hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
培地循環を伴う植物細胞培養法による抗ガン剤の連続生産プロセスの開発

本研究においては,培地循環型のパクリタキセル(タキソール)連続製造プロセスを実用化するために,主として,1)培養細胞によるパクリタキセルの分泌生産速度の限界を見究め,固定化細胞を用いた灌流培養において,高希釈率で分泌生産を促進し高いパクリタキセル生産性を実現すること,2)培地中の低濃度のパクリタキセルを効率的に回収し,培養系へ戻して循環再利用するタキソール分離方法を確立することである。その結果,以下の知見が得られた。1)溶媒抽出によるパクリタキセル分離法の検討:培地からのジクロロメタン抽出後にノルマルヘキサンによる再抽出を行なうことにより,抽出後の培地の繰り返し使用が可能であり,培養系には大きな影響を与えないことが,明らかとなった。また,他のいくつかの溶媒との比較検討も行なった結果,トリカプリリンなどもジクロロメタンと同様の高い抽出効率があることも示された。2)吸着によるタキソール分離法の検討:チューブリン固定化ビーズ,β-CD固定化ビーズを作成し,吸着特性の検討を行った。チューブリン固定化ビーズは,パクリタキセルとその前駆体10-DABの分離が可能であり,また,他のチューブリン結合型の分裂阻害剤に対しても特異的な吸着特性を示し,抗癌剤のスクリーニング系としても利用可能であることを示した。また,β-CD固定化ビーズも,パクリタキセルを吸着することが示された。3)懸濁物を含む系でのタキサン類およびタキサン類生産細胞の分離:培地中の懸濁物質の存在を考え,膨張層型の分離を念頭に,β-CD固定化した磁気ビーズを作成したところ,タキサン類の高生産細胞を選択的に吸着することが可能であり,磁気による生産細砲の分離・保持が可能であることが示された。4)トータルのタキソール連続生産システムの構築:以上の検討結果から,固定化細胞によるパクリタキセル生産サブシステムと選択的吸着による連続分離システムを組み合わせて,培地循環を伴うパクリタキセル連続生産システムが構築可能であることを示した。本研究においては,「培地循環型のタキソ-ル連続製造プロセス」を実用化することを目標に,主として,以下の2点について検討を行う。主たる検討課題は,1)培養細胞によるタキソ-ルの分泌生産速度の限界を見究めるために,固定化細胞を用いた灌流培養において,高希釈率での律速段階を明らかにし,分泌生産を促進し高いタキソ-ル生産性を実現するリアクターの設計と操作条件を確立すること,2)培地中の低濃度のタキソ-ルを効率的に回収し、培養系へ戻して循環再利用するタキソ-ル分離方法を確立すること,の2点である。どちらの場合も,懸濁物を含んだ系であることを考慮して、前者については,ナイロンメッシュと沈降分離を組み合わせたル-ス固定化,後者については,Expanded Bed Chromatographyの手法の適用を試みる。本年度は交付決定が遅れたこともあり、下記の検討を開始したところである。(1)イチイ培養細胞の包括固定化条件の検討:アルギン酸カルシウムゲルを用いて包括固定化したイチイ培養細胞のタキソ-ル比生産速度を検討した。予想されたように包括固定化によるタキサン類の生産速度は,遊離細胞より低下する傾向が見られた。これは,生成物が培地中で懸濁物質とともに存在するためで、包括固定化すると,このような懸濁粒子の排出が抑制されるものと考えられる。従って、よりル-スな方法による固定化の検討が必要である。また,排出機構についての検討も継続している。(2)灌流培養のためのバイオリアクターの操作条件の検討:固定化細胞を用いた連続反応において、灌流のための培地出口について、沈降管とステンレスメッシュを組み合わせたものを考案し,懸濁物質や比較的小さな粒子のみが培地と同伴して流出することを実証した。

3)懸濁物を含む系でのタキサン類およびタキサン類生産細胞の分離:培地中の懸濁物質の存在を考え,膨張層型の分離を念頭に,β-CD固定化した磁気ビーズを作成したところ,タキサン類の高生産細胞を選択的に吸着することが可能であり,磁気による生産細砲の分離・保持が可能であることが示された。4)トータルのタキソール連続生産システムの構築:以上の検討結果から,固定化細胞によるパクリタキセル生産サブシステムと選択的吸着による連続分離システムを組み合わせて,培地循環を伴うパクリタキセル連続生産システムが構築可能であることを示した。本研究の目的は,「培地循環型のパクリタキセル(タキソール)連続製造プロセス」を実用化するために,主として,以下の2点について検討を行うことである。すなわち,1)培養細胞によるパクリタキセルの分泌生産速度の限界を見究めるために,固定化細胞を用いた灌流培養において,高希釈率での律速段階を明らかにし,分泌生産を促進し高いパクリタキセル生産性を実現するリアクターの設計と操作条件を確立すること,2)培地中の低濃度のパクリタキセルを効率的に回収し,培養系へ戻して循環再利用するタキソール分離方法を確立すること,である。本年度は,以下の検討を行なった。(1)溶媒抽出によるパクリタキセル分離法の検討まず,培地からのパクリタキセルの連続分離プロセスにおいても,分析操作と同様にジクロロメタンを用いた溶媒抽出法が可能であるかの検討を行なった。その結果,培地からのジクロロメタン抽出後にノルマルヘキサンによる再抽出を行なうことにより,抽出後の培地の繰り返し使用が可能であり,培養系には大きな影響を与えないことが,明らかとなった。また,他のいくつかの溶媒との比較検討も行なった結果,トリカプリリンなどもジクロロメタンと同様の高い抽出効率があることも示された。(2)吸着によるパクリタキセル分離法の検討溶媒抽出の場合,培地中の懸濁物質が増えてくると,界面の分離が困難になることが予想されるため,吸着法の検討を行なった。吸着の方法として,パクリタキセルなどのタキサン類を含む培地を疎水性の樹脂(アンバーライトXAD-4)を充填したカラムに通し,吸着樹脂からの溶離の際にタキサン類の濃縮が可能か検討した結果,繰り返し回分操作では,ジクロロメタンに匹敵する性能が得られた。また,パクリタキセルの吸着剤として,チューブリン固定化デキストランビーズ,β-シクロデキストリン固定化ビーズを試作し,吸着特性の検討を行ない,分離剤としての有効性を明らかにした。本研究の目的は、「培地循環型のパクリタキセル(タキソール)連続製造プロセス」を実用化するために,主として,以下の2点について検討を行うことである。すなわち,1)培養細胞によるパクリタキセルの分泌生産速度の限界を見究め,固定化細胞を用いた灌流培養において,高希釈率で分泌生産を促進し高いパクリタキセル生産性を実現するリアクターの設計と操作条件を確立すること,2)地中の低濃度のパクリタキセルを効率的に回収し,培養系へ戻して循環再利用するタキソール分離方法を確立すること,である。(1)吸着によるタキソール分離法の検討:パクリタキセルの吸着剤としてチューブリン固定化デキストランビーズ,β-シクロデキストリン(β-CD)固定化ビーズを作成し,吸着特性の検討を行った。チューブリン固定化デキストランビーズは,パクリタキセルとその前駆体10-DABの分離が可能であり,また,他のチューブリン結合型の分裂阻害剤に対しても特異的な吸着特性を示し,抗癌剤のスクリーニング系としても利用可能であることを示した。また,β-CD固定化ビーズも,パクリタキセルを吸着することが示された。
人間との親和性向上のためのヒューマノイドビジョンシステムの研究

本研究では、人間的なビジョンシステムを「ヒューマノイドビジョン」と呼び、今までに行われてきた画像処理技術のみに留まることなく、あくまでユーザが人間らしさを感じることができるビジョンシステムに主眼をおいた。また、各種の人間から見て人間らしさを感じるインターフェースを考察し、ヒューマノイドビジョンとは何かについて明らかにした。これらの研究のために、我々は2眼のアクティブカメラを搭載したヒューマノイドロボットを独自に製作し、これをテストベッドとして人間との親和性を向上させるインターフェースの実現を目指した。まず、距離の測定、人物の位置の特定、ジェスチャー認識を行い、人間とコンピュータとのより親近感のあるコミュニケーションの研究を行った。その成果を基にヒューマノイドロボットにジェスチャーを模倣させるシステムを製作した。続いて、人間とロボットとの親和性についての研究を行った。人間がロボットを見たときにより人間らしさを感じるためには、ロボットが人間らしく振舞う必要があると考えた。そこで、人間の物体追跡方法を観察し、モデル化することにより人間らしい物体追跡を実現した。ヒューマノイドビジョンの観点から考えれば、人間の物体追跡動作は人間の身体形状に最適化されていると思われ、人間を模したヒューマノイドロボットにおいても、この追跡方法が最適となる可能性がある。まず本研究では、人物に移動するマーカーを追跡させ、眼球と首をどのような関係で動かし追跡行動を行うかを調べた。それにより、ある一定速度までは眼球運動で追跡を行い、その後首を用いることが分かった。また、ある一定速度を超えた追跡では、初めから首を用いて追跡を行う。これらの観測結果を基に人間の物体追跡モデルを作成した。作成したモデルを、ヒューマノイドロボットに搭載することにより、より人間らしい物体認識を実現することができた。近年、ヒューマノイドロボットの研究が多方面で行われている。これらのロボットにしばしばカメラが装着されるが、補助的視覚として用いられるのが一般的である。我々は、「ヒューマノイドロボットの眼は、やはりヒューマノイド的であるべき」との観点から、人間的なビジョンシステムを「ヒューマノイドビジョン」と呼ぶ。ヒューマノイドビジョンの研究では、今までに行われてきた画像処理技術のみに留まることなく、身体全体としての応答性を含め、あくまでユーザが人間らしさを感じることができるビジョンシステムに主眼をおく。又、ヒューマノイドは外見及び内部機能的な面で、より人間をシミュレートできると考えられる。本研究では、各種の人間から見て人間らしさを感じるインターフェースを考察し、ヒューマノイドビジョンとは何かについて明らかにすることを目的として行ってきた。本年度は、新たなロボット制御方法として、「見ることによる学習」を実現した。見ることによって学習することで、プログラムにより動作を生成するよりも、より直感的に動作を生成することができると共に、動作作成時の手間を大幅に減らすことができると考えられる。具体的には、パターンマッチング、色領域検出、多重解像度戦略を用いたステレオマッチングを複合的に用い、ヒューマノイドビジョンの観点から人物の姿勢推定を行った。最終的に、スティックモデルを用い人物の大まかな形状を検出し、各関節点をヤコビ行列を用いた逆運動学を解くことにより推定し、ロボットに模写させることに成功した。そこで、「ヒューマノイドロボットの眼は、やはりヒューマノイド的であるべき」との観点から、人間的なビジョンシステムを「ヒューマノイドビジョン」と呼び研究を行った。ここでは、今までに行われてきた画像処理技術に留まることなく、あくまでユーザが人間らしさを感じることができるビジョンシステムの開発に主眼を置いた。また、人間の視覚システムは認識に最適化され進化したと考えられる。そこで、それを解明しパターン認識技術に応用することも目的とした。

まず、人間の物体の追跡方法を観察することにより、カメラを搭載したロボットの眼球の制御方法の確立を行った。被験者の眼球、頭部を用いた物体の追跡方法を特殊なカメラシステムを用いることで解析し、モデル化を行った。その結果、人間は30度/秒以下の速度で動く物体は、まず眼球運動で追跡を行った後、首を使うことが分かった。また、元に戻る際は、眼球を顔正面まで戻した後、首の運動で追跡した。それ以上の速度で動く物体は眼球、首を同時に動かし追跡した。これは追跡、認識するため、また、必要エネルギーを最小にするために最適な追跡運動と考えられる。この実験により得られた結果を基にモデル化を行った。これを、実際にヒューマノイドロボットYAMATOに搭載した。まず、YAMATOに物体を見せ、それを移動させると、その物体の移動速度から眼球運動から追跡するか、首の運動で追跡するかを行わせた。結果、人間らしい物体追跡運動を実現することができた。
グローバル人材育成と留学の長期的インパクトに関する国際比較研究

北米の回顧的追跡調査(SAGE)を参考に、留学にはどのようなインパクト(効果・影響)があるのかを、過去に留学を経験した4,489人の方々と経験していない1,298人の方々を対象に比較分析した日本初の包括的・体系的なアンケート調査である。項目としては、留学中の経験や留学によって向上した能力、授業への積極性、留学終了後の就職やキャリアへの影響、価値観・行動の変化、人生の満足度などであり、留学がこれらのいずれにも非常に大きなインパクトをもっていることが明らかになった。本研究は留学経験者の現在の状況を把握し、留学がその後の社会生活、仕事、人生等においてどのようなインパクトを持つのかを大規模な回顧的質問紙調査によって調べるものである。更に、回答者のネットワークを形成して、今後留学を希望する学生へのメンタリングシステム等につなげていく。2013年度では、この調査のモデルとなった米国のSAGE調査を研究し、日本版調査のための基礎資料としつつ、新たに調査票を作成した。次に、研究のためのホームページとポータルサイトを立ち上げ、留学経験者のネットワークを構築し、2つの調査を実施した。(1)雇用主調査:留学経験者を雇用している企業9,000社のリストを持つ(株)ディスコに委託し、ウェブによるアンケート調査で423社より回答を得て分析した。(2)留学経験者を対象としたウェブによる大規模アンケート調査を実施し、有効回答3,795票の回答を得た。基本統計、相関分析をはじめ、共分散構造分析を用いて入念な分析を実施した。留学経験者を対象とした大規模調査については、昨年度の予算ですでに約3,800サンプルが収集されたが、目標とする5,000サンプルに近づくために、更なる収集を行った。雇用主調査についてもサンプル収集の追加を実施した。この調査の母体となったSAGE調査に関わった米国ミネソタ大学のジェラルド・フライ教授(Dr.Gerald Fry)を招聘して意見交換を行った。これらの調査概要と更なる協力を求めて、東洋大学との連携で第2回GJ5000パネルディスカッションを開催し、約200名の参加者を得た。留学経験の長期的インパクトを総合的に評価するため、2015年1月5月に大規模なアンケート調査を実施し、留学経験者から有効回答4,489票を得た。比較対照群として、同様の背景を持つ非留学経験者にも同じアンケート調査を行い、1,298票を得て比較検討した。その結果、留学経験が価値観の醸成、能力の向上、現在の年収と役職、外国語の使用頻度、キャリアへの影響、大学の授業への積極性、人生の満足度、行動特徴等に対して多大なる影響を及ぼしていることが判明した。この調査結果を多様な切り口から分析し、国内の学会では、異文化間教育学会、比較教育学会、日本高等教育学会、留学生教育学会等5回、海外の学会では、APAIE、CIES等5回発表し、他にもGo Global Japan EXPOではJASSOとも協力して発表した。また、アンケート調査のほかに留学経験者10名のヒアリング調査を行い、本科研経費からは2名分のトランスクリプトを作成した。さらに、収集した関連文献(主に英文)をリストアップし、その中から重要と思われる16文献については日本語で解題を作成した。この作業については、今後も継続してアップしていく予定である。上記以外にも、これまで実施してきた企業の雇用主調査等の報告を含め、研究成果を明治大学国際教育研究所(RECSIE)のHPにアップし、さらにそれらをまとめて書籍として来年刊行する予定(学文社)である。この研究は、実践として留学経験者とこれから留学を考えている若い世代との橋渡しを行う機能も担っており、複数の大学で実践する授業「留学のすすめ」と連携し、その成果を上記RECSIEの中の「留学のすすめ.jp」で公開している。この活動は、科研終了後も継続していく予定である。雇用主調査については、十分とは言えないが、それでも400社以上を対象とした調査ができた。大規模調査については、調査に必要な3,800ほどのサンプルを集めることができたので、一度分析を行った。非常に有益な各種の分析が行われた。ただし、目標とする5,000サンプルに近づけるため、その後もサンプル収集を続け、2015年5月の時点での分析を最終的なものにすることとした。大規模調査の追加サンプル収集が順調に進み、5,227票のサンプルを収集し、データクリーニング後の有効回答4,489票を得た。調査票の作成を丁寧に行ったために、共分散構造分析を含め、多様な切り口で分析が可能となっており、大規模調査を有効に活かすことができた。実際の分析は現在も継続中である。27年度が最終年度であるため、記入しない。異文化間教育先に述べたように、更なるサンプルの収集を行い、目標とする5,000サンプルに近づけることとした。

現在の分析は、全サンプルを対象として実施したが、今後はアジア留学に絞って分析するなど、得られたデータを多角的に分析することとする。更なる調査に協力していただける場合に、任意で連絡先を記載していただいたが、この数が非常に多く、興味深い事例を抽出してヒアリング調査を行う予定である。雇用主調査の結果も踏まえて、留学経験者対象の大規模調査の詳細な分析を継続して進める。また、興味深いサンプルを抽出してインタビュー調査を実施する。更に、この調査結果を今後に活かすために、GJ5000のサイトを用いて留学経験者と留学希望者のネットワーク形成を進める。研究は2015年夏までに最終的な分析結果を得るので、その後学会やイベントを通して発表していく。27年度が最終年度であるため、記入しない。大規模ネット調査の入り口となるサイト大規模調査の入口となるサイトであり、また、結果を広報するためのサイトである。本科研の研究成果は国際教育研究コンソーシアム(RECSIE)のホームページの中に設定した「日本の留学交流の活性化を目指すグローバル人材5000プロジェクト」において公開されている。
地域防災コミュニティの活性化に向けた支援プログラムの開発に関する研究

本研究は自主防災組織を中心とした地域コミュニティの活性化を支援するプログラムの作成を目指す研究の一環としてなされた。基本計画は2カ年で,初年度は支援プログラムの実施可能性を探ることを目的とし,2年目は,支援プログラムの具体化を探ることを目的とした。これらの目的のために初年度には4つの調査-1.神戸市における防災福祉コミュニティの代表者へのヒアリング調査,2.神戸市における小学校長へのヒアリング調査,3.神戸市における中学校長へのヒアリング調査,4.東京都区部における小学校長へのヒアリング調査-を実施し,2年目には5つの調査-1.神戸市における防災福祉コミュニティを対象とした防災活動事例の収集,2.神戸市の防災福祉コミュニティにおける防災訓練ソフトの試行実施,3.大学生を対象にした防災訓練ソフトの試行実施,4.新潟県豪雨災害の被災地における避難所リーダーへのヒアリング調査,5.新潟県中越地震の被災地における避難所リーダーへのヒアリング調査-を実施した。また,これらの活動と平行して,開発中の防災訓練ソフトの改訂を数度実施し,防災活動の支援ツールとしての完成度を高めた。これらの研究を通じて,地域防災を担うコミュニティづくりの基本を小学校区単位とする構想が規模的に適切であることが確認された。また,地域の防災力を強化するためには,事後のみならず,事前の備えにおいても心の問題に目を向けることの重要性が明らかになった。そのため,地域防災コミュニティの活性化に向けた支援プログラムは,近隣の互助力につながる住民間の交流を促進する方向で開発することにより,単に平常時のコミュニティ活動を活発にするだけではなく,災害発生時のライトレスキューを担う重要な防災力の強化支援ツールとして機能すると考えられる。本研究は地域の自主防災組織を中心としたコミュニティの活性化を支援するプログラムの作成を目指した研究の一環としてなされた。基本計画は2カ年で構想され,本報告はその1年目の成果に当たる。本年度の目的はわれわれの構想する支援プログラムの実施可能性を探ることにあり,この目的のために5つの調査-1)東京都区部における小学校長へのヒアリング調査(港区3校,墨田区4校,杉並区4校の計11校),2)神戸市における小学校長へのヒアリング調査(東灘区2校,灘区1校,兵庫区1校,長田区1校,北区1校の計6校),3)神戸市における中学校長へのヒアリング調査(中央区1校,兵庫区1校,須磨区1校,北区1校の計4校),4)神戸市における自主防災組織(防災福祉コミュニティ)の代表者へのヒアリング調査(東灘区3地区,灘区1地区,中央区1地区,兵庫区2地区,長田区1地区,垂水区1地区,須磨区2地区,西区1地区,北区2地区の計14地区),5)神戸市灘区の区役所および消防署と神戸市教育委員会へのヒアリング調査-が実施された。これらの調査対象はわれわれがコミュニティの基本的な範囲として想定する小学校区と密接に関連することから選ばれた。特に神戸市の防災福祉コミュニティは,われわれの想定と同じく小学校区をその基本としている。調査の結果,コミュニティづくりの基本を小学校区とする構想の規模的適切性は,比較的共通する見解として確認されたが,地域の防災活動に対する小学校の関わり方については,多様な見解が見られた。また,自主防災組織の代表者に対する調査では,小中学校との連携だけでなく,組織の活性化や地域住民の防災意識の向上に向けた具体的な活動事例の聞き取りを行った。こうしたヒアリング記録は現在整理・分析中で,次年度の研究活動の中で,支援プログラムへの具体的な応用を検討する。基本計画は2ヵ年で構想され,本報告はその2年目に当たる。

本年度の目的はわれわれの構想する支援プログラムの具体化を探ることにあり,この目的のために年度当初の計画にもとづく3つの研究活動-1)神戸市における自主防災組織(防災福祉コミュニティ)を対象とした活動事例の収集(東灘区2地区,中央区1地区,兵庫区2地区,長田区1地区,垂水区1地区,須磨区1地区,西区1地区,北区1校の計10地区),2)神戸市の自主防災組織(防災福祉コミュニティ)における防災訓練ソフトの試行実施(灘区1地区,2セッション),3)大学生を対象にした防災訓練ソフトの試行実施(7大学,13セッション)-に,昨年10月に起こった新潟県中越地震の被災地における避難所リーダーへのヒアリング調査(長岡市8カ所,小千谷市11ヵ所)を加え,地域の自主防災組織の活性化に関するデータ収集を行った。また,これらの活動と平行して,開発中の防災訓練ソフトの改訂を数度実施し,防災活動の支援ツールとしての完成度を高めた。これらの研究活動から,地域の防災力を強化するためには,事前の備えにおいても心の問題に目を向けることの重要性が明らかになった。そのため,地域コミュニティの活性化に向けた支援プログラムは,近隣の互助力につながる住民間の交流を促進する方向で開発することにより,単に平常時のコミュニティ活動を活発にするだけではなく,災害発生時のライトレスキューを担う重要な防災力の協力ツールとしても機能する。
会話における同期現象分析 －身体経験を表し合う相互作用の解明－

これまでことば・身体動作の同期については研究者が取り決めた基準にもとづいて分析されてきたが,本研究では会話分析の手法を用いることで,当事者たちが「同時・同型」とみなすジェスチャー表現を同期として扱うことを可能にした.そして,ジェスチャーの同期の産出過程と相互行為上の効果を明らかにすることを目的とした.本年度の成果は以下の4点である.(1)語りの構造とジェスチャーの同期の産出位置:ジェスチャーの同期は,語りのクライマックスと語りの滞りの後に産出されることがわかった.特に二人が共に語りをおこなう際の語りの滞りでは,語りを再開するために,互いの足並みがそろっていることを聞き手に示すためにジェスチャーの同期が用いられることがわかった.(2)相互理解の構築と活動の進行性の両立を可能にするジェスチャーの同期:相互行為の中で理解を示し合ったり,経験を確認し合ったりすることは,相互行為を進めていく上で重要な基盤となる.他方,逐一理解を確かめ合うと,活動の進行性が損なわれ,たとえば一度見ただけの内容を再生するのに,記憶が薄れるという問題が生じる.本研究では,アニメーション再生課題という説明活動において,相互理解の構築と活動自体の進行性との両立にジェスチャーの同期が利用されることを示唆した.(3)pivotal transitionを可能にするジェスチャーの同期:ジェスチャーの同期でも,特に一部分を瞬間的に合わせることで,会話の中でこれまでの会話の展開方向を急激に変化させる場として利用されることがあることを示した.(4)「準備」として身体動作の認識可能性:ジェスチャーの同期を産出するためには,それまでの文脈やことばだけではなく,手や腕の形や動きそのものに,その後のジェスチャー表現のやり方を予測可能にするリソースがあることを実証し,明確な合図を用いなくても同期が可能になる理由を示した.ことばに伴うジェスチャーが複数の人の間でほぼ同時に同じ形で産出されること(同期現象)が会話の進行にどのような影響をおよぼすのかを明らかにするために,本年度は実験環境と介護施設で収録した経験に関する語りを研究した.その結果,会話におけるジェスチャーの同期現象の産出位置,機能,利用される状況について一定の成果を得ることができた.【産出位置】語りのクライマックスで同期現象が産出されやすいことを確認した.これは語り手同士における同期だけでなく,語り手と聞き手による同期でも同様であった.語りの内容を知らない聞き手がどのようにしてジェスチャーを同期させることができるのかを検討する中で,語り手が語りを構成する上で類似のジェスチャーを繰り返し用いることに着目した.ジェスチャーの同期においては、産出前に表現される内容とタイミングをかなり正確に捉えておく必要がある.会話中誰かが繰り返しジェスチャーを用いている様子は,内容を知らない者が同期産出対象を予測する上で有効なリソースとなっていることを明らかにした.【機能】経験したことを生のまま表現するのに擬音語・擬態語が用いられることがある.本研究ではジェスチャーの同期現象と擬音語・擬態語を検討した.その結果,同時産出される擬音語・擬態語表現の多様性をひとまとめにする扇の要としての役割をジェスチャーの同期が担いうることがわかった.【利用される状況】語りの滞りを払拭する手続きとして同期現象が利用される場合を明らかにした.そして,これまでの会話の展開方向を変える場としてジェスチャーの同期が利用されることを確認した.実験環境での会話との比較としてはじめた介護施設のデータを検討した結果,介護職員たちは被介護者へのよりよい介助,また被介護者の自発的行動を引き出すためのはたらきかけの土台として理解を構築するために同期を利用していることを確認した.これまでことば・身体動作の同期については研究者が取り決めた基準にもとづいて分析されてきたが,本研究では会話分析の手法を用いることで,当事者たちが「同時・同型」とみなすジェスチャー表現を同期として扱うことを可能にした.そして,ジェスチャーの同期の産出過程と相互行為上の効果を明らかにすることを目的とした.本年度の成果は以下の4点である.(1)語りの構造とジェスチャーの同期の産出位置:ジェスチャーの同期は,語りのクライマックスと語りの滞りの後に産出されることがわかった.特に二人が共に語りをおこなう際の語りの滞りでは,語りを再開するために,互いの足並みがそろっていることを聞き手に示すためにジェスチャーの同期が用いられることがわかった.(2)相互理解の構築と活動の進行性の両立を可能にするジェスチャーの同期:相互行為の中で理解を示し合ったり,経験を確認し合ったりすることは,相互行為を進めていく上で重要な基盤となる.他方,逐一理解を確かめ合うと,活動の進行性が損なわれ,たとえば一度見ただけの内容を再生するのに,記憶が薄れるという問題が生じる.本研究では,アニメーション再生課題という説明活動において,相互理解の構築と活動自体の進行性との両立にジェスチャーの同期が利用されることを示唆した.(3)pivotal transitionを可能にするジェスチャーの同期:ジェスチャーの同期でも,特に一部分を瞬間的に合わせることで,会話の中でこれまでの会話の展開方向を急激に変化させる場として利用されることがあることを示した.(4)「準備」として身体動作の認識

可能性:ジェスチャーの同期を産出するためには,それまでの文脈やことばだけではなく,手や腕の形や動きそのものに,その後のジェスチャー表現のやり方を予測可能にするリソースがあることを実証し,明確な合図を用いなくても同期が可能になる理由を示した.研究の射程とした2点,「複数の人が産出するジェスチャーの同期がその後の会話の進行にどのような影響を及ぼしているか」「実験環境における経験の語りと職業上で得た経験の語りの差がジェスチャーの同期にどう現れるのか」に関して明らかにする手だてを得た.具体的に,前者については語りの構造と関わりがあること,後者については語りを通してその状況で達成されるべき課題への志向性の差が明らかになった.現段階では新たに得た知見を立証する事例数が足りないため,引き続きデータを増やして検討を進める.本研究課題の最終目標である「実践を緻密に観察する立場から,隣接領域の研究者と共有可能な理論を構築する」ために,会話の発話を単純に追うのではなく,その場で優先される行為と発話の関係を明確にし,その上で語りの構造とジェスチャーの同期の産出位置および達成度に関するモデルを複数構築する.モデル構築にあたり,事例分析結果をまとめることと並行して,脳・神経科学研究の知見も参考にする.
セマフォリン・ネトリン伝達系とトラフィック機構の解析

研究目的神経ガイダンス分子による神経回路形成過程と軸索内輸送との機能的連関とその分子機構を明らかとする。本研究は,期間内に,セマフォリン3A(Sema3A)およびネトリン刺激によって誘発される軸索内輸送、ならびにこれらのリガンド自体の輸送動態を明らかにし,神経軸索分子の細胞内情報伝達のしくみ,シグナルの伝播の様相をメンブレントラフィックの観点から時間的・空間的に明らかとする.我々は神経軸索分子Sema3Aが順行性・逆行性の神経軸索内輸送を惹起することを世界に先駆けて報告した.さらに成長円錐部における局所のSema3A刺激が,その受容体であるニューロピリン-1(NRP-1)とその情報媒介分子の一つFynチロシンキナーゼにより細胞体へと伝播することを示唆する知見を得ている.さらに同輸送の選択性を検討した結果,別のタイプIIIセマフォリンSema3Fの受容体であるニューロピリン-2の輸送は無変化であった.さらにSema3Aが大脳皮質および海馬神経においてシナプスの成熟過程を促進する事実を見出した.またオートファジーに関連するイーストApg1pホモログである線虫UNC-51およびUNC-51と相互作用して働くUNC-14について,その遺伝学的解析,イーストツーハイブリッド法およびRNAi法によるスクリーニングを行った.その結果,unc-51およびunc-14の両変異体において,軸索ガイド分子ネトリンの受容体UNC-5が細胞体部に蓄積する等いずれも同様な異常を示すことを見いだした.反発性軸索ガイド分子Sema3Aによる軸索輸送の亢進について種々の検討を行ったところ、1)Sema3Aの受容体複合体であるNeuropilin-1とPlexin-A4は順行性及び逆行性に細かい粒子状の形態で軸索輸送されること、2)成長円錐部での蛋白翻訳開始因子eIF4Eの活性化を介する局所的蛋白合成系が関与することが判明した。3)Sema3Aシグナルの伝達に、CRMP2のCdk5とGSK3bによる2段階のリン酸化が関わることを見いだした。CRMP2のこのリン酸化は、CRMP2のチュブリンへの親和性の低下をもたらし、その結果として、成長円錐のアクチン細胞骨格の再編が起こると推定された。一方、線虫unc-51、unc-14変異体において、Netrin受容体であるUNC-5の細胞内局在の異常が見出され、またunc-5とunc-51、unc-5とunc-14間に各々遺伝的相互関係があることが判明した。UNC-51は出芽酵母のautophagyに必要なapglp分子と相同なリン酸化酵素であるので、UNC-5の細胞内局在にはautophagy、あるいはそれと類似した小胞輸送の制御が重要である可能性が考えられた。さらにUNC-5およびUNC-6::GFP融合蛋白質を発現する線虫を用い、これらの分子の局在化に関わる分子のスクリーニングを開始した。本研究は,期間内に,セマフォリン3A(Sema3A)およびネトリン刺激によって誘発される軸索内輸送、ならびにこれらのリガンド自体の輸送動態を明らかにし,神経軸索分子の細胞内情報伝達のしくみ,シグナルの伝播の様相をメンブレントラフィックの観点から時間的・空間的に明らかとする.我々は神経軸索分子Sema3Aが順行性・逆行性の神経軸索内輸送を惹起することを世界に先駆けて報告した.さらに成長円錐部における局所のSema3A刺激が,その受容体であるニューロピリン-1(NRP-1)とその情報媒介分子の一つFynチロシンキナーゼにより細胞体へと伝播することを示唆する知見を得ている.さらに同輸送の選択性を検討した結果,別のタイプIIIセマフォリンSema3Fの受容体であるニューロピリン-2の輸送は無変化であった.さらにSema3Aが大脳皮質および海馬神経においてシナプスの成熟過程を促進する事実を見出した.またオートファジーに関連するイーストApg1pホモログである線虫UNC-51およびUNC-51と相互作用して働くUNC-14について,その遺伝学的解析,イーストツーハイブリッド法およびRNAi法によるスクリーニングを行った.その結果,unc-51およびunc-14の両変異体において,軸索ガイド分子ネトリンの受容体UNC-5が細胞体部に蓄積する等いずれも同様な異常を示すことを見いだした.
てんかんに併発する精神障害の発症機序に関する免疫組織学的研究

【目的】てんかんに併発する精神障害の発症機序を明らかにするため,電撃けいれん(ECS)を反復負荷したラットの脳組織を用いて免疫組織学的検討を行った。Wistar系雄性ラットにECS(50mA,0.2sec)を7日間反復負荷することによりY-maze試験での自発的交替行動率の低下とOpen-field試験での自発運動量の増加が引き起こされる。我々は既に,これらの行動障害は抗てんかん薬の前投与によってけいれんを抑制することで改善されること,さらに行動障害に脳由来神経栄養因子(BDNF)は関与しないが,ドパミン神経系の機能亢進が関与していることを明らかにしている。今回は,行動障害発現に関する脳部位を明らかにする目的で神経細胞の早期活動マーカーであるc-Fos蛋白質を指標にして検討を行った。「実験:免疫組織学的検討】ECS動物モデルを用いてECS負荷前に抗てんかん薬のバルプロ酸(400mg/kg〓.p.)を投与し,7日間けいれんを抑制した。そして,7日目のECS負荷24時間後に海馬および前頭皮質のc-Fos蛋白質を測定した。【結果】c-Fos蛋白質は,反復ECS負荷によって海馬歯状回で有意に減少した。しかし,バルプロ酸の前処置はこの減少に影響しなかった。一方,ECS負荷+バルプロ酸前処置群では,ECS負荷群と比較して前頭皮質のc-Fos蛋白質が有意に増加した。【考察】以上の結果より,反復ECS負荷による行動障害に及ぼすバルプロ酸の抑制効果には,前頭皮質が関連している可能性が示唆された。
ビタミンK 依存性タンパク質の生合成機構とビタミンK 代謝酵素の機能解析

PZ遺伝子の基本的な発現機構を追究するため、肝癌細胞株HepG2ではHNF-4αが重要な役割を果たすこと、Sp1がエンハンサーとして働くことを明らかにした。また、妊娠期にPZの血中濃度が高くなることからホルモンがPZ遺伝子の発現調節に寄与している可能性が示唆され、プロゲステロンはPZ遺伝子の発現を亢進することを明らかにした。1.研究を進める上で必要な各種タンパク質、酵素の発現系及び測定系などのシステムの構築を行った。(1)ビタミンK依存(VKD)タンパク質であるプロテインZ(PZ)、血液凝固X因子(FX)並びにこれらの生合成に必要なビタミンKエポキシド還元酵素サブユニット1(VKORC1)及びビタミンK依存γ-カルボキシラーゼ(GCX)のcDNAを用い、ヒト胎児腎臓由来のHEK293細胞にて発現系を構築した。(2)上記タンパク質のcDNAを蛍光タンパク質発現ベクターに挿入し、HEK293細胞にて蛍光融合タンパク質発現系を構築し、生細胞内での目的分子の動態観察を可能にした。(3)ビタミンKの酸化・還元状態をHPLCにて追跡する系を確立し、PZ及びFXはwestern blotによる検出系を確立した。2.PZ遺伝子の発現調節の機構が未知であったため、転写調節機構の解析を行ない、その生合成メカニズムの一端を明らかにした。(1) PZ遺伝子の転写調節領域についてレポーターアッセイを行い、プロモーター及びエンハンサー領域を決定した。(2)上記領域に作用する転写因子をゲルシフトアッセイにて調べた結果、プロモーター領域ではSP1及びHNF-4αが、エンハンサー領域ではSP1が作用することにより転写調節が行われていることを明らかにした。3.PZの遺伝子発現や生合成機構を明らかにするためにPZ欠乏患者及び正常者の遺伝子解析を行い、PZ欠乏症へ寄与する遺伝子多型が存在することを明らかにした。(1)血中PZレベルが低値であった血栓症患者及び正常者の遺伝子解析を行ったところ、PZ欠乏患者群においてこれまで未知であった遺伝子多型を発見した。(2)上記多型を血中PZレベルと比較すると多型を有する症例ではPZレベルが有意に低値であり、PZ欠乏症を遺伝子検査により診断する上で有用である。1.研究を進める上で必要なタンパク質の測定系の構築をおこなった。(1)ビタミンK依存性(VKD)タンパク質であるプロテインZ(PZ)および血中でPZと結合して機能を発揮するPZ依存性プロテアーゼインヒビター(ZPI)の血中動態を調べるため、ELISAによる検出法を確立した。2.周産期におけるPZおよびZPIの変動や習慣流産患者との関係について検討した。(1)正常妊娠におけるPZやZPIの変動をELISAにより測定し、妊娠中に血中のPZおよびZPIが大幅に増加することを明らかにした。(2)習慣流産の患者では、ZPIは正常妊娠と同様に増加したが、PZの増加が正常妊娠に比べ小さく、疾患との関与が示唆された。(3)妊娠におけるPZおよびZPIが変動する原因を培養細胞系を用いて調べると、プロゲステロンやエストロゲンのようなホルモンによってPZおよびZPIの発現が亢進することが明らかになった。(4) PZおよびZPIレベルの個体間での差をみると、PZが低値を示した個体では、ZPIも低値を示し、PZとZPIの血中濃度には相関関係があることが明らかとなり、二つのタンパク質の結合が分子の安定化に寄与する可能性や遺伝子発現調節メカニズムに共通性がある可能性などが示唆された。3. PZとX因子(FX)のin vitro発現系を用いてビタミンKやビタミンK代謝阻害薬であるワーファリンの影響について観察した。(1) PZはビタミンKに依存して分泌されるのに対し、FXはビタミンKに非依存的な分泌形式であることが明らかになった。(2)それぞれの因子のドメインを入れ替えることによって上記の現象の原因を調べると、タンパク質のプロペプチドおよびGlaドメインがビタミンKへの依存性やワーファリンに対する感受性を決定することが明らかになった。1.プロテインZ(PZ)とPZ依存性プロテアーゼインヒビター(ZPI)の発現調節機構を調べた。(1)PZを内在的に発現する肝癌細胞株HepG2を用いて、エストロゲンおよびプロゲステロンのPZ遺伝子発現に及ぼす影響をRT-PCRを用いて調べたところ、プロゲステロンがPZの発現を亢進させることが明らかになった。(2)同様にZPIの発現に及ぼすエストロゲンおよびプロゲステロンの作用をRT-PCRにて調べたところ、ZPIの発現には有意な差が見られなかった。(3)PZの遺伝子発現に対するエストロゲンおよびプロゲステロンの影響をさらに詳細に調べるため、ルシフェラーゼレポーターアッセイをおこなったところ、RT-PCRの結果と同様に、プロゲステロンがPZの発現を亢進させることが明らかになった。(4)PZの遺伝子発現に対するビタミンKの影響を調べると、ビタミンK2の存在下ではPZの発現が亢進することが、HepG2細胞を用いたRT-PCRにより明らかになった。

2.昨年度において、血中PZレベルが低値を示した習慣流産の患者について遺伝子多型解析をおこない、遺伝子多型の有無と血漿PZレベルおよび血漿ZPIレベルとの関係について調べた。PZおよびZPIの発現へのホルモンの影響は、さらに多くのホルモンについて調べる必要がある。また、PZおよびZPIは複合体の形成が重要であることから、血漿PZ-ZPI複合体の測定系の構築が必要である。
褥創発生リスクの高い集中治療室入室患者における褥創発生予防

褥創発生を予測し、最も減圧効果があると示唆されたセル型圧切替式エア-マットレス使用しても褥創が発生する。その予防には減圧されながらも低下する個々の組織耐久性の変化をとらえて褥創発生を予測する必要があると考えた。今回、エア-マットレスで減圧しても褥創発生に至った集中治療室入室患者を対象に事例検討を行い、どのような要因が変化し、また各要因がどのように出現して発生に至ったかを明らかにし、発生を予測する方法を検討した。対象は金沢大学医学部附属病院集中治療室に1992年8月1994年12月に入室し、日本語版ブレ-デンスケール14点以下の褥創発生危険者でセル型圧切替式エア-マットレスを導入したにもかかわらず発生に至った患者5名であった。方法は、レトロスペクティブな事例検討を行った。褥創発生要因はブレ-デンらの褥創発生要因の概念を基に組織耐久性の側面から抽出した。その結果、1.組織耐久性の中で変化する要因として、38°C以上の発熱、10g/dl以下の低ヘモグロビン、100mmHg以下の収縮期血圧の低下、酸素投与下での100mmHg以下の低酸素分圧、手術または呼吸・循環停止などの全身への侵襲、下熱に伴う全身の発汗であった。2.発生要因の現れ方は、全身への侵襲後に発熱、低ヘモグロビン、収縮期血圧の低下、低酸素分圧が35日以内に重なり褥創発生に至った。これらの要因は、組織における酸素の受容と供給バランスにかかわり、褥創好発部の組織に虚血をもたらすと考える。以上より、褥創発生予測には、発生リスクの査定と引き金となる要因を加えたものが重要であることが示唆された。今後は対象数を増やし、プロスペクティブな検討を行い褥創発生予測スケールの開発を行いたい。
リピドラフトを介した細胞内寄生菌のマクロファージ内侵入および輸送機構の解析

ブルセラ属菌は人獣共通感染症の一つであるブルセラ症の原因菌で、波状熱あるいは流産などの症状を惹起する。本菌は細胞内寄生菌であり、ファゴソームとリソソームの融合を阻止することによってマクロファージ内で増殖するものと考えられている。このメカニズムは未だ不明な点が多いが、本菌の細胞内増殖能とブルセラ症の発症機構には密接な関係があると考えられている。我々のこれまでの研究により、ファゴソーム膜上の分子の選別が菌の細胞内増殖に重要であることが示されている。ブルセラ菌を含むファゴソームにはリピドラフトの構成分子が集積し、多くの膜貫通型蛋白質が排除される。我々の研究と同時期に細菌以外のウイルス、原虫の感染にもリピドラフトの関与が示唆されている。そこで本研究ではリピドラフトが微生物感染におけるゲートウェイとしての機能を持つという仮説を立て、これを実験的に立証し、そこから得られた成果を基盤にした新たな感染防御法の構築を模索する。具体的には、ブルセラ菌の産生する病原因子が宿主細胞に及ぼす作用を解析し、菌の細胞内増殖のメカニズムの解明を試みた。ブルセラ症の最大の特徴は流産を引き起こすことであり、そのメカニズムを解明するためにマウスを用いた流産モデルの作成を行った。菌感染により母体のTh1/Th2サイトカインのバランスが崩壊し、妊娠の維持が阻害されることにより流産するものと考えられた。また、栄養膜巨細胞が菌の胎盤内増殖において重要な役割を果たしており、菌の細胞内増殖が流産に必須であることが示唆された。栄養膜巨細胞は胎盤形成において重要な役割を果たしていると考えられているが、その詳細な機能は不明な点が多い。菌が栄養膜巨細胞に感染し、その機能を阻害することによってTh1/Th2サイトカインバランスの崩壊および胎盤形成阻害が引き起こされ、流産する可能性も考えられる。本研究ではブルセラ菌の病原因子としてLPSに注目し、その宿主細胞側レセプターとしてクラスAスカベンジャーレセプター(SR-A)の役割を中心に解析し、菌のマクロファージ内増殖における役割を検討した。SR-Aに対するモノクローナル抗体でマクロファージを処理したところ、Brucella abortusの細胞侵入が阻害された。SR-Aはいくつかのグラム陰性細菌のLPSに結合することが報告されている。そこでB.abortusから分離されたLPSでマクロファージを処理したところ、菌の細胞侵入が阻害された。これらの結果から、SR-AはB.abortus LPSのレセプターである可能性が示唆された。SR-Aとリピドラフトの関係を調べるために、菌感染マクロファージの膜上に存在するリピドラフトを分離しSR-Aの局在を検討した。菌が感染していないマクロファージでは、細胞膜上に存在するSR-Aはリピドラフト中に含まれないことが示された。B.aborusの野生株が感染した場合、SR-Aはリピドラフト中に含まれその局在が変化することが認められた。一方、細胞内増殖能を欠くB.aborusのvirB4変異株では、SR-Aはリピドラフト中に含まれず菌が感染していない細胞と同様の局在を示した。SR-Aノックアウトマウスからマクロファージを分離し、B.abortusを感染させたところ、その細胞侵入および細胞内増殖効率が正常マウスのマクロファージに比べ減少していた。また、SR-Aノックアウトマウスの腹腔内に菌を接種し脾臓内での菌の増殖を検討したところ、正常マウスの脾臓に比べ菌の増殖が阻害された。ブルセラ属菌に対するマクロファージ上のレセプターはいくつか存在すると考えられる。本研究ではSR-AがB.abortusのLPSに対するレセプターとしての役割を持つことが示された。SR-Aを介した細胞内シグナル伝達機構は不明な点が多い。膜貫通型蛋白質として知られるSR-Aが菌の感染時にリピドラフト中に集積することから、細胞内へのシグナル伝達に何らかの役割を持つことが推測される。virB4変異株の感染では、リピドラフトにおけるSR-Aの集積が認められないことから、LPS以外の細菌側因子がSR-Aのリピドラフトへの集積に何らかの関係があると考えられた。これらのことから、細菌側の病原因子がSR-Aのリピドラフトへの集積を促進し、SR-Aを介したシグナル伝達が菌の細胞侵入および細胞内増殖に重要な役割を果たしていることが示唆された。

そこで本研究ではリピドラフトが微生物感染におけるゲートウェイとしての機能を持つという仮説を立て、これを実験的に立証し、そこから得られた成果を基盤にした新たな感染防御法の構築を模索する。具体的には、ブルセラ菌の産生する病原因子が宿主細胞に及ぼす作用を解析し、菌の細胞内増殖のメカニズムの解明を試みた。ブルセラ症の最大の特徴は流産を引き起こすことであり、そのメカニズムを解明するためにマウスを用いた流産モデルの作成を行った。菌感染により母体のTh1/Th2サイトカインのバランスが崩壊し、妊娠の維持が阻害されることにより流産するものと考えられた。また、栄養膜巨細胞が菌の胎盤内増殖において重要な役割を果たしており、菌の細胞内増殖が流産に必須であることが示唆された。栄養膜巨細胞は胎盤形成において重要な役割を果たしていると考えられているが、その詳細な機能は不明な点が多い。菌が栄養膜巨細胞に感染し、その機能を阻害することによってTh1/Th2サイトカインバランスの崩壊および胎盤形成阻害が引き起こされ、流産する可能性も考えられる。
ERストレス由来アポトーシスにおけるER局在Caspase-8の役割の解明

1)PC-12細胞のER膜におけるcaspase-8局在の確認:密度勾配遠心分離を用いた細胞分画法により得られた細胞内膜フラクションにおいて、抗caspase-8抗体によるウエスタンブロットを行い、ラット副腎褐色細胞腫PC-12細胞におけるcaspase-8の細胞内局在を調べた。平成15年度の研究においてER膜フラクションにprocaspase-8と思われるバンドを検出していたが、新たに二次元電気泳動ウエスタンブロット等を用いた詳細な検討から、ER膜においてもprocaspase-8が存在し、既知の細胞膜局在procaspase-8と同じく、procaspase-8A,-8B両バリアントが存在するという結果が得られた。また、この過程において、細胞膜、cisゴルジ膜、及びER膜の各膜フラクション間のprocaspase-8A,-8Bバリアントの量を比較した結果、cisゴルジ膜では-8Bが優勢であったが、ER膜では細胞膜と同じく-8Aが優勢であるという結果が得られた。(投稿準備中)2)蛍光顕微鏡を用いたER局在caspase-8活性の検出法の確立:PC-12細胞において、ERストレス由来アポトーシスをTunicamycin(N-glycosylation阻害剤)、Thapsigargin(ER局在Caポンプ阻害剤)等のERストレスインデューサーを用い誘導し、procaspase-12の切断活性化が確認できる条件下で、ER膜マーカーと抗caspase-8抗体を用いた免疫細胞染色を行い、ER膜局在caspase-8活性化の蛍光顕微鏡観察による検出を試みた。しかし、PC-12細胞におけるER局在caspase-8染色像の有意な変化を捉えることは出来なかった。画像解析を行った結果においても同様であった。1)PC-12細胞のERにおけるcaspase-8局在の確認:ショ糖密度勾配遠心分離を用いた細胞分画法により得られた各膜フラクションにおいて、抗caspase-8抗体によるウェスタンブロットを行い、PC-12細胞におけるcaspase-8の細胞内局在を調べた。その結果ER膜フラクションにもcaspase-8と思われるバンドを検出したが、正確な分子量を確定するまでは至らず、procaspase-8なのかそれともprocaspase-8L等のバリアントであるのか詳細な検討が必要となった。ラットにおけるcaspase-8バリアントの報告は初めてとなるため慎重に解析を進めている。そのため、caspase-8抗体を用いた蛍光顕微鏡観察による、caspase-8のPC-12細胞におけるER局在性の確認も結論は出せていない。2)ERストレス由来アポトーシスにおける各caspase familyの活性:ERストレス由来アポトーシスをTunicamyc in(N-glycosylation阻害剤)、Thapsigargin(ER局在Caポンプ阻害剤)等のERストレスインデューサーを用い誘導し、procaspase-12の切断活性化が確認できる条件下で、蛍光基質を用いcaspase familyの活性のタイムコースを調べた。実行caspaseであるcaspase-3が活性化されているにも関わらず、両薬剤処置群のミトコンドリアcaspaseであるcaspase-9の活性およびその経過に差異が認められた。そこでCaspase-9インヒビターを両薬剤と併用したところ、アポトーシスの抑制率に顕著な差が認められた。このことから少なくともある種のERストレス由来アポトーシス実行過程に、ミトコンドリアcaspase-9以外のcaspase-3活性化因子の存在が示唆された(投稿準備中)。