hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
伸長率勾配を有する場における対向流火炎の局所構造の解明

斜め対向流バーナを用いて、伸長率勾配を有する場にエッジフレームを形成し、実験およびスーパーコンピュータを用いて3次元数値解析により、その特性を調べた。まず、バーナ出口流速を固定して、定在エッジフレームを形成し、その特性を調べた。実験結果において、ルイス数が1より小さい希薄メタン及び過濃プロパンのエッジフレームのエッジ部分においては火炎が強化されていること、一方、ルイス数が1より大きい過濃メタン及び希薄プロパンのエッジ部においては火炎強度が低下していることを明らかにした。この傾向は、同時に行った3次元数値解析においても再現することができた。さらに、実験において観察された低伸長率側で現れた火炎エッジ部の形成要因がバーナ端面への熱損失であることが、数値解析により解明された。定在エッジフレームの特性に引き続き、バーナ出口流速を連続的に変化させた時のエッジ部の動的挙動の調査を行った。任意の位置にエッジフレームを定在させたのち、徐々にバーナ出口流速を変化させて、対応するエッジ部の移動速度を調べた。バーナ出口流速を増加させた時のエッジ部の低伸長率側への移動速度(消炎モード)が、バーナ出口流速を減少させた時のエッジ部の高伸長率側への移動速度(着火モード)より大きいことを明らかにした。また、着火モードにおけるエッジ部の火炎輝度が定在時よりも強くなっていること、一方、消炎モードにおけるエッジ部の火炎輝度が定在時よりも弱くなっていることも明らかとなった。伸長率勾配を有する場に形成された対向流火炎について,3次元、詳細化学反応機構を導入した数値解析コードを開発し、詳細な火炎構造を調べた。ルイス数が1より小さいメタン希薄火炎においては、火炎エッジ部において温度、OH,CHラジカル濃度が他の火炎部分より高くなっていること、一方、ルイス数が1より大きなプロパン希薄火炎では、それらの値が他の火炎部分より低くなっていることを示した。それらの結果は、過去に研究代表者が行った実験結果によく一致する。実験で現れたバーナ壁面への熱損失による火炎エッジ部を、壁面境界条件を等温壁とすることにより計算においても再現することができた。また、実験では得ることができない火炎エッジ部における局所流速ベクトル分布を示すことができ、火炎エッジ部で火炎が強化されるメタン希薄火炎ですら、エッジ部での火炎の結合が起こっていないことを明らかにした。さらに、エッジ部での局所伸長率と同一当量比の平面対向流火炎の消炎伸長率の比を調べた。得られた結果において、双子メタン火炎ではその値が約0.7,双子プロパン火炎で約0.6,単一メタン火炎で約0.9,単一プロパン火炎で約0.9であった。これらの値は実験結果にもよく一致した。実験結果では、それらの伸長率比の値が伸長率勾配に影響を受けたが、計算結果では伸長率勾配には依存しない結果となった。この違いの原因が、実験では当量比を固定せずに計測しているため、当量比の変化の影響も結果に反映されたためであることを明らかにした。
造血前駆細胞から白血病幹細胞への転換機構の解明

本研究において、COP1-Trib1を介したAML発症に重要な増殖・分化制御因子C/EBPalphaの協調因子として、代謝因子Aを新規に同定した。これにより、COP1-Trib1は、C/EBPalphaだけではなく、因子Aのタンパク質分解を誘導することで、AML細胞特有の代謝リプログラミングを誘導し、正常な造血前駆細胞から白血病幹細胞へ機能転換を果たすことが考えられた。そこで、COP1-Trib1の結合領域に点変異を加えた因子A変異体を導入し、AML細胞特異的代謝機構を崩すことで、AMLの発症・悪性化を抑制できるか検証した。実際に、因子A変異体をCOP1-Trib1と共発現させたマウス骨髄細胞では、COP1-Trib1によって惹起される増殖促進効果が顕著に抑制され、細胞内の活性酸素種(ROS)レベルが上昇することを見出した。さらに、COP1-Trib1を介したAML発症マウスモデルの解析では、因子A変異体を共発現させることで、AMLの発症を有意に遅延させると同時に、AML細胞の分化促進効果が認められた。これらの結果から、因子Aは、COP1-Trib1を介したAML細胞特有の代謝リプログラミングを誘導するキー分子の一つであり、AML細胞の細胞がん化に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。すなわち、COP1-Trib1からの分解作用を受けにくい因子A変異体や、因子Aの分解を抑制する分子標的薬は、AML細胞内での因子Aタンパク質発現レベルを維持させ、AML細胞特異的代謝機構を崩すことで、AMLの発症・悪性化を抑制できる可能性がある。さらに、因子Aはあらゆるがん細胞で発現が確認されていることから、AML以外の固形がんへの展開も考えられ、増殖・分化の制御だけでは抑えられない“がん"に対して、代謝の側面から“がん細胞の兵糧攻め"を狙う重要な標的因子となることが期待される。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、白血病幹細胞の骨髄内位置情報の取得と増殖促進・分化阻害・代謝異常の分子レベルでの転換機構の解明を同時に行うことで、位置特異的な細胞内外のシグナル環境を考慮したCOP1-Trib1-C/EBPα経路を介したAML発症機構を解明することが目的である。本年度は、COP1-Trib1-C/EBPaを介したAML発症マウスモデル系の解析から、C/EBPaとの協調因子として代謝制御因子Aに着目し、COP1-Trib1を介したタンパク質分解の標的となることを明らかにした。このことから、COP1-Trib1は増殖・分化を制御する因子C/EBPaと代謝を制御する因子Aの分解を誘導することで、正常細胞に対し増殖・分化・代謝に異常を与え、AMLの悪性化を誘導することが考えられる。今後、マウスのCOP1-Trib1を介したAML発症実験を通して、白血病細胞内の特異的増殖・分化・代謝機構の解析を白血病幹細胞の位置情報を含めて行っていく。具体的には、正常マウスから骨髄を採取後, COP1-Trib1、因子AをGFPで標識したレトロウイルスベクターを用いて取り込ませた骨髄由来細胞を作成し、X線照射したマウスに投与することでAMLを発症するマウスモデルを構築し,因子Aのノックダウンあるいは過剰発現を行う系で解析を進める。本研究の成果により、COP1-Trib1経路を介したAML発症の新たな原因因子の特定が可能となり、新しい白血病治療薬開発や白血病幹細胞に特異的な幹細胞維持機構あるいは細胞分化制御機構に関わる生物学的知見の獲得が期待できる。また、白血病幹細胞の骨髄内位置情報が取得できることで、放射線を用いた標的位置の特定など薬剤治療以外の領域における癌の治療・診断にも貢献が期待でき、白血病根治に向けた幹細胞レベルでの新しい治療指針を拓く鍵となる。本年度は,当研究室で扱うCOP1-Trib1-C/EBPaを介したAML発症マウスモデル系から,骨髄球系の増殖・分化を制御する転写因子C/EBPaの協調因子として代謝を制御する因子Aに着目し, COP1-Trib1が関わる代謝制御因子Aのタンパク質分解機構を解明した.因子AがCOP1-Trib1によって,タンパク質分解作用を受けるのかを明らかにするため,細胞にCOP1, Trib1,因子Aを共発現させ,ウエスタンブロッティング・ユビキチン化アッセイを行い,細胞内の因子Aタンパク質発現レベル・ユビキチン化レベルを解析した.結果, COP1とTrib1,因子Aを共発現させると,細胞内の因子Aタンパク質発現レベルは顕著に抑制され,ユビキチン化が促進することが分かり,因子AはCOP1-Trib1によるタンパク質分解作用を受けていることが明らかとなった.実際に, Trib1と因子A間のタンパク質結合領域を特定後,結合領域を欠失させた因子A変異体を作成し,細胞にCOP1, Trib1,因子A変異体を共発現させ,ウエスタンブロッティングを行ったところ,細胞内の因子Aタンパク質発現レベルは維持され, COP1-Trib1による分解作用の影響が少なかった.これらの結果から, AML内では増殖・分化を制御するC/EBPaと共に代謝を制御する因子Aのタンパク質分解が促進することで,白血病細胞が特異的がん機能制御機構を獲得し, AMLの悪性化を誘導していることが示唆される.本研究において、COP1-Trib1を介したAML発症に重要な増殖・分化制御因子C/EBPalphaの協調因子として、代謝因子Aを新規に同定した。

これにより、COP1-Trib1は、C/EBPalphaだけではなく、因子Aのタンパク質分解を誘導することで、AML細胞特有の代謝リプログラミングを誘導し、正常な造血前駆細胞から白血病幹細胞へ機能転換を果たすことが考えられた。そこで、COP1-Trib1の結合領域に点変異を加えた因子A変異体を導入し、AML細胞特異的代謝機構を崩すことで、AMLの発症・悪性化を抑制できるか検証した。実際に、因子A変異体をCOP1-Trib1と共発現させたマウス骨髄細胞では、COP1-Trib1によって惹起される増殖促進効果が顕著に抑制され、細胞内の活性酸素種(ROS)レベルが上昇することを見出した。さらに、COP1-Trib1を介したAML発症マウスモデルの解析では、因子A変異体を共発現させることで、AMLの発症を有意に遅延させると同時に、AML細胞の分化促進効果が認められた。これらの結果から、因子Aは、COP1-Trib1を介したAML細胞特有の代謝リプログラミングを誘導するキー分子の一つであり、AML細胞の細胞がん化に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。すなわち、COP1-Trib1からの分解作用を受けにくい因子A変異体や、因子Aの分解を抑制する分子標的薬は、AML細胞内での因子Aタンパク質発現レベルを維持させ、AML細胞特異的代謝機構を崩すことで、AMLの発症・悪性化を抑制できる可能性がある。さらに、因子Aはあらゆるがん細胞で発現が確認されていることから、AML以外の固形がんへの展開も考えられ、増殖・分化の制御だけでは抑えられない“がん"に対して、代謝の側面から“がん細胞の兵糧攻め"を狙う重要な標的因子となることが期待される。前年度は,当研究室で扱うCOP1-Trib1-C/EBPaを介したAML発症マウスモデル系から,骨髄球系の増殖・分化を制御する転写因子C/EBPaの協調因子として代謝を制御する因子Aに着目し, COP1-Trib1が関わる代謝制御因子Aのタンパク質分解機構を解明した.本年度では,因子Aの分解がAMLの発症にとって重要なのか,また,因子Aの分解はどういった側面からAMLの悪性化を導くのか,AML発症マウスモデル系を用いて研究を進める.現在,正常マウスから骨髄を採取後, COP1-Trib1-因子AをGFPで標識したレトロウイルスベクターを用いて取り込ませた骨髄由来細胞を作成し, X線照射したマウスに投与することでAMLを発症するマウスモデルを構築し,因子Aのノックダウンあるいは過剰発現を行う系で解析を進めている.特に, 1.因子AのノックダウンはAMLの早期発症を誘導するのか,逆に過剰発現はAMLの発症を遅延させるのか, 2.ノックダウン系あるいは過剰発現系のマウス体内において,白血病細胞の増殖,分化,代謝機構はどのような変化を受けているのか, 3. AMLを発症したマウスの骨髄内における,白血病幹細胞の位置情報と因子Aの発現分布に相関があるのか,に焦点を当てる. AMLを発症したマウスに対し,フローサイトメトリーを用いて、白血病幹細胞を含めた各分化段階の細胞回収・機能解析,ギムザ染色による芽球数,形態比較,輪切り化した骨髄内における代謝因子Aと白血病幹細胞の発現位置解析等を通じて,造血前駆細胞から位置特異的に出現する白血病幹細胞への具体的な転換機構を分子レベルで明らかにしていく.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
多面的応用が可能な高感度キナーゼ蛍光アッセイ系の開発

筆者は、リン酸化されたセリンとトレオニンの化学的性質に着目したセリンートレオニンキナーゼの新規蛍光検出法の開発を進めている。具体的には、まず固相に担持した基質ペプチドに、キナーゼを作用させてリン酸化を行い、続く塩基性条件下でのリン酸基のβ脱離により、セリン及びトレオニン残基が炭素-炭素二重結合を有するように誘導化する。この二重結合はマイケル付加を受けやすいため、チオール基等をもつ蛍光性化合物の添加により、リン酸基を有していたセリン或いはトレオニン残基を蛍光性に変換するというものである。既に、固相としてビーズを用いた系で、本検出原理を用いたプロテインキナーゼA活性、カゼインキナーゼ活生の検出に成功しており、本検出原理の一般性が示されている。さらに、本検出系がキナーゼ阻害剤の評価にも用いうることが明らかとなっている。だが、幾つかの問題点が浮き彫りとなった。本検出法最大の問題点は、基質ペプチドのリン酸化段階にある。現在はビーズに固定化したペプチドを基質としているが、巨大な酵素はビーズ内に浸透できず、基質ペプチドがリン酸化されないことが明らかとなった。そこで、固相としてガラスプレートの使用を計画した。プレートを用いた場合、酵素反応は固相表面で進行し、酵素サイズの影響を受け難いと考えられる。また市販のプレートリーダーを用いることで、大幅な集積化、ハイスループット化が可能になる。ローダミンを蛍光団とする新規蛍光色素10種を設計、合成し、市販のプレートリーダーに適用可能で、本アッセイ系に適用しうる新規蛍光試薬の開発に成功した。ペプチドを担持する固相として、様々なプレートアレイを検討したところ、その表面加工により、非特異的な蛍光の強度が大きく異なることが明らかとなった。現在最適なプレートを探索中である。筆者は、セリン-トレオニンキナーゼの新規蛍光検出法の開発を進めている。その原理は、リン酸化されたセリンとトレオニンの化学的性質に着目したものである。具体的には、まず固相に担持した基質ペプチドに、キナーゼを作用させリン酸化を行い、続く塩基性条件下でのリン酸基のβ脱離により、セリン及びトレオニン残基が炭素-炭素二重結合を有するように誘導化する。この二重結合はマイケル付加を受けやすいため、チオール基等をもつ蛍光性化合物の添加により、リン酸基を有していたセリン或いはトレオニン残基が蛍光性に変換するというものである。既に、固相としてビーズを用いた系で、本検出原理を用いたプロテインキナーゼA活性の検出に成功している。本検出原理の一般性を明らかにする目的で、異なるペプチド配列を基質とするカゼインキナーゼ活性の検出を試みたところ、ほぼ同じ条件でカゼインキナーゼ活性の検出にも成功し、本検出原理の一般性が示された。さらに、PKA阻害剤の添加により蛍光強度の阻害剤濃度依存的な減弱が見られ、本検出系がキナーゼ阻害剤の評価にも用いうることが明らかとなった。しかしその過程で、幾つかの問題点が浮き彫りとなった。また市販のプレートリーダーを用いることで、大幅な集積化、ハイスループット化が可能になると考えられる。現在用いている蛍光試薬の励起波長、蛍光波長は市販のプレートリーダーでは検出することが出来ないため、蛍光試薬の改良を中心に研究を進めている。
新規血圧調整因子アドレノメデュリン関連ペプチドの合成及びその構造活性相関研究

本年度の研究の実施結果について以下に述べる。1.生物活性の検定に供するアドレノメデュリン(AM)関連ペプチドhAM(1-15), hAM(15-31), hAM(22-52)の合成をFmoc型固相ペプチド合成法により行い,最終脱保護はほうふっ化水素酸法を用いて行った。得られた粗製品をHPLCにて精製を行うことで高純度の目的物を得た。2.それぞれの生物活性を測定してみたが,いずれも低いcAMP上昇活性しか示さなず有用な知見が得られなかったので,これらを免疫科学的な研究に使用することにした。即ち,AMのN末端部hAM(1-15),ジスルフィド結合を含有する中央部分hAM(15-31)及びC末端部分hAM(22-52)に対するモノクローナル抗体の作成を試みた。その中で,ジスルフィド結合を含有する中央部分hAM(15-31)に関して,モノクローナル抗体を得ることができた。3.抗体は特異的且つ高親和性(Ka=2.5X10^<10>M-1)を示し,このラジオイムノアッセイ系(RIA)はヒト及びラットのAM等モルを認識し,IC_<50>値は8fmol/tubeと高感度であった。このRIAによりウシ内皮細胞,ラット血管平滑筋細胞及びメサンギウム細胞培養上清AM免疫様活性を検出した。以上,AMに対し特異的且つ高親和性のモノクローナル抗体を作成できた。この抗体は今後のAMの生理学的意義の解明に有用であろうと考えている。しかしながら,当初の目的であるcAMP上昇活性を指標とした構造活性相関の研究はあまり進展させることができなかった。今回,免疫科学的な研究に関して大きな成果がえられたが,今後はAMの別の部分をターゲットに構造活性相関の研究を行う予定である。
超薄膜を塗布した磁気ディスクの三次元表面力に関する研究

マイクロ・ナノテクノロジーの分野では,表面カの効果が支配的となるため,ナノメートル厚さの潤滑剤を介した相対運動の特性への関心が高まっている.とくに磁気ディスク装置においては,潤滑膜の厚さは1ナノメートルまで薄膜化されており,ヘッドディスクインタフェースの信頼性を確保するため,動的な表面カの定量化が重要な課題となっている.本研究では,表面カの動的測定のための装置の開発および超薄膜を介した二表面の相互作用モデルを構築することを目的とした.1.実験装置の構成光学干渉面としてシリコン光学反射面付きのカンティレバーを導入し,従来と比較して変位については約5倍,傾きについては約9倍精度を向上させた.2.画像処理方法の構築シリコン光学反射面付のカンティレバーの導入により,新たに放物線回帰による最小二乗近似法を用いた干渉縞のピーク検出を可能にし,直線性の高い尾根線が得られた.これらの結果として変位・傾きともに測定精度を約1.3倍向上させた.3.表面力の計測PFPE系(FOMBLIN Z-DOL 2000)の潤滑剤を塗布した磁気ディスク表面を用いて,触針の垂直方向への分離実験を行った.分離過程のメカニズムとして有限分離モデルを導入し,数値計算により分離時の接触力と潤滑膜の伸びを求める方法を開発した.この方法により速度増加とともに接触力が微増し,膜の伸びも増大して,膜厚の100倍にも達する可能性があることを明らかにした.4.分離現象の膜厚依存性精密な分離モデルを構築するために,種々の厚さの潤滑膜を用いて実験を行い,膜厚が大きいと過渡振動の振幅が突然増大する現象を発見した.この現象は,潤滑膜による引力が液膜の伸びに従って滑らかに0になるモデルでは説明できないことを示し,0でない一定の引力が作用した状態から,瞬間的に開放されるモデルを用いて説明できることを示した.マイクロ・ナノテクノロジーの分野では,表面力の効果が支配的となるために,ナノメートル厚さの潤滑剤を介した相対運動の力学的な特性に関心が高まっている.とくに磁気ディスク装置においては,ディスク表面の潤滑剤の厚さが1nmまで薄膜化されており,ヘッドディスクインターフェースの信頼性を確保するために,動的な表面力の定量化が重要な課題となっている.そこで本研究では,表面力の動的測定のための装置の開発および超薄膜を介した2表面の相互作用のモデルを構築することを目的としている.1.実験装置の構成(1)三次元変位可能なチューブスキャナを導入し,試料の水平駆動を可能にした.チューブスキャナは,各軸間の連成は避けられない構造であるが,チューブ面に円周上に配置された4枚の圧電素子に電圧を印加する場合に,連成を最小にする組み合わせと電圧の印加方法が存在することを確認した.この方法を用いて,水平方向の変位に連成する垂直変位を25%減少させた.(2)シリコン光学反射面付のカンティレバーを導入し,従来と比較して,変位については約5倍,傾きについては約9倍精度を向上させた.2.画像処理方法の開発シリコン光学反射面付のカンティレバーの導入により,新たに放物線回帰による最小二乗近似法を用いた干渉縞のピーク検出を可能にした.この結果,直線性の高い尾根線が得られた.この結果,変位・傾きともに測定精度を約1.3倍向上させた.3.表面力の計測磁気ディスク表面に潤滑剤としてPFPE系(FOMBLIN Z-dol 2000)を用いて,触針の垂直方向への分離実験を行った.分離過程のメカニズムとして有限分離モデルを導入し,数値計算により分離時の接触力と潤滑膜の伸びを求める方法を開発した.この方法により速度増加とともに接触力が微増し,膜の伸びも増大して,膜厚の百倍にも達する可能性があることを明らかにした.マイクロ・ナノテクノロジーの分野では,表面カの効果が支配的となるため,ナノメートル厚さの潤滑剤を介した相対運動の特性への関心が高まっている.とくに磁気ディスク装置においては,潤滑膜の厚さは1ナノメートルまで薄膜化されており,ヘッドディスクインタフェースの信頼性を確保するため,動的な表面カの定量化が重要な課題となっている.本研究では,表面カの動的測定のための装置の開発および超薄膜を介した二表面の相互作用モデルを構築することを目的とした.1.実験装置の構成光学干渉面としてシリコン光学反射面付きのカンティレバーを導入し,従来と比較して変位については約5倍,傾きについては約9倍精度を向上させた.2.画像処理方法の構築シリコン光学反射面付のカンティレバーの導入により,新たに放物線回帰による最小二乗近似法を用いた干渉縞のピーク検出を可能にし,直線性の高い尾根線が得られた.これらの結果として変位・傾きともに測定精度を約1.3倍向上させた.3.表面力の計測PFPE系(FOMBLIN Z-DOL 2000)の潤滑剤を塗布した磁気ディスク表面を用いて,触針の垂直方向への分離実験を行った.分離過程のメカニズムとして有限分離モデルを導入し,数値計算により分離時の接触力と潤滑膜の伸びを求める方法を開発した.この方法により速度増加とともに接触力が微増し,膜の伸びも増大して,膜厚の100倍にも達する可能性があることを明らかにした.4.分離現象の膜厚依存性精密な分離モデルを構築するために,種々の厚さの潤滑膜を用いて実験を行い,膜厚が大きいと過渡振動の振幅が突然増大する現象を発見した.

この現象は,潤滑膜による引力が液膜の伸びに従って滑らかに0になるモデルでは説明できないことを示し,0でない一定の引力が作用した状態から,瞬間的に開放されるモデルを用いて説明できることを示した.
パラトグラフィ-による調音動作計測の補綴処置への応用

口蓋裂や顎欠損を有する被験者の補綴処理前後の発音機能改善の評価を行うために、音響学的解析を行い、以下の結果を得た。被験者は、欠損が硬口蓋に限局している者が2名(グル-ブI)、欠損が軟口蓋まで及んでいる者が1名(グル-プII)、欠損が軟口蓋後緑まで及んでいる者が2名(グル-プIII)の5名である。被験音は、無声破裂音、有声破裂音、弾音である。1.発音明瞭度検査では、グル-プI、IIは義歯装着前には低いが、装着後に向上した。グル-プIIIは、装着前後とも明瞭度は低い。2.Nasometer(6200ー2型)により、処置前後での鼻漏出気流を測定し、正常者10名のデ-タと比較した。グル-プI、IIは、義歯装着前のNasalance値は高いが、装着後に正常者のNasalanc値に近づいた。グル-プIIIは、装着前後のNasalance値は、グル-プI、IIに比べて全体的に高い。しかし、被験音別に見ると、装着後に改善された音もある。Threshold、Time historyについても同様の傾向が見られた。3.音声周波数分析装置による3次元ソナグラムによって、破裂音では、(1)spike fill(2)子音前の空白(3)母音への移行(4)母音ホルマント、弾音では、(1)子音部、(2)移行部に着目し、各々の要素に正常3点、やや異常2点、異常あり1点、まったく異常0点と4段階の評点を与えて評価した。そして、子音の合計点数の満点に対する%をその子音のソナグラム正常度とし、正常者10名のデ-タと比較した。その結果、ソナグラム正常度は、グル-プI、IIでは、義歯装着後に明らかに向上し、グル-プIIIでも、装着後にはやや向上する傾向が見られた。本年度の研究実施計画に従って、口蓋裂や顎欠損を有する被験者の処置前後について、Nasometer(6200-2型)により鼻漏出気量を測定、記録し解析を進めている。1.口蓋裂や顎欠損を有する被験者の補綴処置前後のパラトグラムを採得し、得られたパラトグラムをビデオカメラにて入力し、ビデオプリンタ-に記録した。2.同一条件で採得された5枚のパラトグラム像を画像処理装置によって積算処理して、平均化したパタ-ンの外形線と歯列とを同一基準点で重ね合わせて表示するプログラムを作製した。これをビデオプリンタ-でプリントアウトして、画像を観察し、パラトグラムの異常度を数値化して分析を行った。3.Nasometerにより、補綴処置前後での鼻漏出気流を計測するために、発音検査語表を用いて発音させた。モニタ-上に描かれたナソグラムを解析し、プリンタ-により必要な画面をプリントアウトして、計測時の確認および記録の保存を行っている。4.音声周波数分析装置(DSP Sona-Graph 5500)をNasometerと同期させて、発音時の声紋を同時に記録し解析を行っている。なお、声紋は、カラ-ビデオプリンタ-によって、必要な画面をプリントアウトして計測時の確認および記録の保存に用いた。5.以上のように、パラトグラムとソナグラム、さらに声紋の検査結果を総合して比較検討する方法を確立し、さらに多くの症例について計測を行っている。

口蓋裂や顎欠損を有する被験者の補綴処置前後の発音機能改善の評価を行うために、音響学的解析を行い、以下の結果を得た。被験者は、欠損が硬口蓋に限局している者が2名(グル-プI)、欠損が軟口蓋まで及んでいる者が1名(グル-プII)、欠損が軟口蓋後縁まで及んでいる者が2名(グル-プIII)の5名である。被験者は、無声破裂音、有声破裂音、弾音である。1.発音明瞭度検査では、グル-プI、IIは義歯装着前には低いが、装着後に向上した。グル-プIIIは、装着前後とも明瞭度は低い。2.Nasometer(6200ー2型)により、処置前後での鼻漏出気流を測定し、正常者10名のデ-タと比較した。グル-プI、IIは、義歯装着前のNasalance値は高いが、装着後に正常者のNasalance値に近づいた。グル-プIIIは、装着前後のNasalance値は、グル-プI、IIに比べて全体的に高い。しかし、被験音別に見ると、装着後に改善された音もある。Threshold、Time historyについても同様の傾向が見られた。3.音声周波数分析装置による3次元ソナグラムによって、破裂音では、(1)spike file(2)子音前の空白(3)母音への移行(4)母音ホルマント、弾音では、(1)子音部、(2)移行部に着目し、各々の要素に正常3点、やや異常2点、異常あり1点、まったく異常0点と4段階の評点を与えて評価した。そして、子音の合計点数の満点に対する%をその子音のソナグラム正常度とし、正常者10名のデ-タと比較した。その結果、ソナグラム正常度は、グル-プI、IIでは、義歯装着後に明らかに向上し、グル-プIIIでも、装着後にはやや向上する傾向が見られた。
Viroporinを標的とした新たなウイルス感染症治療法の創出

Viroporinはウイルスのコードする膜タンパク質で、ウイルス粒子の放出を制御している。本研究は、JCウイルスのViroporinであるagnoproteinを標的とした新たなウイルス感染症治療法の開発を目指し、Viroporin活性に必須となるagnoprotein結合宿主因子としてリソソームへの小胞輸送を担うAP3Dを同定した。さらに、AP3Dのagnoprotein結合領域を過剰発現させることによりagnoproteinのViroporin活性を抑制し、JCウイルス感染を抑制することに成功した。「Viroporinを標的とした新たなウイルス感染症治療法の創出」ウイルスの感染サイクルにはウイルスによって様々なステップが存在するが、一般的にウイルスが感染を拡大させていくためには感染サイクルの最終段階として複製した子孫ウイルスを細胞外へ放出する必要がある。エンベロープを持たないウイルスの多くは、その感染の最終ステップにおいて感染細胞を破壊(Cell lysis)することにより、細胞外へと放出されると考えられているが、これは「Viroporin」というウイルスタンパク質による直接的な形質膜への傷害によるものと考えられている。本研究課題では申請者らが機能同定したJCウイルスのAgnoを研究材料として用いて「Viroporinを標的とした新たなウイルス感染症治療法を創出する」ことを目的とする。細胞表面上に存在する膜タンパク質の機能を特異的に制御する物質を得る方法として最も簡単で汎用されているのは特異的な抗体を作成することであり、平成21年度はAgnoを発現させた細胞をマウスに免疫する事により、Agnoの細胞外領域を認識するモノクローナル抗体の作成を試みた。現在、一次スクリーニングを終えた段階で、Agnoを発現させた細胞に強く反応するクローンが20個程得られた。また、クローンの選択に当たりAgnoの機能を効率良く評価できるようにカルシウムイオンプローブのYC3.60を安定的に発現し、Agnoを誘導発現できる細胞株SVG-AG-YC3.60を樹立した。今後は、このクローンの中からAgnoの機能を抑制するクローンをSVG-AG-YC3.60細胞を用いて選択し、さらにこのクローンによる感染抑制について検討する予定である。近年、Viroporinと総称されるイオンチャネル様の複合体を形成するウイルスタンパク質の存在が提唱されている。Viroporinは感染細胞からのウイルス粒子放出に関わっており、ノンエンベロープウイルスにおいてはウイルス粒子を細胞外へ放出するための細胞破壊のイニシエーターと機能していると考えられている。我々は、ヒトの進行性多巣性白質脳症の原因ウイルスであるJCウイルスのagnoprotein(Agno)というウイルスタンパク質がViroporinとしての機能を有している事を見いだし、このタンパク質の機能抑制によりウイルス感染を抑制できることを明らかにしている。本研究課題では、JCウイルスのAgnoを題材としてViroporin活性を抑制する事によりウイルス感染を抑制する新規治療法の開発を試みた。まず、Agnoを発現する細胞を免疫する事により細胞表面上に発現するAgnoを認識し、その機能を抑制するモノクローナル抗体の作成を試みた。しかしながらAgnoを発現した細胞特異的に反応する抗体は作成する事ができたもののAgnoを認識する抗体は得る事ができなかった。Agnoの細胞外領域は非常に小さく通常の方法ではAgnoの細胞外領域にアクセスできるモノクローナル抗体の作成は困難であると考えられた。そこで本年度は、Agnoに結合する宿主分子を同定し、それとの相互作用とAgnoのviroporin機能との関連性について解析した。その結果、AgnoがViroporinとして機能するためには、Agnoがこの分子に結合し、その機能を阻害する事が必須である事が明らかとなった。また、この分子のAgno結合領域のみを発現させた細胞では、Agnoのviroporin活性が低下し、ウイルス感染が抑制する事が明らかとなり、この相互作用がウイルス感染症の標的となりうる事を示した。
強相関酸化物のナノ空間制御による10-100ｎｍスケール電子相の相転移特性解明

従来不可能で有ったサイズが10-100 nmの強相関電子系マンガン酸化物、ニッケル酸化物の極微3次元ナノ構造を独自の手法で作製し、物性の起源であるナノ電子相ドメインを閉じ込め制御した状態を作り出し、3次元ナノ構造体において単一ナノ電子相の外場(温度、磁場、キャリア数)に応答した金属-絶縁体相転移を測定し、電子相関効果特性を明らかにすること、さらにナノ電子相物性を明らかにすることを目的として実験を行った。独自のナノ構造作製技術3DナノテンプレートPLD法を用いることで、線幅80 nmの(La,Pr,Ca)MnO3ナノ細線チャネル電界効果トランジスタ(EDLT)を作製し、電界効果による金属絶縁体相転移(MIT)スイッチングを実現した。また、試料サイズを1/1000にすることでVO2内に形成される電子相ドメインを閉じ込め、IMT時の抵抗変化率を40倍に向上させられることを示した。100 nm線幅のNdNiO3ナノ細線で、ナノ電子相の閉じ込め効果による抵抗のステップ変化の観察に成功した。これはニッケル酸化物では初めてとなるナノ電子相閉じ込め効果観察結果である。NdNiO3内の電子相サイズは30-50 nmと推定される。SmNiO3エピタキシャル薄膜EDLTで105以上の抵抗変調を観察し、その機構が、イオン液体界面での酸素イオン授受に起因することを明らかにした。さらに電圧印加条件の調整による還元反応の進行度の制御によりワイドレンジで抵抗変調度を調整することに成功した。さらに、チャネルサイズを1/100の100 nmサイズにすると変調に必要な電圧が大幅に低下(3 V→1 V)することが分かった。これは反応の起点が10-100 nmサイズの電子相であることに起因すると考えている。29年度が最終年度であるため、記入しない。典型的な強相関電子系酸化物である(La,Pr,Ca)MnO3 (LPCMO)およびVO2の転移過程ではナノ相分離現象が見られ、金属相と絶縁相が101-103nmサイズで共存する。絶縁体-金属転移(IMT)発現の最小単位である単一電子相の物性をデバイスとして制御した新奇ナノデバイス展開を目指して、独自技術であるボトムアップ手法であるパルスレーザー堆積法(PLD)を主とした3DナノテンプレートPLD法を用い、サイズ・位置を精密に制御した極微細なナノウォール細線(nw)構造を作製した。電子相物性を明らかにするために、にナノウォール細線の測定領域をナノスケールにまで局所化し、数個程度のナノ電子相の転移特性観測を行った。さらに、ナノ電子相の特性を電界で直接制御することを期待目的としnwトランジスタのデバイス構造の創製を行った化を試みた。線幅80 nmのVO2 nw細線は、350 K付近でIMTに伴う抵抗変化を示し、薄膜では観測されなかった微小な抵抗の飛びが観測された。これは細線中にナノ電子相が閉じ込められている約150個の電子相のIMTに由来する。ナノ電子相のサイズ・数を定量的に評価するために行ったシミュレーションからを行った。その結果、電子相の大きさは30-50 nmと示唆された同定された。さらに電極間距離の縮小により、電子相10個のIMTを反映したsteepな抵抗変化を抽出することに差成功した。マンガン酸化物では、線幅80 nmのLPCMOナノウォール細線をチャネルに持つFETの創製に成功した。このナノ細線EDLTのゲート電圧印加時のチャネルの抵抗を観察することに成功した。VG = 0 Vでは96 KでIMTが起きているが、-2 V印加により転移温度の高温シフト、抵抗変化率の減少が観測された。今後はチャネルのナノ構造化の効果を明らかにし、ナノデバイス展開への指針を得ていく。初年度に計画していた、従来不可能で有ったサイズが10-100 nmの強相関電子系マンガン酸化物、ニッケル酸化物の極微3次元ナノ構造(ナノワイヤ、ナノウオール)を独自の手法で作製し、物性の起源であるナノ電子相ドメインを閉じ込め制御した状態を作り出す、は計画通り遂行できた。単一電子相の金属-絶縁体転移特性の評価も行い、シュミレーションと組み合わせることでVO2の転移点の分布を明らかにできた電子相ドメインサイズの分布測定んは至らなかったが、次年度の課題であるナノ電子相ドメイン評価測定を少し前倒しで実施できた。

100 nm線幅のNdNiO3ナノ細線で、ナノ電子相の閉じ込め効果による抵抗のステップ変化の観察に成功した。これはニッケル酸化物では初めてとなるナノ電子相閉じ込め効果観察結果である。NdNiO3内の電子相サイズは30-50 nmと推定される。SmNiO3エピタキシャル薄膜EDLTで105以上の抵抗変調を観察し、その機構が、イオン液体界面での酸素イオン授受に起因することを明らかにした。さらに電圧印加条件の調整による還元反応の進行度の制御によりワイドレンジで抵抗変調度を調整することに成功した。さらに、チャネルサイズを1/100の100 nmサイズにすると変調に必要な電圧が大幅に低下(3 V→1 V)することが分かった。これは反応の起点が10-100 nmサイズの電子相であることに起因すると考えている。本研究の成果はヘテロ構造による様々な物質のナノ細線化の可能性を与えると共に、試料の微細化、測定領域の局所化が物性の本質の解明や応答性の巨大化に有効であることを実証した。この起源である電子集団の配置・特性分布を、空間分解能を有する物性測定・分光法(コンダクティブ原子間力顕微鏡:c-AFM)、申請者らが確立したエネルギー移動カソードルミネッセンス走査型電子顕微鏡(ETCL-SEM)により明らかにする。加えて、転移特性の外場応答性の測定を行い、相転移特性の相関関系を調べる。29年度が最終年度であるため、記入しない。
骨芽細胞増殖における蛋白質脱リン酸化酵素による核内蛋白の調節

今回の申請は蛋白質脱リン酸化酵素1型(PP1)のアイソフォームであるPP1δがNucleolinを脱リン酸化反応の基質としているか、また蛋白質脱リン酸化反応が骨芽細胞においてどのような役割を果たしているかを解明することが目的である。PP1と核内蛋白が骨芽紙胞においてどのような相互関係を持つか検討し、骨芽細胞の増殖およびアポトーシスを蛋白質脱リン酸化の観点より解明する。1.培養細胞に二本鎖RNAを導入し、RNAiを生じさせPP1δの発現を抑制した。その際に他のPP1アイソフォームの発現に影響を与えないこと、細胞の形態的な変化は生じないことを明らかとした。これら結果の一部はJ Enzyme Inhib Med Chem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。2.正常増殖状態での骨芽細胞においてNucleolinとPP1δは核小体に局在し、互いに結合していた。また細胞周期進行を阻害した細胞ではこれら分子の発現量が変化することおよびNucleolinのリン酸化状態が変化することを明らかとした。これら結果の一部はJ Histochem Cytochem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。3.蛋白質脱リン酸化酵素をオカダ酸により阻害するとRANKLが発現すること、NF-kBを介してFas, FasLが発現すること、PKR-eIF2α経路が活性化され蛋白質新合成が停止すること、またこれらの経路がLPSによる炎症反応に関与すること、さらに最終的にアポトーシスが生じることを明らかとした。これらの結果の一部はBiomed Res誌、Oral Oncol誌およびJ Biochem誌に発表した。残りの結果については現在論文投稿中である。以上に示すように、現在までにNucleolinとPP1の相互関係を明らかとし、さらに細胞の転写、翻訳、炎症応答、アポト-シスにおける蛋白質脱リン酸化の関与を明らかとする結果を得ている。PP1と核内蛋白が骨芽細胞においてどのような相互関係を持つか検討し、骨芽細胞の増殖およびアポトーシスを蛋白質脱リン酸化の観点より解明する。1.正常増殖状態での骨芽細胞においてNucleolinとPP1δはどちらも核小体に局在し、互いに結合していた。また細胞周期進行および核小体機能を阻害した細胞ではこれら分子の細胞内局在や発現量が変化することおよびNucleolinのリン酸化状態が変化することを明らかとした。2.培養細胞に二本鎖RNAを導入し、RNAiを生じさせPP1δの発現を抑制した。これについてはさらに他のアイソフォームの抑制を試みているところである。3.蛋白質脱リン酸化酵素をオカダ酸のより阻害すると、転写因子EGR-1が抑制されること、またPKR-eIF2α経路が活性化され蛋白質新合成が停止すること、およびNucleolinが分解されること、さらに最終的にアポトーシスが生じることを明らかとした。これらの結果の一部はOral Oncol誌およびBiochem Biophys Res Commun誌に発表した。以上に示すように、現在までにNucleolinとPP1の相互関係を明らかとし、さらに細胞の転写、翻訳、アポトーシスにおける蛋白質脱リン酸化の関与を明らかとする結果を得ている。
細胞外環境に応答したリボソームRNA遺伝子のメチル化制御メカニズムの解明

細胞外環境に応じたrDNAのメチル化状態の変化について、rRNA転写抑制因子NMLによるDNAメチル化酵素(DNMT)の制御に着目し、その分子メカニズムを明らかにすることを目的とし、研究を進めている。rDNAのメチル化状態が変化するとrRNA転写量が変化すると考えられるため、まず、細胞外環境を変化させた細胞におけるrRNA転写量を定量RT-PCR法を用いて検討した。これまでに、培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度、細胞密度を変化させたときに、rRNA転写量が変化することを明らかにした。細胞密度を上げたときにrDNAメチル化が上昇することも明らかになった。このことは、細胞外環境によってrDNAのメチル化状態が変化することを示している。また、NMLがDNMTのrDNA上へのリクルートに関わることも明らかになっている。今年度は、NMLによるDNAメチル化の制御を、マウスを用いた個体レベルで示すことを目標に研究を行った。共同研究者とともに、NMLノックアウトマウスを作成した。NMLを完全に欠損したマウスは、胎児期に死亡するものが多く、一部だけが生育することが明らかになった。この胎児期の死亡の原因は明らかにできていないが、NMLが胎児の発育に重要であることが示唆された。さらに、生育したNML欠損マウスの肝臓において、rRNAの転写が亢進していることが示され、マウス個体の肝臓においてもNMLが機能していると考えられた。興味深いことに、通常のマウスに高脂肪食を与えて過栄養状態にすると、脂肪肝を引き起こすが、NML欠損マウスでは肝臓は正常のままだった。この結果から、NMLがエネルギー状態という環境応答に重要な役割を果たすことが示唆された。rDNAのメチル化状態についても解析を進めている。細胞外環境に応じたrDNAのメチル化状態の変化について、rRNA転写抑制因子NMLによるDNAメチル化酵素(DNMT)の制御に着目し、その分子メカニズムを明らかにすることを目的とし研究を進めている。培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度、細胞密度を変化させたときに、rRNA転写が変化した。本研究員は、メチル基感受性制限酵素HpaIIと定量PCRを用いて、rDNAのメチル化状態を定量的に測定する系を立ち上げた。この実験系を用いて、rRNA転写量が変化する細胞外環境下でrDNAメチル化状態を検討した。培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度を変化させたときにはrDNAのメチル化状態は変化しなかった。細胞密度を上げたときには、rDNAのメチル化状態が上昇することが明らかになった。このことから、細胞密度が高くなり、コンタクトインヒビションがかかって細胞増殖が抑制された状態では、rDNAのメチル化が亢進しrRNA転写が抑制されることが示唆された。先行研究により、NMLはNAD^+依存的ヒストン脱アセチル化酵素SIRT1やヒストンメチル化酵素SUV39H1と複合体を形成することが示されている。加えて、NMLはDNMTとも複合体を形成することが明らかになった。哺乳類は、DNAメチル化酵素としてDNMT1、DNMT3A、DNMT3Bの3種類を持つことが知られている。NMLはそのどれとも複合体を形成することを免疫沈降法によって明らかにした。さらにこの結合は直接的であることが、GST-pull down法によって示された。以上の成果は、DNAメチル化の制御機構を明らかにすることにつながると考えられる。培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度、細胞密度を変化させたときに、rRNA転写量が変化した。また、rDNAメチル化状態を検討したところ、培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度を変化させたときにはrDNAのメチル化状態は変化しなかったが、細胞密度を上げたときには、rDNAのメチル化状態が上昇した。NMLはDNMTと複合体を形成することを明らかにしており、細胞密度の高い状態でのrDNAのメチル化にNML・DNMT複合体が関与していることが考えられた。そこで次に、クロマチン免疫沈降法を用いて、rDNA上へのNML・DNMT複合体のリクルートについて解析した。その結果、細胞密度の高い状態では、NML、DNMT3BがrDNA上への結合を強めていることが明らかになった。さらに、NMLをノックダウンするとDNMT3BのrDNA上への結合が弱まることも示された。これらのことから、NMLはDNMT3BのrDNA上へのリクルートに関与し、細胞外環境に応じたrDNAメチル化の制御を行うことが考えられる。

rDNAのメチル化状態が変化するとrRNA転写量が変化すると考えられるため、まず、細胞外環境を変化させた細胞におけるrRNA転写量を定量RT-PCR法を用いて検討した。これまでに、培養液中のグルコース濃度、血清濃度や酸素濃度、細胞密度を変化させたときに、rRNA転写量が変化することを明らかにした。細胞密度を上げたときにrDNAメチル化が上昇することも明らかになった。このことは、細胞外環境によってrDNAのメチル化状態が変化することを示している。また、NMLがDNMTのrDNA上へのリクルートに関わることも明らかになっている。今年度は、NMLによるDNAメチル化の制御を、マウスを用いた個体レベルで示すことを目標に研究を行った。共同研究者とともに、NMLノックアウトマウスを作成した。NMLを完全に欠損したマウスは、胎児期に死亡するものが多く、一部だけが生育することが明らかになった。この胎児期の死亡の原因は明らかにできていないが、NMLが胎児の発育に重要であることが示唆された。さらに、生育したNML欠損マウスの肝臓において、rRNAの転写が亢進していることが示され、マウス個体の肝臓においてもNMLが機能していると考えられた。興味深いことに、通常のマウスに高脂肪食を与えて過栄養状態にすると、脂肪肝を引き起こすが、NML欠損マウスでは肝臓は正常のままだった。この結果から、NMLがエネルギー状態という環境応答に重要な役割を果たすことが示唆された。rDNAのメチル化状態についても解析を進めている。
プラズマスパッタリングとプラズマ流を利用した微粒子含有酸化亜鉛薄膜熱電素子の開発

高性能の熱電薄膜材料の実現の為に,放電プラズマ焼結プロセスにおける内部構造制御のメカニズムの解明と,プラズマスパッタリングとプラズマ流を併用した微粒子含有酸化亜鉛薄膜のプラズマ成膜装置の開発を行った.高性能の熱電薄膜材料の実現の為に,放電プラズマ焼結プロセスにおける内部構造制御のメカニズムの解明と,プラズマスパッタリングとプラズマ流を併用した微粒子含有酸化亜鉛薄膜のプラズマ成膜装置の開発を行った.1.放電プラズマ焼結装置による酸化亜鉛系材料ターゲットの焼結と最適化・メカニズムの解明短時間、高品質焼結を特長とする未解明の放電プラズマ焼結プロセスを明らかにし,組成比をコントロールした良質のターゲット材料を生成すると同時にプラズマ成膜技術への応用を目指した.放電プラズマ焼結プロセスを用いた粒径20nmの酸化亜鉛ナノ粒子焼結体で観測される優先的配向性の試料内部電流,加圧力等のパラメータ依存性を明らかにした.(1)酸化亜鉛ナノ粒子焼結体では、200°C付近の低温から収縮,内部電流の増加および優先的配向性が生じる.試料内部電流の制限により,配向性が発生し始める温度に違いがあり,粒成長の温度依存性も異なる.優先的配向性が内部電流の増加に依存している可能性が示唆された.(2)加圧力の制御実験より、SPSプロセスで生じる優先的配向性が無加圧の状態では抑制されることから,配向性や焼結に対する内部電流の効果が比較的低温において顕著であり、内部電流と加圧力が複合的に関わって影響を与えていると考えられる。2.プラズマスパッタリングとプラズマ流を併用した新たなプラズマ成膜技術の開発現在,プラズマスパッタリングとプラズマ流を併用した新たなプラズマ成膜装置の開発を進行中である.上記で明らかにした放電プラズマ焼結プロセスを,低温成膜を特徴とするプラズマ成膜に応用することにより、微粒子を内包する微粒子含有型薄膜の生成技術および高機能な新規薄膜材料の製造技術の確立を目指していく予定である。以上の研究成果に関連して,3件の論文投稿および学会発表を行った.1.放電プラズマ焼結装置による酸化亜鉛系材料ターゲットの焼結と最適化・メカニズムの解明平成21年度に引き続き,酸化亜鉛ターゲットの作成,放電プラズマ焼結法のメカニズム解明及びプラズマ成膜への応用のために,放電プラズマ焼結プロセスによる焼結実験を行った.焼結容器の加工,焼結材料上下への絶縁材料(アルミナ板)の挿入などにより,試料内部電流,電圧,加圧力を制御した焼結を行い,焼結試料に印加される電流,電圧,加圧力が総合的に焼結挙動に影響を与えていることが明らかとなった.また,直径50mmのプラズマスパッタリング用ターゲットの製作を行い,これまでの実験と同様に優先的配向性を持ったターゲット材料を得た.直径50mmのターゲット材料ではXRDによる解析より,優先的配向性が径方向で分布を持っており,試料内部電流の径方向分布が焼結材料の内部構造に影響を与えている可能性を示唆している.さらに,放電プラズマ焼結プロセスにおける電流電圧の効果を明確に観測,制御する為に,加熱プロセスと試料内部電流を独立に制御する新しい焼結装置の開発を行った.加熱プロセスを誘導加熱による外部加熱方式とし,それとは独立に試料内部電流を印加することにより,通常の焼結挙動に対する電流電圧の効果を制御することが出来る.2.プラズマスパッタリングとプラズマ流を併用した新たなプラズマ成膜技術の開発対向形プラズマスパッタリングと外部プラズマ源を併用したプラズマ成膜装置の開発を行った,本研究では,プラズマスパッタリングを用いて気相中での材料粒子の成長を促進し,成長した材料微粒子を基板上に輸送する為の外部プラズマ源を利用することで,基板上に微粒子を内包する微粒子含有型薄膜の堆積を行う.上で述べた放電プラズマ焼結プロセスの研究結果より,薄膜中の内部構造が印加される電気パラメータに依存して変化する可能性があり,微粒子を内包するプラズマ成膜に応用することにより,より高機能の薄膜の生成が期待できる.
関節リウマチにおけるカルパイン切断型インターロイキン33の役割

同意を得た関節リウマチ(RA)患者の血清(46例)もしくは関節液(27例)を用いて、ELISAにてインターロイキン33(IL-33)濃度を測定した。その他、IL-1β、TNFα、IL-6、IL-8、IL-17についても測定を行った。結果、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて、持続的な血清および関節液IL-33濃度の上昇を認めた。また、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間には統計学的有意な正の相関が認められた。続いて、培養実験を行い、RA患者由来の線維芽細胞様滑膜細胞(FLS)において、IL-1βが比較的特異性の高いIL-33の誘導因子であることを証明した。これは、関節液IL-33濃度とIL-1β濃度との間に正の相関が認められた結果と関連付けられ、抗TNF治療抵抗性のRAにおいて血清と関節液とのIL-33濃度が高い理由として、IL-1β/IL-33系の持続的な活性が関連すると結論付けた。続いて、血清および関節液を用いてウェスタンブロッティングを行い、抗ヒトIL-33抗体を用いてIL-33タンパク質の検出を行った。ウェスタンブロッティングでは約30KDa付近にELISAの検出値と相関するバンドが認められ、その他に検体によって25KDa、20KDa、15KDa付近にバンドが検出された。約30KDaのバンドはFLSにおいて発現するIL-33タンパク質とほぼ同じ分子量であり、活性型IL-33と考えられた。25KDa付近のバンドはヒトのサンプルにおいて恒常的に発現しており、非特異的なバンドの可能性が高かった。一方、20KDa、15KDaのバンドは一部の検体で検出され、その分子量より我々が発表した(Biochem Biophys Res Commun 2009;387:218-22)カルパイン切断型IL-33の可能性が示唆された。しかしながら、IL-33はカスパーゼ-3、-8など様々なプロテアーゼで修飾されることが近年報告されており、検出されたものがカルパイン切断型IL-33と断定できていない。今後、カルパインを誘導ないし阻害する条件下にてIL-33タンパク質の発現変化を観察する。また、エドマン分解によるカルパイン切断部位の同定や、カルパイン切断型IL-33の機能解析を行いたい。
写真言説の比較文学・比較文化的考察-ポストモダン期フランス語圏の写真とテクスト

前年度に引き続き、写真言説の中でとりわけ重要と思われる、カルティエ=ブレッソン受容文脈の変遷について、研究・調査を行った。昨年度、新型インフルエンザ流行と、海外での資料開示状況が思わしくなかったために見合わせていた出張を積極的に行った。まず六月にニューヨーク近代美術館のアーカイヴへの出張を行った。これはアメリカにおけるカルティエ=ブレッソン受容の状況を掘りこす意味で重要な調査であり、一部、公開審査を停止している資料があったものの、二十世紀後半の状況について、調査を行うことできた。また、八月には国際比較文学会(ICLA)の大会(於韓国ソウル、中央大学校)に参加し、研究発表を行った。これは、前述ニューヨーク出張の成果を踏まえたものである。またこの研究発表に関連して、国際比較文学会のProceedings(研究発表記録集)も英文原稿を投稿し(本年一月)、掲載可否の査読を待っているところである。なお、本研究に関連して博士論文の執筆中であるため、これ以外の途中段階の研究報告は行わなかった。本研究の二年間の採用年度の間に、次々と新しい題材が見つかり、研究対象の範囲を拡げてきたが、写真関連の一次資料(写真集ど)および二次資料(研究文献)は、国内の所蔵が極めて少なく、基本的な文献でも国内の図書館に全く所蔵されていない物も少ななかった。また、これらについて海外の図書館から複写取り寄せを試みたが、いずれも新しい時代の題材であるために,複写許可がりない物がほとんどであった。したがって、必要最低限のものは独自に購入せざるを得ず、本年度も昨年度に引き続き、洋文献購入特別研究員奨励費の多くを使った。その結果、本研究に関わる題材の、海外における研究状況の概略が明らかになったほか、従来の真研究の通説とは違った構図も徐々に発掘でき、現在執筆中の博士論文にも大きな前進が見られた。ポストモダン期の写真を巡る言説の中で、とりわけフランスの写真家アンリ・カルティエ=ブレッソンに関する言説の重要性が明らかになったため、本年度は当初の計画のうち、とりわけニューヨークにおけるカルティエ=ブレッソン受容に重点を置いて研究を進め、1930年代にまで遡って、カルティエ=ブレッソンという写真家がどのように語られてきたのか、という点を究明するため、本年度は仏語圏、英語圏に跨った資料の発掘と、分析を進めた。その結果、1930年代のニューヨークで無名の写真家カルティエ=ブレッソンが世に出たのには、当時のアメリカ写真の動向、アメリカの美術・美術館学を担う新しい世代として登場したハーヴァードのグループ、そして写真での動向に先んじて文学・ジャーナリズムの分野に登場したドキュメンタリー的記述、といった複層的な背景があったことが明らかになってきた。またその成果発表の一貫として、2010年8月に韓国ソウルで行われる、国際比較文学会(ICLA)世界大会での口頭研究発表に英語で応募し、査読に通過、8月17日に研究発表を行う予定である。具体的な発表予定内容としては、1947年のニューヨーク近代美術館における展覧会とそのカタログ、そしてその改訂版に付けられた、リンカン・カースティンとボウモント・ニューホールのテクストの比較が中心になる。本年度は論文発表、および研究発表のための資料作成に関しても進展があり、複写用スタンドを自作して、全国各地の大学図書館から取り寄せた図版資料の複写を行った。2009年6月には日本比較文学会全国大会(大阪大学)に参加し、他の研究者との交流、情報交換に努めた。