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スフィンゴミエリンとコレステロールの急性危険因子としての作用に関する研究

スフィンゴミエリン(SM)やコレステロール(Chol)が細胞に蓄積すると細胞死が誘導されるが、これらを高濃度で含有する血漿リポタンパクが過剰にあるときも細胞死が起こることを明らかにし、そのメカニズムを研究した。また、これら脂質を細胞より排出するHDL粒子の生成を生物物理学的に調査した。以下のように、脂質危険因子の急性細胞傷害について調査・研究した。1.タンパクフリーのリポタンパクモデルとして、表面単分子膜にレシチン(PC)の他、スフィンゴミエリン(SM),コレステロール(Chol)あるいはセラミド(CER)を含有するエマルションを調整した。その粒子径はアポリポタンパクや細胞との相互作用に影響するが、本研究補助金により購入した粒子径アナライザーを用いて調整した。細胞としてはヒト肝癌由来細胞HepG2、マウス単球マクロファージ様細胞J774を用い、アポリポタンパクの添加効果を調査した。2.高脂肪食後に血中に大量分泌されるカイロミクロンレムナントは急性心臓疾患の危険因子である。表面にCholを含有したカイロミクロンレムナントモデル粒子は、表面水和構造が変化してapoEと強く相互作用する。この粒子はHSPG-LRP経由で細胞に過剰に取り込まれ細胞を死に至らしめることが明らかになった(J.Lipid.Res., J.Biol.Chem.)。3.エマルション表面膜のSMあるいはCERによるドメイン形成を、蛍光リン脂質を用いた共焦点顕微鏡観察に基づき調査した。CERの含有により表面膜でドメイン形成がおこり、apoEの親和性が亢進した。この結果から、SM含有LDLが動脈表面に分布するSMaseにより分解・変性され、動脈硬化の危険因子となることが推測された(FEBS Letter)。4.変性LDL表面ではapoBが一部あるいは全部が脂質より遊離し、これが細胞障害の原因の一つになっていると考えられる。本研究で、脂質粒子にインタクトに結合しているapoBはほとんど細胞毒性を示さないが遊離状態では強い細胞障害性を有することを明らかにした。また、ApoA-Iなど両親媒性a-helixもほとんど細胞障害を示さなかった(投稿準備中)。1.高脂肪食後に血中に大量分泌されるカイロミクロンレムナントは急性心臓疾患の危険因子である。表面にCho1を含有したカイロミクロンレムナントモデル粒子は、表面水和構造が変化してapoEと強く相互作用する。この粒子はHSPG-LRP経由で細胞に過剰に取り込まれ細胞を死に至らしめることが前年度の成果より明らかになった。18年度はさらに、細胞内のCho1の分布、これによるアポートシスの誘導を精査した。その結果、Cho1は細胞内のリソソームに蓄積し、リソソーム膜のストレス、cathepsin-Lの細胞質への漏出、細胞障害の誘導に関わっていることが示唆された(投稿準備中)。2.レシチンとスフィンゴミエリンを含有する脂質2分子膜は室温付近で2相分離状態にあり、apoA-1により速やかに崩壊、preβ-HDL様微粒子化すること、また、Cho1の添加により、この過程が制御されること、さらにpreβ-HDL様微粒子化は分離している液晶相側で選択的に進行することを明らかにした(J.Lipid Res.48,882-889,2007)。3.変性LDL表面ではapoBが一部あるいは全部が脂質より遊離し、これが細胞障害の原因の一つになっていると考えられる。また、ApoA-1など両親媒性α-helixもほとんど細胞障害を示さなかった。さらに、細胞内外のCaイオンの動きを精査し、遊離apoBは細胞膜の透過性を障害していることを明らかにした(投稿準備中)。1.コレステロール逆転送系は、脂質のホメオスタシスを維持し脂質危険因子の過剰蓄積を防ぐ防御機構であるが、その最初のステップであるapoA-I一細胞膜相互作用によるHDL形成について、その機構解明と、細胞障害軽減効果の評価を行い、膜表面の脂質の不均一な分布、すなわちスフィンゴミエリンとコレズテロールによるラフトの存在が重要であることがわかった(J. Lipid Res.48,2007)2.脂質のホメオスタシス維持には膜とリポタンパク間の移動と交換が重要であるが、我々は世界ではじめてリアルタイム評価法を中性子散乱測定を基盤に構築した(Phys. Rev. Lett.98,2007)。3.変性LDLとしての遊離apoBの細胞障害が細胞膜の透過性を錯乱することに原因することを、細胞内外のCaイオンの漏れの評価より明らかにした(第127日本薬学会年会発表、投稿中)。4.脂質粒子(カイロミクロン、VLDLモデル)中の過剰CholやSMが細胞障害を引き起こすが、粒子濃度により主とする細胞取り込み経路に差異のあることが見出され、これを詳細に検討中である。交付申請書の研究目的に対する成果を以下に記す。

1.脂質粒子(カイロミクロン、VLDLモデル)中の過剰CholやSMがapoEの働きに媒介されて細胞障害を引き起こすことが、本研究の19年度までの成果により明らかになった。しかしコレステロール含有の脂質粒子の濃度が特に高いとき、apoEの媒介なしで細胞障害の発生することが発見され、これについて調査する。調査の結果、カイロミクロンやVLDLモデル、TO-PC/Cholエマルションは、高濃度において(生理的範囲)、apoE-independentに細胞に取り込まれ、リソソームにCholを過剰蓄積して細胞障害を引き起こすこと、その取り込みは、エマルションから細胞膜にCholが移り、その細胞膜Chol濃度上昇に起因すること、またシクロデキストリン誘導体を用いて細胞膜のChol含有を調整しても、エマルション取り込みが制御されることを明らかにした。2.コレステロール逆転送系は、上記の危険因子の蓄積を軽減する防御機構であるが、その最初のステップであるapoA-I-細胞膜相互作用によるHDL形成について解明を行う。さらにHDLと細胞膜間のコレステロールなどの脂質の移動を生物物理化学的に調査する。apoA-I-細胞膜相互作用は相互誘導適応型であり、膜表面のヘテロな脂質分布あるいは溶液中のapoA-IのpHdependentな高次構造調整により速やかにdisk様HDLが生成することを明らかにした。また、リン脂質やCholはナノ粒子であるHDL中ではそのポテンシャルが上昇し、HDL同士、HDL-生体膜間の移動が促進されることが明らかになった3.以上より脂質危険因子の細胞障害性とHDLによるその防御について総合的に検討する。これらの成果により、脂質分布のホメオスタシスに関わる生物物理学的因子を公表した。
上皮および内皮細胞内でのＧＡＳの病原性発現機構の研究

A群レンサ球菌は、上気道炎などの原因菌として多彩な臨床症状を引き起こす。上皮細胞に感染した場合、オートファジーにより速やかに囲まれ除去されるが、血管内皮細胞ではこのオートファジーが著明に抑制されることを見出した。即ち血管内皮細胞ではオートファジーを抑制する未知なる機構があることが想定される。しかしながら、今回血管内皮細胞を血管内皮細胞増殖因子VEGF存在下に培養した場合、A群レンサ球菌の除去が速やかに起こることを見出した。この除去はオートファジーではなく、エンドソームリソソーム系の活性化によるものであり、この活性化にはそれらの活性化を担う転写因子TFEBの一過的な細胞質から核内への輸送によるものであることを見出した。しかしながらこれはTFEBの機能制御を担うmTROC1を介したものではないことから、新規のTFEB制御経路が存在することを示唆している。一方さらにオートファジーには依存しないものの、オートファジーの実行分子LC3がそのようなエンドソームリソソームにVEGF処理依存にリクルートされることも見出した。以上の結果から、血管内皮細胞ではVEGFに依存して、これまで知られていないシグナル経路を介することにより、A群レンサ球菌を除去する仕組みがあることを見出した。同時にA群レンサ球菌は血液中のVEGFを分解する活性もあることを見出した。これらの分子機構はA群レンサ球菌感染症の格好の治療標的となり、今後の創薬への基盤を提供する重要な結果であると考える。血管内皮細胞の新たな信号伝達経路を発見したため。新たな信号伝達経路の分子的な実体を明らかにする。病原性細菌Group Astreptococcusは、上皮細胞および血管内皮細胞に侵入した場合、オートファジーに関して異なる反応を惹起することをこれまで見出してきている。すなわち後者では、前者で見られるオートファジーがみられない。このことはGroup A streptococcusの伝搬および病原性の発現に関与する可能性があり、そこで本研究では、内皮細胞におけるGroup Astreptococcusの振る舞いを細胞生物学的に検討した。その結果、Group A streptococcusが感染することにより、エンドソームの酸性度が低下することを見出した。さらにそれにはVEGFのシグナル伝達経路が関与することを明らかにした。VEGF存在下に培養した血管内皮細胞では、エンドソームの酸性化度が低下し、それがためにGroup A streptococcusの病原因子などの分泌が阻害されているというモデルが考えられる。実際、電子顕微鏡観察によりGroup A streptococcusは一重膜のエンドソームに取り込まれ脱出できず、オートファジーが亢進しないことが観察された。今後VEGFシグナリング経路がどのようにエンドソームの酸性度を制御するのか、その詳細な分子機構を明らかにすることにより、Group A streptococcusの血管内皮細胞の振る舞いを特徴づける背景を明らかにしていきたいと考える。当初の計画通り、内皮細胞の解析において重要な因子を見出すことに成功している。VEGFシグナリング経路の詳細を明らかにする。その下流に多くの制御因子が知られているため、どの因子が、エンドソームの酸性化に影響するのか、それぞれの因子のノックダウンを行う事により検討する。
逆コンプトンX線による生体イメージの観測

レーザーフォトカソードRFガンから得られる電子ビームの大出力化のための、レーザーのマルチパルス増幅を実施した。具体的にはNd:YLFレーザーの基本波である1047nmの119MHzのIR光を特別に設計したモジュレータにより自在に切り出す事に成功した。これにより、今回、100パルスの大強度IRレーザーを後置の増幅器により生成し、その後非線形結晶により2倍高調波及び4倍高調波であるUV光へ変換することに成功した。また、衝突用のレーザー光を増幅するためにパルスレーザー蓄積装置を実現し、マルチパルスX線の発生に成功した。本研究において予備的ではあるが、生体のX線像を取得した。本研究では、目的の実現に向け、以下のように実験的観点から研究を進めてきた。・高量子効率のCs2Teカソードシステムの構築を実施し、高性能な加速器空洞の製作に成功した。具体的には空洞のQ値として12,000という非常に高性能な空洞政策に成功した。また、空洞の周波数調整に必要なチューナーシステムも開発し、高い電場勾配を持つ新規の超高真空空洞の製作を完了した。これにより、RFパワー10WWにおいて5MeVを超える電子生成に成功するとともに、5nC近い単バンチ電子ビームの生成にも成功し、来年度のマルチパルス発生への目処をつけることができた。・ピコ秒Nd:YLFレーザーの高輝度化技術を更に発展させ、1047nmの基本波を30mJにまで安定増幅し、マルチパルス化の基礎検討を実施し光学設計を完了、次年度に具体的なシステム構築を行える状況となった。・単バンチで発生させた電子ビームについては、詳細な計測を必要としておリ、今年度は電荷量及びエネルギーの入射位相依存性について、詳細なデータを得た。・種々のパラメータを調整し、高度な電子ーレーザー衝突を実現するための高真空チェンバーを製作し、400eVを超えるエネルギーの軟X線の発生を確認した。但し、電子ビームの制御が未だ充分でなく、大きなバックグランドが発生した。そのため来年度以降、電子ビーム制御について更に検討を行っていく必要があることが明確になった。・一方、軟X線の顕微鏡応用の基礎検討としてDeepUVレジストの高感度化を目指した開発も実施し、UVプレ照射法を新たに開発し、数μJICTn2程度まで市販の化学増幅型レジストの感度を向上させることに成功した。昨年度に引き続き、レーザーフォトカソードRFガンから得られる電子ビームの大出力化を目指した研究を推進した。具体的には、既存のNd:YLFシードレーザーを我々が新規に開発し設置したマルチパルス再生増幅器に導入し、1Rレーザーのマルチパルス増幅システムをの設計・開発を行い、その基礎試験を行った。ここで得られた1Rマルチパルスレーザーを更に非線形光学結晶に導き、20パルスの大出力第二高調波の生成に成功した。現在更にこれら第二高調波を第四高調波へ変換するための光学系の最適化を進めている。一方、新規に導入したGs-Teフォトカソードから得られる電子ビーム生成の量子効率を最大限活かすためのレーザー入射位相制御法についても、その基礎を確立する事ができた。一方、X線による2次元画像取得のために必要な検出システム開発も進めた。まずX線集光光学系については、軟X線の集光を最大にするためのキノホルム型ゾーンプレートの設計と電子線描画装置によるパターン作成を実施し、素子開発に目処をつけることができた。また、2次元画像パターンを精度良く得るために、高感度のUVレジストの解像度評価及び感度評価を実施するとともに、より少ないX線量で感光が可能なように、プレ照射法という新規の感度増強に関する手法もほぼ確立する事ができた。これらの研究の進展により次年度に実施する高輝度軟X線生成とそれを用いた2次元画像取得への基礎を確立する事ができた。今年度は、レーザーフォトカソードRFガンから得られる電子ビームの大出力化のための、レーザーのマルチパルス増幅を実施した。具体的にはNd:YLFレーザーの基本波である1047mの119MHz IR光を特別に設計したモジュレータにより自在に切り出す事に成功したた。これにより、今回、100パルスの代強度IRレーザーを後置の増幅器により生成し、その後非線形結晶により2倍高調波及び4倍高調波であるUV光へ変換することに成功した。これにより、UV光の100パルスレーザートレインを発生させる事に成功した。このレーザーパルスとレインを高量子効率のフォトカソード(Cs2Te)を備えたRFガンに導入し、100パルスのピコ秒電子線を安定に発生させる事に成功した。

一方X線検出については、最終的にはnmレベルの解像度を求めているため、UV及びX線レジスト(TDUR-P722及びZEPシリーズ)の高感度化を目指した研究を実施し、従来の感度を1桁以上向上させる事に成功した。また同時に、衝突用のレーザー光を増幅するためにパルスレーザー蓄積装置を実現し、マルチパルスX線の発生に成功した。またX線のパルス長及びエネルギー等の計測についても検討を加えた。具体的には、シンチレータ(LYSO)及びHOPGを用いて種々の計測を実施した。これにより発生させたマルチパルスX線のパルス長が約7.5psと計測された。またエネルギー測定についても分解能等の評価を通じ、数10keVのX線に対する精度のよい計測が可能となった。
肝細胞の蛋白質発現制御機構に関する初代培養系を用いた免疫細胞化学的研究

2.胎生17日目の胎仔ラットの肝臓から肝細胞を単離し、20%の牛胎児血清を含むウイリアムスE培地でovernightインキュベートした。インキュベート後、各々(1)EFG,Insulin(2)EGF,Insulin, DEX(3)EGF, Insulin, DMSO(4)EGF, Insulin, Sodium butyrateを添加した培地に置き換えて36日間培養した。培養後、固定し、c-myc, GST-P, AFPついて免疫染色を施した。その結果、(1)の培地のものではAFPのみが強陽性に染まり、c-myc, GST-Pについては陰性であった。又、(2)と(4)の培地のものではAFPは陰性であったが、(3)の培地のものではAFPは陽性であった。これらの結果は胎仔ラットの培養肝細胞ではAFPが最も発現が強く、DEXとSodium butyrateはAFPの発現を抑制するが、DMSOはその発現を抑制しないことを示している。Seglenの方法によって成熟ラットの肝臓にコラゲナーゼを還流して、肝細胞を単離し、コラーゲンをコートしたプラスチックシャーレ中で培養した。培地は10%子牛血清を含むウイリアムスE培地を用いた。この培地にジメチルスルホキシド(DMSO),レチノイン酸(RA)及びデキサメサゾン(DEX)等の分化誘導剤又はEpidermal Growth Factor(EGF)を加え細胞の分化、増殖を誘導し、その結果、発現の増加した蛋白質を免疫細胞化学的に検出した。DMSOとDEXを添加した培地で培養すると1日目に早くも肝細胞間に毛細胆管様の隙間ができ、RAとDEXを添加した培地では3日目頃に同様の構造が出現した。培養3日目に固定し、抗-アルカリフォスファターゼ抗体を用いて免疫細胞化学的反応を行うと、毛細胆管様間隙の部位に陽性反応が観察された。又、細胞間結合しなかった孤立した肝細胞ではゴルジ野と思われる核に接した細胞質の一部に陽性反応が観察された。EGFを添加した培地では肝細胞は増殖し、平坦に広がった細胞のシートを形成した。この培養条件下ではalpha-Feto-protein,Glutachione S-transferaseの免疫細胞化学的反応において、平坦に広がった細胞間に出現した少数の小型細胞に弱い反応が検出された。EGF添加培地で培養して増殖刺激を行い、数時間後にDMSOとDEXの添加培地と交換し培養すると23日目に肝細胞間に毛細胆管様間隙が形成され、その部位は免疫細胞化学的反応において、アルカリフォスファターゼの陽性反応を示した。肝細胞の単離後,ジメチルスルフオキシド(DMSO)を含む培地で培養した肝細胞ではAlkaline phosphatase(ALP)は毛細胆管様間隙を取り囲む細胞膜に局在したが,上記培地にコルヒチンを添加した培地で培養したものでは細胞質内に多数出現したライソゾーム様の大きな顆粒内に存在した。又,抗チューブリン抗体を用いた蛍光抗体法で微小管を染めるとDMSO培地で培養した肝細胞では線維状の微小管が細胞質内に網目状に分布するがコルヒチン添加培地では線維状の微小管は消失した。このことからコルヒチンによってALPの肝細胞内から細胞膜への輸送が阻害されることが明かになった。現在上記についての論文を作成中である。Cyclic AMP又はタウロコール酸を含む培地で培養した肝細胞ではALPの発現がやや増加し,ALPの局在を示す強度な免疫細胞化学的反応が細胞質に存在した。しかし、これらの薬物には毒性があり,特にタウロコール酸を含む培地で培養したものでは培養中に死滅した肝細胞が多数存在した。一方,γ-Glutamyl transpeptidase(γ-GTP)は無添加のウイリアムスE培地で培養した肝細胞では少数の細胞の細胞質にγ-GTPの酵素細胞化学的反応が検出された。デキサメサゾンを添加した培地で培養した肝細胞ではγ-GTPの存在する細胞数が増加しγ-GTPは細胞の表面に局在する傾向になり,γ-GTPの発現及び肝細胞の分化が促進されたことが明らかになった。

上皮成長因子を含む培地で培養して増殖刺激を行った後,デキサメサゾンを含む培地で培養した肝細胞では更なる発現の増加は見られなかった。2.胎生17日目の胎仔ラットの肝臓を細切してcollagenase液中で37°Cで振とうして肝細胞を単離し、20%の牛胎児血清を含むウイリアムスE培地でovernightインキュベートした。インキュベート後、(1)DEX (2)EGF, Insulinを添加した培地中で3日間培養した。培養後、固定し、c-myc, GST-P, AFPについて免疫染色を施した。その結果、(2)の培地のものではAFPが強陽性に染まり、(1)の培地のものではAFPの陽性細胞数は減少した。c-myc, GST-Pについては(1)(2)ともに陰性であった。すなわちこの時期の肝細胞ではAFPが最も発現が強く、かつDEXによって抑制されることを示している。
軍隊アリと共生する好蟻性ハネカクシの種多様性と種分化

世界各地(ペルー,タイ,マレーシア,フィリピン)で野外調査を行い,多数の目的の好蟻性ハネカクシの標本の採集に成功した。関連する分類群に関する分類学的成果を発表し,分子系統学的な研究を行った。平成22年度は、まず標本採集のため、4回にわたる海外調査を行った。5/115/19は主なフィールドとしているマレーシア、セランゴール州、マラヤ大学演習林を訪れ、これまでに採集できていなかった種の採集を目指し、いくつかの新種を採集することができた。10/1711/3には、タイ、バンコク近郊、カエンクラチャン国立公園を訪れ、これまでほとんど未調査だった地域であることから、非常に多くの未知種を採集することができた。11/1611/27には、再びマラヤ大学演習林を訪れ、さらなる追加種の採集を行った。12/1612/21は香港の嘉道理農場植物園を訪れ、未調査の地域で調査を行い、いくつかの新しい種を得ることが出来た。これらの野外調査と同時に、学生アルバイトの補助を得て、採集した昆虫の標本作製を進め、好蟻性昆虫のまとまったコレクションの一部を形成した。さらに標本から、DNAの抽出、PCR、シーケンスを進めた。また、生物顕微鏡(ニコンエクリプス50i)を購入し、分類学的な基礎づくりのため、分類の研究も進め、いくつかの論文を発表した。論文は軍隊アリと共生するハネカクシに関するもののほか、軍隊アリの捕食対象であるシロアリと共生する好白蟻性のノミバエとハネカクシ(近縁種間で、軍隊アリとの間で寄主転換が見られる)や、潮間帯性ハネカクシ(主題のハネカクシが属するヒゲブトハネカクシ亜科のもので、同亜科の形態学的研究として関連がある)を含んでいる。2011年度はマレーシア(マレー半島・ボルネオ)、南米のペルー、タイにおいて野外調査を実施した。これらの調査により、主な研究材料となるマレーシア産の標本は充分に集めることができ、今後の分類学的研究、分子系統学的研究に活用する見込みであるごさらに、補助的な研究材料となる南米産のグンタイアリ類と共生する種の標本も主要なものを手にすることができた。これらの材料は、軍隊アリと共生するハネカクシの形態進化の考察、収斂進化の可能性について議論するうえで欠かせないものであり、画期的な研究成果に結び付くことが期待される。また、得られた新鮮な標本に基づく分類学的研究、DNAシーケンス情報の蓄積も準めている。分類学的研究では、ボルネオ・(マレーシア・サラワク州)のランビル国立公園に生息し、ツヤヒメサスライアリAenictus laeviceps種複合群と共生するハネカクシをまとめ、複数の新種や新属を記載するとともに、寄主特異性の強さや生物地理学的な考察を行った。この研究により、同所的に生息している多数のヒメサスライアリの種ごどにハネカクシが種分化している可能性が示唆され、隠れた生物多様性の存在が浮かび上がった。また、分子系統学的な研究として、、ミトコンドリアDNAの塩基配列をもとに、ヒメサスライアリヤドリ族の系統解析を行い、適応放散の可能性について言及する内容を日本昆虫学会で口頭発表した。好蟻性昆虫としてきわめて顕著な形態を持ち、さまざまな形で寄主アリとの関わりをもつハネカクシが、実際にどのような進化プロセスを経て多様化しているのかを考察する重要な足がかりとなる研究といえる。軍隊アリのなかで調査の進んでいないヒメサスライアリとハシリハリアリに焦点を絞った調査として、カンボジアとフィリピンで野外調査を行った。カンボジアは過去に野外調査が行われたことがなく、シェムリアップ近郊のアンコールワット遺跡の周辺で徹底的な調査を行った。フィリピンでは、これまで(1950年代以前)にミンダナオ島のみで調査が行われてきたが、今回はルソン島とミンドロ島で調査を行った。どちらの調査においても、これまでに得られたことのないヒメサスライアリとその共生者を得ることができたが、残念ながら共生するハネカクシを得ることはできなかった。ただし、カンボジアにおいて、ハシリハリアリの巣より、まったく未知のハネカクシを採集することができた。ハシリハリアリには原始的な形態を保持する共生ハネカクシがおり、旧世界の軍隊アリ共生ハネカクシの進化をときあかす重要な材料を得られたことになる。また同時に、得られた標本により、分類学的な研究と分子系統解析も行った。分類学的な研究では、マレーシア、タイ、カンボジアで得られた標本のなかに、10種以上の未記載種を確認し、現在記載論文の準備を進めている。また、ミトコンドリアDNAと核DNAを用いた分子系統解析も進めており、きわめて速い形態の進化の様子や寄主アリにあわせて多様化した適応放散の可能性が示唆されるきわめて興味深い結果が得られた。今後、随時論文として発表していく所存である。また、軍隊アリとシロアリの捕食被食の関係で、進化の過程で共生生物が入れ替わることがあり、シロアリと共生する昆虫の多様性に関する研究も関連して行い、いくつかの論文を発表した。また、ハネカクシの形態学的研究の一環として、自由生活種の記載分類も進めた。

研究は計画通り順調に進んでいるが、調査の過程で数多くの新種が見つかり、さらなる調査の必要性が出てきた。充分な標本を得るには、まだ時間がかかりそうである。24年度が最終年度であるため、記入しない。調査の過程で数多くの新種が見つかったため、それらの記載分類を進める必要がある。また、正確な系統関係の推定にあたり、より充実したDNAシーケンスデータの蓄積が必要であり、実験作業をさらに進める必要がある。今後はさらなる野外調査の推進と、成果公表に向けた分子実験を行う予定である。
心拍変動波解析による自律神経機能のレーダーチャート式バランス評価法の応用拡大

この研究で4度の文部省科学研究費補助金、特に最初に試験研究で先ず開発した独自のプログラムによる心拍変動解析器にて試行錯誤のすえ、ほぼ満足できる多くのデータを得てきた。これによってその後数年利用してきたR-R間隔信号採取解析システム機器のOSはMS-DOSで、ここで解析されたデータ中の一定の数値を別のOS機動のMacintoshソフト(エクセル・デルタグラフ)で計算とグラフィック表示をさせるという2段階方式で「自律神経系機能のバランスと歪み」を総合的にレーダーチャート式グラフィック評価する方法を実用化させた。その後はこれら過去の本件に関する成果の集大成として、次ぎにこれを一つのパソコンで一本化し、かつできるだけ小型化して往診でいずれの場所でも最終グラフィック表示をその場で行え診断までできるシステムを新たに開発することを目的としてきた。そのため患者からオンラインで心電図信号をブック型のパソコンに特殊なソフトをプログラミングして一元化した新たなシステムにまで完成させることができた。すなわちこの新しいシステムにより、患者の心拍変動信号を採取したその場で「交感神経・副交感神経機能バランスの歪み」が直ちに正六角形のレーダーチャートに描出でき、どの様な“歪み"状態か、どの様な“バランス調整能"を有しているかを患者の目前で診断、同時に画像で見せることもできる様になった。広く一般臨床の現場での実用化に大きく前進させられる見通しとなった。この心拍変動解析法は患者の自律神経機能を簡単に測定できるので、21世紀に向けた音楽療法など人の心を癒す仕組みの解明にも応用しつつある。この研究に着手してから10年、開発した独自のプログラムによる心拍変動解析器で試行錯誤のすえ、ほぼ満足できる多くのデータを得てきた。これら過去数年にわたり利用してきたR-R間隔信号採取解析システム機器のOSはMS-DOSで、ここで解析されたデータ中の一定の数値を別のOS機動のMacintoshソフト(エクセル・デルタグラフ)で計算とグラフイック表示をさせるという2段階方式で自律神経系機能のバランスと歪み」を総合的にレーダーチャート式グラフイック評価する方法を実用化させた。本年度は過去の本件に関する成果の集大成として、これを一本化して複雑さを解消し、かつできるだけ小型化して往診でいずれの場所でも最終グラフイック表示診断までできるシステムを新たに開発することを目的とした。そのため患者からオンラインで心電図信号をブック型のパソコンに特殊なソフトをプログラミングして、その組み合わせで今まで2つのシステムで行ってきたことを一元化した新たなシステムを完成するところまで完成させることができた。すなわちこの新しいシステムにより、患者の心拍変動信号を採取したその場で「交感神経・副交感神経機能バランスの歪み」が直ちに正六角形のレーダーチャートに描出でき、どの様な′′歪み′′状態か、どの様な′′バランス調整能′′を有しているかを患者の目前で診断、同時に画像で見せることもでき、広く一般臨床の現場での実用化に大きく前進させられる見通しとなった。心拍変動が自律神経機能と密接な関係にあることを利用するため開発した独自の心拍変動解析器で過去多くのデータが得られたが、次いでデータの一部を別のOS(マッキントッシュ)に入力して「自律神経系機能のバランスと歪み」を総合的にレーダーチャート式グラフイック評価する方法を考案した。更に臨床現場での応用に便ならしめるため、この過程を一本化してどこにでも持ち運びできる小型パソコンでこれが可能になる様に研究を重ねた。その結果9年度に新しく完成したブック型のシステムである小型パソコンに、患者からオンラインで心電図信号を小型心電計でとりいれ、その結果と従来型とのデータ上の比較を行い正確に表現しているかどうかのチェックを行ってきた。この新しいシステムの完成で、患者の心拍変動信号を採取したその場で「交感神経・副交感神経機能バランスの歪み」が直ちに正六角形のレーダーチャートに描出でき、どの様な“歪み"状態か、どの様な“バランス調整能"を有しているかを患者の目前で診断、同時に画像で見せることもでき、広く一般臨床各科の現場での実用化に大きく前進させられた。

今後は広く他施設でも利用してもらえるような普及活動を行い、論文、学会・研究会にて発表し、その目的をより広めてゆくことにつとめることができるところまで研究成果を上げることができた。またこの心拍変動解析法による自律神経機能の測定は「音楽運動療法」の医学的評価に応用することもでき、本年度にはNHKテレビや新聞記事にて紹介された。
「親子が離れて過ごすこと」に着目した児童期の子どもの自立に関する長期縦断研究

2013年から追跡を続けている約180の家庭に加え,新規に幼稚園年長児,小1の子どものいる家庭にも調査に参加してもらい,これまで同様,(1)子どもを家に置いて親が外出する,(2)母子で外出し,外出先で母子が一時的に別行動をとる,(3)子どもが母親の同行なしに外出する,の3点について,連続5日間,記録を行ってもらった。データを収集したのは,2018年5月と12月の2回であった。また,このなかの20家庭については,さらに詳細な家族行動調査にも協力を依頼し,上述したものとは別に,連続5日間の記録を依頼した。この間,電話でのインタビューも行い,データの精緻化をはかった。これら20家庭に対しては,学生アルバイトが家庭訪問を実施し,母親へのインタビューを行うことに加え,子どもに対しては,よく遊ぶ場所,出掛ける場所,自宅付近の地図描画などの調査も実施した。調査開始から5年以上が経過し,子どもが親と離れて過ごす時間は増え,その多様性も着実に広がっていることがわかってきた。20家庭の詳細データからは,家族の共行動が減り,離れる,近づくのバラエティーが広がってきているのに加え,子どもの描く地図からは,高学年に近づくにしたがって,町の風景の見え方が着実に変化を遂げていることが伺える。現在,別の研究グループで,他の地域でのデータ収集も進めており,地域環境が子どもの自立に及ぼす影響についても,一定の成果があがるものと予想している。データ収集は順調に進んでいるが,ドロップアウトがややあったのと,データの入力,分析の作業がなかなか追い付かず,成果発表に少し時間がかかっている。集めたデータの入力を学生アルバイトなどを使って進めたい。また,夏に行われる国際学会(ヨーロッパ発達心理学会)で,成果の一部を発表する予定である。データ収集に関しては,6月,12月の2回を予定している。最終年度なので,一定の成果を発表できるよう善処するつもりである。2013年から追跡を続けている約200の家庭(子どもが小2,小3,小4)に加え,新規に幼稚園年長児,小1の子どものいる家庭にも調査に参加してもらい,これまで同様,(1)子どもを家に置いて親が外出した事例,(2)母子で外出し,外出先で母子が一時的に別行動をとる,(3)子どもが母親の同行なしに外出する,の3点について,連続5日間,記録を行ってもらった。また,このなかの20家庭については,さらに詳細の家族行動調査にも協力を依頼し,上述したものとは別に,連続5日間の記録を依頼した。また,これら20の家庭には,学生アルバイトが家庭訪問を実施し,母親へのインタビューのほか,子どもに対しては,よく遊ぶ場所,出掛ける場所,自宅付近の地図描画などの調査も実施した。データ数が膨大であるため,分析がまだ十分に進んでいないが,目下,入力作業を進めているところである。年度内に2回の調査を計画していたが,やや時期がずれて,たったいま(2018年5月)2回目の調査を行っているところである。分析作業もやや遅れている。引き続き,縦断調査を実施する。今年度は,5月,10月,そして2019年3月の3回の調査を予定している。調査を2回実施する予定であったものが,さまざまな事情で,1回しか実施できなかったため,50万円弱が繰り越しされた。だが今年度は,3回の調査を予定している。

協力者への謝礼,学生アルバイトに支出する人件費,アンケート回収にかかる郵送代などに使用することを予定している。調査を3回実施する予定でいたものが,さまざまな事情で2回になってしまったことから,研究費が一部残ってしまった。今年度は,2回の調査ならびに,国際学会での発表にかかる渡航費に研究費を使用する予定である。
移民受入れ国-送出し国の政策相互連関――国際社会学からの比較研究

本プロジェクトの目的は、越境移動のグローバル化の中で、個別の送出し国の視点に立った移民政策の分析を乗り越え、移民受入れ国と送出し国の政策の相互関係を、その交渉・対立・妥協について検討することにある。この視点から、2018年に改定された入管法によって始まる新たな受入れがどの様な変動を引き起こすかを、国内における制度形成過程を分析しつつ、同時にベトナム、フィリピン、インドネシア等の国々との交渉過程と現地での送り出しの制度化の比較分析を行う。この上で、さらに日本とアジア諸国、合衆国とメキシコ、EUと周辺国という3大地域の対照を軸としながら、各国の国際比較を行う。国際的な移民の問題は、今後ますます重要な課題である。特に、移民の送出し国、受け入れ国相互の連関や対立などは、広範囲な社会的影響があり、この社会的プロセスに言及し、取り組む本研究は極めて推進すべき重要な研究課題である。個別国家の受け入れ政策を超えて、<受け入れ国ー送出し国>関係を主軸とした多角的な移民政策と移民現象の分析枠組みを提案することは非常に意義がある。また、これらの研究成果は今後の日本の政策だけでなく、世界へ研究発信できる価値のある研究であり、世界、日本の深刻な問題の課題解決に貢献できる効果が期待できる。
心臓線維化発症における分子機構の解明

申請者はCol1a1プロモーター下にGFPを発現するトランスジェニックマウス(Col1a1-GFPマウス)の心臓初代線維芽細胞を不死化することで、心臓線維芽細胞株を樹立することに成功している。さらに、この細胞株に対し乳酸を刺激することでCol1a1遺伝子発現が増加し線維芽細胞が乳酸により活性化することを確認することができた。乳酸投与により、核内にHIF-1αが誘導されることをウェスタンブロットで確認しており、乳酸が線維芽細胞においてHIF-1αを誘導しCol1a1遺伝子発現が上昇する機序の解明を試みた。乳酸投与により、核内にHIF-1αが誘導されることをウェスタンブロットで確認しており、乳酸が線維芽細胞においてHIF-1αを誘導しCol1a1遺伝子発現が上昇する機序の解明試みた。まず、HIF-1αに対するsiRNAを用いて、乳酸によるCol1a1発現にHIF-1αが関与しているかを検討した。その結果、siRNAによりmRNAレベルでHIF-1αのノックダウンが得られていることは確認されたが、HIF-1αに対するsiRNAの有無によって乳酸によるCol1a1発現の増加は変わらなかった。HIF-1αの核内集積とCol1a1発現への関係につき今後とも検証を加えていく。それ以外にもCol1a1遺伝子発現を上昇に寄与する細胞シグナルとしてTGF-bシグナルやNAD+依存性脱アセチル化酵素であるSirtuinなどを阻害剤を用いて検証した。TGF-b受容体ALK5の阻害剤であるSB-431542を用いて乳酸のCol1a1発現の上昇とSmadのリン酸化を介したTGF-bシグナルが関与しているか検証を行ったが、こちらも阻害剤を使用することで有意な変化は認められなかった。Sirtuin阻害剤を用いた検証でも、乳酸によるCol1a1発現の増加に変わりはなく、Col1a1発現の上昇はsirtuinを介したものではないことが分かった。今後は、乳酸によるCol1a1発現上昇に関与する細胞内シグナルの同定とともに、生体内での線維芽細胞活性化因子の同定を進めていく。1Col1a1-GFPマウスの心臓より線維芽細胞培養株を樹立した。この線維芽細胞培養株はTGF-βによる刺激で活性化することを確認している。また乳酸による刺激により、線維芽細胞活性化を確認している。また、乳酸刺激時、線維芽細胞の核内でHIF-1αが蓄積していることを確認することができた。HIF-1αの核内移行およびCol1a1のプロモーター領域への結合を介してCol1a1発現が増加しているのではないかと想定した。HIF-1αのsiRNAを用いた実験では、Col1a1発現は変化せず、HIF-1αの関与は示すことができなかった。TGF-βーsmadシグナル、sirtuinを介した細胞内シグナルの関与についてそれぞれ阻害剤を用いて検証したが、阻害剤によるCol1a1遺伝子発現の低下は認められなかった。また乳酸刺激による線維芽細胞活性化がpHの低下を介しているかについても検証を行った。DMEM培地に塩酸を加え乳酸を加えたときと同様にpHを低下させた場合も、Col1a1発現の上昇を認めた。乳酸を介した細胞外pHの低下により線維芽細胞の活性化が促されている可能性が示唆された。HEPESを培養液中に加えることで、乳酸によるpHの低下を緩衝したところ、Col1a1発現は低下した。細胞外のpH低下を感知する受容体として、細胞外pH感知Gタンパク質共役型受容体であるGPR4、G2A、OGR1、TDAG8が存在することが知られている。pHが低下した際のこれらの受容体のmRNA発現レベルを確認した。その結果、一部のpH感知Gタンパク質共役型受容体は乳酸刺激により増加しており、Col1a1遺伝子発現が上昇に対する関与を検討した。pH低下時に遺伝子発現上昇を認めた受容体に対する阻害剤を用いて検証を行った。その結果、いずれの阻害剤も乳酸刺激時にCol1a1発現を有意に低下させることはなかった。同細胞株に対しレンチウイルスライブラリーを用いた細胞内シグナルスクリーニングを行い、Col1a1転写にかかわるいくつかの細胞シグナルの候補を同定した。そのうち、TGF-bシグナルやNAD+依存性脱アセチル化酵素であるSirtuinなどを阻害剤を用いて検証したところ、TGF-b受容体ALK5の阻害剤であるSB-431542を用いて乳酸のCol1a1発現の上昇とSmadのリン酸化を介したTGF-bシグナルが関与しているか検証を行ったが、こちらも阻害剤を使用することで有意な変化は認められなかった。クラスIIIヒストン脱アセチル化

酵素であるSirtuinを阻害するsirtinolとsplitomycinを用いた検証でも、乳酸によるCol1a1発現の増加は阻害剤の有無によって変わりがなく、乳酸によるCol1a1発現の上昇はsirtuinを介したものではないことが分かった。細胞内シグナルのうち、低酸素誘導因子であるHIF1αシグナルを検証したところ、乳酸刺激により線維芽細胞核内にHIF1αの集積を認め、Col1a1転写の亢進することを確認することができた。今後、乳酸によりHIF-1αが核内に蓄積する機序についても明らかにするため、PHD2の水酸化酵素活性について検証する。マンマリアン・ツー・ハイブリッドアッセイによるPHD2とHIF-1αのタンパク質相互作用の変化について検証する。またHIF1α抗体を用いて、クロマチン免疫沈降アッセイを行い、Col1a1プロモーター領域へのHIF1αの結合を検証する予定である。申請者はCol1a1プロモーター下にGFPを発現するトランスジェニックマウス(Col1a1-GFPマウス)の心臓初代線維芽細胞を不死化することで、心臓線維芽細胞株を樹立することに成功している。さらに、この細胞株に対し乳酸を刺激することでCol1a1遺伝子発現が増加し線維芽細胞が乳酸により活性化することを確認することができた。乳酸投与により、核内にHIF-1αが誘導されることをウェスタンブロットで確認しており、乳酸が線維芽細胞においてHIF-1αを誘導しCol1a1遺伝子発現が上昇する機序の解明を試みた。引き続き、乳酸によりCol1a1発現が増加する機序について解明を試みる。細胞内シグナルを同定するため、線維化への関与が示唆されているMRTF-Aの関与を検証する。阻害剤であるCCG-1423を用いて、MRTF-Aの核内移行を抑制し、転写活性を阻害したうえで、乳酸によるCol1a1発現に対するMRTF-Aの影響を検討する。また、乳酸投与時にHIF-1αが核内に集積しており、HIF-1αの認識配列である低酸素応答配列下にルシフェラーゼを発現するレポーターアッセイをおこない、乳酸存在下でHIF-1αの転写活性が増加しているかを検討する。siRNAを用いた検証ではHIF-1αのノックダウンにより十分なCol1a1発現の低下は得られなかったが、ノックダウンによってもHIF1αタンパク量としては十分の転写活性を有している可能性もあり、ほかのHIF-1α標的遺伝子発現の低下を確認する。また、HIF-1αの集積により細胞内代謝が変化し酸素消費が低下している可能性がああり、酸素消費速度、細胞外酸性化速度の変化を細胞外代謝フラックスアナライザーを用いて検証する。乳酸が代謝基質として利用されている可能性を検証するため、13Cでラベルした乳酸を用いて、乳酸の分解物がどのように細胞内で蓄積するかを質量分析をお行い検討する。コハク酸の蓄積によりHIF-1αの水酸化酵素であるPHDの酵素活性は低下しHIF-1αが蓄積することが知られており、乳酸投与下で細胞内コハク酸濃度の変化につき検証する。
日本文学における国際的研究理論と互換システム構築をめざして-文化表象を中心に

研究成果として日本文学・文化に関する基礎的検索データ構築のための、北米英語圏約1000名の日本文学研究者リスト、及び3630件の著作論文データ収集、さらに立命館大学における3回の国際シンポジウム(2007年6月「イタリア観の一世紀」、同年12月「国際乱歩コンファレンス」、2009年3月「東南アジアとの通路」)の開催を本研究の成果とする。その詳細は本研究プロジェクトHP上において一般に公開されている。2006年度は2回のシンポジウムと9回の研究会(立命館大学国際言語文化研究所と共催)をおこない、海外の日本文学・文化研究者情報のデータベース化を進展させ、公開に向けた整備を行った。シンポジウム第1回(2006年7月29日30日)は、ゲスト・スピーカーを迎えて2つのラウンド・テーブル「Figuralityと近代意識の発展」(チャールズ・シロー・イノウエ氏、タフツ大学)、「表象文化研究と国際交流」(マイケル・ボーダッシュ氏、UCLA)をもった。ともに、今日の視覚性と日本文学・文化にかかわる研究理論の方法論的転回を模索するきわめて重要なテーマである。イノウエ氏の指摘する「Figurality」という概念は、視覚的情報を言語の代替的機能を果たすものとして「読んで」きたこれまでの文学研究者側からのアプローチを完全にくつがえすものであり、発展可能性に満ちた分析枠組みの提示であった。また後者は、90年代に先進諸国における文化的同調性が強まって以降、持続的な交流形態の維持が失われてきているのではないかという逆説的現象の指摘であった。こうした理論的研究を支える基盤的情報交換システムを整備する我々の活動の必要性を強く再認識することとなった。これらは、「日本近代文学」第75集(2006年11月15日)展望欄に改題の上報告された。シンポジウム第2回では「<外地の日本語文学>を越えて」(西成彦氏、立命館大学)、「表象のパラドックス-記号・意味・強度-」(中村三春氏、山形大学)、「Recent Trends in Japanese Studies in Australia」(Vera Mackie氏、メルボルン大学)、「タイにおける日本語・日本文学研究の現況」(Namthip Methasate氏、チュラルンコン大学)と4本の発表を組み、多岐にわたる議論を展開することができた。本年度本科研の主要な研究成果として、2007年6月、および12月に開催した2つの国際シンポジウムがある。先ず、6月29日から30日に「イタリア観の一世紀」と題する日本とイタリアの交渉史、および相互の文化表象イメージを考える国際シンポジウムをイタリア東方学研究所、立命館大学国際言語文化研究所主催にて開催したが、この実行にあたって本科研メンバーが中心的な立案、実行に参画した。ナポリ東洋語大学、ローマ大学、ニューヨーク州立大学、コペンハーゲン大学から海外研究者の参加があった。また、12月79日の「乱歩コンファレンス」は本科研メンバーを中心に企画され、北米、ヨニロッパからの海外研究者11名、日本側研究者9名がコンファレンス・スピーカー等として参加し、参加者のべ300名以上を集めた。双方の国際シンポジウムにて、ヨーロッパ、北米圏における日本研究、日本文化研究の実際的な相互互換を実行して、なお今後の同一テーマにおける発展を期すことを確認しあった。また、このような国際的な理論構築にむけたワーキングテーブルを今後精力的に推進していくことについても合意した。特にアジア圏での研究状況のフィードバックをはかっていくことを次年度は予定している。本年度における主要な研究成果として2009年3月14日・15日に立命館大学にて開催された東南アジアを中心とした日本文学・文化研究者による国際ワークショップ「東南アジアとの通路」を挙げることが出来る。このワークショップでは、これまで詳細にその研究動向が取り上げられることがなかった東南アジア圏域における日本文化・文学研究の現状が報告された。このワークショップの開催にあたって本科研メンバーが中心的な立案、実行に参画した。海外参加者はタイ2名・ベトナム3名・マレーシア2名・インド1名・インドネシア1名からなるもっとも積極的に活動する日本文学・文化・言語研究者9名からなり、日本側からも国際的なネットワークの中で活動する5名の研究者がコメンテーターとして参加した。今回のワークショップの開催によって、本研究は昨年度の「イタリア観の一世紀」「国際乱歩コンファレンス」とあわせて、ヨーロッパ・北米・アジアにおける国際的な日本文化研究の動向を連動させることが出来たと言える。他に本年度は計5回のワーキングテーブルが設定され、従来の日本文化・文学研究の研究発表、および視覚性・視覚文化の問題を中心に海外研究者8名、日本側研究者8名が参加し活発な情報交換・議論が行われた。以上の研究会・ワークショップの開催によって国際的な日本文化研究の互換・交換によって相互の具体的な研究理論構築への回路が設定されつつあるといえよう。本研究の詳細な研究成果は後日に立命館大学『言語文化研究』という研究紀要に掲載される予定である。これらの活動を基に今後の日本文化・文学研究の国際的研究理論の構築のさらなる発展が期待される。
若者の社会貢献意欲の育成を目的としたやる気・意欲の可視化および評価

現在、若者の無気力、あきらめ思考などが社会問題となっている。高校や大学では、担任制度、心理カウンセラーの配置などで対応しているが、改善の兆しが見られない。心理カウンセラーの人手不足、若者1人1人に適したサポート・応援ができていないことが挙げられる。本研究では、心理専門職ではない一般人でも、1人1人に適応した若者への応援・サポートができる技術を確立する。その目標の第一歩として、若者1人1人のやる気・意欲を、感性工学・生体情報学的手法(注視点計測と大脳皮質の血流量変化)と心理学的手法を融合して可視化・評価する。やる気・意欲の喚起法・メカニズムの解明によって、積極的に社会に貢献する若者を育成する。
談話構造のラベル付けとその電子的表現に関する研究

本研究は、音声対話を記録、保存、交換するために必要な手法を、マークアップ(タグ)を中心にして検討することを目的にしている。今年度の研究では、とくに、音声対話研究の基礎となる言語資料(コーパス)が備えるべき性質について検討を加え、それに基づいてタグセットを規定し、音声対話コーパスのプロトタイプを作成した。音声対話コーパスは3つまたは4つの部分からなる。第一の部分は、音声ファイルであり、これは、対話に参加する2人の話し手の発っした音声が分離して再生することができる形でエンコードするものである。また、発話の生起の時間的関係が明示できなければならない。第二の部分は、映像ファイルであるが、この部分は、現在の技術的レベルでは出来事を完全に再生するものではないので(パースペクティブがあるため)、かならずしも必須の部分ではない。第三の部分は、「アノテーション」であり、ここで音声による出来事とて特定された事件に対するコメントがつけられる。コメントの種類には、正書法転記テキスト、言語タグ、談話タグが含まれる。とくに転記テキストを「アノテーション」の一種とみなすことは、談話などのレベルでの情報を交換するという観点からは不可欠なことであることを示すことができた。これらのタグセットをTEIの規定する方式で定義して、それを利用して128対話からなる地図課題対話コーパスを整理し、公開が可能な厳密性を検証した。あわせて、これらの交換形式を持つ音声対話コーパスを作成するためのガイドラインを提案した。課題志向対話の収録に際して、その目的を明確にすることによって重複した収録を避けるためには、対話のおける「課題」の役割を明らかにすることが重要であるので、「課題」の特長をコミュニケーションにおける情報の流れに注目して分類することができた。情報の流れはたんに言語的なものだけでなく、対話参加者の認知的な状態も含めて考えることにすると、現在までに試みられた対話収録の試み(たとえば、Map Task,TRAINSなど)を分類することができる。また、この分類は、課題解決の構造と対話の構造との関係を解明する前提となる分類である。課題志向対話は、課題の解決の成功の程度の評価することができる。その評価方法について、とくに地図課題対話の場合を検討した。従来の方法は、GiverのルートとFollowerが描いたルートとの対応のみを評価するものであった。この限りでも、効率的な対話(所要時間、発話数、発話量などが少ないもの)における成績との関係を評価できたが、さらにバックチャネルなどを考慮するとより適切な評価ができることがわかった。留学生が酸化する地図課題対話についての特徴を明らかにした。そのなかで、留学生の来日直後とその6ヶ月後とのコミュニケーション能力の比較を行なうと、聞き返しの性質が変化して、自然な対話が実現するようになっていることが明らかになった。

これらのタグセットをTEIの規定する方式で定義して、それを利用して128対話からなる地図課題対話コーパスを整理し、公開が可能な厳密性を検証した。あわせて、これらの交換形式を持つ音声対話コーパスを作成するためのガイドラインを提案した。
人工衛星デ-タを利用したオゾン等微量成分濃度分布の測定・解析法に関する研究

今後ますます重要性を増す衛星を利用した地球観測の一環として、本研究では、1)既存衛星デ-タと他の地上デ-タを比較し、精度の検証と解析法の高精度化の検討、2)デ-タの比較検討から成層圏と対流圏の大気の交換等の機構の研究、3)高度分解能が高い測定法について、大気光学モデルを利用して解析法を検討、を行った。1)Nimbus7搭載のSBUVデ-タを入手し、オゾンの混合比の緯度-高度分布を図示化して、成層圏オゾン濃度分布の季節的特徴を調べ、大気大循環モデル等でその特徴が説明されることを確認した。さらにSBUVデ-タの解析法について検討を行い、受信デ-タからオゾン分布を得る作業の準備を行った。2)対流圏圏界面ギャップを通してオゾンが沈降する振舞いを衛星デ-タと他の地上デ-タから考察した。TOMSデ-タを高層天気図と比較してジエット機流の位置と全オゾン量の高濃度領域周縁の位置関係が良い一致を示すことを確認した(ジェット気流位置に関してTOMSデ-タで高層天気図の代用が可能である)。さらにバックグラウンドオゾンモニタリングデ-タで山岳地域のオゾン値が同時に高くなっているときには成層圏からの沈降があると仮定し、TOMSデ-タとの比較を行った。1986年5月の状況について、衛星デ-タ、高層天気図、ゾンデデ-タ、モニタリングデ-タの比較を行い、沈降現象の事例解析を行った。さらに発達中の台風にオゾンが吹き込んでいる状況を検討した。3)ADEOS衛星に搭載が予定される赤外領域の太陽掩蔽型センサ-で、多素子1次元アレイ検出器を利用した高精度なオゾン濃度の高度分布の計測手法を大気光学モデル(FASCODEおよびLOWTRANプログラム)を用いて測定精度についてシミュレ-ションを行い、シミュレ-ション計算における層の取り方、大気屈折率の影響、多成分分子の分け方等について知見を得た。