hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
前頭-中心部導出視覚誘発電位による障害児脳機能評価

個々の障害児・者に適した教育法を検討する上で正確な脳機能評価が不可欠であり、新しい視点からの簡便かつ正確な脳機能評価法が求められている。そこで、精神遅滞児・者における中心部導出視覚誘発電位の後期成分を測定しIQとの相関を中心に検討した。対象は1歳から52歳の精神遅滞児・者90例で、DQ/IQが20以下の症例が35例、2035の症例が27例、3550の症例が15例、5070の症例が13例であった。方法は誘発電位検査装置(NEB5504)を用いて、反復光刺激を1回/2秒の頻度で与え、中心部より誘発反応を導出し50回加算し記録した。波形の分析は潜時130msec前後に出現する陰性波N130および190msec前後に出現する陽性波P190について行い、すでに報告されている同一年齢群のそれと比較し、3SD以上延長していた場合異常と判定し、以下の成績を得た。1 N130潜時が3SD以上延長していた症例は9例(10.0%)、P190潜時が3SD以上延長していた症例は8例(8.9%)であった。なお、DQ/IQの程度と延長例の出現率には相関は認められなかった。2精神発達段階による影響を除外する目的でDQ/IQが35以下で7歳以上の58例に限定して検討したところ、脳性麻痺またはてんかんを合併した34症例中、N130潜時は6例、P190潜時は5例において延長が認められ、一方、上記合併のない24例には両潜時共に一例の延長例も認められなかった。以上より、N130およびP190潜時の延長は、脳性麻痺やてんかんの原因となった器質的脳障害を反映したものと推測され、また精神遅滞の程度とN130およびP190潜時延長例の出現率に相関はなく、同成分を精神遅滞の客観的評価の目的で臨床応用することは困難と考えられた。個々の障害児・者に適した教育法を検討する上で正確な脳機能評価が不可欠であり、新しい観点からの簡便かつ正確な脳機能評価法が求められている。そこで、従来の後頭部導出視覚誘発電位に加え中心部導出視覚誘発電位の測定を同時に行い、主に後者の後期成分に着目しながら分析を行った。対象は11歳から45歳、平均29歳6ヵ月の精神遅滞児・者18名。DQ/IQは868で、25未満の症例が12例、25以上の症例が6例。方法は誘発電位検査装置(日本光電製NEB5504)を用いて、反復光刺激を1回/2秒の頻度で与え、後頭部および中心部より誘発反応を導出し50回加算し記録した。波形の分析は潜時60msec前後の陰性波N60、75msec前後に出現する陽性波P75、130msec前後に出現する陰性波N130、190msec前後に出現するP190について行い以下の成績を得た。1)後頭部導出視覚誘発電位のIV波は、すでに報告されている同一年齢の健常児・者のそれと比較し、潜時が3SD以上延長していた症例はなかった。2)中心部導出視覚誘発電位では、18例全例にN60、P75、N130、P190の4波形を認めた。3) N60、P75の潜時は個人差が著明であった。4) N130、P190潜時につき、すでに報告されている同一年齢群の健常児・者のそれらと比較し、N130潜時が3SD以上延長していた症例は3例、P190潜時が3SD以上延長していた症例は2例であった。5) DQ/IQとN130およびP190潜時の延長の間には相関は認められなかった。今後、症例を増し基礎疾患による相違や各波形の成分分析も行う予定である。そこで、従来の後頭部導出視覚誘発電位に加え中心部導出視覚誘発電位の測定を同時に行い分析を行った。対象は1歳1ヵ月から50歳2ヵ月の精神遅滞児・者76名。DQ/IQは20未満:38例、2035:23例、3550:7例、5075:8例。1)中心部導出視覚誘発電位では、76例全例にN60、P75、N130、P190の4波形を認めた。2)N60、P75の潜時は個人差が著明であった。3〉N130、P190潜時につき、すでに報告されている同一年齢群の健常児・者のそれらと比較しN130潜時が3SD以上延長していた症例は9例、P190潜時が3SD以上延長していた症例は5例であった。

4)DQ/IQとN130およびP190潜時の延長の間には相関は認められなかった。今後、Down症候群など特異的疾患の波形の成分分析を行い、基礎疾患による相違の検討を行う予定である。個々の障害児・者に適した教育法を検討する上で正確な脳機能評価が不可欠であり、新しい視点からの簡便かつ正確な脳機能評価法が求められている。そこで、精神遅滞児・者における中心部導出視覚誘発電位の後期成分を測定しIQとの相関を中心に検討した。対象は1歳から52歳の精神遅滞児・者90例で、DQ/IQが20以下の症例が35例、2035の症例が27例、3550の症例が15例、5070の症例が13例であった。方法は誘発電位検査装置(NEB5504)を用いて、反復光刺激を1回/2秒の頻度で与え、中心部より誘発反応を導出し50回加算し記録した。波形の分析は潜時130msec前後に出現する陰性波N130および190msec前後に出現する陽性波P190について行い、すでに報告されている同一年齢群のそれと比較し、3SD以上延長していた場合異常と判定し、以下の成績を得た。1 N130潜時が3SD以上延長していた症例は9例(10.0%)、P190潜時が3SD以上延長していた症例は8例(8.9%)であった。なお、DQ/IQの程度と延長例の出現率には相関は認められなかった。2精神発達段階による影響を除外する目的でDQ/IQが35以下で7歳以上の58例に限定して検討したところ、脳性麻痺またはてんかんを合併した34症例中、N130潜時は6例、P190潜時は5例において延長が認められ、一方、上記合併のない24例には両潜時共に一例の延長例も認められなかった。以上より、N130およびP190潜時の延長は、脳性麻痺やてんかんの原因となった器質的脳障害を反映したものと推測され、また精神遅滞の程度とN130およびP190潜時延長例の出現率に相関はなく、同成分を精神遅滞の客観的評価の目的で臨床応用することは困難と考えられた。
非凸領域におけるパラメータ依存方程式に対する解の数値的検証法

Perturbed Gelfand方程式は、非線形パラメータ依存方程式の代表例であり、その解曲線はいくつかのTurning Pointをもつことが知られている。特に、2つのSimple Turning Pointがくっつく点であるDouble Turning Pointについては、数値的にも解析的にも興味をもたれ、さまざまな研究が行われてきた。しかし、方程式の非線形性が強く、Turning Point付近では一般的な非線形方程式に対する数値計算法が破綻するため、数値計算結果もあまり報告されていない。しかも、その報告はすべて近似解に関するものでDouble Turning Pointを精度保証付き数値計算で求めた例はない。また、最近ではDouble Turning Pointに対する精度保証付き数値計算法も提案されているが、実際に、無限次元問題に適用した例はない。そのような中、本研究では、問題を球対称解に制限した上で、Kellerらが導入した拡大方程式と中尾の方法を組み合わせてDouble Turning Pointの局所一意存在性を証明することに成功した。これは、無限次元問題のDouble Turning Point対して精度保証付き数値計算に成功した初めての例である。さらに、矩形領域や非凸領域上でも計算を行い、矩形領域ではいくつか解の数値的検証に成功した。なお、この研究の過程で、いくつかの幻影解(Ghost Solution)が観測された。Perturbed Gelfand方程式は,非線形パラメータ依存楕円型方程式の代表例であり,その解曲線はいくつかのTurning Pointを持つことが知られている.この方程式について調べていく過程で,2つのSimple Turning Pointがくっつく点(Double Turning Pointという)の存在と一意性については証明されていないことに気付き,Double Turning Pointに対して精度保証付き数値計算を試みることにした。そのために,まず,問題を球対称解に制限した上で,Caluwaerts (1985)が導入した拡大方程式を利用してDouble Turning Pointの持つ特異性を取り除き,この拡大方程式に中尾の方法を適用することで,Double Turning Pointに対する精度保証付き数値計算を行ない,数値例を与えた.しかし,今回,使用した拡大方程式はdouble turning pointが存在するための必要条件しか満たしていない.そこで,必要条件の検証で得られた値を使って精度保証付きで解曲線を描き,double turning pointの存在を主張した.無限次元問題のdouble turning pointの存在検証を数値的に試みた例は過去にはないので,新しい結果といえる.なお,現在は数値的検証法による十分条件の導出および矩形領域への拡張も検討している.特に,十分条件の導出を導くために,空間をHilbert空間に設定し,今回導入した拡大方程式以外の方程式の導入を検討している.Perturbed Gelfand方程式は、非線形パラメータ依存方程式の代表例であり、その解曲線はいくつかのTurning Pointをもつことが知られている。また、最近、Double Turning Pointに対する精度保証付き数値計算法も提案されているが、実際に、無限次元問題に適用した例はない。そこで、今回は、問題を球対称解に制限した上で、Kellerらが導入した拡大方程式と中尾の方法を組み合わせて精度保証付きでDouble Turning Pointを求めた。
金属錯体による窒素分子および等電子構造イソニトリルの活性化と反応

窒素分子はイソニトリルと等電子構造と見なすことのできる構造をしており遷移金属錯体ではイソニトリルは同様のend-onの配位をしている。本研究では遷移金属イソニトリル錯体の反応性の探求を通して窒素分子の活性化の方法を開発しようとするものである。先ず、酢酸パラジウム触媒の存在下、各種のイソニトリルがジシランのケイ素-ケイ素結合間に挿入する反応を見出した。この反応では一級および二級アルキルイソニトリル並びに芳香族イソニトリルの末端炭素がビス-シリル化されるのに対して、三級アルキルイソニトリルだけが反応生成物を与えず未反応であった。次に、三級アルキルイソニトリルの存在下における酢酸パラジウムの触媒作用を調べたところ、ジシランによる末端アセチレンのビス-シリル化反応に特異的な触媒作用を示した。従来より知られるビス-シリル化触媒に比較して格段に優れていた。ジシランとアセチレン部分を同一分子内にもつ基質では、この触媒の特長が一層顕著となる。分子化ビス-シリル化反応によってシリコン置換基を三つ、あるいは四つ有する立体障害の大きいエチレン誘導体が良好な収率で合成された。バラジウム/三級アルキルイソニトリル錯体はさらに有用な触媒作用を有している。オレフィンとジシランの分子間ビス-シリル化反応には全く有効性はなかったが、末端オレフィンとジシラン部分を同一分子内にもたせた基質については優れた触媒作用を有した。これまで分子内および分子間にかかわらずオレフィンのビス-シリル化反応は一般に因難とされるものであっただけに、この発見は重要である。種々の分子内オレフィンのビス-シリル化反応で新規有機ケイ素化合物の合成を達成した。また、これらのビス-シリル化生成物の酸化的処理によって立体選択的ポリオール合成の新ルートを開拓した。
人工受容体DREADDによる恐怖記憶の制御機構の解明

平成30年度の研究目的は、15-HT2C受容体ノックアウトマウスにおける恐怖記憶消去促進傾向について確証を得ること、そして、2人工受容体とCre-loxPシステムを用いて海馬の下位領域特異的に記憶の想起・消去における役割を解明することであった。目的1については、十分な個体数を得て、5-HT2C受容体ノックアウトマウスにおいて恐怖記憶消去の促進が見られることが判明した。恐怖記憶の想起そのものには変化が見られなかった。しかし、この促進効果は翌日の恐怖記憶想起には影響しなかったことから、恐怖記憶の消去記憶獲得が促進されてもその記憶の固定は促進されず、5-HT2C受容体はPTSD(心的外傷後ストレス障害)などの疾患に対する治療標的としてはあまり期待できないことが示唆された。また、別の行動試験を実施することで、自発運動量が5-HT2C受容体ノックアウトマウスにおいて高く、特に新奇環境において馴化が遅いことが分かった。さらに、5-HT2C受容体ノックアウトマウスでは不安水準も低いことも見出した。このように、5-HT2C受容体は、記憶に関わるPTSDのような疾患よりもむしろ全般性不安障害のような疾患の治療標的として期待できることが示唆された。目的2については、少数例ながら人工受容体と低用量clozapineを用いた海馬CA3領域の選択的活性化によって、恐怖記憶の消去が阻害される傾向が見られた。この活性化操作は恐怖記憶想起の直後(消去記憶獲得の直後)に実施されたことから、海馬CA3領域は消去記憶の固定化に関与しているものと推測される。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成28年度は行動薬理学的手法により、恐怖記憶の想起・消去に関与するセロトニン受容体を推定し、その詳細なシグナル伝達メカニズムについて電気生理学的手法で明らかにすることに取り組んだ。海馬には14種類のセロトニン受容体のうち、ほぼ全てが発現している(Tanaka et al. 2012)。そのうち不安・恐怖や記憶・学習に関与すると推定されている8種類の受容体(5-HT1A, 2A, 2C, 3, 4, 5A, 6 and 7)について、それぞれの拮抗薬の海馬局所投与を行い、恐怖記憶の想起・消去に関与するセロトニン受容体を推定した。その結果、腹側海馬の5-HT7受容体が恐怖記憶の想起に関与することが見出された。また、腹側海馬の5-HT2C受容体が消去学習を促進している可能性が示された。さらに5-HT7受容体の機能をパッチクランプ法によって追究し、腹側海馬CA3領域の錐体細胞に発現する5-HT7受容体を刺激することでhyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN)channelsの機能が亢進し、入力に対する感度が上昇する(反応しやすくなる)ことが見出された。また、この感度が恐怖条件付けによっても上昇することが見出されたことから、恐怖体験が海馬の入力応答感度を5-HT7受容体を介して上昇させ、その後の関連刺激に対する応答を過敏にしていることが推測された。「研究実績の概要」で記したとおり、当該年度の研究計画を全て遂行済みである。しかし計画を前倒しできるほど進んでいるわけではないことから、「おおむね順調」とした。平成29年度の目的は、1「遺伝工学的手法(セロトニン受容体ノックアウトマウスなど)によって恐怖記憶の想起・消去に関与する5-HT受容体を同定する」に取り組むこと、そして2「人工受容体とCre-loxPシステムを用いて海馬の下位領域特異的に記憶の想起・消去における役割を解明する」の準備を進めることであった。目的1に関しては5-HT2C受容体ノックアウトマウスをJaxson Laboratoryから入手し、これまでの薬理学的結果におおよそ一致する結果を得ることができた。つまり、5-HT2C受容体ノックアウトマウスにおいて恐怖記憶の消去が若干早い傾向が見られた。

恐怖記憶の想起自体には違いが見られなかった。しかしまだ個体数が十分でないため、確証を得るためには追加の実験を続ける必要がある。一方、目的2の準備については、予定より時間がかかったものの、最終的には発現させた人工受容体が機能することを確認することに成功した。具体的には神経活動上昇のマーカーとしてc-Fosタンパクを用い、免疫染色法によって確認した。人工受容体を発現させたマウスにclozapineを投与した場合においてのみ、海馬CA3領域におけるc-Fosタンパク発現が上昇した。なお、当初の計画ではclozapine-N-oxideを人工受容体の刺激薬として使用する予定であったが、その後clozapine-N-oxideが血液脳関門を通過できないとする論文が発表されたことを踏まえ、代替案として今後は低用量のclozapineを人工受容体の刺激薬として用いることとした。c-Fos発現を確認するための抗体探索に時間を要し、繰越申請をしたことを踏まえて、「やや遅れている」と判断した。これまで特に問題なく進行しているため、当初の予定通りの計画を進めて行く。つまり、5-HT2C受容体ノックアウトマウスを入手して前年度の結果を追試することと、人工受容体を海馬CA3領域に発現させる手法の確立を進める。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。5-HT2C受容体ノックアウトマウスを用いた検討を進めると同時に、当初の計画通り海馬CA3領域に人工受容体を発現させたマウスを用いて恐怖記憶の消去に関わる海馬の下位領域を特定する。
四肢形態形成におけるソニックヘッジホック遺伝子発現調節機構の解明

骨と関節は自らの意思で動かすことができる運動器であり、人間が自立性を発揮・維持する上で重要な器官である。そのうちでも四肢、手はとくに重要な役割をはたす。すなわち人は手を使うことで人間としての価値を高め、人間らしい生活を送ることができるのである。その意味で、四肢の形成、発達は非常に重要なものである。四肢の形態異常を理解し、其の治療を進める上で、手指の発生、形態形成の機序を明らかにすることは重要で、其のモデルとして四肢形態異常の症例を分析することは有用である。また関節においては骨と関節軟骨から形成されており、其のうちでも関節軟骨は血管のない"無血管組織"である。ここでは血管新生抑制と血管新生のバランスで維持されている。特に血管新生抑制因子の役割の解明は重要である以上の観点から計画を立て、研究を遂行した。すなわちヒト多指症例患者さん(3才女児)患者症例(PPD)の解析結果よりC7orf2にbreak pointが存在することを明らかにした)および多指変異動物(マウスSsqの解析結果よりC7orf2にbreak pointが存在することが明らかとなった)の検討結果を得た。その結果より、新規遺伝子LMBR1の中に軸性多指症のlocusが存在すること、さらにこのlocusがsonic hedgehog遺伝子のシス配列であることが示唆された。我々は転座を伴うヒト多指症患者および多指変異マウスSsqの解析により、ヒト7q36に存在するSonic Hedgehog(SHH)遺伝子の上流約800kbに存在する新規遺伝子LMBR1の内部に軸前性多指症(PPD)のlocusが存在し、それはSHH遺伝子の四肢特異的発現を調節するシス配列にあることを示唆する結果を得た(裏面PNAS論文に発表)。現在、ヒト多指症症例を対象にヒトとマウス間で高度に保存された候補領域の変異スクリーニングを進めている。一方、未だ不明であったLMBR1遺伝子自体の多指症発症へめ関与の有無を確認する目的で、ニワトリでのLMBR1ホモログをクローニングし、発現時期および部位をイン・サイチュウ・ハイブリダイゼーションにより解析し、引き続き胎生期肢芽への過剰発現実験を計画した。その結果LMBR1遺伝子は胎生期肢芽に発現していることが確認され、現在過剰発現実験の結果を解析中である。PPD(preaxial polydactyly軸前性多指症)はヒトの四肢異常においてよくみられるものである。ヒトにおいては三指節症や重複母指など幅広い異常を示す病態である。いままでの研究によりPPDlocusは染色体7q36に存在することが示されてきた。一方、マウスにおいても同様な形態異常が報告されている。即ちHemimelic extratoes(Hx),Hammertoe(Hw)である。これらの報告によりヒトとマウスの表現型および染色体部位の類似性が示めされた。本研究では1.3才女児の患者症例(PPD)を解析した。その結果よりC7orf2にbreak pointが存在することを明らかにした。2.変異マウス(Ssq)についても解析した。その結果よりLmbrl遺伝子(マウスC7orf2)にbreak pointが存在することが明らかとなった。
走査スクイド顕微鏡による非c軸配向酸化物超伝導薄膜中のジョセフソン磁束の直接観察

超伝導体中では磁束が量子化されるが、層状構造を持つ酸化物超伝導体ではその大きな異方性から、磁束量子は大きく扁平したジョセフソン磁束となる。Bi系超伝導体は固有ジョセフソン効果を発現する代表的材料であるが、薄膜を材料として用いることが実用化上必須である。一方、同効果を用いたデバイス作製には、磁束の微視的挙動の解明が不可欠である。本研究では走査SQUID(超伝導量子干渉素子)顕微鏡(SSM)を用いて非c軸配向のBi系超伝導体単結晶薄膜を観測し、固有ジョセフソン効果を利用したデバイス作製を目指してジョセフソン磁束の挙動を直接観察することにより可視化しようとするものである。本研究は観察対象となる薄膜の膜質の向上とそれをSSMで観察する2点であるが、前者は課題であった非c軸配向Bi系超伝導体薄膜の2方向成長に伴う双晶の抑制について、基板の種類や傾斜角、成長条件などに関する系統的なデータが得られ本年度論文化に至った。また膜質に大きな影響を与える基板に関して、大型で高品質のチタン酸ストロンチウムの単結晶育成を成長させる条件が系統的に明らかになり、これも論文としてまとまった。後者はこの非c軸配向膜を利用したジョセフソン磁束の挙動の直接観察であるが、粒界接合ジョセフソン接合に関する観測を行うことができた。しかし装置の不調が続いたこと、液体ヘリウムの入手の入手が困難でかつ高騰したこと、接合部分の観測に薄膜の微細加工の条件を詰め切るのに時間を要したこと、などから困難なものとなった。固有ジョセフソン接合における磁束の観察に関しては、初期的なデータが得られたが再現性は必ずしも十分ではなく、論文化には至らなかった。しかしこれら非従来型の磁束量子のSSMによる観測データが蓄積され、非整数などの他の非従来型磁束量子の観測につながる多くの知見が得られた。本研究では走査SQUID(超伝導量子干渉素子)顕微鏡を用いて非c軸配向のBi系超伝導体単結晶薄膜を観測し、固有ジョセフソン効果を利用したデバイス作製を目指してジョセフソン磁束の挙動を直接観察することにより可視化するものである。3年計画の初年度となる本年度においては、前述の走査SQUID顕微鏡による観察に必要な薄膜の向上および予備的な研究を実施した。良質な薄膜を得ることは本研究の成否を大きく左右するものである。このため本年度は低温物性評価装置の改良、X線回折法などによる評価手法の改善と、評価結果に基づく薄膜作製プロセスへのフィードバックなど、材料となる薄膜の品質向上を行った。非c軸配向膜は作製条件の範囲が非常に狭く、膜質も非常にデリケートである。低温下での抵抗-温度特性、電流-電圧特性などの超伝導特性評価に関しては、液体ヘリウムを消費せずに測定する環境の改良を行って実施した。これらの評価結果を薄膜作製プロセスにフィードバックすることにより、最終的に観察対象とするために必要な良質な薄膜を得るための知見が得られた。前述のように、本年度は、課題遂行に必要な材料の品質向上を目指した。走査SQUID顕微鏡による測定と材料の合成・評価は平行して行う予定であったが、試料となる材料の改善を優先させるほうがより良い結果に結びつくと判断した。このため、低温物性評価装置の改良、X線回折法などによる評価技術の改善と、評価結果に基づく薄膜作製プロセスへのフィードバックなど、薄膜の品質向上に注力した。これらにより、おおむね順調に進展していると考えられる。3年計画の2年度となる本年度においては、観察に必要な薄膜の向上、薄膜の評価、測定のための薄膜の微細加工のテスト、および前述の走査SQUID顕微鏡による予備的な測定を実施した。良質な薄膜を得ることは本研究の成否を大きく左右するものであるため、本年度も昨年度に引き続き、X線回折法などによる評価手法の改善と、電気的特定の評価を行い、材料となる薄膜の品質向上を行った。また、本年度においては、得られた薄膜を用いて非c軸配向膜の微細加工のテストを行った。微細加工に関しては、本研究の達成に必要な形状や電気的特性に一部改善が必要であることが判明し、次年度においてプロセスの改善を行う予定である。走査SQUID顕微鏡による予備的な測定においては、本研究が目的とする測定に適した膜厚や微細加工形状に関する指針が得られた。

これらの研究から、最終年度に必要な向けた知見が整った。これまで非c軸配向薄膜の電気特性、薄膜の微細加工のテスト、走査SQUID顕微鏡による予備的な測定をおこなってきた。走査SQUID顕微鏡による測定の実施年度に関しては測定の分量のリスケジュールをおこなってきたが、既に予備的な測定を行うことができた。これらにより、おおむね順調に進展していると考えられる。超伝導体中では磁束が量子化されるが、層状構造を持つ酸化物超伝導体ではその大きな異方性から、磁束量子は大きく扁平したジョセフソン磁束となる。Bi系超伝導体は固有ジョセフソン効果を発現する代表的材料であるが、薄膜を材料として用いることが実用化上必須である。一方、同効果を用いたデバイス作製には、磁束の微視的挙動の解明が不可欠である。本研究では走査SQUID(超伝導量子干渉素子)顕微鏡を用いて非c軸配向のBi系超伝導体単結晶薄膜を観測し、固有ジョセフソン効果を利用したデバイス作製を目指してジョセフソン磁束の挙動を直接観察することにより可視化するものである。3年計画の最終度となる本年度においては、観察に必要な薄膜の向上、薄膜の評価、走査SQUID顕微鏡による測定を実施した。測定対象となる超伝導薄膜の膜質の向上に関しては、基板および膜自体の作製が前年度より進み、評価手法も向上することができた。また、得られた薄膜を使用した走査SQUID顕微鏡による試料観察も進め、目的とするジョセフソン磁束に関しては学会発表水準のデータが得られた。しかし、試料の微細加工および走査SQUID顕微鏡測定に関しては、装置の故障や装置のマシンタイムの不足もあり、本年度は最終的な目標となる十分に明瞭な結果を得るには至っていない。走査SQUID顕微鏡による磁束量子の観察、データ解析および発表とりまとめにやや時間を要するため研究計画の変更を行い、期間を延長とした。平成29年度においては、本研究で用いる主たる装置となる走査SQUID顕微鏡の構成品に交換を必要とする故障が生じ、時間と費用を要したこと、本装置を用いる課題が他にも多数出てきたためにマシンタイムおよび実験・データ解析時間が十分に取れなかったこと、また一部予想外の結果が出たため追加の実験が必要となったことなどを総合的に判断し、実験および発表スケジュールを見直し、延長申請を行うこととした。これらにより、やや遅れている。本研究では走査SQUID(超伝導量子干渉素子)顕微鏡(SSM)を用いて非c軸配向のBi系超伝導体単結晶薄膜を観測し、固有ジョセフソン効果を利用したデバイス作製を目指してジョセフソン磁束の挙動を直接観察することにより可視化しようとするものである。
発達段階に応じた類推の指導とその電算化に関する基礎的・実験的研究

(1)電算画面で動く絵を用いて、点対称の関係にある二つの三角形を組み合わせて平行四辺形を構成し、さらにこれを2等分する手続きで三角形の面積を求める公式の意味を説明した文を画面で、中学1年生、3年生と大学生に閲読させた。次にこの手続きから類推して、点対称の関係にある台形を組み合わせて平行四辺形を構成する過程で台形の面積を求める公式の意味を理解し得る程度の指標を求めた。この指標を従属変数、これを説明する変数として対称概念の理解テスト成績、類推の成績、回転図形の識別を求めたイメージ操作能力などを用いた重回帰分析とパス解析とを被験者の年齢別に行った。上記の説明文やテスト図形の提示と反応は、画面に示された図形に対してタッチパネルを用いた選択反応を求める手続きによって測定した。結果からは、これまでの筆者の報告におけると同様、年少の被験者の場合はイメージ操作能力が、中3以上の段階では類推能力が台形の面積の求め方の理解に対する説明変数となった。以上のについてvan Hiele(1986)の幾何学習の発達段階と対応付けた考察を試みた。(2)説明文の理解において、先行オルグ、閲読中の挿入質問と閲読内容の図示から得られた促進効果を指摘する目的で、電算画面に提示される説明文の内容理解の指標としてその登場人物相互間の類似性の5段階評定値を求めてINDSCAL分析を試みた。結果からは上記の先行オルグ、質問のいずれもが内容の図示と相乗効果を示したが、図示は単独では促進効果を示すには至っていない。以上の結果については、類推成立過程、特に写像とその適用過程における自己評価と自己制御の意義を強調した。目下はこの点についての発達的研究に着手している。
ラットとマウスを用いた時間認知の発達メカニズムに関する比較心理学的検討

本研究の目的は時間認知における発達メカニズムの検討を比較心理学的に明らかにすることであり,そのためにラットとマウスにオペラント課題の時間認知課題を学習させた。平成27年度は初年度に続いてラットとマウスに,生体自らが反応で時間を作り出すピーク法(PI)を用いた時間弁別学習を行った。発達メカニズムの検討をするために経時的に実験を行う必要があった。時間の刺激としてはスピーカーから音を提示してその音の提示時間を認知させる。時間産生課題であるピーク法では時間認知の刺激時間の幅は30秒を基本としてそれよりも短い20秒とそれよりも長い40秒も実施して,そのピークの移行過程も検討した。ラットではPI 30sスケジュールで長期間訓練すると,その反応ピークが非常に安定的に観察されることわかった。PI 30sからPI 20sへ,あるいはPI 30sからPI 40sへと強化設定時間を移行したときのピーク時間の変化から,新たな数理モデルを提案した(J Comp Neurosci, 2015)。時間情報処理に関連する脳部位の測定指標として,学習と関連して海馬から観察される海馬θ波も有効だとわかった(Behav Brain Res 2015)。得られた成果は国内・海外の学会で積極的に発表公表してきている。申請時に計画していた学会誌の特集号も,日本基礎心理学会の学会誌である「基礎心理学研究」に「時間認知の解明への学際的アプローチ」と題して特集号の企画が実現した。平成27年度にこの特集号は発刊された。海外の国際学会発表としてはSociety for Neuroscience Annual Meetingに出席してインターバルタイミングに関する発表をして好評を得た。また同学会では多くの時間認知研究者と実りある議論をすることができ,この分野の研究発展の推進に寄与することができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は,ヒトを含めた動物に共通している時間認知を発達過程とともに縦断的に比較心理学的に検討することを目的としている。秒から分単位の時間知覚研究は,時間に関する比較心理学研究においてたいへん重要なものである。動物における実験的なオペラント条件づけの時間弁別課題では,間隔二等分課題やピーク法がよく用いられる。インターバルタイミングと呼ばれる短い時間認知は持続時間の知覚や情報処理能力を調べるものである。ラットとマウスを用いて数秒から数十秒のインターバルタイミングにおける発達メカニズムの比較心理学的な検討に焦点をあてるものである。課題が採択されてからラットとマウスで実験を継続して実施している。ラットではPI 30sスケジュールで長期間訓練すると,その反応ピークが非常に安定的に観察されることが今回の結果から明らかとなった。これらの得られた成果は国内・海外の学会で積極的に発表公表してきている。特集号には12本の原稿が寄せられて,査読を含めて現在その編集作業中である。海外の国際学会発表としては平成26年9月10日から12日までの期間,南米コロンビアの首都ボゴタで開催された国際比較心理学会において,重要な情報交換の場としてラットとマウスにおける時間認知の国際シンポジウムを企画して開催した。多くの参加者から非常に好評を得たシンポジウムであり,「こころの時間学」に関係する時間認知研究を世界に広める貢献ができた。今回のシンポジウムを通して国際的にも時間認知に関する比較心理学的な研究が注目されていると感じた。本研究は研究代表者である坂田が研究全体を取り仕切り時間認知に関する行動実験を実施している。

ラットを用いた時間認知課題であるオペラント条件づけのピーク法と間隔二等分課題の訓練が先行研究で報告されているように順調に進んでいること,ラットのPI 30sスケジュールではその反応が非常に安定して観察されることが明らかになったこと,さらにマウスでもラットと同じPI 30sスケジュールのピーク法訓練を実施しており,ある程度の時間的行動パターンの形成が見られていること,および今後もこの実験を継続して実施していくことの目途がついていることから,来年度はこれらのデータを基にしてある程度の発達メカニズムの解明への期待がもてるため。27年度が最終年度であるため、記入しない。おおむね順調に進展していることから,今年度と同様に次年度以降もラット,マウスのピーク法および間隔二等分課題の訓練を続ける。個体数も増やしながら,縦断的な研究として時間情報処理に関する時間認知における発達メカニズムの解明をラットとマウスを中心にさらに進める予定である。
老化細胞特異的転写因子の解析

我々はこれまでに、フィブロネクチン遺伝子の発現が老化に伴って増加することを明らかにしている。フィブロネクチン遺伝子のプロモーター領域には3つのcAMP responsive element (CRE)の存在が知られており、これがcAMP量の変動のみならず、血清刺激に対する応答にも関与していること、また、恒常的発現にも関与していることが示されている。我々は、これらを含むフィブロネクチン遺伝子の上流約500塩基のプロモータ領域部分について詳細な検討を行い、この領域に存在する10個の転写因子結合部位と思われる配列に結合する蛋白質の幾つかに、老化細胞において結合量が増加するものを見い出した。それは、上述の3つのCREの内CREとしては最も弱い活性を示す-260CREや、TATA boxあるいはAP-2結合部位等に結合する蛋白質に見られた。こうした変化が老化細胞におけるフィブロネクチン遺伝子の発現亢進を導いているかについて検討を加えるために、老化細胞において特異的に結合が増加している蛋白質について調べた。まず、老化細胞のものと若い細胞のものにおける性質の違いについて検討するために、各領域に結合する蛋白質の分離・精製を行った。しかし、検討する領域数が多く、また結合している蛋白質の種類が多いために、且つ結合する蛋白質の量が少ない等、困難が多いために現在も分離・精製に努めている状況である。一方、老化に伴い発現が増加する他の遺伝子についてもその制御を明らかにするために、そうした遺伝子のクローン化を行った。その内、ミトコンドリアDNAにコードされるNADH脱水素酵素のサブユニット2および3、ATP分解酵素6、そして16SリボソームRNAの4種のRNAの発現が、2種類の血管内皮細胞および2種類の線維芽細胞の老化細胞において高まっていることを明らかにし、発表した。我々はこれまでに、フィブロネクチンおよびエンドセリン-1遺伝子の発現が老化に伴って増加することを明らかにしている。フィブロネクチン遺伝子のプロモーター領域には3つのcAMP responsive element(CRE)の存在が知られており、これがcAMP量の変動のみならず、血清刺激に対する応答にも関与していること、また、恒常的発現にも関与していることが示されている。我々は、これらを含むフィブロネクチン遺伝子の上流役500塩基のプロモーター領域部分について詳細な検討を行い、この領域に存在する10個の転写因子結合部位と思われる配列に結合するタンパクの幾つかに、老化細胞において結合量が増加するものを見いだした。それは、上述の3つのCREの内、CREとしては最も弱い活性を示す-260CREやTATA boxあるいはAP-2結合部位等に結合するタンパクに見られた。こうした変化が老化細胞におけるフィブロネクチン遺伝子の発現亢進を導いているかについて検討を加えるために、老化細胞において特異的に結合が増加しているタンパクについても調べている。まず、老化細胞のものと若い細胞の物における性質の違いについて検討するために、各領域に結合するタンパクの分離・精製を行っている。検討する領域数が多く、また結合しているタンパクの種類が多いために、且つ結合するタンパクの量が少ない等、困難が多いために現在も分離・精製が進行中である。また、若い細胞の抽出液を用いたin vitro転写系も、条件の検討を行い系を確立しつつある。一方、フィブロネクチン遺伝子上流500塩基のプロモーター領域よりさらに上流の関与についても検討するために、およそ1.3キロ塩基上流までをクローン化して検討を行っている。これまでに、フィブロネクチン遺伝子の発現が老化に伴って増加することを明らかにしている。

フィブロネクチン遺伝子のプロモーター領域には3つのcAMP responsive element (CRE)の存在が知られており、これがcAMP量の変動のみならず、血清刺激に対する応答にも関与していること、また、恒常的発現にも関与していることが示されている。これらを含むフィブロネクチン遺伝子の上流約500塩基のプロモーター領域の10個の転写因子結合部位と思われる部分について詳細な検討を行った。その結果、フィブロネクチン遺伝子の転写開始点より約260塩基上流に存在するcAMP responsive element(-260CRE)部位に結合する蛋白質に老化に伴う結合増加が見られたので、まずこの部位に結合する蛋白質の分離・精製をてがけた。しかしながら、もともと結合量の少ないものであることなどから困難が多く、この蛋白質を同定する等の情報が得られるには至っていない。また、-20TATA box部位、-40部位、-120部位、-150CAATelement部位にも、老化に伴い結合量増加を示す蛋白質の存在が示されているが、それらを分離・精製し同定するには至っていない。これらもすべて結合量が少ないものなので困難が多いが、現在も本研究の目標に向けて分離・精製に努めている。一方、老化に伴い発現が増加する他の遺伝子についてもその制御を明らかにするために、老化細胞で発現の高い遺伝子のクローン化を行った。その内、ミトコンドリアDNAにコードされるNADH脱水素酵素のサブユニット2および3、ATP分解酵素6、そして16SリボソームRNAの4種のRNAが、2種類の血管内皮細胞および2種類の線維芽細胞の老化細胞において発現が高まっていることを明らかにし、発表した。
自家蛍光標識レトロウイルスによる造血幹細胞マ-キング

Green fluorescent protein(GFP)を用いた自家蛍光標識レトロウイルスベクターを構築するためにまず、血液細胞においてGFPを発現させるにはどのプロモータが適当か、また野生型GFPとある点突然変異を持つGFP(S65T)のどちらが強い蛍光を発するかを検討した。血液細胞にゲノムあたり1コピーのGFP遺伝子を組み込む条件下では、1.検討したプロモータのうち、retrovirus long terminal repeat promoterとcytomegalovirus early promoterによる発現は不十分だが、SRαpromoterおよびβ-actin promoterによる発現は良好である、2.野生型GFPよりS65Tの方が蛍光強度において優れている、という結果を得た。以上より、SRα-S65Tを発現カセットとしてMSCVレトロウイルスに組み込んだベクター(MSCV/SRα-S65T)を構築した。MSCV/SRα-S65TをGP^+E86パッケージング細胞にトランスフェクトして得たウイルス産生細胞集団から、GFPの蛍光を指標にセルソーターで高ウイルス力価のものを選別し得た。選別したウイルス産生細胞との共培養感染法により、マウス白血病細胞株とマウス初代骨髄細胞にそれぞれ約10%の頻度でGFPを発現させることができ、GFP発現細胞をセルソーターで分取することに成功した。分取した骨髄細胞を致死量放射線照射したマウスに注射したところ、得られた脾コロニー(CFU-S_<12>)の大部分が蛍光を発しており、MSCV/SRα-S65Tが未分化な造血幹細胞に感染して機能を発現したことが確認された。以上の結果は、GFPが造血幹細胞の標識に使用できることと、これを用いて外来遺伝子が導入された細胞だけを短期間に選別分取できることを示しており、血球分化・増殖の動態解明と遺伝子治療の研究に画期的な手段を与えるものである。
核内Gタンパク複合体:RCC1/Ranの細胞周期制御における機能の研究

RCC1タンパクは西本等によって発見され、その細胞内存在量はヒストンにも匹敵する核タンパクである。Ponstingle等はこのタンパクと特異的に結合する低分子量Gタンパク:Ranを発見した。RanはRCC1の約20倍量あると推定されており、両者とも酵母からヒトまで良く保存されている。本研究の目的は夫々の発見者が共同研究することでより深く、そして効率良くRCC1/Ran複合体の細胞周期における機能を研究することであった。この共同研究は西本等が発案しPonstingl博士等に呼びかけたものである。西本等は分離したRCC1cDNAに多くの変異を導入しその生物活性をハムスター由来の温度感受性変異株tsBN2と分裂酵母の系を用いて研究する計画を立てた。この計画を実行するにあたり作成された変異RCC1タンパクがどのようにしてRanタンパクと作用するかを知ることは大切な要素となる。そこで、Ranタンパクを生化学的に分離しRCC1タンパクとの結合を証明したPonstingl博士等に呼びかけ変異RCC1タンパクとRanとの結合を調査していただくことにした。彼らはRCC1/Ran複合体の下流にあるGタンパク:Ranのエフェクターを探しておりその成果はRCC1タンパクの機能解析にとり重要であると考えた。我々は既にRCC1cDNAの多数の変異体を分離しており、大腸菌で発現し精製したRCC1タンパクがGEP活性を持っていることをPonstingl博士より供給されたRanタンパクを用いて確認している。また分裂酵母内でRCC1タンパクを過剰に発現させると酵母が死ぬことも確認している。ドイツのグループの役割として以下のことを考えた。1)Ranタンパクの分離精製と供給。2)変異RCC1タンパクとRanとの結合性を調査する。3)Ranタンパクに変異を導入しRCC1タンパクとの結合性、GTPase活性を調べる。4)低分子Gタンパク:Ranのエフェクターを生化学的に探す。計画は2年間であったが1年に短縮されたため、下記の点に重点を置いて研究した。1。アラニンスキャンニングの方法に従いRCC1タンパクの7回繰り返し構造の中にある全ての電荷を持つアミノ酸をアラニンに変えて、変異RCC1タンパクの活性を次の方法で調べる。1)変異RCC1cDNAを動物細胞での発現ベクターにつなぎtsBN2変異の相補活性を調べる。2)変異RCC1cDNAを大腸菌で発現させこのタンパクを精製する。その上で、次の実験を行なう。a:Ponstingl博士等のグループにより精製されたRanタンパクを用いて変異RCC1タンパクのGEP活性を調べる。b:変異RCC1タンパクのRanとの結合性を調べる。2。RCC1/Ranの系と接触しているタンパクを探す。このためには酵母のtwo-hybrid法を用いた。ドイツのグループはこれを生化学的に行なっている。研究は継続中であり1年で目立った成果はでていないが、強いていえば以下の成果が挙げられる。1。両方のグループの親密性がました。当然のことではあるが今後の共同研究にとって良い種をのこすことができた。2。7回繰り返し構造の特定のアミノ酸を変えるとRCC1タンパクのGEP活性が完全にきえることがわかった。これら、GEP活性をなくしたRCC1タンパクはtsBN2変異を相補する活性もなくしていた。3。温度感受性変異を起こしたRCC1タンパク:BN2-RCC1のGEP活性が高温で数分以内に消えることがわかった。これは変異のためにタンパクが消えるのよりははるかに前におこった。4。Ranタンパクと結合する多数のタンパクの存在が我々の方法で示唆された。その内、2個は生化学的方法でドイツのグループにより同定されたものと一致した。この因子と変異RCC1タンパクとの作用は今後の大切な課題である。両グループともに同じような計画を持っていることがわかり今後とも共同研究を継続することでより親密で、深いそして効率のよい研究が可能になると思われる。

ドイツのグループの役割として以下のことを考えた。1)Ranタンパクの分離精製と供給。2)変異RCC1タンパクとRanとの結合性を調査する。3)Ranタンパクに変異を導入しRCC1タンパクとの結合性、GTPase活性を調べる。4)低分子Gタンパク:Ranのエフェクターを生化学的に探す。計画は2年間であったが1年に短縮されたため、下記の点に重点を置いて研究した。1。アラニンスキャンニングの方法に従いRCC1タンパクの7回繰り返し構造の中にある全ての電荷を持つアミノ酸をアラニンに変えて、変異RCC1タンパクの活性を次の方法で調べる。1)変異RCC1cDNAを動物細胞での発現ベクターにつなぎtsBN2変異の相補活性を調べる。2)変異RCC1cDNAを大腸菌で発現させこのタンパクを精製する。その上で、次の実験を行なう。a:Ponstingl博士等のグループにより精製されたRanタンパクを用いて変異RCC1タンパクのGEP活性を調べる。b:変異RCC1タンパクのRanとの結合性を調べる。2。RCC1/Ranの系と接触しているタンパクを探す。このためには酵母のtwo-hybrid法を用いた。ドイツのグループはこれを生化学的に行なっている。研究は継続中であり1年で目立った成果はでていないが、強いていえば以下の成果が挙げられる。1。両方のグループの親密性がました。当然のことではあるが今後の共同研究にとって良い種をのこすことができた。2。7回繰り返し構造の特定のアミノ酸を変えるとRCC1タンパクのGEP活性が完全にきえることがわかった。これら、GEP活性をなくしたRCC1タンパクはtsBN2変異を相補する活性もなくしていた。3。温度感受性変異を起こしたRCC1タンパク:BN2-RCC1のGEP活性が高温で数分以内に消えることがわかった。これは変異のためにタンパクが消えるのよりははるかに前におこった。4。Ranタンパクと結合する多数のタンパクの存在が我々の方法で示唆された。その内、2個は生化学的方法でドイツのグループにより同定されたものと一致した。この因子と変異RCC1タンパクとの作用は今後の大切な課題である。両グループともに同じような計画を持っていることがわかり今後とも共同研究を継続することでより親密で、深いそして効率のよい研究が可能になると思われる。
タイ・マレーシア・シンガポールにおける就学前教育の実態に関する実証的比較研究-民族性・国民性の育成と国際化への対応を中心として-

1.現地調査の実施・シンガポール...2002年8月と2004年1月にそれぞれ1週間、池田が現地調査を行った。主な訪問先は、イスラム系の自助組織やキリスト教系団体が運営する幼稚園、民間教育プロバイダー、教育省就学前教育課などである。・マレーシア...2003年8月に2週間、池田と手嶋が現地調査を行った。主な訪問先は、イスラム系自助組織やこれらの組織が運営する幼稚園、民間教育プロバイダー、教員養成機関などである。・タイ...2002年12月に2週間、鈴木が現地調査を行った。主な訪問先は、タイ文部省、タイ厚生省保健衛生局、タイ内務省コミュニティ開発局、バンコク都教育局などである。各国ともに就学前段階から、(1)英語教育に積極的に取り組んでおり、教授法の開発や教員養成制度の整備が進められている、(2)公的機関では、国民意識の醸成のために、国旗や国史の学習、国家行事への参加など、各種プログラムが導入されている、(3)民族・宗教組織が運営する機関では、各自の伝統、文化が現在も強力に実践されていた。2.研究成果の公開(1)学会発表...2003年6月の日本比較教育学会第39回大会(於・玉川大学)において、池田と鈴木が「東南アジアの就学前教育に見る国際化への対応(1)-タイ・シンガポールの事例から-」というタイトルで発表を行った。また、2004年6月の同学会第40回大会(於・名古屋大学)では、池田・鈴木・手嶋の3名が同タイトルの(2)として発表を行う予定である。(2)講演会や文科省エルネットでの発表...山梨県教育委員会や山梨県立女子短大主催の各種の社会人講座で、本科研の現地調査の成果として、東南アジア地域の幼児教育・保育について講演を行った。また2004年度の文科省エルネット講座において、「東南アジアの幼児教育・保育」のテーマでの採用がなされ、近く録画を行い、全国配信される予定である。(3)中間報告書の刊行・配布...2003年3月に刊行した中間報告書(資料分析集)を、上述の日本比較教育学会第39回大会の発表会場で配布した。また、2003年8月と2004年1月のマレーシア、シンガポールでの現地調査においても、同報告書を現地の関係省庁、幼児教育・保育関連機関にて配布し、研究成果の還元・公開に努めた。(4)ホームページでの情報公開...山梨県立女子短期大学のホームページに、「東南アジアの幼児教育・保育」と題するコーナーを設け、対象3ヶ国の幼児教育・保育の状況について写真やコメントなどを付して紹介した。(5)3ヶ国の幼児教育・保育に関するDVDの配布...現地調査で撮影したビデオは、PCにて編集作業を行い、解説テロップなども加えてDVD化した。上記ホームページで教材・研究用資料として無料配布する旨を案内し、幾つかの大学・短大に配布した。(6)研究成果報告書の作成...提出が義務づけられている成果報告書を、上記日本比較教育学会第40回大会にて、発表資料の一部として配布する予定である。また現地で訪問した各機関へも今後、持参・郵送にて配布していきたい。

また、2003年8月と2004年1月のマレーシア、シンガポールでの現地調査においても、同報告書を現地の関係省庁、幼児教育・保育関連機関にて配布し、研究成果の還元・公開に努めた。(4)ホームページでの情報公開...山梨県立女子短期大学のホームページに、「東南アジアの幼児教育・保育」と題するコーナーを設け、対象3ヶ国の幼児教育・保育の状況について写真やコメントなどを付して紹介した。(5)3ヶ国の幼児教育・保育に関するDVDの配布...現地調査で撮影したビデオは、PCにて編集作業を行い、解説テロップなども加えてDVD化した。上記ホームページで教材・研究用資料として無料配布する旨を案内し、幾つかの大学・短大に配布した。(6)研究成果報告書の作成...提出が義務づけられている成果報告書を、上記日本比較教育学会第40回大会にて、発表資料の一部として配布する予定である。また現地で訪問した各機関へも今後、持参・郵送にて配布していきたい。1.現地調査の実施・本年度は、シンガポールとタイにおいて、国公立の幼稚園・保育園や関連行政機関を中心に、下記期間・訪問先にてインタビュー調査を行った。また、図書館や書店でも関係資料の収集にあたった。(1)シンガポール(池田)・・・2002年8月24日31日。ニーアン・ポリテクニク幼児教育学部、人民協会チャイルドケアセンター、全国労働者組合評議会チャイルドケアセンター。(2)タイ(鈴木)・・・2002年12月15日22日。タイ文部省、タイ厚生省保健衛生局、タイ内務省コミュニティ開発局、バンコク都教育局。2.研究成果の公開・池田が後述の雑誌にてシンガポールの先進的な二言語教育や多文化保育の方法を紹介した。具体的には、個別テーマを設定して、それを中心に英語や中国語、ダンスや図工などの全ての教育活動を組み立てて行くという"統合シークエンス法"について、カリキュラム構成図や教材などを用いながら解説した。・山梨県立女子短期大学のホームページに「東南アジアの幼児教育・保育」と題するコーナーを設けて、シンガポールとタイの幼児教育の状況を写真やコメントなどで、分かりやすく紹介した。3.研究資料集の刊行・タイ、シンガポール、マレーシアにおける就学前教育関連の基本資料に、各国担当者が解説を付けて、資料集として公刊した。これは日本比較教育学会などの関連学会において、発表時に配布する予定である。4.国内会合の開催・2002年7月27旧に、筑波大学大学研究センターで第1回の国内会合を開いた。研究枠組みの設定、資料・文献リストの作成、各国の調査方針などについて討議した。1.現地調査の実施(1)マレーシア調査...2003年8月に2週間、池田と手嶋がマレーシアにおいて現地調査を行った。主な訪問先は、イスラム系自助組織やこれらの組織が運営する幼稚園、民間教育プロバイダー、教員養成機関などである。(2)シンガポール調査...2004年1月に1週間、池田がシンガポールにおいて現地調査を行った。主な訪問先は、イスラム系の自助組織やキリスト教系団体が運営する幼稚園、民間教育プロバイダー、教育省就学前教育課などである。以上の現地調査から、昨年のタイでの調査も含めて判明した点は、各国ともに就学前段階から、