hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
慢性疼痛の中枢機構の解明と新規治療法への展開

前帯状回皮質は痛みの認知や情動的要素に関与する脳部位であり、慢性疼痛の発生に深く関わっている。このため、前帯状回皮質における可塑的的変化が、慢性疼痛の神経機構として考えられるが、そのメカニズムには不明な点が多い。本研究において、ホールセルパッチクランプ法を用いた実験結果から、末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、興奮性シナプスの伝達効率増加が生じ、興奮性伝達物質の放出確率および放出可能シナプス小胞数がともに増大していることが明らかとなった。また、光学的膜電位測定法を用いた実験結果から、同部位において、興奮伝播の範囲増強が生じていることが明らかとなった。末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、興奮性シナプス伝達の伝達効率増加が生じることが知られている。昨年度、素量子解析を用いて詳細に検討したところ、末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、正常マウスと比較して、興奮性伝達物質の放出確率及び放出可能シナプス小胞数がともに増大していることが明らかとなった。しかしながら、前帯状回皮質における局所神経回路の動作機構が、慢性疼痛刺激によりどのように変化するかは不明である。そこで光学的膜電位測定法を用い、局所神経回路の動作機構が、慢性炎症性疼痛刺激によりどのように変化するかを検討した。野生マウスおよび慢性疼痛モデルマウスの前帯状回皮質を含むスライス標本を作製し、膜電位感受性色素(RH-414)を負荷した。そして、前帯状回皮質第3層下部に刺激用のタングステン電極を刺入し、通電によって生じる興奮伝播の時空間パターンを野生マウスおよび慢性疼痛モデルマウス間で観察した。野生型マウスおよび慢性疼痛モデルマウスの前帯状回皮質スライス標本では、第3層下部刺激によって生じる興奮が第2/3層に垂直伝播し、そこから第2/3層内で水平的な伝播が認められた。慢性疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、野生型マウスに比べて、皮質第2/3層での水平方向の興奮伝播範囲が大きく、その時間経過も延長していた。これらの結果から、慢性炎症性疼痛刺激により、前帯状回皮質における興奮伝播の増強が生じる可能性が示唆された。前帯状回皮質は痛みの認知や情動的要素に関与し、慢性疼痛患者では同部位に機能的変化が生じる可能性が示唆されている。本研究では慢性疼痛モデルマウスを使用し、前帯状回皮質において、シナプス機能変化の検討を行ってきた。その結果、末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、興奮性シナプスの伝達効率増加が生じ、素量子解析の結果から、興奮性伝達物質の放出確率および放出可能シナプス小胞数が共に増大していた。また、光学的膜電位測定法を用いた実験結果から、末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、野生型マウスと比較して皮質第2/3層での水平方向の興奮伝播の範囲が大きく、その時間経過も延長していた。これらの結果から、前帯状回皮質における興奮性シナプスの伝達効率増加および、それに伴って生じる興奮伝播の範囲増強が、慢性疼痛の中枢神経機構の一端であることが明らかとなった。本年度は、前帯状回皮質における興奮性シナプス伝達効率増加に寄与する細胞内情報伝達系を明らかにすることを目的とした。アデニル酸シクラーゼI型ノックアウト(AC1 KO)マウスに対して慢性炎症性疼痛モデルマウスを作製し、興奮性シナプス伝達効率および疼痛感受性の変化を検討した。その結果、野生型マウスと比較して、興奮性シナプスの伝達効率増加が優位に小さく、また、疼痛閾値が上昇していた。このことから、末梢性炎症疼痛モデルマウスの前帯状回皮質において、AC1が興奮性シナプスの伝達効率増加に寄与している可能性が示唆された。前帯状回皮質は痛みの認知や情動的要素に関与し、慢性疼痛患者では前帯状回皮質に機能的変化が生じる可能性が示唆されている。それにもかかわらず、慢性疼痛が前帯状回皮質にどのような影響を与えるかについて着目した研究は少なく、シナプス伝達機能変化に関する知見は非常に少ない。申請者のこれまでの研究により、末梢炎症性疼痛モデルマウスや神経因性疼痛モデルマウスの前帯状回皮質では、興奮性シナプス伝達において、伝達効率の増加が生じることが明らかとなった。しかしながら、興奮性シナプス伝達の伝達効率の増加が、興奮性伝達物質の放出確率上昇によるものか、あるいは、放出可能シナプス小胞数の上昇によるものかは明確ではない。そこで本研究では、末梢炎症性疼痛モデルマウスおよび神経因性疼痛モデルマウスを使用し、前帯状回皮質における興奮性シナプス伝達の素量子解析を行った。

正常マウスおよび慢性疼痛モデルマウス(生後6-8週齢)の脳スライス標本を作成し、前帯状回皮質第2/3層の錐体細胞にパッチクランプを行い、微小興奮性シナプス後電流(mEPSC)及び刺激誘発性興奮性シナプス後電流(eEPSC)を記録した。素量子解析により、末梢炎症性疼痛モデルマウスでは、正常マウスと比較して、興奮性伝達物質の放出確率及び放出可能シナプス小胞数がともに増大していた。一方、神経因性疼痛モデルマウスでは、正常マウスと比較して、興奮性伝達物質の放出確率のみが増大しており、放出可能シナプス小胞数は変化していなかった。これらの結果から、疼痛モデルの種類に応じて、シナプス前終末に生じる影響が異なることが明らかとなった。膜電位感受性色素を用いた光学的測定法の結果、慢性炎症性疼痛モデルマウスでは、コントロール群マウスと比較して、前帯状回皮質第3層下部刺激によって生じる興奮伝播範囲が拡大していることを観察した。このように、慢性炎症性モデルマウスの前帯状回皮質において、局所神経回路の動作機構変化を明らかにすることができたため、概ね期待した結果が得られたといえる。しかしながら、この興奮伝播範囲の拡大に、TASK1/3チャネルが関与しているか否かを薬理学的に明らかにしようと試みたが、十分な結果が得られていない。このことから、当初の研究計画よりもやや遅れている。平成23年度は、はじめに、慢性疼痛モデルマウスの確立を試みた。末梢炎症性疼痛モデルマウスは、マウスの後肢に起炎症物質であるComplete Freund's Adjuvant(CFA)を注入することにより作製した。神経因性疼痛モデルマウスは、マウスの腓骨神経を結紮することにより作製した。末梢炎症性モデルマウスおよび神経因性疼痛モデルマウスともに、後肢への機械的刺激に対する痛覚閾値の低下が約2か月持続したため、慢性疼痛モデルマウスとして有用であることを確認した。次に、これらの慢性疼痛モデルマウスを用い、前帯状回皮質におけるシナプス機能変化を確認した。両マウスともに、正常マウスと比較すると、前帯状回皮質では興奮性シナプス伝達の伝達効率の増加が生じていたため、これらのシナプス機能変化が慢性疼痛の神経基盤である可能性が示唆された。さらに、素量子解析により、疼痛モデルの種類に応じて、シナプス前終末に生じる影響が異なることを明らかにした。平成23年度は、慢性炎症性モデルマウスおよび神経因性疼痛モデルマウスの前帯状回皮質において、シナプス機能変化を明らかにすることができたため、おおむね計画通り進展していると考えている。今年度は、慢性疼痛時における興奮伝播増強機構をさらに検討する。興奮伝播におけるイオン機序として漏洩Kチャネルに着目し、興奮伝播に果たす役割を検討する。まず、正常マウスのスライス標本を用いて実験を行い、バリウム(TASK1チャネル拮抗薬)または亜鉛(TASK3チャネル拮抗薬)投与前後で興奮伝播様式を記録する。得られる結果から、正常マウスの興奮伝播におけるTASK1又はTASK3チャネルの役割を検討する。次に、同様の実験を慢性疼痛モデルマウスのスライス標本を用いて行い、バリウムまたは亜鉛が興奮伝播様式に果たす役割を検討する。また、子宮内電気穿孔法を用いたTASK1/3遺伝子ノックダウンマウスを用い、興奮伝播および慢性疼痛におけるTASK1/3チャネルの役割を検討する。これらの結果から、慢性疼痛時の興奮伝播における漏洩Kチャネル(TASK1又はTASK3チャネル)の役割を明らかにする。
レーザー光信号統計処理による高分解能微小循環(血液・髄液流)計測用機器の試作

レーザー光を被照射部位まで誘導するのに光ファイバーを用いた単一モードや参照光方式の光学系ではドプラ周波数シフト(△f)を得るのに多くの困難が存在した。これらの光学系による流れのシミュレーション実験によって、△fとして得られる信号成分のなかには信号そのものに強い影響を与える1KHz以上下の低周波成分が存在することを理論的につきとめた。つまり1KHz以下の周波数成分に流れとは無関係のレーザー光自体のゆらぎや管壁からの強い反射などの成分が含まれることがわかった。一方髄液などの流れの遅い循環系では計算上1KHzのΔfを得ることからこの両者を満足する信号処理が必要であった。ΔfはFast Fourcer Transformation(FFT)によりバワースペクトラムを得るが、この前の段階でband-pass filterを入れること及び演算回路に加算平均処理を利用するなど(Δfが1KHz附近が予測される場合)の工夫を行った。また生体の循環は心周期に一致して変化するので同一条件で加算平均を得るのには心収縮より一定時間を経た後の信号を得る必要があった。結局光学系では前2者よりも感度のよいfringe modeを用い再現性のよいデータが得られた。このようにして血流・髄液流共にΔfと最大流速との間には両軸対数直交座標で表すと良好な直線関係が得られΔfから流速を測定することが可能であった。レーザー照射は被検体血管にどれくらい安全であるかについてはレーザー光特有の細胞変性をふくむ組織変化が異常所見としてとらえられ、安全使用基準も検討できた。このようにして本研究の目的である侵襲の少ないレーザードップラ流速計の基礎的開発段階を終えることができた。次の段階はよりコンパクトな臨床応用段階のLaser Doppler Velocimeter (LDV)に仕上げる段階と思われる。【◯!1】レーザードップラー信号の統計処理を行う演算回路を高速化した。これをon line systemで行えるようセットした。【◯!2】レーザー光照射が生体資料に与える影響についての検討を行った。【◯!3】生体資料に照射する場合、レーザー発生装置と統計処理部分及びこれらと生体とを結ぶ光ファイバーが必要になり、光ファイバー(φ50μm)を破損しないようなコード保護膜の作成が必要である。またファイバーの先端処理やマイクロレンズ装着、光ファイバーコネクターなどの一体となった微動装置の試作と改良を行った。【◯!1】によりドップラー信号の高速演算統計処理が必要となった。【◯!2】実験動物の動脈を清潔な操作により露出してHe-Neレーザービームを微小に収束させてあて、透過率可変フィルターにより、レーザー光のエネルギー密度や照射時間を変化させて条件を設定した。その病理学的変化を急性期及び遅発性障害も加え4週目の慢性期にわたって光顕・電顕レベルで検討した。その結果27/2mWのHe-Neレーザービームを直径200μmのspotとして照射した場合、連続照射時間3600秒、エネルギー密度90W/【cm^2】をこえない範囲で使用すれば生体に安全に使用できることがわかった。この際の病理変化の主体はレーザー光の照射された血管壁の限局性浮腫及び平滑筋層細胞核の消失であった。これらの所見は慢性例にもみられ永続する傾向があった。したがって本試作機は時間を限って使用すれば生体にとって安全、無害のものとなり得ることが証明された。【◯!3】については光ファイバーの保護カバー,レンズなどファイバー先端の処理,マイクロレンズ装着部分,数ミクロン単位で照射角度・位置を可変できる装置の一体となったもので実用性の高いものへの改良を加えつつあるところである。まだ目的を満足するものはできていない。
多発性嚢胞腎のDNA診断法の開発と腎嚢胞形成関連遺伝子の単離

1。高頻度に発症する常染色体優性遺伝病である多発性嚢胞腎(PKD1)の直接DNA診断法を確立した。PKD1遺伝子は46個のエキソンからなるが、まずユニークな塩基配列を持つエキソン34から46をカバーするプライマーを用いて患者のゲノムDNAを鋳型にPCR-SSCP法による解析をおこなった。エキソン45におけるCAGからTAGへのナンセンス変異(Gln4124stop)、イントロン43の20塩基の欠失変異をそれぞれ1家系に見い出した。イントロン42に大きさが異なる複雑な5ケのアリルを見いだした。患者123名中10名にエキソン46においてGACからGAT(Asp4234Asp)への変異、患者107名中7名にエキソン43におけるGCCからGCA(Ala3910Ala)のsingle nucleotide多型を検出した。エキソン1から33の領域については類似の塩基配列をもつ遺伝子が同じ染色体の別の領域に複数存在するためPKD1ユニーク領域からのアンカーPCR、RT-PCRを行ってWAVEによる解析を進めている。現在約200名の患者のゲノムDNAおよびRNAを鋳型にして全領域における変異検出を目指し施行中である。2。腎嚢胞形成関連遺伝子を単離するために(1)PKD 1 cDNAプローブを用いてヒトゲノムBACライブラリーをスクリーニングし、26クローンを得た。FISH法を用いて7個のクローンを16p13に、19個のクローンを16番以外の染色体にマップした。これらのBACクローンDNAを制限酵素消化後パルスフィールドゲル電気泳動を行った。PKD 1 cDNAプローブを用いてサザンハイブリダイゼーション法による解析を行い、PKD 1様遺伝子を含んでいると予測されるDNAバンドを同定した。22q12に座位したクローン12B9,1p13に座位したクローン461G12から4個のDNA断片を精製し、サブクローニングを行った。さらに他のクローンについてサブクローニングをおこなっている。DNA配列決定後ホモロジー検索、完全長cDNAの単離へと進める。(2)手術によって採取された多発性嚢胞腎患者の腎臓からRNAを調製した。正常腎および多発性嚢胞腎由来RNAを鋳型にしてcDNAを作成し。上流プライマー24種類、下流プライマー9種類を組み合わせ計216のPCR反応によるデイファレンシャルディスプレイ法を行った。アクリルアミドゲル電気泳動におけるバンドパターンを比較し、2つの標品における違いを検出した。正常腎にのみ検出されたバンドは40個、嚢胞腎にのみ検出されたバンドは25個であった。これらのPCR産物のDNA配列を決定し、発現の違いの確認をしている。1。2。

1.高頻度に発症する常染色体優性遺伝病である多発性嚢胞賢(PKD1)の直接DNA診断法を確立するためにPKD1にユニークな塩基配列を持つエキソン32から46までの領域における特異的な配列をプライマーに患者のゲノムDNAを鋳型にPCR-SSCP法による解析をおこなった。イントロン42に大きさが異なる複雑な5ケのアリルを見いだした。heterozygosityが高く家系内連鎖解析に非常に有用な多型マーカーであった.エキソン46コドン4234においてGACからGATへの変異を患者107名中7名に見い出した.コドンはどちらもアスパラギン酸であり、single nucleotide多型であった.エキソン45コドン4124におけるC12581Tへの変異でグルタミンから停止コドンへのナンセンス変異を1家系に見い出した。エキソン1から31の領域は類似の塩基配列をもつ遺伝子が同じ染色体の別の領域に複数存在するためユニーク領域の5 ́末端とユニークでない領域のプライマーをデザインし、RT-PCRを行った。現在約200名の患者のゲノムDNAおよびRNAを鋳型にして全領域における変異検出を目指してPTT法、CFLP法による解析を施行中である。2.腎嚢胞形成関連遺伝子を単離するためにPKD1cDNAプローブを用いてヒトゲノムBACライブラリーをスクリーニングし、26クローンを得た。FISH法を用いて7個のクローンを16p13に、19個のクローンを16番以外の染色体にマップした。これらのBACクローンDNAを制限酵素消化後パルスフィールドゲル電気泳動を行った。PKD1cDNAプローブを用いてサザンハイブリダイゼーション法による解析を行い、PKDl様遺伝子を含んでいると予測されるDNAバンドを同定した。22q12に座位したクローン12B9,1p13に座位したクローン461G12から4個のDNA断片を精製し、サブクローニングを行った。現在塩基配列を決定中である。1。高頻度に発症する常染色体優性遺伝病である多発性嚢胞腎(PKD1)の直接DNA診断法を確立した。PKD1遺伝子は46個のエキソンからなるが、まずユニークな塩基配列を持つエキソン34から46をカバーするプライマーを用いて患者のゲノムDNAを鋳型にPCR-SSCP法による解析をおこなった。エキソン45におけるCAGからTAGへのナンセンス変異(Gln4124stop)、イントロン43の20塩基の欠失変異をそれぞれ1家系に見い出した。患者123名中10名にエキソン46においてGACからGAT(Asp4234Asp)への変異、患者107名中7名にエキソン43におけるGCCからGCA(Ala3910Ala)のsingle nucleotide多型を検出した。エキソン1から33の領域については類似の塩基配列をもつ遺伝子が同じ染色体の別の領域に複数存在するためPKD1ユニーク領域からのアンカーPCR、RT-PCRを行ってWAVEによる解析を進めている。2。腎嚢胞形成関連遺伝子を単離するために(1)PKD1cDNAプローブを用いてヒトゲノムBACライブラリーをスクリーニングし、26クローンを得た。
オーデンとマクニースのリブレットおよびラジオドラマのインターメディア的研究

オーデンのリブレット及びラジオドラマとマクニースのラジオドラマを、可能なものは草稿も見て、完成した脚本のテクストと比較した。ラジオドラマの場合、放送テープのデジタル化したものを聴取して音楽の使用法を検討した。オーデンはストラヴィンスキーに英詩の韻律の特徴と音楽の付しかたを教えており、リブレットを書く際にもここはアリアでもレチタティーヴォでも構わないという柔軟性に富む指示をしている箇所が多数あった。マクニースはオーデンほど音楽に熱心ではないがDark Towerの成功における作曲家ブリテンの貢献を大きく評価しており、音楽以外の効果音にもこだわっていることが判った。本年度は、オーデンとコールマン共作のリブレットとマクニースのラジオ・ドラマの読解・解析を進めた。また、ニューヨーク・パブリック・ライブラリーでリブレットDeliaの草稿を調査した。タイプ稿に手書きで書き込みのあるものが2つ残されている。つまり、単なる思いつきにおわった未完の作品ではなくて、リブレット(オペラ台本)としては、丁寧な作業をへて完成に至っているものであることが判った。この作品は作曲家ストラヴィンスキーのために書いたものだが、最終的にはストラヴィンスキーが曲を付すことはなかった。ただし、草稿を見ると、ここはアリアであるとか、ここはレチタティーヴォであるとか、ところによってはアリアとレチタティーヴォの領域を可変的に設定しているところもあることが判った。つまり、オーデンとコールマンは、前作The Rake's Progressの経験にのっとり、きわめて具体的にオペラ台本として書き進めていたことがわかった。また、題材として騎士ものであり、バロック・オペラが参照軸として存在していることをうかがわせるものであった。ただし、バロック期に多かったのが、イタリアの詩人アリオストの叙事詩『狂えるオルランド』やタッソの叙事詩『解放されたエルサレム』を原作とするものが多いのに対し、本作は、George PeeleのThe Old Wives' Taleにもとづいている。また、ストーリーに寓意的要素が強く、反写実的、反自然主義的なのは、前作The Rake's Progressと共通している。本年度は、オーデンとコールマン共作のリブレットにストラヴィンスキーが作曲した《放蕩者のなりゆき》の成立事情を調査した。そのためストラヴィンスキーの第一次資料を収集しているバーゼルのパウル・ザッハー財団のアーカイブでストラヴィンスキーの自筆楽譜のマイクロフィルムおよびオーデンとコールマンのリブレット自筆稿のマイクロフィルムを閲覧した。また、製作から初演にいたる間の作曲家、リブレッティスタおよび劇場関係者の間でやりとりされた書簡(マイクロフィルム)を閲覧したが、劇場関係者がコールマンの存在に当惑していることが判明した。当初はオーデンが単独でリブレットを書くことが想定されていたのである。また、作曲を開始する前に、オーデンがストラヴィンスキーに、英詩の音韻、韻律について一週間集中的に教授していることもわかった。これらの葉書・書簡は書簡集にも掲載されていないものもあった。パウル・ザッハー財団での調査は、すべてマイクロフィルムの閲覧によるもので、そのマイクロフィルムのコピーやデジカメでの撮影は許可されておらず、手書きのメモだけが許可されている。また、イギリスのオールドバラのベンジャミン・ブリテンのアーカイブで自筆楽譜およびリブレットの草稿を調査した。こちらは現物を閲覧することが出来た。ブリテンは様々な詩人の詩を歌曲にしているが、取り上げられた詩の数が最もおおいのはW.H.オーデンであることも判明した。W.H.オーデンとコールマンの共作によるリブレットおよびマクニースのラジオドラマの読解・解析を進めることが出来た。また、スイス、バーゼルのパウル・ザッハー財団のアーカイブで《放蕩者のなりゆき》の成立事情について詳細な調査が出来た。さらに、イギリス、オールドバラのベンジャミン・ブリテンのアーカイブでブリテンがオーデンの詩に多くの歌曲を付していることとその背景について調査することができた。本年度は、オーデンとマクニースのラジオ・ドラマを聴き取り、特に音楽の使用について調査した。そのためあらかじめBritish Libraryに申請し、当館所蔵の音声資料のデジタル化を依頼した。音声資料は、カタログ化されているが、全てがデジタル化されているわけではなく、こちらの依頼があってデジタル化をし、British Libraryの管内でのみ聴取が可能で、館外からのアクセスは出来ないというものが多いためである。マクニースのラジオドラマでも、The Dark Towerは館外からもアクセス可能だが、他作品はデジタル化されていない状態で、今回マクニースのラジオドラマPersons from PorlockとオーデンのラジオドラマAscent of F6そしてマクニースの未亡人HedliAndersonへのインタビューをデジタル化してもらい大英図書館内で聴取した。Ascent of F6は音楽を担当しているのがBenjamin Brittenであるが、ピアノと打楽器による序曲が4分あり、Part1ではウクレレとピアノと歌が流れる部分がある。内容との関係からするとウクレレの異化効果は顕著である。Part1では他に女性の歌がピアノ伴奏で入る。Part2では男性合唱があり、別の箇所で約4分にわたり電子音が用いられている。Persons from Porlockはマクニース自身がプロデューサーを担当しているが、音楽の使用は極めて限定的で、Part2に歌が入る程度である。この2作だけを比較すると、オーデンが音楽の使用に熱心で、マクニースは冷淡なようにも思えてしまうが、The Dark TowerではBrittenが音楽を担当しており、かつマクニースはその成果を高く評価しているので、なるべく多くの作品における音楽の使われ方を比較した上で考察することが必須である。

オーデンのリブレット及びラジオドラマとマクニースのラジオドラマを、可能なものは草稿も見て、完成した脚本のテクストと比較した。ラジオドラマの場合、放送テープのデジタル化したものを聴取して音楽の使用法を検討した。オーデンはストラヴィンスキーに英詩の韻律の特徴と音楽の付しかたを教えており、リブレットを書く際にもここはアリアでもレチタティーヴォでも構わないという柔軟性に富む指示をしている箇所が多数あった。マクニースはオーデンほど音楽に熱心ではないがDark Towerの成功における作曲家ブリテンの貢献を大きく評価しており、音楽以外の効果音にもこだわっていることが判った。作品読解・解析を進めることと、ニューヨーク・パブリック・ライブラリーにおけるW.H.オーデンとコールマン共作のリブレットの草稿調査を実施することが出来た。W.H.オーデンとコールマンのリブレットの読解とオーデンとブリテン歌曲における共作、マクニースのラジオドラマにおけるブリテンの役割について明らかにしたい。ブリティッシュ・ライブラリーでマクニースのラジオ作品を聴く作業を進めたい。とくにラジオドラマでは音楽がどう使用されているかについても留意して聞き取ることにする方針である。英文学、リブレットW.H.オーデンのリブレットおよびラジオ作品とマクニースのラジオドラマの読解・解析を進めるとともに、ブリティッシュ・ライブラリーで彼らのラジオ作品を聴く作業を進めたい。特に、ラジオ作品でどのように音楽が使用されているかに関しては、活字のテクストだけでは判断しかねる部分があるので、この作業が重要になってくる。
地域産業集積の東アジア対応によるビジネスモデルの変容と雇用流動化の実証研究

日本各地の地域産業集積を愛知県、岐阜県、福井県、大阪府、広島県、宮城県、岩手県、鹿児島県、北海道、東京都の10地区のべ16回の現地調査を行った。それにより各地の産業集積は、東アジアからのグローバル圧力によって、総じて企業数・雇用数において2分の1あるいは3分の1にその規模を縮小させていることが確認できた。しかしこれは決して消滅に向かっているわけではないことも同時に確認できた。これらの産業集積では既にこれまでにない新しいビジネスモデルが登場し、東アジアのグローバル圧力の中でしっかりした存立基盤を見つけているとの知見を得ることができた。地域産業集積は21世紀対応をほぼ完了している、が結論である。「産業集積」と「サプライチエーン」の現状にかかわる国内実地調査を3件行った。1.筆産業の産業集積について広島県熊野町を現地調査し、1熊野筆事業協同組合、2(株)白鳳堂、3(株)竹寶堂、4関西金属(株)、5広島木軸、の5カ所を視察し聞き取りと資料収集を行った。2.眼鏡産業の産業集積について福井県鯖江市を現地調査し、1福井県眼鏡工業組合、2(株)シャルマン、3竹内工業(株)、4ヨシダ工業(株)、5(株)マコト眼鏡、の5か所を視察し聞き取りと資料収集を行った。3.東北・宮城県を実地調査し、名古屋経済圏とサプライチェーンで結ばれたトヨタの東北拠点への東日本大震災の影響について、1トヨタ自動車東日本(株)、および2大衝村、3女川町、4閖上町の各自治体を実地調査し、聞き取りと資料7収集を行った。以上の調査結果は2回の研究会を踏まえて、現在検討中であるが、産業集積における「経路依存性」の重要性を抽出することができたと考える。また「空洞化」=海外流出の動向に歯止めがかかり、地域産業集積の自立化と国際競争力の新たな強化を見たように思う。これは実態調査の成果である。この産業集積へのグローバル化の影響、さらにそこでの雇用の流動化についてはまだ検討できていない。本研究の目的でもあるので、今後の課題としたい。各地の伝統産業に起源をもつ産業集積を5件にわたり実態調査することができた。その第1は愛知県一宮市の繊維産業の現状であり、かつての繊維王国愛知の中心地がベッドタウン・マンション街になるなか工業素材で生き残りを図る企業を調査した(2015年7月3日)。その第2は岐阜県関市の刃物産業であり、地域がほとんど海外市場に対応した製品に転換していることを調査した(2015年6月1213日)。第3は東京都大田区の産業集積で3社を調査したが、これら3社は大田区では研究開発とマーケティングのみを行い、モノづくりは国内の地方に移していることを調査した(2015年12月1819日)。大田区の産業集積は会社数で5千社以下となり、しかも本社業務が中心になっていることを知った。大きな変貌である第4は東大阪市の産業集積で2社と東大阪産業創造支援機構を調査し、ここではまだ地域にモノづくりがあることを捉えた(2015年7月1718日)。最後に第5として東北三陸沿岸で、釜石市を中心とした産業集積とその震災後の物流ネットワークの現状を調査した(2016年2月1921日)。釜石の鉄鋼関連産業は製品を絞り込んですでに復興しているとの印象を持った。ただし地域全体の復興水準はまだ50%を越えていない。これら5件の産業集積とグローバル化との関連を言えば総じて国内の地域産業集積は<高級化>によって自立的な道を歩んでいることが分かった。一時の海外流出、空洞化、東アジア依存はほぼ姿を消している。この知見をもとに次年度の報告書を作成を展望していきたい。今年度は実態調査が中心になった。これについては2名で共同して多くの知見を得ることができた。また各自はそれぞれ塩見が「産業集積の源流、その展開とグローバル化での変容(仮)」また井上が「希望学からみた経済学(仮)」というテーマで構文を作成中である。これらはそれぞれ今年の9月に公表する予定である。今年度はここまでしか進めなかったが、新知見に結び付けられそうに思う。現地調査を12回、連携研究者との研究会を2回おこない代表研究者と連携研究者がそれぞれ論文各1を作成・公表できた。現地調査は東京大田区産業集積2回(それぞれ5月)、南知多町篠島・日間賀島1次と2次(6月、2月)、福井県嶺南・嶺北3回(7月に2回、3月)、広島県熊野町(7月)、豊橋市(12月)、尾張一宮(12月)、鹿児島県(3月)、北海道夕張・札幌(3月)であり、各地の産業集積の動向とくにグローバル化の影響について企業訪問、工場見学を丁寧に実施し、産業人、業界団体、行政の産業局などの人々に聞き取りを行った。また企業資料、市誌・産業調査統計などの行政資料を収集した。訪れた自治体の市史、町史、商工会議所年史はほとんどこの機会に収集することができた。これらの現地調査を総じての結論的認識としては、日本各地の産業集積は2分の1、3分の1に縮小しているが産業集積の崩壊に向かっているのでは決してない。グローバル化に対応した新しい強靭なビジネスモデルを確かに生み出しているということである。

われわれ二人は、これらの知見をもとに、それぞれが論文を作成し、名古屋外国語大学現代国際学部『紀要』(2017年3月)に公表した。井上泰夫「地域活性化と経済学」、塩見治人「地域産業クラスターの起源・成長・変容」である。さらにこの共同研究は2018年3月の刊行をめどに、すでに書籍の出版作業に入っている。日本各地の地域産業集積を愛知県、岐阜県、福井県、大阪府、広島県、宮城県、岩手県、鹿児島県、北海道、東京都の10地区のべ16回の現地調査を行った。それにより各地の産業集積は、東アジアからのグローバル圧力によって、総じて企業数・雇用数において2分の1あるいは3分の1にその規模を縮小させていることが確認できた。しかしこれは決して消滅に向かっているわけではないことも同時に確認できた。これらの産業集積では既にこれまでにない新しいビジネスモデルが登場し、東アジアのグローバル圧力の中でしっかりした存立基盤を見つけているとの知見を得ることができた。地域産業集積は21世紀対応をほぼ完了している、が結論である。この研究は実態調査を踏まえた動向を抽出し分析していきたいと考えている。初年度ではあるが3カ所の現地に出かけまず非常に感銘を受けた。多くの現地資料も収集できている。とくに現地自治体の調査データ、過去に刊行された町史・村史が入手できたことは今後の研究に有益な役割を発揮するものと考える。またそれぞれの産業集積の産業組合・業界団体も訪れることができたので今後交流するつもりである。以上のように初年度として本研究のベースは構築できたと考える。今年度は最終年として、引き続き実態調査を行いつつ研究のまとめに入る。実態調査としては、これまでの広島県熊野町、福井県鯖江市、宮城県被災地、大阪府東大阪市、愛知県一宮市、岐阜県関市、東京都大田区、岩手県被災地の8件を再訪問しつつ、データ整理を行い全体像を構築するつもりである。さらに2名の討論を繰り返し、めいめいが独自の論文作成に進みたいと考える。とくに東大社研で立ち上がってきている「希望学」の問題意識と接合・連動を図りつつ、研究成果を集成していくつもりである。経済史・経営史今年度は2年目に入る。東アジアの産業集積とのネットワークの形成について焦点を移す計画である。台湾、ベトナムなどの産業集積とわが国の産業集積との国際地域間連携を実地調査することを予定している。また国内の特に名古屋経済圏の産業集積の調査にも力点を移したい。一宮の繊維産業、有松の絞り産業、関の刃物産業、豊橋の和筆産業を実地調査したい。最後に今年度は雇用動向にも関心を移し研究会を行う。5件の調査を実施できたが、共同研究では相互の都合によりこれが限界だった。しかし有効に調査執行ができたと思っている。資料収集はすすんでいる。1広島熊野町、2福井県鯖江町の2県の伝統産業の産業集積を実態調査し、宮城県の3女川町、4閖上町の被災地および5大衝町のトヨタ自動車東日本(株)の自動車工場を実地調査して名古屋経済圏と東北地方間のサプライチェーンの実態調査を行った。さらに予定の調査もあったが先方との関係もあり、次年度に実施することにした。また調査用の機器を2セット購入し、さらに各自治体刊行の町史、市史をそれぞれ購入した。これまでの調査地域を再訪問して、事実確認を修正し、より拡張したい。また東アジア調査を検討したい。今年度は、残された国内産業集積の実地調査を5件実施し、また東アジアの産業集積の実態調査で台湾ないしベトナム(または2件とも)を計画している。
新規含窒素 1,3-双極子の開発

細胞原形質に存在するCERTは小胞体からゴルジ体へセラミドを輸送するタンパクである.C-アミド置換O-シリルオキシムとスチレンとのBF_3・Oet_2存在下におけるcis-選択的な付加環化反応を用いることにより,CERTの阻害物質syn-HPA-12の合成に成功した.また,Boc_2Oにより促進される分子内オキシム-オレフィン付加環化反応を開発した.細胞原形質に存在するCERTは小胞体からゴルジ体へセラミドを輸送するタンパクである.C-アミド置換O-シリルオキシムとスチレンとのBF_3・Oet_2存在下におけるcis-選択的な付加環化反応を用いることにより,CERTの阻害物質syn-HPA-12の合成に成功した.また,Boc_2Oにより促進される分子内オキシム-オレフィン付加環化反応を開発した.1)グロース由来の不斉素子を有するニトロンとカンファースルタムを不斉素子として有する親双極子との重複不斉誘導を用いた環化付加反応を行ったところ高収率で所望の立体化学を有する環化付加体が得られた。この反応を用いて強力な抗がん作用を有するペプチド型天然物tubulysinの全合成に成功した。今後は誘導体を合成し、細胞毒性試験を行う予定である。2)環状ニトロシリルナートの反応を試みた。2-ヒドロキシニトロアルカンをアミン塩基とジクロロジメチルシランと処理し、次いでアクリル酸メチルとの反応を試みた。しかし、求める環化付加体は得られなかった。これは、立体障害のためと考えられるので、今後、フェニルボリル基などを試したい。3)アミドを有するN-ボラノニトロンのアルケンとの環化付加反応における反応活性や立体選択性を調べた。その結果、3,5-cis-5-イソキサゾリジンが高い立体選択性で得られることを見出した。これは、エステルを有するN-ボラノニトロンとアルケンとの環化付加反応がが3,5-trans-イソキサゾリジンを選択的に与えることと好対照をなす実験結果である。4)カンファースルタムを不斉素子として有するN-ボラノニトロンを調整し、環化付加反応を検討した。面選択性は中程度であるものの、高いtrans-選択性を示し、光学活性な3,5-trans-イソキサゾリジンが得られることが分かった。今後、本反応をnegamycin等の合成に応用したい。1)糖を不斉補助基とするニトロンへのシロキシフランの立体選択的付加反応をnon-NMDA型グルタミン酸受容体の強力なアゴニストであるdysiherbainの合成に応用し、畑山らの中間体を効率よく合成できた。2)Tubulysin Dは、強力な制がん活性を有するテトラペプチド型天然物である。これまで、我々は、この化合物をニトロンの1,3-双極子環化付加反応を用いて合成してきた。このテトラペプチドの中央に位置するtubuvalineは2つの不斉中心を有する非ペプチド型アミノ酸である。このtubuvalineの4つの立体異性体を合成し、テトラペプチドに組み込み、tubulysin Dの11位と13位に関する4つの異性体を合成して生物活性を測定した。その結果、13位の立体化学が生物活性により影響を与えることを見出した。3)カンファースルタムを不斉補助基として用いるN-ボラノニトロンの環化付加反応を用いてnegamysinの合成研究を行いジペプチド構造まで合成できた。4)エステル置換N-ボラノニトロンと1-アルケンとの反応では3,5-trans環化付加体が得られるのに対し、アミド置換N-ボラノニトロンと1-アルケンとの反応では3,5-cis環化付加体が得られるという反応を見出していたが、この反応の一般化を行った。ニトロンとアルケンの分子内及び分子間1,3-双極子付加環化反応は炭素-炭素結合と炭素-酸素結合を一挙に形成しイソキサゾリジン環を与える有用な方法である。イソキサゾリジン環はそのN-O結合を還元的に開裂することにより、1,3-アミノアルコール誘導体に変換可能であり、生理活性を有する複雑な含窒素化合物の合成に利用できる。本年度は、(1) N-ボラノニトロンの付加環化反応を用いるHPA-12の合成研究と(2) Boc2Oにより促進されるオキシムの分子内付加環化反応の開発について述べる。(1) HPA-12はスフィンゴミエリンの生合成の選択的阻害物質として見出され、ごく最近syn体であることが明らかとなった。そこで、N-ボラノニトロンの付加環化反応を用いるHPA-12の合成法の開発を行うこととした。適切なO-シリルオキシムにスチレンをBF3・OEt2存在下で反応させ、一端Boc保護してcis-付加環化体を得た。これを脱保護した後ラウロイルクロリドと反応させた。次いで、N-O結合を還元的に開裂させた後に、加熱することによりγ-ラクトンとした。最後にNaBH4で還元することによりsyn-HPA-12の合成に成功した。(2)新規な1,3ー双極子の開発を目指してオキシムを何らかの手段で1,3-双極子に変換できないかを探った。検討の結果、分子内にアルケンを有するオキシムをジ-tert-ブチルジカルボナート(Boc2O)存在下で加温するとN-Boc分子内付加環化体が収率よく得られることを見いだした。

Boc2O非存在下では、長時間加熱しても反応は全く進行しないか、低収率である。本反応は側鎖に炭素、窒素、酸素で反応が進行する。その反応機構はN-Bocニトロンを経由するものと考えている。これらの結果については、学術雑誌に投稿準備中である。1)ニトロンとシロキシフランの付加反応を用いる合成を完結できた。2)ニトロンの環化付加反応を用いるtubulysin類の合成研究を完結できた3)N-ボラノニトロン用いるnegamycinの合成研究が後一歩である。4)アミド置換N-ボラノニトロンのcis-選択的環化付加反応を一般化できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。1)Negamycinの合成については、途中で立体化学が一部異性化する工程があるので、改善する。2)アミド置換N-ボラノニトロンのcis-選択的環化付加反応を1,3-syn-aminoalcolの合成に展開する。スフィンゴシン合成の阻害剤であるHPA-12の立体構造が極最近1,3-synに訂正された。本反応をHPA-12合成に展開したい。
オートファジー活性化剤によるプリオン病治療法の確立

我々が見出したオートファジー活性化剤であるFK506と既知のオートファジー活性化剤(Torin1,Torin2など)をそれぞれプリオン感染細胞に添加してその抗プリオン効果を比較した。Torin1,Torin2はオートファジー感受性のプリオン株(Fukuoka-1)感染細胞においてPrPScを約50%減少させたが、オートファジー抵抗性のプリオン株(22L)感染細胞に対しては抗プリオン効果を示さなかった。一方でFK506はFukuoka-1、22Lいずれの感染細胞においてもPrPScを約80%減少させた。以上よりFK506の抗プリオン効果は他のオートファジー活性化剤よりも強力であることが分かった。我々は免疫抑制剤FK506が異常型プリオンタンパク(PrPSc)の分解経路とされるオートファジーを活性化することでプリオン病の治療薬となり得ることを報告した。今回、最もよく知られているオートファジー活性化経路(AKT/mTOR経路)の阻害剤をプリオン感染細胞に添加してその治療効果を比較検討した。オートファジーを阻害するとPrPScが増加し、FK506の抗プリオン効果も認められなくなることから、PrPScがオートファジーによって分解されていると考えられる。今回、6種類のオートファジー活性化剤をプリオン感染細胞に添加したが、一つだけPrPScを減少させる化合物があった。現在、この化合物がオートファジーの活性化を介してPrPScを減少させているのか検討中である。また、この化合物と効果のなかった化合物のオートファジー活性化経路を比較しているところである。さらに、FK506のオートファジー活性化の経路を探索するべく、AKT,calcineurinなどのプラスミドをプリオン感染細胞に導入し、PrPScの増減を検討したが、特に変化は認められなかった。我々はmTOR阻害剤に感受性の遺伝性ヒトプリオン病由来のプリオン株(Fukuoka-1株)とmTOR阻害剤に抵抗性を示すヒツジのスクレイピー由来のプリオン株(22L株)を感染させた細胞を用いてmTOR阻害剤及びFK506の抗プリオン効果について比較検討した。mTOR阻害剤はFukuoka-1感染細胞において最大で40%程度PrPScを減少させたが、22L感染細胞においてはほとんどPrPScを減少させなかった。一方でFK506はFukuoka-1および22Lのいずれのプリオン株に対しても70%以上PrPScを減少させていた。以上からFK506はmTOR阻害剤よりも強力で株に依存しない抗プリオン効果を有することが分かった。しかし、FK506の抗プリオン効果がオートファジー活性化によるものだけかは明らかになっていない。今後はATG5などのオートファジーに必須の分子をノックアウトもしくはノックダウンしたプリオン感染細胞においてFK506がPrPScを減少するか検討する予定である。FK506のオートファジー活性化経路について主にDNAプラスミドを用いて探索を行っているところだが、今のところ確証は得られていない。プラスミドがこちらの思っているような活性を示していない可能性がある。プリオン病FK506のオートファジー活性化経路について新たに作成したプラスミドを用いて検討を行う。また、既知のオートファジー活性化剤と比較してオートファジー活性化の程度、活性化に要する時間などとPrPScに対する効果を比較検討する。また、プリオン感染細胞でPrPScを減少させる働きのあった化合物をプリオン感染マウスに投与して治療効果を検討する。初めに予定していた物品はおおよそ購入したが、端数が余ってしまった。研究を遂行するために必要な物品(実験ノートや文房具など)を購入する予定である。
ウイルス抵抗性遺伝子を介した防御応答機構の解明

Nicotiana tabacum cv.SamsunNN由来のN遺伝子のcDNAを用いて,Nタンパク質と相互作用する宿主細胞由来のタンバク質のcDNAクローニングを行い,複数の14-3-3イソフォームを単離した。Nタンパク質のロイシンリッチリピート(LRR)ドメインをプローブとしたファーウエスタンブロット法では14-3-3イソフォームのうちωグループのa, b, c, f, hおよびΨグループのe, iが顕著に結合能を示した。しかし,κグループのd, gは結合能は低く,εグループのT(S)は全く結合しなかった。TMVのエリシターであるレプリカーゼのヘリカーゼドメインをプローブとした場合にもLRRをプローブとした場合とほとんど同様の結果が得られた。逆に,14-3-3をプローブとして結合能を解析したところ,LRRドメインやLRRを含むNタンパク質全体が顕著な結合能を示し,TIRやNBSドメインおよびコントロールのGSTとは全く結合しなかった。また,14-3-3プロープはヘリカーゼドメインと顕著な相互作用を示し,TMVのOMおよびOb系統由来の何れのヘリカーゼとも同様な結合能を示した。14-3-3遺伝子の発現についてノーザンブロット法により解析した結果,イソフォームhはTMV感染後48時間にゼロ時間におけるレベルまでに上昇を示した。以上の結果より,ヘリカーゼドメインは第3のタンパク質を介して間接的にNタンパク質と相互作用していると推定できるので,14-3-3タンパク質はそのような介在タンパク質の候補として有力であると考えられた。Nicotiana tabacum cv.Samsun NN由来のN遺伝子のcDNAを用いて,Nタンパク質と相互作用する宿主細胞由来のタンバク質のcDNAクローニングを行い,複数の14-3-3イソフォームを単離した。
スタチンの多面的作用に着目した新しい心血管保護因子の機能解析

本研究では、新しい心血管病抑制蛋白SmgGDSの内皮機能保護機能や心血管病抑制における意義について基礎的・臨床的研究を進めた。特に、スタチン刺激により細胞外に分泌されるSmgGDSに血管内皮や心血管組織の保護作用があるか否かを検討するために、当科で開発済みである遺伝子欠損マウスや過剰発現マウスを用いた検証を進めた。細胞内SmgGDSはRac1抑制作用を有する一方で、細胞外SmgGDSも線維芽細胞増殖やMMPの抑制に重要な役割を有することが判明した。さらに、スタチン依存性に分泌されたSmgGDSは、未知の細胞外受容体もしくは機能蛋白修飾を介して大動脈瘤破裂を抑制する可能性があることが示された。スタチン発見から40年。あらゆる心血管病における有効性が基礎的・臨床的研究で明らかにされた。しかし、そのコレステロール低下作用によらない心血管保護効果(多面的作用)の本質は未だに解明されていない。我々は最近、スタチンの多面的作用の原因解明研究の結果、SmgGDSを同定した(ATVB 2013)。さらにスタチンは、心筋線維芽細胞からのSmgGDS分泌を促進し、Rac-1/Rho-kinase/ERK活性を抑制すると共に、炎症性サイトカインの分泌低下を引き起こすことを報告した(Hypertension 2016)。従って、スタチンで誘導・分泌されるSmgGDSは、心血管病発症の抑制機構を担うことから、新たな治療標的および創薬ターゲットとしても期待できる。このように本研究では、スタチンによる新規炎症制御蛋白SmgGDSを介した多面的作用の制御機構についての検証を進めている。このように、スタチンに関する一連の基礎的・臨床的研究により、スタチンの心血管病に対するコレステロール低下作用に依らない多面的作用の原因分子の一つとして、SmgGDSを同定し、その機能解析が進行中である。具体的には、SmgGDSはスタチン依存性に主に血管内皮より産生・分泌され、Rac1抑制を介して抗炎症効果を発揮するすることが分かってきた(Cardiovasc Res. 2016)。さらに、SmgGDSはRho-kinase/ERK1/2を抑制し、様々な炎症性サイトカインの産生・分泌を抑制することから、多くの心血管疾患の進行に重要な役割を有する可能性が示唆される。本研究では、これまで全く解明されていない、SmgGDSによる心血管病発症抑制機構を、組織特異的欠損マウスと過剰発現マウスを用い、各種の心血管病モデルを作成し、動物レベルで詳細な検証を進めている。本研究では、新しい心血管病抑制蛋白SmgGDSの内皮機能保護機能や心血管病抑制における意義について基礎的・臨床的研究を進めている。特に、スタチン刺激により細胞外に分泌されるSmgGDSに血管内皮や心血管組織の保護作用があるか否かを検討するために、当科で開発済みである遺伝子欠損マウスや過剰発現マウスを用いた検証を進めている。さらに、スタチン依存性に分泌されたSmgGDSは、未知の細胞外受容体もしくは機能蛋白修飾を介して動脈硬化プラーク破綻や大動脈瘤破裂を抑制する可能性があることが示された。Rac-1/Rho-kinase依存性に心血管組織から産生・分泌される各種の炎症性サイトカインは、血管内皮において、接着因子発現や炎症細胞浸潤、アポトーシス等、内皮機能を障害する。我々は、細胞内SmgGDSがRac1分解を促進することを証明し、SmgGDSは細胞外へも分泌され、直接もしくは間接的な受容体阻害により、細胞外からもRac1やRho-kinaseを抑制することを確認した(Hypertension 2016)。また、Rho-kinase活性化は酸化ストレス増幅蛋白Cyclophilin A (CyPA)の分泌を促進することを我々は示してきたが、スタチンはSmgGDS分泌促進とは逆に、CyPA分泌抑制することが判明した。従ってSmgGDSは、Rho-kinase/CyPA系とは拮抗することが示唆している。実際、Rho-kinase/CyPA系は血管平滑筋増殖作用や炎症細胞浸潤作用のみならず、血管内皮障害作用が示されており、SmgGDSとは全く相反する作用を示すことから、それぞれ、それらのバランスが内皮機能の恒常性維持に貢献している可能性がある。

このように、スタチンに関する一連の基礎的・臨床的研究により、スタチンの心血管病に対するコレステロール低下作用に依らない多面的作用の原因分子の一つとして、SmgGDSを同定し、その機能解析が進行中である。具体的には、SmgGDSはスタチン依存性に主に血管内皮より産生・分泌され、Rac1抑制を介して抗炎症効果を発揮するすることが分かってきた(Cardiovasc Res. 2016)。さらに、SmgGDSはRho-kinase/ERK1/2を抑制し、様々な炎症性サイトカインの産生・分泌を抑制することから、多くの心血管疾患の進行に重要な役割を有する可能性が示唆される。本研究では、これまで全く解明されていない、SmgGDSによる心血管病発症抑制機構を、組織特異的欠損マウスと過剰発現マウスを用い、各種の心血管病モデルを作成し、動物レベルで詳細な検証を進めている。本研究では、新しい心血管病抑制蛋白SmgGDSの内皮機能保護機能や心血管病抑制における意義について基礎的・臨床的研究を進めた。特に、スタチン刺激により細胞外に分泌されるSmgGDSに血管内皮や心血管組織の保護作用があるか否かを検討するために、当科で開発済みである遺伝子欠損マウスや過剰発現マウスを用いた検証を進めた。細胞内SmgGDSはRac1抑制作用を有する一方で、細胞外SmgGDSも線維芽細胞増殖やMMPの抑制に重要な役割を有することが判明した。さらに、スタチン依存性に分泌されたSmgGDSは、未知の細胞外受容体もしくは機能蛋白修飾を介して大動脈瘤破裂を抑制する可能性があることが示された。(A)スタチンのSmgGDS誘導・分泌促進による心血管病抑制機構(動物実験)1. Rac1およびRho-kinaseは多彩な細胞内シグナル伝達機構の要にある重要分子であり、スタチンの多面的作用の機序の一つにSmgGDSによるRac1/Rho-kinase抑制を発端とした炎症性サイトカイン分泌低下とそれらの細胞外受容体阻害による内皮機能保護効果の関与が想定される。2. SmgGDS欠損マウス及び過剰発現マウスを用いることで、in vivoでのスタチン作用の制御機構の詳細な解析が可能である。特に酸化ストレス活性を制御するRac1制御機構の解明により、SmgGDSのRac1抑制による血管恒常性維持機構が明らかになる。(B)ヒト冠動脈血管内皮細胞におけるSmgGDSとRho-kinase/CyPAの相互作用1.ヒト冠動脈血管内皮細胞を用いた細胞外SmgGDS刺激による、Rac1抑制機構にRho-kinase/CyPA系がどのように関わるかを解明する(細胞実験)。2.細胞外SmgGDSのヒト冠動脈血管内皮細胞への受容体阻害機構の解明(細胞実験)(C)動脈硬化病理組織の病理学的検討1.スタチンによるプラーク破綻や二次予防効果にSmgGDSによる血管内皮保護効果があることを確認する目的でSmgGDSの冠動脈病変での病理学的意義を解明する(免疫学的手法)。2.ヒト冠動脈を用いた免疫染色では、動脈硬化不安定プラークでのRac1発現が亢進していることが確認されており、スタチンによる血管内皮SmgGDS誘導や細胞外SmgGDSによるMMP活性化抑制機構を病理学的に評価する。循環器内科研究代表者および研究協力者の海外学会への参加を予定していたが、学内での研究実施を優先し、旅費を削減することができたため。国内および海外学会へ積極的に参加して研究発表を行う予定であり、平成29年度予算と併せて執行をする。