hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クロマチン動態による神経細胞分化の制御機構の解明

神経細胞分化を制御する分子メカニズムに関しては不明な点が多い。クロマチン動態を含めた統合的な遺伝子発現制御の研究が必要とされている。本研究では、大脳皮質形成をモデルとして神経細胞分化においてクロマチン構造制御に関与すると予測されるヒストン脱アセチル化酵素とDNA修復酵素の役割の一端を新たに明らかにすることが出来た。脳は多様な特性を持つ神経細胞からなるシステムであることが明らかになってきたが、その発生過程で神経細胞分化を制御する遺伝子発現の分子メカニズムに関しては不明な点が多い。これまでの転写因子中心の研究に加えて、次の段階として核内空間での分子の配置と動態を含めた統合的な遺伝子発現制御の研究が必要とされている。本研究では、大脳皮質形成をモデルとして神経細胞分化においてクロマチン構造制御に関与すると予測されるDNA修復酵素の役割と意義を明らかにする。さらに、染色体DNAや転写因子、クロマチン構造制御因子、DNA修復酵素の核内空間配置と動態の解析を行い、クロマチン動態による神経細胞分化の制御機構を明らかにすることを目的とした。ノックアウトマウスにおいてアポトーシスが観察される二本鎖切断修復と塩基除去修復に着目し、免疫染色によって発生期における内在的なDNA修復酵素の核内分布を解析した。神経細胞への分化が活発な時期のマウス胚から大脳を摘出し、4%パラホルムアルデヒドで浸漬固定して、冠状切断の凍結組織切片を作製後に免疫染色を行った。これまで、DNA修復酵素の組織切片での免疫染色は困難であったが、細胞固定時間を検討することでDNA修復酵素XRCC1とγH2AXの可視化に成功した。その結果、ともに脳室帯にある細胞の核内に損傷部位への集積と考えられるドット状のfociが観察された。XRCC1に関しては、過酸化水素などで損傷を与えた場合に観察されるfociの形態と異なり、大きな特徴的なfociが観察された。さらに、XRCC1のfociと共局在を示し、機能的複合体を形成すると予想される蛋白質の候補を同定することができた。この複合体は、神経細胞分化の制御関わっていることが推察され、新たな制御機構の解明に繋がるものと考えられる。脳は多様な特性を持つ神経細胞からなるシステムであることが明らかになってきたが、その発生過程である神経細胞分化における遺伝子発現制御に関しては不明な点が多い。これまでの転写因子に着目した研究に加えて、クロマチン構造制御因子を含めた分子の核内空間における配置と動態にまで迫る統合的な研究が必要とされている。本研究では、大脳皮質形成をモデルとしてクロマチン構造制御に関与すると予測されるDNA修復酵素の役割と意義を明らかにすることを目的とした。ノックアウトマウスの神経細胞分化においてアポトーシスが観察される二本鎖切断修復と塩基除去修復の酵素に着目し、免疫染色によって発生期マウス大脳皮質におけるDNA修復酵素の核内分布を解析した。その結果、DNA修復酵素XRCC1と_γH2AX共に脳室帯にある神経前駆細胞の核内に損傷部位への集積と考えられるfociが数多く観察された。XRCC1に関しては、過酸化水素などで損傷を人工的に与えた場合に観察されるfociよりも大きな特徴的なfociが1細胞につき2個程度観察された。興味深いことにXRCC1のfociは、転写伸長中であるリン酸化RNA polymeraseII CTDのfociと共局在していた。さらに、大脳皮質分散培養においても同様な共局在が見られたが、RNA polymeraseII特異的な転写阻害剤α-amanitinを培養液に添加すると、リン酸化RNA polymerase II CTDと共にXRCC1のfociも減少する傾向が観察された。以上の結果から、神経前駆細胞においてDNA損傷が生じていることが明らかとなった。また、XRCC1がRNA polymerase IIと共にfociを形成し、転写と共役して機能している可能性が新たに示唆された。このことから、神経細胞の正常な分化には、神経前駆細胞の段階で転写と共役したDNA修復が機能する必要があると考えられる。
酵母ミトコンドリアを巡るプロテインフラックス

ミトコンドリアは外膜,膜間部,内膜,マトリクスの4つの区画から構成され,サイトゾルで合成されたタンパク質は外膜のTOM,内膜の少なくとも2種類のTIMとよばれるタンパク質複合体の働きによりミトコンドリアに移行し,適切なミトコンドリア内区画に配置される。取り込まれたタンパク質は,マトリクスの分子シャペロンHsp70,Hsp60の働きで機能化する。本研究では,以上のプロセスの全体像を,全ミトコンドリアタンパク質の流れ(プロテインフラックス)として網羅的に解析し,フラックスの大きさと分岐を制御する因子とメカニズムの解明の突破口を開くことをめざした.具体的にはまず5001000種類存在すると考えられるミトコンドリアタンパク質の同定のために,(1)酵母細胞からNycodenz密度勾配遠心を用いて高純度のミトコンドリアを単離精製し,マトリクス画分について二次元電気泳動を行い,CBB染色した各スポットを限定分解→質量スペクトルで同定した(2)単離ミトコンドリアの内在性膜タンパク質画分について,一次元電気泳動後,二次元目に展開せずに,限定分解とMS-MS測定によりタンパク質同定を行った。(3)酵母細胞から全mRNAを単離,in vitroで翻訳しRI標識タンパク質を合成した。これを基質として,in vitroで単離ミトコンドリアへの取り込み実験を行い,プロテアーゼでミトコンドリア内に取り込まれなかったタンパク質を消化した場合としない場合の各々について,ミトコンドリアを回収して二次元電気泳動を行い,標識タンパク質のスポットを検出した。(4)(3)の実験を受容体Tom70の欠損株について行うことにより,Tom70に依存してミトコンドリアに取り込まれるタンパク質を網羅的に解析するために,受容体への結合が律速段階となるようなin vitroインポートの実験条件を確立した。
チンパンジーにおける顔認識およびコミュニケーション信号の処理の解明に向けて

チンパンジーを対象にその顔認識の諸相とコミュニケーション信号の処理の解明に向けて検討を進めてきた。顔認識については、昨年度行ってきた見本合わせを用いた個体識別課題をさらに推し進めた。昨年度は、自種の顔の識別の優位性が年齢を経るにつれて消失することが明らかにしたが、本年度は、さらに、顔特異的な倒立効果の発現についても検討し、若い個体と壮年の個体で、倒立効果の強度に差があることが明らかとなった。また、ヒトにおいては顔処理の右半球有意性が報告されているが、この点についても検討を行った。顔写真を左右に分割し、左部分のみ、右部分のみで構成されたキメラ顔と正常顔の見本合わせを行ったところ、左部分のみで構成されたキメラ顔の方が成績が高いことが明らかとなった。この結果は、左視野入力の情報の処理の優位性を示すものであり、右半球での顔処理の特異性を示唆するものである。昨年度の成果についてはScientific Reportsに掲載され、本年度の成果については現在投稿中である。また、コミュニケーション信号の問題については、チンパンジーのパントフートやドラミングの際のリズミカルなパターンの規則性について、昨年度に引き続き、フラクタル解析等や各種の信号解析手法を用いて検討を進めてきた。その結果、チンパンジーの生成するリズムパターンと音楽との間の類似性や相似性が明らかとなった。9月から、標記題目についての研究を開始した。特に、チンパンジーを対象に、相貌知覚に関する研究を開始した。チンパンジーに遅延見本合わせ課題によるヒトおよびチンパンジーの顔の弁別を訓練し、テストとして顔の構成要素をすべて同時にではなく、系列的に提示する試行を与え、そのテストでのパフォーマンスを分析している。この操作によって、空間的な配置関係の処理の影響を検討することができる。また、チンパンジーの顔のスキャンの自然なパターンとは異なる順序で提示した場合の影響についても検討している。得られたデータについては、刺激間の類似性の分析、時系列解析(マルコフ連鎖解析など)によって分析する。チンパンジーを対象にその顔認識の諸相とコミュニケーション信号の処理の解明に向けて検討を進めている。顔認識については、見本合わせを用いた個体識別課題において、自種の顔の識別の優位性が年齢を経るにつれて消失することが明らかになった。11歳くらいの若いチンパンジーでは、チンパンジー間の個体識別の成績がヒト間の個体識別の成績よりも高かったのに対し、その親世代のチンパンジーでは、逆にヒト間の個体識別の方が成績が良いという結果となった。詳細な分析の結果、この違いは刺激が持っている単純な知覚属性のみでは説明ができないこともわかった。飼育環境という制約された社会環境においてはチンパンジーたちは多様な自種の顔よりも数多くの異なる人の顔に接する機会が多くなる。このような長期にわたる経験の効果が、これまで繰り返し報告されてきた自種優位効果を覆しうることを初めて示した。本成果については現在投稿中である。また、コミュニケーション信号の問題については、チンパンジーのパントフートやドラミングの際のリズミカルなパターンの規則性についてフラクタル解析等を用いて検討を進めている。予備的な結果として、これらのパターンには自己相似的な成分が含まれており、このような多様なコミュニケーション信号を生成する際に、無秩序にそれらが生成されるのではなく、共通するシステムを基盤として生み出される可能性があることが示唆される。今後は、実際のパターンから抽出されたフラクタルパターンをベースにして人工的なリズムパターンを生成し、それらに対する反応を実験的に観察する予定である。なお、顔認識の研究は、インドで開催された国際シンポジウムにおいてポスター発表賞を受賞した。研究計画に沿って順調に研究が進展している。残り半年ではあるが、予定していた計画の大半は完遂することができる見通しである。残り半年の研究期間で、全体の計画を完成させるべく鋭意指導する。得られた成果については順次論文としてまとめて公表する矛定であるが、この点については、問題はない。

また、期間終了後についても、別経費での研究員等としての雇用の道をさぐり、Dahl氏のキャリアパスのサポートを図りつつ、研究室の活性化にも資するよう努力したい。
目を起点とした分子ー細胞ー個体リズムの統合解析による環境と生体の調和技術の開発

恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質発現量に及ぼすDrug A受容体の影響について検討した。野生型またはDrug A受容体欠損マウス肝臓の時計遺伝子PER2のタンパク質はIn VIVOイメージング装置を用い測定した。その結果、肝臓で自律的にリズムを刻む体内時計PER2タンパク質の発現リズムにDrug A受容体欠損が影響を及ぼさないことが明らかとなった。恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子発現リズムに及ぼすDrug A点眼の影響について検討した。恒暗条件下のリズムに及ぼすDrug A点眼の影響を検討したところ、行動リズムの周期、時計中枢SCNの時計遺伝子Per1、Per2発現量の変化が認められた。恒暗条件下飼育マウス肝臓のPer1、Per2の発現量は、Drug A点眼により野生型では変容したが、Drug A受容体欠損マウスでは認められなかった。恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質発現に及ぼすDrug A点眼の影響について、In VIVOイメージングを用い測定した。その結果、野生型にDrug Aを点眼した結果、肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質の発現変容が認められたが、Drug A受容体欠損マウスでは認められなった。以上の結果より、Drug A点眼は肝臓の時計遺伝子PER2の遺伝子のみならずタンパク質の発現にも影響を及ぼすことが明らかとなった。本研究結果より、Drug A受容体作動薬は、Drug A受容体を介し、時計中枢の時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすものと思われる。また、体内時計の同調因子として最も強力とされる光に対して、Drug A受容体は重要な働きを示すことが示唆された。Drug A受容体を標的とするDrug Aは、中枢のみならず末梢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすことが考えられる。本研究結果より、Drug Aはその受容体を介し、時計中枢に加えて、肝臓の末梢時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすことが明らかとなった。Drug A受容体を標的とするDrug Aは、中枢に加えて末梢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすことから、Drug A点眼により全身にわたり生体リズムの位相を操作できる可能性がある。以上のことから、おおむね順調に進展しているといえる。昨年度までに実施した課題1、課題2に加えて、課題3について検討する。すなわち、昨年度までに、Drug AはDrug A受容体を介し、時計中枢および末梢の肝臓の時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすことを明らかにしている。昨年度の研究を充実させるとともに、本年度は、Drug Aが、眼球の時計遺伝子発現に影響を及ぼすか否かを検討する。恒暗条件下飼育マウス眼球の時計遺伝子PER2タンパク質発現量に及ぼすDrug A受容体欠損の影響を検討する。野生型またはDrug A受容体欠損マウス眼球の時計遺伝子PER2のタンパク質はIN VIVOイメージング装置で測定する。野生型WTマウスまたはDrug A受容体KOマウスを行動解析装置に7日間飼育した後、明期を8時間前進させ明暗周期サイクルの変化に対する行動シフトに及ぼすDrug A受容体欠損の影響を検討した。Drug A受容体欠損マウスでは、明暗周期変動に対する行動リズム変化が野生型と比較し遅延していた。両マウスを行動解析装置に7日間飼育した後、明期を8時間前進させ、その後、恒暗条件下で飼育した際の行動の変化に及ぼすDrug A受容体欠損の影響を検討した。Drug A受容体欠損マウスでは、恒暗条件下の行動リズム周期が野生型と比較し長いことからSCNに存在する時計遺伝子の発現リズムに何らかの機能的変化が生じていると考えられる。両マウスSCNの時計遺伝子をIn situ hybridization法を用い測定した結果、時計遺伝子のCry1の発現リズムが変容していた。両マウスを行動解析装置に7日間飼育した後に、常に照明をOFFにした恒暗条件下で飼育した自律的行動リズムの位相と周期に及ぼすDrug A点眼時刻の影響を検討した。両マウスにDrug AをCT14に点眼し、自律的行動リズムに及ぼす影響を確認した結果、WTマウス行動リズムはDrug AのCT14点眼により位相が後退したが、Drug A受容体KOマウスにおいてはその効果は認められなかった。恒暗条件下の行動リズムに及ぼすDrugA点眼により行動リズムの周期が変容したことから、時計中枢SCNの時計遺伝子Per1、Per2発現量に及ぼすDrug Aの影響を検討した。野生型ではDrug A点眼後にSCNのPer1、Per2の発現量が変容したが、Drug A受容体KOマウスでは影響しなかった。恒暗条件下飼育マウスに光を照射する条件またはDrug A点眼後に光照射を併用する条件下、SCNの時計遺伝子発現量に及ぼすDrug A受容体ノックアウトの影響を検討した。野生型マウスでは発現量が変化していたが、Drug A受容体KOマウスでは顕著でなかった。本研究結果より、Drug Aはその受容体を介し、時計中枢の時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼす可能性が高い。Drug A受容体を標的とするDrug Aは、中枢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすことから、Drug A点眼により生体リズムの位相を操作できる可能性がある。

恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質発現量に及ぼすDrug A受容体の影響について検討した。野生型またはDrug A受容体欠損マウス肝臓の時計遺伝子PER2のタンパク質はIn VIVOイメージング装置を用い測定した。その結果、肝臓で自律的にリズムを刻む体内時計PER2タンパク質の発現リズムにDrug A受容体欠損が影響を及ぼさないことが明らかとなった。恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子発現リズムに及ぼすDrug A点眼の影響について検討した。恒暗条件下のリズムに及ぼすDrug A点眼の影響を検討したところ、行動リズムの周期、時計中枢SCNの時計遺伝子Per1、Per2発現量の変化が認められた。恒暗条件下飼育マウス肝臓のPer1、Per2の発現量は、Drug A点眼により野生型では変容したが、Drug A受容体欠損マウスでは認められなかった。恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質発現に及ぼすDrug A点眼の影響について、In VIVOイメージングを用い測定した。その結果、野生型にDrug Aを点眼した結果、肝臓の時計遺伝子PER2タンパク質の発現変容が認められたが、Drug A受容体欠損マウスでは認められなった。以上の結果より、Drug A点眼は肝臓の時計遺伝子PER2の遺伝子のみならずタンパク質の発現にも影響を及ぼすことが明らかとなった。本研究結果より、Drug A受容体作動薬は、Drug A受容体を介し、時計中枢の時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすものと思われる。また、体内時計の同調因子として最も強力とされる光に対して、Drug A受容体は重要な働きを示すことが示唆された。Drug A受容体を標的とするDrug Aは、中枢のみならず末梢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすことが考えられる。本研究結果より、Drug Aはその受容体を介し、時計中枢に加えて、肝臓の末梢時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすことが明らかとなった。Drug A受容体を標的とするDrug Aは、中枢に加えて末梢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすことから、Drug A点眼により全身にわたり生体リズムの位相を操作できる可能性がある。以上のことから、おおむね順調に進展しているといえる。昨年実施した課題1に加えて、課題2について検討する。すなわち、昨年度までに、Drug AはDrug A受容体を介し、時計中枢の時計遺伝子の発現量および行動に影響を及ぼすことを明らかにしている。昨年度の研究を充実させるとともに、本年度は、Drug Aが、中枢のみならず末梢の時計遺伝子発現に影響を及ぼすか否かを検討する。恒暗条件下飼育マウス肝臓の時計
多面的な環境耐性を制御するSTOP1転写制御系と進化の分子的理解に関する研究

植物は陸上適応に引き続く、乾燥地や湿潤環境への適応など、様々な環境ストレスに対応する能力を獲得したと考えられる。STOP1転写因子は、シロイヌナズナではアルミニウムや酸などの、酸性土壌環境での耐性を遺伝子の転写制御を介して担うことが分かっていた。このSTOP1転写因子は、様々な環境耐性を制御する転写因子である。コケ類以上の地上植物が持つことから、陸上植物が陸地環境に適応する際にゲノムに組み込んだ、環境耐性モジュールを制御するHUBであると考えられる。本研究では、その耐性制御の分子進化の解明を目指している。平成30年度の研究では、ハイポキシア耐性に関して明確な分子機構を解明することができた。STOP1変異体(シロイヌナズナ)は、低酸素ストレスに暴露すると、野生型に比較して生存することが極めて困難であった。この感受性の表現型はタバコのSTOP1発現抑制系統でも認められたことから、様々な植物で生じる現象であると推定できた。シロイヌナズナのトランスクリプトームの解析から、シャペロンタンパク質遺伝子の発現制御や、イオン輸送タンパク質遺伝子の発現制御を調節する、複数の転写因子の発現をSTOP1が転写制御していることが明らかとなった。相補試験、プロモーターとSTOP1の結合実験などから、HsfA2とSTOP2の制御による、細胞質酸性化抑制が、低酸素耐性に関わることを明らかにした。細胞質の酸性化が低酸素耐性に機能することは、動物細胞(がん細胞)などでは推定されていたが、植物における制御系を解明した最初の例となる成果を獲得した。ハイポキシア耐性がSTOP1転写因子により制御されることを証明したことは、植物の進化や分子改良への貢献が大きい成果と考えられる。また、乾燥耐性などについても、既に研究に着手していることから、HUB転写因子に関する研究として十分な成果が上げられると考えられる。既に報告した低酸素耐性酸性耐性と、乾燥耐性などの他の形質制御との関係を、分子進化の視点を取り入れて解明する。細胞生物学、分子生物学研究に加えて、シスートランスの関係を、情報工学的な解析(機械学習によるプロモーター配列予測)を加えて実施する予定である。特に、研究全体の方向性を変更する必要はないが、情報科学的な解析を取り入れることが必要であると考えている。
観測に基づいた最高エネルギー宇宙線源同定のための理論的研究

本年度の研究はおおむね研究実施計画に沿う形で行うことができた。内容は1)観測された宇宙線の統計解析とその手法の開発、2)突発的天体での宇宙線生成の可能性、3)原子核宇宙線の量の定量解析の三点であった。関連した3本の論文が投稿され、現在査読者との議論中である。1)南オージェ観測所による新しいデータの公開が期待された本年であったが、個々の宇宙線イベントについてのデータは公開されなかったためこれらの解析はできなかった。そのため、北半球最大の公開データである明野観測所のデーダを再解析し、統計的有意性は南半球より低いながらも銀河系近傍銀河と最高エネルギー宇宙線が相関していることを発見した。ここで開発した統計解析手法は将来的にオージェ観測所のデータにも適用できる。一方で、銀河磁場内での最高エネルギー宇宙線の伝搬軌跡の曲がりを計算し、宇宙線到来方向から実際の宇宙線源がどの程度ずれるかについての定量評価を進めた。2)突発的宇宙線生成による宇宙線到来方向分布を検討する第一段階として、そのような宇宙線源について調べ、新たな宇宙線源候補として生まれたばかりの相対論的ジェットを持つ電波銀河を提唱した。このような天体の数は最高エネルギー宇宙線源の必要量よりはやや少ないのですべての最高エネルギー宇宙線を担うことはできないが、現在稼働中のフェルミ望遠鏡によりガンマ線が検出されたタイプの天体であり、宇宙線・ガンマ線といった多粒子を用いて今後性質を詳細に探って行ける。3)原子核宇宙線の伝搬については国内・海外の研究協力者との調整が難航し進行が遅れ、ようやく数値計算コードの作成に取りかかった。研究の方向性に変更はない。
慢性腎臓病患者のサルコペニアと2ステップ動作を用いた動的バランス能力との関連

慢性腎臓病(CKD)患者では,サルコペニア(筋肉減弱症)により末期腎不全や透析導入のリスクが増大する.また,インスリン排泄能の遅延は低血糖を引き起こし,転倒リスクを高める.動的バランス能力は,身体重心の移動を伴う動作におけるバランス制御能力であり,高齢者では動的バランス能力の低下は転倒リスクになるが,サルコペニアと動的バランス能力の関係はこれまで検証されていない.本研究では,CKD患者を対象に床反力計を用いて2ステップテスト(最大2歩幅)課題における2歩目の重心動揺(動的バランス能力)を計測し,サルコペニアによって動的バランス能力にどのような影響が生じるのか明らかにすることを目的とする.慢性腎臓病(CKD)患者では,サルコペニア(筋肉減弱症)により末期腎不全や透析導入のリスクが増大する.また,インスリン排泄能の遅延は低血糖を引き起こし,転倒リスクを高める.動的バランス能力は,身体重心の移動を伴う動作におけるバランス制御能力であり,高齢者では動的バランス能力の低下は転倒リスクになるが,サルコペニアと動的バランス能力の関係はこれまで検証されていない.本研究では,CKD患者を対象に床反力計を用いて2ステップテスト(最大2歩幅)課題における2歩目の重心動揺(動的バランス能力)を計測し,サルコペニアによって動的バランス能力にどのような影響が生じるのか明らかにすることを目的とする.
励起亜鉛原子と水分子から生成する水素化亜鉛・水酸ラジカルの初期状態分布とその相関

本研究においては、最低励起一重項状態の亜鉛原子と水などの水素化物との反応によって生成する水素化亜鉛や水酸ラジカルの初期状態分布を決定を中心課題に据えた。これらの初期状態分布の解析から反応過程の中間状態についての情報を得た。水の場合、水酸化亜鉛は高く回転励起されており、分布は回転量子数の増加とともに単調に増加した。振動状態分布は、v=1にピークをもち、v=3までが観測された。一方、水酸ラジカルはあまり回転励起されておらず、また振動励起されたものは検出されなかった。これは、水のOH基の一つが、ほとんど反応に関与していないことを示している。このことから、反応は亜鉛原子がH原子を引き抜く形で進行するものと結論された。アルカンでは、生成する水素化亜鉛はアルカンのサイズが大きくなるにしたがって振動励起されにくくなり、ネオペンタンでは統計的に予測されるプライオール分布にほぼ一致した。これらの結果と先に得られた回転状態分布に関する結果から、励起状態の亜鉛原子が炭化水素のC-H結合へ挿入し、ある程度の寿命をもった中間状態を経て反応が進行していると考えることで説明できる。励起金属原子と水素の反応は、金属原子がH-H結合に挿入して進行すると考えられている。今回、水素(重水素)から生成するZnH、ZnDの振動状態分布の測定を行い、ともにあまり振動励起されないことが判明した。また、水素化亜鉛の収率はメタンの場合の半分であった。これは、生成する水素化亜鉛が高く回転励起されており、回転解離による三体解離過程が存在することを示唆している。本研究では、まず励起-重項状態の亜鉛原子と水分子との間の反応性衝突について研究した。生成する水素化亜鉛や水酸ラジカルの初期量子状態分布をポンプアンドプローブ法によって決定した。水素化亜鉛はv=3までのものが検出された。初期振動状態分布は、v=0:v=1:v=2:v=3が10:13:7:2であった。振動が基底状態の水素化亜鉛の回転分布は回転量子数の増加とともに量子数30程度まで増加した。これは、回転温度に換算すると約12000Kにあたる。一方、水酸ラジカルの回転分布は約900Kのボルツマン分布で近似することができ、振動励起されたものは検出できなかった。これは、生成するOH基が、ほとんど反応に関与していないことを示している。このことから、反応は亜鉛原子がOH結合に挿入するのではなく、外からH原子を引き抜く形で進行するものと結論された。次に、励起亜鉛原子と飽和炭化水素との反応によって生成する水素化亜鉛の初期回転状態分布の決定を行った。アルカンとしてはCH_4、C_2H_6、C_3H_8、及びC(CH_3)_4を使用した。すべてのアルカンについて初期回転分布はボルツマン分布で近似できた。C(CH_3)_4での分布は統計的に予測される分布にほぼ一致したがアルカンのサイズが小さくなるにつれて統計分布からのずれは大きくなった。これらの結果は励起状態の亜鉛原子がC-H結合へ挿入しある程度の寿命をもった中間状態を経て反応が進行していると考えることで説明できる。サイズの大きいアルカンは小さい振動数の振動モードをもっているために分子内振動緩和が相対的に速くなり生成物の内部状態分布は統計的なものに近づくと考えられる。平成6年度は、励起一重項状態の亜鉛原子と水素化合物から生成する水素化亜鉛の初期振動状態分布の決定を主に行った。対象としては、メタンなどのアルカン系炭化水素のほか水素(重水素)分子を選んだ。

これらの結果と先に得られた回転状態分布に関する結果から、励起状態の亜鉛原子が炭化水素のC-H結合へ挿入し、ある程度の寿命をもった中間状態を経て反応が進行していると結論された。サイズの大きいアルカンでは小さい振動数の振動モードを持っているために分子内振動緩和が相対的に速くなり生成物の内部状態分布が統計的なものに近づくと考えられる。またZnHの相対収率がすべてのアルカンでほぼ同じであったことからC-C結合が切れる過程はあまり重要ではない。水素分子との反応では、一般に金属原子はH-H結合に挿入すると考えられている。しかし、励起一重項状態の亜鉛に関しては直接的な証拠はこれまでなかった。今回、水素(重水素)から生成する水素化亜鉛の初期振動状態分布の測定を行った。ZnH、ZnDともにあまり振動励起されていなかった。また、水素から生成する水素化亜鉛の収率はメタンの場合の半分であった。これは、生成する水素化亜鉛が非常に高く回転励起されており、回転解離による三体解離過程が存在することを示唆している。これらのことは、反応が挿入型であり、遷移状態が曲がった形をしていることする反応機構と符合している。
単語認知実験と電子化コーパスによる語彙システムの研究

1新聞電子化コーパスを中心とした頻度の計量読売新聞,日経新聞の電子化コーパスの2003年分を購入し,既有の新聞コーパスとあわせて,内容を改訂し,文字・単語の頻度の計量を行った。具体的には,毎日・朝日・読売・日経の新聞種,年次・月次等の時系列,社会面・スポーツ面等の紙面種等,様々なカテゴリを設定して集計作業を実施した。頻度分析においては,全体的な傾向を見るにとどまらず,具体的な文字・単語に即して使用状況の変動パタンについて詳細な検討を加えた。さらに,大規模単語セットについて,サーチエンジンを用いてウェブにおける使用頻度情報の蓄積を進め,得られた結果に基づいて単語群のクラスタリングを試みた。2単語認知課題と質問紙調査の分析1,632個の漢字熟語について語彙判断課題を実施した。この実験で得られたデータを過年度に得たカタカナ語におけるデータ等と総合して,反応時間データベースを構築した。そして,この反応時間を中心とする心理実験データを,1の頻度情報を含む単語特性データ,および被験者特性データ(語彙力,メディア接触度等)と関連付けて分析した。その結果,頻度や親近性等の単語特性が単語認知成績に効果を及ぼすといった従来よく知られた現象を確認するにとどまらず,単語頻度の時系列変動(季節変動およびトレンド)と単語認知成績の間に関連があることと,被験者特性(語彙力,メディア接触度等)と単語認知成績との間に関連があることとを示した。こうした結果から,単語認知の問題を研究する際に,外的語彙,内的語彙の双方の変動を視野に入れることの重要性が明らかになった。1.音読課題、語彙判断課題、親近性評定課題に基づく単語認知データベースの構築Arizona大学のK.Forsterらが開発した認知実験制御ソフトウェアDMASTERを用いてカタカナ語を対象とする音読実験を行った。それに加えて、提示された綴りが単語の場合のみに反応する手続きによる語彙判断課題(go/no-go lexical decision task ; Perea & Gomez,2002)の実験も実施した。また、単語の主観的親近性・主観的頻度の評定を様々な教示条件のもとに行った。これらの結果をもとに単語認知データベースの構築を進めた。2.新聞とWebを中心とした文字・単語頻度の計量新聞という標準的なテキストの電子化コーパスを対象に、文字・単語使用の多様性を分析した本年度は特に、毎日新聞と朝日新聞の各2年分のテキストを対象として、2紙の文字使用に系統的な差異を多く見出した(久野・横山・野崎,2002)。その後、メディアを2紙以外にも拡張して、カタカナ綴りを対象とした紙面差の分析を進めている。Webを対象とした頻度計量は、主にgoo、infoNavigator等のサーチエンジンを用いて行った。Webという、規模が大きく、内容が多岐にわたり、変化のスピードが速いテキストを対象として、頻度(ヒット数)をデータベース化し、1の単語認知データベースと関連づけて分析した。その結果、Webを用いることで、より認知課題のパフォーマンスとの対応がよい頻度情報が得られることが明らかになった。また、大量データの処理をスムーズに進めるためのツール類をPerl、Lisp等で作成した。特に、Lispの使用については、その標準的なテキストであるANSI Common Lisp(Graham,1996)の翻訳も出版に至った(久野・須賀,2002)。1新聞電子化コーパスとWebを中心とした単語頻度の計量外的語彙の特徴について調べるために,電子化テキストを対象とした調査を進めた。まず新聞電子化コーパスに関しては,継続購入をしている毎日新聞,日経新聞の2002年分に加え,読売新聞5年分を新規購入し,研究利用に適した形に整備した。そのうえで,カタカナ綴りに関して,毎日,朝日,読売,日経の4紙を対象とした紙面差の分析と,毎日,読売,日経の3紙を対象とした時系列変動の分析とを進め,多くの紙面差と複雑な時系列変動とが存在することを見いだした。またWebの分析では,サーチエンジンGooおよびGoogleを用いて,大規模単語セットについて様々な検索パタンでヒット件数を調べ,有用性の高い頻度情報の抽出と,単語相互の関連の分析をを行った。2単語認知課題と質問紙調査に基づく語彙特性の分析内的語彙(心的辞書)の特徴について調べるために,単語認知実験と質問紙調査を行った。具体的には,1600のカタカナ単語を対象とする語彙判断課題(go/no-go lexical decision task ; Perea & Gomez,2002)と,単語の主観的親近性,主観的頻度の調査に関して,手続きを改善しつつ,昨年度に引き続きデータの拡充を行い,単語認知データベースの構築を進めた。このデータと,1の結果とを基礎として,単語の特性に関する既存の指標(e.g.,親密度,表記妥当性,頻度)の妥当性について検討し,問題点を明らかにした。

2単語認知課題と質問紙調査の分析1,632個の漢字熟語について語彙判断課題を実施した。この実験で得られたデータを過年度に得たカタカナ語におけるデータ等と総合して,反応時間データベースを構築した。そして,この反応時間を中心とする心理実験データを,1の頻度情報を含む単語特性データ,および被験者特性データ(語彙力,メディア接触度等)と関連付けて分析した。その結果,頻度や親近性等の単語特性が単語認知成績に効果を及ぼすといった従来よく知られた現象を確認するにとどまらず,単語頻度の時系列変動(季節変動およびトレンド)と単語認知成績の間に関連があることと,被験者特性(語彙力,メディア接触度等)と単語認知成績との間に関連があることとを示した。こうした結果から,単語認知の問題を研究する際に,外的語彙,内的語彙の双方の変動を視野に入れることの重要性が明らかになった。
ブタ小腸の保存臭発生機構と天然物による抑臭作用

1.ブタ小腸保存中の悪臭発生の機構について:嫌気状態での保存や抗菌剤の添加などの処理によるメチルメルカプタン発生量と嫌気性菌群数との間に認められた有意に高い相関性、滅菌処理したブタ小腸試料への嫌気性菌群接種による悪臭発生の再現実験、またメチルメルカプタン産生能を持つ菌(Proteus mirabilis)の分離同定により、ブタ小腸保存中に生ずるメチルメルカプタンを主成分とした悪臭の発生は、屠殺後の洗浄で残存したブタ小腸常在菌に由来すると推測される嫌気性菌群の増殖に起因するという結論を得た。2.抑臭に有効な天然物の作用機作について:天然物の中で、ドクダミ、廃糖蜜の抑臭効果は、抗菌作用だけではなく消臭(除臭)作用にもよることが、保存料などとの併用実験によっても再確認された。また、分離同定したメチルメルカプタン産生菌を用いた抗菌性試験系と、メチルメルカプタンに対する消臭活性試験系を確立し、天然物あるいはそれらの抽出画分について抑臭効果の簡便な確認実験を行うことが可能となった。特に抑臭効果の顕著であったドクダミについて、その酢酸エチル画分より消臭活性成分のひとつを単離し得た。今後、同定、機構解明へと展開していく計画である。3.他の臓器の保存臭成分について:ブタ小腸で得られた知見を基に、ブタ大腸、ウシ小・大腸の保存臭成分の同定を行った結果、一日保存後の揮発性成分はメチルメルカプタン、エタノールなど共通した成分が認められ、また微生物叢についてもブタ小腸と同様の増殖傾向を示した。したがってブタ小腸の保存臭に関するこれまでの知見と実験手法が、ブタ大腸、ウシ小・大腸の保存臭発生機構とその抑臭の研究に適用できる可能性が示唆された。1.ブタ小腸保存中の悪臭発生の機構について:ブタ小腸保存時の悪臭発生の主原因が、嫌気性菌の著しい増殖に伴うメチルメルカプタンの発生であることを、滅菌処理したブタ小腸試料への嫌気性菌群の接種による再現実験により立証した。またメチルメルカプタン産生能を持つ菌(菌種はKlebsiella 1種、Streptococcus2種、およびProteus 1種、いずれも通性嫌気性菌)を分離、同定することができた。これらの結果より、研究目的のひとつであるブタ小腸保存中の悪臭発生の機構をほぼ明かにすることができた。2.抑臭に有効な添加物の作用機作について:抑臭有効成分の分離・精製のための準備段階として、分離同定したメチルメルカプタン産生菌を用いた抗菌性試験系と、ガスクロマトグラフ(FPD検出器)によるメチルメルカプタンに対する除臭効果の試験系を確立した。これらふたつの試験系により、天然物あるいはそれらの抽出画分について抑臭効果の簡便な確認実験を行うことが可能となり、廃糖蜜については抗菌力から、またドクダミについては除臭力から抑臭効果の検討を行ってきた。今後、主としてドクダミについて抑臭有効成分の分画・精製そして同定へと研究を進めていく。

1.ブタ小腸保存中の悪臭発生の機構について:嫌気状態での保存や抗菌剤の添加などの処理によるメチルメルカプタン発生量と嫌気性菌群数との間に認められた有意に高い相関性、滅菌処理したブタ小腸試料への嫌気性菌群接種による悪臭発生の再現実験、またメチルメルカプタン産生能を持つ菌(菌種はKlebsiella1種、Streptococcus2種、およびProteus1種、いずれも通性嫌気性菌)の分離同定より、ブタ小腸保存中に生ずるメチルメルカプタンを主成分とした悪臭の発生は、屠殺後の洗浄で残存したブタ小腸常在菌に由来するものと推測される嫌気性菌群の増殖に起因するという結論を得た。2.抑臭に有効な天然物の作用機作について:天然物の中で、ドクダミ、廃糖蜜の抑臭効果は、抗菌作用だけではなく消臭(除臭)作用にもよることが、保存料などとの併用実験により再確認された。また、分離同定したメチルメルカプタン産生菌を用いた抗菌性試験系と、メチルメルカプタンに対する消臭活性試験系を確立し、天然物あるいはそれらの抽出画分について抑臭効果の簡便な確認実験を行うことが可能となった。現在、ドクダミの抑臭有効成分を分画・精製しており、同定、機構解明へと進む最終段階にある。3.他の臓器の保存臭成分について:ブタ小腸で得られた知見を基に、ブタ大腸、ウシ小・大腸の保存臭成分の同定を行った結果、一日保存後の揮発性成分はメチルメルカプタン、エタノールなど共通した成分が認められ、また微生物叢についてもブタ小腸と同様の増殖傾向を示した。したがってブタ小腸の保存臭に関するこれまでの知見と実験手法が、ブタ大腸、ウシ小・大腸の保存臭発生機構とその抑臭の研究に適用できる可能性が示唆された。
アレルギー性鼻炎における上皮細胞の新たなる役割・DEPによる影響

対象:通年性、季節性アレルギー性鼻炎患者検体:アレルギー患者と非アレルギー患者の下甲介粘膜下甲介粘膜から酵素処理で上皮細胞を分離し上皮細胞を単離培養し検討下甲介粘膜上皮細胞とT細胞をダニ抗原存在下に培養したところ、T細胞の活性化を認めた。鼻粘膜上皮細胞は抗原存在下にT細胞を活性化していることがわかる。アレルギー性鼻炎患者の上皮細胞において、CD86とHLA-DRの発現は増加している。培養上皮細胞をDEPで刺激したところ、HLA-DRの発現は増加したがCD86の増加は認めなかった。しかしDEPとダニ抗原存在下に培養したところ、HLA-DRとCD86の発現が増加した。通年性アレルギー性鼻炎患者の上皮細胞では、FcεRIの発現が増加しており、季節性アレルギー性鼻炎患者の上皮細胞では季節外に比べ季節中でFcεRIの発現が増加する。IL-4で刺激すると、培養上皮細胞のFcεRIの発現増加を認めた。抗IgE抗体での刺激でIL-6・RANTES産生の増加を認めた。対象:通年性、季節性アレルギー性鼻炎患者検体:アレルギー患者と非アレルギー患者の下甲介粘膜1) HD患者の鼻粘膜にHDの抗原ディスクを置き誘発後、鼻粘膜上皮層擦過片を採取2)通年性アレルギー患者の鼻粘膜上皮層擦過片を採取高親和性IgEレセプター(FcεRI)α・β・γ鎖のmRNAの発現をRT-PCR法で検討した。FcεRIのα・γ鎖の発現は認めたが、β鎖の発現は、認められなかった。3)甲介粘膜から酵素処理で上皮細胞を分離し上皮細胞を単離培養しIL-4・IL-13・TNF-αで刺激IgE・FcεRI・HLA-DRの発現をフローサイトメトリーを用いて検討した。IL-4の刺激で培養上皮細胞のFcεRIの発現は増加した。
微小残存腫瘍の新しい検出法の開発

本研究の目的は、末梢血中に存在する微量の腫瘍細胞(具体的には急性白血病細胞を対象とする)を感度よく検出する手法を開発することである。筆者らは既成の自動血球分析装置のスキャッタグラムを用いて、白血病細胞を検出するための指標として側方蛍光強度、既成の幼若細胞出現チャンネル、さらに好塩基球出現チャンネルに現れる細胞集団を対象として、それぞれのチャンネルにおける出現程度をスコア化し、あらたな幼若細胞検出スコアリングシステムを考案した。患者末梢血を用いて、上記スコアリングシステムの検出力を目視法との比較で検討したところ、血液1マイクロリットルあたり数個の骨髄性白血病細胞を検出できることが確認された。検査特性として感度・特異度ともに良好な成績が得られたが、リンパ性白血病細胞では検査特性が劣ることもわかり、現段階では本検出法は専ら骨髄性白血病適用される方法とみなされた。急性白血病の治療効果判定や再発の早期発見のためにいわゆる微小残存腫瘍細胞(minimal residual disease;MRD)を効率よく検出することが望まれている。PCR法を用いた白血病特異的遺伝子発現の検出法や高感度フローサイトメトリー法が重用されている。今回我々が考案した手法は、検出感度の面で上記2法に劣るものの、末梢血を用いてルーチン検査の延長線上で簡便に、低コストで実施できることから、今後臨床的有用性が期待されるものといえる。検査特性の改善に向けて、現在さらなる検討を続けている。このことから白血病細胞を検出するための指標として側方蛍光度が重要と考え、種々の白血病細胞株について側方蛍光度を測定した。その結果調べた細胞株のすべてにおいて、患者白血病細胞に比べて著明に側方蛍光度が強いことがわかった。これは細胞株の場合患者細胞に比べてRNA含有量が多いためと考えられた。従って本測定系では細胞株は必ずしも患者検体に対する良い陽性コントロールとはなり難いと判断し、以降専ら患者末梢血を用いて、側方蛍光度による白血病芽球の検出力を目視法との比較で検討開始し、現在に至っている。なお患者検体のルーチン検査外取り扱いについては、既に本学所轄委員会にて承認を受けている。今後側方蛍光度以外のパラメーターもあわせて検討する予定である。急性白血病の治療効果判定や再発の早期発見のためにいわゆる微小残存腫瘍細胞(minimal residual disease ; MRD)を効率よく検出することが望まれている。
細胞質分裂を誘起する分子機構の研究

分裂酵母から初めてアクチンを精製して性質を調べ、骨格筋アクチンと同様のフィラメントに重合することを示した。分裂酵母収縮環のアクチンフィラメントを可視化し方向性を決定できた。収縮環が収縮するにつれフィラメントが短くなることを初めて実証した。収縮環アクチンははじめ分裂面の1点から両方向へ重合すること、その後、方向性が入り交じり収縮が起ることを提唱した。ハエ細胞を用いて、細胞質に拡散しているミオシン分子が細胞分裂期に赤道面表層に集積することを示した。細胞分裂は生物の増殖・再生にとって必須の過程であり、分裂面の決定は多細胞生物の発生・分化にとって重要である。動物細胞や酵母は分裂期に分裂面の細胞膜直下に形成される「収縮環」の収縮により分裂する。この構造は主としてアクチンフィラメントとII型ミオシン(以下ミオシン)から成り、これらの相互作用によって収縮する。収縮環の形成位置(細胞の分裂位置)の決定機構、収縮環の形成機構の問題はこの分野の中心的課題である。そこで分裂シグナル伝達の機構とそれを受けて収縮環がどのように形成され、収縮するかを分子レベルで解明したい。分裂酵母から初めてアクチンを精製し、その性質を調べた。分裂酵母アクチンは骨格筋アクチンと太さ、らせんの周期など構造的に区別のつかないアクチンフィラメントに重合することを電子顕微鏡観察、光回折法により示した。マグネシウムイオンを結合した分裂酵母アクチンは骨格筋アクチンより若干速く重合したが、カルシウムイオンを結合した場合、KClを加えるとフィラメントでなく顆粒状に重合する点が異なっていた。分裂酵母アクチンは骨格筋アクチンに比べ、分裂酵母プロフィリンと強く相互作用したが、骨格筋ミオシンとは弱く相互作用した。分裂酵母細胞中の濃度は8.7μMだった。分裂酵母細胞を透過処理し、ミオシンS1を浸透させて収縮環のアクチンフィラメントをやじり構造に変換させてから樹脂に包埋し、連続切片を作製し、電子顕微鏡観察によりフィラメントの方向性を決定した。その結果、収縮環を構成するアクチンフィラメントの数は1,000-2,000本、平均長は約0.6μm反対方向のフィラメントがほぼ1:1存在していた。収縮環が収縮するにつれフィラメントが短くなることが初めて実証された。また、収縮環のアクチンフィラメントの配列を3次元再構成することにより、分裂酵母においては収縮環アクチンははじめ分裂面の1点から両方向へ重合すること、その後、方向性が入り交じり収縮が起ることを提唱した。収縮環を作るとき、細胞内のほぼ半量のアクチン分子を使っていることが分かった。卵細胞の分裂シグナル関連因子:ウニ卵のformin/diaphanousfamilyタンパク質UDiaの遺伝子クローニングを行い、全長のアミノ酸配列を決定した。また部分長のタンパク質を大腸菌で発現し、抗血清を得た。ウニ卵にカリキュリンを作用させた時に形成される疑似分裂溝の位置は卵軸にたいして角度、距離ともにランダムである事を見いだした。アフリカツメガエル卵の同ファミリータンパク質XDiaの抗体を抗血清からアフィニティー精製した。ウニ卵でアクチンフィラメント結合性蛍光色素タンパク質融合タンパク質のmRNA注入によりタンパク質が発現されることを確認した。分裂期のミオシンリン酸化と分裂シグナル:ショウジョウバエS2細胞のミオシンは表層流によらず、細胞質に拡散しているミオシン分子が赤道面表層で捕捉されることで収縮環に集積することを明らかにした。捕捉にはミオシン調節軽鎖の活性化リン酸化と重鎖のフィラメント形成が必要であることを明らかにした。分裂酵母のシグナル関連因子:分裂酵母のミオシンのターゲットとなるMid1のリン酸化部位を1箇所同定したが、まだ分子全長の20%が解析できたのみなのでさらに継続している。分裂酵母の収縮環の形成過程:分裂酵母に蛍光色素タンパク質で標識したアクチンを発現させた。このアクチンが細胞内で活性を保っているかどうかを検討する。蛍光抗体法によりformin/diaphanousfamilyタンパク質Cdc12が、収縮環前駆構造のアスター様構造の1-数カ所に局在することを見た。分裂酵母キネーシン様タンパク質Klp8の分裂位置への局在は微小管でなくアクチンに依存する結果を得た。卵細胞の分裂関連因子:細胞質分裂中のウニ卵から分裂溝を単離し、2次元電気泳動と免疫ブロッティングによりペプチド延長因子EF1αとEF1βγδ複合体が濃縮されていることを見いだした。In vitro実験によりEF1αはアクチンフィラメントを束化する活性を持つことが分かった。束化能はGTPγS存在下で高く、GDP存在下で低かった。Ca-カルモデュリンとEF1βは束化を阻害した。プルダウン実験により、EF1αとEF1βは細胞質中で結合していることが分かった。蛍光抗体法によりEF1αとEF1βは細胞質分裂時に分裂溝に濃縮することが分かった。

さらにEF1α抗体あるいはEF1βを生きた卵に顕微注入する進行中の分裂溝が元に戻ってしまった。これらの結果から、収縮環の構造がEF1αとEFIβの活性により調節されるという仮説を提唱した。分裂期のミオシン集積とリン酸化:GFP-ミオシンを発現したショウジョウバエS2細胞でミオシン分子のダイナミクスを解析した結果、ミオシンは収縮環形成期に細胞質に拡散している分子が赤道面表層で捕捉されることで分裂位置に集積することが分かった。さらに捕捉には調節軽鎖の活性化リン酸化および重鎖のフィラメント形成が必要であることを明らかにした。分裂酵母収縮環の形成過程:出芽酵母のアクチン結合タンパク質ABP140のアクチン結合ペプチドLifeactと蛍光タンパク質mRubyの融合タンパク質を分裂酵母内に発現させてアクチンを可視化し、分裂過程でのライブイメージングを行った。分裂期に入ると細胞中央部にアクチンの集積が見られ、そこからアクチンケーブルがダイナミックに伸びたり消えたりするのが見られた。やがて1本のケーブルが細胞赤道部で安定化されて収縮環となった。この結果は私達が提唱しているアスター様構造-先導ケーブル仮説を支持する。
急増した鍼灸学科の医療安全教育の評価と、質の保持・向上のためのコンテンツ開発

急増した鍼灸師養成課程の医療安全教育レベルを維持向上させるため、文献調査、海外施設調査、およびワークショップと質問調査による、効果的な鍼灸医療安全教育の授業モデルを作成した。上記各調査およびワークショップの議論を踏まえ、また今まで散在していた教材や方法論を統合して鍼灸安全教育に特化した科目「鍼灸安全学」(90分×15回)のシラバスに組み込み、実際に授業で試行した結果、学生の肯定意見は授業の理解度で89.1%、教材の使用で97.8%と良好な評価であった。10年間で4倍に増加した鍼灸師養成課程(鍼灸学科)の医療安全教育の質・量の評価と教育用コンテンツモデルの開発を計画した。平成24年度に続いて25年度も鍼灸学科の医療安全教育の現状に関する調査把握と、鍼灸による有害事象・過誤報告に関する調査を行った。1.医療安全教育の現状調査においては、全国の鍼灸学科を有する大学・専門学校を対象とした質問調査が別の研究グループにより行われたため、重複を避けて調査票の郵送を中止し、このグループと共同で大学・専門学校と比較可能な質問票を視覚支援学校・視力障害センター計67施設に送付した。その結果、39施設から回答を得た(回収率58.2%)。ほぼすべての施設が重要な有害事象や禁忌・刺鍼深度などについては教授していたが、セクハラ・パワハラは74%、心肺蘇生法と自動体外式除細動器については41%の施設のみ取り扱っていた。また、学生のB型肝炎ワクチン接種を実施していると回答した施設は44%であった。今回の結果から、視覚障害者の理療教育施設における鍼灸安全教育は、施設にかかわらずほぼ同等に行われているが、一部の教育内容については大学・専門学校とともに情報更新や再検討を行う必要があると思われた。2.有害事象・過誤報告に関しては、鍼治療により生じた神経傷害例の情報収集とレビューを実施した。埋没鍼の禁止とディスポーザブル鍼の普及により、相対的に埋没鍼と折鍼による有害事象報告は減少していた。しかし刺鍼による上部頚椎周辺での神経傷害が目立つため、この部位での刺鍼深度に関する知識と技術の教育の再検討の必要性が示唆された。平成24年度は鍼灸学科の医療安全教育の現状に関する調査と、鍼灸による有害事象・過誤報告に関する調査を行った。1.医療安全教育の現状調査においては、別の研究グループにより全国の鍼灸学科を有する大学・専門学校を対象とした質問調査が行われたため、重複を避けるため調査票の郵送を中止し、このグループの調査結果の公表を待つこととした。また、視覚支援学校に対する調査が行われていないため、その質問票を作成し、平成25年度に郵送することとした。2.鍼灸による有害事象・過誤報告に関しては、医中誌WebおよびPubMedにより関連文献を検索し、収集して事象ごとに整理した。報告数は10年前の調査と大差なく同程度の数と割合で掲載されていた。ほとんどの症例は現代西洋医学系学術雑誌に掲載されていたため、情報収集により鍼灸師および学校教育にフィードバックする必要性が示唆された。3.業団体の協力により得られた賠償責任保険による支払例は、平成19年をピークとして例数・金額ともに減少傾向にあった。4.韓国の韓医学部における鍼灸安全教育の概要と教育施設と比較するために、国立釜山大学を訪問して調査した。安全性に関する教育に特化した授業科目はなく、いくつかの授業科目の中に散在していた。また日本と鍼灸の刺法が違うため、刺鍼時の衛生管理教育を単純に比較することは難しかった。平成24・25年度の成果を踏まえて、鍼灸による有害事象・過誤に関する病態別分析、海外の大学における鍼灸安全教育の視察、鍼灸安全教育に特化したシラバスの調査、および安全教育授業コンテンツ開発のためのワークショップを行った。1.鍼灸に関連して発生したとされる有害事象・過誤の報告論文のうち、1気胸、および2気胸を除く臓器損傷・異物について、それぞれ文献レビューを行った。その結果、近年においても鍼治療後に発症した気胸が報告されていた。また、伏鍼が臓器損傷に関与していることがわかった。これらのことから鍼灸師は局所解剖と安全刺鍼深度を理解して不必要な深刺や粗暴な刺鍼操作を避けることが重要であり、そのために鍼灸師に対して安全性関連情報を定期的に更新し情報発信することで継続教育を推進していく必要性が示唆された。2.大学で鍼灸の教育を行っているオーストラリアのシドニー工科大学およびウエスタンシドニー大学の現状を視察した。抜いた鍼の取扱い、安全管理教育プログラムの文章化、およびITを用いた授業について、日本よりも徹底していた。3.大学鍼灸学科で鍼灸安全教育に特化したシラバスがWeb上で入手できるのは4校であり、すべてが過誤、有害事象、感染制御を、また2校以上が関連機器の安全管理、システムとしての事故防止策、インシデント報告、安全刺鍼深度、事故発生時の処置を含んでいた。国内の鍼灸安全教育プログラムが標準化されていないことが確認できた。4.鍼灸安全教育に携わる教員によるワークショップを開催し、1入学直後と臨床実習直前の2回に分けて安全教育を行うべきこと、2安全刺鍼深度に関する人体模型の開発・改良・普及、3教科書およびガイドラインの記載の更新と統一、4シミュレーション教材の積極的な使用、について合意が得られ、将来行うデルファイ法の原案が作成できた。