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トランスポゾン制御を介した積極的な染色体進化促進プログラムの実体解明

トランスポゾンは、ゲノムに散在する反復配列として多様な染色体編成変化を生み出す。私たちはこれまでに分裂酵母を用いて、その作用はストレスなどに応答して発動する正規な細胞プログラムが積極的に生み出している証拠を得てきた。本研究ではそこでのトランスポゾン活性化の仕組みを解析した。分裂酵母トランスポゾンTf2のエピジェネティック制御要素であるヒストンH3-K56のアセチル化について解析を加え、染色体再編成における特異的な影響はないことを示した。一方、複数のTf2遺伝子座の核内クラスター形成が染色体再編成時には崩壊していることを見出した。細胞核の高次構造が染色体編成変化を促している可能性が挙げられる。トランスポゾンは、ゲノムに散在する反復配列として、染色体の転座や重複、欠失、逆位といった多様な編成変化を生み出し、生物進化を引き起こす力の一つに挙げられるが、その作用はストレスなどに応答して発動する正規な細胞プログラムが積極的に生み出すものなのか、あるいはゲノムの恒常性維持機構をかいくぐって偶然に生じた非正規産物が進化的に定着した結果が与える物なのか、判然としない。私たちはこれまでに、細胞に備わる正規プログラムが編成変化時にトランスポゾン活性化を積極的に誘導している可能性を、分裂酵母をモデルとした染色体編成変化アッセイ系で見出してきており、今年度はその制御機構の詳細解明に取り組んだ。当初予定していた計画に従い、まずはトランスポゾンTf2の遺伝子領域に起こるヒストンH3-K56のアセチル化に着目した解析を進めた。H3-K56の脱アセチル化反応を行う酵素Hst4の変異株において染色体編成変化を誘導したところ、Tf2の活性化が認められた。しかしながら、活性化の程度は野生株で検出されるレベルと同等であった。また、当初の計画のとおり、トランスポゾンTf2に由来する小分子RNAに関する研究も推し進めた。まずは小分子RNAを検出する条件の検討を行った。その上で、過酸化水素による酸化ストレス応答条件との比較を行い、小分子RNAの染色体編成変化の特異性を解析した。さらに、RNA品質管理に関わるexosome経路の関与因子Rrp6でのTf2活性化と小分子RNAの産出を解析した。小分子RNAと染色体編成変化誘導の関係性を明らかにすることができた。トランスポゾンは、ゲノムに散在する反復配列として、染色体の転座や重複、欠失、逆位といった多様な編成変化を生み出し、生物進化を引き起こす力の一つに挙げられるが、その作用はストレスなどに応答して発動する正規な細胞プログラムが積極的に生み出すものなのか、あるいはゲノムの恒常性維持機構をかいくぐって偶然に生じた非正規産物が進化的に定着した結果が与えるものなのか、判然としない。私たちはこれまでに、細胞に備わる正規プログラムが編成変化時にトランスポゾン活性化を積極的に誘導している可能性を、分裂酵母をモデルとした染色体編成変化アッセイ系で見出してきており、昨年度に引き続いて今年度もその制御機構の詳細解明に取り組んだ。当初の研究計画に従い、今年度はトランスポゾン遺伝子座の細胞核内クラスター形成と染色体編成変化の関係性について解析した。分裂酵母のTf2トランスポゾンは13コピーの遺伝子座にコードされるが、それらの遺伝子座は細胞内では凝集してTf-bodyと呼ばれる数個の遺伝子クラスターを形成している。Tf-bodyは動原体と共局在し、Tf2トランスポゾンの発現抑制に寄与していることが知られているが、染色体再編成が誘導されている細胞ではそのTf-body数が増加していることが判明した。この観察結果は、染色体再編成時にトランスポゾン遺伝子発現抑制が緩和されることと合致する。しかしながら、Tf2発現抑制とTf-body形成を司るDNA結合タンパク質Abp1を欠損させた細胞で染色体編成変化を誘導しても、得られる染色体再編成結果に大きな変化はなく、Tf-body自体はDNA相同組換えの活性制御に積極的には関与していないことが示された。分裂酵母をモデルとして、LTR型トランスポゾンTf2が染色体編成変化の誘導に伴って脱抑制される仕組みと小分子RNAの産出に関与する仕組みの両者を解析することを計画していたが、どちらもほぼ予定通りに進展している。脱抑制機構の解明では、ヒストンH3-K56のアセチル化を行う酵素Rtt109の寄与、小分子RNAの解析では、RNAi機構との関連性を今後詰めていく必要が残されている。分子生物学当初平成27年度に計画している細胞生物学的な研究アプローチに加え、分裂酵母LTR型トランスポゾンTf2の脱抑制機構の解明としてヒストンH3-K56のアセチル化を行う酵素Rtt109の寄与、Tf2小分子RNAの解析としては細胞内RNAi機構との関連性について、解析を進めていく方針である。

研究の進捗に従って当初計画から残された研究内容に関し、それに該当する物品費に次年度使用額が生じた。翌年度は次年度使用額を物品費に充てて当初計画から残された研究内容を完遂する。
柔軟機能要素の開発と高コンプライアントマイクロロボット構築に関する研究

柔軟機能要素として、高分子材料を母材とした柔軟センサの開発を行い、ゴム製空気圧駆動ソフトアクチュエータであるMcKibben型アクチュエータとFMA(Flexible Microactuator)の制御を行った。柔軟センサは母材である高分子材料と導電性樹脂ペーストから成膜される導電性樹脂膜で構成されており、アクチュエータに内蔵、及び一体成形が可能である。そのため、センサの搭載によるソフトアクチュエータの柔軟性の低下、サイズの増加を防ぐことが可能である。なお、3次元位置決めロボットと液体精密吐出装置からなるペーストインジェクションシステムを構築することで、導電性樹脂膜は任意面に均一な厚みでパターニングすることが可能となっている。センサ特性は高分子材料の粘弾性特性の影響を受けるため、対に配置した2つのセンサの出力差を利用する手法と力学モデルによってセンサのモデル化を行う手法によりセンサ特性の改善を行い、ソフトアクチュエータの変位量と発生力の制御を実現した。また、高分子材料のみで構成される高コンプライアントロボットに柔軟センサを形成した。ロボットは、索状体形であり、非常に安価に製作が可能であるため、将来は大腸内視鏡用ロボットとしての応用が期待できる。人体に挿入することを目指すロボットにはロボットが進行する経路環境に対して、高い安全性を実現することが求められるが、これまで安全性は機構的な柔軟性によってのみ確保されていた。これに対して、柔軟センサを利用して力制御を行うことで、ロボットは通過する経路環境に応じて駆動状態を変化させ、経路壁への過剰な負荷を回避することが可能となり、制御性による安全性を付加することに成功した。1進行波を用いた推進を行うプロトタイプ高コンプライアントロボットの陸上及び,水中での推進について,生物の動きと対応させながら理論考察とシミュレーションを行うと共に,実験によってその移動基礎特性を明らかにした.その結果,陸上での推進方向は進行波の伝播方向と一致し,水中での推進方向はその逆であり,これは陸棲生物であるヤスデ,水棲生物である鰻と一致した.また,移動経路形状に制約を設けた場合でも,ロボットの柔軟性によって受動的にその形状に適応しながら推進が可能であることを確かめた.2柔軟機能要素デバイスの一つとして,柔軟変位センサの製作を行った.センサの母材にゴムを用いることでコンプライアンス性の高い変位センサの開発を行った.センサとして,ゴム表面にスパッタリングによる金属膜を成膜したもの,スピンコータを用いて導電性樹脂塗料膜を成膜したもの,およびカーボンをゴム中に分散させた導電性ゴムの3種類について実験的に検討を行った.その結果,導電性樹脂塗料膜を利用したものが最も変位センサとして優れていた.3 McKibben型アクチュエータに柔軟変位センサを内蔵することで,位置サーボが可能なインテリジェントMcKibbenアクチュエータを製作した.このアクチュエータは柔軟なセンサを内蔵していることから,非常にコンプライアンス性に優れ,またサーボ系を構築した場合のシステムの小型化が可能であった.しかし,センサを含め,このアクチュエータはゴムが基盤であるため,その特性は完全な線形性ではなかった.よって,本アクチェエータを2本用いた拮抗型ロボットアーム機構を製作し,互いの非線形性を相殺させることでアームの回転角度制御を実現した.コンプライアンス性の高さが特徴であるMcKibben型アクチュエータの柔軟性を損なうことなくかつアクチュエータ内部に搭載可能な柔軟圧力センサの開発と、これを用いた圧力制御を行った。センサの構造は内部空間(φ5mm×3mm)を有する円筒状シリコーンゴム(φ8mm×8mm)の上面に導電性樹脂膜を幅2mmで成膜し、電極シールと少量の導電性接着剤を用いて配線をおこなったものとなっており高いコンプライアンス性を実現している。製作時においてセンサの内部空間は大気圧となっており、センサの外部圧力が増加することでセンサに圧縮変形が生じ、これに伴って導電性樹脂膜に変形が起こる。この変形に伴い、歪ゲージと同原理によって導電性樹脂膜の電気抵抗値が変化することで外部圧力を測定することが可能となっている。本センサをMcKibben型アクチュエータに内蔵しセンサの基礎特性を測定した結果、センサの抵抗値は外部圧力の変化に即応して変化するものの、外部圧力を一定に保持した場合でも徐々に抵抗値がドリフトする現象が見られた。これはゴムのクリープ現象に伴うものであると考えられるため、ゴムのクリープ現象を包括したセンサモデルの構築を行った。センサのモデルとして力学モデルであるVoigt Modelを2つ直列に配置したモデルを適応する新たな手法を考案した。この力学モデルは入力に対して即応する特性とゴムのクリープによるドリフト特性を表現することが可能であり、これを利用しセンサ出力をフィードバックすることでアクチュエータの圧力制御を実現した。

センサ特性は高分子材料の粘弾性特性の影響を受けるため、対に配置した2つのセンサの出力差を利用する手法と力学モデルによってセンサのモデル化を行う手法によりセンサ特性の改善を行い、ソフトアクチュエータの変位量と発生力の制御を実現した。また、高分子材料のみで構成される高コンプライアントロボットに柔軟センサを形成した。ロボットは、索状体形であり、非常に安価に製作が可能であるため、将来は大腸内視鏡用ロボットとしての応用が期待できる。人体に挿入することを目指すロボットにはロボットが進行する経路環境に対して、高い安全性を実現することが求められるが、これまで安全性は機構的な柔軟性によってのみ確保されていた。これに対して、柔軟センサを利用して力制御を行うことで、ロボットは通過する経路環境に応じて駆動状態を変化させ、経路壁への過剰な負荷を回避することが可能となり、制御性による安全性を付加することに成功した。
RBがん抑制遺伝子の代謝制御機構

RBがん抑制遺伝子産物は、発がん時よりもむしろ悪性進展時において頻繁に不活性化し、そのことは、腫瘍内不均一性、未分化性、上皮間葉転換等の誘導に寄与する。我々は、このようなコンテクストにおけるRB機能の分子基盤を探索してきた。脂質代謝のマスターレギュレーターであるSREBP転写因子群や解糖系酵素であるPGAM(phosphoglycerate mutase)1,2がRBの重要な標的であるという発見を突破口に、RBが、これまで知られてきた組織特異的転写因子との協調作用に加え、細胞の代謝を調節する事によって、組織細胞分化や腫瘍の未分化性を制御する可能性を見出している。本研究では、様々な悪性進展のコンテクストにおいてRBの代謝制御機能を網羅的に探索することによって、がんの新規治療標的を見出すことを目的とした。本年度までに、RBがPGAM1、PGAM2を制御する転写機序をそれぞれ明らかにした。加えて、RB-PGAM1、RB-PGAM2機軸がRB依存的な脂肪分化、筋分化において果たす役割もそれぞれ解明した。RB-SREBP1複合変異マウスのデータを解析・統合し、ヒトデータベースの解析も加味することによって、RB-SREBP1基軸の臨床的意義を解明しつつある。RB-ELOVL6, RB-SCD1複合変異マウスを解析、ELOVL6欠失背景がRBヘテロ型マウスの寿命を延長する知見を得た。様々ながん細胞株においてELOVL6を発現抑制したところ、多くの細胞株でG1細胞周期停止がおこることを見出した。RB不活性化によってコレステロール依存的にアンドロゲン受容体の核内移行が起こることを見出した。RB-PGAM1、RB-PGAM2機軸がRB依存的な脂肪分化、筋分化において果たす役割もそれぞれ解明した。RB-SREBP1マウスのデータを解析・統合、ヒトデータベースの解析も加味し、その臨床的意義を解明した。これらは、ほぼ計画通りに進行している。本年度は、PGAM1転写制御領域のエピジェネティクス解析を進め、RB-KDM5A複合体の関与に関し検討を行う。RB不活性細胞のメタボローム解析、13Cフラックス解析を総合的に検討し、RBによる中心代謝制御の全貌を把握する。PGAM過剰発現ががん幹細胞様の活性を抑制する、また逆に、PGAM発現抑制がそれを亢進する現象を突破口に、変異体の解析も加え、PGAMのがん制御機構を解明する。様々ながん細胞においてELOVL6の発現抑制を行い、がん治療標的としてのELOVL6のPOCを得る。ELOVL6の発現抑制が脂質代謝に与える影響をメタボローム解析によって探索する。RB不活性化によって生じる去勢抵抗性とコレステロール代謝の関係を解明する。RBによる腫瘍微小環境の制御の代謝的基盤を解明する。

RBがん抑制遺伝子産物は、発がん時よりもむしろ悪性進展時において頻繁に不活性化し、そのことは、腫瘍内不均一性、未分化性、上皮間葉転換等の誘導に寄与する。我々は、このようなコンテクストにおけるRB機能の分子基盤を探索してきた。脂質代謝のマスターレギュレーターであるSREBP転写因子群や解糖系酵素であるPGAM1,2がRBの重要な標的であるという発見を突破口に、RBが、組織特異的転写因子との協調に加え、代謝を調節する事によって、組織細胞分化や腫瘍の未分化性を制御する可能性を見出している。本研究では、様々な悪性進展のコンテクストにおいてRBの代謝制御機能を網羅的に探索することによって、がんの新規治療標的を見出すことを目的とする。本年度までに、RBがPGAM1、PGAM2を制御する転写機序をそれぞれ明らかにした。加えて、RB-PGAM1、RB-PGAM2機軸がRB依存的な脂肪分化、筋分化において果たす役割もそれぞれ解明した。RB-SREBP1複合変異マウスのデータを解析・統合し、ヒトデータベースの解析も加味することによって、RB-SREBP1基軸の臨床的意義を解明しつつある。RB-ELOVL6, RB-SCD1複合変異マウスを解析、ELOVL6欠失背景がRBヘテロ型マウスの寿命を延長する知見を得た。様々ながん細胞株においてELOVL6を発現抑制したところ、多くの細胞株でG1細胞周期停止がおこることを見出した。RB不活性化によってコレステロール依存的にアンドロゲン受容体の核内移行が起こることを見出した。これらは、当所の計画通りに進行した。本年度は、PGAM1転写制御領域のエピジェネティクス解析を進め、RB-KDM5A複合体の関与に関し検討を行う。RB不活性細胞のメタボローム解析、13Cフラックス解析を総合的に検討し、RBによる中心代謝制御の全貌を把握する。PGAM過剰発現ががん幹細胞様の活性を抑制する、また逆に、PGAM発現抑制がそれを亢進する現象を突破口に、変異体の解析も加え、PGAMのがん制御機構を解明する。様々ながん細胞においてELOVL6の発現抑制を行い、がん治療標的としてのELOVL6のPOCを得る。ELOVL6の発現抑制が脂質代謝に与える影響をメタボローム解析によって探索する。
戦間期日本における内務省の女性政策

本研究では、内務省が所管していた行政の諸分野における、戦間期の女性政策の見取り図を作成することを目的とする。おもに、次の2点について、文献研究を行った。第一に、様々な政策についての政策形成過程や女性像を明らかにすることである。第二に、各政策における女性の状況を明らかにすることである。そして、多様な女性政策が形成されており、これらの政策の多くが、第一次世界大戦以降の欧米における女性政策の動向を反映していたことを理解した。平成21年度は4つの作業を進めた。1.衛生局、社会局の政策を概観するため、衛生行政、社会行政の通史、研究書とみなしうる文献を検索、国立国会図書館等で閲覧し、重要文献の収集に努め、検討を進めた。2.社会行政のうち、手始めに職業紹介・失業対策事業の史的展開と女性の扱われ方の変化を確認するため、失業対策事業史にかんする研究書、労働行政の通史、また失業対策事業とかかわりの深い土木行政の通史を入手し、順次検討している。3.社会局、社会行政との関連で、地方局の公営事業論の展開を整理した。社会行政は、最初の専管部署が地方局に設けられたことからも明らかなとおり、地方行政とかかわりが深く、社会行政の展開が、地方行政の認識を大きく変化させていることが確認できる。地方制度は大正末期と昭和初期の二度において、自治権拡充を目的にした大改正がなされた。この二度の改正を担当し、1931年の婦人公民権政府法案立案を担った内務官僚・挾間茂は、地方自治体の使命は公営事業体に変化したと繰り返し主張した。これは、当時、地方局官僚が注目したシドニー・ウェッブの主張でもある。ウェッブの著作は、大正期半ば以降、社会行政が展開するなかでナショナル・ミニマムの視点を提供し、大きな影響を与えるとともに、地方自治体の使命変化認識をもたらした。なお、このような変化の認識は、大正期の都市化にともなう都市計画行政の展開、大都市制度論の隆盛を背景にしていることも確認した。以上の知見は、挾間茂の地方制度論の再読、都市計画行政史や大都市制度論史の通読、1次資料である昭和初期の大都市制度調査会資料、東京市電気局の年史、『社会局関係事務概要』『公私経済緊縮運動概要』等を総合的に検討したことによる。4.元内務官僚の回想資料として雑誌『大霞』の座談会、回想録も収集し、各行政における内務官僚の認識の検討も進めている。平成22年度は、おもに地方局、衛生局の行政について、以下のとおり研究を遂行した。第1。地方局の地方制度改正における女性像を明らかにするため、とくに、大正末期から昭和初期にかけての地方制度改正の研究・立案を担い、地方制度改正課題の1つとして婦人公民権成立を提案した、内務官僚・挾間茂の地方制度改正論を再整理した。その整理によって、挾間が、地方制度改正・研究を担当していた期間をとおして、地方自治体の新たな使命として、「善良なる主婦」としての公営事業体の運営があると認識していたことを確認した。さらに、挾間の「善良なる主婦」としての地方自治体像において、ウェッブ夫妻の思想の影響がどのようであるか、理解するために、ウェッブ夫妻の著作を精読した。その結果、ウェッブ夫妻の著作で示される女性像との相違点を確認した。第2。戦間期の衛生行政・衛生制度において女性政策が展開される様相を理解するため、明治期から大正期にかけての衛生行政・衛生政策・衛生制度に関する歴史研究文献・行政資料などの整理をおこなった。とくに、明治初期から中期において、西洋医学一西洋医療システムの輸入に衛生行政の主眼がおかれたことを確認するとともに、衛生行政と警察行政の相互連関、明治中期の上水道整備のための土木工事の展開などを確認し、衛生行政の展開において地方行政、警察行政、土木行政が連動する様相を理解した。平成23年度においては、次のとおり研究を遂行した。第1。内務省衛生局所管の女性政策の歴史を明らかにするため、とくに、1915(大正4)年に制定された「看護婦規則」、1941(昭和16)年に制定された「保健婦規則」、この2つの制定過程に関する先行研究等の文献閲覧・収集・整理を行った。これらの規則は、業務内容、資格取得の方法、試験内容、資格取得者の登録や停止、罰則などを定めている。「看護婦規則」の制定経緯は、明治期以降、各地での看護婦の活動、国に先行した各府県での規則制定の動き、第一次世界大戦を契機とした内務省令制定と整理される。また、「保健婦規則」の制定経緯は、大正期における都市での巡回看護事業の展開、その社会事業的系譜と公衆衛生的系譜、他方、昭和期以降の農村での事業展開、厚生省創設や保健所法制定を経ての戦時下での規則制定と整理される。なお、保健婦は、その業務として「疾病予防の指導」についで「母乳又は乳幼児の保健衛生指導」が定められており、母子衛生の担い手としても期待されていた。

今後は、2つの女性医療専門職の制定過程における女性像の構図とその変遷などを検討する。第2。内務省社会局所管の女性政策の歴史を明らかにするため、戦前の女性工場監督官にかんする資料およびイギリス女性工場監督官の歴史研究文献等の閲覧・収集を行った。また、大正期から昭和期にかけて東京・大阪・神戸など都市の市役所社会局等が手がけた職業婦人調査、女性への職業紹介案内などの資料閲覧を多数行い、今後の資料収集・整理方法を検討した。第3。内務省警保局所管の女性政策の歴史を明らかにするため、従軍慰安婦関係資料・研究文献などの閲覧・収集を始めた。平成25年度においては、次のとおり研究を遂行した。第一に、前年度より継続して、内務省警保局所管行政における女性政策の歴史を明らかにするため、婦人警官論、社会運動取締、風俗警察や性病対策(花柳病予防など)についての一次資料の収集や整理を行った。第二に、前年度より継続して、内務省社会局所管行政である職業紹介事業や、大都市の社会局によって実施された職業婦人調査等に関する一次資料の収集や整理を行った。職業紹介事業等の資料整理を行うなかで、以下のことを確認した。職業紹介事業において求職者総数に占める女性の割合がしだいに増加していたこと、また、調査報告において、職業婦人として中流階級の女性が一定程度みられることが特記されていること等。第三に、内務省の政策立案や制度構想に携わる官僚や政治家のほか、政策実施に携わる技官や嘱託などの論文集や回想録、伝記などの整理を進めた。とくに、社会局所管行政においては、事業や調査に直接携わった嘱託などの資料において、女性の状況や女性像を考察するうえで参考となる記述を多く確認することができた。以上を踏まえて、地方局における地方行政制度構想、衛生局における看護婦養成、社会局における職業行政、警保局における婦人警官論や花柳病対策などを中心として、それぞれの政策の展開過程や、政策に関与した官僚らの女性像などを整理する作業を行った。平成24年度においては、次のとおり研究を遂行した。第一。内務省警保局所管の女性政策の歴史を明らかにするため、1)婦人警官論、2)社会運動取締、3)風俗警察、4)性病対策についての歴史研究文献や一次資料の収集・整理等を進めた。婦人警官論の展開については、警保局官僚が、大正末期から昭和初期にかけて、第一次世界大戦中のイギリスや、ナチスドイツでの婦人警官の活動事例の紹介記事等を著していることを確認した。社会運動取締については、一次資料として、警保局が大正中期以降、毎年度作成していた「社会運動の状況」の確認等を行い、そこでの女性の記述状況を調べ、大正末期から昭和初期にかけて、農民運動における婦人部の活動に関する記述や、無産政党運動における、わずかな記述を確認した。また、風俗警察と性病対策については、風俗警察に関する警保局官僚の著作物や、花柳病予防に関する調査資料の収集・確認作業を進めた。その作業過程において、大正末期から昭和十年頃にかけて、私娼問題として女給の存在に注目が集まっており、職業紹介事業における女給等の調査等も併せて資料整理・考察を行う必要を確認した。第二。前年より継続して、内務省社会局所管の女性政策の歴史を明らかにするため、1)労働政策の通史、2)東京市の職業紹介事業史などに関する資料整理と再収集、検討を進めた。戦前の労働政策においては、職業紹介事業が重要な柱であることを確認した。
乗用型田植機に装着するアーム型畦畔草刈機の開発と実用化

(1).あぜ草刈の問題点を明確にし,課題の草刈機の設計資料を得るため,研究代表者有馬と分担者木村が企画して信州大学農学部農業セミナー(公開研究・講演会)「あぜ草刈りの省力と安全を求めて」(協賛:長野県,JA長野ほか)を1996年と1998年の2回にわたって開催した。2回とも実用資料とするための講演要旨冊子(3334頁,各500部)を発行し,講演,機械展示と操作実習及び総合討論を行い,多数の参加者から大きな反響を得た。(2).畦畔草刈機の設計資料とするため,伊那地方の畦畔の断面形状,畦畔雑草の時期的消長,田植機の水田内走行時のバウンシング及びヨーイングと旋回性能及び信州大農周辺における平成8年度の水田転作及び調整水田の設置状況を調査した。(3).以上と木村の膨大な研究成果を総合して各種の部品を調達し,草刈機の試作を行った。(4).試作機は田植機のトラクタ,その3点ヒッチの先端から後輪の直後を右方向へ伸ばした片持梁型アーム1本,さらにそれから前方へ4節回転機構で支持したアーム2本,アームのカウンターバランス1個,0.9kw・2サイクルエンジンで駆動する遠心クラッチ付きレシプロ草刈刃,草刈刃の位置と姿勢の制御用レバーその他で構成した。(5).草刈刃は刈幅440mm(又は680mm)のものを用い,運転者の右斜め前側方で作動させる。この草刈刃はトラクタの油圧で上下させ,水平移動は電動アクチュエータでアーム2を操作して行う。また草刈刃は小型のアクチュエー夕でトラクタの進行方向を軸として左右へ傾け畦畔の法面傾斜に適合させる。なお,草刈刃が異物へ衝突した場合の破損防止のために,2種の安全装置を設けた。また路上走行時には全装置を車幅内へ折り畳める特長がある。(6).圃場実験の結果,細部には改良の余地があるものの良好に作動したので1998年9月の公開研究・講演会及び各社の新聞で公表した。学会発表は平成11年3月に農作業学会で行う。1.畦畔草刈機の設計資料とするため次の調査を行った。(1)信州大農周辺における平成8年度の水田転作及び調整水田の設置状況を調査した。(2)各種の畦畔の断面形状を調査した。(3)研究課題に適合する田植機と草刈機の選定を行い,次の機種を購入した。田植機:ヤンマーRR550-PW1台,草刈機:リッキーSR24001台(4)水平かつ平行な2本のレーザー光線を発射し,田植機の水田内走行時のバウンシング,ローリング及びヨ-イングと旋回性能を調査した。2.畦畔草刈の問題点を明確にし,作業の合理化を図るとともに課題の草刈機設計の参考にするため,研究代表者有馬と研究分担者木村が企画して信州大学農学部の農業セミナー(公開研究・講演会)「あぜ草刈りの省力と安全を求めて」(協賛:長野県,JA長野ほか)を開催した。

講師は信州大農の有馬(作業機械),木村(圃場整備),冨永(雑草生理),長野農試の小林(雑草管理),安曇病院の佐々木(作業安全),普及センターの松原(労働科学)及び大規模水稲栽培者の中坪の計7名であり,総合討論と機械展示・操作実習も行い,テキスト(45頁,500部)を発行し多大な反響を得た。3.課題の草刈機は現在,試作中である。平成9年度には実用化可能な性能を得るべく試行を反復している。平成8年度に実施した,信州大学農学部周辺の水田転作と調整水田の設置状況及び畦畔の断面形状調査と基づいて選定し購入した田植機等を用いて以下の試作機を製作した。試作機は田植機のトラクタ,その3点ヒッチの先端から後輪の直後を右方向へ伸ばした片持梁型アーム1,さらにそれから前方へ4節回転機構で支持したアーム2,アームのカウンターバランス,0.9kw2サイクルエンジンで駆動する遠心クラッチ付きレシプロ草刈刃,草刈刃の位置と姿勢制御用レバ-等から構成されている。草刈刃は刈幅440mmまたは,680mmのものを用い,運転者の右斜め前下方で作動させる。この草刈刃はトラクタの油圧で上下させ,水平移動は運転席右のレバ-に連結させたプッシュプルケーブルでアーム2を操作して行う。また草刈刃はトラクタの進行方向を軸として左右へ傾け,畦畔の法面傾斜に合わせることができる。なお,草刈刃が異物へ衝突した場合の破損防止のために,2個所へ安全装置を設けた。圃場実験の結果,おおむね良好に作動したが,軽量構造の片持梁型アームが振動すること,法面への追従性が不充分であること,なお軽量化の余地があること,路上走行時のアーム折りたたみ構造に不満があることなどのため実験と改良を重ねている。したがって,まだ公開には至ってない。本機の構造と性能に関する学会発表は平成11年春季に行う。本研究に関連して平成8年7月には信州大学農学部主催で「あぜ草刈りの省力と安全を求めて」と題した技術者向け公開農業セミナーを開き多大な反響を得た。これを受けて平成10年夏には現地であぜ草刈用機材と実技のセミナーを開催する予定である。それまでに試作機の実験と改良を重ね,栽培者に実用性の評価を依頼する。(1).あぜ草刈の問題点を明確にし,課題の草刈機の設計資料を得るため,研究代表者有馬と分担者木村が企画して信州大学農学部農業セミナー(公開研究・講演会)「あぜ草刈りの省力と安全を求めて」(協賛:長野県,JA長野ほか)を1996年と1998年の2回にわたって開催した。2回とも実用資料とするための講演要旨冊子(3334頁,各500部)を発行し,講演,機械展示と操作実習及び,総合討論を行い,多数の参加者から大きな反響を得た。(2).畦畔草刈機の設計資料とするため,伊那地方の畦畔の断面形状,畦畔雑草の時期的消長,田植機の水田内走行時のバウンシング及びヨーイングと旋回性能及び信州大農周辺における平成8年度の水田転作及び調整水田の設置状況を調査した。(3).以上と木村の膨大な研究成果を総合して各種の部品を調達し,草刈機の試作を行った。(4).試作機は田植機のトラクタ,その3点ヒッチの先端から後輪の直後を右方向へ伸ばした片持梁型アーム1本,さらにそれから前方へ4節回転機構で支持したアーム2本,アームのカウンターバランス1個,0.9kw・2サイクルエンジンで駆動する遠心クラッチ付きレシプロ草刈刃,草刈刃の位置と姿勢の制御用レバーその他で構成した。(5).草刈刃は刈幅440mm(又は680mm)のものを用い,運転者の右斜め前側方で作動させる。この草刈刃はトラクタの油圧で上下させ,水平移動は電動アクチュエータでアーム2を操作して行う。また草刈刃は小型のアクチュエータでトラクタの進行方向を軸として左右へ傾け畦畔の法面傾斜に適合させる。なお,草刈刃が異物へ衝突した場合の破損防止のために,2種の安全装置を設けた。また路上走行時には全装量を車幅内へ折り畳める特長がある。
アメリカのジャポニズム文学とアフリカン・アメリカン・モダニズムの関係性

本研究はアメリカのジャポニズム文学とアフリカン・アメリカン・モダニズムの関係を探ることを目的とするもので、アフリカ系アメリカ人が「日本」をどのように受容したのかといった問題を『ホット・ミカド』や『スイング・ミカド』などのアフリカ系アメリカ人による演劇やリチャード・ライトの俳句を中心に調査を行い、そこに現れる人種とエキゾチシズムの問題を明らかにした。成果として関連トピックの雑誌論文10本、学会発表を14本、図書5冊を5年間に生産した。アフリカンアメリカンモダニズムとジャポニスムの関係を探ることを目的とする。主軸となる計画としては、1.ホット・ミカドやスイング・ミカドなどのアフリカ系ジャポニスム演劇の調査をし、その成果を発表する。2.モダニズムとジャポニスムを俳句芸術を軸に結び付け、論文発表をする、ことの二点があげられるが、芸術とのかかわりも調査する予定である。1.2008年6月に行われたアメリカ学会のパネルで、1970年代のアフリカ系アメリカ人文化における東洋文化の受容をブラックスプロイテーション映画におけるカンフーに焦点をあて検討した。この問題はその後引き続き検討し、2010年1月のハワイにおける国際学会で公民権運動とジム・ケリー主演の映画の関係性について発表した。2.リチャード・ライトの俳句について2008年6月にパリにおいて開催されたリチャードライト生誕100年記念国際学会にて発表。このテーマについてはその後さらにアフリカン・アメリカン・ジャポニスムについての考察を深め、2009年3月に「アフリカン・アメリカン・ジャポニスムとリチャードライトの俳句」というタイトルで日本女子大の『英米文学研究』に論文を発表した。3.20世紀初頭アメリカでジャポニスム小説を発表したWinnifred Eatonの自伝についての論文を執筆。この論文は多民族研究学会の雑誌に応募し受理された。発表は21年度に持ち越される。4.牧野義雄についての展覧会評をジャポニスム学会誌に発表。1 2009年4月末から5月初旬にかけてトルコのエーゲ大学で開催されたCultural Studiesの国際学会にてリチャード・ライトの俳句の現代アメリカ俳句における位置についての論文を発表した。その後、10月にオハイオ大学の大学院セミナー、ウィルバーフォース大学にてアメリカのモダニズムにおける仏教の役割とR.H.ブライスの俳句論とライトの俳句の関係の問題を考察した論文を発表。さらにアフリカ系アメリカ人としてのライトの俳句の特質に焦点をあてた英文論文をヴァージニア・スミス教授が編集する論文集に寄稿した。この本は来年度に出版される予定である。2ジャポニスムとブラック・デコに関しては、グラスゴーやパリにて資料収集を行った。またプリミティヴィズム芸術の流れを汲みながら、それをパロディ化していくアフリカ系アメリカ人芸術家キャラ・ウォーカーについてポスト・ソウルという視点から論文を書いた。ウォーカーについては、雑誌『水声通信』29号、および『黒人研究』79号に論文を掲載した。3「ホットミカド」および「スイングミカド」についてはニューヨークで資料を収集した。また「ホットミカド」についてはロンドンでのパフォーマンスを見る機会に恵まれ、現代版の資料を集めることができた。4『多民族研究』3号に「ウィニーフレッド・イートンの『私』における服飾・階級・エスニシティーアジア系混血女性ノラの「新しい女」へのパッシング」を発表した。イートンについては、ハワイ国際人文学会においても発表、その英語論文はプロシーディングに掲載された。2.2010年5月、ユタ大学にて講演を行った。3.「アフロセントリズム」の理解のためにリンカーン大学主催のエジプト・ツアーに参加し、ブラック・スタデフィーズの視点からのエジプト学についての知見を深めた。4.アメリカ文学会第49回全国大会の「アフリカン・アメリカン文学・文化の新潮流-ポストソウル美学」というパネルで芸術家Kara Walkerについてとりあげ、モダニズムとプリミティヴィズムに現在作家がどのような視点を投げかけているかについて、ポストソウル美学に注目しながら論じた。5.ジャポニスムとモダニズムの問題について論じたアメリカの比較文学者エミリーアプターの「翻訳不可能なもの-世界システム」という論文を翻訳した(来年度刊行予定)。6.木内徹氏の著書『リチャードライト研究-国際比較視点』の書評を『黒人研究』80号に執筆した。2.アジア系アメリカ文学研究会の年次大会で「パキスタン系作家Kamila ShamsieのBunrt Shadowsにおける移動する主体と傷の共有」を発表。これは論文としてAALAジャーナルにも発表した。トランスナショナリズムと移民の問題を考察した。3.エミリー・アプターの論文「翻訳不可能なもの」を翻訳。トランスナショナリズムと翻訳および文化翻訳の問題を論じた論文で、これは『世界文学史とはいかにして可能か』(成美堂)に収められた。4.アフリカ系アメリカ人女性作家ポーリン・ホプキンズの作品における奴隷制のトラウマを考察し、モダニズムに至るアフリカ系アメリカ人文学を読み解いた。発表は台湾花蓮にある東華大学で行い、論文は同大学のウエブ上に掲載された。ホプキンズは新心理学をよく勉強しており、モダニズムの萌芽がすでに見られる。

5.論文「「模倣と剰窃の異国ロマンス-アメリカ・ジャポニスム小説と『作者』」を『作品は「作者」を語る-アラビアン・ナイトから丸谷才-まで』(春風社)の第三章として執筆した。「蝶々夫人」型ジャポニスム文学が書き換えられる様、エスニック・マイノリティや外国人文学者(野口米次郎など)のアメリカ・モダニズムへの貢献を確認した。6.リチャード・ライトの俳句論を"The Sound of Silence : Zenand Bluesin Richard Wright's Haiku"というタイトルで中国杭州の浙江大学にて講演した。アフリカン・アメリカン・ジャポニスムを考える上で、ブルースというアフリカ系アメリカ人芸術ジャンルとの交錯を考えることが重要であることを再確認した.論文としては、アメリカ合衆国のミシシッピーヴァレー州立大学発行の雑誌Journal of Ethnic Literatureに、Kamila Shamsieについての論文を発表した。また国文社から出版された『亡霊のアメリカ文学ー豊穣なる空間』に論文「奴隷制のトラウマと心霊現象ーP.E.ホプキンズの『一つの血から』について」を寄稿した。さらに都留文科大学ジェンダー研究プログラム発行の『ジェンダーが切り拓く共生社会』(論創社、2013年3月出版)に「ネラ・ラーセンの作品における売春、あるいは人種混淆と性の禁忌」を寄稿した。他、論文「ハーレムルネッサンスの<ネグロフィリア>と<プリミティヴィズム>ー新しい黒人のイコノロジー」を執筆した。これは2014年に刊行される都留文科大学英文学科創立50周年記念の論集に掲載される予定である。翻訳として愛媛大学のエドワード・マークス氏の著書の翻訳を完成した。出版は来年度になる。リチャード・ライトの俳句を通し、アメリカのジャポニスム文学とアフリカ系アメリカ人によるモダニズムの関係は結び付けられた。またモダニズムの問題としてのトランスナショナリズム、それに伴う移民経験、戦争体験の影についても考えることができた。しかし、黒人ミカド劇についての論文やプリミテフィヴィズムの考察に関してはまだ継続中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。アフリカ系アメリカ人モダニズムとジャポニスムの関連性を調べるために、もう少し美術分野を調査する必要を感じている。昨年大正期の新版画運動について調べ、その世界的影響を考える機会を持ったが、版画からポスターあるいは挿絵といったものへの影響は、プリミティヴィズム、ドイツ表現主義、ロシア構成主義、キュービズム、イタリア未来派などへの目配りも必要なこともわかり、美術分野への調査もさらに拡大したいと考えている。
ハイブリッド配糖体を機能素子とする分子シンクロシステムの光線力学療法への新展開

1.本研究では光線力学的療法(PDT)に用いる優れた光増感剤の開発を目指して生体的適合性に優れた糖分子を有するFree-baseまたは亜鉛含有の新規水溶性ポルフィリン誘導体の合成を行った。2.糖連結ベンズアルデヒド、ピロールと酢酸亜鉛を原料としてZinc acetylsugar tetraphenyl porphyrin(Zn-AcSugar TPP)を調整し、それらを脱保護することにより、糖連結水溶性ポルフィリンを得た。Free-base AcSugar TPPは塩酸処理することによって調整した。また糖の水酸基が保護されたAcSugar TPPを還元することにより、糖連結水溶性クロリンやバクテリオクロリンを調整し、それらを脱保護することにより、糖連結水溶性クロリン、バクテリオクロリンを得た。これらの光増感剤の一重項酸素発生能ならびに培養がん細胞(HeLa細胞)に対する光毒性評価を行った。3.糖連結ポルフィリン、糖連結クロリン、糖連結バクテリオクロリンの計80種類の化合物を合成した。また、糖を連結させたことでバクテリオクロリンが純粋に得られ、バクテリオクロリン合成において初めての例となった。特にバクテリオクロリンは長波長領域(740nm)に大きな吸光係数のピークを持っており組織透過性の向上が期待される。すべての化合物は一重項酸素を発生し。これらの培養がん細胞(HeLa細胞)に対する光毒性評価の結果、暗所では毒性を示さなかった。クロリン誘導体では糖水酸基を脱保護した水溶性化合物で飛躍的に活性が向上することがわかった。メタ置換亜鉛含有水溶性クロリン誘導体もfree-base体の同じく飛躍的に活性が向上することがわかった。また、メタ置換バクテリオクロリンの一部(m-TGlcPBCやm-TXylPBC)は700nm以下の光をカットしても優れた光毒性を示した。1.最近クリーンながんの治療法として光線力学療法(Photodynamic Therapy, PDT)が注目されている。このPDTに用いる光増感剤としてポルフィリン誘導体が使用されている。本研究では、テトラフェニルポルフィリン(TPP、tetraphenylporpyrin)を骨格とした生体適合性に優れた糖分子を有する水溶性ポルフィリン類・クロリン類の合成、またそれらの化合物の培養がん細胞に対する光毒性評価を行った。2.今回合成したポルフィリン誘導体は、TPPのメソ位のフェニル基のメタ位あるいはパラ位に糖分子をグリコシド結合した一連の化合物で、糖の水酸基の保護の有無や、中心Zn金属の有無などを考慮し、4系統32種類の糖結合ポルフィリンならびに4系統32種類の糖連結クロリンの計64種類である。連結する糖分子として、6単糖(D-グルコース・D-ガラクトース)・5単糖(D-アラビノース・D-キシロース)の4種類を選択した。また、保護体のポルフィリンを還元することにより、保護体のクロリンを調製し、それらを脱保護することにより、糖連結水溶性クロリンを得た。クロリンは、UV-VISスペクトルにおいて長波長領域(650nm)に大きな吸光係数のピークを持っており、組織透過性の向上が期待される。3.ポルフィリン類、クロリン類の培養がん細胞(HeLa)に対する光毒性評価を行った。P-置換ポルフィリン誘導体では糖の水酸基を保護した化合物が、またクロリン誘導体では糖水酸基を脱保護した水溶性化合物で飛躍的に活性が向上することがわかった。P-置換亜鉛含有化合物は、ほとんど光毒性を示さなかった。M-置換亜鉛含有水溶性クロリン誘導体もfree-base体の同じく飛躍的に活性が向上することがわかった。特にm-置換亜鉛含誘導体でもほぼ同等な効果が見られた。このことは亜鉛含有化合物の合成の容易さや、糖質の違いが光毒性の効果に大きく反映している。本研究の知見は、糖質による生体標的分子の設計の可能性を示す興味深い知見である。

クロリン誘導体では糖水酸基を脱保護した水溶性化合物で飛躍的に活性が向上することがわかった。メタ置換亜鉛含有水溶性クロリン誘導体もfree-base体の同じく飛躍的に活性が向上することがわかった。また、メタ置換バクテリオクロリンの一部(m-TGlcPBCやm-TXylPBC)は700nm以下の光をカットしても優れた光毒性を示した。
がん患者への構造化された介入の精神神経免疫学的研究

がん患者への精神科的介入として、どこの施設で誰が行っても一定以上の効果が得られるようなマニュアルを作成した。これは、毎回90分で毎週1回で計5回行うものである。この構成要素は、その構成要素は、(1)心理社会的教育、(2)問題解決技法、(3)支持的精神療法、(4)リラクセーション、(5)イメージ療法などである。乳がん患者47名に対して、文書による同意書を得た後に「構造化された介入」を施行した。化学療法施行令を除外して、残る40名について介入前後のPOMS(Profile of Mood States)を比較すると、抑うつ・活気の無さ・疲労・混乱(いずれもp<0.05)、および緊張・情緒不安定(いずれもp<0.01)などほとんどすべての項目で有意な改善がみられた。次に、乳がん患者に対して「構造化された介入」を施行し、前後でナチュラルキラー細胞活性を測定した。この際、リンパ節転移のある場合には化学療法を施行する可能性が高いため除外し、転移がなくとも化学療法を施行した場合は除外した。化学療法は免疫機能に影響を与えるからである。また、温存療法で放射線療法を施行した場合も、同じ理由で除外したため、対象は32名であった。結果的には、介入前後でのNK細胞活性(lytic units/10^7 cells)の平均は介入前は14.64±9.90、介入後は14.89±11.70であり有意差は認められなかった。このような「構造化された介入」によって、情緒状態に改善はみられたが、免疫機能に有意な増強はみられなかったことになる。その理由としては、対象数が少なかったこと以外に、介入が手術後2-3週間くらいで始まったために、介入前のNK細胞活性値が不安定だったのではないかと推察される。今後は、介入を手術後一定期間を経過してから開始するなど研究デザインを修正し、症例数も増やして検討していきたい。1)がん患者への精神科的介入として,どこの施設で誰が行っても一定以上の効果が得られるようなマニュアルを作成した。これは,毎回90分で毎週1回で計5回行うものである。この構成要素は,その構成要素は,(1)心理社会的教育(がんとストレスの関係,情緒状態と癌の進行の関係,情緒状態と免疫機能の関係,などを説明する),(2)問題解決技法(日常的な問題点や困難に対して現実的・具体的な解決方法を説明する),(3)支持的精神療法(受容・励まし・保証,などにより情緒状態の改善を図る),(4)リラクセーション(漸進性筋弛緩法や自律訓練法などにより心身のリラクセーションを図る),(5)イメージ療法(リラックスした状態でリンパ球やがん細胞をイメージし,がん細胞が退縮したり死滅していく場面をイメージさせる)などである。2)乳がん患者に,主治医とともに本研究の意義や,拒否・中断したとしても不利益を被ることがないことを十分に説明した上で,文書による同意書を得て,10人ずつのグループになり,上記の「構造化された」に参加した。3)カウンセリング前の情緒状態を評価するために,Profile of Mood States(POMS)質問表を施行し,免疫機能としてリンパ球サブセットやナチュラルキラー(NK)細胞活性をなどを測定した。4)終了後,再び上記の質問表を施行し,免疫機能も測定し,介入前後の情緒状態と免疫機能を比較した。

5)質問表のみ施行した40名では,POMS質問表からわかる抑うつ・活気の無さ・緊張や不安・混乱・情緒不安定などの各項目で著明にスコアが減少,すなわち情緒状態が改善することが分かった。免疫機能の測定が可能だった対象はまだ10名と少なく,統計学的な検討は出来なかった。本研究ではまず,乳がん患者47名に対して,文書による同意書を得た後に,週1回で合計5回から構成される「構造化された介入」を施行した。介入前後で施行したPOMS(Profile of Mood States)によれば,抑うつ・活気の無さ・疲労・混乱(いずれもp<0.05),および緊張・情緒不安定(いずれもp<0.01)などほどんどすべての項目で有意な改善がみられた次に,乳がん患者に対して「構造化された介入」を施行し,前後でナチュラルキラー細胞活性を測定した。この際,リンパ節転移のある場合には化学療法を施行する可能性が高いため除外し,転移がなくとも化学療法を施行施行した場合は除外した。化学療法は免疫機能に影響を与えるからである。また,温存療法で放射線療法を施行した場合も,同じ理由で除外したため,対象は32名であった。結果的には,介入前後でのNK細胞活性(lytic units/10^7 cells)の平均は介入前は14.64±9.90,介入後は14.89±11.70であり,有意差は認められなかった。このような「構造化された介入」によって,情緒状態に改善はみられたが,免疫機能に有意な増強はみられなかったことになる。その理由としては,対象数が少なかったこと以外に,介入が手術後2-3週間くらいで始まったために,介入前のNK細胞活性値が不安定だったのではないかと推察される.今後は,介入を手術後一定期間を経過してから開始するなど研究デザインを修正し,症例数も増やして検討していきたい。
PPAR-γを標的とした抗腫瘍活性天然物の探索とその併用効果に関する研究

PPAR-gammaアゴニストであるマグノロールは、Santalum album材より単離された新規抗腫瘍活性セスキテルペンのHL-60白血病細胞に対する選択的腫瘍細胞毒性を100倍以上増強させた。また、カンゾウから単離されたプレニルイソフラボノイド誘導体およびビャクシから単離された新規クマリン誘導体は、PPAR-gammaアゴニスト活性を有し、シスプラチンのA549肺腺がん細胞に対する細胞毒性を増強させた。その他、神秘湯エキスおよびマオウエキスにPPAR-gammaアゴニスト活性を見出した。ハマボウフウからPPAR-gammaアゴニストとして、3種のプレニルフロクマリン誘導体を同定した。種々のがん細胞においてPPAR-γが高発現していることから、近年PPAR-γリガンドの抗腫瘍活性や抗がん剤の増強作用が注目されている。そのメカニズムとして、PPAR-γリガンドのNF-κBやBcl-2抑制によるアポトーシスの誘導が示唆されている。平成25年度は、ビャクダンの心材より単離された5種のセスキテルペン類および2種のリグナン類と、天然物由来のPPAR-γリガンドであるマグノロールとの併用効果を検討した。セスキテルペン類(1.0 x 10-3、1.0 x 10-2、1.0 x 10-1、1.0、3.0、10μg/mL)もしくはリグナン類(1.0 x 10-3、1.0 x 10-2、1.0 x 10-1、1.0μg/mL)と、マグノロール(1.0μg/mL)を併用した場合のHL-60細胞に対する細胞毒性をMTT法により評価した。その結果、セスキテルペン類およびリグナン類はマグノロールとの併用により濃度依存的にHL-60細胞に対する細胞毒性が増強し、アポトーシスを誘導した。セスキテルペン類のうち、(9R,10E)-9-hydroxy-α-santalalの腫瘍細胞毒性はマグノロールとの併用により100倍以上増強し、1.0 x 10-2μg/mLの濃度でHL-60細胞に対してアポトーシスを誘導した。一方、セスキテルペン類もしくはリグナン類とマグノロールを併用しても、TIG3正常細胞に対する細胞毒性の増強は認められなかった。また、マグノロールは陽性対照として用いたetoposideやcisplatinの腫瘍細胞毒性も増強させなかった。以上、天然物由来PPAR-γリガンドのマグノロールは、ビャクダンより単離されたセスキテルペン類やリグナン類の腫瘍細胞毒性を有意に増強させ、アポトーシスを誘導することを見出した。種々のがん細胞においてPPAR-γが高発現していることから,近年PPAR-γリガンド活性物質の抗腫瘍活性や抗がん剤の増強作用が注目されている.平成26年度は平成25年度に引き続き,天然資源からのPPAR-γリガンド活性物質の探索,およびPPAR-γリガンド活性物質と既存の抗がん剤との併用効果を評価した.PPAR-γリガンド活性物質の探索は,EnBio RCAS Kit for PPAR-γNcoR(藤倉化成)を用いたランダムスクリーニングにより評価した.本キットはコファクターとしてNcoR(コリプレッサー)を用いているため,核内レセプターに結合する化合物のスクリーニング・評価を比較的容易に実施できる.腫瘍細胞に対する細胞毒性は,MTT法により評価した.その結果,単一化合物としてはビャクシから単離された新規クマリン酸誘導体と,カンゾウから単離されたプレニルフラボノイド誘導体に,また漢方薬の神秘湯(構成生薬:マオウ,キョウニン,カンゾウ,コウボク,ソヨウ,チンピ,サイコ)エキスにPPAR-γリガンド活性を認めた.新規クマリン酸誘導体とプレニルフラボノイド誘導体は,それぞれ10μg/mL,1.0μg/mLの濃度で,既存の抗がん剤であるエトポシドのA549肺がん細胞に対する腫瘍細胞毒性を約5倍増強させた.神秘湯エキスは20μg/mLの濃度で,エトポシドのA549肺がん細胞に対する腫瘍細胞毒性を約3倍増強させた.このほかに,漢方処方の大承気湯エキスと平胃散エキス,生薬の麻黄エキスと浜防風エキスにPPAR-γリガンド活性を見出した.これらエキスのPPAR-γリガンド活性は,本研究により初めて確認されたものである.昨年までの研究により,神秘湯(構成生薬:マオウ,キョウニン,カンゾウ,コウボク,ソヨウ,チンピ,サイコ)エキスに,PPAR-γリガンド活性とエトポシドのA549肺がん細胞に対する細胞毒性の増強活性を認めたことから,神秘湯の構成生薬を1つずつ抜いた1味抜き処方を調製し,それらのPPAR-γリガンド活性を評価した.その結果,マオウがPPAR-γリガンド活性に関与していることが明らかとなった.そこで,マオウエキスについてポリスチレン樹脂を充填したカラムに付して分画したところ,エフェドリンを含まない低極性画分にPPAR-γリガンド活性を認めた.また,別にPPAR-γリガンド活性を認めたビャクシエキス,ハマボウフウエキスについて,PPAR-γリガンド活性物質を探索した.その結果,ビャクシからは新規フラノクマリン5種,既知フラノクマリン2種を単離し,NMRを中心としたスペクトル解析によりそれぞれの化学構造を同定した.これらのうち,既知フラノクマリン1種にPPAR-γリガンド活性を認めた.