hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
関節リウマチにおけるエクソソームの病態への関与の解明

関節リウマチ(RA)はわが国において70万人以上が罹患している原因不明の自己免疫疾患である。主に中・壮年層に罹患し関節痛・関節変形によるADL・QOLの低下は、経済的損失とも相俟って医学的にも社会的にも重要な疾患である。近年の生物学的製剤による治療法は従来の治療法に比べ優れているが、無効例や効果減弱例が見られることや医療費が高価なことが問題となっている。われわれはラットアジュバンド関節炎モデルを用いてmiR-124前駆体を右踵関節局所に投与した。その結果、全身の関節炎や骨破壊を抑制することを見出した。しかし、右踵関節局所投与にもかかわらず全身の関節炎や骨破壊を抑制した機序は不明である。エクソソームは蛋白やマイクロRNAを内包する細胞間コミュニケーション物質である。RAでは滑膜細胞や免疫細胞から分泌されるエクソソームには向炎症性物質が多く、異なる細胞に取り込まれRAの病態を促進することが報告されている。本研究はmiR-124を高発現させたRA滑膜細胞などから分泌されるエクソソーム中の蛋白質やマイクロRNA及び分泌されるエクソソーム数を解析することにより、エクソソームのRAの病態における役割を明らかにし、RAの新たな治療法の開発を目的としている。平成30年度はRA滑膜細胞株、RA滑膜細胞や変形性関節症(OA)滑膜細胞にmiR-124mimicをトランスフェクションし分泌されるエクソソーム数を種々の方法で検討した。その結果、RA滑膜細胞株ではmiR-124を高発現することによりエクソソームの分泌は抑制されたがRA滑膜細胞やOA滑膜細胞では変化は見られなかった。平成30年度までの実験計画はmiR-124を高発現した滑膜細胞や炎症細胞とmiR-124低発現細胞の滑膜細胞や炎症細胞から分泌されるエクソソームの数やエクソソームに内包するマイクロRNAや蛋白の変化を検討することであった。昨年度はエクソソーム数を正確に計測するため、測定する方法をナノ粒子マルチアナライザー法やPS captureELISA法など種々の方法を検討した。PS captureELISA法は当初の予定より発売が遅れたため計画より遅れた。RA滑膜細胞およびRA患者より単球を分離しM1マクロファージに誘導した細胞およびこれらの細胞にmiR-124を導入した細胞、変形関節症(OA)滑膜細胞および健常者からの単球を分離しM1マクロファージに誘導した細胞から分泌されるエクソソームを抽出し、エクソソームに内包する蛋白質やマイクロRNAのプロファイリングなどを行う。これらより、miR-124によるエクソソームの分泌数および内包蛋白質や内包マイクロRNAの違いを明らかにし、診断候補の蛋白質・マイクロRNAの選定やエクソソームの蛋白質およびマイクロRNAの内包および分泌に影響を及ぼす蛋白質を選定する。検証のために各細胞10例ずつについてそれぞれmiR-124導入および非導入細胞について検討する。次にmiR-124が直接的に選定蛋白質に作用するか否かを検討するため、選定蛋白質をコードするmRNAの3'非翻訳領域をルシシェラーゼベクターに挿入し、ルシフェラーゼアッセイを行い検討する。選定蛋白質についてエクソソームの分泌や蛋白質の内包に機能しているかを確認するためにsiRNAで選定蛋白質の発現をノックダウンして確認する。次にラットアジュバンド関節炎モデルで関節炎ラット、miR-124関節局所投与関節炎ラットについて血漿中のエクソソームを抽出し、選定蛋白質や選定マイクロRNAを測定して検証する。または活動性の高いRA患者および健常者血より上記の方法によりエクソソームを抽出し、エクソソーム中の選定蛋白質や選定マイクロRNAの検証を行う。最後にRA滑膜細胞およびRAマクロファージにmiR-124を導入した細胞から抽出したエクソソームをマウスコラーゲン誘導関節炎(CIA)モデルに投与し、関節炎が抑制されるか否かを検討する。

その結果、RA滑膜細胞株ではmiR-124を高発現することによりエクソソームの分泌は抑制されたがRA滑膜細胞やOA滑膜細胞では変化は見られなかった。平成30年度までの実験計画はmiR-124を高発現した滑膜細胞や炎症細胞とmiR-124低発現細胞の滑膜細胞や炎症細胞から分泌されるエクソソームの数やエクソソームに内包するマイクロRNAや蛋白の変化を検討することであった。昨年度はエクソソーム数を正確に計測するため、測定する方法をナノ粒子マルチアナライザー法やPS captureELISA法など種々の方法を検討した。PS captureELISA法は当初の予定より発売が遅れたため計画より遅れた。RA滑膜細胞およびRA患者より単球を分離しM1マクロファージに誘導した細胞およびこれらの細胞にmiR-124を導入した細胞、変形関節症(OA)滑膜細胞および健常者からの単球を分離しM1マクロファージに誘導した細胞から分泌されるエクソソームを抽出し、エクソソームに内包する蛋白質やマイクロRNAのプロファイリングなどを行う。これらより、miR-124によるエクソソームの分泌数および内包蛋白質や内包マイクロRNAの違いを明らかにし、診断候補の蛋白質・マイクロRNAの選定やエクソソームの蛋白質およびマイクロRNAの内包および分泌に影響を及ぼす蛋白質を選定する。検証のために各細胞10例ずつについてそれぞれmiR-124導入および非導入細胞について検討する。次にmiR-124が直接的に選定蛋白質に作用するか否かを検討するため、選定蛋白質をコードするmRNAの3'非翻訳領域をルシシェラーゼベクターに挿入し、ルシフェラーゼアッセイを行い検討する。選定蛋白質についてエクソソームの分泌や蛋白質の内包に機能しているかを確認するためにsiRNAで選定蛋白質の発現をノックダウンして確認する。次にラットアジュバンド関節炎モデルで関節炎ラット、miR-124関節局所投与関節炎ラットについて血漿中のエクソソームを抽出し、選定蛋白質や選定マイクロRNAを測定して検証する。または活動性の高いRA患者および健常者血より上記の方法によりエクソソームを抽出し、エクソソーム中の選定蛋白質や選定マイクロRNAの検証を行う。最後にRA滑膜細胞およびRAマクロファージにmiR-124を導入した細胞から抽出したエクソソームをマウスコラーゲン誘導関節炎(CIA)モデルに投与し、関節炎が抑制されるか否かを検討する。当初の計画より遅れているため繰越額が生じた。miR-124によるRA滑膜細胞や炎症細胞から分泌されるエクソソームの数や内包する蛋白やmiRNAを測定するために使用する。その後、同定した蛋白やmiRNAがRAの病態にどのように関与しているかを検討するために試薬代に主に使用する。設備は本大学の設備を最大に利用し、旅費、成果発表、印刷費、通信費、翻訳・校閲、専門的知識・技術の提供、論文別刷は最低限に抑え、実験動物費、試薬等の消耗品にあてる。
パピローマウイルスの口腔癌における病因的意義の分子生物学的解析

口腔癌の発生におけるヒトパピローマウイルス(HPV)の病因的意義の解析を行ない次のような研究成果を得た。パピロースウイルス共通抗原に対する抗体を用いて免疫組織化学的検索を553例について行なったところ乳頭腫の73例中の2例(2.8%)、白板症の155例中の1例(0.6%)に陽性所見を得たが、扁平上皮癌181例、乳頭状増殖56例、疣贅状癌6例、異型上皮5例、過角化症15例、扁平苔癬7例、エプリース27例、正常上皮10例などはいずれも陰性であった。これは用いた抗体がウイルスのL遺伝子蛋白に対するものなので、組込まれたものやコピー数の少ないものでは認識できていない可能性が残されている。光学顕微鏡の所見ではコイロサイトーシスが子宮頚部粘膜上皮ではHPVの感染に特異的にみられるとされている。口腔病変について乳頭腫23例、白板症241例、扁平上皮癌310例について検討したが、コイロサイトーシスは免疫組織化学的にウイルス粒子のない所にもみられ、口腔粘膜上皮ではHPVの感染に起因する特異的な所見とは考えられなかった。Southern Hybridizationを29例について行なった。症例は口腔扁平上皮癌22例、白板症1例、疣贅状増殖1例、多形性腺腫3例、粘表皮腫1例、悪性黒色腫1例である。外科手術や剖検材料からDNAを採取してHPV6、11、16、18をプローブとして検索を行なった。舌癌の1剖検例で原発巣は放射線治療で治癒したが、全身転移で死亡した症例で、転移巣は皮膚、喉頭、副腎について調べ、皮膚転移巣で陽性であった。制限酵素による切断後のバンドのパターンから定型的なHPV16でなく、新しいタイプのHPVと考えられ、クローニングを行なったが、採取出来たDNA量が少なかった為残念ながらクローニングには成功しなかった。何故皮膚転移巣のみにみられたか検討中である。口腔扁平上皮癌由来の6細胞株についても同様のプローブで検索したが、いずれの株とも陰性であった。
ヒューマノイドロボットにおける高機能作業動作プランナと視覚機能の統合

本研究の目的は,人間のように目を持って二本脚で歩くことができるヒューマノイドロボットにおいて,視覚機能よる環境計測に基づいて適切な行動計画を生成するアルゴリズムとシステム構成法に関して理論と実験の両面から行うことである.視覚機能には,両眼ステレオ視によりで三次元情報を獲得できるシステムを実現し,環境の静的な状態の知覚だけでなく,物体操作の物体認識と注視処理,および,歩行時における視野全体の運動に対する自己運動と環境物体運動の知覚機能の実現を特徴とする.行動プランニング機能には,ロボットがおかれている状況の認識に基づいて,目標となる環境状態を判断し,自己の行動計画を立案する機能と,物体操作中,歩行移動中の環境変化に対して生成行動の修正を行う仕組みを導入に新規性を持つ.(1)物体操作行動のための環境知識のモデリング法の開発:ヒューマノイドの身体サイズ,構造などの記述するモデリングシステムに対し,物体形状に加え,把持対象点,操作対象店の知識記述を導入することで物体操作行動プランニングを簡潔な記述で実現可能になった(2)人間の物体操作動作の観察:人間と動作物体のモデルベースな視覚認識を用いて動作記述を獲得し,これをプランナが動作計画する際の初期値とすることで,人間に近い自然な動作のプランニングが可能になった.(3)歩行移動のための歩容計画と物体操作のための腕の運動軌道の生成:視覚による環境記述モデルに基づいて移動のための行動計画と物体操作のための動作軌道生成を行った.本度は,視覚処理システムについて,シミュレーション環境と,実画像の両面から環境認識処理を行うシステムの実現を行った1.実験用両眼視覚システムの実現両眼の同期をとりながら画像を取得し,これらの画像を用いてステレオ視が行えるシステムを構成し,両眼立体視と平面空間検出機能に基づいた三次元空間形状と,三次元方向ベクトル計算に基づいた運動情報を得るためのアルゴリズムとソフトウェアの実装を行った.2.実験用日常環境空間の三次元環境モデル構築ロボットの実験環境となる日常環境空間として台所を取り上げ,これの三次元幾何形状モデルを構築した.またこのモデルの内部情報として棚や扉などを24個の可動物体として定義し,さらにこれらの可動物体に対する操作知識として16個の把持可能点の記述行った.3.階層的タスクネットワーク(HTN)の開発行動レベルのプランナと動作レベルのプランナを統合する手法として階層的タスクネットワーク(HTN)を開発した.このネットワークは与えられた上位の行動タスクをプリミティブ動作の集合として表現できるまで分割するものであり,プリミティブ動作は動作レベルプランナを用いて自律的に生成する.4.三次元環境モデル生成用プログラムの実現視覚システムからの情報に基づいて環境の簡易モデリングを行った.床面検出機能を用いてロボットの移動可能領域と障害物の存在知覚を行い,自己の移動経路をその計測モデルから行うシステムを構築した.本研究の目的は,人間のように目を持って二本脚で歩くことができるヒューマノイドロボットにおいて,視覚機能よる環境計測に基づいて適切な行動計画を生成するアルゴリズムとシステム構成法に関して理論と実験の両面から行うことである.視覚機能には,両眼ステレオ視によりで三次元情報を獲得できるシステムを実現し,環境の静的な状態の知覚だけでなく,物体操作の物体認識と注視処理,および,歩行時における視野全体の運動に対する自己運動と環境物体運動の知覚機能の実現を特徴とする.行動プランニング機能には,ロボットがおかれている状況の認識に基づいて,目標となる環境状態を判断し,自己の行動計画を立案する機能と,物体操作中,歩行移動中の環境変化に対して生成行動の修正を行う仕組みを導入に新規性を持つ.(1)物体操作行動のための環境知識のモデリング法の開発:ヒューマノイドの身体サイズ,構造などの記述するモデリングシステムに対し,物体形状に加え,把持対象点,操作対象店の知識記述を導入することで物体操作行動プランニングを簡潔な記述で実現可能になった(2)人間の物体操作動作の観察:人間と動作物体のモデルベースな視覚認識を用いて動作記述を獲得し,これをプランナが動作計画する際の初期値とすることで,人間に近い自然な動作のプランニングが可能になった.(3)歩行移動のための歩容計画と物体操作のための腕の運動軌道の生成:視覚による環境記述モデルに基づいて移動のための行動計画と物体操作のための動作軌道生成を行った.
塩基配列からみたレトロウイルス遺伝子の分子進化学的研究

宿主DNAから取り込まれた年数の記録が明確で,その塩基配列が宿主細胞由来のがん遺伝子と比較可能な9組のウイルス由来のがん遺伝子(v-abl, v-fos(FBJ), v-fos(FBR), v-mos, v-myb, v-myb-E, v-myc, v-rel, v-src)について塩基置換速度を推定した.その結果,どのウイルス由来のがん遺伝子も,塩基置換速度は年当りサイト当り10-3のオーダーであった.これで,対応する宿主細胞のがん遺伝子の塩基置換速度の約100万倍になることが確認された.また,同義置換速度と非同義置換速度を比較したところ,宿主細胞由来のがん遺伝子もウイルス由来のがん遺伝子も,ともに同義置換速度が非同義置換速度よりかなり高いことがわかった.これは,がん遺伝子に何らかの機能的制約が働いていることを示唆する.また,世界各地から単離されたAIDSウイルスのうち,塩基配列データがわかっているものを収集し,統計的に比較した.その比較から塩基置換数を推定して, AIDSウイルスの分子系統樹を作成した.その結果, AIDSウイルスは,大きく「HIV-1グループ」と「HIV-2グループ」に分類されることがわかった.前者のグループは,中央アフリカ・ザイールや北アメリカ及びハイチを中心として流行しているAIDSウイルスであり,後者は西アフリカ・セネガルで採取された新型AIDSウイルスやアカゲザルのAIDSウイルス(SIV-MAC)が含まれる.これらの知見は,「レトロウイルスの起源と進化」を解明する上で,非常に重要であると考えられる.宿主DNAから取り込まれた年数の記録が明確で,その塩基配列が宿主細胞由来のがん遺伝子と比較可能な9組のウイルス由来のがん遺伝子(v-abl, v-fos(FBJ), v-fos(FBR), v-mos, v-myb, v-myb-E, v-myc, v-rel, v-src)について塩基置換速度を推定した.その結果,どのウイルス由来のがん遺伝子も,塩基置換速度は年当りサイト当り10-3のオーダーであった.これで,対応する宿主細胞のがん遺伝子の塩基置換速度の約100万倍になることが確認された.また,同義置換速度と非同義置換速度を比較したところ,宿主細胞由来のがん遺伝子もウイルス由来のがん遺伝子も,ともに同義置換速度が非同義置換速度よりかなり高いことがわかった.これは,がん遺伝子に何らかの機能的制約が働いていることを示唆する.また,世界各地から単離されたAIDSウイルスのうち,塩基配列データがわかっているものを収集し,統計的に比較した.その比較から塩基置換数を推定して, AIDSウイルスの分子系統樹を作成した.その結果, AIDSウイルスは,大きく「HIV-1グループ」と「HIV-2グループ」に分類されることがわかった.前者のグループは,中央アフリカ・ザイールや北アメリカ及びハイチを中心として流行しているAIDSウイルスであり,後者は西アフリカ・セネガルで採取された新型AIDSウイルスやアカゲザルのAIDSウイルス(SIV-MAC)が含まれる.これらの知見は,「レトロウイルスの起源と進化」を解明する上で,非常に重要であると考えられる.
紫外発光シンチレータとMSGCによる高分解能PET用新規検出器の開発

安価かつ高位置分解能なリアルタイムγ線検出器の実現に向けた基礎研究として、本研究では放射線をシンチレータで光へ、その光を光電材料によって電子へと変換し、その電子をマイクロストリップガス比例計数管(MSGC)にて測定するというプロセスの実験的検証を行った。紫外光を電子へ変換する物質としてCsIをシンチレータに塗布した紫外発光フッ化物シンチレータを用い、シンチレータ上に放射線源を配置して測定を行った結果、有意な信号が観察できた。ガス比例計数管は高い位置分解能1mmを切る高い位置分解能、リアルタイム計測性、シングルフォトンカウンティング能などを有する優れた検出器である。放射線を気体の電離作用を利用して検出するが、一般的には高エネルギーX線が入射した場合、気体の密度の低さのために検出効率が低下する。そこで本研究では、放射線の捕捉は固体で密度の高いシンチレータにより行い、信号の取得はガス比例計数管の一種であるMSGCを用いることによって、高位置分解能でシングルフォトンカウンティングに対応可能なリアルタイムガンマ線検出器の実現に向けた研究を行うことを目的とした。平成20年度は放射線をシンチレータで光へ、その光を光電材料によって電子へと変換しマイクロストリップガス比例計数管(MSGC)にて測定するというプロセスの最適化を目指し、測定システムの設計および構築を行った。さらにシンチレータ、光電材料の文献調査や研究者への聞き取り調査を行い、材料の組み合わせの最適化を目指した。その結果、シンチレータに関してはLaF3やBaF2などのフッ化物系材料を用い、光電材料は主として量子効率の面からCsIを用いることとした。量子効率を勘案して発生したシンチレーション光をシンチレータの裏側で電子に変換する透過型の配置とすることとした。また、CsIの化学的安定性、結晶相などを考慮しながらCsIを100nm以下の厚さで基板温度100°Cでの加熱蒸着により塗布した試料の製作までを行った。また、別途MSGCを利用したパルスカウンティングシステムの構築を行った。ガス比例計数管は高い位置分解能1mmを切る高い位置分解能、リアルタイム計測性、シングルフォトンカウンティング能などを有する優れた検出器であり、既に広く使用されている。この検出器は放射線を気体の電離作用を利用して検出するが、一般的には高エネルギーX線が入射した場合、気体の密度の低さのために検出効率が低下する。そこで本研究では、放射線の補捉は固体で密度の高いシンチレータにより行い、信号の取得はガス比例計数管の一種であるマイクロストリップガス検出器(MSGC)を用いることによって、従来の同様のタイプの検出システムに比べ、高位置分解能なリアルタイムガンマ線検出器の実現に向けた研究を行うことを目的とした。本研究では放射線をシンチレータで光へ、その光を光電材料によって電子へと変換しマイクロストリップガス比例計数管(MSGC)にて側定するというプロセスの実験的検証を目指し、紫外光を電子へ変換する物質としてCsIをシンチレータに真空蒸着したBaF2、Nd : LuLiF4などの紫外発光シンチレータを用いて、放射線の検出試験を実施した。シンチレータに数十百nmの厚さのCsIを塗布した面の下にMSGCを配置し、シンチレータ上にAm-241の線源を配置した。計数ガスにはAr+CH4の混合ガス用い、ガスフローの状態で試験を実施した結果、CsI塗布面の下に放出された電子を吸収させるためのアルミフォイルの有無で有意な信号の変化が観察された。この結果、考案した方式による放射線検出の基本的な成立性が実証された。今後、本件検出方式による位置分解能の評価などを行う必要がある。
ルテニウム-パラジウム二核錯体を用いた高活性Heck反応触媒の開発と機構解明

溝呂木-ヘック反応は有用な炭素-炭素結合形成反応の1つであり、関連するStilleカップリングや鈴木-宮浦カップリング等と共に医薬・天然物合成などにも利用される実用性の高い反応の1つである。本研究では、申請者が既に合成に成功しているルテニウムとパラジウムの2つの金属を同一分子内に持つ二核錯体(以下、二核錯体)が溝呂木-ヘック反応活性を示すとの知見を元に、反応条件の最適化や基質適用範囲の探索、反応メカニズムの解明、二核錯体の化学修飾による活性向上を目指している。二核錯体は触媒に使用するには充分な溶解度があるものの、中間体合成を行うための錯体化学を行うには溶解度が低いことがわかったため、溶解度の改善を目指してルテニウム周りに用いているターピリジン配位子に種々の置換基を導入した。その結果、導入した置換基に応じて溶解度を改善することに成功した。また、ターピリジン以外のホスフィン配位子を持つ類似の錯体の合成にも成功した。二核錯体の架橋配位子の部分構造となるビピリジンやピリジルピラゾレートなどの二座配位子を合成し、各種パラジウム錯体を合成した。溝呂木-ヘック反応活性について検討したところ、いずれも活性を示したが、中でもピラゾレートを有する配位子では高い活性を示した。また、ビピリジンを配位子とする系で、中間体の1つに対応する0価パラジウム錯体を合成して、活性を比較したところ、元の触媒の活性を再現したため、反応サイクルにおいて0価を経由している可能性があることが示された。二核錯体を用いた溝呂木-ヘック反応について、その基質適用範囲を検討したところ、ヨードベンゼン類とアクリル酸エステルとのカップリングは置換基の種類に関わらず良好な反応性を示したが、ブロモベンゼン類やクロロベンゼン類については、それぞれ低活性あるいはほとんど活性を示さないことがわかった。一方、反応条件を最適化したところ、温度・溶媒・塩基・添加物などの選択によりヨードアニソールとアクリル酸エステルを基質とした場合に、23時間で2000万回の反応が完結することを見出した。(TON=2000万、TOF=240/秒)二核錯体に含まれるルテニウムおよびパラジウム金属周りの構造を部分的に模した単核の部分構造錯体を別途合成し、これら単独あるいは2つの単核錯体を混合した場合には溝呂木-ヘック反応活性を示さないかあるいは遥かに低い活性しか示さないことがわかった。さらに水銀滴あるいはチオフェンを阻害剤として用いた予備的な不均一テストの結果からは、二核錯体は反応系中でも錯体構造を保った均一系触媒として機能している可能性が高いことが示されている。そのため、見出された高活性は二核錯体構造に由来するものではないかと考えており、現在反応中間体の単離および別途合成に取り組んでいる。
細胞性免疫低下患者における感染症とサイトカイン産生の関係

CD4T細胞の減少を認めるidiopathic CD4T lymphocytopenia(ICL)及び様々なウイルス感染患者の末梢血リンパ球(PBMC)を採取し、CD4T細胞以外のリンパ球のphenotype、及び産生するサイトカインについて検討した。1.PBMCを抗CD3抗体にて刺激することにより産生されるサイトカインを、フローサイトメトリーやELISAを用いて測定した。これらの患者では著明なCD4T細胞の減少に反比例して、γδT細胞、NK細胞の増加を認めた。増加しているこれらの細胞の多くは、早期活性化のマーカーであるCD69を発現していた。これらの細胞の機能を検討したところ、IFN-γ、TNF-αを極めて速やかに産生することがわかった。2.正常人との比較において、γδT細胞のCD69発現、サイトカイン産生の経時的変化を検討したところ、CD4T細胞の減少している患者では、CD69発現、IFN-γ、TNF-α産生ともに亢進していることがわかった。3.一般にγδT細胞のうちでもPBMCにおいて主体を占めるのはVγ9/Vδ2細胞であるが、これらの患者で増加しているγδT細胞においても同様にVγ9/Vδ2細胞が主体をなしていた。4.正常人ではγδT細胞の多くがCD4^-8^-であるのに対し、これらのCD4T細胞が減少している患者ではγδT細胞の多くがCD8ααを発現していた。5.PBMC中のγδT細胞とCD4T細胞の頻度を経時的に検討してみると、CD4T細胞の減少に反比例してγδT細胞の増加が認められた。CD4^+T細胞の著明な減少の認められるidiopathic CD4lymphocytopenia(ICL)の患者より末梢血リンパ球(PBMC)を採取し、その産生するサイトカインのパターンをフローサイトメトリーやELISAなどを用いて検討した。1.PBMCを抗CD3抗体にて刺激することにより産生されるサイトカインを、細胞内サイトカイン染色や、培養上清中のサイトカインレベルの測定などにより検討した。両者の測定においてICL患者のPBMCからのIFN-γ,IL-2産生は、対照に比べ明らかに低値であったが、IL-4,IL-10の産生に関しては、明らかな差違は認めなかった。CD8^+T細胞におけるIFN-γ産生細胞の割合は,ICL患者と対照では有意な差を認めなかったが、CD4^+T細胞のIL-2産生に関しては、対照と比べ著明な低下が認められた。CD4^+T細胞によるT_H2サイトカイン産生に関しては、ICL患者群と対照では有意な差は認めなかった。それに対してCD8^+の産生するT_H2型のサイトカイン(Tc2)ではICL患者群で、むしろ高い傾向が認められた。2.これらの患者にDNCBを繰り返し塗布することにより、免疫反応の回復がある程度認められるが、これと平行してサイトカイン産生パターンにも変化が認められるかを検討し、ICL患者にDNCBを繰り返し塗布することにより、T_H1,Tc1型サイトカインの産生に関して増強が認められた。DNCB塗布の回数が増加するに従い、ICL患者のT_H2、Tc2型サイトカインの産生は対照の値に近づく傾向が認められた。
複合糖質コンドロイチンを介した新しい細胞質分裂制御機構の解明

複合糖質コンドロイチンは細胞質分裂制御に関与している。モデル生物線虫(C. elegans)を用いてコンドロイチンと関連する分子群の生体内機能解析を行い複数の新しい知見を得た。1)コンドロイチンプロテオグリカンによる線虫卵殻と浸透圧障壁形成の機構が明らかとなった。2)更に、コンドロイチンは線虫の卵成熟過程で減数分裂の制御にも関与していた。3)また、コンドロイチンは卵黄蛋白質であるvitellogeninの卵細胞への取込みに必要であった。以上のことから細胞表層のコンドロイチンを介した新たな細胞分裂制御と分子輸送機構が示された。本研究は、コンドロイチン及びコンドロイチンプロテオグリカンの細胞分裂などに関する新しい生体内機能を、モデル生物線虫を用いて解明することが目的である。平成20年度の研究で以下の重要な知見を得た。線虫のコンドロイチンプロテオグリカンであるCPG-1, CPG-2(chondroitin proteoglycan)の蛍光融合蛋白質を発現するトランスジェニック線虫を作成し、三次元タイムラプス顕微鏡で受精から胚発生の様子を観察する実験法を確立した。観察の結果、これらのコンドロイチンプロテオグリカンが卵成熟時に卵細胞の細胞質に蓄積され、granuleの成分として大量に合成、蓄積され、受精後細胞外に移行することで、胚細胞の受精をきっかけとして細胞外に放出されることを確認した。特にCPG-2はcortical浸透圧耐性等に働く線虫の卵殻形成に関与していた。更に、コンドロイチン合成に関する酵素やCPG-1, CPG-2の欠失が線虫生体に及ぼす影響を詳細に観察したところ、生殖巣の卵母細胞にも異常が生じていることが明らかとなった。線虫では通常減数分裂時の卵細胞は受精まで細胞の分裂を停止し休止状態(meiosis-I)に留まるが、コンドロイチン関連因子の異常が生じると受精を待たずに有糸分裂を開始してしまい、高度に多核化する場合があった(endomitotic phenotype)。これは、今まで他の研究グループが指摘していた線虫胚細胞の浸透圧による分裂異常とは明らかに異なる、新しい複合糖質による細胞分裂制御機構を示唆している。また本研究では、平行してコンドロイチン合成酵素や、CPG-1, CPG-2それぞれの欠失型変異体株を得、それらを用いた蛋白質発現変動プロテオーム解析を行っており、これまでに、コンドロイチン関連因子の異常によって線虫卵黄蛋白質等の発現が大きく変動する事が確認されている。本研究は、モデル生物C.elegansの複合糖質コンドロイチンによる細胞質分裂制御機構の解明を目指している。今回の研究では主にChPGコア蛋白質のcpg-1並びにcpg-2 (cpg ; Chondroitin ProteoGlycan)に焦点をあて解析を行った。cpg-1, cpg-2遺伝子はそれぞれの単独機能阻害ではそれほど重篤な表現型を示さないが、共に機能阻害を行うことで線虫初期胚の細胞質分裂異常を引き起こす。cpg-1,cpg-2の発現解析を行ったところ、共に線虫生殖巣に多く存在していた。更にこれらのChPGは卵形成時細胞質に蓄積され、授精直後小胞輸送により細胞外に放出されることで、卵殻と浸透圧に対する障壁の形成を行うことが明らかとなった。cpg-1,cpg-2それぞれの欠失型変異体と野生型線虫の二次元電気泳動(2D-DIGE法)による蛋白質発現変動比較とnanoLC/MS/MSによる同定を行ったところ、両変異体で卵黄蛋白質vitellogeninの発現が大きく減小していた。抗コンドロイチン抗体を用いた免疫沈降法でも、ChPGと相互作用する分子としてvitellogeninが同定され、コンドロイチンとの関与が強く示唆された。vitellogeninは線虫成体の腸で合成され、特殊な小胞輸送により卵成熟の過程で卵に蓄積される分子である。cpg-1,cpg-2欠失型変異体の詳細な表現型解析を行うと、低い遺伝浸透度ではあるが卵細胞が小さく、また卵母細胞が第一減数分裂で停止せずそのまま有糸分裂を繰り返すemo (EndoMitotic Oocytes)表現型を示すものが観察された。細胞膜表面のChPGが異常になるとvitellogeninの取込みが適切に行われず卵成熟に異常を来す。更にemo表現型から、ChPGコア蛋白質の欠矢により、通常はMSP (Major Sperm Protein,精子由来ホルモン様物質)とそのレセプターへの結合により厳密に制御されている卵母細胞の減数分裂期停止機構が働かなくなる事実が明らかとなった。これらの結果は、細胞表層の複合糖質コンドロイチンが、配偶子形成や細胞分裂のタイミング決定に関与する分子機構を示す新しい知見である。
成長に伴う制御性T細胞の機能発達とその異常に関する研究

本研究では、ヒトの制御性T細胞の先天的欠損症(IPEX)の病態解明を通じてその機能発達を明らかにすることを目的とした。フローサイトメトリーを用いた簡易診断法を開発し、我国におけるIPEXの発掘に努め、新たな症例を同定した。IPEX患者、骨移植例、保因者、新生児、健康成人を対象とした検討から、IPEXの責任遺伝子産物FOXP3がヒトの制御性T細胞の発達・分化に果たす役割の一端を明らかにできた。本研究の主題である成長に伴うヒトの制御性T細胞の機能発達とその異常について研究を進め、以下の結果を得た。3)最近、ヒトの制御性T細胞が非制御性T細胞に比べIL-7R(CD127)発現が微弱もしくは欠損していることが知られている。すでに診断のついたIPEX症例を対象に、IL-7R(CD127)発現とFOXP3発現との関係を検討した。興味あることに、IPEX症例のうち臨床的に軽症な例でFOXP3発現が欠損しているにも関わらず、正常に似て末梢血中にCD4^+CD25^+CD127^<dim/->T細胞を検出した。重要なことにこの患者CD4^+CD25^+CD127^<dim/->T細胞は機能的には正常に比べ弱いものの制御性T細胞としての抑制活性を呈することを観察している。症例を追加し解析を進行中である。1)全国より依頼のあったIPEX疑い症例を積極的に解析し、我国におけるIPEX症例の発掘に努め、新規のFOXP3遺伝子変異を有するIPEX一例を診断した。蓄積した5家系でのFOXP3遺伝子変異と臨床像の特徴につき検討し、genotypeとphenotypeの間にある程度の関係を観察している。2)ヒトの制御性T細胞が非制御性T細胞に比べIL-7R(CD127)発現が微弱であることが知られている。興味あることに、IPEX症例のうちFOXP3発現が欠損しているにも関わらず、3例で正常に似て末梢血中にCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞が存在することが観察された。機能的解析を進めこれら患者は機能的には正常に比べ弱いものの制御性T細胞としての抑制活性を有することを明らかにした。3)一部のIPEXにFOXP3を発現しないCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞が観察されたことから、制御性T細胞の分化にはFOXP3分子が必ずしも必須でなく最終的機能の発現に重要であることが示唆された。そのことを検証するために、保因者ではX染色体のランダムな不活化を反映して、FOXP3を発現するCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞に加えて、FOXP3を発現しないCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞が存在する可能性が推測され、保因者であることを遺伝的に確認している2例の母親でCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞におけるFOXP3発現様式を検討した。興味あることに、いずれの例においてもFOXP3陽性と陰性のCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞からなる2峰性パターンを得た。4)ヒトでは制御性T細胞にはナイーブ形質とメモリー形質の2種類存在する。これらをCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞におけるCD45RA発現で分別し、FOXP3発現様式を検討すると、前者でFOXP3発現が微弱で後者でより強く発現していることを観察した。この実もまた制御性T細胞におけるFOXP3発現の役割を暗示させるものである。今後は、両者の機能的違い(抑制能、免疫グロブリン産生への影響、遊走能等)について検討する予定である。1)ヒトの制御性T細胞の遺伝的異常症のIPEXのスクリーニングとして5カラーフローサイトメトリー法を開発、我国のIPEXの発掘に努め、比較的軽症なIPEXを新たに診断した。フローサイトメトリー法によるスクリーニングは、IPEXの臨床的多様性を明らかにする意味で有用であることを検証した。2)制御性T細胞は非制御性T細胞に比べIL-7R(CDI27)発現が弱い。IPEX症例を対象に、CDI27発現とFOXP3発現との関係を検討した。IPEXでは制御性T細胞が欠損とされるが、FOXP3発現が欠損・微弱にも関わらず、一部の症例でCD4^+CD25^+CD127^<dim>

T細胞が存在し、機能的に弱いながらも明らかに抑制活性を有し、制御性T細胞の前駆細胞である可能性を提唱した。4)制御性T細胞にはナイーブ形質とメモリー形質の2種類存在する。これらをCD4^+CD25^+CD127^<dim>T細胞におけるCD45RA発現で分別し、FOXP3発と抑制活性について比較検討した。ナイーブ制御性T細胞はメモリー制御性T細胞に比べFOXP3発現及び抑制活性が弱いことを確認した。この事実もまた制御性T細胞の機能発現にFOXP3が重要であることが支持した。
乳用子牛への木材クラフトパルプ給与によるルーメンアシドーシス制御効果の検証

本研究課題は、離乳移行期の乳用子牛に給与するスターターの一部を木材クラフトパルプ(KP)に置き換えて、ルーメン発酵、代謝内分泌機能、および成長への影響を検討し、KPの飼料素材としての有効性を明らかにする。離乳移行期はスターターを多給することから、成牛と同様に亜急性ルーメンアシドーシス(SARA)が発生する。離乳移行期からのSARAは下部消化管でのアシドーシスを誘発する可能性も高いため、生体機能への影響が危惧されている。KPは木材チップからリグニンを除去した素材であることから、セルロースが主成分である。KPをスターターの一部と置き換えることにより、エネルギー水準を落とさずに繊維給与割合を高められため、SARAの発生とルーメン内エンドトキシン(LPS)による炎症カスケードの抑制につながる。ホルスタイン種子牛20頭(雌10頭、雄10頭)を用いた。試験期間は3週齢から10週齢までの7週間とした。供試牛(体重57.8±1.0kg)は試験開始時に対照区、またはKP区(各区、雌5頭、雄5頭)へ無作為に配置した。KP区のスターターは、対照区と同品の10%をKPで置き換えた。哺乳は全乳を用い、給与上限を9L/日として1日あたり体重の11%量(朝5%、夕6%)を給与した。6週齢で哺乳量を2L/日に減らし、7週齢で離乳した。スターター(CP 21 %、TDN 84%)およびカットチモシー(CP 8.1%、NDF 63.5%)は、週齢にあわせて食べ切れる量を給与した。体重は週1回計測し、日増体重(DG)を算出した。第一胃液は10週齢の11:00に経口採取した。血液は3、4、6、7、8、および10週齢時の飼料給与前に頚静脈から採取した。試験期間における子牛のDGは、KP区が対照区を10-15%ほど上回った(p<0.05)。また、胃液LPS活性レベルはKP区が対照区に比べて半減(p<0.05)した。子牛の出生に合わせて試験を開始するため、現在もI次(通常哺乳)試験を継続中である。供試頭数は、当初の計画通りで進捗している。血液と胃液の一部サンプルについては、アッセイ間変動を避けるために、1次試験終了後に分析を実施する。KP飼料の給与によって糞スコアも低く推移していることから、当初の仮説であるKPの効果は発現していると考えられる。通常哺乳の試験を今夏で終了し、分析に移行する。また。今秋からは2次(高栄養哺乳)試験を開始する。高栄養哺乳の試験では、哺乳ロボット管理におけるサンプリングも予定している。また。

今秋からは2次(高栄養哺乳)試験を開始する。高栄養哺乳の試験では、哺乳ロボット管理におけるサンプリングも予定している。動物実験が継続中なので、当該年度は分析に必要な試薬および資材の購入が無かった。これらの物品は動物試験のI次試験が終了する来年度に購入予定である。
陽性荷電含有ヘパラン硫酸糖鎖ドメインの細胞増殖・分化・アポトーシスにおける役割

陽性荷電含有ヘパラン硫酸糖鎖GlcA-GlcNH3+(JM403抗原)はヒト小腸増殖帯細胞の細胞質に顆粒状に発現し、癌ではその発現は生物学的悪性度と相関する。そこで増殖期にある癌細胞株や胎児(げっ歯類)組織を用いその特徴的発現パターンを調べた。その結果JM403抗原の顆粒状発現は、増殖期にあっても椎間板や神経細胞の細胞質にはほとんど認められず上皮系細胞に特徴的に認められたことから上皮系細胞の分化・増殖に密接に関与していると推定された。我々は陽性荷電をもつヘパラン硫酸(HS)糖鎖GlcA-GlcNH_3^+(JM403抗原)が、細胞の増殖・分化・アポトーシスに応じその発現パターを変える事、その細胞質内発現は、癌の悪性度と相関する可能性が高い事を見出した。本研究目的はこの糖鎖の機能解明を行うと共に、この糖鎖発現が新たな癌バイオマーカーと成りうるかを追及する事である。1 HS糖鎖の細胞増殖、分化及びアポトーシスにおける機能解析白血病細胞株K562細胞を、フローサイトメトリーで調べるとJM403抗原発現はほとんど見られないが、ダウノマイシンを用いてアポトーシスを誘導すると発現上昇がみられた。この時HS糖鎖合成関連酵素群の遺伝子発現を調べたところ、EXT-1とGlcNH_3^+の合成への関与が示唆されているNDST-3の発現増加が見られた。現在細胞の種類を増やし普遍性を追及すると共に候補遺伝子群についてはRNAiを行い糖鎖発現への影響を解析している。また細胞内における本糖鎖発現については乳癌組織を用いて共焦点レーザー顕微鏡で詳細に観察した。この糖鎖は確かに細胞質に顆粒状に存在するが核には存在しない事が判明した。現在電子顕微鏡にてさらにその局在部位を解明中である。2癌の新規バイオマーカーとしての臨床的意義の解明既存の増殖能指標であるKi67抗原との発現様式を詳細に比較検討した。JM403抗原はKi67抗原と共存している細胞も見られるが、細胞によってはどちらか一つの抗原のみ存在する細胞も少なからず認められた。この事からJM403抗原の細胞質内発現率はKi67ラベリングインデックスとは相関するが両者の発現は必ずしも同一の意義を持つものでないと考えられた。現在、JM403抗原の持つ独自の意味合いを、乳癌に大腸癌、膵癌を加えて検討している。我々は陽性荷電をもつヘパラン硫酸(HS)糖鎖GlcA-GlcNH3+ (JM403抗原)が、細胞の増殖・分化・アポトーシスに応じその発現パターンを変える事、その細胞質内発現は、癌の悪性度と相関する可能性が高い事を見出し、その糖鎖発現機構、細胞内局在様式、臨床的意義につき研究している。1.JM403抗原の発現機構一昨年度の研究から、HS糖鎖遺伝子の中からJM403抗原発現に影響を与える遺伝子としてEXT1及びNDST3が候補として挙げられたが、さらに研究を進めたところNDST3は細胞種によっては糖鎖発現にあまり影響しないものも見つかったため、最も普遍的に影響を及ぼしているものはEXT1である可能性が判明してきている。また、これまでJM403糖鎖発現は特異抗体を用いフローサイトメトリー法で検討してきたが、より定量的に測定できるよう、新たにHPLCを用い検討を行った。その結果細胞増殖期にあるJM403糖鎖抗原相当ピークはコンフルエント期のそれよりHS組成比で二倍以上変化することが判明してきている。2.JM403糖鎖抗原細胞内局在乳癌臨床検体を用いJM403抗原の細胞質内局在を電子顕微鏡を用い免疫組織化学的に調べた。その結果JM403抗原は意外にことにゴルジ装置ではなく小胞体に存在する可能性が示唆された。癌細胞はゴルジ装置の発達が悪いことが知られているので本結果はそのことを反映しているのではないかと考察している。3.臨床的意義膵癌を中心に検討した。乳癌に見られたように臨床的に悪性度の高いものについてはJM403抗原の細胞質内発現が高まる傾向がみられている。癌幹細胞マーカーとの関連ではカドヘリンの発現と逆相関する傾向がみられている。陽性荷電を持つ特異なヘパラン硫酸JM403抗原発現は細胞増殖・分化・アポトーシスと密接に関連しているのではないかと考え研究した。i)JM403抗原の細胞内局在の再検討:ヒト乳癌細胞、ラット小腸上皮細胞を用い、JM403抗原の細胞内局在につき電子顕微鏡を用い免疫組織化学的に再検討した。その結果、双方とも局在はゴルジ装置と判明した。ii)JM403抗原の胎児期・創傷治癒過程期における細胞内顆粒状発現

胎児のげっ歯類を用いJM403抗原発現を免疫組織化学的に検討した。腎臓では、JM403抗原の顆粒状発現は尿細管や糸球体原基の上皮と思われる細胞に発現し、一部はKi67抗原発現と一致した。肝臓では、Ki67抗原が血球系、間質系、肝細胞系の細胞を問わず発現するのに対し、JM403抗原は肝細胞系と思われる細胞の細胞質にのみ発現した。胃では、Ki67抗原が主に基底膜上の細胞に発現するのに対し、JM403抗原は更にその数層上層の、より分化したと思われる細胞にまで発現した。興味深いことに椎間板(線維輪)や神経系組織にでは、Ki67抗原発現細胞には、JM403抗原の顆粒状発現は観察されず、Jむしろ、通常ヘパラン糖鎖発現で見られる細胞外マトリックスに認められた。また、成獣皮膚創傷治癒モデルを用いJM403抗原発現を調べた。表皮ではJM403抗原は細胞質に顆粒状に発現し、一部はKi67抗原発現と一致した。一方同じ創傷治癒過程にありながら真皮側の線維芽細胞では、Ki67抗原発現細胞が多数認められるにも関わらずこのJM403の特異的な発現は、ほとんど見られなかった。以上、げっ歯類を用いた胎児と皮膚創傷治癒モデルの実験からJM403抗原の細胞内顆粒状発現は、増殖・分化過程にある上皮系の細胞に特有の現象であると考えられた。この成果は第32回日本糖質学会で発表予定である。細胞増殖、分化、アポトーシスに伴う、JM403糖鎖抗原発現の変化は、細胞種により異なる可能性が生じてきており、評価系としてどのような細胞をモデルとして用いるのがよいか、検討する必要が生じている。また、意外にもこの糖鎖が癌細胞においては小胞体に存在することが示唆されている。この結果、やや進捗が遅れ気味ではあるが、このことはJM403糖鎖発現の生物学的意義にヒントを与えるものであるとも言え、その遅れは大きなものではないと考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。基本的に研究推進方策に変更はない。ただ、JM403の糖鎖発現様式が細胞増殖、分化、アポトーシスに関係し変動するに際し、細胞や組織で各々特徴があることが判明しつつある。このことは当初の計画ではあまり考慮されていなかった点であるため、この点に留意して進めていく。発育過程にある胎児マウスを用いてJM403抗原発現の研究が進められている。
近代朝鮮文学における日本との関連様相

朝鮮近代文学者達の日本体験に関する資料を収集し、また収集した資料にもとずく論文を各メンバーが執筆して、以下のような資料集および論文集を刊行した。1.平成7年度資料集「『満鮮日報』文学関係記事索引(1939.12-1942.10)」2.平成8年度資料集「朝鮮文学関係日本語文献目録(1882.4-1945.8)3.平成9年度資料付論文集「近代朝鮮文学における日本との関連様相」論文集の目次は以下の通り。(1)二つの朝鮮語訳「經国美談」について(2)金東仁の文学に見る日本との関連様相-「女人」について(3)田栄澤論-植民地期作品と監督教(4)廉想渉の長編小説に見える日本-1930年前後の作品を中心に(5)金斗鎔と在日朝鮮人文化論(6)「写真版尹東柱自筆詩稿全集」の編纂刊行作業をめぐって資料集作成と論文執筆の過程、を通して各メンバーは自己の分担である作家や作品に多様な角度と方向論をもってアプローチし、研究目的である<近代朝鮮文学における日本との関連様相>を各自の立場で考察した。その結果明らかになったことは、作家あるいは時期によって様相はさまざまに異なるものの、近代における日本との出会いが朝鮮文学に無視しえぬほど大きな痕跡を残したと言うことである。これはある程度予想された結論とも言えようが、本共同研究によって具体的な資料をともなった実証的な研究成果として明らかになったことには大きな意義がある。今後は作家・作品の対象範囲をさらに広げ、また時期によって同一作家の関連様相にどのような変化が見られるかなど、アプローチの方法も多角化しつつ、本共同研究を継続していく予定である。朝鮮の近代文学にあらわれた日本との関連様相をできるかぎり具体的な資料により多様な角度から明らかにすることで最終的には日本の近代化そのものの様相を逆照射したいという遠大な目的をもつ本研究において、初年度にあたる今年度は、基本的な資料の発掘収集の段階であったということができる。最終年度には論文集を刊行する予定であるが、とりあえず今年度は11月に研究代表者の大村益夫と共同研究者李相範による「『満鮮日報』文学関係記事索引(1939,12,1942,10)」を刊行した。7月の打ち合わせ会議では各自の分担を確認してそれぞれの具体的な研究予定を発表した。その予定にしたがって各分担者は自己の領域の資料発掘と収集につとめ、12月の打ち合わせ会議で成果を報告した。予想されたことではあるが対象とする時代が戦前であるため資料の発掘はむずかしいという報告が多かったが、同時に、それだからこそ現時点でこのような作業がなされねばならぬという、本研究の意義も再確認された。来年度は今年度にひきつづいて資料収集につとめながら、その整理と最終的な論文執筆の準備にはいることになる。また資料整理の一環として今年度と同様資料集(「京城日報」の文学関係資料)を刊行する予定である。朝鮮の近代文学にあらわれた日本との関連様相をできるかぎり具体的な資料によって多様な角度から明らかにすることを目的とする本共同研究において、2年目に入った今年度は、昨年度おこなった資料発掘収集を継続しつつその整理を開始し、最終年度である来年度に予定されている論文執筆にそなえた段階ということができる。12月に行われた打ち合わせ会では、各自がそれまでの資料調査結果をもちよって、来年度執筆予定の論文についての中間発表をおこなった。

まず藤石から金斗鎔の在学時代の学校資料の紹介と、現在までにまとめた作家および作品年譜の提示があり、つぎに芹川が田栄沢の学籍簿と成績表を紹介して、最近韓国で刊行された同作家の全集の年譜が未整備であることを指摘した。つづいて波田野が、藤島武二に私淑したという金東仁の経歴には疑問点が残るが両者の絵画論に共通する要素があることを述べ、白川は廉想渉の長編小説にみえる日本について、いくつかの作品を具体的に分析した結果を発表した。最後に大村から尹東柱の詩草稿と蔵書リストの紹介、および草稿と既刊詩集との差違の指摘がなされた。一見各自の研究のもちよりのようであっても、こうして複数の作家と作品を同時に扱うことによって、個別的な研究ではあらわれにくい日本と朝鮮との関連様相が見えてくるのではないかという、本共同研究の目的と意義が再確認された。来年度は7月に最終的に論文の進抄状況および問題点を話し合う会をもち、年度内に論文集を刊行する予定である。なお本研究の一環として研究代表者の大村は、昨年度、研究協力者の季相範とともに「『満鮮日報』文学関係記事索引」を作成刊行したが、今年度は布袋敏博の協力をえて「朝鮮文学関係日本語文献目録-1882.41945.8-」を作成刊行した。1.今年度は本共同研究の最終年度なので、メンバーおよび研究協力者がこれまでの研究成果をふまえて自己の分担に関する報告論文を執筆して論文集を出した。目次は以下の通りである。(1)二つの朝鮮語訳「經国美談」について(2)金東仁の文学に見る日本との関連様相ー「女人」について(3)田栄澤論ー植民地期作品と基督教(4)廉想渉の長編小説に見える日本ー1930年前後の作品を中心に(5)金斗鎔と在日朝鮮人文化論(6)「写真版尹東柱自筆詩稿全集」の編纂刊行作業をめぐって2.各メンバーが多様な角度から自己の分担である作家・作品にアプローチすることによって、本研究の目的である<近代朝鮮文学における日本との関連様相>を広範な視野をもって俯瞰することができた。これは複数研究者による共同研究でなくてはなしえないことである。本研究によって、近代朝鮮における日本との出会いは文学の領域においても無視しえぬほど大きな痕跡を残していることが明らかになった。3.今後は作家・作品の対象範囲をさらに広げ、また時期によって同一作家の関連様相にどのような変化が見られるかなど、アプローチの方法もより多角化しつつ、本共同研究を継続していく予定である。