hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
亜急性硬化性全脳炎由来の麻疹ウイルスが利用する細胞レセプターの解析

亜急性硬化性全脳炎(SSPE)由来の麻疹ウイルスの変異とレセプターとの結合能、および神経病原性への関与を検討した。その結果、SSPEの神経病原性にFおよびH蛋白の変異が関与すること、特に、F蛋白のアミノ酸置換が重要であることを明らかにした。また、H蛋白のアミノ酸置換がレセプターとの結合能に影響すること、特に、未知のレセプターとの結合に重要と思われる領域の存在を明らかにした。これまで、麻疹ウイルスIC323株の遺伝子全長をコードするプラスミドを基に、個々の遺伝子をSSPE由来麻疹ウイルスの大阪1株もしくは大阪2株のそれに置き換えたウイルスを作製し検討してきた。特に、SSPE株由来のF遺伝子がVero細胞におけるシンシチウム形成能やハムスターにおける神経病原性に中心的な役割を演じていることがF遺伝子を置き換えた組換えウイルスを用いることによって明らかになった。今年度の研究では、まず、大阪2株のF蛋白に生じたどのアミノ酸変異が重要であるのかをさらに検討した。1アミノ酸置換を生じる発現プラスミドを用いたトランスフェクションによる実験により、大阪2株のF蛋白の1か所のアミノ酸が置換しただけでVero細胞における細胞融合が生じることが明らかになった。さらに、これらの変異を持つ組換え麻疹ウイルスを作製し、ハムスターの脳内に接種したところ、同じ部位の1アミノ酸置換を生じる変異をもつウイルスを接種されたハムスターは、短時日のうちに神経症状を呈して発症し、死滅した。したがって、未知のレセプターとの結合後のウイルスの侵入、感染拡大には、F蛋白のわずか1アミノ酸の置換で十分であることが明らかになった。F蛋白のアミノ酸置換部位はSSPE株によって異なることから、現在、大阪1株についても解析を進めている。次に、緑色蛍光蛋白(GSP)をコードする遺伝子をウイルスのN遺伝子の上流に挿入したウイルスを作製した。大阪2株のFおよびH遺伝子に置換し、さらにGFP遺伝子を挿入された組換えウイルスは、GFP遺伝子挿入の無いウイルスと同様に、ハムスターに対して強い神経病原性を有していることが確認された。この方法により、組換えウイルスの感染拡大を容易に、かつ、経時的に観察することが可能になると思われる。麻疹ウイルスIC323株の遺伝子全長をコードするプラスミドを基に、個々の遺伝子をSSPE由来麻疹ウイルスの大阪1株もしくは大阪2株のそれに置き換えたウイルスを作製し検討してきた。その結果、大阪2株では、F蛋白のアミノ酸が1か所置換しただけでVero細胞において細胞融合が生じること、このアミノ酸置換がハムスターにおける神経病原性と相関していることが明らかになった。F蛋白のアミノ酸置換部位はSSPE株によって異なることから、今年度は、大阪1株のF蛋白に生じたどのアミノ酸変異が重要であるのかをさらに検討した。キメラF蛋白を用いた実験から、大阪1株のF蛋白のF2領域にVero細胞における細胞融合能と関連したアミノ酸置換が含まれることが明らかになった。個々のアミノ酸についてさらに検討したところ、F2領域の中のM94Vの置換が最も重要であることが明らかになった。したがって、大阪1株の場合には、大阪2株とは異なるアミノ酸置換がF蛋白の機能の変化に関与していることが明らかになった。今後、これらの変異を持つ組換え麻疹ウイルスを作製し、ハムスターの脳内に接種することにより神経病原性との関連を明らかにする予定である。また、SSPE由来株ではH遺伝子にもさまざまなアミノ酸置換が生じており、Vero細胞においては未知のレセプターとの結合が示唆されていることから、H蛋白のアミノ酸置換と各種レセプターとの親和性の変化を検討する必要がある。そこで、SSPE由来株のH遺伝子をもとに、麻疹ウイルスの本来のレセプターであるSLAMとの結合が生じないようなアミノ酸置換を導入したプラスミド、これまで解析されていない領域のアミノ酸置換を導入したプラスミドを構築した。次年度は、これらを用いてSSPE由来株のH蛋白のレセプターとの結合特性を検討していきたいと考えている。その結果、大阪1株、大阪2株共に、F蛋白の僅か1もしくは2アミノ酸の置換がVero細胞における細胞融合能の増強およびハムスターにおける神経病原性に関与していることが明らかになった。関与するアミノ酸置換部位は二つの株で異なり、大阪2株ではF1領域に、大阪1株では、F2領域に存在した。F蛋白よりも程度は低かったが、SSPE由来のH蛋白をもつ組換えウイルスもハムスターの神経病原性に寄与していることが明らかになった。大阪1株のH蛋白の方が大阪2株のH蛋白よりもより強い病原性を示した。H蛋白のどのアミノ酸置換が重要かは今後の課題である。SLAMとの結合能を失わせると報告されているアミノ酸置換を各種のウイルス株のH蛋白に導入したプラスミドを作製して検討したところ、一部のウイルス株のH蛋白を除いて、Vero細胞に存在する未知のレセプターとの結合能は消失しなかった。

また、これまで検討されていないH蛋白の6番目のベータプロペラ構造内のアミノ酸置換によって一部のウイルス株のH蛋白のレセプター結合能が影響を受けることが示された。すなわち、H蛋白の第6ベータプロペラ構造内のアミノ酸を1か所置換することにより、SLAMとの結合能は保持されるが、Vero細胞に存在する未知のレセプターとの結合能が失われることを見いだした。このことは、Vero細胞に存在する未知のレセプターとの結合に関与する領域がH蛋白の第6ベータプロペラ構造内にある可能性を示唆する。今後この領域において、さらなるアミノ酸置換を導入して検討することが必要と思われる。
ソルガム新奇優性芒抑制遺伝子DAIによる芒抑制メカニズムの解明

芒はイネ科植物小穂の護穎(外穎)の先端から伸びる針状の突起構造である.イネ科野生種は基本的に有芒(有芒が優性形質)であり,芒は地面に落ちた種子の地中への潜り込み,食害回避などの重要機能を持ち,一方で人類が栽培化の過程で除去を試みてきた形質としても知られていることから,栽培化の歴史を紐解くうえでも非常に重要な形質であると言える.イネやオオムギに関しては芒研究が精力的に行われており,これまで芒長を支配する遺伝子が多数同定・解析されてきたが,五大穀物の一角を占めるにもかかわらずソルガムにおいては芒研究がほとんど進展しておらず,芒長に関わる遺伝子は一例も報告されていなかった.申請者らはソルガムRIL集団を用いて芒長に関してQTL解析を行い,奇妙なことに優性で芒を抑制するQTLを検出し,この原因遺伝子としてSbDAIの同定に成功した.優性芒抑制遺伝子の同定は全植物種を通して世界初の快挙ではあるものの,これがどのようにして芒を抑制しているのかは現時点では不明である.本研究ではSbDAIの機能解析を通して芒抑制のメカニズムを解明することを目的として研究を進めている.これまでにSbDAI遺伝子座に関するNILs (Near Isogenic Lines)を大規模に栽培し,発達ステージ毎に幼穂をサンプリング・観察することで, DAIを持つ系統と持たない系統ではどのタイミングで芒の発生・伸長に差が生じ始めるのかを明らかにした.今後は明らかになった上記差の生じ始めるステージ前後に焦点を当て, NILs間でRNA-seq解析の比較を行うことでDAI遺伝子の下流で動くイベントを可視化する予定である.当初の予定通りSbDAI遺伝子座に関するNILsを大規模に栽培し,幼穂の発達ステージ毎に精密なサンプリングを行うことができた.形態学的な比較も完了しており,今後どのサンプルをRNA-seq解析に供するべきかという指標も決定済みである.今年度はNILsを用いた幼穂の観察により, DAIを持つ系統と持たない系統ではどのタイミングで芒の発生・伸長に差が生じ始めるのかを明らかにした.今後は明らかになった上記差の生じ始めるステージ前後に焦点を当て, NILs間でRNA-seq解析の比較を行うことでDAI遺伝子の下流で動くイベントを可視化する予定である.ソルガムゲノム中にはSbDAIと非常に高い相同性を持つパラログと考えられる遺伝子が一つ存在する(第十染色体).シンテニー情報を元に他のイネ科植物ゲノム配列を調べた結果から,遺伝子としてのオリジンは第十染色体上のDAIパラログであり,どこかのタイミングでそのゲノム断片が第三染色体長腕に転移し, (謂わば偶然)小穂で機能するプロモーター配列を得たことでSbDAIが誕生したというストーリーが想像された.近年ソルガム遺伝資源においても全ゲノム解読が進展しているため,これらのゲノム配列情報を精査し遺伝子進化速度等を解析することでSbDAIがいつ頃・どの地域で誕生したかを推定する予定である.これまでに調べた限りでは無芒の遺伝資源は全てBTx623タイプのSbDAI挿入変異を持っていたことから,一遺伝子で,かつ優性で芒を抑制するDAIは利便性が高く過去の人類によって広く利用・伝播されてきたと考えられる.遺伝資源の系統間でゲノム情報を比較解析することでこれらの仮説の検証を目指す.芒はイネ科植物小穂の護穎(外穎)の先端から伸びる針状の突起構造である.イネ科野生種は基本的に有芒(有芒が優性形質)であり,芒は地面に落ちた種子の地中への潜り込み,食害回避などの重要機能を持ち,一方で人類が栽培化の過程で除去を試みてきた形質としても知られていることから,栽培化の歴史を紐解くうえでも非常に重要な形質であると言える.イネやオオムギに関しては芒研究が精力的に行われており,これまで芒長を支配する遺伝子が多数同定・解析されてきたが,五大穀物の一角を占めるにもかかわらずソルガムにおいては芒研究がほとんど進展しておらず,芒長に関わる遺伝子は一例も報告されていなかった.申請者らはソルガムRIL集団を用いて芒長に関してQTL解析を行い,奇妙なことに優性で芒を抑制するQTLを検出し,この原因遺伝子としてSbDAIの同定に成功した.優性芒抑制遺伝子の同定は全植物種を通して世界初の快挙ではあるものの,これがどのようにして芒を抑制しているのかは現時点では不明である.本研究ではSbDAIの機能解析を通して芒抑制のメカニズムを解明することを目的として研究を進めている.これまでにSbDAI遺伝子座に関するNILs (Near Isogenic Lines)を大規模に栽培し,発達ステージ毎に幼穂をサンプリング・観察することで, DAIを持つ系統と持たない系統ではどのタイミングで芒の発生・伸長に差が生じ始めるのかを明らかにした.今後は明らかになった上記差の生じ始めるステージ前後に焦点を当て, NILs間でRNA-seq解析の比較を行うことでDAI遺伝子の下流で動くイベントを可視化する予定である.当初の予定通りSbDAI遺伝子座に関するNILsを大規模に栽培し,幼穂の発達ステージ毎に精密なサンプリングを行うことができた.

形態学的な比較も完了しており,今後どのサンプルをRNA-seq解析に供するべきかという指標も決定済みである.今年度はNILsを用いた幼穂の観察により, DAIを持つ系統と持たない系統ではどのタイミングで芒の発生・伸長に差が生じ始めるのかを明らかにした.今後は明らかになった上記差の生じ始めるステージ前後に焦点を当て, NILs間でRNA-seq解析の比較を行うことでDAI遺伝子の下流で動くイベントを可視化する予定である.ソルガムゲノム中にはSbDAIと非常に高い相同性を持つパラログと考えられる遺伝子が一つ存在する(第十染色体).シンテニー情報を元に他のイネ科植物ゲノム配列を調べた結果から,遺伝子としてのオリジンは第十染色体上のDAIパラログであり,どこかのタイミングでそのゲノム断片が第三染色体長腕に転移し, (謂わば偶然)小穂で機能するプロモーター配列を得たことでSbDAIが誕生したというストーリーが想像された.近年ソルガム遺伝資源においても全ゲノム解読が進展しているため,これらのゲノム配列情報を精査し遺伝子進化速度等を解析することでSbDAIがいつ頃・どの地域で誕生したかを推定する予定である.これまでに調べた限りでは無芒の遺伝資源は全てBTx623タイプのSbDAI挿入変異を持っていたことから,一遺伝子で,かつ優性で芒を抑制するDAIは利便性が高く過去の人類によって広く利用・伝播されてきたと考えられる.遺伝資源の系統間でゲノム情報を比較解析することでこれらの仮説の検証を目指す.サンプリングしたNILsの幼穂に関して,当初は年度内のRNA抽出・RNA-seq解析の外注を考えていたが,サンプル数が想定より多く,処理に手が回らないという可能性が出てきた.これを受けて,これらの処理および外注は次年度にまとめておこなうことに予定を変更したため.
新規遺伝子citrinとaralarの機能解析

本研究の目的は、新規遺伝子産物citrinならびにその類似蛋白であるaralarの機能や生理的役割を解明し、肝特異的疾患である成人発症II型シトルリン血症(CTLN2)の発症機構の解明と診断や治療に応用することである。本研究で得られた新たな知見ならびに成果を以下にまとめた。(1)Citrinは肝臓を中心に、腎臓、心臓、また新生児期の小腸などで発現していたが、aralarの発現は心臓、骨格筋、脳、腎臓に限局していた。肝臓においてaralarが発現していないことは、肝臓特異的疾患であるcitrin欠損症において重要な意味を持つと考えられる。両蛋白は、ミトコンドリア内膜に局在し、aspartate glutamate carrier(AGC)活性を持ち、C-half領域だけでもフル活性を示すことを明らかにした。さらに、EF-hand motifが存在するN-half領域にCa結合能があること、AGC活性はCaにより活性化されることを見いだした。AGCは、尿素合成過程のargininosuccinate synthetase反応にaspartateを供給する一方、malate aspartate shuttleを構成し、NADH(還元当量)をミトコンドリアに運ぶ重要な役割を担う。これらの知見は、CTLN2のようなcitrin欠損症において細胞質でのNADHの処理能力が障害されていることを示唆している。すでに誕生しているcitrinならびにaralar KOマウスを用いて詳細に解析する計画である。(2)CitrinのN-膜外部あるいはC-膜外部と相互作用する蛋白をyeast two hybridsystemで検索した。その結果、protein kinase CのCa^<2+>作用を調節する蛋白あるいは酸化還元に関与する蛋白をそれぞれ同定した。現在これらについてさらに検討している。(3)現在までにCTLN2患者のSLC25A13遺伝子において9種の変異を同定している。その情報に基づき作製した変異citrinのうち、膜貫通部位のほとんどが保持されている変異citrin-GFP融合タンパク質は、ミトコンドリアと細胞質の両方に存在し、同時にミトコンドリアの断片化が認められた。今回観察されたミトコンドリアの断片化がアポトーシスの初期反応であるか否かを、今後検討する予定である。本研究の目的は、Ca-dependent mitochondrial solute carrierと考えられる新規遺伝子産物citrinならびにaralarの機能や生理的役割を解明し、肝特異的疾患である成人発症II型シトルリン血症(CTLN2)の発症機構の解明と診断や治療に応用することである。以下に本年度得られた新たな知見ならびに成果を列挙する。1.Citrinの細胞内分布:Citrinと蛍光タンパク質であるGFPとの融合タンパク質を、ヒト肝細胞株に発現させたところ、fullおよびC-half citrinとの融合タンパク質はミトコンドリアに局在する結果を得た。Citrinに対する特異抗体を用いた免疫化学的解析でも、citrinのミトコンドリア局在が確認できた。2.Ca^<2+>結合性:ナイロンメンブレンにブロットしたcitrinと^<45>CaCl_2との結合をオーバーレイ法を用いて調べたところ、citrinならびにaralarともにEFハンドドメインの存在するN-half領域とCaが結合することが確認できた。4.Yeast two hybrid systemによる相互作用するタンパク質の検索:ヒト肝臓由来cDNAライブラリーを用い、citrinのN-half領域と相互作用するタンパク質を検索するため、1×10^8クローンをスクリーニングした。

一次陽性クローンが73クローン得られ、そのうち70クローンが二次スクリーニングにおいても陽性であった。現在、陽性クローンの解析をおこなっている。また、citrinのC-half領域と相互作用するタンパク質の検索もおこなっている。5.変異citrinタンパク質の作製と機能解析現在までにCTLN2患者のSLC25A13遺伝子において7種の変異を同定している。それぞれの変異citrinとGFPとの融合タンパク質発現系を構築したので、細胞内局在および安定性について検討する予定である。本研究の目的は、Ca^<2+>-dependentmitochondria solute carrierである新規遺伝子産物citrinならびにaralarの機能や生理的役割を解明し、肝臓特異的疾患である成人発症II型シトルリン血症(CTLN2)の発症機構の解明と診断や治療に応用することである。以下に、本年度得られた新たな知見ならびに成果を列挙する。1.Transport能の検討海外共同研究者であるFerdinandoPalmieri(イタリア)ならびにJorgina Satrustegui(スペイン)との共同研究により、citrinおよびaralarがaspartate/glutamate carrierであることを明らかにした。(EMBOJ. 2001)2.citrinと相互作用するタンパク質の解析12年度から引き続きyeast two hybrid systemによるスクリーニングをおこなったところ、citrinのN-膜外部あるいはcitrinのC-膜外部と相互作用するタンパク質として、protein kainese CのCa^<2+>作用を調節するタンパク質あるいは酸化還元に関与するタンパク質をそれぞれ同定した。3.変異citrinタンパク質の細胞内局在ヒト肝細胞株に導入発現させた膜貫通部位を欠く変異citrin-GFPは細胞質全体に分布していた。一方、膜貫通部位のほとんどが保持されている変異.citrin-GFPは・ミトコンドリアと細胞質に存在し、同時にミトコンドリアの断片化が認められた。このミトコンドリアの断片化については、アポトーシスとの関連を次の研究計画で検討する予定である。
ヘルペスウイルスのウイルスゲノム複製依存的後期遺伝子発現のタイムキーパーは何か

ヘルぺスウイルスの転写制御はまず、主として宿主の転写因子によって活性化される前初期遺伝子が活性化される。そして、その前初期遺伝子がウイルスのDNA複製に必要な初期遺伝子を活性化し、DNA複製が開始される。そして、DNA複製に依存してウイルスの構造蛋白の産生に必要な後期遺伝子が活性化される。ヘルぺスウイルスの転写はこうした厳密なカスケードによって制御されている。しかし、どうしてヘルぺスウイルスの後期遺伝子の転写がウイルスDNAの複製依存的に起こるのか、その分子機構は全く不明である。そこで、本研究は組換えヒトサイトメガロウイルス(HCMV)を用いてその分子機構を明らかにすることを目的とし、以下のことを明らかにした。(1)後期遺伝子プロモーターの活性化には、前初期遺伝子産物の他にウイルスDNAポリメラーゼ付随タンパク質であるUL44蛋白が、ウイルス複製に対する作用とは独立して必要であることを明らかにした。(2)そのUL44遺伝子プロモーターには3つのTATA boxが存在し、その中間位に存在するTATA boxは感染後期に活性化される。その後期プロモーターのTATA配列は他のUL44初期プロモーターと異なり、noncanonicalな配列5'-GCTGTATTATTAGA-3'である。これをcanonicalな配列5'-GCTGTATataaAGA-3'(小文字は変異部位)に変更すると、感染初期にDNA複製非依存的に活性化されるようになった。これまでは遺伝子の特異的発現制御はエンハンサーが担い、TATA配列を含むプロモーターは基本転写を維持すると考えられてきたが、ヘルぺスウイルスの時間依存的遺伝子発現制御はプロモーターのTATA配列の違いがその役割を担っている可能性が考えられる。HCMVの転写制御はまず、主として宿主の転写因子によって活性化されるウイルス転写活性化因子である前初期遺伝子が活性化される。その前初期遺伝子がウイルスのDNA複製に必要な初期遺伝子を活性化し、DNA複製が開始される。(1)後期遺伝子プロモーターの活性化には、前初期遺伝子産物の他にウイルスDNAポリメラーゼ付随タンパク質である。UL44蛋白が、ウイルス複製に対する作用とは独立して必要であることを明らかにした。これをcanonicalな配列な5'-GCTGTATataaAGA-3'に変すると、感染初期にDNA複製非依存的に活性化されるようになった。これまでは遺伝子の特異的発現制御はエンハンサーが担い、TATA配列を含むプロモーターは基本転写を維持すると考えられてきたが、ヘルペスウイルスの時間依存的遺伝子発現制御はプロモーターのTATA配列の違いがその役割を担っている可能性が考えられる。本年度研究計画の概要ヘルペスウイルスの転写制御はまず、主として宿主の転写因子によって活性化される前初期遺伝子が活性化される。ヘルペスウイルスの転写はこうした厳密なカスケードによって制御されている。しかし、どうしてヘルペスウイルスの後期遺伝子の転写がウイルスDNAの複製依存的に起こるのか、その分子機構は全く不明である。本研究は組換えヒトサイトメガロウイルス(HCMV)を用いてその分子機構を明らかにすることを目的とする。本年度の研究結果

1.後期遺伝子プロモーターの活性化には、前初期遺伝子産物の他にウイルスDNAポリメラーゼ付随タンパク質であるUL44蛋白が、ウイルス複製に対する作用とは独立して必要であることを明らかにした。2.そのUL44遺伝子プロモーターには3つのTATA boxが存在し、その中間位に存在するTATA boxは感染後期に活性化される。その後期プロモーターのTATA配列は他のUL44初期プロモーターと異なり、noncanonicalな配列5'-GCTGTATTATTAGA-3'である。これをcanonicalな配列5'-GCTGTATataaAGA-3'(小文字は変異部位)に変更すると、感染初期にDNA複製非依存的に活性化されるようになった。これまでは遺伝子の特異的発現制御はエンハンサーが担い、TATA配列を含むプロモーターは基本転写を維持すると考えられてきたが、ヘルペスウイルスの時間依存的遺伝子発現制御はプロモーターのTATA配列の違いがその役割を担っている可能性が考えられる。
アパタイト吸着に基づく抗ガン金属錯体の開発

合成された一連の白金(II)錯体について骨の無機成分であるヒドロキシアパタイトへの吸着を調べたところ,シスプラチンおよびオキザリプラチン部分骨格に脱離基としてリン酸様基を有する化合物に高吸着性を見出した。吸着はラングミュア式に従い,単分子吸着が示された。このとき吸着定数はリン酸基の数に比例した。SEMにより吸着表面に平滑な吸着面の形成が観察され,アパタイト-化合物間だけでなく,化合物一化合物間の相互作用が示された。培養ガン細胞を用いた抗ガン活性はシスプラチンやオキザリプラチンよりはやや低く,カルボプラチンよりは高い活性を示した。脱離基としてリン酸様基を有する白金錯体の中での活性相関は活性基となるPt-N部分の影響を強く受け,高い吸着能を示す錯体=DNAへの高い親和性を持つ=高い抗ガン活性を示すというわけではなかった。しかし,リン酸様基を有する化合物はリン酸基を持たない化合物に比べて高い活性を示すケースが多く,アパタイト吸着能評価は,抗がん剤創製の有力な手段と考えられた。リン酸様基を有した白金錯体は長い半減期を示し,加水分解に強く抵抗した。リン酸基含有白金錯体とオリゴDNAとのX線結晶解析は白金がグアニンN7に単座で配位した新規の相互作用様式を示し,新しい抗がん機構を有する薬剤であることが示された。リン酸様基を有する白金錯体は加水分解に強く抵抗する性質に由来するものと考えられ,(1)DNAとの新しい相互作用,(2)骨への選択的デリバリーなど,アパタイト吸着に基づく抗がん剤開発のアプローチは有効であった。本研究は(1)骨の無機成分であるヒドロキシアパタイトへの金属錯体の吸着を調べ,高吸着金属錯体を開発,(2)培養ガン細胞を用いて抗ガン活性を調べ,(3)新しい作用機構を解明するとともに,骨ガンが痛みを伴うことから早急に開発が求められている骨抗がん剤候補薬へと展開することを目的としている.ヒドロキシアパタイトの成分であるリン酸に着目し、単座配位では不安定なリン酸を分子内キレート環により安定化させ、リン酸のみで配位した白金錯体を種々合成することに成功した。Pt(II)-ジアミノシクロヘキサン-メチレンジホスホン酸錯体のX線結晶構造を明らかにし,白金にホスホン酸が2個酸素ドナーで配位していることが確認された.合成された白金(II)錯体の水中での加水分解に対する安定性を測定したところ、非常に長い半減期を示し、加水分解に安定であることが判明した。ヒドロキシアパタイト吸着量を測定し,吸着量と溶液濃度が比例することからラングミュア単分子膜吸着が起っていること,ラングミュアプロットから吸着量は吸着平衡定数Kに比例することを見出した.平衡定数Kはシスプラチンやカルボプラチンでは10前後と低いのに対し、リン酸基含有白金錯体では5倍以上大きく、リン酸官能基の優れた骨吸着能が明らかになった。合成された白金(II)錯体のin vitro生理活性はヒトガン培養細胞の増殖50%阻害濃度IC50が1487μMとシスプラチンとカルボプラチンの間にあり,抗がん活性を有していた.DNAとの反応を、吸光,CD法で追跡したところ、3目後から急速に反応が進行することが判明した。反応後、マススペクトルによりグアニン部位に白金が結合していることを確認した。反応前の相互作用が抗ガン活性に重要と判断された。

SEMにより吸着表面に平滑な吸着面の形成が観察され,アパタイト-化合物間だけでなく,化合物-化合物間の相互作用が示された。培養ガン細胞を用いた抗ガン活性はシスプラチンやオキザリプラチンよりはやや低く,カルボプラチンよりは高い活性を示した。脱離基としてリン酸様基を有する白金錯体の中での活性相関は活性基となるPt-N部分の影響を強く受け,高い吸着能を示す錯体=DNAへの高い親和性を持つ=高い抗ガン活性を示すというわけではなかった。しかし,リン酸様基を有する化合物はリン酸基を持たない化合物に比べて高い活性を示すケースが多く,アパタイト吸着能評価は,抗がん剤創製の有力な手段と考えられた。リン酸基含有白金錯体とオリゴDNAとのX線結晶解析は白金がグアニンN7に単座で配位した新規の相互作用様式を示し,新しい抗がん機構を有する薬剤であることが示された。これはリン酸様基を有した白金錯体は長い半減期を示し,加水分解に強く抵抗する性質に由来するものと考えられ,(1)DNAとの新しい相互作用様式,(2)骨への選択的デリバリー,等アパタイトに吸着に基づく抗がん剤開発のアプローチは有効であった。
ミクロン粒子担持蛍光分子による液一固界面ヘテロ環境の研究

本年度は次の2点で所期の成果が得られた.1.微小液滴,液膜内の色素分子の蛍光寿命測定を顕微鏡下で行なうことにより,濃厚均一溶液中での光物性を,再吸収効果に左右されないで極めて容易にな行う方法を確立した.高濃度溶液の液滴の粒径が数ミクロン以下になると,サイズ効果が現われることが初めて明らかになった.このような研究はこれまで皆無で,液滴物性の新しい研究法となることが期待される一方,化学修飾シリカゲル等,色素を担持した微粒子において,分子間の距離は均一濃厚溶液に匹敵するので,液滴や,液膜での基礎研究が強く望まれるわけである.2.アミノシリカゲルに担持したエリスロシンの種々の液固界面下での蛍光寿命測定,これまでに種々の色素を化学修飾したシリカゲルに担持して蛍光寿命測定を行なってきたが,担持法が今ひとつ信頼のおけるものではなかった.しかし今回はDCCをカップリング促進剤として用いることにより,色素を強固に担持することができた.担持量と反応条件の関係を定量的に求めた.得られたエリスロシン担持シリカゲルミクロン粒子を,種々の溶媒中に存在させて特異な液一固界面を実現させ,かつ1個1個粒子を選別してから蛍光寿命を測定することを可能にするために,ミクロキャピラリーカラムを用いることが最も有効であることを見出した.もちろん脱気することも可能である.このように暫新な測定法で得られた結果は, a)担持したエリスロシンの蛍光減衰は常に非指数関数的である. b)1つの成分は常に500ps前後の寿命で,シラノール基の影響を反映したものである. c)しかしながら均一溶液中の寿命と比べて,全く同じ寿命とならないのは,担持された色素が完全に溶媒分子に取囲まれてはいないことを示す,等々興味深いものであった.これらの成果は,論文として寄稿した.本年度は次の2点で所期の成果が得られた.1.微小液滴,液膜内の色素分子の蛍光寿命測定を顕微鏡下で行なうことにより,濃厚均一溶液中での光物性を,再吸収効果に左右されないで極めて容易にな行う方法を確立した.高濃度溶液の液滴の粒径が数ミクロン以下になると,サイズ効果が現われることが初めて明らかになった.このような研究はこれまで皆無で,液滴物性の新しい研究法となることが期待される一方,化学修飾シリカゲル等,色素を担持した微粒子において,分子間の距離は均一濃厚溶液に匹敵するので,液滴や,液膜での基礎研究が強く望まれるわけである.2.アミノシリカゲルに担持したエリスロシンの種々の液固界面下での蛍光寿命測定,これまでに種々の色素を化学修飾したシリカゲルに担持して蛍光寿命測定を行なってきたが,担持法が今ひとつ信頼のおけるものではなかった.しかし今回はDCCをカップリング促進剤として用いることにより,色素を強固に担持することができた.担持量と反応条件の関係を定量的に求めた.得られたエリスロシン担持シリカゲルミクロン粒子を,種々の溶媒中に存在させて特異な液一固界面を実現させ,かつ1個1個粒子を選別してから蛍光寿命を測定することを可能にするために,ミクロキャピラリーカラムを用いることが最も有効であることを見出した.もちろん脱気することも可能である.このように暫新な測定法で得られた結果は, a)担持したエリスロシンの蛍光減衰は常に非指数関数的である. b)1つの成分は常に500ps前後の寿命で,シラノール基の影響を反映したものである. c)しかしながら均一溶液中の寿命と比べて,全く同じ寿命とならないのは,担持された色素が完全に溶媒分子に取囲まれてはいないことを示す,等々興味深いものであった.これらの成果は,論文として寄稿した.
データマイニングを用いた日本語構文自己再編モデルによる手書き文章自動認識の研究

一般の手書き文章では,字形に筆者の癖が強く現れ,また文章自体が日本語構文に合致しない場合が多いため,高い認識精度を実現するのが困難であった.本研究では,日本語構文の変遷・誤用に対する対策として,自然言語処理やデータマイニングを用いた,日本語構文解析の自己組織化モデルと,筆者の癖などに対応可能な標準パタン作成のための学習パタンの自己生成に関する研究を行った.その結果,従来の方法に比べて,手書き文章の認識精度を改善することができた.一般の手書き文章では,字形に筆者の癖が強く現れ,また文章自体が日本語構文に合致しない場合が多いため,高い認識精度を実現するのが困難であった.本研究では,日本語構文の変遷・誤用に対する対策として,自然言語処理やデータマイニングを用いた,日本語構文解析の自己組織化モデルと,筆者の癖などに対応可能な標準パタン作成のための学習パタンの自己生成に関する研究を行った.その結果,従来の方法に比べて,手書き文章の認識精度を改善することができた.手書き文章自動認識の精度を向上するため,自然言語処理に関する技術を用いる手法が有効である.しかし,手書き文字の字形に関する多様性や,日本語構文の変遷や誤用により,必ずしも自然言語処理技術が手書き文章認識精度に貢献しているとは言い難い.このような状況において本研究では,誤認識訂正のための日本語構文の自己組織化モデルの開発と,データマイニングを活用した文字認識用学習パタンの漸次生成アルゴリズムの開発を目的としている.日本語構文の自己組織化モデルの検討については,今年度,既存の構文解析システムや形態素解析システムを用いた誤認識訂正の可能性について模索した.この場合,文法的に正しくない場合も既存システムで解析ができるため,解析結果から誤認識箇所を特定し訂正するのは困難であることがわかった.現在それらの分析結果をもとに構文解析アルゴリズムの検討を行っている最中である.また文字認識用学習パタンの自動生成については,これまで提案されてきた手法においては,手書き文字に対応可能な多様なパタンの生成は可能でも,その中から認識精度改善に有効なパタンを選別することが難しく,そのため標準パタンの分布がぼけてしまい,認識精度改善には至っていなかった.本研究では,永字八法に着目し,手書き故に癖が出やすい,「横画」や「右はらい」などに着目し,筆者の癖を抽出することで,筆者毎に有効な学習パタンの自動生成アルゴリズムを検討した.提案アルゴリズムを用いて小規模な予備実験を行ったところ,その有用性は十分に確認できているため,今後,大規模なサンプルデータを収集し,その効果について十分な検証を行って行く予定である.手書き文章自動認識の精度を向上するため,自然言語処理に関する技術を用いる手法が有効である.しかし,手書き文字の字形に関する多様性や,日本語構文の変遷や誤用により,必ずしも自然言語処理技術が手書き文章認識精度に貢献しているとは言い難い.このような状況において本研究では,誤認識訂正のための日本語構文の自己組織化モデルの開発と,データマイニングを活用した文字認識用学習パタンの漸次生成アルゴリズムの開発を目的としている.日本語構文の自己組織化モデルの検討については,前年度の研究成果を受けて,認識処理後の構文解析結果から誤認識箇所を特定し訂正する方法について検討した.その結果,学生のレポートなどに代表されるように,筆者の表現上の癖を構文解析結果から抽出することにより誤認識箇所の検出および訂正するための枠組みを完成させることが出来た.更に,そのアルゴリズムを手書き文書認識システムに組み込み評価実験を行ったところ,誤認識箇所検出・訂正に有効であることがわかり,これによって,日本語構文の自己組織化モデルを作り上げることが可能であることが分かった.また文字認識用学習パタンの自動生成については,これまで提案されてきた手法においては,手書き文字に対応可能な多様なパタンの生成は可能でも,その中から認識精度改善に有効なパタンを選別することが難しく,それをどう実現するかが課題であった.今年度は,書道の永字八法をヒントにして,手書き故に癖が出やすい,「横画」や「右はらい」などに着目し,筆者の癖を抽出することで,筆者毎に有効な学習パタンの自動生成アルゴリズムを検討した.しかし,検討したアルゴリズムでは,膨大な変形パタンを生成し,時間のかかる選別方法を経て,その中から有用なパタンを絞り込むため,今年度は,パタン生成時に筆者の癖情報を適用する範囲に制限を設けることで,パタン選別の高速化も実現することが出来た.本研究は,日本語構文の変遷に対応する暫時学習モデルの検討と,手書き文字の多様性を吸収した手書き文字認識法を検討することにより,手書き文章認識制度の改善を目的とするものである.今年度は,これまでの2年間の研究成果を踏襲し,必要な改善を講じた上で,研究成果をまとめる作業を行った.誤認識訂正法に関しては,筆記者の癖による文章表現の偏りや同じ表現の多様などの情報と,日本語構文と組み合わせることで誤認識訂正精度を改善することができることを前年度までに確認しているため,それらをアルゴリズムとして整理し,誤認識訂正アルゴリズムを完成させた.また,学習パタンの自動収集による個別文字の認識改善については,当初,手書き文字の筆画(とめ・はらいなど)の特徴を抽出して文字画像を変形することで認識制度が改善されると考えていたが,研究の過程において,むしろ文字画像の変形をある種の特徴ととらえ,その特徴の分布に適切な密度関数を当てはめて識別を行う方がより高精度な識別が可能になることがわかり,そのような分布の当てはめによる学習パタン生成の改善を行った.

このことにより,当初の予定では,学習パタン生成にかかる処理時間が指数関数的に増えることが懸念材料になっており,その改善策も検討する必要があったが,分布の当てはめによる手法によりそのような問題点も解消された.以上,2つの課題について取り組み,アルゴリズムを実装し,実験データを用いて検証を行った.その結果,従来の手書き文書認識に比べて処理内容が増えているために認識時間は長くなるが,文章認識精度を大幅に改善できることが検証できた.また,これらの研究成果を研究会などで公表した.本研究は,「誤認識訂正のための日本語構文自己組織化モデルの開発」および「データマイニングを活用した学習パタンの漸次生成アルゴリズムの開発」に分けて研究を行っている.それぞれの今年度の目標である「日本語構文自己組織化モデルの検討を完了し認識システムに組み込んで実験すること」および「学習パタン生成アルゴリズムの完成」がいずれも達成できているので,計画通りに進んでいると判断する,24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は3年計画のうち2年が終了した.1年目に明らかになった既存の構文解析器の設計方針が,本研究の利用に適さない部分があり,一部予定外の検討が必要であったが,それ以外は当初の計画通りほぼ進んでいる.次年度は研究最終年度にあたるため,これから研究上大きな変更を余儀なくされることは考えにくい.よって今後は,これまでの研究成果を踏襲して,1つの認識アルゴリズムとして実装を完成させ,評価を行って行く予定である.24年度が最終年度であるため、記入しない。
照葉樹林の植生動態に対するシカと外来植物の影響と生物多様性保全に関する研究

春日山原始林において,防鹿柵と外来樹木のクリッピングによる実験区を計7カ所に設置し,木本実生および林床植生の変化を2007年秋期から2009年秋期の二年間にわたって調査した。その結果,シカ防鹿柵の設置は,コジイやツクバネガシなどの生残率を有意に高めたが,外来樹木のクリッピングに対する効果は明確には得られず,生物多様性の回復には時間を要することが示唆された。さらに自動撮影装置の解析から,シカの出現頻度は全体の約8割を占め,シカの森林利用が進行していることが明らかにされた。春日山原始林(世界文化遺産、国指定天然記念物)域の照葉樹林群集に大きな負荷を与えている外来種(ナギとナンキンハゼ)の侵入・拡散とシカの食害という二つの生物的要因の相互作用を、野外実験系の設定とモニタリングによって解明するために,2007年9,月に,シカが立ち入らない柵を設置する実験モニタリングサイトを春日山原始林に構築した(文化庁および奈良県・市の調査許可申請済)。モニタリングサイトは,外来種(ナンキンハゼ)除去・非除去区×シカ有・無区の4パターンを1セットとして,1パターン5m×5m実験区を6カ所に構築した(ナンキンハゼとナギそれぞれについて3回の繰り返し)。さらに,コントロール区(ナンキンハゼとナギが生育していない20m×20m)にも,シカ有・無区1カ所を構築し,生育する草本および木本種と個体数,直径および樹木を記録した。同時に,シカによるドングリ(堅果)採食圧を量的に明らかにするために,ツクバネガシを親木とするドングリの生残実験のための防鹿柵を3カ所に設置した。今後,年3回程度の追跡調査により,種数および個体数の変動を明らかにする予定である。現在,実験区設定後,1年を経過していないために,この実験系のデータはまだ得られていない。さらに,シカおよびネズミに関する情報を得るために,自動撮影装置を10カ所に設置した。フイルムにはシカ,ネズミ,イノシシ,鳥類が写っており,現在,森林使用頻度のデータを解析しているところである。春日山原始林(世界文化遺産、国指定天然記念物)域の照葉樹林群集に大きな負荷を与えている外来種(ナギとナンキンハゼ)の侵入・拡散とシカの食害という二つの生物的要因の相互作用を、野外実験系の設定とモニタリングによって解明するために,2007年9月に,シカが立ち入らない柵を設置する実験モニタリングサイトを春日山原始林に構築した(文化庁および奈良県・市の調査許可申請済)。計7カ所の防鹿柵設定後,春,秋の年2回,新規参入実生(木本),枯死木本をナンバーテープによって個体識別しながら,追跡調査を行った。また,年1回,草本の組成について,確認した。さらに,柵内に設置したシードトラップを設置し,シードトラップに入った種子の同定および種子数をカウントし,森林内に種子の散布がどの程度,森林更新に寄与しているのか,シカの影響はどの程度,負荷を与えるのかを評価するための調査を継続中である。また,自動撮影装置を計,8カ所に設置し,シカ,イノシシ,ネズミといった中型小型のほ乳類,フクロウ,カケスなどの鳥類が写っており,現在,シカの雌雄同定,個体数の解析などを行っているところである。防鹿柵設置後,1年経過した時点で,もっとも顕著に把握できたのは,実生消失が,防鹿柵外で著しいこと,草本の多様性が場所によっては,著しく柵内で増加していると言うこと,草本の高さが柵内で顕著に高いことなどである。実験設定することにより,シカの森林に対する影響を定量的に評価できるものと考えているが,ナギとナンキンハゼの外来種が,どのような影響につながるかについては,まだ十分解析がされていない。シードトラップの結果についても,現在解析している段階である。今年1年さらに,追跡調査を行い,種子流入,実生の再残,外来種の他種への影響,シカの森林利用などに関する情報を総合的に評価し,実験系の成果をまとめたいと考えている。2007年秋に設置した防鹿柵で得た二年間のデータを解析し,2009年度日本生態学会で口頭発表した。外来樹木ナギとナンキンハゼ実験区でその効果は異なるものであったが,共通していることは,林床植生の種数及び植被率に顕著な変化はみられないことである。さらに実験を継続することにより変化することを期待するが,シカの森林への影響が100年以上にわたっており,また密度も極めて高い状態(20-30頭/Km^2)が続いていることから,数年という短い期間では森林回復(多様性及び構造など)は困難であることが示唆された。柵の有無(P, NP),外来樹木の有無(C, NC)の組み合わせで4パターン(PxC, NPXC, PxNC, NPXNC)を1セットとして,

ナギ実験区(100m^2)3ヵ所,ナンキンハゼ実験区(100m^2)3ヵ所,外来樹木を含まないコントロール実験区(800m^2)での木本実生動態を解析した。その結果,ナギ実験区では,クリッピングとシカ柵効果によって,コジイの死亡率(2年間)が有意に低い結果が得られた。シカがあまり採食しないクロバイ,イヌガシ,ウリハダカエデなどでは有意差がみられなかった。その一方,クリッピングしたナギの萌芽再生能力が顕著で,死亡率がきわめて低く,今後もナギが照葉樹林に拡大することが十分に予測された。ナンキンハゼ実験区では,クリッピング効果はみられなかったが,柵効果は若干みられた。ナギ同様に,ナンキンハゼに再生能力は高かった。コントロール実験区ではツクバネガシの死亡率が高く,ブナ科の実生に対しては,防鹿柵の効果がみられた。クリッピング及び防鹿柵による組成的な変化は乏しく,森林の多様性を回復するには,時間がかかるため、さらに継続的な調査を続ける必要がある。
皺・弛み・折り目を含む薄膜の確率論的動力学モデルの探求

皺や折り目を含む薄膜の振動応答を画像計測法(格子投影法)で詳細に計測し、皺や折り目が薄膜の振動応答に与える影響を検討するとともに膜面の振動応答の空間分布が経験的に従う確率モデルを検討した。その結果、膜面の皺は曲げ波の伝搬過程に強く影響を及ぼすものの折り目は皺ほど顕著な影響を及ぼさないことがわかった。また、皺や折り目を含む薄膜の変位パワースペクトル振幅値の空間分布は対数正規分布のような理論モデルには従わない。初年度は,現状の格子投影法の形状計測装置に振動計測の機能を追加するとともに,皺・弛み・折り目を含む薄膜の振動実験装置を製作した.そして,基本モデルとなる皺の無い薄膜を対象に振動計測を実施し,膜面の波動の伝播過程,波動から定常振動への移行過程,移行後の定常振動過程を適切に計測できることを確認した(第45回応力・ひずみ測定と強度評価シンポジウムにて報告,2014.1).さらには,皺の生じていない薄膜の振動応答から膜面の任意の点の加速度パワースペクトルを計算し,その空間分布を確率過程の視点から検討した結果,膜面の加速度応答の空間分布は経験的に対数正規分布に従うことがわかった.この結果は,従来の人工衛星の音響振動応答や衝撃応答との類似性を示唆するものであり,大変意義のあるものである.また,形状計測結果に生じるランダムノイズを空間方向に適切に処理する方法としてwiener filterによるランダムノイズの除去法を提案し,その有効性を確認した.さらには,提案した除去法を薄膜の振動計測結果へ適用し妥当性を確認した(第2回サンプリングモアレ法による構造物の計測技術に関する研究会にて報告,2014.3).これらの結果は,次年度の「薄膜の確率論的動力学モデル」を検討する上で基盤的な技術であり,極めて重要な成果である.また,皺の生じていない薄膜の挙動は,皺・弛み・折り目を含む薄膜の挙動を検証するにあたって最も基本的な比較対象となるものであり,その挙動を適切に取得できた意義は大きい.2014年度は,皺や折り目のある薄膜に衝撃力を負荷した際に生じる「膜面上の曲げ波の伝播過程とその後の定常振動過程」を格子投影法による光学的全視野形状計測法で詳細に測定した.そして,膜面の振動特性に皺や折り目が与える影響を検討した.その結果,曲げ波が膜面の皺線に対して直交方向に入射する場合,皺領域から反射していく波とそのまま進行していく波の2つの波が生じることが分かった(第23回スペース・エンジニアリング・コンファレンス,2014.12).これは,皺線方向の張力の影響によって皺領域内の剛性が高くなり,入射する曲げ波に対して皺領域が固定端(完全な固定端ではない)のような働きをするためである.一方,曲げ波が折り目に対して直交方向に入射する場合には,折り目から反射する波は確認されず進行していく波のみが確認された.また,皺や折り目のある薄膜の振動応答から膜面の任意の点の加速度パワースペクトルを計算し,膜面上の加速度パワースペクトルの振幅値を対象にその空間分布が従う確率モデルについて検討した(第46回応力・ひずみ測定と強度評価シンポジウム, 2015.01,日本機械学会中国四国支部第53期総会・講演会, 2015.03).そして,皺や折り目が確率モデルに与える影響を検討した.今後は,これらの結果を基には皺や折り目を含む薄膜の確率論的動力学モデルを探索していく予定である.その他,研究成果の公表としては,昨年度と今年度の研究成果を国際学会へ1件,国内学会へ3件発表した.2015年度は,皺や折り目(ミウラ折りを含む)の生じた薄膜の振動応答を格子投影法で計測し,振動応答の空間分布が従う確率モデルについて検討した。前年度までは計測した変位データを加速度データに変換して検討していたが周波数成分が高くなるにつれ計測データのノイズの影響が無視できなくなることが分かり、2015年度は変位データをそのまま利用して検討した。また、空間分布特性を詳細に検討するために計測データ点数を増やして検討を行った。その結果、データ点数が少ない場合は膜面のパワースペクトル振幅値の空間分布は経験的に対数正規分布に従う結果となったが(2013年度報告)、データ点数を増やして検討したところ全データ数の20%程度の数値(振幅値の大きいデータと小さいデータ)は対数正規分布から外れる傾向にあることがわかった。また、膜面のパワースペクトル振幅値の空間分布は皺や折り目の有無に関係なく平均振幅値の周辺では類似な分布特性になる傾向がみられた。また,薄膜全体の挙動を計測するため複数台のカメラを用いて計測する機能を追加した.研究期間全体を通して得られた結果を以下にまとめる。1)膜面の振動応答に「皺・弛み・折り目」が及ぼす影響膜面に生じた皺は皺線に直交する方向に曲げ波が入射すると反射波を発生させる効果があり膜面の振動応答に強く影響を及ぼす。しかし、膜面の折り目は皺ほど顕著な影響を及ぼさない。2)皺・弛み・折り目を含む薄膜の振動応答が経験的に従う確率モデル膜面の変位パワースペクトル振幅値の空間分布は対数正規分布のような理論モデルには従わない。

しかし、平均振幅値周辺のデータは皺や折り目に関係なく類似な空間分布特性を持つ傾向がみられた。皺や折り目を含む薄膜の振動応答を画像計測法(格子投影法)で詳細に計測し、皺や折り目が薄膜の振動応答に与える影響を検討するとともに膜面の振動応答の空間分布が経験的に従う確率モデルを検討した。その結果、膜面の皺は曲げ波の伝搬過程に強く影響を及ぼすものの折り目は皺ほど顕著な影響を及ぼさないことがわかった。また、皺や折り目を含む薄膜の変位パワースペクトル振幅値の空間分布は対数正規分布のような理論モデルには従わない。当初の予定どおり,2年目では初年度に製作した振動実験装置と計測装置を用いて,膜面に生じる皺や折り目が曲げ波の伝播特性や振動特性に与える影響を明らかにし,その一部を学会発表という形で対外的に公表している.また,2015年度に実施予定の確率論的動力学モデルの検討に資する基礎データを取得することにも成功した.航空宇宙工学今後は,これまで(2013, 2014年度)に取得した薄膜の振動応答が従う確率分布モデル(「皺なし・折り目なしモデル」,「皺有りモデル」,「折り目有りモデル」)を統括的に検討し,皺や折り目によって確率分布モデルがどのように変動するかを詳細に検証するとともに,薄膜の確率論的動力学モデルについて探索していく予定である.また,これまでは格子投影法における計測範囲を薄膜の一部に限定して計測を行っていたが、カメラを複数台用いることで膜面全体の振動応答を全視野で計測し,膜面の振動応答の確率モデルについて詳細に検討していく予定である.そして,これまでに得られた成果を学会発表・論文発表という形で纏めていく.当初の予定どおり,格子投影法の計測装置に振動計測の機能を追加するとともに,皺・弛み・折り目を含む薄膜の振動実験装置の製作を終了している.また,これら計測装置・実験装置の妥当性の確認を終え,対外的にも研究発表という形で公表でき概ね順調に進展しているといえる.年度内に投稿した査読論文の掲載費として見積もっていたが現在もまだ査読中であり、年度内での受理・出版を行うことができなかった。その結果、残額が生じてしまい翌年度に繰り越すこととなった。今後は,初年度に構築した計測・実験装置を用いて,皺・弛み・折り目が薄膜の振動応答に与える影響を検討するとともに,振動応答の空間分布を確率過程の視点から検討し,薄膜の運動が従う確率論的動力学モデルを探索していく.また,初年度の結果を下に,実験装置や計測装置の高度化を併せて実施し,精度のよい実験を行っていく予定である.投稿論文が受理された際の掲載費として使用する予定である。年度末に実験装置のジグの一部を改修する予定であったが,該当するジグを詳細に検討していく段階で時間を費やし,年度内に改修することが難しくなったため次年度に繰り越すこととした.薄膜の振動実験装置の改修費として,ジグの材料費等に利用する予定である.