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『分類杜工部詩諺解剖』注解類の系統に関する研究

まず、テキスト調査から始め、「分類杜工部詩諺解」の周辺諸本を整理した。その結果は次の通りである。1.朝鮮木版本「草堂詩箋」の存在を確認し、北京大学本・天理大学本・内閣文庫本を各々校合した結果、いずれも同一の板木によるものであることが判明した。いずれも複写に成功し、今後さらに詳細な検証・対校を行う。2.この祖本は元大徳年間刊本であることを解明。ただし、朝鮮刊本に付録する「黄氏補遺」については、未詳。3.朝鮮乙亥字本「読杜偶得」は「分類杜工部詩諺解」とほぼ同時期(1501年)刊であることを検証。4.完本ではないが、韓国に残る「范大史精選杜唄詩」の刊行経緯については依然未詳。内閣文庫本(朝鮮木版本)「杜工部詩范徳機批選」(朝鮮楮紙・5目朝鮮綴じ)との関連もこれからの研究課題。次に、以下のような要領で「分類杜工部詩諺解」(原刊本)の註解類のデータベース構築を進行させ、3月末にはおおよそが完了する。1.中世朝鮮語によって成る註および訳解部分のローマナイズ作業。2.帳・面単位の文章型データベースの作成。
社会的交換場面における意思決定過程に関する研究

第一に,昨年度に引き続き,人間とコンピュータを相手とした社会的交換状況において,相手の決定方略が意思決定過程に与える影響を検討した.囚人のジレンマを課題として,(1)ゲームの相手(他の参加者/コンピュータ),(2)相手の決定方略(50%でランダムに選択/方略不明),(3)決定の順序(自分が相手より先に決定/後に決定)の3条件の効果を検討した.主な測定指標としては,(1)決定(協力/非協力),(2)状況に対する主観的利得構造変換,の3つを用いた.昨年度の実験(森・行廣,2001)では決定方略の操作の有効性が確認できなかったため,方略に関する操作をより具体的に改善して実験を行った.結果は,森・行廣(2001)の知見が概ね再現するものであり,人間を相手とした交換は,相互協力を望ましいものであるとして主観的に状況を変換して認識させ,高い協力率を引き出すことが確認された.また,コンピュータ相手の場合の決定過程は,参加者の確率事象に対する理解度と関連していたが,対人場面においては,確率理解度と決定過程は無関係であることが示された.これらの結果は,対人的場面での相互協力が,コンピュータを相手とした抽象的やり取りとは異なり,他者の存在の手がかりを基盤としていることを示す.第二に,決定過程における情報処理プロセスを明らかにするために,利得情報への注視時間をMoving Window Systemによって計測した.協力率等の変数については従来どおりの結果が再現された.しかしながら,各利得情報への注視時間とこれらの変数の関連は認められなかった.既設機器の故障のため,計画していた眼球運動による注視時間測定が実施できなかったが,複数の方法による計測結果をもとに,Moving Window Systemによる測定の妥当性について検討し,同時に計測法を改善することが重要な課題といえる.第一に,人間とコンピュータを相手とした社会的交換状況において,相手の決定方略が決定および決定に至る認知プロセスに与える影響を検討した.具体的には,繰り返しのない囚人のジレンマを課題として,(1)ゲームの相手(同じセッションの他の参加者/コンピュータ),(2)相手の決定方略(50%でランダムに選択/どのような方略をとるかは不明)の2条件の効果を検討した.主な測定指標としては,(1)決定(協力/非協力),(2)決定に要した時間,(3)状況に対する主観的利得構造変換,の3つを用いた.結果から,(1)人間を相手とした交換状況は,状況を「相手が協力してくれるなら自分も協力したほうがよい」という状況へと主観的に変換して認識させる,(2)人間を相手とした場合の方が協力率が高い,(3)人間を相手とした場合は,非協力を決める方が協力を決めるより時間がかかる,という3点が示された.これらの結果は,同じ構造を持であっても、対人的な相互作用を行うときには,コンピュータ相手の意思決定とは異なる認知過程が働いていることを示唆している.我々の社会的行為に特徴的に働く認知過程を明らかにしていくことが今後の課題と考えられた.第二に,決定過程における情報処理プロセスを明らかにするために,利得情報への注視時間を扱うことを検討した.具体的には,眼球運動の測定,およびMoving Window Systemによる注視時間の計測方法について検討した.これを用いた実験を計画・実施することが次年度の課題である.第一に,昨年度に引き続き,人間とコンピュータを相手とした社会的交換状況において,相手の決定方略が意思決定過程に与える影響を検討した.囚人のジレンマを課題として,(1)ゲームの相手(他の参加者/コンピュータ),(2)相手の決定方略(50%でランダムに選択/方略不明),(3)決定の順序(自分が相手より先に決定/後に決定)の3条件の効果を検討した.主な測定指標としては,(1)決定(協力/非協力),(2)状況に対する主観的利得構造変換,の3つを用いた.昨年度の実験(森・行廣,2001)では決定方略の操作の有効性が確認できなかったため,方略に関する操作をより具体的に改善して実験を行った.結果は,森・行廣(2001)の知見が概ね再現するものであり,人間を相手とした交換は,相互協力を望ましいものであるとして主観的に状況を変換して認識させ,高い協力率を引き出すことが確認された.また,コンピュータ相手の場合の決定過程は,参加者の確率事象に対する理解度と関連していたが,対人場面においては,確率理解度と決定過程は無関係であることが示された.これらの結果は,対人的場面での相互協力が,コンピュータを相手とした抽象的やり取りとは異なり,他者の存在の手がかりを基盤としていることを示す.第二に,決定過程における情報処理プロセスを明らかにするために,利得情報への注視時間をMoving Window Systemによって計測した.協力率等の変数については従来どおりの結果が再現された.しかしながら,各利得情報への注視時間とこれらの変数の関連は認められなかった.既設機器の故障のため,計画していた眼球運動による注視時間測定が実施できなかったが,複数の方法による計測結果をもとに,Moving Window Systemによる測定の妥当性について検討し,同時に計測法を改善することが重要な課題といえる.
蛋白・酵素・核酸に関する新しい遺伝標識の法医学的応用

1.核酸に関する遺伝標識の応用親子鑑定にDNAマ-カ-を応用する研究がなされ、日本人に関する分析方法を確立しそのデ-タベ-スに必要な集団の検索を行った。マ-カ-としてはpYNZ22、pYH24、pYN22、MR24/1、3'ーGlobin、Mucin、Haーrasをプロ-ブにより検出されるものを選んだ。PCR法により検出されるMCT118、ApoBー100についても分析と応用が行われた。新しいVNTRとして、GSTπgeneの5末端領域に存在するものが極めて高いヘテロ接合度が日本人に存在することを見いだした。血痕、骨、組織などの法科学的試料からの個人識別を行うため、微量陳旧試料からの効率良い高分子DNAを回収する技術を確立する一方、得られたDNAをPCR法により解析するため、MCT118、およびApoBが検索され有用性が明らかとなった。骨や組織ではpYNH24による有効性も検討された。DNA Fingerprint法も親子鑑定へ実用化され、multiおよびsingle locusのプロ-ブを用いて、各種実例への検討がなされた。2.蛋白・酵素の遺伝標識の応用蛋白レベルのマ-カ-のうち、高度の変異性が報告されながらも、まだ我が国におけるデ-タ不足のものをタ-ゲットに集中的に研究した。ZAG型、IF型、ORM型、AHSG型、FactorBサブタイプ型につき日本人および他のアジア系人種集団に関するデ-タベ-スを作成、人種差に関する検討も行った。特にFactor I、DR、Factor Hについては種々の親子鑑定に応用しその有効性が明らかにとなった。酵素としては唾液アミラ-ゼの遺伝的変異につき分析し、遺伝様式、種差に関して研究成果が上がった。LDHアイソザイムについては損傷局所のパタ-ンの変化を法医学的生活反応に応用する道が開けた。ヒト生体試料として入手が最も容易で多くの遺伝マ-カ-を検出しうる血液・唾液を用いて、有核細胞中のDNA、血漿、赤血球中の遺伝的多型を検索した結果、今年度は主としてDNA多型を中心に多くの成果をあげることが出来た。1)DNA多型:Apolipoprotein B-100遺伝子のVNTRに関し日本人においても70%変異率で多型が検出され、しかもnon-isotopoe法により検出可能であり、実際の親子鑑定でも有用であることが証明された(原田)。更にXY-P-MR24/1、α-Globin 3',Ha-ras,MucinのDNA probeを用いて、日本人集団に対して検索した結果、MR24/1にHinfIをまたglobin 3'にpvuIIをそれぞれ制限酵素を用いた場合、高頻度に異なる表現型を検出しえた。不一致率も84%92%と非常に高いものとなり法医学への応用の有用性が確かめられた(横井)。HLA抗原を規定するDNAの多型をDQA,B,DRB,DPBを対象としてPCRと制限酵素断片長差を利用して検索した結果、非アイソト-プ法により個人識別が可能となり今後親子鑑定への応用の有用性が明らかにされた(福島)。免疫ケログリンのH鎮C領域を支配する遺伝子群(IgCH)をRFLPsにより同定した結果、70%のヘテロ型が検出され、個人識別への応用性が示唆された(鈴木)。2)酵素・蛋白の多型:血漿蛋白のα_2HS-グリコプロティンおよびオルソムコイドの多型について多くの集団について検索した結果、個人識別および各種疾患との相関を示すデ-タが集積された(梅津)。

ヒトおよびサルのアミラ-ゼを唾液および血清について比較した結果、ヒトとサルではバンドの出現の有無、変異について著るしい差が存在することが判明した(石本)。1)DNA多型の応用について.血痕からの人獣鑑別、個人識別に関して超高変異性を検出しうるDNAプロ-ブを用いての検出法のほかVNTR領域をPCR法で増幅して判定する方法が完成した。この成果を親子鑑定、法科学的試料に実際に応用した結果非常に有効であり、実務鑑定への道が開けた。一方、法科学的試料にはさまざまなものがあるが、特に焼死体の血液などからDNAを抽出する場合、多くの問題がある。本研究では超遠心法によりDNAを抽出して、VNTR用プロ-ブにより多型を判定することが可能になった。パライン切片から抽出したDNAによる個人識別もPCR法を用いることにより性別、親子鑑定に関して応用可能になった。これまでシングルおよびマルチロ-カス上のDNA高変異領域の多型同定にフィンガ-プリント用プロ-ブやVNTR検出用プロ-ブが用いられてきたが、このほかにRFLPとして報告されてきたものが数多くある。そのうちヒトガンマグロブリン遺伝子領域に検出される多型形質についても検討を行った結果、親子鑑定に有効な多型性バンドが同定された。更にApoBー100gene,ALDH2alleles,GST1は疾患との相関を示す点で重要な遺伝マ-カ-である。これに関し検索を行った結果、遺伝疫学的観点からのDNAマ-カ-に新たな道が開けた。2)蛋白・酵素の多型の応用についてFactorI,ClR,BFなどの蛋白は血清中に含まれ,日本人でも多型性変異を示す遺伝マ-カ-である。親子鑑定の際、父権肯定確率の計算の基礎となる遺伝子頻度は重要であるため、地方差、地理的勾配の点から検討を行った結果、FactorI,ClRについては東北地方から関西、九州にかけての勾配の存在が認められた。また、Orsomucoid,唾液アミラ-ゼ、赤血球抗原性についても、遺伝子頻度、検出法に新しい知見が得られた。1)DNA多型の検索と応用DNA多型の応用として旧陳で微量な法科学的試料(血痕・組織・骨)からDNAを抽出、各種遺伝マ-カ-を検索することは重要なテ-マである。この観点からさまざまな担体に付着した微量の血痕や精液斑からのDNAを回収する方法および収率についての研究がなされ、そのDNAを用いて司法鑑定を行なう際MCT118のVNTRにつきPCR法と電気泳動法を組み合わせて行なう技術ならびに具体的応用が研究され、pHYN22およびpcMM101をプロ-ブとして多型を検出する方法は日本人に極めて有効であることが判明した。新たにGSTπgeneの5末端側に高変異性を示すVNTRが存在することを発見、日本人集団における個人識別への有用性が示された。2)蛋白・酵素多型の検索と応用Allo Aクレチンを用いた遺伝形質の検出法を開発し、ZAG型、IF型、ORM型、AHSG型につき日本および他のアジア系人種集団に関するデ-タベ-スを作成、人種差に関する検討を行なった。さらに、Factor I(IF)、DIR、Factor HおよびFactor Bの日本人におけるsubtypeの遺伝的変異について研究し、親子鑑定、個人識別における有用性につき検討した。Factor BサブタイプであるFB1をモンゴロイド系民族(日本人、韓国人、中国人、フィリピン人、タイ人)について調べた結果、日本人、中国人、韓国人のみに検出された。
高速度光源を用いたアクティブビジョンセンシングによる運動物体の形状解析

高速度プロジェクタを利用して, 200Hz以上の高フレームレートで計測可能なアクティブビジョンシステムを構築した.まず,高速度プロジェクタと高速度カメラを用いて,時間符号化による高速度構造化光投影システムを構築した.次に,単一の計測画像から距離画像を取得する空間コード化法,および画像演算装置(GPU)を用いた実時間形状復元法を提案した.また,校正物体を用いずに,計測システムの幾何パラメータを自校正する方法を提案した.高速度プロジェクタを利用して, 200Hz以上の高フレームレートで計測可能なアクティブビジョンシステムを構築した.まず,高速度プロジェクタと高速度カメラを用いて,時間符号化による高速度構造化光投影システムを構築した.次に,単一の計測画像から距離画像を取得する空間コード化法,および画像演算装置(GPU)を用いた実時間形状復元法を提案した.また,校正物体を用いずに,計測システムの幾何パラメータを自校正する方法を提案した.DLPデバイスとLED光源を用いた高速度プロジェクタを利用して,200Hzで動作する高速度アクティブビジョンシステムを構成した.申請時の計画では,市販のデータプロジェクタが持つ高周波ノイズパターンを動的光源とする方法を提案していたが,研究開始後に任意パターンを高速度で投影可能なデバイス(TI社製Light Commander)が入手可能になったため,研究実施期間を延長して,研究計画の一部を変更した.具体的には,申請時の計画(1)に挙げた,市販のプロジェクタに固有の不安定なノイズを利用する方法に代わり,グレイコードなどの2進符号化パターンを用いた安定な方法を提案した.計画(2)に挙げた光学機器の幾何校正手法に関しては,手作業が一切不要な完全自動の方法を提案し,国内外の会議にて成果を発表すると共に,プログラムを研究代表者のホームページ上で公開した.さらに自校正の方法論を拡張してStructure From Motlon法の研究を行い,屋内外における人間の3次元位置と姿勢を,単眼の一人称視点ビデオ映像から取得する方法を提案した.計画(3)の3次元計測技術に関しては,(1)の計測システムを用いて,空間コード化法を用いて最大60Hzで距離画像を取得する方法論を明らかにした.並行して,局所識別性の高い空間コードを提案し,多段動的計画法を用いた大域的最適化手法とGPUを用いた並列計算手法を提案し,単一光源と単一カメラを用いた最小構成のアクティブビジョンシステムを用いて,複雑な形状の距離画像を実時間で取得する方法を示した.初年度に開発した高速度プロジェクタカメラシステムを複数組用いて,運動中の物体の表面形状を全周から計測する方法論を研究した.初年度の計画変更に伴い,距離計測に必要となる対応点計算に2進符号化コードを利用することによって,高精度かつ高速度の全周計測装置を構築することに成功した.その一方で,申請時に計画していた,DLPプロジェクタの高周波ノイズを用いた方法に関しても並行して研究を進め,研究成果を関連分野で最も競争率の高い国際学術雑誌(International Journal of Computer Vision)で発表した.申請時の計画(4)では,複数のプロジェクタカメラシステムの組み合わせを提案しており,実際には2組を用いるシステムを構築した.カメラとプロジェクタが互いに向かい合うように配置することによって,申請時の計画で懸念していた,投影光の干渉はほとんど観測されないことが明らかになった.そこで当初計画していた光源分離の手法の研究は省略し,以降の計画に注力した.計画(5)で挙げた,複数のGPUを用いた並列計算手法の研究に関しては,実際に8つのGPUコアを持つ計算機を構築して実験を行った.初年度に開発した並列動的計画法のアルゴリズムを改良したところ,コア数に比例してほぼ線形に速度が向上することを確認し,期待した以上の性能向上を実現できた.研究成果を,欧州の主要な学術会議であるBritish Machine Vision Conference(BMVC)2011で発表した.計画(6)で挙げた動作解析の応用に関して,実際に人間の手の動作,顔の表情,全身運動などを計測し,人体の表面形状の時系列データを取得(パフォーマンスキャプチャ)した.しかし,2組の計測システムの組み合わせでは,計測対象の姿勢によって必ずしも十分な計測範囲を確保することができ無いことが判明した.また,得られたデータを人間工学的な側面から解析するには時間が不足しており,当初計画していた運動特性の解明,動作戦略の分析,作業効率の評価は将来課題として残った.本研究課題では,計測技術の研究に焦点を当てたため,計測後のデータ処理に関しては手付かずである.今後,動作解析のための計測データベースを構築するために,ノイズ除去,遮蔽の検出などの,形状処理の研究が必要であろう.
有機溶媒・試薬を大幅に削減できる連続的配糖化プロセス

本研究では、従来法において少なくとも4段階を必要としてきた配糖体の合成を、水中においてわずか一段階で合成する画期的な有機合成プロセスを開発することを目的とした。具体的には、1.多糖バイオマスからリファイン化原料の調製、2.無保護状態における糖の1位の活性化、3.各種糖受容体の完全選択的な配糖化を、中間体を分離することなく連続的に行う新しい有機合成プロセスを構築する。オリゴ糖を水中で直接活性中間体へ変換する技術の確立水溶性脱水縮合剤を徹底的にスクリーニングした結果、オリゴ糖を直接活性化中間体へ変換する反応に最も適した試薬としてトリアジン骨格を有する脱水縮合剤ならびにジメチルイミダゾリニウム塩を見出した。これらを用いることにより、糖オキサゾリン、1, 6無水糖、チオグリコシド、アジ化糖の一段階合成に成功した。また、トリアジン骨格を有する活性中間体の構造決定を行い、さらに水中における安定性を評価したところ、比較的安定な化合物であることが分かった。酵素触媒による配糖体の合成配糖化反応は、本研究の根幹をなす部分であり、特に綿密な実験計画が必要であるので、以下の3つの観点から周到な準備を行った。すなわち、a :活性糖供与体を最もよく認識する酵素触媒の探索、b :反応系内に混在すると予想されるさまざまな化学種に対する触媒酵素の安定性に関する基礎的知見の集積、c :配糖体収率向上のために必要な諸条件(温度、濃度、pH等)の最適化、について詳細に検討した。その結果、トリアジン系脱水縮合剤の副産物である、ヒドロキシトリアジンがキチナーゼ酵素触媒の活性に与える影響を調査した結果、酵素活性の低下は見られるものの、かなりの糖転移活性を保持していることを認めた。この知見を基に、適切な反応条件を設定し、糖転移反応を試みたところ、目的とする配糖体が高収率で合成できることを明らかにした。1.グルコースを還元末端にに有するオリゴ糖リファイン化原料の調製タマリンド種(Tamarindus indica)由来のキシログルカンを、エンドグルカナーゼで処理することにより、6位が置換されていないグルコースユニットにおいて、位置選択的にグリコシド結合を切断し、9糖(XLLG)をグラムスケールで調製した(X:Xyl-Glc, L:Gal-Xyl-Glc, G:Glc)。この混合物にβ-ガラクトシダーゼを作用させ、7糖(XXXG)を調製した。2.オリゴ糖を水中で直接活性中間体へ変換する技術の確立ペプチド合成の汎用試薬である脱水縮合剤、塩化4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウム(DMT-MM)を用いることで、糖加水分解酵素に基質として認識される新規な活性化糖供与体を、無保護糖からヒドロキシ基を全く保護することなく、水中で直接合成した。3.トリアジン誘導体の加水分解評価ラクトースとDMT-MMから容易に合成されるDMT-β-LacをpH5.5,200mM酢酸緩衝液に溶解し、Trichoderma reesei由来エンドグルカナーゼIII(EGIII)を加え、30°Cで反応させたところ、加水分解が速やかに進行し、ラクトースが生成した。一方、p-ニトロフエニルラクトシドを用いた場合は加水分解がほとんど起きないことから、DMT-β-Lacは糖供与体として十分な反応性を有していることが示唆された。4.酵素触媒による配糖体の合成β-ラクトースに対して2当量のDMT-MMと2,6-ルヂジンを加え、室温で24時間反応させることにより、水中で新規活性化基質を直接生成させた。続いて、EGIIIとフエニルチオセロビオシドを加え、30°Cでインキュベートした結果、ラクトシル化生成物である4糖の生成が認められ(ラクトースからの収率=32%)、無保護糖からのワンポットラクトシル化を達成した。

すなわち、a :活性糖供与体を最もよく認識する酵素触媒の探索、b :反応系内に混在すると予想されるさまざまな化学種に対する触媒酵素の安定性に関する基礎的知見の集積、c :配糖体収率向上のために必要な諸条件(温度、濃度、pH等)の最適化、について詳細に検討した。その結果、トリアジン系脱水縮合剤の副産物である、ヒドロキシトリアジンがキチナーゼ酵素触媒の活性に与える影響を調査した結果、酵素活性の低下は見られるものの、かなりの糖転移活性を保持していることを認めた。この知見を基に、適切な反応条件を設定し、糖転移反応を試みたところ、目的とする配糖体が高収率で合成できることを明らかにした。
冠動脈硬化症に於けるアポEジェノタイプおよびアポE含有リポタンパク質代謝の検討

1995年1月より10月までの期間において当院にて心臓カテーテル検査を行ったアポEジェノタイプは450名、RLP-Cは206名に対して検討した。血清総コレステロール値はE2 : E3 : E4=178±38 : 185±34 : 196±31 (mg/dl)と有為差はないもののE4に多くE2に少ない傾向を示し、この傾向は中性脂肪、LDL-C、アポEに於ても同様であった。アポEは逆にE2 : E3 : E4=6.96±1.86 : 6.46±5.58 : 6.16±2.16 (mg/dl)とE2で多くE4で少ない傾向であった。また、HDL-CはE2 : E3 : E4=48±17 : 44±13 : 44±14 (mg/dl)とE2においてE3、E4に比し高い傾向があり、この傾向はアポA-Iにおいて同様であった。RLP-CはE2 : E3 : E4=8.36±7.63 : 5.86±4.14 : 5.75±5.30 (mg/dl)とE2が多くE4で少ない傾向であった。冠動脈造影上50%以上の狭窄を持つものをCAD(+)と判定しアポE遺伝子多形との関連を検討した結果、CAD(+)はE2 : E3 : E4=79 : 81 : 80 (%)であり一定の傾向を示さなかった。冠動脈疾患の分類を1枝、2枝、3枝病変とに分け検討したが、明らかな傾向は認められなかった。冠動脈疾患とRLP-Cとを検討したところE3、E4においてCAD(+)群においてRLP-Cが高い傾向にあった。以上のことからアポE遺伝子多形はリポ蛋白代謝に対して一定の影響を及ぼすことが示されたが、冠動脈疾患との間には明らかな傾向を見ることが出来なかった。
内側視索前野GnRHニューロンの解析から思春期発来の機構を考える

GnRHニューロンを遺伝子工学的に緑色蛍光タンパク(EGFP)で標識したトランスジェニックラットを作成し、そのニューロンの初代培養系を確立し、生理学的解析を行った。生後3-10日(新生仔)および35-40日(思春期)のラットから麻酔下に脳を摘出し、内側中核、OVLT、内側視索前野を切り出し、酵素処理で分散し、培養した。実験には培養12-24時間のニューロンを供した。EGFP蛍光によりGnRHニューロンを同定し、穿孔パッチクランプ法で膜電位依存性カルシウム電流の解析を行った。新生仔のGnRHニューロンでは低電位活性型(T型)の電流はほとんど認められなかったが、高電位活性型の電流は認められた。このカルシウム電流はニモジピン(L型チャネル阻害剤)とコノトキシンGVIA(N型チャネル阻害剤)でそれぞれ約20%抑制された。さらにR型チャネルの阻害剤であるSNX-482で50%以上が抑制された。しかしP/Q型チャネル阻害剤であるアガトキシンIVAは無効であった。以上から新生仔のGnRHニューロンはL型、N型およびR型のカルシウムチャネルを発現していると考えられる。次に思春期GnRHニューロンについて同様に解析した結果、L型、N型、R型に加えて、T型とP/Q型も発現していることが判明した。すなわち、T型とP/Q型は発達過程で発現調節を受けていることになる。これらのチャネルが思春期に始まるGnRHニューロンの活動変化とどのように関係するのかを今後解明しなければならない。なお雌雄差についても解析を行ったが、有意な差は見られなかった。GnRHニューロンを遺伝子工学的にクラゲ由来の緑色蛍光タンパク(EGFP)で標識したトランスジェニックラットを作成し、そのニューロンの初代培養系を確立し、生理学的解析をすすめている。生後1-3日のラットから氷温麻酔下に断頭し脳を摘出して、内側中隔、OVLT、内側視索前野を切り出し、酵素処理で分散し、培養した。実験は培養1-3日のものを用いた。EGFP蛍光を発するニューロンを選び、穿孔パッチクランプ法でイオン電流の解析を行った。その結果、膜電位依存性のカリウム、ナトリウムおよびカルシウム電流の発現が認められた。現在、カルシウム電流について詳細な解析を行っている。低電位活性型(T型)の電流はほとんど見られなかったが、高電位活性型の電流は認められた。このカルシウム電流はニモジピン、コノトキシン、SNX-482により各々抑制された。アガトキシンは無効であった。以上から新生仔のGnRHニューロンはL-型、N-型およびR-型のカルシウムチャネルを発現していることが明かとなった。なお、雌雄による差は認められなかった。これらのカルシウムチャネルの発現が発達段階でどのように変化するのか。またステロイドやその他の生理活性物質がカルシウムチャネルに作用するのか否か。するとすれば、どのような作用か、そのメカニズムはなにかを、今後あきらかにしなければならない。GnRHニューロンを遺伝子工学的に緑色蛍光タンパク(EGFP)で標識したトランスジェニックラットからGnRHニューロンを単離培養し、生理学的解析を行った。

このカルシウム電流はニモジピン(L型チャネル阻害剤)とコノトキシンGVIA(N型チャネル阻害剤)でそれぞれ約20%抑制された。さらにR型チャネルの阻害剤であるSNX-482で50%以上が抑制された。しかしP/Q型チャネル阻害剤であるアガトキシンIVAは無効であった。以上から新生仔のGnRHニューロンはL型、N型およびR型のカルシウムチャネルを発現していると考えられる。次に思春期GnRHニューロンについて同様に解析した結果、L型、N型、R型に加えて、T型とP/Q型も発現していることが判明した。すなわち、T型とP/Q型は発達過程で発現調節を受けていることになる。なお雌雄差についても解析を行ったが、有意な差は見られなかった。
後進への育成役割を担う看護師の世代継承性を測定するための尺度開発

平成30年度は、これまでの調査ならびに分析から作成した試作版について、追加的に必要となった理論的検討と、それに伴う尺度の再構築を実施した。研究着手当初は予定していなかった理論的検討が必要となった理由は、尺度が対象とする範疇として想定していたキャリア中期の看護師だけでなく、育成に携わる看護師にはキャリア後期の看護師も相当数みられ、キャリア後期の看護師に特異的な下位尺度が存在していることが明らかとなったためである。まず、平成29年度までで整理された下位尺度について、項目としての適切性の観点から追加的な表現の精緻化の要否を吟味したうえで、前年度までの取り組みで課題として残していた以下の点について、部分的な再分析を含めて検討した。その課題は「表現として部分的に難解で回答困難とされた項目」「語句の選択あるいはディクションにより複数の意味として理解された項目」「質問の主体と客体の関係が不明瞭で捉え方により回答が異なり得るとされた項目」「質問項目全体的に回答が困難さを伴う項目」の存在であった。尺度の再構築を実施した結果、将来的な世代継承性の発現に寄与する成年前期に基盤となる経験である「受けた育成への肯定的意味づけ」「絶えざる自己研鑽」「育成者としての葛藤克服」の3点と、キャリア中期以降における世代継承性の発現である「恩義の世代超越的返済(「返済上の葛藤」を含む)」「後継者への職位の発展的委譲」「組織固有のDNAの伝承」として下位尺度が構成された。平成27年度は、本研究課題に先行して取り組んだ、研究活動スタート支援「病院組織に勤務する中堅看護師における世代継承性の構造(課題番号:22890226)」と若手研究(B)「病院組織に勤務する看護師における世代継承性モデルの開発と検証(課題番号:24792420)」の段階で明らかにした内容を、関連文献と照らし合わせつつ尺度構成概念の検討を行った。それに先行し、まずは先行研究レビューの内容を次の観点から追加的に整理した。世代継承性には、第1に、後進に対してどのような内容を受け継いでもらいたいと捉えているかという内容面の項目と、第2に、先達が後進に対して継承のための働きかけを行うことができるようになるのはなぜかという、機序に関する項目の2系統に大別される。したがって本研究にまつわる一連の研究過程で明らかにした世代継承性モデルについても同様の操作を加え、内容面と機序面について弁別した。うち、本研究によって開発しようとする尺度は、看護師が世代という長期的な時間幅の中で繰り広げられる育成的な志向について明らかにするという目的を有しているため、看護師の世代継承性が萌芽し実際に展開するという機序に関する項目に限定する必要があることを特定した。平成27年度末の段階では尺度開発(下位尺度とそれに応じた各質問項目の試作)の最中であるために、各下位尺度を構成するコンテンツについて現段階で公表することは差し控えることとするが、下位尺度(案)としては現時点で概ね5つに大別できており、下位尺度ごとに質問項目の試作への着手を開始している段階である。本研究に関するプロポーザルの進捗に照らして、平成27年度は、世代継承性に関する既存の成果を体系的に統合することと、質問項目の試作に着手することの2点を挙げていた。現時点で双方について到達すべき水準に達しているため、区分(2)とした。平成28年度は、平成27年度に実施した先行研究レビューに基づいて2系統に大別した、世代継承性の内容面と機序面の観点から、下位尺度と各質問項目の試作をおこなった。それに先立ち、もともと研究計画に挙げていた専門家間討議を実施し、経営学のうち組織行動論を専門とする研究者3名と、看護学を専門とする研究者2名からスーパーバイズを受けた。個々のスーパーバイズでは、これまでの分析上の観点としては上っていなかった新規的な観点の付与と、従来までの分析における解釈結果に対して捉え方が異なる観点の付与がなされた。これにより部分的な再分析が必要となったため、当初の計画に追加した分析を実施した。結果的に世代継承性概念の一層の充足がもたらされ、尺度を構成する下位尺度ならびに質問項目について網羅的かつ構成概念としての妥当性の向上に寄与した。以上の取り組みに伴い、結果的に、計6つの下位尺度に分類された。すなわち、将来的な世代継承性の発現に寄与する成年前期に基盤となる経験である「受けた育成への肯定的意味づけ」「絶えざる自己研鑽」「育成者としての葛藤克服」の3つの下位尺度と、キャリア中期における世代継承性の発現である「恩義の世代超越的返済」、定年退職を現実的に控えたキャリア後期での世代継承性の発現である「後継者への職位の発展的委譲」「組織固有のDNAの伝承」である。それら下位尺度ごとに質問項目を試作し、現時点で約80項目の質問項目が見出された。当初のプロポーザルに掲げていた専門家間討議では、多くのスーパーバイズを得ることができ、大変有益な改訂機会となった。一方、それぞれのスーパーバイズの内容を従来までの研究結果へと統合してゆく過程では相応の期間をかけて改定することとなった。これにより、結果的に、当初に予定していた小規模の予備的調査を行うには至らなかった。

平成29年度は、平成28年度までで専門家間討議を経て内容妥当性を担保した下位尺度ならびに各質問項目の試作版について、後進への育成役割を実質的に担っているキャリア中期にある看護師の協力を得、質問項目の表面妥当性を高めるべく、予備調査として表現の精緻化を図った。当初、将来的な世代継承性の発現に寄与する成年前期に基盤となる経験である「受けた育成への肯定的意味づけ」「絶えざる自己研鑽」「育成者としての葛藤克服」の3つの下位尺度と、キャリア中期以降における世代継承性の発現である「恩義の世代超越的返済」「後継者への職位の発展的委譲」「組織固有のDNAの伝承」として構成され、下位尺度ごとに試作した質問項目は計82項であった。表現の精緻化の結果、各々の下位尺度には修正の必要性は認めず、表現として適切であったことが確認された。次いで、各質問項目においては、表現として部分的に難解で回答困難とされた項目、語句の選択あるいはディクションにより複数の意味として理解された項目、質問の主体と客体の関係が不明瞭で捉え方により回答が異なり得るとされた項目等、表現の修正が必要となる項目が存在していた。また、今回協力を得た看護師の経験年数は815年であったが、経験年数の違いにより、キャリア中期以降に発現するとされる下位尺度の「恩義の世代超越的返済」「後継者への職位の発展的委譲」「組織固有のDNAの伝承」については、質問項目全体的に回答が困難であることが確認された。キャリア中期以降に発現するとされる3つの下位尺度に含まれる質問項目全体について、経験年数によっては回答が困難であるという、当初には予期していなかった事象が確認された。本研究課題として開発する尺度の主たる対象は、後進への育成役割を担う看護師であり、キャリア中期までの看護師が該当することを想定している。その場合に、当該下位尺度に内包される質問項目をいかに扱うことが適切かについて、追加的に検討を要する結果となったためである。平成30年度は、これまでの調査ならびに分析から作成した試作版について、追加的に必要となった理論的検討と、それに伴う尺度の再構築を実施した。研究着手当初は予定していなかった理論的検討が必要となった理由は、尺度が対象とする範疇として想定していたキャリア中期の看護師だけでなく、育成に携わる看護師にはキャリア後期の看護師も相当数みられ、キャリア後期の看護師に特異的な下位尺度が存在していることが明らかとなったためである。まず、平成29年度までで整理された下位尺度について、項目としての適切性の観点から追加的な表現の精緻化の要否を吟味したうえで、前年度までの取り組みで課題として残していた以下の点について、部分的な再分析を含めて検討した。その課題は「表現として部分的に難解で回答困難とされた項目」「語句の選択あるいはディクションにより複数の意味として理解された項目」「質問の主体と客体の関係が不明瞭で捉え方により回答が異なり得るとされた項目」「質問項目全体的に回答が困難さを伴う項目」の存在であった。尺度の再構築を実施した結果、将来的な世代継承性の発現に寄与する成年前期に基盤となる経験である「受けた育成への肯定的意味づけ」「絶えざる自己研鑽」「育成者としての葛藤克服」の3点と、キャリア中期以降における世代継承性の発現である「恩義の世代超越的返済(「返済上の葛藤」を含む)」「後継者への職位の発展的委譲」「組織固有のDNAの伝承」として下位尺度が構成された。平成28年度は、尺度の理論的枠組みに沿いつつ、下位概念ごとに質問項目の創出を試作版として完了することを目標とする。次いで、試作版の回答可能性や識別力の有無を明らかにして質問項目を取捨選択し精錬させるために、比較的小規模の対象に対して小規模調査を実施する。
体積変化の計算化学が解明する高圧生体分子反応

本研究は、溶液中のタンパク質体積を、全原子モデルを用いた分子動力学計算によって理論的に調査することで、高水圧が蛋白質の構造・ダイナミクスに与える影響を解明する。また、水圧が到達する細胞質はタンパク質や核酸などの生体分子が高濃度で共存している分子混雑環境である。本研究はこのような細胞環境の物理化学的特徴と、その圧力応答を調査することも目的とした。本研究を通して、細胞環境における蛋白質水和体積や、排除体積効果について分子レベルの解明が進んだ。また、研究に必要な分子の幾何学的性質を解析するプログラムを開発し、大規模計算機上で高速に実行できるように並列化した。これらのプログラム群は近日中に公開する。本研究は、溶液中の生体分子の体積を、分子動力学シミュレーションによって理論的に計算することで、深海生物の圧力耐性の解明や、生体内化学反応の圧力による制御、ひいては圧力によって反応速度が調節可能な新規酵素の設計などに必要な知見を得るための基盤研究である。本研究課題の主要な目標の一つに、細胞環境中における蛋白質体積の微視的調査がある。従来、タンパク質の体積は、実験的および理論的手法によって主に希薄な溶液環境において調査されてきたが、実際の細胞環境は多くの蛋白質、核酸、低分子が近距離で隣り合う濃厚な分子混雑環境である。本年度は実際の細胞質における蛋白質濃度を再現した分子混雑環境(多数の蛋白質が混み合って共存している系)をモデリングし、分子動力学シミュレーションを実行した。得られた原子座標の時系列データから、細胞質中における蛋白質周囲の水分子分布や、ターゲット蛋白質に対するその他の蛋白質の平均的分布を解析した。上記のシミュレーション・解析と並行して、蛋白質の幾何学的体積計算プログラムの開発も進めている。蛋白質の部分モル体積は、構成原子によるVDW(ファンデアワール)体積や、内部の空洞によるキャビティー体積、水分子の水和による水和体積で構成される。vdW体積およびキャビティー体積の計算および可視化は本研究において必要不可欠であるため、MDシミュレーションと連携可能な体積計算プログラムをC++言語を用いて開発中である。本研究は、溶液中のタンパク質の体積的寄与を、全原子モデルを用いた分子動力学シミュレーションによって理論的に調査することで、深海生物の圧力耐性の解明や高水圧がタンパク質機能に与える影響などを分子レベルで明らかにする事を目的としている。一方で、水圧が到達する最終的な場である細胞質はタンパク質や核酸などの生体分子が高濃度で共存している分子混雑環境である。本研究はこのような細胞質内の物理化学的環境と、その圧力応答を調査するという側面も持ち合わせている。本年度は、前年度に引き続き生体分子体積計算プログラムの高速化と改良を行った。空間分割法とセルインデックス法を組み合わせることで、(同じ解像度のグリッドサイズで比較した場合)従来の15倍程の高速化を達成した。このような高速化と並行して、現在まで単一のタンパク質解析用に設計した体積計算プログラムを、細胞内のように多数の蛋白質が互いに近接しながら拡散している場合に適用できるように改良した。溶液系の分子動力学シミュレーションは主に周期境界条件を用いているため、基本セル内の各グリッドが周囲の蛋白質からどれほど離れているか決定するにはイメージセル中の蛋白質も含めて近傍原子を効果的に抽出する必要があった。分子動力学シミュレーションは、昨年度に作成した、小型のタンパク質を用いた分子混雑系モデルに対して続行し、数百ナノ秒ダイナミクスが得られている。シミュレーションから得た原子座標の時系列データから、細胞環境内の水和体積や幾何学的体積の解析を行った。得られた成果の一部は学術誌に投稿準備中である。本研究は、溶液中のタンパク質の体積的寄与を、液体の統計力学理論と全原子モデルを用いた分子動力学(MD)シミュレーションによって理論的に調査する。これにより高水圧が細胞内のタンパク質機能に与える影響などを分子レベルで明らかにする事を目的としている。当該年度は前年度に引き続き生体分子体積計算プログラムの高速化と改良を行った。これについては、さらなる高速化と細胞環境モデルなどの大規模系への拡張性を目的に、計算の並列化を進めた。系を複数の空間に分割し、各部分空間をさらに小さいセルに分割する階層的空間分割法を採用した。部分空間とセルの計算はそれぞれ分散メモリ型並列計算ライブラリ(MPI)と共有メモリ型並列計算環境(OpenMP)によって並列化する、ハイブリッドMPI/OpenMP解析システムを構築した。これにより、同時使用するcpuの数にほぼ比例して計算を加速することが可能となった。東京大学スーパーコンピュータシステムFX-10を用いたベンチマーク計算では、蛋白質の水和体積計算を数千cpuを用いて極めて短時間で計算することが可能となった。この成果については現在学術誌に投稿準備中であるとともに、ソースコードを公開予定である。MDシミュレーションは、昨年度の継続として小型のタンパク質を用いた分子混雑系モデルや、蛋白質+RNA+代謝物+イオンから構成される細胞環境モデルについて試行し、それぞれマイクロ秒スケールの分子挙動が得られた。シミュレーションから得た原子座標の時系列データから、分子混雑環境や細胞環境内の水和体積や幾何学的体積の解析も終了し。成果の一部を学術誌に投稿中である。分子体積計算のプログラム開発(高速化、並列化)および、分子混雑環境や細胞環境の体積寄与の調査は順調に進んでいる。一方で、高圧環境が蛋白質の構造、機能にあたえる調査についてはMDシミュレーションのスケジュール上、やや遅れが生じている。

本研究は、溶液中のタンパク質の体積的寄与を、全原子モデルを用いた分子動力学シミュレーションによって理論的に調査することで、高水圧がタンパク質機能に与える影響などを分子レベルで明らかにする事を目的としている。一方で、水圧が到達する最終的な場である細胞質はタンパク質や核酸などの生体分子が高濃度で共存している分子混雑環境である。本研究はこのような細胞質内の物理化学的環境と、その圧力応答を調査するという側面も持ち合わせている。本年度は、前年度から開発を続けている分子の幾何学的解析プログラムの開発が終了し、所属するグループが開発中の超並列分子動力学ソフトウェアGENESISの解析モジュール「SPANA」として公開準備中である。MDシミュレーションについては、前年度から継続していた小型タンパク質による分子混雑系(細胞質内のように生体高分子が高濃度で混み合っている系)の解析が終了した。ここでは、タンパク質のサイズと水和層体積(タンパク質周囲に形成される水和層の体積)との関係を明らかにし物理化学系専門誌に発表された。また、本研究課題と連携して進められていた大規模細胞質モデルの分子ダイナミクスについても生命科学系専門誌などに発表した。ここで得られる大規模な分子座標データ解析の一部に、本課題で開発したSPANAが使用された。一方で、複数の酵素タンパク質を含む細胞質モデルに高圧を付加したMDシミュレーションについては現在実行中である。本研究は、溶液中のタンパク質体積を、全原子モデルを用いた分子動力学計算によって理論的に調査することで、高水圧が蛋白質の構造・ダイナミクスに与える影響を解明する。また、水圧が到達する細胞質はタンパク質や核酸などの生体分子が高濃度で共存している分子混雑環境である。本研究はこのような細胞環境の物理化学的特徴と、その圧力応答を調査することも目的とした。本研究を通して、細胞環境における蛋白質水和体積や、排除体積効果について分子レベルの解明が進んだ。また、研究に必要な分子の幾何学的性質を解析するプログラムを開発し、大規模計算機上で高速に実行できるように並列化した。これらのプログラム群は近日中に公開する。プログラム開発や、細胞環境の調査は順調に進んでおり、成果の一部は論文投稿を控えている。好圧菌酵素の調査については、立体構造やアミノ酸配列の特徴を調査中である。一方で、多くの生物に共通してみられる解糖系酵素については、細胞環境や希薄溶液環境でのシミュレーションが進んでおり、これらのタンパク質に対しては圧力応答を調査する準備が整いつつある。分子混雑環境や細胞環境におけるタンパク質について、常圧下でのMDシミュレーションが終了し体積要素の解析もほぼ完了している。今後は、このような系に対し、高水圧を付加して各体積要素(水和体積やキャビティーの体積など)がどの程度変化するかを定量的に調査する予定である。可能ならば高圧力による酵素の活性部位の構造やその水和状態の変化などを調査し、生化学的機能との関係を明らかにしたい。
肝臓に対するインクレチン作用機序の解明

小腸より分泌されるincretinは膵に対する作用(insulin分泌増強/glucagon分泌抑制)を介して血糖を低下させる。本研究ではincretinの新たなる作用部位として肝臓に着目し、培養実験にて同シグナルの肝細胞内への到達とそれに伴う糖脂質代謝関連遺伝子の発現動態の変化、更には同細胞質内での脂肪分画組成の変化や培養上清中の糖レベルの変化、更には同剤の投与によるマウス肝内での糖脂質代謝の変化を確認した。本研究結果はincretinの新たな糖脂質代謝調節機構としての肝細胞を介した経路の存在を示しており、更なるincretin関連薬の臨床的有用性の可能性を広げた。小腸上皮細胞より分泌されるインクレチンは主に膵臓でのinsulin分泌増強作用やglucagon分泌抑制作用を介して血糖を低下させる。本研究では、インクレチンの肝臓での糖脂質代謝に及ぼす影響、更には肝線維化や肝発癌への関与を検討し、生体に及ぼす肝臓を介したインクレチン作用を明らかにすることを目的としている。そのため、まず本年度は肝細胞内に直接、インクレチンシグナルの到達を認めることを、1)肝細胞膜表面へのインクレチンレセプターの発現をreal-time PCRや免疫染色法にて確認し、2)更には本来のインクレチン標的臓器である膵β細胞にてインクレチンシグナルが細胞内に到達する際に上昇するカルシウム濃度やPDX-1の発現が、肝細胞内においてもインクレチン添加時に上昇していることを確認した。次に、インクレチンの肝細胞における糖脂質代謝への影響を検討しており、肝細胞株にインクレチンを添加させ、細胞内脂肪量の増加と糖代謝関連酵素の幾つか(CREB, PGC1α, G6PC, PCK1, GK)の発現に変化のあることをmRNAレベルと蛋白レベルにて確認してきた。今後更に、脂質代謝関連遺伝子(SREBP-1&2, MLX, ACC, PK, PPARα, AOX,MTTP, DGAT-1&2, perilipinなど)の発現動態の解析と、肝線維化へのインクレチンの影響(細胞の形態的変化や線維化関連遺伝子(procollagen, MMPs, TIMPs, ICAM-1, VCAM-1など)の発現動態の解析、更には線維化関連サイトカイン(TGFβ, PDGFなど)の発現動態の解析によって)や、肝発癌に及ぼす影響(細胞の増殖能やapoptosisに及ぼす影響細胞増殖関連signal遺伝子の解析によって)を検討する予定である。小腸上皮細胞より分泌されるインクレチンは主に膵臓でのinsulin分泌増強作用やglucagon分泌抑制作用を介して血糖低下作用をうむとして、その関連薬が近年臨床応用されている。本研究では、生体に及ぼす新たなインクレチンの作用部位として肝臓に着目し、インクレチンの肝臓における糖脂質代謝に及ぼす影響、更には肝線維化や肝発癌への関与を、肝培養細胞や動物モデルを用いて検討することを目的とした。我々は、培養実験にてインクレチンシグナルの肝細胞質内への到達とそれに伴う糖・脂質代謝関連遺伝子の発現動態の変化を確認した。更には、HPLC法による肝細胞での脂肪分画組成の変化や細胞上清での糖レベルの変化を確認、更には最終年度において、in vivoによる検討としてマウスに対しインクレチンを投与し肝臓内における糖脂質代謝の変化を確認した。更には肝線維化や発癌に及ぼすインクレチンの影響を検討した。肝星細胞株にインクレチンを添加し細胞の形態的変化や線維化関連遺伝子などの発現動態の解析、線維化関連サイトカインの発現動態の解析を行ったが、いずれも有意な所見は得られず、更にはインクレチン投与マウスの肝細胞を採取し、PNCA染色やBrdU labeling index、TUNEL染色による細胞増殖やapoptosisの変化を評価するも、大きな所見は得られなかった。本研究結果はインクレチンの新たな糖脂質代謝調節機構として肝細胞を介した経路の存在を示し、更なるインクレチン関連薬の臨床的有用性の可能性を広げたが、肝線維化や肝発癌におけるインクレチンの影響に関しては更なる研究課題と思われた。

次に、インクレチンの肝細胞における糖脂質代謝への影響を検討しており、肝細胞株にインクレチンを添加させ、細胞内脂肪量の増加と糖代謝関連酵素の幾つか(CREB, PGC1α, G6PC, PCK1, GK)の発現に変化のあることをmRNAレベルと蛋白レベルにて確認してきた。今後更に、脂質代謝関連遺伝子(SREBP-1&2, MLX, ACC, PK, PPARα, AOX,MTTP, DGAT-1&2, perilipinなど)の発現動態の解析と、肝線維化へのインクレチンの影響(細胞の形態的変化や線維化関連遺伝子(procollagen, MMPs, TIMPs, ICAM-1, VCAM-1など)の発現動態の解析、更には線維化関連サイトカイン(TGFβ, PDGFなど)の発現動態の解析によって)や、肝発癌に及ぼす影響(細胞の増殖能やapoptosisに及ぼす影響細胞増殖関連signal遺伝子の解析によって)を検討する予定である。上記の様に現在、全ての計画の約2/3程度進んだと考えられる。今後、同様に実験計画に基ずいて、実験を遂行したい。上記の様に現在、全ての計画の約1/3程度進んだと考えられる。上記の様に、現在インクレチンシグナルの肝細胞質内への到達とそれに伴う、脂肪蓄積軽減作用と糖代謝関連酵素の発現変化を確認している。今後は、脂質代謝関連遺伝子(SREBP-1&2, MLX, ACC, PK, PPARα, AOX,MTTP, DGAT-1&2, perilipinなど)の発現動態の解析をreal-time PCR法やWestern法にてmRNAや蛋白レベルにて検討する。更には、HPLC法による脂肪分画組成の変化や細胞上清での糖レベルの変化を検討する。そして本年度はin vivoによる検討して、マウスに対しインクレチンを投与し肝臓における糖脂質代謝の変化を検討する。また、肝線維化へのインクレチンの影響の検討として、肝線維化進展に重要な肝星細胞の活性化を細胞の形態学的変化や、免疫染色等によって細胞質内でのαSMAやデスミンの発現動態の変化、更には線維化関連遺伝子(procollagen, MMPs, TIMPs, ICAM-1, VCAM-1など)の発現動態の解析を、同様にreal-time PCR法やWestern blotting法にて検討する。また、インクレチンの肝発癌に及ぼす影響として、細胞の増殖能やapoptosisに及ぼす影響細胞増殖関連signal遺伝子の解析にも検討する予定である。