hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中央省庁組織の制度設計に関する研究

また、中央省庁の制度設計過程を緻密に追跡し具体的に記述した本業績は、機構管理等の行政実務においても参照され得る記録としての価値を有するものである。本研究の主たる成果として事例研究の結果を単著の学術書にまとめ公刊できたことから、ほぼ予定どおりの進捗状況と考えられる。なお、中央省庁のデータセットに基づく統計的分析の成果については、次年度に論文として公表することにした。また、中央省庁組織研究の延長として人事の観点からの官僚制研究も行い、その成果の一部を共編著の書籍の一部として公刊した。引き続き中央省庁の事例研究を行い、加えて、理論のさらなる一般化を目指すために分析対象を1990年代以降設置の中央省庁から戦後以降設置の中央省庁に拡大して、統計手法による分析を可能にするデータセットの作成準備を行う。引き続き中央省庁のデータセットに基づく統計的分析を行い、事例研究によって構築した理論モデルの精緻化を試みる。加えて、組織研究を補完する形で、官僚人事を対象とした官僚制研究を行う。研究に必要となる資料およびデータ等の整理、入力作業を行ってもらう研究補助に係る費用が予定よりも少なくなったため、次年度使用額が生じた。次年度は分析対象を当初よりも拡大する形でデータセットを作成する予定であるため、研究補助に係る費用を増やすことで当該金額を使用する計画である。次年度はこれまでの研究成果を広く公表するため、研究成果の公刊に要する費用や、複数の国際学会での報告に要する旅費を増やすことで当該金額を使用する計画である。
生体フロントラインの防御機構とその破綻による疾病

外界に接している腸などの臓器では、異物の進入を先ず阻む生体フロントラインの防御機能が存在し、その機能破綻によりがん、炎症性腸疾患などが発症する。従って、その全容解明が当該疾患に対する新しい予防、診断と治療法開発のために必要不可欠である。肝臓における異物排出活性を担う実体の同定と、その類似タンパク質の腸管腫瘍形成や炎症性腸疾患への関与に加え、本研究ではさらに、(1)その分子的背景を明らかにして、新しいがん治療の標的として提示すること、(2)異物排出活性の機能阻害によるがんの化学予防が可能なこと、を示す成果を得た。生体フロントラインの防御機能の全容を明らかにして、その機能破綻により発症するがん、炎症性腸疾患などに対する新しい予防、診断と治療法開発へ繋げる事を目的として、平成21年度は2項目について下記の成果を上げた。【1】ABCB1欠損マウスの分子病理解析と疾患発症メカニズムの解明:ABCB1欠損マウスでは一定のサイズ以上の腫瘍が激減することを明らかにし、ABCB1が増殖の促進やアポトーシスの抑制などの特定のステップに関与することを示唆した。網羅的遺伝子発現プロファイルの解析から、TGF-β、TIMP1やセラミド合成経路に加え、未知の遺伝子群が標的ステップであることをつきとめ、抗がん剤感受性因子と既知のがん増殖関連遺伝子に加えて新しいがん治療の標的を提示できる可能性が得られた。【2】相互作用タンパク質の同定と機能修飾の解明:生体膜上微細環境においてABCトランスポーターと協調して細胞死や組織構築に関与、実行しているタンパク質群を同定・単離し、結合膜タンパク質による細胞内局在制御と機能修飾の実体を把握するために、ABCC2を対象としてスプリット・ユビキチン法を計画した。酵母菌内でヒトABCC2を発現させることは極めて難しいことが明らかになったが、(1)酵母の破砕とタンパク質抽出条件を検討することにより極微量の発現クローンの検出系開発に成功し、(2)bait構築体の安定発現株を樹立したのちpreyライブラリーを導入することでヒトABCC2発現の難しさを克服した。さらに、(3)cDNAライブラリー導入後、段階的に選択マーカーを増やすことにより、一段階では得られない「弱い相互作用」を検出できることを明らかにし、スクリーニングを本格化できる系が整った。【1】ABCB1欠損マウスの分子病理解析と疾患発症メカニズムの解明:一昨年度、ABCB1欠損マウスでは、腫瘍が特定のサイズ段階に留まることを見出した。腫瘍形成過程におけるABCB1の作用点を明らかにするために、遺伝子発現プロファイルの比較検討を行ったが、個体ごとに腫瘍をプールして個体間比較を行ったために、腫瘍間の発現差異が混在している懸念があった。そこで平成22年度は、個々の腫瘍を2分割し、一方を詳細な病理学的評価に、他方を発現解析に用いることとした。その結果、(1)腫瘍とともに筋層の混入した検体が3割で見られ、(2)1割の検体で病理学的悪性度が異なる例が確認されたので、この2点をそろえて個体間比較を行うことにより、信頼性の高い解析が可能となった。網羅的遺伝子発現プロファイルの解析から、特定のサイズ段階でERBB2とunspecific monooxygenaseを中心としたパスウェイの発現亢進を見出し、新しいがん治療の標的を提示できる可能性が得られた。【2】相互作用タンパク質の同定と機能修飾の解明:相互作用検出のためにスプリット・ユビキチン法を開始したが、(1)高分子膜タンパク質であるABCトランスポーターの酵母における発現を検出することが予想以上に難しいこと、(2)陽性クローンの出現頻度が極端に低いこと、が問題となった。しかしながら、(1)培養と酵母の破砕・溶解条件の検討により発現検出の困難を克服し、(2)bait構築体の安定発現株を樹立したのちpreyライブラリーを導入することでヒトABCC2発現の難しさを克服した。さらに、(3)形質転換効率が高いサブクローンをスクリーニングにて選別することにより陽性クローンの出現頻度を上昇させることに成功し、(4)cDNAライブラリー導入後、段階的に選択マーカーを増やすことにより、一段階では得られない「弱い相互作用」を検出できることを明らかにした。外界に接している臓器で異物の進入を先ず阻む生体フロントラインの防御機能の全容を明らかにして、その機能破綻により発症するがん、炎症性腸疾患などに対する新しい予防、診断と治療法開発へ繋げる事を目的として、下記の成果を上げた。【1】ABCB1欠損マウスの分子病理解析と疾患発症メカニズムの解明:ABCB1欠損マウスでは腫瘍は特定のサイズ段階に留まり先に進めないこと、網羅的遺伝子発現プロファイルの比較検討により、特定のサイズ段階前後に特異的な発現パターン、すなわちERBB2とunspecific monooxygenaseを中心としたパスウェイの発現が亢進していることを見出した。さらに、定量PCRによる発現変化の確認と、候補遺伝子の導入・機能解析により、ABCB1の欠損による増殖停止の作用点を探ることを試みた。

その結果、マイクロアレイにおける発現量比は、CyBR Greenを用いたリアルタイムRT-PCRによって、定量的にも大変よく再現されていることが確認された。また、候補遺伝子のうち発現変化が大きい6遺伝子について完全長cDNAを単離し、pEGFP-N3ベクターを用いた発現構築体を作製して大腸がん細胞株に導入したところ、腫瘍サイズの増大に伴って発現が低下する遺伝子群のいくつかについては安定形質転換細胞株が樹立できないことが分かり、がん抑制的な作用が想定された。【2】相互作用タンパク質の同定と機能修飾の解明:臨床的意義の大きいABCC2とABCB1をモデルタンパク質としてとして、スプリット・ユビキチン法を開始しこれまでに、振盤機の種類と酵母の破砕・溶解条件の検討により高分子膜タンパク質であるABCトランスポーターの酵母における発現検出の困難を克服し、培養条件の検討とサブクローンの選別により、低い形質転換効率の問題を解決した。さらに、単離された候補タンパク質とABCB1、ABCC2タンパク質との結合様式および相互作用モチーフをプルダウン・アッセイにて解析するために、GateWayシステムを用いて構築体作製の準備を調えた。
造血幹細胞の分化多能性とmidbodyの動態

Cre誘導型のmidbodyレポーターマウスの作製と解析を中心に研究を行った。細胞質分裂時に2つの娘細胞をつなぐ構造物であるmidbodyのマーカーとしてMgcRacGAPと蛍光タンパクであるhmK02との融合タンパクを採用した。造血系特異的にMgcRacGAP-hmKO2レポーターを発現させる目的で、Vav-Creマウスとの交配を行い、造血系特異的にMgcRacGAP-hmKO2を発現するマウスを樹立した。このマウスから採取した造血幹細胞において、細胞分裂時にMidbodyをhmKO2で観察可能であること、造血幹細胞は前駆細胞と比べると高い割合でmidbodyを放出することを明らかにした。本年度の目的は「造血幹細胞が対称・非対称分裂する際にmidbodyが一方の娘細胞に維持されるかあるいは放出されるかを観察する」ことであった。目的達成のために、以下の3つの研究を行った。1in vitro造血幹細胞タイムラプスイメージングシステムを構築。NikonTi顕微鏡をベースとして、東海ヒット社の96 well plate用のチャンバーを組み合わせて、造血幹細胞のシングルセルイメージングを可能にした。2造血幹細胞におけるmidbodyのイメージング。Midbodyを可視化できるマウスも作製中であるが、まずはレトロウイルスを用いて造血幹細胞にmidbody reporter(MgcRacGAP-hmKO2融合タンパク質)を発現させ、タイムラプスイメージングによりMidbodyの不均等分配あるいは放出が1のシステムを用いて観察できるかを検証し、細胞質分裂時にMgcRacGAP-hmKO2のシグナルが造血幹細胞のmidbodyに検出できることを確認した。In vitroにおいては、造血幹細胞の細胞分裂においては、約7割の分裂においてmidbodyは不均等分配され、3割においてmidbodyが放出されることを明らかにした。3midbody-repoterマウスの作製。当初の計画では、造血幹細胞・前駆細胞特異的に発現するRunx1-eR1エンハンサーを用いたeR1-hsp68p-MgcRacGAP-hmKO2マウスを作製する予定であったが、eR1-GFPトランスジェニックマウスの解析から、eR1エンハンサーは必ずしも造血幹細胞・前駆細胞特異的ではないことが判明したので、計画を変更し、Cre-inducibleなMgcRacGAP-hmKO2をRosa26遺伝子座にノックインしたマウスを作製中である。Midbody-repoterマウスの作製が遅れているため。解決策として、当初Midbody-repoterマウス由来の造血幹細胞を使用して行う予定であった研究はすべてレトロウイルスによりMidbody-repoterを導入した造血幹細胞由来細胞を用いて条件検討等を行っている。本年度は、Cre-inducibleなMgcRacGAP-hmKO2マウスの作製(継続)と解析を中心に研究を行った。MgcRacGAPは細胞質分裂時に2つの娘細胞をつなぐ構造物であるmidbodyのマーカーである。造血系特異的にMgcRacGAP-hmKO2レポーターを発現させる目的で、造血系特異的にCreを発現するVav-Creマウスとの交配を行い、造血系特異的にMgcRacGAP-hmKO2を発現するマウスを樹立した(以後、MRGレポーターマウスと呼ぶ)。マウスはメンデルの法則に従い出生し、成熟後も顕著な異常は認められず、正常である。造血系においても正常であることを確認する目的で、MRGレポーターマウスより採取した造血幹細胞(骨髄細胞中のCD150+CD48-cKit+Sca1+Lineage-分画)を致死量放射線照射したマウスに移植し、骨髄再構築能を確認中である。また、造血幹細胞の細胞分裂時にmidbodyをhmKO2で観察可能であることが確認できた。現在、集計中であるが、NIH3T3細胞株に比べて、造血幹細胞は細胞分裂時にmidbodyを放出する割合が多いことが分かった。細胞分裂後、midbodyが一方の娘細胞に取り込まれた場合は、オートファジーによって再利用されること、さらにオートファジーは造血幹細胞分画の維持に必須であることを考えると、midbodyの継承は造血幹細胞の多能性維持に関与している可能性が高いことが考えられる。In vitro培養系において造血幹細胞が長期に渡って多能性を維持できないことと、midbodyを放出する割合が多いことは、midbodyの継承が幹細胞性維持に関与していることを示唆するものである。この点に着目しさらに研究を発展させる予定である。

このマウスから採取した造血幹細胞において、細胞分裂時にMidbodyをhmKO2で観察可能であること、造血幹細胞は前駆細胞と比べると高い割合でmidbodyを放出することを明らかにした。本研究の柱であるMidbody-repoterマウスの作製が遅れているため、代替として、レトロウイルスによりMidbody-repoterを導入した造血幹細胞由来細胞を使用して研究を行う予定である。もちろん、Midbody-repoterマウスが完成し次第、Midbody-repoterマウスから採取した造血幹細胞を用いた研究にシフトする予定である。Midbody-repoterマウスの作製については、現在、ポジティブクローンを選定中であり、マウス樹立後に、Vav1Creマウスとのかけ合わせにより、血液細胞特異的にMidbody-repoter発現するマウスを得る必要があるので、平成28年度中に本研究をすべて終わらせるのは困難であると考えられる。したがって、平成28年度の研究目的は、レトロウイルスによりMidbody-repoterを導入した造血幹細胞由来細胞を用いた各種解析法の検証と確立を中心に行う予定である。当初予定していたin vivoイメージング等の研究については、これも予定を変更し、レトロウイルスによりMidbody-repoterを導入した造血幹細胞由来細胞をマウスに移植し、移植後の同細胞の細胞分裂とmidbodyの分配とをタイムラプスライブイメージングする。28年度が最終年度であるため、記入しない。造血幹細胞学28年度が最終年度であるため、記入しない。
新規炭化ホウ素ナノワイヤの熱電物性計測及び伝導機構解明による廃熱発電素子の開発

本研究では、様々な廃熱を電力に変換する熱電材料として、有望な炭化ホウ素に焦点を当て、そのナノ構造化による高性能化を目指した。その結果、セルロースアニール法で合成した炭化ホウ素ナノワイヤの導電率とSeebeck係数を1本ずつ精密に計測することに成功し、一部の温度でナノワイヤの熱電特性(パワーファクター)がバルク焼結体のそれを上回ることを明らかにし、室温付近で2つのホッピング伝導機構の移り変わりが見られるナノワイヤ特有の伝導機構を見出した。ナノワイヤではフォノン散乱が顕著になるサイズ効果が働くことも見出し、ナノワイヤを用いた熱電素子では効率の高い熱電発電が期待できることを明らかにした。未利用熱を電力に変換する熱電材料として有望な、新規の炭化ホウ素ナノワイヤの合成法についていくつかの方法の検討を進めた結果、セルロースアニール法が最も収率の良い合成法であることを見出し、再現性よく合成するための大まかな合成条件(おおよその合成温度及び原料組成)を決定することが出来た。さらに、合成した炭化ホウ素ナノワイヤに対して、1本のナノワイヤの熱起電力及び電気伝導率を計測するために、備品としてロックインアンプ及び冷却・加熱機構付き真空チェンバーを購入し、交流加熱法によるナノワイヤの熱起電力計測装置を整備した。計測に先立ち、ナノワイヤを基板上に固定して電子線リソグラフィーによる微細電極及び局所加熱ヒータの加工を行い、微細加工の大まかな条件も決定することが出来た。この微細加工を行った基板及び熱起電力計測装置を用いて、当初予定通りに熱起電力及び電気伝導率の測定データを得ることに成功した。ニッケル金属を触媒として合成した場合において、ニッケルがナノワイヤのコア部分にも存在するユニークなコアシェル型炭化ホウ素ナノワイヤを再現性良く合成することにも成功した。以上の成果をもとに、国際会議及び国内学会での成果発表をそれぞれ1件ずつ行った。研究分担者及び連携研究者と協力して、電気伝導機構・結晶構造の解析のための議論を進めてきた一方で、分担者の担当するナノワイヤ凝集体の物性測定のために必要な量のナノワイヤ試料を確保出来なかった。しかしながら、ナノワイヤ粉体取扱い時の静電気除電の検討など、凝集体作製の準備検討を開始した。前年度に合成条件を見出したセルロースアニール法によって炭化ホウ素ナノワイヤを合成し、多数のナノワイヤの熱電物性(熱起電力及び導電率)を、交流加熱法により1本ずつ計測する実験を前年度に引き続き行った。熱電物性計測のための微細電極加工の条件を確立し、高精度な交流加熱法による計測装置を用いてナノワイヤのSeebeck係数及びその温度依存性を計測した。その結果、炭化ホウ素ナノワイヤのSeebeck係数は、個体差が大きいものの、サンプルによっては従来のバルク焼結体の値を上回る結果が得られた。そこで研究分担者と議論し、計測装置改良によりSeebeck係数の測定温度範囲をさらに広げて再計測を行った結果、Seebeck係数の絶対値だけでなく温度係数もバルク体と大きく異なる結果が再現された。これは、ナノ構造での高い熱電特性の可能性を示唆する重要な結果である。この特異な熱電特性の起源を探るべく、ナノワイヤの構造を連携研究者の協力のもと透過電子顕微鏡で観察したところ、積層欠陥や双晶を多量に含む構造であることが明らかになった。ただし、ナノワイヤの表面酸化が懸念され、導電率がまだ十分高いサンプル合成の再現性得られていないため、ナノワイヤ凝集体やその熱電素子の試作には至っていない。一方で、炭化ホウ素は光を良く吸収することから、レーザー光によるナノワイヤの局所加熱による物性改良を行うアイデアを着想し、局所レーザー照射加熱装置を購入した。セルロースアニール法によって合成した炭化ホウ素ナノワイヤのSeebeck係数は、個体差が大きいものの従来のバルク(焼結体・単結晶)の値を上回ることや、その温度係数もバルクと大きく異なる結果について、前年度に引き続き高精度な交流加熱法による計測でデータの再現性を確認した。これらのナノワイヤに対して別途測定した電気伝導率の温度依存性のデータも併せて、電気伝導機構の考察を行った結果、室温より高温域ではスモールポーラロンによるホッピング伝導モデル、200K以下の低温域ではそれに加えて可変領域ホッピング伝導の寄与も含まれるという解析結果を得た。特に、Seebeck係数の温度係数が通常の半導体や可変領域ホッピング伝導では説明できない特異な値を有する結果について、ナノワイヤの結晶構造との関係に関する検討を重ねた。その結果、前年度までに透過電子顕微鏡観察で明らかにしたナノワイヤ中の積層欠陥や双晶が、ホッピング準位の分布に大きな影響を与えている可能性が高いことが分かった。広くホウ素系ナノ構造体の熱電特性測定を行ってきた研究代表者の成果が注目され、米国で開催された無機系材料科学に関する国際会議で招待講演を行った。そこで、上記のように、世界で初めて炭化ホウ素ナノワイヤの構造と熱電物性の関係について明らかにした成果を報告した。一方で、微細電極に固定した炭化ホウ素ナノワイヤへ、前年度に購入したレーザー局所加熱装置を用いてナノワイヤ中の炭素濃度が制御できることが分かった。ナノワイヤの新規の物性制御法として注目すべき成果が得られる可能性がある。この他、最終目標であるナノワイヤ凝集体やその熱電素子の試作に向けて、導電性の高いナノワイヤの量産について、表面酸化を抑制する条件を改良した。

炭化ホウ素ナノワイヤのSeebeck係数及びその温度係数が従来のバルク焼結体の値と異なり、バルク体より高い熱電性能が得られることを確認した重要な成果について、招待講演等で報告した他、ナノワイヤの新規の物性制御法の創出、導電性の高いナノワイヤの量産など、最終目標達成に向けて順調に進展している面を自己評価した。一方で、これまでに蓄積されたデータ・知見を論文に発表する準備を急いでおり、投稿準備が整いつつある。本研究で合成した炭化ホウ素ナノワイヤの熱電性能が、個体差が大きいものの従来のバルク(焼結体・単結晶)の値を上回る要因の解明に集中的に取組んだ。導電率及びSeebeck係数の温度依存性の詳細な解析を行い、ナノワイヤの電気伝導機構を解明した。200K室温の温度域を挟んで、低温側では可変領域ホッピング伝導、高温側ではスモールポーラロンによるホッピング伝導に従う電気伝導であることが分かったが、両者の伝導機構が温度変化で遷移する背景に、ホッピング距離が、上記2つの伝導の拮抗する温度域でいずれも炭化ホウ素正20面体クラスター間の距離に対応している点を明らかにした。双晶や積層欠陥などが入ることで欠陥準位を介した可変領域ホッピング伝導を炭化ホウ素で初めて明瞭に観測できたことも大きな成果である。熱電性能の指標の1つであるパワーファクターが、ナノワイヤの炭素濃度がわずかに変化することで敏感に変化することも見出した。さらに、28年度の特筆すべき成果として、炭化ホウ素のナノワイヤの熱伝導率の低下に関して、Callaway理論及びMatthiesen則に基づいた考察を行い、炭化ホウ素中の点欠陥(ホウ素が部分的に炭素に置換されることによる欠陥)より、ナノスケールのサイズ効果の方が、より効果的にフォノン散乱を引き起こしていることを明らかにした。以上の様に、炭化ホウ素ナノワイヤの高い熱電性能の要因を1つ1つ解明した成果を総括し、full paperとして論文発表した。導電性の高い炭化ホウ素ナノワイヤの凝集体や、それらと他のナノ材料をコンポジット化した熱電材料の開発に引き続き取り組み、得られた成果取りまとめて今後も発表していく。本研究で培った、ナノスケール熱電計測技術、欠陥評価技術、伝導機構の理論的考察を、炭化ホウ素以外の様々なナノ材料に適用し、本研究に関連した研究成果として発信する所存である。本研究では、様々な廃熱を電力に変換する熱電材料として、有望な炭化ホウ素に焦点を当て、そのナノ構造化による高性能化を目指した。その結果、セルロースアニール法で合成した炭化ホウ素ナノワイヤの導電率とSeebeck係数を1本ずつ精密に計測することに成功し、一部の温度でナノワイヤの熱電特性(パワーファクター)がバルク焼結体のそれを上回ることを明らかにし、室温付近で2つのホッピング伝導機構の移り変わりが見られるナノワイヤ特有の伝導機構を見出した。ナノワイヤではフォノン散乱が顕著になるサイズ効果が働くことも見出し、ナノワイヤを用いた熱電素子では効率の高い熱電発電が期待できることを明らかにした。前年度に確立したナノワイヤ合成から物性評価までの一連の実験プロセスを駆使し、さらに熱電計測の温度範囲を広げる装置改良により、炭化ホウ素ナノワイヤのSeebeck係数が従来のバルク焼結体の値を上回る可能性を示したことから、当初定めた2年目の計画としては順調であると判断した。
慢性関節リウマチ病因抗原の分子生物学的研究

研究の背景:慢性関節リウマチは、人口の0.3%を占めるといわれるほど患者数が多いこと、最終的に身体障害者をもたらすこと、などから医療資源の問題としても重要視されつつある。しかし、その原因はいぜんとして不明のままである。現在においても、慢性関節リウマチの病因研究は免疫学的手法が主流であるが、われわれは分子生物学的手法を用いて従来の研究とは違った面からの解析を試みようとした。研究デザイン:慢性関節リウマチ患者に共通する抗原(慢性関節リウマチの病因!)が存在すると仮定する。すると慢性関節リウマチ患者は、共通してこの抗原に対する抗体を持つことになる。慢性関節リウマチの病因たる抗原は、主病変座である病的滑膜に存在する可能性が最も高い。よって、手術時に切除される病的滑膜を材料としてmRNAを分離、これでcDNAライブラリィを作成する。別の慢性関節リウマチ患者の血清を用いて、このcDNAライブラリィを免疫スクリーニングすることにより、前述の共通する抗原遺伝子を分離することができる。研究経過:少なくとも5人の患者の病的滑膜の材料として、それぞれcDNAライブラリィを作成し、1回20万個平均のスクリーニングを10回以上くりかえした。陽性クローンとして分離精製したものは20個以上であり、最終的には塩基配列決定まで行った。研究結果:共通の抗原と思われる遺伝子の単離は失敗した。この研究による結論:慢性関節リウマチにおいて、病因とみなしうる共通の抗原は少なくとも関節滑膜では発現されていない。実験計画およびその実施状況は以下の通りである。(1)慢性関節リウマチ患者骨髄を人工骨頭または人工股関節置換術時採取する。75才、女性のRA患者において、人工骨頭置換術時に大腿骨骨髄から35グラムの骨髄組織を採取した。(2)これらから細胞を分離精製し、mRNAを精製する。Total RNAを5mg,さらにmRNAとして15μgを精製分離した。(3)cDNAに変換し、発現cDNAライブラリィを構築する。酵素的にdscDNAを合成した。回収量は300ngあり、これをBlueScript【○!R】ベクター/ホスト系に組み込んだ(遺伝子組み換え実験)。完成したファージの力価は1.8×10^6cfu/μgであった。(4)(3)の発現cDNAライブラリィを高い力価の血清(抗体)でスクリーニングする。現在、この実験を鋭意実施中であるが、まだ満足できるクローンは分離できていない。以上のようにほぼ予定通り経過している。平成8年度(継続採択が予定された)として、(5)分離精製されたクローンの塩基配列を決定する。(6)決定された塩基配列に基づき、PCRプライマーをデザインする。などの実験を行う予定である。研究デザイン:慢性関節リウマチ患者に共通する抗原が存在すると仮定し、慢性関節リウマチ患者が共通して持つ抗体をもとに、この抗原を検索する。別の慢性関節リウマチ患者の血清を用いて、このcDNAライブラリィを免疫スクリーニングすることにより、前述の共通する抗原遺伝子を分離する。研究経過:少なくとも5人の患者の病的滑膜を材料として、それぞれcDNAライブラリィを作成し、1回20万個平均のスクリーニングを10回以上くりかえした。発現cDNAライブラリィを構築するまではほぼ問題なく進行した。問題が生じたのは、スクリーニングにおいてであり、陽性クローンの同定が困難を極めたことである。明瞭なシグナルを伴うクローンが得られないため、やむを得ず不明瞭な陽性を示すクローンを20個以上にわたって選別し、これの塩基配列を直接に調べた。この結果、(1)アクチン遺伝子/(2)CACACAの繰り返し配列を含む遺伝子。/(3)264塩基長の相同配列のない遺伝子。/(4)ガンマグロブリンC領域遺伝子。などであることがわかった。

その他の精製クローンについて、発現ベクターに断片をクローニングし直し、PinPoint法などによって、融合蛋白質の精製集積を試みた。そして、これらの蛋白質を抗原として、再度慢性関節リウマチ患者血清を用いてELISA法で測定した。しかし、こうして測定した融合蛋白質で、非患者/患者間で明瞭な差が得られなかった。
二機能性キラル金属ナノ粒子触媒の遷移状態における不斉発現機構の解明

二機能性不斉配位子とRh-Agナノ粒子からなるキラル金属ナノ粒子が,アリールボロン酸の不飽和カルボニル化合物やニトロアルケンへの不斉1,4-付加反応において高収率,高エナンチオ選択性をもって目的物を与えることを見出した.本触媒系では,不斉配位子のジエン構造が金属種と相互作用し不斉反応場を構築し,二級アミド構造が水素結合による直接の相互作用で,基質を不斉反応場の適切な位置に配向し,遷移状態のエネルギーを低下させることで反応を加速し,高度な立体選択性が発現しているという仮設を立てた.反応機構研究の結果,金属活性種,不正配位子と金属種との相互作用,不斉発現の遷移状態について多くの知見を得た.本年度は,高分子カルセランド型Rh/Agナノ粒子触媒や,セルロース担持Rh触媒と二級アミド構造を有するキラルジエン配位子を用いることで,アリールボロン酸のα,β不飽和カルボニル化合物に対する不斉1,4付加反応の開発を行った.その結果,幅広い求電子剤について,いずれも高収率,高エナンチオ選択性で目的物を得ることができた.有用な医薬品や生理活性物質の中間体の不斉合成も達成した.また,Au/Pdナノ粒子触媒を用いる,アルコールの酸素酸化とHoner-Wadsworth-Emmons反応の集積化に続く,本触媒系を用いるワンポット合成も達成し,Rh(/Ag)ナノ粒子触媒の汎用性,頑強性を示すことができた.一方,本触媒系の遷移状態を解明するためのメカニズム検討において非常に有益な結果が複数得られた.不斉触媒反応における非線形効果の検討を行ったところ,興味深いことに,不均一系Rhナノ粒子触媒を用いる際には正の非線形効果が得られるのに対し,対応する均一系Rh触媒を用いる際には線形の相関が得られた.このような結果は,不均一系触媒と均一系触媒において全く異なる活性種が生じていることを示唆している.また,これまでにない全く新しい手法をもってキラルジエン配位子と不均一系Rhナノ粒子との相互作用の解明を行った.これまでに,当研究室においてSwollen-resin magic angle spinning (SR-MAS) NMR解析において,固体でありながら膨潤性の触媒中の残基を解析する手法を開発している.今回,本手法に2つの最新の技術,diffusion filterとisotope mixingという手法を組み込むことによって,固体触媒表面に相互作用するキラルジエン配位子の直接的な観測に成功した.さらに,Rhナノ粒子触媒はアリールボロン酸やクエン酸等の還元力を有する物質で予め処理することで,触媒系の導入期を短縮することが可能であることを見出し,還元的な活性化が活性種の生成に重要な役割を有していることがわかった.まず,金属ナノ粒子とキラル配位子の直接的な相互作用を観測するための強力な手法として,Swollen-resin magic angle spinning (SR-MAS) NMR解析と2つの最新の技術,diffusion filterとisotope mixingを融合させた固相NMR解析法を開発した.これにより,セルロース担持Rhナノ粒子と相互作用したキラルジエン配位子を観測することに成功した.本手法を活用することで,例えば,基質を導入した状態での解析を行うことで,今後より詳細な遷移状態解明に向けた解析を行うことができると考えられる.また,反応速度の解析において,予め不均一系Rhナノ粒子触媒を還元剤で処理することで,触媒の導入期が消失することを見出した.これは,遷移状態における金属ナノ粒子の酸化状態を解明するための有力な情報であると考えられ,今後の機構解明において重要な指針となる.さらに,当初の予定通り金属ナノ粒子とキラル配位子を同時に固定化した一体型触媒の開発に向け,キラルジエン配位子構造を有するモノマーの合成を達成している.本年度は,まずキラルジエン配位子を共有結合でスチレン誘導体と連結したモノマーを合成した.本配位子含有モノマーとエポキシ基と水酸基を熱架橋可能な官能基として含有するモノマーを共重合させた高分子(高分子A)を合成した.同時に本配位子含有モノマーとトリメトキシシリル基をゾルゲル架橋可能な官能基として含有するモノマーを共重合させた高分子(高分子B)を合成した.これらの高分子Aと高分子Bを担体としてRhナノ粒子およびRh/Ag合金ナノ粒子を高分子カルセランド法で担持したキラルジエン配位子一体型金属ナノ粒子触媒の調製に成功した.これらの触媒はキラルジエン配位子の外部添加なしに高収率,高エナンチオ選択性をもってアリールボロン酸のα,β不飽和カルボニル化合物に対する不斉1,4付加反応を触媒することが明らかとなった.特に高分子Bを担体として用いた触媒は活性,選択性の低下なしに複数回の再使用が可能であった.また,興味深いことにアリールボロン酸のα,β不飽和アミド化合物に対する不斉1,4付加反応においては,外部添加のキラルジエン配位子を用いる際はLewis酸の添加が高収率を得るのには必要であったが,本一体型触媒を用いる場合そのようなLewis酸を添加しなくても高い収率で目的物を得ることができた.本結果はこのような一体型触媒を調製することで活性種がより安定に保持され高活性につながったことを示唆する.したがって,これらの一体型触媒は今後固相担体中でのキラル金属ナノ粒子の活性状態,反応における遷移状態を観測するにあたり鍵となると考えられる.一方で,Rhナノ粒子触媒が芳香族化合物の水素化反応に有効であることを見出した.芳香族化合物の水素化反応は有機合成のみならず水素貯蔵,輸送の分野でも重要な反応である.

従ってこのような反応のナノ粒子表面における反応遷移状態の解明はより活性な触媒構築において重要である.本年度は当初の予定通り,固相担体中でのキラル金属ナノ粒子の活性状態,反応における遷移状態を観測するにあたり鍵となるキラル配位子ー金属ナノ粒子一体型固相触媒の開発に成功した.また,本触媒は活性,および選択性を維持したまま回収,再使用が可能なことから,その触媒活性種が固相担体中で保持されていると考えられる.従って本触媒を,前年度に開発したSwollen-resin magic angle spinning (SR-MAS) NMR解析と2つの最新の技術,diffusion filterとisotope mixingを融合させた固相NMR解析法でもって解析することで活性種に関するより詳細な情報が得られると考えられる.一方で,Rhナノ粒子触媒の芳香族化合物の水素化触媒としての優れた反応性を見出した.本反応の基質活性化の遷移状態研究を含めたメカニズム解明にも着手した.高分子固定化Rh-Ag粒子触媒と二機能性キラルジエン配位子からなるキラル金属ナノ粒子触媒系を用いて,アリールボロン酸のニトロアルケンへの不斉1,4付加反応が高収率,高エナンチオ選択性をもって進行することを見出した.さらに,反応速度論的解析,kineticisotope効果,非線形効果,XPS測定の結果から本反応の機構解明を行った.その結果,本反応の律速段階がRh活性種の再生段階であり,二機能性配位子のアミドプロトンが高いエナンチオ選択性発現において重要である反面,水素結合によりRh nitronateを安定化する一方,触媒量のジメチル尿素がその触媒再生を加速することを明らかにした.さらに,非線形効果の結果から不均一系と均一系における活性種が極めて類似していることも明らかとした.酸化度の高いRh-Ag二元金属ナノ粒子から,より還元された真の活性種が反応開始後およそ1時間で生成し,触媒回転が定常状態になり,反応がほぼ完結した10時間の時点で,より還元度の高い金属種が生成していた.不均一系で発生する活性種の特徴は,不飽和カルボニル化合物を用いる場合とニトロアルケンを用いる場合とで大きく異なっていた.昨年度開発したキラルジエン配位子一体型金属ナノ粒子触媒中に存在する活性種の解明のため,XPS測定を行ったところ,二機能性配位子を外部添加する場合に比べ,反応終了後でも担持された二機能性配位子の効果により,均一系と類似の活性種が安定化されていることを示唆する結果を得た.昨年度見出したRhナノ粒子触媒による芳香族化合物の水素化反応における反応機構研究を行った結果,基質と水素のRhナノ粒子表面における吸着力の違いが反応速度に大きな影響を及ぼし,バッチ反応系に比べフロー反応系において50倍の加速効果が得られた.基質中に存在する複数の芳香環の吸着力の差により,選択的な水素化を実現した.二機能性不斉配位子とRh-Agナノ粒子からなるキラル金属ナノ粒子が,アリールボロン酸の不飽和カルボニル化合物やニトロアルケンへの不斉
睡眠調節物質のリアルタイム解析

プロスタグランジン(prostaglandin;PG)D2を始めとした内因性の睡眠・覚醒物質の産生・代謝制御機構は、未だに不明であり、ラットやマウスの脳脊髄液中の睡眠物質の変動についても報告されていない。そこで、脳波や筋電位を測定できる電極を埋め込んだラットの脳脊髄液を経時的に採取し、採取した脳脊髄液中の睡眠調節物質の解析を行なうことで睡眠物質による液性調節機構の解明と睡眠物質の代謝や脳脊髄液の流れについて明らかにすることを目的とした。現在までに報告されているラットの脳脊髄液を経時的に採取する方法をベースとして、ラットに脳波解析用の電極を同時に取り付けて、脳波を測定しながらラットの脳脊髄液を経時的に採取する方法を確立する。電極の取り付けに支障がない部位の頭蓋骨に穴を開け、頭蓋骨に沿わせるようにカニューレを大槽まで挿入した。回復させた後、留置しておいたカニューレから脳脊髄液を採取できたことから、本研究に適した脳脊髄液採取方法を確立することができたと考えられる。穿刺によって採取した脳脊髄液と比較検討した結果、同程度のL-PGDS濃度が得られた。また、同一個体より毎日決められた時刻に連続して採取を行った脳脊髄液ではL-PGDS濃度の低下がみられ、同一個体で、脳脊髄液中のL-PGDS濃度を維持するためには、4日間のインターバルが必要であることがわかった。今後、他の睡眠調節物質の解析やL-PGDS濃度の日内変動など検討していく必要がある。
学習者主体の学びの場を目指して～キャリア教育への工学的アプローチ～

学習者による主体的な学習活動をキャリア教育で可能にするために、e-learningにおける「学習者主体の学びの場」を実現する為の学習システムを開発した。このシステムは、「マーカー機能」「メモ書き機能」を持ち、インターネット上にある既存e-learning用webサイトに対し自分の学習の足跡を残すことがでる。これらの情報は学習者ごとにDBに保存され、次回アクセスした時に呼び出され反映される。教材支援システムの教材群の内容について検討しつつ、前年度作成した学習支援システムをさらに改良を加えた。まず、データベースとの連係が不十分だったので、設計を見直して再実装した。次に、学習者の「マーカー」や「メモ書き」の情報は、前年度までは学習者個人が自分の情報を呼び出すのみであったが、他の学習者にも公開する機能を付け加えた。また、前年度のシステムにポートフォリオ機能を付け加える開発を行なった。ポートフォリオ機能を付加するために、現存するポートフォリオシステムについて調べ、その開発業者と意見交換を行った。さらに、PCだけでなく、タブレット端末への対応も組み込むこととした。しかし、ポートフォリオ機能及びタブレット端末対応についてはまだ開発途中となった。このシステムを利用することで「学習者による主体的な学習活動」を支援することが可能になり、特に、教科の性質から教材群が多元的に存在するキャリア教育においては、多元的教材群を一元化し、「社会的・職業的自立学習習慣づけ」と「隙間時間の活用力の育成」を支援することができる。また、他の学習者と「マーカー」や「メモ書き」情報を共有することで、協同学習の効果も期待できる。e-learningにおける「学習者主体の学びの場」を実現する為にJavaScriptとサーバサイドスクリプトを組み合わせ、クライアントから当該システムを通して既存のe-learningサイト(Webサイト)にアクセスする、一種のプロキシー+フィルタの役割をもった学習支援システムを開発した。このシステムは、「マーカー機能」「メモ書き機能」を持ち、インターネット上にある既存e-learning用webサイトに対してあたかも自分のwebページのように学習の足跡を残すことができ、これらの情報は学習者ごとにDBに保存され、次回アクセスした時に呼び出され反映される。本システムを利用することで、「学習者による主体的な学習活動」を支援することが可能となり、特に教科の性質から、教材群が多元的に存在する職業人育成のためのキャリア教育においては、インターネット上に散逸する多元的教材群を本システムで一元化し、個人の学びの場を形成できる。学習者は学ぶための教材選択や学びの機会を獲得することをネット上で行うことが容易になり、「社会的・職業的自立学習習慣づけ」と「隙間時間の活用力の育成」を支援が可能となる。また、他の利用者の「マーカー」や「メモ書き」の情報は、他の学習者にも公開することが可能で、学習の場の共有が可能となり、協同学習の場面も期待できる。最終年度においては、前年度までに開発したシステムを利用して、本学のキャリア教育の一環として稼働している「管理栄養士国家試験対策サイト」とのマッチングを行った。また、学習履歴によるポートフォリオ作成については、学習者の学習ログの収集及び分析に至らず、現在、学習ログの収集及び学習活動のログと学習成果の関わりについての分析を継続して行っている。既存のe-learningサイトを「学習者主体の学びの場」に近づけるために、JavaScriptとサーバサイドスクリプトを組み合わせ、クライアントから当該システムを通して既存のe-learningサイト(Webサイト)にアクセスする、一種のプロキシー+フィルターの役割を持った学習支援システムを開発した。このシステムは「マーカー機能」「メモ書き機能」を持ち、既存のe-learningサイトに対して、マーカー付けやメモ書きができるものであり、DBとの連携でこれらの各学習者ごとの情報は、データベースとして格納される。格納される情報は、各ページにおける、マーカー付けしたテキストの場所、メモ書きの位置や内容等である。これらの情報は、学習者がログインするごとに呼び出され学習画面に反映される。また、教育者は学習者の情報を閲覧でき、コメントを記入することもでき、記入されたコメントは学習者が閲覧できる。さらに、これらのデータからポートフォリオを作成しそれを閲覧することができるような機能を、現在開発中である。これを利用することで、教師とともに学習者自身も自己評価ができ、ステップアップにつなげることができる。ポートフォリオ機能追加作業の中で、既存システムとポートフォリオシステムとの連携は、技術的なことよりも教育上の利用ポリシーがことさら重要で、そのことに苦慮した結果、研究に遅れが生じた。さらに、現在のIT利用状況に即してタブレット端末への対応も組み込むこととしたため重ねて開発に遅れが生じ、本研究で開発したシステムを運用した実証研究がまだできていない状況となった。東日本大震災により科研費補助金の交付が遅れたため、手元の既存サーバを使ってシステムの開発を開始した。

既存サーバから新サーバへの移行作業を避けるために本年度は新規サーバを購入しないまま作業をすすめたが、思いのほかサーバのスペックやOSのバージョンにより、当初不具合が生じたたため、開発に遅れが生じた。ポートフォリオシステム及びタブレット端末対応について完成を目指す。システム完成後は、九州女子大学において運用されているWebClass等のe-learningシステムで実運用し、本研究で開発したシステムが、学習者の学び活動の中で、いかに動機付けや学習の主体的活動へ繋がるのか、またe-learningにおける学習効果がどのように変化するのかを調査研究を行う。教材支援システムの基盤は整いつつ、教材群の内容について検討。また、ポートフォリオシステム作成のためのに必要な情報収集を行い、システム開発を続ける。本稼働のためには現状の機器類では対応できないので、システム稼働要件を満たすサーバ機器の購入を平成25年度に行い、遅延している実証研究を実施するために専用サーバを立ち上げ、実稼働に向ける。当初、初年度に購入予定だったサーバ、端末機器等の購入。継続したポートフォリオに対する情報収集(旅費交通費支出)。
日本列島下の3次元電気伝導度構造と地殻活動の研究

本年度は飛騨地域において集中観測を実施する予定であったが、兵庫県南部地震後、活断層の深部構造が注目されることになり、淡路島の野島断層でボーリング掘削が行われ、断層の回復課程を調べる事になった。これに関連して、1995年11月に野島断層小倉地区で、人口電流を用いた電磁探査(TDEM)を断層を横切る2測線で行った。断層は深部まで大阪層群と領家花こう岩帯との境に位置することがわかった。この成果は、今後長期にわたって繰り返し行われる比抵抗変化観測の初期値として利用される。1994年に実施した“えびの"群発地震域での集中観測の結果から、群発地震は深さ5km位の高比抵抗域に集中して起きた事が新たにわかった。中国・四国地方のNetwork-MTは、室戸岬から鳥取市まで、測線に沿った観測をほぼ終了した。1995年12月に地震研究所で平成7年度CA研究会を行い、地殻電磁気構造や地殻電磁気活動に関する30編の論文発表が行われた。これらの成果を論文集として出版した。1993年11月4日から12日にかけ宮城県北部地区で電磁気構造調査のための電磁気共同観測を実施した。19機関46名が参加した。この地域1962年の宮城県北部地震(M=6.5)をはじめ、幾度かの被害をともなう地震が発生している上、地殻の浅部で微小地震も活発なところである。電磁気グループでは、地震予知計画にも関連して、近年、地震活動と地下の電気抵抗構造との関連に注目して、富士川断層周辺、滋賀県北西部花折断層周辺などで大規模な電磁気共同観測を行なってきた。今回の調査もそれらの一環として行なった。調査した周波数帯域はLF帯の数千秒から10KHz程度のVLF帯にまでおよんでいる。また人工電源を用いたCSMTやTDEM法なども併せて行なった。探査深度は上部マントルにまでおよんでいる。今回の調査の目的は、1)低比抗層の下の構造をいかにして探るか、2)電車漏洩電流など人工的ノイズの影響をいかにして消去するかなど、技術的な問題を解決すること、および、3)断層面が電磁気学的にどの様に見えるか、4)地震活動と電磁気構造との関連はあるかなど、地球物理学的な問題点の解明にあった。現在、まだデータの解析は完全に終わっていないが、微小地震の活動が西から東にかけて浅くなっている特微によく似た電気抵抗の構造がかなり明瞭に検出されたこと、大規模の誘導電流の集中はやはり南北方向にある事などが明らかにされた。また、今回の調査域を含む広域でNetwork-MTがNTTの協力のもとに実施されている。データは地電位差伝送装置を介して東北大学などに収集されている。これらの解析によってマントル上部ないし下部地殻の構造が明らかになる予定である。1994年11月4日から14日にかけ宮崎県えびの地区の加久藤カルデラで電磁気構造調査のための共同観測を実施した。18機関42名が参加した。この地域では1968年のえびの地震(M=6.1)をはじめ、幾度かの群発地震が発生している。これらの地震活動は必ずしもマグマ起源とはいえず、むしろテクトニックな起源と考えられる。電磁気グループでは、地震予知計画にも関連して、近年、地震活動と地下の電気抵抗構造との関連に注目して、富士川断層周辺、滋賀県北西部花折断層周辺、さらに宮城県北部等で大規模な電磁気共同観測を行なってきた。今回は広帯域の地磁気地電流計(V5)を6セット用いて27地点でMT観測を行うと共にULF-MT等も行った。深さ1km程度に広域に低比抵抗層が見つかった。さらに深いところでは高い抵抗層が確認された。詳しい解析は現在進行中である。また、Network-MTは東北地方で20回線、琵琶湖北部16回線、中国四国域18回線で実施されている。一部電車ノイズが大きいところも有るが、一般に良好なデータが蓄積されている。なお、この間三陸はるか沖地震、兵庫県南部地震等が発生したが、顕著な前兆的変化は検出されていない。しかし、琵琶湖の北部、岡山では興味深いコサイスミックな変化が検出されている。

CA研究会を平成7年2月に鳥取市で開催した。参加者は60名を越え、発表論文は40編を越えた。これらはCA研究会論文集にまとめて印刷した。本年度は飛騨地域において集中観測を実施する予定であったが、兵庫県南部地震後、活断層の深部構造が注目されることになり、淡路島の野島断層でボーリング掘削が行われ、断層の回復過程を調べる事になった。これに関連して、1995年11月に野島断層小倉地区で、人工電流を用いた電磁探査(TDEM)を断層を横切る2測線で行った。断層は深部まで大阪層群と領家花こう岩帯との境に位置することがわかった。この成果は、今後長期にわたって繰り返し行われる比抵抗変化観測の初期値として利用される。1994年に実施した“えびの"群発地震域での集中観測の結果から、群発地震は深さ5km位の高比抵抗域に集中して起きた事が新たにわかった。中国・四国地方のNetwork-MTは、室戸岬から鳥取市まで、測線に沿った観測をほぼ終了した。1995年12月に地震研究所で平成7年度CA研究会を行い、地殻電磁気構造や地殻電磁気活動に関する30編の論文発表が行われた。これらの成果を論文集として出版した。
下垂体ホルモン分泌における細胞内情報伝達機構に関する研究

ホルモンの作用発現に細胞内遊離Ca^<++>がどのように関与しているかを知る目的で,まず,視床下部ホルモンを作用させた際のヒト下垂体細胞の細胞内遊離Ca^<++>濃度の変動を検討した。対象は,7例の先端巨大症,4例のプロラクチノーマ,1例の非機能性下垂体腺種で,これら患者の下垂体腺種組織を遊離細胞として実験に供した。まず,4μMのfura-2で20分間前処置した後,蛍光光度計で細胞内Ca^<++>を測定し,これに種々の視床下部ホルモンを加えてその効果を調べた。下垂体腺種細胞の細胞内Ca^<++>濃度の基礎値は97.3±5.6nMであった成長ホルモン産生腺種では,細胞内Ca^<++>濃度はTRH(10^<-6>M),GRF(10^<-7>M)で増加し,ソマトスタチン(10^<-6>M),ドーパミン(10^<-6>M)で低下した。プロラクチン産生腺種では,ドーパミン,ソマトスタチンの添加で細胞内Ca^<++>濃度が低下したが,TRHに対する反応は認めなかった。1例の非機能性下垂体腺種では,TRHに対する著名な増加反応が認められた。以上の検討から,1)TRHだでなく,GRF,ドーパミン,ソマトスタチンなどの視床下部ホルモンの下垂体細胞における作用発現に,細胞内遊離Ca^<++>濃度の変化が関与している,2)非機能性下垂体腺腫のなかにも,視床下部ホルモンに対する受容体をもつものがあることが結論された。次に,各種の細胞内情報伝達系の相互作用を知るため,この系にForskolin(10^<-5>M)あるいはTPA(10^<-7>M)を加えて,細胞内cAMPを上昇させ,あるいは蛋白キナーゼCを活性化させると,細胞内Ca^<++>濃度は,Forskolin添加時には上昇したが,TPAでは変化しなかった。更に,実際に,Ca^<++>代謝異常を示す患者で,下垂体細胞の反応性を検討した。著明な低Ca^<++>血症を呈する特発性副甲状腺機能低下症患者(27歳,男)では,視床下部ホルモンに対する下垂体の反応が一部低下していることが明らかになった。
閉塞性動脈硬化症及び下肢深部静脈血栓症とPAF‐AH遺伝子異常との関連について

動脈の閉塞に伴い、間歇性跛行や足の冷感を主訴に浜松医科大学医学部附属病院に来院し、閉塞性動脈硬化症(ASO)と診断された患者150人(ASO群)と動脈硬化性疾患の既往歴のない患者158人(control群)に対し、インフォームドコンセントの後に血液を採取し、PAF-acetylhydrolase(PAF-AH)のPolymorphism(SNP:(G^<994>→T in exon 9)について調べcase-control studyを行った。その結果、PAF-AH SNPを有する患者はASO群では53例35.3%であったのに対し、control群では40例25.3%と統計学的に有意にASO群ではPAF-AH SNPが多かった(p<0.05)。患者背景因子として、高脂血症について調べたところ、高脂血症を有した者はASO群では32例21.3%、control群では30例20.9%と両者に有意差はなかった。しかし、ASO患者のうち、脳梗塞、あるいは虚血性心疾患の既往歴を持つ者と、持たない者とでPAF-AH SNP、高脂血症の両面から検討したところ、PAF-AH SNP、高脂血症をともに有する者は、いずれも有さない者に比べ、オッズ比11.5と高率に脳梗塞、あるいは虚血性心疾患の既往歴を持っていることが判明した。このことから、生活習慣病の一つであるASO患者においては、とりわけPAF-AH SNPを有する者では高脂血症を来さぬよう、日々の食生活、運動に気をつけなければならず、医師側もそれぞれの患者に応じたテーラーメイドの生活指導を行うことが重要と考えられた。また下肢深部静脈血栓症と診断された患者69例のPAF-AH SNPについても同様に調べた。その結果35例50.7%とcontrol群と比し有意に多くの患者がSNPを有していることが判明した(p<0.01)。このことからPAF-AH SNPは日本人の動脈硬化と血栓症の発症に何らかの関わりを持つことが推察された。動脈の閉塞に伴い、間歇性跛行や足の冷感を主訴に浜松医科大学医学部附属病院に来院し、閉塞性動脈硬化症(ASO)と診断された患者150人(ASO群)と動脈硬化性疾患の既往歴のない患者158人(control群)に対し、インフォームドコンセントの後に血液を採取し、PAF-acetylhydrolase(PAF-AH)のpolymorphism(SNP:(G^<994>→T in exon 9)について調べcase-control studyを行った。

しかし、ASO患者のうち、脳梗塞、あるいは虚血性心疾患の既往歴を持つ者と、持たない者とでPAF-AH SNP、高脂血症の両面から検討したところ、PAF-AH SNP、高脂血症をともに有する者は、いずれも有さない者に比べ、オッズ比11.5と高率に脳梗塞、あるいは虚血性心疾患の既往歴を持っていることが判明した。このことから、生活習慣病の一つであるASO患者においては、とりわけPAF-AH SNPを有する者では高脂血症を来さぬよう、日々の食生活、運動に気をつけなければならず、医師側もそれぞれの患者に応じたテーラーメイドの生活指導を行うことが重要と考えられた。動脈の閉塞に伴い、問歇性破行や足の冷感を主訴に浜松医科大学医学部附属病院に来院し、閉塞性動脈硬化症(ASO)と診断された患者150人(ASO群)と動脈硬化性疾患の既往歴のない患者158人(control群)に対し、インフォームドコンセントの後に血液を採取し、PAF-acetylhydrolase(PAF-AH)のpolymorphism(SNP:G^<994>→Tinexon 9)について調べcase-control studyを行った。その結果、PAF-AHSNI)を有する患者はASO群では53例35.3%であったのに対し、control群では40例25.3%と統計学的に有意にASO群ではPAF-AHSNPが多かった(p<0.05)。また本年度は下肢深部静脈血栓症と診断された患者69例のPAF-AHSNPについても同様に調べた。その結果35例50.7%とcontrol群と比し有意に多くの患者がSNPを有していることが判明した(P<0.01)。このことからPAF-AHSNPは日本人の動脈硬化と血栓症の発症に何らかの関わりを持つことが推察された。
子宮頸癌に対する腫瘍浸潤T細胞療法（TIL療法）実施にむけたTIL培養法の開発

腫瘍浸潤T細胞療法(TIL療法)はTILを患者腫瘍から大量に誘導し、骨髄抑制した患者に輸注する免疫療法であり、現時点で最も効果が高い免疫療法と考えられている。現在、有効な治療法が限られている再発・進行子宮頸癌に対してTIL療法は極めて有望な治療法り、我々は2019年度中に子宮頸癌に対するTIL療法を実施予定である。一方で本療法には改善すべき課題も多い。特に、TIL誘導の成功率の向上、複雑な培養手技の改善、高い抗腫瘍効果を有するTILの誘導、が喫緊の課題である。抗腫瘍効果を発揮するTILの認識抗原解析が重要となる。これらの課題に取り組み、安全かつ抗腫瘍効果の高いTIL療法の開発を目指す。