hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢者・老人の人権の憲法学的・実証的研究

平成6年度、引き続き平成7年度において、基本的に、(I)高齢者の人権(自己決定権・生存権など)についての比較憲法的分析作業、(II)日本における要介護高齢者の施設福祉システムの現状についての実態調査作業と理論分析作業、および、(III)本補助金交付を契機として申請者が設立した「家族と憲法・民法研究会」での発表・検討作業を行ってきた。そして、高齢者の人権をめぐる憲法理論の現況と問題点については、論文「高齢者の人権と憲法学」、「年齢による区別の合憲性」として結実させ、人権基礎論、人権の実効的救済方法論という基本問題へと展開させていくための今後の研究の基礎を固めることができた。また、平成7年度半ばにしてとりわけ重要視されるに至った諸課題-成年後見制度、公的介護保険制度に関する基礎理論と具体的提言等-についても取り組んできた。もっとも、「世代間公平の原理」の法律学的分析もアメリカで比較的最近行われ始めたにすぎないこともあって、なお、比較法的検討を継続すべく、平成7年度末の時点ではこれらの諸論点については、未だ個別論文として公刊するに至っていない。今後、スェ-デン・ドイツ・アメリカなどの外国視察調査(本件科研補助金の対象外)の機会を得て、これらの諸点についても個別論文として完成したいと考えている。平成6年度は、当初の研究計画に従い、(I)高齢者の人権(自己決定権・生存権など)についての比較憲法的分析作業、および、(II)日本における要介護高齢者の施設福祉システムの現状についての実態調査作業と理解分析作業を行った。日本の問題状況についての憲法学上の問題点とその解決の方向性については、論文「高齢者の人権と憲法学」として公表した。平成7年度では、外国における要介護高齢者の法的処遇をめぐる理論動向の分析作業のまとめを公表すること、実態分析作業のまとめを公表することを予定している。なお、申請者は、平成6年度補助金交付を契機として、勤務先京都産業大学法学部の憲法専攻・民法の専攻の研究者および他大学の憲法専攻等の研究者とで「家族と憲法・民法研究会」を設立し、月1回のペースで合同研究を行ってきている。〈高齢者の人権の憲法学的・実証的研究〉の課題は、「高齢者と家族・日本社会、人と人とのつながりのあり方、高齢世代と若い世代とのとの間の公平・公正の原理」といったよりグローバルなきわめて重要な課題に重大なインプリケーションをもつものである。本件補助金交付を契機として開始されることになった上記研究会の意義は大きく、平成7年度以降において、文部省科学研究・出版助成に値する研究へと結実させていきたいと考えている。平成7年度は、平成6年度に引き続き、(I)高齢者の人権(自己決定権・生存権など)についての比較憲法的分析作業、および、(II)日本における要介護高齢者の施設福祉システムの現状についての実態調査作業と理論分析作業を継続した。高齢者の人権をめぐる憲法理論の現況と問題点については、論文「高齢者の人権と憲法学」、「年齢による区別の合憲性」として結実させ、人権基礎論、人権の実効的救済方法論という基本問題へと展開させていくための今後の研究の基礎を固めることができた。
悪性リンパ腫のイノシトールリン脂質多様性に基づく新規治療戦略の確立を目指した研究

イノシトールリン脂質(PIPs)は主に細胞膜に存在し、細胞内蛋白シグナル伝達に重要な役割を果たし発がんにも重要な関与をしている。悪性リンパ腫においてもPIPs-AKT signalingの活性化が報告されている。PIPsは結合する脂肪酸のパターンなどにより200以上の分子種に分けられるが、分子種の違いがもたらす生理学的意義は不明であった。本研究は悪性リンパ腫におけるPIPs分子種多様性の意義を解明するために行っている。リンパ腫細胞株におけるPIPs質量分析はほぼ終了しており、クラスタリング解析により、細胞増殖能が高く悪性度が高い細胞株は、PIPsに結合する脂肪酸側鎖の炭素数が小さく、悪性度が低い細胞株は脂肪酸側鎖の炭素数が多い分子種が主体であることがわかった。現在臨床検体でも同様の結果が得られるか、リンパ腫患者のリンパ節において解析を続けており、検体数200を目標にしている。昨年度は検体数60程度まで増えており、低悪性度の「濾胞性リンパ腫」では、PIPs脂肪酸側鎖の炭素数が38の分子種が主体であるのに対して、中悪性度の「びまん性大細胞型B細胞性リンパ腫」では炭素数34、36の短い鎖長の脂肪酸を有する分子種が多いことが見出された。現在FDAではPI3K阻害剤idelalisibが濾胞性リンパ腫に対する適応を取得しており、PIPs分子種の違いがPIPs-AKT signaling関連抗体薬への効果に関連している可能性もある。現在PIPsプロファイルの異なる細胞株に対する、様々な薬剤感受性を比較検討中である。また、PIPsプロファイルの違いがもたらす遺伝学的背景も検索するため、DNA網羅的遺伝子発現解析を実施しており、炭素数38が主体のグループと炭素数34が主体のグループでは細胞周期に関連する遺伝子群の発現に有意な差があることも確認している。細胞株に対する解析は概ね順調に経過しており、PIPs解析やDNA遺伝子発現解析はほぼ終了している。薬剤感受性試験は予定の20薬剤については実施し終えているが、薬剤を追加して検討を続けている。臨床検体のPIPs解析は200検体を目標にしているが、これまで集まっているのは60検体程度であり予定を下回っている。現在関連施設にも協力を仰ぎ、検体収集に努めている。引き続き臨床検体におけるPIPs質量分析を継続する。In Vivoの解析を追加するため、免疫不全マウスにPIPsプロファイルの異なる細胞株を移植を行う予定であり、現在数種類のリンパ腫細胞株を皮下移植し腫瘤形成することを確認している。今後は移植後マウスにPI3K阻害剤をはじめとする抗がん剤を暴露させ、抗腫瘍効果の違いを検討する。これまで20種類の抗がん剤を用いて、PIPsプロファイルと薬剤感受性の関連を検討していたが、PI3K-AKT signaling

関連の薬剤をさらに追加して検討する必要がある。DNA網羅的遺伝子発現解析はこれまで細胞株に実施していたが、リンパ腫臨床検体でも検討するためマイクロアレイ試薬の追加が必要である。
Candida albicansの粘膜感染に対する生体防御能に関する研究

本研究にて、口腔・咽頭・食道および膣の粘膜カンジダ症マウスモデルモデルをつくることに成功した。これら感染モデルはそれぞれの解剖学的部位にC.albicansを接種した後に、マウスに鎮静剤(クロルプロマジン)を与え、安静状態とし、菌の粘膜進入を促進することによって可能となった。それぞれの粘膜カンジダ症モデルは、C.albicansの増殖が認められるだけでなく、白苔あるいは炎症性分泌物を生じ、症状を示すという点で画期的である。病理組織学的解析では、粘膜上皮にCandidaの菌糸型発育の集落が認められ、炎症細胞を伴う上皮の過形成(hyperplasia)が一部感染動物で見られ、臨床的な粘膜感染症に類似していた。口腔カンジダ症モデルでは、ウシLactoferrin、ヒト唾液および植物テルペノイドが治療効果を示し、組織学的にも患部の粘膜の正常化を早めることを見出した。また、経口投与のLactoferrinの治療効果が、頸部リンパ節細胞の感染に伴う機能回復と関連することを示した。その回復は同リンパ球のCandida抗原刺激IL-2,IFNγ産生能の増加で認められ、Th1型の応答であることが示唆された。またヒト唾液は、Candidaの増殖を阻止しない濃度でCandidaの付着を阻止、解離させるタンパク質の因子を含むこと、その因子の活性は口腔カンジダ症を発症しやすい高齢者の唾液中には、少ないことを明らかにした。これらの研究結果により口腔カンジダ症における生体防御は局所を中心とした免疫学的機序と、抗菌活性よりむしろCandidaの粘膜への付着を阻止し、口腔から流し去り、胃へ送り込み殺菌するという効率的な防御がおこなわれているものと推定している。一方、膣カンジダ症マウスモデルでは、膣粘膜上皮の肥厚が著しく、その表面にC.albicansが付着・増殖するが、分泌液中のデフェンシン、ラクトフェリン等の抗菌因子がその増殖を抑制するものと推定された。1.マウス口腔カンジダ症に関してマウス口腔カンジダ症モデルがクロルプロマジンを用いると、確実に作製できることを論文として報告した[次ページTakakura et al.]。またこのモデルで、ウシラクトフェリンの経口投与が有効であることを論文として報告した[次ページTakakura et al.]。またウシラクトフェリンを経口投与したマウスでは、頚部リンパ節のリンパ球数の増加、および応答能の回復が認められた。これらの治療効果の一部に生体防御能の増強が関与することが示唆されたといえよう。ウシラクトフェリンを投与した場合には、Candida感染による炎症に伴い舌乳頭の消失がおきるが、治療効果発現とともに舌乳頭が認められるようになることがわかった。さらにこのモデルで、漢方薬、ポリフェノールなどがラクトフェリンと同様に、投与後35日目で治療効果を示しうることを明らかにした。一方、このモデルで抗真菌剤の治療功果を検討した結果、投与後12日という短期間のうちに口腔内の生菌数を低下させ、治療効果を発揮することも認められた。これらは、生体防御能の増強が、Candidaの粘膜感染を阻止する手段となることを示唆するものである。2.マウス膣カンジダ症モデルに関して帯下様の炎症が認められるマウス膣カンジダモデルの作製に成功した。その際マウスが膣部をなめないこと、またマウス系統の選択が重要なことを明らかにした。BALB/Cマウスでは免疫抑制剤を投与しない条件でも、コルセットを腹部に装着させるだけで、膣感染4日目で炎症を伴う帯下が認められた。

病理学的解析から、C.albicansは膣重層上皮の上部にのみ菌糸形発育をしていたが、一部には菌が子宮頚管に達する場合も認められた。これらはさらなる病態解析研究の土台となる。マウスモデルを用い、Candida albicansの粘膜感染では感染部位(口腔粘膜と膣粘膜)の違いにより病態が異なること、また、両者で、生体防御反応のあり方後異なることを見いだしさらに、防御反応を高めることが期待される天然物を利用することにより、これら粘膜カンジダ症の新たな予防・治療法の開発が可能であることを示唆する結果を得た。すでに発表したクロルプロマジンを用いた口腔内へのCandida接種で作製した口腔カンジダ症モデルの他に、抗炎症ステロイド吸入剤(ベコタイド)を用いた口腔・咽頭カンジダ症モデルを作製した。このモデルでは、咽頭部にCandidaを塗布しそこにステロイド吸入剤を噴霧することで、軟口蓋にもCandida性白苔を生じ、しかもその白苔の深部に炎症性細胞の浸潤がおこり、表皮の肥厚が認められた。(論文作成中)これらのモデルを用いて、白血球の動態を形態学的に調べると共に、マーカー酵素のミエロパーオキシダーゼ量の変化を測定し炎症の指標とできることを明らかにした。また、多種の天然物を用いて防御能の増強を試みた結果、ヒト正常唾液および漢方補剤十全大補湯の経口投与が、これらのカンジダ症の治療に有効であることがわかった。唾液の場合には、基質に付着したCandidaを剥離させる活性がこの防御作用に寄与している可能性を明らかにした。一方、膣カンジダモデルでは、好中球の集積を伴う炎症がおき、それが白帯下に代表される炎症症状を、増悪することを、見いだした。(論文作成中)炎症反応に対し一部の植物精油が、抑制的に働くことを見いだし(論文発表済)、それら植物精油が膣カンジダモデルで治療効果を発揮しうる可能性を現在さぐっている。
基本転写因子異常による造血幹細胞腫瘍化の機構の解析

進展期MDS症例に観察されるt(11;19)(q23;p13.1)の分子解析を行うことにより、新規融合遺伝子MLL/MENのクローニングを行った。MLLはAT hooksと2つのzincfinger domainsを有する転写因子であり、MENは基本転写因子RNAポリメラーゼII伸長因子をコードしている。MENに対するポリタロ-ナル抗体を作成し、MENが80kDの蛋白質として核内に発現していることを明らかにした。基本転写因子MENの異常発現が白血病発症に至る機序を明らかにする目的で、MENの造腫瘍活性を以下の実験で証明した。ラットの線維芽細胞Rat1にMENを遺伝子導入すると、形態学的変化は観察されていないものの、コロニー形成能の増強及び血清要求性の低下が観察された。これらの効果はMENのc末領域に存在するlysine-rich domainを失った欠失変異体では観察されなかった。また、MENを発現しているRat1細胞ではmock細胞に比較してFOS蛋白質の発現が亢進していた。さらに、TRE siteをプロモーター領域に有するレポーターを用いたルシフェラーゼ・アッセイの結果、MENを発現しているRat1細胞ではAP-1活性が亢進していることが明らかになった。これらの効果はすべてMENのlysine-rich domainに依存性があった。run-Off assayにより、MENはlysine-rich domain依存性にfos遺伝子に対する転写伸長を活性化することが明らかになり、これがFOS蛋白質発現の亢進の原因であると考えられた。従って、MENの造腫瘍活性はFOSの発現亢進を介するAP-1活性の増強によるものであることが予測された。
周期運動のための制御理論の体系化-遅延フィードバックと繰り返し制御

安定化制御器の既約分解表現に基づき,自由パラメータの補間によって特定の極零点構造を制御器に後天的に埋め込む方法を確立し, Lagrange型補間,およびH∞型補間に対応する手法を得た.遅延フィードバックの応用としてネットワーク制御系の機能分散実験,繰り返し制御の応用として電動自転車の高効率パワーアシスト制御実験をおこなった.さらに,周期現象と関連の深いむだ時間系のモデリングと制御,視覚フィードバックへの応用,受動歩行現象の理論解析等に関しても,各種の成果が得られた.安定化制御器の既約分解表現に基づき,自由パラメータの補間によって特定の極零点構造を制御器に後天的に埋め込む方法を確立し, Lagrange型補間,およびH∞型補間に対応する手法を得た.遅延フィードバックの応用としてネットワーク制御系の機能分散実験,繰り返し制御の応用として電動自転車の高効率パワーアシスト制御実験をおこなった.さらに,周期現象と関連の深いむだ時間系のモデリングと制御,視覚フィードバックへの応用,受動歩行現象の理論解析等に関しても,各種の成果が得られた.(1)安定化制御器のLFT構造を用いて,自由パラメータの補間によって遅延フィードバック制御構造を後天的に埋め込む手法を確立し,台車振子系を用いた実験によりその有効性を検証した.同結果を第50回システム制御情報学会研究発表講演会にて発表した.(2)上記の方法をH∞型補間に拡張した方法について,国際会議MTNS2006で発表した.さらにこれを多入出力系へと拡張した方法を確立し,台車振子系を用いた実験によりその有効性を検証した.同結果を国際会議SICE-ICCAS2006で発表した.(3)繰り返し制御の実システム応用として,電動アシスト自転車を用いた実験を開始した.(株)パナソニック・サイクルテックの技術協力を得て,提案手法によるトルク脈動の低減効果に関して検討をおこなった.これらの中間結果について,第7回計測自動制御学会システムインテグレーション部門講演会で発表した.(4)遅延フィードバックならびに繰り返し制御において本質的な役割を果たす,むだ時間要素を含む系に対する制御系設計問題にも取り組んだ.具体的には,汎用のWebカメラを用いたビジュアルフィードバック制御系を構築し,比較的速いダイナミクスをもつメカトロ系である台車振子系の安定化を実現した.同結果を第49回自動制御連合講演会で発表,また国際会議1EEECCA2007に投稿して受理された.(5)さらにネットワーク制御におけるむだ時間補償のために切替型オブザーバを用いる方法について検討し,モデルプラントを作成,実機実験をおこなった.同結果を国際会議IEEE CCA2007に投稿して受理された.(6)ネットワークの輻輳制御モデルに現れる状態依存型むだ時間系のモデリングとSOS解析について検討し,同結果を国際会議IFAC TDS2007に投稿中である.(1)微分差分系の安定解析に用いられる積分作用素のスペクトルの数値計算法に関する結果をまとめ,システム制御情報学会に投稿,掲載済.(2)安定化制御器のLFT構造を用いて,自由パラメータ補間によって遅延フィードバック制御構造を埋め込む手法をまとめ,システム制御情報学会に投稿,掲載済.(3)上記手法をH∞型補間および多入出力系へ拡張した方法をまとめ,計測自動制御学会に投稿,掲載済.(4)ネットワークの輻輳制御モデルに現れる状態依存型むだ時間系のモデリングとSOS解析についての結果をシステム制御情報学会に投稿,掲載済.(5)切替型オブザーバによって通信ネットワークの不規則なむだ時間変動を補償する方法に関して,国際会議IEEE CCA2007において発表.また同内容をシステム制御情報学会に投稿,掲載決定.(6)遅延フィードバックと深い関連を持つ受動歩行の安定解析について,円弧脚形状が歩行安定性に与える効果について第8回計測自動制御学会システムインテグレーション部門講演会で発表.受動歩行に内在する安定化機構に関する結果を第8回計測自動制御学会制御部門大会で発表.さらに同内容についてPadua大学(イタリア)にて講演.(7)むだ時間要素を含む系の一例である,汎用Webカメラを用いたビジュアルフィードバック系の,カメラ設置誤差に対するロバスト設計について,国際会議IEEE AMC2008において発表.1.修正FSFH法によって,微分差分系の安定解析に用いられる積分作用素のスペクトルの数値計算法を発展させた共同研究内容を国際会議European Control Conference2009に投稿,採択された.2.上記計算法において,非因果的一次ホールドを用いた手法を提案し,計測自動制御学会(SICE)制御部門大会2009等にて発表.国際会議IFAC Workshop on Time-Delay Systems2009に投稿中.4.周期運動の代表例である受動歩行の安定化機構について,SICE SI部門講演会2009等で発表.さらに同内容についてCambridge大学(英国)にて講演.5.むだ時間を含む視覚フィードバック系のカメラ設置誤差に対するロバスト設計について,SICE制御部門大会2009にて発表.学生による関連発表(2回)は,SICE関西支部支部長賞奨励賞,システム制御情報学会奨励賞を受賞.これを発展させて,国際会議IEEE IECON 2009に投稿中.6.上記技術を応用した大道芸ロボットSOMENOSUKEを開発.国内/国際会議および学術雑誌に投稿中.7.周期運動制御である電動パワーアシスト自転車のエネルギー効率改善に関する検討および実験を実施.SICE関西支部若手研究発表会にて学生発表(優秀発表賞受賞)
家族制難聴の遺伝子解析

前庭水管拡大症はPendred症候群の原因遺伝子であるPDS遺伝子異常で生じることが近年報告された。前庭水管拡大症6家系7症例について遺伝子解析を行った。患者血液より抽出したゲノムDNAからPDS遺伝子のエクソン領域に限り全塩基配列を決定し、遺伝子変位箇所を同定した。1家系でエクソン4、1家系2症例でエクソン10、3家系でエクソン19における点変異を同定した。残りの1家系はエクソン領域には変異は同定されず、イントロン領域もしくはプロモーター領域に遺伝子変異が存在する可能性は残ったが、同領域は数万塩基体にものぼり遺伝子解析には不向きと判断された。エクソン4と10はいづれもヘテロ接合による変異であったが、エクソン19はヘテロ接合の家系とホモ接合の家系とに分かれた。エクソン3の点変異は今までに報告のない新しい変異であり、正常者50名には同様の変異は認められず、遺伝子多型ではなく遺伝子変異であることが確かめられた。エクソン10と19とは既報告の変異であった。エクソン19、2168番目の塩基の点変異に血縁関係のない日本人3家系が集中したことにより、同変異は日本人における前庭水管拡大症のホットスポットである可能性が考えられる。現在、更に多くの同症の患者の遺伝子解析を進めている。甲状腺腫やMondiniなどの他の内耳奇形を認めない前庭水管拡大症候群5例のうち4例のDNAからPDS遺伝子変異を認めた。うち1例はエクソン4におけるheterozygousによる点変異であった。残り3例はエクソン19における同一の点変異であったが、2例にhomozygous mutation、1例にheterozygous mutationを認めた。エクソン4の点変異は今までに報告のない新しい変異で、正常者50名のDNAに認められず、pendrinのcoding regionでの変異であることから前庭水管拡大症候群の原因遺伝子と考えられる。エクソン19における点変異は既にPendred症候群例の変異として報告があったものと同一であった。ミトコンドリアDNA1555変異をもつ前庭水管拡大症候群症例のPDS遺伝子の全エクソンの塩基配列を現在解析中であるが、既に解析を終えたエクソンにおいて変異は認めなられなかった。現在、残りのエクソンの塩基配列を解析中である。今後は新しい点変異の多形性を調べるため正常者群の症例を増やす予定である。残りの1家系はエクソン領域には変異は同定されず、イントロン領域もしくはプロモーター領域に遺伝子変異が存在する可能性が残ったが、同領域は数万塩基対にものぼり遺伝子解析には不向きと判断された。エクソン4の点変異は今までに報告のない新しい変異であり、正常者50名には同様の変異は認められず、遺伝子多型ではなく遺伝子変異であることが確かめられた。
CRISPRによるRNA病モデルｉＰＳ細胞・動物の構築と病態解明・治療薬創製

本研究は、1スプライシング操作化合物TG003およびRECTASのスプライシング介入ルールの解明、2スプライシング操作により治療可能な遺伝性疾患に適応できる化合物の予測と合成展開、3CRISPR/Cas9法等で作製した疾患モデルiPS細胞やモデル動物による化合物の作用機序解明と有用性の実証を行い、ポストゲノム治療薬を創製する新しいケミカルバイオロジー分野の創出を目指している。本年度は、スプライシング変動によりGFP/RFPの発現が切り替わるdual reporterシステム(SPREADD)を用いた実験から、TG003が深部イントロン変異を有するNEMO異常症患者の偽エクソン発現を抑制する効果を持つことを明らかにし、患者iPS細胞を病態モデルとしたTNFα応答機能障害がTG003処理により改善することを見出し報告した(2019 J Clin Invest.)。また同様に深部イントロン変異により偽エクソンが発現するV型嚢胞性線維症に対してもTG003が偽エクソンの発現を抑制することを見出し、TG003からの化合物展開により、患者iPS細胞で原因遺伝子CFTRの発現回復効果を有する治療薬候補化合物の取得に成功した(投稿準備中)。RECTASについても、家族性自律神経異常症患者の線維芽細胞を用いたmRNA-seq解析と生化学的解析から作用メカニズムを解明し、家族性自律神経異常症モデルマウスと患者iPS細胞でもRECTASがスプライシングを正常化する作用のあることを確認できた(投稿準備中)。RECTASは偽エクソンによる心ファブリー病や、QT延長症候群にも効果があることが見出されたため、標的遺伝子を組み込んだSPREADDにより最適化合物を検索するとともに、CRISPR/Cas9法によりモデル動物・iPS細胞を使った評価系を構築した。1. TG003が治療効果を持ちうる遺伝子疾患として、NEMO異常を見出すなど、スプライシング操作化合物の標的となりうる疾患が複数、見つかってきている。2.スプライシング操作化合物TG003およびその類縁体を用いた偽エクソンのスキッピングについて、化合物が阻害するCLKファミリーメンバーと、関連するSRタンパク質、スプライシング変動が生じるエクソンについて統合的な理解が得られつつある。3.平成31年度末までに到達予定であった、iPS細胞やモデルマウスを用いた解析が進展し、それぞれの系でスプライシング操作化合物の評価結果が得られつつある。また、iPS細胞モデルの解析例としてNEMO異常症におけるTG003の効果を報告した。4.スプライシング操作化合物について、事業参加者らの研究の蓄積により500を超える類縁化合物コレクションを創製保有している。本コレクションとSPREADDの活用により、V型嚢胞性線維症治療薬候補化合物の取得に成功した。本事例、及びNEMO異常症の事例は、FD治療候補薬RECTASと合わせ、今後、化合物によるスプライシング変動ルール解明というケミカルバイオロジー的手法が効率的なスプライシング異常疾患治療薬創製法となることを示している。5か年計画の最終年度となる2019年度は、研究の柱である1スプライシング操作化合物TG003およびRECTASのスプライシング介入ルールの解明、2スプライシング操作により治療可能な遺伝性疾患に適応できる化合物の予測と合成展開、3CRISPR/Cas9法等で作製した疾患モデルiPS細胞やモデル動物をによる化合物の作用機序解明と有用性の実証、のそれぞれについて成果のとりまとめを進め、ポストゲノム治療薬を創製する新しいケミカルバイオロジー分野の確立を目指す。1については2018年度までにTG003およびRECTASについては2018年度までにmRNA-seqデータに基づくスプライシング操作標的エクソンの特徴の記述が終了している。これらの成果を統合し、スプライシング介入ルールの解明および、治療可能な遺伝性疾患に適応できる化合物の予測(2)を完了させる。遺伝性疾患ごとの化合物の合成展開については嚢胞性線維症の原因となる偽エクソンのスキッピングに対して効果があることを見出すことのできたTG003の周辺化合物につて評価を進める。3についてはCRISPR/Cas9法によりモデル動物・iPS細胞を使った評価系の構築が完了した偽エクソンによる心ファブリー病や、QT延長症候群の系について化合物の評価等を進め、モデル動物・iPS細胞を用いてポストゲノム創薬を進めるというコンセプトの確立を目指す。本研究は、リード化合物添加細胞の全トランスクリプトーム解析から導き出されるスプライシング「介入ルール」を解明し、CRISPR-Cas9技術を用いてRNA病患者のゲノム配列を挿入したRNA病モデルiPS細胞やモデルマウスを作成することにより、RNA病等に対するポストゲノム治療薬を創製する新しいケミカルバイオロジー分野の創出を目指している。これまで見出してきた選択的スプライシング介入化合物を用いて、全トランスクリプトームにおける選択的スプライシングに対する影響を解析した。RNA-Seqにより得られた情報を用いて、MISO(Mixture-of Isoforms)により変化するエクソンを同定してきた。平成27年度は、ヒト細胞とマウス細胞の比較、組織特異的比較により化合物のもつスプライスコードに対する「介入ルール」を決定した(Sakuma et al. BMC Mol Biol 2015)。さらに変化するエクソンと前後のイントロン配列をSVM_BPfinder(イントロン,ブランチポイントの配列解析), MaxEntScan (エクソン-イントロン境界の配列解析), SpliceAid (スプライシング因子の解析)によりスコア化した。化合物により変化するエクソンと変化しないエクソンを比較検討することにより化合物の選択的スプライシングに対するルール化を行った。

実際、最近の我々の解析では、遺伝子配列に基づくTG003による独自のスプライシング介入ルールが存在することが明らかになってきた(Iida et al.論文投稿準備中)。このTG003スプライシング介入ルールを元に、NCBI ClinVarデータベースに登録されている61,410件の遺伝子疾患関連変異を解析した結果、介入ルールに合致しており治療効果が期待できる50個以上の疾患を見いだした。1)同一条件で処理した細胞より高品質のRNAを回収する方法を確立し、RNA-Seqにより得られた情報を用いて、MISO(Mixture-of Isoforms)などによりトランスクリプトームの変化を検討し、スコア化した。これにより、当初想定した化合物の選択的スプライシングに対するルール化を行ったばかりでなく、広範な化合物のトランスクリプトームに対する影響を測定した独自の定量的データベースを構築出来た。この独自データベースを用いて、作用機序が未知だが有用な薬効を有する化合物の作用点を推定出来ることが判明した。3)RNA病の異常スプライシングより得られた「異常スプライスコード」とTG003およびRECTASなどの化合物「介入ルール」のマッチングにより、化合物の効果が予想される標的RNA配列、標的RNA病を選択しリスト化し、大手製薬会社との共同開発契約を締結することが出来た。4)TG003は血中での安定性が悪く経口投与が困難であるとの問題を抱えていた。そこで、TG003と同様のスプライシング是正活性を有するが、血中で安定な化合物のスクリーニングを実施し、新たな候補化合物を見出した。この化合物はマウスに経口投与可能で、マウス筋肉でのSR蛋白リン酸化抑制効果やスプライシング是正効果を確認出来た(Sako et al.論文投稿中)本研究課題ではスプライシング異常に起因する「RNA病」に対して、低分子化合物によるRNAスプライシング制御への介入による治療薬の創製、さらには、CRISPR/Cas9技術等で作製したモデルiPS細胞・モデル動物を使った介入様式の解明や有効性の実証を目指している。我々の研究グループでは疾患原因変異を含むエクソンのスキッピングを誘導することで、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療につながりうる低分子化合物:TG003を開発しているが、研究目標を達成するためには、この化合物の標的エクソンやその作用機序を明らかにすることが必要である。このため、分化させたヒト骨格筋由来細胞を対象として、TG003処理(20μM, 4時間)を行ったmRNA-seqデータを取得・解析したところ253個のエクソンにおいてスキッピングが誘導されていることがわかった。これに対し未分化のヒト骨格筋由来細胞でも同様の解析を行ったところスキッピング誘導が生じたエクソンは148個で、分化ヒト骨格筋細胞での結果との一致はわずか14個であった。スプライシング操作化合物の標的エクソンは組織により大きく変化することがわかった。
暗号ハードウェアのリアルワールド解析技術に関する研究

平成22年度は,高安全暗号モジュール設計理論について研究を行い,交付申請書の項目に対応して以下の成果を得た。1.安全性評価手法の高度化として,攻撃者が計測波形に対してプリプロセスを行うことを想定した評価法を示した.まず,時間領域での解析法として,重回帰分析に基づき,時間波形の移動平均などによる品質改善の限界を評価する手法を示した.また,周波数領域での解析法として,漏洩情報を含む狭帯域を同定する手法を示し,帯域制限による波形整形の影響の評価に応用できることを示した.2.項目1の手法に基づき,ケーブルからの電磁界放射や,チップ近傍からの磁界計測など,計測手法に応じた攻撃の能力を定量的に評価・分類した.数十マイクロメートルの空間分解能を有する磁界プローブを、開封したチップの100マイクロメートル程度に配置した近傍からの計測では,回路内の信号線の寄与がばらつきを考慮した評価が必要であることを示した.一方,遠隔からの計測波形では,周辺機器から伝導する無相関ノイズは,項目1の信号処理技術による波形整形により,効率的に除去できることを示した.3.脅威を定量的に評価するための手法として,漏洩信号のモデル化と,鍵が既知の条件で行うシミュレーション(既知鍵検査)に基づく安全性評価法を考案した.本手法により,暗号回路の信号線の寄与分の違いを考慮した信号雑音比(SNR)を波形のみを用いて評価できることを示した.また,本シミュレーション手法を応用することで,適合する漏洩モデルの推定が可能であることを示した.平成19年度は,交付申請書の項目に対応して以下の成果を得た2.上述の安全性評価プラットフォームを用いた実験システムを開発した.これにより,暗号処理の実行とサイドチャネル情報の計測,および,計測したサイドチャネル情報の解析が自動化され,評価実験の効率化が可能となった.具体的には,上述の評価基板,PC,計測器から構成する実験システムにおいて,相互に通信を行いながら計測・制御を行うソフトウェアを開発した.また,研究の新たな展開として,上述の実験システムを用いて様々な計測環境における評価実験を行った.これは,本研究テーマの最終的な目標である,回路の物理的なパラメータを考慮した安全性評価理論の確立を視野においたものである.平成21年度は,交付申請書の項目に対応して以下の成果を得た1.先年度に開発したASICを用い、電力解析実験を実施した。これにより、0.13μm CMOSテクノロジで製造されたASICでも攻撃が成功することを示した。また、ASICに搭載された複数の暗号コアに対して網羅的に実験を行うことで、暗号アルゴリズムの主要演算器であるS-boxの実装方法により、解析の難易度が大幅に変化することを指摘した。2.極めて高い計測能力を持つ攻撃者を想定して、物理的な側面から電力解析の検討を行った。実験では、数十マイクロメートルの空間分解能を有する磁界プローブを、開封したチップの100マイクロメートル程度に配置し、近傍磁界を計測した。計測結果を解析した結果、このようなセットアップでは、S/N比の改善と、場所に応じた局所性、および、近傍界の向きに関する情報が得られることから、より効率的な攻撃が可能となることを実証した。また、計測する物理量に応じて攻撃に用いる漏洩モデルに修正が必要なことを指摘し、修正モデルにより結果が改善することを示した。3.機器に接続されたケーブルを介し、より遠くへ漏洩情報が伝播する危険性の指摘・実証を行った。これにより、遠くにいる攻撃者であっても攻撃が可能となる危険性を指摘した。また、環境電磁工学の観点から、グラウンドバウンスに基づく情報漏洩メカニズムの解析とモデル構築、および計算機シミュレーションを通し、設計時での解析手法を検討した。1.安全性評価手法の高度化として,攻撃者が計測波形に対してプリプロセスを行うことを想定した評価法を示した.まず,時間領域での解析法として,重回帰分析に基づき,時間波形の移動平均などによる品質改善の限界を評価する手法を示した.また,周波数領域での解析法として,漏洩情報を含む狭帯域を同定する手法を示し,帯域制限による波形整形の影響の評価に応用できることを示した.2.項目1の手法に基づき,ケーブルからの電磁界放射や,チップ近傍からの磁界計測など,計測手法に応じた攻撃の能力を定量的に評価・分類した.数十マイクロメートルの空間分解能を有する磁界プローブを、開封したチップの100マイクロメートル程度に配置した近傍からの計測では,回路内の信号線の寄与がばらつきを考慮した評価が必要であることを示した.一方,遠隔からの計測波形では,周辺機器から伝導する無相関ノイズは,項目1の信号処理技術による波形整形により,効率的に除去できることを示した.3.脅威を定量的に評価するための手法として,漏洩信号のモデル化と,鍵が既知の条件で行うシミュレーション(既知鍵検査)に基づく安全性評価法を考案した.本手法により,暗号回路の信号線の寄与分の違いを考慮した信号雑音比(SNR)を波形のみを用いて評価できることを示した.また,本シミュレーション手法を応用することで,適合する漏洩モデルの推定が可能であることを示した.
妊娠高血圧腎症の治療薬はベバシズマブの薬効を減弱するか？

本研究は、癌治療に用いられているベバシズマブ(血管新生阻害薬)の抗腫瘍効果が、特定の薬(とりわけ妊娠高血圧腎症の治療薬として研究されている既存薬)との併用により減弱する可能性があるという仮説を立て、試験管内で3次元的に培養したヒトミニ腫瘍モデルや、担癌マウスでの解析によって検証する。
IPM(総合的害虫管理)を視野に入れた水田ユスリカ類の評価

1.水田生息性ユスリカ類のリスト現在までに記録された世界の水田生息性ユスリカ類を探索した結果、3亜科49属158種が判明した。インドから17属53種、日本から20属51種などである。研究進展によりさらに増加することは間違いなく、ユスリカ類は水田における最優占昆虫群であることが判った。2.ユスリカ類の発育オオヤマユスリカとハイイロユスリカの幼虫齢期、幼虫の発育状況、有効積算温度、発育所要日数、成虫の羽化周期性、寿命、蔵卵数、性比のデ-タを得た。また種々の温度、給餌量、水質、土壌、飼育密度下における幼虫の発育デ-タを得た。3.水田における個体群密度水田におけるユスリカ類成虫の発生個体数を、羽化トラップを使用して系統抽出法で調査した結果、691m^2の水田から6月末からの3か月間での推定発生個体数は414万個体で、約6,000/m^2であった。幼虫の生息密度を土壌サンプリングにより調査した結果、同水田で65日間で約413万個体と推定された。成虫と同一日数に換算すると、幼虫の方が約1/2となったが、調査条件から判断してこの数値は実体よりかなり少ないと思われる。4.幼虫の耐乾燥性ハイイロユスリカ幼虫の培地の含水比を変えて調査した結果、含水比30%で3050日間生存することが分った。5.幼虫の捕食性昆虫ユスリカ幼虫の水生捕食性昆虫としてトンボ目6種、半翅目4種、鞘翅目6種の計16種を確認し、うち13種の捕食量を調査した。1990年度は山口市(野外と室内)を主調査地とし,中国地方(広島県、島根県)と九州(熊本県)でも一部の項目について調査した.得られた結果は下記のとおりである.1.発生ユスリカ類成虫の密度700m^2の水田を6区画にわけた系統抽出法とし,各1個の羽化トラップを2週間毎に区画内を移動させて捕獲ユスリカ個体数を解析した結果,本田初期に全発生量の84.1%が捕獲された.全期間を通した当該水田の推定発生個体数は327万個体で,このうち,ウスイロユスリカが優占種で231万個体と推定された.2.水田内における分布本田初期の高密度時の捕獲は中央部より周辺部で多い傾向がみられたが,以後は差がなかった.6区画のうちの1つは捕獲数が他と比較して少ないが,トラップ面積に対応できるほどユカリカ幼虫の生息はミクロにみて均一ではないと考えられるので,水田全体としてほぼ均一に分布していると推定される.3.オオヤマユスリカとハイイロユスリカの発育幼虫の齢期と発育,成虫の羽化日周性,寿命,蔵卵数,性比,群飛のデ-タを得た.また,種々の温度,給餌量,水質,培地の土壌,密度下における幼虫の発育デ-タを得た.飼育培地の乾燥度(含水比)を変えて幼虫を飼育し,水田の水環境変動に対する適応性を調べた結果,ハイイロユスリカでは含水比30%で30ー50日間生存することが分かった.1991年度に得られた結果は下記のとおりである。1.水田生息性ユスリカ類のリスト現在までに記録された世果の水田生息性ユスリカ類を探索した結果、3亜科49属158種が判明した。

2.水田におけるユスリカ類幼虫の生息密度成虫発生個体数を調査(1990年度)した水田で、幼虫の生息密度を6月9日から8月12日までの期間に5回、3か所から土壌を採取して調査した。7月末以後は乾燥が進み、5回目の採取は、1か所で、多数の幼虫が含まれていた。採集幼虫数から生息密度を推定すると、14回の52日間で約118万個体、15回の65日間では約413万個体となった。先に調査した成虫の推定発生数は94日間で414万個体であったので、5回目を除くと同一日数当りの個体数は幼虫の方が約1/2となり、5回目を入れると幼虫の方が成虫より多い結果となった。調査条件から判断すると,今回の幼虫密度は予想される密度よりも低いと思われる。3.ユスリカ幼虫捕食性昆虫の生態水稲害虫の天敵の寄主ないし代替寄主として重要と考えられるユスリカ類幼虫の水生捕食昆虫のうち、水田の多いトンボ目6種、半翅目4種,鞘翅目6種の計16種について調査した結果、全てユスリカ幼虫を捕食した。うち13種の捕食量を調査したところ、1日当たり平均2479個体を捕食したが,トンボ類の終齢幼虫が捕食量大であった。さらに、ウスバキトンボ幼虫全期間の捕食量推定を行った。4.その他、オオヤマユスリカとハイイロユスリカの各種発育デ-タを得た。
絶縁体界面におけるホットエレクトロンの波動現象とその機能デバイス応用

本研究は、半導体ヘテロ接合では見られない新しい量子サイズ効果を、金属-絶縁体多層ヘテロ接合系の絶縁体界面において発現させ、これを原理とする機能化電子デバイスの実現を目的とし、以下の成果を得た。シリコン基板上に金属/絶縁体(Cosi_2/CaF_2)原子層オーダーの極薄膜多層構造を、絶縁体に対してイオン化ビーム低温結晶成長法、シリサイド金属に対してシリコンとコバルトの二段階成長法を用いて形成した。得られた構造に対して、絶縁体伝導帯に注入したホットエレクトロンの金属/絶縁体界面での干渉現象を観測するため、共鳴トンネルエミッタと金属-絶縁体-金属の垂直入射型電子波干渉計の構造を有するトランジスタを試作し、液体窒素温度においてホットエレクトロンの量子干渉によると考えられる多重微分負性抵抗の観測に成功した。得られた特性は、電圧間隔などが理論予測とよく一致したほか、素子に寄生的に存在するリ-ク電流と抵抗分のために、負性抵抗のピークバレー比が極めて小さくなっていることが等価回路シミュレーションにより明らかとなった。寄生抵抗分の影響を除去して干渉特性を明瞭にするために、素子の平面寸法を電子ビームリソグラフィを用いて微細化することを提案し、その作製プロセスを確立した。このプロセスによって得られた金属/絶縁体量子干渉トランジスタの電流電圧特性を測定し、室温において干渉による多重微分負性抵抗を観測した。この特性から、寄生抵抗分の影響が素子の極微細化によって抑圧されていることが結論された。さらに、素子特性劣化のもう一つの原因であるリ-ク電流について、素子特性の平面寸法依存性から、その原因を列挙し、それらと作製プロセスとの関連を明らかにした。本研究は、半導体ヘテロ接合には見られない新しい量子サイズ効果を、金属-絶縁体多層ヘテロ接合系の絶縁体界面において発現させ、これを原理とする機能化電子デバイスの実現を目的として行い、以下に述べる実績と次年度への方針を得た。シリコン基板上に、シリコンに格子定数の非常に近い金属としてCoSi_2、絶縁体としてCaF_2を選択し、それぞれに対して、シリコンとコバルトの2段階成長およびイオン化ビーム結晶成長法を用いて、原子層オーダーの金属-絶縁体極薄膜エピタキシャル多重層を形成した。この構造を用いて、共鳴トンネルによる単一エネルギーのホットエレクトロン放出部と金属/絶縁体/金属の層構造による絶縁体伝導帯での電子干渉部からなるホットエレクトロン量子干渉トランジスタを作製し、絶縁体伝導帯におけるホットエレクトロンの干渉によると考えられる多重微分負性抵抗の観測に成功した。得られた特性は、電圧間隔などが理論的予測とよく一致したほか、トランジスタ本体に寄生する抵抗などの素子の影響で負性抵抗が小さくなっていることが、等価回路シミュレーションにより明らかとなった。さらに、寄生素子を抑圧して明瞭な量子干渉特性を得るためには、デバイスの極微細化が有効であることが明らかとなった。極微細化は、このような量子干渉を顕著に引き出して機能化電子デバイスへの応用の可能性を拓くという点に加えて、金属-絶縁体デバイスの特徴である高キャリア濃度などにより、半導体では制御の難しいと考えられる極微細状況下のデバイス動作の可能性を実際に示すという点においても、重要な方向である。このため、次年度は、電子線リソグラフィおよびデバイス電極形成の各プロセスおよび材料の最適化により、素子の平面構造の微細化を行う計画である。本研究は、半導体ヘテロ接合では見られない新しい量子サイズ効果を、金属一絶縁体多層ヘテロ接合系の絶縁体界面において発現させ、これを原理とする機能化電子デバイスの実現を目的とし、以下の成果を得た。シリコン基板上に金属/絶縁体(CoSi_2/CaF_2)原子層オーダーの極薄膜多層構造を、絶縁体に対してイオン化ビーム低温結晶成長法、シリサイド金属に対してシリコンとコバルトの二段階成長法を用いて形成した。

得られた構造に対して、絶縁体伝導帯に注入したホットエレクトロンの金属/絶縁体界面での干渉現象を観測するため、共鳴トンネルエミッタと金属-絶縁体-金属の垂直入射型電子波干渉計の構造を有するトランジスタを試作した。昨年度までに、本研究において、このトランジスタ構造によってホットエレクトロンの干渉現象に起因すると見られる電流-電圧特性中の多重微分負性抵抗が微少な量だけ観測されているが、素子に寄生的に存在するリ-ク電流と抵抗分のために、負性抵抗のピークバレー比は極めて小さく、また、観測は液体窒素温度以下のみで、室温では不可能であった。本年度は、寄生抵抗分の影響を除去して干渉特性を明瞭にするために、素子の平面寸法を電子ビームリソグラフィを用いて微細化することを提案し、その作製プロセスを確立した。このプロセスによって得られた金属/絶縁体量子干渉トランジスタの電流電圧特性を測定し、室温において干渉による多重微分負性抵抗を観測した。この特性から、寄生抵抗分の影響が素子の極微細化によって抑圧されていることが結論された。さらに、素子特性劣化のもう一つの原因であるリ-ク電流について、素子特性の平面寸法依存性から、その原因を列挙し、それらと作製プロセスとの関連を明らかにした。
牛パピローマウイルスの病原性解析

牛属はパピローマ(乳頭腫)が最も多く見られる家畜で、その病原体であるパピローマウイルス(PV)のゲノム型と病態との関係を解析した。本研究により、以下の成果が得られた。[1]牛属のヤクの皮膚乳頭腫から新規のPV型を発見し、ヤクの学名(Bos grunniens)にちなみ、BgPV-1と命名された。[2]これまで皮膚の乳頭腫病変からしか見つからなかったBPV-10を舌病変部から発見し、BPV-10の新たな病態を明らかにした。[3]我々が発見したBPV-12の感染病変部に、全長ゲノムにあわせて欠損ゲノムが存在していることを発見し、BPV病変に見られる欠損ゲノムの初めての報告がなされた。牛の舌に発生した腫瘤よりパピローマウイルス(PV)ゲノムを検出し、解析を行った。シークエンス解析によりPVの型を同定したところ、これまで舌からの病変報告がない牛パピローマウイルス10型(BPV10)であったため、全ゲノムをクローニングし、塩基配列を決定した。その結果、既報のBPV10と比較して、E1蛋白遺伝子領域に129bpの欠失が見つかった。我々は以前に発見したBPV12において、欠損環状PVゲノムが同じ病変部に完全PVゲノムと共存していたことを見出していたため、BPV10についても、完全PVゲノムとの共存や他のPV型との共感染を検討した。特異的プライマーによるゲノムPCR、RT-PCRによるmRAN解析ならびにサザンブロットによる解析を試みた結果、この欠損BPV10のみが検出された。またこのBPV10が検出された病変部は、病理組織的解析により上皮性パピローマと診断され、抗BPV抗体による免疫染色でウイルス蛋白が発現していることが確認された(本年度学会および論文発表)。また我々は昨年、ウシ属のヤクから新規PVを発見し、BgPV-1と命名して論文公表したが、ほぼ同時期にインドのグループより、ヤクからBPV 1とBPV2を検出した内容の論文が発表された。それを受けてインドのヤク由来のBPVをGenBankのデータを元に我々が解析したところ、彼らの示したBPV 1の塩基配列は、BPV 1でもBgPV-1でもない、新たなPVの可能性があることが判明した。彼らはウイルス型特異的プライマーを用いたPCRによりBPVの型を特定しており、今回の事例を参考に、我々は、いまだに未発見の型が多く存在する可能性が高いBPVの型解析においては、より厳密な解析が必要であると主張し、国際ウイルス分類委員会PV研究部会委員長であるBurk博士らと共に、Guest Editorialを執筆して発表した。1)通常の牛(学名:Bos Taraus)と同じ牛属に分類され、中国の高地で家畜化されたヤク(学名:Bos grunniens)のパピローマを解析したところ、新規のパピローマウイルス(PV)候補が確認されたため、解析を進めた。既に我々は新しい型の牛パピローマウイルス(BPV)を宮崎の牛の病変部から検出し、BPV12型(BPV-12)と命名して論文公表し、認められているため、当初、ヤクの新型PVの名称として、BPV-13の提唱を試みた。しかし、ウイルスの分類に関するゴールドスタンダードとなる、国際ウイルス分類委員会PV研究部会委員長との協議で、ヤクは同じ牛属であるが、別の動物種に由来するパピローマであることから、ヤクの学名:Bos grunniensにちなみ、BgPV-1(ヤクパピローマウイルス1型)という名称を提案することになった。BgPV-1が検出された病変部は、病理組織的解析により、繊維性パピローマと診断され、抗BPV抗体による免疫染色も陽性となり、ウイルス蛋白が発現していることが示された。これらの成果は、論文として認められ、公表するに至った。2)2011年に我々が発見した、BPV-12が関与する牛の上皮性パピローマの病変部から、一部遺伝子を欠損した環状ゲノム(BPV-12-del)が存在することを見いだし、解析を行った。シークエンス結果より、BPV-12が約7.2kbであるのに対し、BPV-12-delは約3.4kbで、その結果は、サザンブロットでも確認された。リアルタイムPCRを用いて、病変部に存在するBPV-12ゲノムの内のBPV-12-delの割合を求めたところ、42%がBPV-12-delであることが示された。BPV-12-delの生物学的意義は不明だが、これまでこのような報告はなく、本結果は、初めての欠損環状PVゲノムの報告として、論文公表された。

牛に乳頭腫などの腫瘍性疾患を引き起こす牛パピローマウイルス(BPV)の病原性を解明するため、1)新規BPVの検索、2)腫瘍に関与するBPVの性状解析、3)BPV発病に関与する因子の解析、の3項目を行った。本研究により、以下の成果が上がった。1)新しいウイルス型の発見:中国青海省の高地に生息する牛属、ヤクの体表部に見られた繊維性乳頭腫より新しいパピローマウイルス(PV)型を発見した。国際ウイルス分類委員会PV研究部会との協議により、ヤクは家畜種のウシ(Bos taurus)と同じ牛属だが、亜種が違うため、BPVとは独立した新たなPVとして、ヤクの学名(Bos grunience)に因み、BgPV-1と命名することとした。論文発表によりBgPV-1の名称は国際的に認知された。2)舌の腫瘍由来のBPV解析:BPV10型は、これまで体表部での検出報告しかなかったが、本研究の中で、31ヶ月齢の牛の舌で見出された上皮性乳頭腫からBPV10が検出された。この結果は、BPV10による新しい病態として、論文発表された。3)欠損ゲノムの発見:28ヶ月齢の牛の舌で見出された上皮性乳頭腫より、我々は既に新しい型としてBPV12を発見していたが、本研究により、病変部には完全長のウイルスゲノムと共に、ゲノムの47%を欠く欠損ゲノムが、[全長:欠損=58:42]の割合で混在していることを発見した。欠損ゲノムの病原性への関与は不明だが、病変部のBPV12ゲノムの半分近くが欠損ゲノムであったことは興味深い結果であり、またBPVではこれまで欠損ゲノムの存在は知られていなかったことから、欠損BPVゲノムの初めての報告として論文発表された。このほか、BPVとパラポックスウイルスの重感染事例や、BPV感染による牛乳頭腫症の重篤化事例の解析も行い、国際学術雑誌に牛パピローマウイルスの多様性についての論説を掲載するなど、上記の成果とあわせ、BPVの病原性解明に大きく貢献する成果を上げた。基礎獣医学本事業の当初目的に掲げた3項目のいずれについても、すでに成果を上げている。1)新規BPVの検索:事業初年度に、牛属のヤクの乳頭腫から新規のPVとしてBgPV1を発見・命名し、論文発表を行った。2)腫瘍に関与するBPVの性状解析:牛の舌で見つかった乳頭腫から、BPV10を初めて検出し、全ゲノムならびに病理学的解析の結果を論文発表した。3)BPV発病に関与する因子の解析:以前我々が発見したBPV12の由来病変部に、一部遺伝子欠損したBPV12-delが共存していることを発見し、解析結果を論文発表した。また、これまで海外で報告されたBPVの解析法の盲点を見いだし、未知の型が多いBPVの解析には、より厳密な解析法が必要であるという主張をGuest Editorialで発信することもできた。以上のことから、本研究課題である、牛パピローマウイルスの病原性解析に、十分貢献する成果が上がっていると考えられる。新規BPVの検索として、解析中であった新型BPV候補のゲノム解析とクローニングを完了し、国際ウイルス分類委員会とのやり取りをふまえて、牛属のヤクから新たに見いだされたパピローマウイルス(PV)としてBgPV-1を提唱した。病変部の病理組織学的解析とあわせて、BgPV-1の名称が論文として認められたため、当初の第一の目的は達成された。また、BPV発病に関与する因子として、我々が発見した新型BPV12の病変部で見いだされた、遺伝子欠損BPVゲノム(BPV-12-del)が病変部にどの程度存在するか、Realtime PCRにより定量化するとともに、サザンブロットによりBPV-12-delの存在を確認した。
プロセスとして表現される関数微分方程式の分類

B=B((-∞,0];X)上、無限遅れを持つ線形関数微分方程式を考える。ここでAはX上の有界線形作用素のcompact半群のinfinitesimal generatorでμ_1はs∈(-∞.0]に対してμ_t(s)=μ(t+s)によって定義されたBの元である。この相空間Bは扱う微分方程式に対応してその都度選び直す難しさがある。さらに偏微分方程式を一般化した発展方程式にまで対象を広げるとXを無限次元としたときの無限遅れをもつ関数微分方程式として扱う必要がある。本研究の目的はBの選び方に影響されない統一理論の試みであった。そこで本科研費で解明できたのは次の点である。(i)安定理論のプロセスによる特徴ずけ。そのために色々な姿のBに対して統一されたプロセスの構成。(これを準プロセスと名付けた)(ii)非線形振動論のプロセスによる特徴ずけ。特に概周期的プロセスにおける概周期的積分の存在定理を与えた。また、分担者の稲葉は種数無限の開曲面上に極小集合を持たない流れの例を初めて構成した。これは研究目的(ii)を考えるとき、一つの方向性を与えてくれたもので、重要な結果である。分担者の石村・岡田・渚・筒井・久我は多くの具体的モデルの提供によってこの研究が微分方程式の広い分野に応用できることを確信させてくれた。ここでAはX上の有界線形作用素のcompact半群のinfinitesimal generatorでu_tはs∈(-∞,0]に対してu_t(s)=u(t+s)によって定義されたBの元である。そこで今年度は次の段階まで解明できた。(投稿中)(ii)非線形振動論のプロセスによる特徴ずけ。そのためにもっともふさわしいプロセスの構成。(準備中)また、分担者の稲葉は種数無限の開曲面上に極小集合を持たない流れの例を初めて構成した。分担者の石村・岡田・筒井・久我は多くの具体的モデルの提供によってこの研究が微分方程式の広い分野に対応できることを確信させてくれた。ここでAはX上の有界線形作用素のcompact半群のinfinitesimal generatorでu_tはS∈(-∞,0]に対してu_t(s)=u(t+s)によって定義されたBの元である。