hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
西園寺公望文書(書類編)の研究

本研究は、華族西園寺公望家の文庫より発見され、立命館大学貴重書庫に寄託されている元老西園寺公望の関係史料について、目録化し、その詳細について整理・紹介を試みたものである(すでにその内の書簡編に関しては、日本学術振興会科学研究費補助金の交付を得て、目録化・整理・翻刻作業を終了している)。本研究では残る膨大な書類群に関して、(1)全体を目録化する、(2)その内主要なもの数点について、整理作業を加えると共に、内容紹介とくずし字文書については翻刻作業を行う、という二点を主たる目標として進められた。研究代表者の元には関西圏各地の大学院生が集まって西園寺公望関係文書研究会を組織し、整理作業に参加した。彼らの協力によりくずし字史料の翻刻や内容分析、背景説明などの研究作業が著しい進展を見たことを特記しておきたい。研究会は月一回のペースで開かれ、各メンバーが担当する部分について、内容紹介とくずし字史料の翻刻成果が発表された。また春夏冬の各休暇には長期の整理作業期間も設定して作業を進めた。当初予定していた作業の内、全体の目録化については完全に終了した。整理作業については、全体の約半分については、内容紹介と主要なくずし字史料の翻刻を終えることが出来た。今回整理した書類の中には、第二次西園寺公望内閣の内閣機密費に関する史料群など政治史的に貴重なものがいくつか含まれており、それらについては今後順次、史料紹介の形で学界に公開する予定である。なお、その一つとして、小山俊樹による内閣機密費の史料紹介が『メディア史研究』2006年5月号に掲載されている。本研究の目的は、立命館大学図書館の貴重書庫に所蔵されている元老西園寺公望の関係文書中、書類編の整理を行い、同時にそれら資料群について研究を行うことである。今年度は全体の目録化と一部の書類中、特にくずし字体の史料の翻刻に取り組んだ。そのために研究分担者に大学院生十数名を加えて、西園寺文書研究会を組織し、定期的に研究会を開催した。この研究会が、実質的に目録作り史料翻刻の推進母体となった。結果的に目録化は大きな分類についてはほぼ終了、来年度はより詳細な枝番について目録化を行いたい。また史料の翻刻については、今年度は機密費と行財政整理の2ブロックを中心に作業を進めたが、前者についてはすでに研究段階に入り、翻刻は終了、西園寺文書研究会においてそれら史料群を用いた研究報告がされている。後者については、まだ翻刻化が完了していないため、次年度引き続き作業を進めていきたい。この間史料群の背景となる史実を知るために、国立国会図書館憲政史料室を中心とする東京の史資料館に数度出張を行った。現地では、書類史料の各テーマに対応する文献を調査し、文書類の収集を行ったが、これは次年度も翻刻・研究作業に付随して実施していく必要がある。また3月14日18日にかけて、東京晴海海員会館において集中研究会を催し、これには関東方面の研究者や東京大学大学院生数名も参加して、共同作業に取り組み情報交換を行った。総じて、本年度は目的とする研究を順調に進めえた。本年度の作業を通じて、院生たちの史料読解能力も向上してきている。来年度はさらに実績をあげられるように努力したい。立命館大学図書館所蔵の西園寺公望関係文書の内、主として書類編を中心に翻刻作業を行った。同時に大学院生十数名による西園寺公望関係文書研究会を組織して、同史料に関する関連史料の収集や、史料の背景、年代推定などの研究を行った。この書類編は西園寺公望の首相時代、いわゆる桂園時代のものを中心に、公文書、メモ、意見書など実に多様な史料が、ジャンル別に袋わけされて、保存されていた。

これらの史料は西園寺家の書庫から発見されるまで、ほとんど未整理の状態であり、かつ量的にもかなり膨大なものであったため、本研究ではまずそれらの目録を作る作業から研究を開始し、同時に史料の保存状態、形態、内容などについて、包括的な検討を加えた。その上で、それらの中から特に政治的な重要なものを中心に数点をピックアップし、その一つ一つについて綴り込みの史料を一点ずつに分けた上で詳細な目録をとり、それらが持つ政治史的な意味について西園寺公望文書研究会で検討を行った。その成果については、順次『立命館大学』などの紀要を通じて発表していきたいと考えている。また現在は非公開であるこの史料であるが、国内外からの問い合わせが引きも切らないことから、こうした外部の閲覧希望者に対しても早急に公開できるよう、しっかりとした体制作りを進めていきたいと考えている。
就労・育児世代に子宮頸がんの診断・治療を受けた女性の治療後の生活の実態

初年度であり、文献レビューを中心に研究活動を推進した。特に、若年で子宮頸がんを発症した女性の生活状況や、困難の実態を明らかにしていくため、国内外の先行調査を確認し、検討課題を明らかにしていった。今後は先行調査を踏まえたインタビューシートを作成し、プレインタビューを実施し、インタビューシートの精度を高める予定である。その他に、研究フィールドワークの確立、データ収集・分析方法の確認と環境整備、学会での情報収集や、分析に係るセミナー受講を行った。初年度は研究遂行の準備期間として設け、研究フィールドを確立するとともに、国内外の文献を広くレビューし、取り組むべき課題を明確にすることを中心とした研究活動を行った。予定通りに研究フィールドでの調査協力依頼を進めている。また文献レビューを実施しながら研究課題を整理している状況にあり、おおむね順調に進展しているといえる。本研究では、対象者が若年の子宮頸がん発症女性であり、疾患や年齢を限った健康上の課題に取り組んでいる。2040代の女性が対象者となっており、子宮頸がん好発年齢ではあるが対象者数は限られる。そのため対象者へのアクセスや、対象者の研究参加への説明・同意取得方法について、研究フィールドとの調整や研究協力者の依頼など、研究推進のための対策が必要である。研究者の所属大学では大学病院が近隣にあり、また所属学科には産婦人科医師が在籍していることから、協力依頼が可能であると考える。また調査フィールドでは医師や外来勤務看護師との連携を強化して行く必要がある。本年度は調査の準備段階であり、実質の調査は開始していない。そのため、調査実施してから必要な物品の費用が計上されなかった。調査開始後の必要経費として次年度以降に使用予定である。
胃癌の進展・転移における遺伝子異常と血管新生および間質形成の意義

我々は臨床における胃癌組織でのVEGF,p53の発現を調べて、胃癌の血管新生における諸因子の役割と相互関係を明らかにしてきた。P53異常蛋白陽性例はVEGF陽性が多く、両者が共に発現している場合が脈管侵襲、リンパ節転移が高度で、最も予後不良であった。P53異常蛋白がVEGF発現を誘導するものは血管新生を促し、腫瘍内血管密度を高め、癌の浸潤転移を促し、予後不良であることが明らかになった。また、早期胃癌症例(粘膜下層浸潤癌)94例を対象に腫瘍の発育進展形式とVEGFの発現、および血管新生の指標とされる微小血管密度(microvessel density;MVD)との関係について検討した。発育進展形式は、Pen A型(深部浸潤発育型:expansive)、Pen B型(深部浸潤発育型:infiltrative)、Super型(表層拡大型)および分類不能型として分類した。Pen A型はVEGF陽性率が他の発育進展形式に比べ有意に高く(66.7%)、MVDについてもPen A型は25.9±9.2と有意に高い値を示した。Pen A型の5年生存率は81.8%とSuper型の96.7%に比較し有意に低く、Pen A型再発例はすべてVEGF陽性例であった。多変量解析の結果、VEGFの発現はリンパ管侵襲とともに有意な予後因子であった。胃癌の初期進展において、Pen A型胃癌はVEGFを産生して血管新生を促し、静脈侵襲を来し易いと推定でき、そのため血行性転移による再発率が高く予後不良であると考えられた。さらにTGF-β1と胃癌の浸潤・転移について検討した。免疫染色にて胃癌の35.9%においてTGF-β1の発現を認め、奬膜浸潤・リンパ節転移と密接に関係しており、TGF-β1の発現陰性胃癌のリンパ節転移を免疫染色にて検討したところ54.2%にTGF-β1発現陽性を認めた。TGF-β1は癌の浸潤・転移と深く関連していると考えられた。早期胃癌の発育進展形式の違いとp53遺伝子異常および血管新生の関連を調べた。早期胃癌159例についてp53異常蛋白の発現を組織免疫染色にて調べると、予後不良なPenA型胃癌では43%がp53陽性であり、予後良好なSuper型の16%に比べると有意に高い陽性率を示した(P<0.05)。血管新生に関しては血管新生因子であるVEGFの発現率がPenA型では67%と、Super型の19%に比べて有意に高く、腫瘍内血管密度も高かった。胃癌の初期進展におけるp53異常の関与と腫瘍血管新生の転移・再発との関係が明らかになった。発癌のメカニズムに関わるものとして注目されているミスマッチ修復異常は、マイクロサテライト不安定性を調べることで検出可能である。単発癌に比べ重複癌ではマイクロサテライト不安定性の出現頻度は89%ときわめて高値で、マイクロサテライト不安定性を調べることで重複癌発生の危険性の高い集団を同定できる。われわれは自動シーケンサーを用いてマイクロサテライト不安定性の感度の高い新しい解析法を開発した。従来のアイソトープを用いる方法に比べて新しい方法では、(1)TaqポリメラーゼのTdT活性をコントロールすることで、PCR産物は2bp毎となり、再現性のある結果が得られた。

(2)蛍光プライマーと自動シーケンサーを用いて定量性のある解析が可能となった。(3)癌から得られたサンプルと非癌部から得られたサンプルを同一のレーンに泳動することで泳動誤差を皆無にすることができ、重複癌発生の危険性の高い集団を確実に同定することが可能となった。我々は臨床における胃癌組識でのVEGF、p53の発現を調べて、胃癌の血管新生における諸因子の役割と相互関係を明らかにしてきた。p53異常蛋白陽性例はVEGF陽性が多く、両者が共に発現している場合が脈管浸襲、リンパ節転移が高度で、最も予後が不良であった。VEGFは早期、進行胃癌ともに有意な予後因子であった。胃癌において、p53異常蛋白がVEGF発現を誘導するものは血管新生を促し、腫瘍内血管密度を高め、癌の浸潤転移を促し、予後不良であることがこれまでに明らかになった。この研究と平行して我々は種々の癌のマイクロサテライト不安定性についても解析を行っている。末梢血の微量癌細胞の検出方法に関して、偽陽性、感度、特異性の問題があり、現在まで様々な施設からその検出法の報告があったにも関わらず、実際に臨床応用されることはほとんどなかった。今回われわれが行っているPCR定量機器ABI7700Sequence Derecterは、Taqman Probeと呼ばれるヌクレアーゼ処理により蛍光を発するプローブを利用し、リアルタイムにPCR産物の増幅の様子をモニターする革新的な機器であり、現時点で考えられるもっとも優れたPCR定量法である。またこの機器は通常必要な電気泳動をする必要がなく、作業も単純化することができるため大量の解析が可能となった。またこの系を用いて、ミスマッチ修復遺伝子に変異をもつことが知られているヒト大腸癌細胞株をそれぞれサブクローニングし、クローン間の比較によりマイクロサテライト不安定性を検討したところ、変異遺伝子によっては殆どのクローンでマイクロサテライト配列の変化が観察され、この系の鋭敏さが示されるとともにイクロサテライト不安定性の変異遺伝子特異的な特徴が明らかにされた。今までに我々は細胞株また胃癌症例の術中骨髄穿刺による骨髄を用いて、ABI7700を用いたリアルタイムRT-PCR法を確立し解析してきた。一方で上皮細胞の細胞骨格を形成するサイトケラチンを骨髄中やリンパ節内において検索することで癌の微小転移を検索する際のひとつの手段となりえるという報告がある。今回、胃癌症例における末梢血中のサイトケラチンをABI7700を用いた系において解析しその意義解明を行っている。現在までに手術症例、非手術症例、化学療法症例と健常者より約70例の検体を収集し、おのおのの発現量をdataとしてまとめているところである。手術症例に対しては術前、術後1年目までの経過を追うため今後も続けていく予定である。現在までにわかってる結果としては、健常者と比較しサイトケラチン発現量の多い胃癌症例が約10例ほど認められ、臨床病理学的因子との関連を今後検討していく。胃癌手術標本123例を用いて免疫染色によりCyclooxygenase-2(COX-2)の発現率を検討した。陽性率は63.4%であり、臨床病理学的因子との検討では組織型が分化型に多い傾向がみられた。最近の報告ではCOX-2は癌の血管新生に深く関係していることがいわれており、同症例における他の血管新生関連因子との関係を検討していく予定である。
ITを活用した広域ミュージアムスクールで学ぶ恐竜学のカリキュラム開発に関する研究

岐阜県,石川県などに分布する手取層群から産出した恐竜化石など白亜紀(約1億4000万年前)の脊椎動物化石を学習することにより,中生代の白山地域における動植物相や古環境を理解し,中生代と現在の生態系を対比させ,未来の自然と人間の在り方にまで思いを馳せられる次世代の人材育成を目指すための一つのモデル案を策定する研究を行った。小学生・中学生・高校生・大学生,大学院生,研究者,教育者,一般成人などで構成される2つのモジュールを,国立科学博物館「科博たんけんクラブ」と北九州市立自然史・歴史博物館「恐竜時代の生き物たち研究隊」に組織し,共通の化石標本資料(始祖鳥や尾羽竜模型等)などを利用し,携帯電話テレビ会議システムを活用して相互にフィードバックしあいながら恐竜学の基礎を学習するカリキュラムを開発した。また,研究チームは同じ白亜紀の地層を教材に,先進的な活動を行っているメルボルンにあるモナッシュ大学サイエンスセンターを訪問し,同センターが毎年夏期に行っている地域ボランティアによる化石発掘体験プログラム(Dinosaur Dreaming)に参加した。その際に,発掘現場担当者やメルボルンの小・中学生等と交流し,さらに「科博たんけんクラブ」のメンバーを含む科博の入館者の方々と携帯テレビ電話を利用して交流活動を行った。これらの研究成果等はインターネット経由で発信し,広域ミュージアムスクールの一つのモデルを実現した。1.研究実績の概要今年度は小学生、中学生、大学生、大学院生、研究者、教育者、一般成人などで構成される2つのモジュール(チーム)を、国立科学博物館『かはくたんけんクラブ(テーマ-化石-)」と北九州市いのちのたび博物館「恐竜時代の生き物たち研究隊」に組織した。この2つのモジュールは、この活動のために新たに購入した始祖鳥や尾羽竜模型等を利用しながら、相互にフィードバックしあい、恐竜学の基礎を学習した。11月23日には国立科学博物館「かはくたんけんクラブ」の学習成果発表会に携帯電話テレビ会議システムを使って「恐竜時代の生き物たち探検隊」の隊員による活動内容の紹介や質疑等により相互の交流を図った。携帯電話テレビ会議システムで博物館同士が交流することは今回が初めてで、この技術が用いられれば、手軽に野外などの学習の様子を伝え、さまざまな交流を生むことができるようになるので、携帯電話の可能性を活かす実験的な試みを行った。広域ミュージアムスクールを構成する2つのモジュール(チーム)は、互いに進捗状況や研究の内容についてなど、携帯電話テレビ会議システムを利用して意見交換を行った。「恐竜時代の生き物たち研究隊」の活動に関してはhttp://www.kmnh.jp/kenkyutai/index.htmlで公開している。「かはくたんけんクラブ」の活動に関しては国立科学博物館のホームページに「ITを活用した広域ミュジアムスクール」のWebサイトを立ち上げ、情報提供できるよう準備を行っている。(1)「かはくたんけんクラブ(テーマ-化石-)」の活動概要■クラブ員の構成:小学生11名、中学生11名、高校生サポーター6名、計28名■クラブスケジュール:8月から11月まで計13回、実験、観察、フィールドワーク、講義、討議、プレゼンテーションなど多様な学習方法を組み合わせ、科学的な見方、考え方を育む学習のプロセス、学び方を重視した活動を行った。■学習成果の発表:11月23日(日)国立科学博物館大会議室において、恐竜、アンモナイト、始祖鳥などに関する6つの研究報告を行い、「恐竜時代の生き物たち研究隊」の隊員とも携帯電話テレビ会議システムを使い質疑等により相互の交流を図った。(2)「恐竜時代の生き物たち研究隊」の活動概要■隊員の構成:小学生13名、中学生7名、大学生1名、一般8名計29名■学習成果の発表:3月27日(土)北九州市いのちのたび博物館において研究発表会を開催した。
単一細胞における全遺伝子の発現計測と環境応答制御の解析

環境中の細菌は、細胞間で交信し、集団として環境悪化に対応する。異なった役割を果たしている細菌細胞の個性解明を目標に、「単一細胞観測装置」を開発し、単一細胞での転写の動態観測に初めて成功した。一方、環境に応じたゲノム転写パターン決定機構解明を目標に、大腸菌の300種類転写因子の全てについて、制御支配下遺伝子群の同定と調節機能の解析を実施した。本研究の成果を基盤に、新分野『細胞個性学』の確立を目指す。大腸菌ゲノムの約4,000の遺伝子は、約2,000分子のRNAポリメラーゼで転写される。従って、ゲノムの転写パターンは、全遺伝子間での転写装置の分配で決定されると推定される。一方、ゲノム配列分析から、転写装置の遺伝子選択性を制御する転写因子は、大腸菌に約300種存在すると予測した。ゲノム全遺伝子の転写を計測する目的で、各転写因子の認識結合するDNA配列を同定するgenomicSELEX法を開発し、本年度、大腸菌転写因子約100種類に関して、支配下遺伝子群の同定に成功し全体像解明の途を開いた。各転写因子の支配下遺伝子の制御を実証する目的で、大腸菌プロモーター約1,000種をクローニングし、我々が開発した二色蛍光蛋白ベクターに挿入し、GFPをレポーターとしてプロモーター活性を定量的に測定する実験系を開発し、SELEX法で予測した各転写因子支配下プロモーターの調節を解析した。一方、大腸菌培養中の細胞間には、ゲノム転写パターンを含めて生理活性で、顕著な差があることを明らかになって来た。そこで、均一細胞団及び単一細胞で転写を計測する実験系の開発に取り組んだ。培養液局所ゲル化法を利用し、ゲル中に捕捉された大腸菌の個別プロモーター活性を計時的に計測することに成功した。この目的の実験に利用できる「単一細胞観察装置」を開発した。また、糖鎖でコートしたフラスコ基底に大腸菌を安定に捕捉する方法も、単一細胞の長時間観察に応用できることが明らかになった。開発装置を利用し、大腸菌1,000プロモーターの強度と環境応答を系統的に解析する基盤が確立した。ゲノム全遺伝子の発現の包括制御は、転写装置の遺伝子間での配分制御で行われる。RNAポリメラーゼは転写調節因子との会合で転写対象の遺伝子選択性が変化し、その結果、転写装置のゲノム遺伝子間での分配が変動する。転写装置の特異性変化が、環境応答のゲノム転写スペクトラム変換制御の分子的基盤と推測したモデルを実証することを目標に研究を実施した。自然環境では、単細胞の大腸菌も社会構造を形成し、細胞ごとに役割分担があると推定されているので、細菌細胞分画技術や超微細工学技術などを利用して、大腸菌均質細胞集団更には単一細胞を対象に、ゲノム全遺伝子の発現の動態を定量的に計測する技術を開発し,研究を推進した。1)大腸菌ゲノム全遺伝子の環境応答発現の計測トランスクリプトーム及びプロテオーム分析に加えて、大腸菌ゲノムの全プロモーターを単離し、二種類のレポーター蛍光発色蛋白発現ベクターに挿入した「大腸菌プロモーターコレクション」を構築し、全遺伝子、全プロモーターの環境応答の系統的解析を実施した。2)大腸菌全転写因子の支配下遺伝子の同定と制御機能解析大腸菌転写因子280種を純化精製した。純化転写因子を利用して転写因子支配下遺伝子群を同定するGENOMIC SELEX法を開発し、大腸菌転写因子150種に関して支配下遺伝子群を網羅的に同定し、個別に転写調節を解析した。3)大腸菌均質細胞集団および単一細胞観測技術の開発と利用パーコール密度勾配遠心を利用した大腸菌均質細胞集団単離法の確立し、細胞集団間での転写パターンの差を解析した。一方,細胞培養局所ゲル化法を利用し、単一細胞での遺伝情報転写の連続長時間観測技術システムを確立し、単一細胞のプロモーター活性計測に成功した。大腸菌単一細胞の局所環境の変動に伴うゲノム転写応答の包括制御機構の系統的解析を通じて、新たに「細胞個性学」の確立を目指す基盤が確立した。ゲノム全遺伝子の発現の包括制御は、転写装置の遺伝子間での分配制御で行なわれるが、その基盤は、RNAポリメラーゼが、転写因子との会合で、転写対象の遺伝子の選択性を変化させることに依っていることを、石浜らは提唱して来た。生物の環境応答におけるゲノム転写パターンの変化も、こうした分子基盤で行なわれることを実証する目的で,モデル生物・大腸菌の約300種類の全転写因子の支配下標的遺伝子群を同定し、転写装置の環境応答分配制御の全体像の解明を目指した。加えて、自然界の細菌は、集団として環境応答をし、細胞間に役割分担があるので、ゲノム転写の包括制御機構の解析を、単一細胞で実施し、細胞の個性を解くことを目指した。本年度までに、転写因子約280種を純化し、新たに開発した、転写因子が認識結合する標的DNA配列を同定するgenomicSELEX法を利用し、150種については、支配下遺伝子群の予測に成功した。多数の転写因子の支配下遺伝子群を同定できたことから、転写因子の大きな調節ネットワークが見え始めた。

一方、大腸菌プロモーター約1,000種を単離し、二色蛍光タンパクをレポーターとするプロモーター活性定量化ベクターコレクションを構築し、生体内での転写因子の制御機能の検証を実施した。平行して、細胞チップを作製し、大腸菌培養液の局所を固化し、単一細胞のゲノム発現を装置を開発し、プロモーター活性の変動を長時間に亘ってリアルタイムで観測することに成功した。開発した装置を利用して、環境局所環境変動に伴う、細胞ごとの応答を観測する実験を開始した。本研究を通じて、ひとつの生物の全転写因子が関わるゲノム制御の全体像を、初めて解明し、その面での細胞毎の個性を理解できる突破口が開けて来た。ゲノム全遺伝子の発現の包括制御は、転写装置の遺伝子間での分配制御で行なわれるが、その基盤は、RNAポリメラーゼが、転写因子との会合で、転写対象の遺伝子の選択性を変化させることに依っていることを、石浜は提唱して来た。生物の環境応答におけるゲノム転写パターンの変化も、こうした分子基盤で行なわれることを実証する目的で,モデル生物・大腸菌の約300種類の全転写因子の支配下標的遺伝子群を同定し、転写装置の環境応答分配制御の全体像の解明を目指した。加えて、自然界の細菌は、集団として環境応答をして種の存続を計るために、細胞間に役割分担があることが明らになって来た。こうした背景で、ゲノム転写の包括制御機構の解析を、単一細胞で実施し、細胞の個性を解くことを目指した。本年度までに、転写因子が認識結合する標的DNA配列を同定するために、Genomlc SELEX法とSELEX-chip法を開発し、これを利用して大腸菌全転写因子の制御支配下遣伝子群を同定する目的で、転写因子約280種を純化した。純化転写因子150種については、支配下遺伝子群の予測に成功した。多数の転写因子の支配下遺伝子群を同定できたことから、転写因子の大きな調節ネットワークが見え始めた。一方、大腸菌プロモーター約1,500種を単離し、二色蛍光タンパクをレポーターとするプロモーター活性定量化ベクターコレクションを構築し、生体内での転写因子の制御機能の検証を実施した。環境中の細菌は、細胞間で交信し、集団として環境悪化に対応し、種の生存を計る。従って、細菌社会では個々の細胞は異なった役割を果たしていると予想される。細菌細胞の個性解明を目標に、大腸菌の「均質細胞分離法」や、「単一細胞観測系」を開発し、均質細胞集団・単一細胞での転写プロモーターの強度変動の動態観測を実施した。一方、環境に応じたゲノム転写パターンは、転写装置のゲノム遺伝子間での配分制御によって決定されるとのモデルを提唱し、転写装置のゲノム遺伝子間分配決定機構解明を目標に、大腸菌の300種類転写因子の全てについて、制御支配下遺伝子群の同定と調節機能の解析を実施した。
教育大学の学生参加による地域連携型総合的な学習の構築

主として小学生を対象に、大阪府中部農と緑の総合事務所、柏原市市民生活部産業振興課、JA大阪中河内、柏原市教育委員会、地元農家等との連携の下、大阪教育大学理科教育講座及び小学校教員養成課程総合認識系の学生が、地域連携型総合的な学習の時間における森林体験学習と食農教育に参加した。また、これらの活動に参加した卒業生を対象にアンケート調査を行い、これらの活動がこれからの時代に求められる、教員として必要な総合的で体験的な学習の指導力形成につながることが示唆された。森林体験学習:1)大阪府中部農と緑の総合事務所と柏原市産業振興課、柏原市教育委員会との連携により、柏原市高尾山創造の森をフィールドとした森林体験学習を、柏原市立の3小学校の児童を対象に7回実施した。2)柏原市高尾山創造の森の生物図鑑データベースを完成させるため、学生による植物調査を進める一方、柏原市立柏原小学校の教諭から動物(昆虫)に関する情報提供を受け、「柏原市高尾山Web図鑑」を完成した。3)大阪府中部農と緑の総合事務所と柏原市産業振興課と柏原市教育委員会NGO里山復興協力隊(Save Forest Club)との連携により、大学構内の森林を総合的な学習のためのフィールドとするため、調査を行い、遊歩道整備に着手した。食農教育:栽培に対する意識と技術を高め、栽培、流通、消費を視野に入れた総合的な食育をおこなうことができる小学校教員の養成をめざし、教員養成大学でのカリキュラム開発に取り組んでいる。現在のところ、1)大学構内の農園における栽培実習。2)大阪府中部農とみどりの総合事務所、柏原市産業振興課・柏原市教育委員会・地元農家との連携により、柏原市立2小学校での授業計画と実施を通して実践的研究を進めている。柏原市教育委員会、柏原市市民生活部産業振興課、大阪府中部農と緑の総合事務所と本学の連携により、柏原市内の小学校における森林体験学習と食農教育を、総合的な学習の時間を活用して実施した。森林体験学習においては、学生が単に参加するばかりではなく参加するボランティア学生に対し、教師としての成長を促す機会を設定し、その中でプレゼンテーションカ、子ども理解力をたかめ、教育現場に出ても様々な機関と協力して遂行する力量を養う形での学生教育の場も設定し、この教育効果についての調査を行った。また、この活動に参加してきた卒業生に対し、アンケート調査をおこない、この体験が教員になった時にどのように役立ったのかその教育効果についての解析を行った。また、森林体験学習のフィールドである高尾山の植物を材料とした教材開発も行い論文発表を行った。食農教育においては、大学での栽培活動を中心とする研究と柏原市との地域連携の一環とする市内小学校の活動を中心とる研究を行った。大学では、栽培体験学習を行った卒業生に対してステークホルダー調査を実施し、栽培体験が、教員としての資質形成に影響を与えたかどうかについて尋ねた。栽培に関する知識と技能の他、育成の苦労と喜び、他者との協力など多面的な質問項目とした。平成20年度年度は調査結果をまとめる予定である。また、柏原市内の3小学校の稲作体験学習に学生が参加し食農教育の教材開発研究に取り組んだ。平成18年度に引き続き、地域農家での田植え、稲刈りの体験と、収穫物の調理を中心に、栽培、生産と流通、食材と調理、食の安全など食農教育に必要と考えられる教材を開発しだ。柏原市立K小学校4年生(55名)を対象に、大阪府中部農と緑の総合事務所、柏原市市民生活部産業振興課、柏原市教育委員会との連携の下、理科教育講座の学生が中心となり総合的な学習の時間における森林体験学習を実施した。一方、八尾市立M小学校4年生(108名)を対象に、八尾市教育委員会との連携の下、総合認識系の学生が学内教材園をフィールドとして総合的な学習の時間における畑交流会を実施した。地域連携型総合的な学習における森林体験学習:6月以降、5校を対象にした9回の森林体験学習で児童の森林体験学習支援ボランティアとして参加した後、K小学校との事前調整・打ち合わせから活動内容の作成、模擬練習を経て学生が中心となって1月の森林体験学習を実施した。また、森林体験学習を経験して教員となった卒業生を対象にアンケート調査を実施した。これらの結果から、子どもコミュニケーションカの養成、現揚でのコーディネイトカ、教材開発能力等が育成されたことが示された。地域連携型総合的な学習における食農教育:これまで総合的な学習の時間に活用できる地域と連携した食農教育の教育プログラムの実践を踏まえた開発を進めた。これをさらに改善して実施するとともに整理して事例としてまとめた。また、食農教育での体験が小学校現場での教員としての資質にどのような影響を与えるかを調べるため、本教育プログラムを体験した者ののうち、教員となっている卒業生にアンケート調査を実施した。回収率は、60.7%で17名の回答があった。特に、栽培活動と教職専門性について問うたが、他の要素と比べて、食育教育への動機付けとして機能したとする者が多かった。
蓚酸カルシウム結石の成因に関する研究。特に腎及び腸管上皮での蓚酸輸送機構の解明

尿路結石症の最も重要な危険因子である蓚酸の膜輸送機構を解明するためラット腎刷子縁膜小胞(BBMV)を用いて蓚酸の取り込み実験を施行した。BBMVはラット腎皮質よりMgC12沈降法を用いて分離精製し、酵素学的に検証し、BBMVのviabilityはNa依存性のD-glucoseの取り込みを測定して検討した。腸管上皮のBBMVに関しては、本研究開始後Knickelbein,R.J.(J.C.I.77:170-175,1986)らにより報告されたので、腎BBMVに関して検討した。その結果、次の結論を得た。(1)BBMVへの蓚酸集積は、小胞外蓚酸濃度により飽和されない。従って、尿細管腔より細胞内への蓚酸再吸収は受動的拡散による。(2)Na,K勾配(内く外)は蓚酸の取り込みを抑制し、C1勾配は取り込みを促進した。(3)温度の低下(5°C)は小胞への初期集積率を低下させたが、最大取り込み値に変化を与えなかった。(4)小胞外5mMパラアミノ馬尿酸(PAH)は蓚酸の取り込みを抑制した。(5)小胞内より外へのeffluxが観察された。BBMVのhypotonic lysisにより小胞内腔(osmotically sensitive space)に存在する蓚酸が小胞外へ輸送されることを確認した。(6)effluxは、温度依存性で5°Cおよび5mMPAHにより抑制されたが、100μMPAHにては影響を受けなかった。(7)小胞内アルカリpHは取り込みを抑制したが、小胞外アルカリpHは、BBMVへの取り込みに影響を与えなかった。(8)小胞外アルカリpHはeffluxに影響を与えなかった。Basolateral membraneの分離精製は現有設備では困難で、酵素学的検証に耐えなかった。以上BBMVを用いた実験より蓚酸の尿細管腔からの再吸収は受動的拡散、管腔への分泌は能動輸送であることが示唆された。
レーザーによる新規セラミック修復法の開発

近年,歯科用セラミックスや高分子材料は,審美的な要求も満たすため,臨床では修復ならびに補綴処置に頻用されている.しかしながら,歯質と材料との界面結合部の劣化による充填材や冠の脱落など臨床的な事故が多いのが現状であり,本来ある歯質との一体化を確実とした修復治療法は未だ開発されていない.そこで申請者は,歯質と低温溶融型セラミックスをレーザーの特徴である瞬時に発生する熱エネルギーを用いて,エナメル質に直接融着させる新しい方法が開発できれば,将来,歯科界において画期的な歯質保存療法,予防法となり,より歯牙との一体化した歯冠修復治療法の確立が期待できると考えられる.近年,歯科用セラミックスや高分子材料は,審美的な要求も満たすため,臨床では修復ならびに補綴処置に頻用されている.しかしながら,歯質と材料との界面結合部の劣化による充填材や冠の脱落など臨床的な事故が多いのが現状であり,本来ある歯質との一体化を確実とした修復治療法は未だ開発されていない.そこで申請者は,歯質と低温溶融型セラミックスをレーザーの特徴である瞬時に発生する熱エネルギーを用いて,エナメル質に直接融着させる新しい方法が開発できれば,将来,歯科界において画期的な歯質保存療法,予防法となり,より歯牙との一体化した歯冠修復治療法の確立が期待できると考えられる.
障害調整健康寿命(DALE)算出のための効用値の測定と評価指標としてのDALE

介護度別効用値は、専門家のVAS(視覚評価法)の平均値(介護度順、0.80、0.72、0.71、0.61、0.46、0.30、020)とした。6569歳の都道府県の加重障害保有割合(WDP)の平均値(人口千対)は、男性は10.718.9であり、女性は8.915.6であった。65歳の障害調整健康余命(DALE)は、男性は15.6817.72年であり、女性は19.3320.75年であった。DALEとWDPの相関分析は、DALEは多くの健康指標と有意な負の相関を示し、女性のDALEの方が多くの社会経済指標と有意な相関を示した。【研究背景と目的】介護保険統計を用いた障害調整健康寿命(DALE)算出のため、平成19年度では専門家(訪問看護師、ケアマネジャー)を対象に、効用値(01の値)を測定した。本年度では一般の人を対象に測定した効用値の信頼性と妥当性を検証し、専門家で測定した効用値の検証を行った。【研究方法】東京都足立区と岩手県洋野町在住の65歳80歳の男女計300名を住民基本台帳から無作為に抽出し、自記式質問調査を行った。効用値は1名に付き、無作為に選択した1つの介護度について、3つの効用値測定尺度、VAS(視覚アナログ尺度)、TTO(時間得失法)、SG(基準的賭け法)を用いて測定した。効用値の信頼性は一元配置分散分析を行い、尺度ごとの介護度間の効用値の差で検証し、収束妥当性は対応のあるt検定を用いて、尺度間の効用値の差によって検討した。【研究結果】分析対象者は140名(回収率46.7%)であった。効用値は、VAS(介護度順、0.61、0.58、0.61、0.55、0.46、0.39、0.46)SG(0.64、0.65、0.65、0.58、0.43、0.42、0.55)TTO(0.63、0.63、0.62、0.48、0.45、0.29、0.37)であった。一元配置分散分析の結果、21の組み合わせ中、VASは5組に有意差があり、他の尺度は有意差がなく、VASがもっとも介護度間の識別能力が高いことがわかった。t検定はTTOとVAS、TTOとSGは有意差がなく、VASとSGは有意差があった。【考察と結論】一般の人は介護度の識別ができていないことから、測定した効用値は信頼性・妥当性が低いと考えられた。専門家で測定した効用値は、一元配置分散分析では、VASは20組に有意差があり、他の尺度より信頼性と妥当性が高かったため、効用値はVASを採用した。一般の人の枠を広げる必要もあると考えられるものの、専門家を対象に測定した効用値の方が信頼性と妥当性が高いことから、国の健康福祉政策に活用するDALEの算出にはその効用値を用いる必要があると考えた。【研究開始当初の背景】介護保険統計を用いた障害調整健康余命(DALE)の算出には死亡と障害の統計、人口、および介護度別の「効用値(障害の重み)」が必要である。DALEは、継続的に算出することにより、介護予防事業と介護予防サービスの評価指標として使用可能であり、国、都道府県、市区町村の保健福祉計画の評価指標としても利用可能である。【研究の目的】介護度別の効用値を測定し、47都道府県の加重障害保有割合(WDP)とDALEを算出し、DALEと年齢調整WDP、死亡率、社会経済指標、人口学的指標との関連について分析することとした。【研究の方法】約3700ヵ所の介護保険事業所から1208ヵ所を無作為に抽出し、1ヵ所につき、3名分の調査票を郵送した。効用値は、1名につき無作為に組合せた2つの異なる介護度の一般的な健康状態について、4つの効用値測定尺度、5項目法(EQ-5D)、時間得失法(TTO)、基準的賭け法(SG)、視覚評価法(VAS)を用いて測定し、回答は10間の効用値に置換した。効用値の信頼性は一元配置分散分析を行い、妥当性は対応のあるt検定を用いて検討した。DALEの算出は、Sullivan法で算出した。

相関の解析にはSpearmanの順位相関係数を用い、統計学的有意水準は5%未満とした。【研究成果】介護度別効用値は、専門家のVAS(視覚評価法)の平均値(介護度順、0.80、0.72、0.71、0.61、0.46、0.30、020)とした。6569歳の都道府県の加重障害保有割合(WDP)の平均値(人口千対)は、男性は10.718.9であり、女性は8.915.6であった。65歳の障害調整健康余命(DALE)は、男性は15.6817.72年であり、女性は19.3320.75年であった。DALEとWDPの相関分析は、DALEは多くの健康指標と有意な負の相関を示し、女性のDALEが多くの社会経済指標と有意な相関を示した。
構造変化を伴う機能性ＲＮＡのバイオインフォマティクス

構造変化を伴う機能性RNA配列設計のためのアルゴリズム開発を行った。本研究課題で開発した手法では、多目的遺伝的アルゴリズムを用いたことにより、複数の二次構造を安定に持つだけでなく、二次構造間のエネルギーバリアの値や、GC含量を指定した設計を、人為的な目的関数間の重みづけを行うことなしに実行できる。開発した手法の設計性能を構造変化を伴う機能性RNA配列設計のための従来アルゴリズム(RNAdesign法、Frnakenstein法)と比較したところ、同等以上の設計性能を示すことが分かった。本研究課題で開発した手法は、小分子を入力として動作する人工リボスイッチの設計に有用と考えられる。構造変化を伴うRNA配列設計のためのアルゴリズム開発を行った。これまでに培ってきた多目的遺伝的アルゴリズムのノウハウを応用し、人為的な重みづけを行うことなしに複数の目的関数を持つRNA配列設計問題のパレート最適解を探索できるアルゴリズムを開発した。従来手法では、重みづけが経験的に行われていた点がユーザビリティの点において問題であった。本手法により、様々な目的関数をユーザーが自由に変更してRNA配列設計を行うことが従来手法と比して容易となった。また、本研究課題で開発したアルゴリズムでは、ユーザーが指定した配列モチーフや、既知のアプタマー配列・二次構造を考慮した設計も可能とした。「センサー部分の状態により機能をスイッチする人工機能性RNA配列(人工リボスイッチ)」の設計が可能なウェブユーザーインターフェースを持つ設計ツールを開発し、ウェブサービスとして公開した。開発したアルゴリズムの性能評価を、構造変化を伴うRNA配列設計アルゴリズムの従来手法(RNAdesign法やFrnakenstein法)の評価において用いられてきたベンチマーク用ターゲット構造を用いて行った。構造変化を伴うRNA配列設計の性能評価によく利用されているSV11をターゲット構造とした設計では、RNAdesign法やFrnakenstein法では報告されていない、2つのターゲット構造が同時に最安定(最少自由エネルギー構造)となるRNA配列を多数設計することに成功した。また、3つまたは4つのターゲット構造を持つ配列設計において、本研究で開発した手法がRNAdesign法よりもよい設計性能を示すことが分かった。本研究課題では、mRNAの翻訳制御を行う機能性RNAであるシスエレメントのゲノム配列からの網羅的探索を行い、新規なシスエレメントの発見を目指す。また、網羅的探索の結果を元に、人工シスエレメントを高い信頼性を持って設計できる、機能性RNA配列設計のためのキラーアプリケーションとなりうるソフトウェアの開発を行う。本年度の成果は以下のとおりである。1.原核生物ゲノムに対する比較ゲノムによる機能性RNA配列予測の実行原核生物ゲノムを対象とした比較ゲノムにより、網羅的シスエレメント予測を行った。具体的には、S. oneidensisとその近縁種ゲノム配列に対して、独自開発の遺伝的アルゴリズム(Cofolga2アルゴリズム)による比較ゲノムを行い、近縁種間で保存したシスエレメント配列の予測を行った。予測結果として既知シスエレメント配列の一部、ならびに新規シスエレメント候補配列を得ることができた。2.組成を指定したRNA配列設計アルゴリズムの開発本研究課題では、シスエレメント予測法の開発・実行だけでなく、人工的なシスエレメントRNA配列の設計手法についても独自開発を行うことを目的としている。本年度は、多目的遺伝的アルゴリズムによるRNA配列設計のためのMODENA法を拡張し、塩基組成を指定したRNA配列設計が可能な新手法の開発に成功した。これにより、従来手法では困難であった、高精度に塩基組成を指定して機能性RNA配列を設計することが可能となった。最終年度においては、構造変化を行う機能性RNAであるリボスイッチ等を予測可能な機能性RNA遺伝子予測用システムの開発を行い、S. oneidensisとその近縁種に対して適用を行った。平成24年度に行った原核生物ゲノムに対する比較ゲノムによる機能性RNA配列予測手順をベースに、より効率的にRNAシスエレメント配列の予測を行うために、「BLASTにより配列類似性があると判定されたオペロン先頭遺伝子配列間の上流領域に対して多目的最適化によるRNA配列ペアワイズアライメントを行い、特徴的な共通二次構造を持つ配列を予測する」システムとした。また、ヒューリスティクスによるRNA二次構造エネルギーバリア予測法の開発ならびにテストを行った。さらに、前年度から開発を続けてきた「構造変化を伴うRNA配列設計のための多目的遺伝的アルゴリズム」に、エネルギーバリア値を設計に考慮するための機能を付け加えた。このRNA配列設計アルゴリズムについての論文執筆を行い、国際雑誌に投稿を行った。全研究期間のまとめ:バクテリアの全ゲノム配列データを利用して「構造変化を伴う機能性RNA」を含む機能性RNA候補を予測するための比較ゲノムシステムの開発を行い、予測システムの応用結果として複数の機能性RNA候補を予測することができた。また、「構造変化を伴う機能性RNA配列を人工的に設計するための多目的遺伝的アルゴリズム」を独自に開発することに成功し、そのアルゴリズムについて国際学会での発表や国際雑誌への投稿を行った。

バイオインフォマティクスこれまでに構造変化を伴うRNA配列設計と比較ゲノムによるシスエレメント予測を実施することができた点、RNA配列設計アルゴリズムの論文の執筆をほぼ終えており、近い将来投稿できる見込みである点は順調に推移していると考えている。ただし、エネルギーバリア予測についてはまだアルゴリズムの開発を続けており、この点においてはやや遅れていると考えている。(1)独自開発したCofolga2法を用いて、RefSeqデータベースから取得できる原核生物ゲノムを対象とした比較ゲノムによる網羅的シスエレメント予測を行い、予測の難易度が高いと考えられる低配列類似度領域においてシスエレメント予測を行うことができたこと、さらには(2)新規なRNA配列設計手法を開発できたことから、本研究課題はおおむね順調に進展していると考えている。RNA配列設計手法の国際的競争の激化を受け、平成26年度に行う予定であった構造変化を伴うRNA配列設計のためのアルゴリズム開発を前倒しして平成25年度に行ったため、平成26年度は主に平成25年度に予定していた研究を行う。独自開発の共通二次構造予測法であるCofolga2mo法のCUDAを用いた高速化、シスエレメントに特化した共通二次構造予測法の開発と、そのシスエレメント予測法への応用、シスエレメント設計に適した機能性RNA配列設計手法の開発を予定している。平成25年度に投稿予定であった論文の投稿とその学会発表が平成26年度にずれこんだため次年度使用額が発生した。投稿予定であった論文の執筆はほぼ終了しており、完成し次第、速やかに英語専門誌に投稿する予定である。また関連した内容の学会発表も今年度中に行う。研究成果発表を延期したため、「次年度に使用する予定の研究費」が生じた。平成25年度の旅費に併せて使用することを予定している。
水晶振動子検出器つき高速液体クロマトグラフによる裁判化学試料の分析法の開発

1電極分離型水晶発振子は、2枚の白金板とこの間に置かれた水晶振動子とから成っているが、この電極分離型水晶発振子を高速液体クロマトグラフ用検出器として利用できるようにした。電極分離型水晶発振子を用いれば、検出用セルの容量を小さくすることができる。また、従来の高速液体クロマトグラフは、検出器を通過する液体のいずれか一つの物性に着目して、検出していたので、検出器が検出できない物性を持つ物質が通過したときには、見逃す危険があった。しかし、電極分離型水晶発振子は、通過する液体の密度、粘度、電気伝導度、誘電率等に依存して、基本振動数が変化するので、通過する物質を見逃すことがない。さらに、検出感度も従来のものと同等あるいはそれ以上であるので、高速液体クロマトグラフの良好な検出器として、利用できることがわかった。2裁判化学試料となる医薬品には、催眠剤、精神神経用剤、麻薬、覚醒剤など、化学構造や反応性などが、全く異なるものが含まれている。これらの医薬品を、2つの種類、すなわち、水に可溶なものと、有機溶媒に可溶なものとに分け、その各々におけるクロマトグラムの保持時間と、物理的性質とから、未知物質を推定する方法を、共同研究者の三井が、かねてから研究している多変量解析法により検討し、それぞれの組において、未知物質が検出、定量できることがわかった。3今後は、有機溶媒に対しても使える検出器、すなわち、電極分離型水晶発振子の開発と、多変量解析法を組み込んだ高速液体クロマトグラフ装置の開発を行いたい。1電極分離型水晶発振子の高速液体クロマトグラフ(HPLC)検出器としてのフロ-セルの形状,およびこの検出器を用いたHPLCによる医薬品の分析法を検討した。2水晶振動子は市販の9または10MHzの水晶発振子(円形のもの)から,電極を除去し,アセトン中で超音波洗浄して用いた。ガラス管の先端に白金板をエポキシ樹脂で固定し,一方のガラス管には水晶振動子の保持具と白金板とを同時に固定した。白金板はリ-ド線でオシレ-タに接続するようにした。この2本のガラス管をすり合わせ付きフロ-セルに挿入した。この際のセル容量は約0.03cm^<cm>であった。3水晶発振子をHPLCの検出器とし,溶離液としてメタノ-ル:水(1:1)を、試料として塩酸メタンフェタミン0.20μgを用いて検討したところ,検出限界は258nmの測定波長を用いた吸光光度法より約2倍の50ngであり,相対標準偏差(n=10)は0.8%と極めて良好な再現性を示した。検量線の相関係数は,吸光光度法が0.9803なのに出して,水晶発振子は0.9989とかなり良い直線関係が得られた。また,塩酸メタンフェタミンと類似した官能基を持つアミン系医薬品について検討したところ,検討した11種類すべてについて,吸光光度法のように測定波長を選択する必要もなく,検出,定量が可能であった。4高速液体クロマトグラフの検出器として,電極分離型水晶発振子が他の検出器に優るとも劣らないことがわかったので,来年度は,種々の医薬品のクロマトグラムを得て,そのデ-タをコンピュ-タに入れ,多変量解析法により,裁判化学試料を簡単に分析できる方法が確立できる見通しがついた。しかし,有機溶媒に強い検出器の作製にもう一工夫が必要であり,検討中である。1電極分離型水晶発振子は、通過する液体の密度、粘度、電気伝導度、誘電率等に依存して、基本振動数が変化するので、通過する物質を見逃すことがない。また、従来のクロマトグラフにおいては、測定条件を一定にして求めた、既知物質および未知物質のクロマトグラムを比較して、それぞれの保持時間から未知物質を同定、定量していた。したがって、全ての物質の保持時間がわかっていないこと、未知物質の同定、定量が不可能であった。

そこで、この電極分離型水晶発振子を検出器とする高速液体クロマトグラフを用いて、各医薬品のクロマトグラムにおける保持時間とそれら医薬品の物理定数(分子量、融点、溶解度、酸解離定数など)との間の関係を、共同研究者の三井が開発した多変量解析法の一部である重回帰分析と正準相関分析とから、これら物質の定性定量法の確立を試みた。2裁判比学試料の保持時間は、1種類の物理定数のみで説明できるものではなく(1種類の物理定数で決定されるものではなく)、複数の物理定数相互間の相関関係で説明できることがわかった。さらに、重回帰分析及び正準相関分析から、同系統の医薬品であれば34種類の、また、異種の医薬品であれば数種類の、試料についての保持時間と物理定数が分かれば、保持時間の明かでない試料の保持時間を、物理定数のみから推定することも可能であることが分かった。3今後は、高速液体クロマトグラフにこの多変量解析法を組み込んだ装置の開発を試みたい。
文化財建造物の伝統的塗装彩色材料・技術の系譜解明と修理施工・資料活用に関する研究

現在、文化財建造物の漆塗装修理は極力日本産漆を使用が求められるとともに、漆塗料以外の塗装彩色修理には合成樹脂より伝統的な膠材料の使用が求められている。ところが日本産漆や膠材料の調達や使用量の算定、伝統的な金具の漆箔施工の仕様、さらには過去多用されたことが明らかとなってきた柿渋や固化不良が生じやすい乾性油系(油彩系)塗料の伝統的な仕様には不明な点が多い。本研究では文化財建造物における伝統的な塗装彩色材料・技術の系譜の解明と再評価をまず行う。そのうえでこれらの材料・技術を修理に応用した際の施工や保守管理方法の策定、3D技術を応用した復元彩色欄間の作成を資料活用として提示することなどを目的とする。
カスパーゼの活性化に基づいた口腔癌に対する放射線・抗癌剤至併用療法の構築

口腔癌をはじめ種々の癌においては、転写因子であるNF-κBが高発現しており癌の浸潤、転移に密接に関連していることが知られている。また、ある種の癌において放射線や抗癌剤に対する抵抗性の獲得にNF-κBが関与しているとの報告もある。そこで、本研究においては当教室において樹立したヒト口腔扁平上皮癌細胞株であるB88細胞を用いて、NF-κBの抑制により放射線に対する感受性を増強しうるか否か検討をおこなった。B88細胞に5-20Gyの放射線を照射したところ、放射線は線量依存的に細胞増殖抑制効果を発揮した。B88細胞は放射線照射によりNF-κBの核内への移行、ならびにNF-κBの転写活性を上昇させたが、この際に生じるNF-κB活性はその抑制因子であるIκBαの分解によって誘導されていた。次に、26Sプロテアソーム阻害剤を用いてIκBαの分解を抑制しNF-κB活性を抑制した場合、放射線照射によるアポトーシス誘導が増強されるか否か検索をおこなったところ、放射線照射単独処理と比較しプロテアソーム阻害剤併用により有意に細胞増殖抑制効果を増強した。なお、これらの増殖抑制効果はアポトーシスの誘導によるものであった。一方、NF-κBによって誘導される抗アポトーシス因子のうちカスパーゼ3、カスパーゼ9の活性化を抑制するcIAPに関してその発現様式を検索したところ、放射線照射によりcIAP-1,cIAP-2遺伝子の発現が上昇したが、プロテアソーム阻害剤の併用によりその発現上昇が抑制されたことから、cIAPの発現抑制により放射線によるアポトーシス誘導が増強された可能性が示唆された。以上の検索結果より、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株B88細胞においては、転写因子NF-κBを抑制することにより放射線に対する感受性が増強され、アポトーシスの誘導を促進しうる可能性が示唆された。本研究においては我々の教室において樹立したヒト口腔扁平上皮細胞株B88細胞を用いて、口腔癌治療における各種抗癌剤併用投与による治療成績の向上を目的とし、以下の検索をおこなった。B88細胞を5-フルオロウラシル(5-FU;2μg/ml)或いはシスプラチン(CDDP;1μg/ml)にて処理したところ、各薬剤単独投与では40%程度の細胞増殖抑制効果を発揮したが、併用処理においては50%程度の増殖抑制効果を発揮した。なお、これらの増殖抑制はアポトーシスの誘導によるものであった。以下、5-FUとCDDPの併用投与を目的とし、2剤の併用にてB88細胞を処理した。(1)5-FUとCDDPを同時に細胞培養液に添加(シークエンスI)、(2)5-FUにて24時間前処理した後、CDDPを添加しさらに48時間処理する(シークエンスII)、(3)CDDPにて24時間前処理した後、5-FUを添加しさらに48時間処理する(シークエンスIII)。B88細胞を5-FUとCDDP併用処理(シークエンスIIII)にて処理した際のエフェクターカスパーゼ(カスパーゼ-3)の発現を検索したところ、シークエンスIIIにおいて最も高い活性が認められた。また、カスパーゼ-3の活性化に重要な役割を果たすcytochrome Cのミトコンドリアからの放出もシークエンスIIIにおいて著明に上昇していた。さらに、カスパーゼカスケードにおいてカスパーゼ3の上流に存在するカスパーゼ-9(ミトコンドリアを介する経路)とカスパーゼ8(デスレセプターを介する経路)について、各シークエンスにおける活性化を検索したところ、いずれにおいてもシークエンスIIIにおいて最も高い活性が認められた。一方、アポトーシスインヒビターであるBcl-2の発現を検索したところ、シークエンスIIIにおいて蛋白発現が抑制されていた。以上の検索結果より、ヒト口腔扁平上皮細胞株B88細胞においては5-FUとCDDPの併用投与をおこなう際に、CDDP処理の後5-FU処理をおこなうことで、アポトーシスの誘導を促進しうる可能性が示唆された。

以上の検索結果より、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株B88細胞においては、転写因子NF-κBを抑制することにより放射線に対する感受性が増強され、アポトーシスの誘導を促進しうる可能性が示唆された。