hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アドレノメデュリンの循環器疾患における病態生理的意義の解明と診断及び治療への応用

シャントによるラット心不全モデルを作成し慢性期に血行動態,各臓器重量を測定後、血漿AM濃度,組織中のAM濃度をRIAにて、組織のmRNAをノザンブロット法にて測定した。心不全群でsham群に比し左室,右室心筋重量,左室拡張末期圧は有意に増加し、血漿AM濃度もsham群に比し心不全群で有意に増加し、左室心筋重量と有意に相関した。各臓器のAM濃度は腎臓,副腎で2群に差はないものの、心臓,肺では心不全群で有意に増加し、同部位でmRNAの発現もshamに比し有意に亢進した。以上より血漿AMレベルは、ラット心不全モデルにおいて重症度と比例して増加し、心不全時のAMの由来として心臓,肺の産生の亢進が示唆された。2.左室拡大,低心機能を有する拡張型心筋症患者を対象に心臓カテーテル検査中に右室ペーシングを施行し、前後で大動脈(AO),冠静脈洞(CS)から採血を行ない、血漿AM,ANP濃度をRIAにて測定した。ペーシング前でCSからの分泌はAOより19%、ANPは602%高かった。ペーシング後、ANPは著増したが、AMに変化はなかった。心不全におけるAMの心臓からの分泌の亢進はヒトおいても確認され、ペーシング20分では心臓から分泌されるAMは有意に変化せず、ANPと異なった分泌機序が推測された。3.申請者らは、肺高血圧患者において血漿AM濃度が健常者に比し有意に高値であることを以前に報告した。肺高血圧におけるAMの病態生理学的意義を検討するためにモノクロタリンによる肺高血圧ラットモデルを作成し、AMの慢性投与を行ない肺高血圧の予防効果について検討した。AMを慢性投与後の血漿濃度は約2倍であった。AMはこの病態生理学的な範囲内で有意に右室の収縮期圧,右室重量,肺動脈の肥厚を抑制した。以上の結果から肺高血圧時に増加したAMは肺高血圧を抑制する方向に働いているものと推察され、さらにAMが肺高血圧の治療薬となる可能性が示唆された。4.申請者らは、本態性高血圧患者において血漿AM濃度が健常者に比し有意に高値であることを以前に報告した。本態性高血圧患者におけるAMと左室肥大および頚部大動脈との伸展性との間の関係を検討した。本態性高血圧患者において血中AM濃度は左室肥大群で有意に高値であった。またAM高値群で頚部大動脈との伸展性は有意に低下していた。以上の結果より本態性高血圧患者の増加したAMは左室肥大および頚部大動脈との伸展性を一部反映することが示唆された。申請者らはアドレノメデュリン(AM)の病態生理学的意義の解明を目的として、各種の循環器疾患の病態モデルやヒトにおける臨床研究により、以下の研究業績を挙げた。1.急性心筋梗塞患者の血漿AM濃度を入院直後より経時的に測定し、AMの病態生理的意義について検討した。AMは入院直後に既に健常者に比して増加しており、ピークは24-48時間であった。ピーク時のAM濃度は心筋梗塞サイズの指標であるCPK値や左室機能の指標であるLVEFと有意な相関を認め、心不全合併例でさらに高かった。AM濃度はその後徐々に低下し4週間後には正常化した。AM濃度は全身の血管抵抗と有意な相関を認めたことから、増加したAM抵抗血管を拡張するべく代償的に働いている可能性が示唆された。2.血漿AM濃度の源は血管壁(血管内皮、血管平滑筋)と考えられており、サイトカインがAMの産生調節に重要な役割を果たしている可能性がある。そこで心臓血管手術前後でのAMの変動とその病態生理的意義について検討した。血漿AMは麻酔直後では増加せず肺再灌流後に増加した。
自走式アクチュエータ兼用センサによる波動・振動統合型損傷同定アルゴリズムの開発

本研究は、アクチュエータ兼用センサとしてPZT系圧電素子の使用を想定し、接合部周りに加振器兼用センサを取り付け、これらの間での振動伝達特性と波動伝播特性の変化から、損傷箇所と程度をシステマチックに探索するアルゴリズムの提案をその最終目標としている。上記目標実現に向け、溶接接合部に異常がある場合、振動伝達特性と波動伝播特性がどのように特徴的に変化するかを実験的に明らかにするため、鉄骨構造の柱梁接合部の縮小スケール模型を制作し、この模型の溶接接合部の状況をパラメトリックに変化させつつ衝撃加振実験を実施して模型各部の加速度応答を計測し、接合部の状況が全体の振動特性や波動伝播特性に及ぼす影響を実験的に検証した。実験結果より、損傷レベルが高くなると、損傷箇所を経由した振動エネルギーの伝達効率が低下するため、振幅レベルの変動が同大することが明らかとなった。しかし、特に損傷レベルが小さい状態での変動は顕著とは言い難く、この特性変化のみから損傷を判定することは困難を伴うことも明らかとなった。また、波動伝達特性の変化では、波動立ち上がり部はその差が若干現れるが、これ以降は進行波と重複反射波が混在して、損傷判定はきわめて難しいことも明らかとなった。なお、最適な加振力パターンの検討は、研究予算の制約から実験的に実施することは出来なかったが、解析的研究の親展と合わせて今後の重要な研究項目のひとつと考えている。さらに解析的に波動伝播特性変化を再現する試みも実施し、その結果から実験のように対象物の数点の加速度応答波形の変化から溶接部損傷状況を推定することはかなり難しいことが裏付けられた。しかし、部材表面の応力波の面的な伝播状況は、接合部の状態変化に依存して比較的明確に変動することが確かめられたので、今後はこの応力変動を計測可能なセンサが開発されれば、本手法のような損傷同定の可能性があると考えられる。兵庫県南部地震時に被災が多数みられた鉄骨構造の柱梁接合部を対象とし,接合部周りの波動伝播性状の変化から被災レベルを評価する手法を確立するため,以下に示す研究を実施した。(1)単一部材と柱梁接合部における波動伝播状況の変化に関する予備解析本研究の予備解析として,梁を想定した単一鋼製部材と,同一断面で部材中央に柱材を想定した厚板を溶接した部材の両者について解析モデルを構築し,部端に衝撃加振を与えた場合の波動伝播状況の変化を確認した。その結果,モデル部材の加速度応答時刻歴波形から有意な違いを見出すことはやや難しいが,相当応力の時刻歴変化は有意な違いが見出されることが判明した。この結果は(3)の被災レベルをパラメータとした柱梁接合部実験に対して有効な知見であるとともに,波動伝播状況が解析的に確認可能であることを見出したことに意義があると考えられる。(2)波動伝播状況を確認可能な応答加速度観測システムの構築予備解析から,応答加速度時刻歴の性状変化から接合部状況変化を推定するためには,1kHz以上の高周波領域の時刻歴応答観測が必要であることが判明した。そこで,この高周波応答を精度良く観測する応答加速度観測システムを構築した。構築システムは本研究とは別件で実施されている木質構造システムの材料強度確認実験に適用され,その結果本研究で想定されている周波数領域にも十分な精度で観測が可能であることが検証された。(3)被災レベルをパラメータとした柱梁接合部実験鉄骨構造の柱梁接合部の単純なモデルとして,梁をC型鋼,柱を厚板とした接合部試験体を作成し,1)柱梁接合部溶接スポット数をパラメータとした波動伝播実験,2)接合部を加力し,溶接接合部に一部亀裂あるいは剥離が生じた場合の波動伝播実験を実施し,被災レベルと波動伝播状況の関係を実験的に確認した。本実験は現在観測結果を詳細に検証中である。

しかし、部材表面の応力波の面的な伝播状況は、接合部の状態変化に依存して比較的明確に変動することが確かめられたので、今後はこの応力変動を計測可能なセンサが開発されれば、本手法のような損傷同定の可能性があると考えられる。
胎生期脳に発現する性特異的遺伝子の解析

脳には有意な構造上の性差が存在し、単純な性行動ばかりでなく高次機能にも関与していることが知られている。しかしながら、脳におけるこのような性差形成のメカニズムは未だ十分には理解されていない。ラットの性腺形成において性差が見られ始めるのは胎生12日からである。脳の基本構造形成が行われるのは胎生13日から20日の間である。昨年度に施行したエストロゲン受容体mRNAのin situ hybridization解析では、胎生18日、20日ラットで雌雄差があることが示唆された。本研究では、この胎生後期に焦点を当て、ラット雌雄胎仔脳で性特異的に発現している分子の同定による脳の性差形成機構の解明を目指している。本年度は、より機能に直結する蛋白質レベルにおいて、胎生後期脳の性差形成に関与する分子の検索を行った。脳発生のもっとも活発な胎生18日を中心に胎生16日、18日、20日のラットを用い、生後明確な性差が認められる視床と視床下部を一緒に、雌雄別に胎仔脳より分離し、試料を調製した。手法としては、1次元目を固定化pH勾配ゲルにより展開する2次元電気泳動法を用い、銀染色により雌雄間でのプロテオームを比較した。その結果、分子量50K60Kの間に性差を持って発現しているいくつかのスポットが検出された。これらは膜画分に存在し、いずれの時期においても性特異的に発現していた。また、胎生20日の大脳新皮質膜画分においても同様のスポットが検出された。これらのスポットは性差形成の過程に関与する受容体あるいは膜結合型の酵素などではないかと予想される。今後は性差が検出された蛋白質分子のスポットに関して、質量分析やアミノ酸解析等をもとにデーターベースで検索・同定するなど、さらに詳細な解析が必要である。脊椎動物の雄と雌には性固有の行動様式があり、それを司る有意な構造上の性差が脳に存在する。この性差形成のメカニズムは未だ十分には理解されていない。一方、脳発生では胎生後期にもっともダイナミックな変化が起きている。本研究では、この時期に焦点を当て、ラット雌雄胎仔脳で性特異的に発現している分子を検索することにより、脳の性差形成機構の解明を目指している。近年、脳の性差形成にエストロゲン受容体(ER)が関与していることが示唆されており、胎生のこの時期にも関与している可能性がある。本年度はまず胎生期の性差形成を解析する上で指標となるER mRNAの局在を胎生15日、18日、20日ラットの雌雄脳を用いてin situ hybridization法により形態学的に解析を行った。ERには2種のisoformがあるため、解析は新たに作製したERαおよびβ特異的なdigoxigenin標識プローブを用いて行った。ERαプローブを用いた解析では胎生15日、18日では雄雌共にほとんどシグナルは検出されなかった。胎生20日になって視索前野でシグナルが検出されたが雌雄差はほとんど認められなかった。ERβプローブを用いた解析では15日、18日、20日において特に側脳室帯にシグナルが検出された。胎生18日までは雌雄でそれほどシグナルに差は認められなかったが、胎生20日では雄の方が雌よりもシグナルが強い傾向が認められた。この結果は、側脳室帯から移動する神経細胞により大脳皮質、海馬などが形成されることを考慮すると、これらの部位における雌雄差が胎生18日から20日の間に形成され始める可能性を示唆している。本研究は今後、この胎生18日から20日に的を絞り、脳の雌雄差形成に関与する新規分子の検索を行う。
分子動力学による金属及び合金の結晶成長機構の研究

金属中に打込まれた陽電子の状態は金属試料中の原子空孔、点欠陥などイオン密度の低い格子欠陥に非常に敏感であることが最近明らになってきた。LSI,VLSI,ULSIなど半導体の加工が微細化されるにつれ、結晶の欠陥の制御が非常に重要になってきている。それにもかかわらず、半導体中の点欠陥の状態が余り明らかにされていないまま、電子工業への応用のみが先に進んでしまっている。企業においては明日の研究に追われていて、このような基礎の研究をおろそかにしている。半導体中の結晶欠陥の荷電状態はフェルミ準位により異なるため、金属のようには簡単ではない。n型、p型の半導体のフェルミ準位は温度により変化する。これと同時に各不純物準位を占める電子の占有数も異なる。また、それがために、また陽電子を用いて半導体中の欠陥の荷電状態、濃度を調べることができる。本年度は主としてシリコンの中に結晶欠陥およびドーパントがあり、禁止帯の中にエネルギー準位がある場合、温度によりどのように電子による占有確率が変った場合の各々の準位を占める数を計算し、実験結果と合せた。陽電子は電子の反粒子であるので正に帯電している。半導体中の負に帯電した結晶欠陥があると、陽電子はクーロン相互作用により引っ張られ、その結晶欠陥にトラップ(捕獲)される。しかし、これらを鮮明に研究するのには室温以下の温度が必要である。これは第1に室温以下の温度でフェルミ準位がかなり変化する場合がある。陽電子と結晶欠陥の間の結合エネルギーが小さければ高温ではトラップされても再び逃出して(デトラップ)しまうことによる。本研究では温度及びドーパントの量、欠陥の密度、試料温度を制御することにより欠陥の荷電状態を変え、陽電子を用いて結晶欠陥の状態を非破壊的に決定した。これらの成果は半導体工業への基礎となる。
インスリンによるグスコース細胞内輸送促進の分子メカニズム

インスリンは生体へ投与後直ちに血糖値を低下させる唯一のホルモンである。これはインスリンがその標的組織である筋肉及び脂肪細胞表面上にあるインスリンレセプターと結合し、通常は細胞内膜分画に存在していたグルコーストランスポータータイプ4(インスリン反応性グルコーストランスポーター;GLUT4)を細胞膜上に移行(トランスロケーション)させることによりグルコース取り込みを促進し、血糖値を低下させると考えられている。GLUT4は細胞膜を12回貫通するタンパクであるが、GLUT4のトランスロケーションの分子メカニズムは未だ解明されていない。インスリン結合により活性化されたインスリンレセプターチロシンキナーゼはPI3-キナーゼを活性化するが、その先どのような分子が関与し、どのようなメカニズムでGLUT4のトランスロケーションを引き起こし、ひいては細胞に於けるグルコースの取り込みを促進するのかその分子メカニズムを明らかにすることを目的とした。しかし、インスリン刺激で活性化されたPI3-キナーゼがGLUT4のトランスロケーションを引き起こすのに必要かつ十分であるのかは議論のあるところであり明らかでなかった。そこで我々はインスリンレセプターとIRS-1をほとんど発現していないRat3Y1細胞を用いインスリンシグナル伝達の再構成を試みた。3Y1細胞を安定にインスリンレセプター、IRS-1、GLUT4mycをcDNAを介して発現させた細胞を作った。その細胞はインスリン以外のNaFやPMAなどの刺激によってはGLUT4mycのトランスロケーションが起こるので、GLUT4mycをトランスロケーションさせる装置はもっているものと思われる。この細胞をインスリンで刺激するとインスリンレセプターチロシンキナーゼの活性化、IRS-1のチロシンリン酸化、PI3-キナーゼの活性化は起こるが、GLUT4mycのトランスロケーションはみられなかった。このことからRat3Y1細胞においてはPI3-キナーゼの活性化がGLUT4mycのトランスロケーションに必要かつ十分ではないことが明らかとなった。
マウス胎仔皮膚再生とWntシグナルの関係

マウス胎仔の皮膚再生モデルを用いて、さまざまな発生段階のマウス胎仔に創傷を作成し、その治癒過程とWnt遺伝子発現の関連を観察したところ、Wnt3a,5,10とその他のWnt関連タンパクが胎生13日の創傷部では発現が認められなかったが、胎生15日、17日と胎生後期になるに従い、創傷部での発現の増強が観察された。これらのことから、差瘢痕形成とWntシグナルの相関性が考えられた。成獣はオスICR8週令を用いて、背部に長さ1cmの長軸方向に沿った皮膚全層切開創を作成した。さまざまな時間の後に創部を採取した。胎仔はICR妊娠13,14,15日のマウスを用い、全身麻酔下に顕微鏡下で胎仔側胸部に皮膚全層切開創を作成した。創傷作成後、さまざまな時間の後に胎仔を採取した。その後、組織をOCTコンパウンドに包埋し、急速凍結後に7μmの凍結切片を作成し、アセトンで10分間、室温で固定し、免疫染色を行った。1次抗体はWnt1,3A,5Aおよび、Wntのシグナル伝達系であるPhospho-LRP6,Dvl3,Naked1,Naked2,Axin 1を用いた。in situ hybridizationは、Affymetrix社のQuantiGene ViewRNAシステムを用いて、Wnt1,3a,5a,10bなど毛包再生に関係しているものを中心に行った。計画書通りにおおむね順調に研究は遂行されている。Wnt遺伝子群は、発生に伴うパターニングを介した形態形成における細胞間シグナル分子の一つとして広く知られている。一方で、哺乳類においてもある発生段階までは、皮膚の創傷は瘢痕を残すことなく再生する。発生に伴う形態形成では分泌性シグナル分子を介した相互作用が細胞間コミュニケーションの方法として使われており、この細胞間シグナル分子の中で中心的な作用を及ぼす因子としてWntファミリーがある。この中には17種以上のメンバーがあり、線虫、昆虫などの下等生物からマウス、ヒトに至るまでの高等動物において、Wnt遺伝子群は発生のさまざまな局面で時間的、位置的に特異的な発現を示し、形態形成の誘導因子、細胞の極性決定因子、増殖分化の調節因子として機能していることが知られている。本研究では、研究室が独自に開発したマウス胎仔の皮膚再生モデルを用いて、さまざまな発生段階のマウス胎仔に創傷を作成し、その治癒過程とWnt遺伝子発現の関連を観察した。さまざまな発生段階のマウス胎仔に創傷を作成し、さまざまな時間経過の後に創とその周囲の組織を回収し、凍結標本、パラフィン包埋標本を作成し、real time RTPCR用のサンプルの採取を行い定量的に観察した。そして、さまざまなWnt関連因子の発現を、免疫染色、in situ hybridization、real time RTPCTRを用いて発現とその局在を観察した。さらにWntの発現を小分子を用いて発現の抑制、ならびに増強を試み、マウス胎仔の皮膚再生に及ぼす影響について観察した。そして、発現が確定できたWnt関連因子につき、発現をsiRNA試薬を創傷を作成した羊水内に注入し、創傷に及ぼす影響を観察した。今年度も、計画書通りに研究を遂行してゆく。形成外科初年度で使用予定の抗体が、予想よりも使用量が少なかったため。次年度の抗体購入に使用する予定である。
植物病原細菌による発病・抵抗性誘導機構に関する研究

そ菜類軟腐病菌の主要発病因子であるペクチン酸リアーゼの生産制御について、PhoP-PhoQ二分子間制御システムが機能し、植物体内環境と考えられる低pH、低濃度の糖類、低濃度のマグネシウムイオン、有機酸等がシグナルとして認識されて制御されている事を明らかにした。また、本発病因子の他に、鞭毛による運動能力が発病に重要な役割を果たす事をフラジェリン欠損及びモーター遺伝子欠損変異株の解析より明らかにした。また、Xanthomonas属細菌のavrBS3/pthA遺伝子ファミリーは、ハーピンなどの非宿主内一般的抵抗性反応を抑制する機能も持つことを発見した。イネによる病原菌Acidovorax avenae認識には、免疫システムの誘導が必須であり、フラジェリン認識によって誘導されること、タイプIII分泌機構に依存した制御が存在することを見いだした。また、イネの過敏感反応細胞死を誘導する新規転写調節因子を発見した。次に、フラジェリンの様々なドメインを大腸菌で発現させ免疫誘導活性を測定したところ、イネはフラジェリンのC末端側を認識することを明らかにした。イネのフラジェリン認識に関わるタンパク質を探索した結果、FIP50と名付けた機能未知のタンパク質の同定に成功した。根頭がんしゅ病組織におけるテロメラーゼの発現を司るAtBBF1及びAtBBF2を同定し、これがプロモーターに結合することを確認した。テロメラーゼ阻害剤テロメスタチンが植物のテロメラーゼ阻害にも有効であることを確認した後、本阻害剤処理によりHRと平行して現れる細胞死が誘導されることを見いだした。さらに、アポトーシス関連遺伝子(AtBI-1)が病原細菌によるHR細胞死の誘導において抑制的な役割をもつことを明らかにした。次に、植物における細胞死の制御因子であるシロイヌナズナのBax inhibitorおよびイネのHC毒素還元酵素が、各々HR細胞死の抑制および褐条病菌に対する抵抗性に関与することなどを明らかにした。発病因子としてカンキツかいよう病菌のPthA、品種特異的抵抗性誘導因子としてイネ白葉枯れ病菌のAvrXa10をモデル系として、これらの作用機構を調べ、以下の事を明らかにすることが出来た。1)カンキツかいよう病菌より耐熱性エリシタータンパク質を純化し、これを生産する遺伝子をクローニングし、その塩基配列を決定した。相同性検索から、このタンパク質は、他の植物病原細菌で報告されているハーピンとは全く相同性を示さないが、生化学的には共通したタンパク質であった。2)非植物病原細菌Pseudomonas fluorescensにhrp遺伝子群及びpthA或いはavrXa10を導入した形質転換体を用いて、化学発光を指標にした活性酸素の生成パターン、リグニン染色、タバコ葉におけるHR誘導を解析し、いずれの因子もハーピンによると考えられる一般的抵抗性反応を抑制するサプレッサーであることを発見した。このことから、カンキツのかいよう症状は、HR反応が遅延したものであると考え、これについて解析を行っている。化学発光を指標にした活性酸素の生成パターン、リグニン染色、タバコ葉におけるHR誘導の実験結果から、3)カンキツかいよう病菌を宿主植物に接種すると、7日目頃より病徴が現れるが、その直前より一過的にテロメラーゼの活性が高くなることを発見した。動物のガンと同様にテロメラーゼが植物の増生的病徴発現に関与することを示唆するもので、この可能性について検討するため、カンキツよりTERT遺伝子をクローニングした。かいよう形成遺伝子pthAは、Xanthomonas属細菌の多くが持つavrBs遺伝子群と高い相同性を示し、共通のドメイン構造を持つ。

本年度は、各ドメインの役割をさらに具体的に解析するため、イネ白葉枯れ病菌のavrXa10,avrXa7及びpthA遺伝子のキメラ遺伝子のかいよう病菌病原性欠損変異株及びイネ白葉枯れ病菌抵抗性誘導欠損変異株の形質転換体をカンキツ及びXa7,Xa10遺伝子保有イネ品種に接種して解析した。その結果、繰り返し配列部が病原性、抵抗性発現において中心的役割を果す事が明らかになったばかりでなく、これまで指摘されていない領域が新たに病原性発現に重要な役割を果す事が明らかになった(露無)。根頭がん腫病の腫瘍形成過程で誘導されるテロメラーゼ活性の機能および発現調節機構の解明を行った。その結果、当該酵素の触媒サブユニットをコードするAtTERT遺伝子が腫瘍形成に伴って転写され、高い増殖活性を有するがん腫表層付近の細胞で発現していること、腫瘍組織においてテロメア長がほぼ一定に保持されていることを示した。また、AtTERTのアンチセンス鎖を発現するシロイヌナズナの形質転換体を供試したところ、がん腫肥大の顕著な抑制およびテロメア長の有意な短小化が認められた。以上より、腫瘍細胞におけるテロメラーゼ活性は、テロメア長の安定維持を介した分裂能の持続によりがん腫の肥大成長に寄与することを明らかにした。さらに、AtTERT遺伝子の発現が毛根病におけるrolB遺伝子の転写調節に類似した機構で制御されている可能性を示した。(田村)。植物病原細菌による腫瘍形成の際、テロメラーゼ活性が高められることを発見した。また、タパコBY4の葉内にPseudomonas syringae pv. tabaci Pt7364株及びpv.syringaeTMR124株の菌液を注入し、植物病原細菌よる過敏感反応(HR)の誘導時における、テロメラーゼの役割について検討を行った。その結果、前者では6-8時間後に本活性の誘導が認められたのに対し、後者の場合には8-10時間後にわずかな活性の上昇しかみられなかった。さらに、非植物病原細菌であるP. fluorescens Pf55R (pHIR11)株及び同形質転換体のhrcC欠損変異株を同様に接種した場合は、後者の場合にのみ接種後6-8時間で本活性の誘導が見られた。このことから、植物のテロメラーゼ活性は観戦時によるHRに対して抑制的に働くことを示唆した。さらに、植物病原性細菌のavrBs3遺伝子ファミリー及びavrPto遺伝子が、HRの誘導を阻止するサプレッサー活性を持つことを発見した。また、トランスポゾンタギングにより、軟腐病菌の鞭毛形成が発病に重要な役割を果たすこと、さらにフラジェリンのN末端側に位置するペプチドが重要な役割を果たすことを明らかにした。(露無)植物病原Xanthomonas属細菌のavrBS3/pthA遺伝子ファミリーは、本来の品種棟的抵抗反応を誘導するエリシターとして機能する他、ハーピンなどの非宿主内一般的抵抗性反応を抑制する機能も持つことを発見した。
プロトオンコジンと細胞増殖調節遺伝子との相関

現在までに分離された癌遺伝子の性質から細胞増殖の調節に働いている遺伝子が突然変異を起こして増殖促進にのみ働くようになると細胞は癌化することが充分に考えられる。つまり細胞増殖の調節に働いている遺伝子は全てオンコジンとしての潜在能力を持っている。我々はこの観点から細胞増殖の調節にとって重要なG1期の機能とDNA合成と細胞分裂の接点で増殖調節に働いているG2期の機能に関与している遺伝子のクローニングを行った。【◯!1】、G1期遺伝子のクローニング:G1期進行が温度感受性となっているハムスター由来、BHK21株の温度感受性変異株tsBN462をDNA形質転換の受容細胞としてts変異を相補する活性を持つヒト遺伝子を分離した。方法はヒトDNAを取り込んで【ts^+】となった株よりコスミッドベクターを用いてヒトDNAを含むコスミッドDNAを分離した。全部で7個の重なり合うヒトDNAを持つコスミッドDNAが分離され、ヒトDNAの全長は約70kbあり生物活性は中心の55kbの領域にあることが推測された。分離されたヒトDNAはX染色体に由来するものでこれは遺伝学的なデーターと一致する。【◯!2】、G2期遺伝子のクローニング:染色体凝縮により全ての遺伝子機能が失われるのでその開始調節は生物にとって重大な意味がある。高温で未成熟染色体凝縮が起こる温度感受性変異株tsBN2(BHK21株由来)を用いて、この変異を相補するヒトDNAをクローニングした。方法はG1期遺伝子のクローニングと同様に、コスミッドベクターを用いて行った。相補活性を持つヒト遺伝子にはHind【III】切断部位がないことがわかったのでこれを指標にクローニングを用い、高頻度でtsBN2変異を相補する約30kbのヒト遺伝子を分離した。現在これらのクローニングされた遺伝子のcDNAを分離しており、またこれらの遺伝子がプロトオンコジンとしての活性を持つか否かを調べている。
食道・胃の前癌性病変及び癌におけるSAGEを用いた網羅的トランスクリプトーム解析

食道・胃の前癌性病変及び癌における遺伝子発現解析を通した癌の発生・進展の分子機構の解明を目的として、SAGE法を用いて網羅的トランスクリプトーム解析を行った。まず、胃の高分化腺癌、低分化腺癌及び非癌部胃粘膜を対象とし、複数回出現するtagから、NCBIの約120種のSAGE libraryにおいて出現の殆どないものを抽出し、少なくとも8種類のtagを得た。そのひとつは、generating gene type IV (Reg IV)であり、RT-PCR法による解析の結果、肺癌、乳癌、肝癌、食道癌では発現は殆ど認められず、定量的RT-PCR法において胃癌で高発現が認められ、in situ hybridization法においても進行胃癌の浸潤部に特に強い発現が確認された。また、胃癌の原発巣とリンパ節転移巣において発現の異なる遺伝子をSAGE法により解析し、転移巣において発現が消失あるいは著しく低下していた3つのtag/遺伝子を抽出した。そのひとつは、粗面小胞体とゴルジ装置間の小胞輸送に関与するCOP I複合体の1サブユニットであるγCOPであった。γCOPの発現は、正常のリンパ節や脾臓においても認められたため、laser capture microdissection後に原発巣と転移巣での発現をRT-PCR法で比較すると、明らかに転移巣において発現は減弱していた。これら遺伝子の食道癌および前癌性病変における発現解析はISHによって進め、また、SAGE解析のために試料を収集中である。一方、び漫浸潤型のスキルス胃癌で特異的に高発現を示し、SAGE databaseにおいてマッチする遺伝子が同定されないtag (SES1,SES3,SES4)を見い出した。新規の胃癌特異的浸潤関連遺伝子である可能性があり、reverse SAGE法および5'RACE法によりクローニングを行っている。食道・胃の前癌性病変及び癌における網羅的トランスクリプトーム解析研究の初年度として、胃癌における発現遺伝子プロファイルをserial analysisof gene expression(SAGE)法を用いて解析した。胃の高分化腺癌、低分化腺癌及び非癌部胃粘膜を対象とし、cDNAのpolyA tailに近いCATG((Nla III切断部位)下流に存在する10-12塩基(tag)をそれぞれ約10000tagについてsequenceし、その出現頻度と遺伝子の種類を同定した。複数回出現するtagから、NCBIに登録されている約100種のSAGE libraryにおいて出現のほとんどないものを抽出し、少なくとも3種類のtagを得た。そのひとつはgenerating gene typeIV(RegIV)のtagであり、胃癌で組織型に関係なく極めて高頻度にtagが出現したが、他のSAGE libraryでは、わずかに大腸を含む5つに低い出現頻度で認められたのみであった。RegIVはcalcium-dependent lectin superfamilyに属するが、realtime RT-PCRによる検索では、胃癌及び大腸癌で発現が確認され、特に胃癌ではそのレベルは高く、ステージとの相関も認められた。さらに、それぞれの組織型に特異的発現を示す遺伝子がいくつか同定され、それらの中には、密度依存性の細胞増殖、細胞分裂時の染色体の分配、蛋白分解などに関わる遺伝子が存在していたが、現在までに癌における発現や役割の明らかでないものが多く含まれていた。また、胃癌特異的に発現していた数種のtagは全く未知のものであり、reverse SAGEにより遺伝子の同定を行う予定である。尚、食道癌及び前癌性病変における発現解析は、次年度の課題である。食道・胃の前癌性病変及び癌における遺伝子発現解析を通した癌の発生・進展の分子機構の解明を目的として、引き続いてSAGE法を用いて網羅的トランスクリプトーム解析を行った。

前年度に同定したgenerating gene typeIV (RegIV)については、RT-PCR法による解析の結果、肺癌、乳癌、肝癌、食道癌では殆ど発現は認められず、定量的RT-PCR法においてステージの進んだ胃癌で高発現が認められ、さらに、in situ hybridization (ISH)法においても進行胃癌の浸潤部に特に強い発現が確認された。また、胃癌の原発巣とリンパ節転移巣において発現の異なる遺伝子をSAGE法により解析し、転移巣において発現が消失あるいは著しく低下していた3つのtag/遺伝子を抽出した。それらは、CDKインヒビターのp21、γCOPおよび未知のtagであった。γCOPは、粗面小胞体とゴルジ装置間の小胞輸送に関与するCOP I複合体の1サブユニットである。γCOPの発現は、正常のリンパ節や脾臓においても認められたため、laser capture microdissection後に原発巣と転移巣での発現をRT-PCR法で比較すると、明らかに転移巣において発現は減弱していた。これら遺伝子の前癌性病変における発現解析は、ISHによって進め、SAGE解析のために試料を収集中である。一方、び漫浸潤型のスキルス胃癌で特異的に高発現を示し、SAGE databaseにおいてマッチする遺伝子が同定されないtag(SES1,SES3,SES4)を見い出した。新規の胃癌特異的浸潤関連遺伝子である可能性があり、reverseSAGE法および5'RACE法によりクローニングを行っている。
非晶質合金に内在する密度揺らぎとその機能化

電流密度10^7A/m^2の直流を非晶質合金に通じて昇温すると結晶化温度が1030K低下し、均一核形成過程が促進される。ピーク電流密度10^9A/m^2のパルス通電では構造緩和温度以下の低温で結晶化が進み、ある合金種では新結晶相が出現する。パルス通電下で結晶化が進む時間-温度域は熱活性化過程での結晶化の時間-温度域と大きく離れており、かつ、パルス通電下結晶化は、パルス通電の時定数と電流密度の関数であり、動的要素が強い。弾性特性では、10^<-6>域の歪振幅で弾性率を数10Hzから10kHz域で測定周波数に対して測定すると、静的測定値より低い値が観測され、極小を示す測定周波数域は複数カ所ある。極小を示す10^2Hz域で、歪振幅を上げると動的弾性率が高くなる。また、歪振幅を10^<-6>にして、試料に10^7A/m^2の直流を通電すると動的弾性率は上昇する。これらの現象は、金属-金属系、金属-非金属系の多くの非晶質合金で共通して観測される、普遍的現象であり、非晶質合金に内在する密度揺らぎに起因する原子の集団運動が励起されると仮定すると統一的に説明できる。即ち、通電効果では電気泳動力が集団運動する原子数倍だけ局部的に集中し、有効電荷数Z^*が大きくなっている。動的弾性率が低いのは、集団運動が共振運動として励起されるので擬弾性歪が増えた。10^2Hz域で、歪振幅を上げると動的弾性率が高くなるのは、原子の集団運動を可能にしている相対的に密度が低い部分の擬弾性歪(局所的剪断変形)が飽和へ向かうためである。通電すると動的弾性率が上昇するのは内部応力が発生するので前記の擬弾性歪が飽和へ向かうためである。通電による動的弾性率の上昇を、歪振幅増大による動的弾性率上昇と比較して得た有効電荷数Z^*は多くの非晶質合金で似ており、10^5である。パルス通電で新しい結晶相が出現することは、これまでにない未知物質を創成出来る可能性を示唆する。通電による動的弾性率の変化は、可変音波フィルターやマイクロアクチュェータへの機能化が期待できる。非晶質合金で見られる、動的弾性率が10^2Hzの周波数域で低下する現象および電流密度≒10^7A/m^2の通電による結晶化促進現象は、大規模な原子の集団運動の存在を推測させ、内在する密度揺らぎが直ちに想起され、その把握と機能化への基礎的知見の取得を目的に、現象の定量的評価を目指した。パルス通電によるa-Pd_<80>Si_<20>の結晶化促進では3×10^9A/m^2のパルス通電下で結晶化開始温度が300K以上低下する事を見出した。熱活性化の促進を仮定とすると活性化エンタルピーが1eV程度低下することになる。

降伏応力以下の引張応力下でのパルス通電実験ではa-Cu_<50>Zr_<50>の場合0.4%の塑性変形発現を見出し3×10^9A/m^2のパルス通電時に発生する局所内部応力は0.5GPa以上であると推測した。これらを組み合わせ、結晶化促進を熱活性化促進と仮定すると活性化体積30原子体積にもなり、原子空孔機構とは符号も逆である。すなわち、通電時に発生する局所内部応力は動的過程として考える必要がある。それを定量的に追究する手法として動的弾性特性に及ぼす通電効果評価法の改善を行なった。a-Pd_<80>Si_<20>やZr-Cu-Al系等の弾性率変化が小さい合金系での予備的結果は、自由体積が大きい非晶質合金の方が通電下での弾性率変化量は大きいが、共有結合的元素を含む合金系では全体として弾性率変化量は小さくなることが分かった。さらに、X線装置を導入し回折法を利用する動的過程評価法の開発に着手した。また、人為的密度揺らぎ物質として、ナノ結晶について研究を進め非晶質合金と類似する現象が一部に発現することを見出した。コンデンサの放電法を用いてパルス通電による非晶質合金の結晶化をa-Cu_<50>Ti_<50>およびa-Pd_<80>Si_<20>について系統的に調べた。通電時の試料温度上昇を単位体積当りの投入電気エネルギーP_dの関数として調べ、両者が比例していることを確認後実験を進めた。P_dがある閾値P_<d,c>を越すと結晶化が始まり、P_<d,c>は放電時定数τの関数である。a-Cu_<50>Ti_<50>ではτ1msのときP_<d,c>は極小値2.9J/mm^3を示し、その時の試料温度上昇は130Kである。また、a-Pd_<80>Si_<20>ではτ0.5msのときP_<d,c>は極小値2.1J/mm^3を示し、その時の試料温度上昇は80Kである。この温度と放電時間を時間温度変態図(TTT図)上で比較すると、パルス通電下結晶化は熱活性化のみでは起きない領域で進行していることに成り、原子の集団運動の励起による結晶化進行の考えを支持する。一方、その場合には、電流密度が重要な量である。a-Cu_<50>Ti_<50>ではτ2msのとき臨界初期電流密度i_<d0,c>は極小値1.4x10^9A/mm^2を示し、a-Pd_<80>Si_<20>ではτ0.9msのときi_<d0,c>は極小値2.6x10^9A/mm^2を示す。緩和過程では測定周波数fと緩和時間τの間にf=1/(2πτ)の関係が成立するとき緩和現象が観測される。この関係をa-Pd_<80>Si_<20>に当てはめるとf200Hzが得られる。この振動数域は、力学的振動測定時に原子の集団運動が励起されると推定されるf200Hzと良い一致を示す。このことは、原子の集団運動を電気的あるいは力学的に励起出来ることを示唆する。また、a-Pd_<80>Si_<20>ではパルス通電による結晶化の初期では未知の結晶相が出現することや電流密度を高くすると結晶化が逆に押さえられることが見出された。これらの現象は、パルス通電下結晶化現象についての理論的研究結果を支持している。放電法を用いてパルス通電による非晶質合金の結晶化をa-Cu_<50>Ti_<50>、a-Pd_<80>Si_<20>、a-Zr_<60>Cu_<30>Al_<10>について調べた。共に、放電時定数τが10.5msの時に結晶化開始電流密度i_<d,c>(10^9A/m^2)は極小になり、パルス通電時の試料温度と経過時間を相変態ダイアグラムで評価すると特異な結晶化過程が起きていることが明確になった。a-Cu_<50>Ti_<50>、a-Cu_<50>Zr_<50>、a
ダム下流河道への仮置き土砂供給による低水路の変動と砂礫の分級効果に関する研究

ダム下流の河床低下や流路の固定化対策として,置き土砂による土砂供給法がある.本研究では,主として置き土砂の設置位置(瀬,淵)と粒度構成(一様砂,混合砂)が置き土砂の侵食・流送と下流河道に及ぼす影響について検討した.その結果,瀬への設置は侵食効率が高いこと,置き土砂による河床上昇は流路変動を引き起こすこと,混合砂の方が侵食されやすいが,流路の変動性は一様砂河床に比べて低いこと,等を明らかにした.また,置き土砂の側岸侵食モデルを導入した平面2次元河床変動計算法を提示し,実験結果の再現性について検討した.ダム下流の河床低下や流路の固定化対策として,置き土砂による土砂供給法がある.本研究では,主として置き土砂の設置位置(瀬,淵)と粒度構成(一様砂,混合砂)が置き土砂の侵食・流送と下流河道に及ぼす影響について検討した.その結果,瀬への設置は侵食効率が高いこと,置き土砂による河床上昇は流路変動を引き起こすこと,混合砂の方が侵食されやすいが,流路の変動性は一様砂河床に比べて低いこと,等を明らかにした.また,置き土砂の側岸侵食モデルを導入した平面2次元河床変動計算法を提示し,実験結果の再現性について検討した.河川にダムが築造されると,下流域において河床低下や低水路の固定化などの問題が生じる.これに対する方策の一つとして本研究では置き土砂による土砂供給に着目し,その効果的な運用方法を確立するための基本的な検討を行うことを目的としている.本年度は一様砂河床を対象として,主として置き土砂の設置位置による土砂供給効果について検討した.得られた主要な結果を以下に要約する.1.流れの速い場所に設置した置き土砂は,河床低下に対して高い抑制効果を示す.また,浮州に接岸しない置き土砂は,河床低下の抑制効果が遅れて現れるため,置き土砂自体の侵食・流送の点では低効率である.なお,置き土砂位置によって異なる侵食・流送特性や河床低下の抑制効果が現れる時間差を利用すると,ダム等からの放流量や放流時間間隔と置き土砂の設置位置との組み合わせによって効率的な置き土砂方法の検討が可能となる.2.置き土砂の設置によって水の流れや流砂方向が変化し,低水路が変動するため,効果的な置き土砂は低水路の変動を促進させる効果がある.また,流れの速い場所に設置した置き土砂に対して,遅い場所では澪筋の変動量が相対的に大きい.したがって,生態系を保持するなど,低水路に比較的緩やかな変動が必要な場合は流れの速い場所への置き土砂が適当であり,澪筋の固定化を改善するなど,活発な変動が低水路に要求される場合は流れの遅い場所への置き土砂が適当であると考えられる.3.流れの速い場所への置き土砂では,河床侵食の進行に伴って低水路深さが増加する.したがって,低水路深さの増加抑制の観点からは,流れの遅い場所への置き土砂が有利である.ただし,この位置は置き土砂の侵食効率の点で課題があるため,流れの速い場所への置き土砂を基本として設置し,その置き土砂が流送された後,速やかに次の置き土砂の設置法を検討することが必要である.ダム下流域では河床低下や低水路の固定化などの問題が生じている.これらに対する方策の一つとして本研究では置き土砂による土砂供給に着目し,その効果的な運用方法を確立するための基本的な検討を行うことを目的としている.昨年度は一様砂河床を対象としたが,今年度は混合砂河床を対象として,主として置き土砂の設置位置による土砂供給効果について検討した.また,仮置き土砂の侵食・流送の素過程を明らかにするため,一様砂を用いた固定床での仮置き土砂の流送特性についても検討した.得られた主要な結果を以下に要約する.1.置き土砂の侵食性の観点からは流れの速い瀬に相当する場所への設置が有効であることは混合砂においても認められた.また,全ての砂粒子が移動可能な条件であれば一様砂よりも混合砂の置き土砂の方が侵食は活発であることが示された.2.高効率な置き土砂の侵食・流送によって河床低下は遅延し,その抑制効果が現れる.とくに,混合砂河床では効果的な置き土砂の侵食と水みちの埋め戻しによって,早い段階での抑制効果は高い.なお,時間が経過すると再び河床低下が進行するので,河床低下抑制効果の維持のためには継続的な置き土砂設置とモニタリングが必要である.3.澪筋の変動は一様砂河床よりも混合砂河床の方が抑制される傾向にある.これは,混合砂河床における浮州が安定であることに起因している.ただし,置き土砂のフラッシュ流量の増加や流れの集中によって浮州が不安定になると低水路が変動する可能性は高い.4.固定床での置き土砂の侵食・流送に及ぼす設置位置の効果は移動床と同様の特性を示すが,河床上昇の観点からは流れの遅い場所への設置はその直下流域の河床上昇に寄与する傾向にある.本研究では置き土砂による土砂供給に着目し,その効果的な運用方法を確立するための基本的な検討を行うことを目的としている.今年度は,まず,混合砂を用いた固定床での置き土砂の流送特性について検討し,昨年度実施した一様砂の場合と比較検討した.ついで,平面2次元の河床変動シミュレーションプログラムを構築し,移動床および固定床での実験結果の再現性を検討した.得られた主要な結果を以下に要約する.1.置き土砂の侵食は一様砂よりも混合砂の方が活発である.

これは移動床の場合と同様で,細砂は流れが緩やかな場所でも移動しやすく,細砂の抜け出しによって相対的に露出した粗砂が移動,これらが繰り返されることによって置き土砂の侵食が効率的に行われるためである.また,侵食後の流送については,粗砂は露出効果によって高移動性を示すが,細砂は遮蔽効果によって低移動性を示す.2.置き土砂の設置位置の影響に関して,置き土砂の侵食・流送の観点では流れの瀬に設置した方が高効率である.一方,河床上昇効果の観点では淵に設置した方が狭い範囲での河床上昇は期待できる.ただし,混合砂の場合は全粒径階の土砂が移動可能な流量条件が必要である.3.数値シミュレーションにおける置き土侵食のモデル化に関して,側岸での侵食速度を流砂の連続式に組み入れるモデルを構築した.このモデルは流水の蛇行性や流れの集中が強い場所で効果を発揮する.また,固定床については砂粒子の流動層厚の変化を考慮したモデルを構築し,流送土砂の伝播速度の検討を行った.4.置き土砂の侵食に関しては移動床,固定床とも現象の再現性は良好である.しかし,移動床での置き土砂下流の低水路変動については十分な再現はできなかった.また,両河床とも置き土の侵食・流送による河床上昇効果については,両河床とも良好な再現性を示した.なお,本研究で構築された計算法は実河川にも適用は容易である.
潜在的なリスクをもつ家族の虐待予防に向けた看護職共用のアセスメントツールの開発

本研究は、看護職が潜在的な虐待のリスクをもつ家族をアセスメントするためのツールを開発することを目的とした。小児病棟および救急病棟、小児外来、救急外来、保健センターに勤務する看護職12名の面接調査を行ない、虐待が起こるかもしれないと感じた子どもや家族の言動を抽出した。これらの項目の重視度について、子どもと家族にかかわりをもつ看護職を対象に質問紙調査を実施した。全国500床以上の病院および小児専門病院で、調査の協力に承諾の得られた72病院に勤務している看護職729人に質問紙を送付し郵送にて回収し、326人(回収率44.7%)より回答を得た。子どもと家族の観察項目で看護師が重要視する割合の高い内容をもとに、潜在的な虐待リスクをもつ家族をアセスメントするツールの試案を作成した。本研究の目的は、潜在的な虐待のリスクのある家族を早期に発見し、必要な支援を包括的にアセスメントするために、医療機関の看護職が共用できるアセスメントツールを開発することである。子どもと家族の全体像を把握し、包括的アセスメントを行うためには、(1)できるだけ多くの情報が必要であり、(2)観察・情報に見落としがなく、(3)対処が確実にできる一貫性のある枠組み・要素が必要である。本研究は、このような要素を含んだアセスメントツールの作成をめざしている。今年度は、第一段階として、潜在的な虐待のリスクをもつ家族に対する早期発見や予防的支援の必要性に対する看護職の認識や実態を量的記述的研究方法を用いて明らかにする予定であった。しかし、これまでに明らかになっている虐待のリスク要因以外に、科学的にはまだ実証されていないが、虐待が起こりうるかもしれないと看護職が感じている潜在的なリスク項目を文献検討や事例検討会だけで抽出していくことが非常に難しいことが判明した。そこで、昨年度は、虐待が起こるかもしれないと感じている子どもや家族の行動、態度、状況などを質的な研究方法を用いて明らかにしていくこととした。大学の倫理審査により承認を得、熟練の看護職を対象に面接調査を行った。看護職が、虐待が起こるかもしれないと感じる子どもや家族の言動として、【子どもが年齢に合わず自立している】や【母親の表情が暗い】【視線を合わせない】【子どもの病状にかかわらず全く動じない】などいくつかの子どもと家族の言動が由出されている。現在はこれらの結果を分析中であり、今後、さらに分析を深めて調査項目を抽出し精選して、質問紙を作成する予定である。本研究の目的は、潜在的に虐待のリスクをもつ家族を早期に発見するために、包括的にアセスメントでき、医療機関の看護職が共用して使用できるアセスメントツールを開発することにある。昨年度に引き続き、これまで明らかになっている子ども虐待の発生要因以外で、まだ実証されていないが、子どもや家族と関わっている看護職が、虐待が起こるかもしれないと感じた子どもや家族の言動や状況を看護職へのインタビュー調査から明らかにした。虐待された子どもや家族にかかわった経験のある看護職7名と面接を行い、データ収集を行った。インタビューデータを逐語録に起こし、看護職が虐待を予期した親の言動、子どもの言動、家族の状況、それぞれの視点から、データを詳細に分析した。その結果、親の言動では、<子どもに関心を向けない><子どもへの関わりを避ける><相手との距離がとれない><子どもを拒否している><自分のペースに子どもを合わせる><未熟な行動><言動に矛盾がある>など、親の特徴が抽出された。子どもの言動では、<皮膚の状態が悪い><臭いがする><かまって欲しがる><よい子すぎる><我慢している><誰にでも抱っこを求める><抱っこを求めない><親の前で態度が変わる>など子どもの特徴や行動が抽出された。状況では、<医療を受けさせない><複雑な家庭環境(継父や未婚)><整理整頓ができていない><支援者がいない><他機関からの連絡あり><経済的に不安定>などが抽出された。これらの項目は、看護職がこれまでの子どもや家族との関わりの中からあげた、実践の知識であり、及び文献をもとに、質問項目を精選し質問紙を作成する。本研究の目的は、潜在的な虐待のリスクをもつ家族を早期に発見するために、情報を包括的に収集し、アセスメントできるツールの試案を開発することである。

平成20・21年度は、アセスメントツールの項目を抽出するため、小児病棟および救急病棟、小児外来、救急外来、保健センターに勤務する看護職12名の面接調査から、虐待が起こるかもしれないと感じた子どもや家族の言動を抽出した。<子どもに関する項目>17項目、<子どもへの家族のかかわり>の項目18項目、<家族の様子>18項目、<家族背景>9項目、計62項目であった。これらの項目について、子どもと家族にかかわりをもつ看護職がどの程度重要視しているかを明らかにするため質問紙調査を実施した。全国500床以上の病院および小児専門病院で、調査の協力に承諾の得られた72病院に勤務している看護職729人に質問紙を送付し郵送にて回収し、326人(回収率44.7%)より回答を得た。50,9%が小児病棟勤務であり、38.7%が看護職経験年数は17年以上であった。被虐待児や虐待を疑う家族とかかわった経験があったのは8割以上であった。子どもに関する項目で、看護師の重要視度の高かった項目は、「不審な外傷がある」92.3%、「痛みがあっても訴えない」24.5%、「ごめんなさいとすぐに謝る」20.9%などであった。親の言動に関する項目は、「母親にけがが多い」60.1%、「子どもを抱っこしない」54.3%、「親の説明が矛盾している」49.4%、「必要な訓練や予防接種を受けさせない」49.4%、「子どもを怒鳴り散らしている」43.6%、「子どもの心配を訴えない」40,2%、「子どもとのアイコンタクトがない」33,1%であった。家族の観察項目で看護師が重要視する割合の高い項目を元に、潜在的な虐待リスクをもつ家族をアセスメントするツールの試案を作成した。今後はアセスメントツールの妥当性を検証し、潜在的なリスクをもつ家族を早期発見し、予防的支援につなげていきたい。
食脂肪の嗜好性の形成および維持に関する生化学および動物行動学的研究

近年、モルヒネの依存に脳海馬の神経細胞におけるPI3K/Akt-mTOR経路が関与するということが報告されているが、食品の摂取行動に関与しているかについては不明な点が多い。そこでまずマウスに食脂肪として乳化油脂を摂取させ、その際の海馬Akt及びmTORの活性化レベル(リン酸化状態)をウエスタンブロッティング法により解析したところ、乳化油脂の摂取量の経日的な増加に伴い、海馬Akt及びmTORの活性化が見られた。さらにmTORの下流因子であるp70S6K (70-kDa ribosomal S6 kinase)についても同様に乳化油脂摂取により活性化が見られた。次に、海馬PI3K/Akt-mTOR経路を阻害した際に食脂肪に対する嗜好性に変化が見られるかについて調べるために、マウス両側海馬にPI3K阻害剤LY294002及びmTOR阻害剤Rapamycinを微量投与し、乳化油脂摂取量を測定した。その結果、両阻害剤投与時において乳化油脂の摂取量に低下が見られた。以上より、食脂肪の嗜好性に海馬PI3K/Akt-mTOR経路が関与することが示唆された。今後は、食脂肪摂取時に海馬の神経細胞においてPI3K/Akt-mTOR経路が活性化するかどうかについて免疫組織化学法を用いて検討を行う。また海馬におけるオピオイド受容体が食脂肪摂取時に見られる同経路の活性化に関与しているのかについても行動薬理学手法を用いて検討を行う。生化学的手法を用いた検討により、食脂肪摂取時にマウス脳海馬におけるAkt及びmTORの活性化レベルが上昇することを明らかとした。また行動薬理的手法を用いた検討により、PI3K阻害剤及びmTOR阻害剤を海馬に微量投与した際に食脂肪に対する嗜好性が低下することを明らかとした。これらの結果は、食脂肪の嗜好性に海馬PI3K/Akt-mTOR経路が関与するという申請者の仮説を支持するもので、今後のさらなる解析を進めるにあたり基盤となる中心的なデータであると考えている。以上を鑑みると、現在のところ研究は順調に進展していると判断した。モルヒネの依存に脳海馬の神経細胞におけるPI3K/Akt-mTOR経路が活性化すると報告されている。食脂肪に対する嗜好性についても海馬の神経細胞におけるPI3K/Akt-mTOR経路が関与しているかどうかについて免疫組織化学法を用いて検討を行う。またモルヒネへの執着行動における海馬PI3K/Akt-mTOR経路の活性化はμオピオイド受容体を介していることも報告されている。そこで海馬におけるオピオイド受容体が食脂肪摂取時に見られる同経路の活性化に関与しているのかについて行動薬理学手法を用いて検討を行う。