hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アルツハイマー病における細胞内βアミロイド誘導性アポトーシスの抑止法開発

以上より、APOが実際の神経細胞でもプロテアソーム活性の上昇作用と保護効果を有することが証明された。アルツハイマー病(AD)の病態機序として、細胞外蓄積アミロイドβ蛋白(Aβ)によるアミロイドカメケード仮説が知られている。一方で、神経細胞内に蓄積するAβによる神経毒性の重要性が近年提唱されており、我々は最近、細胞内蓄積Aβの分解を促進する薬剤として塩酸アポモルフィン(APO)を見出し、ADの治療・進行防止薬として特許出願を行った。また、H_2O_2添加によるアポトーシス誘導系で細胞生存率の著明な改善が見られ、APOはADの神経細胞死を抑止する治療薬候補と考えられた。また、APOの細胞保護効果はH_2O_2添加の酸化学ストレス誘導に対して強力であり、細胞内グルタチオンペルオキシダーゼ活性上昇作用があることを明らかにした。我々はさらに、ADの動物モデルにおいてAPOの治療的効果を検討した。家族性ADの2つの原因遺伝子(APP・PS1)と神経原性変化(NFT)タウ蛋白の遺伝子変異を有する3XTgマウス(APP-KM670/671NL、Tau-P301L、M146V)では、4ケ月齢で海馬や大脳皮質の神経細胞にAβ42が蓄積、短期記憶が障害され、NFT類似のリン酸化タウ蓄積が見られる。6ケ月齢の3XTgマウスにおいて、APO5mg/kg週1回皮下注射を1ケ月間行った所、モリス水迷路解析で記憶機能の改善を認めた。さらに、非注射マウスと比較して、海馬や大脳皮質の神経細胞内のAβおよびリン酸化タウ蛋白の蓄積が軽減していた。以上より、APOは培養細胞における細胞内Aβ分解促進作用や抗アポトーシス作用だけでなく、ADモデルマウスにおいても認知機能および病理学的な改善効果があり、AD患者における有力な治療薬候補であることをあきらかにした。
細胞分化制御におけるcsk遺伝子の機能解析

がん原遺伝子産物であるSrc型チロシンキナーゼは、細胞の接着、移動、分化に伴う形態変化の過程において重要な細胞内情報伝達分子としてはたらくことから、多細胞動物の正常な組織構築に必須の役割を担うと考えられている。本研究は、Src型チロシンキナーゼの機能を、その制御因子であるCskを利用して解析することによって、特に細胞接着を介する増殖・分化制御および組織構築分子機構の一端を解明することを目的とする。本年度は、Cskの機能調節機構を明らかにするために、Cskに結合する蛋白質の同定を行い、その構造と機能の解析を行った。その結果、以下の成績を得た。1)CskのSH2ドメインに特異的に結合する新規チロシンリン酸化膜蛋白質Cbpを分離精製し、そのcDNAクローニングに成功した。2)Cbpは複数のチロシンリン酸化部位を細胞内ドメインにもつ、TypeIIの膜結合蛋白質であった。3)Cbpは、細胞膜ミクロドメインRaftに局在し、Src-PTKによるリン酸化を介してCskを膜にリクルートする作用を持つ。4)Cbpの強制発現により、Cskを介するSrc-PTKの活性抑制効果が増強された。以上の結果から、CskによるSrc-PTKの制御にCbpが重要な役割を担うことが示された。また、CbpがRaftに局在することから、Raftを起点とする細胞内シグナリングにおける役割が示唆された。現在、細胞接着機構におけるCbpおよびRaftの意義役割について解析を進めている。Src型チロシンキナーゼの生理機能を明かにする目的で、その活性制御因子であるCskおよびチロシンホスファターゼの解析を行い、以下の成績を得た。1)Src型キナーゼの活性抑制因子Cskの欠損細胞株を、ジーンターゲッティング法により作製したCsk欠損マウスから樹立した。その表現系の解析から、Src型キナーゼが細胞外基質との接着の制御に関与することが示唆され、その細胞内標的としてパキシリン、コルタクチンなどのfocal adhesionに局在する蛋白質を同定した。2)Cskの成熟組織における役割を検討するために、Csk欠損キメラマウスの作製を行った。Csk欠損細胞の成熟組織への寄与は小さく、Csk欠損が細胞自律的なdefectを生じること、Cskが発生・分化の初期段階で重要であることが示唆された。3)胚性腫瘍細胞P19にCskを強制発現させて、神経分化に対する影響を観察した。Srcの活性抑制が、神経細胞の凝集塊の形成、軸索の収束を抑制することから、Srcと細胞接着との関連性がさらに支持された。4)CskのSH2/3領域と結合するチロシンリン酸化蛋白質として、パキシリン、FAKなどを同定し、Cskの活性制御におけるSH2/3領域の重要性を明らかにした。5)Src型キナーゼの活性化を担うチロシンホスファターゼの検索を行い、その候補の一つを分離精製した。Srcファミリーチロシンキナーゼの活性抑制因子として本研究室で見い出されたCskチロシンキナーゼの生理機能を、Csk欠損細胞、分化モデル細胞、トランスジェニックマウスなどを用いて検討し、また一方で、Cskを道具として用いてSrcファミリーチロシンキナーゼの本来の存在意義の解析を行ない、以下の諸点を明らかにした。1)Csk欠損細胞を用いた解析より、細胞外基質との接着に依存したSrc標的蛋白質(パキシリンやp130casなど)のリン酸化の制御にCskが必須の役割を担うことを明らかにした。2)神経分化モデルPC12細胞を用いて、Src標的の一つパキシリンがCskと相互作用し、分化促進因子(NGF)などのシグナル伝達系で機能することを見い出した。3)中枢神経分化モデルP19細胞を用いた解析からは、Cskのgain-of-functionに伴うSrcの不活化によって、神経細胞の繊維の束化(fasciculation)の抑制、細胞接着分子L1の発現抑制、L1のcross-linkによるSrcの活性化が観察され、細胞間相互作用による遺伝子発現調節のシグナリングにおけるSrc,Cskの意義が示唆された。4)Cskの機能をアンタゴナイズするチロシンホスファターゼの分離精製を試み、また、繊維芽細胞を用いた解析から、SH2ドメインを持つSH-PTP2にその機能があることを見い出した。Src型チロシンキナーゼの正常細胞における本来の役割を明らかにする目的で、その活性制御因子であるチロシンキナーゼCskを利用した解析を行った。1)神経分化モデルP19を用いた解析:膜結合型Cskを強制発現させることによって、分化に伴うSrc型チロシンキナーゼの活性化が抑制され、それに伴い神経細胞の細胞間相互作用が阻害されることを見いだした。また、細胞接着分子L1を介する細胞内情報伝達系も膜結合型Cskの発現によって抑制されることから、細胞間相互作用による細胞分化制御系におけるSrc,Cskの意義が示唆された。L1とSrcの共役を介在する蛋白質の分離を行った。2)分化モデルPC12を用いた解析。細胞間相互作用によってSrcが活性化することを見いだした。その際活性化型Srcは非イオン性界面活性剤不溶性画分に移行することから、活性化機構として蛋白質相互作用想定してSrc結合蛋白質の同定を進めている。3)Cre-loxPシステムによるコンディショナルターゲッティングの試み。

csk遺伝子にloxP配列を導入したマウスをケルン大学と共同で開発し、in vivoおよびin vitroでCreをアデノウイルスを用いて導入することによってcsk遺伝子のコンディショナルにノックアウトする試みを行った。4)Cskの機能をアンタゴナイズするチロシンホスファターゼの分離同定:膜結合型チロシンホスファターゼPTP-BEM1の遺伝子を単離し、そのノックアウトマウスの作製を継続して進めた。がん原遺伝子産物であるSrc型チロシンキナーゼの、正常細胞における本来の役割を明らかにする目的で、それらの活性制御因子であるCskチロシンキナーゼを利用した解析を行った。1)神経突起伸展促進作用のある細胞接着分子L1の下流にSrcチロシンキナーゼが位置し、その制御にCskが重要であることを明らかにした。2)初代培養アストロサイトにアデノウイルスベクターを用いてCskを強制発現させ、その細胞機能に対する効果を解析した。その結果、インテグリンを介する細胞接着およびfocal contactの形成維持にSrcの活性が必須であり、その制御にCskおよびチロシンホスファターゼが関与することを示した。3)細胞間の直接的な接着によってSrcが活性化することを見いだし、またその活性化にSrcの細胞骨格画分への移行が重要であることを明らかにした。さらに、細胞内Ca^<2+>によってFyuの活性が制御されることを見いだした。以上の結果より、Src型チロシンキナーゼが細胞間および細胞外基質との接着による細胞機能制御において、その接着刺激のトランスデューサーとして必須の役割をになっていることが示された。さらに、4)初代細胞培養した神経およびグリア細胞を用いてCre-loxPシステムによるコンディショナルなCskノックアウトを行い、その表現系の解析を行った。5)Cskの機能をアンタゴナイズすることが期待される膜結合型チロシンホスファターゼPTP-BEM1遺伝子を単離し、そのノックアウトマウスの作製を継続して進めた。研究目的がん原遺伝子産物であるSrc型チロシンキナーゼは、細胞の接着、移動、分化に伴う形態変化の過程において重要な細胞内情報伝達分子としてはたらくことから、多細胞動物の正常な組織構築に必須の役割を担うと考えられている。本研究は、Src型チロシンキナーゼの機能を、その制御因子であるCskを利用して解析することによって、特に細胞接着を介する増殖・分化制御および組織構築分子機構の一端を解明することを目的とする。本年度は、1)アデノウイルスベクターを用いた初代培養細胞における急性発現系を利用した解析、2)Cre-loxPシステムによるCsk遺伝子のコンディショナルターゲッティングによる解析、3)また、Src型チロシンキナーゼおよびCskの機能調節に関与する結合蛋白質の解析も行い、それらの介在する細胞内情報伝達経路を明らかにする。結果がん原遺伝子産物Src型チロシンキナーゼの活性制御因子であるCskの機能解析を行い、以下の諸点を明らかにした。1)アデノウイルスベクターを用いた発現系による解析から、a)細胞の正常な接着機構において、Cskがその制御因子として重要な役割を担うこと、b)Cskの下流でFAKが最も重要な役割を担い、これまで細胞接着制御で重要と考えられていたパキシリンのリン酸化は必須ではないことを明らかにした。2)Cskの機能調節に関与する結合蛋白質の検索を行い、CskのSH2ドメインに特異的に結合する新規蛋白質p90を分離精製し、その構造を明らかにした。
三次元スペックルトラッキング法を用いた高精度虚血メモリーイメージングの開発

心エコー法による虚血メモリーイメージング法が近年注目されているが、3Dエコー法での検討は行われていない。3D法は2D法でみられる様々な問題を克服できる可能性がある。本研究では動物実験により、3Dスペックルトラッキング心エコー法を用いた虚血メモリーイメージングを開発するための基盤となる研究を行った。その結果、虚血時にみられる微細運動であるpost-systolic shorteningは3D法においても虚血回復後に残存し、虚血メモリーの評価が可能であった。その評価には左室の円周方向の動きの解析が優れていると考えられた。スペックルトラッキング技術により、心臓超音波検査法(心エコー法)を用いた詳細な局所心筋運動の解析が可能になった。われわれはこれまでに、虚血後に収縮運動がすみやかに回復した場合でも、微細な異常運動であるpost-systolic shortening(PSS)がしばらく残存することを報告してきた。この現象を観察することで、虚血メモリーイメージングが可能と考えられるが、これまでのわれわれの検討は二次元(2D)断層像での評価であった。この方法では、左室の全領域を評価するためには、多断面の画像取得が必要となり、解析に時間もかかる。一方、三次元(3D)スペックルトラッキング法は先にあげた問題点を克服できるため、簡便かつ精度の高い虚血メモリー評価が期待できる。このような背景から、平成24年度の研究では3Dスペックルトラッキング法を用いた簡便かつ高精度な虚血メモリーイメージングを開発するための基盤となる研究を行った。麻酔開胸犬にて左冠動脈回旋枝を2分間閉塞後、再灌流し、経時的に三種類のフレームレート(FR:22、38、48fps)で3D動画像を取得した。動画像データからスペックルトラッキング法により左室全領域における円周方向ストレインを解析し、虚血・非虚血領域の収縮期最大ストレイン、PSSの指標であるpost-systolicindex(PSI)を計測した。FRによらず、虚血領域の収縮期最大ストレインは閉塞時に低下したが、再灌流後速やかに回復した。一方、PSIはFR38と48では、再灌流後約20分間、閉塞前と比べて有意に高値を示したが、FR22ではこの傾向はみられず、残存PSSの検出は困難であった。この結果から、3Dスペックルトラッキング法においても微細な異常運動であるPSSの残存は確認でき、虚血メモリーの評価が可能であることを明らかにできた。ただし、この評価には画像取得時の心拍数に対して十分なFRが必要であることが示唆された。スペックルトラッキング技術により、心臓超音波検査法を用いた詳細な局所心筋運動の解析が可能になった。われわれはこれまでに、虚血後に収縮運動が回復した場合でも、微細な異常運動であるpost-systolic shortening(PSS)が残存することを報告してきた。この現象を観察することで、虚血メモリーイメージングが可能と考えられるが、これまでの検討は二次元(2D)断層像での評価であった。平成24年度の研究では、3Dスペックルトラッキング法においても微細な異常運動であるPSSの残存は確認でき、虚血メモリーの評価が可能と思われた。ただし、3D画像のフレームレートは2D画像と比べて低いため、微細なPSSの同定に困難である場合もあることがわかった。このため、当初の予定では平成25年度は、より軽度の虚血メモリー検出の可否を検討する予定であったが、まずは、本法における最も高感度な指標の確立を優先することとした。前年同様、麻酔開胸犬にて左冠動脈回旋枝を2分間閉塞後、再灌流し、経時的に得られた3D動画像データからスペックルトラッキング法を解析し、円周方向以外に、長軸方向、半径方向のストレインを解析し、どの方向のストレイン波形を用いるのが最も効果的か評価した。また、PSSのみでなく、近年注目されている収縮早期のearly systolic lengthening(ESL)による評価が可能かも検討した。結果は、すべての方向でPSSは虚血時には検出可能であったが、再灌流20分後に評価可能であったのは円周方向のみであった。また、ESLは3Dのデータからは評価は難しく、3D虚血メモリー評価にはPSSの方が優れていると考えられた。スペックルトラッキング技術により、心エコー図法を用いた詳細な局所心筋運動の解析が可能になった。

我々はこれまでに、虚血後に収縮運動がすみやかに回復した場合でも、微細な異常運動である収縮期後の心筋短縮運動(post-systolic shortening: PSS)がしばらく残存することで虚血メモリーイメージングが可能であることを報告してきた。しかし、これまでの検討は二次元(2D)画像で行われたもので、近年開発された三次元(3D)スペックルトラッキング法で虚血メモリー評価が可能であるかどうかは不明であった。本研究は平成24年度に開始され、これまでに3D法においても微細な異常運動であるPSSの残存は確認でき、虚血メモリーの評価が可能であること、更に、その評価には左室の円周方向の動きの解析が優れていることを明らかにした。一方、収縮早期の心筋伸展運動(early systolic lengthening: ESL)が虚血診断の新しい指標として有用であると近年報告され、このような背景から、3D法による虚血及び虚血メモリー診断法の確立には、各心筋ストレイン指標の診断精度を管理されたモデルで比較する必要があると考えられた。このため、最終年度は3D法により得られる各指標の虚血診断精度を検討した。麻酔開胸犬を用い、左冠動脈回旋枝の血流をコントロール時より40-60%低下させた冠狭窄時において、3D解析から得られる様々な心筋ストレイン・ストレインレート指標の虚血診断精度をROC解析の曲線下面積(AUC)から算出した。その結果、PSSとESLの虚血診断精度は一般的な指標である収縮期最大ストレインより優れたAUCを示した。しかし、虚血再灌流モデルでの虚血メモリー診断においては、再灌流後にPSSが認められても、ESLの検出は困難な場合が多かった。これらの結果から、3D法を用いた高精度虚血メモリーイメージングにはPSS指標を用いるべきであると考えられた。26年度が最終年度であるため、記入しない。超音波医学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は、交付申請書に記載されたように、3Dスペックルトラッキング法による虚血メモリー診断のための有効な指標と装置設定の評価が行われ、上記の結果が得られた。おおむね交付申請書の目的は達成されたものと考える。平成25年度は、上記の理由により、軽度の虚血モデル(心筋酸素消費量を増大することで虚血が生じるモデル)の検討は行わず、高感度3D虚血メモリーイメージング評価のために最適な指標の確立を目指した。これは従来の研究計画に含まれていた項目を前倒しにしたもので、おおむね順調に進展しているものと考える。また予定していた3Dスペックルトラッキング法における心内膜追随の精度検証は、現在進行中である。平成25年度は、「心筋の酸素消費量が増大時に生じる虚血」をシミュレートしたモデルで虚血メモリー診断が可能か検討する予定である。また、前年度の検討から、3D心エコー法は様々な利点を持つ反面、空間・時間分解能においては2D法と比べて劣るため、3Dスペックルトラッキング法における心内膜の追随精度の検証を行う必要があると考えられた。そのため、コンダクタンスカテーテルを用いた左室容積測定装置による左室容積を標準とし、3Dスペックルトラッキング法から得られた左室容積を比較し、心内膜面の追随が妥当かを3段階のフレームレートで検討する予定である。
腸管環境下におけるアシル化アントシアニン退色物の生成機構と機能性の解明

XAD-2000,PVPおよび分取HPLCによる単離・精製を組み合わせることにより,紫甘藷塊根及び赤アサガオ花弁から純粋な色素の大量調製を比較的短時問で成し遂げることができた。これらは,共通の骨格である3-ソホロシド-5-グリコシドをもつ,アシル化アントシアニン類であることを確認した。単離したアシル化アントシアニンを腸管環境下(pH6.8,37°C,暗所)に24時間置いた結果,退色度(不安定性)はYGM-5b>SOA-4>YGM-3と-6>SOA-6の順であった。この結果はAGH阻害活性の順(SOA-4>SOA-6>YGM-3,6)と異なっており,不安定性とAGH阻害活性は相関しないことが判明した。この反応液中にはアンヒドロベース(A),シュードベース(B)およびカルコン(C)と思われる3種類の成分が見られた。経時的にA→B→Cの様に反応が進み,24時間後に組成はYGM-5bとSOA-6を除いて,A : B : C≒1:1:2となった。いずれもカフェ酸を保持していることが判明した。次に,SOA-4を大量に腸管環境下で退色させ,分取HPLCを用いてCの単離・精製を試みた結果,溶離液として中性リン酸緩衝液系を用いた場合に成分Cと他の成分が分離でき,成分Cを再現性よく単離できた。また,質量分析の結果,成分CはSOA-4が水和と異性化して生成したカルコンであることが強く示唆された。現在,脱塩とNMRによる構造解析を予定している。また,残りの成分AとBの単離についても検討中である。SOA-4のAGH阻害活性は退色化(アグリコン部の構造変化)によって変化しないことから,AGH阻害活性の発現にはSOA-4,-6およびYGM-3,-6が共通に持つ3-位アシル化糖側鎖構造(6-カフェオイルソホロース部位)が必須と考えられた。1.アシル化アントシアニン色素の単離(1)紫甘藷"アヤムラサキ"塊根および赤アサガオ"スカーレットオハラ"花弁からアシル化アントシアニン系色素(AAN)類の精製・分離をXAD-2000吸着樹脂,PVPなどのオープンカラムやODS分取HPLCシステムなどを用いて行った。その結果,紫甘藷塊根からYGM-0a,0b,of,3,4b,5b,6および赤アサガオ花弁からSOA-1,2などをトリフルオロ酢酸塩の形で単離できた。(2)単離AAN類の構造を確認するため,フォトダイオードアレイ検出器-HPLC(PDA-HPLC)分析を行った。また,ESI/TOFMS測定による分子量確認を行った結果,UV-Visスペクトルや分子イオンピークの質量数などから単離AAN類の構造はいずれも予想通りであることを確認できた。2.人工腸液中でのアントシアニン色素の退色検討(1)ペオニジン系のAAN類を用いて腸管環境下(pH6.8,37°C)で24時間まで放置し,反応液の組成をPDA-HPLCで検討した。

その結果,いずれのAANも,残存フラビリウム型色素(AH^+)の他に主に2種の退色分子種(dAAN)が見いだされた。これらはUVスペクトルからシュードベース(B)およびカルコン(C)と考えられた。さらに,色素の構造によって退色パターンが異なることも判明した。すなわち,1.カフェ酸を多く持つAANほどB/Cの比が小さくなる。2.カフェ酸をG_bグルコースにもつ場合にはアンヒドロベース(A)が出現する。3.カフェ酸の代わりにフェルラ酸をG_bグルコースにもつ場合(YGM-6)にはほとんど変化しないことなどが判明した(2)現在,退色させた反応液を用いてdAANの精製・分離を各種吸着カラムや分取HPLCシステムなどを用いて検討中である。(1)赤アサガオアントシアニン色素からの退色物の単離法検討平成12年度に確立した方法で単離したアシル化アントシアニン色素類のうち,最もAGH阻害活性の高い赤アサガオ花弁からのSOA-1を一夜(16時間),腸管環境下(pH6.8,37°C)に置いた。最適条件下でPDA-HPLC分析をした結果,この反応液中にはシュードベース(B),発色型分子種(残存フラビリウムまたはアンヒドロベース(AH^+/A))およびカルコン(C)と思われる3種類の成分の明瞭なピークが見られた(310nmでの面積比は,それぞれほぼ2:1:1であった。)。この反応液より,分取ODS-HPLCシステムを用いてSOA-1からの退色分子種(BおよびC)の単離・精製を試みた。溶離液として酢酸系溶媒ではうまく分離できなかったが,人工腸液用のリン酸緩衝液(50mM, pH6.8)を用いた場合(A液:蒸留水;B液:50%リン酸緩衝液,50%アセトニトリル)にはB成分と他の成分(AH^+/A,C)とが分離し,B成分を再現性よく単離できた。(2)単離退色物の化学構造検討単離した成分Bは323nm付近に吸収極大を持ち,SOA-1がもっていたカフェ酸が脱離していないことが判明した。また、ESI/TOFMSにより分子量測定を行った結果,SOA-1のAH^+/A型分子種が水和された後,脱プロトン化し,更にK^+が結合したと思われる明瞭な分子イオンピーク(m/z=1299=B(1260)+K^+(39);AH^++H_2O+K^+→[B+K]^++H^+)が観察された事より,成分Bは予想通りSOA-1が水和退色して生成したシュードベースであることが強く示唆された。現在,NMRによる構造解析を進めている。また、残りの成分(AH^+/A成分とC成分)の単離についても検討中である。
抗精神病薬による未治療統合失調症患者の大脳基底核容量変化の解析

抗精神病薬による基底核容量変化が起こるか確認するために、まず、治療開始時の横断研究を行った。未治療統合失調症患者の11名(平均27.0歳SD7.6)と,一年以上の薬物投与を受けている統合失調症患者の7名(平均28.9歳,SD8.2)の基底核体積を比較した.未治療統合失調症患者は,生涯で抗精神病薬服用は3ヶ月未満でかつMRI撮影の直前の抗精神病薬投与は8週間までとした.次に、縦断研究として、未治療統合失調症患者において、同意の取れた被検者9人に対し6ヵ月間、非定型抗精神病薬(risperidone n=6、olanzapine n=3)にて治療を行った後、フォローアップのMRI撮影を行い、基底核体積変化を測定し、基底核容量の変化は認められなかった。統合失調症患者の基底核容量が変化するかの有無を確認するためには、更なる症例が必要である。本研究の目的は、統合失調症患者の大脳基底核に対する定型抗精神病薬(定型薬)、非定型抗精神病薬(非定型薬)の効果の差異を、精神症状評価、錐体外路症状評価、構造的MRI研究にて確認し、その分子的背景を動物モデルにて解析することである。抗精神病薬の効果を明らかにするため、まず初発統合失調症患者に対して、ベースラインのMRI撮影を行い、非定型抗精神病薬による6ヵ月の治療後の大脳基底核の容量変化を測定した。初発症例は12例の測定が可能であったが、6ヵ月後に非定型薬の同一処方でコントロール出来た症例は、同意の撤回や病状の悪化による単剤治療の継続不能などによる脱落例が多く、6ヶ月間の研究を完了できた例は4例と少なくなった。4例での検討では、半年間の非定型薬による治療は大脳基底核には変化を及ぼざなかった。我々はさらに、定型薬にて治療を行われている慢性期の統合失調症患者を非定型薬単剤に切り替えることで基底核容量の変化を確認し非定型、定型抗精神病薬治療の効果を確認しようとしているところである。このために、入院中の定型薬にて治療されている慢性期の統合失調症症例を非定型薬単剤に置換することで精神症状と錐体外路症状、大脳基底核の変化を確認しようとしている。また、本年度後期から非定型薬の大脳基底核への直接的効果が定型薬の効果と異なるかどうか、定型薬であるハロペリドールとリスペリドンをラットに飲用させ、大脳基底核を様々な神経特異的抗体を用いて免疫組織染色で染色する動物実験を始めているが、結果はまだでていない。
高圧下におけるCo/Cu多層膜の磁気抵抗効果

最近Fe/Cr系やCo/Cu系の金多層膜において巨大磁気抵抗の大きさがCr層やCu層の厚さtの関数として振動することが報告されている。本研究は、この事実を基にしてCo/Cu系多層膜に圧力をかけることによりtを連続的に変化させ、この系の伝導電子の散乱機構及び磁気的状態を明らかにし、巨大磁気抵抗効果の機構解明を目的として行った。(Co10Å/Cu10Å)_<15>の試料について磁気抵抗効果DELTAR/R=(R(H)-R_0)の測定をP<20kbarの圧力範囲で行った。その結果T=4.2K、P=1barで磁気抵抗の大きさは約51%、飽和磁場H_Sは8.3kOeであることがわかった。この磁気抵抗の大きさは、P=20kbarで約6%圧力と共に減少する。この減少の割合は、Fe/Cr系化合物に比べ約1桁小さい。また、飽和磁場H_Sは圧力と共に減少しFe/Crて得られた結果と圧力係数の符号が反対であることがわかった。このFe/Cr系との違いが、非磁性層Cr及びCuの電子構造の違いなのか強磁性層Fe及びCoの違いなのか現在不明であるが、Co/Cu系人工格子の電子状態がFe/Cr系のそれに比べて安定であること及び磁性層間の相互作用の符号が、Fe/r系とCo/Cu系で反対であることが本研究により明らかになった。
人工プラークを用いたpHサイクリングによるヒトエナメル質の脱灰/再石灰化

従来のpHサイクリングでは、用いる緩衝液のpH変動が急激で、そのうえ歯質とプラークの界面で起こる脱灰/再石灰化現象を反映しているとは言い難い。そこで、今回S.mutans NCTC10449のcellがアガロースを混合して調製した人工プラーク下のpHを、微小電極により連続的に記録しながら、直下のエナメル質に脱灰病変を形成するモデルを考案した。人工プラークによる脱灰系は以下の3種類である。(1)アガロース/livecell/グルコース溶液(3)アガロース/脱灰液(pH4.0)ペンスタポンプを用い、pH7.0の人工唾液を滴下することにより、すべての人工プラークにおいて同様のpH曲線を得ることができた。実験前後のエナメル質表面のビッカース硬さを求めたところ、すべての脱灰系により対照(pH7.0の人工唾液浸漬)群に比べ有偽に硬度の減少が認められたが、SEM観察による実験後の表面形態には大きな差異が認められた。(1)で脱灰したエナメル質表面には様々の大きさのpitが観察された。(2)、(3)では用いた脱灰液および人工唾液の滴下速度が同じで得られたpH曲線もほとんど同じであるにもかかわらず、前者では比較的健全な歯面が維持されているのに対して、後者においてはエナメル小柱がいくぶん露出し、表層が部分的に破壊されている像が観察された。今回3種類の人工プラーク下にin vivoのステファン曲線に類似したpH変化を起こすとともにエナメル質表面に種々の脱灰病変を形成することが可能であることがわかった。このモデルは今までの実験齲蝕やpHサイクリングシステムに比べ、人工プラークの存在や人工唾液の滴下速度が可変であるという点でin vivoの状態をよりよく再現できるため様々の条件下で起こる齲蝕のプロセスを明らかにいていくうえで有用であると思われる。
心筋細胞分化の分子機序

酵母細胞を用いたtwo-hybrid system法により心筋特異的転写因子Csx/Nkx2-5と相互作用する分子として、新規LIMタンパクCal((CSX-associated LIM protein)とジンクフィンガータンパクZim1を同定した。CalはLIMドメインを介してCsx/Nkx2-5のホメオドメイン相互作用することにより、協調的にCsx/Nkx2-5による標的遺伝子の転写を活性化した。また、Calには核外移行シグナル(nuclear export signal : NES)が存在し、通常CalはNESにより細胞質に局在しているが、細胞内カルシウム濃度を上昇させるような刺激により核内へとその局在を変える。NESを欠損し核内に局在するCal変異体(Cal-ΔNES)は野生型のCalよりも、Csx/Nkx2-5との協調的な転写活性化が強く、さらにCal-ΔNESを恒常的に発現するP19C16細胞は通常のP19CL6細胞よりも高率に心筋細胞に分化した。それに対して、Zim1はジンクフィンガードメインを介してCsx/Nkx2-5のN末およびホメオドメインと相互作用することにより、Csx/Nkx2-5による標的遺伝子の転写を抑制する。また、Zim1を一過性に強制発現させたP19C16細胞は通常のP19CL6細胞よりも心筋細胞への分化が抑制された。以上より、CalのようなコアクチベーターやZim1のようなコリプレッサーによって、Csx/Nkx2-5による転写活性は心筋発生において精密に調節していると考えられた。また、心筋細胞への分化段階の早期に発現し、P19CL6細胞の心筋細胞分化を促進するリン酸化酵素Midoriの発生における機能解析のために、マウス胚性幹細胞を用いたジーンターゲティングを行った。相同変異体2クローンが得られ、現在はF1マウスを作成中である。Calは、CSXとの相互作用を介して協調的にCSXによる標的遺伝子の転写を活性化する新規LIMタンパクである。NESを欠損し核内に局在するCal変異体(Cal-ΔNES)は野生型のCalよりも、CSXによるatrial natriuretic peptite (ANP)遺伝子プロモーター活性化作用が強く、さらにCal-ΔNESを恒常的に発現するP19C16細胞は通常のP19CL6細胞よりも高率に心筋細胞に分化し、GATA-4やsarcoplasmic reticulum calcium-ATPase 2、connexin 43、calreticulin、ANPなどの遺伝子発現も亢進していた。したがって、Calは細胞内局在を変化させ、核内ではCSXと結合してCSXの転写活性を制御することで、心筋細胞分化を調節していると考えられる。MidoriはP19CL6細胞の心筋分化の初期段階で発現するリン酸化酵素であるが、発生における機能の解析のために、ノックアウトマウスを作成中である。マウスMidoriのゲノムDNAの構造解析を行い、Midori遺伝子の翻訳開始点から2.8kbをβ-galactosidase遺伝子とneomycin耐性遺伝子に置換し、5'端と3'端にそれぞれ7.5kbと0.9kbの相同領域を有し、ネガティブセレクションマーカーであるジフテリア毒素Aカセットを含んだターゲティングベクターを構築した。現在、マウス胚性幹細胞にエレクトロポレーション法による遺伝子導入を行い、相同変異体のスクリーニングを行っている。

酵母細胞を用いたtwo-hybrid system法により心筋特異的転写因子Csx/Nkx2-5と相互作用する遺伝子Zim1を同定した。Zim1はKruppe1-associated boxと11個のジンクフィンガードメインを有しゲノムインプリンティングを受ける遺伝子で、胎生期から成体まで心臓に強い発現があり、その他に脳や肢芽にも発現が認められた。Zim1はジンクフィンガードメインを介してCsx/Nkx2-5のN末およびホメオドメインと結合することで、Csx/Nkx2-5による標的遺伝子の転写を抑制した。さらに、Zim1によるCsx/Nkx2-5転写活性の抑制の心筋発生における役割について、P19CL6細胞を用いたin vitroでの心筋分化の実験系で検討したところ、Zim1を一過性に強制発現させたP19C16細胞は通常のP19CL6細胞よりも心筋細胞への分化が抑制された。したがって、Zim1はCsx/Nkx2-5による転写活性を抑制することで心筋細胞分化をネガティブに制御することが示唆された。また、P19CL6細胞において心筋細胞への分化段階の早期に発現し、P19CL6細胞の心筋細胞分化を促進するリン酸化酵素雌Midoriの発生における機能解析のために、Midori遺伝子の翻訳開始点から2.8kbをβ-galactosidase遺伝子とneomycin耐性遺伝子に置換するターゲティングベクターを構築し、マウス胚性幹(ES)細胞にエレクトロポレーション法による遺伝子導入を行った。neomycin耐性のES細胞からサザンブロット法にて相同変異体2クローンを得た。
１４位エピ化を鍵とした新規タキステロール類の核内受容体アゴニストとしての構造展開

申請者は14位をエピ化することによりタキステロール骨格が安定に単離できることを見いだし、更に化学合成によって種々の14-エピタキステロール誘導体を合成した。それらの生物活性評価を行ったところ、天然の活性型ビタミンD3に匹敵する活性を見いだした。また、X線共結晶構造解析によって受容体中における結合様式を解明したところ、前例のない5,6-および、7,8-シス構造をとることが明らかとなった。本年度は14-epi-19-nortachysterolの2位ヒドロキシプロピル、及びヒドロキシプロポキシ置換誘導体の化学合成を行った。ここでは昨年度合成した14-epi-19-nortachysterolの合成法を活用し、A環部には(-)-キナ酸、またはシキミ酸を原料とし、2位にあらかじめヒドロキシプロピル基、ヒドロキシプロポキシ基を導入したビニルスズ化合物と、エノールトリフラートとしたCD環部とのStilleカップリング反応によって合成を達成した。また、上記の合成法を元に、19位のメチル基を復元した、より天然に近い誘導体、すなわち14-epi-tachysterolの化学合成を行った。ここでは、中間体の不飽和エステルをジアゾメタンと環化付加反応させた後、DMF中で加熱することにより熱分解を行い、19位に相当するメチル基を導入し、その後の変換により19位メチル基を持つA環フラグメントを合成した。これを上記と同様にCD環部とのStilleカップリング反応により合成した。以上、合成した化合物のヒトVDR結合親和性を測定した。その結果、2位ヒドロキシプロピル、及びヒドロキシプロポキシ置換14-epi-19-nortachysterolで低い親和性を示し、この骨格においては2位置換基の効果はメチル、及びメチレン基とは異なることが分かった。14-epi-tachysterolについても低い親和性を示し、この骨格においては19位のメチル基は親和性に寄与しないことが分かった。続いて、VDRとの結合様式の解明を行うべく、X線共結晶解析を試みた。14-epi-tachysterolについても14-epi-19-nortachysterolと同様に5,6-及び、7,8-s-trans配置を取ることが分かり、19位のメチル基の有無に関わらず、トリエンの安定性を優先すると考えられる。本年度は誘導体デザインについて側鎖構造、及び1,3位水酸基の修飾よりも、トリエン部が分子構造に与える影響について優先的に研究を進めた。具体的には、8,9位を飽和させたtachysterol誘導体の化学合成を行い、それを足がかりとして新規骨格をデザイン、合成し、広くtachysterol類の構造化学についての知見を得ることとした。合成計画として、先に合成した14-epi-19-Norprevitamin D3の合成法を活用し、A環部とCD環部のStilleカップリング反応によって合成することとし、まず始めに14位をエピ化した化合物、8,9-dihydro-14-epi-19-Nortachysterolを母核とする誘導体を合成した。特に今回は、あらかじめ8,9位を飽和結合としたCD環部を合成するため、以下のように合成を行った。25-hydroxy-Grundmannsケトンの25位水酸基をTESで保護し、14位をエピ化した化合物に対し、Wittig反応を行いexoメチレンを構築し、9-BBNを用いたヒドロホウ素化反応と続く酸化反応により1級水酸基を導入した。これに対し、光延反応によってメルカプトベンゾチアゾール基を導入し、続く酸化反応によりJuliaカップリング前駆体となるスルホン体へと導いた。A環部は(-)-キナ酸から導いたアリルアルコールを酸化して得られたアルデヒド体を用いた。以上のフラグメントを、LHMDSを用いたJuliaカップリング反応にふしたところ、カップリング成績体が認められ、続くTBAFによる脱保護を行い、二工程の収率79%にてカップリング体が得られた。これを精査したところ、6,7位の二重結合部においてcis/trans 23:77の比率で異性体が得られた。その結果、天然の活性型ビタミンD3と比較して両化合物ともに1%未満という低いものとなった。また、数字には表れないが、cis体とtrans体ではやや後者が高い親和性を示した。現在、VDRとの結合様式の解明を行うべく、X線共結晶解析を検討中である。本年度は14-epi-19-Norprevitamin D3から14-epi-19-Nortachysterolへの異性化機構の解明に着手した。Hos細胞培養液、血清、バッファーの関与、また、共結晶作成中のVDR、バッファー、無機塩の影響についてそれぞれ精査したところ、この異性化には酸性プロトンの存在が必要であることが分かった。続いて、14-epi-19-Nortachysterol誘導体の化学合成を行った。ここでは先に合成した14-epi-19-Norprevitamin D3の合成法を活用した。

すなわち、A環部には(-)-キナ酸から導いたtrans配置をもつビニルスズ化合物と、エノールトリフラートとしたCD環部とのStilleカップリング反応によって合成を達成した。ここで、14位の立体について、天然のビタミンD3と同じ立体配置を持った19-Nortachysterolの合成を同様の合成ルートにより、14位の立体配置の逆転したCD環部を用いて行い、両化合物の安定性を比較した。その結果、19-Nortachysterolは非常に不安定であり、骨格の安定性には14位の立体化学が関与することを明らかにした。また、上記の合成法を元に、2位にメチレン、α-メチル、β-メチル基を導入した誘導体の合成を合わせて達成した。以上、合成した化合物のヒトVDR結合親和性を測定した。その結果、天然の活性型ビタミンD3と同様に2位の置換基による親和性への寄与が確認され、2-メチレン置換体において最も高い親和性を有することが分かった。続いて、VDRとの結合様式の解明を行うべく、X線共結晶解析を試みた。2位α-メチル、β-メチル置換体について検討したところ、5-8位の立体化学について、天然の活性型ビタミンD3と異なり、前例の無い5,6-及び、7,8-s-trans配置を取ることを明らかにした。14-epi-19-Nortachysterolの更なる誘導化を行った。また、14-epi-tachysterolの化学合成を達成し、19位メチル基の導入法を確立することができ、順調に研究計画が進行した。また、合成した新規化合物のヒトVDR結合親和性を測定し、またVDRとのX線共結晶解析を行い、結合様式の解明を行った。その結果、2位置換基の効果についてvitamin D骨格とは異なる効果を明らかにした。また、19位のメチル基の結合様式に対する効果を明らかにし、概ね研究計画通りに進行している。始めに14-epi-19-Norprevitamin D3から14-epi-19-Nortachysterolへの異性化機構の解明について、酸性プロトンの必要性を明らかにし、次に、14-epi-19-Nortachysterol誘導体の化学合成を当初計画した合成ルートで達成することが出来た。これらについては、極めて順調に研究計画が進行した。その結果、高い結合親和性と、前例の無い結合様式を取ることが明らかとなり、研究計画以上の成果が得られた。昨年度合成した新規化合物のヒトVDRとのX線共結晶解析を行い、非常に興味深い結合様式が明らかとなり、それについての今年度の結果を踏まえ、当初の研究計画に若干の修正を加えることとする。すなわち、今後の誘導体デザインについて側鎖構造、及び1,3位水酸基の修飾よりも、トリエン部が分子構造に与える影響について優先的に研究を進める。具体的には、8,9位を飽和させたtachysterol誘導体の化学合成を行い、それを足がかりとして新規骨格をデザイン、合成し、広くtachysterol類の構造化学についての知見を得ることを目的とし研究を推進する。
清代「内陸アジア交易ネットワーク」の形成・展開と文化変容における歴史的特徴の解明

本研究は、北アジア・東北アジアにおける個々の交易ネットワークが、如何にして一体的な広域ネットワークに発展したのかを、文書資料解析だけでなく現地調査により得られる様々な情報から検討することで、明らかにしようとするものである。それは、従来の広域ネットワーク論が、各地域の言わば単純総和的な枠組みで提示されてしまい、そもそも広域ネットワーク化した際に個々の地域の個別ネットワークが如何なる変容を被ったのか、あるいは個々のネットワークが広域ネットワーク全体に如何なる影響を与え、それが広域ネットワークに如何なる変容をもたらすものだったのかを十分明らかに出来ていなかったことの克服を試みるものでもある。
カルシウム感受性のあるミオシン分子のモーター・ドメインの機能的発現の試み

ミオシン(従来型のミオシンII)は代表的な生物分子モーターであり、その構造と機能の理解にはモーター機能部位を組換体発現蛋白質として得る事がカギとなっている。その理由は、i)分子生物学上の変異をかけた上で蛋白質化学的な解析が可能となるうえ、ii)結晶化を試みるだけの蛋白質が得られるからである。ところが、この部位を機能を維持したかたちで発現させるのは難しく、下等有核生物・ディクチオステリウム及び脊椎動物・平滑筋で成功しているにすぎない。これらのミオシンはリン酸化による制御を受けるタイプに属する。私どもの関心のある、Ca^<2+>結合により制御をうけるタイプのミオシンについては未だ成功していない。本研究ではCa^<2+>結合性を有する下等有核生物・フィザルムと軟体動物・ホタテ貝よりのミオシンを合わせて扱う。そして、Ca^<2+>が前者にはactivatorとして後者にはinhibitorとして働くことを利用して、Ca^<2+>による制御の詳細の検討を行うものである。具体的にはフィザルム・ミオシン重鎖の「モーター・ドメイン」を軽鎖を結合する「制御・ドメイン」を含んだかたちで組換体発現蛋白質として得ようとするもので、同じ下等有核生物のディクチオテリウム発現系を利用するものである。本年度にはクローニングが未だなされていなかったフィザルム・ミオシン重鎖につき、「制御ドメイン」のみならず「モータードメイン」のcDNAをクローニングすることができた。これでフィザルム・ミオシン「制御ドメイン」を構成するすべての蛋白質のcDNAが揃ったことになる。さらに、制御ドメイン、必須軽鎖及び制御軽鎖を大腸菌内で発現蛋白質化することを試み、これに成功した。全ての蛋白質は可溶性であり、これを精製し、Ca結合性を測定した。確かに、Ca結合が認められ、今後の見通しが得られた。本来の目的はモータードメインの発現であるが、大腸菌の発現系では無理と考えられ、ディクチオステリウムの系を用いる発現ベクターに組込みの作業中である。
治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする統合的看護介入モデルの開発

本研究は、治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする統合的看護介入モデルを開発するために、第一段階として、治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感に対する認知と取り組みを明らかにすることを目的とした。半構成面接法によりデータ収集を行い、得られたデータを質的帰納的に分析した。これにより、治療期の進行肺がん患者が呼吸困難感に取り組むことを支える看護として、進行肺がん患者の様々な身体症状のマネジメント、および病気や苦痛症状を意味づける支援の必要性が示唆された。本研究の目的は、キュアとケアを統合して治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする統合的看護介入モデルを開発することである。平成26年度は、治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感に対する認知と取り組みを明らかにすることを目標とし、文献検討の実施、インタビューガイドの作成に取り組んだ。肺がん患者の呼吸困難感について、国内では、薬物療法や呼吸リハビリテーション、鎮静によるマネジメントが報告されているが、多くは終末期の肺がん患者を対象としている。また、看護師の苦悩(宮坂ら,2014)や日常生活援助の判断過程が明らかにされているが、事例研究から看護の在り方や役割を検討している文献が多くみられた。また、進行肺癌患者を対象に調査し、体験や情緒的反応(橋本ら,2011)、対処が明らかにされているが、呼吸困難感の認知や取り組みは明らかにされていない。国外では、呼吸困難感との関連因子として、がんに関連するもの、喘息、COPD、不安や抑うつ、倦怠感や疼痛などが明らかにされ(Dudgeon,2013ほか)、精神的因子が呼吸困難感の認知を増幅させると考えられている(Brueraら, 2002)。がん患者の呼吸困難感のマネジメントについて、ガイドラインや治療アルゴリズムが開発され、エビデンスに基づく看護介入も示されているが、非薬物療法の多くはエビデンスが不十分であり、看護介入の指針については示されていない。以上のことおよびtotal dyspneaとして捉えることが提唱されていることを踏まえ、全人的な側面から進行肺がん患者の呼吸困難感の認知および取り組みを明らかにするインタビューガイドを作成し、プレテストを実施した。現在は、所属施設の看護研究倫理審査委員会の承認を得て2つの施設に研究依頼を行い、返事待ちである。研究協力が得られ次第、データ収集を進めていく予定である。呼吸困難感を体験している治療期の進行肺がん患者を対象に、呼吸困難感に対する認知と取り組みを明らかにするために、前年度、文献検討をもとに作成したインタビューガイドを用いて半構造的面接調査を実施した。代表例を以下に示す。対象者は80歳代男性で化学放射線療法を受けており、PS2であった。対象者は、呼吸困難感による日常生活の制限や身体的な苦痛を体験していたが、呼吸困難感を天命で仕方ないものと捉え、生活の支障や精神的苦痛をもたらすものとは認識していなかった。その一方で、このような状態で生き続ける意味の喪失について語られた。対象者は、呼吸困難感を仕方ないものとして意味づけることで、苦痛に取り組みながら治療を継続していると考えられた。治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする上で、自己効力感を高めるセルフケア支援、および呼吸困難感の苦痛体験を意味づけるプロセスの支援の必要性が示唆された。今後は、治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする上で必要な看護を抽出し、呼吸困難感をマネジメントする統合的看護介入モデルの開発に取り組みたい。研究協力施設へのアクセスおよび研究協力施設における研究倫理審査のプロセスにおいて時間を要したため、当初の計画よりもやや遅れている。現在、研究協力依頼を行い、研究協力施設における研究倫理審査の受審中である。27年度が最終年度であるため、記入しない。がん看護学治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感に対する認知と取り組みを明らかにするために、データ収集と並行しながら分析を進める。そして、治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感のマネジメントにおいて、高度な看護実践を行うがん看護専門看護師が、キュアとケアを統合して看護介入が必要な問題・課題および看護介入方法を判断する過程を明らかにするために、データ収集・分析に取り組み、キュアとケアを統合して治療期の進行肺がん患者の呼吸困難感をマネジメントする看護介入モデルの開発を目指す。
地域保健分野で働く看護職のリスクとリスクマネジメント

地域保健分野における看護職のリスクとリスクマネジメントの特徴を明らかにすることを目的に、保健所、市町村、地域包括支援センターの看護職に調査を行い以下の知見を得た。共通するリスクには『信頼関係』『対象者、看護職自身とその家族への感染』『情報管理』等があった。保健所では『感染症患者のプライバシーや人権の保護』、市町村では『保健事業における対象者の身体的損傷』、地域包括支援センターでは、初回電話対応時の『信頼関係』や緊急対応時に無防備な状態で高齢者に対応しているリスクの実態が明らかになった。リスクマネジメントは個々人が気を付ける、職場で注意喚起、それぞれの事例で対処する事が多い現状であった。本年度はまず、文献調査から地域保健福祉分野の看護実践で「リスク」という言語をどのように使っているのかを整理した。これをベースに前年度調査データ分析結果を再検討しリスクマネジメントに焦点を当てた分析を深めた。医学中央雑誌Webで「アクシデント」「事故」×「地域保健・地域福祉」でヒットした91文献の内容のほとんどは地域の医療機関における医療安全に関するもので、地域看護学の教科書等では、公衆衛生行政を担う保健所の立場から医療機関の医療安全や医療事故の記載はあるものの、地域保健福祉活動における事故等の記載はなかった。また、医学中央雑誌Webで地域保健福祉分野における「リスク」「リスクマネジメント」に関連する132文献を抽出し分析した結果、91(68.9%)文献が【対象者のハイリスク状態】に関するものであった。また、他に【災害時の健康危機管理】、【事故やアクシデント】に関わるもの、【援助者が受ける暴力や危機的状況】があった。地域保健福祉分野で用いる「リスク」は対象者のリスクそのものやハイリスク者への援助リスクに関連する事、健康危機管理の比重が大きく、医療安全において用いる「リスク」と混在して使用している状況である。前年度調査データを、リスクマネジメントに焦点を当てて分析を行った結果、【個々人が気をつける】【職場で注意喚起して予防】【それぞれの事例で対処】が多い現状で、看護者の傷害保険や予防接種等に関しては【組織的に管理】していた。また、地域包括支援センター、保健所、市町村のいずれにおいても、対象者と看護職の当事者だけでなく、対象者家族や協働する他職種・ボランティア、時には看護者の家族のリスクにも関係しマネジメントする必要性があった。さらに、対象者のリスク特性に対しては、対象者と看護者に起こりうるリスクを予見しリスク回避しながら看護援助を展開しマネジメントしていた。地域保健福祉分野で働く看護職が対人サービスにおいて遭遇する具体的なリスクとそれに対応するリスクマネジメントの実態を調査し、以下の知見を得た。1『対象者への感染』『看護職自身と家族への感染』のリスクに対しては、個々人が感染防御の対策をとることや、職場内で感染情報を共有しスタッフはもちろん対象者への教育活用を促進していた。また、組織的なマネジメントとして感染予防教育や指導、健康診断や予防接種が行われており、感染事案では関連病院でフォローしたり労働災害を適応したりして対処していた。しかし、緊急対応時の感染防御やスタッフの感染に関する意識向上の対策は不充分な状況であった。2『対象者との信頼関係』のリスクでは、対象者への援助を通して個々人で対策を取っており、困難事例には上司のフォローや対応者の交代、事例検討会で共有等職場内でマネジメントしていた。業務として外部研修へ参加する施設もあったが、組織内研修や教育が行われているところは少数であった。3『暴行など危険行為の可能性がある対象者への対応』のリスクでは、男性職員と複数で対応する、関係機関とチームで対応する、警察や消防の協力を得るなど組織内に留まらず地域の関連職種・機関と協働体制をつくるマネジメントをしていた。4『情報管理』のリスクに対しては、職場内環境と情報管理システムによって組織的にマネジメントしていた。また、組織内外で研修や指導が行われていた。情報管理、傷害保険、予防接種等に関しては組織的にリスクマネジメントされていたが、その他のリスクでは個人がそれぞれ気を付ける、職場で注意喚起、事例毎に対処する事が多い現状であった。また、対象者のリスク特性に対しては、対象者と看護者に起こりうるリスクを予見しリスク回避しながら看護援助を展開しており、看護職個々人・職場・組織に留まらず地域ネットワークの中でリスクをマネジメントしていた。本研究の目的は地域看護の視点から、地域保健分野で働く看護職が対人サービスにおいて遭遇するリスクの特徴とリスクマネジメントの在り方を明らかにすることである。本年度は少人数への面接調査と文献調査から地域保健分野の看護職が遭遇するリスクと対策の実態の概要を把握した。文献調査からリスクとリスクマネジメントに関する面接内容の枠組みを検討し保健所、市町村、地域包括支援センターのそれぞれ45名、合計14名の看護職に半構成的面接を行った。