hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
南極域における大気中酸素濃度の精密観測を目的とした高精度連続観測システムの開発

大気中の酸素濃度の変動は二酸化炭素濃度変動と密接に関係しているため、酸素濃度をppmvオーダーで精密に観測することによって、地球表層における二酸化炭素収支の研究に新たな拘束条件を供することが可能である。本研究では、市販の小型燃料電池式酸素濃度計に独自の改造を加え、更に可搬型の試料空気導入系とネットワーク透過な制御系を製作することにより、南極・昭和基地に設置が可能な高精度(目標精度0.5ppmv)酸素濃度連続観測システムを開発することが目的である。まず小型燃料電池式酸素濃度計(SableSystems社製FC-2)と試料大気ハンドリング系での試料大気の圧力・温度をアクティブに制御し、酸素センサ部分に存在する酸素分子数の変動をppmvオーダーに抑えることにより、酸素濃度測定の再現性を0.5-0.8ppmvまで向上させることに成功した。また、試料大気を酸素濃度計に導入する際に、配管の形状や流路、使用する材質などによって試料大気中の酸素濃度が変化することが明らかになったため、酸素濃度を変化させずに試料大気を酸素濃度計に導入するための条件を求めた。さらに、ppmvオーダーでの酸素濃度測定において誤差要因になる試料空気中の水蒸気を、-90度に冷却したパイレックスガラス製トラップに大気試料を通すことで除去しつつ、大気試料の温度が配管を通過中に大きく変化することによる酸素濃度の変化を最小限に抑える手法を開発した。最後に、酸素濃度連続観測システムを構成するすべての機器類を2つの17インチ標準ラックに収め、各機器間の電磁的および熱的な干渉が測定精度に影響しないことを確認し、本システムの開発を終了した。今後、昭和基地に持ち込むまでの間に連続観測試験を継続実施し、さらに完成度を高める予定である。本年度は、まず小型燃料電池式酸素濃度計(SableSystems社製FC-2)と試料大気ハンドリング系での試料大気の圧力・温度をアクティブに制御し、酸素センサ部分に存在する酸素分子数の変動をppmvオーダーに抑えることにより、酸素濃度測定の再現性を0.50.8ppmvまで向上させることに成功した。更に、一定時間毎に大気試料と校正用標準ガスを酸素濃度計に供給するためのバルブ類の選定と試験を行い、これらのバルブ制御と酸素濃度計出力データの取得を行う自動制御部の製作・試験を実施した。以上のように、本年度の研究・開発作業によって、実用型の酸素濃度連続観測システムの設計・製作を行うために必要な諸条件の抽出と検証がほぼ終了した。次年度には、実用型システムの設計・製作を行い、実際の大気試料を用いて連続観測試験を行う予定である。

本年度は、前年度の成果を元にして、南極・昭和基地に設置が可能な実用型の酸素濃度連続観測システムの設計・製作・試験を開始した。まず、試料大気ハンドリング系に外気をダイヤフラムポンプで吸引するインレット部を付加し、ポンプ内でのダイヤフラムの振動が酸素濃度計内の試料大気圧力を変動させないよう、インレット部分の構造に工夫を加えた。さらに、ppmvオーダーでの酸素濃度測定において誤差要因になる試料空気中の水蒸気を、-90度に冷却したパイレックスガラス製トラップに大気試料を通すことで除去しつつ、大気試料の温度が配管を通過中に大きく変化することによる酸素濃度の変化を最小限に抑える手法を開発した。最後に、酸素濃度連続観測システムを構成するすべての機器類を2つの17インチ標準ラックに収め、各機器間の電磁的および熱的な干渉が測定精度に影響しないことを確認し、本システムの開発を終了した。今後、昭和基地に持ち込むまでの間に連続観測試験を継続実施し、さらに完成度を高める予定である。
イギリス19世紀の衛生政策

科研費補助金による本テーマで有名な外国雑誌に論文が掲載されたことは、重要な成果と考えている。ひとつ明確になった重要な衛生政策上の事柄は、科学者の言動がいかに人々を翻弄するかということである。世界的な権威とされた科学者が、黒を白だと言えば、世間一般はいとも容易にその言説に流されるということである。リービッヒの事例を通して、その確かな例を発掘しえたと考えている。また19世紀の衛生学のさまざまなテーマとダーウィンの進化論が意外な結びつきを持っていたという新たな事実も解明できた。それは、著者がダーウィンについてすでに一著を成したことと無関係ではない。また衛生学の研究の中で、幾人かの女性たちの主張を取り上げるときには、これまでの歴史的なジェンダー研究が無駄ではなかったと思われる繋がりも見出すことができた。現在一冊の本にまとめているところである。本研究の目的は,19世紀イギリスにおける衛生政策の解明をめざすものである。これに取り組むについて,とくにドイツの有機化学者ユストゥス・リービッヒから英国に対してなされた政策提言に注目している。本年は,衛生政策の前提となるリービッヒとイギリスの関係を明らかにする作業に取り組んだ。科研費補助金によって,2度渡英して多くの資料収集ができた点,とくに大作油彩については,その展示場所を実際訪問できたということは,その絵画にまつわる謎を解く上で,大きな収穫となった。リービッヒは屎尿をテムズ河に投棄する愚をいましめ,屎尿を農業生産の上で十分に活用すべきことを提案する。その活用の素地は,イングランドにおける農業の科学化にかかっていて,リービッヒはこのシンボル的人物とみなされていた。このような経緯から,まずはイギリスにおけるリービッヒと王立農学協会とのつながりを洗い出し,同協会の1842年のブリストル大会の様子を描いたとされる,大作油絵にまつわる謎解きを進めながら,リービッヒの影響や活躍の様子を明らかにした。これについては論文「創ちれた絵画:リービッヒとイングランド王立農学協会」としてまとめることができた。論文発表後から,さらに多くの新事実を得ることができたので,英語での大幅な改訂版を用意して,査読をクリアし現在掲載まちである。本研究は、イギリス19世紀の衛生政策に関係する1次資料の掘り起こしを前提とする研究である。科研費のおかげで、本年度もイギリスへ資料収集に出かけることが出来たのは、研究の進展にきわめて大きく役立った。コレラの流行に伴う衛生意識の高まりは、日本でも少数ながら研究が進められているが、コレラの元凶となった上水と下水の混在を解消する事業については、それほど明らかにはされてきていなかった。本研究では、化学分野ではよく研究されてきているドイツの有機化学者リービッヒとイギリスとの関係を洗い直し、彼の農学方面での貢献を明らかにするとともに、テムズ河の汚染に深刻な影響を与えてきた屎尿の放流について、リービッヒがかかわった指導と改善を明らかにした。本年度解明できた衛生政策の政治的な側面は、『化学史研究』に投稿し査読を終えて、現在掲載待ちの状況である。利権の絡む大きな公共工事には、政治的な駆け引きが付き物であることは、いつの時代もどの国においても変わらないなということを明解にできたと思う。とくに、科学者がどの政策を支持するかによって、その後の政策実施に大きな影響があることを認識すべき重要事例を発掘できたと考えている。
肝細胞癌におけるMAGE-D4遺伝子の包括的機能解析と、新規血清マーカーへの応用

肝細胞癌(HCC)の診断・治療標的分子検索のためMAGE-D4の発現・機能解析を行った。HCC細胞株の56%でMAGE-D4発現亢進を認め、ノックダウンにより遊走能・浸潤能抑制がみられた。背景肝群間で発現レベル差を認めなかった。免疫染色法により蛋白発現変化も良好に確認しえた。MAGE-D4のHCC組織中高発現群は予後不良であった。腫瘍部VEGF発現とMAGE-D4発現に相関性が示唆されたが、CD34・HIF-1aとは相関性を認めなかった。HCC群で血清MAGE-D4値の上昇症例を認めたが、AFP・PIVKA-IIと相関関係はなかった。MAGE-D4はHCCの有望な標的分子と考えられた。本研究では、申請者らがその過剰発現が肝細胞癌の進展・再発と強く相関し、優れた予後因子であることを見出したMAGE-D4遺伝子に着目し、肝細胞癌の診断、治療における臨床応用の可能性を追求している。平成26年度に予定していた研究はMAGE-D4遺伝子の機能解析である。・in vitro実験;予備実験より得られた結果から、MAGE-D4高発現細胞株を選別し、これらに対し、SiRNA法によるMAGE-D4のノックダウンを行い、それによる細胞株の増殖、遊走、浸潤能の変化を調べる。・in vivo実験;上記in vitro実験により確認されたノックダウンの手法および結果を応用し、in vivoでのMAGE-D4機能解析を行う。そのためにまずマウス皮下腫瘍モデルを確立する。・血管新生とMAGE-D4発現との相関性検討;HCCは血流豊富な腫瘍であるため、HCC切除標本を用いて血管新生マーカーであるVEGF, CD34およびHIF-1αの免疫染色を行い、MAGE-D4発現パターンとの相関性を解析し、MAGE-D4の血管新生への関与の可能性を調べる。現在までの研究実績の概要を以下に記す。・in vitro実験;MAGE-D4高発現HCC細胞株を対象としてMAGE-D4に特異的な、siRNAを用いたMAGE-D4のノックダウンを行った。それにより、HCC細胞株の増殖能、浸潤能の低下を認めた。・免疫染色; HCC切除標本を用いてVEGF, CD34およびHIF-1αの免疫染色を行った。VEGFの発現度とMAGE-D4の発現度に関連があるものと思われた。・in vivo実験;今後の研究計画に必要となる、ヌードマウスを用いた皮下腫瘍モデルの作成を行っている。本研究では、肝細胞癌の治療の個別化につながる新規分子標的治療薬と、正確な診断および臨床病期決定のための鋭敏でかつ病態を反映し得る腫瘍マーカー開発の基盤となるデータを得ることを目的として遂行してきた。申請者らがその過剰発現が肝細胞癌の進展・再発と強く相関し、優れた予後因子であることを見出したMAGE-D4遺伝子に着目し、肝細胞癌における統合的発現・機能解析を行った。まず、in vitroでのMAGE-D4遺伝子の機能解析ではMAGE-D4高発現肝細胞癌細胞株であるHep3B、HepG2およびPLC/PRF/5の3種類に対し、siRNA法によるMAGE-D4のノックダウンを行った。コントロールと比較して、肝細胞癌細胞株の遊走能および浸潤能の抑制がみられた。肝細胞癌は血流豊富な腫瘍であるため、肝細胞癌切除標本を用いて血管新生マーカーであるVEGF, CD34およびHIF-1αの免疫染色を行い、MAGE-D4発現パターンとの関連性を調べた。腫瘍部でのVEGF高発現症例で、MAGE-D4蛋白の高発現の頻度が高い傾向にあったが、CD34およびHIF-1aの染色レベルとは相関性を認めなかった。8例の非担癌患者と、肝細胞癌患者から得られた血清中のMAGE-D4値をELISA法によって測定したところ、肝細胞癌患者群にのみ、血清、MAGE-D4値の上昇している症例を認めた。本研究の成果により、MAGE-D4は診断・治療の両面から肝細胞癌における有望な標的分子であることが示唆された。まず研究計画に則り、MAGE-D4遺伝子の機能解析に着手した。in vitro実験では、MAGE-D4高発現株のHepG2およびPLC/PRF/5の3種類のHCC細胞株に対してsiRNA法によるMAGE-D4のノックダウンを行い、それによる細胞株の増殖、遊走、浸潤能の変化を調べている。いずれもノックダウンによる増殖能、浸潤能の低下を認めた。in vivo実験のために、現在、ヌードマウスを用いた皮下腫瘍モデルの作成を行っている。

また、血管新生とMAGE-D4発現との相関性検討を調べるため、HCC切除標本を用いて血管新生マーカーであるVEGF, CD34およびHIF-1αの免疫染色を行い、MAGE-D4発現パターンとの相関性を解析したところ、VEGF強発現例でMAGE-D4蛋白の発現度が高い傾向を認めた。消化器外科学MAGE-D4のHCC血清診断マーカーとしての有用性の検証を検証していく。HCC患者および健常者血清検体のおけるMAGE-D4の検出を行う。名古屋大学医学部附属病院にて、HCC症例から、倫理委員会の指針に則った文書による同意を得た上で、各治療段階における血清検体を採取している。コントロールとして、健常者ボランティアの血清も採取予定である。血清検体は採取後速やかに-80°C下で保存する。また、検体採取と同時に一般血液検査に加えてAFPおよびPIVKA-IIのデータも蓄積していく。検体準備が進んだところでELISA法による血清MAGE-D4レベルを測定し、組織中MAGE-D4発現度や各種臨床病理学的因子との相関性を解析する。
超準解析による解析学の研究とその応用

当初の計画では、落合が代表者で超準解析学を中心に研究を進める予定であったが、急死したため、緒方が途中で代表者に交代した。従って、研究実績は、緒方と柳原の成果が主となった。一年目は、それぞれの分担面での研究を進める形をとったが、2年目は、できるだけ連絡をとり合って研究をした。しかし、遠隔のため、思う様に討議はできなかったが、特に今後の研究の見通しは充分でき、その成果は近いうち発表できると思う。現在までの研究の成果は大略次のようである。緒方は、次のような結果を得た。ΩをR^Nの外部領域、その境界を〓Ωとするとき、次の問題を考える。ここで、仮定として、f_1gが次のような条件をみたすとする。このとき、次の様な結果と応用を得た。また、この結果は、C.Swanson等の(E)の解の個数の分析を更に精密に分析することが予知できる。今後は、解の振舞いについて、研究する予見をもっている。柳原は、sをparasueterとするとき、ヒルベルト空間で線形系について、大きな成果を得た。当初の計画では,落合が代表者で超準解析学を中心に研究を進める予定であったが,体調をくずしたために,緒方が途中で代表者に交代した.従って,研究実績は,緒方と柳原の成果が主となった.更に,この研究は2年継続なので, 1年目はそれぞれの分担面での研究を進め, 2年目に統括することとした.本年の成果は次の通りである.緒方は次のような成果を得た.ΩをR^Nの外部領域,その境界をδΩとするとき,次の問題を考える.〔結果〕(E)は次のような無限個の解{Ui}をもつ.柳原は次のような成果を得た.sをdescreteなparameterとするとき,ヒルベルト空間で次の方程式を考える.本年は2年目であるが、最終年度のため2人はできるだけ連絡をとり合って、成果をまとめた。ただ、余りにも遠隔であったため、思うように研究討議ができない面もあったが、今後の研究方向は充分確認できた。本年度の成果は、大略、次のようである。緒方は、初年度に引き続き次の問題を考え、考案した。ΩをR^Nの外部領域、その境界をaΩとする。そのとき、次の問題を考える。[方法](E)をnorlinear operator equationで表すとき、このoperator pn monotonicityをもつように工夫し、又uとuとのlower contactのidearを導入して調べる。又、C.Swamsinの(E)に対する結果を応用することを考える。[結果](E)はlower contactのdegreeにより、u〓u〓〓か、無限個の解{ui}:u〓u_1〓...〓ui〓...〓u〓〓をもつ。また、ある(E)の具体例を上げ、必ず無限個の解をもつことを示した。柳原は、初年度に引き続き、線形系の方程式:を考え、同型写像の関係によって、contimous fumilisのclassifictionについて、研究し成果をえた。
通常の学級における発達障害の子どもと他の在籍児との関係性支援に関する研究

状況と表出表情にそれぞれ快と不快を設定し、人物の感情を推測する質問項目を作成した上で、小学4・6年生を対象に調査を行った。その結果,状況と表情が対立する条件の場合と,表情が不快な場合には,感情の読み取りに難しさがあることがわかった。また,子どもたちは不快な表情に敏感であり,この敏感さが他者との関係づくりに影響していることが推察された。この結果とともに、担任教師の関わりを整理し,学級における子どもの情緒傾向と担任の意識・配慮について考察をした。本研究では、通常の学級での、障害のある子どもと周囲の子どもとの関わり場面における言語的,および非言語的に表現されるコミュニケーションの様子から、主に,発達障害のある子どもと学級内の子どもたちの関係性の傾向と支援の可能性について検討することが目的である。そこで,平成20年度は,研究協力を依頼する学校の状況について情報収集をすると共に,海外で取り組まれているソーシャル・エモーショナル・ラーニングについての情報収集を行った。ソーシャル・エモーショナル・ラーニングとは,他者の感情に気づき,自分の行動を考えるというもので,アメリカ,イギリス等の教育現場で取り組まれているものである。特にイギリスでは,年齢に応じて物語や写真などを利用し,自分の感情への気づきと感情の調整,他者の感情への共感,学習等に向けるモチベーションの上昇,ソーシャルスキルの獲得などを目的に授業が行われており,一定の効果を上げていることが分かった。この情報は,今後,相手の表情の読み取りという非言語的な情報の受け取りが子ども同士の関係性づくりに与える影響について考える上で参考になるものであり,研究成果を学校場面で生かしていく可能性を考える上でも重要なものだと思われる。また来年度,協力校で行う"他者の感情への気づき"に関する調査で使用する表情写真カードの作成を行った。本調査は,表情という非言語的な情報の読み取りが,発達障害のある子どもを中心とした子ども同士の関係性づくりに与える影響について考えるものであり,本研究のテーマである「関係性」について検討するには必要な要素の1つだと考えている。発達障害のある子どもが学齢期になり,学校への不適応を起こす原因の1つとして,基本的信頼感の弱さや自己肯定感の低さがあると言われる。このような特性を持つ子どもたちが学校生活を過ごすのは,多くの場合通常の学級であるため,学級に在籍する子ども同士の関係性づくりをすすめることは重要である。本研究では,通常の学級における子どもたちの情緒的関わりの傾向等を明らかにすることから,通常の学級におけるより良い関係性づくりの在り方について検討することが目的である。平成20年度は,表情から相手の感情をどのように読み取るかについて,事例的に小学校4年生と6年生の通常の学級に在籍する児童を対象に調査を行った。また,Q-Uと学級担任へのインタビュー調査を行い,客観的情報を収集した。その結果,4・6年生とも満足度の高い子どもが多い学級であったが,4年生では,友人関係に敏感な傾向がみられた。その理由として,些細なことへの被害感や,極端な自信のなさ等が考えられた。こうした子どもたちに表情の読み取り調査をおこなったところ,同じ表情,同じ状況であっても,相手の感情が同じく読み取られていた訳ではなく,状況や表情の意味づけは読み取る者に依存するため,相手の感情が正確に読み取られることの難しさが明らかとなった。こうした学級の状況において,学級担任は,(1)安定した態度で接する。(2)子どもの表情を見たり,言葉遣いを気に掛ける。(3)できる限り子どもと一緒に時間を過ごす。(4)感じていることを言葉で伝える。等を意識していた。また,発達障害のある子どもを学級の中に役割をもって位置づけていた。このように,子ども同士の情緒的な関係の弱さに,学級担任のサポートが大きく影響していることが分かった。今後は,子ども自身が力をつけられるよう,学校の中で取り組める具体的な関係性支援の方法についても検討していくことが課題である。
ヒト胃癌、膵癌、肺がん拒絶抗原の同定とがんワクチン開発

1)自家癌抗原の遺伝子クローニング:自家癌骨肉腫OS2000から癌抗原遺伝子PBF(papilloma-binding factor)を単離した。PBFは軟部腫瘍ばかりでなく、上皮性腫瘍の約50%に発現をみた。一方、PBFは正常膵臓や卵巣にmRNAレベルで発現をみたが、抗体を開発し蛋白レベルでの発現を検討したところ、腫瘍に比し、正常膵、卵巣での発現はウエスタン解析、免疫組織学的解析とも検出感度以下であった。このように、蛋白発現レベルが正常で極めて低いことにより腫瘍ワクチンとしての利用が示唆された。2)reverse-immunologicalapproachより同定された癌抗原ペプチドの臨床試験:(1)IAPのひとつサバイビンが多くの腫瘍で高い発現率を示すこと、およびサバイビン由来2Bペプチド(AYACNTSTL)がHLA-A24拘束性CTLエピトープとなっていることが判明したため、本学IRBの審査を経て、第1相臨床試験を開始している。現時点で副作用はみられず7/15例の大腸癌患者、乳癌4/14例、6/13例肺癌患者で応答がみられた。(2)一方、SYT-SSX由来Bペプチド(GYDQIMPKK)についても第1相臨床試験を続行した。現時点で副作用はみられず、2/6例でテトラマー解析での免疫応答がみられた。3)Bioinformaticアプローチにより同定された腫瘍抗原:本法を利用した網羅的解析によって35種類の新規癌抗原候補を抽出し、RT-PCRによって正常組織に発現が極めて低く、癌組織に過剰発現する癌抗原17種類を同定した。ヒト自家腫瘍の解析系で癌抗原遺伝子、抗原ペプチドを新しく同定することは有効な癌ワクチン開発に最も重要である。本年度は1)HLA-A31拘束性CTLとHST-2胃癌からC98遺伝子をクローニングした。2)膵癌PUNではHLA-A26、肺癌LHK-2ではHLA-A24、骨肉腫OS2000ではHLA-A24拘束性のCTLクローンをとることに成功した。3)口腔扁平上皮癌OSC20よりHLA-DR8拘束性のCD4T細胞エピトープがα-enolase由来であることが判明した。4)また、癌と正常では網膜に発現するリカバリンからHLA-A24拘束性の抗原ペプチドを同定した。5)アポトーシス抑制性に働くサバイビン2BからHLA-A24拘束性に働く抗原ペプチドを同定した。さらに6)滑膜肉腫にみられる染色体転座による発現する融合蛋白SYT-SSXからHLA-A24拘束性の抗原ペプチドを同定した。今年度は以下の研究成果を得た。1)膵癌PUNではHLA-A26に提示される癌抗原の候補遺伝子をとることに成功した。2)骨肉腫OS2000ではHLA-B55に提示される抗原遺伝子の侯補を得た。3)IAPであるサバイビン蛋白由来HLA-A24拘束性2Bペプチド、リビン由来L7ペプチドを同定した。テトラマー解析により2Bペプチド反応性CTL前駆細胞数は多くの患者で上昇していた。他方、L7は高いCTL活性を誘導することが示され、リビン発現腫瘍には癌ワクチンとして優れている可能性が示された。4)リカバリン由来HLA-A24拘束性R49.2ペプチドはテトラマー解析により多くの癌患者でCTL前駆細胞数が上昇していた。また臨床的な進行癌と相関することも示唆した。5)滑膜肉腫転座産物由来HLA-A24拘束性SYT-SSXペプチドもテトラマー解析の結果CTL前駆細胞数が滑膜肉腫患者で上昇し、特に肺転移を示す患者にはより著明な上昇が示された。6)抗原ペプチドの細胞内提示機構について解析した。

チロシナーゼ由来ペプチド等、約10種類のペプチド(9-10アミノ酸よりなる)につき、分子シャペロンhsc73結合性を小胞体内への転送効率につき相関性をみた。その結果、hsc73への親和性と小胞体内への転送には正の相関が認められた。1自家癌抗原の遺伝子クローニング:昨年クローニングした自家癌骨肉腫OS2000の癌抗原遺伝子papilloma-binding factor(PBF)の解析を進めた。発現は骨肉腫やユーイング肉腫など多くの肉腫に発現をみ、また扁平上皮癌などの上皮性腫瘍にも広く発現していた。一方、正常組織では卵巣と膵臓に弱い発現をみたが、抗体では検出されなかった。C末に存在するエピトープも決定した。また我々はHLA-A31拘束性胃癌抗原遺伝子C98を同定し、この遺伝子のスプライシングバリアントが腫瘍特異的に発現していた。いずれも癌抗原としての特徴に優れ、ヒト癌免疫ワクチンの候補と考えられた。2reverse-immunologicalapproachより同定された癌抗原ペプチドの臨床試験:(1)HLA-A24拘束性サバイビン2Bペプチド(AYACNTSTL)を用いた第1相臨床試験を昨年3月より大腸癌、乳癌、肺癌、口腔癌等で開始した。明らかな副作用はみられず、5/15例の大腸癌患者、2/6例肺癌患者で腫瘍マーカーの低下やCT、MRI上の腫瘍増殖抑制がみられた。(2)SYT-SSXのBペプチド(GYDQIMPKK)の臨床試験でも現在まで副作用は'みられていない。免疫学的応答として患者2例でテトラマー陽性のCTL前駆細胞の上昇をみた。1)自家癌抗原の遺伝子クローニング:自家癌骨肉腫OS2000から癌抗原遺伝子PBF(papilloma-binding factor)を単離した。PBFは軟部腫瘍ばかりでなく、上皮性腫瘍の約50%に発現をみた。一方、PBFは正常膵臓や卵巣にmRNAレベルで発現をみたが、抗体を開発し蛋白レベルでの発現を検討したところ、腫瘍に比し、正常膵、卵巣での発現はウエスタン解析、免疫組織学的解析とも検出感度以下であった。このように、蛋白発現レベルが正常で極めて低いことにより腫瘍ワクチンとしての利用が示唆された。2)reverse-immunologicalapproachより同定された癌抗原ペプチドの臨床試験:(1)IAPのひとつサバイビンが多くの腫瘍で高い発現率を示すこと、およびサバイビン由来2Bペプチド(AYACNTSTL)がHLA-A24拘束性CTLエピトープとなっていることが判明したため、本学IRBの審査を経て、第1相臨床試験を開始している。現時点で副作用はみられず7/15例の大腸癌患者、乳癌4/14例、6/13例肺癌患者で応答がみられた。(2)一方、SYT-SSX由来Bペプチド(GYDQIMPKK)についても第1相臨床試験を続行した。現時点で副作用はみられず、2/6例でテトラマー解析での免疫応答がみられた。3)Bioinformaticアプローチにより同定された腫瘍
リンパ球が産生し神経・内分泌系細胞に作用する新しいタイプのサイトカイン―ファジーセットクローニング法による検索―

生体の恒常性の維持に、神経-内分泌-免疫系が相互に作用しあっていると考えられるようになってきた。そこで神経-内分泌系細胞の両性質をもつ副腎髄質細胞に対して、免疫系の情報伝達物質であるサイトカインの一種インターフェロン-α(IFN-α)のカテコールアミン分泌やその再取り込みに対する作用を検討した。その結果、IFN-αがウシ副腎髄質細胞からのアセチルコリン刺激によるカテコールアミン分泌を抑制するとともに、副腎髄質のノルエピネフリントランスポーターを抑制しカテコールアミンの再吸収を阻害することが明らかとなった。次にウシリンパ球(免疫系)とウシ副腎髄質細胞(神経-内分泌系)の直接の相互作用を調べる目的で両細胞を一緒に培養してみたところ、培養メディウムの中のカテコールアミン量が増加することが分かった。そこでリンパ球だけを培養して、その培養メディウムを副腎髄質に添加してみると、同様にメディウム中のカテコールアミンが増加してきた。この事から、副腎髄質細胞からのカテコールアミン遊離を促進する何らかの因子がリンパ球で合成され放出されていることが判明した。この因子を以下リンパ球由来因子と呼ぶことにする。リンパ球由来因子を生化学的に部分精製し、その活性フラクションに対する抗体(ファジー抗体)をウサギにて作成した。リンパ球由来因子を生化学的手法(Sephacryl S-300カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等)で精製を試みたが、完全に精製するには至らなかった。そこで、上記のファジー抗体を用いて、ウシ脾臓cDNAライブラリィーから20ヶの陽性反応を示すクローンを分取した。その各々のクローンの部分塩基配列を解読して既知蛋白質とのホモロジー検索を行ったところ、全く報告されていない塩基配列をもった3ヶのクローン(NY10,NY11及びNY105)が見つかった。また、3ヶのクローン(NY16,NY18及びNY5)のさらに長い塩基配列を解読した結果、IgMの新しいisoform, ornithine decarboxylaseのあるイントロン領域、そしてserine proteaseの一種であることが判明した。今回の研究により、神経-内分泌系の副腎髄質細胞に作用するリンパ球由来因子の存在を示し、免疫系から神経-内分泌系への調節作用に関する新たな1ページを開くことが出来たと考えている。この研究は、リンパ球で産生され神経・内分泌系に生理・薬理活性を示す因子を探求し、最終ゴールとしてその因子のクローニング及びその生理的役割を明らかにする目的で行われた。まず最初、ウシ副腎髄質細胞とウシ腹部リンパ球を同時に培養すると、培養メディウム中のカテコールアミン量が増加してきた。次にリンパ球だけを培養し、その培養メディウムを副腎髄質細胞に添加して培養すると同様にメデイウム中のカテコールアミン量が増加した。この結果からリンパ球から何らかの因子がメデイウム中へ放出され、それが副腎髄質細胞に作用してメデイウムへのカテコールアミン分泌を促進していることが考えられた。このリンパ球由来因子の生化学的性質を調べてみると、熱感受性で分子量が10kDa以上であることが判明した。このリンパ球由来因子を硫酸アンモニウム分画及び各種カラムクロマトグラフィーにより部分精製した。この部分精製した因子に対する抗体(ファジ-抗体)をウサギに免疫感作して作製した。ウシ脾臓cDNAライブラリイ-を用いて大腸菌にてそれらの蛋白質を発現させ、上記のファジ-抗体にて検索した。その結果、この抗体と陽性反応を示したクローンを20ヶ得ることが出来、現在その遺伝子の部分塩基配列を解読している。その他の研究成果として、サイトカインの一種インターフェロン-αを副腎髄質細胞に長期処理するとアセチルコリン刺激によるカテコールアミン分泌が抑制された。以上のように既存のサイトカインや今回見出したリンパ球由来因子が神経・内分泌系細胞に作用してその細胞機能を修飾している可能性を示した。その各々のクローンの部分

塩基配列を解読して既知蛋白質とのホモロジー検索を行ったところ、全く報告されていない塩基配列をもった3ヶのクローン(NY10,NY11及びNY105)が見つかった。また、3ヶのクローン(NY16,NY18及びNY5)のさらに長い塩基配列を解読した結果、IgMの新しいisoform, ornithine decarboxylaseのあるイントロン領域、そしてserine proteaseの一種であることが判明した。今回の研究により、神経-内分泌系の副腎髄質細胞に作用するリンパ球由来因子の存在を示し、免疫系から神経-内分泌系への調節作用に関する新たな1ページを開くことが出来たと考えている。この研究は、リンパ球で産生され神経・内分泌系に活性作用を示す因子をクローニングし、その生理的役割を明らかにすることである。前年度までの研究の概要は、(1)リンパ球培養メディウム上清分画中の因子が副腎髄質細胞からのカテコールアミン遊離を促進した、(2)その因子を部分精製し2つの活性分画を分取した、(3)それらに対するファジィー抗体を作成し、(4)その内の1つの活性分画に対するファジィー抗体を用いて、ウシ脾臓cDNAライブラリィーから20ヶの抗体陽性クローンを得た。今年度は上記で得られた20ヶのクローン全ての部分塩基配列を解読した。GENBANK(またはEMBL)で既知蛋白質とのホモロジー検索を行った。その結果、60%以下ホモロジー(4ヶ;NY5,NY10,NY11,NY105)、6070%ホモロジー(4ヶ;NY2,NY12,NY18,NY19)、7080%ホモロジー(3ヶ;NY102,NY103,NY107)、8090%ホモロジー(5ヶ;NY13,NY15,NY16,NY101,NY110)、90%以上ホモロジー(4ヶ;NY4,NY7,NY106)であった。この中でNY16がIL-1 antagonistと87%、NY18がIL-2の5-flanking領域と65%のホモロジー、NY5は全く報告がなかった。それでcDNAウォーキング法を用いてこれらの全塩基配列の解読を試みた。その結果、NY16,NY18は各々IgMの新しいisoform及びornithine decarboxylaseのイントロン領域とホモロジーの高いシークエンス、そしてNY5はその直後に登録されていたserine proteaseの一種であることが判明した。現在、残りのクローンでまだ解読されていないクローンの塩基配列を解読している。さらにもう1つのファジィー抗体を用いてウシ脾臓cDNAライブラリィーから新たな陽性クローンを検索する予定である。これらの検索の結果、新しい塩基配列をもった因子が見つかれば、その因子を用いて副腎髄質細胞の機能(カテコールアミン分泌、生合成及びノルエピネフリントランスポート活性等)に対する影響を検討する予定である。前年度までの研究結果の概要は、(1)リンパ球培養メディウム
分子イメージング法を応用した子宮肉腫肺転移機構の解明と新治療法の開発

子宮肉腫は、子宮体部悪性腫瘍の数%を占める稀な疾患ではあるが、再発・転移が多く極めて予後不良である。子宮肉腫は1稀少疾患であるため有効な臨床研究が実施されていない、2転移能を保持した動物実験モデルがないことから、子宮肉腫の転移メカニズムは不明な点が多い。本年度の研究の目的は、肺転移性子宮肉腫の同所移植モデルを開発し、転移メカニズムの解明、特にその分子メカニズムの解明を研究の第一段階とした。GFP遺伝子を導入したヒト子宮肉腫由来MES-SA細胞株を樹立し、KSNヌードマウスの子宮頸部へ同所移植し腫瘍を形成させた。約6週間後、腫瘍を摘出した後細片化し、異なるマウスに同所移植した。その際、肺への転移数別にグループ分けし移植を繰り返すことで、高転移株と低転移株の樹立を試みた。また摘出した原発巣はDNAマイクロアレイ解析に供した。さらに担ガンマウスをFDG-PET撮像実験に供し、FDG集積と肺転移との相関関係を検討した。また、マイクロアレイで解析した遺伝子の関連タンパクの実際の子宮肉腫患者血清の検体を用いて発現状況を検討した。子宮肉腫は、極めて予後不良の疾患である。腫瘍が子宮内に限局した状態で外科的に完全摘出した症例でも、無病生存期間は12-19ヶ月である。半数以上の症例で、肺に血行性再発・転移を生じる。5年生存率は、腫瘍が子宮外に進展して発見されたII期以上の場合、20%以下である。発生頻度は極めて稀であるため(子宮体部悪性腫瘍の3-8%)、十分な臨床研究がなされておらず、その多くは後視法的研究である。現在判明している危険因子は、未婚・ホルモン剤内服・乳がん術後のタモキシフェン内服・肥満が知られており、今後少子・晩婚化、乳がん患者の増加、ホルモン療法の普及で患者の増加が考えられる。従って、子宮肉腫に対する早期診断法・経過観察に有用なバイオマーカー・治療法確立は今後重要な課題になる。現在問題になっている点は、1有効な早期発見の診断マーカーが確立されていないため、30歳以上の女性の約25%に生じる子宮筋腫との鑑別が困難で、術後摘出標本で初めて診断されることが多い。2稀少症例であるため有効な臨床研究が実施されていないため、適切な治療薬が不明である。3患者の臨床病態を反映した適切な動物実験モデルがないため、疾患の詳細な病態が不明である。4血行性転移を予防する適切な治療薬がない。本研究の目的は、難治性子宮肉腫に対して、分子イメージング法を用いた診断バイオマーカーの開発・患者の臨床状態を反映した同所移植動物実験モデルの開発・それらを用いた新規血管保護による肺転移予防法の開発を行うことである。子宮筋腫と子宮肉腫の治療前の鑑別診断法の確立は、適切な外科的治療法の選択において、最も重要な問題点である。我々の施設は、EstrogenにF-18を添加したF-18-Estradiol (FES)トレーサーの開発を行いPETを用いて診断能の向上を試みてきたが、検査の煩雑さや多施設での検討が困難であるという問題点があった。そこで、子宮肉腫と子宮筋腫とをより簡便に鑑別するために、NCBIより公開されているビックデーターの解析を行い、子宮肉腫に特異的な新たな血清マーカーを検出し(特願2015-152893)、東洋紡と共同で、ELISA法を用いた高感度迅速測定法(5-6分)を開発した。検出された血清生理活性蛋白はオステオポンチン蛋白質、プログラニュリン蛋白質、GDF-15蛋白質、および、ミッドカイン蛋白質である。次に子宮肉腫は、約50%に遠隔転移(特に肺転移)をきたす疾患であり、その機序を解明するために子宮肉腫肺転移動物モデルを作成し、抗転移株と低転移株を樹立し転移責任遺伝子候補を同定した(特願2014-149007)(Cancer Letter)。同定された遺伝子は、TNNT1、ZIC1、COLIA2であった。特にTNNT1は、子宮肉腫の低酸素環境と強く関連し、転移能と関連する遺伝子として最近着目されている。

また、我々は18F-FDG PET/CTイメージングで得られた画像を「ディジタル画像処理」を行い、ピクセル強度の空間的な変動の関数として腫瘍内の低酸素領域の不均一性を数量化する試みとしてテクスチャー解析を実施した。その結果コントラストが、最も子宮肉腫の予後を反映した。このことは、18F-FDG PET/CTイメージングを用いたテクスチャ特徴量パラメータContrastは、子宮肉腫の腫瘍内低酸素領域の不均一性を反映し予後不良因子であることが示唆された。1子宮肉腫に特異的なバイオマーカー候補遺伝子を同定臨床検体あるいはがんゲノムビックデーターから、Progranulin, Osteopontin, Midkine, GDF-15が子宮肉腫に優位に高発現していることを見出している(特願2017-148278)。2バイオマーカー候補遺伝子分泌タンパクの血中測定系を確立(PECcube system)多孔性フィルター上でELISAを行うことにより全血検体から前記子宮肉腫バイオマーカーを迅速に測定できる系を確立した。本実験系では従来血液検体を50-100ul程度必要とし、反応時間も46時間程度要するが、本システムは血液検体の量を、5-20&#61549;l程度、測定時間も15分50分以内に短縮することができる。3GFP陽性ヒト子宮肉腫細胞株マウス同所移植転移モデルの遺伝子プロファイリングから、転移関連遺伝子を同定DNAマイクロアレイ解析において、高転移株ではTNN1,COLIA2発現が増加し、細胞増殖シグナルに関する遺伝子ZIC1発現が抑制されていることを見出している(特願2014-149007)。4分子イメージング手法を用いた病態解析我々の樹立した動物モデルは、animal PETで転移巣をモニタリングすることが可能になった。子宮肉腫におけるFDGの集積を「Texture解析」し、高次特徴量を定量化する「Radiomics解析」で、Entropy, Correlationの高次テクスチャ特徴量が特異的であることを報告した。A)臨床検体を用いる実験系を作成し、より臨床病態を反映した転移動物実験系を確立する。B)動物実験モデルを用いた子宮肉腫の発生・転移の機序を分子生物学的に解明する。樹立したモデルマウスの原発腫瘍、転移巣および正常組織の遺伝子プロファイリングをマイクロアレイにより比較し、発現レベルに顕著な差を有する遺伝子を同定する。蛍光イメージング法やPETイメージング法により、原発巣を同定し、さらに転移巣を同定する(「場」情報)。それらが、どのような時間経過で発現するかをモニタリングする(「時間」情報)。転移前・転移初期・転移進行期の時間情報を元に、原発巣だけではなく、転移標的臓器(肺)の組織・腫瘍細胞さらに周囲間質細胞を分離・精製して遺伝子プロファイリングを行う。特に、腫瘍ー腫瘍周囲間質の変化を検討する。その時間・場所の変化の中で、様々な分子間での相互作用、解離-結合-変化の全体の動的な機能を検討する。C)そして、B)で同定された、転移の早期発見可能な遺伝子・蛋白質をターゲットとした新たな分子イメージングトレーサーの開発の研究基盤を確立する。D)さらに、C)で同定された転移の早期発見可能な遺伝子・蛋白質をターゲットとした新たな腫瘍マーカーの作成を行い、臨床検体で検討する。まず市販薬であるエリブリンメシル酸塩(ハラヴェン&reg;)は、本邦で開発された悪性軟部腫瘍に対する適応を持った微小管ダイナミクス阻害薬である。
結合蛋白に着目したStratifinによる肺腺癌初期悪性化の分子メカニズム解明

本研究は、肺腺癌の新規oncogeneと考えられるStratifin(SFN)の肺腺癌細胞における機能とその分子機序の解明を目的とした。始めにhSFNを肺のみで高発現させたTgマウスを作製し、このマウスが野生型に比して有意に肺腫瘍発生率が高いことを示した。機能解析ではSFNはE3ユビキチンリガーゼSCFのアダプター部分であるSKP1に結合し、その機能を抑制することでoncoproteinの安定化を引き起こしていることが明らかになった。SKP1とSFNとの結合部位はすでに予測されており、SFN阻害薬を開発しSFN-SKP1結合をブロックすることで初期肺腺癌の進行を阻止できると期待される。本研究は、肺腺癌の新規oncogeneと考えられるStratifin(SFN)の肺腺癌細胞における機能とその分子機序を解明することを目的としたものである。始めにSFNを肺のみで高発現させたトランスジェニックマウス(Tg-SPC-SFN)を作製した。これに発癌物質NNKを投与し20週観察し、その間10・15週の時点でCTを用いて肺を経過観察した。一部のTg-SPC-SFNでは10週からCTで肺に腫瘍が発生していることが確認できた。20週経過後、コントロールである野生型ICR肺における腫瘍発生率が11.1%であったのに対し、Tg-SPC-SFNでは47.8%と有意に高い結果となった。さらに興味深いことに、Tg-SPC-SFNはNNK非投与群でも28.6%に腫瘍が発生していた。これはSFNが肺腺癌の悪性化だけでなく発生にも関与することを示す。次に、先行実験により肺腺癌細胞でSFN結合因子として同定されたSKP1とその制御因子の1つであるリン酸化cyclin E1の免疫染色を肺腺癌組織を用いて行った。SFN陽性症例はSKP1核・細胞質に陽性、SFN陰性症例はSKP1核のみ陽性になるという傾向があった。この結果はSFN発現を抑制するとSKP1の核内発現が有意に上昇するという先行実験の結果と一致し、SFNはSKP1と細胞質において結合し、その機能を抑制している可能性が示唆された。さらにリン酸化cyclin E1はSFNと同様に肺腺癌の悪性化とともに発現量が高くなっていくことも示され、SKP1を含むSCF複合体によるリン酸化cyclin E1のユビキチン化がSFNにより抑制された結果であると考えられる。SFNはSCF複合体の機能抑制を介して肺腺癌初期悪性化を促していることが示唆され、SFN-SKP1の結合をブロックすることで初期肺腺癌の進行を阻止できる可能性が示された。本研究は、肺腺癌の新規oncogeneと考えられるStratifin(SFN、14-3-3 sigma)の肺腺癌細胞における機能とその分子機序を解明することを目的としたものである。一部のTg-SPC-SFNでは15週からCTで肺に腫瘍が発生していることが確認できた。次に、先行実験により肺腺癌特異的SFN結合因子として同定されたSKP1とSFNとの結合部位をClusProプログラムによるタンパク質-タンパク質ドッキングシミュレーションにより予測した。現在は、予測された結合部位に変異を導入したクローンを作製し、in vitroでシミュレーション結果の確認を行っている。また、同時にSFN内のドラッガブル部位を同定し、その部位に特異的に結合するコンパウンドのスクリーニングに入っている。SFNはSKP1を介して肺腺癌初期悪性化を促していることが示されており、同定されたコンパウンドによってSFN-SKP1結合をブロックすることで初期肺腺癌の進行を阻止できる可能性が示唆された。トランスジェニックマウスの樹立と管理に予想以上の時間を要したため、申請書の計画に記した26年度の実験全てを終わらせることはできなかった。しかし、トランスジェニックマウスを用いた実験では予想を上回る結果を得ることができ、研究に新たな展開をもたらしている。

また、26年度に着手できなかったSFNとSKP1の結合部位の同定については、27年度に計画している内容と同時に進行させ十分に終わらせられるものと考えている。実験病理学26年度はSFNが肺腺癌の発生と悪性化を促すこと、それはSCF複合体の機能抑制を介したものであることを示すことができた。27年度はその知見を肺腺癌治療に応用することを目標として研究を進める。具体的には、SFNとSKP1の結合を阻害できる物質を探索し、その制癌作用を評価する。阻害物質としては始めに既存の14-3-3(SFNの属する分子ファミリー)アンタゴニストを検討する。また、上市薬をスクリーニングすることにより、SFN-SKP1の結合を阻害できるものの同定も並行して行う。それらの物質を用いて、in vitroでは添加前後のSFN-SKP1結合力の変化を解析した後、肺腺癌細胞の増殖能抑制作用を評価する。さらにin vivoでは担癌マウスに経静脈/経口投与することで腫瘍サイズがいかに変化するかを解析し、新規抗がん剤として使用しうる可能性を探る。
急性肝不全に対する補助肝移植の研究-異種肝を用いた代用肝開発-

本研究は、急性または亜急性に肝不全に陥った患者に対する補助肝移植による治療法開発の基礎的検討をラットモデルを用いて行った。A.急性肝不全モデルの作成とその評価:体重200300gの近交系LEWラット(RT1^l)を使用した。エーテル麻酔下に左肋骨弓下切開で開腹し、脾臓を創外に出し左側腹部皮下に固着した。4週間後、横切開にて開腹し、門脈を脾静脈合流部より肝門で結紮した。これを肝外門脈閉塞モデルとして、体重及び肝重量、さらに肝機能の変化を観察した。肝の変化は組織学的検討をつけ加えた。また門脈造影を施行し、その血行動態を見た。結果は門脈結紮後腸管鬱血なく生存したP-Sラットは72%(13/18)であった。生存したラットは一過性の体重減少をきたしたが、3週後にはコントロールラット(開腹のみ)と同等になった。門脈結紮後一過性に肝障害をきたしたが、経時的に開腹した。肝重量は徐々に減少し3週後にはコントロールラットに比し70%減少した。門脈遮断時の造影では脾臓を介して側副血行路を経て体循環系に流入する像が確認できた。肝の組織学的検索では中心静脈周囲の肝細胞を中心に著明な細胞萎縮を認めた。B.ラット異所性肝移植モデルの作成と代謝改善の評価:ラット異所性肝移植(ALT)モデルを開発した。カフによる血管吻合を行うためきわめて高い成功率を示した。本モデルを用いてWS正常ラット肝を先天性高ビリルビン血症ラット(Gunn)にALTを行った。代謝は移植後すみやかに改善し、本ALTモデルは肝不全時に対応できるものと判断された。C.急性肝不全ラットへの異種ALTモデルの応用:異種モデルとしてマウス-ラット、ハムスター-ラットの組み合わせで検討を行った。ALTは前述に記したモデルを応用して行った。ドナー肝の大きさや胆道系ドレナージにその技術の難しさがあった。サイクロフォスファミドとFK506の免疫抑制剤を組み合わせることで異種肝の長期生着が誘導された。このようなレジメを用いることで急性肝不全から自己肝が回復するまでの間、異種肝によるサポートが可能であると考えられた。我々は脾臓の皮下自家受動によるP-Sシャントモデル(Bengmark, 1970年)をレシピエントに用いて急性肝不全に対する補助肝移植の研究を行ってきた。現在まで明らかにしたラットP-Sシャトモデルの子細を述べ,本モデルを用いて現在我々の行っている肝移植研究の現状を報告する。[実験材料及び方法]1.P-Sシャントモデル作成とその評価:体重200300gの近交系LEWラット(RT11)を使用した。エーテル麻酔下に左肋骨弓下切開で開腹し,脾臓を創外に出し左腹部皮下に固着した。4週間後横切開にて開腹し,門脈を脾静脈合流部より肝門で結紮した。

これを肝外門脈閉塞モデルとして体重及び肝重量,さらに肝機能の変化を観察した。肝の変化は組織学的検討を付け加えた。また門脈造影を施行し,その血行動態を見た。2.P-Sシャントモデルの肝移植への応用:同所性肝移植(OLT)は既報の如くカフを用いて行った(Kobayashi, Microsurgery 14:541, 1993)。異所性肝移植(ALT)はドナー肝の門脈、下大静脈をレシピエントの左腎動脈・静脈に各々カフを用いて吻合した。総胆管及び上大静脈は結紮した。[結果及び考察]1.門脈結紮後腸管鬱血なく生存したP-Sラットは72%(13/18)であった。生存したラットは一過性の体重減少を来したが,3週間後にはコントロールラット(開腹のみ)と同等になった。門脈結紮後一過性に肝障害を来したが,経時的に開腹した。肝重量は徐々に減少し3週間後にはコントロールラットに比し70%減少した。門脈遮断時の造影では脾臓を介して側副血行路を経て体循環系に流入する像が確認出来た。肝の組織学的検索では中心静脈周囲の肝細胞を中心に著名な細胞萎縮を認めた。これらの実験結果は今後肝萎縮メカニズムの解明に利用できるものと考えられる。2.0LTにこのシャントラットを使用するとレシピエントの無肝期の延長が可能で初心者によい実験系であると思われた。またALT時にP-Sラットを使用し急性肝不全に対する補助肝移植の研究に利用し,引き続き研究を進めている。本研究は、急性または亜急性に肝不全に陥った患者に対する補助肝移植による治療法開発の基礎的検討をラットモデルを用いて行った。A.急性肝不全モデルの作成とその評価:体重200300gの近交系LEWラット(RT1^l)を使用した。エーテル麻酔下に左肋骨弓下切開で開腹し、脾臓を創外に出し左側腹部皮下に固着した。4週間後、横切開にて開腹し、門脈を脾静脈合流部より肝門を結紮した。これを肝外門脈閉塞モデルとして、体重及び肝重量、さらに肝機能の変化を観察した。肝の変化は組織学的検討をつけ加えた。また門脈造影を施行し、その血行動態を見た。結果は門脈結紮後腸管鬱血なく生存したP-Sラットは72%(13/18)であった。生存したラットは一過性の体重減少をきたしたが、3週後にはコントロールラット(開腹のみ)と同等になった。門脈結紮後一過性に肝障害をきたしたが、経時的に開腹した。肝重量は徐々に減少し3週後にはコントロールラットに比し70%減少した。門脈遮断時の造影では脾臓を介して側副血行路を経て体循環系に流入する像が確認できた。肝の組織学的検索では中心静脈周囲の肝細胞を中心に著明な細胞萎縮を認めた。B.ラット異所性肝移植モデルの作成と代謝改善の評価:ラット異所性肝移植(ALT)モデルを開発した。カフによる血管吻合を行うためきわめて高い成功率を示した。本モデルを用いてWS正常ラット肝を先天性高ビリルビン血症ラット(Gunn)にALTを行った。代謝は移植後すみやかに改善し、本ALTモデルは肝不全時に対応できるものと判断された。C.急性肝不全ラットへの異種ALTモデルの応用:異種モデルとしてマウス-ラット、ハムスター-ラットの組み合わせで検討を行った。ALTは前述に記したモデルを応用して行った。ドナー肝の大きさや胆道系ドレナージにその技術の難しさがあった。現在、免疫抑制剤投与による長期サポートを検討している。
消化管運動機能異常に対する体表刺激の意義に関する研究

健常成人男子29名を対象に、胃排出能に及ぼす体表(経穴)への種々の刺激の影響を検討した。実験前日の午後9時以降絶食とした被験者に、前採血を行い、流動食200ml(OKUNOSA,(株)奥野)に、acetaminophen1.5gを混入し十分攪拌したものを服用させ、その後15分、30分、45分、60分、90分、120分の各時点で採血を行い、採取した血清のacetaminophen濃度をFPIA法を用いて測定し、その濃度曲線から胃内容の排出能を推測した。体表刺激部位は胃疾患の治療に用いられる径穴として下腿外側に位置する足三里(ST36)及び陽陵泉(GB34)を選択し、それぞれ鍼灸針(直径0.18mm)を10mmの深度まで刺入し、10分間放置した。以上の刺激を前採血直後に行う群と、刺激を行わないcontrol群の計3群においてacetaminophen濃度の相違を比較検討した(実験1、n=13)。また、実験1と同様に、胃排出能を最も反映していると考えられる、流動食服用後45分の時点のacetaminophen濃度を指標に、下肢(足三里、ST36)、腹部(中,CV12),および耳介への経皮的通電(TENS)の影響を検討した(実験2、n=16)。【結果】実験1;controlおよび陽陵泉への鍼刺激時の血中acetaminophen濃度曲線はほぼ同様の経過を示し、足三里刺激においては、刺激直後の15分の採血において、他の2群よりやや排出能の遅延する傾向がみられたが、有意差には至らなかった。実験2;流動食服用45分の時点でのacetaminophen濃度は、各TENS刺激およびcontrolのの間で有意差を認めなかった。【考察】これまで経穴刺激の胃機能に対する影響が多く報告されてきたが、今回の刺激方法では、健常成人男子の胃排出能に与える影響は少ないと考えられた。