hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
側鎖を有するテトラセンの分子配列ライブラリーの構築と特異な固体光物性の探索

さらに、C7H11体では、結晶学的に構造が異なった分子が単位格子内に4つ存在していた(C5H7体は一種類であった)。C5H7体の固体色調は他の側鎖長の化合物に比べるとより赤色が濃い特徴が見られた。固体の反射スペクトルの測定からクベルカ-ムンク変換を行って吸収スペクトルの形式に変形すると、吸収端が他のものに比べ50nmは長波長側にシフトしていた。この原因をX線結晶構造における分子配列から調べた。C5H7体は他の結晶に比べ、テトラセン環の間の距離が短いこと、およびπ-オーバーラップがあることがわかった。この配列の違いにより、色調の長波長化と色の深みをもたらしたことが示唆された側鎖置換基の導入による固体状態での分子配列の変化とそれに伴って生じる固体状態の光物性の変化の機構の解明を図るために、テトラセンの外側のベンゼン環にエステル基を導入した分子、および、テトラセンの内部ベンゼン環にアルキニル基を導入した分子のライブラリー構築を行った。前者の分子において、プロピルとブチルエステル体を合成し有機固体の光物性を調べた。プロピル体でX線結晶構造解析を行った。後者の分子において、側鎖の炭素の個数が5から10個のものを合成した。X線結晶構造解析から、炭素の個数が少ない方がテトラセンの重なりが大きいことがわかったテトラセンの内側のベンゼン環に置換基を有する化合物の合成を進め、固体状態の光物性および分子配列について調べる。これまでに合成した分子のアルキル置換体の数を増やしたり追加、新しい置換様式の分子の合成の可能性について検討を行う。X線結晶構造解析が不可能な固体については粉末X線回折測定から分子配列に関する情報を取得するように努める。分子配列がわかったものに対してはDFT計算により分子間相互作用を調査する。テトラセンの内側のベンゼン環にアルキニル基を有する化合物のアルキル部分の長さを変えて合成を行い、固体状態の光物性および分子配列について調べる。新しい置換様式や共役骨格をもつ分子の合成の可能性について検討を行う。化学本研究課題で重要な役割を占めるX線回折計の不具合が2016年3月に発覚し、高額な修理の見積となった。修理を行うと2016年度の予算が不足し研究の遂行に問題を生じる可能性が出てきたため、残金を繰り越して2016年度の予算で修理を計画した。X線回折計のメーカーからX線管球を発注し交換を行う。その他の不具合箇所についても修理で対応を行う。
庄内藩主酒井家を中心とした諸大名の和歌・俳諧及び文事に関する研究

山形県鶴岡市致道博物館所蔵の、庄内藩第7代藩主酒井忠徳の和歌・俳諧資料は、大名の文事研究の基礎固めのために、全資料を漏れなく集成することを前提として、和歌・俳諧の二つに分け、和歌については、和歌資料目録と同翻字篇(詠草その他・短冊・書簡)に、また、俳諧についても、俳諧資料目録と同翻字篇(俳諧之連歌・一枚刷・詠草その他・短冊)にまとめ、それぞれに解説を付した。この忠徳の和歌資料は、大名家における和歌製作時の、また、和歌修業の実際を伝えるものであると同時に、冷泉家と日野家が入れ替る当時の堂上歌壇の変化を生々しく写したものであり、他に類例を見出しえない貴重な資料であることが判明した。また、俳諧資料は、断片類までの全てが、大名の点取俳諧の実際を具体的に伝えるものであり、この資料の出現によって、初めて大名の点取俳諧の実際、俳諧連歌の創作の場、宗匠と連衆達の遣り取り、点を付け、集計し、賞品を贈るという点取俳諧の手順の実際等々が明らかとなったといえる。長野県長野市松代藩文化施設管理事務所(真田宝物館)、および国文学研究資料館史料館所蔵真田家文書、並びに同館真田家寄託文書中の真田幸弘の和歌・俳諧資料の調査は、ようやく全体を見渡せる地点に達したといえるが、資料の蒐集整理は、その作業に着手したばかりである。現在の進捗状況を示しておけば、1,百韻620余巻分の詳細調査カード2,『引墨到来覚』の翻字(全7冊中の3冊分)3,『御側御納戸日記』全8冊よりの抄出翻字4,幸弘追善俳書『ちかのうら』の紹介5,和歌・俳諧・漢詩詠草類リストその他である。真田幸弘の俳諧資料は、総体では10万句を越える厖大なものであり、現時点において日本第一の大名点取俳諧資料だということができる。今後この真田家資料と酒井家資料とを重ねてみれば、大名の点取俳譜の全貌が見えてくる筈である。また、大名家の文事が、親しい大名仲間を核として、和歌・俳諧、さらには漢詩へと広がっていることが特に注目される。酒井家・真田家資料全体の調査研究を通して、新しい近世文学史の構築が期待できるように思う。研究はこれから始まるといってよいであろう。本年度は、庄内藩酒井家の和歌・俳諧関係資料の収集・検討として山形県鶴岡市致道博物館所蔵資料の調査整理・資料撮影・翻刻作業及びデータ化、また信濃上田真田家の和歌・俳諧資料の収集として長野県松代市松代藩文化施設管理事務所所蔵資料の調査整理・資料撮影、さらにワシントン議会図書館所蔵の大名関係資料の基礎的調査を行った。致道博物館所蔵資料については、書誌事項の調査などの基礎的作業をほとんど完了し、これまでに約3,800枚の写真撮影を終え、それをもとにした翻刻作業及びデータ化に着手した。

さらに、翻刻段階で問題となった難読箇所を検討するための原本調査を重ね、よりいっそう信頼のおけるデータ化を目指している。松代藩文化施設管理事務所所蔵資料の調査整理では、膨大な和歌・俳諧資料の基礎的整理に着手し、原本の書誌事項の調査とともに、約550枚の写真撮影を行った。これらは厖大な資料の一部にしか過ぎず、翻刻作業及びデータ化にむけて、さらなる原本調査と写真撮影による資料収集作業が必要である。これまでの作業によって、酒井家の残存書簡及び懐紙や手控帖の解読がすすみ、酒井家と日野・冷泉家といった京都堂上家との交渉の経緯が徐々に明らかになってきている。これらの交渉から近世和歌における指導の実態を看取することができ、そのことから近世和歌の成立と質的な転換についての展望がひらけてきた。これらを有意義な翻刻資料として刊行することを目指して、難読箇所の解読とともに、個々の書簡の年代推定や相互関係などについての調査をさらにすすめていきたい。本年度は、主として山形県鶴岡市致道博物館所蔵資料の写真をもとに翻刻及びデータ入力作業をすすめた。致道博物館所蔵資料については、昨年度までに約3,800枚の写真撮影が完了している。これらの写真を整理・点検し、資料写真の各々について翻刻等諸作業の進捗状況を把握できる表を作成した。また、資料の難読箇所やデータ化の問題点について検討を重ねながら、データ入力要領の凡例を作成し、この要領に従ってデータ蓄積を続けている。松代藩文化施設管理事務所(真田宝物館)所蔵資料については、昨年度に引き続き書誌事項調査・資料整理と写真撮影を行った。翻刻作業とデータ化にも着手したが、膨大な資料群の全体像を明らかにするには、今後さらに調査を継続する必要がある。他のコレクションに関しては、高知県立図書館、高知市立市民図書館、浜松市立賀茂真淵記念館、芦庵文庫、岐阜県加茂郡富加町郷土資料館において、大名関係資料の基礎的調査を行った。二年間の調査、整理、翻刻作業によって、庄内藩酒井家の書簡類、懐紙、手控帖等の解読がすすみ、酒井忠徳と日野、冷泉両家との交渉の経緯が明らかになりつつある。江戸時代中期の京都堂上家による和歌指導のあり方を看取できる資料群と、酒井家を中心とした諸大名家の和歌、俳諧及び文事の実態を解明するための基礎資料が集成されつつあり、これらを有意義な翻刻資料として公開・刊行することを目指し、来年度は出版への日程を考慮しながら作業を継続したい。本年度は、主として山形県鶴岡市致道博物館所蔵資料の写真をもとに翻刻及びデータ入力作業を行い、出版を視野に入れた目録作成の準備を進めた。致道博物館所蔵資料について、これまでに撮影した写真をもとに、約110点の俳諧資料、約6300首の和歌短冊、約200点の書簡、その他周辺資料の翻刻作業を終えている。今後はこれらのデータをもとに、資料翻刻を付した詳細な目録を作成する予定である。写真では判別しにくい資料の難読箇所について、致道博物館に赴き、原典とつき合わせて確認する作業を行ったが、出版目録のクオリティを保証するためにはこの作業をさらに重ねる必要がある。松代藩文化施設管理事務所(真田宝物館)では、原典を直接手に取りながら、大名点取俳諧の膨大な資料についての詳細な書誌カードを作成している。それと平行して、これらの書誌カードをデータ化する作業を進めている。真田藩下で頻繁に行われていた「百韻」「二百韻」の点取俳諧の詠者名及び点者名について、その全てをデータ化することができれば、近世における点取俳諧の実態を解明する貴重な資料となると思われる。また、この他に、ワシントン議会図書館所蔵の大名俳諧関係資料の調査を行った。最終年度に当たる来年度は、庄内藩酒井家歌俳資料についての目録及び翻刻の内容を確実なものとし、それを研究報告書として公表する。
不斉な結晶場を利用した固相不斉反応

不斉選択性の高い新規な固相不斉反応の開発を目的として研究し下記の結果を得た。(1)各種のγ-シアノプロピルコバロキシム錯体は、固相で光照射する際、β-置換錯体を経て一方向的にα-置換錯体へ異性化すること、不斉な結晶格子に制御された不斉光異性化反応がおこり、最高91%eeの不斉選択率で光学活性α-シアノプロピルコバロキシム錯体が生成すること、その際、一般に、反応速度は1段階目より2段階目の方が大きい、また、不斉収率も、1段階目より2段階目の方が高いことなどを明らかにした。更に、γ-シアノプロピル錯体の結晶構造に基づいて描かれた反応空間の形から優勢に生成するエナンチオマーを予測できることを明らかにした。更に単結晶を用いた反応系で、経時的にX線結晶構造解析を行い、反応基の動きを詳細に直接観測する事に成功した。(2)一方、γ-位に比較的大きな置換基を導入したγ置換プロピルコバロキシム錯体の反応を検討したところ、γ-シアノ系列の場合と異なり第1段階の速度定数k1より第2段階の速度定数k2の方が小さいという異常な結果が得られた。また、この系列の錯体のX線結晶構造解析によりその理由を明らかにした。(3)平面配位子に嵩高い置換基を導入したシアノエチルコバロキシム錯体の反応では、従来の錯体に比して反応速度が著しく向上する反面、不斉選択性は極めて低いという問題点が生じた。そこで、反応空間を適度に充填するため反応基を適度に嵩高くした2-methoxycarbonylethyl錯体を用いて反応を検討した結果、高い不斉選択性(例えば、平面配位子の置換基がフリルで、軸配位子が(S)-phenylalaninolの場合81%ee)が達成された。また、構造解析の結果、その原因は反応基が上方から圧縮されてキラルなコンホメーションを強要されていることに帰せられた。(4)δ-置換ブチル錯体の固相光反応でも、逐次γ、βを経由してα錯体に異性化することを明らかにした。先に、光学活性軸配位子を配位したβ-置換エチルコバロキシム錯体(β-位の置換基:シアノ基、メトキシカルボニル基域いはカルバモイル基)に固相で光照射すると(β→α)不斉光異性化反応が起こり、対応するα-置換エチルコバロキシム錯体が最高88%eeの不斉選択率で生成することを明らかにしている。そこで、基質の平面配位子、軸配位子、アルキル残基を変えた新しいアルキルコバロキシム錯体を合成するとともに、それらの固相光反応を検討し不斉選択性の高い、新規な固相不斉反応を開発することを目的として研究を行い、今年度は次に記述するような成果を得た。先ず、(1)β-位の置換基として数種のN-置換カルバモイル基を有する錯体で同上の反応が起こることを見いだした。また、(2)各種のγ-シアノプロピルコバロキシム錯体を合成し、固相におけるそれらの光反応を検討した結果、β-置換錯体を経て一方的にα-置換錯体へ異性化することを明らかにした。

更に、結晶格子をキラルにするためのキラルハンドルとして、光学活性アミン[(R)-2-aminobutanol(a),(S)-2-phenylalaniol(b),(R)-1-phenylethylamine(c),(R)-2-phenylglycinol(d),(S)-1-cyclohexylethyamine(e)など]をaxialに配位させたγ-置換プロピル錯体を合成し、それらの固相光反応を検討したところ、キラルな結晶格子に制御された固相不斉光異性化反応が起こり、光学活性α-シアノプロピルコバロキシム錯体が室温で最高71%ee、-70°Cで最高91%eeの不斉選択率で生成することを明らかにした。反応速度は1段階目(γ→β)より2段階目(β→α)の方が大きい、また、不斉選択率も、eを配位した錯体以外は全て第1段階目よりは第2段階目の方が高いという興味ある結果が得られた。昨年度の研究で、各種の光学活性アミンをaxialに配位させたγ-シアノプロピルコバロキシム錯体に固相で光照射すると、β-置換錯体を経て一方向的にα-置換錯体へ固相不斉光異性化反応が起こり、光学活性α-シアノブロピルコバロキシム錯体が最高91%eeの不斉選択率で生成することを明らかにした。その際、反応速度は1段階目より2段階目の方が大きい、また、不斉選択率も、第1段階目よりは第2段階目の方が高いという興味ある結果を明らかにした。今年度は、更に新規な固相不斉反応を開発すること並びに不斉選択機構を明らかにすることを目的として研究を行い、次に記述するような成果を得た。(1)今回新規に合成し光反応を検討したγ-シアノプロピル錯体の中で、(S)-1-cyclohexylethylamine並びに(S)-l-benzyl-3-aminopyrrolidineを配位した錯体の場合、これまでの一般的な傾向と異なりβ錯体の不斉収率の方がα錯体のそれより大きいという異常な結果が得られた。(2)各種のγ-シアノプロピルコバロキシム錯体のX線結晶構造に基づいて描かれた反応空間の形により、生成するα錯体の優勢なエナンチオマーを予測できることを明らかにした。(3)(1)で記述した異常な結果をもたらす機構を明らかにするため単結晶に光照射し、経時的にX線結晶構造解析を行った結果、まず、反応基のコンホメーションが変化し次いでβ錯体が生成することを直接観測することに成功した。このことにより一連のγ-シアノプロピル錯体の反応において中間に生成するβ錯体の立体配置を明確にすることができた。(4)平面配位子に嵩高い置換基を導入した新規β-シアノエチル錯体の固相光反応を検討した結果、この系列の錯体では、従来の錯体に比して反応速度が著しく向上すること、並びにその原因は反応空間が拡大しているためであることをX線構造解析に基づいて明らかにした。昨年度までの研究で、各種のγ-シアノプロピルコバロキシム錯体は、固相で光照射する際、β-置換錯体を経て一方向的にα-置換錯体へ異性化すること、不斉な結晶格子に制御された不斉光異性化反応がおこり、最高91%eeの不斉選択率で光学活性α-シアノプロピルコバロキシム錯体が生成すること、その際、一般に、反応速度は1段階目より2段階目の方が大きい、また、不斉収率も、1段階目より2段階目の方が高いことなどを明らかにした。更に、γ-シアノプロピル錯体の結晶構造に基づいて描かれた反応空間の形から優勢に生成するエナンチオマーを予測できることを明らかにした。更に単結晶を用いた反応系で、経時的にX線結晶構造解析を行い、反応基の動きを詳細に直接観測する事に成功した。本年度は更に検討を進めて以下に記述するような成果を得た。(1)γ-位に比較的大きな置換基を導入したγ置換プロピルコバロキシム錯体の反応を検討したところ、γ-シアノ系列の場合と異なり第1段階の速度定数k1より第2段階の速度定数k2の方が小さいという異常な結果が得られた。
末梢血成熟単核球からのCD34陽性細胞の誘導〜血球の戻り分化は存在するか〜

【目的】末梢血単核球を固相化CD3抗体とIL-2を用いて強く活性化させるかあるいは同様に末梢血CD4陽性細胞を活性化培養した培養上清にて末梢血単核球を培養するとCD34陽性細胞が出現してくる現象を発見した。本研究において、この末梢血単核球から出現してくるCD34陽性細胞が造血幹細胞としての機能を持つのかどうか、また造血細胞移植の第3の幹細胞ソースになり得るのか明らかにすることを目的とする。【方法】成人ボランティアより採血した血液からFicol比重遠心法にて単核球を分離した。RPMI 1640を基礎培地とする培養液にインスリン、ピルビン酸、オギザロ酢酸、IL-2を添加し、CD3抗体で固相化したフラスコにて7日間の培養を行った。7日後に細胞を回収し、フォローサイトメトリーにて表面抗原解析を行い、CD34陽性細胞の出現率を算出した。CD34陽性細胞の造血機能検査として、コロニー形成能とNOD/SCIDマウスへの移植による長期造血再構築能を検討した。【結果】【考察と結論】この現象はあらかじめT cellを活性化した培養上清にても再現することができることから、活性化T cellが産生するサイトカインに末梢血単核球からCD34陽性細胞を出現させる機能をもつものが存在すると考えられる。この細胞は造血幹細胞としての機能を有し、移植医療に貢献できるものと考えられる。固相化OKT-3(オルソクローン)+IL-2+活性化CD4陽性細胞の培養上清を用いて成人の末梢血単核球を培養するとCD34陽性細胞が出現してくる。この細胞の表面抗原を詳細に検討すると、約半数はCD3陽性であるが、CD3陰性分画においては、CD45弱陽性、CD117陽性、HLA-DR陽性、CD38陽性で造血幹細胞と同様の表面抗原を示した。CD34陽性細胞をソーティングし、コロニー形成能を行なうとCFU-GM, BFU-E, CFU-Mixなど全ての系統のコロニーが形成された。またin vivoでの造血再構築能を調べるため、NOD/SCIDマウスの拒絶モデルを作成し、臍帯血単核球から分離培養した活性化したCD4陽性細胞輸注群、活性化したCD8陽性細胞輸注群においてのヒト細胞キメリズムを比較した。活性化CD4陽性細胞輸注群のみで生着を確認し、末梢血、骨髄、脾臓、リンパ節へのヒト細胞生着を確認した。また本年度は活性化されたCD4陽性細胞に造血刺激サイトカインが存在するという仮説を立てて、既存のサイトカイン72種類についてウエスタンブロッティング法により網羅的に解析した。その結果、活性化されたヒト末梢血CD4陽性細胞は35種ものサイトカイン、ケモカインを産生することが確認された。これらのサイトカインの組み合わせにおいて末梢血からCD34陽性細胞が出現されるかどうか追試を行なっているところである。
高性能腸内細菌培養装置による生体大腸における異常腸内細菌叢の是正戦略を立てる

潰瘍性大腸炎は、大腸内側の粘膜に炎症が起きる事でびらんや潰瘍ができる病気であり、再発する場合が多い。潰瘍性大腸炎患者の腸内細菌叢は、健常人と比べて構成が異なっている事(dysbiosisと呼ばれている)が知られている。しかし、患者の腸内細菌叢を是正する事は容易ではなく、その評価系の構築が求められていた。我々は高性能ヒト腸内細菌叢培養装置を世界で初めて構築し、健常人の腸内細菌叢種を網羅したモデルを構築してきた。そこで本研究においては、潰瘍性大腸炎患者のヒト大腸細菌叢モデルを構築し、dysbiosisを是正する候補投与物を探索する事を目的とした。潰瘍性大腸炎患者の臨床検体(糞便)を使用して、モデルを作成した。その結果、潰瘍性大腸炎患者モデルは健常人モデルと菌叢構造が異なっており、特にLachnospiraceaeに関連する菌の割合が有意に減少していた。この結果は、臨床検体で得られた結果と一致していた。すなわち、潰瘍性大腸炎患者のdysbiosis状態をIn vitro系内に再現する事に成功した。また、潰瘍性大腸炎患者モデルは健常人モデルと比べて、酪酸生成量が有意に減少している事を世界で初めて明らかとした。酪酸は大腸抹消由来Treg(制御性T細胞)分化の促進活性を有している事が知られており、潰瘍性大腸炎患者ではTreg細胞数が減少している事が示唆された。何よりも、潰瘍性大腸炎の病勢pMayoスコアが高い患者からpMayoスコアが低い患者に至るまで、一律にLachnospiraceae科に関連する菌の割合が腸内細菌叢において低かった。すなわち、潰瘍性大腸炎患者はpMayoスコアの違いに関わらず、腸内細菌叢はdysbiosis状態が継続されており、本疾患が再燃・寛解を繰り返す事と腸内環境異常が関与している事が示唆された。候補投与物の添加効果については以下で述べる。我々は潰瘍性大腸炎患者のヒト大腸細菌叢モデルをin vitro系内に再現する事に世界で初めて成功し、酪酸生成の減少を観察した。酪酸はヒト腸管内では吸収されてしまうが、in vitro系内では吸収されないため本モデルにおいて酪酸生成の傾向を検出する事が可能となった。既報により潰瘍性大腸炎患者は低級脂肪酸の生成が減少する事が知られており、本結果は既報と一致する。現在、医療の現場において潰瘍性大腸炎に対しては5-アミノサリチル酸製剤が治療薬として用いられている。しかし患者は治療薬の投与に関わらず、腸内細菌叢のdysbiosis状態が継続されている事を我々の結果は示唆してきた。そこで腸内細菌叢を改善するプレバイオティクスを投与する事は、治療薬の効果を補完する処方として期待される。一方、腸炎モデルのラットに対してClostridium butyricum MIYAIRIを投与する事が、ラット腸内の酪酸産生を増加させる事が知られている。そこで、我々が開発した潰瘍性大腸炎患者のヒト大腸細菌叢モデルにC. butyricum MIYAIRIを投与した。その結果、酪酸生成が改善されており、C. butyricum MIYAIRI投与の有用性が示された。潰瘍性大腸炎に対して効果的な投与物を得ているため、当初の計画以上に進展している。潰瘍性大腸炎患者の腸内細菌叢は酪酸生成能が低下している事が明らかとなった。そこで、酪酸生成関連の遺伝子に着目して、解析を進める。候補投与物はヒトへの内服が可能である。そこで、潰瘍性大腸炎患者に対して効果の認められた添加物を内服し続けてもらい、腸内において発酵プロファイルの変化が認められるか確認する。将来的に、患者の治療戦略構築に役立てる。

すなわち、潰瘍性大腸炎患者はpMayoスコアの違いに関わらず、腸内細菌叢はdysbiosis状態が継続されており、本疾患が再燃・寛解を繰り返す事と腸内環境異常が関与している事が示唆された。候補投与物の添加効果については以下で述べる。我々は潰瘍性大腸炎患者のヒト大腸細菌叢モデルをin vitro系内に再現する事に世界で初めて成功し、酪酸生成の減少を観察した。酪酸はヒト腸管内では吸収されてしまうが、in vitro系内では吸収されないため本モデルにおいて酪酸生成の傾向を検出する事が可能となった。既報により潰瘍性大腸炎患者は低級脂肪酸の生成が減少する事が知られており、本結果は既報と一致する。現在、医療の現場において潰瘍性大腸炎に対しては5-アミノサリチル酸製剤が治療薬として用いられている。しかし患者は治療薬の投与に関わらず、腸内細菌叢のdysbiosis状態が継続されている事を我々の結果は示唆してきた。そこで腸内細菌叢を改善するプレバイオティクスを投与する事は、治療薬の効果を補完する処方として期待される。一方、腸炎モデルのラットに対してClostridium butyricum MIYAIRIを投与する事が、ラット腸内の酪酸産生を増加させる事が知られている。そこで、我々が開発した潰瘍性大腸炎患者のヒト大腸細菌叢モデルにC. butyricum MIYAIRIを投与した。その結果、酪酸生成が改善されており、C. butyricum MIYAIRI投与の有用性が示された。潰瘍性大腸炎に対して効果的な投与物を得ているため、当初の計画以上に進展している。潰瘍性大腸炎患者の腸内細菌叢は酪酸生成能が低下している事が明らかとなった。そこで、酪酸生成関連の遺伝子に着目して、解析を進める。候補投与物はヒトへの内服が可能である。そこで、潰瘍性大腸炎患者に対して効果の認められた添加物を内服し続けてもらい、腸内において発酵プロファイルの変化が認められるか確認する。将来的に、患者の治療戦略構築に役立てる。想定以上に研究が進捗したため。
非病原性ウイルスを用いた魚類ウイルス病のバイオコントロール

本年度に得られた研究結果は以下のように要約される。1)アクアビルナウイルス(ABV)の投与法浸漬法,経口法および注射法によりABVをマハタ稚魚に投与し,経時的にウイルス感染価(腎臓および脳)を測定した。その結果,注射法(10^7TCID_<50>/fish)でのみ,接種3,7および14日後に10^<3.7-4.>TCID_<50>/gのウイルスが検出され,21および28日には検出限界以下となった。2)ABVとワクチンの同時接種による感染防御効果ABVおよび不活化ベータノダウイルスワクチンをマハタ稚魚に接種(注射)し,3,7,14,21および28日後にベータノダウイルス(RGNNV)による注射攻撃をおこない,ウイルス性神経壊死症に対する感染防御効果を調べた。実験区として,(1)ABV単独区,(2)不活化ワクチン単独区,(3)ABVと不活化ワクチン混合区,および(4)対照区の4区を設定した。べータノダウイルスに対する中和抗体を測定した結果,(2)区および(3)区で,接種14,21および28日後にほぼ同程度の抗体価が得られた。即ち,1:100(14日),1:500(21日)および1:900(28日)であった。攻撃試験の結果、(1)区は接種3,7,14および21日後の攻撃に対して,(2)区では接種21および28日の攻撃に対してそれぞれ防御反応を示し、(3)区では328日のいずれの攻撃に対しても強い防御反応を示した(RPS=60以上)。以上の結果から、ABVと不活化ワクチンを同時に接種することにより,ABVによる速やかな非特異的防御とワクチンによる長期間におよぶ特異的防御が賦与されることが明らかとなった。本剤(ABV添加不活化ワクチン)はウイルス性神経壊死症に対する優れたワクチン製剤となるであろう。本年度実施した研究結果は以下のように要約される。(1)マハタに対するアクアビルナウイルス(ABV)の病原性当初の計画ではマハタ仔魚に対するABV(FBV株)の病原性を検討する予定であったが、本種の種苗生産が不調であったため、仔魚を用いた実験は実施できなかった。魚体通過による病原性獲得の有無をみるため、RTG-2細胞で培養したFBV株をマハタ稚魚(体長約15cm)の筋肉内に接種し(10^7TCID_<50>/fish、各5尾供試)、接種3日後に腎臓からウイルスをRTG-2細胞で分離した。この魚体通過操作を計10回行なった後、分離ウイルスを10^7TCID_<50>/fishマハタ稚魚に接種し、2週間(水温25°C)観察した結果、実験魚に病的徴候は認められなかった。コイヘルペスウイルス病へのABVの応用を目的として、ABV(FBV株)のコイ(マゴイ)に対する病原性を筋肉内注射法(10^7TCID_<50>/fish)により調べた結果、FBV株はマゴイに対して病原性を示さなかった。(2)魚体内でのABVの動態上と同様、FBV株を10^7TCID_<50>/fishマハタ稚魚に接種し、接種3,7,14,21,28日(水温25°C)に、RTG-2細胞を用いて腎臓内ウイルスを定量した(各5尾供試)。その結果、3日後では5尾中3尾から平均10^<4.9>TCID50/g(腎臓>でFBVが検出され、10^<3.9>TCID_<50>/g(7日後)、10^<3.7>TCID<50>/g(14日および21日後)と減少し、28日後には検出限界以下(10^<2.6>TCID_<50>/g)となった。一方、ヒラメ稚魚(約10g)では、FBV株を10^7TCID_<50>/fish筋肉内接種された魚の腎臓におけるウイルス力価はかなり高く、3-14日後で平均^<4.5-7.5>TCID_<50>/g、21日後でも平均10^<4.7>TCID_<50>/gであった。マゴイでのウイルスの消長は未検討。(3)コイヘルペスウイルスに対するABVの感染防御効果コイ(マゴイ)にABV(FBV株)を筋肉内注射し(10^7TCID_<50>/fish)、接種3日後にコイヘルペスウイルスによる攻撃試験を行なった結果、実験区とABVを接種しなかった対照区との間の死亡率に有意差は認められなかった。

2)ABVとワクチンの同時接種による感染防御効果ABVおよび不活化ベータノダウイルスワクチンをマハタ稚魚に接種(注射)し,3,7,14,21および28日後にベータノダウイルス(RGNNV)による注射攻撃をおこない,ウイルス性神経壊死症に対する感染防御効果を調べた。実験区として,(1)ABV単独区,(2)不活化ワクチン単独区,(3)ABVと不活化ワクチン混合区,および(4)対照区の4区を設定した。べータノダウイルスに対する中和抗体を測定した結果,(2)区および(3)区で,接種14,21および28日後にほぼ同程度の抗体価が得られた。即ち,1:100(14日),1:500(21日)および1:900(28日)であった。攻撃試験の結果、(1)区は接種3,7,14および21日後の攻撃に対して,(2)区では接種21および28日の攻撃に対してそれぞれ防御反応を示し、(3)区では328日のいずれの攻撃に対しても強い防御反応を示した(RPS=60以上)。以上の結果から、ABVと不活化ワクチンを同時に接種することにより,ABVによる速やかな非特異的防御とワクチンによる長期間におよぶ特異的防御が賦与されることが明らかとなった。本剤(ABV添加不活化ワクチン)はウイルス性神経壊死症に対する優れたワクチン製剤となるであろう。
光応答性酸素発生機能を有するトキイロヒラタケ由来の色素タンパク質の構造研究

光応答的に酸素分子を発生するトキイロヒラタケ由来色素タンパク質の遺伝子同定とクローニングを行うと共に、酸素発生活性の測定と結晶構造解析を行うため、子実体からタンパク質試料の調製と結晶化を行った。結晶構造解析の結果、従来色素タンパク質に結合していると発表されていた色素に相当する分子は観測されなかったが、これまでの研究では明らかにされていなかった新規の直鎖状色素分子が色素タンパク質に含まれていることを発見した。光応答的に酸素分子を発生するトキイロヒラタケ由来色素タンパク質の結晶構造解析によって、活性中心の構造と酸素発生メカニズムの解明を目指す。色素タンパク質を構築する2種類のポリペプチド鎖のうち、1種類については立体構造が解析されているので、もう一つのサブユニットを含んだ全体の構造を明らかにする。また、すでに報告されている酸素発生活性の再確認と、トキイロヒラタケ子実体から遺伝子の塩基配列の決定から試料調製、結晶化、構造解析まで行う。平成22年度は次の4点について計画していた。1.色素タンパク質遺伝子同定と塩基配列の決定、2.試料調製、3.酸素発生活性測定、4.色素タンパク質の結晶化。1についてはRNAからcDNAクローンを作成し、それを元に塩基配列の決定に成功した。2については試料調製を行い、吸収スペクトルから判断して従来と同一の物が得られることが判明した。3については現在の所、活性を示すクロマトグラフィー画分を再現性良く得ることには至っていない。また、活性に関与する電気泳動バンドを特定することが出来ていない。4については結晶化実験には至ったが、結晶は得られていない。これは3の結果がはっきりとしないため、必要なサブユニットを全て含む試料を調製出来ていないことが原因である可能性がある。従って、1と2については目的を達成することが出来たが、3と4についてはまだ完全には達成できていないため、引き続き23年度に活性に関与するタンパク質またはサブユニットの同定と結晶化を行う必要がある。本研究課題では主に以下の3点に絞って研究を計画していた。2-1試料調製、2-2酸素発生活性測定、3-1ヘテロダイマーの結晶化、3-2ヘテロダイマー結晶のX線回折実験、3-3旧結晶化条件で得られた結晶構造の精密化上記項目の内、2-1と2-2については目的をほぼ達成したが、3-1については平成23年度中には結晶化に成功しなかった。そのために3-2の遂行には至っていない。3-3については、構造精密化の過程で、これまでに知られていなかった物質が色素タンパク質内部に含まれていることが明らかになった。この物質の同定はまだ出来ていないが、おそらく色素分子であると推察される。ペプチド部分の精密化作業は完了したが、この新規分子の同定が完了しなければ全体の精密化を完了することが出来ないため、同定のための準備を進めている。平成23年度までの研究で、精製試料のSDS-PAGE上で2つのバンドが現れており、これがヘテロダイマーの両サブユニットであると予想して研究を進めてきた。しかし、X線結晶構造解析の結果、結晶中には1種類のサブユニットしか含まれていなかったため、SDS-PAGE上で2つのバンドに分かれたのは精製中に分解した産物または不純物が含まれている可能性が考えられた。そこで、結晶のSDS-PAGEと再結晶化を行うと共に、大腸菌発現系を構築することでSDS-PAGEのパターンがどのようになるか調べた。その結果、結晶のSDS-PAGE上には低分子量側のバンドはほとんど現れず、大腸菌発現系によって得られた試料では高分子量側だけの単一のバンドが現れたので、高分子量側のバンドが結晶化した色素タンパク質サブユニットであることが分かった。従って、低分子両側のバンドは他方のサブユニットではなく、分解産物である可能性も考えられる。従来の結晶化条件では片方のサブユニットだけが選択的に結晶化してしまうので、両サブユニットを含む結晶化条件の検索を行ったが、得られた結晶ではすべて1種類のサブユニットしか含まれていなかった。そこで新たな結晶化条件を検討するため、市販の結晶化スクリーニングキットを用いて結晶化条件の検索を行った。その結果、従来とは異なる結晶化条件を見出した。新規結晶化条件で得られた結晶について、構造解析を行った結果、従来型と同型の結晶であり、立体構造も同様であった。研究実績の概要で記した、3-1ヘテロダイマーの結晶化の項目が平成23年度中には目的を達成できなかった。それによってそれ以降の計画を遂行できなかった。24年度が最終年度であるため、記入しない。

平成23年度中に達成できなかった3-1の項目以降について引き続き結晶化のための研究を遂行する。結晶が得られなかった理由の一つとして、試料の純度が結晶化に十分ではなかったことがあげられる。そのため、精製方法の更に検討し、より高純度の試料を調製することを目指す。また、色素タンパク質内部に見つかった新規分子の同定を行い、構造精密化を完了させる。24年度が最終年度であるため、記入しない。
マウス胚の着床期におけるスペーシング機構の解明

哺乳動物全般で、自発性流産の回避は種の保存および食資源動物の生産性の向上にとって必要不可欠のものである。胚(胎子)の自発性流産は、着床期に頻度が最も高いことが知られており、着床期自発性流産の解決は次世代の食糧確保、稀少動物の資源確保にとって不可欠の難題である。このような観点から、本研究では着床期における胚のスペーシング機構について、遺伝子、蛋白質レベルでの解析を行い、着床機構の全貌を明らかにすることを目的とした。平成17年度には、マイクロアレイ法によって得られた約1kbsの長さを持つ遺伝子についてタンパク質レベルでの解析を行った。まず、遺伝子配列からORFを予測し、ウサギを使ってポリクローナル抗体を作製した。次に常法に従い、着床遅延マウスを作製した後、白血病阻止因子(LIF)を投与して1時間後、3時間後、および6時間後の組織標本を作製し、免疫組織化学を行った。結果、1時間後および3時間後の子宮上皮に強いシグナルが認められた。その後、作製した抗体を用いて、着床阻害試験を行った。抗血清現液、2倍濃縮、および4倍濃縮した液を10マイクロリットルずつ、片側子宮内に投与し、もう片方の子宮には正常ウサギ血清及び、同濃縮した血清を対照群として投与した。結果、抗血清を投与した群で有意に着床が阻害された。現在は、トランスクリプトームとプロテオームの違いについて検討し、スペーシング機構が概観として転写レベルでの制御に支配されるのかそれとも翻訳レベルの制御が強いのかについて調べている。自発性、習慣性流産の90%以上は種を問わず着床期に起こり、この障害が動物の種の保存、動物食資源の効率的な配分に対する障壁になっていることは疑いの余地がない。着床期流産の回避は、動物食資源の確保という点から極めて重要な問題であるが、胚着床の制御機構が不明瞭なため抜本的な対策が取れない現状にある。このような観点から、我々は胚着床の分子機構を明らかにすべく、本研究では特に胚のスペーシング機構を明らかにすることを目的とした。本年度は着床期における胚のスペーシング機構について遺伝子、蛋白質レベルでの解析を行った。研究開始時点までに選定した二つのESTクローンおよび既知の二つの分子について解析を行った。二つのESTクローンについてはcDNA全長配列の決定を行うとともに、定量PCR法を用いてマイクロアレイデータの発現パターンを確認した。全長配列の決定によりopenreading frameを推定したところ、それぞれ分子量約0.5kと1kの小さなタンパク質であった。さらにrecombinantタンパク質を作製した。これを用いてポリクローナル抗体の作製を行っている(17年度完成目標)。既知の二つの分子についても定量PCR法によりマイクロアレイデータの確認を行い、さらに同分子に対する抗体の作製を行っている(17年度完成目標)。本年度はさらに、二次元電気泳動法を用いて着床期に発現量の上昇するタンパク質の同定を行った。結果、4つのタンパク質スポットを抜き出した。現在、N末端配列の決定を行っている(17年度完成目標)。
ヒト消化管ストローマ細胞腫瘍(GIST)とc-kitの変異

がん原遺伝子c-kitはレセプクーチロシンキナーゼ(KITレセプター)をコードしており、そのリガンドはSCF(stem cell factor)である。c-kit遺伝子にはSCFが結合しなくてもKITレセプターの活性が亢進する機能獲得性の突然変異が存在するが、われわれは消化管ストローマ細胞腫瘍(GISTs)に高頻度にc-kit遺伝子の機能獲得性突然変異が見られることを明らかにした。最近GISTsの多発する2家系を見つけたので、本研究ではこの2家系の腫瘍発生にc-kit遺伝子の変異がどのように関与しているのか調べた。違うタイプではあったが、どちらの家系の患者の腫瘍組織にも傍細胞膜領域をコードする部分のc-kit遺伝子に突然変異が見つかった。患者の末梢血白血球または正常組織から得たgenomic DNAにも腫瘍組織でみられたのと全く同一のc-kit遺伝子の突然変異がみつかったことから、この突然変異はgermlineでの突然変異であることが明らかになった。上記の変異型KITレセプターはSCFで刺激しなくてもリン酸化が強く見られ、変異型c-kit cDNAはIL-3依存性に増殖するマウス前リンパ球培養細胞株Ba/F3細胞を自律的に増殖させるようになったことから、機能獲得性の変異であることが示された。患者の正常様に見える消化管壁には、筋間神経叢の部分にびまん性の紡錘状細胞の過形成が見られ、これらの細胞は免疫染色によりKITレセプター・陽性・CD34陽性であることがわかり、カハールの介在細胞由来であると考えられた。以上から、c-kit遺伝子のgermlineにおける機能獲得性突然変異は、家族性にカハールの介在細胞の瀰漫性過形成を起こし、これを母地に多発性のGISTsが発生すると考えられた。カハールの介在細胞の瀰漫性過形成から多発性のGISTsが発生するためには、何らかの遺伝子異常の集積が必要と考えられ、今後詳細な解析によりこれらの家系における腫瘍発生機構を解明したい。
データ利活用知識構造化と再利用による意思決定支援システムの研究

異なる領域のデータを組み合わせることで新たな知識を獲得し、新規ビジネスの創出や価値の創造という潜在的な可能性に期待は高まっている。組織内・外で蓄積した保有データを活用し、新事業の創出や既存サービスの付加価値向上の動きや取り組みを始めている企業も出てきている。一方で、データをどう使っていいのか分からない、データを使うことによりどのような問題が解決可能であるのか、というデータ利活用知識を構造化し再利用する仕組みは十分ではない。データ駆動型イノベーションの促進には、データ市場の仕組みを理解するとともに、利用価値のあるデータの利用方法を知り、どのような仮説が検証可能かということを議論するプラットフォームと、データ利活用知識を蓄積し再利用する技術が必要となる。本研究では、データ市場の仕組みとデータ利活用方法の検討による価値化プロセスを理解し、提案手法の有用性を評価するため、実際のデータ市場に参画するステークホルダー(実業家、研究者、分析者など)を参加者とした実験的データ市場を設計した。そして、データ市場に関わる様々なステークホルダーの意図や目的が反映される要求とデータ利活用案をデータ利活用知識として構造化し、ステークホルダー間の創造的コミュニケーションによるデータ価値化とデータ市場創出を支援する技術を開発した。平成28年度に全18回のデータ利活用方法検討ワークショップを実施。研究成果の一部は、英文ジャーナル論文3件、和文ジャーナル論文1件及び3件の査読付き国際学会にて発表。平成28年度の東京大学大学院工学系研究科長賞(社会貢献)を受賞。東京大学大学院リーディングプログラム「社会構想マネジメントを先導するグローバルリーダー養成プログラム(GSDM)」にてGSDM Student Leadership Awardを受賞。平成29年3月に博士課程修了。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
看護理論と看護倫理に支えられた看護管理に関する研究

A県看護協会主催の看護学生実習指導者講習会および認定看護管理者教育ファーストレベル受講者207名およびA県内200床以上の病院の看護部長105人を対象に、留置法による質問紙調査を実施した。対象者には、倫理的配慮のもと同意が得られた者のみ回答を得た。調査内容は、看護理論及び看護倫理教育の有無、看護理論の活用状況、看護理論、看護倫理、看護管理についての意識等である。有効回答数はそれぞれ161名(回収率77.7%)、58名(回収率55.2%)であった。看護基礎教育時に看護理論の授業があった者は125名(77.6%)で、看護倫理の授業があった者は96名(59.6%)であった。院内教育プログラムに看護理論に関する内容があった者は74名(46.0%)で、看護倫理に関する内容があった者は76名(47.2%)で、参加した者はどちらも4割に満たなかった。「患者看護ケア時に病院全体で統一した看護理論を使用しているか」の問いに対し、統一した看護理論を使用しているが32人(55.2%)、病棟ごとに使用する看護理論は異なるが7人(12.1%)であった。看護理論を看護ケァに多少なりとも関連づけているのは67%であった。意識調査では、「病棟全体で同じ看護観を持つ必要はない」と思うものとそうでないものとは半々であった。「患者ケアでは看護過程を踏むべきである」とするものが多かった。ケアの成果を的確に把握するという過程を常に踏むことが求められ、その基盤を看護理論の基礎的概念が提供してくれることの意義・重要性を再度認識し、看護実務者全員に浸透させる手段を管理者の立場から遂行していく必要がある。看護基礎教育をベースに臨床現場で実際に活用できるような具体的学習の機会と継続的な教育が重要だと示唆された。平成18年6月10月にA県看護協会主催の看護学生実習指導者講習会および認定看護管理者教育ファーストレベル受講者207名へ質問紙調査を実施した。対象者には本研究の目的を文書及び口頭にて説明した。調査内容は、看護理論及び看護倫理教育の有無、看護理論の活用状況、倫理委員会の有無、看護理論及び看護倫理に対する意識等である。調査の結果、有効回答数161名(回収率77.7%)で、対象の平均年齢36.9歳、臨床経験は15年以上が70名(43.5%)であった。看護基礎教育時に看護理論の授業があった者は125名(77.6%)、院内教育プログラムに看護理論に関する内容があった者は74名(46.0%)で、参加した者は25名であった。一方、看護基礎教育時に看護倫理の授業があった者は96名(59.6%)で、院内教育プログラムに看護倫理に関する内容があった者は76名(47.2%)で、参加した者は26名であった。看護理論に関する意識調査において、肯定的な回答が多かったものは『患者の状況によって適した看護理論を用いた方が良い』131名(81.4%)、『患者ケアでは看護過程を踏むべきである』125名(77.6%)であった。また、看護倫理に関する意識調査では、『倫理的問題に直面したときは、病棟単位で検討する必要がある』128名(79.5%)、『病棟全体で同じ倫理観を持っ必要がある』114名(70.8%)が多かった。

これらの結果より、看護基礎教育で約6割から7割の看護師が看護理論及び看護倫理教育は受けているが、院内教育として看護理論及び看護倫理に関するプログラムのある病院は少なく、プログラムへ参加した者はさらに少ない事が明らかとなった。しかし意識調査から看護理論及び看護倫理の必要性を感じており、看護基礎教育をベースに臨床現場で実際に活用できるような具体的学習の機会と継続的な教育が重要である。平成19年6月7月にA県内200床以上の病院の看護部長105人を対象に、留置法による質問紙調査を実施した。対象者には、本研究の目的および方法、研究協力は任意であること、調査票は無記名であり匿名性が確保されることを文書にて説明し、同意が得られた者のみ回答を得た。調査内容は、看護理論、看護理念表明の有無とその内容、看護理論、看護倫理、看護管理についての意識を問うた。調査の結果、有効回答は58名(回収率55.2%)であった。年齢は39歳から65歳で、平均53.4歳であった。臨床経験年数は、56人が15年以上であり、看護部長としての就任歴は3年未満が26人(44.8%)であった。「患者看護ケア時に病院全体で統一した看護理論を使用しているか」の問いに対し、統一した看護理論を使用しているが32人(55.2%)、看護理論を使用しているが、病棟ごとに使用する看護理論は異なるとしたものが7人(12.1%)であった。看護理論を看護ケアに多少なりとも関連づけているのは39人、すなわち67%が該当する。57人の病院で、看護理念表明が存在した。含まれる語句は、「安全・安楽な看護」、「患者中心の看護」、および「質の高いケアの提供」がそれぞれ60%以上であった。作成者は「看護部」25人(43.1%)、「看護部長」22人(37.9%)であり、参考にしたものは、「病院の理念」が48人(82.8%)と最も多かった。意識調査では、「病棟全体で同じ看護観を持つ必要はない」と思うものとそうでないものとは半々であった。「患者ケアでは看護過程を踏むべきである」とするものが多かった。ケアの成果を的確に把握するという過程を常に踏むことが求められ、その基盤を看護理論の基礎的概念が提供してくれることの意義・重要性を再度認識し、看護実務者全員に浸透させる手段を管理者の立場から遂行していく必要がある。
TRAF6シグナル経路による炎症性発がんの制御

TLRシグナルを制御する細胞質内分子FLN29やSOCS1の抗腫瘍免疫や炎症性発がんにおける意義を解明するため、以下の実験を行った。(1)myeloid系細胞特異的SOCS1欠損(SOCS1-cKO)マウスを作製し、突然変異誘発剤と腸炎誘導剤(DMH+DSS)による大腸がんの炎症性発がんモデル実験を行ったところ、SOCS1-cKOマウスは発がん抵抗性を示し腫瘍数が減少することを見いだした。また、B16メラノーマ細胞の移植モデルでも、SOCS1-cKOマウスで腫瘍体積の減少と生存率の上昇を認めた。この作用はIFNγ欠損背景ではみられないことから、SOCS1欠損マクロファージや樹状細胞がIFNγを介してTh1型ヘルパーT細胞を積極的に誘導してCTLを活性化するものと考えられた。また、マクロファージ自身もNO産生が増加しており、腫瘍障害活性は亢進していた。従って、マクロファージや好中球でのSOCS1欠損は、炎症性発がんの促進よりも、むしろ抗腫瘍免疫応答の増強につながることが明らかとなった。(2)一方、TRAF6の負の制御因子であるFLN29の欠損マウスを作製し、骨髄細胞より分化誘導した樹状細胞(BMDC)のリポ多糖LPSの応答性を解析したところ、TNF、IL-6などの炎症性サイトカインの産生亢進とLPSショック感受性の亢進が認められた。さらに、FLN29欠損線維芽細胞では、RNAウイルス(VSV)感染や二本鎖RNA(polyI:C)刺激によるI型IFNの産生が亢進し、VSV感染に対する抵抗性の増強を認めた。しかし、FLN29欠損マウスにB16メラノーマ細胞を移植したところ、腫瘍体積や生存率に有意な差は認められなかった。本研究はSOCS1やTRAF6コンデショナルノックアウト(cKO)マウスを用いて、自然免疫細胞とT細胞の炎症性発がんにおける意義を解明すること、また新規に同定したTRAF6制御因子の炎症性発がんにおける機能を解明することを目的とする。まずmyeloid系特異的SOCSI cKOマウスの解析を行った。その結果SOCS1欠損マウスは突然変異誘発剤と腸炎誘導剤の組み合わせ(AOM-DSS)による炎症性大腸発がんに抵抗性であり、腫瘍数の減少を認めた。またB16メラノーマ細胞の移植の系においてもSOCS1-cKOマウスでは腫瘍体積の減少および生存率の増加を認めた。この作用はIFNγ欠損背景ではみられないことからおそらくSOCS1欠損マクロファージや樹状細胞がヘルパーT細胞をTh1型に誘導しCTLを活性化するものと考えられた。またマクロファージ自身もNO産生が増加しており腫瘍障害活性の亢進も認められた。次にTRAF6の負の制御因子であるFLN29の欠損マウスの作製を行った。マウスではFLN29を欠損したことによる明らかな形態的異常は認められなかった。TLRシグナルにおけるFLN29の生理的な役割を明らかにするためにFLN29欠損マウスの骨髄細胞より分化誘導して得た樹状細胞(BMDC)をリポ多糖LPSで刺激して炎症性サイトカインの産生を野生型と比較したところ、ELISA、RT-PCRにおいてTNF、IL-6の産生の上昇が若干みられた。またウイルス感染に対する抵抗性が増加していた.TLRシグナルを制御する細胞質内分子FLN29やSOCS1の抗腫瘍免疫や炎症性発がんにおける意義を解明するため、以下の実験を行った。
北海道における中期旧石器の研究-斜軸尖頭器石器群の地域性と機能-

本研究は列島各地の中期旧石器時代と後期旧石器時代初頭の石器群の地域性、連続性を検討する中で、北海道の該期石器群を考究するという目的と、斜軸尖頭器の機能的な推定という目的で遂行されてきた。列島各地の後期旧石器時代初頭石器群の様相検討では、北海道を除く各地域で石斧と台形様石器が主要な利器として用いられ、すでに地域性が認められた。また中期旧石器時代石器群の剥片剥離技術の検討では従来求心的剥離が主体と言われてきたが、打面転移剥離も多く、台形様石器や切断調整の初原的ナイフ形石器を生産した剥片剥離技術との類似性が認められた。石斧については後期旧石器時代初頭と中期旧石器時代では、製作技術上の相違点は少ないが、片刃両刃比率とサイズの相違が顕著であり、機能的な差異が予想された。したがって北海道の後期旧石器時代初頭石器群が石斧を組成しないのは植生への環境適応と考えられた。北海道では明瞭な台形様石器は存在しないが、剥片剥離技術は本州の台形様石器石器群に近似し技術基盤の共通性が顕著であった。個別石器に表出した表現形式での相違が北海道の後期旧石器前半期を規定するものと考えた。こうした北海道の後期旧石器初頭石器群と総進不動坂遺跡などの斜軸尖頭器石器群後半期石器群では、剥片生産基盤の共通性が確認された。斜軸尖頭器の型式学的な検討による本州の該期石器群との対比も可能であると思われ、群馬県桐原遺跡、新潟県津南町高位段丘遺跡例などと型式的な共通性が伺えた。また中期旧石器時代の尖頭器の機能推定研究は欧米でも少なく、実験的手法による検討が必要となり、予備的な実験も行った。しかし旧石器ねつ造事件によって本研究の対象としている中期旧石器についても慎重に取り扱う必要が生じており、今後は藤村氏関与資料と非関与資料は研究遂行上分けて取り扱い、資料の有効性の検討作業を行うべきものと考える。日本列島の中期旧石器時代(12万年3万年前)の石器群を対象に遺跡立地、石器組成、剥片剥離技術、斜軸尖頭器の型式学的検討、使用石材の検討を行い観察記録票を作成した。今年度は関東地方、東北地方、北海道地方の該期石器群について観察を行った。観察と併せ計測、写真撮影も行った。その結果、中期旧石器遺跡の立地が痩せ尾根に限定され、使用石材も従来から指摘されているとおり頁岩など前期旧石器に較べ軟質で加工の容易な石材が選択されていることを確認した。また斜軸尖頭器については左右対称形で槍先としての機能を想定できそうなものと、左右非対称形で刃器としての機能を推定できそうなものに二分できそうな見通しを持った。さらに斜軸尖頭器の素材剥片を剥離する石核については、従来言われてきた円盤形石核より単なる打面転移石核の方が量的には多いようである。北海道の中期旧石器については今年度新たに総進不動坂遺跡7層上面で5点の中期旧石器が出土した。この石器群は台形状剥片を用いた基部加工石器と縦長剥片素材のスクレイパーからなり、斜軸尖頭器が含まれていなかった。一昨年同遺跡6層上面から出土した石器群はすべて斜軸尖頭器であったことと対称的であり、北海道については資料の希少性もあり中期旧石器石器群の全貌はまだ明らかでない。また同遺跡のX層で前期旧石器も出土し、北海道での中期旧石器がこうした前期旧石器の系統になるのか更なる問題も生じた。また、槍先の着柄・固定に関わる文献の検討では、オーストラリア・アボリジニの民族資料について資料の収集を行った。タール、ピッチを用いて柄と石器を固定する方法について多くの事例を収集することが出来た。

また中期旧石器時代の尖頭器の機能推定研究は欧米でも少なく、実験的手法による検討が必要となり、予備的な実験も行った。しかし旧石器ねつ造事件によって本研究の対象としている中期旧石器についても慎重に取り扱う必要が生じており、今後は藤村氏関与資料と非関与資料は研究遂行上分けて取り扱い、資料の有効性の検討作業を行うべきものと考える。