hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
樹状細胞を用いた小児白血病に対する免疫療法の確立

さらに、患者末梢血のT細胞と白血病細胞融解液でパルスした樹状細胞または白血病細胞由来樹状細胞を共培養し、インターフェロン-γ産生性細胞の発現頻度を測定するとともに、患者由来の白血病細胞をターゲットとして患者白血病細胞におけるアポトーシスの発現頻度を測定することにより、in vitroにおける抗腫瘍免疫能を解析した。小児白血病の治療成績は、予後因子による患者の層別化と化学療法の進歩、造血幹細胞移植術の導入などにより大きく改善した。しかし、依然として不幸な転帰をとる患児は多数存在し、小児白血病の治癒率はプラトーに達しつつある。本研究では、小児がんの中で最も頻度の高い白血病患児に対する樹状細胞療法の可能性を検討し、従来の治療法によって救命できなかった小児白血病患児に対する新たな治療法を開発することを目的とする。まず、高い有効性を持つ樹状細胞療法を開発するために、白血病細胞を樹状細胞へと分化誘導することを試みた。白血病患児より得られた白血病細胞をGM-CSF、TNF-α、Flt-3 ligand、IL-4の存在下で無血清培地にて2週間培養したところ、急性骨髄性白血病M4、M5aでは、CDllc、CD80、CD83、CD86が陽性化し樹状細胞への分化が観察され、白血病細胞由来の樹状細胞が直接細胞傷害性T細胞を誘導する可能性を見いだした。しかし、急性巨核芽急性白血病(M7)では、樹状細胞への分化は観察されなかった。一方、より有効な樹状細胞療法を可能とするために、樹状細胞を活性化することが知られているセンダイウイルスベクター利用の予備研究を開始した。すなわち、小児悪性腫瘍に対する、温度感受性非伝搬型組換えセンダイウイルスベクター(ts-rSeV/dF)により活性化された樹状細胞療法の臨床研究を実施するための前段階として、実際に小児悪性腫瘍の患児から採取した末梢血幹細胞から分化誘導した樹状細胞へts-rSeV/dFを作用させたところ、得られた樹状細胞は治療効果を期待できるレベルにまで活性化可能であるとの結果が得られつつある。
金属細線上へのラテラル成長化合物半導体の結晶性向上に関する研究

低抵抗・高アスペクト比を持つタングステン細線の形成電気的特性改善のために、スパッタ法によりバルク値の6倍まで低抵抗率化されたタングステン膜の形成と、電子ビーム露光法とリアクティブイオンエッチング(RIE)により、幅100nm、アスペクト比約1の細線形状を得ることを可能とした。MOVPEでのタングステン細線埋込成長とHBTによるその結晶性評価GaAsおよびInPにおけるタングステン細線のラテラル成長による埋込みの原料依存性/成長条件依存性を明らかにした。また、金属細線を埋め込んだ近傍での結晶性も、その上に作製したヘテロ接合バイポーラトランジスタの十分な電流利得から、良好で有ることを明らかにした。さらにInP系においてはサブミクロンサイズの微細なトランジスタの高周波特性を通して、界面近傍の電気的評価を行った。その結果、埋め込み成長温度によって、金属細線近傍の電気的特性が変わることが明らかになった。これは、タングステンワイヤから不純物が拡散してキャリアを生成していると考えることが妥当であり、今後タングステンの純度の向上、埋め込み成長前の表面処理、埋め込み成長温度のさらなる低下等で低減できると考える。金属細線をゲートとする新たなトランジスタ作製二重障壁構造と埋込み金属細線を組みあわせることで、走行するキャリヤがホットエレクトロンとなり、アンドープ層のみを走行する新しいトランジスタ構造を作製した。半絶縁性基板を用いると共に、半導体層をエッチングすることによりフリースタンディングワイヤーで埋め込まれたゲート金属と電極用パッド間の配線することで、エミッターゲート間のリーク電流を低減化した。電圧一電流特性から、埋め込んだ金属細線のゲートによって引力ポテンシャルが形成できることが確認でき、この素子の将来性を示せた。本年度は以下の実績を得た。1.埋め込まれた金属をショットキーコレクタとするヘテロ接合バイポーラトンジスタ動作の確認InP MOVPEでタングステン細線を埋め込んだ後にヘテロ接合バイポーラトランジスタ用構造を形成し、トランジスタとして動作させることで、金属上にラテラル成長した化合物半導体の評価を行った。全面メッシュ状埋込み金属をコレクタとし、大きな(50μm×50μm)エミッタ構造を持つ構造及び小さな(2μm×10μm)エミッタ直下のみに細線を形成した構造の両者を作製し、その両者で10以上の電流利得を観測し、良好な結晶性を確認した。2.タングステン細線のGaAs MOVPEでの原料依存性/成長条件依存性GaAs MOVPEでの原料依存性/成長条件依存性を明らかにした。タングステンが埋め込まれるまでは、原料としてトリエチルガリウムが優れ、異常核成長が出ない範囲でマイグレーションを抑制した条件が良く、埋め込まれた後の平坦性の為には原料としてトリメチルガリウムが優れ、マイグレーションを促進する条件が優れていることを示した。また、全面メッシュ状埋込み金属をコレクタとするGaAs系ヘテロ接合バイポーラトランジスタを作製し、通常成長の場合と同程度の電流利得を観測し、良好な結晶性を確認した。3.微細タングステン細線の抵抗評価上記1,2の結果から、細線で形成したタングステンの抵抗値の高さが問題となった。そこで、その原因を調べた結果、細線形成ではなく、作製時の温度によって大きくその抵抗値が劣化し、逆に言えば、作製時の温度を上げることで、抵抗値を下げることが出来ることを示した。今後アスペクト比の向上と併せて新プロセスの開発を行う必要があることが判明した。1.タングステン薄膜の低抵抗率化昨年度作製したInP基板上へのタングステン薄膜の抵抗率がバルク値の約30倍となった為その改善を試みた。当初期待されていたE-

gunによる高温蒸着による方法ではInPの表面状態が悪化しない温度範囲では改善されなかったが、スパッタによる成膜が有効であることを確認し、成膜時の圧力、膜厚に抵抗率が大きく依存することが解った。圧力3mTorr、膜厚200nmにおいてバルク値の6倍まで低抵抗率化に成功した。2.高アスペクト比を持つタングステン細線の形成とそのInPによる埋め込み成長高アスペクト比パターンの為に、タングステン薄膜のリアクティブイオンエッチング(RIE)による加工を試み、マスクとしてSiO_2とTiの多層構造を用いることでRIE時の垂直なエッチング側面とエッチング後のマスク削除を可能とした。その結果幅100nmのタングステン細線形成を可能にし、アスペクト比約1の細線形状を得ることが可能となった。さらにこのタングステン細線上にInP層を成長することをMOVPEで試み、タングステン細線上に200nm程度のInP層をラテラル成長し、平坦なヘテロ界面が形成しうることを示した。3.埋め込まれた金属をショットキーコレクタとするサブミクロンヘテロ接合バイポーラトランジスタ以上の1,2の結果を基にInP MOVPEでタングステン細線を埋め込んだ後にヘテロ接合バイポーラトランジスタ用構造を形成し、トランジスタとして動作させることで、金属上にラテラル成長した化合物半導体の評価を行った。その結果、エミッタ幅が500nmで、エミッタ幅の下に幅100nm、高さ100nm、周期200nmのタングステン細線3本がコレクタとして働くトランジスタにおいて10以上の電流利得を観測し、良好な結晶性を確認した。本年度は以下の実績を得た。埋め込まれた金属をショットキーコレクタとするサブミクロンヘテロ接合バイポーラトランジスタの界面電気的特性の評価InP MOVPEで埋め込んだタングステン細線をコレクタとして用いたヘテロ接合バイポーラトランジスタの高周波特性の解析から、界面近傍の電気的評価を行った。その結果、埋め込み成長温度によって、金属細線近傍の電気的特性が変わることが明らかになった。埋込み成長温度585°Cの場合、埋められた金属細線の周囲に形成される導電性領域の幅は0.25μmに相当する。一方、埋め込み成長温度600°Cの場合、導電性領域の幅は1μmに広がる。広い底面にはキャリアを生成する損傷がないことと導電性の層の幅が成長温度に依存し変化することから考えると、タングステンワイヤから不純物が拡散してキャリアを生成していると考えることが妥当であり、今後タングステンの純度の向上、埋め込み成長前の表面処理、埋め込み成長温度のさらなる低下等低減できると考える。金属細線をゲートとする新たなトランジスタ作製二重障壁構造と埋込み金属細線を組みあわせることで、走行するキャリヤがホットエレクトロンとなり、アンドープ層のみを走行する新しいトランジスタ構造を作製した。半絶縁性基板を用いると共に、半導体層をエッチングすることによりフリースタンディングワイヤーで埋め込まれたゲート金属と電極用パッド間の配線することで、以前の素子で問題となっていたエミッターゲート間のリーク電流の低減をはかった。
牛の排泄場所の行動的制御における無線ID内蔵型起立検知装置の開発

牛が牛舎内の休息場所で排泄せず、他の場所で排泄するようにする「牛のトイレのしつけ」が目標である。本研究では、無線ID内臓型起立検知装置とフィードステーション(FS)を用いて、排泄場所をコントロールする方法とそれを実用化に近づける方法を検討した。1.無線ID内臓型起立検知装置の開発起立検知装置のセンサは、当初水銀スイッチを利用していたが、公害問題を考えて傾斜スイッチに変更した。さらに、起立検知装置とICタグさらにFSを1台のパソコンで制御するプラグラムもほぼ実用化レベルまで到達した。2.群飼育での試験(1)供試動物と飼養施設:2年間で3実験を実施した。3実験ともホルスタイン種育成牛6頭を用い、飼養場所はFSを模した施設で行った。各牛の左後肢に起立検知装置を取り付けた。(2)試験1:牛が起立後、制限時間以内にFSに進入すると配合飼料が給与されるようにした。制限時間は60分、30分、10分、5分という4処理を設定した。結果:FSを利用すると休息場所の排糞は有意(P<0.05)に減少した。しかし、FSへの誘導成功率は処理間で一定しなかった。(3)試験2:制限時間を60分と10分の2処理を設定した。結果:休息場所の排糞は制限時間60分の方がより減少することが明らかとなった。(4)試験3:2処理を比較した。〔起立給餌期〕起立した後FSに進入すると最初の1回のみ給餌した。〔4回給餌期〕FSで6時間間隔1日4回給餌した。結果:FSを使用するとFS周辺の排糞が顕著に増加した。4回給餌では起立直後の排糞が多かったが、起立給餌にすると起立直後にFSへ進入し、FSで採食を終了してから排糞する傾向がみられた。以上の研究成果より、起立検知装置を使った〔起立給餌〕の方法が、牛の排泄場所制御において、より効果的であることが示された。A)無線ID内臓型起立検知装置の開発1.水銀スイッチを利用した起立検知装置は完成した。2.しかし、水銀スイッチは将来的に公害問題で使用が難しくなるとの情報により、傾斜スイッチに置き換えたものを試作し、現在も試験中である。3.起立検知装置の受信とRFIDさらにフィードステーションを制御するプラグラムはほぼ完成した。B)牛の群飼育での実地試験二つの試験を行った。1)試験1:ホルスタイン種育成牛6頭を、フリーバーンを模した施設で放し飼いした。牛の左後肢に起立検知装置を取り付けた。牛が起立後、制限時間以内にフィードステーションに進入すると配合飼料が給与されるようにした。処理間の移行はコンピュータで自動的に行うようにした。試験期間は62日間とした。排泄行動の制御では、休息エリアの排泄糞の個数は有意(P<0.05)に減少し、ほぼ成功したといえる。しかし、誘導成功率は上昇しなかった。2)試験2:牛の頭数、施設、機器は試験1と同じであった。制限時間は60分と10分の2つの処理を設定した。処理の移行は人為的に行った。結果は試験1と同じように、休息エリアの排泄糞の個数は有意(P<0.05)に減少した。特に制限時間60分の後半の減少が顕著であった。

また、制限時間60分から10分に移行した直後は、誘導率が低下し、休息エリアの排泄糞の個数が増加する傾向がみられた。3)二つの試験結果から、休息エリアにおける排泄糞の減少は明らかであった。しかし、起立直後にフィードステーションに進入するまでの制限時間の設定は短い必要はないと考えられる。今後は、さらに効率の良い牛の行動制御の方法を検討していきたい。また、無線ID内臓型起立検知装置の改良も考えている。1.無線ID内臓型起立検知装置(起立検知機)の開発(1)水銀スイッチは将来的に公害問題で使用が難しくなるとの判断により、傾斜スイッチを用いた起立検知機を試作し、実験した結果、利用できることが確認された。(2)起立検知機からの受信とICタグによる個体識別、さらにフィードステーション(以下FS)による配合飼料給餌を1台のパソコンで制御するシステムの試験を実施し、実用化できるレベルに達したと判断した。2.牛の群飼育での実地試験【材料と方法】ホルスタイン種育成牛6頭を、フリーバーンを模した施設で放し飼いし、113日間の試験を実施した。フリーバーンを牛が休息するベッドエリアと採食する給餌エリアに分けた。試験は次の3処理(4期)とした。〔閉鎖期〕FSを閉鎖し、牛が使用できないようにした。28日間と27日間の2回実施。〔起立給餌期〕起立検知機を牛の左後肢に取り付け、起立した後、FSに進入すると最初の1回のみ給餌するように設定した。29日間実施。〔4回給餌期〕FSで1日4回給餌(6時間間隔)するように設定した。起立検知機は使用しなかった。29日間実施。【結果】(1)全アリアに対するベッドエリアでの排糞割合は、閉鎖期59%、起立給餌期41%、4回給餌期48%で、FSを利用するとベッドでの排糞が有意に減少した(p<0.05)。(2)FS周辺での排糞割合は、閉鎖期7%、起立給餌期46%、4回給餌期21%で、起立検知機を使用するとFS周辺の排糞が顕著に増加することが明らかとなった(p<0.01)。(3)起立検知機を使用しないと起立直後(起立後2分以内)の排糞が多くなるが、起立検知機を使用すると、起立後FSに直行し、採食を終了してから排糞(起立後36分)する傾向がみられた。(4)今回の試験で起立検知機を利用した排泄場所の制御は、実用可能な技術であるとの確信が得られた。
ファンデルワ-ルス界面を利用した単結晶超薄膜の作成とその精密物性の解明

本研究においては、研究代表者らが開発したファンデルワ-ルスエピタキシ-法により、絶縁物から半導体、金属、さらには超伝導金属と多岐に亙る層状物質の単結晶単層膜を自由に積層して、天然界にはまったく存在しない人工物質を創製し、それが示す新しい物性を解明することをその目的としている。本年度においてはまず、昨年度に成功したS原子により表面ダングリングボンドを終端したGaAs基板上への層状物質のファンデルワ-ルス・エピタキシ-をさらに追求し、成長第1層とそれに続く第2層以上の成長とで成長温度を変える。二段階成長法による膜質の著しい改善、SーGaAs基板上へのNbSe_2ーMoSe_2ヘテロ構造成長等に成功した。また本研究経費で購入した超高真空装置を用いて、GaAsのS原子による終端化機構の解明に着手し、S原子が表面のダングリングボンドに直接結合して終端化していること、またSと同族のSeによっても同様に安定な終端化が可能である事を明らかにした。一方NbSe_2膜の成長中のRHEEDパタ-ンの時間変化を、ビデオカメラにおさめ、ファンデルワ-ルス・エピタキシャル成長中の回折点の強度変化を詳しく調べたところ、鏡面反射点の強度が1ユニット層の成長の周期に合わせ、振動する事実が見い出され、1層毎の層成長している事実が明らかになった。さらに高次の回折点では、2ユニット膜成長の周期の振動が発見され、成長膜のポリタイプが2Hタイプである事が明らかになった。RHEED強度振動は、IIIーV族半導体やSi等の薄膜の成長では多くの報告があるが、層状物質の成長ではこれが初めであり、またX線回折等の他の方法では不可能なポリタイプに関する情報が得られた意義は大きい。本研究においては、研究代表者らが開発したファンデルワールスエピタキシー法により、絶縁物から半導体、金属、さらには超伝導金属と多岐に亙る層状物質の単結晶単層膜を自由に積層して、天然界にはまったく存在しない人工物質を創製し、それが示す新しい物性を解明することをその目的としている。従来ファンデルワールス・エピタキシーは、層状物質である遷移金属ダイカルコゲナイド物質間のように、同種の層状物質間でのみ可能であったが、本年度の研究の進展により、ファンデルワールス・エピタキシー法を以下に述べるような幅広い系にまで応用することが可能となった。まず結晶構造や物性が著しく異なる白雲母の劈開面上に、MoSe_2やNbSe_2の遷移金属ダイカルコゲナイドの成長を試み、格子定数が50%近くも異なるにも関わらず、良質のヘテロエピタキシャル膜が成長することを明らかにした。これにより、硬く大面積で平坦な表面を有する試料が容易に得られる雲母を、ファンデルワールス・エピタキシーの基板とする可能性が拓けた。白雲母は透明かつ良質の絶縁体なので、電気的光学的測定を行なう試料の基板としても優れている。また、硫化物処理したGaAs表面のダングリングボンドがS原子により規則正しく終端され、それが580°Cまで安定であることを、電子分光測定により明らかにした。この事実に立ち、6回対称性を有するCaAs(111)面を硫化物処理した後、この上にNbSe_2のファンデルワールス・エピタキシャル成長を試みた結果、界面の第1層から良質のヘテロエピタキシャル膜が成長することに成功した。この成功は、GaAsのような三次元物質基板上にNbSe_2のような二次元物質をヘテロ成長できることを最初に実証した点で興味があるだけでなく、GaAsをベースとするオプトエレクトロニクス素子上に、NbSe_2等の層状超伝導体をベースとする超伝導素子を集積化する可能性を拓いた点で、実用上の意義も大きいと思われる。

RHEED強度振動は、IIIーV族半導体やSi等の薄膜の成長では多くの報告があるが、層状物質の成長ではこれが初めであり、またX線回折等の他の方法では不可能なポリタイプに関する情報が得られた意義は大きい。
連続インピーダンスを用いた穿刺針位置確認システムの開発

本研究の目的は、現在麻酔科領域で行われている神経ブロックにおいてブロック穿刺針の先端がどこに位置するかを正確に確認する方法を開発することである。一方組織毎に電気的インピーダンス(EI)値は変化するため、EI値を連続的かつリアルタイムに測定しEI値変化の情報を医師に提示するリアルタイムインピーダンス感知神経ブロックシステム(RISBS)を開発し、神経ブロックにおける穿刺針の位置確認を可能にし、今まで不可能であったレベルに正確性を向上させることが本研究の目的である。2018年度は実験動物を使用しin vivoにおいて連続的にEI値を測定,組織においてEI値が異なる事の実験を行った。実験動物であるウサギの座骨神経をターゲットとしてその周辺のEI値を測定したところ、神経内にブロック針が挿入された際にEI値が大きく変化する事を確認した。この実験を3匹の実験動物を使用して行ったところ安定した数値が得られた。また同実験でこのEI値変化を使用して実際の神経ブックを染色した局所麻酔薬を使用して行ったところ、肉眼で神経周囲が染色されている事を確認した。現在この結果を医学雑誌に投稿中である。2018年度に行った動物実験の結果を医学雑誌に投稿中である。次の段階として、同動物実験で現在臨床で頻繁に使用されている神経ブロックのひとつである腹横筋膜面Transverse abdominis plane(TAP)ブロックをEI値変化を使用して実際の神経ブックを染色した局所麻酔薬を使用して行う予定である。またこのEI値変化を視覚ではなく音などの聴覚で認知できるインターフェイス法の開発を共同研修者の大阪大学工学部と行い、可能となった場合、動物実験においてその有用性を検証する予定である。初年度は豚の肉塊を使用しin vitroにおいて連続的にEI値を測定,組織においてEI値が異なる事の再現実験を行った。その結果より現在臨床で頻繁に使用されている神経ブロックのひとつである腹横筋膜面Transverse abdominis plane(TAP)ブロックを肉塊でシュミレーションする事を行った。この結果から各組織特有のEI値があり、連続的にEI値を測定しながらその変化を感知することにより穿刺針の位置確認が可能であり、穿刺針が神経ブロックのターゲットとする組織に位置した時点で局所麻酔を注入する事により神経ブロックが正確に行えるという事を確認している。現在この結果のデータを蓄積し結果としてまとめる作業に入っている。この研究は動物実験の段階に進め、in vivoにおけるEI値を測定、システムの開発に進める段階となっている。申請者らは本研究を進めるあたり豚の肉塊を使用しin vitroにおいて連続的にEI値を測定,組織においてEI値が異なる事を確認した。現在臨床で頻繁に使用されている神経ブロックのひとつである腹横筋膜面Transverse abdominis plane(TAP)ブロックを肉塊でシュミレーションする事を行った。初年度はその再現実験を行うとともにその結果を実際の臨床現場で再現できるかの検証を行うにあたって、連続インピーダンスを測定する医療機器の選別を行った。脳外科で使用している、通常の神経ブロックを行う時に使用する神経刺激装置などを双極針を使用してTAPブロックを行いながらインピーダンスを測定する事を試みたが、測定幅の違いなどにより、実際臨床現場で使用する医療機器では測定困難である事が判明した。この事より今後この原理を実際の臨床で使用する場合は、現在実験で使用しているインピーダンス測定装置を新しくインピーダンス測定のための測定器機を医療用として申請する必要がある事が判明した。次年度はその再現実験を行うとともにその結果を実際の臨床現場で再現できるかの検証を行うにあたって、連続インピーダンスを測定する医療機器の選別を行った。体脂肪を測定する医療器具でインピーダンスが測定できる事が判明し、購入に至ったが本来神経ブロック用ではないため、神経ブロック針と伝導させ、インピーダンス測定がブロック針を通じて可能になるように現在共同研究の大阪大学工学部内で改良中である。

肉塊を用いて神経を含む各組織特有のEI値測定を繰り返したが、筋肉、脂肪、筋膜等で各組織のEI値の測定は可能である事は証明されているが、神経ブロックのターゲットである神経のIE値を生理的電流の流れていない肉塊で測定することは不可能であり、を動物実験の段階に進め、in vivoにおけるEI値を測定、システムの開発に進める段階となっている。また前述の体脂肪測定器を神経ブロック針と接続可能な仕様に開発終了した際には、肉塊での試験を経て、臨床現場で実際のTAPブロックを行う予定である。本研究の目的は、現在麻酔科領域で行われている神経ブロックにおいてブロック穿刺針の先端がどこに位置するかを正確に確認する方法を開発することである。一方組織毎に電気的インピーダンス(EI)値は変化するため、EI値を連続的かつリアルタイムに測定しEI値変化の情報を医師に提示するリアルタイムインピーダンス感知神経ブロックシステム(RISBS)を開発し、神経ブロックにおける穿刺針の位置確認を可能にし、今まで不可能であったレベルに正確性を向上させることが本研究の目的である。2018年度は実験動物を使用しin vivoにおいて連続的にEI値を測定,組織においてEI値が異なる事の実験を行った。実験動物であるウサギの座骨神経をターゲットとしてその周辺のEI値を測定したところ、神経内にブロック針が挿入された際にEI値が大きく変化する事を確認した。この実験を3匹の実験動物を使用して行ったところ安定した数値が得られた。また同実験でこのEI値変化を使用して実際の神経ブックを染色した局所麻酔薬を使用して行ったところ、肉眼で神経周囲が染色されている事を確認した。現在この結果を医学雑誌に投稿中である。2018年度に行った動物実験の結果を医学雑誌に投稿中である。今年度は、動物実験に重きを置いて、実験用インピーダンス測定装置を使用して各組織に固有の各組織EI値を割り出すことと、動物実験においてリアルタイムEI感知神経ブロックシステムを用いて実際の神経ブロックを行うことを行っていく。同時に今使用している実験用のインピーダンス測定装置を臨床に使用すべく申請を行うか、もしくはさらに実際に使用している医用器機に同じ性能があるものがないか検索を続ける予定である。今年度は、動物実験において神経を中心としたEI値の測定を行う。また体脂肪測定器を神経ブロック針と接続可能な仕様に開発終了し臨床現場で実際のTAPブロックを行う。次の段階として、同動物実験で現在臨床で頻繁に使用されている神経ブロックのひとつである腹横筋膜面Transverse abdominis plane(TAP)ブロックをEI値変化を使用して実際の神経ブックを染色した局所麻酔薬を使用して行う予定である。またこのEI値変化を視覚ではなく音などの聴覚で認知できるインターフェイス法の開発を共同研修者の大阪大学工学部と行い、可能となった場合、動物実験においてその有用性を検証する予定である。当該残高では、予定している物品の購入ができなかったため、翌年度に配分があった際、それと合わせて購入しようと予定している。(理由)当初予定していた動物実験における動物の購入ができなかった為。(使用計画)
p116Rip proteinの気道ムチン分泌に及ぼす影響について

p116Rip proteinに対する特異的siRNAを用いた培養細胞でのgene silencingでのcell motilityへの影響を検討し、さらにp116Rip transgenic miceの作成を行いブレオマイシンの持続皮下ポンプ注入での急性肺障害モデルマウスの作成に成功して、p116Rip proteinの急性肺障害に及ぼす影響を検討した。細胞運動機能の引き金となるミオシンのリン酸化は、ミオシンリン酸化酵素(MLCK)とミオシン脱リン酸化酵素(MLCP)の相対的酵素活性バランスにより制御を受けている。ミオシンリン酸化の新たなメカニズムとして同定された、MLCPの一分子であるMYPT1の新たな結合蛋白質のp116Ripは、RhoA、MLCPと結合することによって、RhoAを不活化しMLCP活性を上昇させ、その結果として細胞内のミオシンのリン酸化を抑制的に制御していた。p116Ripは平滑筋や脳、肺に発現していることが報告されていることから、肺由来のヒト繊維芽細胞(HFL-1)及び、ヒト気道上皮細胞(HBEC-3)の培養細胞を用いてp116Ripのタンパク発現の検討を特異的抗体を使用したウエスタンブロット法にて行った。さらにp116Ripに対する特異的siRNAを使用してHFL-1及び、HBEC-3細胞内におけるp116Ripのgene silencingの検討を行った。また、気道ムチン産生性の肺胞上皮細胞株であるNCI-H292 cellを用いて、p116Ripのgene silencingの検討を行い、いずれの細胞株においてもp116Ripが発現しており、かつp116RipsiRNAを用いる事によって特異的に効率よくp116Ripの蛋白発現がknock downされることが判明した。そして、p116Ripのgene silencingに伴い、ミオシンのリン酸化が上昇している事もウェスタンブロット法により判明した。In vitroだけでなくin vivoにおいてのp116Ripの役割を解明するために、世界初となるp116Ripの全身過剰発現型モデルマウス(トランスジェニックマウス)を作製しており、現在のところFOマウスが三匹誕生している段階で、今後のF1マウスの繁殖を待ちながら、誕生するマウスのphenotypeを解析し、それらマウスの気道上皮細胞のムチン分泌に及ぼす影響をwild typeと比較検討して行く予定である。細胞運動機能の引き金となるミオシンのリン酸化は、ミオシンリシ酸化酵素(MLCK)とミオシン脱リン酸化酵素(MLCP)の相対的酵素活性バランスにより制御を受けている。In vitroだけでなくin vivoにおいてのp116Ripの役割を解明するために、世界初となるp116Ripの全身過剰発現型モデルマウス(トランスジェニックマウス)の作製を行い、現在のところF0マウスからF5マウスまでの繁殖に成功し今後、数を増やして誕生するマウスのphenotypeを解析し、それらマウスの気道上皮細胞のムチン分泌に及ぼす影響をwild typeと比較検討して行く予定である。
ゼータ関数と跡公式による密度分布定理と不変量に関する研究

リーマンゼータ関数と素数定理、セルバーグゼータ関数と素測地線定理に代表されるように、ゼータ関数と密度分布定理の間には密接な関係がある。本研究では、ゼータ関数や跡公式を用いて、密度分布やそれに付随する不変量に関する研究を行うことで、空間や多様体の性質を明らかにすることを目的とする。とくに、双曲多様体上の閉測地線の長さの集合として定義されるlength spectrumは多様体の特徴付けにおいて重要であり、研究期間中に数論的な多様体に関するlength spectrumを数論的な対象を用いて明示的に記述すること、そして、その記述を用いてlength spectrumの重複度の「平均的な」分布を表わす漸近公式を導くことができた。さらに、副産物として、不定値2元2次形式の類数の分布のある種の精密化を行うことができた。本年度は、主に、2次元および3次元双曲多様体に関するセルバーグゼータ関数の数論的な記述に関する研究を行った。このセルバーグゼータ関数の数論的な表示は、一般的にはよくわからない、多様体上のlength spectrumの具体的な記述を与えている。現在までに、ある特定のモジュラー群の合同部分群を基本群とするような、2次元の数論的双曲多様体については、原始的な不定値二元二次形式の狭義類数と基本単数を用いた記述が得られている。本年度の研究では、これを全ての合同部分群において、セルバーグゼータ関数が、同様に二次形式の類数と基本単数で表されることを証明した。さらに、用いられた代数体を虚二次拡大することによって、この結果を3次元双曲空間に作用するモジュラー群の任意の合同部分群を基本群とする3次元双曲多様体に拡張することができた。この研究結果は、length spectrumのような幾何学的な対象の具体的な記述を与えるだけではなく、ガウスの時代から伝統的に研究されている、二次形式の類数分布に関する情報も与えている。実際に、これまでにも、モジュラー群に関する素元定理から、二次形式の類数和に関する漸近公式が得られている。この漸近公式は、本研究の研究成果を応用することで、精密化できる。実際に、合同部分群に関する素元定理を類数を使って記述し、いくつかの合同部分群に関する素元定理の交代和をとることで、類数の部分和に関する漸近的な分布を得ることができた。モジュラー群に関する素測地線定理によって、不定値二元二次形式の狭義類数の和に関する漸近公式が得られることが知られている。この漸近公式は、ガウスによって予想され、ジーゲルによって証明された漸近公式と形は似ているが、和をとる順番が違うので、類数の分布を調べるための重要な比較対象であるといえる。本年度の研究では、類数全てではなく、特定の算術性をもつ判別式のみで類数の和をとったとき、その増大度はどのようになるか、を調べた。実は、同様の研究はすでに、2009年にRaulfによって行われており、増大度の主要項の係数の決定まで行われている。ただ、この係数の表示の仕方は、非常に複雑で、具体的にどのような値なのかを知ろうとするときに、さらに手間のかかる計算をしなければならない。また、誤差項の評価も大雑把である。本年度は、この漸近公式の係数のより簡明な表示を得たことと、誤差項の非自明な評価を行ったことが研究成果として挙げられる。アプローチとしては、モジュラー群を有限化した(主合同部分群で割って得られた)群上での、二次形式と素測地線との間の関係を明示的にあらわし、それをチェボタレフ型素測地線定理に適用する、という方法を用いた。このような研究は、跡公式・セルバーグゼータ関数・素測地線定理の古典数論への応用という観点で、重要であるといえる。Length spectrumは多様体上の素な測地線の長さの集合として定義される。とくに、双曲的な距離をもつ2つのコンパクトリーマン面に対しては、length spectrumが一致することと、ラプラシアンのスペクトルが一致することが同値であることが知られていることから、length spectrumは多様体の特徴づけという観点からも重要な研究対象のひとつであるといえる。本年度は、このlength spectrumの重複度の分布を、モジュラー群の合同部分群を基本群としてもつリーマン面に対して調べた。重複度については、Peter(2002)がモジュラー群の場合に、Lukianov(2007)が合同部分群のひとつであるΓ_0(n)の場合に、2乗和に関する漸近式を導いている。この漸近式の主要項にあらわれる係数は、Rudnick(2005)によって得られたラプラシアンのスペクトルに関するnumber

varianceの公式にもあらわれることから、スペクトル的な観点からも意義深いと考えられる。本年度の研究では、PeterやLukianovの成果を、Schwarz-Spilkerによってまとめられた数論的関数の理論と、素測地線定理、そして、不定値2元2次形式に関する古典的な研究成果を用いて、「すべてのモジュラー群の合同部分群」、そして、重複度に関する「任意の冪和」に対して拡張し、漸近式の主要項を係数の明示的な表示を得ることができた。これによって、合同部分群に関するlength spectrumの分布の様子がより鮮明になったといえる。この成果を、非合同部分群を含む数論的な基本群に拡張すること、そして非数論的な基本群の場合と比較することが今後の課題である。
分裂酵母における減数分裂の制御機構

分裂酵母を用いて減数分裂を制御する分子機構を調べた。減数分裂に必要な一群のmRNAは栄養増殖時の細胞では「選択的除去」とよぶRNA分解を受ける。この機構を解析し、関係する諸分子を明らかにした。中心因子であるMmi1タンパク質は、標的mRNA上の特定の6塩基配列を認識し結合した。減数分裂時にMmi1を不活化させるmeiRNAにはこの6塩基配列が多数存在し、Mmi1をおびき寄せていた。また、RNA polymerase IIのC末端領域のSer-2のリン酸化が減数分裂開始に必要な特定遺伝子の転写に不可欠なこと、ストレスに応答するMAPキナーゼ経路がそこ介在することを解明した。本年度大きな進展のあった2点につき述べる。(1)分裂酵母で減数数分裂に必要とされる主要な遺伝子のmRNAにはそれらの分解を指示する領域(DSR)が組み込まれており、栄養増殖時には「選択的除去」と名づけたメカニズムによって細胞から除かれている。ヌクレアーゼ複合体エキソソームがこの分解を実行するが、分解のためには標的mRNAの3'末端のポリA配列が重要であることを予備的に見出していた。今回、DSRを認識するRNA結合タンパク質Mmilpと複合体を作るタンパク質として、ポリA結合タンパク質Pab2pを同定した。さらに、このタンパク質が選択的除去のためのエキソソームの活性化に不可欠の役割を持つことを証明した。標的mRNAのもつポリA配列が果たす役割の一つは、Pab2pを呼び込むことであると考えられる。(2)選択的除去を受ける標的mRNAの中に、モータータンパク質ダイニンの軽中鎖をコードするものが含まれることを見いだした。対応する遺伝子の破壊を行うことにより、ダイニン軽中鎖が、すでに解析された重鎖と同じく、減数分裂時に見られる核の周期的往復運動に必要とされることが明らかとなった。ダイニン軽中鎖がなくてこの往復運動が起こらないと、減数分裂時相同組換えの頻度が大きく低下し、減数分裂を正しく完了できない細胞の割合が増加した。今回新たに同定された軽中鎖と、既知のダイニン重鎖、中鎖、軽鎖、およびダイニンと緊密に相互作用するダイナクチンのサブユニットが、どのようにアセンブリーして微小管上でモーター活性を発揮するかを解析し、モデルを提唱した。本年度論文発表に至った2研究項目につき述べる。(1)分裂酵母で減数数分裂に必要とされる主要な遺伝子のmRNAは、それらの分解を指示する領域(DSR)をもち、栄養増殖時には「選択的除去」と呼ぶメカニズムによって細胞から除かれる。今回、種々の解析を組み合わせて、DSRにRNA結合タンパク質Mmi1pが特異的に結合すると、通常型ポリAポリメラーゼによってポリA配列が過剰伸長され、そこにポリA結合タンパク質Pab2pが結合し、これらのタンパク質が共同してヌクレアーゼ複合体エキソソームを呼び込んで、核内に大きな構造体を形成することにより分解を実行しているという模式を提唱した。(2)減数分裂の際の染色体動態の制御における微小管の役割を探る中で、体細胞分裂でも減数分裂でも核膜の崩壊は見られない分裂酵母細胞において、減数第二分裂の一時期だけに核膜の透過性が非常に昂進することを見出した。解析の結果、その時期は第二分裂で染色体の分配が始まる後期に相当していた。核膜は小胞体から作られるが、分裂酵母の減数分裂過程では小胞体の成分は小胞輸送によって胞子の前駆体へも移行する。突然変異あるいは特異的薬剤を用いて胞子形成、とくに小胞輸送を抑えると、核膜のもっ隔離作用の喪失が起きにくくなることが分かった。すなわち、一過性の核膜の透過性の増大は、前胞子膜の形成のための小胞輸送によって核膜に何らかの欠損がもたらされることに起因すると考えられた。核膜の構造が残りながら染色体分配時に核と細胞質の隔離が失われるこの現象は、高等動物などで見られる有糸分裂時の核膜の崩壊にも通じる、進化学的にも興味深いものと考えられる。本年度論文発表に至った三つの主要な研究項目につき記載する。まず減数分裂特異的mRNAの選択的除去機構について、除去の標的となる減数分裂特異的mRNAにはDSRと呼ぶ領域があり、Mmi1タンパク質がそこに結合してmRNAを分解に導くが、DSR配列には一見規則性がなかった。今回、DSRの基盤はMmi1に親和性のある4種の6塩基の配列で、それらが複数集合して強いDSR活性が生じることを証明した。さらに、Mei2タンパク質と結合して核内ドット構造を作り、Mmi1を引き寄せて抑制する非コードRNAのmeiRNAには、上記の6塩基配列を多数含む3'テイル部分をもつ分子種が存在した。すなわち、meiRNAはMmi1タンパク質をおびきよせる疑似餌の役割を果たすという興味深い機構が浮かび上がってきた。

次に、Mei2の新奇機能の解析から、分裂酵母では窒素源飢餓下にストレス応答性のMAPキナーゼがCTDK-Iをリン酸化し、CTDK-1がRNAポリメラーゼIIのC末端領域(pol II CTp)をリン酸化して、mθ12遺伝子の転写因子をコードするste11遺伝子の転写を促進することが分かった。しかも、Mei2はフィードバック制御により、ストレス応答性MAPキナーゼ経路を活性化していることも分かった。一方、全く予期せぬ現象として、分裂酵母の減数第二分裂において、紡錘体の形成を阻害しても染色体分配が進行することを見いだした。微小管阻害剤によって極間微小管を消失させても、紡錘極体(SPB)から構築が始まる前胞子膜が、複製した紡錘極体を分離し、さらにそこに結合した染色体を両極に分離させる能力をもつことが明らかとなった。染色体分配機構の進化を考える上で興味深い発見と思われる分裂酵母において栄養増殖時に減数分裂特異的mRNAの選択的除去を行う分子メカニズムを解析し、標的mRNAを認識して分解へと導くMmi1タンパク質複合体の新規構成因子としてIss10を同定した。Iss10は複合体中で、主要構成因子で標的配列に結合するMmi1と分解に関わるZn-フィンガータンパク質Red1との結合を仲立ちしていることを見出した。また、Mmi1活性を抑えて減数分裂を開始させるスイッチタンパク質Mei2について、栄養状態がよいときにはTORキナーゼ複合体TORC1に依存するリン酸化を受け、それによってプロテアソームによるMei2の分解が促進されて機能抑制されることを明らかにした。減数第一分裂が開始する直前には染色体の構造が大きく変化し、それまでテロメアが紡錘極体(SPB)に結合していた状態からセントロメアがSPBに結合した状態へと移行する。この移行において、SPBから伸び出した新たな微小管がセントロメアを捉え、SPBへと引き寄せていることを明らかにした。さらに、減数第二分裂の制御について、後期促進複合体APC/Cの抑制因子Mes1の欠損が引き起こすサイクリンの欠乏ほどは強く減数第二分裂を阻害しないが、欠損すると第二分裂が正常に進行しない細胞が増加するSpo5タンパク質の機能を解析し、Spo5がサイクリンのmRNAに結合して、合成の面から第二分裂期に必要なサイクリン量の確保に寄与していることを明らかにした。また、Cuf2タンパク質が後期促進複合体APC/Cの活性化因子Fzr1のための転写因子で、その働きが第二分裂後にサイクリンを完全分解するために必要であり、欠損した場合は残存したサイクリンによって減数第三分裂とも言えるような異常な分裂が引き起こされることを発見した。論文に成果発表した主要な研究項目につき記載する。まず減数分裂特異的mRNAの選択的除去機構の研究では、除去の対象のmRNAを認識するMmi1タンパク質が、ヘテロクロマチン形成にも関与するという発見があった。Mmi1は細胞増殖時に、RNA依存性の転写サイレンシングに関わるRITS複合体を減数分裂特異的遺伝子に呼び寄せ、その染色体領域にヘテロクロマチン構造を誘導して遺伝子の転写を抑制していた。
栽培植物における生理特性の解析と制御

矮性問題:山根はインゲンの矮性(マスターピース)及びキュウリの矮性(スペースマスター)とそれぞれの高性種との間で内生GA量に差がないことをみつけた.インゲンではGA感受性の低いことが,キュウリでは加齢の早いことが矮性の原因であると推定された.倉石はオオムギ幼葉鞘でのオーキシン合成はL-Tryからラセマーゼ・D-Tryアミノトランスフェラーゼの反応経路で行われると推定し,矮性uguは後者の活性か低いためオーキシン生産が少ないという知見を得た.勝見はGA感受性,高GA生産性矮性トウモロコシD_8の中胚軸の細胞膜微小管の配向を顕微蛍光抗体法で観察し,表皮細胞では高性株との間に配向パターンの差は見られないこと,しかしD_8の皮層では,細胞伸長軸に対して直角配向をする微小管をもつ細胞が,高性株に比べて狭い区域に限られていることみつけた.この結果はD_8がGAの受容体に関する突然変異だとする仮説と矛盾しない.佐野は5-アザシチジン(AzaC)処理によって矮性化が誘導されること, F1でも矮性形質か残ることから, AzaC誘導の形態変化は遺伝することを示した. AzaCはシトシンのメチル化を抑えていることも確かめられた.この結果は,矮性株のGNAはメチル化が低いという前年度の結果を支持するものである.生殖生長:湯田はビワ果実の無種子化をGA3を主体とする処理により成功した.より効果的な処理のためにはビワ固有のGAを使うことが望ましいと考え,ビワ幼果から抽出を行ない, 3つの新GAを発見した.ビワの生理活性GAはGA_<34>と推定される.近内はブラシノステロイドによる作物の子実の増収を検討した.開花初期における処理は,コムギ,ナタネ,ダイズで増収効果があった.またトウモロコシの花粉の発芽率も高まった.桂はサトイモの地上部からGA_<24>を単離同定した.花芽誘導に関与するGAを検討中である.矮性問題:山根はインゲンの矮性(マスターピース)及びキュウリの矮性(スペースマスター)とそれぞれの高性種との間で内生GA量に差がないことをみつけた.インゲンではGA感受性の低いことが,キュウリでは加齢の早いことが矮性の原因であると推定された.倉石はオオムギ幼葉鞘でのオーキシン合成はL-Tryからラセマーゼ・D-Tryアミノトランスフェラーゼの反応経路で行われると推定し,矮性uguは後者の活性か低いためオーキシン生産が少ないという知見を得た.勝見はGA感受性,高GA生産性矮性トウモロコシD_8の中胚軸の細胞膜微小管の配向を顕微蛍光抗体法で観察し,表皮細胞では高性株との間に配向パターンの差は見られないこと,しかしD_8の皮層では,細胞伸長軸に対して直角配向をする微小管をもつ細胞が,高性株に比べて狭い区域に限られていることみつけた.この結果はD_8がGAの受容体に関する突然変異だとする仮説と矛盾しない.佐野は5-アザシチジン(AzaC)処理によって矮性化が誘導されること, F1でも矮性形質か残ることから, AzaC誘導の形態変化は遺伝することを示した. AzaCはシトシンのメチル化を抑えていることも確かめられた.この結果は,矮性株のGNAはメチル化が低いという前年度の結果を支持するものである.生殖生長:湯田はビワ果実の無種子化をGA3を主体とする処理により成功した.より効果的な処理のためにはビワ固有のGAを使うことが望ましいと考え,ビワ幼果から抽出を行ない, 3つの新GAを発見した.ビワの生理活性GAはGA_<34>と推定される.近内はブラシノステロイドによる作物の子実の増収を検討した.開花初期における処理は,コムギ,ナタネ,ダイズで増収効果があった.またトウモロコシの花粉の発芽率も高まった.桂はサトイモの地上部からGA_<24>を単離同定した.花芽誘導に関与するGAを検討中である.
テレビ漫画の影響に関する実証的研究

本研究は、子どものテレビ漫画視聴態度とそうした態度に対する保護者の認知の実態を分析することが目的である。調査の結果、見い出された主要な諸事実は以下のようである。(1)テレビ漫画をよく見る子どもほど漫画雑誌・漫画本をもよく見ており、したがって子どもたちの間で漫画メディアへの接触が多重化している傾向がある。そしてテレビ漫画への接触が多い子どもほど仲間とテレビ漫画についての情報を交換している。(2)子どもたちのテレビ漫画の選択理由は、年齢とともに絵とか登場人物の表情というような形式的な側面からストーリー性という内容的な側面へと変化している。(3)低学年の子どもほど、また多接触型の子どもほどテレビ漫画の世界に同一化する傾向が見られる。(4)子どものテレビ漫画視聴に対して父親は母親よりも許容的であり、母親は父親よりも子どものテレビ視聴を強く規制している。しかも子どもは親が規制いていると思っているほどに強く規制を感じていない。(5)親自身も多くがテレビ漫画を視聴しているが、そのきっかけは子どもが見ていたからであり、いわば偶然的な視聴理由である。だがテレビ漫画は子どもとの共通の話題になるし、また子どもと一緒に視聴することで一家団欒を得られると親は思っている。ところが実際には親子間でテレビ漫画が話題になることは多くない。(6)親はテレビ漫画が子どもに対して「言葉使いのマネ」などのように否定的な影響を与えると認めているが、他方では「友だちとの共通の話題になる」と肯定的な影響をも認めている。テレビ漫画は動く画像と音像とを結合させた映像であるだけに子どもにとっては具体的・迫真的であり、その影響は他のメディアの比ではない。だが、その影響は受け手である子どものタイプによって異なるだろう。そこで本研究では、子どもを社会的特性によってタイプ化し、それぞれのタイプの子どものテレビ漫画への接触頻度、選択するテレビ漫画のタイプ、テレビ漫画に対する反応(影響)を明らかにしようとした。そのために第1段階の質問紙調査、第2段階の面接法による事例調査という2段階の調査を考えた。今年度は小学生および中学生を対象に質問紙調査を実施した。対象地は大都市の影響を受けない地方都市で、かつ日本社会の平均的な産業構成を示している都市とし、大分県H市を選定した。このH市の小学校8校の4年生412名、6年生470名と中学校2校の2年生315名の合計1197名を調査対象とした。ごく大まかな傾向の一部を見ると以下のような諸点がある。1.子どものテレビ漫画の選択範囲は、一般に漫画本に比すると相当に幅が広く、多様化している。2.子どもは好きなテレビ漫画番組はだけではなく、嫌いなテレビ漫画番組をも視聴している。嫌いなテレビ漫画番組は「ながら視聴」である。漫画本には、こうした傾向は見られない。3.漫画本をよく読んでいる子どもほどテレビ漫画の接触も高い。また逆にテレビ漫画への接触頻度が高い子どもほど漫画本をよく読んでいる、つまり漫画本とテレビ漫画とは相乗的な関係にある。4.テレビ漫画への接触頻度が高い子どもほど、テレビ漫画の世界へののめり込みが大きく、テレビ漫画の登場人物への同一化が強い。(1)テレビ漫画をよく見る子どもほど漫画雑誌・漫画本をよく見ており、したがって子どもたちの間で漫画メディアへの接触が多重化している傾向がある。

(4)子どものテレビ漫画視聴に対して父親は母親よりも許容的であり、母親は父親よりも子どものテレビ視聴を強く規制している。しかし子どもは親が規制していると思っているほどには強く規制を感じていない。(5)親自身も多くがテレビ漫画を視聴しているが、そのきっかけは子どもが見ていたからであり、いわば偶然的な視聴理由である。だがテレビ漫画は子どもとの共通の話題になるし、また子どもと一緒に視聴することで一家団欒を得られると親は思っている。ところが実際には親子間でテレビ漫画が話題になることは多くない。(7)親はテレビ漫画が子どもに対して「言葉使いのマネ」などのように否定的な影響を与えると認めているが、他方では「友だちとの共通の話題になる」と肯定的な影響をも認めている。
乳癌術前化学療法後の病理学的完全奏功(pCR)の術前診断システムの開発

本研究は乳癌術前化学療法(NAC)後の病理学的完全奏功(pCR)を高い精度で診断するシステムの開発を目指した。paclitaxel±trastuzumab -FEC療法後に手術を施行したStage II-IIIの原発性乳癌において、NAC前の乳腺造影MRIでの腫瘤の形状、ホルモン受容体、遺伝子解析によるintrinsicサブタイプ、循環血液中腫瘍DNAのメチル化の減少が有意にpCRと相関した。ROC解析では腫瘤の形状とintrinsicサブタイプとの併用が最も有用なpCR予測モデルであった。臨床的CR症例では、腫瘤の形状とclinicalサブタイプの併用が高率にpCRを予測できた。本研究は、術前化学療法を受ける乳癌患者において、術前化学療法施行前後での乳腺造影MRI所見と、化学療法施行前に採取した針生検サンプルを用いて乳癌組織中の既存および新規の種々のマーカーを測定することにより、術前化学療法によって病理組織学的完全奏功(pathological complete response, pCR)がえられているかどうかを手術前に高い精度で診断できるシステムの開発を目的とする。平成27年度は、pCR術前診断システムの開発として、まず“後ろ向き検討"を行った。2005年12月2013年12月までに大阪大学医学部附属病院乳腺内分泌外科において、paclitaxel-FEC療法により術前化学療法を行い、その後に手術を施行したStage II -IIIの患者276人のうち、当院で化学療法の前後で乳腺造影MRI検査を施行した229例で評価を行った。229例中52例(22.7%)がpCRとなった。このpCRと相関する臨床病理学的因子を検討したところ、閉経の有無、組織学的グレード、ホルモン受容体、HER2、Ki67、NAC前の造影MRIでの形状、辺縁、造影率などがpCRと有意に相関した。以上の項目にさらに遺伝子発現解析によるsubtype分類(intrinsic subtype)を用いてpCR予測のROC解析を行い、(i)ホルモン受容体+MRIの形状、あるいは(ii)この2項目にHER2とKi67を加えた場合、さらには(iii)症例数は少数になるがMRIの形状にintrinsic subtypeを用いた場合がpCRの予測モデルとしてはAUCが高いことを明らかにした。当初の予定通り、平成27年度は、pCR術前診断システムの開発として“後ろ向き検討"を行った。2005年12月2013年12月までに大阪大学医学部附属病院乳腺内分泌外科において、paclitaxel-FEC療法による術前化学療法の前後で乳腺造影MRI検査を施行した229例で評価を行った。これによりpCRと有意に相関する臨床病理学的因子を明らかにした。また従来の臨床病理学的因子に加え、画像所見(術前化学療法前の造影MRIでの形状、辺縁、造影率など)も強くpCRと相関することも明らかにした。また、pCRの予測モデルの作成も行い、その結果を論文報告することができた(13.研究成果参照)。平成28年度は、前年度の検討からさらに症例を増やし、術前化学療法後の乳腺造影MRI検査でclinical CR (cCR)と判定された結果と、手術後の病理検査によるpCRとの乖離について“後ろ向き検討"を行った。2003年4月2014年12月までに大阪大学医学部附属病院乳腺内分泌外科において、paclitaxel±trastuzumab -FEC療法により術前化学療法を行い、その後に手術を施行したStage II-IIIの原発性乳癌患者385人のうち、当院で化学療法の前後で乳腺造影MRI検査を施行した266例を対象に評価を行った。266例中101例(38.0%)がcCRとなったが、このうちpCRとなった症例は48例(47.5%)しかなく、約半数において乖離がみられた。このcCRとpCRの乖離に関して、有意な相関因子がないか、臨床病理学的因子を中心に検討を行った。その結果、閉経の有無、組織学的グレード、ホルモン受容体、Ki67、そして術前化学療法前の造影MRIで腫瘍の形状が、有意にcCR-pCRの乖離に相関することが明らかになった。特にホルモン受容体とMRIの形態分類を組み合わせると、より高い精度で乖離を予測することができ、pCRの術前予測診断には有用であることが示された。2003年4月2014年12月までに当科において、paclitaxel±trastuzumab-FEC療法により術前化学療法を行い、その後に手術を施行したStage II-IIIの患者385人のうち、当院で化学療法の前後で乳腺造影MRI検査を施行した266例で評価を行った。266例中101例(38.0%)がcCRとなったが、このうちpCRとなった症例は48例(47.5%)であった。