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中世末期ヨーロッパ北方美術におけるユーモア表現

ヨーロッパ北方美術のユーモア表現は、ゴシック聖堂内彫刻の笑顔から発展し始める。それら笑顔を意味で分類すると、天国に入る人に与えられた祝福された笑顔、悪魔の笑顔、肖像における笑顔、死の笑顔、道化の笑顔などになる。笑顔が美術作品を見る人の笑いを誘うのである。他に笑いのテーマ・手法としては、以下に分類される。あべこべの世界、遊戯、スカトロジー、セックス、擬獣化(動物に演じさせる)、諺の造形化などである。これらのテーマ等は、美術諸ジャンルで相互に関連し伝播しながら発展するが、ジャンル毎の特異性もある。そして、ジャンル毎に受容者の特徴があり、半識字者から聖職者まで広がるのである。・北方ヨーロッパ美術におけるユーモア表現に関する基本文献を、特にミゼリコルディアに関連してミュンヘン、ニュルンベルクなどで調査、収集した。・平成27年9月に、ウルム大聖堂、フライブルク大聖堂、マウルブロン修道院聖堂、コンスタンツ大聖堂など、ミゼリコルディアを中心とする教会内部のユーモアモティーフを中心に調査旅行を実施した。それらはデジタル画像による資料として保存した。また、ミゼリコルディアの表現を、大口を開けた怪物の顔、糞尿的モティーフ、ハイブリットな怪物表現、動物、鳥、逆さまの世界などモティーフ別に分類することを開始した。これらにより、多くの市民的教会はもちろんのこと、修道院聖堂にも滑稽なミゼリコルディア表現が存在することが判明した。これは中世世界がユーモアに満ちていたことを示している。・美術館における作品調査としては、ニュルンベルク市ゲルマン民族博物館、ミュンヘン市アルテ・ピナコテークおよびバイエルン州立博物館、カールスルーエ市バーデン・ヴュルテンベルク州立博物館などにおいて、ヨーロッパ北方の中世からルネサンスにかけての絵画、版画、彫刻などを調査し、ユーモア表現を詳細に分類した。・版画の広汎な調査・分類を実施し、ユーモア表現の手法を(a)駄洒落、(b)糞尿譚的イメージ、(c)艶笑譚的イメージ、(d)擬獣化イメージ、(e)男女逆転イメージ、(f)動物と人間の逆転イメージ、(g)その他に分ける。・15世紀フランドルの巨匠ファン・エイク兄弟作《ヘント祭壇画》におけるユーモア表現を分析し、大教会の大祭壇画における笑いの要素を発見し、そのことを論文として発表した。・教会堂におけるユーモア表現、特に内陣内のミゼリコルディアに関する調査を実施するため、南ドイツに2週間程調査旅行を実施した。これによってウルム、ニュルンベルク、ミュンヘン、コンスタンツ、フライブルク、バーデン-バーデン、マウルブロンなどに所在する多くの教会内部を調査することができた。ただし、ベルリンを含む北ドイツの調査は平成28年度以降となる。また、治安上の理由でベルギーなどへの調査は断念した。テロなどの状況ゆえやむをえなかった。・ルネサンス絵画や版画を調査するため、ニュルンベルク、ミュンヘン、カールスルーエなどの美術館調査を実施し、それらの収蔵作品に多くのユーモア表現を発見し、その手法を分類することができた。・版画、絵画のユーモア表現の具体的研究に関しては、《ヘント祭壇画》という本格的な大祭壇画におけるユーモア性を発見したので、この見解を論文にした。意外な発見だったので、それに時間を割かれたが、研究全体を見渡した時、かえって有益な発見だったと思われる。(1)北ドイツの教会、美術館、博物館等において版画、絵画、彫刻などのユーモア美術作品を詳細に調査した。具体的には、トリーア、コブレンツ、マリア・ラーハ、ハンブルク、リューベック、リューネブルク、マクデブルク、ハノーファー、コルヴァイ、マールブルクの教会、美術館における作品である。(2)特にマクデブルク大聖堂を中心として、リューネブルク、リューベックの諸教会をくわえ、ミゼリコルディアのモティーフ分析を実施した。さらにミゼリコルディアがどのようなユーモア表現の手段を利用したかを解析した。さらにミゼリコルディアがミサの儀式とどのように関連するかを説教集などの資料に基づき解釈した。それらの成果は、新約聖書図像研究会第16回例会において報告し、好意的に受けとられた。(3)ユーモア美術の具体的例として笑顔表現をとりあげ、マクデブルク大聖堂彫刻《賢い乙女と愚かな乙女》を中心に分析した。さらに12世紀から13世紀までの変遷を追跡するため、マクデブルクから、ケルン、バンベルク、ナウムブルク、マインツ、バーゼル、ストラスブール、エアフルトなどの大聖堂における笑顔表現を分析した。特に「賢い乙女と愚かな乙女」を中心としてキリスト教図像学的分析を実施した。また、これら笑顔表現と宗教史の関係を、メヒティルト・フォン・マクデブルクを中心とするベギン会の活動と結びつけて解釈した。(4)版画の分析では国内で展覧会が開催されたイスラエル・ファン・ネッケネムとルーカス・クラーナハを中心として、具体的に実施した。(5)ゴシック時代からルネサンス、バロックにかけて、絵画、版画、彫刻などにおける多様な笑顔表現の意味を解釈し、その成果を山形美術館における連続講座「笑いの西洋美術史」において5回にわたって報告した。(1)ミゼリコルディアの調査研究は、マクデブルク大聖堂を中心とし、リューネブルク、マールブルクの諸聖堂をくわえて、詳細に実地調査した。これにてドイツの実地調査は終了とする。また、特にミゼリコルディアのモティーフとして、トゥティウィルスという、礼拝における司祭や女性のおしゃべりを記録する、ユニークな悪魔の表現に注目した。トゥティウィルス・モティーフは、ミゼリコルディアだけでなく、ボン大聖堂やマリア・ラーハ修道院付属聖堂の内陣仕切りや西方面柱頭などにも現れ、それら図像の機能や意味の分析を進めた。

このモティーフは、教会におけるユーモアのあり方を考察する上できわめて興味深い例であり、ジャック・ド・ヴィトリなどの説教集に登場するという点で、言語による説教とイメージによる教会美術の関連を具体的に示す好例となる。(2)そのトゥティウィルスを版画や素描にも探索し、イスラエル・ファン・ネッケネム銅版画やアルブレヒト・デューラーの素描や木版画などにその例を見い出した。それはミゼリコルディアなどの教会美術と版画・素描芸術との密接な関連を物語ることになるだろう。宗教美術諸ジャンル相互の関係の追究である。(3)さらにトゥティウィルスから他の悪魔の笑顔表現へと考察を進め、中世末期宗教美術の中心に悪魔の笑顔を措定することができた。具体的には、最後の審判図像周辺にも例を見いだすことができる。(4)前年度に進めたファン・エイクを例としたブルゴーニュ宮廷美術におけるユーモア美術の分析は、ヘラルト・ダーフィトなどファン・エイク以外の画家をも取り上げ始めた。(1)前年度までの旅費で調査したマクデブルク大聖堂等ドイツ語圏聖堂の彫刻作品における笑顔に関連して『山形大学大学院社会文化システム研究科紀要』に論文を発表し、ゴシック時代の聖堂に笑顔表現が誕生し、それは主に最後の審判図像と悪魔図像の笑顔であることを明らかにした。(2)29年度末に科学研究費報告書を出版した。そこでは、ユーモア美術の誕生に笑顔モティーフが関連していることを解明し、笑顔の多彩な意味を以下のように具体的に分析した。祝福された笑顔(最後の審判図像における天国に入る人々の笑顔)、悪魔の笑顔、現実の人物の笑顔、死の擬人像の笑顔、道化の笑顔などである。特に悪魔におけるトゥティウィルスの笑顔とその意味、さらにデューラーによる肖像素描における笑顔の意味などを詳細に分析した。その上、中世末期における写本挿絵、ミゼリコルディア、版画、板絵など多様な美術媒体におけるユーモア美術をテーマ毎に分析した。具体的には、「あべこべの世界(価値の逆転)」による笑い、特に「アリストテレスとフィリス」という男女の逆転による笑い、さらに遊戯テーマ、スカトロジー、性、動物を利用したテーマ、諺の造形化による笑いなどである。それらをまとめて、各美術媒体間の関係、さらに各媒体の特徴等を分析した。具体的には、ミゼリコルディアと写本挿絵ではユーモア表現のテーマが異なることをそれら媒体の特異性から分析した。美術媒体の特質が笑いのテーマを規程するのである。最後にユーモア美術を受容した社会層が「半識字者」であろうと提案し、ユーモア美術の機能としては、風刺とともに教訓的な意味も有する、両義的なものであったことを提示した。(3)それらの成果をもとにして、山形美術館で美術講座「美術で笑う」を行い、笑うことを目的としたユーモア美術の多様なテーマに関して具体的な作例をあげながら、分析を行い、市民に披露した。ヨーロッパ北方美術のユーモア表現は、ゴシック聖堂内彫刻の笑顔から発展し始める。
大腸癌細胞の解糖系を介した抗癌剤耐性獲得におけるc-MYCの役割解明

c-MYCノックダウンによる解糖系に関する酵素群(HK2、PKM2、LDHA)の発現レベルの変化について、大腸がん細胞株・4株におけるc-MYCの発現レベルの検討および抗がん剤感受性について検討した。また、c-MYC高発現の細胞株において、c-MYC阻害薬を用いたアポトーシス誘導や抗がん剤感受性の変化について検討を行う条件検討を行った。グルコース飢餓環境下の大腸癌細胞株におけるc-MYC発現レベルおよび標的DNAへの結合力の変化を検討するため、グルコース飢餓の条件検討を行った。c-MYC阻害薬と抗がん剤との併用効果やグルコース飢餓の条件検討に時間を要した。また、c-MYC高発現で、解糖系酵素の発現も高い細胞株の選定にも時間を要した。大腸癌細胞株におけるc-MYC阻害による、解糖系に関する酵素群(HK2、PKM2、LDHA)の発現レベルの変化を検討し、また、グルコース飢餓環境を作成し、c-MYC発現レベルおよび標的DNAへの結合力の変化を検討し、解糖系に関する酵素群の発現レベルの変化を検討する。臨床検体においても、免疫染色の条件検討を行い、随時進めていく。本年に参加を予定していたアメリカ癌学会に、結果がそろわず発表ができなかったため参加しなかったことから、旅費、参加費に未使用額が生じた。この未使用額については、平成31年度の学会への旅費、参加費と併せて使用する。
黒毛和種集団の遺伝的多様性維持に際して優先すべき系統の特定

わが国の牛肉生産は、1991年に実施に踏み切られた牛肉輸入の自由化以降、安価な輸入牛肉に対抗するために、肉質とくに脂肪交雑の追求に著しく偏重する傾向を強めた。その結果、黒毛和種においては、肉質の育種価に優れた特定の系統の種雄牛が集中的に供用され、集団の遺伝的多様性が急激に低下する事態が生じている。品種内に残されている分化構造を有効に利用して、黒毛和種の遺伝的多様性を回復・維持するための方策の1つとして、既存の分集団から種畜の生産を行う複数の系統を造成し、それらの系統から供給される種雄牛を巡回的に実用雌に交配して、コマーシャル生産と更新雌牛の生産を行うことが有効であると考えられる。この方策の成否は、種畜の生産を行う系統群の基礎となる分集団を、いかにして既存の分集団群から選出するかにかかっている。そこで本研究では、黒毛和種の県集団を分集団とみなして、優先的に保全すべき分集団の選出を試みた。その際、分集団群から得られる合成集団の遺伝的多様性を最大化するように各分集団の寄与率を決定する方法(コアセット法)、および品種全体の遺伝的多様性に対して寄与の大きい集団に高い優先順位を与える方法(Weitzmanの方法)を採用した。いずれの方法でも、中国・九州地方の伝統的生産県(兵庫、鳥取、岡山、広島、島根、大分、宮崎、鹿児島)に高い優先順位が与えられた。中国・九州地方の伝統的生産県が黒毛和種の遺伝子給源としての役割を担ってきた事実を考え合わせると、これらの伝統的生産県を新たな系統群の基礎とすべきと考えられた。わが国の牛肉生産は、1991年に実施に踏み切られた牛肉輸入の自由化以降、安価な輸入牛肉に対抗するために、肉質とくに脂肪交雑の追及に著しく偏重する傾向を強めた。そこで本年度は、黒毛和種の県集団を分集団とみなして、優先的に保全すべき分集団の選出を試みた。その際、分集団群から得られる合成集団の遺伝的多様性を最大化するするように各分集団の寄与率を決定する方法(コアセット法)、および品種全体の遺伝的多様性に対して寄与の大きい集団に高い優先順位を与える方法(Weitzmanの方法)を採用した。前者の方法では、すでに種畜を介して多くの遺伝子を品種全体に供給し、さらに分集団内の遺伝的多様性が低い兵庫および鹿児島の2県は下位に順位づけられた。一方、後者の方法ではこれらの2県は上位に順位づけられた。しかし、いずれの方法でも、これら2県を除いた中国・九州地方の伝統的生産県には高い優先順位が与えられた。兵庫および鹿児島を加えた中国・九州地方の伝統的生産県が黒毛和種の遺伝子給源としての役割を担ってきた事実を考え合わせると、これらの伝統的生産県を新たな系統群の基礎とすべきと考えられた。

黒毛和種の遺伝的多様性を回復・維持するための方策の1つとして、品種内に残されている分化構造を有効に利用して、既存の分集団から種畜の生産を行う複数の系統を造成し、それらの系統から供給される種雄牛を巡回的に実用雌に交配して、コマーシャル生産と更新雌牛の生産を行うシステムが有効であると考えられる。この方策の成否は、種畜の生産を行う系統群の基礎となる分集団を、いかにして既存の分集団群から選出するかにかかっている。そこで本研究では、まず、黒毛和種の県集団を分集団とみなして、優先的に保存すべき分集団の選出を試みた。その際、分集団群から得られる合成集団の遺伝的多様性を最大化するように各分集団の寄与率を決定する方法(コアセット法)、および品種全体の遺伝的多様性に対して寄与の大きい分集団に高い優先順位を与える方法(Weitzmanの方法)を採用した。2つの方法間では兵庫および鹿児島に対する優先順位に相違が認められたが、いずれの方法でも、これら2県を除いた中国・九州地方の伝統的産地に高い優先順位が与えられた。黒毛和種集団では、育種集団とコマーシャル集団が明瞭に分離していないため、保存すべき系統群を維持する集団にもコマーシャルとしての経済価値が付与される必要がある。そこで、つぎに枝肉価格を経済価値の指標として、遺伝的多様性を現状以上に維持し、経済価値を低下させない合成集団の構成について吟味した。そのような合成集団には、鳥取、島根、大分、宮崎および鹿児島の5県が含まれた。このことから、伝統的産地を中心とした分集団群は遺伝的多様性の維持としてだけでなく、コマーシャル生産としての役割も担えることが明らかになった。
紫外共鳴ラマン分光によるエンケファリンのコンフォメ-ションとレセプタ-結合様式

メチオニンエンケファリン、ロイシンエンケアァリンおよび4番目のフェニルアラニン残基をトリプトファンに置換した〔Trp^4〕メチオニンエンケファリンを、脂質(ジパルミトイルホスファチジルコリン)リポソ-ムに埋めみ、213nmおよび240nm励起の紫外共鳴ラマンスペクトルを測定した。これまで蓄積した基礎デ-タを基にスペクトルの詳しい解析を行った結果、多くの重要な知見を得た。また、ラット脳よりδ型オピオイドレセプタ-を抽出、精製し、紫外共鳴ラマン及び円偏光二色性スペクトルを測定、解析することによりレセプタ-の構造を検討した。以下に結果を記す。1.上記エンケファリンのいずれも水溶液中では多種の延びたコンフォメ-ションをとるが、脂質膜に結合している状態では、折れ曲がった主鎖コンフォメ-ションをとる。2.チロシン側鎖は脂質膜の内部疎水領域に埋もれているのに対し、フェニルアラニン(またはトリプトファン)側鎖は、膜外側の極性領域に存在するか、または膜表面に突き出ている。3.チロシン側鎖の膜内への埋まり方は、上記3種のエンケファリンのうちロイシンエンケファリンでは浅い。4.チロシン側鎖が膜に埋もれているほど、レセプタ-との結合も活性も増す。5.生体膜は活性上重要なチロシン側鎖を疎水環境下に保護することにより、エンケファリンが酵素などにより分解されにくくする。6.レセプタ-はβーシ-ト型主鎖構造が多い蛋白質であり、芳香族アミノ酸残基、特にチロシンとトリプトファン残基をほとんど含んでいない。メチオニンエンケファリンおよびロイシンエンケファリンの4種の結晶形のラマンスペクトルを測定し、結晶構造との比較から、βタ-ン構造およびβシ-ト構造に特徴的な、ペプチド主鎖の振動バンドを見いだした。また、エンケファリン中のチロシンやフェニルアラニン側鎖の構造や脂質膜結合時の環境が、紫外共鳴ラマンスペクトルにどのような影響を与えるかを調べるために、数種の溶媒を用いて、チロシンおよびフェニルアラニン誘導体の紫外共鳴ラマンスペクトルを測定し、1600cm^<-1>付近の二本のラマンバンドの相対強度が、環境の親水性、疎水性マ-カ-となることを見いだした。以上のような基礎デ-タを基に、脂質(ジパルミトイルホスファチジルコリン)リポソ-ムに埋め込んだエンケファリンの構造解析を、213nmおよび240nm励起の紫外共鳴ラマン分光によって行い、次の結果を得た。1.メチオニンエンケファリンは、脂質相転移以下の温度では脂質膜中に入らず、単なる水溶液と同じ構造、すなわち、多種のコンホ-マ-の共存状態を採っている。一方、ロイシンエンケファリンは、脂質膜に結合した状態と水相に存在する状態の間に、平衡的に存在する。2.相転移温度以下では、両エンケファリン共に脂質膜中に入り、βタ-ン型構造を採る。3.脂質膜中、チロシン側鎖は、メチオニンエンケファリンの場合、疎水性環境下にあるが、ロイシンエンケファリンでは、水相中につき出ているか、または、脂質の親水部に存在する。現在、エンケファリン受容体の精製を始め、受容体との結合様式のを紫外共鳴ラマン分光とフ-リエ変換赤外分光法で解析するための準備を行っている。以下に結果を記す。メチオニンエンケファリン、ロイシンエンケファリンおよび4番目のフェニルアラニン残基をトリプトファンに置換した[Trp^4]メチオニンエンケファリンを、脂質(ジパルミトイルホスファチジルコリン)リポソ-ムに埋めみ、213nmおよび240nm励起の紫外共鳴ラマンスペクトルを測定した。

これまで蓄積した基礎デ-タを基にスペクトルの詳しい解析を行った結果、多くの重要な知見を得た。また、ラット脳よりδ型オピオイドレセプタ-を抽出、精製し、紫外共鳴ラマン及び円偏光二色性スペクトルを測定、解析することによりレセプタ-の構造を検討した。以下に結果を記す。1.上記エンケファリンのいずれも水溶液中では多種の延びたコンフォメ-ションをとるが、脂質膜に結合している状態では、折れ曲がった主鎖コンフォメ-ションをとる。2.チロシン側鎖は脂質膜の内部疎水領域に埋もれているのに対し、フェニルアラニン(またはトリプトファン)側鎖は、膜外側の極性領域に存在するか、または膜表面に突き出ている。3.チロシン側鎖の膜内への埋まり方は、上記3種のエンケファリンのうちロイシンエンケファリンでは浅い。4.チロシン側鎖が膜に埋もれているほど、レセプタ-との結合能も活性も増す。5.生体膜は活性上重要なチロシン側鎖を疎水環境下に保護することにより、エンケファリンが酵素などにより分解されにくくする。6.レセプタ-はβーシ-ト型主鎖構造が多い蛋白質であり、芳香族アミノ酸残基、特にチロシンとトリプトファン残基をほとんど含んでいない。
慢性関節リウマチにおける視床下部-下垂体-副腎系の異常の解析

1)RA患者滑膜(表層細胞、炎症性単核球、フィブロブラスト様細胞、血管内皮細胞)においてCRHとβ-endorphin蛋白の著明な発現を免疫染色法を用いて証明した。2)RA患者滑膜ではCRH及びβ-endorphin蛋白は変形性関節症(OA)患者に比べ、有意に強い発現(P<0.01)がみられた。3)RA患者滑膜ではCRHmRNAが滑膜表層細胞、炎症性単核球、フィブロブラスト様細胞、血管内皮細胞において強く発現していた。一方、OA患者滑膜では表層細胞において弱い発現がみられるのみであった。4)RAのモデルラット(SCWおよびアジュバント)関節炎でも炎症の増強に伴い滑膜、軟骨、周囲皮膚においてCRH及びβ-endorphinの発現増強がみられた。5)グルココルチコイド投与によりモデルラット(SCWおよびアジュバント)関節炎と同時にCRH及びβ-endorphinの発現も軽度抑制された。6)抗CRHまたは抗β-endorphin抗血清をAlzetポンプを用いて2週間雌Lewisラット腹腔へ投与するとアジュバント関節炎が抑えられた(約40-50%)。7)抗CRH抗体投与により、免疫染色では関節滑膜や軟骨におけるCRHの発現は抑制されていた。8)抗β-endorphin抗体投与により、同様に関節滑膜や軟骨におけるβ-endorphinの発現は抑制されていた。以上より、CRHやβ-endorphinは様々な免疫作用と同時に、炎症惹起作用を有すると考えられ、RAの病態に強く関与している可能性がある。今後、RAにおけるHPA系の機能異常の解析が進むとともに、その機能修復によるRA治療という新しいアプローチが試みられるものと考えられる。3)RA患者滑膜ではCRH mRNAが滑膜表層細胞、炎症性単核球、フィブロブラスト様細胞、血管内皮細胞において強く発現していた。7)抗CRH抗体投与により免疫染色では関節滑膜や軟骨におけるCRHの発現は抑制されていた。現在、抗CRHまたは抗β-endorphin抗血清による関節炎治療のメカニズムについて検討しているところである。また、他の神経ペプチド(Substance-P,Somatostatinなど)についてもRA患者滑膜における発現を調べる予定である。1) RA患者滑膜(表層細胞、炎症性単核球、フィブロブラスト様細胞、血管内皮細胞)においてCRHとβ-endorphin蛋白の著明な発現を免疫染色法を用いて証明した。2) RA患者滑膜ではCRH及びβ-endorphin蛋白は変形性関節症(OA)患者に比べ、有意に強い発現(P<0.01)がみられた。3) RA患者滑膜ではCRH mRNAが滑膜表層細胞、炎症性単核球、フィブロブラスト様細胞、血管内皮細胞において強く発現していた。

一方、OA患者滑膜では表層細胞において弱い発現がみられるのみであった。4) RAのモデルラット(SCWおよびアジュバンド)関節炎でも炎症の増強に伴い滑膜、軟骨、周囲皮膚においてCRHおよびβ-endorphinの発現増強がみられた。5)グルココルチコイド投与によりモデルラット(SCWおよびアジュバンド)関節炎と同時にCRH及びβ-endorphinの発現も軽度抑制された。6)抗CRHまたは抗β-endorphin抗血清をAlzetポンプを用いて2週間雌Lewisラット腹腔へ投与するとアジュバンド関節炎が抑えられた(約40-50%)。7)抗CRH抗体投与により、免疫染色では関節滑膜や軟骨におけるCRHの発現は抑制されていた。8)抗β-endorphin抗体投与により、同様に関節滑膜や軟骨におけるβ-endorphinの発現は抑制されていた。以上より、CRHやβ-endorphinは様々な免疫作用と同時に、炎症惹起作用を有すると考えられ、RAの病態に強く関与している可能性がある。今後、RAにおけるHPA系の機能異常の解析が進むとともに、その機能修復によるRA治療という新しいアプローチが試みられるものと考えられる。
国際テロリズムと第一次世界大戦

本研究は政治目標を達成する手段として暴力を用いる秘密結社をテロ組織と位置づけ、こうした組織の国境を越えた活動によって既存の国際政治の秩序が崩れ、大規模な変動が生じるという仮説から、第一次世界大戦前夜の黒手組、IMRO、CUPエンヴェル派、ARFという4つのテロ組織の活動を分析した。四つの組織は何れも民族主義団体であり、相反する政治目標を持っていたが、テロの実行に際してしばしば協力していたことが判明し、そのノウハウを共有することで行動様式が類似するようになったことが確認された。四つの組織の活動の結果、地域の政治秩序が崩壊し、第一次世界大戦の引き金となった。本研究は第一次世界大戦の勃発に国際テロリズム組織が及ぼした影響を探ることを目的としている。分析対象とした具体的な団体は、内部マケドニア革命機構(IMRO)、セルビア・チェトニク運動(SCM)、統一と進歩委員会(CUP)エンヴェル派、および、アルメニア革命連盟(ARF)である。四つの組織は目的も理念も異なるが、その行動様式にはいくつもの共通点が指摘できる。いずれの組織もゲリラ戦を主とする武装闘争路線を採用しており、都市部での活動では暗殺・強盗・無差別な民間人殺害・破壊工作を援用していた。組織論の点でも、四つの団体は、ボリシェヴィキに代表されるような少数精鋭主義ではなく、大衆路線を標榜していたが、組織化の方法はフリーメイソン型の秘密結社方式であった。本研究が解明を目指す第一の課題は、なぜ四つの組織が類似する戦術と組織論を採用したのかであるが、本年度の研究では、IMROがゲリラ部隊の暴力を利用して潜在的支持母体である東方正教徒オスマン国民を迫害・脅迫し、恐怖支配を貫徹することで組織員と支持者を拡大する戦術を発明し、それが対オスマン闘争で同盟関係にあったARFによって模倣されたこと、さらに次のステップとして、IMROを取り締まる立場にあったCUPの将校団、および、IMROの攻勢に対峙する立場にあったSCMによっても経験的およびIMROからの転向者の情報によって学習・模倣されたプロセスが概ね明らかとなった。本研究は第一次世界大戦勃発に国際テロ組織が果たした役割の解明を目指している。史学史の視点からは国民史叙述の空隙を埋め、比較紛争学の視点からは紛争における非国家主体の役割の概念化という学術的意義をそれぞれ帯びている。分析対象とした具体的な団体は、内部マケドニア革命機構(IMRO)セルビア・チェトニク運動(SCM)統一と進歩委員会(CUP)及びアルメニア革命連盟(ARF)である。四つの組織は目的も理念も異なるが、その行動様式には幾つもの共通点が指摘できる。いずれの組織もゲリラ戦を主とする武装闘争路線を採用しており、都市部では暗殺・強盗・無差別の民間人殺害・破壊工作を行っていた。組織論の面では、大衆路線を標榜しながらもフリーメイソン型の秘密結社の形態を取っていた。本研究が解明を目指す第一の課題は、四つの組織が類似した戦術と組織論を採用した理由の解明である。前年度には、IMROの先駆的なモデルが同盟関係にあったARF、ついで、ライバル関係にあったSCM、そして、本来は取り締まる側にあったCUPへと伝播したことを明らかとしたが、本年度は、さらに、IMRO指導者のボリス・サラフォフが果たした役割を解明することに成功した。本年度は、ブルガリアでの調査によって、ボリス・サラフォフ関係の資料の収集が進展したことに加えて、ブルガリア軍事アカデミーのディミタル・ミンチェフ名誉教授の知遇を得たことで、IMRO幹部のペータル・ダルヴィンゴフの活動に関する資料を多数収集できた。また、ギリシャでは、マケドニア革命研究所のヴァシリス・グナリス所長との知遇を得たことで、アンダルテスの活動に関する詳細な資料集の入手にも成功した。トルコでの調査では、オスマン帝国関係の未刊行資料を多数収集することにも成功した。こうして豊富な資料が揃ったことで、テロ組織同士の隠れた協力関係のより詳細な実態が明らかとなりつつある。本年度は昨年の研究課題として浮上したIMROのBoris Salafov派とセルビア政府の関係についての資料収集を継続した。その結果、Salafovの二重スパイ説を裏付けると思われる資料が発見されたが、傍証する資料をさらに調査する必要もあることが華名した。この作業と並行して、非国家主体が国際関係の変化に及ぼす影響の理論化に向けた分析も開始した。これまでの研究で、第一次世界大戦前夜には、従来の国際関係の構造的変化が進んでおり、そのためにテロ組織の活動による南バルカンの地域的政治状況の変化が大規模な変動をもたらすことになったことを確認してきたが、理論化に際しては、21世紀前半の状況との比較が有効ではないかと考えている。国際関係の変化としては、19世紀に成立した欧州5強体制が米国の台頭や独墺ブロックと英仏露ブロックの形成によって変質しつつあった20世紀初頭の状況と、冷戦後の米国一極集中体制が中国の台頭や生産拠点のアジア・シフトなどにより多局化へと変わりつつある現状の間に類似性が指摘できる。テロ組織の活動による地域政治の変化としてもISの台頭によるシリア内戦をめぐる国際関係が変化し、欧米諸国がアサド政権打倒からイスラム過激派の抑制へとシフトし、同じくイスラム過激派への懸念からロシアがイランと協調してアサド政権存続に政策を変化させ、それに中国が間接的に関与する状況が生まれていることは、20世紀初頭のマケドニア問題を巡る状況と酷似している。この点に注目しながら、イスラム過激派の活動が現在の国際体制に及ぼす影響を他の地域の事例を加えてより精緻に分析する作業に着手し始めたところである。

本研究は研究完成年度までに20世紀初頭のバルカンのナショナリストの活動を、テロ戦術に焦点を置きつつ解明すること目指していた。具体的な作業は、史料の収集と分析であるが、前者に関しては重要なものはほぼ収集し尽したと言える。収集した史料の分析に関しても、新事実の発見を含めて、当初予定していた以上に速いペースで進展している。本研究の成果の中核部分は、IMROとIttihat ve Terakkiの間の協力関係に関する論文に加えて、Black Handの起源に関する従来の定説を批判する論文を発表するなど、すでに内外の学術誌に公開されている。その意味では、研究の所期の目的は概ね達成されており、今後は新たに得られた知見をもとにより一般的な理論化の作業を進めて行く予定であるが、完成年度までにこの作業を完了する見通しも開けている。本年度は過去3年間に収集した資料の読解に重点を置き、成果を公開する準備を進めた。それを概略すると以下のようになる。19世紀末のマケドニアで内部マケドニア革命機構IMROが結成された。IMROは、従来は軍・警察等の体制側の標的を狙っていたテロの手法を民間の非戦闘員に対して用いることで大衆動員を可能とするという新たな戦術を編み出した。この戦術はマケドニアのセルビア派活動家を通じてセルビア軍特殊部隊の指揮官だったヴォイスラフ・タンコシッチに伝授され、タンコシッチはセルビア軍内部にIMROに範をとったゲリラ部隊を建設した。これがセルビア軍内部の青年将校組織である黒手組の原型である。この手法は1913年のボスニア併合危機以降、当時ハプスブルク領だったボスニアに応用され、タンコシッチはハプスブルク支配に不満を持つ青年層を接触し、プリンツィプ・グループへ武器を供与した。一方、IMROを取り締まる側にあったオスマン帝国陸軍でも新たなテロ戦術に注目する将校たちが存在し、彼らは統一と進歩協会CUP内に独自の組織を結成した。この組織はエンヴェル・パシャに率いられていたが、青年トルコ革命を機にIMROのサンダンスキ派と協力関係に入り、エンヴェルの部下であったスレイマン・アスケリーがブルガリアに派遣されてIMROと共同でゲリラ戦を展開する部隊が結成された。この組織は第一次世界大戦前夜にオスマン陸軍内の特殊工作部隊であるテシュキラート・マフスーサとなった。この間、IMRO内でもアレクサンダル・プロトゲロフをリーダーとする軍人出身の活動家が組織の主導権を握った。こうして第一次世界大戦直前にセルビア,ブルガリア、トルコで陸軍内部に政府の統制を離れた秘密結社が誕生し、バーブ・アリー事件、サラエボ事件、ブルガリアの参戦等の原動力となり、第一次世界大戦の勃発とその展開に重要な影響を及ぼしたのである。本研究は政治目標を達成する手段として暴力を用いる秘密結社をテロ組織と位置づけ、こうした組織の国境を越えた活動によって既存の国際政治の秩序が崩れ、大規模な変動が生じるという仮説から、第一次世界大戦前夜の黒手組、IMRO、CUPエンヴェル派、ARFという4つのテロ組織の活動を分析した。四つの組織は何れも民族主義団体であり、相反する政治目標を持っていたが、テロの実行に際してしばしば協力していたことが判明し、そのノウハウを共有することで行動様式が類似するようになったことが確認された。
双環オキサラクタム誘導体の結晶場を利用する特異的反応制御

双環オキサラクタム、8-オキサ-6-アザビシフロ[3,2,1]オクタン-ク-オン(以降BOL)の固相反応性に及ぼす置換基の効果について検討した。BOLのN-アシル誘導体の構造と反応について明らかにするために、N位をベンザイル基(Bz)で置換したBz-BOLとシナモイル基で置換したCin-BOLの構造解析を行った。また後述する様に、ラクタム部分の配向を水素結合で規制することにより、固相反応の進行が期待される。そこで、C^1位を水素結合ドナーであるヒドロキシメチル基で置換したMe(OH)-BOLおよびその誘導体の合成を進めている。第一段階として、Me-BOLの合成に成功したのでその解析も行った。Cin-BolとBz-BOLの構造解析の結果、ラクタム基に対するBz基、シナモイル基の配向にはお互いに良い対応がみられた。即ち、アシル置換ラクタムでは、2面角などからみてラクタムとアシル基の間で完全な共役系が形成されていないにもかかわらず、特定の規則構造を採り易いことが示された。N-アシルBOLにおいて、ラクタム基中のC=O、C=N結合距離とアシル基中の対応するC=O、C=N結合距離との間には有意な差は見られない。しかし、N-アシルBOLと元のBOLとの対応する結合距離を比較すると。Bz-BOL、CN-BOLではBOLと比べ置換基の導入によりラクタムC-N結合が有意に伸びている。即ち、BOLのラクタム系では形成されていた共役系がN-位のアシル化により弱められている。その結果、カルボンル結合の二重結合性が強まりCN結合はより単結合性が増加していために、アシル化されていないBOLと比べて、N-アシルBOLの開環反応性が増加することが明らかとなった。上記BOL誘導体の固相反応を試みたが、反応は進行しなかった。パッキング様式の検討より、ラクタム部分の配向を規性するためにC^1かC^5位に水素結合可能な置換基を導入する必要性が、示唆された。
脳の老化機構におけるメイラード反応後期生成物(AGE)の意義

Advanced glycation end products(AGE)の構造体であるカルボキシメチルリジン,ペントシジンは免疫組織化学的に脳の老化関連封入体であるリポフスチン顆粒,アミロイド小体に局在し,また痴呆疾患に出現するピック球,ballooned neurons,レビー小体にも認められたが,神経原線維変化には観察されなかった。カルボキシメチルリジン,ペントシジンは糖化酸化反応物と考えられているため,老化および痴呆疾患の病態に糖化ならびに酸化が関与している可能性が推察された。一方,AGE受容体の一つであるRAGEはアルツハイマー病(AD)の病変形成に関与しているという報告がある。本研究では他のAGE受容体であるガレクチン-3とADとの関連を調べるために,免疫学的手法によりAD脳および非痴呆者脳を各々検索した。その結果,AD患者と一部の高齢非痴呆者の脳では,イムノブロットによりガレクチン-3のバンドが認められたが,他の非痴呆者では観察されなかった。各内側側頭葉の免疫染色では,カルボキシメチルリジン,ペントシジンに加えガレクチン-3が反応性アストロサイトとグリオーシスを伴う老人斑に認められ,共焦点レーザー顕微鏡観察により,老人斑内ガレクチン-3陽性物質はアストロサイトに由来していることが明らかになった。これらの結果により,老化およびADではガレクチン-3を有するアストロサイトがAGEを貪食・分解し,その一部が活性化してADにおける老人斑形成および成熟化に関与している可能性が示唆された。脳の老化関連封入体(リポフスチン顆粒,アミロイド小体,平野小体,顆粒空胞変性,ユビキチン陽性構造物)と痴呆疾患に関連した異常構造物(老人斑,神経原線維変化,ピック球,ballooned neurons,レビー小体)におけるadvanced glycation end products(AGE)の局在をAGEの構造体であるカルボキシメチルリジン,ペントシジンに対する抗体を用いて免疫組織化学的に検索し,下記の結果が得られた。1.カルボキシメチルリジン,ペントシジンの陽性反応はリポフスチン顆粒,アミロイド小体で観察されたが,アミロイド小体における反応はペントシジンの方がカルボキシメチルリジンより高度であった。2.平野小体,顆粒空胞変死,ユビキチン陽性構造物などではこれらのAGE構造体の陽性反応は認められなかった。3.アルツハイマー病変では,老人斑がカルボキシメチルリジン陰性であったが,ペントシジンは陽性で,神経原線維変化においてはともに陽性反応はみられなかった。4.ピック球やballoonedneurons,レビー小体において両AGE構造体の陽性反応が認められた。これらの所見により,一部の老化関連封入体と痴呆疾患病変におけるカルボキシメチルリジン,ペントシジンの局在が明らかになった。カルボキシメチルリジン,ペントシジンは糖化・酸化反応物と考えられているため,老化および痴呆疾患の病態に糖化ならびに酸化が関与している可能性が推察された。AGE受容体の一つであるRAGEはアルツハイマー病(AD)の病変形成に密接に関与していると報告されている。そこで,本研究では他のAGE受容体の一つであるgalectin-3とAD関連を調べるために,抗galectin-3抗体を用いた免疫学的手法によりアルツハイマー病(AD)患者および非痴呆者の脳を検索した。まず,海馬傍回組織を用いたイムノブロットでは,AD患者と一部の高齢非痴呆者においてgalectin-3のバンドがみられたが,他の非痴呆者では認められなかった。したがって,galectin-3が脳に存在することが明らかになり,これが加齢あるいはADプロセスと関連していることが推測された。つぎに,脳におけるgalectin-3の分布を明らかにするために,各内側側頭葉のパラフィン切片を免疫組織化学的に検索したところ,galectin-3は反応性アストロサイトとグリオーシスを伴う老人斑に認められた。

さらに,老人斑のどの細胞要素にgalectin-3が局在するかを調べるため,抗galectin-3抗体とアミロイドβ蛋白,タウ,GFAP,フェリチンの各々に対する抗体を用いた蛍光免疫二重染色を行い,共焦点レーザー顕微鏡で観察した。その結果,galectin-3がGFAP陽性部分に存在することが判明した。これらの所見より,galectin-3が活性化したアストロサイトに局在することが明らかになった。このAGE受容体はADでみられるアミロイドβ蛋白によるアミロイドーシスと関係しているとはいえず,むしろアストロサイトーシスと関連していることが推察された。
力学的根拠に基づいた脊椎疾患治療用体内固定具の固定性評価

脊椎疾患の外科的治療として体内固定具を使用した固定術が広く用いられている.この手術では長期経過例において固定隣接椎間に椎間板変性やすべり症などが発生すると報告されているが,その要因は明確にされていない.そこで本研究では,イノシシ多椎間脊椎を用いた力学試験により,固定具の装着が隣接椎間の椎間可動域に及ぼす影響について検討した.その結果,変位量を規定した試験において,固定モデルの隣接椎間可動域および最大トルクは損傷モデルに比べ著しく増加することがわかった.このことから,脊椎固定術後の隣接椎間障害は,固定前と同じ角度まで運動を行った際に,固定により失われた固定椎間の可動域を補うために大きなトルクが負荷されて発生すると推察された.脊椎疾患の外科的治療として体内固定具を使用した固定術が広く用いられている.この手術では長期経過例において固定隣接椎間に椎間板変性やすべり症などが発生すると報告されているが,その要因は明確にされていない.そこで本研究では,イノシシ多椎間脊椎を用いた力学試験により,固定具の装着が隣接椎間の椎間可動域に及ぼす影響について検討した.その結果,変位量を規定した試験において,固定モデルの隣接椎間可動域および最大トルクは損傷モデルに比べ著しく増加することがわかった.このことから,脊椎固定術後の隣接椎間障害は,固定前と同じ角度まで運動を行った際に,固定により失われた固定椎間の可動域を補うために大きなトルクが負荷されて発生すると推察された.身体運動の軸機関および支持機関である脊椎の疾患に対する診断・治療において,脊椎の剛性を定量的に把握することは,適切な治療方針・手術手技を決定する上で極めて重要である.そこで本研究では,脊椎不安定性を力学的観点より定量的に明らかにすることを目的とし,研究代表者らが開発した脊椎強度測定用6軸材料試験機を活用することにより,複雑な脊椎変形挙動を精密かつ系統的な実験により調査する.特に,本科学研究費申請期間においては,脊椎疾患治療のための体内固定具を用いた各種の手術手技が損傷により生じた不安定性の解消にどの程度寄与しているのか,および損傷椎間への体内固定具の装着が隣接椎間にどのような影響を及ぼしているのかについて重点的に検討する.この目的を達成するため,本年度は,まず以下に示す試験機の改良を実施した.損傷椎間への固定具装着が隣接椎間に及ぼす影響を調査するためには,多椎間脊椎を対象とした力学試験において,個々の椎体の変形情報を取得しなければならない.すなわち,これまでの単椎間の力学試験は,下位椎体を固定し,上位椎体に力学的負荷を加える試験であったため,脊椎変形挙動の計測はエンドエフェクタの位置情報より容易に行えた.しかし,試験体が多椎間になると,上端と下端以外の椎体(例えば3椎間ならば中央の2椎体)の位置情報を計測し得るシステムを導入する必要がある.そこで本研究では,個々の椎体の位置情報を得るための計測システムとしてビデオカメラと動画解析ソフトウェアを導入し,このシステムにより多椎間脊椎試験における変形挙動計測を実施した.その結果,導入した計測システムが,多椎間脊椎試験において個々の椎体の変形挙動を計測する上で十分な精度を有することを確認した.身体運動の軸機関および支持機関である脊椎の疾患に対する診断・治療において,脊椎の剛性を定量的に把握することは,適切な治療方針・手術手技を決定する上で極めて重要である.そこで本研究では,脊椎不安定性を力学的観点より定量的に明らかにすることを目的とし,研究代表者らが開発した脊椎強度測定用6軸材料試験機を活用することにより,複雑な脊椎変形挙動を精密かつ系統的な実験により調査する.特に,本科学研究費申請期間においては,脊椎疾患治療のための体内固定具を用いた各種の手術手技が損傷により生じた不安定性の解消にどの程度寄与しているのか,および損傷椎間への体内固定具の装着が隣接椎間にどのような影響を及ぼしているのかについて重点的に検討する.さらに,この一連の実験的調査から,力学的根拠に基づいた体内固定具の固定性評価手法を確立することを目指す.上述の目的を達成するため,本年度は,損傷椎間への固定具装着が隣接椎間に及ぼす影響について実験的に調査することを研究実施計画とした.具体的には,イノシシ屍体腰椎の3椎間(L3-L6)試験体を用い,中央の椎間(L4-L5)に損傷を加えた損傷モデルと損傷モデルの損傷椎間に固定具を装着した固定モデルの2種類のモデルに対し回旋試験を実施し,固定具の装着が隣接椎間(上位椎間L3-L4および下位椎間L5-L6)の椎間可動域に及ぼす影響について検討した.その結果,トルクを規定した試験では両モデルの隣接椎間可動域は同程度であるのに対し,角変位を規定した試験では固定モデルの隣接椎間可動域は損傷モデルに比べ著しく増加することがわかった.このことから,椎間板変性やすべり症などの脊椎固定術後の隣接椎間障害は,固定前と同じ角度まで運動を行った際に,固定により失われた固定椎間の可動域を補うために隣接椎間が大きく可動することにより発生すると推察された.身体運動の軸機関および支持機関である脊椎の疾患に対する診断・治療において,脊椎の剛性を定量的に把握することは,適切な治療方針・手術手技を決定する上で極めて重要である.そこで本研究では,脊椎不安定性を力学的観点より定量的に明らかにすることを目的とし,研究代表者らが開発した脊椎強度測定用6軸材料試験機を活用することにより,複雑な脊椎変形挙動を精密かつ系統的な実験により調査する.

特に,本科学研究費申請期間においては,脊椎疾患治療のための体内固定具を用いた各種の手術手技が損傷により生じた不安定性の解消にどの程度寄与しているのか,および損傷椎間への体内固定具の装着が隣接椎間にどのような影響を及ぼしているのかについて重点的に検討する.上述の目的を達成するため,本年度は,昨年度に引き続き損傷椎間への固定具装着が隣接椎間に及ぼす影響について検討するとともに,強固な脊椎固定が必要な場合にPedicle screw and rod system(PS)に併用して用いられるCrosslink system(Crosslink)の固定性について実験的に調査した.具体的には,イノシシ屍体腰椎を用いて作製したPSモデルおよびCrosslinkモデルに対し,前後屈,左右側屈およびそれらの中間の全8方向の曲げ試験および回旋試験を実施し,強固な固定を獲得するために用いるCrosslinkの併用効果について検討した.その結果,曲げ試験においては,いずれの曲げ方向に関してもCrosslinkモデルの椎間可動域はPSモデルと同程度であるのに対し,回旋試験においては,Crosslinkモデルの椎間可動域はPSモデルに比べ有意に減少することがわかった.このことから,Crosslinkは主に回旋運動時の脊椎固定性を高める効果を有すると考えられた.上述の通り,本研究課題は,本年度当初に研究計画に掲げた「損傷椎間への固定具装着が隣接椎間に及ぼす影響についての実験的調査」に関して予定通り実験を遂行し,研究成果を挙げることができた.よって,おおむね順調に進展していると判定した.24年度が最終年度であるため、記入しない。上述の通り,本研究課題は当初の研究計画に沿って順調に進展しており,研究計画の変更あるいは研究を遂行する上での問題点等は特にない.24年度が最終年度であるため、記入しない。
口腔癌の化学療法による腫瘍細胞のアポトーシス誘導の状態に基づいた効果判定法の開発

本研究の目的は,抗癌剤による口腔扁平上皮癌(SCC)のアポトーシス誘導の程度が化学療法の効果判定の指標になり得るかどうかを検討することである.アポトーシスの検出法であるTUNEL法は組織切片上でアポトーシスを捉える有用な方法ではあるが,組織の処理や試薬の反応条件等の要因により陽性細胞の発現頻度が大きく異なることが明らかとなり,まずTUNEL法の技術的な検討を行った.その結果新鮮凍結組織切片において再現性のある条件を見出すことができた.次に,SCCの術前化学療法前後の組織切片上で,TUNEL法を用いてアポトーシスの誘導という観点から化学療法の効果を検討した結果,TUNEL法のみによる検討では従来の大星・下里の分類を凌駕する結果は得られなかった.そこで,免疫組織化学的にssDNAを染色しアポトーシスを検出する抗ssDNA抗体法とTUNEL法の二つの方法によるアポトーシス細胞の検出を行い,両者の検出結果を比較検討してみた.その結果TUNEL法と抗ssDNA抗体法での検出結果に統計学的に有意な相関関係が認められたが,抗ssDNA抗体法の方がデータの再現性に優れている可能性が示され,化学療法の効果判定への応用が期待できる結果であった.一方,病理組織形態学的な指標では捉えられない,癌細胞の生物学的性状の変化に基づいた癌化学療法の効果判定法の開発という本研究の本来の主旨に沿って,化学療法によって癌細胞における発現に影響を及ぼされ,悪性度が変化する可能性がある細胞接着因子や増殖因子関連タンパク等の発現についても検討した.その結果,化学療法がSCCにおける発現に影響を及ぼし,SCCの性状を悪性度の低い方向に変化させていることを示す細胞マーカーとしてE-カドヘリン,αカテニン,ヘパラン硫酸グリコサミノグリカン,Cyclin D1,Ki67等が有用であることが明らかとなった.本研究の目的は,抗癌剤による口腔扁平上皮癌(SCC)のアポトーシス誘導の程度が化学療法の効果判定の指標になり得るかどうかを検討することである.アポトーシスの検出法であるTUNEL法は組織切片上でアポトーシスを捉える有用な方法ではあるが,組織の処理や試薬の反応条件等の要因により陽性細胞の発現頻度が大きく異なることが明らかとなり,まずTUNEL法の技術的な検討を行った.その結果新鮮凍結組織切片において再現性のある条件を見出すことができた.次に,SCCの術前化学療法前後の組織切片上で,TUNEL法を用いてアポトーシスの誘導という観点から化学療法の効果を検討した結果,TUNEL法のみによる検討では従来の大星・下里の分類を凌駕する結果は得られなかった.そこで,免疫組織化学的にssDNAを染色しアポトーシスを検出する抗ssDNA抗体法とTUNEL法の二つの方法によるアポトーシス細胞の検出を行い,両者の検出結果を比較検討してみた.その結果TUNEL法と抗ssDNA抗体法での検出結果に統計学的に有意な相関関係が認められたが,抗ssDNA抗体法の方がデータの再現性に優れている可能性が示され,化学療法の効果判定への応用が期待できる結果であった.一方,病理組織形態学的な指標では捉えられない,癌細胞の生物学的性状の変化に基づいた癌化学療法の効果判定法の開発という本研究の本来の主旨に沿って,化学療法によって癌細胞における発現に影響を及ぼされ,悪性度が変化する可能性がある細胞接着因子や増殖因子関連タンパク等の発現についても検討した.その結果,化学療法がSCCにおける発現に影響を及ぼし,SCCの性状を悪性度の低い方向に変化させていることを示す細胞マーカーとしてE-カドヘリン,αカテニン,ヘパラン硫酸グリコサミノグリカン,Cyclin D1,Ki67等が有用であることが明らかとなった.口腔扁平上皮癌(SCC)に対する癌化学療法によって,癌細胞が完全に死滅した大星・下里の分類のGradeIII,IV症例においては,化学療法が明らかに長期生存率の向上に寄与することが示されてきた.しかし,化学療法単独で腫瘍が組織学的に消失することは稀であり,大部分の症例ではGradeIIaあるいはIIb程度に止まっている.このような生存可能な癌細胞が残存している大多数の症例は,従来の病理組織学的判定基準からは無効とされ,化学療法が癌の生物学的性状に影響を与え,癌の浸潤・転移を抑制する可能性に関してはこれまで検討されていない.本研究では,抗癌剤による癌細胞のアポトーシスの誘導の有無を組織標本等を用いて検討し,そのアポトーシスの誘導の程度が,臨床的な化学療法の効果に相関するものかどうか,さらに,このような検討が化学療法の効果判定の指標になり得るかどうかを検討することを目的とする.H11年度では,アポトーシスを捉える方法としてのTUNEL法の検討,およびアポトーシス関連マーカーとしてのpRB,DDK4,Cyclin D1,p16,p53等のSCCにおける発現,さらに,SCCの増殖活性の程度を捉えるマーカーとしてのKi67等のSCCでの発現の検討を行った.その結果,TUNEL法は組織切片上でアポトーシスを捉える有用な方法ではあるが,組織の固定あるいは酵素処理等の条件,炎症性病変による影響,試薬の反応時間,温度,濃度等の様々な要因により,TUNEL陽性細胞の発現頻度が大きく異なることが明らかとなり,今後さらにTUNEL法の技術的な検討が必要かと思われた.

また,アポトーシス関連マーカーの検討に関しては,免疫組織化学的手法に技術的に大きな問題は無かったが,SCC組織における陽性細胞は,均一に分布することは少なく,むしろ部分的に偏在する症例が多く認められたため,今後,上記マーカーの発現の定量的な検討には,統計学的観点からさらに検討が必要と思われた.本研究の目的は,抗癌剤による口腔扁平上皮癌(SCC)のアポトーシス誘導の程度が化学療法の効果判定の指標になり得るかどうかを検討することである.アポトーシスの検出法であるTUNEL法は組織切片上でアポトーシスを捉える有用な方法ではあるが,組織の処理や試薬の反応条件等の要因により陽性細胞の発現頻度が大きく異なることが明らかとなり,まずTUNEL法の技術的な検討を行った.その結果新鮮凍結組織切片において再現性のある条件を見出すことができた.次に,SCCの術前化学療法前後の組織切片上で,TUNEL法を用いてアポトーシスの誘導という観点から化学療法の効果を検討した結果,TUNEL法のみによる検討では従来の大星・下里の分類を凌駕する結果は得られなかった.そこで,免疫組織化学的にssDNAを染色しアポトーシスを検出する抗ssDNA抗体法とTUNEL法の二つの方法によるアポトーシス細胞の検出を行い,両者の検出結果を比較検討してみた.その結果TUNEL法と抗ssDNA抗体法での検出結果に統計学的に有意な相関関係が認められたが,抗ssDNA抗体法の方がデータの再現性に優れている可能性が示され,化学療法の効果判定への応用が期待できる結果であった.一方,病理組織形態学的な指標では捉えられない,癌細胞の生物学的性状の変化に基づいた癌化学療法の効果判定法の開発という本研究の本来の主旨に沿って,化学療法によって癌細胞における発現に影響を及ぼされ,悪性度が変化する可能性がある細胞接着因子や増殖因子関連タンパク等の発現についても検討した.その結果,化学療法がSCCにおける発現に影響を及ぼし,SCCの性状を悪性度の低い方向に変化させていることを示す細胞マーカーとしてE-カドヘリン,αカテニン,ヘパラン硫酸グリコサミノグリカン,Cyclin D1,Ki67等が有用であることが明らかとなった.