hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
複眼視細胞における視物質の細胞内分布と視細胞の構造と機能の相関

ルを暗保すると、11ーcisとallーtrans3ヒドロキシレチナ-ルがそれぞれ2.4倍,1.6倍に増加し、また、青色光を照射した後では、それぞれが3.5倍,2.0倍に増加している事がわかった。この新しく合成された3ヒドロキシレチナ-ルの前駆体が3ヒドロキシレチノ-ル(ビタミンA3アルコ-ル)であるか、否かを調べるため、ビタミンA1アルコ-ル(レチノ-ル)がビタミンA1アルデヒド(レチナ-ル)にこのサイトゾ-ル内で変換されるかを調べた。その結果、レチノ-ル(11ーcis又はallーtrans)をナミアゲハ複眼のサイトゾ-ル内に加え暗保したり、青色光を与えておくとレチナ-ル(11ーcis,allーtrans)というビタミンA1アルデヒドが生合成されてきた。以上の事から、ナミアゲハ複眼のサイトゾ-ルにはビタミンA3アルコ-ルからビタミンA3アルデヒド(3ヒドロキシレチナ-ル)に変換する仕組みがあり、この仕組みは青色光により促進される。節足動物の主要な光受容器である複眼の視細胞の光受容部位はラブド-ムといわれ、その細胞膜が管状に突き出した微絨毛(microvilli)が無数に規則正しく配列されたものである。この膜の中に光を最初に吸収する視物質が含まれており一連の視興奮系の初発反応の場である。カイコ蛾(Bombyx mori)にラブド-ムが発生する蛹の時期に10、000luxという極端に強い光を連続照射すると、ラブド-ムの発生はあまり阻害されないが、ミエロイド小体が視細胞中に多数発生しているのが観察された。ミエロイド小体は板状の構造がぎっしりと平行に配列されたもので、その方向はラブド-ムと直角、即ち光の方向と平行に配列されている。これは正常な昆虫の複眼には発生の途中を含めて見られないものである。フリ-ズフラクチャ-法での観察によると、このミエロイド小体の膜内粒子の大きさや密度はラブド-ムのそれらとほぼ同じであることがわかった。またオ-トラジオグラフィ-法での観察によりラブド-ムと同じ程度、同じ蛹の時期(中期)にラベルされたアミノ酸(ロイシン)が取り込まれることが観察された。更にたとえ10、000luxで連続照射しつずけても成虫(蛾)になるとミエロイド小体は視細胞から消失してしまうことが分かった。これらのことから光照射により視細胞内の小胞体で作られる光受容膜の合成が異常に昂進し、この過剰に生産された光受容膜が一時的に貯蔵されている構造がミエロイド小体であると推測した。視細胞の光にたいする応答を電気生理学的にしらべたところ、ミエロイド小体を含んでいる視細胞は正常と変わり無い反応を示した。ショウジョウバエ(Drosophila melanogaster)をカロチノイド欠乏で飼育し光照射によるラブド-ムの破壊と餌の関係を調べた。その結果、カロチノイドが欠乏するとラブド-ムの微細構造は破壊され易くなることが分かった。
複合適応形質進化の遺伝子基盤解明

本領域の目的である、多様な研究から「複合適応形質進化の共通メカニズム」を推定するという総合的研究を展開する、進化生物学とゲノム生物学を融合させる、を実現するため総括班を有機的に組織し、下記の活動を行い、効率的に連携できた。(1)領域会議を年2回、インフォマティクス情報交換会を5年で18回、ニュースレターを5年で63号発行し、領域内での情報共有、共通意識形成を行った。(2)ゲノム支援活動として実験方法のアドバイス、ゲノム配列決定支援、外部委託についてのアドバイス、各班のインフォマティクス担当者などに指導を行った。(3)形質転換実験技術支援を行った。(4)国内、国際シンポジウムをほぼ毎年開催した。(1)9月と2月に領域会議を開催した。9月の会議で平成22年度の研究方針、総括班活動計画の策定、3月の会議で研究情報交換を行った。領域会議時に総括班会議を開催し、領域の迂遠映方法について検討した。(2)9月、12,月、2月にゲノム支援委員会を開催し、総括班支援について検討した。領域の研究支援のため、1分子並列処理DNAシークエンサー、大容量ディスクファイルサーバーを導入し、設置、稼働した。計画班のゲノム解読支援を行った。9月、12月、2月にインフォマティクス情報交換会を開催し、ゲノム解析の情報交換、知識の共有を行うとともに、インフォマティクス研究者のネットワーク形成と若手人材育成を行った。12月にゲノムインフォマティクスオープンセミナーを開催し、本領域の研究に必要なインフォマティクス研究の情報交換と本領域での成果公開を行った。(3)遺伝子機能解析技術支援活動として、昆虫におけるRNAi法の実験法をニュースレターで公開した。(4)9月に総括班員を中心として、国内シンポジウムを開催した。2月に複合適応形質に関する国際シンポジウムを開催した。(5)領域ホームページを立ち上げ、領域の目的、シンポジウム案内などを発信した。ニュースレターはホームページから自由にpdfをダウンロードできるようにし、広報に役立てた。平成22年度にVol.1 No.1からNo.9、号外1号を発行した。(6)9月の公開シンポジウム後に、ポスター発表による若手ワークショップを行った。(1)7月と3月に領域会議を開催した。9月の領域会議で平成23年度の研究計画、3月の領域会議で研究報告、総括班活動報告を行った。領域会議時に総括班会議を開催し、領域の運営方法について検討した。(2)最新のゲノム生物学の知見を領域内で共有するため、インフォマティクスオープンセミナーを7月4日、3月5日に行った。領域内でのゲノム生物学的研究促進のため、インフォマティクス担当者を中心として、バイオインフォマティクス情報交換会を7月6日、10月8日、12月21日、3月7日に行った。総括班ゲノム支援活動として、博士研究員、技術支援員を雇用しRNA-seq、ゲノム解読などの支援を行った。支援内容については方法開発班が各申請者に実験方法の指導をするとともに、最終的にゲノム支援委員会で審議を行い決定した。(3)10月6,7日に遺伝子機能解析技術ワークショップを開催し、遺伝子機能解析技術の領域内への普及を行った。(4)Society for Molecular Biology and Evolution 2011 Kyoto Conference並びに日本進化学会第13回大会において、2つの国際シンポジウムを開催し領域の成果発表と国際化を支援した。(5)若手研究者の育成を目的に、若手ワークショップを10月7,8日に開催した。若手研究者による講演とともに、遺伝子解析技術に関する招待講演を行い、領域内における遺伝子解析技術向上に役立てた。また、日本応用動物昆虫学会において領域若手研究者を中心とするワークショップを開催し、若手研究者による研究成果発表を支援した。(6)領域ホームページの更新、合計10号のニュースレターをホームページ上で発行し自由にpdfをダウンロードできるようにすることにより、領域活動の発信、領域内外における広報に役立てた。(1)6月4日に研究計画発表、3月10-11日に研究成果発表のための領域会議を開催した。6月には、各班の研究計画に加えて、領域全体として複合適応形質進化をどのように理解していくかについてこれまでの領域における研究の総括と中間ヒアリングに向けた方針を検討した。(2)総括班ゲノム支援活動として、博士研究員、技術支援員を雇用しRNA-seq、ゲノム解読などの支援を行った。支援内容については方法開発班が各申請者に実験計画を指導し、最終的にゲノム支援委員会で審議を行い支援内容を決定した。最新のゲノム生物学の知見を領域内外で普及するため、外国人3名、日本人2名の講演による第4回インフォマティクスオープンセミナーを9月25日に開催した。第5回インフォマティクスオープンセミナーは3月1日から3日まで、生命情報科学若手の会年会と共催で開催した。インフォマティクス情報交換会の運営について若手班員を中心にワーキンググループを構成し、運営方針を決定した。その方針に基づき、6月5日に第8回、9月26日に第9回、12月27日、28日に第10回、3月9日に第11回の情報交換会を開催した。(3)遺伝子機能解析のための技術開発・向上をはかるため、10月25日、26日に遺伝子機能解析技術ワークショップを開催した。

(4)領域の中間取りまとめと成果発表のために、9月26日に国内公開シンポジウム、3月17日から19日にシンガポールで国際シンポジウムをPlant and Animal Genome Asiaと共催で開催した。(5)ホームページを領域活動における情報共有の場とするとともに、広く一般に広報した。とくに、領域活動成果はニュースレターとして年間10部を発行した。(6)若手研究者の活性化を目的として若手ワークショップを3月29日に開催した。本研究領域では、複合適応形質がどのように進化するのかを研究し、従来の進化理論で複合適応形質の進化を説明できるのか、あるいは、新しい共通理論が必要なのかを明らかにすることを目指している。総括班では計画・公募研究の支援をするとともに、各研究結果の一般性を探り出すことを目的として活動した。1領域会議:領域代表(長谷部)、領域事務担当(川口)を中心として、6月と3月に領域会議を開催した。6月は本年度の研究計画、3月は本年度の成果発表を行い、それぞれの講演要旨集を作成し、領域web pageで公開した。班員間の情報共有、今後の研究方針などを議論した。同時に総括班会議を行い、領域運営について意見交換を行った。2ゲノム支援活動:計画班、公募班のゲノムの解析支援を行った。支援内容については西山班が解析方法について助言するとともに、総括班と西山班班員を加えたゲノム支援委員会で審査し決定した。博士研究員1名、技術支援員1名を雇用し支援業務を行った。方法開発班員と各研究のインフォマティクス担当者が4回情報交換会を開いた。これによりインフォマティクス研究者のネットワーク形成と若手人材育成を行うことができた。インフォマティクスオープンセミナーを開催し、領域内への最新情報の提供とともに領域外への研究成果発信を行った。3遺伝子機能解析技術支援活動:遺伝子機能解析技術支援担当(藤原)が中心となって少人数の研究者・大学院生等を対象とした技術講習会を開催した。4国際シンポジウムの開催:領域の成果発表と今後の展開を模索するため国際シンポジウムを開催した。5ホームページ・ニュースレター作成:ホームページ・ニュースレター担当(深津)を中心として、ホームページ作成管理およびニュースレター発行を行った。6若手ワークショップ:関連集会担当(嶋田)を中心に若手研究者のためのワークショップを開催した。(1)領域会議開催:領域代表(長谷部)、領域事務担当(川口)を中心として、8月に領域会議を開催した。本年度の研究計画、領域の取りまとめについて、計画班、公募班全員が発表を行い、講演要旨集を作成し、班員間の情報共有、今後の研究方針などを議論した。同時に総括班会議を行い、領域の取りまとめに向けた運営方法、研究内容についての意見を聴取した。(2)ゲノム支援活動:計画班、公募班のゲノムの解析支援を行った。
水中のプロトン移動のダイナミックスと水の揺らぎが化学反応へ及ぼす影響の理論的研究

我々は液体の水また氷の中のプロトン移動の分子論的機構の解明、また超臨界水の反応性の起源について研究を行い、次のようなことを明らかにした。水中ではH_3O^+は3配位を好み、プロトンが3配位の水分子へ選択的に移動する。また、プロトンが移動する際、水分子のO-O間距離が短くなり、プロトンは最近接の2つの水分子と(H_5O_2^+)構造を形成しており、プロトン移動は、これらの水分子間の往復運動である。氷では、液体の水での結果と異なり、プロトンが結合距離から4配位の水分子へ付着している。配位する4つの水分子のうち1つの水分子との結合は非常に不安定であり、エネルギー的に配位を形成していない。プロトンの移動に伴い、不安定な結合をする4配位目の水分子との距離、相互作用エネルギーが大きく変化しており、この水分子が氷のプロトン移動の機構に大きく関わっている。水のpHと超臨界水の非常に高い反応性について、水和の機構との関係を調べるために、電子状態理論および溶液論を組み合わせ、水の中で水分子が解離するときのポテンシャルエネルギー曲線を求めた。真空中で水分子が解離するときのポテンシャルエネルギー曲線では、ラジカル解離(radical channel)がイオンで解離する(ion channel)よりも安定である。水の中ではion channelの方がradical channelよりも安定となり、これは実際に水は一般条件下でpH=7になっておりion channelが安定であることと一致している。超臨界水の条件下では、ion channelは水和によって更に安定化する。これは、溶媒(水)が希薄のため、超臨界水では水和によるイオンの安定化は小さいが溶媒間の構造を壊す不安定化も小さいためである。したがって超臨界水自身では、一般の水と同じようにion channelの方が安定であり、少し酸性に傾いている。さらに有機分子の周りの水和の様子、そこにおける水分子の解離の状態を調べ、超臨界水の高い反応性の分子機構(特にradical channelの役割)を明らかにしつつある。水中のプロトン移動の計算解析、水クラスターの大域的ポテンシャルエネルギー(PES)の様相、水のミクロレベル運動に関する高次非線型分光の理論計算、水素結合系のクラスターのダイナミックスの解析、ポリエンの光異性化過程のポテンシャルエネルギー面とダイナミックス、の研究を行ってた。水のクラスターへのプロトン付着のダイナミックスの分子動力学計算を行い、プロトン移動の機構とそれに伴うエネルギー緩和過程のダイナミックスを明らかにした。特に、速いプロトン移動の機構とその後のゆっくりした、いわゆるプロトン移動のダイナミックスに及ぼす、まわりの水の揺らぎの影響を調べた。Concertedな速いプロトン交換型移動が起こること、それにともない水分子酸素間の距離が縮み、また3配位の水分子ができること、周りの水の水素結合の組み替えが移動反応の規律になっていること、また多くの水分子の蒸発が非平衡的に起き、とくに蒸発水分子の並進に大きなエネルギーが集中することなどを明らかにした。水クラスターの大域的ポテンシャルエネルギーの様相を解析し、そのLandscapeが高度な結晶構造(5+6員環を多く含む)に向かってFurnellの形をしていることを、Normal Mode Followingによる反応座標決定法を用い示した。水の3次の非線型分光の計算したスペクトルに関し実験との非常に良い一致をみた。さらに実験では得られない各構成成分の解析を行った。

現在5次の非線型分光の計算を行っている。また水分子クラスターについて、統計的RRKM理論とトラジェクトリー計算の結果を比較し反応が統計的であるかを調べ、水素結合が如何に運動をコントロールしているかを明らかにした。モード間の結合がエネルギーと供に如何に変わるかを解析し、それに基づく改良RRKMによる結果は非常に良い値を与えることを示した。我々は本研究で次の3つのことを明らかにした。1.液体の水または氷の中のプロトン移動の分子論的機構の解明を行い水の中のプロトン移動においては3配位の水分子が大切な役割をしている。即ち水の中のネットワークの揺らぎで作られた3配位の水分子の上をプロトンは選択的に移動して行く。またプロトンが移動する2つの水分子間のO...O間距離は収縮する。一方氷の中では、これら3配位の水O...O間の収縮は起こりにくいが、氷の中のプロトン移動は水の中よりも速いことがしられている。実際計算してみると、氷の中ではプロトンのついた水分子は構造的には4配位している。しかしエネルギー的にはその1つの水素結合が強い斥力となっており3配位構造となっており、さらにその斥力によってその反対側のO...O間距離が短くなっており、これが氷の中のプロトン移動を容易にしている原因であることを見つけた。2.水素結合ネットワークの構造変化に伴う、水分子の集団運動と1/fタイプの揺らぎ、またそれらが実験として如何に超高速次非線型分光に反映されるか、を理論的に検証した。3.液体におけるポテンシャルエネルギー面は、Fragile Liquidの性質を持ち、その上での系の運動はSluggishである。従って温度が下がればその様な乱れたゲル構造にトラップされアモルファス氷になるはずであるが、一般的な条件下では結晶氷に凍る。我々は大域的なポテンシャルエネルギー面の様相を調べることによって水が如何に最小エネルギー状態を見つけているかを明らかにした。其の結果、大域的には最低エネルギー状態に向かってポテンシャルエネルギー面が漏斗型をしているのが分かった。この様に最低エネルギー状態に向かうドライビングフォースがあり効率良く水の結晶化がおこる。ポテンシャルエネルギー面にはBottleneckがあり、ここで運動を止めることが出きればアモルファス氷を作ることができる。我々は液体の水また氷の中のプロトン移動の分子論的機構の解明、また超臨界水の反応性の起源について研究を行い、次のようなことを明らかにした。水中ではH_3O^+は3配位を好み、プロトンが3配位の水分子へ選択的に移動する。また、プロトンが移動する際、水分子のO-O間距離が短くなり、プロトンは最近接の2つの水分子と(H_5O_2^+)構造を形成しており、プロトン移動は、これらの水分子間の往復運動である。氷では、液体の水での結果と異なり、プロトンが結合距離から4配位の水分子へ付着している。配位する4つの水分子のうち1つの水分子との結合は非常に不安定であり、エネルギー的に配位を形成していない。
生徒・児童・幼児の心身の諸特性の解析とその具体的体育方法の改善に関する研究

昭和63年度は、対象幼稚園として4園を選定。各園とのラポートをとりつつ、次にような測定、調査(調査実数594名)を試みた。Iこころの機能に関するもの1精神発達検査(運動・探索・社会・生活習慣・言語)2田中B式検査IIからだの機能に関するもの1感覚能力テスト(1)調整力(感覚)テスト(とび越しくぐり回数・巧緻性;反復横とび・回数・敏捷性;ジグザグ走・秒・巧緻性;棒反応時・糎・反応時間)、(2)総合的運動感覚能力(一輪車テスト)。2運動量(歩度計による)テスト3運動内容(ビデオによる)分析(1)動作分析(88項目から10項目に集約)(2)自由遊びの特性【○!1】注意力・思い切りのよさ・持続性・判断の速さ・工夫・リーダーシップ・活動性など。(2)ゲーム性・安全性(対象・遊具・年令なみの遊びの程度など)III社家的生活背景に関する調査1あなたのお子さんについて2両親について3両親の意見について4家庭のことについて、など32項目。2子どもの精神発達上の特長について(母親のコメント)以上の調査・測定を昭和63年10月64年2月に亘り実施。3月以降、コンビューター処理のため、コーディング・プログラミング・パンチングなどの作業を進めつつあり、4月に入り、因子分析にとりかかる手筈になっている。なお、対家園は、都内公私幼稚園各1、郡部は姫路市と宇都宮市の郊外の幼稚園各1で、前者は年令別、後者は混成型のクラス編成で保育が行われている。(平成元年3月31日・記)昭和63年度は、対象幼稚園として4園を選定。(平成元年3月31日・記)
GVHDにおける多臓器線維化因子IL-26を標的とした抗線維化薬開発の基盤研究

IL-26による多臓器線維化の分子メカニズムの解明:ア)正常ヒト初代培養細胞を用いたIL-26による線維化カスケードの解明IL-26による皮膚以外の臓器におけるコラーゲン産生の誘導・維持メカニズムを、まずin vitroで解明した。IL-26受容体を発現している種々の正常ヒト初代培養細胞に遺伝子組換えIL-26を添加し線維化関連遺伝子や筋線維芽細胞への形質転換マーカーの発現をリアルタイムPCR、ウエスタン解析を行った。イ)モデル動物を用いたIL-26による線維化カスケードの解明上記ア)で明らかにしたIL-26による多臓器線維化ネットワークループを疾患モデルでの実証実験を行った。IL-26はマウスに存在しないため、これまで疾患モデルによるIL-26と病態の詳細が不明であったが、われわれが樹立したhIL26Tgマウス及びヒト免疫化マウスによりモデル動物でのIL-26の解析が可能となった。そこで、慢性炎症性臓器線維症モデルとして骨髄移植(BMT)後慢性GVHDモデル(hIL26TgあるいはベクターコントロールTgマウスの骨髄・脾臓T細胞B10.BRマウスに移植するMHC完全ミスマッチBMTモデル、同様にレシピエントがB6D2F1のMHCマイナーミスマッチモデル)を利用した。各臓器(皮膚、肺、肝、腎)の炎症・線維化を病理組織学的に解析した。また、組織や血清のIL-26レベルを解析した。同様に、ヒト免疫化慢性GVHDモデルにおいても、GVHDを発症しないT細胞除去ヒト臍帯血幹細胞のみを移植したヒト免疫化コントロールマウスと比較解析した。研究計画に則って順調に実験が進み、データ解析を実施している。ア)前年度に明らかにしたIL-26による多臓器線維化ネットワークループを疾患モデルで実証する。そこで、慢性炎症性臓器線維症モデルとして骨髄移植(BMT)後慢性GVHDモデル(hIL26TgあるいはベクターコントロールTgマウスの骨髄・脾臓T細胞をB10.BRマウスに移植するMHC完全ミスマッチBMTモデル、同様にレシピエントがB6D2F1のMHCマイナーミスマッチモデル)を利用する。各臓器(皮膚、肺、肝、腎)の炎症・線維化を病理組織学的に解析するまた、組織や血清のIL-26レベルを解析する。同様に、ヒト免疫化慢性GVHDモデルにおいても、GVHDを発症しないT細胞除去ヒト臍帯血幹細胞のみを移植したヒト免疫化コントロールマウスと比較解析する。イ)モデル動物によるIL-26を標的とした抗線維化療法の開発(1)IL-26単クローン抗体による抗線維化効果の証明応募者が樹立した中和抗体IL-26mAbにより多臓器の線維化の制御が可能であることをモデル動物で実証する。このために、上記1と同じ線維化モデル動物に対してIL-26mAbを投与する。すなわち、処置前に投与して線維化を予防できることを、また、線維症発症後に投与し線維化を可逆的に制御できることを実証し、予防的投与及び治療的投与における至適な投与量・投与スケジュールを決定する。IL-26mAb投与による免疫系への影響を検討する(上記(1)の投与マウスにおて)。さらに、抗腫瘍免疫能への影響を調べる。

IL-26はマウスに存在しないため、これまで疾患モデルによるIL-26と病態の詳細が不明であったが、われわれが樹立したhIL26Tgマウス及びヒト免疫化マウスによりモデル動物でのIL-26の解析が可能となった。そこで、慢性炎症性臓器線維症モデルとして骨髄移植(BMT)後慢性GVHDモデル(hIL26TgあるいはベクターコントロールTgマウスの骨髄・脾臓T細胞をB10.BRマウスに移植するMHC完全ミスマッチBMTモデル、同様にレシピエントがB6D2F1のMHCマイナーミスマッチモデル)を利用する。各臓器(皮膚、肺、肝、腎)の炎症・線維化を病理組織学的に解析するまた、組織や血清のIL-26レベルを解析する。同様に、ヒト免疫化慢性GVHDモデルにおいても、GVHDを発症しないT細胞除去ヒト臍帯血幹細胞のみを移植したヒト免疫化コントロールマウスと比較解析する。イ)モデル動物によるIL-26を標的とした抗線維化療法の開発(1)IL-26単クローン抗体による抗線維化効果の証明応募者が樹立した中和抗体IL-26mAbにより多臓器の線維化の制御が可能であることをモデル動物で実証する。このために、上記1と同じ線維化モデル動物に対してIL-26mAbを投与する。すなわち、処置前に投与して線維化を予防できることを、また、線維症発症後に投与し線維化を可逆的に制御できることを実証し、予防的投与及び治療的投与における至適な投与量・投与スケジュールを決定する。IL-26mAb投与による免疫系への影響を検討する(上記(1)の投与マウスにおて)。さらに、抗腫瘍免疫能への影響を調べる。
Arylhydrocarbon receptor の細胞内機能の解析

1.免疫染色によるAh receptor細胞内局在の解析我々はAh receptorの細胞内局在を制御しているシグナル配列を決定するため、この配列を含む短いペプチド配列とGST-GFPとの融合タンパクを用いて解析をおこなってきた。本年度は細胞に発現させた全長AhRの局在様式を解析する為、Hisタグを融合したAhRの細胞内局在を、蛍光抗体による細胞染色で調べた。マウスHepa1c1c7細胞でHis-AhRを一過性に発現させた。コントロール細胞で主に細胞質に局在したのに対し、AhRリガンドであるメチルコランスレン(MC)処理すると核に局在した。一方、核外移行を阻害するレプトマイシンで処理によっても核局在が観察された。これらより、全長のAhRタンパク質についても核ー細胞質間を往復していることが示された。2.細胞内シグナル伝達系によるAhRの活性調節AhRの活性は細胞に内在するリガンドによって調節されていると考えられるが、ステロイドホルモン受容体や他の核内受容体で観察されているように、リン酸化などを介したシグナル伝達経路によっても制御されている可能性がある。そこで、細胞内シグナル伝達に重要な役割をもつRasタンパク質のAhR活性への影響を、AhR/ARNTが認識するXRE配列およびCYP1A1の5 '上流領域を連結したLuciferase発現プラスミドを用いて検討した。Hepa1c1c7細胞に活性化型Rasを遺伝子導入し、さらに細胞をMC処理すると、それぞれ単独処理と比べて高いLuciferase活性が検出された。このことはwestern blotにより検出されたCYP1A1タンパク質量によっても再現された。これらの結果から、AhR/ARNTによる転写調節機能はRasのシグナル系によって調節を受けることが示唆された。arylhydrocarbon receptor(AhR)は、細胞内でダイオキシンの受容体として機能するリガンド依存性転写因子であり、リガンド結合により活性化されたAhRは細胞質から核へ移行する。AhRには活性のあるNLS(核移行シグナル)およびNES(核外移行シグナル)が存在し、核-細胞質間を往復するシャトル蛋白として機能する可能性があることを既に報告した。今年度はGFPとの融合蛋白を多核細胞の核に注入することによりシャトルしていることの証明を試みた。AhRのNLS.NESを含むAhR(13-75)をGST-GFPのリンカー部位に連結した融合蛋白質を大腸菌で発現させた。これをSendai virusで多核にしたBHK細胞の細胞質に注入すると、全ての核に分布した。また1つの核に注入して一定時間保温後に観察すると、全ての核に融合蛋白質は分布していた。しかしながら、コントロールとして用いたBSAは注入部位にのみ認められた。これらよりAhRはシャトル蛋白であることが証明された。AhRの核外移行はレプタマイシンB(LMB)で完全に阻害され、NESレセプターとしてCRM1の関与が示唆された。野生型Hepa-1細胞でのCYP1A1の転写活性はAhRのリガンドである3-メチルコランスレンで誘導される。しかしながらLMB処理された細胞では誘導的発現が阻害された。またAhRが発現していないHepa-1c12細胞に野生型AhRとNES変異型AhRをトランスフェクトしてCYP1A1の転写活性を調べたところ、転写活性は野生型の方が高かった。従ってAhRの核外移行は標的遺伝子CYP1A1の発現維持に関与することが示唆された。
次世代型ウシ飼養システムの創造:初期成長期の代謝インプリンティング機構の解明

本研究では、黒毛和牛において初期成長期の異なる栄養処理による体質制御効果について、分子生物学的、形態学的および生理学的に時系列的な変化を解析した。黒毛和牛の哺乳期および育成期に高栄養処理をすることで、その後20ヵ月間粗飼料(国内草資源)のみで肥育した。黒毛和牛において、初期成長期の高栄養処理による代謝インプリンティングが、粗飼料のみで肥育した場合に、その産肉量と肉質に著しい影響を及ぼすこと、およびその骨格筋における分子生物学的、形態学的および生理学的な時系列変化を明らかとした。平成20年度は草資源で良質かつ安全な牛肉を生産するシステム構築のためのウシの体質形成プログラムの検討を行った。給与飼料についてまず、初期成長期を代用乳(インプリンティングに使用するミルクは全酪連への特注によるタンパク質と脂肪分、エネルギーをそれぞれ強化したミルクを使用予定)し濃厚飼料を用いた穀類多給区と代用乳(通常市販ミルク)と粗飼料を用いた粗飼料多給区の2群に分け、これらの飼養環境における影響を解析した。量的にも哺乳ロボットを用いることで、飽食にした。ニードルバイオプシーおよびショットバイオプシーにより微量筋サンプルをロース芯(胸最長筋)より採取し、体質制御における肉質関連の候補遺伝子群の発現を調査し、特に脂肪形成因子群で初期成長期の栄養処理の影響が出ることが明らかとなった。また、和牛の体質制御におけるDNAチップを用いたゲノムワイドな遺伝子の網羅的発現解析による代謝インプリンティング機構関連因子の探索も行い、いくつの代謝に影響を与えるpathwayが見つかっている。これらの解析によって初期成長期の和牛の代謝インプリンティングによる体質制御機構に関連した遺伝子のプロファイル、単離、それらの相互作用、発現動態を明らかにする予定である。平成21年度は草資源で良質かつ安全な牛肉を生産するシステム構築のためのウシの体質形成プログラとその後の粗飼料による肥育時の検討を行った。給与飼料についてまず、初期成長期を代用乳(インプリンティングに使用するミルクは全酪連への特注によるタンパク質と脂肪分、エネルギーをそれぞれ強化したミルクを使用予定)し濃厚飼料を用いた穀類多給区と代用乳(通常市販ミルク)と粗飼料を用いた粗飼料多給区の2群に分け、10カ月齢以降は、乾草飽食と放牧肥育の組み合わせによる粗飼料で肥育した。これらの飼養環境における初期成長期の栄養の影響を解析した。ニードルバイオプシーおよびショットバイオプシーにより微量筋サンプルをロース芯(胸最長筋)より採取し、体質制御における肉質関連の候補遺伝子群の発現を調査し、特に10カ月齢時には、脂肪形成因子群で初期成長期の栄養処理の影響が出ることが明らかとなった。しかし、粗飼料肥育期に入るとそれら遺伝子群の発現は減少することがあきらとなった。これらを全ポイントで行う予定で、随時データがでているが、情報量が膨大で、解析には時間が要している。また、DNAメチル化の網羅的解析について、チップを一部のサンプルを用いて行った。これらの解析によって初期成長期の和牛の代謝インプリンティングによる体質制御機構に関連した遺伝子のプロファイル、単離、それらの相互作用、発現動態が明らかになりつつある。平成22年度は草資源で良質かつ安全な牛肉を生産するシステム構築のためのウシの体質形成プログラとその後の粗飼料による肥育時の検討を行った。哺乳期の高タンパク質、高脂肪乳の強化哺乳と育成期の強化飼養の代謝インプリンティング効果が、より効率的な放牧肥育に影響するかどうかについて、最終的な肉質も含めて検討した。その結果、産肉性において枝肉重量で約14%以上の増加(インプリング区293kg、粗飼料のみ区256kg)、および肉質において筋内脂肪含量40%以上の増加((インプリング区13%、粗飼料のみ区9%)が認められた。肥育終了時における胸最長筋の筋線維型構成に両区間で差異はなかったものの、そのサイズはインプリング区で有意に大きかった。また筋内脂肪細胞のサイズもインプリング区で有意に大きくなっていた。すなわち代謝インプリンティングを施した牛群で産肉性に優れ、その肉質、特に脂肪交雑も有意に向上することが示唆された。ルーメン液の解析により、ルーメン内プロピオン酸生成加速効果が認められた。また、3、10、14、20および30カ月齢時にバイオプシーによって採取した筋サンプルを用いて、既知の肉量および肉質関連遺伝子群だけでなく、ウシDNAチップ解析および(ヒトではあるが)メチル化チップを用いて網羅的な遺伝子群の相互作用あるいは新規遺伝子の探索解析を行った。その結果、初期成長期の栄養処理によりメチル化動態に差異があることが明らかとなった。

また、リアルタイムPCR解析とDNAチップ解析により、反芻獣の体質の代謝インプリンティングについて、当初、仮説していた脂肪代謝よりもグルコース代謝がより影響を受ける可能性を示す結果が得られた。以上、代謝インプリング効果と国内粗飼料をフルに活用した新規家畜飼養への応用についての基礎的知見を得た。
低分子量G蛋白質Rap1によるVE-Cadherin活性制御機構の解明

血管内皮特異的細胞間接着分子VE-Cadherin (Vascular Endothelial Cell Cadherin)はアドヘレンスジャンクションの形成を介して血管のバリヤー機能を厳密に制御している。最近、我々は低分子量GTP結合タンパク質Rap1がVE-Cadherin接着を制御していることを明らかにした。平成18年度はその分子メカニズムについてさらに解析を行い、以下のような結果を得た。(1)Rap1によるアクチン細胞骨格系制御を介したVE-cadherin接着制御メカニズムサイクリックAMPによるVE-cadherin接着亢進メカニズムについて解析した結果、サイクリックAMPはRap1を介して細胞間接着部位でアクチン線維の束化を引起こすことが分かった。また、このアクチン線維はVE-cadherinの細胞間接着部位における安定化に寄与しており、これによりVE-cadherin接着が増強されることが示された。(2)Rap1によるVE-cadherinの細胞内輸送制御機構の解析EGTAにより細胞外カルシウムを除去しVE-cadherin接着を破壊すると、その一部はエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれ、初期エンドゾームやリサイクリングエンドゾームに局在することが分かった。また、細胞外へのカルシウムを添加によってVE-cadherin接着を再形成させると、エンドゾームに局在していたVE-cadherinが細胞間接着部位へ輸送されたが、この効果はRap1の活性化によって促進されることが分かった。このことから、Rap1はVE-cadherinのエンドゾームから細胞間接着部位への輸送に関与している可能性が示唆された。(3)部位および刺激依存的にRap1を活性化するシステムの開発FRB (rapamycin binding domain of mTOR)とFKBP (FK506-binding protein)はrapamycin依存的に会合する分子である。今回この現象を利用して、Rap1活性を時・空間的に制御可能なシステムを開発した。具体的には、細胞にFKBPにRap1の活性化因子(C3G、Epacなど)の触媒領域を融合した分子、および膜移行シグナルを付加したFRBを発現させ、rapamycinで刺激した。その結果、細胞膜でrapamycin刺激依存的なRap1の活性化が観察された。今後、細胞の様々な部位に局在するRFBを作製し、Rap1によるVE-cadherin接着の制御機構を詳細に解析していく。平成17年度はその分子メカニズムについてさらに解析を行い、以下のような結果を得た。(1)VE-cadherin接着によるRap1の活性化機構とその細胞間接着における役割Rap1活性化モニターリングプローブを用いて血管内皮細胞におけるRap1の活性化の可視化を試みた。その結果、細胞間接着部位でRap1が活性化されることが分かった。この細胞間接着によるRap1の活性化はVE-cadherin接着に依存すること、またそのメカニズムとしてVE-cadherinがβ-cateninとアダプター分子MAGI-1を介してRap1グアニンヌクレオチド交換因子PDZ-GEFを細胞間接着部位にリクルートしRap1の活性化を惹起することを明らかにした。さらに、このRap1の活性化はVE-cadherin接着をさらに増強し、成熟したアドヘレンスジャンクションの形成に重要であることを示した。(2)心筋細胞におけるサイクリックAMP (cAMP)によるN-cadherin接着およびgapjunction形成機構我々は心筋細胞についても解析を行い、cAMPがEpac-Rap1シグナル伝達系を介してN-cadherin接着を亢進することを明らかにした。また、それによってconnexin-43が細胞間接着部位にリクルートされ、Gap junctionの形成が亢進することがわかった。(3)Rap1によるVE-cadherin接着亢進メカニズムの解析血管内皮細胞においてRap1の活性化は細胞間接着部位でアクチン重合を惹起すること、またこのアクチン重合が細胞間接着部位でVE-cadherinを安定化させ、これによりVE-cadherin接着が増強されることが分かった。さらに、Rap1の活性化がエンドゾームから細胞間接着部位へのVE-cadherin分子の輸送を制御している可能性を示唆するデータも得ている。

(2)Rap1によるVE-cadherinの細胞内輸送制御機構の解析EGTAにより細胞外カルシウムを除去しVE-cadherin接着を破壊すると、その一部はエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれ、初期エンドゾームやリサイクリングエンドゾームに局在することが分かった。また、細胞外へのカルシウムを添加によってVE-cadherin接着を再形成させると、エンドゾームに局在していたVE-cadherinが細胞間接着部位へ輸送されたが、この効果はRap1の活性化によって促進されることが分かった。このことから、Rap1はVE-cadherinのエンドゾームから細胞間接着部位への輸送に関与している可能性が示唆された。(3)部位および刺激依存的にRap1を活性化するシステムの開発
肝癌の血管新生に関する病理学的検討

平成13年度研究において3cm以下の肝癌における悪性度を判定する病理組織学的パラメーターを検索し、肝癌の癌組織内での腫瘍マーカーであるAFP(アルファプロテイン)の発現が指標となることを明らかにした。悪性度を検索した理由として肝癌は切除後に高率に再発してくるが、多中心生発生を来す症例も多く、単純に生存期間の比較だけでは悪性度の判定が困難であるからである。平成14年度は肝細胞癌の悪性度に更に注目して検討し、肝癌の肉眼形態と転移巣との関連を検討し、肉眼形態により門脈侵襲や肝内転移頻度が異なることを明らかにした。平成15年度は血管新生因子angiopoietin、Tie 2(angiopoietin receptor)の発現に関して検討を行った。対象は3cm以下肝癌46例である。分化度は高分化型6例、高分化型癌組織を内包する中分化型肝癌10例、ほぼ均一な中分化型30例である。腫瘍径は22.6±5.6mm SDであった。Angiopoietinは46例中18例(39.1%),Tie 2は27例(58.7%)に発現が見られた。Angiopoietinの発現とTie 2の発現には相関関係は見られた。またangniopoietn及びTie 2の高発現は中分化型肝癌に多く見られた。肝癌は高分化癌組織と発生し脱分化により動脈血流の豊富な中分化癌組織が主体を占めるようになり転移を来すとされていることからは、angiopoietin-Tie 2経路がその血管新生のプロセスの一翼をになっていることが伺われた。しかし細動脈との有意な相関が見られなかったことは、同じ動脈血流の豊富な中分化癌組織でも血管新生に関してはVEGFやinterleukin-8等の種々の因子が関与しているものと思われた。今後は特にangiopoietin高発現例の臨床的な特長を明らかにしたい。当教室における3cm以下肝癌切除例114例における細動脈数のカウントを行っている。しかし近年の画像診断の進歩により、CTでもhelical CTmulti slice CT、超音波検査もCO2USレボビスト静注超音波等多数の機種がでており画一化的な検討がなかなか困難な状態であり、現在14例のみ通常の肝細胞がんの細動脈数と画像所見との対比を行った。組織分化度は総べて中分化型肝癌で、血行動態が異なっている事が報告されている高分化の肝癌は含まれていない。この画像診断は通常のCTを使用したもので、そのCTと細動脈数との対比では早期濃染を示す症例における細動脈数はそうでないものに比較して多い傾向にあるが、細動脈数が多い症例でも早期濃染の程度が乏しいものもあり、造影剤注入と撮影タイミングのずれによるものが示唆され、今だ多数例でのより客観的な評価ができておらず、来年度はこの点の改善を行う。次に本研究では同じ3cm以下の通常型肝癌における細動脈の発達と悪性度との比較が重要なポイントである為、悪性度を判定する病理組織学的パラメーターを検索した。この理由は肝癌は切除後に高率に再発してくるが、多中心生発生を来す症例も多く、単純に生存期間の比較だけでは悪性度の判定が困難であるからである。肝癌の腫瘍マーカーや肝癌の肉眼型が悪性度のマーカーとなりうるという臨床的な報告があり、これらの点について病理学的に検討した。68例の3cm以下肝癌におけるAFP, PIVKA-IIの発現を検討し特にAFPを産生する肝癌は、産生しないものに比較して悪性度が高く、PIVKA-IIではそのような傾向は見られないことを報告した。また現時点では肝癌の肉眼型と門脈侵襲及び肝内転移と相関することを検討している。平成13年度研究において肝癌の癌組織内での腫瘍マーカーであるAFP(アルファプロテイン)の発現が悪性度の指標となることを明らかにした。平成14年度は肝細胞癌の悪性度に更に注目して検討した。肝癌は治療後に高率に再発してくるが、その再発形式としては新たな発癌による多中心性発癌と、初発の肝癌の転移再発つまり治療時は検出困難であった微少な転移巣からの再発という2つが考えられている。この内肝癌患者の予後を不良にしている因子は転移再発とされている。この転移再発を初発時の肝癌切除組織から推察することが可能であれば、非常に貴重な悪性度の評価と考えられる。そこで今回は肝内転移巣と肝癌の肉眼型との関連に注目して検討した。原発性肝癌の肉眼分類(境界不明瞭型、単結節型、単結節周囲増殖型、多結節癒合型)に準じて当科における3cm以下肝癌切除例209例における肝内転移を含めた病理組織学的パラメーターを検討した。その結果早期の肝癌肉眼型と考えられる境界不明瞭型には門脈侵襲や肝内転移は確認されず従来の報告を裏づけるものであった。一方他の3型においては腫瘍径や組織分化度には有意差は見られなかったが、門脈侵襲や肝内転移の頻度に単結節型とその他の2型(単結節周囲増殖型、多結節癒合型)の間に有意差があることが確認された。そこで209例の内肝内転移が見られた22例の転移巣(149結節)を微細に検討した。

その結果肝内転移巣の約60%は5mm以下と現時点での画像診断で検出困難な結節径であり、肉眼型によって原発巣から転移巣への距離も異なる事が示唆された。これらのことから実際の肝癌の画像診断で血流評価とともに肝癌の肉眼型の評価が極めて重要であることを明らかにした。平成13年度研究において3cm以下の肝癌における悪性度を判定する病理組織学的パラメーターを検索し、肝癌の癌組織内での腫瘍マーカーであるAFP(アルファプロテイン)の発現が指標となることを明らかにした。悪性度を検索した理由として肝癌は切除後に高率に再発してくるが、多中心生発生を来す症例も多く、単純に生存期間の比較だけでは悪性度の判定が困難であるからである。平成14年度は肝細胞癌の悪性度に更に注目して検討し、肝癌の肉眼形態と転移巣との関連を検討し、肉眼形態により門脈侵襲や肝内転移頻度が異なることを明らかにした。平成15年度は血管新生因子angiopoietin、Tie 2(angiopoietin receptor)の発現に関して検討を行った。対象は3cm以下肝癌46例である。分化度は高分化型6例、高分化型癌組織を内包する中分化型肝癌10例、ほぼ均一な中分化型30例である。腫瘍径は22.6±5.6mm SDであった。Angiopoietinは46例中18例(39.1%),Tie 2は27例(58.7%)に発現が見られた。Angiopoietinの発現とTie 2の発現には相関関係は見られた。またangniopoietn及びTie 2の高発現は中分化型肝癌に多く見られた。肝癌は高分化癌組織と発生し脱分化により動脈血流の豊富な中分化癌組織が主体を占めるようになり転移を来すとされていることからは、angiopoietin-Tie 2経路がその血管新生のプロセスの一翼をになっていることが伺われた。しかし細動脈との有意な相関が見られなかったことは、同じ動脈血流の豊富な中分化癌組織でも血管新生に関してはVEGFやinterleukin-8等の種々の因子が関与しているものと思われた。今後は特にangiopoietin高発現例の臨床的な特長を明らかにしたい。
河川流域のネットワーク構造に着目した環境インパクトの水系伝播モデルの構築

持続可能社会のためには,社会と自然との共生,健全な物質循環,人間活動の低炭素化などを実現させる必要がある.本研究では,流域を地域の基本構成単位として捉え,内部エネルギーや流量など自然環境インパクトが河川流域を伝播する機構を明らかにし,流域圏社会の再生に資する環境解析手法を構築した.まず,揖保川流域の水温観測と解析に基づいて河川水系の水温分布が再現され,環境因子としての水温形成機構と流域内の伝播特性が明らかにされた.次に,生態系を規定する河床材料,社会経済活動を反映する土地利用や人口,水資源賦存量などの社会・自然環境因の分布構造が流域ネットワークを規定する地理情報パラメータによって記述され,流域内の自然共生度や環境平衡性を定量解析するための方法論が構築された.さらに,将来の気候変動が流域環境におよぼす影響を予測するために,IPCCシナリオに基づく水温予測解析を実施した.流域で展開されるその他の社会・自然環境因子におよぼす気候変動の影響に関しても,本研究で確立された解析手法を適用し得ると考える.気候変動にともなう水温解析は連続観測を実施する揖保川水系に限定されるが,地理情報に基づく流域環境因子の解析に関しては全国109の一級水系を対象として解析しており,社会環境要素としての土地利用・人口と自然要素としての流域地形特性との間に非常に明確な相関関係が見出された.本研究によって,水系毎の社会経済活動や自然環境の分布構造が解明され,統合流域環境管理を実現するために必要な環境情報の分析手法が確立された.本研究の成果を国土経営政策に反映することによって,環境平衡を実現させるための流域圏の人間活動展開のあり方や地域再生・国土グランドデザインのための持続可能な社会発展の方向性が議論し得ると考えられる.本研究では,地域社会と自然環境を規定する地理的ユニットして河川流域を捉え,そこで展開される自然環境と共生した流域圏社会の形成手法開発を目標とする.本課題ではまず,河川流域のネットワーク構造を考慮して,自然環境に負荷されるインパクトが時空間的にどのように伝播・拡散するかを河川水温観測と熱収支解析によって検討した.流域全域の水温連続観測を揖保川で実施し,環境諸因子の構造と流域地形との相関性を明らかにするとともに,流域全域の水温勾配を再現し,その形成機構・インパクトの伝搬特性を明らかにした.さらに,河道ネットワークにおける水質・生態系など水環境を規定する重要な環境因子として河床材料に着目し,河川地形パラメータを説明変数とする河床材料の水系内分布特性を実証的に明らかにした.その一方で,自然共生型流域圏の形成要件として,自然環境因子と社会活動の流域内分布特性およびそれらの相関性に着目した研究を実施した.社会活動は自然環境と調和して展開されるべきであり,この考えに基づけば,河川水温や河道地形など流域の自然環境構造は共生型流域圏形成のための有力な指標となる.全国109の一級水系について,社会環境要素としての土地利用・人口と自然要素としての流域地形特性との相関関係を明らかにした.水系毎に「社会活動-自然環境」構成比が明らかになり,自然共生型の流域圏として形成されるべき地域構造の分析方法が確立された.さらに,主成分分析に基づいて109水系の自然共生度を判別した.以上の成果は,自然共生型流域圏における社会活動の適正配置など地域・国土のグランドデザインに反映し得る基礎的知見を提供するものと考える.持続可能社会のためには,社会と自然との共生,健全な物質循環,人間活動の低炭素化などを実現させる必要がある.本研究では,流域を地域の基本構成単位として捉え,内部エネルギーや流量など自然環境インパクトが河川流域を伝播する機構を明らかにし,流域圏社会の再生に資する環境解析手法を構築した.まず,揖保川流域の水温観測と解析に基づいて河川水系の水温分布が再現され,環境因子としての水温形成機構と流域内の伝播特性が明らかにされた.次に,生態系を規定する河床材料,社会経済活動を反映する土地利用や人口,水資源賦存量などの社会・自然環境因の分布構造が流域ネットワークを規定する地理情報パラメータによって記述され,流域内の自然共生度や環境平衡性を定量解析するための方法論が構築された.さらに,将来の気候変動が流域環境におよぼす影響を予測するために,IPCCシナリオに基づく水温予測解析を実施した.流域で展開されるその他の社会・自然環境因子におよぼす気候変動の影響に関しても,本研究で確立された解析手法を適用し得ると考える.気候変動にともなう水温解析は連続観測を実施する揖保川水系に限定されるが,地理情報に基づく流域環境因子の解析に関しては全国109の一級水系を対象として解析しており,社会環境要素としての土地利用・人口と自然要素としての流域地形特性との間に非常に明確な相関関係が見出された.本研究によって,水系毎の社会経済活動や自然環境の分布構造が解明され,統合流域環境管理を実現するために必要な環境情報の分析手法が確立された.本研究の成果を国土経営政策に反映することによって,環境平衡を実現させるための流域圏の人間活動展開のあり方や地域再生・国土グランドデザインのための持続可能な社会発展の方向性が議論し得ると考えられる.
近世社会における士庶混淆と武士の威厳に関する基礎的研究

日本の近世社会では、日常生活を送る上での一齣一齣が互いの身分格式を表しており、日常的な秩序維持の装置である様々な生活規制が張り巡らされ、互いの身分格式を確認するかの如き相互行為の繰り返しによって上下の秩序が保たれていた。しかるに、18世紀後半以降の仙台藩では、武士と庶民の身分的・社会的な混淆状況が見られるようになり、その結果、身分秩序の紊乱と武士の威厳の低下現象が惹起されてしまう。本研究は、こうした様相が個別藩レベルに止まる固有の問題なのかどうかを列島規模で確認することを目指すものであり、武士たちが置かれた社会的状況の変化と百姓・町人らが武士を見る眼差しの変化について探ろうとするものである。
伝統的民家における外観保存と内部空間整備の整合性に関する調査研究

外観保存は伝統的民家の保存において重要な手法のひとつであるが、近年、内部空間との関わりからの問題点が指摘されるようになった。本研究は重要伝統的建造物群保存地区(以下、「重伝建地区」とする)を中心に、伝統的民家の外観保存の実際を調査し、伝統的な外観の保存と内部空間整備の整合性に関する問題点を明らかにし、さらには復原的考証とその妥当性、内部空間整備のための外観改変の妥当性など、今後の指針となるようなオーセンティックなプロセスを提案しようとするものである。第1年度は、全国の重伝建地区を対象にアンケート調査と補助金交付要項の分析を行い、通りに面した第1室に対する指導や助成を行っている地区がわずかながら見られたが、ほとんどの地区では、外観保存において内部空間整備との整合をはかるシステムがないことなど、実際の修理・修景事業における外観保存の問題点を明らかにした。この研究結果を第1章、第2章にまとめている。また、長野県楢川村の奈良井伝統的建造物群保存地区における鎮神社の祭礼調査を行い、祭礼時に町家の空間的特性を生かした演出が行われていることを明らかにした。第2年度は、奈良井伝建地区において、重伝建地区選定時から現在までの景観変遷の分析を行い、修理修景事業が、本来の伝統的景観ではない「宿場町らしい」景観をつくりだしてきたこと明らかにし、また、全戸に対するヒアリング調査から、祭礼時の空間利用が、修理修景事業における伝統的外観保存のモメントになっていることを明らかにした。これが第3章である。これらの結果をふまえ、今後は登録文化財や一般の民家における外観保存と内部空間整備の整合性について研究をすすめていきたい。これが第3章である。外観保存は伝統的民家の保存において重要な手法のひとつであるが、近年のその問題点、とくに内部空間との関わりからの問題点が指摘されるようになってきた。本研究は重要的伝統的建造物群(以下「重伝建地区」とする)を中心に、伝統的民家の会館保存の事例を調査し、伝統的外観保存と内部空間整備の整合性に関する問題点を明らかにし、さらには復原的考証とその妥当性、内部空間利用のための外観改変の妥当性の検討など、今後の指針となるようなオーセンティックなプロセスを提案しようとするものである。本年度の作業は次の2点である。まず、全国の重伝建地区にたいしてアンケート調査を行い、外観保存の実績、修理の方針について各地区の取り組みを明らかにした。その実態は内部空間整備と直接関わりのない形で外観保存を行っている地区がほとんどで、通りに面した1室について、復元の指導を行っている地区がわずかながらあった。また、補助金交付要綱の分析から、内部空間も修理の補助対象にしている地区が少ないことが問題であるといえる。次に長野県楢川村奈良井伝統的建造物群保存地区を対象に、地区内にある鎮神社の祭礼時における伝統的町家の空間利用と演出に関する調査を行った。そして、祭礼時に町家の空間的特性、とくに通りと内部空間の関係を上手く活用した演出が行われていることが明らかした。また、重伝建地区の修理・修景における改造と祭礼時の内部空間の利用に関係があることを明らかにした。

第1年度は、全国の重伝建地区を対象にアンケート調査と補助金交付要項の分析を行い、通りに面した第1室に対する指導や助成を行っている地区がわずかながら見られたが、ほとんどの地区では、外観保存において内部空間整備との整合をはかるシステムがないことなど、実際の修理・修景事業における外観保存の問題点を明らかにした。また、長野県楢川村の奈良井伝統的建造物群保存地区における鎮神社の祭礼調査を行い、祭礼時に町家の空間的特性を生かした演出が行われていることを明らかにした。第2年度は、奈良井伝建地区において、重伝建地区選定時から現在までの景観変遷の分析を行い、修理修景事業が、本来の伝統的景観ではない「宿場町らしい」景観をつくりだしてきたこと明らかにし、また、全戸に対するヒアリング調査から、祭礼時の空間利用が、修理修景事業における伝統的外観保存のモメントになっていることを明らかにした。