hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多相固体包有物を用いたプレート収斂域深部流体の組成復元

本研究では100ー150 km深度で形成された超高圧変成岩に含まれる多相固体包有物を様々な方法で解析し、深部流体・メルトの化学組成を復元し,沈み込み帯の多様性を解明する。沈み込み帯深部の100ー150km深度に存在する流体の化学組成を決定することが可能となれば、流体が重要な役割を果たす地震発生場やマグマ生成などの理解に大きく貢献することができる。しかし鉱物粒界に存在する流体の多くは岩石が地表に持ち上がってくるまでの間に失われるため、その実態は明らかではなかった。そこで本研究では,多相固体包有物の微小分析および高温高圧実験によって,深部流体組成の復元を行なう.本研究では100ー150 km深度で形成された超高圧変成岩に含まれる多相固体包有物を様々な方法で解析し、深部流体・メルトの化学組成を復元し,沈み込み帯の多様性を解明する。そこで本研究では,多相固体包有物の微小分析および高温高圧実験によって,深部流体組成の復元を行なう.
核－マントル境界における金属鉄－ケイ酸塩メルト間の塩素分配に関する実験的研究

本研究では地球表層の塩素存在量が同程度に揮発性をもつ元素(例えばカリウムや亜鉛、フッ素など)と比較して枯渇している問題について、地球分化過程において核や深部マントル鉱物に取り込まれた可能性を実験的に検証することを目的としている。本年度は昨年度得られた高圧下における金属鉄ーケイ酸塩液相間の塩素分配係数に関する実験結果から任意の温度圧力条件に適用可能な塩素分配係数のスケーリング式を構築し、先行研究で見積もられている実効的な核ーマントル分離圧力温度条件に適用した。その結果、塩素は核に取り込まれず、大部分がマントルに分配されることが明らかとなった。これらの結果は論文にまとめ、学術雑誌へ投稿した。現在、査読結果に対して論文内容を改訂中である。また、上述の結果を受けて核形成後のマグマオーシャンが固化する過程で塩素がどのように分配されるのかについて遷移層・下部マントル圧力条件下で鉱物とケイ酸塩メルトとの間の分配反応実験を行った。実験結果から塩素はどのマントル鉱物にも溶け込まず、大部分がケイ酸塩メルトに分配されることが明らかとなった。こうした結果は核形成およびその後のマグマオーシャン固化過程において塩素が表層物質、例えば原始地殻や大気海洋に濃集したことを強く示唆する。従って、地球表層の塩素枯渇は塩素に富んだ表層物質が宇宙環境に失われたことを示す地球化学的証拠になりうると考えている。現在、鉱物ーケイ酸塩メルト間の塩素分配についても追加実験を行っており、これについても論文にまとめて学術雑誌に投稿する予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は金属液滴とケイ酸塩メルト間の塩素分配係数を実験的に求めるということを行った。具体的には温度と圧力に対して分配係数がどのように変化するのかを明らかにし、任意の温度圧力条件に適用可能な塩素分配係数のスケーリング式を構築した。このスケーリング式を先行研究から見積もられている地球の核ーマントル分離条件に適用した結果、塩素は核には取り込まれず、ほとんどがマントルに分配されることが明らかとなった。本研究の成果は地球表層の塩素枯渇の起源として地球形成期に揮発性元素である塩素に富んだ貯蔵層、おそらく原始大気海洋が宇宙空間に失われたことを示唆し、地球型惑星の大気海洋形成に重要な制約を与えるものである。この成果は日本地球惑星科学連合大会やGoldschmidtといった国内外の学会で発表され、現在論文投稿準備中である。初年度に目標としていた実験・分析をすべて終えることができ、金属液滴ーケイ酸塩メルト間の塩素分配係数について任意の温度圧力条件に適用可能な式を構築することができた。以上から概ね順調に進展していると判断した。初年度では核ーマントル分化時において塩素が核へは取り込まれないことを明らかにした。今後はこの成果を論文としてまとめ、国際学会誌に投稿する予定である。また、マントルに分配された塩素がマグマオーシャンが固化する際に固相に取り込まれるのか液相に濃集するのかについても実験的に明らかにしていく予定である。
自己免疫制御因子としてのＨＩＦ－１αと解糖系の役割

全身性エリテマトーデス様の自己免疫疾患を発症する、HIF-1α欠損キメラマウスの病態形成機序を検討した。B細胞特異的HIF-1α欠損マウスの解析より、自己抗体の産生はB細胞の分化段階の極めて初期にHIF-1αにより制御されている、あるいはB細胞以外の細胞においてHIF-1αが重要な働きをしている可能性が示された。一方、HIF-1α欠損キメラマウスで有意な増加が観察された制御性T細胞は、その生存には解糖系への依存度が低くCD2分子を介したアポトーシス促進因子Bimの減少が関与していることを明らかにした。(1)転写因子HIF-1αの骨髄B細胞における機能発現は、分化段階特異的にIL-7により制御されることを示したが、この検証をHIF-1α欠損骨髄細胞を用いて行った結果、骨髄B細胞ではIL-7によりHIF-1αが制御されていることを明らかにした。(2)HIF-1α欠損キメラマウスで観察される自己免疫が骨髄B細胞分化異常に起因するかを検討した。これまでに解糖系阻害剤2DOGにより、骨髄細胞培養でHIF-1α欠損キメラマウス骨髄でのB細胞分化と同様な表現型を再現できることを明らかにしてきた。2DOGを用いて培養した骨髄細胞を免疫不全RAG-2欠損マウスに移植してキメラマウスを作製・解析した結果、このキメラマウスでは自己抗体産生は検出されず、脾臓B細胞亜集団も正常マウスとほぼ同様であった。しかし、骨髄でのB細胞分化は、pre-B細胞分画が著しく減少したHIF-1α欠損キメラマウスと同様であった。これらの結果から、HIF-1α欠損B細胞の骨髄での分化異常が末梢B細胞の表現型及び自己抗体産生に直接関与するものではないことが示唆された。また、HIF-1α欠損キメラマウスでの、自己抗体産生と外来抗原に対する抗体産生におけるHIF-1αの役割を検討した結果、これらの抗体産生ではHIF-1αの役割が異なることが示唆された。連携研究者:橋口昌章(研究者番号20372443、獨協医科大学医学部准教授、博士(農学))、柏倉裕志(研究者番号40382890、獨協医科大学医学部助教、博士(医学))全身性エリテマトーデス様の自己免疫疾患を発症する、HIF-1α欠損キメラマウスの病態形成機序を検討した。(1)骨髄でのB細胞の発生・分化過程では、転写因子HIF-1αが液性因子によりその機能の発現が制御されていると予想しマウスの実験を行った。結果、最も未熟なpro-B細胞では、HIF-1αにより制御される分子(VEGF)の発現がIL-7により誘導され、これはHIF-1α阻害剤により抑制された。現在、HIF-1α欠損骨髄細胞を用いて確認実験を行っている。(2) HIF-1α欠損キメラマウスでは末梢にmarginal zone(MZ)型B細胞が多く出現する。これは野生型マウス同様に脾臓でのみ観察され、HIF-1αが脾臓でのB細胞の分化に関与していることを明らかにした。現在、自己抗体産生との関連を検討中である。さらに、自己抗体産生におけるHIF-1αの役割を明らかにすべく、抗体産生とクラススイッチにおけるHIF-1αの役割を探る予備実験系を立ち上げた。(3)制御性T細胞(Treg)の機能発現における解糖系等の細胞代謝の役割を検討するために、マウスTregを調整し実験を行った。その過程で新たに樹立した末梢リンパ組織由来ストローマ細胞がCD2分子依存的にTregの生存を支持することを見いだした。これにはアポトーシス促進因子Bimの発現減少を伴うことを明らかにした。また、Tregは解糖系への依存度が他のT細胞と比べて低いものの、オートファジー関連遺伝子の発現が高いことを示唆する結果を得た。さらにTregは免疫応答時の挙動が他のT細胞と著しく異なることを明らかにした。現在、これが細胞代謝の違いによるものか検討を進めている。連携研究者:橋口昌章(研究者番号20372443、獨協医科大学医学部准教授、博士(農学)、B細胞におけるHIF-1αと解糖系の解析)、柏倉裕志(研究者番号40382890、獨協医科大学医学部助教、博士(医学)、制御性T細胞におけるHIF-1αと解糖系の解析)B細胞特異的HIF-1α欠損(CKO)マウスを樹立し解析を行った。CKOマウスでは、抗体のクラススイッチの機能不全は観察されたものの、HIF-1α欠損キメラマウスで見られた自己抗体産生を伴った自己免疫現象が観察されなかった。また、CKOマウスでは野生型マウスと同様のmarginal zone B細胞とfollicular B細胞の分布を示していた。

CKOマウスではHIF-1αはB細胞分化の初期段階で欠損するが、HIF-1α欠損キメラマウスでは骨髄幹細胞ですでにHIF-1αを欠損しており、自己抗体産生及び末梢でのB細胞分化は、B細胞の分化段階の極めて初期にHIF-1αにより制御されている、あるいはB細胞以外のリンパ球においてHIF-1αが重要な働きをしている可能性が示された。また、解糖系阻害剤を用いて、解糖系への依存性が低い骨髄細胞を選択培養し、それらを免疫不全マウスに移入して免疫系の再構築を試みたところ、骨髄でのB細胞分化はHIF-1α欠損キメラマウスのそれと酷似していたが、自己抗体の産生は検出されなかったことから、分化の表現型と自己抗体産生が関連していないことが示された。一方、解糖系の依存性が低い制御性T細胞(Treg)はconventional T細胞(Tconv)に比べてATP産生が低いことを明らかにし、Tregの解糖系への依存性の低さは、エネルギー要求性の低さによる可能性を示した。しかし、脂肪酸のT細胞の活性化における役割を検討したところ、脂肪酸によりTreg依存性にTconvの活性を阻害する可能性を示唆する結果が得られ、Tregは糖ではなく脂肪酸をエネルギー源として利用し、自己免疫を含む免疫応答の制御に寄与する可能性が示された。この結果はリンパ球サブセットにおけるエネルギー代謝の違いが免疫制御の標的となる可能性を示している。連携研究者:橋口昌章(研究者番号20372443、獨協医科大学医学部准教授、博士(農学)、柏倉裕志(研究者番号40382890、獨協医科大学医学部助教、博士(医学)免疫学本研究計画では(1)正常な骨髄でのB細胞分化過程におけるHIF-1αの機能発現機序、(2)自己抗体産生B細胞分化におけるHIF-1αと解糖系の役割、(3)Tregの機能発現におけるHIF-1αとエネルギー代謝、特に解糖系の役割、の3点を明らかにすることを目標とした。二年目終了の現在、(1)に関してはIL-7など液性因子による機序を明らかにし、現在論文投稿準備中である。(2)については、HIF-1αの自己抗体を含む抗体産生が、骨髄での分化異常によるものではなく、末梢での分化過程で獲得される可能性を示す結果を得ている。これを検証するために現在B細胞特異的HIF-1α欠損マウスを用意している最中であり、もう一世代の掛け合わせで樹立されるところである。HIF-1α欠損B細胞が安定的に供給されることにより、養子免疫等により、本課題に一定の結果を得られるものと期待できる。(3)では、末梢においてTregの酸化的リン酸化への依存度がTconvよりも高いことが明らかとなった。これまで、Tconvと比べて依存度が低いものは明らかになってきたが、依存度が高い機構が初めて明らかになった。Tregの代謝の解明の突破口になることが期待できる。また、Tregが他のT細胞と比べて、免疫応答時の、代謝だけではなく、挙動が異なることを明らかにしてきている。この挙動が代謝の違いで説明できるかを検討するのは大変興味深く、次年度以降の新たな検討課題としてとらえている。以上、次年度以降への研究の進展が期待できる結果が得られている。連携研究者:橋口昌章(研究者番号20372443、獨協医科大学医学部准教授、博士(農学))、柏倉裕志(研究者番号40382890、獨協医科大学医学部助教、博士(医学))本研究計画では、1)正常な骨髄でのB細胞分化過程におけるHIF-1αの機能発現機序、2)自己抗体産生B細胞分化におけるHIF-1αと解糖系の役割、3)Tregの機能発現におけるHIF-1αとエネルギー代謝、特に解糖系の役割、の3点を明らかにすることを目標とした。
全てのHA亜型のインフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するユニバーサル抗体の作出

全亜型のA型インフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するモノクローナル抗体を作出することを目的とした。初めに、抗体作出の免疫抗原として、表面にHAstalkを持つHIV Gagウイルス様粒子を検討した。HAstalk領域をHIV Gagとともに細胞に発現させると、HAstalkは放出されたGagウイルス様粒子に取り込まれた。しかし、ウイルス様粒子を精製しても免疫必要量を得ることができなかったため、免疫抗原を精製インフルエンザウイルスに変更し検討した。免疫したマウスの脾臓を採取して細胞融合した。現在、免疫抗原とは異なる亜型のHAを使用して様々なHA亜型を認識する抗体を選別している。本研究では、全てのA型インフルエンザウイルスに有効な治療法の開発を目指して、全ての亜型のA型インフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するユニバーサル抗体を多数作出することを目的とする。HAは、血清型の違いにより、H1からH18までのHA亜型に分類される。HAはI型の膜蛋白質であり、細胞外領域は球状のhead領域と棒状のstalk領域からなる。HAはインフルエンザウイルスに対する液性免疫の主要ターゲットであり、インフルエンザウイルスの感染またはワクチン接種により、主にHAのhead領域に対する抗体が作られる。HAは免疫システムから逃れるために変異を重ねた結果、その抗原性が変化する。この血清型の違いおよび抗原性の変化がHAをターゲットとした医薬品開発の障害となっている。これまでに、複数の亜型のHAを中和するモノクローナル抗体が、ワクチン接種したヒトのメモリーB細胞・形質細胞や免疫したマウスから(わずかではあるが)分離されている。これらはHA亜型間で高度に保存されているHAのstalk領域を認識していた。さらに、全てのHA亜型(H1-H16)のstalk領域を認識し、調べた全てのHAを中和するモノクローナル抗体が1クローン分離された。これらの報告は、全HA亜型間で高度に保存されているHAstalkの免疫により、全亜型を認識し中和するモノクローナル抗体の作出が可能であることを示している。そこで本研究では、HA亜型間で高度に保存されたHAstalkを免疫し、全てのHA亜型のインフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するユニバーサル抗体を多数作出する計画である。抗体が標的とするのは、全亜型のHAでの保存領域、つまりHA機能の必須領域であるため、耐性ウイルスの出現は少ないことが予想され、インフルエンザの新たな治療法の開発につながると期待できる。これまでに、複数の亜型のHAを中和するモノクローナル抗体が、ワクチン接種したヒトのメモリーB細胞・形質細胞や免疫したマウスから、わずかではあるが分離されている。そこで本研究では、HA亜型間で高度に保存されたHAstalk領域を含む精製HA蛋白質をマウスに免疫し、抗体産生ハイブリドーマを得た。その中から、全てまたは複数のHA亜型のインフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するユニバーサル抗体を選出している。本研究では、HA亜型間で高度に保存されたHAstalkを免疫し、全てのHA亜型のインフルエンザウイルスHA蛋白質を中和するユニバーサル抗体を多数作出する計画である。その際のHAstalk領域に対するモノクローナル抗体作製の免疫抗原として、表面にHAstalkを持つHIV Gagウイルス様粒子を使用する計画である。今年度は、免疫抗原について検討した。H1亜型のA/Puerto Rico/8/34 (PR8)(H1N1)およびH3亜型のA/Hong Kong/1/68 (H3N2)のHAからhead領域をさまざまな長さで欠損させたHAstalk領域の発現プラスミドを作製した。それらプラスミドを細胞にトランスフェクションし、発現するstalk蛋白質量を比較した。

またHIV Gag発現プラスミドとともにトランスフェクションし、上清に放出されたstalk蛋白質量を比較し、条件検討を行った。ウイルス学プラスミドのトランスフェクションにより培養上清に放出されたHAstalkを持つHIV Gagウイルス様粒子を、シクロースを用いたウイルス/VLP精製法にいより精製する。マウスに免疫し、抗体産生ハイブリドーマ法を作出する。抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには、HAstalkを持つHIV Gagウイルス様粒子を抗原としたELISAと、HAを全く持たないGagウイルス様粒子を抗原としたELISAを組み合わせ、HAstalkのみを認識する抗体を選別する。その後、免疫抗原とは異なるH5亜型およびH7亜型の精製インフルエンザウイルスまたは精製HA蛋白質を抗原としたELISAにより、さまざまなHA亜型を認識する抗体を選別する計画である。次年度行う予定である、ハイブリドーマの培養、ELISAによる抗体産生ハイブリドーマのスクリーニング等には消耗品を非常に多く使用する計画であるため、次年度に使用する必要性が生じた。次年度には抗体産生ハイブリドーマ法を作出する計画である。抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには、さまざまなELISAを行う計画であり、そのためには、細胞培養液類、プラスチック器具、抗体類、試薬類など非常に多くの消耗品を使用する計画である。
ヒト透明帯タンパクの遺伝子組換法による生産と避妊ワクチンへの応用

哺乳動物の卵細胞の周囲を取り巻く透明帯は、ZPA, ZPB, ZPCの3種の硫酸化糖タンパクより構成される。いずれも(1)抗原性の強さ、(2)組織特異性の高さ、(3)受精における重要性から、避妊ワクチンへの応用が研究されているが、天然の透明帯を用いる方法では、一定の純度の製品を安定して供給することが容易ではない。また、多くのエピトープを含む抗原は副作用の危険も高い。本研究では、ヒト透明帯タンパクのひとつ(hZPA)を遺伝子組換法で大量に生産し、天然の透明帯と同様な抗原活性を保持しているか、また、対応する抗体が避妊ワクチンとしての効果を示すかどうかを検討した。本研究期間には、次の4つの項目について実験を行い、結果を得た。1,ヒト透明帯タンパクZPAは707アミノ酸から成るが、」そのアミノ末端より206アミノ酸をコードするDNAを用いて発現ベクターを構築した。大腸菌(BL21)を形質転換し、目的の組換体hZPAタンパク(r-hZPA)を合成することに成功した。封入体として生産されたr-hZPAを8M尿素で溶解し、His-tagを利用し、ニッケルカラムで精製した。2,組換体タンパク(r-hZPA)が天然の抗原性を保持していることをモノクローナル抗体を用いて確認した。また、生理的機能を保持したタンパクであることを精子への結合性を調べることにより確認した。3,r-hZPAをウサギに免疫して作成した抗血清は、ヒトのみならずブタ、ウサギの透明帯とも交差反応した。また、in vitroにおけるヒト精子の透明帯への結合を阻害した。以上より、本研究で合成に成功したr-hZPAは、ヒト、ペット、野生動物のpopulation controlに、避妊ワクチンとして応用できるペプチドであることが明らかとなった。哺乳動物の卵細胞の周囲を取り巻く透明帯は、(1)抗原性の強さ、(2)組織特異性の高さ、(3)受精における重要性から、避妊ワクチンへの応用が盛んに行われているが、天然の透明帯を用いる方法では、一定の純度の製品を安定して供給することが容易ではない。本研究の目的は、ヒト透明帯タンパクのひとつを遺伝子組み換法で大量に生産し、天然の透明帯と同様な抗原活性を保持しているか、また、対応する抗体が避妊ワクチンとしての効果を示すかどうかを検討することである。平成12年には、次の4つの項目について実験を行い、結果を得た。1,米国Jurrien Dean博士より供与を受けたヒトZP2(hZP2)タンパクをコードするDNA断片を元に、hZP2のアミノ末端より206アミノ酸を発現するベクターを構築した。大腸菌(BL21)を形質転換し、目的の組換体hZP2タンパクを1mg/ml brothの高収量でinclusion bodyとして合成することに成功した。これを8M尿素で融解し、His-tagを利用し、ニッケルカラムで精製した。2,すでに保有しているヒト透明帯に反応するモノクローナル抗体を用いて、組換体タンパクが天然の抗原性を保持していることを確認した。3,透明帯タンパクhZP2は先体反応を誘起した精子と反応することが知られているので、組換体タンパクが生理機能を維持しているかどうか、すなわち、先体反応ヒト精子が組換体タンパクに結合するか否か検討した。4,次に、組換体タンパクを完全フロインドアジュバントとともにウサギおよびマウスに免疫した所、いずれの動物においても天然のヒト透明帯と反応する抗体が産生された。そしてこれらの抗体はヒト精子の透明帯への結合をin vitroで阻害した。

哺乳動物の卵細胞の周囲を取り巻く透明帯は、ZPA, ZPB, ZPCの3種の硫酸化糖タンパクより構成される。いずれも(1)抗原性の強さ、(2)組織特異性の高さ、(3)受精における重要性から、避妊ワクチンへの応用が研究されているが、天然の透明帯を用いる方法では、一定の純度の製品を安定して供給することが容易ではない。また、多くのエピトープを含む抗原は副作用の危険も高い。本研究では、ヒト透明帯タンパクのひとつ(hZPA)を遺伝子組換法で大量に生産し、天然の透明帯と同様な抗原活性を保持しているか、また、対応する抗体が避妊ワクチンとしての効果を示すかどうかを検討した。本研究期間には、次の4つの項目について実験を行い、結果を得た。1,ヒト透明帯タンパクZPAは707アミノ酸から成るが、」そのアミノ末端より206アミノ酸をコードするDNAを用いて発現ベクターを構築した。大腸菌(BL21)を形質転換し、目的の組換体hZPAタンパク(r-hZPA)を合成することに成功した。封入体として生産されたr-hZPAを8M尿素で溶解し、His-tagを利用し、ニッケルカラムで精製した。2,組換体タンパク(r-hZPA)が天然の抗原性を保持していることをモノクローナル抗体を用いて確認した。また、生理的機能を保持したタンパクであることを精子への結合性を調べることにより確認した。3,r-hZPAをウサギに免疫して作成した抗血清は、ヒトのみならずブタ、ウサギの透明帯とも交差反応した。また、in vitroにおけるヒト精子の透明帯への結合を阻害した。以上より、本研究で合成に成功したr-hZPAは、ヒト、ペット、野生動物のpopulation controlに、避妊ワクチンとして応用できるペプチドであることが明らかとなった。
戦後日本の経済復興と経済政策

戦後経済復興のメカニズムを経済安定本部を中心として立案・実施された経済政策に焦点をあてて検討するという研究目的にしたがって、資料の収集・整理を行った。第一に、東京大学経済学部が所蔵する経済安定本部資料マイクロフィルムのうち、経済復興計画、単一為替レートの設定、産業合理化政策、産業金融政策に関連する部分をプリントし、その中に含まれる必要なデータをパソコンに入力した。第二に、東京大学社会科学研究所が所蔵するGHQ/SCAP資料マイクロフィルムのうち産業政策に関連する部分について、カード化されてるリストをパソコンに入力してデータ・ベースとしての利用を可能にした。第三に1940年代後半50年代前半の経済雑誌(東洋経済新報、経済連合、日産協月報など)から産業政策関連部分を網羅的に選択してコピーして、製本した。第四に資料発掘に努め、新たに発見された資料についてはマイクロフィルムに撮影した。以上のような資料収集・整理作業と平行して、それらの分析を進め、いくつかの分野については論文を発表ないし作成中である。第一に、戦後の産業金融システムに関して、メインバンク制を補完するさまざまな政策金融・金融規制の仕組みについて英文論文を発表した。第二に、1950年代前半に経済成長が始動するにあたっての産業合理化政策の役割について経済安定本部による長期経済計画と産業合理化審議会に焦点を当てた論文を執筆しつつある。第三に、1940年代後半の産業金融における日本銀行の役割に関する論文を執筆しつつある。
早期発症型歯周炎の病態解析と診断基準確立に向けた共同研究の企画調査

早期発症型歯周炎(Early-Onset Periodontitis;EOP)は乳歯あるいは永久歯列を有する者において、いわゆる成人性歯周炎の発症時期よりも明らかに早期に発症し、その後、急速な進行経過をたどって歯の脱落にいたる疾患である。本邦における発症頻度は欧米におけるそれと比較してかなり低いといわれているが(岡本ら0.18%)、全国規模での疫学調査報告はなく、詳細については明らかになっていない。その発症には細菌学的、免疫学的要因の関与が示唆されているが、成人性歯周炎におけるそれらと同様、単一病原細菌による特異的な疾患ではなく、複数の細菌種が関与しているという報告がほとんどであるが、欧米においては主要な原因菌としてActinobacillus actinomycetemcomitans(Aa)がもっとも注目されており、その病原因子や、病態との関連について多くの報告がある。また、宿主防御機構の異常が示唆されることから免疫機能に関係している因子についても多くの研究があり、免疫担当細胞の機能異常との関連が示唆されている。しかし、日本人早期発症型歯周炎とAa菌の関連は低いとする報告や、宿主防御機能の低下についても統一された見解は得られていない。この理由は診断に統一された基準が無く、いずれもAAPの基準を参考に独自の基準を加えて行っていることによると思われる。そこで、本企画調査では日本人における早期発症型歯周炎の病態を明らかにし、診断の一助とするために患者集団の選択、細菌検査・免疫学的検査の項目・方法を統一するための基準作りをすることが決められた。
チョウ目幼虫の耳の進化：捕食回避のための機械感覚子は生活様式に規定されるか？

ガの幼虫は、体表に点在する糸状感覚子(機械感覚子の1種)で音を検知することができる。この感覚子は気流等も検知する。この糸状感覚子は胸部に存在するが、チョウ目において糸状感覚子の数や位置が多様であると考えられる。本研究では、チョウ目を網羅する分類群における糸状感覚子の形態観察、行動実験による機能解明、そして糸状感覚子に関する系統・進化解析をおこなうことで、寄主植物における生活様式の変化によって、感覚子が発達や退化をおこしていることを検証する。当年度までにガ類及びチョウ類の幼虫を日本各地で採集し、糸状感覚子の同定並びに比較をおこなった。日本産35上科中、28上科200種以上(ガ類:26上科38科159種、チョウ類:2上科5科43種)を観察した結果、糸状感覚子を1)胸部にのみを持つ種(6上科)、2)腹部にのみ持つ種(2上科)、3)腹部と胸部の両方に持つ種(5上科)、そして4)糸状感覚子を欠く種(15上科)がみられた。チョウ目の約98%の種を含む二門類では糸状感覚子を持つ種が多く多様性に富んでいたが、二門類以外(より原始的な分類群)では糸状感覚子を欠く種が多い傾向があった。ただし、二門類においても葉などのシェルターに隠れて生活する内部食の種で糸状感覚子を欠く傾向があった。チョウ目幼虫において、内部食から植物体外に出て摂食する外部食へと進化してきたとされている。その過程で糸状感覚子を発達させ、天敵に対する防衛を進化させてきた可能性が高い。8上科200種以上を観察し、糸状感覚子の多様化のパターン(胸部のみ、腹部のみ、胸部と腹部、なし)を特定できた。その過程で糸状感覚子を発達させ、天敵に対する防衛を進化させてきた可能性が高いことが、内部食の種で糸状感覚子を欠く傾向から示唆された。チョウ目複数分類群において、糸状感覚子が未同定の複数種における観察をおこなう。そして、これまで観察された感覚子の多様化のパターン(胸部のみ、腹部のみ、胸部と腹部、なし)と、幼虫の生活様式(内部食、外部食)や捕食に関して、系統関係を参照した解析をおこない、糸状感覚子の多様化と寄主植物における生活様式との関係性を明らかにする。本研究では、チョウ目を網羅する分類群における糸状感覚子の形態観察、行動実験による機能解明、そして糸状感覚子に関する系統・進化解析をおこなうことで、寄主植物における生活様式の変化によって、糸状感覚子が発達や退化をおこしていることを検証する。今年度は、ガ類の幼虫を対象として、日本各地で採集し、気流を感知する糸状感覚子の同定を試みた。ヤガなどの25上科において多数種の個体を観察した結果、胸部の第1-3節に存在する糸状感覚子により気流を感知する種が最も多く存在した。さらに腹部の単数または複数の節において糸状感覚子を持つ種もあった。それらの数や配置等は上科間そして上科内においても多様であり、また糸状感覚子の形態にも変異が見られた。これらの変異は生活様式に規定されると推察され、今後さらなる系統・進化解析をおこなう。さらに、オオシモフリスズメ(カイコガ上科)の幼虫は、腹部の気門から空気放出することで、防衛のために発音することを示した。オオシモフリスズメの幼虫は、捕食者であるクロカタビロオサムシ成虫に対して、頭突き、吐き戻し、発音による防衛をおこない、特に頭突きがクロカタビロオサムシの攻撃を阻止するのに有効であった。ガ類の幼虫25上科において、糸状感覚子が胸部の第1-3節と腹部の単数または複数の節にあることが特定された。これらの変異は生活様式に規定されると推察される。また、オオシモフリスズメの幼虫は、頭突きや発音による防衛をおこなっていた。

チョウ目の約98%の種を含む二門類では糸状感覚子を持つ種が多く多様性に富んでいたが、二門類以外(より原始的な分類群)では糸状感覚子を欠く種が多い傾向があった。ただし、二門類においても葉などのシェルターに隠れて生活する内部食の種で糸状感覚子を欠く傾向があった。チョウ目幼虫において、内部食から植物体外に出て摂食する外部食へと進化してきたとされている。その過程で糸状感覚子を発達させ、天敵に対する防衛を進化させてきた可能性が高い。8上科200種以上を観察し、糸状感覚子の多様化のパターン(胸部のみ、腹部のみ、胸部と腹部、なし)を特定できた。その過程で糸状感覚子を発達させ、天敵に対する防衛を進化させてきた可能性が高いことが、内部食の種で糸状感覚子を欠く傾向から示唆された。チョウ目のうちチョウ類において、糸状感覚子の形態観察、行動実験による機能解明をおこなう。そして、チョウ目全体の糸状感覚子に関する系統・進化解析をおこなうことで、寄主植物における生活様式の変化によって、感覚子が発達や退化をおこしていることを検証する。特に、糸状感覚子の分布が生活様式や捕食回避等に規定されるかどうかに注目するチョウ目複数分類群において、糸状感覚子が未同定の複数種における観察をおこなう。そして、これまで観察された感覚子の多様化のパターン(胸部のみ、腹部のみ、胸部と腹部、なし)と、幼虫の生活様式(内部食、外部食)や捕食に関して、系統関係を参照した解析をおこない、糸状感覚子の多様化と寄主植物における生活様式との関係性を明らかにする。計画していた物品が、別の手法によって代用可能であったため、購入をとりやめた。その余剰分について、来年度には研究成果報告のための打合せや、サンプル採集のための旅費として計上する。森林総合研究所において、計画していた物品購入は、当初の計画よりも5種以上の実験が結果が得られたことから不要となり、一部をとりやめた。余剰分について、来年度には研究成果報告のための打合せや、サンプル採集のための旅費として計上する。
ネットワーク社会に有用な「覚え易く、忘れにくく、更に覗き見にも強い画像認証方式」

本研究は、人間の認知の特性である「スキーマ」の仕組みを利用することで、ユーザの記憶負荷軽減と覗き見攻撃の困難化という、矛盾する課題を両立させ得る画像認証方式を実現するものである。本方式の最大の特徴は、オリジナル画像の代わりに、オリジナル画像に対して不鮮明化処理を施した一見無意味な画像(以下,不鮮明化画像)をパス画像として使用することにある。人間は画像を記憶することに優れているが、それは有意味な画像を記憶する場合に限ってのことであり、無意味に見える(意味を言語化できない)画像を記憶することは難しい。ゆえに、他人のパス画像(不鮮明化画像)を覗き見て記憶することは、攻撃者にとって困難な作業となる。一方、正規ユーザにはパス画像登録時に不鮮明化画像とともにオリジナル画像を見ることが許される。これにより、正規ユーザの脳の中でオリジナル画像と不鮮明化画像の両者が関連付けられ、正規ユーザは不鮮明化されたパス画像の意味を簡単に認識することができる。本研究期間においては、特に、覗き見耐性の強化、囮画像の自動生成、利便性の向上の観点から、不鮮明化画像を用いた認証方式を深化させる。本方式の最大の特徴は、オリジナル画像の代わりに、オリジナル画像に対してモザイク化等の不鮮明化処理を施した一見無意味な画像(以下,不鮮明化画像)をパス画像として使用することにある。人間は画像を記憶することに優れているという特性を有するものの、それは有意味な画像を記憶する場合に限ってのことであり、無意味に見える(意味を言語化できない)画像を記憶することは難しい。本年度は、「画像認証のワンタイム化」や「囮画像の自動生成」など、不鮮明化画像を利用するというメリットを最大限に活用することによって得られる画像認証システムの安全性・利便性の強化に関する萌芽的なアイデアを種々創出した。その分、中期的な認証実験の実施、および、認証システムの自動化に関する具体的検討のために時間をまわすことが難しい状態であったため、これらに関しては次年度の研究に引き継ぐ。本年度は、本人確認に画像を用いる画像認証だからこそ可能であるユーザ認証の拡張の一つとして、従来の「ユーザがPCにログインする際の(一度きりの)本人確認」手段であった画像認証を「ユーザがPCを使用している間、常時本人確認をし続ける」野いう方法に改良する方法を模索した。

本方式の最大の特徴は、オリジナル画像の代わりに、オリジナル画像に対してモザイク化等の不鮮明化処理を施した一見無意味な画像(以下,不鮮明化画像)をパス画像として使用することにある。人間は画像を記憶することに優れているという特性を有するものの、それは有意味な画像を記憶する場合に限ってのことであり、無意味に見える(意味を言語化できない)画像を記憶することは難しい。ゆえに、他人のパス画像(不鮮明化画像)を覗き見て記憶することは、攻撃者にとって困難な作業となる。一方、正規ユーザにはパス画像登録時に不鮮明化画像とともにオリジナル画像を見ることが許される。これにより、正規ユーザの脳の中でオリジナル画像と不鮮明化画像の両者が関連付けられ、正規ユーザは不鮮明化されたパス画像の意味を簡単に認識することができる。ここで問題となるのが、画像の不鮮明度である。不鮮明化の強度が低いと、スキーマを持たない攻撃者も不鮮明化画像からオリジナル画像が類推できてしまう。よって本方式は、ユーザにある程度以上の不鮮明化画像に対する認識能力を要求する。そこで本年度は、オリジナル画像を類推するというタスクに対し、不鮮明化の強度をどこまで高めることができるかを競うようなゲームを提供することにより、ユーザが楽しんで自らの不鮮明化画像認識能力を高めるような仕組みを実現するという方法を模索した。本研究は、人間の認知の特性である「スキーマ」の仕組みを利用することで、ユーザの記憶負荷軽減と覗き見攻撃の困難化という、矛盾する課題を両立させ得る画像認証方式を実現するものである。本方式の最大の特徴は、オリジナル画像の代わりに、オリジナル画像に対して不鮮明化処理を施した一見無意味な画像(以下,不鮮明化画像)をパス画像として使用することにある。人間は画像を記憶することに優れているが、それは有意味な画像を記憶する場合に限ってのことであり、無意味に見える(意味を言語化できない)画像を記憶することは難しい。本年度は、最終年度であることに鑑み、不鮮明化画像を用いることによって得られるメリットの総括を行った。具体的には、覚えやすさと覗き見耐性の両立、囮画像生成の容易化、不鮮明化の強度のコントロールによるユーザ認証へのエンターテイメント性の注入、パス画像に対するプライバシ保護、等が挙げられる。また、本研究を通じて得られた「画像解析に関する人間の認知処理能力に関する知見」を、他のセキュリティ技術に応用することも模索した。その中で、4コマ漫画や3次元コンピュータグラフィクス画像を利用したCAPTCHA(人間と機械を識別するチューリングテスト)に関する有用な成果が得られた。人間の認知特性を利用した画像認証に対して、ゲームに対するインセンティブという人間の心理を導入することによって、不鮮明画像認証方式を更に進化させるアイデアの着想へと至った点は、当初の計画以上の進展である。ただし、そこに時間が費やされた分、不鮮明化画像に認知に関する実証実験の時間が少なくなってしまった。両者を総合すると、達成度は「概ね順調に進展している」に区分されると考える。
エンドセリン誘発収縮に関与する新しい因子の検索とそのクローニング

エンドセリン(ET)による血管平滑筋収縮の機構については、かなり以前にホスホリパーゼCの活性化によるイノシトールトリスリン酸産生増加によるカルシウムイオン放出と、電位依存性カルシウムチャネルの活性化による外液カルシウムイオン流入が重要であることを指摘した。しかしこれらの系はいずれもET濃度が高い時におこる現象であり生理的なET濃度ではおこりにくいことがわかった。さらに生理的なET濃度では非選択的カチオンチャネルが活性化されこれを通ってカルシウムイオンの流入がおこることがわかった。これがET誘発血管収縮の重要な機構と考えられる。本年度はこのチャネルのcDNAクローニングを試み、いくつかのクローンの採取した。現在そのクローンを検討中である。さらに本年度はエンドセリン受容体の構造とそれにカップルするG蛋白質の検討を行った。その結果GαsはET_Aの第二細胞内ループに、GαiはET_Bの第三細胞内ループに、またGαqは両ET受容体のC末端部に結合することがわかった。それぞれのG蛋白質は異なった構造に結合することがわかった。しかし、それぞれのG蛋白質のcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせ、細胞内のG蛋白質レベルを上昇させるとGαsもET_Bに、GαiもET_Aにカップルすることがわかった。これらの事実はET受容体のサブタイプのはGαs,GαiそれぞれのG蛋白質に対する親和性の差で説明出来ると思われる。本年度はまずエンドセリンの血管収縮の作用機序について検討した。ET-1刺激により細胞内の遊離カルシウムイオン濃度は一過性に上昇後一定の濃度で長時間持続する。この一過性の相は細胞内カルシウムプールに由来し、後の持続相は外液のカルシウムイオンの流入による。しかし、ET-1の受容体への結合速度は遅いため、低濃度でのエンドセリン誘発血管収縮には細胞内カルシウムプール由来の一過性のカルシウムイオン上昇より外液のカルシウムイオン流入の方が重要である。そこでどのチャネルがこのカルシウムイオンを透過させるかを検討した。ブタ冠動脈平滑筋では、エンドセリンは比較的高濃度で電位依存性カルシウムチャネルを開くことが示された。一方エンドセリン受容体および電位依存性カルシウムチャネルを持たないラットL細胞にヒトETA受容体cDNAをトランスフェクトしET-1で刺激、電流をwhole cell patch clamp法で測定した。その結果ET-1で刺激すると内向き電流が増加すること、外液のナトリウムイオンをN-メチル-D-グルカミンにかえてもこの内向き電流増加は存在しメフェナム酸によって完全に抑制出来ることから、エンドセリンによって非選択的カチオンチャネルが開口し外液カルシウムイオンが流入することが示された。実際ウサギ大動脈リング標本にエンドセリンで誘発された収縮をメフェナム酸がある程度抑制する。これにニカルジピンを加えると相加的にこの収縮を抑制した。一方一酸化窒素による平滑筋弛緩のメカニズムを検討するためにまずニトロプルシッドによる血小板の細胞内カルシウムイオン濃度の検討を行った。ニトロプルシッドによって細胞外からのカルシウムイオン流入が抑制された。このメカニズムをさぐるためcGMPによってリン酸化される蛋白質の解析、およびカルシウムインフラックスに影響を与える因子について検討中である。
シャペロニンの機能発現の速度論

本研究では,ストップトフロー蛍光スペクトルとストップトフローX線小角散乱の速度論的手法を用いて,シャペロニンの作用の分子機構を明らかにすることを目標とする。以下の成果が得られた。1.最近まで,大腸菌シャペロニンGroELのアロステリック転移の速度論に関しては,定性的な実験結果を基に互いに矛盾した複数のモデルが提出されていたため,混乱が続いていた。特に,もともとこの系のアロステリック転移の提唱者であったHorovitz等が転移の可逆性に関する誤った取り扱いをもとに,転移には複数の並行経路が存在し,遷移状態はATP非結合下で安定なT状態に類似していると報告したため,この混乱に拍車をかけることになった(PNAS99:14095(2002))。そこで,今回,われわれはストップトフロー・ダブルジャンプ法を用いて,アロステリック転移の可逆性に関するHorovitz等の取り扱いの誤りを指摘し,アロステリック転移が速度論的MWC(Monod=Wyman-Changeux)モデルで表され,遷移状態はATP結合下で安定なR状態に類似していることを明らかにした。2.超好熱性古細菌Thermococcusi sp.strain KS-1のグループIIαシャペロニンについて,その野生型とヘリックス突出欠損変異体のATPによる構造転移を蛍光スペクトルとX線小角溶液散乱により調べた。その結果,ヘリックス突出が,変性した標的蛋白質との結合にとって必要というよりは,むしろATPによる構造転移にとって重要であり,そのような構造転移が標的蛋白質のフォールディングを介助していることがわかった。
造礁サンゴ類のタンパク性機能分子に関する研究

昨年度,アナサンゴモドキから単離した細胞毒性物質(MCTx-1)はL1210マウス白血病細胞に対する活性強度(IC_<50>値)は79ng/mLであり、過去に報告されている海産生物由来の細胞毒性低分子化合物と比較しても遜色のない強い活性を有していた。ザリガニに対する致死毒性(腹腔内投与)のLD_<50>値は106μg/kgであった。単離したMCTx-1の部分アミノ酸配列を基にcDNAクローニングを行1い、MCTx-1をコードする全塩基配列および全演繹アミノ酸一次配列を明らかにした。相同性検索の,結果、MCTx-1はdermatopontinファミリーに属する新規タンパク質毒素であることが明らかとなった。Dermatopontinは当初哺乳類の表皮からデコリンなどと共に細胞外マトリックスとして単離されたがその機能の詳細については不明点が多い。今回、単離・構造決定されたMCTx-1は毒として機能することが示された初めてのdemmtopontinである。また,アナサンゴモドキから刺胞を取り出す際に得られた上清に含まれるオレンジ色の色素画分はUV照射により赤色蛍光を示した。この色素をゲルろ過HPLCに供し、色素タンパク質(分子量約15kDa)を単離した。単離した色素タンパク質のN末端アミノ酸配列を解析し、得られたアミノ酸配列を基に、cDNAクローニングを行った。その結果、色素タンパク質の全塩基配列および演繹アミノ酸一次配列を決定した。その結果,本タンパク質は新規なペリディニンクロロフィルa結合タンパク質(PCP:peridinin-chlorophyll a protein)であることが明らかとなった.刺胞動物のアナサンゴモドキ類は,日本では奄美大島以南,沖縄諸島などに生息している.これらはいずれも強い刺胞毒を有しており接触により激しい刺傷症状をもたらすことからfire coral,火炎サンゴとも呼ばれている.今までに,イタアナサンゴモドキ類から溶血活性タンパク質の単離が報告されているものの、刺傷被害を引き起こす原因毒の化学的性状に関してはいまだ不明な状況である.そこで,今回沖縄で採取した細枝状のアナサンゴモドキのタンパク質毒素の性状解明を目的として研究を行った.冷凍アナサンゴモドキから刺胞を取り出す際に、共生藻の存在が邪魔をした。しかし、各種刺胞単離法を検討した結果、処理する溶媒や遠心分離法などを工夫することにより、刺胞のみの単離に成功した。また、刺胞からの極めて効率のよい粗毒抽出法も見出すことができた。予備実験の結果、その粗毒溶液中には溶血活性や細胞毒性などさまざまな活性を示す複数のタンパク質性の化合物が存在することが明らかとなった。まず、溶血活1生を示すタンパク質毒素の精製に着手した。各種クロマトグラフィーなどを用いて精製条件の検討を行い、最終的に分子量約10万のタンパク質を溶血活性を保持したまま単離することに成功した。ペプチドフラグメントを行った結果、一断片の配列のみを決定することができたが、その配列は既知のタンパク質とは相同性を示さず、新規な活性タンパク質であることが示された。また、細胞毒性を示すタンパク質毒素についても精製を行った。各種クロマトグラフィーなどを行った結果、分子量約2万のタンパク質が細胞毒性物質として単離された。現在、ペプチドマッピングを行い、複数のペプチド断片について配列の解析が終了し、詳細な全遺伝子の配列解析を行っている。この細胞毒性物質についても新規なタンパク質であることが判明した。その結果,本タンパク質は新規なペリディニンクロロフィルa結合タンパク質(PCP:peridinin-chlorophyll a protein)であることが明らかとなった.
脳内ペプチドによる胃酸分泌調節の研究

ラットで、片側の迷走神経背側核にガストリンを投与すると胃酸分泌が促進され、同核の神経細胞にガストリン感受性が存在することが判明した。ガストリンを左右の核に同時投与すると、片側投与と比較して、より大きな分泌促進反応が誘発された。しかし、反応の開始と持続時間は変化しなかった。また、片側投与で無効の用量でも両側への同時投与で相加的促進反応が得られた。これらの観察は、左右核に分泌反応の強さと反応閾値を変調する神経回路が存在することを示している(投稿準備中)。一方、片側投与のオキシトシンは胃酸分泌を抑制することから、同核細胞のオキシトシン感受性が明らかとなった。両側への同時投与は、片側投与と比較して、反応の強さ、開始と持続時間を変えなかった。片側投与で無効の用量を両側に投与してもより強い分泌抑制効果は得られなかった。従って、両核の機能相間の存在は否定された。これらの所見と組織学的検索から、迷走神経背側核にペプチド感受性細胞が存在し、異なる方向性を示す分泌調節系を中継するとの確信を得た(投稿準備中)。延髄核間で、迷走神経背側核と孤束核の機能相関を調べる目的で孤束核を破壊しても、迷走神経背側核投与のガストリンとオキシトシン由来の胃酸効果は影響を受けなかった。すなわち、内臓からの入力神経信号はこの胃酸分泌系に関与しないと理解された。雌動物の卵巣による修飾特性を求める系は、低血糖下で基礎胃酸分泌量の分散が大きく判定方法を含めて改良のための時間を費やした。測定系全般の見直しを迫られているが、基礎的資料は報告した(発表)。本研究はグルコース代謝とペプチド活性発現であるが、得られた所見の大枠は総説として発表した(印刷中)。更に、胃酸分泌を補完する胃運動に対する脳内の回路特性に関する知見も得た(発表)。ラットでガストリンを左右の室傍核に同時投与すると、片側投与と比較してより強い胃酸分泌の促進が誘発されたが反応開始時間は変化なく、持続時間は相加的に延長し、両側の核間の相互作用の存在が明らかとなった。また、片側投与では無効用量でも両側同時投与では有意な促進反応が得られたことから核間の双方向に反応閾値を調節する神経回路の存在も示唆された(投稿中)。しかし、オキシトシンでは、胃酸分泌の抑制は再現されるが反応開始時間、持続時間は変化なく、片側投与では無効用量を両側同時投与しても有意な反応が得られず両核間の相互作用は否定された。これらの所見と組織学的検索から、同一細胞が異なる方向性を示す分泌調節能を発揮するとの確信を得た。ペプチドの種類により両核間の相互作用が出現することも見出された。この系の延髄中継核では孤束核の右側回路の優位性も明かとなった(投稿中)。ガストリンとオキシトシンに関する結果から室傍核では同一神経細胞が複数のペプチドに応じて作動し胃酸分泌を促進あるいは抑制の方向に導くとの仮説の裏付けが得られた(総説として投稿中)。この点に関し、組織学的対応からも確認できた。こうした室傍核のペズチド感受性細胞はペプチドの種類によって左右の室傍核間に相互作用を有しており、作用の切り替えの要因のひとつが血中グルコース濃度であることも突き止めた。この反応系は延髄の中継核を介して引き起こされるが、優先回路もペプチドの種類によって異なることも明かとなった。雌動物の卵巣による修飾特性を求める系は、インスリン低血糖下で基礎胃酸

分泌量の分散が大きく単純な効果の判定は困難であり判定方法を含めて改良を要するが基礎的資料はまとめた(印刷中)。胃酸分泌を補完する胃運動に対する延髄レベルでの回路特性に関する知見も得た(発表)。ラットで、片側の迷走神経背側核にガストリンを投与すると胃酸分泌が促進され、同核の神経細胞にガストリン感受性が存在することが判明した。ガストリンを左右の核に同時投与すると、片側投与と比較して、より大きな分泌促進反応が誘発された。しかし、反応の開始と持続時間は変化しなかった。また、片側投与で無効の用量でも両側への同時投与で相加的促進反応が得られた。これらの観察は、左右核に分泌反応の強さと反応閾値を変調する神経回路が存在することを示している(投稿準備中)。一方、片側投与のオキシトシンは胃酸分泌を抑制することから、同核細胞のオキシトシン感受性が明らかとなった。両側への同時投与は、片側投与と比較して、反応の強さ、開始と持続時間を変えなかった。片側投与で無効の用量を両側に投与してもより強い分泌抑制効果は得られなかった。従って、両核の機能相間の存在は否定された。これらの所見と組織学的検索から、迷走神経背側核にペプチド感受性細胞が存在し、異なる方向性を示す分泌調節系を中断するとの確信を得た(投稿準備中)。延髄核間で、迷走神経背側核と孤束核の機能相関を調べる目的で孤束核を破壊しても、迷走神経背側核投与のガストリンとオキシトシン由来の胃酸効果は影響を受けなかった。すなわち、内臓からの入力神経信号はこの胃酸分泌系に関与しないと理解された。雌動物の卵巣による修飾特性を求める系は、低血糖下で基礎胃酸分泌量の分散が大きく判定方法を含めて改良のための時間を費やした。測定系全般の見直しを迫られているが、基礎的資料は報告した(発表)。本研究はグルコース代謝とペプチド活性発現であるが、得られた所見の大枠は総説として発表した(印刷中)。更に、胃酸分泌を補完する胃運動に対する脳内の回路特性に関する知見も得た(発表)。
長波長ESRによるヘム鉄蛋白の触媒作用の研究

油回転眞空ポンプとピラニイ眞空計を用いることにより試料の温度を1.4Kまで下げることができ、本格的な試料の測定を始めた。前回報告したように試料の変性がときどきおこるので、先ず入=3cm即ち10000【MH_2】でESRを行い、試料が酸化状態のチトクローム【C_3】であることを確認した。試料は多いほど望ましいが今回は9mgを使用した。測定は20-50【MH_2】で行われた。このような長波長では測定器の感度が一番問題になるが、0.3mgのDPPHの測定によって、1.5Kでは、試料の吸收線の巾が極端に広くなければ感度は充分であることをたしかめた。4.2Kでは測定器はかなり安定であったが、1.5Kまで温度を下げると、回転ポンプの振動等の故か、安定度はかなり下った。又熱伝導度を考慮して、液体ヘリウム中での試料測定回路は非磁性のステンレス鋼を使用しているが、この一部が低温で強磁性になるためか、測定回路のバランスが、磁界、10エルステッド以下でくずれることもわかった。磁界は勵磁電流を微少直流電圧計で読み、積算された信号は記録計で記録した。例えば、39.9【MH_2】,温度1.4Kでの測定では、吸收線とみとめられるものはなかった。測定器の感度から推定して、もし吸收線が、交換相互作用等でなんらかのnarrowingをうけていれば前述のように感度は充分あるが、認められなかった事実は少くとも吸收線の巾が、50エルステッドを超えていると推定される。この事実はチトクローム【C_3】では、交換相互作用は比較的小さく、dipolar broadningが吸收線の巾をきめていると云え、我々がメスバウア効果から期待した事象は強くは生じていないと決論される。