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金融市場危機下のドイツにおける「雇用の奇跡」の社会構造分析

リーマンショック後ドイツは雇用を急速に回復した。この要因をハルツ改革とする声があるが反対論もある。本研究は実態調査のため国際化するドイツ資本主義の社会構造分析を行い、次の結果を得た。(1)ユーロ導入がドイツ経済の優位化を固定したことと今世紀初めからの賃金抑制の継続とが、雇用に対する余裕を生み出した。(2)その前提は協約自治の弱体化戦略にあり、非典型雇用の増加、協約の個別企業対応への緩和に加えて、ハルツ改革もその一手段であった。それゆえ、その外観にもかかわらず、ドイツ労働市場には多様な問題が発生している。本年度の調査は,2期にわたって行った。第1期は,9月に行った。本体チームは金融危機下のドイツでの雇用回復の社会的枠組を捉えることを目的に,ドイツ社会の主要組織(経済界系のドイツ経済研究所,労働組合系のドイツ経済社会研究所,左翼党本部)において,グローバル化と戦後の従来型の労働市場と労使関係の変化,金融危機の影響ついて,それぞれの見解を調査した。EUで「ひとり勝ち」の経済情勢を反映し,雇用回復が不安定雇用層の増大と同時進行したことや,協約自治制度の弱体化など,従来の「社会的市場経済」の構造転換を孕む問題点についての危機意識が弱く思えた。産業調査チームは,中小企業で雇用される労働者の処遇が生み出す社会的消費力の基盤が経済成長を支える要因であることを認識した。また,マイノリティーと雇用問題の調査チームでは,トルコ人移民受け入れ50周年の大会に参加するとともに,移民子弟が多数をしめる教育現場を訪問し,マイノリティーの社会参加と教育による貧困からの脱却の支援情況を探った。第2期は,3月に行った。連邦移民難民局において,移民労働者の動向と政府の統合プログラムの情況をインタビューした。2011年5月までの移民受け入れモラトリアムと金融危機後の影響で,当初,EU域外からの移民は,英国,北欧に集中し、金融危機後は,ポーランドなどの経済成長が進んだ地域に吸収され,ドイツに来なかった。他方,西欧の不況産業からの移民がドイツの不況産業に流入し,雇用のミスマッチが生じている。政府の統合プログラムには毎年10万人程度が教育を受け,当局は遠からず目標が達成されるとみている。その障害となるムスリムの宗教・文化習慣等については,あまり課題視されていなかった。統合問題の権威エアランゲン大学のローエ教授も,概ね楽観的な感想で,雇用の不安定化などの情況変化がマイノリティーに与える影響等については,危機感が弱いように思われた。今年度の研究成果は、以下の通りである。(1)ドイツの雇用回復の最大の社会的背景は、共通通貨ユーロを媒介としてドイツ経済の一人勝ち体制が構造的に進められていた帰結である。ユーロ導入はドイツ緒貿易黒字を永遠化するものとして作用するが、リーマンショック後、TARGET2の機能による貿易決済不安の解消とともに、再びドイツ経済の一人勝ちが安定化して、急速な雇用回復の原動力となった。(2)ドイツ企業の国際競争力はドイツの一人勝ちのための前提であるが、この生産力格差の形成に寄与したのが労賃の抑制であった。労賃抑制は、21世紀初頭の社会保障改革(ハルツ改革)による失業補助・社会補助の弱体化、協約賃金制度がカバーしない事業数の増大などで促進された。拡大EUに向けた労働力移動の国際化と外国人労働力の導入もその手段となり、その中で、縁辺労働市場を中心に雇用の非典型化が進み、雇用の不安定化と労働コスト抑制が進んだ。(時間外労働などにみられる「日本化」というべき状況が広がりつつあり、最低賃金制など法的手段を媒介とする規制の必要性が高まった。)(3)競争条件の均一化を理由にEUによるヨーロッパ・スタンダード作りが、高賃金・髙社会福祉国の賃金抑制手段として利用されており、この下で市民運動や労働運動の抑制と反転攻勢とがせめぎ合う関係を必然化することが分かった。(4)研究の理論面では、危機論を批判する理論分析、社会的ヨーロッパ論の背景にあるオルド自由主義に関する認識、EUの収奪機関としての機能への認識が進み、現在のヨーロッパは、統合に向かってのコンフリクトを形成しつつも、いわゆるヨーロッパ分裂の危機などは存在しないことが分かった。(5)共同著作「ヨーロッパと日本の支店からのグローバル化の諸問題」がドイツ語で出版された。また、平成26年度に日本語版での著作『欧州グローバル化の新ステージ』の出版を計画している。今年度の研究成果は,以下のとおりである。(1)統一通貨ユーロが,ドイツ経済の「一人勝ち」のメカニズムとして機能し,国際的収奪通貨の役割を果たしている。EUにおける利潤は「勝ち組」の国家に集約され,「負け組」の国家は経済的困難に陥っているのが,いわゆる欧州金融危機の実態である。

しかし,金融面で危機が喧伝される一方で,TERGET2(ヨーロッパ中央銀行を軸とする各国中央銀行のネットワーク)が経済的困難を調整し,危機の発現を繰り延べるシステムとして機能しており,ギリシャ危機が南欧危機に即座に転化することを防いでいる。(2)グローバル化の下でのドイツ労使関係は,従来のモデル・ドイツの質的転換を求めている。この点に関しては従来の研究は不十分であった。この構造転換に関する本研究の成果(ドイツ労使関係の理論的,実態的把握)に対して,マールブルク大学で政治学・経済学者から全面的な支持が得られた。(3)金融危機とグローバル化の日独比較に関連して,共同著作の執筆を計画し,出版の準備がととのった(ドイツ語で出版,来年度6月予定)。日本における金融危機の社会構造的分析を中心に,年度内中の日本での別冊の出版に向けた論文集になっており,日独の研究パートナーシップで,より高い理論的交流の前提となるものとなった。(4)ムスリム移民の統合とマイノリティ労働市場の調査が新たな段階に入った。昨年度の調査では,マイノリティにおける貧困・格差の再生産問題については,ドイツ連邦政府やドイツのムスリム研究者がかなり楽観的であったが,その実態を調査することで,そのような見解の問題点が鮮明になった。調査過程で,社会的統合の研究者,ムスリム女性の保護団体等の対話ができた。公益法人との対話では,強制結婚や体面殺人に直面するムスリム女性やムスリム家庭の教育の問題などについて,多くの知見を得ることができた。今年度予定していた,ドイツの雇用情勢を形成する枠組についての主要な主張については,確認できた。その他,移民労働の現状,マイノリティーの統合政策の現状などについては,最新の情報をえることができた。その結果,グローバル化の進展にともなう今後のじょ新たな調査課題を再認識できた。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成24度は調査研究の基盤となるヨーロッパ経済の理論的解明が新たな段階に入り,その結果,従来の調査の見直しと,新たな理論的課題に向けた調査計画の検討が進み,この点で,大きな飛躍があったといえる。理論的成果としては,(1)統一通貨ユーロの導入によるEUの域内・域外における利潤の還流メカニズムとドイツの「一人勝ち」のメカニズムが解明された。これまでその実態の指摘はなされても,理論的解明という点では不十分であった。今回,国際的収奪通貨ユーロという我々の分析によって,この領域の研究を新たな水準に高めることができた。さらにユーロによる利潤還流が,ドイツにおける産業の振興や雇用,賃金問題の良好さを生み出すことへ理解が深まり,ドイツの労使関係の切迫感の相対的欠如の背景への理解がすすんだ。その中でも財界戦略と雇用問題(特に不安定就業化),協約自治における労働組合の力量低下などについての統一的理解の課題が鮮明化された。(2)社会的底辺の雇用問題である移民労働とムスリムの社会的統合問題については,これまで政府の楽観的な主張を,移民の実態調査を通じて検証し,その困難さと課題を知るとともに,イスラム団体に対しても,ヨーロッパ的価値の尊重とコミュニケーション課題などを議論しあうことができた。(3)EUの行動指針である「社会的市場経済」
β細胞型ATP感受性カリウムチャネルの延髄におけるあえぎ呼吸への寄与

動物は強い低酸素状態や虚血時に低酸素誘発性のあえぎ呼吸を示す。あえぎ呼吸は意識を消失しても起こり、最低限の換気の確保により生命保護の役割を果たす。しかしあえぎ呼吸の発生および維持の分子機序は明らかではない。今回断頭による急激な虚血に際して、野生型マウスは全て10回以上のあえぎ呼吸を示したのに対してATP感受性カリウム(K_<ATP>)チャネルのKir6.2サブユニットを欠失させたノックアウトマウス(KO)は、あえぎ呼吸をほとんど示さないことが判明した。一方、類似サブユニットKir6.1の欠損マウスのあえぎ呼吸は野生型と変わらなかった。麻酔下で強い低酸素を負荷して呼吸応答を検討した結果、野生型マウスでは最初ため息(sigh)と共に呼吸活動が亢進した後(頻呼吸)、呼吸頻度が低下し(徐呼吸)、続いてあえぎ呼吸が出現し安定に持続した。これを持続性あえぎ呼吸と名づけた。更に低酸素状態が持続すると、呼吸停止の直前に、明らかに異なったパターンのあえぎ呼吸が数回出現した。このあえぎ呼吸は末期あえぎ呼吸と名づけた。KOマウスも低酸素負荷に対して野生型に類似した応答を示したが、徐呼吸、および二種類のあえぎ呼吸ともに野生型マウスより持続時間が有意に短かった。加えて無麻酔条件下では、KOマウスの末期あえぎ呼吸は常に野生型マウスより早く開始し、4.5-7%O_2の範囲の強い低酸素環境においてあえぎ呼吸の開始時点は負荷する酸素濃度を低下させても変化しなかった。これに対して野生型マウスでは負荷酸素濃度の低下に従ってあえぎ呼吸開始時点が早くなった。このようにKOマウスでは、低酸素の強さの程度に応じて低酸素応答を適切に調節するはずの機序が機能不全に陥っている事、およびKir6.2含有K_<ATP>チャネルは低酸素誘発性のあえぎ呼吸と徐呼吸について、その発生よりむしろ維持において決定的な役割を担っていることが示唆された。gasping(あえぎ呼吸)の中枢制御機構に対するATP感受性カリウムチャネルの関与を明らかにする目的で本年度は以下の実験を行った.(1)断頭実験野生型とKir6.2 KOマウスが断頭時に示すgaspingのonset、duration、回数を調べた.その結果野生型とKOマウスのいずれも第二頸髄より中枢側で断頭した場合gaspingしなかったが第2頸髄より末梢側で断頭した場合、KOマウスは野生型に比しgaspingのonsetは有意に遅く、durationは有意に短く、回数は有意に少ないなど詳細が明らかになった.(2)無麻酔下における高炭酸ガス負荷実験予備実験ではKOマウスはhypoxiaでは死亡直前までgaspingできないが、hypercapniaによるgaspingは一見野生型と変わらないように見えた。このためKOマウスはgaspingする能力はあるが低酸素応答に異常がありhypercapniaによるgaspingには異常がないと予想した。野生型とKOマウスに対して無麻酔で80%の炭酸ガスを負荷し呼吸数および呼吸周波数の経時的変化を比較したところ、予想に反しKOマウスは野生型よりgaspingの持続時間が短い傾向にあった.従ってhypercapniaによるgaspingにもATP感受性カリウムチャネルが関与する可能性が示唆された.(3)無麻酔下におけるgasping検知systemの構築従来gaspingは麻酔下での横隔神経記録により特徴づけられていたが野生型とKOマウスの低酸素誘発性gaspingを比較する際には手術侵襲や挿管による影響を一定にできない問題点があった.そこで無麻酔のマウスを呼吸を抑制しない程度に拘束し、gaspingによる振動をピエゾ素子で、マウスの呼気をCO_2センサーを用いて検出するsystemを作成した.これにより独自に無麻酔下で低酸素条件下のgaspingを定義することが可能になった。gaspingの中枢制御機構に対するATP感受性カリウムチャネルの関与を明らかにする目的で以下の実験を行った.(1)無麻酔下における低酸素負荷実験昨年度作成したgasping検知systemを用い、野生型とKir6.2KOマウスが低酸素負荷時に起こす呼吸応答を比較した.酸素濃度が8%以上では両者ともgaspingしないため低酸素負荷は4-7%で行った.またKir6.2KOマウスは無麻酔で急激に5%付近で低酸素負荷されると全身痙攣を起こし死亡するため低酸素負荷はゆっくり行った.呼吸間隔が0.8秒以上をgaspingと定義し、onsetとdurationを比較するとonsetはKOでは酸素濃度に依存しないのに対し、WTではO_2濃度を下げるに従って早くなり両者は4%付近で一致した。durationは両者とも酸素濃度との間に明確な相関はないが、WTで有意に長かった(WT:93秒、KO:21秒)。無麻酔の実験から低酸素によって起こるgaspingの開始にも維持にもKir6.2の関与が示唆されるがそれは4-7%の間であることが分った.(2)麻酔下における低酸素負荷実験独自に作成したsystemで検知する呼吸パターンをphrenic nerve activityで定義づけた。ウレタン麻酔下の野生型マウスをpiezo素子つきヒーター上で体温を一定に維持し、気切挿管後phrenic nerveを剖出して気管カニューレはサーミスタセンサーと呼気ガスモニターを装着したプラスチックチューブに接続した.これら4通りに呼吸が検知できる状態で酸素濃度が4.5-5%の酸素95%窒素混合ガスを気管tubeに接続したプラスチックチューブから負荷し、gaspingさせてpiezo素子で記録し、そのパターンがphrenic nerve activityと一致することを確認した。これによって独自にgaspingを定義できた.

動物は強い低酸素状態や虚血時に低酸素誘発性のあえぎ呼吸を示す。あえぎ呼吸は意識を消失しても起こり、最低限の換気の確保により生命保護の役割を果たす。しかしあえぎ呼吸の発生および維持の分子機序は明らかではない。今回断頭による急激な虚血に際して、野生型マウスは全て10回以上のあえぎ呼吸を示したのに対してATP感受性カリウム(K_<ATP>)チャネルのKir6.2サブユニットを欠失させたノックアウトマウス(KO)は、あえぎ呼吸をほとんど示さないことが判明した。一方、類似サブユニットKir6.1の欠損マウスのあえぎ呼吸は野生型と変わらなかった。麻酔下で強い低酸素を負荷して呼吸応答を検討した結果、野生型マウスでは最初ため息(sigh)と共に呼吸活動が亢進した後(頻呼吸)、呼吸頻度が低下し(徐呼吸)、続いてあえぎ呼吸が出現し安定に持続した。これを持続性あえぎ呼吸と名づけた。更に低酸素状態が持続すると、呼吸停止の直前に、明らかに異なったパターンのあえぎ呼吸が数回出現した。このあえぎ呼吸は末期あえぎ呼吸と名づけた。KOマウスも低酸素負荷に対して野生型に類似した応答を示したが、徐呼吸、および二種類のあえぎ呼吸ともに野生型マウスより持続時間が有意に短かった。加えて無麻酔条件下では、KOマウスの末期あえぎ呼吸は常に野生型マウスより早く開始し、4.5-7%O_2の範囲の強い低酸素環境においてあえぎ呼吸の開始時点は負荷する酸素濃度を低下させても変化しなかった。これに対して野生型マウスでは負荷酸素濃度の低下に従ってあえぎ呼吸開始時点が早くなった。このようにKOマウスでは、低酸素の強さの程度に応じて低酸素応答を適切に調節するはずの機序が機能不全に陥っている事、およびKir6.2含有K_<ATP>チャネルは低酸素誘発性のあえぎ呼吸と徐呼吸について、その発生よりむしろ維持において決定的な役割を担っていることが示唆された。
1920年代における反理論に関するメディア受容の研究

2018年度は、(I)『文芸戦線』における反理論の論争と(II)農民たちによる運動と反理論について、資料の収集と分析を進めた。(I)については、雑誌『文芸戦線』における、同人の中西伊之助から提起されたマルクス主義者たちの理論への批判と論争を中心にしつつ、『文芸戦線』の全発行期の必要となってくる資料について調査と分析を行った。(II)については、雑誌『農民自治』における、読者や運動の支持者たちの反理論的態度を中心にしつつ、必要となってくる資料についての調査と分析を行った。加えて、2019年度の研究を見据えて、渋谷定輔の日記原本の分析にも一部着手し始めた。これらの研究成果として、下記のものがある。2018年4月のメディア史研究会第283回月例研究会(立教大学)において、「戦前期における渋谷定輔の出版活動ー『農民自治』の創刊と廃刊への道程」として報告を行った。2018年5月の「近代日本の日記文化と自己表象」第16回研究会(明治学院大学)において、「戦前の農民運動家・渋谷定輔日記原本と往復書簡ー理論と反理論の行方」として報告を行った。こうした研究報告を踏まえつつ論文を執筆し、日本出版学会に査読論文として投稿した。この論文は、「雑誌『農民自治』と渋谷定輔の社会運動ー農民における理論と反理論の相克」として、『出版研究』49号(印刷中)に掲載されることが決定している。また、今年度の研究成果の一部を踏まえて、博士予備審査論文の執筆を行った。2019年3月に二次予備審査が実施され合格となった。資料調査は順調に済んでおり、分析にも取り組めている。また、2019年度に本格的に取り組む渋谷定輔の日記の分析にも着手することができている。その成果として、研究報告を2つ行い、査読論文を1つ執筆した。加えて、博士予備審査論文を執筆し、審査に合格した。これらのことを踏まえ、おおむね順調に進展していると判断できる。今後については、1つは、『農民自治』の同人であった渋谷定輔の日記や書簡など渋谷定輔文庫の資料の調査と分析を進め、反理論意識の形成過程を詳細に取り扱う。もう1つは、社会運動に関係していた雑誌『文芸戦線』・『戦旗』・『労農』・『マルクス主義』における、読者と編集部の理論をめぐるやり取りを取り扱う。
種子の発育とGA供給からみたモモ果実の開花日および発育日数と品質の関係

モモ樹内の果実品質のばらつきと開花日との関係を明らかにするために、開花日の異なる果実の発育および種子発育とジベレリン生成との関係を調査した。果実の成長や糖蓄積を促進するジベレリンの生成は、胚が成長する第2期までは種子で高く、その後果肉で高まることが示された。開花日の遅い果実は、いずれも種子の占める割合が相対的に高く、第3期初めの胚乳や胚のサイズが大きかった。開花日が遅い果実は、早い果実と比べて、収穫直前まで肥大し続ける一方、果肉でスクロース合成酵素の活性が高く、糖蓄積が優れた。モモ果実の大きさや糖度は変動しやすいことが知られており、同一樹内でも品質変動が認められるが、この変動を招く要因に関して、これまで知見がほとんど得られておらず、果実品質の安定化において重大な支障となっている。そこで、樹内で開花日の差が大きいことに着目し、開花日および果実発育日数と果実品質との関係を調査するため、中生品種の'紅清水'と中晩生品種の'清水白桃'で、それぞれ樹内のいずれの部位でも開花していた5つまたは4つの日を2,3日間隔で選び、その果実をラベルして、果実肥大や収穫果の品質を調査した。その結果、開花日が異なると、果実肥大様相が大きく異なり、開花日の早い果実は肥大が緩慢となった後に収穫されたのに対し、開花日の遅い果実は肥大が収穫直前まで継続した。収穫果の果実重には大差なかったが、開花日が遅い程、果汁糖度の高い果実の割合が増加した。また、開花から収穫までの日数を示す果実発育日数で比較すると、発育日数が短い程、糖度が高くなる傾向が認められた。果汁糖度が13%以上である高糖度果と10%未満である低糖度果の間で肥大様相を比較すると、高糖度果は低糖度果と比べて第1期末以降果実肥大が優れるとともに、維管束近傍の果肉細胞が大きかったことから、糖蓄積に第1期末以降の果実肥大および果肉細胞の成長が関係した。従って、開花日が遅いと、第1期末からの果実肥大能が優れるために、糖蓄積が高まると推察された。モモ'清水白桃'において、第2期のジベレリン含量を調査したところ、胚の大きさと種子中ジベレリン含量との間に正の相関が認められ、胚の成長が良好な区では、第2期に生理的落果の発生が少なく、果実発育第3期に早く移行した。これらのことから、種子の発育が良好に進むことは、ジベレリンの生成を介して、第2期までの着果を継続するとともに、第3期以降の果肉細胞の肥大や糖蓄積に密接に関係すると考えられた。開花日が異なる果実間で、果実肥大および収穫果の品質、特に糖度への影響を調査した。本年は、開花が遅く、開花日の幅が小さかったが、前年の結果と同様に、開花日が遅いほど果実糖度が有意に高かった。いずれの開花日の果実も、果肉の糖の蓄積様相は果実発育第3期半ばから急激に変化し、スクロース含量の割合が高まったが、開花の早かった果実では、ソルビトールやスクロースの蓄積がほとんど停止していたのに対し、開花の遅い果実では、収穫適期までこれらの糖の蓄積が続いた。モモの収穫果の糖度と密接な正の相関関係を示した果肉のスクロースリン酸合成酵素の活性を開花日間で比較したところ、開花の遅い果実の方が早い果実よりも高い傾向が認められ、開花の遅い果実が高糖度となることには、糖代謝酵素活性、特にスクロース合成に関連する酵素の活性が収穫期まで高く維持されることが関係していると推察された。モモ'清水白桃'で果実発育第2期後半の種子と果肉のジベレリン含量を測定した。その結果、果実発育第2期半ばまでは、種子特に胚の初期成長に合わせて、ジベレリン含量が高まる一方、果肉ではその時期にジベレリン含量がほとんど変化しなかったが、第2期後半にジベレリン含量が急速に高くなった。このことは、第2期初めまでは種子のジベレリンによって果実発育が維持されていたのに対し、その後急激に果肉のジベレリン生成が促され、果肉のジベレリン生成能が果実への養分分配に密接に関与していることを裏付けた。以上のことから、肥大が収穫期まで継続した開花の遅い果実で、果肉のGA生成が旺盛であったとみなされ、このジベレリンによって、果実への取り込みが持続するとともに、糖代謝酵素の活性を増大させて、果実への糖蓄積が高まると考えられた。

モモの果実品質のばらつきと開花日との関係を明らかにすることを目的として、本年度は、第1に開花日が異なると、種子成長が異なり、生理的落果の発生やその後の果実発育に変化が生じることが知られていることから、バイオアッセイ法を用いて、胚の生長に基づく種子から果肉へのジベレリン供給を定量するとともに、その後の果肉自体でのジベレリン生成過程に直結していることの証明、第2に開花日が収穫果の品質に及ぼす影響の調査を継続し、普遍性があることの確認を行った。その結果、種子のジベレリン含量は、胚の生長が旺盛なほど高く果肉へのジベレリン供給が続くと考えられた。一方、果肉のGA含量は種子のGA含量が高まった時期には、胚の長さと関連が認められたが、その1週間後には胚の長さに関係なく、3倍程度に急速に高まり、ほぼ一定となった。このようなことから、種子から十分にGAが供給されると、果実肥大を再開する第3期変遷前に果肉でGAを早々に形成できるようになり、果肉に養分を収集できるようになると考えられた。一方、開花日の早い果実は、開花日の遅い果実と異なって落果したことから、種子特に胚の発育が劣りやすいことが明らかとなった。これらのことから、開花日の早い果実は、第1期の肥大は旺盛なものの、緩慢なジベレリン生成によって第2期以降の果実発育や、昨年明らかにしたように第3期の糖蓄積過程の持続が開花日の遅い果実よりも劣ることにつながったと推察された。開花日の早い果実は、収穫果の糖蓄積が劣るだけでなく、果肉障害の発生も多く果肉軟化の様相にも変化が生じることが示された。以上のように、開花日の早晩は、モモにおいて果実の糖蓄積に関して、果実肥大および種子および果肉のジベレリン生成を通して影響を及ぼすことが示唆された。開花日調査果の結実率が悪く、各開花日の果実数を十分に確保できなかったが、2品種で同様の実験を行うことで、同じ傾向を示すことや、種子の発育が優れるほど種子からのGA供給が高まり、急速な肥大を再開する前に果肉のGA含量が高まること々示すことができ、また糖度と果肉の糖代謝酵素活性との間に関連があることを明らかにすることができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。果実発育第2期に、種子発育に及ぼす開花日の影響を明らかにするとともに、果実発育第3期を中心に、開花日の異なる果実について、果実のジベレリンの定量と糖代謝酵素活性を測定して両者の関連性を明確にする。また、これらの結果をモモ栽培に活用し、果実生産の高品質安定生産にむけた技術化も進める。
会計検査院の検査基準と検査に対する権利保護に関する比較法的研究-西ドイツの場合

1.まず西ドイツにおいては、1985年に連邦会計検査院法が改正され、検査院は一層議会へ近寄せられ、今や、議会と政府の中間に立って、双方のために活動する特別の財政コントロール機関と捉えられるようになった。また、検査権限は決算の検査ばかりでなく、広く国の予算や経済の運営にまで及ぶものである。その際、検査基準としては「経済性基準」が最も重要であるが、その内容は経済学上の経済性概念によりかかっている。そのため、検査院は非常に抽象的な基準で強いコントロール権を行使するので、たとえ検査報告には法的拘束力がないにせよ、その影響力は非常に大きい。そこで検査権の限界が重要な問題となるが、最大の争点は政治的決定にたいして検査権を行使できるかどうかである。しかし西ドイツでは伝統的な検査院の非政治性のドグマに批判がなされ、経済性基準の下では原則的には政治的決定にも検査は及ぶとされ、但しそれは自制すべきことと解されている。さらに権利保護の問題については、検査報告全体を争う時は憲法争訟で、報告の部分的撤回を求める時は行政訴訟の給付訴訟で、さらに検査の通知にたいして、それを処分と捉えて行政訴訟の取消訴訟で争うことを認める判例や学説が例外的ではあれ登場してきた。しかしこれらの争訟手段のうち、行政訴訟は1985年の改正法により、検査院の検査手続には連邦行政手続法は一般的には適用されないとされたので、使用困難になったといえよう。2.日本の場合には、本研究は、憲法90条の改正なしでも、西ドイツと同じく、検査報告を政府へと同時に国会へも提出できること、また経済性基準により、決算の検査に伴って広く行政の運営にも改善要求の形式等で検査院は介入できることなどを明らかにした。以上のような研究をふまえて、今後は、アメリカやカナダおよびイギリス等の会計検査院の研究を推進したい。
部分問題を構成しつつ探索する協調分散型進化計算による知識導出

本研究では,部分問題に分割し,部分問題毎に並行して協調的にルール生成を行う新たな進化計算を提案し,提案手法を知識導出に適用する.部分問題に分割することにより多様性を維持しつつ効率的にルールを探索する.この知識導出に確率モデルを用いた進化計算である分布推定アルゴリズムを適用・拡張した.本研究では,部分問題に分割し,部分問題毎に並行して協調的にルール生成を行う新たな進化計算を提案し,提案手法を知識導出に適用する.部分問題に分割することにより多様性を維持しつつ効率的にルールを探索する.この知識導出に確率モデルを用いた進化計算である分布推定アルゴリズムを適用・拡張した.本研究では,部分問題に分割し,部分問題毎に並行して協調的にルール生成を行う新たな進化計算を提案し,提案手法をデータマイニングにおける知識導出に適用する.部分問題に分割することにより多様性を維持しつつ効率的にルール探索を行うことができることが期待される.提案手法では,精度を落とさない範囲で,世代毎に部分問題を構成する学習事例を部分問題間で複製・移動する.このことにより,探索中にルール生成に望ましい部分問題構成の最適化を行う.このように,提案手法では,集団の分割と部分集団ごとに分布推定アルゴリズムを適用して知識抽出を行う.本年度の研究成果について,それぞれの項目について説明する.前半の集団の分割については,多様体学習の適用を検討した.これは,多次元空間に学習事例が分散しているときに,次元を縮約できるアルゴリズムである.多様体学習の本質である測地距離を用いることにより適切な集団の分割ができることを示唆した.一方,ルール抽出に用いる分布推定アルゴリズムの高性能化については,分布推定アルゴリズムを強化学習問題へと適用したEDA-RLの提案を行った.EDA-RLの新奇性が認められ,進化計算の最も権威のある国際会議であるACM SIGEVO Genetic and Evolutionary Computation Conference(GECCO)の2009年の会議で最優秀論文賞が授与された.EDA-RLについては,さらに,人工知能学会研究会優秀賞(JSAI Incentive Award)が授与されることが決まった.本研究では,部分問題に分割し,部分問題毎に並行して協調的にルール生成を行う新たな進化計算を提案し,提案手法をデータマイニングにおける知識導出に適用する.部分問題に分割することにより多様性を維持しつつ効率的にルール探索を行うことができることが期待される.提案手法では,精度を落とさない範囲で,世代毎に部分問題を構成する学習事例を部分問題間で複製・移動する.このことにより,探索中にルール生成に望ましい部分問題構成の最適化を行う.前年度に集団分割の有用性を確認したので、ルール抽出に用いる分布推定アルゴリズムの高性能化に重点をおいて研究した。前年度に提案し、ACM Genetic and Evolutionary Computation Conference (GECCO)のBest Paper Awardと人工知能学会研究会優秀賞(JSAI Incentive Award)を受賞したした、分布推定アルゴリズムを強化学習問題へと適用したEDA-RLの拡張を行った。具体的には、確率モデル生成時に教師データとして用いる選択エピソード群から冗長経路を見出し、削除することにより学習速度が飛躍的に向上すること。また、カイ自乗検定により矛盾状態を検出し、矛盾を解消するための確率モデル構造探索機構を導入した。これにより、いわゆる不完全知覚問題であっても、問題解決ができるようになった。さらに、集団分割に用いた、測地距離に基づく次元縮約法である、多様体学習について、進化学習エージェントの前件部に用いることにより学習の効率化が図られることを見出した。
RAA系によるMR-pendrin系の制御機構とその病態生理学的意義の解明

本研究は前年度までに、塩分欠乏時のpendrin活性化にはアンジオテンシンII(AngII),アルドステロン(Aldo)の両者が不可欠であることを示した。また、塩分欠乏時にpendrin活性化は正常血圧維持に寄与すること、塩分充足時にpendrin活性化は低カリウム血症発症に抑制的に働くことを示し、生体内での鉱質コルチコイド受容体(MR)-pendrin系の意義について明らかにした。最終年度は、pendrin欠損マウスを用いてpendrin活性化が低カリウム血症発症に抑制的に働くメカニズムの解明に取り組んだ。Aldo感受性遠位ネフロンは、ナトリウム再吸収だけでなく、カリウム排泄にも重要な役割を果たしている。集合管主細胞においてAldoは上皮性ナトリウムチャネル(ENaC)を活性化しナトリウム再吸収をもたらし、それに伴いROMKが刺激されカリウム排泄が生じることが知られている。そこで、Aldo持続投与pendrin欠損マウスと野生型マウスの腎臓膜蛋白を用い、ENaC活性化を表すcleaved ENaCγ発現を評価したところ、pendrin欠損マウスでは野生型マウスと比較して腎髄質cleaved ENaCγ発現の増加を認めた。このことからpendrin欠損マウスではNaCl再吸収が抑制された結果、遠位へのナトリウムflowが増加したためにENaC/ROMK活性化を介してカリウム排泄が増加し、低カリウム血症の増悪を認めたものと示唆された。今後さらなる詳細を検討予定である。また、MR活性化機構及びその病態生理学的意義の解明の一環として、治療法開発が喫緊の課題である糖尿病性腎症進展におけるMRの意義についての研究も開始した。今後さらに詳細な解析を行う予定である。本研究は、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン(RAA)系による鉱質コルチコイド受容体(MR)-pendrin系の活性制御機構を解明し、更にMR-pendrin系の生体内での役割を明らかにすることを目的として取り組んできた。マウスへの低食塩食投与、また、副腎摘出マウスへのアンジオテンシンII(AngII)、アルドステロン(Aldo)投与を行い解析を行った。そしてAngIIにより脱リン酸化したMRに、Aldoが結合することではじめてpendrin発現が上昇すること、つまり、食塩欠乏時のpendrin活性化にはAngIIとAldoの両方が不可欠なことを明らかにした。次に、このMR-pendrin系の生体内意義を明らかにするため、pendrin欠損マウスを用いて血圧測定を行った。その結果、食塩欠乏によりRAA系の活性化した状態では、pendrinが血圧を正常に維持するために重要な役割をしていることが明らかとなり、ここまでの成果を論文発表した(Hirohama D, et al. Aldosterone is essential for angiotensin II-induced upregulation of pendrin. J Am Soc Nephrol 29: 57-68, 2018)。RAA系によるMR-pendrin系の活性制御機構を解明し、食塩欠乏時にpendrinが正常血圧維持に重要な役割をしていることが明らかとなり、成果をまとめて論文発表することができた。なお、MR-pendrin系がカリウム恒常性維持に重要な役割を持つことを示唆する結果も得られており、さらに解析を進める予定である。Pendrin欠損マウスでアルドステロン投与時に認められた低カリウム血症の原因検索を進め、MR-pendrin系の生体内での役割解明を目指す予定である。今年度は物品購入費が当初の予想よりも少なく済んだが、次年度はマウス維持管理費、試薬などの消耗品購入費用が増加することが予想され、その費用に充てる予定である。
複数衛星観測を用いた四次元時空間における宇宙プラズマ構造の再現

複数衛星観測のデータを用いて、宇宙プラズマの四次元時空間構造を再現する革新的なデータ解析手法を開発することを目的とした。二次元構造の時間発展を精度よく再現する手法、磁場やプラズマの三次元空間構造を二衛星観測から再現する手法、磁気リコネクションの電子拡散領域の二次元構造を再現する手法などの開発に成功した。そのうちの一手法をテミス衛星観測に適用し、地球磁気圏界面での磁気リコネクションによって形成された磁気フラックスロープが強い三次元性を持つことを発見した。2015年3月に無事打上げられたNASAの磁気圏編隊観測衛星(MMS)がもたらす高分解能データの解析に必要な手法開発は、ほぼ終了したと言える。平成25年度は、一機あるいは二機の衛星によるプラズマ・電磁場観測から、宇宙プラズマ中の三次元の時空間構造(空間三次元の定常構造や、空間二次元の非定常構造)を再現するためのデータ解析手法の核となっている数値コードの改良を行い、それを実際の衛星観測データに適用することにより情報抽出を試みた。また、三機の衛星による観測から、四次元の時空間構造を再現するために必要となる基礎方程式系の定式化を、ダートマス大学のSonnerup教授とともに行った。まず、磁気静水圧(magneto-hydrostatic)平衡の仮定の下で、一衛星観測から時間発展する二次元空間構造を再現する既存の手法を改良し、プラズマの圧縮性の効果をとりこめるようになった。これにより、太陽風中で日心距離とともに膨張していくと考えられる、磁気フラックスロープ(惑星間空間コロナ質量放出現象)などの進化を再現できるようになったのが、重要な改良点である。また、磁気静水圧平衡の仮定の下で、二衛星観測から磁場・プラズマの三次元空間構造を再現する手法を、THEMIS衛星によって地球磁気圏界面で観測された磁気フラックスロープに適用した。その結果、既存の一衛星観測から二次元構造を再現する手法よりも正確に磁場構造を再現できることが実証できた。さらに三次元磁場構造の可視化により、磁気圏界面のフラックスロープが三次元的な構造をしており、磁気圏界面の磁気リコネクションによって生成されたと思われる磁力管が複雑に絡み合い、相互作用している様子を明らかにすることができた。平成24年度は、一機あるいは二機の衛星によるプラズマ・電磁場観測から、宇宙プラズマ中の三次元の時空間構造、すなわち空間三次元の定常構造や、空間二次元の非定常(時間発展する)構造を再現するために必要となる基礎方程式系の定式化を行い、再現手法の核となる部分の数値コードの開発を行った。まず、磁気静水圧(magneto-hydrostatic)平衡を仮定して、一衛星観測から空間二次元・非定常構造を再現する既存の手法を改良し、時間エイリアシングの影響を除去するためのコード開発を行った。実際の観測データは有限の時間で取得されるが、既存の手法ではある時間帯の時系列データが瞬間的に取得されたと仮定していた。二次元電磁流体(MHD)シミュレーションを用いたベンチマークテストによって、上記の仮定を取り除いた改良版は、従来版よりもより正確に二次元準平衡構造の時間発展を再現できることを確認した。さらに、改良した再現手法をACE衛星による太陽風中の磁気フラックスロープ構造に適用し、実際の衛星観測データの解析に利用できることを確認した。適用結果は、磁気リコネクションの効率や、大規模構造中のメソスケールの磁場構造の運動の推定に使用できる可能性があることが分かった。また、空間三次元・MHD平衡(定常)構造や、空間二次元・非定常MHD構造の再現に必要となる基礎方程式系の定式化を行った。前者の構造再現のための数値コード開発も行ったが、基礎方程式系が多数の特異点をもつことに起因する数値的な問題により、プラズマ構造を正確に再現することは難しく、今後の数値スキームの改良や、三機以上の衛星観測データを利用したデータ同化などの統計的手法を組み込んでいくことが重要であることが分かった。平成26年度は、一衛星観測から磁気リコネクションのエンジン部分である電子拡散領域の二次元構造を再現するための方程式系(電子流体方程式系)を確立し、それに基づいて再現法の数値コードを開発した。また、電子流体方程式系の解析解を用いて、数値コードのベンチマークテストを行い、開発が成功したことを確認した。このような開発を行ったのは、磁気リコネクションの基礎物理を解明することを目指す、Magnetospheric Multiscale(MMS)衛星のデータを解析するために、新しい手法が必要であると考えたからである。4機の衛星からなるMMSは、2015年3月13日(日本時間)に無事打ち上げられた。磁気リコネクションは、磁気圏ダイナミクスや太陽フレア等において、中心的な役割を演じているプラズマ過程である。

新しく開発したこの革新的な解析手法を用いることによって、磁気リコネクションの散逸メカニズムや効率、電子拡散領域の構造、磁気中性線の方向などを推定できるようになり、磁気リコネクションの理解が大きく進展することが期待される。また、従来の手法は、衛星観測データを初期条件として用いて多次元構造を再現する、すなわち「初期値問題」を解くものであったが、平成26年度は衛星観測データを境界条件として用いて多次元構造を再現する数値コードも開発した。一衛星のみのデータを解析手法の入力値として用いる場合には、後者の「境界値問題」を解くバージョンは使うことはできないが、複数衛星観測のデータを用いれば境界値を与えることができるようになり、より正確に宇宙プラズマ構造を再現できる可能性がある。境界値問題と初期値問題から導かれる解を比較することにより、どのような条件下でどちらがより正確な解を与えるか、明らかになった。宇宙プラズマ物理学二衛星観測から三次元の時空間構造を再現するための基礎方程式の定式化は、ダートマス大学のSonnerup教授との共同研究により、ほぼ終了した。数値コードの開発状況であるが、これまでに、時間発展する二次元磁気静水圧平衡構造、定常三次元の磁気静水圧平衡構造、そして定常三次元の電磁流体平衡構造を再現するものについて、基礎となる部分の開発が完了した。また、米国ロスアラモス国立研究所の中村琢磨氏の協力の下、数値シミュレーション(電磁流体コードや電磁粒子コード)を用いて、開発した手法が前提とする仮定が破られている状況下でどの程度まで機能するか、試験を開始した段階である。以上の理由により、研究の目的はおおむね順調に進展していると言える。今後は、三衛星以上の観測データを最大限に利用することにより、数値誤差を減らし、再構築結果を最適化するための、データ同化や情報量基準などの統計的手法や指標を、再現手法に組み込んでいく必要があると考えているが、その実装方法については現在検討中である。また、将来的には研究者コミュニティに我々が開発した手法を広く使ってもらえるように、手法の自動化や汎用データ解析ツールの開発を行っていく必要があると考えている。二衛星観測から三次元の時空間構造を再現するための基礎開発は、ほぼ終了した。また、既存の空間三次元・磁気静水圧平衡構造を再現するための数値コードを改良し、衛星軌道周辺のより広い領域にわたって構造を再現することが可能となった。この改良の背景にある概念は、磁気静水圧平衡構造だけでなく、MHD平衡構造や時間発展している構造の再現にも応用できると考えられる。さらに、名古屋大学太陽地球環境研究所の大学院生らとの共同研究により、再現手法の自動化や公開に向けた解析ソフトの整備を開始することもできた。今後は、三衛星以上の観測データを最大限に利用するための、データ同化や情報量基準などの統計的手法や指標を、再現手法に組み込んでいく必要があると考えているが、その実装方法については検討を開始した段階である。
二量体化ライブラリーを用いた増殖・抗アポプトーシス関連遺伝子の単離

本研究ではDNA gyraseあるいはエストロジェンレセプターなどの人為的2量体化システムを用いてライブラリーを作成し、細胞増殖あるいは抗アポプトーシス活性を指標に、2量体化によって活性化を受ける新規分子の単離を目標とした。当初の計画どうりレトロウイルスライブラリーを用いることとし、エストロジェンレセプター、DNA gyraseそれぞれと融合蛋白質となるようなライブラリーを作成し、マウスIL-3依存性株であるBa/F3細胞に導入した。その後IL-3非依存性に増殖するクローン、ガンマ線照射後も生存するクローンを単離し、genomic PCRによりレトロウイルスにより染色体中に導入された遺伝子を単離した。その結果、IL-3非依存的に増殖する株からは融合蛋白質をコードすると思われる配列が見いだされず、IL-3非依存性の増殖はインサーションミュタジェネシスによるものと予想された。一方、ガンマ線照射に対し耐性になる株からはヒストンアセチレース2のマウスホモログが単離された。このものが、ガンマ線照射に対して実際に耐性となるのかどうか検討を加えている。
クラスターDNA損傷が誘発するDSB末端のKuタンパク質による認識機構の解明

電離放射線によるDNA損傷には放射線の飛跡に沿って損傷が集中しやすい特徴があると考えられ、クラスターDNA損傷と呼ばれる。単独の損傷の場合と比べるとクラスターDNA損傷は修復酵素が作用しにくいために修復されにくく、また、複数の損傷が近傍に存在することから二本鎖切断(double strand break: DSB)を誘発しやすいと考えられる。KuはDSB末端を認識し、これに結合するタンパク質であり、Kuタンパク質の結合を足がかりとしてDSB修復経路の一つであるnon-homologous end-joining(NHEJ)が開始されると考えられている。NHEJにおけるKuタンパク質結合後の修復プロセスは生化学的、分子細胞生物学的実験により詳細な報告がなされているが、その最も初期の過程であるKuタンパク質によるDSB末端認識結合機構には未だ不明な点が多い。クラスターDNA損傷が誘導するDSB末端は一本鎖の突出、末端近傍塩基の損傷等、DNA切断時の状況よって様々なバリエーションが考えられる。本研究では、クラスターDNA損傷によって誘発されるDSBをKuタンパク質がどのように認識し結合するのかを、従来の分子細胞生物学的手法に加え計算化学的手法を導入することで明らかにしたい。クラスターDNA損傷が生じた場合に想定される二本鎖切断末端構造モデルとしてThymine glycol (TG)を導入したDNA分子に加え、本年度は5'突出末端を有するDNA分子も設計し、Ku-DNA複合体モデルに導入して分子シミュレーションを行い、Ku-DNA間の結合力を推定した。さらに同構造をもつDNA分子に実際にKuを作用させゲルシフト・アッセイを行なうことで、計算結果の妥当性を検証した。本年度は、クラスターDNA損傷が生じた場合に想定される二本鎖切断末端構造として、5'突出末端、および酸化損傷塩基を配置したDNA分子モデルを作成し、分子構造の変化を分子シミュレーションにより観察した。また、ライブセルイメージング法を用いて細胞内におけるKuタンパク質の挙動を検証するためのモデルとして、マウス、ヒトに続きイヌのKuタンパク質の挙動を追跡する実験系を確立した。本年度は、クラスターDNA損傷が生じた場合に想定される二本鎖切断末端構造の例として、5'突出末端一本鎖上、もしくは二本鎖領域に損傷塩基を配置したDNA分子のモデリングを行った。これまでモデリングを行って来たSSB、8oxoG等の力場パラメーターを利用し、5'側に1塩基5塩基突出したDNA末端を設計し、二本鎖領域中に8oxoGを配したDNAモデルを作成した。各分子モデルに対し数ナノ秒間MDシミュレーションを行い、末端が平滑なDNAの計算結果と比較すると、突出末端側二本鎖領域中の塩基対が解離する等、やや不安定な挙動を示すものの明瞭な分子構造の崩壊は観察されなかった。また、挿入する酸化損傷塩基にはこれまでモデリングを行ってきた酸化損傷プリンである8oxoGを用いてきたが、酸化損傷ピリミジンの例としてthymineglycolを含むDNA分子のモデリングも検討した。現在、分子軌道計算ソフトウエアGAUSSIANを用いた計算によって得られた電子状態を反映させた力場パラメーターを作成中である。更に、ライブセルイメージング法を用いて細胞内におけるKuタンパク質の挙動を検証するためのモデルとして、マウス、ヒトに続きイヌのKuタンパク質の挙動を追跡する実験系を確立し、マイクロビーム照射により誘発されたDSBにKuタンパク質が凝集される様子を観察した。

本研究では、クラスターDNA損傷によって誘発されるDSBをKuタンパク質がどのように認識し結合するのかを、従来の分子細胞生物学的手法に加え計算化学的手法を導入することで明らかにしたい。本年度は、クラスターDNA損傷が生じた場合に想定される二本鎖切断末端構造モデルとして、主にThymine glycol (TG)を含むDNA分子のモデリングを行い、Ku-DNA間の結合力を推定した。計算結果の妥当性を検証するため、現在計算に用いたTGを含むDNA配列を合成し、ゲルシフト・アッセイを行なっている。昨年度に引続き、クラスターDNA損傷が生じた場合に想定される二本鎖切断末端構造モデルの構築を行なった。本年度は挿入する酸化損傷塩基としてThymine glycol (TG)を含むDNA分子のモデリングを行った。TGには2種類の光学異性体、TG (5R, 6S),TG (5S, 6R)が存在する事が報告されている。そこで、両異性体の分子構造に対して分子軌道計算を行い、得られた電子状態を反映させた力場パラメーターを作成、既報のKu-DNA複合体モデル中のThymineと置換した分子モデルを作成した。非損傷DNAとKuとの複合体モデルも加え、3種類の分子モデルに対して、それぞれ3ナノ秒間の分子動力学計算を行い、得られた座標データからKu-DNA間の結合力を推定したところ、非損傷DNA-Ku > TG (5S, 6R)を含むDNA-Ku > TG (5R, 6S)を含むDNA-Kuの順で両分子間の結合力が減少する事が判明した。現在、計算結果の妥当性を検証するため、計算に用いたTGを含むDNA配列を実際に合成し、Kuを作用させてゲルシフト・アッセイを行なっている。電離放射線によるDNA損傷には放射線の飛跡に沿って損傷が集中しやすい特徴があると考えられ、クラスターDNA損傷と呼ばれる。単独の損傷の場合と比べるとクラスターDNA損傷は修復酵素が作用しにくいために修復されにくく、また、複数の損傷が近傍に存在することから二本鎖切断(double strand break: DSB)を誘発しやすいと考えられる。KuはDSB末端を認識し、これに結合するタンパク質であり、Kuタンパク質の結合を足がかりとしてDSB修復経路の一つであるnon-homologous end-joining(NHEJ)が開始されると考えられている。NHEJにおけるKuタンパク質結合後の修復プロセスは生化学的、分子細胞生物学的実験により詳細な報告がなされているが、その最も初期の過程であるKuタンパク質によるDSB末端認識結合機構には未だ不明な点が多い。クラスターDNA損傷が誘導するDSB末端は一本鎖の突出、末端近傍塩基の損傷等、DNA切断時の状況よって様々なバリエーションが考えられる。
イヌのナチュラルキラー(NK)細胞に関する病態生理学的解析

(1)モノクローナル抗体の作成:本学付属家畜病院に来院したlarge granularlymphocytosis(LGL)と診断された犬の末梢血単核細胞をBALB/Cマウスに免疫した。同マウスの脾細胞を分離し,P3X63-Ag8.653株と融合させた。96穴平底プレート上でハイブリドーマを培養し,培養上清中に産生される抗体を,フローサイトメトリー法を用いて解析した。LGL細胞の表面抗原を認識するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ9株を樹立した。作成したモノクローナル抗体のうち2種類(BDおよびDC5)の性状を詳細に解析した結果,BD(lgG1)は,B細胞を除く全リンパ球,単球,好酸球と結合でき,Thy-1分子を認識していると考えられた。また,DC5(lgG1)は,健常犬の23.4から32.8%のリンパ球と結合でき,CD3陽性CD4陰性の細胞を認識するなどCD8分子を認識すると考えられた。現在,作成したモノクローナル抗体の性状について、解析を進めている。(2)イヌの甑関連遺伝子のクローンニング:本学付属家畜病院に来院したlarge granular lymphocytosisと診断された犬,あるいは健常なビーグル犬,それぞれの末梢血単核細胞から,TRIZOL(インビトロゲン社)を用いてmRNAを抽出した。GeneRacer kit(インビトロゲン社)を用いたRT-PCR法によりcDNAを合成した。5'-race法,3'-race法を用いて犬CD56遺伝子の全長2,899塩基を解読した。また,轍CS法で分離したThy-1陽性リンパ球に,CD56遺伝子が発現していることが判明した。一方,犬CD94遺伝子については,部分配列が明かとなったが引き続き全長のクローニングを行なっている。(3)甑細胞分画の同定:肝内リンパ球を用いてフローサイトメトリーで解析したところ,CD3陰性CD21陰性リンパ球のほとんどがThy-1陰性であった。イヌのNK細胞は,Thy-1を発現しているとの報告があるが,現在CD3陰性CD21陰性リンパ球のNK活性について精査している。1,NK関連遺伝子のクローンニングCD56は、ヒトにおいてNK細胞の特異的表面抗原であるため、イヌのCD56遺伝子をクローニングし、その性状を解析することを目的に実験を行った。イヌ末梢血リンパ球をレクチンにて刺激した後、RNeasy Kit(キアゲン社)を用いてmRNAを抽出し、RT-PCR法によりcDNAを合成した。それを用いてCD56遺伝子の部分塩基配列を解読し(未発表)、さらに5',3'RACE法を用いて全長の解析を進めている。2,既存の抗体を用いたNK分画の同定ヒトもしくはマウスにおいて、肝臓にNK細胞が多く存在することが知られているため、健常犬の肝臓を腹腔鏡を用いて採材した後、肝臓内リンパ球を精製し、その表面抗原について解析をおこなった。その結果、CD3陰性CD21陰性(DN)リンパ球が肝臓内リンパ球の40%前後を占めていることを明らかにした(論文発表済み)。また、末梢血においては、DNリンパ球は3%前後、リンパ節においてはほとんど認められなかった。現在、その分画の細胞を分集して、NK活性および形態学的特徴について解析を進めている。また、抗ヒトCD56抗体(Leu-19、MY31、NKH-1)がイヌのCD56を認識したが、イヌにおいはDN細胞上には発現しておらず、CD3陽性CD4陽性T細胞もしくはCD3陽性CD8陽性T細胞上にのみ発現していることを明らかにし、ヒトとは異なりCD56はイヌのNK細胞上には存在しないことが示唆された(論文発表済み)。3,NK活性の測定イヌのNK標的細胞として使用を計画していたCL-1株では論文で報告されているほどの細胞傷害性が得られなかったために、別の細胞株(CTAC株)を入手し、イヌのNK活性測定系を確立した。(1)イヌのNK活性測定系の確立:96穴平底プレートの各wellにCTAC株を10^4付着させ、NK細胞を含むエフェクターをE/T比10100になるように加えた。14時間後に浮遊している細胞を除去し、細胞内脱水素酵素を利用した高感度水溶性ホルマザン生成法を用いて、細胞活性を計測し、NK活性を測定した。(2)イヌのNK関連遺伝子のクローンニング:本学付属家畜病院に来院したlarge granular lymphocytosisと診断された犬の末梢血単核細胞から,TRIZOL(インビトロゲン社)を用いてmRNAを抽出した。ヒト,サル,およびマウスのCD94遺伝子間で相同性の高い部位よりprimerを設計し,GeneRacer kit(インビトロゲン社)を用いたRT-PCR法によりcDNAを合成した。現在までに、犬CD94遺伝子の一部(430塩基)が解読できている。引き続き全長のクローニングを行なっている。(3)NK細胞分画の同定:健康なビーグル犬より腹腔鏡を用いて、肝組織約200mgを採材した。コラゲナーゼを用いて肝組織を解した後、比重遠心法により肝臓内リンパ球を採取した。メイギムザ染色により、肝臓内リンパ球の約30%が好酸性細胞質内顆粒を有し、LGL様を呈していた。また、flow-cytometryにより、肝臓内リンパ球の約40%がCD45陽性CD