hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微細構造を制御した新規信号応答性ゲルの分子設計

テレケリックポリマー:上記のようにして得られた信号応答性ポリマーとともに、既存で知られているビニル重合型信号応答性ポリマーも含めて、テレケリックス化を試みた。モデルネットワーク構築のために極めて反応性の高い末端基(ビニル基、アミノ基、イソシアナ-ト基)の導入、新ネットワーク構築のため、異なる官能基の導入(ヘテロテレケリックス)等を試みた。ポリサイラミンはアニオン重付加反応で合成するため、末端にビニルシリル基、2級アミノ基を定量的に導入することが可能であった。さらに2,5-トルエンジイソシアナ-トにより、両末端にイソシアナ-ト基を有するテレケリックポリマーの合成にも成功した。新しい信号応答性ゲルを調製するにあたって、平成10年度は前年度までに得られているポリサイラミンゲルの信号応答特性を追究するとともに、側鎖にアミノ基を有する側鎖型材料を合成し、その信号応答特性に関して比較検討を行った。i)ポリサイラミンのプロトン化度とガラス転位点:ポリサイラミンのガラス転位点を様々なプロトン化度に対して測定し、プロトン化度50%の点でガラス転位点が著しく上昇することを見いだした。ii)ポリサイラミンハイドロゲルの弾性率測定:種々のプロトン化度に対応した膨潤度とともに、膨潤ゲルの弾性率を測定した。ハイドロゲルではプロトン化度50%付近で体積相転移し、10倍以上に膨らむとともの、弾性率が一桁上昇した。これは通常の信号応答性ハイドロゲルが、含水して膨らむとともに柔らがくなるのに対し、全く反対の挙動を示す、初めての例である。iii)側鎖型信号応答性ポリマー及びゲルの調製:3級アミノ基を側鎖に有するポリマーとして、種々ポリメタクリル酸ジアルキルアミノエチル及びポリアクリルアミドジアルキルアミノプ口ピルを合成した。これらpH応答性材料のハイドロゲル特性調製として、電子線架橋を行ったところ、極めて高感度で3次元架橋化が進むことを見いだした。これは電子線に対するアミノ基非共有電子対の高い反応性に起因することが結論づけられた。これら材科の主鎖信号応答型材料との比較に関してさらに検討を進める予定である。新しい信号応答性ゲルを調製するにあたって、本年度は以下のように研究を進めた。i)ポリマー合成法の確立:本研究では最終目標として、DDS及び生体適合性を念頭に置いているため、水中で相転移するポリマー合成を推進する。ビニル重合体の代わりに主鎖に親水性・疎水性セグメントを交互に有する新規ポリマーの合成を行った。ゲルとしての運動性を導入するため、疎水部には有機シリコン或いははシリコーンを中心にポリサイラミンおよびポリシロキシエチレングリコールの合成法を確立した。ii)テレケリックポリマー:上記のようにして得られた信号応答性ポリマーとともに、既存で知られているビニル重合型信号応答性ポリマーも含めて、テレケリックス化を試みた。実際には末端にアクリルアミド基を導入し、下記のようにゲルを調製した。iii)ゲル調製と物性評価:上記i)、ii)で得られた材料からゲル粒子を調製した。水中分散方によりラジカル重合法を用いて100500マイクロメートル程度の微粒子を調製した。
磁気流体シミュレータによる降着円盤の時間変動とジェット形成機構の解明

3次元磁気流体コードを改訂して超並列計算機に実装し、降着円盤の大局的シミュレーションに適用可能にした。このコードを用いてジェット伝播計算を実施し、ジェットと星間ガスの境界に分子ガスの鞘が形成されることを示した。シミュレーション結果から輻射スペクトルを計算するモジュールも実装し、超高光度X線源のスペクトルを再現した。また、降着円盤内部で平均磁場方向が準周期的に反転するダイナモが発生することを示した。宇宙磁気流体シミュレーションソフトウェアCANSを国立天文台に新たに導入されたスカラー並列計算機に実装し、計算効率を高める方法について秋季天文学会で発表した。近似リーマン解法の一種であるHLLD法に基づく磁気流体シミュレーションエンジンを作成し、各種テストを行った結果を秋季天文学会等で発表した。このコードを国立天文台スカラー並列計算機に実装して降着円盤からのジェット形成の3次元シミュレーションに適用し、2009年春季天文学会で報告した。Flux Limited Diffusion近似に基づく輻射流体コードに逆コンプトン散乱によるコロナ冷却の効果を含めて超臨界降着流の2次元シミュレーションを実施し、強いアウトフローが発生すること、超光度X線源のスペクトルを再現できることを示した。また、シミュレーション結果をもとに、モンテカルロ法によって輻射スペクトルを計算するモジュールを作成した。輻射輸送方程式の1次のモーメント式を用いるMlスキームによる輻射磁気流体コード作成にも着手した。光学的に薄い円盤から厚い円盤への遷移中に形成される磁気圧で支えられた降着円盤の定常モデルを光学的に厚い領域を含む場合に拡張することに成功し、結果をまとめた論文がAstrophysical Journalに掲載が決定した。また、相対論的磁気流体コードの検証に用いることができる相対論的に膨張する磁気ループの自己相似解を求め、英国王立天文学会誌に論文を発表した。共同作業を円滑に進めるため、8月と3月に研究推進会議を千葉大で開催した。研究成果は2008年11月に南京で開催されたEastAsia Numerical Astrophysics Meeting等の国際会議で発表した。近似リーマン解法の一種であるHLLD法に基づく円筒座標系3次元の磁気流体コードを国立天文台のスカラー並列計算機に実装して初期に弱い方位角磁場に貫かれた降着円盤の大局的3次元シミュレーションを実施した。その結果、磁気回転不安定性の成長による円盤磁場の増幅など、従来のコードで得られた結果をほぼ再現できた。その後、div B=0を満たすCT法よりも数値的に安定で実装が容易なdivergence cleaning法に基づく磁気流体コードを実装し、軸対称磁気流体ジェットの伝播、降着円盤の大局的3次元磁気流体シミュレーション等に適用して2010年3月開催の日本天文学会春季年会で発表した。以上により、数値振動が少なく高精度なHLLD法を用いて降着円盤の大局的3次元シミュレーションを実施することが可能になった。分担者の廣瀬はFlux Limited Diffusion (FLD)近似に基づく輻射磁気流体方程式を陰的に解くマトリックスソルバーの並列効率を改善する作業を行った。輻射輸送方程式の1次のモーメント式を解くM1コードの開発も進めた。シミュレーション結果をもとにモンテカルロシミュレーションによって輻射スペクトルを計算するモジュールを実装し、ブラックホール超臨界降着流の輻射流体シミュレーション結果に適用することにより、超光度X線源(ULX)のスペクトルを再現することができた。相対論的ジェット伝播のシミュレーション結果、円盤の一部を取りだした局所3次元輻射磁気流体シミュレーション結果、方位角磁場及びイオン温度と電子温度が異なる効果を考慮した降着円盤の理論モデル等の研究成果を出版した。研究推進会議を千葉大学で2回開催して進捗状況を確認するとともに研究方針について議論した。また、研究成果を各種国際会議で発表した。近似リーマン解法の一種であるHLLD法に基づくカーテシアン座標系及び円筒座標系の3次元磁気流体コードを国立天文台及び東京大学情報基盤センターのスカラー並列計算機に実装して並列効率を高めるチューニングを行った。その結果、空間2次精度の解法の場合には、従来使用してきた修正Lax-Wendroff法のコードの2倍程度の計算時間で数値的振動の少ない計算結果を得ることが可能になった。このシミュレーションエンジンを以前に開発した宇宙磁気流体シミュレーションソフトウェアCANSに実装して各種シミュレーションに適用した。星間ガスの冷却を考慮したジェット伝播シミュレーションの結果、ジェットと中性水素ガスの相互作用によって高温低密度ジェットを鞘状に包む低温高密度領域が形成されることが明らかになった。また、降着円盤の大局的3次元シミュレーションに適用することにより、準周期的な円盤ダイナモが発生する可能性を調べた。その結果、セル境界の値をより高い空間精度で求めて磁場の数値散逸を抑制する必要があることが判明したため、空間5次精度のスキームを実装した。輻射流体計算については輻射流束の時間発展を計算するM1スキームの実装を進めた。光子輸送のモンテカルロ計算を行うことによって輻射スペクトルを求める解析ツールの計算精度を高め、硬X線が強いハードステートから軟X線が強いソフトステートへの状態

遷移中のスペクトル変化を計算して日本天文学会秋季年会で発表した。コード開発状況と各種磁気流体シミュレーションに適用した計算結果を2010年11月に台北で開催された東アジア数値天体物理学国際会議等で発表した。CANS改訂版の公開に向けて、全体設計の見直しも行った。
イネの種子登熟過程におけるリン酸貯蔵の分子機構と分子育種

種子へのリンの貯蔵を制御している可能性の高い酵素、イノシトール1リン酸合成酵素の発現制御機構を明らかにすることで、種子におけるリン酸貯蔵(フィチン貯蔵)の意義、および役割を明らかにすることを目的として、以下の実験を行った。1.CaMV35Sプロモーターに連結したセンス及びアンチセンスのイノシトール1リン酸合成酵素遺伝子を導入した形質転換イネを作出した。これまでのところ形態異常は見つかっていない。2.イネ成熟種子胚盤から誘導した培養細胞を材料として、イノシトール1リン酸合成酵素遺伝子の糖、リン酸、およびABAに対する応答をノーザンブロット解析により調査した。その結果、本酵素はリン酸には応答しないが、糖及びABAに応答して発現が誘導されることが明らかとなった。糖による応答については、sucroseやglucoseでの誘導が観察されるのに対し、mannitolでは誘導されないことから、浸透圧の変化によって本酵素が誘導されるのではないことが明らかとなった。さらに、糖単独、あるいはABA単独の処理と比較して、糖とABAを同時に処理した場合にイノシトール1リン酸合成酵素の発現が高まることが示され、糖とABAに相乗的効果があることが明らかになった。3.イネのゲノミックライブラリーよりイノシトール1リン酸合成酵素のゲノムクローンを単離し、プロモーター領域の配列を明らかにした。その結果、多くのABA応答配列、種子特異的発現に関与するcis-acting element、及び重金属応答配列の存在が明らかになった。4.イネのイノシトール1リン酸合成酵素プロモーターにGUSレポーター遺伝子を連結したコンストラクトを導入したイネを作出した。同様に、イノシトール1リン酸合成酵素プロモーターにイノシトール1リン酸合成素を連結したコンストラクト導入形質転換イネを作出した。1.CaMV35Sプロモータに連結したセンス及びアンチセンスのイノシトール1リン酸合成酵素遺伝子を導入した形質転換イネを作出した。2.イネ成熟種子胚盤から誘導したカルスを材料として、イノシトール1リン酸合成酵素遺伝子の糖、リン酸、およびABAに対する応答をノーザンブロット解析により調査した。糖による応答については、sucroseやglucoseでの誘導が観察されるのに対し、mannitolでは誘導されないことから、浸透圧の変化によって本酵素が誘導されるのではないことが明らかになった。3.イノシトール1リン酸合成酵素の糖およびABAに対する応答をin vitroで調査する前提として、また、cis配列を明らかにする目的で、イネのゲノミックライブラリーをスクリーニングし、ポジティブクローンを得た。4.細胞内局在を調べる前提として抗体を作製するため、イノシトール1リン酸合成酵素遺伝子のcDNAを大腸菌発現ベクターに連結し、大腸菌で発現させた。大腸菌よりイノシトール1リン酸合成酵素タンパク質を精製し、抗体作製を業者に委託した。

2.イネ成熟種子胚盤から誘導したカルスを材料として、イノシトール1リン酸合成酵素遺伝子の糖、リン酸、およびABAに対する応答をノーザンブロット解析により調査した。その結果、本酵素はリン酸には応答しないが、糖及びABAに応答して発現が誘導されることが明らかとなった。糖による応答については、sucroseやglucoseでの誘導が観察されるのに対し、mannitolでは誘導されないことから、浸透圧の変化によって本酵素が誘導されるのではないことが明らかとなった。さらに、糖単独、あるいはABA単独の処理と比較して、糖とABAを同時に処理した場合にイノシトール1リン酸合成酵素の発現が高まることが示され、糖とABAに相乗的効果があることが明らかになった。3.イネのゲノミックライブラリーよりイノシトール1リン酸合成酵素のゲノムクローンを単離し、プロモーター領域の配列を明らかにした。その結果、ABA応答配列、及び糖応答様配列の存在が明らかになった。4.イネのイノシトール1リン酸合成酵素プロモーターにGUSレポーター遺伝子を連結したコンストラクト導入形質転換イネを作出した。
単離心筋機械負荷操作を用いた心臓の機械電気相互作用の統合生理研究

21年度前半は前年度後半に引き続き単離心筋細胞レベルの伸展実験と臓器レベルの機械電気相互作用としてトリ心臓における機械刺激誘発性不整脈実験をおこなった。これらの実験から伸展刺激誘発性不整脈に対するSAKCAチャネル(伸展感受性BKチャネル)や機械受容非選択的陽イオンチャネル(nSAC)などの関与が明らかとなったが、21年度後半はそれらの機械電気相互作用実験結果を心筋細胞数理モデルに統合するためのシミュレーション実験を行った。心筋細胞モデルとしては、Iribe-Kohl-Nobleモデルの電気生理・カルシウム動態モデルを用いた。伸展刺激によるnSACを介したナトリウム流入電流は背景ナトリウム電流のコンダクタンスを変化させることにより再現した。伸展刺激によるSAKCAチャネルを介したカリウム流出電流はMoczydlowskiらのBKチャネルモデルのコンダクタンスを変化させることにより再現した。機械刺激誘発性不整脈はnSACの活性化による脱分極によって誘発されるとされているが、このメカニズムは再現された。また、我々の実験結果に基づき、筋小胞体からのカルシウム放出を機械刺激に伴って増加させたところ、このメカニズムによっても不整脈が誘発されることが示唆された。背景K電流に伸展感受性を持たせた場合は機械刺激誘発性不整脈を抑制したが、我々の実験結果とは異なりSAKCA電流は機械刺激誘発性不整脈を抑制しなかった。現在の所、nSACの分子実態は不明でその数理モデルも確立されていない。背景電流のコンダクタンスを変化させるのみの単純なnSACモデルでは実験結果を完全には再現できなかったものと思われ、さらにnSACの電気生理的特徴を詳細に解明していく必要がある。平成20年度前半は心臓内の力学的不均一性を評価するために、オックスフォード大学のグループとの共同研究により、モルモット心の心房、右室、左室の3領域から単離した心筋細胞の力学的特性を比較検討した。その結果、心房筋細胞は心室筋細胞に比して静的力学特性としての弾性(拡張期末長さ張力関係で表される)が有意に高く、また最大収縮速度や弛緩速度などの動的な力学特性も心房筋の方が速いことが明らかとなった。一方で左右両心室筋間には静的・動的いずれの力学特性も有意な差は認められず、臓器(心室)内における心筋細胞の機械的特性の違いは小さいことがわかった。そこで20年度後半は臓器レベルの機械電気相互作用として、SAKCAチャネル(ヒト心筋遺伝子ライブラリーから新しくクローニングされた進展感受性BKチャネル。生理的な役割はよくわかっていない)を介した現象を、ヒトと共通したSAKCAチャネルが存在するトリ摘出心を用いて詳細に検討した。トリ摘出ランゲンドルフ灌流心の左室腔内に挿入したラテックスバルーンの内容液量を急激に変化させて左室壁を伸展することにより不整脈を誘発した。誘発された不整脈は機械電気相互作用の臓器レベルにおける統合出力であるが、これは多くの機械受容チャネルをブロックするGsMTx-4で阻害され、特異的なBKチャネルブロッカーのIberiotoxin(IbTx)にて増強した。この結果からSAKCAチャネルは他の機械受容チャネルにより引き起こされる機械刺激誘発性不整脈を抑制する効果があるものと思われた。今年度の研究結果はSAKCAチャネルの生体心における役割を示した最初の知見であり、ヒトにおける機械電気相互作用の全容を解明するための重要な研究結果である。また今年度の知見を統合した心筋細胞数理モデルの開発も進んでいる。
ＶｐｘのＣ末端領域に存在するポリプロリンモチーフの存在意義と機能解析

HIV-2特有のタンパクであるVpxはC末端領域に高度に保存された7つの連続するプロリン残基からなる特徴的なモチーフ(ポリプロリンモチーフ: PPM)があり、Vpxの機能に必須であることが知られている。本研究ではVpxのPPMがVpxの機能発現のためにどのような役割を果たしているのかについて解析を行い、以下のことを明らかにしてきた。マクロファージのようなHIV-2増殖にVpxを必要とする細胞でのPPM変異体のウイルス増殖能とVpx PPM変異体の発現量はよく一致していた。また、セルフリーでの転写・翻訳系を用いた研究により、PPMは翻訳過程において、Vpxの発現を促進していることが示された。HIV-2特有のタンパクであるVpxはマクロファージ(MΦ)での増殖に必須であり、逆転写産物の生成以前の過程で機能することが明らかとなっている。VpxのC末端領域にHIV-2/SIVsm系において高度に保存された7つの連続するプロリン残基からなる特徴的なモチーフ(ポリプロリンモチーフ: PPM)があり、Vpxの機能に必須であることが知られている。本研究ではVpxのPPMがVpxの機能発現のためにどのような役割を果たしているのかについて解析を行い、MΦを標的とした抗HIV戦略の基盤の立ち上げを目的としている。現在までに申請者は以下のことを明らかにしてきた。(1)MΦのようなHIV-2増殖にVpxを必要とする細胞でのPPM変異体のウイルス増殖能とVpx PPM変異体の発現量は一致していた。このことは、PPMがVpxの発現を促進する機能を有することを示している。(2)これらPPM変異体の発現量の低下はプロテアソームやリソソーム系でのタンパク分解によるものではなかった。(3)ウサギ網状赤血球抽出液を用いたin vitroでの転写・翻訳系により、Vpx PPM変異体の発現量はin vivoと同様の発現パターンを示した。mRNAの転写量は野生型およびPPM変異体で差はなかったことから、PPMは翻訳過程において、Vpxの発現を促進していることが示された。(4)大腸菌抽出液を用いたin vitro転写・翻訳系においても、PPM変異体の発現量は著しく減少した。(5)種々の異なるサル種から分離されたVpxのPPMについても、PPMがVpxの発現を促進していることを突き止めた。このように、Vpx PPMは真核・原核生物に共通の翻訳機構によりVpxの発現を増強し、またVpx PPMの機能は様々な宿主から分離されたHIV-2/SIV Vpxにおいても保存されていることを示した。さらに、Vpxを導入したMΦでは、HIV-1のみならず、マウス白血病ウイルス(MLV)のようなレトロウイルスに対してもウイルス増殖が促進されることが報告され、Vpxは大きな注目を集めている。VpxのC末端領域に高度に保存された7つの連続するプロリン残基からなる特徴的なモチーフ(ポリプロリンモチーフ: PPM)があり、Vpxの機能に必須であることが知られている。(1)マクロファージやHSC-F細胞のようなHIV-2増殖にVpxを必要とする細胞でのPPM変異体のウイルス増殖能とVpx PPM変異体の発現量はよく一致していた。また、mRNAの転写量は野生型およびPPM変異体で差はなかったことから、PPMは翻訳過程において、Vpxの発現を促進していることが示された。このように、Vpx PPMは真核生物および原核生物に共通の翻訳機構によりVpxの発現を増強することが示された。本研究はVpxのC末端領域にHIV-2/SIVsm系において高度に保存されたPPMがVpxの機能発現のためにどのような役割を果たしているのかについて解析を行い、MΦを標的とした抗HIV戦略の基盤の立ち上げを目的としている。

過去の報告からVpxと遺伝的に近縁のHIV-1/HIV-2 Vprは細胞内でタンパク分解機構によりHIV-2 Vpxと比較し、比較的短い半減期を有することが知られていた。またVprはそのC末端にPPMを有しないことから、当初はPPM変異体の発現量の低下はプロテアソームやリソソーム系でのタンパク分解によるものと予想していた。しかしながら、現在までにPPMがVpxの発現を翻訳過程において促進することにより、Vpxの発現を増加させる機構を担っていることが明らかになった。このように当初の予想とは異なる結果になったものの、Vpx PPMの機能を明らかにするという研究目的を達成できたことから、本研究は概ね順調に進展していると考えている。当初はPPM変異体の発現量の低下はプロテアソームやリソソーム系でのタンパク分解によるものと予想していたため、研究計画はプロテアソームやリソソーム系でのタンパク分解に関わる宿主因子の同定を予定していた。そのため、今後はVpx PPMがどのようにしてタンパク翻訳を促進しているのかについて詳細な検討をしたいと考える。まず、Vpx PPMの翻訳促進は真核、原核生物共通の分子機構で働いていることが分かっているので、野生型VpxおよびVpx PPM変異体について、真核および原核細胞において免疫沈降実験を行い、野生型Vpx/Vpx PPM変異体間で異なる結合様式を示す因子について、質量分析を行いその因子の候補を同定する。その後、決定した候補因子をsiRNAによりノックダウンさせ、その効果を検証する。以上の研究により、Vpxの非常に特徴的なポリプロリンモチーフがVpxの機能に付与する分子機構を明らかにする。このことはVpxのMΦにおけるHIV増殖促進機構についても重要な知見を与えると考える。該当なし
スルメイカの卵塊形成に関与するムチン型糖タンパク質の生化学的研究

スルメイカは直径1mにもなる巨大な卵塊を生み、卵塊内の受精卵は1週間ほどで孵化する。本研究ではこの卵塊を包み、卵を保護しているゲル状の膜(主に卵塊膜ムチン)とその前駆体と推定される包卵腺粘質ムチンの諸性状を調べた。1.卵塊膜は約75%以上がムチン型糖タンパク質で、希アルカリ処理で容易に可溶化され、50-60%のエタノールで沈殿として単離された。この卵塊膜ムチンは分子量約300万に及ぶ巨大分子で、タンパク質14%、アミノ糖43%および中性糖43%から成り、アミノ酸の90%以上は、Thr、Pro、Ileが2:1:1のモル比で存在する特異な一次構造をもつ。さらに、包卵腺ムチンと極めて良く類似した諸性状を示す事から、卵塊膜は主に包卵腺ムチンに由来することが判明した。2.次にムチンの糖鎖構造を明らかにするため、包卵腺ムチンの糖鎖を80°C-9時間の気相ヒドラジン分解で切り出し、N-アセチル化の後、主要な中性糖鎖の一つをバイオゲルP-4カラムで単離した。この主要糖鎖の構造を質量分析法とNMR法で調べると、Calの2、4および6位にそれぞれFuc、4-O-Me-Glc(新奇糖成分)および4-O-Me-GlcNAc(新奇糖成分)の結合した特異な分岐4糖で、脊椎動物のムチン糖鎖とは全く異なるユニークな糖鎖であった。なお、この糖鎖はタンパク質部分のThrに結合する糖成分として知られるGalNAcを欠き、ムチン型糖鎖としては異例である。ヒドラジン分解による副分解の可能性があり、今後のさらなる検討が必要であろう。以上のごとく、これまでにほとんど研究例のない無脊椎動物のムチンとして、スルメイカの包卵腺および卵塊膜ムチンの特異な性状を明らかにすることが出来た。スルメイカは海洋中に直径70100cmの巨大な卵塊を生む。卵塊中の受精卵は1週間ほどで孵化するが、その間はゲル状の卵塊膜で保護されている。この卵塊膜は雌イカの成熟と共に急速に発達する包卵腺の粘質物に由来すると言われている。本研究では卵塊膜の主成分が防御タンパク質のムチン型糖タンパク質であり、その前驅体は包卵腺粘質物中のムチンであることを明らかにした。1.卵塊膜は約75%がムチン糖タンパク質であり、希アルカリ処理(0.4NNaOH,4°C,3日)で可溶化することが出来た。その主要成分は50%エタノールで定量的に沈殿し、超遠心的に単一成分であった。このムチンはタンパク質14%、アミノ糖43%および中性糖43%から成り、アミノ酸の90%以上はトレオニン、プロリン、イソロイシンが2:1:1のモル比で存在する特異な一次構造をもつ。沈降分析と粘度測定から算出した分子量は約320万で、水溶液は著しい粘性を示した。2.包卵腺ムチンは粘質物の希アルカリ処理(0.4NNaOH,4°C,4h)で可溶化し、50%エタノール沈殿で単離された。このムチンは化学組成および高粘性の点で卵塊膜ムチンと良く一致しているが、分子量は多少小さく、約230万であった。

3.卵塊膜および包卵腺ムチンに含まれる多量の糖鎖を単離して構造を解明する第一歩として、本年度に備品として購入したヒドラクラブを用い、タンパク質部分と糖鎖をヒドラジン分解で分離することを試みた。現在、分解条件の詳細を検討中であり、次年度には分離した糖鎖の構造解析を試みる。既に、本ムチンには2種類の新奇な糖成分を発見しており、防御タンパク質としての機能と糖鎖構造の関係も調べてみたい。スルメイカは直径1mにもなる巨大な卵塊を生み、卵塊内の受精卵は1週間ほどで孵化する。卵塊はムチン型糖タンパク質を主成分とするゲル状の膜によって保持されており、この卵塊膜は雌イカの成熟と共に急速に発達する包卵腺が分泌する粘質物に由来する。本研究では卵塊膜の主成分であるムチンの糖鎖構造を調べた。1.スルメイカ・ムチンは脊椎動物・ムチンと異なり、その糖鎖は希アルカリ処理によるβ-位離脱反応で切り出すことが出来なかった。そこで、ヒドラジン分解による糖鎖の切り出しを試みた。初めに、標準的な条件である80°C-9時間の気相ヒドラジン分解を行った。遊離した糖鎖はN-アセチル化の後、バイオゲルP-4を用いるゲル濾過で分画した。その結果、中性糖鎖画分の主成分はTLCおよび逆相HPLCで分析すると、ほぼ単一成分であることが判明した。2.この主要糖鎖の構造を質量分析法とNMR法で調べたところ、ガラクトースの2、4および6位にそれぞれフコース、4-O-メチルグルコース(新奇糖成分)および4-O-メチル-アセチルグルコサミン(新奇糖成分)の結合した4糖からなる特異な分岐糖鎖であることが判明した。無脊椎動物のムチンに関する研究はこれまでにほとんど無く、脊椎動物のムチンとは性状を異にするユニークな糖鎖の存在が明らかとなった。3.しかし、ムチン型糖鎖はN-アセチルガラクトサミンを介してタンパク質のトレオニンあるいはセリンとグリコシド結合している。本研究で得た糖鎖はN-アセチルガラクトサミンを欠いており、ヒドラジン分解に問題があるのかも知れない。今後、分解条件の検討を行い、このユニークなスルメイカ・ムチン糖鎖の構造を解明したい。
神経細胞微小管における神経線維と微小管関連蛋白の結合

ブタ脳より精製したチュブリン蛋白をtaxol存在下で重合し微小管を形成させ、ウシ脊髄より精製しアルカリフォスファターゼ処理にて脱リン酸化したニューロフィラメントHサブユニット(NF-H)と、ブタ脳より精製した微小管関連蛋白2(MAP2)を、その微小管とインキュベーションし結合させた後、共沈実験を行った。共沈の遠心条件は、微小管及びそれに結合した蛋白は沈殿になるが、遊離のNF-HまたはMAP2は上清に残る強さとした。遠心後の沈殿の蛋白量を、SDS-PAGE上のチュブリン蛋白、NF-H、及びMAP2のバンドをdensitometerにより測定し、チュブリン蛋白のバンドの値をもとに補正して比較した。微小管へNF-H及びMAP2を同時に結合させた場合、結合したNF-Hはチュブリン蛋白を100として9.2、同じくMAP2は6.3であった。微小管へNF-Hのみを結合させた場合は、結合したNF-Hは10.9となった。また、MAP2のみを結合させた場合は、結合したMAP2は6.8となった。この結果よりNF-HとMAP2の微小管上の結合は部分的に競合すると考えられ、結合部位は隣接して存在するか、あるいは一部重なっているものと思われた。しかし、MAP2、NF-Hともその分子形態は線維状の蛋白であり、線維状に伸びた部分により、機械的に他の蛋白の結合が阻害される可能性があり、MAP2あるいはNF-Hの微小管結合部位のみを用いた実験を行う必要がある。この点については、酵素による切断で作製したMAP2の微小管結合部位のフラグメントはニューロフィラメント蛋白と結合することが知られており、微小管へNF-HとMAP2の微小管結合フラグメントを加え共沈実験を行う場合、NF-HとMAP2のフラグメントが結合し沈殿となることが考えられる。今後これらの点を解決する必要があると思われるが、一つの案としては、NF-Hをキモトリプシンでtail domainを残し切断して用いてみる事などが考えられる。
グルココルチコイドによる組織特異的作用発現のメカニズム〜転写共役因子からの検討〜

グルココルチコイド(GC)は,細胞質にあるグルココルチコイドレセプター(GR)に結合すると,熱ショック蛋白が解離して核内へ移行し,さらに二量体を形成して,標的遺伝子のGC応答配列(GRE)に結合することによりその遺伝子の転写活性化を引き起こす。そして,GC作用は,ホルモンとそのレセプターGRに加えて,転写共役因子(コアクチベーター)がGRに動員結合することにより,ホルモン作用の強弱が調節されることが示されている。そこでまず初めに,内因性にGRが存在しない腎臓線維芽細胞由来COS-1細胞において,GRE-luciferaseをレポーター遺伝子として用いたTransient transfection assayにより,コアクチベーターの機能を検討した。,デキサメサゾン(DEX)の濃度を上げても,GRを発現させないとGR作用を認めなかった。次に,GRを外因性に発現させてDEX濃度を上昇させると,濃度依存性にGR作用の増加を認めた。そこに,外因性にコアクチベーターSRC-1を過剰発現させると,DEX依存性のGR作用がさらに5-10倍に増強された。しかし,GRとSRC-1を過剰発現させてもDEXを加えないとGR作用は全く消失した。以上の結果より,(1)GR作用の発現にはホルモン,GRおよびコアクチベーターの三者が必須であること,(2)またコアクチベーターは細胞内に内因性に存在するが飽和していないこと,(3)コアクチベーターの細胞内発現量の変化は,GR作用の増幅効果があること,(4)ホルモンがGRに結合しなければコアクチベーター単独ではGR作用を発現できないことが明らかとなった。この結果から,ホルモン処置によりコアクチベーターそのものの発現量が変化すれば,ホルモン作用の発現に大きな影響を与える調節機構となると考えられ,以下の研究を進めた。そこで,本年はin vitroでラット腎メサンジウム細胞を用いてその調節を詳細に検討した。10^<-6>MのDEX処置にてNorthern blotでは24時間後にSRC-1 mRNAレベルのdown-regulationを認めた。さらに,抗SRC-1ペプチド抗体を用いたWestern blotでは約6時間後にSRC-1タンパクのdown-regulationを認めた。GCにより腎臓メサンジウム細胞でコアクチベーターSRC-1の遺伝子転写レベルでのdown-regulationが明らかとなった。しかし,腎臓全体の中でメサンジウム細胞の占める割合は少なく,腎臓全体の約90%を占める尿細管細胞での調節を検討するために,マウス近位尿細管由来MCT-1細胞において同様の検討を行ったところ,10^<-7>10^<-6>MのDEX処置によりタンパクレベルで明らかなSRC-1のdown-regulationを認めた。したがって,in vivoのラット腎臓において認めたSRC-1のdown-regulationは,in vitroにおいても近位尿細管およびメサンジウム細胞においてmRNAおよびタンパクレベルにて確認された。以上の結果を考え合わせると,腎臓においてGC投与に対してその作用が過剰に持続しないように生体防御的にGRおよびコクチベーターのSRC-1がdown-regulationされていることが推察された。今後,SRC-1遺伝子のプロモーター領域にGREが存在するか否かなどの検討により,down-regulationの詳細な機序が明らかになることが期待される。グルココルチコイドは臨床的には,多くの炎症性疾患や免疫アレルギー疾患の治療に広く用いられており,高血圧症などの組織特異的な副作用の発現や,グルココルチコイド抵抗性が生じる機序は不明である。近年,ステロイド受容体による遺伝子転写制御において,受容体とホルモン依存性に結合して,基礎転写因子複合体と受容体の間の橋渡しをする転写共役因子(coactivator,corepressor)がクローニングされ,その病態生理学的役割が注目されている。標的臓器におけるホルモン感受性を調節する因子として,局所のホルモンの濃度や,組織特異的に発現している転写共役因子の発現量が考えられる。多くの転写共役因子はすべての組織にubiquitousに,しかし限られた量が発現していることが報告されている。したがって,リガンド投与により,組織特異的に転写共役因子の発現量が変化すれば組織特異的な作用の原因となりうる。そこで本年度は,in vivoのラットを用いてデキサメサゾン投与時の組織特異的な転写共役因子の発現量を検討した。まず,in vivoのSDラットにデキサメサゾンを経口的または経腹腔的に投与(15mg/kg体重)し,投与4時間,8時間,12時間,24時間,72時間,8日後と経時的にラットを屠殺し,各臓器を摘出した。まず,各時点におけるラット血漿ACTHおよびコルチコステロン濃度は投与前と比べて有意に抑制されており,デキサメサゾンが各ラットに十分量投与されていることを確認した。次に,各時点におけるグルココルチコイド受容体(GR),coactivatorのSRC-1(steroidreceptor coactivator-1),CBP(CREB-binding protein)mRNA量をNorthem blotまたはRT-PCR法にて検討した。その結果,肝臓,腎臓,心臓および胃においてGR mRNAは投与4時間後に著明な低下を認め,以後もとのレベルへ上昇した。そして,coactivatorの発現量では,SRC-1 mRNAは検討した臓器において期間中有意な変化を認めなかったが,興味深いことにCBP mRNAは,腎臓および心臓において投与後4時間後に一過性の有意な減少を認め,以後徐々に上昇した。以上より,coactivatorそのものもグルココルチコイドにより組織特異的なdownregulationを受けること,またcoactivatorの種類によりSRC-1とCBPは異なる発現調節を受けることが示唆された。

次に,リガンドによるcoactivatorの発現調節が遺伝的に高血圧を発症するラットにおいて違いがあるか検討するために,高血圧自然発症ラット(SHR)および対象としてWKYラットにおいて同様の検討をしたが,有意な差を認めなかった。次のステップとしては,転写共役因子の発現がリガンドにより組織特異的な発現調節が起こる機序を検討する必要があり,in vitroの培養細胞を用いて,グルココルチコイドおよびGR拮抗薬を用いて詳細な発現調節をmRNAレベルのにならず,蛋白レベルでも検討すること,また,GRE(グルココルチコイド応答配列)を含むレポーター遺伝子を用いたtransient transfection assayにて転写活性を測定し,coactivatorの組織特異的な発現量がグルココルチコイド作用に及ぼす機能的解析も行う予定である。グルココルチコイド(GC)は,細胞質にあるグルココルチコイドレセプター(GR)に結合すると,熱ショック蛋白が解離して核内へ移行し,さらに二量体を形成して,標的遺伝子のGC応答配列(GRE)に結合することによりその遺伝子の転写活性化を引き起こす。そして,GC作用は,ホルモンとそのレセプターGRに加えて,転写共役因子(コアクチベーター)がGRに動員結合することにより,ホルモン作用の強弱が調節されることが示されている。そこでまず初めに,内因性にGRが存在しない腎臓線維芽細胞由来COS-1細胞において,GRE-luciferaseをレポーター遺伝子として用いたTransient transfection assayにより,コアクチベーターの機能を検討した。,デキサメサゾン(DEX)の濃度を上げても,GRを発現させないとGR作用を認めなかった。次に,GRを外因性に発現させてDEX濃度を上昇させると,濃度依存性にGR作用の増加を認めた。そこに,外因性にコアクチベーターSRC-1を過剰発現させると,DEX依存性のGR作用がさらに5-10倍に増強された。しかし,GRとSRC-1を過剰発現させてもDEXを加えないとGR作用は全く消失した。以上の結果より,(1)GR作用の発現にはホルモン,GRおよびコアクチベーターの三者が必須であること,(2)またコアクチベーターは細胞内に内因性に存在するが飽和していないこと,(3)コアクチベーターの細胞内発現量の変化は,GR作用の増幅効果があること,(4)ホルモンがGRに結合しなければコアクチベーター単独ではGR作用を発現できないことが明らかとなった。この結果から,ホルモン処置によりコアクチベーターそのものの発現量が変化すれば,ホルモン作用の発現に大きな影響を与える調節機構となると考えられ,以下の研究を進めた。そこで,本年はin vitroでラット腎メサンジウム細胞を用いてその調節を詳細に検討した。10^<-6>
アルドステロンによるENaC異常調節に起因する体液量感受機構破綻の分子メカニズム

食塩感受性高血圧Dahl(Dahl-S)ラットにおいて、高食塩食摂取により血圧が上昇すること、普通食塩食あるいは低食塩食は血圧には影響を与えないこと、食塩抵抗性Dahl(Dahl-R)ラットでは、高食塩食・普通食塩食・低食塩食のいずれにおいても血圧には影響を与えないことが明らかとなった。Dahl-Sラットにおいて、上皮型ナトリウムチャネル(ENaC)α,βおよび_γサブユニットmRNAの発現は高食塩食摂取により増大すること、ENaCの細胞内トラッフィキングを制御するserum and glucocorticoid-regulated kinase1(SGK1)のmRNAおよびタンパク発現が、Dahl-Sラットにおいては、増大することが明らかとなった。Dahl-Rラットにおいては、ENaCαサブユニットmRNAの発現は高食塩食摂取により低下し、一方低食塩食摂取によりENaCαサブユニットmRNAの発現は低食塩食摂取により増大することが明らかとなった。正常遠位部尿細管上皮細胞において、低浸透圧刺激によりENaC mRNAは増大するが、この増大機構に受容体型チロシンキナーゼが関与して、そのシグナル下流にJNKが関与していることが明らかとなった。これらの細胞内シグナルとしてクロライドイオンが重要な働きを果たしていることも明らかとなった。以上のことから、食塩感受性高血圧症における異常制御機構として、ENaCおよびSGK1の発現制御の破綻があることが明らかとなった。さらにアルドステロンが細胞内ENaCの細胞内局在部位移動速度および局在部位の変化をもたらすことが明らかとなった。腎遠位部尿細管モデル細胞において、アルドステロン非処理の細胞においては、多くのNaCはゴルジ装置に存在し、アルドステロン刺激により、産生されたENaCの多くはERに存在し、管腔側膜上から細胞内へのENaC取り込み速度が低下し、一方細胞内から管腔側膜上への移動速度には変化を及ぼさないことを明らかとした。浸透圧上昇により、ENaCの管腔側膜上から細胞内へ取り込み速度が上昇し、この細胞内に取り込まれたENaCは、ERへのリサイクルされることも明らかとなった。24時間に渡る低浸透圧負荷は、ENaCのβ/γmRNA発現を増強させること、およびこれらのmRNAの発現増強に係わるシグナルとして、p38が関与しているを示した。浸透圧変化によるENaC遺伝子発現制御、またENaCタンパクの細胞内移動制御に係わるSGK1遺伝子発現制御に細胞内カルシウムイオンが関与していることも明らかした。食塩感受性高血圧ラットにおいて、アルドステロンの効果を検証するため、副腎摘出手術を施行することにより、内在性副腎皮質ホルモンの関与を除去した食塩感受性高血圧および食塩耐性正常血圧Dahlラットを作製した。アルドステロンを投与した副腎摘出食塩感受性高血圧Dahlラットおよび食塩耐性正常血圧Dahlラットにおいて、以下の実験を行なった。食塩感受性高血圧症モデル動物のDahl salt-sensitive(DS)と対照のDahl salt-resistant(DR)

ラットを用いてアルドステロンによるENaCの発現制御とフラボノイドの作用について検討した。DSラットに高食塩食を摂取させると血圧が著しく上昇するが、フラボノイドであるケルセチンの同時摂取は腎でのENaC発現を抑制して、高食塩食による血圧上昇を有意に抑制した。さらに、副腎摘出したラットに、アルドステロンを腹腔内に注入し、6時間後に腎臓を摘出してENaCの発現やその発現制御に関わる因子の活性を測定した。その結果、DSラットにおいてENaCのalphaサブユニットはアルドステロンの増大に伴って発現が増大したが、betaとgammaサブユニットは発現が減少し、血漿アルドステロン濃度と逆相関した。以上のことから、アルドステロンによるENaCの発現制御異常が食塩感受性高血圧症発症の一因であることが示唆され、食塩感受性高血圧の発症はフラボノイドの摂取によりENaC発現制御を介して抑制されることが示された。食塩感受性高血圧Dahlラットにおいて、高食塩食摂取により血圧が上昇すること、普通食塩食あるいは低食塩食は血圧には影響を与えないことが明らかとなった。また、食塩抵抗性Dahlラットにおいては、高食塩食・普通食塩食・低食塩食のいずれにおいても血圧には影響を与えないことが明らかとなった。食塩感受性高血圧Dahlラットにおいて、上皮型ナトリウムチャネルα,βおよびγサブユニットmRNAの発現は高食塩食摂取により増大することが明らかとなった。また、上皮型ナトリウムチャネルの細胞内トラッフィキングを制御するserum and glucocorticoid-regulated kinase 1のmRNAおよびタンパク発現が、食塩感受性高血圧Dahlラットにおいては、増大することが明らかとなった。食塩抵抗性Dahlラットにおいては、上皮型ナトリウムチャネルαサブユニットmRNAの発現は高食塩食摂取により低下し、一方低食塩食摂取により上皮型ナトリウムチャネルαサブユニットmRNAの発現は低食塩食摂取により増大することが明らかとなった。さらに、正常遠位部尿細管上皮細胞において、低浸透圧刺激により上皮型ナトリウムチャネルmRNAは増大するが、この増大機構に受容体型チロシンキナーゼが関与して、そのシグナル下流にJNKが関与していることが明らかとなった。これらの細胞内シグナルとしてクロライドイオンが重要な働きを果たしていることも明らかとなった。以上のことから、食塩感受性高血圧症における異常制御機構として、上皮型ナトリウムチャネルおよびserum and glucocorticoid-regulated kinase 1の発現制御の破綻があることが明らかとなった。アルデステロンが細胞内ENaCの細胞内における存在部位移動速度および存在部位の変化をもたらすことが明らかとなった。腎遠位部尿細管モデル細胞において、アルドステロン非処理の細胞においては、多くのENaCはゴルジ装置に存在し、アルドステロン刺激により産生されたENaCの多くはERに存在することが明らかとなった。
腹部大動脈瘤ステントグラフト内挿術後の諸問題解決を目指すMRIの新戦略

腹部大動脈瘤に対するステントグラフト内挿術によるEVAR(endovascular aortic repair)治療は、その低侵襲性から、近年多用されるようになり、本邦でも2011年以降、開腹直達手術件数を上回る件数が施行されている。それに伴い、エンドリークや脚閉塞などの術後合併症が問題となってきた。本研究ではMRIを用いた4次元流速解析(4DFLOW)を駆使し、EVAR後の合併症の超早期検出と高精度病態解明で、より安全なEVAR実現への道筋を拓くことが目的である。今年度はTypeIIエンドリークの責任動脈の血行動態の特徴について4D FLOWを用いて検討した。EVARを施行した155例の患者のうち107症例でCT angiography(CTA)と4D FLOWが同時期に施行され、一年後の動脈瘤径がCTAで計測された。1週間後の段階で、39症例(36.4%)でtype IIエンドリークが生じていた。その内28症例が1年後にCTAと4D FLOWで再評価された。7症例が動脈瘤の増大を認め(増大群)、21症例は動脈瘤の増大は見られなかった(非増大群)。7日目には, 28症例は4DFLOWにて80本のtype IIエンドリークを検出したが、39本(48.8%)は1年の経過でflowが消失した(一過性)、ところが、41本(51.3%)はflowが持続した(持続群)。持続群のうち、動脈瘤増大群では責任動脈の内部血流のpeak flow velocityとそのamplitudeが有意に大きかった。EVAR後の動脈瘤の予後はtype IIエンドリークの血管内のflow dynamicsを調べることである程度予想ができる可能性があり、それには4DFLOWが有用であることがわかった。臨床的に最も問題となっているEVAR後のtype IIエンドリークについて、4DFLOWを用いた血行動態の評価に成功した。動脈瘤のfateについてもエンドリークの責任動脈の血行動態(peak flowとflow amplitude)とある程度関連性を示唆する所見を得ることができた。更に症例を集積し、その他のendoleakについても有意な結果を得たい。腹部大動脈瘤(AAA)に対するステントグラフトによるEVAR(endovascular aortic repair)治療は、その低侵襲性から、近年多用されるようになり、本邦でも2011年以降、開腹直達手術件数を上回る件数が施行されている。しかし、それに伴い、エンドリーク、脚閉塞による間欠跛行、腎臓等の臓器虚血、臀筋跛行、陰萎、脊髄梗塞等といった術後合併症が問題となってきた。これらの診断には現在は専らX線DSAや造影CTが行われているが、十分な精度とは言えない。本研究ではMRIを用いた4次元流速解析や独自開発の超微量ガドリニウム造影剤漏出検出法を駆使し、EVAR後の合併症の超早期検出と高精度病態解明により、より安全なEVAR実現への道筋を拓くことである。今年度はそのデータ収集の準備を行った。1)学内臨床研究倫理審査委員会から介入研究として承認を得た。2)名古屋大学附属病院においてMRIの撮像プロトコルの最適化を行った。装置はSiemens社の3T MR装置skyraで撮影した。2名の健常ボランティアで、探索的に非造影の4DFLOW撮影を行い、撮像時間10分で4DFLOWの検査が施行できるように、撮像シーケンスを最適化した。三軸の速度イメージから非造影でも比較的良好な血管壁のboundaryが決定でき、segmentationは可能であることがわかり、造影では描出は更に容易であると考えられた。3)名古屋大学附属病院において、EVAR術後の患者を初めてentryし、撮影を施行した。造影剤を用いた3DMRAで4DFLOWの3次元速度ベクトルのsegmentationを行い、flow analysisを行うと共に、造影剤の漏出を検討した。当初計画にある平成29年度の目標をほぼ達成した。

持続群のうち、動脈瘤増大群では責任動脈の内部血流のpeak flow velocityとそのamplitudeが有意に大きかった。EVAR後の動脈瘤の予後はtype IIエンドリークの血管内のflow dynamicsを調べることである程度予想ができる可能性があり、それには4DFLOWが有用であることがわかった。臨床的に最も問題となっているEVAR後のtype IIエンドリークについて、4DFLOWを用いた血行動態の評価に成功した。動脈瘤のfateについてもエンドリークの責任動脈の血行動態(peak flowとflow amplitude)とある程度関連性を示唆する所見を得ることができた。撮影プロトコルの見直し等により一件毎の検査時間を最適化し、更に検査件数を増やす。更に症例を集積し、その他のendoleakについても有意な結果を得たい。今年度、研究分担者の日程がなかなか合わず、全体会議が十分行えなかったことで研究分担者の旅費の支出が少なかったことが主因と考えられる。このことによる研究の進捗には直接的な影響は無く、今年度の目的を概ね達成したが、次年度、予算と支出の差額が生じないように留意してゆきたい。分担者全員とのミーティングが行えなかったことが理由として考えられます。ネット会議等を利用して、研究計画に齟齬が無いようにしていますが、留意したいと思います。
ブライトリム分子雲に於けるSequential Star Formation

私は、Sugitani et al.(1991,ApJS77)でブライトリム分子雲に於けるトリガーされた星生成の候補としてIRAS点源(遠赤外線源)が付随する44個のブライトリム分子雲を北天でピックアップし、これら天体を近赤外JHK3色イメージング観測を米国キットピーク観測所の1.3m望遠鏡と赤外線カメラ(SQIID)で行った。予備的な解析により、多くの天体で前主系列星のクラスターを発見し、少なくとも6つの天体では電離波面爆縮(radiation-driven implosion)による連鎖的星形成(sequential star formation)の証拠を得た。しかしながら、この段階の観測サンプルはまだ少なく、この連鎖的星形成の重要性はまだよく認識されているとは言えない。そこで、さらにこのような観測例を増やし、ブライトリム分子雲に於ける小さなスケールでのトリガーによる星生成の伝搬に関しての基本的な描像を与えることを目的として、キットピーク観測所のデータの詳しい解析を行った。その結果、さらに5例のsequential star formationの事例を発見した。私は、IRAS点源が付随するブライトリム分子雲の探査を北天と同様にして南天でも行い、45個のIRAS点源が付随するブライトリム分子雲をカタログしている(Sugitani et al.1994,ApJS92)。サンプルを飛躍的に増やすために、これら45天体の近赤外線観測を南半球のセロトロロ天文台の赤外線カメラ(CIRIM)を用いて行った。本格的な解析はこれからであるが、北天と同様に多くの前主系列星のクラスターを発見した。これからの詳しい解析により、ブライトリム分子雲に於ける星形成、特にSequential Star Formationの理解が深まることが大いに期待できる。研究遂行上、大量の近赤外線イメージ・データの解析を効率化するために、大容量のハードディスクを導入した。また、経費の一部はデータ解析の補助のための謝金、その他研究遂行に必要な消耗品などに経費に充てた。
口腔悪性腫瘍における第11番染色体上の共通欠失領域の同定

ヒト第11番染色体におけるヘテロ接合性(Loss of heterozygosity,LOH)はヒトの様々な癌で既に報告されている。第11番染色体上の癌抑制遺伝子の存在の可能性を検索するために、本研究ではこの染色体に特有な22個のマイクロサテライト・マーカーを使用して、31人の患者から採取した口腔扁平上皮癌組織について精密な欠失地図を作製した。コントロールは同一患者の正常組織を用いた。LOHは25症例中14例で認められた(56.0%)。特に、欠失が多く認められたのはこの染色体の長腕上においてであった。しかも、我々のデーターは異なった2個所の欠失領域の存在を示した。まず、第一の領域は11q23の領域であり、マイクロサテライト・マーカーのD11S939とD11S924の間に3cMにわたって存在した。第二の共通欠失領域は11q25の領域でマイクロサテライト・マーカーのD11S912とD11S910の間に7cMにわたって存在した。これらの結果は口腔悪性腫瘍の発生・進展に関係した癌抑制遺伝子が第11番染色体長腕上に少なくとも2つ以上存在する可能性を示唆した。