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小児肝胆道疾患における肝内胆管上皮障害と発癌に関する分子遺伝学的研究

小児外科領域における肝胆道疾患のうち胆道閉鎖症、肝内胆管低形成症と劇症肝炎や先天性胆道拡張症の病態を理解し解明するために胆道上皮細胞の発生から変性・再生について細胞生物学的に検討することを目的として研究を行った。その結果、先天性胆道拡張症の臨床例において膵管胆管型の合流形式を示す例では胆管膵管型に比較して胆嚢粘膜の発癌の危険性が高いことを明らかにした。さらに、臨床例において膵液の逆流による胆嚢の粘膜の細胞機能への影響を検討した結果、胆汁酸とトリプシンは異なった作用経路を介して、いずれも細胞増殖亢進に働くことが明らかとなった。一方、胆道系の胎児発生段階から胆道閉鎖症や先天性胆道拡張症を引き起こす原因となる病態についての研究では、胆道閉鎖症の病態発生において、胎児期の胆道系上皮の発生過程の異常を示す“ductal plate malformation"を有する胆道閉鎖の臨床例では、それを有さない場合に比して予後が不良となる結果であった。また、胆道閉鎖症児の下部胆管開存例の膵・胆管合流異常の検討から胆道閉鎖症の病態発生に関しては、合流異常の存在が必ずしも関与しているとはいえないとの結果が得られた。従来より申請者らは、臨床材料を用いた解析により膵胆管合流異常の胆嚢粘膜には早期より発癌プロモーター作用が働いていることを明らかにしてきた。そして、膵管胆管型の合流形式を示す例では胆管膵管型に比較して胆嚢粘膜の発癌の危険性が高いことを示した。そこで、今年度は臨床例において膵胆管合流異常に伴う膵液の逆流によって、胆嚢の粘膜の細胞機能にどのような影響が及んでいるかをより詳細に検討するために解析を行った。その結果、胆汁酸とトリプシンは異なった作用経路を介して、いずれも細胞増殖亢進に働くことが明らかとなった。これらが、最終的に胆道発癌を来たすためには、肝内胆管上皮細胞に対する慢性的な障害因子の関与に加えて、癌細胞がアポトーシスを生じることなく生き残って増殖期に入ること、すなわちアポトーシス抑制タンパク(IAP)が発現することが重要であると示唆されてきた。そこで、アポトーシス抑制タンパク(IAP)であるsurvivinに注目して小児胆道癌のアポトーシス回避機構から癌の進展に至る機構を分子生物学的な手法を用いて、遺伝子的背景を解明すべく次に示す研究を計画した。すなわち手術で得られた胆嚢と胆管の切除標本を用いて、通常の組織学的検査に加えて免疫組織化学的検査を行い胆道上皮の細胞機能を評価・検討した。さらに小児の膵胆管合流異常の胆道粘膜において抗survivinモノクローナル抗体を利用した免疫組織化学的検討を行って、小児の過形成を呈するような胆道上皮のsurvivinの発現を評価するための予備実験を行った。先天性胆道拡張症の患児で、膵管胆管型の合流形式を示す例では胆管膵管型に比較して胆嚢粘膜の発癌の危険性が高いことを示した。そこで、昨年度は臨床例において膵胆管合流異常に伴う膵液の逆流によって、胆嚢の粘膜の細胞機能にどのような影響が及んでいるかをより詳細に検討するために解析を行った。これらが、最終的に胆道発癌を来たすためには、肝内胆管上皮細胞に対する慢性的な障害因子の関与に加えて、癌細胞がアポトーシスを生じることなく生き残って増殖期に入ること、すなわちアポトーシス抑制タンパク(IAP)が発現することが重要であると示唆された。そこで、アポトーシス抑制タンパク(IAP)であるsurvivinに注目して小児胆道癌のアポトーシス回避機構から癌の進展に至る機構を分子生物学的な手法を用いて、遺伝子的背景を解明するための研究を計画した。すなわち手術で得られた胆嚢と胆管の切除標本を用いて、通常の組織学的検査に加えて免疫組織化学的検査を行い胆道上皮の細胞機能を評価・検討すること。

さらに小児の膵胆管合流異常の胆道粘膜において抗survivinモノクローナル抗体を利用した免疫組織化学的検討を用いて、小児の過形成を呈するような胆道上皮のsurvivinの発現を評価するための予備実験を行った。医歯薬学
国連海洋法条約体制の包括的分析ー条約発効20年の総括と将来への展望

2018年度は、本研究課題の最終年度であり、この4年間に進めてきた研究の成果をまとめるため国内でBBNJ研究会を中心に2回の研究会を開催し、また日本海洋法研究会の研究会を2019年3月に開催して、これまでの研究を一応締めくくるとともに、今後成果として公刊するものについて確認した。2018年度は特に分担者坂元茂樹の『日本の海洋政策と海洋法』、富岡仁の『船舶汚染規制の国際法』の2つの研究成果がまとめられたことにみられるように4年にわたる共同研究と個人研究の成果が具体的な著書になってまとめられ、研究が順調に進んだことを示す積極的貢献があった。また、他の分野でもこれまでの各年度に発表された成果に加えて、各分担者による各研究分野に関する論文の発表があり、又はその準備が進められた。ただし、本研究の重点課題の一つであるBBNJ及び深海底の分野については、政府間交渉が必ずしも当初の予測通りには進展しておらず、2019年3月入って開始された第2回政府間交渉以降も継続研究を必要としている。そこでBBNJについては、これまでの研究成果を踏まえてまずその原則部分を2019年度に『国家管轄権外区域に関する海洋法の新展開』と題する共同研究にまとめるべく章立てと執筆陣を整えたところである。幸い、本科研の研究は、少し陣容を替える形で、本年度以降の科研費総合研究Aに継承されていくので、新たな分担者、協力者を加えて刊行を推進することになろう。また本研究の成果は、新しい海洋法判例も含めて海洋法の新しい動向を反映した2019年5月刊行の薬師寺公夫、坂元茂樹、浅田正彦、酒井啓亘編集代表の『判例国際法』(第3版)にも反映されている。また中国の海洋法研究者との定期的な研究交流が再開され、2年間の日本での共同シンポジウムの成果を踏まえて、2019年9月には中国西安で共同シンポジウムを開催することを決定した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、日本海洋法研究会に所属する代表者及び分担者を中心に、国連海洋法条約発効後30年余を経過した今日における、同条約体制の制度上の展開とそれ以降に生じた新たな問題に対する条約制度の課題を3つの領域、すなわち、1国連海洋法条約設置機関の運用と課題、2海洋の開発と保全をめぐる問題、3国連海洋法条約と地域レジームとの相互関係という3つの領域から総合的に検討することを目的とする。平成27年度は、本研究の開始の年度に当たり、年度当初に、各分野に属する分担者がそれぞれの分担分野について研究を開始するとともに、全体の共通認識を形成するために海洋法の最近の動向について研究の進展している分野の研究動向を分担者及び協力者から発表してもらう全体研究会を日中海洋法ワークショップを含めて3回開催することを計画した。日中海洋法ワークショップについては2016年3月下旬に開催予定で準備が進められたが、当時の政治的状況もあって、最終的に中国側から開催延期の申入れがあったため翌年度に延期をせざるをえなくなったが、2回の海洋法研究会は予定どおり実施した。2回の研究会では、「EU統合的海洋政策の成立と展開」、「海洋保護区ーBBNJを視野に入れて」、「国家管轄権外区域の海洋生物多様性をめぐる海洋法の現状と課題」、「公海における人身取引等に関与している疑いのある外国船舶への法執行について」について報告・討議された。これらも含めて刊行を予定している現代海洋法の潮流第9巻の準備も進行中である。分担者の研究状況は後述する。また代表者(薬師寺)・分担者(坂元・富岡)は、編集委員会を設置して、本研究に部門責任者の一人として加わる予定であった故田中則夫氏の『国際海洋法の現代的形成』(478頁、2015年11月)を刊行した。全体として、研究は順調に開始されたが、海外交流では前述のような事情もあり、次年度に課題を持ち越した。前述したように、2015年度は4年にわたる研究の開始年度に当たるために、研究全体の組織化と始動が主要な課題であり、可能であれば、日本海洋法研究会で続けられてきたが政治的事情もあって一時中断せざるを得なく日中の海洋法ワークショップを再開することが懸案であった。国連海洋法条約採択後30年余を経た国連海洋法条約体制の包括的分析という総合的テーマについて、各分担者が3つの領域で研究を開始しその一定のまとまりがついたものから成果を発表していくという点では、後述するように初年度から相当の前進がみられた。予定された2回の全体研究会も当初の予定どおり、日本海洋法研究会として同志社大学及び西南学院大学で実施した。他方、2016年度3月下旬に予定されていた日中シンポジウムが上述のように、中国側の都合によりキャンセルとなり、ワークショップ開催は2016年度の課題となった。現在2016年度開催に向けて、準備をすすめている。

2016年度は、2015年度3月末に九州で計画しながら、1、最終段階で中国側からの出席が困難となり開催できなかった日中の海洋法研究者の共同ワークショップを開催すること、2、これを含めて、現在日本にとっても重要課題となっているBBNJ問題につきBBNJ研究会との共同研究を含む2階の全体会議を開催すること、3、本研究では(a)「国連海洋法条約設置機関の運用と課題」、(b)「海洋の開発と保全をめぐる問題」、(c)「国連海洋法条約と地域レジーム」の3領域について、これまでに行ってきた研究につき成果を順次発表していくことを重点課題とした。最大の課題としてきた日中海洋法研究者の共同ワークショップについては、南シナ海仲裁裁判判決後の複雑な状況もあったが、困難を克服して、2017年2月15日に準備会合を開き、その翌日の2月16日午前9時から午後5時にわたり立命館大学朱雀キャンパス217号教室において第6回海洋法に関する日中ワークショップ「海洋法に関する新たな展開と課題」を開催することができた。同ワークショップには中国側3名と日本側14名が出席し、合計8人の報告と1本の書面報告があった。重要な国際的及び日中間の海洋法問題を活発に議論できた。BBNL問題については同研究会主催の2016年11月の第3回BBNJ研究会(上智大学)に多くの科研費代表者・分担者が参加し、討議に加わった。また、2016年11月4ー7日に開催された2016年DILA国際会議には研究代表者が参加して南シナ海をはじめとする海洋環境保護問題について検討した。第3に、これまでの研究経過をまとめて発表する点では、3つの各分野について、個別的研究の成果が徐々に蓄積されつつあり、それらが主要には後述のような論文の形式で発表された。一部実現できなかった課題があるが(国内での全体を集めた2度目の集約)、これは次年度の課題としたい。昨年度は、日中間の海洋問題をめぐる緊張や、中国・フィリピン間の南シナ海仲裁裁判の影響もあって、3月末に予定していた日中の海洋法研究者の共同のワークショップを最後の段階で開催できなくなったが、今年度は早くからその準備をすすめていったこともあって、前述したように、2017年2月に第6回海洋法に関する日中ワークショップを開催することに成功し、重要な課題に関する双方の側の研究者による報告と活発な議論を行うことができた。3つのグループに分かれつつも、国連海洋法条約締結以降の海洋法の国際的動向を全体的に把握しようとする本研究の進展状況は、2年目の2016年度は、まだ全体的に進んだというよりは、船舶の航行とそれへの規制および介入、海洋保護区・BNJJを含む海洋開発と海洋環境保護の、フィリピン・中国間の南シナ海仲裁裁判問題に焦点が集まった。これらの点については、分担者の個人研究を中心に相当の進展があり、後述するように多くの分担者が論文や口頭発表の形で様々の機会をとらえて発表を行ってきている。3つの柱は、それぞれが相互に連携しているが、研究課題「国連海洋法条約体制の包括的分析」として条約発効後の総括と展望の特徴点を総合的に指摘できるように、後半の2年で遅れた部分を検討し、全体のバランスを考えた成果のまとめに向けた検討を2017年度は意識して取り組みたいと思っている。2017年度当初に同年度の目標として、国家管轄権区域を越える海洋生物多様性の保全と持続可能な利用をめざすBBNJを重点課題として、BBNJ研究会とも連絡を取りながら条約交渉の進展状況について検討すること、海洋裁判事例について理論的分析を深めること、これらをまとめる形で2回ほど全体的な海洋法研究会を開催すること、中国の海洋法研究機関との海洋法ワークショップを開催することを重点課題として設定した。すべての計画を完遂することはできなかったが、概ね順調に研究を進めることができた。年2回の全体研究会合の開催については、科研チームの研究発表会と全体会議を2017年9月西南学院大学で、また重点に置いたBBNJの研究成果を研究所として刊行する計画をたてる全体会合を2018年3月に上智大学で、開催し、計画を確定した。
放射線照射後におけるクロマチン構造変化の解析

クロマチン構造変化に関連する研究対象として、シュゴシン-PP2A複合体がセントロメアの染色体接着を守る機構の解析を行った。シュゴシンSgoは真核生物に広く保存されたタンパク質である。ヒトの細胞では、分裂前期に染色体が凝集するのに伴い、コヒーシンがPolo-like kinase(Plk1)によりリン酸化されることにより染色体腕部から解離するが、セントロメアのコヒーシンは分裂中期まで守られる。この素過程において、ヒトシュゴシンhSgo1およびhSgo2はセントロメアに局在してセントロメアのコヒーシンを守っていると推測されるが、その分子機構については未だ不明であった。本研究では、HeLa細胞でヒトのシュゴシンhSgo1およびhSgo2と共沈するタンパク質の解析により、hSgo1およびhSgo2がプロテインフォスファターゼPP2Aと複合体を形成していることが明らかとなった。実際、HeLa細胞から精製したhSgo複合体が、コヒーシンサブユニットのSA1およびSA2よりリン酸を脱離する活性を持っことがin vitroの実験で示された。またin vivoの実験から、間期から分裂期への移行に伴ってSA2の大部分はリン酸化されると同時にクロマチンから解離するが、セントロメアにわずかに残されたSA2は脱リン酸化されていることが判明した。これらの事実は、セントロメアでPP2Aと複合体を形成したシュゴシンがPlk1によるコヒーシンのリン酸化を防ぐことによって、分裂中期までコヒーシンの解離を防いでいることを強く示唆している。さらにそれまでの研究を発展させるため、マウス精巣組織を用いて減数分裂期の細胞のセントロメアクロマチン構造の解析に着手した。ここではセントロメアクロマチン構成因子であるCENP-C蛋白質に会合する因子の網羅的同定を行い、何が体細胞分裂期と減数分裂期のクロマチン構造に機能的な差異を与えているのかを解明しようと試みた。具体的にはマウス精巣の減数分裂期細胞から分離したクロマチン画分よりセントロメアタンパク質CENP-Cに対する抗体を用いたaffinity精製により減数分裂期セントロメアタンパク複合体の同定をおこなった。LC-MS/MS解析の結果、(1)既知のキネトコア構成タンパク質群(CENPs、Mis12複合体、スピンドルチェックポイントタンパク質)に加えて、(2)PIWIをはじめとする生殖細胞内でsmall nuclearRNAのプロセシングに関与すると推測される多数のタンパク質群が含まれていることが判明した。さらに上記(1)(2)のいずれのクラスにも分類されない生殖細胞特異的に発現する新規のタンパク質について焦点を絞って解析を行った。生殖細胞特異的に発現するRing-Zn fngerタイプの新規タンパク質は減数分裂期のPachytene期以降に強く発現し、相同染色体の脱対合の時期にSynaptnemal complexと部分的に共局在することが判明した。このことはSynaptnemal complexの脱離過程で、このRing-Zn finger型タンパク質がなんらかの機能を演じていることを示唆するものである。現在この新規タンパク質のノックアウトマウスを作製し、減数分裂期の染色体分離に与える影響を解析しようと試みている。実際、HeLa細胞から精製したhSgo複合体が、コヒーシンサブユニットのSA1およびSA2よりリン酸を脱離する活性を持つことがin vitroの実験で示された。この研究成果はNature誌のarticleに共著論文として発表され世界的な評価を得た。

本研究では、HeLa細胞でヒトのシュゴシンhSgo1およびhSgo2と共沈するタンパク質の解析により、hSgo1およびhSgo2がプロテインフォスファターゼPP2Aと複合体を形成していることが明らかとなった。実際、HeLa細胞から精製したhSgo複合体が、コヒーシンサブユニットのSA1およびSA2よりリン酸を脱離する活性を持つことがin vitroの実験で示された。またin vivoの実験から、間期から分裂期への移行に伴ってSA2の大部分はリン酸化されると同時にクロマチンから解離するが、セントロメアにわずかに残されたSA2は脱リン酸化されていることが判明した。これらの事実は、セントロメアでPP2Aと複合体を形成したシュゴシンがPlk1によるコヒーシンのリン酸化を防ぐことによって、分裂中期までコヒーシンの解離を防いでいることを強く示唆している。この研究成果はNature誌のarticleに共著論文として発表され世界的な評価を得た。クロマチン構造変化に関連する研究対象として、シュゴシン-PP2A複合体がセントロメアの染色体接着を守る機構の解析を行った。シュゴシンSgoは真核生物に広く保存されたタンパク質である。ヒトの細胞では、分裂前期に染色体が凝集するのに伴い、コヒーシンがPolo-like kinase(Plk1)によりリン酸化されることにより染色体腕部から解離するが、セントロメアのコヒーシンは分裂中期まで守られる。この素過程において、ヒトシュゴシンhSgo1およびhSgo2はセントロメアに局在してセントロメアのコヒーシンを守っていると推測されるが、その分子機構については未だ不明であった。実際、HeLa細胞から精製したhSgo複合体が、コヒーシンサブユニットのSA1およびSA2よりリン酸を脱離する活性を持っことがin vitroの実験で示された。さらにそれまでの研究を発展させるため、マウス精巣組織を用いて減数分裂期の細胞のセントロメアクロマチン構造の解析に着手した。ここではセントロメアクロマチン構成因子であるCENP-C蛋白質に会合する因子の網羅的同定を行い、何が体細胞分裂期と減数分裂期のクロマチン構造に機能的な差異を与えているのかを解明しようと試みた。具体的にはマウス精巣の減数分裂期細胞から分離したクロマチン画分よりセントロメアタンパク質CENP-Cに対する抗体を用いたaffinity精製により減数分裂期セントロメアタンパク複合体の同定をおこなった。
HLAおよびT細胞レセプター遺伝子によるヒト免疫応答の遺伝子支配に関する研究

ヒト免疫応答の遺伝子支配を、ペプチド抗原、HLA遺伝子およびこれらを認識するT細胞レセプタ-の3者を解析することを目的に研究を遂行した。(1)昨年までに樹立した、SCWに特異的でDR2(DRB1*1502)、DR2(DRB5*0102)、DQw6(DQA1*0103,DQB1*0601)、DPCp63(DPA1*0201,DPB1*0901)あるいはDR4(DRB1*0405)に拘束されたT細胞株の認識するペプチド抗原の同定を行った。SCWの主要成分であるM12蛋白上の遺伝子を、抗原を抽出したSS95/12株より単離し塩基配列を決定し、AB領域とC領域に分けてリコンビナントM12蛋白を作製した。また、M12蛋白由来の20mer程度の合成ペプチドを30個合成した。これら合成ペプチドとそれぞれのT細胞株との反応性を検討したところ、DQw6に拘束されたSCW特異的T細胞株は、M12(353ー365)に反応し、他のペプチドには反応しなかった。一方、SCW特異的でDPCp63に拘束されたT細胞株は、M12(112ー136)に対して主に反応した。現在、これらのペプチドおよびクラスII分子に特異的に反応するT細胞のTCRについて検討を行っている。これに対し、DRに拘束されたSCW特異的T細胞株は、リコンビナントM12蛋白にも合成ペプチドに対しても反応せず、SCWに含まれるM蛋白以外の蛋白上にエピト-プがあると考えられた。(2)昨年作製したT細胞レセプタ-可変領域を認識する単クロ-ン抗体の特異性を決定を試みた。逆転写PCR法用い、プライマ-としては、Vα1から18,Vβ1から20までのファミリ-特異的なものそれぞれ18コ、22コと定常域のものとの間にて行った。Vαに関しては、いくつかのファミリ-が検出され、どれかのファミリ-に特定することができなかった。一方Vβに関してはどのプライマ-においても増幅できずこの抗体は現在までに報告のないVβ領域を認識していると考えられた。現在、inverse PCR法を用いてその特異性を検討している。ヒト主要組織適合抗原(HLA)、T細胞レセプタ-(TCR)および抗原の相互作用による、ヒトの免疫応答の調節機構を解析することを目的として研究を遂行した。まず、近年急速に解明されたHLAクラスII対立遺伝子の塩基配列をもとにして、各対立遺伝子に特異的な塩基配列に対応する合成オリゴヌクレオチドプロ-ブを作成し、これとPCR法により増幅したHLA遺伝子との結合の有無を解析することにより、対立遺伝子を同定する方法を確立した。この方法を用いてインスリン依存型糖尿病とDQA1*0301、慢性関節リウマチとDRB1*0405、溶連菌抗原に対する低応答性とDQA1*0102ーDQB1*0602あるいはDQA1*0103ーDQB1*0601、B型肝炎ウィルスS(HBs)抗原に対する低応答性とDQA1*0301ーDQB1*0401との相関を明らかにした。さらに健康人より、溶連菌、PPD、HBs、あるいはスギ花粉の各抗原に特異的で、HLAーDR、DQあるいはDP抗原に拘束されたCD4^+T細胞を数多く樹立し、DQw6分子と溶連菌抗原を認識するヒトT細胞は、TCRVβ5.3を使用する頻度が、非常に高いことが明らかとなった。さらにDR4分子と溶連菌抗原を認識するCD4^+T細胞に発現されたTCRに対する単クロ-ン抗体で、既存のTCRVαあるいはVβとは異なる特異性を認識する抗体を作製した。また、ヒトTCRVαおよびVβファミリ-をコ-ドするDNAをPCR法により特異的に増幅するためのプライマ-を合成した。これを用いてヒトT細胞より抽出したmRNAよりcDNAを作製し、PCR法によりTCRVαあるいはVβファミリ-を同定する方法を確立した。平成3年11月に開催される第11回国際主要組識適合性ワ-クショップを組識し、HLAクラスII対立遺伝子を上記の方法でDNAレベルで同定するプロジェクトを主催している。さらに、各種の自己免疫疾患患者のHLAおよびTCR遺伝子の多型をDNAレベルで解析するプロジェクトも組織しており、現在国際協力による研究が進行中である。

これら合成ペプチドとそれぞれのT細胞株との反応性を検討したところ、DQw6に拘束されたSCW特異的T細胞株は、M12(353ー365)に反応し、他のペプチドには反応しなかった。一方、SCW特異的でDPCp63に拘束されたT細胞株は、M12(112ー136)に対して主に反応した。現在、これらのペプチドおよびクラスII分子に特異的に反応するT細胞のTCRについて検討を行っている。これに対し、DRに拘束されたSCW特異的T細胞株は、リコンビナントM12蛋白にも合成ペプチドに対しても反応せず、SCWに含まれるM蛋白以外の蛋白上にエピト-プがあると考えられた。(2)昨年作製したT細胞レセプタ-可変領域を認識する単クロ-ン抗体の特異性を決定を試みた。逆転写PCR法用い、プライマ-としては、Vα1から18,Vβ1から20までのファミリ-特異的なものそれぞれ18コ、22コと定常域のものとの間にて行った。Vαに関しては、いくつかのファミリ-が検出され、どれかのファミリ-に特定することができなかった。一方Vβに関してはどのプライマ-においても増幅できずこの抗体は現在までに報告のないVβ領域を認識していると考えられた。現在、inverse PCR法を用いてその特異性を検討している。
ヒト子宮平滑筋の収縮頻度調節に関与する細胞膜イオンチャンネルに関する研究

子宮平滑筋の収縮力については細胞膜のL型Ca^<2+>チャンネルがその規定因子として重要と考えられるが、十分な弛緩状態の形成に関与するチャンネルについては未だ明確になっていない。我々は先の研究でラットにおいては心筋と同様に過分極により活性化されるイオン非選択的内向き電流(Ih電流)が子宮平滑筋のautomaticityの決定に重要であることを見いだした(European Journal of Physiology 439:76-85,1999)。しかしこのチャンネルは、単離したヒト妊娠子宮平滑筋を用いた電位固定法による我々の検討では、多くの場合記録する事ができず、実験条件に問題がある可能性も否定できないが、ヒトにおける収縮頻度調節における生理的意義は大きくないものと考えられた。そこで収縮頻度を調節している可能性のある他のチャンネルとしてT-type Ca^<2+>channelに着目し、まずはラットを使用して以下のような結果を得た。非妊娠、妊娠7、12、15、21日目、分娩中のラット子宮筋より輪走筋と縦走筋を別々に採取し、T型カルシウムチャンネルの亜型であるα1G、α1H、α1IサブユニットをencodeするmRNAの発現量をcomparative kinetic RT/PCR法にて評価した。妊娠経過中、T型チャンネルのα1G、α1H mRNAは縦走筋、輪走筋の両方の筋細胞で発現していたが、α1I mRNAは発現していなかった。縦走筋ではα1H mRNAは妊娠中徐々に増加したが、α1G mRNAは分娩時のみ発現量の増加を認めた。輪走筋ではα1H mRNA発現は妊娠により変化を示さず、α1G mRNAは15日目と分娩時のみに増加した。すなわちラット子宮筋において、T型チャンネルは縦走筋、輪走筋で妊娠中異なる発現パターンを示し、両筋層の活動電位パターンの相違や分娩時の劇的な変化に関与しているものと思われた。さらに我々はヒト妊娠子宮平滑筋においてT型Ca^<2+>チャンネルにnative formを含めて4つのsplice variantが存在することを見いだした。今後このチャンネルに関して電気生理学的な検討を加える予定である。患者から文書による同意を得た上で、帝王切開時に採取したヒト子宮筋切片を、57×2mmの小片に細切した後、Ca除去生理食塩水にcollagenaseを加えた溶液中(1mg/ml)で37°C、60分酵素処理することで、平均250×40μmの単離子宮平滑筋細胞を得ることが出来た.本細胞はCa除去生理食塩水中に浮遊させた場合はほとんどが弛緩しているが、外液をCaを含んだ生理食塩水とし、オキシトシンやATPを投与することで倒立顕微鏡下に収縮を確認する事ができ、細胞の状態として問題の無いことが示唆された.電位依存性のカリウム電流を抑制した内外溶液組成の条件下(外液は通常の生理食塩水、内液は高Cs溶液)で、得られた細胞にwhole-cell voltage-clamp法を応用して電流を測定し、内向きのCa電流にはいわゆるL型Ca電流とT型Ca電流が存在する事を確認した.

前者は収縮の強度を調節する役割を持っているが、後者はその活性化電位が低い事から収縮頻度の調節をしていることが十分考えられるので、今後はその遺伝子をクローニングし、T型Ca電流を有さない細胞に発現させた上でその機能的意義を検索する方針である.過分極誘発性内向き陽イオンチャンネル電流(If)については、細胞により認められるものとそうでないものが混在しており、同チャンネルを有する細胞の出現頻度が低いため十分な特性の評価をするまでに至っていないが、この結果はヒト子宮ではラットと異なり縦走筋と輪走筋の区別は形態的には不可能であるが、やはり性質の異なる細胞が混在している事を示すものではないかと考えている.患者から文書による同意を得た上で帝王切開時に採取したヒト子宮筋切片を用いた電気生理学的研究では収縮頻度調節に関与している可能性がある科分極誘発性内向き電流(If)は安定して記録されず、研究の標的としては不十分な結果しか得られない可能性がある。従ってもうひとつの候補であるT型カルシウムチャンネルを対象として、平成15年度は主に生化学的手法でアプローチした。妊娠ヒト子宮筋切片よりT型カルシウムチャンネルをコードするmessenger RNA (mRNA)を抽出し,そのサブタイプを検討したところ、市販の未妊娠女性由来のヒト子宮筋細胞株でのサブタイプとかなり異なることが分かった。同時にヒト子宮筋の詳細な実験に移る前の予備的実験として、妊娠ラット子宮筋を使用してcomparative kinetic RT/PCR法によりL型およびT型カルシウムチャンネルmRNA量の妊娠中の変化を縦走筋と輪走筋各々で検討した。T型カルシウムチャンネルのサブタイプとしてはα1G、α1H、α1Iの三つを比較検討した。まずL型カルシウムチャンネル(α1C)mRNAは妊娠中縦走筋では妊娠初期と後期に増加を示し、N型の変化となるが、輪走筋では妊娠後期に増加する変化であった。T型カルシウムチャンネルmRNAではα1Iは縦走筋、輪走筋ともに発現していなかった。縦走筋ではα1H mRNAはα1Cと同様のN型の変化であり、一方α1G mRNAは分娩日に急速な増加を示した。輪走筋ではα1Hは変化に乏しく、α1G mRNAは妊娠15日と分娩日に有意に増加していた。今後はヒト子宮筋のT型カルシウムチャンネルをアフリカツメガエルの卵に発現させ、電位固定法により機能的な意義を検討する予定である。子宮平滑筋の収縮力については細胞膜のL型Ca^<2+>チャンネルがその規定因子として重要と考えられるが、十分な弛緩状態の形成に関与するチャンネルについては未だ明確になっていない。ヒト妊娠子宮に存在する過分極誘発性内向き電流は安定して記録できないことから、収縮頻度を調節している可能性のある他のチャンネルとしてT-type Ca^<2+>channelに着目し、ラットを使用して以下のような結果を得た。非妊娠、妊娠7、12、15、21日目、分娩中のラット子宮筋より輪走筋と縦走筋を別々に採取し、T型カルシウムチャンネルの亜型であるα1G、α1H、α1IサブユニットをencodeするmRNAの発現量をcomparative kinetic RT/PCR法にて評価した。妊娠経過中、T型チャンネルのα1G、α1H mRNAは縦走筋、輪走筋の両方の筋細胞で発現していたが、α1I mRNAは発現していなかった。縱走筋ではα1H mRNAは妊娠中徐々に増加したが、α1G mRNAは分娩時のみ発現量の増加を認めた。輪走筋ではα1H mRNA
高血圧症疾患モデルに対するデクスメデトミジン添加リドカインの効果

β遮断薬を投与した高血圧ラットに対してデクスメデトミジン添加リドカインが表わす循環動態について評価した。本実験は高血圧ラットを使用した。我々はDEX単独または100microgramのアドレナリンをβ遮断薬を投与した高血圧ラットに投与した。その後、我々は循環動態を評価する為に血圧と脈拍を測定した。血圧と脈拍は100microgramのアドレナリン投与時に増加した。また、高血圧ラットの収縮期血圧と脈拍は高濃度のデクスメデトミジン(50microgram/ml)の投与で減少した。私たちの結果は5maicrogram/mlDEX添加2%リドカインでは血圧も脈拍も変化しなかった。【緒言】歯科用局所麻酔薬は、アドレナリンにより、作用時間の延長や効力の増強を期待している。しかし、臨床ではアドレナリンとの併用禁忌薬剤を服用している患者は多数存在する。例えば、高血圧症患者は降圧薬としてβ受容体遮断薬を服用している。一般にβ受容体遮断薬を服用している患者にアドレナリンを投与すると、アドレナリンのα作用が顕著に出現するため強力な末梢血管収縮作用があらわれ高血圧を呈する。そのような患者に局所麻酔を行う場合、アドレナリンが添加されていないリドカインを使用する場合が多い。近年、国内外においてα2受容体作動薬であるデクスメデトミジン(DEX)を添加したリドカインを新しい局所麻酔薬として使用する研究が進められている。その理由としてDEXは、α2受容体への選択性が極めて高く、投与量増加によるα1受容体を介した循環動態の変化が少ないからである。われわれは、DEX添加リドカインがβ受容体遮断薬を服用している高血圧患者に対して安全な局所麻酔薬になるのではないかと示唆している。そこで今回、DEX添加リドカインがβ受容体遮断薬を投与した高血圧ラットに対して与える影響について検証した。【結果】脛骨神経にDEX添加リドカインを投与すると、熱による侵害刺激により後足の逃避行動までの反応潜時は有意に延長した。また、β受容体遮断薬を投与された高血圧ラットにアドレナリン添加リドカインを投与すると収縮期血圧および拡張期血圧は有意に上昇したが、DEX添加リドカイン投与では変化しなかった。【考察】DEXは局所麻酔薬の作用時間を延長することが示唆された。また、β受容体遮断薬を投与された高血圧ラットに対してDEXは一過性の高血圧を呈しなかった事から、DEX添加リドカインはβ受容体遮断薬を投与された高血圧症患者に対して循環動態を変化させない有用な局所麻酔薬になるのではないかと示唆された。歯科臨床において広く使用されている局所麻酔薬は、麻酔効果の延長や増強の目的でアドレナリンに代表される血管収縮薬を併用している。しかし、近年の超高齢化社会においてアドレナリンとの併用禁忌薬剤を常用薬としている患者は増加の一途をたどっている。例えば、アドレナリンとの併用禁忌薬であるβ受容体遮断薬は高血圧症患者に対する降圧薬として利用されている。一般に、β受容体遮断薬服用患者にアドレナリン添加リドカインを用いることは禁忌となっている。その理由は、β受容体遮断薬を服用している患者にアドレナリンを投与すると、アドレナリンのα作用が顕著に出現するため強力な末梢血管収縮作用があらわれ、予期せぬ高血圧を呈するからである。近年、α2受容体作動薬であるデクスメデトミジン(DEX)を添加したリドカインの鎮痛効果が注目されている。DEXはα2受容体への選択性が極めて高く、投与量増加によるα1受容体を介した循環動態の変化が少ない。そのため、DEXは、高血圧症患者に対して交感神経の抑制を介した降圧薬として用いられている。そこで平成2627年度に申請者はDEX添加リドカインはアドレナリン添加リドカインと比較してβ受容体遮断薬を投与した高血圧ラット(SHR/Izm)に対して循環動態の変動が少ない局所麻酔薬になり得るのではないかと考え、tail cuff methodを用いてDEX添加リドカインとリドカイン単体を投与したβ受容体遮断薬を投与した高血圧ラットの収縮期血圧と拡張期血圧を比較検討した。その結果、DEX添加リドカインはアドレナリン添加リドカインと比較してβ受容体遮断薬を投与した高血圧ラットの循環動態の変化が少ないことを報告した。研究は当初の予定よりも順調に進んでいる。歯科麻酔学今後も、さらに実験を進めていく。具体的には、DEXの濃度差による、効果を検討する予定である。研究が当初の予定よりも順調に進み、少数の動物で結果を得ることが出来た。よって、動物購入費が減額できた為、次年度使用額が生じた。今回生じた次年度使用額を使用して、DEXの濃度差による結果を検討する予定である。
パスカルの宗教思想における理性の意義

パスカルの三秩序の思想にも明らかなように,かれの宗教観を支える根本の概念はいうまでもなく「心情」であるが,しかし決して理性の働きが宗教において認められていないのではない.むしろ,理性の最後の一歩は理性をこえるところにあるといわれている.理性は決して心情と無縁なるものではない.この両者の関係を明確にとらえていないところに,これまでのパスカル論がキリスト者パスカルと科学者パスカルとを別個の存在として捉えて,あるいは両者を殊更に対立させたり,あるいは逆にその対立をぼかしたりする感があった.両者の関係を公平に捉えようとした20世紀前半のパスカル研究でさえ,やはり両者を別個のものとする観点を依然として脱却していない観がある.じじつ, 20世紀フランスの最高の詩人といわれたヴァレリーでさえ,こうした観点を色こく残している.本研究はまずこのヴァレリーのパスカル論を徹底的に分析して,かれのパスカル論がどうしてそのようなものとならざるをえなかったかを明らかにした.こうしたパスカル論の分析から明らかになったことは,根本的にはパスカルの科学に働いている理性がかれの宗教において働いている理性とが別のものであると考えられている点にあった.そこで次にパスカルの理性が宗教においていかに働いているのかを探究した.元来,パスカルにおいては,理性の面からいうと神は無限なるものと考えられている.ところが無限なるものという概念は,実は単に宗教の領域に限られるものではない. 1654年の決定的回心を経てキリスト教に身を投ずる以前においても,〓学者あるいは科学者としてのパスカルは様々の仕方で無限なるものに遭遇している.そこで,パスカルを内面的に統一する観点を確立するために,無限を捉える理性の科学的操作を解明することを通じて,かれの宗教における無限ととかれの科学における無限とがどのような関係にあるのかを究明した.パスカルの三秩序の思想にも明らかなように,かれの宗教観を支える根本の概念はいうまでもなく「心情」であるが,しかし決して理性の働きが宗教において認められていないのではない.むしろ,理性の最後の一歩は理性をこえるところにあるといわれている.理性は決して心情と無縁なるものではない.この両者の関係を明確にとらえていないところに,これまでのパスカル論がキリスト者パスカルと科学者パスカルとを別個の存在として捉えて,あるいは両者を殊更に対立させたり,あるいは逆にその対立をぼかしたりする感があった.両者の関係を公平に捉えようとした20世紀前半のパスカル研究でさえ,やはり両者を別個のものとする観点を依然として脱却していない観がある.じじつ, 20世紀フランスの最高の詩人といわれたヴァレリーでさえ,こうした観点を色こく残している.本研究はまずこのヴァレリーのパスカル論を徹底的に分析して,かれのパスカル論がどうしてそのようなものとならざるをえなかったかを明らかにした.こうしたパスカル論の分析から明らかになったことは,根本的にはパスカルの科学に働いている理性がかれの宗教において働いている理性とが別のものであると考えられている点にあった.そこで次にパスカルの理性が宗教においていかに働いているのかを探究した.元来,パスカルにおいては,理性の面からいうと神は無限なるものと考えられている.ところが無限なるものという概念は,実は単に宗教の領域に限られるものではない. 1654年の決定的回心を経てキリスト教に身を投ずる以前においても,〓学者あるいは科学者としてのパスカルは様々の仕方で無限なるものに遭遇している.そこで,パスカルを内面的に統一する観点を確立するために,無限を捉える理性の科学的操作を解明することを通じて,かれの宗教における無限ととかれの科学における無限とがどのような関係にあるのかを究明した.
宋代を中心とする天文占書の研究

今年度は、『霊台秘苑』と『観象玩占』のテキスト調査をもとに研究発表と論文執筆をし、本研究のまとめとした。『霊台秘苑』に関しては、北周に編纂・宋代に重修されたが、現存の15巻本がどこまで北周の内容を残すかは長年疑問のままであった。本研究において国内所蔵のテキストを比較し、宋代の特徴が色濃く、北周の内容をほとんど残していないと指摘した。これにより、宋代のテキストとして『霊台秘苑』を研究に利用することが可能となった。このことについて、2019年3月に東京ミーティング2019.3にて研究発表し、同2月には「『霊台秘苑』のテキストについて」という論考が武田時昌編『天と地の科学』(京都大学人文科学研究所)に掲載された。また、『観象玩占』は現存テキストも多い天文占書であるが、成立時期は不明で著者・巻数・内容等にヴァリエーションがあり、いずれが正しいとも判断しがたい扱いづらい文献である。そこで本研究において朝鮮刊本を調査し、江戸時代の日本と朝鮮王朝の天文占書受容を比較した。その結果、『観象玩占』は日韓両国に流入したものの、朝鮮王朝では粛宗・英祖期に幾度も刊行され、国の役所である観象監で測候の際に参照される等、中国由来の天文書として権威をもった。一方、日本(江戸時代)では一部の有力大名が所持するものの、勘文等政治の場では用いられず、使用の実態が見られなかったことを明らかにした。さらに、『霊台秘苑』の2系統のテキストを電子テキストとして入力した。今後、天文占書フルテキストデータベースにて公開予定である。本研究は、中国天文学史を研究する上で対象となる天文占書を調査し実態を明らかにした上で、利用可能な資料とすることを目的とする。天文占書は同じ書名でも内容が大きく異なることも多く、系統を整理しながら調査を進める必要がある。本年度は、対象となる天文占書のうち『霊台秘苑』の入力作業を進めた。また、『観象玩占』と『霊台秘苑』のテキスト調査を行い、特に『霊台秘苑』に関しては、静嘉堂文庫へ赴き資料調査を進めた。現在は、『霊台秘苑』の複数のテキストを比較し、論文にまとめる作業を進めている。『霊台秘苑』は目録上比較的初期のまとまった天文占書であり、実態が明らかになれば、他の天文占書研究にも寄与しうる。入力作業が当初の計画より進まず、また都合により海外への資料調査に赴く事もできなかったため。本研究は、中国天文学史を研究する上で対象となる天文占書を調査し実態を明らかにした上で、利用可能な資料とすることを目的としている。具体的には『観象玩占』や『霊台秘苑』、『景祐乾象新書』、『乾象通鑑』など宋代を中心とする文献を対象としている。中でも当該年度は『観象玩占』と『霊台秘苑』の調査・検討を進めた。『観象玩占』は、大きくは49巻本と50巻本の2系統があるが、そのほかにもテキストによって項目の配列や文字に違いがある。申請者はこれまで、国内所蔵のテキスト調査、テキスト間の基礎的な比較とデータベースの作成に留まっていた当該年度は韓国ソウル大学奎章閣にて『観象玩占』の資料調査を行ない、韓国刻本の存在を確認した。『霊台秘苑』は北周・ユ季才(516ー603)撰とされる120巻本があり、宋代に王安礼等の重修を経て15巻にまで整理されたとされる。しかし、現在確認できるのは15巻本のみであり、内容や星座体系の分析からは、宋代以前の記録の跡が確認できないため、現行本が宋代に新たに作られた可能性が考えられる。当該年度はこれまで複写したテキストを用いて分析を進め、内容が宋代のものであろうと言う結論を導き出した。これら『霊台秘苑』と『観象玩占』に関して研究発表を行ない、多くの意見を得ることができた。また、『霊台秘苑』については現在データベースに用いるテキストの入力を進めている。2種のテキストについて入力を行ない、テキストを比較できるようにする計画である。個人的な事情により、作業をやむを得ず中断せざるを得ない時期があったため、天文占書のテキスト入力作業が予定よりやや遅れている。

そこで本研究において朝鮮刊本を調査し、江戸時代の日本と朝鮮王朝の天文占書受容を比較した。その結果、『観象玩占』は日韓両国に流入したものの、朝鮮王朝では粛宗・英祖期に幾度も刊行され、国の役所である観象監で測候の際に参照される等、中国由来の天文書として権威をもった。一方、日本(江戸時代)では一部の有力大名が所持するものの、勘文等政治の場では用いられず、使用の実態が見られなかったことを明らかにした。さらに、『霊台秘苑』の2系統のテキストを電子テキストとして入力した。今後、天文占書フルテキストデータベースにて公開予定である。今後は本年度の研究を引き続き継続するとともに、『景祐乾象新書』、『乾象通鑑』の調査・分析を進める。また、各文献のテキストデータベースの公開、研究発表や論文の投稿など、研究成果を順次形にしていく。今後は『観象玩占』と『霊台秘苑』の検討結果を論文にまとめ、さらに他文献に関して調査を進める。また、本研究機関内に『霊台秘苑』のテキスト入力を終える予定である。予定よりも旅費を使用する機会が減ったため。旅費が想定していたよりも安価だったため、少額の次年度使用額が生じた。使用計画として、データベースのカスタマイズ費用、中国天文学関連の書籍購入、中国へのシンポジウム参加旅費を支出する。平成29年度も都合により旅費の使用が減る可能性があるが、その分遅れ気味のテキスト入力作業を進めたいと考えている。そのため、次年度は人件費・謝金に重点をあてて使用する。
調音運動データベースの構築とデータベース間の正規化および調音運動ベースの音声合成

人間の発声メカニズムに近い音声合成を実現するため,次の3項目の研究を実施する.(I)人間の発話時の舌や唇の動作を収録しデータベースを作成する.(II)既存の外国語のこうしたデータベースとの相互変換を可能にする.(III)データベースを用いて音声合成の研究を行う.これまで日本語のこのようなデータベースは公開された物が存在しなかった.したがってこうしたデータベースを公開することの意義は大きい.人間の発声メカニズムに近い音声合成を実現するため,次の3項目の研究を実施する.(I)人間の発話時の舌や唇の動作を収録しデータベースを作成する.(II)既存の外国語のこうしたデータベースとの相互変換を可能にする.(III)データベースを用いて音声合成の研究を行う.これまで日本語のこのようなデータベースは公開された物が存在しなかった.したがってこうしたデータベースを公開することの意義は大きい.
エイズ脳症の発症機序とアポトーシス抑制因子14-3-3を軸としたその治療法の研究

我々はこれまで、分子シャペロン14-3-3蛋白質がエイズ脳症患者の脳脊髄液中にアイソマー特異的に検出されてくる事から、エイズ脳症の脳内病変の進行状況を的確に把握できるマーカーとして提唱してきた。一方、HIV感染による中枢神経障害は、ウイルス自身か、ウイルスに感染したマクロファージ等の炎症性細胞が、血液脳関門(BBB)を介して脳内に侵入し、これによって引き起こされる神経細胞死がその主な原因と考えられているが、その詳細なメカニズムは分かっていない。今回我々は、エイズ脳症発症に重要なこの2つのプロセスでの14-3-3蛋白質の役割解析を行う事でそのメカニズムの一部を明らかにした。1)HIV-1膜糖蛋白gp120による神経細胞死の14-3-3蛋白質による制御機構の解明14-3-3蛋白質は、哺乳類ではこれまで7つのアイソマーが存在する事が知られているが、この内14-3-3τがエイズ脳症患者脳内で特異的に発現誘導される事を見出した。エイズ脳症の神経細胞死では、膜蛋白質gp120が有力な誘導物質と考えられているので、培養細胞を用いたin vitroモデルでgp120による細胞死での14-3-3τの役割を解析した。その結果、14-3-3τは、細胞死実行因子Badのgp120による脱リン酸化を防ぐ事で、Badのミトコンドリア移行を抑制しgp120による細胞死を抑制的に制御している事が明らかとなった。2)HIV-1膜糖蛋白gp120による脳血管内皮細胞のタイトジャンクション(TJ)構築障害における14-3-3蛋白質の役割解析BBBは主に脳血管内皮細胞と神経膠細胞から成るが、その中でも血管内皮細胞間で形成されるTJは、BBBバリアー機能に極めて重要となる。最近、HIV-1のgp120やTatが、直接このTJを障害しBBBの破綻を引き起こす事が報告されているが、その詳細は分かっていない。その新しいメカニズムとして、今回我々は、gp120がZO-1,ZO-2等のTJ構成分子のプロテアソームによる分解消失を誘導し、このプロセスが14-3-3τによって抑制的に制御されている事を明らかにした。これにより、細胞接着構造にひずみをきたしBBB破綻に繋がる事が想定された。今回我々の解析により得られた知見は、エイズ脳症発症の機序解明に重要な手掛かりを与えるものと考えられた。エイズ脳症は、脳内に侵入したウイルス感染マクロファージ等の炎症性細胞から遊離されるウイルス蛋白やサイトカインによって引き起こされる神経細胞死がその主な原因と考えられるが、その発症メカニズムについては未だ解明されていない。我々は足場蛋白である14-3-3が1)エイズ脳症初期患者脳の神経細胞内でその発現が増強する事、2)脳症の進行に伴い神経細胞が破壊されると脳脊髄液中に漏出してくる事からエイズ脳症発症機序におけるその重要性に着目してきた。

エイズ脳症の神経細胞死では膜蛋白gp120が有力な誘導物質と考えられる事から、gp120によるCXCR4を介したアポトーシス誘導機序とその過程に係る14-3-3蛋白質の役割に焦点を絞り解析を行った。今回我々の研究から、14-3-3蛋白質は、細胞死誘導因子Badのgp120による脱リン酸化を防ぐ事で、Badのミトコンドリア移行を抑制しgp120による細胞死を抑制的に制御している事が明らかとなった。一方、ウイルスの脳内進入において血液脳関門(BBB)は極めて重要な意義を持っている。そこで本研究では、gp120によるBBBの破綻を想定し、ヒト脳血管内皮細胞を用いそのタイトジャンクション構築における14-3-3蛋白質の役割を解析した。その結果、gp120は細胞極性因子Par-PKC複合体から14-3-3蛋白質の遊離を促進する事でZO-1等タイトジャンクション構成分子のプロテアソームによる分解消失を促進し、これにより、細胞接着構造にひずみをきたしBBBの破綻に繋がる事が予想された。これらの結果は、14-3-3蛋白質がHIV感染(gp120依存的)による神経細胞死においてより包括的にその制御を担っている事を示唆すると共に、エイズ脳症発症の機所解明の手掛りを与えるものになると考えられた。我々はこれまで、分子シャペロン14-3-3蛋白質がエイズ脳症患者の脳脊髄液中にアイソマー特異的に検出されてくる事から、エイズ脳症の脳内病変の進行状況を的確に把握できるマーカーとして提唱してきた。一方、HIV感染による中枢神経障害は、ウイルス自身か、ウイルスに感染したマクロファージ等の炎症性細胞が、血液脳関門(BBB)を介して脳内に侵入し、これによって引き起こされる神経細胞死がその主な原因と考えられているが、その詳細なメカニズムは分かつていない。今回我々は、エイズ脳症発症に重要なこの2つのプロセスでの14-3-3蛋白質の役割解析を行う事でそのメカニズムの一部を明らかにした。1)HIV-1膜糖蛋白gp120による神経細胞死の14-3-3蛋白質による制御機構の解明14-3-3蛋白質は、哺乳類ではこれまで7つのアイソマーが存在する事が知られているが、この内14-3-3τがエイズ脳症患者脳内で特異的に発現誘導される事を見出した。エイズ脳症の神経細胞死では、膜蛋白質gp120が有力な誘導物質と考えられているので、培養細胞を用いたin vitroモデルでgp120による細胞死での14-3-3τの役割を解析した。その結果、14-3-3τは、細胞死実行因子Badのgp120による脱リン酸化を防ぐ事で、Badのミトコンドリア移行を抑制しgp120による細胞死を抑制的に制御している事が明らかとなった。2)HIV-1膜糖蛋白gp120による脳血管内皮細胞のタイトジャンクション(TJ)構築障害における14-3-3蛋白質の役割解析BBBは主に脳血管内皮細胞と神経膠細胞から成るが、その中でも血管内皮細胞間で形成されるTJは、BBBバリアー機能に極めて重要となる。最近、HIV-1のgp120やTatが、直接このTJを障害しBBBの破綻を引き起こす事が報告されているが、その詳細は分かっていない。その新しいメカニズムとして、今回我々は、gp120がZO-1,ZO-2等のTJ構成分子のプロテアソームによる分解消失を誘導し、このプロセスが14-3-3τによって抑制的に制御されている事を明らかにした。これにより、細胞接着構造にひずみをきたしBBB破綻に繋がる事が想定された。今回我々の解析により得られた知見は、エイズ脳症発症の機序解明に重要な手掛かりを与えるものと考えられた。