hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
サルトル演劇に見るモラルの研究

主人公の「我有化」への意志に従属する人間関係はそこで「所有の原則」によって規制されていることが分析から明らかとなった。サルトルの倫理構想における特権的な思索の場として、昨年度主に考察した「拷問」も、やはり「他者の自由の我有化」に動機づけられた暴力である。哲学的著作では、『存在と無』以降言及されることがなかった「我有化」は果たして乗り越えられたのか。その答えを、戯曲『アルトナの幽閉者』(1959)の考察から得たことが今年度の最も重要な成果である。大会社の相続者にして、大戦中にナチス将校として拷問を行った主人公は、戦後、その行為の意味を自問し続けている。戯曲は行為の動機の発見を主題に展開し、ついに主人公は父親との対話を通じて、みずからの行為を動機づけていたものが「我有化」への意志であったことを自覚する。「我有化」への意志が、他者ばかりでなく自己をも疎外することに思い至る主人公の思惟は、父親との「対話」によって導かれている。いわば一人称の「存在欲求」を乗り越える、他者とのコミュニケーションのありかたは、「対話のモラル」という倫理モデルとして提起し得るというのが、本研究全体の結論でもある。本研究の全成果は論文集の形態で、研究成果報告書として冊子にまとめた。
ES細胞を利用した鳥類遺伝子組換え技術の構築

本研究では,ニワトリ(6ヵ月)よりも性成熟までの期間が圧倒的に短いウズラ(6週間)をモデル動物として,鳥類において多能性幹細胞を用いた遺伝子組換技術の確立を試みた.これまでのニワトリの研究を基に,複数のウズラ系統を用いて樹立を試みた結果,長期間に亘ってES様の形態を維持したウズラ胚性幹(qES)様細胞の樹立に成功した.この細胞は,JAK-STATシグナルによってその多能性を維持しており,生殖細胞系列を含めたキメラ形成が可能であった.しかしながら,そのキメラ形成率は,細胞株間で大きく異なっており,本研究の期間では,遺伝子組換え体の作出技術の確立には至っていない.鳥類多能性幹細胞を利用した遺伝子組換え体の作出に向けて,ウズラの胚盤葉細胞を用いた細胞株の樹立を試みた.研究開始前に想定していたニワトリ由来LIFの使用に加え,特定の低分子阻害剤を培養培地に添加することによって,安定的なウズラ胚盤葉細胞の長期継代培養が可能となった.また,胚盤葉細胞は,使用するウズラの系統によって培養効率に明確な差が現れることが明らかとなったことから,細胞の特徴解析を行っていく際,特に生殖系列伝播の可否を検証する場合にも系統間差が大きな影響を与えることが考えられた.継代培養を行った細胞は,未分化および多能性マーカーに陽性を示し,初期胚に移植することでキメラ体を作出可能であった.そのため,長期間継代培養を行った細胞が,多能性幹細胞としての特徴を維持していることが示された.作出したキメラウズラは,生殖系列伝播を確認するため,現在後代検定を実施中である.長期の継代培養が可能となった多能性幹細胞は,緑色蛍光タンパク質遺伝子と薬剤耐性遺伝子を共発現するプラスミドの導入を試み,安定細胞株の取得に成功した.遺伝子導入細胞は,初期胚に移植することでキメラ体を作出可能であり,胚体内の様々な部位で緑色蛍光が観察可能であった.現在,移植した細胞が生殖細胞系列を含め胚体内のどのような組織・細胞に分化しているか検証を行っている.また,ニワトリ細胞を使用した際に問題となった,遺伝子導入に伴う染色体異常の発生についても現在検証中である.ニワトリのES細胞培養系を改変する事で,ウズラの胚盤葉細胞からウズラES様細胞の培養に成功した.この細胞は,哺乳類ES細胞に酷似した形態のコロニーを形成し,長期間の継代培養と凍結保存が可能であった.さらに代表的な未分化マーカーや多能性関連マーカーの発現を維持していると共に,初期胚に移植することでキメラ体を形成可能な多能性を有していることが分かっている.ウズラES様細胞は培養に使用するウズラの系統によって樹立の効率が大きく異なることが明らかとなったが,構築した培養系では複数の系統で同様の特徴を有した細胞が樹立可能であった.そのため,この培養系はニワトリ細胞にも応用可能ではないかと思われる.また,本研究で培養したES様細胞は,JAK/STATシグナルを阻害することで分化形態に形状が変化するが,FGFシグナルの阻害では影響が殆ど見られなかったことから,未分化維持機構はマウスやラットのES細胞のようにLIFシグナルに依存しているナイーブ型に近い性質を有していると思われる.ニワトリES細胞では,染色体異常の発生がキメラ体における生殖系列伝播を阻害している一因であると考えられたが,ウズラES様細胞においても複数の細胞株で染色体異常が観察された.この染色体異常は,遺伝子導入の有無に関わらず検出されており,遺伝子操作によって引き起こされたのではなく,継代培養の積み重ねにより発生しているものと考えられる.そのため,キメラ体の作出には染色体異常が殆ど検出されない細胞株を使用することが肝要であり,現在,キメラ体作出までの培養日数,特に遺伝子操作とその後の選抜を短縮することを試みている.研究計画では,平成27年度の段階で樹立したウズラES細胞を移植したキメラ体において,生殖系列キメラであることを判定する後代検定を実施する予定であった.しかし,ウズラES様細胞において,遺伝子操作の有無に関わらず染色体異常が複数の細胞株で検出され,その原因は培養日数の蓄積によるものと考えられた.そのため,染色体異常の発生を避けるために,より短い培養日数で樹立,遺伝子操作およびその後の細胞選抜を完了することが望ましい.ニワトリES細胞では,遺伝子操作後もキメラ体において生殖細胞系列への分化が確認できているものの,その後ES細胞由来の子孫は得られていない.その主要な原因の一つが移植細胞における染色体異常の発生と考えられるため,ニワトリのモデルとして利用予定であるウズラES様細胞において染色体異常を回避する手法を検証することは極めて重要であり,現在はそのための改良を行っている段階である.申請者は,これまでに行ってきたニワトリES細胞の培養系と昨年度までの研究成果を利用することで,ウズラES細胞の培養系の構築に成功している.ウズラのES細胞は,哺乳類の多能性幹細胞におけるナイーブ型とプライム型の特徴を一部ずつ併せ持った特徴を有しており,本研究では,この細胞を利用して遺伝子組換えウズラ・ニワトリ個体の作出を試みている.ウズラのES細胞は,胚盤葉への移植によって一部が定着可能であり,キメラ体として三胚葉に由来する種々の組織に分化していることが明らかとなっている.さらに,キメラ胚の生殖腺内には,導入遺伝子であるGFP陽性でかつVasa陽性な始原生殖細胞の存在を検出しており,ウズラES細胞がキメラ体内で生殖細胞系列に分化可能であることを確認した.

これにより申請者が樹立したニワトリ・ウズラのES細胞が,共に生殖細胞系列に寄与可能な特徴を有していることが明らかとなり,鳥類の多能性幹細胞とそれを利用した遺伝子組換え体の作出技術の構築に向けて培養系の有効性の一部が示されたといえる.一方で,ウズラES細胞によるキメラ体の作出効率は,移植に使用する細胞株によって大きく異なり(020%),特に生殖細胞系列に寄与しているキメラ体の存在が稀であるため,予定していた研究計画に対して遅れが生じている.現在,生殖系列伝播を考慮した染色体異常が少ない細胞株の利用とキメラ体の作出効率が高い細胞株の選抜を実施しており,キメラ体の作出効率向上による遺伝子組換え個体の作出を目指している.研究計画では,昨年度までにウズラES細胞を利用した遺伝子組換え個体の作出と,その培養条件をニワトリES細胞へとフィードバックさせたニワトリの組換え個体の作出を実施する予定であった.しかし,ウズラのES細胞を用いたキメラ体の作出効率が細胞株によって大きく異なること,またウズラES細胞がキメラ体内で生殖細胞系列に寄与している率が低いことが問題となり,研究の進捗状況は遅れている.一方で,本研究で樹立したウズラES細胞が,申請者がこれまでにニワトリで樹立してきたES細胞と同様に,生殖細胞系列に寄与できることが確認出来ており,これまでに構築した鳥類の多能性幹細胞の培養系の有効性と遺伝子組換え個体の作出に向けた必要条件を満たしたものであることが明らかとなっている.現在は,キメラ体の作出効率が高いウズラ細胞株の選抜と,キメラ体を用いた検証を行っている.昨年度までに,ウズラの胚盤葉細胞を培養することで,ウズラES細胞の樹立を行い,その樹立効率における使用ウズラ系統の違いや樹立した細胞における多能性の確認,核型異常の有無などを確認し,生殖系列キメラ体の作出へ向けて検証を行ってきた.本年度は,昨年度までの成果を基にして,培養したウズラES細胞を用いて,遺伝子組換え体の作出を試みた.ウズラES細胞は,これまでに長期間の培養後も初期胚に移植することで胚体に寄与してキメラ体を作出することが可能であり,多能性を維持していることが確認されている.また,胚体中には,in vitroで挿入したEGFP遺伝子を発現した組織や生殖細胞に特異的なタンパク(Vasa)と共発現を示す細胞も確認されており,生殖細胞系列への分化能も保持していることを確認してきた.一方で,移植胚体内においてドナー細胞の寄与が確認できるキメラ体数は限られており,細胞のキメラ形成率は低いものであった.その原因としては,培養系における細胞の分化段階の進行が考えられた.特に初期胚のマーカーとして使用されるSSEA-1は,培養開始直後の胚盤葉細胞では,殆ど発現が見られないのに対し,培養後は徐々にその発現細胞の割合が増殖し,長期間培養後はほぼ全ての細胞がSSEA-1に対し陽性を示した.このことは,培養過程によってウズラ胚盤葉細胞とウズラES細胞の間で性質が変化していることを示しており,移植時に細胞がレシピエント胚に定着できなかった要因の一つと考えられた.そのため,ウズラES細胞を用いてキメラ体を作出するためには,培養前の胚盤葉細胞の性質を保持したまま培養系を維持する何らかの因子が必要であることが示唆されている.本研究では,ニワトリ(6ヵ月)よりも性成熟までの期間が圧倒的に短いウズラ(6週間)をモデル動物として,鳥類において多能性幹細胞を用いた遺伝子組換技術の確立を試みた.
新規の水性二相分配抽出法による細胞の特異的分離法の開発

a-アミラーゼに対するモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ16-3F株、ミエローマNS-1株、脾細胞などの細胞を用いて、種々の水性二相系での分配について調べたところ、塩をあまり含まない系では、細胞は上相に分配される傾向にあった。系への塩の添加によって細胞は凝集ぎみになり、上相から排除されて界面や下相に分配するようになった。16-3F細胞の特異的な分配を検討するために、pH変化により溶-不溶状態を制御できかつ水性二相系で上相に分配するポリマーであるEudragitに、a-アミラーゼあるいは抗マウスIgG抗体をリガンドとして結合させ、PEG8000-Dextran T500水性二相系に導入した。Eudragitを導入しない系では塩がない場合、細胞は上相に分配したが、リガンドを固定したEudragitを導入することによって、上相の割合が低下し界面への分配が多くなった。しかし塩を加えることによって上相への分配の割合は増加した。この塩を入れた条件では、Eudragitを入れない場合およびリガンドを結合していないEudragitを入れた場合は、細胞は下相に分配されることからリガンド固定によって選択的な分配が行えたものと考えられた。また系に導入したリガンド固定Eudragit濃度を増すにつれて、細胞の上相への分配が増加した。リガンドを固定したEudragitの使用で目的細胞の上相への分配を促進できることがわかったので、つぎに細胞混合物からの分離を試みた。16-3F細胞とその親株であるNS-1細胞の細胞混合物にa-アミラーゼを固定化したEudragitをふくむPEG8000-Dextran T500系を添加したところ、16-3F細胞が選択的に上相に分配され、本研究で開発した分離系は、細胞混合物からも目的細胞を分離可能であることがわかった。
マウス肺発癌耐性遺伝子Par2の高精度染色体マッピングと機能解析

BALBマウスのウレタン誘発肺発癌耐性遺伝子であるPar2は、第18染色体遠位部に存在する。Par2をポジショナルクローニングするためには、C57BL/6マウスの第18染色体Par2領域をBALBマウスの同領域に移入したPar2-congenicマウスを利用し、同遺伝子の高精度染色体マッピングを行う必要がある。慣習的には、10回の戻し交配をもってcongenicマウスの樹立が完了したものと判断される。しかし、我々は予備実験により、Par2の高精度染色体マッピングを目的とする場合、4回の戻し交配を終了した段階の不完全なcongenicマウスでも充分実用に足りることを明らかにした。よって、平成12-13年度にかけて、6回ないし7回の戻し交配を終えたsemi-6ongenicマウスを利用し、Par2の高精度染色体マッピングを試みた。その結果、Par2はD18Mit103遺伝子座とD18Mit188遺伝子座に挟まれる約0.5cMの領域に存在することが明らかになった。今後は同領域に含まれる候補遺伝子を精査し、Par2遺伝子の単離を進める。一方、Par2-congenicマウスの樹立も9回の戻し交配により既に完了した。樹立されたcongenicマウスの肺発癌過程を親系統であるBALBマウスと比較することにより、Par2遺伝子単独の生物学的機能を解析することができる。特に、二段階発癌説に基づいたイニシエーション相、プロモーション相におけるPar2遺伝子の作用を組織、個体のレベルで明らかにする目的にcongenicマウスを役立てて行く。BALB/cByJ(BALB)マウスはウレタン誘発肺発癌に比較的耐性を示し、最も高感受性であるA/Jマウスに比べ、その感受性は約14分の1である。我々の研究により、BALBマウスは18番染色体のD18Mit123遺伝子座とD18Mit144遺伝子座に挟まれた約25cMの領域にA/Jの発癌感受性を優性に抑制する遺伝子であるPar2を有することが判明している。今後我々はPar2遺伝子のpositional cloningを最終目標として研究を進めるが、今年度はその前段階として、同遺伝子の染色体上位置をさらに1cM内外に絞るべく、congenicマウスを利用したfine mappingを行った。まず、D18Mit123とD18Mit144に挟まれたPar2領域をC57BL/6(B6)マウスからBALBマウスへ移入したPar2-congenicマウスの樹立を完了した。B6はA/Jと同じく、Par2の劣性アレル、つまり、発癌抑制作用のないアレルを有することが知られている。次に、Par2のfine mappingを行うため、D18Mit123とD18Mit144の間にrecombinationを有する雄を(BALB x congenic)F_1 x BALB backcross miceより9匹選択し、雌A/Jマウスと交配させた。生まれた子マウスをウレタンにて処理した後、発生肺腫瘍数に関する連鎖解析をPar2に連鎖するinformativeなmicrosatellite marker遺伝子座において行ない、各recombinantのPar2遺伝子型を決定した。この結果を各recombinantの詳細なrecombination位置の情報と照らし合わせ、Par2遺伝子が二つのmicrosatellite markersに挾まれる約0.5cMの領域に含まれることが明らかになった。BALBマウスはウレタン誘発肺発癌に比較的耐性を示し、最も高感受性であるA/Jマウスに比べ、その感受性は約14分の1である。我々は、BALBマウスが18番染色体の遠位部にA/Jの発癌感受性を優性に抑制する遺伝子であるPar2を有することを初めて示した。我々の最終目標はPar2遺伝子のpositional cloningである。Par2の位置が0.5cMの領域にまで狭められていることを考えると、X遺伝子がPar2そのものである可能性は高いと考えられる。

X遺伝予は比較的最近単離されたがん関連遺伝子であり、その機能については未だ不明な点が多い。よって、今後Xの機能と多型との関係につき、さらに解析を加える必要がある。最終的にX遺伝子がPar2であることを証明するためには、Xのノックアウトないしトランスジェニックマウスを作製し、その肺発癌感受性への影響を調べることになる。
マイクロ機能要素集積デバイスによるフィジカルマンマシンインタラクション

MEMS/マイクロ機能要素を集積化することにより,人間と機械間の力学的インタラクションを実現し,高度なマンマシンインタフェイスを提供することを目的とし,アクティブ多面体の試作と適用実験を中心に研究を進めた.アクティブ4面体では,6本のマイクロシリンダ,マイクロエンコーダ,マイクロジョイント,圧力センサを集積した.さらに,マイクロエンコーダを内蔵したマイクロシリンダと,マイクロ15自由度ジョイントを新たに開発することにより,高集積化が可能となり,アクティブ20面体を試作することに成功した.次にこれら多面体によるフィジカルマンマシンインタラクションの効果を調べるために,例として商用の機構解析ソフトウェア(Visual NASTRAN 4D)に組み込んで,制御系の構築と操作実験を行った.PC内部にの実際のアクティブ多面体と同じ構成の仮想物体を構築し,実際のアクティブ多面体の動きおよび力を検出してこれを基にリアルタイムで機構および運動解析を行い,その結果をPC内部の仮想モデルと実際のアクティブ多面体の両方に反映させる方法をとった.操作実験の結果,(1)人間→PC内部の仮想モデルの形状入力,(2)PC→人間への形状提示,(3)フィジカルインタラクションによるPC内部モデルの力学特性(剛性)の提示が良好に実現できた.さらに,20面体に加速度ジャイロスコープを組み込むことにより,仮想物体の接触点を切り替える方式を考案し,5000面からなるPC内の仮想物体をアクティブ20面体で取り扱うことに成功し,これをバーチャルクレイと名づけた.従来のインタフェイスでは困難であった,3次元連続体の持つ分散的な物理情報を取り扱うマンマシンインタラクションが実現できた.今後は,CAD/CAEのインタフェイスへの応用展開を進めたい.MEMS/マイクロ機能要素を集積化することにより,人間と機械間の力学的インタラクションを実現し,高度なマンマシンインタフェイスを提供することを目的とし,アクティブ多面体の試作と適用実験を中心に研究を進めた.アクティブ4面体では,6本のマイクロシリンダ,マイクロエンコーダ,マイクロジョイント,圧力センサを集積した.さらに,マイクロエンコーダを内蔵したマイクロシリンダと,マイクロ15自由度ジョイントを新たに開発することにより,高集積化が可能となり,アクティブ20面体を試作することに成功した.次にこれら多面体によるフィジカルマンマシンインタラクションの効果を調べるために,例として商用の機構解析ソフトウェア(Visual NASTRAN 4D)に組み込んで,制御系の構築と操作実験を行った.PC内部にの実際のアクティブ多面体と同じ構成の仮想物体を構築し,実際のアクティブ多面体の動きおよび力を検出してこれを基にリアルタイムで機構および運動解析を行い,その結果をPC内部の仮想モデルと実際のアクティブ多面体の両方に反映させる方法をとった.操作実験の結果,(1)人間→PC内部の仮想モデルの形状入力,(2)PC→人間への形状提示,(3)フィジカルインタラクションによるPC内部モデルの力学特性(剛性)の提示が良好に実現できた.さらに,20面体に加速度ジャイロスコープを組み込むことにより,仮想物体の接触点を切り替える方式を考案し,5000面からなるPC内の仮想物体をアクティブ20面体で取り扱うことに成功し,これをバーチャルクレイと名づけた.従来のインタフェイスでは困難であった,3次元連続体の持つ分散的な物理情報を取り扱うマンマシンインタラクションが実現できた.今後は,CAD/CAEのインタフェイスへの応用展開を進めたい.
MPを用いた適応的動画像符号化システムの開発

1)非低エネルギー領域多段探索法によるアトムの高速探索アルゴリズム3)ロバスト動き推定に基づく動オブジェクト抽出における領域統合法4)動的輪郭モデルとWatershedアルゴリズムを組み合わせた動オブジェクト抽出法5)適応的な速度関数を用いたレベルセット法による動オブジェクト抽出この研究の目標はサブバンドMPと他符号化方式との適応的動画像符号化システの構築である.この動画像符号化システムの中心技術の一つとなるサブバンドMPは,以前の研究により得られた成果である.今回の動画像符号化システムはそれを用いた従来のシステムの発展型にあたる.研究計画としては,(1)Matching Pursuitsの基礎性能向上,(2)適応的符号化システムの構築,(3)符号化システムの最適化,(4)符号化システムの機能拡張について研究を進める.また,これらのシステム構築のための基礎実験および評価実験は,画像解析・シミュレーションシステムおよび所属機関の計算機を連携させ,シミュレーション実験により行う.1)非低エネルギー領域多段探索法によるアトムの高速探索アルゴリズム3)ロバスト動き推定に基づく動オブジェクト抽出における領域統合法4)動的輪郭モデルとWatershedアルゴリズムを組み合わせた動オブジェクト抽出法5)適応的な速度関数を用いたレベルセット法による動オブジェクト抽出Matching Pursuits (MP)と呼ばれる符号化技術は、最も効率がよい場所を選択して逐次的に符号化を行うため、低ビットレートに強く、ブロック雑音が生じない。本研究は、Matching Pursuitsを組み込んだ低ビットレートに強い新たな動画像符号化方式の確立および実用化に向けた適用範囲と機能の向上を目的としている。本年度の研究によって得られた成果は大きく以下の2つである。1.Matching Pursuitsの符号化処理では、信号とそれに類似したパターンを持つ辞書を探索する処理を行うが、非常に多くの計算量が必要であり、高速な符号化処理の障害となっている。そこで探索処理において、予測誤差信号中の信号エネルギーと最適近似信号の分布特性を考慮し、信号エネルギーの低い領域を探索対象から外し、残った領域について多段探索を行うアルゴリズムを開発し、処理速度向上を実現した。2.システムの任意形状符号化への対応に関連し、映像からの動オブジェクト抽出について検討を行った。まず動的輪郭モデルを用いた輪郭抽出の結果に基づく、エネルギー最小化項をWatershedアルゴリズムの地形図に組み込んで動オブジェクト抽出を行う手法を開発した。これにより正確で滑らかな動オブジェクト輪郭の抽出が可能となった。これらの成果により、MPを用いた動画像システムの処理性能の向上が実現し、機能拡大の検討が進んだ。Matching Pursuits(MP)と呼ばれる符号化技術は、最も効率がよい所を選択して逐次に符号化を行うため、低ビットレートに強く、ブロック雑音が生じない。本年度の研究によって得られた成果は大きく2通りである。2.Matching Pursuitsの符号化特性は用いる辞書に大きく依存する。従来の学習による汎用的な辞書設計においては、符号化対象信号への最適化とシーケンス内の特性変化への対応ができなかったために提案した動的学習辞書設計法では,符号化中に各フレームにおいて学習・最適化を行うため,対象信号への最適化とシーケンス内の特性変化への対応が可能となった。これにより, Matching Pursuitsを用いた動画像符号化における符号化特性の改善が実現した。Matching Pursuits(MP)は、最も効率がよい場所を選択して逐次的に符号化を行うため、低ビットレートに強く、ブロック雑音が生じない。本年度の研究によって得られた成果は以下の通りである。Matching Pursuitsは、任意の場所を効率的に符号化対象とすることが可能なため、このオブジェクト符号化技術に適していると考えられる。そこで任意形状の動き補償予測誤差画像の符号化にMatching Pursuitsを適用することを検討する。その一環として、オブジェクト符号化の前提となる重要な要素技術である画像からの動オブジェクト領域抽出する技術を中心に検討を行った。一つは領域統合法に基づく動オブジェクトの抽出であり、信頼性が高い動きが抽出可能な特徴点を用い、それから得られる統合による動き推定誤差の変位量に基づく評価関数により、高い領域の統合精度を実現した。もう一つはWatershedアルゴリズムの地形図に動的輪郭モデルに基づいたエネルギー最小化の結果を盛り込むことで、良好な動オブジェクト輪郭の抽出法を提案した。

そこで任意形状の動き補償予測誤差画像の符号化にMatching Pursuitsを適用することを検討する。その一環として、オブジェクト符号化の前提となる重要な要素技術である画像からの動オブジェクト領域抽出する技術を中心に検討を行った。一つは動的輪郭モデルの一種であるレベルセット法において、画像のノイズ分布に基づいた静止背景領域推定を行い、それによって得られた動領域の概形を用いて、動オブジェクト抽出の安定性と精度の向上を行なう手法を提案した。もう一つは、クラスタ数の自動決定が可能なx-meansアルゴリズムにより、動きによる特徴点のクラスタリングを行い、その結果に基づいて空間分割した領域をラベリングすることで,オブジェクト数を与えることなく、適切なオブジェクト数で動オブジェクト抽出を行う手法を提案した。
膵β細胞におけるグルコ-ス刺激に対する細胞内Ca応答の解析

ウィスタ-系ラット膵島をコラゲナ-ゼ法にて採取し機械的に単一細胞に分離し、furaー2顕微測光法により37°C表面潅流下にてβ細胞内Ca^<2+>濃度[Ca^<2+>]_iを測定した。(1)16.7mMグルコ-ス刺激に対し、[Ca^<2+>]_iは約0.5分のlagを伴ったゆるやかな減少と、約3分のlagを伴った急峻な増加を示した。(2)温度を26°Cへ低下させると[Ca^<2+>]_iの減少と増加のlagの延長と振幅の減少が見られた。(3)グルコ-ス代謝阻害剤Mannoheptuloseはグルコ-スによる[Ca^<2+>]_i減少と増加を共に阻害した。(4)グルコ-ス代謝中間体Glyceraldehydeは[Ca^<2+>]_i減少と増加をもたらした。(5)電子伝達系阻害剤KCNは[Ca^<2+>]_i減少と増加を可逆的に阻害した。(6)グルコ-ス刺激によりATP依存性Kチャネル電流の抑制が見られ、そのlagは[Ca^<2+>]_i増加のlagと良く一致した。(7)10^<-5>Mアセチルコリン(ACh)は一過性の[Ca^<2+>]_i上昇を誘起し、それは細胞内貯蔵部からのCa^<2+>遊離によった。グルコ-スを1mMから5mMへシフトすると[Ca^<2+>]_i減少のみが出現したが、その後AChを加えると[Ca^<2+>]_i上昇応答が増強された。以上の結果より、グルコ-ス刺激に対するβ細胞[Ca^<2+>]_iの減少と増加の機構として次の点が明らかとなった。(1)グルコ-スに対するβ細胞[Ca^<2+>]_iの減少と増加は共にグルコ-ス代謝に依存する。(2)[Ca^<2+>]_iの減少と増加をもたらす細胞内メディエ-タ-として、ピルビン酸以降のグルコ-ス代謝産物、NADH,H^+,ATP等が有力な候補に挙げられる。(3)グルコ-ス代謝産物によるATP依存性Kチャネル抑制が[Ca^<2+>]_i増加をもたらす主たる機構である。(4)グルコ-スによる[Ca^<2+>]_i減少の主たる機構はACh感受性の細胞内Ca^<2+>貯蔵部へのCa^<2+>取り込みによる。
ドメスティックバイオレンス支援者支援プログラム:コミュニケーション学の視点から

本研究は、ドメスティック・バイオレンス(以下、DV)サバイバーの支援に携わる人々が抱える課題を、コミュニケーション学的視点から明らかにし、よりよい支援を実現させる教育プログラムの開発・実施を目的とした。研究過程と教育プログラムの双方に、言語・非言語コミュニケーションの均衡した視座を取り入れ、DV支援団体のみでなく対人支援現場に貢献すべく、独習およびグループワークに使用できる教材を開発し、配布した。2006年度は、(1)関連文献、論文の精読、(2)実務家への聞き取り調査、(3)実地調査の企画、パイロットスタディ、(4)関連分野のセミナー受講を行った。関連文献、論文等の精読からは、(1)ドメスティックバイオレンス(以下、DV)への対応は、アメリカでの実践、研究成果の影響を強く受けており、(2)支援者のためのスーパービジョン等も、枠組み・理念はアメリカのものが参照されているが、日本の制度や支援の現状に馴染みづらいことが明らかとなった。支援技法については、(3)言語が重視されており、非言語コミュニケーションへの着眼・研究は十分なされていないことが確認された。実務家からの聞き取り調査は、民間シェルター、女性センターに勤務する方々、カウンセラーや心理療法士、ボランティア支援者など、広い分野を対象に行った。そこでは、(1)DVの課題は、きわめて広範、かつ複雑に折り重なりながら裾野が広がっており、(2)草の根のアドボカシーによって切り拓かれてきた経緯がありながら、支援の現場では、財政的、時間的、資源的な制約から、連携やトレーニングが困難な事、(3)日常の支援活動では、非言語メッセージを敏感に駆使しているが、それを意識的に把握したり、言語化する視座や訓練はあまり受けた事がないこと、などが明らかにされた。これらの基礎研究を通じ、我々の研究は非言語コミュニケーションに焦点を絞ったものとすることの意義が確認された。上期には、DVの現状および、支援者支援の傾向を知るために、関連の学会や、民間の支援者向けセミナーを受講した。そこでも、非言語コミュニケーションの視座が十分でないことが確認されたため、下期には、広く対人援助者育成講座の中から、非言語の要素を含んだセミナー受講を行った。次年度早々には、調査の第二段階である質問紙をDV支援者に配布し、非言語メッセージの活用状況を実地に把握するべく準備中である。本年度は、ドメスティックバイオレンスサバイバーのための民間支援団体の協力を得て、支援における非言語コミュニケーションに関するグループインタビューを実施した。これらの調査により、非言語コミュニケーションの具体的な表出場面の事例を収集し、(1)非言語メッセージを介したコミュニケーションスキルは経験的に培われるものであり、気づきを高めることでスキルの向上が期待できること、(2)支援プロセスにおける相互作用の中に、支援者のアイデンティティの流動的かつ錯綜した状況があること、(3)(2)が支援への姿勢や意欲に少なからぬ影響を与えていることが確認された。これらの調査結果に基づき、錯綜するアイデンティティの諸相を、ポジショニング理論を用いて説明することの学術的意義を見出した。この成果は「DVサバイバー支援者のアイデンティティ表出違いを超えたコミュニケーションを目指して」と題する学会発表および学術論文で総括した(論文発行は平成20年度)。本研究の社会的意義は、学術上の理論枠組みと知見を、よりよい支援コミュニケーションスキルの実践につなげることにある。そのためには、言語化以前の潜在的な部分への気づきを高めるワークが必要とされる。そのため、コミュニケーション学に限らず、心理学や現象学、行動科学などの隣接領域で行われている潜在意識や身体感覚へのアプローチを試みる技法のトレーニングやセミナーを受講し、本研究が想定する受講者(DVサバイバー支援者)への応用可能性を検討した。各種の手法の融合・修正・補足を通じて、独自のワークショップ開発に向けた試行的な実践を3回実施し、支援者支援プログラムの公開に向けての準備を完了しつつある。一連のプロセスを通して、ドメスティックバイオレンスをはじめ様々な対人支援職につく人々とのつながりを形成し、ワークショップへの参加者を広く募る土壌も整いつつある。本研究では、対人支援者の支援コミュニケーションスキル向上に資する教材開発に取り組んだ。研究の始点はドメスティックバイオレンス(DV)サバイバー支援に限定していたが、DV支援は他のあらゆる社会福祉、医療、警察、司法、教育領域等と深い相互乗り入れ関係にある。さらに、支援者へのニーズ調査から、特定の支援領域に限定せずとも、コミュニケーション学が貢献できる領域が多々あることが明らかとなった。そこで、何らかの「傷つき」を経験した人に対する支援において、重要かつ体系的な学習機会が限られている非言語コミュニケーションに焦点を絞り、教材を開発した。この成果は「対人支援者のためのハンドブック非言語コミュニケーションへの気づきを高める」(日本語・英語)に纏めた(発行は研究分担者、猿橋順子の所属する玉川大学への分担金を充てた)。本教材は、実際の支援と学習との結びつきを強めるねらいから、学習者各人の支援事例に基づいて考察を重ねるワークシート形式を採用した。知識学習と内省による学びのバランスが考慮されている。

また、支援の現場では、人材不足や資金不足から、専門的な訓練を十分に受ける機会が限られている。そこで教材は、独習とグループワークの双方に使えるよう工夫した。さらに、増加傾向にありながら、孤立しがちな外国人支援者を考慮し、日本語版・英語版の二言語を作成した。外国人支援者の学びに資すると共に、同じ内容を共有することで、日本人支援者と外国人支援者の間の連携が促進されることが期待される。教材は、ニーズ調査に協力してくださった支援者のネットワークにも頼りながら、官民、国境を問わず、広く支援者に無料頒布した。今後も継続して、コミュニケーション研究から対人支援現場への貢献可能性(内容)と方法を考え、実践していく必要があるが、本研究はその基盤となる重要な研究活動となった。
安心と信頼の視点から見る留学生のソーシャル・サポート・ネットワークと異文化適応

本研究課題の目的は留学生の内集団(留学生同士,特に文化背景が同じ人たち)に対する安心感と,外集団(文化背景が異なる人)に対する信頼感が彼らのソーシャル・サポート・ネットワーク(SSNs)と異文化適応とどのように関係するのかを究明することである。また,SSNsの形成と効果は対面によるものと,多種多様なメディアによるものと比較していかに異なるのか,個人的要因との関係性も含めて検討を行う。そこで,今年度は1留学生の外集団に対する信頼感がいかにソーシャル・サポートと関係するのか,2それは留学生の語学力(日本語能力と英語能力)や自尊感情,一般的な日本人学生に対する好意度に関連するかどうか,3これらの要因が日本における被受容感や異文化適応とどのように関係するのか,を究明することを目的とした。2017年6月上旬7月上旬に関東地域の国立大学に在籍する留学生を対象に横断調査を実施した。206名の回答を対象に分析した結果,以下のことを明らかにした。(1)自尊感情の高い留学生は一般的な他者に対する信頼度が高く,また,一般的な日本人学生に対する好意度の高い留学生はより多くの日本人と接触することができた。その結果,多くの日本人からソーシャル・サポートを得ることができ,日本における被受容感を高めることができた。(2)一般的な他者に対する信頼感の高い留学生は多くの日本人と同国人からそれぞれソーシャル・サポートを得ることができたが,日本人から得られたソーシャル・サポートのみ留学生の日本における被受容感を高めることができたのに対して,同国人から得られたソーシャル・サポートは同様の効果が見られなかった。(3)日本語能力の高い人は一般的な日本人学生に対する好意度も高く,それは彼らの日本における被受容感を高める効果が見られた。調査は予定より早く実施することができたため,成果発表も予定より早く公開することができた。平成30年度と31年度は主に留学生の外集団に対する信頼感と内集団に対する安心感,ソーシャル・サポート・ネットワーク,及び異文化適応の3者間がどのような因果関係にあるのかを解明する。また,各種のメディア使用が彼らの情報行動や対人コミュニケーションにいかに影響を及ぼすのかも明らかにする。そのため,3変数の因果関係を推定できる3時点のパネル調査を実施する予定である。平成30年度は1・2時点目,平成31年度は3時点目の実施を予定する。また,平成29年度の調査と同様に,調査結果は留学生の語学力に左右されないよう,本パネル調査も日本語版・英語版とともに,中国語・韓国語による調査票も用意し,参加者らが各自の意思で自由に選択できるようにする。
造血細胞のシグナル伝達

造血細胞の増殖分化に関わるシグナルリングについての本年度の主要な成果は以下のようである。AGM領域で発生した造血幹細胞胎生肝臓での増幅をin vitroで再現し、長期の造血再構築能が発生段階が進むにつれて低下することを示した(宮島)。gp130欠損マウスマウスのAGM培養では、血球の出現がほぼ完全に抑制され、AGM内の背側大動脈に発現する分子としてendomucin-1を同定し、この分子が細胞接着阻害作用をもつことを見いだした(田賀)。c-Kitを介する細胞遊走シグナルやCa2+influxには、Y567/srcファミリーキナーゼ/p38MAPK経路とY719/PI3kinase経路の二経路が重要であることを明らかにした(金倉)。c-Kitに結合する新規分子Spredをクローニングし,細胞膜に局在し活性化されたRas, Rafと複合体を形成することで、チロシンキナーゼからのRas/MAKキナーゼ経路を選択的に阻害することを明らかにした(吉村)。Stat1とStat3の造血における機能を解析するために、抑制型Stat3トランスジェニックマウス、さらにStat1のKOマウスとの交配により、抑制型Stat3/Stat1 KOマウスを作製し、Stat3は巨核球系前駆細胞の増幅に、Stat1は赤芽球系前駆細胞の増幅に重要であることを示した(小松)。骨髄球特異的転写因子MZF-2に結合する核内因子を探索し,SWI2/SNF2型クロマチン再構成因子であるmDomino/p400を同定し,骨髄球分化に関わる遺伝子発現には,MZF-2とmDominoの相互作用によるクロマチン再構成が関与することを示唆した(福永)。新規Znフィンガータンパク質SalIのノックアウトマウスでは左右の腎臓が完全に欠失していた。胎生11.5日に尿管芽が間葉に進入して後腎の発生は開始するが、ノックアウトマウスではこの段階で発生が障害されており、この遺伝子は後腎発生のもっとも初期に必須であることが判明した。この遺伝子は腎臓未分化細胞である後腎間葉のみならず、神経幹細胞、ES細胞でも発現しており、共通の機構が幹細胞において働いている可能性が示唆された(横田)。造血幹細胞増殖に重要な機能をもつc-Kitとgp130受容体および造血サイトカインの主要なシグナル伝達経路であるJAK/STATの機能などにつき以下の成果を得た。造血幹細胞発生に重要なOSMのマウス受容体遺伝子のクローニングを通じて機能的なマウスOSM特異的受容体の構造を明らかにした。さらに、OSM受容体のノックアウトマウスの作成を行った(宮島)。gp130とGM-CSF受容体のキメラ分子をES細胞に発現し、多分化能維持にSTAT3が必要であることを示した。さらに、キメラ分子を発現するtransgenic mouseを作成し、造血幹細胞増殖の制御を試みている(横田)。gp130のシグナル伝達に重要なSTAT3のセリンリン酸化するキナーゼの分離を試み、3種の候補を得た(田賀)。一方、c-Kitの細胞内アミノ酸残基の置換による恒常的活性化は特異なダイマー形成によることが示された。また、IL-3,EPOによる増殖にはSTAT5によるcyclin D1の発現が重要であることも明らかにした(金倉)。サイト力インのシグナル伝達を制御するCISのtransgenic mouseはSTAT5欠損マウスに似た表現型を示した。一方、JABのtransgenic mouseではJAK1欠損に近い表現型を示したことから、CIS,JABはそれぞれSTAT5,JAK1の抑制因子として働いていることが明らかになった(吉村)。EPOによるSTAT1,STAT3の活性化には受容体のC末側が必要であること、およびEPOとTPO受容体によるクロストークの存在を示した(小松)。好中球の増殖分化に関与する転写因子MZF-2の機能解析から転写の制御ドメインを同定した。また、MZF-2に生理機能のために、その標的遺伝子の探索とノックアウト作成を進行中である(福永)。造血細胞の増殖分化に関わるシグナルリングについての主要な成果は以下のようである。造血幹細胞の前駆細胞ヘマンジオブラストの抗原PCLP1を同定し、PCLP1+CD45-の細胞集団に長期骨髄再構築能があることを示した(宮島)。gp130とGM-CSF受容体のキメラ分子を発現するtransgenic mouseを作成し、GM-CSFによる造血幹細胞増殖を示した(横田)。gp130のシグナル伝達とTGFbによるシグナル伝達のクロストークを示した(田賀)。c-Kitの細胞内アミノ酸残基の置換によりダイマーが形成され恒常的活性化が起こることを示し、IL-3やTPOによる増殖にはRasとSTAT5によるcyclin D1の発現が重要であることも明らかにした(金倉)。サイトカインシグナルの制御因CIS3は赤芽球前駆細胞においてJAK2に会合しEPOのシグナルを抑制する胎児肝造血幹細胞の負の制御因子であるとことを示した(吉村)。抑制型STAT3transgenic mouseを作成し、STAT3が抗癌剤投与による骨髄抑制からの回復に重要であることを示した(小松)。好中球の増殖分化に関与する転写因子MZF-2の転写活性化には骨髄細胞特異的なコアクチベーターの関与が示唆された(福永)。造血細胞の増殖分化に関わるシグナルについての主な成果は以下のようである。

AGM領域で発生した造血幹細胞が胎生肝臓で増幅するin vitro系を確立した。胎生肝臓の分化にはSTAT3依存性と非依存性の機構があることを見いだした(宮島)。gp130とGM-CSF受容体のキメラ分子を発現するtransgenic mouseの造血幹細胞がc-Kitとgp130を同時に活性化することで自己複製する可能性を示した(横田)。初期造血に関与するシグナル分子を探索し、胎児造血組織で発現する核移行配列を有する新規分子ELYSを得た(田賀)。巨核球が多倍体化する際にG2/M期特異的に発現するAIMキナーゼの発現が低下が必要かつ充分であることが示唆された(金倉)。白血病の染色体転座から発見されたTEL・JAK2の癌化能をJABが抑制することを見いだした。その際、SOCS-boxを介したユビキチン/プロテアソーム系によるキナーゼの分解が抑制に重要であることを示した(吉村)。GATA1プロモーターに抑制型STAT3を連結したtransgenic mouseを作成し、STAT3が赤血球・巨核球系前駆細胞の増幅に重要であることを示した(小松)。好中球の増殖分化に関与する転写因子MZF-2の転写活性化ドメインがMAPキナーゼでリン酸化され、負の制御を受けることが示唆された(福永)。造血細胞の増殖分化に関わるシグナルリングについての本年度の主要な成果は以下のようである。AGM領域で発生した造血幹細胞胎生肝臓での増幅をin vitroで再現し、長期の造血再構築能が発生段階が進むにつれて低下することを示した(宮島)。gp130欠損マウスマウスのAGM培養では、血球の出現がほぼ完全に抑制され、AGM内の背側大動脈に発現する分子としてendomucin-1を同定し、この分子が細胞接着阻害作用をもつことを見いだした(田賀)。c-Kitを介する細胞遊走シグナルやCa2+influxには、Y567/srcファミリーキナーゼ/p38MAPK経路とY719/PI3kinase経路の二経路が重要であることを明らかにした(金倉)。c-Kitに結合する新規分子Spredをクローニングし,細胞膜に局在し活性化されたRas, Rafと複合体を形成することで、チロシンキナーゼからのRas/MAKキナーゼ経路を選択的に阻害することを明らかにした(吉村)。Stat1とStat3の造血における機能を解析するために、抑制型Stat3トランスジェニックマウス、さらにStat1のKOマウスとの交配により、抑制型Stat3/Stat1 KOマウスを作製し、Stat3は巨核球系前駆細胞の増幅に、Stat1は赤芽球系前駆細胞の増幅に重要であることを示した(小松)。骨髄球特異的転写因子MZF-2に結合する核内因子を探索し,SWI2/SNF2型クロマチン再構成因子であるmDomino/p400を同定し,骨髄球分化に関わる遺伝子発現には,MZF-2とmDominoの相互作用によるクロマチン再構成が関与することを示唆した(福永)。新規Znフィンガータンパク質SalIのノックアウトマウスでは左右の腎臓が完全に欠失していた。
健康成人のB型肝炎ワクチンに対する抗体獲得能に関わる宿主因子の研究

健康成人におけるHBVワクチンの効果を正確に把握するために、過去の感染を意味するHBc抗体陽性者を除いた上で、当院医療従事者1,085例のHBs抗体陽性率を検討した。HBc抗体陰性者のHBs抗体陽性率は83.1%であり、従来の報告と同程度であった。ワクチン接種歴の記憶が曖昧な例があり、各医療機関における正確な把握の必要性を感じた。HBVワクチンによるHBs抗体獲得不良の後天的要因をnaive CD4陽性細胞のmiR-181aで検討した。既報の如くmiR-181aは年齢とともに低下したが、抗体価獲得との関連は示せなかった。その原因としてワクチン接種者の背景因子が多様であったことが考えられた。感染リスクの高い医療従事者において、B型肝炎ウイルス(HBV)ワクチン投与が行われているが、複数回の接種にも係らず、感染防御に効果的な抗体価を獲得できない個人が存在する。本研究ではまず、HBVワクチンの"真"の効果を調べる目的で、当センターの医療従事者1,085名に対し血液検査を行い、既感染あるいは現在感染していると思われるHBc抗体陽性者27名を除いた1,058例のHBs抗体価を測定した。HBs抗体陽性率は83.1%で既報と同レベルであった。HBc抗体陽性者でHBs抗体陽性率は高い傾向を認めたが有意差はなかった。ワクチン接種歴のある908例中、6例でHBc抗体が陽性であり、ワクチン接種後に感染したと考えられるが発症した例はなかった。抗体獲得不良の後天的要因としてのT細胞内シグナル伝達に焦点を当てた。そのシグナルにmiR-181a、DUSP6 (dual specific phosphatase6)が関連すると最近報告されたのを受けて、HBV当センター職員のうち、年齢、性をマッチさせた高HBs抗体獲得者56例と低HBs抗体価56例からリンパ球を抽出し解析を行った。Naive CD4細胞の検討では、既報の如く、年齢とともにmiR-181aの発現が有意に低下していたが、memory CD4細胞では、その差は認めなかった。また、HBs抗体価別にnaive CD4細胞におけるmiR-181aの発現を解析したところ、HBs抗体価の多寡によるmiR-181aの発現は変わらなかった。その原因として、高HBs抗体価例の中にはワクチン接種歴が不明例が含まれており、不顕性HBV感染の存在も疑われた。そこで、前年度に低抗体価が確認され、HBVワクチンを接種した例に限定して再度解析すると低HBs抗体価例で有意にmiR-181a発現が低下していた。本研究では、まず、"真の"HBVワクチンによる抗体獲得率を評価するために、HBc抗体を測定し、過去の感染者を除外した上で、HBVワクチンによる抗体獲得率を検討した。当センターの研究参加への同意が得られた医療従事者1,085名に対し、検診時の血液を用いて、HBc抗体を測定し、HBc抗体陽性者27名を除外した1,056名のHBs抗体価を測定した。HBVワクチン接種歴は各対象者が記載した内容をまとめた。HBs抗体陽性率は、83.1%と既報と同レベルであった。HBc抗体陽性者で、HBs抗体陽性率は高い傾向を示したが有意差はなかった。HBVワクチン接種歴なしとした87例ではHBs抗体獲得率は36.8%と高く、本人の記憶違いであった可能性が高いものと考えられた。これらのことから、今後HBVワクチン接種歴は(プライバシーの問題はあるものの)各医療機関で正確に把握し、転職の場合は次の医療機関へ情報伝達するなど徹底した管理が必要と考えられた。このことにより、不必要なワクチン接種を減らし、かつ抗体獲得不良例を効率に囲い込めるものと考えられた。一方、ワクチン接種歴のある908例中6例でHBc抗体が陽性者で、そのうち2例はワクチン接種後に感染したと考えられた。すなわち、この2例は臨床的肝炎は予防できたが、感染は予防できなかったことになる。一方、HBs抗体獲得不良の後天的要因としてのT細胞内シグナル伝達に焦点を当てて研究した。当センター職員のうち、年齢、性をマッチさせた抗HBs抗体獲得者56名と低HBs抗体価の56例からリンパ球を抽出し、さらにnaive CD4陽性細胞とmemory CD4陽性細胞を分離し解析を行った。既報の如く年齢とともにnaive CD4陽性細胞中のmiR-181aは有意に低下した。また、高HBs抗体価が得られた例と得られなかった例を比較すると、miR-181aの発現に有意な差は認めなかった。その原因として対象者の背景が、非常に異なっており、様々な要因が複雑であることが原因と考えられた。当センター医療従事者を対象としたHBVワクチンの抗体獲得に係る研究は順調に進み、論文はHepatol Resにacceptされた。加齢に伴う後天的T細胞内シグナル伝達不良を解明する研究は仮説(抗体獲得不良例では細胞内シグナル伝達が不良)通りの結果が得られていない。その理由として、今回収集した集団の中には、HBVワクチン接種歴が様々(回数、間隔)で、かつHBc抗体を測定していないので既感染例も含まれている可能性も否定できない。よって、純粋なHBVワクチン反応例と不反応例を比較できていなかった可能性がある。

本研究では、健康成人における純粋なHBVワクチンの抗体獲得率を知るために、HBc抗体を同時に測定し、過去のHBV感染を除外した上で解析した。当センターの医療従事者のうち、研究参加の同意が得られた1,085名のうち、HBc抗体陽性者27名を除外した1,056名のHBs抗体価を測定した。HBVワクチン接種歴は各対象者が記載した内容をまとめた。HBs抗体陽性率は、83.1%と同レベルであった。HBc抗体陽性者におけるHBs抗体陽性率は高い傾向を示したがHBc抗体陰性者との間に有意差は認めなかった。一方、HBVワクチン接種歴なしと回答した87例においてもHBs抗体陽性率は36.8%あった(全例HBc抗体陰性)。これらの例はHBVワクチン接種済みと考えられるが、本人の記憶違いであった可能性が高い。これらのことから、個々のHBVワクチン接種歴は、プライバシーの問題はあるものの、各医療機関で正確に把握し、転職の場合は次の医療機関へ情報伝達するなどの徹底管理が必要であると考えられた。このことにより、不要なワクチン接種を減らし、かつ抗体獲得不良例を囲い込める可能性がある。一方、ワクチン接種歴のある908例中6例で、HBc抗体が陽性で、そのうち2例は状況からワクチン接種後に感染したものと考えられた。すなわち、同省例は臨床的肝炎は予防できたが、感染は予防できなかったことになる。同時にHBs抗体獲得不良の後天的要因としてT細胞内シグナル伝達に焦点を当てて研究した。当センター職員のうち、年齢・性別をマッチさせた高HBs抗体獲得者56名と低抗体価の56例からリンパ球を抽出し、さらにnaive CD4陽性細胞とmemory CD4陽性細胞を分離し解析を行った。結果として年齢とともにnaive CD4陽性細胞中のmiR-181aは有意に低下したが、抗体獲得の有無でmiR-181aの発現に有意な差は認めなかった。その原因として対象者のワクチン接種に関する背景が多様であったことが考えられた。健康成人におけるHBVワクチンの効果を正確に把握するために、過去の感染を意味するHBc抗体陽性者を除いた上で、当院医療従事者1,085例のHBs抗体陽性率を検討した。HBc抗体陰性者のHBs抗体陽性率は83.1%であり、従来の報告と同程度であった。ワクチン接種歴の記憶が曖昧な例があり、各医療機関における正確な把握の必要性を感じた。HBVワクチンによるHBs抗体獲得不良の後天的要因をnaive CD4陽性細胞のmiR-181aで検討した。既報の如くmiR-181aは年齢とともに低下したが、抗体価獲得との関連は示せなかった。その原因としてワクチン接種者の背景因子が多様であったことが考えられた。当センター医療従事者のHBs抗体獲得状況についての解析は順調に進んでおり、現在、論文化を進めている。本研究ではHBc抗体陽性者を除いているので(すなわち、HBVワクチン接種による抗体獲得不良の一因とされる潜在感染例を除いている)3次医療機関勤務の医療関係者における真のHBs抗体陽性率を確認できるものと考えている。HBVワクチンによる抗体獲得不良機序の解明については、本年度の検体を収集し、naive CD4細胞とmemory CD4細胞に分離し凍結保存した。約半数の検体については解析を開始し、miR-181a発現の解析では、既報の如く年齢と共にその発現は低下していた。ところが、HBs抗体価別にmiR-181aの発現を解析すると、高抗体価群と低抗体価群で有意な差を認めなかった。