hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
露清貿易の再検討-山西商人の観点より-

露清貿易に関わる従来の研究をまとめ、ウラン・ウデ(ロシア)で刊行されている学術雑誌『内陸アジアの人文研究』にロシア語論文を投稿したところ、平成22年4月に雑誌に掲載された。平成22年6月にロシア国立図書館(在サンクト・ペテルブルク)を訪れ、露清貿易と関わる、『ウラジーミル新聞』(1838-60年)の記事を閲覧した。そのことにより、露清のキャフタ貿易を通じて、ロシア製綿織物がどのように清に輸出されたかを確認した。この調査の結果を現在、論文にまとめており、平成23年度中に学術雑誌に投稿する予定である。平成22年12月4日に日本大学文理学部で開催された、近代東北アジア地域史研究会20周年記念大会に、招待講演者として招かれ、「東北アジアにおける蒸気機関の導入と流通の革新」と題して講演を行った。これは19世紀の100年間に生じたロシアとアジア間の流通の変化を論じたものであり、本研究課題で検討した、山西商人が関わった露清貿易の研究も講演で触れた。講演内容は、近代東北アジア地域史研究会の雑誌NEWSLETTERに23年度内に掲載される予定である。平成22年12月22日には、モスクワ大学歴史学部・経済史研究センターの定例研究会に招かれ、「ロシア更紗とアジア貿易」という題目で研究報告を行った。これは19世紀にロシア更紗がアジア商人によりアジア地域に輸出されるが、その全体像を俯瞰した報告を行った。その報告の中で、露清貿易に従事した山西商人の役割を紹介した。報告内容は、モスクワ大学・経済史センターが毎年出版する年報にロシア語で掲載される予定である。平成20年度は、5月にドイツのグライフスバルト大学で「日独ワークショプ」が開催され、研究経過の内容を報告した。参加者の多くはバルト海域史の研究者であったが、露清間の貿易史の研究には関心を持たれ、様々なアドヴァイスを得ることができた。21年2月には、シンポジウムの報告書『帝国の貿易1819世紀ユーラシアの流通とキャフタ』を出版することができた。これは、20年3月に行なった同名のシンポジウムをまとめた報告書であり、私自身も論文「キャフタを通じた中国茶のロシア向け輸出」を執筆した。シンポジウムそのものは、露清間で行われたキャフタ貿易に焦点を当て、ロシア史研究者、中国史研究者、モンゴル史研究者を招聘し、国境を横断する議論を行なった。日本人だけでなく、中国からも研究者を招いたので、充実した内容に仕上がっている。この報告論の編集を通じて、露清貿易に関する総合的な知見が得られた。とりわけ、中国における山西商人の研究を学ぶ機会があったことは有益であった。これを今後の研究に活かしたいと考えている。21年3月には、ロシアのサンクト・ペテルブルクに2週間出張し、ロシア科学アカデミー図書館やロシア国立図書館で、露清貿易に関する資料収集を行なった。この収集した資料に基づき、21年度中に論文を二つ執筆する予定である。
DAMPsおよび咬合性外傷に注目した限局型侵襲性歯周炎の発症機序の解明

本研究では、PAMPsの影響のない無菌マウスを用いて咬合性外傷や結紮によってDAMPsが誘発されるか、また歯周組織に与えるDAMPsの生物学的影響に関して、NGSを用いて網羅的な解析を行う。さらに通常のマウスと比較を行い、PAMPs影響下におけるDAMPsの働きに関して解析を行うことで、現在の咬合性外傷に対するコンセンサスに生物学的な根拠を追加できるよう模索する。
プロスタグランジンによる破骨細胞の分化・機能性の調節とその作用メカニズムの解明

本研究は、プロスタグランジン(PG)類による破骨細胞の分化誘導と機能調節の分子メカニズムの解明を目的とした。まず、(1)マウス大腿骨の骨髄細胞からカラムで分離した造血幹細胞を、RANKL存在下で培養したところ、PGE2やH2O2の刺激により破骨細胞の分化が促進された。次に、(2)破骨細胞の分化に伴うPG受容体のRNA発現を調べたところ、EP1とEP2は分化前後で安定に発現したのに対し、EP4は分化前で強く発現し、分化後に減少した。また、(3)PGE2刺激に伴うPKAとPKCの活性を調べたところ、破骨細胞の分化前後においてPGE2濃度に依存した活性の上昇が認められた。さらに、(4)PG刺激により誘導される遺伝子をdifferential display法を用いて同定したところ、PGE2刺激によりEP受容体,C-jun, RANKなどの発現が誘導された。また、(5)PG刺激によるcAMP濃度や細胞内Ca2+濃度の変化を調べたところ、EP1とEP3が重要な働きを持つことが明らかになった。さらに、(6)PG受容体とPGRPのcDNAを細胞に導入し、膜画分上の両タンパク質の結合をWestern blot法を用いて調べたところ、PG受容体とPGRPがタンパク質レベルで結合していることが判明した。また、(7)PG受容体とPGRPの分子間結合やリン酸化が破骨細胞の分化や機能性に影響することが明らかになった。以上の結果から、破骨細胞の分化誘導におけるプロスタグランと受容体および調節タンパク質の働きと作用経路が明らかになった。本研究は、プロスタグランジン(PG)類による破骨細胞の分化誘導と機能調節の分子メカニズムを明らかにすることを目的とした。特に、PGE_2とPGF_2αが造血幹細胞に直接作用する点に着目し、PGや酸化ストレスによる破骨細胞の分化・機能性の変化や、酸化ストレスによるPG受容体の発現変化、さらに破骨細胞の分化前後におけるPKAとPKCの活性変化などの解析を行った。まず、(1)マウス大腿骨由来の骨髄細胞からG-10カラムにより分離した造血幹細胞を、種々の増殖因子(M-CSF、RANKL)存在下で培養し、PGF_<2α>やPGE_2の濃度、時間、作用時期などを変えて作用させ、破骨細胞への分化と機能性に対する変化を観察した。その結果、上記の培養系において多核でTRAP陽性の破骨細胞の形成が観察され、しかもPGE_2の濃度と時間依存的に破骨細胞の分化が促進された。特に、培養初期にPGE_2を添加した場合に破骨細胞の形成促進が認められた。また上記の培養系にH_2O_2を添加したところ、破骨細胞の形成が著しく促進された。次に、(2)定量RT-PCRを行い、破骨細胞の分化に伴うPG受容体(EPおよびFP)のmRNAの発現変化を解析した。その結果、EP1とEP2は分化前後で安定に発現したのに対し、EP4は分化前で強く発現し、分化後に減少することが明らかになった。一方、FP受容体は、分化に伴う発現変化は認められなかったが、造血幹細胞のH_2O_2刺激により発現が著しく誘導された。また、PGE_2刺激に伴うPKAとPKCの活性を調べたところ、破骨細胞の分化前後においてPGE_2濃度に依存した活性の上昇が認められた。本研究の結果から、PGE_2や酸化ストレスは、造血幹細胞に直接作用してEP4/EP2を介したPKAやEP1を介したPKCを活性化することにより、破骨細胞の分化や機能性の制御に関わっていることが示唆された。

まず、(1)マウス大腿骨の骨髄細胞からカラムで分離した造血幹細胞を、RANKL存在下で培養したところ、PGE_2やH_2O_2の刺激により破骨細胞の分化が促進された。次に、(2)破骨細胞の分化に伴うPG受容体のRNA発現を調べたところ、EP1とEP2は分化前後で安定に発現したのに対し、EP4は分化前で強く発現し、分化後に減少した。また、(3)PGE_2刺激に伴うPKAとPKCの活性を調べたところ、破骨細胞の分化前後においてPGE_2濃度に依存した活性の上昇が認められた。さらに、(4)PG刺激により誘導される遺伝子をdifferential display法を用いて同定したところ、PGE_2刺激によりEP受容体,C-jun, RANKなどの発現が誘導された。また、(5)PG刺激によるcAMP濃度や細胞内Ca_<2+>濃度の変化を調べたところ、EP1とEP3が重要な働きを持つことが明らかになった。さらに、(6)PG受容体とPGRPのcDNAを細胞に導入し、膜画分上の両タンパク質の結合をWestern blot法を用いて調べたところ、PG受容体とPGRPがタンパク質レベルで結合していることが判明した。また、(7)PG受容体とPGRPの分子間結合やリン酸化が破骨細胞の分化や機能性に影響することが明らかになった。以上の結果から、破骨細胞の分化誘導におけるプロスタグランと受容体および調節タンパク質の働きと作用経路が明らかになった。
アジアのシェイクスピア受容と上演-沖縄と大和を出発点として-

本研究は、日本のシェイクスピア受容と世界のシェイクスピア受容をつなぐヒントとを求めて、地理的/文化的にも日本と他のアジアの国々との間のある沖縄の演劇の歴史と現状を下記の4つの観点から調査/分析し、国際交流の場としての沖縄の可能性に焦点をあてることを目的にしていた。1)アジア地域のシェイクスピア受容と変容の歴史2)組踊から沖縄芝居までのシェイクスピアの受容と変容と大和劇などの影響3)戦後の沖縄芝居の近代化とシェイクスピア4)現代の「沖縄」演劇におけるシェイクスピア劇受容と他のアジア地域におけるシェイクスピア劇受容SARSの影響などによる計画の変更もあり、すべての目的を達することはできなかったが、大和と沖縄での調査のほか、シンガポールでの国際学会、インド・ジャイプールでの国際演劇学会及びニュー・デリーでのインド・シェイクスピア学会でそれぞれ研究発表と討論に加わり、また、タイでも取材することもできた。しかし、インドのラスタム・バルーチャも指摘するように、それぞれの国の言語や歴史を理解しないまま、西欧発の「アジアとシェイクスピア」というテーマを追うと、西欧が東洋にいだくオリエンタリズムを、西欧化されたアジア人がアジアの伝統演劇にあてはめ、新たな文化搾取を生む危険性をはらんでいる。この点に注意しながら、大和と沖縄との関係や、沖縄や大和の地域演劇を鍵に、インド、タイ、シンガポール例などを対比させながら深めていきたい。尚、今回の報告書において、沖縄の近代化とシェイクスピアとの関係については、人類館事件及び沖縄と大和の「オセロ」の受容と上演を中心にまとめた。I.海外での研究発表II.ワークショップ、講演、研究会の企画・開催と司会2.2002年7月14日(日)ブラウン大学東アジア研究学科准教授Steve Rabson氏を京都に招いての講演と研究会「沖縄からの移住者と本土滞在経験-移住経験の人類学的調査と文学的表象の分析」(一般公開)そのほか、6月における沖縄芸能史研究会参加、8月におけるRSCサマースクール参加など、国内外での調査と資料分析につとめたまず、5月24日、25日と、関西外国語大学でおこなわれた日本演劇学界全国大会〔テーマ:世界の中の日本演劇〕のために、「世界の中の沖縄芝居」という小セッションを企画し、沖縄大学の与那覇晶子氏、沖縄芸術大学出身の大嶺可代氏に発表者として加わってもらい(5月25日14:3016:30 303会議室)また、大会初日にはハワイ大学のジェームズ・ブランドン氏の基調講演「American Censorship of Kabuki;1945-1949 19451949年の歌舞伎の検閲」を私が通訳したこともあり、ブランドン氏にもフロアからこのセッションに参加してもらった。
非木材林産物生産による熱帯林の持続的利用と多様性保全

COE形成基礎研究「アジア・アフリカにおける地域編成原型・変容・転成」(代表者:白石隆)によって新たに京都大学東南アジア研究センターに所蔵された「Indian Forester」「Indian Forest Records」と、代表者がこれまでに収集した資料を素材として、19世紀後半からの東南アジア大陸部を中心とした「非木材林産物生産資料集成データベース」を構築した。また上記以外の資料として戦前の南方林業関連文書を閲覧調査するために京都大学並びに東京大学の図書室を活用した。ラオスではダマール樹脂、カジノキ、染料原料、タイではミアン茶園、ミャンマーではタンニン生産用樹皮などの森林産物利用の現地調査を行った。これらの現地調査とデータベースとを連携させて、東南アジア大陸を中心とした非木材林産物生産と結びついた熱帯林保全の検証作業を行った。今後はこのデータベースをさらに充実させてそれを活用することで、20世紀の熱帯林産物のポリティカルエコロジー研究を進めたい。COE形成基礎研究によって新たにアジア・アフリカ地域研究研究科に所蔵された「Indian Forester」「Indian Forest Records」と、代表者がこれまでに収集した「タイ国国立公文書館所蔵の森林局関連文書」を素材として、19世紀後半からの東南アジア大陸部を中心とした「非木材林産物生産資料集成データベース」の構築を始めた。1)データベースの構築:科学研究費助成金でパソコンと補助記憶装置を購入した。上記資料を整理し、データベースのスタイルを決定した上で、上記データベースに入力している。2)資料の追加収集:また上記以外の資料として「台湾総督府の熱帯林関連文書」を閲覧調査するために京都大学並びに東京大学図書室を訪問した。台湾関連では、樟脳の生産と流通が、興味深い。江戸期の日本は、世界的な樟脳生産国であり、とりわけ薩摩藩・土佐藩が長崎出島を通じて樟脳を輸出した。明治期に入り、日本の樟脳生産は、当時の植民地である台湾に移り、台湾総督府の大きな収入源となった。再生樟脳の技術開発、セルロイド需要などが重なり樟脳需要が伸びた一方で、合成樟脳の出現により、天然樟脳の生産は減少してゆく。近代化過程で代替が進む熱帯林産物の典型を見るようである。3)現地調査:研究分担者として参加している科学研究費補助金(基盤研究A)(代表者:古川久雄)で、ラオスでの安息香の現地調査を行い、同じく研究分担者として参加している科学研究費補助金(基盤研究B)(代表者:安藤和雄)で、ミャンマーでの森林産物利用の現地調査を行った。これらの現地調査を本研究と有機的に連携させて、非木材林産物生産と結びついた熱帯林保全の検証作業をすすめている。初年度にはデータベース構築作業を開始し、現在も鋭意、作業を進行中である。今後は、このデータベースの充実に努めるとともに、それを活用して、20世紀の熱帯林産物のポリティカルエコロジー研究を進めたい。COE形成基礎研究によってアジア・アフリカ地域研究研究科に所蔵された「Indian Forester」「Indian Forest Records」と、代表者がこれまでに収集した「タイ国国立公文書館所蔵の森林局関連文書」を素材として、19世紀後半からの東南アジア大陸部を中心とした「非木材林産物生産資料集成データベース」の構築を初年度に引き続き進めた。1)データベースの構築:上記資料を整理し、データベースへの入力を進めた。2)資料の追加収集:また上記以外の資料として「戦前南方林業関連文書」を閲覧調査するために京都大学並びに東京大学図書室を訪問した。3)現地調査:ラオスでは安息香・ダマール樹脂の現地調査を行い、ミャンマーでは森林産物利用の現地調査を行った。これらの現地調査をデータベースと有機的に連携させて、東南アジア大陸を中心とした非木材林産物生産と結びついた熱帯林保全の検証作業をすすめている。COE形成基礎研究によってアジア・アフリカ地域研究研究科に所蔵された「Indian Forester」「Indian Forest Records」と、代表者がこれまでに収集した「タイ国国立公文書館所蔵の森林局関連文書」を素材として、19世紀後半からの東南アジア大陸部を中心とした「非木材林産物生産資料集成データベース」を構築した。また上記以外の資料として「戦前南方林業関連文書」を閲覧調査するために京都大学図書室を活用した。研究拠点形成費補助金と基盤研究Bによって、ラオスではダマール樹脂の現地調査を行い、ミャンマーでは森林産物利用の現地調査を行った。これらの現地調査をデータベースと有機的に連携させて、東南アジア大陸を中心とした非木材林産物生産と結びついた熱帯林保全の検証作業を行った。また3月に岩手大学で開催された第114回日本林学会大会において研究成果の一部を報告した。
転倒や事故予防のための加齢変化早期発見・改善を目的としたインタフェース開発

近年の社会問題の1つとして、医学的に健康な高齢者の運動機能や認知機能の加齢による影響を要因とした、自動車などによる事故や転倒による寝たきり化などが挙げられるが、その予防策への支援は未だ十分とは言い難い。特に、健康高齢者が自分自身の身体や認知の変化には気づきにくいという問題がある。そこで本研究では、健康な高齢者の転倒や事故を未然に防ぐため、高齢者自身が自らの変化の気づきを促す支援を可能とするインタフェースの提案,及び,その健康増進のための改善技術の提案を目的とする。本年度は、研究代表者らが提案した、姿勢(脊柱の湾曲度合い)を簡易的に評価する手法を用いて、実際に健康高齢者を対象とした体力測定会で300人以上の高齢者を対象に姿勢計測を実施した。その結果、高齢者が自分自身で気づくことが困難であった、前かがみの猫背姿勢の補正や円背姿勢の早期発見として本手法が有効であることが示された。今年度は、提案手法の有効性検証を目的とし、システムを改良したうえで、300人以上の健康高齢者を対象に、体力測定会において姿勢計測を行い、体重・身長・腕力・脚力・骨密度などの計測結果とともに、姿勢計測の実施が実現した。その結果、簡易計測システムの有効性が示された。従って、予定されていた基礎的な実験は十分遂行できたと評価できる。さらに、予定されていた姿勢と年齢の関係性に加え、新たに、腕力・脚力・骨密度・身長・体重・年齢・性別などの結果を加え、姿勢評価のモデリングを実施している最中であるため、おおむね順調に進展していると評価する。次年度は、健康高齢者の身長・体重・年齢・性別・腕力・脚力・骨密度と姿勢の関連性を明らかにしたうえで、転倒リスクを予防するモデル構築を予定している。転倒には、高齢者の認知状態も関与することから、認知タスクに関連する指標も取り入れて、分析を実施する予定である。今年度は得られた結果に基づき新たに装置開発の予定を立てていたが、健康高齢者300人を対象とした実験を実施し際に、当初予定していた姿勢と年齢の計測データ以外の、高齢者の健康パラメータを複数取得することができた(身長・体重・骨密度・脚力・腕力など)。従って、それらを含めてモデリングした結果に基づき、システムを改良する手順に急遽切り替えたため、次年度に改めて装置開発を行う手順とした。この方法により、さらに良い結果が得られるとともに、従来得られなかった姿勢や他の健康指標との関係性も明らかになることが期待される。
C型肝炎ウイルスタンパク質による細胞形質転換機構の解析

本研究はC型肝炎ウイルス(HCV)による肝炎、肝がん発症のメカニズムを明らかにする目的でHCVタンパク質発現培養肝細胞における細胞遺伝子の発現変化ならびにHCV遺伝子あるいは遺伝子産物と相互作用を行う細胞性因子を解析するものである。以下にその研究成果をまとめる。1.紫外線クロスリンク法を用いて培養細胞抽出液中にHCV遺伝子断片と結合する細胞性因子が存在することを見い出した。さらに、その細胞性因子がポリピリミジン配列結合タンパク質であることを明らかにした。2.培養肝がん細胞HepG2を用いて一過性外来遺伝子発現細胞の選択的濃縮を行い、HCV全遺伝子発現、非発現によって変化する既知遺伝子500クローン以上について検索をおこなったが、有為な変化を示すものは認められなかった。3.上記濃縮細胞を抗Fas抗体あるいは腫瘍壊死因子(TNF)-αで処理してアポトーシスを誘導した場合、HCV全遺伝子発現細胞はそれに抵抗性を示すことがわかった。またその効果は全遺伝子中コアタンパク質の発現に依存することを見い出した。4.コアタンパク質は上記アポトーシス誘導物質による細胞性転写因子NF-κBを相乗的に活性化することで抗アポトーシス作用を示す場合があることがわかった。また同時にNF-κB非依存的なコアタンパク質による抗アポトーシス作用も存在することも明らかとなった。5.コアタンパク質恒常発現細胞の樹立を通してコアタンパク質はRas遺伝子産物と協調して細胞を形質転換することを示した。6.コアタンパク質はMAPキナーゼの活性化を通して細胞増殖活性化をおこなう可能性を示す結果を得た。以上のようなHCVタンパク質による細胞のアポトーシスならびに増殖制御はHCVの持続感染および肝発がんとの関連が考えられ、現在その詳細な分子機構について解析を進めている。本研究はC型肝炎ウイルス(HCV)による肝炎、肝癌の発症のメカニズムを明らかにする目的でHCVタンパク質発現培養肝細胞の細胞性遺伝子の発現変化ならびにHCV遺伝子あるいは遺伝子産物と相互作用を行う細胞性因子を解析するものである。1.HCVタンパク質が調節的に発現することが可能であるプラスミドを用いて安定遺伝子導入肝細胞の樹立を行った。発現プラスミドにはテトラサイクリンによって発現調節可能な転写プロモーターを有するものを用いた。一時的な遺伝子導入実験からこれらの遺伝子調節発現系が有効であることが確認できたが、作成した安定遺伝子導入細胞では発現誘導時にすべてのウイルスタンパク質が確認されたほど効率の高い発現は得られないことがわかった。対応索として以下の3種類について行っている。(1)誘導発現を正確に行えるクローンの選択、(2)新規に昆虫ホルモンであるエクジソンを誘導剤として使用する誘導発現系の作成、そして(3)一時的な遺伝子導入細胞を特異的に濃縮する方法の確立。2.HCV遺伝子あるいは遺伝子産物結合する細胞性タンパク質の検出を行っている。UVクロスリンク法等を用いてHCV遺伝子3'末端に結合する細胞性タンパク質を見い出しこれがポリピリミジントラクト結合タンパク質であることを明らかにした。3.現在一時的な遺伝子導入細胞を濃縮する方法が確立されHCVの全タンパク質を一時的に発現する細胞を80%以上の濃縮率で得られるようになったため、これらの細胞で特異的な発現調節を受けている既知の細胞性遺伝子のスクリーニングを進めている。さらに未知の遺伝子の検出についてはRDA(Representational Difference Analysis)法による解析を行っている。本研究はC型肝炎ウイルス(HCV)による肝炎、肝がん発症のメカニズムを明らかにする目的でHCVタンパク質発現培養肝細胞の細胞性遺伝子の発現変化ならびにHCV遺伝子あるいは遺伝子産物と相互作用を行う細胞性因子を解析するものである。以下に本年度のその研究実績をまとめる。1.培養肝がん細胞HepG2を用いて一過性外来遺伝子発現細胞の選択的濃縮を行い、HCV全遺伝子発現、非発現によって変化する既知遺伝子の検索をおこなった。

500クローン以上の細胞性遺伝子発現を比較したが有為な変化を示すものは認められなかった。2.上記濃縮細胞を抗Fas抗体あるいは腫瘍壊死因子(TNF)-αで処理してアポトーシスを誘導した場合、HCV全遺伝子発現細胞はそれに抵抗性を示すことがわかった。またその効果は全遺伝子中コアタンパク質の発現に依存することを見い出した。3.コアタンパク質は上記アポトーシス誘導物質による細胞性転写因子NF-κBを相乗的に活性化することで抗アポトーシス作用を示す場合があることがわかった。また同時にNF-κB非依存的なコアタンパク質による抗アポトーシス作用も存在することも明らかとなった。4.コアタンパク質恒常発現細胞の樹立を通してコアタンパク質はRas遺伝子産物と協調して細胞を形質転換することを示した。5.コアタンパク質はMAPキナーゼの活性化を通して細胞増殖活性化をおこなう可能性を示す結果を得た。以上のようなHCVタンパク質による細胞のアポトーシスならびに増殖制御はHCVの持続感染および肝発がんとの関連が考えられ、現在その詳細な分子機構について解析を進めている。
癌におけるMBD1およびhPc2による転写抑制機構を標的とした新規治療法の開発

本研究ではメチル化DNA結合タンパク質およびポリコームタンパク質群による転写抑制機構を標的とした癌抑制遺伝子の再活性化による癌治療の可能性を、分子生物学的手法にて解明することを目的とした。現在までの研究にてMBD1あるいはhPc2をノックダウンすることで、再活性化する遺伝子の存在、膵癌細胞株におけるMBD1およびhPc2の発現状況の確認を終えている。今後はこれらが細胞増殖へ与える影響を検討していく。申請者はこれまでの研究にてメチル化DNA結合タンパク質のひとつであるMBD1とポリコームタンパク質群に属するhPc2およびRingibによる転写調節機構の存在を世界で初めて明らかにした。本研究は、この成果を臨床医学・癌治療に応用することを最終目標とする研究である。本年度の研究実施計画にて1.「メチル化DNA結合タンパク質MBD1およびポリコームタンパク質hPc2の癌への関与の検討」として(1)MBD1およびhPc2の消化器領域固形癌における発現状況の確認、(2)MBD1およびhPc2の遺伝子導入による癌細胞への影響の検討、(3)MBD1およびhPc2ノックダウンを用いた転写抑制機能阻害による癌細胞への効果検討、を挙げた。(1)に関しては、まず膵癌細胞株に置いてウエスタンブロットの手法を用いてcell lineにおいて高発現細胞および低発現細胞を探索した。これらの細胞を用いて以後の実験を行う計画である。(2)に関しては、タンパク発現用遺伝子導入ベクターは作成済みであるのでこれらの至適導入効率を得られる条件を検討中である。(3)に関しては、ノックダウン用ベクターを作成済みであるのでノックダウン効率を検討したのち実験に入る予定である。また2.「MBD1およびhPc2ノックダウンによって影響を受ける癌抑制遺伝子の探索」に関しては現在進行中である1.「メチル化DNA結合タンパク質MBD1およびポリコームタンパク質hPc2の癌への関与の検討」の実験においてある程度の結果を得たのちに平行して行えるよう開始する予定である。本年度の研究実施計画にて1.「メチル化DNA結合タンパク質MBD1およびポリコームタンパク質hPc2の癌への関与の検討」として(1)MBD1およびhPc2の消化器領域固形癌における発環状況の確認、(1)MBD1およびhPc2の遺伝子導入による癌細胞への影響の検討、(3)MBD1およびhPc2ノックダウンを用いた転写抑制機能阻害による癌細胞への効果検討、を挙げた。(1)に関しては、まず膵癌細胞株に置いてウエスタンブロットの手法を用いてcell lineにおいて高発環細胞および低発現細胞を探索した。これらの細胞を用いて以後の実験を行っている最中である。(2)に関しては、タンパク発現用遺伝子導入ベケターは作成済みであるのでこれらの至適導入効率を得られる条件を検討中である。(3)に関しては、ノックダウンベクターの高率が得られず再建頭注である。岡時にDNAメチル化に関連したタンパクであるEZH12は、前立腺癌、乳ガンなどで予後との相関性が示されており、膵癌との関連性を現在検討している。
クロマチン長期記憶による環境応答制御機構

1)遺伝子内クロマチン修飾による遺伝子発現制御遺伝子に抑制目印であるH3K9meやDNAメチル化が蓄積するシロイヌナズナの変異体ibm1およびH3K9メチル化酵素遺伝子の変異体を用いた解析から、遺伝子内部のH3K4me1の重要性を示す結果を得ている(Inagaki et al 2017 EMBO J)。この経路の理解を目指し、逆遺伝学的アプローチで、H3K4me1およびH3K4me2の減少する変異体を見出した(Oya et al論文未発表)。これらの系統を用いて、H3K4me1とH3K4me2の変化が、それぞれ別のヒストン修飾に影響することがわかった。さらに、H3K4me1の減少する変異下で数世代を経た後に、特定の発生異常が再現性をもって生じることがわかった。2)ヒストンバリアントH2A.Zによる遺伝子DNAメチル化の制御H3K4me1やH2A.Zは、酵母からヒトにまで保存されたエピジェネティックな目印であるが、その理解は遅れていた。植物の遺伝学およびエピゲノミクスを用いたアプローチから、これらの目印にたどり着き、環境応答の文脈で、これらの目印の役割と制御の理解に迫る結果が得られつつある。これらの結果がまとまると、当初の想定を超えた波及効果を持つと考える。環境応答に関与する因子であるH2A.Zや、転写と結びつく遺伝子内修飾であるH3K4me1が、どのようにして、より安定な修飾の制御に結びつくか、遺伝学とエピゲノミクスを用いて理解したい。H2A.Zをはじめとするヒストンバリアントや、H3K4meに影響するシロイヌナズナの変異体を用い、他のエピゲノム目印への影響を、定常状態とともに、非定常状態で調べる。これによって、エピゲノムのリプログラムにおけるこれらの目印の役割の更なる理解を目指す。「CGメチル化パタン形成様式の解析」遺伝子のコード領域においてCGサイトがメチル化されていることの生物学的役割と、その制御機構を探索している。このようなgenebodyメチル化は、動物と植物の両方で観察されるが、その理解は進んでいない。CGサイトのメチル化は、発現する遺伝子の内部に見られる。このようなDNAメチル化パタンが生じる機構を知るため、CGメチル化酵素遺伝子の変異体met1とMET1の補助因子をコードするVIM1/VIM2/VIM3三重変異体を交配した後代個体でのDNAメチル化を調べた。F0であるmet1やvim三重変異体(vim123)では、トランスポゾン(TE)と遺伝子の両方で、CGのメチル化がほぼ消失した。そのF1では、両親と比べてde novoのメチル化が観察されたが、一般にそのレベルは野生型個体よりもずっと低かった。哺乳類の生活環では、配偶子形成や初期発生の過程における脱メチル化とde novoのメチル化によってDNAメチル化パタンが再プログラムされる。植物はde novoメチル化酵素を持つが、いったん下がったメチル化、特にCGサイトのメチル化は即座に回復しないと報告されており(参考文献)、上記の結果はこれと一致する。F1個体においてde novoのメチル化がおきた配列は主にTEで、遺伝子のde novoメチル化は少なかった。さらに、F2個体では、F1と比べてさらにTEのDNAメチル化が進んだ。DNAメチル化パタンの形成には、世代を超えて継承されるエピジェネティックな情報が重要と考えられる。また、このようなde novoのDNAメチル化は、F0の変異体における24ntのsmall RNAの存在と強い相関を持ち、small RNAによるde novoメチル化の重要性が示唆された。またF2では遺伝子のメチル化も進んだので、今後は、この実験系を用いて遺伝子メチル化パタンの形成機構にも迫りたい。当初の計画どおりに研究を進めるとともに、遺伝子内メチル化と関連の深いヒストン修飾の制御機構について予想外の新たな知見を得ている。今後新たな方向へも研究を展開できると考える。プロモーターのクロマチン修飾は遺伝子発現のON/OFF状態の記憶に働く。一方、多くの真核生物で、遺伝子のコード領域にもクロマチン修飾がみつかるが、その機能は未解明である。本研究では、遺伝子内のクロマチン修飾に影響する変異体を用いた遺伝学とゲノミクスによるアプローチで、環境に対する応答性や細胞増殖の文脈で遺伝子内クロマチン修飾の制御機構と役割とを研究することを計画している。我々は、活性な遺伝子の内部に抑制目印が蓄積するシロイヌナズナの変異体を用いて、遺伝子内部におけるクロマチン修飾の制御と意義にアプローチした。シロイヌナズナの変異体ibm1では、多数の活性遺伝子の内部にH3K9meやDNAメチル化が蓄積し、それにともない発生異常が引き起こされる。今回の研究では、ibm1変異体背景であるにも関わらず発生異常が生じない新たな変異体を同定し、これを用いることで下流経路の理解を目指した。同定された変異体の原因遺伝子であるLDL2はヒストン脱メチル化酵素をコードしていた。ヒストン修飾解析などから、LDL2が遺伝子内部の修飾による転写抑制を仲介することがわかった。興味深いことにLDL2は、H3リジン4のモノメチル化(H3K4me1)を遺伝子内部において減少させることで転写抑制を引き起こしていた。同様の経路が多くのトランスポゾンでも働いていた。動物ではH3K4me1はエンハンサーの修飾と考えられているが、本研究は、遺伝子内部のH3K4me1の重要性を示した。

また、ibm1による発生異常にともない病害応答関連遺伝子の活性化が起こる。遺伝子内抑制クロマチンと病害応答経路の関連は、今後の重要な研究課題になると思われる。当初予定したように研究が進んでいる。1)遺伝子内クロマチン修飾による遺伝子発現制御遺伝子に抑制目印であるH3K9meやDNAメチル化が蓄積するシロイヌナズナの変異体ibm1およびH3K9メチル化酵素遺伝子の変異体を用いた解析から、遺伝子内部のH3K4me1の重要性を示す結果を得ている(Inagaki et al 2017 EMBO J)。この経路の理解を目指し、逆遺伝学的アプローチで、H3K4me1およびH3K4me2の減少する変異体を見出した(Oya et al論文未発表)。これらの系統を用いて、H3K4me1とH3K4me2の変化が、それぞれ別のヒストン修飾に影響することがわかった。さらに、H3K4me1の減少する変異下で数世代を経た後に、特定の発生異常が再現性をもって生じることがわかった。2)ヒストンバリアントH2A.Zによる遺伝子DNAメチル化の制御H3K4me1やH2A.Zは、酵母からヒトにまで保存されたエピジェネティックな目印であるが、その理解は遅れていた。植物の遺伝学およびエピゲノミクスを用いたアプローチから、これらの目印にたどり着き、環境応答の文脈で、これらの目印の役割と制御の理解に迫る結果が得られつつある。これらの結果がまとまると、当初の想定を超えた波及効果を持つと考える。1)遺伝子内クロマチン修飾による遺伝子発現制御転写制御におけるプロモーターのH3K9meやDNAメチル化の重要性はよく研究されている。一方これらの目印は遺伝子内部にも分布する。遺伝子内部にH3K9me2が蓄積するシロイヌナズナの変異体ibm1では、さまざまな発生異常が誘発される。この現象を遺伝学的に理解するため、この発生異常をサプレスする変異体を順遺伝学的に選抜し、H3K9メチル化酵素遺伝子やDNAメチル化酵素遺伝子に加え、H3K4脱メチル化酵素であるLDL2を同定した。LDL2はibm1変異による遺伝子のH3K4me1低下に関与することで転写の異常と発生異常を引き起こすことが明らかとなった。さらに、H3K9メチル化酵素遺伝子の変異体では、H3K9me2の低下に伴い、H3K4me1が上昇することがわかった。これらの結果は、H3K9me2が遺伝子内部のH3K4me1の減少を介して転写を抑制していることを強く示唆する(Inagaki et al 2017 EMBO J)。さらに、ibm1変異体を用いたエピゲノム解析によって、この変異体における発生異常誘発は病害応答経路の活性化によることが明らかになった。病害応答の記憶にエピジェネティックな修飾が関わりうることを支持する結果としても興味深い。2)配列特異的抗抑制因子の解析トランスポゾンのコードする抗抑制因子
アブシジン酸のシグナル伝達因子の検索

植物ホルモンであるアブシジン酸(ABA)は種子休眠、乾燥に対する適応機構の引き金となるシグナル物質である。ABAのシグナル伝達因子の研究は、ABA応答性遺伝子プロモーターのシス解析などによって下流因子について盛んに行われているが、植物ホルモンレセプターなどの上流因子に関するものは少ない。その一つの理由として、ABAのシグナル伝達に関する突然変異株の検索が十分に行われていないことが挙げられる。そこで本研究では、シロイヌナズナを用いて新しいABAのシグナル伝達因子に欠損が生じた突然変異株のスクリーニングをおこなった。申請者は以前の研究によってABAの生合成欠損突然変異株を分離・解析してきた。ABA欠損突然変異株の植物体は乾燥し易い。そこでこの突然変異株を変異誘発処理し、植物体が乾燥に強くなる復帰突然変異株のスクリーニングをおこなった。スクリーニング方法はEMSにより変異誘発処理をしたM2植物の葉一枚を刈り取りペ-パ-タオルの上で3-4時間自然乾燥させた後、ヘラでそれぞれの葉一枚を潰し水分含量が多い植物について、もう一度同様の操作を行い再現的に乾燥処理に対する水分の保持能力が高い株を検索した。約4000個体についてスクリーニングを行い3株を得た。これらの株について乾燥処理時の蒸散速度を親株であるABA欠損変異株と比較したところ、3株とも親株と比べて有意に蒸散速度が遅い、すなわち、水分保持能力が高いことが明らかとなった。これまで、ABAのシグナル伝達に関する突然変異株のスクリーニングは種子発芽においてのみ行われている。本研究では植物体の形質を指標にABAのシグナル伝達の突然変異株をスクリーニングする系を確立した。シロイヌナズナは世界的なゲノムプロジェクトにより、変異遺伝子のクローン化が容易であり、本研究で同定した変異もポジショナルクローニング法によってクローン化をおこなう予定である。
臨床応用を目指したヒト成体細胞からの歯の再生技術の確立

象牙質塊の作製に関する研究:ヒト歯髄細胞幹細胞の採取について,ヒトの過剰歯10本から歯髄を採取後,歯髄細胞を単したところ,10本すべてに幹細胞が存在することが分かった。次に,その細胞をPLGAを主体とした担体に播種して免疫不全マウスの背部皮下に移植したところ,象牙質の硬さに類似した硬組織が再生した。歯周組織の再生に関する研究:ラット脂肪組織の成熟脂肪細胞から分離した脱分化脂肪細胞は間葉系幹細胞の特性を持ち,歯周組織欠損部に移植すると歯周組織再生能を示した。また,ヒト頬脂肪体から単離した成熟脂肪細胞から得られた脱分化脂肪細胞も間葉系幹細胞の特性を示し,歯周組織再生能を持つことが予測できる。1.ヒト歯髄細胞幹細胞の採取本年度は,ほとんどの症例で抜歯される過剰歯を,10本回収することができたので,その10本の正中埋伏過剰歯から歯髄を採取し,歯冠部と歯根部に分離して,細胞を獲得後,それぞれの細胞群を間葉系幹細胞のパラメータを用いて解析すると,表面抗原の一つであるCD105が,過剰歯からの間葉系幹細胞の採取に有効であることを見出した。2.ヒト歯髄間葉系細胞に適した新規担体の開癸ハイドロキシアパタイト添加の有無と気孔径の異なる4種類のポリ乳酸を基材としたブロック(担体)を作製した。3.象牙質塊の再生象牙質再生に有効なブロックを明らかにするために,培養した歯髄細胞を各ブロックに播種して,免疫不全マウスの背部皮下に移植した。移植16週後に担体を取り出して,マイクロCTによる解析は終了した。マイクロCTによる結果を解析すると,気孔率90%のブロックは,早期に吸収することが分かった。気孔率80%の担体は,移植16週が経過しても,もともとの形態は大きく変化していなかった。しかし,組織が形成される空間が少ないことから,組織の成熟度は,気孔率が高いほど,硬い組織ができることが分かった。したがって,気孔率が異なると再生する組織の性質も異なることが分かった。現在,組織学的解析および免疫化学的解析を行っている。1.ヒト歯根膜組織由来間葉系幹細胞と歯肉組織由来間葉系幹細胞の採取ヒト歯根膜組織中の間葉系幹細胞をCD146の表面抗原を用いて,陽性細胞と陰性細胞に分取して,多分化能を検討したところ,CD146陽性細胞に多分化能を持つ細胞が多いことが明らかとなった。次に,矯正治療中に抜歯される小臼歯の歯根中央部からは,歯根膜が,歯頸部からは歯肉の粘膜固有層が同時に採取できることがわかった。そこで,両組織から間葉系細胞を培養増殖し,間葉系幹細胞の特性を解析したところ,歯肉粘膜固有層の細胞も,骨芽細胞への分化能を持つことが明らかとなった。したがって,歯肉の粘膜固有層も歯周組織再生に有効な細胞源であることが示唆できた。この結果については,現在,論文の投稿準備中である。2.脱分化脂肪細胞の培養法の確立:近年,脂肪組織から採取できる細胞にも,歯周組織再生能を持つことが報告されている。そこで,初めに,ラットの皮下脂肪組織から採取した間質細胞と脱分化脂肪細胞の歯周組織形成能を比較するために,ラット下顎骨に歯周組織欠損を作製し,培養した細胞を移植すると,どちらも細胞にも歯周組織形成能が認められた。組織再生における細胞の担体の選択は,組織再生の結果を左右することがあきらかとなっている。今回は,気孔径の違いによる歯周組織再生誘導能を評価したが,予測と反して,有意な差は認めなかった。現在,ヒト細胞の獲得のために余剰となった頬脂肪体から,間質細胞と脱分化脂肪細胞の採取と培養方法を確立している。3.間葉系幹細胞マーカーの発現量について:過剰歯,永久歯,乳歯の歯髄,歯根膜および歯肉から採取した間葉系細胞の表面抗原解析を行った。間葉系幹細胞の採取に,CD105の表面抗原が有用であることを明らかにできそうである。過剰歯から採取した歯髄10例における歯髄細胞の特性については,英文論文として採択されている。初めに,象牙質の再生に必要となる担体の検討を行った。ヒト象牙質再生用の新規担体として,PLGAにハイドロキシアパタイトを配合して,気孔径の異なる担体を作製し,ヒト歯髄細胞を播種後,ヌードマウスに移植して,象牙質再生能を評価した。気孔径90%が気孔径80%と比較して,天然の象牙質の硬さに近い硬組織が再生することがわかった。

次に,歯周組織再生のために必要となる細胞の検討を行った。計画書では歯根膜細胞の応用を考えていたが,歯根膜細胞より,歯肉の粘膜固有層から単離した間葉系幹細胞が歯根膜から単離した間葉系幹細胞と比較して,骨芽細胞への分化能が高いことが分かった。さらに,口腔内から採取できる脂肪組織から,脱分化脂肪細胞が単離・培養できることが分かってきた。そこで,脱分化脂肪細胞の骨芽細胞への分化能を検討したところ,容易に骨芽細胞に分化することが分かってきた。幹細胞の移植には,多くの幹細胞の数が必要となる。したがって,幹細胞を未分化なまま増殖させることが困難であることから,組織から単離した際に,少しでも多くの幹細胞が取るための有利な条件の検討も重要となる。脱分化脂肪細胞から成熟脂肪細胞から非対称分裂にて現れる。したがって,はじめの脂肪組織から単離する成熟脂肪細胞の酵素条件を検討することで,同じ量の脂肪組織から多くの成熟脂肪細胞が取れることが,細胞移植医療においては,培養期間の短縮ができることからも,有利となる。しかしながら,成熟脂肪細胞の単離方法の詳細な検討は行われていなかった。そこで,成熟脂肪細胞の単離時のコラゲナーゼ濃度の検討したところ,従来報告されていた濃度より効果的な濃度があることを見出した。さらに,その濃度で単離後に現れる脱分化脂肪細胞は,細胞増殖能が高いこともわかってきた。さらに,脱分化脂肪細胞を歯周組織の欠損部に移植すると歯周組織の再生も促進することが明らかになった。26年度が最終年度であるため、記入しない。再生医学26年度が最終年度であるため、記入しない。申請書に記入した今年度の3つの目標のうち,最初の二つはほぼ終了し,3つ目の課題についても,実験は終了し,組織学的解析のみが残っているのみであることから,おおむね順調に進展していると考えた。1.細胞と担体による象牙質塊の作製において,象牙質と同様な硬さを持つ象牙質塊が再生できていないので,現在,担体の基盤となるPLGAに混合するハイドロキシアパタイトの焼成と顆粒の大きさなどを検討している。2.再生した象牙質塊の周囲に歯周組織を再生させる術式において,まだ,現在,検討中である。全体の周囲を覆う前の段階として,象牙質上に歯周組織を再生させる有用な細胞源を検討することが重要と考えて,現在,新たに,脂肪組織由来の間葉系幹細胞の評価を行っている。脂肪組織由来の細胞については,当初の研究計画に含まれておらず,新しく実験を計画し,開始していることから,当初の予定より遅れていると判断した。しかしながら,臨床を考えるには,歯根膜の採取には,抜歯を必要とすることから,脂肪組織由来の細胞の有効性が認められれば,臨床応用を前提にした本課題においては,有用であると考えて,実験を開始したことをご理解いただきたい。本年度は,初年度に行った移植実験における再生組織の評価を行うことで,本課題の最も重要な時期となる。そこで,実験を推進させるために,実験補助を雇用する。また,歯周組織再生に有効となる細胞源についても,課題に記載した細胞のみだけではなく,歯以外の組織由来に細胞も用いることで,大きな成功を導きたいと考えている。1.ヒト脂肪組織由来の間葉系細胞の培養方法の確立:頬脂肪体から脂肪組織が大量に採取できる。したがって,昨年度,確立した脱分化脂肪細胞の単離方法にて,ヒト脂肪細胞からの単離を試みる。単離した脱分化脂肪細胞の特性を間質組織由来の間葉系幹細胞と比較検討することで,有意な細胞群を決定する。
脳虚血耐性現象におけるアポトーシス抑制機序の関与の解明

虚血耐性現象におけるinterleukin-1βconverting enzyme(ICE)およびinterleukin-1β(IL-1β)の発現について検討した。砂ネズミ一過性前脳虚血モデルを用い、5分間の致死的虚血導入1、2、3、4、7日後に砂ネズミを灌流固定し、HE染色で海馬CA1錐体細胞数、ICE・IL-1β免疫染色で海馬CA1領域におけるそれらの発現、TUNEL法でDNA断片化を示した海馬CA1錐体細胞数を評価した。虚血耐性獲得群では、5分虚血24時間前に2分間の非致死的虚血を加えた。HE染色では致死的虚血導入3日後より海馬CA1錐体細胞の染色性がやや低下し、4日後以降で著明な神経細胞数の減少が観察されたが、この4日後以降の神経細胞数減少は虚血耐性を獲得させることで有意に抑制された。ICE陽性神経細胞は致死的虚血導入2日後より出現し34日後で強く認められたが、虚血耐性獲得群では致死的虚血導入34日後で散見されたのみであった。IL-1βは致死的虚血導入4日後においてミクログリアに強く発現したが、致死的虚血導入3日以前あるいは虚血耐性獲得群ではIL-1β陽性細胞は散見される程度であった。TUNEL陽性神経細胞は、致死的虚血導入3日後以降で著明に増加したが、虚血耐性獲得群では同時期以降散見される程度であった。これらの結果は、虚血耐性獲得に際してアポトーシス抑制機序が関与していることを示唆していると考えられた。平成10年度は、砂ネズミ一過性前脳虚血モデルを用い海馬CA1領域における総錘体細胞数とDNA断片化を示した錘体細胞数の変化について検討した。実験動物は以下のように4群に分類した。I群は非致死的虚血後に致死的虚血を加える虚血耐性獲得群で、5分間虚血の24時間前に2分虚血を加えた。II群は非致死的虚血のみを加える群で、実験24時間前に2分虚血のみを導入した。III群は致死的虚血のみを加える群で、5分虚血のみを導入した。IV群は対象群で、sham手術のみを行い全く虚血を加えなかった。海馬CA1錘体細胞数は、II群(非致死的虚血群)およびIV群(sham群)では全く変化しなかった。I群(虚血耐性獲得群)およびIII群(致死的虚血群)では、致死的虚血導入後7日で海馬CA1錘体細胞の脱落を認めたが、この脱落の程度はI群ではIII群と比較して軽度であった。TUNEL陽性錘体細胞は、II群およびIV群では観察されなかった。I群およびIII群では、致死的虚血導入3日後にTUNEL陽性錘体細胞の出現を認めたが、この程度はI群ではIII群と比較して軽度であった。

HE染色では致死的虚血導入3日後より海馬CA1錐体細胞の染色性がやや低下し、4日後以降で著明な神経細胞数の減少が観察されたが、この4日後以降の神経細胞数減少は虚血耐性を獲得させることで有意に抑制された。ICE陽性神経細胞は致死的虚血導入2日後より出現し34日後で強く認められたが、虚血耐性獲得群では致死的虚血導入34日後で散見されたのみであった。IL-1βは致死的虚血導入4日後においてミクログリアに強く発現したが、致死的虚血導入3日以前あるいは虚血耐性獲得群ではIL-1β陽性細胞は散見される程度であった。TUNEL陽性神経細胞は、致死的虚血導入3日後以降で著明に増加したが、虚血耐性獲得群では同時期以降散見される程度であった。これらの結果は、虚血耐性獲得に際してアポトーシス抑制機序が関与していることを示唆していると考えられた。
『日本書紀』熱田本の史料学的研究

本課題の最終年度にあたる平成30年度には、これまで作成した熱田本『日本書紀』の高精細影印本をもとに、さらに熱田本の研究を推進した。熱田本『日本書紀』の特徴としては、1和歌懐紙を利用して紙背に『日本書紀』を書写していること、2時宗僧の信仰のネットワークを通じて熱田神宮に奉納されたこと、があげられる。熱田本『日本書紀』は、14世紀に生きた人びとにとっても信仰・学術の結晶であり、これを多角的に分析することによって、時代を越えて受け継がれた書物と人との対話を明らかにすることができた。今年度の研究では、和歌懐紙の利用・時宗僧による寄進といった、他の『日本書紀』写本ではみられない熱田本独自の要素を詳細に分析するよう努めた。また、いっぽうで、『日本書紀』の写本系統のなかで、熱田本の占める位置についても分析を勧めたが、こちらは奥書が巻9にしかないこともあって、いかなる親本を書写したものかを全巻についてたしかめることは困難であった。しかしながら、全体としては、実際の写本を対象として日本古代史・中世史はもとより、日本文学・日本語学の領域を越えた人文科学の総合研究として、熱田本を多角的に分析することができたのは大きな収穫であった。所蔵者・熱田神宮の理解と協力を得て、熱田本という貴重な文化遺産を広く活用できる基盤を作り、学術上の要望に応えたことは、原本の保存・管理を目指すことは、われわれの大きな悦びとするところである。平成28年度は、熱田本日本書紀について、全15巻を原本について丹念に調査し、その墨・紙質・筆跡等を確認した。また、全巻について順次撮影を進め、28年度中に全巻の撮影を終え、実地検証とその紙焼きの確認などをもとに種々の研究をおこなった。とくに重点を置いたのは、熱田本の性格についてである。この写本がどのような経緯で書写され、それが熱田神宮に奉納されたかを検討した。その成果については、研究分担者の遠藤慶太が、2016年12月の皇學館大学神道研究所公開学術シンポジウムにおいて「日本書紀写本と中世神道説ー日本書紀熱田本の調査からー」と題して報告している。予定していた撮影を終えるとともに、その過程で得た知見を整理することができたから。平成28年3月27日から翌月5日にかけて、熱田本日本書紀の全巻の撮影を実施するとともに、われわれ研究メンバーが原本の詳しい調査をおこなった。撮影は、古典籍撮影の第一人者藤田一男氏が担当し、宇都宮啓吾(大阪大谷大学文学部教授)・大槻信(京都大学大学院文学研究科教授)・木田章義(京都大学名誉教授)・是澤範三(京都精華大学人文学部准教授)・渡辺滋(山口県立大学国際文化学部准教授)の諸先生も、公務の合間を縫って調査に参加した。こうして28年度中に撮影と調査は無事終了し、その後、天理時報社において最新の技術を駆使して印刷が進められ、同時に「解説」の執筆も開始した。そして、平成29年7月には、再度の原本調査と色校正を実施し、これを受けて、10月には第一分冊が印刷、ついで第二・三分冊も順次鉛槧に附され、ここに全巻完成の運びとなった。予定していた影印本の刊行も無事終了し、その「解説」の執筆のために、熱田本の書誌学的研究もかなり進んだ。28年度の調査と撮影した写真をもとに、熱田本日本書紀の書誌をまとめるとともに、紙背の和歌についても検討を加え、報告する。とくに、文字のかすれている巻や表裏とも利用されている巻、具体的には、・文字のかすれがめだつ巻第一上(神代上)や巻第七(景行・成務紀)・何かを塗った痕跡のある巻第二(神代下)・表裏の顕微鏡撮影をした巻第六(垂仁紀)について検討を加える。熱田本日本書紀の影印版に附した「解説」は、個々の専門家が執筆したもので、それぞれの横の連絡に乏しい憾みがある。そこで、本年は、共同の研究会を数回開催しながら、討論の成果を最終的に報告書としてまとめたい。

今年度写真撮影にかかる費用としてあてていた金額が当初の計画を下回ったため。必要書籍の購入価格が予定より安価に抑えられたので、それを若干次年度の報告書の製作費に回した。次年度撮影分に充当して消化する。
ラット視神経挫滅モデルにおける塩酸ロメリジンの神経保護効果

ラット視神経挫滅によりSecondary degeneration(二次的変性)を誘導し、逆行性に生じた網膜神経節細胞あるいは網膜全体の障害評価を、生存網膜神経節細胞数のカウント並びに組織切片にて施行した。視神経挫滅により誘導される網膜神経節細胞死は、ラット両側上丘より蛍光色素を注入し、逆行性に生存している網膜神経節細胞を標識することにより、モデル作製後4週後に評価した。対照眼と比較し約34%に網膜神経節細胞死が認められた。また、H.E染色による組織切片を用いて、視神経挫滅後の網膜各層(内網状層、内顆粒層および外顆粒層)の構造的変化が認められるか否かについても検討した。いずれの層においても対照眼と比較し、統計学的有意な変化は認められなかった。眼科領域において様々な神経変性疾患(緑内障や網膜色素変性症など)が存在し、そのいずれもが確固たる治療方法が確立されていない。今回用いた視神経挫滅モデルは、Secondary degeneration(二次的変性)を今後分子生物学的あるいは種々の薬効評価をするのに有効なモデルであると考えられた。そこで我々は、この視神経挫滅モデルを用いて塩酸ロメリジンの神経保護効果を検討した。方法は、塩酸ロメリジン10 or 30mg/kgの量を1日2回の割合で経口摂取にて4週間投与し、同様の手段にて網膜神経節細胞および網膜内層の変化について検討した。網膜神経節細胞死は、塩酸ロメリジン10mg/kg or 30mg/kgの両群ともに約10%程度に抑えられた。両群間に有意差はなかったものの、両群ともコントロール群に対し有意に網膜神経節細胞が保護された。塩酸ロメリジンは、二次的変性を来たす視神経疾患の障害を軽減することから、将来の新しい視神経変性疾患の治療薬としてその可能性が示唆された。眼圧測定は、モデル作製後1週間、2週間、1ヶ月後に施行した。このモデルによりラット眼圧は、術後1週には11.5mmHgと対照眼(11.0mmHg)と比較しわずかながらではあるが上昇していた。この傾向は1ヶ月後に安楽死させるまで同様に認められた。眼圧上昇により誘導される網膜神経節細胞死は、ラット両側上丘より蛍光色素を注入し、逆行性に生存している網膜神経節細胞を標識することにより、モデル作製後1ヶ月後に評価した。対照眼と比較し約33%に網膜神経節細胞死が認められた。また、組織切片を用いて視神経挫滅モデルにより網膜各層(内網状層、内顆粒層および外顆粒層)の構造的変化が認められるか否かについても検討した。いずれも層においても対照眼と比較し、統計学的有意のある変化は認められなかった。眼科領域において様々な変性疾患(緑内障や網膜色素変性症など)が存在し、そのいずれもが確固たる治療方法が確立されていない。本研究の成果は、第14回日本緑内障学会(平成15年9月、東京)にて報告した。いずれの層においても対照眼と比較し、統計学的有意のある変化は認められなかった。この視神経挫滅モデルを用いて、塩酸ロメリジンをそれぞれ10 or 30mg/kgの量を1日2回の割合で、経口摂取にて4週間投与した。モデル作製時と同様の方法にて逆行性に染色した網膜神経節細胞の生存率と、H.E染色にて作製した組織切片にて、現在塩酸ロメリジンの神経保護効果を検討している。研究の成果は、第14回日本緑内障学会(平成15年9月、東京)にて報告した。