hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
黒毛和種及びブラ-マン種♂との交雑F_1雌牛の繁殖育成能力並びにそれらの産子の産肉能力

その結果、3回の哺乳量の平均はNN,ZN,ZH,ZB,BN,BBの順に多く、それぞれ7.2,6.6,6.6,5.5,4.9,3.9kgとなり、NNが最も多く、BBが最も少なかった。3.去勢肥育牛の産肉性における品種グル-プ間比較NN2頭、BN13頭、BB19頭、計34頭を用いて、放牧育成後(約18カ月齢)から8ー12カ月間、濃厚飼料多給方式で肥育し、増体量、生体の皮下脂肪厚及び枝肉格付成績を調査した。その結果、増体量はNN,BN,BBの順に大きく、皮下脂肪もその順に厚かった。しかし,肉質、とくに脂肪交雑ではBBが最も優れ、BNとNNとは差異はなかった。1.黒毛和種♂×ブラ-マン交雑種F_1♀および黒毛和種の子牛群の採食量、採食行動および耐暑性ブラ-マン種(Z)♂×黒毛和種(B)、日本短角種(N)、ホルスタイン種(H)♀のF_1雌牛にB♂を交配して得られた、1/4ブラ-マン交雑種(Zー)とBBの子牛各6頭を用い、両群の放牧適性を採食行動の面から比較するために、6ー10月の期間、牧草地で増体量、採食量、粗飼料利用性、放牧行動、耐暑性を調査した。その結果、ZーがBBよりも1日増体量は大きく、特に秋期にその差が顕著であった。日中の採食時間割合、代謝体重当りの採食量もZーがBBよりも大きかった。乾物及びADF消化率はいずれもZーがBBよりも大きい傾向がみられた。8月の庇蔭舎の利用時間割合からみて耐暑性はZーがBBよりも優れていた。以上を総合してみると、1/4ブラ-マン交雑種はBBよりも放牧適性で優れていることが示された。2.黒毛和種、日本短角種及びそれらのF_1去勢肥育牛の産肉性BB、NN、BNの計32頭を放牧育成後、濃厚飼料多給方式で肥育し、増体量、生体の皮下脂肪厚及び枝肉格付成績を調査中である。現在までのところ、増体量はNN、BN、BBの順に大きく、皮下脂肪もその順に厚かった。肉質、とくに脂肪交雑ではBBが最も優れ、BNとNNの間には差異はなかった。
プラトンの『国家』における市民の生存益に関する基礎的研究

本研究はプラトンの『国家』における市民の生存益を主題としている。研究代表者は、はじめに生存益が問題とされる文脈を特定した。そうすることによって、市民の生存益には種々の制約が課せられていることが明らかになった。本研究の達している結論からいえば、この制約は外的制約と内的制約に区別される。外的制約は、主として体育と医術の協力関係という文脈で論じられるが、国家を成立させている枠組みを自壊させないための条件として提出されている。それは欲望の充足を際限なく放任しておく贅沢国家への警鐘でもあった。いっぽう内的制約とは、その核心に「身体の所有」という問題を抱え込む厄介なテーマとならざるをえないが、制約の一つの表現としては、犯罪の加害者と被害者との関係において、賠償の特定化という問題において、プラトンは十分な検討を加えていないこととして現われ、またもう一つの表現としては、結婚と子作りの国家管理にあたる守護者ないし固有の意味での支配者に関わる虚偽意識という問題として、現れている。また研究分担者は、プラトンの『国家』第一巻において、「「術の類比」の射程に関する研究」を行なった。すなわち、『国家』第一巻は正義の「何であるか」を問いうる新たな語りの地平を生成させ、人のあり方と国家のあり方が同じ一つの問題として研究されなければならない次第を明らかにしている。そのことによって第一巻は、第二巻以降の叙述の仕方を準備し、かつまた定めているのである。1設備・備品については,研究代表者の所属する上越教育大学の藤沢研究室の情報処理関連機器の充実,および研究課題関係図書,主としてギリシャ哲学・倫理学関係図書の購入に当てられた。また,旅費については,東京での打ち合わせを2回行うとともに,研究分担者は北海道大学にて,また研究代表者は東京大学にて,それぞれ資料調査・収集を行うのに当てられた。2 1による活動ないし機器の支援を得ながら,研究を進めた結果,研究代表者は次のような知見をえた。プラトンの『国家』における市民の生存益は,おおむね二つの文脈において論じることができる。一つは生存益の外的制約であり,それは主として体育と医術の協力関係という文脈で論じられる。それは国家を成立させている枠組みを自壊させないための条件として機能する制約である。そして,今一つは生存益の内的制約と呼ばれるべきものであって,その核心に「身体の所有」という問題を内包している。この内的な制約の表現は,犯罪の加害者と被害者における賠償の特定化という問題において,プラトンが十分な取り扱いをしていないこととして,また,結婚と子作りの国家管理にあたる支配者に関る虚偽意識の問題として,それぞれ登場しているように思われる。3研究分担者は「術の類比」の射程に関する研究」を『国家』第一巻を中心に行った。すなわち,(1)ケパロス,ポレマルコス,トラシュマコス等の登場人物の「正義の誤り」の分析,(2)「正義の技術」という考えの分析,(3)「報酬獲得術」という特異な術の位置づけ,等の研究を行った。研究代表者は研究成果の一部を論文「プラトン『国家』における市民の生存益について」として発表し,分担者は論文の準備中である。

いっぽう内的制約とは、その核心に「身体の所有」という問題を抱え込む厄介なテーマとならざるをえないが、制約の一つの表現としては、犯罪の加害者と被害者との関係において、賠償の特定化という問題において、プラトンは十分な検討を加えていないこととして現われ、またもう一つの表現としては、結婚と子作りの国家管理にあたる守護者ないし固有の意味での支配者に関わる虚偽意識という問題として、現れている。また研究分担者は、プラトンの『国家』第一巻において、「「術の類比」の射程に関する研究」を行なった。すなわち、『国家』第一巻は正義の「何であるか」を問いうる新たな語りの地平を生成させ、人のあり方と国家のあり方が同じ一つの問題として研究されなければならない次第を明らかにしている。そのことによって第一巻は、第二巻以降の叙述の仕方を準備し、かつまた定めているのである。
多職種によるリエゾン精神医療チーム内および一般科との間の連携・協働のあり方の検討

A病院の精神科CLTが介入した731件の事例に関し、単独の職種による介入とチームによる介入の差異を概観したうえで、リエゾンナース・臨床心理士が介入した63事例の内容と構造を示した。睡眠障害は医師、適応障害はリエゾンナースにより、せん妄等、移植前の精神機能評価、IV軸のある患者は単独の職種よりもチームで多く介入していた。前者は、看護チーム内の葛藤の調整、セルフケアの査定、適応障害患者への積極的傾聴を中心とした保証、後者は、客観的ツールも加えた精神状態の査定、体系的な心理療法を担っていた。医学的・心理社会的複雑さからみる精神的問題とともに、医療者の対応の困難度を役割分担の指標とすることが必要である。【目的】A施設の精神科コンサルテーション・リエゾンチーム(以下、精神科CLT)が介入した755件の事例について、単独の職種およびチームの介入の差異を概観し、リエゾンナース・臨床心理士が介入した63事例の内容とその構造を明らかにした。【方法】2011年9月8月に精神科CLTが介入した755件の事例について、依頼者の職種、身体疾患、依頼理由、精神科診断大分類、介入した職種およびチーム、介入方法を調査した。介入職種は「医師単独介入群」「リエゾンナース単独介入群」「精神科CLT介入群」に分けて分類し、各項目に関してχ2検定により群間比較を行った。また、リエゾンナース・臨床心理士が介入した63事例に対し介入内容を詳細に記述し、そこから各職種の役割の特徴を抽出し内容を質的に分析した。【結果】適応障害はリエゾンナースが単独により、せん妄等、うつ病性障害、移植前の精神機能評価、IV軸のある患者はチームにより多く介入していた(p< .01)。リエゾンナースと臨床心理士は、患者・家族の精神状態の理解の仕方を示すことにより、医療者に対しても教育的・情緒的な支援に重きをおいた介入を行っていた。また、精神科CLT内、他部門、他専門職者との調整および橋渡しを担っていた。それぞれの特徴として、リエゾンナースはチーム内の葛藤の調整や対応困難な患者理解への促進、セルフケアの査定、適応障害患者への積極的傾聴を中心とした保証や認知の気づきの促しを行っていた。臨床心理士は、客観的ツールも加味した精神状態の査定、より精神病理の重い患者に対する体系的な心理療法を担っていた。【考察】各職種の役割に共通の役割および各々の特徴が明示された。従来より提唱されている医学的・心理社会的複雑さからみる精神的問題とともに、医療者の対応の困難度を役割分担の指標とすることにより、多角的な見方、多方面からのチーム介入が可能となると考えた。【目的】多職種からなるコンサルテーション・リエゾン精神医療チーム内の連携・協働、および一般科との連携・協働の具体的な過程および方法を明らかにし、一般病院に入院する精神疾患および精神症状を有する患者に対する医療・ケアの提供に向けてチームが効果的に機能するための示唆を得ることである。【方法】2011年9月2012年8月の1年間において、A大学病院の精神科CLTが介入した731件の事例に関し、単独の職種による介入とチームによる介入の差異を統計学的に概観したうえで、質的分析によりリエゾンナース・臨床心理士が介入した63事例の内容と構造を示した。【結果】睡眠障害は医師、適応障害はリエゾンナースにより、また、せん妄等、移植前の精神機能評価、IV軸のある患者は単独の職種よりもチームで多く介入していた。リエゾンナース・臨床心理士は、医療者への教育的・情緒的支援にも重きを置き、チームの内外で連携を促進していた。各特性として前者は、看護チーム内の葛藤の調整、セルフケアの査定、適応障害患者への積極的傾聴を中心とした保証、後者は、客観的ツールも加えた精神状態の査定、精神病理の重い患者への体系的な心理療法を担っていた。【考察】医学的・心理社会的複雑さからみる精神的問題とともに、医療者の対応の困難度を役割分担の指標とすることにより、多角的な見方、多方面からの介入が可能となると考えた。【結論および今後の課題】精神科リエゾンチーム内の連携について明らかとなった。一方で、診療科で担える事例と精神科リエゾンチームの介入を要する事例についての特徴は明らかとなっておらず、診療科と精神科リエゾンチームの間の効果的な連携・協働について示せていない。今後は、特に精神科リエゾンチームへのニーズが高いせん妄に焦点化し、これらを明らかにすることを課題とし、継続して研究を行いたい。多職種からなるコンサルテーション・リエゾン

精神医療チーム内の各職種の役割・機能を明らかにすることを目的に、平成23年6月12月の間にデータ収集を行った。具体的には、研究者ら(実践を行うリエゾンナース、臨床心理士)が事例ごとにコンサルテーション活動時の各職種の役割・機能、対象の変化をデータとして記録した。その後、平成24年1月3月に、得られた59事例のデータから各職種の役割・機能を抽出した。なお、データの妥当性および分析結果について、実践に直接関わらない研究者のスーパーバイズを得て、研究者全員で検討、確認した。結果、精神科医は主に患者の精神障害に対する診断および薬物の選択、その後の評価を行っていた。しかしながら、継続したモニタリング、評価のなされない事例もあることが明らかとなった。リエゾンナースと臨床心理士は、患者や医療従事者にとって精神科医よりも敷居の低い存在として、患者・家族に対する精神状態の査定、それに基づいた直接的なケア、医療従事者からの相談への応答、患者理解とケアのための保証や教育的支援、人間関係および状況の調整(患者・家族間、患者・医療者間、医療者間のコミュニケーションスタイルの評価・介入)を共通の役割として担っていた。一方、両者においてアプローチ方法には一部違いがあることも明らかになった。リエゾンナースは、より看護師の側面的支援を重んじ、倫理を含む看護チーム内の葛藤の調整や対応困難な患者の理解を通したケアの促進を行っていた。また、患者・家族に対しては、生活全般のセルフケアの査定を重視していること、積極的傾聴を中心とする中で、保証や認知への気づきを促す介入が多いことがわかった。これに対し、臨床心理士のほうがより認知機能や性格傾向の評価に客観的ツールを用いており、構造化された心理療法を扱っていることが明らかとなった。精神科リエゾンチームにおける各職種の役割について、特にリエゾンナースと臨床心理士の役割を明らかにした。本研究では、リエゾンナースと臨床心理士の役割機能の重なりとともに、その中でもその職種が有する専門的な特性を示した。そのうえで、精神医療の質の維持・向上、特定の医療者への負担の軽減、両者のバランスをとった精神科CLT内の役割分担およびチーム連携の指標について示唆を得た。また、A施設内の各科における精神科リエゾンチームへのコンサルテーション件数、主たる依頼内容、精神疾患の内訳が明らかとなった。また、循環器科、救命科、糖尿病科においてヒアリングを行ったことにより、精神科リエゾンチームに求められる精神ケアのニーズの具体的な内容が示された。本研究は、臨床における実践活動を通して行うアクションリサーチである。実践上、各職種の役割・機能について明確化し、各職種間で共通理解を図ることはチーム活動上、最も重要なことと考え、初年度はここに重点を置いた。研究計画立案当初は、連携のあり方、方法を明らかにすることも含めていたが、この点はまだ不十分であり、次年度の課題とする。上記の研究結果では、精神科リエゾンチーム内の各職種の役割とその分担の指標を明らかとなったため、今年度は本研究の最終的な課題である「連携のあり方」について示し、特定の診療科に応じた連携体制の基本的な枠組みを提案することを目指す。方法として、まず、精神科リエゾンチーム内の精神科医・臨床心理士・リエゾンナースの職種の連携について、コンサルテーション活動内容の質的データより導き出す。
トラス梁柱材における個材の弾塑性座屈挙動を考慮した梁要素モデルに関する研究

著者らの一連の研究により、個材の降伏や座屈を含むトラス梁の挙動を単一要素にて解析するために必要な基本プラットフォームはほぼ完成されていると考えられる。しかしながら、個材座屈の影響を考慮したトラス梁要素では、個材の材料特性として完全弾塑性を採用しており、硬化特性あるいはバウシンガー効果を有する実挙動と比べると結果に大きな隔たりがある。そこで、本研究では、個材の硬化特性あるいはバウシンガー効果を合理的に考慮するための「個材に対する梁要素モデル」を提案している。具体的には、ここで提案する梁要素モデルは、従来の一般化塑性ヒンジモデルと同等の簡便さを残しつつ、一般化塑性ヒンジモデルでは考慮されない、塑性化領域長の影響、ならびに、硬化則およびバウシンガー効果の影響をも合理的に考慮しうるものである。本論文で得られた結論を列挙する。1.力学的に明快なトラス梁を対象として、局所のひずみ硬化の現象による塑性領域長の変化が材端力に及ぼす影響について数値解析を通して検証するとともに、塑性化領域の広がりを考慮する上での基本的な考え方を明らかにした。2.個材を2フランジ断面を有する梁として表現し、ひずみ硬化および塑性化領域の広がりを考慮する力学モデルを構築した。局所的な硬化は混合硬化を考慮したバイリニアモデルに限定して定式化をおこない、提案モデルと有限要素法による精解とを比較することにより妥当性の検証を示した。3.2で構築した力学モデルに、バウシンガー効果の影響を付加させ、塑性化によるエネルギー散逸を正当に評価する力学モデルへと拡張・展開した。さらに、提案モデルと有限要素法による精解とを比較することにより妥当性の示した。トラス梁の地震時の崩壊挙動を正確にシミュレートするためには、繰り返し軸力載荷を受ける個材の力学的特性が極めて重要である。このために、平成13年度は、これまでに当研究室にて作成された個材の弾塑性座屈挙動に関する定式化を再考するとともに、これに関する予備実験を行った。これにより、繰り返し軸力を受ける個材の挙動をシミュレートするためには、バウシンガー効果およびひずみ硬化等により発生する個材内部の塑性域の広がりを適切に評価しなければならないことの問題点を確認した。このことを踏まえ、まず、バウシンガー効果を表現するために、従来、1軸応力状態(純引張・純圧縮繰り返し載荷)でのバウシンガー効果を表現するために多用されているモデルであるBounding surfaceモデルを、軸カー曲げモーメント空間に拡張展開するとともに、その妥当性および有効性を示した。また、従来の塑性ヒンジ法などの方法は、完全弾塑性体の場合には有効であるものの、個材内部の塑性域の広がりを考慮することは不可能であり、従来の概念にはない新たな評価手法が必要であることを確認した。しかしながら、その他の厳密な弾塑性評価法は実現象を正確にシミュレートできる反面、計算時間の増大など実用上の困難さを有している。そこで、ここで提示した塑性モデルでは、材端力に関する制約条件である降伏関数の形態を塑性域の広がりとともに変化させる新たな手法を提案している。これにより、塑性ヒンジ法と同等の計算時間で非常に精度の高い解が得られるようになった。トラス梁の地震時の挙動を効率よくシミュレートするためには、個材の挙動を正確かつ簡便に評価する必要があり、そのような観点から行った昨年度の研究成果として、個材内部の塑性領域の広がりを評価しうる簡易手法の確立が重要であることを示した。しかしながら、昨年度の成果である簡易モデル、すなわち塑性領域の広がりとともに材端力に対する降伏関数の形態を変化させる方法は極めて有効であることは確認されたが、理論上の曖昧さが残されており、より一般的な状態を想定すると、必ずしも十分な定式化がなされていたとは言い難い。

そこで、今年度は個材内部への塑性領域の広がりを考慮した材端力に対する降伏関数とは如何なるものかを理論的に誘導するために、個材の断面を2フランジ断面に限定し、その導出を試みた。その結果、昨年度の評価モデルよりも拡張性の高い簡易評価モデルを抽出することに成功した。特筆すべき点は、塑性領域の広がりを厳密に評価するためには、最低でも2つの材端力に対する制約条件式が必要であること、そのうちその2式から昨年度用いた降伏関数が誘導できる点である。このような考え方は、世界的に類のないものであり、少なくとも2フランジ断面部材の単調載荷時の場合、正解を与えるものである。さらに、この考え方を個材の弾塑性座屈問題にまで拡張し、この場合においても本評価方法が有効であることを確認した。トラス梁の地震時の挙動を効率よくシミュレートするためには、個材の挙動を正確かつ簡便に評価する必要があり、そのような観点から行った昨年度までの研究成果として、個材内部の塑性領域の広がりを評価しうる簡易手法についての意義、ならびに、2フランジ断面に限定した上で理論的に基礎式の誘導を試み、個材の弾塑性座屈問題に対する本手法の有効性について提示した。ただし、実際の個材は2フランジ断面ではなく、中実断面を有するものであり、このことを踏まえ、今年度は、これを長方形断面に拡張することを目的として、断面内での塑性化の進展を考えた場合の断面力(軸力・曲げモーメント)および軸ひずみ・曲げひずみ間における解法の提案を行った。具体的には、長方形断面における断面力に対する制約条件式となる降伏条件式、塑性流れ則、および、硬化則の本来あるべき表現について提示している。当然ながら、これらは従来終局耐力を降伏関数とする一般化塑性ヒンジモデルとは全く異なるものであり、このような厳密な式を提示した研究はほかに見られない。この研究での工学上の特筆すべき点は、断面内が完全に塑性化するまでの挙動は、残留する弾性部分の影響により生じる見かけ上のひずみ硬化を有する弾塑性体として取り扱うことが可能であることである。なお、ここでは長方形断面に限定して基礎式の誘導を行ったが、他の断面形状にも容易に適用することができるものであることは式展開からも明らかである。残念ながら、本手法を用いた中実断面を有する個材の座屈問題に対する解法の確立までは達しなかったが、これについては今後の謀題とする。
グリコシダーゼの基質認議機構の解析および機能改変

最終年度にあたり、全体の成果を概要する。本研究ではグリコシダーゼの機能のうち、特に基質特異性を中心課題とし、その構造的解析を行うとともに機能改変を狙った。gulucodextranaseの一次構造を決定し、これが他のdextranaseとは相同性がなく、glucoamylaseの一部と高い相同性を認めた。このことは酵素のα-1,4結合とα-1,6結合の認識がどの部位でどのようにされているかを究明する足がかりとなるものある。isomaltotrio-dextranaseの遺伝子クローニング、組換え酵素の発現、性質の調査に成功し、endo型デキストラナーゼとの相同性を議論した。澱粉の生合成に関与する枝作り酵素は、アミラーゼの性質と転移酵素の性質の両方を持っている。前者はまさにグリコシダーゼの範疇のものである。そこでこの酵素遺伝子を2種類単離し、大腸菌発現を行い、性質を調査し、基質認識の異なるアイソザイムであることを確認した。両者の各種キメラ酵素を作成し、C末端領域がアミロースとアミロペクチンの親和性を決めていることを証明した。さらに、このようなキメラ酵素に転移鎖長の相違を見出し、本来一方の酸素が持つ機能の改変に成功した。さらに各種グリコシダーゼの諸性質を調べるとともに、応用研究として新しい非還元オリゴ糖の生産に成功した。今年度は主としてデキストラン加水分解酵素について研究を行い,下記のような結果を得た。デキストランのα-1,6結合を認識し,エンド型にこれを水解する3種の酵素(glucodextranase,isomalto-dextranase,isomaltotrio-dextranase)のうち,isomaltotrio-dextranaseの遺伝子を解析し,一次構造を明らかにするとともに,大腸菌での発現にも成功し報告した。glucodextranaseについても同様な研究を行い,一次構造を明らかにした。この酵素は既に我々が明らかにしたエンド型デキストラナーゼのisomalt-dextranaseおよび上記のisomaltotrio-dextranaseとは相同性がなかったが,驚くべき事に,Clostridium由来のglucoamylaseと37%の相同性を示した。さらにこの傾向は,glucoamylaseの活性部位と推定される領域と顕著であった。α-1,6結合水解酵素glucodextranaseとα-1,4結合水解酵素glucoamylaseが類似の構造を持つことから,今後両者のキメラ酵素を作成して解析することにより,基質認識の重要な機構が明らかになると期待される。・デキストラナーゼ:isomaltotrio-dextranase遺伝子の近停にα-glucosidase遺伝子が見つかり、これらが連動して働いていることが判明した。glucodextranaseの大腸菌における高発現に成功し、各種変異体酵素の作成が可能となった。α-1.6とα-1.4認識の酵素領域の解析のためにクロストリジウムよりglucoamylase遺伝子をクローニングし、解析中である。α-グルコシダーゼ:アルカリpHで良く作用するα-glucosidaseの存在を明らかにし、ほぼ精製された標品を手にした。これはこれまでの酸性および中性α-glucosidaseと比較しながら研究が進められるが、アルカリ酵素の発見は世界で初めてである。ブランチングエンザイム:植物種子より枝付け酵素branching enzymeを単離精製し性質を明らかにするとともに、2種のcDNAを取得した。互いに相同性は50%であった。α-アミラーゼファミリーで保存されている4つの領域を中央部に持っており、そのN未側およびC未側について、アイソザイム間でキメラを作成し、基質特異性および生成物特性の面から研究と進めた。Arthrobacter globiformisのglucodextranaseの一次構造を決定し、これがこれまで報告されている他のdextranaseとは相同性が全く認められないが、Clostridium glucoamylaseの一部と高い相同性があることを認めた。そこで、Clostridium thermoamylolyticumからglucoamylaseの全遺伝子を単離し、大腸菌発現を行うとともに発現酵素の諸性質を解析した。

他のglucoamylaseとは異なり、α-1,4結合に良く作用する特徴ある酵素であることを明らかにした。両者の遺伝子を獲得し、それらの発現に成功したことにより、キメラ酵素の作成が可能となった。澱粉の生合成に関与する枝作り酵素は、アミラーゼの性質を有している。インゲンマメから性質の異なる2種類の遺伝子の単離と各酵素(pvSBE1、pvSBE2)の発現は済んでいた。今年度はこれらのキメラ酵素を作成し、C末端領域がアミロースとアミロペクチンの親和性を決めていることを証明した。また、N末端領域は活性化因子などの調節と関係していることを明らかにした。さらに、このようなキメラ酵素に転移鎖長の相違を見出し、本来一方の酵素が持つ機能の改変に成功した。これらとは別に、N末端領域の延長酵素がデンプン粒結合酵素としての機能を特徴づける事実を証明した
超低分子量4ヘムタンパク質の構造と昨日-重金属還元による環境修復の分子機構-

Shewanella putrefaciensはさまざまな重金属を電子受容体として生活できる特異なバクテリアである。92残基のアミノ酸からなる4ヘムタンパク質(チトクロムc_3)はこのバクテリアが持つ電子伝達タンパク質の一つである。これは現在までに報告されているものでは最も分子量の小さい4ヘムタンパク質であり、ヘム密度は著しく高い。昨年度と今年度のNealson教授らとの共同研究でその酸化還元性質をかなり明らかにすることができた。まず、分子間電子移動速度は遅いが分子内電子移動速度は速いのは硫酸還元菌のチトクロムc_3と同じである。3つのヘムには主たる還元ステップが一応あるといえるが、1つのヘムには特に大きな還元ステップが見られない。相互作用ポテンシャルも正の値、負の値ともに著しく大きなものがあった。これらの事柄はヘム-Hisイミダゾール環-Phe側鎖芳香環の3つがスタッキングしている特殊なヘムの存在によるものかも知れない。完全還元状態でのヘムプロトンの帰属をおこなったことで、中間還元状態では確認できなかったS_4における全てのヘムメチルシグナルを知ることができた。これにより微視的酸化還元電位を決定する上で重要なパラメーターである還元率がより正確に算出された。興味深いことは、通性嫌気性菌であるS.putrefaciens菌体内にチトクロムc_3が存在し、チトクロムc_3の酸化還元電位が低いことである。重金属を電子受容体として利用した呼吸を行えるS.putrefaciensの電子伝達系の特性は、このようなチトクロムc_3の酸化還元挙動によるのであろう。また、c型チトクロムを多く持つこのShewanella putrefaciensを宿主にして硫酸還元菌Desulfovibrio vulgaris Miyazaki F株のチトクロムc_3(107残基)遺伝子の発現系をつくることに成功した。Nealson教授が6月に訪日の予定であったが、緊急の会議のため訪日を中止したので電子メールを使い研究計画を立てた。これに基づき、小澤潔助手が7月25日から8月28までカリフォルニア工科大学のNealson教授の研究室を訪れ、Shewanella putrifaciensを宿主とした硫酸還元菌のチトクロムc_3の発現に関する実験を行った。これがみごとに成功し、世界で初めてヘテロな宿主を用いたc型チトクロムの大量発現系を確立することができた。この結果は今まで発現が困難とされてきた多くのc型チトクロムの研究に大きなインパクトを与えるものである。小澤助手はパサデナで精製したS.putrifaciensのチトクロムc_3を日本に持ち帰り、当研究室において酸化還元電位の解析を行った。電気化学的にはなかなか安定したデータが得られなかったので、条件をいろいろ変えて検討した。本研究代表者阿久津は11月始めにNealson教授を訪ね、この問題を検討した。さらに、専門家の意見を求めるためにアリゾナ大学のCusanovich教授を訪ねて討論を行った。帰国後、これらの議論を踏まえて実験を行ったところ再現性のある結果が得られるようになった。これらのデータを携えて、3月3日から7日まで藤原敏道助教授がパサデナを訪れて、討論を行った。微視的酸化還元電位のNMRによる解析も並行して進めている。

これは現在までに報告されているものでは最も分子量の小さい4へムタンパク質であり、へム密度は著しく高い。昨年度と今年度のK.Nealson教授らとの共同研究でその酸化還元的性質をかなり明らかにすることができた。3つのヘムには主たる還元ステップが一応あるといえるが、1つのヘムには特に大きな還元ステップが見られない。相互作用ポテンシャルも正の値、負の値ともに著しく大きなものがあった。また、c型チトクロムを多く持つこのShewanella putrefaciensを宿主にして硫酸還元菌Desulfovibrio vulgaris Miyazaki F株のチトクロムc_3(107残基)遺伝子の発現系をつくることに成功した。今年度は平成11年6月にウィスコンシン大学のFillingame教授が横浜国立大学を訪れてエネルギー変換系タンパク質の遺伝子発現系について討論を行った。平成12年1月には研究代表者阿久津が渡米して、カリフォルニア工科大学にてNealson教授、Tsapin研究員と共同研究のまとめかたについて討論を行い、さらにマサチューセッツ工科大学にてGriffin教授と固体NMRの利用について討論を行った。平成12年3月に研究分担者の小澤潔助手が渡米してカリフォルニア工科大学でNealson教授と、アリゾナ大学でCusanovich教授と実験データについて討論した。さらに、その後、カリフォルニア工科大学のTsapin研究員が来日し、横浜国立大学において研究代表者、分担者とともに研究のまとめを行った。
超薄切片法を用いた炭素質コンドライトの電子顕微鏡岩石学的研究

超薄切片法を隕石試料に対して用いて電子顕微鏡観察・分析用の試料を作成した。使用した試料は、オリビンが主要な構成鉱物であるCVコンドライト(Allende及びNingqiang隕石)のマトリックスである。超薄切片法を隕石試料に対して適用する際には、日本原子力研究所環境安全研究部の佐藤努博士と愛媛大学理学部の村上隆助教授に様々なアドバイスをしていただいた。なお、ウルトラミクロトームは日本原子力研究所環境安全研究部のReichert社のUltracutを、透過電子顕微鏡は同研究所のHitachiH-800を使用させていただいた。試料の前処理について試料は、真空デシケーター中でエポキシ系樹脂を浸潤させた後、シアノアクリレート系接着剤にてスライドグラスに貼り付けて、岩石薄片を作成した。後に低粘性エポキシ系樹脂を包埋する際に、薄片作成時に使用した通常のエポキシ系樹脂が試料の包埋の障害になるという指摘があった。このため、通常のエポキシ系樹脂を浸潤させずに作成した薄片も作成し比較したが、超薄切片はどちらでも作成できた。包埋樹脂は、Polysicence社とTAAB社の低粘性エポキシ系樹脂を用いたが、TAAB社の樹脂で、超薄切片を作成するに十分な硬度が得られた。切削条件について超薄切片を作成する際の切削スピードは、粘土鉱物を切断する場合よりもはるかに遅く0.4から0.6mm/sの時に良好な切片を得ることができた。結果粘土鉱物の超薄切片のようにコンスタントに50mmの厚さの試料を切り出すことには成功していない。(いわゆる、chatteringがおきてしまう)。しかし、試料が直径約100mum以下の時には、100nm前後の厚さの試料を切り出すことができた。作成した試料を透過電子顕微鏡で観察したところ、サブミクロンのオリビンの数の頻度が、イオンシンニングを用いた場合よりも多くなる傾向が見られた。これは、イオンシンニングを用いた場合には、粒径の小さいものが脱落しやすいためであると考えられる。しかし、細粒な数十nm以下の粒径の鉱物を観察しやすい厚さに試料を切削すると上述の様に良い切片が得られない。現在も、試料サイズなどを調整し、更に薄い試料を得られる条件を探している。
次世代型DDS製剤としての細胞内動態制御技術の確立

本研究では細胞質内での薬物徐放を念頭にナノスフェアー(NS)封入膜融合リポソームの作製方法を確立し、細胞質内へのNS導入キャリアーとしての有用性を検討した。その結果、混合脂質粉末を用いた水和法により、粒子径500nmまでのNSなら膜融合リポソームに封入出来ることを示した。また、共焦点レーザー顕微鏡による検討において、NSを封入した通常のリポソームでは細胞内にNS由来の蛍光が殆ど観察されないのに対して、NS封入膜融合リポソームを作用させると、細胞あたり約十数個の粒子状の蛍光が細胞質内に確認された。つまり膜融合リポソームは、リポソームに内封したNSを細胞質内に効率よく導入可能であることが確認された。またFACS法を用いた検討においても同様の結果が得られ、NS単独およびNS封入リポソームを作用させても、NSの細胞内導入が殆ど確認されないのに対して、NS封入膜融合リポソームを用いた場合には、どの細胞株においても90%以上の細胞に効率よくNSが導入されていることを証明した。さらに膜融合リポソームを用いた場合では、サイトカラシンB処理した細胞においても、未処理の細胞とほぼ同等のNS取り込みが確認されたことより、エンドサイトーシス非依存的な経路、つまり細胞膜との融合により、NSが細胞質内に直接導入されていることが示唆された。本結果は、マイクロマニュピュレーターを用いることなく、固形粒子を細胞質内に直接導入できることを示した初めての報告であり、今後、遺伝子治療の最適化を目指した細胞質内薬物動態制御研究への応用が期待される。現在、本技術を用いてアンチセンス核酸の細胞内徐放に関する検討を行っている。
暴力から共存へ：2018年レファレンダムに至るニューカレドニア情勢の研究

本研究は,1980年代に独立をめぐって激しい対立が引き起されたニューカレドニアにおいて、2018年11月に,ほぼ平穏のうちに独立をめぐるレファレンダムが行われるに至る、ほぼ30年間の政策過程を検証し、対立が緩和された経過を明らかにすることを目指すものである。研究は主にフランス公文書館における文書調査と、当時の政策担当者およびニューカレドニアの政治アクターおよび住民へのインタビューによって行う。これによって自治や独立を求める地域と中央政府の対立という、世界の各地で起こっていて,日本も無縁とはいえない問題の解決のための知見を得ることを目指す。
時空間的パターン誘導による細胞群機能改変システム

細胞は生物の基本的な構成要素で、細胞は自分自身でその機能を保つことが出来る最小単位である。近年大きく期待されている再生医療の実現には、細胞の機能の高度な制御が欠かせないが、どのように細胞を制御するかについては、現在の技術では細胞集団を対象に、一括して簡単な指示を出すことしか出来ない。我々は独自技術として、光により制御可能な細胞膜局所酸化による細胞内物質導入を研究している。この方法では細胞集団を対象に、印刷のように任意のパターンで細胞内に物質を導入することが期待される。昨年度は、ナノ剣山状の表面構造を持つ細胞膜穿孔樹脂シートの開発と、細胞群への自動運用システムの開発に成功している。本年度は細胞膜穿孔シートの安全性の向上およびパターン作製、また結果の迅速な評価のために穿孔法に加え観察法の自動化を進めた。その結果、接着細胞であるHeLa細胞に対して、従来の紫外線よりも安全な可視光での穿孔反応により、細胞膜不透過性蛍光色素であるAlexafluor 594や、同じく細胞膜を透過しがたいGFPタンパクの導入が達成されたことを蛍光観察により確認した。また、微細加工技術によりシートの作成用転写鋳型をいくつかのパターンで作製に成功した。しかしながらこのようなパターン導入を安定して行うには、適用細胞数や物質導入パターンに応じて、穿孔樹脂シートの加圧条件を最適化させる必要があり、今後の課題となった。しかしながら最も効率のよかった実験例においては、細胞内導入物質が蛍光色素のみならずタンパク質であった場合でもほぼ100%の導入が可能であることを実証した。今後は細胞群に対し様々なパターンで安定した物質導入が行えるよう、一層のシステムの改良を進める予定である。望ましくは個々の細胞に個別指導をするような形が必要であるが、細胞の外からでは限界がある。このため細胞の内部に直接介入する方法があればよいが、細胞は細胞膜によって自分と外界を隔てている。細胞膜は柔軟で改変作業を受け付けにくく、また改変作業を引き金に自分を分解して死んでしまう。他に、ウイルスが細胞の中に入り込む機能を応用する方法も進んでいるが、ウイルスにより細胞に指示出来る情報と、その量は限定されたものに留まっている。これに対し、代表者らは細胞膜のごく一部に強い酸化反応を引き起こすことで、細胞膜を数百ナノメーターという従来にない大きさで穿孔し、なおかつ数分以内に細胞自身がその孔を修復し、生存する現象を発見した。この穿孔径であれば、様々な分化誘導物質を直接に細胞内へ導入可能と考えられる。本研究はこの技術を発展させ、細胞集団に対する任意のパターンでの物質導入を目指すものである。本年度の成果としては、この穿孔能力を備えかつ量産可能な樹脂シート、及びその自動運用システムの開発に成功した。更に、様々な分野の研究者・技術者がこの穿孔法を実施できるよう、安価な簡易穿孔システムの開発にも成功した。今後このシステムを改良し、印刷技術のように細胞集団に対する物質パターン導入を行えるよう、システムの開発を進めてゆく。
薬動力学解析に基づく抗体医薬品の最適な個別化投与設計法の構築

がん患者およびリウマチ患者を対象とした抗体医薬品の薬物動態解析を行い、また同時に二次無効発現要因を検索することで、抗体製剤の最適な投与設計支援システムを構築することを目的とした。TOF型質量分析計ならびにタンデム四重極質量分析計を用い、主成分分析を中心とするバイオマーカー探索手法を行うことで、アミノ酸配列に関する情報の有無に関わらず短時間で抗体医薬品ならびに関連成分の分析が可能となった。本プロセスはアミノ酸配列情報の有無に関わらず対応できることから、多くの抗体医薬品や、その効果に影響を与える成分の分析に応用できると考えられる。現在本法を用いて二次無効関連因子の網羅的検索を進めている。抗体医薬品は特定の分子に作用し、その分子の遺伝子多型に基づく効果や副作用の個人差が報告されているが、遺伝子多型解析のみでは個人差を説明できず、さらに抗体医薬品に対する抗体生成に伴う二次無効や抗体生成が関係するとされるinfusionreactionなどの発現が問題となっている。本研究では抗体医薬品の薬物動態解析および二次無効に関連するもしくは薬効の個人差に関連するバイオマーカーの検索を検索し、患者ごとに適した薬物投与設計法の構築ならびに二次無効発現の回避方法について検討することとした。前年度中に抗体医薬品のうち抗リウマチ薬に分類されるインフリキシマブを対象として質量分析計を用いた分析法を検討し、臨床検体の分析に必要な感度を満たす測定系を構築したが、本年度臨床検体を分析するにあたり、その前処理に不安定な工程があり、安定した分析が難しいことが確認されたため、当該年度は臨床血液サンプル中のインフリキシマブ測定に向けた調整と抗インフリキシマブ抗体の分析に向けた動物実験の条件を検討するとともにインフリキシマブの分析に向けた固相抽出を用いた安定的な前処理条件を構築した。現在、前処理によって目的成分を十分に濃縮できることが確認されており、またその前処理法は非常に安定していることが確認されているため、本法を用いた血液中インフリキシマブの定量を開始している。同時に抗インフリキシマブ抗体の生成に関する主要因の一つとして考えられる免疫抑制剤の高感度分析法を構築し、臨床データの解析ならびに動物実験の実施に向けた条件を確立した。次年度、インフリキシマブを用いた臨床薬物動態解析ならびに抗インフリキシマブ抗体の発現要因に関する動物実験を並行して進める予定である。抗体医薬品は特定の分子に作用し、その分子の遺伝子多型に基づく効果や副作用の個人差が報告されているが、遺伝子多型解析のみでは個人差を説明できず、さらに二次的無効(耐性化)等が現在問題となっている。本研究では抗体医薬品の薬物動態の観点から抗体医薬品の効果の個人差を解明しこの個人差を予測するためのマーカー検索を進め、同時に二次無効の発現メカニズムおよび対応方法を検討することとした。現在、対象抗体医薬品として抗リウマチ薬であるインフリキシマブおよび抗腫瘍薬であるセツキシマブを対象に設定し、薬物血中濃度解析法の構築を進めている。高速液体クロマトグラムー質量分析計を用いた各抗体医薬品の血中濃度解析方法について検討した。対象薬剤を含む血液サンプルおよびブランクサンプルをそれぞれ還元アルキル化、ペプチド消化した後にTOF型質量分析計を用いて全フラグメントを分析し、主成分分析法により各薬剤特異的なフラグメントピークを抽出した。抽出されたピークを対象に分析法の感度を検討したところ、臨床評価に十分耐えうる感度を有していることを確認した。本検討により質量分析計を用いた抗体医薬品の直接的分析法を簡便に検討する方法論が確立でき、また同様の方法により二次無効要因の検索が可能であることが確認された。なお、本法を用いた抗体医薬品濃度の分析については現在臨床検体を用いてその評価を進めている。今後は本法を用いた抗体医薬品の薬物動態解析を進め、既存技術の結果と比較すると共に、薬効への影響を評価する。また、二次無効要因の検索を目的として、対象患者の抽出を進めており、本年度構築した手法を用い、今後二次無効要因の検索を進める予定である。抗体医薬品は多くの疾患の治療に用いられており、副作用が少なく、高い治療効果が期待できるとされている。一方、その効果や副作用には個人差が存在することも知られており、抗体医薬品に対する抗体(抗抗体医薬品抗体)発現に起因すると考えられる二次無効や重篤な副作用の発現は特に臨床上の重大な問題となっている。本研究では抗体医薬品および抗抗体医薬品抗体の薬物動態の観点から抗体医薬品の効果の個人差を解明し、この個人差を予測するためのマーカー検索を進めるとともに二次無効の発現メカニズムおよび対応方法を検討することとした。昨年度までにバイオマーカー解析技術を用いた質量分析計による生体中抗体医薬品等の分析法の確立プロセスについて検討し、インフリキシマブの分析方法を構築したが、その前処理法に問題が確認されたため、生体中抗体医薬品の分析法を再構築した。

本分析法構築プロセスをセツキシマブの分析法構築に応用したところ、当該抗体医薬品のアミノ酸配列の確認を経ず、短時間で血中濃度分析法を確立できた。これにより、抗抗体医薬品抗体等の未知タンパクを含む各種生体内タンパク成分の分析法の短時間での構築が可能となった。現在、本法を用いて患者の血中抗体医薬品の分析および抗抗体医薬品抗体の解析を進めている。また、抗抗体医薬品抗体の発現に影響すると考えられる免疫抑制薬や各種免疫関連因子も同時に解析し、抗抗体医薬品抗体や二次無効発現リスクへの影響の評価を進めている。さらに、抗抗体医薬品抗体の発現機構の詳細な解析に向けた動物実験として、ラットおよびマウスを用いた抗体医薬品投与に伴う血液中タンパク成分の変動解析および各主成分の発現と抗体医薬品の効果の関係に関する研究について詳細な実験条件の調整等の準備を進めている。これらの結果がまとまり次第、基礎検討結果および臨床研究結果を論文発表もしくは学会発表の形で公表する予定である。臨床薬理学前年度に構築した分析法において前処理方法に不安定な部分があり、臨床検体測定時の測定結果について十分な精度が担保できないと判断したため、臨床検体測定を若干遅らせ、分析法について詳細な検討を追加したため、臨床検体の分析についてはやや遅れている。一方、抗抗体医薬品抗体の発現に関する大きな要因の一つとして考えられる免疫抑制薬の微量分析法を当該年度中に構築し、また次年度中に臨床薬物動態解析と二次無効発現要因に関する動物実験を同時に進行できるよう、臨床検体の分析のみならず動物実験に関する基礎検討条件を構築し、各種倫理委員会の承認を得られたことから、研究全体としてはおおむね順調に進展していると判断した。当初の予定通り、抗腫瘍薬および抗リウマチ薬を対象として、質量分析計を用いた直接的な血中抗体医薬品濃度の分析法を確立した。現在詳細な評価を進めているが、臨床検体の分析には十分使用できると考えられる。二次無効患者のサンプルを入手できなかったが、患者情報の抽出を進めており、入手出来次第分析が可能な条件を整えており、順調に進めていると評価できる。これまでに抗体医薬品の分析法構築を簡便化するためのプロセスが構築され、さらに臨床応用するための前処理方法の安定化を可能としている。また、抗体医薬品に対する抗体生成に大きく関与するとされている免疫抑制薬の微量分析法も構築できていることから、今後は臨床検体ならびに動物実験における血液検体を回収し、淳司分析を進めていく予定である。なお、動物実験により二次無効要因として抽出されたデータについてはリアルタイムに臨床検体のデータ解析に応用できるよう、両解析は同時に進行し、臨床検体については血清サンプルをタンパク分解した後の全成分を分析し、保管することで動物実験から得られたデータとの互換性を評価することとする。平成24年度の研究で確立した高速液体クロマトグラムー質量分析計を用いた抗体医薬品の血中濃度解析方法を用い、がん患者およびリウマチ患者の血中薬物動態を解析する。この解析結果と治療効果および副作用の発現の関係を評価し、薬物動態と治療効果・副作用の関係を検討する。
亜鉛徐放性チタンスキャフォールドと歯髄幹細胞による薬剤関連顎骨壊死治療法の開発

MRONJは2003年にMarxがビスフォスフォネート(bisphosphonate; BP)製剤投与患者における顎骨壊死を報告して以来、BPとは作用機序が異なる抗RANKL抗体(デノスマブ; Dmab)や血管新生阻害薬(ベバシズマブ; BEV)に関連する顎骨壊死も報告され、本邦を含め世界的に症例数は増加の一途を辿っていると同時に発症すると難治性であり臨床上大きな問題となっている。これまでの基礎的・臨床的研究の結果、1骨芽細胞機能抑制とそれに伴うRANKL産生低下や2破骨細胞分化抑制および3血管新生抑制がその一因と考えられており骨芽細胞が担う骨形成およびRANKL、OPGによる破骨細胞誘導と破骨細胞が担う骨吸収などの正常骨でみられる骨リモデリングのバランスが崩壊することがMRONJの発症・増悪につながることが指摘されている。以上の知見から正常骨と同様の骨リモデリングを回復させることがMRONJの根本的治療において重要である事が想定される。申請者らはこれまで亜鉛の骨芽細胞および骨形成に対する作用に着目し、新規骨再生療法の開発を目的としてチタンに亜鉛修飾処置を施した亜鉛徐放性チタンスディスク上で歯髄幹細胞を培養した結果、骨芽細胞分化および基質石灰化の亢進が観察されることを報告した。そこで、本研究ではMRONJの根本的治療を目的として亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞の複合体を応用することで、新たなMRONJ治療を構築する事を目指す。本年度は前年度に引き続きMRONJのin vitroモデルの作製および解析を行った。マウス骨芽細胞様細胞(MC3T3-E1)へゾレドロン酸添加および圧縮ストレスを負荷することで基質石灰化が減弱する事が確認された。また骨芽細胞分化マーカーのmRNA発現をリアルタイムPCRで確認を行い、Type 1コラーゲン、ALP、Runx2の発現が同様に減弱することが確認された。また亜鉛徐放性チタンスキャフォールドと歯髄幹細胞(Zn-Ti/DPSCs)複合体作製のため、亜鉛修飾処理時間を24、48および72時間に設定し亜鉛徐放性チタンディスクの作製を行った。本年度の実験結果によりゾレドロン酸添加および圧縮ストレスが骨芽細胞分化を抑制する可能性が示された。次年度は亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞複合体とMRONJのin vitroモデルの共培養を行い、共培養が骨芽細胞分化へ与える影響を検索するとともにin vivoにおける移植実験を予定している。本研究では申請者がこれまで開発・報告してきた骨再生の技術を用いて薬剤関連顎骨壊死(medication-related osteonecrosis of the jaw; MRONJ)の治療法を構築することを目的とする。申請者らはこれまで亜鉛の骨芽細胞および骨形成に対する作用に着目し、新規骨再生療法の開発を目的としてチタンに亜鉛修飾処置を施した亜鉛徐放性チタンスディスク上で歯髄幹細胞を培養した結果、骨芽細胞分化および基質石灰化の亢進が観察されることを報告してきた。そこで、本研究ではMRONJの根本的治療を目的として亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞の複合体を応用することで、骨リモデリングを促進する新たなMRONJ治療を構築する事を目指す。本年度はMRONJのin vitroモデルを作製し、その解析を行った。in vitro MRONJモデルはマウス骨芽細胞様細胞(MC3T3-E1)に1,10,100μMのゾレドロン酸を添加するとともにガラスシャーレおよび鉛玉を用いて2,4g/cm2の圧縮ストレスを負荷して培養を行った。100μM添加群はいずれの細胞においても著明な細胞死を認めた。一方で、1-10μMのゾレドロン酸添加群ではゾレドロン酸の添加濃度および圧縮ストレスの有無による細胞生存率の著明な変化は認めなかった。また培養21日目にアリザリンレッド染色による基質石灰化の評価を行った。4g/cm2の圧縮不可および1-10μMのゾレドロン酸添加が基質石灰化を減弱させることが確認された。以上の結果よりゾレドロン酸の投与および咬合力等の力学的負荷が顎骨における骨芽細胞分化を抑制し結果としてMRONJ発症、増悪に寄与することが想定された。MRONJは2003年にMarxがビスフォスフォネート(bisphosphonate; BP)

製剤投与患者における顎骨壊死を報告して以来、BPとは作用機序が異なる抗RANKL抗体(デノスマブ; Dmab)や血管新生阻害薬(ベバシズマブ; BEV)に関連する顎骨壊死も報告され、本邦を含め世界的に症例数は増加の一途を辿っていると同時に発症すると難治性であり臨床上大きな問題となっている。これまでの基礎的・臨床的研究の結果、1骨芽細胞機能抑制とそれに伴うRANKL産生低下や2破骨細胞分化抑制および3血管新生抑制がその一因と考えられており骨芽細胞が担う骨形成およびRANKL、OPGによる破骨細胞誘導と破骨細胞が担う骨吸収などの正常骨でみられる骨リモデリングのバランスが崩壊することがMRONJの発症・増悪につながることが指摘されている。以上の知見から正常骨と同様の骨リモデリングを回復させることがMRONJの根本的治療において重要である事が想定される。申請者らはこれまで亜鉛の骨芽細胞および骨形成に対する作用に着目し、新規骨再生療法の開発を目的としてチタンに亜鉛修飾処置を施した亜鉛徐放性チタンスディスク上で歯髄幹細胞を培養した結果、骨芽細胞分化および基質石灰化の亢進が観察されることを報告した。そこで、本研究ではMRONJの根本的治療を目的として亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞の複合体を応用することで、新たなMRONJ治療を構築する事を目指す。本年度は前年度に引き続きMRONJのin vitroモデルの作製および解析を行った。マウス骨芽細胞様細胞(MC3T3-E1)へゾレドロン酸添加および圧縮ストレスを負荷することで基質石灰化が減弱する事が確認された。また骨芽細胞分化マーカーのmRNA発現をリアルタイムPCRで確認を行い、Type 1コラーゲン、ALP、Runx2の発現が同様に減弱することが確認された。また亜鉛徐放性チタンスキャフォールドと歯髄幹細胞(Zn-Ti/DPSCs)複合体作製のため、亜鉛修飾処理時間を24、48および72時間に設定し亜鉛徐放性チタンディスクの作製を行った。本年度の実験結果によりゾレドロン酸添加および圧縮ストレスがMRONJ発症、増悪に寄与することが示唆された。次年度以降で遺伝学的メカニズムの解析を進めるとともに、亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞複合体との共培養とその結果を踏まえた上でin vivoにおける移植実験を予定している。本年度の実験結果によりゾレドロン酸添加および圧縮ストレスが骨芽細胞分化を抑制する可能性が示された。次年度は亜鉛徐放性チタンスキャフォールドおよび歯髄幹細胞複合体とMRONJのin vitroモデルの共培養を行い、共培養が骨芽細胞分化へ与える影響を検索するとともにin vivoにおける移植実験を予定している。