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ES細胞のインビト口分化誘導系を用いた赤血球の発生・分化に関する研究

マウスES細胞をマクロファージコロニー刺激因子を欠損するストロマ細胞株であるOP9と共生培養すると、効率よく骨髄系・Bリンパ系の細胞に分化誘導できるシステムを開発してきた。この方法を用いることにいより、分化誘導10日以後に成体型赤血球(definitive erythrocyte: EryD)が出現することを報告してきたが、本年度の研究により、それ以前に胚型赤血球(primitiveerythrocyte: EryD)がマウス個体発生と非常に類似した時系列をもって発生してくることが明らかとなった。そこで、個体発生において最初に発生してくるEryP発生の性格付けならびにEryDとの細胞系列の異同についての検討をおこなった。EryP数は分化誘導後7日目にピークを抑え、その後急激に減少する。OP9分化誘導系ではエリスロポエチン(EPO)遺伝子の発現が認められないこと、またEPOの添加によりEryPの減少を解除することが可能であったことから、(1)EryPの発生にはEPOが不要であること、しかし、(2)EryPの生存にはEPOが必須であること、が明らかとなった。また、c-kitの阻止抗体であるACK2を分化誘導時に添加したところEryDの出現は完全にブロックされたが、EryPの出現は全く影響をうけなかった。さらに、EryPの前駆細胞の出現とEryDの前駆細胞の出現を限界希釈法を用いて検討したところ、それぞれの前駆細胞は異なった細胞系列に属するとの結論を得た。この結果は古来からの造血発生上の問題に終止符をうつものである。
渭河流域における秦文化成立の考古学的研究

中国陝西省および甘粛省東部の渭河流域に分布する早期・前期秦文化から春秋戦国時代秦文化の遺跡・遺物の考古学的調査を行うことが当該研究の研究目的である。2018年度は北京大学考古文博学院と当該研究を課題とした学術交流を行い、陝西省内の秦建国期・春秋時代の秦人および周人の遺跡発掘に参加した。2018年10月10日から10月19日の10日間、研究代表者飯島武次、研究分担者角道亮介、研究協力者大日方一郎は、中国宝鷄市鳳翔県の秦都雍城遺跡の発掘調査に加わり、秦都雍城の中心部の宮殿区において調査をおこない、また雍城造営開始時期の遺構を求めて踏査も行った。その結果、西周文化の伝統を濃厚に受け継ぐ秦人の文化を遺構と遺物の上から確認することができた。発掘参加終了後、19日から25日の間、四川省成都市で開催された「中国考古学論壇」「中国考古学会」の二つの学会に参加し、西周腰坑および、秦建国期の王陵関係の発表を行った。2018年度は、当該研究の最終年度に当たったので、研究のまとめを行い、併せて積極的に研究成果の発表を論文・学会発表において行った。3年間の研究では、秦都城の研究に併せて秦陵の葬制に関しても研究を進めた。その中で、甘粛省礼県大堡子山M3号墓の被葬者は秦襄公、M2号墓の被葬者は襄公の配偶者である可能性が高いとの結論を導き出した。秦建国期から戦国時代後期に至る陵墓・大型墓の変化と発展を確認した。秦建国期・春秋時代の陵墓は中字型墓であるが、戦国時代後期には亜字型墓が出現する。春秋時代の陵墓上に墳丘は無く、穆公陵と景公陵の墓上には大型建築が存在するが、戦国時代後期になり惠文王公陵・武王永陵の陵墓上には方錐台形墳丘が出現する。この発展・変化が始皇帝陵の大方錐台形墳丘と寝殿の造営に繋がる。秦陵葬制の発展と変化の中に秦文化が形成されていく象徴的姿を見ることが出来た。中国陝西省渭河両岸に分布する西周時代併存早期秦文化および東周時代秦文化の遺跡・遺物の考古学調査と研究を行うことを目的として1年間の研究活動を行ってきた。基礎作業として、『史記』『漢書』『水経注』など文献史料に記載された早期秦・東周時代秦に関わる史料を考古学の目で再確認を行った。2016年5月2023日の間、研究代表者飯島武次は、中国鄭州市で開催された「中国考古学大会」に参加し、講演および研究発表を行い、あわせて秦文化成立にかかわる研究連絡を陝西省考古研究院の王偉林院長・焦南峰教授と行い、その後、24・25日には、北京大学考古文博学院を訪問し、徐天進教授と9・10月の遺跡発掘に関して打ち合わせを行った。2016年8月299月1日の間、研究代表者飯島は、北海道にある東京大学大学院人文社会系研究科付属北海文化常呂実習施設に於て行われた北京大学考古文博学院の発掘実習に出向き、発掘技術交流を行った。2016年9月26日から10月5日の間、研究代表者飯島武次、研究分担者角道亮介、研究協力者大日方一郎・于術は、北京大学考古文博学院・陝西省考古研究院が行った中国宝鷄市岐山賀家村の発掘調査に参加した。早期秦文化に併存する西周時代遺構が主体であったが、西周遺構を切る東周時代秦文化の土器窯の存在を確認し、土器や瓦の出土があった。発掘期間を利用して、秦漢時代遺跡の大発見である鳳翔県血池の北畤祭祀遺跡の発掘を視察した。又この期間に宝鷄市青銅器博物館、秦公一号墓、秦雍城の見学、雍城遺跡発掘工作站の訪問を行った。研究協力者大日方一郎は、発掘終了後、飯島の指示で10月69日の間、甘粛省礼県の前期秦文化の大堡子山遺跡・圓頂山遺跡の踏査を行った。研究協力者于術が中国へ帰国したため、2017年度から山本尭(東京大学大学院人文社会系研究科博士課程考古学)に研究協力者を頼むことにした。研究計画として当初、文献史料の再確認、中国側への研究協力依頼と研究計画打ち合わせ、早期・前期秦文化関係遺跡の発掘・踏査の、三つの基本的な行動計画を予定していたが、それらはおおむね予定通り実行できた。早期秦・東周時代秦に関わる『史記』『漢書』『三輔黄図』『水経注』等の史料を考古学の目で再確認する作業は順調に進んでいる。史料に見られる犬丘・邑之秦・岐以西之地・幵渭之間・平陽・雍城と想定される地域を研究の対象と考えた。研究協力依頼と研究計画打ち合わせに関しては、5月に中国鄭州市で開催された「中国考古学大会」に参加することによって、陝西省考古研究院・王偉林院長および焦南峰教授と直接打ち合わせを行うことが出来、協力を得られることになった。9月26日から10月5日の10日間、研究代表者飯島武次、研究分担者角道亮介は、北京大学考古文博学院・陝西省考古研究院が実施した中国宝鷄市岐山

賀家村に存在する西周時代・早期秦文化時代遺跡の発掘に参加し、秦建国前後の秦人と周人との関係に関して考古学的に成果を上げることが出来た。ただ予算の関係から調査期間が短くなった。発掘期間を利用して、陝西省考古研究院が行っていた鳳翔県血池の北畤祭祀遺跡の発掘現場を視察し発掘担当者田亜岐研究員と学術交流を行うことが出来た。また雍城遺跡発掘工作站において北畤祭祀遺跡出土遺物を観察、調査することが出来た。これは秦文化研究の上で文献史料に見られる鹿畤など秦四畤(秦漢五畤)の記載と対応可能な思わぬ成果であった。又この期間に宝鷄市青銅器博物館見学、秦雍城の踏査は予定通り行えた。研究協力者大日方一郎は、10月69日の間、甘粛省礼県の前期秦文化の大堡子山遺跡・圓頂山遺跡の踏査をおこなった。これは当初からの予定の活動であったが、飯島は時間の関係で踏査に参加できなかった。中国甘粛省東部から陝西省の渭河両岸に分布する早期秦文化の遺跡・遺物および春秋戦国時代秦国の遺跡・遺物、統一秦時代の遺跡・遺物の考古学的調査と研究を行うことが当該研究の研究目的であるが、その研究目的に従って2017年度も、北京大学考古文博学院と当該研究を課題とした学術交流を行い、陝西省内の西周時代及び併存期の秦人遺跡の発掘に参加し、また春秋戦国時代・統一秦時代の秦国大型墓の踏査を行った。2017年9月4から7日の4日間、研究代表者飯島武次は北海道にある東京大学大学院人文社会系研究科付属北海文化常呂実習施設に於て行われた北京大学考古文博学院の発掘実習に出向き徐天進教授と秦文化成立問題に関わる研究交流を行った。2017年9月22日から9月28日の7日間、研究代表者飯島武次、研究分担者角道亮介、研究協力者大日方一郎は、北京において北京大学考古文博学院と当該研究の打ち合わせを行った後、甘粛省礼県の春秋時代初頭の大堡子山遺跡の踏査と、張家川回族自治県の馬家原遺跡発掘見学を行った。あわせて天水市博物館で開催されていた「西戎文化的発現与研究学術研討会」に出席した。2017年10月11日から10月21日の11日間、研究代表者飯島武次、研究分担者角道亮介、研究協力者大方日一郎は、中国宝鷄市扶風県召陳村の西周時代・春秋時代遺跡の発掘調査に参加した。発掘終了後、咸陽市の秦武王陵の踏査と、西安市臨潼区秦東陵の踏査を行った。以上の研究結果として、発掘調査では周人の支配下にある秦人の存在を遺構と遺物の上から推定することが可能となってきた。また踏査では、大堡子山遺跡3号・2号墓が、各説在る中で、3号墓が秦襄公墓、2号墓が襄公妃墓である可能性を確信した。また雍城14号陵園M45号墓が秦穆公の墓であるとの仮説を持つに到った。昨年4月に「今後の研究の推進方策等」として予定した研究活動をおおむね予定通り完了することができた。8月上旬としていた早期秦関係遺跡発掘調査の打ち合わせは9月22日からになったが、北京における北京大学考古文博学院との発掘調査の打ち合わせの後、甘粛省に入り甘粛省文物考古研究所・天水市博物館の全面的な支援を受けて、早期秦の大堡子山遺跡・円頂山遺跡・平山遺跡の踏査を行い、その後西戎墓地群とされる馬家原遺跡の踏査と、現在行われている発掘を見学することができた。また早前期秦文化または西周文化関係遺跡の中国側の発掘調査には、10月に陝西省扶風県召陳遺跡において参加することが出来、その時期の大型建築遺構を検出した。10月の発掘参加終了後、咸陽市の秦武王陵と武王妃陵の踏査と秦咸陽時代の秦東陵の踏査を行い、東陵においては始皇帝の曾祖父昭襄王・父親荘襄王時代の陵墓の存在位置を確認し、大規模な版築遺構を検出することが出来た。
アンジオテンシンII及びカテコラミンの心筋肥大における意義 ー間質のコラ-ジェン・ラミニン・フィブロネクチンの遺伝子発現の検討

【目的】心肥大は高血圧症の臓器合併症とし重要である。最近、ある種の降圧剤により、心肥大の退縮が生じることが報告されているが、各降圧剤毎に心筋肥大の退縮をひき起こす機序に違いがあると考えられる。そこで、今回は自然発症高血圧ラット(SHR)をモデルし、各種降圧剤の血圧・心臓重量に及ぼす影響と左室心筋のCOL・LB_2の遺伝子発現を検討した。【方法】8・12・20週齢のSHRと対照としてのWKYラットを用いて、血圧、心・腎重量を測定し、左室心筋のCOLα_1(I)・α_2(I)・α_1(IV)及びLB_2のmRNAを定量した。さらに、12週齢のSHRに、カプトプリル40mg/kg/日、ニトレンジピン30mg/kg/日、アテノ-ル100mg/kg/日、ドキサゾシン50mg/kg/日を8週間投与し、20週時に上記パラメ-タ-を測定した。【結果】1.LB_2mRNAの発現は、両群の12週でほとんど検出できなくなり、20週では8週の通信強度の34%(WKY)・36%(SHR)であった。COLα_1(IV)・COLα_1(I)のmRNAは、加齢とともに漸減した。2.カプトプリルあるいはニトレンジピンの投与は、無投薬対照群に比し、約45mmHg血圧を低下させた。しかしながら、心重量はカプトプリル投与群でのみ0.23g減少した。この際のLB_2のmRNAの発現は、両群で60ー70%減少したが、COLα_1(IV)のmRNAは、カプトプリル群で対照の11%と著減したが、ニトレンジピン群では74%にとどまった。3.アテノロ-ルあるあはドキサゾシンの投与で、血圧はそれぞれ59・42mmHg低下した。心重量はアテノロ-ル群でのみ減少した。COLα_1(IV)のmRNAは、両群とも20%程度に有意に減少し、COLα(I)・LB_2のメッセ-ジも同様な傾向を示した。【結論】高血圧発症に伴う心筋肥大の予防に、ACE阻害とβ遮断薬が有効であった。左室心筋のCOLの遺伝子発現が、ACE阻害剤・β遮断薬・α_1遮断薬により抑制されたことより、心筋肥大の発生には、血圧の関与のみでなく、レニンーアンジオテンシン系やカテコラミンが関与している。
ヤーン・テラー効果とスピン軌道相互作用によるスピネルフェライトの磁気異方性増大

まず、Cu2+のヤーン・テラー効果とCo2+の磁気弾性効果による磁気異方性増大に関しては、磁気弾性の現象論に基づいて検討をおこなった。(Cu,Co)Fe2O4微粒子の磁気異方性においては、結晶歪(c/a ー1)と実効的な磁気弾性定数(B1)が相関関係にあることを示すことができ、ヤーン・テラー効果と磁気弾性効果の結合を示唆した。この結果について、ICM 2018において口頭で発表した。次に、(Cu,Co)Fe2O4微粒子の保磁力について、正方晶と立方晶の試料において結晶歪や磁気異方性と保磁力の関係を検討した。保磁力の温度依存性について解析を行い、磁化反転機構解析に用いられるマイクロマグネティックモデル(MM)及びグローバルモデル(GM)に適応した。後者の結果から結晶歪のほかに、粒子間相互作用も磁化反転に影響すると考えられ、この結果についてINTERMAG 2018にて口頭で発表した。正方晶化の試料では低温での保磁力の低下が観測され、現に提案されているいずれのモデルでも説明ができない。そこで、GMで確認された低温におけるモデルへの不一致性を考慮し、局所的な発熱の影響を取り入れた拡張GMを検討した。具体的に、磁気余項測定の測定温度が実温度と比べて20Kほど高温側にシフトしていることを見出した。さらに、実温度Tとして、T+20Kの実効的な温度をを用いるとGMが低温においても保磁力を説明することができた。この結果は、磁化反転に伴う局所的な温度上昇が(Cu,Co)Fe2O4の磁化反転機構の理解に不可欠であることを示した。保磁力の解析実験について、仏国ネール研究所において磁気予項測定を行い、その結果と解析に基づいて保磁力解析の専門家であるGivord博士とディスカッションをすすめた。上記の研究成果の総括は学位論文として纏めて2019年2月に発表した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
マークアップ言語を基点としたデータ交換指向システム開発手法に関する研究

モジュール組み合わせ手法の考案スキーマ体系に基いた汎用的なデータ交換モジュールを組み合わせる手法を考案した.各々のデータ交換モジュールにはベースとなるスキーマが存在するため,まずはシステム間で送受されるデータのスキーマをこれらのベーススキーマ群と,ベーススキーマ同士を関係づける組み合わせスキーマとに分割する.ベーススキーマには対応するデータ交換モジュールを割り当る.組み合わせスキーマに対しては,データ交換モジュールの入出力部の結合を目的としたコントローラモジュールを用意し,スキーマにしたがってデータ交換モジュールの連結を行う.この手法によって,統合的に情報交換システムを構築することが可能になると考えた.Webシステムを利用した実装研究成果をWebシステム上で実装し,実証実験を行った.データ交換モジュールおよびコントローラモジュールは主としてPHPモジュールとして実装した.実装にあたっては既存のコンテンツ管理システムのモジュール構成を参照し,各モジュールの管理メカニズムは,既存のものを流用した.PHPという汎用性の高い実装技術を利用したことで,サーバOSやクライアントブラウザに依存しない実装が可能となった.研究成果の公表研究成果を利用して作成されたWebサービス向けのデータ交換用モジュールについて,電子情報通信学会ソフトウェアサイエンス研究会において発表した.特にモジュールの機能をWebサービス開発環境の中に取り込む手法について議論を行った.また,セマンティックWebなどの新しい実装技術との関係についても議論した.データスキーマの記述形式の調査代表的なXMLスキーマ記述言語(DTD, XMLSchema, RelaxNG)について、スキーマ記述体系を調査した。特にRelaxNGの設計理念に含まれている形式性に着目し、この形式性を効果的に利用するためのデータ交換について考察した。形式性によって得られる効果とは、データや機能の検証が可能となることである。そこで、アプリケーションが扱うデータや機能をすべてマークアップ言語(ML)で記述し、これらに対応するRelaxNGスキーマ記述を用いることで、データ型検査や機能検証が可能となる。あわせて、MLで記述されたデータや機能を解釈実行することができるアプリケーションフレームワークを提案し、既存のML技術を用いて実現可能であることを示した。スキーマ体系に基づくデータ交換用モジュールの設計RelaxNGでもちいられるスキーマ要素と、データ交換機能との関係性に基づき、汎用的なデータ入出力用モジュールの設計を行った。この時、アプリケーションとしてのある程度の具体性が必要となったため、まずはデータ交換において制約の多いアプリケーションを対象とした。具体的には、携帯端末を利用したデータ交換に着目し、RelaxNGスキーマと入出力インタフェースの関係性を一般化し、スキーマからインタフェース記述を自動生成することを試みた。生成されたインタフェース記述は汎用的な実行モジュールによって、アプリケーションインタフェースとして実働する。モジュール組み合わせ手法の考案スキーマ体系に基いた汎用的なデータ交換モジュールを組み合わせる手法を考案した.各々のデータ交換モジュールにはベースとなるスキーマが存在するため,まずはシステム間で送受されるデータのスキーマをこれらのベーススキーマ群と,ベーススキーマ同士を関係づける組み合わせスキーマとに分割する.ベーススキーマには対応するデータ交換モジュールを割り当る.組み合わせスキーマに対しては,データ交換モジュールの入出力部の結合を目的としたコントローラモジュールを用意し,スキーマにしたがってデータ交換モジュールの連結を行う.この手法によって,統合的に情報交換システムを構築することが可能になると考えた.Webシステムを利用した実装研究成果をWebシステム上で実装し,実証実験を行った.データ交換モジュールおよびコントローラモジュールは主としてPHPモジュールとして実装した.実装にあたっては既存のコンテンツ管理システムのモジュール構成を参照し,各モジュールの管理メカニズムは,既存のものを流用した.PHPという汎用性の高い実装技術を利用したことで,サーバOSやクライアントブラウザに依存しない実装が可能となった.研究成果の公表研究成果を利用して作成されたWebサービス向けのデータ交換用モジュールについて,電子情報通信学会ソフトウェアサイエンス研究会において発表した.特にモジュールの機能をWebサービス開発環境の中に取り込む手法について議論を行った.また,セマンティックWebなどの新しい実装技術との関係についても議論した.
二酸化炭素フリー燃焼への反応機構からのアプローチ

メタンの熱分解反応及燃焼反応の実験結果を基にして、メタンの燃焼反応機構(219個の素反応からなる)を構築し、その機構を使用して以下に述べる結果を明らかにした。酸素/メタン比が0.2の試料(5%CH_4、1%O_2、95%Ar)を1700Kに加熱し、反応させると、加熱から9msでメタンの約60%が反応し、メタン初濃度の75%の水素、17%の一酸化炭素、アセチレンが生成し、二酸化炭素の生成量は1%以下であった。この条件下では二酸化炭素フリーに近い反応を起こさせることができた。酸素/メタン比が0.5の試料(5%CH_4、2.5%O_2、92.5%Ar)を1700Kに加熱した場合、2msでメタンの90%が消費され、メタンの初期濃度以上の水素を生成した。この条件での水素以外の主生成物としては一酸化炭素、アセチレンであった。反応時間9msではメタンの94%が反応し、メタン初濃度の105%の水素、30%の一酸化炭素、20%のアセチレンが生成し、二酸化炭素の生成量は4%となった。酸素/メタン比が0.8(5%CH_4、4%O_2、91%Ar)の試料を1700Kに加熱した場合は、1ms以内にメタンの全てが反応した。最終的には、メタン初濃度の145%の水素、93%の一酸化炭素、6.3%の二酸化炭素が生成した。酸素/メタン比が1の試料(1%CH_4、1%O_2、98%Ar)を1700Kに加熱し、反応させた場合、2ms以内にメタンは消費され、メタン初濃度とほぼ同量の水素と74%の一酸化炭素を生成した。しかし、16%近くの二酸化炭素が生成した。反応物の平衡状態では、一酸化炭素の生成量は酸素/メタンのモル濃度比を0.8で反応させた場合に最大となった。酸素/メタンのモル濃度比が0.8の試料での温度と生成物量の関係を以下に述べるように明かにした。反応温度が2200Kではメタン初濃度の約93%が一酸化炭素に酸化され、2200K以下では反応温度の低下と共に一酸化炭素の生成量も減少し、1800Kでメタン初濃度の約60%となった。又反応温度2200K、酸素/メタンのモル濃度比0.8で反応させた場合、最大水素量はメタン初濃度の1.45倍となる事が明かとなった。又酸素/メタン比が0.8以下では二酸化炭素の生成量は減少するものの、アセチレンの生成量が増加し、又それ以上の比では一酸化炭素は減少し、二酸化炭素量が増加する事が分かった。
肝臓におけるIRS-1、IRS-2の生理的・病態生理的役割の解明

2型糖尿病の肝臓では、糖代謝においてはインスリン抵抗性(糖新生の抑制障害)を呈するのに対し、脂質代謝においてはむしろインスリン作用の亢進(脂肪合成促進・脂肪肝)が認められるという一見相反する病態を呈する。そこでその分子メカニズムを解明するため肝特異的IRS1(LIRS1KO)、肝特異的IRS2(LIRS2KO)欠損マウスに高脂肪食負荷(HF)を行った。HFによりIRS1ではなくIRS2の発現のみ低下していた。LIRS1KOは重度の耐糖能異常と脂肪肝が顕著に抑制されていた。一方LIRS2KOはコントロールと同程度の脂肪肝と軽度の耐糖能異常が認められた。以上の結果からIRS2発現が低下しているHF下では、IRS1はIRS-2による糖代謝調節を代償し、脂肪合成に重要な役割を果たしてことが明らかとなった。肝臓は糖・脂質代謝において中心的な役割を果たしている臓器の1つであり、インスリンは肝臓において糖新生を抑制し、脂質合成を促進する。ところが、2型糖尿病の肝臓では糖新生抑制に対してはインスリン作用の低下が認められ、脂肪合成に対してはむしろインスリン作用が亢進している病態が認められるという"インスリン作用におけるpathogenic paradox"が存在することが知られているが、そのメカニズムは十分に解明されていない。そこで私は、肝臓において主要なインスリン受容体基質(IRS)であるIRS-1・IRS-2に着目し、肝臓特異的IRS-1欠損(LIRS1KO)マウスと肝臓特異的IRS-2欠損マウス(LIRS2KO)に高脂肪食を負荷し検討をおこなった。その結果、IRS-1の遺伝子発現はコントロールマウス、LIRS2KOマウスいずれにおいても高脂肪食で変化を認めなかったが、IRS-2の遺伝子発現は、コントロールマウス、LIRS1KOマウスいずれにおいても絶食時、高脂肪食群において約1/3に低下していた。次に糖負荷試験を行ったところ、LIRS1KOマウスでは、コントロールマウスに比し顕著な耐糖能障害が認められたが、LIRS2KOマウスの耐糖能異常はコントロールマウスに比べて軽度であった。さらに脂肪肝について検討したところ、LIRS1KOマウスではコントロールマウスに比し脂肪肝が顕著に抑制されていた。一方、LIRS2KOマウスではコントロールマウスと同様に脂肪肝が認められた。以上の結果から肥満などで惹起されたインスリン抵抗性による、持続する高インスリン血症下では、慢性的にIRS-2の発現が低下し、高血糖・耐糖能異常を呈し、さらなる高インスリン血症を呈し、IRS-1を介したインスリン作用は増強し、脂肪合成が促進され、脂肪肝、高脂血症を呈し、悪循環を形成すると考えられた。ところが、2型糖尿病の肝臓では糖新生抑制に対してはインスリン作用の低下が認められ、脂肪合成に対してはむしろインスリン作用が亢進している病態が認められるが、そのメカニズムは十分に解明されていない。そこで肝臓において主要なインスリン受容体基質(IRS)であるIRS-1・IRS-2に着目し、肝臓特異的IRS-1欠損(LIRS1KO)マウスと肝臓特異的IRS-2欠損(LIRS2KO)マウスに高脂肪食を負荷し検討をおこなった。IRS-1の遺伝子発現はコントロールマウス、LIRS2KOマウスいずれにおいても高脂肪食で変化を認めなかったが、IRS-2の遺伝子発現は、コントロールマウス、LIRS1KOマウスいずれにおいても高脂肪食群において約1/3に低下していた。ピルビン酸負荷試験にて糖新生について検討したところ、糖負荷試験と同様、HRS1KOマウスでは、顕著な耐糖能障害が認められたが、LIRS2KOマウスの耐糖能異常は軽度にとどまっていた。実際、糖新生系の酵素の遺伝子発現は、LIRS1KOマウスでは有意に上昇していたが、LIRS2KOマウスでは上昇傾向を認めるのみだった。さらに脂肪肝について検討したところ、LIRS1KOマウスでは脂肪肝が顕著に抑制されていたが、HRS2KOマウスではコントロールマウスと同様に脂肪肝が認められた。今後どのようなメカニズムでIRS1とIRS2が役割分担をしているのかについて検討していく。インスリンは肝臓において糖新生を抑制し、脂質合成を促進するが、2型糖尿病の肝臓では糖新生抑制に対してはインスリン作用の低下が認められ、脂肪合成に対してはむしろインスリン作用が亢進している病態が認められるが、そのメカニズムは十分に解明されていない。

そこで肝臓において主要なインスリン受容体基質(IRS)であるIRS-1・IRS-2に着目し、肝臓特異的IRS-1欠損(LIRS1KO)マウスと肝臓特異的IRS-2欠損(LIRS2KO)マウスに高脂肪食を負荷し検討をおこなった。肝臓におけるIRS-1,IRS-2の遺伝子発現を検討したところ、IRS-1の発現はコントロールマウス、LIRS2KOマウスいずれにおいても普通食と差を認めなかったが、IRS-2の発現は、コントロールマウス、LIRS1KOマウスいずれにおいても高脂肪食において約1/3に低下していた。次に脂肪合成について検討したところ、LIRS2KOマウスではコントロールマウスと同様に脂肪肝が認められたのに対し、LIRSIKOマウスではコントロールマウスに比し脂肪肝が顕著に抑制されていた。またoil-red O染色では、コントロールマウス、LIRS2KOマウスの肝臓において高脂肪食負荷により脂肪滴の著明な増加が認められたが、LIRS1KOマウスではこうした増加が明らかに抑制されていた。次に糖代謝について検討するためにグルコース負荷試験を行ったところ、LIRS1KOマウスでは、コントロールマウスに比し顕著な耐糖能障害が認められたが、LIRS2KOマウスでは軽度の耐糖能障害を呈するのみであった。さらに、ピルビン酸負荷試験を行ったところ、LIRS1KOマウスは著明な高血糖を呈したのに対し、LIRS2KOマウスは軽度な高血糖に留まっていた。
自己免疫疾患発症における細胞内コレステロール代謝の病態生理学的意義

研究代表者は、自己免疫疾患の発症における免疫担当細胞内のコレステロール代謝の病態整理的意義を解明することを目的として研究を進めている。特に、抗原提示細胞内のコレステロール代謝異常が自己免疫疾患の発症原因である可能性と、抗原提示細胞内のコレステロール量の減少が新しい自己免疫疾患の治療薬の確立につながる可能性を検証することを目的としており、研究期間内に、以下2つの課題に取り組むことを計画している。1SLEモデルマウスにおけるコレステロール代謝能の解析およびコレステロール逆輸送系促進の病態への影響の解析2ヒトSLE患者における病態進展とコレステロール代謝能の経時的変化の解析研究代表者は期間中に、上記の課題に関して次の成果を得た。まず、SLEモデルマウスとして、アポトーシス誘導受容体であるFasに変異を有しSLEを自然発症する遺伝性lpr/lprマウス、およびミネラルオイルであるプリスタンあるいはTLR7アゴニストであるイミキモドによりSLEを誘導する薬剤誘導モデルを用いて、経時的に解析を行った。SLEを発症するマウスでは、血中コレステロール濃度に変化がなくても免疫担当細胞内のコレステロール含量が多いことを見出した。またこのとき、血中中性脂肪濃度やリポプロテイン分画にも変化がないことを明らかにし、SLEの発症や進展の過程における免疫細胞の脂質蓄積は、全身の脂質代謝とは独立して制御されることが明らかになった。一方、全身の脂質代謝を改善する薬剤の投与により、SLE病態の一部が改善したことから、早期の脂質代謝の改善がSLE治療標的となる可能性が示唆された。1SLEモデルマウスにおけるコレステロール代謝能の解析およびコレステロール逆輸送系促進の病態への影響の解析2ヒトSLE患者における病態進展とコレステロール代謝能の経時的変化の解析研究代表者は平成29年度中に、上記の課題に関して次の成果を得た。まず、SLEモデルマウスであるC57BL/6 lpr/lprマウスと対照野生型マウスを経時的に比較することにより、血中コレステロール濃度に変化がなくてもSLEモデルマウスにおいては免疫担当細胞内のコレステロール含量が多いことを見出した。またこのとき、血中中性脂肪濃度やリポプロテイン分画にも変化がないことを明らかにした。さらに、脾臓およびリンパ節の免疫担当細胞では脂質蓄積の挙動が異なることを明らかにし、血中免疫担当細胞の挙動を含めて、現在さらに詳細に解析を進めている。また、ヘルパー依存性アデノウイルスを用いたApoA1の長期安定発現によるSLE病態発症・進展への影響を解析中である。当該期間内にSLEモデルマウスの基礎的な解析を行い、血中コレステロール濃度に変化がなくてもSLEモデルマウスにおいては免疫担当細胞内のコレステロール含量が多いことを見出した。今後、ヒトSLE患者の検体を用いた解析や、抗原提示細胞ないのリピドミクス解析を行う必要があるものの、研究計画全体としては大きな問題はなくおおむね順調に進展していると判断できる。本年度以降に予定している研究計画は以下の通りである。1SLEマウスから単離した免疫担当細胞、特に抗原提示細胞におけるリピドミクス解析:研究代表者らは、コレステロール逆輸送により細胞からコレステロールが引き抜かれる際には、細胞全体からではなく、細胞膜特異的にその含量が減少することを見出している。また、コレステロール量のみでなく、リン脂質組成が変化することを予備的に見出している。本研究では、リン脂質、特にホスファチジルコリンを中心に、リピドミクス解析を行う予定である。

2ヒトSLE患者におけるコレステロール代謝能の解析と抗原提示細胞における脂質代謝解析:共同研究者のグループにより、慢性関節リウマチ患者の病態とHDLのコレステロール排泄能に相関関係があることが報告されている。ヒトSLE患者あるいは健常者の血液を用いてHDLのコレステロール排泄能に差があるかを検討する。また、抗原提示細胞内のリピドミクス解析を行い、マウスとヒトの病態で共通して変化する脂質を明らかにすることにより、SLE発症のより詳細な分子機構の解明を目指す。(理由)研究は順調に進んでいたが、既に手元にある試薬類を使用できる実験が多かったため、当初の予定よりも当該助成金を使用する機会が少なかったことが大きな理由である。(使用計画)平成29年度の終盤より該当助成金の使用が増加しつつある。その理由として、SLEモデルマウスの解析結果より、組織によって免疫担当細胞内の脂質代謝の挙動が大きく異なり、多臓器で解析する必要があることが挙げられる。本年度は、臓器から単離した免疫担当細胞内のリピドミクス解析を計画しているが、血液中、脾臓、リンパ節の3種類で行う必要があるため、昨年度からの繰越分で補填する必要があり、当該助成金を使い切る予定である。
脳深部刺激術における局所フィールド電位測定に基づく刺激プログラミング法の開発

パーキンソン病(PD)に対する視床下核刺激療法(STN DBS)においてSTN内の局所フィールド電位(LFP)を解析して術後の至適刺激パラメーター設定に役立てることを目的に研究を行った。術中微小電極からのLFP記録でβ-band activityの増加(β-oscillation)を認めた。この異常神経活動はSTNの背側から腹側まで基底核の広い範囲で同調して認められた。さらに運動タスクによる筋固縮の誘発はβ-bandのピークパワーの有意な増加を引き起こし、PDの固縮を反映する特徴的所見であった。研究は継続中で、さらにデータ収集を行い今後LFP記録に基づく刺激調整法確立について検討する。本研究の目的は術中にDBS電極より記録した局所フィールド電位(LFP)を解析して術後の至適刺激パラメーター設定に役立てることである。本研究は患者さんの術中データを使用するため、まずは順天堂大学の病院倫理委員会の承認を受ける手続きを行った。また、実施に当たって手術時のLFP記録データを収集して解析するためのシステムを選定し購入した。倫理委員会の承認を受けるのにやや時間を要したため、実際にLFPデータ記録を行なえたのはまだ4症例で当初の予定よりは遅れている。術中記録は患者さんの負担のないように一側につき約1分程度にとどめており、現時点では運動負荷試験は行っていない。収集したLFPデータを解析ソフト(LabChart)を用いて適宜オフラインで周波数解析を行っている。その結果、いずれの記録でも当初予想されたとおり、20-30Hzにピークを持つβband activityの増加が観察された。しかし記録ノイズなどの問題もあり、データ収集における至適フィルター設定や解析方法についてはまだ改善の余地があると思われ、関係技術者からの助言を得ながら検討中である。したがって術後の至適パラメーターとの関係を比較検討する段階には至っていない。今後さらに症例数を増やして検討を行う予定である。また、当院で行っているDBS手術の妥当性を示すためにこれまでの症例のDBS後長期治療成績についてまとめて論文発表を行った。本年度は順天堂大学の病院倫理委員会の承認を受けた後にまずDBS手術中にLFP基礎データの収集に着手した。これまでにデータ収集を行ったのは23症例46側であり、それぞれ安静時および指タップによる運動負荷時に約1分間の記録を行った。収集したLFPデータを適宜解析ソフト(LabChart)を用いてオフラインで周波数解析を行った。その結果、多くの記録で当初予想されたとおり、20-30Hzにピークを持つβband activityの増加が観察されたが、最初の10例程度は記録ノイズも大きくデータに問題があると思われた。データ収集における至適フィルター設定や機材についてまだ改善の余地があると思われたので、関係技術者からの助言を得て記録ケーブルの改良を行うとともに、記録は0-1, 2-3電極間のバイポーラー記録にとどめた。その後の症例ではノイズの少ない安定した記録が得られたので、当初の計画通り術後の至適パラメーターとの関係について比較検討を行った。いずれの記録においても15-30Hzにピークを持つβband activityの増加が観察されたが、症例毎にピーク周波数のばらつきが大きく、術後最終的な刺激設定における電極選択との有意な相関関係は得られていない。また、運動負荷におけるピーク周波数変化についても症例毎にばらつきが大きく一定の傾向はまだ得られていない。本研究は患者さんの術中データを使用する臨床研究である。まず研究を開始するにあたり、順天堂大学の病院倫理委員会の承認を受ける必要があり、また機器の選定にも時間を要したため実際に術中のデータ収集を行うまでに1年近くの時間を要した。その後もノイズ除去のため記録ケーブルの改良にも時間を要した。さらに実際の測定データの解析においてもデータのばらつきが多く当初の目論見である至適刺激パラメーターとの関連を見いだすことができていない。データのばらつきについては術中のDBSリードからの局所フィールド電位測定に問題があるとも考えられ、測定方法についての再検討を余儀なくされているのが実状であり、これらの理由により研究の達成がやや遅れている。昨年度までにデータ収集を行ったのは23症例46側であり、それぞれ安静時および指タップによる運動負荷時に約1分間の記録を行った。その結果、多くの記録においても15-30Hzにピークを持つβband activityの増加が観察された。当初の計画通り術後の至適パラメーターとの関係について比較検討を行ったが、症例毎にピーク周波数のばらつきが大きく、術後最終的な刺激設定における電極選択との有意な相関関係は得られなかった。データのばらつきの原因として、術中のDBSリードからの局所フィールド電位記録ではリードを挿入した途端に微小破壊効果により症状が改善することがしばしばあり、病態が修飾されている可能性があり、それにより症例毎のばらつきがみられたとも考えた。そこでこうした微小破壊効果による変化を排除するために、術中の細胞外電位記録測定のための微小電極記録時に同時に微小電極からLFPを記録して解析する方法に切り替えて記録システムを再構築した。こうして新たなシステムで14症例で記録を行った。

記録は微小電極記録を行った範囲(視床下核腹側縁のターゲットより15mm上方から視床下核を超えて黒質に至るまで)で1mm毎に行った。その結果、視床下核のみならず記録を行った基底核の広い範囲でより安定したβband activity(16.5±3.1 Hz)の増加が観察された。さらに筋固縮の誘発によりβband activityのpeak powerの増加が観察され、パーキンソン病の病態に関わっていることが示された。現在術後の至適パラメーターとの関係についてさらに検討中である。パーキンソン病(PD)に対する視床下核刺激療法(STN DBS)においてSTN内の局所フィールド電位(LFP)を解析して術後の至適刺激パラメーター設定に役立てることを目的に研究を行った。術中微小電極からのLFP記録でβ-band activityの増加(β-oscillation)を認めた。この異常神経活動はSTNの背側から腹側まで基底核の広い範囲で同調して認められた。さらに運動タスクによる筋固縮の誘発はβ-bandのピークパワーの有意な増加を引き起こし、PDの固縮を反映する特徴的所見であった。研究は継続中で、さらにデータ収集を行い今後LFP記録に基づく刺激調整法確立について検討する。本研究は患者さんの術中データを使用する臨床研究である。したがって研究を開始するにあたり、まずは順天堂大学の病院倫理委員会の承認を受ける必要があった。申請書、患者さん用説明書、同意書の作成や研究協力者の臨床研究についてのe-learning受講、倫理審査などに数ヶ月を要した。また、交付額が当初予算より少なかったため、本研究において中心的な役割を果たす局所フィールド電位記録解析システム(DBS測定システム)を再選定する必要があり、その選定にも時間を要した。また実際の手術において病院から機器の滅菌方法での問題点を指摘され、それをクリアするための接続ケーブルを特注で作製するのに時間を要した。これらの理由により実際の研究開始が遅れたため研究の達成がやや遅れている。今後さらに症例数を増やして検討を行いたいところであるが、これまでの解析結果ではデータのばらつきが大きく、実際の測定データがパーキンソン病の病態を本当に反映しているかどうかに疑問が残る。その理由として、術中のDBSリードからの局所フィールド電位記録ではリードを挿入した途端に微小破壊効果により症状が改善することがしばしばあり、病態が修飾されている可能性がある。微小破壊効果の程度の違いにより症例毎のばらつきがみられたとも考えられる。今後こうした微小破壊効果による変化を排除するために、術中の細胞外電位記録測定のための微小電極記録時に同時に微小電極からLFPを記録して解析する方法を検討中である。機能的脳神経外科学これまでに4例の患者さんで術中のLFP記録を行った。
顎骨のリモデリングを制御する補綴誘導ストレスの分析

義歯を装着する高齢者の口腔機能と形態の保全を目指すため,口腔粘膜と顎骨内部に安全で望ましい荷重環境を誘導する理論的背景を明らかにした.口腔内の荷重試験により明らかにした顎堤粘膜の粘弾性性質を挿入した被検者それぞれの三次元力学モデルをCTデータから構築し,粘膜と骨内部の歪みと応力を分析した.荷重時には粘膜と顎骨に微小歪みが蓄積するため,これを抑制する義歯の設計と新しい診療アプローチを明らかにした.義歯を装着する高齢者の口腔機能と形態の保全を目指すため,口腔粘膜と顎骨内部に安全で望ましい荷重環境を誘導する理論的背景を明らかにした.口腔内の荷重試験により明らかにした顎堤粘膜の粘弾性性質を挿入した被検者それぞれの三次元力学モデルをCTデータから構築し,粘膜と骨内部の歪みと応力を分析した.荷重時には粘膜と顎骨に微小歪みが蓄積するため,これを抑制する義歯の設計と新しい診療アプローチを明らかにした.メカニカルストレスと顎骨のリモデリングとの関係が注目されている.本研究の目的は,歯の喪失後,補綴治療を受けた患者の顎骨の形態変化と,咬合力下で骨内部に生じる歪みとの関係を明らかにし,これを天然歯列のデータと比較することにより,メカニカルストレスが骨の吸収とリモデリングに及ぼす影響を明らかにすることである.平成20年度においては,大臼歯部の咬合支持を喪失した症例を対象として,小臼歯部の歯周組織に生じる応力の変化を明らかにすることを目的とした.被験者は下顎の片側(ML1群,7名)もしくは両側大臼歯部が欠損した被験者群(ML2群,7名)と健常な歯列を有する対照群(CD群,7名)とした.下顎臼歯部歯槽骨の形状をエックス線写真と研究用模型から計測し,これを基に三次元有限要素モデルを構築した.次に,各被験者における咬合接触点と咬合力を,咬頭嵌合位における最大咬みしめをもとに計測し,得られた咬合力をモデル上の一致する点に付与した.各小臼歯の咬合力負担と咬合力重心の他,モデルの解析から得られた歯頚部皮質骨に生じる主応力を求めた結果,以下の結論が得られた.すなわち,1)両側性の大臼歯部の喪失は,小臼歯の歯周組織への応力負担の増加を引き起こす.この結果は,咬合力重心の同部への接近と関係が深いと考えられる.2)歯周組織への応力負担の増加は義歯装着によって抑制されない.大臼歯部の咬合支持を喪失した症例に対しては,咀嚼能力など機能的な側面の検討が多くなされてきた.しかし,機能的な問題以上に,小臼歯など残存歯列の予知性への影響に重大な関心が払われるべきである.また,本年度の研究成果より,メカニカルストレスが骨の吸収とリモデリングに及ぼす影響の一部が明確となった.研究成果を基に,補綴診療により骨内部に安全で望ましいストレス環境を誘導するための新しい診療アプローチを推進する.メカニカルストレスと顎骨のリモデリングとの関係が注目されている.本研究は,補綴診療により骨内部に安全で望ましいストレス環境を誘導し,これにより高齢者の口腔機能と形態の保全を目指す,新しい診療アプローチを推進するものである.平成21年度においては,前年度までに得られた被験者ごとに個別の力学モデルを用い,様々なパラメータを指標として力学解析を行った.被験者個々のモデルに咬合力のデータを代入し,下顎骨の各部に生じる応力と歪みの分布を算出した.このうち代表的な分析結果(Journal of Dentistry 37 (7) : 541-548, 2009)を以下に要約する.大臼歯部を欠損した患者の小臼歯歯周組織に起こる力学的環境の変化と,義歯装着がこれに及ぼす影響を明らかにするため,患者個々の画像データを元にした三次元モデルと口腔内で計測した咬合接触部位と咬合力を基に,小臼歯部の歯周組織に生じる歪みと応力の分析を行った。被験者は下顎の両側大臼歯部が欠損し,部分床義歯を支障なく使用中である女性患者(欠損群,n=7,51歳69歳)とし,健常な歯列を有する同年代の女性を対照群(n=7,50歳68歳)とした。各小臼歯の咬合力負担,皮質骨の最大主歪みおよび歯根表面の最大主応力の値は,欠損群の被験者間で大きくばらつく傾向を示したが,いずれの結果も,欠損群は対照群と比較して有意に大きな値を示し,またそれらの値は義歯を装着しても低下しなかった。皮質骨の微小破壊を引き起こすと考えられている限界歪みを超える大きな圧縮歪みを示す被験者も数名見られ,歯根破折の高いリスクを示唆する最大応力を示す症例も見られた。本研究の結果から,大きな咬合力を示す患者においては,両側の大臼歯部を喪失することが,最後方歯群となる小臼歯の歯周組織の力学的環境に強い影響を及ぼすことが示唆された。補綴装置による痛みや損傷とその予後を予後を左右する原因となる.ヒトの顎堤粘膜の動的挙動を検討,分析し,軟組織内部のストレスと歪みの動態を明らかにした.荷重ピンによる負荷,除荷の制御と粘膜の変位量を感知するセンサを含む,口腔内における粘膜変位量測定システムを用いて,上顎片側大臼歯が欠損した被験者の欠損部顎堤

粘膜に対し一定荷重を10秒間負荷し,除荷後20秒間の変位の変化を記録した.各被験者の顎堤粘膜と顎骨の三次元有限要素モデルを歯科用コーンビームCTの断層画像を基にトレース法で構築した.粘膜は均質な等方性弾性体とし,非線形特性である粘弾性を付与した.粘弾性性質は,緩和弾性率G(t)=G_0×EXP(-t/τ)の式を応用し,被検者ごとの初期弾性率(G_0)と緩和時間(τ)を,測定データを基にしたカーブフィット法から算出して求めた.分析は,粘膜内部の主応力および主歪みの大きさと方向を対象とした.持続荷重や繰り返し荷重下で最大歪みが増加・蓄積される一方,最大応力はわずかに減少した.この結果は,粘弾性体の主要な性質である応力緩和特性によると考えられ,粘膜のクリープ現象が組織内の応力集中を他の部位に分散させる自己防衛の役割を担うものであることが示唆された.そして,繰り返し荷重により粘膜表層の圧縮歪みが徐々に蓄積される現象からは,義歯床下粘膜の痛みや損傷が,単発の荷重よりも咀嚼運動の繰り返しと深く関係していることが示唆された.顎堤粘膜は本来義歯床を介して咬合力を受け止めるための構造を有しているわけではなく,義歯の設計においてはその特異な力学的挙動を考慮する必要がある.補綴診療が安全で望ましいストレス環境を誘導し,高齢者の口腔機能と形態の保全を目指すためには,治療後の生体内部におけるメカニカルストレスの分析が不可欠であることが示唆された.
公私協力方式に関する研究-自治体と私立大学との協力関係を中心にして-

事前に滋賀県と栃木県の状況について研究をした後、平成11年度は質問紙調査の問題紙を作成、公私協力方式により設置された大学(原則として1980年より1997年まで)108を調査の対象とし、それを支援した自治体である18の県や100の市町村に送付した。平成12年度は回収した結果の分析を行い、学会発表を行うとともに、概要についての報告書を作成しつつある段階である。県や市町村の自治体からはすべて回収され、地域開発の核としての大学の誘致や進学率の向上と地域の生涯学習のニーズ等に応えるため、大学設置に関心をもち、よい関係を保つことに協力している。一方、80大学からの回収があり、自治体のニーズに合わせそれぞれの方法で努力していることが理解できた。この方式による大学の設置は新潟県が一番多いことを知り、県市や大学へは訪問の機会をもった。大学進学率の向上と卒業生の地元定着を考えておられる。なお、公設民営による大学の設置が5大学4短大あり、それに近い大学や短期大学もあること知り、数校訪問して実態調査を行った。「自治体がつくる私立大学」については、開学後の運営は厳しく、早く完全に民営化することが大切であると考えた。しかし、この方式による設置には多くの課題が残されている。全体としていえることは、自治体と私立大学の努力により成功しているといえよう。(1)研究代表者・分担者はまず、先行研究や内外の文系を蒐集して、調査と併行し、文献による研究を行った。(2)研究代表者は分担者とともに、質問紙による調査内容の作成を行った。質問紙の作成については専門家(愛知教育大学教授)のご意見を伺って、大学と自治体に送付する2種類のものを作成した。何度も修正し、印刷までに相当の時間を要した。すなわち、「公私協力方式による私立大学」(1980年度1997年度の間に立地された)大学新設45大学、学部新設18大学、学科新設2大学及びこれに協力した18道府県と95の市町村の各自治体に11月郵送で依頼して年内に解答を得た。大学60%、道府県70%、市町村は90%の回収率で、この問題については、地元に設置されていて、その設置に協力している市町村(自治体)の大学に対する関心度の高いことが理解できた。(3)研究代表者は特色ある自治体、この方式で多くの大学を設置している新潟県と両者がよい関係を保って運営されている群馬県と市、大学等を訪問して実態調査を行った。(4)研究分担者はアルバイトを使って、コンピュータ入力をしおえた。自由記述部分の分析や資料の不備の補足については明年度の仕事であり、この調査書に基ずいて研究し、学会報告を行い、報告書を書く予定である。事前に滋賀県の状況について研究をした後、平成11年度・12年度科学研究補助金を頂いたので、平成11年度に質問紙調査の問題紙を作成し、公私協力方式により設置された大学(原則として1980年より1997年まで)108を調査の対象とし、それを支援した自治体である18の県や100の市町村に送付した。県や市町村の自治体からはすべて回収され、地域開発の核としての大学の誘致、進学率の向上と地域の生涯学習のニーズ等に応えるため、大学設置に関心をもち、よい関係を保つことに協力している。一方、80大学からの回収があり、自治体のニーズに合わせそれぞれの方法で努力していることが理解でき、双方いずれも聖幸している旨の海藤であった。なお、この方式による大学の設置は新潟県が一番多いことを知り、とくに県庁と市役所には実態調査に伺い、大学進学率の向上と、卒業生の地元定着を考えておられることを知り、代表的な大学へも訪問する機会を得た。なお、公設民営による大学の設置が5大学あり、それに近い大学・短期大学もあることを知り、いわゆる「自治体がつくる私立大学」についても考察しなければと考え、数校訪問して自治体側と大学とから調査した。

始めから私立大学の設置を考えていた自治体と自治省が許可しなかった大学とがあるが、大学側はこの方式は開学後が厳しいとのことであったが、学校法人としての開学後は、早く完全に民営化することが大切であると考えた。
自然免疫系と獲得免疫系の連繁機構の解析

1.細胞内寄生性病原体(リステリア菌)の感染そのものが樹状細胞に変化を引き起こし、T細胞の抗原特異性に関わらずに、獲得免疫系のシフトを起こす。この感染に伴う宿主の免疫応答は、細胞内に侵入した細菌と宿主細胞との関わりにより活性化され、この活性化はT細胞抗原レセプターによる活性化とは独立したものである。2.リステリア菌は樹状細胞や腸管上皮細胞へ侵入する性質を持つことから、細胞外寄生性細菌の感染による宿主応答とは異なる局面を持つと考えられる。細胞外感染性細菌の感染病態に重要なTLR群は、細胞内寄生性細菌の感染に伴う感染初期遺伝子の発現には密接に関わるものの、宿主免疫系の偏倚、特にTh1/Th2細胞サブセットの偏倚には影響を及ぼさない。さらに、リステリア菌の感染初期に作動する細胞内侵入に関わる遺伝子(InlA/B, hly, mpl, actA, plcB, etc)の欠損変異株を用いたin vitro感染系で、これらの遺伝子群がT細胞を中心とする宿主免疫系の活性化には影響しないことが明らかになった。3.ウイルスと同じく細胞内に侵入する性質を持ち、上皮細胞やマクロファージ、樹状細胞に特異的に感染するリステリア菌を用いた遺伝子導入法の基礎開発を行ってきた。リステリア菌を特異的に分解するファージ由来の酵素をビルレンス遺伝子のプロモーターに結合し、ビルレンス遺伝子発現以前に菌を自己分解する方法がとれる。この考えに基づき、リステリア菌をベクターとして用いた細胞種特異的遺伝子導入法を開発した。この新しい遺伝子導入法を用いたこれまでの解析で、宿主免疫応答を変化させることができることが明らかになった。さらに、極めてわずかのリステリア菌ベクターの腹腔内投与により、脾臓に接種したメラノーマ細胞の増殖がほぼ抑制されることを見いだした。感染症のコントロールは日本および中国の医学・医療において重要な社会的要請の一つである。細菌・ウイルスが感染すると宿主はこれを排除するために感染抵抗性を示す免疫細胞群を誘導し、これは同時にアレルギーに関与する細胞群の誘導を抑制する。したがって、宿主の本来持っているこの機能・機序を明らかにすることが、感染症やアレルギーに対する治療法を考えるうえで極めて重要であると考える。そこで、細菌感染により免疫系が感染抵抗性あるいは抗アレルギー状態になることに着目し、宿主にこのような免疫応答を誘導する細菌遺伝子を同定することから、この問題を解決することを考えた。病原体感染に引き続き、宿主の免疫応答は、感染抗原提示細胞の影響を強く受け、免疫応答が強くTh1優位に偏倚する。そこで、感染初期に宿主にどのような遺伝子発現が生じるかを検討した。腹腔マクロファージにリステリア菌を感染し解析した結果、病原体の表面構造に対するレセプター(TLR)を介するシグナルにより発現する感染初期活性化遺伝子群と、感染に伴い感染細胞から分泌される分子により二次的に活性化される遺伝子群とが認められた。後者の遺伝子群は、リステリア菌が細胞に感染後、細胞質内に移動することにより、何らかの機序により活性化され、TLRを介するシグナルとは異なるシグナルにより誘導される分子により、パラクラインあるいはオートクライン機序により誘導されることが示唆された。