hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
梗塞後不全心におけるβ受容体とアンジオテンシン受容体シグナリング間のクロストーク

心筋梗塞後慢性期に認められる非梗塞部心筋の不全化の機序をβ受容体シグナリングおよびアンジオテンシンシグナリングの観点から明らかにし、梗塞後左室リモデリングの病態を解明することを目的とした。ラット左前下行枝結紮6週間後、左室径の増大と収縮率の低下とともに非梗塞部の壁厚増加率の低下を認めた。アンジオテンシン受容体拮抗薬(ARB)カンデサルタンを梗塞後4週より2週間のみ投与した群では、安静時左室機能に変化はないながらも、イソプロテレノール負荷時の左室dP/dtおよびVcfの変化率が回復することを明らかにした。また非梗塞部心筋における高親和性β受容体の比率およびイソプロテレノール刺激下のアデニリルシクラーゼ活性もARB投与群においてvivo実験と同様に回復していることが明らかになった。ARBの短期投与は、安静時左室機能および血行動態に対して影響を及ぼしておらず、これらのβ受容体シグナリングの変化は、心機能改善に伴う二次的変化というよりも、アンジオテンシンシグナリング抑制に伴う変化と考えられた。また、非梗塞部心筋ではシャム群に比較し、G蛋白共役受容体燐酸化酵素(GRK2)の細胞膜分画における発現が亢進していること、またプロテインキナーゼC(PKC)の活性が上昇していることが明らかになった。PKCのアイソフォームの中では、Ca非依存性PKCの1アイソフォームであるPKC_εの発現が特異的に亢進しており、ARBの投与は、このアイソフォームの発現亢進を抑制し、β受容体シグナリングを改善することが示された。新生仔ラット心筋細胞にPKC_εのdominant negative mutant遺伝子を導入したところ、GRK2の発現が亢進し、イソプロテレノール負荷時のcAMP産生が低下する事を明らかにした。結語:PKC_εはアンジオテンシン受容体とβ受容体シグナリングのクロストークに関連し、不全心筋におけるGRKの発現上昇とβ受容体シグナリングの障害に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。この結果により、PKC_εの抑制が心不全におけるβ受容体感受性を良好にし、運動耐容能の改善をもたらす可能性、また、将来的には心不全の新たなターゲットとなる可能性も示唆された。ラット心筋梗塞モデル(梗塞後6週)において、左室拡張末期容積の増大と収縮率の低下を認めた。またイソプロテレノール負荷時の左室dP/dtをカテ先マノメーターにより経時的に測定したところ、β受容体刺激に対する心筋収縮の反応性が低下していることが明らかとなった。次に、左室非梗塞部心筋において、β受容体シグナリングの変化について検討を行った。心筋β受容体数は変化していないにもかかわらず、高親和性のβ受容体の比率およびイソプロテレノール刺激時の心筋アデニリルシクラーゼ活性が低下していた。このことより非梗塞部心筋において、β受容体とGs蛋白のuncouplingが生じていることが示唆された。心筋細胞膜分画におけるG蛋白共役受容体燐酸化酵素(GRK)の発現について、Immunoblottingにより検討したところ、GRK2の発現亢進を認めた。GRK2の発現は、PKCεの発現亢進とともに認められた。他のPKCアイソフォームには有意な変化を認めなかった。アンジオテンシン受容体拮抗薬を梗塞後4週目より2週間投与したところ、安静時左室機能に有意な変化は生じないにもかかわらず、イソプロテレノール刺激に対する心筋収縮(dP/dt)の反応性および心筋アデニリルシクラーゼ活性の改善が認められた。Immunoblottingでは、PKCεの発現低下とともにGRK2の発現軽減を認めた。上記所見より、心筋梗塞後左室リモデリングの過程において心筋β受容体の反応性は低下していること、アンジオテンシンシグナリングの抑制により、β受容体シグナリングが改善し、反応性が回復すること、β受容体シグナリングとアンジオテンシン受容体シグナリング間には、PKCとGRKを介したクロストークが存在している可能性が示唆された。

PKCのアイソフォームの中では、Ca非依存性PKCの1アイソフォームであるPKC_εの発現が特異的に亢進しており、ARBの投与は、このアイソフォームの発現亢進を抑制し、β受容体シグナリングを改善することが示された。新生仔ラット心筋細胞にPKC_εのdominant negative mutant遺伝子を導入したところ、GRK2の発現が亢進し、イソプロテレノール負荷時のcAMP産生が低下する事を明らかにした。結語:PKC_εはアンジオテンシン受容体とβ受容体シグナリングのクロストークに関連し、不全心筋におけるGRKの発現上昇とβ受容体シグナリングの障害に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。この結果により、PKC_εの抑制が心不全におけるβ受容体感受性を良好にし、運動耐容能の改善をもたらす可能性、また、将来的には心不全の新たなターゲットとなる可能性も示唆された。
ポリナフチレン:精密ナノ構造制御材料の創成と機能

1,1'-ビ-2-ナフトール骨格からなる高分子の精密合成法の開発は、高次構造や機能の制御など、新規材料創製の観点から極めて興味深い。我々は、2,3-ジヒドロキシナフタレン誘導体をモノマーとした不斉酸化カップシング重合法の確立による、その構築について種々の検討を行なってきた。1.銅(I)-ビスオキサゾリン錯体が2,3-ジヒドロキシナフタレンの重合において高い触媒活性を有し、ポリ(2,3-ジヒドロキシ-1,4-ナフチレン)を室温で定量的に与えることを見出した。さらにこの触媒系が、2-ナフトール誘導体3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸エステル類とのカップリング反応において極めて高いクロスカップリング選択性を示すことを明らかにした。また、非対称型あるいは対称型の6,6'-ジヒドロキシ-2,2'-ビナフチル誘導体の不斉酸化カップリング重合を行なうことにより、Head-to-Tail構造、交互共重合構造を有するポリマーを高選択的に構築することに成功した。すなわち、様々な構造を有するポリ(ビナフトール)誘導体を高選択的に構築することに成功した。2.触媒設計による2,3-ジヒドロキシナフタレンの重合についてさらに検討した結果、市販のオキソバナジウム(VI)塩とビスオキサゾリン配位子から容易に調製される錯体が高い立体選択性を有し、高収率でポリマーを与えることを見出した。このような光学活性バナジウム錯体を用いた有機反応はこれまでに報告例がなく、新規な不斉触媒として非常に興味深い。また、2核型の構造を有する新規な銅(II)錯体が、2,3-ジヒドロキシナフタレンの重合において高い触媒活性を有することを見出した。1,1'-ビ-2-ナフトールは、有機化学の分野において最も重要な不斉骨格の1つである。高分子合成の分野においても、この骨格を高分子主鎖中に導入することによる高次構造や機能制御などの多くの研究がなされてきている。これに対して我々はこれまでに、ビナフトール骨格がその4,4'-位で連続的に結合した主鎖構造からなるポリマーの合成に成功しており、新規な芳香族系高分子・機能性高分子として非常に興味深いものであることから、より簡便な合成法の開発・構造制御、その応用などについて検討を行っている。本年度は、新規な触媒系の開発による簡便かつより高度な立体制御の可能性について検討を行った。実用性の観点から、市販の安価な化合物である2,3-ジヒドロキシナフタレンをモノマーとして用いるポリマーの構築法について検討を行った。その結果、2核型の構造を有する新規な銅(II)錯体が比較的高い活性を有することを見出した。この錯体は極めて容易に調製できる上に、これまで用いてきた銅(I)錯体に比べ、安定で取り扱いが容易であることなどから、非常に有効であると考えられる。しかし、立体制御に及ぼす効果については、これまでのところ、十分な効果は得られておらず、配位子のより高度な設計が必要である。一方最近、不斉酸化カップリング反応の触媒として効果的であることが報告されている、オキソバナジウム錯体の重合における触媒としての効果について調べたところ、配位子の構造や重合条件を設計することにより、触媒活性や立体構造のより高度な制御が可能であり、新規な不斉酸化カップリング重合触媒として有効であることが明らかとなった。これまでの研究で、市販の安価な化合物である2,3-ジヒドロキシナフタレンをモノマーとする酸化カップリング重合において、新規な触媒である銅(I)-ビスオキサゾリン(Phbox)錯体が、ビナフトール骨格がその4,4'-位で連続的に結合したユニークな主鎖構造からなるポリ(2,3-ジヒドロキシ-4,4-ナフチレン)を室温で定量的に与えることを見出している。

しかし、重合における立体制御は必ずしも十分とは言えず、また、ポリマーは新規な芳香族系高分子としても非常に興味深いものであることから、本年度は、本重合系におけるより高度な構造制御・立体制御の可能性について検討を行った。構造制御に関しては、非対称な構造を有する6,6'-ビ-2-ナフトール誘導体をモノマーとして本触媒系を用いて重合を行ったところ、従来型の酸化カップリング重合触媒に比べ、高選択的にクロスカップリング反応が進行すること(96%)を見出した。ビナフトールを与える酸化カップリング反応において触媒的にクロスカップリング反応を行った例はこれまでになく、極めて興味深い結果である。また、立体制御に関しては、これまでに効果的な不斉酸化カップリング触媒として知られている種々のアミノ酸から調製した光学活性なオキソバナジウム(IV)錯体は、重合条件を適切に設計することにより、高収率でポリマーを与えるものの、立体選択性は上述の銅(1)-Phbox錯体に比べいずれも低く、2,3-ジヒドロキシナフタレンの不斉重合触媒としては有効ではなかった。これに対して、市販のオキソバナジウム(IV)塩と市販の光学活性配位子から容易に調製される新規な錯体が、高立体選択的(80%ee)に重合を進行させ、ポリマーを高収率で与えることを明らかにした。このような光学活性バナジウム錯体を用いた有機反応は、これまでに報告例はなく、新規な不斉触媒としても極めて興味深いものである。1,1'-ビ-2-ナフトールは、有機化学の分野において最も重要な不斉骨格の1つである。この特徴的な骨格に基づき、ビナフトール類は不斉合成反応触媒や光学分割などに幅広く応用されているばかりでなく、高分子中に導入することによる高次構造や機能制御などに関しても数多くの研究がなされてきている。したがって、その精密合成法の確立は極めて重要な研究課題である。2-ナフトール誘導体の酸化カップリング反応はその最も効果的な構築法の1つであるが、これまでホモカップリング反応にていては数多く報告されているものの、触媒的なクロスカップリング反応に関する研究例はほとんど知られていなかった。我々はこれまでに、市販の2,3-ジヒドロキシナフタレンをモノマーとした不斉酸化カップリング重合において、銅(I)-ビスオキサゾリン錯体が高い触媒活性を有し、ポリ(2,3-ジヒドロキシ-1,4-ナフチレン)を室温で定量的に与えることを見出している。この酸化カップリング反応としては新規な触媒系についてさらに詳細に検討を行なった結果、2-ナフトール誘導体と3-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸エステル類とのカップリング反応において極めて高いクロスカップリング選択性を示すことを見出し、その選択性は最高で99.7%に達した。さらにこの触媒系を用い、非対称型あるいは対称型の6,6'-ジヒドロキシ-2,2'-ビナフチル誘導体の不斉酸化カップリング重合を行なったところ、前者の単独重合では、クロスカップリングユニット比(Head-to-Tail構造)99%に達する、また後者の共重合反応では、同比(交互共重合構造)93%に達するポリマーが高選択的に得られた。すなわち、様々な構造を有するポリ(ビナフトール)誘導体を高選択的に構築することに成功した。
社会的文脈における数学的判断力の育成に関する総合的研究

本研究は,わが国の子どもに,「数学的論拠に基づいて,事象を分析,解釈し,意志決定する能力」である「数学的判断力」の育成することを目的としたものである。数学的判断プロセスを規定し,数学的判断力に関する実態調査を実施するとともに,数学的判断におけるプロセス能力の水準化や,そのプロセス能力と数学の内容・選択支援・社会的価値観・他者との相互作用の五つの軸によって構成される授業の枠組みを作成した。そして,小・中・高校で実験授業を実施し,その有効性について実証的に検討した。本研究の目的は,わが国の子どもに,社会的文脈における問題場面で数学を用いて意志決定する力を育成することを意図し,そのための教材並びに授業,その力を評価するための課題,教師向けワークショップ等に関する枠組みの構築とモデルの開発をし,その有効性について実証的に検討し,学校数学の改善に資する提言を行うことである。初年度である平成22年度は,第一に,認知心理学における「意志決定」研究を参照し,社会的文脈における問題場面で数学を用いて意志決定するプロセスを「数学的判断プロセス」として規定した。第二に,イングランドの,「プロセススキル」の育成を意図して作成された,デジタル数学教材"Bowland Maths."に注目し,詳細に分析するとともに,イングランドにおいてBowland Maths.ディレクターに対するインタビュー,それを用いた授業調査,並びに,教師や生徒へのインタビュー調査を実施した。また,日本において,研究協力者がその教材の一つを用いた実験授業を行った。このような教材は,わが国に例がなく,日本の算数・数学教育にとって有益な示唆が得られており,この成果の一部をwebページで公開した。第三に,日本の子どもの数学的判断に関する様相を明らかにするための調査を企画し,調査問題を開発した。そして,予備調査を行い,その結果をもとに調査問題を修正し,確定した。小学生,中学生,高校生,大学生に対する調査の実施とその結果の分析が次年度の課題となっている。本研究は,わが国の子どもに,社会的文脈における問題場面で数学を用いて意志決定する力である「数学的判断力」を育成することを意図し,そのための教材,授業,評価,並びに,教師教育に関する枠組みを構築し,それらの有効性について実証的に検討し,学校数学の改善に資する提言を行うことを目的としている。2年次である平成23年度は,第一に,昨年度実施した,数学的判断力に関わるイギリスの算数・数学教育プロジェクト"Bowland Maths."を,目標,教材,評価,教師教育の観点で分析し,論文にまとめた。この論文は,日本数学教育学会学会誌「数学教育」に掲載された。第二に,わが国の子どもの数学的判断力に関する様相を明らかにすることを意図し,小学校6年生,中学校3年生,高等学校2年生,大学生に対する調査を実施し,その結果の第一次分析を行い,学校段階による差の見られる問題とあまり見られない問題があることなどを明らかにした。第三に,昨年度明確化した数学的判断のプロセスをもとに,社会的文脈における問題解決を扱う,算数・数学の授業の枠組みを構築した。この成果の一部は,日本数学教育学会「論文発表会」において発表した。第四に,上述の"Bowland Maths."の関係者を招聰し,2校で4時間の研究授業および研究討議を行うとともに,講演会(一般公開)を実施し,数学的判断力の育成およびそれを育成するための教師教育に関する示唆を得た。本研究は,わが国の子どもに,社会的文脈における問題場面で数学を用いて意志決定する力である「数学的判断力」を育成することを意図し,そのための教材,授業,評価,並びに,教師教育に関する枠組みを構築し,それらの有効性について実証的に検証し,学校数学の改善に資する示唆を得ることを目的としている。最終年次である平成24年度は,主として,以下の4点を行った。第一に,昨年度実施した,小学校6年生,中学校3年生,高等学校2年生,大学生に対する数学的判断力に関する実態調査の結果を詳細に分析し,主たる実態として「基準を設けて適切に数値化する児童生徒が少ない」,「自ら仮定を設定して問題解決する児童生徒が少ない」,「複数の項目に着目して判断する児童生徒が少ない」ことを明らかにした。第二に,イギリスの数学教育改良プロジェクトBowland Maths.の教師教育プログラムを詳細に分析した。第三に,これまで検討してきた数学的判断のプロセスの実現を意図した教材の枠組みをもとに,算数・数学を用いて優劣や順位を付けたり,最適な状態を考えたりして判断をする,35の教材を開発した。第四に,数学的判断における「プロセス能力」の水準化を試みた上で実験授業を行い,その結果をもとにプロセス能力,数学の内容,選択支援,社会的価値観の四つの軸によって構成される「数学的判断に関する授業の枠組み」に「他者との相互作用」の軸を設ける必要性を明らかにした。その上で,小学校4,中学校6,高等学校1の実験授業を実施し,子どもの数学的判断の様相を分析し,授業の有効性について実証的に検討した。

これらの成果は「最終報告書」にまとめるとともに,日本数学教育学会「論文発表会」(11月10日,奈良教育大)において,2つの論文発表を行った。イングランドの算数・数学教育プロジェクトの分析およびその開発者らとの研究討議が順調に進み,本研究目的に対する多くの示唆が得られている。また,社会的文脈における問題解決を扱う,算数・数学の授業の枠組みを作成し,それに基づく実験授業が2校で実施できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。数学的判断力の実態調査の第2次分析を行い,学会等で発表する。また,実験授業を行い,子どもの学びの様相を質的に分析する。イングランドの算数・数学教育プロジェクト"Bowland Maths."と協働しながら,数学的判断力を育成するための教師教育の枠組みを構築する。
シスプラチン耐性癌に有効な新規白金複核錯体と核酸との結合様式に関する研究

(1)シスプラチンから誘導したジヒドロキソ架橋複核白金錯体とピラゾールを反応させて,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体を合成した.生成物の確認は,核磁気共鳴法,赤外吸収法スペクトル,質量スペクトル法,X線構造解析法を用いて行った.(2)複核白金錯体とグアノシン-5'ーリン酸,9-エチルグアニン(9EG),核酸との反応を経時的に高速液体クロマトグラフ(HPLC)法,核磁気共鳴法,円二色スペクトル法により測定し,反応速度論的に解析した.それらの結果をシスプラチンの場合と比較し,申請者の分子設計した白金錯体の核酸塩基に対する反応特性を明らかにした.(3)ピラゾール架橋白金二核錯体は,2分子の9EGに対して,白金の複核構造を維持したまま結合し,核酸塩基錯体を生成した.この結晶のX線構造解析を行い,分子内の2つの9EGがスタッキングしていることを認めた.(4)培養がん細胞に対する細胞毒性を検索した.その結果,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体が,シスプラチン耐性L1210細胞に対して強い増殖抑制効果を示すことを認めた.(5)最近の分子生物学的な研究の成果から、シスプラチン耐性癌細胞は、核酸の構造的な歪みを認識して白金を切り出す修復酵素を通常の癌細胞より多く有しているといわれている.(3)で述べたように複核錯体と9EGとの付加物において2分子の9EGがスタッキングしていることから、本複核錯体は核酸に対して局部的な構造の歪みを与えない可能性があり、そうであるなら本複核錯体による核酸の傷害は修復酵素系から認識されず、修復を逃れるためにシスプラチン耐性癌細胞に対して有効であるものと推論した.(6)以上の結果、本複核錯体は新しい世代の制癌剤を開発するためのリ-ド化合物となりうると考えられる.また本研究は白金錯体の構造-活性相関を考えるための重要な資料を提供すると考えられる.(1)シスプラチンから誘導したジヒドロキソ架橋複核白金錯体とピラゾールを反応させて,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体を合成した.生成物の確認は,核磁気共鳴法,赤外吸収法スペクトル,質量スペクトル法,X線構造解析法を用いて行った.(2)複核白金錯体とグアノシン-5'ーリン酸,9-エチルグアニン(9EG),核酸との反応を経時的に高速液体クロマトグラフ(HPLC)法,核磁気共鳴法,円二色スペクトル法により測定し,反応速度論的に解析した.それらの結果をシスプラチンの場合と比較し,申請者の分子設計した白金錯体の核酸塩基に対する反応特性を明らかにした.(3)ピラゾール架橋白金二核錯体は,2分子の9EGに対して,白金の複核構造を維持したまま結合し,核酸塩基錯体を生成した.この結晶のX線構造解析を行い,分子内の2つの9EGがスタッキングしていることを認めた.(4)培養がん細胞に対する細胞毒性を検索した.その結果,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体が,シスプラチン耐性L1210細胞に対して強い増殖抑制効果を示すことを認めた.(5)最近の分子生物学的な研究の成果から、シスプラチン耐性癌細胞は、核酸の構造的な歪みを認識して白金を切り出す修復酵素を通常の癌細胞より多く有しているといわれている.(3)で述べたように複核錯体と9EGとの付加物において2分子の9EGがスタッキングしていることから、本複核錯体は核酸に対して局部的な構造の歪みを与えない可能性があり、そうであるなら本複核錯体による核酸の傷害は修復酵素系から認識されず、修復を逃れるためにシスプラチン耐性癌細胞に対して有効であるものと推論した.(6)以上の結果、本複核錯体は新しい世代の制癌剤を開発するためのリ-ド化合物となりうると考えられる.また本研究は白金錯体の構造-活性相関を考えるための重要な資料を提供すると考えられる.(1)アミノ配位子を含む種類のジヒドロキソ架橋複核白金錯体と,ピラゾールおよびその誘導体とを反応させて,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体を合成した.生成物の確認は,核磁気共鳴法,赤外吸収スペクトル法,質量スペクトル法,X線構造解析法を用いて行った.(2)(1)で合成した複核錯体の培養がん細胞(L1210)に対する細胞毒性を検索した結果,これら化合物はシスプラチン耐性がん細胞の増殖を強く阻止することを認めた.(3)複核白金錯体とグアノシン-1ーリン酸との反応を経時的に高速液体クロマトグラフ(HPLC)法[装置は本年度設備費により購入]により測定し,反応速度論的に解析した.同様の実験を核磁気共鳴法によっても行い,申請者の分子設計した白金錯体が予想通り複核構造を維持したまま核酸塩基に結合することを明らかにした.(4)核酸塩基として9-エチルグアニン(ETG)を選び,複核白金錯体との反応物の構造をX線構造解析法により解析した.その結果,白金に結合した2分子のETGのスタッキング形勢を認め,複核錯体が核酸構造に大きな歪みを与えることなく結合し,Watson-Crick塩基対間の水素結合を弱めるものと推定した.

複核白金錯体は,核酸構造を大きく歪めることなく結合するため,シスプラチン耐性がん細胞が備える修復機構による監視システムから逃れ,修復を受ける程度が小さく,結果的にシスプラチン耐性がんに有効となるという作用機構を提案した[環太平洋国際化学会議にて発表,1995,12Honolulu].1.シスプラチンから誘導したジヒドロキソ架橋複核白金錯体とピラゾールとを反応させて,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体を合成した.生成物の確認は,核磁気共鳴法,赤外吸収スペクトル法,質量スペクトル法,X線構造解析を用いて行った.2.本複核白金錯体とグアノシン-5′ーリン酸,9-エチルグアニン(9EG),核酸との反応を経時的に高速液体クロマトグラフ法,核磁気共鳴法,円二色スペクトル法により測定し,反応速度論的に解析した.得た結果をシスプラチンの場合と比較し,本複核錯体の核酸塩基に対する反応特性を明らかにした。3.本二核錯体は,2分子の9EGに対して複核構造を維持したまま結合し核酸塩基錯体を生成した.この結晶のX線構造解析を行い,分子内の2つの9EGがスタッキングしていることを認めた.4.培養がん細胞に対する細胞毒性を検索し,ピラゾールおよび水酸化物イオンがそれぞれ1分子架橋した白金二核錯体が,シスプラチン耐性L1210細胞に対して強い増殖抑制効果を示すことを認めた.5.最近の分子生物学的な研究によれば,シスプラチン耐性癌細胞は,核酸の構造的な歪みを確認して白金を切り出す修復酵素を通常の癌細胞より多く有しているといわれている.3.で述べたように複核錯体と9EGとの付加物において2分子の9EGがスタッキングしていることから,本複核錯体は核酸に対して局部的な構造の歪みを与えない可能性があり,そうであるなら本複核錯体による核酸の傷害は修復酵素系から認識されず,修復を逃れることができる。本複核錯体がシスプラチン耐性癌細胞に対して有効である理由は本錯体の核酸に対する結合様式がシスプラチンのそれと大きく異なっているためであると考えられた.6.以上,本研究は新しい世代の白金制癌剤を開発するための重要な資料を提供すると考えられる.
半側空間無視におけるプリズム順応と注視パタン変化-改善機序とリハビリテーション-

視覚対象が10度右側にシフトして見えるプリズム眼鏡を,Rossettiら(1998)に準拠して作成し,半側空間無視に対するプリズム順応の効果を検討した.順応を成立するための動作は,健側の右上肢が届く位置の視標に向けての到達運動である.Rossettiらの原法は身体正面から左または右10度にある視標をランダムな順序で指さす.平成16年度の検討では,欧米の研究成果と同等の半側空間無視改善効果が得られなかったため,視標の位置と到達運動の回数を増やした順応方法も検討した.しかし,半側空間無視が重いと左側の視標を発見できない場合もあり,症例に適した順応方法を選択することが重要と考えられた.平成19年度までにプリズム順応を実施できた半側空間無視患者は14例であった.無視の改善がみられたのは5例であり,著効といえるBIT通常検査成績83点→127点(最高146点)が持続した1例を除き,改善程度もわずかにとどまった.プリズム順応の半側空間無視に対する効果は症例により大きく異なり,また,探索的課題と線分二等分のどちらが改善しやすいという一定の傾向もなかった。病巣については,後頭葉病巣では効果が少ないという報告もあるが,我々の検討で改善をみた1例の病巣は後頭葉にあった.他の改善例の病巣は,頭頂葉1例,側頭頭頂葉2例,被士出血1例と一定しない.本研究では,プリズム順応が有効な半側空間無視例の特徴を明らかにすることはできず,また,改善効果も限定されることが示された.しかし,重症度に応じて方法を工夫し,プリズム順応を成立させることができれば,半側空間無視改善のきっかけとなり得る。プリズム順応は,急性期から慢性期のいずれの時点でも,リハビリテーションの一環に取り入れる価値があると考えられた。視覚対象が10度右側にシフトして見えるプリズム眼鏡を,Rossettiら(1998)に準拠して作成した.本研究ではレンズをプラスチック製としたため,通常の眼鏡フレームのサイズで作成しても,眼鏡総重量を30グラムに抑えられた.プリズムの大型化によって周辺から入る視覚情報の影響が減少したため,ゴーグルタイプは不要と考えた.プリズム眼鏡をかけた状態では,身体正面から左方10度にある視標は正面に見えるが,それに指で到達するには10度左方への運動が必要となる.この状態で標的を右示指で素早く正確に指し示す動作を1クール50回行った.健常人はプリズム眼鏡をかけると違和感が強いが,半側空間無視(以下,無視)患者は不快感を訴えることなく1クールを達成できた.この後,正面の指標を指し示して左へ到達運動がずれることで順応の成立を確認した.対象とした4例の無視患者では1クールで十分な順応が得られた.3例にプリズム順応後の無視症状の改善がみられ,そのうち1例(症例SK)で改善が持続した.症例SKでは6ヶ月間,中重度の無視が続いていたが,1回のプリズム順応を実施した翌日からBIT行動性無視検査(BIT)の探索課題である3つの抹消試験成績が著しく改善し翌月まで持続した(線分抹消,文字抹消,星印抹消の合計得点:79→122点).一方,刺激呈示前の注視位置に依存しやすい線分二等分試験は順応直後に改善したが,翌日には順応前の成績に戻った.本例でみる限り,無視症状の改善は,刺激呈示前の注視位置が順応後に左方へシフトしたことよりも,左方への探索が繰り返し出現しやすくなったことによると考えられた.

検査によらず改善を示さなかった1例はBITで重度の無視を示していた.次年度は症例を増やして,改善する課題としない課題の検討,ならびに,重症度をはじめとする適応症例の選択基準などについて研究を進める.プリズム順応を半側空間無視患者に対して実施し,無視症状の改善と順応の方法・持続性との関係について検討した.これまで,プリズム眼鏡を装用して行う到達運動の標的は,身体正面の1か所としていた.順応の成立については,上肢が見えないように板で覆って視界からさえぎり,正面の視標の方向を指さすstraight ahead pointingで検討した.この場合,順応が成立していれば,正面を見てその方向を示す位置が,順応後に順応前よりも左方へ偏倚する.本年度にプリズム順応を実施した半側空間無視患者では,順応後の無視症状の改善効果が少ない例が多く,その場合にstraight ahead pointingでみた順応が不十分な例が多かった.すなわち,順応直後に指示方向の左方へのずれがみられても,10回程度の繰り返しで指示方向が次第に正面に戻る場合があった.この原因として,順応の強度が不十分なのではないかと考えた.そこで,液晶タブレット上に,身体正面,左または右5度,左または右10度の5通りの位置に,ランダムな順番で1か所ずつ標的を出して到達運動を行う方法を試みた.この方法を用いると,少なくとも健常人は,1点を指し示す到達運動よりも安定した順応効果の持続を示した.到達運動の回数も50回から80回に増加させたが,単調な繰り返しによる集中力低下を避けるため標的の色を変えながら呈示することにした.Rossettiらの原法(1999)では,正面から右または左10度の位置を指ささせており,欧米のこれまでの報告のほとんどがこの方法に従っている.Rossettiとの私信で,必ずしもこの方法が最良とは考えておらず,指し示す位置は多い方が強固な順応につながるだろうという意見をもらった.次年度は,我々の新しい順応方法を半側空間無視患者に適応し,順応を確認しながら無視症状の改善効果を検討する予定である.プリズム順応を半側空間無視患者に対して実施し,無視症状の改善と順応の方法との関係を検討した.昨年度から,プリズム順応を強化するため,液晶タブレット上に,身体正面,左または右5度,左または右10度の5通りの位置に,ランダムな順番で1か所ずっ標的を出して到達運動を行う方法を試みている.到達運動の回数も50回から80回に増加させたが,集中力低下を避けるため標的の色を変えながら呈示することにした.この方法を用いると,少なくとも健常人では安定した順応が得やすい.一方,半側空間無視患者では,重症度ならびに協力性の程度によって,5通りの位置の到達運動が可能な場合と原法による2通りの標的でないと到達運動ができない揚合とがあり,症例によって使い分ける必要が生じた.順応の直前,直後,2時間後に線分抹消試験,星印抹消試験,模写試験,線分二等分試験をすべて実施できた半側空間無視患者は,本年度は6例であった.無視の重症度別では,重度1例,中等度2例,軽度3例である.無視症状の改善は,中等度の1例のみに認められた(本例は,高齢で協力性がやや得にくかったため原法で順応を行った).改善は,線分二等分の右方偏位量の減少として現われ,2時間後にも効果が持続した.抹消試験では,既に時間をかけての代償的探索が可能となっており,最も左側の数個の見落としに変化はなかった.この例の病巣は右後頭葉にあり,Serinoら(2006)の後頭葉病巣ではプリズム順応の効果がないという報告とは相反する結果となった.
路面公共交通整備に伴う地域変遷の実証的研究

本研究は、路面電車等の路面公共交通の整備が、沿線地域の社会、経済等の活動に与える影響を、国内と国外の事例・データ収集、分析に基づき、実証的に明らかにしようとしたものである。具体的には、沿線土地利用、商業の発達、都市景観面への寄与、地方行政における社会的合意形成や社会的融合等への影響である。平成30年度には現地での治安問題等により延期していた欧州での現地調査を再開し、スペイン・アンダルシア地方のLRTの整備状況、整備課題について現地調査およびトラム担当部局にヒアリングを行い、平成29年度までのフランスとスペインでの事例調査に新たな知見を加えた。具体的には、フランスとは異なり、自治体の一般財源をベースとして行われているスペインでのトラム整備の成果と課題、アンダルシア州政府の主導下で行われたハエンやベレスマラガでの新規トラムの運行休止問題等について考察した。当初の研究の目的等に照らして本研究では十分な成果が上げられた。期間全体での概要を以下に示す。(1)国内路面電車沿線の土地利用、商業施設分布状況データをGISベースで分析し、路面電車が沿線土地利用や商業立地にどのような影響を与えたかを定量的に把握し、路面電車の有無が、商業発達に寄与していることを明らかにできた。(2)フランス、スペイン等数十都市の現地調査によるトラム関連施設(停留所、架線、軌道、付属施設等)について、都市景観の中にそれら施設のデザイン特性を位置づけ、歴史的経緯や周辺環境等との関連から分類して考察し、これらLRT特有のデザインが、歩行者空間の上質化(安全性、心地よさ、わかりやすさ、バリアフリー、美しさ、周遊性、都市のシンボル性等)に大きく寄与していることを定性的に明らかにした。(3)国外事例も含めて、路面電車新設における地方財政の役割、国内既存路面電車への公的支援の重要性を明らかにした。平成27年度の研究課題と課題毎に得られた成果の概要について述べる。(1)国内都市の路面電車の有無と沿線地域特性の分析......国内の中程度の人口規模(おおむね15万人100万人)を有する50都市程度を抽出して、路面電車の有無を外的基準としてモデル分析を行い、沿線地域特性を分析する。沿線土地利用等のミクロな分析を行うために、土地利用図、航空写真等から沿線土地利用データを収集した。収集されたデータに基づいてモデル分析を実施している所である。(2)沿線地域変遷と路面電車需要特性変化の分析......平成26年度10月に実施した阪堺電車利用客アンケート調査結果から、阪堺電車の利用状況、阪堺電車に対する広報の評価、および利用者属性(個人属性、居住地、トリップ目的等)を説明変数として集計分析、比率の有意性検定、数量化II類分析により、阪堺電車需要量の要因分析を行った。また沿線地域の商業開発との関連性について分析した。(3)フランス諸都市のデータ収集......フランスでLRTが開通した28都市(平成26年10月現在)と類似の都市規模で未整備の都市、合計40都市程度を選定した。公共交通整備の経過年数に応じた地域への波及効果の違い、また特に大きな交通整備を行わなかった都市と比較する、という観点からこのようなグループ分けを行っている。これらの都市について主要な都市データの収集を行った。また、フランスで3都市の現地ヒアリング調査を行い、開通前後の対比が可能な情報・データや、都市内の地区データや計画関連情報等を収集した。なお、参考として、スペインにおける事例も有用と考え、担当者ヒアリングも含めて現地調査を実施した。遅れの内容は2点ある。ひとつは、妥当なモデル分析結果が十分に得られていないこと、もうひとつはフランス都市関連データの収集が十分に進んでいないことである。モデル分析については、使用する指標の見直し(集計単位の見直しを含む)や妥当なモデルのパラメータ値が出るまでのトライアンドエラーの不十分さが挙げられる。トライアンドエラーを繰り返すことで、統計的にも妥当な結果を得た上で、モデル分析結果の解釈に入りたい。フランス都市関連データについては、当初見込みよりも一般に公表されている指標が少ないことが明確になった。わが国の指定統計のようにフランス全国一律の統計調査は少なく、また各市独自の調査は一般には公開されていないこともあり、収集に苦慮している。各都市担当者と直接コンタクトを取る、収集すべき指標を見直す等の対応を行う予定である。平成28年度の研究課題と課題毎に得られた成果の概要について述べる。(1)国内都市の路面電車の有無と沿線地域特性の分析......市町村レベルでの社会経済指標に基づく分析は完了しているが、引き続き路面電車沿線土地利用等のミクロな指標を取り込んだ分析を進めた。そのため、GISを用いて都市計画図等から土地利用状況等を取り込むツールを作成した。これを用いて、現在ミクロなデータを収集中である。これまでに、国内10都市の路面電車通過都市の土地利用データが収集できた。平成29年度中に追加して4都市程度の路面電車運行都市、10数都市程度の比較対照としての路面電車非通過都市の土地利用データを収集する。その後、統計分析に進む。(2)フランス諸都市のデータ収集・ヒアリング......フランスに加えてスペインについても調査を行うこととした。昨年度のフランス6都市、スペイン7都市での現地調査に引き続き、今年度も現地での追加調査を実施する予定であったが、ニースでのテロ事件等治安状況を鑑みて、一旦現地調査を延期して、平成29度に実施する。

平成28年度は、国内で収集できる統計データのみ収集している。特に、フランスLRT開通都市の都市圏交通計画(PDU)の収集と翻訳を重点に実施した。(3)路面公共交通整備と地位変遷の都市景観デザイン面での分析......地域変遷の一例として、都市景観にどのような影響を与えたかという観点から、路面公共交通施設を景観構成要素に分類して、その特徴や変遷について分析した。フランスやスペインの都市関連データおよび事業実施状況データの収集が十分に進んでいない。前年度報告でも述べたが、フランスやスペインでの都市データは、わが国の指定統計のように全国一律の統計調査は少なく、また各市独自の調査は一般には公開されていないこともあり、各都市担当者と直接コンタクトを取る必要があるが、平成28年度は当初予定していた現地調査・ヒアリングを実施しなかったために、データ収集が遅れた。平成29年度中に精力的に実施する予定である。本研究は、路面公共交通中でも路面電車の運行が、沿線地域の社会、経済等の活動にどのような影響を与えたかを実証的に明らかにしようとするものである。具体的には、沿線土地利用、商業の発達、都市景観面への寄与、地方行政における社会的合意形成や社会的融合等への影響である。平成29年度は主に以下の2点を実施した。1.路面電車沿線の土地利用、商業施設分布状況の実証的分析全国13の路面電車通過地方都市と社会的・経済的に同規模の16の県庁所在土地を対象として、路面電車・主要道路沿線の商業的土地利用の比較を行い、路面電車の有無が沿線商業的土地利用に影響を与えているかどうかについて考察した。また、その内、路面電車運行都市において、業種別商業立地状況について、道路、鉄道駅、地方鉄道沿線、路面電車沿線の立地環境要因別に分析した。いずれも、GISベースで分析し、路面電車が沿線土地利用や商業立地にどのような影響を与えたかを定量的に把握した。路面電車の有無が、商業発達に寄与していることを明らかにできた。2.都市景観構成要素としてのLRT施設のデザイン特性に関する分析これまで本科研での現地調査の中で収集してきたフランス、スペイン等数十都市のトラム関連施設(停留所、架線、軌道、付属施設等)について、都市景観の中にそれら施設のデザイン特性を位置づけ、歴史的経緯や周辺環境等との関連から分類して考察した。また、これらLRT特有のデザインが、歩行者空間の上質化(安全性、心地よさ、わかりやすさ、バリアフリー、美しさ、周遊性、都市のシンボル性等)に大きく寄与していることを定性的に明らかにした。2016、2017年度に、フランス、スペインで追加の現地調査や行政の交通計画担当者へのヒアリングを実施する予定であったが、治安上の問題から現地調査を延期した。その間、国内でできること(国内路面電車の影響分析および欧州トラムの既存収集データの分類、分析、考察)を実施した。科研調査期間を1年延長し、2019年度に遅れた分を回復する予定である。本研究は、路面電車等の路面公共交通の整備が、沿線地域の社会、経済等の活動に与える影響を、国内と国外の事例・データ収集、分析に基づき、実証的に明らかにしようとしたものである。
中世後期における北部九州と朝鮮

本年度の研究実績としては、まず先年までに発表・執筆を行った論文「中世日朝関係における後期受職人の性格」に修正・加筆し、『日本歴史』に投稿を行った。結果、掲載されることが決定した。また、先年に投稿を行った論文「中世後期における壱岐松浦党の朝鮮通交」が『九州史学』134号に掲載された。本年度は上記の執筆活動の他に、朝鮮前期における日本人通交者の犯罪と処罰に関する史料の集積・分析を行った。これにより、明らかにされていないいくつかの興味深い事例を指摘することができた。まず、使者として朝鮮へ来朝する通交者の犯罪に対して朝鮮は「日本人犯罪論決之法」を制定して対処していたことが明かとなった。また、朝鮮へ投降・居住した「向化倭人」と呼ばれる日本人に対しても、朝鮮国民と同様に法を適用して処罰していることが確認できた。日本人居留地「三浦」に居住する「三浦恒居倭人」に関しては、先行研究において、その検断権が朝鮮ではなく対馬宗氏に付託されていたことが明らかにされているが、これとは明らかに相違する状況が存在していたことになる。さらに、成宗期における倭冠と三浦恒居倭人に関する取り締まりを通して、朝鮮と対馬との関係が明確に転換していく状況を明らかにすることができた。具体的には処罰の要請とその実行を通した友好的な関係が、対馬から逃亡した中国人の告発により、対馬の詐欺行為の露呈、朝鮮側の不信感の増大へと進み、最終的に日本人(特に三浦恒居倭人)に対する朝鮮の態度硬化、その反動たる三浦の乱へと結びつくと結論づけた。この研究については、研究会等において口頭発表を行い、多くの貴重な意見を聞くことができた。これにより、研究の主題をより意義深いものに位置づけることができ、さらに発展・深化させる足掛かりとすることができた。
骨髄細胞におけるアンジオテンシン受容体機能の動脈硬化性病変形性への関与

1)骨髄局所におけるアンジオテンシンII(Ang II)-Ang II type 1受容体(AT1R)系の、動脈硬化病変形成への影響を解明する。骨髄移植によりApoE欠損マウスの骨髄をGFP陽性ApoE欠損マウスまたはGFP陽性AT1R・ApoEダブルノックアウトマウスのものに置換し、これらの二系統の骨髄移植モデルマウスにAng IIを投与し動脈硬化病変形性形成の程度を比較することで、骨髄におけるAng II-AT1R系の作用を検討した。結果は血管系にAT1Rを有するマウスでも骨髄のAT1Rを欠損させるとAng II投与による動脈硬化の促進が抑制された。さらに動脈硬化病変への骨髄由来細胞の動員は、AT1R陽性細胞に多く見られた。これらの結果は、従来の血管壁に存在するAng II-AT1R系だけでなく、骨髄細胞に存在するAng II-AT1R系も、動脈硬化病変形成に関わることを示す結果である。2)AT1R陽性骨髄細胞とAT1R欠損骨髄細胞の性状の差異の検討上記の結果から、AT1Rの有無により末梢血中の骨髄由来細胞(白血球)の性状に差があることが考えられたため、FACSを用いて、その性状を検討した。その結果、白血球の総数に差は無かったが、動脈硬化にかかわりの深いMac-1陽性細胞は、有意にAT1R陽性骨髄細胞に多く存在した。すなわち、骨髄に存在するAng II-AT1R体系は単球やマクロファージ系の細胞の分化に関与することで、動脈硬化病変の形成に関与することが考えられた。(1)アンジオテンシンII (Ang II)-Ang II type1受容体(ATIR)系ブロックの動脈硬化病変形成に対する影響(1)薬物によるATIR遮断;ApoE欠損マウスにATIR拮抗薬を投与することで、大動脈における動脈硬化病変の形成が抑制された。さらに大動脈起始におけるプラークの安定化が見られた。(2)ATIR・ApoEのダブルノックアウトマウスの作成;ApoE欠損マウスとATIR欠損マウスのクロスブリードから、ATIR・ApoEのダブルノックアウトマウスを作成した。このマウスは通常のApoE欠損マウスと比較し、大動脈の動脈硬化病変の形成が抑制されていただけではなく、大動脈起始におけるプラークの安定化が見られた。以上よりApoE欠損マウスにおける動脈硬化病変形成にAng II-ATIR系の関与が強く示された。(2)動脈硬化病変における骨髄由来細胞の役割の特定骨髄をGFP陽性マウスの骨髄で置換したApoE欠損マウスにAng IIを投与することで、動脈硬化病変の形成が促進され、プラークが不安定化されることを確認した。さらに病変部位への骨髄細胞の動員が促進されることを見出した。これらの骨髄由来細胞は局所でMMP9やMCP1を発現していたことから、骨髄由来細胞が病変部位において、その増大や不安定化に関与することが示唆された。(3)骨髄局所におけるAng II-ATIR系の、動脈硬化病変形成への影響を解明する。骨髄移植によりAT1R・ApoEのダブルノックアウトマウスの骨髄をApoE欠損マウスまたはAT1R・ApoEのダブルノックアウトマウスのものに置換し、これらの二系統の骨髄移植モデルマウスにAng IIを投与し動脈硬化病変形性形成の程度を比較することで、骨髄におけるAng II-AT1R系の作用を検討した。結果は血管系にAT1Rが無いマウスでも骨髄にAT1R存在するとAng II投与により、動脈硬化病変の形成が促進された。現在論文第一報目を準備中である。
夛波長高速計測によるフラクトルミネッセンスの緩和励起状態に関する研究

本研究は,力学的エネルギーの付加によって励起される発光中心の形成過程,緩和励起状態について新たな知見を得ることを目的として遂行された.これまで得られた主な結果は以下のようなものである.(1)固体材料の塑性変形過程や破断の際に観測される発光(フラクトルミネッセンス)は観測時の雰囲気の影響を強く受ける.すなわち,発光は低真空化(約130Pa)で最も強く,高真空(10^<-4>Pa)や常圧下(1atm)ではほとんど観測できなかった.(2)雰囲気ガスが空気やArである場合に比べてNeの場合に最も強い発光が観測された.(3)New雰囲気下における発光のエネルギースペクトルはNew放電管の示すスペクトルに一致する.固体の破断に伴う発光は10100マイクロ秒と短いため,発光スペクトルの観測はマルチアノード光電子増倍管を利用することによって正確なデータが得られた.(4)破断時の発光の場合と同じエネルギースペクトルが塑性変形中の発光についても観測された.(5)固体表面にAu電極を蒸着し,塑性変形中に固体表面において電荷の移動が発生していること,つまり,表面帯電ができることを確認できた.以上の結果より,固体の破壊時および塑性変形中に観測される発光は固体の変形に伴う転移の移動によって形成される表面電荷の蓄積に起因する放電現象であることが明らかとなった.すなわち,塑性変形に伴う固体表面に生ずるミクロな新生面における帯電がその起因をなすと考えられる.従って,この発光における緩和励起状態は固体表面における雰囲気ガスの励起状態であると云える.平成12年度における研究計画は主に雰囲気を変えて測定できるフラクトルミネッセンス装置とマルチアノード光電子増倍管による発光パルスの測定装置の作製およびその評価であるが,計画に従って行った研究の成果は以下の通りである.(1)ロータリーおよびターボ分子ポンプから成る排気系を構成することによって試料室の気圧は10^510^<-4>Paの間でコントロールでき,また,適当な気体(Ne,Arなど)を導入してルミネッセンスを観測できる装置を完成した.(2)マルチアノード光電子増倍管(16ch)からの出力信号は増幅回路(増幅度:10^3,周波数帯域:100kHzのものを16個作製),A/D変換ボードを通し,パソコンで処理した.(3)作製した測定システムの動作チェックは標準信号発生器を用いて行い,また,性能評価は直接フラクトルミネッセンスの観測によって行った.作成した装置の出力と高速オッシロスコープによる波形との比較を行った結果,両者は良く一致し実験に使用可能であることが分かった.作製した装置を用いることによってこれまでに次のことが明らかになった.観測対象試料として,代表的なイオン結晶であるKCl:Ca(0.1mol%仕込濃度)を用い,3点曲げの方法によって試料が破断する際の発光を観測した.・イオン結晶のフラクトルミネッセンスは破壊雰囲気の影響を強く受けること.・空気の場合,10Pa10^3Paの間で発光が観測され,10^2Pa付近で最も強い発光が見られること.・Neを導入すると発光スペクトルにおけるピークは600nm付近にあって,その発光強度が空気とか,Arを導入した場合に比べて数倍増大すること.本研究は,力学的エネルギーの付加によって励起される発光中心の形成過程,緩和励起状態について新たな知見を得ることを目的として遂行された.これまで得られた主な結果は以下のようなものである.(1)固体材料の塑性変形過程や破断の際に観測される発光(フラクトルミネッセンス)は観測時の雰囲気の影響を強く受ける.すなわち,発光は低真空化(約130Pa)で最も強く,高真空(10^<-4>Pa)や常圧下(1atm)ではほとんど観測できなかった.(2)雰囲気ガスが空気やArである場合に比べてNeの場合に最も強い発光が観測された.(3)New雰囲気下における発光のエネルギースペクトルはNew放電管の示すスペクトルに一致する.固体の破断に伴う発光は10100マイクロ秒と短いため,発光スペクトルの観測はマルチアノード光電子増倍管を利用することによって正確なデータが得られた.(4)破断時の発光の場合と同じエネルギースペクトルが塑性変形中の発光についても観測された.(5)固体表面にAu電極を蒸着し,塑性変形中に固体表面において電荷の移動が発生していること,つまり,表面帯電ができることを確認できた.以上の結果より,固体の破壊時および塑性変形中に観測される発光は固体の変形に伴う転移の移動によって形成される表面電荷の蓄積に起因する放電現象であることが明らかとなった.すなわち,塑性変形に伴う固体表面に生ずるミクロな新生面における帯電がその起因をなすと考えられる.従って,この発光における緩和励起状態は固体表面における雰囲気ガスの励起状態であると云える.
miRNAデリバリーを利用したシェーグレン症候群に対する新たな治療法の探索

最終年度においては、当初計画していたNFS/sldミュータントマウスを使用予定であったが、作成手技の煩雑さの観点から使用マウスを変更し、シェーグレン症候群(SS)自然発症モデルであるIQIマウス(ヒトSS末期病変と類似したB細胞浸潤が顕著な唾液腺炎病変を形成する(SaegusaとKubota, JVMS, 1997))とした。IQIマウスについて、コントロール群であるICRマウスと比較検討したところ、IQIマウスでは生後4か月から顕著な唾液腺炎病変が観察された。生後12か月のIQIマウスの唾液腺組織を使用し、SSに関与すると考えられるmiRNAを東レの3D-Gene miRNAを使用し網羅的に解析、同定した。その結果、コントロール群に対してmiRNA146a-5pとmiRNA146b-5pの2つがIQIマウスの唾液腺において有意に上昇していた。miRNA146は内因性の免疫、炎症性サイトカインの産生、免疫細胞の増殖などに関わっており(Pauley et al., Eur. J. Immunol. 2011. 41: 2029-2039)、この機能がIQIマウスのシェーグレン症候群様症状で観察される唾液腺炎に関連する可能性が示唆された。これまでmiRNAの発現を制御する手法によって様々な疾患に対する治療法が実践されていることから、本研究で同定されたIQIマウスにおけるmiRNA-146a-5pとmiRNA146b-5pを利用し、新たなシェーグレン症候群の治療法や診断マーカーへとつながる可能性が考えられる。また本研究で使用したIQIマウスがシェーグレン症候群のモデルマウスとして新たなmiRNA同定の検討に使用できることも示唆した。本研究は、シェーグレン症候群(SS)に対する核酸デリバリーシステムを利用した新しい治療法の開発を目的とている。SSは涙腺・唾液腺などの外分泌器官を主な標的臓器として炎症細胞の浸潤が起こり、慢性の炎症や分泌量の低下、乾燥症状を引き起こす全身性の難治性自己免疫疾患であり、他の自己免疫疾患と比べても有効な治療は確立されておらず、対症療法に留まっているのが現状である。そこで本研究では、近年盛んに研究がなされている核酸医薬とドラックデリバリーに着目した。低分子医薬品にかわるシーズとして核酸医薬の研究が盛んになされているが、その中でもmiRNAなどのRNA干渉を応用した技術は疾患の原因となる遺伝子を特異的かつ直接的に攻撃できることから、次世代の医薬品候補としての期待が大きい。そこで今回私達は、以下の2点について検討を行った。(1)原発性SS特異的モデルマウスを作成し、SSに特異的なmiRNAを網羅的に解析、同定する(2)同定されたmiRNAをデリバリーシステムにより障害部へ導入し、その効果を多角的に解析する今年度は(1)について重点的に検討を行った。当初計画していた研究実施内容においてはNFS/sldミュータントマウスを使用予定であったが、作成手技の煩雑さの観点から使用マウスを変更し、SS自然発症モデルであるIQIマウス(ヒトSS末期病変と類似したB細胞浸潤が顕著な唾液腺炎病変を形成する(SaegusaとKubota, JVMS, 1997))とした。現在、生後12か月のIQIマウスを使用し、SSに関与すると考えられるmiRNAを網羅的に解析、同定している状況である。当初計画していた研究実施内容は舌下腺粘液細胞に分化異常をきたすNFS/sldミュータントマウスに生後3日目の胸腺摘出を施すことにより,原発性SSモデルマウスを作成することを目標としていた。しかしながら摘出手技の正確性を向上させるためには多くの時間が必要なこと、および摘出後のフローサイトメトリー手技の煩雑さの観点から使用マウスを変更し、SS自然発症モデルであるIQIマウス(ヒトSS末期病変と類似したB細胞浸潤が顕著な唾液腺炎病変を形成する)とした。現在、生後12か月のIQIマウスを使用し、SSに関与すると考えられるmiRNAを網羅的に解析、同定している状況であるが、当初の予定では今年度中に有意なmiRNAを同定している予定であったため、進捗はやや遅れている状況である。

miRNA146は内因性の免疫、炎症性サイトカインの産生、免疫細胞の増殖などに関わっており(Pauley et al., Eur. J. Immunol. 2011. 41: 2029-2039)、この機能がIQIマウスのシェーグレン症候群様症状で観察される唾液腺炎に関連する可能性が示唆された。これまでmiRNAの発現を制御する手法によって様々な疾患に対する治療法が実践されていることから、本研究で同定されたIQIマウスにおけるmiRNA-146a-5pとmiRNA146b-5pを利用し、新たなシェーグレン症候群の治療法や診断マーカーへとつながる可能性が考えられる。また本研究で使用したIQIマウスがシェーグレン症候群のモデルマウスとして新たなmiRNA同定の検討に使用できることも示唆した。当初計画していた研究実施内容はNFS/sldミュータントマウスから原発性SSモデルマウスを作成することを目標としていた。しかしながら摘出手技の正確性を向上させるためには多くの時間が必要なこと、および摘出後のフローサイトメトリー手技の煩雑さの観点から使用マウスを変更し、SS自然発症モデルであるIQIマウスとした。今年度中にNFS/sldミュータントマウスから有意なmiRNAを同定し、それらの解析へと進んでいる予定であったため次年度の使用額が生じてしまった。翌年度分では当該助成金も使用し、当初から計画していた研究実施内容に沿って助成金の使用を進めていく予定である。