hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
経済格差に基づく女性の連鎖的結婚移動と家族に関する地域間比較研究

本年度は、1共同研究「現代中国における内国移動とエスニシティ」を通じた中国国内の人口移動現象の地域間比較および国際ワークショップの開催、2中国雲南省およびミャンマー・シャン州におけるフィールドワークの実施(2019年2月3月)を行った。さらに本課題に関わる研究として、3中国雲南省ラフの文化資源に関する研究およびラフの文字文化に関する研究も進めている。1について、2017年度より10名の学外研究者を率いて共同研究を推進している。2019年2月16-17日には、深セン市の南方科技大学において、王暁葵教授との協力のもと、第二回国際ワークショップ「現代中国的人口流動与社会変遷」を主催し、自身も「深森中的生存:雲南ラフ的“移動的慣習"與其今日的変化」というタイトルで発表を行った。2について、産育休からの復帰後初のフィールドワークを行った。ミャンマーから中国へと向かうラフ女性の移動ルートやそれに対するローカルな言説について、調査を進めている。雲南省では、ミャンマー側から雲南に嫁いだ女性へのインタビューを進めている。子どもの出産および産育休の取得により、2017年度には研究上の遅れが出たが、2018年度にはフィールドワークを再開し、さらに実地調査を進めるとともに、共同研究の推進と国際ワークショップの実施、査読付き英語論文の執筆と、少しずつ研究を進展させている。当初の研究計画のなかにあった、ラフ女性の嫁ぎ先である漢族農村での調査はまだ実現できていないが、それを共同研究を通じた他地域の研究者との対話で補う努力を行っている。また、東南アジア学会の分科会でも発表して隣接分野の研究者とも議論を行っている。共同研究「現代中国における内国移動とエスニシティ」について、日本文化人類学会植松東アジア研究基金、京都大学IPCR(共同利用・共同研究拠点「東南アジア研究の国際共同研究拠点」)、大幸財団などへ応募してさらなる研究資金を確保しつつ研究を推進し、2020年度には共著の本を刊行予定である。また、フィールドワークに関しても、ミャンマー・雲南省双方での調査は継続予定である。ラフ女性の嫁ぎ先での調査については実現をめざして現地の人との調整中である。本年度は、出産に伴う産育休のため、当初の予定であるフィールドワークではなく文献研究を中心として研究活動を行った。地域間経済格差に基づいて起こる、女性の結婚に伴う移動の連鎖に関して、中国のみならずアジアの研究動向をまとめたレビュー論文「女性の越境移動研究の展開:アジアにおける婚姻移動を中心に」(社会人類学年報43号、2017年)を投稿した。また、現代中国における女性の婚姻移動の連鎖について、女性の送り出し社会の末端に位置するラフ族地域に起こる社会変化と、女性の嫁ぎ先である安徽省や河南省とのあいだに築かれつつあるネットワーク、そのあいだを揺れ動くラフ女性たちの葛藤や逡巡を論じた単著『娘たちのいない村ーヨメ不足の連鎖をめぐる雲南ラフの民族誌』(京都大学学術出版会、2008年)を執筆・出版した。さらに、近年中国国内で起こる様々な人口移動現象と女性の婚姻に伴う移動との関わりや異同を考えるために、国際ワークショップ「現代中国的人口流動与族群関係」を企画・主催し、2018年3月24-25日に四川大学にて開催した。四川大学、西南民族大学の中国人研究者陣および、日本からは北海道大学、東北大学、南山大学、尚絅学院大学などの若手中国研究者が参加し、活発な議論によって多くの知見を得た。このワークショップの母体となる共同研究「現代中国における内国移動とエスニシティ」(堀江主催)は、本科研課題と問題意識の重なる部分が多く、今後も本研究課題と平行しながら継続していく予定である。産育休のため、フィールドワークがしばらく延期になっているが、そのぶん国際ワークショップの開催や文献研究によって、成果を出すことができている。当初の予定よりも中国側の研究が先に進むかたちになっているため、ミャンマー側での研究・フィールドワークを行う時期がもう少し後ろにずれ込む可能性があるが、研究の進捗に問題の出る範囲ではない。

また、東南アジア学会の分科会でも発表して隣接分野の研究者とも議論を行っている。中国の諸大学との国際共同研究については、今後も積極的に続けていく予定である。次回のワークショップ開催が2008年の夏になる可能性があり、それに伴い、2018年8月に予定していたミャンマーへのフィールドワークの時期があとにずれこむ可能性がある。その場合、ミャンマーでのフィールドワークは、2019年2月、3月の雲南へのフィールドワークと時期を合わせて行うこととする。共同研究「現代中国における内国移動とエスニシティ」について、日本文化人類学会植松東アジア研究基金、京都大学IPCR(共同利用・共同研究拠点「東南アジア研究の国際共同研究拠点」)、大幸財団などへ応募してさらなる研究資金を確保しつつ研究を推進し、2020年度には共著の本を刊行予定である。また、フィールドワークに関しても、ミャンマー・雲南省双方での調査は継続予定である。ラフ女性の嫁ぎ先での調査については実現をめざして現地の人との調整中である。妊娠出産に伴う産育休の取得のため、当初の予定であったフィールドワークを延期することとなった。それに伴い、海外渡航費およびそれに関する人件費を次年度に繰り越すことになった。次年度は、前年度に行う予定であったフィールドワークを行うと同時に、国際共同研究の打ち合わせのための諸経費、および国際ワークショップの開催のための諸経費や渡航費・招聘費に本予算を使用する計画である。2017年度に子どもを出産し、産育休の取得のため研究を一時中断していた。また、復帰後もしばらくはフィールドワークにいくことができず、国内での研究会の開催や国際ワークショップに経費を使用したのみであったため、次年度使用額が生じた。また、2018年度のフィールドワークには別予算からの補助も一部受けられることになったため、科研費の使用が少なく済んだ。次年度使用計画は、1共同研究における第三回国際ワークショップの開催(雲南省社会科学院を予定)、2フィールドワークの実施(2020年2月3月を予定)である。
高性能イミュノトキシンを用いた肺上皮幹細胞の選択的培養法の開発

初年度については肺上皮幹細胞の選択的培養に用いる抗体の選別を中心に行った。ディスパーゼならびにコラゲナーゼを用いて正常肺組織から肺細胞を取り出しヒト肺細胞(HuL細胞)とした。このHuL細胞には肺胞上皮(I型およびII型)、血管内皮細胞、間質系細胞およびマクロファージなどの血液系細胞が多数含まれているため、肺胞上皮幹細胞を選択するにはこれらの細胞を除く必要があった。第一段階としてこれらの細胞の除去を目的に培養を試みた。BEGM培地(Lonza社)で培養することで間葉系および血液系の殆どの細胞は死滅し、この環境で樹立される細胞の大半は肺上皮系の未熟な細胞集団と考えられた(TROP2+ITGA6+CD24low細胞)。この細胞を更にマトリゲル上に播種し3D培養をすることで肺胞上皮および気管支上皮の性質を持った細胞へ分化することが可能であった。また、ブレオマイシンで肺を損傷させた免疫不全マウス(NSGマウス)の気道から肺に移植することで、これらの細胞はマウス肺に生着し更に気管支ならびに肺胞様構造が確認出来た(Tanaka Y, Yamaguchi M,et al. Exp Cell Res. 2018Nor 15;372(2):141-149.)。以上の結果からBEGM培地で培養された細胞は肺上皮幹細胞に極めて近い細胞集団であり、HuL細胞をBEGM培地で培養するだけで第一段階の選択的培養は確立できた。しかしながら、この環境で長期培養すると間葉系細胞が出現し目的細胞(肺上皮幹細胞様細胞)の増殖は抑制され、殆どの細胞が間葉系細胞(CD90+CD73+細胞)に変化することが分かった。ここで出現した間葉系細胞を除去することで肺上皮幹細胞の長期培養が可能になると考えられた。現在、内在化能がある間葉系細胞に発現する抗体の樹立を進めている。現時点で候補抗体が40個樹立できており、抗原同定を行っているところである。我々の目的は肺上皮幹細胞の効率的な培養系の確立である。現時点でBEGM培地で培養するだけで肺上皮幹細胞様細胞が選択的培養が確立できた。これは第一段階が成功していることが示される。また、次の段階である抗体を用いた肺幹細胞の長期選択培養についてもいくつかの抗体が樹立できており、順調に進捗している。今後は、現在樹立済みの抗体の抗原同定と得られた抗体の特異性を調べ、抗体による選択的培養を完成させる。(理由)納入に時間を有する試薬(輸入)が含まれていたため、当該年度の納入が出来なかった。(使用計画)輸入試薬は新年度早々に納入されるため、直ちに使用できる。
O-17水分子・酸素分子MRIによる定量的脳血流・酸素代謝イメージングの開発

MRI信号の理論式を用いて、様々な組織におけるMRI信号強度のシミュレーションを行った。O-17濃度別ファントムのMRI信号値との間に良好な相関が確認され、MRI信号強度からO-17濃度を算出する方法として確立した。健常人ボランティアでのMRI撮像を行い、FSE法を用いて安定したMRI撮像法を確立し、血流量の定量解析を行うアルゴリズムの開発を行った。O-17酸素分子の製造体制の構築を行い、動物用の吸入装置の設計を行った。小径のO-17濃度別ファントムを作成し、動物用MRIでの撮像実験を行った。O-17水を投与してマーモセットにてMRI撮像を行い、良好な画像コントラストを得た。H26年度は、O-17濃度別ファントムや健常人ボランティアでのMRI撮像を行い、撮像法開発を行った。過去の検討によりsteady state型のT2強調画像をベースに開発を進め、様々な撮像法を試みたが、steady state型の撮像法が最適と考えられた。しかし、その他の撮像法も改良の余地があるということが判明し、引き続き検討を行うこととした。steady state型の撮像法では画像コントラストの向上にFA、TE、TRの調整が必須であり、長いTEやTRが有効と考えられた。ただし、長いTEやTRを用いた撮像ではbanding artifactが非常に目立つため、artifact抑制のためには高精度なshimmingが必要であることが判明した。また、円筒型のファントムではbanding artifactが同心円状に生じるため、信号の評価が困難であることも判明し、ファントムの設計変更や動物実験による検討も考慮する必要があることも判明した。過去に行われたO-17水分子の静脈内投与データを用いて、画像解析ソフトの開発も開始した。撮像されたMRIデータの読み込み、時間濃度曲線の作成を行う事が可能となり、さらに血流量の定量解析を行うアルゴリズムの開発に着手した。O-17酸素分子に関しては、O-17水分子の静脈内投与用製剤の供給元である国内企業との協議を開始し、製造体制の構築に向けた準備を開始した。また、医師主導臨床試験のプロトコル作成を行い、倫理委員会の承認を得た。H27年度は、O-17濃度別ファントムや健常人ボランティアでのMRI撮像を行い、撮像法開発を継続した。過去の検討によりsteady state型のT2強調画像をベースに開発を進めたが、長いTEやTRを用いた撮像ではbanding artifactが非常に目立つため、円筒型のファントムの設計変更を行った。また、脳実質のT1値やT2値に近い値に溶液を調製したものを新たに作成し、ファントム実験を継続した。その結果、steady state型ではないT2強調画像の撮像が有用であることが判明し、新たな撮像法としての有力な候補となった。医師主導臨床試験としてO-17水分子を健常人ボランティアに投与してMRI撮像を行っているが、そのデータを用いて撮像法開発や画像解析法開発を継続し、画像解析ソフトの基盤を作成した。撮像されたMRIデータの読み込み、時間濃度曲線の作成を行う事が可能となり、さらに血流量の定量解析を行うアルゴリズムの開発を継続した。O-17酸素分子に関しては、O-17水分子の静脈内投与用製剤の供給元である国内企業との協議を行い、製造体制の構築に向けた準備を行った。具体的に動物で投与するためのボンベやパイピングなどの協議を開始し、H28年度に動物での投与が可能となるような準備を行った。O-17濃度別ファントムではヒト用に加えて動物用MRIで用いることができるような小径のファントムを作成し、ヒト用と同様にT1値やT2値の調整も行い、動物用MRIでの撮像実験を開始した。ヒト用MRIで用いた撮像法を何種類かテストし、動物用MRIでも類似したコントラストで撮像できることを確認した。O-17濃度別ファントムや健常人ボランティアでのMRI撮像にて、撮像法の開発は順調に進んでおり、安定した信号が取得出来るようになってきた。さらに高コントラストな撮像法が望まれており、パラメータ設定に関してはもう少し検討が必要である。既存の医師主導臨床研究でのMRI画像データを用いることで画像解析ソフトの開発も行っている。O-17酸素分子の製造体制構築に関しては企業側での対応が主体であるが、動物実験を行うための準備も順調であり、H28年度には動物でのMRI撮像が可能となる予定である。Steady State法におけるMRI信号の理論式による数値シミュレーションを行い、組織のT1値、T2値、MRI撮像パラメータ(TR、TE、FA値)や、O-17のT2緩和能に基づき、様々なO-17濃度における様々な組織(灰白質、白質、脳脊髄液)のMRI信号強度のシミュレーションを行った。その結果、脳の灰白質や白質ではMRI信号強度とO-17濃度との関係がほぼ直線的であることが判明し、回帰直線を求めることができた。脳脊髄液では直線関係は見られなかったが、低濃度では直線的であることがわかった。これらの直線関係から、O-17濃度を定量化する回帰直線を算出した。O-17濃度別ファントムのMRI撮像を行い、シミュレーション結果と実測のMRI信号値との間に良好な相関が確認された。MRI信号強度シミュレーションを過去の撮像データに当てはめ、MRI信号強度からO-17濃度を求める方法として確立した。健常人ボランティアでのMRI撮像を継続し、新しい撮像法(FSE法)にて、より安定したMRI撮像法を確立した。Gd造影剤とO-17の濃度別ファントムを作成し、それぞれの緩和能を算出した。

それらのデータから、コンパートメントモデルを用いたO-17水およびO-17酸素ガスの定量解析法に向けて動脈内濃度測定用のMRI撮像法の開発を行った。酸素代謝をターゲットとしたO-17酸素分子を用いた動物実験として、動物への投与方法の検討を行った。O-17酸素ガスのボンベ化や、投与経路としてのパイピングなどの調整・設計などを行った。O-17酸素ガス吸入下でのマーモセットのMRI撮像に向けて、O-17水を投与してMRI撮像を行い、O-17による良好な画像コントラストを得た。MRI信号の理論式を用いて、様々な組織におけるMRI信号強度のシミュレーションを行った。O-17濃度別ファントムのMRI信号値との間に良好な相関が確認され、MRI信号強度からO-17濃度を算出する方法として確立した。健常人ボランティアでのMRI撮像を行い、FSE法を用いて安定したMRI撮像法を確立し、血流量の定量解析を行うアルゴリズムの開発を行った。O-17酸素分子の製造体制の構築を行い、動物用の吸入装置の設計を行った。小径のO-17濃度別ファントムを作成し、動物用MRIでの撮像実験を行った。O-17水を投与してマーモセットにてMRI撮像を行い、良好な画像コントラストを得た。O-17濃度別ファントムや健常人ボランティアでのMRI撮像にて、撮像法の開発は順調に進んでいるが、パラメータ設定に関してはもう少し検討が必要である。また、過去のデータを用いることで画像解析ソフトの開発を前倒しで行っているが、一方でO-17酸素分子の製造体制構築に関しては企業側での対応が主体であるため、引き続き協議が必要である。医師主導臨床試験はプロトコル作成も終わり、倫理委員会の承認も得られているため試験の準備も順調に進んでいる。濃度変更を行ったO-17濃度別ファントムをヒト用MRIで撮像し、信号強度からO-17濃度を定量化する式を求める。さらに、健常人ボランティアでのMRI撮像を継続し、脳腫瘍をターゲットとした撮像法開発を行い、より安定して高コントラストなMRI撮像法の確立を目指す。また、医師主導臨床試験のMRI撮像データから脳腫瘍用の撮像法開発を行い、画像解析法開発に関してはコンパートメントモデルを用いた定量解析法のアルゴリズム作成を行う。定量化の際には、O-17濃度別ファントムでの信号濃度直線を利用する。酸素代謝をターゲットして、O-17酸素分子を用いた動物実験を行う。動物への投与方法の検討としO-17酸素分子ガスのボンベ化や、投与経路としてのパイピングなどの調整、O-17酸素分子の濃度調製方法の最適化などを行う。MRI撮像はコモンマーモセットを用いて行い、ヒト用のMRI撮像法をベースに動物用MRIでの最適化を実施し、O-17酸素分子の投与後に連続データとして撮像を行い、信号変化から定量化を目指す。28年度が最終年度であるため、記入しない。神経放射線診断O-17濃度別ファントムや健常人ボランティアでのMRI撮像を継続して行い、撮像法開発を加速する。
尿路性器平滑筋における神経成長因子受容体を有する神経の研究

ヒト正常尿路性器組織における神経成長因子受容体(低親和性神経成長因子受容体:LNGFR、高親和性神経成長因子受容体:TrkA,TrkB,TrkC)の分布に関する免疫組織学的並びに分子生物学的研究。1)膀胱:膀胱粘膜層にはLNGFR神経は豊富に存在し、知覚求心性神経としての役割を担っている可能性が示唆された。膀胱筋層では平滑筋組織のみならず、間質にもLNGFR陽性神経が認められた。2)尿道:(1)男性前立腺部尿道:粘膜、筋層にLNGFR陽性神経とTrkA陽性神経が認められた。(2)女性尿道:粘膜、筋層にLNGFR陽性神経を認めたが、遠位部尿道に比べ近位部尿道においてLNGFR陽性神経線維数は多く、女性の尿禁制に対し何らかの形で関わっている可能性が示唆された。3)前立腺:免疫組織学的検討(1)transition zone:間質組織内にLNGFR陽性神経、TrkA陽性神経、TrkC陽性神経を認めたが、TrkB陽性神経は認めなかった。腺上皮細胞はLNGFRとTrkBで陽性を示した。(2)前立腺被膜:LNGFR,TrkA,TrkC陽性神経が認められた。前立腺では神経成長因子受容体は腺分泌にも関与している可能性が示唆された。分子生物学的検討;transition zoneより採取した組織よりRNAを抽出し、逆転写によりcDNAを作成した。PCR,Southern blot hybridizationによりTrkB,TrkCの存在を遺伝子レベルで確認した。4)陰茎:陰茎海綿体、白膜にLNGFR陽性神経を多数認め、特に陰茎海綿体内の動脈周囲に豊富に存在していた。一酸化窒素合成酵素含有神経(NADPH-diaphrose染色)との分布の比較では、陰茎海綿体および白膜にNADPH陽性神経を多数認めたが、海綿体内の動脈の中・外膜に多く存在し、明らかにLNGFRとは分布様式が異なっていた。LNGFRは勃起に関して一酸化窒素とは異なる機構に関与している可能性が示唆された。正常尿路性器組織における低親和性神経成長因子受容体(LNGFR)、高親和性神経成長因子受容体(TrkA,TrkB,TrkC)の分布に関する免疫組織学的研究。1.膀胱:膀胱粘膜層にはnetworkを形成するようにLNGFR陽性神経は豊富に存在していた。膀胱筋層では平滑筋組織内のみならず、間質にもLNGFR陽性神経が認められた。神経線維数では粘膜層が筋層に比べ豊富であり、LNGFR陽性神経は知覚神経としての役割っを担っている可能性が示唆された。2.尿道(1)正常男性前立腺部尿道:粘膜および筋層にLNGFR陽性神経とTrkA陽性神経が認められた。TrkB,TrkCは認められなかった。(2)正常女性尿道:粘膜および筋層にLNGFFR陽性神経を認めたが、遠位部尿道に比べ近位部尿道においてLNGFR陽性神経線維数は多く、女性の尿禁制に対して何らかの形で関わっている可能性が示唆された。3.前立腺(1)Transition zone:間質組織内にLNGFR陽性神経、TrkA陽性神経、TrkC陽性神経を認めた。LNGFR陽性神経、TrkC陽性神経は豊富に存在していた。TrkB陽性神経は認められなかった。(2)前立腺被膜:LNGFR,TrkA,TrkC陽性神経が確認された。前立腺では神経成長因子受容体は腺分泌にも関与していることが示唆された。4.陰茎(1)陰茎海綿体、白膜にLNGFR陽性神経を多数認めた。特に陰茎海綿体内の動脈周囲に豊富に存在した。(2)一酸化窒素合成酵素含有神経との分布の比較:NADPH-diaphroseを用いた免疫組織染色では、陰茎海綿体、白膜にNADPH陽性神経を多数認めたが、海綿体内の動脈の中膜、外膜に多く存在し、明らかにLNGFRとは分布様式が異なっていた。LNGFRは勃起に関し、一酸化窒素とは異なる機構に関与していると推察された。

(2)前立腺被膜:LNGFR,TrkA,TrkC陽性神経が認められた。前立腺では神経成長因子受容体は腺分泌にも関与している可能性が示唆された。分子生物学的検討;transition zoneより採取した組織よりRNAを抽出し、逆転写によりcDNAを作成した。PCR,Southern blot hybridizationによりTrkB,TrkCの存在を遺伝子レベルで確認した。4)陰茎:陰茎海綿体、白膜にLNGFR陽性神経を多数認め、特に陰茎海綿体内の動脈周囲に豊富に存在していた。一酸化窒素合成酵素含有神経(NADPH-diaphrose染色)との分布の比較では、陰茎海綿体および白膜にNADPH陽性神経を多数認めたが、海綿体内の動脈の中・外膜に多く存在し、明らかにLNGFRとは分布様式が異なっていた。LNGFRは勃起に関して一酸化窒素とは異なる機構に関与している可能性が示唆された。
生体内に生じるアントシアニンの機能性代謝物の探索

我々のこれまでのアントシアニンの吸収・代謝・臓器分布の研究から、その生理機能に無色の代謝物が寄与していることが強く示唆される。生体での無色代謝物の探索の基礎として生理的条件下でアントシアニンの分解と退色産物を経時的に追った。試みた5種のアントシアニン全てで、中間生成物としてレトロカルコンをLC-タンデムMS分析により初めて明瞭に捉える事に成功した。レトロカルコンの生成は510時間で最大となり、その後さらに分解が進む。平成19年度の研究で、当初の目標である種々のアントシアニン(6種のアグリコンのグルコース配糖体の精製標品を様々な精製手法で確保し、in vitro,in vivoでの実験に供することを可能にした。我々が進めている、アントシアニン類の吸収・代謝・臓器分布の研究からは、インタクトあるいはアグリコンの構造を保持した代謝物だけでは、生体内でのその機能性を説明できないことが明らかになりつつある。そこで、生体内でのアグリコン構造が保持されていない退色代謝物を探索するための予備実験として、in vitroでのアントシアニンの退色産物の探索を行った。各アントシアニン(シアニニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペツニジンの3-グルコシドおよびシアニジン、デルフィニジンの3-ルチノシド)を生理的条件下(pH7.4、37°C)で48時間インキュベートし、その間のアントシアニンの分解と退色産物の生成をHPLC-フォトダイオードアレイシテムで経時的に追跡した。いずれのアントシアニンも一次反応的に減少し、それに伴い350nm付近に吸収極大を持つ、退色産物と考えられる液クロピークが現れる。このピークは510時間で極大となり、その後は減少していく。この退色産物を同定するために、シアニジンとデルフィニジンの3-ルチノシドについてLC-タンデムMS分析を行った。どちらのアントシアニンでもアグリコンのレトロカルコンに対応するプロトン付加分子ピークが明瞭に検出される。従来アントシアニンの分解過程で生じるとされていたレトロカルコンを初めて明確にとらえることができた。これらの結果を昨年の3rd International Conference on Polyphenols and Healthで報告した。現在、他のアントシアニン類のin vitroでの退色産物の同定とin vivoでの退色産物の検出、定量を進めている。平成20年度の研究では、in vitroの生理的条件下(pH7.4、37°C)で生成する各アントシアニン(シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペツニジンの3-グルコシド)の退色産物の同定を、LC-タンデムMSを用いて進めた。いずれのアントシアニンにおいても、平成19年度にシアニジンとデルフィニジンの3-ルチノシドの退色産物で確認されたのと同様、アグリコンのレトロカルコンに対応するプロトン付加分子ピークが確認された。これらのレトロカルコンはアントシアニンの分解過程の中間生成物で、その生成量は上記反応条件で510時間で最大となり、その後異なる無色化合物に変化する。また、レトロカルコンは酸性条件下で元のアグリコンに戻ることも明らかとなった。現在、これらのレトロカルコン配糖体がオープンカラムで分取可能であることを見出し、比較敵大量に分取する手法の開発を進めており、これによりNMRによる構造決定が可能になる。一方、in vivoでの血中のレトロカルコンをはじめとする退色代謝物については、レトロカルコンが不安定なため、インタクトのアントシアニンの血中分析のような分析方法は適用できない。採取血液の後処理を省くためにHPLCにカラムスイッチング法を用いることを進めている。また、in vitroでレトロカルコン配糖体の標準品を得ることで、HPLCより分析時間をはるかに短縮できるUPLCの分析条件の検討、設定が可能となり、in vivoでの血中アントシアニンの退色代謝物のより正確な分析が可能になる。
経済刑法総論の探求及びそれに基づく特別刑法の解釈・運用について

経済刑法の刑罰法規は、基本的に個別的・断片的に分析され各法システム内で完結しており、それを超えた議論は行われてこなかった。そのため、経済刑法という法領域に共通する要素の有無や内容についての検討、すなわち、経済刑法総論と呼ばれる領域の検討が、必ずしも十分に行われてこなかったように思われる。経済刑法を他の特別刑法から切り離す独自性として、犯罪行為が日常的な経済行為と隣接性を有すること、及び、それ故に、犯罪行為を規律する刑法が違反行為を規律する民事・行政上の措置と連続性を有するエンフォースメント手段の一つとして捉えられていることなどが挙げられる。本研究では、上記独自性に基づく視角をもって経済刑法総論を構築し、それによって、各則である各刑罰法規を検討することによって、その解釈・運用・立法に寄与するとともに、経済刑法に関する全体・個別の議論の更なる活性化を目的とするものである。1.本年度は、経済刑法に属する各法領域の断片的部分や、比較研究から、経済刑法総論として取り扱うに値する論点を抽出した。とりわけ、その過程において、経済刑法分野における判例の判断手法や、学説の検討方法について検証することを行い、その成果は、2019年度以降に論文集(共著)の形で公表される予定である。また、日常的な経済活動と犯罪行為を峻別する要件として経済刑法の一部に要求されている目的要件についても検討を行い、その成果の一部は、2019年5月の刑法学会ワークショップにおいて発表される。2.研究の過程の副次的成果として、私法上の契約関係と密接な関係にある横領罪に関する論考を公表したほか、特別刑法に関する判例研究も行った(2019年度以降に公表される予定である)。3.研究分担者は、代表者の研究内容に、私法や法と経済学の観点から助言を行うとともに、関連する民事法分野における業績も公表している。今年度は研究計画に従った研究をおおむね実施することができた。もっとも、抽出すべき論点や、比較法的分析の余地がなお考えられるため、(1)とは評価しなかった。基本的に当初の研究計画に従って研究を進めていく。2019年度は、前年度抽出した経済刑法総論として取り扱うに値する論点について、本研究の分析の視角に基づいた検討を加えるとともに、比較法研究も踏まえてさらなる論点を抽出する。また、それと並行して、本研究の前提とする経済刑法の特性の妥当性についても詳細に検証する。購入予定の書籍(洋書)の出版が次年度になったため、次年度使用額が生じた。2019年度に出版されれば購入する。
高速共焦点スキャナを用いた複雑な３次元マイクロ構造のデジタル光造形と混相流動計測

本研究では、赤血球のマイクロ挙動解明に向けたモデル実験に用いる、3次元特殊形状マイクロビーズの造形を念頭におき、マイクロ流路内に複雑な3次元形状の構造物を高速造形する手法の開発を目的とし、高速共焦点スキャナとDMD(デジタルミラーデバイス)を組み合わせた光造形法を提案した。光学設計においては、照度むらを無くすための光学設計に特に留意し、空間フィルタやビームホモジナイザを導入することにより、全域に渡っての輝度差を10%以内に抑えた。共焦点効果による硬化スポットは、理論的な共焦点深度よりも厚くなる傾向がみられるが、その厚みはレーザの強度を抑え、露光時間を長めに取ることで薄くできる可能性が示された。今年度は装置の各コンポーネントの購入と、より高精度な形状の造形の実現を目指して改良を行った。初年度に検討を行った光源について、最も本手法に適したレーザを選定し、購入した。波長は共焦点スキャナ内部を通すことのできる最短波長の375nmとし、パワーは必要十分なMAX70mWとした。特に熟慮を要した部分は、レーザのプロファイル(強度分布)であり、できるだけきれいな同心円状ガウシアン分布を持つ機種を選定した。これは、最終的にビームシェイパーを用いて均一でフラットなプロファイルに成形するためである。さらに、光路にピンホールを挿入することでより理想的なプロファイルに成形し、フラットにしたときの強度のばらつきを10%程度にまで改善した。次に、光造形において硬化面を精密に位置制御するための対物レンズピエゾポジショナを選定・導入した。スペックとしては従来型の100μmに対して250μmのストロークとし、より深い流路に対応した。システムの核となるDMD(デジタルミラーデバイス)は動作確認を終了したもののUV対応品の製作にメーカ側で時間がかかっており、年度内の納入に間に合わなかった。よって、現在は単純なパターンをミラーに貼って代用している。DMD納入までに計画のStageIIにあるDMDとピエゾ、共焦点スキャナの同期、ビーズ連続生成と回収、およびマイクロ混相流の計測を先行して行った。システムの同期にはLabViewを用いて同期プログラムを構築し、露光とz位置制御のタイミングを制御可能とした。現在はビーズ連続生成システムも組み込んだより高度な制御を構築中である。混相流の計測へ向けては、硬化させたビーズの挙動計測のため、内部により小さな蛍光トレーサ粒子を混入させて硬化する手法を確立した。一年延長した本年度の初めに、デジタルミラーデバイス(DMD)を導入した。さまざまなパターンをPC上で作成し、それに拡大・均一化したレーザを照射することで任意のUVパターンを反射させることに成功した。なお、前年導入したレーザのプロファイルを改善するため、レーザ射出直後に空間フィルタを設置し、より強度的にフラットなパターン光の生成に成功している。UVパターン光の導入は、共焦点スキャナの中間光路に直接導入する方式を採用し、パターンが共焦点光学系を通って対物レンズの焦点に結像することが確認できた。ただし、本方式は非常に緻密な光路のハンドリングを要し、また光路長も長くなってしまうため、装置の移動などが容易にはできない。将来的にはやはり光ファイバで共焦点スキャナ内に導入し、共焦点スキャナ内にDMDを設置する一体型が望ましいと考える。次に、本装置を用いて流路空間内に充填したUV硬化樹脂にパターン光を照射する実験を、条件を変えて数多く試行した。最も難しい点は、焦点面以外の深さも硬化してしまうことであり、対物レンズの光学特性とレーザ強度、照射時間の主に3つのパラメータに依存する。具体的な値は公表予定ではあるが、基本的に集光性の高いNAの大きいレンズの方が、比較的容易な傾向がみられている。それでも、レンズと共焦点スキャナで規定される共焦点深度より数倍厚い硬化物ができてしまい、中央部が厚くなり易いため、高さを変化させての3次元構造物の製作は非常に難易度が高いというのが現状である。最終年度の目標である、「マイクロ混相流の計測」および「様々なアプリケーションへの応用検討」については、まず、流れのある流路内での硬化については、硬化する前に下流へ流れてしまう不具合が起き、一時的に静止させるStop Flow法の適用が必須である。また、アプリケーションとしてはキトサンゲルなどの素材を検討中である。初年度は露光システムの構築と硬化条件の調査に充てた。まず、狙っていた共焦点効果によるマイクロチャネル空間内への露光エネルギー集中と硬化物生成については十分に効果が確認され、流路の奥深くに硬化物を生成することができた。また、数種の対物レンズを用いて、倍率やNAが硬化物のサイズに与える影響のデータを集めることができた。光源は主に高出力の白色光源と波長幅の狭いレーザを数種類テストした。

調査の結果、白色光源は十分な出力を備えていたが、要求されるレベルにまで共焦点深度を絞ることができないことが判明した。レーザを用いると共焦点深度をより浅く絞ることが可能となったが、硬化樹脂の感光特性との組み合わせによっては、全く硬化しない場合や硬化に時間がかかりすぎる場合があった。これについてはいくつかの波長と樹脂をテストし、最適な組み合わせと短時間硬化に必要な出力を見出すことができた。これらコンポーネントのテストに当たっては、多くのレーザメーカ、樹脂メーカの協力を得られている。照射面内での均一な硬化については、ガウス分布などの光強度プロファイルを持つレーザをそのまま共焦点スキャナに挿入すると、照射面内で均一な強度分布にならず一様な厚みの硬化物が得られなかった。そこで、反ガウス分布の減衰率を持つアポダイジングフィルタを光路に挿入することにより、強度分布の均一化を達成した。ただし、この手法では全体的な照射強度が低く抑えられてしまうため、より出力の高いレーザもしくは回折素子の導入を検討している。パターン露光に用いるデジタルミラーデバイスはその挿入位置の検討をまず行い、共焦点スキャナ内の反射ミラーと置き換える形で挿入し、光学的に像が歪まないことも確認した。いくつかの候補位置のうち、角度調整や外部との配線を行いやすい位置に設置することとした。本来であれば本年度までの2年間での研究終了を予定していたが、DMD(デジタルミラーデバイス)導入に関する一連の遅れにより、1年間の延長申請を行うこととなった。具体的には、まずDMDの性能確認のためのデモの都合がなかなかつかなかったことと、UV対応としたことなどにより、製作期間が予想以上に長くかかってしまっていることが挙げられる。DMDは本研究の中心的デバイスであるため、確実な成果を達成すべく研究期間の延長に踏み切らざるを得なかった。ただし、その間にDMD以外の部分のシステム構築を進め、光学的な設計と硬化の確認、光源とz軸の同期制御プログラムなどはほぼ完成している。また、硬化させる樹脂の特性把握、および樹脂内部へのPIV用蛍光粒子分散に関しても良い結果が得られており、後はDMDの到着を待ってシステムの完成とそれを用いての目的達成を試みる。本研究の目的とした、1)共焦点3次元光造形システムの開発、2)血球モデル混相流の流動計測、3)3次元光造形システムの応用先の提案に対し、1)に関してほぼ予定通りに研究が進んでいる。具体的には、初年度計画の露光システムの構築および硬化条件の調査に関して、要求された仕様に対して必要な検討を行い、定量的なデータを得ることができている。光源の購入が遅れてはいるが、選定済みであり、納品に時間がかかっているのみである。また光源納品までの期間を用いて次年度予定のシステム同期を一部前倒しで進めており、制御ソフトウェア「LabVIEW」を用いた制御プログラムの開発を行っている。1年間延長した平成25年度(最終年度)の初頭にDMDの納入が予定されており、いち早くシステムの完成に尽力する。その後は研究計画のStageIIを進め、複雑な3次元形状の造形や、ビーズ状硬化物を造形しての固液混相流のPIV計測につなげていく。
2次元フェーズドアレイ探触子による高精度非破壊評価と鋼床版リブ交差部への適用

当研究は鋼床版縦リブ横リブ交差部に発生する疲労き裂をマトリクスフェーズドアレイ超音波探傷により検出し,精度よく寸法を評価することを目的としている.フェーズドアレイ探触子は素子を密に配置した構造で,電子的な操作により入射波の方向を変化させることができるものである.これまでの検討で用いられてきたマトリクスフェーズドアレイは一次元に素子を配置したものが多いが,当研究は実用的な試験ではいまだ活用が進んでいない二次元に素子を配置したものを使用する.当研究では,素子寸法,くさび使用をはじめとする探傷条件を検討項目とし,確実な疲労き裂検出と高精度な寸法推定を目指す.今年度までは,システムを構築し,スリット試験体での実験を行った.フェーズドアレイ探傷システムは128素子を使うことができるものである.二次元配置フェーズドアレイ探触子の場合,一次元配置よりも素子数が多くなるため,多くの素子での使用が必要となる.き裂の画像化に開口合成法という手法を用いている.開口合成は反射源からのエコーを重ね合わせる形で像を形成していくため,フェーズドアレイ法のように条件を変えて何度も探傷する形の収録法に適している.1次元配置のための開口合成法を2次元配置フェーズドアレイ探触子に拡張した.今年度は現場での実験を何度か試す機会に恵まれた.しかし,現場では,上向きの探傷となるので,探傷装置に工夫が必要であることがわかった.今後は探傷装置,つまり探触子治具と走行装置(スキャナ)の改善に取り組む予定である.当初の計画と異なる点が2つある.一つは現場での適用をあとにしていたのだが,今年度に適用することができたこと,もう一つは探触子の素子をパラメータとした検討を実験室レベルで行う予定であったが,それをしていないことである.両者は関連するところも多い.現場での探傷においては,特に上向きのように条件が厳しくなると,探触子のサイズにより走査性が変わる.現在所有のものよりも小さいものを考えており,今年度の結果は今後の良いフィードバックになるものと考えている.以上より,当初の予定と比較しても遅れてはいないと判断した.今後の研究遂行に際して,次の3つを行っていく.第一は現場の探傷に耐えうる走行治具の開発および作製である.昨年度の検討にもあったように,現場では,上向きの探傷を行う必要が生じる.上向き探傷のため,治具には磁石を入れて固定する仕組みとなっている.しかしながら,現行で用意したシステムでは,磁石の力が弱く,走行時にはずれることなどもあった.よって磁石を強力にすることやスムーズな走行ができるような機構を考える必要がある.第二は探触子素子寸法の検討である.現行のシステムでは1mm四方のサイズであるが,これよりも小さい0.6mm程度のものを作製する予定である.素子が小さくなることは感度の低下にもつながるといったデメリットがあるが,探触子を小さくすることができるので,走行しやすいといったメリットもある.現行の大きいものではメリットとデメリットが逆になる.当初の予定と検討順序が逆になったが,最終的な成果としては,影響はないものと考えている.探触子を用意した後には確認のために実験室レベルでの疲労試験と探傷試験を行う予定である.第三は縦横リブ交差部に対応した治具の開発および開口合成プログラムの改良である.疲労き裂は拘束力の強い縦および横リブが交差する位置に発生しやすいことがこれまでの検査よりわかっている.そのためには,角度調整のできる治具や角度情報を考慮できるように開口合成プログラムを改良する必要がある.第三の検討は翌年度以降となる可能性が高い.当研究は鋼床版縦リブ横リブ交差部に発生する疲労き裂をマトリクスフェーズドアレイ超音波探傷により検出し,精度よく寸法を評価することを目的としている.フェーズドアレイ探触子は素子を密に配置した構造で,電子的な操作により入射波の方向を変化させることができるものである.これまでの検討で用いられてきたマトリクスフェーズドアレイは一次元に素子を配置したものが多いが,当研究は実用的な試験ではいまだ活用が進んでいない二次元に素子を配置したものを使用する.当研究では,素子寸法,くさび使用をはじめとする探傷条件を検討項目とし,確実な疲労き裂検出と高精度な寸法推定を目指す.今年度までは,システムを構築し,スリット試験体での実験を行った.フェーズドアレイ探傷システムは128素子を使うことができるものである.二次元配置フェーズドアレイ探触子の場合,一次元配置よりも素子数が多くなるため,多くの素子での使用が必要となる.き裂の画像化に開口合成法という手法を用いている.開口合成は反射源からのエコーを重ね合わせる形で像を形成していくため,フェーズドアレイ法のように条件を変えて何度も探傷する形の収録法に適している.1次元配置のための開口合成法を2次元配置フェーズドアレイ探触子に拡張した.今年度は現場での実験を何度か試す機会に恵まれた.しかし,現場では,上向きの探傷となるので,探傷装置に工夫が必要であることがわかった.今後は探傷装置,つまり探触子治具と走行装置(スキャナ)の改善に取り組む予定である.当初の計画と異なる点が2つある.一つは現場での適用をあとにしていたのだが,今年度に適用することができたこと,もう一つは探触子の素子をパラメータとした検討を実験室レベルで行う予定であったが,それをしていないことである.両者は関連するところも多い.

現場での探傷においては,特に上向きのように条件が厳しくなると,探触子のサイズにより走査性が変わる.現在所有のものよりも小さいものを考えており,今年度の結果は今後の良いフィードバックになるものと考えている.以上より,当初の予定と比較しても遅れてはいないと判断した.今後の研究遂行に際して,次の3つを行っていく.第一は現場の探傷に耐えうる走行治具の開発および作製である.昨年度の検討にもあったように,現場では,上向きの探傷を行う必要が生じる.上向き探傷のため,治具には磁石を入れて固定する仕組みとなっている.しかしながら,現行で用意したシステムでは,磁石の力が弱く,走行時にはずれることなどもあった.よって磁石を強力にすることやスムーズな走行ができるような機構を考える必要がある.第二は探触子素子寸法の検討である.現行のシステムでは1mm四方のサイズであるが,これよりも小さい0.6mm程度のものを作製する予定である.素子が小さくなることは感度の低下にもつながるといったデメリットがあるが,探触子を小さくすることができるので,走行しやすいといったメリットもある.現行の大きいものではメリットとデメリットが逆になる.当初の予定と検討順序が逆になったが,最終的な成果としては,影響はないものと考えている.探触子を用意した後には確認のために実験室レベルでの疲労試験と探傷試験を行う予定である.第三は縦横リブ交差部に対応した治具の開発および開口合成プログラムの改良である.疲労き裂は拘束力の強い縦および横リブが交差する位置に発生しやすいことがこれまでの検査よりわかっている.そのためには,角度調整のできる治具や角度情報を考慮できるように開口合成プログラムを改良する必要がある.第三の検討は翌年度以降となる可能性が高い.今年度より,実際の橋梁での現場計測の機会をいただけることになり,探触子の素子寸法の検討を行わなかったので,探触子を購入する費用が使われなかった.次年度は探触子を購入する予定であるので,予算を執行することになる.なお,現場計測は今後も行うことができるので,現場に即したシステム開発を行うことも今後とも十分に可能である.
ＡＩＤによるゲノム再構成に伴うクロマチン制御

AIDによって誘導され転写されうるIgH領域のゲノム再編成はDNA切断と組換えの過程を経る。本研究の目的はAIDに誘導されるSHMとCSR転写と会合したクロマチン領域の同定である。DNA切断中のAID標的となる領域はSPT6,FACT,H3K4me3と3.3に富んでいる事を見いだした。SPT6,FACTはIgH領域のエピジェニックな厳密性を認識するヒストンシャペロンであるが、SPT6は特異的にAID領域が必須である。一方、AcH4リダーBRD4はUNG、IgH上のDNA修復蛋白のリクルートの促進が必要である。故に、DNA切断・修復に関わる標的領域はAIDによるゲノムの不安定性制御に必須である。AIDは抗体遺伝子の多様化の過程でIgHローカス上でのゲノムの不安定化を引き起こす。AIDは、また癌化につながる形質転換の原因となる異常なゲノムの再編成を引き起こす。それ故に、基本的な発症メカニズムを理解することは重要である。ヒストンシャペロンFACTに関する我々の初期の仕事によって、AIDによって引き起こされたDNA切断上のクロマチン制御の重要性が示唆された。我々は、ヒストンシャペロンSpt6がAIDならびにAIDが標的とする領域におけるクロマチン制御に関与していることを証明した。驚くべきことに、Spt6による2つの領域制御は、異なった2つの独立したエピジェネティックな標識によりコントロールされている.これらの発見によってクロマチンがAIDによるゲノムの再編成を制御しているという我々の仮説が支持された。我々は、さらにH3K4me3-DNA切断複合体の単離と、新規なクロマチン因子の同定へと展開した。我々のプロジェクトは順調に進んでおり、初年度に計画された目標に達している。タンパク質複合体の単離に関する研究では、FACT、Top1およびH3K4me3が同じ複合体に含まれていることを示し、それはクロマチンに依存したAIDの活性化に際しては、クロマチン上にTop1-DNA切断複合体を形成することを示唆していた。新規なクロマチン修飾蛋白を探索するためにsiRNA法を用いたスクリーニングにより、6つの可能性のある候補を同定できたが、それは強くCSRを制御していた。さらに、我々はS領域特異TALE結合タンパク質を産生することを目標としていたが、主要なTALE構成物の作成はうまくいった。まとめると、我々は、Spt6が介入するAID標的クロマチン制御に関する新しい機能的データを得ることができ、また新規クロマチン蛋白を同定できた。その機能解析によって、AIDによって引き起こされるゲノム不安定化をコントロールするヒストンのエピジェネティックな制御を明らかにできる可能性がある。我々は、CSR制御に強い効果を示した2つのクロマチンタンパク質に焦点を絞ることを計画している。詳細な研究によって、AIDによるCSR、SHMおよび異常なトランスロケーションに関するそれらの役割が導かれるだろう。Top1-FACT-H3K4me3の相互作用とクロマチン切断複合体形成の正確な様式を探索する。この点に関しては、S領域TALE結合性タンパク質を利用することでS領域の繰り返し構造と関連付けられるDNA切断を干渉する能力をためす実験をする予定である。他のTALEのCSR制御の特質に基づいて追加的な実験を考える。in vivoでのAIDによって導入されるゲノム不安定化のクロマチンの役割を探索するために、我々はヒストンシャペロンSpt6ノックアウトマウスの作成を計画している。我々はその基となるマウスを得ており、それはCre特異的交差性を必要としており、現在継続中である。我々が初年度の研究計画目標をほぼ達成したように、次年度においても予定通り進むための予算が必要である。次年度の主要な到達点の1つとして、我々がsiRNA法を用いたスクリーニングによって同定した新規クロマチンタンパク質の特性を明らかにすることが挙げられる。したがって、主な研究費用は、siRNAに基づいた細胞培養作業、およびタンパク質免疫沈降を含むクロマチン関連作業(クロマチン免疫沈降)に必要な試薬およびキットに使われる。さらに、我々の仕事を発表、討議するための国内外の会議に出席するための費用に役立てたい。消費可能な研究試薬:1,400,000円
温度応答性イオン素子によるイオン輸送ベクトル制御

ポリビニルアルコール(PVA)にN-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)をグラフト重合したポリマーと高分子アニオンのポリマーブレンド溶液をキャスト製膜後、熱処理及びグルタルアルデヒドで架橋することにより温度応答性荷電膜を作製した。この膜にパルス状の温度変化を与えて膜荷電密度変化を測定すると、10°Cから50°Cへの昇温サイクルにおいて荷電密度は0.07mol/dm^3から0.26mol/dm^3へ1分以内に変化し、この変化は実験を繰り返してもほぼ同じ挙動を示した。これはこの膜が高速で可逆的な温度応答性を有することを示している。この温度応答性荷電膜を2つのセルに挟み、片側セルに3.0×10^<-3>M KClと5.0×10^<-4>M CaCl_2、もう一方にその10倍濃度の混合電解質溶液を入れた系においてCa^<2+>イオン濃度だけがその初期濃度の±10%の変位でノコギリ波状に振動するように系の温度を変化させた。その結果、K^+イオン濃度は単調に増加し、このイオンの輸送ベクトルは温度に依存しない。一方Ca^<2+>イオン濃度は予測通りに初期濃度の±10%の変位でノコギリ波状に振動した。これは高温時にCa^<2+>イオンがその濃度勾配に逆らって輸送され、低温時に、このイオンが高濃度側から低濃度側に拡散するからである。このことはこの膜がCa^<2+>イオンの輸送ベクトルだけを温度制御可能であることを示している。今回はCa^<2+>イオン濃度をノコギリ波状に振動させたが、この膜を用いれば応答度の範囲内でこのイオン濃度の時間変化を任意の形に変調することが可能である。ポリビニルアルコール(PVA)にN-イソプロピルアクリルアミド(NIPAAm)とメタクリル酸をグラフト重合したポリマーのDMSO溶液をキャスト製膜し、グルタルアルデヒド溶液で架橋を行うことで温度応答性荷電膜を作製した。この膜の荷電密度は下限臨界溶解温度(LCST)以上で急激に減少し、25°Cにおける膜荷電密度が40°Cの時よりも15倍高い値となった。温度増加に対してこの感温性荷電膜の荷電密度が低下する原因は、LCST以下の温度ではNIPAAmが親水性であるため、グラフト重合鎖はPVA網目中に存在する水相に溶解するが、LCST以上の温度ではNIPAAAmが疎水性となるためPVA網目中で疎水性相と親水性相に相分離し、このときNIPAAm-MAcグラフト重合鎖に固定された荷電基の一部がこの疎水性相の中にとじ込められるためであると考えられる。この膜を用いてKCl,CaCl_2混合溶液の拡散透析系において温度を変えて透過実験を行った。40°Cでは低濃度側でのK^+,Ca^<2+>イオン濃度は時間とともに増加し、これより両イオンが受動輸送していることが判明した。しかし、25°Cにおける透過実験では、時間とともに低濃度側のK^+イオン濃度は増加するが、Ca^<2+>イオン濃度は減少しており、これはCa^<2+>が濃度勾配に逆らって低濃度側から高濃度側へとUphill輸送されていることを示している。これらの結果は、感温性荷電膜を用いることで、2価イオンの輸送ベクトルを温度変化により制御できることを示している。

この膜にパルス状の温度変化を与えて膜荷電密度変化を測定すると、10°Cから50°Cへの昇温サイクルにおいて荷電密度は0.07mol/dm^3から0.26mol/dm^3へ1分以内に変化し、この変化は実験を繰り返してもほぼ同じ挙動を示した。これはこの膜が高速で可逆的な温度応答性を有することを示している。この温度応答性荷電膜を2つのセルに挟み、片側セルに3.0×10^<-3>MKClと5.0×10^<-4>MCaCl_2、もう一方にその10倍濃度の混合電解質溶液を入れた系においてCa^<2+>イオン濃度だけがその初期濃度の±10%の変位でノコギリ波状に振動するように系の温度を変化させた。その結果、K^+イオン濃度は単調に増加し、このイオンの輸送ベクトルは温度に依存しない。一方Ca^<2+>イオン濃度は予測通りに初期濃度の±10%の変位でノコギリ波状に振動した。これは高温時にCa^<2+>イオンがその濃度勾配に逆らって輸送され、低温時に、このイオンが高濃度側から低濃度側に拡散するからである。このことはこの膜がCa^<2+>イオンの輸送ベクトルだけを温度制御可能であることを示している。今回はCa^<2+>イオン濃度をノコギリ波状に振動させたが、この膜を用いれば応答速度の範囲内でこのイオン濃度の時間変化を任意の形に変調することが可能である。
血友病における異常第IX因子遺伝子の解析

1.SSCP(single strand confromation polymorphism)による血友病B患者DNAにおける変異のスクリーニング:血友病B患者のうちで第IX因子抗原が存在しない変異病型であるCRM-(cross reacting material)10例と第IX因子抗原が存在する病型CRM+2例においてエキソンahとそれぞれのスプライスジャンクションを含む領域についてPCRした。PCRされたフラグメントをホルママイドを含むnon-denatureゲルに泳動し高次構造をとったDNAのバンドの位置を観察することにより変異部位の存在するフラグメントをスクリーニングした。すでにエキソンhに点変異の同定されているCRM+の2例(血友病B桐生、高槻)において未検索であったエキソンagでスクリーニングを行い正常バンドと移動度に差をみとめなかった。CRM-の2例においてエキソンhのスクリーニングで正常とは移動度のちがうバンドを認めた。変異部位の塩基配列解析:今回、SSCPによるスクリーニングで正常とは移動度の異なったCRM-の2例についてゲノムDNAを鋳型としてPCRしたフラグメントを、TA-cloning Kit(Invitrogen)を用いてプラスミドクローニングしたのちダイデオキシ法により現在塩基配列解析中である。3.Hinf Iポリモルフィズムを用いた血友病B桐生における家系解析:すでに31,059T→Aの点変異が同定されている血友病B桐生家系に関して、この点変異により新たにHinf Iポリモルフィズムが生ずることを用い、家系解析を行った。その結果は、凝血学的解析に一致するものであった。