hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マメ科植物の共生的窒素固定および同化産物蓄積に関する研究

落花生の共生窒素固定と乾物集積,化合態窒素吸収の関係が調べられ,落花生においても,化合態窒素の過剰施用が根粒の窒素固定能を抑制し,個体全体の同化産物集積量は増加させるが子実収量の増加はもたらさないこと,吸収窒素の大部分がアスパラギンの形態で地上部へ移行することなどが明らかになった(熊沢).また,子房柄の地中への侵入後,結実圏からも葵が直接養分を吸収するが,葵の化合態窒素吸収は,結実圏でのCaの存在によって促進され,子実形成に利用されることが明らかになっか(堀口).ダイズ,インゲンにおける経根吸収窒素と根粒固定窒素の動態,根粒窒素固定に対する化合態窒素と糖の影響が調べられた.ダイズのNO3-吸収は培地濃度1025ppmで飽和し,アンモニアに比べて根粒へは移行しにくいが,根粒中のアラントイン・アスパラギン蓄積を誘起することが示された(大山).また,根粒着生ダイズでは,非着生のものに比べて根中サイクリトールが増加し,逆にサイクリトール(ミオイルシトール)を経根的に供給すると,根粒着生や個体当りARAを上昇させ,また,生育後期の根粒崩壊やARA比活性低下を抑制することが示された(河合).インゲン根粒の窒素固定能はダイズのそれに比べて化合態窒素ストレスを受けやすく,特に硝酸の影響を受ける.経根吸収窒素の器官分配には特に大きな差はなく,根粒1個当りの重量がダイズよりも著しく小さくなることとの関連が注目された(有馬).ダイズ優良根粒菌としてHup+株に着目した研究が進められ, Hup+株は,根粒菌の細胞外多糖構成単糖によって分類された一群にしか存在せず,また, Hup-株のみに集積が認められのセリノールと同一の部分構造を持つルゾビトキシンは, Hupの誘導を強く阻害することが示された(南沢).落花生の共生窒素固定と乾物集積,化合態窒素吸収の関係が調べられ,落花生においても,化合態窒素の過剰施用が根粒の窒素固定能を抑制し,個体全体の同化産物集積量は増加させるが子実収量の増加はもたらさないこと,吸収窒素の大部分がアスパラギンの形態で地上部へ移行することなどが明らかになった(熊沢).また,子房柄の地中への侵入後,結実圏からも葵が直接養分を吸収するが,葵の化合態窒素吸収は,結実圏でのCaの存在によって促進され,子実形成に利用されることが明らかになっか(堀口).ダイズ,インゲンにおける経根吸収窒素と根粒固定窒素の動態,根粒窒素固定に対する化合態窒素と糖の影響が調べられた.ダイズのNO3-吸収は培地濃度1025ppmで飽和し,アンモニアに比べて根粒へは移行しにくいが,根粒中のアラントイン・アスパラギン蓄積を誘起することが示された(大山).また,根粒着生ダイズでは,非着生のものに比べて根中サイクリトールが増加し,逆にサイクリトール(ミオイルシトール)を経根的に供給すると,根粒着生や個体当りARAを上昇させ,また,生育後期の根粒崩壊やARA比活性低下を抑制することが示された(河合).インゲン根粒の窒素固定能はダイズのそれに比べて化合態窒素ストレスを受けやすく,特に硝酸の影響を受ける.経根吸収窒素の器官分配には特に大きな差はなく,根粒1個当りの重量がダイズよりも著しく小さくなることとの関連が注目された(有馬).ダイズ優良根粒菌としてHup+株に着目した研究が進められ, Hup+株は,根粒菌の細胞外多糖構成単糖によって分類された一群にしか存在せず,また, Hup-株のみに集積が認められのセリノールと同一の部分構造を持つルゾビトキシンは, Hupの誘導を強く阻害することが示された(南沢).落花生のδ【^(15)N】値を測定したところ、ダイズ等窒素固定作物とは異なり、地上部のδ【^(15)N】値が高い傾向がみられた。この現象は、ウレイド産生植物,アマイド産生植物の相異から生ずるものと考えられた。ダイズ,インゲンの根粒窒素固定能に対する化合態窒素施用の影響を比較し、インゲンではいわゆる化合態窒素ストレスがダイズよりも激しく発現することが、アセチレン還元能・根粒重において認められた。次に培養液硝酸濃度のダイズの窒素の吸収と集積に及ぼす影響を調べたところ、培養液濃度25,50,100ppm区の硝酸吸収速度に差は認められなかった。窒素の器官分布を見ると、高濃度窒素区では葉の蛋白及び茎の可溶性窒素に上昇傾向が認められた。落花生の根圏と結実圏とを隔離し、【NH_4】【^(15)N】【O_3】を与え、結実圏にカルシウムを供給する区としない区を設けて裁培した。【^(15)N】濃度,乾物重あたりのexcess【^(15)N】量,1莢あたりのexcess【^(15)N】量ともに莢ではカルシウム欠除区の方がやや高かったが、種子ではカルシウムを供給した区が欠除区の2倍以上の値を示した。この結果から、結実圏にカルシウムが不足すると莢には【^(15)N】がとりこまれるが種子へのとりこみが著しく妨げられることが明らかになった。

ダイズの根粒の窒素固定に対する環状炭水化物(cyclitol)の経根投与の効果を検討した。myoinositol投与区においては、17日後に根粒重のみの促進が見られたが、glucose投与区においては、一時的に窒素固定能の増加が見られた。これは、吸収されたcyclitolが根粒形成に機能し、エネルギーとならないことを示唆していた。ダイズ根粒菌40株-11の血清型を含む-を対象とし、根粒のセリノール含量,【Hup^+】型,リゾビトキシン生産能を調べたところ、0.6μprol/g以上のセリノール含量を示す菌株は全て【Hup^-】型であり、それ以下のものの大部分は【Hup^+】型であった。【Hup^+】型でセリノール集積タイプ菌株の約4割がリゾビトキシンを生産した。
腎修復における骨髄細胞移植の有用性の検討

下記の虚血性腎尿細管障害モデルを作成し腎修復における骨髄細胞の供給と分化誘導能を経時的に検討した。B6マウスをレシピエントとし、12Gyの放射線照射後にグリーンマウスから分離した骨髄細胞を移植した。移植14日後に左腎摘出群、腎虚血再還流(腎動静脈を1時間クランプ後開放)群、無処置群(コントロール群)を各々6匹作成した。第1、3、7日後に2匹づつ開腹、腎臓を摘出し蛍光実体顕微鏡で観察した。腎摘群では腎摘7日後に右腎間質および糸球体内外の一部静脈内皮細胞にGFP陽性と思われる細胞浸潤が少量認められたが、明らかな腎組織修復の関与は認められなかった。虚血再還流群では虚血側、健側腎ともに虚血後7日目までには、プレリミナリーな実験で得られたほどの尿細管周囲への細胞浸潤は認められず明らかなGFP陽性細胞は観察されなかった。コントロール群においてもGFP陽性細胞は7日目までには観察されなかった。すなわち腎摘または1時間虚血モデルにおいて、術後7日目では明らかな腎組織への尿細管上皮あるいはpodocytesに分化する骨髄細胞の供給は認められなかった。しかし腎摘群において認められた糸球体内外の静脈内皮細胞がGFP陽性であったことから、今後これら細胞が腎組織修復へ関与していく可能性が示唆された。これまでC57BL/6系マウスに対し12Gy放射線照射後グリーンマウスの骨髄を移植し、移植後1、4、12週にFACS解析により骨髄キメラ率を測定し、蛍光顕微鏡下に腎におけるGEP陽性細胞の分布と陽性細胞数(200倍、/HPF)を検討した結果、骨髄キメラ率は移植後それぞれ40±18.5%、82.6±23.4%、72±18%で4週・12週は1週に比し有意に高値を示した(P<0.01)。以上より本実験系の妥当性が示唆される。そこでB6マウスをレシピエントとし、12Gyの放射線照射後にグリーンマウスから分離した骨髄細胞を移植した。移植14日後に左腎摘出群、腎虚血再環流(腎動静脈を1時間クランプ後開放)群、無処置群(コントロール群)を各々6匹作成した。腎摘群では腎摘7日後に右腎間質および一部静脈内皮細胞に細胞浸潤を認めGFP陽性を思われる細胞が少量認められたが、明らかに腎組織の一部を構成し修復に関与しているわけではなかった。虚血再環流群では虚血側、健側腎ともに虚血後7日目までには、プレリミナリーな実験で得られたほどの尿細管周囲への細胞浸潤は認められず明らかなGFP陽性細胞は観察されなかった。すなわち腎摘または1時間虚血モデルにおいて、術後7日目では明らかな腎組織への骨髄細胞の供給は認められなかった。しかし腎摘群において認められたわずかなGFP陽性細胞が今後どのような組織に分化誘導していくのかを免疫染色などを用いて確認する必要がある。また、教室の腎虚血モデルでは虚血時間の違いによって組織修復における増殖反応の著しい違いが存在することが判明していることから、虚血時間を延長した場合の検討も考えている。さらに術後7日ではまだ骨髄から分化誘導されていない可能性があり、今後腎摘、虚血両群ともに30、60日後と長期にわたる経過を追った検討をする予定である。これまでC57BL/6系マウスに対し12Gy放射線照射後グリーンマウスの骨髄を移植し、移植後1、4、12週にFACS解析により骨髄キメラ率を測定し、蛍光顕微鏡下に腎におけるGFP陽性細胞の分布と陽性細胞数(200倍、/HPF)を検討した結果、骨髄キメラ率は移植後それぞれ40±18.5%、82.6±23.4%、72±18%で4週・12週は1週に比し有意に高値を示した(P<0.01)。

そこでB6マウスをレシピエントとし、12Gyの放射線照射後にグリーンマウスから分離した骨髄細胞を移植した。移植14日後に左腎摘出群、腎虚血再還流(腎動静脈を1時間クランプ後開放)群、無処置群(コントロール群)を各々6匹作成した。第1、3、7日後に2匹づつ開腹、腎臓を摘出し蛍光実体顕微鏡で観察した。腎摘群では腎摘7日後に右腎間質および一部静脈内皮細胞に細胞浸潤を認めGFP陽性と思われる細胞が少量認められたが、明らかに腎組織の一部を構成し修復に関与しているわけではなかった。虚血再還流群では虚血側、健側腎ともに虚血後7日目までには、プレリミナリーな実験で得られたほどの尿細管周囲への細胞浸潤は認められず明らかなGFP陽性細胞は観察されなかった。コントロール群においてもGFP陽性細胞は7日目までには観察されなかった。すなわち腎摘または1時間虚血モデルにおいて、術後7日目では明らかな腎組織への骨髄細胞の供給は認められなかった。
磁界の強さを変数とする有限要素法と境界要素法の併用による三次元渦電流場の解析

本研究は電気機器設計に対する応用を前提とした三次元電磁界の有力な解析手法の開発を目指しており、特に、今まで長期にわたり担当者が研究開発してきた有限要素・境界要素併用法の三次元化と渦電流問題への拡張が具体的な目標である。三次元解析では未知数の個数が急増するため、要素分割数を減らし計算機容量を節約せざるをえないのが現状であり、解析精度を落とすことなく未知数の個数を減らす工夫が重要である。本研究の対象である有限要素・境界要素併用法は広大な空気領域を境界法である境界要素法で定式化するため、未知数の少なさの点で大変有利である。この併用法の長所を更にのばす目的で、磁界の強さHと磁気スカラポテンシャルψを考察物理量とするH-ψ法を我々は提案し、未知数減少を最優先としたψを極力多用する定式化や複雑な励磁電流分布への対応を考慮したHによる定式化等に成功した。さらに有限要素法・境界要素法の両手法の接合に有利な辺要素を定式化に導入し、H、ψ以外の様々な物理量を未知変数として採用することを可能にした。具体的には有限要素法領域に電界の強さE、磁気ベクトルポテンシャルA、変形磁気ベクトルポテンショルA^*などを適用した新たな定式化の開発に成功し、各定式化の得失も明らかにした。これら全ての併用法に対して、実測値が公表されている数種の三次元渦電流場検証モデルの解析を行い有効性を確認している。このような基礎理論の開発と並行して三次元電磁界解析の実際の電気機器への応用も試みた。具体的には、リニア誘導機における縁効果や二次導体のスリットのもたらす影響などの数値解析を行い、機器の特性改善の指針となる有効な解析結果を得て、各併用法の妥当性と有効性を確認した。以上、研究期間を通じて予定通り研究を進めることができた。本研究は、電気機器設計に対する応用を前提とした、三次元電磁界の有力な解析手法の開発を目的としている。具体的には、今まで長期にわたり担当者が研究開発してきた有限要素法と境界要素法の併用手法の、三次元化と渦電流問題への拡張を目指している。三次元解析では未知数の個数が急増するため、計算機容量の制限から要素分割数を極端に減らさざるを得ないのが現状である。従って解析精度を落とすことなく、未知数の個数を減らす工夫が必要となる。広大な空気領域を境界法である境界要素法で定式化する有限要素・境界要素併用法は、未知数の少なさの点で大変有利である。この併用法の長所を更にのばす目的で、磁界の強さHと磁気スカラ-ポテンシャルφを考察物理量とするHーφ法を我々は提案している。このHーφ併用法を用いて解析を行うにあたり、考察対象領域の特性に応じて有限要素法、境界要素法の何れを採用するのか、また変数としてH、φのどちらを選ぶのかを決める必要があり、この決定法には幾つかのバリエ-ションが考えられる。本年度はこのHーφ法の定式化における基礎的な理論の確立に重点を置いた。まず未知数減少を最優先としたスカラ-ポテンシャルφを極力多用する定式化に成功し、電気学会より提案されている三次元渦電流場検証モデルの解析を行った結果、その有効性を確認できた。次に有限要素法領域と境界要素法領域の接合に有利な辺要素を導入した定式化に成功し、同検証モデルの解析を行い、高精度な計算結果を得た。現在、最終的に求めたい物理量である渦電流と磁束密度を始めから未知数として採用する定式化を検討中である。

また、このような基礎理論の開発と並行して、三次元電磁界解析の実機への応用(磁気浮上システムにおける永久磁石の特性解析)も行った。次年度は更に実機(角筒型リニア誘導機など)の解析を行っていく予定である。以上、本年度は予定通り研究を進めることができた。本研究は電気機器設計に対する応用を前提とした三次元電磁界の有力な解析手法の開発を目指しており、特に、今まで長期にわたり担当者が研究開発してきた有限要素・境界要素併用法の三次元化と渦電流問題への拡張が具体的な目標である。三次元解析では未知数の個数が急増するため、要素分割数を減らし計算機容量を節約せざるをえないのが現状である。従って解析精度を落とすことなく、未知数の個数を減らす工夫が大変重要となる。本研究の対象である有限要素・境界要素併用法は、広大な空気領域を境界法である境界要素法で定式化するため、未知数の少なさの点で大変有利である。この併用法の長所を更にのばす目的で、磁界の強さHと磁気スカラーポテンシャルφを考察物理量とするH-φ法を我々は提案している。併用H-φ法の安定化には様々なバリエーションが考えられ、未知数減少を最優先としたスカラポテンシャルφを極力多用する定式化や、複雑な励磁電流分布への対応を考慮したベクトルHによる定式化等に現時点で成功しており、実測値が公表されている数種の三次元渦電流場検証モデルの解析を行った結果その有効性を確認できた。次に有限要素法領域と境界要素法領域の接合に有利な辺要素を導入した定式化もに成功し、同検証モデルの解析を行い、高精度な計算結果を得ている。また、併用法の定式化に辺要素を導入した場合、両手法の変数にH、φ以下の様々な物理量を採用することができ、これらの解析精度に対する影響を現在、検討中である。また、このような基礎理論の開発と並行して、三次元電磁界解析の実際の電気機器への応用(磁気浮上システムにおける永久磁石の特性解析、角箇型リニア誘導機の励磁電流最適化など)も行った。次年度は更に実機(リニア誘導機における縁効果や二次導体のスリットのもたらす影響)の解析を行っていく予定である。三次元解析では未知数の個数が急増するため、要素分割数を減らし計算機容量を節約せざるをえないのが現状であり、解析精度を落とすことなく未知数の個数を減らす工夫が重要である。本研究の対象である有限要素・境界要素併用法は広大な空気領域を境界法である境界要素法で定式化するため、未知数の少なさの点で大変有利である。この併用法の長所を更にのばす目的で、磁界の強さHと磁気スカラポテンシャルψを考察物理量とするH-ψ法を我々は提案し、未知数減少を最優先としたψを極力多用する定式化や複雑な励磁電流分布への対応を考慮したHによる定式化等に成功し、実測値が公表されている数種の三次元渦電流場検証モデルの解析を行った結果その有効性を確認できた。さらに有限要素法、境界要素法の両手法の接合に有利な辺要素を導入した定式化もに成功し、同検証モデルの解析を行い高精度な計算結果を得ている。また辺要素を導入した場合、H、ψ以外の様々な物理量を未知変数として採用することができ、有限要素法領域に電界の強さE、磁気ベクトルポテンシャルA、変形磁気ベクトルポテンシャルA^*などを適用した新たな定式化の開発に成功し、各定式化の得失も明らかにした。
数学基礎論のプログラミング言語理論への応用

昨年度までの、非可換なLinear Logicの証明図にあたるnon-commutative proof netsについての研究をさらに進めた。non-commutativeなsystemにおけるnetsの概念であるmarkednetsのwell-formed structureに対する必要十分条件を考える。今年度は、昨年得ていた定理である、marked net Gがwell-formedとなる必要十分条件は、Gがstrongly planarであり、region conditionを満たし、かつL-only subgraphとR-only subgraphがacyclicかconnectedのどちらか一方である、をさらに分析し、平面的グラフの概念を用いないstack conditionによって同値の条件が表現できることが分かった。新しい定理は、marked net Gがwell-formedとなる必要十分条件は、Gがstack conditionを満し、R-only subgraphがacyclicかconnectcdのどちらか一方である、というものである。このstack conditionは、基本的なアルゴリズムを用いて記述でき、その計算量は線形時間であることがすぐにわがる。従って、marked netがnon-commutative proof netかどうかの判定は線形時間である、という新しい結果が得られた。これは、今までnetが(commutative)proof netかどうかを判定するのにquadratic timeががることが知られていたので、non-commutativityが判定アルゴリズムを単純化することに相当する。一方最近になって、Stefano Guerriniは、ある種のproof structureが(commutative)Proof netかどうかを判定する方法として、線形時間のものがあることを発表した(証明はまだ公開されていない)。この結果とわれわれの結果にどのような関係があるのか、今後の研究課題としてとても興味深い。まず、今まであまり研究されていなかったnon-commutativeなsystemにおけるnetsの概念として、strongly planar markednets導入し、そのwell-formed structureに対する必要充分条件について考察した。ここで、tree-likeな平面的グラフと、そのグラフによって仕切られるregionsとの条件を考えることにより、平面的グラフに対するオイラーの公式が適用できる。これにより、regionsがあるcondition(region condition)を満たす時、well-formed structureかどうかを調べるのに、旧来のswitching conditionにおいて行われたいた。サブグラフのacyclicityとconnectnessの検証がどちらか一方でよいことがわかった。さらにこのregion conditionのもとでは、switching conditionで考慮されるサブグラフの数も劇的に減らすことができた。旧来のswitching conditionでは、mをpar-linkの個数とすると、2のm乗個のサブグラフの検証が必要となる。しかし新しい必要充分条件では、L-only subgraphとR-only subgraphと呼ばれる2つのサブグラフの検証で充分である。これにより、定理として、marked netがwell-formedとなる必要十分条件は、Gがstrongly planarであり、region conditionを満たし、かつL-only subgraphとR-only subgraphがacyclicかconnectedのどちらか一方であることがわかった。さらに、これからCyclic Linear Logicのmultiplicative fragmentにおけるnon-commutative proof netの新しい特徴づけ定理も得られる。このように、本年度は研究において大きな前進がみられた。来年度はさらにこれを進め、Non-commutative Linear LogicやLambek Calculusにおける定理の自動証明に適用できるような、具体的なアルゴリズムの研究を行っていきたい。
反応速度分析における活性化剤の役割及び金属一活性化剤錯体の溶存状態と触媒作用

鉄(II)によるバナジウム(V)及び銅(II)の酸化還元反応に及ぼす配位子(縮合リン酸、アミノポリカルボン酸類)の作用をポテンシオメトリ-により詳細に検討し、鉄(II)による銅(II)の還元反応を定量的に進行させるネオクプロインと迅速に進行させるピロリン酸の作用を利用した鉄(II)のフロ-インジェクション分析法を開発し、1×10^<ー6>mol dm^<ー3>の鉄(II)の定量を可能にした。酸化還元反応を利用する接触分析法における活性化剤の役割りに関して、構造化学的な観点から水溶液中における銅(II)の2、2'-ビピリジン及び1、10-フェナントロリン錯体についてEXAFS法により構造解析を行った。その結果、両配位子のモノ及びトリス錯体は水和銅(II)イオンと同様に6配位の歪んだ八面体構造であったが、2、2'-ビピリジンのビス錯体は5配位の三角両錐構造であった。6配位の歪んだ八面体錯体中における平面方向の銅(II)ー供与原子間距離は高次の錯体程、若干長くなる傾向がみられたが、軸方向の結合距離に顕著な相違は観察されなかった。また、5配位の三角両錐錯体中における銅(II)ー水分子間距離はモノ錯体あるいは水和銅(II)イオン中における距離よりもかなり長くなっていることを明らかにした。金属ポルフイリンとEDTAの配位子置換反応機構の検討から、カドミウム(II)ポルフイリン及び鉛(II)ポルフイリンのEDTAとの置換反応の機構は亜鉛(II)ポルフイリンのものとは顕著な相違のあることが明らかとなり、このことを利用した速度差分析法を開発し、金属鉛やカドミウム化合物における微量の亜鉛の定量を可能とした。また、ポルフイリンは核酸と分子錯体を形成するが、ポルフイリンと核酸の相互作用においいては、静電的な相互作用よりも核酸塩基とポルフイリンとの相互作用の大きなことが明らかとなった。元素の触媒作用を利用する接触分析法においては、分析法の感度や選択性を増大させるためにしばしば活性化剤が使用される。活性化剤は金属イオンと錯形成する配位子がよく用いられるが、活性化剤の役割には不明なことが多く、金属イオンと錯形成することによって著しい触媒作用を示すと考えられているに過ぎない。本年度は、活性化剤錯体の触媒作用について、主として構造化学的な観点から研究を行った。銅(II)の接触分析法では、しばしばピリジンが活性化剤として使用される。水溶液中における銅(II)-ピリジン錯体の構造解析をEXAFS法により行った結果、モノ-、ビス-、トリス-、テトラキス(ピリジン)銅(II)錯体はすべて歪んだ八面体構造であることが明らかとなった。エカトリアル位置の銅(II)イオンと水和水分子の酸素原子あるいはピリジンの窒素原子との結合距離は、高次の錯体ほど若干長くなる傾向が見られるのに対して、アキシャル位置の銅(II)イオンの水和水分子の距離は、高次の錯体ほど顕著に長くなるという非常に興味深い結果が得られた。

2価遷移金属イオンとポルフィリンの生成反応はアミノ酸の共存により非常に加速されるが、そのうちで銅(II)-アミノ酸錯体の触媒作用に関しては、EXAFS法や分光光度法によって水溶液中における銅(II)-アミノ酸錯体の構造化学的デ-タを得た結果、銅(II)-アミノ酸錯体は水溶液中ですべて歪んだ八面体構造をとっていることが明らかになった。銅(II)イオンと第一配位圏にある供与原子との結合距離は、アミノ酸の種類によらず、またモノ-、ビス-、トリス錯体中においても変化せずほぼ一定であった。このことからアミノ酸錯体の触媒作用は銅(II)イオン周りの配位水が置換され易くなることにより発現するのではなく、アミノ酸側鎖の置換基とポルフィリンの疎水性相互作用が重要であることが明らかとなった。鉄(II)によるバナジウム(V)及び銅(II)の酸化還元反応に及ぼす配位子(縮合リン酸、アミノポリカルボン酸類)の作用をポテンシオメトリ-により詳細に検討し、鉄(II)による銅(II)の還元反応を定量的に進行させるネオクプロインと迅速に進行させるピロリン酸の作用を利用した鉄(II)のフロ-インジェクション分析法を開発し、1×10^<-6>mol dm^<-3>の鉄(II)の定量を可能にした。酸化還元反応を利用する接触分析法における活性化剤の役割りに関して、構造化学的な観点から水溶液中における銅(II)の2、2'ービピリジン及び1、10ーフェナントロリン錯体についてEXAFS法により構造解析を行った。その結果、両配位子のモノ及びトリス錯体は水和銅(II)イオンと同様に6配位の歪んだ八面体構造であったが、2、2'ービピリジンのビス錯体は5配位の3角両錐構造であった。6配位で歪んだ八面体錯体中における平面方向の銅(II)ー供与原子間距離は高次の錯体程、若干長くなる傾向がみられたが、軸方向の結合距離に顕著な相違は観察されなかった。また、5配位の三角両錐錯体中における銅(II)ー水分子間距離はモノ錯体あるいは水和銅(II)イオン中における距離よりもかなり長くなっていることを明らかとした。金属ポルフィリンとEDTAの配位子置換反応機構の検討から、カドミウム(II)ポルフィリン及び鉛(II)ポルフィリンのEDTAとの置換反応の機構は亜鉛(II)ポルフィリンのものとは顕著な相違のあることが明らかとなり、このことを利用した速度差分析法を開発し、金属鉛やカドミウム化合物中における微量の亜鉛の定量を可能とした。また、ポルフィリンは核酸と分子錯体を形成するが、ポルフィリンと核酸の相互作用においては、静電的な相互作用よりも核酸塩基とポルフィリンとの相互作用の大きなことが明らかとなった。
単球/マクロファージにおけるオキシステロール生成の機序に関する研究

これまでのマウス由来マクロファージクローンを用いた検討では、細胞膜表面に持続的にoxysterolを発現するクローンと全く発現しないクローンとが見出されたが、それらのクローンにおけるoxysterol発現量を調節する因子は未だ見つかっていない。そこで今年度は、これらのクローンについて、細胞表面抗原の発現、サイトカイン産生能をインターフェロン-γ(IFN-γ)あるいはリポポリサッカライド(LPS)による刺激の前後について詳細に検討し、oxysterolの発現と相関する因子を探索した。細胞表面抗原はクラスII抗原(H-2^d)、Mac-1、CD40、B7-1/-2等についてFITC標識抗体を用いたFACS解析を行った。サイトカインはIFN-γ、LPS刺激前後のマクロファージ培養上清中IL-1、IL-6、IL-12、TNF、GM-CSF,をELISA法を用いて測定した。クラスII抗原の発現量はクローン間で大きく異なり、IFN-γによって発現が誘導されるものとそうでないものが見いだされた。しかし、クラスII抗原の発現量とoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。Mac-1、CD40、B7-1/-2はすべてのクローンで検出され、クローン間に発現量の差はみられたがoxysterol発現量との間で相関するものはなかった。サイトカインはすべてについて無刺激のマクロファージクローンの培養上清には検出されず、1L-1、IL-6、TNF、GM-CSFはLPS刺激によってすべてのクローンで産生が確認されたが特にGM-CSFにおいて産生量がクローン間で大きく異なった、IFN-γによる前処理はLPS刺激後のサイトカイン産生を増加させた。IL-12はLPS単独の刺激で産生するもの、IFN-γとLPSで刺激することで初めて産生するもの、IFN-γとLPSでの刺激後も産生しないもの、の3種類に分かれた。しかしこれらのサイトカイン産生のパターンとoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。以上の結果から、マクロファージにおけるoxysterolの発現は細胞表面抗原の発現あるいはサィトカイン産生の調節とは独立した機構で調節されていることが示唆された。本年度はマクロファージにおけるoxysterol産生の調節について検討を行った。これまでのマウス由来マクロファージクローンを用いた検討では、細胞膜表面に持続的にoxysterolを発現するクローンと全く発現しないクローンとが見出されたが、それらのクローンにおけるoxysterol発現量を調節することの出来る因子は未だ見つかっていない。そこで今年度は、ヒト末梢血より分離された単球の試験管内での培養中にマクロファージ活性化物質;インターフェロン-γ(IFN-γ)、リポポリサッカライド(LPS)、カルシウムイオノフォア、フォルポールーミリステートーアセテート(PMA)、等を添加し、一定期間培養後に回収した単球、あるいは単球細胞膜より抽出した脂質成分による腫瘍細胞増殖抑制活性を検討した。その結果、PMA刺激後の単球あるいは単球細胞膜より抽出した脂質成分に顕著な細胞増殖抑制活性が検出された。PMAはプロテインCキナーゼ(PKC)を活性化することが知られており、このことから、PKCの活性化が単球/マクロファージにおけるoxysterolの生成に関与することが示唆された。また、マウス由来マクロファージクローンを用いてoxysterolの発現と相関するマクロファージ機能;抗原提供能、貧食能、LPS刺激後のサイトカイン(IL-1、IL-6、TNF、IL-12、GM-CSF等)産生能、プロスタグランジンE_2(PGE_2)産生能、細胞表面I-A抗原発現量、等の検索を行ったが、oxysterol発現の有無と有意に相関するマクロファージ機能は見つからなかった。

IL-12はLPS単独の刺激で産生するもの、IFN-γとLPSで刺激することで初めて産生するもの、IFN-γとLPSでの刺激後も産生しないもの、の3種類に分かれた。しかしこれらのサイトカイン産生のパターンとoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。以上の結果から、マクロファージにおけるoxysterolの発現は細胞表面抗原の発現あるいはサィトカイン産生の調節とは独立した機構で調節されていることが示唆された。
小形卵Sm系統に於ける卵形成異常のメカニズムに関する研究

小形卵系統(sm)は小さな卵を作り、孵化しない致死性の突然変異である。小さい卵を作る要因としては、卵黄形成異常、コリオン形成異常などが考えられる。本研究ではこの突然変異をおこしている要因を調べる目的で、生化学と分子遺伝学的解析を行なった。また突然変異種を調べることで、カイコの卵形成に関わる遺伝子の発現とその調節機構が明らかになることが期待された。卵黄形成に関わる主要なタンパク質、ビテロジェニン、30Kタンパク質と卵特異タンパク質は、smの卵には極めてわずかな量しかみられず、これが小さな卵を作る主たる原因と考えられた。ビテロジェニンと30Kタンパク質は、smの脂肪体で正常に生合成され、体液中に分泌されていた。正常系統においては、これらのタンパク質が体液中から卵巣へ取り込まれる時期になると、体液中から急速に減少していくのに対して、smでは逆に増加しはじめ、体液中に蓄積されていった。したがって、smは、体液中からタンパク質を取り込む機構に何らかの異常があるために、卵黄形成が進まず結果的に小さな卵が作られるものと考えられた。ビテロジェニンと30Kタンパク質は、胞卵被膜細胞間の隙間を通り抜け、卵細胞表面のリセプターを介して取り込まれている。smはビテロジェニンと30Kタンパク質以外にも、卵特異タンパク質の取り込みもみられないことから、卵特異タンパク質の生合成の場でもある胞卵被膜細胞の異常が考えられた。そこで、卵特異タンパク質の生合成と遺伝子発現について調査した。smは、正常系統と同じように遺伝子が発現し、卵特異タンパク質が胞卵被膜細胞において作られていることがサザン、ノーザンそしてin situハイブリの実験から明らかになった。以上の結果から、smは卵黄タンパク質の取り込みの場であるリセプターに異常のあることが明らかであり、現在リセプターの精製を進めているところである。
組織特異性と安全性の高いバイオナノカプセルによるピンポイントターゲッティング

平成15年から17年度にかけての3年間の研究により以下のような成果が得られた。1.HBs抗原L粒子のC末端側に緑色蛍光タンパクを結合させたL粒子を作製し、in vitroおよびヒト肝細胞癌およびヒト大腸癌細胞をヌードマウス皮下に移植したモデルに投与すると、in vitroおよびin vivoでヒト肝細胞癌でのみ緑色蛍光が認められ、ヒト大腸癌では緑色蛍光は検出されなかった。2.HBs抗原のpreS1を削除しランダムペプチドを結合させるとあらゆる細胞に遺伝子および蛍光物質が取り込まれた。3.アドリアマイシン封入L粒子によるヒト肝細胞癌に対する殺細胞効果:アドリアマシン封入L粒子を作製・精製してヒト肝細胞癌株にin vitroで添加し、細胞数をMTT assayで測定すると、濃度依存的な殺細胞効果が認められた4.HBs抗原結合GFPcDNA封入MPCポリマーに関する研究:cationic portionを導入したMPCポリマーに緑色蛍光cDNAを結合させてエステル基にHBs抗原を反応させたHBs抗原結合遺伝子封入MPCポリマーを作製して、in vitroおよびin vivoでヒト肝細胞癌に投与すると7日後にと殺して各種臓器の蛍光を測定するとヒト肝細胞癌組織でのみ緑色蛍光物質の発現が認められた5.RNase挿入FGFタンパクによるin vivoにおける血管新生阻害:小さなチャンバー内でがん細胞株であるA431を培養し、培養液内にRNase挿入FGFを添加し、その後チャンバーをマウス背部皮下に置きその部位の血管新生を形態学的に測定し、対照群と比較すると、腫瘍細胞であるA431を培養しているチャンバーを皮下に植え込んだマウス背部では培養液のみの対照群より蛇行した血管新生が著明に認められたが、A431に加えてRNase挿入FGFを添加したチャンバーを植え込んだマウス背部では血管新生が抑制され、対照群と有意の差を認めなかった。血管内皮細胞増殖因子(VEGF)受容体のsoluble formの一つであるmFLK-1-cDNAをshuttlue vectorに封入してヒト肝細胞癌培養株に作用させるとヒト肝細胞癌培養上清中のsVEGF受容体をELISA法で測定するとsVEGF受容体が検出された。次に、ヒト肝細胞癌およびヒト大腸癌をヌードマウス皮下の皮下左右にそれぞれ腫瘍塊を形成させた後に、mFLK-1-cDNAを封入したshuttlue vectorを静注するとヒト肝細胞癌およびヒト大腸癌はshuttle vectorのみを静注した対照群に比較して有意に増殖が抑制されていた。ヌードマウスの体重や各主要臓器重量は両群間で有意な差違は認められなかった。ヒト肝細胞癌とヒト大腸癌をそれぞれ左右の皮下に移植したヌードラットにGFP遺伝子を封入したHBs抗原L粒子を静脈から投与しても、ラットの体重ならびに各主要臓器重量には対照群と有意な差違は認められなかった。また緑色蛍光はヒト肝細胞癌のみで検出され、ヒト大腸癌組織やラット肝組織やその他の重要臓器では緑色蛍光は検出されなかった。Tymedine kinase cDNAを封入したHBs抗原L粒子を、ヒト大腸癌およびヒト肝細胞癌を皮下に移植したヌードラットに静脈注射したのち、ガンシクロビルを投与してヒト大腸癌およびヒト肝細胞癌の推定腫瘍重量を測定するとヒト肝細胞癌でのみ腫瘍重量が有意に抑制された。体重や各主要臓器重量は対照群と有意の差を認めなかった。これらの結果は、HBs抗原L粒子を用いた組織特性と安全性の高いピンポイントガーゲッチングが可能であることを明らかにしている。今後、臨床応用を目指してさらなる研究を進展させたいと考えている。

ヒト肝細胞癌とヒト大腸癌をそれぞれ左右の皮下に移植医s太ヌードマウスにdextranをelectroporation方でHBs抗原L粒子に封入して尾静脈から静注して,翌日にヌードマウスを犠死せしめ,ヒト肝細胞癌組織とヒト大腸癌組織をはじめマウス肝臓組織や腎組織など各種組織を摘出して,蛍光顕微鏡にて各種組織を検索すると,ヒト肝細胞癌組織でのみ蛍光が検出され,ヒト大腸癌組織をはじめマウス肝臓組やその他のマウス各組織では蛍光は全く検出されず,本HBs抗原L粒子によるヒト肝細胞に対するピンポイントターゲッチングが可能であることがさらに確認された.さらに,HBs抗原と可溶性VEGF受容体遺伝子(sFlt-1 cDNA)とを結合させた生体適合性を有するナノ粒子を用いて,肝細胞癌に対してpin-pointに抗腫瘍効果を有する遺伝子治療を開発した.<方法>1.生体適合性を有したMPCと,遺伝子に結合可能なCation unitであるN,N-dimethylaminoethyl methacrylate (DMAEMA)と,蛋白質のNH2基とエステル結合し特異性を持たせることを可能にさせるp-nitrophenylcarbonyloxyethyl methacrylate (NPMA)とがpolymer結合した化合物(PMDN)をVectorの骨格として用いた.さらにPMDNに組織特異性を持たせる目的でHBs抗原またはEGFを,抗腫瘍効果を発現させるために生体内で血管新生抑制作用を有するsFlt-1 cDNAをそれぞれ結合させたもの(PMDN complex; sFlt-1/PMDN with HBsまたはsFlt-1/PMDN with EGF)を作製した.2.上記PMDN complexを用いて,腫瘍細胞HepG2,WiDrそれぞれにtransfectionさせELISA法にてsFlt-1発現量を比較検討した.3.腫瘍細胞HepG2の皮下担癌マウスモデルを作製し,それらに上記PMDN complexを腹腔内投与し腫瘍径を経時的に測定し抗腫瘍効果を検討した.<結果>ELISA法によるsFlt-1発現量は,HepG2にsFlt-1/PMDN with HBsをtransfectionさせた群において,他の群に比較して有意に多く認められた.さらにHepG2皮下担癌マウスにsFlt-1/PMDN with HBsを腹腔内投与した群において,他の群と比較して有意な腫瘍縮小効果を認めた.<考察>HBs抗原を結合させたPMDN complexはin vitro, in vivoにおいて肝細胞癌特異的に遺伝子を発現させることが可能であり,新しい遺伝子治療のVectorとなりうる可能性がある.本年度は以下のような結果が得られた。1.アドリアマイシン封入L粒子によるヒト肝細胞癌に対する殺細胞効果:アドリアマイシン封入L粒子を作成・精製してヒト肝細胞癌株にin vitroで添加し、細胞数をMTTassayで測定すると、濃度依存的な殺細胞効果が認められた。
癌病態評価高精度ゲノムミニアレイの開発

外科切除により採取された胃癌症例を用いてアレイCGH解析を行い、リンパ節転移の有無や組織型といった臨床病理学的事項と関係の深いBACクローンを抽出し、胃癌の病態評価のためのミニアレイを作製した。このミニアレイで新規胃癌症例について病態予測を行ったところ、リンパ節転移が実際にない症例のうち7割のものを正しく予測できた。今後精度を上げるための検討は必要だが、今回開発したミニアレイは癌の病態評価(予測)に十分利用できると考えられる。癌の個別化治療の指標となる病態を客観的かつ自動的に評価する各々の癌に特異的な高精度ゲノムミニアレイを開発する目的のために、21年度はまずミニアレイに貼り付ける候補となるクローンを抽出する目的で、各種固形癌(胃癌、大腸癌など)それぞれ数十例程度の症例について、アレイCGH解析を行った。それぞれの固形癌について、ある程度データが得られた段階で、以前からの蓄積したCGHデータともあわせ、独自に開発したインフォマティクス技術を駆使し、癌の病態(リンパ節転移や沿革転移の有無、組織型、進達度など)と強い関連をもつゲノム領域を(アレイCGHに貼り付けてあるBAC単位で)抽出することにしているが、中でも胃癌については以前からのデータ蓄積量も豊富であり、臨床病態を判断するのに有用である数十個のBACクローンを同定することができたため、コントールとしてのBACクローンとあわせ、百数十個程度のBACクローンを貼り付けたミニアレイの試作品を作成することができた。作成したミニアレイはアレイの大きさは通常のアレイCGHのものと同じであるが、1つのスライドグラス(アレイ)に2セットBACクローンが貼り付けてあるため、同時に2症例の解析が可能である。BACの貼り付けてある範囲が狭いため、ハイブリダイゼーションのムラが生じにくく、失敗が少ない。(検体を無駄にすることが少なくてすむ。)通常のアレイCGHとの比較も行ったが、コピー数異常のパターンに違いはなく、胃癌に特化したアレイとして期待できる。83例の切除胃癌を対象としてBAC(bacterial artificial chromosome)アレイを用いて、アレイCGH(comparative genomic hybridization)解析を行った。染色体領域20q12-q13と8q24でのコピー数増加が43%の症例で認められた。一方、4q35.2,1p36,4q34,4q12,14q32におけるコピー数減少が33-37%の症例で検出された。DNAの増幅は、17q21.1(癌遺伝子HER2を含む領域)、11q13.3(癌遺伝子CCND1を含む領域)、11q13(癌遺伝子FGF4を含む領域)見られた。得られたゲノムデータを臨床病理学的データと対比することにより、それぞれの臨床病理パラメータと密接に関連するBACクローンを選定した。臨床病理パラメータとしては、治療に直結するリンパ節転移、腹膜播種、肝臓転移、壁進達度(早期癌か進行癌かの区別)、組織型の5項目を選んだ。クローン選択には2種類の方法を用いた。すなわち、決定木(decision tree)による方法と、二群間で統計的有意差があるクローンを選択する方法とを採用し、結果として50クローンを選択した。対照とするクローンを含めて、約100クローンを搭載したミニアレイを設計し、試作した。これによる診断精度は、リンパ節転移、肝転移、腹膜播種、進達度に関して、それぞれ67%、87%、87%、97.6%の一致率であった。また、大腸がん77例についても同様にCGH解析を行った。20q、特に20q11.21におけるDNAコピー数の増加は症例の70%に見られた。一方、DNAコピー数の減少は18q23で症例の68%に認められた。リンパ節転移と比較すると、8q24.3におけるDNAコピー数増加が最も関係していた(p=3.52319E-05)。22年度の成果を基にして作成された胃癌の病態評価のためのミニアレイの評価を胃癌31症例、32病巣を用いて行った。病巣の内訳は早期病巣が21病巣、進行病巣が11病巣で、治療前の内視鏡生検切片12片、あるいは内視鏡切、除術標本の一部を標本として採取し、-20°Cで保存、後日DNAを抽出しミニアレイCGHを行い、病態評価、特に生検組織からのリンパ節転移予測を試みた。まず生検切片からのミニアレイCGHであるが、32病巣中25病巣(78.1%)に対して施行することができた。アレイCGHが不可能であった症例は切片が小さすぎ量的に不足したものや乾燥により抽出したDNAの質が良くなかったものであった。乾燥防止のため組織を湿らせたろ紙へ付着させてから凍結するようにしたところ、その後の8例はすべてアレイCGH可能であった。

ミニアレイCGHの結果から予測されたリンパ節転移と病理結果との一致率であるが、リンパ節転移有りと予想された16病巣のうち、実際に転移があったものが4例(25%)、リンパ節転移なしと予想された9病巣のうち、転移がなかったものは7例(77.7%)であった。胃生検切片からのアレイCGHは技術的に可能ではあったが、今回の検討ではリンパ節転移について偽陰性が22%もあった。生検組織でのアレイCGHの結果からリンパ節転移を予測しようとした場合、偽陰性は許されず、今後さらに症例数を増やし、より精度高くリンパ節転移を予測できる推定カスケードの更新およびその精度評価を行い研究を進めていきたい。
天体衝突が地球システムの進化に与える影響

本研究では、天体衝突によって作られた蒸気の塊(以下衝突蒸気雲と呼ぶ)の内部で進行する化学反応系を、数値的にシミュレーションし、どのガス種が、どれだけ作られるのかを求める。衝突蒸気雲は、形成直後はきわめて高温・高圧だが、急激に膨張・冷却する。高温・高圧の条件下では化学反応の速度は速く、容易に化学平衡が達成される。これに対し、膨張・冷却が進むと、化学平衡はもはや達成されなくなる。従来の研究では、膨張過程のある瞬間で化学反応がクエンチ(停止)すると考え、単純に衝突蒸気雲の膨張のタイムスケールと、ある化学種がかかわる反応のタイムスケールとの比較から、膨張・冷却後の衝突蒸気雲の組成を見積もってきた。本研究では昨年度までに、開発した1次元球対称モデルを用いて得られる結果について、ガス成分の種類や量について議論を重ね、論文の準備を行ってきた。しかし一連の議論の中で、蒸気雲中の化学反応ネットワークは、系全体がサブシステムに細分化されてゆき、サブシステムの中で局所平衡が達成されるように進むことが明らかになってきた。この描像は従来考えられていたものとは異なっており、この性質をうまく使うことでガス種同士の相対存在度から逆に衝突条件を求めることができるようになるかも知れない。ただし、どのガス種組合せでサブシステムを構成するようになるのかは、温度圧力条件(衝突条件)だけでなく、初期組成にも依存する。本研究では今後も、衝突蒸気雲が地球システムに与える影響を議論するための、幅広いパラメタ空間でのシミュレーションなどを続けてゆく。ところがこの方法には、いくつかの間題がある。(1)ひとつの化学種の生成・消滅に関わる化学反応経路が多数存在するため、どの反応速度に着目するべきかわかりづらい(2)膨張・冷却の仕方にもよるが、化学反応はある瞬間で停止するわけではない(3)化学反応は複雑なネットワークを形成しているため、直接関わる反応が停止しなくても平衡からずれることは十分に考えられる。そこで本研究では、急激に膨張・冷却する衝突蒸気雲内部で進行する化学反応をシミュレートする数値モデルを開発している。今年度は、球対称1次元モデルを開発し、様々な初期条件の下で、様々な化学種の最終生成量を求め、これを従来の方法(タイムスケールの比較で最終生成物とその量を求める方法)で求められた生成量と比較した。その結果、H_2OやCO_2の生成量は大きくは変わらなかったが、CH_4やHCNといった、特に初期地球の大気や生命の発生と進化に大きく影響を与えたと考えられる成分の生成量については、従来の手法では数桁以上も違っていることが示された。巨大な蒸気雲ほど、膨張・冷却はゆっくりと進むため、この傾向が強い。本年度は計算機能力の限界から1次元かつ大気がない場合のみ扱ったが、すでに大気がある地球への衝突の場合、この傾向はより強くなると考えられる。ここまでの成果については、3月にアメリカ、ヒューストンで開かれた月惑星科学会議で発表し、現在論文を準備中である本研究では、天体衝突によって作られた蒸気の塊(以下衝突蒸気雲と呼ぶ)の内部で進行する化学反応系を、数値的にシミュレーションし、どのガス種が、どれだけ作られるのかを求める。
細胞傷害性Tリンパ球はウイルス感染防御に必要か

ウイルス感染防御においては、CD8陽性細胞傷害性Tリンパ球(CTL)がウイルス産生細胞を破壊し、中和抗体が感染の拡大とウイルス粒子除去に関与すると信じられている。このため、ワクチン開発に当たって、CTLとウイルス中和抗体の誘導が重要な指標とされることが多い。我々は、免疫系の完成した成体マウスへの接種により致死性赤白血病を誘発するフレンドレトロウイルス(FV)を用い、FVに感受性の高い(BALB/c ×C57BL/6)F_1マウスに、β2-ミクログロブリン遺伝子欠損をホモ接合で導入して、CD8陽性細胞を欠く系統を育成、これと野生型F_1マウス、及びBリンパ球を欠く免疫グロブリン遺伝子膜貫通エクソン欠損マウスを用いて、ペプチドワクチンによる感染防御実験を行った。ウイルス被膜タンパク質上のCD4陽性Tリンパ球認識エピトープを単独で含む合成ペプチドで、一度だけ免疫することにまり、野生型マウスの80%以上でFV誘発白血病が予防できた。驚くべきことに、CD8陽性Tリンパ球欠損F_1マウスでも、その約70%がペプチドワクチン免疫によりFVに抵抗性となり、感染後の脾腫発症・死亡率は、免疫した野生型マウスと有意差がなかった。しかし、Bリンパ球欠損マウスでは、ペプチドワクチンで白血病死を防止できなかった。ペプチド免疫マウスでは、CD8陽性Tリンパ球非存在下でも、FV感染4週間後までに骨髄および脾からウイルス産生細胞が排除された。一方、Bリンパ球欠損マウスでは、感染初期のウイルス産生細胞数増加は抑制されたが、感染2週間目以降はワクチンの効果が見られなかった。以上から、CD4陽性Tリンパ球認識抗原エピトープを用いてフレンド白血病ウイルスに対する感染防御を誘導する系に関しては、CD8陽性細胞傷害性Tリンパ球は感染防御に必須ではないことが明らかとなった。CD8陽性Tリンパ球を欠損する(BALE/cXC57BL/6)F_1-β_2ミクログロブリンノックアウトマウスに、我々がフレンド白血病レトロウイルスenv遺伝子産物上に同定したヘルパーT細胞認識エピトープを単独で含むペプチドワクチンを投与し、種々の感染価でフレンドウイルスを接種して、脾臓中の感染細胞数の増減経過と脾腫発症及び白血病死の経過を観察、CD8陽性Tリンパ球を持つ(BALB/cXC57BL/6)F_1マウスと定量的に比較した。その結果、感染ウイルス価を15 spleen focus-forming units (SFFU)に設定するとCD8陽性Tリンパ球欠損マウスでもペプチド免疫により完全な感染防御が得られること、150SFFUの感染では、対照マウスでほぼ完全な感染防御効果が得られるのに対し、CD8陽性Tリンパ球欠損マウスでは白血病発症マウスが増加すること、しかしその場合でも統計的に有意な数の個体がペプチドワクチンによる防御効果を示すことが明らかとなった。脾細胞中のウイルス産生細胞数は、ペプチド免疫を受けたCD8陽性Tリンパ球欠損マウスでも、同じ免疫操作を受けた対照マウスとほぼ同じ経過で減少した。エフェクター機構として、ペプチド免疫後フレンドウイルスを感染したCD8陽性Tリンパ球欠損マウスも、血清中には対照マウスとほぼ同じ経過でウイルス中和抗体が産生された。これに対し、Bリンパ球欠損マウスではペプチドワクチン効果が著しく減弱し、感染細胞の排除も遅れた。これらの結果から、ペプチドワクチン免疫によるウイルス感染防御には、CD8陽性Tリンパ球以外のエフェクター機能が重要な役割を果たす可能性が考えられた。