hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
長期臥床に伴う関節拘縮に起因する軟骨変性をリハビリテーションで予防する

本研究は、関節拘縮に伴う軟骨変性を予防するリハビリテーション介入方法を検討することを目的とした研究である。前年度実施された研究活動スタート支援の発展形として、ラット関節不動モデルを用いて、関節拘縮に伴う軟骨変性の病態の解析と、同モデルに対するリハビリテーション介入機器開発が実施された。軟骨はメカニカルストレスによりその組織構造や機能を維持するため、関節拘縮下の軟骨変性においても、荷重もしくは非荷重の状態が及ぼす影響は異なると考えられる。ラット関節不動モデルにおける8週間の関節不動と再関節運動介入は、軟骨の領域ごとに異なる変性状態を有するとの報告をもとに(Nagai et al., 2016)、再関節運動介入を行った際の軟骨の変性病態について、形態学的手法、力学的手法、超微細構造観察による解析を行った。また同モデルに対するリハビリテーション介入に向けて、介入頻度や角度の調節が可能な関節可動域訓練介入装置の作成を行った。評価領域は荷重部とその周辺部とし、力学試験より、骨軟骨複合体の硬度は荷重部より周辺部で経時的に高くなることが明らかになった。透過型電子顕微鏡(TEM)と走査型顕微鏡(SEM)を用いた超微細構造観察では、荷重領域では軟骨細胞の顕著な核萎縮像が、周辺領域では細胞膜内に複数の空胞を有する軟骨細胞が複数観察され、これらは先行研究の領域特異的な嚢胞様変性像と類似していた。一方、両評価領域とも軟骨表面のコラーゲン形態は正常に近い像であることが明らかとなった。また、完成した関節可動域訓練介入装置は、現在後続研究者によって活用されている。本研究により、関節不動後の再関節運動介入が及ぼす領域ごとに異なる軟骨変性病態は、軟骨細胞の変性に加え骨軟骨複合体硬度の相違が一因である可能性が示唆された。その一方で、同介入は軟骨表面形態には良好な影響を及ぼす可能性が示唆された。
Sukhavativyuhaの成立史的研究

所謂東方偈には仏の微笑、放光という授記の物語によく見られるモチーフが使われている。類似する物語は小品般若経系統の経典に見られるが、東方偈のものとは表現上の若干の相違がある。Sukh全体としては、般若経系統の思想を体系的に取り入れたという証拠はなく、東方偈についてもその影響を受けたと考えるのは難しい。東方偈の内容は有部系のAvadana文献における授記物語のものとも対応するが、成立年代が東方偈の方が古い分、表現はそれらほど冗長ではない。Sukhは内容や構成の点で物語としてはavadana的な特徴を持ち、Avadana文献と近い関係にあったことが推測されるが、東方偈が直接影響を受けたという積極的な証拠はない。Sukhは前半の法蔵(Dharmakara)菩薩の前世の物語と、後半の阿弥陀仏(Amitabha/Amitayus)の衆生救済の物語に大別することが出来る。阿弥陀仏は他の経論によく知られているが、その前身の法蔵菩薩に言及する経論は少ないばかりか、十五種の異説まで存在する。それらの異説を持つ経論の多くがSukhの成立年代と近い段階のものであり、Sukhの成立当初から後代まで、阿弥陀仏ほど法蔵菩薩は知られていなかったと考えられる。このことは一例であるが、あくまでSukhの中核は阿弥陀仏の物語であり、jataka或はavadanaといった形式の物語の影響のもとに前世の物語が付加されてSukhが成立したのではないかと考えられる。Sukhにおける法蔵菩薩の誓願の内容と誓願の成就の記述の分析を行った。特に偈頌に見られる誓願の内容は誓願文や後半部散文よりも単純で、より古い段階を示すと推測される。「仏の光明」と「衆生の安楽」並びに「聞名による救済」が誓願の中核と考えられるが、讃仏偈(歎仏偈)に現れない「聞名による救済」の誓願は前二者よりも遅れて成立した可能性がある。
血漿リポタンパク質のタンパク質脂質相互作用に関する分光学的研究

本研究は血漿リポタンパク質を振動分光学的手法で調べることにより、タンパク質脂質相互作用を解析する方法論の開発とその臨床化学的な応用を目的とし、次のようなテーマに焦点を絞って研究を推進した。(1)超低密度、低密度リポタンパク質(VLDL,LDL)の状態解析:VLDL、LDLの構成物質について溶液中と固体フィルムの赤外・ラマン測定を調べた。リポタンパク質の赤外スペクトルを帰属するために、脂質のスペクトルデータをベース化した。1750-1700cm^<-1>付近のエステルCO伸縮振動領域に着目したところ、リポタンパク質中のコレステロールエステルのマーカーになるだけでなく、遊離脂肪酸のカルボキシル基も反映する可能性が高いことがわかった。(2)高密度リポタンパク質(HDL)亜分画のタンパク質脂質相互作用:HDL亜分画のタンパク質と脂質の構造解析を赤外分光法で調べた。その結果、タンパク質と脂質の組成、構造の違いがエステルCOバンドとアミドバンドの強度に反映されることが明らかになった。各HDL亜分画のアミドIバンドのパターンは、主成分タンパク質であるアポリポタンパク質A-Iのパターンと類似していた。従って、HDL中のアポリポタンパク質A-Iの二次構造は脂質との相互作用によりほとんど起きていないことがわかった。(3)FTIR法のモデル動物血漿への応用:高脂血症モデル動物(ウサギ)の血漿をFTIR法を用いて解析したところ、血漿中のコレステロールエステル、中性脂肪の状態解析の切り口になることがわかった。さらに、フンボルトペンギンの孵化前後の血漿を調べたところ、孵化前に血中の中性脂肪濃度が増加することを赤外エステルCO伸縮振動バンドを用いて追跡できることがわかった。今後ヒト血清に適用すれば、コレステロールエステル、中性脂肪の新しい状態解析法として確立されることが期待できる。本研究は血漿リポタンパク質を振動分光学的手法で調べることにより、タンパク質脂質相互作用、水和構造を解析する方法論の開発を目的とした。平成13年度は次のようなテーマに焦点を絞って研究を推進した。(1)超低密度、低密度リポタンパク質(VLDL、LDL)の状態解析: VLDL、LDLの構成物質について溶液中と固体フィルムの赤外測定を調べた。溶液中とフィルムを比較すると、脂質に由来するバンドは類似していたが、タンパク質由来のバンドに違いが見られた。これまでの研究成果の一部をChem. Phys. Lipids, in pressにて発表した。(2)高密度リポタンパク質(HDL)亜分画のタンパク質脂質相互作用: HDL亜分画のタンパク質と脂質の構造解析を赤外分光法で調べた。各HDL亜分画のアミドIバンドのパターンは、主成分タンパク質であるアポリポタンパク質A-1のパターンと類似していた。従って、HDL中のアポリポタンパク質A-1の二次構造は脂質との相互作用によりほとんど変わらないことがわかった。平成14年度では低密度リポタンパク質の亜分画レベルに関して振動分光学的なキャラクタリゼーションを行う。また、さらに高脂血症モデル動物の血漿を分光学的手法を用いて解析することにより、臨床化学的に方法の新しい切り口として発展させる。
大脳皮質の層・領野構造形成に及ぼす入力線維の役割に関する研究

大脳皮質の層・領野構造はその細胞構築の基盤であり、脳形成の原理を内包している。従来、大脳皮質における細胞分化や回路形成の過程で、内因的な要因に加えて視床軸索や神経活動などの外因的要因が重要な役割を果たすことが示唆されてはいるものの、そのメカニズムについてはほとんど明らかにされていない。本研究では、この問題を解明することを目指した。これまでに視床皮質軸索の標的層に発現する遺伝子の探索を行い、細胞表面分子や転写調節因子を含む遺伝子群が発生期大脳皮質2/3-4層に限局して発現することを見出しているが(Zhong et al.,2004)、中でもunc5h4(netrin受容体の新規分子)の発現は4層への限局が明瞭である。この発現パターンと領野の区分との関連性について詳細に調べた。その結果、視覚性、体性感覚性の視床から直接強い入力を受ける皮質領野に一致してunc5h4の発現が不連続に強いことが示された。このことは、視床線維との相互作用によって皮質細胞の分化や結合性が制御される可能性を示唆するものである。第2に、視床皮質軸索や皮質内回路を介する神経活動の関与を調べるために、視床-大脳共培養系にナトリウムチャネルやグルタミン酸受容体のブロッカーを加えて培養し、視床皮質投射の結合パターンを解析した。その結果、いずれの場合も視床皮質軸索の枝分かれが対照群に比べて減少するとともに、4層での特異性が著しく低下することが明らかになってきた。このことは、層特異的な神経回路形成に必要な皮質細胞でのリガンド分子や視床皮質軸索上の受容体分子の正常な発現に神経活動が関与することを示唆している。
超音速分子線を用いた半導体表面反応ダイナミックスの分子論的解明

本年度の研究目的は、結晶成長反応の試験的な系として、Ge(100)及びSi(100)上のアルカリ原子と、O_2の反応を分子線技法にて調べる事である。とりわけ、直接的解離吸着反応と物理吸着拡散反応の断面積を評価する事である。清浄表面にCsを吸着させ、エネルギーEiが0.30eVと0.09eVの2種類のO_2ビームを照射し、散乱してくるO_2を四重極質量分析計で測定した。散乱収量はO_2ビームのドーズと共に増大し、やがて飽和した。飽和した時の散乱強度を基準して、各ドーズでの吸着確率Sを求めた。照射初期の吸着確率SoをCsの被覆率の函数としてGe及びSi表面に対して実験を行った。その結果、Ge(100)表面でのSoはSi(100)でのSoよりも各Cs被覆率に於て大きくなった。又、更に、入射エネルギーが0.09eVと小さくなる事によりGe(100)ではSoは大きくなった。入射エネルギーが低下すると、物理吸着確率が大きくなるが、この事実をもとにすると、Ge表面では、物理吸着を経る事によりCsによる吸着促進作用が増大することが言える。そこで、反応断面積を評価する為に、指数函数的に減衰するSのドーズ変化のシュミレーションを行った。その結果、直接的に反応する断面積は約27A^2、表面拡徒を供う断面積は60A^2が得られた。この様な評価は、本研究が初めてである。更に同じ様な評価をSi(100)でも試みた。Si(100)では、拡散によっては、吸着Csとは反応できないことが判明した。Ge(100)とSi(100)のこの違いは、Ge-Ge間結合エネルギーがSi-Si間結合エネルギーよりも小さいということに由来している。この様な研究手法により、近い将来、吸着GaとAs_2分子の反応断面積の評価を行って行く予定である。
21水酸化酵素欠損症の成因ならびに治療に関する研究

21水酸化酵素欠損症は先天性副腎過形成のうち最も頻度が多く、新生児スクリーニングにより新生児期から経過観察出来治療されるようになっている疾患である。21水酸化酵素欠損症の治療目的は、(1)生命の維持、(2)男性化の防止、(3)健全な成長発育である。(3)に関しては内因性ハイドロコーチゾン分泌(6-8mg/m^2従来はこの2倍とされていた)に対し、過投与しなければならない症例が多いため,最終的に低身長となる例があると考えられる。異常副腎からのコルチゾル・アルドステロン前駆体分泌が、antagonistとして働くため過投与となり、酵素失活が重篤なほど治療の課題が多い。新生児期から本症の副腎計測を超音波断層法により経時的に行った。21水酸化酵素(CYP21)遺伝子は染色体6番目に存在し、近傍に偽遺伝子が存在する。CYP21遺伝子のEXON3をはさむ形で特異的にCYP21のみを遺伝子増幅法(PCR法)で増幅する系を作り、CYP21遺伝子全体の塩基配列を出来るようにした。副腎超音波断層法をCAHの診断・治療のモニターとして検討し、副腎腫大持続例は、検査成績を正常化するためハイドロコーチゾン投与量増加する事が示された。現在まで10家系を調べCYP21遺伝子の完全欠失例2例を見いだした。新生児期から副腎計測を行った本症3例のうち副腎腫大持続例では、本法によりCYP21遺伝子の欠出が証明された。症例の集積とさらなる、直接塩基配列決定法によるDNA塩基配列に至る解析を行っている。最終的な論文発表は、新生児期より経過を追った症例数10をメドに現在の系を用いた解析を行いまとめる。
中咽頭がん術後の摂食嚥下障害のアセスメントを導くアルゴリズムの検証

目的:中咽頭がん術後の摂食嚥下機能をベッドサイドで簡便にアセスメントするツールとして、術式から摂食嚥下障害の状況を特定するまでのアセスメントのプロセスを可視化するアルゴリズム案を作成し、臨床での実施可能性、妥当性を確認の後修正案を作成した。アルゴリズム修正案の信頼性と臨床での汎用性を検証することを目的とした。研究期間:2年間(平成28、29年度)の予定で実施したが、予定症例数に満たなかったため、平成31年3月31日まで研究期間を延長してデータ収集を行った。対象と方法:がん専門病院2施設における術後中咽頭がん患者13名(男性11名、女性2名、平均年齢64.2歳、再建なし3名、再建あり10名)、当該病棟の看護師13名(女性10名、男性3名、頭頸部外科病棟平均4.8年)を対象とした。看護師がアルゴリズムを用いて術後患者の摂食嚥下機能をアセスメントし、至適基準を嚥下造影検査(Videofluorography:VF)結果として、9項目のアセスメント判定結果の敏感度(アルゴリズムで問題あり/VFで問題あり)と特異度(アルゴリズムで問題なし/VFで問題なし)を算出した。VFの評価基準は、嚥下造影の標準的検査法(詳細版)(日摂食嚥下リハ会誌2004)に準拠した。結果と考察:他の頭頸部がんにて手術歴のあった1名を除く12名を分析した。アセスメント所要時間の平均は、13.8分であった。各アセスメント項目の敏感度の平均0.28、特異度の平均0.78で敏感度が低かった。アルゴリズムを用いたアセスメントでは、VF結果で問題があった項目を診査するための身体診査は導き出すことができていた。しかし、看護師の身体診査実施経験が少なかったこと、今回のアセスメントでは、身体診査の実施が1回のみであったことが、敏感度の低さに繋がったと考える。今後は、身体診査の普及や身体診査の実施回数を増やす必要があると考える。手術療法に伴う中咽頭の構造的・機能的変化を観察することは難しく、炎症反応による創部浮腫の経日的変化により、中咽頭がん術後の摂食嚥下機能のアセスメントは看護師にとって困難であると考えられる。また、看護チームとして複数の看護師がケアを提供するため、当該領域の経験が浅い看護師であっても、術後の摂食嚥下機能をアセスメントできるツールが求められる。そこで、中咽頭がん術後の摂食嚥下機能をベッドサイドで簡便にアセスメントするツールとして、術式から摂食嚥下障害の状況を特定するまでのアセスメントのプロセスを可視化するアルゴリズム原案を平成22年度に作成した。国内のがん専門病院3施設において、このアルゴリズム原案を用いて、看護師がアセスメントを実施し、信頼性を検討した。その検討結果に基づきアルゴリズムを修正したため、本研究では、アルゴリズム修正案の信頼性と臨床での汎用性を検証することを目的とした。平成27年度は、看護師が中咽頭がん術後患者の摂食嚥下機能をアルゴリズム修正案を用いてアセスメントを実施し、アルゴリズムの修正案の信頼性を検証するとともに、アセスメントの対象となった患者に対する生活の質(QOL)の質問紙調査を実施し、患者の術式、栄養状態、アセスメントの結果等との関連性を確認するため、研究計画書を作成した。本研究計画は、平成27年11月に愛知県立大学研究倫理審査委員会より実施許可を得、現在は研究協力者の摂食・嚥下障害看護認定看護師が所属する埼玉県立がんセンターの倫理審査委員会にて審査中である。本研究計画は、平成27年11月に愛知県立大学研究倫理審査委員会より実施許可を得、現在は埼玉県立がんセンターの倫理審査委員会にて審査中である。当該年度中の実施には至らなかったが、倫理審査委員会からの実施許可が出次第、データ収集を開始する予定であり、研究は順調に進展していると考えられる。また、看護チームとして複数の看護師がケアを提供するため、当該領域の経験が浅い看護師であっても、術後の摂食嚥下機能をベッドサイドで簡便にアセスメントできるツールが求められる。その検討結果に基づきアルゴリズムを修正した為、本研究は、アルゴリズム修正案の信頼性と臨床での汎用性を検討することを目的とした。看護師が中咽頭がん術後患者の摂食嚥下機能をアルゴリズム修正案を用いてアセスメントを実施し、その信頼性を検証するとともに、アセスメントの対象となった患者に対する生活の質(QOL)の質問紙調査を実施し、患者の術式、栄養状態、アセスメントの結果等との関連性を検証するため研究計画書を作成した。本研究計画は、平成27年11月愛知県立大学研究倫理審査委員会より実施許可を得た。

平成28年度は埼玉県立がんセンター及び愛知県がんセンター中央病院の倫理審査委員会の実施許可を得、現在データ収集中であり、目標の対象数に到達するまで実施する予定である。データ収集中であり計画通りに進んでいる。中咽頭がん術後患者の看護において、中咽頭の構造的・機能的変化を理解することが、摂食嚥下機能に関する的確な観察や問題の把握につながると考える。一方、手術による中咽頭の構造的・機能的変化は観察が困難であること、術後の口腔・咽頭は炎症反応によって浮腫を来し経日的に変化することが、看護師にとってのアセスメントを難しくさせている。また、看護チームの複数の看護師によってケアが提供されるため、当該領域の経験の浅い看護師にも活用でき、術後の摂食嚥下機能をアセスメントできるツールが求められている。そこで、中咽頭がん術後の摂食嚥下機能をベッドサイドで簡便にアセスメントするツールとして、術式から摂食嚥下障害の状況を特定するまでのアセスメントのプロセスを可視化するアルゴリズム案を2010年度に作成した。国内のがん専門病院3施設において、看護師がアルゴリズム案を用いてアセスメントを実施し、その信頼性を検討した。その結果から見出された改善策をもとに、アルゴリズム修正案を作成し、本研究は、その信頼性と臨床での汎用性を検証することを目的とした。平成27年度に所属施設である愛知県立大学研究倫理審査委員会の承認を得、平成28年度に研究実施施設である愛知県がんセンター中央病院及び埼玉県立がんセンター倫理審査委員会にて承認を得た。平成28、29年度は研究実施施設において、データ収集を実施した。中咽頭がん術後患者の摂食嚥下機能について、看護師がアルゴリズム修正案を用いてアセスメントを実施し、その信頼性をアセスメント結果と嚥下造影検査結果との比較によって検証した。平成29年8月までの研究成果は、第23回日本摂食嚥下リハビリテーション学会学術大会において発表した。研究実施施設2施設において、現在までに14名のデータが収集されている。平成30年度は、予定症例数30例となるまで引き続きデータ収集を行う。平成28,29年度の研究実施施設における中咽頭がんの手術件数が、例年よりも大幅に少なかったため、2年間のデータ収集で目標の症例数には到達しなかった。目的:中咽頭がん術後の摂食嚥下機能をベッドサイドで簡便にアセスメントするツールとして、術式から摂食嚥下障害の状況を特定するまでのアセスメントのプロセスを可視化するアルゴリズム案を作成し、臨床での実施可能性、妥当性を確認の後修正案を作成した。アルゴリズム修正案の信頼性と臨床での汎用性を検証することを目的とした。研究期間:2年間(平成28、29年度)の予定で実施したが、予定症例数に満たなかったため、平成31年3月31日まで研究期間を延長してデータ収集を行った。対象と方法:がん専門病院2施設における術後中咽頭がん患者13名(男性11名、女性2名、平均年齢64.2歳、再建なし3名、再建あり10名)、当該病棟の看護師13名(女性10名、男性3名、頭頸部外科病棟平均4.8年)を対象とした。看護師がアルゴリズムを用いて術後患者の摂食嚥下機能をアセスメントし、至適基準を嚥下造影検査(Videofluorography:VF)結果として、9項目のアセスメント判定結果の敏感度(アルゴリズムで問題あり/VFで問題あり)と特異度(アルゴリズムで問題なし/VFで問題なし)を算出した。VFの評価基準は、嚥下造影の標準的検査法(詳細版)(日摂食嚥下リハ会誌2004)に準拠した。結果と考察:他の頭頸部がんにて手術歴のあった1名を除く12名を分析した。
人工遺伝子回路を用いた細胞パターン形成機構の構成的理解

本研究では、反応拡散機構で哺乳類培養細胞上に空間パターンを作ることを目指して、Nodal-Leftyシグナルの反応拡散系を単純化した人工遺伝子回路をHEK293細胞上に作製した。この人工遺伝子回路は、Nodal(アクチベーター)、Lefty(インヒビター)、Co-receptor、下流の転写因子、ルシフェラーゼレポーター、という5つの遺伝子部品から成っており、いわゆるアクチベーター・インヒビター型の反応拡散回路になっている。この人工遺伝子回路を組み込んだ細胞では、レポーター陽性ドメインと陰性ドメインから成るパターンが自発的に形成され、維持される様子が観察できた。そこでこのパターン形成の機構を調べるため、NodalとLeftyの細胞外分布を測定したところ、Nodalの細胞外分布は、Leftyにくらべて3分の1程度と非常に狭いことがわかった。これは、Nodalタンパク質内のFinger1と呼ばれるドメインのせいだとわかった。実際、NodalのFinger1ドメインをLeftyに移植すると、Leftyの分布が狭くなり、パターン形成も阻害された。さらに、実測・推定した生化学パラメーターを用いて数理モデルを構築し、パターン形成の条件を考察した。以上の結果は、世界初の哺乳類細胞における人工反応拡散パターンの作成例と言え、これらの成果は2018年12月にNature Communications誌上で発表した(Sekine et al, Nat Commun, 9, 5456, 2018)。本研究では、いわゆるTuringパターンと呼ばれる、細胞の空間パターン形成機構を再構成することを目指す。初年度である本年度は、Nodal-Leftyシグナルの反応拡散系を単純化した人工遺伝子回路を哺乳類培養細胞上に作製した。人工遺伝子回路は、Nodal、Lefty、Co-receptor、下流の転写因子、ルシフェラーゼレポーター、という5つの遺伝子部品から成っている。それぞれの部品は、トランスポゾンベクターを用いてHEK293細胞のゲノムに安定に組み込んだ。そして、この最小限の遺伝子回路を組み込んだ細胞は、レポーター陽性の細胞集団と陰性の細胞集団を自発的に形成した。つまり、最小限のNodal-Lefty遺伝子回路でドメイン形成が可能であるとわかった。一方で、パターン形成の条件を探り、パターンを更に改良するためには、遺伝子回路の定量化が重要である。そこで細胞外のNodalとLeftyの可視化を試みた。はじめは蛍光タンパク質と融合させたが、シグナルが弱すぎる、タンパク質の機能が阻害されるなどでうまくいかなかった。そこで新しい発光タンパク質などを色々試した結果、最近ついにNodalとLeftyの細胞外分布が測定できるようになった。以上のように、本研究はおおむね順調に進行している。今後はこの実験系を用いて拡散係数、分解係数、合成関数などの定量化を進め、現在形成されているドメインをよりきれいなパターンへと改良していく予定である。最小限のNodal-Lefty遺伝子回路を作ったところ、自発的にドメインが形成されており、パターン形成への第一段階が達成できたと言える。また、NodalとLeftyの定量化はずっとうまくいっていなかったが、HiBiTという新しい分割ルシフェラーゼシステムを用いることにより、細胞外分布を可視化することに成功した。よって、研究は計画通り進んでいると言える。本研究では、反応拡散機構で哺乳類培養細胞上に空間パターンを作ることを目指している。これまでに、Nodal-Leftyシグナルの反応拡散系を単純化した人工遺伝子回路をHEK293細胞上に作製した。人工遺伝子回路は、Nodal(アクチベーター)、Lefty(インヒビター)、Co-receptor、下流の転写因子、ルシフェラーゼレポーター、という5つの遺伝子部品から成っている。まず、コントロールとして作製したLeftyを含まない人工遺伝子回路では、最初はレポーター陽性の細胞がランダムに点在しているが、しだいに陽性の細胞ドメインが周囲の細胞に広がって、2日後には全ての細胞がレポーター陽性となった。一方、完成版の遺伝子回路では、初期のレポーター陽性ドメインの広がり方はコントロール回路と似ているが、1日後頃に陽性ドメインの成長が止まり、陽性ドメインと陰性ドメインから成るパターンが形成され維持された。よって、拡散性のアクチベーターNodalとインヒビターLeftyの相互作用によるパターンが作製できた。さらに昨年度は、このパターンの形成機構を知るべくNodalとLeftyの拡散機構を重点的に調べた。Nodalの細胞外分布は、Leftyにくらべて3分の1程度と非常に狭く、実質1細胞分くらいの距離しか届かないとわかった。さらにこの時、細胞外のNodalは細胞の下(basal側)に局在していることが観察された。一般的に拡散というと、細胞の上(apical側)や培養液中で起こるイメージだが、Nodalの場合は細胞と培養皿の間に囲いこまれており、これがNodalの拡散が遅い原因と推測された。Nodal-Leftyによる細胞パターンが作製できた。また、Nodalの拡散がLeftyに比べて遅いのは、Nodal finger1ドメインと細胞の下への局在に原因があるとわかった。さらに、人工遺伝子回路のいくつかの生化学パラメーターを実験的に変化させることにも成功している。よって、計画はおおむね順調に進んでいると言える。

この人工遺伝子回路は、Nodal(アクチベーター)、Lefty(インヒビター)、Co-receptor、下流の転写因子、ルシフェラーゼレポーター、という5つの遺伝子部品から成っており、いわゆるアクチベーター・インヒビター型の反応拡散回路になっている。この人工遺伝子回路を組み込んだ細胞では、レポーター陽性ドメインと陰性ドメインから成るパターンが自発的に形成され、維持される様子が観察できた。そこでこのパターン形成の機構を調べるため、NodalとLeftyの細胞外分布を測定したところ、Nodalの細胞外分布は、Leftyにくらべて3分の1程度と非常に狭いことがわかった。これは、Nodalタンパク質内のFinger1と呼ばれるドメインのせいだとわかった。実際、NodalのFinger1ドメインをLeftyに移植すると、Leftyの分布が狭くなり、パターン形成も阻害された。さらに、実測・推定した生化学パラメーターを用いて数理モデルを構築し、パターン形成の条件を考察した。以上の結果は、世界初の哺乳類細胞における人工反応拡散パターンの作成例と言え、これらの成果は2018年12月にNature Communications誌上で発表した(Sekine et al, Nat Commun, 9, 5456, 2018)。現在の最重要課題は、Nodal-Leftyシグナルのドメイン形成をきれいなパターン形成へと改良することである。そのために、現在の人工遺伝子回路を定量化し、どのパラメーターを調整すべきか指針を得る予定である。最近、HiBiTシステムを用いることでNodalやLeftyを可視化できるようになったので、これを用いて、NodalやLeftyの拡散係数、分解係数などを定量化する。細胞パターンができ、その形成機構もわかってきたので、今後はデータの精度を上げて論文化する。また、パターン形成を説明する数理モデルをいくつか構築しているので、その比較や解析を行う。本年度の研究が順調に進捗したため、次年度の研究用の試薬を購入するべく前倒し請求をしたが、実際の購入が間に合わないものがでたため。パターン形成の観察やNodalやLeftyの細胞外分布を測定するための実験条件を確定させるのに思ったより時間がかかったことと、発光イメージング用の顕微鏡が混み合っていたため、繰り返し実験があまりできなかった。よって、それらの実験に使う試薬代などに誤差が生じた。来年度はその分の繰り返し実験も行い、再現性の検証やデータの精度を上げる。計画通り、次年度分の試薬の購入にあてる。
心疾患に関連する新奇生理活性物質 D-グルタミン酸の合成酵素に関する研究

本研究の目的は、遊離のD-グルタミン酸(D-Glu)の合成活性を有する酵素として最近同定した、ラットGluラセマーゼ(L-GluとD-Gluの相互変換を触媒する酵素)の機能の詳細を解明することである。本酵素は哺乳類で初めて見出されたGluラセマーゼであり、細菌で既に同定されているGluラセマーゼとは異なるファミリーに属する。本酵素とは別に、我々は最近、生体内でD-Gluを分解する唯一の酵素としてD-Gluシクラーゼを同定し、この酵素の欠損マウスの心臓ではD-Glu含量が著しく増加することなどを明らかにした。すなわち、哺乳類は心機能に関連する新奇な生理活性物質としてD-Gluを利用していると考えられる。そこで本研究では、ラットGluラセマーゼの酵素学的性質・機能のほか、種々のアミノ酸の細胞内および細胞外含量に与える影響の解明を試みる。平成30年度は、大腸菌で発現させて精製したラット組換えGluラセマーゼを酵素標品として、本酵素の酵素学的性質・機能を解析した。具体的には、本酵素の(1)オリゴマー構造、(2)反応特異性、(3)基質特異性、(4)補酵素要求性、および(5)補因子要求性を解析した。その結果、本酵素が(1)モノマーとして存在すること、(2)ラセマーゼ反応のみならず、デヒドラターゼ反応も触媒すること、(3)ラセマーゼ反応においてはL-GluとD-Gluを基質とし、デヒドラターゼ反応においてはL-セリン、D-セリンおよびL-スレオニンを基質とすること、(4)細菌のGluラセマーゼとは異なり、ピリドキサール-5'-リン酸を補酵素として要求すること、および(5)哺乳類で報告されている唯一のアミノ酸ラセマーゼであるセリンラセマーゼとは異なり、金属陽イオンやヌクレオチドを補因子として要求しないことが明らかになった。本研究の開始当初における研究計画は、主に次の2つに大別される。すなわち、1つは、(1)大腸菌で発現させて精製したラット組換えグルタミン酸(Glu)ラセマーゼを酵素標品として用いて、本酵素の酵素学的性質・機能を解析することである。もう1つは、(2)哺乳類由来の培養細胞株を用いて、本酵素が細胞内および細胞外アミノ酸含量に与える影響を解析することである。また、上記(1)の具体的な研究計画は、本酵素のオリゴマー構造、反応特異性、基質特異性、補酵素要求性、補因子要求性、至適pH、至適温度、および動力学定数を明らかにすることであった。一方、上記(2)の具体的な研究計画は、本酵素遺伝子をノックアウトした哺乳類由来培養細胞株を樹立し、本酵素の細胞内および細胞外アミノ酸含量に与える影響を明らかにすることであった。平成30年度は、主に上記(1)の研究を進め、ラットGluラセマーゼのオリゴマー構造、反応特異性、基質特異性、補酵素要求性、および補因子要求性を明らかにした。すなわち、計画していた研究全体の約35 40%程度が進行したと思われる。したがって、本研究は「おおむね順調に進展している」と考えられる。平成31年度は、平成30年度に引き続き、大腸菌で発現させて精製したラット組換えグルタミン酸(Glu)ラセマーゼを酵素標品として用いて、本酵素の酵素学的性質・機能を解析する。具体的には、本酵素のラセマーゼ反応およびデヒドラターゼ反応それぞれにおける至適pHならびに至適温度を決定する。また、ラセマーゼ反応およびデヒドラターゼ反応それぞれの反応において基質とするアミノ酸に対する動力学定数を決定する。さらに、平成31年度には、本酵素遺伝子をノックアウトした哺乳類由来培養細胞株を樹立する。もし、目的とするノックアウト株が樹立できない場合には、当教室で既に確立・経験済みのsiRNAを用いたノックダウン法により本酵素遺伝子の発現を抑制した細胞株を樹立して対応する。また、ノックダウン法による発現抑制株の樹立も難しい場合には、当教室で既に確立・経験済みの遺伝子導入法により本酵素遺伝子を高発現させた細胞株を樹立して対応する。平成32年度には、樹立したノックアウト株、ノックダウン株、または高発現株の細胞内および細胞外(培養上清中)のD-Glu含量を経時的に測定し、本酵素が生体内においてD-Glu合成酵素として機能しているかどうかを確認する。同様に、D-Glu以外のアミノ酸含量に与える影響も解析する。

具体的には、本酵素の(1)オリゴマー構造、(2)反応特異性、(3)基質特異性、(4)補酵素要求性、および(5)補因子要求性を解析した。その結果、本酵素が(1)モノマーとして存在すること、(2)ラセマーゼ反応のみならず、デヒドラターゼ反応も触媒すること、(3)ラセマーゼ反応においてはL-GluとD-Gluを基質とし、デヒドラターゼ反応においてはL-セリン、D-セリンおよびL-スレオニンを基質とすること、(4)細菌のGluラセマーゼとは異なり、ピリドキサール-5'-リン酸を補酵素として要求すること、および(5)哺乳類で報告されている唯一のアミノ酸ラセマーゼであるセリンラセマーゼとは異なり、金属陽イオンやヌクレオチドを補因子として要求しないことが明らかになった。本研究の開始当初における研究計画は、主に次の2つに大別される。すなわち、1つは、(1)大腸菌で発現させて精製したラット組換えグルタミン酸(Glu)ラセマーゼを酵素標品として用いて、本酵素の酵素学的性質・機能を解析することである。もう1つは、(2)哺乳類由来の培養細胞株を用いて、本酵素が細胞内および細胞外アミノ酸含量に与える影響を解析することである。また、上記(1)の具体的な研究計画は、本酵素のオリゴマー構造、反応特異性、基質特異性、補酵素要求性、補因子要求性、至適pH、至適温度、および動力学定数を明らかにすることであった。一方、上記(2)の具体的な研究計画は、本酵素遺伝子をノックアウトした哺乳類由来培養細胞株を樹立し、本酵素の細胞内および細胞外アミノ酸含量に与える影響を明らかにすることであった。平成30年度は、主に上記(1)の研究を進め、ラットGluラセマーゼのオリゴマー構造、反応特異性、基質特異性、補酵素要求性、および補因子要求性を明らかにした。すなわち、計画していた研究全体の約35 40%程度が進行したと思われる。したがって、本研究は「おおむね順調に進展している」と考えられる。平成31年度は、平成30年度に引き続き、大腸菌で発現させて精製したラット組換えグルタミン酸(Glu)ラセマーゼを酵素標品として用いて、本酵素の酵素学的性質・機能を解析する。具体的には、本酵素のラセマーゼ反応およびデヒドラターゼ反応それぞれにおける至適pHならびに至適温度を決定する。また、ラセマーゼ反応およびデヒドラターゼ反応それぞれの反応において基質とするアミノ酸に対する動力学定数を決定する。さらに、平成31年度には、本酵素遺伝子をノックアウトした哺乳類由来培養細胞株を樹立する。もし、目的とするノックアウト株が樹立できない場合には、当教室で既に確立・経験済みのsiRNAを用いたノックダウン法により本酵素遺伝子の発現を抑制した細胞株を樹立して対応する。また、ノックダウン法による発現抑制株の樹立も難しい場合には、当教室で既に確立・経験済みの遺伝子導入法により本酵素遺伝子を高発現させた細胞株を樹立して対応する。平成32年度には、樹立したノックアウト株、ノックダウン株、または高発現株の細胞内および細胞外(培養上清中)のD-Glu含量を経時的に測定し、本酵素が生体内においてD-Glu合成酵素として機能しているかどうかを確認する。同様に、D-Glu以外のアミノ酸含量に与える影響も解析する。
家禽の破卵および脚弱を制御するリン代謝調節機構の解明

鶏では起立不能の脚弱あるいは卵殻の薄化による破卵が頻発し、多大な経済的損失を被っている。これらは、いずれも、リンとカルシウムからなる骨の代謝異常に起因する。本研究では、リン輸送を司るナトリウム依存性リン酸トランスポーター(NaPi-II)が腎臓ならび腸管で発現しており、成熟とともにその発現量は増加しリン吸収が増加していることを明らかにした。また、これらリン代謝はエストロジェンによって生成された活性型ビタミンD3によって調節されていることを示唆した。平成26年度では、以下の研究成果が得られた。1.産卵鶏におけるナトリウム/リン酸共輸送体サブタイプ(NaPi-IIaおよびNaPi-IIb)の遺伝子発現リアルタイムPCRにより、産卵鶏の腸管、腎臓、卵管および骨髄骨におけるNaPi-IIサブタイム遺伝子の相対的発現量を検討したところ、NaPi-IIaは腎臓でのみ発現していることが示された。一方、NaPi-IIbは、腸管、骨髄骨ならびに卵管で発現がみられ、とりわけ、十二指腸(相対値1.00)で最も高く、卵管卵殻腺部(0.48)、卵管卵白分泌部(0.44)、卵管峡部(0.32)、空腸(0.32)でも比較的高い発現量を示した。骨髄骨(0.03)、回腸(0.001)、直結腸(0.001)では、わずかな発現量を示すにすぎなかった。このことより、NaPi-IIaは主に腎臓でのリンの再吸収に関与していることが示唆された。また、NaPi-IIbは腸管でのリンの吸収(能動輸送)に関与しており、とりわけ十二指腸ならびに空腸でリンの吸収が行われていることが示唆された。卵管でもNaPi-IIbが高発現していることが示され、卵殻形成にリン吸収もしくは排出が何らかの関与をしていることが考えられた。10日齢の未成熟産卵鶏と産卵鶏の腸管および腎臓におけるNaPi-IIサブタイプ遺伝子の相対的発現量を比較したところ、産卵鶏の腎臓でNaPi-IIa遺伝子発現量が3.39倍に増加していた。また、NaPi-IIbは十二指腸で1.80倍、空腸で6.94倍増加していた。このことより、鶏は産卵の開始に伴い腎臓でのリンの再吸収が増加するとともに、十二指腸ならびに空腸でリンの吸収が増加することが考えられた。平成27年度では、以下の研究成果が得られた。産卵鶏の血中リンおよびカルシウム濃度を計測するとともに、リアルタイムPCRにより腸管および腎臓におけるナトリウム/リン酸共輸送体サブタイプ(NaPi-IIaおよびNaPi-IIb)とカルシウム結合タンパク質(CaBP)の相対的発現量について、卵殻形成の行われていない時期(卵白分泌期)と卵殻形成の行われている時期(卵殻形成期)の間で比較した。その結果、血中リン濃度は卵白分泌期において4.79 mg/dL、卵殻形成期において6.79 mg/dLであり、卵殻形成期でリン濃度が有意に増加した。しかしながら、血中カルシウム濃度は産卵周期に伴う変化はみられなかった。NaPi-IIa遺伝子の相対的発現量は卵白分泌期と比較して、卵殻形成期の腎臓では0.73倍であった。NaPi-IIb遺伝子の相対的発現量は、卵白分泌期と比較して卵殻形成期の腎臓では0.53倍、十二指腸では0.40倍、空腸では0.33倍、回腸では2.56倍、直結腸では0.28倍で多くが低い発現量を示した。CaBP遺伝子の相対的発現量は卵白分泌期と比較すると、卵殻形成期では腎臓では0.53倍、十二指腸では0.40倍、空腸では0.38倍、回腸では0.98倍、盲腸では0.66倍、直結腸では1.13倍を示し低かった。このことは、卵殻形成期では腎臓ならびに腸管でのリンおよびカルシウムの吸収は減少していることを示している。しかしながら、血中リン濃度は卵殻形成期で増加していることから、卵殻形成時には骨髄骨からの骨吸収によりカルシウムが供給され、卵殻が形成されていることが示された。現在の養鶏産業においては、ブロイラーでは起立不能となる脚弱、産卵鶏では卵殻の薄化による破卵が頻発し、多大な経済的損失を被っている。これらは骨疾患であり、また、卵殻のカルシウム供給源は骨であることから、カルシウムに加え、骨の主成分であるリンもその原因に深く関わっていることが推測される。家禽におけるリン代謝を解明する上で、腸管ならびに腎臓でのリン(再)吸収能の動態を明らかにすることは重要である。本研究では、リン吸収を示す指標としてNaPi-IIサブタイプに着目し、各器官での発現の有無と相対的発現量を検討した。その結果、腎臓にはNaPi-IIaが、腸管ではNaPi-IIbが発現しており、リンの再吸収と吸収に関与していることを示した。また、これらリンの腎臓での再吸収と腸管での吸収は、産卵の開始とともに増加することを明らかにした。加えて、産卵鶏では、産卵周期に伴いNaPi-IIサブタイプとCaBP遺伝子の相対的発現量が変化することを初めて明らかにした。すなわち、卵殻形成期にも関わらず、リンおよびカルシウムの腎臓での再吸収と腸管での吸収は、いずれも低下していることを示した。このことは、卵殻形成に必要なカルシウムは骨髄骨から供給されていることを示唆している。

以上のように、本研究の主要目的である家禽のリン代謝が明らかになり、本研究はおおむね順調に進んでいると評価できる。今後は、これらリン代謝を調節しているホルモンを探るとともに、飼料中のカルシウム濃度がリン代謝に及ぼす影響について検討する。平成28年度では、以下の研究成果が得られた。1.未成熟鶏(10日齢)にエストロジェンを投与することで血中カルシウムおよびリン濃度が増加した。カルシウムの能動輸送を司るカルシウム結合タンパク質(CaBP D28k)遺伝子の発現量は空腸、回腸および盲腸において有意に増加し、リンの能動輸送を司るナトリウム/リン酸共輸送体(NaPi)サブタイプIIb遺伝子の発現量も腸管において増加がみられた。また、血中の活性型ビタミンD3濃度もエストロジェン投与によって増加した。しかしながら、エストロジェン投与によりエストロジェンおよびビタミンD受容体遺伝子発現量は増加しなかった。2.通常飼料区の未成熟鶏(40日齢)において、エストロジェン投与により腸管ならびに腎臓でのカルシウムおよびリン吸収が増加した。通常飼料区とビタミンD欠乏飼料区の間でのエストロジェン作用について比較したところ、ビタミンD欠乏飼料区において血中活性型ビタミンD3濃度が有意に減少し、血中カルシウム濃度、腸管ならびに腎臓におけるCaBP D28kの発現量も減少した。しかし、血中リン濃度およびNaPi遺伝子の発現量は変化しなかった。3.産卵鶏にタモキシフェンを投与してエストロジェン受容体の働きを阻害すると、血中カルシウムおよびリン濃度が有意に減少し、腸管におけるCaBP D28k、腸管および腎臓におけるNaPi-II遺伝子の発現量が有意に減少した。また、血中活性型ビタミンD3濃度も有意な減少がみられた。以上の結果から、エストロジェンは活性型ビタミンDの生成を介してカルシウムならびにリン代謝を調節していることが示唆された。また、平成26-27年度の結果を合わせて考えると、産卵鶏では成熟に伴う卵胞からのエストロジェンの分泌により、活性型ビタミンD生成を介して腸管ならびに腎臓でのカルシウムおよびリン吸収が促進するものと推察される。鶏では起立不能の脚弱あるいは卵殻の薄化による破卵が頻発し、多大な経済的損失を被っている。これらは、いずれも、リンとカルシウムからなる骨の代謝異常に起因する。本研究では、リン輸送を司るナトリウム依存性リン酸トランスポーター(NaPi-II)が腎臓ならび腸管で発現しており、成熟とともにその発現量は増加しリン吸収が増加していることを明らかにした。また、これらリン代謝はエストロジェンによって生成された活性型ビタミンD3によって調節されていることを示唆した。現在の養鶏産業においては、ブロイラーでは起立不能となる脚弱、産卵鶏では卵殻の薄化による破卵が頻発し、多大な経済的損失を被っている。これらは骨疾患であり、また、卵殻のカルシウム供給源は骨であることから、カルシウム代謝はもちろんこと、骨の主成分であるリンの代謝も深くその原因に関わっていることが推測される。家禽におけるリン代謝を解明する上で、腸管ならびに腎臓でのリン吸収能の動態を明らかにすることは重要である。本研究では、リン吸収能を示す指標として、NaPi-IIサブタイプに着目し、各器官での発現の有無と相対的発現量を検討した。その結果、腎臓ではNaPi-IIaが、腸管ではNaPi-IIbが発現しており、リンの再吸収と吸収に関与していることが明らかとなった。また、哺乳類とは異なり、腸管では十二指腸で最もリン吸収が行われていることを示した。
酵素免疫測定法の特徴に関する研究

酵素免疫測定法は免疫反応を解析し易い特徴を持つ。この特徴を応用した研究の成果を報告する。1.微生物の酵素免疫測定法に関する研究。種々の微生物,柑橘潰瘍病,虫菌菌,黄色ブドウ球菌,在郷軍人病菌,ナス科植物青枯水病菌,コレラ菌,植物病原菌フザリウムにつき、同菌種の異株を共通して測定できる高感度の酵素免疫測定法が開発出来た。2.特異抗体の作製研究。各種の抗癌剤、ピューロマイシン,3-N-(p-hydroxyphenyl)mitomjcin C,アクラシノマイシンA,クロモマイシンA-3,オリボマイシンやミスラマイシン等に対するそれぞれの高感度な酵素免疫測定法を開発した。また、コリスチンやセファレキシンの酵素免疫測定法を開発し、虹鱒や鶏にこれらの医薬品を投与した場合に、体内に残流する医薬品の検出と定量が出来た。3.特異抗体の性状解析研究。特異抗体ブラスチサンジンS抗体の精製法を詳細に検討し、その最適条件を確立した。この精製法でネオカルチノスタチンに対する特異抗体を精製し、この抗体に高感度で高精度な酵素免疫測定法を開発出来た。また、改良酵素標識法を利用して、人のIgGに対する高感度で高精度の酵素免疫測定法を開発した。特異抗体の抗原に対する結合定数を測定することは従来法では容易で無かったので、酵素免疫測定法を用いた簡便な新しい測定法を開発することが出来た。4.モノクローン抗体の作製研究。バイオマイシンに対する2種類のモノクローン抗体を作製し、その性状を詳しく解析した結果両抗体はバイオマイシン分子のみを確認し、担体蛋白質や蛋白とハプテンとの結合部を認識しないことが判明した。
植物の過敏感反応の誘導と抑制機構の解析

植物の過敏感反応(HR)誘導のシグナル伝達に関与する因子を単離するために、BY-2細胞及びHRエリシター・エリシチンのモデル系において、HR誘導時に活性化、もしくは不活性化される遺伝子群の単離をすすめた。これまでにいくつかの新規防御応答遺伝子を見いだしたが、本年度は、その中で特に、受容体型キナーゼ遺伝子に注目し、本分子を介したシグナル伝達機構について解析を行った。本キナーゼは、少なくとも3つのメンバーよりなるファミリーを形成していることが明らかとなり、さらにそのうちの2つがエリシチン及び、ジェネラルエリシターにより発現が特異的に誘導されることが示された。また、構造解析の結果より、本キナーゼは、レクチンと高い相同性を持つ構造を受容体様ドメインとして有し、間に膜貫通ドメインをもつ、セリン/スレオニンタイプのプロテインキナーゼであることが示された。防御応答に関与する受容体型プロテインキナーゼとしては、イネの抵抗性遺伝子Xa21が知られており、タンパク質-タンバク質の相互作用を介したシグナル伝達経路が予想されている。今回単離されたキナーゼもリガンド-レセプターを介して、キナーゼによりそのシグナルを下流に伝達するというモデルが推測されるが、受容体としてレクチン様のドメインを有していることから、多糖類、もしくは糖タンパク質をリガンドとして認識する新しいシグナル伝達経路の存在が示唆される。そこで、現在、本遺伝子の組み換えタンパク質を作製し、上流のリガンド分子及び下流のターゲット分子の探索を行っている。また、本遺伝子の過剰発現系、サイレンシングの系を構築しており、今後これらの組み換え植物の解析をさらに詳細にすすめていくことで、本分子を介したシグナル伝達経路とともに、過敏感反応シグナル伝達経路の全貌についても少しづつ明らかとなるものと考えている。
『医心方』所引の仏教関連書籍から見る東アジアの仏教医学伝播の諸相

1.中国における文献調査鳥インフルエンザ蔓延の恐れがあったため延期されていた中国調査を本年度行った。調査地は北京である。北京では、国家図書館・北京大学図書館・北京中医薬大学の善本室で、明治期に流出した日本の古医籍を中心に『医心方』所引の典籍や目録を調査し、一部史料の複印を得た。また若干の収書を行った。この成果については、平成23年度に学会発表および論文発表を予定している。北京中医薬大学では、中国医学史の研究者である梁永宣教授を、北京大学では、唐代の西域仏教医学の研究者である陳明教授を訪問、当地の中国医学研究者と情報を交換し、交流を図った。2.日本における文献調査国立国会図書館・金沢文庫・京都大学などで、『医心方』および中国医学関連の文献を精査した。この調査により、隋唐時代までの中国古医籍の残存状態の理解および『医心方』所引の典籍の研究が進んだ。また、12月から翌1月にかけて杏雨書屋・岩瀬文庫・内藤記念くすり博物館図書館を調査、江戸医学館で『医心方』安政刊本の編集・発刊に貢献した小島宝素旧蔵書の実態について、知見を得た。この成果については、本年7月に京都大学人文科学研究所の共同研究「術数学-中国の科学と占術」(武田時昌教授)で発表(本来は3月13日に当該研究班東京ワークで発表予定だったが、東日本大震災のため、9月に延期された)、目録については、今年度中に出版助成を受ける予定である。3.『医心方』所引の仏教医学文献の輯佚と復元購入した書籍を利用し、『医心方』所引の仏教医学文献の内、「僧深方」を輯佚し、復元を試みている。今年度は『外台秘要方』所引僧深方および先行医書との校合を続けた。この成果については、本年9月刊行の国際日本文化研究センターの『日本研究』47号に掲載予定である。総合的な輯佚の結果については、出版助成を受ける予定である。成果の一部はCD-ROM化して海外の学会で配布した。(本来は3月13日に配布予定だったが、延期となったので随時配布に変更)1.台湾における文献調査本年度の海外調査は、当初中国を予定していたが、調査予定時に鳥インフルエンザ蔓延の恐れがあったため、平成22年度に予定していた台湾に調査地を変更した。台湾では、台北市の故宮博物院と国家図書館の善本室で、明治期に流出した日本の古医籍を中心に『医心方』所引の典籍を調査し、一部史料の複印を得た。この成果については、平成21年度に学会発表および論文発表を予定している。また、台中市に赴き、中国医学史の研究者である中興大学の林富士教授および中国医薬大学立夫中医薬展示館を訪問、当地の中国医学研究者と情報を交換し、交流を図った。2.日本における文献調査国立国会図書館・北里大学・金沢文庫・京都大学などで、『医心方』および中国医学関連の文献を精査した。また、7月に兵庫県豊岡市において、但馬国府跡の祢布ケ森遺跡出土の習書木簡を調査、平安期における日本の漢籍受容の実態について、知見を得た。この成果については、12月に木簡学会で発表、来年度(平成21年12月刊行予定)の『木簡研究』に論文掲載予定である。この成果については、12月に京都大学人文科学研究所の共同研究「陰陽五行のサイエンス」(武田時昌教授)で発表、論文は平成22年度刊行予定の同共同研究の報告論文集に掲載予定である。(1)香港におはる文献調査本年度の海外調査は、当初中国を予定していたが、調査予定時にH1N1型新型インフルエンザの流行があり、調査に支障を来す可能性があったため平成21年度に予定していた香港に調査地を変更した。香港では、香港大学図書館と香港中文大学図書館で、明治期に流出した日本の古医籍を中心に、幕府医学館で『医心方』復刻に当たった小島宝素関連等の典籍を調査した。この成果については、平成22年度に国際シンポジウム(8月南京大学)および学会・論文発表を予定している。また、香港大学では、中国科学史の馮錦榮助教授と交流を図った。(2)日本における文献調査国立国会図書館・金沢文庫・京都大学などにおいて、『医心方』および中国医学関連の文献を精査した。(3)『医心方』所引の仏教医学文献の輯佚と復元科研費で購入した書籍を利用し、『医心方』『外台秘要方』所引の仏教医学文献の内、「僧深方」を輯佚し、復元を試みている。この成果については、昨年9月に日本宗教学会で発表し、3月刊行の国際日本文化研究センター『日本研究』41号および日本宗教学会『宗教研究』83(4)に掲載された。

(4)一昨年7月に兵庫県豊岡市において、但馬国府跡の祢布ケ森遺跡出土の習書木簡を調査、この成果を同12月に木簡学会で発表したものの成果については、昨年12月刊行の木簡学会『木簡研究』31号に掲載された。1.中国における文献調査鳥インフルエンザ蔓延の恐れがあったため延期されていた中国調査を本年度行った。調査地は北京である。北京では、国家図書館・北京大学図書館・北京中医薬大学の善本室で、明治期に流出した日本の古医籍を中心に『医心方』所引の典籍や目録を調査し、一部史料の複印を得た。また若干の収書を行った。この成果については、平成23年度に学会発表および論文発表を予定している。北京中医薬大学では、中国医学史の研究者である梁永宣教授を、北京大学では、唐代の西域仏教医学の研究者である陳明教授を訪問、当地の中国医学研究者と情報を交換し、交流を図った。2.日本における文献調査国立国会図書館・金沢文庫・京都大学などで、『医心方』および中国医学関連の文献を精査した。この調査により、隋唐時代までの中国古医籍の残存状態の理解および『医心方』所引の典籍の研究が進んだ。また、12月から翌1月にかけて杏雨書屋・岩瀬文庫・内藤記念くすり博物館図書館を調査、江戸医学館で『医心方』安政刊本の編集・発刊に貢献した小島宝素旧蔵書の実態について、知見を得た。この成果については、本年7月に京都大学人文科学研究所の共同研究「術数学-中国の科学と占術」(武田時昌教授)で発表(本来は3月13日に当該研究班東京ワークで発表予定だったが、東日本大震災のため、9月に延期された)、目録については、今年度中に出版助成を受ける予定である。3.『医心方』所引の仏教医学文献の輯佚と復元購入した書籍を利用し、『医心方』所引の仏教医学文献の内、「僧深方」を輯佚し、復元を試みている。今年度は『外台秘要方』所引僧深方および先行医書との校合を続けた。この成果については、本年9月刊行の国際日本文化研究センターの『日本研究』47号に掲載予定である。総合的な輯佚の結果については、出版助成を受ける予定である。成果の一部はCD-ROM化して海外の学会で配布した。(本来は3月13日に配布予定だったが、延期となったので随時配布に変更)