hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マイクログリアは心肺停止・蘇生後脳障害を悪化させるか？

本研究の目的は、マイクログリアが心停止・心肺蘇生(CA/CPR)後の全脳虚血に対してどのように作用しているかを解明することである。研究担当者はコンディショナル・ノックアウトマウスを用いて、CX3CR1陽性細胞のみをターゲットとし、さらにマイクログリアとマクロファージのターンオーバー時間の差を利用してマイクログリアのみを除去したマウスを作成し、この方法で作成したマイクログリア除去マウスでマイクログリアが実際に大幅に減少していることをフローサイトメトリーと脳組織のIba-1染色で確認した。上記マイクログリア除去マウスを用いてCA/CPR後の神経細胞障害を調べる予定であったが研究担当者の異動に伴い動物実験が遂行困難になったため、予備実験で得たデータや、本研究で使用するモデルと同じモデル(マウスCA/CPRモデル)を使った他臓器プロジェクトの脳標本から得られたデータをもとに解析をするに留まった。マイクログリア除去マウスの予備実験で得られたCA/CPR生存マウスから抽出した脳組織標本(海馬)の神経細胞死の評価をおこなった。条件が異なるため厳密な比較にはならないが、他臓器プロジェクトに使用した通常マウスのCA/CPR後の脳組織と比較して、マイクログリア除去マウスの脳組織では神経細胞死が少ない傾向がみられた。また、予備実験で得られた生存マウスの脳組織をIba-1染色で評価したところ、いくつかの標本でIba-1 positiveの像がみられた。マイクログリアが除去されているため、Iba-1 positiveの細胞は末梢から侵入したマクロファージであると予想される。全脳虚血による脳障害を再現したCA/CPRモデルでは、局所脳虚血による脳障害を再現した脳梗塞モデルと異なりマクロファージは脳血管関門を超えて虚血部位に侵入しないと先行研究では報告されているが、異なる結果が得られた。この目的を達成するために、平成28年度はマイクログリア除去マウスを用いてCA/CPR後の神経細胞障害を調べる予定であった。しかし平成28年度は動物実験の結果が得られず、研究担当者が予備実験で得たデータや、本研究で使用するモデルと同じモデル(マウスCA/CPRモデル)を使った他臓器プロジェクトの脳標本から得られたデータをもとに解析をするに留まった。研究担当者はコンディショナル・ノックアウトマウスを用いて、CX3CR1陽性細胞のみをターゲットとし、さらにマイクログリアとマクロファージのターンオーバー時間の差を利用して、マイクログリアのみを除去したマウスを作成した。この方法で作成したマイクログリア除去マウスでマイクログリアが実際に大幅に減少していることをフローサイトメトリーと脳組織のIba-1染色で確認した。マイクログリア除去マウスにCA/CPRを行う際に、ある程度の生存率を維持する条件を設定する必要がある。マイクログリア除去マウスを用いた予備実験では、心停止時間、鼓膜温、マイクログリア除去からCA/CPR施行までの時間、CA/CPR施行から組織学的評価までの時間など条件を変えて生存率の確認を行った。なお、本研究に関連して、対象となる臓器は異なるものの、本研究と同じモデル(マウスCA/CPRモデル)における腎機能障害に関して新たな知見を得ることができ、論文を発表することができた。この結果を本研究の条件検討に役立てる事ができると考える。平成28年度は動物実験の結果が得られず、研究担当者が予備実験で得たデータや、同モデル(マウスCA/CPRモデル)を使った他臓器プロジェクトの脳標本から得られたデータをもとに解析をするに留まった。概要に記したマイクログリア除去マウスの予備実験で得られたCA/CPR生存マウスから抽出した脳組織標本の神経細胞死の評価をおこなった。

マイクログリア除去マウスの予備実験で得られたCA/CPR生存マウスから抽出した脳組織標本(海馬)の神経細胞死の評価をおこなった。条件が異なるため厳密な比較にはならないが、他臓器プロジェクトに使用した通常マウスのCA/CPR後の脳組織と比較して、マイクログリア除去マウスの脳組織では神経細胞死が少ない傾向がみられた。また、予備実験で得られた生存マウスの脳組織をIba-1染色で評価したところ、いくつかの標本でIba-1 positiveの像がみられた。マイクログリアが除去されているため、Iba-1 positiveの細胞は末梢から侵入したマクロファージであると予想される。全脳虚血による脳障害を再現したCA/CPRモデルでは、局所脳虚血による脳障害を再現した脳梗塞モデルと異なりマクロファージは脳血管関門を超えて虚血部位に侵入しないと先行研究では報告されているが、異なる結果が得られた。当初、実験は研究担当者の所属する教室の施設・器機を使用して行う予定であったが、研究担当者が他県にある同施設の分院へ異動したため、動物実験が遂行困難になった。平成29年度もプレリミナリーデータを使用して解析をすすめているが、当初計画していたin vivoの実験系からin vitroの実験系へ変更することも検討している。今後の方針を再検討する必要がある。平成28年度は研究担当者の異動により動物実験の遂行が困難であると予想されたため、実験用動物の購入を行っていない。実験に必要な各種生体モニター、器機等は九州大学研究院麻酔・蘇生学教室にすでに備わっている器機を使用する予定であるが、故障等あれば新規購入する。昨年度に購入を予定していた実験動物、実験器具を購入する。研究内容に応じて薬剤等購入する。
PI3Kを標的とする新規抗がん剤を用いた光線力学療法の開発

新規抗がん剤として開発されたPI3K阻害剤XL147を、前立腺がん培養細胞にかけ青色波長の光を照射するとがん細胞表面にブレッブが形成され著しい細胞傷害がもたらされることがわかった。この細胞傷害効果の程度は、XL147の濃度と青色光の強さに依存する。活性酸素(ROS)蛍光検出薬での観察で、XL147存在下での光照射により細胞内にROSが産生されることが確認され、この細胞傷害はROSによるものと考えられる。青色光の照射量を低減することで、がん細胞にアポトーシス誘導することもできた。これらのことから、XL147はがん治療の光線力学療法の新規光感作剤として有望であると考えられる。光線力学療法は、がん細胞に選択的に集まる感受性物質を体内に投与し、レーザー光線を照射することでその薬剤から発生するフリーラジカル分子でがん細胞を死滅させるという新しい治療法である。本研究は、経口がん治療薬として開発された新規PI3K阻害剤(XL-147)を光線力学療法の新しい感受性物質として利用を確立しようとするものである。本年度は、上皮系がん細胞(A431細胞)、前立腺がん細胞(PC-3細胞、LNCaP細胞)、膀胱がん細胞(253J細胞)、白血病由来マクロファージ(RAW264)を用いて、in vitroでXL-147処理後に光刺激蛍光顕微鏡でライブ観察を行い、光照射をした細胞の傷害を位相差顕微鏡による形態変化、細胞表面のブレッブ形成を指標にして評価した。XL-147存在下で特定の細胞に光を当てると、どの種類のがん細胞においても、照射215分で細胞表面にコブのようなブレッブが形成され、ついで細胞内に空胞化が起き細胞死に至るようである。光を当てていないまわりの細胞には障害は認められない。照射光の波長は430 nm, 470 nm, 530 nmの三つで一定の強度で比較したところ、430 nmが、最も短時間でブレッブを形成した。また、ブレッブ形成までの時間や細胞傷害の程度は、照射光の強度にも依存する。XL-147濃度は、100 nM-2μM範囲で濃度を上げるとブレッブ形成が起きるまでの時間が短縮する傾向が見られた。XL-147なし(DMSOだけ)の場合は、同程度の強度の光照射でブレッブ形成、細胞傷害は認められなかった。以上の結果から、XL-147は、照射する光の波長及び強さ依存性にがん細胞を傷害することができることが証明され、光線力学療法の光感受性物質としての利用が有望である。光線力学療法は、がん細胞に選択的に集まる感受性物質を体内に投与し、レーザー光線を照射することでその薬剤から発生するフリーラジカル分子でがん細胞を死滅させるという治療法である。光線力学療法は、低い光エネルギーでがん組織を選択的に治療することが可能で、従来の化学療法や放射線治療に比し正常組織への侵襲性が低いという利点がある。しかし、現在、光線力学療法に用いることができる光感受性物質の数は限られており、新たな光感受性物質の開発が望まれている。本研究は、経口がん治療薬として開発された新規PI3K阻害剤(XL147)を光線力学療法の新しい感受性物質としての利用を確立しようとするものである。昨年度までの研究で、上皮系がん細胞(A431細胞)、前立腺がん細胞(PC3細胞、LNCaP細胞)、膀胱がん細胞(253J細胞)、白血病由来マクロファージ(RAW264)などにおいて、XL147処理後に光刺激蛍光顕微鏡で青色波長光を照射することでがん細胞を死傷させることができた。また、その細胞傷害の程度は、XL147の濃度依存性、光の強度依存性があることが確認できた。本年度は、PC3細胞を用いて光照射XL-147による細胞傷害メカニズムの解析を行い、細胞傷害がXL147光照射による活性酸素の生成に起因することを確認した。XL147の存在下で光照射することでPC3細胞内に非常に多くの活性酸素が産生していることをライブイメージング蛍光検出によって観察することができた。XL147非存在下での光照射では、活性酸素の産生はわずかであり、蛍光定量解析でも明らかな差が認められた。このことから、XL147存在下での光照射でおきるがん細胞の傷害は、活性酸素産生によるものと考えられる。また、XL147光照射によるがん細胞傷害効果は、XL147と競合する他のPI3キナーゼ阻害剤の前処理により軽減されるため、XL147はがん細胞内のPI3キナーゼに結合することでそのがん細胞傷害効果をもたらしていると考えられる。このように、当初の目的である、XL147光照射によるがん細胞傷害効果のメカニズムに関する知見が得られたため、研究はおおむね順調に進んでいる。光線力学療法は、がん細胞に選択的に集まる感受性物質を体内に投与し、レーザー光線を照射することでその薬剤から発生するフリーラジカル分子でがん細胞を死滅させるもので、低い光エネルギーでがん組織を選択的に治療することが可能となり、従来の化学療法や放射線治療に比し正常組織への侵襲性が低いという利点がある。

この研究で上皮系がん細胞(A431細胞)、前立腺がん細胞(PC3細胞、LNCaP細胞)、膀胱がん細胞(253J細胞)、白血病由来マクロファージ(RAW264)などにおいて、XL147処理後に光刺激蛍光顕微鏡で青色波長光を照射することでがん細胞を短時間で死傷させることができた。その細胞傷害の程度は、XL147の濃度依存性、光の強度依存性があった。またPC3細胞のXL-147光照射で活性酸素を生成することを可視化し、細胞傷害が活性酸素の生成に起因することを確認した。比較的強い光照射エネルギーでは、数分程度で細胞傷害・細胞死が起きるが、光照射エネルギーを減らした条件下では、24時間後にPC3細胞でアポトーシスを誘導することもできた。以上のことから、XL147は新規の光線力学療法光感作物質として有望であると考えられる。新規抗がん剤として開発されたPI3K阻害剤XL147を、前立腺がん培養細胞にかけ青色波長の光を照射するとがん細胞表面にブレッブが形成され著しい細胞傷害がもたらされることがわかった。この細胞傷害効果の程度は、XL147の濃度と青色光の強さに依存する。活性酸素(ROS)蛍光検出薬での観察で、XL147存在下での光照射により細胞内にROSが産生されることが確認され、この細胞傷害はROSによるものと考えられる。青色光の照射量を低減することで、がん細胞にアポトーシス誘導することもできた。これらのことから、XL147はがん治療の光線力学療法の新規光感作剤として有望であると考えられる。様々な種類のがん細胞株を用い、抗がん剤であるXL-147存在下で光刺激蛍光顕微鏡による光照射でがん細胞に傷害を与えることを確認することができた。細胞傷害の程度は、XL-147濃度、光の波長と強度に依存し、新しい光線力学療法の光感受物質として利用することができることが示された。がん細胞と非がん細胞への効果・影響の差異についてはまだ明確にされていないが、この顕微鏡を用いたライブセルイメージングでのアッセイで、XL-147をもちいて多くの種類のがん細胞を傷害する条件を確立することができたので、計画はおおむね順調に進んでいる。光線力学療法においては、がん細胞のアポトーシスを誘導することが臨床的に重要である。XL147の濃度あるいは光照射を減じることで、がん細胞にアポトーシスを誘導する方法を探索する。また、担癌マウスを用いたin vivoにおける効果を確かめる。XL147の類似物質で同様の効果あるいはより長い波長での光感作が可能な化合物を探索する。細胞生物学XL-147存在下での光照射でがん細胞は数分程度で細胞死に至るが、照射からの効果が表れるまでの時間が短いことから、これまでのPDTに使われているポルフィリン系薬剤と同様にXL-147が光と反応しフリーラジカルを生成し、活性酸素などによる脂質過酸化、機能タンパク質の酸化により細胞に傷害を与えることが考えられる。この仮説を証明するために、細胞内での活性酸素生成や脂質過酸化反応を生きた細胞内で可視化できる蛍光試薬により蛍光ライブセルイメージング、定量解析をおこなうことでXL-147の光照射によるがん細胞傷害のメカニズムを明らかにする。光照射XL-147の効果の標的分子同定として、PI3キナーゼ分子の過剰発現細胞の作製を計画していたが、PI3K競合阻害剤の前処理によって細胞傷害効果が低減したためPI3キナーゼが標的分子であることが示唆されたため、遺伝子導入実験を行わなかった。
北琉球諸語の文法記述・ドキュメンテーション及び歴史的研究

本研究は,北琉球諸語に属する地域変種を対象に,文法の体系的記述を行うこと,自然談話・民話などの一次資料を収集しアーカイビングを行うこと,比較言語学的手法に基づく系統的位置づけを行うことの3点を目的としている。平成29年度は,喜界島(上嘉鉄/小野津/志戸桶),奄美大島奄美市笠利町(佐仁),龍郷町(浦/幾里),大和村(今里),瀬戸内町請島(請阿室)・与路島(与路)に断続的に計約2ヶ月滞在し,文法記述・系統研究のための質問調査及び自然談話の収録・書き起こし調査を行い,分析結果の一部を論文・学会等で発表した。詳細は以下のとおりである。1.疑問詞について調査を行い,喜界島上嘉鉄方言の疑問詞のうち,単独で述語を成す「述語疑問詞」とその他の疑問詞について意味的・形態統語的特徴の相違を分析した。特に,述語疑問詞の言語行為に応じた使い分け,及び,丁寧標示・疑問補文標示との共起制限を論じた。理由疑問詞については,Lukas Rieser氏(山形大学)との共同研究において,感嘆文における用法を分析し,発表した。2.喜界島小野津方言・志戸桶方言の指示詞について調査し,人称代名詞属格形と近称指示詞の複合形が指示詞の新たな系列として発展していることを報告した。その他の地点でも指示詞の語形と機能の概略について調査を行った。3.奄美大島笠利町佐仁方言については,音韻論・形態論・統語論の概要を調査し,特に,重野裕美氏(広島経済大学)との共同研究として,尊敬動詞の意味的・形態統語的特徴を論文にまとめた。4.奄美大島龍郷町浦方言について,これまでに収集した談話を書き起こし,形態素分析と語釈を加えて言語資料を作成する作業を行った。奄美大島奄美市笠利町佐仁方言,龍郷町幾里方言についても自然談話の収集を行い,書き起こしの作業に着手した。収集,整理した言語資料は今後出版,公開予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、北琉球諸語に属する地域変種を対象に、1文法の体系的記述・2言語一次資料の収集とアーカイビング・3比較言語学的手法に基づく系統的位置づけの3点を目的としている。当該年度は、主に1と2の目的のため、喜界島(上嘉鉄集落/小野津集落/志戸桶集落)、奄美大島龍郷町(浦集落)、瀬戸内町請島(請阿室集落/池地集落)・与路島(与路集落)に断続的に約2ヶ月滞在してデータを収集し、分析結果の一部を論文・学会等で発表した。1の文法記述について、喜界島上嘉鉄方言の形容詞の語形変化・形態統語的・意味的特徴、テンス・アスペクト・エビデンシャリティについて発表した。喜界島小野津方言・志戸桶方言について、格助詞・取り立て助詞の形式と機能を調査し、小野津方言について報告書にまとめた。Lukas Rieser氏(京都大学大学院博士後期課程)との共同研究として、上嘉鉄方言の文末辞-sooの形態統語的特徴と文法化経路について分析、発表した。重野裕美氏(広島経済大学准教授)との共同研究として、奄美大島龍郷町浦方言、喜界島上嘉鉄方言・小野津方言を対象に、名詞句の有標性階層に関わる現象(主格標識・複数標識・名詞修飾標示・短母音化交替)についてまとめて報告した。重野氏との共同研究として、請島請阿室方言・池地方言・与路島与路方言の基礎語彙調査、動詞・形容詞の語形変化の調査、名詞と助詞の境界で起こる子音交替の調査を行い、その結果をもとに請阿室方言の分節音の分布の制限と交替について発表した。2の資料収集について、小野津方言・志戸桶方言について、自然談話の収録(録音・録画)と童謡の方言訳の作成及び録音を行った。重野裕美氏との共同研究として奄美大島龍郷町浦方言の自然談話を収録(録音・録画)し、書き起こし(形式と意味の確認)を行い、言語学的研究に資する資料とするための語釈づけを行い、自然談話資料を作成した。当該年度は、喜界島上嘉鉄方言・小野津方言・志戸桶方言について、形態面・音韻面・統語面の種々の分析に資するデータを収集・分析し、一部を成果として報告した。このうち、特筆すべき点として、小野津方言の短母音化交替がある。小野津方言では、名詞の語幹末長母音が一定の条件で短母音と交替する。その条件として、有生性階層における位置、名詞語幹の長さ、後続要素(接辞及び助詞)の長さが関与的であることを報告した。また、研究蓄積の少ない瀬戸内町請島(請阿室集落/池地集落)・与路島(与路集落)の方言を対象に、現地調査に着手し、音韻面及び形態面の記述のためのデータを収集した。請島・与路島を含む瀬戸内町の諸方言では、他の北琉球諸語及び日本語に比べて音節末に現れる子音の制限が緩く、語末に(調音点の対立する)閉鎖音・摩擦音・鼻音が現れうる点、調音点の異なる子音連続が許される点が特徴的であり、音韻論的/形態音韻論的分析上大きな分析課題となる。

当該年度は語末子音及び子音連続の分析に資するデータを収集し、有声性及び口蓋化における音節末子音の分布制限と子音交替について、分析・発表し、フィードバックを得た。以上は、本研究の目的1の音韻面/形態面/統語面に渡る体系的文法記述に相当する成果であり、最終的に報告書として提出する文法概説の一部となるものである。また、当該年度は喜界島小野津方言・志戸桶方言・浦方言について、自然談話の収録(録音・録画)・書き起こし(形式と意味の確認)と童謡の方言訳の作成及び録音を行った。これは、本研究の目的2の言語資料のアーカイビングに相当する成果であり、得られた資料は長期的に管理し、承諾を得られた部分について研究者・地域コミュニティが学術研究及び方言教育、言語維持・再活性化のための活動など多目的に利用可能なかたちで公開する予定である。本研究は、北琉球諸語に属する地域変種を対象に、(1)音韻論・形態論・統語論に渡る文法の体系的記述を行うこと、(2)自然談話・民話・民謡などの一次資料を収集しアーカイビングを行うこと、(3)比較言語学的手法に基づく系統的位置づけを行うことの3点を目的としている。平成28年度は、主に(1)・(2)の目的に沿って調査研究を行った。喜界島(上嘉鉄集落/小野津集落/志戸桶集落)、奄美大島龍郷町(浦集落)、名瀬市笠利町(佐仁集落)、瀬戸内町請島(請阿室集落)・与路島(与路集落)において文法記述のための聞き取り調査及び自然談話の収録・書き起こし調査を行い、分析結果・資料の一部を論文・学会等で発表した。まず、(1)について、上嘉鉄方言の疑問詞のうち、理由疑問詞の特徴に着目し、文末形式との共起制限、感嘆文の用法をその他の疑問詞と対照しながら分析した。小野津方言については、動詞形態論の記述を行い、動詞語幹クラス、語幹と接辞の異形態、定動詞/連体動詞/副動詞の形態的構造とパラダイムを示した。請阿室方言の音韻論について、音素体系、音節構造、音素配列、形態音韻論的交替を記述した。交替については母音/子音の挿入/削除/交替に分類し、規則とその適用例を詳述し、特に、音節構造の制限と母音の削除/挿入との連関、子音の調音点/調音方法と子音同化の連関を論じた。与路方言の格標識の形式と機能の記述を行い、さらに有生性階層との連関、形式名詞との共起を扱った。次に、(2)について、小野津方言/志戸桶方言/浦方言/佐仁方言/請阿室方言/与路方言を対象に、談話資料の収集を行い、小野津方言と浦方言について、形態素ごとのグロス(意味注釈)と日本語訳を付した資料にまとめた。平成28年度は、喜界島(上嘉鉄集落/小野津集落/志戸桶集落)、奄美大島龍郷町(浦集落)、名瀬市笠利町(佐仁集落)、瀬戸内町請島(請阿室集落)・与路島(与路集落)について、形態面・音韻面・統語面の種々の分析に資するデータを収集・分析し、一部を成果として報告した。特に、小野津方言の動詞形態論に関して、動詞クラスと異形態について詳述し、研究蓄積の少ない請阿室方言・与路方言について、前年度に引き続きデータ収集/分析を行い、形態音韻論的交替と格助詞について論文にまとめた。また、奄美大島北部地域の中で周辺方言との言語差が特に大きい方言として知られる佐仁方言の調査/研究に着手し、動詞形態論を中心に予備調査を行った。以上は、本研究の目的(1)の音韻面/形態面/統語面に渡る体系的文法記述に相当する成果である。また、平成28年度は小野津方言・志戸桶方言・佐仁方言・浦方言・請阿室方言・与路方言について自然談話の収録(録音・録画)を行い、一部を資料にまとめて発表した。これは、本研究の目的(2)の言語資料のアーカイビングに相当する成果であり、得られた資料は長期的に管理し、承諾を得られた部分について研究者・地域コミュニティが学術研究及び方言教育、言語維持・再活性化のための活動など多目的に利用可能なかたちで公開する予定である。
気管支喘息の難治化におけるIL-23/IL-17経路の役割の解明

近年、IL-17の主要な産生細胞であるIL-17産生性CD4陽性T細胞(Th17細胞)が自己免疫疾患における慢性炎症の誘導に深く関与すること、IL-23がTh17細胞の生存維持に重要な役割を果たすことが示された。一方、難治性喘息患者では、その重症度と気道でのIL-17産生との間に正の相関が認められることが報告されている。しかし、抗原誘発性気道炎症におけるIL-23/Th17細胞経路の役割の詳細は依然不明であり、本申請研究ではその解明を目的に研究を行った。その結果、1)感作マウスに抗原を吸入投与すると気道局所でIL-23の発現が誘導されること、2)感作マウスに対する抗IL-23抗体の抗原吸入前投与は、抗原誘発性好中球性気道炎症のみでなく、好酸球性気道炎症も抑制すること、3)肺特異的にIL-23を過剰発現させたトランスジェニックマウス(CC10 IL-23マウス)では、IL-17産生と好中球性気道炎症の増強のみでなく、Th2サイトカインの産生と好酸球性気道炎症の増強、及び気道過敏性の亢進が認められることを明らかにした。さらに抗原誘発性気道炎症におけるThl7細胞の役割を明らかにするため、抗原特異的なTh17細胞を作製し、細胞移入実験によりその作用を検討した結果、Th17細胞単独移入では好酸球性気道炎症を誘導しないが、Th2細胞と共に移入するとTh2細胞による好酸球性気道炎症を増悪させることが判明した。これらの研究結果より、IL-23/Th17細胞経路は、自己免疫疾患のみでなく、アレルギー性気道炎症の病態にも深く関与することが明らかとなり、IL-23/Th17細胞経路が喘息の新たな治療標的と成りうることが示唆された近年、IL-17の主要な産生細胞であるIL-17産生性CD4陽性T細胞(Th17細胞)が自己免疫疾患における慢性炎症の誘導に深く関与すること、IL-23がTh17細胞の生存維持に重要な役割を果たすことが示された。これらの研究結果より、IL-23/Th17細胞経路は、自己免疫疾患のみでなく、アレルギー性気道炎症の病態にも深く関与することが明らかとなり、IL-23/Th17細胞経路が喘息の新たな治療標的と成りうることが示唆された気管支喘息の基本病態は気道を場とした慢性アレルギー性炎症と気道のリモデリングであり、その発症にはTh2細胞が深く関与している。しかしその一方で重症喘息患者の気道には好酸球、好塩基球、リンパ球などに加え、好中球の増加と炎症性サイトカインの増加が認められること、さらに好中球性炎症と喘息、の重症度に正の相関がみられることが示されている。近年IL-12ファミリーに属する新規サイトカインであるIL-23が報告され、好中球性炎症の惹起や遷延化に関与していることが示唆された。またこのIL-23により増殖が促進される新規CD4陽性T細胞サブセットであるIL-17産生性T細胞(Th17細胞)が慢性炎症の発症、維持に重要であることが明らかにされた。しかしアレルギー性気道炎症におけるIL-23/IL-17経路の重要性は依然不明である。そこで本研究では気管支喘息の病態、特に難治化におけるIL-23/IL-17経路の役割を明らかにすることを目的とした。そして今年度の研究により、1)アレルギー性気道炎症の肺局所においてIL-23の発現が誘導されること、2)肺特異的にIL-23を過剰発現するトランスジェニックマウス(CC10 IL-23Tgマウス)では、アレルギー性気道炎症の増悪、杯細胞の増加、気道過敏性の亢進がみられること、3)CC10 IL-23Tgマウスでは、アレルギー性気道炎症のみならず、好中球性炎症も惹起されること、4)CCIO IL-23Tgマウスでは、肺胞洗浄液中のIL-17、IL-13産生が増加していることを明らかにした。

今後、野生型マウスに抗原特異的TCRを持つTh17細胞を移入する実験系を用いて、Th17細胞がアレルギー性炎症を増悪させる分子機構について解析する予定である。近年,IL-17の主要な産生細胞であるIL-17産生CD4陽性T細胞(Th17細胞)が自己免疫疾患における慢性炎症の誘導に深く関与すること,IL-23がTh17細胞の生存維持に重要な役割を果たすことが示された。一方,難治性喘息患者では,その重症度と気道でのIL-17産生との間に正の相関が認められることが報告されている。しかし,抗原誘発性気道炎症におけるIL-23/Th17細胞経路の役割の詳細は依然不明であり,本申請研究ではその解明を目的に研究を行った。その結果,1)感作マウスに抗原を吸入投与すると気道局所でIL-23の発現が誘導されること,2)感作マウスに対する抗IL-23抗体の抗原吸入前投与は,抗原誘発性好中球性気道炎症のみでなく,好酸球性気道炎症も抑制すること,3)肺特異的にIL-23を過剰発現させたトランスジェニックマウス(CC10IL-23マウス)では,IL-17産生と好中球性気道炎症の増強のみでなく,Th2サイトカインの産生と好酸球性気道炎症の増強,及び気道過敏性の亢進が認められることを明らかにした。さらに抗原誘発性気道炎症におけるTh17細胞の役割を明らかにするため,抗原特異的なTh17細胞を作製し,細胞移入実験によりその作用を検討した結果,Th17細胞単独移入では好酸球性気道炎症を誘導しないが,Th2細胞と共に移入するとTh2細胞による好酸球性気道炎症を増悪させることが判明した。これらの研究結果より,IL-23/Th17細胞経路は,自己免疫疾患のみでなく,アレルギー性気道炎症の病態にも深く関与することが明らかとなり,IL-23/Th17細胞経路が喘息の新たな治療標的と成りうることが示唆された。
子どもの声から作成する看護の自己評価尺度－病棟看護師用－の開発

入院中の子どもが求めている看護師像の解明と、それに基づいた実践振り返り表の開発と効果の検証を行った。子どもは、看護師が子どもに関心を寄せること、子どもを尊重することや身体的精神的な苦痛軽減などを求めていた。看護師は、実践振り返り表を使用する中で【経験的に学び大切にしていることへの肯定感と強化】がある一方、【子どもに対して援助ができていないことへの不全感】を持った。さらに【今まで気づけなかった子どもの気持ちへの寄り添い】や【親ではなく子どもの気持ちを尊重する意識の高まり】があり、【実践振り返り表で気づいた点を基にした行動の変化】に繋がり、【自己の行動変化による子どもとの関係の深まり】に至った。本研究では、まず入院中の子どもが看護師に対する思いや感覚を明らかにすることを目的としている。今年度は、国内外の入院中の子どもの思いに関する先行研究を中心に文献検討を行った。所属大学の倫理審査を受け、その後病院に研究依頼を行ったのち、病院の倫理審査を受けた。現在までに入院中の学童期の子ども25名にインタビュー調査を実施した。データ収集と同時に分析を行っているが、子どもの語った言葉の解釈を丁寧に行っており、現在分析の途中である。さらなるデータ収集が必要と思われる。本研究では、まず入院中の子どもが看護師にどのような思いや感覚を抱いているのか明らかにする。次に、明らかとなった入院中の子どもが看護師に抱く思いに基づいて看護師が実践を振り返ることができるものを作成することを目的としている。今年度は、インタビューを終えた学童期の子ども25名の分析を行い、その中で入院中の子どもが看護師に対して、子ども自身を尊重することの大切さなどの思いを抱いていることが明らかとなった。来年度関連学会での発表と学会誌への投稿を予定している。次に、明らかとなった入院中の子どもが求めている看護師の態度や行動をもとに、看護師用の試作版実践振り返り表の作成を行った。その後小児病棟師長や小児看護の研究者たちと専門家会議を行い、その結果から実践振り返り表の内容を検討・修正した。研究者が所属する機関の研究倫理審査委員会と調査施設の病院長の承認を得て、2月より小児病棟で勤務中の看護師の方へのインタビューを開始している。入院中の子どものインタビューデータ分析に予定より時間をかけて行ったため遅れを生じていたが、その後の実践振り返り表の作成や研究倫理審査承認、調査施設での承認などが順調に進んだため、年度末にはデータ収集を開始するまでに至った。本研究では、1入院中の子どもが看護師にどのような思いや感覚を抱いているのか明らかにすること、2その結果を受けて、入院中の子どもが求めている看護師像に基づいた看護師のための実践振り返り表を作成すること、3看護師が実践振り返り表を用いて自己評価することで子どもに対する看護師の態度や行動について、どのような気づきや変化があるのか、について明らかにすることを目的とした。平成27年度は、目的1に対して、入院中の6ー12歳の子どもに半構造化インタビューを行った。平成28年度は、目的12に対して、インタビューの分析とその結果を受けて、試作版実践振り返り表の作成を行った。小児病棟の看護師長や小児看護研究者などの協力を得て専門家会議を開き、検討を行い、その結果を基に修正を行った。平成29年度は、目的3に対して、研究協力の得られた小児病棟で勤務中かつ小児看護経験を3年以上有する看護師5名に半構造化インタビューを2回ずつ行った。一回目のインタビューを行った後、定期的に子どもの求めている看護師像について理解を深めてもらい、実践を続けてもらった。第一回目のインタビューから2週間以上空けて、第二回目のインタビューを行い、看護師自身にどのような気づきや変化が起きたのか調査した。得られたデータに関して分析を行った。実践振り返り表を通して、自身の実践を見つめ直す機会に繋がっていた。日々の多忙な業務の中で、気づけていなかった子どもの気持ちに目を向けるようになることや、何となく経験的に思っていたことを大切だと再認識すること等があった。さらに気づいたことを実践に繋げていく看護師もいた。本研究の一部は関連学会において発表を行った。さらに関連学会への発表と学術誌への投稿を予定している。現在までに25名の子どものインタビューを終了しているが、子どもの言葉を分析していく過程を丁寧に行っているため、予定よりやや遅れている。子どもの思いを明らかにするためには、さらにデータ収集が必要と思われる。実践振り返り表を使用した研究のデータ収集と分析を行う。先に分析を行った入院中の子どもが看護師に抱く思いについて、関連学会での発表と学会誌への投稿を行う。医歯薬学入院中の子どもの看護師に対する思いや感覚を明らかにするため、さらにインタビューを通してデータ収集を行っていく。

本研究で得られた結果がまとまりしだい、随時学会発表と論文投稿を経て発信していく。目的に照らし合わせて検討した結果、当初の予定とデータ収集方法が変更となった。また、今年度にデータ収集を終了する予定であったが、一部を次年度に行うこととしたため、繰越金を出すこととなった。当初の予定よりも、子どもへのインタビューによるデータ収集と分析に時間をかけて行っている。さらなるデータ収集を予定としているため、次年度に繰り越し金を出すこととなった。繰り越しとなった次年度使用額は、データ収集関連の交通費費や謝金、学会参加等の交通費、物品購入等として使用する予定である。データ収集や学会参加等に関係した交通費や謝金、物品購入等に使用していきたいと考えている。
高分子錯体膜の合成と膜内非対称性を利用した能動輸送系に関する研究

1.高分子錯体として合成したものはポリビニルアセテートとその誘導体数種類に関するものであり、さらにポリビニルアルコールの部分スルホン化物を合成し、これらを薄膜化することによって各種膜試料とした。その他のポリマーについては現在調整中である。2.ポリビニルアセテート錯体膜は骨格ポリマーの重合度、分岐の多寡によって異なる透過挙動を示した。低重合度のものではヨウ化物イオンの能動輸送は起こらず受動輸送のみが観察された。中程度の重合度を持つ錯体膜ではもっとも能動輸送が実験条件下で起こりやすく、高分岐度の錯体膜でもほぼ同程度の能動輸送を示した。3.これら錯体膜中の錯体成分の非対称分布は膜電位の経時変化と対応しているようであったが、直ちにこれを膜内の非対称性の尺度とすることはできなかった。4.そこで部分スルホン化ポリビニールアルコールを重畳した非対称膜について検討を行ったところ、荷電密度の鋭く変化する境界を持つ二層膜について見かけの透過係数が負の値を示す場合のあることを確認した。5.また、ヨウ素錯体膜について、これを各種塩濃度の水溶液に浸漬して膨潤挙動を追跡したところ低濃度水溶液中で膨潤し、高濃度水溶液中で収縮することを見いだした。6.これは濃度の異なる溶液を錯体膜で隔てることによって膜の両表面に著しい非対称性が膜自身の判断によって導入される生体膜類似の現象であることを示唆しており、重畳膜では見られない現象である。
音象徴性と共感覚の解明を目指したfMRI計測研究

音象徴性に基づいて日本語オノマトペが主観的印象を表現するときの脳活動部位を同定するために、機能的磁気共鳴画像法を用いて、オノマトペの音声呈示と文字呈示による脳活動の計測を試みた。オノマトペ呈示に対して有意な反応を示す典型的な脳活動パターンを同定できたが、一般の形容詞・副詞の呈示による活動パターンとの統計的有意差が検出できなかった。このことから、個々のオノマトペは、語彙の意味空間において、一般の形容詞・副詞と同様なニッチを獲得しているため、音象徴性に基づいて作られたという事実以上の固有の性質を持たないと考えられる。日本語における音象徴性の言葉であるオノマトペを聴覚的または視覚的に呈示した場合とで、脳の活動領域を確認するために、機能的磁気共鳴画像法により4テスラの装置で計測を実施した。計測には、4人の健康な右利きの被験者を用い、ブロックデザインにより行った。オノマトペとしては、主に擬態語を呈示した。聴覚呈示では、一次聴覚野を中心とする上側頭回周辺と左前頭葉背外側部に強い反応が得られ、右脳の前部島皮質にも弱いながら有意な反応が現れることがあった。反転オノマトペ呈示と比較すると左前頭葉の内側部と背外側部、および小脳内側部に有意差が見られた。こうした反応には、男性話者と女性話者による有意差は見られなかった。視覚呈示では、一次視覚野および舌状回に強い反応が見られた他、左脳の角回、縁上回、上側頭回、前頭葉背外側部、ブローカ野周辺に有意な反応が見られた。特に、舌状回は文字の認識に関係するという先行研究と整合すると同時に、ブローカ野の活動はオノマトペの受動的な認識における内言の関与が示唆される。全体として、視覚による文字呈示では、左脳に有意な反応が見られた。今年度は、ブロックデザインを用いて受動的にオノマトペを呈示することによって、どの脳領域に着目すべきかを確認することができたので、次年度に実施予定のevent-related paradigmを用いた個々のオノマトペに対する反応領域の相違を調べるための準備が整ったと考える。平成26年度より、日本語オノマトペに対する主観的印象パターンと音象徴を表現する脳活動を機能的磁気共鳴画像法による計測を試みてきた。その結果、オノマトペの音声呈示および文字による視覚呈示により有意に活動する領域が、古典的言語野以外にも分散して存在する一方、音声呈示と文字による視覚呈示によって共通に活動する領域の存在が確認できた。しかしながら、当初の課題を遂行する上で、いくつかの問題があることも判明した。まず一つに、脳の解剖学的形状のみならず活動パターンには大きな個人差が見られること、もう一つには、個々のオノマトペを構成する音韻による活動パターンを検出できるほど計測された信号のS/Nが良くないことが判明した。この2点から、オノマトペを言語たらしめている音象徴のメカニズムに迫るには、現行の実験手法では困難であることが結論された。そこで、平成26年度の後半からは、性格特性語としての通常の形容語とオノマトペを刺激として文字呈示し、その性格特性語が自分または特定の他人に当てはまるか否かを問うという課題を用いて、オノマトペの意味的な相違と活動領域との関係を調べることにした。この課題では、10名の成人男女(男子6名、女子4名)を被験者として、1回または2回の計測を実施した。やはり、活動の有意性については大きなばらつきがあるものの、基本的なパターンには共通性が見られた。まだ、完全な解析が終了していないので確定的なことは言えないが、言葉に対する脳内表現には階層性があり、例えば、言葉のニュアンスは共通して活動する部位の周辺または言語野以外の異なる領域に分散して表現されている可能性が考えられる。今後は、この活動部位および活動の有意性における微妙な差異を、標準脳にマップして解析する必要があると考える。当初の計画よりもやや遅れている大きな要因として、基本的には、脳の解剖学的形状のみならず、特に活動パターンには予想以上に大きな個人差が見られたことが挙げられる。この個人差を克服して、被験者に共通する活動パターンを求めるためには、さらに多くの被験者を用いた計測が必要である。しかしながら、個人差の原因として、ある共通の課題を遂行するときの脳の活動様式、言い換えれば、情報処理の戦略が被験者ごとに異なる可能性も想定され、その場合には、いくつかの考えられる戦略にタイプ分けをする必要がある。そのため、当初の目的を達成するためには更なる計測と詳細な解析が求められる。また、音象徴のメカニズムの解明に関しては、現在の計測方法の延長ではほとんど絶望的であろうと考えている。その原因は、個々のオノマトペを構成する音韻による活動パターンを検出できるほど計測された信号のS/Nが良くないため、必要な分解能が得られないからである。この点を克服するためには、例えば角回周辺にFOVを限定することによって分解能を上げる必要があり、さらに計測のための時間が必要である。平成26年度より、日本語オノマトペに対する主観的印象と音象徴を表現する脳活動部位を同定するために、機能的磁気共鳴画像法を用いたオノマトペを呈示したときの脳活動の計測を試みてきた。健常な成人被験者に呈示する言葉として、性格特性語を用い、自分または特定の他者に当てはまるか否かを手元のボタン押しによって反応してもらいながら脳活動計測を実施した。

通常の形容詞・副詞とオノマトペの視覚呈示によって古典的言語野を含む多くの領域が分散して有意な活動を示したものの、通常語とオノマトペによる活動パターンには有意な差がまったく見られなかった。このことから、本研究の結論としては、少なくとも健常な成人を対象として調べる限りでは、日本語オノマトペは既に通常の形容詞・副詞とまったく同等な機能的意味を持っているため、脳内表象にも差が現れないことが示唆された。すなわち、オノマトペを日本語の中に言語として位置付けるときには、音韻イメージと五感との象徴変換のプロセスが関与したことが想像されるが、一度日本語の中に言葉として組み込まれてしまうと、他の通常語との違いである音象徴性を失ってしまうと考えられる。また、語彙空間における個々の言葉が担う領域を考えるとき、日本語では動詞のバリエーションが少ないため、オノマトペが動詞を修飾することによって動詞にバリエーションをもたらし、結果的にオノマトペの種類が他言語に比べて豊富になってしまったことが想定される。音象徴性に基づいて日本語オノマトペが主観的印象を表現するときの脳活動部位を同定するために、機能的磁気共鳴画像法を用いて、オノマトペの音声呈示と文字呈示による脳活動の計測を試みた。オノマトペ呈示に対して有意な反応を示す典型的な脳活動パターンを同定できたが、一般の形容詞・副詞の呈示による活動パターンとの統計的有意差が検出できなかった。このことから、個々のオノマトペは、語彙の意味空間において、一般の形容詞・副詞と同様なニッチを獲得しているため、音象徴性に基づいて作られたという事実以上の固有の性質を持たないと考えられる。当初、生理学研究所と理化学研究所脳科学総合研究センターのMRI装置を用いて、同時進行で研究を進める予定であったが、生理学研究所での計測を分担していた研究者が計測を実施できなかったことが、研究が遅れた最大の理由である。また、被験者として電気通信大学の学生を想定していたが、授業と就職活動等により当初予定していたほど被験者へのリクルートが容易ではなかったため、十分なデータを収集できなかった。まず、音象徴のメカニズムを詳細に調べるためには、これまで実施してきたような全脳を対象とする計測では不可能であろうと考えられる。また、平成27年度の計測によって得られた仮説である「言葉に対する脳内表現には階層性があり、主観的印象の差異は共通して活動する部位の周辺または言語野以外の異なる領域に分散して表現されている」を実証するためには、これまで通りの全脳を対象とする計測が必要である。残り1年での研究期間を考えるとき、後者の研究計画を推し進めることが、安全な方策せあると考えられる。その際、脳の形状の個人差に起因する活動パターンのばらつきを解消することが最低限求められる。そこで、これまで計測した被験者の中で最も解剖画像にゆがみの少ない脳を標準脳とし、脳活動パターンの類似性・相違性を統計的に分類して、オノマトペによる主観的印象の脳内表象に迫る予定である。理論神経科学当該年度は、16個のオノマトペを一つの群として、反転オノマトペやレストとの活動度の比較を実施したが、次年度は、オノマトペを音韻的または意味的にいくつかの群に分け、event-related paradigmでの計測を計画している。また、生理学研究所でのMRI計測を分担していた研究者を本研究から外し、新たに学内の別の研究者に分担者となっていただき、理化学研究所での計測に専念することとした。
マウス2細胞期胚に発現する遺伝子の研究

マウスの2細胞期は受精後初めて胚由来の遺伝子の活性化(zygotic induction)が認められ,その後の発生の進行に関わるさまざまな遺伝子が活動としていると思われるが,明かにされたものはほとんどない.本研究はいかなる遺伝子がこの時期に発現し,どのような特徴的な構造と働きを持っているかを解明することを目的として,2つの角度からアプローチした.1.マウス初期胚で高率に発現されている反復配列B1(130bp)を含むcDNAクローンの解析.約100個の塩基配列決定から(1)2細胞期に発現する特異的なB1配列はない.(2)mRNA上の方向性に法則性はない.(3)多くはmRNAの非翻訳領域に存在する.ことが明かとなった.また結果的に典型的なB1反復配列はなかたが,染色体上のヘテロクロマチン領域の遺伝子発現調節に関わると思われる遺伝子M32(およびM31)と2細胞期のcDNA,2B1-30のホモログとして成体マウスの精巣特異的に発現するtsec-1,tsec-2遺伝子について,そのcDNA構造と発現パターンを詳細に明かにした.2.2細胞期に高い発現を示す未知遺伝子SSEC-D(Stage-Specific Embryonic Clone-D)の解析.(1)実験用マウスでは遺伝子座は2つ(一つは偽遺伝子座),少なくとも3つのエキソンからなり,げっ歯類,霊長類で特によく保存されている遺伝子である事を解明した.(2)900ntdsのRNAの発現は成体マウスのすべての組織で強く,このRNA長がおそらくは3'へのpolyAの付加により,受精後15時間前後で一過性に約400ntds大きくなる事を発見した.この遺伝子は2細胞期の遺伝子発現調節のマーカー遺伝子として極めて注目できると共に,調節そのものに関わる可能性を期待させる.今後,以上の仕事を手がかりとしてさらにもう少し系統的な解析を発展させたい.マウスの2細胞期は受精後初めて胚由来の遺伝子の活性化(zygotic induction)が認められ,その後の発生の進行に関わるさまざまな遺伝子が活動としていると思われるが,明かにされたものはほとんどない.本研究はいかなる遺伝子がこの時期に発現し,どのような特徴的な構造と働きを持っているかを解明することを目的として,2つの角度からアプローチした.1.マウス初期胚で高率に発現されている反復配列B1(130bp)を含むcDNAクローンの解析.約100個の塩基配列決定から(1)2細胞期に発現する特異的なB1配列はない.(2)mRNA上の方向性に法則性はない.(3)多くはmRNAの非翻訳領域に存在する.ことが明かとなった.また結果的に典型的なB1反復配列はなかたが,染色体上のヘテロクロマチン領域の遺伝子発現調節に関わると思われる遺伝子M32(およびM31)と2細胞期のcDNA,2B1-30のホモログとして成体マウスの精巣特異的に発現するtsec-1,tsec-2遺伝子について,そのcDNA構造と発現パターンを詳細に明かにした.2.2細胞期に高い発現を示す未知遺伝子SSEC-D(Stage-Specific Embryonic Clone-D)の解析.(1)実験用マウスでは遺伝子座は2つ(一つは偽遺伝子座),少なくとも3つのエキソンからなり,げっ歯類,霊長類で特によく保存されている遺伝子である事を解明した.(2)900ntdsのRNAの発現は成体マウスのすべての組織で強く,このRNA長がおそらくは3'へのpolyAの付加により,受精後15時間前後で一過性に約400ntds大きくなる事を発見した.この遺伝子は2細胞期の遺伝子発現調節のマーカー遺伝子として極めて注目できると共に,調節そのものに関わる可能性を期待させる.今後,以上の仕事を手がかりとしてさらにもう少し系統的な解析を発展させたい.ほぼ計画に従って、平成7年度の研究は進められた.1.マウス2細胞期のcDNAライブラリーに多量に含まれる,散在性反復配列B1を持つクローンについてその構造的な特徴を解析した.まだ数十クローンの解析結果からではあるが,2細胞期に発現する特に特異的なB1配列はなさそうなこと,またmRNA上の方向性に法則性はないこと,多くはmRNAの非翻訳領域に存在するらしいこと等が判明した.またホモロジー解析の結果から,染色体構造と遺伝子発現に関係があると期待されるヘテロクロマチン修飾タンパク質遺伝子hmp2,あるいは初期発生に深く関わっていると思われるtctex-1, eng-1に相同な配列を持つcDNAが単離されている.2.マウス2細胞期のサブトラクションライブラリーから単離されたSSEC-Dクローンについて解析を進めた.当初,約400bpの短いcDNAクローンしか単離されていなかったが,再度2細胞期のcDNAライブラリーをスクリーニングすることにより,最長600bpの複数のクローンを得た.約900ntdsのRNAの発現は調べる限り成体マウスのすべての組織で強く,ハウスキーピング遺伝子の一つではないかと思われる.成体脳のcDNAライブラリーからも同じ配列を持つcDNAを単離したが,いずれも全長のcDNAが得られないことから5'RACE法を試みたが,強固な二次構造を形成し得る塩基配列を持っている為か,まだ全長cDNAは得られない.またcDNA上にcytoplasmicpolyadenylation elementが見いだされた.

この遺伝子は2つの遺伝子座を持つらしいこと,また種を越えて,げっ菌類,霊長類で特に良く保存されているらしいことが判明した.5個の遺伝子クローンも単離し,これらが構造から2つのグループに分けられ,一方は偽遺伝子であることを明かに出来た.成果は目下投稿準備中である.平成8年度は,ほぼ計画に従って研究が実施された.マウスの初期胚では2細胞期に発現の高いクローンとして単離されたSSEC-D cDNAは,その内部に強力な2次構造を取り得る配列が存在し,昨年度以来その全長cDNAの取得に苦労してきた.以前の2細胞期のcDNAライブラリーから単離した26個のクローンはいずれも短く,また5'RACEもうまく行かなかったが,今回新規の2細胞期cDNAライブラリーよりほぼmRNAの全長(約900bp)に相当すると思われるクローンを単離できた.以前から予想翻訳領域の下流に細胞質でpolyA配列を付加するのに必要とされるcytoplasmic polyadenylation element様の配列を見いだしていたが,面白いことに初期胚の各時期のRNAに対してRNAblot解析を行ったところ,このmRNAは受精後10時間から15時間前後にそのmRNAが伸長することが判明した.翻訳調節との関連が極めて興味深いが,まずはこの伸長がpolyAの付加によるものかどうかを検討している.成体マウスでは種々の組織で伸長型のmRNAが産生されていることから,初期胚と成体マウスでの発現の機能的差異が想定できる.抗体等の作製も同時に進行中であるが,遺伝子クローンの解析では少なくとも3個のエキソンを同定した.B1配列含有クローンについてもその塩基配列決定を進め,2細胞期に発現するB1配列に特に構造的な特徴はないものと判断した.また明解なB1配列はないものの,クロマチン構造を修飾するタンパク質MOD2のcDNAについてはその全一次構造を決定し,また遺伝子クローンの単離から,これらが偽遺伝子を含む多くの遺伝子群を形成することを見いだした.同様の解析を他のいくつかの遺伝子についても進めている.平成9年度もほぼ計画にしたがって研究が実施され,3年間のまとめを行った.1.B1配列含有cDNAクローンの構造解析と発現解析.未決定のマウス2細胞期cDNA各クローンの塩基配列決定を行い,DNAデータベースの既知配列と比較を行った.その結果,未知の遺伝子が数多く発現していることが明らかになると共に,海外の研究者達が最近登録した1万クローンを越えるマウス2細胞期cDNAとホモロジーを示すものが多数有り,双方の解析の正確さを確認し合うことができた.また結果的に典型的なB1反復配列はなかったが,染色体上のヘテロクロマチン領域に存在する遺伝子の発現調節に関わると思われる遺伝子M32(およびM31)と2細胞期のcDNA2B1-30のホモログとして成体マウスの精巣特異的に発現するtsec-1,tsec-2遺伝子についてそのcDNA構造と発現パターンを詳細に明かにし,成果をまとめる事ができた.2.2細胞期に有意に高い発現を示すSSEC-D遺伝子の解析.(1)初期胚における時期特異的な発現については,計画段階のRT-PCRに加え,検出感度の改良を行った結果,30個程度の受精卵の全RNAを用いてNorthern Blottingが実施できるようになった.
小線源治療併用外部放射線治療の線量分布を生物学的に最適化する手法の開発

小線源治療の物理線量を生物学的等価線量に変換し直腸のgEUD(generalized Equivalent Uniform Doses)を計算した。その結果、gEUDが増加するほどGrade2直腸出血の頻度が高くなることがわかった。また多変量解析において、gEUDがGrade2直腸出血の有意なリスク因子であることが示された。小線源治療併用外部放射線治療において重篤な合併症を経験することがあり、小線源治療と外照射でそれぞれ個別に治療計画を作成・評価し治療を実施していることが一因と考えられる。小線源治療で得られる線量分布を放射線生物学的に再計算して外照射の線量制約に加え、両者を統合した最良の治療計画を作成する手法を開発することが本研究の目的である。平成25年度は、第一段階として、小線源治療で得られる線量分布が外照射と生物学的に等価になるように変換する手法の構築を目指した。これまでの研究成果(前立腺癌における外照射およびシード治療の線量分布のデータ)を活用し、小線源治療の物理線量(Physical doses)を生物学的等価線量(Equivalent doses)に変換し直腸のgEUD(generalized equivalent uniform dose)を計算したところ、gEUDが増加するほどGrade2直腸出血の頻度が高くなることがわかった。本研究成果は、Int J Radiat Oncol Biol Physics 2013;87(1):182-187や平成25年度の米国放射線腫瘍学会および国内学会において発表済みである。小線源治療および外照射の等価線量に基づき両者を合算して算出する手法が臨床的意義を示した点で、画期的な成果であるといえる。これまでの研究成果(前立腺癌における外照射およびシード治療の線量分布のデータ)を活用し、小線源治療の物理線量を生物学的線量に変換し直腸のgEUD(generalized equivalent uniform dose)を計算したところ、gEUDが増加するほどGrade2直腸出血の頻度が高くなることがわかった。このように、小線源治療および外照射の等価線量に基づき両者を合算して算出する手法が臨床的意義を示したことを踏まえ、平成26年度は、小線源治療と外照射を統合したNTCP(Normal Tissue Complication Probability)の算出に着手した。NTCPの算出および算出に必要なパラメータに関しては結果が得られており、現在、平成27年度の米国放射線腫瘍学会に抄録を提出中である。このように、小線源治療および外照射の等価線量に基づき両者を合算して算出する手法が臨床的意義を示したことを踏まえ、平成26年度より小線源治療と外照射を統合したNTCP(Normal Tissue Complication Probability)の算出に着手した。NTCPを用いることで、外照射や小線源治療を含む様々な放射線治療モダリティ間で有害事象の発生確率が客観的に比較可能となる。平成27年度の米国放射線腫瘍学会にて小線源治療と外照射を合算したNTCPを提案し、算出に必要なパラメータも併せて発表した。現在、学会発表した内容に関して論文投稿中である。小線源治療と外照射を統合したNTCPに関して、平成26年度中の発表を目指していたが、平成27年度にずれ込んだため。