hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ミトコンドリア転写因子の老化への関与の分子遺伝学的研究

本研究では,mtDNAへのTFAMタンパク質の非特異的な結合が生体に及ぼす影響を明らかにすることにより,老化におけるTFAMの役割を考察することを目的としている。このために,ショウジョウバエとヒトのTfam遺伝子について,mtDNAとの特異的な結合に必要とされているC末端側32アミノ酸残基を欠く遺伝子を作成してショウジョウバエに導入し,GAL4-UAS遺伝子強制発現系を用いて発現させた。本年度は,ミトコンドリアの形態への影響について,さらに解析を進めた。(1)TFAMの過剰発現個体の胸部筋肉におけるミトコンドリアを,電子顕微鏡によって観察した。過剰なTFAMの存在下では,クリステや内膜の疎化,及びマトリクスの密度低下が引き起こされ,その程度は加齢が進むにつれて増大した。特に,生存率が大きく低下し始める12日齢頃からこの変化は顕著になり,電子顕微鏡写真におけるミトコンドリア領域での密度の差は,過剰発現個体とコントロール個体で有意であった。(2)胸部の筋肉組織においては,ミトコンドリアの形態と筋原繊維の状態に関連がみられた。形態が著しく変化したミトコンドリアに囲まれた筋原繊維や,周囲のミトコンドリアの数が極端に減少している筋原繊維では,その損傷の程度がひどく,サルコメア構造にも影響が及んでいることが示された。適正な量のTFAMタンパク質とmtDNAの結合が,ミトコンドリアの機能,ひいては個体の活動の維持にとって重要であることが,本研究の結果より示唆される。本研究で示されたようなミトコンドリアの構造の変化は,呼吸活性にも影響し,さらには,筋原繊維の保持にも重要であると考えられる。今後,過剰なTFAMの存在下におけるミトコンドリアの活性を確認するとともに,mtDNAの転写や複製への影響を明らかにすることは,ミトコンドリアと老化の関連の理解に大きく貢献するものと期待される。ショウジョウバエとヒトのそれぞれのTfam遺伝子について,mtDNAへのTFAMの特異的な結合に必要とされているC末端側25アミノ酸残基を欠く遺伝子(ΔC)を作成し,それらを挿入したショウジョウバエの系統と,さまざまなプロモーターをもつGAL4系統を交配させることによって,その子孫個体における挿入遺伝子の組織または時期特異的な発現を調節することができる。本年度は,(1)過剰なTfamの発現が個体の生存と寿命に及ぼす影響,および(2)ミトコンドリアの形態への影響,を明らかにすることを目指した。(1)GAL4系統のもつプロモーターにより,全細胞,および神経系,幼虫の翁肉系などの組織にTfamを発現させたところ,過剰な発現は致死を引き起こすことが示され,その効果は,ショウジョウバエのΔC-Tfamの場合の方が強かった。この発現をヒートショックで作動するプロモーターで調節した場合には,産卵後の発現であれば羽化に至ることから,TFAMは発生の過程で重要な役割も果たしていることが示唆された。また,過剰発現個体の寿命は,♀ではショウジョウバエのΔC-Tfamを用いた場合に極端に短くなっていたが,♂ではショウジョウバエ>ヒトの順に減少が大きくみられた。この性による差,生物種による差異については,さらに検討を進める必要がある。(2)ショウジョウバエでは,通常より膨大し内部のクリステが粗になったミトコンドリアの頻度が,老化するにつれて高まることを,すでに観察している。ΔC-Tfamの過剰発現個体では,若い個体のミトコンドリアの形態は正常なものと差はみられないが,最大寿命に近づいた個体では,クリステが断片化したように極端に構造が乱れたミトコンドリアがみられた。このような変化を起こしたミトコンドリアが増加することと寿命の短縮との関連を明らかにするため,今後はミトコンドリアの構造と活性の変化について,あわせて調べる予定である。

今後,過剰なTFAMの存在下におけるミトコンドリアの活性を確認するとともに,mtDNAの転写や複製への影響を明らかにすることは,ミトコンドリアと老化の関連の理解に大きく貢献するものと期待される。
エイズの総合的基礎研究.A05エイズの予防と治療に関する研究

エイズの発病予防剤、治療剤の開発・探索研究を行った。1.非中和抗体によるHIVー1の増殖抑制(上田重晴)HIVー1キャリア-の血友病患者血清、新たに作成したHIVー1(JMHー1株)のp24に対する単クロ-ン抗体3種とpNL432の発現p17に対する単クロ-ン抗体7種(gag1229の認識抗体3種、同5387の認識抗体1種、同87115の認議抗体3種)をそれぞれ10%にJMHー1感染細胞の培養液中に添加し、1夜培養することによって、患者血清と抗p24単クロ-ン抗体2種、抗p17単クロ-ン抗体4種が培養液中のJMHー1の感染価を90%抑制できることを見出した。2.抗HIV活性を有する抗生物質の発見(竹内富雄)放線菌や細菌などの土壌微生物を培養し、その培養ろ液中に含まれる微生物二次代謝産物の抗HIV活性を測定した。2124株のうち19株に活性を見出し、MI198ーfF29株(Streptomyces sp.)の産生する活性物質が既知のポリエ-テル抗生物質Alborixinであることを同定した。この結果から、新規に発見したKijimicinにも優れた抗HIV活性を見出した。また、Benanomicin関連物質11種の抗HIV活性を検討し、低毒性と強い抗真菌作用からBenanomicin Aにエイズ治療剤として期待をかけうる結果を得た。また、天然有機化合物としては初めての構造、DーβーLysineと直鎖のアルドアミナ-ル構造をもつDーβーLysylmethanediamineが抗HIV活性を示したことから新しい研究領域が示唆される結果となった。3.抗HIV活性を有する化学療法剤の検索(鶴尾隆)簡便で感度の高いアッセイ系を開発し、スクリ-ニングを行った結果600種類以上の化合物の中からcarbovirの誘導体である9ー(cー4,tー5ーdihydroxyーmethylcyclopentー2ーenーrー1ーyl)ー9Hーadenine(BCA)に比較的強い抗HIV活性のあることを見出した。
1,5-アンヒドロ-D-グルシトールを含む新奇脂質複合体の生化学的研究

グルコースの1-デオキシ体である1,5-アンヒドログルシトール(AG)はほ乳類の体液・組織に広く存在するポリオールである。まず、昨年度に、1)このポリオールのラット体内における分布を確かめた(その成果はJ.Biochem.に公表した)。ついで、2)肝癌由来培養細胞(H35)を用いて放射能ラベルしたAGの脂質分画、糖脂質分画、糖蛋白分画等への取り込みを調べ、最後に、3)グルコースからAGを生成する生合成反応を解析した。2)動物臓器からAGを含む複合体を前年度に引き続き検討したが、その存在量が極めて小量であり、特定生体物質の単離には至らなかった。我々はこの様な微量物質も生理学的には大きな役割を担っている可能性を考えている。そこで、[^<14>C]AGをもちいてH-35細胞による放射性AGの取り込み実験によりAGを含む生体物質の特定を試みた。外から与えたAGは脂質分画ばかりでなく、むしろ、複合糖質と思われる分画により多く取り込まれた。その取り込み物質の同定は今後の課題として残った。3)昨年度観察したH-35細胞によるAGの生合成を[U-^<13>C]グルコースから[U-^<13>C]AGの生成をGC/MSで分析することにより解析した。AG生合成には数時間におよぶ誘導時間が観測され、寿命の長い中間代謝物がAGの前駆体となっているのではないかと思われる。また、AGの生合成におけるグルコースに対するKmは解糖系の律速段階であるヘキソキナーゼのグルコースに対するKmよりはるかに大きくグルコースの血中濃度5mMよりも大きかった。そこで、解糖系には属さないグルコースの代謝物がAG生合成の前駆体であると思われる。この生合成に関する論文は準備中である。ラット肝臓100gより,BlighーDyerの方法を一部改良した方法にて脂質を抽出した.この脂質をIATORBEADSを充填したカラムによりいくつかの成分に分画した.そのうち1,5ーアンヒドログルシト-ル(AG)を多く含み,かつ夾雑物の比較的少ない画分について,Silicaー60を用いた順相HPLGによってさらに分画精製し、最も多くAGを含む画分について,chemical characterizationを行った.各段階でのAGの分析は,サンプルをFolch washによって分配し,その上層,下層を塩酸加水分解によりAGを遊離させた後に遊離AGを精製し,アセチル化の後にGC/MSを用いてそのAGを測定した.その結果以下の成果を得た.抽出された脂質のFolch下層に18.2ng/g tissue,上層に1.9ng/gtissue相当のAGが検出された.この下層の脂質をIATROBEADSにて分画すると,広範囲にわたってAGが分布したが,そのうちfraction6とfraction12のAG含量が高く,7.5ng/g tissue,9.4ng/g tissue相当で,それぞれの乾燥重量は9.7mg/g tissue,0.4mg/g tissueであった.より純度の高いfraction12付近を集め,Silicaー60にかけた。fraction12ー6と12ー7にAGが多く含まれたので,2つのfractionを集めてchemical characterizationを行った.対照であるphosphatidylーinositol(PI)と比較して,acetolysis,mild alkaline methanolysis処理に対する安定性が顕著に低く,AGは容易に遊離された。この結果よりAGはカルボン酸エステルを介して疎水性グル-プに結合しているものと思われる.粗脂質のFolch分配において上層にも1.9ng/gtissue相当のAGが存在するが,下層にその約10倍の18.2ng/g tissue相当のAGが存在しており,明確にAGー脂質複合体の存在が示された.この画分は主要成分のうち極性の最も高いと思われる部分を集めているので,肝臓中に多く含まれる成分の中にリン脂質がある可能性は低い.グルコースの1-デオキシ体である1,5-アンヒドログルシトール(AG)はほ乳類の体液・組織に広く存在するポリオールである。

また、AGの生合成におけるグルコースに対するKmは解糖系の律速段階であるヘキソキナーゼのグルコースに対するKmよりはるかに大きくグルコースの血中濃度5mMよりも大きかった。そこで、解糖系には属さないグルコースの代謝物がAG生合成の前駆体であると思われる。この生合成に関する論文は準備中である。
steel因子導入による肥満細胞症・色素性じん麻疹モデルマウスの作成とその解析

肥満細胞増殖因子として知られるsteel因子を皮膚に強制発現させることにより、肥満細胞症・色素性じん麻疹モデルマウスを作成し、以下の知見を得た。1)肥満細胞症の発症は分泌型のsteel因子を表皮基底細胞に発現させることで達成された。膜結合型steel因子のみでは、色素細胞の増殖は見られたが、肥満細胞は増殖しなかった。2)肥満細胞と同時に同じ部位で色素細胞も増加したので、肥満細胞症の中で最も頻発する色素性じん麻疹のモデルとして使える。3) steel因子の受容体(c-kit)に結合してsteel因子からシグナルを阻害する抗体の投与により、マスト細胞と色素細胞が消失したことから、それぞれの細胞はsteel因子に直接反応して増殖していることが示唆された。4)このモデルマウスは、炎症反応の立ち上がりが早く、また炎症反応がより強いことから、肥満細胞の炎症における役割を知るのにも適当なマウスであることがわかった。肥満細胞増殖因子として知られるsteel因子を皮膚に強制発現させたトランスジェニックマウスを作成し、以下のことを明らかにした。1,過去に我々の作成したマウスでは一例を除きトランスジェニックマウスは発育不全を呈し系統の維持が困難であったが、サイトケラチンプロモーターにマウスsteel因子を接続したDNAの濃度を5μg/mlから2μg/mlに下げることにより、生存可能なモデルマウスの作出に成功した。2,作成したマウスは、色素細胞が全身の皮膚で異常に増殖し、同所での肥満細胞の増加も観察されたので肥満細胞症・色素性じん麻疹症のモデルマウスとして適していると判断された。発生階段による肥満細胞の増殖部位・量の変化については現在研究中である。3,色素細胞については、全身の皮膚で、胎児16日以降に過剰な増殖が観察された。さらにトランスジェニックマウスでは、野性型では色素細胞が発生初期から存在していない部位にまで色素細胞が分布していたので、steel因子は色素細胞の生存・増殖・分化の他に移動を促進することが明示された。4,これらのトランスジェニックマウスの作成には膜貫通型、分泌型のsteel因子の両者を発現するDNAを用いている。膜結合型のsteel因子のみを発現するトランスジェニックマウスを新たに作成したところ、色素細胞の増殖はみられたが、肥満細胞の増加は認められなかった。従って、肥満細胞の増殖には少なくとも分泌型のsteel因子が必要であることが明らかになった。
モジュール性を有するニューロ進化に基づく創発デザインに関する研究

平成30年度の研究では,モジュラ性を有するニューロ進化の有用性を検証した.検証法としては,各種ベンチマーク問題に適用した進化の結果に関して階層的な繰り返し構造が得られるかを解析した.モジュラ性によって,ニューロ進化の時間的な発達過程で情報が再利用でき,新しい構造を展開できると期待される.それにより,従来の人工物設計に伴う困難さ(部分解から全体の解が適切に得られない点や環境の変化にロバストに適応できない点)を解決を試みた.この点に関して,具体的には(1)ヒューマノイドロボットの動作生成、(2)X線画像による危険物検知、(3)群ロボットによる協調搬送、の3つの項目について実験的に検証した。ヒューマノイドロボットの検証実験ではモジュラ性を有するニューロ進化の有用性を確認することができた。より詳しく言えば、従来困難とされていたバク転やローラーコースターでの滑り動作を遺伝子ネットワークに基づいて合成し、実機上で安定して動作することを検証できた。X線画像による危険物検知については、ニューロ進化にもとづいてペットボトル、ナイフ、はさみなどの危険物の検出率を従来手法から向上させることに成功した。これは自然画像で得られる訓練データでの学習結果をX線画像の認識に適応して学習させるという転転移学習の枠組に基づいている。ニューロ進化を転移先のドメインでの再学習に適用することでX線画像のような訓練例の少ない分野での画像認識を可能にする枠組を提案した。ロボティクスや危険物探知への応用を通じて,各種設計問題における工学的準最適化問題に適用することができた.とくに,モジュラ性の知能創発に基づく,1.学習後の部分解の再利用,2.学習結果からの知識抽出,3.ニューロ進化の構造を用いた依存関係推定,について実証的に検証し,提案手法の有効性について評価することができた.ロボティクスや危険物探知における実証的な検証を引き続き行う。そのほかに実際的な応用として,Webインテリジェンスの代表であるWWW情報検索の課題に対して検証を行う.さらに,リアルタイム性が要求される金融市場に対する戦略を,創発デザインに基づいて自動生成することを試みる.金融工学における実問題の解決のためには,価格変動の予測だけでは十分でない.より重要なのは,状況を的確に判断する戦略の獲得である.具体的には,過去の経験をもとにした売買タイミングの生成や,手持ち資金の制約に依存した運用ルールの構築が不可欠である.これは典型的な制約付き問題解決となっている.これらを通じて提案手法の頑強性,汎用性,効率性について評価する.一般に人工物の設計には数多くの変数と部分的な依存関係が存在するが,ニューラルネットや進化計算による実現ではそれらの間の因果関係を適切に推定する必要がある.たとえば最近では機械学習(転移学習やビリーフ・プロパゲーション)を応用した手法もいくつか提案されている.これらの手法はある程度有効ではあるが,状態数やカテゴリ数を事前に与える必要があり複雑な問題への適用は困難であった.こうしたことをふまえて,平成29年度の研究ではスケーラビリティを考慮しながら,複数の変数と部分構造の因果関係を的確に導出するノンパラメトリックな推定法や非線形力学に基づく解法の実現を試みた.このメカニズムの解明はモジュラ性を制御して,部分解から全体解を的確に導く性質の理論的基盤となる.具体的には,ニューロ進化の基本的なデータ構造であるグラフや木構造のような離散構造に対してディクリレ混合過程,ビリーフ・プロパゲーションなどの統計的学習・非線形力学系解析を利用して効果的に構造を生成するアルゴリズムを実現した.ディリクレ過程混合分布を用いてグラフ構造をクラスタリングする方法はすでに提案されており,研究代表者らは進化計算にもこの手法を適用している.これは生成モデルの混合分布を用いることでクラスタリングを行う手法である.この手法を応用することで,プログラム内の変数と部分構造に関する因果関係モデルに基づいて,プログラムのようなデータ構造のモジュラ性を推定・合成する方法を構築した.ニューラルネットワークのような構造のあるデータにおける依存関係についてのノンパラメトリックな推定手法を利用したモジュラ性の推定・再合成の枠組みの構築にある程度成功した.この方法は確率テーブルや条件付確率表などの明示的なパラメータを持たないという利点がある。そのため、創発デザインのためのニューロ進化の的確なモジュラ性の実現のための重要な一歩と考えられる。非線形力学の解析手法を適用することで,ニューロ進化の時間発展における構造の的確な分布推定の実現が期待される.さらに、ディリクレ過程混合分布を用いてグラフ構造をクラスタリングする方法を進化計算に応用した.これは生成モデルの混合分布を用いることでクラスタリングを行う手法である.この手法を応用することで,プログラム内の変数と部分構造に関する因果関係モデルに基づいて,プログラムのようなデータ構造のモジュラ性を推定・合成する方法が構築できた。ヒューマノイドロボットの検証

実験ではモジュラ性を有するニューロ進化の有用性を確認することができた。より詳しく言えば、従来困難とされていたバク転やローラーコースターでの滑り動作を遺伝子ネットワークに基づいて合成し、実機上で安定して動作することを検証できた。X線画像による危険物検知については、ニューロ進化にもとづいてペットボトル、ナイフ、はさみなどの危険物の検出率を従来手法から向上させることに成功した。これは自然画像で得られる訓練データでの学習結果をX線画像の認識に適応して学習させるという転転移学習の枠組に基づいている。ニューロ進化を転移先のドメインでの再学習に適用することでX線画像のような訓練例の少ない分野での画像認識を可能にする枠組を提案した。ロボティクスや危険物探知への応用を通じて,各種設計問題における工学的準最適化問題に適用することができた.とくに,モジュラ性の知能創発に基づく,1.学習後の部分解の再利用,2.学習結果からの知識抽出,3.ニューロ進化の構造を用いた依存関係推定,について実証的に検証し,提案手法の有効性について評価することができた.創発デザインのためのニューロ進化の的確なモジュラ性を検証し、提案手法をさまざま問題領域に応用し,知能創発の実現を実証する.実証的検証の第一ステップとして,複数・異種のロボット間の協調動作設計や行動計画に応用し,提案手法の有効性をより実際的な領域で検証する.想定するタスクは,与えられた条件を満たすロボットの動作やサービスロボットの誘導プランを効率的に設計するものである.実際の検証実験には,実機ロボットとロボットシミュレータ(OpenHRP, Webots)の使用を予定している.ロボティクスや危険物探知における実証的な検証を引き続き行う。そのほかに実際的な応用として,Webインテリジェンスの代表であるWWW情報検索の課題に対して検証を行う.さらに,リアルタイム性が要求される金融市場に対する戦略を,創発デザインに基づいて自動生成することを試みる.金融工学における実問題の解決のためには,価格変動の予測だけでは十分でない.より重要なのは,状況を的確に判断する戦略の獲得である.具体的には,過去の経験をもとにした売買タイミングの生成や,手持ち資金の制約に依存した運用ルールの構築が不可欠である.これは典型的な制約付き問題解決となっている.これらを通じて提案手法の頑強性,汎用性,効率性について評価する.
構造物の強風災害防止のための設計風速の予測に関する研究

1.任意地点に建設する構造物の設計風速を合理的に決定するために、地表風の性状に及ぼす地形および地表粗度の影響を、適確に評価する方法を確立する必要がある。その基礎資料を得る目的で、実験および解析を行った。(1)松本は各地の台風による卓越風向と台風中心位置との関係を明らかにした上で風洞実験を行い、山脈などの大地形が地表の風向風速に及ぼす影響を調べ、藤野、山田はより小さな地形を対象とした実験を行い、気象官署の風観測値の地形因子解析結果と合せ、主要な地形因子の抽出を試みた。(2)大熊、藤谷はそれぞれ市街地および平野部を対象とし、建物や地物の分布と地表境界層の性状との関係を明らかにするために風洞実験を行い、粗度の形状、配置が乱流境界層の発達に及ぼす影響等について新知見を得た。(3)田村は気象官署周辺の建物密度の経年変化を航空写真で調べ、気象官署の風観測値について、これに関する補正が必要であることを確認した。2.長大橋、高層ビル、鉄塔等の柔構造物の設計には、建設地点の地表の乱流特性を適確に推定する必要がある。これに関する資料の蓄積を目的として、市街地、山岳地および湾岸での強風観測とその解析を行った。(1)神田、岩谷は市街地強風を対象とし、東京都内の過去の観測記録の解析を行うとともに、新たに線上に4個所の観測点を設け、台風接近時の強風記録を得た。(2)光田は山岳地の高圧送電鉄塔を対象とし、700mの測線上の強風観測を行い、陵線をこえる強風の空間的特性について新知見を得た。(3)小林は湾岸に建設される長大橋を対象とした強風観測を行い、乱れの強さ、スケール、パワースペクトル等、橋梁の耐風設計に必要な資料を得た。
DNA修復系で働くDNAポリメラーゼXの分子機能・細胞機能解析

バクテリアのDNA修復において、DNAを合成する酵素であるDNAポリメラーゼX(PolX)が、一般的なDNAポリメラーゼとは異なる反応機構を持つことが分かった。DNAポリメラーゼは通常、DNAに結合した状態でDNAの材料であるヌクレオチドを取り込んで合成を進めるが、あるバクテリアPolXにおいては、先にヌクレオチドを結合しておき、その状態から"ヒットエンドラン"的にDNAと反応することが分かった。これは一見効率が悪そうだが、このPolXは塩基除去修復系というDNA修復系において、1塩基のDNAギャップを埋めるステップで働くと予想されるため、好都合であると考えられた。さらに、昨年度得られた結晶構造情報を利用することで、ヌクレオチドと強く結合するために重要なアミノ酸残基を同定した。また、バクテリアPolXのみが持つPHPドメインの機能はよく分かっていなかったが、塩基除去修復系で必要とされる2つの活性である、脱塩基部位を切断する活性と、プライマーの3'末端をブロックする構造を除去する活性があることが分かった。バクテリアにはすでにこの活性を持つEndoIVという酵素が存在することが知られているが、PolXのそれらの活性はEndoIVよりも低く、バックアップとして働いていると予想された。そこで、PolXとEndoIVの遺伝子を両方破壊した遺伝子破壊株を作製したところ、2つの遺伝子を破壊したときのみ、塩基除去修復系を誘導するようなストレスに対して非常に高い感受性を示したことから、PolXがEndoIVのバックアップであるという仮説が支持された。これらの結果から、バクテリアPolXは塩基除去修復系に特化した酵素であることが明らかとなった。本研究が、PolXの機能や塩基除去修復系の全容解明に貢献できると期待している。DNA修復に関わるDNAポリメラーゼX(PolX)はDNAを合成することで修復を助ける生物界全体に保存された酵素であるが、バクテリアのPolXは他とは異なり、DNAを合成する活性に加えて、DNAを切る活性も持っており、この活性はPHPドメインというアミノ酸単位が担うことが分かっている。このようなバクテリアPolXの分子機能を解明し、DNA修復についての理解を深めるため、立体構造解析を行った。既に得られていた基質であるヌクレオチドとの二者複合体の他に、プライマー/テンプレートDNAとヌクレオチドとの三者複合体、ギャップのあるDNAとヌクレオチドとの三者複合体を決定することに成功した。これらの立体構造を比較することで、バクテリアPolXは基質の結合に伴って大きな構造変化を起こす可能性が示唆された。また、DNAがなくてもヌクレオチドと強く結合することが他の実験からも示唆された。さらに、ギャップのあるDNAは、PolXが生体内で実際に働くと考えられている基質であり、実際の働きに近い形の立体構造から、バクテリアPolXも他のPolXと同様な形で修復合成を行うことが明らかになった。また、これまでバクテリアPolXのDNAを切る活性についての詳細は不明であったが、今回得られた立体構造の中に、PHPドメインがDNAに結合している様子を初めて観察できた。これらの立体構造をヒントとして実験を進めることで、PolXの分子機構の全容が解明できることを期待している。
両利きの経営を支援するマネジメント・コントロール・システム

本研究課題の目的は、両利きの経営を実現するために、マネジャーがどのようにマネジメント・コントロール・システム(MCS)を用いているのかを明らかにすることである。平成30年度は、平成29年度から引き続き、両利きの経営が実現されている、またはその実現を目指しており、そのためにMCSが用いられている企業を対象とした定性的調査を実施した。その概要は以下の通りである。平成30年度は、建設機械メーカーおよび制御盤製造メーカーの2社に対する定性的調査を実施した。どちらの事例においても、経営危機をきっかけとして導入された新たな管理会計システムが各部門の会計責任を明確化することで、深化(活用)を重視する部門と探索を重視する部門の分化を促進していた。一方、それらの部門の統合においては、間接費の配賦や会計責任の共有がインタラクティブ・ネットワーク(Simons, 2005)を構築することで両部門間の協働を促し、統合を図っていることが示された。定性的調査において予定していた3社のうち、2社について調査先の担当者の異動等の要因もあり、当初の調査計画と比べて調査実施に遅れが生じており、「やや遅れている」と評価している。今年度は調査実施に遅れが生じている2社について調査研究を推し進め、調査を完了する予定である。平成29年度は、(1)両利きの経営と関連した管理会計研究の文献レビュー、および(2)両利きの経営が実現されている、またはその実現を目指しており、そのためにMCSが用いられている企業を対象とした定性的調査を実施した。それぞれの概要は以下の通りである。(1)両利きの経営を直接扱った管理会計研究が近年徐々に行われつつある。これらの研究はコンティンジェンシー・アプローチを用いた定量的研究であり、活用を重視している企業、探索を重視している企業、活用と探索を両立させている(つまり両利きの経営を実現している)企業のそれぞれでどのようなMCSが適合的に利用されているのかについて明らかにしている。しかしながら、これらの研究ではMCSがどのようなプロセスを経て両利きの経営を実現しているのかという部分については十分に明らかにされていない。特に、両利きの経営では活用と探索の分化と統合が重要であると指摘されているが、MCSがどのように活用と探索の分化と統合を達成しているのかについての知見が不十分である。両利きの経営を直接扱った研究ではないが、Dent(1987)やSimons(2010)はこの問題に示唆に富む知見を提供している。つまり、管理の幅と責任の幅を調整することで、活用を重視する部門と探索を重視する部門の分化と統合が実現可能なことを示唆している。(2)文献レビューの結果をふまえて、建設機械メーカーおよび不動産会社の2社に対する定性的調査を実施した。どちらの事例においても、管理会計システムが活用を重視する部門と探索を重視する部門の分化を促進すると同時に、それらの部門を統合するような役割を果たしていることが明らかとなった。定性的調査において当初調査を予定していた3社のうち、2社が調査先の都合により中断しており、再開の目処が立っていない状況である。不動産会社への調査は予定通り実施ができ、また代替的なリサーチサイトとして建設機械メーカーの協力を得たが、当初予定していたリサーチサイトへの調査が実施できなかったため、全体の計画からは「やや遅れている」と評価している。今年度は現在調査を行っている2社の研究をさらに推し進めるとともに、現在調査が中断しているリサーチサイトの調査再開および新たなリサーチサイトの獲得と調査を行う予定である。当初調査を行う予定であった調査先で調査が中断したリサーチサイトが発生したため、次年度使用額が生じている。今年度は昨年度調査を実施した2社に加えて、現在中断しているリサーチサイトの調査再開および新規のリサーチサイトへの調査を行うため、主にこれらの調査に係る旅費として使用する予定である。調査先3社のうち2社において当初の調査計画より遅れが生じているため、次年度使用額が生じている。今年度は調査に遅れが生じている2社の調査を推し進めるため、主にこれらの調査に係る旅費として使用する予定である。
意味的類型論から見た日英語の比較:コーパスを用いた事象構造化パタンの研究

本研究の研究成果は、研究資料の作成と、論文の二種類に分けられる。研究資料に関しては、移動などの言語表現を複数の言語で比較する際に重要な資料となるFrog storyの日本語データを、23人の日本語話者から採集し、データベース化した。また、移動表現に関する膨大な文献リストを2002年度に最初に出版の形で公開し、その後も順次追加改訂してウェブ上で公開した(http://www.lit.kobe-u.ac.jp/yomatsum/motionbiblio.html)。現在文献数は990に達し、言語グループ別、研究テーマ別の構成にしたため、利便性が高くなっている。この二つには引き続いて取り組んでいく予定である。研究成果の公開に関しては、(先の文献目録のほか)4つのの論文を学会誌などに発した。これらは、使役移動構文の意味的制約に関するもの(2002a)、Talmy,の移動表現の類型の改訂に関するもの(2003a, b)、及び日本語の視覚的移動に関もの(2004)である。これらは、理論的な考察とともに、コウビルド・コーパス、毎日新聞データ集などのコーパスデータの検証に基づくものである。2003a, bでは、Talmyの類型論が異なる解釈を与えられてきたことを指摘し、さらに、経路が表されるのが動詞句の主要部であるのかそうでないのかという観点からその類型を再定式化するという主張を行った。2004においては、日本語の視覚表現に移動がどのように関与していることを議論した。この視覚的移動に関しては、2004年度の英語学会シンポジウムにおける発表論文で、どのように移動表現の類型論と関わるかについて論じた。その中で、移動、使役移動、視覚移動の順で、動詞句非主要部で経路が表される可能性が高くなる、という普遍的仮説を提示した。1.先行研究に関する文献目録を出版した。これは移動動詞に関する、現在出版されているもっとも網羅的な目録である。2.本研究の出発点となっているLeonard Talmyによる移動表現の類型論に関して、それをめぐる問題点を指摘し、新たな提案を行った。それは、以下の三点にまとめられる。(1)Talmyの類型論は、学者によって三通りの異なる解釈が行われている。(2)その三つの解釈は、実際には異なる現象に注目したもので、それによる言語の分類は一致しない。(3)Talmyの類型論は、文の主要部に移動のどの意味要素が表現されるかという立場から解釈されるべきである。そのためには、用語と一部の概念の変更が必要となる。3.コウビルド・コーパス、新潮文庫の100冊、毎日新聞テキストデータベースの三つのコーパスから、移動動詞の用法を収集した。また、日本語によるfrog storyの録音を行った。これらの資料の分析は次年度に行われる。本年度はデータ収集の面と、研究成果の発表の両方で大きな進展を見ることができた。まず、データ面に関してであるが、近年、移動などの言語表現を複数の言語で比較する際にFrog storyと呼ばれるデータが広く用いられるようになったことをふまえて、Frog storyの日本語データを15名の日本語話者から採集し、データベース化を行った。このデータベースは近く公開する予定である。このデータは移動のみならず、視覚、コミュニケーションに関する事象をどのように日本語で表現するかに関して、他の言語との比較の上で重要な資料となる。また、英語の視覚、コミュニケーションの動詞と経路句との共起についての調査を、コウビルドコーパスを用いて行った。研究成果の公開に関しては、いくつかの著作を完成させた。まず、本研究の理論的背景となっている認知意味論に関して、編著本(『認知意味論』)を刊行することができた。

特にその中で意味的な類型論に関して一章をさいて論じた。また、本研究の中心課題である移動表現の類型論に関しては、その出発点となるTalmyの類型論の諸問題について、英語で論文を完成させた。また、移動表現の拡張としての視覚表現に関して日本語で論文を刊行することができた。これは、日本語の視覚表現に現れる移動を表す表現の性質について正面から取り上げたものとして、おそらく日本で初めての本格的研究論文であるといえる。本年度は、本研究の最終年度として、収集された資料をまとめたデータベースの作成と、研究成果のまとめと発表のに重点を置いた。まず、データベースに関しては、移動などの言語表現を複数の言語で比較する際に重要な資料となるFrog storyの日本語データを10名の日本語話者から収集した。さらにそのデータを、昨年までに収集したデータと合わせてデータベース化した。また、2002年度に公開した移動表現に関する膨大な文献リストを追加改訂し、ウェブ上で公開した(http://www.lit.kobe-u.ac.jp/yomatsum/motionbiblio.html)。文献数は990に達し、研究テーマ別の構成にしたため、利便性が高くなっている。研究成果の公開に関しては、理論的な研究と日本語・英語のコーパスの調査にもとづき研究を進た結果を4つの論文をまとめた。それは、1)経路の多様性に関するもの、2)直示的経路に関するもの、3)使役移動と視覚移動の語彙化パタンの類型に関するもの、4)単一経路の制約に関するものである。1)から3)はTalmyの移動表現の類型の改訂を提案したものであり、経路がTalmyが仮定していたのよりも多様な形で表現できること、また、移動以外の事象の表現においては、移動の場合と異なるパタンが見られることを主張したものである。4)は移動以外の経路表現も含めた経路表現に関するGoldbergの提案を改訂したものである。その内容の一部は学会などで発表した。特に、日本英語学会の第22回大会においてシンポジウムを開催し(コーディネーターおよび発表者)、研究成果を発表すると同時に、ほかの研究者との意見交換を行った。執筆した論文は投稿中、または投稿へむけて改訂中である。
生体模倣カクテル試薬を用いた『薬物の潜在的リスク評価システム』の開発

【背景・目的】薬物の反応性代謝物は、生体高分子との共有結合を介し副作用を惹起するため、通常グルタチオン等のトラッピング試薬とLC-MSの組合せでスクリーニングされる。そこで本法の「スループットの低さ」、「生体高分子との差異」、「試薬自身の代謝」等の問題点を改善すべく、ハイスループット・ハイブリッドな評価システム開発を目的にした。【成果】1求核性部位の単純モチーフ化とカクテルとしての利用により、反応点の網羅と代謝の問題を解決した。2各試薬の安定同位体標識体の添加で、特徴的なダブレットピークによる生成物の評価が出来た。3ダブレットピークをトリガーとする自動MS/MS解析法を確立した。薬物の反応性代謝物は、タンパク質・DNAとの共有結合を介し想定外の副作用を惹起する。そのため医薬品開発現場では、反応性代謝物の分析・反応性評価に、グルタチオンで捕捉・解析するトラッピング法が汎用されている。しかし、Cys以外の共有結合を評価できない事、LC分離によるスループットの低さ、MS/MS解析の煩雑さなどの課題を残す。そこで、従来法の欠点を克服するため、求核性アミノ酸側鎖およびDNAをモチーフとした試薬カクテルを調製し検討した(Arg型, 1-methylguanidine, D0/D3; Cys型, 2-mercaptoethanol, D0/D4; His型, 4-methylimidazole, D0/D5; Lys型, n-butylamine, D0/D9; DNA塩基型, 2'-deoxyguaninosine, 13C015N0/13C115N2;非標識体:標識体=1:1)。モデル代謝物にはN-acethyl-p-benzoquinoneimine、ketoprofen-N- hydroxysccinmide、2-oxoticlopidineなどを用いた。その結果、各プローブは、保存・インキュベート中安定であった。MSのイオン化は、測定対象の相違に寛容かつ高流速での使用が可能なAPCIを選択した。またショートカラムを用いたLC条件を最適化し、1サンプル1.8分の測定が可能であった。捕捉したモデル代謝物は、ダブレットピークの質量差により、反応点を同定出来た。質量差が同じArgとDNA型プローブの付加体は、デオキシリボースのインソース脱離(ー116 Da)で分別出来た。また、グルタチオンで捕捉困難なアルデヒド類も、Lys型プローブ付加体として検出出来た。ミクロソーム中で生成したacetaminophenの代謝物もCys型プローブ付加体として確認出来た。【背景・目的】薬物の代謝過程で生成する反応性代謝物は、タンパク質やDNAとの共有結合を介して、種々の副作用を惹起し得る。現在リスク評価法として、in vitroの反応性代謝物をグルタチオンで捕捉し、LC/MS/MS解析するトラッピングアッセイが汎用されているが、反応点(求核性官能基)を網羅できない等の欠点が多い。そこで、インタクトのタンパク質、あるいは生体高分子上の各種求核性部位を単純モチーフ化したプローブと対応する安定同位元素標識体の混合溶液の使用を企てた。【結果・実績】アセトアミノフェン、プロプラノロール等を代謝活性化後、HSAあるいはトラッピング試薬カクテルと反応させ、LC/ESI-MS分析に付した。HSA付加体はtryptic peptideとして、カクテルとの反応では求核性部位の違いを評価出来る特徴的なダブレットピークとして検出され、ミクロソーム系への応用も示した。また、isotope data dependent scanを用て付加体のダブレットピークをトリガーにしたMS/MS解析が可能であった。臨床分析化学1.トラッピング試薬のデザインと調製(平成25年度中を計画):終了2.試薬の評価(平成25年度後期平成26年度前期を計画):前倒し終了3.検出系の評価(平成25年度前期平成26年度前期を計画):前倒し終了4.前処理の検討(平成25年度後期平成26年度前期を計画):継続中5.in vitro代謝系での応用(平成26年度中を計画):前倒し開始、継続中継続中の『前処理の検討』、『in vitro代謝系での応用』は、各々以下の様に行う。前処理の検討:オートサンプラーやMALDIプレートに直接サンプリング可能な96穴型の固相抽出(C18等)を用い、洗浄条件・溶出条件を最適化し、回収率等を検討する。in vitro代謝系での応用:モデル薬物を用い、肝ミクロソーム系での方法論を確立する。さらに、CYP種ごと(3A4、1A2、2C9など)で評価可能か検討する。

加えて、更なるハイスループット化・自動化・高感度化を考慮したFIA-ESI-MS/MS(イオントラップ型)、マイクロフォーカスMALDIプレートを用いるMALDI-MS/MS(イオントラップ型)も検討する。更にアイソトープパターンを認識して行うisotope pattern dependent MS/MSを用い、自動判別システムの可能性を検討する。
動作ダイナミクスにおけるコーチング・ノードの探索と指導者の類型化

投球動作指導に関する大規模なアンケート調査を行った結果,幅広い対象年齢層で意見集約が可能なもの(C-node)は以下の3項目だった;片脚立位時に軸足がブレないこと,片脚立位時に軸脚の膝が外を向かないこと,ステップ時にグラブ側前腕を回内すること.他に,ステップ時の踏み出し脚の出し方もプロ熟練経験者ではC-nodeとして,中学・高校熟練指導者では極めてC-nodeに近い項目として挙げられた.中学熟練指導者特有のC-nodeとして,ストライド時に体幹を捻らずに投球方向と平行に出ること,が挙げられた.また,指導者を動作指導の特徴によって8つに分けることが可能であった投球動作指導に関する大規模なアンケート調査を行った結果,幅広い対象年齢層で意見集約が可能なもの(C-node)は以下の3項目だった;片脚立位時に軸足がブレないこと,片脚立位時に軸脚の膝が外を向かないこと,ステップ時にグラブ側前腕を回内すること.他に,ステップ時の踏み出し脚の出し方もプロ熟練経験者ではC-nodeとして,中学・高校熟練指導者では極めてC-nodeに近い項目として挙げられた.中学熟練指導者特有のC-nodeとして,ストライド時に体幹を捻らずに投球方向と平行に出ること,が挙げられた.また,指導者を動作指導の特徴によって8つに分けることが可能であった本研究は,熟練した運動指導者や優れた技能の保持者が有する経験知の伝達・学習に関して,経験の浅い運動指導者が気軽に利用できるようなWeb-baseの経験知獲得支援システム開発の一環として,そのコンテンツ作成を目的に行われた.特に,対象動作を野球の投球動作指導に限定し,熟練指導者あるいはプロ野球経験者などの高い専門的知識を有する被験者の意見が集約される動作(コーチング・ノード)の同定を今年度の目的とした.野球指導者およびプロ野球投手経験者に対し,1)面談方式,2)郵送方式,3)講習会方式で投球動作に関するアンケート調査を実施した.アンケートの調査項目は,先行研究や先行インタビューでの意見を参考にして,47件法の30項目を選定した.回答者の内訳は,プロ野球投手経験者112名,社会人・大学野球指導者22名,高校野球指導者78名,少年野球指導者69名などであった.このうち,プロ野球1軍投手を10年以上経験し,且つ,プロ野球で指導も経験している20名(P群)とアマチュア野球で指導を25年以上行っている19名(A群)を今回の分析対象とし,コーチング・ノードの同定を行った.その結果,1)着地時の肩の開き具合は、投球方向と平行またはややクローズド(015。)にする(P群の95%が賛成,A群の95%が賛成),2)着地時の踏み足の方向は投球方向に真っ直ぐまたはややクローズド(020。)にする(P群95%賛成,A群90%賛成),3)振り上げ脚を振り上げた際に、軸足がずれないようにする(P群95%賛成,A群79%賛成),4)ストライド中,グラブ側の前腕を内側に捻る(回内する)(P群85%賛成,A群79%賛成),5)振り上げ足を上げる際には,軸足の膝を外(3塁側)に向けない(P群80%賛成,A群84%賛成)など計9項目がいずれの群においても70%以上の合意が認められた.本研究は、熟練した運動指導者が有する経験知を、経験の浅い運動指導者に伝達するための経験知獲得支援システムのコンテンツ作成を目的に行われた。本年度は、中学野球部の指導者及び高校野球の指導者を対象に大規模なアンケート調査を行うことによって、投手の動作指導に関して指導者間の意見の相違点を明らかにすることを目的とした。アンケート調査は、全日本軟式野球連盟に所属する中学軟式野球部および日本高等学校野球連盟に所属する硬式野球部の全チームに疑似無作為に郵送方式で実施した。中学野球部への送付総数は2731チーム、高校野球部へは2232チームの計4964チームで、有効回答数は、それぞれ786通、899通であった。投球動作指導について、中学指導者と高校指導者および指導歴3年以下の指導者(非熟練指導者)と20年以上の指導者(熟練指導者)をχ^2検定にて比較した。まず、指導歴3年以下の指導者に関しては、中学指導者も高校指導者も動作指導法の分布に有意差はなかったが、指導歴20年以上の指導者に関しては、中学指導者と高校指導者では、1)振り上げ足を上げる際の軸足の使い方、2)振り上げ足の膝の高さ、3)軸足の膝の曲げ方、4)ステップ時の体幹の捻り具合、5)着地後の踏む出し足の動き、に有意差(p<.05)が認められた。また、高校指導者の非熟練指導者と熟練指導者を比較すると、1)片脚立位時の軸足の使い方、2)ステップ時の体幹の捻り具合、3)テイクバック時のグラブ腕の使い方、4)フォロースルー時の頭部の位置、に有意差(p<.05)が認められた。また、1)片脚立位時の軸足の使い方、2)テイクバック開始時の両腕の使い方、3)ステップ時の体幹の捻り具合、4)着地時の踏み出し足の方向、5)着地時の体幹の具合、においては熟練指導者の75%以上が同一の見解を示した。

本研究は,熟練指導者や熟練技能保持者が有する経験知を,経験の浅い指導者に伝達するための経験知獲得支援システム開発の一環として,そのコンテンツ作成を目的に行われた.本年度は,アンケート調査の結果から,複数の熟練指導者の意見が集約される動作(以下,C-node)の同定および指導者の類型化を行うことを目的とした.プロ野球投手10年以上経験者(76名),指導歴20年以上の熟練高校指導者(239名)及び熟練中学野球指導者(115名)のアンケート調査の回答を基に,それぞれの群の回答が「賛成」または「反対」のいずれかに70%以上の意見が集中した場合にC-nodeとみなした.C-node数は,30項目中それぞれ5,5,6で,3群ともに同様のものは,3つだけであった.類型化の際の変数選択にあたって,5群(プロ投手10年以上,高校指導20年以上,高校指導3年未満,中学指導20年以上,中学指導3年未満)で有意な差があった12項目を分析変数とした.その後,カテゴリカル主成分分析を行い,7次元が得られ,そのオブジェクトスコアを基に,K-means法によるクラスター分析を行った.以下は,各クラスターの特徴概要である:クラスター1:こだわりを持たず,多くのことを投手次第で柔軟に対応する指導者.クラスター2:反動を使った動作を支持する傾向が強い投球速度重視型指導者.クラスター3:自然体で前に出ることを好む,投手育成に自信を持つ指導者.クラスター4:反動を使った動作を嫌い(制球重視型),踵着地を好む指導者.クラスター5:制球重視型で足の内側着地を好む指導者.クラスター6:制球重視型で足裏全体着地を好む指導者.クラスター7:投手板を強く蹴ることを好むが,反動を使った動作を嫌い,それ以外は投手次第で柔軟に対応する指導者.クラスター8:栂指球着地と肘を前に出すことを好む指導者.指導対象の年齢レベルや指導方針によって,指導方法を類型化可能であった.
分娩時オキシトシン投与モデルマウスの脳細胞障害と発達障害

C57BL/6J mice (WT)の妊娠マウス(18.5日)の皮下に、各種濃度(0.6, 6,18,240マイクログラム)のオキシトシン水溶液を浸透圧ポンプの埋め込みを行い、通常どおり経腟分娩させたのちに生存新生仔数をカウントし、生存新生仔の脳を摘出した。この脳組織を用いてどのような障害が発生しているのかを、領域別、また構成する細胞種(ニューロン・各種グリア細胞)別に免疫組織染色および定量PCRを用いて評価した。オキシトシン6マイクログラム投与マウスでは、生存新生仔数は対象と有意差がなかったが、18マイクログラム以上を投与したマウスでは、生存新生仔が減少した。定量PCRでは、生後0, 5日目に安楽死後に脳を摘出し、脳細胞の最初期遺伝子であるc-fos, c-Jun, JunBのmRNAの発現を確認したが、6マイクログラム以上の投与でその発現は有意に増加していた。マウス出生直後の前頭前野(PFC)、手綱核(Hb)、室傍核(PVN)におけるTUNEL陽性細胞数を免疫組織染色で確認したところ、やはり6マイクログラム以上でオスマウスに限って増加を認めた。しかし、他の領域では、これら遺伝子のmRNA発現量は有意差を認めなかった。母獣への6マイクログラムのオキシトシン投与は、胎仔・新生仔の死亡は増加させなかったが、脳局所におけるc-fos, c-Jun, JunBの発現、TUNEL細胞増加を示したことから、母獣オキシトシン負荷マウスは、胎仔脳障害発生モデルとなりうることが示された。先行研究と飼育環境を同様にしたが、先行研究でみられた結果を一部再現できなかった。飼育環境の変更、マウス種別の変更などで、先行研究の再現性を求めつつ、現在得られている結果から、さらなる知見を見出すことを進める。研究計画の若干の遅れにより、平成30年度使用予定の試薬を購入できず、平成31年度(令和元年度)に使用する。
末梢血液中遊離肝癌細胞の特性に関わる分子生物学的研究

門脈腫瘍栓を持ち、血中のAFPmRNAが反復して検出される男性肝癌患者より末梢血を採取し、セルソーターによって上皮細胞成分を抽出した。この分画における,AFPmRNAはもと.の末梢血に比較して高濃度に検出された。初代培養細胞は、明らかに血液細胞とは異なる形態をとっていた。この結果、末梢血中の肝癌細胞を分離することができたと考えた。分離された末梢血中肝癌細胞と、肝切除時に得られた原発巣との遺伝子発現の相違を、まずRT-PCRで検討したが、AFP、Albumin、p53、pRb、p16、p21については発現レベルに有意な差はなかった。northernblottingでも発現量に差は易いだしえなかった。このためスクリーニング的な手法を使用する必要があると考え、末梢血肝癌細胞から樹立した細胞株MS-1からmRNAを抽出しそ検索を追加した。differential displayによってMS-1由来mRNAと原発巣のmRNAを比較したところ、両者で発現が異なると思われる候補を相当数認めることができた。そこでこれらから代表的なものを選択して塩基配列寮決定することとしたが、再度MS-1由来mRNAの検討を行った結果、MS-1からのAFPmRNAの発現は極めて弱いことが判明した。改めて代表的な遺伝子発現の検討を行い、また培養細胞の形態などに関して観察を行った結果、MS-1はソーティングによって得られた肝癌細胞ではなく、線維芽細胞由来であることがわかった。由来した患者は既に手術を終えており、この症例を用いた検討は一旦終了せざるを得なくなった。今後も異なる症例を用いて研究を継続したい。一方、手術前後でのAFPmRNAの変化に関する検討は継続して行っており、術後早期に陽性を示した症例は、短期間に再発所見を認める傾向を明らかにした。この知見に関しては現在論文を準備中であり、近く投稿を予定している。末梢血中に出現するhAFPmRNA陽性細胞の変化を経時的に観察するために、肝細胞癌患者における肝切除術に際して、末梢静脈血、門脈血を採取し、hAFPmRNAの検出を試みた。総計34例の肝切除例のうち、術前で陽性であったものは約1/3に当たる12例であった。これらの症例のうち、術後に引き続き検出されたものは6例で、残る6例は検出不能となっていた。逆に術前陰性であった22例のうち、7例が術中または術後に陽性に変化していることが観察された。このような症例においては、術操作によって腫瘍細胞または正常肝細胞が末梢血中に播種している可能性が示唆されたが、門脈血での検出結果と末梢血における検出結果の間に不一致が認められること、陽性転化の時期が症例によって異なることなどから、はっきりした結論を出すのは困難であると考えている。また、持続陽性を示した正令の中に予後不良例が多く認められたが、観察期間中無再発の症例もあった一方で、持続陰性例で予後不良例も認められることより、周術期以降に関しても今後検討を重ねる必要が感じられた。一方、末梢血中からのhAFPmRNA発現細胞の分離については、基礎的検討として培養細胞を対照血に希釈して回収実験を行った場合はhAFPmRNAをRT-PCRにて検出することは可能であったが、希釈濃度については一定せず、標的遺伝子の選択を含めて再検討する必要も感じられる。臨床症例についても一部分離できた症例もあったが、回収数が不足しているために、追加検討には不十分であり、方法論の確立を今後急ぐ必要がある。
プロソディーの獲得と障害に関する言語学的研究

前年度に引き続き、日本語のリズム構造(モーラ構造)が崩れる音韻環境を分析し、そのような反リズム現象が及ぶ範囲と起こる理由を考察した。前年度の研究から、日本語のモーラ構造が崩れる環境は、語末の長母音/短母音の対立であることが明らかになっていたが、今回は長短母音の中和現象が、音の知覚レベル、音響レベル、視覚による音の知覚(視覚情報に基づく音の区別判断)のレベルでも観察されることを明らかにした。とりわけ音響レベルの中和化については、東京方言話者(成人4名)を用いた音響実験を行い、(a)短母音・長母音を問わず語末の母音が語中の母音よ音声的に短くなること、(b)同じ傾向が撥音の「ん」を含む音節についても観察されること、(c)1モーラ音節(自立拍)についてはそのような位置による音節長の変動が極めて小さいこと、以上の3点を明らかにした。この結果は、日本音声学会の全国大会で口頭発表し、実験データの詳細をその予稿集に報告した。この研究と並行して、日本語の幼児語彙・成人語彙に見られる音節構造の有標性について考察した。この問題については、幼児語から成人の言葉遊びに至る日本語の言語現象・過程を分析し、一定の音節構造の組み合わせが日本語の広範囲な言語現象に観察されることを指摘した。具体的には、2モーラからなる重音節(長音節)と1モーラからなる軽音節(短音節)の組み合わせ(つまり重音節+軽音節)がもっとも一般的で、逆に軽音節+重音節の組み合わせが忌避される傾向が強いことを明らかにした。また、この傾向が他の言語にはほとんど見られない傾向であることもあわせて指摘した。