hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リスニング能力を芫めるためのオンラインソフトウェアのデザインと開発

この研究の目的は、英語のリスニングの練習のウエブサイトをデザイン・開発することにあり、ふたつの部分で構成されている。ひとつは、html tagsとJavaScriptで書かれたコンピュータサイエンスの文献を自動的にマークアップするためのソフトウエアの開発であり、もうひとつはその文献の字幕のついたQuickTimeムービーのストリーミングの開発である。まずコンピュータサイエンス用英語の分折を、よく使われる語彙の基本セットを選び出して決定することから始めた。このセットは、辞書を引かない言葉を選ぶためのストップリストとして使われる。最終的なマークアップページは、多くの語の発音サンプルのついたワンクリックで使える辞書が検索できるようになっている。もうひとつは、同じ文献が読み上げられ、それがビデオテープに音声とテキストとして録画される。そのテープはデジタル化され、QuickTimeのストリーミングとしてアクセスできる「ヒントムービー」に変換される。そのムービーに字幕をつけるためにいろいろなシステムを試してみた。この過程は単純そうに見えるが、実のところそうではなかった。最終的に、文章は45語の句に分けてテキストファイルとして保存すべきであるとの結論に至った。そしてテキストファイルは、おのおのの句が2秒間ほど現われるQuickTimeに変換される。更にムービーは文献のビデオ録画のテレプロンプターの役割をもって再生される。しかるに、音声は文章とシンクロナイズし、その逆方向性はない。そしてテキストムービーはボイスムービーと合体し、最終映像はストリーミングサーバー上に「ヒント」として登場する。最終的にマークアップドキュメントとストリーミングムービーの両方がウエブページ上に設置され、利用者がアクセスできる環境が整う。今回サンプルとして使った8つの文献の全てが、マークアップされ、字幕のついたストリーミングムービーとなった。
精神分裂病の病的多飲行動の分子遺伝学研究

精神科疾患の多飲行動が遺伝の影響下にあることを調べるために、まず対象として親子または同胞で精神科疾患に罹患している例、64ペアを発見した。そのペアでの多飲行動の有無がどれほど一致するかを見たところ、予測されるよりも有意に高い確率で一致が見いだされた(goodness-of-fitness検定:χ^2=6.81,df=1,p=0.009)。つまり、精神科疾患での多飲行動が遺伝の影響を受けていることを支持する結果となった。次にどのような遺伝子が多飲行動に関わっているかを調べるために、多飲行動のある精神分裂病患者65名と多飲行動のない精神分裂病対照患者97名の間で、多飲行動に関係するとの報告のあるアンジオテンシン変換酵素の遺伝子多型(ACE遺伝子I/D多型)について関連研究を行ったところ、遺伝子頻度において多飲のある群でACE遺伝子D遺伝子頻度が高い傾向を示した(χ^2=2.95,df=1,p=0.086)。また多飲行動のある群を水中毒発症群に限定した場合は有意にD遺伝子頻度が対照群に比較して高かった(χ^2=5.46,df=1,p=0.0196;Bonfferoni correction,p=0.0392)。またこの有意差は性、年齢、抗精神病薬投与量、喫煙の有無などの交絡因子を回帰分析で補正しても残った。ACEのD遺伝子はI遺伝子に比べてACE活性の上昇をもたらすことが知られており、本研究は遺伝的にACE高活性の患者に病的多飲や水中毒が発症しやすいことを示唆しているものと考えられた。上記結果については現在、医学雑誌に投稿中であり、第23回日本生物学的精神医学会(平成13年4月、長崎)で発表予定である。精神分裂病を親子あるいは兄弟にて発症しているペアを集積しており、現在まで約15ペアを発見している。来年度は更に例数を増やした上で、多飲・水中毒の一致率を集計してその遺伝の関与を検討する予定である。また分子遺伝学的研究に関しては、多飲・水中毒の非発症群について約100例の患者に書面にて同意を得た上で末梢血からのDNA抽出を行なった。今後、発症群についてもできるだけ多人数(約100人)の発見に努め、DNA抽出を行なう予定である。その後、多飲行動と関係あると考えられる遺伝子のDNA多型を用いて患者-対照試験による関連研究を行なう。
ゲル形成能を持つ電解質多糖の標準資料作製とその分子特性解析

ゲル形成能を持つ電解質多糖として、既に分子構造の解析が行われているジェランガムを選び、その精製法を検討した。ジェランガムはD-グルコース、D-グルクロン酸、D-グルコース、L-ラムノースを繰り返し単位とする直鎖状高分子である。平成8年度には、ジェランガムの0.1%水溶液を105Cで10時間加熱溶解後ろ過し、60Cでナトリウムイオンに置換したイオン交換樹脂カラムを通し更に凍結乾燥を行い試料を回収することにより、混入した不要なイオンが除かれ、ナトリウム型の精製試料が得られることを見い出した。精製試料を用いてNaCl水溶液中で温度を変えて浸透圧測定を行った結果、ジェランガム分子の数平均分子量は約5×10^4であり、分子に形態は温度低下にともない1分子から2分子会合体形成へと変化すること、その際の会合速度は溶液の塩濃度が高いほど速く、会合の自由エネルギーは20KJmol^<-1>程度であることなどの知見を得た。さらに試料のNaCl溶液の固有粘度の温度依存性の測定からも温度低下に伴う形態変化を示唆する結果が得られた。平成9年度には粉砕時間を210分から30分までかえた6種のジェランガム粉砕試料について、それぞれの水溶液を加熱溶解(105Cで10時間)ろ過により粉砕時に混入した金属粉を除きさらに、イオン交換樹脂カラムを通して試料中のイオンをナトリウムに置換して、ナトリウム型の精製試料を作製した。これらの試料を50mM,NaCl水溶液に溶解し、40°Cで浸透圧測定を行い、数平均分子量を求めた。得られた分子量は6万から1万にわたり、粉砕により分子の主鎖が切れ、異なった分子量の試料が作製されたことが確認された。また、これら試料溶液の浸透圧第二ビリアル係数はほぼ一致した値であり、イオン間の相互作用を示すものと考えられた。本年度の研究で、ジェランガムの0.1%水溶液を105Cで10時間加熱溶解後ろ過し、60Cでナトリウムイオンに置換したイオン交換樹脂カラム(アンバーライト120B)を通し更に凍結乾燥を行い試料を回収することにより、混入した不要なイオンが除かれ、ナトリウム型の精製試料が得られることを見い出した。イオン交換カラム、凍結乾燥器は本年度科学研究費補助金で購入したものである。分子量の異なる試料を得るために、現在粉砕処理をしたジェランガムについてもイオン交換処理行っている。未粉砕の精製試料を用いてNaCl水溶液中で温度を変えて浸透圧測定を行った結果、ジェランガム分子の数平均分子量は約5×10^4であり、分子に形態は温度低下にともない1分子から2分子会合体形成へと変化すること、その際の会合速度は溶液の塩濃度が高いほど速く、会合の自由エネルギーは20KJmol^<ー1>程度であることなどの結果を得た。それらナトリウム型ジェランガムNaCl溶液の固有粘度の温度依存性の測定からも温度低下に伴う形態変化を示す結果が得られた。また、浸透圧、粘性の測定を通じて、希薄溶液中における分子の形態に及ぼすK^+イオンの影響が、他種のイオンに比べ特に大きいことを見い出した。現在ズリ応力を変えて粘度を測るために、本年度新たに作製した水平型のガラス毛細管粘度計を用いて測定精度などの検討を行っている。来年度は粉砕処理した精製試料について、浸透圧と粘性の測定を行う予定である。

ゲル形成能を持つ電解質多塘として、既に分子構造の解析が行われているジエランガムを選び、その精製法を検討した。ジエランガムはD-グルコース、D-グルクロン酸、D-グルコース、L-ラムノースを繰り返し単位とする直鎖状高分子である。本年度の研究で、ジエランガムを粉砕時間を210分から30分までかえて6種の試料を作製した。それぞれの試料の0・1%水溶液を105Cで10時間加熱溶解後ろ過し、粉砕時に混入した金属粉を除いた。その後、60Cでナトリウムイオンに置換したイオン交換樹脂カラム(アンバーライト120B)を通し更に凍結乾燥を行い試料を回収することにより、試料中の不要なイオンが除き、ナトリウム型の精製試料を作製した。作製試料を50mM,NaCl水溶液に溶解し、40°Cで浸透圧測定を行い、数平均分子量を求めた。得られた分子量は6万から1万に渡り、粉砕により分子の主鎖が切れ、異なった分子量の試料が作製されたことが知られた。また、これら試料溶液の浸透圧第二ビリアル係数はほぼ一致した値であり、イオン間の相互作用を示すものと考えられた。以上の結果についてはRept.Prog.Polym.Phys.Japanに投稿準備中である。作戦試料は分子量分布が広いと考えられるので、現在、生体高分子分離用連続限外ろ過装置を使いさらに精製を行っている。
筋輝度を用いた口腔周囲筋の加齢変化の解明と新たな摂食嚥下機能評価法の開発

本年度は、健常成人ボランティア10名(男性5名,女性5名,平均年齢22.3±2.7歳)を対象として,BMI(Body mass index),SMI(Skeletal muscle mass index),咬筋厚さ(安静時,咬合時),筋輝度および最大咬合力の関連について評価を実施したとした。対象者には事前に研究内容の十分な説明を行い,同意を得た.BMI,SMIの測定には体成分分析装置(In Body S10,grobal health社製),咬筋厚,筋輝度の測定には超音波診断装置(Voluson E8,GE Healthcare社製) ,最大咬合力の測定にはDENTAL PRESCALE,富士写真フィルム社製),オクルーザーFPD-707,ジーシー社製)を用いた。統計学的検討は,最大咬合力を従属変数として,BMI,SMI,咬筋厚(安静時・咬合時),筋輝度を独立変数とした重回帰分析を行った.すべての統計の有意水準は,5%未満とした.最大咬合力に影響を与える有意な因子として,筋輝度が抽出され,回帰係は-0.787(p<0.01)であった.最大咬合力は,四肢の筋肉量の指標であるSMIや,咬合時の咬筋厚よりも,咬筋の筋輝度と強い相関が認められた.筋輝度は,筋生検による脂肪浸潤と関連することが報告されている3).また,筋ジストロフィー患者を対象に超音波診断装置を用いた口腔周囲筋の評価において,筋輝度は摂食嚥下機能低下の指標の一つとなると報告されている4).今回の結果からも,咬筋の筋輝度を指標とした質的評価が口腔機能評価法として有用である可能性が示唆された.また,今回我々が行った超音波診断装置を用いた咬筋の筋輝度を指標とした口腔機能評価法は,簡便に実施することが可能であり,今後は高齢者施設入所者を対象として,対象者を増やした調査を実施する予定である.健常成人ボランティアを対象とした調査により、SMIやBMI、咬筋の厚さなどの項目と比較して、超音波診断装置による咬筋の筋輝度評価と既存の最大咬合力評価法であるDENTAL PRESCALEの測定値の間に強い相関を認めることができた。研究実施計画の記した測定機器と一部異なる測定機器を使用することになったものの、計画は概ね遂行できたものと考えられる。本年度は高齢者施設入所者を対象として、昨年度健常成人ボランティアにて強い相関が認められた超音波診断装置による筋輝度評価を咬筋に加えて、舌筋群も加えて実施する予定である。また、健常成人ボランティアでは相関が認められなかったSMI、BMIや金の厚さに関する評価も同時に実施する。また、現在の摂取可能食品と筋輝度との関連性についても調査を実施する予定である。現在、協力施設を選定するとともに施設利用者ならびに大学者に対して研究説明を実施し、多くの対象者に参加いただけるよう準備しすすめている。

また、現在の摂取可能食品と筋輝度との関連性についても調査を実施する予定である。現在、協力施設を選定するとともに施設利用者ならびに大学者に対して研究説明を実施し、多くの対象者に参加いただけるよう準備しすすめている。研究計画書に記載していた超音波診断装置が当該予算では購入できなくなってしまったため、本研究に使用できる代替機種を選定した。結果として、超音波診断装置は上位機種との価格差が大きく、次年度使用額が生じることとなった。
初期発生に関与する形態形成遺伝子のゼブラフィッシュを用いた解析

両生類における背腹軸の決定は、受精に引き続き植物極背側に形成されるNieuwkoopセンター、それにより背側赤道上に誘導されるSpemannオーガナイザーの形成、及びオーガナイザーからの誘導シグナルが重要な役割を果たしていると考えられている。本研究において、ゼブラフィッシュ初期原腸胚より発現cDNAライブラリーを作成し、それより合成したmRNAを受精卵に注入し、ゼブラフィッシュ胚を背側化する新規遺伝子dharmaを同定した。dharmaはpaired型ホメオボックス遺伝子であり、接合遺伝子としては最初期に予定背側部の胞胚細胞に発現し、胞胚期後期には卵黄多核層の胚側に発現が限局することを見い出した。dharma mRNAの受精卵への注入によって、オーガナイザー及びそれに由来する組織が拡大あるいは異所的に形成されたdharma mRNA注入受精卵を用いた卵黄移植実験、dharma mRNAの卵黄への限局注入実験により、dharmaの発現した卵黄多核層は細胞非自律的に近接した胞胚細胞をSpemannオーガナイザーになるよう誘導していることを明らかにした。また、オーガナイザー・中軸中胚葉・前脳形成の形成に異常を有するゼブラフィッシュ変異体bozozokの責任遺伝子がdharmaであることを見い出した。以上の結果より、dharma遺伝子はゼブラフィッシュにおける卵黄多核層背側でのNieuwkoopセンターの形成・機能および中枢神経前部の領域化に重要な役割を担っていることを明らかにした。
タバコrDNAスペーサー領域の構造とrRNA転写機構の解析

本研究の当初の研究計画は、(1)タバコrDNAのクローニングとスペーサー領域の塩基配列の決定、および(2)in vitro転写系の確立、の2点であった。(1)のクローニングについては平成4年度に達成し、それをもとに2年間にわたってスペーサーの全領域の、4996bpの塩基配列を決定した。その結果以下のことが明らかになった。(I)転写開始点を含むと思われる、植物でよく保存された塩基配列(以下転写開始点と呼ぶ)がスペーサーのほぼ中央に存在する。(II)転写開始点より下流に互いにホモロジーの高い(90%以上)約120bpの配列が、14bpまたは20bpの2種類の短い配列を介在して15回繰り返されたサブリピートが存在する。(III)転写開始点のすぐ上流の約440bpにわたり非常にA-Tな領域が存在し、それが同じナス科植物のトマトあるいはジャガイモのrDNA転写開始点の上流域とホモロジーを有する。(IV)A-Tリッチ領域のさらに上流にもサブリピートが存在する。これは基本的には約220bpの配列が直列に6回繰り返されているが、その内の3つは後半の約90160bpが、1つは前半の約60bpが欠失した不完全な反復の形をとっている。(2)のin vitro転写系に関しては、2年間にわたってタバコ培養細胞(BY2)の全細胞抽出液の調製方法について検討し反応に使用したが、今のところ転写活性を持ったものが得られていない。その理由として、これらの抽出液中のヌクレアーゼ活性が高いためと考えられるため、今後は核分画からのエクストラクトの調製法を検討しin vitroの反応系に導入する予定である。本研究の平成4年度における研究計画は、(1)タバコrDNAのクローニングと(2)rRNAのin vitro転写系の確立、の二点であった。(1)に関しては、rDNAの反復単位一つ分に相当する約10.5kbのXbal断片のクローンを得た。さらに、非転写領域を含む大スペーサーの塩基配列を決定する目的で、スペーサーの全領域を内包する約5.8kbのEcoRI断片をサブクローンを行った。現在そのサブクローンをもとにして種々の欠失突然変異分子を作製し、塩基配列の決定を実施中である。まだ部分的なデータからの知見であるが、(i)高等植物のrRNA転写開始点領域に共通して見られる塩基配列が、タバコのrDNAスペーサーにも存在しており、スペーサーの中央より少し上流に位置する、(ii)タバコrDNAスペーサー内には少なくとも二種類のサブリピートが存在し、その一つは、転写開始点と予想される位置よりも上流に、もう一つは下流にある、(iii)上流側のサブリピートと転写開始点と予想される領域との間にはA/Tリッチな領域が存在する、ということが明らかになった。今後さらに塩基配列に未決定あるいは不明確な部分の解析を行いスペーサー構造の全貌を明らかにする予定である。一方(2)に関しては、タバコ培養細胞(BY2)から全細胞抽出液を調製し、in vitro転写反応を行っているが現在までのところ転写産物が検出されていない。したがって、今後、抽出液の調製方法あるいは反応の条件をさらに詳細に検討して行く予定である。本研究の平成5年度における研究計画は、前年度に引き続きタバコrDNAスペーサー領域の塩基配列の決定、及びrRNAのin vitro転写系の確立の二点についてであった。塩基配列については、スペーサー全域(4996bp)にわたって読み取ることができた。その結果、新たに以下のことが明らかとなった。

(1)転写開始点を含むと思われる、植物でよく保存された領域(以下転写開始点と呼ぶ)の下流に約120bpの配列が、20bpまたは14bpの2種類の短い配列によって区切られる形で直列に15回繰り返すいわゆるサブリピートが存在する。120bpサブリピート間の塩基配列のホモロジーは90%以上の高い値を示した。(2)転写開始点より上流約440bpに渡り、非常にA-Tに富んだ(約81%)領域が存在する。このようなA-Tリッチな領域は、同じナス科植物のトマトやジャガイモのrDNA転写開始点のすぐ上流にも見られ、特に転写開始点に近い部分での塩基配列の相同性は約100bpにわたって3者間で約80%であった。(3)上記のA-Tリッチ領域のさらに上流にもサブリピートが存在する。このサブリピートは基本的には約220bpの配列が直列に6回反復しているが、その内の3つは後半の約90160bpが、1つは前半約130bpが欠失した不完全な反復の形をとっている。in vitroの転写系に関しては、今年度さらに3通りの方法で全細胞抽出液を調製し反応にかけたが、転写産物が検出できなかった。その理由として、これらの全細胞抽出液中のヌクレアーゼ活性が高いことが考えられるため、現在は核抽出液を導入することを検討している。
新規なキトペンタオース生成キチナーゼに関する研究

キチンはN-アセチルグルコサミンを構成単位とする巨大分子である。このキチンを加水分解して得られる高重合度キトオリゴ糖(4-8個)に多くの生理活性作用が明らかにされ、注目を集めている。現在、キチナーゼを用いた有効な製造方法が注目されているが、高重合度キトオリゴ糖を得るには高濃度の基質を有機溶媒存在下にて反応を行わなくてはならず、実用化には至っていない。そこで、申請者は、高重合度キトオリゴ糖を安価な基質であるコロイダルキチンより生産するべく、新規な高重合度キトオリゴ糖生成キチナーゼ生産菌のスクリーニングを行った。その結果、熊本県の有明海よりキトペンタオース生成キチナーゼを含む数種類のキチナーゼを菌体外に生産するVibrio alginolyticus TK-22株を分離することに成功した。酵素の精製は、培養ろ液11.5Lから硫安沈殿及び各種カラムクロマトグラフィーで行い、最終的に6.0mgの凍結乾燥標品を得た。酵素の分子量は、SDS-PAGEで66000、ゲルろ過では57000と算出され、酵素1%濃度溶液の280nmでの吸光度は11.5、当電点はpH4.3であった。精製酵素の反応最適pHはpH4.0と9.0の二箇所にあり、30°C、24時間の処理でpH5.0からpH9.0まで安定であった。また、最適反応温度は45°Cであり、30分の熱処理で40°Cまで安定であった。特に、基質特異性はユニークで、pH4.0ではコロイダルキチンをキトビオース単位に分解するが、pH9.0ではコイダルキチン及び(GlcNAc)_2、(GlcNAc)_4よりキトペンタオースを生成することが明かとなった。また、キチンオリゴ糖に対する作用機作を調べたところ、pH9.0のみで糖転移反応によってキトペンタオースを生成することが判明した。以上の結果を既知酵素と比較し、本酵素をユニークな性質を持つ新規なキチナーゼであると結論した。また、水溶液中の反応で低濃度のコロイダルキチンよりキトペンタオースが生成されることから、反応条件の検討により効率的なオリゴ糖の生産系が構築出来るものと考えられる。キトペンタオース生成キチナーゼは、熊本県の有明海海水より分離したVibrio alginolyticus Tk-22株の生産する酵素で、コロイダルキチンよりキトペンタオースを生成する非常にユニークな反応特異性をもつキチナーゼである。本研究課題ではキトペンタオース生成キチナーゼの反応特異性及び一次構造解析などの基礎研究から、最終的には生成した高重合度キトオリゴ糖の応用研究を目標として、本年度は以下に示す研究成果を得た。1.酵素の反応特異性の解析:本酵素を0.5%コロイダルキチン溶液に作用させると7.2%の反応収率でキトペンタオースが得られた。

反応初期にはN-アセチルグルコサミン、キトビオース及びキトテトラオースが生成することから、これらオリゴ糖が糖転移反応でキトペンタオースを生成したと考察された。そこで、このユニークな特異性を解明するために、重合度の異なるキトオリゴ糖を基質に反応特異性の検討を行った。HPLCの分析結果よりキトビオースからN-アセチルグルコサミン、キトテトラオース及びキトペンタオースが、また、キトテトラオースからN-アセチルグルコサミン、キトビオース、キトテトラオース及びキトペンタオースが各々生成したと推定された。現在、生成産物の同定ならびにキトペンタオース蓄積の最適反応条件の検討を行っている。2.一次構造の解析:生産菌Vibrio alginolyticus TK-22株は酵素生産量が低く、培養上清12リットルから精製収率2.1%で約6mgの酵素タンパクしか得られず、一次構造を蛋白レベルで決めるためには、50-100mgの酵素サンプルが必要である。現在、最適酵素生産条件を検討して大量培養を行っている。本実験で高純度の酵素標品が得られたならば、アミノ酸組成値はもちろんのこと全一次構造を決定すると共にDNAプローブを合成してキチナーゼ遺伝子のクローニングを行う予定である。平成5年度は、Vibrio alginolyticus TK-22株の分離と同定及び生産されたキトペンタオース生成キチナーゼの精製と酸素化学的、理化学的諸性質を明らかにした。本年度は、pH4.0と9.0の二ヶ所の至適pHでのコロイダルキチン及びオリゴ糖に対する詳細な反応特異性の検討を行った。酸素反応は0.01Units(蛋白量7.5μg)の酸素を用い、30°Cで行った。(1)コロイダルキチン(2.5mg/ml)に対する作用:pH4.0で24時間反応させた場合、GlcNAcが0.015mg/ml、(GlcNAc)_2が0.84mg/ml、(GlcNAc)_3が0.059mg/ml、各々生成した。pH9.0では、24時間反応でGlcNAcが0.13mg/ml、(GlcNAc)_2が0.46mg/ml、(GlcNAc)_3が0.078mg/ml、(GlcNAc)_5が0.13mg/ml、各々生成し、更に、36時間まで反応を続けるとGlcNAcが0.13mg/ml、(GlcNAc)_2が0.34mg/ml、(GlcNAc)_3が0.068mg/ml、(GlcNAc)_5が0.36mg/mと各濃度に変化が認められた。(2)キチンオリゴ糖(1mg/ml)に対する作用:pH4.0で24時間反応させた場合、(GlcNAc)_4は(GlcNAc)_2に、(GlcNAc)_5は(GlcNAc)_2と(GlcNAc)_3に各々分解したが、(GlcNAc)_2、(GlcNAc)_3には作用しなかった。pH9.0では(GlcNAc)_2からGlcNAc、(GlcNAc)_3、(GlcNAc)_5を32.2%、3.3%、1.6%ずつ、(GlcNAc)_4からGlcNAc、(GlcNAc)_2、(GlcNAc)_3、(GlcNAc)_5を11.7%、66.0%、4.6%、15.1%ずつ、また、(GlcNAc)_5から(GlcNAc)_2、(GlcNAc)_3、(GlcNAc)_5を52.1%、45.1%、2.8%ずつ生成した。しかし、(GlcNAc)_3には作用しなかった。以上の結果より、キトペンタオース生成キチナーゼは、pH4.0ではコロイダルキチンをキトビオース単位に分解するが、pH9.0ではコロイダルキチン及び(GlcNAc)_2、(GlcNAc)_4よりキトペンタオースを生成することが明かとなった。また、キチンオリゴ糖に対する作用機作から、pH9.0のみで糖転移反応によりキトペンタオースを生成することが示唆された。
アフリカイネ由来の一年生遺伝子による転流能の強化

アフリカイネ(O. glaberrima)の一年生形質に着目し遺伝解析を行った。染色体部分置換系統群(GLSL)を用い、染色体6、7、8に一年生遺伝子が存在する可能性を見出した。染色体8では、高位分げつが見られ、ひこばえ発生率低下の原因であると考えられた。大規模集団を用いたマッピングでは、ひこばえ発生率QTL(qRA8)および高位分げつ発生率QTL(qHNT8)は出穂期遺伝子Hd5と同じ場所に検出され、これら3つが同一であることが示唆された。一年生GLSLはそれぞれ異なる生理・形態形質を示した。qRA8では、高位分げつに結実し、収量が増加していた。以上、イネ穂重増加のヒントとなる知見を得た。研究代表者者らのグループは、イネの生産性向上に関する遺伝子の同定を進めており主にシンク能を決定する穂の形態・草型などの形態形質をターゲットとしてきた。一方、本課題ではO. glaberrima由来の「一年生」遺伝子に着目し、それを物質動態特性と結びつけることで、シンク能・転流能を兼ね備えた高収量品種の育成に向けた新たな知見を得ることを目的としている。平成24年度は、以下の様な研究を行った。(アフリカイネ由来の一年生遺伝子の単離および機能解析)コシヒカリとCSSL25との交雑から得られた約8000個体のF2分離集団から、qRA8近傍で組換えをもつ約800個体を選抜し、その後代検定を行ったが、表現型(ひこばえ量)の分離が明確でなく、期待された制度でのマッピングはできなかった。(アフリカイネ由来の一年生形質の植物生理学的解析およびqRA8以外の遺伝子の探索)コシヒカリとCSSL25を複数の条件で栽培し、光合成産物の配分を解析するための試料を得た。CSSL25以外のアフリカイネ染色体部分置換系統に関しても、一年生特性の調査を行い、コシヒカリと比較して一年生の傾向を示した系統を見出した。また、「あそみのり」と「IR24」の交雑に由来する組換え自殖系統を利用して、新規遺伝子の探索を行い、qRA8と同じ染色体領域にQTLを見出した。(アフリカイネ由来の一年生形質の応用の可能性の評価)(アフリカイネ由来の一年生遺伝子の単離および機能解析)コシヒカリとCSSL25との交雑から得られた約8000個体のF2分離集団から選抜したqRA8近傍で組換えをもつ約180個体の後代検定を行い、qRA8の候補遺伝子を絞り込みを試みたが、表現型の判別が困難であったため、十分な絞り込みができなかった。しかしながら、qRA8をもつ系統特有の草型や穂型の違いを見出した。また収量構成要素の変化の調査を行った。(アフリカイネ由来の一年生形質の植物生理学的解析およびqRA8以外の遺伝子の探索)CSSL25以外のアフリカイネ染色体部分置換系統においても一年生の傾向を示す系統が見出されたため、原因遺伝子のマッピングを試みた。14年4月現在、解析中である。また、「あそみのり」x「IR24」の交雑により得られた組換え自殖系統および染色体部分置換系統を用いた一年生遺伝子の探索とキャラクタライゼーションを継続した。その結果、この交配組合せで見出された一年生QTLは雑種不稔との関連が示唆された。(アフリカイネ由来の一年生形質の応用の可能性の評価)「CSSL25」X「ST-12(高シンク系統)」および「CSSL25」X「ST-6(高シンク系統)」のF2集団を栽培し、収量構成要素および非構造性炭水化物に関するQTL解析を試みた。(アフリカイネ由来の一年生遺伝子の単離および機能解析)qRA8を単離するため、新たに500個体以上の分離集団を育成し、マッピングを行った。また、CSSL25に特徴的形態である、高位分げつにも着目して、同じ集団でマッピングを行った。しかしながら、表現型の判別が困難であったため、マッピングはQTL解析のレベルに留まった。二つの形質に関するQTLのピークは出穂に関するHd5遺伝子の位置と重なった。qRA8と、高位分げつに関する遺伝子はほぼ同じ位置にあることが示され、ひこばえ数の減少と高位分げつは一体の関係にあることが強く示唆された。(アフリカイネ由来の一年生形質の植物生理学的解析およびqRA8以外の遺伝子の探索)

CSSL25以外のアフリカイネ染色体部分置換系統においても一年生の傾向を示す系統が見出されたため、CSSL25を含めて生理学的解析を行った。GLSLを用いたスクリーニングによって、Chr6-2、Chr7-3、Chr8-1にひこばえ発生率および挿し木の再生力を低下させる一年生遺伝子が存在する可能性を見出した。収量構成要素、収量関連指数および成長解析、生育調査によって、一年生GLSL(Chr6-2、Chr7-3、Chr8-1)がコシヒカリと異なった形態をもつことが明らかとなった。特にChr7-3、Chr8-1において出穂前後の時期の分げつ数の増加が見られた。Chr7-3では、茎葉重、穂重、穂長の増加が見られた。Chr8-1では、穂長が短くなっていたが、発生した高位分げつに穂がつき登熟することにより、穂数が増加し、穂重の増加が起こっていた。(アフリカイネ由来の一年生遺伝子の応用の可能性の評価)qRA8が収量増加に貢献できるかを確認するため、CSSL25 x ST-6(高シンク能系統)のF2集団を栽培したが、ひこばえ数の分離が必ずしもqRA8と一致しなかった。26年度が最終年度であるため、記入しない。植物遺伝育種学26年度が最終年度であるため、記入しない。概ね計画通りであったが、qRA8の表現型を約800系統マッピング集団において調査したが、形質分離が明確に得られず、高精度連鎖解析における絞り込みを十分にできなかった。O. glaberrima由来のqRA8の単離同定が遅れている。台風などの気象条件に恵まれず、遺伝子マッピングが十分にできかったのが原因である。しかしながら、環境に左右されにくい形態などの違いを見出したため、これらの情報を生かしてqRA8の単離を進める。概ね当初の計画通り研究を推進する。また、平成24年度に十分な結果が得られなかったqRA8の高精度連鎖解析が停滞したため、余剰の資金を次年度に使用することとした。特にqRA8の絞り込みに投入を行うとともに、CSSL25の形態のより詳細な解析や同化産物の配分の解析を行う。特に出穂期関連遺伝子による形態の変化と一年生形質の関連が示唆されているためこれに着目して研究を進める。qRA8の絞り込みに投入を行うとともに、次世代シーケンサーによる全ゲノム塩基配列解析や一年生に関連すると思われる遺伝子のmRNA発現解析などにより多くの資金を投入する。qRA8の遺伝子マッピングの進展が思わしくなかったため、遺伝子の機能解析等に使用する試薬類が不要となった。qRA8の単離と同定および機能解析に投入を行う予定である。
デンマークにおける「生涯にわたるキャリアガイダンス」の機能と役割に関する研究

本研究は、デンマークにおける「生涯にわたるキャリアガイダンス」を事例として、その制度的枠組みと歴史的変遷、理論上の基盤、社会的位置づけと機能、そして課題を明らかにする。それらの考察を通じて、人々の多様な生き方を支援する「生涯にわたるキャリアガイダンス」の具体的な在り方を示すことを目的としている。本研究は全4段階で構成されており、初年度は、第1段階と第2段階を行う計画であった。具体的な内容は以下の内容である。第1段階では「国際的なキャリア教育・ガイダンスの改革動向の把握と先行研究の批判的検討」を行う。具体的には、日本及び国際的なキャリアガイダンスの先行研究の批判的検討と動向、課題を把握する。第2段階では、「デンマークのキャリアガイダンスに関する制度面、理論面での歴史的変遷の整理」を行う。具体的には、まずデンマークのキャリアガイダンスに関する研究及び公的文書の分析をし、次に制度面、理論面での歴史的変遷、議論を整理し全体像を把握する。なお、これらの作業では、デンマーク語、英語、日本語文献を対象に文献調査、ウェブ情報調査を行う。また日本比較教育学会や日本生涯教育学会等の国内学会に参加し、情報交換・意見交換を行う。そして基礎的調査として、2018年9月に現地での資料収集とインタビュー調査を行う。以上が当初の計画であった。上記の計画に照らして、研究初年度の2018年度は、主として「国際的なキャリア教育・ガイダンスの改革動向の把握と先行研究の批判的検討」と「デンマークのキャリアガイダンスに関する制度面、理論面での歴史的変遷の整理」について研究を進めることができた。具体的には、可能な限りの先行研究及び公的文書の収集と分析を行った。また2018年9月に現地での資料収集を行い、日本比較教育学会や日本生涯教育学会の国内学会に参加し、情報交換・意見交換を行うことができた。本研究は4段階で構成されており、第1段階では「国際的なキャリア教育・ガイダンスの改革動向の把握と先行研究の批判的検討」、第2段階では「デンマークのキャリアガイダンスに関する制度面、理論面での歴史的変遷の整理」を行う計画であった。この点、先行研究の資料収集は概ね行うことができた。また、2018年に基礎的な調査として、現地での資料収集や関連施設の訪問も行うことができた。しかし、インタビュー調査は行えていない状況である。今年度の本格調査の前に、情報の整理と焦点化を行う必要性がある。今年度は、初年度でまとめた内容を基に、成人対象のガイダンスの取組に特化して調査と分析を行っていく必要性がある。計画の第3段階では「成人を対象としたキャリアガイダンスの機能と『従前学習認証』活用の実態分析」を行う。具体的には、2019年9月に教育省、成人対象の自治体ガイダンスセンター、ジョブセンター、成人教育・継続訓練センター、そしてガイダンスカウンセラーの養成、研修を担う大学において資料収集とインタビュー調査を行う予定である。また、今年度内に論文への投稿を予定している。

今年度は、初年度でまとめた内容を基に、成人対象のガイダンスの取組に特化して調査と分析を行っていく必要性がある。計画の第3段階では「成人を対象としたキャリアガイダンスの機能と『従前学習認証』活用の実態分析」を行う。具体的には、2019年9月に教育省、成人対象の自治体ガイダンスセンター、ジョブセンター、成人教育・継続訓練センター、そしてガイダンスカウンセラーの養成、研修を担う大学において資料収集とインタビュー調査を行う予定である。また、今年度内に論文への投稿を予定している。
分界条床核外側部CRHニューロンの痛み行動における性腺ステロイドホルモンの役割

本研究の目的は、これまで我々が明らかにしてきた分界条床核背外側部のCRH(Corticotropin-releasing hormone)ニューロンにおける痛み反応の情動成分の役割に関して明らかにすることにある。今年度は、性腺ステロイドホルモンの役割に焦点をあて、電気生理学的に検討した。実験にはCRH発現細胞にてVenus由来の強い蛍光を示すCRF-VenusΔNeoマウスを用いた。6週齢で雌雄の性腺を摘除、8週齢で低濃度エストロジェンチューブ(20 ug/ml)、対照群としてコントロールチューブ(sesame oil)を皮下に留置し、9週齢で痛み刺激としてホルマリンテストを行った。このdoseは、我々の研究から報告されたestrogenのnegative feedbackのみが引き起こされる量である。これまでの研究で性差が認められたホルマリン投与10分後に脳を摘出し、パッチクランプホールセル法で膜電位固定法により-60mVに電位を固定、TTX存在下でシナプス入力を遮断し、ビククリン存在下でmEPSC(miniature Excitatory Postsynaptic Current)を検討した。その結果、雄性マウスではエストロゲンによる影響、すなわちmEPSCの頻度や振幅に有意な変化は認められなかった。一方、雌性マウスでは、卵巣を摘除するとmEPSCの振幅には変化が認められなかったが、頻度が抑制され、低濃度エストロジェンチューブにより頻度が増加する事が明らかとなった。これらのことから、痛み行動における性差はAMPA受容体を介したグルタミン酸の興奮性入力における伝達物質の放出確率が関与する可能性があるが、推測どおり雄性ではエストロジェンの影響を受けないこと、一方、雌性ではエストロジェンによる痛み行動の変化が、分界条床核背外側部のCRHニューロンが関与することが示唆された。本研究の目的は、これまで我々が明らかにしてきた分界条床核外側部の痛み反応の情動成分における性腺ステロイドホルモンの役割について、CRH(Corticotropin-releasing hormone)ニューロンに焦点をあて、電気生理学的に検討することにある。CRH発現細胞にてVenus由来の強い蛍光を示すCRF-VenusΔNeoマウスを用いて実験を行い、痛み刺激としてホルマリンテストを指標に行った。雌雄のマウスを用いてホルマリンテストを行い、まず、行動学的な解析を行った。これまでの我々の研究から性差が認められた投与10分後にイソフルラン麻酔下で脳を摘出し、スライス切片を作成しパッチクランプ実験に供した。痛み行動はラットと一致して生食投与群では雌雄ともに痛み行動は示さなかったが、ホルマリン投与により雌雄ともに痛み行動を示したが、雌では雄と比較して有意に痛み行動が強かった。ただちにスライス切片を作成してTTX存在下でシナプス入力を遮断し、ビククリン存在下で蛍光顕微鏡を用いてCRHニューロンを同定し、その電気活動をパッチクランプホールセル法で膜電位固定法により-60 mVに電位を固定して、mEPSC(miniature Excitatory Postsynaptic Current)を検討した。出現したmEPSCはCNQXで完全に消失することからAMPA受容体を介したグルタミン酸の興奮性入力であることを確認した。実験の結果、雌マウスにホルマリンを投与した群でのみmEPSCの頻度が有意に増加することが分かった。現在、性腺ステロイドホルモンを変化させることによる痛み行動とCRHニューロンの変化を電気生理学的に検討中である。また、電位を0 mVに固定してmIPSCも検討している。パッチクランプ法による電気生理学的な手法により、分界条床核外側部のCRH陽性ニューロンの電気生理学的な特徴と痛みの関係を性差の観点から明らかにしている。今回、パッチクランプホールセル法で膜電位固定法によりmEPSC(miniature Excitatory Postsynaptic Current)を検討し、雌マウスにホルマリンを投与した群でのみmEPSCの頻度が有意に増加することが分かり、概ね順調に実験が行われている。これまでの我々の研究から性差が認められたホルマリン投与10分後にイソフルラン麻酔下で脳を摘出し、スライス切片を作成しパッチクランプ実験に供した。痛み行動はラットと一致して生食投与群では雌雄ともに痛み行動は示さなかったが、ホルマリン投与により雌雄ともに痛み行動を示し、雌では雄と比較して有意に痛み行動が強かった。出現したmEPSCはCNQX投与により完全に消失することからAMPA受容体を介したグルタミン酸の興奮性入力であることを確認した。同様に、TTX存在下でシナプス入力を遮断し、CNQX存在下で0 mVに電位を固定して、mIPSC(miniature Inhibitory Postsynaptic Current)を検討した。出現したmIPSCはビククリン投与により完全に消失することからGABA受容体を介した抑制性入力であることを確認した。

実験の結果、雌マウスにホルマリンを投与した群でのみmEPSCの頻度が有意に増加することが分かった。mIPSCでは雌雄差及びホルマリン投与における変化は認められなかった。現在、性腺ステロイドホルモンを変化させることによる痛み行動とCRHニューロンの変化を電気生理学的に検討中であるパッチクランプ法による電気生理学的な手法により、分界条床核外側部のCRH陽性ニューロンの電気生理学的な特徴と痛みの関係を性差の観点から明らかにしている。今回、パッチクランプホールセル法で膜電位固定法によりmEPSC(miniature Excitatory Postsynapti c Current)及びmIPSC(miniature Inhibitory Postsynaptic Current)について検討し、雌マウスにおけるホルマリンを投与した群でのみmEPSCの頻度が有意に増加することが分かった。これは実験計画書通りであり、概ね順調に実験が行われていると言える。本研究の目的は、これまで我々が明らかにしてきた分界条床核背外側部のCRH(Corticotropin-releasing hormone)ニューロンにおける痛み反応の情動成分の役割に関して明らかにすることにある。今年度は、性腺ステロイドホルモンの役割に焦点をあて、電気生理学的に検討した。実験にはCRH発現細胞にてVenus由来の強い蛍光を示すCRF-VenusΔNeoマウスを用いた。6週齢で雌雄の性腺を摘除、8週齢で低濃度エストロジェンチューブ(20 ug/ml)、対照群としてコントロールチューブ(sesame oil)を皮下に留置し、9週齢で痛み刺激としてホルマリンテストを行った。このdoseは、我々の研究から報告されたestrogenのnegative feedbackのみが引き起こされる量である。これまでの研究で性差が認められたホルマリン投与10分後に脳を摘出し、パッチクランプホールセル法で膜電位固定法により-60mVに電位を固定、TTX存在下でシナプス入力を遮断し、ビククリン存在下でmEPSC(miniature Excitatory Postsynaptic Current)を検討した。その結果、雄性マウスではエストロゲンによる影響、すなわちmEPSCの頻度や振幅に有意な変化は認められなかった。一方、雌性マウスでは、卵巣を摘除するとmEPSCの振幅には変化が認められなかったが、頻度が抑制され、低濃度エストロジェンチューブにより頻度が増加する事が明らかとなった。これらのことから、痛み行動における性差はAMPA受容体を介したグルタミン酸の興奮性入力における伝達物質の放出確率が関与する可能性があるが、推測どおり雄性ではエストロジェンの影響を受けないこと、一方、雌性ではエストロジェンによる痛み行動の変化が、分界条床核背外側部のCRHニューロンが関与することが示唆された。
神経ステロイドのオートファジー活性化作用を介した緑内障性視神経症の抑制効果

ex vivo緑内障実験モデルは、ラット眼球を摘出し前眼部を切除したのちex vivo分離眼杯標本を作成し、培養液中に1 μM AlloPと1 μM ent-AlloPを添加し、閉鎖型加圧装置によって75 mmHg、24時間加圧した。ラットin vivo緑内障実験モデルは、ラット前房内に35Gマイクロニードル針で直径6μmのマイクロビーズを注入し、1週間後に神経ステロイド(AlloP、ent-ALloP)を硝子体内に注射投与し、さらにその2週間後に眼球を摘出した。いずれの緑内障実験モデルにおいても、アポトーシスTUNEL染色と抗NeuN抗体を用いたRGC(網膜神経節細胞) survival analysisにおいて、加圧によって誘導されるRGCの傷害はAlloPおよびent-AlloP投与によって防御された。ex vivo緑内障実験モデルにおいてGABA-A受容体拮抗薬を用いると、AlloPの神経保護効果は失われたが、ent-AlloPの神経保護効果は失われなかった。ent-AlloPの神経保護効果の機序を解明するため、抗LCB抗体と抗p62抗体を用いた免疫電気泳動を行なった結果、LC3Bはent-AlloPによってより強く、p62はent-AlloPによってより弱く誘導された。以上の結果から、AlloPはGABA-A受容体を介して加圧傷害を防御し、ent-AlloPはオートファジー誘導によって神経保護効果を発揮すると考えられた。・ラットin vivo緑内障実験モデルを作製し、AlloPおよびent-AlloPの神経保護効果を、アポトーシスTUNEL染色と抗NeuN抗体を用いたRGC survival analysisによって証明することができた。・ex vivo緑内障実験モデルにおいて、GABA-A受容体拮抗薬を用いると、AlloPの神経保護効果は失われたが、ent-AlloPの神経保護効果は失われなかった。AlloPはGABA-A受容体を介して加圧傷害を防御するが、ent-AlloPは異なる機序で神経保護を行うことが明らかになった。・以上の結果、ex vivoおよびin vivo緑内障モデルにおいて、AlloPとent-AlloPの神経保護のメカニズムが明らかになり、当初の計画以上に進展している。現在、オートファジーを介したent-AlloPの緑内障視神経症に対する神経保護効果について、ワシントン大学医学部精神科と共同で、米国において以下の特許申請を行っている。出願日:2019年2月5日今後はent-AlloPの臨床応用を目指して、米国の製薬企業との共同開発を募集する予定である。
生体のストレス応答と適応機構の解析-活性酸素種の生成・消去系からの検討-

我々は、まず運動負荷をストレスのモデルとした研究を実施し、1時間を超える持久性運動では好中球のプライミングが生じ、これが成長ホルモンやインターロイキン6・8等の生理活性物質の血中濃度上昇と相関があること、さらに好中球のプライミング現象が筋損傷にも関与することを証明し、以上のストレス応答は運動の反復により馴化することも証明した。さらにマラソンレースでの検討で、好中球活性化の指標である脱顆粒物質(ミエロペルオキシダーゼ・ラクトフェリン)の血中・尿中濃度の著明な上昇より生体内で好中球が活性化されていることを証明し、機序として成長ホルモン、プロラクチン、インターロイキン6・8、顆粒球コロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージ遊走ペプチド1等の食細胞をプライミングするサイトカインが血中・尿中で増加することも明らかにできた。一方、コルチゾール・インターロイキン10等の免疫抑制物質の血中濃度も上昇することを証明し、さらにマラソンレース後の血漿中にはin vitroで好中球・単球が産生した活性酸素を消去する抗酸化活性が上昇していた。原因と考えられる抗酸化物質を検索したところ、ビタミンCの血中濃度がレース後に2倍以上上昇しており、運動中に産生される活性酸素を消去する一つの適応機構として働いているものと推察された。この他、手術侵襲をストレスのモデルとした検討も行ったが、このような極端なストレスでは、サイトカイン濃度が顕著に上昇しても好中球機能はむしろ抑制されることが判明した。以上を総合すると、生体がストレスに曝されると、種々の生理活性物質が分泌され血中好中球や単球が活性酸素や蛋白分解酵素を放出しやすい状態となり、炎症による生体損傷が惹起されるが、恒常性の攪乱を防ぐための適応機構も存在し、ビタミン等の補給により病態形成を阻止できる可能性が示唆された。炎症等でprimingされた好中球から産生された活性酸素種は化学発光法で広く測定されているが,同時に好中球からnitric oxide synthase(NOS)が誘導されてnitric oxide(NO)も産生されていることも判明してきた。つまり化学発光法の発光量にもNOSの関与が基質であるL-arginine添加で上昇し,NOSの1阻害剤を用いると抑制される。本年の研究目的はNOS活性の化学発光法による測定条件の確立である。基質濃度の変化が及ぼす影響を.阻害剤のL-NAMEと組み合わせて,発光増感剤(lucigenin,luminol)に種々のROS代謝修飾物質を加えることで多条件のROS検出系(8系)を設定して検討した。各検出系に対してNOSの拮抗阻害剤であるL-NAMEの有無の2条件下に各々NOSの基質であるL-arginineを添加してNOSの関与を検討した。好中球刺激物質としてはオプソニン化ザイモザン(OZ)で刺激する場合としない場合(NOS活性のみによる発光)の各々につき化学発光を測定した。又primingされた好中球へのNOSの影響をみるためにlipopolysaccharides(LPS)でprimingした好中球についても検討した。結果は以下に要約できる。(1)lucigenin依存性化学発光より1uminol依存性化学発光の方がNOSの関与が大。(2)luminol依存性化学発光を起こすペルオキシナイトライト産生にスーパーオキサイドが関与。(3)ミエロペルオキシダーゼの特異的阻害剤であるsalicyl-hydroxamic acid(SHA)と過酸化水素を基質とするhorseradishperoxidase(HRP)自体にNOSへの関与あり。(4)HRPは人の好中球のNOSに対しても誘導効果があり。

(5)luminol+HRP+NaN_3(ミエロペルオキシダーゼとcatalaseの非特異的阻害剤)が好中球が産生する過酸化水素の量と窒素ラジカルを反映。(5)LPSで好中球をprimingした場合にはluminol+SHA,luminol+HRP+NaN_3の2つの系が好中球から誘導されたNOSの影響をより反映。以上により化学発光によるNOS活性の測定方法はほぼ完成した。次年度は本法を応用して次段階の実験を行う。昨年、好中球活性酸素種産生能の測定系であるルミノール依存性化学発光法に関して、プライミングされた好中球では一酸化窒素合成酵素が12%程度発光に寄与するすることを証明した(Kudoh et al. 1999)。一方、運動負荷をモデルとした生体のストレス応答の研究を実施し、1時間を超える持久性運動では好中球のプライミングが生じ、これが成長ホルモンやインターロイキン6・8等の生理活性物質の血中濃度上昇と相関があること、さらに好中球のプライミング現象が筋損傷にも関与することが証明された(Suzuki et al. 1999)。さらにフルマラソン前後での検討で、血中一酸化窒素濃度がレース後に2倍程度上昇し、インターロイキン2の減少(消費)と相関すること、またフルマラソンではインターロイキン6・8、顆粒球コロニー刺激因子、成長ホルモン、プロラクチン等の好中球プライミング作用を有する生理活性物質が劇的に上昇するのみならず、コルチゾール・インターロイキン10等の免疫抑制物質の血中濃度も上昇することが証明された(Suzuki et al. 2000)。また手術侵襲をストレスのモデルとした研究も行ったが、このような極端なストレスでは、サイトカイン濃度が顕著に上昇しても好中球機能はむしろ抑制されることも判明した(Kowatari et al. 1999)。以上を総合すると、生体がストレスに曝されると、種々の生理活性物質が分泌され血中好中球が活性酸素種や一酸化窒素を放出しやすい状態となり、炎症による生体損傷が惹起されるが、恒常性の攪乱を防ぐための適応機構も存在するものと考えられた。今後は、ビタミン等の活性酸素消去物質の動態をin vivoで調べると同時に、in vitroでも検討を進め(Liu et al. 1999)、スポーツ選手や消耗性疾患の栄養補給に関する基礎資料を得るための研究を展開し、包括をはかる。昨年、マラソンレースのような過酷な運動負荷では、インターロイキン6・8や顆粒球コロニー刺激因子のような好中球をプライミングするサイトカインの血中濃度が上昇することを報告した(Suzuki et al.2000)。今年度は尿中濃度の測定も含めさらに詳細な検討を行い、まず好中球活性化の指標である脱顆粒物質(ミエロペルオキシダーゼ・ラクトフェリン)の血中・尿中濃度の著明な上昇からin vivoで好中球が活性化されていることを証明し、上記サイトカインの血中・尿中濃度上昇も再現できた。さらにマクロファージコロニー刺激因子、マクロファージ遊走ペプチド1等の単球・マクロファージ系をプライミングするサイトカインも血中・尿中で増加することも明らかにした。