hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
O-グリコシド結合型N-アセチルグルコサミン転移酵素の組織、細胞における発現

糖蛋白質の糖鎖には、アスパラギン型糖鎖とムチン型糖鎖がよく知られている。それらに加えて、細胞質および核内の種々の蛋白質を構成するセリン或いはスレオニン残基に、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)が1つだけOグリコシド結合したO-GlcNAcの存在が、近年明らかとなった。このようなOグリコシド結合型N-アセチルグルコサミン(O-GlcNAc)の機能はセリンやスレオニンのリン酸化の調節や、細胞内シグナル伝達あるいは核内での転写の制御への関与などが示唆されている。またO-GlcNAcは、従来より知られている糖鎖合成過程とは全く異なる経路で合成される。最近、このO-GlcNAc転移酵素の遺伝子がラット、ヒト、線虫などでクローニングされたが、その局在については不明である。今回、ラット膵臓におけるO-GlcNAc並びにO-GlcNAc転移酵素の局在を検討した。光顕的に観察すると、O-GlcNAc転移酵素は外分泌部では腺房細胞に、またランゲルハンス島ではA細胞と膵ポリペプチド(PP)細胞に強く発現していることが認められた。さらに、電顕観察より、O-GlcNAc転移酵素は主に細胞の核のユークロマチンに存在し、また腺房細胞の酵素原顆粒の周囲、並びにA細胞のα顆粒の周囲の細胞質に存在することが明かになった。このようなO-GlcNAc転移酵素の局在は、O-GlcNAcの場合とほぼ一致していた。血管平滑筋細胞は,動脈硬化症を惹起する基礎病態である高脂血症,高血圧,糖尿病などの疾患に於て重要な役割を演じる。一方,細胞質および核に存在する種々の蛋白質には、セリンやスレオニンにN-アセチルグルコサミン(GlcNAc)が1つだけOグリコシド結合したO-GlcNAc型糖が存在することが近年明らかになった。このO-GlcNAcは,糖尿病との関係で最近注目を集めている。UDP-GlcNAcはO-GlcNAcの供与体であり、高濃度のグルコースによってもたらされる細胞内UDP-GlcNAcの増加は、ある種の蛋白質のO-GlcNAc化の異常をもたらすことが予想されている。今回、O-GlcNAcならびにO-GlcNAc転移酵素の糖尿病との関係を明らかにする目的として,ラット大動脈由来平滑筋細胞におけるO-GlcNAc転移酵素の発現の高濃度グルコースによる変化を生化学的並びに組織細胞化学的に検討した。その結果,ラット大動脈並びに大動脈由来平滑筋細胞に於るO-GlcNAc転移酵素の局在を検討してみると,O-GlcNAc転移酵素は主に核内に存在し,また細胞質にも瀰慢性に存在することが明らかになった。さらに電顕観察より,O-GlcNAc転移酵素は,主に核内の真正クロマチンならびに細胞質基質に存在が確認された。さらに,高濃度グルコース存在下で平滑筋細胞を培養すると,O-GlcNAc転移酵素の活性が増大し,さらに核および細胞質に於るO-GlcNAc転移酵素の染色性の減弱が認められた。このような高グルコースによるO-GlcNAc転移酵素の活性の変化は,さらに細胞内でのある種の蛋白質のO-GlcNAc化の変化をもたらすと考えられる。[目的]O-GlcNAc転移酵素は,蛋白質のセリン残基あるいはスレオニン残基に,UDP-GlcNAcからN-アセチルグルコサミンをO-グリコシド結合で転移する。最近、本酵素のcDNAがヒト,ラット,線虫などでクローニングされた。ヒトの種々の臓器における遺伝子発現をNorthern bolt法で調べたところ他の臓器に比べて膵臓で非常に強く発現していることが報告されている。このことからO-GlcNAc転移酵素は,膵臓においてインスリン分泌やグルコース濃度の調節に関与することが示唆されており,糖尿病との関係が注目を集めている。今回、正常並びにストレプトゾトシン糖尿病ラット膵臓におけるO-GlcNAc転移酵素の局在を免疫組織化学的に検討した。[方法]SD系ラット(雄,体重150g)にストレプトゾトシン(65mg/kg)を腹腔内注射後,経時的に膵臓を採取し,ホルムアルデヒド固定の後,O-GlcNAc転移酵素に対するポリクローナル抗体を用いて免疫染色を行なった。[結果]光顕的に観察すると正常な膵臓では,O-GlcNAc転移酵素は外分泌部の腺細胞,グルカゴンを産生するランゲルハンス島A細胞ならびに膵ポリペプチド(PP)細胞に強陽性反応が認められた。またこのようなO-GlcNAc転移酵素の局在はO-GlcNAcの局在とほぼ一致することがすることが明かになった。ストレプトゾトシン胞では正常と比較して染色強度の増強が観察された。O-GlcNAc転移酵素活性は糖尿病ラット膵臓では正常よりも有意な上昇が認められた。[考察]O-GlcNAc転移酵素並びにO-GlcNAcはチモーゲン顆粒あるいはランゲルハンス島A細胞のα顆粒の分泌に関与すること,さらにB細胞における蛋白質へのO-GlcNAcの修飾の変化が糖尿病と関連することが示唆された。

それらに加えて、細胞質および核内の種々の蛋白質を構成するセリン或いはスレオニン残基に、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)が1つだけOグリコシド結合したO-GlcNAcの存在が、近年明らかとなった。このようなOグリコシド結合型N-アセチルグルコサミン(O-GlcNAc)の機能はセリンやスレオニンのリン酸化の調節や、細胞内シグナル伝達あるいは核内での転写の制御への関与などが示唆されている。またO-GlcNAcは、従来より知られている糖鎖合成過程とは全く異なる経路で合成される。最近、このO-GlcNAc転移酵素の遺伝子がラット、ヒト、線虫などでクローニングされたが、その局在については不明である。今回、ラット膵臓におけるO-GlcNAc並びにO-GlcNAc転移酵素の局在を検討した。光顕的に観察すると、O-GlcNAc転移酵素は外分泌部では腺房細胞に、またランゲルハンス島ではA細胞と膵ポリペプチド(PP)細胞に強く発現していることが認められた。さらに、電顕観察より、O-GlcNAc転移酵素は主に細胞の核のユークロマチンに存在し、また腺房細胞の酵素原顆粒の周囲、並びにA細胞のα顆粒の周囲の細胞質に存在することが明かになった。このようなO-GlcNAc転移酵素の局在は、O-GlcNAcの場合とほぼ一致していた。
21世紀米国が探求する19世紀アメリカのナショナル・ナラティブ研究

本研究は、21世紀アメリカでベストセラーを記録したマーク・トウェインの自伝『マーク・トウェイン完全なる自伝』のとくに第1巻を取り上げて、なぜベストセラーとなったのか、21世紀の社会はトウェインの自伝になにを求めていたのか、明らかにするものである。結果、Amazonの同書に寄せられた400件ちかいレヴューなどの分析を通して、同書がトウェインの個人的な自伝としてではなく、トウェインの目を通して見た19世紀社会を描いた書籍として受け入れられていた点を明らかにした。このように受け止められた理由として、同書が筆記ではなく、口述筆記によって執筆されていた点を指摘し、その背景と意義についても考察を加えた。平成26年度はマーク・トウェインの自伝についての研究と、さらに時代背景を深めるための19世紀の歴史に関して、とくにトウェインの自伝において興味深い南北戦争期の史実の整理を行った。また、極西部でのボヘミアン・サークルとトウェインとの関係について、書評を書く機会を得て、研究の進展に役立った。研究成果としては、エコクリティシズム研究学会の年次大会において「マーク・トウェインの自伝にみる記憶に刻まれた風景」と題して研究発表を行った。その内容を大幅に書き改めて、『エコクリティシズム・レヴュー』に報告論文として投稿した。また、著書の分担執筆として論文「彼岸なきハックのダンス・マカーブル:19世紀進化思想とマーク・トウェイン」(『文学から環境を考える:エコクリティシズム・ガイドブック』(勉誠出版、2014))を執筆した。さらに、書評として「Ben Tarnoff著The Bohemians:Mark Twain and the San Francisco Writers Who Reinvented American Literature (New York: Penguin, 2014)」を『マーク・トウェイン研究と批評』(南雲堂、校正中)を執筆した。このほか、時代背景を整理する一環として共著として『欧米社会の集団妄想とカルト症候群:生成のメカニズムの宗教・社会史的考察』(明石書店、校正中)に「アメリカに飛び火した魔女狩り」および「アメリカの秘密結社クー・クラックス・クラン」を寄稿した。2015年度はトウェインの新刊の『自伝』のなかでも特に重要だと思われるQuarles Farm農場での経験について考察をすすめた。とくに、Quarles Farmでの経験を回想する際に、トウェインの筆記に特異な文体の変化が生じている点に着目し、その文体が文語ではなく口語口調になっている点を明らかにしたうえで、その特質がのちの『完全なる自伝』を執筆する原動力となる「自伝的口述筆記」を採用するきっかけになった点を明らかにし、ミズーリ州ハンニバルで開催された、2015年度Mark Twain Conferenceにおいて発表した。また、トウェイン西部経験の重要性についても再考を加えた。とくにトウェインが若き頃の西部経験を執筆した『西部放浪記』、『ハワイ通信』、『ブラウン氏との旅』、『地中海遊覧記』を横断的に論じながら、トウェインの観察眼の特質である「相対的な視野」の源流が西部にある点を指摘し、その発展過程をトウェインの西部経験の咀嚼方法と合わせて考察し、明らかにした内容は日本マーク・トウェイン協会第19回大会において学会報告した。さらに、トウェインの人種観についても踏み込み、同時代に結成された秘密結社クー・クラックス・クランの活動についても、トウェインとの接点を模索する試みを行った。2015年度の研究内容は、主に19世紀を中心にしながらも、現代との結びつきの接点を探るための軸足を整えることができたものと考えている。すなわち、『自伝』研究ではとくに、自伝執筆の原動力となったクオールズ農場での経験について、トウェインの人生および『自伝』内での重要性を明らかにできたことで、農場という牧歌(パストラル)的な表象の重要性を見出すことができた。その価値は、都市とウィルダネスを結ぶ中庸として現代のアメリカにおいても認められており、本研究が主軸とする21世紀の米国が19世紀に見出した価値観の一端を紐解く鍵になると考えられる。マーク・トウェインの『完全なる自伝』は3巻本で各1巻が800頁ほどある大部の自伝である。この自伝がなぜ、21世紀のアメリカでベストセラーになったのか、本研究の関心はこの点に定まっていた。2015年までに、自伝執筆の原動力となった口述筆記に着目し、なぜトウェインが口述筆記を執筆手段として選んだのか、その理由について、自伝以外の資料も参照しつつ、総合的に検討した。結果、トウェインのクオールズ農場についての記憶を述懐するときに、口述筆記が魅力的な執筆手段としてトウェインに認識された可能性がある点を明らかにした。これをふまえ、2016年では、口述筆記が開始される節目に着目し、トウェインにとっての、クオールズ農場の記憶の特異性と、その記憶がトウェインの自伝執筆に与えた影響について、考察した。とくに、口述筆記という執筆手段が、トウェインと記憶との関係についても、影響をおよぼし、記憶は思い出される受動的なものではなく、記憶の回想を導く主体的な存在として、トウェインの自伝執筆を導いていた可能性を指摘した。そのうえで、21世紀の現代とのかかわりとの考察として、アマゾンのレビュー等でしばしば、牧歌的なアメリカの原風景を垣間見るようである、というコメントが複数あった点を考慮して、クオールズ農場の記憶と、アメリカの「牧歌」の記憶との接点を探るために、アメリカにおける西部とパストラリズムの背景をふまえて、クオールズ農場について検討した。本研究は、21世紀アメリカでベストセラーを記録したマーク・トウェインの自伝

『マーク・トウェイン完全なる自伝』のとくに第1巻を取り上げて、なぜベストセラーとなったのか、21世紀の社会はトウェインの自伝になにを求めていたのか、明らかにするものである。結果、Amazonの同書に寄せられた400件ちかいレヴューなどの分析を通して、同書がトウェインの個人的な自伝としてではなく、トウェインの目を通して見た19世紀社会を描いた書籍として受け入れられていた点を明らかにした。このように受け止められた理由として、同書が筆記ではなく、口述筆記によって執筆されていた点を指摘し、その背景と意義についても考察を加えた。研究計画の段階では、平成26年度は自伝の中身の整理を中心に行う予定にしていた。しかし、外部からの執筆依頼などがあり、当初の計画にくわえて、当時の時代背景の研究などを深めることができ、予定していた以上の進展がみられた。したがって、全体的には「おおむね順調に進展している」との自己評価を行った。2016年度では、より現代との結びつきに焦点を合わせて研究を行う予定にしている。とりわけ、2015年の研究において明らかにした、牧歌的表象の価値について、この点を基軸としながらアメリカにおける史的意義を踏まえつつ考察をすすめていきたいと考えている。アメリカ文学今後の計画としては、自伝の内容の整理を27年度中に行い、さらに、本年は7月にアメリカのトウェイン研究の学会において研究発表をする機会を得ているため、これまでの成果を発表してアメリカ人研究者からの批評を仰ぐことにしている。さらに、10月には日本マーク・トウェイン協会の年次大会において、トウェインの西部経験についてのシンポジウム発表を行う予定になっている。これらの活動を通して、中身の整理とともに資料の分析と研究もすすめていきたい。当初は旅費として計上していた金額であったが、別途で申請した旅費に対する助成が得られたため、旅費使用予定の金額に未使用額が多く生じることになった。次年度使用額は2184円と、26年度の残金として発生したものによる。より有効に活用するため、27年度に繰り越しした。本年度の研究を遂行するために、また、成果を発表していくために、当初の使用区分である旅費としての使用に努めていきたい。ただ、より研究を促進させるために必要が生じた場合には、研究関係の資料としての購入にも充当したい。27年度はアメリカにおいて学会発表も予定しているため、関係諸費に充当する。
第二次世界大戦直後におけるソ連勢力圏の形成とスターリンの対外認識

第二次世界大戦直後からその死去に至るまでの時期(1945年53年),スターリンには超大国を特徴づける世界戦略は基本的になかったということができる。この時期,東欧の「人民民主主義諸国」や中華人民共和国の誕生によって,ソ連の勢力範囲が第二次世界大戦前に比べ格段に拡大したのは事実であるが,スターリンが重視した地域,すなわち中国,朝鮮,東ヨーロッパなどに関しては,その要因をソ連の国益と安全保障の観点から説明することが可能である。スターリンがポーランド問題に関しては,英米との安易な妥協を排する姿勢を崩さなかったものの,ギリシアやトリエステに関してはさしたる関心を示さず,英米と妥協したのはその好例であろう。その意味では,スターリンの世界観は1930年代より変化がほとんどみられないといっても過言ではない。しかし,第二次世界大戦前に比較して,唯一スターリンの世界観が拡大しつつあったのかとみられるのは,1950年以降死の直前に至るまで続くことになる,インドネシア共産党綱領問題をめぐる執着であった。スターリンがソ連の国益や安全保障にとってさしたる重要性をもつとも思われない地域に対して関心を示し,旧植民地における革命運動の道程や土地革命,統一戦線のあり方,党活動方式など普遍的なテーマを追求しつつあったことは,超大国に特有な世界戦略形成への萌芽とも位置づけられるべき内容をもっている。ただし,それは1953年スターリンの死によって明確な形をとるまでには至らなかった。さらに,インドネシア共産党綱領をめぐる問題で,スターリンがアジアにおける中国共産党との「パワーシェアリング」を志向しつつも,同党の革命路線を批判するともとれる行動に出たことは,後の中ソ対立を予見させるものでもあった。ロシア国立社会政治史文書館において,スターリン関係ファイル,特にインド共産党,インドシナ(ベトナム)共産党,インドネシア共産党,中国共産党ファイルの閲覧および関連資料の収集にあたった。また,本研究課題申請書提出直後,2004年1月より,中国外交部档案館(北京)が本研究課題の対象とする時期とも重なる194955年の資料公開を開始したため,中ソ関係,中国・ベトナム関係,朝鮮戦争関係資料を同館で閲覧・調査した。その結果,以下の諸点を明らかにすることができた。1.当該時期の国際共産主義運動の構造は極めて単純なものであった。各共産党は自党の内部で決着できない問題をモスクワに持ち込んでは,スターリンの裁可を仰いでいた。これは,コミンテルンはすでに解散していたとはいえ,モスクワを国際共産主義運動の中心とみなし,そこから何らかの指示を得て行動しようとするベクトルが各国共産党の側から発せられていたことを意味する。2.スターリンの各共産党に対する指示は,具体性を追究しようとしている点で一致している。すなわち,スターリンは漠然とした「帝国主義」論を嫌い,イギリス帝国主義,オランダ帝国主義など個別具体的な対象を設定した戦略の構築を各党に指示した。これらの点をみてもわかるように,スターリンは問題を普遍化・一般化して自らのあるいはソ連としての世界戦略を構想するという段階には至っていない。唯一,スターリンは中国共産党にアジア地域の共産党の指導をまかせようとする一方で,同党の革命路線が普遍化することに異議を唱えようとしていた点に,世界戦略形成の萌芽をみてとることができるが,それは死去直前の時点のことであった。ロシア国立社会政治史文書館において,スターリン関係ファイル,特にイギリス共産党,中国共産党ファイル,チャーチルとの往来書簡ファイルの閲覧および関連資料の収集にあたった。また,昨年度に引き続き,中国外交部档案館においても,1949年から55年までを対象に,中ソ関係,中国・ベトナム関係,朝鮮戦争関係資料を同館で閲覧・調査した。(1)昨年度は,スターリンが漠然としたアジア全般を問題にしていたわけではなかったことを明らかにしたが,同様なアプローチはヨーロッパについてもあてはまる。

スターリンは,ポーランド問題に関しては,安易な妥協を排する姿勢を崩さなかったが,ギリシアやトリエステに関してはさしたる関心を示さず,英米と妥協した。ここからは,自国の安全保障に直結する問題を最重視しようとするスターリンのアプローチが確認される。(2)スターリンはイギリス共産党幹部との書簡往復,会談の中で,「アングロ・サクソン諸国の共産党」という観念を提示している。ここには国家を超えた,スターリンの数少ない世界観が示されているともとれるが,その本質は伝統的なスターリンの民族論やかつてコミンテルン内部にみられた地域区分と重複しており,第二次世界大戦後に生まれた新しい観点とはみなせない。(3)以上のようなスターリンのヨーロッパに対するアプローチや,世界観の片鱗を,フルシチョフ時代のソ連の対外政策と比較すると,フルシチョフが世界を大きく社会主義体制と資本主義体制とに二分して把握したり,民族解放運動支援の名の下に,アジア・アフリカ・ラテンアメリカ地域の革命運動に積極的に関与していったりしたのとは,同列に論じられる性質をもつものではないことがわかる。
数論とその周辺分野における諸方法の綜合的研究

代数解析的方法の研究として,木村達雄らにより(1)整数論的なフ-リエ変換の新しい計算法の開発(2)佐藤ー新谷ゼ-タ関数が簡単な関数等式をみたすような系列を見出すこと(3)これまで必要とされていた条件なしに,p進関数等式をみたすものの系列を見出すことに成功した。また,木村がかつて概均質ベクトル空間のbー関数を決定するのに用いた方法をp進的な場合と結びつけることにより,既約正則概均質ベクトル空間の井草局所ゼ-タ関数の実数の極がbー関数の根であることが示されていた。代数的方法の研究としては,竹内光弘により,qーbracket積の概念を導入することにより,古典型(A,B,C,D)の量子包絡環のPBW基についての結果が得られ,またGL(n)の2変数量子化GLα,β(n)の構成がなされ,対応するU(gl(n))の量子化Uα,β(gl(n))の存在が示された。八牧宏美らによって,sharp tripletをもつ群の指標の像による特徴づけと,E_7型単純群に対するフロベニウス予想の検証がなされた。解析的方法の研究として,三河寛らにより,概素数P_2の等差数列中の分布と概素数対の分布を調べるための平均化の方法が開発され前者については略,最終的な結果が得られた。位相的・幾何学的方法としては田崎博之らにより,コンパクト対称空間内の極小部分多様体の安定性に関する研究がなされ,両側不変リ-マン計量をもつコンパクト連結単純リ-群内のDynkinの意味の指数1のコンパクト連結単純リ-部分群が体積の変分に関して安定になることが証明され,また安定な3次元コンパクト連結単純リ-部分群を完全に決定することができた。
超低振動数ラマン分光装置の開発とイオン液体の液体構造解明への応用

低振動数ラマンスペクトルの変化を0.1秒単位で高速に追跡可能な新規の分光手法を開発した。この結果をApplied Spectroscopy誌などで発表し、表紙に掲載されるなどの形で注目を集めた。この手法を用いることにより、格子振動などの分子間振動が相転移などによって変化する様子をリアルタイムに追跡することができる。さらに本年度は、この手法を用いたイオン液体融解過程の観測を行うことで、液体状態のイオン液体に見られる低振動数ラマンバンドが結晶状態からどのように生じるのかを研究した。典型的なイミダゾリウム系イオン液体である、塩化ブチルメチルイミダゾリウムの結晶を急熱して、融解する過程の0.5秒単位での実時間観測を行った。その結果、低振動数領域に見られるシャープな複数の格子振動バンドが加熱に伴って消失し、消失に伴って幅広の低振動数ラマンバンドが生じる様子を観測することができた。この幅広のバンドは200cm-1以下の振動数領域に見られるバンドであり、液体状態のイミダゾリウム系イオン液体全般に見られるバンドと一致している。さらに、指紋領域及び低振動数領域のスペクトルを比較することにより、カチオン内部のブチル基コンホメーション変化と格子振動の消失過程とを比べることができる。その結果、内部構造変化が結晶構造の消失より遅れて起こることが明らかになった。これは内部構造を保つような結晶秩序が、融解の後期まで持続していることを意味しており、イオン液体の秩序構造に関連したものと予想している。次年度以降の実験の要となる新規の低振動数ラマン分光装置を開発した。これはヨウ素ガスによってレイリー散乱光を除去し、低振動数ラマン散乱光のみを分光する装置で、アルゴンイオンレーザーの単一モード発振線とヨウ素ガスの吸収線とが同じ波長になることを利用している。本年度はヨウ素ガスフィルターとポリクロメーターとを組み合わせた装置を開発した。本装置は、従来の装置とは異なり多重モノクロメーターを用いる必要がない。そのため感度の大幅な向上と測定時間の短縮が可能となった。本装置は9.8cm^<-1>のラマンバンド(L-シスチン)まで測定できるほどの性能を有しており、これまでの我々の装置では30cm^<-1>より高振動数のバンドしか測定できなかったことを考えると、非常に高いレイリー散乱除去能を有すると言える。測定時間も従来の手法の100分の1以下であり、30秒程度でスペクトルを得ることができる。同じ領域を測定する他の分光手法と比較しても、この測定時間は非常に短い。本装置を用いることで、より低い振動数までラマン散乱測定ができるようになっただけでなく、過渡的な液体構造変化に対応する実時間低振動数スペクトル変化を測定することも可能となる。上記の装置開発と平行して既存の装置を用いたイオン液体の研究も行った。本年度はイオン液体のカチオン種の芳香属性に注目し、低振動数スペクトルの形状を比較した。その結果、これまでの研究で得られていたイミダゾリウム系イオン液体の強い低振動数バンドが、芳香属系イオン液体には見られ、非芳香族系イオン液体には見られないことが分かった。この結果から、強い低振動数バンドが主にカチオンの運動に由来していることが確かめられた。さらにこの結果は、芳香族系イオン液体と非芳香族系イオン液体との液体構造に違いがあることを示唆している。前年度に開発したヨウ素フィルターによるマルチチャンネル型の装置を用いて、低振動数ラマンスペクトルの秒単位実時間測定を行い、イオン液体や分子液体の融解における構造変化を観測した。融点が常温より高くアニオンの構造が単純なbmim Clを試料として用い、結晶の急速な加熱によって低振動数ラマンスペクトルが変化してゆく様子を観察したところ、格子振動に対応すると考えられるシャープなバンドが加熱に伴い消失することが見いだされた。これは試料の温度がプラトーとなる時刻とも一致しており、融解によって結晶構造が崩れてゆく過程を低振動数ラマンスペクトルの変化として観測することに成功したと言える。さらに各バンドの消失速度に差があることから、格子振動の消失に時間差があること、すなわち段階的な融解過程を推察することができる。今後時間分解能をより高めて、より精密に観察することによって、融解後に見られる幅広のバンドと結晶中のシャープなバンドとを対応させることができ、さらには結晶構造がどのように失われて液体になるのかについての手がかりが得られると考えている。比較のため同様の実験を分子結晶(アントラセン、ジフェニルナフタレン)についても行っており、既に帰属のついている格子振動バンドの融解に伴う変化についての考察を進めている。また装置性能も向上させた。特にヨウ素フィルターの温度を最適化することで、シスチンの9.8cm^<-1>までの低振動数バンドを露光時間0.2秒で観測することが可能となり、低振動数ラマン分光の応用の幅が広がった。

典型的なイミダゾリウム系イオン液体である、塩化ブチルメチルイミダゾリウムの結晶を急熱して、融解する過程の0.5秒単位での実時間観測を行った。その結果、低振動数領域に見られるシャープな複数の格子振動バンドが加熱に伴って消失し、消失に伴って幅広の低振動数ラマンバンドが生じる様子を観測することができた。この幅広のバンドは200cm-1以下の振動数領域に見られるバンドであり、液体状態のイミダゾリウム系イオン液体全般に見られるバンドと一致している。さらに、指紋領域及び低振動数領域のスペクトルを比較することにより、カチオン内部のブチル基コンホメーション変化と格子振動の消失過程とを比べることができる。その結果、内部構造変化が結晶構造の消失より遅れて起こることが明らかになった。これは内部構造を保つような結晶秩序が、融解の後期まで持続していることを意味しており、イオン液体の秩序構造に関連したものと予想している。
脳虚血に対する保護物質としてのデルタオピオイドの基礎的研究

ラットにおける強度の全前脳虚血(10分)に選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)は効果がなく、軽度な脳虚血(6,8分)においてDADLEに保護効果があることがわかり、8分の虚血においてデルタオピオイド拮抗薬natrindoleはDADLEの保護効果を相殺したが、6分虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺するだけでなく逆に悪化させた。この結果からデルタオピオイド受容体刺激は軽度脳虚血においてのみ保護効果を有することがわかった。しかしながらデルタオピオイド受容体遮断が非常に弱い脳虚血に対して脳障害を悪化させるのか不明であり、昨年度はこのメカニズムを内因性オピオイドの関与も踏まえ検討した。虚血前にnatrindoleを投与することによりデルタオピオイドレセプターをブロックしておくと軽微な脳虚血負荷を与えた場合脳障害を増悪させた。これは内因性デルタオピオイドアナログをブロックしたためと考えられ、デルタオピオイド受容体は内因性脳保護に関与していることが示唆された。また本年度はnatrindoleそのものの中枢神経毒性が懸念されたため、虚血負荷の無い場合のnatrindoleの中枢神経毒性について検討した。結果、中枢神経毒性は無いことが分かった。以上の結果ををまとめNeurosci Lett、Br J Anaesthに発表したラットにおける強度の全前脳虚血(10分)に選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)は効果がなく、軽度な脳虚血(6,8分)においてDADLEに保護効果があることがわかり、8分の虚血においてデルタオピオイド拮抗薬natrindoleはDADLEの保護効果を相殺したが、6分虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺するだけでなく逆に悪化させた。以上の結果ををまとめNeurosci Lett、Br J Anaesthに発表したラット全前脳虚血モデルの導入および選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)の対虚血脳保護効果の検討及び至適投与量の検討を行った。SDラット(300-350g)にイソフルランにて麻酔を施し虚血負荷開始30分前にDADLE[D-Ala2,D-Leu5]-enkephalin):0、025、1.0、4.0、16mg/kgを腹腔内に投与した。右外頚静脈からの脱血により平均動脈圧を35mmHgに維持し、両側総頚動脈を血管クリップにより10分間遮断した(両側総頚動脈遮断+脱血低血圧モデル)。運動機能と活動性の評価を虚血7日後に行ない、海馬領域を中心に組織学検討を行った。また、やや軽度な虚血(8分、6分)において、デルタオピオイドアゴニストであるnatrindole 10mg/kgの虚血負荷開始30分前の腹腔内投与を用いてデルタオピオイド受容体遮断が脳障害を増強させるか検討した。いかなる濃度のDADLEも10分間虚血による脳障害を軽減しなかった。しかし、8分の虚血においてnatrindoleは脳障害を増悪させた。これらの結果よりラットにおけるデルタオピオイドは強い虚血に対しては保護効果を有さないが、軽度の虚血には関連する可能性が示唆された。次年度は軽度脳虚血に対するDADLEの影響を検討する。ラットにおける強度の全前脳虚血(10分)に選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)は効果がないことがわかった。軽度な脳虚血(6,8分)においてDADLEに保護効果があるかどうか本年は検討を行った。その結果軽度脳虚血はDADLE投与により損傷が軽減することがわかった。しかしながらデルタオピオイド受容体を解して保護効果を示したかどうか検討する必要がありデルタオピオイドアゴニストであるnatrindoleによるデルタオピオイド受容体遮断を行った場合DADLEの保護効果がどのような影響を受けるかも検討した。8分の虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺したが、6分虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺するだけでなく逆に悪化させた。しかしながらデルタオピオイド受容体遮断が非常に弱い脳虚血に対して脳障害を悪化させるのか不明であり、次年度はこのメカニズムを内因性オピオイドの関与も踏まえ検討する予定である。ラットにおける強度の全前脳虚血(10分)に選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)は効果がなく、軽度な脳虚血(6,8分)においてDADLEに保護効果があることがわかり、8分の虚血においてデルタオピオイド拮抗薬

natrindoleはDADLEの保護効果を相殺したが、6分虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺するだけでなく逆に悪化させた。この結果からデルタオピオイド受容体刺激は軽度脳虚血においてのみ保護効果を有することがわかった。しかしながらデルタオピオイド受容体遮断が非常に弱い脳虚血に対して脳障害を悪化させるのか不明であり、本年度はこのメカニズムを内因性オピオイドの関与も踏まえ検討した。虚血前にnatrindoleを投与することによりデルタオピオイドレセプターをブロックしておくと軽微な脳虚血負荷を与えた場合脳障害を増悪させた。これは内因性デルタオピオイドアナログをブロックしたためと考えられ、デルタオピオイド受容体は内因性脳保護に関与していることが示唆された。ラットにおける強度の全前脳虚血(10分)に選択的デルタオピオイドアゴニスト(DADLE)は効果がなく、軽度な脳虚血(6,8分)においてDADLEに保護効果があることがわかり、8分の虚血においてデルタオピオイド拮抗薬natrindoleはDADLEの保護効果を相殺したが、6分虚血においてnatrindoleはDADLEの保護効果を相殺するだけでなく逆に悪化させた。しかしながらデルタオピオイド受容体遮断が非常に弱い脳虚血に対して脳障害を悪化させるのか不明であり、昨年度はこのメカニズムを内因性オピオイドの関与も踏まえ検討した。また本年度はnatrindoleそのものの中枢神経毒性が懸念されたため、虚血負荷の無い場合のnatrindoleの中枢神経毒性について検討した。結果、中枢神経毒性は無いことが分かった。以上の結果ををまとめNeurosci Lett、Br J Anaesthに発表した
味噌の抗酸化力を持続・増大させる調理法の検討

〔目的〕味噌によって生活習慣病を予防するため、味噌の抗酸化力を維持・増進する味噌の調理法、併用する香辛料や野菜の影響を検討する。〔方法〕調理温度、香辛料野菜の種類による味噌の褐色度、ポリフェノール化合物、イソフラポンの変動とORACの関係を測定する。味噌の生体内抗酸化力への影響は、野菜の味噌煮液をラット肺ホモジネートの上清に加え、SOD活性、GSH-Px活性と12-HETE生成量の変動を測定して推定した。〔結果〕1.調理法の影響味噌の抗酸化力は主として70%エタノール可溶性画分のORACで、色度の明度、総イソフラボン量やアグリコン量に比例した。味噌の調理法による抗酸化力は蒸す、煮る、妙める、焙る、加圧加熱の順で褐色度、DPPH-SCとORACが増大し、総イソフラボン量とアグリコン量が減少した。加熱によるORACの増大要因にはメラノイジンの生成が示唆された。2.香辛料の影響味噌を香辛料と調理すると、ショウガやゴマはポリフェノール量とOARCを増加し、ニンニクはポリフェノール量やイソフラボン量は増加しなかったが、ORACを増加した。唐辛子は褐色度とORACを低下させ、和芥子はポリフェノール量を増加したがイソフラボン量をORACを減少させた。これらの結果から、ショウガ、ニンニクとゴマはそれぞれ固有の抗酸化物質を溶出付加して味噌の抗酸化力を向上させ、唐辛子はメラノイジンの生成を抑制し、和芥子はメラノイジンの生成抑制とイソフラボンアグリコン量の減少により味噌の抗酸化力を減少させることが示唆された。3.野菜の影響味噌をニンニク、葉ネギ、チンゲンサイ、ナスやブロッコリーと加熱するとORACが増加した。その要因には、ニンニクの場合はポリフェノールの溶出により、葉ネギ、チンゲンサイとブロッコリーの場合はポリフェノールの溶出と褐色度の増加が示唆された。4.生体内抗酸化力ニンニク、ゴボウ、葉ネギはSOD活性とGSH-Px活性や12-HETE生成を促進し、タマネギ,チンゲンサイとピーマンはSOD活性を増大し、白ネギはSOD活性と12-HETEの生成を促進し、ナスはGSH-Px活性と12-HETEの生成を促進して体内でも味噌の抗酸化作用を増強することが示唆された。〔目的〕味噌には、イソフラボンやメラノイジンによるラジカル消去力、生体内抗酸化力がある。しかし、味噌の坑酸化力は調理素材、併用調味料や加熱条件によって変化する可能性がある。本研究では、調理した味噌の健康におよぼす効果を調べるために、味噌の調理条件、併用調味料・香辛料、調理素材が味噌の生体内坑酸化力に及ぼす影響を推測する。〔方法〕加熱条件:煮る(100°C,10分)、妙める(140°C,4分)、揚げる(180°C,2分)、缶詰(210°C,60分)。併用調味料・香辛料:ショウガ、ニンニク、一味唐辛子、和辛子、煎りゴマ調理素材:

ピーマン、ナス、ブロッコリー、チンゲン菜、葉ネギ、白ネギ、タマネギ、ニンニク、大根、ゴボウ、生姜。測定項目:スーパーオキシド消去力、イソフラボン量、ポリフェノール量。〔結果〕味噌は加熱すると温度と時間の如何にかかわらずスーパーオキシド消去力が向上した。ニンニク、ショウガ、ゴマ、梅酢、食酢を併用すると味噌のスーパーオキシド消去力はさらに向上した。このスーパーオキシド消去力の増大はニンニク、ショウガとゴマの場合は、それぞれの香辛料に固有な坑酸化物質の作用により、梅酢の場合は、長時間加熱によるメラノジンの増大によることが示唆された。調理素材として用いた野菜は全て味噌のポリフェノール量を増大させ、ダイコン、白ネギ、葉ネギ、チンゲンサイ、ブロッコリー、ピーマンはイソフラボン量を増加させた。また、ニンニク、ブロッコリー、チンゲンサイはスーパーオキシド消去力を強くした。これらの結果から、ショウガ、ニンニク、ダイコン、タマネギ、ゴボウ、白ネギ、葉ネギ、チンゲンサイ、ナス、ピーマンを味噌で調理すると、味噌のスーパーオキシド消去力を促進したり、ポリフェノール量を増大させて味噌の生体内坑酸化作用を増強することが示唆された。1.各種野菜が味噌の抗酸化力におよぼす影響をトルロックス当量で評価した。昨年度測定した味噌の抗酸化力(DPPH-IC_<50>とO_2-IC_<50>)をトルロックス当量で測定し直し、DPPH-SCとORACで評価した。この評価法により、抗酸化力の強さがDPPH-SCとOIUCの数値に比例し、野菜の抗酸化力の判定が容易になった2.野菜と調理した味噌が生体内抗酸化力におよぼす影響をラットの肺を用いて調べた。野菜と加熱した味噌の上清をラットの肺ホモジネートの上清に加え、SOD活性,GSH-Px活性と12-HETE生成量に及ぼす影響を調べた。ニンニク、ゴボウ、葉ネギはSOD活性とGSH-Px活性や12-HETE生成を促進し、タマネギ、チンゲンサイとピーマンはSOD活性を促進し、白ネギはSOD活性と12-HETEの生成を促進し、ナスはGSH-Px活性と12-HETEの生成を促進した。これらの結果から、味噌をニンニク、ゴボウ、葉ネギ、タマネギ、チンゲンサイ、ピーマン、白ネギやナスと加熱調理すると、これらの野菜が味噌の生体内抗酸化作用を増強することが示唆された。3.生体内抗酸化力を維持・増進させる調理法味噌の抗酸化力は蒸す、煮る、妙める、焙る、加圧加熱の順に強く、ニンニク、ゴボウ、葉ネギ、タマネギ、チンゲンサイ、ピーマン、白ネギやナスと加熱すると強くなった。
ゲノム改変細胞を用いたコアヒストンの生理機能解析

コアヒストンはクロマチン構造の根幹をなす分子であり、部位特異的なアセチル化、メチル化等の修飾が様々なDNA介在反応に与える影響は明らかではあるが、これらの知見は主として修飾酵素のノックアウト・ダウン実験から得られた間接的なものである。それは高等動物では、コアヒストン分子やその化学修飾の有する生理機能を遺伝学的にin vivoで直接検証できる実験系が存在しないためである。これは動物種の個々のヒストン遺伝子が数十数百コピーからなる多重遺伝子であり、複数の染色体に局在しているため、個々の全コアヒストン遺伝子を任意の変異ヒストンと置換することは極めて困難であると考えられてきたためである。。本研究目的は、これまで多重遺伝子であるため遺伝学的解析は困難とされてきたコアヒストンの生理機能をニワトリB細胞株であるDT40を利用したゲノム改変細胞を用いて明らかにすることである。ニワトリDT40細胞の全Canonicalヒストン遺伝子群(各H1,H2A, H2B, H3, H4遺伝子が5-10コピー/haploid)が、一番染色体上の一カ所(約100kb内)に存在する利点を生かし、conditionalに本ローカスを一括して除去可能な改変細胞株の樹立を試みた。平成30年度は、ゲノム編集技術を基盤とした統合的ヒストンゲノム制御システムの構築を検討した。ヒストンゲノム除去システムとして、今回Cre-loxシステムを用いてヒストン除去できるノックインベクターを作製した。現在、DT40細胞を用いて、これらベクターの効果について検討している。当初計画していたノックインベクターの構成に問題が生じたことと、研究実施体制を整えるのに時間を要してしまい、計画通りに進めることができなかったため。1.引き続き細胞レベルでヒストン制御システムの開発を行う。当初候補に挙げていたノックアウトベクターの構成の問題で十分な効果が得られない可能性が出てきたため、候補の追加やベクター構成の変更等も視野に入れて検討する。2.構築した統合的ヒストンゲノム制御システムを導入した遺伝子改変細胞を作製する。。
初期面で退化した偏微分方程式の解の構造とその応用

バウエンディーグラウイック(M.S. Baouendi -C.Goulaouic)が定義したフックス(Fuchs)型偏微分方程式,すなわち初期面に沿って確定特異点をもつ線形偏微分方程式,に対しては,指数多項式(indicial polynomial)と呼ばれる多項式,及びその零点である特性指数(characteristic exponent)が重要な役割を果たす.従来の研究においては,この特性指数に条件を付けて考察されることがほとんどであったが,平成11年度以前に当研究グループが行った研究において.特性指数の滑らかさを仮定せずに,初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ斉次方程式の解の構造を局所的に明らかにすることができた.1階のフックス型システム(偏微分方程式系)に対しても,ほとんど同様に解の構造を明らかにすることができた.平成12年度からの本研究においては,まず,1階のみではなく,いわゆるVolevic型のシステムに対して,同様に解の構造を明らかにすることを目指し,これに成功した.上で述べたフックス型偏微分方程式においては,1変数(t)だけが特別な働きをする(これをフックス型変数と呼ぶ).今までの研究において得られた諸結果やアイデアを,フックス型変数が2つ以上ある場合(N.S.Madi氏による定義を採用した)に適用できるかどうかを明らかにすることを次の主目標とした.アルジェリアのM.Belarbi氏やM.Mechab氏の協力を得る事ができ,特に実領域における超関数解の存在について考察した.フックス型変数が1つの時よりずっと複雑な状況にあることが分かったが,複素領域における斉次方程式のすべての解の構成を行ったときのアイデアを援用することで,ある程度の結果が得られた.その他,非線型フックス型方程式やその応用などについても結果が得られた.バウエンディーグラウイック(M.S. Baouendi -C.Goulaouic)が定義したフックス(Fuchs)型偏微分方程式,すなわち初期面に沿って確定特異点をもつ線形偏微分方程式,に対しては,指数多項式(indicial polynomial)と呼ばれる多項式,及びその零点である特性指数(characteristic exponent)が重要な役割を果たす.従来の研究においては,この特性指数に条件を付けて考察されることがほとんどであったが,平成11年度以前に当研究グループが行った研究において.特性指数の滑らかさを仮定せずに,初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ斉次方程式の解の構造を局所的に明らかにすることができた.1階のフックス型システム(偏微分方程式系)に対しても,ほとんど同様に解の構造を明らかにすることができた.平成12年度からの本研究においては,まず,1階のみではなく,いわゆるVolevic型のシステムに対して,同様に解の構造を明らかにすることを目指し,これに成功した.上で述べたフックス型偏微分方程式においては,1変数(t)だけが特別な働きをする(これをフックス型変数と呼ぶ).今までの研究において得られた諸結果やアイデアを,フックス型変数が2つ以上ある場合(N.S.Madi氏による定義を採用した)に適用できるかどうかを明らかにすることを次の主目標とした.アルジェリアのM.Belarbi氏やM.Mechab氏の協力を得る事ができ,特に実領域における超関数解の存在について考察した.フックス型変数が1つの時よりずっと複雑な状況にあることが分かったが,複素領域における斉次方程式のすべての解の構成を行ったときのアイデアを援用することで,ある程度の結果が得られた.その他,非線型フックス型方程式やその応用などについても結果が得られた.バウエンディーグラウイック(M.S.Baouendi-C.Goulaouic)の意味のフックス(Fuchs)型偏微分方程式,すなわち,初期面に沿って確定特異点をもつ線形偏微分方程式が,我々の重要な研究対象の一つである.今年度は,前年度までの研究において得られた単独フックス型偏微分方程式やフックス型偏微分方程式の1階システムに対する結果を,Volevicタイプのシステムに対して拡張することが主なテーマとなった.たとえば,複素領域における斉次方程式の解(初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ解)の構造を局所的に明らかにすることについて,Volevicタイプのフックス型偏微分方程式システムに対しても,1階システムなどの場合と同様の結果が得られた.解写像を構成する基本的なアイデアは同様であり,解をコーシー積分を用いて表すことが基本となるが,斉次方程式の解がすべて高々多項式増加であることをまず示さなければならない.これは主に田原の努力により解決された.正則なデータを与える初期値問題においても,特性指数が非負整数になるときには,一般には正則解が存在しない.初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ解で,ある意味で正則解に"近い"解が構成できることが分かった.しかし,元の方程式が正則解を持つときでも,この解はその正則解になるとは限らない.この点に関しては単独方程式等も含めて,さらなる研究が必要であり,又,このような解とMellin変換との関連なども調べる必要がある.上記の結果に関しては,フックス双曲型方程式のC^∞解や超関数解全体の構造についても,同様のアイデアで,Volevicシステムが扱えるかどうか,又,Volevicタイプのシステムを越えて,非可換行列式を使って条件を与えることができるかどうか,等が今後の大きな問題となると思われる.

バウエンディーグラウイック(M.S.Baouendi-C.Goulaouic)の意味のフックス(Fuchs)型偏微分方程式,すなわち,初期面に沿って確定特異点をもつ線形偏微分方程式が,我々の重要な研究対象の一つである.今年度は,前年度までの研究において得られた諸結果を見直し,残された問題の相互の関連性などを再検討することから始めた.たとえば,複素領域における斉次方程式の解(初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ解)の構造を局所的に明らかにすることについては,前年度までに,単独方程式やVolevicタイプのフックス型偏微分方程式システムに対して解写像が構成されていたが,これらの構成は全く局所的なものであり,非特性的な場合のように,初期面に沿ってつないでいくことができない.この点について,いろいろな例を考察することにより,解の構成法の変形可能性などを探った.難しさの核心のようなものはつかめてきているが,解決にはもう1段のアイデアが必要である.また,この点に関連して,われわれが構成した解とMellin変換との関連などについても考察を進めた.正則な右辺を与える初期値問題においても,特性指数が非負整数になるときには,一般には正則解が存在しない.初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ解で,ある意味で正則解に"近い"解が構成できることも分かっているが,元の方程式が正則解を持つときでも,この解はその正則解になるとは限らない.この点に関して,構成法の問題点が,上で述べた初期面に沿って解をつないでいく際の問題点と深く関係していることが分かってきた.バウエンディーグラウイック(M.S.Baouendi-C.Goulaouic)の意味のフックス(Fuchs)型偏微分方程式,すなわち,初期面に沿って確定特異点をもつ線形偏微分方程式が,我々の重要な研究対象の一つである.このフックス型作用素においては,1変数だけが特別な働きをする(これをフックス型変数と呼ぶ).今年度は,前年度までの研究において得られた諸結果やアイデアを,フックス型変数が2つ以上ある場合(N.S.Madi氏による定義を採用した)に適用できるかどうかを明らかにすることを,始めの主目標とした.アルジェリアのM.Belarbi氏やM.Mechab氏の協力を得る事ができ,特に実領域における超関数解の存在について考察した.従来のフックス型変数が1つの場合の議論だけでは,どうしても超えられない部分が生じたが,複素領域における斉次方程式のすべての解の構成を行ったときのアイデアを援用することで,ある程度の結果が得られた.複素領域における斉次方程式の解(初期面にのみ特異性(多価性も許す)を持つ解)の構造を大域的に明らかにすることについては,前年度同様考察を加えたが,まとまった結果には至らなかった.難しさの核心のようなものはつかめてきているが,解決にはもう1段のアイデアが必要である.また,田原を中心として非線型フックス型方程式の研究も進み,複素領域において,見かけの特異性を持つ解が実は正則解となるための十分条件について,改良に成功した.また,派生的に生じる常微分方程式に関する問題について,坂田を中心として,区分的に一定な時間遅れを持つある2次元微分方程式系x'(t)=-α{1-|x(t)|^2}R(θ)x([t])に対し,係数αをパラメータとして,この系が漸近安定な場合と星形の周期解が存在する場合との分類をαを用いて行った.
複合培養系の統合深化による新奇抗生物質の探索

現在市販されている抗生物質の約半分は微生物が生産する。ペニシリンの発見以来人類は様々な抗生物質を微生物の培養液から求めている。本研究では複合培養という手法により、抗生物質を生産する微生物(放線菌)が他の微生物(ミコール酸含有細菌)によって刺激を受けることにより、放線菌が生産する抗生物質の種類が増えることが明らかとなったため、この現象がどのようなメカニズムで行われるのか、また、複合培養によって新たな抗生物質を発見することを目指して研究を行った。その結果、複合培養では両菌株が直接接触することが必須条件であり、また、複合培養を用いることにより新たに17種類の新規二次代謝産物を発見した。微生物培養時には純粋分離した微生物を用いるのが常套手段であるが、自然環境下では様々な微生物が共存しており、純粋培養状態での生育は極めて希である。微生物の物質生産、特に抗生物質等の二次代謝は他の微生物との共存下で自身が有利に生育するために行う代謝活動であり、この点を考慮すると、抗生物質生産においては純粋培養とは異なる共培養法による生産が有利な場合が少なからず存在すると考えられる。複合培養は、申請者らが開発した抗生物質生産に適した共培養法である。放線菌とミコール酸を外膜に有する微生物(ミコール酸含有細菌)を共培養すると、放線菌が純粋培養時とは異なる抗生物質生産パターンを示す。複合培養法は本現象を用いた抗生物質探索に適した新規培養法である。本年度は、次世代シーケンサーによるゲノムワイドの転写シークエンスを用いて、複合培養時に特異的に発現する遺伝子群の同定をおこなった。Streptomyces lividansは複合培養時にのみ赤色色素・アクチノロージンの生産が誘導される。そこで、S. lividansの近縁種で完全長のゲノム情報が明らかになっているStreptomyce coelicolor A3(2)をモデル放線菌とし、ミコール酸含有細菌であるCorynebacterium glutamicum(Cg)もしくはRhodococcus erythropolis(Re)との複合培養を行い、次世代シーケンサーによるランダムシーケンスにより純粋培養時との間で転写量の増減を比較した。複合培養36時間目の菌体を集菌してmRNAを調整した後、シーケンスを行った。その結果、Cg、Reとの複合培養によって転写量が3倍変化している遺伝子はそれぞれ995個、311個であり、そのうち転写因子遺伝子であったものは46個、44個であった。本年度は、昨年度に引き続き、次世代シーケンサーによるゲノムワイドの転写シークエンスを用いて、複合培養時に特異的に発現する遺伝子群の同定をおこなった。近縁種で完全長のゲノム情報が明らかになっているStreptomyce coelicolor A3(2)をモデル放線菌とし、ミコール酸含有細菌であるRhodococcus erythropolis(Re)との複合培養を行い、次世代シーケンサーによるランダムシーケンスにより純粋培養時との間で転写量の増減を比較した。前培養後両菌を同じフラスコに投入して複合培養を開始するが、投入直後、約10分におけるサンプリングにおいても遺伝子発現に差が生じることが明らかになった。16SrRNAを除去したmRNA調整に手間取ったが、精製行程を工夫することにより、混入の少ないmRNAの調整ができるようになった。本調整サンプルを用いて次世代シーケンサーを用いたトランスクリプトーム解析を行い、複合培養と純粋培養における遺伝子発現の差を明らかにする予定である。本年度研究計画(3)複合培養の統合深化による効率的な新奇抗生物質の探索に関しては、Arcyriaflavin E, chojyalactone類, 5-alkyl-1,2,3,4-tetrahydroquinoline類を発見し、学術誌にて発表した。研究計画は3つからなり、本年度の研究実績の概要は以下の通りである。(1)次世代シーケンサーによるゲノムワイドな転写シークエンスによる複合培養時特異的発現遺伝子の同定。本年度は、昨年度に引き続き、次世代シーケンサーによるゲノムワイドの転写シークエンスを用いて、複合培養時に特異的に発現する遺伝子群の同定をおこなったが、遺伝子の発現パターンの有意な差を検出することが出来なかった。(2)複合誘導時に特異的に誘導される二次代謝生合成遺伝子プロモーターの転写調節機構の解明。Streptomyces nigrescens HEK616とT. pulmonisとの複合培養により5-alkyl-1,2,3,4-tetrahydroquinoline (5a-THQ)が複合培養特異的に発現することが明らかになったため、複合培養によって5a-THQ生合成遺伝子群の転写が活性化しているかどうかについて解析を行った。ドラフトゲノム解析より5a-THQの生合成遺伝子群を同定、クローニングした。S. lividansを用いた異種発現より5a-THQの生産を確認した。