hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ホジキンリンパ腫におけるＣＤ３０によるＨＳＰ９０誘導を介したシグナル伝達制御

本研究はCD30シグナルによるHSP90を介した「Hodgkinリンパ腫(HL)における重要なシグナル伝達経路:NF-κB, ERK, AKT, JAK-STAT等とのクロストークを明らかにする」ことにより、HLにおけるシグナル伝達の脱制御を「従来のような単一経路の積み上げによる説明ではなく、クロストーク機構により俯瞰的に明らかにする」ことを目標とする新たな試みである。我々はFL細胞にCD30を過剰発現させるとHSP90の発現誘導とNF-κB, ERK, AKT, JAK-STATの活性化を誘導することを発見した。このことはCD30がHSP90の誘導を介して様々なシグナル伝達経路のクロストークと活性化維持に寄与することを示唆する。さらにHL細胞株においてCD30をノックダウン、マイクロアレイによる下流のシグナル伝達分子の挙動を網羅的な解析にて行ったところ、多くの遺伝子に変動を認め、HLにおいてCD30過剰発現によるの恒常的な活性化が、下流の遺伝子群に強い影響を与えている事が示唆された。これらの遺伝子群にはHSP90に加えてHLにおける重要なシグナル伝達経路:NF-κB, ERK, AKT, JAK-STATに関わる遺伝子が含まれた。ウエスタン法や免疫染色によっても上記結果を示唆する結果が得られた。さらにHSP90の阻害剤により、これらのシグナル伝達経路が抑制される事が示された。以上のことはCD30がHSP90の誘導を介して様々なシグナル伝達経路のクロストークを維持し、HL特有の分子基盤を維持している可能性を示唆した。Hodgkinリンパ腫(HL)においてはNF-κB, ERK, AKT, JAK-STATを代表とするシグナル伝達系の恒常的な活性化が報告されているが、いずれも個別の細胞膜から核への縦の方向の議論が中心であり、各シグナル伝達経路間のクロストークについては明らかではない。本研究はCD30シグナルによるHSP90誘導を一つの軸として各シグナル伝達経路間のクロストークを明らかにするものである。今年度はHSP90のプロモーター領域の単離を行い、HSP90プロモーター活性誘導に重要な領域を特定、その領域に結合しうる転写因子を解析、同定した。HSP90のプロモーターのdeletion mutantはあらかじめ解析しておいた既存の転写因子のマップを参考として作成しておき、可能性の高い既知の転写因子の同定を第一目標とした。HL細胞株等を用いた解析によりHSRE(heat shock responsive element)をHSP90プロモーターに見いだし、heat shock factor 1(HSF1)によりHSP90が誘導されている事が示唆された。さらにCD30シグナルがHSF1をリン酸化することをCD30の過剰発現系およびHL細胞株におけるCD30ノックダウンの系を使用して明らかにした。HSF-1はCD30のシグナルによらず核内に存在して、CD30シグナルによりリン酸化を受けることが示唆された。このことはHSF-1がCD30シグナルとは別の経路によって誘導されている事が示唆される。HLの臨床検体と正常扁桃をコントロールとして用いた検討では、HL細胞においてHSP90、HSF-1、リン酸化HSF-1が強く発現していることが示された。期待した結果を得る事が出来ているから。古典的Hodgkinリンパ腫(cHL)細胞では複数のシグナル伝達経路の恒常的活性化を認め、病態への関与が報告されている。しかしながら、これらのシグナル伝達経路の統括的制御機構は明らかではない。本研究ではCD30によるheat shock protein (HSP)90の誘導機構の解析を通して、cHL細胞で恒常的に活性化、病態と関わるシグナル伝達経路との横断的関係を検討した。FL細胞でのCD30過剰発現、cHLおよび未分化大細胞型リンパ腫(ALCL)細胞株でCD30をノックダウン、さらにHSP90阻害剤を用いて病態と関わるとされる下流のシグナルの変化を検討した。さらにレポータージーンアッセイ法などを用いてCD30によるHSP90誘導機構を解析した。FL細胞ではCD30過剰発現によりHSP90の誘導に加えてNF-κB、ERK/MAPK、AKT、JAK-STAT経路の活性化を認めた。一方、cHL細胞株でCD30をノックダウンするとHSP90は抑制、上記経路の抑制を認めた。HSP90阻害剤でも同様の効果を認めた。cHL細胞株でCD30のノックダウンにより、HSP90の誘導に関わるHeat shock factor (HSF)-1の活性低下を認めた。FL細胞にCD30を過剰発現するとJNK-HSF-1活性化を介してHSP90のプロモーター活性の上昇を誘導した。CD30はHSP90の誘導を通して、cHL細胞において恒常的に活性化し病態と関わるとされるNF-κB、MAPK/ERK、AKT、JAK-STAT経路のシグナルの活性化を増強して横断的に統合する機能を果たし、cHL細胞の病態に関与していることが示唆された。一方、cHL細胞におけるCD30の機能はNPM-ALK陽性ALCLではALKによりにより代替されていることを示唆する結果を得た。初年度に計画していた実験はほぼ完了し、仮説の検証に必要な基本的なデータを取得できたから。CD30シグナルによるHSF1のリン酸化を介したHSP90誘導機構に関与するCD30シグナル伝達経路について明らかにする事を目的にする。CD30を過剰発現して恒常的にHSP90の発現を認めるFLCD

30細胞を使用して、これまでCD30の直接の下流にあることが報告されているNF-κB、ERK1/2、p38MAPKに加えTRAFの下流にあると報告されているJNK経路の阻害剤を用いて、HSP90の発現に対する効果をウエスタン法を用いて検討する。一方、HLと同じくCD30を過剰発現する未分化大細胞型リンパ腫(ALCL)におけるCD30-HSF-1-HSP90経路の意義について検討する。ALCLにはNPM-ALK陽性のものと陰性のものがある。NPM-ALK陽性ALCL細胞株においてALK阻害剤によるNF-κB, ERK, AKT, JAK-STAT経路の変化を検討する。さらに細胞株および臨床検体を用いてHSP90、HSF-1、リン酸化HSF-1の発現を検討する。さらにNPM-ALKによるHSP90誘導の可能性について検討するためにBA/F3細胞に恒常的にNPM-ALKを発現するトランスフォーマントをベクターのものコントロール細胞とともに作製して、HSP90、HSF-1、リン酸化HSF-1の発現を検討する。NPM-ALK陽性ALCL細胞株においてALK阻害剤を用いてHSP90、HSF-1、リン酸化HSF-1の発現の変化について検討する。さらにNPM-ALK陽性ALCL細胞株とNPM-ALK陰性ALCL細胞株においてCD30をsiRNAを用いてノックダウンしてHSP90、HSF-1、リン酸化HSF-1の発現の変化について検討する。以上の結果をふまえてHL、NPM-ALK陽性ALCLとNPM-ALK陰性ALCLにおけるCD30を介したHSP90経路の役割について比較検討する。がん、細胞生物学、分子標的療法HSP90のプロモーター領域の単離を行う。HSP90プロモーター活性誘導に重要な領域を特定したらその領域に結合しうる転写因子を解析、同定する。HSP90のプロモーターのdeletion mutantはあらかじめ解析しておいた既存の転写因子のマップを参考として作成しておき、可能性の高い既知の転写因子の同定を第一目標とする。さらに同定した転写因子をもとに上流シグナルを含めた制御機構を明らかにしていきたい。同定した転写因子と関連分子をもとにHSP90プロモーター活性誘導を上流からのシグナルからの制御機構と言う形で具体的に明らかにする。現時点ではheat shock factor 1(HSF1)の関与を疑っており、HSF1-HSRE(heat shock responsive element)という視点での解析を行う。研究は順調に進捗しているが、一部の実験が次年度に繰り越されたため。研究は順調に進捗しているものの、論文投稿が予定より遅れ関連費用を繰り越しているため。また一部の実験を繰り越したため。実験に使用する物品費に使用する予定である。論文投稿関連費用への使用と実験のための物品費として使用する。
CYP2C9の誘導が関与する薬物間相互作用の網羅的予測と注意喚起に関する研究

【研究目的】薬物代謝酵素チトクロームP450(CYP)2C9は、抗凝固薬、糖尿病薬、NSAIDsなどの薬物の代謝に関与しており、これらの薬物との相互作用に十分配慮する必要がある。しかし、臨床におけるCYP2C9の誘導の程度については十分明らかでない。そこで、本研究では、CYP2C9の誘導作用を有することがin vitroで確認されているリファンピシンについて、CYP2C9の誘導作用の程度を調査し、関連する薬物間相互作用の網羅的な予測を検討した。【研究方法】既に我々は、CYP3A4の阻害および誘導による相互作用について、阻害薬の阻害率(IR_<CYP3A4>)あるいは誘導薬のCYP3A4のクリアランス活性の増加(IC_<CYP3A4>)と、基質薬のCYP3A4のクリアランスの寄与率(CR_<CYP3A4>)から精度良く予測出来ることを報告している。そこで、この方法をCYP2C9の誘導による相互作用への適用を試みた。なお一部の薬物は市販の発現系ヒトP450を利用し、RAF法でCRを確認した。代謝速度はLC-MS/MSにて未変化体の消失を定量することで評価した。CYP2C9が代謝に関与する基質薬11剤のCR_<CYP2C9>をフルコナゾール併用時のAUC変化の報告から算出した。ついで、リファンピシンのIC_<CYP2C9>をリファンピシン併用時のS-ワルファリンのAUC変化の報告から算出した。算出したリファンピシンのIC_<CYP2C9>と各基質薬のCR_<CYP2C9>から、リファンピシン併用時の他のCYP2C9基質薬のAUC変化の予測値を算出し、報告値と比較して、予測精度を検証した。【研究成果】リファンピシンのIC_<CYP2C9>は1.14と算出され、この値を用いてリファンピシン併用時の他のCYP2C9基質薬のAUC変化を予測したところ、11剤中全ての薬剤において報告値の±20%の範囲内であった。本方法は、リファンピシンのCYP2C9の誘導による相互作用の程度を精度良く網羅的に予測可能であり、臨床報告が無い薬剤との相互作用の程度を評価するのに有用と考えられた。
脂肪酸伸長酵素Elovl6によるインフラマソーム制御機構の解明

生活習慣病の発症に重要な慢性炎症の制御機構の1つとして注目されているNLRP3インフラマソームにおける脂肪酸伸長酵素Elovl6の役割を解析した。Elovl6欠損マウスの肝細胞および腹腔マクロファージでは、飽和脂肪酸(パルミチン酸)によるNLRP3インフラマソームの活性化が抑制された。このとき、パルミチン酸刺激により活性化されるNLRP3インフラマソームの上流制御因子の1つが、Elovl6欠損マウスの細胞では抑制されることが明らかとなった。Elovl6の阻害が慢性炎症を抑制し、生活習慣病の改善にはたらく可能性が示唆された。近年、肥満に伴う代謝性疾患の発症・進展に、肥満関連ストレスセンサーであるインフラマソームが重要な役割を果たすことが明らかになってきた。申請者は、脂肪酸伸長酵素Elovl6のノックアウトマウスの解析から、生活習慣病の発症・進展における脂肪酸の質の重要性を明らかにし、また最近、Elovl6欠損マウスの初代肝細胞では、飽和脂肪酸であるパルミチン酸により惹起されるNLRP3インフラマソームの活性化と炎症が抑制されることを明らかにした。そこで本研究では、Elovl6によるインフラマソームの制御機構を肝細胞およびマクロファージで解析し、脂質蓄積病態において細胞内で量的・質的に変化してインフラマソームを制御する脂質の同定と、その脂質による炎症制御機構を分子レベルで明らかにすることを目的とする。本年度は、野生型およびElovl6欠損マウスの肝細胞とマクロファージのパルミチン酸(C16:0)によるインフラマソーム活性化の違いを評価するとともに、マイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。Elovl6欠損マウスの肝細胞ではパルミチン酸によるIL-1betaの発現および分泌が抑制された。遺伝子発現解析から、WTとElovl6欠損マウスの肝細胞では取り込まれたパルミチン酸の代謝経路が異なることが明らかとなった。Elovl6欠損マウスのマクロファージにおいてもパルミチン酸によるインフラマソーム活性化が抑制される傾向が得られているが、各実験間でのばらつきが大きく、さらなる追試および実験条件の検討が必要である。申請者は脂肪酸伸長酵素Elovl6のノックアウトマウスの解析から、生活習慣病の発症・進展における脂肪酸の質の重要性を明らかにし、また最近、Elovl6欠損マウスの初代肝細胞では、飽和脂肪酸であるパルミチン酸により惹起されるNLRP3インフラマソームの活性化と炎症が抑制されることを明らかにした。そこで本研究では、Elovl6によるインフラマソームの制御機構を肝細胞およびマクロファージで解析し、脂質蓄積病態において細胞内で量的・質的に変化し、インフラマソームを脂質する脂質の同定と、その脂質による炎症制御機構を分子レベルで明らかにすることを目的とした。本年度は、肝細胞特異的Elovl6欠損マウスとマクロファージ特異的Elovl6欠損マウスにおける炎症病態の解析と、初代肝細胞およびELOVL6をノックダウンしたHepG2細胞でのパルミチン酸による炎症を解析した。高脂肪・高コレステロール食による肝臓の炎症は、肝細胞特異的Elovl6欠損マウスでは抑制されなかった。マクロファージ特異的Elovl6欠損マウスでの検討は現在進行中である。初代肝細胞およびELOVL6ノックダウンHepG2細胞では、パルミチン酸によるインフラマソームの活性化が抑制された。また、パルミチン酸で活性化されるが、Elovl6の欠損またはノックダウンでは抑制されるストレス応答経路を見出した。代謝内分泌学一部の実験で、各実験間でのデータのばらつきが大きく、さらなる追試および実験条件の検討が必要であるため。パルミチン酸を負荷した野生型およびElovl6欠損マウスの肝細胞、マクロファージの脂質分析を行う。また、肝細胞特異的Elovl6欠損マウスおよびマクロファージ特異的Elovl6欠損マウスを用いたin vivoでの炎症病態の解析を行う。
糖鎖プロファイリングによる再生医療に対する新規バリデーション・システムの創成

幹細胞による再生医療を安心して行っていくためには、移植する細胞の品質を評価することが必要である。様々な細胞評価法が提示されている中、本研究では細胞表層糖鎖の発現解析プロファイリングによる品質評価を試みた。移植用ソースとして利用される種々のヒト間葉系幹細胞、多能性幹細胞について糖鎖プロファイルの取得を行った結果、幹細胞が有する分科ポテンシャルを反映した特徴的な糖鎖プロファイルがあることがわかった。治療目的に適した細胞の選択をより早く行うことが可能となり今後の臨床での応用が期待される。本研究では、様々な組織から樹立したヒト間葉系細胞ならびにヒトES細胞において、レクチンマイクロアレイ技術による糖鎖プロファイルデータの蓄積を進めている。24年度は、さらにデータの蓄積を進めてるとともに、これまで得られたデータについてバイオインフォマティックスによる解析を行い、臨床に資する良好な細胞の品質管理に向けた評価法に関する検証を始めた。具体的には、糖鎖プロファイリングによる解析結果について、遺伝子発現解析結果との比較、細胞表面抗原解析結果との比較を行うとともに、ウエットの実験として、解析した細胞のin vitro/ in vivoでの分化特性試験や細胞移植による安全性・有効性評価を行った。これまでのところ、各組織由来の間葉系細胞では、それぞれにユニークな特性を有していることがわかってきているが、それを反映した糖鎖プロファイリングの解析結果が得られている。またES細胞では、未分化性ならびに分化特異的な糖鎖構造の存在がわかり、その構造については質量分析によっても確認することができた。以上のことから糖鎖プロファイルによる細胞評価は、細胞の特性を的確に反映していることを強く示唆する結果が得られている。今後さらに精度を上げるために他の細胞群によるデータの蓄積をはかるとともに、再生医療にむけた安全性・有効性の品質管理評価基準の設定ならびに、適切な細胞選択を行うためのレクチンによる選別技術の検証を進めていく予定である。本研究では多能性幹細胞であるヒトES細胞、iPS細胞ならびに体性幹細胞である主として間葉系幹細胞について、細胞表層糖鎖を網羅的に解析するレクチンアレイ技術による糖鎖プロファイリングを進めている。25年度は、多能性幹細胞のもつ未分化性ならびに分化特性による特異的なレクチンの抽出を行った。レクチンアレイデータを元に統計的解析を行い、まず未分化特異的なレクチンを数種見出した。これは分化誘導後の残存する未分化細胞の存在の有無の判断ならびに除去することを目的とする。どの程度の未分化細胞残存で検出可能かの定量検証ならびに、細胞除去のための細胞選別技術を進めている。さらに体性幹細胞は様々な組織から樹立可能であり、ヘテロな集団であり、分化特性も異なる。これまで糖鎖プロファイリングを行った細胞について、間葉系幹細胞の代表的な分化指標となる脂肪、骨、軟骨分化誘導を行い、各分化度の定量を行った。その分化特性評価と糖鎖プロファイリング情報をバイオインフォマティクスで解析をして関連性を調べた。その結果各分化特性と相関するレクチンの存在が明らかとなった。さらにその相関性を確証するため、得られたこれらのレクチンで細胞を選別して分化誘導を進めている。ヒト幹細胞移植医療は近年注目されており、特に間葉系幹細胞についてはすでに臨床段階において種々の疾患治療用として利用されている。一方で移植細胞の品質評価は十分とはいえず、移植治療の有効性や安全性の評価を客観的に示す指標がなく、今後一般医療として拡大していくための大きな課題となっている。そこで我々は細胞の状態を示す指標として細胞表面にあり、ES細胞やiPS細胞の未分化マーカーとしてや癌などの疾患マーカーとして多く知られている糖鎖に着目した。我々は最近開発されたレクチンマイクロアレイという技術を用いて、細胞表面タンパク質の修飾糖鎖を網羅的に見る手法を試みた。本年度は、様々な組織由来の間葉系細胞に対して糖鎖プロファイルを実施し、臨床に資する良好な細胞の品質管理のための評価技術となる基盤データを蓄積した。具体的には間葉系細胞の品質を評価する上で重要な、1)継代を重ねた際の細胞の特性変化(増殖性、分化特性など)2)凍結融解前後での細胞の同等性について糖鎖プロファイルによる評価を実施した。その結果、1)継代後の細胞は増殖性、分化能の低下が認められるが、その特性に応じた糖鎖プロファイルの変化を認めた。その中から特徴的な糖鎖構造変化が示唆され、増殖や分化特性を示すマーカーとして有用である可能性が考えられ、現在その詳細について検討を始めた。2)凍結融解を繰り返すと細胞は徐々に増殖能が低下してくるが、実際に表現型として現れてくるのは継代数が5継代以上経過してからである。しかし継代毎の糖鎖プロファイルを実施してみると、その変化は凍結融解後に既に現れていることが明らかとなり、特徴的な糖鎖構造を持っていることを認めた。これは糖鎖が細胞の品質状態(今回の検討では増殖性)をいち早く察知していることを示唆している。

現在種々の特性をもつ細胞での再現性について検討している。幹細胞移植医療において国内外で最も臨床研究が行われている細胞ソースは間葉系幹細胞であり、今後期待されるのがES細胞である。臨床研究経過の報告も相次ぐ中、間葉系幹細胞はヘテロな細胞集団のためその評価に明確な基準がなく、移植後の有効性などの効果を正確に判定できていない。ES細胞は先ず安全性評価を確立する必要がある。さらに今後の幹細胞移植医療では一定の評価基準が低コストで行われるようなシステムを構築する必要がある。我々はその評価法としてレクチンマイクロアレイを使用した糖鎖プロファイリング技術の活用を考えた。本研究期間において、ヒトES細胞ならびに種々の組織由来の間葉系幹細胞を樹立し、増殖能や分化能を検証し、レクチンマイクロアレイによる糖鎖プロファイリングを行った。さらに間葉系幹細胞は継代を経ることによって増殖能/分化能が低下し、細胞老化を引き起こす。細胞老化までのプロセスにおける糖鎖プロファイリングの変化についても検証を行った。間葉系幹細胞は、採取組織によって一定の増殖特性や分化能特性をもっているが、糖鎖プロファイリングにおいて、その傾向を明確に判断でき、培養、分化誘導することなく、いち早く細胞特性を判断することが可能であることを示唆された。さらに細胞老化に至る過程における糖鎖プロファイリングの経時的変化をみてみると、より早い段階でプロファイリングの違いが認められることが明らかとなった。どこまで細胞を増やすかの判断は、臨床試料として提供する際の重要な指標である。その判断をいち早く行う上で糖鎖プロファイリングが有効である可能性が示唆された。ES細胞では未分化、分化誘導過程での明確なプロファイリングを得て今後の安全性評価の基盤を築いた。今後は、研究サイドから臨床サイドに即した形で実際に実施可能かどうかを簡便性やコストの面から検討していく必要である。幹細胞生物学ヒト間葉系幹細胞ならびにヒトES/iPS細胞に関して、これまで予定していた試料数以上の糖鎖プロファイリングデータを取得できた。これらのバイオインフォマティックスによる解析を進めており、それぞれの特性に応じた特徴的レクチンの選択にも成功している。今後遺伝子発現や幹細胞がもつ分化特性などとのデータを融合させ、再生医療に適した幹細胞の評価バリデーションの構築を行っていくが、今年度までにその基盤が確立したといえる。多能性幹細胞は、ライン間で分化特性が異なることが知られている。これまで糖鎖プロファイリングを実施した各細胞について、分化特性について詳細な検討を進めた。特に継代に伴い、ゲノムレベルでの変化(エピゲノム修飾、ゲノム変異等)が起こっていることがわかってきており、その変化による特性、特に分化能への影響について検証を続けている。その過程における糖鎖情報も蓄積してきた。細胞の品質評価において、これまで以上に多面的な情報が得られてきており、今後これらの情報をいかに統合していくかが重要と考えている。レクチンチップにかかる実験をデザインした。
人工抗体を用いる生体試料中の薬物および代謝物の高感度・高選択的分析法の開発

人工抗体(粒子径単分散分子インプリントポリマー)の調製は、テンプレート分子としてナプロキセンを用いた場合、機能性モノマーとして4-ビニルピリジンを、テンプレート分子としてプロプラノロールを用いた場合、機能性モノマーとしてメタクリル酸を用い、多段階膨潤重合法により行った。また、架橋剤としてエチレングリコールジメタクリレート、希釈剤としてトルエンを用いた。重合は、アゾビスジメチルバレロニトリルを開始剤として用い、50°Cで行った。表面親水化は、重合開始4時間後に過硫酸カリウム、グリセリンモノメタクリレート(GMMA)およびグリセリンジメタクリレート(GDMA)を70°Cで添加して行い、添加するGMMAおよびGDMAの割合を変化させて行った。GMMA : GDMA=5:5において、牛血清アルブミンの回収率はほぼ100%であった。表面親水化を行った充填剤は、表面親水化を行わない充填剤と比較して、種々の化合物の保持時間が短くなる傾向を示したが、テンプレート分子は選択的に保持された。これらのことから、表面修飾によって粒子表面が選択的に親水化されていることが明らかとなった。微量の薬物の分析においては、テンプレート分子のポリマーからの漏出がおこり、微量の薬物の分析には適用できなかった。そこで、ナプロキセンをインプリントしたポリマーを用いて、イブプロフェンの選択的濃縮を、プロプラノロールをインプリントしたポリマーを用いて、β-ブロッカーであるアテノロール、アルプレノロール、ピンドロールの選択的濃縮を検討した。表面親水化だけを行ったポリマーでは、これらの薬物は前処理カラムに保持されずに溶出したが、表面親水化を行った分子インプリントポリマーでは選択的な濃縮が可能であった。微量の生体試料中の薬物および代謝物の高感度・高選択的分析法としての本法の有用性が明らかとなった。人工抗体(粒子径単分散分子インプリントポリマー)の調製は、テンプレート分子として(S)-ナプロキセンあるいは(S)-イブプロフェン、機能性モノマーとして4-ビニルピリジン、架橋剤としてエチレンジメタクリレート、希釈剤としてトルエンを用い、多段階膨潤重合法により行った。表面親水化は、重合開始4時間後に過硫酸カリウム、グリセリンモノメタクリレート(GMMA)およびグリセリンジメタクリレート(GDMA)を70°Cで添加して行った。表面親水化は、添加するGMMAおよびGDMAの割合を変化させて行った。GMMA:GDMA=5:5において、BSAの回収率はほぼ100%であった。表面親水化を行った充填剤は、表面親水化を行わない充填剤と比較して、種々の化合物の保持時間が短くなる傾向を示したが、(S)-ナプロキセンあるいは(S)-イブプロフェンは選択的に保持された。さらに、(S)-ナプロキセンあるいは(S)-イブプロフェンをインプリントしたポリマーをプレカラムとして用い、血清中のこれら薬物の直接注入分析を検討した。しかしながら、微量のこれら薬物の分析においては、テンプレート分子のポリマーからの漏出がおこり、微量のこれら薬物の分析には適用できなかった。そこで、(S)-ナプロキセンをインプリントしたポリマーを用いて、(S)-イブプロフェンの選択的濃縮を検討したところ良好な結果が得られた。現在、この手法を他の薬物および代謝物の分析に適用することを検討中である。

人工抗体(粒子径単分散分子インプリントポリマー)の調製は、テンプレート分子としてプロプラノロール、機能性モノマーとしてメタクリル酸、架橋剤としてエチレンジメタクリレート、希釈剤としてトルエンを用い、多段階膨潤重合法により行った。重合は、アゾビスジメチルバレロニトリルを開始剤として用い、50°Cで行った。表面親水化は、重合開始4時間後に過硫酸カリウム、グリセリンモノメタクリレート(GMMA)およびグリセリンジメタクリレート(GDMA)を70°Cで添加して行った。表面親水化は、添加するGMMAおよびGDMAの割合を変化させて行った。GMMA : GDMA=5:5において、牛血清アルブミンの回収率はほぼ100%であった。表面親水化を行った充填剤は、表面親水化を行わない充填剤と比較して、種々の化合物の保持時間が短くなる傾向を示したが、プロプラノロールは選択的に保持された。これらのことから、表面修飾によって粒子表面が選択的に親水化されていることが明らかとなった。さらに、プロプラノロールをインプリントしたポリマーをプレカラムとして用い、血清中のプロプラノロールの直接注入分析を検討した。しかしながら、微量の薬物の分析においては、テンプレート分子であるプロプラノロールのポリマーからの漏出がおこり、微量の薬物の分析には適用できなかった。そこで、プロプラノロールをインプリントしたポリマーを用いて、β-ブロッカーであるアテノロール、アルプレノロール、ピンドロールの選択的濃縮を検討した。表面親水化だけを行ったポリマーでは、これらの薬物は保持されずに溶出したが、表面親水化を行った分子インプリントポリマーでは選択的な濃縮が可能であった。微量の生体試料中の薬物および代謝物の高感度・高選択的分析法としての本法の有用性が明らかとなった。
サイズ選別した気相生成ナノサイズ金粒子の触媒機能評価

本研究では微分型静電分級器(Differential Mobility Analyzer ; DMA)システムを用いたサイズ選別法との組み合わせにより,気相中でナノサイズ粒子の生成とサイズ選別を同時に行い,ナノメーターオーダーの気相生成金粒子を用いた触媒の生成,およびそのサイズ依存性を含めた機能評価を行うことを最終目的とし,以下の成果を得ている。(1)Au粒子を発生部温度(10001100°C)で発生させた(加熱炉,温度コントローラの購入)ところ,発生部温度の上昇により幾何平均径,粒子個数濃度ともに大きくなり,DMA計測径で約1.735nmの範囲の粒子発生を確認した。すなわち,金粒子で触媒活性が認められている10nm以下のサイズの金粒子を発生させることに成功した。(2)DMA設定径とTEM観察径の比較を行った結果,DMA設定径がTEM観察径(円面積相当径)よりもわずかに大きいものの両者には良い相関を得た。ただし,その形状は球形とは言えず,楕円形,やや扁平な不定形の粒子が多く存在することを明らかにした。(3)DMAシステムで分級後にTEM観察を行うことで,粒子捕集時間を制限することにより,独立した単一粒子のサンプリングが可能であることを示した。また,その粒径分布の幾何標準偏差の値は1.14-1.25の範囲であり,分布の均一性を確認した。(4)粒子発生部後に熱処理部を設置し,加熱することで粒子の形状を整えること,サイズの均一化が可能となった。(5)単極イオンを利用したナノサイズ粒子の高効率荷電法を開発し,高効率サイズ選別を可能とし,ナノサイズ粒子の効率の高い利用を実現した。(6)触媒反応評価用のガスクロ計測システムの立ち上げを行い(マスフローコントローラの購入),現在,炭化水素の選択的酸化反応における触媒機能の評価を開始し,データの蓄積を行っている。本研究では微分型静電分級器(Differential Mobility Analyzer;DMA)システムを用いたサイズ選別法との組み合わせにより,気相中でナノサイズ粒子の生成とサイズ選別を同時に行い,ナノメーターオーダーの気相生成金粒子を用いた触媒の生成,およびそのサイズ依存性を含めた機能評価を行うことを最終目的としている。13年度は第一段階として,ナノサイズ機能性粒子の研究動向調査に加えて,加熱蒸発凝縮法によりAu多分散ナノサイズ粒子を発生させ,DMAシステムを用いた粒径分布測定,サイズ選別後の粒子のサンプリングおよびその電子顕微鏡(TEM)を行い,以下の結果を得ている。(1)Au粒子を発生部温度(10001100°C)で発生させたところ,発生部温度の上昇により幾何平均径,粒子個数濃度ともに大きくなり,DMA計測径で約1.735nmの範囲の粒子発生を確認した。ただし,その形状は球体とは言えず,楕円形,やや扁平な不定形の粒子が多く存在することを明らかにした。また,TEM観察は,TEMのスペック上の制限から4.3nm以上の粒子に限られた。(4)粒子発生部後に熱処理部を設置し,加熱することで粒子の形状を整えること,サイズの均一化の試みを開始した。

(5)触媒反応評価用のガスクロ計測システムの立ち上げを開始した。本研究では微分型静電分級器(Differential Mobility Analyzer ; DMA)システムを用いたサイズ選別法との組み合わせにより,気相中でナノサイズ粒子の生成とサイズ選別を同時に行い,ナノメーターオーダーの気相生成金粒子を用いた触媒の生成,およびそのサイズ依存性を含めた機能評価を行うことを最終目的とし,以下の成果を得ている。(1)Au粒子を発生部温度(10001100°C)で発生させた(加熱炉,温度コントローラの購入)ところ,発生部温度の上昇により幾何平均径,粒子個数濃度ともに大きくなり,DMA計測径で約1.735nmの範囲の粒子発生を確認した。すなわち,金粒子で触媒活性が認められている10nm以下のサイズの金粒子を発生させることに成功した。(2)DMA設定径とTEM観察径の比較を行った結果,DMA設定径がTEM観察径(円面積相当径)よりもわずかに大きいものの両者には良い相関を得た。ただし,その形状は球形とは言えず,楕円形,やや扁平な不定形の粒子が多く存在することを明らかにした。また,TEM観察は,TEMのスペック上の制限から,4.3nm以上の粒子に限られた。(3)DMAシステムで分級後にTEM観察を行うことで,粒子捕集時間を制限することにより,独立した単一粒子のサンプリングが可能であることを示した。また,その粒径分布の幾何標準偏差の値は1.14-1.25の範囲であり,分布の均一性を確認した。(4)粒子発生部後に熱処理部を設置し,加熱することで粒子の形状を整えること,サイズの均一化が可能となった。(5)触媒反応評価用のガスクロ計測システムの立ち上げを行い(マスフローコントローラの購入),現在,炭化水素の選択的酸化反応における触媒機能の評価を開始し,データの蓄積を行っている。
ホイスラー合金を用いた強磁性エピタキシャルトンネル接合の製作技術と特性評価の研究

本研究では,これまでに,Co系ホイスラー合金に属するCo_2Cr_<0.6>Fe_<0.4>Al(CCFA)の単結晶MgO基板上へのエピタキシャル成長を実証するとともに,これらの単結晶エピタキシャル薄膜とMgOトンネルバリアを組み合せた単結晶エピタキシャルMTJ(CCFA-MTJ)を製作し,室温において比較的高いTMR比である室温で42%を実証した.しかし,この以前に報告したCCFA-MTJにおけるCCFA薄膜の組成はCo_<2.0>Cr_<0.61>Fe_<0.38>Al_<0.81>と,フルホイスラー合金Co_2YZの本来の2:1:1の組成比に対し無視できない組成ずれを有していた.これに対して,本年度の研究成果として,保磁力差型CCFAIMgO/Co_<50>Fe_<50>MTJにおいて,CCFA薄膜の組成を化学量論的な値に近づけることにより,室温で90%(4.2Kで240%)に達するTMR比が得られた.さらに,上部強磁性Co_<50>Fe_<50>電極に対して反強磁性体を用いて交換バイアスを与えた構造の,交換バイアス型エピタキシャルCCFA/MgO/Co_<50>Fe_<50>MTJを製作し,室温で109%,4.2Kで317%の高いTMR比が得られた.また,得られたTMR比よりB2構造を有するエピタキシャルCCFA薄膜の実効的なスピン偏極率を見積もったところ,4.2Kで0.88(室温で0.57)の高い値が得られた.この結果より,コヒーレントトンネリングによりエピタキシャルCCFA/MgO/Co_<50>Fe_<50>MTJのTMR比が増大している可能性が示唆された.以上の結果より,Co系ホイスラー合金薄膜の本質的に高いスピン偏極率を活用する上で,すべての層が単結晶エピタキシャル成長の強磁性トンネル接合の構造が有用であることを示した.本研究では,これまでに,Co系ホイスラー合金に属するCo_2Cr_<0.6>Fe_<0.4>Al(CCFA)の単結晶MgO基板上へのエピタキシャル成長を実証するとともに,これらの単結晶エピタキシャル薄膜とMgOトンネルバリアを組み合せた単結晶エピタキシャルMTJ(CCFA-MTJ)を製作し,室温において比較的高いTMR比である室温で42%を実証した.しかし,この以前に報告したCCFA-MTJにおけるCCFA薄膜の組成はCo_<2.0>Cr_<0.61>Fe_<0.38>Al_<0.81>と,フルホイスラー合金Co_2YZの本来の2:1:1の組成比に対し無視できない組成ずれを有していた.これに対して,本年度の研究成果として,保磁力差型CCFAIMgO/Co_<50>Fe_<50>MTJにおいて,CCFA薄膜の組成を化学量論的な値に近づけることにより,室温で90%(4.2Kで240%)に達するTMR比が得られた.さらに,上部強磁性Co_<50>Fe_<50>電極に対して反強磁性体を用いて交換バイアスを与えた構造の,交換バイアス型エピタキシャルCCFA/MgO/Co_<50>Fe_<50>MTJを製作し,室温で109%,4.2Kで317%の高いTMR比が得られた.また,得られたTMR比よりB2構造を有するエピタキシャルCCFA薄膜の実効的なスピン偏極率を見積もったところ,4.2Kで0.88(室温で0.57)の高い値が得られた.この結果より,コヒーレントトンネリングによりエピタキシャルCCFA/MgO/Co_<50>Fe_<50>MTJのTMR比が増大している可能性が示唆された.以上の結果より,Co系ホイスラー合金薄膜の本質的に高いスピン偏極率を活用する上で,すべての層が単結晶エピタキシャル成長の強磁性トンネル接合の構造が有用であることを示した.
日本の算数・数学教師の持つ潜在的授業観・潜在的授業力に関する研究

本研究の目的(1)「日米双方の研究者・実践者が日本の『よい数学の授業』を検討することで、『日本の数学教育関係者にとって暗黙の前提となっている潜在的授業観・授業力』の顕在化を試みること」については、3年間の研究期間を通じて、アメリカ・ユタ州Brigham Young UniversityのDouglas Corey准教授と、インターネットを介して概ね週1回のペースで議論を進めた。今年度は特に、先の科研プロジェクト(研究代表者:相馬一彦,平成2527年度基盤(C),課題番号25350183)における主要研究成果物である『理論×実践で追究する!数学のよい授業(明治図書,2016)』の英訳作業において、さらに多くの知見を得ることができた。尚、この書籍の英訳本は、日本の数学教師が授業実践において参照する書籍の卓越した事例として、National Council of Teachers of Mathematics(全米数学教師評議会)から出版される予定のもので、今は粗訳について不明な点などの洗い出しを進めている。本研究の目的(2)「日本の研究者・実践者が協力し授業研究を進めることで、「よい数学の授業」の本質を更に追究し、その外延と内包を明らかにすること」については、国内での授業研究会を引き続き精力的に進めた。今年度は8月に旭川で、1月に東京で授業研究会が行われ、研究代表者・分担者をはじめとして、研究協力者として埼玉・北海道・東京の現職教員が参加し、検討会では活発な議論が展開した。具体的には、「二次方程式」「比例と反比例」「三角形と四角形」の研究授業を行い、『よい授業』の外延の一端を明らかにした。特に、旭川での研究授業では、2名の異なる教員が同じ内容(二次方程式)での授業を行い、2つの授業を比較検討することで、様々な知見を得ることができた。今年度実施した「日米合同授業研究会」として、9月15日に埼玉大学附属中学校において研究授業を行なった。Brigham Young大学大学院より、現職の高校教諭でもあるMelville教諭を招聘し、Melville教諭自身が日本語で「統計」の授業を行なった。国内研究グループによる授業研究会は、埼玉・旭川・静岡(山梨)の3地区において、各1回ずつ開催した。埼玉においては、上述の埼玉大附属中での授業研究会と、9月16日に寄居町立寄居中において堀江教諭・青木教諭の研究授業(文字式の利用、方程式の利用)を行なった。旭川においては、11月14日に旭川市立光陽中の渡辺教諭による研究授業(平行と合同)、並びに旭川市立東陽中の角地教諭による研究授業(反比例のグラフ)を行なった。また静岡(山梨)においては、1月11日に焼津市立大村中の福中教諭による研究授業(図形の計量)、1月12日に甲府市立北中の望月教諭による研究授業(図形の証明)を行なった。これらの授業研究会は、日本の数学の授業において潜在化している「授業観・授業力」を顕在化させることを目的としている。日米合同授業研究会では、日本の教材のアメリカの数学科教師が教えることで、日米それぞれの視点から検討を進めた。また国内研究グループによる授業研究会では、日本国内の異なる地域の数学科教師がそれぞれ授業をすることで、地域に固有な潜在性を顕在化させることを試みた。これらの授業研究会での検討を通して、日本の数学の授業において潜在的に存在している事柄として『教材研究』をキーワードとすることが見出すことができた。更に「教材研究」については、9月に来日したMelville教諭がアメリカの視点から、日本の数学科教師が教材研究をどのように捉えているかについて調査を進めている。氏の調査結果は、今年度中には成果として纏められる見通しである。本科研の研究分担者である相馬一彦教授(北海道教育大学旭川校)、國宗進名誉教授(静岡大学:静岡大学において科研資格喪失者とされたため、書類上は本科研の分担者ではないが、実質的には分担者の一人)とは、電子メール等により頻繁に連携を取りながら、研究を進めている。日本国内では、それぞれの地域(埼玉・旭川・静岡)で定期的に授業研究会を進めた。各地域の研究チーム(現職の中学校教諭を含む)がそれぞれの地域で行われる授業研に参加することで、授業研において「地域に独自の事柄」と「共通する事柄」を峻別することで、日本の「よい授業」の背後にある『潜在的な』要因を探ることを試みた。一方、日米の連携研究では、ユタ州Brigham Young大学のCorey准教授を中心としたチームとの、定期的な研究討議を進めてきた。平成28年度は、Brigham Young大学大学院のMatthew Melville教諭(修士課程院生)を日本に招聘し、特に『教材研究』について日本の先生方へのインタビューを行うことで、日本の先生方が暗黙のうちに捉えている「教材研究」の様相を探った。「教材研究」について厳密な定義は存在していないが、インタビューの結果から、1日々の授業を進める際に行う日常的な教材研究、2研究授業などの「イベント」的な授業を行なう際の準備としての教材研究、の2通りの捉えられ方がされていることが明らかになった。Corey准教授とはインターネットを介して定期的に研究協議を進めている。基盤研究(C)(平成25ー27年度)「算数・数学科における問題解決の授業の具現化に関する研究」(研究代表者:相馬一彦、研究分担者:國宗進・二宮裕之)の研究成果として明治図書から出版された『理論×実践で追究する!

数学の「よい授業」』をもとに、「よい授業」を視点として日米双方の視点から、日米双方の数学の授業を分析している。本研究の目的(1)「日米双方の研究者・実践者が日本の『よい数学の授業』を検討することで、『日本の数学教育関係者にとって暗黙の前提となっている潜在的授業観・授業力』の顕在化を試みること」に関しては、アメリカ・ユタ州Brigham Young UniversityのDouglas Corey准教授と継続的に議論を進めた。Corey准教授とは週に1回のペースでインターネットを介して標記課題について検討を深め、今年度はその成果を論文に纏め学術誌に投稿した。査読を経て無事受理され、今年度中に出版される予定である。昨年度に来日し、日米合同授業研究会の一環として日本の学校で授業を行った、Matthew Melville教諭(現University of Delaware博士課程大学院生)とも継続して連携を取り研究を進めている。Melville教諭は日本語に堪能であることから、日本の算数・数学教育研究サークルに、インターネットを介して参加してもらい、日米の授業の違いなどについて議論を深めている。目的(2)「日本の研究者・実践者が協力し授業研究を進めることで、「よい数学の授業」の本質を更に追究し、その外延と内包を明らかにすること」については、国内での授業研究会を引き続き精力的に進めた。今年度は11月に旭川で、1月に東京・埼玉で授業研究会が行われ、研究代表者・分担者をはじめとして、研究協力者として埼玉・北海道・東京の現職教員が参加し、検討会では活発な議論が展開した。具体的には、「平面図形」「比例と反比例」「三平方の定理の利用」「確率」「割合」「確率」の6つの研究授業を行い、『よい授業』の外延の一端を明らかにした。Douglas Corey准教授との議論の成果は、論文「Values of the Japanese Mathematics Teacher Community」として纏められ、今年度中にSpringer社より出版されることになっている。この論文では、日本の数学教師が持つ「価値観」のうち典型的なもの8つを取り上げ、それが確実に日本の教師に特有のものであることを実証的に明らかにしている。また、日本の算数・数学教師が持つ価値観について、教員コミュニティ形成の過程を事例として纏めたものが、共著論文として、Springer社より刊行された書籍『Mathematics Lesson Study Around the World』に掲載されている。一方で、平成29年度は、11月に旭川で、1月に東京・埼玉で授業研究会を行った。具体的には、11月8日:旭川市立緑が丘中学校1年「平面図形」(那須はるか教諭)、旭川市立神楽中学校1年「比例と反比例」(中本厚教諭)、1月15日:東京学芸大学附属世田谷中学校3年「三平方の定理の利用」(鈴木誠教諭)、世田谷区立用賀中学校2年「確率」(石綿健一郎教諭)、1月16日:東松山市立新宿小学校6年「割合」(稲葉昌弘教諭)、吉見町立西小学校2年「かけ算」(小林徹校長)である。それぞれの授業研究会には、研究代表者・分担者をはじめ、協力者として本科研に協力いただいている現職教員が参加した。
インプラント周囲疾患細菌叢の機能解析と新たな治療方略策定への展開

インプラント周囲炎と歯周炎部位において、メタトランスクリプトーム解析により両疾患に関連する細菌種や機能遺伝子発現について比較した。16S rRNAを基にしたインプラント周囲炎と歯周炎の細菌組成には類似性が認められなかったものの、mRNAをもとにした機能遺伝子組成には類似性が認められた。病原性因子組成についても両疾患で類似性が認められ、これは健常部位の組成とは明らかに異なっていた。またmRNAの発現のデータをもとに由来細菌種の共起関係を調べネットワーク解析を行った結果、その特徴は両疾患で異なっていた。両疾患における細菌学的特徴は一部の共通性とともに明らかに異なる部分が存在していた。本研究の目的は、インプラント周囲疾患に関わる細菌叢の群衆構造および機能を細菌の遺伝子情報から明らかにするとともに、これら細菌学的情報をインプラント周囲疾患の診断および治療に応用しようとするものである。本年度はインプラント周囲炎および歯周炎部位から歯肉縁下プラークを採取し、DNAおよびRNAの抽出後、これを基に16S rRNA解析およびトランスクリプトーム解析を試みた。16S配列解析により、インプラント周囲炎と歯周炎における種多様性は両群間で差が認められず、基本的に類似した細菌叢であると考えられた。種レベルでみるとインプラント周囲炎と歯周炎ではCoreとなる細菌種が異なり、例えばインプラント周囲炎では、Prevotella nigrescensが、歯周炎においてはPeptostrepptococcaceae sp.やDesulfomicrobium oraleが多く検出された。また、rRNAおよびmRNA配列を抽出して系統分類した場合では、DNAベースの解析の結果と同様に、どちらの場合においてもインプラント周囲炎と歯周炎で検出される主要な細菌種に差は認められなかった。但し、rRNA配列に基づく解析とmRNA配列に基づく解析を比較すると、Pprphyromonas gingivalisなど既知の歯周病原菌などを含む約200種が共通していた一方で、約80種の菌についてその検出率や割合に差違が認められた。この違いが臨床症状や細菌叢のもつ機能にどの様な変化を与えているかについて現在解析中である。本研究の目的は、インプラント周囲疾患における細菌叢の群衆構造および機能を明らかにし、これらを疾患の診断や治療に応用することである。インプラント周囲炎および歯周炎部位に加え、本年度は健常部位からも歯肉縁下プラークサンプルを採取し、DNAおよびRNAの抽出後、高速シーケンサーを用いて塩基配列を決定した。DNAサンプルを用いてインプラント周囲炎と歯周炎の構成細菌種を調べたところ、種多様性は両群間で差が認められなかったものの、歯周炎と健常部位を比較した場合には主座標分析により違いが認められた。種レベルでみると、これらの3群では検出細菌種に明らかな違いが認められ、さらに16SrRNAを基に細菌種を調べた場合でもインプラント周囲炎と歯周炎の細菌構成に差違が確認できた。一方でmRNAの塩基配列から機能遺伝子や病原遺伝子の発現を調べた場合には、インプラント周囲炎と歯周炎で類似性が認められ、健常部位のそれとは明らかに異なっていた。ここで、mRNAの由来細菌種を調べると、その組成には疾患間の差異が認められた。インプラント周囲炎と歯周炎は、いずれも複合細菌感染により炎症が引き起こされ組織破壊につながる疾患であるが、インプラント周囲炎では歯周炎と同様の治療を行っても効果が不十分かつ病状の進行が早いとされている。2つの疾患では発現している主要な病原遺伝子は同じものの、これを担う細菌種が異なっていることから、その病態や治療感受性の違いが生じている可能性が考えられた。治療による細菌叢の変化や機能遺伝子の発現変化については現在解析中である。サンプル採取、およびデータの解析は継続中であるが、これまでの研究データをまとめ学会発表を行った。また論文についても現在投稿中である。本研究の目的は、インプラント周囲疾患における細菌叢の群衆構造および機能を明らかにし、これらを診断や治療に応用することである。本年度は特にインプラント周囲炎および歯周炎部位から採取した歯肉縁下プラークサンプルにおける細菌RNAにターゲットを絞り、解析を進めた。高速シーケンサーを用いて塩基配列を決定後、MG-RAST、NCBInr等各種データベースを用いて、細菌叢の機能解析を中心に行った。mRNAの塩基配列から機能遺伝子や病原遺伝子の発現を調べた結果、インプラント周囲炎と歯周炎で類似性が認められ、健常部位のそれとは明らかに異なる傾向が認められた。これらmRNAの由来細菌種を調べると、その組成はインプラント周囲炎と歯周炎で違いが認められた。菌量に比べて(16S rRNAから検出された量)、機能遺伝子を多く担っている菌(mRNAから検出された量)は複合菌感染症の中でもkeystone pathogenとなる可能性が高いと考え、さらにネットワーク解析から細菌種間の相互作用を多く担い、細菌叢の主体をなしていると推測される細菌群を検索し、それぞれの疾患においてこれらに当てはまる細菌種群を"interacting core taxa"と定義した。この細菌群は健常な状態からDysbiosisを引き起こし、インプラント周囲炎や歯周炎に導く主要な役割を果たしており、またこの細菌構成の差がインプラント周囲炎の治療効果の不確実性を生じさせていると推測され、両疾患の治療や予防のターゲットとなりえると考えられた。

16S rRNAを基にしたインプラント周囲炎と歯周炎の細菌組成には類似性が認められなかったものの、mRNAをもとにした機能遺伝子組成には類似性が認められた。病原性因子組成についても両疾患で類似性が認められ、これは健常部位の組成とは明らかに異なっていた。またmRNAの発現のデータをもとに由来細菌種の共起関係を調べネットワーク解析を行った結果、その特徴は両疾患で異なっていた。両疾患における細菌学的特徴は一部の共通性とともに明らかに異なる部分が存在していた。サンプル数は予定よりは若干少ないものの解析は進んでいる。サンプル採取やDNA・RNAの処理法の検討に時間を費やしたものの、その結果これまでサンプル処理が困難であった健常歯周囲のプラークからも細菌DNA抽出が達成できた。今後、同サンプルの解析も進める予定である。これまでの研究結果をまとめ学会発表を行う予定があり、また論文投稿の準備中である。解析データを基にインプラント周囲疾患や歯周炎に関連した細菌や機能遺伝子が明らかになってきたため、治療の経過を追ってこれらの変化を観察していく予定である。この臨床的な検討のための被験者募集とサンプル採取・解析は引き続き行う。歯周病学引き続きインプラント周囲細菌叢の組成および機能解析を行う。データ解析の作業が膨大であり時間がかかるため、この部分については新たにサンプルを増やすことはしない予定である。また今後、この解析データを基にインプラント周囲疾患の診断や治療方針をたてる上で有用と思われる細菌・機能遺伝子を選出し、治療の経過を追ってこれらを観察していく予定である。この臨床的な検討のための被験者募集とサンプル採取は積極的にすすめていく。一部物品で見積額よりも安価に購入できたため。次年度の予算と合わせて、細菌DNAおよびRNA抽出試薬、シークエンス用試薬など消耗品のの購入にあてる。