hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
複数タグセットのタグがついたコーパスによる語義曖昧性解消の転移学習

この後,もう一つの手法を新しく考えている.具体的には,LSTM(Long short term memory)を用いて語義曖昧性解消のシステムを作成する予定である.このシステムは,分類語彙表の語義(分類番号)を使った語義曖昧性解消になる予定である.この際,分類語彙表の分類番号は,岩波辞典の語義とは異なり,複数の単語で同じ意味を共有している.そのため,この点を活かしたシステムとなる予定である.また,LSTMなどのディープラーニングを用いた機械学習を使うことによって,Fine-tuningやマルチタスク学習等の技術を使って,片方の語義曖昧性解消の知見を,もう片方の語義曖昧性解消の知見に再利用しやすくなると考えており,将来的にはLSTMを使ったマルチタスク学習の利用を想定している.参加を予定していた国際会議が国内で開催されたこと,また,もうひとつの国際会議に学生を連れて行く予算を計上していたが,別の予算を使用することにしたため,未使用額が生じた.2019年度の研究成果発表のための費用(渡航費,論文投稿料など)にあてたい.
エコーガイド下のトレーサー注入による大脳基底核出力路の解析

本研究では、従来の二次元超音波断層法を用いた、霊長類の脳のトレーサー注入を継続してきた。本年度は、これまでに得られた神経解剖学的所見について検討してたが、また、別途に方法論的な大きな進展があった。それは、三次元超音波断層法を新たに生きた霊長類脳の観察に応用し、従来の方法より、きわめて高精度のトレーサー注入を容易に得る事ができるようになったことである。(Tokuno and Chiken, Neurosci. Res. 2004)本方法においては、専用の三次元超音波断層装置をを用いることにより、数十秒のスキャンで、100から200断面の二次元超音波断層像を収集し、デジタルデータとしてコンピュータによる画像処理を適用することができる。脳のさまざまな断面の像を自由に観察することができると同時に、表面レンダリング法により、脳表からの観察像を再構築することも容易に可能である。今回われわれは、ニホンザルにおいて、脳固定、頭蓋骨部分除去の前処置後に硬膜上からその下の脳の観察を試みた。脳の断面の観察を行うとともに、金属電極や、注入用ガラスマイクロピペットの刺入時の像の観察を行った。脳の深部の構造と、金属電極・注入用ガラスマイクロピペットの両者の像を同時観察することが可能で、刺入のミスがあった場合、容易に発見可能であった。大脳皮質運動野や補足運動野でも、脳表面レンダリング像上で電極の同定が可能であり、皮質の脳溝・脳回パターンとの対比ができた。本方法をもちいて、脳深部の構造で大脳基底核出力核のターゲットである上丘にトレーサーを注入し、組織学的検索を行うことにより、三次元超音波断層法が有用であることがさらに確認できた。大脳基底核の線維連絡と機能を超音波断層法と各種トレーサー、ペプチド受容体特異的神経毒を用いて、実験的に研究を行い、報告してきた。本年度の主な研究成果は、以下の2点である。(1)超音波断層法をさらに改良して、現在もっとも新しい装置である、三次元超音波断層装置を用いて、ニホンザルの脳研究における有効性を確認した。三次元超音波断層装置によるデジタル画像再構築によって、薬剤注入時の脳の様々な断面像を観察することができ、また、表面像の再構築により大脳皮質の、脳溝・脳回のパターンを生体で可視化することに成功し、大脳皮質へのアプローチがきわめて容易になることを確認した。今後のトレーサー、各種薬物の脳内注入や電気生理学実験におおいに有用である方法と考えられた。(2)Substance P-saporinの線条体注入による線条体介在ニューロンの選択的破壊が、大脳基底核の出力核である淡蒼球内節のニューロン活動に影響を及ぼすことを、Cytochrome oxidaseによる組織化学によって明らかにした。介在細胞の破壊の結果、淡蒼球内節のCytochrome oxidaseは有意に低下し、一方視床下核の活性は変化しなかった。このことは線条体の直接出力路である線条体-淡蒼球内節投射(抑制性)の活動が上昇し、その結果淡蒼球内節ニューロンの自発活動が低下したものと考えられた。この変化はパーキンソンモデル動物での淡蒼球内節の活動性の変化とは逆のものであり、治療への応用も視野に入れて今後の研究を行なっていかなければならないものと考えられた。本年度は、そういった神経解剖学的所見について検討してたが、また、別途に方法論的な大きな進展があった。

それは、三次元超音波断層法を新たに生きた霊長類脳の観察に応用し、従来の方法より、きわめて高精度のトレーサー注入を容易に得る事ができるようになったことである。(Tokuno and Chiken, Neurosci.Res.2004)本方法においては、専用の三次元超音波断層装置を用いることにより、数十秒のスキャンで、100から200断面の二次元超音波断層像を収集し、デジタルデータとしてコンピュータによる画像処理を適用することができる。脳のさまざまな断面の像を自由に観察することができると同時に、表面レンダリング法により、脳表からの観察像を再構築することも容易に可能である。今回われわれは、ニホンザルにおいて、脳固定、頭蓋骨部分除去の前処置後に硬膜上からその下の脳の観察を試みた。脳の断面の観察を行うとともに、金属電極や、注入用ガラスマイクロピペットの刺入時の像の観察を行った。脳の深部の構造と、金属電極・注入用ガラスマイクロピペットの両者の像を同時観察することが可能で、刺入のミスがあった場合、容易に発見可能であった。大脳皮質運動野や補足運動野でも、脳表面レンダリング像上で電極の同定が可能であり、皮質の脳溝・脳回パターンとの対比ができた。本方法をもちいて、脳深部の構造で大脳基底核出力核のターゲットである上丘にトレーサーを注入し、組織学的検索を行うことにより、三次元超音波断層法が有用であることがさらに確認できた。
近世東アジアにおける商業構造の研究――仲介業を中心に――

本研究では、東アジアの近世、とりわけ中国の明清時代にかけて仲介業の経営構造を取り上げ、それが近世中国においてどのように変遷したのかを解明することを目標としている。2018(平成31)年度の研究実績:1前期においては、明代と清代における牙行制度の連続・継承性問題に考察を加え、その成果を中国の雑誌『蘇州大学学報』に論文「従明末牙行換帖銀的起徴看牙行制度的清承明制」として投稿した。2後期においては、水運業者の支配者である「埠頭」を対象に、その経営実態と国家からの彼らに対する管理制度を検討し、これまでに明らかにしてきた「牙行」との異同について詳細に分析を加えた。この成果は、2019年度の社会経済史学会第88回大会において発表を行う。意義と重要性:第1部分の研究では、明清牙行制度の継承性に対する先学らの認識に修正を加えたと同時に、明代北京商人層の経営実態に関する研究に、新たな検討視角を開いた。第2部分の研究によっては、埠頭の機能が明清時代にかけでどのように変遷したのか、国家の運送業・仲介業に対する管理制度がどれほどの区別を有するのかなど、より具体的な検討が可能になる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、東アジアの近世、特に中国の明清時代にかけて仲介業の経営構造を取り上げて、それが近世中国においてどのように変遷したのかを系統的に明らかにする。そしてこれを鍵として、中国の商業構造の特質を解明するとともに、東アジア地域における同類組織の関連性・類似性を把握することを企図する。2017年度の研究内容:主に三部分に分けて進めた。まず第一は修士段階の研究成果を踏まえて、明清時代の江南を中心に、仲介業と輸送組織(運送業者)との関わりを再検討し、仲介業の輸送業を支配する状況と、その限定性を明らかにした。次第二は京都で開催した2017年度明清史夏合宿に参加して、海外貿易に関わる仲介業の経営構造や商品流通の構造について最新の研究情報を収集して、関係史料の調査を行った。これにより、外交史の分野にも関連する優れた先行研究の成果も吸収していた。最後第三は研究計画書に従って東アジアの各地域ー主に中国、日本、琉球を中心にーにおける仲介業の管理制度や経営構造、および国家の管理制度を考察して、基礎的な研究史整理を行った。意義と重要性:第一部の研究は前の研究成果を深めて、水運業者と仲介業者との関係を三種類に分けて、経営構造上の実相を捉えた。第二部分の研究は海外貿易に関わる仲介業の研究を進める基礎的な作業として、研究計画書に遂げるため不可欠であった。第三部分の基礎的な整理は第二部分より順調し、日本仲介業と中国仲介業との基礎的な比較はこれにより可能になった。まずは2017年の4月から7月まで、修士段階の研究成果を踏まえて、明清江南における仲介業と輸送組織との関わりについて再検討し、陸運業者と水運業者とに分けてその経営構造を考察し、発表の準備を行った。次に、8月7日から10日まで、京都大学により主催する明清史2017夏合宿に赴き、「明清時代における江南の輸送組織と牙行ー水上輸送を中心に」というテーマの口頭発表をして、海外貿易と関わる仲介業史料の収集を行い、仲介業に関する史料調査を遂行した。そして、10月、仙台で2017東北史学会に口頭発表「清代脚夫の官役充当問題と陸運流通の構造についてー湖南と江南を中心に」を行い、学会雑誌『歴史』129輯に学界動向「中国仲介業研究の視座ー明清時代を中心にー」を発表した。その後、日本・琉球の仲介業に関わる先行研究を整理した上で、日本の問屋と琉球の土通事・球商の経営状況を分析し、日本・琉球仲介業と中国仲介業との経営構造に関する基礎的な比較を実施した。2018年の3月、東京の早稲田大学で東方学若手アジア史論壇に「近世東アジア流通構造の外と内ー日中琉仲介業発展の概観と日中仲介業構造の比較を中心にー」を口頭発表した。また、中国復旦大学の期刊『歴史地理』36輯に論文「論明末北京牙商的分布與經濟地位ー以買弁、税收機構的相關史料為中心ー」を発表した。

第2部分の研究によっては、埠頭の機能が明清時代にかけでどのように変遷したのか、国家の運送業・仲介業に対する管理制度がどれほどの区別を有するのかなど、より具体的な検討が可能になる。研究計画に基づいてて引き続き進める。2017年度は主に江南地域を中心に、碑刻史料を考察し、仲介業と陸運・水運業者との関係を分析した。この考察は民間レベルの社会史料を使用しているので、史料性格上の偏差が確か存在している。この偏差を克服するため、これからは中央レベルの財政史料たる『度支奏議』を中心に、北京における仲介業の経営・分布状況と市場での重要性を明らかにし、さらに明末仲介業の時代的な特徴を、ほかの時代との比較により明らかにしたい。また、海外貿易に関わる中国仲介業の史料整理を行う一方、日本・琉球の仲介業に関わる史料を調査して精読し、本格的な日本・中国・琉球仲介業のあり方への比較に努力する平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
尿酸分解系酵素遺伝子発現の分子進化的研究

本研究課題を実施するために、各生物種におけるウリカ-ゼ発現のちがいに注目した。すなわち、ニワトリにおいて初期胚の時期にのみ発現していると考えられるウリカ-ゼの存在を、抗ラット肝ウスカ-ゼ抗体との交叉反応やラット肝ウリカ-ゼcDNAとの相同性により明らかにすることを試みた。それらの交叉産物やcDNAの存在はニワトリ胚で認めることはできたが、ウリカ-ゼの発現量が微量であるため、アミノ酸配列を決定し、確認することが困難であった。そこでウリカ-ゼが成体で発現しているラットに注目し、その遺伝子構造を明らかにして、遺伝子レベルでウリカ-ゼの分子進化を考えることとした。ラットウリカ-ゼ遺伝子分離のためには、我々が既に分離したラット肝ウリカ-ゼcDNAをプロ-ブにして、遺伝子ライブラリ-のスクリ-ニングを行い5つのクロ-ンを分離した。その結果、ラットウリカ-ゼ遺伝子は、8エクソンで構成され、全長40Kbに及ぶことが明らかになった。更に、サザン法による解析により、ラットウリカ-ゼ遺伝子は単一遺伝子であることが示唆され、各生物種のウリカ-ゼ遺伝子を考える上で興味深い。エクソンーイントロン境界領域はGT/AGル-ルに従っており、第8エクソンには、ポリA付加シグナルの下流25塩基に3'側スプライシングシグナルが存在していた。転写開始点はプライマ-伸長法とS1マッピング法により決定し、翻訳開始メチオニンコドンの上流55塩基であることを明らかにした。更に転写開始点の上流200塩基までの領域に、TATA配列,CAAT配列及びダイレクトリピ-トで囲まれたパリンドロ-ム配列が見られた。これらの典型的なプロモ-タ-構造が、ウリカ-ゼの肝特異的発現に関与している可能性がある。尿酸分解系酵素群のうち、その第一段階を触媒する酵素である尿酸オキシダ-ゼ(ウリカ-ゼ)に注目して、その遺伝子発現の分子進化的研究に着手した。そのために、ウリカ-ゼが発現しているラットと発現していないヒトの遺伝子をそれぞれ単離することを計画した。ラットの遺伝子は、我々が既に分離しているラット肝ウリカ-ゼcDNAをプロ-ブにして単離することを試みた。さらに、ヒトウリカ-ゼ遺伝子は偽遺伝子化している可能性があるので進化的に最も近縁であるサル肝ウリカ-ゼcDNAを分離し、それをプロ-ブにして単離することを試みた。その結果、ラット肝ウリカ-ゼ遺伝子は全長70K塩基以上に及び、その2%以下の配列に全エクソンが分散していることが明らかになった。第一エクソンの上流にはTATA配列、CAT配列に相当するものが存在しているので、現在、プロモ-タ-部位を、プライマ-伸長法やSIマッピング法を用いて決定することを計画している。次に、ウリカ-ゼの発現していないヒト遺伝子にアプロ-チするため、プロ-ブとしてサル肝ウリカ-ゼcDNAを分離することを計画した。我々は、サル肝ウリカ-ゼを大量に精製する方法を確立したので、その部分的アミノ酸配列を決定するとともに、酵素をウサギに注射して抗体を作製した。明らかになったアミノ酸配列からは、適当なオリゴプロ-ブは作製できなかったので、抗体法を用いて発現ベクタ-のライブラリ-よりサル肝ウリカ-ゼcDANを分離することを試み、いくつかのクロ-ンを分離したので、その塩基配列を決定中である。本研究課題に関する世界的競争を考慮して、本年度はウリカ-ゼが発現しているラットの遺伝子構造を明らかにすることが必須であると判断し.以下の事を実施した。

ラット遺伝子分離のためには、我々が概に分離したラット肝ウリカ-ゼcDNAをプロ-ブにして、三つのライブラリ-よりスクリ-ニングを行ない5つのクロ-ンを分離した。その結果、ラットウリカ-ゼ遺伝子は8エクソンから構成され、全長40kbに及ぶことが明らかとなった。更にサザン法による解析により、ラットウリカ-ゼ遺伝子は単一遺伝子であることが示唆され、各生物種のウリカ-ゼ遺伝子の進化を考慮するうえで興味深い。エクソン-イントロンの境界領域はGT/AGル-ルに従っており、第8エクソンには、ポリA付加シグナル(AATAAA)の下流25塩基に3'側のスプライシングシグナル(AGTGTTTT)が存在していた。遺伝子構造が概に知られているマメウリカ-ゼについても8エクソンで構成されているが、スプライシング部位はラット遺伝子の部位と異なっていることが明らかとなった。転写開始点はプライマ-伸長法とSIーマッピング法により決定し.翻訳開始メチオニンコドンの上流55塩基であることが明らかとなった。更に、転写開始点の上流200塩基までの領域に、TATA配列、CAAT配列及びダイレクトリピ-トで囲まれたパリンドロ-ム配列が見られた。これらの典型的なプロモ-タ-構造がウリカ-ゼの肝臓特異的発現に関与している可能性がある。CATアッセイにより、この上流領域の役割を知るための準備として、現在、ベクタ-にサブクロ-ンしている。
金属―ゲルマニウム不飽和結合を鍵反応場とする高活性遷移金属錯体の創製とその機能

1.ゲルミリン錯体(金属-ゲルマニウム三重結合化学種)の反応性研究ゲルミリン錯体の反応性の研究はこれまで全く未知であるが、金属-ゲルマニウム三重結合も有効な反応場と考えられるため、幾つかの有機分子との反応性を研究した。まず、基本的な求核剤として、水およびアルコール(メタノール、エタノール)との反応を行ったところ、室温で速やかに付加反応が進行し、高収率でヒドロキシ基あるいはアルコキシ基を置換基として持つ新しいヒドリド(ゲルミレン)錯体が生成した。この結果は、このゲルミリン錯体が、Fischer型ゲルミリン錯体であることを示している。また、過剰のエノン(メチルビニルケトン、エチルビニルケトン)を加えると、室温で2分子のエノンが取り込まれカップリングしてπ-アリル(カルボニル)錯体を比較的収率よく与えた。このエノンとの生成物には、ゲルマニウム-酸素-炭素-炭素-炭素の連結を持つ5員環骨格が含まれている。また、タングステン-ゲルマニウム間にオキシπ-アリル部位が挿入した形をとることが、X線結晶構造解析および各種分光学的測定から明らかにされた。このような反応および生成物はこれまで全く例が無く、ゲルミリン錯体の三重結合の特異な性質を反映している。2.新規ヒドリド(ゲルミレン)錯体の合成研究当研究室で開発したゲルミレン錯体は、金属およびゲルマニウム上の両方に水素を持つが、ゲルマニウムの水素を最も小さなアルキル基のメチル基に置き換えたゲルミレン錯体も反応機構の解明および新しい反応の発見のために重要な合成ターゲットと考えられる。そこで、このタイプの錯体を合成するために、まず、前駆体となるメチル(トリシル)ジヒドロゲルマンの合成を行った。このジヒドロゲルマンとメチル(カルボニル)タングステン錯体との反応を行ったところ、目的の生成物が生成することを確認した。1.ゲルミリン錯体生成反応の機構に関する理論的研究先に、ヒドリド(ヒドロゲルミレン)タングステン錯体とメシチルイソシアナートとの熱反応から、タングステンーゲルマニウム三重結合を持つゲルミリン錯体が生成し、同時にイソシアナートの水素化物が定量的に得られるという全く新しい反応を見出している。今回、この反応の機構をDFT理論計算により詳細に解明した。特に、出発のゲルミレン錯体の金属およびゲルマニウム上の2つの水素が段階的に基質の水素化に使われる過程が明確になった。すなわち、イソシアナートのC=0結合のヒドロゲルミル化によって反応が開始し、5員環中間体を経て、ゲルマニウム上の水素が金属に1,2-転位した後、この水素が基質の末端の窒素上にプロトンとして移ることで反応が完結することが明らかになった。2.ヒドリド(ヒドロゲルミレン)タングステン錯体とヘテロクムレン類との反応ヒドリド(ヒドロゲルミレン)タングステン錯体とイソチオシアナートやカルボジイミドとの反応でも、ヒドロゲルミル化反応により5員環錯体が生成することが明らかになっている。そのため、メシチルイソシアナートとの反応と同様な水素化反応が、これらの5員環錯体を高温にする、あるいは、反応を始めから100度以上の温度で行うことで進行するかを検討したが、複数の生成物が得られたのみであった。また、二酸化炭素との反応を1気圧条件下で様々な温度条件下でおこなったところ、脱水素が起こりゲルミリン錯体が比較的高収率で生成することを明らかにした。この際、反応中間体として、二酸化炭素のC=O結合のヒドロゲルミル化が起こったと考えられる5員環錯体がごくわずかNMRにより確認されたため、イソシアナートとの反応と類似の反応が起こっていると考えられるが、形式的に生成するはずの"ギ酸"はこの反応条件下では確認できなかった。脱炭酸をしている可能性があり、補足剤の添加等を検討する必要があることが分かった。

そこで、このタイプの錯体を合成するために、まず、前駆体となるメチル(トリシル)ジヒドロゲルマンの合成を行った。このジヒドロゲルマンとメチル(カルボニル)タングステン錯体との反応を行ったところ、目的の生成物が生成することを確認した。東日本大震災で研究室が破壊されたため、仮住まい場所への引越しと研究室の立ち上げを繰り返した上に、これまでに合成した錯体や試薬の多くを損失したため、原料から錯体合成を行わなければならず、研究に遅れが生じた。昨年秋に、新しい仮住まいの研究室に移り研究を再開したので、現在、遅れを取り戻すべく研究に適進している。
脳の左右差の研究-神経回路解析と行動解析の統合

我々は、野生型マウスを用いた薬理学的・生化学的な解析により海馬神経回路の非対称性を明らかにした。そこで、これを異なる手法を用いてさらに確認することを目的として,NR2Aサブユニットのノックアウトマウスを用いた生理学的・解剖学的な解析をおこなった。その結果、海馬錐体細胞シナプスの非対称性を再確認するとともに,介在神経細胞シナプスには非対称性が存在しないことを明らかにし、これを報告した(J.Neuroscience,25(40),9213-9226,2005)。2)ivマウス神経回路の生理学的解析ivマウスはモーター蛋白(dynein)をコードする遺伝子に変異を持つため、体軸の形成機構が正常に働かない。このためホモ接合型のivマウスからは内臓逆位と正位のマウスが1対1の確率で生まれる。我々はivマウス海馬神経回路の特徴を解析した。その結果、内臓正位、逆位ともにivマウスでは、海馬神経回路の左右の非対称性が消失していることが明らかになった。3)ivマウスを用いた行動解析ivマウスでは、内臓正位、逆位ともに海馬神経回路の左右の非対称性が消失していた。したがって、ivマウスを用いて行動解析を行うためには、対照群としては別系統のマウス、例えばC57BL6マウスを用いなければならない。そのためには、ivマウスの遺伝的なバックグラウンドをC57BL6に合わせる必要がある。現在、スピードコンジェニック法を用いて急ぎこの動物を作成中である。また、手持ちのivマウスを用いて行った予備的な行動実験において,ivマウスでは物体認知障害が示唆されたが、運動量に差は見られなかった。
日本語史の理論的・実証的基盤の再構築

本研究では、伝統的な日本語史研究の成果と、最新の言語理論の調和を図り、今後の日本語史研究の方向性を見出すことを目的として、研究代表者・分担者・協力者による研究発表と討議を重ねた。またその成果として、『シリーズ日本語史』と題する叢書の企画・構成を行った。『シリーズ日本語史』は「音韻」「語彙」「文法」「日本語史のインタフェース」の4巻構成とすることとし、特に「日本語のインタフェース」では、日本語史資料を言語資料と見る際に、その生成過程に十分な注意を払う必要のあること、日本語史における社会言語学的視点を導入することの重要性、ステレオタイプ的表現と言語の実態を区別する必要のあること等を扱うこととした。各研究代表者・分担者の、本研究に関わる成果は以下の通りである。金水およびその協力者は、統語論的観点を導入することにより、格助詞の発達・変化の過程や名詞句の構造変化の過程が鮮明に浮かび上がらせられることを示した。岡崎は、古代語ソ・サ系列の本質は「目に見えない対象を指示する」というものであったが、照応用法を残して他の用法が衰退したため、曖昧指示その他の用法が例外的に見えるということを示した。大鹿は、古代語の連体ナリの本質が「叙述性のない形式に叙述性を与える」ことであるということを示した。高山倫明は、和歌の「字余り」が、和歌の詠唱法に依存する問題であり、言語の本質的な声質には関与しない問題であることを示した。乾は、上代の様々な資料における和歌の表記の変異を整理し、仮名の成立と和歌の関連について考察した。渋谷勝己(大阪大学大学院文学研究科・助教授)は、日本語の可能形式の文法化について考察し、可能形式以外の表現から可能形式化した形式は、可能形式に止まったまま他の可能形式に道を譲る傾向が強いことを示した。安部清哉(学習院大学・文学部・教授)は、酸味を表す語彙の文献および方言資料からの収集・整理から、日本語基礎語彙の基本構造の一端を明らかにした。前田広幸(奈良教育大学・教育学部.助教授)は、生成音韻論、最適性理論等の日本語史における応用の可能性を示すとともに、平家物語譜本の音韻論的解釈について考察した。本年度は、計5回の研究打ち合わせ・討議と研究会を実施した。第1回研究会では、乾善彦氏の発表「表記体と文体」にもとづき、表記史に関する問題点を整理した。乾氏は、「文体」と「表記体」とを区別し、また漢字の用法により、その「表語用法」を文章表記の基本とするものと「表音用法」を文章表記の基本とするものとにわけ、その中間的な段階をさまざまに設定することを提案した。第2回研究会では、前田広幸氏の発表「制約序列と入力形の変化」に基づき、音韻史の問題について討議した。前田氏は、個々の表層形の有標性、忠実性だけでなく、音韻体系の有標性、忠実性に関する制約を立てるよう拡張されたOTの枠組みを導入し、当該変化の分析を行った。

また、ある世代で制約序列のリランキングが起こったとしても、次世代で習得されるグラマー(や入力形)がそのリランキングの結果(やそれをもとにレキシコンを最適化した形)であるとは限らないことを指摘し、グラマーの史的変化に関し、単純に上のような一般方向のみを前提とする立場の危うさについて検討した。第4回研究会では、大鹿薫久氏の発表「「べし」の衰微から」に基づき、助動詞の意味変化について討議を行った。大鹿氏は、平家物語における「べし」と、それに対応する天草版平家物語における諸形式を詳細につきあわせることにより、「べし」の意味がどのように推移したかが明らかになり、ひいては古代語と現代語の、モダリティに関する体系の違いが浮き彫りになることを示した。第5回研究会では、学生の発表もまじえ、古代語のテンス・アスペクト体系とその歴史的変化、古代・中世語の語構成論、当為表現の変遷、仮名遣いの発生等の問題について討議を行った。毎回、研究会とともに、本研究の成果発表としての出版について打ち合わせを行った。出版物のコンセプト、巻数、構成等について大まかな方針を定めた。本年度は、計5回の研究打ち合わせ・討議と研究会等を実施した。第1回(2005年6月18日)として、青木博史氏(京都府立大学)が「原因主語他動文の歴史」という発表を行い、非情物主語による他動文が日本語に古くから存在したことを指摘した。第2回(2005年9月18日)として、屋名池誠氏(東京女子大学)が「日本語のアクセント活用」という発表を行い、あらゆる方言および歴史的資料に現れた日本語の動詞アクセントが二種の型に還元できることを示した。第3回(2005年9月30日)としては、韓国・高麗大学校外国語学部日語学科との共催により、「日本語史・日本語学研究の新展開」という研究会を開催した。発表者は金水敏、乾善彦、深澤愛(同志社大学講師)、岡崎友子・朴美賢(大阪大学研究員)、李漢燮(高麗大学校)真島知秀(同・大学院)であり、役割語、表記、語彙、コーパス等の面から討議を行った。第5回(2005年12月17日)としては、半沢幹一氏(共立女子大学)が「バイイの文体研究の方法論的可能性」という発表を行い、文体、位相という概念を中心に理論的検討を加えた。また上記研究会とは別に、韓国日本語学会への研究協力者の派遣なども行った。本年度は3回の会合および講演会を実施した。会合では、主として、叢書「シリーズ日本語史」の内容・構成について検討した。「シリーズ日本語史」は、「音韻」「語彙」「文法」「日本語史のインタフェース」の4巻からなるものとし、それぞれについて目次案と執筆者を確定した。3回の講演者はすべて、「シリーズ日本語史」の執筆者の中から依頼した。講演の第1回(H18.6.3)は、岡島昭浩氏(大阪大学大学院文学研究科)による「和漢混淆史としての日本漢語史をめざして-新・和漢混淆時代の江戸後期から明治を中心に-」である。「日本語史における漢語の歴史は和漢混淆の歴史という観点から考えなくてはいけない」という考えに基づき、新漢語の時代と言われる江戸後期から明治にかけてを、「新・和漢混淆時代」と捉えて、そこに見られる諸事象を関連づけて述べるものであった。第2回(H18.9.10)は、木部暢子氏(鹿児島大学法文学部)による「トーンから見た日本語諸方言アクセントの形成」である。この発表は、下げ核、昇り核、トーンといった弁別要素を中心にして諸方言アクセントの形成過程を考えるもので、現在、核の方言と言われているものの中にもトーンの痕跡が見られることがあり、トーンの地理的広がりが従来考えられていたよりも広いことを指摘した。この観察を踏まえ、〔トーン・核〕言語から〔核〕言語と〔トーン〕言語が形成されたと考えることにより、いくつかの現象に説明が付くことを述べた。
コラーゲン３重らせんペプチドを利用したＰＥＤＦ血管新生阻害の分子機構の解明

血管上皮由来因子(PEDF)は血管新生を阻害するが、その機構は未解明である。近年、コラーゲン上のPEDF認識配列を同定し、それが血管新生促進因子であるヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)の認識配列とオーバーラップしていることがわかった。また、PEDFもコラーゲンのみならず、HSPGと相互作用することが知られている。そこで、PEDFやHSPGのみに特異的に結合するコラーゲン様のペプチド、およびコラーゲンやHSPGのみに特異的に結合するPEDF変異体をデザイン・調製した。さらに、血管新生へ与える影響をin vitroで評価するための、創傷治癒モデルであるスクラッチアッセイの最適条件を決定した。色素上皮由来因子(PEDF)は、血管新生を強く阻害する生体分子として知られている。その作用機序は未だ不明であり、様々な検証が行われているが、決定的な解明には至っていない。申請者は、所属研究室が以前に発見したPEDFとヘパラン硫酸が、コラーゲン上で競合的に相互作用するという知見に基づき、血管新生阻害作用との関連を調査することとした。本相互作用を検証するためには、in vitroにおける血管新生の評価系の構築が不可欠である。そこで、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた創傷治癒モデルを用いることとし、その実験条件を精査した。まず、培地中に含まれるヘパリンを除いた系を検証したところ、アッセイ系が機能することが示された。つづいて、アッセイ前に行うブロッキング濃度の最適化を行い、高いS/Nを得ることができるアッセイ系の構築に成功した。つづいて、PEDF存在下、本アッセイ系を行ったところ、過去の知見通り、HUVECの移動が阻害されている様子を観察することができた。さらなる精査を行うため、ヘパリンやPEDFと特異的に相互作用するコラーゲンペプチドをFmoc固相合成法で調製し、またヘパリンおよびコラーゲンへの結合能を欠損したPEDF変異体を大腸菌の形質転換することにより得た。現在、これらの化合物とともに、ヘパリンやヘパリン阻害剤であるプロタミンを用いた条件、あるいはそれらの共存条件下でアッセイを行っている。今後は、血管新生において、これらの化合物一つ一つが果たす役割を解明するために、創傷治癒モデルによる精査を続けるとともに、管腔形成アッセイを行い、それらの結果の裏付けを行う。色素上皮由来因子(PEDF)は血管新生を強力に阻害する分子として知られている。その血管新生阻害の機構について、ラミニン受容体の一部やF1 ATPシンターゼとの相互作用が提唱されているが、詳細な生化学的解析が行われておらず、未解明な部分が多い。申請者の所属研究室では、以前の研究により、コラーゲン上にPEDF認識配列を同定した。本配列は、血管新生を促進する分子として知られるヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)の認識配列とオーバーラップしていた。くわえて、HSPGはPEDFと結合することが報告されている。そこで、生体内での血管新生の制御機構の一つとして、コラーゲン-HSPG-PEDFの三者間の相互作用が働いていると考え、研究を行った。まず、コラーゲン-HSPGおよびコラーゲン-PEDF間の特異的な相互作用を評価するために、HSPGあるいはPEDFに結合するコラーゲン様3重らせんペプチドをそれぞれ化学合成した。くわえて、コラーゲン-PEDFおよびHSPG-PEDF間の特異的な相互作用を評価するため、コラーゲンあるいはHSPGへの結合能を失ったPEDF変異体を遺伝子工学的手法により得た。つづいて、細胞の遊走の度合いを評価可能な創傷治癒モデルであるスクラッチアッセイを行い、三者間の相互作用が血管新生に与える影響を評価した。その結果、PEDF存在下で細胞の遊走は阻害されたが、さらにヘパリンを添加するとその活性は中和された。一方で、ヘパリン単体では細胞の遊走に影響は与えなかったものの、ヘパリン中和剤であるプロタミンを加えることで細胞遊走の阻害が確認された。今後は、上記で調製したコラーゲン様ペプチドおよびPEDF変異体を組み合わせることで、それぞれの分子間の特異的な相互作用と血管新生の関係を解明していく。現在、上記相互作用を検証するために必要な化合物を調製し、アッセイの最適条件を検討したところである。本アッセイ系を用いて、それらの化合物が血管新生における役割を精査している。それらの結果は再現性がよく、また高いS/N比を持っているため結果の考察が容易となった。そのため、現段階で研究状況で問題となっていることはない。25年度が最終年度であるため、記入しない。引き続き、創傷治癒モデルを用いて、複数の化合物が共存した条件でのアッセイを行う。

その際、ある特定の相互作用のみを検証できる実験系を組み立てることで、その分子が血管新生において担っている役割を精査していく。また、管腔形成アッセイを行い、さらなる結果の裏付けを行う。25年度が最終年度であるため、記入しない。
黄体退縮とプロテアーゼ、アポトーシス、ヒートショクプロティンに関する研究

本研究の研究実績は次の3つに分けられる。まずラット黄体structural luteolysis(SL)のメカニズムとしてのmatrix metalloproteinase(MMP)の活性化とapoptosis、luteolysinであるprostaglandin(PG)F_<2α>のphpspholipase D(PLD)の活性化、ヒト黄体機能に対する過酸化水素のluteolytic effectについてである。SLの発生にはMMP-2の活性化が顕著に認められる事を報告してきたが、このMMP活性をin vivoにおいて調節しているものの一つにtissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)がある。このTIMPをmRNAレベルで検討してみると活動期黄体、functional luteolysis(FL)の黄体に比べてSLの黄体ではTIMP mRNAの発現が著しく減少している事が明らかになった。またこの現象はprolactin(PRL)そのものによってもたらされるのではなく、PRLの低下とそれに引き続く再上昇というSLに特有のPRLの変化によってのみ起こる事が明らかになった。またNick End labeling法でSLの黄体にのみ約3%の細胞にapoptosisが起きている事が明らかになった。一方FLの黄体にはapoptosisは認められなかった。この事よりSLのメカニズムとしてMMP-2の活性の上昇とapoptosisが重要な役割を果たしている事が明らかになった。また培養黄体細胞を使った実験でPCF_<2a>がPLDを活性化する事が明らかになり、黄体退縮にPLDが関与している事が示唆される。ヒト黄体化顆粒膜細胞の培養実験から過酸化水素は黄体細胞の細胞内ATP濃度を低下させるが、これによって細胞が死に向かう事はない。また過酸化水素のcAMP生成抑制作用はこのATP減少によるものではない事を明らかにした。黄体の退縮機序を明らかにするためわれわれの確立したラット実験モデルを用いてfunctional luteolysisからstructural luteolysisへの経時的変化を検討した。血中progesteroneは低値のまま変化せず、20α-dihydroprogesterone値は漸減した。matrix metalloproteinase(MMP)-2活性は増強し、一方tissue inhibitor of metallo-proteinase(TIMP)mRNA発現は減少した。つまりstructural luteolysisの発生過程ではMMP-2の増強とTIMP発現の減少が相まって細胞がマトリックスの破壊がおこり、これが総プロゲスチン値の低下に関わっている事が示唆された(日本産婦人科学会発表予定)。apoptosisの関与を検討するためNick end labeling法で検討したが、structural luteolysisの黄体ではapoptosisが起きている細胞が多く認められ、重要なメカニズムの一つであることが示唆された。また排卵卵胞閉鎖過程におけるapoptosisの関与をPMS-hCGで過排卵させたラットで検討したが、hCGを投与せずPMS投与5日後の卵胞よりもhCG投与後、排卵しないで残った卵胞に明らかなapoptosisが認められ卵胞閉鎖過程では、LHサージがない事ではなく十分なLHサージがある事がapoptosis発生に重要である事が示唆されこれは非常に興味深い結果であった(投稿中)。活性酸素のヒト黄体退縮過程への関与が注目されており、われわれは過酸化水素が細胞内cAMP濃度を減少させる事を報告しているが(J Clin Endocrinol Metab),今回ヒト黄体化顆粒膜細胞を用いた実験では過酸化水素は細胞内ATP濃度を減少させるが、cAMPの低下はこのATP濃度の減少とは関連のない事を明らかにした(投稿中)。まずラット黄体

structural luteolysis(SL)のメカニズムとしてのmatrix metalloproteinase(MMP)の活性化とapoptosis、luteolysinであるprostaglandin(PG)F_<2α>のphpspholipase D(PLD)の活性化、ヒト黄体機能に対する過酸化水素のluteolytic effectについてである。SLの発生にはMMP-2の活性化が顕著に認められる事を報告してきたが、このMMP活性をin vivoにおいて調節しているものの一つにtissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)がある。このTIMPをmRNAレベルで検討してみると活動期黄体、functional luteolysis(FL)の黄体に比べてSLの黄体ではTIMP mRNAの発現が著しく減少している事が明らかになった。またこの現象はprolactin(PRL)そのものによってもたらされるのではなく、PRLの低下とそれに引き続く再上昇というSLに特有のPRLの変化によってのみ起こる事が明らかになった。またNick End labeling法でSLの黄体にのみ約3%の細胞にapoptosisが起きている事が明らかになった。一方FLの黄体にはapoptosisは認められなかった。この事よりSLのメカニズムとしてMMP-2の活性の上昇とapoptosisが重要な役割を果たしている事が明らかになった。また培養黄体細胞を使った実験でPGF_<2α>がPLDを活性化する事が明らかになり、黄体退縮にPLDが関与している事が示唆される。ヒト黄体化顆粒膜細胞の培養実験から過酸化水素は黄体細胞の細胞内ATP濃度を低下させるが、これによって細胞が死に向かう事はない。また過酸化水素のcAMP生成抑制作用はこのATP減少によるものではない事を明らかにした。
ポーラス錯体ナノ空間におけるクラスター型分子吸着の開拓

ナノ空間における分子吸着の科学は、フレキシブルナノポーラス金属錯体による「ゲート型吸着」の発見でブレイクスルーをみたが、最近になり「ゲート型吸着」の問題点が顕在化し、新しい機構による、吸着機能革新が求められている。本研究では、「ナノ空間内でのゲスト分子間相互作用」が吸着において主要な役割を担う、新しいナノ空間物質を創製する。この新物質によって、特定の数の分子が集合化して吸着する「クラスター型吸着」の概念を実証し、ナノ空間物質の機能革新を目指す。本研究は「ナノ空間内において特異的な分子集団はどのように形成されうるか」との問いに対して、科学的な解を示すことで、ナノ空間の科学の新領域を開拓する。
ガドリニウムの熱中性子吸収反応でのガンマ線の相関測定

本研究「ガドリニウムの熱中性子吸収反応でのガンマ線相関測定」の目的は、熱中性子(エネルギーEn=0.002-0.025eV)をガドリニウム標的(10ミクロン厚)に照射し、生成する各ガンマ線のエネルギーと2ー3本のγ線の角相関を標的を囲ったゲルマニウム半導体検出器群(ANNRI装置)で世界で初めて測定することであった。その結果、代表者が既に推進しているガドリニウム添加の水チェレンコフ装置開発に必須な基礎データを提供するものであった。実績結果:1)測定には、JPARC物質生命科学実験施設(MLF)の世界最高の強度とエネルギー分解能を有する熱中性子ビームとゲルマニウムガンマ線検出器群(ANNRI)を使い、データを35億事象以上取得した。2)解析も順調に進み、新しい結果を、2つの国際会議、数回の日本物理学会で発表し、2つのプロシーディングス誌(査読付き)に出版した。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、物質生命科学実験施設(MLF)の世界最高の強度の熱中性子ビーム(エネルギー0.002-0.025eV)をガドリニウム標的(10ミクロン厚)に照射し、生成する各ガンマ線のエネルギーと2-3本のγ線の角相関を、高精度のエネルギー分解能を有するゲルマニウムガンマ線検出器群(ANNRI)を使い、測定し、基礎データを提供することである。実績:1)天然ガドリニウム標的を使い35億事象の中性子ガドリニウム吸収反応データが順調に取得された。2)解析も進み、初期データを2回国際会議で発表、日本物理学会等国内発表も数回行った。解析が順調に進んでいる。H26年度の計画は、1)成果を学術論文にまとめること。2)Gd-157, Gd-155を使った実験を5月にJPARCに提案し、認められれば今年度中に実施する。
がん医療現場の臨床心理士支援のための病学連携の試み

臨床心理士養成大学院教員が,がん医療現場の臨床心理士を臨床実践及び研究上で支援する方法を明らかにするため,質問紙調査,文献研究,事例研究を行った。その結果,臨床心理士の研修機会は少なく,大学院教員に対する期待は大きいことがわかった。そこで,大学院教員が協力してシンポジウム,ワークショップ,事例検討会等のイベント型の研修機会の創出やインターネットによる情報・意見交換等の支援方法を試みた。本研究の目的:がん医療現場の臨床心理士(以下,心理士)を臨床心理士養成大学院教員(以下,教員)が臨床及び研究において支援する体制を構築することを目的とする。第1次調査:初年度の本年度では,心理士の業務や研修の実態と教員へのニーズを明らかにするため,質問紙調査を行った。心理士200名に調査票を配布し,66名から有効回答を得た。回答者の7割ががん診療連携拠点病院に所属し,院内では精神科所属と地域連携科など全科対応の組織所属に分加れたが,その多くは緩和ケアチームの一員だった。主な業務は,スタッフからのコンサルテーションが最も多く,次いで患者や家族のカウンセリングだった。7割が研修機会に恵まれていないと感じ,もし身近にがん医療専門の教員がいたら,研究会やスーパービジョンへの参加を希望する回答が多かった。2年半前の同様の調査と比較し,この領域の心理士がこの数年で急増し研修ニーズも高いとがわかった。第二次調査:こうした心理士のニーズに教員がどう応えるか,教員対象の質問紙調査を現在継続中で,次年度に結果を報告する予定である。メーリングリストの開設:平成19年10月から,研究代表者が管理者となり,心理士及び教員ががん医療緩和ケアに関する情報や意見を交換するためのメーリングリスト(ML)を開設し,平成20年3月の時点で160名が参加し,160通のメールが投稿された。本MLでは,心理士支援に有益だけでなく,本研究への協力依頼,研究成果のフィードバックなど,インターネットによる新たな研究手法の可能性を示唆している。本研究の目的:がん・緩和医療現場の臨床心理士(以下,心理士)を臨床心理士養成大学院(以下,大学院)の教員が臨床及び研究において支援する体制を構築することを目的とする。第二次調査:前年度の第一次調査で明らかになった心理士の大学院教員に対するニーズに大学院教員がどう応じているかを明らかにするため質問紙調査を行ったが,10数名の回答しか得られなかった。そこで,数名の大学院教員とともに,心理士対象に合宿形式の事例検討会,学会等を舞台にしたシンポジウムやワークショップを実施し,心理士の感想を求めるアクション・リサーチを行った。その結果,心理士の活動や緩和ケアチーム内の役割が医療現場のニーズに応じて多様化しているため,研修も多様かつ組織的なものが求められていることがわかった。また,前年度に本研究の一環として開設したメーリングリストには,心理士,大学院教員等が250名参加し,がん・緩和医療の研修機会や臨床実践に関する情報や意見交換が続けられており,そこからも大学院教員の果たすべき役割が明らかになっている。第三次調査:心理士と大学院教員が継続的に連携しているモデルとして,関東地区,関西地区,中国四国地区,九州地区からそれぞれ1つの研究会を選び,連携の現状と今後の課題について聞き取り調査による事例研究を行った。その結果,2事例は大学院教員が企画運営の中心であるのに対し,他の2事例は心理士が中心に企画運営し,大学院教員は側面からの援助をしており,2つのタイプにおいて活動のあり方がいくつかの点で異なることがわかった。この4事例について,次年度も調査を継続する予定である。研究の目的:本研究は,がん・緩和医療現場の臨床心理士(以下,心理士)を臨床心理士養成大学院(以下,大学院)の教員が臨床実践及び研究において連携支援(以下,病学連携)する体制を構築することを目的とする。研究実績:(1)第三次調査前年度に引き続き,継続的に病学連携している関東地区,関西地区,中国四国地区,九州地区の「パリアティブケア研究会」及びその合同研究会の計5団体の病学連携の現状と今後の課題に関し事例研究を行った。研究初年度に開設したメーリングリスト(メンバー295名,通算650通)で連携情報を公開し,各団体の事務局担当者が一堂に会した全国規模のシンポジウムを2回開催した。その結果,5団体の病学連携はこの3年間で順者に展開し,心理士支援の効果を発揮したが,心理士に比べ大学院教員の参加者数が依然少なく,研究会の定期的開催のために新規参入教員のリクルートが課題とされた。(2)第四次調査前年度までの調査を基に,心理士の教育研修には,職種固有と多職種協働等の2軸以上,院内(例ケースカンファ),地域(例地域密着事例検討会),全国(例学会)等の3層以上の研修機会が必要であるとし,「多軸多層的研修モデル」を提唱した。本年度は,多職種協働に加え,がん患者団体との協働の軸の創出をめざした全国規模のシンポジウムを行った。

また,年度末に,心理士約300名に,本年度の1年間の研修経験に関するWEB調査を実施し,現在集計中であるが,多軸多層的な研修を受けた心理士の割合は少なく,とくに多職種協働軸の全国規模の医学会への参加率が低かった。心理士の多くは非常勤職で出張旅費が保障されていない等の事情が考えられる。研修機会の促進及び阻害要因の解明,多軸多層的研修の普及方法の開発,さらには当初予定していた大学院カリキュラムの検討は今後の課題として残された。
虚血耐性におけるHIF-1αの機能解明とその制御によるスーパー肝細胞の開発

本研究課題は将来の臨床応用に繋がるより高い虚血耐性能を有する肝細胞の開発を目指し、低酸素環境への肝実質細胞の機能的適応変化に対する分子メカニズムを解明することを目的としてきた。この目的遂行のために、我々はCre-loxpシステムに基づいた遺伝子ターゲティングを行うことで肝細胞特異的に生体内低酸素感受性転写制御因子であるhypoxia inducible factor-1(HIF-1)の機能を欠失させたマウスを確立した。このマウスは肝臓においてサザンブロット解析上約60%以上の割合でHIF-1α遺伝子欠損が認められるにもかかわらず、全身性にHIF-1α遺伝子を欠失させた場合と異なり胎生致死に至らず正常に発生・成長することが確認された。肝湿重量変化は対照群と比較して特に有意な差は認められず、また組織学的な検討では肝小葉構築形成には異常が認められないものの、HIF-1α欠損マウス肝臓において終末肝静脈と終末門脈との血管距離が約50μm延長していることが明らかになった。一方、低酸素刺激によりHIF-1を介して発現誘導が認められる解糖系酵素群の肝小葉内発現パターンに関して特にHIF-1α欠損肝臓で変化が認められないことが免疫組織学的検討により明らかになった。以上の結果より、HIF-1発現は肝臓の発達において基本肝小葉構築形成には必須でないものの肝微小血管構築形成を規定する因子として重要な役割を演じている可能性があると考えられた。さらにHIF-1α欠損肝臓における部分肝切除術後の肝再生過程が対照群と比較して遅延することを見出し、この現象がG1期およびS期サイクリンなどの細胞周期関連蛋白質発現減少を伴った細胞増殖応答低下によるものであることを明らかにしてきた。本研究期間ではHIF-1が肝臓内基本構造および機能発現において重要な役割を演じていることを明らかにすることが出来たが、今後更に詳細な分子メカニズムの解明を行っていく必要があると考えている。本研究課題は将来の臨床応用に繋がるより高い虚血耐性能を有する肝細胞の開発を目指し、低酸素環境への肝実質細胞の機能的適応変化に関する分子メカニズムを解明することを目的としている。本年度は研究計画通りに実験に従事し、Cre-loxp systemを用いて作成した肝臓特異的HIF-1α(hypoxia inducible factor)遺伝子欠損マウス(HIF-/-)の詳細な生化学的・組織学的なcharacterizationを行った。まず、in vivoにおけるCre recombinase蛋白発現によるHIF-1α遺伝子改変効率を定量的に解析するためにSouthern blotを行った。その結果、8週令HIF-/-マウスでは肝臓特異的に約60%のHIF-1α遺伝子欠損が起きていることが明らかになった。しかし、このマウスにおける出生後の体重増加率は対照群と比較して大きな変化がなく、また成獣における肝湿重量/体重比においても両者間に著名な変化は認められなかった。一方、HIF-/-マウス肝臓のH.E.染色による組織学的検討では、肝小葉構築形成には異常が認められないものの対照群と比較して終末肝静脈と終末門脈の間の肝小葉内血管間距離が約50μm延長していることが明らかになった。現在、この血管間距離の変化が肝小葉内血管数の現象によるものか否かおよびこの現象による肝小葉の機能的変化の有無について解析を行っている。また、HIF-1遺伝子欠損による定常状態における肝臓内遺伝子発現変化の有無について定量的RT-PCR法にて解析を行ったが、PGK, PK, VEGFなど低酸素刺激によりその発現がHIF-1依存的に誘導されることが報告されている遺伝子群の発現に変化は認められなかった。

次に、肝再生機構におけるHIF-1の関与を明らかにするために外科的2/3部分肝切除術を行った。その結果、HIF-1-/-マウスも対照群同様に約1週間以内に肝重量の回復が認められ肝再生が起きることが明らかになったが、術後3日までHIF-1-/-マウスでは肝重量の回復率が対照群と比べ低下しており早期肝再生過程においてHIF-1が重要な役割を演じていることが明らかになった。今後、この分子メカニズムについて検討を行って行く予定である。本研究課題は将来の臨床応用に繋がるより高い虚血耐性能を有する肝細胞の開発を目指し、低酸素環境への肝実質細胞の機能的適応変化に関する分子メカニズムを解明することを目的としている。この目的遂行のために本年度も継続して生体の低酸素応答システムの中心に位置する転写制御因子hypoxia inducible factor-1(HIF-1)の肝臓特異的な機能欠損マウスを用いて肝再生機構における役割について解析を行った。まず、昨年度認められた正常肝再生過程におけるHIF-1の転写活性化が、HIF-1α遺伝子の転写活性化に基づいたHIF-1α蛋白発現亢進によることを定量的RT-PCR法にて明らかにした。また、再生肝臓内において低酸素化が誘導されないことを免疫組織学的に明らかにした今回の結果とあわせ、肝再生過程のHIF-1依存性転写活性化には肝臓内酸素環境変化に起因したHIF-1αタンパク質安定化依存性活性化メカニズムと異なった新しい転写レベルでの制御機構の関与を強く示唆していると結論づけた。一方、昨年度明らかにしたHIF-1欠損マウスにおける早期肝再生過程遅延現象について詳細な解析を行い、この再生肝重量回復遅延が肝実質細胞の部分的な細胞増殖応答抑制によることをBrdUによる免疫組織染色により明らかにした。また、この細胞増殖応答抑制はHIF-1活性欠損により細胞周期特にG1期からS期への移行を司るサイクリンD1,E,Aの発現が部分的に減少し、その結果サイクリン依存性キナーゼ(CDK)の活性が抑制されたためであることをwestern blotおよびkinase assayにより証明した。これまでにG1/S期移行に関わるサイクリン蛋白の発現調節にHIF-1が関与しているということは報告されておらず、また本研究においてこれらサイクリンのプロモーター解析を行ったところ直接的なHIF-1依存性メカニズムを示唆する所見が得られていないことを考慮すれば、HIF-1が間接的にあるいはCIP,KIPなどのCDK抑制因子の発現を介している可能性を示していると考えられる。