hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
全食品群を対象とした日本版抗酸化能データベースの構築と栄養疫学研究への展開

わが国で摂取量が多いと考えられる食品を食事記録データをもとに選定し、妥当性を確認したH-ORACおよびL-ORAC法でそれらの抗酸化能を測定して、189品目(総分析点数約600点)からなる日本版食品抗酸化能データベースを完成させた。データベースに収載した食品は摂取量で総重量の約8割を占めており、疫学解析に用いるために十分なデータを収載していると判断した。食品群別の抗酸化能摂取総量に占める割合は、H-ORACでは嗜好飲料と野菜で約半分であり、L-ORACでは魚介類が約3割で最も高かった。食事摂取の特徴から見ると、L-ORAC高値の食品摂取が日本食をより適切に反映していた。一般住民を対象とした秤量法により収集した食事記録データをもとに、わが国で摂取量が多いと考えられる食品合計140品目を、日本食品成分表の食品群別に選定した。具体的には、穀類13品目、いも及びでんぷん類4品目、砂糖及び甘味類5品目、豆類8品目、種実類6品目、野菜類25品目、果実類18品目、きのこ類4品目、藻類4品目、魚介類8品目、肉類5品目、卵類2品目、乳類5品目、油脂類3品目、菓子類8品目、し好飲料類8品目、調味料及び香辛料類9品目、調理加工食品類5品目である。これらの食品を統一された方法に従い、可食部を縮分、必要に応じて凍結乾燥した後、親油性・親水性抗酸化物質を抽出した。抽出液の抗酸化能をORAC法により測定して、データベースの構築のためのデータを蓄積した。また、データベースから推算される抗酸化能摂取総量と疾病発症リスクの因果関係を見いだすため、大迫コホート縦断研究を継続して実施している。一般住民を対象とした秤量法により収集した食事記録データをもとに、わが国で摂取量が多いと考えられる食品合計140品目を選定している。本年度はこの140品目を中心に、定められた方法で可食部を抽出し、抗酸化能を測定してデータベースに収載した。これまでに153品目について470点の分析を完了している。内訳は、穀類11品目、いも及びでんぷん類4品目、砂糖及び甘味類5品目、豆類9品目、種実類6品目、野菜類26品目、果実類22品目、きのこ類4品目、藻類5品目、魚介類9品目、肉類8品目、卵類4品目、乳類5品目、油脂類3品目、菓子類12品目、し好飲料類8品目、調味料及び香辛料類7品目、調理加工食品類5品目である。また、一部の食品については抗酸化能に寄与する抗酸化物質を同定した。親油性酸素ラジカル吸収能測定法の妥当性確認を完了した。親油性、親水性いずれの画分の抗酸化能ともに妥当性確認された測定法で測定しており、相互比較可能な測定値としてデータベースに収載している。データベースから推算される抗酸化能摂取総量と疾病発症リスクの因果関係を見いだすため、大迫コホート縦断研究を継続して実施している。今年度も継続して、1.観察型疫学研究の実施と、2.食品の抗酸化能データベースの構築という2つのアプローチで研究を実施している。1.においては、大迫コホート縦断研究の継続実施を行っている。また、食事記録データをもとに摂取量が多い食品を食品群別に選び出し、抗酸化能測定の研究者と共有化した。2.においては、妥当性確認の完了した測定法を用いて親油性・親水性量画分の抗酸化能測定を継続しており、わが国で摂取量が多いと考えられる食品として選定した140品目についてほぼ抗酸化能の測定・データベースへの収載が完了している。以上より、現在まではおおむね計画通りに研究が進行していると判断している。今年度は、これまで測定が不可能だった油脂類の抗酸化能測定法を開発し、油脂類の抗酸化能測定値をデータベースに収載した。さらに、摂取重量が大きいその他の食品についても妥当性を確認したH-ORAC、L-ORAC測定法を用いて抗酸化能を継続的に評価し、最終的に189品目、分析点数約600点からなる食品抗酸化能データベースを完成させた。このデータベースは食事記録による全食品の摂取重量の約80%をカバーしていた。抗酸化能摂取総量への寄与が高い食品としては、H-ORACでは茶・大豆食品・米が、L-ORACでは大豆食品・魚介類・藻類がそれぞれ特徴的であった。これまで抗酸化能が注目されていなかった動物由来食品の抗酸化能摂取総量への寄与が高いことが注目された。また、茶・米・魚介類・大豆食品といった伝統的な日本型食生活は高い抗酸化能摂取へ寄与している可能性が考えられた。食品抗酸化能データベースは、食品番号と抗酸化能測定値が一対一対応しており、コホート研究等で行なわれている食事頻度調査から抗酸化能摂取総量を推算することが可能であり、今後疾病発症リスクと食事からの抗酸化能摂取総量との相関が見出せるものと考えている。

データベースに収載した食品は摂取量で総重量の約8割を占めており、疫学解析に用いるために十分なデータを収載していると判断した。食品群別の抗酸化能摂取総量に占める割合は、H-ORACでは嗜好飲料と野菜で約半分であり、L-ORACでは魚介類が約3割で最も高かった。食事摂取の特徴から見ると、L-ORAC高値の食品摂取が日本食をより適切に反映していた。今年度は、1.観察型疫学研究の実施と、2.食品の抗酸化能データベースの構築という2つのアプローチで研究を実施した。1.においては、抗酸化能測定のための食品群別摂取寄与順位の算出と大迫コホート縦断研究の継続実施を計画としており、食事記録データをもとに摂取量が多い食品を食品群別に選び出し、抗酸化能測定の研究者と共有化した。また、縦断研究を継続して実施している。2.においては、入手可能時期が限定される一部の食品を除き、抗酸化能の測定が完了した。また、油脂類、調味料及び香辛料類の一部の食品は統一された方法のままでは前処理が不可能であったが、それらの抗酸化能を測定可能な手法を見いだした。以上より、現在まではおおむね計画通りに研究が進行していると判断している。最終年度の今年度は、これまでに蓄積した食品の抗酸化能データを用い、観察型疫学研究を本格化する。継続中のコホート縦断研究をもとに、1998年時の親油性・親水性抗酸化物質の摂取量が、疾病アウトカムおよび予後とどのように関連するかを縦断的に検討する。抗酸化能データベースが食品成分表番号に従って抗酸化能データを蓄積していることから、すでに実施している食事頻度調査にデータを反映させて抗酸化物質摂取総量の推計がスムーズに行えると考えている。また、個々の抗酸化能と摂取頻度から考察して、特に食事全体の抗酸化能に大きく寄与すると考えられる食品について、抗酸化能測定データを補完する。28年度が最終年度であるため、記入しない。食品機能化学平成26年度に得られた測定結果をもとに、個々の抗酸化能と摂取頻度から考察して、特に食事全体の抗酸化能に大きく寄与すると考えられる食品を選定する。選定した食品のうち、加工食品では6試料以上を、青果物では、産地・季節が異なる試料(3地域×4季節)を入手し、抗酸化能の変動を調査する。以上を通じて、抗酸化能データベースの個々のデータの質を向上させる。一方、観察型疫学研究においては、コホート縦断研究を継続するとともに、平成27年度の途中までに蓄積された食品の抗酸化能のデータをもとに、横断的な疫学データにおける疾患リスクと予後との関連について検討を開始する。抗酸化能データベースが食品成分表番号に従って抗酸化能データを蓄積していることから、すでに実施している食事頻度調査にデータを反映させて抗酸化能摂取総量の推計がスムーズに行えると考えている。技術的な問題が生じず、メール等での打合せ等により食品の抗酸化能データの蓄積が計画通り進行したことから、旅費の必要額が減少した。研究分担者が雇用予定であった研究補助者が、組織上の契約手続き等により雇用が遅れ、計上していた人件費・謝金の執行が計画通りすすまなかった。併せて、キックオフミーティング後に技術的な問題が生じず、メール等での打合せ等により食品の抗酸化能データの蓄積が計画通り進行したことから、旅費の必要額が減少した。最終年度の今年度は、これまでに蓄積した食品の抗酸化能データを用い、観察型疫学研究を本格化するため、旅費を含めて計画通りの執行を予定している。
肝細胞性胆汁うっ滞発生に及ぼすマクロファージ刺激とサイトカイン反応の影響

エンドトキシンとKupffer細胞あるいは好中球との反応産物に、胆汁分泌および毛細胆管周辺の機能に影響を与える因子が存在することを確認した。その作用としては、胆汁流量・胆汁酸排泄量の減少および軽度の肝実質細胞障害(ライソソーム酸素上昇、ミトコンドリア局在酸素逸脱、そして毛細胆管形態異常を誘導すること)を確認した。このような作用のある分画を用い単クローン抗体の作製を試み数種類の抗体を得るに及んだが、上記反応産物中の毛細胆管への作用を著名に抑制しうる抗体については得られなかった。さらにその詳細の未知な抗体を用いて、既知のサイトカイン(IL-1IL-6,IL-8,IL-10,TNF,PAF)との関係も検討したが、これらに対する抗体ではないことも確認した。しかし、唯一一種類の抗体でのみ肝実質細胞に対する細胞障害性を若干抑制しうる結果を得たが、その意義については現在その詳細を検討中である。今回はその中でこの抗体を中心としてin vivoの実験系を用いて詳細な検討を加えた。さらにin vitro系にて既知のサイトカイン抗体を用いて肝細胞へのcytotoxicity,modulation効果を検討した。in vitroの系では既知の抗体を用いて興味ある効果が得られたことからin vivoの実験では既知の抗体を用いての有用性を検討した。これらの抗体(抗TNF抗体、抗IL-1抗体)について肝細胞障害性効果を有するfractionの門脈内投与にあたり前投与(n=3)および後投与(n=3)を試みたところ、前者においては胆汁分泌量と胆汁酸組成が対照群に近似値を示し、毛細胆管形態に全く異常を生じなかったのに対し、後者においてはそれが極く軽微な影響として得られたものの対照群のそれと有意差はなかった。なお後者における胆汁中胆汁酸組成、毛細胆管形態については、一定の結果を得られず、後投与の効果については明言できぬような固体差を認めるデータとなった。in vitro系における抗体投与効果はin vivoにおけるそれより明瞭なもので、肝実質細胞リソソーム酵素活性化、糸粒体ATPase活性低下については、抗体非使用群に比し明らかに抑制し得た。抗原・抗体の特性をより明確にする必要性があることが本研究で残された課題である。類洞内細胞-肝実質細胞相関の観点から、Kupffcr細胞、単球、好中球より放出される多くのサイトカインを分析するとともに、これらの胆汁うっ滞への影響を可能性をin vivo,in vitroの実験から検討することを初年度の研究目標とした。エーテル麻酔下のもと経門脈的に既知のサイトカインあるいは各種間葉系細胞とエンドトキシンを反応させた培養上清を持続投与し、肝の形態的・酵素学的変化および肝外胆管での流出胆汁を分析した。肝の形態的変化については、とくにbilc canaliculus周辺の肝細胞内microtubulusの変化とbilc canaliculusの変化を酵素学的変化についてはリンソーム酵素および蛋白合成系のkcy cnzymcを中心に測定した。胆汁については胆汁酸分析とビリルビンの測定を行った。流出胆汁量については、多くの条件下では著明な変化を認めなかったがTNFおよび間葉系細胞-エンドトキシン混合培養液の門注群で減少傾向を生じた。

形態学的変化については、対照群に比して、生じた有意な変化は類洞内皮細胞にのみ認められ、bilc canaliculusについては明らかな変化を認めなかった。胆汁成分変化については、現在検討中である。Kupffcr細胞、好中球、単球をそれぞれ分離し、エンドトキシンと反応させ、放出・分泌されるサイトカインを抽出するとともにそれらの特性を同定し、それらの肝細胞に対する胆汁うっ滞、cytotoxicity,modulati-onの影響を検討した。また既知のサイトカインとの比較およびその定量を行い、非既知のサイトカインについては抗体作製を試みた。胆汁うっ滞の指標として、培養液中へ放出された微量ビリルビン定量を測定中である。培養肝細胞のcytotoxicity,modulationについては、^3H-ロイシンの摂取率およびトリパンブルー染色、AFP産生能等を検討するとともに、培養液中のサイトカインを測定した。新しい抗体作製を試みているが、結果は出ていない。昨年度までの研究において、エンドトキシンとKupffer細胞あるいは好中球との反応産物に、胆汁分泌および毛細肝管の形態に影響を与える因子が存在することを確認し、さらにその因子は、蛋白と非蛋白部分より構成されていることと、分子量測定からは3種類の因子の存在が明らかとなった。本年度は、これらの因子に対する単クローン抗体の作製を試みることが第一のテーマであった。3種の因子に対し作製された抗体は、それぞれ3ないし数種類に及んだが、上記反応産物の作用を著明に抑制しうる抗体は得られなかった。さらにこれらの詳細の未知な抗体を用いて、既知のサイトカイン(IL-1IL-6、IL-8、IL-10、TNF、PAF)との関係も検討したが、これらに対する抗体ではないことも確認した。しかし、唯一一種類の抗体でのみ肝実質細胞に対する細胞障害性を若干抑制しうる結果を得たので、これについてin vivoの実験系を用いて詳細な検討を加えた。さらにin vitro系にて既知のサイトカイン抗体を用いてcyto-toxicity,modulation効果への影響を検討した。in vitro系において肝実質細胞へ最も大きな影響を与えたfractionを抗原として得られた抗体を同fraction門脈内投与にあたり前投与(n=3)および後投与(n=3)すると、前者においては胆汁分泌量と胆汁酸組成が対照群に近似値を示し、毛細肝管形態に全く異常を生じなかったのに対し、後者においてはそれが極く軽微な影響として得られたものの対照群のそれと有意差はなかった。なお後者に置ける毛細肝管形態については、一定の結果を得られず、後投与の効果については明言できぬ段階にある。前投与については投与量を減量し比較検討したところdose-dependent反応を認めた。in vitro系における抗体投与効果はin vivoにおけるそれより明瞭なもので、肝実質細胞リソソーム酵素活性化、糸粒体ATPase活性低下を対照群に比し明らかに抑制し得た。今後、抗原・抗体の特性をより明確にする必要がある。
1985年社会階層と社会移動全国調査研究

本研究は、昭和59年度科学研究費補助金総合(A)「第4回社会階層と社会移動全国調査研究」の研究組織を継続した。昭和60年5月に行われた調査委員会総会の決定にもとづいて、調査票の作成、サンプリング、調査の実施が、昭和60年度においておこなわれた。(1)調査票については、社会階層と社会移動の趨勢分析・社会階層と社会意識に関する研究・教育と社会移動に関する研究・女性の社会的地位に関する研究の各研究会の討議にもとづき、男性A:B票、女性票の3種類の調査票を作成した。(2)調査票の作成と並行して、サンプリング作業をすすめ、全国300地点、男性4060サンプル、女性2170サンプルが対象者として抽出された。(3)昭和60年11月中旬より面接調査が開始された。全国300地点のうち、168地点は研究分担者が直接管理にあたり、残り132地点を調査会社(興論科学協会)に調査委託するという方式で調査をすすめ、昭和61年2月28日をもって調査を終了した。昭和60年度調査では、経費の不足から、十分な回収率を得ることができなかったため、昭和61年度において補充調査が行われた。補充調査は昭和60年度調査と同時期の昭和61年11月中旬により面接調査が開始され、昭和62年1月31日に終了した。昭和61年度においては、上記の補充調査のほかに次のことを行った。(1)調査結果のコーディング作業を行い、コード・ブックを作成し発行した。(2)昭和60年度調査と補充調査の結果を集計し、データを点検したうえで、このデータを記録した磁気テープを作成した。(3)これをもとに、各質問項目についての基礎集計を記載した基礎集計表を作成した。以上の成果をもとにする詳細な分析は、以後、各委員会においておこない、発表する予定である。本研究の研究組識である全国調査委員会は、上記の成果をもって、その本務を終了した。
国際協働による回遊性水産重要種の初期生態解明～東シナ海のブリ属をモデルとして～

本研究では,国境を越えて東シナ海を回遊するブリ類の生息域を全て網羅するように調査水域を設定する。この水域を日本と台湾とで3年に亘って共同調査し,ブリ類の仔稚魚を採集し,日齢査定と食性解析に加えて生息水域の環境情報解析を行う。さらに,遺伝子解析による系群判別を実施する。以上の知見をもとに,東シナ海のブリ類,特に知見の皆無であるカンパチの初期生活史の回遊パターンを詳らかにするとともに,資源量推定の算定基準に資することを目的としている。本年度は,日台で共同採集したブリ類仔稚魚のミトコンドリアDNA解析に加えて,DNAマイクロサテライトおよびSNP解析を行ってデータの精度を高めた。マイクロサテライト(MS)マーカー解析については,既報マーカーを用いて4遺伝子座のマルチプレックスPCRシステム3セット(合計12座)を構築した。このシステムで採集した仔稚魚のサンプルを解析した。これらの仔稚魚について現時点では明瞭な差は検出されていない。さらに,台湾で2017年に採取されたカンパチ成魚(n=50)に形態的な差異を認めたため,これらが異なる系群であるかを,次世代シーケンサーを用いたGenotyping by Sequencing(GBS)法によるSNP解析で比較した。データ取得条件を満たした約75000座SNPマーカーを用いて2群を比較解析(Structure解析,系統樹解析,PCA解析)した結果,2群に遺伝的な違いは見られず,同一系統であると考えられた。これらの結果とこれまでの知見とを照合すると,東シナ海におけるブリとカンパチの系群はそれぞれ1つであり,産卵場は両種ともに東シナ海陸棚の縁辺部に南北に広く亘って形成されているが,ブリの場合は我が国よりに産卵場が形成されて産卵期は2-5月であるのに対し,カンパチはより南側,すなわち台湾近傍で126月に産卵していると推測された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。以上の知見をもとに,東シナ海のブリ類,特に知見の皆無であるカンパチの初期生活史の回遊パタンを詳らかにし,さらに,資源量推定の算定基準に資することを目的としている。本年度は東シナ海において長崎大学水産学部練習船長崎丸・鶴洋丸,および台湾水産試験所の調査船によって,ブリ類仔稚魚の採集を実施した。その結果,流れ藻に附随するブリ類稚魚は摂餌を主とした要因として蝟集しておらず,その他の生態学的意義,すなわち,shelter from predatorまたはmeeting point仮説が支持されることが明らかになった。また,台湾西海岸の澎湖島周辺でカンパチの仔稚魚の採集に成功した。これらの耳石日周輪の解析と,周辺水域の海洋構造の精査を行った。カンパチ仔稚魚は水温フロントで採集され,その全長は7.4-42.5 mm,18-56日齢であった。以上の結果からカンパチの孵化日は4月から6月で,カンパチの仔稚魚はフロントに集積されると推測され,台湾周辺水域にカンパチの産卵場があると推定された。さらに,採集された100個体を超えるカンパチ仔稚魚のサンプルのほぼ全個体から遺伝子抽出に成功し,現在mtDNA D-loop領域のシーケンスを行っている。日台共同調査を初めて実施したが,ここで,目的とするカンパチ仔稚魚を100個体以上採集することに成功し,これらの初期生態解明に踏み込むことが出来た点が大きな成果である。その一方で,稚魚に対して仔魚の採集個体数が少なかったため,詳細な産卵ルートを推定するには精度が低い。以上の点を持って概ね順調に進展していると評価した。以上の知見をもとに,東シナ海のブリ類,特に知見の皆無であるカンパチの初期生活史の回遊パタンを詳らかにするとともに,資源量推定の算定基準に資することを目的としている。本年度は東シナ海台湾を網羅する広範な水域で,4月に長崎大学水産学部練習船長崎丸,西海区水産研究所陽光丸および台湾行政院農業委員会水産試験所水試壱號の3船による同時サーベイを実施することができた。ここで,ブリ属仔稚魚を100個体以上採集したが,そのうちブリは北部水域に,カンパチは南部水域に出現し,いずれも陸棚縁辺部を北上する傾向が見て取れた。特にカンパチについて,東シナ海中南部では陸棚縁辺部を中心に46尾の仔稚魚が採集された。全長と日齢のレンジはそれぞれ,0.4-7.2 cmと10-82日齢であった。また,親魚の産卵期は2017年の1-4月の期間と推定された。

一方,台湾南西-北部海域ではカンパチ仔稚魚は採集されなかったが,台湾基隆の沿岸で2017年5月に稚魚(全長3.7 cm, 63日齢)が1尾採集され,産卵期は3月と推測された。2016年採集のカンパチ仔稚魚21個体のミトコンドリアDNA解析の結果,ハプロタイプ数は20とハプロタイプ多様度は高く(h=0.99),日齢の近い個体でも系統樹上に分散して分布した。以上のことから,東シナ海に分布するカンパチは単系統であり,その産卵場が台湾以南の水域にあることが強く示唆された。東シナ海全般を網羅する形で仔稚魚の採集航海を日台共同で同時期に実施できたことが,本研究の趣旨からも最も大きな成果であると考えている。さらに,これらの標本解析を進めたところ,ブリの産卵場が東シナ海の我が国の領海内にあることが再確認されるとともに,カンパチの産卵場が台湾側にあると予測が付けられたことは非常に大きな発見である。本研究では,国境を越えて東シナ海を回遊するブリ類の生息域を全て網羅するように調査水域を設定する。この水域を日本と台湾とで3年に亘って共同調査し,ブリ類の仔稚魚を採集し,日齢査定と食性解析に加えて生息水域の環境情報解析を行う。さらに,遺伝子解析による系群判別を実施する。以上の知見をもとに,東シナ海のブリ類,特に知見の皆無であるカンパチの初期生活史の回遊パターンを詳らかにするとともに,資源量推定の算定基準に資することを目的としている。本年度は,日台で共同採集したブリ類仔稚魚のミトコンドリアDNA解析に加えて,DNAマイクロサテライトおよびSNP解析を行ってデータの精度を高めた。マイクロサテライト(MS)マーカー解析については,既報マーカーを用いて4遺伝子座のマルチプレックスPCRシステム3セット(合計12座)を構築した。このシステムで採集した仔稚魚のサンプルを解析した。これらの仔稚魚について現時点では明瞭な差は検出されていない。さらに,台湾で2017年に採取されたカンパチ成魚(n=50)に形態的な差異を認めたため,これらが異なる系群であるかを,次世代シーケンサーを用いたGenotyping by Sequencing(GBS)法によるSNP解析で比較した。データ取得条件を満たした約75000座SNPマーカーを用いて2群を比較解析(Structure解析,系統樹解析,PCA解析)した結果,2群に遺伝的な違いは見られず,同一系統であると考えられた。これらの結果とこれまでの知見とを照合すると,東シナ海におけるブリとカンパチの系群はそれぞれ1つであり,産卵場は両種ともに東シナ海陸棚の縁辺部に南北に広く亘って形成されているが,ブリの場合は我が国よりに産卵場が形成されて産卵期は2-5月であるのに対し,カンパチはより南側,すなわち台湾近傍で126月に産卵していると推測された。日台共同調査を次年度も実施し,仔魚採集に注力する。また,水産機構・西海区水産研究所との共同研究も開始することが出来たため,ほぼ同時期に台湾長崎までの仔魚採集を行い,より精度の高い標本採集が期待される。前年度に引き続き,1)日台共同で東シナ海縦断のフィールド調査,および2)東シナ海に出現するブリ類の系群解析を継続して行う。特に日台にまたがって分布するカンパチに焦点を当て,遺伝子解析にミトコンドリアDNA解析に加えて,DNAマイクロサテライトおよびSNP解析を行ってデータの精度を高める。
古代ロシア文語萌芽期における動詞時制・アスペクト体系の研究

古ロシア語の動詞に関しては、文章語誕生以前に古代教会スラヴ語をそのままなぞっていた時期、また、その後の文章語としての古代ロシア文語が確立された時期について、それぞれしかるべく研究が行われている。たとえば、1995年にはロシア科学アカデミー編の『古ロシア語文法:XII-XIII世紀』が出版されている。しかしながら、その萌芽期にかかわる研究、とりわけ動詞時制、アスペクトに関しては十分に研究されているとは言えないのが現状である。平成10年度には、1092年に成立した『アルハンゲリスク福音書』を資料として文献学的な作業を行った。現存するロシア最古の福音書『オストロミール福音書』(1056年1057年)が古代教会スラヴ語に極めて忠実であるのに対し、わずか40年足らず遅れて成立した『アルハンゲリスク福音書』はロシア語化の度合いがはるかに高く、注目に値する文献である。平成11年度には、『ムスチスラフ福音書』(1117年までには成立)といった文献も加えて、前年同様の作業を行う一方で、最近の言語学的研究の検討も行った。古ロシア語の過去時制のうち未完了過去については、今世紀初頭のソボレフスキー以来、古代教会スラヴ語からロシア語にもたらされた外来の要素であるとの学説があり、それをめぐる議論は今日もなお決着をみていない。そのような現状を踏まえて、ゴルシュコワ、ハブルガーエフやB.ウスペンスキーらの最近の研究をたどった。平成12年度では、前年度までの作業を継続するとともに、アスペクトの問題にも取り組んだ。また、古ロシア語ならびにその文章語である古代ロシア文語の概念やその研究史についても考察を加えた。以上のような研究をとおして、「古代ロシア文語とは」、「古代ロシア文語萌芽期における動詞のアスペクトと時制について」の二論文を含む研究成果報告書を平成13年3月に纏め上げた。古ロシア語の過去時制の体系については、多くの問題点が含まれている。その一つは、未完了過去についてのもので、今世紀初頭のソボレフスキー以来、この過去時制は古代教会スラヴ語から古ロシア語にもたらされた外来要素であるとされている。近年にいたって、アオリストも古ロシア語にとっては人為的な過去時制であるとの研究が相次いだ(80年代のイサチェンコ、ゴルシュコワとハブルガエフ、B.ウスペンスキーらの研究)。さらに、1995年に、ロシア科学アカデミー編の『古ロシア語文法:XII-XIII世紀』が出版され、これらの問題に関してこれまでの研究の総括的な概観が可能になった。一方で、上記アカデミーの文法の書名からも分かるように、古代ロシア文語の萌芽期たる11世紀については、まだまだ研究が十分ではない。そこで、内外の言語学的な研究成果を整理し採りいれるとともに、『アルハンゲリスク福音書』(1092年成立)、『ムスチスラフ福音書』(1117年までには成立)といった文献の点検を行い、文献学的な知見を得るべく作業を続けている。来年度も、ほぼ同様の作業を行う予定だが、対象とする資料の選沢にもう少し意を用いてみたい。なお、昨年平成10年12月4日に催されたシンポジウム「スラヴ語学文学研究の最前線-国際スラヴィスト会議の研究発表を中心に-」(主催:創価大学スラヴ東欧研究センター)において、「古代ロシア文語の統語論と語彙の資料としての『アルハンゲリスク福音書』」の題目で口頭発表を行った。

古ロシア語の過去時制の体系については、多くの問題点が含まれているが、ロシア科学アカデミー編の『古ロシア語文法:XII-XIII世紀』(1995年)が出版され、これら諸問題に関してこれまでの研究の総括的な概観が可能になった。一方で、上記アカデミー文法の書名からも分かるように、古代ロシア文語の萌芽期たる11世紀については、まだまだ研究が十分ではない。そこで、昨年度来、内外の言語学的な研究成果を整理し採りいれるとともに、『アルハンゲリスク福音書』(1092年成立)、『ムスチスラフ福音書』(1117年までには成立)といった文献の点検を行い、文献学的な知見を得るべく作業を続けている。本年度も、ほぼ同様の作業を行ったが、その際、研究課題のもう一つのテーマであるアスペクト研究の視点からのアプローチも徐々に組み入れていった。この視点からの研究作業は、来年度前半の中心的な課題となるはずである。アスペクト体系の通時的な研究においても、従来のスラブ語研究で中心的であった、ごく狭い意味での形態論的研究から、N.BermelやK.T.Holdenといった研究者らによる談話レベルでの論考が目に付くようになってきている。来年度は、このような言語学的な研究の流れを踏まえつつ、これまでに得た文献学的知見を整理して、研究報告書を纏め上げて行きたい。近年、ロシア語の通時的な研究においては、ひたすら抽象化を目指すような,ラングのみに目を向けたような研究よりは、それとやや距離をおいたアプローチが注目を集めつつある。しかしながら、どのようなアプローチを選ぶにせよ、11世紀末から12世紀前半という文語萌芽期にあたる時期の資料の文献学的研究が重要な鍵となることに間違いはない。そこで、平成10年度以来、内外の言語学的な研究成果を整理し採りいれるとともに、『アルハンゲリスク福音書』(1092年成立)、『ムスチスラフ福音書』(1117年までには成立)といった文献の点検を行い、文献学的な知見を得るべく作業を続けている。本年度も、同様の作業を続けたが、その際、研究課題のもう一つのテーマであるアスペクト研究の視点からのアプローチも徐々に組み入れていった。この視点からの研究作業が、本年度の中心的な課題となった。アスペクト体系の通時的な研究においても、従来のスラヴ語研究で中心的であった、ごく狭い意味での形態論的研究から、N.BermelやK.T.Holdenといった研究者らによる談話レベルでの論考が目に付くようになってきている。本年度は、このような言語学的な研究の流れを踏まえつつ、これまでに得た文献学的知見を整理して、「古代ロシア文語とは」、「古代ロシア文語萌芽期における動詞のアスペクトと時制について」の二論文を含む研究報告書を纏め上げた。
角膜炎症におけるインフラマソーム発現　－オートファジーとの関連－

細胞内パターン認識受容体であるNLRP3(NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3)の活性化を引き金とするインフラマソームの発現亢進が、様々な炎症病態に関連することが最近明らかとなっている。本研究では角膜炎症とインフラマソームとの関連を明らかにすることを目的として、WTマウスおよびNLRP3ノックアウト(KO)マウスに対しLPS点眼、またはアルカリ外傷を作製し角膜炎症を惹起することで、角膜炎症におけるNLRP3インフラマソームの役割について検討した。昨年度は、両モデルのWTマウスにおけるインフラマソーム関連因子であるNLRP3、アダプター蛋白ASC、Caspase-1、IL-1βの発現亢進を認め、KOマウスにおける角膜実質中の好中球浸潤抑制、さらにアルカリ外傷モデルのKOマウスにおける角膜混濁抑制を示した。今年度は、LPS点眼モデル・アルカリ外傷モデルの双方において、KOマウスでのIL-1β・MMP-9陽性細胞抑制を免疫組織化学的検討を用いることで、さらにIL-1β・MMP-9の遺伝子発現抑制をレーザーマイクロダイセクション・リアルタイムRT-PCRを用いてそれぞれ示した。また、アルカリ外傷モデルにおけるKOマウスでの好中球走化性のケモカインの網羅的な発現抑制をPCRアレイで示した。これらのことから、角膜炎症においてNLRP3インフラマソームは好中球依存性にIL-1β・MMP-9発現を誘導するという結論に達し、上記成果をまとめたうえで海外誌に論文投稿し現在査読(再査読)中である。NLRP3ノックアウトマウスを用いて、LPS点眼・アルカリ外傷という2つの角膜炎症モデルにおいてNLRP3依存性の炎症が関与していることを示したことがおおむね順調に進展していると判断した最大の要因である。インフラマソームは、細菌菌体成分、尿酸結晶等の微小粒子、細胞死の際に放出されるDNA等のDAMP(damage-associated molecular pattern)、紫外線と非常に多岐にわたる因子により活性化され、オートファジーによる制御を受ける。その活性化に際してはこれら誘導因子を細胞内に貪食することでインフラマソームが誘導されるとされており、その主座となる細胞はマクロファージが最も報告されているが、その後好中球もインフラマソームが発現することが報告されるようになった。本研究では、NLRP3 KOマウスを用いることで、角膜炎症においてはNLRP3インフラマソームはマクロファージでなく好中球優位に誘導されること、好中球を介したIL-1β・MMP-9発現によって角膜炎症を惹起することを明らかにすることができた。そして、これらの結果を論文投稿できたこともおおむね順調に推移していると判断した根拠である。一方、角膜炎症の臨床検体を用いた検討、培養角膜細胞を用いた検討はまだ行うことができておらず、次年度の課題と考えている。また、インフラマソームの抑制因子であるオートファジーの検討も培養角膜細胞を用いて行う予定である。インフラマソームの抑制因子としてはオートファジーによる制御が挙げられる。角膜炎症におけるオートファジーの役割は明らかではない。一方、角膜においてはアクネ菌(P.acnes)を原因とした非感染性の角膜潰瘍であるフリクテン性角膜炎を発症することがあり、原因は感染アレルギーと考えられていた。皮膚科領域においては、尋常性&#30180;瘡の起炎菌でもあるP.acnesの菌体成分であるpeptidoglycanを刺激因子として、皮膚線維芽細胞におけるインフラマソーム発現を亢進することが報告されている。本研究でも培養ヒト角膜上皮細胞・角膜実質細胞に対してpeptidoglycanを投与し細胞内ROS、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βの発現挙動をウエスタンブロット法で検討するとともに、上述の実験系においてオートファジー関連蛋白の発現について、免疫組織化学的検討とウエスタンブロット法を用いてmTOR、Atg7、LC3発現を検討し、アクネ菌とインフラマソームとの関連を検討する予定である。また、角膜炎症においてNLRP3依存性の好中球浸潤が生じることが明らかになった一方、アルカリ外傷モデル角膜においてはNLRP3ノックアウトマウスでは逆に浸潤が亢進するという結果が得られたため、マクロファージ誘導に関するケモカイン・サイトカイン発現とインフラマソーム関連因子の検討を行っていく。これらインフラマソームの上流・下流因子について角膜における挙動は全く不明であり、それらが明らかになることで今後の治療への応用も可能となってくると思われる。眼表面にあり外的要因からの影響を受ける角膜におけるインフラマソームとの関連を報告した研究は少ないため、本研究ではまず角膜炎症とインフラマソームとの関連を明らかにすることを目的とした。WTマウスおよびNLRP3ノックアウトマウスに対しLPS・ペプチドグリカン点眼、アルカリ外傷を作製し角膜炎症を惹起することで、角膜炎症におけるインフラマソームの役割について検討した。LPS点眼マウスにおいてWTマウスにおける角膜実質中の好中球浸潤と、インフラマソーム関連因子であるNLRP3、アダプター蛋白ASC、Caspase-1、IL-1βの発現亢進を認め、NLRP

3ノックアウトマウスではLPS点眼後の好中球浸潤を強く抑制した。また、MMP(matrix metalloproteinase)-9発現を抑制することが明らかとなった。アルカリ外傷モデルでは、やはりNLRP3ノックアウトマウスにおいて角膜実質中の好中球浸潤とMMP-9発現、IL-1β発現を有意の抑制でき、NLRP3ノックアウトマウスにおいてアルカリ外傷による角膜混濁も有意に抑制された。しかし、同じ貪食細胞でありインフラマソーム関連の報告が多いマクロファージについては、NLRP3ノックアウトマウスにおいて逆に浸潤が有意に増加することが示された。これらのことから、角膜炎症におけるNLRP3インフラマソームの重要な役割が示唆された。NLRP3ノックアウトマウスを用いて、LPS点眼・アルカリ外傷という2つの炎症モデルにおいてNLRP3依存性の炎症病態を示すことをできたことがおおむね順調に進展していると判断した最大の要因である。また、LPS点眼によってWTマウスに角膜実質中に好中球浸潤とNLRP3インフラマソーム関連因子の発現亢進を惹起させるモデルも順調に作製できたこともおおむね順調に進んでいる要因と考えている。マウス角膜切片から角膜実質のみを単離してRT-PCRを行うレーザーキャプチャーマイクロダイセクションも順調に稼働しており、LPS点眼モデルにおけるNLRP3ノックアウトマウスでのMMP-9発現低下、アルカリ外傷モデルにおけるNLRP3ノックアウトマウスでのIL-1、MMP-9発現低下を示すことができた。一方、当初は予期していなかった事象として、アルカリ外傷モデル角膜におけるNLRP3ノックアウトマウスでのマクロファージ浸潤増加があり、今後の検討課題である。細胞内パターン認識受容体であるNLRP3(NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3)の活性化を引き金とするインフラマソームの発現亢進が、様々な炎症病態に関連することが最近明らかとなっている。本研究では角膜炎症とインフラマソームとの関連を明らかにすることを目的として、WTマウスおよびNLRP3ノックアウト(KO)マウスに対しLPS点眼、またはアルカリ外傷を作製し角膜炎症を惹起することで、角膜炎症におけるNLRP3インフラマソームの役割について検討した。昨年度は、両モデルのWTマウスにおけるインフラマソーム関連因子であるNLRP3、アダプター蛋白ASC、Caspase-1、IL-1βの発現亢進を認め、KOマウスにおける角膜実質中の好中球浸潤抑制、さらにアルカリ外傷モデルのKOマウスにおける角膜混濁抑制を示した。今年度は、LPS点眼モデル・アルカリ外傷モデルの双方において、KOマウスでのIL-1β・MMP-9陽性細胞抑制を免疫組織化学的検討を用いることで、さらにIL-1β・MMP-9の遺伝子発現抑制をレーザーマイクロダイセクション・リアルタイムRT-PCRを用いてそれぞれ示した。
映像の言語的性質に基づいたディジタルシューティングによるコンテンツ生成技術の研究

ディジタルシューティングでは、高解像度の映像から、どのような概念に基づいて映像を切り出し、二次的な映像を作り出すべきかという背景概念が必要となるが、既に広汎している基本概念は1910年代から40年代の古典的アメリカ映画で培われた映像撮影・編集技法の特徴を捉えた、古典的デクパージュが指し示す概念である。本研究では、その概念が、今日の映画、特にTV放送において、一般大衆の誰もが自然に受け入れる映像表現法と成り得たために、一般大衆を相手にするTV放送の制作現場で支配的な制作概念となっていることを示し、ディジタルシューティングに応用できる背景概念として整理した。その技法は、第一に、見る者にとってだけではなく、先人の優れた表現法を分析し、見本として学び、優れた弁論家を目指す古来の文法学の姿勢と同等であることや、わかりやすさ、内容の効率的な伝達を目指しつつ、優れた技法は意識されず、内容への没入を誘導する、文学の美学としての「技法の隠蔽」を実現し得る概念に基づく体系であるとして、整理した。これらの概念は、映像制作の新人、素人、また、映像を自動生成する計算機システムが見本とし、映像の基本的品質を保つために役立つ。また、ディジタルシューティングでは、仮想カメラが動的にフレームを駆動するため、その動的軌跡について自己評価を行いながら仮想的撮影を行うための高速な動的カメラワーク解析法とカメラワークの善し悪しを判定する評価法が必要となる。プロの撮影者による映像では、問題が起こりにくいため、素人による単一ショット撮影について、古典的デクパージュの概念に基づくカメラワークの問題点を分類し、評価法について研究を行い、ディジタルシューティングを実現する基盤技術について研究を行った。映像の撮影を行う上で、最も基本的な操作は、フレーム枠に対象をどのように含めるかを定めるフレーミングと、カメラを動かす際のカメラワークである。ただしプロの撮影では、短い時間間隔を持つ複数のショットの接続により、映像の制作者が意図した映像内容が視聴者へ自然に伝達されるよう、映像の言語的性質が考慮される。今年度は、まず20世紀初頭から半世紀にわたって議論された映像の言語的性質として映画言語や映画文法の概念を示す文献から、ショットの配列による意味操作の概念、映像の表現技法と言語の関係を調査し、学内誌に掲載した。ディジタルシューティングでは、コンピュータが仮想的なカメラを駆動してフレーミングとカメラワークを行うことになるが、コンピュータが仮想的なカメラを駆動する手がかりが必要となる。今年度は、サッカーの試合を撮影する課題についても取り組んだ。これまでは、試合進行の状況を考慮せず、ボールと選手との動きの関係のみからディジタルカメラワークのパンニングを実現する研究に取り組んでいたが、今回、選手とボールの動きをルール化し、イベントを自動検出することにより、仮想カメラのズーミング操作を制御する手法について研究を行った。また、ディジタルシューティングの課題としては、コンピュータが仮想カメラを操作し、映像の撮影者になることから、生成された映像の品質を評価し、問題点をコンピュータにフィードバックし、映像の品質を改善する機構も必要になる。特に、ディジタルシューティングをライブ映像の撮影に適用するためには、実時間でカメラワークを評価する手法も必要になる。この課題に対し、撮影された映像の問題点を指摘する機構を研究するため、まず人間の撮影者のカメラワークを実時間で評価し、問題の指摘を行うシステムの実現に取り組んだ。このシステムを実現するために、輝度投影相関法と構造テンソルを用いた実時間カメラワーク解析法について研究し、撮影中の映像を評価し、問題を指摘する映像撮影ナビゲーションシステムの研究を行った。スポーツの試合中継などで、人間のカメラマンの行為、カメラを切り替えるスイッチャーが行う行為は、スポーツの内容が視聴者に伝わるよう実際に放映される映像の構造を考慮した思考に基づいて実施される。その構造は、言語と同じく、非連続要素(ショット)の一次元的接続に従う。これは、ソシュール言語学でいう線状性と構造上等価であり、そのショットの接続では、言語学でいう統語規則に相当する文法的な観点との対比が浮き彫りとなる。つまり、スイッチャーによるカメラの切り替え、また編集者による編集が文法と対比される。この点で、本研究では、放送局で実用的に用いられる映像文法という概念を用いて研究を行っているが、映像と文法との関係に関する議論は、1940年代また1960年代で取り上げられて以来、近年の言語学の進展を反映した対比が行われていなかった。本研究では、言語的性質を計算機システムに導入する技術的手法を見出すことも目的の一つとなっている。そこで、文法という概念の本質を見極めるため、古代ギリシアに端を発し、近代に至る文法の概念の変遷を調査し、学内誌に掲載した。また、文法という概念は、意味との関係で、独立・非独立的に扱う相互の立場がある。映像の世界でも、文法と対比される編集行為自体に意味との対応を見るモンタージュ論と、編集行為にむしろ意味を持たせないように編集を行うデクパージュがある。この点で、モンタージュと呼ばれてきた内容を調査し、学内誌に掲載した。また、ソシュール以来の近代言語学では、人間の個人性と切り離した社会的な意味での言語学が進展してきたが、近年の認知言語学では、むしろ言語は人間の認知機構と切り離せないとする立場をとる。この立場は、映像を言語的に取り扱う上で、これまでの近代言語学より映像の言語的性質を説明する重要な示唆を含む。この認知の問題を取り扱うため、脳から見た言語と認知の関係を調査し、学内誌に掲載した。

ディジタルシューティングでは、高解像度の映像から、どのような概念に基づいて映像を切り出し、二次的な映像を作り出すべきかという背景概念が必要となるが、既に広汎している基本概念は1910年代から40年代の古典的アメリカ映画で培われた映像撮影・編集技法の特徴を捉えた、古典的デクパージュが指し示す概念である。本研究では、その概念が、今日の映画、特にTV放送において、一般大衆の誰もが自然に受け入れる映像表現法と成り得たために、一般大衆を相手にするTV放送の制作現場で支配的な制作概念となっていることを示し、ディジタルシューティングに応用できる背景概念として整理した。その技法は、第一に、見る者にとってだけではなく、先人の優れた表現法を分析し、見本として学び、優れた弁論家を目指す古来の文法学の姿勢と同等であることや、わかりやすさ、内容の効率的な伝達を目指しつつ、優れた技法は意識されず、内容への没入を誘導する、文学の美学としての「技法の隠蔽」を実現し得る概念に基づく体系であるとして、整理した。これらの概念は、映像制作の新人、素人、また、映像を自動生成する計算機システムが見本とし、映像の基本的品質を保つために役立つ。また、ディジタルシューティングでは、仮想カメラが動的にフレームを駆動するため、その動的軌跡について自己評価を行いながら仮想的撮影を行うための高速な動的カメラワーク解析法とカメラワークの善し悪しを判定する評価法が必要となる。プロの撮影者による映像では、問題が起こりにくいため、素人による単一ショット撮影について、古典的デクパージュの概念に基づくカメラワークの問題点を分類し、評価法について研究を行い、ディジタルシューティングを実現する基盤技術について研究を行った。
ワルファリン抵抗性ドブネズミ及びクマネズミにおける新規抵抗性機構の解明

2012年度も継続的にサンプリングを行い、280頭を超える野生ネズミの死体サンプルの獲得に成功した。この一部において、尾よりゲノムDNAの抽出を行い、VKORC1遺伝子のシークエンス解析を行ったところ、VKORC1に変異を持つ個体は複数確認されたが、その変異パターンは全て本研究において過去に確認されたもので、新規の変異パターンは確認されなかった。またヨーロッパにおける抵抗性個体の持つ139番アミノ酸に変異を持つ個体も確認されなかった。しかし、殺鼠剤抵抗性個体の分布領域の拡大が考えられたため、VKORC1の解析が行われている個体群を用いて日本における野生ネズミの系統地理的解析を行い、これとVKORC1の変異パターンとの関連性について検討した。この解析では特に、抵抗性個体で見られる41番アミノ酸のアラニンがバリンに変異している個体群に着目して解析を進めた。尾より抽出したゲノムDNAを用いて、AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)解析を行い、この情報をもとに系統地理的解析を行った。その結果、ドブネズミ(R. norvegicus)はクマネズミ(R. rattus)と完全に分かれたクレードを形成し、同じクレード内で混在することはなかった。しかし、同時に、クマネズミ個体においては2つの分集団が確認されたが、いずれもVKORC1の変異パターンや地理的な観点において明確な意味を持つcladeを形成するものではなかった。このことから、Ala41Va1の変異個体に関してVKORC1遺伝子の変異獲得について主要となる由来はなく、変異獲得の起源は複数存在していることが示唆された。野生ラットにおいて、VKORC1遺伝子のアミノ酸シークエンス解析を行ったところ、ワルファリンに抵抗性を示した、首都圏由来、大阪由来、新潟由来の個体群はそれぞれ異なる変異パターンを有していることがわかった。またこの他にワルファリンに対して感受性を示す個体の中でもVKORC1遺伝子に変異をもつ個体が確認され、抵抗性を示す変異パターンを含めると、VKORC1のアミノ酸配列のパターンは全部で10種類にも上ることがわかった。しかし、ヨーロッパにおける抵抗性個体のもつ139番アミノ酸に変異を持つ個体は存在しなかった。ワルファリンはVKORの酵素活性を阻害し、血液凝固系を破綻させることによって失血死をもたらすという作用機序を有している。そこでVKORC1遺伝子に遺伝多型が認められる個体について、その機能的変化について検討するために、血液凝固因子の変化に着目して検討した。はじめにワルファリン非存在下、すなわち生理的条件下における血液凝固時間はワルファリン感受性個体と抵抗性固体の間に有意な差は認められなかった。次に、ワルファリン投与後24時間後及び48時間後の血液凝固時間を測定したところ、ワルファリン感受性個体はワルファリン投与後24時間後、及び48時間後において血液凝固時間の延長がみられたのに対し、ワルファリン抵抗性個体はワルファリン投与後24時間後及び48時間後の血液凝固時間は延長はみられなかった。またVKORの変異パターンの異なるワルファリン抵抗性個体について、ワルファリン投与後の血液凝固時間を感受性個体と比較したところ、APTTとHPTにおいて抵抗性個体の血液凝固時間は有意に短いことがわかった。以上より、ワルファリン抵抗性個体はワルファリン中毒下でも血液凝固因子が正常に機能していることがわかり、変異を有するVKOR酵素はその機能的変化が見られたことがわかった。2011年度も継続的にサンプリングを行い、250頭を超える野生ネズミの死体サンプルの獲得に成功した。この一部において、尾よりゲノムDNAの抽出を行い、VKORC1遺伝子のシークエンス解析を行ったところ、VKORC1に変異を持つ個体は複数確認されたが、ヨーロッパにおける抵抗性個体の持つ139番アミノ酸に変異を持つ個体は確認されなかった。またその変異パターンは全て本研究において過去に確認されたもので、新規の変異パターンは確認されなかった。しかし今年度、別地点由来の個体から既存の抵抗性個体と同じ変異パターンを持つものが確認され、殺鼠剤抵抗性個体の分布領域の拡大が考えられた。そこで、VKORC1の解析が行われている個体群を用いて日本における野生ネズミの系統地理的解析を行い、これとVKORC1の変異パターンとの関連性について検討した。尾より抽出したゲノムDNAから、マイクロサテライト領域7か所の遺伝領域のフラグメント解析を行った。この情報をもとにNJ法を用いて系統樹を作成したところ、ドブネズミ(R.norvegicus)はクマネズミ(R.rattus)と分かれたクレードを形成し、ほとんどのドブネズミがクレード3に属した。また、41番アミノ酸に変異をもつ大阪由来抵抗性個体型と新潟由来抵抗性個体型はどちらもクレード2に属していた。しかし、単一のVKORC1の変異パターンによる独立したクレード形成は確認されなかったため、野生ネズミのワルファリンに対する抵抗性は、ある地域で抵抗性となるVKORC1の変異を獲得した個体群が、その生息域を拡大させてその分布を広げたのではなく、それぞれ独自にVKORC1の変異を獲得した可能性が示唆された。しかし、一部に予想に反した結果も散見されたため、今後、他の遺伝情報を用いることも視野に入れて改めて結果の妥当性を検討することが必要であると考えられた。

この一部において、尾よりゲノムDNAの抽出を行い、VKORC1遺伝子のシークエンス解析を行ったところ、VKORC1に変異を持つ個体は複数確認されたが、その変異パターンは全て本研究において過去に確認されたもので、新規の変異パターンは確認されなかった。またヨーロッパにおける抵抗性個体の持つ139番アミノ酸に変異を持つ個体も確認されなかった。しかし、殺鼠剤抵抗性個体の分布領域の拡大が考えられたため、VKORC1の解析が行われている個体群を用いて日本における野生ネズミの系統地理的解析を行い、これとVKORC1の変異パターンとの関連性について検討した。この解析では特に、抵抗性個体で見られる41番アミノ酸のアラニンがバリンに変異している個体群に着目して解析を進めた。尾より抽出したゲノムDNAを用いて、AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)解析を行い、この情報をもとに系統地理的解析を行った。その結果、ドブネズミ(R. norvegicus)はクマネズミ(R. rattus)と完全に分かれたクレードを形成し、同じクレード内で混在することはなかった。しかし、同時に、クマネズミ個体においては2つの分集団が確認されたが、いずれもVKORC1の変異パターンや地理的な観点において明確な意味を持つcladeを形成するものではなかった。このことから、Ala41Va1の変異個体に関してVKORC1遺伝子の変異獲得について主要となる由来はなく、変異獲得の起源は複数存在していることが示唆された。野生ネズミのサンプリングについて、コンスタントに捕獲及び採材ができていること、またVKORC1の解析により、その遺伝子の変異パターンの新規のものは確認されなかったが、ネズミの行動範囲からは想像できない地点での抵抗性ネズミの分布拡大が確認されたことより、本研究はおおむね順調に進展していると考える。今後も継続的に野生ネズミのサンプリングを行い、ワルファリン抵抗性ネズミの分布領域やそのVKORC1の変異パターンについて解析する。また分布領域の拡大について検討するために遺伝情報をもとに野生ネズミの系統地理的解析を行い、VKORC1の変異パターンとの関連性について検討する。系統地理的解析を行う際に用いる遺伝情報についてはよ妥当性の高い結果が得られるよう、現在用いているマイクロサテライト領域7ヶ所だけでなく他の遺伝領域を用いることも検討することが必要と考える。
生体関連金属イオンによる活性酸素生成機構の解明

生体内にあって生命維持に重要な働きをしているCu(II)、Fe(II)、Fe(III)、バナジルイオン(VO^<2+>)およびそれらの錯体と過酸化水素(H_2O_2)の反応による活性酸素種、ヒドロキシルラジカル(・OH)の生成についてスピントラップ試薬、3、5-ジブロモ-4-ニトロソベンゼンスルホネート(DBNBS)、5、5-ジメチル-1-ピロリンN-オキシド(DMPO)およびα-(4-ピリジル-1-オキシド)-N-t-ブチルニトロン(POBN)を用いESRで検討した。その結果Cu(II)イオンおよびそのエチレンジアミン(en)錯体ではH_2O_2と反応し、OHラジカルを生成した。これに対し、EDTAなどのポリアミノポリカルボン酸を配位子としたCu(II)錯体はH_2O_2とはまったく反応しなかった。この系に還元剤であるアスコルビン酸(AH_2)を共存させると、Cu(II)がCu(I)に還元され、次いで還元されたCu(I)がH_2O_2とFenton型の反応によりOHラジカルを生じることが明らかになった。この結果は、Cu(II)イオンの酸化還元電位が配位子によって大きく変化したことを示している。一方、Fe(III)-EDTA錯体は還元剤が存在しなくてもH_2O_2と反応し、OHラジカルを生成した。Fe(II)-EDTA錯体はH_2O_2とFenton反応により高収率でOHラジカルを生じた。したがって、Feイオンの場合にはEDTAの配位によってもそれ程酸化還元電位は変化しないことが推測される。VO^<2+>イオンとH_2O_2の反応でも反応初期にFenton型の反応によりOHラジカルの生成することが明らかになった。しかし、EDTA錯体はCu(II)錯体と同様まったくH_2O_2とは反応しなかった。この結果は、VO^<2+>イオンもEDTAと錯体を形成することにより酸化還元電位が変化し、H_2O_2を還元できなくなったものと推定される。以上のことから、生体内にあって有用な金属イオンでも、細胞内でH_2O_2と共存した時には、生体に極めて有害な活性酸素種、ヒドロキシルラジカルを生ずる可能性のあることを示唆している。