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太平洋島嶼国における芸術とアイデンティティ-太平洋芸術祭を焦点として-

・収集したり、閲覧したビデオ資料などから、それぞれのパフォーミング・アーツの形態が、この芸術祭を開始したときから、多少の変化を被っていることがわかる。芸術祭も含めた太平洋の諸文化同士の出会いが、さまざまな混交を生んでいることがわかった。・また、新しい芸術活動は、現地社会のなかからアーティストが育ちつつある。また海外移民社会において、特にニュージーランドでは、ポリネシア系の人々の芸術活動が、きわめて盛んなものになりつつある。・豊田・橋本・安井は夏休み中に別日程で事前調査に出かけた。各国の準備状況を目の当たりにして調査を行うことができた。それぞれの地の政治・経済状況が芸術祭に代表を送ることと深く関わっていることが検証できた。・芸術祭は、学期中であったが、山本・船曳・豊田・橋本・安井が現地入りして、多くの観察を行うことができた。残念ながら、勤務校の都合で、棚橋は芸術祭の時期に大学を離れることができず参加できなかった。・芸術祭期間中はプレス登録をしたので、会期中の様々な情報を速やかに得ることができる立場にあった。また、芸術祭の主催者へのインタヴューや、シンポジウムの傍聴などにより、様々な資料や情報を得ることができた。・芸術祭の主たるテーマである伝統的な歌とダンスのパフォーマンスの観察、その他、文化遺産の展示、新しい創作芸術の展示、映画、写真展、入墨の実演、彫刻や工芸品の創作実演、文学の朗読会兼シンポジウム、演劇、創作ダンスの公演、ファッションショーなどの観察を実施した。・山本は、3月に再度海外調査にでかけ、オークランド大学で過去の芸術祭ビデオを見、また、ニューカレドニアで、関係者に芸術祭の成果に関するインタヴューを行った。・安井は、3月に再度グァムでの調査を行い、芸術祭の成果と新しい創作芸術についてインタヴューを実施した。・芸術祭の主催自体が、それぞれの国の国内事情や文化状況と深く関わっている。ニューカレドニアに関しては、フランスからの独立の可能性の生じてきている今、カナク文化をニューカレドニアのアイデンティティの正面に据えることは、先住民であるカナクにとって大きな意味を持っていた・また、それぞれの国の送り出す代表団の構成や文化の提示方法などが、それぞれの国の国内事情や文化状況とさまざまな絡まり方をしていることが解釈できる。
こころのリスク状態における脳構造および脳機能の解明

統合失調症の白質の変化についての検討では、複数の神経線維束でのfractional anisotropy(FA)の低下が確認され、脳梁前方部のFAと陰性症状に負の相関を認め、白質構造の変化の一部は、臨床症状と関連があることを示唆された。At Risk Mental State(ARMS)の灰白質のついての検討では、VBMによる検討では、ARMSの脳の形態学的変化が初発統合失調症患者に比べて軽微であることが示唆されたが、ARMSの中には、MRI撮像以降に精神病を顕在発症する例、発症しない例が混在していることが影響していると思われた。関心領域法による縦断的検討では、発症後の早期に統合失調症患者で進行性の灰白質体積減少を認めた。統合失調症の前駆状態の診断精度向上のため、前駆状態にみられる臨床的特徴および脳形態・機能の特徴を明らかにすることを目的とする。すなわち、国際的に共通して用いられる「こころのリスク状態(ARMS)」の臨床診断基準により診断された統合失調症の発症危険群を対象に、詳細な臨床症状の評価、構造的MRIによる脳構造の評価、DTIによる脳部位間の機能的結合の評価、社会性関連課題を用いた機能的MRI検査による脳機能の評価を行う。平成19年度には、富山県の「こころのリスク目談事業」を通して、こころのリスク状態(ARMS)の対象者を募集した。ARMS9例(男性7例、女性2例)について、「こころのリスク状態の包括的評価(CAAMS)」を用いて詳細な判定を施行し、陽性症状評価尺度(SAPS)、陰性症状評価尺度(SANS)、および簡易精神症状評価尺度(BPRS)を用いた半構造化面接を行い、臨床症状の重症度の評価を施行した。また、これらの9例については、3次元MR画像、拡散テンソル画像の撮像を施行した。また、統合失調症26例(男性14例、女性12例)、うち初回エピソード患者10例(男性7例、女性3例)について、当科外来より募集し、陽性症状評価尺度(SAPS)、陰性症状評価尺度(SANS)、および簡易精神症状評価尺度(BPRS)を用いた半構造化面接を行い、臨床症状の重症度を評価するとともに、3次元MR画像、拡散テンソル画像の撮像を施行した。ARMS例については、当科の心のリスク外来で、現在も経過を観察中で縦断的な経過の検討を予定している。また、統合失調症例についても当科外来で治療的介入を継続している。得られた画像データにつては、今後の検討のため必要な処理を行い、蓄積している。統合失調症の前駆状態は、表出される症状が多彩で非特異的であるため、診断精度には限界がある。このため、こころのリスク状態(ARMS)という共通の概念で、統合失調症の発症危険群について、3次元MR画像、拡散テンソル画像のデータを蓄積し、検討することで、客観的な生物学的指標による統合失調症の前駆状態の補助診断法の開発を目指すことは、統合失調症の早期介入、発症予防にとって重要である。平成20年度には、富山県の「こころのリスク相談事業」を通して、こころのリスク状態(ARMS)の対象者を募集した。また、予備的検討として進めてきた、拡散テンソル画像を用いた統合失調症患者と健常対象者の白質のfractional anisotropyの群間差、臨床症状との相関についての検討を日本統合失調症学会第4回大会で発表した。

統合失調症の前駆状態の診断精度向上のため、前駆状態にみられる臨床的特徴および脳形態・機能の特徴を明らかにすることを目的とし、国際的に共通して用いられる「こころのリスク状態(ARMS)」の臨床診断基準により診断された統合失調症の発症危険群を対象に、詳細な臨床症状の評価、構造的MRIによる脳構造の評価、DTIによる脳部位間の機能的結合の評価、社会性関連課題を用いた機能的MRI検査による脳機能の評価を行った。平成21年度には富山大学附属病院神経精神科と県の精神保健行政サービスが中心となり行っている「こころのリスク相談事業」の利用者から、新たに11名のARMS症例を対象として加えることができ、富山大学病院精神科外来で経過観察をしながら、全脳の3次元MRI画像、拡散強調画像を得ると同時に臨床症状の評価を行った。また、初発統合失調症については9例を対象として加え、精神科外来で治療を行いながら、脳画像の収集、臨床症状の評価を行った。予備的検討として、上記対象のデータの一部を用いて、統合失調症患者の3次元全脳画像と拡散強調画像を用いて、Statistical Parametric Mapping2(SPM2)により、白質の微細構造の変化の指標であるfractional anisotropy(FA)と臨床症状、灰白質体積についての統計学的な解析を行った。臨床症状との検討では統合失調症患者の脳梁前方部のFAと陰性症状の重症度に負の相関の認め、脳梁前方部のFAが小さい患者ほど陰性症状が重度であることが示された。灰白質体積との検討では患者群で左下前頭後頭束のFAと左後頭葉内側面、左シルビウス裂後部の灰白質体積、右下前頭後頭束のFAと右前部、後部帯状回の灰白質体積に正の相関を認めた。平成22年度には富山大学附属病院神経精神科と県の精神保健行政サービスが中心となり行っている「こころのリスク相談事業」の利用者から、新たに4名のARMS症例を対象として加えることができた。上記対象のデータの一部を用いて、初回エピソードの統合失調症患者について、白質の微細構造の変化の指標であるfractional anisotropy(FA)と灰白質体積についての統計学的な解析を行った。初回エピソード統合失調症患者で右内包、左上縦束、右下縦束でFA低下を認め、FAと灰白質体積の相関の検討では、左上縦束のFAと左眼窩前頭皮質の灰白質体積に正の相関を認めた。上縦束は、前頭葉-側頭葉を連絡する主要な神経線維束であり、統合失調症患者でのlanguage pathwayの異常への関連が示唆されており(Li et al.,2009)、初回エピソード統合失調症患者でDTI研究でもFA低下が報告されている(Perez-Iglesias et al.,2010)。統合失調症患者における白質FA低下の一部は、その線維束が連絡する皮質の体積減少と関連することが示唆された。平成23年度はARMS症例、初発統合失調症患者、健常者について、ボクセル単位解析により、灰白質体積について、統計学的な検討を行った。ARMSと初発統合失調症患者の比較では、初発統合失調症患者で左前部帯状回の灰白質の有意な減少を認めたが、ARMSと健常者の比較では、灰白質の有意差を認めなかった。ARMSでは精神病の顕在発症群の前部帯状回の灰白質減少が過去に報告されており、我々の対象者でも既に顕在発症している例ではベースラインでの前部帯状回の灰白質体積が統合失調患者の平均近くに分布していた。
分散情報ネットワークにおける情報資源発見機構の開発研究

本研究は、広域ネットワークに分散する情報情報システムにおいて、電子文書などの情報資源にアクセスする際の名前管理、名前の解決の大局的な方式の提案と実証を目的としている。ここで、情報資源とは具体的には文書、ファイル、画像等のマルチメディアデータベースシステムに格納されるオブジェクトを念頭においており、本研究では、WWWで使われるURLに対しURS(Uniform Resource Specification)という情報資源の属性を記述する記法を提案した。本研究は、分散ディジタル図書館システムの構築の基礎となる研究である。まず、情報資源識別子の体系化を行い、個々の情報資源オブジェクトを一般的に識別するための体系の仕様を検討し、仕様を作成した。本研究のソフトウェアはC1ient-serverモデルの元で動作するので、サーバにアクセスするためのプロトコルを定める必要がある。これには、基本的にはデータベースの問い合わせ言語に基づくプロトコルを援用でき、SQLが現在広く使用されている。しかし本研究では重負荷のc1ient-serverネットワークに適合した、より軽量のアクセスプロトコルの開発を行った。ANSI Z39.50を基礎としたものを採用することを念頭において検討した。名前解決サーバの基本動作はURSを与えてその識別子を返す。そのため、URS解決のためにはルールベースのアルゴリズムを採用することにし、URS仕様との整合性を取りつつ、サーバ機能の設計を行った。また、既存のHTTPサーバとの互換性も必要である。そのため、パブリックドメインにあるHTTPサーバソフトウェアを参考に、URSサーバと通信する機能を接続し、利用者側からは双方のサーバにアクセス可能なようなソフトウェアの設計を行った。以上のような研究から、名前解決のモデルの有効性を結論づけことができると考えており、さらに評価を詳細に行うことが今後の課題である。本研究は、広域ネットワークに分散する情報情報システムにおいて、個々の情報資源にアクセスする際の名前管理、名前の解決の大局的な方式の提案と実証を目的としている。ここで、情報資源とは具体的には文書、ファイル、画像等のマルチメディアデータベースシステムに格納されるオブジェクトを総称し、本研究では、WWWで使われるURLに対しURS(Uniform Resource Specification)という情報資源の属性を記述する記法を提案した。研究の第一年目として、基本仕様の検討とプロトタイプ開発の基礎作りを行った。本研究では電子図書館システムへの応用を念頭に置いているので、ページ画像やポストスクリプトで記述された本や雑誌、フルテキストで用意された記事等を対象として、より広いファイル等の資源とも整合の取れるような仕様として作成している。次にプロトタイプ実装設計を行った。以上の一般仕様に基づき、ページ画像を蓄積する電子図書館システムのデータベースにアクセスするようなサーバに関して、一部実装を行った。この作業は次年度に継続する。研究の第二年目として、プロトタイプ実装環境を作成した。

名前解決サーバの基本動作はURSを与えてそのURIを返すものであり、昨年に引続きソフトウェアの実装を行い、実際に動作させて評価を行った。本研究のソフトウェアはclient-serverモデルの元で動作するので、サーバにアクセスするためのプロトコルを定める必要がある。これには、基本的にはデータベースの問い合わせ言語に基づくプロトコルを援用でき、SQLた現在広く使用されている。しかし本研究では重負荷のclient-serverネットワークに適合した、より軽量のアクセスプロトコルの開発を行う。ANSIZ39.50を基礎としたものを採用することを念頭において検討した。購入したワークステーションとLAN環境で、名前解決サーバの動作の検証を行った。特に、他のシステムと協調できるようなインターフェースの柔軟さに配慮して設計し、実装するようにした。以上の研究から、名前解決のモデルの有効性を結論づけことができると考えており、さらに評価を詳細に行うことが今後の課題である。
口腔内免疫機構を賦活する歯科補綴バイオマテリアルインターフェイス構築法を探る

本研究では高齢者の心身賦活を促す歯科補綴治療法を確立することを根幹の目的とし、ヒト生来備わっている口腔内免疫機構(抗菌ペプチド等の生体分子利用)に基づく、補綴物(歯科材料)の抗菌効果と高齢者の免疫機構賦活効果を期待し、歯科材料への抗菌ペプチドの機能的結合方法(リンカー部)の構築を取り組んできた。リンカー部はファージによって提示されるペプチドライブラリーよりセレクションを試みた。しかしながら、これまでの実験ではペプチドの同定にいたっていなかった。今年度は、その点を解決するため、PMMA粉末を用い表面積(ターゲット濃度)の増加を図り、結合するペプチドの回収率の向上を期待し、実験を遂行した。その結果、PMMA粉末に対しリンカー部候補となるペプチドが数種類得られ、その中のひとつはワイルドタイプファージ(M13KE)とのPMMA粉末への結合比較実験を行ったところ、2倍強の親和性を持つペプチドであることが明らかになった。また、PMMA板上に対して同じ比較実験をおこなったところ同様の結果が得られた。このことは、今回同定されたペプチドはPMMA表面に生体分子を構築するリンカー部としての利用が期待できる。さらに、板状のPMMA表面にこのペプチドの結合が確認できたことは、臨床において、重合後のPMMA表面に対しても応用が可能と考えられる。今後、リンカー部と生体分子を融合させたペプチド(タンパク)を合成し、そのPMMA表面での機能評価をおこなうことで、いままでPMMAが持ちえなかった生体活性能を高効率かつ簡便に付与できると期待される。本研究では高齢者の心身賦活を促す歯科補綴治療法を確立することを根幹の目的とし、個々の条件に影響されず、ヒト生来備わっている口腔内免疫機構に基づく、補綴物(歯科材料)の抗菌効果と高齢者の免疫機構賦活効果を期待して、抗菌ペプチドを用い、(1)歯科材料への結合(吸着)検索性に優れた抗菌ペプチドライブラリーの製作を行い、(2)それを利用することによる樹脂(PMMA)、金(Au)、チタン(Ti)およびハイドロキシアパタイト(HA)表面への抗菌ペプチドの構築を確立し、(3)その評価を行う。初年度は歯科材料と結合するペプチドのセレクションを行った。その際に、当初の実験計画を再検討し、実験効率、信頼性の点から抗菌ペプチドライブラリーの作製を変更しPhage Display Peptide Library (NEB)を使用し実験をおこなう計画を立案した。またPhage Display PeptideLibraryの使用にあたっては、東北大学遺伝子組み換え実験計画承認を得て行った今回は、PMMAについてペプチドセレクション実験を行った。その結果、PMMA結合ペプチドの候補となる、ペプチド提示ファージが数種セレクションされた。しかしながら、それらとペプチド非提示ファージ(M13KE)とのPMMAへの結合比較実験を行ったところ、有意な差が認められず、現段階ではPMMAと特異的な親和性を持つペプチドであることを明らかにできていない。この結果はPMMAとファージタンパクの非特異的結合が問題となっているためと考えられ、今後、ペプチドのセレクションを行う際、PMMAとファージタンパクとの非特異的結合を最小に抑えるためのブロッキング条件、洗浄条件を細かく検討すること必要である、さらにPMMA表面の改質処理を行うことによる結合の特異性の向上についても検討し、実験を遂行していく。本研究では高齢者の心身賦活を促す歯科補綴治療法を確立することを根幹の目的とし、ヒト生来備わっている口腔内免疫機構(抗菌ペプチド)に基づく、補綴物(歯科材料)の抗菌効果と高齢者の免疫機構賦活効果を期待し、歯科材料への抗菌ペプチドの機能的結合方法の構築を昨年度より取り組んできた。昨年度、PMMA特異的ペプチドのセレクションが困難であることが明らかとなり、今年度は、その点を解決するため、PMMA表面をプラズマイオンボンバーダ((株)日立ハイテクフィールディング)を用い改質処理を行うことにより、結合の特異性の向上を期待し、実験を遂行した。その結果、プラズマ処理PMMAは未処理のものに対して以下の違いが認められ、表面の組成が変化していることわかった。(1)0濃度が未処理より低かった。(2)Clsスペクトルにおいて、カルボン酸メチル由来の289eV成分、メトキシ基由来の286eV成分の比率が低かった。(3)Olsスペクトルにおいて、532eV成分が主成分となった。(旭化成株式会社基盤技術研究所)この表面処理したPMMAに対し、ファージディスプレイによるペプチドのセレクションを行ったところ、候補となるペプチドは残ったが、これらもワイルドタイプファージ(M13KE)とのPMMAへの結合比較実験を行ったところ、有意な差が認められず、現段階ではPMMAと特異的な親和性を持つペプチドであることを明らかにできていない。このことは、今回表面処理に用いたプラズマイオンボンバーダは簡便で、臨床的にも応用が容易と考えられたが、得られた表面処理の結果は特異的ペプチドを得るまでには至らなかった。本研究において、PMMA特異的ペプチドの同定は最重要点であるため、今後はシランカップリング材、4-METAを用いPMMAに反応基を取り込ませ樹脂改質を行い、特異的ペプチドの決定を行う予定である。

しかしながら、これまでの実験ではペプチドの同定にいたっていなかった。今年度は、その点を解決するため、PMMA粉末を用い表面積(ターゲット濃度)の増加を図り、結合するペプチドの回収率の向上を期待し、実験を遂行した。その結果、PMMA粉末に対しリンカー部候補となるペプチドが数種類得られ、その中のひとつはワイルドタイプファージ(M13KE)とのPMMA粉末への結合比較実験を行ったところ、2倍強の親和性を持つペプチドであることが明らかになった。また、PMMA板上に対して同じ比較実験をおこなったところ同様の結果が得られた。このことは、今回同定されたペプチドはPMMA表面に生体分子を構築するリンカー部としての利用が期待できる。さらに、板状のPMMA表面にこのペプチドの結合が確認できたことは、臨床において、重合後のPMMA表面に対しても応用が可能と考えられる。今後、リンカー部と生体分子を融合させたペプチド(タンパク)を合成し、そのPMMA表面での機能評価をおこなうことで、いままでPMMAが持ちえなかった生体活性能を高効率かつ簡便に付与できると期待される。
同所移植モデルを用いた膵臓癌の診断及び治療への応用を目指すＰＥＴイメージング研究

臨床の状況を反映する同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。当モデルを用いて膵臓癌の診断・治療に応用可能なPETイメージングプローブの候補である三つ(64Cu-RAFT-RGD、11C-Sorafenib、11C-DAC)の内、64Cu-RAFT-RGDプローブに焦点をおいてin vitro、in vivo実験、小動物PETイメージング、FDG-PETと比較などを行い、実用性を検討した。腫瘍への特異性をオートラジオグラフィー、組織化学的染色、免疫組織化学的染色法などによって検証した結果、64Cu-RAFT-RGDは、αvβ3発現している膵癌の診断に応用できる可能性があると結論できた。膵臓癌は腫瘍の中で最も予後が悪い癌で高死亡率と低生存率が報告されている。早期診断および効果的な治療方法は主な課題である。一方癌研究には臨床の状況にできるだけ密接し、適した腫瘍モデルを確立することが望ましい。本研究の目的は、(1)臨床の状況を反映する同所移植膵臓癌モデルを確立すること(2)当モデルを用いて膵臓癌の診断及び治療に応用可能な様々新しいPETイメージングプローブを前臨床段階で検討することである。前年度は同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。今年度は、当モデルを用いて膵臓癌の診断に応用可能な候補PETイメージングプローブ三つ(64Cu-RAFT-RGD、11C-Sorafenib、11C-DAC)の内, 64Cu-RAFT-RGDプローブに焦点してin vitro、in vivo実験などを実行した。膵癌の評価のために18F-FDG-PETは最も一般的に用いられますが、false positiveやfalse negative所見などがあり、診断の正確さは制限されている。代謝変化より病気特定の異常分子一つであるαvβ3インテグリンをターゲットする64Cu-RAFT-RGD PETプローブを用いて小動物PETイメージングを行い18F-FDG-PETと比較した。正確で簡単に膵臓癌病変の発見に向けてPETと形能イメージング(CT、MRI)を併せて評価した。特にPETイメージング後造影CT(CECT)を行った。PET/CECT融合イメージより得られた画像解析からプローブの腫瘍への集積、集積の特異性、他の組織への分布、クリアランスなどを調べてからプローブの実用性を検討した。撮影後、腫瘍と非腫瘍組織へのプローブ蓄積とプローブ得意性をex vivoオートラジオグラフィー法、組織化学的染色法、免疫組織化学的染色法、免疫蛍光試験などによって総合的に検証した。膵臓癌は腫瘍の中で最も予後が悪く、高死亡率と低生存率が報告されている。早期診断および効果的な治療方法が主な課題である。今年度は,赤色蛍光タンパク(RFP)レポーター遺伝子を安定導入したヒト膵臓癌細胞株を確立して、その培養細胞をヌードマウスの皮下に移植して腫瘍モデルをまず作製した。そしてドナーヌードマウスに作った皮下腫瘍の一部を最適な手術法によりレシピエントマウスの膵臓に移植する同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。膵臓に直接注射法に見られる細胞懸濁液の漏出による腹膜スプレッドと癌腫症などを避ける事ができ、急速かつ予測可能な腫瘍の成長が高いTumor takerate (100%)で得られた。さらに、当モデルを用いて腫瘍のαvβ3インテグリンをターゲットする64Cu-RAFT-RGD PETイメージングプローブの有用性を検討している。様々な膵臓癌細胞株と腫瘍におけるαvβ3インテグリンの発現をWestern blotting, fluorescence-activatedcell sorting (FACS)手法で調査した結果、ある膵臓癌細胞株(例;BxPC3, PANC-1)にαvβ3インテグリンの高発現が見られた。64Cu-RAFT-RGDプローブのin vivobiodistributionやblocking実験などを行い、プローブの腫瘍と非腫瘍組織への集積および集積の特異性なども検証した。膵臓癌は腫瘍の中で最も予後が悪い癌であり、早期診断および効果的な治療が主な課題である。本研究の目的は、(1)臨床の状況を反映する同所移植膵臓癌モデルを確立すること(2)当モデルを用いて膵臓癌の診断及び治療に応用可能な様々な新しいPETイメージングプローブを前臨床段階で検討することである。24年度は同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。25年度は、当モデルを用いて膵臓癌の診断に応用可能なPETイメージングプローブの候補である三つ(64Cu-RAFT-RGD、11C-Sorafenib、11C-DAC)の内, 64Cu-RAFT-RGDプローブに焦点をおいてin vitro、in vivo実験などを行った。αvβ3インテグリンをターゲットする64Cu-RAFT-RGDプローブを用いて小動物PETイメージングを行い、18F-FDG-PETと比較した。

PETイメージング後造影CT(CECT)を行い、PET/CECT融合イメージより得られた画像解析から64Cu-RAFT-RGDプローブの腫瘍への集積、集積の特異性、他の組織への分布、クリアランスなどを調べてからプローブの実用性を検討した。撮影後、腫瘍と非腫瘍組織へのプローブ蓄積とプローブ特異性をex vivoオートラジオグラフィー法、組織化学的染色法、免疫組織化学的染色法、免疫蛍光試験などによって総合的に検証した。前年度は、他の候補プローブである,11C-Sorafenibと11C-DACのために、様々な膵臓癌細胞株と腫瘍におけるターゲット分子PBR(11C-DAC)、VEGFR1, VEGFR2(11C-Sorafenib)の発現をWestern blottingやfluorescence-activatedcell sorting (FACS)、免疫組織化学的染色手法などで調査した。同所移植膵臓癌モデルや皮下異種移植腫瘍モデルを用いてプローブの体内分布や予備PET実験などを行った。24年度は臨床の状況を反映する同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。25年度は、当モデルを用いて膵臓癌の診断・治療に応用可能なPETイメージングプローブの候補である三つ(64Cu-RAFT-RGD、11C-Sorafenib、11C-DAC)の内, 64Cu-RAFT-RGDプローブに焦点をおいてin vitro、in vivo実験などを行った。αvβ3インテグリンをターゲットする64Cu-RAFT-RGDプローブを用いて小動物PETイメージングを行い、18F-FDG-PETと比較した。PET後造影CT(CECT)を行い、PET/CECT融合イメージより得られた画像解析から64Cu-RAFT-RGDプローブの腫瘍への集積、集積の特異性、他の組織への分布、クリアランスなどを調べてからプローブの実用性を検討した。腫瘍と非腫瘍組織へのプローブ蓄積とプローブ特異性をex vivoオートラジオグラフィー法、組織化学的染色法、免疫組織化学的染色法、免疫蛍光試験などによって総合的に検証した。26年度は、他の候補プローブである,11C-Sorafenibと11C-DACのために、様々な膵臓癌細胞株と腫瘍におけるターゲット分子PBR(11C-DAC)、VEGFR1, VEGFR2(11C-Sorafenib)の発現をWestern blottingやfluorescence-activatedcell sorting (FACS)、免疫組織化学的染色手法などで調査した。前年度は、11C-Sorafenibと11C-DACを用いて再実験などを行いましたが有意な集積、特異性などが認められなかった。それで、代わりに使えそうな他の候補ターゲット分子の検討などを行いました。臨床の状況を反映する同所移植膵臓癌モデルを確立することに成功した。当モデルを用いて膵臓癌の診断・治療に応用可能なPETイメージングプローブの候補である三つ(64Cu-RAFT-RGD、11C-Sorafenib、11C-DAC
改良PRP療法の歯内療法処置への応用の可能性を探る

本研究は、多血小板血漿(platelet-rich plasma; PRP)から分離した、洗浄血小板(washed platelet, WPLT)がヒト歯髄細胞の増殖に対し、促進的に作用することを明らかにしたものである。細胞増殖に対しPRPは弱い促進作用しか示さなかったがWPLTは、より効果的にその細胞増殖を促進した。また、乏血小板血漿(platelet poor plasma, PPP)の添加は濃度依存的に培養ヒト歯髄細胞の成長を抑制した。これらの結果からWPLTはPRPよりも効果的にヒト歯髄細胞の増殖を促進することが示された。申請者はすでに、PRPから血漿成分を除去した洗浄血小板を応用することにより、血小板中の増殖因子の効果を有効に作用させることができることを明らかにしており、この改良PRPの、ヒト歯髄細胞の増殖・分化に与える効果を詳細に検討することにより、歯髄組織保存再生療法実現の為の一助としたいと考えた。また、骨組織は骨を形成する骨芽細胞と骨吸収を担う破骨細胞により一定の形態が保持されており、歯においては象牙芽細胞と破歯細胞がこの役割を担っている。そこで、歯髄の内部吸収・歯根吸収に対するPRPの効果を検討するため、現時点では性状が不明な破歯細胞に代え、破骨細胞形成実験系を用いて同因子の効果の検討を進めた。従い、本研究課題は硬組織の形成と吸収の両面に対する改良PRPの効果を明らかにすることにより、安全で効果的な歯髄組織保存再生療法を確立する事を目的とした。上記の研究を行った結果、PRPそれ自身は歯髄細胞に対して有意な増殖促進効果を示さないこと。PRPから血漿成分を除去し、洗浄血小板とすることにより血小板中の増殖因子を有効に作用させることができること。しかしながら、血漿を除去することにより、臨床応用を計る上で、創傷部位に増殖因子の濃度を維持するための何らかの架橋体が必要であることが明らかとなった。また、この洗浄血小板によるヒト歯髄細胞の増殖促進効果は、同因子に含まれるTGF-βにより、同細胞から産生誘導されたPGE2が促進的に作用することが明らかとなりた。さらに、マウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞を用いた、RANKL誘導性破骨細胞分化誘導活性測定系において、洗浄血小板は破骨細胞形成を有意に抑制した。これらの結果は、洗浄血小板がヒト歯髄細胞の増殖を促進し、硬組織形成に促進的に作用する可能性を示唆するものである。現在までの研究結果から、PRPそれ自身は歯髄細胞に対して有意な増殖促進効果を示さないこと。しかしながら、血漿を除去することにより、臨床応用を計る上で、創傷部位に増殖因子の濃度を維持するための何らかの架橋体が必要であることが明らかとした。従って、これらの点をより詳細に検討し、臨床応用への基礎データを集積するため、19年度は以下の研究を行った。また、19年度の研究計画においては、臨床応用への現実性を持たせるため、増殖因子に対する架橋体の検索、ラットを用いてのvivoにおける効果の確認も行い、改良PRP療法の臨床応用への可能性を確認した。1)ヒト歯髄細胞の増殖及び分化に及ぼすアルギン酸創傷被覆材の影響は、ごく僅かであった。2)実験的ラット生活歯髄切断創に対する洗浄血小板の効果が確認できた申請者は現在までに、PRPから血漿成分を除去した洗浄血小板を応用することにより、血小板中の増殖因子の効果を有効に作用させることができることを明らかにしており、この改良PRPのヒト歯髄細胞の増殖・分化に与える効果を詳細に検討することにより、歯髄組織保存再生療法実現の為の一助としたいと考えた。平成20年度までの研究結果から、PRPそれ自身は歯髄細胞に対して有意な増殖促進効果を示さないこと。

PRPから血漿成分を除去し、洗浄血小板とすることにより血小板中の増殖因子を有効に作用させることができること。しかしながら、血漿を除去することにより、臨床応用を計る上で、創傷部位に増殖因子の濃度を維持するための何らかの架橋体が必要であることが明らかとした。そこで本年度は、臨床応用への現実性を持たせるため、増殖因子に対する架橋体の検索、ラットを用いてのvivoにおける効果の確認も行い改良PRP療法の臨床応用への可能性を確認し、以下の結果を得た。1)ヒト歯髄細胞の増殖及び分化に及ぼす新架橋体の検索:ヒト歯髄細胞の増殖及び分化及ぼすアルギン酸創傷被覆材の影響は、ごく僅かであった。そごで、アテロコラーゲン皮膜による被覆材を検討したところ、同材料は有意にヒト歯髄細胞の増殖、分化を促進できることが明らかとなった。しかしながら、このコラーゲンのソースはウシであるため、本研究課題の根幹となる自己由来因子としての観点からは受け入れ難い。2)実験的ラット生活歯髄切断創に対する洗浄血小板の効果:微少なラット歯髄創面に貼薬するため、石灰化面積の検索が困難であるが、有意な治癒促進効果が得られてる。以上め結果から、改良PRP療法は、より臨床応用可能な段階へ近づいた。
口腔扁平上皮癌におけるmicroRNA-655の腫瘍浸潤能マーカーとしての開発

癌の浸潤や転移に関連するEMTに着目して申請者が独自に確立した機能的探索モデル系を用いて、新規EMT抑制性microRNAとしてmiR-655を同定し、miR-655の癌細胞の浸潤能抑制作用や、食道扁平上皮癌検体におけるmiR-655発現と予後の相関を示した。血漿中のmiR-655の測定による診断マーカーとしての臨床応用が食道扁平上皮癌において進められていることから、本研究ではmiR-655の口腔癌への適応を評価する。口腔扁平上皮癌検体や血漿中の遊離miR-655の発現と臨床病理学的因子との相関性を検討することで、その発現変化の意義を解明し、浸潤能診断マーカーとしての臨床応用を目標とする。
合成短繊維添加によるコンクリートの収縮ひび割れの防止

本研究は,合成短繊維を少量添加することでコンクリートの収縮ひび割れを低減・防止することの実用化を目指すものである。研究は二つの柱からなり,(1)すでに剥落対策を目的として少量の短繊維を使用しているJR東日本の構造物を中心に,実構造物での繊維のひび割れ抑制効果を調査すること,(2)繊維がコンクリートの収縮ひび割れを抑制するメカニズムを解明すること,を並行して進めた。実構造物の調査からは,コンクリートの収縮変形に対する外部拘束の程度により,繊維の収縮ひび割れ抑制効果が出る場合と,ほとんど出ない場合があることが分かった。具体的には,トンネルの二次覆工コンクリートで背面の一次覆工コンクリートとの縁が防水シートで切れているような場合は,二次覆工コンクリートの天井部の収縮ひび割れが繊維の存在によりかなり抑制されていた。一方で,高架橋の中間スラブのように四辺を梁で拘束されるような場合には,繊維のひび割れ抑制効果はほとんど見られなかった。収縮ひび割れの抑制メカニズムについては,繊維がプラスチック収縮ひび割れを抑制する機構を解明した。繊維は親水性がある場合,ペースト中の水分を捕捉しており,この効果だけでも,ペーストのプラスチック収縮ひび割れをかなり抑制する。プラスチック収縮ひび割れのひび割れ幅の抑制には,繊維の架橋効果も寄与している。架橋効果は従来から指摘されていたが,水分を捕捉する効果については,国内外で初めて発見した機構である。また,一部の繊維を適量用いることで,中長期的なコンクリートの収縮ひび割れも抑制することが明らかとなったが,その機構解明は今後の課題として残った。実搆造物の調査は,新潟中越地震の影響もあり,JR東日本の構造物の調査は平成17年2月になってから本格的に開始した。現時点では繊維の効果を結論付ける段階にはないが,平成17年度も調査を継続し,調査結果を公表する予定である。収縮ひび割れの抑制メカニズムについては,基礎的実験を重ねて,新たな知見を得た。繊維は基本的にコンクリートのブリーディング(材料分離)を抑制する効果があることが分かった。ただし,繊維に親水性処理がない場合,コンクリートの水を加える前に繊維を添加する場合(先添加)は,ブリーディングの抑制効果がないことが分かった。ブリーディングを抑制する場合は,繊維がコンクリート中の水分を捕捉しているものと考えている。そして,ブリーディングを抑制した繊維は,ペーストのプラスチック収縮ひび割れを明らかに抑制し,親水性処理のない繊維や,繊維を先添加した場合は抑制効果が小さくなることが明らかとなった。これらの実験事実から,繊維がペースト中の水分を捕捉することで,ペーストの急激な体積変化が抑制され,プラスチック収縮ひび割れが抑制されたものと考えた。また,この効果に加えて,従来から言われている繊維のひび割れ間の架橋効果もひび割れ抑制に寄与していると考えている。現時点では,特殊な条件で発生するペーストのプラスチック収縮ひび割れの抑制効果を明らかにしたに過ぎず,コンクリートの収縮ひび割れとの関連性を明らかにすることが次年度の課題である。
自由境界の最適制御問題

科学研究費補助金による2年間の研究課題「自由境界の最適制御問題」を総合的に研究するために(1)プラズマやPorous medidに現われる自由境界問題(2)ファジィモデルの安定性の問題(3)2相ステファン問題に関して研究を進めた。それらの成果は、論文や日本数学会における講演などで発表している。成果の主な内容は次の通りである。1.プラズマの形状を望む形にするために、プラズマの形成される容器の形状をどのように設計すれば良いかという最適形状設計問題のアルゴリズムを提案し、それにもとづいて数値解を得た。また、地下水の流れに現われる自由境界の振舞いが流れの深さによって異なるという結論を理論的解析と数値的解析とによって得た。2.ファジィモデルの安定性を調べるために、これを非線形システムと考えて、それに含まれるあるパラメ-タに関するBifurcationを論じた。また、無限次元システムのファジィモデルについても調べた。3.1次元2相ステファン問題の解の一意性が非線型項が多価の場合にも成り立つことを示した。また、ステファン問題に対する領域や境界での「形状最適化問題」を提案し、その解の存在について論じた。各研究分担者は「自由境界の最適制御問題」を総合的に研究するために、(1)プラズマやPorous mediaにあらわれる自由境界問題(2)2相ステファン問題(3)差分方程式に関して研究を進め、論文や数学会における講演等々の成果をあげている。主な点をあげると次の通りである。1.プラズマにあらわれる自由境界の数値解析を出し、その自由境界と容器に関する最適形状問題を理論的・数値的に論じた。またporous mediaにおける自由境界の漸近的振舞いを自由境界上で定義される擬微分作用素を調べることによって論じた。2.熱源項を制御項とする場合の一次元空間における2相ステファン問題の古典解の存在とその振舞いを論じた。3.差分方程式において、位数有限な有理形解をもつための必要・十分条件を決定した。4.フレッシュコンクリ-ト(粘弾性流体)をポンプ圧送する場合を対象として、ビンガム流に現われる自由境界を数値計算した。また、タイヤと地面の接地面が小さな摩擦係数をもつときに、タイヤがどのように変形するかを数値計算した。各研究分担者は「自由境界の最適制御問題」を総合的に研究するために(1)プラズマやPorous mediaに現われる自由境界問題(2)ファジィモデルの安定性の問題(3)2相ステファン問題に関して研究を進め、論文や日本数学会における講演などで成果を発表している。1.プラズマの形状を望む形にするために、プラズマの形成される容器の形状をどように設計すれば良いかという最適形状設計問題のアルゴリズムを提案し、それにもとづいて数値解を得た。
食道癌に対する相互マシンラーニング法によるＨｅｄｇｅｈｏｇ新規阻害剤の開発

相互マシンラーニング法により同定した候補化合物は増殖抑制能と細胞死誘導能を有していた。候補化合物はマウス皮下発癌モデルにおいて腫瘍の増殖を抑制した。ヒト食道癌組織からのIn vivo細胞株の樹立をおこなったが、十分に成長しなかった。またヒト膵癌でも樹立できなかった。しかし共同研究施設において大腸癌組織ではあるが、In vivo細胞株が樹立できた。マウス皮下発癌モデルでの候補化合物の網羅的遺伝子解析を行なった。候補化合物の投与群においてlincRNA(long intergenic noncoding RNA)の発現を認め、lincRNAの候補化合物の作用機序への関与が示唆された。相互マシンラーニング法によるスクリーニングの結果同定した候補化合物に関して、ヒト癌由来細胞株での増殖能、細胞死誘導の検討を継続した。その結果候補化合物による増殖抑制能と細胞死誘導能は濃度依存的であることを明らかにした。昨年度のマウス皮下発癌モデルへの候補化合物の少量試験投与では抗腫瘍効果を認めなかったため、本年度は候補化合物の投与量を増量し、投与期間も延長し再度抗腫瘍効果の検討を行った。ヒト胆管癌、膵癌のマウス皮下発癌モデルに候補化合物を経口にて週1回で3週連続投与した。いずれの皮下発癌においても候補化合物投与群において腫瘍の増殖抑制効果を認めた。軽度の体重減少を認めたが、候補化合物投与に伴う死亡例などは認めなかった。切除したヒト癌組織のヌードマウスへの皮下移植によるIn vivo細胞株の樹立をおこなったが、十分に成長しなかった。癌腫を変えヒト膵癌でも同様の検討をおこなったが十分に生着できず樹立できなかった。共同研究施設にIn vivo細胞株の樹立を依頼したところ、大腸癌組織のSCIDマウス皮下への移植により移植後約3ヶ月で生着しIn vivo細胞株が樹立できた。樹立されたIn vivo細胞株に対して候補化合物を投与し増殖能、浸潤能、細胞死について評価を行なうとともに、食道癌においてもあらためてIn vivo細胞株の樹立を行なう。胆管癌組織のパラフィンサンプルを用いて免疫染色による発現解析を行った。現在Hedgehogの発現量と予後、悪性度等に関しての臨床病理学的検討を継続中である。相互マシンラーニング法によるスクリーニングの結果同定した候補化合物に関して、ヒト癌由来細胞株での増殖能、細胞死誘導の検討を行った。候補化合物は増殖抑制能と、細胞死誘導能を有しており、それらの作用が濃度依存的であることを明らかにした。切除したヒト食道癌組織のヌードマウスへの皮下移植によるIn vivo細胞株の樹立をおこなったが、十分に成長しなかったため、マウス皮下発癌モデルを用いて検討した。これら担癌動物モデルへの候補化合物の少量試験投与では抗腫瘍効果を認めなかったため、候補化合物の投与量を増量し、投与期間も延長し再度抗腫瘍効果の検討を行った。ヒト胆管癌、膵癌のマウス皮下発癌モデルに候補化合物を経口にて週1回で3週連続投与にて、いずれの担癌動物モデルにおいても候補化合物投与群において腫瘍の増殖抑制効果を認めた。ヒト食道癌によるIn vivo細胞株の樹立に関して、癌腫を変えヒト膵癌でも同様の検討をおこなったが十分に生着できず樹立できなかった。食道癌においてもあらためてIn vivo細胞株の樹立を試みたが、樹立できなかった。そのため、In vivo細胞株ではないが膵癌のマウス皮下発癌モデルに候補化合物の経口投与を行い、DNAアレイ法による網羅的遺伝子解析を行なった。候補化合物の投与群においてlincRNAの発現を認め、これらlincRNAの候補化合物の作用機序への関与が示唆された。食道癌の治療成績は化学療法・放射線療法と手術療法の併用により、以前より向上してきた。しかし治療抵抗例も存在し食道癌の治療には限界があり、新たな治療法の開発が必要である。Hedgehogは、微小環境における上皮間葉移行(epithelial-mesenchymal transition:EMT)との関連も報告され、標的分子として注目されている。本研究の目的は相互マシンラーニング法によるHedgehog新規阻害剤の開発およびin vivo細胞株による担癌動物モデルでの機能解析によりHedgehog新規阻害剤の有効性を検討し新規治療法を開発することである。最終目的は、食道癌に対するHedgehog新規阻害剤による新たな癌治療法により治療成績を向上させることである。本年度は小分子化合物の相互マシンラーニング法によるスクリーニングを行い、150種類の候補化合物を選択した。ヒト癌

由来細胞株に対して150種類の候補化合物を1mMから10nMまで濃度をかえて投与し、培養後24時間から48時間の増殖能について経時的にMTTアッセイ法にて評価した。同様に細胞死に関してもトリパンブルー色素法にて評価した。その結果、増殖抑制および細胞死を誘導する候補化合物を選択した。選択した候補化合物のうち1種類に関してマウス皮下発癌モデルに対して少量の試験投与を行なった。抗腫瘍効果を認めなかったが、明らかな副作用も認めなかった。抗腫瘍効果を有する新規の小分子化合物の研究開発は新たな癌治療法へと直結する重要な研究である。新規の小分子化合物の作用機序の解明により新たな知見の得られる可能性があり、本研究は意義のある研究である。相互マシンラーニング法によるスクリーニングにて候補化合物を同定しており、ヒト胆管癌、膵癌のマウス皮下発癌モデルでその有効性を確認している。大腸癌でIn vivo細胞株の樹立ができており、食道癌でのIn vivo細胞株の樹立を継続中である。またHedgehogの免疫染色による発現解析およびHedgehogの発現量と予後、悪性度等に関して臨床病理学的検討を行っている。一方で候補化合物のDNAアレイ法による網羅的遺伝子解析およびシグナル伝達系の解析が不十分でありやや遅れていると考えられる。本年度中に予定された小分子化合物の相互マシンラーニング法によるスクリーニングを行い、候補化合物を選択した。選択した候補化合物をヒト癌由来細胞株へと投与し、その増殖能、細胞死誘導能の評価が行い、抗腫瘍効果を有する化合物の同定ができた。1種類ではあるがマウス皮下発癌モデルへの候補化合物の少量の試験投与を行い抗腫瘍効果、副作用の評価まで行えた。In vivo細胞株に関しても倫理委員会での承認が得られ、今後樹立をおこなっていく。以上よりおおむね良好に進行していると考えている。Hedgehog新規阻害剤を食道癌細胞株に導入し、Hedgehogの抑制効果について検討する。増殖能、浸潤能、アポトーシス誘導能などについても明らかにする。Hedgehog新規阻害剤の基礎的研究として食道癌細胞株へHedgehog新規阻害剤を投与後、DNAアレイ法による網羅的遺伝子解析を行ない、シグナル伝達系を明らかにする。網羅的遺伝子解析に同定されたシグナル伝達系について、発現している遺伝子の抑制等行い、その機能をさらに解明する。また皮下発癌、腹膜播種、肝転移モデルにHedgehog新規阻害剤を投与し、その効果および副作用を明らかにする。皮下発癌、腹膜播種、肝転移モデルにHedgehogに対する阻害剤を投与し、治療奏功群と治療抵抗群においてDNAアレイ法による網羅的遺伝子解析をおこない、耐性機構を明らかにする選択した候補化合物をヒト癌由来細胞株へと投与し、その浸潤能の評価についても行う。癌細胞株へ候補化合物を投与後、DNAアレイ法による網羅的遺伝子解析を行ない、シグナル伝達系を明らかにする。
有機アニオントランスポーター遺伝子群に多様性と構造機能的解析

有機アニオントランスポーターLST-2は正常ヒト肝臓のみに弱く発現しているが消化固形癌においては非常に強く発現している。一方消化器固形癌ではLST-1やfolate transporterの発現は低いことからLST-2に特異的に輸送される特異的基質の解明されることにより、新たなMTX誘導体の抗癌剤や、特異的基質に抗癌剤を結合させ細胞内に取り込まれた段階で基質から切断され作用する様な癌特異性が高く肝毒性、骨髄抑制の少ない抗癌剤の開発の可能が示唆された。しかし現時点ではLST-2に特異的な基質は不明であり、また放射能標識体の数は限られるため放射性物質を用いて広くスクリーニングすることには限界がある。過去にLST-1やLST-2が輸送するタウロコール酸に抗癌剤クロラムブシルを結合させ治療に用いようとしたが、特異性や肝毒性の面から実用に至っていないのが現状である。さらに我々はLST-1やLST-2を発現する培養細胞株を樹立したがその発現量はあまり高くなくまた継代していくと脱落していく。アフリカツメガエル卵母細胞発現系は煩雑かつ結果にばらつきがでるので多くのサンプルをスクリーニングするには不向きである。そこで上記の欠点を克服するためアデノウイルスを用いた強制発現系を樹立し、蛍光マイクロタイタープレートを用いて、LST-2で輸送される蛍光基質の取り込みの抑制を指標とした消化器固形癌指向性薬物のスクリーニング系の開発を行い新たな基質を開発した。さらに我々はアデノウイルスを用いたトランスポーターの強制発現系を樹立した。LST-1およびLST-2アデノウイルスを培地中に投与したヒト培養肝細胞(PLC/PRF-5、HT-17、HepG2)は胆汁酸、ステロイドホルモンをベースに比べて約30100倍取り込んだ。さらに我々はスキッドマウスに消化器固形癌細胞を移植し、生着した癌組織にLST2組み換えアデノウイルスを注入し、更に腹腔内にMTXを投与したところ、コントロールに比較してLST-2のアデノウイルスを注入した癌細胞は約4週でほぼ消滅した。このことは癌細胞へのLST-2の導入がin vivoにおいてもMTXに対する感受性を上昇させることを示す重要な知見であり今後の制癌療法の新しいアプローチを提示した。有機アニオントランスポーターoatp/LST群の研究は肝臓における胆汁酸の取り込みの研究からスタートした。肝臓は生体内で最も多様な代謝機能と血中から内因・外因性物質を胆汁へ排除する機構をつかさどり、生体の恒常性維持に欠くべからざる重要な役割を果たしている。胆汁酸は肝細胞内でコレステロールから生合成された後に胆汁中に排泄され消化管内に分泌された胆汁酸は消化管から血中に再吸収され再び肝細胞に吸収されるという、いわゆる「腸肝循環」をうけている。この第1段階として血中からの胆汁酸の取込み機構が肝類洞腔側の肝細胞膜上に存在しており近年の分子生物学の進歩によりその輸送が各種トランスポーターによって構成されていることが解明されてきた。

ラットの有機アニオントランスポーター遺伝子の発見から約10年が経過しナトリウム依存性のNTCP、ナトリウム非依存性のOATPという単純な図式から一転し、有機アニオントランスポーターは多くの分子が関与する複雑な機構を有しておりさらに臓器・動物種によってその発現パターンが大きく異なっていることが明らかとなってきた。ヒトゲノムの全容が解明された現在、今後は単なる単離に終わらせずこれら一つ一つの分子について発現臓器、発現パターン、基質特異性、細胞内局在などを明らかにして行くことが重要と考えられた。またこれまでそのリガンドや機能が不明であった核内レセプター、farnesoid X receptor (FXR)が胆汁酸と結合し転写調節を司っていることが判明し、胆汁酸は肝細胞を含む多くの細胞の生理活性を調節している重要なリガンドである可能性が指摘され、胆汁酸による転写調節の研究は一躍脚光を浴びている。有機アニオントランスポーターの基質は胆汁酸のみならず甲状腺ホルモンや抱合型ステロイドなど多くの生理活性物質を輸送することよりこれらの核内レセプターのリガンドを細胞内に取込む最初のステップを担っている可能性もあり、今後はさらにこれらのトランスポーターの詳細な機能を明らかにして行くことが必要であると考えられた。有機アニオントランスポーターLST-2は正常ヒト肝臓のみに弱く発現しているが消化固形癌においては非常に強く発現している。一方消化器固形癌ではLST-1やfolate transporterの発現は低いことからLST-2に特異的に輸送される特異的基質が解明されることにより、新たなMTX誘導体の抗癌剤や、特異的基質に抗癌剤を結合させ細胞内に取り込まれた段階で基質から切断され作用する様な癌特異性が高く肝毒性、骨髄抑制の少ない抗癌剤の開発の可能が示唆された。しかし現時点ではLST-2に特異的な基質は不明であり、また放射能標識体の数は限られるため放射性物質を用いて広くスクリーニングすることには限界がある。過去にLST-1やLST-2が輸送するタウロコール酸に抗癌剤クロラムブシルを結合させ治療に用いようとしたが、特異性や肝毒性の面から実用に至っていないのが現状である。さらに我々はLST-1やLST-2を発現する培養細胞株を樹立したがその発現量はあまり高くなくまた継代していくと脱落していく。アフリカツメガエル卵母細胞発現系は煩雑かつ結果にばらつきがでるので、多くのサンプルをスクリーニングするには不向きである。そこで上記の欠点を克服するためアデノウイルスを用いた強制発現系を樹立し、蛍光マイクロタイタープレートを用いて、LST-2で輸送される蛍光基質の取り込みの抑制を指標とした消化器固形癌指向性薬物のスクリーニング系の開発を行い新たな基質を開発した。さらに我々はアデノウイルスを用いたトランスポーターの強制発現系を樹立した。LST-1およびLST-2アデノウイルスを培地中に投与したヒト培養肝細胞(PLC/PRF-5、HT-17、HepG2)は胆汁酸、ステロイドホルモンをベースに比べて約30100倍取り込んだ。さらに我々はスキッドマウスに消化器固形癌細胞を移植し、生着した癌組織にLST2組み換えアデノウイルスを注入し、更に腹腔内にMTXを投与したところ、コントロールに比較してLST-2のアデノウイルスを注入した癌細胞は約4週でほぼ消滅した。このことは癌細胞へのLST-2の導入がin vivoにおいてもMTXに対する感受性を上昇させることを示す重要な知見であり今後の制癌療法の新しいアプローチを提示した。