hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
IgA腎症凍結腎生検標本糸球体のIgAを主体とした沈着物の解析と抗原の同定

標的膜タンパク質周囲の微小環境にあるタンパク質を蛍光色素で標識するEMARS法は,細胞・組織を破壊することなくタンパク質複合体を同定できる。この方法を用いてIgA腎症の腎生検試料でIgA沈着物を同定することを試みたが,標識の特異性と標識タンパク質の回収率に問題があり,高純度に精製したラット腎糸球体を材料としてネフリンを標的にしてEMARS法の検討を行った。fluorescein-tyramideを標識試薬として用いることにより特異性が高くなること,スリット膜を構成する多くの分子を同時に同定できることがわかった。しかし,標的タンパク質の回収の段階で,特異性と低い回収率に問題が認められた。本研究の目的は、臨床試料(凍結腎生検標本)を用いて、糸球体メサンギウム領域にIgAを主体とする沈着物を認める原発性糸球体腎炎であるIgA腎症において、IgA免疫複合体を構成するタンパク質分子を質量分析計により定性的・定量的に解析することにある。このためには糸球体に沈着するIgA免疫複合体を特異的に単離・精製することが重要である。我々は最初に凍結腎生検試料の薄切切片から糸球体をLaser microdissectionにより回収する方法を用いたが、当然のことながらこの方法で分離した糸球体は大量の血液由来タンパク質が存在し、解析の大きな妨げになる。これを回避するため、前に報告した腎生検試料切片のPBSによる洗浄法を改良し、一定速度の振蕩条件下で3回洗浄することにより、ほとんどの血液由来タンパク質を再現性よく除去できるばかりでなく、不溶性タンパク質成分が相対的に濃縮されることを見出した。また、IgAに対する抗体を用いたタンパク質複合体の蛍光標識法(EMARS法)を確立するため、ラットの腎臓から単離した糸球体を用いてネフリンの細胞外ドメインに対する抗体によりネフリン複合体を特異的に標識する方法を検討した。EMARS法は、標的としたタンパク質の周辺200-300 nmにあるタンパク質を蛍光色素で標識する方法であり、さらに標識の入ったタンパク質を標識に対する抗体を用いて選択的に精製することが可能である。標識されたタンパク質は切片のまま、あるいは溶出後、電気泳動とスキャナーを用いて可視化することができ、また。精製後に複合体タンパク質のみを遊離させて直接的に質量分析で解析することが可能である。現在、腎生検試料から分離した糸球体の解析に十分な感度と持つ方法を確立することを視野に検討を重ねている。本研究の目的は、凍結腎生検標本を用いて、糸球体メサンギウム領域にIgAを主体とする沈着物を認める原発性糸球体腎炎であるIgA腎症において、IgA免疫複合体を構成するタンパク質分子を質量分析計により定性的・定量的に解析することにある。糸球体を特異的に解析することは研究の精度を高めると考え、Laser microdissectionで回収した糸球体を研究対象とした。さらに、大量に存在する血液由来タンパク質を除去するために、凍結切片を氷冷PBSで浸漬洗浄し、ほとんどの血液由来タンパク質を除去する方法を確立した。一方で、IgA免疫複合体を可視化するため蛍光色素で標識する方法として、EMARS法の基礎的検討を行った。EMARS法は標的としたタンパク質を認識する抗体(一次抗体)を組織に結合させ、さらにHRP標識した二次抗体を結合後、FITC-arylazideと反応させると、FITC-arylazideが活性化されてフリーラジカルを生じ、標的タンパク質周囲200-300 nmのタンパク質がFITCで標識されることを利用する。本年度は、このEMARS法を腎組織に応用することを目的として、ラット腎臓から高度に精製した糸球体を対象とし、スリット膜に存在するネフリンの細胞外ドメインを認識する抗体を一次抗体として用い、ポドサイト表面から、ネフリン周囲に存在するタンパク質を質量分析法を用いて網羅的に同定する方法を確立することを目的とした。検討の結果、FITC-arylazideは内在性peroxidaseに起因する非特異的な反応が多いことがわかり、FITC-tyramideを用いる方法に切り替えることにより、一次抗体特異的にFITC標識することに成功した。さらに、FITC標識タンパク質を精製・濃縮するため、抗FITC抗体を用いた免疫沈降法を試み、特異的な免疫沈降に成功した。Enzyme-Mediated Activation of Radial Sources (EMARS)法は,生細胞の任意の膜表面タンパク質の近傍(200-300 nm)にあるタンパク質分子群を細胞外から蛍光色素であるfluoresceinで網羅的に標識する方法である。これまでの検討で腎組織では特異的な標識が困難であることがわかったため,最初にラット腎臓から磁気ビーズ灌流法により高度に精製した糸球体を対象として詳細な検討を行った。スリット膜を構成する主要タンパク質であるネフリンの細胞外領域を認識する抗体(5-1-6モノクローナル抗体)を一次抗体として用い,特異的標識が可能であることがわかったfluorescein-tyramideを標識試薬として使用することにより, EMARS法により,ネフリン周辺のマイクロドメイン(200-300 nm)にある膜表面タンパク質を,一次抗体依存的にfluoresceinにより網羅的に標識することに成功した。可溶化した標識タンパク質はfluoresceinに対する特異的抗体を用いて免疫沈降により濃縮後,トリプシン消化で生成したペプチド試料を高感度・高精度質量分析計を用いて同定したところ,既知のスリット膜構成分子nephrin、Neph1、podocinに加えて,JAM-A,claudin-5,GLEPP1,CAR,CRB2,Thsd7aなどの微量成分まで同定できることがわかった。

最終的な目的は,IgA腎症臨床試料(凍結腎生検標本)を用いたIgA免疫複合体体の解析であり,この課題に大きく近づいたといえる。標的膜タンパク質周囲の微小環境にあるタンパク質を蛍光色素で標識するEMARS法は,細胞・組織を破壊することなくタンパク質複合体を同定できる。この方法を用いてIgA腎症の腎生検試料でIgA沈着物を同定することを試みたが,標識の特異性と標識タンパク質の回収率に問題があり,高純度に精製したラット腎糸球体を材料としてネフリンを標的にしてEMARS法の検討を行った。fluorescein-tyramideを標識試薬として用いることにより特異性が高くなること,スリット膜を構成する多くの分子を同時に同定できることがわかった。しかし,標的タンパク質の回収の段階で,特異性と低い回収率に問題が認められた。1)凍結腎手術標本からlaser microdissectionで回収した糸球体には大量の血液由来タンパク質が含まれ、IgA免疫複合体を構成するタンパク質の同定・定量に干渉することが予想されたため、血液由来タンパク質を効率よく除去する方法を確立することから開始したため。2) EMARS法による標的タンパク質の同定には、特異的標識が可能かどうか、解析に必要なFITC標識タンパク質を効率的に回収できるかが重要である。最初の検討課題として、ラット腎臓から高度に精製した糸球体を材料とし、スリット膜構成タンパク質であるネフリンの細胞外ドメインを認識するモノクローナル抗体を一次抗体として用いて、細胞外からネフリンの近傍にあるタンパク質(スリット膜構成タンパク質)をFITC標識して、質量分析計で同定できるかどうかを検討した。しかし、ラット腎組織は内在性のperoxidase活性が高く、常法のperoxidase抑制処理を行っても、特異的なFITC標識を示す結果は得られなかった。そこで、標識試薬をFITC-arylazideからFITC-tyramideに変えたところ、一次抗体依存性にタンパク質をFITC標識できることがわかった。3) EMARS法により特異的に標識されるタンパク質は低濃度であり、質量分析計で解析を行うためには、FITC標識されたタンパク質を濃縮する必要があることがわかった。そこで、抗FITC抗体を用いて、FITC標識されたタンパク質を免疫沈降法で精製・濃縮する方法を検討し、FITC標識タンパク質を効率よく分離濃縮することに成功した。この方法の困難な点は、未反応のFITC試薬が存在であり、特異的標識タンパク質の免疫沈降の収量を著低下させる事にある。そこで未反応のFITC試薬をほぼ完全に除去する方法を検討するために、時間を要した。腎糸球体のプロテオミクス1)ラット腎臓から精製した糸球体を用いて、EMARS法とプロテオミクスを組み合わせて、ネフリン複合体を構成するタンパク質を同定することは、生理学的にも、病態生理学的にもきわめて興味深い課題であり、PAN腎症などの腎疾患モデルでネフリン複合体構成成分の変化を知ることは大きな意義がある。共同研究者とともに、この課題も継続して行う予定である。
新しい癌ワクチン療法におけるinterleuk in-15遺伝子導入療法の有用性

IL-15を用いた癌免疫遺伝子治療の有用性について咋年度報告した。本年度はさらに免疫応答を詳細に解析した。【方法】(1)Meth-A/IL-15移植局所に浸潤したリンパ球のサプセットを免疫組織化学染色により解析した6(2)Meth-A/IL-15拒絶マウスに対して親株のMeth-Aおよびcolon26の再移植を行った。(3)IL-15産生量の異なるクローンにおいて抗腫瘍効果を解析した。(4)Meth-A/IL-15移植後、抗IL-15抗体投与により抗腫瘍硬貨が減弱するか否かを検討した。【結果および考察】(1)Meth-A/IL-15移植局所において7日目から単核球(CD4+and Muc-1+)および好中球の浸潤を認めた。一方、Meth-A/Neo移植局所には細胞浸潤はほとんど認められなかった。BALB/cnu/nuマウスではMeth-A/IL-15とMeth-A/Neoの間に著差を認めなかった。(2)さらにMeth-A/IL-15拒絶マウスでは、Meth-A親株の再移植も全て拒絶し、移植局所には著明な単核球(CD8+and Muc-1+)の浸潤を認めたが、Colon-26親株の増殖は制御できなかった。(3)IL-15産生量が200-500pg/10^6 cells/24hrsの3クローンを使用して移植実験を行ったが、産生量による抗腫瘍効果に差は認めなかった。(4)これらの増殖抑制効果は抗IL-15抗体で減弱した。【結語】IL-15遺伝子導入により、Meth-Aでは完全な腫瘍拒絶と腫瘍特異免疫が得られたことから、IL-15遺伝子導入は癌免疫療法において新たなstrategyとなると思われた。BALB/cマウスでは,Meth-A/IL-15の増殖はMeth-A/Neoと比較して明らかに抑制され腫瘍細胞は全て拒絶された.さらにMeth-A親株の再移植も全て拒絶した.組織像はMeth-A/IL-15では著明な単核球と好中球の浸潤を認め,親株再移植時には著明な単核球の浸潤を認めた.一方BALB/c-nu/nuマウスでは,これらの免疫反応は極めて微弱であった.これらの結果から,IL-15産生腫瘍細胞はT細胞の局所浸潤能を増強し,さらに2次的に誘導されたサイトカインの作用により好中球の浸潤を引き起こすことにより,抗腫瘍活性を誘導していることが示唆され、IL-15遺伝子導入腫瘍細胞を用いた癌ワクチン療法が新しい癌治療のstrategyとなることが期待された.IL-15を用いた癌免疫遺伝子治療の有用性について咋年度報告した。
細胞特異的エストロゲン受容体欠損マウスを用いた進行性下顎頭吸収の分子標的治療開発

進行性下顎頭吸収(Progressive Condylar Resorption; PCR)は、下顎後退・前歯部開咬を呈し、QOLの低下をもたらすが、病態は不明な点が多い。本研究では、エストロゲンを欠乏させたPCRモデルマウスの作成を試み、PCR病態成立機序の検討を行った。モデルマウスに他の外的刺激を加えたところ、若齢成獣マウスにおいて下顎頭海綿骨領域における骨代謝回転の変化が生じる事を見出した。よって、エストロゲンは他の外的因子と相互作用し、下顎頭形態維持に重要な役割を担う事が示唆された。下顎頭の変形および吸収が継時的に変化する進行性下顎頭吸収(Progressive Condylar Resorption; PCR)は、下顎後退・前歯部開咬を呈し、重篤な症例ではQOLが著しく低下する。治療においては外科的矯正治療を余儀なくされる場合も多く、時に咬合治療の施行自体が困難となりうる難治症例である。PCRは女性に多く、エストロゲン欠乏症の併発が多い事等から、性ホルモンであるエストロゲンの関与が強く示唆されている。本研究では分子生物学的手法を用い、顎関節を中心とした顎顔面領域におけるホルモンの影響、刺激に対する遺伝子発現変化の検討を行うことを目的とした。まず、ペプチドホルモンであるリラクシン(RLN)が骨芽細胞と破骨細胞の分化マーカーの発現に関与し、RLNの受容体であるRxfp2を介して骨芽細胞のコラーゲン生成を促進する事を明らかにした。さらに、マウス胎児の下顎骨・上顎骨を含む頭蓋顔面領域にヒストンメチル化酵素であるWHSC1が発現する事を見出した。特に口蓋においてはレチノイン酸の過剰投与によりWHSC1の発現が抑制され、口蓋裂の発生との関与が示唆された。また、エストロゲン受容体に関してはマウス軟骨細胞株であるATDC5ならびにマウス頭蓋冠由来骨芽細胞様細胞MC3T3-E1の入手およびsiRNAによるエストロゲン受容体(ERα、β)のノックダウン系の確立を行った。現在細胞表現型(増殖、遊走、分化、細胞死のアッセイ)の解析について詳細な検討を行っている。また一方で外傷やメカニカルストレス等の外的因子の関与も指摘されており、複数の因子の交絡がPCR発症に寄与するものと考えられている。本研究では分子生物学的手法を用い、顎関節を中心とした顎顔面領域の硬組織におけるホルモンの影響、刺激に対する組織学的変化ならびに遺伝子発現変化の検討を行うことを目的とした。我々は、蛍光免疫染色を行い間欠的PTH投与(iPTH)が短期間で骨芽前駆細胞に与える影響を検討し、骨髄では骨芽前駆細胞を増加させ、皮質骨においては骨細胞が減少する結果を見出し、副甲状腺ホルモンの骨に対する影響には部位特異性がある可能性を報告した。iPTHにより血中Sclerostinの低値を認めたことから、この現象はマウスの全身の骨において引き起こされる事が示唆された。また細胞骨格を司るアクチン結合タンパクであるProfilinの発現量が骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1においてBMPに依存する事を見出した。さらにProfilinをsiRNAを用いてノックダウンを行うと、BMPの転写活性を減少させMC3T3-E1の分化活性が低下する事を示した。現段階では下顎頭吸収のメカニズム解析のため、下顎頭を構成する細胞(軟骨細胞・骨細胞・骨芽細胞・破骨細胞)の相互作用について、検討を行っている。PCRモデル動物実験のpilot studyを実施中である。またメカニズム解析のために下顎頭初代継代培養細胞の採取ならびにex vivoイメージングを試みている。進行性下顎頭吸収(Progressive Condylar Resorption; PCR)では、下顎頭の変形および吸収が継時的に変化する事で下顎後退・前歯部開咬を生じ、顔貌の変化やQOLの低下を呈する。PCRは女性に多く、エストロゲン欠乏症の併発が散見され、性ホルモンの関与が強く示唆されている。また一方で外傷やメカニカルストレス等の外的因子の関与も指摘されており、多因子疾患様の病態を示すPCRの病態解明が必要とされている。本研究は分子生物学的手法を用い、顎関節を構成する硬組織に着目し、ホルモンや外的刺激に対する組織学的変化ならびに遺伝子発現変化の検討を行うことを目的としている。我々は、骨においてメカニカルストレス応答機能を持つ骨細胞に着目し、細胞骨格を司るProfilin1の機能を解析した。Profilin1は骨細胞様株であるMLO-Y4において樹状突起形成および細胞遊走に必要である事が示唆された。さらに、Cre/Loxpシステムを用い、骨細胞特異的にProfilin1をノックアウトしたマウスでは骨量の減少を呈した。以上の結果から、Profilin1は骨構造維持に必須の遺伝子である事が示された。また、数種類のPCRのモデル動物作成を試み、顎関節部のマイクロCT撮影を行い、表現型解析を行った。今後組織化学的解析ならびに分子メカニズム解析を進める事で、他因子疾患様の発症を示すPCRの病態解明に寄与するものと思われる。

進行性下顎頭吸収(Progressive Condylar Resorption; PCR)は、下顎後退・前歯部開咬を呈し、QOLの低下をもたらすが、病態は不明な点が多い。本研究では、エストロゲンを欠乏させたPCRモデルマウスの作成を試み、PCR病態成立機序の検討を行った。モデルマウスに他の外的刺激を加えたところ、若齢成獣マウスにおいて下顎頭海綿骨領域における骨代謝回転の変化が生じる事を見出した。よって、エストロゲンは他の外的因子と相互作用し、下顎頭形態維持に重要な役割を担う事が示唆された。実験室の環境整備の都合上細胞培養系の実験系の確立に時間を要したが、実験に必要な材料の準備が整い、性ホルモンの一種であるペプチドホルモンであるリラクシン(RLN)が骨芽細胞と破骨細胞の分化マーカーの発現に関与し、RLNの受容体であるRxfp2を介して骨芽細胞のコラーゲン生成を促進する事を明らかにすることができた。今後はPCRモデル動物の作製を進める。ERαおよびERβそれぞれを骨芽・軟骨・破骨細胞特異的にノックアウトするcKOマウスだけでなく、下顎頭にメカニカルストレスを与えるための咬合挙上モデルやエストロゲン欠乏を呈する卵巣摘出モデルの介入実験を組み合わせる事で、他因子疾患様の発症を示すPCRの病態解明に寄与するものと思われる。歯科矯正学今後はPCRモデル動物の作製を進める。ERαおよびERβそれぞれを骨芽・軟骨・破骨細胞特異的にノックアウトするcKOマウスを作製し、エストロゲンの作用が各細胞で欠失した下顎頭の変化を解析する。cKOマウスの作成はCre-loxP systemを用い、ERαfloxマウスおよびERβfloxマウスと、Osx creマウス(骨芽細胞特異的)、col2a1 creマウス(軟骨細胞特異的)もしくはCathepsin-K creマウス(破骨細胞特異的)との交配で行い、6種のcKOを得る。研究室を含む施設の改修工事のため、一部実験設備の設置に時間を要したため。研究室を含む施設の改修工事のため、実験室の使用が困難な時期があったため。下顎頭吸収モデルマウスを作製し、下顎頭初代継代培養細胞の採取ならびにex vivoイメージングに企てる。環境整備の都合上細胞培養系の実験系の確立に時間を要したが、今後実験モデルマウスの作製に企てる。
里親養育に関する社会的支援モデルの開発研究ー縦断的・質的調査を中心としてー

里親家族のライフサイクルのなかでの里子の成長過程および支援の実際を明らかにするために、単一事例研究の継続に加え補完的な複数の里親インタビューを実施し、里親養育の実態、フォーマルおよびインフォーマルな支援状況を具体的に示すことができた。また、滋賀県の児童相談所、里親支援機関、里親会、市町の家庭児童相談室等による里親支援体制や支援状況を調査し、本県の里親支援状況を明らかにした。これらの研究に基づき、本県の公的支援を柱とした社会的養護の支援ネットワークモデルを構想し、市町の里親等の養育者チームによる相互支援と市町の社会的資源を活用した支援環境の充実を目的としてシンポジウムを開催した。里親家庭が置かれている状況を明確にし、社会的支援のあり方を考察するために、下記の調査をおこなった。(1)調査に協力してくれる里親家庭、施設等を確定した。里親家庭は7件である。里親家庭のうち、養育里親は3件(ただし1件は現在未委託)、養子里親は2件、小規模住居型児童養育事業(里親ファミリーホーム)は2件である。(2)調査協力里親の居住地の児童相談所、児童福祉施設等による里親支援体制を調査した。児童相談所および里親支援機関事業委託施設を訪問し、里親・里子のキャンプや研修等の活動内容を明らかにした。(3)調査協力里親の居住地の子ども会、自治会など地域社会の組織は、里親にインタビュー調査時に、その報告を聞いた。(4)調査協力里親の居住地の里子が通園・通学する学校等の里親制度等に関する知識、支援体制等を調査した。1カ所の保育所と、1カ所の教育委員会を訪問し、里親への支援の実際について話を聞いた。(5)調査協力里親の所属する里親会の活動状況等を調査した。1カ所の里親会の事務局を訪問し、年間の活動等についての概要を伺った。(6)先行研究および、申請者らの研究結果をもとに、対象別の調査項目を設定した。インタビューガイドラインを作成して、実際の聞き取りをおこなった。(7)訪問によるインタビューを開始した。合計、12回里親家庭を訪問した。(8)里親へのインタビューはICレコードに記録し、逐語禄を作成した。教育委員会および児童相談所などの行政、当事者団体である里親会や施設の協力を得て、調査を開始することができたことは、里親支援に関わる体制の構想と実践への足がかりとなり得た。里親家庭が置かれている状況を明確にし、社会的支援のあり方を考察するために、下記の調査をすすめるとともに、現段階での整理・分析等をおこない、学会発表および論文として公表した。(1)調査に協力してくれる養育里親1件を、新たに開拓した。(2)調査協力里親-現在子どもを受託している養育里親(上記を含む)、小規模住居型児童養育事者、過去に子どもを受託しているが現在は未委託里親、養子里親-を訪問しインタビューを実施した。(3)1件の継続的な調査事例に新たな調査結果を加えて、再整理・分析した。(4)そして、就学後の委託児童の育つ課程を具体的に示し、里親家族のライフサイクルのなかでの里子の成長及び里親・里子を支えるフォーマルな支援とインフォーマルな支援を整理することを試みた。(5)調査協力里親からの現時点でのインタビュー調査結果を整理・分析することにより、里親の問題対処の実態を特徴づける試みをした。(5)里親宅を訪問してのインタビュー調査は、合計11回実施した。(6)里親へのインタビューはICレコードに記録し、逐語禄を作成した。(7)調査協力里親の所属する里親会のみならず、本地域の全部の里親会(県里親会、14箇所の里親会)の組織、運営等の実態について、主に電話による調査を実施した。(8)そして、それらを整理・分析し、里親会の現状を明らかにし、課題を明示した。(9)市家庭相談室における里親支援に関わる訪問調査をした。これまでの研究結果と併せて本研究の2年間の調査により得られた結果等は、2011年10月、本県に発足した里親委託等推進委員会において「里親支援事業の実施方法等について」を議論する上で、本研究の代表者が委員会委員長に選出されたこともあり、貢献することができた。これまでの調査資料を整理・分析し、補完的な調査を実施した。これらについては、学会等と論文で公表した。また研究成果を踏まえて滋賀県における里親・里子、実親への全体的な支援体制の在り方の構想を講演しシンポジウムを開催した。さらに、市町レベルでの具体的な支援環境の充実をシンポジウムという形態で実施した。これらの活動を内容とする報告書を製本化し、里親支援諸機関・施設等に配布し、里親支援体制の在り方、具体化への共有と、地域社会のより広い範囲への広報に努めた。具体的には以下である。(1)里親支援

専門相談員に具体的な支援について聞き取り調査を実施した。(2)新たに開設された地域小規模児童養護施設の職員に聞き取り調査を実施した。(3)その結果を踏まえて論文を発表した。(4) 2009年度2012年度の4年間の滋賀県の里親支援体制及び実践について調査・整理し論文発表した。(5)滋賀県内の全市町の児童家庭相談室など、児童家庭相談機関の所属長等と相談窓口業務に従事する相談員に対して「里親支援を考えるための滋賀県内市町アンケート調査」を実施し、その結果を学会発表した。(6)これまでの研究成果を踏まえて、第56回滋賀県里親大会(2013年10月26日)で「里親・里子、実親への支援の在り方ー12年間の里親研究を踏まえてー」基調講演した。当日続けて、シンポジウム「今、支援として何が必要か」を開催した。(7)滋賀県主催による「滋賀県里親支援強化事業里親開拓フォーラム&里親応援シンポジウム」において、滋賀県里親連合会の協力のもと大津市(2014年1月25日)と近江八幡市(2014年2月23日)でシンポジウムを開催した。(8)これら(5)(6)(7)を『滋賀県における里親・里子への支援体制の充実にむけて』調査研究報告書として製本し、県・市町、里親支援関係諸機関・施設等に滋賀県里親連合会を介し配布した。里親家庭が置かれている状況を明確にし、社会的支援のあり方を考察するために、継続的調査をすすめ、現段階での整理・分析等を行った。研究成果は、講演、学会発表、論文として公表した。具体的には以下である。(1)調査協力里親4件を新たに開拓した。(2)昨年に引き続き調査協力里親ー委託里親、養子里親、小規模住居型児童養育事業者ーを訪問しインタビューを実施した。(3)調査協力里親のうち養子里親(2名)の現時点での調査結果をもとに養子里親の抱える困難及び対処の実際を分析し論文で発表した。(4)昨年に引き続き、滋賀県(以下「県」と略)の里親会全部の実態調査をすすめ、県里親会全体をめぐる現状と課題を論文で発表した。(5)上記(4)の研究成果は県里親会総会で研究代表者が講演し、里親関係者及び行政担当者と意見交流をはかり、里親会の現状認識を共有した。(6)継続的インタビュー調査による幼児期から前思春期の単独事例を再整理・分析し、就学前と就学後の支援の枠組み及び課題を明らかにした。(7)上記(6)の結果は、県全体の中核的里親会の定例会で、研究代表者により「里親はどのような支援をもとめているか」のテーマで、講演・問題提起し、里親等と2度の意見交流を図った。(8)研究代表者は、研究成果を踏まえて県委託・里親会主催の未委託里親研修会で「里親制度のもとで、子どもはどのように成長しているか」をテーマに2度、講演した。(9)県内所在の全部の地域小規模児童養護施設を訪問し、養育のリーダ職員にインタビュー調査をするとともに、担当職員及び施設長にアンケートを実施した。(10)上記(9)研究成果を学会で発表した。(11)SOS子どもの村福岡を訪問し村長とセンタースタッフに養育・支援状況等のヒアリング等をした。
組織工学と体性幹細胞工学を融合した脊椎の再生技術の開発

損傷した脊髄の再生技術が開発できれば、患者のQOLの向上に大きく貢献する。この為には、迅速な神経再生を促進するデバイスが希求されている。人工骨格をベースとする組織工学と体性幹細胞を組み合せて、神経再生を促進し、機能的神経を再構築する技術の開発は国内外に例はなく、上記の期待に充分答える新しい医療を提供できるものと考える。神経軸索の伸展を促進するため、マイクロチャンネルおよびマルチフィラメントを作製し、これらを足場とし、またNGF等の徐放機能を搭載することより、神経束の伸展と接続を意図し、また体性幹細胞(皮膚に微量含まれる神経幹細胞)を入れるころにより、迅速な神経再生を試みた。前半期は、内筒のマルチチャンネルおよびマルチフィラメント構造体を、以前に独自に開発した重合性ゼラチンと水溶性可視光ラジカル開始剤を用い、微細孔および微細フィラメントを作製する光重合加工法を考案し、設計通りのマルチチャンネル内筒(内径50ミクロン、チャンネル数:140)およびマルチフィラメント(フィラメント径50ミクロン)束を作製した。一方、これらを入れる外筒として、新しい化学を導入してヒアルロン酸の架橋による生分解性の筒を作製した。内筒と外筒をアッセンブルすることにより、デバイスのプロトタイプを作製した。後半期においては、動物移植実験に移行する予定であったが、実験開始には至らなかった。このデバイスは神経切断部位の神経組織以外の組織の侵入を完全に抑止し、神経組織のみを再生することを目的としており、その実現の可能性は大きいと考える。
難治性ぶどう膜炎の免疫動態と治療に関する研究

実験的ぶどう膜炎(EAU)は従来Th1優位の自己免疫疾患であるとされている.また近年,ヒトの自己免疫疾患の炎症活動性にTh1及びTh2のバランスが関与していることが報告され注目を集めている.今年度は,ぶとう膜炎のサイトカイン療法に関する基礎研究としてEAUにおけるTh1/Th2比の推移を解析した.方法:非免疫の0日群及び,免疫後3,6,8,10日群から脾臓を摘出し,比重遠心法でリンパ球を分離し細胞表面のCD4および細胞内のIEN-γ,IL-4を染色し,フローサイトメータで解析した.結果:CD4^+細胞におけるIFN-γ産生細胞の割合は,EAU発症前の免疫後3,6,8日群で有意に増加したが,発症後の10日群では減少した.一方,CD4^+細胞におけるIL-4産生細胞の割合は発症直罰の8日群で増加したが,10日群では減少し始めた.また,CD^+IEN-γ産生細胞/CD4^+IL-4産生細胞比は,3日群から上昇し6日群で更に上昇したが8日群では低下した.これより発症過程における脾臓Th細胞は発症以前に最もTh1優位になり,その後はむしろ減少する事が明らかとなった.実験的自己免疫性網膜ぶどう膜炎(EAU)の病態形成と治癒過程における末梢血,脾臓,眼局所におけるThサブセットの変動を調べるために,本年度はT細胞内サイトカインを染色しフローサイトメトリーによりTh1/Th2比を調べる技術を開発した.この結果を応用し、炎症が形成される過程におけるサイトカインの関与を現在解析中である.一方,このEAUのぶどう膜炎におけるapoptosisの関与を組織学的に調べ,炎症早期の組織に浸潤している細胞にTUNEL法で染色されるアポトーシスが観察され,EAUの炎症が消炎寛解に至る過程に浸潤細胞のアポトーシスが関っている可能性が明らかになった.これらの結果を元に今後はぶどう膜炎を自発的に消炎される機序の検討を進める.EAUの治療に関する研究では,腫瘍壊死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-alpha)産生能と抗TNF-alpha抗体治療について調べ,In vivoでのlipopolysaccharide刺激後の血清中TNF-alpha濃度は免疫9日後より有意に上昇することを見出し,これをもとに免疫7日目より連日抗TNF-alpha抗体を投与したところ,炎症のスコアは濃度依存性に抑制された.この抗体がベーチェット病のぶどう膜炎の治療に応用されうるものであると考えられる.実験的ぶどう膜炎(EAU)は従来Th1優位の自己免疫疾患であるとされている.また近年,ヒトの自己免疫疾患の炎症活動性にTh1及びTh2のバランスが関与していることが報告され注目を集めている.今年度は,ぶとう膜炎のサイトカイン療法に関する基礎研究としてEAUにおけるTh1/Th2比の推移を解析した.方法:非免疫の0日群及び,免疫後3,6,8,10日群から脾臓を摘出し,比重遠心法でリンパ球を分離し細胞表面のCD4および細胞内のIEN-γ,IL-4を染色し,フローサイトメータで解析した.結果:CD4^+細胞におけるIFN-γ産生細胞の割合は,EAU発症前の免疫後3,6,8日群で有意に増加したが,発症後の10日群では減少した.一方,CD4^+細胞におけるIL-4産生細胞の割合は発症直罰の8日群で増加したが,10日群では減少し始めた.また,CD^+IEN-γ産生細胞/CD4^+IL-4産生細胞比は,3日群から上昇し6日群で更に上昇したが8日群では低下した.これより発症過程における脾臓Th細胞は発症以前に最もTh1優位になり,その後はむしろ減少する事が明らかとなった.
ＰＣＲクランプ法を用いたＮＯＴＣＨ１遺伝子変異の高感度迅速検出システムの開発

点突然変異を有する変異Notch1遺伝子のみを特異的に増幅するために、PCR clamp法を利用することとした。変異部位の正常DNAに対応する相補的な配列のPNAを用いたclamp primerを設計し、また続いて変異型を検出するために、変異に対応するfluorogenic probeとして、mutant probeを設計(Mutant probeでは野生型と変異型を厳密に区別するために、変異部位に対応する場所にLNAを用いる)することを検討したが、いずれも成功しなかった。点突然変異を有する変異Notch1遺伝子のみを特異的に増幅するために、長井らの論文を参考にPCR clamp法を利用することとした。変異部位の正常DNAに対応する相補的な配列のPNAを用いたclamp primerを設計し、また続いて変異型を検出するために、変異に対応するfluorogenic probeとして、mutant probeを設計(Mutant probeでは野生型と変異型を厳密に区別するために、変異部位に対応する場所にLNAを用いる)することを検討したが、残念ながらいずれも成功しなかった。gamma secretase(Notch)阻害剤は、J Clin Oncol誌(2012年7月1日号、P2307-2313)にMK-0752という薬剤がPhaseIの段階であるが、順調に臨床開発が進んでいる。その他の薬剤も学会レベルでの報告が散見されており、本研究の遂行速度を速める必要性を再認識した肺癌という病気の特性上、臨床で得られる生検検体には、野生型のDNAが多数含まれることから、将来的には、次世代シークエンサーを用いた臨床診断が中心となるだろうが、その間、あるいは、簡便なスクリーニングツールとして、本検査法を開発する意義については失われていないと思われず、今後の発展が望まれる。1)PNA-LNA PCR clamp法によるNotch1遺伝子変異の高感度検出システムの開発を試みた。まずClamp primerには、野生型と変異型を効率的に判別するためにPNAを使用することとした。PNAはTaq DNA polymeraseの5'→3'エキソヌクレアーゼに耐性で、PNAの相補鎖と強く結合でき、さらに1塩基のミスマッチでTmが大きく減少するため、clamp primerとしての使用に適している。このPNAを正常DNAと相補的に作成することで、PCRの際に正常DNAの増幅を阻害できる。変異部位の正常DNAに対応する相補的な配列のPNAを用いたclamp primerを設計し、また続いて変異型を検出するために、変異に対応するfluorogenic probeとして、mutant probeを設計(Mutant probeでは野生型と変異型を厳密に区別するために、変異部位に対応する場所にLNAを用いる)することを検討しているが、残念ながらいずれも現時点で成功していない。2)学会に参加し、Notch阻害剤等の最新状況に関する情報を収集した。その他の薬剤も学会レベルでの報告が散見されており、本研究の遂行速度を速める必要性を再認識した。プライマーの設計もうまくいっておらず、研究は計画よりも遅れている。該当なし
欲望と差異の詩学ー18世紀イギリス小説史の再構築

イギリス18世紀の小説が、統御できない欲望への不安を様々な形で描いていることに注目し、この時代を代表する小説家が、それぞれ別の手法でこの問題に取り組んだことを、登場人物の名前の表記に注目することで論証した。また、上記の視点と最近の人類学の知見を組み合わせることで、一般的な文学史で小説に分類されない作品や、小説史の傍流に置かれている作品を組み込んだ、新しいイギリス小説史の構築への土台を築いた。単著論文「『トリストラム・シャンディ』と留保される名前」では、『トリストラム・シャンディ』について、「仮名的世界」という新しい概念から分析を試みた。また、共著『きっとあなたは、あの本が好き。』は、一般向けの読書ガイドではあるが、本書におけるルイス・キャロルらの分析には、「欲望と差異」を鍵に近代文学を再考する本研究のアプローチが役立っている。研究発表のうち、「注釈と反復」では、スウィフト『ガリヴァー旅行記』を注釈への欲望を喚起する書物として再考することを示唆し、「『重力の虹』と『ガリヴァー旅行記』第三篇」では、スウィフトとピンチョンという近代の始まりと終わりに立つ作家が、いずれも科学批判という形で近代人の際限ない欲望に鋭く切り込んでいる点に注目した。さらに、“Fiction and the Glorious Revolution: Providence in Defoe's Writings"では、名誉革命の熱心な擁護者であったデフォーが『ロビンソン・クルーソー』執筆に至るまでの過程を、政治と文学の関係に注意しつつ再考した。これらの発表は、いずれも18世紀小説史を欲望と差異に注目して書き直そうという本研究の成果と見なすことができる。なお、勤務先の東京大学から半年の研究休暇を得ることができたため、平成27年9月15日より平成28年3月14日まで、アメリカ合衆国の研究機関で資料調査を行った。具体的に訪ねたのはルイジアナ州立大学ミドルトン図書館、同大学ノエル・コレクション、同大学ヒル記念図書館、イェール大学ルイス・ウォルポール図書館、ハーヴァード大学ホートン図書館である。デフォーとスウィフト、ヘイウッド(ほか女性作家)の作品における欲望と差異の問題を研究する予定であったが、デフォーとスウィフトに関しては研究発表で成果を示した。ヘイウッドに関しては、彼女だけでなくマンリーなど他の女性作家の著作も調査し、加えて彼女らと関係の深いフランス語からの翻訳小説についても資料を集めた。予定より多くの資料を扱うため、まだ成果を発表していないが、2016年度には発表する予定である。スターンに関する論考を2本執筆予定であったが、これは長い論考を1本のみ発表することになった。また、ヘンリー・フィールディングに関しても考察を深め、これは2016年に論考を発表予定である。研究論文の発表数は予定より少ないが、口頭発表に関しては、2回の予定が5回に増えている。アメリカでの文献調査では、当初はイェール大学のルイス・ウォルポール図書館とバイネケ図書館のみを訪れる予定だったが、このうち後者は改築中等の理由で訪問を断念した。しかし、半年に渡って合計5つの図書館で調査を実施したので、当初の予定よりも進展があったといえる。ノエル・コレクションでは、18世紀イギリスに関する多様な資料を開架の状態で自由に閲覧でき、大いに知識を深めることができた。ルイス・ウォルポール図書館では、ホラス・ウォルポールによるスウィフト著作集・書簡集への膨大な欄外書き込みをすべて解読し、18世紀の文壇および政界におけるスウィフト評価について、大いに得るところがあった。また、ホートン図書館では、偽書『台湾史』を1704年に刊行しスキャンダルを巻き起こしたジョージ・サルマナザールに関する膨大な資料のほとんどを読み、『台湾誌』を『ロビンソン・クルーソー』(1719)と『ガリヴァー旅行記』(1726)の文脈で再評価することが18世紀の文学史にとって重要な意味をもちうることを確認できた。今年度は、フィールディングに関する長編の論考「小説の機能(5)『トム・ジョウンズ』と僭名の時空」を完成させ、2年間『群像』に掲載してきた「小説の機能」を完結させた。本評論は2017年に書籍化される予定である。この研究は、近代小説を匿名の強迫的な欲望、および欲望からのズレ、すなわち差異とのダイナミズムという観点から捉え直し、イアン・ワット以来の近代小説と個人主義と中産階級を結びつける小説観を批判的に乗り越える試みである。この研究成果は、2017年5月発売予定の『教室の英文学』(研究社)における拙稿「小説の誕生」にも反映されている。また、2016年2月から3月にかけて、ハーヴァード大学ホートン図書館でおこなった資料調査を元に、今年度はジョージ・サルマナザールに関する研究を進めた。サルマナザールによる偽書『台湾誌』が、単なる際物ではなく、18世紀初期の出版界の需要を反映した点で、出現すべくして出現したテクストであること、また『台湾誌』から振り返ってデフォーやスウィフトのテクストを読み返すことで、18世紀文学への見方がラディカルに変容しうることが明らかになった。この成果は、主に北京大学での招待講演"Curiosity and Credulity"に示されている。また、この研究の関連で、ヴィヴェイロス・デ・カストロ『食人の形而上学』など最新の人類学を文学研究に応用する方法について考えるようにもなった。これに加えて、昨年のデフォー『ペストの記憶』研究から発展して、先述の『教室の英文学』の論考のほか、“Autonomy and Ambiguity of the Trading Capital"という論考を研究論集に寄稿した。

さらに、『ロビンソン・クルーソー』とソッローの『市民政府への抵抗』とを比較する発表を日本ソロー学会で行った。研究成果そのものは、日本語、英語の論考ともに順調に発表できているし、国際学会での発表も実施できている。とりわけ、フィールディング研究は、当初の計画通り、従来の研究を踏まえつつ新しい『トム・ジョウンズ』の読み方を示せたのではないかと自負している。また、サルマナザールに関する研究は、当初の予定にはなかったものの、本研究に人類学の応用という新しい方向性を示してくれている。他方で、本年度実行する予定だったリチャードソン『サー・チャールズ・グランディソン』研究には、ついに踏み込めなかった。また、国際学会での発表について、当初はイギリス18世紀学会でおこなうつもりだったが、他の海外での招待講演が入った関係もあって、実現できなかった。加えて、イギリスでの資料調査も予定どおりには行わなかった。これは上述のイギリスでの研究発表を諦めたためでもあるが、同時に昨年度の半年のアメリカ滞在で得られた膨大な資料を読み返すだけで十分研究を進められたからでもある。まとめると、当初の予定にはない進展もみられたものの、その分本来計画された研究のすべては遂行できなかった。この反省点を生かして、2017年度の研究を遂行したい。本年の研究成果として、以下の3つが特に重要である。(1)ダニエル・デフォー『ペストの記憶』(1722年)の翻訳・解説の出版。(2)ジョージ・サルマナザール『台湾史』(1704年)を人類学研究の最新成果を取り入れつつ分析し、18世紀イギリスのフィクションのあり方を問い直す研究(3)ローレンス・スターン『トリストラム・シャンディ』(1759-67年)における詩学を抽出し、近代文学史の原理を再構築する研究。(1)については、2017年9月に研究社から刊行された訳書の解説(349-65)で、『ペストの記憶』という作品が、すでに近代初期において市民が市民を統治するという自律的権力の問題を生々しく描いていることを指摘した。これは自由な個人が欲望をいかに制御するか、という問題から近代小説を読み直すという、本研究の視点を公権力の領域に応用したものである。(2)については、2017年5月20日の日本英文学会第89回大会でのシンポジウム「身体・人種・人間ー英語圏文学研究の人類学的転回」(武田将明、小川公代、梶原克教、春日直樹)における武田の発表において明示された。18世紀の散文フィクションが多くの虚偽(deception)にまみれていたことから、事実の表象(representation)ではなく先行する情報の変容(transformation)として18世紀フィクションを捉え直すことを提案した。着想にあたり、人類学者エドゥアルド・ヴィヴェイロス・デ・カストロ(および彼の紹介するレヴィ=ストロースやドゥルーズ/ガタリ)の著作が役に立った。(3)については、2018年3月刊行の『ローレンス・スターンの世界』所収の拙論等で展開した。スターンにおける反古典主義的な詩学を解説することで、本研究の「欲望と差異の詩学」への理解を深めた。
炎症性骨破壊における樹状細胞の役割の解明

歯周病やリウマチの罹患部では炎症にともなって破骨細胞形成が誘導され、壊滅的な骨や軟骨の破壊がおこる。したがって、破骨細胞の分化誘導機構を解明すれば、骨破壊を伴う疾患の新たな治療方法の開発に役立つと期待される。破骨細胞は単球・マクロファージに由来するが、これらの細胞からは樹状細胞と呼ばれる免疫に深く関与する細胞も誘導される。我々は、共通の前駆細胞を用いて破骨細胞と樹状細胞の分化過程における形質変化について詳細に検討した。その結果、約72時間を要する破骨細胞分化の過程において、24時間以内に樹状細胞への分化能が失われることを見いだした。また、この時点での細胞の形質は極めてユニークであり、マクロファージ様の貪食能を有しているものの、破骨細胞分化誘導因子であるRANKLの刺激を生存に必要としていた。さらに我々は、破骨細胞と樹状細胞の分化の振り分けに関与する因子を同定するため、DNAマイクロアレイを用いて破骨細胞と樹状細胞への分化過程におけるメッセンジャーRNAの発現レベル変化を網羅的に解析した。その結果、IRF-8(仮名DOF1)と呼ばれる転写因子の発現レベルが樹状細胞分化では変化せず、破骨細胞分化においてのみ低下することを見いだした。IRF-8欠損マウスを解析したところ、破骨細胞分化が亢進し、著明な骨粗鬆症を発症していることが明らかになった。さらに、前駆細胞にIRF-8を強制的に発現させると破骨細胞分化が強く抑制され、樹状細胞のみに分化することが判明した。これらの結果は、破骨細胞と樹状細胞の分化の振り分けにおいてIRF-8が破骨細胞分化を抑制する一方、樹状細胞分化を促進する役割を担っていることを示唆し、歯周病やリウマチなどにおける骨・軟骨破壊の治療法の開発に役立つと期待される。【目的】難治性疾患である関節リウマチでは、樹状細胞やT細胞などの免疫細胞の活性化に伴って骨や軟骨が破骨細胞によって破壊される。本研究の目的は、マイクロアレイを用いて前駆細胞を共有する破骨細胞と樹状細胞の分化の振り分けに関与する調節因子を同定し、その生理機能を解明することである。【方法】分化途中の破骨細胞の前駆細胞におけるmRNAの発現レベル変化はマイクロアレイ(Affymetrix社)により解析した。前駆細胞へのDOF1 cDNAの導入および強制発現にはレトロウイルスを用いた。DOF1ノックアウトマウスの骨組織の構造はマイクロCTを用いて解析した。NFATc1の転写活性はLuciferaseアッセイ法を用いて評価した。【結果】破骨細胞の前駆細胞を破骨細胞分化誘導因子(RANKL)で刺激し、その後のmRNAの発現レベルを網羅的に解析した。その結果、破骨細胞分化初期に発現レベルが大きく低下する既知の転写調節因子を見いだし、DOF1と名付けた。一方、樹状細胞分化においてDOF1 mRNA発現レベルは上昇した。DOF1を破骨細胞の前駆細胞に強制発現させると、破骨細胞への分化は完全にストップした。DOF1ノックアウトマウスの骨組織を解析したところ、重篤な骨粗鬆症が雌雄の差なく認められた。DOF1ノックアウトマウスから調整した前駆細胞は、通常よりも極めて低濃度の分化誘導因子による刺激で破骨細胞に分化した。また、DOF1は破骨細胞分化に必須の転写因子であるNFATc1の転写活性を完全に抑制した。【考察】DOF1は破骨細胞分化を負に制御する転写調節因子であり、分化初期にこの発現レベルが低下することが破骨細胞分化を進行させるための必須条件であると考えられる。

従ってDOF1のノックアウトマウスでは、破骨細胞分化の抑止力低下によって破骨細胞形成が促進された結果、骨粗鬆症を発症したものと思われる。さらに、破骨細胞分化の誘導に必須であるNFATc1の転写活性を抑制することがDOF1による破骨細胞分化抑制のメカニズムであると推察される。歯周病などの炎症性疾患では、破骨細胞の増加による異常な骨の吸収が認められる。したがって、破骨細胞の分化を調節する因子を同定できれば将来新しい治療方法の開発に役立つことが着たいされる。我々は、DNAマイクロアレイを用いて破骨細胞の分化を調節する因子を探索し、IRF-8と呼ばれる転写因子が破骨細胞の分化を抑制する役割を担うことを明らかにした。IRF-8の欠損マウスでは、破骨細胞の増加に伴う重篤な骨粗霧症の発症が観察された。このマウスから調整した破骨細胞の前駆細胞は極めて高い破骨細胞への分化ポテンシャルを持っていた。逆に、IRF-8を細胞に強制的に発現させると、破骨細胞分化は完全に抑制された。また我々は、IRF-8が破骨細胞の分化に必須の転写因子NFATc1と複合体を形成し、NFATc1の転写促進機能やそれ自身の発現を抑制することを明らかにした。さらに、微生物の構成成分を感知するToll-like receptorの活性化によって破骨細胞の分化は抑制されるが、IRF-8欠損マウスの細胞を用いると抑制作用が著しく減弱した。これは、微生物感染による骨破壊にToll-like receptorが関与し、IRF-8が破骨細胞分化を抑制する機能を担っていることを示唆する。以上の結果は、IRF-8が骨の恒常性および炎症性疾患において、骨吸収を抑制する重要な転写因子であることを意味する。
銀河間物質からの酸素輝線検出のためのマグネティックカロリメータの開発

1.Gradiometer型SQUIDの評価マグネティックカロリメータの読み出しに使用するgradiometer型のSQUID素子の評価を行った。60mKまでの冷却試験を行ない、磁場中においてもノイズレベルとして0.5μΦ^0/√<Hz>を達成し、論文を発表した。またさらなるノイズ削減等のための改良に着手、製作・評価を行った。2.断熱消磁冷凍機の改良これまで冷却実験を行っていた冷凍機の温度安定度の改善を行う予定であったが、真空漏れ等により最低到達温度が劣化するという不具合が発生したため、断熱消磁冷凍機全体の真空系、配線の見直しを行うに留まった。3.銀河間物質に関する観測的研究「すざく」衛星搭載X線CCDカメラを用いることで銀河間物質、銀河内の星間物質における酸素輝線を観測可能になった。カロリメータのように赤方偏移を用いて奥行き方向の距離を決めることは難しいが、銀河間空間での酸素の総量を明確に測定可能になったことは画期的である。これらを用いて銀河団内部、および銀河団周辺の重力的に束縛されていない大構造を形成するバリオン中の酸素の量について観測的に決定、制限を行ない論文にまとめた。4.将来の銀河間物質観測ミッションに関する検討カロリメータを用いて、銀河間物質の直接観測を行う衛星計画が、日本国内の小型衛星計画DIOSや、国際共同ミッションEDGEとして検討されている。宇宙大構造を見るのに必要な観測的精度や、技術的可能性などの具体的な項目について検討を行った。今年度は、マグネティックカロリメータ素子の製作、物性測定をまず行った。金に微量のErを溶融し、小片にしてRF-SQUIDによって磁化測定を行った。数gの材料において、目標の1000ppmレベルになっていることを確認した。20mg程度に分割した際のムラはfactor 2程度であった。また、マグネティックカロリメータを冷凍機中で駆動させるために、DC-SQUIDの設置、磁場印加用のコイルの作成を行った。目標の数mTの磁場をかけること、またその環境下でSQUIDの動作をさせることに成功した。そこで、希釈冷凍機中に、0.2mgに切断したマグネティックカロリーメータ素子、Nb-Ti線によるピックアップコイル、SQUIDを設置し、241Amによる5.5MeV α線の照射実験を行った。80mK,100mK,120mKに冷却し、放射線からのパルスを検出することができた。これが照射によるパルスであることは、磁場の向きで信号出力が反転すること、線源を取り除くとパルスが出ないことなどから確実であり、日本初のパルスであることから、論文として投稿中である。ただ、予想よりも波高値がかなり小さく、この原因としては、Er濃度の不均一性によるものではないかと考えられる。今後素子製作方法の改善を行い、さらに実験を重ねる予定である。観測的研究としては、銀河間物質からの酸素輝線の検出可能性について、数値シミュレーションによる解析を行い、論文にまとめた。またXMM-Newtonによるクェーサーの吸収線の観測により、マージナルではあるが、銀河間物質の存在の証拠を検出し、論文にまとめている。1.希土類溶融金センサの作成、物性測定これまでは赤外炉による溶融を行っていたが、温度がやや低く一様なセンサ製作が難しかった為、今年度からAr雰囲気化での抵抗加熱方式によるセンサ製作を行った。センサの評価も、これまでのrf-SQUIDによる磁化測定に加え、電子顕微鏡、磁気顕微鏡による観察を行ない、Erが均一に拡散していることを確認した。2.断熱消磁冷凍機内での測定環境の整備、マグネティックカロリメータの動作試験昨年度のα線検出実験について、論文にまとめ発表を行った。希釈冷凍機による実験では温度安定度があまり良くないために、今年度は断熱消磁冷凍機での実験を進めるべく、測定環境の立ち上げを行った。到達温度60mKで3時間の安定した冷却を行うことができた。

この中にSQUID、バイアスコイル、センサを設置した。雑音を下げることでより低エネルギーのX線検出にむけ、環境の整備を進めている。3.グラジオメータ式SQUIDの製作マグネティックカロリメータからの信号を読み出すために、センサを直接設置でき、かつグラジオメータ構造によって環境磁場のゆらぎを相殺するような専用のSQUIDを試作した。今後実際の素子を用いた動作試験を行う。4.観測的研究Chandra/XMM-Newton衛星を用いて銀河間物質の観測的研究を行った。銀河間物質の空間分布についての論文、およびクェーサーの吸収線観測による、Warm-hotな銀河間物質の検出についての論文を発表した。また、銀河間物質からの酸素輝線検出可能性について、数値シミュレーションを用いた理論的考察を行ない、論文として発表した。1.Gradiometer型SQUIDの評価マグネティックカロリメータからの信号を読み出すために、センサを直接設置でき、かつグラジオメータ構造によって環境磁場のゆらぎを相殺するようなSQUIDを昨年度設計した。このSQUIDの性能評価を行い、断熱消磁冷凍機内で60mKに冷却した状態で、目標であるノイズレベル0.5μΦ_/√Hz以下を達成していることを確認した。また、SQUID基板上に設置した磁場印加コイル、およびコイルへの電流を制御する超伝導スイッチについても所定の動作を確認した。2.Gladiometer型SQUIDを用いたX線検出上記SQUID上にAu:Erセンサを貼付し、断熱消磁冷凍機内で55FeからのX線を照射し、X線検出実験を行った。X線による信号が得られ、分解能としては6keVにおいて50eV以下を確認した。このエネルギー分解能は半導体検出器を凌駕しているものの、SQUIDのノイズレベルから期待される値よりは劣化している。磁場印加は永久電流によって行っているが、外乱磁場あるいは温度の不安定性による影響で信号波形そのものが変化している可能性が高い。来年度にむけ改善を試みる。金に微量のErを溶融したAu:Erによる磁気温度計センサ部の作成について、作成時の圧力、温度の調整による均質化に取り組んだ。また、レーザーマーカによって数十μm以下の大きさに切断する工夫をしているが、まだ成功率が低く今後の改良が必要である。4.銀河間物質の観測的研究Chandra/XMM-Newton衛星を用いて銀河間物質の観測的研究を行い論文として発表した。また今年度軌道上に打ち上げられた「すざく」衛星による観測結果についても、解析を進めている。1.Gradiometer型SQUIDの評価マグネティックカロリメータの読み出しに使用するgradiometer型のSQUID素子の評価を行った。60mKまでの冷却試験を行ない、磁場中においてもノイズレベルとして0.5μΦ_0/√<Hz>を達成し、論文を発表した。またさらなるノイズ削減等のための改良に着手、製作・評価を行った。2.断熱消磁冷凍機の改良これまで冷却実験を行っていた冷凍機の温度安定度の改善を行う予定であったが、真空漏れ等により最低到達温度が劣化するという不具合が発生したため、断熱消磁冷凍機全体の真空系、配線の見直しを行うに留まった。