hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低エネルギー(100eV以下)イオンと炉壁材料との相互作用の物理・化学過程の解漫

本年度は主要設備である低エネルギーイオン源を設置し、その性能試験および性能向上を行った。これと平行して既設イオン源を用いて、グラファイト表面におけるReV希がスイオンの捕捉と再放出、グラファイト表面上のクロムのスパッタリングおよびグラファイト表面上のNi膜中における捕捉重水素の濃度分布を調べた。低エネルギーイオン源の性能試験の結果、【Ar^+】イオンビームの電流密度は10eVにおいて約1μA/【cm^2】であった。また【Cu^+】イオンビームの電流密度は10eVにおいて約0.1μA/【cm^2】であった。これらの電流密度は本研究の遂行可能なイオン強度であるが、実験時間の短縮化のため今後更に性能向上を試みる。グラファイトにイオン注入した希ガス原子の捕捉量とその後の加熱による再放出量の測定から、活性化エネルギーの異なる2種類の捕獲座に捕捉されることが判明した。グラファイト表面上の付着クロムのスパッタリングの実験結果から、グラファイト表面上の金属原子は、その表面濃度が一原子層以下の時、再スパッタされ難いことが判明した。これはイオンにより金属原子が表面から反跳注入されることになる。今後は付着量が大きい場合について自己スパッタ収率を低エネルギーイオン源を用いて測定することが重要である。グラファイト表面上のNi膜中のイオン注入重水素の照射下における飽和濃度の深さ分布を決定し、その表面濃度からNi膜表面における重水素の再結合係数を評価した。今回の評価では照射中のNi膜内に存在する重水素は全て動き得ると仮定したが、厳密な評価を行うためには捕獲座に捕捉され動き得ない重水素量を決定することが必要である。今後は同様の実験を上述の低エネルギーイオン源を用いて行う。
ジェスチャ及び音声認識を用いたコミュニケーション能力育成教材の開発と実践評価

日本のクラスサイズではスピーキング練習に時間を割けないことから,我々は仮想的にインタビューを行うVirtual Interviewing System (VIS)を開発してきた.しかし,英語コミュニケーションではジェスチャ等の非言語による情報伝達が45-60%を占める.当該システムは,非言語を含めた英語コミュニケーション能力向上を考慮して,顔,音声,ジェスチャ認識で構成される.音声認識部では,既存の音声認識エンジンを用い,日本人のアクセントに対する精度向上を図った.顔認識では双子を判別することが可能になった.ジェスチャ認識では隠れマルコフモデルを利用し定型のジェスチャ認識を行った.日本のクラスサイズではスピーキング練習に時間を割けないことから,我々は仮想的にインタビューを行うVirtual Interviewing System (VIS)を開発してきた.しかし,英語コミュニケーションではジェスチャ等の非言語による情報伝達が45-60%を占める.当該システムは,非言語を含めた英語コミュニケーション能力向上を考慮して,顔,音声,ジェスチャ認識で構成される.音声認識部では,既存の音声認識エンジンを用い,日本人のアクセントに対する精度向上を図った.顔認識では双子を判別することが可能になった.ジェスチャ認識では隠れマルコフモデルを利用し定型のジェスチャ認識を行った.
椎骨動脈破裂の法医病理学的診断法の確立-内因性,外因性の機序の解明と鑑別-

頭蓋内椎骨動脈の破裂によるクモ膜下出血の法医解剖例について,連続切片を作製して病理組織学的に検討した.内因性動脈解離と外傷性動脈破裂との組織形態学的鑑別を試みた結果,外傷例では破綻部位の外膜伸展が無いのに対し,内因例では全例の外膜が伸展していることが両者の鑑別に最も有用でことが判った.また内因性動脈解離の成因は未だ不明であるが,本研究結果から中膜の変性が初期病変となっている可能性が示唆された.頭蓋内椎骨動脈の破裂によるクモ膜下出血の法医解剖例について,連続切片を作製して病理組織学的に検討した.内因性動脈解離と外傷性動脈破裂との組織形態学的鑑別を試みた結果,外傷例では破綻部位の外膜伸展が無いのに対し,内因例では全例の外膜が伸展していることが両者の鑑別に最も有用でことが判った.また内因性動脈解離の成因は未だ不明であるが,本研究結果から中膜の変性が初期病変となっている可能性が示唆された.本研究は,頭蓋内椎骨動脈破綻によるクモ膜下出血の内因・外因の法医学的鑑別法の確立が目的である.初年度となる本年は,主として内因性の椎骨動脈解離によるクモ膜下出血の疫学的・病理学的特徴について考察した.内因性頭蓋内椎骨動脈解離によるクモ膜下出血44剖検例のうち8割は男性であり, 30-50代が多かった.背景因子として肥満,高血圧が約半数にみられた.破綻血管の左右差はなかった.前駆症状が4割にみられるとともに,過去の解離を示唆する器質化血栓が20例にみられた.病理学的特徴として,全例に中膜平滑筋の融解壊死と内弾性板のノコギリ状変化が認められた.結果から,頭蓋内動脈解離における多発性病変の存在と,その原因としての血管の脆弱性につながる先行性病変の存在が示唆された.全例に中膜平滑筋の融解壊死が認められたことから,動脈解離発生の重要なひき金であることが強く推察された.検討結果に見られた中膜壊死は,腹腔内動脈解離の原因のひとつであるsegmental arterialmediolysisに類似しており,両者の比較検討が今後の病態解明に重要と考えられた.また,特殊な事例として,死亡直前の交通事故による頭部外傷をともなう椎骨動脈破綻の剖検例を経験した.本例は,椎骨動脈の連続切片の観察によって事故に先行して多発性の動脈解離が発生していたこを証明た.組織所見から内因性の動脈解離により外膜破綻が生じ,クモ膜下出血を発症したため運転を誤り交通事故に至ったものと診断した.頭蓋内椎骨動脈破綻によるクモ膜下出血の法医鑑定において組織学的検索法が有用であることがわかった.研究最終年にあたる本年度は,外傷性の頭蓋内椎骨動脈破綻によるクモ膜下出血剖検例の検討を行い,内因性椎骨動脈解離症例との病理形態学的鑑別を試みた.具体的には,外傷性・内因性事例の左右椎骨動脈を一括包埋し,連続横断切片標本を作成し,比較検討を行った.その結果,最も特徴的な形態学的鑑別点として,内因性動脈解離では先行する中膜血腫の結果,破綻部位の外膜が伸展しているのに対し,外傷性動脈破裂では動脈の全層破綻により外膜の伸展が見られないことが確認できた.その他に,非破綻部位の血管所見として,外傷例では非破裂の内膜・中膜亀裂や内弾性板の分断化が観察された.一方で内因性の動脈解離例では中膜の壊死または変性が全例に認められ,陳旧性の非破裂の動脈解離像が約半数に確認された.また,これらの形態学的変化は,発症から死亡まで数週間の経過があった事例に於いても確認が可能であった.以上の所見は,肉眼所見だけでは鑑別が困難な頭蓋内椎骨動脈破綻によるクモ膜下出血例の内因・外因の鑑別に極めて有用と考えられ,国際シンポジウムにて発表した.さらに,昨年,内因性椎骨動脈解離の発生原因として中膜病変の重要性を指摘し,腹腔内動脈解離の原因のひとつであるsegmental arterial mediolysisとの関連を報告したが,今回,椎骨動脈解離と腹腔内動脈解離が合併した事例を経験し,両者の関連をより強く示唆する事例として学会および国際誌に報告した.
晋宋期における地方官吏の文学空間――山水と神怪の探求

本研究は、詩文創作、書物編纂あるいは説話伝承の場としての「地方官吏の文学空間」に着目し、晋宋時期の文学のありようを明らかにしようとするものである。晋宋期には、各地に、地方官吏・豪族・僧侶・隠士などが関わる、学問や詩文創作の場が形成された。本研究では、当時の学術や詩文の主要テーマであった山水と神怪(神明)を、地方官吏とその周辺の人々がどのように探求し、表現したのかについて、詩文や地志、志怪書などの文献を用いて総合的に考察する。
１９世紀アイルランド小説のアイリッシュネスの発展と拡散に関する研究

1801年にアイルランドは政治的にイギリスの傘下に入り、以降、アイルランドの作家はアイルランド性を色濃く打ち出した小説を広くイギリス読者に向けて発表していく。プロテスタントの作家だけでなく、1820年代以降はカトリック出身の作家の活躍も顕著となる。こうした中で、イギリスからの旅行者がアイルランドの実態を語る旅行記を数多く発表するようになる。小説と旅行記を読み解くことから、イギリスとアイルランドの双方の視点から見るアイルランド性の諸相を浮彫にした。本年度は、19世紀アイルランド小説におけるアイリッシュネス(アイルランド性)の表現と受容の問題を、旅行記や絵画・挿絵との関連性の中で捉えた。特に成果として挙げられる点は次のとおりである。1.アイルランド農民出身の作家であるウィリアム・カールトン(1794-1869)は、カトリック信徒である農民の生活を描いてアイルランド性を世に訴える作品を執筆し、新たなアイルランド文学の確立を目指した。その原点には、シーザー・オトゥウェイ(1780-1842)の手がけたアイルランド旅行記があり、そこには、国教徒のアングロ・アイリッシュの視点でカトリック世界やアイルランド伝承物語に注目し、イギリスの読者にアピールしようとする姿勢が示されている。小説と旅行記のジャンル横断的な影響関係に目を向けることで、小説とアイリッシュネスをめぐる課題の新たな側面が明らかとなった。2.アイリッシュネスへの認識は、小説や旅行記のテクストだけではなく、それに付随する挿絵、そしてそれに関連する絵画を取り巻く環境にも目を向けることで、作家・画家の出自や立場によって、その概念が複雑な様相を呈することが明らかとなった。アイルランド農民のカトリック性と貧困がアイリッシュネスの概念を支える重要な要素だが、両者に対する捉え方は、イギリス人、アングロ・アイリッシュ、アイルランド人の間に齟齬がある。具体的には、アイルランドのコーク出身の画家、ダニエル・マクリース(1806-1870)を鍵として、テクストと視覚芸術の関係性を解き明かしながら、重層的なアイリッシュネスの概念を明確にした。以上、西および南アイルランドという地域を舞台としたテクストを中心に研究を展開した。19世紀の小説をめぐって、アイリッシュネスの発展と拡散を解き明かす研究の3年度目にあたる。初年度および2年度目における研究から、イギリス人を中心とした旅行者が書き残した当時の旅行記にも目を配り、そこでのアイルランドやアイルランド人の描き方を小説での扱いと比較・検討することが有効である点が明確となってきた。本年度の研究を進める過程で、小説と旅行記の比較研究によって、アイルランド内外でのアイリッシュネスの概念の多面性や齟齬が明らかとなり、イギリスの帝国主義的な文脈の中で、アイルランドとそこに住む人々の立場を新たな視点から捉えられる点がさまざまに確認された。特に、1810年前後から土地戦争が激化する前の1870年前後までの時代に焦点を絞ることで、その後のアイルランド民族主義運動が高まりを見せていく時代を見据える基盤研究が提示できる点も明らかになってきた。結果的に、旅行記に関する考察に多くの時間を費やし、挿絵などの関連図版についても意識的に考察を進めた。本年度において具体的に展開した主たる点は、1旅行記の情報整理・収集および考察、2飢饉以降に刊行された小説の情報整理・収集および考察、3アイルランドの都市部(ダブリン、コーク、ゴールウェイ、ベルファスト、リメリック)にかかわる小説および旅行記における扱い方に関する考察である。3については、前年に展開した研究(アイルランド辺境の地の扱い)の発展であり、比較研究によって質の異なるアイルランド性を解き明かすことにもなった。なお、国際学会での成果発表、アイルランドと北アイルランドでの現地調査も行った。本研究の初年度にあたり、研究環境および基盤を固めるとともに、1820年代と1830年代におけるアイルランド小説およびアイルランド旅行記を対象とし、アイリッシュネス(アイルランド性)がどのように表現され、またそれがどのように受容されていったかについて明らかにした。この時期には、ジョン・バニムとマイケル・バニム、ウィリアム・カールトン、ジェラルド・グリフィンなどのカトリック作家が執筆活動を展開しはじめ、カトリック教徒である農民の現実を内側から描く小説が登場した。こうした作品には、プロテスタント作家であるマライア・エッジワース、シドニー・オーウェイソンらが描いてきたアイルランド人とは異なった、厳しい現実に翻弄される悲劇的なアイルランド人の姿が印象的に描かれている。カトリック作家の登場で、英語文学において表現され、そして受容されるアイリッシュネスが重層的に拡大したように捉えられそうだが、本年度の研究をとおして、むしろ、この時期には、アイリッシュネスがアイルランド農民という階級や西アイルランド(コナハトやマンスター)という地域と密接に関連づけられて受容される傾向にあった点が明らかとなってきた。このことは、当時のアイルランド旅行記に目を向けることで明確になってきたものである。英国人やアングロ・アイリッシュ(アイルランドにおけるプロテスタント支配者層)だけでなく、ヨーロッパからの旅行者の手になる旅行記には、執筆者が何をアイルランド的であると捉え、そして何を読者にアピールしようとしているか如実に示されている。旅行記

研究の意義については、ベルギーでの国際学会における研究発表によって明確に意識するにいたり、本研究の鍵を握るものと捉えている。本研究の最終年度にあたり、19世紀のアイリッシュネスの発展と拡散をめぐって小説と旅行記、および刊本に含まれる関連図版に注目して研究を進めた。本年度の主たる研究項目は次のとおりである。1アイルランド北西部、ドニゴール州にある「聖パトリックの煉獄」は、中世期から現代にいたるまで、ヨーロッパ全土からカトリック巡礼の集まる地として知られている。この聖地は、18世紀末から19世紀にかけ、宗教的、考古学的な関心の対象であるとともに、さまざまなジャンルの文学作品や旅行記などでも取り上げられ、アイルランド農民の実態を描くのに有効な題材としての意義を有するようになった。プロテスタントの目線から、アイルランド人を描く格好の素材として、それまでには見られなかったパースペクティヴの下で取り上げられるようになった事実を詳らかにした。2アイルランド南西部は、ゲールの文化伝統を引き継いだ地域として知られるが、18世紀末から19世紀にかけ、アイルランド内外から多くの旅行者を引き付けていた。貧しいアイルランド農民や彼らを取り巻く環境、そして、彼らの語りの文化伝統が、アイルランド内外のプロテスタントによってどのように取り上げられたかに注目し、アイルランド的なものの発信戦略のあり様を、文献テクストと刊本に含まれる図版の分析をとおして詳らかにした。アイルランドへの目線の複数性の重要性が明確に認識できた。3前年度までの研究を踏まえ、18世紀末から19世紀のブリテンにおいて、アイルランドの特定地域がアイルランド性を有する文化的トポスとしてどのようなネットワークの中で注目されるものとなったかを総括した。アイルランド発信の小説とアイルランド内外のプロテスタントによる旅行記が鍵を握っている点が明らかとなった。英語圏文学現在、4年計画の研究の半ばにあるが、これまで、カトリックの背景を持つアイルランド人作家の作品を軸として、イギリス人およびアングロ・アイリッシュの残した旅行記との比較検討をとおして、そのアイリッシュネスのアピールの実態について考察してきた。アイルランドのカトリック性と貧困問題が、時にゲールの文化伝統と絡み合って提示され、そのあり様がアイルランド的なものとして広くイギリスに浸透していていた状況が大枠で捉えられた。結果的に、西および南アイルランド地方を舞台としたテクストに焦点が当てられることとなったが、都市部におけるアイルランド人にまつわる描写について、今後意識的に読み解いていく必要があろうと思われる。研究後半では、アングロ・アイリッシュの作家作品に注目し、アイルランド性のアピールの様相を考察することが必要となる。研究前半の成果と照らし合わせて、書き手の背景や立場の違いにより、アイリッシュネスの捉え方には相応の差異が見られることを明確にしていく段階にあると認識している。
セレン転移タンパク質群の機能解析とセレントラフィッキング制御の解明

本研究では、反応中間体複合体状態の構造解析、速度論解析、質量分析を駆使した解析により、セレン代謝とセレンタンパク質の生合成に関与するタンパク質・酵素群が成し遂げる厳密にセレン特異的な化学変換の構造機能の全貌を原子レベルで詳細に明らかにし、セレンの微量必須元素としての機能発現制御の分子基盤を築き上げた。1.セレノシステイル-tRNAの生成過程およびセレノシステインの共翻訳的挿入に関与することが示唆されているタンパク質(SCL、SPS1、SPS2)の各々をbaitとしたtwo-hybridスクリーニング、および、タグを付けて発現させた各々のタンパク質を用いたpull-down解析を行い、これらの因子に相互作用するタンパク質を探索し、候補となるタンパク質を得た。2.セレノシステイン、亜セレン酸はいずれも、生体内のセレンタンパク質合成においてセレン源として用いられる。亜セレン酸は血中で赤血球に取り込まれ、還元された後に血漿中に放出されることが知られているが、セレノシステインの動態については明らかにされていない。そこで、セレノシステインが十二指腸から吸収されて血液中へ移行した際の挙動を調べるため、血球細胞との相互作用を調べた。その結果、セレノシステインが赤血球に取り込まれることを初めて見出した。さらに、亜セレン酸とは異なり、セレノシステインは血漿成分存在下であっても赤血球から放出されないことが明らかとなった。3. Geobacter sulfurreducensのセレンタンパク質翻訳に関与すると考えられるSelBをクローングし、その諸性質を調べた。また、本細菌に存在する新規セレンタンパク質であるMHSEPの発現誘導条件を検討したところ、マンガンによって特異的に発現が誘導される可能性が示唆された。本研究では、セレン代謝とセレンタンパク質の生合成に関与するタンパク質・酵素群が成し遂げる厳密にセレン特異的な化学変換の構造機能の全貌を原子レベルで詳細に明らかにすることにより、セレンの微量必須元素としての機能発現制御の分子基盤を築き上げことを目的とした。セレノシステインリアーゼがセレンと硫黄を識別してセレノシステインのみに作用する機構について、反応中間体複合体状態の構造解析、速度論解析、質量分析を駆使して詳細に解析した。活性中心において基質から奪ったセレン原子を本酵素がどのようにして活性中心外に汲み出し、他のタンパク質へと転移するのかを明らかにした。Geobacter sulfurreducensは細胞の表面から細胞外の電子受容体となる金属化合物へ電子を移動させる能力をもつ。この還元の過程で本菌はエネルギーを獲得し生育する。本菌のゲノム配列を解析した結果、サブユニットあたり5つのヘム結合部位と1つのセレノシステイン残基をもつ新奇タンパク質MHSEP (multi-heme-containing selenoprotein)が見つかった。Cross over PCR法によりP.aeruginosa Cyt c_<551>のペリプラズム移行シグナルを組み込んだMHSEP遺伝子断片の作製に成功した。また、この断片をpET22b Vectorに挿入した同遺伝子発現用Vectorの作製に成功した。これら作製した2つの発現VectorおよびE.coli由来ヘム生合成系遺伝子の発現VectorであるpEC86を同時に導入した三重形質転換体の作製に成功した。
異なる上皮の接点　の形成・維持機構の解明と試験管内発がんモデルの開発

Sox2-EGFP、Gata4-td TomatoダブルレポーターES細胞を用いて、分化誘導を行った。食道胃接合部の前駆細胞であるSox2(+)Gata4(+)前駆細胞を分化誘導し、その後、食道オルガノイド、胃オルガノイド、食道胃接合部オルガノイドの作成に成功した。次にSox2+Gata4+前駆細胞をFACSで分取し、3次元培養を行ったところ、食道オルガノイドと胃のオルガノイドの作成に成功した。しかしながら、単一細胞から食道胃接合部オルガノイドを作成することはできなかった。その原因は、食道側と胃側では分化に重要な因子が異なることが原因と考えられた。しかし、異なる上皮における間葉系と上皮の相互作用は未解明の問題であり、まずその問題を解決することが先決であると考えた。注目している転写因子、p63、Sox2、Gata4の発現は食道胃接合部形成過程においてdynamicに変化するが、それらの転写因子の食道胃接合部発生における役割はわかっていない。まずSox2+Gata4+前駆細胞が食道と胃へ運命分分岐する時期にGata4をKOすると、胃領域に異所性食道上皮が生じた。またp63及びSox2を同様の時期にKOしたところ、ともに重層扁平上皮の形成が阻害され、食道胃接合部に特異的に存在する移行上皮が形成された。前年度に報告したlineage tracing実験の観察結果と合わせて、「食道胃接合部は胎生13.5日以前のSox2+Gata4+細胞から発生し、Gata4の発現が消失したところでは、p63が誘導され食道上皮に、Gata4の発現が保たれたところでは胃上皮に運命分岐していく」ことを証明した。上記転写因子をコントロールする因子として、大規模解析からFgf10-MAPKシグナルを抽出し、その役割について検証している。29年度が最終年度であるため、記入しない。最初にp63-EGFP、Gata4-td TomatoダブルレポーターES細胞を作成した。そのES細胞を用いて分化誘導を行うことでp63(+)食道上皮とGata4(+)胃上皮のオルガノイドの作り分けを行った。ダブルレポーターES細胞を用いることで、分化誘導過程でp63とGata4の発現がどのように変化していくかを追跡可能となったが、それにより仮説の間違いに気づいた。胎生期の段階的な免疫染色の結果から、食道と胃の運命分岐は胎生13.5日付近であると考えていたが、分化誘導実験の結果から、dish上で胎生8.5日の原腸回転期に相当する時期には、食道と胃の前駆細胞の運命はすでに概ね分かれていることが推察された。そこで、より早期に食道領域に発現するSox2に着目した。胎生8.5日の原腸は、ほぼ均一な形態をとるため、免疫染色で将来の消化管の領域化を推定するのは困難と考えられた。そこでSox2とGata4のin vivo lineage tracingシステムを新たに作成し、発生初期(e7.5e11.5)にそれぞれの転写因子を発現している細胞が、発生後期(e18.5)に食道・胃のどの領域に寄与できるかを調べた。その結果、胎生8.5日には食道と胃の領域化がほぼ決定しており、Sox2とGata4の発現パターンで区画化できることを証明した。次にSox2-EGFP、Gata4-tdTomatoダブルレポーターES細胞を新たに作成し、Rainbow organoidの分化誘導を行い食道(Sox2)・胃(Sox2+Gata4+)・十二指腸(Gata4+)が連続する上部消化管オルガノイドを作成した。また、上部消化管オルガノイドからそれぞれの細胞群を単離し、3次元培養することで、食道・胃・十二指腸オルガノイドをそれぞれ作成することで、異なる上皮の前駆細胞をそれぞれ誘導できていることを証明した。概要に記載の通り、異なる上皮の接点の形成時期が、推定よりも早期であったため、その検証に適したレポーターES細胞を作成し直すことになった(食道p63→Sox2)。新たに接点の形成時期と推定されたe8.5の胎仔は非常に小さく、食道胃の位置のメルクマールとなる肺や肝臓、膵臓が未だ形成されていないため、免疫染色で将来の接点形成領域の遺伝子発現パターンを正確に評価することが困難であった。そこで、新たにSox2-CreER、Gata4-CreERマウスを作成し、lineage tracing実験を行うことで、異なる上皮の領域化がe8.5には概ね決定していることを証明した。上記のように、当初の仮説に誤りがあり、新たに必要な実験が増えたため、「異なる上皮の接点の形成メカニズムの解明」という主題への取り組み遅れており、進捗は「やや遅れている」と判断した。

その原因は、食道側と胃側では分化に重要な因子が異なることが原因と考えられた。しかし、異なる上皮における間葉系と上皮の相互作用は未解明の問題であり、まずその問題を解決することが先決であると考えた。注目している転写因子、p63、Sox2、Gata4の発現は食道胃接合部形成過程においてdynamicに変化するが、それらの転写因子の食道胃接合部発生における役割はわかっていない。まずSox2+Gata4+前駆細胞が食道と胃へ運命分分岐する時期にGata4をKOすると、胃領域に異所性食道上皮が生じた。またp63及びSox2を同様の時期にKOしたところ、ともに重層扁平上皮の形成が阻害され、食道胃接合部に特異的に存在する移行上皮が形成された。前年度に報告したlineage tracing実験の観察結果と合わせて、「食道胃接合部は胎生13.5日以前のSox2+Gata4+細胞から発生し、Gata4の発現が消失したところでは、p63が誘導され食道上皮に、Gata4の発現が保たれたところでは胃上皮に運命分岐していく」ことを証明した。上記転写因子をコントロールする因子として、大規模解析からFgf10-MAPKシグナルを抽出し、その役割について検証している。今後の研究は、1vitroで分化誘導した各細胞が、どれだけvivoの発生を段階的に模倣できているかの証明と、2vitroで前腸前駆細胞が、食道及び胃前駆細胞に分岐するメカニズムの解明を中心に行っていく予定である。1の具体例として、分化誘導した細胞のblastocyst injection (Cell stem cell 2016で他の研究者より発表された手法)を行う。dish上で分化誘導したGata4+前腸細胞がvivoでどの前腸領域に寄与できるかをみることで、dish上で作成した細胞が、食道・胃の双方に寄与できる前駆細胞であるか、またvivoの細胞にどの程度近い細胞をdish上で作成できたかの検証を行う。2に関しては、運命分岐のメカニズムについて、in vitroでシグナルを複合的に操作し、population解析を行うことで、その解明を試みる。29年度が最終年度であるため、記入しない。
T細胞最終分化系譜の分子機構の解明と腫瘍免疫への応用

癌免疫療法において、分化段階をターミナルエフェクターではなくメモリーT細胞に留めた癌抗原特異的T細胞を効率的に誘導する方法が求められている。しかしながら、メモリーT細胞がターミナルエフェクターT細胞に分化する分子機構は明らかでない。そこで本研究では、申請者が発見したT細胞自身の代謝産物によるターミナルエフェクターT細胞分化促進メカニズムを詳細に解析することで、T細胞の分化制御および効率的なメモリーT細胞誘導方法の開発に貢献することを目的とする。我々は、T細胞自身がビタミンAを代謝し、活性化型に変換することでレチノイン酸シグナルを誘導し、ターミナルエフェクターへの分化を促進させること、それにはエピジェネティックな包括的な遺伝子発現制御が大きく関与していることを明らかにしてきた。平成30年度では、レチノイン酸シグナルによってクロマチン状態がオープンになることで発現が上昇する遺伝子X(未発表のため仮名)を同定した。LM-OVA感染症モデルを用いてCD8+T細胞における遺伝子Xの発現量を解析したところ、遺伝子XはエフェクターメモリーやSLECと呼ばれるエフェクターT細胞に高発現する一方で、ナイーブやセントラルメモリーT細胞では低発現であることが明らかとなり、この結果はヒトのT細胞でも共通していた。さらに遺伝子XをT細胞に強制発現すると、CD62L発現・増殖能・生存能が低下しターミナルエフェクター様の機能を示した。そこで遺伝子XがターミナルエフェクターのCD62L発現・増殖能・生存能を回復させる標的になりうるか発現抑制系を用いて検討した。期待した通りに、in vitroで誘導したヒト・ターミナルエフェクターT細胞の遺伝子X発現を抑制することで、CD62L発現と生存能が回復した。ターミナルエフェクターT細胞分化を決定づけ、その機能を回復させるための標的となる遺伝子Xを同定することができた。<T細胞における遺伝子Xの生理的機能の解明>遺伝子Xは、増殖能や生存能が低いエフェクターメモリーやターミナルエフェクターで高発現することから、T細胞分化の決定的な制御遺伝子である可能性が高い。これを証明するために遺伝子XをT細胞で特異的に欠損するコンディショナルノックアウトマウを作製しLM-OVA感染症モデルを行う。また、薬剤誘導性に遺伝子Xを欠損するマウスを用いて、ターミナルエフェクターT細胞における遺伝子Xの役割を明らかにする。<遺伝子Xを標的とした癌免疫療法の開発>ヒト由来ターミナルエフェクターT細胞における遺伝子X発現を抑制することで、CD62L発現・生存能が回復することを見出した。しかしながら、その効果は十分ではなかった。本年度では、強力に遺伝子Xの働きを抑制するshRNA配列・dominant negative mutant・低分子化合物などの探索を行う。この結果をもとに遺伝子Xを標的とすることで担癌免疫不全マウスに対するヒト癌抗原特異的T細胞輸注療法の効果を増強できるか検討する。我々は、T細胞自身がビタミンAを代謝し、活性化型に変換することでレチノイン酸シグナルを誘導し、ターミナルエフェクターへの分化を促進させることを明らかにしてきた。平成29年度では、レチノイン酸シグナルがどのようにT細胞をターミナルエフェクターT細胞へ分化させているのか明らかにするために、当初の予定通りに、ヒストン修飾に焦点を当てたChIP-seq解析と網羅的遺伝子発現解析を行った。その結果、レチノイン酸シグナルは、ヒストンH3K9/14アセチル化を減少させ、ヒストンH3K27トリメチル化を増加させることが明らかとなった。このヒストン修飾の変化により、メモリーT細胞に関連するgene signatureが消失した。さらに、このようなChIP-seq解析によって得られたレチノイン酸シグナルによるエピジェネティック変化とレチノイン酸シグナルによって誘導された遺伝子発現の変化を重ね合わせて解析することで、T細胞の分化を制御すると思われる新たな遺伝子を複数同定することに成功した。レチノイン酸シグナルの下流で働く新規T細胞分化制御遺伝子の候補を複数同定することができた。現在、このうちの一つ(遺伝子Aとする)に注目し研究を進めているが期待通りの結果が得られてきている。

LM-OVA感染症モデルを用いてCD8+T細胞における遺伝子Xの発現量を解析したところ、遺伝子XはエフェクターメモリーやSLECと呼ばれるエフェクターT細胞に高発現する一方で、ナイーブやセントラルメモリーT細胞では低発現であることが明らかとなり、この結果はヒトのT細胞でも共通していた。さらに遺伝子XをT細胞に強制発現すると、CD62L発現・増殖能・生存能が低下しターミナルエフェクター様の機能を示した。そこで遺伝子XがターミナルエフェクターのCD62L発現・増殖能・生存能を回復させる標的になりうるか発現抑制系を用いて検討した。期待した通りに、in vitroで誘導したヒト・ターミナルエフェクターT細胞の遺伝子X発現を抑制することで、CD62L発現と生存能が回復した。ターミナルエフェクターT細胞分化を決定づけ、その機能を回復させるための標的となる遺伝子Xを同定することができた。当初の予定では、レチノイン酸シグナルによる1epigenetic markerの変化、2遺伝子発現変化、そして3レチノイン酸レセプター結合領域の同定を行うことを目標にしていた。平成29年度では、1と2については達成することができたので、平成30年度では3レチノイン酸レセプター結合領域の同定を次世代シークエンサーを用いて行う。その結果を、1および2と比較解析することで、レチノイン酸シグナルによるターミナルエフェクターT細胞への分化機構を俯瞰する。上記の1epigenetic markerの変化、および2遺伝子発現変化を比較解析したところ、新規のT細胞分化制御遺伝子候補を同定した。そのうちの遺伝子Aは、レチノイン酸シグナルによってヒストンH3K27トリメチル化が減少し、ヒストンH3K9/14アセチル化が増加する。このヒストン修飾の変化と一致して、レチノイン酸シグナルによりT細胞における遺伝子発現が増加する遺伝子であった。つまり、遺伝子Aは、ターミナルエフェクターT細胞への分化と一致して発現が上昇する特徴を持っていた。そこでリステリア菌感染症モデルにおいて、生理的にT細胞の分化と遺伝子Aの発現が一致するか検討したところ、short lived effector cellと呼ばれるKLRG1+CD127-T cellにおいて高い発現が認められた。また、感染後28日以降のmemory phaseにおけるCD62L-lowのエフェクターメモリーT細胞においても、CD62L-highのセントラルメモリーT細胞に比べて遺伝子Aの高い発現が認められた。したがって、この遺伝子Aは生理的にT細胞の分化を制御する遺伝子である可能性が高い。平成30年度では、遺伝子Aに関する研究をさらに推進する。また、そのほかの候補遺伝子についても、同様にT細胞分化との関連を詳細に解析していく。<T細胞における遺伝子Xの生理的機能の解明
分離・反応媒体としての多次元金属錯体

1.新規多次元錯体の設計合成と構造解析(1)ホフマンージアミノアルカン型包接体:芳香族ゲスト分子に対する包接選択性の基礎的データとして,同一ホスト種における各種ゲスト包接体の構造変化ならびにジアミン鎖長の異なるホストに対する同一ゲスト包接体の構造変化を単結晶X線回折法により明らかにした.(2)テトラシアノニッケル酸塩系ホスト:全く新しい3次元錯体構造をもち,多様な包接選択性を示す「ニシキオリ型」包接体を合成し,シクロヘキサン包接体の結晶構造を明らかにした.(3)テトラシアノカドミウム酸塩系ホスト:配位子とゲストの組み合わせによって,表面修飾粘土鉱物型,ゼオライト型,あるいは包接水和物型に類似した多次元錯体ホストを開発し,それらの多様な包接機能を検証すると共に,代表的包接体の結晶構造を解析した.2.物性評価多次元錯体ホストとして最も基本的なホフマン型系ホスト包接体の熱分析反応の解析,ゲスト分子配向状態の分子動力学計算を行い,反応媒体としてのマクロ及びミクロ物性の評価を試みた.3.分離挙動の評価ホフマンージアメチルアミン型ホストにおけるオルト,メタ,パラキシレンならびにベンゼンの2-4元混合系に対するゲスト選択性を総括し,錯体ホスト選択性発現を速度論的効果で説明した.4.反応挙動の解析ホフマンージメチルアミン型ホストに包接されたパラキシレンの5°Cにおける脱メチル化によるベンゼンあるいはトルエンへの変化過程に対する共存化学種の効果を検討した.1.新規多次元錯体の設計合成と構造解析(1)ホフマンージアミノアルカン型包接体:芳香族ゲスト分子に対する包接選択性の基礎的データとして,同一ホスト種における各種ゲスト包接体の構造変化ならびにジアミン鎖長の異なるホストに対する同一ゲスト包接体の構造変化を単結晶X線回折法により明らかにした.(2)テトラシアノニッケル酸塩系ホスト:全く新しい3次元錯体構造をもち,多様な包接選択性を示す「ニシキオリ型」包接体を合成し,シクロヘキサン包接体の結晶構造を明らかにした.(3)テトラシアノカドミウム酸塩系ホスト:配位子とゲストの組み合わせによって,表面修飾粘土鉱物型,ゼオライト型,あるいは包接水和物型に類似した多次元錯体ホストを開発し,それらの多様な包接機能を検証すると共に,代表的包接体の結晶構造を解析した.2.物性評価多次元錯体ホストとして最も基本的なホフマン型系ホスト包接体の熱分析反応の解析,ゲスト分子配向状態の分子動力学計算を行い,反応媒体としてのマクロ及びミクロ物性の評価を試みた.3.分離挙動の評価ホフマンージアメチルアミン型ホストにおけるオルト,メタ,パラキシレンならびにベンゼンの2-4元混合系に対するゲスト選択性を総括し,錯体ホスト選択性発現を速度論的効果で説明した.4.反応挙動の解析ホフマンージメチルアミン型ホストに包接されたパラキシレンの5°Cにおける脱メチル化によるベンゼンあるいはトルエンへの変化過程に対する共存化学種の効果を検討した.1.包接選択性の評価:ホフマン-ジメチルアミン型包接体におけるベンゼン-キシレン異性体混合系からの包接選択性をクロマトグラフ分析し、結晶構造との関連を明らかにした(日本分析化学会第35年会〔分化年会〕発表)。2.新3次元錯体ホスト:N-メチル-1,3-ジアミノプロパンカドミウムテトラシアノニッケル酸塩の脂肪族・脂環族・芳香族包接体を新たに合成し、シクロヘキサン包接体の結晶構造解析によってそれらが全く新しい3次元錯体ホストであることを確認した(第36回錯塩化学討論会[錯討]日本化学会第40年会[日化年会]発表)。3.熱分解反応性:en-tα型ベンゼン及び重ベンゼン包接体の熱分解脱ゲスト反応活性化エネルギーを測定し、有意の同位体効果はなく、反応がホスト錯体3次元構造支配であることを確認した(日化年会発表)。4.分子力場計算:ホフマン型ベンゼン包接体におけるゲスト分子の配向状態を説明するために、剛体近似分子力場計算を行い、実測された結晶構造での配向と良好な一致を見た(日化年会発表)。5.光学分割媒体挙動:層状ホスト構造をもつモンモリロナイトに光学活性混合配位子コバルト(【III】)錯体を吸着させた微粒子を充填剤とした高速液体クロマトグラフにより、コバルト(【III】)およびクロム(【III】)のトリスアセチルアセトナト錯体ならびにβ-ジナフトールの光学分割を行った(分化年会・日化年会発表)。6.不斉合成・光反応媒体挙動:光学活性ニッケルおよびルテニウムのトリスビピリジル錯体を吸着させたモンモリロナイトを反応媒体として、可視光照射下での各種有機スルフィド化合物の酸化反応を行い、最高78%の光学収率を得た(錯討・日化年会発表)。1.ホフマンージメチルアミン型ホストにおけるオルト,メタ,パラキシレンならびにベンゼンの2ー4元混合系に対するゲスト選択性を総括し,ホスト錯体の2次元構造と選択性との関連から,キシレン2元系及び3元系でのオルト異性体への選択性を速度論的効果で説明した.またキシレン異性体とベンゼンとの4元系では,理由は明確ではないが,極めて低濃度のベンゼンが選択包接され,キシレンではパラ異性体が選択包接される事実を見出し,それらを論文として発表した.2.新多次元ホストとして,シアン化カドミウムを主要骨格成分とし,アミノアルキルーNー置換

アンモニウムが単座橋配位子となる(1)表面修飾粘土鉱物型,あるいはゲストのように包接空間に収納される(2)ゼオライト型構造を開発し,その多様な包接選択性を示唆する結果を得,速報として発表した.また,シアン化カドミウムそのものだけで3次元ホスト構造をつくる(3)包接水和物型構造をとる全く新しい錯体ホスト包接体を得た.3.ホフマンージメチルアミン型ホストでのアルキルベンゼン誘導体における置換基の転位・脱離反応については多くのデータが集積されたが,約5°Cの低温でこのような反応が進行する例は極めて希であるため,最終的な報文の作成には慎重な対処が必要である.4.2年間にわたる研究成果を総合したB5版約80ページの研究成果報告書として印刷作成し,所定機関に提出すると共に,錯体化学研究会(会員約400名)の組織を通じて関連研究者に配布する.
環境調和型反応を利用したマイクロスケール有機化学実験の開発

陰イオン界面活性剤と陰イオン界面活性剤を活用し,水溶媒中で進行する環境調和型の有機化学反応を検討した。得られた知見をもとに,芳香のあるアルデヒドが生成するアルコールの酸化,ベンゼンの臭素化,安息香酸ベンジルのけん化に関する実験教材を開発した。1.ベンゼンの臭素化表記反応は高等学校化学における重要な反応の1つであるが,臭素単体の毒性や反応条件さらにはベンゼンに発ガン性,血液毒性があることなどから,従来は実験教材として扱われなかった。昨年度の検討で,触媒量の臭化ドデシルトリメチルアンモニウム(陽イオン界面活性剤)の存在下で,硫酸酸性水溶液中で臭素酸カリウムと臭化カリウムをモル比1:2で混合し,ベンゼンを加えて加熱すると,ブロモベンゼンが高収率で生成することが見出された。本法によれば,危険な臭素単体を用いることなくベンゼンの臭素化の実験を行うことができる。また触媒量の陽イオン界面活性剤を触媒に用いることで,水溶液中で重金属化合物を用いることを回避できるので,廃棄物による環境負荷を軽減することができる。2.アルコールの酸化陰イオン界面活性剤の存在下で過マンガン酸カリウムと硫酸マンガン(II)との反応で生じた界面活性剤一体型活性酸化マンガン(IV)を酸化剤に用いると,ベンジルアルコールからベンズアルデヒドへの酸化が円滑に進行することが見出された。このとき酸化マンガン(IV)の表面に構築される疎水環境が十分でない場合には,ベンズアルデヒドから安息香酸への酸化が進行するという望ましくない反応が進行することが見出された。これによって,水溶液中で酸化マンガン(IV)によるアルコールの酸化の実験を手軽に行えるようになる。一方で,同じ条件下でシンナミルアルコールを酸化すると,中程度の収率しか達成されないことがわかった。1.アルコールの酸化(芳香のあるアルデヒドの合成)昨年度までの検討で,水溶液中,ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)の存在下に調製された陰イオン界面活性剤一体型酸化マンガン(IV)によって,ベンジルアルコールからベンズアルデヒドへの水溶液中での酸化が,極めて円滑に進行することが見出されている。しかし本系をシンナミルアルコールの酸化に適用した場合は,得られるシンナムアルデヒドの収率が低かった。そこで用いる界面活性剤の種類など反応条件を検討したところ,添加するSDSの量を増加させることによって,アルデヒドの収率が改善することが見出された。得られた知見を元に実験プランを立て,東洋英和女子学院高等学校において授業実践を行った(対象:2年生,3年生)。アルデヒドの確認は,銀鏡反応と生成物の芳香の確認という,視覚と嗅覚の両感覚を利用する方法で行った。ベンジルアルコールの酸化で得られるベンズアルデヒドは杏仁豆腐様の苦扁桃臭,シンナミルアルコールの酸化で得られるシンナムアルデヒドはシナモン臭を示し,いずれも身近な食品に含まれる臭気であるため,実験後のアンケートでは嗅覚面での生徒達の興味・関心が極めて高く,銀鏡反応による視覚面の興味・関心を上回る結果が得られた。また本実験が,有機化学実験特有の臭気による負のイメージを払拭する教材となることもわかった。2.陽イオン界面活性剤によって加速されるベンゼンの臭素化昨年度までに,希硫酸中で臭化カリウムと臭素酸カリウムを用いるベンゼンの臭素化が,陽イオン界面活性剤である臭化ドデシルトリメチルアンモニウムにより加速される現象が見出されている。そこで本反応をマイクロスケール実験教材とするための検討を行った。予め臭化カリウムと臭素酸カリウムをモル比2:1で混合した合剤を利用することで実験操作が簡便となり,生成物をマイクロポーラスフィルムに吸収させてバイルシュタインテストで確認することにより,揮発性有機溶媒の使用を回避できる実験法を考案した。一連の結果をまとめて,「化学と教育」誌(日本化学会)に論文を投稿し,8月号に掲載された。ベンゼンの臭素化については平成21年度までに研究が完了したので,平成23年度は,アルコールの酸化と,ベンゼンの臭素化とアルコールの酸化の両研究で得られた知見を活かした"エステルのけん化"の実験教材化を検討した。平成22年度までに,水中で有効に機能する酸化剤である陰イオン界面活性剤一体型酸化マンガン(IV)を開発し,ベンジルアルコールおよびケイ皮アルコールを基質とするアルコールの酸化の実験教材を検討した。得られるアルデヒドは,それぞれ特有の芳香を有しており,教育現場や現職の教員を対象とする講習会でも「有機化学の臭いによる負のイメージを軽減する実験」として好評を得た。得られた成果をまとめ「化学と教育」誌(日本化学会)に論文を投稿し,8月号に掲載された。ベンゼンの臭素化の研究で得られた知見から,陽イオン界面活性剤の有機触媒としての機能に着目し,難分解性エステルである安息香酸ベンジルのけん化反応を,陽イオン界面活性剤で加速するというアイディアを得た。種々の陽イオン界面活性剤を検討した結果,塩化テトラデシルベンジルジメチルアンモニウムが効果的な触媒であることを見出した。これによって,けん化実験における水酸化ナトリウム水溶液の濃度を従来よりも低下させ,生徒実験を安全かつ迅速に行うことができるようになった。

反応後の系中にはベンジルアルコールの油滴が存在するので,これをマイクロポーラスフィルムによって吸収・分離して,上記の陰イオン界面活性剤一体型酸化マンガン(IV)と反応させると,ベンズアルデヒドの芳香を観察することができる。また分離後の水相に希硫酸を加えると,安息香酸の結晶が析出する。これらの操作によって,けん化反応の生成物を検出することができた。
超音波を新しいモダリティーとしたレジンセメント接合界面の質の評価

本研究は,レジンセメントの初期硬化挙動あるいは弾性率変化について超音波音速を指標に検討した。すなわち,セメント練和後の試片に対してプライマー塗布の有無および照射強度を0(照射なし),200および600mW/cm^2に変更した際の試片を伝播する音速変化からその弾性率を求めた。その結果,いずれのレジンセメントにおいても照射開始からその音速は上昇する傾向を示したものの,用いた製品によってその傾向は異なった。さらに,プライマー塗布の有無および照射強度の違いはレジンセメントの初期硬化挙動および弾性率に影響を及ぼすことが判明した。これまで、歯質あるいは修復材の弾性率については、引張り、曲げ,圧縮試験あるいは微小硬さ試験などによって測定されてきた.しかし,そのいずれの試験も象牙質に破壊的応力を負荷するものであり,測定した試験体を他の実験に用いることはできないために,異なった試験体を用いてそれぞれの試験を行い,その結果を総合して考察してきた。また,引張りあるいは圧縮試験においては,試験サイズあるいはひずみ速度などの測定条件が測定値に影響をおよぼす可能性が指摘されていることからその試験結果の評価は慎重に行われる必要性が指摘されていた。そこで,レジンセメントの弾性率を非破壊的に測定する方法として,超音波パルス法に着目し,これを歯質とレジンセメントとの接合界面における物性評価法とするという新しいモダリティーの構築を試みる。ウシ新鮮抜去歯あるいは重合硬化させた修復材を,その厚さが約1mmになるようにスライスして直方体の試片を製作し,その寸法と質量から密度を求める。超音波伝播時間の測定は,パルサーレシーバー(Model 5800, Panametrics、現有)を用い,音響レンズ前面に先端直径3mmの超音波収束機構を有するコーン状のチップを接続して行う.このチップ先端を試片に接触させ,試片中を伝播する送信波と反射波との時間的な差を求め,得られた値と理論式とから弾性率を求めた。弾性率を測定した歯質を被着面とし,各製造者指示に従って製作された接着試片を,試片製作後37°C精製水に浸漬保管し.インストロン万能試験機(Type 4204,Instron,現有)を用いてあその勇断接着強さの測定を行った。これまで,歯質あるいは修復材の弾性率については,引張り,曲げ,圧縮試験あるいは微小硬さ試験などによって測定されてきた。しかし,そのいずれの試験も部材に破壊的応力を負荷するものであり,測定した同一試験体を他の実験に用いることはできないために,異なる試験体を用いてそれぞれの試験を行い,,その結果を総合して考察してきた。そこで,レジンセメントの弾性率を非破壊的に測定する方法として,超音波パルス法に着目し,これを歯質とレジンセメントとの接合界面における物性評価法とするという新しいモダリティーの構築を試みた。そこで演者らは,レジンセメントの初期硬化挙動と弾性率について,照射条件およびプライマーの有無でどのように変化するのかについて検討した。照射条件は600,200mW/Cm^2および照射なしの3条件で,その条件にプライマーの塗布および塗布なしの条件を加えた6条件とした。いずれのセメントにおいても光線照射開始から,セメント内部を伝播する音速は上昇したが、その傾向はセメントの種類によって異なるものであった。すなわち,光線照射の影響)受けやすく短時間に音速が早くなるものと光照射の影響をある程度受けるが,その後徐々に硬化が進み伝播速度が緩やかに上昇するものとに分けられた。また,光強度の違いとプライマーの有無によって,初期硬化拳動に明らかな違いが認められた。
多重ストレス時における精神活動変化の可視化とストレスマネジメント方略

ストレスが生体に与える影響を捉えるには、客観的に測定可能なツールが必要である。快・不快な画像を見た時の反応が、絶食ストレス下で変化するのか、20名の健常者を対象に実験を行った。計測は主観的評価(VAS)、脳磁計、伝統的な自律神経系指標である脈拍、呼吸を用い、平常時と比較した。脳磁計の結果をみると、絶食時には快刺激に対する応答の低下がみられたことから、絶食時では情動的刺激に対する感受性が変化する可能性が考えられた。脈拍や呼吸では、絶食時と平常時で、違いはみられなかった。以上より、脳磁計は客観的にストレス応答を図る指標として、新たな知見をもたらす可能性があることが見出された。目的:ストレスが身体機能に与える影響を評価することを目的として、今年度は絶食ストレス下で情動的ー快(P)/中性(N)/不快(U)ーな画像刺激を与えられた時の脳磁図、脈拍数、酸素飽和度(SpO2)、主観的快強度(視覚的アナログ尺度:100mmVAS)を計測し、平常時と比較した。方法:被験者は21.4±1.2歳の健常大学生、男女各10名であった。平常時をControl、前夜21時から実験終了まで1215時間絶食した状態をFastingとした。IAPS(Florida Univ.)から画像水準(P/N/U)ごとに各8枚の画像を選び、1画像あたり10回をランダム順に呈示した。脳磁場解析では、視覚誘発反応に感度の高いセンサーを被験者ごとに10個ずつ抽出し、α帯域脳律動振幅のセンサー平均について、画像呈示前を基準として呈示中の減衰率を求めた。100mmVASは各画像に対する快強度について実験直後に質問紙により回答を得た。結果:条件要因(Control/Fasting)×画像水準(P/N/U)の2要因反復測定分散分析を行った。100mmVASでは交互作用(p=.047)があったが、Control、Fastingとも全画像水準間で有意差がみられ、画像が情動的に認知されていることが確認できた。脈拍数・酸素飽和度は有意な結果はみられなかった。一方、α帯域脳律動振幅は、画像呈示直後の時間帯(呈示後0.5ー1.75sの平均)で交互作用(p=.027)がみられ、ControlではP・UがNに比べて有意に低かったのに対し、FastingではPの低下はみられなかった。すなわち、平常時では快/不快いずれの画像もα帯域脳律動を抑制するが、絶食ストレス下では快画像による抑制が生じないことがわかった。目的:昨年度は、情意刺激直後の短い時間帯において、情意刺激に対する生体反応の応答および脳磁図計測によるデータにおいて絶食下における特異な反応を見出すことができた。それらを踏まえて、今年度は絶食時におけるストレス応答を平常化させるための介入条件とストレス時におけるケアの可能性を探るための実験を行った。また、介入条件におけるコントロール群として、また絶食下における特異な反応を引き続き確認するために、介入のない絶食ストレス下の条件における脳磁図、脈拍数、主観的快強度(視覚的アナログ尺度:100mmVAS)のデータ収集も追加継続した。方法:被験者は健常大学生、男女各10名であった。実験装置は、昨年度、ストレス刺激セットが情意刺激として生体に有効に作用していることが確認できたため、同装置を引き続き使用した。加えて、昨年度の結果から、刺激直後の短い時間帯において情意刺激に対する生体反応は応答していることが明らかとなったため、十分に捉えきれなかった自律神経系活動の計測装置を改良し、脳磁計と連動させて刺激直後の脈拍数をデータ収集できるように工夫した。絶食ストレス下の脳磁界応答に対する介入条件には音楽(正再生/逆再生)を用い、その効果を検討した。解析では、条件(正再生/逆再生)×画像(快/中性/不快)の2要因反復分散分析を行った。結果:現在、健常者4名(男女各2名)の解析を終了した。逆再生音楽の聴取時には、昨年度同様、快画像に対するα振幅が不快画像よりも有意に大きく、快画像に対する応答が低下していることを示唆した。しかし、正再生音楽の聴取時には快画像と不快画像に対する有意差が見られなかった。この結果は、音楽の聴取によりストレスが緩和されるという可能性を示している。残る被験者の解析および脈拍数、主観的快強度(100mmVAS)の解析を次年度に継続する。26年度は、ストレスが生体に与える影響を評価することを目的として、絶食ストレス下で情動的ー快(P)/中性(N)/不快(U)ーな画像刺激を与えられた時の脳磁図等の生体計測を行い、平常時と比較した(以下、実験1)。脳磁計の結果から、絶食時には快刺激に対する応答の低下がみられ、快の程度により特異な脳活動応答が生じると推察された。27年度は対象者を増やしてデータ収集を追加し、また、当初予定の研究計画をさらに発展させ、絶食時における快刺激への応答を正常化させる介入の試み(以下、実験2)を行ったため、最終年度ではこれらについて分析・考察した。実験1は、26年度の結果・考察をもとに、画像水準を刺激の強度ー快(P)および不快(U) /中性(N)ーからみた、新たな切り口により分析・解析を行った。