hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マイコプラズマ属の潜在感染による胎児拒絶型妊娠合併症発症の分子機構の解明

Urのlipoprotein(LP)が単球細胞に及ぼす影響:Urの菌体からLPを抽出した。TLR-2,-4の存在が知られているヒト単球系細胞株THP-1細胞に添加しTLRのリアルタイムPCRを行ったところ、TLR-2の発現増強が認められた。Ur LPで刺激したTHP-1細胞のapoptosis, necrosisの誘導をflow cytometerで確認したところ、apoptosis, necrosisともに誘導された。さらにELISA法にて、早産に関わる炎症性サイトカインIL-1β,IL-6,IL-8,TNF-αの測定を行ったところ、Ur LPで刺激されたTHP-1細胞は時間経過とともにIL-8の産生が増加したことが確認されたが,その他の炎症性サイトカイン誘導は無かった。また、IL-18は測定感度以下であった。マイコプラズマ属、特にUreaplasma(Ur)属感染の臨床的意義:妊婦の膣分泌物のUrと一般細菌培養を同時に施行した。検出したUrよりDNAを抽出、urease遺伝子をPCRにて増幅しbiotypeを決定した。Ur感染に関して、正期産例では32/62(51.6%)がUr陽性、biotype 1は17/32(53.1%)、biotype 2は3/32(9.3%)であった。早産例では12/23(52.2%)が陽性、biotype 1は6/12(50.0%)、biotype 2は1/12(8.3%)であった。正期産例と早産例のUr感染率やbiotypeに関して差は認めなかった。細菌性膣症に関しては、正期産例では15/62(24%)、早産例では8/23(34%)に陽性で、早産例に検出率が高い傾向がみとめられた。また入院から分娩までの平均日数はUr陽性例では8.4日、Ur陰性例では18日であり、Ur感染が早産進行と関連する傾向が認められた。羊膜細胞培養と羊膜細胞のTLR-2,-4発現:帝王切開より得られた胎盤の羊膜より羊膜上皮培養を行った。この培養細胞はTLR-2、-4-mRNAを発現していた。グラム陰性菌のLPSはTLP-2を介して細胞を刺激するが、Urのlipoprotein(LP)も羊膜細胞に発現するTLR-2を介して細胞を直接刺激する可能性が示唆された。Urが直接TLRを介して細胞を刺激することができるか:Urの菌体からLPを抽出し、ヒト単球系細胞株THP-1細胞に添加したところ、TLR-2、-4-mRNAの発現が増加した。またApoptosis誘導については、PBS添加コントロールでは1.3%、LPS添加では3.0%、UrのLP添加では2.5%であった。以上よりTHP-1細胞において、UrのLPは、LPSと同様にTLR-2、-4-mRNAの発現およびApoptosisを誘導することがわかった。マイコプラズマ属のUreaplasma urealyticum(Ur)感染の臨床的意義:妊婦の膣分泌物を培養し、UrよりDNAを抽出、urease geneをPCRにて増幅し、biovarを決定した。Ur感染に関して、正期産例のUr陽性例は901300(30.0%)、biovar 1は55/61(90.2%)、biovar 2は6/61(9.8%)であった。早産例のUr陽性例は15/30(50.0%)、biovar 1が10/10(100.0%)であった。正期産例と早産例におけるUr感染率は早産例に有意に高く認められた。またbiotypeは正期産、早産ともにbiovar1が高かった。羊膜細胞でのToll like receptor(TLR)-2,-4発現:帝王切開より得られた胎盤の羊膜より羊膜上皮細胞培養を行い、RNAを抽出した。RT-PCRでTLR-2,TLR-4の発現が確認され、Urのlipoprotein(LP)およびグラム陰性菌のLPSは羊膜上皮細胞のTLR-2,-4に認識され活性化シグナルが伝達される可能性が示唆された。Urが直接TLRを介して細胞を刺激することができるか:Urの菌体からLPを抽出した。LPS及びUr LPで刺激したTHP-

1細胞のapoptosis誘導は、無添加群に比べて有意に高かった。さらにELISA法にて、Ur LPで刺激されたTHP-1細胞は時間経過とともにIL-8の産生が増加したことが確認された。またLPS刺激したのちUr LPを添加し培養したところ、LPS単独添加に比べてLPS+LPではIL-8の産生が有意に増加した。IL-18は測定感度以下であった。Urのlipoprotein(LP)が単球細胞に及ぼす影響:Urの菌体からLPを抽出した。TLR-2,-4の存在が知られているヒト単球系細胞株THP-1細胞に添加しTLRのリアルタイムPCRを行ったところ、TLR-2の発現増強が認められた。UrLPで刺激したTHP-1細胞のapoptosis,necrosisの誘導をflow cytometerで確認したところ、apoptosis,necrosisともに誘導された。さらにELISA法にて、早産に関わる炎症性サイトカインIL-1β,IL-6,IL-8,TNF-αの測定を行ったところ、UrLPで刺激されたTHP-1細胞は時間経過とともにIL-8の産生が増加したことが確認されたが,その他の炎症性サイトカイン誘導は無かった。また、IL-18は測定感度以下であった。
福島県におけるコミュニティスポーツ政策について - スポーツ実態調査に基づいて -

「福島県におけるコミュニティスポーツ政策に関する研究」において,その研究成果の最終まとめとして,浜通り地区,中通り地区,会津地区の三地区から男女別に概要を記載する.1.浜通り地区男性:スポーツ活動に対する目的意識が他地区に比べ低い.浜通り地区におけるスポーツ施設の不十分さを強く感じている.女性:この地区の女性は,スポーツ活動派とスポーツ無関心派の両極に分かれる傾向にある.スポーツ教室への参加者が他地区に比べ多い.スポーツ施設として,プールの要求が高い.中通り地区男性:スポーツ活動に対する目的意識は高いものを持ち,また運動をしたい,しなければならないという強い意欲を持っている.スポーツ教室への参加者が他地区に比べ高い.女性;スポーツ仲間の存在が他地区に比べ低い.スポーツ教室へ参加したいという強い意欲を持っている.3.会津地区男性:スポーツ仲間の存在は他地区に比べると低いが,その存在はスポーツ活動を助長するという強い考えをもっている.会津地区におけるスポーツ指導者の少なさを感じている.スポーツ施設として総合体育館を望む.女性:スポーツ活動量が他地区に比べ非常に少なく,全体的にスポーツの普及,浸透が他地区に比べ遅れている.学校時代における運動クラブ経験者が他地区に比べ低く,現在のスポーツ活動の少なさの裏付けともなっている.「福島県におけるコミュニティスポーツ政策に関する研究」において,その研究成果の最終まとめとして,浜通り地区,中通り地区,会津地区の三地区から男女別に概要を記載する.1.浜通り地区男性:スポーツ活動に対する目的意識が他地区に比べ低い.浜通り地区におけるスポーツ施設の不十分さを強く感じている.女性:この地区の女性は,スポーツ活動派とスポーツ無関心派の両極に分かれる傾向にある.スポーツ教室への参加者が他地区に比べ多い.スポーツ施設として,プールの要求が高い.中通り地区男性:スポーツ活動に対する目的意識は高いものを持ち,また運動をしたい,しなければならないという強い意欲を持っている.スポーツ教室への参加者が他地区に比べ高い.女性;スポーツ仲間の存在が他地区に比べ低い.スポーツ教室へ参加したいという強い意欲を持っている.3.会津地区男性:スポーツ仲間の存在は他地区に比べると低いが,その存在はスポーツ活動を助長するという強い考えをもっている.会津地区におけるスポーツ指導者の少なさを感じている.スポーツ施設として総合体育館を望む.女性:スポーツ活動量が他地区に比べ非常に少なく,全体的にスポーツの普及,浸透が他地区に比べ遅れている.学校時代における運動クラブ経験者が他地区に比べ低く,現在のスポーツ活動の少なさの裏付けともなっている.交付申請書に記載してある通り、昭和61年度における研究は、研究実績の概要を示すまでの計画ではなく、調査の実施から回収,コンピューターによる資料整理及びその結果の報告である。従って、本研究績実積の概要については、昭和61年度の第一次報告書の作成までの実施過程と、昭和62年度の研究計画の概要及び発表予定学会,雑誌を記載することとする。1.昭和61年度の研究実績の概要(1)、調査の目的:福島県民のスポーツに関する実態を把握し、今後のスポーツ施策の資料とする(2)、調査対象:福島県20才以上の男女より1,555名(住所不明者20名を含)を地区別の人口比例により無作為抽出(3)、調査時期:対象者抽出作業、昭和61年8月9月,アンケート用紙配布、昭和61年9月より。(4)、調査方法:対象者にアンケート用紙を郵送し、郵送により回収(5)、回収結果:回収数778名、回収率50.7%(6)、第一次報告書作成:昭和62年2月第一次報告書(B.4用紙23枚より成る)完成。2、昭和62年度研究計画(1)、調査結果の考察:昭和62年4月6月(2)、調査結果の地域への報告及び指導:昭和62年7月8月(3)、学会発表及び雑誌発表:昭和62年10月、日本スポーツ教育学会(於仙台)に口答発表予定、昭和62年9月及び昭和63年1月提出〆切「福島大学教育学部論集」に掲載予定。62年度における研究の主な目的は,単純集計によって得られた資料の考察と,クロス集計によって得られた資料の考察及び研究発表,また対象地区への資料配布及び指導である.以上の目的のもとに62年度の研究実績の概要(新たな知見等は研究発表雑誌にて掲載)は以下の通りである.1.資料の考察について単純集計の考察結果より男女別,地区別におけるスポーツ活動の実態に相違がみられたことより,クロス集計の段階ではまず地区別からのクロスと年令層別からのクロスをそれぞれ男女別に実施(カイ自乗検定を含む)した.2.集計結果資料の配布及び指導について対象地区の行政事務所単位に資料を持参し,資料から読み取れる要点を指摘し,地区に応じたコミュニティスポーツ政策をアドバイスした.また,必要に応じて県民の意見を直接面接聴き取り法により収集した.従って,本件に関しては63年3月まで継続された.3.研究発表について(1)学会発表:「福島県におけるコミュニティスポーツ政策について」(その1)-福島県民のスポーツに関する実態調査に基づいて-日本スポーツ教育学会第7回大会昭和62年10月23日於:仙台(2)雑誌論文:裏面,研究発表欄に記載した2点を報告した.4.今後の研究計画研究発表の継続として, 1988年11月発行の論文等に,本研究の最終報告として掲載予定である.
名詞と動詞の構築

この研究では第一に実験的方法で名詞と動詞の学習方法を探求し、第二に日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙のデータを使って語を獲得する時に作用する容易さについて研究を行なった。実験的方法では平成30年度中には平成28年度に収集した12の保育園の100人の被験者からのデータをCoder, Matlab, Excelを使って分析し、研究発表まで終了できた。選好追視法を使用した新奇語の学習法のデータ収集後、年少グループ(14ヶ月から21ヶ月)内で全ての子どもの目の動きを1フレーム(0.4秒ごと)にコード化する作業を完成できなかったため、コネチカット大学の研究協力者にデータを送り、コード化の協力を得た。これは、月齢の低い子供達の目の動きが不安定で第2コーダーから信頼性を得る必要があったからである。また、保護者から収集した日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の回答と学習法のデータ分析結果の相関関係などを詳しく調べて、学会発表をすることができた。第二の既存のデータを使って語学習について考察するプロジェクトでは、語学習に寄与する要因の1つである心像性について日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の標準化テデータの名詞語彙項目、動詞語彙項目の理解と表出の50%到達月齢と平均出現率(獲得指標)及び佐久間(2005)の心像性値から明らかにした。語彙理解の名詞、動詞と心像性との関係はいままで検討されてこなかったので興味深い結果であり、平成28年度に収集した各語彙カテゴリーの割合(語彙カテゴリーの構成(普通名詞、述部(動詞、形容詞)、閉じた語類、幼児語、社会語)の年齢変化)に追加して国際学会で発表することができた。第一実験では、パイロット調査を行い、実験方法の改善を決定した。まず、新奇語を選出し、大学生対象にそれらの新奇語が動詞あるいは名詞のどちらとして理解されやすいのかについてのアンケート調査を行った。T検定の結果、有意差がないもの10語を保育園児の実験に使用することに決定した。その後、新奇語を学習の刺激ビデオの製作を始めた。このビデオは、アメリカと韓国で研究協力者のNaigles教授がすでに行われている実験の動画の刺激を日本語に吹き替えたもので、その刺激を使用して、日本の子供達とのパイロット調査を行ったのだが、パイロット調査に参加した10名の結果を確認すると、日本の子供には米国児に使用した刺激が不適切であることが判明した。しかし、アメリカと韓国との比較検討のため、5つは米国児、韓国児と同様な刺激を、5つは日本独自の刺激とすることとした。(その動画は5月中に完成予定である)。第二実験の方はおおむね順調に進んでいる。1.日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙(JCDI)「語と身振り」版語彙チェックリスト448語、「語と文法」版711語に対する8-36ヶ月児4091名の標準化データから総表出語数に占める各語彙カテゴリーの割合を算出し、語彙カテゴリーの構成(普通名詞、述部(動詞、形容詞)、閉じた語類、幼児語、社会語)の年齢変化を明らかにした。普通名詞が語彙理解では14ヶ月から、語彙表出では20ヶ月から総表出語数に占める割合は第一位であった。述部の理解は16ヶ月からは名詞に次いで第二位であった。述部の表出は25ヶ月から名詞に次いで第二位であった。2. JCDIの語彙チェックリストの各語の出現率から50%到達月齢を算出した。実験対象児が17か月から19か月、24か月から27か月の幼児であるため、学内の倫理委員会の承認を得られるのに時間がかかった。調査は保育園での実施を計画しているが、個別の実験のため、部屋の確保や保育士付き添い可能な協力園を得ることが難しい状況に直面した。この研究では第一に実験的方法で名詞と動詞の学習方法を探求し、第二に日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙のデータを使って語を獲得する時に作用する容易さについて研究した。実験的方法では平成27年度中には12の保育園の100人の被験者から選好追視法を使用した新奇語の学習法のデータ収集に成功し、無事調査を終えた。内訳は、年少グループ(14ヶ月から21ヶ月)は57人分(男児28人;女児29人)が集まり、年長グループ(23ヶ月から31ヶ月)は43人(男児16人;女児27人)である。27年度後半はすべての子どもの目の動きを1フレーム(0.4秒ごと)にコード化する作業に費やした。その結果、数人の集中できなかった子どもを除いてほとんどの子どものコード化が終了している。今年度はそのコード化されたデータをMatlabで解析し、保護者からの日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の回答との相関関係などを詳しく調べ、また先行研究のアメリカの英語母語者の実験結果と比較する予定である。第二の既存のデータを使って語学習について考察するプロジェクトでは、語学習に寄与する要因の1つである心像性について日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の標準化データの名詞語彙項目、動詞語彙項目の理解と表出の50%到達月齢と平均出現率(獲得指標)及び佐久間(2005)の心像性値から明らかにした。名詞の心像性が動詞よりも高いことは先行研究と一致していた。表出で名詞の獲得が動詞の獲得より容易であるとの仮説は、30ヶ月までは妥当であった。また、語彙理解では動詞の平均出現率が名詞よりも高かった。

語彙表出では名詞心像性と獲得指標との低い相関があり、語彙理解では動詞心像性が獲得指標と高い相関があった。語彙理解の名詞、動詞と心像性との関係はいままで検討されてこなかったので興味深い結果であるといえる。前年度は保育園の協力を得る作業が難航し、進捗情報がやや遅れていたが、データ収集が終わるとコード化も一気に進めることができ、研究課題は概ね順調に進展している。実験的方法では平成27年度中には12の保育園の100人の被験者から選好追視法を使用した新奇語の学習法のデータ収集を終えた。27年度に終えられなかったコード化の作業(子どもの目の動きを1フレーム(0.4秒ごと)ごとに目の動きをコード化する)を100人分全員終え、コード化されたデータをMatlabで解析した。コード化の結果、落ち着きのない子供、あるいは片方ばかりを向いている子供、泣いてしまった子どもなどを解析対象被験者グループから削除し、最終グループが年少グループ(16ヶ月から19ヶ月、平均年齢18.8ヶ月)は32人分、年長グループ(23ヶ月から31ヶ月平均年齢26.8ヶ月)33人分、合計65人分のデータが使用可能となった。11月にはボストン大学で行われたBoston University Conference on Child Language Developmentで口頭発表をした。子供の選好追視の違いとしては、年少グループの名詞優位に有意差が見られたが、年長グループには見られなかった。また、年少グループの子供達はすぐに対象物の方を追視し、動作の方は目を向けなかったが、このトレンドは年長グループには見られなかった。保育園児と大人の選好の違いについては、大人には動詞優位に有意差が見られたが、園児グループに動詞優位の傾向は見られなかった。また先行研究のアメリカの英語母語者の実験結果とも比較発表した。今年度は保護者からの日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の回答との相関関係を調べてこの研究を完成させ、論文執筆に集中する予定である。初年度は保育園の協力を得る作業が難航し、進捗情報がやや遅れていたが、コード化も無事終えられ、学会発表にまで至った。研究課題は概ね順調に進展している。この研究では第一に実験的方法で名詞と動詞の学習方法を探求し、第二に日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙のデータを使って語を獲得する時に作用する容易さについて研究を行なった。実験的方法では平成30年度中には平成28年度に収集した12の保育園の100人の被験者からのデータをCoder, Matlab, Excelを使って分析し、研究発表まで終了できた。選好追視法を使用した新奇語の学習法のデータ収集後、年少グループ(14ヶ月から21ヶ月)内で全ての子どもの目の動きを1フレーム(0.4秒ごと)にコード化する作業を完成できなかったため、コネチカット大学の研究協力者にデータを送り、コード化の協力を得た。これは、月齢の低い子供達の目の動きが不安定で第2コーダーから信頼性を得る必要があったからである。また、保護者から収集した日本語マッカーサー乳幼児言語発達質問紙の回答と学習法のデータ分析結果の相関関係などを詳しく調べて、学会発表をすることができた。
HNF-1β高発現により免疫抑制環境にある卵巣明細胞腺癌の免疫抑制環境の改善

免疫抑制作用のあるIL-6やIL-8を高産生する卵巣明細胞腺がん(OCCC)の免疫環境の解析とその制御法の開発を行った。OCCC組織中の浸潤T細胞数は、卵巣漿液性腺がんを含む他のがん種より低値であった。次に、薬剤ライブラリーから、IL6産生を阻害する薬剤12種を同定した。その中の一つは、OCCC特異的転写因子でIL-6の産生に関与するHNF-1βの発現をエピジェネティックな機構で抑制した。この薬剤はOCCC移植担癌マウスで、血中のヒトIL6を低下させ、樹状細胞の機能を回復させた。以上より、この薬剤でOCCC患者の免疫抑制を解除でき、既存の免疫療法の効果を増強できる可能性が示唆された。本研究では、卵巣明細胞腺癌(OCCC)に高発現するHNF-1βによる免疫抑制的・がん細胞進展促進的ながん微小環境を、臨床検体サンプルを用いて検討し、新しい診断・治療法の開発基盤を構築することを目指す。20042011年のステージI-II手術検体41例を用いてCD3,CD4,CD8,FOXP3免疫組織染色し画像解析ソフトを用いて定量的解析行い予後との関連を検討した。その結果、CD4、CD3、CD8陽性細胞間には強い相関が認められた。またMann-Whitney Utest、Kaplan-Meier analysisでもCD3、CD4、CD8高値は予後良好、FOXP3高値は予後不良の傾向を認めたがいずれも有意では無かった。またNF&#61547;B、IL6陽性細胞の染色状態は病理医によるスコアリングを行い、陽性細胞が多いと予後不良の傾向を認めたが同様に有意では無かった。これら腫瘍内浸潤リンパ球数は大腸がん、非小細胞肺がん、子宮頚がんにと比較すると圧倒的に低値であり、OCCCでは他の癌種と異なり初期のステージでもIL6高値で強い免疫抑制環境が既に構築されていることを反映しているとためと考えられた。昨年までの解析からOCCCにおいてHNF-1βを抑制すると、NF-kBやSTAT3の活性が抑制されることによりIL-6の産生が抑制され、さらにDCが活性化されT細胞刺激能も増強することがin vivoにおいても示された。したがって、HNF-1βはOCCCの癌免疫抑制環境に関与するとともに、それを解除する標的分子となる可能性が示された。そこでOCCC細胞株を用いてIL6を指標にしてdrug repositioningによるスクリーニング系を確立し、現在スクリーニングを行っており、IL6分泌を抑制する数種の候補分子の存在を確認した。OCCC臨床検体サンプルを用いて検討し、新しい診断・治療法の開発基盤を構築することを目指すことを計画した。研究実績で明らかにしたようにOCCCでは明らかに腫瘍浸潤リンパ球が少なく、網羅的な遺伝子発現法により浸潤リンパ球関連遺伝子発現を指標として特異的遺伝子発現との関連による解析法は浸潤リンパ球関連遺伝子発現が低いかとが予想され、他の癌種と同様な解析法は困難な可能性が示された。そこでHNF1&#61538;昂進により下流で高発現しているIL6を指標としてdrug repositioningを行いそこからNHF1&#61538;発現を制御する標的分子を同定し、逆にHNF1&#61538;の発現を調べることによりその調節機構を明らかにする。現在、OCCC細胞株を用いIL6を指標としたスクリーニング系を確立し、既存薬ライブラリーからのスクリーニングを行っている。これまでに数種の薬剤がIL6産生を抑制することを確認している。以上、ほぼ順調に進捗している。本研究では、卵巣明細胞腺がん(OCCC)に高発現するHNF-1βによる免疫抑制的・がん細胞進展促進的ながん微小環境を、臨床検体サンプルを用いて検討し、新しい診断・治療法の開発基盤を構築することを目指す。平成27年度卵巣明細胞腺癌(OCCC)手術検体41例を用いて、腫瘍浸潤CD3,CD4,CD8,FOXP3数が、大腸がん、非小細胞肺がん、子宮頚がんにと比較すると圧倒的に低値であることを報告した。平成28年度は漿液性腺がん57例をCD3,CD4,CD8,FOXP3免疫組織染色を実施し、OCCCとの比較を行った。漿液性腺がんCD3,CD4,CD8,FOXP3浸潤数は大腸がん等と同等であり、卵巣がんでもOCCCのみが低値で有ることが示され、他の癌種と異なりHNF-1β昂進によりIL6高値の免疫抑制環境が既に構築されているためと考えられた。平成27年度までに、OCCCにおいてHNF-1βを抑制すると、NF-kBやSTAT3の活性が抑制されることによりIL-6の産生が抑制され、さらにDCが活性化されT細胞刺激能も増強することが明らかになり、HNF-1βはOCCCの癌免疫抑制環境に関与するとともに、それを解除する標的分子となる可能性が示され、OCCC細胞株を用いてIL6を指標にスクリーニング系を確立した。平成28年度は既存薬ライブラリーを用いてIL6産生と細胞増殖能を指標によりスクリーニングを2種のOCCC細胞株を用いて実施し、細胞増殖能に影響なくIL6産生能を減少させる薬剤12種を同定された。これらは5種の薬剤に分類することが出来た。この中にはHNF-1β下流のNF-kB阻害薬として報告されている薬剤もあった。

これら薬剤の中にはHNF-1βを阻害する薬物が含まれている可能性がある。今後、これら薬剤の中からHNF-1βを抑制させる薬剤の選択を行う。OCCC臨床検体サンプルを用いて検討し、新しい診断・治療法の開発基盤を構築することを目指すことを計画した。研究実績で明らかにしたように卵巣がんでも漿液性腺がんとは異なりOCCCでは明らかに腫瘍浸潤リンパ球が少なく、網羅的な遺伝子発現法により浸潤リンパ球関連遺伝子発現を指標として特異的遺伝子発現との関連による解析法は浸潤リンパ球関連遺伝子発現が低いかとが予想され、他の癌種と同様な解析法は困難な可能性が示された。HNF-1β昂進により下流で高発現しているIL6を指標としてdrug repositioningを行い、そこからHNF-1β発現を制御する標的分子を同定し、逆にHNF-1βの発現を調べることによりその調節機構を明らかにする。平成27年度OCCC細胞株を用いIL6を指標としたスクリーニング系を確立し、平成28年度、既存薬ライブラリーからのスクリーニングを実施し、12種の薬剤がIL6産生を抑制することを明らかにした。これら薬剤の中にはHNF-1β下流だけで無くをHNF-1β上流を阻害する薬物が含まれている可能性がある。今後、HNF-1βを抑制する薬剤の選択とその機序の解析を行う。このように研究はほぼ順調に進捗している。本研究では、卵巣明細胞腺がん(OCCC)に高発現するHNF-1βによる免疫抑制的・がん細胞進展促進的ながん微小環境構築機構を、臨床検体サンプルを用いて検討し、新しい診断・治療法の開発基盤を構築することを目指す。OCCC組織中の腫瘍浸潤T細胞数を解析したところ、大腸がん、非小細胞肺がん、子宮頚がん、卵巣漿液性腺がんと比較すると低値であることが分かり、OCCC特有の免疫抑制機序の存在が示唆された。樹状細胞抑制作用などを持つIL-6は、OCCCで高産生されていることが報告されているが、OCCCにおいてHNF-1βを抑制すると、このIL-6の産生が抑制されることがわかり、これらの分子がOCCCの免疫抑制環境構築に関与するとともに、免疫抑制解除の標的分子となる可能性が示された。そこで、既存薬ライブラリーを用いてIL6産生と細胞増殖能を指標によりスクリーニングを2種のOCCC細胞株を用いて実施し、細胞増殖能に影響なくIL6産生能を減少させる薬剤12種を同定した。このうちの薬剤Aは、HNF-1βの発現を抑制できることが分かった。さらに、この薬剤の標的分子である分子aをOCCC細胞株でノックアウトするとHNF-1β発現が低下すること、分子aがHNF-1βのプロモーターに結合していることが分かり、OCCCでのHNF-1βの発現機構が分子aによる事が示唆された。さらに、ヌードマウスにOCCC細胞株を移植した担癌マウスモデルでは、リンパ節、および腫瘍中の樹状細胞の機能が低下するが、薬剤Aの投与で、血中のヒトIL6が低下し、さらに樹状細胞の機能が回復した。以上より、分子aはOCCCのHNF-1β,IL-6の発現を介して免疫抑制を誘導しており、薬剤Aによってそれを解除でき、既存の免疫療法の効果を増強できる可能性が示唆された。免疫抑制作用のあるIL-6やIL-8を高産生する卵巣明細胞腺がん(OCCC)の免疫環境の解析とその制御法の開発を行った。OCCC組織中の浸潤T細胞数は、卵巣漿液性腺がんを含む他のがん種より低値であった。
Ah レセプターを介するベータカテニン分解および炎症の抑制による大腸癌抑制作用

Ahレセプター(AhR)欠損マウスに自然発生した盲腸がんから、AhRの大腸がん抑制作用が示唆された。このAhRの役割を検討するため、炎症性サイトカインについて調べた。AhRKOに産生されるIL-1βおよびIL-6は、発がんが遅延したAhR-/-・ASC-/-より有意に高かった。マウス腸上皮細胞の初代培養系でマクロファージと共培養をおこない、産生されるサイトカインを解析した。1炎症性サイトカインの発現に与えるAhRの作用1)炎症性サイトカイン量の比較:AhR KOマウスにみられる盲腸の自然発がんに与える炎症作用の影響を調べるため、炎症が低下しているASC KOマウスと掛け合わせたAhR・ASC二重遺伝子KOマウス(DKO)を作製した。LPS刺激後の血中IL-1β、IL-6濃度は、AhR KOで有意に高く、DKOでは低下した。また腹腔マクロファージに由来する成熟型IL-1βについても同様であった。さらに細切した盲腸組織の培養上清に含まれるIL-1β、IL-6濃度も、AhR KOでより高い数値を示した。これらより、盲腸の発がんと、炎症性サイトカインの発現とは相関関係にあることが示唆された。2)サイトカインのシグナル伝達経路と発がん:マウスの腸におけるSTAT蛋白の発現と活性をimmunoblotにより調べた。各STAT分子種の中でもSTAT3は、AhR KOに見られる発がんと正の相関があることが示された。2腸上皮細胞におけるAhRの作用初代培養系の確立:生後1-2週齢のマウスの盲腸直腸をコラゲナーゼ処理して得た細胞を、コラーゲンゲル内で培養した。3日目には上皮細胞の細胞塊が見え始め、1月以上の培養が可能である。この間、crypt様の構造がゲルの中に再構築される。凍結切片を作製し、免疫染色をすることにより、これらの細胞塊がE-cadherinを発現する上皮性細胞であること、Ki67を発現しており増殖能力を維持していることがわかった。この培養系は、サイトカインを添加することや間質に存在する細胞とco-cultureすることにより、がん化に関わる因子の解析に役立つことが期待される。AhRが機能する免疫担当細胞の解析AhRKOマウスでは、腸の炎症が亢進する。また無菌的に飼育されたAhRKOマウスにがんは生じなかったことから、AhRは外部環境に対する生体防御的な役割をもつと考えられる。この役割は、どの細胞によって担われているのだろうか。本年度はAhRが機能する細胞を調べる目的で、免疫担当細胞について検討した。デキストラン硫酸(DSS)を投与する事により、マウスに大腸炎を誘導した。1%DSSを飲水投与すると、AhRKOマウスでは下痢や血便がみられ、有意な体重の減少が観察された。正常マウスではこのような影響はみられなかった。DSS投与後の炎症性サイトカインは、小腸および結腸に比べて、盲腸で高かった。また盲腸の免疫染色により、マクロファージおよびT細胞が集まっている事が示された。AhRKOマウスはDSSに高感受性であり、組織間で比較すると、盲腸は形態的にも、機能的にもDSSの影響を受けやすい組織であることが示唆された。大腸がん発生における免疫細胞と腸上皮細胞との相互作用サイトカインの細胞増殖に与える影響を調べる目的で、生後およそ1週間のマウスの腸から得た細胞をコラーゲンとmatrigelを含む培地中で初代培養した。形成される細胞塊を共焦点レーザー顕微鏡で観察すると、E-cadherin抗体で認識される腸のクリプト様の構造を形成し、その底部は増殖マーカーであるKi67(+)細胞が配置された。細胞塊の凍結切片を免疫染色すると、Ki67(+)細胞と分化マーカーであるCK20(+)細胞の層は分離されており、培養系においても生体に近い形で上皮細胞の増殖・分化が調節されていることが示された。この培養系を使って、上皮細胞の増殖を調べた。15万の細胞をまいて5日目の細胞塊の数はおよそ50であった。1-5ng/ml IL-1βを添加すると、生じる細胞塊の数は20-50%減少する傾向がみられた。しかしながら現段階ではWTとAhRKOの比較は困難であり、さらに実験系を整える必要がある。腸上皮細胞におけるAhRの発現と機能:野性型C57BLマウスの腸組織を用いて、in situ hybridizationによりAhR発現細胞の分布を解析した。陽性細胞は主としてリンパ組織や粘膜固有層に見られたが、クリプト底部にもシグナルが認められた。AhRKOマウスの腸に陽性細胞はみられず、シグナルの特異性が示された。

クリプト底部は増殖の盛んな部位であり、AhRと増殖調節機能の関連性が示唆された。ヒト大腸がん手術材料を用いて、免疫染色によりAhR発現部位を検討した。がん部において陽性細胞は間質細胞、がん実質細胞に認められた。ヒト大腸がん細胞株で、RT-PCRおよびイムノブロットによりAhR発現量を検討した。RNAレベルと蛋白レベルは相関した。MG-132処理後のAhRタンパク量を調べると、処理の前後でタンパク量に差はみられなかった。細胞内AhR蛋白量は、蛋白分解よりはむしろ転写レベルで調節されていると考えられた。c-kitはstem cell factorの受容体であり、マウス腸由来の自然リンパ球ではAhRの標的遺伝子であること、またクリプト底部の上皮細胞に分布することが示されている。ヒト大腸がん細胞株を用いてAhRによるc-kit発現誘導を検討した。AhRリガンドであるメチルコラントレン処理により、既知のAhR標的遺伝子であるCYP1A1 mRNAが誘導される条件下で、c-kit mRNAの増加が認められた。がん微小環境の形成:野性型またはAhRKOマウスから採取した腹腔マクロファージと三次元培養した腸初代培養細胞を種々に組み合わせてco-cultureし、培養4週目の培養上清に含まれるサイトカインの差異をメンブレンアレイを用いて検討した。CXCL1やCXCL5、GCSFやMCSF、IL-6等が検出されたが、組み合わせによる差は認められなかった。初代培養はできるようになってきたものの、これを使った増殖のアッセイや、幹細胞マーカーの検出等がまだできていないため。24年度が最終年度であるため、記入しない。AhRノックアウトマウスにおける発がんは、AhRの発現低下と細胞がん化または悪性化との間に密接なつながりがあることを示唆している。大腸がん細胞株を使ってAhRの発現調節について調べる。また、AhRの炎症抑制作用に必要な細胞を検討するため、細胞特異的にAhRがdeleteされているconditional KOマウスを使った解析をおこなう。
ICTを利用した老人介護施設の無断外出見守りタイ

老人介護福祉施設では,夜間の警備が必ずしも十分ではない.このような状態の中で,夜間の痴呆性患者の徘徊は患者の生命に関係する重大な事故につながりかねない.この研究では, RFIDシステムのアクティブ型タグ及び画像処理を利用する. RFIDシステムは出入り口周辺を感知し,画像処理システムは出入り口に焦点を当てて感知するという特性を持つ.このシステムにより,患者の無断外出をより正確に感知することを目的とする.老人介護福祉施設では,夜間の警備が必ずしも十分ではない.このような状態の中で,夜間の痴呆性患者の徘徊は患者の生命に関係する重大な事故につながりかねない.この研究では, RFIDシステムのアクティブ型タグ及び画像処理を利用する. RFIDシステムは出入り口周辺を感知し,画像処理システムは出入り口に焦点を当てて感知するという特性を持つ.このシステムにより,患者の無断外出をより正確に感知することを目的とする.ICタグの特性(ID管理、通信範囲、電波強度、計測時刻)を老人介護施設及び施設に相当する場所について実験を行い次のような結果を得た。(1)ICタグリーダ設置場所(天井付近で、出入りする可能性のある人の動線を見渡せる場所が好ましい。)(2)ネットワークによる信号の取出し(プログラムにより、ICタグ検知信号をネットワークによりサーバに転送する。)(3)ICタグの所持の仕方の決定(ICタグを常時持っていただくことが前提であるが、現在はペンダントをするような形態で携帯する。)関連機器の信号取得及び処理プログラムの結果となる処理手順(ICタグの確認信号はプログラムにより、サーバマシンに転送する。また画像処理による感知信号はメール発信によりサーバマシンに届ける。この信号とメールを受け取ったサーバマシンは、無断外出があったかどうかの最終的な判断を行う。)今後、特定の老人介護施設を選定して次のような項目に関する実験を行う。(1)サーバマシンによる最終的な判断による無断外出者を感知ときには、ナースコール主装置へ情報を送るシステムを実現する。(2)上記のシステムによる実証実験を行い、評価する。一方、画像処理に関する研究では老人介護施設の監視カメラの映像をビデオテープに録画し、そのデータを再生しながら映像中の人物の検出を行うプログラムを作成した。その検出結果により、電子メールで知らせる機能がある。今後は、検出した人物の移動を解析し、メールを送信するタイミングを検討する必要がある。(研究開始当初の背景)老人介護福祉施設では、痴呆性患者が徘徊をすることにより、患者の生命の危険、あるいは患者・家族に対する施設管理上の問題が生じる。館内の出入り口を施錠することは、消防法に違反することになるため、何らかの対策を講じる必要がある。(研究の目的)本研究では、ICT技術を使用することにより、患者の安全、患者の家族の安心を確保することを目的とする。(研究の方法)上記の目的を達成するため、痴呆性患者にアクティブ型ICタグ(RFIDのICタグ)を装着させ、夜間の徘徊等の無断外出を抑止あるいは防止する。しかしながら、RFIDだけでは感知範囲が広く、無断外出を特定することが難しいため、人間を感知する画像処理システムを併用することにより、出入り口付近の限られた範囲内で無断外出を判断することとする。RFIDシステムと画像処理システムを併用したことにより、より精度の高い患者の無断外出の判定ができる。さらに、無断外出者があったときには、あらかじめ録音された音声データをスピーカを使って呼びかけて、患者本人に語りかける仕組みも組み込む。このシステムにより、実用化に耐えうる痴呆性患者の無断外出の抑止あるいは防止システムを制作する。(研究成果)RFIDによる感知結果と画像処理の感知結果はいずれもメールで送信される。それらのメールから無断外出者を判定・特定するメールサーバシステムを構築した。現在のところ、本研究の基本的な構成はできあがり、基本実験を行いながら、本研究の有効性を担保するために実践的実験データを累積している。
局所麻酔薬の複数同時使用時の中毒閾値に関する研究

麻酔科領域を中心に神経ブロックを行う機会が増加している。迅速な効果発現と効果持続時間の長さが求められるため、短時間作用型と長時間作用型の局所麻酔薬を併用する場合がある。異なる局所麻酔薬の併用投与によって中毒閾値が変化するか否かが明らかにされていないため、併用投与の極量は明らかではない。本研究では動物実験で、2種類の局所麻酔薬を同時投与した場合、中毒閾値の変化を持続静注による痙攣誘発量を求めることによって検討する。脳内マイクロダイアリーシス法で、局所麻酔薬の脳内濃度を測定することによって、同時投与する2種類の局所麻酔薬の痙攣誘発量の相互関係が薬力学的ならびに薬物動態学的に説明できるかを検討する。
随意動作の習熟に伴う大脳運動電位、筋電位の出現様式

<目的>身体運動のコントロ-ルの巧みさに関する研究は体育科学の重要な研究課題の一つであると考える。本研究においては随意動作に先行して約5060msecに出現し、運動駆動に直接関与していると考えられている大脳運動電位、筋電位が随意動作の習熟に伴っていかなる変化を示すかを詳細に検討し、身体運動の制御機構の一端解明に寄与することを目的とした。<実験方法>被験者は児童、青年期にある生徒、学生をもちいた。脳波はスピン電極を用い、国際式10-20配置法に従って測定した。筋電図は表面電極を用いて測定した。動作課題は非スキル動作として単純なballistic動作、力発揮動作、随意動作とスキル動作としては連続的なtracking動作、目的識別動作であった。これらの両課題動作中の脳波、筋電位を測定し、Computerで分析処理した。<結果と考察>(1)大脳運動電位はすべての動作課題において、動作肢と反対側の中心領野において著名に高い値を示し、特にHand Grip動作課題(力発揮)において最も高い値を示した。(2)大脳運動電位は遅反応動作より筋の緊張保持から急速な反応動作(ballistic動作)の場合に著明な振幅増加を示した。(3)反応時間が短縮するにつれて、大脳運動電位潜時も短縮した。(r=0.648、p<0.01)以上のことから大脳運動電位と中枢out putは密接な関係があると推測される。(4)動作が習熟するにつれて反応時間にばらつきがなくなり、運動野に相当する部位から導出される大脳運動電位の振幅も増加した。また、筋電図も集中的に出現しており余分な筋群を使ってないことが確認された。大脳運動電位形成には、大脳運動野ばかりではなく小脳も関与することから、大脳小脳連関により運動が習熟の域に達することがわかる。
C型インフルエンザウイルスの増殖過程における第二の膜蛋白質CM2の役割の解明

本研究の目的は、C型インフルエンザウイルスの第二の膜蛋白質であるCM2のウイルスの増殖過程における役割を明らかにすることである。本研究では、野生型およびCM2を欠損したウイルス様粒子(VLP)を作製し、VLP産生細胞、VLP、およびVLP感染細胞に発現したウイルス蛋白質とウイルス遺伝子を解析した。その結果、CM2は粒子のpackagingとuncoatingに関与することが明らかとなった。C型インフルエンザウイルスの第二の膜蛋白質であるCM2がウイルスの増殖過程においてどのような役割を演じているのかを明らかにすることが本研究の目的である。当該年度では、293T細胞に、ウイルス遺伝子(GFP-vRNA)とウイルス蛋白質を発現させ、野生型のC型インフルエンザウイルス様粒子(WT-VLP)およびCM2欠損ウイルス様粒子(ΔCM2-VLP)を作製し、VLP産生細胞および産生されたVLPを詳細に解析した。得られた成績を下に示す。1.ΔCM2-VLPの産生量(VLPを構成する蛋白量)、およびその蛋白質の構成比は、野生型VLP(WT-VLP)との間に差を認めなかった。2.ΔCM2-VLP内の核蛋白質の量は、WT-VLPの約2分の1であった。3.ΔCM2-VLPの内部に含まれる遺伝子(GFP-vRNA)量は、WT-VLPの約3分の1であった。4.ΔCM2-VLPの産生細胞に発現したGFP-vRNA量とウイルス蛋白量は、WT-VLP産生細胞と差はなかった。これらの結果から「CM2は粒子へのゲノムのpackagingに関与する」という結論が得られた。本研究で得られた成果は、インフルエンザ糖蛋白質の新規の機能を提唱するものであり、またC型ウイルスベクターの開発に応用可能なものとなる。平成22年度は、前年度の研究で作製した2種類のC型インフルエンザウイルス様粒子、すなわち野生型(WT-VLP)およびCM2欠損ウイルス様粒子(△CM2-VLP)、を用いた研究を行った。1. Flow cytometryを用いてVLP感染細胞を解析した。その結果、ΔCM2-VLPはWT-VLPと同じ効率で細胞表面に吸着し、侵入することが判明した。2.精製したVLPとニワトリ赤血球を酸性条件下で吸着させ、VLPのもつスパイク糖蛋白質HEFの溶血能を比較した。ΔCM2-VLPの溶血能はWT-VLPと等しかった。すなわち、感染細胞においてVLPの膜融合能には差がないことが明らかになった。3. VLP感染細胞を核と細胞質に分画し、各々に含まれる遺伝子(GFP-vRNA)量を定量した。WT-VLP感染細胞では、感染60分後に核内の遺伝子(GFP-vRNA)量は感染直後の約3倍に増加した。一方、ΔCM2-VLP感染細胞では、核の中のGFP-vRNA量は減少した。このことは、endosome内のWT-VLPは適切にuncoatingされたが、ΔCM2-VLPはuncoatingされずにdegradationを受けたことを示す。これらの結果から「CM2は、粒子のuncoatingに関与する」という結論が得られた。本研究で得られた成果は、インフルエンザ糖蛋白質の新規の機能を提唱するものである。C型インフルエンザウイルスの第二の膜蛋白質であるCM2蛋白がウイルスの増殖過程においてどのような役割を演じているのかを明らかにすることが本研究の目的である。これまでに、CM2を欠損させたウイルス様粒子virus-like particle(ΔCM2-VLP)を用いた研究を行った。その結果、CM2はウイルスゲノムのpackagingと粒子のuncoatingの両者に関与することが明らかとなった。このことを感染性ウイルス粒子を用いた実験で証明すべく、M遺伝子にCM2がコードできないような変異を導入し、リバース・ジェネティクスでウイルスの作製を試みた。しかしながら、感染性ウイルスは回収できなかった。この事実はCM2がウイルスの増殖に必須の蛋白であることを示す。次に、CM2の翻訳後修飾部位に着目した。CM2の4種類の翻訳後修飾(糖鎖の付加、パルミチン酸の付加、リン酸化、4量体形成)に関与するアミノ酸残基は進化学的に保存されているので、これらの修飾はウイルスにとって重要であることが窺われる。そこでまずパルミチン酸化部位を欠失したウイルス(rC65A)を作製し、その増殖を調べた。その結果、rC65Aの増殖能は野生型ウイルスと有意な差はなかった。このことは、パルミチン酸化はウイルスにとって必須ではないこと、および、組換えウイルスrC65Aを用いてCM2の機能を明らかにすることはできないことが明らかになった。
金属材料の抗菌性およびバイオフィルム生成挙動評価

抗菌性金属材料の創製に必要不可欠な基礎的データを収集することを目的に、21種類の金属元素および23種類の金属イオンの抗菌特性を明らかにした。また、金属材料表面に形成されるバイオフィルム形成挙動を観察した。その結果、銀、銅、コバルト等の金属元素は抗菌性が高く、錫、タンタル、白金等の金属元素は抗菌性を示さないことが分かった。金属イオンによる抗菌試験においても金属元素と同様な傾向の結果が示された。また、抗菌性の高い金属表面ではバイオフィルムの形成が抑制されることが示された。金属材料の抗菌性評価については、JIS Z2891に基づいて21種類の金属(Al,si,Ti,V,Cr,Mn,Co,Ni,Cu,Zn,Zr, Nb,Mo,Pd,Ag,Sn,Ta,W,Pb,Au,Pt)について評価試験を行い、その結果を纏めた。この場合、菌と材料が接して24時間後の菌数の減少により評価する抗菌性の有無の他に、24時間以内での菌数の減少曲線から金属元素の抗菌性の強弱についても評価した。これによると、大腸菌および黄色ブドウ球菌の両菌に対して抗菌特性がある金属はAl,Co,Ni,Cu,Zn,Mo,Pd,AgおよびWの9つの金属であり、黄色ブドウ球菌には抗菌性を示さず大腸菌に対してだけ抗菌性を示した金属はPtおよびPbの2種類であり、黄色ブドウ球菌に対してだけ抗菌性を示した金属はVおよびZrの2種類であった。また、抗菌性を示さない金属はSi,Ti,Cr,Mn,Nb,Sn,TaおよびAuであった。更に、抗菌性の強い金属はCu,Ag,Coなどであった。以上のように数多くの金属元素について統一的にその抗菌性を明らかにした。これらの実験結果を基にすることにより、抗菌性が高く、機械的特性や加工性に優れる金属材料の開発に繋がるものと期待される。各種金属材料表面におけるバイオフィルムの付着特性については、現在調査を進めているが、これまでの結果では、抗菌性の高い材料表面へのバイオフィルム付着量はやや少ない傾向にあること、また、抗菌性を示す材料表面では抗菌性を示さない材料表面と初期付着量では大差が無い場合にも、菌の生死判別の結果、死菌が多くバイオフィルムの急速な発達は起こらない可能性が高いことなどが分かってきた。これらの結果を総合することにより、微生物腐食のような微生物による害悪に強い材料開発に繋がるものと期待される。前年度までに銀、金、白金等の貴金属を含む20種類以上の金属元素について抗菌性を評価した。この場合、JISの評価基準である材料が菌液と接触後24時間での生菌数の調査だけでなく、24時間以内の各時間による生菌数変化を追跡し、各種金属材料の抗菌特性を総合的に評価した。抗菌性を調べた結果を参考として選定した金属材料試験片上で大腸菌ならびに黄色ブドウ球菌等の微生物を培養して、各種金属元素材料表面上へのバイオフィルムの付着状況を調査した。光学顕微鏡を用いてバイオフィルムの付着面積率を調査することにより、各種金属元素材料の抗菌性とバイオフィルムの付着状況の相関性について検討した。その結果、銀などの抗菌性が非常に強い材料表面では、抗菌性が認められない材料表面に比べてバイオフィルムの生成が抑制されることが判った。また、抗菌処理を施した材料表面では、抗菌性を持たない材料表面のバイオフィルムの付着面積率が同一でもバイオフィルム内の生菌数が異なる場合があることが判った。これはバイオフィルム内の菌のほとんどが生菌である活性なバイオフィルムを生成する金属表面とほとんどが死菌になる活性を失ったバイオフィルムを生成する金属表面があることを示している。これはバイオフィルム内の菌の生死判別についても二重染色法等を用いて蛍光顕微鏡により観察して得られた知見である。これらの調査を通じてバイオフィルムの生成挙動と各種金属材料の抗菌性の関係について更に検討する。また、金属材料の他に金属イオンを用いて、金属イオンによる最小殺菌濃度を求めることにより金属イオンによる抗菌性を調べる実験を開始している。金属材料および金属イオンの両者の抗菌性を比較する事により総合的に金属の抗菌性を評価できると考えている。20種類以上の金属イオンについて抗菌性を評価した。対象とした金属イオンはAg、Mg、Mn、Co、Ni、Cu、Zn、Pb、Fe、Cr、Al、Zr、Mo、Pd、Au、Pt、Sn、V、Ti、Si、Nb、TaおよびWの23種類である。試験菌は、グラム陰性菌であるE.coliおよびグラム陽性菌であるS.aureusの2種類である。先ず、抗菌製品技術協議会の試験法に従い各種金属イオンの最小殺菌濃度を測定した。この結果、多くの金属イオンでは試験液のpHが試験菌の至適pHを逸脱し、このpH変化の影響により菌が死滅すると思われる問題が起こり、各種金属イオンの最小殺菌濃度を測定することができなかった。そこで、金属イオン濃度4ppm一定とした試験液における抗菌性定量評価を行った。

この試験では金属イオン濃度4ppmとして24時間後の菌数を比較することにより各種金属イオンの抗菌性の強弱を相対的に比較することが可能になる。この結果、最小殺菌濃度および抗菌活性値に基づく金属イオンの抗菌性の順位は試験菌E.coliをとした場合、Ag>Cu=Cr>Zn>Pb>Al>Au>Co=Ni>V>Pt>Pd>Mo=Mn=Zr>Fe>W>Sn>Ti=Si=Mg>Nb>Taとなり、試験菌をS.aureusとした場合Ag>Cr>Cu=Pb>Zn>Mn>Ni>Au>Co>Nb>Pd>Zr>Ta>Ti>Fe>Al>Sn>V>Mo>Pt>W>Si>Mgとなった。また、グラム陰性菌E.coliはグラム陽性菌S.aureusに比べて金属イオンの抗菌性に対する高い抵抗性を持つ可能性があることが示された。金属イオンの抗菌性の順位とバルク状純金属の抗菌性の順位にはある程度の相関が見られ、金属イオンの抗菌性を周期律表に配置したところ,抗菌性の強い金属は第9族から第13族に多く,抗菌性の弱い金属は第4族から第8族に多い傾向があることが示された。
細菌多様性の系統分類学的解析

細菌の生物学的多様性に注目して菌株の分離を行い、入手した分離株について従来の手法すなわち形態、生理・生化学的性欲、化学分類学的性状に加えて、分子系統の情報を加えた多面的アプローチから細菌系統の解析を行い、細菌系統分類学の確立と生物資源の確保を計ることを目的とした。1.Proteobacteria門の菌株2.Bacteroidetes門の菌株3.Verrucomicrobia門の菌株海中環境を模倣したin situ cultivationの手法で海水から分離した菌株はVerrucomicrobia門の新属新種Coraliomargarita akajimensis、Pelagicoccus mobilus, P.albus, P.litoralis,およびCerasicoccus arenaeとすることを提唱した。これらの細菌群の細胞は細胞壁にペプチドグリカン層を欠如しており、通常のグラム陰性細菌よりもさらに原始的な細胞を有しているものと思われた。4.Cyanobacteria門の菌株地衣類に共生するシアノバクテリアの分離を行い、9株の分離株について形態と分子の両形質の統合的解析から同定を試みた。5.Firmicutes門の菌株6.Actinobacteria門の菌株細菌の生物学的多様性に注目して菌株の分離を行い、入手した分離株について従来の手法すなわち形態、生理・生化学的性欲、化学分類学的性状に加えて、分子系統の情報を加えた多面的アプローチから細菌系統の解析を行い、細菌系統分類学の確立と生物資源の確保を計ることを目的とした。5.Firmicutes門の菌株6.Actinobacteria門の菌株本研究は有用細菌全般にわたる応用微生物学の中の細菌系統分類学の確立と生物資源の確保に寄与することを目的としている。具体的には、広く細菌(グラム陰性細菌、グラム陽性細菌、およびシアノバクテリア)について、その生物学的多様性に注目して菌株の分離を行い、入手した分離株について従来の手法すなわち形態、生理・生化学的性状、化学分類学的性状に加えて、分子系統の情報を加えた多面的アプローチから細菌系統の解析を行い、これらの結果をもとに正しい分類群への位置付けを明らかにすることを目的としている。本年度実施した研究内容を以下に述べる。1)土壌から分離した細菌株DY株について、系統解析による遺伝形質と形態、生理・生化学的性状、化学分類学的性状の比較による表現形質との多角的解析を行い、新属新種Terrimonas portokiを提唱した。2)新規の海洋細菌の分離と系統解析を含めた分類学的解析を行った。貝類の消化管から細菌分離株について系統分類学的位置を調べた結果、α-Proteobacteriumの新属新種の細菌と判明したので、Teteyamaria omphaliiとすることを提唱した。また海草から分離した滑走運動を示すBacteroidetes門の細菌株3株(strain 24,62,74)は新属新種と判明したので、Aureospira marinaとすることを提案中である。本菌種は細胞中に著量の高度不飽和脂肪酸であるアラキドン酸を含むことが見出されたので、特許を申請した。3)根粒菌の分離とその系統分類に関する研究を試みた結果、ミヤコグサに根粒を形成するAminobacter属細菌を見出した。4)地衣類に共生するシアノバクテリアの分離を試み、形態と分子(16SrRNA遺伝子、rpoC1遺伝子、rpoD1遺伝子、gyrB遺伝子)両形質の統合的解析からシアノバクテリアの分類体系の確立をめざしている。5)Family Microbacteriaceae細菌の系統解析に関する研究では、細胞壁に2,4-ジアミノ酪酸を含み、地衣類から分離されたグラム陽性細菌分離株KHIA株の分類学的位地を調べた結果、新属の菌種と推定した。6)新規のグラム陰性細菌分離株IAM 15137についてその分類学的位置について検討した結果、本菌株はγ-proteobacteriumの新属新種であることが判明したのでKoukoulimonas aurantiacaとすることを提唱した。本研究は細菌系統分類学の確立と生物資源の確保に寄与することを目的として、有用細菌全般にわたって検討を行った。具体的には、広く細菌の多様性に注目して自然界より菌株の分離を行い、形態、生理・生化学的性状、化学分類学的性状に加えて、分子系統の情報を加えた多面的アプローチから細菌系統の解析を行い、これらの結果をもとに正しい分類群への位置付けを明らかした。本年度実施した研究内容は、1 Proteobacteria門の菌株2 Bacteroidetes門の菌株3 Verrucomicrobia門の菌株海中環境を模倣したin situ cultureの手法を用いて、海水から分離された菌株について系統分類学的位置を明らかにし、さらに、生化学的解析を試みた。