hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔病原性細菌の菌体表層多糖合成機構を標的とした新規抗生剤の開発

(平成12年度)A. actinomycetemcomitans (Aa)の莢膜様多糖ならびにS. mutansの細胞壁多糖の合成に関わる遺伝子をクローニングした。クローニングした遺伝子の塩基配列を決定して、この領域に存在する遺伝子について相同性の検索を行ったところ、グリコシルトランスフェラーゼをコードしていると予想される数種の遺伝子を特定できた。(平成13年度)クローニングした遺伝子を大腸菌に発現させて、各遺伝子産物の詳細な機能の解析を試みた。この結果rgp遺伝子群の最上流に位置するrgpA遺伝子産物が最初のラムノース残基を転移するグルコシルトランスフェラーゼであることが明らかとなった。また、野生株のXc株ならびにXc41株の抗生物質に対する薬剤耐性を比較することで、血清型特異細胞壁多糖がS. mutansの薬剤耐性に重要な働きをしていることが明らかとなった。(平成14年度)血清型a型のAa SUNYaB75株の染色体遺伝子からGDP-D-mannose 4,6-dehydrataseならびにGDP-keto-6-deoxy-D-mannose reductaseをコードしている遺伝子をクローニングした。さらに挿入失活を行い、血清型a, c, d型莢膜様多糖抗原を失った変異株の作製に成功した。また、これらの変異株の各種抗生剤に対する薬剤耐性を調べたところ、いずれの変異株もバシトラシンおよびバンコマイシンに対する感受性が僅かに高まっていた。(平成15年度)S. mutansのrgpCおよびrgpD遺伝子を大腸菌で発現させて、発現したタンパク質を精製し、これを抗原として抗体を作製した。得られた抗体を培地に添加して、S. mutansを培養したが、細胞壁多糖合成を効果的に阻害することはできなかった。そこで、抗体をリポソーム中に取り込ませて培地に添加し、その効果を調べたところ、細胞壁多糖合成阻害の傾向が若干認められた。Aaについても同様に、莢膜様多糖の合成に関与すると考えられるABCトランスポーターをコードしていると予想される各遺伝子産物に対する抗体を作製して莢膜多糖の合成阻害を試みたところ、何れの場合もわずかではあるが阻害効果が認められた。本年度は下記の手順に従ってActinobacillus actinomycetemcomitansならびにStreptococcus mutansの菌体表層多糖合成に関与する遺伝子のクローニングを行い、各遺伝子の機能の解明を進めた。1.血清型a型からe型までの各菌の染色体遺伝子のSau3AI不完全消化断片をコスミドpMBLcosに組み込み、赤痢菌のdTDP-ラムノース合成遺伝子をプローブとして用い、プローブに反応する断片が組み込まれたコスミドを選択した。この結果、プローブと反応する遺伝子断片の塩基配列を調べ、存在するORFを失活してその機能を調べたところ、血清型b,c,d,e型の4種のA.actinomycetemcomitansについては糖鎖合成に関与する遺伝子群がプローブと反応する領域に存在することが示唆された。また、相同性検索の結果、この領域にグリコシルトランスフェラーゼと相同性の高いORFがいくつか認められたため、これらを大腸菌に組み込み各遺伝子の機能解析を試みる準備が調った。

2.S.mutansについては、赤痢菌のdTDP-ラムノース合成の最終段階を触媒するrmlD遺伝子と相同性を示す遺伝子をS.pyogenesの全塩基配列のデータベースで検索し、これをプローブとして用いて、糖鎖合成遺伝子群をコードする領域をクローニングすることができた。この領域には、ABCトランスポーターシステムの構成因子をコードする遺伝子と共に、グリコシルトランスフェラーゼと相同性の高い5つのORFが認められた。これらの遺伝子についても、大腸菌内に組み込んで、糖鎖合成における各遺伝子の機能について検討を行う段階に至った。本年度は糖ヌクレオチドであるdTDP-ラムノースからS.mutansの菌体表層血清型特異多糖の合成を行う各種のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子を大腸菌に発現させて、各遺伝子産物の詳細な機能の解析を試みた。この結果rgp遺伝子群の最上流に位置するrgpA遺伝子産物が細胞膜に位置する脂質担体に転移されたN-アセチルグルコサミンに最初のラムノース残基を転移するグルコシルトランスフェラーゼであることが明らかとなった。すなわち、この遺伝子を失活した変異株Xc41株は、多糖合成の前駆体であるdTDP-ラムノースを合成することはできるが、dTDP-ラムノースを用いてラムノースを転移できないためその細胞壁に血清型特異多糖を全く合成しない株であり、細胞壁多糖がS.mutansの薬剤耐性に及ぼす影響を調べるのに、好都合の変異株であることが明らかとなった。そこで、野生株のXc株ならびにXc41株の抗生物質に対する薬剤耐性を比較した。その結果、野生株の発育阻止には200U/mlのカナマイシンおよびスペクチノマイシンンあるいは7U/mlのバシトラシンを必要としたが、Xc41株では20U/mlのカナマイシン、67U/mlのスペクチノマイシン、0.53U/mlのバシトラシンによって発育が阻止されたことから、血清型特異細胞壁多糖がS.mutansの薬剤耐性に重要な働きをしていることが明らかとなった。この結果から、rgpAの遺伝子産物に対する阻害物質が、カナマイシ、スペクチノマイシン、バシトラシンなどの既知抗生剤に対するS.mutansの感受性を高めることが確認できた。A.actinomycetemcomitansついてはa-eの血清型の細胞壁多糖を合成する遺伝子系をすでにクローンニングしたが、すべて血清型のA.actinomycetemcomitansで相同性組み換えの技術が確立していないため現在、その技術を確立している。この技術が確立でき次第上記と同様な系を用いて、各変異株の薬剤耐性を確認する。さらに、血清型a, c, d型の菌株についてはdouble cross overの相同的組み換えによって目的の遺伝子を挿入失活することができるようになった。そこで、糖鎖抗原合成に関与する遺伝子群を標的とした挿入失活を行い、血清型a, c, d型莢膜様多糖抗原を失った変異株の作製に成功した。さらに、これらの変異株のエリスロマイシン、バシトラシン、バンコマイシンに対する薬剤耐性を調べたところ、いずれの変異株もバシトラシンおよびバンコマイシンに対する感受性が僅かに高まっていた。
野生水禽や家禽におけるマレック病ウイルスの病原性進化の分子機序の解明

鶏に悪性リンパ腫を主徴とするマレック病(MD)を引き起こすマレック病ウイルス(MDV)の野外における病原性進化の分子機構を解明するために、国内でワクチン接種したにも関わらずMDが発生するワクチンブレーク鶏からMDVを単離して、その分子生物学的性状及びウイルス学的性状を解析した。その結果、分離したMDVは、病原性に重要なウイルス遺伝子に新規の多型が同定され、鶏に病原性を示したが、全ゲノムの系統樹解析の結果、米国等で従来報告されていたものとは異なる分子機構で病原性進化している可能性が示唆された。マレック病ウイルス(MDV)は、ワクチンにより制御されているが、近年、ワクチン接種鶏でのマレック病発生や野生水禽での強毒MDV感染が報告されており、野外でのMDVの病原性進化が示唆されている。そこで、近年日本国内の養鶏や野生水禽から検出されたMDVの分子生物学的性状を従来の分離株と比較して、同定されたMDVの遺伝子多型や欠損のMDV病原性進化のおける役割を明らかにするために、組換え感染性MDVクローンを作成し、鶏を用いた感染実験等で解析する。本年度は、日本各地のワクチンブレーク鶏から、国内で流行しているMDV株の分離を行った。マレック病(MD)を発症したワクチン接種鶏由来の血液材料等を用いて、細胞培養やMD感受性鶏での継代でワクチン株を除去した国内MDV株を単離した。そしてMDV発癌遺伝子であるmeq遺伝子配列を、米国で報告されている強毒MDV株のものと比較したところ、meq遺伝子産物の生物活性に重要なドメインに多型が検出されたが、従来の強毒株とは異なるものであった。今後、実験感染による病原性の検討が必要である。他にも日本各地で採取したMD発症鶏材料で検出したMDVのmeq遺伝子配列を決定したが、やはり従来の強毒株のものとは異なっていた。以上より国内でワクチンブレークを引き起こすMDV株は、米国の強毒MDV株とは異なる性状を持つことが示唆された。近年、種々の腫瘍や難治性慢性感染症において免疫抑制因子PD-1/PD-L経路が免疫回避に重要であることが報告されているので、MD腫瘍においてもPD-1/PD-L経路による免疫回避が病態形成に関与しているかを検討した。その結果、MD腫瘍ではPD-L2が多く発現しており、T細胞に発現しているPD-1を介して免疫抑制を引き起こすことが示唆された。今後、MDVの病原性進化と免疫抑制因子を介した免疫回避との関連を検討する必要がある。マレック病(MD)は、マレック病ウイルス(MDV)の感染により引き起こされる鶏の伝染性疾病である。MDは現在、ワクチンにより制御されているが、近年、野外で分離されるMDVの病原性は増強傾向にあり、ワクチン接種鶏においてもMDの発症がみられるワクチンブレイクが日本を含む世界各地で問題となっている。そこで本研究では、近年日本国内の養鶏等から検出されるMDVの分子生物学的性状を従来の分離株と比較して、さらに同定されたMDVの遺伝子多型や欠損のMDV病原性進化における役割を明らかにするために、組換えMDVクローンを作成し、鶏を用いた感染実験等で解析することを目的とした。前年度、MDVによる病態形成に最も重要な役割を果たす分子meq遺伝子において、同定された遺伝子多型についてMeqの生物活性に対する影響を解析した。その結果、予想に反して、過去に分離されたMDVに比べて、近年分離されたMDVのMeqは、転写活性化能および形質転換能ともに低いことが示唆された。次に前年度、ワクチン株を混入させずに分離することに成功したMDV株(奈良株)を用いて感染実験を実施した。その結果、使用した奈良株は鶏に強い病原性を示すことが判明した。以上より、現在国内に広く分布しているMDVは、奈良株と同様の配列を示すMeqをコードしていると考えられるため、国内におけるMDVの病原性進化には、従来報告されていたMeq以外のウイルス性因子も関与しうることが示唆された。そこで、次世代シークエンサーを用いて、単離した奈良株の全ゲノム解析を行った。そして従来の強毒MDV等と比較して、meq遺伝子以外にも多くの遺伝子変異・欠損等を同定した。現在、同定した遺伝子変異等のMDV生物性状への影響を解析している。本年度は、前年度に国内の養鶏等から検出されたMDVのmeq遺伝子について、その多型が遺伝子産物の機能にどのような影響を及ぼすか検討して、予想に反する結果を得た。また全ゲノム解析によりmeq遺伝子以外のウイルス遺伝子においても従来のMDVとは異なる遺伝子変異等を同定できたので、大きな成果が得られたと考えられる。さらに単離に成功したMDV株を用いた感染実験も実施して、その病原性の確認も行えているので、概ね順調に進展していると考える。マレック病ウイルス(MDV)は、鶏に悪性リンパ腫を主徴とするマレック病(MD)を引き起こし、養鶏業に大きな被害をもたらしてきたが、現在では生ワクチンの開発・実用化により効果的に予防されている。しかし野外においては、MDVの病原性が増強する傾向にあり、ワクチン接種鶏でMDが発生するワクチンブレークが問題となっている。そこで本研究では、近年日本国内の養鶏等から検出されるMDVの分子生物学的性状を従来の分離株と比較して、さらに同定されたMDVの遺伝子多型や欠損のMDV病原性進化における役割を明らかにするため、鶏を用いた感染実験等で解析することを目的とした。

前年度までに、ワクチン株の混入を除外してMDVを単離する方法を樹立して、強毒MDV株を分離することに成功した。今年度は、さらに分離したMDV株の病原性を鶏を用いた感染実験で確認した。その結果、分離MDVは鶏に対して強い病原性を示したが、対照の米国分離強毒株(686株)に比較すると、その病原性は低いことが判明した。さらにMDVの病原性に重要なmeq遺伝子に、これまで強毒MDVで報告されていない遺伝子多型が同定された。より詳細な解析を行うため、前年度に続いて分離したMDV株の全ゲノム解析を行い、世界各地で分離されているMDV株との系統樹解析を行った。その結果、今回分離したMDV株には、meq遺伝子に加えて、テグメントタンパク質であるUL36等に相違があることや、米国由来MDV株に比べて、ヨーロッパや中国由来MDV株により近縁であることが示された。以上より、国内MDVでは、米国で報告されている病原性進化と異なり、ヨーロッパや中国に分布するMDVと同様の進化を遂げている可能性が示唆された。鶏に悪性リンパ腫を主徴とするマレック病(MD)を引き起こすマレック病ウイルス(MDV)の野外における病原性進化の分子機構を解明するために、国内でワクチン接種したにも関わらずMDが発生するワクチンブレーク鶏からMDVを単離して、その分子生物学的性状及びウイルス学的性状を解析した。その結果、分離したMDVは、病原性に重要なウイルス遺伝子に新規の多型が同定され、鶏に病原性を示したが、全ゲノムの系統樹解析の結果、米国等で従来報告されていたものとは異なる分子機構で病原性進化している可能性が示唆された。ワクチンブレーク鶏からワクチン株を除外して、強毒MDV株を単離することは、MDVが細胞随伴性であるため困難である。しかし本年度、ワクチンブレーク鶏から国内で流行していると考えられるMDV株の単離に成功したため、今後、遺伝子レベルではなく、ウイルスの生物学的性状を感染実験等で解析できるので、国内におけるMDVの病原性進化の機序を明らかにする上で非常に有用な材料を確立できた。また分離MDVの感染性クローンの作成の開始しており、より多面的な解析が可能となる。また本年度の解析によりMDVの病原性進化と免疫抑制との関連が示唆され、今後の解析でMDV病態形成における免疫抑制の役割が解明されることが期待される。以上より、初年度としては、大きな成果を挙げたと判断した。今後は、さらに単離したMDV株を用いた詳細な感染実験を行うとともに、全ゲノム解析を継続して行う。そして同定された遺伝子変異等について、その生物学的意義を明らかにするとともに、それらの変異等を導入した組換えMDVクローンを作成し、鶏を用いた感染実験等で解析する。28年度が最終年度であるため、記入しない。獣医学MDVの病原性進化に伴うMDVゲノムの遺伝子変化・多型の同定およびそれらの役割を解析するために、前年度から継続して、野生水禽やワクチンブレーク鶏由来MDV株特異的変異を導入した組換えMDV感染性クローンを作製して、MD感受性鶏を用いた感染実験により、その生物学的性状・病原性を親クローンと比較する。また複数の変異がワクチンブレークに関与していることも予想されるので複数の薬剤耐性マーカーを用いて変異領域と連結した合成遺伝子を作製して、複製の変異を導入した組換えMDV感染性クローンを作製しての解析も検討する。
ショウジョウバエの幼虫キノコ体において匂い識別学習に関わる神経回路の機能研究

ショウジョウバエの幼虫脳をモデルとして、嗅覚一次中枢と嗅覚二次中枢の一つであるキノコ体カリックスの神経結合様式を投射神経細胞の単一クローンを誘導する手法で解析し、一次中枢の感覚地図を作成し、二次中枢においてその対応関係を明らかにした。幼虫脳のカルシウムイメージングの系を確立して匂い刺激応答をカリックスで解析し、解剖学的な解析結果の検証を行った。この研究結果により始めて単一細胞レベルで高次脳において匂い地図を作成した。研究の目的:ショウジョウバエのキノコ体は嗅覚連合学習に必須な脳中枢である。私は、幼虫キノコ体の入力領域に糸球体構造が存在することを発見し、34個の糸球体を同定した。嗅覚信号を運ぶ投射神経細胞(PNs)はステレオティピックにカリックスに入力することが分かり、一方、個々のキノコ体神経細胞(KCs)は約6個のカリックス糸球体にランダムに樹状突起末端を持つことを明らかにした。そこで本研究では、幼虫キノコ体の神経解剖学的解析を行い、カリックスの神経回路構築モデルを提案することと、機能イメージングの系を確立し、解剖学的解析を基盤に、カリックスの匂い情報処理機能のモデルを検証することを目的とする。研究計画:1)カリックス糸球体と感覚地図との対応関係を明らかにする為、単一細胞クローンを作製し、触角葉とカリックスの神経結合様式の神経解剖学的構築を明らかにする。更に、幼虫期に発現が見られるGAL-4系統をスクリーニングし、投射神経細胞以外のカリックスへ入力をする神経細胞を同定する。2)幼虫の機能イメージングの系を最適化する。ライブイメージングによって再現性よくデータを取得するためには、サンプルの調製と匂い刺激装置の最適化が必須である。そこで、一個体あたり5から8種類の匂い刺激のデータを取得することを目標に設定し、速やかなサンプル調製、および連続的な匂い刺激のイメージングが可能となる実験系の構築を目指す。GAL-4系統にカルシウムセンサー(G-CaMP)を導入したハエ系統を用いて種々の匂い化合物の刺激によるGCaMP蛍光の上昇を測定し、ライブイメージングの条件の最適化とともに、カリックス糸球体の機能的な同定を進める。私は、幼虫キノコ体の嗅覚情報の入力領域であるカリックスにおいて糸球体構造が存在することを発見し、34個の糸球体を同定した。また、嗅覚系の二次神経細胞はステレオティピックにカリックスに入力することが分かり、個々のキノコ体神経細胞は約6個のカリックス糸球体にランダムに樹状突起末端を持つことを明らかにした。そこで本研究では、幼虫キノコ体の神経解剖学的解析を行い、カリックスの神経回路構築モデルを提案することと、機能イメージングの系を確立し、解剖学的解析を基盤に、カリックスの匂い情報処理機能のモデルを検証することを目的とした。研究成果:1)投射神経細胞の単一細胞クローンを作製し、触角葉とカリックスの神経結合様式を明らかにすることで、カリックス糸球体と感覚地図との対応関係を明らかにした。2)カルシウムセンサー(G-CaMP)を導入したハエ系統と単一の嗅細胞が機能するハエ系統を作成して幼虫を匂い物質で刺激し、特定の嗅細胞の活性化によるカリックスでの投射神経細胞末端の活性化様式をG-CaMP蛍光で測定した。活性化された糸球体の同定によってライブイメージングによるカリックス糸球体の機能的な同定を行った。結果と意義:嗅覚系の脳内二次中枢における感覚情報の表現様式を単一細胞レベルで初めて明らかにした。単一の嗅覚細胞の情報は一個、ないし数個のカリックス糸球体において局所的に表現されるというモデルを提案し、嗅覚一次中枢において匂い情報の特異的な広がりが証明された。本研究で確立した匂い情報モデルとライブイメージングを用いた解析系はカリックス糸球体の感覚地図を単一細胞レベルで正確に記述することを可能にし、嗅覚情報処理機構を解析するための重要な研究基盤を確立したといえる。
古墳時代における渡来系集団の出自と役割についての考古学的研究

奈良県内から検出された古墳時代(36世紀)の朝鮮半島と関わる考古資料を集成し、百済・馬韓地域、新羅・加耶地域と関連する遺構・遺物及び特定地域とは結びつけることのできない遺構・遺物に分類した。これらから、渡来系集団の足跡をたどり、それぞれが当時の生活様式・生産技術の革新に大きな役割をはたしたことを確認した。さらに、渡来系集団の出自は、政治的中心地ではなく周縁地域にあり、その技術も最先端のものではないことを明らかにし、帰属意識の明確でない自由往来の海洋民の存在が重視される点を明らかにした。本年度は、昨年度までにおこなった奈良盆地における韓式系軟質土器・陶質土器集成データベースに追加・修正を加えるとともに、渡来系集団に関連する遺物である土製品(移動式竈・鍋、土製竈枠、煙筒形土製品)のデータベース作成をおこなった。また、分布図作成のためのベースマップの作成をおこなった。さらに、韓国慶尚道方面で以下のような関連遺物資料の調査と遺跡踏査などをおこなった。巨済長木古墳出土円筒形土器、金海鳳凰台遺跡出土移動式竈・羽釜(以上国立金海博物館)高霊伝大加耶宮出土竈・泗川勒島遺跡出土土製竈枠・煙筒形土製品(以上国立晋州博物館)金海礼安里古墳群出土羽釜・金海伝金官加耶宮墟址出土移動式竈(以上釜山大学校博物館)大邱漆谷遺跡出土移動式竈・慶山林堂遺跡出土移動式竈、煙筒形土器・慶山漆谷遺跡出土移動式竈・高霊伝加耶宮墟址出土竈・大邱時至遺跡出土土管(以上国立大邱博物館)浦項冷水里古墳出土移動式竈(国立慶州博物館)奈良盆地における韓式系軟質土器・陶質土器を集成し、データベースを作成した。その成果の一部とそれに関わる研究報告を学会で発表した(坂靖「古墳時代中期の遺跡構造と渡来系集団」、中野咲「大和地域」古代学研究会2012年度拡大例会・シンポジウム)。また、関連論文として権五栄2007「住居構造と炊事文化からみた百済系移住民の畿内地域への定着とその意味」『韓国上古史学報』第56号を翻訳し、学術雑誌『古代学研究』に投稿した(『古代学研究』197号、2013年4月20日刊行)。さらに、韓国西南部・南部地域で資料調査をおこない、土器・土製品の地域性や、倭系遺物について検討した。主な資料は、ソウル風納土城出土長胴甕・土製竈枠、海南龍頭里古墳出土須恵器系土器、霊岩チャラボン古墳出土埴輪・土器、霊巌長洞古墳出土埴輪、羅州伏岩里遺跡出土土器、山清下村里遺跡出土土器、金海鳳凰台遺跡出土土器・土製品、巨済鵝州洞1485番地遺跡出土土器、金海大成洞古墳群出土遺物などである。韓国国内における甑や長胴甕の地域性や、埴輪・土製竈枠や土師器・須恵器類似資料を確認し、奈良盆地の渡来系集団の出自を究明するうえで新たな認識を得るとともに、考古資料からみた当時の日韓交渉について新たな知見を得た。加えて、関連論文を韓国で発表した。(坂靖「日本畿内地域百済・馬韓系住居址の検討」『甕棺古墳社会住居址』韓国国立羅州文化財研究所)。本年度は、奈良盆地における韓式系軟質土器・陶質土器集成データベースに追加・修正を加え、渡来系集団に関連する遺物である土製品(移動式竈・鍋、土製竈枠、煙筒形土製品)のデータベースの追加をおこなった。資料調査として、八尾市埋蔵文化財センターで八尾南遺跡、東大阪市埋蔵文化財センターで鬼虎川遺跡出土韓式系土器、群馬県埋蔵文化財調査事業団で温井遺跡・吹屋糀屋遺跡、高崎市立観音塚考古資料館で剣崎長瀞遺跡、大阪府教育委員会調査事務所で蔀屋北遺跡出土韓式系土器、大阪文化財研究所出戸収蔵庫で長原遺跡、歴史に憩う橿原市博物館で西新堂遺跡、高取町歴史研修センターで清水谷遺跡、桜井市埋蔵文化財センターで纒向遺跡・阿部寺遺跡・上ノ宮遺跡のそれぞれ韓式系土器の調査をおこなった。さらに、九州大学でおこなわれた山の神古墳研究会に参加するとともに、九州国立博物館で韓国国立公州博物館所蔵の武寧王陵の資料と、それに関わる国内資料の関連展示があり、九州大学所蔵の番塚古墳出土の鳥足文土器などを熟覧して、九州出土の渡来系遺物や韓式系土器について検討もおこなった。本年度は、福岡県・長崎県、千葉県や近畿圏内の八尾市立埋蔵文化財センター・大阪府文化財センター中部事務所・四條畷市立歴史民俗資料館・神戸市立埋蔵文化財センター・大阪文化財研究所難波宮調査事務所・出戸収蔵庫・京都府立山城郷土資料館・滋賀県立安土城考古博物館・守山市立埋蔵文化財センターなどで踏査や補足の資料調査をおこなったうえで、報告書を刊行した。内容は、報告文として「古墳時代における渡来系集団の出自と役割に関する考古学的研究」(p793)を掲載し、奈良県内の古墳時代における渡来系集団に関わる考古資料を悉皆的に分析したうえで、その出自と役割について言及した。

さらに特論1として「56世紀の渡来系集団と朝鮮半島西南部の前方後円墳・埴輪」(p95-114)、特論2として「羽釜と移動式カマドの受容と展開」(p115-136)を掲載し、それぞれ埴輪や羽釜・カマドなど個別の資料から、渡来系集団の果たした役割について言及した。奈良県内から検出された古墳時代(36世紀)の朝鮮半島と関わる考古資料を集成し、百済・馬韓地域、新羅・加耶地域と関連する遺構・遺物及び特定地域とは結びつけることのできない遺構・遺物に分類した。これらから、渡来系集団の足跡をたどり、それぞれが当時の生活様式・生産技術の革新に大きな役割をはたしたことを確認した。さらに、渡来系集団の出自は、政治的中心地ではなく周縁地域にあり、その技術も最先端のものではないことを明らかにし、帰属意識の明確でない自由往来の海洋民の存在が重視される点を明らかにした。本年度は、海外での資料調査はできなかったが、それを国内の資料調査で充当し、新資料を加えたデータベースの作成を完了した。ほぼ目的の朝鮮半島系の渡来系集団に関わる資料の検索と集成は完了したので、次年度にこれを詳しく検討し、最終報告をおこなう。考古学検討課題に照らし、追加の資料調査を実施したうえで、報告書の作成・印刷をおこなう。奈良盆地を中心とした地域の古墳時代における朝鮮半島系渡来集団の出自についての検討を、基礎資料の公開とともに詳細な考察で、明らかにする。データベースのがほぼ完成し、追加調査などをおこなう段階である。本年度は朝鮮半島南部・南東部地域での資料調査を実施した。昨年度の西部・西南部地域の資料調査とあわせると、残るのは東部・中部地域を残すのみである。データベースは一部を公表することができた。韓国での資料調査を西南部・南部・西部地域で実施することができた。翻訳作業をおこない学術雑誌に投稿した。平成25年度初頭に公開し、抜き刷りの印刷をおこなった。本年度は海外で資料調査をおこなう予定であったが、国内での資料調査をおこなってそれに充当した。今後はデータベースの追加及び、金属資料など奈良盆地の渡来系集団と相関する基礎資料の調査をおこなう。海外での朝鮮半島南部・西南部地域の追加調査をおこなうとともに、まだ調査をおこなっていない東部・中部地域の資料調査をおこないたい。その上で、資料調査の結果を分析し、奈良盆地各地に居住した渡来系集団の出自とその役割について考察し、その成果を公表する。データベースの充実をはかるとともに、国内外の資料調査をおこなう。本年度に追加の資料調査をおこなうのに加え、最終年度の報告の印本費が不足していたのでそれに充当する。また、分析資料のカラー印刷などに充当する。本年度計画していた短期の海外調査が研究代表者の体調不良により1件中止となったため。最終年度に計画している印本費の追加及びそれに関わる人件費に充当する。海外(韓国東部・東南部地域)での資料調査を夏期に計画をしている。また引き続き、当該研究に関わる韓国語の論文の翻訳作業をおこなう。
二層法と希少糖を駆使した膵島移植成績向上のための研究

1型糖尿病の治療法の1つに膵島移植があり、分離後膵島の機能を改善できれば移植成績向上につながる。本実験では希少糖D-アロースを膵島の培養時に併用し、膵島機能を改善できるか検討した。ラットの分離後膵島の培養液にD-アロースを添加して一晩培養すると、D-アロース非添加コントロール群と比較しインスリン分泌能が有意に改善した。またD-アロース添加培養した膵島を1型糖尿病モデルマウスに移植すると、コントロール群と比較し糖尿病治癒率が有意に高くなった。D-アロース添加培養群の膵島の酸化ストレスマーカーが有意に低かったことから、D-アロースの抗酸化作用が膵島機能改善の機序である可能性が示唆された。平成24年4月より必要物品・ラットを購入し実験を開始した。しかし膵島分離は非常に特殊な手技であり、その安定に時間と相応のラット数を要した。膵臓の二層法保存にD-alloseを添加して有用性をみる実験では、まず有用性の有無をおおまかに判断するため、現在50mMの濃度のみで検討を行っている。これまでの結果からは有意差はないものの、D-allose投与群で膵島収量が高い傾向にあり、nを増やして検討を継続している。また分離後膵島の保存実験では、D-alloseの濃度を150mMまでのいくつかに振り分けた実験を行い、24時間培養保存のみでの検討だが、D-alloseを添加した方が有意にインスリン分泌能を改善することをつきとめた。しかしnが少なく、使用したラットの週数なども統一できていなかった。また添加するD-allose濃度も25mMが最も良いと思われる結果が判明し、現在はラットの週数を統一し、添加するD-allose濃度も25mMに統一したプロトコールで再度有意差が出るか検討を重ねている。なお平成25年3月1日に香川県高松市で開催された第40回日本膵・膵島移植研究会において、研究分担者である柏木がこれまでの研究結果について報告した。まずラット摘出膵の二層法保存において、D-アロースの添加により分離膵島の収量を増加できるか否かについては、nを増やして検討したがD-アロース添加群とコントロール群の膵島収量に有意差を認めなかったため、効果無しと判断して検討は終了とした。一方、分離後膵島の培養時にD-アロースを添加することで膵島機能の改善を図れるかについては、D-アロースを25mM添加培養した群のインスリン分泌能(stimulation index; SI)がコントロール群のSIよりも有意に高値となり、D-アロース添加培養により分離後膵島のインスリン分泌能が有意に改善されることが判明した。この効果はin vivoにおいても確認され、D-アロース添加培養を行った膵島をストレプトゾトシン投与により1型糖尿病モデルにしたヌードマウスの腎被膜下に移植したところ、D-アロース非添加培養を行った膵島を移植したコントロール群のヌードマウスに比べ、有意に糖尿病治癒率が高いことが判明した。このD-アロースによる膵島機能の改善効果の機序として、これまでの報告からD-アロースのもつ抗酸化作用が考えられ、脂質過酸化反応の指標の一つであるmalondialdehyde(MDA)値を測定し比較検討したところ、D-アロース添加培養群の膵島中のMDA値がD-アロース非添加培養を行ったコントロール群の膵島中のMDA値よりも有意に減少していることが判明し、D-アロースのもつ抗酸化作用が分離後膵島の機能改善の機序の一端であることが示唆された。なおこれらの成果は、研究分担者である柏木が現在論文を作成し、投稿準備中である。また平成26年3月7日に開催された第41回膵・膵島移植研究会で、研究分担者である柏木が今回の成果を発表しており、加えて平成26年9月10日に開催予定の第50回日本移植学会総会に演題応募予定としている。初年度は京都大学に出張し、膵島分離手技の実際を見学し、膵保存液であるUW液を購入して実験の準備を進めた。本研究を開始するに当たり、まず特殊な手技である膵島分離手技を安定させなくてはならなかったため、それに時間を要した。ラットの週数や各種薬剤、必要物品などの選択も行わなくてはならず、そのための予備実験も必要であった。現在はin vitroでの実験を行っているが、上記の通り手技の安定やマンパワーの不足などにより、D-alloseが有効であることのメカニズムの解明についてやvivoでの移植実験などには入れていないのが現状である。研究代表者・研究実施者ともに臨床業務で多忙であり、予定通りの研究内容の実施が行えない状況であった。

まず使用するラットの背景および添加するD-alloseの濃度を均一化したプロトコールでのデータ集積を図り、D-alloseの有効性についてを明らかなものとして確立する。その後保存した膵臓や膵島の形態学的な観察を行うと同時に、D-alloseの有効性の根拠として考えられる抗酸化作用の証明にむけてフリーラジカルの解析などを行う予定である。vitroでの有効性・メカニズムが証明されればvivoでの移植実験に移行していく方針である。新たな研究分担者を追加し、平成23年度に予定していた膵臓保存実験ならびに膵島培養実験を平成24年度で鋭意行っていく。さらに平成25年度以降は膵島移植実験、機序の検討、二層法にD-アロースを駆使した膵島移植の推進を進めていく。上記方針に従って、必要数のラットや試薬・消耗品の追加、および形態学的観察のための各種免疫染色キット・フリーラジカル解析のためのキットなどを検討し購入する予定である。初年度は前述の理由で予定していた必要器材の購入が行えなかったため、研究費の未使用分については繰り越しとした。今後の研究の状況に応じて必要器材・試薬・ラットなどの購入を予定している。
加熱・高圧・乾燥処理による野菜・果実の物性変化とペクチン質の関係

野菜・果実を加熱、乾燥、高圧処理したときの物性変化とペクチンの関係を検討し、以下の結論を得た。金糸瓜を煮熟するとそうめん状に剥離するのは、糸状組織を接着する物質が高メトキシルペクチンでβ-脱離により分解するためである。カリンの生果肉は非常に硬いが、煮熟軟化するのは、煮汁が酸性のためペクチンが加水分解するため。水道水の種類によりジャガイモの煮熟軟化度が異なるのは、カルシウム量の違いによる。煮熟後のヤマクラゲ(乾燥ステムレタス)の歯触りのよさは、乾燥により低エステル化度ペクチンの割合が増加するため。柑橘類の果皮をクエン酸溶液に浸漬して軟化させ高圧処理すると、風味のよいマーマレードが製造できる。I.加熱処理による野菜・果実の物性変化とペクチン質の関係金糸瓜はなぜそうめん状に剥離するか金糸瓜を煮熟、または各種キレート剤に浸漬した時の剥離状態を比較し、ペクチン質の性質を調べ、そうめん状に剥離する原因について検討した。pH2のHCl溶液に浸漬すると、高エステル化度のペクチンが溶出し、加熱しなくてもそうめん状に剥離した。この結果から、糸状組織を接着しているのは高メトキシルペクチンであることを明らかにした。水道水で煮熟したジャガイモの軟化・硬化総社市水道水に浸漬・煮熟すると煮汁がpH8の弱アルカリ性であるにもかかわらず、岡山市水道水より煮熟軟化しにくかった。イモを脱イオン水、水道水で煮熟、または20°C、30°C、60°Cで浸漬後煮熟すると、浸漬温度が高く浸漬時間が長くなるほど硬化した。Ca^<2+>濃度とpHを同じにすると、総社市水道水中で煮たときと同程度に硬化し細胞壁の分離が抑えられた。浸漬液、煮汁中のCa^<2+>が煮熟後の硬さに影響することを明らかにした。II.高圧処理による果実の物性変化とペクチン質の関係ユズのペクチン質・組織・物性の測定と高圧マーマレードの試作ユズの外果皮、中果皮、内果皮・果肉を、加熱、高圧処理、pH2のクエン酸液に浸漬し、軟化とペクチンの関係を検討した。クエン酸溶液に浸漬するとペクチンが約30%溶出し軟化した、加熱するとペクチンが加水分解して軟化したが、高圧処理では分解せず軟化がわずかであった。果皮をクエン酸浸漬して軟化させた後、砂糖を添加し高圧処理することにより、香味のよいマーマレードを製造できることを明らかにした。I.加熱処理による野菜・果実の物性変化とペクチン質の関係生カリンは非常に硬い。なぜ煮熟により軟化するかカリンを生および煮熟後、希塩酸、続いて酢酸塩緩衝液に浸漬し、ペクチン質をエステル化度の違いにより分別抽出した。また、組織構造の変化を観察した。カリンは石細胞や食物繊維を多く含むため、生の果肉は非常に硬いが、15分煮熟で中層のペクチン質が溶出して細胞壁が分離し、軟化した。カリンのペクチンのエステル化度は非常に高く、高メトキシルペクチンがβ-脱離により分解して煮汁中に溶出し、軟化したものと思われる。II高圧処理による果実の物性変化とペクチン質の関係1.イチゴ、リンゴなどを高圧処理するとなぜ軟化するかイチゴ、リンゴを切断後、真空包装し、500MPa、30分間高圧力処理、または100°Cで10分間加熱処理した。イチゴは低分子量の水可溶性ペクチンが非常に多く、高圧・加熱処理により高メトキシルペクチンが減少し、組織が著しく軟化した。リンゴの水可溶性ペクチンはイチゴより少なく、低エステル化度のペクチンが比較的多かった。そのため、高圧・加熱処理による軟化の程度がイチゴより低かった。リンゴのpHが4付近であったため、ペクチンがβ-脱離でなく加水分解により低分子化し、軟化したものと思われる。2.各種柑橘類からフレッシュな香りの高圧マーマレードを作る方法の確立日向夏の外果皮をスライスし、中果皮・内果皮・果肉は磨砕しpH2.7のクエン酸溶液に24時間浸漬した。これに最終糖度50%となるように蔗糖を添加し、500MPaで30分間高圧力処理、または100°Cで10分間加熱処理してマーマレードを作製した。果皮をクエン酸に浸漬すると軟化が促進し、細胞壁にゆるみが生じた。マーマレードの粘弾性は高圧・加熱処理により大差なかった。

高圧力処理したほうが加熱処理したものよりゼリー部分のナリンギン量が少なく、フレッシュな香りも維持しており、官能評価の総合評価が高かった。市販のヤマクラゲ(乾燥ステムレタス)は水戻し後、煮熟しても歯切れが良い。この原因を調べる目的で本研究を行った。自家栽培したステムレタス(茎チシャ)を縦半分に切断し、半分を生試料、残りの半分を室温で自然乾燥し乾燥試料とした。各試料は3等分し、上部、中部、下部とした。乾燥試料は市販品(ヤマクラゲ)と比較した。生の試料と乾燥試料の煮熟前後の硬さを測定し、組織構造の変化をクライオ走査電子顕微鏡で観察した。また、生および乾燥試料を水戻ししたもの、さらにそれらを煮熟した試料よりアルコール不溶物(AIS)を作成し、ペクチン質を水、0.01N塩酸、0.1M酢酸塩緩衝液、2 %ヘキサメタリン酸ナトリウム、0.05N塩酸溶液でエステル化度別に分別抽出し、WSP、PA、PB、PC、PDとし、ガラクツロン酸の定量を行った。生ステムレタスは下部にいくほど硬かった。煮熟すると軟化したが、下部ほど軟化度が小さかった。生を乾燥させて水戻ししたり、それを煮熟すると、生より乾燥させたものの方が煮熟前後どちらも硬い結果となった。組織観察では、上部<中部<下部に行くほど表皮の細長い細胞が多くなり、維管束が発達していた。生を煮熟すると、外側の柔組織および維管束の細胞壁は大きな開裂がみられなかったが、中間部、中心部の柔組織は細胞一次壁にゆるみが生じ、中層が開裂していた。上部>中部>下部の順に大きく開裂していた。ペクチンを分別抽出すると、生の上部、中部では高エステル化度のPAの割合が高く、下部では低エステル化度のPCの割合が高かった。煮熟すると煮汁中へのペクチンの溶出は上部>中部>下部の順に多く、WSPも増加した。乾燥すると、全て低エステル化度のPBの割合が著しく増加した。ペクチンメチルエステラーゼによるものと思われる。このため煮熟してもβ-脱離による分解が起こりにくく軟化しにくいと示唆された。I.加熱処理による野菜・果実の物性変化とペクチン質の関係1生カリンの果肉は石細胞や食物繊維を多く含むため、非常に硬いが、15分煮熟すると中層のペクチン質が溶出し細胞壁が離解し、軟化した。カリンのペクチンのエステル化度は非常に高く、高メトキシルペクチンがβ脱離により分解して煮汁中に溶出したため、軟化したと考えられる。2ジャガイモを脱イオン水、カルシウム濃度の異なる水道水で煮熟、または20°C、30°C、60°Cで浸漬後煮熟したときの物性測定と組織観察を行い、硬化の原因がカルシウムであることを明らかにした。II高圧処理による果実の物性変化とペクチン質の関係1イチゴ、リンゴを高圧処理するとなぜ軟化するかについて検討した。イチゴは低分子量の水可溶性ペクチンが非常に多かった。また、高圧・加熱処理により高メトキシルペクチンが減少し、組織が著しく軟化した。リンゴはイチゴより水可溶性ペクチンが少なく、低エステル化度のペクチンが多いため、高圧・加熱処理により軟化しにくかった。リンゴのpHが4付近のため、ペクチンがβ脱離でなく加水分解し、軟化することを明らかにした。2柑橘類からフレッシュな香りの高圧マーマレードを作る方法を検討した。日向夏の外果皮をスライスし、中果皮・内果皮・果肉は磨砕しpH2.7のクエン酸溶液に24時間浸漬した。これに最終糖度50%となるように蔗糖添加し、500MPaで30分間高圧力処理、または100°Cで10分間加熱処理してマーマレードを作製した。果皮をクエン酸に浸漬すると軟化が促進し、細胞壁にゆるみが生じた。
MRI-ASL法を応用した血管内信号強調潅流画像における実用的有用性の評価

アーテリアルスピンラベリング(以下ASL)を用いた潅流画像(以下ASL潅流画像)をもやもや病患者に施行し、他のMR画像やSPECTと比較検討をおこなった。脳血流動態を評価するのに十分役立つと思われた。硬膜動静脈瘻や症候性てんかん患者に対して施行したところ、ASL灌流画像は血流動態の変化が観察され、経過観察に有用であることが示唆された。脳腫瘍患者におけるASL灌流画像では画像の評価には注意点があることが判明した。当該年度において、健常者ボランティアにてMRI-ASL法のTI_2心電図波形との関係、血管内信号の抑制などの撮影パラメータの最適化の検討をおこなった。その結果は以下の通りである。(1)パラメータTI_2(=撮影タイミングの指標)の検討では2秒が最適であること、(2)心電図同期下での撮影では200ms遅延での撮影が最もSIN比が良好であること、(3)4cm/s以上の血管内信号を抑制すると、文献的に呈示されている健常者の脳血流シンチグラフィーと比較して、血流分布に関して類似はするが、脳血流値は低値を呈すること、これら3つのことが判明し、今後の検討に適宜応用させていく予定である。また、次年度あるいは次々年度でこの結果のまとめについて学会での発表を目標としている。また、前述の検討項目に平行して臨床的な応用として、以下の項目を検討した。(4)もやもや病について、血管内信号を4cm/s以上抑制と設定することで、ダイアモックス負荷時の脳血流シンチグラフィーと近似した脳血流値が得られること、(5)転移性vs.原発性脳腫瘍の鑑別について、血管内信号を4cm/s以上抑制と設定すると、文献的には転移性vs.原発性脳腫瘍の鑑別が有用とされているが、今回の検討では富血管性腫瘍が膠芽腫と鑑別が難しいことが判明し、血管内信号抑制値の再検討が必要と思われた。本年度の臨床応用での検討ではこれらが明らかとなった。これらはすでに学会での発表をおこなった。2年目となる当該年度において、MRI-ASL法の臨床応用を中枢神経系疾患に対して施行した。その結果、以下に挙げるいくつかの疾患で有用な結果を得ることができた。1.症候性てんかん患者に対してMRI-ASL法を適用したところ、一過性高値を示した3例を見出した。てんかん発作後の一過性高血流を反映した所見と考えられ、これについて学会発表した。2.もやもや病患者に対しMRI-ASL法を適用し、SPECTとの脳血流値の対比を行ったところ、アセタゾラミド(=脳血管拡張剤)負荷による脳血流値との強い相関性を見出した。この結果について英語発表をおこなった。3.もやもや病患者におけるMRI-ASL法の活用法の更なる検討として、通常の撮影方法に加え、脈波同期させたMRI-ASL法を考案し、SPECTとの対比を行った。この結果、前述の如く通常のASLはアセタゾラミド(=脳血管拡張剤)負荷による脳血流値との相関性が再確認されたのに加え、脈波同期MRI-ASL法は安静時脳血流値と比較的良好な相関性があることを見出した。これについて学会発表した。4.頭蓋内硬膜外動静脈瘻患者に対してMRI-ASL法を適用したところ、シャント血流について、優れた描出能を持つことがわかった。この臨床的有用性を英語論文にて発表した。また前年度に引き続き、MRI-ASL法の定量性とその特性について、物理・数学的背景を解読しえた。これについて以下の如く発表を行った。1.MRI-ASL法のバリエーションひとつであるFAIR法による定量評価の理論的背景について、臨床医に理解しやすく解説したものを学会発表した。3年目となる当該年度において、MRI-ASL法の臨床応用を中枢神経系疾患に対して施行した。1.もやもや病患者に対しMRI-ASL法を適用し、SPECTとの脳血流値の対比を行ったところ、アセタゾラミド(=脳血管拡張剤)負荷による脳血流値との強い相関性を見出した。この結果について海外学会にて発表後、論文発表をおこなった。2.もやもや病患者におけるMRI-ASL法の活用法の更なる検討として、通常の撮影方法に加え、脈波同期させたMRI-ASL法を考案し、SPECTとの対比を行った。これについて海外学会にて発表した。

3.基礎的研究において、ASL-MRIを用いた脳血流画像取得における加算回数についての臨床的検討し、加算回数を減らしても、画像的に遜色ないことを明らかにした。これを国内学会及び海外学会にて発表した。4.もやもや病同一患者におけるMRI検査において、1.5Tと3Tの装置の違いにより画像を過大あるいは過小評価する可能性があり、注意が必要であることが判明した。5.超急性期脳梗塞に対し血栓溶解療法を施行しえた患者において、MRI-ASL法を適応したところ、DWIでの所見とあわせた検討で、その患者の予後がある程度予測されることを見いだした。この結果については更なる検討を行い、今後学会発表を行っていく予定である。
“遊び”を取り入れた幼児のバランステストの開発

本研究は、幼児のバランス能力評価が未確立である側面(支持基底面の大きさ、重心移動の正確性、外乱負荷応答)を評価する“遊び"を取り入れた幼児のバランステストの開発を目的として、以下の3つの検討課題に取り組んでいる。検討課題1:既存のバランステストの信頼性の検証検討課題2:新規バランステストの開発検討課題3:遊びを取り入れたバランス能力測定方法の妥当性の検証平成30年度は、検討課題1および検討課題2に重点的に取り組んだ。検討課題1既存のバランステストの信頼性の検証においては、幼児でも十分信頼性を確保できることを検証した。検討課題2に関して、本研究で検証しているバランス能力の3つの観点のうち、「支持基底面の大きさ」を評価する魚釣りテストに関して予備実験を繰り返し、テスト開発および信頼性を確認することができた。また、「重心移動の正確性」および「外乱負荷応答」を評価するテストでは、それぞれバランスボードテストおよびシーソー遊びテストを開発し、信頼性の検証を継続している。上記の各テストにおいては幼児における新規テスト開発の目途が立ちつつある。一方、当初計画していた一部のテストでは、テストの信頼性および妥当性に加え、テスト機器の安全性等の問題で計画の変更を余儀なくされている。いずれのテストにおいても成人を対象に予備実験を繰り返しており、今年度は幼児を被験者として信頼性の検証を繰り返すとともに既存のテストを基にした基準関連妥当性の検証を進めていく予定である。本研究は幼児を対象とした新規バランステストの開発を目的としているが、当初計画していたテストの一部では、テストの信頼性や妥当性の問題に加え、テスト機器の安全性・購入の目途立たないなどの理由により計画の変更を余儀なくされている。申請書にて以下のように記した通り、当初計画していた「乗り物遊びテスト」「綱引き遊びテスト」「タッチ遊びテスト」に関しては開発を中断し、その他のテスト開発に絞って進めることとする。・新規バランステストの開発では、開発の進行が遅れることを考慮し、各評価の観点において2種類の方法を考案している。計画が遅れた場合、信頼性や実用性等を考慮し、より実現可能性が高い方法に絞って本研究課題を進める。また、テスト開発の計画変更により、幼児を対象とした新規テストの信頼性の検証(検討課題2)が遅れていることから「(3)ややおくれている」と判断した。今年度は、「検討課題2:新規バランステストの開発」および「検討課題3:遊びを取り入れたバランス能力測定方法の妥当性の検証」に取り組む。当初計画していた新規バランステストの中で開発の目途が立っている「魚釣り遊びテスト」「バランスボードテスト」「シーソー遊びテスト」を中心にまずは幼児を対象とした信頼性の検証を実施する。各テストで十分な信頼性を確保できる測定方法の確立ができ次第、既存のテストを基にした基準関連妥当性の検証に移る予定である。検討課題2および3の検証のために幼児の被験者のリクルートを引き続き進めていく。次年度は「検討課題3:遊びを取り入れたバランス能力測定方法の妥当性の検証」に重点を置く予定であるが、本年度に新規テストの開発が十分に進まなかった場合、新たなテスト方法を考案・開発し、次年度に信頼性および妥当性の検証を進める予定である。検討課題1:既存のバランステストの信頼性の検証検討課題2:新規バランステストの開発検討課題3:遊びを取り入れたバランス能力測定方法の妥当性の検証平成29年度は、まずは実験環境を整備し(実験器具の改良、購入)、検討課題2に重点的に取り組んだ。具体的には新規バランステスト案である乗り物遊びテスト、バランスボード遊びテスト、魚釣り遊びテスト、シーソー遊びテストのテスト開発に取り組んだ。成人を対象にこれらのテストの難度、安全性、実用性を考慮し、様々な条件設定を試験的に実施することで、幼児を対象とした際の実施可能性を検討した。その結果、種々の問題点が明らかとなった。乗り物遊びテストでは、2輪型の立乗り型パーソナルモビリティによるテスト実施を試みたが、安全性の面に課題が見つかりテスト方法や実験器具の改良の必要性が示された。シーソー遊びおよびバランスボード遊びテストでは器具によりテスト難度設定が難しく、乗り物遊びテストと同様に実験器具改良の必要性が示された。一方で、魚釣り遊びテストに関しては難度設定や安全性の確保が容易であり、幼児でも実施可能なテスト設定を明確にできた。問題点が生じた新規バランステストに関しては器具や条件設定の改良にめどが立っており、H30年度に幼児でも実施可能な方法へ改良を試みる。当初の計画において、平成29年度は検討課題1:既存のバランステストの信頼性の検証および検討課題2:遊びを取り入れたバランステストの開発(成人を対象として)に取り組む予定であった。実際に、平成29年度は、本研究の中核である検討課題2に重点的に取り組み、新規バランステストの開発にある程度の目途を立てることができた。しかしながら、テスト開発にあたり、安全性確保およびテスト難度調整の観点から実験器具およびテスト条件設定に種々の改良を加える必要性が生じ、多大な時間とコストを要した。そのため、検討課題1に関しては進捗がやや遅れている。以上の理由から(3)やや遅れていると判断した。

本研究は、幼児のバランス能力評価が未確立である側面(支持基底面の大きさ、重心移動の正確性、外乱負荷応答)を評価する“遊び"を取り入れた幼児のバランステストの開発を目的として、以下の3つの検討課題に取り組んでいる。検討課題1:既存のバランステストの信頼性の検証検討課題2:新規バランステストの開発検討課題3:遊びを取り入れたバランス能力測定方法の妥当性の検証平成30年度は、検討課題1および検討課題2に重点的に取り組んだ。検討課題1既存のバランステストの信頼性の検証においては、幼児でも十分信頼性を確保できることを検証した。検討課題2に関して、本研究で検証しているバランス能力の3つの観点のうち、「支持基底面の大きさ」を評価する魚釣りテストに関して予備実験を繰り返し、テスト開発および信頼性を確認することができた。また、「重心移動の正確性」および「外乱負荷応答」を評価するテストでは、それぞれバランスボードテストおよびシーソー遊びテストを開発し、信頼性の検証を継続している。上記の各テストにおいては幼児における新規テスト開発の目途が立ちつつある。一方、当初計画していた一部のテストでは、テストの信頼性および妥当性に加え、テスト機器の安全性等の問題で計画の変更を余儀なくされている。いずれのテストにおいても成人を対象に予備実験を繰り返しており、今年度は幼児を被験者として信頼性の検証を繰り返すとともに既存のテストを基にした基準関連妥当性の検証を進めていく予定である。本研究は幼児を対象とした新規バランステストの開発を目的としているが、当初計画していたテストの一部では、テストの信頼性や妥当性の問題に加え、テスト機器の安全性・購入の目途立たないなどの理由により計画の変更を余儀なくされている。申請書にて以下のように記した通り、当初計画していた「乗り物遊びテスト」「綱引き遊びテスト」「タッチ遊びテスト」に関しては開発を中断し、その他のテスト開発に絞って進めることとする。・新規バランステストの開発では、開発の進行が遅れることを考慮し、各評価の観点において2種類の方法を考案している。計画が遅れた場合、信頼性や実用性等を考慮し、より実現可能性が高い方法に絞って本研究課題を進める。また、テスト開発の計画変更により、幼児を対象とした新規テストの信頼性の検証(検討課題2)が遅れていることから「(3)ややおくれている」と判断した。今年度は引き続き検討課題2:遊びを取り入れたバランステストの開発に取り組む。既に新規バランステストの問題点や改良点は検討されており、改良に必要な実験機材等の準備もほぼ整っている。成人を対象としてテスト方法の条件設定を再度検討した上で、幼児を対象に新規バランステストの信頼性や実用性の検討を実施する。また、新規テスト開発に目途が立った段階で遅れている検討課題1:既存のバランステストの信頼性の検証にも併せて取り組む。