hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クリスタリン制御因子突然変異マウスを用いた細胞分化の制御機構の研究

δEF2aはSox-2とSox-3、δEF2bはSox-1に対応すると結論された。またδEF2がδEF3と協同してはじめて転写活性化が起きることが示された。δEF1は、分子量12万の蛋白質で、CACCTをコアとした塩基配列に結合し、それはE2-box(CACCTG)を含む。δEF1が、bHLHによる転写活性化をE2-box特異的に競合的に抑制すること、また、δEF1が、以前から検出されていたE2-boxに特異的な抑制活性を説明するものであることを示した。マウス胚のなかでδEF1は、筋節、中枢神経系、神経堤、胸腺原基などでとくに強く発現されていた。個体の中でδEF1がどの組織のどの遺伝子と活性化因子を標的としているのかを明かにするために、δEF1突然変異体マウスを作成した。それらのマウスは、胸腺でのT細胞分化に異常を示した。胚発生の途上で起きる細胞分化の典型例として水晶体の分化をとりあげた。とくに、ニワトリのδ-クリスタリン遺伝子の発現制御機構を研究の中心に据えた。まず、δ-クリスタリン・エンハンサーのなかのDC5領域に結合する3種類の因子(δEF1、δEF2、δEF3)の作用が水晶体特異的なエンハンサー活性をもたらすことを結論した。δEF2、δEF3は協同的に作用して水晶体特異的な遺伝子の転写活性化をもたらす。δEF2はSoxファミリーのなかのサブファミリーに対応することが明かになった。δEF1は抑制因子としてδEF2、δEF3の作用を調節するとともに、水晶体以外でのδ-クリスタリンの発現を抑制している。δEF1の作用機構の解析やδEF1欠損突然変異マウスの作製によって、δEF1はさまざまな組織の分化過程に重要な役割を果たす因子であることも明かになった。これらの因子が水晶体分化に果たす役割を明かにするために、Sey突然変異マウスの原因遺伝子であるPax-6の発現と、Soxの発現を比較検討した。その結果、頭部外胚葉に広く発現されるPax-6が水晶体への分化可能性を与え、次いで、おそらく眼胞からの誘導に応じて発現されるSoxがその領域の水晶体への分化を規定し、さらにδEF3をはじめとするいくつかの転写制御因子の発現がその領域にもたらされて水晶体分化が実現されると結論された。
小児固形腫瘍に対する昇圧化学療法

科学研究費補助金の援助により、小児固形腫瘍に対する昇圧化学療法に対する研究を行い、以下の結果を得た。1)家兎扁年上皮癌VX-2癌を用い、angiotensin【II】を静脈内持続投与し、1.5倍の平均血圧の上昇を得た際の、正常組織ならびに腫瘍組織での血流量の変化を交叉熱電対にて検討した。肝臓,腎臓,筋肉に代表される正常組織では、angiotensin【II】による昇圧で、大した血流量の変動は認められないが、腫瘍組織では163240%に達する血流量の変化率の増加が認められた。2)マウス神経芽腫C-1300を実験モデルとしてangiotensin【II】と活性型cyclophosphamideの併用実験を行った。併用群は、活性型のcyclophosphamide単独群に比し、著明な抗腫瘍効果があり、処置後6日目には処置時の腫瘍体積の20%にまで減少していた。3)マウス神経芽腫C-1300を実験モデルとしてangiotensin【II】とmasked compoundである非活性型cyclophosphamideの最適併用時期ならびに併用効果につき検討した。Masked compoundである非活性型cyclophosphamideを静脈内一回投与することにより血中および腫瘍組織内ともに投与後60分までは活性型cyclophosphamideが増加傾向にあるが、その後漸減した。この結果をふまえて、masked compoundである非活性型cyclophosphamideを単独静脈内投与した群とangiotensin【II】を併用した群とで抗腫瘍効果を検討したところ、angiotensin【II】併用群の抗腫瘍効果は処置後極めて早期より認められ、cyclophosphamide単独投与群と比し増強されていた。4)臨床応用。横紋筋肉腫の進行症例に昇圧化学療法を行った。併用化学療法はcyclophosphamide,actinomycinD,υincristineであった。従来のVAC療法に比し、効果発現が一週間程早くから認められ、小児悪性固形腫瘍の治療における本法の有用性が判明した。4)臨床応用。
モンゴル帝国成立史の解明を目指した環境考古学的研究

本研究の目的はモンゴル帝国の強大化の背景を明らかにすることである。我々は史料だけに拠らず、遺跡などの考古資料から研究を進めた。王朝の興亡に自然環境変化が関係するという意見は古くからある。モンゴル帝国の勃興についても中世温暖期のピーク以降の寒冷化でチンギス・カンがモンゴル族を統合し、力を蓄えて世界征服へと乗り出したという仮説がある。我々は環境考古学的方法でその仮説を検証した。その結果、チンギス登場時のモンゴルは寒冷・乾燥、征服戦争を遂行していた時期は温暖・湿潤であったと想定できた。我々はモンゴル高原における温暖湿潤傾向による農耕と牧畜の盛行に、モンゴル帝国の拡大の理由が隠されていると考える。本研究は、歴史上著名な出来事でありながら、文字資料が不十分でその過程が明らかになっていない13世紀の「モンゴル帝国成立の背景」というに課題ついて、考古学、とくに環境考古学的アプローチから解明を試みようとするものである。研究初年の平成22年度は、その予備的な研究期間と位置づけ、体制の確立と調査方法の整備に主力が注がれた。具体的な成果としては次のようなものがある。平成22年6月に東京にて第一回の研究集会が開かれ(代表者・分担者・連携研究者)調査方針が決定された。8月から9月にかけてモンゴル国、中国、ロシアを中心に野外調査、資料収集旅行が実施された(代表者・分担者・連携研究者)。とくにモンゴル帝国初期の中心地であるアウラガ遺跡とカラコルム遺跡での調査が興味深い知見をもたらした。それらの成果は、次年度からの調査の基礎となるとともに、学術論文として公刊されるであろう。10月にはモンゴル国ウランバートル市で学術講演会を実施した。在モンゴル日本大使館の共催を得て、モンゴル国の一般市民に開かれた有意義な会であった。その成果報告書は平成23年2月に日本語とモンゴル語で刊行された。同2月にはモンゴル人考古学者2名を招聘し、愛媛大学を会場にして国際シンポジウムを開催した。一般にも開放されたもので、多数の参加を得て成功であった。3月には東京において23年度に向けた調査方針を決める会議をもった。このように本研究は、初年度にもかかわらず、野外調査で良好な資料を得ることに成功し、また、国際的会議を2度も催すなど、内容はもちろんのこと注目度も高いスタートを切ることができたといえる。本研究は、歴史上著名な出来事でありながら、文字資料が不十分でその過程が明らかになっていない13世紀の「モンゴル帝国成立の背景」という課題ついて、考古学、とくに環境考古学的アプローチから解明を試みようとするものである。研究計画2年目の平成23年度は、前年度の準備的期間の成果を踏まえ、研究上最も重要となる環境考古学的基礎データの集積に主力が注がれた。以下、具体的な実績を記す。平成23年4月下旬から5月上旬にかけてモンゴル国東部山岳の泥炭層が発達した地域で古環境試料の収集を行った。帰国後年代測定を委託して実施したところ、モンゴル帝国と関連する時期の試料であることがわかった。その報告をかねて6月に東京で研究集会を開き、重要なデータなので、さらに補足追求して充実すべきとの結論が得られた。同月には中国内モンゴル自治区でモンゴル帝国期遺跡の立地データ収集を企図した踏査を行った。環境変化研究に資する新遺跡を発見できた。7月にはモンゴル国東部の金属工房遺跡の踏査が行われ、金属生産と周辺環境破壊に関するデータを収集した。8月から9月にかけてモンゴル国チンギスカン本営(アウラガ)遺跡で発掘調査が実施され、チンギスカン期の住居跡が完全な形で検出された。そこでは多くの環境考古学関連資料の収集に成功した。12月にはモンゴル人考古学者を招聘し、九州の大学を会場にした研究会で成果発表した。また、一般および学生に最新モンゴル考古学に関する情報を提供することに寄与した。平成24年4月下旬にはモンゴル東部の泥炭地の再調査を行った。その試料に関して年代分析を行った結果、本研究のターゲットの時期にきわめて整合する試料だということが判明した。このように本年度の研究では、野外調査で良好な資料を得ることに成功した。また、研究者招聘で研究成果の公開と国際情報共有に、おおむね成果をあげたといえる。本研究はモンゴル帝国の成立および興亡の背景を、環境考古学という新たな視点からとらえようと企図されたものである。本年度は5年計画の4年目にあたる。本年度の調査・研究は、モンゴル国での資料収集を目的とした発掘調査が中心となった。5月から6月にかけて、モンゴル国ヘンティ県タワン・ハイラースト遺跡で、モンゴル科学アカデミー考古学研究所と共同して、モンゴル帝国期の墓地遺跡の発掘調査が行われた。

ここはチンギス・カンが拠点を置いたアウラガ遺跡に近く、そこの住民たちの墓所だと考えられている。本年度は5基の発掘を行い、人骨や棺材など環境考古学的資料を得ることに成功した。分析は研究分担者を中心に行い、一部の年代測定や食性分析は外部委託で行った。現在、データの解析中である。8月から9月にかけて、アウラガ遺跡の発掘調査を、科学アカデミー考古学研究所と共同で行った。市街地遺構から一基の住居跡を選別し、その調査を100平方メートルの規模で実施した。建築木材、食物残渣の炭化穀物粒、家畜獣骨などが発見された。帝国成立期の環境を知る上で重要な資料になろう。それらの分析も研究分担者と、年代測定などの一部は外部研究機関に委託して行われた。そのような結果を踏まえ、平成25年末に、鳥取大学乾燥地研究センターで研究分担者と連携研究者による合同の研究集会が行われ、データの評価と、それらをまとめる研究叢書出版の計画が討論された。データの公開は次年度中に行えるように、整理体制の強化が図れることが決まった。モンゴル帝国成立と興隆の背景を、環境考古学的に解明することを目的とし、外国フィールド調査と国内整理作業を両輪として研究を推進した。外国調査では、中国大興安嶺西麓の森林草原混交地帯のモンゴル帝国期遺跡とその立地環境を調べる現地踏査を実施した。とくに、これまで情報が少なかったチンギス・カンの諸弟「東方三王家」領地内の、詳細な記録が取れた意義は大きい。簡易測量、周辺土壌、植生などの良好なデータが得られた。そのまとめは進行中である。また、モンゴル国アウラガ遺跡でチンギス・カン勃興期の住居遺跡を発掘した。13世紀前半のモンゴル帝国成立期の建物で、大変興味深い。動物骨、炭化植物遺存体を多数採集できた。この整理作業も進行中である。国内作業としては、モンゴル国ヘンティ山地周辺で採集された泥炭試料による花粉分析を行った。これは平成22・23年度に本科研で採集されたものである。年代の速報ではモンゴル帝国時代に対応する良好な堆積物であることがわかっていて、詳細な分析が求められている。また、衛星写真分析用のソフトを購入した。これは現地踏査できない地域の環境情報把握に資すると考える。さらに、業者に委託し、放射性炭素年代と鉄資料の金属学的分析も行った。特筆すべきはゴビ地域の金属学的分析である。対象試料は匈奴時代のものであったが、燃料などの資源の少ない地域での手工業の実態を知る上で重要かつ、比較資料としてモンゴル帝国研究に示唆的であった。以上の調査研究は順調に進行し、成果が蓄積されている。ただ、ひきつづいて検討する余地が残されている。モンゴル帝国について、史料が限られ文献史学では知り得なかった成立過程を、モンゴル国でのフィールド調査に基づく考古資料から実証的に解明することを目指した研究の5年目(最終年度)にあたる。本研究では当時の過酷な環境変化にチンギス・カンらモンゴル族がどのように立ち向かったかに焦点を当てて、環境考古学的視点からモンゴル帝国の強大化の背景を明らかにしようとした。今年度はこれまでの調査での成果を検証・補足することに中心をおいて調査を行った。
メカニズムに基づいたPK-PD解析モデルによる医薬品の最適投与設計

本研究は、sufonylurea(SU)系糖尿病治療薬tolbutamide(TB)の血糖降下効果を、病態(高血糖・糖尿病)時で、しかも血糖恒常系の日内変動が存在する中で検討し、その結果得られた情報を基に、SU剤の全く新しい最適投与計画を策定しようとするものである。今回は、成人型糖尿病として2型糖尿病(NIDDM)に焦点を絞り、二種類の自然発症病態モデル動物を用いて検討を行った。1つは非肥満型NIDDMモデルであるGK Rat、もう一つは肥満型NIDDMモデルであるZDF Ratである。このうちGK Ratは膵ランゲルハンス島β細胞からのinsulinの分泌が成長にしたがって速やかに低下するとともに、insulin抵抗性を獲得する病態動物である。これに対しZDF Ratは、肥満発症とともにinsulinの分泌が徐々に低下し、insulin抵抗性も獲得する病態動物である。これら自然発症病態動物を本研究で用いた理由は、アロキサン糖尿病ラットやストレプトゾトシン糖尿病ラットなどの化学物質誘導病態と異なり、今回用いたTBなどのSU剤に感受性があるばかりでなく、血糖恒常系自体も維持されていると考えられたからである。実際、GK Rat、ZDF Ratとも血糖値は正常ラットに比べ有意に高いものの、血糖値の日内リズムは規則正しく刻まれている、すなわち血糖恒常系が維持されていることが明らかとなった。GK Ratにおける血糖値の概日リズムは、リズム平均(Mesor)=119 mg/dL、振幅(Amplitude)=6.91 mg/dL、頂点位相(Acrophase)=18時30分となり、正常ラットに比べ、振幅が有意に大きくなると同時に、頂点位相が約3時間後方にずれることが判った。一方ZDF Ratにおける血糖値の概日リズムは、リズム平均(Mesor)=121.9mg/dL、振幅(Amplitude)=25.37mg/dL、頂点位相(Acrophase)=19時20分であった。この値は正常ラットに比べ、振幅が大きくなり、また頂点位相も約4時間後方にずれていることが判った。このように本研究によって、これら糖尿病態時の血糖値、血漿中insulin濃度の日内変動動態を、詳細に明らかにすることが出来たことは、大きな成果であると考えている。またこれら病態時の血糖恒常系の中で、TBの薬理効果を検討した結果、投与時刻によって薬理効果が著しく変動することを明らかにした。特にGK Ratでは、明期(休息期)にTBを投与しても薬理効果(血糖降下効果)はほとんどないのに対し、暗期(活動期)に投与すると著しく薬効が現れることが明らかとなり、生体の持つ概日リズムの重要性が改めて浮き彫りとなった。また、ZDF Ratにおいても、暗期(活動期)にTBを投与する方が、明期(休息期)に投与するよりも、薬理効果が大きくなること、さらに糖尿病病態では、薬理効果発現が遅延することが明らかになった。今後これらの現象の原因を追究するとともに、当初の目的である"Mechanism-based PK-PD Model"を設計し、定量化を目指すとともに、これら結果を組み込んだ、全く新しい薬物投与計画の設定、さらにはこれを応用したDDS製剤の新しい概念を提唱したいと考えている。

またこれら病態時の血糖恒常系の中で、TBの薬理効果を検討した結果、投与時刻によって薬理効果が著しく変動することを明らかにした。特にGK Ratでは、明期(休息期)にTBを投与しても薬理効果(血糖降下効果)はほとんどないのに対し、暗期(活動期)に投与すると著しく薬効が現れることが明らかとなり、生体の持つ概日リズムの重要性が改めて浮き彫りとなった。また、ZDF Ratにおいても、暗期(活動期)にTBを投与する方が、明期(休息期)に投与するよりも、薬理効果が大きくなること、さらに糖尿病病態では、薬理効果発現が遅延することが明らかになった。今後これらの現象の原因を追究するとともに、当初の目的である"Mechanism-based PK-PD Model"を設計し、定量化を目指すとともに、これら結果を組み込んだ、全く新しい薬物投与計画の設定、さらにはこれを応用したDDS製剤の新しい概念を提唱したいと考えている。本研究は生体恒常系のフィードバック調節系に着目し、投与された薬物の生体内動態(pharmacokinetics : PK)と、薬理効果(pharmacodynamics : PD)との関係を、概日変動(circadian rhythm)を含めた「メカニズムに基づいたPK-PD解析(mechanism-based PK-PD analysis)」を行うことで定量化し、これを使用して新しい投与計画設定法の確立を目指すものである。本年度は血糖恒常系について糖尿病態ラット(GKラット)を用い、先ず血糖値のcircadian rhythmを測定するとともに、sulfonylurea系糖尿病治療薬tolbutamide(TB)を投与して、その時間薬理学的、時間薬物動態学的検討を、正常ラットとの比較で行った。実験は、812週齢のGKラットを6時点灯、18時消灯の明暗サイクルで1週間予備飼育した後、絶食状態で2時間毎24時間に亘って採血し、血糖値のcircadian rhythmを測定した。これらをコサイナーモデルで解析した結果、リズム平均(Mesor)=119mg/dL、振幅(Amplitude)=6.91mg/dL、頂点位相(Acrophase)=18時30分となり、先に私たちが報告した正常ラットに比べ、頂点位相が約3時間後方にずれていることが判った。血糖リズムの最高値を示す22時と最小値を示す10時にそれぞれ耐糖能試験(GTT)を行ったところ、10時のGTTの方が血糖減少速度が緩やかで、体内インスリン分泌能あるいはインスリン感受性に時刻差があることが示唆された。そこで、同時刻にインスリン感受性試験(ITT)を行ったところ、22時の方がやや血糖降下効果が大きいものの、インスリンの感受性自身には殆ど時刻差はないことが判った。GKラットは元々肝からの糖放出が亢進して高血糖を示すが、肥満は呈さない特徴を持っている。本年度はGKラットの血糖恒常系に関する基礎データ集積については、ほぼ目標通りの成果を得た。現在sulfonylurea系糖尿病治療薬tolbutamide(TB)を投与して、その時間薬理学的、時間薬物動態学的検討を始めている。本研究は生体恒常系のフィードバック調節系に着目し、投与された薬物の生体内
チベット文献を中心にしたインド外教諸派の研究

チベット宗義文献(grub mtha')中に叙述されるインド外教の諸派の思想を取り出すことを目差す本研究は、具体的には次の順序に従って研究を遂行した。1.十四世紀ウパロサルdBus pa blo gsalの『宗義解説の蔵』(Grup pa'i mtha' rnam par bs^^ ́adpa'i mdzod)インド外教諸派の説を述べる部分は、第二章:総説、第三章:ロ-カ-ヤタ(順世外道)、第四章:サ-ンキャ派、第五章:シヴァ派(実はニヤ-ヤ・ヴァイシェ-シカ派)、第六章:ヴィシュヌ派(実はミ-マ-ンサ-学派)、第七章:ジャイナ教という構成になっているが、これらの諸章をまず読解し、同時にコンピュ-タ-に入力してデ-タを作成し、固有名詞や用語を何時でも検索出来るようにした。2.その他の宗義書(特に十二・三世紀のサキャ・パンディタに帰される『宗義善説』や十七・八世紀のジャムヤンシェパやチャンキャロルペ-ドルジェやコンチョクジクメワンポの宗義書)中に紹介される諸学派説と比較し、思想内容の一層の明確化を計った。3.以上の成果を踏まえて、これらのインド外教諸派の全てが概観されている『宗義解説の蔵』第二章の批判的校訂本と翻訳を完成した。4.続いて、その他のインド外教諸派を扱った章の校訂本作成と翻訳の作業にとりかかり、かなりの程度に進展することは出来たが、本年度中に出版に堪え得る形に完成するには至らなかった。今後作業を継続し、近い将来出版出来るよう目差したい。本研究全体を通じて、従来のチベット語辞書に未登録であった多くの用語を同定、確認できたことは大きな収穫であったといえよう。
開発した制菌性Ti-Ag合金を組織制御し、制菌のメカニズムを解明する

本研究課題では、(1)熱処理により制菌性Ti-Ag合金の組織制御を試みる。そして、組織制御した合金と制菌性の関係を調べ、(2)Ti-Ag合金における制菌メカニズムを解明し、新たな機能性合金を開発するための基礎を構築する。さらに、Ti-Ag合金の機械的性質や耐食性を調べ、(3)制菌機能を強化したTi-Ag合金のインプラント応用の可能性を評価する。平成30年度は、合金組織制御の一例として、Ti-Nb-Cu合金を設計試作し、その歯科鋳造体のX線回折試験と金属組織観察を行った。その結果を基に、歯科鋳造条件における室温でのTi-Nb-Ti2Cu擬三元状態図を作成した。また、その中のいくつかの組成について機械的性質を調べた。【合金インゴットの試作】設計した合金組成となるようにスポンジチタンとニオブ塊、銅片を秤量し、アルゴンアーク溶解炉を用いて溶解して、ボタン状の合金インゴットを溶製した。【鋳造体試料の作製】板状ワックスパターンを埋没材で埋没して鋳型を作り、歯科用チタン鋳造機で試作インゴットを鋳込んで板状試験片を製作した。【X線回折試験】試料の表面を耐水研磨紙で1000番まで研磨し、X線回折試験を行い、合金相を同定した。【金属組織観察】鏡面研磨後にエッチングした試料を光学顕微鏡で観察した。【引張試験】ダンベル状の試料を作製し、万能試験機で引張試験を行った。【結果】Ti-Nb-Ti2Cu擬三元状態図にはα-Ti、β-Ti、Ti2Cuの3相が存在した。α+β型のTi-Nb-Cu合金の引張強さは、チタンより著しく大きかった。また、α+β+Ti2Cuを示すTi-Nb-Cu合金の硬さは、チタンより著しく大きかった。合金組織制御の一例として行ったTi-Nb-Cu合金の開発研究により、これまで調べられていなかった新たな状態図を作成することができた。この成果は査読付きの英文誌に投稿済みである。他にも、Ti-Fe合金とTi-Mn合金についての研究を行い、添加元素量と合金相の変化を詳細に知ることができた。Ti-Fe合金やTi-Mn合金の平衡状態図は、本研究課題の主題であるTi-Ag合金と同じ共析型の状態図である。これらの研究成果により、状態図と合金組織の関係の理解を深めることができた。今後のTi-Ag合金の組織制御に役立つ知識を得ることができた。【圧延加工】圧延機を用いてTi-Ag合金インゴットの圧延加工(強加工)を行い、金属組織観察により結晶粒の大きさや分布を調べ、加工度との関係を検討する。【真空熱処理】圧延により強加工したTi-Ag合金に対し、再結晶による結晶粒微細化と、共析反応によるTi2Agの分散析出を目指し、真空熱処理を行う。熱処理温度と処理時間をパラメーターとする。X線回折と金属組織観察により組織制御を評価する。【バイオフィルム形成試験】細菌培養試験用品を用いて、試料をスクロース含有液体培地に浸漬し、バイオフィルム形成細菌を嫌気培養する。表面に形成されたバイオフィルムを回収して蒸留水に懸濁し、分光光度計で濁度を測定することで、バイオフィルム量を推定する。【殺菌試験】細菌培養試験用品を用いて、バイオフィルム形成細菌を試料上で、フィルム密着法により培養する。培養後に試験菌を洗い出し、寒天平板培養法で生菌数を求め、試験成立条件の判定を行う。試験が成立した場合について抗菌活性値を計算し、抗菌性を評価する。

また、α+β+Ti2Cuを示すTi-Nb-Cu合金の硬さは、チタンより著しく大きかった。合金組織制御の一例として行ったTi-Nb-Cu合金の開発研究により、これまで調べられていなかった新たな状態図を作成することができた。この成果は査読付きの英文誌に投稿済みである。他にも、Ti-Fe合金とTi-Mn合金についての研究を行い、添加元素量と合金相の変化を詳細に知ることができた。Ti-Fe合金やTi-Mn合金の平衡状態図は、本研究課題の主題であるTi-Ag合金と同じ共析型の状態図である。これらの研究成果により、状態図と合金組織の関係の理解を深めることができた。今後のTi-Ag合金の組織制御に役立つ知識を得ることができた。【圧延加工】圧延機を用いてTi-Ag合金インゴットの圧延加工(強加工)を行い、金属組織観察により結晶粒の大きさや分布を調べ、加工度との関係を検討する。【真空熱処理】圧延により強加工したTi-Ag合金に対し、再結晶による結晶粒微細化と、共析反応によるTi2Agの分散析出を目指し、真空熱処理を行う。熱処理温度と処理時間をパラメーターとする。X線回折と金属組織観察により組織制御を評価する。【バイオフィルム形成試験】細菌培養試験用品を用いて、試料をスクロース含有液体培地に浸漬し、バイオフィルム形成細菌を嫌気培養する。表面に形成されたバイオフィルムを回収して蒸留水に懸濁し、分光光度計で濁度を測定することで、バイオフィルム量を推定する。【殺菌試験】細菌培養試験用品を用いて、バイオフィルム形成細菌を試料上で、フィルム密着法により培養する。培養後に試験菌を洗い出し、寒天平板培養法で生菌数を求め、試験成立条件の判定を行う。試験が成立した場合について抗菌活性値を計算し、抗菌性を評価する。(理由)先ずはチタン系合金の状態図の理解を深めるため、特に組成と冷却速度と金属組織の関係を知るべきと考え、最も費用のかかる熱処理を31年度に先送りしたためである。このおかげで、目指すべき金属組織やベースとなる組成が熱処理に先行してイメージできたため、試行実験回数を抑制でき、効率化できたと考えている。(使用計画)当初の予定通り、熱処理に必要な消耗品類と、大量に必要となるTi-Ag合金の材料に使用する。
Power, government and the discrimination of Roma in Romania: an alternative explanation

この研究では、ロマ民族に対する構造的な差別(言説、政策、官僚的対応)という観点から、現代ルーマニアの歴史的な政治体制を比較し、共通点及び相違点を特定し、分析した。共通点に注目した場合、全ての政治体制(立憲君主制、独裁体制、民主主義体制)を支える権力ダイナミクス(トップダウン政治、統治・可視化、簡略化)に、進歩的な言説及び科学的なツールが合わさり、ロマに対する差別的な構造がつくられたと論じる。政治体制が変わる度に、進歩主義が謳われるものの、ロマに対する差別は異なる文脈において再利用され、深く根付くことになった。従って、今日に至るまで、依然としてロマに対する差別は「当然視」されている。社会科学
中枢神経損傷から修復過程におけるゲノム高次構造の変動

中枢神経障害からの機能回復のためには神経回路の再建が不可欠である。中枢神経回路が形成される過程では多数の遺伝子が、時間軸、空間軸に従って変動する。本研究では、中枢神経障害から修復の過程で変動する遺伝子群を包括的に制御する仕組みを明らかにする。
腫瘍血管特異的な作用であるEPR効果を利用した新規イメージングプローブの開発

I-124を用いた標識合成において未反応であったI-124の回収を行い、I-124の再利用を検討したところ、陰イオン交換カラムを用いることによって再利用できる可能性が考えられた。I-124標識SIB(スクシンイミジルヨードベンゾエイト)を原料からIODOGEN法を用いて合成したところ、I-124標識SIBは約50%の収率で得られた。しかし、動物実験に供するだけのI-124標識ラクトソームは合成できなかった。本研究はサイクロトロンで製造された核種、I-124を用いるが、年間のサイクロトロン運転時間が当初より大幅に減少したため、実際に1年間でI-124を製造できるのは12回程度であった。また、これまでのI-124を用いた種々の放射性薬剤の標識合成において、収率は1020%と決して高くなかった。すなわち、未反応のI-124を廃棄していたことになる。これらのことを鑑み、本年度の研究はI-124を用いた標識合成に際し、未反応であったI-124を回収することにより、サイクロトロンによって製造されたI-124を再利用するための研究を行った。このI-124の回収においてI-124は溶液中で陰イオンの形で存在することから、陰イオン交換カラムを用いることによりヨウ素の回収ができるのではないかと考え、実験を行った。具体的には、市販の陰イオン交換カラムを用い、導入実験としてメチルタイロシンへのI-124導入反応を行い、未反応のI-124の回収を試みた。その結果、メチルタイロシンとI-124を反応後、その混合物を陰イオン交換カラムに通じることによって、標識合成されたI-124標識メチルタイロシンはカラムに捕集されず、未反応のI-124のみ捕集されることが明らかとなった。さらにこの陰イオン交換カラムに硫酸ナトリウム溶液を通じることによってI-124を陰イオン交換カラムより回収することもできた。従って、陰イオン交換カラムを用いた回収はI-124の効率の良い利用法として期待できると考えられる。本研究はサイクロトロンで製造された核種、I-124を用いるが、年間のサイクロトロン運転時間が当初より大幅に減少したため、今年度はI-124の製造ができなかった。そこで本年度の研究はI-124の代わりにI-125および標識体のヨウ素を用い、陰イオン交換カラムからの回収条件検討とSIB標識合成における条件検討の研究を行った。ヨウ素の回収実験においてヨウ素は溶液中で陰イオンの形で存在することから、陰イオン交換カラムを用いることにより行った。具体的には、市販の陰イオン交換カラムを用い、SIBへのI-125導入反応を行い、その際の反応条件検討を行うと共に未反応のI-125の回収を試みた。その結果、SIBとI-125を反応後、その混合物を陰イオン交換カラムに通じることによって、標識合成されたI-125標識SIBはカラムに捕集されず、未反応のI-125のみ捕集されることが明らかとなり、I-124を用いた場合と同様に未反応のヨウ素は陰イオン交換カラムに捕集されることが明らかとなった。さらにこの陰イオン交換カラムに硫酸ナトリウム溶液を通じることによってI-125を陰イオン交換カラムより回収することもできた。また、I-125標識SIBもHPLCの結果より放射化学的純度95%以上で合成出来たことも明らかとなった。本研究の遂行にはサイクロトロンによるI-124の製造が必須であるが、現在、当センターではサイクロトロンの年間運転時間が約5ヶ月と大幅に削減されている。このため、サイクロトロンを用いてI-124を製造することができなかったが代替えとしてI-125を用いて実験を行ったので予定通りに研究は進んでいる。1. I-124の製造:I-124の製造はターゲットとしてTe-124を用い、当施設にあるサイクロトロンにて行ったが通常約200 MBqのI-124が得られのに対し20 MBq程度しかI-124が製造できなかった。原因調査を行ったが不明のままであった。2. I-124標識修飾SIBの作製:I-124標識SIB(スクシンイミジルヨードベンゾエイト)を原料からIODOGEN法を用いて合成した。合成条件は先にI-125を用いた条件検討によって得られた条件を用い、その後HPLCを用いて分離、精製を行った。その結果、I-124標識SIBは約50%の収率で得られたものの、放射能量としては約10 MBqと低かった。3. I-124標識ミセルの作製:得られたI-124標識SIBを用いてミセル化合物に標識合成を行った。I-124標識ミセル化合物の合成は確認できたが、動物実験を行うことができる放射能量のI-124標識ミセル化合物を得ることができなかった。そのため動物実験は行わなかった。以上の結果より、目的とするI-124標識ミセル化合物は得ることができたもののI-124の製造量が少なかったため、動物実験を行える放射能量のI-124標識ミセル化合物は得ることができなかった。

今後はI-124の製造量が低下した原因を調査し、原因を究明して初期の製造量が得られるようになった後、再度I-124標識ミセル化合物の合成を行う予定である。I-124を用いた標識合成において未反応であったI-124の回収を行い、I-124の再利用を検討したところ、陰イオン交換カラムを用いることによって再利用できる可能性が考えられた。I-124標識SIB(スクシンイミジルヨードベンゾエイト)を原料からIODOGEN法を用いて合成したところ、I-124標識SIBは約50%の収率で得られた。しかし、動物実験に供するだけのI-124標識ラクトソームは合成できなかった。本研究の遂行にはサイクロトロンによるI-124の製造が必須であるが、現在、当センターではサイクロトロンの年間運転時間が約5ヶ月と大幅に削減されている。このため、サイクロトロンを用いてI-124を製造することが年間12回程度しか割り当てられない。そこで、当初の予定とは異なり、少ない製造回数でもより効率的にI-124を使用できるようにI-124の再利用について検討したため、研究の遅れが生じている。標識前駆体であるヨウ素標識SIBの合成に関して反応条件や分析条件の検討を行った結果、目的とするものが得られたことが明らかとなった。今年度はこの標識前駆体を利用して、目的の薬剤であるヨウ素標識ミセル化合物の合成を行う。その際、反応条件や分析条件の検討を行う。目的とするヨウ素標識ミセル化合物が得られたならば、それを用いて動物実験を行う予定である。核薬学現在、I-124の再利用については陰イオン交換カラムを用いることにより未反応のI-124を捕集することができることは確認したが、陰イオン交換カラムからのI-124の再回収において、用いる硫酸ナトリウム溶液の量が多くないとI-124が陰イオン交換カラムから溶出されてこないことが結果として得られている。この場合、I-124の再利用には濃縮等の過程が必要となってくることから少量で効率の良いI-124の回収方法について検討を行う。その際、I-124の使用が困難ならば、I-125を用いて条件検討を行う。その後、実際に当初の研究目的であるSIBの標識合成において前述の回収方法を行いながら、反応条件検討等を行う予定である。I-124の製造に際し、製造ができなかったため、当初の計画を変更し、I-125を用いて検討を行った。この検討は既にほぼ所持していたものを利用して行った。また、高額であるSIBの前駆体や他の原料を前年度に発注しているが輸入品や注文品であるため前年度内に納品されなかった。これらの事柄が次年度使用額の生じた理由である。I-124の製造に際し、製造回数が少なかったため、当初の計画を変更し、I-124の再利用に関しての検討を行った。また、高額であるSIBの原料やI-124の製造原料であるTe-124などを購入しなかった。今年度は前年度に発注した物品の納品や動物実験を行う等研究計画に沿って、研究を行う予定である。当該年度に購入しなかったI-124の製造原料であるTe-124やSIBの原料を購入し、次年度の研究計画に沿って、研究を行う予定である。
ミヤマノコギリシダ複合体における浸透性交雑の解析

屋久島のミヤマノコギリシダ複合体(ミヤマノコギリシダ、ホソバノコギリシダ、オオバミヤマノコギリシダ、ヒロハミヤマノコギリシダの4種とそれらの推定雑種)集団について、外部形態、体細胞染色体数、減数分裂の挙動、胞子稔性、核と葉緑体遺伝子を用いた分子遺伝学的分析を行い、雑種形成と種分化について解析した。屋久島では、これら4種間で複雑な雑種形成や戻し交雑が繰り返されていることがわかった。これらの結果、シダ植物における初めての例となる倍数体複合体の浸透性交雑を実証し、複雑なミヤマノコギリシダ複合体の形態変異の一因を明らかにした。本年は各地のミヤマノコギリシダの調査とともに、主に鹿児島県上屋久町小瀬田愛子岳林道付近のミヤマノコギリシダ複合体集団について、外部形態、胞子稔性、核と葉緑体遺伝子を用いた分子遺伝学的分析によって雑種形成について解析した。当地には、ミヤマノコギリシダ(以下ミヤマ)、ホソバノコギリシダ(ホソバ)、ウスバミヤマノコギリシダ(ウスバ)、オオバミヤマノコギリシダ(オオバ)、ヒロハミヤマノコギリシダ(ヒロハ)の5種とそれらの間での複雑な形態をした雑種群が認められた。ロープを計340m地面に張り、ロープの両側1m以内をライントランゼクトした144個体について、全ての個体の位置を正確に記録し、個体マークを行い、今後数年間継続調査を行えるようにした。全ての個体から葉を採集して乾燥標本とした。完成標本から胞子を採取し、正常形態の胞子の割合を調べ、胞子稔性を求めた。また、核遺伝子3酵素4遺伝子座を用いたアロザイム多型分析、葉緑体DNAのpsbCtrnS(UGA)、trnW(CCA)trnP(UGG)、trnL(UAA)trnF(GAA)の3遺伝子間領域でPCR-SSCP分析を行った。胞子稔性が高い個体には、形態的な特徴から種と思われる個体と、ミヤマ、ホソバ、オオバ、ヒロハ間の雑種と思われる個体があった。母親がヒロハ、オオバの個体には、形態的にも核遺伝子からも父親がミヤマ、ホソバ、もしくはその雑種と考えられる稔性が高い個体があった。あるヒロハを母親に持つ個体についてはオオバ由来の雑種を親に持ち、戻し交雑された雑種第3代と推測される個体もあった。屋久島では、これら4種間で複雑な浸透性交雑が繰り返されていることがわかった。本年は昨年度に続き鹿児島県屋久町小瀬田のミヤマノコギリシダ複合体集団について、外部形態、染色体数、胞子稔性、核と葉緑体遺伝子を用いた分子遺伝学的分析によって雑種形成について解析した。当地には、ミヤマノコギリシダ(以下ミヤマ)、ホソバノコギリシダ(ホソバ)、オオバミヤマノコギリシダ(オオバ)、ヒロバミヤマノコギリシダ(ヒロハ)の5種とそれらの間での複雑な形態した雑種群が認められた。昨年度に加え合計250個体について、全ての個体の位置を正確に記録し、個体から葉を採集して乾燥標本とした。完成標本から胞子を採取し、正常形態の胞子の割合を調べ、昨年度分も再調査し胞子稔性を求めた。10個体は採集し染色体調査を行った。葉緑体DNAのpsbCtrnS(UGA)、trnW(CCA)trnP(UGG)、trnL(UAA)trnF(GAA)の3遺伝子間領域と核遺伝子のPgiCでPCR-SSCP分析を行った。染色体数を調査した個体は全て2n=164の四倍体で、同一の四倍体レベルでの雑種形成であった。胞子稔性が高い個体には、形態的な特徴から種と思われる個体と、ミヤマ、ホソバ、オオバ、ヒロバ間の雑種と思われる個体があった。雑種には胞子稔性が高い個体があり、戻し交雑された雑種第3代と推測される個体もあった。本研究では、屋久島集団における四倍体シダ植物ミヤマノコギリシダDiplazium mettenianum複合体において生じていると考えられる浸透性交雑を、細胞学、分子遺伝学などの点から明らかにすることを目的とする。浸透性交雑の有無、方向性、隔離機構について明らかにし、ミヤマノコギリシダ複合体の種分化について考察する。20年度は、これまでの研究成果をふまえ、追加実験を行った。屋久島に渡島し、18、19年度の調査で選んだ個体について、減数分裂の固定、体細胞分裂観察用の根の固定を行ない、研究室で細胞学的な解析をおこなった。その結果、本集団が2n=164の四倍体から構成されていること、減数分裂において、正常なものから様々な異常分裂を行うものまで見いだされた。

また、同時にサンプリングした葉を用いて、アロザイム多型と葉緑体DNAの再サンプルを行なった。これらの結果、シダ植物における初めての例となる倍数体複合体の浸透性交雑を実証し、複雑なミヤマノコギリシダ複合体の形態変異の原因を明らかにすることができた。結果の一部は学会で発表し、論文として投稿準備中である。
天然物を素材とした薬剤耐性克服薬の探索と創製

化学療法は癌の有効な治療法のひとつであるが、ほとんどの抗癌剤が効かなくなる多剤耐性の問題は癌化学療法の大きな障害となっている。一方、耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)に代表されるように、感染症の治療に有効な抗菌剤に対して耐性を獲得した病原菌が出現し、大きな社会問題となっている。本研究では、植物、微生物、海洋生物など広範囲の天然物を素材として、MRSAをはじめとする耐性菌に有効な抗菌物質の探索、多剤耐性癌に有効な耐性克服作用をもつ化合物の探索、薬剤耐性克服作用をもつ天然物の化学合成や化学修飾、薬剤耐性発現機構の解明とそれに基づく耐性克服物質の開発を検討した。以下に当該研究機関の研究成果の概要を報告する。1)日本産イチイおよび中国産イチイより数種の新規タキサン化合物を単離し、それらのうちのいくつかにP-糖蛋白質機能阻害作用を見い出し、in vivoでの耐性克服作用も認められた。2)環状ヘキサペプチドRAの構造活性相関の検討により、抗腫瘍性環状ペプチドRA-VIIを開発し、臨床第1相試験を行った。3)キュラシンAの全合成とその類縁体の構造活性相関、ウスチロキシンDの化学変換による活性構造の解析を検討した。4)薬剤耐性癌細胞に効果を示す物質を放線菌ならびに植物より単離した。5)キノリン誘導体MS-209が、in vivoで多剤耐性白血病細胞に対する抗がん剤の治療効果を増強することを明らかにした。また、シクロスポリン誘導体PSC833の多剤耐性克服能が抗P-糖タンパク抗体MRK-16により増強されることを見い出した。6)抗結核剤であるリファンピシンに対する抗酸菌の耐性機構として新たに見い出したリボシル化が、抗酸菌のみならず多くの病原性放線菌においても重要な役割を果たしていることが明らかとなった。リボシル化に関与する遺伝子がクローニングされ、さらにリボシル化の中間体と考えられるADP-リボシル化したリファンピシンの存在が明らかとなった。7)独自に開発したTTN酸化法を用いて、セコアグルコバンコマイシン類を合成し、本化合物がバンコマイシン耐性菌に存在する細胞壁モデルのペプチド鎖と強い分子間水素結合を形成することを明らかにした。また、多剤耐性克服活性をもつハパロシンの全合成を行った。以下に本年度の研究成果の概要を報告する。

1)薬用植物、海洋動物、微生物の抽出物について、スクリーニングを行った結果、日本産イチイより数種のP-糖蛋白質機能阻害物質を単離し、これらの化合物がアジトピンのP-糖蛋白質への結合を競合的に阻害することを見い出した。2)環状ペプチドRAの全合成ならびに環状ペプチド・アスチン類の化学修飾を行い、抗腫瘍活性の評価を行った。3)ウスチロキシンDの化学変換による活性構造の解析、キュラシンAの部分構造の合成による絶対構造の決定と活性評価、アレナスタチン類のチューブリンへの作用、新規タキソイドのチューブリンへの活性評価を行った。4)薬剤耐性癌細胞に効果を示す物質を微生物代謝産物より単離した。5)耐性の治療においては、新しいキノリン化合物MS-209やシクロスポリン誘導体PSC833、チアパミール誘導体Roll-596D、等が耐性克服に有効であることが見い出された。6)タキサン化合物の13位のエステル部分の種々の光学活性誘導体の一般合成法を開発した。7)抗結核剤であるリファンピシンに対する抗酸菌の耐性機構として、リボシル化という新しい不活性化機構を見い出し、この機構が多くの非結核性の抗酸菌に存在することを証明した。8)ビフェニルエーテルの新しい構築法を開発し、セコアグルコバンコマイシンの合成に成功した。また、合成セコアグルコバンコマイシンが細胞壁モデルのN-Ac-D-Ala-D-Alaを分子認識することを明らかにした。化学療法は癌の有効な治療法のひとつであるが、ほとんどの抗癌剤が効かなくなる多剤耐性の問題は癌化学療法の大きな障害となっている。一方、耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)に代表されるように、感染症の治療に有効な抗菌剤に対して耐性を獲得した病原菌が出現し、大きな社会問題となっている。本研究では、植物、微生物、海洋生物など広範囲の天然物を素材として、MRSAをはじめとする耐性菌に有効な抗菌物質の探索、多剤耐性癌に有効な耐性克服作用をもつ化合物の探索、薬剤耐性克服作用をもつ天然物の化学合成や化学修飾、薬剤耐性発現機構の解明とそれに基づく耐性克服物質の開発を検討した。以下に本年度の研究成果の概要を報告する。1)日本産イチイおよび中国産イチイより数種の新規タキサン化合物を単離し、それらのうちのいくつかにP-糖蛋白質機能阻害作用を見い出した。2)環状ヘキサペプチドRAの各種誘導体を調製し、構造活性相関を検討し、植物性関連抗腫瘍性環状ペプチドの探索を行った。3)ウスチロキシンDの化学変換による活性構造の解析、キュラシンAの全合成とその類縁体の構造活性相関を検討した。また、アレナスタチン類がリゾキシンに拮抗的にチューブリンに結合することを見い出した。4)薬剤耐性遺伝子が発現している癌細胞に効果を示す物質を放線菌より離した。5)シクロスポリン誘導体PSC833が、in vivoで固形がんに対する抗がん剤の治療効果を増強することを明らかにした。また、PSC833の多剤耐性克服能が抗P-糖タンパク抗体MRK-16により増強されることを見い出した。6)抗結核剤であるリファンピシンに対する抗酸菌の耐性機構として新たに見い出したリボシル化が、抗酸菌のみならず多くの病原性放線菌においても重要な役割を果たしていることが明らかとなった。リボシル化に関与する遺伝子がクローニングされ、さらにリボシル化の中間体と考えられるADP-リボシル化したリファンピシンの存在が明らかとなった。
実験動物における種特異的補体制御膜因子の研究

種特異的補体制御膜因子は自己細胞に対する補体反応を防いで、侵入異物にのみ補体が反応するという、自己・非自己の識別を司る合い言葉の役割を果たすと考えられる。ヒトの種特異的補体制御膜因子としては、DAF,MCP,HRF20(CD59)などがcDNAのクローニングも含めて同定され、作用機序の解析も進んでいたが、実験動物での研究は立ち遅れていた。我々は、ラットの512Ag(Crry)の他に、ラットDAF,MCPのcDNAのクローニングやマウスのDAF,MCP,CD59等のcDNAクローニングにも成功した。Morgan教授らもラットのCD59の他に、我々とは別の方法でラットDAFのcDNAをクローニングすると共に、それに対するモノクローナル抗体の作成にも成功した。我々は更にモルモットのDAFやMCPのcDNAをクローニングすると共に、その遺伝子をハムスター細胞に導入発現させ、補体活性化制抑作用について解析し、Altemative spricingによって多形性を示すDAFの中で鎖長の長いものの方が補体抑制活性が強いことを示した。マウスのDAFについては、CHOに遺伝子導入して発現させたトランスフェクタントをアルメニアハムスターに免疫して、そのリンパ球をマウスミエローマ細胞株と融合させてハイブリドーマをつくり、モノクローナル抗体産生株を樹立した。我々の作成したモノクローナル抗体やMorgan教授らの作成したモノクローナル抗体を用いて免疫組織染色を行い、ラット、マウス、モルモット等の実験動物における種特異的補体制御膜因子群の生体内における発現動態を明らかにした。更に、消化管等に炎症をおこさせることにより、DAF等の発現増強が起こることも示した。炎症反応に関わる膜分子としてラットのC5aレセプターの遺伝子をクローニングすると共に、C3aレセプターのcDNAのクローニングについても英国のグループと共同で成果を挙げた。1)ボストンでの国際補体ワークショップにおいて、ヒトのC3_aレセプターがクローニングされたとの情報を得た。そこでラットのC3_aレセプターのクローニングを行い、遺伝子の一部を得た。2)中枢神経系におけるC5_aレセプターの発現動態を免疫組織化学法で解析し視床下部の大型神経細胞で強く発現していることを明らかにした。3)ラットのC5_aレセプターの遺伝子をクローニングした。4)ラットDAFの遺伝子をクローニングした。5)モルモットDAFのcDNAをハムスター由来のCHO細胞にトランスフェクトして発現させると、CHO細胞がモルモット補体の反応に抵抗性になることを明らかにした。6)モルモットのMCP(membrane cofactor protein)の遺伝子をクローニングし、ヒトの場合とは異なって、MCPは精巣に強く発現していることを明らかにした。7)ラットの脳内にオカダ酸を持続注入してフォスファターゼを抑制し、その際の補体系因子の沈着について解析を行った。8)ラットの補体制御因子として同定した5I2抗原の腎における発現と、その抑制によって起こる病態の解析を米国のモ-ガン博士らと行った。

Morgan教授らもラットのCD59の他に、我々とは別の方法でラットDAFのcDNAをクローニングすると共に、それに対するモノクローナル抗体の作成にも成功した。我々は更にモルモットのDAFやMCPのcDNAをクローニングすると共に、その遺伝子をハムスター細胞に導入発現させ、補体活性化抑制作用について解析し、Alternative spricingによって多形性を示すDAFの中で鎖長の長いものの方が補体抑制活性が強いことを示した。マウスのDAFについては、CHOに遺伝子導入して発現させたトランスフェクタントをアルメニアハムスターに免疫して、そのリンパ球をマウスミエローマ細胞株と融合させてハイブリドーマをつくり、モノクローナル抗体産生株を樹立した。我々の作成したモノクローナル抗体やMorgan教授らの作成したモノクローナル抗体を用いて免疫組織染色を行い、ラット、マウス、モルモット等の実験動物における種特異的補体制御膜因子群の生体内における発現動態を明らかにした。更に、消化管等に炎症を起こさせることにより、DAF等の発現増強が起こることも示した。炎症反応に関わる膜分子としてマウスのC5aレセプターの遺伝子をクローニングすると共に、C3aレセプターのcDNAのクローニングについても英国のグループと共同で成果を挙げた。
国内外の日本語教育環境におけるインプットとタスクが習得に及ぼす影響

本研究では,初級・中級・上級の外国語としての日本語の授業を対象として,学習者の発話量と発話の質,教師のインプットと訂正フィードバック,参加者間のインターアクション,そして,インターアクション中に注意を向ける内容について,授業活動のタイプをもとに分析した。そして,これらの結果を,これまで印欧語でしかなされていない先行研究の結果と比較をし,日本語の授業の特徴を明らかにするとともに,指導の課題について考察した。平成21年6月から8月にかけて、米国ミドルベリー大学下記日本語集中講座にて、初級中級上級の授業のビデオを5時間から6時間ずつ収録した。同時にこれらの授業鬼参加していた学生、各クラス4名の学習者の授業中の発話を録音した。現在これらのビデオを書き起こし、信頼度を測定した。また、このうち初級のクラス5時間分はCOLT(Communicative Orientation for Language Teaching)と呼ばれる観察記録システムを持ち、コード化し、授業の特性、学習者と教師の発話を分析した。この成果は、平成22年7月31日に開催される世界日本語教育大会で発表することになっている。また平成22年7月に国内の日本語学校の初級レベルの授業8時間分を録画し、現在書き起こしをしている。更に平成22年6月から8月にかけて、米国ミドルベリー大学の中級上級日本語学習者を対象に。会話タスクの構成要因によって学習者の発話内容と記憶にどのような英挙を与えるか実験をするため、現在タスクの事前テストを行っている。本年度は、この実験結果を分析すると供に、現在書き起こし中のデータ分析を行う予定である。平成21年に録画した米国ミドルベリー大学下記日本語集中講座の授業のビデオのうち初級の授業を元に、授業構成、学習者の発話と教員の発話、そしてフィードバックの効果について分析し、結果を世界日本語教育学会で、二つの論文として発表した。更に、中、上級のデータについて、授業構成、学生の発話と教員の発話の分析をまとめ、平成23年4月2日のAssociation for Teachers of Japanese Annual Conferenceのパネルセッションで発表することになっている。また、ここでは、初級、中級、上級の授業内でのペア、グループワークの発話を分析し、教師主導の授業とグループワークでは、学習者の発話の長さ、複雑さ、正確さに違いがあるかどうかを検証し、発表することになっている。そして、初級、中級、上級の比較結果を、同学会の雑誌に投稿し、現在査読中である。更に、文法練習に焦点があたりがちな授業中のペアワークと、近年有効性が主張されている学習者の注意を意味に向ける会話タスクとの有効性を比較するために、平成22年6月から8月に米国ミドルベリー大学の初級と中級の日本語学習者を対象に、会話タスクの構成要因によって学習者の発話内容と記憶にどのような影響を与えるかの実験を行った。多数中の発話データを収録し、書き起こすとともに、学習者の注意がどの程度意味や形式に向いているか、またタスク遂行中の発話がその後の発話修正に影響するかどうかを分析中である。この結果の一部はすでに上記のアメリカの学会で発表することになっているが、その他に、授業中のペアワークの発話と比較をし、タスクタイプと発話との関係を調査している。平成23年度にはこれらの結果をまとめ日本語教育学会で発表するとともに報告書にまとめる予定である。平成2122年に収集した米国ミドルベリー大学の日本語集中講座の初級、中級、上級の授業データについて、授業構成、学習者の発話と教員の発話について分析し、結果を米国のATJ/AAS Conferenceと世界日本語教育学会、および日本語教育学会で発表した。ここでは、初級、中級、上級の授業内でのペア、グループワークの発話を分析し、教師主導の授業とグループワークでは、学習者の発話の長さ、複雑さ、正確さに違いがあるかどうかを検証した。また、授業活動をタスクの特徴(使用する言語形式が限定されているタスクと限定されていないタスク)によって分類し、タスクの違いによって、学習者の発話の正確さや流暢さ、複雑さ、言語形式に注目する頻度が異なるか否か比較し、論文にまとめた。さらに、学習者の言語形式の間違いの自己修正率がタスクと言語能力によって異なるか分析し、現在論文にまとめているところである。また、教師のフィードバックの方略と成功率を分析し、世界日本語教育学会に投稿中である。更に、平成22年6月から8月にミドルベリー大学の初級と中級の日本語学習者を対象に、文型練習を主としたペアワークと近年有効性が主張されている学習者の注意を意味と言語形式に向けるペアワークとの有効性を比較する実験を行った。この結果は米国のATJ/AAS Conferenceで発表した。また、平成23年8月から9月にかけてミドルベリー大学、アイオワ大学で、別の会話タスクを用い実験を行った。今回は日本語の習熟度によって学習者の談話構造と発話に変化がみられるかを分析した。この結果は、カナダのAATJ Conferenceで発表し、Japanese Language and Literature投稿中である。また、一連の研究について、4月に台湾心理大学、5月にプリンストン大学、8月にカナダ日本語教育学会で招待講演をする予定である。