hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
インターネットから収集される感染症情報に基づく疫学情報解析支援システムの開発

インターネットは他のメディアとは比較にならないほどの豊富な情報が迅速に入手出来る情報の宝庫である。このインターネットを情報源として感染症情報の疫学分析を行なうことができたならば、従来の方法とは異なる視点での最新の事象を分析出来るのではないかと考え、疫学情報解析支援システムの開発を行なって来た。インターネットの情報源としては、ProMEDメーリングリストを対象として、プロトタイプシステムを開発してきた。このメーリングリストでは編者がメールで記述される事象の症例情報や分野、地域情報を設定してあるため、容易に分類可能であった。初年度ではこの編者の評価に基づき行なってきたシステムによる自動分類を拡張し、メール本文の全文検索により同じ結果が得られるかどうかを評価した。この方法が確立すれば、特殊な構造に依存せず、より一般的な情報資源に対応出来るシステムへと拡張可能になる。その結果は良好であった。最終年度では、分類木の整備を行なった。分類木はその葉に検索キーワードを持ち、その節に分類項目を持つ木状複合オブジェクトである。このデータは、分類判定の元になるものであるが、システムとともに更新され、成長するデータベースである。これを半構造化データとして扱う方法を検討した。この半構造化データについての研究内容は、他の分野の内容とともに成果を公表することができた。今後は専門家の視点から整備を行ない実用となるデータベースへと成長させる予定である。このシステムはデジタルアーカイブに基づきそこから有意なデータを導き、より高度なデータへとデータ自身を培養することを目的としている。このようなデータカルチャリングシステムへの展開も検討したい。プロトタイプを公開すべく準備中である。特に検索と結果の視覚化の部分はWebアプリケーションなどでグローバルに活用出来るものにする予定である。本年度は、ProMEDメーリングリストを題材として、システムの基本部分の構築を行った。ProMEDの監修者による分類を以下に述べるテキストマイニングに基づくシステムで同様に再現できるかどうかが今回の拡張の大きな要点であった。特に内容の特定と自動分類のために、1.テキスト情報の構造化電子メールには電子メールの構造があり、その構造をシステムが認識して解析できるように格納する必要がある。また、メーリングリスト固有の構造(見出しの配置、リンク情報やコメントの出現など)もまた、計算機が内容を分析する際の手がかりになるので、これらの構造を反映した情報の格納や引用を実現できるように設計した。この部分については、既に他の分野の内容と合わせて研究発表を行っている。2.テキストマイニングテキストから情報を抽出するために、文に対する形態素解析を行い、その結果の文節情報に対して、正規表現などのパターン認識に基づくキーワードの抽出システムを考案した。特にひとつの内容に対して多くの記述形式が存在するため、この類義語辞書とパターン認識を複合して、分類木を作成した。3.自動分類単なるキーワード分類ではなく、類義語辞書に基づく分類木に従って、自動分類、検索を行うシステムへと拡張した。を行った。現在、1994年から現在までの2万件以上のProMEDデータをXML形式で構造化の上、格納している。システムはインデックスのためのRDBMSと自由構造を格納するXMLDBから構成されている。ProMEDの監修者による分類と本文テキストからの自動分類を比較検討しているが、若干の例外を除いて、一致する結果が得られている。これによって、システムをProMED以外の感染症情報システムへの適用するように拡張できる可能性が見えてきた。昨年度において、情報源の構造依存性を取り除き、より一般的なインターネット情報にも耐えうるシステムを拡張するため、分類木の導入と文書からのテキストマイニングを取り入れた。それを整備すべく以下のような点を中心に開発を進めてきた。1.分類木の整備自動分類のために様々な分類木を定義し、獲得情報の決定に用いてきた。

しかしながら、この分類木もまた、時とともに更新を必要とするデータであるため、今年度はその構造を整備する目的で、分類木のXMLデータ化を検討してきた。この半構造化データについての研究内容は、他の分野の内容とともに成果を公表ことができた。今後は専門家の視点から整備を行ない実用に向けての体制を取りたい。2.システムの適用範囲の拡大にかかわる検討システムの適応範囲を拡大することは技術的な問題としては昨年度の研究で解決出来たが、他の情報源にあたってみた場合、(1)常用される専門用語の違いが広範囲に存在する。また、情報源毎に目指している分類体系も異なるなど、分類木に関して更に検討を加える必要が有る。(2)情報源としてインターネット全体にその資源を求めることは、個々の情報源の信頼性が非常に重要な課題となる。などの問題点が明らかになった。今後の課題として残されている。3.プロトタイプシステムの公開と分析結果の視覚化プロトタイプを公開すべく準備中である。特に検索と結果の視覚化の部分はWebアプリケーションなどでグローバルに活用出来るものにする予定である。4.データカルチャリング(データ培養)のための分析研究システムこのシステムの目的はインターネットから収集されたデジタルアーカイブに基づきそこから有意なデータを導きだすことにある。このようなシステムはデータを培養し様々な視点からデータに付加価値を与えるものとして今後、大きな役割を果たすであろう。このような拡張を今後検討していきたい。
下流制御因子の同定によるノンクライマクテリック型果実の成熟・老化制御機構の解明

ノンクライマクテリック型果実であるイチゴの成熟や老化への関与が示唆される制御下流因子群の探索と候補因子の機能解析手法の確立を試み、以下の結果を得た。1)アグロバクテリウム種子感染法によるVIGS手法の確率:候補遺伝子の機能解析の一つとしてVIGS法によるターゲット遺伝子のサイレンシングがある。遺伝的に純系なイチゴの2倍体野生種Fragaria vescaを用い、TRV2系のVIGSコンストラクト保持するアグロバクテリウムの感染において、種子に感染することで高頻度でVIGSを誘導する手法を確立した。2)EIN3/EILs抑制RNAi個体の育成と解析: EIN3/EILsの保存領域を利用したRNAi個体について、Fv-EIL1とFv-EIL2が抑制される個体の育成を継続したが成熟への影響は観察されなかった。Fv-EIL3の発現量が比較的多いこと、系統樹解析では、これまで、エチレンシグナルへの関与が報告されている遺伝子群とは異なるクラスターに属しており、他の成熟関連シグナルの伝達に関与している可能性が示唆された。1)種子感染手法によるVISG処理個体を育成し植物体を得ている。3)NAC転写因子とmiRNA164の成熟制御への関与の解析:miRNA164のターゲット配列を持ち、成熟に伴って発現量が100倍に増加するNAC-SFに関して、シュート形成が見られたが生長点がなく植物体の育成に至らなかった。このことから、NAC-SFは成熟のみならず、植物体の初期発生にも関わる可能性が示唆れた。再分化を必要としない、1)種子感染手法によるVISG処理個体を育成し植物体を得ている。4)miRNAのin silico解析:データベース上のmiRNA情報を利用して、イチゴ成熟に関連する可能性のある、miRNA164以外の候補miRNAを探索したが、強い候補と判定できるものはなかった。本研究では、成熟や老化にエチレンが関与せず、その制御機構が不明なノンクライマクテリック型果実に関して、制御機構の下流では、エチレンシグナル伝達系と同様の因子が関与していると仮定し、エチレンシグナルを含む様々なシグナルのハブとしての役割を持つEIN3/EILsおよびその下流において働くmiRNA164とNAC転写因子に注目し、以下の結果が得られている。イチゴ2倍体野生種F. vescaのゲノム内に存在する5つのEIN3/EILsの内4つで発現が検出され、特に、Fv-EIL1の発現量が葉と果実において高かった。EIN3/EILsの保存領域をhair-pin構造に利用したRNAi個体を作成したところ、Fv-EIL1が抑制されており、他のホモログの抑制されていなかった。このRNAi個体では、エチレンによる葉の黄化が抑えられ、一方では、果実成熟や老化には影響がなかった。Fv-EIL1はエチレン応答や葉の黄化へ関与し、一方、他のホモログの果実成熟を含む別のシグナル伝達への関与が示唆された。Fv-EIL5のみ抑制するRNAiや4つのFv-EILsの一部を繋いだRNAiコンストラクトを作成した。イチゴのmiRNA164のターゲット配列を持つNAC転写因子として、NAC38、NAC87、NAC-SFに着目し、その発現量変化を調査した。その結果、果実成熟に伴いNAC-SFの発現量が100倍以上に増加していた。NAC38とNAC87は成熟に伴い減少していた。これより、NAC-SFは正の制御因子として、NAC38とNAC87は負の制御因子としてそれぞれ成熟への関与の可能性が示された。特に、NAC-SFに関して、F. vescaおよび栽培イチゴにおいてRNAi個体の作成を進めた。本年度は、以下の2項目に関して、研究を実施したが、記載のように概ね順調に進展している、本研究では、まず、EIN3/EILsの保存領域として、Fv-EIL1由来の配列をhair-pin構造に利用したRNAi個体の作成に成功している。これまで、Fv-EIL1のみ抑制された個体が出現した。この個体では、エチレン応答は抑制されてたが、成熟には影響はみられておらず、Fv-EIL1がエチレン応答に、他のホモログが果実成熟など他のシグナル伝達に関与している可能性が示された。通常RNAi個体においては、世代を経ることにより、サイレンシングは強くなる傾向があり、この結果は予定通りである。今後、このRNAi個体の後代より、他のホモログも抑制された個体が得られ、他のホモログの果実成熟などエチレン以外のシグナルへの関与が明らかになるものと期待される。本研究では、さらに、他のホモログとの相同性が低いFv-EIL5のみ抑制するRNAi個体の作成や、発現が検出された4つのFv-EIlsを繋げたコンストラクトにより、同時に抑制するRNAi個体の作成の準備も進めており、予定通りに研究は進んでいる。miRNA164のターゲットとして注目していた3つのNAC転写因子は、いずれも、果実の成熟に伴い発現量の変化が観察されており、成熟に関与が示された。特に、NAC-SFは果実成熟に伴い発現量が100倍状に増加しており、果実成熟の正の制御因子として期待できる。このNAC-SFについて、2倍体モデルイチゴ野生種F. vescaに加えて8倍体の栽培イチゴにおいても、その発現を抑制するRNAi個体の作成を進めている。

このRNAi個体の成熟様相や成熟関連遺伝子の発現解析により、NAC-SFの成熟への関与が明らかになると期待される。本研究では、成熟や老化にエチレンが関与せず、その制御機構に不明な点の多いノンクライマクテリック型果実に関して、EIN3/EILsおよびその下流において働くmiRNA164やNAC転写因子の関与に注目し、以下の結果が得られている。1)EIN3/EILs抑制RNAi個体の育成と解析: EIN3/EILsの保存領域を利用したRNAi個体について、後代を育成したところサイレンシングが広範となり、Fv-EIL1に加えてFv-EIL2が抑制される個体が得られたが、果実成熟や老化へのサイレンシングの影響はなかった。一方では、後述するRNA-seq解析により、Fv-EIL1、Fv-EIL2に加えてFv-EIL3の発現量が多かった。そこで、Fv-EIL3を抑制するRNAiやVIGSコンストラクトを作成した。2)NAC転写因子とmiRNA164の成熟制御への関与の解析:miRNA164のターゲット配列を持ち、成熟に伴って発現量が100倍に増加するNAC-SFのRNAi個体の作成を試み、100系統以上の組換え体のカルスが得られ、その内1系統ではシュートが再分化まで到達した。VIGS法に関して、種子に感染させ高頻度でVIGSを誘導する手法のイチゴ野生種F. vescaでの開発を試み、手法確認のためのPDS遺伝子やEIL3、NAC-SFなどを導入したTRV2コンストラクトを作成した。3)イチゴ成熟時の遺伝子発現の網羅的解析:RNA-seqにより、イチゴの果実成熟に伴う、遺伝子発現量変化の網羅的解析を進め、成熟に伴って増大する遺伝子群を把握した。NAC-SFに加えて、トマト成熟への関与するSl-NAC1および4のイチゴのホモログが老化時に発現が増加することが明らかとなり、新たな候補NAC遺伝子を発見している。本年度は、以下の3項目に関して、研究を実施し、以下のように概ね順調に進展している、1) EIN3/EILs抑制RNAi個体の育成と解析では、EIN3/EILsの保存領域として、Fv-EIL1由来の配列をhair-pin構造に利用したRNAi個体において、後代を育成し、Fv-EIL1に加えてFv-EIL2が抑制された個体が得られた。この個体では、成熟には影響はみられておらず、他のホモログの成熟制御への関与の可能性が示された。RNA-seq解析により、Fv-EIL1、Fv-EIL2に加えてFv-EIL3の発現量が多いことから、成熟制御の候補因子となってきた。これは想定の範疇であり、Fv-EIL3のみ抑制するRNAiやVIGSの準備も進めており、予定通りに研究は進んでいる。2) NAC転写因子の成熟制御への関与については、miRNA164のターゲット配列を持ち、成熟に伴い発現量が増大するNAC-SFについて、RNAi個体の作成を進め100系統近くの組換え体のカルスが得られている。これらより個体が再分化され、RNAi個体の成熟様相や成熟関連遺伝子の発現解析により、NAC-SFの成熟への関与が明らかになると期待される。3)RNA-seqによる網羅的解析により、前述のFv-EIL3の重要性や、NAC-SFの成熟時の発現増大などが確認されのに加え、老化に関与する他のNAC候補遺伝子の発見に至っている。また、種子に感染させることで高頻度にVIGSを誘導する手法のイチゴ2倍体
LPS刺激後のマクロファージ活性化のシグナル伝達を鉄イオンが担う可能性の検討

平成14年度はエンドトキシン刺激後の肝マクロファージの細胞内鉄およびエンドトキシンにより誘導される発現調節因子の一過性の変動の検討を行った。1.)まずエンドトキシンにより刺激したマクロファージの細胞内で転写因子NF-kBの刺激直後の超短時間でのbinding activityの変化をおった。3分,5分,10分,30分、60分と検討を行い、活性の上昇が30分という早期こおいておこっていることが明らかになった。同時に検討したIRPのmNAへのbindingは有意の結果が得られず。2)エンドトキシン刺激後の肝マクロファージ内の非ヘム鉄の変動であるが、鉄イオンをキレーターでそれぞれ2価と3価で選択的に細胞外の培養液中で測定するととを検討したが,3分5分という極めて早期では変動を捕らえられなかった。ついでマクロファージを細胞ごとFe-59でラベリングし、細胞をエンドトキシンで刺激し、細胞を誘拐させ細胞質分画を分離しそのradioactivityを測定することで,細胞質の低分子鉄(chelatable iron)の変動を検討した。ピークでおよそ2倍程度であったっが、エンドトキシン刺激後わずか3分、5分で細胞内の低分子鉄が一過性に増加していることが明らかとなった。3)直接鉄負荷によるTNFaの発現誘導の検討であるが細胞培養液に単純に鉄を添加するだけでは、マクロファージの活性化TNFaの誘導は認めなかった。このため、次年度の検討としては細胞内にマイクロインジェクションで鉄を注入しTNFaあ変動を検討したい。
至適ながん放射線治療を実現する新規分子設計に基づく低酸素領域可視化プローブの開発

申請者が提案した低酸素SPECTプローブの分子設計は、低酸素還元代謝によりプローブの物理的性質を変化させることで膜透過性が変化し、細胞内に蓄積するという独自の戦略である。初年度はこの理論を実現しうるTc錯体の合成に成功した。最終年度ではin vivo SPECTプローブとして機能させることを目的として研究を実施した。前年度の成果として得られたTc-SD32をリード化合物として、Tc錯体を構成する母核に関する構造最適化をめざしTc-SD59, Tc-SD60, Tc-SD61, Tc-SD70, Tc-SD79, Tc-SD86, Tc-SD90を合成した。リード化合物であるTc-SD32は腫瘍への取り込みが投与3時間後において0.06%(T/B = 1.42)と低かったのに対し、Tc-SD70が最も良い結果を示し、腫瘍集積性は投与3時間後で1.0%(T/B = 2.08)であった。次に、Tc錯体と低酸素応答部位をつなぐリンカー部分に関する最適化を目的として、Tc-SD70をリードとしTc-SD128, Tc-SD129, Tc-SD130の合成を行い評価したところ、Tc-SD128は投与1時間後において腫瘍集積性が1% (T/B = 2.3)と高い腫瘍集積性・選択性を示した。Tc-SD128を投与した担癌マウスのSPECTを撮像したところ、腫瘍内に低酸素領域と思われる局所的な集積が認められた。また、腫瘍を取り出し、薄切切片を作成後、オートラジオグラフィー、HE染色、pimonidazole染色等を行い、プローブの分布に関する評価を行ったところ、プローブの集積部位と低酸素領域が一致したことから、本プローブはインビボにおいても腫瘍内の低酸素領域に集積していることが明らかとなった。本研究成果から、汎用性の高いTcを用いた低酸素可視化プローブの合成に成功した。がん治療成績の向上をめざし、本研究では新規分子設計戦略に基づいた汎用性の高い低酸素領域可視化SPECTプローブの創製を目指している。申請者が提案するプローブの分子設計は、低酸素細胞内で高頻度に生じる還元代謝によりプローブ自身が解裂することで物理的性質を変化させ、細胞膜透過性が変化し、結果的に細胞内に蓄積する独自の設計である。さらに、核種としてTcを用いるため、高い汎用性が期待される。本設計に基づき、様々なテクネチウムリガンドの合成の検討を行った結果、チオエーテル型Tc錯体、Tc-SD22、Tc-SD40、Tc-SD41、Tc-SD43、Tc-SD46、Tc-SD48、及び、エステル型錯体Tc-SD32を得ることに成功した。次に、得られたTc錯体を用いて低酸素細胞への集積性を評価した。評価方法は低酸素細胞へのプローブの集積率に対する常酸素細胞の集積率の比(H/N)を比較した。結果は、チオエーテル型錯体はいずれもH/Nが1よりも小さかったことから、これらのプローブは低酸素細胞選択的な集積は示さないと考えられた。解析の結果、これらのプローブは低酸素細胞内で選択的な還元代謝を受けるが、その後Tc錯体がトランスポーター等を介して細胞内から汲みだされ、結果的に低酸素細胞への集積率が低下したと考えられた。

一方、Tc-SD32は低酸素細胞に高い集積性を示すことが明らかとなった。LC-MSを用いて詳細な分子構造の変化を検討したところ、Tc-SD32は分子設計通り、低酸素細胞内において還元代謝を受け、水溶性が大幅に上昇し、細胞内にとどまっていることを明らかにした。このような分子メカニズムで低酸素細胞集積性を示すTc錯体はこれまで知られていないことから、非常に独自性の高い有用な方法論を確立できた。現在、Tc-SD32をリード化合物とし、in vivoでのプローブの構造最適化を行っている。本研究において考案した低酸素プローブの分子設計はこれまでの低酸素プローブとは異なる集積機序に基づき低酸素細胞に蓄積するプローブである。本年度で達成したことは、低酸素プローブとなる分子の設計、候補化合物の合成、in vitroでのスクリーニングや、LC-MS, NMR等の様々な機器を用いた分子設計の検証である。その結果から、本研究で考案した低酸素プローブの分子設計が妥当なものであり、かつ有用性が高いものであったことを示すことができた。これらの結果については、国内・海外での学会で報告しており、また本研究成果の一部を学術論文へ投稿し、採択された。現在、In vivoイメージングを行うためにTcプローブの体内動態の最適化に着手しており、Tc-SD32をリード化合物とし、さらに様々なプローブを合成・標識し、それらについて担癌動物を用いたin vivoスクリーニングを実施している。現在、得られている知見から有用と考えられる候補化合物が見つかってきており、様々な検証を行っている段階である。また、in vivo実験の評価で必要とされる、免疫組織学的評価のための予備検討や、小動物SPECT撮像を行うための条件検討といった基礎的検討もすでに終了していることから、研究の目的で示した計画はおおむね順調に進行していると考えている。現在進めている、担がん動物を用いたin vivoでの評価・スクリーニングを行っていく。具体的には、分子設計に基づき合成した担癌動物を用いて、低酸素選択的集積性を示すプローブの体内動態の経時的変化を調べる。このようにして得られたin vivoのデータを新たな分子設計にフィードバックし、プローブの分子構造の最適化を行っていき、適切な体内動態と、腫瘍集積性を両立させたプローブを見出す。最適化されたプローブは小動物SPECT装置によるイメージングを行い、画像から得られる定量値と実測した体内動態分布との比較を行う。また、取り出した腫瘍切片をプローブの腫瘍内分布を確かめるべくオートラジオグラフィの撮像するほか、抗ピモニダゾール抗体(低酸素マーカー)、CD31(血管マーカー)等により染色し、組織学的解析を行い、プローブがインビボにおいても低酸素領域に集積しているかを確認していく。このようなプロセスで見出された低酸素SPECTプローブについて、キット化についての検討を行う。そのうえで、メラノーマや扁平上皮癌といった放射線感受性の異なる腫瘍を移植した動物を作成し、低酸素領域の画像評価、及び組織学的評価を行い、低酸素プローブの集積量の違いを確認したうえで、放射線治療実験を実施する。種々の放射線量を低酸素プローブの集積性の異なるモデル動物の腫瘍に照射し、経過観察を行う。経過観察時には、腫瘍体積の増加やマウス生存率の変化、18F-FDGの取り込みといった項目を、未照射群をコントロールとして比較し、データを取得する。また、アポトーシスやネクローシスといった放射線治療の影響と推定できる細胞死を、それぞれTUNEL染色やアネキシンV、HE染色等を用いて組織学的に解析し、腫瘍組織に対する放射線治療効果を調べる。得られた放射線治療に対する反応とSPECT画像により診断された低酸素領域との相関を調べる。
メディアがつくる東北方言イメージの調査・研究ーその拡散と変遷

本研究は、東北方言のイメージの変化と拡散について、国内外の知見を参考にしつつ、特にメディアに表象される東北方言のステレオタイプ的なイメージがどう再生産されてきたのかを調査研究してきた。これまでのまとめとして、東北方言が東北を舞台としたNHK連続テレビ小説でどう表象されているのかという点から分析し、さらに、アメリカの大学の日本語学習者にある方言イメージについてのアンケート調査を実施した。明らかになったことは、まずドラマについては、東北方言は、舞台が東北というリアリティのためならず、依然として根底にあるのは「田舎・粗野・下層・老人」といったマイナスイメージをもつ社会方言として強く表象されているということである。また、ヒロインには、極力東北方言を使わせないように制作されているという点である。特に、2000年代に入ってからは皆無である。コスプレ的に使用することはある。他の地域が舞台となった場合は8割強、関西地域ではすべて、ヒロインは地域方言話者として設定されていることから、同じ方言でも東北方言は、ヒロインには似合わない方言というイメージのままであることが分かった。結局、ドラマで用いられる東北方言は、いまだに東北方言、東北、方言話者のイメージを高めることにはつながらないままである。さらに、アメリカの大学での日本語学習者へのアンケート調査では、お笑いで人気の関西方言は知っているものの、東北方言については知らないという結果となった。アニメから日本語に興味関心を持つようになった学習者が多いが、東北方言があまり使用されていないため、当然の結果である。本研究では、方言ブームの今日においても、東北方言イメージは依然としてマイナスであり、メディアにおける方言利用については、特に東北方言において、改善の余地が十分にあるということを明らかにした。平成28年度は計画の初年度にあたる。実施したことは大きく3つある。1つ目は、東北方言の歴史的、社会的位置づけについて、「粗野、乱暴、女らしくない」といったイメージをもつ東北方言とは対極的なイメージをもつ女版標準語である「女ことば」に注目し、その社会的言説(「女ことば」は衰微した)を批判的に検証し、十分な証拠のないまま流通してしまっていることを指摘し、論文にまとめた。主人公が自立して生きようとするたくましい女性である場合にも、「女ことば」で訳されることの弊害について考察し、論文にまとめた。2つ目は、東北方言のメディア表象について、NHKで放送された2作品(『どんど晴れ』と『あまちゃん』)を取り上げ、東北方言を使用する人物の性格付けとそれらの人物の東北方言の言語特徴をまとめ、標準語を使用する人物と対照的に、「田舎、乱暴、女らしくない」というイメージを強く押し出されるものとなっていることをまとめ、学会で発表した。3つ目は、岩手地域で、東北方言に関する資料収集を行った。現地でしか入手できなかった資料があり、有益なものとなった。4つ目は、アメリカにおけるマイノリティ言語のメディア表象、今回はユダヤ英語について、研究者に会い、直接教示してもらうことができた。アメリカ社会におけるマイノリティの立場がメディアにどう反映されているかを知る機会になった。さらに、アメリカの大学で日本語教育を行っている研究者と、日本語学習者に対する東北方言のイメージ調査について、その内容と方法について意見交換した。内容や調査方法、調査自体については、抜本的に修正した方がよいことがわかり、時間をかけて、さらに継続して、検討していく必要があることが認識でき、非常に有益な意見交換ができた。平成28年度は、当初計画していたことの78割を実施できた。1つ目は、東北方言のイメージ形成の歴史的、社会的背景からみた要因について、そのイメージの対極をなす「都会、丁寧、女らしい」イメージをもつ「女ことば」をめぐり、その言説と翻訳の弊害について考察し、論文にまとめた。この点をさらに詳しく説明すれば、ジェンダーからみて、東北方言が「女らしくない」というイメージを強く持ち続ける要因を考えるのに、その対極にある「女らしさ」を象徴的に示す「女ことば」がどういうふうに位置づけられてきたかを見ていく必要があると考えたからである。日本において、そもそも「女ことば」が広く使われてきたのかという点については、証拠がないまま、言説がひとり歩きしてきた恐れがある。メディアで特に、フィクションにおいて、「女ことば」が広く使用されてきたため、そのイメージが先行した結果、先の言説が幅を利かせてきたと考えられる。その対極に置かれた東北方言のイメージも、メディアによって同様に作られてきた結果、そのマイナスイメージが執拗に維持されてきたと考える。2つ目は、東北方言のメディア表象について、具体的な作品を分析し、その成果を発表した。3つ目は、岩手地域で、東北方言についての資料収集を行った。地元でしか入手できない資料や方言例が収集できた。4つ目は、アメリカ出張により、アメリカにおけるマイノリティ言語のメディア表象の研究者(今回は、ユダヤ英語)に直接その意味づけの教示をしていただいた。さらに、アメリカで日本語教育している研究者と、予定しているイメージ調査の具体的内容や方法について、意見交換を行った。内容や調査方法について、さらに検討が必要なことがわかり、この点については、さらに時間をかけて、検討することにした。そのため、おおむね順調に進展していると思われる。本研究の二年目にあたり、実施したことは以下の4つである。一つ目は、東北方言話者たちをゲストに迎えて自由にトークする娯楽番組を調査分析した結果、従来の東北方言のイメージやステレオタイプを助長するものであることが明らかになった。これは国際学会で発表し、そこで他の地域の研究者と意見交換を行い、有益な視点をもらうことができた。

二つ目は、「方言の価値が高まった」という言説の検証を行った。昨今、方言が様々なところで使用されるようになってきたのは、かつてに比べ、方言の価値が高まったためだとする言説がある。その言説をとなえる方言研究を再吟味しつつ、一方において、東北方言を使用したドラマや作品などの具体的事例の分析を行った。その結果、この言説は、関西方言など一部の方言にはあてはまるものの、少なくとも東北方言にはあてはまらないことが明らかになった。これは論文にまとめた。三つ目は、2017年に放送された地域ドラマ(東北や大阪を舞台としたもの)を分析し、従来の方言イメージがまさに反映されていることが分かった。つまり、従来の方言イメージ、たとえば、東北方言は素朴、関西方言は面白い、といったイメージが再生産されているにすぎないドラマであることを示した。従来の方言イメージをもとに、最新の地域ドラマが制作されていることは、何を意味しているのだろうかといった問いも生まれ、さらに検討すべき課題も得ることができた。これも論文にまとめた。四つ目は、アメリカの大学での日本語学習者の、日本語学習用のテキストや日本語教材について、アメリカの大学の付属図書館で閲覧する機会を得た。標準語を中心としたテキスト・教材が中心であり、方言などの多様な言葉遣いについては、それほど扱われていないことが確認できた。今後の調査の参考になった。当初計画していたことの7割実施できた。一つは、標準語・「女ことば」との対比で、東北方言が使用されたテレビ番組、ドラマ、文学作品などを分析することで、東北、東北方言、東北方言話者のイメージがどうなっているのか、ある程度明らかにすることができた。それは、方言ブームといわれる現代においても、明治以降に流通したイメージやステレオタイプが執拗に存在しているということである。東北方言は、標準語とのかかわりにおいても、さらに他方言とのかかわりにおいても、より周縁に位置づけられており、それが、イメージに大きく反映されていることが分かった。二つめは、方言の価値が高まったとする言説を再考し、少なくとも東北方言にはあてはまらないということが確認できたことである。以上は順調に進展しているものである。一方、今年度、東北方言のイメージについて、アメリカの大学で日本語を学んでいる学生への方言アンケートを実施することにしていたが、1年目にアンケート内容をさらに吟味し、改善すべきであるとのアドバイスをもらい、今年度は、その吟味に時間をかけることになった。本研究の三年目に、アメリカでアンケート調査を実施する予定をたてている。したがって、この点については、おおむね順調に進展していると思われる。本研究は、東北方言のイメージの変化と拡散について、国内外の知見を参考にしつつ、特にメディアに表象される東北方言のステレオタイプ的なイメージがどう再生産されてきたのかを調査研究してきた。
リンパ球由来の黄体機能賦活因子の解析

体外受精時に得られたヒト黄体化顆粒膜細胞の培養系を用い、その性ステロイド産生に対する免疫因子の影響を検討した結果、以下の知見を得た。1.黄体化顆粒膜細胞のプロゲステロン産生は、自己(auto)および非自己(allo)末梢リンパ球との共培養により増加した。この刺激作用はリンパ球培養上清の添加によってもみられた。培養上清中の活性は56°C、30分間の加熱では失活しなかったが、70°C、15分間の加熱により失活した。また、限外濾過による分析から、この活性は分子量30,000以上の物質であると考えられた。2.黄体化顆粒膜細胞のステロイド産生に対する種々のサイトカインの影響を検討した結果は以下のとおりである。インタ-フェロン(IFN)ーγはhCG刺激時のプロゲステロン産生を濃度依存的に抑制するとともに、hCG非添加時のプロゲステロン産生にも抑制効果を示した。この効果は他のIFN、すなわちIFNーα、IFNーβでも観察された。これに対し、マクロファ-ジ由来のサイトカインであるインタ-ロイキン1(ILー1)、tumor necrosis factorα(TNFーα)はhCG刺激時のプロゲステロン産生には影響を与えず、hCG非刺激時のプロゲステロン産生に対してはむしろ分泌促進傾向を示した。エストロゲン産生に対しては、ILー1・TNFーα・IFNーγともに抑制作用を示した。リンパ球由来の別のサイトカイン、ILー2はプロゲステロン・エストラジオ-ルいずれの産生に対しても影響をおよぼさなかった。したがって上記のリンパ球由来の黄体機能賦活因子は、IFN・ILー2とは別の物質であることがあきらかとなった。また同時に、黄体細胞はさまざまな免疫因子による機能調節を受けている可能性が示された。
十脚甲殻類における環境ストレスとホルモンの関係

これまでの研究で、申請者は、クルマエビ類Litopenaeus vannameiの甲殻類血糖上昇ホルモン(以下CHH)に分類される既知8種のペプチドのうち、SGP-Gが空気暴露および低塩分ストレス条件下で分泌され、その作用によりエネルギー供給が促進されることを明らかにした。こうした結果をもとに、採用最終年度である昨年度、申請者は補足実験と成果のとりまとめを行った。補足実験においては、交付申請書に従い、水温ストレス条件下の応答の分析を行った。本種も含め甲殻類は変温動物であるため、当初は血中グルコース濃度をはじめとする既存のストレス指標は、低水温条件下では低下し、高水温条件下では上昇する温度依存的な動態を示すと申請者は予想していた。しかし、こうした予想に反し、本種の血中グルコース濃度は低水温条件下で著しく上昇することが明らかとなった。これは、温度をはじめとする体内の生理状態を直接的に変化させるストレス条件下であっても、既存のストレス指標は利用可能であることを示唆していた。申請者はさらなる解析を試みたものの、東日本大震災による実験の中断に加え、これまで使用していた実験系が機能しなくなるなどのトラブルに見舞われたため、結果的に申請者の研究は当初の研究計画通りに進展しなかった。しかし、その一方で、成果のとりまとめにおいては、申請者は3本の論文を国際誌に投稿し、うち1本を高いインパクトファクターを有する一流誌に受理されるに至った。また、残りの2本の論文についても、校正後、受理される予定である。このように、申請者は、実験面においては研究をあまり進展させることができなかったものの、論文投稿においては十分な成果を挙げることができた。上述した通り、東日本大震災をはじめとし、実験系の不調など、様々なトラブルに見舞われたため、申請者の研究は実験面において十分進展しなかった。そのため、申請者は自身の研究状況をやや遅れていると評価した。本研究では、エビ、カニなどの十脚甲殻類のストレス指標の確立を目的として、ストレスに順応するためのエネルギー供給に主要な役割を果たしていると予想される甲殻類血糖上昇ホルモン(以下CHH)に着目し研究を行っている。本年度は、水産有用種Litopenaeus vannameiを実験動物に用い、CHHの測定条件を確立し、ストレス応答を示すCHHの特定を行った。まず、HPLCおよびMALDI-TOF MSを使用し、ホルモン貯蔵器官であるサイナス腺中のストレスに伴う各CHH動態を分析した。実験には、ストレス処理法として水棲生物にとって最も大きな環境ストレス要因となる大気暴露を用いた。その結果、ストレス条件下において、これまで知られている8種のCHHのうち、Pev 26およびSGP-Gと呼ばれているCHHがサイナス腺中で減少していることが明らかになった。これは、これらのCHHがストレス応答のためにサイナス腺から血中に分泌されたことを示唆している。この結果をもとに、本研究ではストレス応答を示したCHHの中でもサイナス腺中に最も多量に存在していたSGP-Gに着目してさらに詳細な分析を行った。まず、血中のSGP-Gを分析するため、有機溶媒により血中の夾雑物を除去し、各CHHをHPLCによって分離した後、EIAによってSGP-Gを検出する分析系を確立した。この分析系を用いて血中SGP-Gの動態を試験したところ、対照区ではSGP-Gが全く検出されなかったのに対し、大気暴露ストレス条件下では約1.7ng/mLのSGP-Gが血中より検出された。この結果は、サイナス腺におけるSGP-G動態と並んで、SGP-Gがストレス応答を示すホルモンであることを示唆している。以上の結果から、CHHの中でも従来SGP-Gと呼ばれていた分子がストレスホルモンとして機能している可能性が示唆された。これをもとに、平成22年度は塩分、水温などそれぞれの環境ストレス条件下におけるSGP-G動態と各種ストレス応答を網羅的に分析する。これにより、SGP-Gが異なるストレス要因に対し共通に作用するホルモンであることが明らかになると期待される。本研究では、甲殻類のストレス応答において、全てのストレス要因に対し共通して機能する機構が存在すると仮定し、その機序を解明することを目的として研究を行っている。クルマエビ類Litopenaeus vannameiを用いた昨年度までの研究で、既知の8種の甲殻類血糖上昇ホルモンのうち、SGP-Gと呼ばれる分子がストレス条件下で血中に分泌されることが示唆された。この結果に基づき、本年度はSGP-Gの機能の解明に取り組んだ。一般的に、ストレス条件下にある生物の体内では、ストレス源に対し闘争または逃避行動をとるためにエネルギー供給が促進されることが知られている。これに基づき、まずエネルギー源となる物質のストレス条件下における血中動態を網羅的に分析した。実験にあたり、全く異なるストレス条件である空気暴露および低塩分を実験条件として用いた。市販のキットおよびHPLCを用いた分析の結果、異なるストレス条件下で血中のグルコース、グリシン、L-アルギニン、D-およびL-アラニンの濃度が共通して上昇することが明らかになった。一般的に、グルコースは生物の代表的なエネルギー源の一つであり、また、グリシン、L-アルギニン、D-およびL-アラニンは容易にエネルギー利用可能なアミノ酸であることが知られている。このことから、これらはストレス条件下で共通してエネルギー源として利用されていると考えられる。

この結果に基づき、次にSGP-Gがこれらの応答の制御に関与しているか明らかにするため、SGP-Gのバイオアッセイを行った。サイナス腺より精製したSGP-Gを実験動物に投与し、1時間後に採血して血中グルコースおよび各種アミノ酸濃度を分析した。その結果、投与量に応じて血中グルコース濃度のみが上昇傾向を示した。このことから、SGP-Gはストレス条件下に共通してみられるエネルギー供給応答の一部を制御するホルモンであると推測される。これまでの研究で、申請者は、クルマエビ類Litopenaeus vannameiの甲殻類血糖上昇ホルモン(以下CHH)に分類される既知8種のペプチドのうち、SGP-Gが空気暴露および低塩分ストレス条件下で分泌され、その作用によりエネルギー供給が促進されることを明らかにした。こうした結果をもとに、採用最終年度である昨年度、申請者は補足実験と成果のとりまとめを行った。補足実験においては、交付申請書に従い、水温ストレス条件下の応答の分析を行った。本種も含め甲殻類は変温動物であるため、当初は血中グルコース濃度をはじめとする既存のストレス指標は、低水温条件下では低下し、高水温条件下では上昇する温度依存的な動態を示すと申請者は予想していた。しかし、こうした予想に反し、本種の血中グルコース濃度は低水温条件下で著しく上昇することが明らかとなった。これは、温度をはじめとする体内の生理状態を直接的に変化させるストレス条件下であっても、既存のストレス指標は利用可能であることを示唆していた。申請者はさらなる解析を試みたものの、東日本大震災による実験の中断に加え、これまで使用していた実験系が機能しなくなるなどのトラブルに見舞われたため、結果的に申請者の研究は当初の研究計画通りに進展しなかった。しかし、その一方で、成果のとりまとめにおいては、申請者は3本の論文を国際誌に投稿し、うち1本を高いインパクトファクターを有する一流誌に受理されるに至った。また、残りの2本の論文についても、校正後、受理される予定である。このように、申請者は、実験面においては研究をあまり進展させることができなかったものの、論文投稿においては十分な成果を挙げることができた。上述した通り、東日本大震災をはじめとし、実験系の不調など、様々なトラブルに見舞われたため、申請者の研究は実験面において十分進展しなかった。そのため、申請者は自身の研究状況をやや遅れていると評価した。
重層的決済システムと中央銀行制度成立過程の再考

本研究は、経済活動における決済の役割について、各地の商慣習や文化の役割を意識しつつ、どのようにして決済がシステムとして各々の経済活動を支えるものとして成立したのか、研究代表者と研究分担者、そして海外の研究協力者とも協力して、比較史的観点から検討しようとするものである。その中でも特に近代銀行業の中核として認識されている中央銀行との関係に焦点をあて、中央銀行を導入することが決済システムの効率化と経済発展に不可欠と捉えている多くの先行研究に一定の修正を迫りたいと考える。その上で決済システムにおける中央銀行の役割について、現代的な問題関心から考察する時にも本研究の成果がその一助になればと考える。
吸啜から咀嚼への発達に伴う三叉神経上領域の回路特性の変化についての研究

吸啜から咀嚼への転換ならびに咀嚼運動の成熟には多くの興味深い点が認められるが、過去の検索からこれらは咀嚼機能を構成する神経筋機能が大きく関与し、その源は筋紡錘や歯根膜圧受容器からのフィードバックを受けるCentral Pattern Generatorの回路特性の変化が要因であると思われるデータを昨年度報告した。そこで、本年度は吸啜から咀嚼への転換における末梢変化として歯の萌出による歯根膜圧受容器からのフィードバックの存在がCentral Pattern Generatorの回路特性にどのような変化を及ぼすか電気生理学的手法を用いてその検索を行った。その結果、Central Pattern Generatorにおいて、末梢からの入力を受けていると考えられている三叉神経主知覚核はリズミカルな顎運動を司る三叉神経運動路核へと投射するpremotor neuronとしての役割を担っていると考えられ、この領域の回路特性を細胞外電位記録法を用いて検索したところ、新生ラットおよび日齢の異なるラットにおいてそのニューロン特性に違いがあることが分かってきた。これらには、咀嚼運動に同調して発火するニューロン群、咀嚼運動に同調せず持続性に発火するニューロン群、および咀嚼運動には直接関与しないが、他のpremotor neuronに対して促進的または抑制的に関与しているニューロン群の存在が確認されたことから、現在は、マイクロインジェクターを用いてこれらのニューロン群に対して選択的にBicucullineならびにPicrotoxin(以上GABAa受容体拮抗薬)、NMDA(興奮性アミノ酸神経伝達物質)、lidocaine(神経伝達阻害物質)等を微量投与することでその領域における咀嚼リズム構成の役割の検索を継続的に行なっているところである。また、今後は先に得られたデータより、歯の萌出を認めないtl/tlラットにおいて同様な検索を行い、歯の萌出がCentral Pattern Generatorにおける回路成熟のトリガーとなるであろうという仮説を検証したいと考えている。哺乳類の吸啜運動から咀嚼運動への発達の過程において、電気生理学的手法を用いてpremotor neuronさらには、pre-premotor neuronレベルでの経時的変化に焦点を当てて解析を行った。その結果、新生児ラットの三叉神経上領域から記録された細胞外電位は持続性あるいは間歇性であり、架空吸啜運動の開口相または閉口相にバーストが認められるリズミックニューロンユニット、あるいはサイクルを通してバーストが認められるラスティングニューロンユニットとに大別された。これらのニューロンバーストをベクトル化し、1サイクルを360度としたサークルプロットにて評価すると、リズミックニューロンユニットは三叉神経運動ニューロンのバーストと同期して発火するニューロン群と三叉神経運動ニューロンの休止期に発火するニューロンが認められたが、それらの多くは三叉神経運動ニューロンのバーストと同期して発火するニューロンであった。また、これらのニューロン群の多くは三叉神経上領域の内側領域、背側領域、尾側領域に多く認められ、その発火パターンは多くのニューロンにおいて複数の発火パターンを有していた。さらに、これらのニューロン群の多くは上顎切歯の歯根膜圧受容器からの入力を受けていることが認められた。三叉神経上領域への局所麻酔薬の微量注入により、三叉神経運動路核から記録された活動電位にはサイクル時間延長ならびにバーストエリアの減少が認められたことから、三叉神経上領域からの三叉神経運動核への入力は促進的であることが示唆された。
子宮での細胞増殖因子発現異常検出によるリピートブリーダー牛の診断および治療法開発

酪農業に重大な経済被害をもたらすリピートブリーディングの対策を講じるため子宮機能異常による不妊牛の摘発および治療法を検討した。まず、子宮における主要な増殖因子とサイトカインの周期的変動を調べた。そのうち上皮成長因子(epidermal growth factor, EGF)は発情後2-4および13-14日目に明瞭なピークを持つ周期的変動を示し、リピートブリーダー牛の約70%ではこれらのピークが消失していることを明らかにした。また、この異常は治療処置を行わなければ持続し、治療処置により受胎したリピートブリーダー牛の8090%では、妊娠に先立ちEGF発現が正常化していることも明らかにして、EGF発現異常がリピートブリーダー牛の不妊原因の一つであることを示した。次いで、EGF濃度異常の治療法を検討し、リピートブリーダー牛に対しプロジェステロン徐放剤と高用量(5mg)の安息香酸エストラジオールを組み合わせた治療を施すと約70%の牛でEGF発現が正常化し、その内70-80%の牛は治療後2回までの授精で受胎することを示し、効果的な治療法開発に成功した。一方、授精待機牛においてはEGF発現が受胎性の指標となることを示し、子宮内膜EGF濃度測定を受精卵移植のレシピエント選抜に応用することで受精卵移植後の受胎率が向上することを示した。また、分娩後の子宮におけるEGFの周期的変動が回復する時期とその異常を来す機序を明らかにするため、分娩後の子宮内膜でのEGF発現に影響を及ぼす因子を調べた。その結果、EGFの周期的変動回復には少なくとも8日以上の黄体期の出現が必要であることが明らかとなり、産褥期に短い間隔で排卵を繰り返す牛および子宮回復前に長い黄体期の出現した牛ではEGF発現異常の頻度が高まることが示唆された。不妊牛の中でもその原因が特定できず,有効な対策を講じることが出来ないリピートブリーダー牛の不妊原因の鑑別法と治療法の確立を目指し,上皮成長因子(EGF)の子宮内膜濃度を調べることによってリビートブリーダー牛の中から子宮機能異常により妊娠しないサブグループを選別することを試みた。まず,乳牛の発情周期中の子宮内膜EGF濃度を調べ,発情後2-4および13-14日目にビークを示す特徴的な変化を明らかにした。ついで,子宮内膜材料採取後2回以内の授精により妊娠した正常牛50頭を用いて発情後3,7およぴ14日目の子宮内膜EGF濃度の正常範囲を決定し,この3日間の子宮内膜濃度とその後の受胎成績を調べて,通常の検査では不妊原因を特定できなかった不妊牛の約70%で3あるいは14日目のEGF濃度が低下していることを明らかにした。そこで,子宮内膜EGF濃度の低下が認められた計180頭の乳牛を用い2回の治療試験を実施したところ,膣内留置型プロジェステロン徐放剤に1mgの安息香酸エストラジオール(E_2)製剤とプロスタグランジン(PG)F_<2α>製剤を組み合わせた治療法により約40%の受胎率を得ることができた。また,E_2製剤の投与量を5mgに増加すると,子宮内膜EGF濃度の正常化率が向上し(1および5mg投与群でそれぞれ30および70%),受胎率も約70%に向上した。特に,EGF濃度が正常化した牛の受胎率は両群ともに約90%と極めて高い数値であった。以上の結果より,子宮内膜EGF濃度測定により特定の原因をもつ不妊牛のサブグループを選別できることが示され,このタイプの不妊牛には膣内留置型プロジェステロン徐放剤にE_2製剤とPGF_<2α>製剤を組み合わせた治療法が有効であることが示された。

また,E_2製剤の投与量は乳用牛における通常量(0.51mg)の510倍に当たる5mgの投与が効果的であることが分かった。子宮内膜の上皮成長因子(EGF)発現異常と受胎性の関係を明らかにするために以下の2点を検討した。1)乳用牛におけるEGFおよびステロイドレセプター濃度変化の周期性回復時期乳用牛の卵巣周期の回復と子宮内膜でのEGF発現およびエストロジェンレセプター濃度の周期性回復の関係を調べた。その結果、分娩後120日以内に受胎した正常牛(51頭)では卵巣周期の回復に伴いEGF発現の周期性も回復するが、リピートブリーディングを示した牛(22頭)では正常な黄体期が回復した後もEGF発現の周期性が回復しないことが分かった。エストロジェンレセプターの発現には、両者間で差異はみられなかった。以上の結果より、卵巣周期回復後授精再開前に子宮内膜EGF濃度を調べることにより、授精再開後にリピートブリーディングを示す牛を摘発できることが示された。また、分娩後のEGF発現の回復時期は調査した21戸の農場間で大きく異なり(平均4888日)、農家毎の授精再開適期を決める指標となる可能性が示された。2)EGF発現およびエストロジェンレセプター濃度と胚移植後の受胎性の関係胚移植用レシピエント牛(120頭)の子宮内膜EGF濃度(発情後3日目)と胚移植(同7日目)による受胎率の関係を調べたところ、EGF濃度が正常範囲よりも低い牛では正常牛に比べ受胎率が低かった(15 vs. 76%、P<0.01)。全体の受胎率(59%)は、子宮内膜の生検による材料採取を行わないで胚を移植した場合(64%)と同等であり、内膜採取による受胎率への影響は認められなかった。また、EGF濃度正常牛だけの受胎率は、通常の受胎率に比べて高かった(P<0.05)。以上の結果より、子宮内膜EGF発現は牛の受胎性と密接に関係しており、リピートブリーディングの予測および受精卵レシピエント牛の選抜指標となることが示された。1.子宮内膜EGF濃度測定によるリピートブリーダー牛の診断法を野外応用するため,子宮内膜の代替となる診断材料を検索するとともに,測定材料の前処理法簡易化を検討した。前者については,子宮内膜生検材料と腟円蓋部背側から採取した腟粘膜材料のEGF濃度(ng EGF/mg蛋白)の間に強い相関のあることを明らかにし,採取が容易で特殊な器具を必要としない腟粘膜材料を用いたリピートブリーダー牛の診断を可能とした。後者については,市販のC18カートリッジを用いた測定用試料調整法の簡素化を検討した。その結果,子宮内膜生検材料および腟粘膜材料からそれぞれ1および0.1M酢酸を用いて抽出した蛋白をC18カートリッジに充填し,50%メタノールにより溶出した材料を用いてEGF濃度測定を行う測定系を開発した。これにより,ゲルろ過,凍結乾燥および再溶解とステップが多く時間を要した(1.5日/50サンプル)試料調整法を,大幅に簡素化し所要時間を短縮(3時間/50サンプル)することに成功した。2.分娩後子宮内膜EGF濃度変化の周期性が回復する時期とその異常が生じる原因を明らかにするため,分娩前後の飼養管理および周産期疾病の有無と子宮内膜のEGF濃度変化回復過程の関係を調べた。その結果,EGF濃度変化の回復時期は分娩後約40日目であり,子宮修復前に黄体期がみられた個体,分娩後に短い周期で発情・排卵を繰り返した個体および分娩後の子宮修復が遅れた個体でEGF発現異常の頻度の高いことが分かった。