hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フォルニカータ生物群におけるミトコンドリア関連オルガネラの機能進化の解明

フォルニカータ生物群はミトコンドリア(Mt)およびミトコンドリア関連オルガネラ(MRO)の進化・多様性の解明のために最適な研究対象である。本研究では、嫌気真核生物研究のトップを走るRoger教授の研究と我々のプロテオミクス研究を共同研究として発展させることにより、フォルニカータの進化史におけるMRO局在タンパク質の喪失と獲得の過程を明らかにする。その知見を生息環境や生活様式、生理動態などの違いとともに総合的に考察して、MRO機能の進化の原動力とメカニズムを理解する。さらに、フォルニカータ以外の真核生物も視野に入れた比較解析により、Mt/MROの縮退進化と嫌気適応進化のメカニズムの解明に迫る。
ネーデルラント美術にみる共感表現・スペクタクル・美術市場――レンブラントを中心に

昨年度に引き続き次の(1)から(3)の課題についてついて研究し、一定の見通しを得ることができた。(1)観者との共感表現を考察する上でメルクマールとなる、初期レンブラント《イーゼルの前に立つ自画像》(ボストン美術館)では前面のイーゼルを大きく強調している。「情念を描く画家」としてレンブラントを特徴づけていることからも独特であった。こうしたレンブラントの「情念」を軸に据えた「共感表現」は、《復活》《埋葬》を完成するに際して「もっとも偉大でもっとも自然な感情」を表現しようと腐心したというレンブラントの言葉にも表されている。こうした姿勢は、これまで制作者としての姿勢と解されてきたが、実は、鑑賞者との共感関係こそが絵画の成否にかかわる、というレンブラントの信念の表明でもある。この姿勢が、レンブラントの《夜警》をはじめ、晩年に至るまでの作品にどのようにあらわれているのかを追跡したい。共感表現をスペクタクルにふさわしく仕上げ、市場にも訴えかける戦略であることを明らかにすることができた。(2)レンブラントの評価史は、美術批評家の言説だけでなく、売り立てなどの記録も加味し、美的な趣味の変遷の中で捉える。もとよりネーデルラントの美術は、感覚の変遷、モードの変化こそが第一義的だという姿勢に貫かれている。つまりこれは本質ではなく、属性の重視である。ネーデルラント美術は、本質と属性とが逆転しているところに特徴があり、近代に先駆けていたのである。この点について文献調査を継続的におこなっており、今年度においてもう少し明確で具体的な結論を得たい。(3)こうした研究からレンブラントが活躍したオランダの美術市場は、異種混交の場であり、鑑賞者を巻きこむ芸術的な競争の場であることを具体的に検討する足がかりをつかむことができた。研究を推敲していく課程で、いくつかの追加的な課題があることに気づき、本課題の研究の完成がやや遅れることになった。それは、当初「共感表現・スケクタクル・美術市場」の問題をヨーロッパの枠内で解決できると考えていたが、「グローバリズム」という視点を導入することが不可欠であると気づいたことによる。つまり、本研究の主要課題である都市の発達とそこで展開する美術市場に、オランダが深くかかわったヨーロッパの外からのインパクトを考慮することが不可欠であるとわかってきた。そのため、当初予定していた研究実施期間を延長することで、研究を深化させ、「共感・スペクタクル・美術市場」がダイナミックに結びつき創造的な「場」を創りだしていくことを明らかにしていく。研究方法の再検討により「グローバル」「〈アジア〉のインパクト」という視点を導入することで、本研究の主要課題「都市の発達と美術市場」をより革新的で発展性のある課題となるという見通しを得た。追加の海外調査と文献調査を実施し、「共感・スペクタクル・美術市場」が融合した近代を先取りした斬新な芸術空間が17世紀アムステルダムに出現したことを明らかにしたい。オランダとアジアとの関係にまで研究範囲を広げ、アジアの事物やイメージ群がオランダの感性をどのように変えたのか、という消費者の側にも注目し、オランダ美術を「オランダ的なもの」表象とみなす、閉ざされた芸術観を問い直していきたい。本研究の課題がオランダの感性の変容を問うものである以上、当時大量にオランダに流入してきた中国磁器やムガルのミニアチュールのようなアジアのイメージ群がオランダの芸術表現に大きなインパクトを与え、その表現の新しさが市場を活性化させたことを具体的に探っていきたい。そうすることで、オランダの美術市場がさまざまな種類のイメージを結びつけ交換する媒体として機能したことが明らかになっていくに違いない。以上、これらの観点を整理し、最終年度に研究成果をまとめていきたい。レンブラントの絵画戦略の三位一体を表す「共感表現・スペクタクル・美術市場」は、ネーデルラント美術の特質と深く結びついている。そのことを明らかにするために、ファン・エイク兄弟前後での絵画・写本における画面構成、個々のモチーフの描写の比較、「新しき信仰」との関連性を手がかりにして、ネーデルラント美術の感性が広く浸透するのに与って力のあった版画の機能について考察した。そして、上にあげた三位一体が大きく促進される「聖・俗表現」の転回点にあたる「イコノクラスム」(偶像破壊運動)前後における宗教場面の表現から、17世紀美術へと展開していく画家に注目して研究を行った。そしてとくに「聖・俗表現」の転回点に位置づけられるのが、ヒエロニムス・ボッスの芸術である糸口をつかむことができた。これは従来に見られない新しい見た方である。ボッス作品のコピーやそれを発想源とした大量の版画作品である。ボッスの描くハイブリッドな形態は、理解不能なものとか、あるいは秘密の文書に典拠をもつメッセージとしてではなく、見る者の心をかきみだしたり、あるいは喜ばせたりする新しいメディアであった。この「メディア」は、ブリューゲル作品の版画ともども「ネーデルラントらしさ」という感性の形成にも大きな力があった。この現象を解明することは、イメージが象徴性よりも感性的な機能によって大きな力を持っていたことを示す証左となろう。こうした観点から執筆したのが「ヒエロニムス・ボッスの革新とそのリバイバルー美術市場が創る新しい感性」(『西洋美術研究』(19号)2016年)である。そこでは、ネーデルラントにおける感性を重視する芸術表現が、写本から絵画という過程だけでなく、版画という媒体においてはっきりあらわれてくることを明らかにした。

それはとりもなおさず「共感関係」のあらわれとして成り立つ美術市場の裾野が拡大したことを跡づけるものとなる。この課題の概要は次の通りである。レンブラントの絵画戦略の三位一体を表す「共感表現・スペクタクル・美術市場」の特質は、ネーデルラント美術の特質と深く結びついていることを解明するにあたって、ファン・エイク兄弟前後での絵画・写本における画面構成、個々のモチーフの描写の比較と「新しき信仰」との関連性から始めて、ネーデルラント美術の感性が一般に広く浸透するのに与って力のあった版画の機能について検討を加える。そして、上にあげた三位一体が大きく促進される「聖・俗表現」の転回点にあたる「イコノクラスム」(偶像破壊運動)前後における宗教場面の表現から17世紀へつながる特質を剔抉する。レンブラントで1つの頂点に達する「情念」表現と「美術市場」が共振する意義の解明である。こうした問題について、28年度には、まず以下の基本問題にアプローチした。写本やこれまであまり比較されなかった板絵などの断片的な絵画資料をあらためて精査すると、ファン・エイクに始まる15世紀ネーデルラント美術が、ファン・エイク以前と比較する写実性という点で大きな違いがある。ファン・エイク前後で美術表現の象徴性と写実性の関係がどう変化したのかを追跡した。この検討過程の中で、都市の勃興、商業資本の蓄積により、美術市場が芽生えたことなどが具体的に明らかになり、神の世界がこの地上で実現されたという考え方が前面に出てくるようになる。それと軌を一にして、美術において象徴性よりも感性にうったえかける美術が幅を利かせるようになってくる。感性の大きな転回が起こったゆえんだ。その問題を、28年度は、ヒエロニムス・ボッスの芸術を通して解明した。しかし、28年度は、海外調査をおこなうことができず、資料収集が十分にはできなかった。そのため次年度使用額が生じた。その点が29年度以降の課題として残った。初年度に引き続き次の(1)から(3)の課題について研究し一定の見通しを得ることができた。(1)コックの版画工房「四方の風」の果たした功績は、世俗的な感情表現や自然表現を大量に市場に投入したことによって、画像の記号的な意味よりも、形態が与える気分や感情といった感性的な作品需要を促したことだ。「四方の風」の波及効果として、オランダではホルツィウスの版画工房が、物語ではなく、聖なる感情を感じることで神を直観するというプロテスタント的な神秘主義とふれあうところがあった。神秘主義と美的感情との接点について、1枚の硬貨の表裏の関係にあった聖と俗併せ持つ美術が、美術市場を介して大量に取引された。これは市場が感性を形成するプロセスと不可分の関係にあったことを示している。(2)俗の中に聖を感じるというヘブライズム的な精神が、プロテスタント精神の核心にある。この点に「イコノクラスム」がネーデルラント美術の衰退ではなく、盛況への出発点になったパラドックスがある。イコノクラスムが、ネーデルラントにおける美意識の転換に決定的ともいえる影響を与えたゆえんだ。それは色彩の面において顕著に見られる。
疑似有性生殖による植物共生糸状菌の進化機構の解明とその利用

植物の内部で共生的に生育する微生物はエンドファイトと総称されている。イネ科牧草の細胞間隙に共生するEpichloe/Neotyphodium属エンドファイトは、植物を病害虫から守る様々な生理活性物質を生産する。本研究では、植物を守る活性の強い菌株を作出する方法を確立する事を最終目的として、エンドファイトの進化機構の解明を目指した。その結果、異種エンドファイトの菌糸が会合した際に、菌糸融合、核の移行および核の融合が発生し、新たなhybdid菌株が出現した。hybdid株は、親株由来の多様な性質を持っており、疑似有性生殖様の機構がエンドファイトの遺伝的多様性を高める役割を担っていると示唆された。Epichloae(Epichloe/不完全菌Neotyphodium属)エンドファイトは、イネ科牧草/芝草の細胞間隙で伸長し、共生関係を保っている糸状菌エンドファイトである。不完全菌であるNeotyphodium属エンドファイトは植物の種子を介して繁殖するため、外界の微生物や近縁種と遭遇する機会は限られているにも関わらず、生理活性物質の生産性などに著しい多様性が認められる。以前よりNeotyphodium属エンドファイトは疑似有性生殖を介して進化したと推察されているが、詳細は明らかではない。そこで、本研究では、in vitroでのEpichloe属菌間とNeotyphodium属菌の疑似有性生殖の細胞学的観察、宿主植物内での疑似有性生殖による新奇菌種の作出、疑似有性生殖によって得られた菌種のゲノム構造の解析、疑似有性生殖を用いた有用遺伝子のピラミッティング法の確立を行い、糸状菌進化における疑似有性生殖の役割の解明と有効な利用法の確立を目指している。本年は、異なるE. festucae菌株にハイグロマイシンまたはジェネティシン耐性遺伝子を導入し、同時にGFPあるいはDsRedにより蛍光ラベルすることで、菌糸融合と疑似有性生殖の結果現れた菌株を簡易に単離する実験系の確立に成功した。また、核局在性タンパク質であるNsiAと蛍光タンパク質の融合タンパク質を発現した菌株を作出し、菌糸融合の後に核がパートナー細胞に移行する様子を共焦点レーザー顕微鏡で観察した。さらに、疑似有性生殖に用いる菌株における耐虫性に関わるペラミン生合成遺伝子(PerA)およびロリン生合成遺伝子(LolAなど)、家畜に毒性を占めすロリトレムBの産生に関わるロリトレムB生合成遺伝子(LtmEなど)の分布を明らかにした。Epichloaeエンドファイトは、イネ科植物の細胞間隙で伸長し、共生関係を保っている糸状菌エンドファイトである。以前よりエンドファイトは疑似有性生殖を介して進化したと推察されているが、詳細は明らかではない。そこで、本研究では、エンドファイトの疑似有性生殖の細胞学的観察および新奇菌種の作出、疑似有性生殖によって得られた菌種のゲノム構造の解析を行い、糸状菌進化における疑似有性生殖の役割の解明と有効な利用法の確立を目指している。本研究では、異なるE. festucae菌株にハイグロマイシンまたはジェネティシン耐性遺伝子を導入し、同時にGFPあるいはDsRedにより蛍光ラベルすることで、菌糸融合と疑似有性生殖の結果現れた菌株を単離する実験系の確立に成功した。また、核局在性タンパク質と蛍光タンパク質の融合タンパク質を発現した菌株を作出し、菌糸融合の後に核がパートナー細胞に移行する様子を共焦点レーザー顕微鏡で観察した。さらに、国産のエンドファイト菌株(約30菌株)の生理活性物資の生合成遺伝子群の分布を調べたところ、ペラミン生合成遺伝子(PerA)、ロリン生合成遺伝子群(LolAなど)、ロリトレムB生合成遺伝子群の分布に著しい多様性が認められた。サザン解析によりβ-tubulin遺伝子を調べたところ、約半数の菌株で複数のバンドが検出され、これら菌株が種間雑種である可能性が示された.また、Epichloe属菌とNeotyphodium属菌の異種間の細胞融合の観察に成功し、現在そのゲノム構造の解析を進めている。以上の結果は、エンドファイトが疑似有性生殖により種間雑種を形成し,遺伝的多様性を獲得している可能性を示した。植物病理学平成25年度は、E. festucae菌株Fl1、抗菌性の高いE437株、ゲノム配列が明らかな2638株に、DsRed(ハイグロマイシン耐性)およびGFP(ジェネティシン耐性)を導入し、これらの菌糸融合と疑似有性生殖の結果現れた菌株の単離に成功した。

また、Fl1株に核局在性タンパク質であるNsiA-GFPを発現した菌株を作出し、菌糸内での核の形態や、胞子形成、菌糸融合時における核の挙動を詳細に観察した。さらに菌糸融合の後に核がパートナー細胞に移行する様子を経時的に観察した。また、Fl1株、E437株、2638株における耐虫性に関わる遺伝子群、家畜に毒性を示す物質の産生に関わる遺伝子群のなどの分布を明らかにし、疑似有性生殖後に得られた菌株においてこれら遺伝子の分布が簡易に確認できる様になった。このように、今年度は今後の解析に必要な実験系の確立が順調に進められたことより、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。1) Hybrid株のゲノム配列の解読と親株のゲノム構造と比較解析これまでに、疑似有性生殖によって得られた菌株のゲノム配列が解析された例はない。そこで、異種間での疑似有性生殖によって作出された新たな菌種の全ゲノム配列を解読し、ゲノムの再構築を明らかとする。まず、疑似有性生殖の用いるE. festucae Fl1株およびNeotyphodium属菌株におけるNsiA-GFPあるいは、NsiA-DsRed発現ベクターの挿入様式を調査する。サザンブロット解析により、1コピーのベクターが挿入された菌株を選抜する。次に、次世代シークエンサーを用いて2つの親株および独立した実験より単離された4つのhybrid株の全ゲノム配列を解読し、5つのゲノム配列のアセンブリとゲノム構造の比較を行う。得られたゲノム配列から、ゲノムサイズ、hybridゲノムでのトランスポゾンの分布、相同遺伝子の重複、4つの独立したhybrid株間のゲノム共通性と多様性など、疑似有性生殖によっておこるゲノムの再構築を詳細に調査する。2)疑似有性生殖による有用遺伝子のピラミッティング法の確立ハイグロマイシン耐性E. festucae Fl1株および、ジェネティシン耐性2368株を作出する。ハイグロマイシンおよびジェネティシンに耐性のhybrid株を独立した対峙培養および単分生子分離から多数得る。得られたhybrid菌株群におけるペラミン生合成遺伝子(PerA)およびロリン生合成遺伝子(LolAなど)の分布を調べる。また、家畜に毒性を占めすロリトレムB生合成遺伝子(LtmEなど)を失ったhybrid菌も同時に探索する。さらに野生株のE. festucae Fl1株および2368株を対峙培養し、コロニーが交差した部位から分生子を得る。様々な栄養条件での疑似有性生殖が起きた菌株の比率を調べ、薬剤耐性遺伝子を用いない実験系での効率を調査する。
心筋への交感神経支配再構築による不整脈発生基質の修復

交感神経分布異常をきたすsemaphorin 3a過剰発現マウスと野生型マウスの心拍数・心拍変動などの心電図パラメータの解析と不整脈発生の観察を行った。その結果、野生型に比べ、Sema 3a TGマウスにおいては心室頻拍と心室細動が高頻的に誘発されることが観察された。また、Sema3aTGマウスにおける心臓のイオンチャネル・トランスポータ・受容体等のmRNAをRT-PCR法で調べたところ、CaチャネルやKチャネルなどをはじめとする、複数の遺伝子発現に変化が生じていることが分かった。さらに、ラット新生仔の交感神経上頸神経節細胞と心室筋細胞を単離し、近接培養を行い、Nerve growthfactor (NGF)、Glialcell line-derived neurotrophic factor (GDNF)、Ciliaryneurotrophic factor (CNTF)、Sema3aなどを添加し、5日目に、交感神経細胞の伸長、神経・心筋接合部の状態を免疫染色法で観察した。また、多電極培養皿を用いた心筋細胞の細胞外電位記録法により、ニコチン誘発神経刺激後の心室筋細胞の自己拍動の変化を観察した。その結果、NGFとGDNFは、心筋細胞へ向かう交感神経細胞突起の伸長を明らかに促進した。一方、CNTF、Sema3aを添加した培養群では、神経突起の伸長が阻害された。ニコチン(1μM)添加により、GDNF添加群の心筋細胞自己拍動レートは、Control群に比べて有意に増大した。以上の結果より、GDNFが、心筋細胞に向かう交感神経突起の伸長と心筋-神経の機能的な接合形成を促すことが判明し、交感神経分布異常にたいする新しい修復法となりうると考えられた。自律神経活動は、生体において血圧や心拍数のコントロールの制御を行い、ストレスや環境の変化などへの対応を可能としている。一方、この自律神経制御システムの破綻は、「心臓突然死」の発生に極めて重要な役割を果たしていると考えられる。本研究においては、心筋内における交感神経伸長と神経・筋接合形成のメカニズムの詳細を明かとするために、ラット新生仔の心室筋細胞と上頸神経節由来交感神経細胞を間隔1mmで近接培養し、神経伸長、神経・筋接合部形成に対するnervegrowthfactor (NGF: 50ng/mL)、glialcell line-derived neurotrophic factor (GDNF: 10ng/mL)の効果を、免疫染色法、電子顕微鏡写真および多電極付培養皿を用いた細胞外電位記録法により調べ、NGF、GDNF非添加のControl群と比較した。その結果、NGFまたはGDNF存在下では神経軸索伸長と心筋細胞表面のsynapsin発現増加がみられ、心筋細胞に近接する神経終末小胞が観察された。また、βアドレナリン受容体は交感神経線維が分布している心筋細胞において有意に増加した。細胞外電位記録実験では、ニコチン添加による神経細胞刺激で、心筋細胞の自己拍動が有意に増加した。以上の結果から、NGF、GDNFは交感神経と心筋の形態学的、及び機能的な接合形成を促進することが示唆された。
多読活動が学生の長期的な自律的読書習慣に与える影響の研究

本研究は,日本人大学生を対象とした多読の効果を明らかにすることを目的としている.英語・英文学科の学生を「多読あり(2年間)」と「多読なし」のグループに分け,「多読あり」のグループは,難易度別英語読本を読むことをコースの必須とした.その結果,両グループ間で,英語力の伸長において有意な差が見られなかった.また,多読が外国語の自律学習にどのような影響をもたらすかを調査するアンケートを開発した.理工学部の英語学習者を「多読あり」と「多読なし」のグループに分け,両グループに対して,自律学習のアンケートを1年次最初と2年次終了時に実施した.しかし,2グループ間において,有意な差は見られなかった.本研究は,日本人大学生を対象とした多読の効果を明らかにすることを目的としている.英語・英文学科の学生を「多読あり(2年間)」と「多読なし」のグループに分け,「多読あり」のグループは,難易度別英語読本を読むことをコースの必須とした.その結果,両グループ間で,英語力の伸長において有意な差が見られなかった.また,多読が外国語の自律学習にどのような影響をもたらすかを調査するアンケートを開発した.理工学部の英語学習者を「多読あり」と「多読なし」のグループに分け,両グループに対して,自律学習のアンケートを1年次最初と2年次終了時に実施した.しかし,2グループ間において,有意な差は見られなかった.京都ノートルダム女子大学人間文化学部英語英文学科の英語プログラムでの「多読」(Extensive Reading)を経験していないグループ(2006年入学者)と経験したグループ(2008年入学者)の語学力を比較し始めた。各グループは二年間でTOEIC[○!R]能力試験を四回受け、このテストのリーディングセクション(パート5、6、7)の点数を集めたが、まだ詳しい有意義検定は実施していない。次に調べたのは、必修多読プログラムと自発的読書習慣との関係である。プログラムを終了した学生(多読を経験したグループ、多読を経験していないグループ)にアンケートを配布したが回収率が低く、やむなくこの方法でのデータ収集を中止した。個人インタビューも行ったが、参加してくれる学生が少なすぎ、これもデータが集められないため中止した。そのため自発的読書習慣のデータは、2006-2010年度の京都ノートルダム女子大学図書館での学生による貸し出し数(英文/和文図書)を使用することにした。まだ詳しい有意義検定は実施していない。多読プログラムの学生への効果を評価するためには、どの査定方法が適切なのか考え、既に立証されたプログラムにおける二つの最も一般的な査定方法について検証した。客観的アプローチとしては、学生がレベル別読本の内容に関する質問をオンラインで解答する手法、主観的アプローチとしては、学生がレベル別読本についての意見や感想を述べるという手法である。両アプローチを検討し、それぞれのメリットやデメリットについて調べてみた。昨年、京都ノートルダム女子大学人間文化学部英語英文学科の英語プログラムにおける「多読」(Extensive Reading)を経験していないグループ(2006年入学者;N=159)と経験したグループ(2008年入学者;N=213)の語学力を比べた。各グループは二年間でT0EIC能力試験を四回受験し、そしてこのテストのリーディングセクション(パート5、6、7)の点数を集め、有意義検定を実施した。経験していないグループ(M=160.2,SD=53.7)と経験したグループ(M=169.4,SD=57.9)に、示差的な相互関係を見つけることは出来なかった(t(370)=1.57,p=0.12)。自発的読書習慣のデータは2006-2010年度の京都ノートルダム女子大学図書館での学生による貸し出し数(英文/和文図書)を使うことにした。有意義検定を実施したが、データー不足でやむなく中止した。23年度に立命館大学理工学部で新しく始まった多読プログラムの学生への効果評価をするため、査定方法が適切かどうか熟考した。客観的アプローチと主観的アプローチのメリットやデメリットについて調べ、客観的アプローチをするようにした。学生に自発的な英語読書習慣をつけさせる方法を23年度に考え、24年度にデーターベースを作り、25年度からスタートする予定である。前年度に多読プログラムに参加した103人の学生のグループと、参加していない学生102人のグループ、合計205人にアンケートを配布し、二つのパートに分かれた質問について回答を集めた。一つ目のパートには25個の質問があり、英語での読書に対する姿勢や、それが英語力を向上させるためにどのぐらい重要かなどを問うものである。しかしその回答は、多読に参加した学生と参加していない学生との間にあまり差がなく、有意性に欠ける結果であった。二つ目のパートは205人の学生全てが前年度に答えたものと同じで、自発的な英語学習についての質問である。しかしながらこの結果もそれぞれのグループの間に差がなく、有意な結果を得られなかった。昨年度、Extensive Reading(多読)について三つのアンケートを実施した。一つ目は多読を続けることによって、英語での読書に対し、学生の取り組む姿勢や態度にどのような変化が現れるのかというものである。このアンケートは、私の研究状況により適応するよう、Stokmans, 1999に手を加えたものである。二つ目は多読と学生の自発的英語学習との関係について調べたものである。日本人大学生218人に自分の自発的な英語学習についてエッセイを書かせ、その内容を元に作ったものである。

三つ目は多読と付随的学習における語彙習得を調べたものである。3000wordlevel test (Laufer & Nation, 1999)を修正したものであったが、アンケートの配布の仕方に不備があり、このデータ収集方法をやむなく中止した。同じ必修英語教育課程を受講している日本人大学一回生205人のうち、約半分は多読プログラムに参加させ、あとの半分は参加させないようにし、全員に対して前述の二つのアンケートを合わせたものを実施した。25年度にこのアンケート結果を細かく分析し、学会で報告する。アンケートを分配したが、回収率が低かったため、このデータ収集法を中止した。個人インタビューも開始したが、参加してくれる学生も少なく、このデータ収集法も中止した。職場が変ったため元々勤務していた学校の多読プログラムを続けることも、学生のデータを集めることも諦めざるをえなくなった。しかし、新しい職場に多読プログラムを作ることかでき、これから再度データを集められるようになった。25年度が最終年度であるため、記入しない。三つのアンケートを配布し、そのうち二つから研究に使える結果を集めた。これからも学会に参加し、論文を読み、多読について引き続き勉強する。オンラインで客観的効果評価するための査定方法を作り始めており、それが学生の英語力と自発的な英語読書習慣とどういう関係があるか調べる予定。多読の長期的な影響を調べるために、同じ学生に同じアンケートを一年後に配布する予定。
細胞外マトリックスによる各種臓器細胞の大量培養、保存および生体内移植法の開発

1)マウス前立腺上皮細胞をコラ-ゲンゲル内に包埋して培養すると、これまで単層培養では全く観察されていなかったアンドロゲンによる増殖促進効果がみられた。2)ラット肝実質細胞をコラ-ゲンゲル内に包埋培養すると、長期にわたってアルブミンの分泌がみられた。アルギン酸被覆コラ-ゲンゲルビ-ズでも同様な結果が得られ、大量培養への応用が期待された。包埋培養では、肝特異的酵素活性の上昇が見られた。DNA合成は単層培養と同程度に起こり、細胞密度に依存した増殖抑制制が見られた。3)ニワトリ胚脊髄神経細胞をアルギン酸被覆コラ-ゲンゲルファイバ-内に培養したところ、ファイバ-の長軸方向に神経細胞の伸長がみられた。4)ラット視交又上核細胞を、コラ-ゲンでコ-トしたディッシュ上に培養した。数日で神経細胞の集合とネットワ-クの形成がみられ、約24時間の周期を持つバゾプレッシン分泌の変動が観察された。コラ-ゲンゲル内包埋培養ではこのようなネットワ-クが形成されず、バゾプレッシン分泌は低く、リズムも示さなかった。5)マウスの体外受精卵を卵管内で培養したところ、93%が胚盤胞期まで発生した(対照では13%)。卵管を切開して卵管組織上で培養した場合には46%の卵が発生したが、血管内で培養したり採取した卵管液を培養に加えても、対照と差がなかった。コラ-ゲンゲル内に包埋培養した細胞との共培養では今のところ効果はみられていない。1)マウス体外受精卵の培養ICRマウスの体外受精卵を卵管内で培養したところ、93%が胚盤胞期まで発生した(対照では13%)。血管内で培養したり、採取した卵管液を培養に加えても、発生率は対象とほとんど差がなかった。卵管を切開して卵管組織上で培養した場合には46%の卵は発生したが、卵管内での培養より効率が低かった。現在、卵管上皮細胞を管状に培養して初期胚をこの管状構造の内部で培養するために、コラ-ゲンゲルの管状構造を作ることを試みている。2)肝細胞の培養ラット肝細胞をコラ-ゲンゲル内で培養すると、長期にわたってアルブミンの分泌がみられることがわかった。また肝特異的酵素、例えばチロシンアミノトランスフェラ-ゼの活性が、細胞をゲル内に包埋する事によって上昇すること、この上昇はタンパク合成を介しておこることがわかった。コラ-ゲンゲル内包埋培養における増殖の最適条件については、現在検討中である。3)神経細胞の培養ニワトリ胚脊髄神経細胞をアルギン酸被覆コラ-ゲンファイバ-内に培養したところ、ファイバ-の長軸方向に神経細胞の伸長がみられた。ラットの視交叉上核細胞のコラ-ゲンゲル内培養を試み、バゾプレッシンの分泌、一部の神経細胞の伸長などを確認したが、効率よく細胞を分散させ、長期間培養するまでには至っていない。1.マウス体外受精卵の培養マウス1細胞期胚を、コラ-ゲンゲル内に包埋した乳腺上皮細胞と共培養して発生を観察した。今回の実験では発生率に有意差はみられなかった。2.ラット肝実質細胞の培養ラット肝細胞をコラ-ゲンゲル内に包埋して培養したところ、細胞分裂は観察されなかったがDNA合成は単層培養と同程度に起こった。単層培養では細胞密度により増殖の抑制が起きるが、同じようなことが包埋培養でも観察された。3.ラット視交叉上核の培養ラット視交叉上核を切りだし、細胞を分散させ培養した。コラ-

ゲンでコ-トしたプラスティックディッシュ上に培養すると、細胞が集まって三次元的な固まりを作り、固まり同士が神経繊維で結合した構造をとった。この培養系においては、バゾプレッシンの分泌は約24時間の周期を示し、in vitroで概日リズムを示す系を確立することが出来た。基質としては、ポリオルニチン、ラミニン、フィブロネクチン等よりコラ-ゲンが適していた。コラ-ゲンゲル内に包埋した場合、細胞の集合はみられず、バゾプレッシンの分泌は少なく、リズムも示さなかった。培養した細胞を視交叉上核を破壊したラットに移植し、リズムの回復を観察することには今のところ成功していない。
低周波空気振動の睡眠影響に関する研究

1.低周波空気振動の睡眠影響に関する暴露実験:低周波空気振動による睡眠影響の発現の有無・程度ならびに騒音の場合との比較検討を行った.種々の周波数・音圧を組み合わせた低周波空気振動ならびに模擬交通騒音を睡眠中に暴露し脳波を記録した.(1)10, 20, 40, 63Hzの低周波空気振動に暴露した場合の反応率はノンレム睡眠ではS1で最も高くS3+4で最も低かった.レム睡眠では反応の陽性率はS2と同程度であった.反応率50%以上となる音圧レベルをその周波数の睡眠への影響発現の閾値とすると, 10および20Hzに関しては評価することができなかったが, 40Hzでは95dB, 63Hzでは90dBと設定することができた.低周波空気振動を暴露しても,睡眠率,睡眠段階移行回数,睡眠段階別出現率には特記すべき変化は認められず低周波空気振動の睡眠への影響は小さいことが示唆された.(2)1020Hz, 1040Hz, 1080Hzの帯域の低周波空気振動を暴露した場合には,音圧が70dB以下の場合には1020Hzの帯域で影響が把握できること,影響は一過性で睡眠パターンはほとんど影響を受けないことが示唆された.(3)低周波領域(25Hz)に音圧レベルのピークをもつ模擬道路交通騒音(40, 50, 60dB・L50)に暴露した場合にはいずれの睡眠段階でも60dBで最も大きな影響を受けたが, S1の場合には40dBでも反応率は51%に達した.また,交通騒音暴露の影響は一過性のものとはいえず,睡眠パターンにかなりの影響を与えることが示唆された.2.住民反応調査:実際に低周波空気振動が発生している地域の住民に面接調査を行い低周波空気振動の影響を騒音による影響と比較しつつ検討した.(1)種々の訴えは環境の騒音レベルでは60dB,低周波空気振動の音圧レベルでは80dBでより顕著になった.(2)睡眠の妨害に関しては低周波空気振動によるとする傾向より,騒音によるとする傾向の方がはるかに大であった.1.低周波空気振動の睡眠影響に関する暴露実験:低周波空気振動による睡眠影響の発現の有無・程度ならびに騒音の場合との比較検討を行った.種々の周波数・音圧を組み合わせた低周波空気振動ならびに模擬交通騒音を睡眠中に暴露し脳波を記録した.(1)10, 20, 40, 63Hzの低周波空気振動に暴露した場合の反応率はノンレム睡眠ではS1で最も高くS3+4で最も低かった.レム睡眠では反応の陽性率はS2と同程度であった.反応率50%以上となる音圧レベルをその周波数の睡眠への影響発現の閾値とすると, 10および20Hzに関しては評価することができなかったが, 40Hzでは95dB, 63Hzでは90dBと設定することができた.低周波空気振動を暴露しても,睡眠率,睡眠段階移行回数,睡眠段階別出現率には特記すべき変化は認められず低周波空気振動の睡眠への影響は小さいことが示唆された.(2)1020Hz, 1040Hz, 1080Hzの帯域の低周波空気振動を暴露した場合には,音圧が70dB以下の場合には1020Hzの帯域で影響が把握できること,影響は一過性で睡眠パターンはほとんど影響を受けないことが示唆された.(3)低周波領域(25Hz)に音圧レベルのピークをもつ模擬道路交通騒音(40, 50, 60dB・L50)に暴露した場合にはいずれの睡眠段階でも60dBで最も大きな影響を受けたが, S1の場合には40dBでも反応率は51%に達した.また,交通騒音暴露の影響は一過性のものとはいえず,睡眠パターンにかなりの影響を与えることが示唆された.2.住民反応調査:実際に低周波空気振動が発生している地域の住民に面接調査を行い低周波空気振動の影響を騒音による影響と比較しつつ検討した.(1)種々の訴えは環境の騒音レベルでは60dB,低周波空気振動の音圧レベルでは80dBでより顕著になった.(2)睡眠の妨害に関しては低周波空気振動によるとする傾向より,騒音によるとする傾向の方がはるかに大であった.低周波空気振動の睡眠への影響を実験的に明らかにする目的で、健常男子大学生を低周波音実験室に寝かせ、各種の音圧レベルで10Hz,20Hz,40Hz,63Hzの低周波空気振動に20分間隔で1回につき30秒間暴露した際の睡眠への影響をポリソムノグラムを記録することにより検討した。本研究では対照夜を設定するために実験第1夜と第2夜には低周波空気振動を暴露せずポリソムノグラムを記録した。実験第1夜のSW(覚醒)の出現率は実験第2夜より高かった。また、第1夜では、第2夜よりも睡眠段階【S_(3+4)】,【S_4】およびSREMの出現率が低かった。これらの結果より、実験第1夜における各被験者の睡眠が十分でなかったことが推察された。そこで、本研究では実験第2夜を低周波空気振動の睡眠への影響を検討するための対照夜とした。低周波空気振動の暴露夜において、暴露音は各睡眠段階の出現率とほぼ一致した割合で各睡眠段階に挿入されていた。

この結果から、被験者を20分間隔で低周波空気振動に暴露した今回の実験条件は適切であることが確認された。暴露中30秒間を含めた1分間の低周波空気振動に対する反応の陽性率は、ノンレム睡眠においては【S_1】で最も高く、睡眠段階が深くなるに従い低下していた。レム睡眠における反応の陽性率は【S_2】とほぼ同程度であった。低周波空気振動の暴露中30秒間を含めた1分間の低周波空気振動に対する反応の陽性率が50%以上となる音圧レベルを、その周波数の低周波空気振動による睡眠への影響の発現いき値と考えた場合、10および20Hzに関しては評価することができなかった。40Hzではいき値が95dB,63Hzでのいき値は90dBと設定することができた。低周波空気振動を暴露しても、睡眠パターンの指標となる睡眠率,睡眠段階移行回数,睡眠段階別出現率には特記すべき変化は認められず、低周波空気振動の睡眠への影響は小さいことが示唆された。
一酸化炭素中毒における連鎖的大脳白質障害の病態解明と最適予測因子の検索

当該研究は、一酸化炭素(carbon monoxide, CO)中毒後急性期の酸化ストレス度、亜急性期の脱髄が連鎖的に起こっていることを確認し、CO中毒後遺症としての認知障害を予測しえる最適は検査法と検査時期を明らかにすることを目的として行われた。次に、発症から8日目から14日目までの亜急性期に、3.0-T高磁場MRIを用いて大脳深部白質のfractional anisotropy値(FA)を各症例毎に測定した。MMSEスコア26点以下をCO中毒による認知障害と定義したところ、認知障害は6例、非認知障害は24例であった。認知障害症例群は、非認知障害症例群より、有意にOA比が高値、かつ、FA値が低値であった。CO中毒による後遺症としての認知障害は、超急性期における酸化ストレス、亜急性期の大脳白質神経線維の崩壊が連鎖的に起こっていることが示唆された。また、CO中毒後の認知障害の発症予測の方法として、超急性期の酸化ストレス度(OA比)、亜急性期のMRIによるFA値測定が有用な検査時期と検査法である可能性が示唆された。CO中毒による後遺症としての認知障害が、超急性期における酸化ストレス、亜急性期の大脳白質神経線維の崩壊が連鎖的な生体内変化が原因である可能性が示された。また、CO中毒後の認知障害の発症予測として、超急性期の酸化ストレス度、亜急性期のMRIによるFA値測定が有用な検査法である可能性も示すことができた。一方、当初の計画にあった、トレーサPK11195を用いたpositron emission tomography (PET)による慢性期の大脳白質内マイクログリア活性の測定は、予定どおり進行できなかった。理由として、高純度のPK11195を精製することができなかったこと、CO暴露後1528日以内の期間内に患者をサイクロトロン施設(車で30分)に搬送する必要があったが、病状等により全症例を予定通り撮像することができなかったことが挙げられた。最良の感度・特異度で慢性期認知障害の予知が可能となる閾値をOA比、FA値のそれぞれで決定することを目指す。トレーサPK11195の精製において機材を変更するなどの工夫を行い、より高い純度の精製を模索する。また、対象となる症例の重症度を低く設定し、より多くの症例を蓄積するとともに、サイクロトロン施設への搬送が可能な症例を増加させる方針である。その後6ヶ月間患者を観察し、慢性期中枢神経の出現の有無と程度を観察した。4例が慢性期中枢神経症状を起こした。中枢神経症状発生症例の各定量値は無症候症例に比較して有意に高値を示した(BAP/ d-Roms ratio, p = 0.01; FA値, p = 0.01; PK11195定量値, p = 0.04)。Receiver operatingcharacteristic (ROC)曲線で症状発生の予測を検討したところ、2のFA値が最も高い感度(85.4%)・特異度(100%)で症状発生症例を予測し得ることがわかった。1酸化ストレス相対値BAP/ d-Roms ratio、2拡散テンソル画像FA値、3PK11195-PET定量値の3つの検査の施行が許される症例は限りがあり、未だ予定登録症例数に至っていない。また、慢性期中枢神経症状を代表する認知障害の程度と定量値の関係を観察することが目的の一つであるが、症状発生症例が未だ4例と少なく、再現性のある結果が出せない状況である。

理由として、高純度のPK11195を精製することができなかったこと、CO暴露後1528日以内の期間内に患者をサイクロトロン施設(車で30分)に搬送する必要があったが、病状等により全症例を予定通り撮像することができなかったことが挙げられた。地域関連病院と協議し可能であれば一酸化炭素中毒の症例を率先して当施設に搬送してもらい、今1例でも多く登録するよう努力する。認知障害を来すほどの重症症例の割合は非常に低いため、認知障害以外の神経症状(振戦や歩行障害)について検討する方針転換も考慮すべきと考えている。最良の感度・特異度で慢性期認知障害の予知が可能となる閾値をOA比、FA値のそれぞれで決定することを目指す。トレーサPK11195の精製において機材を変更するなどの工夫を行い、より高い純度の精製を模索する。また、対象となる症例の重症度を低く設定し、より多くの症例を蓄積するとともに、サイクロトロン施設への搬送が可能な症例を増加させる方針である。登録症例数が当初の計画よりも少なく、それに伴って検査に使用する予算が予定より低かったことが次年度使用額が生じた理由である。特に認知障害を来す重症症例が少ないことが問題であったが、本年度は認知障害以外の歩行障害、振戦などの症状と定量値の関係を検討することに費用を使用する計画である。また、現時点での成果を学会発表、学術誌に掲載するための費用とする予定である。当初の計画にあったトレーサPK11195の予定通りに精製されなかったこと、PK11195を用いたPET撮像が全症例に施行できなかったことによる。次年度は、予定通りの精製および患者への投与を行う。
高熱流束気泡微細化沸騰の伝熱機構と安定性に関する研究

液体が強くサブク-ルされている場合に、本来遷移沸騰や膜沸騰が生じる領域において、伝熱面温度がほとんど一定に保たれたまま、熱流束が核沸騰の限界熱流束をはるかに越えたところまで増加する現象、すなわち気泡微細化沸騰について、その伝熱機構と安定性に関する実験的研究を行った。気泡微細化沸騰は供給される液体のサブク-ル度と流速に強く影響され、それらの大小により大きく分けて2種類の異なった様相、および伝熱特性を示す。一つはサブク-ル度と流速がともに大きい場合に生じるもので、大きな沸騰音を伴いながら微細気泡を伝熱面から噴き上げ、熱流束は2×10^7W/m^2以上にも達する。これをS-MEBと名付けた。このとき伝熱面まわりの液体の圧力変動は大きいが、伝熱面の温度変動はCHFに比べて小さく、気泡運動の激しさと、液体の攪拌の強さを示している。もう一つはサブク-ル度と流速がともに小さい場合に生じるもので、気泡は微細化するが激しい攪拌は行われず、音も静かである。また、熱流束の急激な上昇もない。これをC-MEBと名付けた。中間的な条件では、両者の間を往復振動するなど、不安定な様相を呈する。また、気泡微細化現象はサブク-ル核沸騰とは異なる大きな音を発生し、その音圧レベルは二つの卓越した周波数を持つ。周波数5001250Hzに現れるピークは特に大きく、気泡微細化現象独特のピークである。周波数800016000Hzに現れるピークは、高サブク-ル時には核沸騰でも生じる。それぞれのピークの強さはサブク-ル度および熱流束と密接な関係がある。一方、気泡挙動については、気泡微細化現象では気泡が伝熱面に向かって崩壊すること、気泡の崩壊周波数と音圧レベルの周波数は類似した分布を示すことが明らかになった。このことから、気泡微細化現象の熱伝達には気泡の崩壊が重要な要素として関わっていることが考えられる。以上から、気泡微細化沸騰発生後の状況はかなり明らかになったといえる。今後は、気泡微細化の初生と、各変動の1サイクルと気泡挙動の対応が明らかにされる必要があろう。液体が強くサブクールされている場合に、核沸騰以降の、本来遷移沸騰や膜沸騰が生じる領域において、伝熱面温度がほとんど一定に保たれたまま、熱流束が核沸騰の限界熱流束をはるかに超えたところまで増加する現象、すなわち気泡微細化沸騰について、その発生条件と安定性に重点をおいた研究を行った。実験は直径15mmの水平上向き伝熱面に、サブクール水を伝熱面周囲から供給し、中心上方に吸い上げる系でおこなった。気泡微細化沸騰は供給される液体のサブクール度と流速に強く影響され、それらの大小により大きく分けて2種類の異なった様相、および伝熱特性を示す。一つはサブクール度と流速がともに大きい場合に生じるもので、大きな沸騰音を伴いながら微細気泡を伝熱面から噴き上げ、熱流束は2×10^7W/m^2以上にも達する。

このとき伝熱面まわりの液体の圧力変動は大きいが、伝熱面の温度変動はCHFに比べて小さく、気泡運動の激しさと、液体の攪拌の強さを示している。もう一つはサブクール度と流速がともに比較的小さい場合に生じるもので、気泡は微細化するが激しい攪拌は行われず、発生音も静かである。また、熱流束の急激な上昇もない。これをC-MEBと名付けた。中間的な条件では、両者の間を往復振動するなど、不安定な様相を呈する。現在、気泡の挙動と発生音、ならびに圧力変動の詳しい測定と解析を行っており、その結果を基に、気泡微細化現象の機構を考察する予定である。液体が強くサブク-ルされている場合に、核沸騰以降の本来遷移沸騰や膜沸騰が生じる領域において、伝熱面温度がほとんど一定に保たれたまま、熱流束が核沸騰の限界熱流束をはるかに超えたことろまで増加する現象、すなわち気泡微細化沸騰について、その発生条件と安定性に重点をおいた研究を行った。実験は5mm×10mmの水平上向き及び鉛直伝熱面に、サブク-ル水を伝熱面に並行に供給する系でおこない、気泡微細化沸騰で生じる音について音圧レベルの周波数特定特性を計測し、サブク-ル核沸騰の音との比較から、両者の違いを定量的に示すとともに、その結果から気泡微細化現象の発生音と伝熱現象の関係を考察した。(1)気泡微細化現象はサブク-ル核沸騰とは異なる大きな音を発生し、その音圧レベルは二つの卓越した周波数を持つ。(2)周波数5001250Hzに現れる音圧レベルのピークは特に大きく、核沸騰領域ではあまり見られない気泡微細化現象独特のピークである。(3)周波数800016000Hzに現れるピークは、高サブク-ル時には核沸騰でも生じる。(4)それぞれのピークの強さはサブク-ル度および熱流束と密接な関係がある。とくに熱流束と強い相関を示す。また、音は沸騰の場合には気泡の成長・収縮の挙動によって発生している可能性が高いことから、音圧レベルの測定と同時に高速度カメラによる気泡運動の撮影を行い、気泡微細化現象での気泡の様相と発生音の関係を検討すると共に、その結果を基に気泡微細化現象の熱伝達機構に対する考察を試みた。(5)気泡微細化現象では気泡が伝熱面に向かって崩壊する。(6)気泡の崩壊周波数と音圧レベルの周波数は類似した分布を示す。(7)(4)および(6)を併せて考えると、気泡微細化現象の熱伝達には気泡の崩壊が重要な要素として関わってきることが考えられる。
英領西アフリカ現地新聞の分析を通した、第二次世界大戦期の日本アフリカ交渉史研究

本研究は、第二次世界大戦期に「連合国」の一員に組み込まれた英領西アフリカ植民地(主にゴールドコースト[現ガーナ])の現地新聞が、「枢軸国」の一員として敵対国となった「日本」をいかに報じ・論じたかを、現存する当時の新聞及び、新聞発行に関する植民地側・新聞社側双方の史資料を用いて検証した。これにより、現地知識人層の第二次大戦観と「日本」観の変遷、及び第二次大戦期における植民地当局と現地メディアの関係の一端を解明することができた。研究初年度にあたる平成21年度は、基礎資料の収集を研究活動の中心に据えた。平成21年12月にイギリス・英国図書館付属新聞図書館において本研究最初の海外文献調査を実施し、第二次世界大戦期に英領ゴールドコースト(現ガーナ)で発行されたThe Gold CoastIndependent紙を参照する機会を得た。同紙の第二次大戦期の発行分は、報告者がこれまでに確認した限り、出版国のガーナを含む世界の他の図書館・文書館には所蔵されておらず、先行研究においても言及されていないものであるため、貴重な資料を収集することができた。当該資料はすべて'Fragile items(保護指定資料)'に分類されていたため、複写することは許可されていない。そのため、全て筆写もしくはパソコンへの手入力により記事内容の記録をおこなった。平成22年3月にはガーナ共和国への資料調査を実施し、同国公文書館(PRAAD)アクラ本館においては、第二次大戦期前後の日本=ガーナ間貿易に関する統計資料(ADM7シリーズ・特にOffice of the Government Statistician, 'Statistics of External Trade and Shipping and Aircraft Movements 1935-1953', February,1956.)を参照し、同館クマシ分館では、同時期にゴールドコースト植民地政府が放送したラジオ番組のスクリプト(ARG1/28シリーズ)を参照する機会を得た。いずれも、当時のゴールドコーストの新聞記事の分析を行う上で、日本との経済関係及び、植民地政府が提供していた戦争情報及び「敵国としての日本像」を跡づけるための重要な資料である。昨年は、その他、予備考察として5月にアジア世界史学会での研究報告(African Press Coverage of Japan and British Censorship during World War II : Case Study of the Ashanti Pioneer,1939-1945)を行い、現在当該報告原稿を英文の研究論文として出版すべく、最終的な内容修正をおこなっている。研究最終年度にあたる平成22年度の研究活動は、研究論考の作成及び海外研究者との研究上の情報交換に加え、2度(前半[89月]及び後半[3月])に渡って現地での文献調査を実施し、関連史資料の収集をおこなった。前半の調査はケニアとガーナにて実施した。まずケニア国立公文書館において、第二次世界大戦期初期の現地発行新聞(The East African Standard)戦争報道記事を収集した。これにより、開戦期にあたる1939年後半の記事を集中的に確認・収集し、白人入植者の大戦観及び開戦を受けての植民地政策の転換提言など、現地アフリカ人と本国政府との間で植民地統治の重要なアクターとなった白人入植者の戦争報道に関する重要な情報を得ることができた。さらに、ガーナ国立公文書館(PRAAD)アクラ本館では、同館が所蔵する第二次大戦期の英領ゴールドコースト政府関連文書の中から、日本に関する史料を一つずつ洗い出す作業を進めた。その結果、対日戦に関する優勢を報じるラジオニュース原稿などに加え、同大戦期にゴールドコースト政府に捕虜として収容された3名の「日本人」に関する公文書の存在を確認することができた。ガーナで実施した後半の調査では、PRAADアクラ本館において、第二次大戦期の植民地情報局関係資料の所在確認と収集を行い、対日戦に関する優勢を報じるラジオニュース原稿や、同大戦期にゴールドコースト政府の総督府と情報局との間で交わされた、情報統制政策に関する書簡類の存在を確認・収集することができた。また、PRAADクマシ分館においては、前回までの現地調査に引き続き、第二次大戦期のゴールドコースト植民地内のアシャンティ地域における植民地当局による情報統制関係文書の確認・収集を行った。その結果、第二次大戦期の植民地政府・放送局関連の文書(ARG6/8/4)の存在を確認し、当館スタッフの助力によって、全文書の複写を行うことができた。これら調査によって得られた情報に基づき、報告者は英文論考を発表した。
癌免疫療法を目的としてロイシンリッチリピート分子の基礎的解析

【要約】1 TLR4に会合する分子MD-2をクローニングした。2ヒトTLR4はLPSを認識するが、その際にMD-2の会合が必須である。【研究目的】今まで謎であった、病原体を認識するレセプター分子とその認識機構を分子レベルで明らかにする。これにより、癌免疫療法における免疫賦活剤として用いられてきた病原体由来の物質に変わる新たな免疫賦活剤の開発のための理論的基盤となることが期待される。【方法と結果】1 TLR4はLPSに低応答性を示すミュータントマウスC3H/HeJの原因遺伝子であり、LPSレセプターであると考えられていた。しかしながら、ヒトのTLR4を細胞株に単独で発現させてもLPS応答性は獲得されなかった。我々はTLR4によく似たRP105をすでにクローニングしており、それに会合する分子MD-1も同定していた。MD-1によく似た分子がTLR4に会合し、LPS応答性に重要ではないかという仮定のもとに、MD-1類似分子をデータベースにて検索し、新たな分子MD-2の遺伝子クローニングに成功した。2新たに作成したヒトTLR4に対するモノクローナル抗体を用いてTLR4を免疫沈降したところ、MD-2がTLR4とともに共沈されることが明らかとなった。従って、TLR4とMD-2が会合していることがわかった。3 IL-3依存性細胞株であるBa/F3にTLR4単独、TLR4とMD-2を発現させ、同時に導入したNF-kBレポーター遺伝子でLPSシグナル伝達によるNF-kB活性化をルシフェラーゼアッセイで測定した。その結果、TLR4単独ではLPS応答性は見られないが、MD-2の共発現により応答性が獲得されることが明らかとなった。この事実から、TLR4とMD-2複合体がLPSを認識していることが明らかとなった。【考察】LPSは強力に免疫細胞活性化を誘導するにも関わらず、その認識機構は長い間謎であった。Positional cloningの結果TLR4がそのレセプターであることが示唆されたが、我々の結果によって、TLR4とMD-2の会合が重要であることが明らかにされた。この結果は、免疫システムにおいて、病原体が抗原レセプターとは異なる分子によって認識される機構を分子レベルで明らかにするうえで、重要な糸口となると考えられる。この機構の解明は、免疫システムの制御技術開発のうえでも重要であり、癌免疫療法に貢献しうると期待される。