hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アンシアン・レジーム期の王権の文化・社会とその文化資源としての建築

1)「『下町』の創設とシャルルロワ要塞の都市化-シャルルロワ市の成立についてその3」、『日本建築学会学術講演梗概集』F・2建築歴史・意匠、PP.189・190、・20056年9月本研究課題はヴェルサイユ宮殿を主な対象としているが、それを補完すべく、国境地帯に次々に築かれた都市防御施設とその立体模型も取上げ、王権の顕示・表現の問題に対し、それを支えた技術はどういったものだったのかという技術史的視点からも取組むことを考えている。これは同時に、文化資源としての建築の創造が、建築家などの一部エリートだけではなく、市井に生きる職人たちによっても支えられていたのだと明らかにすることでもある。本稿ではその一環として、ベルギーの工業都市シャルルロワ市を取り上げている。シャルルロワ市は、現在、ベルギー王国フランス語圏に位置し、重厚長大産業花盛りの頃には工業都市として栄えた。実は、その歴史は中世まで遡るものではなく、わが国と比べヨーロッパでは数少ない、近世城郭から発展した町である。1666年前後のスペイン軍による要塞建設と、1668年から1678年にかけてのフランス軍による要塞強化を扱った拙稿:「ピレネー和約とスペイン軍の新防衛拠点構築-シャルルロワ市の成立についてその1」、『日本建築学会学術講演梗概集』F-2建築歴史・意匠、pp.31-32、2002年8月、および、idem:「アーヘン和約とフランス軍の新攻撃拠点構築-シャルルロワ市の成立についてその2」、『日本建築学会学術講演梗概集』F-2建築歴史・意匠、pp.525-526、2003年9月に続き、本稿ではフランス軍占領時代の都市化事業に焦点を当てている。とくにフランス統治下に新たに築かれた「下町:Ville-Basse」建設の意義を浮き彫りにする。1)「ヴェルサイユ宮殿と1674年の祝典の劇場作品-ヴェルサイユ宮殿および付属庭園における絵画や彫刻を媒体とした寓意表現についてその3」2)「ヴェルサイユ宮殿の図像プログラムとラシーヌの悲劇『イフィジェニー』序文にみる新旧論争」ヴェルサイユ宮殿は、天井画や庭園彫刻の図像プログラムという形で、人文主義的古代神話体系が17世紀の末に最後の輝きを放ったものである。このような側面から初めてヴェルサイユを捉えたのは美術史家マール氏の研究である。1963年にはギュー氏の謎解き本が刊行されたが、当分野の研究が盛んだったのは1980年代だった。1990年代には研究成果の一般書における普及が顕著である。その中で、ヴェルサイユ宮殿の絵画・彫刻主題の解釈に、従来から用いられてきた当時の公式記録や証言などに加えて、同時代の劇場作品の詩句を援用するようになったことが近年の成果として挙げられる。しかし、当時のスペクタクルの様々なタイプのうち、どのジャンルの作品を取り上げるべきなのか、以上の方法を用いるに際し、原点となるこの問題から論じられたことはない。筆者は、1674年に当宮殿で催された祝典での様々な上演作品の分析が、この宮殿の図像主題と同じ世界を共有する演劇ジャンルを見出す手がかりになると考える。1)の学術講演ではそこで上演された作品がどのような性質のものだったのかを明らかにした。2)の論文では、ラシーヌの悲劇「イフィジェニー」序文の分析という方法で、まずは、古典主義演劇が、ヴェルサイユの図像主題の世界とはあまり関わりを持っていないことを明らかにするとともに、空間論や様式論などの建築学の伝統的方法ではみえてこなかった面に光をあてた。1)「ヴェルサイユ宮殿付属庭園の『諸学芸とミューズたちの泉』案-ヴェルサイユ宮殿および付属庭園における絵画や彫刻を媒体とした寓意表現についてその4」ヴェルサイユ(Versailles)宮殿は、天井画や庭園彫刻の図像プログラムという形で、人文主義的古代神話体系が17世紀の末に最後の輝きを放ったものである。1963年にはギユー氏の謎解き本が刊行されたが、当分野の研究が盛んだったのは1980年代だった。本稿では2004年に初めて校訂版が世に出たこの史料を用い、音楽神でもあるアポロンが宰領するミューズたちとパルナス山の主題に基づく、ヴェルサイユ(Versailles)庭園の実現しなかった泉水案に注目し、その姿がどのようなものだったのかを示した。この主題は自らを太陽神アポロン(Apollon)に装えた165070年代のルイ14世(Leuis XIV)の宮廷においてよく用いられ、1650年代から1670年代にかけてのフランス宮廷の図像プログラムのなかでも重要な位置を占めていたと考える。とくに、1660年8月26日の国王夫妻パリ入場式の際の仮設記念門が代表的な例としてよく知られている。

これは同時に、文化資源としての建築の創造が、建築家などの一部エリートだけではなく、市井に生きる職人たちによっても支えられていたのだと明らかにすることでもある。本稿ではその一環として、ベルギーの工業都市シャルルロワ市を取り上げている。シャルルロワ市は、現在、ベルギー王国フランス語圏に位置し、重厚長大産業花盛りの頃には工業都市として栄えた。実は、その歴史は中世まで遡るものではなく、わが国と比べヨーロッパでは数少ない、近世城郭から発展した町である。1666年前後のスペイン軍による要塞建設と、1668年から1678年にかけてのフランス軍による要塞強化を扱った拙稿:「ピレネー和約とスペイン軍の新防衛拠点構築-シャルルロワ市の成立についてその1」、『日本建築学会学術講演梗概集』F-2建築歴史・意匠、pp.31-32、2002年8月、および、idem:「アーヘン和約とフランス軍の新攻撃拠点構築-シャルルロワ市の成立についてその2」、『日本建築学会学術講演梗概集』F-2建築歴史・意匠、pp.525-526、2003年9月に続き、本稿ではフランス軍占領時代の都市化事業に焦点を当てている。とくにフランス統治下に新たに築かれた「下町:Ville-Basse」建設の意義を浮き彫りにする。
企業の新技術導入行動と経済政策研究

5本の論文が学術誌に掲載され、2本の論文がアクセプトされた。そのうち、4本の論文では新技術の導入を考えている企業の行動に焦点を当てた分析を行った(1)。また、3本の論文では、新技術を持つ企業の戦略的行動を分析した(2)。1市場の競争環境と企業の新技術導入インセンティブの関係を分析した。市場の競争と新技術導入インセンティブの関係については様々な分析結果がある。競争の激化が新技術導入を促進するという主張もあれば、逆に、競争の激化が新技術導入を抑制するという主張もある。また、非線形の関係を導出した研究も存在する。すなわち、競争と新技術導入インセンティブのU字型、または逆U字型の関係である。本研究では、これまでに無いモデルを使い、競争と新技術導入インセンティブの関係を分析した。分析の結果、一定の条件下で競争と新技術導入インセンティブの逆U字型の関係を導出した。これまでに理論分析を用いて競争と新技術導入インセンティブの逆U字型の関係を導出したものは見当たらず、本研究の特色である。加えて、経済政策や新技術導入費用に関する分析も行った。企業による新技術の導入は、経済にとって重要な意味を持つ。発展途上国においては、貧困改善に生産技術の向上が重要である。本研究は新技術の導入が進みやすい市場環境を明らかにしたため、経済政策に資すること出来ると考えられる。2新技術を持つ企業の戦略を分析した。新技術を持つ企業が新たな市場で利潤の獲得を目指す場合、新技術を用いて参入するか、旧技術を使って生産している既存企業へ新技術をライセンシングするか、戦略的に判断すると考えられる。それぞれの戦略が採用される条件を明らかにした企業の参入またはライセンシングの戦略的な選択行動は、経済に異なった影響を与える。本研究は、技術の大きな不均衡が存在する世界経済の諸問題を考える上で重要な役割を果たすと考えられる。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
グライコミクス解析を応用した尿中糖鎖検出による新規癌診断法の開発

癌細胞の特徴の一つとして、細胞表面や分泌される糖蛋白の糖鎖構造の変化が一般的に良く知られている。血液では腫瘍マーカーとして糖鎖にフコースが付加された血中抗原(CA19ー9など)が測定されている。本研究では担癌患者の尿からグライコミクス技術を用いてフコシル化オリゴ糖を検出することで、新たな癌の存在診断法を開発した。癌細胞の特徴の一つとして、細胞表面や分泌される糖蛋白の糖鎖構造の変化が良く知られている。例えば、腫瘍マーカーとして汎用されているSLX/CA19-9(膵癌、大腸癌など)、AFP-L3分画(肝細胞癌)、PSA(前立腺癌)では、いずれも糖鎖にフコースが付加された血中抗原が測定されている。申請者らは、癌細胞(膵および大腸癌)が14C-Fucoseを積極的に摂取するとともに、培養清中にフコシル化蛋白を短時間で放出することを最近見出した(PLoS One, 2012; JNCI, in press)。一方担癌患者では、尿中フコース濃度が有意に増加していることが報告されているが(Clin Chem 36:474-6, 1990)、その形状など詳細は不明である。本研究では担癌患者の尿からグライコミクス技術を用いてフコシル化低分子オリゴ糖を検出することで、新たな簡便な癌の存在診断法を開発することを目的とする。当科は消化器癌を中心とする腫瘍内科であり、初発、再発の消化器癌患者が多数来院される。当該年度ではまず初発の膵癌、胃癌、大腸癌患者を対象とし、初発時の病変評価(RECIST v1.1および各種癌取り扱い規約に準ずる)および各種生化学データ、腫瘍マーカーを含めた臨床情報の蓄積を行った。また同患者の尿検体、血清検体、手術検体の収集を行った。まず最初に膵癌の患者検体を使用し、preliminaryで検討した方法にて糖鎖構造を検討した。研究は計画の通りおおむね進んでおり、健常人と膵癌患者検体との比較検討中である。本研究では担癌患者の尿からグライコミクス技術を用いてフコシル化低分子オリゴ糖を検出することで、新たな簡便な癌の存在診断法を開発することを目的とした。まず初発および再発の膵癌、胃癌、大腸癌患者を対象とし臨床情報を集積した。同時に同患者の尿、血漿および組織検体の採取を行った。それらの採取検体における糖鎖精製および解析を行い、健常人および担癌患者の尿で有意差を認める複数のGlycan候補が見つかった。各種細胞株における糖鎖精製および解析を行うも、vitroでの検出は困難であり、検出法は今後の検討課題であった。In vivoにおける尿中のGlycanは担癌患者のBiomarkerとして有用であった。本研究課題は、おおむね予定通り進捗しており、その計画に変更はない腫瘍内科
研究職を離れた言語研究者が保持する言語データの適正再資源化のための基盤確立研究

本研究は,これまで言語研究者が蓄積してきたデータがポストを離れたり,物故したりした後に,再び入手できない貴重な資料が永遠に失われる事態を避けるための方法論や枠組みの基盤確立を目指すものである。その具体的な内容は,(1)言語データの管理方法論,(2)データ保存の技術的課題の整理と解決,(3)研究文化に関わるデータの個別的・全体的課題の3領域に分けられる。以下3領域の研究内容・作業工程・進捗状況を踏まえて,研究実績の要点を記す。まず,言語データの管理に関する枠組みの研究においては,既存のデータの扱いにかかる倫理的な問題と,その対応策について,議論を進め,論点が明らかになっている。既存のデータも,調査協力者の承認状況に差異があり,現在とは個人情報や著作権にかかる意識が異なることもあって,一律に処理できないため,それぞれに細かにケースを分けて対応策をあらかじめ決めておく必要があり,その現実的な対応マトリックスを作成しており,完成し次第,成果として公開することを考えている。第2領域となる,言語データ保存の技術的な課題については,可能な限り,既存のデータの提供を受け,保存対象データとして問題がなく,有効性が認められるかを確認するために,先行してデータ化を進めている。データはアナログであったものをデジタル化することで損耗なく半永久的に残すことができるが,デジタル化のレベルと形式の問題があることが判明している。現時点では,ご遺族に寄贈をうけた故湯川恭敏東大名誉教授のデータのデジタル化が終わり,菅原孝和京大名誉教授のデータのデジタル化を進めている。このため,アフリカの言語について保存管理が進んでいることになる。第3領域となる研究風土の差異に基づく,データ保存の問題点は,各セクションでの論点整理が進んだ。事前に想定した地域差・領域差を確認し,方法論の差異の調査も一定の進捗を見た。本研究は,(1)言語データの管理方法論,(2)データ保存の技術的課題の整理と解決,(3)研究文化に関わるデータの個別的・全体的課題の3領域に分けられるので,領域ごとの進捗状況と全体的な状況について記す。第一領域(言語データの管理に関する枠組みの研究)では,論点整理と現状分析が終わり,それを成果として発表する準備を進めている。ただし,言語データの扱いについては,データ収集状況に関する時代や個々の研究者の倫理意識が異なり,権利や情報管理に関する考え方も変遷があることから,事前の計画よりも細かにケースを分け,その状況の記述と問題点の確認などに時間を要することが推測される。しかしながら,作業工程そのものは大きく遅滞してはおらず,全体的に見て問題なく進捗している。第2領域となる,言語データ保存の技術的な課題については,方法論的な問題の整理ができており,既存のデータについても,ご遺族に寄贈をうけた故湯川恭敏東大名誉教授のデータのデジタル化が終わり,菅原孝和京大名誉教授のデータのデジタル化を進めている。このほかのデータもいくつか平行してデジタル化を進めている。全体としては,当初予定していた作業工程よりも作業量が増えているが,作業工程そのものは特に遅れがなく,成果は予定以上のアウトプットになるものと推定している。第3領域の課題は,アフリカ諸語・日本語諸方言・オーストロネシア諸語などに分けて論点整理を進めており,それぞれの領域で相応の進捗が見られた。当初の計画では,この領域は工程の順序において優先せず,あとに回す予定であったことから,全体としてはやや予定より進捗していると言える。第一領域・第二領域ともに,当初計画よりも作業量が増えているが,特段の遅れはなく,第三領域は予定以上の進捗が見込まれるので,計画以上の進捗状況とまではいえないものの全体としては順調に推移している。計画年度(4年のうちの)2年目にあたる今年度(2019年度)は,引き続き,第2領域における言語データのデジタル化を進めながら,データ処理手法の問題点などを明らかにしていくが,デジタルデータの形式の問題やデータ破損の復旧の問題にも取り組むことを考えている。アフリカ諸語から日本語諸方言やアジアの言語など,他の言語についても徐々にデータ化の準備を進める。第一領域における研究倫理とデータ管理の関係については,整理した結果をマトリクスとして公開できる状況を目指している。少なくとも,研究倫理の一般論と,言語研究特有の問題については,論点整理が進んでいるので,いくつかの解決策を提案できるように進めている。必要に応じて,国内外の研究者にインタビューや知見提供を受けることも想定し,なるべく言語研究だけの課題に矮小化せずに,人文科学の研究全体あるいは科学研究全体に応用可能なものとして進めたいと考えている。あわせて,データの利活用の手法と権利の保護についても,明確にする必要があると判断しており,データ収集の状況との関係から論点整理を進める。第三領域については,個々の分野ごとでの問題点が整理できているので,それを共通の課題や独自の課題として再整理する段階にさしかかっている。本研究計画では主に3つの大きなフィールド領域しか想定していないので,他のフィールドの研究者から知見や意見を徴する機会をどのように設けるべきか(個別調査かワークショップ形式か)などを早い時期に確定させ,その準備を今年度のうちに進めたい。現時点の進捗状況では,4年の内の3年目で,おおよその成果は出そろうと思われるので,その段階では研究内容を拡張することや前倒しして早めることなどを検討したいと考えている。

その具体的な内容は,(1)言語データの管理方法論,(2)データ保存の技術的課題の整理と解決,(3)研究文化に関わるデータの個別的・全体的課題の3領域に分けられる。以下3領域の研究内容・作業工程・進捗状況を踏まえて,研究実績の要点を記す。まず,言語データの管理に関する枠組みの研究においては,既存のデータの扱いにかかる倫理的な問題と,その対応策について,議論を進め,論点が明らかになっている。既存のデータも,調査協力者の承認状況に差異があり,現在とは個人情報や著作権にかかる意識が異なることもあって,一律に処理できないため,それぞれに細かにケースを分けて対応策をあらかじめ決めておく必要があり,その現実的な対応マトリックスを作成しており,完成し次第,成果として公開することを考えている。第2領域となる,言語データ保存の技術的な課題については,可能な限り,既存のデータの提供を受け,保存対象データとして問題がなく,有効性が認められるかを確認するために,先行してデータ化を進めている。データはアナログであったものをデジタル化することで損耗なく半永久的に残すことができるが,デジタル化のレベルと形式の問題があることが判明している。現時点では,ご遺族に寄贈をうけた故湯川恭敏東大名誉教授のデータのデジタル化が終わり,菅原孝和京大名誉教授のデータのデジタル化を進めている。このため,アフリカの言語について保存管理が進んでいることになる。第3領域となる研究風土の差異に基づく,データ保存の問題点は,各セクションでの論点整理が進んだ。事前に想定した地域差・領域差を確認し,方法論の差異の調査も一定の進捗を見た。本研究は,(1)言語データの管理方法論,(2)データ保存の技術的課題の整理と解決,(3)研究文化に関わるデータの個別的・全体的課題の3領域に分けられるので,領域ごとの進捗状況と全体的な状況について記す。第一領域(言語データの管理に関する枠組みの研究)では,論点整理と現状分析が終わり,それを成果として発表する準備を進めている。ただし,言語データの扱いについては,データ収集状況に関する時代や個々の研究者の倫理意識が異なり,権利や情報管理に関する考え方も変遷があることから,事前の計画よりも細かにケースを分け,その状況の記述と問題点の確認などに時間を要することが推測される。しかしながら,作業工程そのものは大きく遅滞してはおらず,全体的に見て問題なく進捗している。第2領域となる,言語データ保存の技術的な課題については,方法論的な問題の整理ができており,既存のデータについても,ご遺族に寄贈をうけた故湯川恭敏東大名誉教授のデータのデジタル化が終わり,菅原孝和京大名誉教授のデータのデジタル化を進めている。このほかのデータもいくつか平行してデジタル化を進めている。全体としては,当初予定していた作業工程よりも作業量が増えているが,作業工程そのものは特に遅れがなく,成果は予定以上のアウトプットになるものと推定している。
超高緩和性・高安定性・ターゲティング能を有する革新的MRIコントラスト剤

核磁気共鳴イメージング(MRI)測定では感度とコントラストを向上させる造影剤(CA)としてガドリニウム(Gd)-ポリアミノカルボン酸錯体が多用されるが,感度の頭打ち,腎性全身性線維症の問題が指摘されている.そこで緩和能を向上させ,安定かつターゲティング可能な革新的CAとしてサンドイッチ型多核錯体Gd3TCAS2を提案する.本研究ではその生成,構造,緩和能を評価し,革新的コントラスト剤設計指針を得た.本研究では超高緩和性・高安定性・ターゲティング能を併せ持つ革新的MRI造影剤の設計原理をサンドイッチ型多核錯体Gd3TCA2を基体として検討する(TCA =チアカリックスアレーン).本年度はi) Gd3TCA2の1H緩和機構を解明した.まずGd3TCA2の1H緩和能r1を精査した.Gd当たりの緩和能は水溶液中ではr1 = 5.8 mM-1s-1 at 20 Hz (37 °C, pH 7.4)となった.これは既存のMRI造影剤であるGd-DOTAやGd-DTPAの緩和能よりも70%ほど大きな値で実用上の高緩和能が期待できた.ついで血流イメージングを想定し,血清アルブミンとGd3TCA2との相互作用を解析した.発光性Tb3TCA2を用い会合定数をキャピラリー電気泳動で求めたところ1.71 ×10^6 M-1 (pH 7.4)となった.これは4.5%のHSAの存在する血中ではGd3TCA2は定量的にHSAに結合していることを示している.そこで4.5% HSA存在下で緩和能を測定したところr1 = 5.5 mM-1s-1 at 20 Hz (37 °C, pH 7.4)となった.通常,HSAの様な回転相関時間の大きな分子に造影剤が結合するとr1は飛躍的に増大するが,増大しなかったことから,水交換速度kexが小さいことが示唆された.そこで実際に17O NMRによりkexを測定したところ1.0 ×10^4 s-1 (25 °C)となった.これは通常の造影剤の水交換速度よりも1から4桁小さな値である.これほどkexが小さいのは予想外であったが,その原因として3つのGd核と2つのTCAとの間の多重結合に基づく構造の剛直性が水交換における遷移状態エネルギーを高くしているためと考えている.以上総合するとGd3TCA2の緩和にはGd中心の水交換は寄与しておらず,第2配位圏での水交換を通した緩和であると結論づけられる.本研究では超高緩和性・高安定性・ターゲティング能を併せ持つ革新的MRI造影剤の設計原理をサンドイッチ型多核錯体Ln3TCA2を基体として検討する(Ln =ランタニド,TCA =チアカリックスアレーン).1. Ln3TCA2の常磁性シフトを利用する常磁性化学交換飽和移動法(CEST)能:今年度購入した時間分解測光システムで主な錯体の配位水分子数を決定した.その結果Tb: 2.4, Nd:2.0, Yb:2.5となり,CESTの必須要件である配位水分子を有することを明らかにした.次いでTbからYbの中希土から重希土のLn3TCA2を合成した.研究協力先の装置上の問題からCEST測定に供することができたのはYb3TCA2のみであったが,CEST効果は得られなかった.これは常磁性シフトが小さいか,配位水の交換速度kexが大きいかのどちらかの要因によると考えられる.Ln全体の系統的データ取得が待たれる.2.ドナー原子電子密度制御の影響評価:p-位置換基導入を検討した.スルホ基からスルホンアミドへの変換は,反応中間体の自己縮合を防止するためのOH基の保護が必要であることがわかった.一方カルボキシ化は途中まで進行している.3.動物実験:翌年度の展開に先立ち,50 mM Gd3TCA2を100 μl,マウス尾部から注入しMRI像取得を試みた.しかし投与後10秒程度で死亡した.心臓の電子伝達系を阻害したものと考え,急性毒性抑制のための分子修飾が必要であることがわかった.1.については装置上の問題という予想外のトラブルにより進行が遅れているが,これが解決すれば系統的なデータが取得でき,その解析が可能となる.2.について,スルホンアミドへの変換は保護-脱保護の検討を要し手間取った.そのためカルボキシ基導入については途中まで,ニトロ基やアミノ基の導入は未着手となった.3.は予備的検討であるが,Ln3TCA2の急性毒性という重要な問題を明らかにしており,毒性を抑える分子修飾,という意味でも2.が重要であることを浮き彫りにしている.よって総合的に見て概ね順調と判断した.本研究では超高緩和性・高安定性・ターゲティング能を併せ持つ革新的MRI造影剤の設計原理をサンドイッチ型多核錯体Ln3TCA2を基体として検討する(Ln =ランタニド,TCA =チアカリックスアレーン).i)Ln3TCA2の安定性評価:Ln3TCA2を生体に適用するにあたり,生体安全性の観点からその速度論的安定性が必須である.その指標となる解離反応速度定数は常磁性シフトを利用する常磁性化学交換

飽和移動法(CEST)で重要な配位水分子交換速度とも関連する.本年度は軽希土からNd,中希土としてGd,重希土としてYbを選定し,酸加水分解条件下でLn3TCA2の解離反応速度定数を算出した.それぞれ24.3, 2.73, 9.97 ×10(-1) s(-1)となり中希土のGd3TCA2が最も高い安定性を示すことを見いだした.その半減期は70.5時間となり,実用的な造影に耐える高安定性が得られた. ii)ターゲティング能付与:TCAのスルホ基を酸クロリドに変換し,ジアミンリンカーを介して葉酸を導入し,葉酸レセプターが過剰発現している腫瘍細胞への送達を検討した.しかしながら予想外化学修飾が困難で,TCAのスルホ基すべてを酸クロリドに変換することはできなかった.ターゲティング能付与のためのTCAの化学修飾が予想外に困難を極めた.本研究では超高緩和性・高安定性・ターゲティング能を併せ持つ革新的MRI造影剤の設計原理をサンドイッチ型多核錯体Ln3TCA2を基体として検討する(Ln =ランタニド,TCA =チアカリックスアレーン).i)Ln3TCA2の安定性評価:まず全Ln系列に対し系統的にLn3TCA2の解離反応速度定数を求めた.安定性の序列は大まかに中希土>重希土>軽希土の順に低下することがわかった.重希土側ではYb3TCA2にみられるように配位水が多く,解離しやすいこと.軽希土側ではイオン半径が大きく,解離反応中間体を与えやすいことがこの序列の原因と考えた.温度変化測定により活性化パラメタを求めることに成功した.重希土のYbや中希土のTbはΔH‡が支配的であり,Eu, Sm, NdはΔH‡に関しては正であるもののエントロピー項TΔS‡の寄与も大きくなっていることがわかった. ii)ターゲティング能付与:TCAのスルホ基の修飾が困難であったため,カルボキシル基を導入した配位子を合成した.水酸基をメチル保護した後,p位をLi化し,CO2によりカルボキシル基を導入することができた.今後これを基に葉酸修飾を行う予定である.核磁気共鳴イメージング(MRI)測定では感度とコントラストを向上させる造影剤(CA)としてガドリニウム(Gd)-ポリアミノカルボン酸錯体が多用されるが,感度の頭打ち,腎性全身性線維症の問題が指摘されている.そこで緩和能を向上させ,安定かつターゲティング可能な革新的CAとしてサンドイッチ型多核錯体Gd3TCAS2を提案する.本研究ではその生成,構造,緩和能を評価し,革新的コントラスト剤設計指針を得た.1.については装置上の問題が解決し次第,早急にデータ取得とその解析を行う.2.について,カルボキシ基,ニトロ基やアミノ基の導入が現在進行中であり,これを加速させる.併せてターゲティング能を付与するため擬似抗体分子として葉酸を導入する.また,これらTCAの修飾体のLn3TCA2型錯体形成の条件を調べる.3.では2.で検討した葉酸導入Ln3TCA2について,腫瘍へのターゲティングを調査する.TCA配位子の分子設計を改め,スルホ基の代わりにカルボキシル基を導入し,葉酸修飾の足がかりとする.TCAについてのカルボキシル基導入の報告例はないが,Li化を経てCO2と反応させる常法で対応できると考えている.28年度が最終年度であるため、記入しない。分析化学緩和機構の決定までは順調に進んでいる.「おおむね」を選択した理由は当初計画では想定できなかったことが判明したためである.即ち,HSA存在下で緩和能r1が期待したほど増大せず,小さかったこと,さらにその原因は配位水分子交換速度kexが異常に小さかったことによる.これについては次項で述べる様にkexの小ささを活かしたイメージングモードである常磁性化学交換
プラナリア生殖様式転換機構の概年リズムを司る因子を探る

プラナリアには季節変化に応じて、無性生殖と有性生殖を転換する個体が存在する。本課題では生殖様式転換を誘起する環境因子を解明するために、沖縄で1年を通して定期的に採集し、実験室内の一定環境下で飼育したのちも生殖様式の転換が観察される系統(転換系統)を確立した。転換系統に対して、夏期の無性生殖状態の転換系統個体に対して明期10時間、暗期14時間、15°C(低温)の冬条件で飼育したところ、有性生殖に転換した。しかし、転換系の性質は実験室環境下では3年以上は維持することができないことがわかった。本実験の継続させるためには、恒常的に新たな転換系統を確立することが必要である。季節変化に応じて無性生殖と有性生殖を転換する生物が広く知られている。申請者は、プラナリアを用いて無性個体を実験的に有性個体に転換させる系を確立し、個体における有性生殖転換能・生殖細胞分化能について研究を進めてきた。本課題では、環境と個体の関係に着目する。自然界で起こる生殖様式転換現象の解明を目指して、野外個体の定点観察により生殖様式の周年変化を観察し、生殖様式を転換する系統を確立する。この系統を用いて、実験室条件下で日周期と温度が環境要因となるか否かを明らかにする。概年リズムの特長である自律振動性・温度補償性について検討し、生殖様式転換が概年リズムを示すか否かを明らかにする。また、環境要因により最初期に発現される遺伝子をRNAseqにより探索することを目指す。本年度は、沖縄地方の扁形動物の生態に詳しい研究協力者の協力を受け、1年を通して(4,5, 6, 9,10,11月)沖縄県宜野湾市大山の田芋畑、国頭郡金武町大川にて採集した。研究室にて採集個体を飼育し、生殖様式を組織切片の作製により調べ、その周年変化を記録している。周年変化の記録は現在も進行中である。採集した個体から実験室飼育条件下でも季節に依存して、無性から有性または有性から無性に転換する個体を選択した。この個体を元に、得られた個体を切断・再生により個体数をふやし「生殖様式転換系統」として確立した。現在、この新規系統を光周期と温度周期を変化させ、それに伴う、生殖様式転換の観察を継続している。自然界には季節変化に応じて、無性生殖と有性生殖を転換する生物が多く存在する。申請者は、扁形動物プラナリアを用いて無性生殖個体を実験的に有性生殖個体に転換させる系を確立し、個体における有性生殖転換能および生殖細胞分化能について研究を進めてきた。本課題では、環境と個体の関係に着目し、自然界で起こる生殖様式転換現象の解明を目指して、野外個体の定点観察により生殖様式の周年変化を観察し、生殖様式を転換する個体がいることを確認した。この個体を切断と再生を繰り返し無性生殖により殖やし、系統として確立した。この系統を用いて実験室条件下で日周期と温度が環境要因となるか否かを明らかにすることを目指した。昨年度から本年度にかけては、沖縄で1年を通して定期的に採集し、実験室内の一定環境下で飼育したのちも生殖様式の転換が観察される系統(転換系統)を確立した。転換系統では、自然界でも実験室内の一定環境下でも秋期から春期にかけて有性生殖、夏期が無性生殖に転換することが明らかとなった。本年度は、転換系統を継続的に飼育し、生殖様式の転換が継続的におこることを確認した。さらに継続的に確認できた系統に対して、光周期と温度周期を変化させた条件下での生殖様式転換の観察をおこなった。夏期の無性生殖をおこなっている転換系統個体に対して有性生殖になる条件である明期10時間、暗期14時間、15°C(低温)の冬条件で飼育した。コントロール実験としては、明期一定、20°Cにて飼育をおこない観察した。秋期から春期にかけて有性生殖、夏期が無性生殖に転換する転換系統を構築できたので、本年度は、転換系統を継続的に飼育し、生殖様式の転換が継続されることを確認し、2サイクルまでは安定に概年リズムを継続することが観察された。さらに、実験室内で2回の生殖様式転換サイクルを行った個体を用いて、リズムを光周期と温度周期を変化させた条件下での生殖様式転換の観察をおこなった。短日処理では、コントロールに比べて早い有性生殖への転換が観察された。しかし、コントロール個体で実験室内での3回目の生殖様式転換サイクルを観察することができたが、その後は無性生殖に戻り、生殖様式転換の概年リズムは見られなくなった。そのため、プラナリア生殖様式転換の概年リズムの恒常条件下での維持は難しいことがわかった。季節変化に応じて、効率よく個体数を増やすことができる無性生殖と環境適応などに有効な有性生殖の間で生殖様式を転換して繁殖する生物がいる。その代表である扁形動物プラナリアは自切と再生による無性生殖を行う個体、生殖器官を形成し受精による有性生殖を行う個体、さらに季節に応じて両生殖様式を転換させる系統が存在する。代表者は、実験的有性化のシステムを用いて有性生殖転換能や生殖細胞分化能について研究を進めてきた。本課題では、環境要因と個体の生殖の関係に着目した。

自然界からプラナリアを定点で定期的に採集し、個体ごとに生殖器官の有無を観察し、季節によって生殖様式の分布が変化することを明らかにした。秋から冬にかけて無性生殖を行う状態から有性生殖を行う状態に、春から夏にかけて有性生殖を行う状態から無性生殖を行う状態に転換することが明らかとなった。有性生殖から無性生殖に転換する際に、卵巣、精巣、交接器官などの生殖器官はアポトーシスにより消失することを明らかになった。また、実験室の恒常条件下でこれらの個体を飼育し、生殖器官の有無を観察し、生殖様式を転換する系統が存在することを明らかにし、その転換系統を確立した。これらの系統は1年以上の間、生殖様式を転換する現象を保持しており、生殖様式の転換は概年リズムを示すと考えられた。しかし、2年目に入ると、季節によって転換する個体は減少し、実験室環境下での概年リズムの維持は難しいと考えられた。よって、本研究を進めるためには多くの転換系統が必要であると考え、再度、以前の採集地点で採集を試みたが、採集地点にバイパスが作られ、環境が大きく変化しており、プラナリアを大量に採集することが困難になっていた。今後、新しい採集地点の検討が必要となった。プラナリアには季節変化に応じて、無性生殖と有性生殖を転換する個体が存在する。本課題では生殖様式転換を誘起する環境因子を解明するために、沖縄で1年を通して定期的に採集し、実験室内の一定環境下で飼育したのちも生殖様式の転換が観察される系統(転換系統)を確立した。転換系統に対して、夏期の無性生殖状態の転換系統個体に対して明期10時間、暗期14時間、15°C(低温)の冬条件で飼育したところ、有性生殖に転換した。しかし、転換系の性質は実験室環境下では3年以上は維持することができないことがわかった。本実験の継続させるためには、恒常的に新たな転換系統を確立することが必要である。本年度は、沖縄地方の扁形動物の生態に詳しい研究協力者の協力を受け、1年を通して(4,5, 6, 9,10,11月)沖縄県宜野湾市大山の田芋畑、国頭郡金武町大川にて採集した。研究室にて採集個体を飼育し、生殖様式を組織切片の作製により調べ、その周年変化を記録した。採集した個体から季節に依存して、無性から有性または有性から無性に転換する個体を選択した。この個体を元に、得られた個体を切断・再生により個体数をふやし「生殖様式転換系統」として確立した。現在、この新規系統を光周期と温度周期を変化させ、それに伴う、生殖様式転換の観察した。予備実験として無性生殖状態の夏の転換系統を冬条件(10L14D,15°C)20匹、コントロール(24D,20°C)10匹で飼育した。これらの個体の観察により、冬条件では速やかに有性生殖に転換するが、コントロール個体でも2ヶ月後には有性生殖に転換する傾向がみられた。平成27年度の成果により、プラナリア生殖様式転換の概年リズムの恒常条件下での長期間の維持は難しいことがわかった。また、転換系統の個体の長期間維持も困難であることがわかった。平成28年度は新たに自然界より生殖様式転換系統の採集を行い、速やかに、光周期と温度周期を変化させた条件下で飼育し、その影響を観察する。生殖生物学前年度は1年を通して(4,5, 6, 9,10,11月)
看護観察の質評価・改善のための方法論開発研究

看護観察は随時生産できることから,医療の質安全上非常に重要な情報といえる.良質な看護観察となっている看護ナビコンテンツを用いて某県14病院の胃癌手術患者の術直後の観察の記録状況を調査した結果,バイタルサイン・インアウトに関する観察率は高かったが,症状に関する記録率は1064%(平均29.5%)と低く,看護の質評価が可能であった.1000床の急性期病院で,看護ナビコンテンツを臨床現場で活用した結果,某病棟において,情報収集時間に30分以上を費やしている看護師率が,45.8%から4%に減少していることがわかった.以上より看護ナビコンテンツが,医療の質の改善に有用であることが示唆された.急性期病院における看護観察から可視化・共有化される患者状態は、医療者にとって非常に有用で,医療の質安全上重要な情報といえる.しかしながら,必要な観察項目が網羅されているか,また必要とする観察が実施されているかについてあきらかにできているとは言い難い.もし必要とする観察が実施されていなければ,情報が欠落したまま医療者は当該患者状況を想定することになり,判断ミスを発生させるリスクがある.録がないものを後追いで可視化することは困難である.つまり、医療における「状況の揮発性」という問題が実在することになる.本研究では、看護観察の欠落状態から看護観察の質評価をする方法論を開発する.また看護観察の改善に向けたPDCAサイクルが回る改善モデルを開発する.某県14病院の協力を得て,直近の胃がん手術患者で合併症・問題事象の発生した症例を選択し,看護ナビコンテンツで導出された術後急性期の「標準観察項目」を調査項目とし,術後急性期の期間の看護記録内に記載されていた看護観察項目をチェックする調査を実施した.その結果,バイタルサイン・インアウトに関する記録率は高かったが,症状に関する記録率は,10%64%(平均29.5%)という低い記載率であった.約1000床のA急性期病院は看護ナビコンテンツを臨床で活用することを決定した.A病院は看護ナビコンテンツを標準看護計画として日常的に運用できる情報システムを構築した.某病棟において調査した結果,毎日の情報収集時間が30分以上必要とする看護師率が,45.8%から4%に減少していることがあきらかになった.看護観察の質評価をするための方法論が完成した.またこの評価結果により,病院の看護が観察計画の質を問題とし,臨床看護知識を活用した結果,一定の改善効果が確認されたことから,PDCAサイクルを回し始める評価方法となっていることが示唆された.看護観察は随時生産できることから,医療の質安全上非常に重要な情報といえる.良質な看護観察となっている看護ナビコンテンツを用いて某県14病院の胃癌手術患者の術直後の観察の記録状況を調査した結果,バイタルサイン・インアウトに関する観察率は高かったが,症状に関する記録率は1064%(平均29.5%)と低く,看護の質評価が可能であった.1000床の急性期病院で,看護ナビコンテンツを臨床現場で活用した結果,某病棟において,情報収集時間に30分以上を費やしている看護師率が,45.8%から4%に減少していることがわかった.以上より看護ナビコンテンツが,医療の質の改善に有用であることが示唆された.医療管理学・医療情報学・品質管理工学
急性心筋梗塞後の心不全の発症・進展におけるIL-21の作用メカニズムの解明

近年、心筋梗塞後の組織修復に免疫細胞が関与し、心不全発症を制御することが示されている。本申請者はこれまで、1CD4陽性T細胞(CD4+T細胞)の活性化が組織修復を促進するM2マクロファージ(M2)の誘導に必要であること、2M2が分泌するMMP-12が心筋梗塞後の組織修復を促進し、心不全発症を防ぐことを明らかにした。さらに心筋梗塞後の組織修復を促進するM2の誘導機構を明らかにするため、(1)心筋梗塞領域のM2のトランスクリプトーム解析を行い、IL-21受容体がM2に高発現していること、(2)心筋梗塞領域でCD4+T細胞がIL-21を産生すること、(3) IL-21欠損マウスは心筋梗塞後の生存率が高く、心機能低下が起こりにくいことも見出した。本年度は、まず、野生型マウスとIL-21欠損マウスにおいて、心筋梗塞後の病理学的な違い、心筋梗塞領域における遺伝子発現の違いを検討し、IL-21欠損によって生じる心筋梗塞後の変化を詳細に解析した。その結果、野生型マウスとIL-21欠損マウスとの間で、梗塞領域の大きさには違いがないものの、梗塞領域における線維化の程度(組織修復の速さ)に関しては、IL-21欠損マウスで有意に高いことがわかった。さらに、遺伝子発現、細胞外マトリックスを分解するはMatrix metalloproteinase (MMP)-9の酵素活性がIL-21欠損マウスで有意に低く、創傷治癒が促進していることが示唆された。現在は、心筋梗塞領域においてIL-21が作用する細胞の同定、およびその細胞にもたらすIL-21の作用の解析を進め、それに並行して、可溶化IL-21受容体-Fcキメラ蛋白(sIL-21R-Fc)によるIL-21中和の急性心筋梗塞後心不全に及ぼす効果を検証している。初年度に予定していた、野生型マウスとIL-21欠損マウスにおける心筋梗塞後の病理学的な違い、心筋梗塞領域における遺伝子発現の違いに関して、上述の如く、明らかにすることができた。また、初年度のうちに心筋梗塞領域においてIL-21が作用する細胞の同定、およびその細胞にもたらすIL-21の作用の解析を開始することができており、3年目に行う可能性のあった、可溶化IL-21受容体-Fcキメラ蛋白(sIL-21R-Fc)によるIL-21中和の急性心筋梗塞後心不全に及ぼす効果の検証についても、既に準備段階を迎えており、研究が順調に進捗しているものと考えている。上述のように、研究が順調に進行していることから、大幅な研究計画の変更は予定していない。今年度は、心筋梗塞領域においてIL-21が作用する細胞の同定、およびその細胞にもたらすIL-21の作用の解析、及び、IL-21中和の心筋梗塞後心不全予防効果の解析を行う計画である。

今年度は、心筋梗塞領域においてIL-21が作用する細胞の同定、およびその細胞にもたらすIL-21の作用の解析、及び、IL-21中和の心筋梗塞後心不全予防効果の解析を行う計画である。残額は次年度の物品費に充当する。
アデノウイルスによる形質転換細胞のジアシルグリセロ-ルによる選択的破壊とその応用

制癌剤としての脂質の応用の可能性を検討するため、ラットの培養2倍体線維芽細胞株3Y1と、それから派生した各種のDNAウイルス、RNAウイルス、癌遺伝子、突然変異原によって癌化した3Y1細胞株に対する各種リン脂質による致死効果を調べた。ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルノシト-ルの培養液への投与は、アデノウイルス12型(Ad12)によって癌化した3Y1細胞のみを選択的に殺傷した。この選択的殺傷作用は、ジリノレオイルグリセロ-ル(DLG)によって代替された。DLGに対する特異的感受性はAd12のE1A遺伝子の12Sおよび13SmRNA産物によって規定されていた。DLG処理によって脂質過酸化物が顕著に増量した。DLG処理による細胞膜の部分的損傷が電子顕微鏡により観察された。ヒト癌のなかにE1A発規3Y1細胞に似た生化学的特徴を持つものがあれば、ホスファチジルコリンやDLGによる化学療法の対象になり得ると考えた。そこで、ヒト癌由来の細胞株のDLG感受性を調べた。各種臓器の固形癌由来の11株の細胞株にDLG感受性の強いものは見つからなかった。白血病由来の細胞株10株の内、HTLVーI由来の1株が比較的感受性が強かったが、E1A発現3Y1細胞に見られるほど強い感受性は示さなかった。Ad12で癌化した細胞は細胞膜が変化しており、この細胞膜の変化がDLG感受性と関係していると考えられている。ヒトの癌細胞の中にも同じ様な変化が起きているものがあればこの細胞はDLGに感受性になっているはずである。さらに多くのヒト癌由来の細胞株のDLG感受性を調べることにより、DLGの制癌剤としての応用への可能性を検討する必要がある。
腫瘍細胞内のチロシンキナーゼ活性化部位の同定とそれに基づく創薬基盤の開発

イマチニブに蛍光分子(NBD, BODIPY)を付加し、in vitroでのライブイメージングをおこなった結果、予想外に、大部分のイマチニブの分布はゴルジ様に見えず、核周辺領域に蓄積していた。さらに、イマチニブ抗体による免疫染色でも同様の結果を得た。イマチニブとKitとの局在を比較したところ、両者の大部分は共局在しなかった。イマチニブが細胞内に取り込まれる過程を生細胞観察したところ、エンドサイトーシスの関与は否定され、別機序で細胞膜を通過し核周辺に移行していることが示唆された。核周辺のイマチニブに関して、詳細に解析した結果、イマチニブはリソソームの細胞質側の膜へ集積することが明らかになった。一方で、変異KITキナーゼの阻害はある程度ゴルジで生じており、これらを総合する、投与したイマチニブで、細胞内ターゲットに届いている阻害剤は、ごく一部であり、細胞内分布の点において、分子標的薬の改善点の余地が多く残されていることを示唆する。今後、イマチニブが分布する詳細なオルガネラを確認し、Kitのシグナルの場であるゴルジ体周辺に至るイマチニブが、全体のどの程度の割合で、また、どの程度がゴルジ以外の画分に分布しているのかを明確にしたい。さらに、他の分子標的治療薬での検討を重ね、最終的には、ターゲットへの効率的な送達を試みる予定である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。標的治療では、変異標的へのオンターゲット効果に加え、正常標的や他のキナーゼの阻害などオフターゲット作用があり、腫瘍細胞を消滅させるほど抗がん効果を発揮できず治療後も腫瘍細胞が生き残り、最終的にその中から薬剤耐性腫瘍細胞(多くの場合標的遺伝子の二次変異)を生じ、治療効果が無くなる。従って、より有効な治療を追求するなら、標的に薬剤が選択的に届き、オンターゲット効果のみを持つようなDDSを考える必要がある。申請者はGISTで、二次耐性の現れる要因と腫瘍細胞内での変異チロシンキナーゼの活性化に伴う増殖機構を研究してきた。その過程で、1.src family活性化等特徴的な表現型を持つ細胞集団(persistent tumor cells)から耐性細胞が生じている事(Takahashi T. Genes Chromosomes Cancer)2.GISTやマスト腫瘍では、細胞膜に輸送されリガンドSCFと結合し活性化するwild type KITとは異なり、変異KITは、それぞれゴルジ或いはリソソームで活性化していることを発見した(Obata Oncogene 2017, Obata et al. Nat. Commun 2014)。変異チロシンキナーゼが正常カウンターパートとは異なる細胞内小器官で活性化している事は他の肺がん(EGFR)等でも最近指摘されている。一方で標的治療薬(例;イマチニブ)の細胞内動態に関して詳細は全く不明である。これらの結果に基づき、本研究は以下の目的で行う。I.細胞内の変異KITの局在化の詳細部位を同定し、ゴルジ局在・活性化の分子機構を解明する、II.イマチニブの細胞内動態と分布を解明する、III.変異KITの局在する細胞内オルガネラ(ゴルジ)に集積するKIT阻害剤を開発し、細胞内ドラッグデリバリー手法の基礎的開発を行うことが本研究の目的である。最初に変異KITのゴルジへの集積経路を明らかにした。Pitstop2とfilipinを加え細胞膜からのendocytosisを阻害してもトランスゴルジに集積していた。小胞体(ER)⇒ゴルジ輸送阻害剤であるbrefeldin Aを投与すると変異KITはERに集積し、KITは一部リン酸化するも完全リン酸化に至らず、下流のシグナル伝達系も不活性化状態であった。次に、ゴルジでのglycosylationの影響を見たがglycosylationを阻害しても、KITの活性化とゴルジ集積は変化しなかった。ゴルジ⇒細胞膜の輸送阻害剤であるmonensinの添加によるKITのゴルジ集積とそこでのKIT活性化に変化を認めなかった。また、幾つかの下流のシグナル伝達系の阻害剤を投与したが(ATK-mTOR、STAT5、MEK-Erk阻害剤)、何れの薬剤もKITの集積部位を変化させることは無かった。また、変異KITの活性化をイマチニブで阻害するとwild type KITと同様にゴルジに留まらず細胞膜に移動した。以上より、GISTでは変異KITはトランスゴルジに集積し増殖・生存シグナルを出している。このトランスゴルジへのKITの集積にはKIT自体の自己リン酸化が必要であることが示された。次に、GIST細胞に変異EGFRをtransfectionするとendosomeに分布し、EGFR肺癌に変異KITをtransfectionするとゴルジ体に集積し活性化した。ゴルジ体で留まる場合は、チロシンキナーゼが完全活性化し下流のシグナル伝達系が働いており、ゴルジ体を超えてendosomeに分布する場合は、キナーゼのリン酸化は起こっても完全活性化には至らず、下流のシグナル伝達系全てが活性化しているわけではないことが明らかとなった。これまで本研究からGISTのKIT変異体のリン酸化は、細胞膜ではなくゴルジ体で起こっていることが明らかになった。今回、GIST細胞でKITタンパク質の小胞体→ゴルジ体輸送を阻止すると、KITリン酸化が起きず、細胞増殖が止まることを見出した。ゴルジ体に移動できないKITは、小胞体でホスファターゼによって脱リン酸化されていることを明らかにした。

KITのゴルジ体での自己リン酸化、および小胞体での脱リン酸化は、イマチニブ感受性型・耐性型いずれのKIT変異体でも同様に起こっていた。SCLIMを用い、蛍光タグをつけたイマチニブ(イマチニブの1/10のKIT阻害活性を持つ)の細胞内局在を詳細に解析した。BODIPYならびにNIBを付加したイマチニブは速やかに細胞内に取り込まれ、主にライソソームに集積し、一部ER様の局在分布を示した。SCLIMで解析では、蛍光タグ付イマチニブはライソソーム内腔ではなくライソソーム膜上に局在することが示唆された。Turn-ONシステムでも、ターンオンタグ付イマチニブ(イマチニブの1/10のKIT阻害活性を持つ)は、細胞内に取り込まれた後、ライソソームならびにER様の局在を示し、イマチニブを同時に加えると、ライソソームとER様に局在する蛍光シグナルが抑制されたことから、イマチニブはライソソームならびにER様局在を示すことが強く示唆された。一方で、イマチニブはUV領域の励起光で蛍光を発することから、蛍光標識を行わず多光子励起顕微鏡によるイマチニブの細胞内局在測定を試みているが、まだ測定法の確立に至っていない。現在までの進捗状況はおおむね順調に進展している。小胞体-ゴルジ間の輸送阻害剤のスクリーニングとin vitroでの活性確認、動物実験を計画している。また、多光子励起顕微鏡の高感度化をはかる予定である。GISTのKIT変異体のY703, 730, 936リン酸化が、これまで考えられてきた細胞膜ではなくゴルジ体で選択的にリン酸化されていることを明らかにした。それらのリン酸化部位は、新規合成直後の小胞体ではホスファターゼにより脱リン酸化されていることを見出した。KITのゴルジ体での自己リン酸化および小胞体での脱リン酸化は、イマチニブ感受性型変異・耐性型変異にかかわらず、どちらのKIT変異体でも同様に起こっていた。種々のタグを付加したイマチニブを作成し、その細胞内動態および局在の解析を行った。これらタグ付イマチニブは全てライソソームおよびER様局在を示し、タグを付加していないイマチニブによる競合阻害によりそれらのオルガネラに局在する蛍光シグナルの減弱が見られたことから、タグを付加していないイマチニブもライソソームとER様の局在を示すことが強く示唆される結果を得ることが出来た。加えて超解像顕微鏡システムにより蛍光タグ付イマチニブがライソソームの膜に局在することも明らかとすることができ、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。イマチニブに蛍光分子(NBD, BODIPY)を付加し、in vitroでのライブイメージングをおこなった結果、予想外に、大部分のイマチニブの分布はゴルジ様に見えず、核周辺領域に蓄積していた。さらに、イマチニブ抗体による免疫染色でも同様の結果を得た。イマチニブとKitとの局在を比較したところ、両者の大部分は共局在しなかった。イマチニブが細胞内に取り込まれる過程を生細胞観察したところ、エンドサイトーシスの関与は否定され、別機序で細胞膜を通過し核周辺に移行していることが示唆された。核周辺のイマチニブに関して、詳細に解析した結果、イマチニブはリソソームの細胞質側の膜へ集積することが明らかになった。