hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
造血器腫瘍に関連する遺伝子異常と細胞の分化,増殖における役割

1.MALTリンパ腫の病因と病態に関する遺伝子の解明と分化,増殖における役割の研究:粘膜関連リンパ組織(MALT)リンパ腫は全悪性リンパ腫の約10%を占め,節外性リンパ腫のなかでもっとも頻度が高い.我々は,MALTリンパ腫に特徴的な染色体転座t(11;18)を解析し,API2-MALT1キメラ遺伝子異常を明らかにした.本研究では,蛋白レベルでの解明として,API2-MALT1キメラ蛋白,API2蛋白,MALT1蛋白の細胞内分布を規定する領域(NES : Nuclear Exporting Signal)を明らかにした.さらに,API2-MALT1ならびにMALT1は細胞質と核の間を行き来することを発見した.従来考えられていた,API2-MALT1およびMALT1は単に細胞質において機能しているのではなく,核内においても何らかの機能を有していることを世界で始めて明らかにした.2.悪性リンパ腫のゲノム異常の研究:びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)は全悪性リンパ腫の3040%を占めるもっとも頻度の高いリンパ腫であるが,その中には複数の疾患単位が含まれる.我々は,DLBCLについて,発現解析による分類(GCBおよびABC type)とArray CGHにより得られたゲノムプロファイルを検討し,それぞれのsubtypeに特徴的なゲノム異常が認められることを明らかにした.また,13q31両域の増幅は予後に関与することを明らかにし,その領域から,新規遺伝子Cl3orf25ならびにmicroRNAを見出し,これらが増幅領域の標的遺伝子であることを世界で始めて明らかにした.マントル細胞リンパ腫についても同様に検討し,病型特徴的なゲノム異常が存在することを明らかにした.また,2q13ホモ欠失領域からその責任遺伝子が,BCL2の機能に拮抗するBIM1であることを始めて見出した.1.MALTリンパ腫の病因と病態に関する遺伝子の解明と分化,増殖における役割の研究:粘膜関連リンパ組織(MALT)リンパ腫は全悪性リンパ腫の約10%を占め,節外性リンパ腫のなかでもっとも頻度が高い.我々は,MALTリンパ腫に特徴的な染色体転座t(11;18)を解析し,API2-MALT1キメラ遺伝子異常を明らかにした.本研究では,蛋白レベルでの解明として,API2-MALT1キメラ蛋白,API2蛋白,MALT1蛋白の細胞内分布を規定する領域(NES : Nuclear Exporting Signal)を明らかにした.さらに,API2-MALT1ならびにMALT1は細胞質と核の間を行き来することを発見した.従来考えられていた,API2-MALT1およびMALT1は単に細胞質において機能しているのではなく,核内においても何らかの機能を有していることを世界で始めて明らかにした.2.悪性リンパ腫のゲノム異常の研究:びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)は全悪性リンパ腫の3040%を占めるもっとも頻度の高いリンパ腫であるが,その中には複数の疾患単位が含まれる.我々は,DLBCLについて,発現解析による分類(GCBおよびABC type)とArray CGHにより得られたゲノムプロファイルを検討し,それぞれのsubtypeに特徴的なゲノム異常が認められることを明らかにした.また,13q31両域の増幅は予後に関与することを明らかにし,その領域から,新規遺伝子Cl3orf25ならびにmicroRNAを見出し,これらが増幅領域の標的遺伝子であることを世界で始めて明らかにした.マントル細胞リンパ腫についても同様に検討し,病型特徴的なゲノム異常が存在することを明らかにした.また,2q13ホモ欠失領域からその責任遺伝子が,BCL2の機能に拮抗するBIM1であることを始めて見出した.リンパ造血器腫瘍には、病型病態を特徴付ける染色体転座とその責任遺伝子が明らかとなっている。しかし染色体転座単独では腫瘍化しないことも明らかとなっており、転座以外のにどのような遺伝子が関与しているのか明らかではない。本研究の目的は、染色体転座関連遺伝子とそれらに関連して腫瘍化に寄与する遺伝子を見出し、正常リンパ造血器細胞の分化、増殖、細胞死における役割の解明することである。びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)は全悪性リンパ腫の3040%を占めるもっとも頻度の高いリンパ腫であるが,その中には複数の疾患単位が含まれる.我々は,CD5細胞表面マーカーに着目し,CD5陽性(+)DLBCLが予後の悪い疾患単位を形成することを報告し,ゲノム異常様式も異なることを明らかにした。また、全ゲノムを均等に検討できるArray CGH法を確立することができたので、悪性得リンパ腫に認められる遺伝子異常について検討した。その結果、CD5+DLBCLとCD5-DLBCLとで、ゲノム異常様式が異なることを見出した。さらに、13q31両域の増幅が、予後因子として認められることを明らかにした。その領域から、新規遺伝子C130rf25を見出したが、その腫瘍化能や生物学的機能は現在検討中である。T/NKリンパ腫の病因と病態に関する遺伝子の解明と分化,増殖における役割の研究については、現在27症例を集積することができた。現在、array CGH法による解析を進めている。1.MALTリンパ腫の病因と病態に関する遺伝子の解明と分化,増殖における役割の研究:粘膜関連リンパ組織(MALT)

リンパ腫は全悪性リンパ腫の約10%を占め,節外性リンパ腫のなかでもっとも頻度が高い.我々は,MALTリンパ腫に特徴的な染色体転座t(11;18)(q21;q21)を解析し,API2-MALT1キメラ遺伝子異常を明らかにした.本年度は,蛋白レベルでの解明の第一歩として,API2-MALT1キメラ蛋白,API2蛋白,MALT1蛋白の細胞内分布に細胞内分布を規定する領域を検討した.その結果,API2-MALT1ならびにMALT1は細胞質と核の間を行き来することを見出し,その責任領域であるNES(Nuclear Exporting Signal)が存在することを発見した.従来考えられていた,API2-MALT1およびMALT1は単に細胞質において機能しているのではなく,核内においても何らかの機能を有していることを世界で始めて明らかにした.2.びまん性大細胞型B細胞リンパ腫の病因と病態に関する遺伝子の解明と分化,増殖における役割の研究:びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)は全悪性リンパ腫の3040%を占めるもっとも頻度の高いリンパ腫であるが,その中には複数の疾患単位が含まれる.我々は,DLBCLについて,発現解析による分類(GCB typeとABC type)とArray CGHにより得られたゲノムプロファイルを検討し,それぞれのsubtypeに特徴的なゲノム異常が認められることを明らかにした.マントル細胞リンパ腫についても同様に検討し,病型特徴的なゲノム異常が存在することを明らかにした.また,2q13ホモ欠失領域からその責任遺伝子が,BCL2の機能に拮抗するBIM1であることを始めて見出した.
血管内皮由来の血管収縮ペプチド.エンドセリンの薬理学的生物学的研究

本研究計画は、エンドセリンの薬理作用、特に血管収縮作用、拡張作用を中心にその作用機構を解明することを目的とした。一方でエンドセリンは内皮細胞のみならず、かなり広汎な組織、細胞に存在することから、その基礎としてその受容体の構造と機能の解明が重要であると考えた。本研究計画の初段階でエンドセリンの3種のアイソタイプの発見がおこなわれ、それぞれのアイソタイプの組織における分布の検討が行なわれた。一方エンドセリンの種々の組織における薬理作用がつぎつぎに報告されることからエンドセリンの受容体のサブタイプの存在が推察された。われわれはラット肺、ヒト腸管のcDNAライブラリ-によりエンドセリン受容体のcDNクロ-ニングを行なった。その結果これらの受容体は二種のサブタイプにわかれることがわかりそれぞれETA,ET_Bと名づけた。これらはいずれも7回膜貫通型のG蛋白質共役型受容体である。さらにこれら2種の受容体キメラ受容体を作製し、それぞれの受容体の性格を決定する部位の検討が行なわれた。いずれの受容体もそのアゴニストに刺激によりホスホイノシト-ルリン酸の系が活性化され、細胞内遊離カルシュウム濃度が上昇することが確かめられた。また多くの細胞でカルシュウムチャンネルの開口が示され細胞外カルシュウムイオンの流入が認められた。特にブタ冠動脈平滑筋では電位依存性のカルシュウムチャンネルの開口が認められこれに百日咳毒素感受性のG蛋白質が関与することが示された。また自然発症高血圧症ラットの血管がエンドセリン感受性の高いことが示され、その原因についての検討が行なわれた。さらにエンドセリンの薬理作用の詳細にわたる検討、ヒト血中エンドセリン濃度の測定により、エンドセリンの病態生理的意味に関する多くの知見が加えられ、エンドセリンの薬理作用、生理的意義解明にむけて重要な研究成果をあげることが出来た。我々は以前にヒト遺伝子の解析から3種のエンドセリンのアイソタイプのある事を指摘した。このアイソタイプのcDNAをヒト腸管のcDNAライブラリ-の中からクロ-ニングし、その構造を決定した。このライブラリ-のエンドセリンクロ-ンはETー3のものが多く、次いでETー1、ETー2はわずかであった。この事は腸管では3種のエンドセリンが全て発現されており、そのほとんどがETー3とETー1であり、ETー2はわずかである事を示している。同様にラットの各組織からmRNAを調製しノ-ザンブロット法を行った。ETー3は副腎と腸管で、腎臓皮質ではETー2とETー1が発現されていた。脳ではETー1が圧倒的であるが、ETー3もわずかに発現されている。内皮細胞ではETー1だけが発現されていた。これらの各エンドセリンの発現はエンドセリンの研究の今後の方向性を決めるものとして極めて重要である。ブタ冠動脈を用いた実験では、エンドセリンによる持続的収縮は外液のカルシュウムイオンを必要とし、また、ジヒドロピリジン系のカルシウム拮抗薬で拮抗される。エンドセリン収縮のジヒドロピリジン系のカルシュウム拮抗薬による抑制は血管によって異なり、またこの薬物の結合部位はエンドセリンの結合部位とも異なることが示された。またL型カルシュウムチャンネルのエンドセリンによる活性化は百日咳毒素に感受性のあるG蛋白を介する系であることも示唆された。一方、エンドセリンはホスホリパ-ゼCを活性化し、イノシト-ルトリスリン酸を増加させる。したがってエンドセリンによる平滑筋収縮の際の細胞内信号伝達系は少なくとも2つの経路を介して行われることが示唆された。

さらにこ他共同研究としてエンドセリンの受容体の問題、エンドセリン合成のプロセッシングの問題、ヒト血中エンドセリン濃度測定による病態生理の解析の点で大きな進展がみられた。強力な血管収縮ペプチドエンドセリンの薬理学的、分子生物学的基礎研究を推し進めるため、いくつかの研究計画を推進しているが、本年度の大きな成果として以下の2つのことがあげられる。1)ブタ冠動脈から単離した平滑筋を用いた場合、エンドセリン1によってホスホリパ-ゼCとカルシュウムチャンネルの活性化がおこる。前者の活性化の過程では百日咳毒性に感受性のないGタンパク質が関与する。ニフェジピンを作用させるとエンドセリン1による血管収縮の用量反応曲線は右方に移動する。これを百日咳毒素であらかじめ処理しておくとやはりエンドセリンの用量反応曲線は右方に移動する。またエンドセリンによる放射性カルシュウムの取り込みも減少する。冠動脈を百日咳毒素処理することによって41,000ダルトンの膜タンパクがADPリボシル化される。これらの事実は、この過程は百日咳毒素に感受性のあるGタンパクを介していることを示している。2)ラット肺のcDNAライブラリ-から、エンドセリンの受容体のcDNAをクロ-ン化した。この受容体は415残基のアミノ酸からなっていると考えられ7回形質膜を貫通するとみられるGタンパク質結合性のロドプシン型の受容体である。発現ベクタ-中にこのcDNAを挿入してCOSー7あるいはCOPー5細胞中に発現させ、3種のエンドセリンアイソペプチドの結合性、あるいは細胞内遊離カルシュウムを調べてみると、この受容体は3種のアイソペプチドに対して同程度に親和性を持ち、エンドセリン1あるいは3、いずれでも同様に一過性の細胞内遊離カルシュウム濃度上昇をもたらし、またホスホイノシト-ルを産生するタイプの受容体であり、平滑筋膜上のエンドセリン受容体とは異なると考えられる。事実ノ-ザンブロット法によっても平滑筋では発現されていないことが確かめられた。2種のヒト・エンドセリン受容体からキメラ受容体を作成し,その構造活性相関を解析した。これら受容体には、共に細胞内外に各3コのル-プがあるが、これに相当するcDNAの適当な位置に、siteーdirected mutagenesisにより共通の制限酵素部位を導入し、ここを接続点としてキメラ受容体cDNAを作成した。native及びキメラ受容体cDNAを、哺乳類発現ベクタ-に組み込み、DEAEーDextran法によりCOS細胞に一過性に発現させた。そして、ラジオリガンド結合実験及び、リガンド刺激による細胞内カルシウム上昇を蛍光色素であるFuraー2を用いて測定した。すべてのキメラ受容体は、エンドセリン受容体としての最低限の構造は保っていた。ETー3のK_D値のETー1のそれに対する非を検討した。nativeのET_Bでは,何者の比は1.0であった。ET_Bの構造を基本とし、N末端細胞外部分から3番目の膜貫通部分までをETAの構造に置換してもETー3のK_D値に有意な変化は認めなかった。ETー3のK_D値のETー1のそれに対する比を検討した。nativeのET_Bでは、3番目の膜貫通部分までをET_Aの構造に置換してもETー3のK_D値に有意な変化は認めなかった。
液胞タンパク質のプロセシングに着目した機能性食品設計法の開発

種子には大量に存在する貯蔵タンパク質以外にも、さまざまなアレルゲン、レクチン、トリプシンインヒビターなどの生理活性を持つタンパク質が含まれている。これらのタンパク質のほとんどは前駆体として合成されるが、この前駆体タンパク質は液胞にいて成熟型にプロセスされる。このプロセシングによりタンパク質は大きな構造変化、ひいては性質の変化をひき起こす。即ち液胞内プロセシングに関わる酵素は種子タンパク質の構造を決定する鍵酵素の一つといえる。本研究では食糧となる種子細胞内のプロセシングを制御することにより、その栄養価を落とすことなく、そこに含まれる有害タンパク質の無毒化を目指していきたいと考えている。植物由来のアレルゲンの一つとして報告されているヒマ種子の2Sタンパク質と類似性のあるタンパク質は高等植物の種子に広く分布しているが、このタンパク質の登熟種子細胞中での生合成を調べた結果、主要な貯蔵タンパク質と同様の過程を経て合成輸送され、液胞内で成熟型に変換し蓄積されることが判明した。ヒマ種子より単離精製した液胞プロセシング酵素は様々な種子タンパク質のプロセシングに関わっていることが示された。即ち本酵素は多種類の種子タンパク質の最終的な構造を決定する鍵酵素とみなすことができる。この液胞プロセシング酵素に着目した分子育種を目指すために、本酵素のcDNAを単離し、その翻訳領域の構造解析を行った。その結果、液胞プロセシング酵素はcysteine Proteinaseであるが、既知のcysteine Proteinaseとは類似性を示さず、唯一住血吸虫Schistosoma mannsoniで報告されている推定上のProteinasesと33%の同一性を示した。また、この翻訳産物は55kDaで、N末端のシグナルペプチド、37kDa活性酵素領域、そしてC末端のプロ領域からなっている。前駆体はプロセシング活性を持たず、活性発現のためにはC末端プロ領域の除去が必要であることが判明した。
機能理解による設計意図抽出に基づいた再設計支援システムに関する研究

本研究の目的は対象物の現在の物理構造・振舞いのモデルと改善要求,評価基準を与えられて,概念設計段階における有用な再設計案を提案する再設計支援システムの設計と実現である.前年度までに,再設計について検討し,機能達成方式知識の体系化の重要性が明らかになった.本年度では,機能達成方式知識を機能概念体系に基づいて体系的に定式化することを目指した.これによって前年度の研究によって明らかとなった従来の知識整理法の欠点を解決し,再利用性のある知識を記述することを目指した.また,問題解決をガイドする知識として,昨年度考察した方策知識を含む様々な戦略を表す再設計戦略知識の同定を行った.さらにこれらの考察に基づいて,前年度実装した再設計案提案モジュールを,体系的機能方式知識を用いて柔軟な戦略の再設計ができるように拡張した.具体的には以下の研究項目を行った.(1)機能達成方式知識の記述の基盤となる機能概念オントロジーを整備した.従来開発してきたデバイス系の機能概念に加えて機構系の機能概念について考察し,各概念を明確に定義したものを集積した.(2)昨年度考察した機能達成方式知識を,一般的機能概念オントロジーに基づいた形に,再記述した.これによって知識の再利用性が向上した.(3)昨年度考察した再設計方策を一般化し,再設計戦略知識として記述した.機能達成方式を代替する再設計をその戦略のひとつとして定式化した.(4)昨年度実装した再設計案生成モジュールを拡張した.一般的機能概念オントロジーの定義と制約に基づいた機能達成方式知識を用いて,多様な再設計戦略に沿って,改善要求を満足する機能構造を出力するシステムのプロトタイプを構築した.以上の研究によって,概念設計レベルにおける改良設計を行うシステムが必要とする知識構成が明らかになり,特に主要な役割を果たす機能達成方式知識を記述する枠組みが明らかになった.本研究の目的である概念設計段階における有用な再設計案を提案する再設計支援システムの設計と実現を目指して,再設計タスクの4つのステップのうち,3番目にあたる「再設計案生成」に焦点を絞った研究を行った.まず,機能構造を大きく変える再設計の実例を収集し,分析した.設計方法論,価値工業(VE)や経営工学(IE)などの文献から例を収集し,例を改善要求,評価基準,機能構造の変化,注目した機能または方式などの要素に分解・整理した.次に,これらの再設計例から一般的な再設計知識を抽出した.ここで機能を部分機能へ展開する際に注目した原理や現象,構造などを「方式概念」として明示化することで,機能を達成する様々な方式を本質的属性に基づいて体系化することができることが明らかとなった.従来の知識整理ではこのような概念は暗黙的な背景知識となっており,このことが従来の方式的知識において分類の観点が混在しまた必要以上に複雑になっていた原因のひとつであると考えられる.次に,考察の結果に基づいて,再設計知識を計算機上に記述した.本年度では単純な問題空間モデルに基づき,ルール形式で知識を定式化した.これらの知識を解釈し,実行する再設計案生成モジュールの第1版を実装した.モジュールはWindows NT上のAllegro Common LISPで実装されており,知識の適用条件に基づいて適用すべき再設計知識を決定することができることを確認した.再設計知識には,上述の機能達成方式知識のほかに,再設計のアプローチを規定する戦略知識が重要である.本年度の基礎的考察に基づき,来年度においてさらなる検討を加える予定である.本研究の目的は対象物の現在の物理構造・振舞いのモデルと改善要求,評価基準を与えられて,概念設計段階における有用な再設計案を提案する再設計支援システムの設計と実現である.前年度までに,再設計について検討し,機能達成方式知識の体系化の重要性が明らかになった.本年度では,機能達成方式知識を機能概念体系に基づいて体系的に定式化することを目指した.これによって前年度の研究によって明らかとなった従来の知識整理法の欠点を解決し,再利用性のある知識を記述することを目指した.また,問題解決をガイドする知識として,昨年度考察した方策知識を含む様々な戦略を表す再設計戦略知識の同定を行った.さらにこれらの考察に基づいて,前年度実装した再設計案提案モジュールを,体系的機能方式知識を用いて柔軟な戦略の再設計ができるように拡張した.具体的には以下の研究項目を行った.(1)機能達成方式知識の記述の基盤となる機能概念オントロジーを整備した.従来開発してきたデバイス系の機能概念に加えて機構系の機能概念について考察し,各概念を明確に定義したものを集積した.(2)昨年度考察した機能達成方式知識を,一般的機能概念オントロジーに基づいた形に,再記述した.これによって知識の再利用性が向上した.(3)昨年度考察した再設計方策を一般化し,再設計戦略知識として記述した.機能達成方式を代替する再設計をその戦略のひとつとして定式化した.(4)昨年度実装した再設計案生成モジュールを拡張した.一般的機能概念オントロジーの定義と制約に基づいた機能達成方式知識を用いて,多様な再設計戦略に沿って,改善要求を満足する機能構造を出力するシステムのプロトタイプを構築した.以上の研究によって,概念設計レベルにおける改良設計を行うシステムが必要とする知識構成が明らかになり,特に主要な役割を果たす機能達成方式知識を記述する枠組みが明らかになった.
効率的な防災施策提言のための地震動予測地図と文化財データベースの融合手法の構築

重要文化財美術工芸品の空間情報データベースを構築し、これまでのデータとあわせて現時点での国指定文化財に関する一連の空間情報データベースの構築が完了した。同時に、データベースの構築や国内での聞き取り調査から、データベース構築の際の問題点を明らかにした。また、イタリアでの空間情報データベースを利用した文化財防災の事例と、アメリカでの文化財の地震対策に関する調査を行い、日本の事例との比較および日本への適用の可能性について検討した。さらに、これまでに構築したデータベースと発生した地震のデータとを連携することにより被害予測を行ったところ、実際の被害状況とよく一致したことから、災害発生時のレスキュー活動への活用の可能性を示した。1重要文化財美術工芸品空間情報データベースの構築本年度は、重要文化財美術工芸品9,817件をデータベースに登録し、所有者でグループ化して空間情報データベース化した。ただし、今回情報源とした文化庁のウェブサイトで公開されている国指定文化財の情報には、公的機関であるにもかかわらず所有者や所蔵者が記載されていない場合が多く、空間情報データベースとして利用可能な件数は557件であった。さらに、同一の所有者で名称の表記が異なっていたり、地番の標記の不統一や住所の誤記などにより同一所有者と認識できないレコードが見られた。そこで、データベース構築の過程と、既存のデータベースの問題点についてまとめた。2イタリアの文化財防災行政に関する事例調査イタリアでは、1990年から「文化財危険地図(Carta del Rischio del Patrimonio Culturale)」を構築し、国内の文化財を対象にデータベース化・危険度評価を実施している。2006年11月5日11日まで、イタリア・ローマの国立中央修復研究所(ICR)で担当者(アンジェラ・マリア・フェローニ、アレッサンドロ・ビアンキ、カルロ・カカーチェの3氏)への聞き取り調査を行った。フェローニ氏とカカーチェ氏は1990年のシステム構築開始から文化財危険地図に関する業務に携わっている。また、ビアンキ氏は、イタリア南部の文化財の地震危険度に関する総合調査の責任者である。今回、主に下記のような項目について調査を行った。・文化財の危険度の評価の定量化に用いられる指標および危険度の算出方法・文化財危険地図構築の歴史と文化財・文化活動省の文化財危険地図に対する態度の変化・データベース構築の組織とデータ管理方法・イタリア南部での地震危険度に関する総合的な調査・インターネットを経由した地方の文化財監督局の参加のありかたと参加を促す手法1.重要文化財美術工芸品空間情報データベースの構築昨年度にごく一部の所在地情報しか登録できなかった重要文化財美術工芸品9,817件について、「国宝・重要文化財大全」の情報を用いて住所および所在市町村の緯度経度をデータベースに登録した。当該書籍には個人蔵の文化財についても所在地が明記されているため、この作業により現時点での国宝・重要文化財に関する空間情報データベースが完成した。2.アメリカの美術館の地震対策に関する事例調査アメリカの西海岸地域は日本と同様に大規模な地震災害が発生する。サンフランシスコ市では、耐震レトロフィットとよばれる地震対策により、歴史的建造物の保護と活用が行われている。2008年3月15日20日に、サンフランシスコ市のデ・ヤング美術館、アジア美術館で、耐震レトロフィットや展示室内での展示品の地震対策について調査を行うとともに、関連の資料を収集した。この2つの美術館は近年まで同一の建物の両翼に分かれて所在していた。デ・ヤング美術館はゴールデンゲートパークに新たに建造された建物、アジア美術館は市内中心部の旧図書館を改修した建物に移転するという対照的な対応をとっている。両者とも、ダンパーによる建物全体の免震を行っているものの、収蔵品のうち、陶磁器などは転倒防止対策がなされていたが、特にデ・ヤング美術館収蔵の絵画では、吊り金具などについて日本と比べ目立った対策が観察できなかった。今後、免震の博物館・美術館での個別の作品への地震対策の必要性について検討が必要である。3.災害時における成果の活用これまでに作成したデータベースを用いて、能登半島地震および新潟県中越沖地震の各地の震度と文化財空間情報データベースとの連携により、被災の可能性のある文化財を抽出したところ、実際の被害状況とほぼ一致していることがわかった。1.国内外の文化財防災に関する事例調査:文化財防災や文化財データベース構築に関する国内外の事例について、関連のシンポジウムへの参加および現地での聞き取りによる調査を行った。本研究での空間情報データベース構築においても課題となった点であるが、データベース構築にあたっては、所在地情報や所有者の情報など、セキュリティとプライバシーの問題を解決するためのしくみが必要とされていた。また、想定される利用対象者を特定することや、地域特有の災害に着目することなども、データベース改善のための課題として挙げられた。2.成果の活用:これまでに作成したデータベースを用いて、2008(平成20)年に発生した宮城・岩手内陸地震の各地の震度と、文化財空間情報データベースとの連携により、被害のおそれのある文化財を抽出することで、データベースの活用の可能性を示した。
性関連精神神経疾患の分子基盤の解析

近年、急速な高齢化社会を迎え、加齢に伴う更年期障害の一つとしてうつ病が注目を集めている。女性では閉経に伴うエストロゲンの急激な低下により、抑うつ、不安やうつ病のリスクが増加する。また、男性更年期障害としてもうつ病が広く認知されつつある。性ステロイドホルモンは種々の核内受容体を介した、標的遺伝子群の転写調節によりその生理作用が発揮される。このように、性ステロイドホルモンは抗うつ作用を有していることは明らかであるものの、その作用機序は不明な点が多い。そこで本研究では、性ステロイドホルモン依存性うつ病モデル動物の確立を図るため、アンドロゲン受容体(AR)、及び二種のエストロゲン受容体(ER・、ER・)の3重欠損、2重欠損、及びそれぞれのシングル遺伝子欠損(KO)マウスの作出を行った。3重へテロマウス3重KO雄マウスは正常に出生したものの、性特異的行動発現が完全に消失していたばかりでなく、明暗往来テスト、高架式十字迷路テスト、オープンフィールドテストにおいて顕著な不安行動障害が観察された。したがって、性ステロイドホルモン依存性うつ病モデルマウスの確立に成功したと判断した。次にマイクロアレイ解析により、標的遺伝子群の検索を行った。その結果、アンドロゲン受容体及びエストロゲン受容体はそれぞれ協調して、リガンド依存的に転写因子Xの転写調節を介し、セロトニン1A受容体の発現を正に調節することで、抗不安作用を発揮している可能性が示された。そこで本研究では、性ステロイドホルモン依存性うつ病モデル動物の確立を図るため、アンドロゲン受容体(AR)、及び二種のエストロゲン受容体(ERα、ERβ)の3重欠損、2重欠損、及びそれぞれのシングル遺伝子欠損(KO)マウスの作出を行った。3重ヘテロマウス3重KO雄マウスは正常に出生したものの、性特異的行動発現が完全に消失していたばかりでなく、明暗往来テスト、高架式十字迷路テスト、オープンフィールドテストにおいて顕著な不安行動障害が観察された。その結果、性ステロイドホルモン受容体はリガンド依存的に転写因子の転写調節を介し、セロトニン1A受容体の発現を正に調節することで、抗不安作用を発揮している可能性が示された。したがって、性ステロイドホルモン依存件うつ病モデルマウスの確立に成功したと判断した。

その結果、アンドロゲン受容体及びエストロゲン受容体はそれぞれ協調して、リガンド依存的に転写因子Xの転写調節を介し、セロトニン1A受容体の発現を正に調節することで、抗不安作用を発揮している可能性が示された。
近代日本における児童教育雑誌の成立と読者共同体の成立過程に関する研究

(1)明治期以降の読者意識の性格・特徴は、「国家主義」・「良妻賢母」・「立身出世」思想に裏打ちされていた。投稿者は勉学・作品投稿で切磋琢磨し絆を深めた。(2)『子ども読者』年齢層は幼稚園児小学校高学年迄が多かった。(3)『読者共同体』は愛読者の自然な結びつきであり男女により特徴に差異があった。「児童」の意義は明治期では主に「少年」に近い意味で使用され、大正期以降は「小学生以上の少年・少女」に変化した。本研究課題は「近代日本における児童教育雑誌の成立と読者共同体の成立過程に関する研究」であり明治期以降にわが国に登場した児童教育雑誌がいかなるかたちで作成され、それが子どもの読者を通じてどのような影響を与えたのかについて分析を試みるものである。また今後明らかにしようとする課題として掲げた1)「明治期から昭和戦前期に発刊された児童教育雑誌を考察し、児童教育雑誌の特徴を分析し、その特徴を明らかにする」については、大正期から昭和戦前期に焦点をあてた児童雑誌の分析は進められてきた(『赤い鳥』・『金の船』(後継雑誌『金の星』)・『幼年倶楽部』など)が、明治期刊行の雑誌については『幼年の友』のみを扱っただけに止まっているため、平成21年度は、おもに明治期刊行雑誌の収集や分析を進めていかなければならないと考えている。2)「明治期から昭和戦前期における『子ども読者』の年齢層およびその特徴を明らかにする」ことについては、およそ明治期から昭和戦前期までにかけ、おおかた幼稚園児(3歳)から小学校高学年(10歳)ごろまでの読者が多いことが分析により明らかになった。3)「想像上の『読者共同体』の形成過程を考察し、その特徴について明らかにする」ことについては、大正期から昭和戦前期にかけて発刊された児童雑誌の多くは、多くの読者を獲得しながら、自然に「読者共同体」を形成していることがわかってきた。しかしながら明治期刊行雑誌の分析が未開拓であることから、今後はそちらに力を傾け、悉皆研究を行わなければならないと考えている。昨年来から明らかにしようとした課題についても、1)「明治期から昭和戦前期に発刊された雑誌を考察し、雑誌の特徴を分析しその特徴を明らかにする」については、昨年度に引き続き大正期から昭和戦前期に焦点をあてた雑誌読者分析を進めてきた。(『幼年の友』・『幼年世界』・『少年世界』・『少年界』・『小学少年』・『小学少女』等)すべての刊行雑誌の分はでなかつたのの、明治期以降の読者像・読者意識の性格や特徴については、「国家主義」の思想と「良妻賢母」・「立身出世」思想めメルクマールとして結びついていることが多く、愛読者仲間とともに勉学、優秀作品投稿など互いに切磋琢磨することで絆を深めた。女子読者は特有の「女性言葉」を使用することで、仲間意識を高め、共同体の形成につながっていった。当初の研究目的についてはおおむね明らかにするととができた。2)「明治期から昭和戦前期における『子ども読者』の年齢層およびその特徴を明らかにする」ことについても明治期から昭和戦前期までにかけて大方幼稚園児(3歳)から小学校高学年(10歳)ごろまでの読者が多いことが分析より明らかになった。また男子読者・女子読者によって共同体の特徴が異なる点や結束力の強さの違いについても明らかにならた。また「児童読者」については、わが国においては明治期からすでに存在し、おもに「少年」に近い意味で使用されていたこと、さらに大正期以降になると、とりわけ「小学生以上の少年・少女」を指すものに変化してくることも児童雑誌分析より見いだすことができた。今後は成果報告書の作成に方全を期すと同時に、近代の少年雑誌・少女雑誌の読者分析についても行うことを課題としたい。
自閉症スペクトラム児とその養育者への対人関係構築のための支援プログラムの有効性の検討

自閉症児を持つ養育者への支援のあり方を検討することを目的に調査研究を行った。養育者の認識する子どもの特性が実際の診断より過剰である場合、問題行動のみに注目し、見通しをもった対応が減る傾向にあることから、支援では子どもの行動に関する共通認識を持った上で具体的な対応を提示する必要性が示唆された。また、養育者が受講するコミュニケーションや社会性促進を目的としたプログラムは、非言語的行動や情緒面への理解を深めることから有効であることが示唆された。ICD-10およびDSM-IVにおける自閉症基準において、中核となる3つの症状、対人的相互反応における質的な障害、コミュニケーションの質的な障害、および限定・反復的・常同的行動や興味があげられる。欧米におけるこうした症状の正確な診断には、ADI-RやADOSが用いられる。本研究では、米国において開発された対人関係構築に焦点を当てたプログラムRDI^[○!R](Relationship Development Intervention)の理論的背景に関する文献検討を行うこと、そしてADI-R(養育者から子どもの症状を聞き取る形式)とADOS(専門職による子どもの行動観察)における評価に違いが生じた場合に、それが養育者の特性とどのような関連にあるかを検討した。最初に、RDI^[○!R]に関する文献検討を行った結果、本プログラムが自閉症における中核となる問題にアプローチするために有効な手法を用いていることが整理された。すなわち、対人関係に重要であり本質的な基盤となる、定型発達児が生後すぐより開始し育み始める社会的なやりとりの手段の一つである視線や表情、さらに指さし等の非言語的なコミュニケーション手段について、再度育み治すということを重視している。そして養育者が子どもの最も良き指導者であるという視点から介入技法をプログラムとしてまとめたものがRDI^[○!R]であり、その有効性に関する研究も行われている(Gutstein, Burgess&Montfort,2007)。次に、ADI-RとADOSにおける評価の違いと養育者との特性について検討した。阪大病院「親と子の発達相談」事業においてADI-RとADOSの両方を実施した家族18名を分析対象とした。ADI-RとADOSの各下位領域のうち、コミュニケーションおよび社会的相互関係に関する項目を比較検討した結果、9名においてADI-RとADOSに関する内容に違いがみられた。そのうち、ADOSにおける結果がADI-Rより重篤であったのが2ケース(自閉症特性過小認識群)、ADI-Rにおける結果がADOSより重篤であったのが7ケース(自閉症特性過剰認識群)あった。これらの2群について養育者の特性(エゴグラムやKGPSI等)に関する量的分析を試みたが、被検者数が少なかったことから有意な違いは見られなかった。次に対象児の長所や困難点等に関する自由記載の分析を行った。その結果、自閉症特性過剰認識群については、将来に対する不安に関する記述が多いこと、この傾向のある養育者は配偶者の非協力を感じている点が明らかとなった。また対人関係の相互性よりも、非言語的あるいは想像性が求められるコミュニケーションについて、問題ととらえている傾向が見られることが明らかとなった。今後、データを蓄積していくことで、より明確な傾向を抽出する必要がある。本研究では対人関係を構築することに焦点をあてたプログラムの受講による養育者と子どもとの相互作用の変化を、養育者と子どもそれぞれの特性の及ぼす影響を考慮して検討することを目的として行われた。対人関係発達指導法の手法を取り入れたセッションを養育者に対し実施し、各セッションで宿題として養育者と子どもとのやりとりをビデオ録画してもらった。対象となったのは高機能発達障害のセッション開始時5歳4ヵ月の男児とその養育者、および6歳10ヵ月の男児とその養育者であった。なお、面接開始前には養育者特性を把握するための質問紙調査、子どもに対してはADOSを実施し、合わせて養育者と子どもの相互作用を測定できる行動観察アセスメントを行った。行動観察アセスメントに関しては非言語的コミュニケーションに焦点をあてたセッション15回終了時点にて再度同じ内容で行い、質的分析を通して養育者と子のやりとりの変化を検討した。その結果、両対象児ともにみられた変化として、面接開始前と比較して「言葉」としての反応ではなく、他者を参照するための視線、動作による提示などの増加がみられた。また、5歳4ヵ月の男児とその養育者との行動観察アセスメントにおける相互作用では、開始前では癇癪として物を投げるという動作(5秒後)がみられたのに対し、15回終了時には言葉による説明(5秒後)と適応的な代替行動として感情を表現(40秒後)といった変化がみられた。養育者の内的特性による相互作用の変化の違いはみられなかった。
機能に基づく仕様のコンポーネント化を可能とする形式仕様言語の開発

本研究では、仕様のコンポーネント化を支援するための諸機能を有する仕様記述言語CafeOBJを基盤ツールとして用いた。CafeOBJは、研究代表者を中心に開発を続けている代数仕様言語で、抽象データ型のみならず、オブジェクト指向におけるオブジェクトや抽象機械の記述にも適しており、仕様のコンポーネント化を支援する強力なモジュールシステムを有するのも特徴の一つである。具体的には以下のことを行った。・検証実験:鉄道の信号システム、航空管制システム、病院における患者監視システム等、人命に多大な影響を及ぼし得るシステムは、並列分散(実時間)システムであることが多い。これらシステムをCafeOBJ支援のもとで検証する方法を整理、提案し、いくつかの事例研究をとおして提案手法の有効性を確認した。・ツールの設計および作成:コンポーネントを組み上げて高品位のソフトウェアを作成するための基礎理論を作り、その理論に基づいてソフトウェアを作成するツールの設計および作成を行った。本年度は,以下のとおり,代数モデルによるUMLの意味論の記述と,代数仕様言語用モジュールシステムの設計・検証を行なった.1.代数モデルによるUMLの意味論:UMLのクラス図とCafeOBJの振舞仕様とを対応づけることにより意味を明確にする方法を提案した.この方法ではUMLのクラス図から振舞仕様の指標,振舞仕様からUMLのクラス図を得る事ができる.さらにUMLで記述された仕様に自然言語の説明やstate chartがある場合には,それらを基に振舞仕様の等式を記述することが可能である.システムの動作を記述するUMLの要素(state chart等)を,どのように振舞仕様に対応させるかについては今後の課題である.本方法は,UMLで記述された仕様に形式仕様を使って厳密な意味を付加するための方法として使える他に,UMLを振舞仕様のユーザインタフェイスとして使うための基礎としても有効である.本方法では,振舞仕様から対応するUMLの完全なクラス図が得られるので,形式仕様の可読性の向上に貢献できると考えられる.2.代数仕様言語用のモジュールシステムの設計・検証:代数仕様言語のモジュールシステムのモジュールとしてソフトウェアコンポーネントを効率よく扱うには,効率のよいモジュールシステムが必要である.そこで,代数仕様言語用のモジュールシステムの仕様をCafeOBJで記述し,モジュールシステムのデータ構造をStandardMLの実装を参考に設計するとともに,その仕様をCafeOBJで記述した.前者の仕様を要求仕様,後者を設計仕様と呼ぶ.設計仕様が要求仕様の詳細化であることをCafeOBJを用いて検証した.以上をもとに,次年度以降では,引続き「代数モデルによるUMLの意味論の記述」および「代数仕様言語用のモジュールシステムの設計・実現」を行ない,目的とする仕様言語の設計を開始する.本年度は,以下のことを行った。・コンポーネントの合成による仕様記述および検証:形式仕様記述言語CafeOBJのための,仕様のコンポーネント化のための基礎技術を開発した。この基礎技術にもとづいて仕様を記述することで,コンポーネントの仕様記述のみならず,検証をも再利用することができる。また,この仕様作成および検証方法は,オブジェクト指向によるソフトウェア開発との相性がよい。・コンポーネントの合成により作成した仕様の閲覧システム:上記の仕様作成方法に則り,ODP Trading Functionの仕様を記述し,その仕様の閲覧システムを作成した。・コンポーネントの合成により作成した仕様の自動検証:コンポーネントの合成方法に制限を設ける(オブジェクト合成と呼ぶ)ことで,合成により作成した仕様の自動検証を可能にした。ここで意味する検証とは,合成により作成した仕様が,与えた基本仕様の詳細化になっていることの確認である。・鉄道信号システムの仕様記述と検証:コンポーネントの合成による仕様記述に基づいて,分散システムの一例である鉄道信号システムの仕様を記述し,鉄道信号システムの安全性(列車追突のないこと)を検証した。コンポーネントの合成により仕様を作成することで,仕様の再利用性を促進できたことを確認できた。本年度は,以下のことを行った.・コンポーネントに基づくソフトウェア開発におけるソフトウェア発展:コンポーネントに基づくソフトウェア構築では,コンポーネントを組み上げて作成したシステムの性能の予測が難しい.性能とは,システムの非機能的性質で,システムの応答速度や実行効率,メモリの使用効率等を指す.非機能的な性質は,機能的性質,つまりシステムの論理的で静的な性質が満たされた上で初めて議論可能である.機能的性質と非機能的性質の2つの側面に着目し,その2つの側面がコンポーネントに基づく代数仕様の枠組みを使って、うまく扱えることを示した。・高信頼コンポーネントソフトウェア開発および支援ツール:コンポーネントを組み合わせてソフトウェアを開発する方法の信頼性を高めるためのコーディネーションモデル(ソフトウェアアーキテクチャ)として「木アーキテクチャ」を提案した.

木アーキテクチャの仕様記述には,詳細化検証の自動化が容易である射影型振舞仕様を用い,これにより,詳細化検証の自動化のみならず,コネクタの自動生成も可能となる.さらに,この発方法を支援するツールを設計し,ツールのプロトタイプを作成し,いくつかの例題を用いて開発方法および支援ツールの妥当性を確認した.本研究では、仕様のコンポーネント化を支援するための諸機能を有する仕様記述言語CafeOBJを基盤ツールとして用いた。CafeOBJは、研究代表者を中心に開発を続けている代数仕様言語で、抽象データ型のみならず、オブジェクト指向におけるオブジェクトや抽象機械の記述にも適しており、仕様のコンポーネント化を支援する強力なモジュールシステムを有するのも特徴の一つである。具体的には以下のことを行った。・検証実験:鉄道の信号システム、航空管制システム、病院における患者監視システム等、人命に多大な影響を及ぼし得るシステムは、並列分散(実時間)システムであることが多い。これらシステムをCafeOBJ支援のことで検証する方法を整理、提案し、いくつかの事例研究をとおして提案手法の有効性を確認した。・ツールの設計および作成:コンポーネントを組み上げて高品位のソフトウェアを作成するための基礎理論を作り、その理論に基づいてソフトウェアを作成するツールの設計および作成を行った。
タンパク質の凝集や失活を防ぐ高分子アディティブの開発

タンパク質の凝集をふせぐ低分子の溶液添加剤が開発されてきた。本研究では、タンパク質凝集をふせぐ高分子アディティブを開発し、その機構を解明することを目的とした。ポリエチレングリコールは低分子のアルギニンとは異なり、高温での凝集抑制能が高く、アルギニンと併用すると加算的な効果を示すことがわかった。カチオン性高分子電解質のポリアリルアミンと、アニオン性高分子電解質のポリアクリル酸は、荷電相補的にタンパク質に結合して安定化することがわかった。これらの高分子アディティブは大きなタンパク質に対して凝集させる性質があったが、PEG化ポリマーにはより高い凝集をふせぐ働きがあった。荷電相補性高分子アディティブであるポリアリルアミンおよびポリアクリル酸と、タンパク質であるリゾチームおよびリボヌクレアーゼの複合体の構造を、円偏光二色性および蛍光分光によって調べた。その結果、高分子アディティブとこれらモデルタンパク質との複合体は構造に変化がないことを確認できた。さらに、高濃度の塩を加えることで高分子アディティブをタンパク質から解離させたときの残存活性と立体構造を円偏光二色性および蛍光分光によって調べた。その結果、いずれの酵素も残存活性が残っており、立体構造も変化しないことがわかった。さらに、ここで確立した系を用いて、モデルタンパク質から産業酵素への展開をはかった。糖質関連に広く用いられる産業酵素であるαーアミラーゼやβーガラクトシターゼに対して、モデルタンパク質と同様に高分子アディティブが結合するかを調べた。その結果、これらの酵素の立体構造を変化させずに高分子アディティブが結合できることがあきらかになった。興味深いことに、プロテアーゼであるキモトリプシンに高分子アディティブを加えると、活性が増加するという現象があきらかになってきた。この現象は産業展開にも有利な現象である。分子機構はまだ明らかにできていないが、おそらく高分子アディティブと基質との静電的な相互作用によって、基質のキモトリプシンの触媒中心にあるみかけの濃度が高まったことによるという仮説が成りたつ。今後、研究を深めていきたいと考えている。本研究では、タンパク質と複合体をつくる電解性高分子や親水性高分子、タンパク質の構造や安定性に影響を与える電解性高分子や親水性高分子を探索し、凝集の抑制能や失活抑制能を調べることを目的にした。また、タンパク質とポリマーとの相互作用の分子機構を明らかにすることを目的とした。ポリエチレングリコールの加熱凝集への効果を調べた。その結果、ポリエチレングリコールはアルギニン塩酸塩と加算的な凝集抑制効果を示すことがわかった。4つのエチレン基からなるテトラエチレングリコールは高温ほど凝集抑制能が高く、これまでに知られていた低分子凝集抑制剤のアルギニンとは異なっていることがわかった。一連の結果は、高分子アディティブを用いる凝集抑制剤のデザインのガイドラインになるだろう。タンパク質構造の表面での安定性を調べた。脂質二重膜と繊維状タンパク質であるアミロイドと、スタートアグリゲートと呼ばれる数十ナノメートルの大きさのタンパク質凝集体は、いずれも脂質二重膜と結合して破壊する性質があることがわかった。ナノスケールの粒子に毒性があることの物理的根拠になると考え、今後の研究につなげたい発見である。以上、高分子アディティブとなるポリアリルアミンやポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、PEG化高分子などを開発し、タンパク質との会合の分子機構を明らかにすることができた。さらに、タンパク質の凝集や失活を、バルク溶液中で精査することができたほか、固体表面やリポソーム膜へも調べることができた。荷電相補性のある高分子アディティブをデザインし、タンパク質を安定な、すなわち凝集をおこさない複合体を形成させることを目的として研究を進めた。正電荷を持つポリマーであるpoly(N,N-diethylaminoethyl methacrylate)-block-poly(ethylene glycol) (PEAMA-b-PEG)を用いると、βガラクトシターゼやαアミラーゼと安定で凝集しない複合体を形成することがわかった。この状態では酵素機能がない状態だった。さらに負電荷を持つポリマーであるポリアクリル酸(PAAc)を使うと、PEAMA-b-PEGを解離させることにも成功した。すなわちPEAMA-b-PEGとPAAcを使うことで酵素機能スイッチングが実現した。この結果はLangmuir誌に投稿し記載された。さらに、タンパク質凝集に関する溶媒環境の影響を調べるために、タンパク質のメタノール溶媒中での構造変化および凝集と溶解度を調べた。エタノール中でウシ血清アルブミンやリゾチームの凝集と構造変化を円偏光二色性スペクトルによって調べたところ、50%以上になるとαヘリックス構造へと転移し、溶解度も単調に減少した。しかし興味深いことにSH基を修飾したアンフォールド型のバリアントの溶解度も、エタノール濃度を増加させるにつれて減少した。

この結果はたんに溶媒が疎水性相互作用を弱めることで凝集をふせぐのではないということを意味しており、アディティブのデザインの指針になると考える。以上の結果はInt. J. Biol. Macromol.誌に2本の論文として投稿し記載された。タンパク質・高分子アディティブ複合体の形成に成功した。さらに形成させた構造はネイティブ構造を保っており、活性が残っていた。さらには活性がインタクトのものよりも増加するという現象も見つかってきた。タンパク質凝集や失活の抑制を高分子アディティブに持って行くという点において、おおむね研究は順調に進展した。つまり、(1)モデルタンパク質によって検証した相補性ポリマー系を用いるタンパク質凝集の抑制が、糖質関連酵素や脂質関連酵素等の産業タンパク質に既に展開できたこと、(2)実際に分子アディティブとタンパク質の複合体の構造や安定性を円偏光二色性や動的光散乱法などの手法によって明らかにできたことがある。このような準備のもと、(3)その方法を用いることで、これまでに実現しなかった不安定なタンパク質をターゲットにした酵素機能スイッチが実現した。以上により、当初の研究の達成度どおりに進捗していると考えていい。高分子アディティブとタンパク質の複合体の活性がきわめて増加するという現象をさらに深めるために、酵素の種類および基質の性質を定量的に変化させて原理を明らかにする。そのとき基材表面での酵素活性の残存および、基材からの回収についても想定しておく。まずLangmuir誌に既に報告した成果に関する高分子アディティブとタンパク質の複合体の構造を分光学的に明らかにすることを目的とする。当初の予定ではモデルタンパク質系のみを想定していたが、予想より研究が進んでいるため、本年度ではポリマーを利用する高活性化にまで研究を進めていく可能性が高い。本年度までに明らかにした結果によると、タンパク質は高分子と複合体を形成し、その結果、酵素活性の機能が低下する。しかし逆に、基質と高分子アディティブとの親和性が高ければ、酵素活性がさらに増加する可能性があると考えるからである。該当なし。研究費は主にタンパク質や試薬や容器などの消耗品に使用する。一部は国内の学会発表と論文投稿の費用に使用する。
C型肝炎の病態解明に関する実験病理および分子ウイルス学的研究

C型肝炎ウイルス(HCV)感染症は高率にキャリア化することが知られているが、そのメカニズムは未だ明確にされていない。そこで本年度は、HCV遺伝子の変異と肝炎の進展の関係についてチンパンジー実験から解析した。方法は、HCV-F株の接種により感染が成立した6頭のチンパンジーから経時的に採取した血清を用いてnested RT-PCR法によりHVRを含むE1E2領域の遺伝子(399bp)を増幅した。得られたDNAをpBluescriptベクターを用いてクローニングし、少なくとも6クローンの遺伝子について塩基配列を決定した。その結果、計132個のアミノ酸における変異を比較したところ、急性発症で終わるものは、その変異は軽度であった。これに対し、慢性肝炎に移行するものは、感染早期から遺伝子変異を認めた。慢性期におけるアミノ酸変異は血清ALT値の変動を示す1例では比較的強い傾向を示したが、不顕性持続感染例では軽度であった。アミノ酸変異は特定の箇所に発生するのではなく各個体で異なっていた。また特にHVR内に変異が集中する傾向はみられず、その隣接部にも同等に観察された。このようなescape mutantの出現が、HCVの持続感染成立に深く関与していることが示唆された。