hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
インスリン分泌における小胞体ストレスセンサーIRE1aの機能とその分子機構の解析

現在は培養細胞系の膵島β細胞を用いているが、培養細胞だと高グルコースにして5分の段階だとインスリン分泌がはっきりとは見えないため、マウスから膵島をとって高グルコース存在下で5分で4μ8cの効果が現れるかを見る。4μ8c存在下でインスリン分泌が5分で阻害された場合、エクソサイトーシスに関わる因子を4μ8cが直接阻害している可能性が高い。これを明らかにした上で、今後はIRE1αの阻害にはレンチウィルスにsiRNAもしくはsgRNAを入れて阻害を行う。Preliminaryな結果では、4μ8c存在下で蛍光抗体法によりインスリン顆粒の量が減少している可能性があること、またIRE1αのRNaseドメインの変異体をマイクロインジェクションにより15時間程度で発現させたところ、インスリンの合成阻害が起こることがわかった。このことはIRE1αが短時間の間にインスリンの生合成に関与していることを示唆する。今後は高グルコース時にIRE1αに別のタンパク質が結合していないかどうか免疫沈降法によって結合タンパク質を調べ、遺伝子発現を介さずにIRE1αがインスリン分泌に影響を与える分子機構を明らかにする。28年度が最終年度であるため、記入しない。細胞生物学28年度が最終年度であるため、記入しない。
発話、身振り、呼吸の個人内・個人間での協調を生態力学的に制約する情報に関する研究

本研究は、発話と身振りの個人内・個人間における協調を可能にする機構を生態力学という観点から明らかにすること、特に発声の下位系である呼吸運動に着目して発話と身振りの協調を生態力学的に制約する情報を特定することを目的に実施され、現在尚進行中である。人は発話する際しばしば発話内容と意味的に関連する身振りをする。発話と身振りの共起に関する説明は、伝統的には、命令系である脳で両者の共起関係・意味的関連を全て特定するプランを作成し、それを実行系である運動器官で実行するとするものが主流である。ところが、最近の研究では空間的な情報を教示する場面等で教示者-学習者間でも発話と身振りの意味的に関連する部分が共起することが報告されており、全てが機械的に繋がった命令系-実行系を前提とする理論では十分ではなく、個人間に存在する情報を介して成立する協調系に関するデータの蓄積と理論化が必要であると考えられる。このようなことを背景に、本研究では、伝統的な理論の代替案として、運動の制御が当該の運動に直接的・間接的に関与する下位の系間の結合と競合の結果として自己組織的に創発する協調によるのであり、身体運動間の協調はこのような生態力学的に自己組織化する系と意図的な制御との緊張関係の中で成立するとする生態力学の観点から、特に発話-身振りの協調において発話の下位系である呼吸運動に着眼して実験・観察データを蓄積しつつある。本年度は、手首の伸展・屈曲運動と/a/という音声の発声運動を、屈曲時に発声し、伸展時に発声しないモードA、屈曲時に発声せず、伸展時に発声するモードBという2つのモードで、段階的に周波数が高くなるように設定されたメトロノーム音と同期させるように被験者に求める個人内協調に関する実験を行い、発話と手首運動の協調パターンが質的に転換する際に、呼吸運動のパターンにも変化が起こっていることを示唆する結果が得られた。この他、個人間における発話と身振りの協調についての予備的な実験を実施したり、自然会話場面で同様の現象が観察されるかどうかを確かめるためのデータを集録し、得られたデータの解析を現在進めている。今後もこのような研究を続けることで、発話-身振り協調系の総合的な記述と理論化を更に進め、コミュニケーションにおける人間の情報処理の理解、並びに情報学の深化に貢献していきたいと考えている。
アルミニウム活性化型有機酸トランスポーターの分子機構

コムギのアルミニウム活性化型リンゴ酸トランスポーターをコードするALMT1遺伝子について、遺伝子上流域のクローニングと構造解析を行い、根端で高レベル発現を制御するプロモーター領域を同定した。また、ALMT1トランスポーターのアルミニウム活性化に関与するアミノ酸を明らかにした。さらに、シロイヌナズナのALMT1相同遺伝子の機能解析を行うことで、アルミニウム耐性や気孔閉口に関与することを明らかにし、ALMTファミリータンパク質の機能多様性を明らかにした。1.ALMT1蛋白質の機能解析アルミニウム活性化型リンゴ酸トランスポーターALMT1の蛋白質機能領域の解明を目的として、コムギALMT1と相同性を示す他植物の相同遺伝子を単離して配列と機能の比較解析を行っている。本年度は、リンゴ酸とクエン酸を放出することで高いアルミニウム耐性を示すライムギからALMT1の相同遺伝子を単離した。ライムギには約40箇所で一塩基多型を示す5つのALMT1相同遺伝子の存在が明らかとなった。これらは通常は構成的発現を示すが、根のアルミニウム処理により発現量が上昇する誘導的発現を示した。この遺伝子発現様式は、有機酸放出様式と類似することから、ライムギ相同遺伝子も有機酸放出能を持つことが示唆された。さらに、発現している遺伝子型が個体ごとに異なっていたことから、ライムギの自家不和合性により集団中に様々な遺伝子型が生じたと推測された。今後、遺伝子型の違いと有機酸放出能に関係があるかを明らかにし、さらにコムギALMT1と比較解析を行う。2.ALMT1上流配列の解析コムギ系統間で見られるアルミニウム耐性度の違いは、主にALMT1遺伝子の高発現に起因すると考えられた。そこで、ALMT1遺伝子の上流域配列をクローニングし、アルミニウム耐性度の異なる系統間で比較解析を行った。代表的なアルミニウム耐性の2系統では280bp配列が3繰り返しになっており、感受性の2系統ではその領域は1つであった。また、中間の耐性をもつ1品種ではこの280bp領域を含む803bp配列が2つ繰り返しになっていた。従って、この繰り返し配列がALMT1遺伝子の高発現に関与することが強く示唆された。現在、さらに多数のコムギ系統でアルミニウム耐性度と繰り返し配列の関係を解析している。また、レポーター遺伝子の実験系を用いて上流配列の発現制御領域を特定する予定である。1.ALMT1蛋白質の機能解析アルミニウム(Al)活性化型リンゴ酸トランスポーター、ALMT1の蛋白質機能領域の解明を目的として昨年、リンゴ酸とクエン酸を放出し高いAl耐性を示すライムギからALMT1の相同遺伝子を単離し、一塩基多型を示す5つのALMT1相同遺伝子の存在を明らかとした。本年度は、ライムギALMT1の3つの遺伝子型をタバコ培養細胞に形質転換し、それぞれの有機酸放出を調べた。各遺伝子型ともAlで活性化されるリンゴ酸の放出は見られたが、クエン酸の放出は検出できなかった。この結果は、ライムギのALMT1は遺伝子型にかかわらずリンゴ酸を放出すること、また、クエン酸の放出は別の他の染色体に座上するAl耐性遺伝子のトランスポーターが関与する可能性を示す。さらに我々は、日米豪の共同研究によりシロイヌナズナの相同遺伝子AtALMT1が、やはりAlで活性化されるリンゴ酸輸送体であることを明らかにした(Hoekenga et al.2006)。今後、これらALMT1相同遺伝子のアミノ酸保存領域の改変を行い、ALMT1タンパク質の機能領域を明らかにする予定である。2.ALMT1上流配列の解析コムギ系統間で見られるAl耐性度の違いは、ALMT1遺伝子の上流域配列の繰返しに起因すると考えられた。本年度は、69系統のコムギを用いてAl耐性度と繰り返し配列の関係を解析した。日本以外の育種系統には、6種のパターンの異なるALMT1上流配列が存在し、その繰り返しの回数がAl耐性度ならびに遺伝子発現量と正の相関を示した。従って、この繰り返し配列が、ALMT1遺伝子の高発現に関与することが強く示唆された。一方で、日本の育種系統では2種類の上流配列のみが見られ、発現量やAl耐性との相関は低かった。しかし、Alで活性化されるリンゴ酸放出量と、Al耐性度とは正の相関を示したことから、日本のコムギ系統においてもリンゴ酸放出量がAl耐性の第一要因であると考えられる。そして、日本の系統ではALMT1遺伝子の発現量以外に、転写後の制御が関与する事が示唆された。1.ALMT1蛋白質の機能:膜配向性の解析アルミニウム(A1)活性化型リンゴ酸トランスポーターALMT1のA1結合領域などの蛋白質機能領域の解明のためには、膜タンパク質における膜貫通領域の数や親水性領域の配向性の解析が重要と考えた。そこで本年度は、コムギのALMT1タンパク質の膜配向性の解析を行った。ALMT

1遺伝子を一過的に発現させたヒト培養細胞において、界面活性剤により細胞内に抗体が透過した場合にのみ染色がみられる揚合、この領域を細胞の内側と判定し、界面活性剤処理の有無にかかわらず染色がみられる場合は外側と判定した。その結果、ALMT1は6つの膜貫通領域を持ち、N末端およびC末端は細胞の外側に存在すると結論した。さらに、パッチクランプ法による電気生理学的解析を行った結果、ヒト培養細胞で発現させたALMT1タンパク質もA1により特異的に活性化されるアニオンチャネル活性を示すことが明らかとなった。従って、本研究で明らかとなったヒト培養細胞におけるALMT1タンパク質の膜配向性は、機能とリンクした正しい配向性であることが強く示唆された。2.AMM1遺伝子の発現制御:上流配列によるA1耐性度の判定昨年度、ALMT1遺伝子上流には6種の異なる繰り返しパターンが存在し、外国で育種されたコムギ系統では、配列の繰り返しの数がALMT1遺伝子の転写量およびA1耐性度と正に相関することを見出した。本年度はさらに179系統を用いてALMT1の上流の繰り返しおよび遺伝子配列のSNPとA1耐性とを比較した結果、必ずしもユニバーサルではないが、上流配列はコムギのAl耐性系統を選抜する分子マーカーとして有効であることを示した。1.タバコ培養細胞で発現させたコムギALMT1タンパク質の機能に関する電気生理学的解析コムギALMT1遺伝子がコードするA1活性化型リンゴ酸トランスポーターの機能を詳細に解析するため、ALMT1遺伝子を導入した形質転換タバコ細胞を用いてパッチクランプ法により解析を行った。その結果、本輸送体は陰イオン輸送体であり、輸送活性は細胞外のA1により増大し、ランタンとガドリニウムでは増大しないこと、さらに陰イオンとして硝酸や塩素よりもリンゴ酸に特異性が高いこと、タバコ細胞においてA1で活性化されるリンゴ酸の輸送活性が、コムギ根のプロトプラストにおいて観察されたものと同程度あることを証明し、ALMT1タンパク質自身がA1で活性化されるリンゴ酸チャネルとして機能していることを明らかにした。2. ALMT1遺伝子の発現制御:転写後制御の可能性これまでに、日本で育種されたコムギ系統ではALMT1タンパク質の発現と機能が転写後制御を受けている可能性を見出していた。この制御因子の同定のため、ALMT1の転写量が同程度であるのにもかかわらず、A1耐性度が異なる系統の交雑を行い、後代(F2)において、A1感受性と耐性の個体数が1:3に分離するものを得た。すなわち、ALMT1遺伝子の転写後制御は1つの遺伝子で制御されている可能性が示唆された。現在、この遺伝子の同定に向けた解析を進めている。3. ALMT1タンパク質の精製ALMTタンパク質ファミリーの立体構造を明らかにするため、コムギALMT1タンパク質の精製を試みている。タバコ培養細胞(BY-2)にC末端Hisタグ融合ALMT1を発現させたところ、A1で活性化されるリンゴ酸放出がみられたことから、Hisタグ融合ALMT1は機能を保持していると考えられた。しかし、界面活性剤による可溶化や、Niカラム精製後の回収率が低くかったことから、現在他の異種発現系を用いて、ALMT1タンパク質の精製を進めている。
不安及び不安障害に関する生物学的マーカーの臨床研究:予防医学的観点より

平成15年度は不安尺度の妥当性及び信頼性を検討することが課題であり、一般健康人(大学生を含む)に対してさまざまな心理検査を行った。対象は5,011例であり、文書にて説明と同意を行い施行した。因子分析を行ったところ、内的一貫性は高値であり、不安など情緒状態を測定する心理検査との相関関係は有意な正の相関関係を示した。またソーシャルサポートなどを始めとしたストレス対処能力を測定する尺度とも有意な正の相関関係を示した。さらに抑うつなどの精神症状とも同様に有意な正の相関関係が存在することがわかり、不安尺度が有用である可能性が示唆された。これらの結果は性差や年齢の影響を受けなかった。以上により本研究の結果は、不安レベルがベンゾジアゼピン受容体の結合能に相関するというデータが高い信頼性を有することを示す根拠になり得ると考えられる。不安及び不安障害に関する生物学的マーカーの臨床研究を実施した。本年度は不安を中心に検討した。対象は、1)精神科で治療を受けている精神疾患患者19例、2)婦人科にて腫瘍などの手術のために入院治療を受けた女性患者25例である。対象に対して不安の定量化を行うためにState and Trait Anxiety Inventory (STAI)を実施した。婦人科疾患には、手術前後に実施した。一方、末梢血液20ccを採血し、血小板に含まれる末梢型ベンゾジアゼピン系受容体の結合能を測定し、STAIのState Anxiety, Trait Anxietyとの相関関係を統計的に検討した。その結果、精神疾患患者群では、両者に有意な相関はみられなかったものの、10%水準での傾向はみられた。婦人科疾患患者群でもそれに近い結果が得られた。精神疾患患者群では、抗不安薬などのベンゾジアゼピン系薬剤の服用が影響が考えられた。また婦人科疾患患者群では、標準的な不安尺度では計り得ない他のさまざまな不安が関与しているので、明確な有意差として結果が得られなかった可能性がある。それと同時に行った一般健康人では、両者の間に有意な相関がみられ、末梢型ベンゾジアゼピン系受容体の結合能が、不安との間に相関し、生物学的マーカーになり得る可能性が示唆された。来年度以降は対象の選択をより厳密に行い、不安及び不安障害に関する生物学的マーカーの臨床研究を実施していく予定である。
エチレンセンサーたんぱく質ETR1のシロイヌナズナによる発現系構築と構造解析

植物ホルモンの中で最も単純な分子構造を持つエチレンは、植物の発生から枯死に至るまでの様々な過程において重要な役割を果たしている。しかし、植物のエチレン濃度感知機構や、その情報伝達機構に関しては不明な点が多く残されている。本研究では、シロイヌナズナ由来のエチレンセンサータンパク質ETR1におけるエチレン感知とその情報伝達機構を解明することを目的として、ETR1の大量発現系構築を行った。平成16度は、シロイヌナズナの培養細胞T87を用いた発現系構築を行い、5系統の形質転換した培養細胞を得ることができた。得られた細胞の膜画分を用いてウェスタンプロットを行ったところ、ETR1の強発現を2系統で確認できた。1度の培養で得られるETR1は微量(ナノグラムオーダー)であり、より高発現を目指して培養条件の検討を行なったが、飛躍的な向上には至っていない。微量ではあるが、発現したETR1のHis-tagアフィニティカラムによる精製条件の検討も行った。ETR1は膜タンパク質であり、界面活性剤での可溶化が必要となるが、用いる界面活性剤によってはアフィニティカラムに非特異的に吸着してしまった。しかし、最適な界面活性剤を選択することができれば、精製も可能であると思われる。ETR1は銅イオンを含むので、本研究では精製後にX線吸収スペクトル(XAS)の測定を行う計画であった。しかし、本研究のように微量の試料しか得られない場合、従来の測定システムでの測定は困難である。そこで、平成16年度には微量XAS測定に向けた実験もSPring-8で行なった。その結果、本研究の対象試料ではないが、Rieske-type [2Fe-2S]型クラスターを有する金属タンパク質の微量XAS測定から、鉄イオンの配位数を決定することに成功し、その結果を論文として発表することができた。エチレンは植物ホルモンとして、植物の発生から枯死に至るまでの様々な過程を制御している。そのため、植物におけるエチレン分子の認識機構やエチレンシグナル伝達機構を分子レベルで解明することは、農作物の生産性を向上させることにもつながる。本研究では、シロイヌナズナ由来のエチレン受容たんぱく質であるETR1の大量発現系構築を目的としている。本年度は、シロイヌナズナ個体を用いたETR1の発現系構築を試みた。アグロバクテリウムによる方法を用いて、ETR1を強発現する形質転換シロイヌナズナを作製した。ETR1のC末には、発現系構築に成功した後の精製段階で利用できるようにHis-tagを融合させた。形質転換された個体(約100line)より得られた種子を、それぞれMS培地のプレート上に蒔き、明16時間・暗8時間のサイクルで約1ヶ月成長させた。成長した個体から細胞膜画分を得て、His-tag抗体を用いたウェスタンブロット法によりETR1の発現を確認したところ、心配されたco-suppressionは起きずに、形質転換シロイヌナズナにはETR1の強発現が確認された。100lineの中から、もっとも発現量の多いものを選択しようとしたが、その際、それぞれの個体から種子を得るまでに、3ヶ月以上も要することが分かった。このタイムスケールは、ETR1たんぱく質を得る目的からすると極めて不利なものである。そこで、研究計画段階でも考慮していたシロイヌナズナの培養細胞(T87)を利用した発現構築にも本年度から着手した。培養細胞の場合にもアグロバクテリウムによる方法でETR1の強発現系を構築し、現在、形質転換したT87をカルスから培養細胞にするための培養を始めたところである。この発現系構築に成功すれば、2週間程度で成長した細胞を得ることができるため、個体を用いた場合よりも効率が良いと期待される。その結果、本研究の対象試料ではないが、Rieske-type [2Fe-2S]
巨核球系細胞の白血病・リンパ腫増殖機構における機能解析

研究代表者らは、本研究において、生体内の腫瘍増殖促進因子の一つであるマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)の活性が、血液線維素溶解系(線溶系)因子プラスミンの生成によって制御されていることを明らかにした。また代表者らは、マウス実験により、プラスミン阻害剤が、MMP活性制御を介して、一部の白血病・リンパ腫の増殖を抑制し得ることを明らかにし、凝固・線溶系の亢進と白血病・リンパ腫増殖との関連性、そしてこれらの疾患に対する、線溶系因子を新たな分子標的とした治療法の可能性を示唆した。本研究は、生体における血小板増加と病的血管新生との関連性、白血病・リンパ腫の進展と骨髄由来の非白血病細胞との関連性、さらには異常な血管新生に伴う各種病態形成に伴う凝固線維素溶解系(線溶系)亢進の生理学的意義の解明を目的としている。研究代表者らは、今年度、生体内血管新生め起点となる「血管新生スイッチ」を担うと考えられているマトリックスメタロプロティナーゼ(MMP)の生体内活性化機構について研究を進め、潜在酵素であるpro-MMPからのMMPの生成が、線溶系因子プラソミノ-ゲン(Plg)の活性化とプラスミンの生成によって制御されていること、さらに組織型Plgアクチベーター(tPA)の投与により、マウス生体組識中のMMPの活性化が誘導され、白血病・ダンパ腫細胞の増殖由子でもあるKit-ligandのプロセシングが促進されること等を示した。また代表者らは、異常血管新生を誘導する血管内皮増殖因子、ケモカインCXCL12の生体内供給媒体となる血小板をはじめとする骨髄由来細胞の産生、培殖及び組識内浸潤が、MMP-9の活性によっつて制御されていることを報告した。さらに今年度の実験で、マウス悪性リンパ腫細胞の生体内増殖が、tPAの投与によって促進されることを見出し、線溶系の酵素活性が、MMPの活性制御を介して、リンパ腫細胞及び各種骨髄由来細胞の動員あるいは組織内浸潤を制御していること、さらに骨髄由来細胞群によって供給される各種血管新生因子、あるいはMMPtによってプロセシングされる細胞増殖因子が、白血病・リンパ腫増殖を促進していることが推察された。線溶系、そしてMMP活性を介した骨髄由来の各種細胞の末梢組織への動員と血管新生、リンパ腫細胞増殖との関連性を示した本研究成果は、各種錬溶系因子群、また骨髓由来細胞動員の制御因子群が、白血病・リンパ腫治療の新たな分子標的となり得ることを示唆している。本研究は、生体内の血小板増加、凝固・線維素溶解系(線溶系)亢進と病的血管新生との関連性、白血病・リンパ腫細胞の生体内増殖における凝固・線溶系亢進の生理学的意義の解明を目的としている。研究代表者らは、これまでの研究で、生体内腫瘍増殖の促進因子と考えられているマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)の活性化ー潜在型酵素pro-MMPから活性型MMPへの変換が、線溶系因子プラスミノーゲン(Plg)の活性化ープラスミンの生成によって制御されていることを明らかにした。昨年度代表者らは、マウス生体に移植された悪性リンパ腫細胞の増殖が、線溶系の亢進により、MMPの活性化を介して促進されることを見出し、この時、骨髄由来細胞の末梢組織中への動員とKit-ligand(stem cell factor)等の一部の造血因子の細胞外ドメイン分泌が惹起されることを確認した。今年度の研究で代表者らは、マウス生体において形成されたリンパ腫組織中へと動員された血小板を含む骨髄由来細胞が、血管内皮増殖因子(VEGF)をはじめとする血管新生因子の組織内供給源として機能していること、さらに線溶系・プラスミン阻害剤の投与によりリンパ腫の増殖を抑制し得ることを確かめた。このことは、凝固・線溶系の亢進が白血病・リンパ腫増殖、また伴行する異常血管新生の起点となっていることを示唆するものであり、いわば本研究課題の目的でもあった「白血病・リンパ腫細胞の生体内増殖における凝固・線溶系の亢進の生理学的意義」を解明したものと言える。またMMP活性を抑制する一部の線溶系阻害剤が、リンパ腫増殖抑制に有効であったことは、今後の白血病・リンパ腫の治療法開発において線溶系因子群が、新たな分子標的となりうることを示唆したものと考えられる。研究代表者らは、これまでの研究で、生体内腫瘍増殖の促進因子と考えられているマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)の活性化-潜在型酵素pro-MMPから活性型MMPへの変換が、線溶系因子プラスミノーゲンの活性化-

プラスミンの生成によって制御されていることを明らかにした。昨年度までの研究で、代表者らは、マウス生体に移植された白血病・リンパ腫の増殖過程において、生体各所でMMPの活性化が起り、これらがストローマ細胞からの各種の細胞増殖因子の細胞外ドメイン分泌を促進すること、またMMPの活性化に伴って組織中へと動員された血小板を含む骨髄由来細胞が、血管新生因子の組織内供給源として機能していることを確かめた。これらを基礎とした今年度の研究で、代表者らは、線溶系・プラスミン阻害剤の投与が、一部の白血病・リンパ腫の増殖を抑制し得ることを明らかにした。このことは、凝固・線溶系の亢進と白血病・リンパ腫の生体内増殖との強い関連性を示唆するものであり、いわば本研究課題の目的でもあった「白血病・リンパ腫細胞の生体内増殖における凝固・線溶系の亢進の生理学的意義」を具体的に証明したものと言える。また本研究成果として、欧米で治験が暗礁に乗り上げているMMP阻害剤に対して、その上流の線溶系を阻害することによって一部の白血病・リンパ腫の増殖掬制が証明されたことから、今後の白血病・リンパ腫の治療法開発において、線溶系因子群が、MMP阻害剤の代替として、新たな分子標的の可能性を示唆したものと言える。
誘発地震前後における異常現象の発生機構の研究

九州の八丁原および大岳地域では、地熱発電の還元井への水の注入が行われている。その地域に地震観測点を設置し、水の注入による誘発地震がどのように発生するかを調べるのが、この研究の目的である。63年度には、大分県と熊本県の県境付近に高感度地震設を設置して、微小地震の発生を把え、地震波をカセットテープに収録する方法で観測を開始し、現在も継続中である。臨時に地震計を設置したのは、大分県側が後山・中板・中村・畑倉の4か所であり、熊本県側が立岩1か所で、計5か所である。地熱世帯であるため、固い岩盤上に地震計を置くことのできる場所は少ないが、八丁原地域の地熱発電を行っている所を取り囲むように設置したため、水の注入による誘発地震を、かなり小さなものまで記録することができた。また、大分県滝上地区では、地熱資源開発のために、現在ボーリングが行われており、調査のための注水実験も行われている。これらによる誘発地震も発生し、その地震波記録を得ることができた。誘発された地震は、マグニチュード1程度の微小地震が多く、震源位置を精度よく決めるためには、さらに密度の高い観測点配置によらなければならないということがわかった。これは、この地域の地殼上部の破砕度が高いために、地震波の地表付近での減衰が大きいためと考えられる。最も重要な成果としては、ボーリング坑への加圧注水によって、非常に短時間ではあるが、微小地震が群発するという現象が確認されたことである。このことから、注水の機会にあわせて、さらに精密な地震観測やその他の地球物理現象の観測を実施することが地震前兆現象の発生メカニズム解明の目的などに対しても有効であることがわかった。
モンゴル遊牧社会の変容と将来像

本研究の目的は、自然生態系との関連で、遊牧生産と「地域」の基礎過程に注目しつつ、モンゴル遊牧社会の変容と将来像を明らかにすることにある。本年度も2班に分かれて調査を実施した。「ボグド郡」研究班は、平成8・9年度に引きつづき、ボグド郡ツェルゲル村に調査基地を定め、この村と併行してローガル村を調査した。郡役所では、前年度に引きつづき人口・家族構成・家畜群の構造の実態を明らかにする資料を収集することができた。調査項目は、四季の遊牧循環と牧地配分、家畜群の再生産構造、家族経営の分析、遊牧共同体ホタ・アイルとその上位の共同体の動向、ホルショーの可能性、学校教育と地域の問題などであり、「ボグド郡モデル地域構想」策定への基礎研究を進展させることができた。「考現学」研究班は、前年度に引きつづき、首都ウランバートルの中心的寺院ガンダン寺院・ダンバ・ダルジャー寺院・北部地方のアマルバヤスガラン寺院やカラコルム遺跡のエルデネゾー寺院のほか,ウグシン・ヒート遺跡,ザヤイーン・フレー寺院跡の調査をおこなった。また,モンゴル西部のバヤン・ウルギー県において,イスラム教の復興状況や,スキタイ,突厥,ウィグル,ナイマン,モンゴルの墓制について調査した。このほか,カザフ人,ウリャンカイ人のゲルを調査し、遊牧社会の変容の諸相を多面的に捉え、モンゴルにおけるラマ教,イスラム教,仏教などの再生と展開に着目して考察することができた。本研究の目的は,モンゴル遊牧社会の変容を確認し,この多文明共存の時代に遊牧社会が生き残りうるのか否か,生き残るとすればどのような形で生き残るのを考究することにある。平成8年度は,以下のような調査を実施し,多様な成果をあげることができた。ウランバートル,フブスグル地域の調査ウランバートルでは,高層アパート居住,郊外の避暑地,市街地の中のゲルについて,住様式および生活空間の実態を調査した。同時に,人々の生活時間や,首都ウランバートルと地方との関係,人びとのふるさと意識も調査した。また,フプスグル湖畔のゲルの住様式および生活時間と生活空間の実態を調査した。ゲルの構造や道具・調度品などを実測し,季節によるゲルの移動,家畜の種類と数などの聞取り調査を実施した。同様の調査を中央部のアマルバヤスガラン寺院近く,古都カルコルム近くなども実施した。ゴビ・遊牧地域の調査大砂漠の中に横わたるゴビ・アルタイ山脈の山中にあるツェルゲル村で,(1)各冬営地拠点の実測とGPSによる位置確定,(2)家畜群の数的変化と構造的変化,(3)四季の遊牧循環,(4)家畜経営の実態,(5)遊牧共同体ホタ=アイルの実態,(6)市場経済への急激な移行と地域の変化,(7)上位共同体の可能性,(8)伝統的手工業と地域,(9)教育・文化・医療などの協同的機能と地域形成の問題などを重点的に調査した。放牧の収容力の限界との関連で新たな地域秩序の形成がみられ,こうした現象にも着眼して,「ボクド郡モデル地域構想」の作成の準備をした。乳文化と乳加工技術の調査乳酒の伝統的な蒸留方法を,実験室での試作と比較検討した。冬期における調査ウランバートルにおいて冬季の生活調査を実施した。また,遊牧民の宗教活動についても調査した。ガンダン寺において聞取り調査を実施し,ソ連に持ち去られた,巨大な観音像が再建されるなど,仏教がナショナリズムと組あわさる形復活する様子を観察した。本研究の目的は、自然生態系との関連で、遊牧生産と「地域」の基礎過程に注目しつつ、モンゴル遊牧社会の変容と将来像を明らかにすることである。「ボグド郡」研究班は、前年度に引きつづき、大砂漠の中に連なるゴビ・アルタイ山脈にあるボグド郡ツェルゲル村に調査基地を定め、この村と併行してフ-ブル村を調査し、郡役所では、郡内6個村の人口・家族構成・家畜群の構造の実態を明らかにする資料を収集することができた。主なる調査項目は、四季の遊牧循環と牧地配分、家畜群の再生産構造、家族経営の分析、遊牧共同体ホタ・アイルとその上位の共同体の動向、ホルショーの可能性、伝統的手工芸と商品流通、教育・文化・医療など、公共的機能と地域形成の問題であり、すでに策定した「ボグド郡モデル地域構想」の再検討と、新たな「構想」策定への基礎研究を進展させることができた。「考現学」研究班は、前年度に引きつづき、首都ウランバートルの中心的寺院ガンダン寺院・チョイジンラマ寺院・北部地方のアマルバヤスガラン寺院やカラコルム遺跡に建つエルデネゾ-寺院を調査、本年度は、19世紀東部モンゴルの封建領主ト・ワンが建立した「文化興隆寺」の遺跡をあわせて調査し、遊牧社会の変容の諸相を多面的に捉え、モンゴル仏教の再生と展開に着目して考察することができた。またウランバートルでは、寺院建築および都市計画に関する資料を収集し、都市形成に関する歴史的研究の基礎を築くことになった。

「ボグド郡」研究班は、平成8・9年度に引きつづき、ボグド郡ツェルゲル村に調査基地を定め、この村と併行してローガル村を調査した。郡役所では、前年度に引きつづき人口・家族構成・家畜群の構造の実態を明らかにする資料を収集することができた。調査項目は、四季の遊牧循環と牧地配分、家畜群の再生産構造、家族経営の分析、遊牧共同体ホタ・アイルとその上位の共同体の動向、ホルショーの可能性、学校教育と地域の問題などであり、「ボグド郡モデル地域構想」策定への基礎研究を進展させることができた。「考現学」研究班は、前年度に引きつづき、首都ウランバートルの中心的寺院ガンダン寺院・ダンバ・ダルジャー寺院・北部地方のアマルバヤスガラン寺院やカラコルム遺跡のエルデネゾー寺院のほか,ウグシン・ヒート遺跡,ザヤイーン・フレー寺院跡の調査をおこなった。また,モンゴル西部のバヤン・ウルギー県において,イスラム教の復興状況や,スキタイ,突厥,ウィグル,ナイマン,モンゴルの墓制について調査した。このほか,カザフ人,ウリャンカイ人のゲルを調査し、遊牧社会の変容の諸相を多面的に捉え、モンゴルにおけるラマ教,イスラム教,仏教などの再生と展開に着目して考察することができた。
戯曲資料から見た金瓶梅の作者とその描かれた時代についての研究

明末清初の文人で戯曲と小説の両分野で活躍する人が多く、同一題材のものを一方で戯曲にしつつ、他方で小説にもしたりした。本研究は、「金瓶梅」と関連が深いと思われる戯曲本体の分析ならびにそれら戯曲と「金瓶梅」との関係の考察とから、「金瓶梅」の作者が真に描きたかった事柄とは何かを明らかにしようとしたものである。以下に、簡単に研究成果の概要を記しいた。まず、作中に登場する人物の死亡日時に関する干支の記載から、この小説は、嘉靖末年から隆慶にかけての十数年間をかけて書かれたものであろうと推定した。また、作中、歴史上実在した人物の名前が書き加えてあり、しかも宋代の人と明代の人とを混ぜている。また、「金瓶梅」のプロットは、そもそも「水滸伝」中の武松物語に依存しており、「金瓶梅」の素材に占める「水滸伝」の比重はすこぶる大きいが、中でも「金瓶梅」中の駢語の中には、「水滸伝」中の突調子もない部分から読者の意思をつく形で引用されていることがある。これらの事実は、この小説の作者が、この小説を単なる好色本として見ていたであろう広範な読者層の外に作中に歴史上に実在した人名が盛り込まれていることの意味の判る高等な読者や、「水滸伝」からの意外な駢語の引用によるおもしろさが判るマニヤ的読者層をも想定していたことを意味する。同じことがこの作者が作中に込めたであろう政治諷刺についても言えることである。明代の読者のうち判る人には判ったであろうこの作品における政治諷刺とは何であったのであろうか。実は、「金瓶梅」と同じく、王世貞ないしその門人の作とされる戯曲に「鳴鳳記」というものがある。また「続金瓶梅」と同一作者の手になる戯曲に「表忠記」なるものがある。この小説と戯曲、更に原作と続作との関係から、「金瓶梅」に投影された時代は、嘉靖時代であり、作者は、恐らく楊継盛の事件に特別な感情をいだいていた人物だったであろうと推定した。本年度発表した論文を中心に、以下、研究実績の概要を述べてみたい。まず、「『金瓶梅』執筆時代の推定」では、「金瓶梅」中の登場人物物語・李瓶児・西門慶の以上三人の死亡日時に関する干支の記載例九例を検討した結果、これは、明代では嘉靖四十年から隆慶六年までの年に符合することが判明した。これは偶然とは思われず、作者がこの小説を執筆していた時の生活時間感覚をそのまま作中に盛りこんだ為ではなかったかと考えられる。もしこの推測が正しいならば、「金瓶梅」は、嘉靖末年において十数年かけて執筆されたものと思われる。次に、「『金瓶梅』における調利と洒落について」では、本小説65回には、山東八府の役人達が西門家に勢揃いして、都から花石綱を受け取りに来た勅使を迎える一段があるが、この役人達は、いずれも歴史上に実存した人物達であり、かつ奇妙なことには、朱代の人物と明代の人物を混在させている。本考では、この意味について考えてみた。

結論としては、この作者は曲者で、これは、自分の作品の読者として作者は(1)この小説を主に好色本として関心をもったであろう広範なる一般読者と、(2)登場人物中に歴史上の人名が用いられていることも、またそれにこめられた政治的調利や洒落によるおもしろさを味わうことのできたいわば高等な一部読者の両種の読者を悪定した為ではなかったとした。また、「金瓶梅の発想」では、「金瓶梅」には沢山の素材が使われているが、中でも「水滸伝」に依存する割合が高く、しかも「水滸伝」中の駢語を「金瓶梅」ではまったく別の個所に用いられていることがあり、この用いられ方を検討してみると、作者の連想により引用されていたが判る。本考ではこれがこの作者の創作手法の一つではなかったかという点について明らかにした。明末清初の俗文学においては、小説と戯曲の両面で活躍した人が多く、同一題材を小説にし、あるいは戯曲にする。また、小説を戯曲化したり、逆に、戯曲を小説したりすることが多くなされた。小説「金瓶梅」と関係すると思われる戯曲に、「宝創記」「鳴鳳記」「表忠記」の三曲があるが、この三作品は、すべて中央の大官による専権護国がテーマである点で共通する。中でも「鳴鳳記」と「表忠記」は、直接嘉靖朝の大官厳嵩の横暴とそれに身を賭して反対する楊継盛から官僚達の戦いを活写する歴史劇である。「鳴鳳記」も「金瓶梅」も、久しく王世貞ないしその門人による作とされ、また「表忠記」は、「続金瓶梅」と同じく丁耀元による作である。丁耀元は、「金瓶梅」の続作で「金瓶梅」と同じ作者の手になる小説「玉嬌麗」の稿本を所持していたとされる丘志充と同郷であり、その息子とは無二の親友であった。また嘉靖の正義漢楊継盛には深く敬慕の念を有していた。彼の書いた「続金瓶梅」は、「玉嬌麗」を参考にして書かれた可能性があり、また、同じ彼の「表忠記」は、正に楊継盛の活躍を描く歴史劇であった。惜しいことに、「玉嬌麗」は、夙に散俟して今に伝わらないので、その詳細は不明だがこの作品は、作中において南宋初と明の嘉靖年間とが二重写しとなっている「借古喩今」の作風をもったものであった可能性が高い。従って、この小説のもとになった「金瓶梅」も基本的には、話の時代背景を一応北宋末にしているものの、実際には、明代のことを描く「借古喩今」の作品であったと推察される。本研究遂行者(荒木)は、「金瓶梅」と楊継盛-小説と戯曲との関係から見た-という論文において、小説と戯曲、また原作と続作との関係から「金瓶梅」に実際に投影された時代を探り、それは、明の嘉靖年間だろうと結論したが、もとより、まだ未解決の問題も少なくない。更に研究を続行したい。
ＮＰＯにおける社会的行為の組織化とそれが地域社会に及ぼす影響に関する実証的研究

本研究では「地域通貨」と「まちの縁側(まちの居場所、コミュニティカフェ)」の二つの市民活動を題材に、市民活動の現場でのミクロな社会的行為が、地域住民間の「つながり」の形成・維持に具体的にどう貢献しているかを調べた。「地域通貨」の取引行為の社会ネットワーク分析および「まちの縁側」のスタッフと利用者のやり取りの会話分析的観察から、この二つの市民活動における社会的行為が地域住民間の「つながり」の形成・維持に役立ってはいるものの、この社会的行為自体が既存のソーシャル・キャピタルに依存しながら行われるものであることが明らかになった。本研究プロジェクトの目的は、サードセクター領域の組織のなかでもとくにソーシャルキャピタル論との親和性が高いと考えられる「地域通貨」ならびに「まちの縁側」を対象事例とし、1これらの二組織における取引行為およびコミュニケーションという社会的行為の組織化の原理を明らかにするとともに、2この二つの社会的行為を促進する/による蓄積されるソーシャルキャピタルの様相を探り、3これらの活動が「つながり」の回復という観点から地域社会にどのような影響を与えうるのか、どうすればそれらの活動を活性化できるのかを明らかにすることである。本研究プロジェクトの2年目にあたる昨年度においては、代表者と分担者がIJCCR(International Journal of Community Currency Research)に投稿した論文が掲載されたことに加え、筆者らのこれまでの地域通貨の社会ネットワーク分析研究について、『社会と調査〈第10号〉特集ネットワーク調査の問題と展開可能性』の中にまとめることができた。このほか代表者は、日本において過去10年以上にわたり取り組まれている千葉県千葉市の地域通貨組織における取引記録の社会ネットワーク分析を行い、その結果を『専修経済学論集』で発表した。さらに、本研究プロジェクトのもうひとつの対象である「まちの縁側」については、宮城県仙台市および山形県天童市の「まちの縁側」における調査研究(インタビュー調査・参与観察)を行うことができた。また分担者は、コミュニケーションにおいて人々が経験を語り合い、それによってネットワークを形作る様子を分析し、その結果を『現代社会学理論研究』で発表した。さらに分担者が専門にする会話分析の分析手法を『社会言語科学』で紹介した。本研究プロジェクトの最終年度では、これまでに収録したデータと先行研究の整理をふまえて、「地域通貨」と「まちの縁側」について経験的な分析が行われ、いくつかの成果が刊行・発表された。「地域通貨」については、まず千葉県の先進事例「ピーナッツ」の調査結果を代表者の中里がペーパーにまとめ、国際地域学会(The Regional Science Association International:RSAI)の発表論文に採択された。この研究では取引ネットワークの分析から得られたネットワーク指標に会員の属性を変数として投入した分析を行い、どの属性の者同士が取引行為に従事する傾向にあるのかを明らかにした。加えて代表者は釜石市と南三陸町で使われている復興応援地域通貨(東日本大震災からの復興に使われている地域通貨)の実践事例を観察し、復興応援地域通貨フォーラム(於:岩手県一関市)において、その内容の報告を行った。この研究成果は、さわやか福祉財団発行の報告書『地域通貨・時間通貨を活用したふれあいのまちづくり』の一章にまとめられた。「まちの縁側」については、分担者の平本が京都市内の「まちの縁側」の包括的な調査を行い、ガイドブックの編集と執筆に携わった。この調査に並行して、「まちの縁側」活動を支援するNPOにおける社会的行為の組織化の調査も進められ、この分析結果が『フォーラム現代社会学』に採択された(平成26年5月に刊行予定)。これらの調査結果は順次刊行される予定である。最後に、コミュニティ成員間の「つながり」創出に「地域通貨」と「まちの縁側」がそれぞれどんな役割を果たすかを、機能の面から比較した。その結果「地域通貨」はソーシャルサポートのセーフティーネットとしてはたらく一方、「まちの縁側」は多様な「つながり」を創出する機能があることを明らかにした。この分析結果も公刊を検討中である。本研究プロジェクトの目的は、サードセクター領域(市民社会領域)の活動のなかでもとくにソーシャルキャピタル論との親和性が高いと考えられる「地域通貨」および「まちの縁側」を対象事例とし、(1)これらの二組織における取引行為およびコミュニケーションという社会的行為の組織化の原理を明らかにするとともに、(2)この二つの社会的行為を促進する/により蓄積されるソーシャルキャピタルの様相を探り、(3)これらの活動が「つながり」の回復という観点から地域社会にどのような影響を与え得るのか、どうすればそれらの活動を活性化できるかを明らかにすることである。本研究プロジェクトの初年度であった昨年度においては、代表者は、「地域通貨」活動がソーシャルキャピタルの活用/醸成においてどのように位置づけられるのかを整理するとともに(『立命館産業社会論集』掲載論文)、昨年度分担者とともに国際学会(International Conference on Community and Complementary Currencies)において報告した論文を修正し、国際ジャーナル(『International Journal of Community Currency Research』)に投稿した。本稿は、一連の査読審査を経て、2012年5月頃発行される予定となっている。

加えて、本課題の研究協力者のストックホルム商科大学のWijkstrom准教授、そしてストックホルムの地域通貨組織のRune Jonsson氏とは今年度に実施する予定である質問紙調査について十分な話し合いの場をもつことができた。また分担者は、会話を通じた社会関係の形成と更新の手続きを明らかにする経験的分析の枠組みを整備した(『社会学評論』掲載論文)。本研究プロジェクトの「研究目的」に沿った形で、昨年度にひきつづき代表者・分担者ともに「地域通貨」の取引行為と「まちの縁側」のコミュニケーションという二つの社会的行為の組織化原理の解明に向けた調査研究をさらに進めることができたと考えている。まず地域通貨については、スウェーデンの事例のみならず、共同研究という形で千葉県千葉市において活動を行う地域通貨組織の10ヶ年分の取引記録データの社会ネットワーク分析を行い、その構造的特徴量を把握することを通してそれが地域社会にどのようなつながりをもたらしているのかを考察することができた。あわせて、今年度の「まちの縁側」の調査を行うための基盤作り(宮城県仙台市および山形県天童市の「まちの縁側」において運営者ならびにそこに来ている利用者に対するインタビュー調査と参与観察)を進めることができた。なお、昨年度は代表者と分担者が共同で2本、それ以外に代表者は1本、分担者は2本の論文を執筆し、それらは国内外の学会誌に掲載されたという点からも着実な研究成果を得ることができたと考えている。「研究実績の概要」のところに記述した本研究プロジェクトの研究目的に沿った形で、プロジェクトの初年度にあたる昨年度は代表者・分担者ともに、「地域通貨」の取引行為と「まちの縁側」でのコミュニケーションという二つの社会的行為の組織化原理の解明という今年度の研究の深化/発展にむけた基盤を整備することが概ねできたと考えている。また昨年度は、代表者は2本、分担者は3本の論文を執筆し、学会誌に掲載されたという点からも一定の成果を得ることができたと考ている。本研究プロジェクトをはじめるにあたって「交付申請書」に記述した3ヶ年間のスケジュールの3年度目(平成25年度)の研究計画に沿った形で、ひきつづき研究を進めてゆくということで、研究分担者および協力者らとの合意が得られている。とくに代表者は、山形県天童市の「まちの縁側」における調査研究(インタビュー調査・参与観察)に加えてビデオデータの収録を行い、分担者が専門とする会話分析手法を用いて、そこで行われているコミュニケーション行為の詳細を分析する。そして、「まちの縁側」のソーシャルキャピタル醸成機能および地域社会への影響を検討するとともに、「地域通貨」と「まちの縁側」の比較分析および考察を進める。
ヒト唾液腺癌細胞における増殖、浸潤、転移の抑制

唾液腺癌培養細胞や臨床検体を用いてId protein family及びステロイドホルモンレセプターが増殖、浸潤、転移に及ぼす影響を調べた。まず、培養細胞、臨床検体におけるId protein family及びプロゲステロンレセプター(PR)の発現を中心に検討した。唾液腺癌培養細胞3種においてはId1、2共に強発現しており、比較として用いた乳癌細胞や扁平上皮癌に比較し発現レベルは高かった。PRは唾液腺癌培養細胞、唾液腺腫瘍組織、正常唾液腺ともに発現を認めず、コントロールに用いた乳癌細胞、組織などとは発現様式が大きく異なった。次いで、Id1、2に対するsiRNAを用いて唾液腺癌細胞ACCMの増殖に与える影響を調べた。Id1-siRNAは増殖抑制に働いたが、Id2-siRNAは増殖促進に働いた。Id1、Id2それぞれのアンチセンスベクターを導入したACCM細胞においても同様の結果が得られた。この結果は乳癌における過去の報告と類似しており、唾液癌細胞においても同様のメカニズムが考えられた。また、ステロイドホルモンレセプターに関しては、PR陰性のACCM細胞にPR発現ベクターを導入し、プロゲステロン(PG)を作用させ増殖に与える影響を調べた。すると、PR導入ACCM細胞はPG処理によって増殖が有意に抑制されたほか、細胞形態の有意な変化を認めた。細胞形態は平坦化、伸張し多角形の細胞へと変化した。さらに引き続いて細胞浸澗に対する影響を調べた。Id1の抑制により唾液腺癌培養細胞ではボイデンチャンバー法にて細胞浸潤の抑制が見られた。Id2の抑制ではこの変化は確認されず、唾液腺癌細胞ではId1が浸潤能に大きく影響していると考えられた。また、PR導入細胞においてもPG処理により、細胞浸潤は有意に抑制された。この変化はId1の発現減少を伴っており、ここでもId1の重要な役割が確認された。唾液腺癌は現在、手術治療以外の有効な治療法が確立されていないが、今回得られた結果から、Idタンパク、及びPRを標的とした治療が有効である可能性が示唆された。唾液腺癌培養細胞や臨床検体を用いてId protein family及びステロイドホルモンレセプターが増殖、浸潤、転移に及ぼす影響を研究している。本年度は、まず培養細胞、臨床検体においてId protein family及びプロゲステロンレセプター(PR)の発現を調べた。唾液腺癌培養細胞3種においてはId-1、2共に強発現しており、比較として用いた乳癌細胞や扁平上皮癌に比較し発現レベルは高かった。次いで、Id-1、2に対するsiRNAを用いて唾液腺癌細胞ACCMの増殖に与える影響を調べた。Id-1-siRNAは増殖抑制に働いたが、Id-2-siRNAは増殖促進に働いた。Id-1、Id-2それぞれのアンチセンスベクターを導入したACCM細胞においても同様の結果が得られた。効率的なsiRNAや遺伝子導入細胞の樹立は修了しているため、次年度も引き続きこれらの材料を用い、浸潤及び転移に関する影響を調べる予定である。

唾液腺癌は現在、手術治療以外の有効な治療法が確立されていないが、今回得られた結果から、Idタンパク、及びPRを標的とした治療が有効である可能性が示唆された。
機能性人工核酸の集積合成

本研究では固相法で連続的縮合反応を活用し、合成が困難であった複雑な構造をもつ核酸誘導体を効率よく合成する手法を開発した。先ず、核膜透過機能をもつ核内低分子であるU1snRNAの5'末端構造のRNAオリゴマーの合成に成功した。このRNAオリゴマーをさらに別途調製したRNAトランスクリプトと連結することによって、世界で初めてU1snRNA分子の合成を達成できた。また、筋ジストロフィー薬として期待されている2'-O-MCE-RNAのホスホロチオエート誘導体の固相合成も検討した結果、極めて効率のよい合成条件を見いだすことができた。また、フローマイクロ系でこの原料のウリジン誘導体も合成することができた。強塩基性条件で安定でかつ4本の水素結合で塩基対形成できる修飾シトシン塩基として、4-N-(ピロールー2-イル)シトシン塩基をもつDNAオリゴマーの合成を検討した。その結果、図2に示す、この塩基をもつアミダイトユニットの合成に成功し、このユニットを用いて、この修飾塩基を15個もつDNA13量体の固相合成に成功した。また、この人工核酸の相補鎖DNAに対する結合能を2重鎖融解実験から求めたところ、導入した位置に拘わらす、相加的に修飾塩基が増えると、結合能が向上することがわかった。ウラシル塩基の塩基識別能と塩基対形成能を向上させる目的で、ウラシルの5位にプロパギル基、2位にチオカルボニル基を導入した修飾塩基を分子設計し、この塩基をもつヌクレオシドとアミダイトユニットの合成を検討した結果、問題なく合成できることがわかった。さらに、このアミダイトユニットを用いて、CPGを固相担体として用いて、固相合成法によって、この修飾塩基を組込んだ人工核酸を合成することができた。縮合反応はほぼ定量的に進行し、得られて人工核酸を相補的RNAオリゴマーと2重らせんを形成させ、その2重鎖熱融解実験をおこない、安定性を調べたところ、現在知られている人工核酸を凌ぐ、強力な結合能をもっていることがわかった。本研究は、固相合成法を駆使し、塩基対形成能と塩基識別能を向上させた機能性人工核酸を創出することを目指すものである。本年度では、核酸塩基部を人工的に改変し、従来の核酸塩基よりもより優れた性質をもつ人工核酸と、糖部位の2'-水酸基に修飾基を導入し、ヌクレアーゼ耐性能を付与した新規RNA誘導体の創成のため、その効率的合成法の開発を行った。まず、シトシン塩基部位のアミノ基に(ピロールー2-イル)カルボニル(Pyc)基を導入したDNAオリゴマーの合成を固相合成法で種々検討した。その結果、このPyc基を損なうことなく目的の修飾DNAオリゴマーの合成法を確立することができた。また、未修飾体に比べると、より強く標的DNA,RNAと結合できることを明らかにした。さらに、2'一水酸基に2-(N-メチルカルバモイル)エチル(MCE)基やアリル基を導入した新規RNA誘導体の合成法も同様に検討した。その結果、これらの修飾RNA誘導体の固相合成には、Activator42が有効であることをみいだし、これらの一般的合成法を開拓することができた。また、これらの修飾RNAは極めて優れたヌクレアーゼ耐性能をもつこともわかった。さらに、これらの核酸合成に必要な合成中間体であるN^β-ベンゾイルウリジン誘導体をマイクロフロー系を用いた相間移動触媒反応によって、大量合成ができることをみいだした。この新規反応はわずか5分で完結した。2'-0-修飾RNAの合成に関連して、事前に分子動力学的解析によって、その標的RNAに対する結合能を評価できる世界初のシュミレーション法も開発することができた。本研究では、多種多様な要求に答えられる高度に機能化した革新的人工核酸を固相法で効率よく高純度で合成する手法の確立を目指し、研究をおこなうものである。そのために、平成23年度では、核酸塩基部や糖部に機能増強を図り、アンチセンス核酸を基盤とする最適な修飾人工核酸を種々合成し、それらの機能を評価し、様々な用途に応用し、有用性を明らかにすることを目指した。その結果、本年度は筋ジストロフィー治療薬である2'-O-[2-(N-メチルカルバモイル)エチル]-RNAのホスホロチオエート体をはじめ、アデニル化されたDNAやTMGキャップ構造をもつRNAなどを連続的固相合成によって合成を達成できた。また、アンチセンス核酸として筋ジストロフィー治療薬として有望である2'-O-[2-(N-メチルカルバモイル)

エチル]-RNAのホスホロチオエート体を下記の固相合成によって合成に成功し、モデルマウスによる実験によって、エキソンスキッピング活性があることを見いだした。この核酸医薬の重要な中間体である3',5'-O-(1,1,3,3-テトライソプロピルジシラン-1、3-ジイル)ウリジンの合成をマイクロフロー系の二相系のシステムを用いて、わずか0.14秒という極めて短い時間で反応を完結することができた。さらに、ヌクレオシドのホスホロアミダイト誘導体を1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾールと反応させると、リンの転位反応を含む反応が起こり、トリエステル型の活性エステルに変換される知見を利用し、別途固相合成で合成した5'-末端がホスホリル化されたDNAオリゴマーに対して反応させたところ、アデニル化されたDNAオリゴマーとTMGキャップ構造をもつRNAオリゴマーを連続的固相合成により合成した。また、チオカルボニル基を含有した塩基を導入したRNA誘導体の合成にも成功し、中性条件下でもDNAに強く結合できることを世界で初めて示した。本研究は高度に機能化した革新的人工核酸を固相法で効率よく高純度で合成する手法の確立し、多種多様な要求に答えることを目指し、研究をおこなうものである。連続的固相合成法を用いて、細胞核内移行シグナルであるTMGキャップ構造の合成、筋ジストロフィー治療に適用可能な、より効能の高い核酸医薬の開発、次世代の核酸医薬として期待されるアンチジーン法に用いる三重鎖形成核酸の合成を通し、核酸医薬の新しい展開をはかった。核内移行シグナルとして働くことがこれまでの研究によって明らかとなっている。そこで我々は核内移行シグナルとして働くことがこれまでの研究によって明らかとなっているU1snRNAのTMGキャップ構造を、集積合成を利用した化学合成法を検討し、極めて効率的な合成手法を開拓することができた。この際、リンの転位反応を含む反応を経由する新規リン酸化反応を開発し、これを用いることで、トリリン酸結合を収率よく構築できることに成功した。我々は効率的な難治性疾患である筋ジストロフィー治療薬の開発に向けて、連続的固相合成法を利用し多種多様なRNA誘導体の合成を検討した結果、現在用いられている核酸医薬よりも効能の高い2 ́-O-[2-(N-メチルカルバモイル)エチル]-RNA(2'-O-MCE-RNA)のホスホロチオエート体を創成することに成功した。また、mRNAではなくゲノムDNAを標的とするアンチジーン法に必要な全く新規な三重鎖形成核酸(TFO)の集積合成を検討した。その結果、中性条件下でもDNAに強く結合できる新規TFOを合成することができた。この新規TFOは核酸塩基部位にチオカルボニル基を導入したもので、上流あるいは下流の塩基と強いスタッキング相互作用によって、DNAに対して強い親和力をもつことも明らかにした。本年度以降は、リボヌクレオシドの2′水酸基部位に2-(N-メチルカルバモイルエチル)基(MCE基)を導入したRNAに、これまで開拓してきた修飾塩基をはじめアデニン塩基に新しく分子設計した修飾基を組み込んだ人工核酸の固相合成法を検討した。その結果、塩基部位に2-チオウラシル塩基を導入すると、ホスホロチオエートに誘導する段階で副反応が生じることが判明した。この問題については、次年度以降に対応する予定である。アデニン塩基の代わりに、2-アミノアデニン塩基を含む2'-O-MCE-RNAを筋ジストロフィー医薬として合成したが、結果的にエキソン・スキッピング活性が低かった。