hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
開口反射誘発部位の看護形態学的特徴-エビデンスに基づいた機能訓練法確立のために-

成果として,「開口反射誘発法としてのK-point刺激法のエビデンス」が把握出来た。開口障害のある患者にとって、開口運動を繰り返すことは,筋力の回復という面だけでなく,口腔内の衛生ケアにとっても利点となる。また, K-point刺激による開口反射の後には,咀嚼用運動と嚥下が引き続いて起こる。このK-point刺激法を効果的に行えば,仮性球麻痺患者の摂食・嚥下機能の回復につなげることができる。本研究の目的は「開口反射誘発法としてのK-point刺激法の形態学的根拠を明らかにする」ことにより,「エビデンスに基づいた摂食・嚥下訓練法」のための基礎的資料を得ることである。この目的に従い今年度は,口腔粘膜上皮の形態を光学顕微鏡・走査電子顕微鏡を用いて検索した。まず,既存資料で立てた仮説の検証と例数の増加を図るため,新規標本を蓄積した。記録作業としては,血管や神経起始部の位置・本数・痕跡枝の有無の確認,剖出図描画,写真撮影を行った。併せて,既存標本全体の再検査も行った。また,並行して,保管しているニホンザルの標本を用いて筋群,神経を剖出し,実体顕微鏡により支配神経の走行や栄養血管の分布状態,周囲組織との関係を観察した。次に,各筋群の固定をおこない試料を作成した。神経と血管との関係を明らかにするために,既存,新規を併せた摘出標本の動脈に,着色樹脂(酢酸ビニルが主)を注入した。頭側を結紮して,動脈の太さに応じた注射針(最細33G)を使って手圧で注入を行い,血栓等で滞る場合は,遠位に注射針を刺入する作業を繰り返した。標本の固定状態や血管壁の脆さによっては,着色ゼラチン溶液やラテックスゴムの方が良好な結果が得られた。この動脈注入によって,静脈やリンパ管との区別がつきやすくなった。おわりに,神経と剖出した動脈,周囲の静脈を含む軟組織との関係を詳細に解剖図として記録した。これにより進入部位,位置関係,直腸周辺での動脈,他の動脈との吻合関係など,従来とは異なる視点で観察にあたることが出来るようになった。動脈剖出の過程で随時写真撮影をし,最終的な立体モデル作製の補正資料とした。舌神経の走行する側頭下窩には,外側翼突筋と内側翼突筋がある。外側翼突筋は,蝶形骨の大翼下面から起こる上頭と蝶形骨の翼状突起外側板の外側面より起こる下頭との2頭を有し,これら2頭は後方に向かい走行するうちにたがいに合流して下顎骨頚の前面および顎関節円板に停止していた。外側翼突筋は,下顎神経前枝からの枝による神経支配を受けていた。内側翼突筋も,上顎結節より起こる浅頭と蝶形骨の翼状突起外側板の内側面より起こる深頭の2頭を有するが,これらをなす筋線維群は下後外側方に向かい走行して下顎角の内側面に停止していた。内側翼突筋は,下顎神経本幹からの枝による神経支配を受けていた。三叉神経の第3枝である下顎神経本幹は,内側に位置する口蓋帆張筋と外側に位置する外側翼突筋との間を下行しながら前枝と後枝とに分かれていた。下顎神経後枝からの枝は,耳介側頭神経と舌神経が出ていた。舌神経は,外側翼突筋の内側面,次いで内側翼突筋の外側面に沿って下行して,その後,上咽頭収縮筋下縁の高さで前内側方へと向きを変えていた。顎下部に達した舌神経は舌骨舌筋の外側面に沿い,前方に走行していた。舌神経は側頭下窩において下顎神経からの1分枝として分かれ,上咽頭収縮筋下縁に沿って茎突舌筋と下顎第3大臼歯の間の部位を前内側方に走行していた。その後,顎下腺の深層部分の上方を舌骨舌筋の外側面に沿って前方に進んでいた。舌骨舌筋の前縁に達した舌神経はいったん下行して顎下腺管の外側を通りながらこれを横切り,次に再び上前方に進み,顎下腺管の内側に位置を占めていた。本研究目的は、「エビデンスに基づいた摂食・嚥下訓練法」のための基礎的資料を得ることであった。この目的に従って,口腔粘膜上皮の形態を光学顕微鏡・走査電子顕微鏡を用いて検索した。

併せて,概存標本全体の再検査も行った。また,並行して,保管している標本を用いて筋群,神経を剖出し,実体顕微鏡により支配神経の走行や栄養血管の分布状態,周囲組織との関係を観察した。次に,各筋群の固定をおこない試料を作成した。神経と血管との関係を明らかにするために,既存,新規を併せた摘出標本の動脈に,着色樹脂を注入し、頭側を結紮して,動脈の太さに応じた注射針を使って手圧で注入を行い,血栓等で滞る場合は,遠位に注射針を刺入する作業を繰り返した。標本の固定状態や血管壁の脆さによっては,着色ゼラチン溶液やラテックスゴムの方が良好な結果が得られた。この動脈注入によって,静脈やリンパ管との区別がつきやすくなった。最終的に,神経と剖出した動脈,周囲の静脈を含む軟組織との関係を詳細に解剖図として記録した。これにより進入部位,位置関係,直腸周辺での動脈,他の動脈との吻合関係など,従来とは異なる視点で観察にあたることが出来るようになった。これらの結果より、「開口反射誘発法としてのK-point刺激法のエビデンス」が大まかに把握出来た。開口運動を繰り返せば,筋力の回復という面だけでなく,P腔内の衛生ケアにとっても利点となる。また,K-point刺激による開口反射の後には,咀嚼用運動と嚥下が引き続いて起こるという。このK-point刺激法を効果的に行えば,仮性球麻痺患者の摂食・嚥下機能の回復につなげることが大いに期待できる。
新規光感受性イオンチャネルの創製による細胞機能の光制御

本研究では、イオン環境が鍵となる生命現象の基盤の解明のために、非侵襲な光で活性が制御される光感受性イオンチャネルを創製し、細胞機能を操作する系を確立することを目的とした。[最終年度に実施した研究の成果]1.候補となる青色光感受性キメラチャネル変異体を大腸菌で発現・精製し、脂質平面膜法により電気生理学的に活性を調べた。その結果、これまでに酵母を用いた増殖能実験で常に高い活性を示していた変異体は、青色光照射の有無にかかわらず常に高い開確率を示すことがわかった。増殖能実験で光感受性を示した変異体は、今回検討した光照射条件では光依存的なチャネル電流の変化は見られなかった。青色光の強度や照射時間などを検討する必要がある。2. HEK細胞に候補となる光感受性イオンチャネル変異体を発現させ、光照射に依存したイオン環境の変化を捉えるための系を立ち上げた。変異体遺伝子をHEK細胞へリポフェクション法で導入し、変異体の発現をタグとして付加した蛍光タンパク質の蛍光で確認した。また、パッチクランプ法によりHEK細胞のイオン電流を測定することができた。[研究期間全体を通じて実施した研究の成果]様々な長さのKcsAチャネルに、光感受性ドメイン(LOV)または様々な長さの光感受性蛋白質(PAC)を付加した変異体の遺伝子ライブラリーを約100種類作製した。これらをK+輸送欠損大腸菌を用いて光刺激の有無でK+輸送能が異なる変異体をスクリーニングし、最終的に青色光照射下で増殖能が高い変異体が6種類得られた。そのうちの1種類の詳細な活性を電気生理学的手法で調べたが、検討した光強度・照射時間では光依存的な活性の変化は見られなかった。また、細胞の活性の光制御のため、作製した変異体をHEK細胞に導入し、パッチクランプ法により活性を測定する系を確立した。本研究では、光刺激で活性が制御される光感受性イオンチャネルを作製し、非侵襲な光で細胞機能を操作する系を確立することを目的としている。この系の確立により、光で細胞内のイオン環境を操作することが可能になり、イオン環境が鍵となる生命現象の基盤の解明が促進されることが期待される。本年度は、光感受性イオンチャネルの創製のため、以前我々が解明したK+チャネル(KcsA)の活性制御機構の知見を利用し、光刺激で構造変化する光感受性ドメインや蛋白質を用いて、光刺激でKcsAチャネルの活性が変化する変異体を作製することを目標とした。詳細を以下に示す。1、KcsAチャネルの細胞内領域による活性制御において最も重要なアミノ酸E146の荷電状態を光刺激で制御するため、E146付近に光感受性ドメイン(LOV)を付加した変異体を3つ作製した。これらの変異体の活性測定により、KcsAチャネルのE146付近の5アミノ酸残基の有無で活性が異なることがわかった。2、様々な長さのKcsAチャネルに、光感受性ドメイン(LOV)または様々な長さの光感受性蛋白質(PAC)を付加した変異体のコンストラクトを約70種類作製した。これらをK+輸送欠損大腸菌に形質転換し、光刺激の有無で増殖能が異なる、すなわちK+輸送能が異なる変異体をスクリーニングした。その結果、暗所で増殖が高い変異体が15個得られた。また、約3分の2の変異体が野生型KcsAチャネルとは異なる増殖能を示した。今後はこれらの情報を基に、光刺激で活性を示すイオンチャネルの作製に向け、キメラ変異体の再設計を行う。本年度実施した研究により、KcsAチャネルに光感受能を付与するのに重要な部位を絞り込むことができた。得られた情報を基に、さらにキメラ変異体の再設計を行うことで、光照射時のみ活性を示すチャネルを創製できると考えられる。本年度は、光感受性チャネル作製の基盤となるK+チャネル(KcsA)の構造機能相関を解明することと、KcsAチャネルと光感受性蛋白質のキメラ変異体群から光感受能を持つ変異体を選び出すことを目標とした。詳細を以下に示す。1、KcsAチャネルの細胞内領域の構造状態を改変した変異体の活性測定により、構造状態の違いがイオン選択性に影響を与えることを明らかにした。この結果より、KcsAチャネルの細胞内領域に光感受性蛋白質を付加した場合にはイオン選択性が変化してしまう可能性が高いことが示唆された。2、昨年度行ったKcsAチャネルと光感受性蛋白質のキメラ変異体群のスクリーニングの結果から得られた情報をもとに、変異体のコンストラクトを再設計し、約40種類の変異体を作製した。これらをK+輸送欠損酵母に形質転換し、光刺激の有無で増殖能が異なる、すなわちK+輸送能が異なる変異体をスクリーニングした。その結果、青色光照射下で増殖能が高い変異体が6種類、暗所で増殖能が高い変異体が7個得られた。今後は増殖能試験で光感受能を示した変異体の光感受能についてさらに詳細に調べるとともに、変異体の光感受能を高めるために改変を行う。本年度実施した研究により、光感受能をもつ変異体チャネルを選び出すことができた。

得られた変異体を改変することにより、高い光感受能をもち、様々なイオン選択性を持つ光感受性チャネルを創成できると考えられる。本研究では、イオン環境が鍵となる生命現象の基盤の解明のために、非侵襲な光で活性が制御される光感受性イオンチャネルを創製し、細胞機能を操作する系を確立することを目的としている。本年度は、光感受性チャネルを構成するK+チャネル(KcsA)の活性制御機の解明と、昨年度スクリーニング実験により選び出した光感受性チャネル候補変異体の特性を調べた。以下に詳細を示す。1.KcsAチャネルの細胞内領域の数個のアミノ酸の荷電状態が変化した変異体は不活性化が起こらないことから、細胞内領域は不活性化に関わる活性制御に重要な影響を与えていることがわかった。光感受性チャネル作製の際は、KcsAチャネルの細胞内領域の状態を光で変化させればチャネルの開・閉状態を制御できると考えられる2.昨年度得られたKcsAチャネルと光感受性蛋白質から成る光感受性チャネル候補変異体のうち、KcsAチャネル全長と光感受性蛋白質PACの光感受性ドメインであるBLUFドメインから成る変異体は、野生型と比べて常に高いチャネル活性を示した。BLUFやKcsAの長さがそれぞれ数10アミノ酸短い変異体は高い活性を示さなかったことから、これらの削った部位での相互作用が活性に影響していると考えられる。また、スクリーニング(増殖能測定)の結果から光照射時より暗所で活性が高いと考えられていた変異体は、実際はチャネル活性に影響はなく、PACの活性(cAMP産性能)の光感受性が増殖能に強く反映されていたことがわかった。本年度の研究により、光感受性チャネルとなりうる候補のキメラ変異体を絞れ、さらにその変異体の活性制御に関わる知見が得られた。このキメラ変異体の改変により、目的のイオンチャネルが創製できると考えられる。本研究では、イオン環境が鍵となる生命現象の基盤の解明のために、非侵襲な光で活性が制御される光感受性イオンチャネルを創製し、細胞機能を操作する系を確立することを目的とした。[最終年度に実施した研究の成果]1.候補となる青色光感受性キメラチャネル変異体を大腸菌で発現・精製し、脂質平面膜法により電気生理学的に活性を調べた。その結果、これまでに酵母を用いた増殖能実験で常に高い活性を示していた変異体は、青色光照射の有無にかかわらず常に高い開確率を示すことがわかった。増殖能実験で光感受性を示した変異体は、今回検討した光照射条件では光依存的なチャネル電流の変化は見られなかった。青色光の強度や照射時間などを検討する必要がある。2. HEK細胞に候補となる光感受性イオンチャネル変異体を発現させ、光照射に依存したイオン環境の変化を捉えるための系を立ち上げた。変異体遺伝子をHEK細胞へリポフェクション法で導入し、変異体の発現をタグとして付加した蛍光タンパク質の蛍光で確認した。また、パッチクランプ法によりHEK細胞のイオン電流を測定することができた。[研究期間全体を通じて実施した研究の成果]様々な長さのKcsAチャネルに、光感受性ドメイン(LOV)または様々な長さの光感受性蛋白質(PAC)を付加した変異体の遺伝子ライブラリーを約100種類作製した。これらをK+輸送欠損大腸菌を用いて光刺激の有無でK+輸送能が異なる変異体をスクリーニングし、最終的に青色光照射下で増殖能が高い変異体が6種類得られた。
がん糖鎖による低酸素環境下でのがん細胞の利己的転移戦略の解明

がんの進展に伴って生じる低酸素環境へのがん細胞の応答は浸潤・転移、血管新生等に深く関与しているが、その詳細な分子機構や意義は十分には解明されていない。これまで申請者らは腫瘍内低酸素環境により誘導されたシアリルTn糖鎖(sTn)抗原が、インテグリンシグナルを介したがん細胞の浸潤亢進及び、周辺細胞を使役することにより転移を促進させる機能分子であることを明らかにしてきた。本研究ではさらにsTn抗原によるインテグリン活性化機構及び、sTn抗原含有エクソソームによるがん細胞の増殖・浸潤制御機構に着目し、sTn抗原を介した低酸素環境がん細胞の利己的転移戦略の解明を目的とした研究を推進している。本年度は、sTn抗原発現におけるインテグリンシグナル増強の原因であったインテグリンタンパク質の寿命延長の仕組みの解明を目的として、インテグリンタンパク質上のsTn抗原修飾部位を解析に供するための組み換えインテグリン発現系を構築し精製することに成功した。また、sTn抗原発現細胞が獲得するアポトーシス抵抗性獲得のメカニズムを解明するため、sTn抗原発現細胞において発現誘導される抗酸化酵素の誘導メカニズムを転写制御の観点から解析した。さらに、sTn抗原発現がん細胞でのエクソソーム産生亢進メカニズムを解析するため、その産生制御メカニズムの解析を行った。加えて、sTn抗原発現エクソソームを受容した細胞の形質変化の原因がsTn抗原に起因するものであるのかを検証した。sTn抗原発現細胞においてインテグリンシグナルが増強されるメカニズムを解析したところ、sTn抗原発現細胞では、インテグリンmRNAの発現上昇を伴わずに、タンパク質レベルが上昇していることが判明した。この結果は、インテグリンタンパク質量がposttranslationalの制御を受けていることを意味していた。実際、細胞表面のインテグリン分子の減衰速度を解析した結果、sTn抗原発現細胞では、インテグリンタンパク質の半減期が約3倍に延長しており、その分子寿命延長のためタンパク質が増加していることが判明した。このインテグリン分子寿命の延長メカニズムを解明するため、C末の膜貫通領域及び細胞質領域を欠失し、Hisタグに置換した組み替えインテグリン発現プラスミドを構築し、sTn抗原発現細胞において発現させた。その結果、培養上清中にsTn抗原修飾を受けたインテグリンタンパク質を得た。腫瘍組織では、sTn抗原発現細胞領域において、酸化ストレスレベルが低いことが見出され、それに符合してアポトーシス細胞も殆ど観察されなかった。これと一致して、sTn抗原発現細胞では、スーパーオキサイドの消去酵素であるSOD2が高度に誘導されていることを見出し、さらに、sTn抗原発現細胞では虚血再灌流負荷によるスーパーオキサイド産生レベルの抑制とアポトーシスの抑制が観察された。この発現誘導メカニズムの解析から、NF-κBがイントロン1のシスエレメントに結合することで転写活性が上昇することが判明した。これまでの解析から、sTn抗原発現細胞が産生するエクソソームの方が、より高度に取り込まれることが判明し、これが、エクソソーム受容細胞の増殖抑制や運動能低下に大きく寄与していると考えられた。この現象は、sTn抗原発現がん細胞におけるエクソソームの産生量の増加が原因の一端であることを見出した。細胞表面におけるsTn抗原発現インテグリンタンパク質の安定化のメカニズムとして、細胞表面にcisでsTn抗原を認識・結合する分子が発現していることが考えられる。そこで、次年度からはsTn抗原発現インテグリン分子と相互作用する分子をEMARS法により探索し、分子メカニズムの解明に取り組む。sTn抗原発現細胞におけるNF-κBを介したSOD2の発現誘導のメカニズムを明らかにするため、sTn抗原発現細胞におけるNF-κBの上流シグナル伝達系を解析し、sTn抗原発現とシグナル活性化との相関関係を明らかにしていく。sTn抗原発現細胞で亢進しているエクソソーム産生メカニズムの詳細を解明するため、その鍵となるTSAP6の発現制御メカニズムに焦点を当て、解析を進めていく。これら解析結果を総合的に解釈し、sTn抗原発現がん細胞の利己的転移・生存戦略の解明に取り組んでいく。本研究初年度はsTn抗原発現細胞においてインテグリンシグナルの増強のメカニズム解析から、インテグリンmRNAの発現上昇を伴わないタンパク質レベルの上昇が観察された。その原因が、細胞表面におけるインテグリンタンパク質の安定化によるタンパク質の増加に起因することを明らかにした。加えて、腫瘍組織においてsTn抗原発現細胞はアポトーシス抵抗性を示すことを見出し、その原因がsTn抗原発現による抗酸化酵素の誘導であることを示す知見を得た。

さらに、sTn抗原発現細胞では、非発現細胞と比較してエクソソーム産生レベルの増加や産生エクソソームの取り込み量が増加することによる情報伝達が促進していることを示す知見を得た。今後、そのメカニズムの解析を進めていく予定である。sTn抗原発現細胞においてインテグリンシグナルが増強されるメカニズムを解析したところ、sTn抗原発現細胞では、インテグリンmRNAの発現上昇を伴わずに、タンパク質レベルが上昇していることが判明した。この結果は、インテグリンタンパク質量がposttranslationalの制御を受けていることを意味している。そこで、細胞表面タンパク質をビオチン標識し、その後細胞表面のインテグリン分子の減衰速度を解析した結果、sTn抗原発現細胞では、インテグリンタンパク質の半減期が約3倍に延長しており、その分子寿命延長のためタンパク質が増加していることが判明した。腫瘍組織では、sTn抗原発現細胞領域において、酸化ストレスレベルが低いことが見出され、それに符合してアポトーシス細胞も殆ど観察されなかった。腫瘍組織内では虚血再灌流が繰り返されていることは周知の事実であり、この結果から、低酸素環境に誘導されたsTn抗原が何らかの抗酸化酵素を誘導し、虚血再灌流への抵抗性を獲得したものと考えられた。事実、sTn抗原発現細胞では、スーパーオキサイドの消去酵素であるSOD2が高度に誘導されていることを見出し、さらに、sTn抗原発現細胞では虚血再灌流負荷によるスーパーオキサイド産生レベルの抑制とアポトーシスの抑制が観察された。sTn抗原発現細胞と非発現細胞が産生するエクソソームを精製し、蛍光標識し、その後培養細胞への取り込み量を顕微鏡観察により解析した。その結果、sTn抗原発現細胞が産生するエクソソームの方が、より高度に取り込まれることが判明し、これが、エクソソーム受容細胞の増殖抑制や運動能低下に大きく寄与していると考えられた。がんの進展に伴って生じる低酸素環境へのがん細胞の応答は浸潤・転移、血管新生等に深く関与しているが、その詳細な分子機構や意義は十分には解明されていない。これまで申請者らは腫瘍内低酸素環境により誘導されたシアリルTn糖鎖(sTn)抗原が、インテグリンシグナルを介したがん細胞の浸潤亢進及び、周辺細胞を使役することにより転移を促進させる機能分子であることを明らかにしてきた。本研究ではさらにsTn抗原によるインテグリン活性化機構及び、sTn抗原含有エクソソームによるがん細胞の増殖・浸潤制御機構に着目し、sTn抗原を介した低酸素環境がん細胞の利己的転移戦略の解明を目的とした研究を推進している。本年度は、sTn抗原発現におけるインテグリンシグナル増強の原因であったインテグリンタンパク質の寿命延長の仕組みの解明を目的として、インテグリンタンパク質上のsTn抗原修飾部位を解析に供するための組み換えインテグリン発現系を構築し精製することに成功した。また、sTn抗原発現細胞が獲得するアポトーシス抵抗性獲得のメカニズムを解明するため、sTn抗原発現細胞において発現誘導される抗酸化酵素の誘導メカニズムを転写制御の観点から解析した。さらに、sTn抗原発現がん細胞でのエクソソーム産生亢進メカニズムを解析するため、その産生制御メカニズムの解析を行った。加えて、sTn抗原発現エクソソームを受容した細胞の形質変化の原因がsTn抗原に起因するものであるのかを検証した。
実船に適用可能な船側相対水位の同時多点計測システムの開発

船体や海洋構造物まわりの水位分布の計測はそれらの状態を把握するためのモニタリングの重要項目の一つである。船体や海洋構造物まわりの水位変化を実時間で同時に計測するために、浮体表面にセンサ電極列を貼付した電気抵抗水位計測法を着想した。しかしながら電気抵抗法は雑音や電気的特性から計測距離が長くなる場合不利であった。そこで長距離の計測に向いた時間領域反射法(TDR)と組み合わせて相互補完を試みる。先ずTDRによる水位計測が可能なことを確かめ、電気抵抗法と組み合わせて実物スケールに近い側面水位計測実験を実施し計測適用範囲を調べる。この計測法は水位分布波形や荷役のトリム計測など幅広い応用が期待できる。
けい園詩文派と明代文学-感性の思想史-

本研究は江戸の詩壇を風靡した荻生徂徠一門(〓園)の詩文や詩論を明代文学との比較を通して分析するものです。まず、文献調査については、今年度は明代文学を中心に中国国内、台湾、香港の数多くの大学の図書館を調査した結果、多くの貴重な資料と研究書を入手することができました。これらの文献資料は今後の研究を展開する上でも必須で重要となるものです。文献調査と並行して、荻生徂徠や太宰春台、服部南郭、山県周南など〓園一門の詩文集の読解に努めており、〓園グループの文化生活の実態を把握しようとしました。その成果の一部は論文「〓園学派と音楽」にまとめられ、『日本思想史学』第37号に発表しました。その中では、〓園社中のメンバーの音楽との関わり、演奏を詩作や飲酒とともに享受する様子を、書簡・詩文などから具体的に考察しながら、近世知識人の儒教の受容の仕方の一端を明らかにしました。〓園一門は近世の知的共同体と言ってもよいような、一つの学問的小宇宙を形成していました。しかし人間関係を始め、その実態(例えば塾での規則や集会の様子などなど)についてはまだ不明な部分が多い状況です。彼らの詩文集をもとにして、詳細な年譜を作成することは必要な作業です。現在年譜の作成が進行中で、完成次第「〓園-門年譜と人的交流系譜」という題で公表したいと考えています。また、明代古文辞家の詩文の読解・分析をより深くした上で、〓園一門の詩文との比較研究についての論考も完成させたいと考えています。今年度はまた徂徠学派を研究した上で無視することのできない「上総道学」(山崎闇斎の学統を継ぐ稲葉黙斎及びその儒学グループ)の研究にも時間を割いていました。指導教官高島元洋氏のもとで、稲葉黙斎に関する資料の収集、テキストの校正、注釈作業に加わり、その成果が近いうちに出版される予定です。本研究は江戸の詩壇を風靡した荻生徂徠一門(〓園)の詩文や詩論を明代文学との比較を通して分析するものである。今年度はその第一段階としてまず〓園社中の詩文集の調査と収集作業を行ってきた。国会図書館、鶴岡市立図書館、東北大学狩野文庫、国際日本文化研究センター、大阪大学懐徳堂、東京都内各大学の図書館などを調査した結果.多くの文献資料が入手できたが、一方資料が各地に散在しているため、調査は予想以上に手間取っていて、まだ充分ではない。調査が進むにつれ、この研究テーマが含む問題の広大な広がりも見えてきた。本研究の基盤を実証的に確実なものにするために、来年度は調査範囲を拡大して、更に調査を綿密に続行してゆくことが大変必要だと痛感している。今年度は文献調査と並行して、荻生徂徠や太宰春台らの詩文集の読解にも努めており、〓園グループのネットワークの実態を把握しようとした。また徂徠学派を研究した上で、これに拮抗していたもう一つの儒学集団として無視することのできない「上総道学」(山崎闇斎の学統を継ぐ稲葉黙斎及びその儒学グループ)の研究にも関心を持ち、その成果の一部は論文「稲葉黙斎論」にまとめ、高島元洋平成15年度文部科学省科学研究費補助金研究成果報告書『東アジアにおける儒教思想の倫理思想史の研究』に掲載されることになっている。来年度は〓園詩文集の版本・明代文学に関する書籍の収集を続行すると同時に、さらに〓園の詩文の作品の分析をし、この作業を通して江戸文学史における漢詩文の再評価という問題について考究する。本研究は江戸の詩壇を風靡した荻生徂徠一門〓園)の詩文や詩論を明代文学との比較を通して分析するものです。今年度はその二年目として、まず昨年度に引き続き、〓園社中の詩文集と明代文学の文献調査と収集作業を行ってきました。国会図書館、静嘉堂文庫、東京都内各大学の図書館、京都大学図書館、上海図書館、復旦大学図書館、南京大学図書館、蘇州大学図書館などを調査した結果、一通り文献資料を入手することができました。今年度は文献調査と並行して、荻生徂徠や太宰春台、服部南郭、山県周南など〓園一門の詩文集の読解に努めており、〓園グループの文化生活の実態を把握しようとしました。具体的に彼らの日常生活や旅行・宴会・送別会などの場面において、どのように詩文が詠まれていたのか、彼らが嗜みとした音楽生活とその思想的意味がどのように関わっているのか、その実態を明らかにしました。その成果の一部は論文「〓園学派と音楽」にまとめられ、『日本思想史学』第37号に投稿しました。また、明代文学と関連して、「孝」に関する民間文芸と儒家思想との関わりについての論文「中国民間信仰と儒家における『孝』」をお茶の水女子大学『比較日本学研究センター研究年報』創刊号(印刷中)に発表しました。来年度は若干の補充調査・収集を行うとともに、〓園の詩文の作品と明代の王世貞・李攀龍の文学作品の分析をし、この作業を通して江戸文学史における漢詩文の再評価という問題について考究したいと思います。

まず、文献調査については、今年度は明代文学を中心に中国国内、台湾、香港の数多くの大学の図書館を調査した結果、多くの貴重な資料と研究書を入手することができました。これらの文献資料は今後の研究を展開する上でも必須で重要となるものです。文献調査と並行して、荻生徂徠や太宰春台、服部南郭、山県周南など〓園一門の詩文集の読解に努めており、〓園グループの文化生活の実態を把握しようとしました。その成果の一部は論文「〓園学派と音楽」にまとめられ、『日本思想史学』第37号に発表しました。その中では、〓園社中のメンバーの音楽との関わり、演奏を詩作や飲酒とともに享受する様子を、書簡・詩文などから具体的に考察しながら、近世知識人の儒教の受容の仕方の一端を明らかにしました。〓園一門は近世の知的共同体と言ってもよいような、一つの学問的小宇宙を形成していました。しかし人間関係を始め、その実態(例えば塾での規則や集会の様子などなど)についてはまだ不明な部分が多い状況です。彼らの詩文集をもとにして、詳細な年譜を作成することは必要な作業です。現在年譜の作成が進行中で、完成次第「〓園-門年譜と人的交流系譜」という題で公表したいと考えています。また、明代古文辞家の詩文の読解・分析をより深くした上で、〓園一門の詩文との比較研究についての論考も完成させたいと考えています。今年度はまた徂徠学派を研究した上で無視することのできない「上総道学」(山崎闇斎の学統を継ぐ稲葉黙斎及びその儒学グループ)の研究にも時間を割いていました。指導教官高島元洋氏のもとで、稲葉黙斎に関する資料の収集、テキストの校正、注釈作業に加わり、その成果が近いうちに出版される予定です。
ヘルペスウイルスゲノム末端の組換えによる相同化と切断時の位置的影響

1.研究目的代表的ヘルペスウイルスである単純ヘルペスウイルス(HSV)を研究対象とし,ウイルスゲノム末端を規定する配列であるa配列の,組換えの機序を明らかにすることを目的とした。2.研究方法多数のHSV分離株から,より短いa配列を持つものを選択し,そのa配列の塩基配列を決定することで,a配列として必須な構造を明らかにした。一つのHSV株から,多数の子孫株を分離し,子孫株におけるa配列の長さの変動の様式を求め,変化したa配列の塩基配列を明らかにした。3.結果と討論a配列の基本構造が,DR1ーUbー(DR2)nーDR4tーUcーDR1であることが判明し,現在報告されている中では最も短いa配列をもつHSV株を同定し得た。子孫HSV株間でのa配列の長さの変化は、DR2のコピ-数の変化によることが,塩基配列から判明した。DR2のコピ-数の変化は,DR2領域間の組換えに主に依存し,複製時のSlippageによることは少ないことがわかった。2本鎖切断及びギャップ修復モデルは、a配列の動態を都合良く説明し得た。以上の結果は、ウイルスゲノムの組換えの機序を理解するために有用であるのはもちろんとして,広く哺乳動物細胞におけるゲノムの構築及び再編を理解するためにも多くの寄与を行うことが可能である1.研究目的代表的ヘルペスウイルスである単純ヘルペスウイルス(HSV)を研究対象とし,ウイルスゲノム末端を規定する配列であるa配列の,組換えの機序を明らかにすることを目的とした。以上の結果は、ウイルスゲノムの組換えの機序を理解するために有用であるのはもちろんとして,広く哺乳動物細胞におけるゲノムの構築及び再編を理解するためにも多くの寄与を行うことが可能である
急性冠症候群発症時における早期受診を目的とした患者教育プログラムの構築

急性冠症候群は発症から受診までの時間を短縮することで生命予後の改善が期待できる。そのため、発症から受診までの時間を短縮することは非常に重要である。先行研究では、受診までの時間に影響を及ぼす要因や時間短縮を目的とした研究は行われているが、大半は海外で行われており、社会的・文化的な背景の違う国内に当てはめることは難しい。また、発症から受診までの時間短縮を目的とした介入研究は国内では行われておらず、受診時間に影響を及ぼす要因に関する国内のエビデンスも乏しい。そのため、本研究では、急性冠症候群患者の現状を明らかにし、急性冠症候群を発症した患者の早期受診を促す患者教育プログラムの構築を目指す。
アイルランドにおけるジェイムズ・ジョイス受容と文学的伝統の変容

本研究は、アイルランドにおけるジェイムズ・ジョイスの受容とそれにまつわるアイルランドの文学の変容を考察することを目的とした。ジョイスはモダニズムの大変革者として評価されていたが、アイルランドでは異端者として無視される傾向にあった。その流れを覆したのが1993年のEU加盟であり、アイルランドもヨーロッパの趨勢を無視しえなくなってきた。アイルランドがジョイス化したと思われる。その一方、アイルランドは国家としてのアイデンティティを死守する都合もあった。こうしたバランスによって立ち、ジョイスの受容が進行し、同時にアイルランドの文学観も変貌していった。本研究はその流れを検証した。ジェイムズ・ジョイスは、生誕百年祭の1982年、アイルランドで自国の作家として承認された。以降、ジョイスはアイルランドの文学的伝統のなかに回収されることになる。ジョイスは大陸のモダニズムの運動に同調した先鋭な作品を創作したため、アイルランド人作家として受け入れられなかったが、そのアイルランドもジョイスの世界的な名声を無視しえなくなっていた。本研究の目的は、そうした自国アイルランドでのジョイス受容の動向を探り、モダニストとしてのジョイス評価、さらにジョイス受容にともなう文学的伝統の変容を具体的に検証することにある。アイルランドにおけるジョイス受容の波紋を論じる研究者は少ない。これまでモダニストとしてのジョイスの位置を測定し、さらにジョイスの文学の源泉がアイルランドにあることも論じてきたが、モダニストとして定立された世界的な作家としてのジョイスが、逆にアイルランドの文学的伝統に及ぼしている影響についての視点は欠けていた。アイルランドでのジョイス受容はその文学的伝統の構想とも関わる大きな問題である。そこで本研究は4年をめどに、アイルランドでのジョイス受容と、それにともなう文学的伝統の変容を考察するものである。そのため4期に絞りながら、その具体的な関わりを順次検証する。すなわち、11922年のアイルランド独立からジョイスが亡くなるまでの「潜伏期」、2ジョイス没後からジョイス受容が承認される1982年までの「変遷期」、3ジョイス受容の承認から北アイルランドとの和平協定が締結される2007年にいたる「開花期、42007年の和平協定締結から今日にいたる「転換期」の4期である。時代の参照枠としては社会学的なアプローチを試みるが、中心となるのはそれぞれの時代の主要な作家や作品との照合である。大陸で創作を続けていたために、アイルランドとは無縁な作家として評されていたジェイムズ・ジョイスも、アイルランド人作家として受容されることにより、アイルランドの文学的伝統にどのような変化が起こったのかを検討することが本研究の目的である。そのためアイルランドでのジョイス受容を4期に分けて、年代順に問題を析出している。すなわち、11922年のアイルランド独立からジョイスが亡くなる1941年までの「潜伏期」、2ジョイス没後からジョイス受容が承認される1982年にいたる「変遷期」、3ジョイス受容の承認から北アイルランドとの和平協定が締結される2007年にいたる「開花期」、42007年の和平協定締結から今日にいたる「転換期」の4期を念頭に入れている。平成27年度はその4期のうち、2の「変遷期」をたどることにした。この期間はアイルランドでジョイス受容が迫られた時期である。そのため、この時代のアイルランド事情を考察し、文学的には独自の一枚岩的な国民文学の構想に中心があったことを明らかにした。その一方で、世界での状況として、ヨーロッパ大陸でのジョイス研究の進展、またその研究を徹底的に追及したアメリカ合衆国のジョイス研究も検証した。同時代、イギリスではジョイスへの嫌悪が続いていたが、世界でのジョイスへの関心は、アイルランドの文学者も無視しえぬところであった。かくしてアイルランドの文学者たちは長らくジョイスと絶縁していたが、世界のジョイス研究と調整する必要に迫られた。そしてアイルランドはジョイスの作品の背景を解明する歴史的な宝庫であったため、独自のアプローチが試みられた。もちろんアイルランドのジョイス研究自体はゆるやかなものであったが、世界でのジョイスの名声が刺激となり、国民文学にジョイスを取り入れることになった。本年度はその事情を詳細に検証した。平成27年度はアイルランドの文学的伝統におけるジェイムズ・ジョイス受容をめぐり、ジョイス没後の1941年から、生誕百年祭の1982年にジョイスがアイルランド人作家として承認されるにいたる「変遷期」を対象とし、その動向を詳細に分析した。そしてそのアイルランドでの変貌の動力になったのが、世界でのジョイス研究、ならびに1973年のアイルランドのEC加盟であった。本年度はその問題を検証することができた。世界での動向としては、フランスでジョイスへの関心が高まり、また彼の文学に心酔した文学者が多かったことを挙げたい。このフランスの事情を推進したのがアメリカであった。その先鋒として、エドマンド・ウィルソンやハリー・レヴィン、さらにヒュー・ケナーやリチャード・エルマンなどによる確固とした研究が推進された。同時期にはウラジミール・ナボコフのような作家もジョイスを文学講義で扱い、ジョイス熱をあおることとなった。さらにアメリカでは文学理論に新思想を取り込み、構造主義的なアプローチなど、斬新なジョイス論を提示した。そしてアメリカは世界の先導役として、ジョイスの研究誌を刊行し、さらには国際学会も開催することになった。こうした世界のジョイス研究はアイルランド出身の作家という狭い枠を広げ、その作品の背景にあるモダニズムへの傾倒、とりわけトリエステ、チューリヒ、パリというジョイスの

移り住んだ大陸の都市と創作との関わりも論じるようになった。本年度においては、そうした都市とジョイスの関係も検討することができた。同時に、アイルランド人作家たちの動向も明らかにした。エリザベス・ボーエン,あるいはフラン・オブライエンなど、ジョイスをアイルランド人作家として哀惜した。この時代のアイルランドでは検閲の問題があったが、それでも世界のジョイス研究に励まされて、アイルランドでもジョイスの名前を公言できるようになっていた。当該年度においては、アイルランドにおけるジェイムズ・ジョイス受容と文学的伝統の変容をめぐり、1982年から2007年にいたる期間を中心に考察した。これは1982年のジョイス生誕百年祭から、1993年のアイルランドのEU加盟、さらに南北の間の和平協定が締結された2007年までの期間で、政治的にも変革期にあたる。そしてジョイスを自国の文学者として定立した、アイルランドのジョイス受容の「開花期」に相当する。そこで最初にこの間のアイルランドのジョイスに対する文学的な方位を検討した。ジョイス生誕百年祭の1982年、アイルランドはジョイスを自国の文学者として承認した。そののち1991年には、ジョイス死後50年が経過し、版権が切れた都合もあり、アイルランド人の学者の手により、注釈を付した安価なペンギン版で、ジョイスの作品集が刊行された。また1994年にはダブリン市内にジェイムズ・ジョイス・センターが開設され、ジョイスをアイルランド人作家として観光の目玉とした。そしてアイルランドは1993年にEUに加盟したこともあり、国際的な作家としてのジョイスと開かれた国家としてのアイルランドの相関関係が構築された。その一方、アイルランドは南北問題を抱え、自国の作家としてのジョイス論も無視しえぬ問題となっていた。ジョイスはモダニストの作家であり、政治とは無縁であるとされてきたが、ポストコロニアリズムの到来もあり、ジョイスの文学には政治が組み込まれていると論じられたのである。ジョイスをめぐる国際性と民族性は、1993年に発行されたジョイスの10ポンド紙幣に見事に反映している。表はゲール語、裏は多言語で書かれた『フィネガンズ・ウェイク』からの引用である。ゲール語を母語としながら、英語を使用する矛盾した国家を具現するものである。「開花期」のジョイス受容はそうした矛盾する国家の文化闘争でもあった。本研究はアイルランドにおけるジェイムズ・ジョイス受容と文学的伝統の変容をめぐり、4期に分け、順次考察を進めており、当該年度はその3期目の1982年から2007年までを対象とすることができた。そしてジョイス受容に関わる主要な文献を精査し、その背景に潜むアイルランドの文学的伝統の変容を論じた。具体的には、アメリカやヨーロッパ大陸の国々のジョイス研究の隆盛に対抗し、ジョイスを自国の作家として奪還しようとする、アイルランドの研究の起こりを跡付けることができた。
魚類ウィルス病の遺伝子診断法の開発とその応用に関する研究

各種有用魚介類の種苗生産技術が確立され、生産が軌道に乗る過程においてウイルス性の疾病が発生し大きな障害の一つとなっている。このウイルス病対策の確立が増養殖事業における緊急かつ重要な課題である。本研究では海産魚の種苗生産で問題となっているウイルス性神経壊死症(VNN)およびサケ科魚類の伝染性造血器壊死症(IHN)を対象にPCRによる遺伝子診断法の確立を試みた。得られた成果は以下のとおりである。1.シマアジのウイルス性神経壊死症原因ウイルス(SJNNV)の外被タンパク質をコードしているRNA2遺伝子の塩基配列をもとに、本ウイルス検出用RT-PCRを検討し、海産魚のウイルス性神経壊死症の遺伝子診断法を確立した。2.伝染性造血器壊死症ウイルス(IHNV)のNタンパク質をコードしているRNA遺伝子の塩基配列をもとに、本ウイルス検出用RT-PCRを検討し、本法による診断法を確立し、分離株の迅速同定への応用を可能にした。3.伝染性造血器壊死症ウイルス(IHNV)の分離に最適な細胞の選抜と、ウイルス性神経壊死症原因ウイルスに感受性を示す細胞の検索を行い、RTE-2細胞およびSBK-2細胞を選抜し得た。4.本PCRを用いた採卵親魚の生殖産物の検査結果による親魚選別法が有効であることを明らかにし、魚病被害の軽減に貢献した。5.不顕性感染魚あるいはキャリヤ-の検出法として、遺伝子組換え大腸菌が産生する外被タンパク質を抗原としたELISA法を確立し、PCRによる遺伝子診断法と併用することによりウイルス病被害の軽減を計ることができた。6.ウイルス性神経壊死症原因ウイルスのRNA2遺伝子の可変領域の塩基配列の比較から、本病原因ウイルスの進化速度を求め、宿主である種苗の移動との関連性を考察した。7.IHNVに対するプライマーとIPNVに対するプライマーを同時に用い、最適条件下でRT-PCRを行うことにより、同時に両ウイルスの検出が可能になった。今年度、まずサケ科魚類の伝染性造血器壊死症ウイルス(IHNV)の分離に最適な魚類培養細胞の選択を目的に、教室で継代保存中の細胞の中から24種類を選び、IHNVに対する感受性と魚の卵巣腔液成分に対する感受性を検討した。その結果、RTE-2細胞がウイルスに対する感受性が高く、かつ毒性を示さないことを明らかにすることができた。次いで、IHNVのN蛋白をコードしているRNAの塩基配列の中からプライマーとして最適な部位を選択し、5種のプライマーセットを作成した。これらのプライマーを用いてPCRを行い、その産物を比較してIHNV株間に関係なく遺伝子が増幅されるプライマーセットを得ることができた。さらにIHNVのN蛋白をコードしているRNAの塩基配列の中でIHNVを特徴ずける部位を選択し、ビオチン化プローブを作成した。また北日本の種苗生産施設で問題になっているマツカワの原因不明疾病について、採卵親魚、生産種苗を対象に、シマアジのウイルス性神経壊死症原因ウイルス(SJNNV)のプライマーを用いたPCRを行い、本症がSJNNVと若干異なるものの類似のウイルスによる感染症であることを明らかにし得た。今年度は、まず昨年度作製したIHNVのPCR用プライマーの中から安定してIHNV遺伝子の検出が可能なプライマーの選択とPCR条件の設定およびこの条件下での検出限界を検討した。IHNV N-geneのオープンリーディングフレーム212-231、669-688番目に位置するプライマー(PCR産物は510bp)を選抜した。本プライマーを用いたPCRは日本および北米由来株いずれの遺伝子をも検出でき、検出限界は6感染粒子であった。

病魚腎臓試料からもIHNV遺伝子の検出が可能となったが、成熟親魚の卵巣腔液中のIHNV検出は困難であった。この問題は昨年度選抜したRTE-2細胞に試料を接種し、24時間培養してウイルスを増殖させた後、この感染細胞をPCRに用いることにより解決し、培養細胞を用いたウイリス増幅法は遺伝子抽出阻害あるいはPCR反応阻害物質を含む試料に有効であった。昨年度の研究で明らかになったマツカワの神経壊死症に関連し、孵化仔魚および稚魚を魚体サイズ毎にPCR法により検査したところ、発症サイズは12cm前後までであったが、その後はウイルスキャリヤ-となることが判明した。同時に餌料生物についても検査したが、全て陰性であった。一方ヒラメ稚仔魚を対象にPCR法によるウイルス検査を実施したところ、一部陽性魚群が確認され発症が見られた。これら発症群およびキャリヤ-種苗は全て廃棄処分となった。本年度、ウイルス性神経壊死症(VNN)を対象に感染履歴を有するウイルスキャリヤ-新魚のPCRによる遺伝子診断結果と実際の孵化仔魚の発病例を比較すると共に、可変領域の遺伝子の変化からウイルスの進化速度を求め疫学的調査結果と比較した。一方培養が可能な伝染性造血器壊死症ウイルス(IHNV)を対象に培養法とPCRを組み合わせた検出法の改良および濾過膜により補足したウイルス遺伝子の検出を試み、さらに伝染性膵臓壊死症ウイルス(IPNV)の同時検出を試みた。また海産魚のラブドウイルス病に関しても遺伝子診断が応用できるように、HRVの塩基配列を検討した。得られた成果は以下のとおりである。1.PCRによる遺伝子診断法には検査試料の関係から限界があり、VNN不顕性感染魚あるいはキャリヤ-の検出法として遺伝子組換え大腸菌が産生する外被タンパク質を抗原としたELISA法とPCRを併用することにより、ウイルスキャリアの検出が可能となった。2.神経壊死症原因ウイルスのRNA2遺伝子の可変領域の塩基配列から、本病原因ウイルスの進化速度を求め、宿主である魚種の種苗の移動との関連性を考察し得た。3.VNN原因ウイルスに感受性を示す細胞として、グル-パ-のNNVを対象にシ-バス由来のSBK-2細胞を見い出すことができた。4.海産魚のラブドウイルス(HRV)のM1およびM2タンパク質をコードしているRNAの塩基配列を明らかにし、HRV特有の塩基配列を明らかにし得た。5.IHNVの増殖が早くかつ産生量の多いRTE-2細胞を用いた培養細胞中のウイルスあるいは濾過上に補足したウイルスの遺伝子をPCRで検出し、最確数法で計数することにより環境水中のIHNVの計数が可能になった。6.IHNVに対するプライマーとIPNVに対するプライマーを同時に用い、最適条件下でPCRを行うことにより、同時に両ウイルスの遺伝子検出が可能になった。
新しい光イオン分光法による簡単な気相分子の解離性光電離機構の解明

エネルギーが比較的大きい真空紫外光をMN分子に照射したときに起る解離性光電離過程を調べるために、新しく"解析的光イオン分光法"を考案した。その方法は、光子エネルギーの函数として測定された各種のイオン(【MN^+】,【M^+】,【MN^(2+)】,【M^(2+)】など)の生成割合をマイクロコンピュータで解析的に処理し、イオンの生成割合の増加,減少を微分スペクトル化して解離のチャネルを解明しようとするものである。この方法を2原子分子(HF,HCl,HBr)と3原子分子(【N_2】O,【CO_2】,【H_2】O)のデータに適用し、これらの分子イオンの解離に関与している電子状態について多くの新しい知見を得ることができた。具体的には、1.HFについてすでに知られているA【^2Σ】とB【^2π】状態の解離に加えて、B状態または2重電離状態に収歛すするリュドベリ系列が【F^+】イオンに選択的に解離すること,2.HClでは、最近の研究で明らかになった電子配置相関効果による多電子遷移状態と、H【Cl^+】イオンの解離生成物のうち特に【Cl^+】イオンへの解離チャネルとの間に密接な関連があることを見いだした。3.【N_2】Oでは(1)B【^2π】状態の【NO^+】と【N(_2^+)】の解離イオンスペクトルを得,(2)E>20eVの領域に存在する多電子遷移状態の【N(_2^+)】と【N^+】イオンへの解離を見いだした。これらの成果のうち、HFとHClについてはJ.Chem.Phys.に投稿し、【N_2】Oの結果は国際学会で発表した。4.【CO_2】分子についても(1)多電子遷移状態の特定イオンへの解離を明らかにするとともに、(2)2重電離が起る領域で【CO(_2^(2+))】イオンは全イオンの約13%はそのまま生き残るものの大部分は解離すること,CやO原子の主に2s電子で構成される電子状態では完全に解離すること,2重電離状態に収歛するリュドベリ系列が【CO^+】に解離することなどがわかったので研究論文を準備中である。HBr,【H_2】O,C【S_2】についても光イオンスペクトルを得たので引き続き検討し、順次、論文として発表する予定である。
メモリー表現型T細胞を過剰に持つ突然変異マウスからの責任遺伝子単離とその機能解析

メモリーT細胞は特定の抗原を認識し、生体内に長期にわたり存在する細胞で、抗原の再感染時に早期に強力に増殖してその抗原を排除するものである。生体にメモリーT細胞を人為的に作製するためにワクチン接種がなされている。私は最近、正常SPFコロニーのマウスから過剰のメモリーT細胞を持つ突然変異B10#4を見つけた。この形質は常染色体劣性遺伝することが明らかになった。本研究によって、(1)B10#4マウスは過剰のメモリーT細胞を持つ以外に、以下の様な免疫学的な種々の異常が認められた。T, Bリンパ球初期発生障害(胸腺のCD4 CD8細胞及び骨髄の未熟B細胞の著減)、血小板増多、貧血、抗赤血球抗体および肝臓、脾臓へのリンパ球浸潤などの多彩な異常形質を持つことが明らかとなった。また、骨髄移植の実験から変異表現型は環境因子では無く、骨髄細胞自体に由来することが判明した。また、(2)SSLP法によって責任遺伝子が存在する遺伝子座を1cMの領域まで狭めることができた。また、その断片には約40遺伝子存在していた。その中の20遺伝子に関してコントロールとB10#4マウスの脾臓、骨髄を用いてRTPCRを行ったところ1つの遺伝子の発現が大きくコントロールとB10#4で異なっていた。バンドのサイズは同一だがスプライシング産物の量比が有為に異なっていた。この原因としてこの遺伝子内に変異が有りその影響でmRNAの発現される種類が異なることあるいはB10#4マウスの変異のために脾臓および骨髄に存在する細胞集団が異なってその影響でmRNAの発現される種類が異なることが考えられた。そのために、その遺伝子に関して染色体遺伝子の塩基配列を解析したところエクソン部には変異を認めることができなかったがイントロン部に2カ所変異を認めた。加えて、コントロールとB1O#4マウスの胸腺からDN3細胞をソーターで単離してその遺伝子のmRNAの発現をRTPCRで解析した。その遺伝子の発現はB10#4マウスで有為に高かった。本研究費で解析している突然変異マウス、BL10#4は正常C57BL10コロニーから末梢血中に過剰のメモリー表現型T細胞を持つBL10#4である。このマウスの形質は常染色体劣勢遺伝し、1遺伝子で規定されること、血球系分化に異常が認められ、それぞれプレTおよびプレB細胞受容体信号が必要な時期で重度な分化障害が有ること、程度の貧血が認められ、抗赤血球抗体の検出できる個体が有ること、骨髄移植の実験から変異表現型は環境因子では無く、骨髄細胞自体に由来することが判明した。本年度、BL10#4とNZBマウスをかけ合わせて、100匹以上の形質陽性および陰性F2マウスを得ることができた。それらのF2マウスの肝臓からDNAを抽出し、BL10とNZBで長さの異なるMITマーカーを用いてSSLP法にてBLlO#4の形質の責任遺伝子の存在を解析した。責任遺伝子の存在する1cM程度の領域を2番染色体に同定することができた。また、セレラ社のデータベースを用いてこの領域を解析したととろ、約45個の遺伝子が存在していることが判明した。

このマウスは、末梢血中に過剰のメモリー表現型T細胞を持つことで申請者に発見されたが、その後、自己免疫疾患様症状として肝臓および膵島にリンパ球浸潤を持つこともわかった。ヒトの1型糖尿病を含めた自己免疫疾患は多因子疾患であるが、それらの発症に関連する遺伝的要因の一つにこのマウスの責任遺伝子が成りうる可能性が高い。また、BL10#4マウスではT細胞の分化がβ選択の時期に強く障害されているので末梢のT細胞の数を増加させるために、自己反応性のT細胞が末梢に存在する可能性が有る。同定した2番染色体の1cMの領域には既知の分子の変異マウスで似た表現型を持つものも存在しない。このことはBL10#4での変異遺伝子は新規の遺伝子であることが強く示唆される。メモリーT細胞を過剰に持ちC57BL10#4マウスの解析:C57BL10#4マウスをNZBマウスに掛け合わせ、C57BL10#4と同様の形質を持つF2マウス約100匹と持たないマウス約40匹を得た。染色体DNAを抽出してMITマーカーを用いたPCR法にて責任遺伝子の存在する遺伝子座を約1センチモルガンまで狭めることができた。その断片には約40遺伝子存在していた。その中の20遺伝子に関してコントロールとC57BL10#4マウスの脾臓、骨髄を用いてRTPCRを行ったところ1つの遺伝子の発現が大きくコントロールとC57BL10#4で異なっていた。バンドのサイズは同一だがスプライシング産物の量比が有為に異なっていた。この原因としてこの遺伝子内に変異が有りその影響でmRNAの発現される種類が異なることあるいはC57BL10#4マウスの変異のために脾臓および骨髄に存在する細胞集団が異なってその影響でmRNAの発現される種類が異なることが考えられた。そのために、その遺伝子に関して染色体遺伝子の塩基配列を解析したところエクソン部には変異を認めることができなかったがイントロン部に2カ所変異を認めた。加えて、コントロールとC57BL10#4マウスの胸腺からDN3細胞をソーターで単離してその遺伝子のmRNAの発現をRTPCRで解析した。その遺伝子の発現はC57BL10#4マウスで有為に高かった。以上の2つの結果はその遺伝子内の変異がコントロールとC57BL10#4の形質の差を反映していることを強く示唆するものである。