hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
合成カンナビノイドの体内動態とカタレプシー発現との関連性の解明

この化合物は脂溶性が非常に高く、摂取後速やかに脂肪組織中に蓄積されるものと考えられている。しかし実際の各臓器組織にどのように分布しているかについては、いまだ確たる研究データが示されていない。そこでMALDI-IT-TOF型質量顕微鏡を用いて、薬物を投与したC57BL/6J雄性マウスの各臓器組織におけるイメージング質量分析を実施した。昨年の研究でマトリクスとしてはCHCAが適していることが判明したが、感度不足であったことからさらに蒸着条件等を検討し、膜厚等の最適化により感度を向上させた。次に、JWH-210を1ー5mg/kgの用量で腹腔内投与し、脳、肺、心臓、肝臓、腎臓、脾臓を摘出して速やかに凍結した後、20μmの薄切とし、今回最適化した条件でマトリクスを蒸着してイメージング画像を測定した。その結果、各臓器中に広くJWH-210が分布していることが観察され、特に脳では脈絡叢に高濃度に分布していることが明らかとなった。また、0.05ー0.5 mg/kgのJWH-210を腹腔内投与したマウスに対しBar test法にてカタレプシー持続時間を測定した。さらに同様に薬物を投与したマウスを経時的に屠殺して心臓血を採取し、血中消失半減期を求めてカタレプシー持続時間との比較検討を行った。その結果、JWH-210の消失半減期は約0.5hであり速やかに血中から消失したのに対し、カタレプシーは投与後4h後においても認められ、血中濃度とカタレプシー持続時間には乖離が認められた。ヒトの中毒事例おいても合成カンナビノイドの血中濃度が有害作用の発現強度を直接反映しない事例が報告されており、今回の結果はその事実を反映したものと考えられる。昨年の研究においてはラットを用いた実験系を予定していたが、実験を遂行するにあたり手技上の問題からより扱いやすいマウスを用いた実験系へと修正した。これにより一部基礎検討のやり直しに迫られた関係で研究に遅れが生じたものの、マウスに切り替えたことで動物の取り扱いが容易になり実験は前進した。また、低温下で速やかに組織切片を作成する技術の習得に予定より時間がかかったほか、台風の影響による装置の不調による実験の遅れも重なった。現在のところ、実サンプルでの感度が不十分であることから、さらなるマトリクス代替化合物の検索、マトリクス塗布方法の最適化、サンプル採取から測定に至る過程での対象薬物の分解抑制方法の開発等を主軸にすえて検討中である。十分な感度が達成されれば、合成カンナビノイドを腹腔内投与したラットの臓器組織を摘出して、順次イメージング質量分析を実施する。皮下脂肪については適切な薄切を作製する難度が高いことから、今後、手法の改善を要するものと考えられる。また、実験に使用する組織の種類数を再検討するなどして、遅延の解消に極力努めることとする。合成カンナビノイドのうち現在は主にJWH-210を用いた実験を行っているが、イメージング、生体半減期の測定、カタレプシーの測定の全てにおいて一定の目処が立ったことから、次年は他の化合物へと順次拡大する予定である。しかしながら、昨年に比べて質量顕微鏡の条件最適化による高感度化により生体試料のイメージングは可能となったものの、いまだ十分とは言えず薬物投与量を当初の予定よりも高く設定し直す必要があった。
言語変化の要因についての基礎的研究

言語史研究としての日本語史研究は、言語史研究の大きな課題である言語はなぜ変化するのかという側面に十分に答えてきたとは言いがたい。そこで本研究は、言語変化の過程とその段階のモデルを構築しつつ、方言研究などの文献日本語史以外の分野の成果も活用して、言語変化の要因にはいかなるものがあるのかということの類型の枠組みを構築し、言語変化の要因研究の基盤を固めることを目的とする。同時に、言語変化の言語内的側面として文法史研究、言語外的側面として語彙史研究の実践をおこない、構築された言語変化の要因の枠組みを検証していく。
異教徒間取引の実現と大会社の成立－１９世紀末ドイツのＡＥＧ設立事例－

2015年度は、ベルリン市民社会において、大会社AEGに出資した大銀行の設立になぜユダヤ教徒も参加することができたかを考察した。大銀行の一つであるベルリン商業銀行の設立に際して、ベルリン商業会議所が中心的な役割を担った。そこで、第一に、この会議所の成立過程を調べた。特に商業における「営業の自由」(商業ギルドの解散と会議所の成立)とユダヤ教徒の政治的な解放をプロイセン政府が推進することになった理由を明らかにしようと努めた。具体的には、プロイセン政府内で議論された法律案やユダヤ教徒が提案した会議所の規約案などを分析し、当時のユダヤ教徒とプロイセン政府がそれぞれユダヤ教徒の解放と「営業の自由」に何を期待していたかを見ていった。第二に、会議所の成立から大銀行の設立にかけて、会議所内部のユダヤ教徒とキリスト教徒の関係がどのように変化したかを見ていった。まず、会議所が主導した金融機関や鉄道会社の設立に着目し、ユダヤ教徒とキリスト教徒の間でリスク共有がどのように進展したかを確認した。そのうえで、会議所内におけるユダヤ教徒の立場の変化をユダヤ教徒の市民名簿と会議所の歴代役員の名簿を使って分析した。以上により、ユダヤ教徒とキリスト教徒が、国家市民という法的にほぼ対等な関係を成立させただけでなく、その後、互いにビジネスで協力するようになり、経済市民層という経済的な利害を一致させた社会集団を形成していった過程で、ラーテナウの企業家精神を支えた大銀行が成立したことを明らかにした。この成果は、論文として『社会経済史学』に「19世紀半ばベルリンの市民社会における利害関係の世俗化ーユダヤ教徒の解放のはじまりからベルリン商業銀行の設立までー」という題目で掲載されることが決定している。(掲載号が決まっていないため、研究成果の欄に記載はない。)27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。宗教的なマイノリティのユダヤ教徒が、ビジネスにおいて、キリスト教徒とどのように協力関係を築き、近代ドイツ資本主義の発展に貢献するようになったかを、大会社AEGの成立背景の分析によって明らかにすることが本研究の課題である。2014年度は、19世紀末のAEGの成立に際して、ドイツ銀行やベルリン商業銀行といったベルリンの大銀行が、どのような役割を果たしていたかについて注目してきた。また、そうした大銀行の経営とベルリン商業会議所の運営が、どのような関係にあったかについても考察してきた。その結果、19世紀末ベルリンで、大会社を興したユダヤ教徒の企業家精神を、ユダヤ教徒とキリスト教徒の社会的な統合の進展によって説明することができた。具体的には、まず、19世紀のベルリンにおいて、ユダヤ教徒とキリスト教徒の利害の一致が、市民社会から金融業へと段階的に進んでいったことを明らかにした。そして、そうした市民社会の利害が、それまで特定の家族の利害に基づいて構成されていた会社でも受け入れられるようになった点を見出した。さらに、このような市民社会の利害を受け入れて大会社を成立させた事例を、ユダヤ教徒の企業家の社会的な同化傾向として説明した。この成果は、「市民的な統合と宗教的マイノリティの企業家精神ー19世紀末ベルリンのユダヤ教徒の同化・解放と大会社AEGの成立ー」として『経営史学』に掲載されることが決まった。市民社会と経済活動の相互連関の歴史的展開に、今後も注目していきたい。)経営史学の国内トップジャーナルである『経営史学』に掲載が決定したため。大会社AEGの成立した背景として、この大会社に出資した大銀行の設立が、ユダヤ教徒とキリスト教徒の協力関係が進展していた市民社会の歴史の中で、具体的にどのように位置付けられるかを検討していく。
抗体遺伝子クラススイッチ組み換え及び体細胞突然変異におけるAIDの役割

B細胞は、抗原とであった後、ヘルパーT細胞依存的にその抗体遺伝子をDNAレベルで改編する。抗体遺伝子の体細胞突然変異(SHM)と抗体定常部領域遺伝子(C)のクラススイッチ組み替え(CSR)がこれにあたり、それぞれ高親和性抗体産生及び定常領域遺伝子のアイソタイプスイッチ現象の分子基盤である。近年AID(activation induced cytidine deaminase)は、SHM, CSR両方に必須な分子である事が遺伝子のノックアウト等から明らかとなった。が、未だその分子機構は不明な点が多い。AIDが、どの様にSHM, CSR2つの現象を引きおこすかを解明する事は、SHM, CSRの分子機構を解き明かす上で、緊要の課題である(結果と考察)我々は、AIDの細胞内局在の解析とそれを規定する機構の解明、ならびにそのCSR SHM活性との関連の探索のため、野生型並びに変異を持つAIDとGFPの融合タンパク質を多数作成し、細胞内局在を決める領域を決定した。その結果AIDはN末端側に弱い核移行シグナル。C末端側に核排出シグナルを持ち、核と細胞質を行き来する事を明らかにした。核外移行はCRM1依存性である。AIDのC末端側領域はCSRに重要だがSHMには必須ではない。逆にCSR活性は維持されるがSHMのみが失われる変異があるかどうかをランダムに変異を導入したAIDを用いて検討した。その結果、N末端側の部分にSHMに重要だがCSRに必須でない部分がある事を見いだした。CSRとSHMには、それぞれ異なる補因子がN末端C末端に結合する事を示唆すると考えた。Estrogen受容体との融合により活性誘導できるAIDを用い、CSR及びSHM誘導で生ずる特異的DNA切断を、ピストンH2AXリン酸化を指標に検出できる系を確立した。その系に於いてDNA切断はAID活性化後の蛋白合成を必要とする事が明らかとなった。近年AID(activation induced cytidine deaminase)は、SHM,CSR両方に必須な分子である事が遺伝子のノックアウト等から明らかとなった。AIDが、どの様にSHM,CSR2つの現象を引きおこすかを解明する事は、SHM,CSRの分子機構を解き明かす上で、緊要の課題である。1.我々は、AIDの細胞内局在の解析とそれを規定する機構の解明、ならびにそのCSR SHM活性との関連の探索のため、野生型並びに変異を持つAIDとGFPの融合タンパク質を多数作成し、細胞内局在を決める領域を決定した。その結果AIDはN末端側に弱い核移行シグナルを、又、C末端側には核排出シグナルを持ち、核と細胞質を行き来する事を明らかにした。核外移行はLMBで阻害される事から核排出シグナルにトランスポーターCRM1が結合すると考えられた。核外移行シグナルの欠損変異体はSHM活性を野生型以上に有しているが、CSR活性は低い事がわかった。2.AIDの変異体にCSR活性は維持されるがSHMのみが失われるものがあるかどうかをランダムにC末端側に変異を導入したAIDを用いて検討した。その結果、N末端よりの部分にSHMに重要な領域がある事を同定した。

以前同定したC末側のCSRに重要な領域の存在と合わせ、CSRとSHMには、それぞれ異なる補因子がN末端C末端に結合する事を示唆すると考えた。3.CSRにおけるUNGの役割が、Uを除去する事によらない事をUNGの不活化型変異体を用いて明らかにした。また、CSR時のDNA鎖切断にはAID発現後にタンパク合成に依存する過程がある事を明らかにした。B細胞は、抗原とであった後、ヘルパーT細胞依存的にその抗体遺伝子をDNAレベルで改編する。抗体遺伝子の体細胞突然変異(SHM)と抗体定常部領域遺伝子(C)のクラススイッチ組み替え(CSR)がこれにあたり、それぞれ高親和性抗体産生及び定常領域遺伝子のアイソタイプスイッチ現象の分子基盤である。近年AID(activation induced cytidine deaminase)は、SHM,CSR両方に必須な分子である事が遺伝子のノックアウト等から明らかとなった。が、未だその分子機構は不明な点が多い。AIDが、どの様にSHM,CSR2つの現象を引きおこすかを解明する事は、SHM,CSRの分子機構を解き明かす上で、緊要の課題である(結果と考察)我々は、AIDの細胞内局在の解析とそれを規定する機構の解明、ならびにそのCSR SHM活性との関連の探索のため、野生型並びに変異を持つAIDとGFPの融合タンパク質を多数作成し、細胞内局在を決める領域を決定した。その結果AIDはN末端側に弱い核移行シグナル。C末端側に核排出シグナルを持ち、核と細胞質を行き来する事を明らかにした。核外移行はCRM1依存性である。AIDのC末端側領域はCSRに重要だがSHMには必須ではない。逆にCSR活性は維持されるがSHMのみが失われる変異があるかどうかをランダムに変異を導入したAIDを用いで検討した。その結果、N末端側の部分にSHMに重要だがCSRに必須でない部分がある事を見いだした。CSRとSHMには、それぞれ異なる補因子がN末端C末端に結合する事を示唆すると考えた。Estrogen受容体との融合により活性誘導できるAIDを用い、CSR及びSHM誘導で生ずる特異的DNA切断を、ヒストンH2AXリン酸化を指標に検出できる系を確立した。その系に於いてDNA切断はAID活性化後の蛋白合成を必要とする事が明らかとなった。
聴覚障害者の聴能向上を促進する音楽システムについての研究

これまでの研究で聴覚障害者の音楽トレーニングのための音楽ゲームの開発,特にトレーニングとして使用するコンテンツの作成を行い,平成29年度に長期実験を行った.その結果,実験前に予測していた,聴能(聴き取り理解する力)の向上が見られなかった.このことに鑑み,平成30年度は,実験に用いたトレーニングならびに,聴能を計測するテストについての再考を行った.聴覚障害者の音楽トレーニングの成果が見られなかったことから,トレーニング期間の短さが指摘された.しかし,より長期間の実験を行う前に,音楽トレーニングが聴覚障害者にとって難しすぎるということが考えられたため,健聴者を参加者として平成29年度に行ったものと同様の実験を行い,トレーニングの難しさについて調査した.これにより,健聴者にとっては決して難しいものではないことが明らかになった.そのため,聴覚障害者の音楽聴取に関する基礎的実験として音色の聴取・理解に取り組み,聴覚障害者にとっては,同じ高さの音を様々な楽器で演奏させたものに聴きやすさ,聴きにくさがあることが分った.したがって,トレーニングとして使用するコンテンツについては聴こえるものを精査する必要があることが分った.聴能を計測するテストは,メロディ弁別など,健聴者を対象とした音楽テストに準拠したものを用いた.これに関して,トレーニングとして使用するコンテンツと同様,健聴者を対象としたものの変更では聴覚障害者に対して用いることができない場合が多いということが明らかになった.平成29年度,30年度の実験を通して聴覚障害者の音楽トレーニングについて,多くのデータが得られたため,現在論文への掲載を目指している.また,音色聴取の基礎的実験については,国際会議で発表した.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。聴覚障害者が楽しみながら聴能を向上させるための音楽ゲームの開発のための基礎調査と,音楽ゲームとしてタッピングゲームとミュージックパズルそれぞれについてα版の開発を行った.基礎調査は,聴覚障害者の音楽聴取についての現状を知るために,音楽聴取の頻度や音楽経験についてアンケートを行った.タッピングゲームは,音楽のテンポをタップすることによる追従率を調べるもので,聴覚障害者を被験者とする実験を開始する前にフィージビリティテストを繰り返し,ゲームで使用する音楽の長さ,難易度,曲数について改良を重ねた.タッピングゲームを用いた実験では,音楽のテンポに合わせた視覚情報であるガイド表示を提示する場合としない場合をランダムに決めた.聴覚障害者がゲームを使用し,短期使用の結果,視覚情報を伴う場合に追従に影響があることを認めることができた.タッピングゲームの設計・開発・分析は,研究代表者の平賀と研究分担者の寺澤・松原が行った.ミュージックパズルはスウェーデンの研究協力者であるスウェーデン王立工科大学のK. F. Hansen博士とL. Elblaus氏が担当した.以前研究開発したものをゲーミフィケーションの点から再デザインした.二人が来日し,研究代表者の平賀と共にフィージビリティテストを繰り返し,聴覚障害者に使いやすい音楽の難しさや種類について調査した.聴覚障害者が主体的に継続して音楽経験を積むことで楽しみながら聴能を向上させることを目的とした音楽ゲームを開発し,長期間使用することで,聴能が向上するかどうかについての調査を行った.平成27年度に長期実験を行った音楽ゲームは拍認識をゲーム形式で行うタッピングゲームである.平成26年度の実験結果を基に,ゲームの仕様ならびにゲームで使用する音楽コンテンツに関して改良を行った.ゲーム自体は一人でも飽きずに使えるように難度を取り入れ,音楽コンテンツに関しても,様々な聴取能力に対応するよう,簡単な曲から難しい曲までを網羅するようにした.平成26年度の実験結果は国内の論文誌に投稿し採録となった.タッピングゲームの設計変更は,主に研究分担者の寺澤が,音楽コンテンツの選択は研究代表者の平賀と研究分担者の松原が行った.実験の被験者について,研究分担者の田渕が耳鼻科医として診察とクリニックテストを行った.本研究課題ではタッピングゲーム以外に音楽のメロディや音色に注意を傾ける必要のある音楽ゲーム(ミュージックパズル)を設計・開発する.ミュージックパズルに関して海外の連携研究であるスウェーデン王立工科大学のK. F. Hansen博士とL. Elblaus氏を9月に研究代表者平賀と研究分担者松原が訪問し,ゲームを用いた実験をスムーズに開始できるようミーティングを行った.実験は平成28年度日本で行う予定で,実施については研究代表者平賀と連携研究者2名が担当することを決めた.聴覚情景識別においては,環境音の認知が不可欠となるため,本年度は,日常における環境音の認知とトレーニングに関する研究も行った.聴覚障害者の環境音認知については研究分担者の寺澤と松原が,環境音トレーニングについては研究代表者の平賀が担当した.4年間で設計・開発を行う予定の2種類のゲームのうちの一つであるタッピングゲームについては,長期実験を行い,ゲーム自体と実験方法について問題点を洗い出すことができた.もう一つのゲームであるミュージックパズルについては,開発現状の確認と実験計画を立てた.日常の音情景に重要な役割を持つ環境音にも取り組むことができた.国内の研究

代表者平賀と研究分担者寺澤・松原はタッピングゲームに関して毎月ミーティングを実施し,進捗を確認してきた.タッピングゲームの長期実験においては,自発的なゲーム使用を促すことが難しいという結果から,平成28年度以降の長期実験の実施方法について熟考が必要であることが明らかになり,異なる方法で成果を導くようにする.平成27年度から研究分担者として研究に参加することになった耳鼻科医の田渕は,実験に参加する被験者に関してクリニックにおけるテストを行い,聴取に関する話し合いを持った.このことにより,実験で用いる音楽コンテンツの選び方の基準を考えることができた.データ分析では,聴覚障害者ならではの新しいテンポ追従のパターンを見つけることができたが,それだけ分析方法が難しいものとなり,まとめるために時間がかかった.ミュージックパズルを担当するスウェーデン王立工科大学の連携研究者2名とは9月にスウェーデンでミーティングを行い,平成28年度の研究への準備を整えた.聴覚障害者の音楽聴取に関するアンケート調査も含め,国内論文誌への掲載1件,国内研究会での発表4件,国際会議での発表2件,発表予定1件,招待講演2件を行うことができた.英文論文誌への投稿準備も進めることができた.本研究課題ではタッピングゲームと音楽を集中して聴くことを求められるゲーム(ミュージックパズル)を実験で使用する.ミュージックパズルは,連携研究者である,スウェーデン王立工科大学のK. F. Hansen博士が主として開発しており,10月に博士を研究代表者が訪問し,H29年度の長期実験に関する話し合いを進め,次年度の長期実験実現に向け,実験開始前・途中・終了直後それぞれにおいて行う聴取のテストの内容,ならびに"長期"という場合,実験の妥当な時間について確定した.人工内耳に関する国際シンポジウムに参加,ミュージックパズルの短期使用実験において健聴者と聴覚障害者を比較した内容についてのポスター発表を行った.タッピングゲームでは,ゲームの難度は使用する音楽コンテンツに依存するが,音楽コンテンツのリズムに関しての難度を明らかにするための実験を聴覚障害者を対象として行い,リズムの複雑さと音の重畳が特に難度に関係することが分かった.今後,ゲームにおいて音楽コンテンツを選択する場合の参考になる結果となった.研究代表者は,実験計画をたて,研究分担者の寺澤はミュージックパズルの長期使用実験のデザインとタッピングゲームの実験分析,同松原はコンテンツ作成とタッピングゲームの実験分析を担当した.同田渕は,特に人工内耳装用者が実験に参加する場合に予想される状況を分析した.また,H29年度には,環境音認知,タッピングゲーム,ミュージックパズルの短期使用実験に関する英語論文をまとめたので,H29年度中に投稿する.これまでのタッピングゲームの長期実験結果から,ユーザがゲームを継続して自発的に取り組むための要因の一つとして難度が重要であることが明らかになったため,H28年度はタッピングゲームで用いる音楽コンテンツのリズムに関しての実験を行った.リズムの複雑さ,音の重畳,テンポ,アクセントについてそれぞれ複数種類のコンテンツを準備,それらを組み合わせ,テンポ追従の実験を行った.これにより,リズムの複雑さとアクセントの有無がテンポ追従に影響を持つことが明らかになった.
喘息発作におけるイノシト-ル燐脂質ーCa^<2+>系の役割

気管平滑筋の膜電位依存性のCaチャンネルでも、開口の機構は、Kの場合と少し異なり、おそらく開口のシグナルとしてGTP結合蛋白が関与しているのであろうという事、GTP結合蛋白をかいしたCaチャンネルの開口に対しプロテインカイネ-スC(PKC)は、positiveに修飾する可能性がある事を報告してきた。この事と関連して、実際に、複数の収縮薬剤の存在下でhistamineの反応性が増し、これがPKCの活性と関連のある事を見い出した。また、細胞内のHの増加はCaの感受性を低下させるとともにCa依存性Kチャンネルの開口時間を短縮し、逆にHの減少はCaの感受性を高め、開口時間を延長する事によりチャンネルの開口機構を抑制する事、Interleukinー2とInterferonーγは、好中球のsuperoxide産生の増強を介して炎症を中心とした肺、気道系の病勢増悪に一役担っている可能性がある事、enprofyllineは炎症細胞のsuperoxide産生抑制を介して気道炎症の増悪を抑えること、エリスロマイシンはTリンパ球増殖抑制、好中球superoxideおよび遊走能抑制などを通じ、気道過敏性を改善するなどの新知見が得られており、既に発表済みである。また、抗アレルギ-剤が実験喘息において、β受容体、adenylate cyclaseを介して気道過敏性の改善に係わっている事、ニュ-ロペプタイドの一つであるpituitary adenylate cyclase activating polypeptideが気道平滑筋をcyclic AMPを介して弛緩させる事、などを明かにすることができた。一方、GTP給合蛋白とフォスフォライペ-スA_2(PLA_2)との直接共役がヒト多核白血球膜上で生じていることを示すことを目的として検討した結果、膜画分のPLA_2活性の制御にGTP結合蛋白が、関与していることを示唆する結果を得ている。これらは喘息発作の機序、その対策などに一つの指針を与えてくれたものと思われる。これら新知見は発表済み、または発表中である。現在、研究計画に従い、さらに燐脂質ーCa系を中心とした気管支喘息での意義を中心に研究を進めているが、気道過敏性の意義とそれへの対策も検討中である。膜電位依存性のCaチャンネルでも開口の機構は、K^+の場合と少し異なり、おそらく開口のシグナルとしてGTP結合蛋白が関与しているのであろうということ、GTP結合蛋白を介したCaチャンネルの開口に対し、プロテインカイネ-スCはポジティブに修飾する可能性があることを示唆していることは報告してきた。つまり、収縮物質の反応機序の1つであるelectromechanical couplingは、薬物受容体反応に基づく場合に限りイノシト-ル脂質代謝の結果、活性化されるプロテインカイネ-スCによって、大量にCaが流れ込むように修飾される可能性があることがわかってきている。さらに、Interleukinー2とInterferronーγは、好中球のsuperoxide産生の増強を介して炎症を中心とした肺・気道系の病勢増悪に一役担っている可能性があること、enprofyllineは炎症細胞のsuperoxide産生抑制を介して気道炎症の増悪を抑えること、エリスロマイシンはTリンパ球増殖抑制、好中球superoxideおよび遊走能抑制などを通じ気道過敏性を改善するなどの新知見が得られており、既に発表済み、発表中である。

また、細胞内のH^+の増加はCa^<++>の感受性を低下させるとともにCa^<++>依存性Kチャンネルの開口時間を短縮し、逆にH^+の減少はCa^<+2>の感受性を高め、開口時間を延長することによりチャンネルの開開機構を抑制すること、キサンチン製剤の気管支拡張作用の一つに、cyclic GMP phosphodiesterase阻害能も関与しているなどの基礎的な新治見も得ており、喘息発作の機序、その対策等に一つの指針を与えてくれたものと思われる。現在、研究計画に従い、さらに燐脂質-Ca^<2+>系を中心とした気管支喘息での意義を中心として研究をすすめているが、気道過敏性の意義とそれへの対策も検討中である。気道平滑筋の膜電位依存性のCaチャネルでも、開口の機構は、Kの場合と少し異なり、開口のシグナルとしてGTP結合蛋白が関与しているのであろうという事、GTP結合蛋白を介したCaチャネルの開口に対しプロテインカイネ-スC(PKC)はpositiveに修飾する可能性がある事を報告してきた。この事と関連して実際に、複数の収縮薬剤の存在下でhistamineの反応性が増し、これがPKCの活性と関連のあることを見い出した。また,エリスロマイシンはTリンパ球増殖抑制、好中球superoxideおよび遊走能抑制などを通じ、気道過敏性を改善すること、抗アレルギ-剤が実験喘息において、β受容体、adenylate cyclaseを介して気道過敏性の改善に係わっている事、ニュ-ロペプタイドの一つであるpituitary adenylate cyclase activating polypeptideが気道平滑筋をcyclic AMPを介して弛緩させる事、キサンテン製剤の気管支拡張作用の一つにcyclic GMP phosphodiesterase阻害能も関与しているなどを明らかにすることができた。さらに,oxygen radicalsが実験喘息の気道過敏性が関与していることも明らかにできた。一方、GTP結合蛋白とフォスフォライペ-スA_2(PLA_2)との直接共役がヒト多核白血球膜上で生じていることを示すことを目的として検討した結果、膜画分のPLA_2活性の制御にGTP結合蛋白が、関与していることを示唆する結果を得ている。さらに、イノシト-ル三燐酸の関与について検討中であり、気道平滑筋へも応用することで、喘息発作における意義を詳細にすべく検討している。これらから、喘息発作の機序、その対策などに一つの指針を与えてくれたものと思われる。これら新知見は発表済み、または発表中である。
岩澤理論に於ける非可換数論的現象の探求

2018年度は主に以下の2つの項目について研究を実施した;(1) CM体の同変岩澤主予想の定式化と証明の方針(2) CM非可換拡大のイデアル類群の高次Fitting不変量と先頭項予想(愛媛大学大下達也氏との共同研究)以下各項目の研究について報告する。(1)のCM体の非可換岩澤理論の研究に関しては(特に“捩れ合同式"の観点から)Athanasios Bouganis, Dohyeong Kim等による部分的な先行研究が存在するが、(特にCM体の古典的な多変数岩澤主予想を包含する形での)主予想の定式化といった理論的基礎づけはなされていなかった。今年度の研究では、多変数非可換岩澤代数の局所化の理論(Ardakov, Brown等による)など、CM体の非可換岩澤理論を扱う上で必要とされるであろう基礎理論を整理した上で、Ritter, Weiss等によって考察されていたタイプの非可換拡大に対する非可換p進ゼータ関数の構成戦略を打ち出した。現状では細かいチェックが必要な点が残っており、そのうちの幾つかはCM体の古典的な(アーベル拡大の場合の)多変数岩澤理論にまで遡る重要な問題と関係していそうなので、今後は細部の検証に注力し、論文としてまとめたい。(2)については、David Burnsと佐野昂迪による“非可換ゼータ元"の理論に基づき、非可換Rubin-Stark元を用いてイデアル類群の高次Fitting不変量を記述することが目標であったが、(定式化も含めて)ある程度証明の方針を立てることが出来た。こちらも細部を詰めつつ、次年度には論文の形で発表することを目標としたい。なお、第26回整数論サマースクール『多重ゼータ値』での研究代表者の講演内容が報告集として出版されたことを付記しておく(ゼータ値のp進的性質の研究発展への寄与が期待される)。CM体の同変非可換岩澤主予想については、セミナー等での口頭発表およびその後の研究討論などを通じて、これまでの研究方針が概ね正しい方向性を示しているという確信を強めることが出来た。また、非可換拡大のイデアル類群の高次Fitting不変量の計算については、(高次Fitting不変量が加群の有限表示の取り方にア・プリオリには依存するため)主張の定式化の段階で大きな障害が立ちふさがっていたが、大下達也氏との研究討論を通じてある程度自然な形で主張を定式化して証明をつける見通しがついたという意味でそれなりに進展は見られたと考えている。ただ、いずれの項目についても残念ながら2018年度中に論文として公表する段階には漕ぎ着けられなかった。この点は大いに反省し、次年度は(研究をさらに進展させていくこともさることながら)得られた結果を論文の形にまとめて発信してゆくことを目標として研究を進めていきたいと考えている。「研究実績の概要」(1), (2)の課題については、いずれも2018年度の研究で方針は概ね確立している状態なので、細部の検証を終わらせて論文の形にまとめ、発信することを目指す。(1)について、総実体の場合と同様の整対数準同型を用いた議論を展開するためには、CM体の多変数p進L関数の(解析的)ミュー不変量が0となることを仮定する必要がある。p進L関数のミュー不変量の自明性については、CM体がpで絶対不分岐の場合は肥田晴三や謝銘倫等の結果による肯定的な結果が得られているが、一方でCM体がpで絶対不分岐でない場合は(Katz-肥田-Tilouineが構成した) p進L関数のミュー不変量が0になることは期待できないことがDohyeong Kimによって観察されている。KimはKatz-肥田-Tilouineの構成したp進L関数に修正を施したものを構成し、自身が構成したp進L関数はミュー不変量が0となることが期待できるのではないかと主張しているため、先ずはKimの主張の検証に着手し、CM体のp進L関数のミュー不変量についての考察を深めたい。(2)について、これまではBurns-佐野の手法に従って、イデアル類群の表示として(一般化) Tate 4項系列に付随するもののみを考えていたが、最近その制約を外せる(或いは弱められる)可能性が出て来た。そのことを検証しつつ、かつ定理の主張のより良い表現も吟味した上で、なるべく早めに論文執筆に着手したい。また、2018年度の整数論サマースクールでの講演に向けた準備研究を踏まえ、2019年度は多重ゼータ値の岩澤理論的観点からの研究にも着手できたらと考えている。

今年度の研究では、多変数非可換岩澤代数の局所化の理論(Ardakov, Brown等による)など、CM体の非可換岩澤理論を扱う上で必要とされるであろう基礎理論を整理した上で、Ritter, Weiss等によって考察されていたタイプの非可換拡大に対する非可換p進ゼータ関数の構成戦略を打ち出した。現状では細かいチェックが必要な点が残っており、そのうちの幾つかはCM体の古典的な(アーベル拡大の場合の)多変数岩澤理論にまで遡る重要な問題と関係していそうなので、今後は細部の検証に注力し、論文としてまとめたい。(2)については、David Burnsと佐野昂迪による“非可換ゼータ元"の理論に基づき、非可換Rubin-Stark元を用いてイデアル類群の高次Fitting不変量を記述することが目標であったが、(定式化も含めて)ある程度証明の方針を立てることが出来た。こちらも細部を詰めつつ、次年度には論文の形で発表することを目標としたい。なお、第26回整数論サマースクール『多重ゼータ値』での研究代表者の講演内容が報告集として出版されたことを付記しておく(ゼータ値のp進的性質の研究発展への寄与が期待される)。CM体の同変非可換岩澤主予想については、セミナー等での口頭発表およびその後の研究討論などを通じて、これまでの研究方針が概ね正しい方向性を示しているという確信を強めることが出来た。また、非可換拡大のイデアル類群の高次Fitting不変量の計算については、(高次Fitting不変量が加群の有限表示の取り方にア・プリオリには依存するため)主張の定式化の段階で大きな障害が立ちふさがっていたが、大下達也氏との研究討論を通じてある程度自然な形で主張を定式化して証明をつける見通しがついたという意味でそれなりに進展は見られたと考えている。ただ、いずれの項目についても残念ながら2018年度中に論文として公表する段階には漕ぎ着けられなかった。この点は大いに反省し、次年度は(研究をさらに進展させていくこともさることながら)得られた結果を論文の形にまとめて発信してゆくことを目標として研究を進めていきたいと考えている。「研究実績の概要」(1), (2)の課題については、いずれも2018年度の研究で方針は概ね確立している状態なので、細部の検証を終わらせて論文の形にまとめ、発信することを目指す。(1)について、総実体の場合と同様の整対数準同型を用いた議論を展開するためには、CM体の多変数p進L関数の(解析的)ミュー不変量が0となることを仮定する必要がある。p進L関数のミュー不変量の自明性については、CM体がpで絶対不分岐の場合は肥田晴三や謝銘倫等の結果による肯定的な結果が得られているが、一方でCM体がpで絶対不分岐でない場合は(Katz-肥田-Tilouineが構成した) p進L関数のミュー不変量が0になることは期待できないことがDohyeong Kimによって観察されている。KimはKatz-肥田-Tilouineの構成したp進L関数に修正を施したものを構成し、自身が構成したp進L関数はミュー不変量が0となることが期待できるのではないかと主張しているため、先ずはKimの主張の検証に着手し、CM体のp進L関数のミュー不変量についての考察を深めたい。(2)について、これまではBurns-佐野の手法に従って、イデアル類群の表示として(一般化) Tate 4項系列に付随するもののみを考えていたが、最近その制約を外せる(或いは弱められる)可能性が出て来た。そのことを検証しつつ、かつ定理の主張のより良い表現も吟味した上で、なるべく早めに論文執筆に着手したい。
農作物の洪水被害リスク評価法の開発と保険ビジネスへの展開

気候変動により生じる両極端現象(渇水と洪水)の増大に焦点をあて、これまで別々に解析してきた農地水利用と氾濫を伴う洪水を同時に連続して解析できる「シームレス一体型解析モデル」を開発するとともに、農作物の洪水被害リスクの定量化を行い農業分野への保険ビジネスの展開を行う。その結果、広域に渡る農地や水利施設群の一体的管理のため、灌漑水利用と洪水を継ぎ目無く追跡可能にし、農作物へのリスクを確率的に評価することができるようになる。
ケラチノサイト・メラノサイトの腫瘍化に働く新規皮膚がん抑制遺伝子Ppp6c

我々は、これまでの研究で、脱リン酸化酵素PP6の触媒サブユニット(Ppp6c)が皮膚がん(非メラノーマ)の抑制遺伝子であることを、遺伝子改変マウスを用いて世界で初めて証明してきた。一方、最近のがんゲノムプロジェクトの成果により、がん遺伝変異データベースでは、皮膚基底細胞がんとメラノーマにおいて、Ppp6c変異がそれぞれ約20%と約10%の頻度で報告されている。申請者は、プレリミナリーな検討で、Ppp6c欠損ケラチノサイトの腫瘍形成に対して、変異型RAS、または変異型変異型RASおよびp53欠損が、相乗効果をもって、腫瘍化を更新させる可能性を示唆する結果を得ている。本研究では、3つの課題の解明を行っている。課題1は、ケラチノサイト特異的に2重変異(Ppp6c欠損+変異型RAS)を導入し、腫瘍発生の有無とその特徴を明らかにすることである。課題2は、メラノサイト特異的に2重変異(Ppp6c欠損+変異型BRAF)を導入し、Ppp6cがメラノーマがん抑制遺伝子として働くか否かの検証を行うことである。課題3は、ケラチノサイト特異的に3重変異(Ppp6c欠損+変異型RAS+p53欠損)を導入し、変異型RASとp53欠損による腫瘍形成能に対するPpp6c欠損の働きを解析することである。これらデータをもとに、PP6の脱リン酸化反応が不全になったことによって引き起こされる皮膚腫瘍(ケラチノサイトおよびメラノサイト由来の腫瘍)に対する治療の可能性を探る。課題1に関しては、特に進展が顕著であり、以下の結果が得られた。重層扁平上皮特異的に、タモキシフェン投与により、2重変異(K-rasG12D発現とPpp6c欠損)を誘導発現させるマウスK14-CreTAM; KrasLSL-G12D/+; Ppp6cflox/floxK14-CreTAM; p53loxp/+; Ppp6cflox/flox上記の証明のため、申請者は、扁平上皮細胞で2重変異(変異型KRAS発現とPpp6c欠損)を惹起するマウスを作製し、全身皮膚にこの2重変異導入する実験を開始した。驚いたことわずか2週間で、口唇、手指、乳頭、会陰部などで、著しい皮膚の肥厚(papilloma)が認められた。一方で、変異型KRASのみの発現だと殆ど異常は認められない)。さらに重要なことには、3週間目には、口唇の肥厚部に、扁平上皮がん(SCC)が認められた。一方、課題2および課題3に関しても概ね順調に進展しており、今後は以下の方策で進展させる。課題2に関しては、市販のメラノーマ誘導マウス(変異型BRAFとPTEN欠損:Tyrosinase-CreERT2;BrafF-V600E/+;Ptenflox/flox)を利用して、検証用のマウス(変異型BRAFとPpp6c欠損:Tyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ppp6cflox/flox)をした。タモキシフェンにより変異を誘導させたところ、2重変異導入のみでは、メラノーマが発生しないことが分かった。今後は、2重変異導入マウスに対して、UV照射を行い、メラノーマの発生の有無を検討する。課題3に関しては、扁平上皮細胞で2重変異(変異型p53発現とPpp6c欠損)を惹起するマウスの作製に成功した。今度は、本マウスに、タモシフェンを投与して、腫瘍の発生の有無を検討する。重層扁平上皮特異的に、タモキシフェン投与により、2重変異(K-rasG12D発現とPpp6c欠損)を誘導発現させるマウスK14-CreTAM; KrasLSL-G12D/+; Ppp6cflox/floxK14-CreTAM; p53loxp/+; Ppp6cflox/flox

上記の証明のため、申請者は、扁平上皮細胞で2重変異(変異型KRAS発現とPpp6c欠損)を惹起するマウスを作製し、全身皮膚にこの2重変異導入する実験を開始した。驚いたことわずか2週間で、口唇、手指、乳頭、会陰部などで、著しい皮膚の肥厚(papilloma)が認められた。一方で、変異型KRASのみの発現だと殆ど異常は認められない)。さらに重要なことには、3週間目には、口唇の肥厚部に、扁平上皮がん(SCC)が認められた。一方、課題2および課題3に関しても概ね順調に進展しており、今後は以下の方策で進展させる。課題2に関しては、市販のメラノーマ誘導マウス(変異型BRAFとPTEN欠損:Tyrosinase-CreERT2;BrafF-V600E/+;Ptenflox/flox)を利用して、検証用のマウス(変異型BRAFとPpp6c欠損:Tyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ppp6cflox/flox)をした。タモキシフェンにより変異を誘導させたところ、2重変異導入のみでは、メラノーマが発生しないことが分かった。今後は、2重変異導入マウスに対して、UV照射を行い、メラノーマの発生の有無を検討する。課題3に関しては、扁平上皮細胞で2重変異(変異型p53発現とPpp6c欠損)を惹起するマウスの作製に成功した。今度は、本マウスに、タモシフェンを投与して、腫瘍の発生の有無を検討する。消耗品費が当初の想定よりも少なく済んだため。最終年度の消耗品費に上積みし、より迅速な計画進捗をねらう。
日本近世政治秩序の形成と展開

日本近世の幕府(将軍)と藩(大名)による政治秩序の形成・展開過程を解明するという研究課題に基づき、本年度は、昨年度に引き続いて研究に利用する史料の収集を行うと共に、これまでの研究成果をまとめて日本史研究会大会において口頭報告し、後にその内容を活字化して発表した。まず、近世政治史に関わる史料等を購入して分析を進めた。平成22年5月及び7月に高知県高知市の土佐山内家宝物資料館において史料調査・撮影を行い、平成22年5月・8月・11月には東京都文京区の東京大学史料編纂所において史料調査を行った。土佐山内家宝物資料館では、山内家文書を閲覧し、近世前期の藩主書状を中心に構成されている史料である「長帳」を撮影した。東京大学史料編纂所では、広島藩浅野家の編纂史料である「済美録」をはじめとした諸大名家関係史料を閲覧した。また、昨年度に収集した各史料の記事検索・分析作業を継続して進めると共に、近世政治秩序に関わる研究史のまとめを行うため、重要な先行研究を収集して評価し、整理した。昨年度から今年度にかけての研究成果を集大成したものとして報告した「幕藩政治秩序の成立-大名家からみた家光政権-」(2010年度日本史研究会大会共同研究報告)では、近世大名家が持つ固有(個別)性と共通(普遍)性を連関させて理解することを目的として、共通性の形成過程を考察した。事例としては、主に西国の外様国持大名を取り上げ、大名家の視点から徳川家光政権期の歴史的位置を描き出した。以上のような研究により、「日本近世政治秩序の形成と展開」を研究課題とする本研究は、一定の達成をみたと考えている日本近世における幕府(将軍)と藩(大名)による政治秩序の形成・展開過程を解明するという本研究の課題にしたがって、本年度は近世前期の政治史に関わる幕府や各大名家の関連史料を収集することを中心に行った。幕府関係史料としては、『徳川実紀索引』・『明暦年録』・『寛文年録』等の刊行されている基本史料を購入した。大名家関係史料としては、2009年9月10・11日に山口県文書館において「毛利家文庫」の閲覧・撮影、2010年1月27・28日に岡山大学附属図書館において「池田家文庫」の閲覧・撮影を行った。デジタル撮影により収集した主な史料は、「公儀所日乗」・「福間彦右衛門覚書」・「高須市介書状」・「秀就様御代之記録物」・「京都大坂長崎御屋敷事」(以上、「毛利家文庫」)・「芳烈公御手留」・「万覚書」・「御留帳」・「故羽林君御記録」・「光政公被仰出留」(以上、「池田家文庫」)である。また、近世前期政治史に関わる重要な大名家関係の史料集である『細川家史料』・『綿考輯録』・『萩藩閥閲録』・『梅津政景日記』・『池田家履歴略記』・『池田光政日記』他を購入した。これら収集史料については、研究課題に関連した記事の検索作業を進めており、特に、近世前期の譜代大名の位置づけ、京都と大名家の関係、について多くの事実を明らかにすることに成功した。前者の成果については学会で口頭報告し、学術雑誌への論文掲載(論題「近世初期譜代大名論-軍事編成と所領配置-」)が決定している。今後も本年度に収集した上記史料の分析を続けていくことにより、さらに多くの重要な史実が解明されていくはずである。以上のような研究により、「日本近世政治秩序の形成と展開」を研究課題とする本研究は、一定の達成をみたと考えている
気管支喘息などのアレルギー性疾患治療薬としての活性化プロテインCの有用性の検討

世界的に気管支喘息などのアレルギー性疾患が増加しており、特に日本においてその増加率は著しい。気管支喘息に対しては多くの治療薬が開発され、吸入ステロイドを第一選択としての治療が進められているにもかかわらず、難治例は少なからず存在し、死亡率の著明な改善も認められていない。これらのアレルギー性疾患に対する新たな治療戦略が強く望まれている。我々は従来から血液凝固因子の炎症性疾患における役割に注目し、特に気管支喘息などの呼吸器領域での炎症性疾患において凝固・線溶系の因子がその病態形成に重要な役割を果たしていることを報告してきた。さらに抗凝固因子である活性化プロテインC(APC)が抗炎症作用を有することを見いだし、気管支喘息におけるAPCの臨床的意義と疾患モデルマウスでのAPCの治療効果を明らかにした。本研究ではこうしたこれまでの研究成果をふまえて、アレルギー性疾患治療薬としてのAPCの有用性をさらに明らかにするため、抗原提示細胞からのリンパ球活性化、リンパ球によるサイトカイン、IgE産生に対するAPCの抑制効果を検討した。Ovalbumin誘発気管支喘息マウスモデルにおいて、APCは樹状細胞による抗原提示、リンパ球によるIL-4、IL-5、IL-13等のTh2サイトカインの産生、好酸球の活性化を優位に抑制することが明らかになった。また、APCはB細胞のIgEへのクラススイッチに必要であるJAK-STAT6とPKC-NFκBの細胞内シグナル伝達機構の活性化も優位に抑制した。以上の結果よりAPCが喘息等のアレルギー疾患の発症に中心的な役割を果たしている樹状細胞によるリンパ球の活性化を抑制することが明らかになり、APCが新たなアレルギー性疾患の治療薬になる可能性が示唆された。15年度は、ovalbumin(以下OVA)を抗原提示した骨髄由来樹状細胞を気道内に移植し、OVAを吸入させることで気管支喘息モデルを作製し、活性化プロテインC(以下APC)の抗原提示細胞に対する効果を検討した:(1)気管支喘息モデルの作成:樹状細胞の気道内移植による気管支喘息モデルは、従来より共同研究をおこなっているLambrechtらの方法(J.Clin.Invest.2000)に準じて作製することができた。マウス長管骨の骨髄より樹状細胞を分離培養後、in vitroでOVAをパルスし抗原提示させた後気道内に(1x10^5)移植しOVAを(1日/90分)吸入させた。喘息の発症は気道過敏性試験(enhanced pause値)で確認した。(2)樹状細胞へのAPCの効果の検討:樹状細胞にOVAをパルスする前後、あるいは気道内に移植する直前にAPC(30と60μg/ml)を培地中に添加し、気道内移植した。OVA吸入後気管支肺胞洗浄液(BALF)中の好酸球数、各種サイトカイン等を測定し、APCの樹状細胞に対する効果を検討した。その結果APCで処理した樹状細胞はAPC処理した細胞に比べ喘息の発症が軽度でBALF中のinterleukin-13の濃度は低下した。(3)肥満細胞とリンパ球に対するAPCの効果の解析:ヒト肥満細胞株MHC-1をIgEと抗IgE抗体で刺激した。IgEと抗IgE抗体の刺激によるMHC-1細胞培養上清中のIL-4の濃度は、コントロール細胞に比べ、有意に高値であった。また、IL-4で刺激したマウスリンパ球培養上清中のIgEの濃度は、コントロール細胞に比べ、有意に高かった。これらの実験系でAPCの抑制効果を検討した。APCは肥満細胞からのIL-4及びマウスリンパ球からのIgEの分泌を有意に抑制した。これらの結果からAPCは気管支喘息に対する治療薬としての有用性が示唆されている。16年度は、前年度の検討を続けるとともに、好塩基球細胞とリンパ球のシグナル伝達に対するAPCの効果を検討した。

(1)好塩基球とリンパ球の細胞株に対するAPCの効果の解析:KU812好塩基球細胞株とJurkatリンパ球細胞株をトロンビンで刺激した。トロンビンの刺激によるKU812とJurkat細胞培養上清中のIL-5の濃度は、コントロール細胞に比べ、有意に高値であった。また、トロンビンで刺激したマウスリンパ球培養上清中のIgEの濃度は、コントロール細胞に比べ、有意に高かった。これらの実験系でAPCの抑制効果を検討した。APCは好塩基球とリンパ球からのIL-4及びマウスリンパ球からのIgEの分泌を有意に抑制した。(2)樹状細胞へのAPCの効果の検討:樹状細胞にOvalbuminをパルスする前後、あるいは気道内に移植する直前にAPC(60μg/ml)を培地中に添加し、気道内移植した。Ovalbumin吸入後気管支肺胞洗浄液(BALF)中の好酸球数、Th2サイトカインを測定し、APCの樹状細胞に対する効果を検討した。その結果APCで処理した樹状細胞はAPC処理しなかった細胞に比べ喘息の発症が軽度でBALF中のinterleukin-4、interleukin-15の濃度は低下した。(3)リンパ球のシグナル伝達に対するAPCの効果:IL-4またはIL-4+APCで培養したJurkat細胞を用いてWestern blottingでPKCの活性化を検討した。また、Gel shift assayでNFκBの活性化も検討した。APCはPKCによる伝達機構とNFκBの活性化を抑制した。これらの結果からAPCは気管支喘息に対する治療薬としての有用性が示唆されている。
セマフォリン4Aに着目した好酸球性副鼻腔炎に伴う嗅覚障害の病態解明

我々は好酸球性副鼻腔炎(以下ECRS)において、好酸球の膜蛋白であるセマフォリン4Aが好酸球性炎症の遷延化に寄与することを報告した。本研究においては、セマフォリンファミリーが神経軸索延長に阻害的に働くことに着目し、好酸球に高発現するSEMA4Aを介したECRSの嗅覚障害について解析する。本研究を通じてECRSにおける嗅覚障害の病態解明およびSEMA4Aの治療ターゲットとしての可能性について検討する。
異常レベルに応じた選択的な細胞死誘導

附属腺では、分化状態の異常(転写因子Pairedレベルの低下)に相関して、JAK-STATシグナルが上昇する。また、上皮性異常によりPvrシグナルが誘導される。細胞死誘導においては、Pvrシグナルが細胞死トリガー、JAK-STATシグナルが細胞死許容として機能することが明らかになった。今回、JAK-STATシグナルによる細胞死の許容メカニズムを解明すべく、下流因子の同定を目指した。その結果、JAK-STATシグナルは、イニシエーターカスパーゼDroncの発現を上昇させることが明らかになった。また、Droncを不活化することで、Pvr依存的な細胞死誘導が部分的に抑えられた。これらの結果から、JAK-STATシグナルは、Droncの基礎発現量を上昇させることで細胞死誘導を起こしやすくしている(許容)と考えられた。附属腺では、Pvr・JAK-STATシグナルが異常センサーとして協調的に機能することで、異常細胞の選択的排除が誘導される。一方で、非再生系組織である附属腺においては、細胞排除は組織喪失のリスクも伴う。そこで、細胞排除機構の意義を明らかにするために、Pvr・JAK-STATシグナルを人為的に抑制し、加齢時の附属腺への影響を調べた。その結果、細胞排除誘導シグナルの抑制は、大規模細胞死や組織サイズの縮小を引き起こすことが明らかになった。これは、異常細胞生存し続けたため、周囲の正常組織を巻き込んだ壊死を生じた結果であると予想される。これらの結果から、選択的細胞排除は、あらかじめ異常な老化細胞を取り除くことで、大規模な組織喪失を防いでいると考えられた。28年度が最終年度であるため、記入しない。1. Pvrシグナルを誘導する細胞異常の同定申請者は、加齢時に活性化し、細胞死誘導能をもつシグナルとして、Pvrシグナルを同定している。一方で、Pvrシグナルを誘導する要因ははっきりしていない。そこで、平成27年度計画では、Pvrシグナル活性化を誘発する細胞異常の同定を試みた。遺伝学的手法により、1)染色体異常、2)上皮性異常、3)基底膜接着異常、4)細胞成長異常、5)小胞体ストレス異常を誘発し、Pvrシグナル活性への影響を検証した。その結果、scribble遺伝子のノックダウンにより2)上皮性異常を誘発した場合、Pvrシグナル活性が上昇することが明らかになった。この結果は、Pvrシグナルは上皮性不全に応答し、細胞死を誘導するシグナルであることを示唆している。Pvrシグナルは、細胞死誘導能を持つものの、その誘導効率は極めて低い(強制発現実験における結果)。興味深い点として、Pvrシグナルによる細胞死誘導効率は、人為的加齢誘導状態(Pairedのノックダウン)において大きく上昇する。我々は、Paired低下に相関して、活性化するシグナルとしてJAK-STATシグナルを同定している。平成27年度計画では、Pvrシグナルによる細胞死誘導に対する、JAK-STATシグナルの関与について検証した。その結果、Pvrシグナルは、JAK-STATシグナルと共活性化することで、極めて高効率に細胞死誘導を行うことが明らかになった。一方で、JAK-STATシグナルを単独で活性化しても細胞死は誘発されない。この結果は、JAK-STATシグナルが細胞死を“誘導"するシグナルではなく、Pvrシグナルによる細胞死誘導を“許容"するシグナルであることを示唆している。平成27年度において計画していた、「1. Pvrシグナルを誘導する細胞異常の同定」、「2. JAK-STATシグナルによる細胞死許容メカニズムの検証」について計画通りの検証を行い、一定の成果を上げることができた。これらを考慮し、研究計画は“おおむね順調に進展している"と判断した。ただし、当初計画に加えて以下のような実験を行い、さらなる検証を行っていく必要があると考えている。“1"の検証において、“上皮性異常"がPvrシグナルを活性化する要因であることが示唆されたが、その誘導能は低かった(活性レベルが低い)。これは、上皮性異常が十分に誘発できていない為であると考えられる。そこで、E-CadherinノックダウンやLglノックダウンといった、他の手段により上皮性異常を誘発することで、本検証結果についてさらなる確証を得る必要がある。“2"の検証において、Pvr誘導性細胞死に対するJAK-STATシグナルの機能を検証することができた。一方で、本検証実験は、Pvrシグナル・JAK-STATシグナル共活性化実験のみによって得られたものである。当初計画していた、Pvrシグナル活性化・JAK-STATシグナル不活化実験については、十分な検証を行えていない。これは、JAK遺伝子に対する一過的なノックダウンの効果が不十分であることによる。そこで、遺伝子ノックダウン法ではなく、JAK-STATシグナル抑制因子であるSocs36Eを強制発現する方法により、本実験を再検証したい。