hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
繊維染色プロセスゼロエミッション化へのデータベースとプロセスシミュレータの開発

本研究では、水と薬剤を大量に使用する繊維染色プロセスのマスバランス、排水処理のコスト、薬剤の性状についてデータベースを構築するとともに、プロセスシュミレーターを用いて個々の改善策の全体での物質の流れに対する影響を推算することを目的とする。本年度は、昨年度のアンケート調査に加え、事業場の訪問調査を行い、水使用量、薬剤使用量、工程からの排水の水質について詳細に検討した。この結果、ポリエステル浸染の代表的工程において、マスバランスが明らかとなり、膜分離など現在確立されている技術によって何をどこまでリサイクルが可能かが計算できるよう様になった。その結果、糊抜工程からは合成糊剤(PVAなど)が回収可能であること、合成糊剤はほとんど繊維業界のみで用いられており、回収した糊剤の引き受け先としては織布製造業ぐらいしかないこと、減量工程からはポリエチレンテレフタラートが回収され、これはポリエステル製造工程等にリサイクルできること、また同工程からアルカリを回収することができ、これを同一工程で再利用できること、などが明らかになった。将来のさらなるゼロエミッション化のためには、生物分解性が低いが現在のところ代替が難しいノニオン系界面活性剤の回収技術あるいは生物分解性の高いものへの代替、水、溶剤使用量を極力低減するインクジェットプリント法の開発等が技術開発課題であることが明らかとなった。また、染色業は中小規模の事業場が多いため、高価なリサイクル装置などの導入が難しい場合がある。染色業のゼロエミッション化のためには、この様な業界の事業を考慮しながら、リサイクル技術の普及、新ゼロエミッション技術の開発を進める必要がある。
乳癌細胞のホルモン依存性増殖に対する細胞内レドックス制御機構の関与

当該研究期間中に明らかにした点は、(1)TRXの細胞内発現量の寡多でクローニングした乳癌細胞株MCF-7を用いた細胞周期DNA解析で、TRX発現量の少ないクローンほどエストロゲン依存性増殖速度が速い傾向がみられた。(山内清明、稲本俊)(2)乳癌の免疫組織染色で、TRX細胞内発現量が中等度以上みられる症例では、ER陽性群のpS-2発現率がER陽性群に比べて有意に高く、p53陽性群のmitotic indexがp53陰性群に比べて有意に高い傾向がみられ、ERとpS-2の発現やp53の働きに細胞内のTRXが関与していることが示唆された。(山内清明、稲本俊)(3)wild type p53陽性乳癌細胞株においてp53依存性p21活性化における転写活性がTRXにより増強されることを明らかにした。この知見より、TRXは乳癌細胞の酸化ストレスに対する防御機構や増殖機構に関与することが示唆され、レドックス制御を応用した新しい治療法の開発が可能であると考えられる。(淀井淳司)(4)エストロゲンレセプターのシステイン残基をアラニンに置換した変異体を用いた解析から、DNA結合領域だけでなく、リガンド結合領域にもTRXによって制御されるレドックス高感受性部位が存在することが示された。(林慎一)(6)ホルモン依存性に増殖する子宮筋に比べて子宮筋腫では、転写因子であるAP1のレドックス制御に関与するRedox Factor1(Ref-1)は、子宮筋腫では還元型が主体に、子宮平滑筋では酸化型主体に、またTRXはその逆に発現している可能性が見られたので、本年度は乳癌細胞株(MCF-7)において抗Ref-1抗体を用いてウエスタンブロッティング法により同様の研究を行った。その結果、乳癌細胞株でも、Redox Factor1(Ref-1)の還元型及び酸化型と思われる34Kd及び37Kdに相当する二本のバンドが認められたので、乳癌細胞株(MCF-7)においても細胞内レドックスの制御に破綻をきたしている可能性が考えられた。(二階堂敏雄)以上より本研究で示されたERに対するレドックス制御は乳癌の生物学的特性を考える上で非常に重要である。今後、ERのレドックスによる機能制御の分子機構の解明、さらに、効果的な乳癌ホルモン療法を確立する必要がある。本研究は、乳癌細脚のエストロゲン依存性増殖において細胞の活性化に関与するチオレドキシン(TRX)の機能や意義を解析し、効果的な乳癌ホルモン療法を確立することを目的とする。今年度明らかにした点は、(1) TRXの細胞内発現量の寡多でクローニングした乳癌細胞練MCF-7を用いた細胞周期DNA解折でエストロゲン依存性増殖速度とチオレドキシン発現量は負の相関を示した。更にチオレドキシン発現量の高いクローンは抗エストロゲン製剤に対し抵抗性を示した。(山内清明、稲本俊)

(2)子宮内膜からとった初代培養間質細胞において、TRXはエストロゲンによりその発現増強が認められた。またその増殖に対して、TRX単独ではその増殖促進作用は認められなかったが、上皮成長因子による増殖促進作用をTRXが増強することが明らかとなった。(淀井淳司)(3)チオール基を酸化する作用のあるdiamideの添加によって、ERのDNA結合能は失われたが、還元剤DTTの添加で回復し、TRXの添加によっても回復を示した。これらのことからERはレドックス制御に高感受性であり、少なくともその一因は標的配列へのDNA結合能にあることが示された。また、その際の直接のエフェクターとしてTRXが直接ERに作用して、効率的に還元することが示唆された。(林槙一)(4)子宮筋に比べ子宮筋腫では、cyclinE.p34cdc2、p33cdk2の異常発現増加が認められた。一方、子宮平滑筋と子宮筋腫ではTRXの発現にも差異があることより、TRXは細胞周期調節になんらかの関与があるものと推測された。(二階堂敏雄)以上より本研究で示されたERに対するレドックス制御は乳癌の生物学的特性を考える上で非常に重要である。今後,ERのレドックスによる機能制御の分子機構の解明、さらに、効果的な乳癌ホルモン療法を確立する必要がある。本研究は、乳癌細胞のエストロゲン依存性増殖において細胞の活性化に関与するチオレドキシン(TRX)の機能や意義を解析し、効果的な乳癌ホルモン療法を確立することを目的とする。今年度明らかにした点は、(1)TRXの細胞内発現量の寡多でクローニングした乳癌細胞株MCF-7を用いた細胞周期DNA解析で、TRX発現量の少ないクローンほどエストロゲン依存性増殖速度が早い傾向がみられた。(山内清明、稲本俊)(2)乳癌の免疫組織染色で、TRX細胞内発現量が中等度以上みられる症例では、ER陽性群のpS-2発現率がER陰性群に比べて有意に高く、p53陽性群mitotic indexがp53陰性群に比べて有意に高い傾向がみられ、ERとpS-2の発現やp53の働きに細胞内のTRXが関与していることが示唆された。(山内清明、稲本俊)(3)wild type p53陽性乳癌細胞株においてp53依存性p21活性化における転写活性がTRXにより増強されることを明らかにした。この知見より、TRXは乳癌細胞の酸化ストレスに対する防御機構や増殖機構に関与することが示唆され、レドックス3制御を応用した新しい治療法の開発が可能であると考えられる。(淀井淳司)(4)エストロゲンレセプターのシステイン残基をアラニンに置換した変異体を用いた解析から、DNA結合領域だけでなく、リガンド結合領域にもTRXによって制御されるレドックス高感受性部位が存在することが示された。(林慎一)(4)ホルモン依存性に増殖する子宮筋に比べて子宮筋腫では、転写因子であるAP1のレドックス制御に関与するRedox Factorl(Ref-1)は、子宮筋腫では還元型が主体に、子宮平滑筋では酸化型主体に、またTRXはその逆に発現している可能性が見られたので、本年度は乳癌細胞株(MCF-7)において抗Ref-1抗体を用いてウエスタンブロッティング法により同様の研究を行った。
核内構造物への移動により制御される転写活性と蛋白質分解の共役的進行の可視化

従来,蛋白質分解の研究は細胞の集団から蛋白質を抽出して免疫ブロット法等の解析を行うしか方法がなく,われわれも同様の方法により転写因子GATA2発現の細胞周期特異的な分解を見いだし報告した.しかし,このような解析には細胞周期を同調させた細胞集団が必要であり,多様な増殖特性を持つ細胞を持ち,細胞周期の同調が困難な正常組織の細胞を用いた解析は不可能であった.一方,免疫組織化学的方法においては,個々の細胞における発現を捉えられるものの,定量的解析が困難であった.そこで,我々は,転写因子等の核内因子と,細胞表面抗原,DNAの多重蛍光染色を行い,フローサイトメーターを用いて解析する方法を検討した.この方法では,性質の異なる細胞集団ごとにゲートをかけた解析が可能であり,また,個々の細胞の持つDNA量と転写因子発現の関係を2次元の図として解析することができる.我々は,造血幹細胞を含む細胞分画の解析を行い,GATA2発現はS期からG2期にかけて高く,M期に低下することを明らかにした.M期には細胞周期を進行させるサイクリン等の分解も起きるが,GATA2とサイクリンとDNAの3重染色の結果から,GATA2の分解はサイクリンBの分解より早い段階に起きることを見いだした.このような蛋白質分解制御はGATA2に特異的であり,類似のDNA結合特性を持つGATA1においては認められなかった.さらに,我々は緑色蛍光蛋白質とGATA2およびその変異体との融合蛋白質のフローサイトメーター解析を行い,サイクリン/Cdk複合体による複数のセリン/スレオニン残基のリン酸化がGATA2の細胞周期特異的分解を制御していることを明らかにした.本研究は、蛋白質分解系を介した転写因子発現制御機構と核内構造、転写活性の制御の関連の視覚的な提示を目的としている。本年度は、造血幹細胞、骨格筋、脂肪細胞等の組織の恒常性の保持に不可欠な転写因子であるGATA-2について、これまでの研究成果をもとに、発生工学的手怯によりマウス個体に生体内発現させた緑色蛍光蛋白質(GFP)を用いて,造血幹細砲における本因子の発現を可視化してその生育環境を明らかにし、また、転写制御に必要なシス因子について報告を行った(業績参照)。さらに、本因子の蛋白質レベルの制御機構について報告を行い、本因子が、類似の転写因子であるGATA-1に比較して格段に速い速度で分解されており、特に、紫外線照射後には非常に速い発現低下が認められることを示した。また、この分解はユビキチン・プロテアソーム経路を介しており、分解系の活性に必要なドメインが1分子内に3カ所存在することを明らかにした。そこで、次に、このような分解経路が働く場のイメージングや、蛋白質安定性と細胞周期制御の関係性の解明を目指し、本因子、および、各分解制御ドメインとGFPとの融合蛋白質を発現させるベクターを構築し、293T細胞への一過性発現系、白血病細胞株への安定導入株の作成などを行った。その結果、GATA-2はS期後半からG2期に発現が安定化することを明らかにし、このような発現制御に関わるドメインを検討し(未発表)。さらに、白血病細胞株やヒト臍帯血幹細胞分画の内在性GATA-2の発現も同様の細胞周期特異的な発現制御を受けていることを、各種薬剤を用いた同調培養法により示した。(未発表)。現在は、このような制御と核内構造物との関係について解析を行っている。従来,蛋白質分解の研究は細胞の集団から蛋白質を抽出して免疫ブロット法等の解析を行うしか方法がなく,われわれも同様の方法により転写因子GATA2発現の細胞周期特異的な分解を見いだし報告した.しかし,このような解析には細胞周期を同調させた細胞集団が必要であり,多様な増殖特性を持つ細胞を持ち,細胞周期の同調が困難な正常組織の細胞を用いた解析は不可能であった.一方,免疫組織化学的方法においては,個々の細胞における発現を捉えられるものの,定量的解析が困難であった.そこで,我々は,転写因子等の核内因子と,細胞表面抗原,DNAの多重蛍光染色を行い,フローサイトメーターを用いて解析する方法を検討した.この方法では,性質の異なる細胞集団ごとにゲートをかけた解析が可能であり,また,個々の細胞の持つDNA量と転写因子発現の関係を2次元の図として解析することができる.我々は,造血幹細胞を含む細胞分画の解析を行い,GATA2発現はS期からG2期にかけて高く,M期に低下することを明らかにした.M期には細胞周期を進行させるサイクリン等の分解も起きるが,GATA2とサイクリンとDNAの3重染色の結果から,GATA2の分解はサイクリンBの分解より早い段階に起きることを見いだした.このような蛋白質分解制御はGATA2に特異的であり,類似のDNA結合特性を持つGATA1においては認められなかった.さらに,我々は緑色蛍光蛋白質とGATA2およびその変異体との融合蛋白質のフローサイトメーター解析を行い,サイクリン/Cdk複合体による複数のセリン/スレオニン残基のリン酸化がGATA2の細胞周期特異的分解を制御していることを明らかにした.
河内地域の仏教文化と歴史に関する総合的研究

平成29年度は4年計画の第2年次にあたる。本年度は昨28年度に引き続き、河内長野市に所在する天野山金剛寺において、塔頭の摩尼院を中心に所蔵文化財の調査および写真撮影を行なった。また、本坊においても、甲冑類、文書類に関して補足調査を行なうことができた。その結果、金剛寺の文化財においては一部分野を除き、概ね調査を終えることができた。金剛寺以外では、同じく河内長野市に所在する真言宗の古刹観心寺において、第1回目の悉皆調査として宝物館の収蔵庫に収められている文化財を中心に、作品の整理を兼ねた調査を行なった。さらに、聖徳太子および叡尊にゆかりがある八尾市の教興寺においては、彫刻作品を中心に所蔵文化財の調査を行なった。これらの調査の中で、摩尼院においては、重要文化財に指定されている文書の一部を発見するなど、重要な成果を上げることができた。また観心寺においては、宝物館の収蔵庫に収められている作品の整理をおこない、収蔵庫の作品についてはほぼ全貌を把握することができた。調査を行なった文化財に関しては調書を作成するとともに、重要作品に関してはデジタルカメラによる写真撮影を行なった。これらデータはパソコンに入力し、デジタルデータ化を順次進めている。具体的な調査日程と調査件数は以下のとおりである。1金剛寺摩尼院本調査6月19日23日調査作品数220件2金剛寺補足調査10月10日13日調査作品数26件3観心寺悉皆調査30年2月19日23日調査作品数175件4教興寺彫刻調査30年2月26日27日調査作品数10件4年計画の2年目である本年度は、河内長野市の金剛寺において塔頭摩尼院の悉皆調査と本坊の補足調査を行なった。それぞれの調査で、金剛寺が所蔵する文化財ついては一部を除きほぼ調査を行うことができ、報告書刊行に向けての調書作成及び写真撮影を、ほぼ予定通り終えることができた。また、おなじく河内長野市の観心寺において第1回目の悉皆調査として、宝物館の収蔵作品を中心に175件の文化財に関する調査を行ない、報告書刊行に向けての調書作成及び写真撮影をすることができた。これらの情報をデジタルデータとしてエクセルに入力し、写真資料に関しても分類・整理を順調に進めることができた。本事業は4年計画であり、初年度から第3年度にかけては各年度毎に1ヶ所以上の寺院を当該地域から選択し(28年度は金剛寺、29年度は観心寺)、全研究員参加による悉皆調査を行うことを予定している。28年度は金剛寺が所蔵する文化財が想像以上に多かったため、その調査に終始したが、29年度に関しては当初の予定どおり、摩尼院の悉皆調査、金剛寺本坊の補足調査、観心寺宝物館の第一回目の悉皆調査を行なうなど、総計431件にのぼる多数の文化財を調査し資料を収集できた。30年度についても引き続き観心寺・教興寺の悉皆調査を行なう予定である。また、それらの調査で得られたデータに関しては、最終年度に発行予定の報告書に向け、順次デジタル化をはかる予定である。河内地域の仏教文化と歴史に関する調査について、4年計画の初年度である平成28年度は、河内地域の中心的な寺院のひとつである、河内長野市・金剛寺において悉皆調査を行った。金剛寺は、奈良時代の天平年間に開山されたといわれ、平安時代、真言密教の隆盛を受けて、平安時代後半には高野山から阿観上人が入山し、現在の金堂、多宝塔、食堂などといった、伽藍配置の基礎を築いたといわれる寺院である。金剛寺では、これまでも膨大な経典や聖教の調査を、京都国立博物館の研究員が十数年に渡り、進めてきていることや、金剛寺を特集した展覧会を開催するなど、所蔵する文化財の一部の調査を行ってきており、今回の調査では、本調査、補足調査をあわせ、計三週間にわたる調査を行い、金剛寺本坊および宝物館に管理されている彫刻、絵画、工芸、歴史資料などの文化財に関して、おおよその調査を完了し、報告書刊行に向けての調書、および写真撮影をほぼ終了することができた。今後、調書や写真等のデータ整理が必要ではあるものの、これまでその詳細が明らかではなかった金剛寺の文化財の状況を明らかにできたことは、当該地域の仏教美術、仏教文化を学術的に解明していく上での基礎資料となることは間違いなく、本研究課題を進めていく上でも重要性があるといえる。加えて、河内地域の歴史的な文献資料や関連する書籍などを収集し、先行研究をあらためて確認するとともに、調査成果を分析するための基礎作業を行った。当初の計画では、初年度に河内地域の複数寺院を調査する計画ではあったが、今年度の調査は金剛寺のみにとどまった。その理由としては、金剛寺が所蔵する文化財が、事前に予想していた点数よりもはるかに多く存在していたことが、調査を進めていく段階で明らかとなってきたことが挙げられる。また、これまでほとんど取り上げられることのなかった、金剛寺の吉祥院、摩尼院といった子院に所在する文化財も多数存在することが、今回の調査で分かってきた。一部子院の調査は、すでに進めてはいるが、金剛寺山内全体として文化財を把握する上でも、来年度以降に子院の調査をさらに行う必要がある。

本年度は昨28年度に引き続き、河内長野市に所在する天野山金剛寺において、塔頭の摩尼院を中心に所蔵文化財の調査および写真撮影を行なった。また、本坊においても、甲冑類、文書類に関して補足調査を行なうことができた。その結果、金剛寺の文化財においては一部分野を除き、概ね調査を終えることができた。金剛寺以外では、同じく河内長野市に所在する真言宗の古刹観心寺において、第1回目の悉皆調査として宝物館の収蔵庫に収められている文化財を中心に、作品の整理を兼ねた調査を行なった。さらに、聖徳太子および叡尊にゆかりがある八尾市の教興寺においては、彫刻作品を中心に所蔵文化財の調査を行なった。これらの調査の中で、摩尼院においては、重要文化財に指定されている文書の一部を発見するなど、重要な成果を上げることができた。また観心寺においては、宝物館の収蔵庫に収められている作品の整理をおこない、収蔵庫の作品についてはほぼ全貌を把握することができた。調査を行なった文化財に関しては調書を作成するとともに、重要作品に関してはデジタルカメラによる写真撮影を行なった。これらデータはパソコンに入力し、デジタルデータ化を順次進めている。具体的な調査日程と調査件数は以下のとおりである。1金剛寺摩尼院本調査6月19日23日調査作品数220件2金剛寺補足調査10月10日13日調査作品数26件3観心寺悉皆調査30年2月19日23日調査作品数175件4教興寺彫刻調査30年2月26日27日調査作品数10件4年計画の2年目である本年度は、河内長野市の金剛寺において塔頭摩尼院の悉皆調査と本坊の補足調査を行なった。それぞれの調査で、金剛寺が所蔵する文化財ついては一部を除きほぼ調査を行うことができ、報告書刊行に向けての調書作成及び写真撮影を、ほぼ予定通り終えることができた。また、おなじく河内長野市の観心寺において第1回目の悉皆調査として、宝物館の収蔵作品を中心に175件の文化財に関する調査を行ない、報告書刊行に向けての調書作成及び写真撮影をすることができた。これらの情報をデジタルデータとしてエクセルに入力し、写真資料に関しても分類・整理を順調に進めることができた。金剛寺の調査において、予想以上の文化財が存在していたことにより、研究計画段階のスケジュールにやや遅れがみられるが、金剛寺全体の悉皆調査を行うことによって、河内地域の仏教文化を探る上でも重要な知見を得られることが期待できるため、まずは、引き続き金剛寺の調査を行いたい。それと同時に金剛寺と並び、河内地域を代表する河内長野市の観心寺の調査を合わせて進めていく計画である。それに加えて、彫刻、絵画、書跡、工芸といった分野毎の調査も八尾市の教興寺をはじめとする複数社寺で行う予定である。また、三年目以降に、計画段階にで列挙している寺院について、文献資料等を用い、博物館施設等に寄託されている作品を含め、所蔵する文化財の状況の把握を行い、より効率的な調査を行えるよう検討を行う。本事業は4年計画であり、初年度から第3年度にかけては各年度毎に1ヶ所以上の寺院を当該地域から選択し(28年度は金剛寺、29年度は観心寺)、全研究員参加による悉皆調査を行うことを予定している。28年度は金剛寺が所蔵する文化財が想像以上に多かったため、その調査に終始したが、29年度に関しては当初の予定どおり、摩尼院の悉皆調査、金剛寺本坊の補足調査、観心寺宝物館の第一回目の悉皆調査を行なうなど、総計431件にのぼる多数の文化財を調査し資料を収集できた。30年度についても引き続き観心寺・教興寺の悉皆調査を行なう予定である。
噴流と後流の組合せによる衝突伝熱の促進

スロット噴流の二次元性を高めるために,アスペクト比25の大きな縮流ノデル(40mm×1000mm)を製作し,噴流の衝突領域に再度焦点を絞って界面更新に寄与する大きなスケ-ルの流れの非定常性について実験により調べた。そのために局所壁面親度勾配変動を測定するための平面型シア-センサ-を衝突板表面に凹凸がないように埋め込み,その両側5mmに平面圧力変動を測定するための圧力タップを設けた。圧力変動はピエゾバランス式差圧変換器により測定した。界面更新運動を抽出するために局所壁面速度勾配の時間変化率を採用し、条件付統計解析をする一方,表面圧力の時間変化率を用いて界面更新に寄与する非定常れのパタ-ン分類を行った。その結果,伝熱面をノズル径(幅)の6倍下流に設置した場合,淀み領域の伝熱促進に寄与すると思われる界面更新効果の強い流れは,(1)噴流コアの高速部・低速部の伝熱面への周期的な衝突による非定常な加速流,および(2)噴流中心軸の揺動による瞬間的淀み点のずれによる非定常な加速流であり,外縁領域における界面効果の強い流れは姿突する噴流の剪断層でできる大きなスケ-ルの渦の伝熱面への断続的な衝突による非定常流であることが明かになった。この結果は円柱を押入した後流についても言えることであり,今後,円柱後流を非定常性の強い流れにするために円柱の配列を工夫すべきことが示差された。
述語隠喩に関する心理言語学的研究

引き続き、三島由紀夫『金閣寺』などの文学作品を調査し、述語隠喩を中心とした用例データベースを作成した。データベースに含まれる情報の核をなすのは隠喩の分類情報である。隠喩はその形式上、単純隠喩と複合隠喩に分けられる。単純隠喩は句隠喩と文隠喩に分かれる。句隠喩は一文の中にベースと喩辞を含むもので、その中でさらに述語隠喩と名詞隠喩に細分される。文隠喩は「猿も木から落ちる」というような文全体が喩辞をなすものである。複合隠喩は一文中に複数の単純隠喩が重ね合わされるものでその例はあまり多くない。隠喩の分類を行った後、述語隠喩の構造分析に着手した。名詞隠喩がその構造上、喩辞と主題と根拠に分解できるのに対して、述語隠喩の場合には喩辞と主題=根拠に二分される。たとえば、「人の心を読む」という述語隠喩は喩辞「読む」とその背後にある主題=根拠「理解する」から成り立っている。述語隠喩の特徴はこれに加えて述語との結びつきの密接な典型的事例がからむことで、「読む」の場合には「本(のように)」がそれにあたる。こうした構造上の違いをふまえて、今後、差異性と類似性とによる名詞隠喩の理論に対応するような述語隠喩の説明理論の構成に取り組む。本研究の目的は、相互作用理論の枠組みの中で、意味の集合論モデルに立脚して動詞や形容詞などの述語が隠喩として機能するための条件を明らかにすることにある。研究の手順として、まず、隠喩全体の中で述語隠喩の位置づけを把握するため、用例の収集と予備的な意味分析を行った。具体的には、太宰治、三島由紀夫らの小説を基に隠喩の用例を収集した。それらの用例は名詞隠喩、述語隠喩、文隠喩に大別した後、さらに細かくそれぞれの内部で下位分類を行った。全体的な数量的傾向として、名詞隠喩、述語隠喩、文隠喩の順で多く、文隠喩は前2者に比べてごくわずかであった。また、一つの文に名詞隠喩と述語隠喩が同時に用いられる複合隠喩の例も確認された。用例を基に隠喩構造の分析を行った。その結果、従来の知見と異なって、名詞隠喩と述語隠喩の境界線は必ずしも明瞭なものでなく、そのどちらとも解釈できる用例が存在することが見いだされた。たとえば、「月光が洪水のように満ちあふれる」という例は「月光=洪水」という名詞述語とも、「月光が満ちあふれる」という述語隠喩とも捉えることができる。こうした連続性の発見は、名詞隠喩について提案されている有力な隠喩モデルを述語隠喩に援用する可能性が開かれたという点、および、一般性のより高い隠喩モデルを構築する可能性が高まったという点で意義深いものであると考える。今後は、さらに隠喩モデルの構築を進めると同時に、それを実証するための実験を実施する予定である。
磁気表面プラズモン効果の起源解明とナノ分解能高速プラズモニック磁気センサへの応用

表面プラズモンを用いた新規磁気センサを開発することを目的とし,1)表面プラズモンの磁気応答現象の起源解明、2)表面プラズモンの磁気応答特性向上、及び3)表面プラズモン導波路を用いた高効率光信号伝送技術の確立を行った.貴金属中に磁性金属が分散する構造のAg-Co薄膜を用いることにより,膜厚制御により表面プラズモンの励起条件を容易に制御し,単層において高い磁気応答性の導出に成功した.本研究では、強磁性体の強磁性共鳴(Ferromagnetic resonance: FMR)周波数よりも高い周波数で応答可能で、かつ、微小領域情報を検出可能な磁気センサの開発に向け、表面プラズモンを用いた新規原理に基づく磁気センシング技術を開発することを目的とし、表面プラズモンの磁気応答現象を発展させ、磁気応答現象の起源解明、表面プラズモンの磁気応答特性向上、及び表面プラズモン導波路を用いた高効率光信号伝送技術の確立を目指した。特に、表面プラズモンの磁気応答特性の向上に向け、技術的なアプローチ及び材料物性的アプローチを検討した。技術的なアプローチとして、微弱な外部磁界に敏感に応答するための薄膜構成として、表面プラズモンを励起するのに必要な貴金属層の膜厚の最適化を行った。これにより、反射率差の向上を確認した。一方で、従来の貴金属/磁性金属の多層構成では貴金属層の膜厚だけでなく、磁性金属層の膜厚及び全膜厚が表面プラズモン励起の条件に寄与するため、最適化が複雑化する。そこで、膜厚調整の容易な単層において表面プラズモンを励起し、かつ、磁気応答特性を示す材料系の検討を行った。貴金属と磁性金属がマトリックス状態で混在する材料系Ag75Co25、Cu75Co25単層薄膜において、膜厚による表面プラズモン励起条件の制御を確認し、磁気応答を確認した。特にAg75Co25薄膜においては、膜厚調整による急峻な反射率変化が得られていることにより、従来の多層薄膜以上の磁気応答特性を得た。さらにこれら試料の可視光の波長領域(405 - 780 nm)における誘電分散特性を活用した表面プラズモンの磁気応答特性の検討を行い、磁気応答特性における入社波長依存性を確認した。磁気応答現象の起源解明に向けた表面プラズモン励起層と磁気制御層とに機能を分離した多層薄膜構造における検討において、磁気制御層の磁性材料にCo-Ni相を用いて一原子あたりの電子数と表面プラズモンの磁気応答性との相関を検討した。本Co-Ni薄膜においてはCo相からNi相まで広組成範囲において面心立方構造の不規則構造を有し、飽和磁化も連続的に変化するため、同一の膜厚の磁気制御層を作製することにより、負の一軸磁気異方性を連続的に変化可能である。表面プラズモン励起層にはCuを用いた。表面プラズモンの磁気応答信号の増強には、上記磁気制御層の条件のみならず、非磁性層材料である表面プラズモン励起層の膜厚の最適化が有効であることを示した。一方、Co-Ni相の組成依存性については薄膜作製条件の最適化が今後の課題となった。磁気応答特性向上の検討として、可視光の波長領域(400 - 800 nm)における誘電分散特性を活用した磁気表面プラズモン現象の検討を開始した。作製した試料において吸収の大きい光学特性が得られており、期待する表面プラズモン特性に至っていないことが課題となっている。表面プラズモンを励起する層と磁気応答性を有する磁気制御層とに機能を分離した積層薄膜構造の試料において検討を行っている。その磁気制御層において、形状異方性を連続的に変化可能な材料系として広組成範囲で同一の面心立方構造を有するCo-Ni薄膜について検討を行った。このCo-Ni相においては可視光における吸収が大きく、単相では十分に表面プラズモンの励起が行えないため、表面プラズモン励起層との層構成の最適化が重要となってくる。今回作製した試料においては、積層構造においても単相と同様の傾向である吸収の大きい光学特性が得られている。この課題解決には、薄膜の成長条件の検討により表面平坦性の悪い粒状成長ではなく層状に成長させることが有用だと考えられる。誘電率の分散特性を活用し、磁気表面プラズモン信号増強の検討を引き続き進めていく。最適な薄膜の作製条件の検討を引き続き行っていくのと同時に、材料系や薄膜構造の変更も検討する。

分散特性を考慮した表面プラズモン励起層材料と磁気制御層の選定、局在プラズモンの活用を念頭に表面プラズモン励起層中に磁気制御層が分散した構造の検討を行う。該当なし
ＧＯＡＴ及びグレリン受容体の立体構造に基づいたグレリン脂肪酸修飾・認識機構の解明

今年度はグレリン受容体の結晶構造解析に向けて、熱安定化変異体のスクリーニングおよび新規化合物による安定化効果のスクリーニング、精製グレリン受容体の結晶化に取り組んだ。これまでグレリン受容体の結晶化に成功していない理由として、グレリン受容体自身の基礎活性が非常に高いため、安定性が低く精製が困難であることが考えられた。そこで、受容体のさらなる安定化を図るために出芽酵母を用いた変異体スクリーニングを行った。その結果、受容体の安定性を向上させる新たな点変異を3箇所見出した。この結果をもとに、発現宿主を昆虫細胞に変更し、大量培養およびアフィニティーカラムによる精製を行ったところ、これらの変異体はこれまでのコンストラクトと比較して発現量も高く、再現よく精製できることが確認された。加えて、受託合成によってさらに2種類のグレリン受容体阻害剤を入手した。これらの阻害剤とこれまでの精製・結晶化で使用していた市販の阻害剤との熱安定性について比較検討したところ、新規阻害剤では、いずれも熱安定性が5度以上上昇することが確認された。現在、これらの検討に基づいて精製グレリン受容体の結晶化を試みているが、これまでのところ結晶は得られていない。今後、結晶化の条件などについて細かく検討していく必要があると考えられるが、変異体のスクリーニングおよび新規阻害剤の作製によってグレリン受容体の安定化を図れたことは研究全体を通して大きな成果であり、研究は着実に進展しているものと考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、グレリン脂肪酸修飾酵素(グレリンO-アシルトランスフェラーゼ; GOAT)及びグレリン受容体の立体構造を解明することにより、グレリンへの脂肪酸修飾機構及びグレリン受容体による活性化グレリン認識機構を明らかにすることを目的としている。本年度は、特にグレリン受容体に焦点を絞り、その発現・精製及び結晶化を実施した。一般にグレリン受容体のようなGタンパク質共役型受容体(GPCR)を結晶化する場合、1可溶性タンパク質と融合させたキメラ体として大量発現させ、2mgオーダーの精製品を準備し、3精製品を脂質二重膜中に再構築して結晶形成させる。グレリン受容体もこのスキームに従って結晶化を試みた。グレリン受容体と可溶性タンパク質の組み合わせから100種類を超えるキメラ体を作製した。スクリーニングは、出芽酵母でキメラ体を発現させ、ゲル濾過クロマトグラフィーでその安定性を評価した。その結果、これまでに構造が明らかになっているGPCRと比較してグレリン受容体は非常に不安定であることが示唆された。しかしながら数種類のキメラ体は比較的安定に発現していることが確認できた。これらグレリン受容体変異体を昆虫細胞で大量発現させ、タグタンパク質を用いたアフィニティー精製によってmgオーダーの精製タンパク質を得ることができた。その後、膜タンパク質の結晶化でよく用いられる脂質キュービックフェーズ法を試みたところ、これまでにいくつかの条件でグレリン受容体変異体のものと思われる微小結晶が得られており、今後、Spring8の放射光で回折実験を行う予定である。グレリン受容体の安定性が低いことから当初、精製困難と考えられた。そのため結晶形成に不利なグレリン受容体のN末端およびC末端の欠失、さらに可溶性タンパク質の融合を経て、グレリン受容体変異体の大量発現および精製ができるようになった。結晶化にはmgオーダーの精製タンパク質が必要となるが、昆虫細胞10L培養液からおよそ1mgのグレリン受容体を精製できるようになった。またその後の精製グレリン受容体変異体の結晶化では、すでに微小結晶が得られるなど期待する成果が得られている。一方でグレリン脂肪酸修飾酵素は安定化変異体の作出に時間がかかっており、これまでのところ大量発現まで進んでいない。原因としては、活性を維持した変異体を作出できないことにある。これまでの研究結果から、結晶化の際に不利となるN末端やC末端を欠失させると活性を全く持たなくなることが示唆されており、生化学実験の結果をもとにさらなる安定化変異体を作製する必要がある。

27年度が最終年度であるため、記入しない。これまでに構造が決定されたGPCRはわずか30種類で、500種類以上あるとされるGPCR全体のおよそ5%しか明らかにされていない。このことは、GPCRの構造解析が如何に難易度の高い研究であるかを示している。平成27年度は、本研究助成の最終年度となるため、今後はグレリン受容体に多くの時間を費やして結晶化条件のさらなる最適化を進め、グレリン受容体の構造を決定したいと考えている。そのためには発現・精製のステップを見直し、より高品質かつ高収量のグレリン受容体変異体を精製する必要があると考える。最終収量が1mg/10L培養液という現状では毎週、発現・精製しなければならず研究の進捗が遅れる一因となっている。そのため具体的には、Sf9細胞に感染させるバキュロウイルスのMOIや感染時間の検討、Sf9細胞からHigh five細胞への変更および精製に使用しているタグタンパク質をHisタグからFLAGタグに変更するなどして最終収量の増加を試みる。結晶化条件の最適化と発現・精製ステップの見直しを同時並行で進めて、構造解析に足る良品質の結晶の作製に力を注ぐ予定である。グレリン脂肪酸修飾酵素についても活性を維持した安定化変異体の作出を試みる予定である。すでにN末端やC末端を欠失させると失活してしまうことは確認されているので、N末端やC末端または細胞内外のループに種々の可溶性タンパク質を融合させた変異体を作製して、酵素活性および熱安定性を測定することで安定化変異体を作製する。
胎児期の低栄養が早産児の消化管機能に及ぼす影響の検討

胎児期の低栄養が早産児における消化管機能に及ぼす影響について研究を進めるにあたり、まず退院時の脂質代謝に関する検討を行った。胎児発育不全を伴う児では伴わない児に比べ、Tcho/HDL比、LDL/HDL比、apo B/apo AI比が有意に高値であったことから、胎内環境が早産児の脂質代謝に影響を及ぼしている可能性が示唆された。胎児期の低栄養やインスリン抵抗性が早産児における腸管機能、消化管ホルモン分泌に及ぼす影響について研究を進めるにあたり、まず早産児における日齢3のインスリン抵抗性および感受性の指標(HOMA-IR、QUICKI)と在胎週数、出生時の体格との関連について検討した。その結果、在胎週数とHOMA-IR, QUICKIの間に有意な相関を認め、未熟性がインスリン抵抗性に影響を及ぼしている可能性が示唆された。さらに、出生体重1,500g以下の極低出生体重児を対象に日齢0、3において同様の検討を行ったところ、子宮内発育不全のため出生体重基準値からの標準偏差が低く、胎児期低栄養の程度が強いほど生後早期のインスリン抵抗性の指標はむしろ低いとの結果を得た。また、NICU退院前の早産児を対象に同様の検討を行ったところ、出生週数の早い低出生体重児ではインスリン抵抗性が高いとの結果を得た。これらの検討より、未熟性や胎児期低栄養は生後早期から退院前の早産児におけるインスリン抵抗性に影響を及ぼしていることが証明された。次年度は胃電図(哺乳前、哺乳後2時間での測定)や腹部超音波による上腸間膜動脈などの血流測定を用いて胎児期低栄養やインスリン抵抗性が早産児の腸管機能に及ぼす影響について検討を進めていく予定である。胎児期の低栄養が早産児における腸管機能に及ぼす影響について研究を進めるにあたり、まずNICU退院時の脂質代謝に関する検討を行った。血中Tcho/HDL比、LDL/HDL比、apo B/apo AI比を用いて評価したところ、胎児発育不全を伴う児では伴わない児に比べ、Tcho/HDL比、LDL/HDL比、apo AI/apoB比が有意に高値であったことから、胎内環境が早産児の脂質代謝に影響を及ぼしている可能性が示唆された。さらに腸管機能に影響を与える栄養法の違いとインスリン抵抗性や脂質代謝との関連を調査するため、退院前の早産児を母乳栄養児と人工乳栄養児の二群に分け、前述した脂質代謝の指標に加え、インスリン抵抗性および感受性の指標(HOMA-IR、QUICKI)を用いて両群間で比較した。その結果、母乳群では人工乳群に比べ、HOMA-IRは有意に低値を、QUICKIは有意に高値を示した。また、母乳群ではTcho/HDL比、LDL/HDL比、apo AI/apoB比が人工乳群に比べ有意に高値であったことから栄養法の違いが退院時のインスリン抵抗性や脂質代謝に影響を及ぼしていることが示唆された。これまでの検討により、胎児発育不全は生後早期から退院前のインスリン抵抗性や脂質代謝に影響を及ぼしていることが証明された。これらの指標はメタボリックシンドローム(MS)のリスク因子としても知られ、胎内環境や未熟性と将来のMS発症との関連という観点からも興味深い研究結果と考えられた。胎児発育や生後の栄養法が腸管機能に及ぼす影響について胃電図や腹部超音波を用いた検討を現在継続中である。
専門教育と連動した中国語初級教材の開発

専門科目と連動した中国語初級教材を開発するために、学習者に対するアンケート結果、インタビュー結果、専門科目の授業談話の分析結果に基づき、教材開発方法について考察した。その結果、1学習者が専門分野と関連する知りたい語彙、身につけたい能力、専門分野で興味・関心のある事・物・人について分析する。2学習者の専門分野に関する教室談話のデータを収集し、頻出語彙、単語間の共起ネットワークについて分析する。3学習者の内省による専門性への気づきを促す、という手順を段階的に行うことにより、学習者主体の専門分野と連動した中国語初級教材開発が可能になることを示した。今年度は教材作成のための以下の予備的調査を行った・1.学習者ニーズに対する調査中国語関連科目履修者に対するアンケート調査を、前期、後期それぞれ1回づつ行い、1専攻分野と関連して、習得したい語彙、2将来専攻分野を生かす職業につくことを想定して、どのような中国語能力を身につけたいか、3専攻分野と関連して、中国語圏のどのようなトピックに関心があるか、について分析を進めた。1回めの調査に基づいて習得したい語彙において、分類語彙表の「相」にあたる語彙が少なかったので、2回めの調査では「評価することば」についてしぼったアンケート調査を行った。2.芸術分野で使用される言語に関する調査中国の芸術系大学・学部、および美術館・博物館において、どのような語彙が使用されるかについて現地調査を行った。調査方法は、許可を得た上で、大学での授業、芸術家へのインタビュー、美術館・博物館の解説を録音し、それらを文字化した。中国語学習者に対する調査において、当初予定していなかった「評価を表わすことば」についての追加調査を行うことで、芸術系の分野で使用される語彙のデータを増やすことができた。中国における現地調査においては、4つの芸術系大学、学部、2つの博物館での解説員の解説に加え、北京在住の画家とインタビューすることができたことは、制作者の側からの使用語彙のデータを収集するうえで有益であった。中国語を履修している芸術系学生に対してアンケート結果をもとに、学習者の視点から見た、学びたい語彙、身につけたい能力、関心のあるトピックについて分析・考察した。学びたい語彙の上位のものには、「形」「色」アニメーション」「デザイン」などが、身につけたい能力には「日常会話」「自分の職業・専門紹介」「プレゼン能力」などが、関心のあるトピックには「金属工芸」「アニメ」「漆」「イラスト」などが上位にあげられている。中国語を3年間履修した学生に対してインタビューを行い、どのような時に学習意欲が高まったについて、質的分析手法を用いて考察した。その結果、授業中に流暢に音読ができた時に満足感を感じること、Twitterで受信する中国語のコメントが読めた時、つながっているという感覚が生まれ、学習意欲が高まることが明らかになった。中国の芸術系授業の教室談話を分析し、授業の属性ごとに頻出する語彙、表現について初歩的な分析を行った。語彙については、形を表す語彙、色を表す語彙を中心に、芸術系学生が中国語を学ぶ際に、専門性と関連した発展性を持たせ得る教材への応用について考察を行った。アンケート調査結果の分析及びインタビューによる分析は予定通り進んだ。中国における芸術系授業談話についても、授業の属性(美学、広告デザイン、CG演習、国画)による特徴的な語彙、および共起ネットワークに関する初歩的な分析を行った。それらの結果に基づき、専門分野と連動する語彙、表現について検討をはじめ、その中間的な報告を、日本中国語学会北陸支部例会において、口頭発表を行った。本年度は研究最終年度であり、研究成果の公表及び本研究に続く発展的研究を視野にいれた、データの蓄積を行った。具体的には、これまでの研究成果をWeb上で公開するためにホームページを作成し、学会発表等の際の資料、研究成果をまとめた論文を公開した。従来、外国語教材作成は、教授する側が、学生のニーズを把握し、語彙、語法、表現、テーマなどを設定したうえで、文法項目の簡単なものからより複雑なものへと段階的に進んで行く、というプロセスを経ることがほとんであった。本研究においては、アンケート調査において、学生にニーズを把握した後、教材の一部を学習者自身が自らの関心のあるトピックを選び、内容を中心としたオリジナル教材を自ら作成するという方法で、中国語初級教材を作成した。トピックは学習者自身が設定し、対話文も基本稿は学習者が中国語で作成する。教師は学習者が作成した基本稿に対し、正しい中国語に修正するとともに、語彙の難易度、文法事項の難易度という観点から修正を加えたものである。教材の一課分は、語彙、文型、対話文、練習問題の他に、言語の背景にある「文化」への気づきを「コラム」形式で学習者自身が100字程度で日本語で記述した。こうした教材作成手法は、学習者の学修時間と学習形態に合わせて、たとえば学期のまとめとして、学習者にこれまで学習した語彙、文型を元に、自分のテーマに沿った教材を自ら作成するという形で、授業の中に組み込むことが可能である。本研究に続く発展的研究として、分野別コーパスの構築を構想しており、芸術系小規模コーパス構築のため、中国の義務教育における美術科教科書のコーパスを作成し、高出現語彙を品詞別に調査し、参考資料としてWeb上に公開した。さらに中国で採集した芸術系授業の音声データも試聴できるようにホームページを作成した。

その結果、1学習者が専門分野と関連する知りたい語彙、身につけたい能力、専門分野で興味・関心のある事・物・人について分析する。2学習者の専門分野に関する教室談話のデータを収集し、頻出語彙、単語間の共起ネットワークについて分析する。3学習者の内省による専門性への気づきを促す、という手順を段階的に行うことにより、学習者主体の専門分野と連動した中国語初級教材開発が可能になることを示した。今年度は、前年度に収集したデーターを分析し、分析結果に基づいて教材の試用版を作成する。試用版は、特定の場面を想定した対話文を中心に作成する。なお、言語の背景にある社会・文化的な側面についての記述方法をあわせて検討する。試用版は今年度後期の授業で試験的に使用し、受講生に対してアンケート調査を行う。最終年度においては、試用版を修正し、最終版を作成するとともに、学会発表のための論文執筆、論文発表を行う予定である。今年度前期終了時に過年度と同様に学生へのアンケート調査を行い、データを補充する。継続的に中国語を履修している学生(3年生)に対して、インタビューを行い、中国語学習と専門性とのつながりについて質的な分析を継続して行う。前年度までの調査研究に基づき、芸術系学生を対象にした中国語初級教材を作成する。これまでの研究成果を論文の形にまとめ、大学紀要に発表する。外国語教育専門的知識の提供および資料整理に予定していた人件費・謝金を使用しなかったこと。音声データ文字化に予定していた経費が掛からなかったことによる。旅費、人件費の支出がなかったことによる。資料整理、専門的知識の提供、文字データを分析可能な形に加工する人件費に使用する。研究成果を国際会議で口頭発表する計画があり、そのための旅費に充てる。ホームページ作成を外部委託により作成する計画があり、そのための経費に充てる。
細胞膜上に発現する代謝型カフェイン受容体の分子同定と機能解析

我々は、マウス小腸由来のSTC-1細胞にカフェインを投与すると細胞内Ca^<2+>濃度の上昇が起こること、この応答が、Phospholipase C(PLC)の阻害剤によって抑制されることを見いだした。この現象は、STC-1細胞にGq結合型の代謝型受容体が存在することを示唆する。そこで、ツメガエル卵母細胞を用いた機能発現法によるこの分子のクローニングに取り組んだが、cDNAの単離には至らなかった。一方で、STC1細胞を用いた機能解析を継続していたところ、カフェインに対する応答が細胞外Ca^<2+>を取り除くと消失すること、Transient Receptor Potential(TRP)チャネルのブロッカーによって、抑制されることを見いだした。この現象は、代謝型受容体ではなく、カフェイン感受性を持つTRPチャネルの存在を示唆する。そこで、STC1細胞に発現しているTRPチャネルをPCR法により単離し、HEK 293細胞、およびツメガエル卵母細胞を用いた異所性発現実験を行い、マウスTRPA1チャネルがカフェインによって活性化されることを新規に発見した。また、TRPA1チャネルを発現している後根神経節の感覚神経細胞もカフェインによって活性化され、TRPA1チャネル遺伝子を破壊したノックアウトマウスでは、この応答は見られなかった。特異抗体を作成して、TRPA1チャネルの発現パターンを観察したところ、舌の神経細胞線維で強い発現が観察された。さらに、野生型マウスでは、有意に、カフェインを含む飲料水を忌避する行動が見られ、ノックアウトマウスでは、忌避が観察されなかった。以上の結果から、マウスTRPA1チャネルは、カフェインによって活性化されること、そして、TRPA1チャネルがカフェインを含む飲水の忌避行動に役割を果たしていることが明らかになった。我々は、先に、機能解析の実験により、小腸上皮細胞STC-1にカフェインを投与すると、細胞内Ca2+濃度の上昇が起こること、この応答が、Phospholipase Cの阻害剤によって抑制されることを見いだした。この現象は、細胞内Ca2+ストアに対するカフェインの直接効果によるものではなく、STC-1細胞に、Gq結合型の代謝型受容体が存在することを示唆する。そこで、cDNAの単離によりその実在を証明することを目的として、本研究を開始した。今年度、以下のように、機能発現法によるクローニングに取り組んだ。まず、STC-1細胞からpolyA(+)RNAを精製して、これをツメガエル卵母細胞に注入し、カフェイン投与によりGq応答による細胞内Ca2+濃度の上昇がみられるかどうかを、2本刺し膜電位固定下で、Ca2+依存性Cl^-電流を記録することにより行った。Positive controlとして用いた、STC-1細胞に発現する既知のGq結合型受容体に対するリガンドである、ボンベシンを投与すると、明確なCa2+-Cl-電流が観察されることから、polyA(+) RNAの精製自体は、問題なく行われていることが確認できた。しかしながら、カフェインに対する応答は見られず、機能発現法によるカフェイン受容体遺伝子の単離には未だ至っていない。そこで、併行して、いくつかの既知のイオンチャネルファミリー等の有力な候補に対する、いわば決め打ちのアプローチも行うこととし、まず、PCR法による遺伝子の単離を行った。カフェインは多彩な薬理作用を持つことがよく知られている。我々は、マウス小腸由来のSTC-1細胞にカフェインを投与すると細胞内Ca^<2+>濃度の上昇が起こること、この応答が細胞外Ca^<2+>を取り除くと消失すること、Transient Receptor Potentialチャネルのプロッカーによって、抑制されることを見いだした。この現象は、細胞内Ca^<2+>

ストアに対するカフェインの直接効果によっては説明がつかず、STC-1細胞に、カフェイン感受性を持つTRPチャネルが存在することを示唆する。その分子実態を明らかにするために、cDNAの単離と、HEK293細胞、および、アフリカツメガエル卵母細胞を用いた異所性発現実験を行い、マウスTRPA1チャネルがカフェインによって直接活性化されることを新たに発見した。また、TRPA1チャネルを発現していることが知られている後根神経節の感覚神経細胞もカフェインによって活性化され、TRPA1チャネル遺伝子を破壊したノックアウトマウスでは、この応答は見られなかった。特異抗体を作成して、TRPA1チャネルの発現パターンを観察したところ、舌の神経細胞線維で、強い発現が観察された。さらに、野生型マウスでは、有意に、カフェインを含む飲料水を忌避する行動が見られ、ノックアウトマウスでは、忌避が観察されなかった。以上の結果から、マウスTRPA1チャネルは、カフェインによって活性化されること、そして、TRPA1チャネルがカフェインを含む飲水の忌避行動に役割を果たしていることが明らかになった。
新潟県の新生児聴覚スクリーニング検査refer児の追跡調査

本研究では、全新生児対象の新生児聴覚スクリーニング検査について、人口225万人自治体地域の受検児の診断・療育・教育経緯について追跡を行い、その効果と課題を明らかにする。そのために新潟県の新生児聴覚スクリーニング検査において要精密検査(refer)となった児について、スクリーニング実施医療機関から精密検査実施医療機関までに至る状況、市町村や早期支援機関からの支援の有無、支援があった場合はその内容について保護者および教育等関係機関へアンケートやインタビューを行い確認する。この研究によって、新生児聴覚スクリーニング検査とそのfollow-up体制のモデルを提言していく。
WASPファミリー蛋白質によるダイナミックな細胞骨格再編

様々な細胞が様々な外部刺激を受けて、急激に細胞内骨格系を再編し、細胞の分裂に備えたり、細胞の運動性、遊走性を高めることは良く知られている。細胞の方向性を持った遊走は炎症性細胞の炎症部位への移動、癌細胞の浸潤、転移のみならず、個体発生や器官の形成にも必須な重要な生命現象である。我々は細胞内骨格系の再編や遊走に関与する分子としてWASP及びWAVEファミリー蛋白質を採り、アクチン重合への役割を解明してきた。これらの分子は全て、C-末にVCA(verprolin, cofilin-like, acidic)領域を持ちV領域にG-アクチンを結合し、CA領域にArp2/3複合体を結合させアクチンの核化、重合を促進する。一方、N-末側にはこれらの分子を調節する蛋白質が結合するサイトが存在する。N-WASPはWIP, WISH, Cdc42やPIP2と結合し,WAVEはIRSp53と結合することで,VCA領域が露出する。その結果、Arp2/3複合体が結合、活性化されることで、アクチンの重合が促進される。N-WASPはCdc42の下流にあって糸状仮足の構築に関わり、WAVEはRacの下流にあって葉状仮足の形成に関わると考えられている。細胞が遊走する際の先端部においてこれらの蛋白質は活性化され、糸状仮足、葉状仮足を生じて、細胞に推進力を与える。我々が以前に見いだしたN-WASPは多くの機能ドメインを持ち、特徴的なのは低分子量G蛋白質のCdc42結合モチーフであるGBD/CRIBドメインを持つことと、アクチン結合サイトとしてverplorin相同領域(V)及びArp2/3複合体結合部位のcofilin-likeとacidic(CA)の領域を持つことである。更に、我々はWASPのC末と相同性が高く、VCA領域を持つWAVEを3種類を見つけた。N-WASPがCdc42によって活性化され糸状仮足を形成するのに対し、WAVEはRacによって活性化され、葉状仮足を生じた。しかしWAVEはRacによって活性化されるものの、直接結合せず、RacとWAVEの間にシグナルを橋渡ししている分子があることを示唆した。極く最近、Racの下流にあってWAVEにシグナルを渡し、Arp2/3複合体の活性化を生じて、葉状仮足形成を促す分子を特定した。その分子はIRSp53という全く機能が分かっていない蛋白質であった。IRSp53は活性型のRacに特異的に結合し、さらにSH3ドメインでWAVEのプロリンに富む配列に結合して、WAVEを活性化し、膜ヘリクルートする蛋白質であった。WAVEにもVCA領域が存在し、Arp2/3複合体を介してアクチンの核化、重合を促進する。N-WASPがCdc42の下流にあって活性化され、糸状仮足形成を起すのに対し、WAVEはRacによって活性化され、葉状仮足を生じる。以上の研究成果より、これらWASPファミリー蛋白質は外界からの遊走シグナルを受けて、活性化され、遊走先端部でダイナミックなアクチン線維の再構築を引き起こし、細胞を直接移動させるキイの蛋白質であることが分かってきた。WASPファミリー蛋白質は全て、C末にVCA領域を持ち、Arp2・3複合体を結合、活性化してアクチンの急激な重合を引き起こし細胞骨格の再編を行う蛋白質群である。細胞が遊走する際の先端部ではメッシュ状のアクチン線維構造が見られ、枝分かれ構造部位にArp2・3複合体が存在する。細胞は運動する際にメッシュ状のアクチン線維を先端部に向けて伸ばし、これが細胞へ推進力を与える。しかしながらWASPファミリー蛋白質がいかにしてこのような構造構築に関わり、細胞に推進力を与えているのかは明らかではなかった。我々は推進力発生のモデルとして人工的にN-WASPをビーズに結合させ、脳の抽出液をかけるとビーズがアクチンのコメットを作って泳ぎだす系を利用した。