hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
琉球方言における特色音声の音響学的研究

琉球方言は,日本語方言の中でもその特色は際だっている.特に,音声は本土と異なるものが多く認められる.本研究は,琉球方言の音声の特色を精密な録音と精密なスペクトル分析で永久的に保存すること,そしてその音響的特性を解明することを行った.経費の関係で,全てをつくすことは無理であったが,沖縄本土の首里方言,宮古島平良市狩俣方言,奄美大島方言,徳之島方言の特色音声については,当初より考えていたとおりの成果をあげることが出来た.資料はテープ1時間もの約50巻分を得た.分析法も,共同者とパソコンで行うLPC分析, AbS分析を完成させた.小型化したのはわが国で初めてであろう.それも駆使して,鋭意分析に努めた.研究成果の一部は,日本音響学会,日本方言研究会,日本音声学会研究例会等で発表してきた.特に,琉球方言のウが本土のとは異なっていることを発見した.第一ホルマント370Hz,第二ホルマント790Hzとなる.琉球全体に共通するであろう.本土でのオとウを合成した時の音声である.中舌化母音でイのそれは,音響的なスペクトル分析結果に大きな違いはないが,聞こえにおいて違う点もある.今後の課題である.同じく中舌化母音で奄美方言のエの場合,第一ホルマント500Hz,第二ホルマント1500Hzとなることが分かった.まさに母音の中性化であることも発見した.また,奄美方言の母音変化・中本教授の仮説が,徳之島山の場合,年層別に母音分析して正しいことを証明した.首里方言などのグロッタルストップもインテンシティーにて視察できた.後日,スペクトル分析資料集を中本教授と刊行する予定.刊行に手間取っている理由は,スペクトル分析結果とそれに付ける音声記号との照合を琉球方言研究の権威中本教授と綿密にしているからである.琉球方言は,日本語方言の中でもその特色は際だっている.特に,音声は本土と異なるものが多く認められる.本研究は,琉球方言の音声の特色を精密な録音と精密なスペクトル分析で永久的に保存すること,そしてその音響的特性を解明することを行った.経費の関係で,全てをつくすことは無理であったが,沖縄本土の首里方言,宮古島平良市狩俣方言,奄美大島方言,徳之島方言の特色音声については,当初より考えていたとおりの成果をあげることが出来た.資料はテープ1時間もの約50巻分を得た.分析法も,共同者とパソコンで行うLPC分析, AbS分析を完成させた.小型化したのはわが国で初めてであろう.それも駆使して,鋭意分析に努めた.研究成果の一部は,日本音響学会,日本方言研究会,日本音声学会研究例会等で発表してきた.特に,琉球方言のウが本土のとは異なっていることを発見した.第一ホルマント370Hz,第二ホルマント790Hzとなる.琉球全体に共通するであろう.本土でのオとウを合成した時の音声である.中舌化母音でイのそれは,音響的なスペクトル分析結果に大きな違いはないが,聞こえにおいて違う点もある.今後の課題である.同じく中舌化母音で奄美方言のエの場合,第一ホルマント500Hz,第二ホルマント1500Hzとなることが分かった.まさに母音の中性化であることも発見した.また,奄美方言の母音変化・中本教授の仮説が,徳之島山の場合,年層別に母音分析して正しいことを証明した.首里方言などのグロッタルストップもインテンシティーにて視察できた.後日,スペクトル分析資料集を中本教授と刊行する予定.刊行に手間取っている理由は,スペクトル分析結果とそれに付ける音声記号との照合を琉球方言研究の権威中本教授と綿密にしているからである.琉球方言の中でも特色音声の著しい奄美大島・徳之島と宮古島の音声を周到な準備のもとに録音し、音響分析機器とパーソナルコンピュータによって特色音声に関する大量のスペクトル分析結果を得た。典型的なもの(奄美大島・徳之島・宮古島の中舌化母音つまり[【I! ̈】:][【e! ̈】:]等)の音響的静特性および動特性を把握するための見通しを得た。具体的には以下のとおりである。調査のために、今石元久編『音声調査票(日本語方言音声スペクトル分析用)』を修訂し、かつ特色音声を目当てとする約500の専用調査項目を選定した。音声資料は、高校・中年・老年・高老年の男性の中で好条件の人を選出して得た。その他では、自然談話の収録も行った。特色音声の聴取では、機器導入により聴取率が飛躍的によくなり多くの音声記述を行った。琉球の音韻研究の第一人者中本正智氏他より聴覚的音声記述の協力を得て、分析結果に付与された音声記号の信頼性も一段と高まった。音声分析に関する研究成果では、大きく二つに大別される。一つは、分析システムの開発に成功したことである。既設デジタルソナグラフ7800(Kay社)による分析手法はすでに確立しているが、岩手大情報工学三輪譲二氏から技術援助を受けて、パーソナルコンピュータでも音声分析を可能にし実用化した。このようにしてLPC分析を文科系にて行ったのはわが国で最初になるであろう。これをInteractive SpeechAnalysis Systemと言う。そして、二つにはパーソナルコンピュータや音響分析機器を駆使し、奄美大島・徳之島等のスペクトル分析を試みて、多くのソナグラムとホルマント周波数のデータを得た。
機能性脂質粉末の形態、安定性制御手法の構築

機能性脂質として注目されている中鎖脂肪酸トリアシルグリセロール(Medium Chain Triglyceride, MCT)は、炭素数8-10の常温で液状の油脂であり,消化,吸収,代謝において長鎖脂肪酸トリアシルグリセロールと比較して特異な特性を持ち,吸収されやすく,肝臓にてエネルギーとして代謝されるため,消化吸収系統器官の衰弱した患者に高カロリーを与えることができる.そのため、MCT含有粉末は手術後のエネルギー源や未熟児のためのエネルギー源としての機能性食品粉末として利用されている。摂取粉末量あたりのエネルギー量を多くするためにMCT高含有粉末作製の要望が多いにも拘らず、乳化MCT含有噴霧乾燥粉末の工学的データが殆どないのが現状である。よって、本研究では、オクテニルコハク酸修飾デンプンを主賦形剤とする混合修飾デンプンを用いて、賦形剤の3倍重量を含むMCTオイル高含有噴霧乾燥粉末を作製し、粉末表面オイルおよびMCTオイル包括率と噴霧乾燥粉末構造の関係について電子顕微鏡、共焦点レーザー顕微鏡、薄層クロマトグラフイ炎光検出装置等を用いて検討した。種々の混合賦形剤、噴霧乾燥条件でMCT高含有噴霧乾燥粉末を作製し、乳化オイルのエマルション径と噴霧乾燥粉末の平均粉末径の比が、噴霧乾燥粉末の表面オイル量、MCTオイル包括率に非常に重要であることを明らかにした。その結果、2種類のオクテニルコハク酸修飾デンプンと酸化変性デンプンの3種の混合賦形剤を用いることにより、賦形剤重量の2.9倍量のMCTオイルを包括し表面オイルの少ない機能性オイル粉末を作製することができた。近年、老齢化に伴う機能性食品開発が盛んに行なわれている。ドコサヘキサエン酸(DHA),エイコサペンタエン酸(EPA)、Sea Buckthorn Oilのような高度不飽和脂肪酸の粉末は、ゼラチン30%以上を含む硬い錠剤型のものが販売されているが老齢者には飲み込むことが難しく、粉末化が望まれている、また、日常食している米に、栄養機能補助兼、嗜好促進のためのフレーバー制御粉末の開発が企図されている。アメリカでは、米への栄養補助剤粉末の添加が販売者の段階で義務付けられている。機能性脂質を安定粉末の形で、機能性食品として供給できるようにするためには、機能性脂質を粉末化するための賦形剤・脂質の抗酸化剤の選択ばかりでなく、粉末中の機能性脂質の分布、粉末形態を制御できなければばらない。噴霧乾燥粉末の形態制御と作成粉末の一粉体観察を目的に、以下の実験を実施した。本年度は、(1)賦形剤として、DEの異なるマルトデキストリンを用いて噴霧乾燥粉末を作成し、粉末構造をSEM,CLSMを用いて検討した。アトマイザー回転数、噴霧乾燥温度により、噴霧乾燥粉末径を制御できた。噴霧乾燥粉末中の空孔サイズは、CLSMを用いて測定できた。単糖であるトレハロースを用いて噴霧乾燥粉末を用いた場合は、中実球粉体が作成できた。(2)中空デンプン粒子を用いて、単一噴霧乾燥粉体中のフレーバー移動挙動をCLSMにより観察する手法の詳細について検討を実施した。(3)噴霧乾燥粉末中のフレーバーエマルション径、粉末径が、フレーバー徐放性、安定性に与える影響、腑形剤の影響について検討した。その結果、粒径が大きい粉体中にあるフレーバーが安定であること、賦形剤のガラス転移温度とフレーバーの安定性におおきな関係があることを明らかにした。機能性脂質として注目されている中鎖脂肪酸トリアシルグリセロール(Medium Chain Triglyceride, MCT)は、炭素数8-10の常温で液状の油脂であり,消化,吸収,代謝において長鎖脂肪酸トリアシルグリセロールと比較して特異な特性を持ち,吸収されやすく,肝臓にてエネルギーとして代謝されるため,消化吸収系統器官の衰弱した患者に高カロリーを与えることができる.

そのため、MCT含有粉末は手術後のエネルギー源や未熟児のためのエネルギー源としての機能性食品粉末として利用されている。摂取粉末量あたりのエネルギー量を多くするためにMCT高含有粉末作製の要望が多いにも拘らず、乳化MCT含有噴霧乾燥粉末の工学的データが殆どないのが現状である。よって、本研究では、オクテニルコハク酸修飾デンプンを主賦形剤とする混合修飾デンプンを用いて、賦形剤の3倍重量を含むMCTオイル高含有噴霧乾燥粉末を作製し、粉末表面オイルおよびMCTオイル包括率と噴霧乾燥粉末構造の関係について電子顕微鏡、共焦点レーザー顕微鏡、薄層クロマトグラフイ炎光検出装置等を用いて検討した。種々の混合賦形剤、噴霧乾燥条件でMCT高含有噴霧乾燥粉末を作製し、乳化オイルのエマルション径と噴霧乾燥粉末の平均粉末径の比が、噴霧乾燥粉末の表面オイル量、MCTオイル包括率に非常に重要であることを明らかにした。その結果、2種類のオクテニルコハク酸修飾デンプンと酸化変性デンプンの3種の混合賦形剤を用いることにより、賦形剤重量の2.9倍量のMCTオイルを包括し表面オイルの少ない機能性オイル粉末を作製することができた。
相同組換え修復開始を導くクロマチン構造変換後のpseudo転写構造形成の解明

放射線照射によって生じるDNA二本鎖切断は最も重篤なDNA損傷であり、その修復の成否は細胞の生死に大きな影響を与える。本研究では、DNA二本鎖切断の修復経路の一つである相同組換え(HR)に着眼し、HR開始に関わる新規因子を同定するためスクリーニングを行った。その結果、転写のみならずHRにも関わる新規HR因子を同定した。同定されたMEC1およびREC1は、HR開始を導くDSB end resectionを促進することが明らかになった。これらの発見は、放射線照射が誘発するゲノム安定化機構を理解する重要な分子情報基盤となる。放射線照射(IR)によって生じるDNA損傷の中でも、DNA二本鎖切断(DSB)は最も重篤な損傷であり、その修復の成否は細胞の生死を決める。DSBに対する修復経路はnon-homologous endjoining(NHEJ)及びhomologous recombination(HR)の二つがある。NHEJは簡略化された分子機構とそれに伴う素早い修復速度で迅速にDSBを修復する。またNHEJは細胞周期を問わずDSBを修復することが出来る。しかしながら修復後の連結部位に欠失変異等を引き起こす。一方でHRは姉妹染色分体が必要であるためS/G2期のみで機能する。HRの最大の利点はその正確な修復反応機構である。しかしHRは修復速度が遅く、DNA損傷後の細胞周期チェックポイント機構が厳密ではないヒト細胞においては損傷を有するまま分裂期に進行する危険がある。申請者らの研究から、ヒトS/G2期細胞においてIR後に用いられる主要経路はNHEJであり、HRはマイナー経路である事が分かっている。また、NHEJがDSB修復の第一選択であり、NHEJからHRへの移行、つまりHR開始点が両修復経路決定の運命を担う分岐点である事が分かってきた。本研究ではHR開始に関わる新規DNA-end resection因子を探索し、HR開始点における新モデルを提案することを目的としている。またHR開始点で必要と考えられるクロマチン構造変化を導くヒストン修飾酵素を同定することで、HR開始に必要なゲノム構造変換とその分子機構を明らかにする。siRNAライブラリー及びIP-MSを用いた別々の方法により、合計5つの新規HR候補因子が見出された。これら因子をsiRNAによりノックダウンした細胞ではRPAのリン酸化だけではなく、RAD51 foci形成の減少及びHR頻度の低下が認められた。DSBに対する修復経路はnon-homologous endjoining(NHEJ)及びhomologous recombination(HR)の2つがある。一方でHRは姉妹染色分体必要であるためS/G2期のみで機能する。しかしHPは修復速度が遅くDNA損傷後の細胞周期チェックポイント機構が厳密ではないヒト細胞においては損傷を有するまま分裂期に進行する危険がある。これまでの申請者らの研究から、ヒトS/G2期細胞においてIR後に用いられる主要経路はNHEJであり、HRはマイナー経路である事が分かっている。これらの因子をsiRNAによりノックダウンした細胞ではRPAのリン酸化だけではなく、RAD51 foci形成の減少及びHR頻度の低下が認められた。研究計画にあるスクリーニング及び発見された因子の機能解析が進んでいる。DSBに対する修復経路はnon-hommologous endjoining(NHEJ)及びhomologous recombination(HR)の2つがある。HR最大の利点はその正確な修復反応機構である。本研究ではHR開始に関わる新規DNA-end resection因子を探索し、HR開始点における新モデルを提案する。またHR開始点で必要と考えられるクロマチン構造変化を導く分子を同定することで、HR開始に必要なゲノム構造変換とその分子機構を明らかにする。

これらの因子をsiRNAによりノックダウンした細胞ではRPAのリン酸化だけではなく、RAD51 foci形成の減少及びHR頻度の低下が認められた。また発見された中の因子の一つは、DSB依存的に翻訳後修飾を受け、その修飾は転写阻害剤により抑制されたことから、DSBと転写が連携しながらresectionを進行させていることが示唆された。現在はCRISPR/Cas9システムによりノックアウト細胞を作成し解析を進めている。HRに関わる新規候補遺伝子を発見しているが、これらの分子間ネットワークを繋ぐ相互作用因子または翻訳後修飾が見つかっていない。また、これらの分子はDSB部位への集積量がおそらく少ないため、従来のDSB修復分子のようにfociを形成しない。そのため、転写構造と共役するDSBを部位特異的に発生させるアッセイ系を構築する方針に変えて実験を行っているため、当初の計画よりやや遅れている。放射線照射(IR)によって生じるDNA損傷の中でも、DNA二本鎖切断(DSB)は最も重篤な損傷であり、その修復の成否は細胞の生死を決める。DSBに対する修復経路は、non-homologous end joining(NHEJ)及びhomologous recombination(HR)の2つがある。NHEJは簡略化された分子機構とそれに伴う素早い修復速度で迅速にDSBを修復する。一方でHRは姉妹染色分体必要であるためS/G2期のみで機能する。HR最大の利点はその正確な修復反応機構である。これまでの申請者らの研究から、ヒトS/G2期細胞においてIR期後に用いられる主要経路はNHEJであり、HRはマイナー経路であることが分かっている。また、NHEJがDSB修復の第一選択であり、NHEJからHRへの移行、つまりHR開始点が両修復経路決定の運命を担う分岐点であることが分かってきた。本研究ではHR開始に関わる新規DNA-end resection因子を探索し、HR開始点における新モデルを提案することを目的として研究を行った。本研究では転写に関与する因子群に着目し、siRNAライブラリー及びIP-MSを用いた別々の方法により、合計5つの新規HR候補因子が見出された。しかしこれらの因子は従来のDSB修復因子とは異なりfociを形成しない。そのためDSBを優先的に誘発する730nmレーザーを用い、GFP融合タンパクとしてその一連の修復に関わる分子動態を研究した。以上の結果から、本研究では転写と共役する相同組換え修復機構とその分子群の機能が明らかになった。放射線照射によって生じるDNA二本鎖切断は最も重篤なDNA損傷であり、その修復の成否は細胞の生死に大きな影響を与える。
数学学習における物語性についての考案

数学学習を物語性という視点からとらえたとき、次のような研究課題を新しい相貌のもとでとらえることができた。1.興味、関心の喚起を促す学習数学学習における興味、関心、すなわち内発的な動機づけは、意外性や理解の不確かさによって生じるが、そこには「笑いのメカニズム」や、「ずれ」の認識が大きく関与し、それらが実は「物語」や「劇的なるもの」を産み出す主要な要因であることが、各種の授業実践や数学のビデオの視聴を通して推察できた。2.コミュニケーションと数学教育コミュニケーションを対自的、対他的な観点からとらえたとき、それらはモノクローグとダイアローグとして考察することができる。つまりコミュニケーションと数学学習との関連を考えるとき、モノクローグ的数学、ダイアローグ的数学という形で数学をとらえることができ、後者の数学教育をもとにした考察を深める過程において、数学を「語る」という行学が、数学の理解に算的な変化を促し、同時に数学学習における共同性を創出させる可能性があることがわかった。3.数学史の教材化物語的視点が「数学基礎」(新学習指導要領)の内容構成に大きく役立つことがわかった。特にリクールの「時間と物語」(新曜社)が有効であることがわかった。本研究は、意外性、思いちがい、理解の不確かさといった認知・認識のずれや「了解の落差」に着目した学習意欲喚起の課題のもつ限界を乗り越えようとするために行われたものである。つまり、その学習意欲の喚起の課題からいかにして人間的価値や数学的価値を生じせしめるかという研究であったが、次の2つの言明に着目することによって研究の具体化への手がかりを得ることができた。1つは哲学者野家啓一氏の「物語の哲学」の中の「物理学も1つの物語である」という言明、いま1つは数学者渡辺公夫氏の「数学を『語る』ことによって自分の数学が育つ」という言明である。この2つの言明から、概念図式(スキーマ)や理解的枠組が1つの「物語」として特定することが可能となり、現在、この視点から、イギリスのオープンスクールで作製された数学のビデオ教材と芳賀和夫氏作製の「オリガミクス」のビデオ教材をそれぞれ分析し、概念図式と理解的枠組のもつ物語性を実証的に明らかにしようとしているところである。実証された「物語性」にもとづく新しい数学単元、及び授業構成が来年度の課題となる。
書字運動中のダイナミクス計測装置の開発

署名は個人認証の手続きとして古くから用いられている手続きであるが、文字を書くという現象については詳細に解明されているわけではない。本研究では、書字中の指・手首などの運動情報を詳細に分析し、署名・筆跡の安定性などを支持するための分析手法の開発を行うことを目的とした。書字中の運動では、筆具と人の指先の力の相互作用に着目し、それらの力を計測するための力覚検出ペンを開発した。力の方向の接触力を検出するペンは、3自由度の小型力センサーをペン型形状のホルダーに3つ使用した。書字運動中の人差し指、親指、ペン先の分力を正確に計測することができ、実際の書字中における分析が可能であることを示した。
軟骨細胞におけるSIRT1の役割

本研究により、SIRT1の過剰発現により軟骨細胞におけるIL-1β誘導による関節破壊を促進する細胞外基質分解酵素の発現の抑制をすることが分かった。本研究結果から、SIRT1が軟骨細胞において保護的に働いていることが示唆された。(1) SIRT1を軟骨細胞に過剰発現した場合に軟骨細胞の肥大化、アポトーシスを抑制するか、また、基質合成の促進するかを確認する(in vitro)SIRT1の過剰発現による軟骨細胞での機能解析まず、SIRT1を発現するplasmidを調整し,lipofection法にてtransfectionを行った。SIRTIの過剰発現をreal-time PCRにて確認した後western blottingにて確認した。また、過剰発現の影響はwestern blottingにてP53のアセチル化を調べることにても確認した。SIRT1を過剰に発現した軟骨ではアセチル化したP53の発現が減少しており、タンパク量の増加だけでなく、脱アセチル化が促進されていることを確認した。続いて、過剰発現による遺伝子発現におよぼす影響を調べた。SIRT1の過剰発現単独でAGGRECAN、COLLACEN2A1の発現量の増加をみとめた。一方COLLAGEN1OA1の発現の低下をみとめた。さらに、IL-1βで軟骨細胞を刺激した状態でSIRT1を過剰に発現させてSIRT1が軟骨の破壊に保護的に機能するか調べた。上記のようにSIRT1を過剰発現させた後にIL-1βにて刺激し、IL-1β刺激後RNAを採取して遺伝子変化を調べた。IL-1β刺激ではAGGRECANの発現量は80%程度までの低下にとどまった。IL-1β刺激下でSIRT1を過剰発現させた群ではAGGRECANの発現量の増加をみとめた。COLLAGEN2A1の発現量も同様の変化をみとめた。一方ADTAM-TS5やMMP13の発現量はIL-1β刺激により上昇をみとめたが、SIRT1を過剰発現させた群ではその発現の上昇が一部抑制され、SIRT1の過剰発現が軟骨細胞に保護的に働く可能性が示唆された。現在さらにより多くの遺伝子の変化を調べている段階である。また、アポトーシスの抑制についても調べている。2)生体内でのSIRT1の軟骨における役割の解析(1)in vitro:まず、SIRT1を発現するplasmidをIL-1β刺激下に導入し、遺伝子発現の変化を調べた。IL-1βの刺激で、aggrecanやCOL2A1の発現は低下し、MMP-1、-2、-3、-13、ADAMTS-5の発現は有意に上昇した。一方、SIRT1の過剰発現した軟骨細胞にではaggrecan, COL2A1の低下は抑えられ、MMPや、ADAMTS-5の上昇は有意に抑制された。さらにSIRT1の影響を確認するために、IL-1β刺激下で逆にSIRT1を抑制して影響を調べた。SIRT1の抑制により、aggrecan, COL2A1の発現はさらに低下し、MMP、ADMTS-5の発現はさらに上昇した。以上より、SIRT1がIL-1β誘導による軟骨分解酵素や軟骨基質成分の発現の調節に関与していることが強く示唆された。そこでその調節機構のメカニズムを調べた。IL-1β誘導によるMMPの発現をNF-κB経路が伝達することが知られているため、SIRT1のNF-κB経路に対する影響を調べた。IL-1βはNF-κBの一つであるP65をアセチル化させ、一方でSIRT1はIL-1β誘導によるP65のアセチル化を抑制した。また、免疫沈降にてSIRT1がP65と結合することが分かった。P65の転写活性はアセチル化により活性化されることが知られており、SIRT1はP65と結合して脱アセチル化すし、IL-1β誘導によるMMPの発現上昇を抑制すると考えられた。(2)in vivo : SIRT1の軟骨細胞特異的ノックアウトマウスは外観上及び軟骨の表現型の異常が明らかでなかったため、現在変形性関節症モデルを作成してその解析をおこなっている。
維管束を介したサイトカイニン情報の長距離伝播の仕組みと役割

多様な器官から構成される植物が、絶えず変化する環境下で個体として生存に最適なバランスを維持するためには、細胞間だけでなく、器官間での緊密な情報のやり取りも不可欠である。サイトカイニン(CK)は植物の成長・発達の様々な段階で不可欠な植物ホルモンであり、局所シグナルとして作用するとともに、道管・師管を介して長距離輸送されて器官間(長距離)シグナルとしても重要な役割をもつ。申請者らはこれまでCKの生合成を担う遺伝子群、CK分子の側鎖修飾によりCK作用の器官特異性を生み出すメカニズム、根から地上部への輸送のために道管へのCK積み込みを司る遺伝子など、CKの長距離シグナルとしての働きを支える分子機構を明らかにしてきた。しかし(A)CKの道管への積み込みの分子メカニズムと(B)師管を介した地上部から根へのCK情報の長距離伝搬のメカニズムと生理的役割に関しては未解決の問題が多く残されている。未解決問題Aに関しては、申請者らが最近同定したCKの道管への積み込みを司る因子の詳細な機能解析を行った。ABCG14はABC輸送体ファミリーの一員であるが、基質や輸送特性などの詳細は全く明らかになっていなかった。そこで薬剤誘導的にABCG14を発現する形質転換T87培養細胞を作製し、阻害剤の処理と組み合わせて細胞中と培地中のCKの分析を行った。その結果、ABCG14はリボチド型CK前駆体を排出する輸送体であることを強く示唆する結果を得た。またabcg14変異体背景でABCG14を細胞種特異的に発現させた形質転換体の解析を行い、まだ予備的ではあるが、ABCG14は師部と前形成層からリボチド型CK前駆体を排出することにより、道管への積み込みに寄与していることを示唆する結果を得た。未解決問題Bに関しては、名古屋大学野田口研究室で開発された接ぎ木ディバイスを用いて接ぎ木を行うことに成功した。特に問題なく進捗している。未解決問題A、Bについて本年度は以下のような計画で研究を実施する。申請者らが最近同定した、CKの道管への積み込みを司る遺伝子ABCG14 (Ko et al. 2014)の詳細な機能解析を進める。シロイヌナズナT87培養細胞を用いた系による解析から、ABCG14がリボチド型サイトカイニン前駆体のエクスポーターであることを示唆する結果を得た。これについて確証を得るため、in vitro輸送アッセイ系による解析を行う。またabcg14変異体背景で細胞種特異的にABCG14を発現させた形質転換体シリーズ(師管、伴細胞、道管、前形成層、内鞘細胞で発現)をすべて確立し、道管液のCK量や分子種の変化、地上部の成長などを解析する。これらの結果を総合化し、ABCG14がどの細胞種でリボチド型CKを排出することが道管へのCK積み込みに重要なのかを明らかにする。(B)師管を介した地上部から根へのCK情報の長距離伝搬のメカニズムと生理的役割名古屋大学野田口研究室で開発された接ぎ木ディバイスを用い、CK生合成・情報伝達関連変異体間の接ぎ木を行い、根の表現型の評価を行う。シロイヌナズナT87

培養細胞を用いた系による解析から、ABCG14がリボチド型サイトカイニン前駆体のエクスポーターであることを示唆する結果を得た。これについて確証を得るため、in vitro輸送アッセイ系による解析を行う。またabcg14変異体背景で細胞種特異的にABCG14を発現させた形質転換体シリーズ(師管、伴細胞、道管、前形成層、内鞘細胞で発現)をすべて確立し、道管液のCK量や分子種の変化、地上部の成長などを解析する。これらの結果を総合化し、ABCG14がどの細胞種でリボチド型CKを排出することが道管へのCK積み込みに重要なのかを明らかにする。(B)師管を介した地上部から根へのCK情報の長距離伝搬のメカニズムと生理的役割名古屋大学野田口研究室で開発された接ぎ木ディバイスを用い、CK生合成・情報伝達関連変異体間の接ぎ木を行い、根の表現型の評価を行う。
現代日本語名詞シソーラスから見た語量の意味分類

現代日本語の名詞シソーラスを作成しながら、語彙の意味分類の多様性についての研究を行った。現在までに、シソーラスを通して現代日本語の名詞の意味分類ができあがりつつあるが、こうして似た意味の単語をまとめてみると、全体が不整号になる現象が発生する。そこで、ある単語のグループを取り出して、そのグループが確かにグループになっているかどうかを検討することにした。シソーラスに関するさまざまな処理はパソコンを用いて行っているが、プログラムなどの整備が進み、シソーラスの効率的な検索を行うプログラムができあがった。このプログラムの完成によって、パソコン上でわかりやすい形でシソーラスが検索でき、またそれを利用してシソーラスのチャックができるというような態勢ができあがった。また、シソーラス全体を圧縮してフロッピーに格納するコマンド、およびフロッピーからハードディスクに圧縮を解除しながら格納するコマンドも作成した。以上の結果、シソーラスをフロッピー版で公開する用意が整った。本研究では、現代日本語の名詞シソ-ラスを作成しながら、語彙の意味分類の多様性についての研究を行なう。今年度は、まず長期的な設備の整備として、光磁気ディスクを購入し、大量デ-タの保存上の問題点を解決した。次に、ふたりの研究補助者に依頼して、シソ-ラスの中の語のチェックを行なった。シソ-ラスの中では、語は、互いの意味関係を通して相互に結び付いている。その結び付きが、システム全体として整合性を保つようになっていないと、シソ-ラスの構造がつかめず、研究の目的である「語彙の意味分類」にまで進むことはできない。そこで、シソ-ラス中の語の意味関係が正しくついているかどうかということは、たえずチェックしていかなければならない大問題なのである。チェックした項目はいろいろあるが、もっとも多く時間を割いたのは、ある単語Xの上位語Yにさらに同義語Zが指定されているときにXの上位語をZと書き直していいかという問題である。論理的にはそれでいいと考えられるが、実際にそのような例を抽出して検討してみると、単純にいいともいえないことがわかった。そこで、一つ一つの例について検討しながら、上位語を書き換えたり、書き換えなかったりした。今年度は、約5000語についてチェックを行なった。この作業は膨大な時間がかかる。しかし、これをクリア-しないと、シソ-ラスの記述が全体として有効なものになりえないので、この作業は来年度も継続して行なっていく予定である。今年度は、前年度に引き続き、ふたりの研究補助者に依頼して、シソ-ラスの中の語の意味のチェックを行なった。今年度は、前年度に引き続き、約7000語についてチェックを行なった。これで合計12000語についてのチェックが終了したことになる。このチェックも続けながら、さらに、別の検討も行なった。現在までに、シソ-ラスを通して現代日本語の名詞の意味分類ができあがりつつあるが、こうして似た意味の単語をまとめてみると、全体が不整号になる現象が発生する。そこで、ある単語のグル-プを取り出して、そのグル-プが確かにグル-プになっているかどうかを検討することにした。現在のところ、ほんの数十個のグル-プ(500語程度)についてだけ検討が終わった段階であるが、これによって、相当にシソ-ラスの意味体系が整うようになってきた。本研究では、現代日本語の名詞シソーラスを作成しながら、語彙の意味分類の多様性についての研究を行なう。今年度も、研究補助者に依頼してシソーラスの中の語の意味のチェックを行なった。シソーラスの中では、語は、互いの意味関係を通して相互に結び付いている。

その結び付きが、システム全体として整合性を保つようになっていないと、シソーラスの構造がつかめず、研究の目的である「語彙の意味分類」にまで進むことはできない。そこで、シソーラス中の語の意味関係が正しくついてるかどうかということは、たえずチェックしていかなければならない大問題なのである。現在までに、シソーラスを通して現代日本語の名詞の意味分類ができあがりつつあるが、こうして似た意味の単語をまとめてみると、全体が不整号になる現象が発生する。そこで、ある単語のグループを取り出して、そのグループが確かにグループになっているかどうかを検討することにした。今年度は、約400グループ(6000語程度)について検討が終わった。シソーラスに関するさまざまな処理はパソコンを用いて行なっているが、今年度も関連プログラムなどの整備を進めた。主に努力をそそいだのは、検索プログラムである。このプログラムの完成によって、パソコン上でわかりやすい形でシソーラスが検索でき、またそれを利用してシソーラスのチェックができるというような態勢ができあがった。また、シソーラス全体を圧縮してフロッピーに格納するコマンド、およびフロッピーからハードディスクに圧縮を解除しながら格納するコマンドも作成した。以上の結果、シソーラスをフロッピー版で公開する用意が整った。今年度が最終年度であるため、3年間の研究成果をとりまとめて、報告書を作成した。
所得の不平等度とナイト流不確実性

本研究プロジェクトでは、(1)ショケ型期待効用理論の公理化、(2)メビウス表現の特徴付け、およびジニ係数の特徴付け、(3)ナイト流不確実性下の情報の更新(Dempster-Shafer rule, Fagin-Halpern ruleおよびnaive Bayes' rule)に関する公理化、について研究を行い、これまでに知られていない新しい結果を導出した。(1)、(2)の研究は国際的学術誌に掲載され、(3)については、現在、国際的学術誌に投稿中である。平成25年度は研究計画に基づき、以下の点について研究活動を行った。1.最小作用素から構成される選好の表現関数に関する研究:平成25年度に執筆した最小作用素(min operator)から構成される選好の表現関数についての論文を完成した。これは、Rohdeの不平等回避の選好を含んだ代表関数であり、また、Ben-PorathとGilboaのジニ係数についての選好をも表現できる代表関数であるから、本研究のテーマの中核を成す論文である。この論文は、査読付き国際的学術誌Theory and Decisionに投稿し、12月に採択された。2.協力ゲームにおける特性関数のメビウス表現に関する研究:平成25年に執筆した協力ゲームにおける特性関数のメビウス表現に関する論文を完成した。これは、協力ゲームとナイト流不確実性下の意思決定とで共通に使われる特性関数に関する研究である。この研究では、特定の基底たちに対するメビウス係数が0になる条件、及び、非負になる条件を導くものである。この論文で得た定理によって、Ben-PorathとGilboaのジニ係数についての選好をショケ積分によって特徴づけることができる。本論文は、査読付き国際的学術誌に投稿され、改訂要求が届き、再投稿を行い、現在審査中である。3.ナイト流不確実性下での情報の改訂の研究:不平等に関する経済主体の選好においては、不確実性の問題は重要である。それは、通常の確率的不確実性ではなく、ナイトの意味での不確実性であると考えられる。その際、入手された情報でどのような信念の改訂(updating)が生じるかは難しい問題であり、まだ定番の研究がない状況である。本研究では、この問題を扱い、現在、ナイト流不確実性下での情報改訂の公理化を構築中である。26年度中にはこの論文を完成し、査読付き国際的学術誌に投稿する予定である。平成26年度は研究計画に基づき、以下の点につき研究を行った。1.協力ゲームにおける特性関数のメビウス表現に関する研究:平成25年度から執筆し、改訂を続けた協力ゲームの特性関数のメビウス表現に関する論文を完成した。これは、協力ゲームとナイト的不確実性下の意思決定で共通に用いられる特性関数に関する研究である。この研究は、特定の基底たちに関するメビウス係数が0である条件と、非負である条件を導くものである。とりわけ、これは、不平等度を計測するGini係数に対して、Ben-Porath and Gilboa (1994, Journal of Economic Theory)が導入した公理を、ショケ積分によって特徴付けるものであり、本研究にとって中核を成すものの一つである。この論文は、査読付き国際的学術雑誌Mathematical Methods of Operations Researchに投稿し、8月号、vol.80に掲載された。2.ナイト的不確実性下での情報の更新の研究:経済主体の不平等に関する選好の研究においては、不確実性の問題は重要である。経済主体は、将来の不確実性のあり方に応じて、備えをし、また社会選択に関する主観を構成する。その主観は、入手された情報によって更新される。しかも、主観やその更新は、ほとんどの場合、通常の確率的なものではなく、ある種の歪みを備えていると考えられる。従って、ナイト的不確実性での非加法的確率の更新の問題は本質的である。本研究では、この非加法的確率の更新の問題に取り組み、Dempster-Shaferの更新、Fagin-Halpernの更新に対する統一的な公理系を与えることに成功した。現在、論文の初稿を完成し、鋭意改訂中である。27年度中には投稿する予定である。平成27年度は研究計画に基づき、以下の点について研究を行った。1.ナイト的不確実性下での情報の更新の研究:平成26年度から執筆し、改訂を続けてきた、ショケ期待効用における情報による認識改訂についての研究を完成した。これは、確率的推論に変わる新しい不確実性下の推論として研究が著しく発展中のショケ期待効用に対して、確率理論の条件付確率に対応する概念を作り出す研究である。重要な改訂方法として、Naive-Bayes改訂、Dempster-Shafer改訂、Fagin-Halpern改訂の三つが提唱されているが、これらを統一的に公理化する方法を開発した。さらには、前の二つに対しては、推論の改訂において問題になっているdynamic consistencyとの関係をはっきりさせた上で、dynamic consistencyをぎりぎりに制限しての公理化を行った。この論文は、現在、国際的英文学術誌に投稿し、審査中である。2.素事象の分離性を基礎とした不平等回避の公理化の研究:平成26年度から研究し、十分な議論を続けてきた、素事象の分離性を基礎とした不平等回避の公理化の研究を完成し、論文を執筆した。この研究は、Machinaが提唱した事象の分離性を、ショケ期待効用の枠組みでの素事象の分離性に発展させ、それを公理化したものである。この公理系によって、GilboaのVariation回避や、Rohdeの不平等回避を統一的に公理化することができる。

そればかりではなく、もっと多様な構造の不平等回避をも、容易に公理化が可能となる。この論文は、精密な改訂の上、近日中に投稿の予定である。本研究プロジェクトでは、(1)ショケ型期待効用理論の公理化、(2)メビウス表現の特徴付け、およびジニ係数の特徴付け、(3)ナイト流不確実性下の情報の更新(Dempster-Shafer rule, Fagin-Halpern ruleおよびnaive Bayes' rule)に関する公理化、について研究を行い、これまでに知られていない新しい結果を導出した。(1)、(2)の研究は国際的学術誌に掲載され、(3)については、現在、国際的学術誌に投稿中である。完成して、査読付き国際的学術誌に投稿し、公刊された論文が二本。完成して、査読付き国際的学術誌に投稿準備中の論文が一本。アイデアを得て、執筆を控えている論文が三本あることから、そう評価する。ミクロ経済学27年度は研究計画に従って、投稿準備中の論文を完成し、投稿する。また、論文化のアイデアを得ている三本の論文を執筆し、投稿の準備をする。とりわけ、その中の一本は、ロールズの提唱した、不平等に関するマックスミン原理を公理化する重要な論文なので、年度内での完成を目指す。完成して査読付き国際的学術誌に投稿し、既に採択された論文が一本。完成して査読付き国際的学術誌に投稿し、改訂要求を受けて再投稿している論文が一本。研究は完成し、投稿準備中の論文が一本。アイデアを得て、論文化を控えている論文が二本あることから、そのように自己評価する。当初、処理能力の高いコンピューター、数値計算ソフトの購入を計画していたが、当該年度は理論研究を中心に研究を進めたため、次年度購入とし、無理な執行は回避した。26年度は研究計画に従って、まず、投稿準備中の論文を完成し、投稿する。また、アイデアを得ている二本の論文を具体的に論文化し、投稿準備を行う。さらには、今後二年の計画として、本研究によって最も重要となるジョン・ロールズのマックスミン原理の公理化の着想を固める。3年間の研究プロジェクトを着実に推進するため、処理能力の高いコンピューターの購入、研究報告のための旅費に支出する予定である。当初、コンピューター、数値計算ソフトの購入を予定していたが、次年度に購入した方が研究の推進上、より相応しいと判断し、無理な執行は回避した。3年間の研究プロジェクトを計画通り推進するため、処理能力の高いコンピューター、数値計算ソフトを購入する計画である。
転写因子E2Aによる染色体高次構造変化を介したT細胞分化制御

T細胞受容体b鎖(TCRb)遺伝子は、多くのV, D, J遺伝子から構成され、最も未熟なCD4/8 Double Negative(DN)胸腺細胞で、VDJ組換えを受けることで多様性を獲得する。これまでに、bHLH転写因子E2AがTCRβ遺伝子の多くのV, D, J遺伝子に結合し、ヒストンアセチル化の上昇を介して組換えを誘導すること、さらに組換えが成功すると、CD4/8 Double Positive(DP)胸腺細胞へ分化が進むとともに、E2Aがもう片アレルのV領域から解離し、さらなる組換えが抑制されることがわかった。Immuno-FISH解析により、DN細胞ではE2Aがfociを形成し、E2A fociの近傍でVとDJ領域が接近するのに対して、DP細胞ではVとDJ領域が離れ、さらに減弱したE2A fociからも離れることがわかった。E2Aを過剰発現させるとDP細胞でもE2A fociが増加し、VとDJ領域が接近する傾向を認めた。以上の結果から、E2Aはfociを形成することでTCRb遺伝子のVとDJ領域を接近させ、遺伝子再構成を誘導することが示唆された。
二枚貝晶稈体を構成する新規タンパク質を活用したバイオリアクターシステム等の開発

二枚貝の餌の種類に応じた晶桿体酵素の誘導を知る目的で,主要な糖源の分解に関わる酵素について,アサリを用いて調べた。CMセルロース及びブドウ糖を投与した場合はセルラーゼとアミラーゼ活性が強くなり、可溶性デンプンを投与した場合はアミラーゼ活性が強くなった。77kDaのセルラーゼがCMセルロースおよびブドウ糖給餌により誘導され,50kDaのセルラーゼがブドウ糖給餌により誘導された。米粉給餌個体では強いアミラーゼ活性が誘導された。以上の結果から,アサリは環境中の糖源を感知し,最適な酵素活性を誘導することが示唆された。ハマグリ、アサリ、ヤマトシジミの晶稈体からクリスタルタンパク質の精製を行った。陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、疎水性クロマトグラフィーなどを組み合わせることで、電気泳動的にほぼ均一に近い標品を得ることができた。精製クリスタルタンパク質は2本のメジャーバンドを示した。精製したクリスタルタンパク質を酵素分解し、得られたアミノ酸配列(EQSPTEF)をもとに特異的プライマー(5'-dGARCARTCNCCNACNGARTT; R=A or G, N=A, C, G, or T 5')を合成した。得られたPCR産物をもとに、5'側プライマーとしてGTCGTAGCTTGAAAGCGTAAGGACCTTCを用いてさらにPCRを行った。その結果、1692bpのcDNAを得ることができた。このcDNAは563アミノ酸からなるタンパク質をコードすると演繹された。EQSPTEFをこの内部に見出すことことができたこと、翻訳開始に必要なコザック配列RNNATGN (R=A or G)を含んでいたことから、このcDNAは機能的なクリスタルタンパク質をコードすると判断された。興味深いことにクリスタルタンパク質のアミノ酸配列はパーフォリンと呼ばれる膜攻撃タンパク質と高い相同性を示した。特にウニから得られているアペキシトリンという毒タンパク質との相同性が高かった。これらの結果は、クリスタルタンパク質が無脊椎動物において様々な機能を担うタンパク質に分化していることを示唆するものであった。組換えタンパク質を用いた非変性系電気泳動法により、クリスタルタンパク質はヤマトシジミなどの二枚貝由来のセルラーゼ等の消化酵素のほかに、血清アルブミンやカゼインなどの各種酵素タンパク質に加え、市販の微生物由来のアミラーゼやプロテーゼに対して幅広い固定化スペクトルを持つことを確認した。興味深いことに、クリスタルタンパク質に固定化されることで酵素タンパク質の熱安定性は著しく向上した。この結果は、精製タンパク質で見られた結果と一致した。変性剤であるSDSと尿素の存在下ではクリスタルタンパク質とタンパク質との結合は解離するが、メルカプトエタノールのような還元剤は影響を与えないことから、タンパク質間の結合においては水素結合が重要なことが確認された。クリスタルタンパク質を大腸菌組換え体を用いて、いくつかの部分に分けてタンパク質固定化能の局在性を調べたが、固定化部位を特定することはできなかった。この結果から、クリスタルタンパク質のタンパク固定化能は、特定のアミノ酸配列によって担われているのではなく、いくつかのドメインが共同的に作用することで機能しているものと推測された。組換えタンパク質を抗原としてウサギを用いてポリクローナル抗体の作製を試みた。3度のブースター投与のにより、ウエスタンブロット分析並びに光学顕微鏡を用いた免疫組織化学的手法を用いた検定で陽性を示す抗体の作製に成功した。この抗体を用いて晶稈体におけるクリスタルタンパク質の局在性を調べた結果、晶稈体全体にびまん性に分布することが示された。晶稈体は、透明で柔軟な構造を持つ二枚貝に特有の消化器官である。本研究では、晶稈体の骨格となる主要タンパク質であるクリスタルタンパク質についてその構造と機能を明らかにすることを目的とする。本タンパク質は分子量約55000の単純タンパク質でサブユニット構造を持たないモノマー構造を持つこと、種々の酵素やタンパク質に対して幅広い結合能をもつことが明らかとなった。ヤマトシジミやバクテリアに由来するセルラーゼ、アミラーゼなどを精製したクリスタルタンパク質に結合させたところ、これらの結合体は非変性電気泳動では分離しない強い結合で結びついていること、いずれの酵素活性も安定的に発現されること、酵素活性の熱安定性はクリスタルタンパク質に結合することで高まることが示された。ヤマトシジミでは晶稈体に結合したセルラーゼがセルロースをブドウ糖オリゴマー(ブドウ糖が5ー10分子程度結合したもの)にまで分解し、そのオリゴマーを同じく晶稈体に結合したβ-グルコシダーゼがブドウ糖単分子にまで分解することが知られている。そこでヤマトシジミの晶稈体から精製したセルラーゼとβ-グルコシダーゼをクリスタルタンパク質に結合させた人工のバイオリアクターを用いて、セルラーゼ分解をモデルにその機能を検証した。その結果、この人工バイオリアクターがセルロースをブドウ糖にまで分解することが示された。さらに同タンパク質のドラックデリバリー機能を検証するため、がん細胞表面抗原に対する抗体を結合させた複合タンパク質を作製し、ゼブラフィッシュを用いて、その機能を検討している。クリスタルタンパク質の構造と機能に関して、その多機能なタンパク質に対する結合能と酵素複合体を用いた人工バイオリアクター機能については、当初の計画通り、セルロースのブドウ糖への分解機能として確認することができた。この結果は、この人工バイオリアクターを用いてトウモロコシなどに由来するセルロースを分解し、バイオマス発酵に利用できる可能性を下するものであった。一方、ドラッグデリバリーシステムについては、すい臓がん細胞FGCAS/CrKの表面抗原の発現実験が難航し、予定より遅れている。

二枚貝特有の消化器官である晶稈体は、ゼラチン状の組織であり晶稈体嚢と呼ばれる袋状組織に包まれている。その一部は胃内に突出し、繊毛運動で回転することで唇弁からろ過物を胃内に運び込み、自らの中に固定化した酵素を利用して、それらを分解する。昨年度までの研究により分子量薬55000のクリスタルタンパク質の構造と機能を明らかにするとともに、セルラーゼ、アミラーゼ、などの結合性を示すこと、結合により酵素が安定化されることが示された。今年度は、これらの酵素を結合させた酵素ークリスタルタンパク質複合体について、酵素活性とゼブラフィッシュによるドラッグデリバリー機能を検討した。その結果、複合体の安定化を確認することができた。デリバリー機能については特異的な体内輸送機構を明らかにするにはいたらなかった。しかし、二枚貝の餌の種類に応じた晶桿体酵素の誘導を知る目的で,主要な糖源の分解に関わる酵素について,アサリを用いて調べた結果、CMセルロース及びブドウ糖を投与した場合はセルラーゼとアミラーゼ活性が強くなり、可溶性デンプンを投与した場合はアミラーゼ活性が強くなった。77kDaのセルラーゼがCMセルロースおよびブドウ糖給餌により誘導され,50kDaのセルラーゼがブドウ糖給餌により誘導された。米粉給餌個体では強いアミラーゼ活性が誘導された。以上の結果から,アサリは環境中の糖源を感知し,最適な酵素活性を誘導することが示唆された。二枚貝の餌の種類に応じた晶桿体酵素の誘導を知る目的で,主要な糖源の分解に関わる酵素について,アサリを用いて調べた。CMセルロース及びブドウ糖を投与した場合はセルラーゼとアミラーゼ活性が強くなり、可溶性デンプンを投与した場合はアミラーゼ活性が強くなった。計画通り、クリスタルタンパク質のタンパク結合の機構を明らかにできたこと、また、組換え体を用いて、今後予定しているバイオリアクターシステムならびにドラッグデリバリーシステム構築のための予備実験として、種々のタンパク質結合能を明らかにすることができたため。卵巣がん細胞A2780とすい臓がん細胞FGCAS/CrKを移植した透明ゼブラフィッシュを作製する。次にこの個体にがん特異抗体を結合させたクリスタルタンパク質をインジェクションし、標的がん細胞への結合を視覚的に観察する予定である。海洋生物機能学バイオリアクター担体としての機能を、ヤマトシジミのセルラーゼとβーグルコシダーゼを固定化したクリスタルタンパク質担体を用いて評価する(セルロース糖化能を指標)。
サクラ自家不和合遺伝子の多様性-遺伝子の機能、変異、進化をつなぐ分子生態学的解析

サクラ局所個体群におけるS対立遺伝子の保有状況:マメザクラ個体群(静岡県富士宮市人穴)内の開花個体及び特定の着果個体(母樹)から採取した自然交雑種子を対象として、SSRマーカーを用いて花粉親を同定した。次に、花粉親のサイズ(樹高、地上30cmの高さにおける幹断面積、樹冠面積)及び開花時期、母樹との距離が花粉親としての貢献度に及ぼす影響を調べた。花粉親のサイズや母樹との距離については、調べた母樹に共通する影響は確認できなかった。しかし、母樹周辺の開花個体密度が高い場合は、周辺個体の貢献度が高く、ディスプレイ効果が反映されていると推察された。また、母樹との開花時期の重なりが長い個体が花粉親になりやすい傾向がみられた。一方、同定した花粉親におけるS遺伝子座と連鎖するSSR座の対立遺伝子頻度は、開花個体群の対立遺伝子頻度とよく似ていたが、種子に伝達された花粉親由来の対立遺伝子の頻度分布は、母樹と一致するS対立遺伝子が完全に拒絶されたことを示していた。このため、ランダムな受粉がおこなわれる条件下で自家不和合性が確実に機能していることが確認された。また、S遺伝子座と連鎖のないSSR座の遺伝子流動には部分不和合の影響が認められなかった。以上の結果から、マメザクラでは個体間距離、個体サイズ、開花時期のいずれもが局部的には遺伝子流動を変化させる要因となりうるが、個体群全体としてはランダムな受粉がおこなわれること、個体群が保有するS対立遺伝子の多様性が高いため、S対立遺伝子の空間分布の偏りは遺伝子流動の制限要因とならないことが明らかになった。サクラS-RNaseの塩基配列の多様性:マメザクラ個体群内で同定した51個のS対立遺伝子のうち38個の塩基配列を決定し、分子進化学的解析を行った。分子系統樹を解析した結果、マメザクラを含むサクラ亜属のS対立遺伝子はtrans-specific evolutionにより進化したと推定された。また、38個のS対立遺伝子全てが異なるS対立遺伝子として機能していることが推察された。サクラ局所個体群におけるS-RNase対立遺伝子の保有状況局所個体群が保有するS対立遺伝子数、頻度、空間分布を調べるため、富士山麓(フジザクラ)および八丈島(オオシマザクラ)の試験地内の全個体をマーキングし、樹木位置を測量し、DNA分析用の葉を採集した。また、試験地内の成熟個体(36個体)から液果を採種し、実生育成をおこなっている。DNA分析の結果、フジザクラの個体群ではS対立遺伝子の片方を共有する個体が空間的にも近い位置に存在していることが認められた。また、S対立遺伝子の両方を共有する個体の組み合わせも複数存在し、これらの大部分がS遺伝子以外の遺伝マーカーについても共通であったため栄養繁殖で生じたものであると推察された。自然受粉種子の解析については、八丈島の個体群についてのみ終了しており、母樹当たり平均5個体以上の花粉親が種子形成に関与していること、母樹と花粉親との空間的距離は比較的近く大部分の花粉親が母樹から40m以内に存在していた。サクラS-RNaseの塩基配列の多様性フジザクラからクローニングした37個のS対立遺伝子の塩基配列を決定し、解析をおこなった。その結果、RNase活性部位のヒスチジンやジスルホシル結合を構成するシステインの部分では同義置換、非同義置換共にきわめて小さく、強い機能的制約が働いていることを反映していた。また、非同義置換が同義置換を上回る領域が4ヶ所存在し、自己-非自己の認識に作用している領域であると想像された。次に、全ての対立遺伝子の組み合わせについて非同義置換と同義置換を計算したところ、同義置換の平均は0.172、非同義置換の平均は0.109であった。この値をPrunus属栽培品種(サクランボ、アーモンド)と比較すると、非同義置換についてはほぼ等しいが、同義置換の値が少さく、局所個体群に作用した遺伝的浮動を反映すると推察された。

以上の結果から、マメザクラでは個体間距離、個体サイズ、開花時期のいずれもが局部的には遺伝子流動を変化させる要因となりうるが、個体群全体としてはランダムな受粉がおこなわれること、個体群が保有するS対立遺伝子の多様性が高いため、S対立遺伝子の空間分布の偏りは遺伝子流動の制限要因とならないことが明らかになった。サクラS-RNaseの塩基配列の多様性:マメザクラ個体群内で同定した51個のS対立遺伝子のうち38個の塩基配列を決定し、分子進化学的解析を行った。分子系統樹を解析した結果、マメザクラを含むサクラ亜属のS対立遺伝子はtrans-specific evolutionにより進化したと推定された。また、38個のS対立遺伝子全てが異なるS対立遺伝子として機能していることが推察された。