hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
分子標的MRIを基盤とした低酸素・活性酸素種・レドックス活性可視化への挑戦

酸素は、生体が生命活動を維持するために必要なエネルギーの産生に不可欠な物質であり、その消費は様々な生命機能と深く関わっている。例えば、成長過程など細胞が活発な活動をする際にはエネルギーの産生が必要であり、酸素消費が増進する。一方、酸化ストレス等により細胞内ミトコンドリアに異常が起こると、酸素消費量は低下する。従って、酸素と生命機能には強い相関があり、細胞内での酸素量をリアルタイムに可視化する分子プローブの開発が求められている。そこで本新学術領域研究では、細胞核内にプローブを送達するHoechst33258とりん光発光性ルテニウム錯体との複合化により、新しい細胞核内酸素濃度検出プローブ(Ru-Hoechst)を設計・合成し、その機能を評価した。まず、Ru-Hoechstプローブの水溶液に、405 nmの励起光を照射すると、600 nm付近にルテニウム錯体由来のりん光発光が観測された。水溶液の溶存酸素濃度を変化させたところ、ルテニウム錯体に由来するりん光発光は、酸素濃度の増大に伴い減弱した。従って、Ru-Hoechstプローブは、酸素濃度の変動を可視化する機能を有することが明らかとなった。なお、Stern-Volmerプロットから算出したKSV値は982 M-1であり、りん光発光は、酸素濃度の変動に対する応答であることが示された。Ru-Hoechstプローブは高いDNA結合特性を有する。すなわち、A549細胞の細胞核にRu-Hoechstプローブを集積させ。培地中の酸素濃度を20%から0%に変化させ、再度20%に戻した結果、酸素濃度の変動に応答したりん光発光強度の増減が観測された。以上の様に、Ru-Hoechstプローブは、細胞の分化・発生において重要な役割を果たす細胞核の機能解明に有効なプローブである。28年度が最終年度であるため、記入しない。腫瘍組織には通常の組織とは異なり、細胞の増殖が速すぎるために血管新生が追い付かず、血管から離れた場所に低酸素領域が存在する。この低酸素領域は初期の腫瘍から存在し、酸素が少ないために活性酸素種が発生し難いため、放射線治療に対して抵抗性を有する。そのため、この低酸素領域が、腫瘍の悪性度や転移能を高める原因の一つと考えられている。そこで、まず、研究代表者は、2ーニトロイミダゾール(2ーNI)に着目した。2ーNIは、低酸素環境下で機能する放射線増感剤であり、低酸素環境下の細胞内において、一電子還元酵素による還元を受け、親水性が向上、あるいは細胞内物質と結合する。その結果、細胞膜逆透過が抑制され、腫瘍細胞内に蓄積すると考えられている。次に、診断方法として、研究代表者が開発した独創的「分子標的NMR/MRI法」に着目した。分子標的MRI法の基礎となる三重共鳴NMR法は、分子プローブの特定の1Hシグナル(1H-13C-15N配列の1H)のみを高選択的に観測する優れた手法である。すなわち本法を用いることにより、生体内の水や脂質由来の1Hによるバックグラウンドノイズは完全に消去され、13C、15N核を有する分子プローブのみを高選択的に検出可能となる。そこで平成27年度は、以上のプローブ設計指針に基づき、2ーNIと13C/15N二重ラベル化ホスホリルコリンとを、鎖長が異なるアルキル鎖を介して複合化した13C/15NーNIPCプローブの合成に成功した。さらに、in vitroでの機能評価により、アルキル鎖長が6である13C/15NーNIPC 6が低酸素環境下、最も高い放射線増感能を示すこと、および細胞夾雑物が多数存在する系においても三重共鳴NMRにより、13C/15NーNIPC 6プローブのみを高選択的に検出可能であることを明らかにした。本公募研究では、生体内の「酸素」環境をリアルタイムに画像化するため、「分子標的MRI法」に有効な3種類の新しい13C/15Nーラベル化双極性ポリマープローブ(造影剤)の開発を目指している。その中で、平成27年度は、「生体内の低酸素領域に高集積し、同時に放射線増感剤としての機能を維持する13C/15NーNIPCの開発」に成功した。さらに、感度向上のために、母骨格であるホスホリルコリンの原子移動ラジカル重合(ATRP)を行い、13C/15NーPMPC/NIの合成と機能評価が必要であるが、第一の研究テーマである(1)生体内の低酸素領域に高集積し、同時に放射線増感剤としての機能を維持する13C/15NーNIPCの開発については、順調に進展している。

そこで本新学術領域研究では、細胞核内にプローブを送達するHoechst33258とりん光発光性ルテニウム錯体との複合化により、新しい細胞核内酸素濃度検出プローブ(Ru-Hoechst)を設計・合成し、その機能を評価した。まず、Ru-Hoechstプローブの水溶液に、405 nmの励起光を照射すると、600 nm付近にルテニウム錯体由来のりん光発光が観測された。水溶液の溶存酸素濃度を変化させたところ、ルテニウム錯体に由来するりん光発光は、酸素濃度の増大に伴い減弱した。従って、Ru-Hoechstプローブは、酸素濃度の変動を可視化する機能を有することが明らかとなった。なお、Stern-Volmerプロットから算出したKSV値は982 M-1であり、りん光発光は、酸素濃度の変動に対する応答であることが示された。Ru-Hoechstプローブは高いDNA結合特性を有する。すなわち、A549細胞の細胞核にRu-Hoechstプローブを集積させ。培地中の酸素濃度を20%から0%に変化させ、再度20%に戻した結果、酸素濃度の変動に応答したりん光発光強度の増減が観測された。以上の様に、Ru-Hoechstプローブは、細胞の分化・発生において重要な役割を果たす細胞核の機能解明に有効なプローブである。生体内の「酸素」環境のリアルタイムでの画像化を実現する以下の革新的分子プローブ(1)(3)を開発する。さらに「診断」と放射線等による「治療」とを同時に実現するセラノスティックプローブの開発へと展開し、本新学術領域研究「酸素生物学」が目指す「酸素の生物学的理解」に貢献する。(1)生体内の低酸素領域に高集積し、同時に放射線増感剤としての機能を維持する13C/15NーNIPCの開発(2)抗酸化活性を“その場"観測する13Cで二重ラベルした分子プローブの設計・合成と、分子標的MRI法による生体内での活性酸素種の可視化(3)レドックス活性を観る13C/15Nーラベル化MRIプローブを設計・合成する。合成した分子プローブが、溶液、組織、動物レベルで低酸素領域・抗酸化活性・レドックス活性を「分子標的MRI法」を用いて定量的に画像化する。28年度が最終年度であるため、記入しない。
代数構造と表現について

本研究では、有限群・多元環・頂点作用素代数等の表現論的な構造について考察し,同時に有限幾何的な構造,組合せ論的な構造,数論的な構造等との関連を調べた。特に,シャープ指標の分類問題に関連した問題として,有限群とその指標に関する表現グラフの構造によって,有限群の構造がどのぐらい制限されるかを考察。さらに,abelian defect groupsをもった有限群のブロックに関するブルエ予想とドノバン予想等について研究し,具体的には,以下の成果を得た。平成10年度の主な成果:1.指標の平方に含まれる既約成分が少ない群の決定。2.2つの群環が多元環として同型なとき,正規化群のシロー群による剰余群が可換群となるための必要十分条件について。3.2つの群環の各ブロックイデアルがMorita同値になるための条件平成11年度の主な成果:1.マシユー群M_<12>に対するGreen対応のLoewy seriesを計算。2.Fischer群F_<24>の局所部分群の構造を調べ,直交群O(7,3)の2種類の非分裂拡大の直接的な構成法を与えた。3.ホモロジー代数的な手法を用いて、可換な局所環のフィルトレーションに付随する次数付き環のある種の性質を明らかにした。なお,これらの結果は、Journal of Algebra等の雑誌に発表,あるいは掲載予定である。本研究は、有限群・多元環・頂点作用素代数等の表現論的な構造を明らかにし、同時に有限幾何的な構造、組合せ論的な構造、整論的な構造等との関連を調べることである。まず,シャープ指標の分類問題に関連した問題として、有限群Gとその指標xに関する表現グラフD(G,x)の構造によって,有限群Gの構造がどのぐらい制限されるかを考察し,次の結果が明らかにされた。すなわち,グラフD(G,x)がループを持つことを許す道の場合には,シャープな(G,x)しか存在しないことが清田による研究で解明された。この結果は,代数的組み合わせ論に応用され,群アソシエーションスキームX(G)がQ-多項式的スキームなときの群Gの構造を完全に決定するものであり,シャープ指標の研究が,アソシエーションスキームの研究とも密接な関連があり、ある意味で相補うものであることを裏付けているように思われる。次に,頂点作用素代数に関連した研究だが,これに関してはまだ成果が出ていない。しかし,一連の研究の中で,多様体のL-関数を定義する際,Affine Kac-Moody Lie代数あるいは頂点作用素代数の表現が必要になるのではないかと推測され,今後,いかなるAffine Kac-Moody Lie代数あるいは頂点作用素代数の表現を用いれば重み2のHecke作用素の固有関数となる保型形式が得られるか興味深いものがある。実際,重み2の固有保型形式は,Hecke環の表現と同じものなので,この問題はAffine Kac-MoodyLie代数あるいは頂点作用素代数の表現とHecke環の表現の間の関係を与えることになるので是非とも解明したい。本研究は,有限群・多元環・頂点作用素代数等の表現論的な構造を明らかにし,同時に有限幾何的な構造,組合せ論的な構造,整論的な構造等との関連を調べることである。まず,シヤープ指標の分類問題に関連した問題として,有限群Gとその指標Xに関する表現グラフD(G,X)の構造によって,有限群Gの構造がどのくらい制限されるかを考察し,次の結果が明らかにされた。すなわち,グラフD(G,X)がループを持つことを許す道の場合には,シャープな(G,X)しか存在しないことが清田による研究で解明された。この結果は,代数的組み合わせ論に応用され,群アソシエーションスキームX(G)がQ-多項式的スキームなときの群Gの構造を完全に決定するものであり,シャープ指標の研究が,アソシエーションスキームの研究とも密接な関連があり,ある意味で相補うものであることを裏付けているように思われる。

次に,頂点作用素代数に関連した研究では,北詰によりある符号頂点作用素代数の自己同型群が決定され,ヤコビ不等式を含む,ある種の恒等式を証明した。さらに,一連の研究の中で,多様体のL-関数を定義する際,Affine Kac-Moody Lie代数あるいは頂点作用素代数の表現が必要なことが解明され,今後,いかなるAffine Kac-Moody Lie代数あるいは頂点作用素代数の表現を用いれば重み2のHecke作用素の固有関数となる保型形式が得られるか興味深いものがある。実際,重み2の固有保型形式は,Hecke環の表現と同じものなので,この問題はAffine Kac-Moody Lie代数あるいは頂点作用素代数の表現とHecke環の表現の間の関係を与えることになるので,今後の課題として解明したい。
画像・電気同時計測による脂質分子の自己集積化初期過程の研究

(1)形成初期過程観測法の開発昨年度までに構築したシステム[画像計測:生物顕微鏡(オリンパス)+CCDカメラ(Opteon製、SB1J30)、電気計測:LCRハイテスタ(日置電機製、3522-50)]の同時計測速度向上を行った。デユアルCPU搭載コンピュータ(別予算購入)を用いたマルチスレッドプログラミングを画像計測に導入し、モノクロ79万画素8ビットのCCDカメラ画像を、30Hzで非圧縮保存することに成功した。このとき電気計測データの保存も別コンピュータを同期させて行っており、30Hzでの同時計測が可能となった。この速度は、昨年度(9.3Hz)の3倍以上であり、大幅な性能向上を達成したといえる。(2)単一脂質二分子膜形成初期過程の観測上記で開発した手法により、単一脂質(ジフィタノイルフォスファチジルコリン)二分子膜形成初期過程観測を行った。まず初めに、膜形成用の穴を水平に配置し、上方から水浸対物レンズを利用した顕微鏡観測を試みた。しかし、この配置では、穴に展開した膜形成液が浮力のため浮上してしまい、うまく二分子膜形成しなかった。そこで、膜形成用の穴を垂直に配置し、側方からの観測を行える特製セルを設計・構築した。これにより、予備的な膜形成の観測に成功した。しかし、条件を一定かつ安定に制御した膜形成およびその観測のためには、マイクロマニピュレータを用いた膜形成液の展開が必要であることがわかり、新たに必要となる部品を設計中である。この改良装置が完成すれば、1で開発した同時計測による膜形成初期過程の詳細な観測が可能になると考えている。画像・電気同時計測により、脂質二分子膜形成(脂質分子の自己集積化)の初期過程を解明する事を目指し、以下の二つの研究を行った。1:膜形成初期過程の観測・解析法の確立二分子膜形成の初期過程、すなわち二分子膜構造が創生する瞬間を、出来る限り詳しく観測するために、画像・電気同時計測システムの改良を図った。画像計測では、まず顕微鏡部分をより開口数の高い生物顕微鏡(オリンパス)に変更した。CCDカメラとしては、モノクロ79万画素8ビットの解像度を持ち、毎秒30フレームの画像を記録可能である購入備品の計測用デジタルカメラ(Opteon製、S B1J 30)を組み込んだ。一方、電気計測では、計測速度を重視し、購入備品のLCRハイテスタ(日置電機製、3522-50)を組み込んだ。これらを制御するプログラムを組み、性能テストを行うと、同時計測速度は9.3Hz(以前のシステムの2.6倍)まで向上していた。さらに、種々の調査の結果、デユアルCPUを用いたマルチスレッドプログラミングを画像計測用コンピュータに導入すれば、さらに30Hz近くまでの速度向上が期待できる事が分かった。現在、この路線に沿ったシステム速度向上の途上であり、改良システムによる膜形成過程の観測はまだ行っていない。2:単一脂質二分子膜成長の観測1の研究と並行し、予備実験として、既存の画像・電気同時計測システムにより、単一脂質分子(ジフィタノイルホスファチジルコリン)の二分子膜成長を観測した。得られたデータを解析した結果、膜形成液滴の付着・放置後に、まず膜厚約60nmになるまで薄膜化し、その後二分子膜に相当する膜厚4nmの領域が出現し、その構造を保ったまま拡大・成長する事が確認された。
水晶体におけるアミロイドβ蛋白の解析と認知機能との相関に関する研究

アルツハイマー病(Alzheimer's disease ; AD)患者の剖検水晶体におけるアミロイドβ蛋白(Aβ)の蓄積が報告されたが,白内障手術検体を含め水晶体中のAβの定量法は未確立である.本研究では非認知症患者における白内障水晶体中のAβの抽出方法およびELISAによる定量化を検討した結果,認知症を伴わない白内障患者において,水晶体中にAβx-42が少量ながら蓄積し,白内障の増悪に伴って増加している事が確認された.アルツハイマー病(Alzheimer's disease ; AD)患者の剖検水晶体におけるアミロイドβ蛋白(Aβ)の蓄積が報告されたが,白内障手術検体を含め水晶体中のAβの定量法は未確立である.本研究では非認知症患者における白内障水晶体中のAβの抽出方法およびELISAによる定量化を検討した結果,認知症を伴わない白内障患者において,水晶体中にAβx-42が少量ながら蓄積し,白内障の増悪に伴って増加している事が確認された.ヒト水晶体中にはアルツハイマ一病(Alzheimer's disease;AD)脳の特徴的蓄積物質であるアミロイドβ蛋白(amyloid βprotein;Aβ)のAβ1-40やAβ1-42が同定されているが、本研究では、白内障の手術で得られた水晶体を用いて、Aβの定量をはじめとする生化学的検討を行う。本年度はまず認知機能が正常な対象の水晶体に含まれるAβの定量を行なった。白内障手術により破砕され、生理食塩水とともに回収された水晶体試料は、-20度で保存した。溶解時にプロテアーゼ阻害剤を加え混和した。10万G、4°C、1時間の超遠心後、水晶体試料のペレットを得た。こうして得られたペレットは、4°C、プロテアーゼ阻害剤の存在下でテフロン製マイクロホモジェナイザーを用いて、ホモジェナイズし、各種溶液にて水晶体蛋白をその可溶性に応じて連続的に抽出した。各分画のAβペプチドをAβx-40およびAβx-42に対するC末端特異的なELISA系にて定量した。TBS分画、Triton X分画並びにグアニジン分画では、AβはAβx-40およびAβx-42測定系のいずれにおいても検出感度以下であり、可溶性の高い状態では、その存在量はごく少量と考えられた。次に、アルツハイマー病脳でのAβペプチド蓄積と同様に、水晶体でもAβペプチドが、その蓄積に伴って重合・凝集し、その可溶性が極めて低下している可能性を想定し、アミロイドの拙出法に倣って、抽出性の極めて高いギ酸抽出を行った。一部サンプルのAβが測定感度以下であり、これらのAβ量を0と仮定した場合、N=39(sample No1149)でAβx-40は平均0.08fmol/mgレンズSD=0.17であり、Aβx-42は平均0.28 fmo1/mgレンズSD=0.24であった。今後、年齢や認知機能などとの相関を解析していく予定である。アルツハイマー病(Alzheimer's disease ; AD)患者の剖検水晶体におけるアミロイドβ蛋白(Aβ)の蓄積が報告された[Goldsteonら,Lancet 2003].もし認知症の顕在化以前に水晶体にAβが蓄積するならば,白内障手術の際に回収される水晶体中のAβを定量する事で,ADの早期診断ができる可能性がある.しかし,白内障手術検体を含め,水晶体中のAβの定量法は未確立である.本研究では非認知症患者における白内障水晶体中のAβの抽出方法およびELISAによる定量化を検討した.通常の白内障手術時に回収し,研究目的使用に同意が得られた水晶体試料(N=86)より,Aβを溶解度の異なる各種溶液(TBS,1%TritonX-100,ギ酸)を用いて連続的に抽出し,ELISAにてAβ量を測定した.次にELISAで検出されたAβの存在を確定するためにウエスタンブロッティング(WB)を行った.連続抽出した上清中のうち,ギ酸分画でAβを検出した.血漿や脳脊髄液同様,個人差が大きかったが,タンパク重量あたりのAβx-42は平均7.13±1.96pg/mg(Mean±SEM)であった,Aβx-40は感度以下であった.性別,年齢,白内障LOCSIII分類別の分析では,Aβx-42は白内障グレードの上昇に伴い有意に増加し,年齢の上昇に伴って増加する傾向が示唆された.WBの結果では,Aβx-42の存在が確認されたが,抗体の反応性の違いから,水晶体中Aβでは構造変化が生じている可能性が示唆された.認知症を伴わない白内障患者において,水晶体中にAβx-42が少量ながら蓄積し,白内障の増悪に伴って増加している事が確認された.今後,軽度認知機能障害を含めた様々な白内障患者の認知機能との定量比較と,白内障水晶体におけるAβx-42の翻訳後修飾等の同定を行い,水晶体Aβに適合した測定系の開発を行う事で,ADの早期診断につながる可能性が見出された.アルツハイマー病(Alzheimer's disease;AD)

患者の剖検水晶体におけるアミロイドβ蛋白(Aβ)の蓄積が報告された[Goldsteonら,Lancet 2003]が,白内障手術検体を含め,水晶体中のAβの定量法は未確立である.本年度は非認知症患者における白内障水晶体中のAβの抽出方法およびELISAによる定量化を更に検討した.ウエスタンブロッティングでは、主にAβダイマーが確認された。4G8と6E10の混合抗体では、ウエスタンプロッティングのシグナルは非常に弱く、抗Aβ(1-42)C末端特異抗体ではより強いシグナルが確認された。今回の水晶体試料は上清中にAβが残存していた可能性があり、全眼水晶体試料を用いて、回収時の遠心条件を想定した検討を行った。その結果は、48Krpmの超遠心に比べ低速(3K、6Krpm)ではAβがそれぞれ48%、16%程度上清に残存していた。今回検討に用いた白内障水晶体試料はいずれも非認知症患者のものであったが、白内障の乳白濁度が増加した水晶体では、Aβが有意に蓄積しており、認知症発症以前から水晶体中にAβが蓄積する可能性が示唆された。年齢別の比較では、年齢が増加するに従ってAβが増加する傾向がみられたが、年齢とグレード別間では相関はみられず、年齢による早期診断への影響は無視できるものと考えられた。ウエスタンブロッティングでのAβの確認試験では、Aβダイマーの存在が確認された。また、4G8と6E10の混合抗体での反応性が悪かったことより、4G8と6E10のエピトープ近傍に存在するアスパラギン酸が、ラセミ化を起こし、立体構造が変化している可能性が示唆された。αBクリスタリンなどの水晶体中の他のタンパクは同様に、白内障水晶体中のAβはラセミ化やイソ化などの翻訳後修飾や重合が進んだ状態で存在している可能性が示唆された。
リゾホスファチジン酸産生酵素オートタキシンの生理機能の解明

ゼブラフィッシュで軟骨組織を観察するため、軟骨細胞特異的にGFPを発現するcol2a1:EGFPトランスジェニックゼブラフィッシュを確立した。このフィッシュに対し、LPA_1またはATXのアンチセンスモルフォリノ(MO)を投与した所、いずれにおいても下顎の軟骨細胞の配列の乱れが観察された。よってATXから産生されたLPAがLPA_1を介して軟骨細胞の配列制御を行っている可能性が示唆された。またwhole mount in situ hybridizationの解析結果から、LPA_1及びATXの発現部位は軟骨細胞であることが明らかとなった。次にin vitoの系でこの分子メカニズムを明らかにすることを目的とし、軟骨細胞とその細胞外基質への接着作用に着目した。マウスより初代軟骨細胞を調製し、II型コラーゲンに対する接着能を評価した所、LPA_1 KOマウス由来の軟骨細胞においてその接着作用及びdishへの接着面積が有意に低下していることを見出した。一方でコントロールマウス由来の軟骨細胞はLPA刺激によって接着能が亢進することも明らかとなった。これらの実験結果から、LPA_1 signalがβ_1 integrinによる細胞接着作用を強めることで軟骨細胞の配置を制御すると考え、col2a1:EGFPフィッシュにβ_1 integrin MOを投与した所、LPA_1またはATX MOと類似の表現型が観察された。本研究によって、軟骨細胞に発現しているATXがLPAを産生し、LPA_1を介して軟骨細胞の配置制御を行っていることが示唆された。これまでに個体レベルでATXがLPAを産生し、特定のLPA受容体へ作用させるという報告は存在せず、本研究はその可能性を初めて示唆した点で新規性がある。(1)ATX^<lox/->マウスの骨形成異常の解明ATX^<lox/->およびLPA_1 KOマウスにみられる頭部骨格異常の原因を調べるため、同様の表現型を示すマウスの文献検索を行った。すると、頭蓋骨の長さを決定するとされる頭蓋底と呼ばれる部位に異常を示す報告が多数認められたことから、ATX^<lox/->およびLPA1_KOマウスにおいても頭蓋底を観察した。その結果、野生型のマウスに比べてATX^<lox/->およびLPA_1 KOマウスにおいては頭蓋底の軟骨部が早期に癒合している様子が観察され、これらマウスでみられる頭部骨格異常は頭蓋底の異常に起因することを明らかにできた。さらに、抗体を用いた蛍光免疫染色法やレーザーマイクロダイセクションと定量PCRを組み合わせた方法によって、頭蓋底軟骨部でのATXおよびLPA受容体の発現を解析したところ、この部位においてLPA_1受容体が特に高く発現していること、ATXはより成熟段階の進んだ軟骨細胞に高く発現していることを見出した。これらのことから、ATX-LPA_1シグナルは、頭蓋底の軟骨細胞に作用し、増殖もしくは成熟過程に作用していることが示唆された。(2)ゼブラフィッシュを用いたATX-LPA-LPA_1 pathwayの骨形成への関与の評価現在、ATXおよびLPA_1の機能抑制によってゼブラフィッシュにおいてもマウスと同様に頭蓋軟骨に形態異常を示すことを明らかにしている。軟骨特異的にEGFPを発現するゼブラフィッシュの確立に成功したので、今後はこのゼブラフィッシュを利用して軟骨形成におけるLPAシグナルの分子機構の解明を目指す。
HIV排除を目指した、糖代謝リプログラミングを介したウイルス複製制御機構の解明

HIV感染症/AIDSは未だ根治には至っていない。根治を妨げている要因には、HIVの有する高度な変異性やHIV潜伏感染の存在がある。これまでに30種類を超える薬剤が開発され多剤併用療法が行われているが、現在の多剤併用療法では薬剤耐性ウイルスや潜伏感染ウイルスには効果を示さない場合がある。そこで本研究では、薬剤耐性ウイルスや潜伏感染ウイルスに効果を示す新規治療標的の同定を目指す。そのために申請者は、実際にHIV感染時に生体内で起こる細胞環境変化の中でもエネルギー産生経路に着目し、薬剤耐性ウイルスや潜伏感染ウイルスの存在によって変化する「タンパク質」に着目した研究を行う。
南部アフリカにおける政治変動と国民形成に関する研究

大半のアフリカ諸国で、国民統合は言語やエスニシティの同一性によってもたらされはしなかった。冷戦後の現代においても国民形成はアフリカでは最重要な課題であり続けている。この問題を民主化、移動、都市化と関連させて検討した。都市第一世代であった年長者に比して、現在の都市青年層はより教育を受けているが就業が困難であり、彼らの国民的そしてエスニックなアイデンティティの動向に注目する必要がある。小倉はルサカの二つの居住区で調査を行い、20年前に実施したルサカ調査結果と比較した結果、農村との絆も弱まり、出稼ぎ還流型の様相はかなり弱くなっていることが判明した。若い世代ほど教育程度の高さに比しフォーマル・セクター就学者の比率が少なく、教育による社会的上昇の期待が満たされていないため、アフリカ政治に影響を与える存在である。青木はアンゴラの政治動向に影響を与えている中国の政策に注目し、中国に赴きアフリカに「出稼ぎ」に行った場合の条件などの聞き取り調査を行った。さらにアフリカ研究センターを訪問し、研究スタッフとの討議を行った。なおアンゴラの政治変動と国民形成に関する資料・文献などの収集も併せておこなった。井上はジンバブウェで選挙管理委員会副委員長、再定住相、そしてジンバブウェ大学教授等へのインタビューそして資料の収集をおこなった。また農村部においては、再定住政策の成果ならびにジンバブウェ・ドルの廃止に伴う商品の交換状況の調査をおこなった。遠藤は南部アフリカにおける「民主化」動向に関し、一方で従来民主化とされてきた政治変動のあり方を「民主化なき移行」と再認識するなどの理論研究をめぐる最近動向の文献調査を行うとともに、ザンビアにおける新憲法制定の現状把握を目指した現地調査を実施した。船田はモザンビークの国民形成に重要な役割を果たした脱植民地化プロセスに注目し、同プロセスに東西冷戦が与えた影響について、米国の対ポルトガル政策の推移をアイゼンハワーからケネディ政権への移行期に注目して行った。眞城は民主化後のエチオピア政治について、ティグライ州で調査を行った。前年に実施された総選挙とそれに伴う地方政治の変容について調査をし、南部アフリカと対比して考察した。さらに、民主化後のティグライ州のローカルNGOと政党、またディアスポラの関係に着目して研究を行った。小倉はザンビアの首都ルサカにおける3つの居住区で、民族意識・政治意識調査を行った。ザンビア人であるという意識や民族間紛争を回避してきたことへの誇りが強いことが判明した。都市第二・第三世代である青年層の教育程度はかなり高いが、かつての年長者のようには就業機会に恵まれず、低所得層の青年の不満はきわめて強いことが判明した。青木は南アフリカ、ボツワナ両国での中国系企業および中国人の進出に関する現地調査を行った。井上はジンバブウェにおける選挙権威主義体制(競合的権威主義体制)の展開について現地調査をおこなった。遠藤は2011年8月に行われたザンビアでの総選挙の事前動向の調査を実施した。政権交代が予測され、実際に政権交代が起こったこともあり、国際的な監視団も数多く関与していたほか、初めて事前の世論調査が行われるなど、民主化を検討する際の新たな材料を得られた。また、選挙実施に関わる管理体制にかんしても資料収集を行った。舩田は近年モザンビークで進む二つのレベルの異なった政治・社会変動、すなわち国レベルでの政権の権威主義化、そしてモザンビーク北部における換金作物栽培とジェンダー関係の変化について、文献収集及び首都マプトとニアサ州で現地調査を行った。眞城は南部アフリカにおける国民形成の特徴を明らかにする比較研究の一環として、エチオピアのティグライにおける民族と地域再編に関する調査・資料収集を行った小倉はザンビアの首都における都市第二世代・第三世代である青年層の民族・国民意識と民族間関係についての2010年・11年調査結果に基づき分析を行い、その結果をまとめた。さらにジンバブウェのムガベ政権と政策変化を国際社会学的な視点で考察し、それらを踏まえ、研究分担者とともに、研究成果を『現代アフリカ社会と国際関係』として取りまとめた。青木は南アフリカ、ナミビア、レソト、マラウィで、これら諸国と中国との関係について資料収集と聞き取りを行った。井上はジンバブウェにおける政治変動と国民形成に関する研究の一環として、ジンバブウェにて現地調査をおこなった。現地においては都市部ならびに農村部における現政権(連立政権)に対する市民意識および国家に対する帰属意識の調査をおこなった。遠藤は2011年9月の総選挙で20年ぶりに政権交替が行われた結果誕生した愛国戦線(Patriotic Front)のサタ政権における諸政策の現状と課題に関する現地調査を実施した。中国との関係においては、従来の強硬姿勢を変更した協調傾向が見られる。今後の大きな課題としては、高齢の大統領の後継問題などとも関わる中期的な政権運営を指摘することができる。舩田はモザンビークにおいて、紛争後の平和構築と民主化が、国民の間の分断にどのような影響を及ぼしたのかについて、同国北部の2州の各3村での現地聞き取り調査に基づき検討を行った。

その結果、「和解」の傾向がみられる一方、戦後の競争的複数政党制選挙の導入、独立以来政権に就き続ける現政権の権力集中、格差と不平等の進行により、集団内部で複雑な亀裂が生み出されていることが明らかになった。眞城はエチオピア・エリトリア間の国境により分断されたティグライ民族と独立後のエリトリアについて調査をし、南部アフリカと対比をして、エリトリアとその中のティグライの国民意識について明らかにした。研究代表者・分担者ともに、当初の目的に沿った現地調査を行うことが出来た。その結果有益な調査結果が得られ、かつ資料収集も順調に進んだ。24年度が最終年度であるため、記入しない。次年度が最終年度となるため、補充的な調査を行うとともに、3年間に渡る各自の研究成果をまとめる作業に入る。なおこの作業にとって有益であると判断される場合は、各自の担当地域のみならず、他の分担者の調査地に赴く。それにより、知見を広め、比較の視点を援用しつつ対象地域の特徴の把握に努める。
糖尿病を併せ持つ精神疾患患者に疾病の自己管理を促す患者参画型糖尿病教室の開発

糖尿病を併せ持つ精神疾患患者を対象とし,グループダイナミックスを活用して患者の精神症状の安定と意欲・参画力を高められる患者参画型糖尿病教室を開発した。患者参画型糖尿病教室に1年以上継続して参加した11名のうち7名の糖化ヘモグロビン値が,教室初回参加時と比較して低下した。また,患者参画型糖尿病教室の参加した患者と看護師にエンパワメントを見いだすことができた。糖尿病を併せ持つ精神疾患患者の糖尿病自己管理に向けた介入研究を行っている。具体的には当該の精神科病院に入院中もしくはデイケア通所中の糖尿病を併せ持つ精神疾患患者6名を対象とし,患者参画型糖尿病教室を実施し,患者のやる気と自己教育力の育成をめざしている。研究実施予定の精神科病院において研究協力者を募集し,精神科医師1名,栄養士2名,看護師5名と共に糖尿病および参画理論に関する学習会を4回実施した。その後参加者に対して,2週間に1回のペースで患者参画型糖尿病教室を開催している。まず,糖尿病に関する知識をKJ法により整理し,知りたいことや取り組んでみたいことを明らかにし,それに沿って学習計画を立案した。糖尿病に関する知識として,どんな疾患でどのような副作用があるのかは理解できている患者が6名中4名,ほとんど理解できていない患者が2名であった。しかし全員が,どうして血糖が高くなるのか,インスリンの役割は何か,なぜ運動が必要なのか等,糖尿病のメカニズムに関して理解できておらず,様々な疑問が出された。また,運動や間食について具体的な方法が理解できていないことや,清潔などの日常生活での留意点に関してほとんど知識がないことも明らかとなった。そこで,自分たちの食生活を知ることを目標に,各自が1週間食事やおやつをデジカメで撮影し,栄養士に分析を受けた。運動に関して,万歩計を貸与し1週間測定した。それを元に自己の目標を設定し,発表会を行うようにした。6か月後,「デジカメで食事を撮影すると意識してよい」「万歩計をつけて意識的に歩くようになった」などの言葉が聞かれ,6名中4名にデータ状の改善と体重減少がみられた。2名に関してデータの改善はみられていないが,そのうち1名は,実際に摂取した量をありのままに報告できることを目標にし,間食制限を開始した段階にある。今後は,12か月に1回程度,各自の目標を自己評価しながらフォローアップ研修を実施していく予定である。参加者および研究協力者のインタビュー内容を分析し,意識の変化を明らかにする予定である。また,新たな施設においても患者参画型糖尿病教室を開催する予定にしている。1.目的糖尿病を併せ持つ精神疾患患者の糖尿病自己管理に向けたエンパワメントと,スタッフのコーチングスキルを明らかにすることを目的としている。2.方法精神科病院に入院中もしくはデイケア通所中の糖尿病を併せ持つ精神疾患患者14名とスタッフ10名を対象とし,患者参画型糖尿病教室を展開する介入研究3.活動内容A精神科病院において6名の参加者を対象に1回/月,B精神科デイケアにおいて8名の参加者を対象に2回/月の患者参画型糖尿病教室を展開している。毎回,患者の希望により活動テーマを決め,学習会やディスカッションを実施している。時々ディスカッションの中で振り返りを行い,各自のできるようになったことや変化,課題などを確認している。4.意義・重要性患者参画型糖尿病教室の様子の参加観察記録とディスカッションの記録をデータとして,ベレルソンの内容分析法を用いて,参加者のエンパワメントを明らかにすることができた。また,関わっているスタッフにインタビューし,その内容から,スタッフの意識の変化や,エンパワメントを高めるためのコーチングスキルを抽出することができている。これを明らかにすることは,精神障害者の糖尿病自己管理だけでなく,他の疾病自己管理に向けたエンパワメントと,それを引き出すコーチングスキルとして応用範囲が広いと考える。患者参画型糖尿病教室を企画した目的は,患者の参画力(自らそこにコミットメントし,課題解決に向かう行動を企画・実施・評価・伝承していく力)を育成することである。A精神科病院とB精神科デイケアにおいて,68名のグループを作り,1か月に12回の割合で教室を開催した。その進め方は,まず,患者に糖尿病に関して知っていることを書き出してもらい,KJ法により既知と未知を整理する図解を作成する。図解をもとに,メンバー参画により学習会を企画していくものである。何回か学習会を実施した後に振り返りを行い,各自が目標設定をするセッションを取り入れるようにした。Aグループは2年以上,Bグループも1年以上継続し,その効果を糖尿病検査データの推移で実証できた(石橋,第5回島根看護学術集会論文集,2010)(石橋,第2回日中韓看護学会,2010)。

今年度は,患者の振り返りの語りから,アウトカムとしてのエンパワメントを抽出し,「オープン性の高まり」「現実に立ち向かう意欲」「自己成長」「生活の質の改善」「能力の開花」「希望の感覚」「コントロール感」「自己決定」のパワーが高められたことを明らかにした(石橋,第37回日本看護研究学会,2011)。また,患者参画型糖尿病教室を担当してきた援助者に,フォーカス・グループ・ディスカッションを行い,エンパワメントにつながった援助方法として,「ペースを合わせる」「グループダイナミクスを活用する」「関心を向け続ける」「成功体験を活用する」「やりたいことに取り組む」「メカニズム(原理)を伝える」「入念な準備をする」「具体的に対応する」「認める」「自分で考える機会を提供する」などを明らかにした(石橋,第6回島根看護学術集会,2011)。
カルシウムシグナルによるタンパク質の産生・輸送・分解の制御機構

研究代表者等は、哺乳動物細胞に極めて近い細胞内情報伝達系を持ち、厳密な分子遺伝学的解析が可能な分裂酵母モデル系を用いて、カルシウム依存性脱リン酸化酵素であるカルシニューリンが細胞質分裂等の多様な細胞機能を制御することを明らかにしてきた。この過程で、カルシウムシグナルがタンパク質の分解や輸送系の制御を示唆する多くの結果を得ている。本研究は、分裂酵母モデル系の分子遺伝学的解析を行うことでカルシウムシグナルによるタンパク質の産生・輸送・分解の制御機構を解明し、この制御機構の破綻による細胞病態を明らかにする事を目的とした。1)細胞内小胞輸送を担うアダプチン遺伝子とカルシニューリンの遺伝学的関連について高温感受性と免疫抑制薬感受性を同時に示す分裂酵母変異体を単離し,その遺伝子を決定した。その結果,変異遺伝子は,ゴルジ・エンドソームからの小胞輸送を担うことが知られているミュー・アダプチンをコードしていることが明らかになった。また,アダプチン遺伝子ノックアウトでも同様の表現型が認められることも確認した。これらの結果から,細胞内輸送とカルシニューリンとの関連が明らかになった。2)mRNA制御における安定性制御の重要性についてタンパク質産生においては,mRNA量制御がきわめて重要である。これまでは,シグナル伝達系によりmRNA量が制御される場合は,主に転写の制御が考えられていたが,我々は,分裂酵母ではカルシニューリンとマップキナーゼがクロライドイオンホメオスタシスに関して拮抗的関係にあることを利用し,RNA結合タンパク質のリン酸化によるmRNAの安定性制御が重要であることを明らかにした。(1)ゴルジのカルシウムポンプPmr1とNrampホモログPdt1によるマンガンホメオスターシス制御機構の解明Ca^<2+>/カルシニューリン(CN)により遺伝子発現が制御されているPmr1の遺伝子発現がMn^<2+>によっても調節されていることを示した。また,Pmr1遺伝子KO株の表現型を過剰発現により抑圧する遺伝子として,NrampホモログPd t1を単離した。Pmr1とPdt1のダブルKO細胞は極めて異常な細胞形態を示し,この異常が細胞外へのMn^<2+>の添加により回復することを示した。(2)細胞内ユビキチン量制御因子Lub1の発見ストレス感受性を指標とした遺伝学的スクリーニングによりlub1遺伝子を発見した。lub1遺伝子KO細胞は,ストレス感受性を示すとともにユビキチン量が著しく低下した。また,過剰発現により表現型を抑圧する遺伝子としてポリユビキチン遺伝子が単離された。またLub1はCdc48と複合体を形成することで細胞内での安定性を獲得していることも明らかにした。(3)新規RNA結合蛋白質Rnc1の発見CNのKO表現型を相補する多コピー抑圧遺伝子として,新規RNA結合蛋白質をコードするrnc1遺伝子を単離した。Rnc1は,マップキナーゼを抑制すると思われるPmp1マップキナーゼホスファターゼのmRNAと結合する事が示された。さらに,マップキナーゼにより燐酸化されたRnc1は燐酸化されていないRnc1よりも強くPmp1mRNAに結合し,安定化することが明らかになった。(4)CNの下流で働くzincfinger型転写因子Prz1の同定CNの下流で働きカルシウムポンプPmr1やPmc1の遺伝子発現を制御する転写因子Prz1を同定した。さらに,CNの下流にPrz1を介する経路と介さない経路があり,マップキナーゼと拮抗するのはPrz1を介さない系であることも明らかにした。
スルファチドの合成研究

スフィンゴ糖脂質は細胞間の認識や相互作用に重要な役割を担っているがそのうちスルファチドと呼ばれる硫酸基を含む一群の化合物については生理的意義がよくわかっていない。スルファチドは混合物であるが、それは主として糖脂質部中の脂質部セラミドが混合物であることに帰因する。従って、化学的に純粋なスルファチドを合成するためには、セラミド、特にそれを構成する基本塩基のスフィンゴシンを純粋に合成することが必要である。また糖脂質の糖部に対する位置選択的硫酸化法の開拓も重要な課題である。この二つの問題を解決すべく本研究を行い、以下の成果をえた。(1)糖類の位置選択的酸化反応を経由するアミノ糖の合成入手容易な天然糖類をキラル源として、これを位置選択的に酸化してオキソ糖に導く方法を開拓し、さらにこれらを立体選択的にアミノ糖に変換する方法を確立した。この方法を用いて、グルコシダーゼ阻害剤として注目されている抗生物質ノジリマイシンの実用的合成法を開発した。(2)スフィンゴシンへの共通中間体の合成上記の方法でキシロースよりアミノアラビノース誘導体を合成し、これを目的のスフィシゴシンへの共通中間体に変換した。これよりCー18スフィンゴシンの合成を行った。(3)糖類の位置選択的硫酸化モデルとして各種のガラクトース誘導体を、ジブチルスズオキシド法で硫酸化し、選択的に3位硫酸化が起ることを明らかとした。(4)糖硫酸エステルの分析法糖祭酸エステルのような、UV吸収をもたず、高い極性の化合物は、HPLCで検出が困難であるが、吸光度検出イオンクロマトグラフィー(PIC)がよい結果を与えることを明らかとした。ミエリンなどの軸索,脳脂質に多く存在するスルファチドは,糖脂質硫酸エステルであり,脂質部の構造を異にする数種の化合物の混合物である.本研究は,これらスルファチドを化学的に純粋な単一の化合物として合成し,スルファチドの生成機能開明に役立てることを目的としている.スルファチドの合成は,基質となるべき糖脂質(例えばガラクトシルセラミド)の合成(I),その糖部への位置選択的硫酸化(II)の二つの問題を含んでおり,さらに糖脂質の合成(I)は,それを構成する脂質部(セラミド)の合成(I-a)と,それに対する糖結合の形成(I-b)の二つに分けられる. I-aに関する研究は従来数多いが,任意の脂質鎖に対応できる一般的方法はない.我々はキシロースより誘導した唯一つの前駆体から,スフィンゲニン,フィトスフィンゲニン,さらにはセラミドを合成する一般的方法を開拓し,この問題を独自に解決した.本法は合成の最終段階で脂質部を導入するもので,任意の長さの脂質鎖に対応できる利点を有している.ついで糖水酸基の位置選択的硫酸化反応(II)の研究を開始し,先に我々が開拓したジブチルスズオキシド法がこの目的に有効であることを確立した.さらに糖硫酸エステル類の分離分析のためのモデル化合物として,グルコースー6-硫酸,グルコースー3-硫酸,ガラクトースー3-硫酸およびそれらの誘導体を合成し,種々なカラムを用いたHPLCを検討した結果,これら高極性の糖硫酸エステル類は,吸光度検出イオンクロマトグラフィー(PIC)によって,はじめて高感度に分離分析しうることを明らかとした.硫酸基をもった糖脂質の一群であるスルファチドの化学的純合成は、基質となるべきスフィンゴ糖脂質の合成、スフィンゴ糖脂質への位置選択的硫酸化の二つの過程よりなる。スフィンゴ糖脂質は、セラミドと糖部から成立っており、セラミドはさらにスフィイゴシンとアシル部にわけられる。天然スフィンゴシンは炭素鎖が1618のものの混合物である。

従って、化学的に純粋なスルファチドを合成するためには、スフィンゴシンの純粋な合成が必須となる。このような各種のスフィンゴシンは、単一の共通中間体より合成するのが最も効率よく、望ましい。本年度はこの問題に焦点をしぼって研究を行った。そのため、スフィンゴシンの二つの不斉中心の構築に、キラル源として天然に豊富な糖類を利用することを考えた。まず、糖類の位置選択的な酸化法を確立し、オキソ糖類の効率よい合成法を開拓した。次にこれらを立体選択的にアミノ基に変換して、アミノ糖類の有効な合成法を開発した。この方法でえた4-アミノ-4-デオキシアラビノースより、短工程で下記の構造の、目的の共通中間体を合成した。本品は、各種のイリドによるWittig反応によってスフィンゲニン類を、またグリニヤル反応によってフィトスフィンガニンを(保護された形で)うることができる。また、本研究のさらなる成果として、グルコシダーゼ阻害剤として注目されている抗生物質のジリマイシン(5-アミノ-5-デオキシ-D-グルコース)の実用的な合成法を開拓することができた。
新興病原生物の進化における宿主個体群の遺伝的構造の役割

コイヘルペスウイルス(CyHV3)感染症をモデルとし、宿主個体群遺伝構造と新興病原体の相互作用を評価するための解析手法の確立と基礎的知見の取得を行った。まず、宿主個体群の遺伝的構造を迅速に明らかにするための環境DNA手法を開発した。この手法を野外に適用し、各地のコイ個体群の遺伝的構造を迅速に評価することに成功した。また、自然水域から採取したCyHV3の遺伝子解析より、CyHV3が日本に導入された数年後には、複数の遺伝子型が出現したことを明らかとした。日本には単一系統のCyHV3が導入されたことより、導入後に遺伝的変異が生じたことが示唆された。本研究課題は、新興感染症コイヘルペスウイルスをモデルシステムとし、宿主個体群の遺伝的構造が病原ウイルスの進化に及ぼす影響を明らかにすることを目的とする。そのためには、宿主個体群と病原ウイルス双方の遺伝解析が必要となるが、2014年度は、宿主コイ個体群の遺伝的構造を評価する手法の確立に重点を置き、研究を行った。日本の河川・湖沼には、古来から日本に生息する在来系統のコイに加え、ユーラシア大陸から人為導入された外来系統のコイが生息している。そして、在来系統は外来系統に比べ、コイヘルペスウイルスに対する耐性が低いことが分かっている。そこで、宿主個体群の遺伝的構造を、在来系統由来の遺伝子と外来系統由来の遺伝子の集団における頻度によって評価することとした。まず、複数の宿主個体群の遺伝的構造を迅速に解析するため、研究代表者による先行研究および本研究において、環境DNA(水に含まれる生物に由来するDNA)を用いた在来:外来遺伝子頻度の定量手法を実験室レベルで確立した(論文投稿中)。さらに、本定量手法を野外へ適用する妥当性を検討した。すると、実際に湖沼から捕獲したコイの在来:外来遺伝子頻度は、環境DNAを用いた定量手法から推定された在来:外来遺伝子頻度と良く一致することが分かった。これらの結果より、環境DNAを用いた在来:外来遺伝子頻度定量法を野生コイ個体群に適用すれば、各個体群の遺伝的構造を迅速に把握できることが確かめられた。本研究では、2003年に日本へと導入された新興感染症コイヘルペスウイルスをモデルシステムとし、宿主個体群遺伝構造と新興病原体の相互作用を評価するための解析手法の確立と基礎的知見の取得を行った。宿主個体群の遺伝的構造を迅速に評価するため、環境DNA(水に含まれる、生物に由来するDNA)を利用した解析手法の開発を試みた。まず、一塩基の違いを高感度に区別できるサイクリングプローブ技術を用いたリアルタイムPCRにより、一塩基多型に基づいて2つの遺伝子型を判別するとともに、両者の頻度を定量する環境DNA手法を水槽実験レベルで確立した。さらに本手法の実用性を確認するため、本手法を自然水域へと適用したところ、複数のコイ地域個体群の遺伝的構造を広域的かつ迅速に評価することに成功した。環境DNAによる宿主個体群遺伝構造解析に関わる研究成果は、平成27年度に国際学術誌に公表された。また、2008年から2009年にかけて自然水域から採取されたコイヘルペスウイルスの遺伝子解析を行った。すると、日本には単一系統のコイヘルペスウイルスのみが導入されたのにも関わらず、導入数年後には複数の遺伝子型が存在することが明らかとなった。つまり、日本への導入後、コイヘルペスウイルスに遺伝的変異が生じたことが示唆された。以上の成果より、宿主コイ個体群遺伝構造とコイヘルペスウイルスの相互作用プロセスを検証するための土台を構築することができた。半年という短い研究期間のうちに、本研究課題を遂行する上で非常に重要となる、宿主個体群の遺伝的構造の迅速解析手法の確立に成功した。従来は、宿主個体群の遺伝的構造を把握するためには、宿主生物の捕獲に加え、個体毎の遺伝解析が必要であったため、ひとつの地域個体群の解析を行うだけでも多大な時間と労力を要した。しかし、2014年度に確立した環境DNAを用いた手法では、生息水域から水を採取し、抽出したDNAを用いて解析を行えば、その水域の個体群の遺伝的構造を迅速に評価することが可能である。2014年度の成果により、2015年度より本格的に開始する、宿主個体群の遺伝的構造と病原ウイルスの遺伝的変化の関係に関する実験と解析を、円滑に進めていくための土台ができあがった。27年度が最終年度であるため、記入しない。生態学2014年度の研究により、環境DNAを用い、宿主コイ個体群における在来:外来遺伝子頻度を定量する手法を確立した。環境DNAを用いる本手法の利点は、時間と労力のかかる宿主コイの捕獲を行わなくとも、水を採取し、そこから環境DNAを抽出するだけで、宿主個体群の遺伝的構造の把握が可能となることである。

そこで、2015年度は、調査範囲を拡大し、複数の水域における宿主個体群の遺伝的構造解析を実施することを目指す。同時に、水からコイヘルペスウイルスDNAを回収し、病原ウイルスの遺伝解析も進めていく。水中のコイヘルペスウイルス濃度は、春から夏にかけて増大するので、この時期にあわせてサンプリングを行う予定である。複数の水域における、宿主個体群と病原ウイルスの遺伝解析結果を得ることにより、本研究課題が目標とする、宿主個体群の遺伝的構造が病原ウイルスの進化に及ぼす影響の評価を実現することができると考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。
脳卒中患者の家族介護者に対する在宅支援介入プログラムに関する研究

本研究課題は、脳卒中患者の在宅移行看護介入プログラムの作成と検証を目指すが、検討中に看護師の認識と家族の病気の不確かさの関与が考えられ、今年度は入院数日後(T1)と集中治療室退室後(T2)の家族の病気の不確かさの変化を調査した。概要は以下の通りである:不確かさ得点はT1の85.8からT2の78.0に低下したが有意差はなかった。全31項目の平均得点を比較すると、T1での高得点項目は「必要時にはそこにいる看護師に私は頼ることができる」「医師や看護師は日常的な言葉を使ってくれるので言っていることは理解できる」「退院したらどのように私は家族の世話をして行くのか漠然としている」「私が説明を受けたことは全て理解している」「家族に何が起こるのかはっきりしない」「症状は予測なく変化を続ける」「1つ1つの治療の目的は私にははっきりしている」「どれくらいで私自身で世話をすることができるようになるのか決め難い」で、この全てがT2で低下した(このうち5項目は逆転項目)。また、T1での低得点項目は、「痛みがどう悪化して行くのかはっきりしない」「何がどう悪いのかわからない」「病がどれくらいで終わるのか予測できる」「検査結果は矛盾が多い」「家族について受けた説明に対する私の印象ははっきりしないというものだ」で、最初の2項目以外はT2で上昇した。以上のことから、1)入院時から家族の今後に対する支援が必要である、2)入院時の医療者の病状説明や親身な関わりは不確かさを低下させる、3)患者の病状変化があった時の医療者の説明や関わりは不確かさを低下させる可能性がある、4)集中治療室退室後も医療者が家族に注目していることを行動で示す必要がある、ことが効果的であると考えられた。本調査は、入院数日後の家族を対象としたため調査協力が難しく、対象者数確保に時間を要し、効果的な介入は明らかになったが、検証に至らなかった。初年度は、本研究の最終目的である介入プログラムの効果測定に向けて、研究協力者の研究実施に向けた準備、脳卒中患者の家族に対する介入プログラム暫定版の作成、比較群調査の準備を計画した。天理よろづ相談所病院の協力を得て、脳血管系患者を収容する5部署から研究協力者となる15名の看護師の推薦を受け、研究チームを構築した。研究代表者が中心となって国内外の論文を提示し、それらを抄読しながら、急性期から回復期までの各部署で現在行っている家族支援の実際と照らし、現実に即した介入方法についてディスカッションした。その結果、以下のケアの重要性が確認された:1.急性期から介護者の情報ニーズに積極的に応じること、2.早期から介護者となる予定の家族成員をケアに巻き込み共に考えること、3.効果的な介入となるタイミングを外さないこと、4.介護者の認知的評価やコーピング、性格傾向に感心を寄せスクリーニングすること、5.介護者の意思決定を促進し支持すること、6.介護者自身の生活の質やメンタルヘルスに関心を向け維持すること。しかし、病期の異なる複数の部署での一貫したケアを提供する具体的なプログラムを作成するには、転棟(部署移動)時のケアの継続性における課題とケースワーカー等の関連他職種との調整における課題が残り、実践可能なプログラム作成には至らなかった。介入プログラムは本研究の核となるものであり、十分な検討を必要とすると考えることから、平成27年度も介入プログラムの検討は継続することとした。一方、研究協力者の研究実施に向けた教育については、研究に対する苦手意識が強いために、介入プログラム検討のための論文抄読の際に研究方法についても言及し、時間をかけて準備を整えているところである。本研究は、脳卒中患者の円滑な在宅移行と長期的な在宅介護を可能にする急性期から在宅までの連続的な看護介入プログラムの開発とその効果を検証することを主たる目的としている。2年目となる今年度は、これまで脳卒中を受け入れる急性期病棟・亜急性期病棟・回復期リハビリテーション病棟、協力施設の看護部担当者、大学内の研究協力者と構築してきた本研究チームにおいて、特に、脳卒中患者の家族介護者の体験や彼らに対する介入の効果に関する文献を検討しながら、研究チーム員の脳卒中患者の看護体験を踏まえて、効果的な看護介入やその時期、患者の回復に応じて転棟する中で継続的看護を実施する方法、本介入プログラムのアウトカムやその測定用具について検討を重ねた。その結果、救急搬送された超急性期から急性期・亜急性期・回復期・在宅期へと患者の回復過程に応じた家族成員への看護介入の内容を整理した。このプログラムは、次々と転棟あるいは転院を余儀なくされる脳卒中患者とその家族に対して、部署あるいは施設ごとに異なるケアを行うのではなく、連続的なケアを目指すもので、患者の回復を促進するケアを実施すると同時に、入院時から家族と積極的に関係を築き、内の関係性や家族のニーズを把握しながら、急性期には、情報・保証・接近・安楽のニーズを充足すること、家族の在宅介護の意向を把握しながら、在宅移行を実現するための支援と在宅介護を継続するための支援を柱とするものである。次年度は、プログラムを洗練させて、これに基づく看護実践に取り組む予定である。本研究課題の初年度からの研究チーム員のリクルートや研究協力者の研究に関する教育による遅れが現在に影響している。過去2年間で、介入プログラムの素案が作成できたため、現行の介入との比較調査を実施する予定であった。