hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
転写開始複合体の機能構造とCRPの作用機構

大腸菌の転写因子であるCRPはRNAポリメラーゼとの相互作用およびDNA構造変化を誘起することにより転写を促進させる。CRPの作用機構(作用点)はCRP結合部位の相対的位置により異なることが速度論的解析から示唆されてきたが、昨年度までに、代表的な3種のCRP依存プロモーターの転写活性化にCRPは共通して活性型転写開始複合体の形成までに寄与しており、それ以降の転写反応には必要ないことを明らかにした。この過程で、malTプロモーターではCRP非存在下においてもRNAポリメラーゼがヘパリン耐性転写複合体を形成することを見いだした。今年度は転写開始複合体形成に着目してその生化学的性質とCRPの作用について解析を行った。malTプロモーターにおけるCRP非依存のヘパリン耐性転写複合体はabortiveRNA合成能を有するがrun-offRNA合成能を欠損した不活型転写複合体であった。この複合体はコアプロモーター上流のA/Tに富む領域(UP-like element)の結合様式がCRP依存の活性型転写複合体と異なることが明かとなった。UP-like elementの転写複合体形成とCRPの作用に対する役割を変異体を用いて解析した。その結果、このelementはコアプロモーターとの距離によっては不活型転写開始複合体を形成させるシグナルともなること、CRPによる転写活性化にこの領域が必要であることなどが明らかとなった。即ち、CRPはUP elementとRNAポリメラーゼとの相互作用を調節することにより不活型から活性型転写開始複合体の形成を促進しmalTプロモーターの転写を活性化すると結論した。
ペルオキシゾ-ム薬物代謝反応の薬効・毒性評価への応用

本研究はペルオキシゾ-ムを特徴づける薬物代謝反応を薬物の薬効・属性評価に応用しようとして実施されたものであり、その成果の概要は以下のとおりである。1.ペルオキシゾ-ムでの薬物代謝反応の特性:薬物の側鎖の酸化的短縮反応にはβ酸化系が関与し、それはすべてペルオキゾ-ムで行われること、そのような特性は構成酵素の基質反応性に基づくという我々の提案を確認した。2.ペルオキシゾ-ム薬物代謝活性の変動因子:薬物によるペルオキシゾ-ムβ酸化酵素の誘導に関して、薬物の構造-活性相関、動物種差を証明し、さらにカルシウムアンタゴニストが酵素優導を抑制することを発見した。3.ペルオキシゾ-ム薬物代謝活性のスクリ-ニング法:薬物による酵素誘導は、培養肝細胞においても同様の現象として把握できた。また遊離肝細胞における薬物のアシル基酸化反応は肝臓のβ酸化活性を反映することを確認した。これらの実験系はペルオキシゾ-ムβ酸化酵素誘導のスクリ-ニング法として利用できることが判明した。4.薬物によるペルオキシゾ-ム薬物代謝酵素誘導の評価:薬物の長期投与実験により、これら薬物による発癌はβ酸化活性上昇に伴う酸化的ストレスに起因するとの従来の見解を否定した。以上の結果は、薬物の有効性と安全性評価の新しい方法として、肝ペルオキシゾ-ム薬物代謝活性の測定の重要性を明らかにし、そのスクリ-ニング法を提案するものである。初年度に設定した研究計画はほぼ完全に実施された.得られた成果を計画した課題別にまとめると以下のとおりである.1.ペルオキシゾーム薬物代謝反応の形式遊離肝細胞を用いたペルオキシゾーム薬物代謝活性の測定法を開発した.またアルキル側鎖のω酸化を経る反応にも応用可能であることを実証した.さらにアルキル側鎖のω酸化反応とそれに続くアシル基のβ酸化反応とでは前者の方が律速となり,ペルオキシゾーム代謝活性は十分に高いことを証明した.2.ペルオキシゾーム薬物代謝系の酵素学的機構ペルオキシゾームおよび対比すべきミトコンドリアのβ酸化系酵素7種をラット肝細胞から精製した.それを用いた検討結果から,薬物アシル側鎖の短縮反応がペルオキシゾームで優位に進行するのは,ペルオキシゾーム構成酵素の特性に基づくことを明らかにした.3.ペルオキシゾーム薬物代謝活性の変動因子ペルオキシゾーム酵素活性の変動を主として薬物投与による影響の面から検討し,ペルオキシゾーム酵素の誘導形式が薬物種により分類できることを示唆した.また次年度以降に予定されていた誘導の種差についてもすでに検討が進んでいる.以上の研究成果は,別紙研究論文の他に,下記の方法で発表している.(A)国際先天性代謝異常学会サテライトシンポジウム(1987年5月,箱根), (B)日本生化学会シンポジウム(1987年10月,金沢), (C)新潟神経内科シンポジウム(1987年11月,新潟), (D)日米合同薬学大学シンポジウム, (1987年12月,ハワイ),日本薬学会年会〈7編〉(1988年4月,広島)昭和63年度における研究計画は、ペルオキシゾーム薬物代謝酵素活性を変動させるさまざまな要因を解明し、さらにその活性変動を測定する新しいスクリーニング法を開発することであった。以下はそれらに関する研究の進展状況の概要である。1.ペルオキシゾーム薬物代謝酵素活性の変動因子の関する検討昨年度までの成績を基礎にして、各種動物の肝ペルオキシゾームβ酸化系酵素の誘導現象を詳細の検討した。その結果、(1)ペルオキシゾーム酵素を誘導する薬物の構造上の特徴として、脂溶性部分と極性部分の両方が必要であること、(2)これらの酵素の誘導は糖尿および高脂肪食摂取時にも起ること、さらに(3)上記の条件下でペルオキシゾーム以外の酵素にも誘導が生じ、特にミクロゾームω酸化酵素はペルオキシゾームβ酸化酵素と並行して変動することを明らかにした。

2.ペルオキシゾーム機能の新しいスクリーニング法の開発ペルオキシゾーム機能を測定することは、最近多数報告されているペルオキシゾーム欠損性疾患の診断、および薬物による薬理作用(血中脂質低下作用)や毒性(発肝癌性)の評価に極めて有用な情報をもたらす。本研究では、当研究室で開発した特異的基質を用いて、ラット肝細胞のペルオキシゾーム機能を測定することに成功した。現在、その方法のヒト細胞への応用性について検討している。以下の研究成果は、別紙研究論文発表の他に以下の学会等で発表している。〈1〉第2回国際薬物動態学会(2編,1988年5月,神戸)、〈2〉日本薬物動態学会(1988年10月,大阪)、〈3〉薬物代謝と薬効・毒性シンポジウム(3編,1988年10月,大阪)、〈4〉第28回日本臨床化学会年会シンポジウム(1988年11月,松山)、〈5〉日本薬学会第109年会(7編,1989年4月,名古屋)。本年度の研究計画は、「ペルオキシゾ-ム薬物代謝反応を基礎とする薬効・毒性評価法の確立」であり、その研究成果の概要は以下のとおりである。1.ペルオキシゾ-ム薬物代謝活性の生理的変動:絶食・糖尿時にラット肝ペルオキシゾ-ムβ酸化活性が上昇し、特に高脂肪食摂取時には薬物による誘導と類似したものであることを明らかにした。2.薬物によるペルオキシゾ-ム増殖の種差:クロフィブレ-ト系脂質低下薬による肝ペルオキシゾ-ム増殖および酵素誘導には極めて顕著な種差があることを明らかにした。3.薬物の長期投与によるペルオキシゾ-ム変化と発癌の関連性:ペルオキシゾ-ム増殖薬3種をラットに約2年間連続投与し、肝ペルオキシゾ-ム酵素の変化と薬物代謝系酵素、活性酸素代謝系、さらに肝癌発生に関する検討を行った。その結果薬物によるペルオキシゾ-ム酵素の誘導が長期にわたっても、活性酸素代謝系に変化はないことが判明した。4.薬物によるペルオキシゾ-ム増殖の肝毒性評価への応用:肝毒性に対するペルオキシゾ-ム増殖薬の評価法として、種々の検討を行った。各種実験動物を用いたin vivo実験および培養細胞を用いたin vitro実験の特徴と限界点を明らかにした。以上の知見は、ペルオキシゾ-ム増殖性薬物の肝毒性評価に極めて有用な情報と手段を与えるものである。なお本研究の一部は、(1)日本生化学会(1989年11月、京都)、(2)日本薬学会(1989年4月、名古屋)、(3)薬物代謝シンポジウム(1989年10月、札幌)、(4)米国毒科学会(1990年2月、マイアミ)で発表した。
X染色体上のRFLPマーカーを用いた口腔内腫瘍様病変のclonality解析

2.Ki-67,PCNAは正常上皮では基底細胞層に陽性であり、dysplasiaでは優位な陽性率の上昇はみられなかったが、扁平上皮癌では明らかに陽性率が上昇した。しかし、その浸潤部と非浸潤部の間には陽性所見に差は認められなかった。Cyclin D1もほぼ同様の結果となった。3.CK15は正常では基底細胞層に限局した強陽性反応がみられたが、dysplasiaや扁平上皮癌ではその反応性は減弱ないし消失する傾向を呈した。CK7とCK19は総じて陰性であり、癌の角化巣にCK7に対して軽度の陽性反応が認められたのみであった。4.CD5,CD30,CD34,CD56は正常・dysplasia・癌ともに全て陰性であったが、CD10は一部の癌症例で陽性を呈し、CD45RBは正常は陰性でdysplasiaで弱陽性陽性、癌で陽性強陽性を示す傾向があった。5.浸潤性扁平上皮癌症例を追加し、CD10とCD45RBの発現を詳細に検討した。CD10は正常・dysplasiaで陰性、癌では34%の症例で陽性を示した。CD45RBはdysplasiaでは50%の症例が、癌では87%の症例が陽性という結果であった。6.結論:口腔内の腫瘍様病変のパラフィンブロックは、DNAの保存状態が悪く、clonalityの解析は困難であったが、各種表面抗原・細胞周期マーカー・細胞内骨格を免疫組織学的に検索した結果、CD10が感度は低いものの癌に特異的に発現しており、CD45RBはdysplasiaを経て癌に至る過程で発現が並行して増強することが推定され、病理組織診断の一助となると期待される。1.パラフィンブロック組織からDNAを抽出し、X染色体androgen receptor(AR)遺伝子をPCRにて検出した。その知見は以下の通り。(1)固定時間が2448時間を越える組織から得られたDNAは断片化を来たし、PCRによる増殖は不良であった。(2)固定条件が良好な組織を選択し、さらに新たに入手した組織を24時間以内で固定したところ、安定した増幅結果が得られた。(3)病変を顕微鏡下で選択的に切り出したものから、改めてDNAを抽出した。PCRの結果、扁平上皮癌23例中、10例がAR遺伝子に関してヘテロ接合性を示した。白板症(keratosis with atypia)は、14例中3例がヘテロ接合性を示したのみであった。合計37例中、ヘテロ接合性を呈したのは13例であった。2.HpaIIによってDNAを処理し、しかるのちにPCRを行って、個々の症例にいてclonalityを検討した。HpaII処理前に得られた2本のバンドと同一の2本のバンドが得られた場合はpolyclonal、2本のうち1本のみとなった場合をmonoclonaと判定した。(1)扁平上皮癌10例中、3例がHpaII処理後のPCRが可能であり、その全てが単一のバンドを呈したことより、monoclonalと判定された。
伝達物質放出部位の分子構成とシナプス小胞係留機構

伝達物質放出の分子機構は最近の研究によって分かり始めてきたが、放出部位の構造、シナプス小胞の係留機構等に関しては不明な点が、多く残されている。本研究ではまず、放出機構の細胞質蛋白質による制御の観点から、私たちが発見した細胞質蛋白質シナーフィンの作用機序を追究した。シナーフィンのSNARE結合部位部分のペプチドを用いた実験によって、シナーフィンとSNARE複合体との相互作用が速い放出に必須であることが証明された。生化学的解析により、シナーフィンがSNARE複合体の会合を促進することがわかった。シナーフィンはシナプス小胞のドッキング後の膜融合あるいはその直前のステップで作用すると思われる。伝達物質放出部位に局在する代謝型グルタミン酸受容体7型に結合する蛋白質の解析は現時点で、続行中である。これらの蛋白質のmRNAいずれもは極めて分解されやすく、これまでのところ完全長cDNAが得られていない。今後これらの蛋白質の実体と機能を解明する。シナプス小胞の神経終末内の局在機構を知るため、ショウジョウバエ幼虫の神経筋接合部を用いて研究した結果・開口放出に続くエンドサイトーシスにおいて、シナプス前膜直下に存在するシナプス小胞のreadily releasable poolの形成に細胞骨格蛋白質チューブリンが関与することを見だした。伝達物質放出およびエンドサイトーシスに際してチューブリンはきわめてダイナミックな動きを示すことが初めて示された。従来、神経終末には微小管は存在しないとされてきたが私たちの結果はシナプス小胞の循環におけるチューブリンおよび微小管の重要性を示唆する。伝達物質放出は神経終末の特定部位(active zone)でのみ起こる。その部位には伝達物質を高濃度に含むシナプス小胞が集積しており、電位感受性Caチャネルを通して流入した外液のCa^<2+>の作用により開口放出で伝達物質が放出される。しかし、この部位の分子構成、シナプス小胞の結合機構等はほとんど解っていない。本研究はこの部位の構造と機能を明らかにするため、伝達物質放出の分子機構の追究、この部位に特異的に存在する代謝型グルタミン酸受容体に結合する蛋白質の同定、細胞骨格系とシナプス小胞の関係の解明等を目指している。放出の分子機序に関して、イカ巨大シナプスを用いた実験によってSNARE複合体に結合する細胞質蛋白質シナーフィンが放出に必須であることを証明し、それがSNARE複合体のオリゴマーを形成することによって働くことを示した。細胞骨格系との関連では、我々が発見したシナプス小胞蛋白質シナプトタグミンIと微小管を構成するチューブリンとの特異的結合の生理的意義をショウジョウバエ幼虫の神経筋接合部を用いて検討し、チューブリンが伝達物質放出過程においてダイナミックに移動することを見いだした。微小管の重合、脱重合が迅速に起こることを示す結果と考えられる。代謝型グルタミン酸受容体結合蛋白質のcDNA断片をtwo-hybrid法によって得て、その全長の、クローニングを試みているが、成功していない。マウスのcDNAがつい最近かなり報告されたので、それを探索して、類似性の高いクローンが見いだされるならば、それを用いて研究を進める予定である。シナ-フィンのSNARE結合部位部分のペプチドを用いた実験によって、シナーフィンとSNARE複合体との相互作用が速い放出に必須であることが証明された。

伝達物質放出部位に局在する代謝型グルタミン酸受容体7型に結合する蛋白質の解析は現時点で、続行中である。これらの蛋白質のmRNAいずれもは極めて分解されやすく、これまでのところ完全長cDNAが得られていない。今後これらの蛋白質の実体と機能を解明する。シナプス小胞の神経終末内の局在機構を知るため、ショウジョウバエ幼虫の神経筋接合部を用いて研究した結果、開口放出に続くエンドサイトーシスにおいて、シナプス前膜直下に存在するシナプス小胞のreadilyreleasablepoolの形成に細胞骨格蛋白質チューブリンが関与することを見だした。伝達物質放出およびエンドサイトーシスに際してチューブリンはきわめてダイナミックな動きを示すことが初めて不された。従来、神経終末には微小管は存在しないとされてきたが私たちの結果はシナプス小胞の循環におけるチューブリンおよび微小管の重要性を示唆する。
機能的電気刺激と併用する歩行アシスト、歩行リハビリテーションロボットの開発

高齢者や障害者の歩行動作を支援し,通常の歩行を再建するための電動モータによるパワーアシストと機能的電気刺激を用いたロボットシステムの開発を行った.筋力の推定や筋制御機能に関する基礎的な研究に基づきロボットシステムを設計製作した.製作したロボットによって実験を実施しその歩行アシスト効果を検証した.電気刺激との併用によって,機能回復のトレーニング効果が期待できるほか状況に適応した歩行支援が行えることを確認した.高齢者や障害者の歩行動作を支援し,通常の歩行を再建するための電動モータによるパワーアシストと機能的電気刺激を用いたロボットシステムの開発を行った.筋力の推定や筋制御機能に関する基礎的な研究に基づきロボットシステムを設計製作した.製作したロボットによって実験を実施しその歩行アシスト効果を検証した.電気刺激との併用によって,機能回復のトレーニング効果が期待できるほか状況に適応した歩行支援が行えることを確認した.モータと機能的電気刺激装置を併用する歩行アシスト装置を試作した。重要は10kg以内、消費電力は300W以内となり、当初の目標を達成した。歩行動作と起立・着席動作をアシストするモータ制御アルゴリズム、モータと強調して麻痺した筋肉を人工的に動作させる機能的電気刺激の刺激パターンの生成アルゴリズムを制作し、試作した歩行アシスト装置に実装した。健常者を被験者とする起立・着席実験と片足のみの運動をアシストする歩行実験を実施した。モータの制御アルゴリズムでは、角速度をフィードバックする制御法と角度をフィードバックする制御法を比較して、角度をフィードバックする方が性能や安全性確保の問題で有利であることを確認した。比較のため、モータによるアシストのみを行った場合についても実験を実施した。本研究で提案するハイブリッドアシスト方式は、モータのみを歩行のアシストに用いる場合に比べてモータのエネルギー消費を大幅に減らすことができることが明らかになった。これは、装置全体をウェアラブルかするためには、小容量のバッテリーでの動作を可能となるので大きなメリットとなる。また、機能的電気刺激のみで歩行再建を目指す場合には、発生する関節トルクの正確な再現が困難であることが知られているが、モータを併用するために正確な歩行動作の再現が可能となり、実用化に近づいたということができる。これらの研究成果は、二つの国際会議で発表され、注目を集めた。歩行アシスト装置を製作し、被験者を用いた実験をトレッドミルの上で実施した。モータによるアシストと機能的電気刺激による筋力制御を併用したことによる効果を検証した。モータ単体によるアシストと比較して、アシスト装置の消費エネルギーを低減できるし、機能的電気刺激を用いたことによるリハビリテーションの効果を確認することができた。250W程度の仕事率を有するモータアシスト装置によって、障害者の歩行アシストとリハビリテーション支援を行うことが可能であることがわかったので、このデータに基づいて実用化モデルを設計することが可能となった。筋骨格モデルを用いた歩行シミュレーションによって、製作した歩行アシスト装置の検証を行うことを試みたが、歩行制御制御機構のロバスト性が足らないためうまくシミュレートできなかった。歩行制御機構のロバスト性向上のための制御アルゴリズムについて検討を行い、一定の見通しを得た。リハビリテーションの効果検証に用いることを目的に、立位の姿勢安定性の評価法を検討した。姿勢制御に関するモデルに基づいて、姿勢安定性を評価できることが実験的に明らかになった。機能的電気刺激をリハビリテーションのためのローイング動作に適用する研究を行った。健常者での実験では、動作支援が可能であることがわかった。受動的な機械要素であるバネを用いて、上肢の作業をアシストする装置の開発を行った。バネとその平衡点を移動させるモータ、さらには上肢をサポートするリンク機構からなる装置によって、重力による一定荷重を安全にキャンセルすることができることを示した。この装置を用いることによって、筋疲労を低減できることを実験的に示した。本研究を通して以下の結果を得た。(1)歩行リハビリテーションの際に重要となると予想される障害肢の運動系と感覚系の関係を明らかにするための基礎として、健常者の運動系強度(発生筋力の大きさ)と感覚系の感度の関係について、マニピュレータを用いて実験的に検討した。感覚系感度は運動系強度と強い相関があることを明らかにした。(2)歩行アシスト装置の運動制御における外乱に対するロバスト性を向上させるために歩行中の関節角度の主成分に着目したフィードバック制御系と歩行運動を作り出すための非線形振動子コントローラの併用を検討した。3次元の筋骨格系モデルを用いた歩行シミュレーションでは、歩行中の外乱応答の実験結果をよく説明する制御系が達成できた。(3)歩行アシスト装置の外乱に強い制御系を構築できたことに基づいて、実際に製作した歩行アシスト装置を人に装着した場合の歩行シミュレーションを行った。センサの配置や人の運動パラメータに不確定性がある場合について歩行が維持できるかどうか検証した。構築した制御系は実用的な環境でも使用可能であることを確認した。(4)シミュレーションで確認した歩行アシスト装置の制御系をコンピュータの実装し、健常者に対する歩行アシスト実験を行った。関節角度と関節トルク、モータ発生トルクを分析した結果、歩行アシスト装置は有効の動作していることが確認された。(5)歩行アシスト装置を利用することになる下肢障害者に対する実験計画を立てて、そのための予備実験を実施した。また、本装置を実用化するために必要な装置、制御系の改良点、治験の計画を検討した。
乳癌細胞のホルモン依存性喪失過程の解明に関する研究

本年度はエストロゲン依存性DMBA誘発ラット乳癌実験系を用いて、ラット乳癌細胞のER(Estrogen Receptor)とc-erbB-2癌遺伝子の蛋白レベルおよびmRNAレベルにおける発現を解明し、さらに卵巣摘出による内因性エストロゲンの除去が、ERおよびc-erbB-2蛋白発現に与える変化を解明することとした。今回の実験結果を列挙する。(1)DMBAにより誘発させ、ラットに乳癌癌腫が触知されるまでの間、ラット乳腺を採取し、ERおよびc-erbB-2蛋白の局在を観察したところ、腫瘍細胞の発現前では、ラットERはほぼ全乳腺細胞に高度に発現していた。c-erbB-2蛋白はmammary ductの辺縁部に軽度発現するものが散見された。mRNAレベルでの観察で、c-erbB-2mRNAは発現していなかった。(2)DMBA誘発ラット乳癌が触知された後、2週ごとに癌腫を採取し、ラットERおよびc-erbB-2蛋白の局在を観察した。結果、1.ラットERの癌腫内におけるER陽性細胞率は第0週より4-20週まで(中央値8週)、ほぼ100%であった。その後、ER陽性細胞率はlogarithmicに減少することが観察された。2.c-erbB-2蛋白の癌腫内における蛋白陽性細胞率は第0週より6-16週まで(中央値10週)、5%未満で推移した。その後、蛋白陽性細胞率はgraduallyに増加したが、個体による変動差が高かった。(3)DMBA誘発ラット乳癌触知後、2週ごとに癌腫を採取し、ラットERおよびc-erbB-2mRNAの局在を観察したが、ラットERmRNAについては結果が得られなかった。c-erbB-2mRNAの局在は、c-erbB-2蛋白の陽性細胞率が30%を越えない場合は観察できなかった。癌腫触知後、卵巣摘出により内因性エストロゲンを除去したラットを用いて前項の実験を行い、現在解析中である。
ヒト化マウス薬剤評価系を用いた新規エイズ治療薬の開発とＨＡＡＲＴの改善・強化

エイズ/ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の標準的な治療法であるHAARTを補完あるいは必要に応じて代替する新規治療薬の開発を目的とした。重度免疫不全マウスにヒト臍帯血由来の造血幹細胞を移植して、ヒト免疫機構を構築したヒト化マウスを作製した後、このマウスにHIV-1を感染させて感染モデル/薬剤評価系を構築した。この感染マウスを用いて、免疫刺激分子OX40LやHIV-1受容体を発現する組換え水疱性口内炎ウイルスVSVの治療効果を評価したところ一定の効果が認められた。昨年度から、エイズ/ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の標準的な治療法であるHAART (Highly active anti-retroviral therapy)を補完あるいは必要に応じて代替する新規治療薬の開発を目的に、ヒト免疫機構を構築したヒト化マウスのHIV-1感染モデルを用いて、本研究を進めている。具体的には、重度免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植してヒト化マウスを構築した後、HIV-1を感染させて感染モデルを作製し、その生体内で新規エイズ医薬品候補がHIV-1感染を効果的に制御しうるかどうか検討している。本年度は、新規医薬品候補として、ゲノム中のG遺伝子を欠損させ、その代わりにHIV-1受容体であるヒトCD4、CXCR4、及びCCR5をコードする3遺伝子を組み込んで発現させた組換え水疱性口内炎ウイルス(VSV)を創製した。この組換えウイルスは、in vitroにおいて、HIV-1実験室適応野生株のX4株或いはR5株のエンベロープ蛋白を発現させた細胞のどちらにも特異的に感染することが分かった。また、ヒト臍帯血由来の造血幹細胞を重度免疫不全マウスであるNOGマウスに移植し、ヒト化NOGマウスを構築する方法の最適化を検討した。特に、ヒト臍帯血からの造血幹細胞の精製方法や、NOGマウスに細胞を移植する前の放射線照射の必要性の有無について検討した。その結果、造血幹細胞に混在する赤血球を効率良く除去し、造血幹細胞の回収率や精製度を向上させることができた。また放射線照射の必要性については、放射線照射により造血幹細胞のマウスへの生着率はやや向上するようであるが、長期的な観察には適していない場合があり、必ずしも必要ではないことが分かった。今後は、この最適化された方法でヒト化マウスを作製していく予定である。本研究は、ヒト免疫機構を構築したヒト化マウスのヒト免疫不全ウイルス1型(HIV-1)感染モデルを用いて、エイズ/HIVの標準的な治療法であるHAART(Highly active anti-retroviral therapy)を補完あるいは必要に応じて代替する新規治療薬を開発することを主な目的としている。具体的には、重度免疫不全マウスにヒト臍帯血由来の造血幹細胞を移植してヒト化マウスを構築した後、HIV-1を感染させて感染モデルを作製し、その生体内で新規エイズ医薬品候補のHIV-1感染に対する治療効果を検証することである。本年度までに、新規医薬品候補として、HIV-1感染細胞を標的化する、ゲノム中のG遺伝子を欠損しその代わりにHIV-1受容体であるヒトCD4、CXCR4あるいは/及びCCR5をコードする遺伝子を組み込んで発現させた組換え水疱性口内炎ウイルス(VSVΔG-CC4、VSVΔG-CC5、VSVΔG-CC54)を創製して準備した。これらの組換えVSVは、in vitroにおいて、HIV-1実験室適応野生株のX4株あるいはR5株のエンベロープ蛋白を発現させた細胞にそれぞれ特異的に(VSVΔG-CC54はその両方の細胞に)感染し、殺傷することが分かった。また、HIV-1の臨床分離株(薬剤耐性株を含む)を入手し、増殖させた後調製した。これらのHIV-1に対する組換えVSVの感染抑制効果をin vitroで検討している。さらに、NOGマウスを用いてヒト化マウスを構築する方法を最適化したので、この方法でヒト化NOGマウスを構築した後、臨床分離株を含めた種々のHIV-1感染モデルを作製し、組換えVSVのin vivoにおける治療効果を検討している。エイズ/ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の標準的な治療法であるHAART (Highly active anti-retroviral therapy)を補完あるいは必要に応じて代替する新規治療薬を開発することを目的に、ヒト免疫機構を構築したヒト化マウスのHIV-1感染モデルを用いて、本研究を進めている。具体的には、ヒト化マウスを構築した後、HIV-1を感染させて感染モデルを作製し、新規エイズ医薬品候補がその個体内でHIV-1感染を効果的に制御しうるかどうか検討している。本年度は、新規医薬品候補として我々が創製した、VSV G遺伝子を欠損させ、その代わりにHIV-1受容体であるCD4、CXCR

4或いはCCR5、及び活性化T細胞免疫刺激分子OX40Lをコードする遺伝子をゲノムに組み込んで発現させた組換え水疱性口内炎ウイルス(VSV)の実効性を評価した。まず、ヒト臍帯血由来造血幹細胞を重度免疫不全マウス(NOGマウス)に移植し、ヒト化NOGマウスを構築した。このヒト化マウスにHIV-1実験室適応野生株(X4株或いはR5株)を感染させて、感染モデルを作製した。その後、このモデルマウスに上記組換えVSVを接種したところ、CD4/CXCR4或いはCCR5発現組換えVSVと同様に、効果は限定的であるものの、コントロール(組換えVSV未接種群)に比べ血漿中のHIV-1ウイルス量、p24量が低下し感染増殖を抑制することが分かった。また、実験観察期間の最終日に脾細胞を採取し、HIV-1プロウイルス量を測定したところ、同様の抑制効果が認められた。さらに興味深いことに、CD4/CCR5/OX40L発現組換えVSVに関しては、CD4/CCR5発現組換えVSVと比較して、R5株感染に対しより長期的な抑制効果を示し、OX40L発現により治療効果が増強することが分かった。これまで、ヒト臍帯血由来の造血幹細胞をNOGマウスに移植してヒト化NOGマウスを構築し、このヒト化マウスにHIV-1実験室適応株(X4株、R5株)を感染させて感染モデルを作製してきた。このモデルマウスに、新規医薬品候補として、ゲノム中のG遺伝子を欠損させ、その代わりにヒトCD4、CXCR4或いはCCR5、及びOX40Lをコードする遺伝子を組み込んで発現させた組換えVSVを接種し、この新規医薬品候補のHIV-1感染抑制効果を明らかにすることができた。HIV-1感染モデルとしては、HIV-1の実験室適応株だけでなく、臨床分離株(薬剤耐性株を含む)を感染させたヒト化マウスモデルも作製していきたいが、まだこの感染モデルの作製ができていないため。初年度は、作製したヒト化マウスにHIV-1の実験室適応株(X4株、R5株)を感染させ、2種類の新規治療薬候補を単独投与または併用し、それら薬剤候補のHIV-1感染抑制効果を検討することを目標とした。そこで本年度は、ヒト臍帯血由来造血幹細胞をNOGマウスに移植し、ヒト化NOGマウスを構築した。このヒト化マウスにHIV-1実験室適応株を感染させて、感染モデルを作製した。その後、このモデルマウスに、新規医薬品候補として我々が創製した、VSV G遺伝子を欠損させ、その代わりにCD4、CXCR4或いはCCR5、及びOX40Lをコードする遺伝子をゲノムに組み込んで発現させた組換えVSVを単独投与し、そのHIV-1感染抑制効果を検討できたため。今後は、ヒト化マウスにHIV-1臨床分離株を感染させたモデルマウスも作製し、この感染モデルマウスに新規治療薬候補(組換えVSV)を投与してその有効性を検討していく。また、臨床的に大きな問題となっているHIV-1薬剤耐性株を用いて同様に感染モデルマウスを作製し、その感染に対する組換えVSVの治療効果を評価していきたい。このことにより、HAARTでは治療困難なHIV-1感染症に対しても有効な新規治療薬の開発を推し進めていく。
日本付近特有の温帯低気圧概念モデル構築に向けた統計的・数値的研究

日本付近特有の低気圧構造を明らかにするために、日本付近で発達する温帯低気圧と大西洋で発達する温帯低気圧の構造のを長期再解析データを用いて統計的に比較した。解析の結果、日本付近と大西洋で温帯低気圧構造に違いがあることが明らかとなってきた。まず、日本付近で発達する温帯低気圧を、日本海で発達する温帯低気圧と太平洋で発達する温帯低気圧に分類した。両者を比較すると特徴に違いが見られ、日本海で発達する温帯低気圧は、低気圧に伴う寒冷前線が温暖前線よりも強く発達するのに対し、太平洋で発達する温帯低気圧は温暖前線、寒冷前線とも強く発達する様子が見られた。また、低気圧の発達成熟期においては、太平洋で発達する温帯低気圧において、後屈前線と呼ばれる前線構造がより明瞭に見られた。また、太平洋で発達する温帯低気圧と大西洋で発達する温帯低気圧を比較すると、特に低気圧の発達成熟期において、温暖前線に明瞭な違いが見られた。太平洋で発達する低気圧は温暖前線が低気圧中心から南東に伸びる傾向にあるが、大西洋で発達する低気圧ではより東東南東方向に伸びる傾向が見られた。また、後屈前線は、大西洋で発達する温帯低気圧において、より低気圧中心よりも後面に入り込む傾向があり、前線強度も強い傾向が見られた。これらの成果は、国内では、2018年日本気象学会春季・秋季大会にて発表した。また、国際学会では、2019年アメリカ気象学会年会にて口頭発表を行った。これまでの解析により、日本付近特有の低気圧構造が見えてきており、これは新たな発見であると言える。特に日本海で発達する低気圧は、他の海域とは特徴が異なることがわかってきており、順調に進展している。一方で違いが見られる理由についてはまだ明確な答えが得られていないため、理想化実験などを用いて海域による低気圧構造の違いを明らかにする必要がある。現在、理想化した環境場におけるテスト実験を行っている。今後は、海域による低気圧構造の違いが見られる理由について、多方面から分析していく予定である。まず、ジェット気流の構造に着目し、低気圧がジェット気流に対してどの場所で発達しているかを基準に、それぞれの海域の低気圧を分類し、構造の違いを調べる。また、理想化数値実験を本格的に行い、ジェット気流と低気圧構造の関係のより基礎的な理解を得る予定である。その他、海陸分布、海面温度分布の違いなども考慮し、低気圧構造の違いが生じる要因を調べていく。長期客観解析データから抽出した温帯低気圧のデータベースを用いて、竜巻を生ずる温帯低気圧と生じない温帯低気圧の構造や環境場の違いを明らかにした。全ての季節において、竜巻はより不安定な成層を持つ環境下で発生していた。一方で、低気圧スケールの鉛直シアの違いは、竜巻を生ずる低気圧と生じない低気圧の間で大きな違いが見られなかった。また、日本と米国で竜巻を生ずる温帯低気圧の構造や環境場を比較したところ、米国の温帯低気圧内部はより竜巻発生に適した環境場を形成することが明らかとなった。竜巻発生の環境場を理解する上で、竜巻を生ずる低気圧と生じない低気圧の違いを明らかに出来たことは重要な成果であると考えられる。これらの成果を査読付きの国際学術論文誌に投稿し、受理された。また、日本付近特有の温帯低気圧の一般的な構造を明らかにするために、温帯低気圧のデータベースを用いて、日本と米国の低気圧の特徴の比較を行なった。低気圧構造とそれに関わる前線構造に着目し、北西太平洋で発達する低気圧と北西大西洋で発達する低気圧の統計的な違いを調べたところ、前線構造に違いが見られた。特に温暖前線に違いが見られ、上層のジェット気流の特徴が太平洋と大西洋で異なることに起因することが示唆された。低気圧に伴う前線構造は、低気圧内の3次元の流れ場や温度場と強く関係しており、低気圧の発達過程にも関連するため、地域による違いを明らかに出来たことは重要な成果である。竜巻を生ずる温帯低気圧の構造を明らかにし、学術論文として受理され、一つの成果を得ることが出来た。また、北西太平洋と北西太平洋の温帯低気圧の構造および前線の特徴を明らかにするという初年度の目標を達成することが出来た。理想化数値実験の準備がやや遅れているため、区分(2)とした。

また、後屈前線は、大西洋で発達する温帯低気圧において、より低気圧中心よりも後面に入り込む傾向があり、前線強度も強い傾向が見られた。これらの成果は、国内では、2018年日本気象学会春季・秋季大会にて発表した。また、国際学会では、2019年アメリカ気象学会年会にて口頭発表を行った。これまでの解析により、日本付近特有の低気圧構造が見えてきており、これは新たな発見であると言える。特に日本海で発達する低気圧は、他の海域とは特徴が異なることがわかってきており、順調に進展している。一方で違いが見られる理由についてはまだ明確な答えが得られていないため、理想化実験などを用いて海域による低気圧構造の違いを明らかにする必要がある。現在、理想化した環境場におけるテスト実験を行っている。初年度は北西太平洋と北西大西洋の低気圧および前線構造の違いを、統計的に明らかにすることが出来たため、学術論文として投稿する予定である。また、日本付近の他の地域で発達する低気圧についても、特徴を調べる。特に日本海やオホーツク海で発達する低気圧は世界的にも特有の領域であると考えられ、その特徴を明らかにする。さらに、低気圧構造の普遍的理解を深めるために、平均的な環境場を基本場とした理想化数値実験を行う予定である。今後は、海域による低気圧構造の違いが見られる理由について、多方面から分析していく予定である。まず、ジェット気流の構造に着目し、低気圧がジェット気流に対してどの場所で発達しているかを基準に、それぞれの海域の低気圧を分類し、構造の違いを調べる。また、理想化数値実験を本格的に行い、ジェット気流と低気圧構造の関係のより基礎的な理解を得る予定である。その他、海陸分布、海面温度分布の違いなども考慮し、低気圧構造の違いが生じる要因を調べていく。翌年度使用のため。次年度に繰り越す
表面プラズモンポラリトンを介した自由な低速光電子と光との間の相互作用の実証

本研究課題では,世界で初めて,自由電子である低速光電子と光の間の表面プラズモンポラリトンを介した相互作用を実験的に実証し,実用的なプラズモニックデバイスにおける表面プラズモンポラリトン励起ダイナミクスを調べるための新手法,「フェムト秒光電子スペクトロ顕微鏡」及び「フェムト秒大気圧光電子分光法」の実現の可能性を探ることを目的とした.そのために最終年度には,基板上へ作製したAuナノ粒子試料に対して,X線光電子分光装置内で可視光並びに紫外光を照射して表面プラズモンポラリトン励起を行い,表面プラズモンポラリトンを介した低速光電子と光との相互作用の存在を実証することを試みた.これを実現するために実験条件の検討を行い,Auナノ粒子試料はガラス基板上に作製することとした.これは,基板背面からレーザーを照射することで,レーザーによる表面プラズモンポラリトンの励起効率と光電子の検出効率を同時に向上させるためである.本手法は,ガラス基板への光照射によって誘起される基板の帯電を中和させるためにも有効であることを確認した.この測定条件を実現するための背面光照射試料ホルダーも開発した.可視光並びに紫外光導入系については,汎用のX線光電子分光装置での測定を実現するために,小型軽量な光学系を設計,試作した.これらホルダーと測定系を試作し,相互作用の有無を光電子スペクトルにより検出することを試みた.しかしながら現段階では,未だ存在を実証できる段階には至っていない.現在までに,今後実証するための改善策を検討し,パルスレーザーの採用が有効であると考えている.本研究課題では,低速光電子(自由電子)と光の間の表面プラズモンポラリトン(SPP)を介した相互作用を実験的に実証することを目的とする.この目的を達成するために必須な項目として,本研究に適した試料作製法の開発,真空装置であるX線光電子分光法(XPS)装置内へ設置した試料への最適なレーザー光照射系の立ち上げを行った.1.本研究ではSiO2(ガラス)上へAuナノ粒子を高密度で固定する試料作製法を採用し,50 nm程度のAuナノ粒子を高密度配置させたガラス基板を作製した.試料作製に関しては,本学に所属するAuナノ粒子を用いたバイオセンサー作製等を研究している専門家と連携して実施した.ガラス基板上や,Si基板上の極薄SiO2膜上へAuナノ粒子を固定した試料の作製を実施した.ガラス基板上についてはSPP励起による光吸収が起きるAuナノ粒子試料を作製できることを確認した.極薄SiO2膜上への作製については,わずかながら起きる基板等の洗浄中のSiO2膜のエッチングを制御するための詳細な条件の検討を行っている.2.赤,緑,青の各色のレーザー光を,XPS装置内の真空中に設置されている試料表面照射するための光学系を立ち上げた.さらに,装置内のX線源や電子分光器などの配置関係を検討し,できる限り高い効率で試料表面へレーザー光を照射するための反射型,あるいは透過型の試料ホルダーの試作を行った.3.以上と並行して,Auナノ粒子試料のXPS測定の条件等も検討した.XPSスペクトル測定に加えて,より低速である二次電子のスペクトル測定等も行えるよう,試料へのバイアス電圧印加系も試作し,厚いガラス基板上のAuナノ粒子に対しても帯電等の影響なくスペクトル測定を行えることを確認した.本研究課題では,世界で初めて,自由電子である低速光電子と光の間の表面プラズモンポラリトンを介した相互作用を実験的に実証し,実用的なプラズモニックデバイスにおける表面プラズモンポラリトン励起ダイナミクスを調べるための新手法,「フェムト秒光電子スペクトロ顕微鏡」及び「フェムト秒大気圧光電子分光法」の実現の可能性を探ることを目的とした.そのために最終年度には,基板上へ作製したAuナノ粒子試料に対して,X線光電子分光装置内で可視光並びに紫外光を照射して表面プラズモンポラリトン励起を行い,表面プラズモンポラリトンを介した低速光電子と光との相互作用の存在を実証することを試みた.これを実現するために実験条件の検討を行い,Auナノ粒子試料はガラス基板上に作製することとした.これは,基板背面からレーザーを照射することで,レーザーによる表面プラズモンポラリトンの励起効率と光電子の検出効率を同時に向上させるためである.本手法は,ガラス基板への光照射によって誘起される基板の帯電を中和させるためにも有効であることを確認した.この測定条件を実現するための背面光照射試料ホルダーも開発した.可視光並びに紫外光導入系については,汎用のX線光電子分光装置での測定を実現するために,小型軽量な光学系を設計,試作した.これらホルダーと測定系を試作し,相互作用の有無を光電子スペクトルにより検出することを試みた.しかしながら現段階では,未だ存在を実証できる段階には至っていない.現在までに,今後実証するための改善策を検討し,パルスレーザーの採用が有効であると考えている.現段階での達成度は「(2)おおむね順調に進展している」と判断する.試料作製については,本研究の着想段階より試料作製がまず最初の大きな問題であると認識していた.そこで本学に所属するAuナノ粒子の倍音センサーへの応用等を研究する専門家と密に連携することで,Auナノ粒子を高密度で固定したガラス基板やSiO2薄膜試料の作製に成功した.試料作製中に起こるSiO2極薄膜のわずかなエッチングは想定外であったものの,専門家と連携することで,エッチングを制御して試料作製を行うことがほぼ実現できている.

また,光学系の設計と立ち上げだけでなく,従来の試料ホルダーよりも高効率でSPPの光励起を行える専用の試料ホルダーの開発も本研究遂行中に着想して遂行しており,当初計画より,より高い効率での実験が可能となっているのは大きな進展である.さらに将来の時間分解計測のために必須である,フェムト秒レーザーを光源に用いた場合の信号強度についても,高エネルギー電子に対する既報告論文の結果なども参考に見積もりを始めている.ここでは,レーザー光によるSPP励起の専門家とも連携して研究を推進しており,計画通り,将来の展開を見据えた研究を遂行できている.研究を進めていく上で必要に応じて研究費を執行したため,当初の見込み額と執行額は異なった.試料作製については,試料作製中のSiO2薄膜のエッチングをほぼ制御できる段階まで達成できたため,今後,任意の膜厚を持つSiO2極薄膜試料作製や,Auナノ粒子サイズや粒子の分布密度が異なる試料を作製する.また,抗体などで修飾したAuナノ粒子や,さらに抗原反応まで行った試料なども作製し,本研究での試料として検討する.また,より高い効率でSPP励起を行うための試料ホルダーについて更に検討・試作を進める.更に基本3原色のレーザーについて高強度レーザー光照射系の検討と試作,紫外レーザー光導入系の試作などをも行う.以上を総合的に推進することで,低速光電子(自由電子)と光の間の表面プラズモンポラリトン(SPP)を介した相互作用を実験的に実証することを目指す.研究を進めていく上で必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額は異なったが研究計画に変更はなく,前年度の研究費も含めて当初予定通りの計画を進めていく.
プラジュニャーカラグプタ自己認識理論の研究-クマーリラとの論争と思想史的意義-

本年度は、以下のとおり研究を実施した。1.プラジュニャーカラグプタ著『プラマーナ・ヴァールッティカ・アランカーラ』知覚章後半部に展開される外界実在論者クマーリラ批判の箇所を読了し、それに後続する箇所、及び関連する先行議論を読み進め、その校訂テキストおよび翻訳を作成した。本年度中にこれまで作成した校訂テキストと翻訳研究を出版するには至らなかったが、これらの成果は、一冊の本にまとめ、近く公刊する予定である。2.2009年9月1日から5日にかけて京都で開催されたThe 14^<th> World Sanskrit Confbrenceにおいて、仏教徒が主張する二諦説と論証活動のかかわりについて口頭発表を行った。クマーリラは、暫定的な真理と究極的な真理という二重の真理観を持つ仏教徒を激しく批判する。これに対してプラジュニャーカラグプタは、暫定的な真理を完全に否定した場合、あらゆる論証活動が崩壊してしまうということを詳細に検討し、仏教徒の立場から回答を与えようとする。発表では、このクマーリラに対するプラジュニャーカラグプタの再批判の内容をまとめ、両者の間に見られる真理観の相違を明らかにした。なお、この研究成果は次年度に刊行されるJournal of Indian Philosophyに掲予定である。3.2009年9月8,9両日、大谷大学で開催された日本印度学仏教学会第60回学術大会において、外界を認めることなく、いかにして推理が成立するかということをプラジュニャーカラグプタの議論をもとにまとめ、その研究成果を口頭発表した。特にプラジュニャーカラグプタの議論が、ダルマキールティが果物の味からその色を推理する場合を説明する際に持ち出した「同一基体に依存すること」という概念と密接に関連していることを指摘した。1.プラジュニャーカラグプタ著『プラマーナ・ヴァールッティカ・アランカーラ』知覚章後半部に展開される外界実在論者クマーリラ批判の箇所をクマーリラ著『シュローカ・ヴァールティカ』ニルアーランバナ・ヴァーダ章と対比しつつ読解し、校訂テキストおよび翻訳を作成した。なお、当該箇所については次年度の早い段階で読了することが確実である。2.2007年1月、インド・コルカタで開催されたInternational Conference on Logic,Navya-nyaya&Applicationsにおいて、他人の心を推理することは可能か否か、仏教論理学派全体における他心推理の歴史的な変遷、およびプラジュニャーカラグプタの見解について口頭発表した。本年度はその研究成果を論文としてまとめた。3.認識を成立させる手段とその結果は本来同一なものであるということが説かれるダルマキールティの『プラマーナ・ヴァールティカ』知覚章第319偈について、他の注釈者たちが差異の否定という観点からのみ論じるのに対して、プラジュニャーカラグプタは無差異の否定という観点も導入して説明している。そのことを『比較論理学研究』第4号掲載論文に報告した。4.2008年6月、アメリカ・アトランタで開催される国際仏教学会での発表に向け、海外の一部の研究者の間で問題となっている仏教論理学派の知覚の分類、特に〈意知覚〉と〈自己認識〉との関係について着目し、研究を進めた。仏教論理学派の創始者ディグナーガの言明をプラジュニャーカラグプタがどのように理解しているかについて、『印度学仏教学研究』第56巻第2号掲載論文にて報告し、さらにそのプラジュニャ「カラグプタの見解が後代の作者不詳の著作『タルカ・ラハスヤ』においてどのように扱われているかについて『比較論理学研究』第5号掲載論文にて報告した。1.プラジュニャーカラグプタ著『プラマーナ・ヴァールッティカ・アランカーラ』知覚章後半部に展開さる外界実在論者クマーリラ批判の箇所をクマーリラ著『シュローカ・ヴァールティカ』ニラーランバナ・アーダ章と対比しつつ読解し、校訂テキストおよび翻訳を作成した。本研究が目的とする箇所を読了し、き続き後続する議論、および関連箇所を現在参照している。2.2008年6月、アトランタで開催された第15回国際仏教学会にパネリストの一人として参加し、海の一部の研究者の間で問題となっている仏教論理学派の知覚の分類、特に〈意知覚〉と〈自己認識〉との係に着目し、仏教論理学派の創始者ディグナーガの言明をプラジュニャーカラグプタがどのように理解しいるかについて口頭発表した。この研究成果は次年度に刊行されるJournal of Indian Philosophyに掲載れる予定である。3.2008年9月、愛知学院大学で開催された日本印度学仏教学会第59回学術大会において、論争の場おける〈審判者〉の役割について口頭発表を行った。インドでは古くから討論術が発展してきた。本発表は、インドにおける討論術において、立論者と対論者とは別に審判者の役割が重要視されている点に着目しそれが外界非実在を主張する唯識説においてどのように機能するかをプラジュニャーカラグプタの議論もとに明らかにした。その成果を『印度学仏教学研究』第57巻第2号掲載論文にて報告した。4.2008年11月、東京外国語大学で開催された第56回日本西蔵学会大会において、認識結果としての自己認識の解釈に対するチベット仏教認識論の伝統とインド仏教認識論の伝統における見解の相違について口頭発表を行った。この研究成果は次年度に刊行予定の『日本チベット学会会報』にて報告予定である。

1.プラジュニャーカラグプタ著『プラマーナ・ヴァールッティカ・アランカーラ』知覚章後半部に展開される外界実在論者クマーリラ批判の箇所を読了し、それに後続する箇所、及び関連する先行議論を読み進め、その校訂テキストおよび翻訳を作成した。本年度中にこれまで作成した校訂テキストと翻訳研究を出版するには至らなかったが、これらの成果は、一冊の本にまとめ、近く公刊する予定である。2.2009年9月1日から5日にかけて京都で開催されたThe 14^<th> World Sanskrit Confbrenceにおいて、仏教徒が主張する二諦説と論証活動のかかわりについて口頭発表を行った。クマーリラは、暫定的な真理と究極的な真理という二重の真理観を持つ仏教徒を激しく批判する。これに対してプラジュニャーカラグプタは、暫定的な真理を完全に否定した場合、あらゆる論証活動が崩壊してしまうということを詳細に検討し、仏教徒の立場から回答を与えようとする。発表では、このクマーリラに対するプラジュニャーカラグプタの再批判の内容をまとめ、両者の間に見られる真理観の相違を明らかにした。なお、この研究成果は次年度に刊行されるJournal of Indian Philosophyに掲予定である。3.2009年9月8,9両日、大谷大学で開催された日本印度学仏教学会第60回学術大会において、外界を認めることなく、いかにして推理が成立するかということをプラジュニャーカラグプタの議論をもとにまとめ、その研究成果を口頭発表した。特にプラジュニャーカラグプタの議論が、ダルマキールティが果物の味からその色を推理する場合を説明する際に持ち出した「同一基体に依存すること」という概念と密接に関連していることを指摘した。
ヒト癌/NOGマウス遠隔転移モデルによるヒト癌の新しい転移関連分子の探索

平成16年度の研究ではヒト膵癌をNOGマウス脾門部に移植し、癌細胞株の遠隔転移能を統計的有意性のもとに定量的に評価した。その結果、低効率転移能高転移能ヒト膵癌細胞株を同定することができた。これらの膵癌細胞株の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析し、癌細胞株の転移能に関連する遺伝子発現変化を同定した。ヒト膵癌低転移能細胞株BxPC3株を同定した。BxPC3の肝転移巣をNOGマウス脾門部→肝転移病巣を反復継代移植し高転移細胞株BxPC3LM1を作製した。こられの細胞株の遺伝子発現プロファイルの有意差から、NOGマウス遠隔転移に関与する候補遺伝子・分子としてS100A4分子を同定し結果を論文として投稿中である。平成17年度の研究ではヒト大腸癌、悪性黒色腫細胞株をNOGマウス脾門部、尾静脈に移植し遠隔転移能を定量的に評価し、低効率転移能高転移能ヒト大腸癌および悪性黒色腫細胞株を同定した。このうち大腸癌細胞株の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析し、癌細胞株の転移能に関連する遺伝子を評価した。低転移能細胞株SW48の肝転移巣をNOGマウスに反復継代移植し転移能が増加するかを確認し、高転移細胞株SW48LM2を作製した。SW48およびSW48LM2の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析し、肝転移に関与する候補分子を探索した。大腸癌細胞株SW48LM2では膵癌細胞株において最も転移に良く相関していたS100A4の発現増強は認められなかった。現在、他の候補遺伝子について転移との相関性を解析中である。また、悪性黒色腫細胞の転移能がS100A4遺伝子発現増強に相関して増強されることを明らかにした(N.Ikoma, M.Nakamura et al., Oncol.Reports,2005)。平成16年度の研究ではヒト癌細胞株(大腸癌、膵癌)をNOGマウス脾門部、尾静脈に移植し、癌細胞株の遠隔転移能を統計的有意性のもとに定量的に評価した。研究(1):門脈血行性肝転移能、全身血行性転移能、全身リンパ行性転移能をヒト膵癌培養細胞株(Capan1,Capan2,Capan3,MIA Paca2,Panc1,BxPC3)を10^210^6個をNOGマウス脾門部、尾静脈、皮下に移植し、38週間観察し剖検し、肉眼的にマウス全身諸臓器の転移巣(数、大きさ)を確認した。組織標本を作製し転移巣の病理像を確認した。一部は凍結標本とし、分子生物学的・生化学的解析に供した。対照群として、同様の実験をNOD/scidマウス移植実験で行った。研究(2):研究(1)からヒト膵癌細胞株のin vivo転移能を評価し、低転移能細胞株高転移能細胞株を同定し、低転移能細胞株BxPC3株を同定した。

さらに低転移能の細胞株BxPC3の一部については肝転移巣をNOGマウス脾門部→肝転移病巣を反復継代移植し転移能が増加するかを確認し、高転移細胞株BxPC3LM1を作製した。研究(3):in vivoにおける遠隔転移能の同定されたヒト癌細胞株の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析した。遺伝子発現プロファイルの相互比較を有効なものとするためにDNAチップ解析回数3回のデータを解析し、発現の有意差を検討した。遺伝子発現プロファイルの有意差から、NOGマウスin vivo遠隔転移に関与する候補遺伝子・分子としてS100A4分子を同定し、現在結果を論文として投稿準備中である。平成17年度の研究ではヒト大腸癌、悪性黒色腫細胞株をNOGマウス脾門部、尾静脈に移植し、癌細胞株の遠隔転移能を定量的に評価した。その結果、低効率転移能高転移能ヒト大腸癌および悪性黒色腫細胞株を同定することができた。このうち大腸癌細胞株の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析し、癌細胞株の転移能に関連する遺伝子を評価した。研究(1):門脈血行性肝転移能をヒト大腸癌培養細胞株(SW480,SW48など)10^210^6個をNOGマウス脾門部に移植し、4週間観察し剖検し、肉眼的にマウス肝臓の転移巣(数、大きさ)を確認した。組織標本を作製し転移巣の病理像を確認した。一部は凍結標本とし、分子生物学的・生化学的解析に供した。研究(2):研究(1)からヒト大腸癌細胞株のin vivo肝転移能を評価し、低転移能細胞株高転移能細胞株を同定し、低転移能細胞株株SW48を同定した。さらに肝転移巣をNOGマウス脾門部→肝転移病巣を反復継代移植し転移能が増加するかを確認し、高転移細胞株SW48LM2を作製した。研究(3):SW48およびSW48LM2の遺伝子発現プロファイルをDNAチップにより解析した。遺伝子発現プロファイルの有意差から、NOGマウスin vivo肝転移に関与する候補遺伝子・分子を同定した。大腸癌細胞株SW48では前年度の膵癌細胞株の研究において最も転移に良く相関していたS100A4遺伝子の発現増強は認められなかった。現在、他の候補遺伝子について転移との相関性を確認中である。