hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経再生医療を目指した多能性組織幹細胞の単離と神経分化ペプチドによる神経分化誘導

2ペプチド合成:神経分化ドメインペプチドに蛋白導入ドメイン(PTD)を結合したペプチドを合成し、この際に蛋白導入ドメイン(PTD)のペプチドを結合し、細胞膜透過性の形状に合成した。3各種幹細胞の分離・培養:幹細胞は、神経幹細胞、皮膚由来幹細胞、脂肪幹細胞を用いた。これらについて神経分化ドメインペプチドによる神経分化誘導活性を検討した。4幹細胞の神経分化誘導:上記の幹細胞に対して、培地中に蛋白導入ドメイン(PTD)を結合した神経分化ドメインのペプチドを添加し、神経突起の伸長を形態学的に観察した。また、ニューロンマーカーの発現を蛍光免疫染色を行い、ウエスタンブロット法にて検討した。更に、ニューロンのサブタイプに関してどのタイプのニューロンへ分化するか解析し、SOCS5由来のペプチドではアセチルコリン陽性のモーターニューロンに、VHL由来のペプチドは主にドーパミンニューロンへ分化誘導された。5神経分化ドメインの関わる神経分化誘導メカニズムの解明:神経分化ドメインペプチドを導入した幹細胞内で引き起こされる反応を明かにし、神経分化ドメインの関わる神経分化誘導のメカニズムを次の2点を中心に一部を解明した。i)神経分化ドメインペプチドの細胞内導入後のStat3の発現抑制と神経分化メカニズムの関係の検討した。ii)神経分化ドメインペプチドを導入した幹細胞をドナー細胞とした神経再生医療の開発:特にヒト皮膚組織由来幹細胞をドナー細胞として、ラットの脳内に移植して神経の再生が得られるかを検討した。東日本大震災の影響から、科学研究費補助金の支給が遅れ、必要な物品が購入できず、研究が施行でなかったため、計画してた研究が順調に進まなかった。ただ、10月以降に支給されてからはやや回復したものの、当初の計画通りには進んでいない。25年度が最終年度であるため、記入しない。現在までの研究の達成度は、目標の約7割程度で順調に推移していると考えられる。様々なBCボックス蛋白由来のペプチドにより異なる種類のニューロンが誘導されたことは、新たな成果であった。この神経分化誘導のメカニズムに関しては、更に検討が必要であると考えられるが、STAT3の抑制が関与していることは明らかとなった。現在、この研究をまとめた論文を執筆中であり、それをもって目標が達成されるものと考えている。、研究計画は大幅に変更する必要はなく、研究課題申請書に記載通りに進めれば問題ないと思われる。ただ、現在の職種が申請時と異なってきており、研究内容にも若干違いが生じて分担研究者も24年度からは変更することにした。今後は東工大の分担研究者(特任准教授)と共に研究を進めてゆくことになる。研究を遂行する上では、大型動物を再生医療の実験に使用できることになるメリットが大きいと考えている。今回の研究において、様々な種類のBCボックス蛋白由来のペプチドから異なる種類のニューロンが分化誘導できたが、わずかなアミノ酸配列の違いでなぜそのように異なる種類のニューロンが分化誘導できたかは不明である。
国際取引契約交渉の日米比較

本研究の主な目的は、(1)国際取引交渉に見る法文化の日米比較および(2)国際交渉のスキルの教育のための教材・資料の集大成であった。1.研究会、ビジネスパーソンや実務家の面接、学生による日米間の交渉シミュレーションの観察等を通じて、国際取引交渉に見る文化について、より豊かな理解が得られた。『交渉ケースブック』、「交渉と科学と文化」等において、交渉に見る文化を取り上げる。オーストラリア人で、アメリカ合衆国ワシントン大学ロースクールの教授であるテーラー氏との共同研究を通じて、"Japan's `Era of Contract'"(印刷中)において、「契約の再規制」とでもいうべく、日本における契約観の動向を、研究分担者内田が分析する。2.国際交渉のスキルの教育のための教材・資料に関して、多くの成果をあげた。『交渉ケースブック』の本文は主として理論編からなり、交渉と教育、交渉の基本原理、交渉技法等のテーマを取り上げている。本文の他に、実践編中心で、教員用のCD-ROM(非売品)において、様々なシミュレーションその他の資料が収まっている。「座談会、法律実務家のスキルとしての交渉」も交渉スキルの教育を重要なテーマとしている。他にも、交渉教育の普及に貢献した。研究期間の間に、インターネットを介して、東京大学とワシントン大学の学生との間の、同時交渉シミュレーションの授業を確立し,定着させてきた。その授業モデルを紹介する論文が印刷中であるが,既に他の大学(例えば、青山学院、早稲田、オーストラリア国立大学)が同様の教育モデルを使って授業を提供してきた。そして研究代表者、分担者がインタカレッジネゴシエーションコンペティションの運営委員会に加わり、交渉教育の普及をすすめてきた。研究は順調に進み、継続中である。13年度中において、主な研究実績は次の通りである:1.定期的に研究会を行い、業界で実務経験豊富なビジネスマンによる日本及び世界各地における契約書の利用、交渉、役割等に関するヒアリングを行った。2.契約の交渉スキル、契約書の作成に関する書籍・資料や日本人の契約意識・契約行動に関する書籍・資料を蒐集した。3.モデル契約書を集めて、そしてアメリカ合衆国の契約書と日本の契約書の実例を集めはじめ、整理しはじめた。4.アメリカ合衆国ワシントン大学の実務家教員と協力して、(1)特許ライセンスと合弁契約を含むシミュレーションプロブレムを作成して、(2)契約交渉スキル、契約作成スキル、国際取引等に関する従来のアメリカの資料をもとに教材を作って、(3)東京大学とワシントン大学との間、日米の契約意識・行動の違い、契約実務と理論等をテーマとして、ビデオ会議を4回(内2回日米双方の実務家を交えて)実施して、ビデオテーピングして、(4)上述したシミュレーションプロブレムを使って、東京大学とワシントン大学で学生5人ずつのそれぞれ4班に、インターネット等を通じての契約交渉と契約作成をさせて、指導しながらその経過をフォローして、契約意識と行動を検討した。14年度中において、主な研究実績は次の通りである:1.定期的に研究会を行い、業界で実務経験豊富なビジネスマンによる日本及び世界各地における契約書の利用、交渉、役割等に関するヒアリングを行った。2.日米両国のビジネスマン,弁護士を対象に、契約書の利用,形態,交渉に関するインタビューを行った。3.契約書の利用,形態、交渉等に関するアンケート調査の計画を立てた。4.法科大学院の設立に向けて,契約交渉術に関する教科書づくりをはじめた。5.アメリカ合衆国ワシントン大学の日米取引経験豊の2人の実務家教員と協力して,(1)日本の中小企業の買収を中心としたシミュレーションプロブレムを新しく作成した、(2)契約交渉スキル、契約作成スキル、国際取引等に関する教材をさらに充実したものにした、(3)東京大学とワシントン大学との間、日米の契約意識・行動の違い、契約実務と理論等をテーマとして、ビジネスマン/弁護士を交えてビデオ会議を4回実施して、ビデオテーピングした、

(4)上述したシミュレーションプロブレムを使って、東京大学とワシントン大学で学生6人ずつのそれぞれ3班に、インターネット等を通じての契約交渉と契約作成をさせて、指導しながらその経過をフォローして、契約意識と行動を検討した。6.オーストラリアの学者と共同で,日本における契約法の動向に関する論文の作成(投稿準備中)を行った。研究は順調に進み、継続中である。15年度中において、主な研究実績は次の通りである:1.日米両国のビジネスマン,弁護士を対象に、契約書の利用,形態,交渉に関するインタビュー調査を行った。2.無作為に抽出された2000人を対象に、友人間・知人間における契約書の利用等に関する質問表調査を行った。その結果を分析中である。3.法科大学院の設立に関連して,実務家・他の研究者と共同で、契約交渉術に関する教科書づくりに積極的に取り組んだ。16年秋の出版に向けて、「交渉の授業モデル」、「ドラフティングの授業モデル」、「よい交渉・悪い交渉」、「交渉の準備とは何か」、「交渉とゲーム論」等のそれぞれの節および数多くのシミュレーション問題の作成が投稿中である。4.日本全国8校の大学より200人ぐらいの学生が参加した、15年11月に行われた「第二回インターカレッジ・ネゴシエーション・コンペティション」の運営委員会に加わり、契約に絡む紛争をテーマとした問題の修正・英訳、そしてコンペティションの計画及ぶ運営の様々な面に協力した。16年11月実施予定の第三回コンペティションのプラニグにも加わった。5.14年度に引き続き、アメリカ合衆国ワシントン大学の2人の実務家教員と協力して、(1)日本の中小企業の買収を中心としたシミュレーションプロブレムをさらに修正した、(2)契約交渉スキル、契約作成スキル、国際取引等に関する教材をさらに充実したものにした、(3)東京大学とワシントン大学との間、日米の契約意識・行動の違い、契約実務と理論等をテーマとして、ビジネスマン/弁護士を交えてビデオ会議を15年度も4回実施して、ビデオテーピングした、(4)上述したシミュレーションプロブレムを使って、東京大学とワシントン大学で学生6人ずつのそれぞれ3班に、インターネット等を通じての契約交渉と契約作成をさせて、指導しながらその経過をフォローして、契約意識と行動を検討した。6.オーストラリアの学者と共同で,日本における契約法の動向に関する論文の作成(投稿中)を行った。研究は順調に進み、本年度で完了した。16年度中における、主な研究実績は次の通りである:1.法科大学院の設立に関連して、15年度に引き続き、実務家・他の研究者と共同で、契約交渉術に関する教科書づくりに積極的に取り組み、その教科書(『交渉ケースブック』、出版社:商事法務)を完成した(出版予定:17年5月)。
HDLの抗動脈硬化作用におけるアポリポ蛋白AIIの役割

善玉コレステロールとして知られるHDL(低比重リポ蛋白)の抗動脈硬化作用を明らかにするため、HDLを構成する蛋白のひとつである、アポリポ蛋白AII(アポAII)に着目して研究を行った。アポAII遺伝子を導入した遺伝子改変ウサギを作製して、アポAIIの役割を検討した結果、アポAIIが多いほど、血中の中性脂肪が増え、HDL-コレステロールが減少してしまうことが明らかになった。本研究により、アポAIIは脂質代謝に悪影響を与えることが判明し、今後、アポAIIを標的とした治療法の開発が必要と考えられる。高比重リボ蛋白(HDL)は,心筋梗塞をはじめとする動脈硬化性疾患の防御因子であるため,その機能の増強が疾患の予防に大きく貢献することが予想される。しかしながら,このHDLの主要な構成蛋白のひとつであるアポリポ蛋白AII(アポAII)は,未だにその機能が明らかにされていない。そのため我々は,アポAIIの役割を明らかにするために,ヒトのアポAIIを過剰発現した,アポAIIトランスジェニック(Tg)ウサギを開発した。平成19年度の研究では,このTgウサギの特徴を明らかにすることで,アポAII機能を検証した。我々が開発したアポAII Tgウサギは発現量の異なる3系統(アポAII濃度;6.8,13.6,26.8mg/dl)が存在し,これらの血中脂質を解析した結果,アポAII濃度依存的に,ウサギの血中総コレステロールおよび中性脂肪濃度が増加傾向にあることを見出し,また逆に高比重リボ蛋白(HDL)コレステロールは,アポAIIが高値のウサギほど低値になっていること,が判明した。このことから,我々の開発したヒトアポAII過剰発現ウサギは,複合型高脂血症の特徴を有していることが明らかになった。さらに詳細なリポ蛋白分画解析を行なったところ,本モデルのコレステロールおよびトリグリセリドの増加は,主として超低比重リポ蛋白(VLDL)および中間比重リポ蛋白(IDL)が含有するコレステロールおよびトリグリセリドの割合が多いことに由来することが判明した。一方でHDLコレステロールの低下は,HDLI分画の中でも特に比重の高く粒子サイズの小さいHDLである,HDL3のコレステロール含量が低下しているために生じたものと考えられた。高比重リポ蛋白(HDL)は、心筋梗塞等の動脈硬化性疾患の防御因子であり、その増加や機能の増強は、疾患発症の予防に優れた効果を発揮することが予想される。HDLの主要な構成蛋白にはアポリポ蛋白(アポ)AIとAIIがあるが、アポAIに比ベアポAIIは、その機能に未だ不明な点が多い。そのため我々は、アポAIIの役割を明らかにするため、ヒトのアポAIIを過剰発現したアポAIIトランスジェニック(Tg)ウサギを開発した。ウサギは内因性のアポAIIを持たないため、導入したヒトアポAIIの役割の解明に適している。平成20年度の研究では、昨年度に明らかになったアポAII Tgウサギの脂質異常症(高トリグリセリド血症、低HDL-C血症)の成因を明らかにするため、脂質代謝に関連する酵素の活性を測定した。その結果、アポAII Tgウサギでは、リポ蛋白リパーゼ(LPL)の酵素活性が著明に低下していることが明らかになった。さらに、この脂質代謝異常が動脈硬化の発生進展にどのように影響するかを明らかにすべく、アポAIITgウサギと同腹の対照ウサギを用いて、コレステロール添加食負荷による動脈硬化誘導実験を行った。すると、同量のコレステロールを含む餌を与えているにも関わらず、アポAII Tgウサギでは、血中の総コレステロールおよびトリグリセリドが著明に増加し、このウサギは環境要因(食餌)の影響に対する感受性が高いことが明らかになった。動脈硬化病変における変化は現在病理組織学的解析を進行中である。
Nb⊇Sn超電導導体の電磁特性

磁気閉込型核融合炉には高磁界パルスマグネットが必要とされるが、超電導【Nb_3】Sn線材は優れた高磁界パルス導体となる可能性を秘めている。これは(1)【Nb_3】Snの臨界温度がNbTiに比べて高く高い温度マージンがとれる。(2)【Nb_3】Snの拡散反応層は通常1μm厚程度である為にフィラメント径が細く履歴損失が小さい、(3)母材がブロンズでその導電率が小さい為に結合損失が小さい、という本質的な特徴を有していることによるものである。しかしながら実状は、高磁界直流マグネット用としてわれているにすぎない。本研究の目的は、高磁界パルスマグネット用としての【Nb_3】Sn線材の電磁特性を充分に把握した上で、これを実用化する際に重要な導体化(ケーブリング)の方法について検討を行い、低損失【Nb_3】Sn導体の構造設計に資することである。我々はまず、(1)Taバイヤをもつ線材、(2)Nbバリヤをもつ線材、(3)ダブルスタッフ型の線材、(4)Nbチューブ法による線材の計4類の【Nb_3】Sn線材の損失特性を比較した。これらの検討結果から一般的な線材設計の指針が得られるが、これらの線材は応用の際ケーブリングされ導体という形で使われる為、付加的に発生するストランド間結合損失まで含めた低損失化の議論が必要である。本研究では、断面構造が複雑化してきた実用【Nb_3】Sn導体の損失特性をより定量的に評価する為に、有限要素法を用いた数値解析を行った。有限要素法を超電導体の電磁現象に適用した例は従来なく、我々はまずこの場合の適用上の問題点を抽出し検討した。次に、これらの基礎的な考察を基にして、線材を3本ずつケーブリングした数種類の導体の損失計算に実際に適用し、種々のパラメータが導体の損失にどの様に影響しているかを調べた。以上本研究では、複雑な断面形状をもつ実際の【Nb_3】Sn導体の損失を定量的に評価する方法を確立し低損失導体を得る為の指針を与えた。
TGF-βシグナル伝達に関わる分子の消化器癌における異常の解析及び癌治療への応用

1)ヒト肝細胞癌(肝癌)における第4染色体欠失の意義を検討するため、76症例の肝癌組織及びその非癌部を用い、第4染色体上のSmad1遺伝子の突然変異の有無をRT-PCR-SSCP法にて解析した。Smad1遺伝子(CDNA)のMH2ドメインに3組のPCRPrimerを設定しSSCP法を施行したが、肝癌症例でSmad1遺伝子に異常が認められた例はなかった。次にRNAの得られた36症例の肝癌において、Smad1遺伝子の発現を半定量的PCRを用いて検討した。半定量的PCRはβ-アクチンの発現をコントロールとして用い、26サイクルのPCRを行い判定した。その結果、非癌部に比し癌部で発現量の低下が認められた症例はなかった。一方これらの症例における第4染色体欠失の頻度はFGA座位で27%(PCR-RFLP法)、FABP座位で16%(PCR-RFLP法)、D4S125座位で12%(サザンブロット法)、D4S1537座位で20%であった。上記より肝癌の約2割に第4染色体欠失が認められるが、Smad1遺伝子の異常は認められなかった。2)同様にSmad2、Smad4、TGF-βタイフIIレセプターの突然変異をRT-PCR-SSCP法にて解析したが、異常の認められた例はなかった。3)上記の肝癌症例において、TGF-βシグナル伝達に関わる分子であるp15^<INK4B>遺伝子の異常の有無を解析した。PCRを用いて解析した結果p15^<INK4B>遺伝子の欠失が認められた例はなかった。しかしp15^<INK4B>遺伝子でプロモー夕のメチル化を、メチル化特異的PCR法にて解析した結果、44例中5例にプロモーターのメチル化が認められた。現在これらの症例において発現の低下の有無をウエスタンブロット法にて確認している。1、ヒト肝細胞癌では、第4染色体の欠失が効率に認められ、第4染色体上にはBMPシグナル伝達に関る遺伝子Smad1が存在している。そこで、76症例のヒト肝細胞癌組織及びその正常部を用い、Smad1遺伝子(cDNA)のMH2ドメインに3組のPCR primer(302bp,308bp,176bp)設定しRT-PCR-SSCP法にて解析した。しかし解析した76例の肝細胞癌症例でSmad1 cDNAに異常が認められた例はなかった。次に肝細胞癌36症例においてSmad1の発現を半量的PCR(β-アクチンをコントロールとして26サイクルのPCRを施行)で検討したが、癌部、非癌部において差が認められた症例はなかった。これらの肝細胞癌症例における第4染色体欠失の頻度は、FGA座位で27%(PCR-RFLP法)、FABP2座位で16%(PCR-RFLP法)、D4S125座位で12%(サザンブロット法)であった。現在、RFLPマーカーを増やして肝細胞癌における第4染色体の共通欠失領域を求めており、Smad4遺伝子が肝細胞癌の共通欠質領域内に存在する遺伝子であるか否かを確認している。さらにSmad1遺伝子の発現をウエスタンブロット法にても検討する予定である。2、Smad2,3,4遺伝子のMH2ドメイン及びTGF-β受容体遺伝子の肝細胞癌及び他の消化器癌における異常の有無も、現在解析を進めている。
壷・甕の容積をはかるために必要なソフトウエアの開発

今や考古学では、多種多様なデータを扱うことが必要である。そのデータには、テキストデータから画像データまであり、特に、大量の画像データの解析が求められている。主要な画像データは、陶磁器の実測図である。陶磁器の実測図には、いくつもの情報がある。その情報をどのようにして得るのか、その方法論を作り上げることが求められている。この研究の最大のテーマは、陶磁器の実測図から様々な情報を得るための技術開発である。そして最も遅れている分野である、容積を実測図から計るためのソフトウエア開発である。このソフトウエアは、C言語を使って、そしてVisual Basic言語を使って作り上げた。WindowsのマシンとMacintoshのマシンで使えるようにした。特に需要のあるWindows用に、Visual Basicによって作り上げた。重要なのは、甕などの図面をスキャナに取り込み、画像データの輪郭を構成する各点を座標として、二次元データに変換する。この二次元データを使って容積計算することである。誰でも簡単に使えるよう、いくつかのインタフェースを用意した。ソフトウエアをコントロールするためのホーム・インタフェース、白と黒の情報を0と1に変換するためのインタフェース、スケール計算をするためのインタフェース、容積を計算するためのインタフェース、容積と高さの関係用のインタフェース、容積を昔の基準値で換算するためのインタフェースである。このソフトウエアの開発によって、これまでは不可能であった実測図からの容積計算が、簡単にできるようになった。このソフトウエアは、世界の考古学の発展に大いに貢献するものである。考古学では毎年世界的にも多くの発掘調査が行われており、調査資料・報告書とも厖大なものとなっている。そのような厖大な資料をどのように処理するか、研究上も大きな課題である。そしてそうした資料の一つが、実測図であり、厖大な実測図の処理をいかに行い、有意義なデータをどのようにして得るのか、世界的な課題でもある。このような視点に立って荻野と坪川は、実測図の解析から様々な情報を得るべき方法を考え、独自のソフトウエアを構築することによって世界に貢献すべきと考えた。それが容積を自動的に計算し、歴史的な意味を引き出すための方法の構築、「壺・甕の容積計算ソフトウエア」であった。これまでは、原理的なプログラムを数学ソフトに依存し構築してきたが、さらに一歩進め、C言語による独自のプログラムの構築を行った。計算上の原理原則についてはこれまでに明らかにしてきたので、C言語による独自のプログラムの作成を進めた。その結果、今回までに、数値データの二値化、数値の補正、容積計算、容積換算など、一連の流れの大枠は構築した。C言語による二値化とは、白を「0」、黒を「1」に変換し、画像をTEXT書類として保存する。この際、画像は独自に解析した、tiff形式を採用することにしたが、まだ一部の画像形式にしか対応していないので、他の画像形式にも対応できるようにする必要がある。容積計算については、これまでの方法にのっとり、高さが1dotの円柱の積み重ねを用い、上下の半径が等しい円柱とみて計算した。さらに古代の度量衡に対応するためのプログラムも構築し、容積計算から時代の必要性に対応すべき、実測図上の各種データの情報処理に必要なシステムを作り上げることができた。このよう容積計算からのC言語への移植は終了し、容積計算システムの構築は一応の姿をみることとなった。次年度は、使いやすさなどを考慮し、インタフェースの構築などを完了し、世界で唯一つの「容積計算ソフトウエア」の完成を目指すことになる。本研究の最終年度として、次のような点に中心をおいて研究と予算の執行を行った。まず前年度までに作り上げてきたC言語によるプログラムについて、改良と問題点の洗い出しを行った。そして、より多くの研究者が利用できるための方法論の模索を行った。と同時に、そうした方法に必要なシステムの構築とプログラムの作成を行った。

なんと言っても大きな問題は、既存のソフトウエアに依存しないために、できるだけ自前のシステムとプログラムの作成によって、オリジナルなソフトウエアを作り上げることであった。そこでまず問題にし重要と考えたのは、画像を自前で保存し処理するための画像形式をどうするかであった。そこで「C言語」によるプログラムに際し、Unix上で広く使われている「TIFF」ファイル形式の解析であった。幸いにしてこのファイル形式は、構造的特長がオープンとされていて、自由に解析することが可能であったため、この「TIFF」ファイルを解析・使用することにし、実際、我々のソフトウエアでは、重要な位置を占めることになった。もう一つ当研究で重要視したのは、汎用性のあるソフトウエアを作り上げるには、どのようなものがよいかということであった。そこで我々は、広く使われている「Windows」上での使用を想定し、「Windows」でのシステムを構築することにした。そしてそのために、これまでの「C言語」による開発の他、「Windows」用ということで、開発言語として、「Visual Basic」を使用することにした。これは、利用者が様々なインタフェースを使って、意図した方向性をもって操作を可能とさせる点で、大いに役立つものである。ただこの方法によると、これまでの方法では不十分な所もでてきたので、「Visual Basic」によるプログラムへの移植を行った。この「Visual Basic」によるソフトウエアには、「二値化処理インタ」で、画像の二値化を行う。その後「情報量補正(スケール値)インタ」で、「k」値の算出を行う。そして「容積計算インタ」で、陶磁器画像の配列と「k」値によって容積の計算を行う。計算終了後、必要ならば、「高さと容積インタ」で、任意の高さに対する容積計算を行う。また必要ならば、「換算インタ」で、容積の古代換算を行う。
犯罪被害者へのアウトリーチ支援体制モデルの構築

事業初年度は、アウトリーチ支援体制の準備を行う目的にて研究基盤の整備や、次年度以降の調査準備を行った。本年度の取り組みの一例として、犯罪被害者支援の国内外の研究動向の概要を掴む目的から、暴力関連の研究に焦点をあてた文献研究を実施した。1960年1月1日2017年5月31日に発行された研究論文を対象とし、暴力/Violenceをタイトルに含む国内外の論文を収集。1960年代が和/英文は、8篇/73篇、70年代33/406、80年代117/742、90年代191/3750、2000年代が751/6443、20102017が645/8837だった。文献の内容確認を進めることとと並行し、論文タイトルのテキストマイニングによって、暴力/violenceという用語とともに、支援や被害者等の用語がどのような頻度で使用されているかを確認した。年代を通して上位にあがったカテゴリは、和文は「患者」、洋文は「women」だった。中でも、特徴的な用語のカテゴリは、洋文では「health」や「prevention」、和文は「登校拒否」「非行」等がその一例として挙がり、国内の論文では被害者や支援の用語がカテゴライズされなかった。また、国内外で暴力/violenceに関する研究は増加傾向であることがわかり、更にカテゴリの変遷から、研究テーマの年代ごとの移り変わりをみたところ、国外では被害者の権利や被害者の健康に係る研究が国内よりも先に取り組まれている傾向にあると読み取ることができた。研究代表者、共同研究者共に研究機関を異動することになり、調査等を行うにあたってのフィールド開拓を新たに行う必要が出てきたため。研究代表者、共同研究者が当初研究基盤として想定していた地域を離れることとなったため、研究遂行に支障が出ないようにするために、平成31年度からは共同研究者を1名追加し、研究体制を整備している。31年度は、被害者支援システムの構築の準備段階としての、質問紙調査を実施する予定である。
18世紀までの人間を中心とした発生と死の理論及び発生と死をめぐる実践的問題の研究

9年度は、日本人の死生観や死の民俗を辿った「死にまつわる栃木点描」が、6人共著の本『とちぎ解剖学』(下野新聞社)として1997年6月刊行された。発生・生殖方面では、プラトンの発生・生殖理論を探らんとしてその結果「プラトンの女子教育論と優生思想」となった。10年度以降は、ヨーロッパにおいて伝統的な産婆術が変容を迫られ、男性外科医が難産を通して産科方面に進出し、婦人病学の知識が探求されていき、男性医師による産婦人科学が成立してくる15・16世紀に研究を集中しているが、10年度は、1998年5月末の愛知大学での日本科学史学会年会で、口頭発表による報告「レスリンとリュフに見る16世紀産婦人科学の成立史」を行った。また11年度は、1999年5月末の拓殖大学での日本科学史学会年会で、口頭発表による報告「帝王切開術と16世紀産婦人科学の成立」を行った。論文「帝王切開術と産婆世界への男性外科医の侵入」が1999年8月から9月にかけて、『科学医学資料研究』(月刊)の300号と301号に掲載された。なおこの論文と同じ表題の講演を、1999年2月27日、順天堂大学医学史ゼミにおいて行った。12年度は、発生・生殖の問題や産婦人科学の歴史方面の執筆の速度は夏の間一時鈍った。夏は中世ルネサンスの医学や自然誌全般の歴史「中世ルネサンスの医学と自然誌」を書くのに費やされた。これは、10人ほどの共著の『生命科学の近現代史』(仮題)頚草書房に収められて2001年刊行される予定である。また中世の自然誌関係では、「アルベルトゥス・マグヌスの翻訳文献情報」を5月に発表した。夏前には産婦人科学の歴史方面の講演活動を行い、2000.6.6.に「産婆術と産婦人科学の歴史」をICU科学史フォーラム(国際キリスト教大学)で行い、ついで2000.6.24.に「女性史と医学史-産婆術と産婦人科学の歴史」を科学史学校(国立科学博物館)で行った。後者はビデオに収められ、前者は『Newsletter科学史フォーラム』に講演抄録が掲載された。資料収集活動は4年間を通じて今までになく活発に行うことができた。資料収集活動は平成9年度は今までの中で最も活発におこなった。資金に余裕ができ、しばしば資料のマイクロフィルムを取り寄せたり、製本に出したりしたことや、研究補佐者(print out作業の補助を担当)を多少なりとも得たおかげである。発生理論方面の一次資料、とくに15・16世紀に出た刊本のマイクロフィルムの収集とそのprint out及び製本の作業能率が上がり、産婆術書・産婦人科学書・解剖学書・外科学書などの稀少本の複製が徐々に集まりつつある。執筆活動は思うようにはなかなかはかどらないが、死の方面では、「死にまつわる栃木点描から」と題して地元栃木県に足場を据えて死生観や死の民俗をたどってみた。これが6人共著の本『とちぎ解剖学』(下野新聞社)に収録され、1997年6月刊行された。

また1996年12月には、脳死・臓器移植問題に触発されて書いた「現代の医療の生と死への介入と日本人の死生観」なる論文も『帝京大学理工学部研究紀要(社会篇)』5:1-21に収録され、一足先に刊行されている。発生・生殖方面では、プラトンの発生・生殖理論をも探らんとして、プラトンを気にしていたが、哲人教育に男女の差別は無用との論(女性観の一種)と優生思想との絡みの方が前面に出てしまい、生殖理論は背景にうっすら出て来るだけの論文「プラトンの女子教育論と優生思想」となった。また、産婆を含む女性医療家の歴史についての二つの書物の書評、「B・エーレンライク/D・イングリシュ『魔女・産婆・看護婦』、J・アクターバーク『癒しの女性史』」を『化学史研究』24(1997):171-173に掲載した。資料収集、その分析・検討、論文の執筆などをすべて小松ひとりで行なった。資料は、本年度もひき続き、産婦人科学・外科学方面の一次資料(15世紀後半以降の刊本のマイクロフィルム)や研究文献を収集した。米国のNLMからのみでは入手できない資料を、今年度後半は英国のWellcome Institute Libraryからも購入したら、高価であった。取り寄せたマイクロフィルムをprint outしてくれる補佐者は今年度は見つからなかったので、製本まで済んだ形になった資料はそう多くはなく、昨年度ほどの能率は上がらなかった。このところ筆者は、ヨーロッパにおいて伝統的な産婆術のあり方が変容を迫られ、男性外科医が難産の局面を通して産科方面に進出し、婦人病学の知識の必要性が浮上して収集され生産されていき、男性医師による産婦人科学が成立してくる15・16世紀に研究を集中している。その成果の報告としては、1998年5月末の愛知大学での日本科学史学会年会で、口頭発表による報告「レスリンとリュフに見る16世紀産婦人科学の成立史-リュフはいかにレスリンの産婆術書を換骨奪胎したか-」をおこなった。また、論文「帝王切開術と産婆世界への男性外科医の侵入」は1999年前半に『科学医学資料研究』(月刊)掲載される予定である。この論文と同じ表題の講演を、1999年2月27日順天堂大学医学史ゼミにおいておこなった。資料収集、その分析・検討、論文の執筆などをすべて小松ひとりで行った。資料は、本年度もひき続き、産婆術・産婦人科学・外科学・解剖学方面の一次資料(15世紀後半以降の刊本のマイクロフィルム)や研究文献を収集した。一次資料は米国のNLMや英国のWellcome Institute Libraryから購入した。取り寄せたマイクロフィルムをprint outしてくれる補佐者は今年度も見つからなかったので、製本まで済んだ形になった資料はそう多くはなかった。このところ筆者は、ヨーロッパにおいて、男性医師による産婦人科学が成立してくる15・16世紀に研究を集中している。その成果の報告としては、1999年5月下旬の拓殖大学での日本科学史学会年会で、口頭発表による報告「帝王切開術と16世紀産婦人科学の成立-ボーアンはなぜルセを支持したのか-」をおこなった。また、論文「帝王切開術と産婆世界への男性外科医の侵入」は『科学医学資料研究』(月刊)の1999年8月号と9月号に掲載された。資料収集、その分析・検討・総合、論文・著作の執筆などをすべて小松ひとりで行った。資料は、発生理論・産婦人科学・外科学・解剖学方面の一次資料(15世紀後半以降の刊本のマイクロフィルム)や研究文献を中心に、収集した。15・16世紀などの古い時代の刊本は稀少本であり、欧米の図書館からマイクロフィルムで取り寄せ、それをマイクロリーダープリンターでprint outして読めるようにし、さらに製本しなければならないが、本年度もprint outの作業を補佐してくれる人がうまくみつからなかった。
在日ネパール人/ベトナム人女性の労働とリプロダクティブヘルスの両立

在日ベトナム人及びネパール人を中心とするアジア系女性外国人労働者のリプロダクティブヘルスに焦点を当て、母子の健康行動と受療行動の実践を、労働環境や生活環境との関連から明らかにする。そしてさらに、疾病予防、あるいはリプロダクティブヘルスの観点から、当事者のみならず、周囲への働きかけに向けた実践研究を行う。在日外国人女性労働者のリプロダクティブヘルスが侵害されている要因を、個人の嗜好性や選択に求めるのではなく、社会構造において正式な労働者として位置付けられていない女性たちのリプロダクティブヘルスに関する問題として、いわば国際的な労働保健の問題として捉えようとする試みである。
メスバウア-分光学的マイクロアナライザ-・X線分析器の開発

本研究で用いたX,γ線同時計数システムを図1に示す。核壊変に伴う脱励起によって生成される^<57>Feの化学状態についてこのシステムを用いて研究し、種々の化合物においてX,γ線同時計測法が有効であることがわかった。また、通常の転換電子散乱メスバウア-分光法(CEMS)を用いて、スズやブリキ、トタンを各種酸で処理した時に生成する腐食層について調べた。その結果硝酸の場合にはメタスズ酸が、リン酸の場合にはピロリン酸スズ(IV)が生成することが分った。一方、マレイン酸、マロン酸、シュウ酸では酸スズが形成されることが分った。この酸化スズの生成はX線回折では分からず、CEMSの有用性が実証された。また、鉄の含有量や焼成零囲で色調の変化する鉄-バリウム釉の研究にもCEMSを適用した。^<57>Coから放出されるγ線を利用して、ブリキ中の元素の同定を行った。照射に用いた^<57>Coはメスバウア-用のもので、このことにより、メスバウア-の測定とX線分析が行えることが分かり、当初のもう一つの開発目的であったマイクロアナライザ-については、同時計測法に関する基礎的デ-タは得られたが、今後、スポット化やコリメ-ト法についてさらに改良がなされなければならない。研究の初年度である本年度においては、内部転換電子とγ線との同時計数回路を組みたてコリメーターとその分解能の検討および同時計数のタイミング設定など種々の測定条件について検討した。また、測定用の試料の作成およびその評価についても併行して行なった。右図に、内部転換電子とγ線との同時計数回路のブロック図を示す。Detectorは気体増幅比例計数管で内部転換電子を観測する。気体としてはHe-i-C_4H_<10>を用いた。NaI(Tl)はシンチレーションカウンターで、122KeVのγ線および各種のX線を測定するために使用する。シンチレーションカウンター系には、特定のγあるいはX線を導入し、同時計数のタイミングをとるための回路が付属しており、γ線と電子の同時計数の条件にあった信号だけがマルチチャンネル波高分析器に入力され、同時計数メスバウアースペクトルが観測される。スペクトルが観測されても試料表面のどの程度の局所からの情報が得られているのか精度よく同定することは難しく、スポットの検定のための標準試料として、特定の大きさのスポットを有す試料を作成し、電子顕微鏡やそれに付属している分析装置によりその大きさを決定しておく必要が生じた。そのための試料は、現在^<57>Fe濃縮鉄を用いて作成中である。さらに、次年度には、X線と内部転換電子との同時計数を行なうとともに、特性X線による共存元素の分析、同定を行なう予定である。本年度は前年度にひきつづき、散乱電子とこれにともなって放出される時性X線との同時計測回路の組み立てと測定を試みた。具体的な系としては、放射壊変で生成する57Feの化学状態をとりあげ、同時計数の基礎的問題と局所分析のモデルとして検討した。その結果、122KeVのγ線や内部転換電子の放出にともなうX線などと同時計数することが可能であることがわかり、種々の化合物について、時間分割による測定を行い、壊変直後からの生成核種(^<57>Fe)の化学状態に関する情報を得た。次に、散乱電子メスバウア-分光法に関して、各種酸による表面腐食生成物の測定や鉄ゆう(釉)の測定を行い表面層における基礎的デ-タの収集を行った。すなわち、ブリキを硝酸で処理した場合には、濃度が高いと腐食層が厚くなり基板のβスズのピ-クが観測されず、表面層に生成したメタスズ酸によるピ-クのみ観測される。しかし、濃度を低くすると腐食層に次第に薄くなり基板のβスズが観測されるようになる。また、リン酸で処理すると、ピロリン酸スズ(IV)が生成することがわかった。このように、散乱メスバウア-分光法は表面層の測定に有効である。

さらに鉄ゆうの場合には、処理温度、含有される鉄の量により色調が変化するが、鉄の濃度が高くなるにつれて、酸化鉄が偏析してくることが確認され、特に表面層ではαーFe_2O_3の結晶として存在していることが、磁気分裂ピ-クの強度化から結論された。一方、^<57>Coを用いたX線分析は、Ge半導体検元素分析を行うことができた。このことから、散乱電子メスバウア-スペクトルとX線分析が同じ^<57>Co線源を用いて十分行えることがわかり、メスバウア-分光学的X線分析器の開発の途は開いたと考えられるが、当初のもう一つの目的であるマイクロアナライザ-については、同時計数法に関する基礎的デ-タは得られたが、スポット化に対してはさらなる改良、工夫が必要とされる。
嫌気的自然環境で起こる有機汚染物質の脱塩素化反応を好気条件下で実現させる

ポリ塩化ビフェニル類(PCBs)は難分解性の環境汚染物質で、土壌河川等の有効な浄化法は未だ無く、PCBs廃絶は持続可能な社会形成に極めて喫緊な課題として国際的に認識されている。自然界でのPCBs微生物分解には「好気下での酸化的ビフェニル環開裂」と、反応条件が厳しく実用的利用が困難とされる「嫌気下での還元的脱塩素化」が知られる。本研究は、高塩素置換型PCBsの還元的脱塩素化分解を大気下で実現させる、世界初の革新的な生物触媒の創出を目的とする。偏性嫌気性細菌のPCBs還元的脱塩素酵素(Wangら、2014)は、ビタミンB12を補酵素として1価コバルトが活性種となり触媒反応するが、コバルト再生に高い還元力が要るため大気下で活性を維持できない。我々は、PCBs脱塩素酵素に1価コバルトを安定的に再生する特性を付与することを目標に、当該年度は本酵素を発現する遺伝子組換え細菌の作製を試みた。我々は以前に、デハロコッコイデス属細菌の公開ゲノム情報を基にPCBs脱塩素酵素2種類を選抜し、酵素活性に必須と推測した細胞膜結合アンカータンパク質を共発現する人工遺伝子を作製して、大腸菌を宿主とした組換え酵素の発現に成功したものの、活性は検出できなかった。そこで今回は、宿主としてビタミン高生産株で好気と嫌気の両条件下で生育可能な大腸菌近縁の腸内細菌(A株とする)の使用を検討した。本菌株が数種類の抗生物質に自然耐性を示したためプラスミド選択マーカー遺伝子を変更し、lacプロモーター制御下の発現系を再構築したが、嫌気・好気いずれの条件下でも組換え酵素の発現を確認できなかった。そこで、tacプロモーター制御下の新たな発現ベクターを構築してA株に導入した結果、2種類のうち1種類について目的タンパク質の発現を確認することができた。当該年度に実施計画していた「PCBs脱塩素酵素を発現する遺伝子組換え細菌の作製」は、デハロコッコイデス属細菌由来の組換え酵素について、ビタミン高生産細菌のA株を宿主とした酵素タンパク質発現系の構築に成功することで達成できた。実験経過において、A株が数種類の抗生物質に対して自然耐性を示したことや、発現酵素タンパク質を検出できなかったことなどから、発現ベクターを構築し直す必要があったが、最終的にはtacプロモーター制御下で発現誘導可能な遺伝子組換え細菌を作製することができた。選抜した2種類のPCBs脱塩素酵素のうち、1種類についてはまだ酵素タンパク質の十分な発現量を確認できていないため、引き続き検討を行う予定である。当該年度に作製成功したPCBs脱塩素酵素タンパク質を発現する本遺伝子組換え菌株を用いて、次年度は当初の予定通り、PCBsに対する脱塩素化活性の確認を行っていく。当該年度において、PCBs脱塩素酵素タンパク質を発現する組換え細菌株の作製に成功した。よって次年度以降は、(1)組換え酵素が嫌気下で高塩素置換型PCBsを脱塩素化することを確認した後、さらに(2)その組換え酵素に1価コバルトを安定再生できる特性を付与した新しい機能性酵素を創生し、好気下でも高塩素化PCBsを脱塩素化することを確認する。(1)組換え酵素による高塩素置換型PCBsの脱塩素化反応組換え細菌株が、嫌気下で高塩素化PCBsに対し脱塩素化活性を示すことを確認する。高塩素化PCBsには市販PCBs及び同族体単体の標準品を使用し、特に生体毒性の高いコプラナーPCBsや、PCBs酸化的環開裂分解の初発酵素ビフェニルジオキシゲナーゼが作用しないPCB同族体の脱塩素化に注目する。本実験はグローブボックス内で行い、反応系にはチタン(III)ークエン酸錯体を添加した還元下で行う(Zehnderら、1976)。(2)コバルトを安定再生できる特性を付与した新機能酵素の創生本特性を付与するにあたって、組換え酵素の活性中心付近に低分子化合物を導入するため、マレイミド結合型蛍光プローブ導入に代表される、タンパク質の部位特異的ラベル化方法を利用する(Takatsukaら、2010)。組換え酵素の活性中心付近へチオール基やアミノ基等を持つラベル可能なアミノ酸残基を導入し、反応基を導入した低分子化合物を結合させる。この新機能性酵素で、好気下でのPCBs脱塩素化反応を試みる。我々は以前に、デハロコッコイデス属細菌の公開

ゲノム情報を基にPCBs脱塩素酵素2種類を選抜し、酵素活性に必須と推測した細胞膜結合アンカータンパク質を共発現する人工遺伝子を作製して、大腸菌を宿主とした組換え酵素の発現に成功したものの、活性は検出できなかった。そこで今回は、宿主としてビタミン高生産株で好気と嫌気の両条件下で生育可能な大腸菌近縁の腸内細菌(A株とする)の使用を検討した。本菌株が数種類の抗生物質に自然耐性を示したためプラスミド選択マーカー遺伝子を変更し、lacプロモーター制御下の発現系を再構築したが、嫌気・好気いずれの条件下でも組換え酵素の発現を確認できなかった。そこで、tacプロモーター制御下の新たな発現ベクターを構築してA株に導入した結果、2種類のうち1種類について目的タンパク質の発現を確認することができた。当該年度に実施計画していた「PCBs脱塩素酵素を発現する遺伝子組換え細菌の作製」は、デハロコッコイデス属細菌由来の組換え酵素について、ビタミン高生産細菌のA株を宿主とした酵素タンパク質発現系の構築に成功することで達成できた。実験経過において、A株が数種類の抗生物質に対して自然耐性を示したことや、発現酵素タンパク質を検出できなかったことなどから、発現ベクターを構築し直す必要があったが、最終的にはtacプロモーター制御下で発現誘導可能な遺伝子組換え細菌を作製することができた。選抜した2種類のPCBs脱塩素酵素のうち、1種類についてはまだ酵素タンパク質の十分な発現量を確認できていないため、引き続き検討を行う予定である。当該年度に作製成功したPCBs脱塩素酵素タンパク質を発現する本遺伝子組換え菌株を用いて、次年度は当初の予定通り、PCBsに対する脱塩素化活性の確認を行っていく。当該年度において、PCBs脱塩素酵素タンパク質を発現する組換え細菌株の作製に成功した。よって次年度以降は、(1)組換え酵素が嫌気下で高塩素置換型PCBsを脱塩素化することを確認した後、さらに(2)その組換え酵素に1価コバルトを安定再生できる特性を付与した新しい機能性酵素を創生し、好気下でも高塩素化PCBsを脱塩素化することを確認する。(1)組換え酵素による高塩素置換型PCBsの脱塩素化反応組換え細菌株が、嫌気下で高塩素化PCBsに対し脱塩素化活性を示すことを確認する。高塩素化PCBsには市販PCBs及び同族体単体の標準品を使用し、特に生体毒性の高いコプラナーPCBsや、PCBs酸化的環開裂分解の初発酵素ビフェニルジオキシゲナーゼが作用しないPCB同族体の脱塩素化に注目する。本実験はグローブボックス内で行い、反応系にはチタン(III)ークエン酸錯体を添加した還元下で行う(Zehnderら、1976)。(2)コバルトを安定再生できる特性を付与した新機能酵素の創生本特性を付与するにあたって、組換え酵素の活性中心付近に低分子化合物を導入するため、マレイミド結合型蛍光プローブ導入に代表される、タンパク質の部位特異的ラベル化方法を利用する(Takatsukaら、2010)。組換え酵素の活性中心付近へチオール基やアミノ基等を持つラベル可能なアミノ酸残基を導入し、反応基を導入した低分子化合物を結合させる。この新機能性酵素で、好気下でのPCBs脱塩素化反応を試みる。当初、遺伝子組換え細菌作製の宿主菌株として、上手く機能しなかった場合を考慮し複数菌種を予定していたが、第一候補菌株での作製に成功したため菌株購入費を使用せずに済んだ。
RA系非依存的な糖尿病性腎症の発症予測バイオマーカーと分子標的治療法の開発

BMP4がSmad1の活性化を直接制御し、腎症モデルではメサンギウム基質増生に伴いBMP4とリン酸化Smad1の発現を認めた。BMP4の誘導型transgenic miceでは、誘導後BMP4の発現と伴い糸球体硬化症を認めた。BMP4(+/-)miceではストレプトゾシンによるメサンギウム病変は改善していた。さらに糖尿病マウスにBMP4の中和抗体を投与し、組織病変の改善とリン酸化Smad1の発現低下を認めた。本研究ではBMP4/Smad1系の糖尿病性腎症の発症進展における意義を明らかにした。(1)糖尿病においてTGFβがSmad1制御分子として調節を担っているが、BMP2およびBMP4がより強力な活性化分子として発現を制御している。BMP2/4の糖尿病性腎症発症に果たす役割を明らかにするために、培養メサンギウム細胞において、TGFβ、BMP2/4による刺激を加えると、いずれも、Smad1のリン酸化が容量依存性に進行し、核内への転送が促進された。さらに、AGEsを用いて、Smad1発現誘導・活性化機構を検討し、TGFβ-ALK1-Smad1およびBMP2/4-ALK3/6-Smad1の両経路が活性化していることが確認された。糸球体硬化の進行過程におけるSmad1活性化機構が明らかとなった。(2)STZ誘導糖尿病マウスを作製し、糸球体病変を惹起させた。また、より進行した硬化病変を有するiNOSトランスジェニックマウスも用いて、Smad1およびTGFβ、BMP2/4とその受容体などのSmad1制御分子の発現が、mRNA・タンパク質レベル発現、免疫組織学的解析により、病期の早期から亢進していくことを確認した。また、Smad1遺伝子過剰発現マウスを作製し、糖尿病を誘導し、従来のモデルよりも、よりヒト腎症の変化に近似しているごとを病理組織学的解析により明らかにした。(3)正常の発生における異常を避けるため、BMP2/4のタモキシフェン誘導型調節発現マウスの作成を行った。BMP2/4により発現誘導・活性化されるSmad1の腎での動態を確認した。それと同時に、Smad1の下流にある硬化関連分子群の発現の増強と病理学的な糸球体硬化病変の相関を解析したところ、BMP4によって、著明に病変形成が進行することが明らかとなった。(4)尿中BMP2/4が尿中Smad1の出現に先行して、糖尿病マウスにおいても尿中に検出できた。測定感度の低さを解決するために、βガラクトシダーゼを用いた高感度化を行った。(1)糸球体硬化の進行過程におけるBMP2/4によるSmad1活性化機構の解析:前年度に確立したSmad1発現誘導因子同定システムにおいて、最も重要な因子であることが明らかになったBMP4を用いて、いわゆるヒトでの長期暴露の影響を確認するために、ヒトメサンギウム細胞に長期反復投与を行い、糖尿病性糸球体硬化関連分子群のうちでもSox9の発現が誘導されることを明らかにし、分子治療の新規ターゲットを得た。(2)糖尿病性腎症モデルマウスを用いた既存の治療法の再評価:糖尿病性腎症の治療として現在、一般に用いられている、インスリン、アンギオテンシン受容体拮抗薬などの効果を、Smad1の発現抑制の程度、硬化症進行抑制の程度により評価し、RA系阻害薬などの既存の治療では改善し得なかった、糸球体硬化をBMP4の特異的な中和抗体投与により、改善し得るか検討するため、血液・尿の回収を行っている。現時点では有害な副作用を認めていない。(3)BMP2/4のコンディショナルトランスジェニックマウスを用いた治療法の検討:Smad1はリン酸化されて、病変形成に本質的な役割を果たすため、細胞質中でのSmad1の活性化阻害の候補薬として、MET阻害薬などのスクリーニングにより、数種類の候補薬剤を得た。特に、BMP2/4のコンディショナルトランスジェニックマウスへの投与を行い、安全性の確認を行った。Smad1の活性化抑制効果、ならびに糸球体硬化症形成の抑止効果を判定するため、血液・尿の回収を行っている。(4)糖尿病性腎症の発症・進展時の尿中BMPのバイオマーカーとしての有用性の検討:前年度に選定・樹立された高感度でかつ特異度の高い尿中BMPの測定を行い、ストレプトゾトシン誘導糖尿病マウス、iNOSトランスジェニックマウスとそれぞれのコントロールマウスの尿中BMPと従来の尿中Smad1を測定し、尿中BMPが尿中Smad1の出現に先行して尿中に出現することを確認した。また、尿中バイオマーカーのパネル化のために、各ステージにおける腎糸球体硬化症の重症度とバイオマーカーによる重症度評価を行い、良好な相関関係が得られつつある。

糖尿病性腎症の分子病態に基づいた発症と分子標的治療法の開発における基礎研究を行った。腎症に特異的なメサンギウム基質増生は転写因子Smad1により制御されていることを見いだしたが、本研究ではSmad1の活性化に関わるこれら分子群に着目し、(1)糸球体硬化の進行過程におけるBMP2/4によるSmad1活性化機構の解析を行い、BMP4がSmad1の活性化を直接制御し、腎糸球体病変形成を惹起することを明らかにした。(2) iNOSを膵β細胞に発現させたトランスジェニックマウス(糖尿病性腎症モデルマウス)での検討ではメサンギウム基質増生に一致してBMP4とリン酸化Smad1の発現を認めた。(3) BMP4のコンディショナルトランスジェニックマウスを用いた組織学的な病態解析では、タモキシフェン誘導後5日でBMP4の発現と伴い典型的な糸球体硬化症を認めた。これらマウスの糸球体硬化症の重症度とアルブミン尿は相関を認めた。(4)糖尿病性腎症のBMP4の役割を解明するためBMP4ノックアウトマウスを解析した。BMP4(+/-)ではコントロールに比較しストレプトゾシン(STZ)誘導によるメサンギウム病変は改善していた。リン酸化Smad1の発現も低下していた。(5)iNOSトランスジェニックマウスにおいて、尿中BMP4排泄は糸球体硬化症と有意の相関を認めた。(6)糖尿病性腎症の糸球体組織病変形成に対するBMP4/Smad1系の抑制効果があるか検討するため、STZで誘導した糖尿病モデルマウスにBMP4の中和抗体を投与した。その結果、著明な組織病変の改善とリン酸化Smad1の発現低下を認めた。本研究では糖尿病による糸球体硬化病変の形成過程の分子病態を解明し、有効な抑止策がないまま増加し続けている糖尿病性腎症の発症予測・治療効果判定の確立と本症に特異的な分子を標的とした治療法の開発を行った。腎不全の不可逆的な進行を決定づける因子としてSox9を同定した。糸球体毛細血管の狭窄が進行し、血流不全をきたして、hypoxic stressに糸球体構成細胞はさらされると、Sox9は誘導された。Sox9が軟骨というavascularな環境に適応する形質を司どるタンパク質であり、軟骨と同様のコラーゲン類を産生し、糸球体硬化を促進させることが明らかとなった。さらに、BMP4-Smad1-Scleraxisという異常なシグナル伝達経路も見出し、BMP4の塘尿病性腎症進展における意義が分子レペルで証明された。コンディショナルノックインモデルによって、BMP4のシグナル遮断が、組織変化の改善を示すことが明らかとなった。24年度が最終年度であるため、記入しない。Sox9の発現がhypoxic stressに適応するための発現誘導と考えられるが、この誘導が、糸球体硬化の進展抑制のために有益であるのか、それとも不利であるのかはまだ不明であり、Sox9のコンディショナルトランスジェニックマウスなどによるphenotypeの解析が必要である。糖尿病性進展における尿中Smad1、BMP4がヒトの腎症の進展においても病態の変化を正確に反映するバイオマーカーたりえるかどうかの検証が、ヒトの尿・腎組織の解析によって行う必要がある。これらの推進によって、糖尿病性腎症の分子病態とそれに連動する尿中バイーオマーカーの可能性が高まり、さらには、分子病態を踏まえた新規治療法の確立に門戸を開くものであると考えられる。