hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
タンパク質膜組み込み機構の構造基盤の解明

本研究では、タンパク質膜組み込み機構の構造基盤の解明のため、YidCの立体構造情報に基づいた機能解析を進めることを目指している。前年度までの研究から、YidCが分子内部に親水的なアミノ酸残基を多く含んだ溝をもち、その溝を介して基質タンパク質と相互作用することが明らかとなった。しかし、YidCの基質認識機構や、タンパク質膜組み込み機構のダイナミクスは不明のままであった。そこで本年度は、YidCとその基質タンパク質との複合体のX線結晶構造解析を行い、それらを明らかにすることを目指した。YidCのC末端に基質タンパク質を融合させ、YidC-基質タンパク質の融合タンパク質として構造解析を行うことを試みた。アフィニティの低い二つのタンパク質の複合体の構造解析を行う際に、両者をリンカーを介して融合し、両者が相互作用しやすくするという手法は、有効な戦略の一つである(Kang et al., Nature, 2015)。基質タンパク質を融合させた際のトポロジーを考慮し、適したトポロジーをもつMscLを基質タンパク質として使用した。YidC-MscLの融合タンパク質を大腸菌に過剰発現させ、界面活性剤ドデシルマルトシドにより可溶化し、Niアフィニティークロマトグラフィー、プロテアーゼによるHisタグの切断、ゲルろ過クロマトグラフィーという過程により精製した。精製タンパク質に対し、脂質キュービック相法による結晶化スクリーニングを行ったところ、結晶が得られ、大型放射光施設SPring-8にてX線回折実験を行ったところ、最大分解能7.0Åの回折データを得ることができた。しかし、得られた分解能のデータでの構造解析は非常に困難であり、得られたモデルの構造精密化を十分に行うことはできなかった。現在は、さらに高分解能のデータ取得を目指し、結晶化コンストラクトの最適化や結晶化条件の最適化を行っている。27年度が最終年度であるため、記入しない。タンパク質膜組み込み機構の構造基盤の解明のため、「YidC」と「Secトランスロコン-リボソーム複合体」の詳細構造をX線結晶構造解析により決定し、構造情報に基づいた機能解析を進めることを目指している。本年度は、細菌の内膜において、タンパク質膜組み込みに重要な役割を果たす膜タンパク質であるYidCのX線結晶構造解析に取り組んだ。これまでにYidCの結晶から、最大分解能3.0ÅのX線回折データセットが得られていた。そこで、YidCの立体構造を決定するために、水銀原子の異常分散を利用した位相決定を試みた。まず水銀の結合のため、Yl50C変異体YidCを作製し、野生型Yidcと同様の手順で精製した。精製タンパク質と塩化メチル水銀を混合し、脂質キュービック相(Lipidic Cubic Phase : LCP)法による結晶化スクリーニングをしたところ、柱状の良質な結晶が得られた。この結晶を用いて大型放射光施設SPring-8にてX線回折実験を行ったところ、X線回折データが得られ、水銀原子の異常分散を用いた多波長異常分散法により、YidCの立体構造を決定した。YidCは新規フォールドを持つ5回膜貫通型タンパク質であり、膜貫通ヘリックスの内側に、膜の内部に広がる「親水的な溝」を持っていた。この溝は、保存された多くの親水的なアミノ酸残基によって構成されており、細胞内側と膜側に開いている一方で、細胞外側には閉じていた。このような親水的な溝が疎水的である生体膜の中に存在し、膜内に親水的な環境を作り出していることは、これまでの研究からは全く予測されていない新規の発見であった。本構造に基づいた遺伝学的な解析とクロスリンク実験の結果、基質はYidCの親水的な溝と相互作用し、溝の内側に存在する保存されたアルギニン残基がYidCの機能に重要であることが明らかとなった。これらの知見から、YidCによるタンパク質膜組み込みの分子機構を新たに提唱した。本研究成果を論文としてまとめ、Nature誌に投稿し、既に受理されている。本年度は,細菌の内膜において,タンパク質膜組み込みに重要な役割を果たす2つの膜タンパク質「YidC」と「Secトランスロコン」が,どのように協調して機能しているのかを調べるために,グラム陰性菌である大腸菌由来YidC (EcYidC)のX線結晶構造解析に取り組んだ.EcYidCの細胞外ドメインは,Secトランスコロンと相互作用することにより,YidCのシャペロンとして働きを助け,効率的なタンパク質膜組み込みに重要であることが知られている.これまでに詳細な立体構造が報告されている,グラム陽性菌であるBacillus halodurans由来YidC (BhYidC)はこの細胞外ドメインを持っておらず,Secトランスコロンとの複合体形成への構造基盤は不明のままであった.まず,EcYidCを大腸菌に過剰発現させ,大腸菌細胞膜を界面活性剤ドデシルマルトシドにより可溶化し,ニッケルアフィニティークロマトグラフィー,プロテアーゼによるHisタグの切断,ゲルろ過クロマトグラフィーという過程により精製した.精製タンパク質に対し脂質キュービック相法による結晶化スクリーニングを行い,良質な結晶が得られた.

この結晶を用いて大型放射光施設SPring-8にてX線回折実験を行ったところ,最大分解能3.2 Aの回折データを得ることに成功した.結晶構造が既知である可溶性ドメインとBhYidCの結晶構造をサーチモデルとした分子置換法により,3.2 A分解能でEcYidCの結晶構造を決定した.EcYidCの結晶構造に対し,これまでに報告されたSecトランスコロンとの相互作用部位をマッピングすることにより,YidCがシャペロンとしての機能する際に形成するSecトランスコロン-YidC複合体についての構造的な示唆が得られた.本研究成果をまとめた論文は,Scientific Reports誌に掲載された.本研究では、タンパク質膜組み込み機構の構造基盤の解明のため、YidCの立体構造情報に基づいた機能解析を進めることを目指している。前年度までの研究から、YidCが分子内部に親水的なアミノ酸残基を多く含んだ溝をもち、その溝を介して基質タンパク質と相互作用することが明らかとなった。しかし、YidCの基質認識機構や、タンパク質膜組み込み機構のダイナミクスは不明のままであった。そこで本年度は、YidCとその基質タンパク質との複合体のX線結晶構造解析を行い、それらを明らかにすることを目指した。YidCのC末端に基質タンパク質を融合させ、YidC-基質タンパク質の融合タンパク質として構造解析を行うことを試みた。アフィニティの低い二つのタンパク質の複合体の構造解析を行う際に、両者をリンカーを介して融合し、両者が相互作用しやすくするという手法は、有効な戦略の一つである(Kang et al., Nature, 2015)。基質タンパク質を融合させた際のトポロジーを考慮し、適したトポロジーをもつMscLを基質タンパク質として使用した。YidC-MscLの融合タンパク質を大腸菌に過剰発現させ、界面活性剤ドデシルマルトシドにより可溶化し、Niアフィニティークロマトグラフィー、プロテアーゼによるHisタグの切断、ゲルろ過クロマトグラフィーという過程により精製した。精製タンパク質に対し、脂質キュービック相法による結晶化スクリーニングを行ったところ、結晶が得られ、大型放射光施設SPring-8にてX線回折実験を行ったところ、最大分解能7.0Åの回折データを得ることができた。しかし、得られた分解能のデータでの構造解析は非常に困難であり、得られたモデルの構造精密化を十分に行うことはできなかった。現在は、さらに高分解能のデータ取得を目指し、結晶化コンストラクトの最適化や結晶化条件の最適化を行っている。大腸菌由来YidC (EcYidC)のX線結晶構造解析に成功し、その結晶構造から、YidCがSecトランスロコンと協調して機能する際の構造基盤の一端を明らかにすることができた。本成果をまとめた論文はScientific Reports誌に掲載され、研究は計画以上に進展している。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、Secトランスロコン-リボソーム複合体の精製、結晶化を行い、X線結晶構造解析を目指す。また、昨年度および今年度の研究により、YidCが基質タンパク質とどこで相互作用しているかが明らかとなった。このような新しい知見が得られたため、基質タンパク質とYidCの共結晶化を行い、その基質認識機構や膜組み込みの詳細な分子機構を解明することを目指す。YidCの結晶構造を決定し、その構造からこれまでの研究からは全く予測されていない新規の発見があったため、当初の計画以上の進展があった。本成果はNature誌に投稿し、既に受理されており、研究は順調に進展している。
向社会的行動の発達的視点・内分泌物質による理解

Social Mindfulness (SoMi) Taskにおける多数派選択をとる人は共感性や思いやりが強いと考えられている一方で、ペン選択課題を用いでは、他者評価が影響しない状況で課題を実施した場合に多数派を選択する割合が減少することが報告されており、多数派選択には複数の動機が混在していると考えられていた。本研究では、SoMi Taskにおける多数派選択の動機を明らかにするため、成人と未就学児を対象とした実験を実施した。SoMi taskにおける多数派選択数について年代による違いを検討した結果、未就学児は20代・30代・40代と比べて多数派選択が少ないことが明らかとなった。未就学児と成人ではSoMi Taskにおける多数派選択数に違いがあり、この違いには認知的な発達的要因が関与していると考えられる。唾液中オキシトシン濃度(sOT)については、唾液から解析した結果において成人のデータのみが得られたため、成人のsOTと多数派選択との関連を検討した。sOTの高群・低群に分類し共感性及びFNEとの関連を調べたところ、どちらの群においても共感性の関与が示され、FNEの関与は示されなかった。本研究のSoMi taskは他者評価が影響する状況ではなかったことから、多数派選択の動機としては共感性が基礎になっており、他者評価が影響する状況に応じてFNEなど他の動機が影響する可能性を示している。また、成人では他の年代と比べて50代の多数派選択数が少なく、50代では性別によって多数派選択と共感性及びFNEとの関連が異なって示されることも明らかとなった。本研究の結果は、年代や性別によってSoMi taskにおける多数派選択に関与する動機の種類や影響力の大きさが異なることを示し、他者評価の影響を考慮した上でFNEなどの社会的動機の影響を検討する必要性を示唆する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。Social Mindfulness Taskにおける多数派選択には複数の動機(共感性と評価懸念)が混在すると考えられるが、これまでの研究ではこれらの動機を弁別する客観的方法がなかったため、分離して検討することはできなかった。本研究ではこの動機の違いを発達的視点・内分泌物質によって理解することを目的として、未就学児と成人を対象とした実験を計画しており、これまでに未就学児を対象とした唾液の採取およびSocial Mindfulness Taskを実施し、成人についても未就学児と同様のSocial Mindfulness Taskと共感性・評価懸念を評価するための質問紙調査を実施している。先行研究において未就学児を対象としたSocial Mindfulness Taskの研究報告は見当たらず、本研究の成人との比較による発達的な視点からの検討は、向社会性に関わる動機の発達的な変化を捉えるための重要な手がかりになると考えられる。本研究では、未就学児を対象としたSocial Mindfulness Taskを成人と同様の方法で実施しており、発達的視点からの比較が可能と考えられる。今後、十分な実験データが集まった時点で未就学児と成人の結果についての比較・検討を行う予定としている。また、唾液の採取についても先行研究と同様の方法を用いることで、未就学児を対象とした唾液の採取を問題なく実施できることを確かめている。今後、唾液中のオキシトシン濃度の解析を行い、Social Mindfulness Taskにおける多数派選択との関連を検討する予定としている。当初の計画通り、子どもを対象とした参加者リクルート及びSocial Mindfulness Taskと唾液の採取を実施しており、成人を対象とした実験についても参加者リクルート及び子どもの実験と対応する形での実験データの収集が進んでいる。未就学児を対象とした参加者リクルート及び実験を継続し、子どものSocial Mindfulness Taskの成績についてデータ解析を進めていき、未就学児の実験データを対象に解析及び結果のとりまとめを行う。

唾液中オキシトシン濃度の解析については、十分な検体の数が集まった時点で、最近の研究知見に基づき解析の妥当性などを検討した上で、外部の研究機関等に依頼する予定である。また、成人を対象とした実験についても、参加者リクルート及び実験の実施を継続していく。成人の向社会性の指標となる課題の実験データを対象に解析及び結果のとりまとめを行う。成人の唾液中オキシトシン濃度の解析は未就学児の解析結果と比較可能な方法で実施する。その後、未就学児の解析結果と成人の解析結果の比較・検討を行い、未就学児と成人の多数派選択の動機の違いを明らかにする。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
硫黄サイクルとＡＮＡＭＭＯＸを活用した畜産関連排水処理の開発

畜産関連排水を対象として,硫黄サイクルとANAMMOXを活用した畜産関連排水処理の開発を目的とした.まず,畜産関連施設を対象として,それぞれ流入排水,処理水および処理槽内の各フローの試料を採取し,実験室に持ち帰り分析を行った.有機物濃度および窒素濃度は高く,塩分濃度も非常に高い結果であった.さらに,生物処理の前段で高分子凝集剤とポリ鉄(ポリ硫酸第2鉄)を用いて凝集沈殿させているために生物処理槽への流入硫酸塩濃度が非常に高い値を示したことから硫黄サイクルを活用した処理が可能と考えられた.次に,炭素繊維を充填した嫌気無酸素生物ろ床装置を用いて室内連続処理実験を行った.本処理法では,嫌気槽で硫酸塩還元による有機酸生成を行い,好気槽から循環した亜硝酸塩を従属栄養脱窒および硫黄脱窒により除去するとともに,ANAMMOX反応によりアンモニウム塩の低減を目指す.前凝集を行った排水を模擬した人工排水(有機物,窒素濃度800mg/L,アンモニア濃度500mg/L,硫酸濃度1000mg/L,鉄濃度50mg/L)を作成して運転を行い,無酸素槽には好気槽からの循環を想定し,亜硝酸を装置下部から添加した.その結果,嫌気槽では,硫酸還元反応が活発に進行し,有機物の約60%が除去された.無酸素槽では,嫌気槽に残存した有機物がほとんど減少し,亜硝酸脱窒が進行したが,硫酸塩の増加は少なく硫黄粒が槽内に蓄積されていると推定された.本システムでは,通常の硝化液循環よりも省エネルギーで高い窒素除去率が得られることが期待できる.翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
陸棚域の化学合成独立栄養化石群集の立体復元と消長

本研究は,付加帯の化学合成群集の内,主に水深500m以浅に生息した化石群集の解析を行ったものである.研究成果の概要を以下に示す.1)更新統小柴層の化学合成群集を産出する露頭に100mのボーリングを実施した結果,この群集は,層理面に垂直な方向に約40m,水平な方向に約20mの規模で分布することが判明した.コアの一部には,基質が完全に白色の炭酸塩でできている部分,大型二枚貝が破砕されている部分,また,岩相の境界が推定される地層境界の地層の傾斜と斜交している部分が見い出された.この事実は爆発的なメタンの噴出により,地層中の基質が吹き飛ばされたり,地層の一部が礫化していると考えないと説明がつかない.また,コアと周囲の露頭の対比を試みた結果,粒度に基づく岩相区分はほぼ対比できるものの,鍵層となる凝灰岩層は,全く対比できないことが判明した.この理由は,化学合成群集生息域の著しく活発な内生生物活動により凝灰岩層が乱され散逸してしまったことが考えられる.2)宮崎県の鮮新統高鍋層から発見した陸棚域に生息する化学合成群集の産状を調査した結果,少なくとも厚さ10mで,走向方向に100mの規模で分布していることを確認した.この群集は,走向方向の広がりでは日本最大の化石化学合成群種である.3)北海道稚内沖で,約1000年前のオウナガイ類と約10000年前のシロウリガイ類を含むコンクリーション岩塊を発見した.また,魚群探知機を使用して発見地点の海底地形調査を行った結果,一部に凹凸の地形を見い出した.4)北海道の中新統望来層のシロウリガイ類を含む化学合成群集を調査した結果,シロウリガイ類がCalyptogena pacificaであることと産状が2つの層準にまたがることを確認した.本研究は,付加帯の化学合成群集の内,主に水深500m以浅に生息した化石群集の解析を行ったものである.研究成果の概要を以下に示す.1)更新統小柴層の化学合成群集を産出する露頭に100mのボーリングを実施した結果,この群集は,層理面に垂直な方向に約40m,水平な方向に約20mの規模で分布することが判明した.コアの一部には,基質が完全に白色の炭酸塩でできている部分,大型二枚貝が破砕されている部分,また,岩相の境界が推定される地層境界の地層の傾斜と斜交している部分が見い出された.この事実は爆発的なメタンの噴出により,地層中の基質が吹き飛ばされたり,地層の一部が礫化していると考えないと説明がつかない.また,コアと周囲の露頭の対比を試みた結果,粒度に基づく岩相区分はほぼ対比できるものの,鍵層となる凝灰岩層は,全く対比できないことが判明した.この理由は,化学合成群集生息域の著しく活発な内生生物活動により凝灰岩層が乱され散逸してしまったことが考えられる.2)宮崎県の鮮新統高鍋層から発見した陸棚域に生息する化学合成群集の産状を調査した結果,少なくとも厚さ10mで,走向方向に100mの規模で分布していることを確認した.この群集は,走向方向の広がりでは日本最大の化石化学合成群種である.3)北海道稚内沖で,約1000年前のオウナガイ類と約10000年前のシロウリガイ類を含むコンクリーション岩塊を発見した.また,魚群探知機を使用して発見地点の海底地形調査を行った結果,一部に凹凸の地形を見い出した.4)北海道の中新統望来層のシロウリガイ類を含む化学合成群集を調査した結果,シロウリガイ類がCalyptogena pacificaであることと産状が2つの層準にまたがることを確認した.横浜市栄区上郷に露出する更新世小柴層の外側陸棚相から産出する大型合弁二枚貝類を主体とした化学合成化石群集のボーリング調査を行った.ボーリングは下部密集層に層理面に平行な20mボーリングを一本,水平ボーリング地点から層理面に垂直な25mボーリングを一本,上部密集層と下部密集層を貫く層理面に垂直な40mボーリングを一本,および化石の水平方向の広がりを確認するための層理面に垂直な15mボーリングを一本実施した.その結果,以下の点が明らかになった.1)水平ボーリングの結果,化石密集層は水平的には広がらず,露頭の周囲だけに存在することが確認された.2)垂直ボーリングは,石灰質コンクリーションと大型二枚貝が層理面に垂直な方向に35m以上連続していることを示した.従って,調査露頭の化学合成化石群集は,地層の層理面に垂直に打込まれた杭のような形状を示すと思われ,湧水現象が長期に渡って継続していたことを示す.垂直方向の規模は,この群集が世界で最も層理面に垂直な方向に継続した群集であることを示す.3)垂直ボーリングの一部に貝殻が破砕された大型二枚貝が観察された.また,粗粒堆積物の基質が全て炭酸塩で構成されている層準が確認された.これらの現象は,一時的に非常に強い湧水がないと説明できない.

4)北海道稚内沖の現生と考えられる大型二枚貝を含む石灰質団コンクリーションを調査したところ,深度50mから得られたサンプルにシロウリガイ類が多数含まれていることが確認された.この記録は世界で最も浅い場所から発見されたシロウリガイ類の記録である.本年度は,主に更新統小柴層の化学合成化石群集のボーリング試料4コアの解析,北海道稚内市沖の完新世化学合成群集の解析,および宮崎県の宮崎層群中の鮮新世の化学合成群集の化石を行った.これらの群集はいずれも陸棚相から産出する.1)横浜市の更新統小柴層のコアを調査した結果,コアの岩相には凝灰質物質が卓越するのに対して周囲の露頭の同層準の露頭には凝灰質物質が相対的に少ないことが明らかとなった.この理由は,化学合成群集の生息場が周囲よりへこんでいたため,選択的に凝灰質物質などの粗粒堆積物が流入したためではないかと推定した.コア中のコンクリーションには,カルサイト,アラゴナイト,ドロマイトが存在することが判明し,これらの起源を炭素と酸素の安定同位体比から検討中である.2)北海道稚内沖の水深60120mから採集されたシロウリガイ類やオウンガイ類を含む石灰質コンクリーションを調査し,基質の炭素と酸素の安定同位体比,および貝殻の炭素の放射性同位体年代を測定した.その結果,いずれの基質も非常に低い炭素の安定同位体比を示し,メタン湧水に依存した群集であることが明らかとなった.また,オウナガイ類は約1000年前,シロウリガイ類は約10000年前に生息していた個体であることが判明し,現在の陸棚にも湧水性化学合成群集が生息していたことが明らかとなった.3)宮崎県の鮮新統高鍋層から陸棚域に生息する化学合成群集を発見し,その産状を調査した結果,この群集はツキガイモドキ類からなり,石灰質コンクリーション中に著しく密集して産出することが明らかとなった.本年度は,昨年度に引続き,主に更新統小柴層の化学合成化石群集のボーリング試料4コアの解析,北海道稚内市沖の完新世化学合成群集の解析,および宮崎県の宮崎層群中の鮮新世の化学合成群集の解析を行った.これらの群集はいずれも陸棚相から産出する.1)横浜市の更新統小柴層のコアの調査結果と周囲の露頭の対比を試みた.その結果,粒度に基づく岩相区分はほぼ対比できるものの,鍵層となる凝灰岩層は,全く対比できないことが判明した.この理由として,1)化学合成群集生息域の著しく活発な内生生物活動により凝灰岩層が乱され散逸してしまったことと,2)爆発的なメタンの噴出により,コア中の一部の岩相が礫化していることが考えられる.2)漁船を借り上げ,北海道稚内沖の化学合成群集採集地点での魚群探知機を使用した海底地形調査を行った.この結果,一部に凹凸の地形を見出したが,魚群探知機の性能の制限からこれらの地形とメタン湧水の関係を解明するには至らなかった.3)宮崎県の鮮新統高鍋層から発見した陸棚域に生息する化学合成群集の産状を調査し,少なくとも厚さ10mで,走向方向に100mの規模で分布していることを確認した.この群集は日本最大の化石化学合成群種である.
感覚間一致への比較認知科学的アプローチ

本研究では、言語ラベルの進化的・発達的基盤の一つの要因として近年注目を浴びている「感覚間一致」に注目し、その進化的起源をあきらかにするため、比較認知科学的研究を実施した。これまでに、チンパンジーを主たる対象として、以下の感覚間一致を分析してきた。すなわち、1)社会的順位と空間の感覚間一致、2)系列情報と空間の感覚間一致、3)音の高さと明るさの感覚間一致。本年度は3)の研究である。先行研究から、ヒトの音の高さと明るさの感覚間一致には、高い音の後には明るい色、低い音の後には暗い色に目が向きやすくなる注意バイアスと、中間的な色の見えが音によって変化する知覚バイアス、という二つのメカニズムが存在することが示されてきている。本年度は、1昨年度につづきこの知覚バイアスの研究を継続した。また、加えて、2音の高さと空間の位置の間の感覚間一致に研究を展開した。それらの結果、1では、実験をおこなったすべての個体が、中間色の明るさ判断をする際に、高音を聞いた際には明るい色と判断すること、低音を聞いた際には暗い色と判断することがしめされた。この結果はチンパンジーも音の高さと明るさの間の感覚間一致をもつこと、さらに、そのメカニズムとして知覚バイアスがチンパンジーにも存在していることが示唆するものである。2については、現在もデータの解析を進めているところであるが、これまでのところ、高い音が空間の高い位置に被験体の注意を誘導、低い音は空間の低い位置に注意を誘導する傾向が在ることがみえている。本研究では、言語ラベルの進化的・発達的基盤の一つの要因として近年注目を浴びている「感覚間一致」に注目し、その進化的起源をあきらかにするため、比較認知科学的研究を実施ている。これまでに、チンパンジーを主たる対象種として、以下の感覚間一致を調べてきた。1)社会的順位と空間の感覚間一致、2)系列情報と空間の感覚間一致、3)音の高さと明るさの感覚間一致。本年度は、特にこの2)と3)の研究を推進した。2)では、まず、数字を順番に触ることを訓練した後(数字系列課題)、その順序が空間上に自発的にマッピングされるかを分析した。その結果、これまでに、序列の早いものは空間の左側に、序列の遅いものは空間の右側に自発的に配置されることがわかった。本年度は、さらにその感覚間一致が生じる機序をあきらかにするために、空間記憶課題と系列課題を2重課題として提示し、コントロール条件と比して、その2課題の間でもっとも認知的資源の競合が生じていることを確認した。また、3)では、音の高低と明るさの感覚間一致の研究を深化させるため、その効果を一致する刺激に目が向きやすくなる注意バイアスと、中間的な色の見えが音によって変化する知覚バイアスとに切り分け、特に後者の効果を計測した。具体的には、明るさの弁別をバイセクション法で訓練した。そののちに干渉刺激として高音、低音を提示した。その結果、まだ予備データではあるものの、2個体が中間色の明るさ判断をしている際に、高音を聞いた際には明るい色と判断することが、低音を聞いた際には暗い色と判断することが、統計的に有意な水準で生じた。本申請研究は、さまざまな感覚間一致を分析することで、その進化的起源を探ることを目的としている。平成28年度は、これまでに自身が報告してきた系列順序と空間の間の感覚間一致、および音の高低と明るさの感覚間一致の研究をより深化させ、順調なフォローアップ研究が行えている。一方で、まったく新規な感覚間一致への展開がおこなえていない、という問題点もあるため、「おおむね順調」と判断した。本研究では、言語ラベルの進化的・発達的基盤の一つの要因として近年注目を浴びている「感覚間一致」に注目し、その進化的起源をあきらかにするため、比較認知科学的研究を実施している。これまでに、チンパンジーを主たる対象主として、以下の感覚間一致を分析してきた。本年度は3)の研究を推進した。これまでにヒトを対象とし実施された研究から、音の高さと明るさの感覚間一致には、高い音の後には明るい色、低い音の後には暗い色に目が向きやすくなる注意バイアスと、中間的な色の見えが音によって変化する知覚バイアス、という二つのメカニズムが存在することが示されてきている。本年度は、昨年度予備実験を行ったこの知覚バイアスの研究をさらに展開した。具体的には、まず、明るさの弁別をバイセクション法をもちいて訓練した。被験体がこの弁別を学習したのちに、干渉刺激として高音、低音を呈示するテストを実施した。その結果、実験をおこなったすべての個体が、中間色の明るさ判断をする際に、高音を聞いた際には明るい色と判断すること、低音を聞いた際には暗い色と判断することがしめされた。本申請研究は、様々な感覚間一致を分析することで、その進化的起源を探ることを目的としている。本年度も順当に知見を集めている点はあるが、研究を広く展開することができなかったため、やや遅れている、と判断した。

本研究では、言語ラベルの進化的・発達的基盤の一つの要因として近年注目を浴びている「感覚間一致」に注目し、その進化的起源をあきらかにするため、比較認知科学的研究を実施した。これまでに、チンパンジーを主たる対象として、以下の感覚間一致を分析してきた。すなわち、1)社会的順位と空間の感覚間一致、2)系列情報と空間の感覚間一致、3)音の高さと明るさの感覚間一致。本年度は3)の研究である。先行研究から、ヒトの音の高さと明るさの感覚間一致には、高い音の後には明るい色、低い音の後には暗い色に目が向きやすくなる注意バイアスと、中間的な色の見えが音によって変化する知覚バイアス、という二つのメカニズムが存在することが示されてきている。本年度は、1昨年度につづきこの知覚バイアスの研究を継続した。また、加えて、2音の高さと空間の位置の間の感覚間一致に研究を展開した。それらの結果、1では、実験をおこなったすべての個体が、中間色の明るさ判断をする際に、高音を聞いた際には明るい色と判断すること、低音を聞いた際には暗い色と判断することがしめされた。この結果はチンパンジーも音の高さと明るさの間の感覚間一致をもつこと、さらに、そのメカニズムとして知覚バイアスがチンパンジーにも存在していることが示唆するものである。2については、現在もデータの解析を進めているところであるが、これまでのところ、高い音が空間の高い位置に被験体の注意を誘導、低い音は空間の低い位置に注意を誘導する傾向が在ることがみえている。今後もひきつづき感覚間一致、音象徴について比較認知科学的分析をおこなう。特に、下記の2点に重みを奥が、選択する感覚感一致や音象徴については、研究の進捗状況、ヒトを対象にした先端研究の動向に応じ柔軟に選択し、包括的に感覚間一致の進化的起源を探求する。研究1:音の高さと空間一致の間の感覚間一致を分析する。視覚刺激の種類は特に問題とならないため、通常の見本合わせ課題をもちいる。そのうえで、選択刺激の配置を上下に並べて提示する。干渉刺激として高音・低音、あるいは高音から低音へと移行する下降音やその逆の上昇音などをもちいる。もし、ヒトと同様に高音と空間の上部、低音と空間の下部の間に感覚間一致が生じるのであれば、被検体は高音や上昇音からは、空間上方に、低音や下降音からは空間の下方に注意がシフトしやすくなると考えられ、その方向に正答がある場合は、その逆の場合よりも成績がよくなると考えられる。研究2:音の大きさ・高さと物体の大きさの感覚間一致まず、さまざまな形・大きさをした視覚刺激をもちいて、大小弁別を訓練する。手続きには多対一象徴見本合わせ課題(バイセクション課題)をもちいる。その後、干渉刺激として聴覚刺激を提示する。この聴覚刺激には、異なるデシベル数の純音、および高音、低音を用意する。ヒトの場合大きな音・低音は大きさの大きいものと、小さな音・高音は小さなものと結びつくことが知られている。30年度も感覚間一致、音象徴について比較認知科学的分析をおこなう。特に、昨年度予定していながら、音の高さと明るさの感覚間一致の下位メカニズムの研究に変更し実施できなかった、下記の2点を実施する。ただし、選択する感覚感一致や音象徴については、研究の進捗状況、ヒトを対象にした先端研究の動向に応じ柔軟に選択し、包括的に感覚間一致の進化的起源を探求する。研究1:音の高さと空間感覚の間の感覚間一致を分析する。
すず・銀系鉛フリーはんだバンプの疲労寿命予測とエリアアレイパッケージへの適用

超高精度マイクロフォース試験機(分解能50nm)を応用した微細はんだ接合部疲労試験システムを開発し、Bi量を変化させた実物大Sn-Ag系はんだ接合部の疲労き裂発生・進展寿命に及ぼすBi量の影響について調べた。また、同時に任意曲線法によるはんだ接続部のき裂発生・進展解析に必要な繰返し応力-ひずみ曲線およびクリープ・疲労損傷に関するデータを3種類の雰囲気温度(303K,318Kおよび333K)と繰返し周波数(1Hz,0.1Hzおよび0.01Hz)の組み合わせに対して採取した。また、CCDカメラ付き実体顕微鏡と画像処理ボードを組み込んだパーソナルコンピュータからなるき裂発生・進展モニター記録システムとSEM観察とを併用して、き裂発生・進展メカニズムに及ぼす微視組織の影響を詳細に調べた。さらに、上述した実験観察に基づいて、Sn-Ag系鉛フリーはんだ材のクリープ・疲労損傷を統一的に表現できる損傷変数の発展を組み込んだ支配方程式を常微分方程式の境界地問題に帰着させて解くことを念頭において導出し、任意曲線法をさらに拡張発展させた。この理論をプログラムに追加し、鉛フリーはんだ接合部の疲労寿命予測を行い、その妥当性について調べた。その結果、本研究で提案した疲労寿命予測法により鉛フリーはんだ接合部の寿命予測が行えることを確認した。最後に、これらの計算をエリアアレイパッケージのような大規模計算に適用するために、任意曲線法の並列化アルゴリズムおよび任意曲線法と有限要素法との結合解法を提案し、その有効性を示した。今年度、本補助金を用いて購入した分解能50nmの超高精度マイクロフォース試験機を用いて、微細はんだ接合部の高精度疲労試験システムを開発した。そして本システムを用いて、Sn-Ag系鉛フリーはんだ接合部の疲労強度特性について詳細に調べた。具体的には、まずBi量を変化させたSn-Ag-Bi系はんだ接合部の一連の疲労試験を行い、疲労き裂発生・進展寿命に及ぼすBi量の影響について調べた。また、同時に任意曲線損傷変数法によるはんだ接続部のき裂発生・進展解析に必要な繰返し応力-ひずみ曲線およびクリープ・疲労損傷に関するデータを3種類の繰返し周波数(1Hz,0.1Hzおよび0.01Hz)に対して採取した。また、クリープ・疲労試験中のき裂発生・進展挙動の観察・測定が非常に重要であるので、現有設備のCCDカメラ付き実体顕微鏡と画像処理ボードを組み込んだパーソナルコンピュータからなるき裂発生・進展モニター記録システムとSEM観察とを併用して、き裂発生・進展メカニズムに及ぼす微視組織の影響を詳細に調べた。また、上述した実験観察に基づいて、Sn-Ag-Bi系鉛フリーはんだのクリープ・疲労損傷を統一的に表現できる損傷変数の発展を組み込んだ支配方程式を常微分方程式の境界地問題に帰着させて解くことを念頭において導出し、任意曲線損傷変数法をさらに拡張発展させた。この理論をこれまで開発してきたプログラムに追加し、鉛フリーはんだバンプ単体の疲労寿命予測のための計算を行っているところである。すず・銀系鉛フリーはんだバンプが受ける疲労・クリープ損傷について詳細に調べるため、分解能50nmの超高精度マイクロフォース試験機を用いた新しい高精度疲労試験システムを開発した。

さらに、上述した実験観察に基づいて、Sn-Ag-Bi系鉛フリーはんだのクリープ・疲労損傷を統一的に表現できる損傷変数の発展を組み込んだ支配方程式を常微分方程式の境界地問題に帰着させて解くことを念頭において導出し、任意曲線法をさらに拡張発展させた。この理論をこれまで開発してきたプログラムに追加し、鉛フリーはんだバンプ単体およびエリアアレイパッケージの疲労寿命予測を行った。そして、これらの解析結果と実験結果とを比較することにより、本予測法の妥当性を確認した。
学校における職業教育に関する経済学的研究

本研究は、学校で実施される職業教育について、その効果を経済学的観点から評価し、より良い職●生涯の形成に効果的な教育プログラムを提案することを目的とした。そこで学校における職業教育に●いて、効果的なプログラムを構築するための基礎となる実証的論拠を収集することを主眼に、インタ●ネット調査ならびに全国郵送調査を実施した。調査に基づく本研究の知見からは、現状までの学校教育は所得増加に寄与するといった、積極的な●済的効果を見出すことは出来なかった。ただし、適切な職業教育の実施は、中途退学の抑制及び正社●就業の促進といった学校から職業への移行を円滑化する他、就業後のやりがいや満足度などの主観的●価を高める可能性を有することが、複数の調査から実証的に支持されるところとなった。職業教育については、それが客観的な付加価値の増大に結びつかない以上、不必要といった見解も●り得よう。しかし本研究の検証は、そのような意見とは異なる解釈を行っている。むしろ高齢化、無●者増大、格差拡大といった実現見通しのある希望形成を必然的に困難にする社会状況が進むなか、個●人の希望保有を促し、その実現に向け主体的に努力する素養や経験を蓄積する職業教育およびキャリ●教育は、現下の状況においてむしろ重要性が高まりつつあると考えられる。そこでは、単に職業遂行上の表面的な専門知識の形成を促す教育ではなく、好奇心やチャレンジ精●等の涵養の他、希望の多くが経験する挫折のなかで、主体的かつ柔軟に希望を修正・進化させること●促す職業教育こそが、重要となることが本研究からは明らかにされた。その効果は、単に学校での職●教育のみならず、家族による学生・生徒本人への適切な期待と、本人を支える友人関係の円滑な構築●よって、より大きな効果が期待されること等が指摘された。本研究では、学校を主体に実施される職業教育について、その効果を経済学的観点から評価することを目的としている。そこで本年度は、無業や失業状態にある若者に対する就職支援を実施しているジョブ・カフェなどの若年に対する就業支援を行っている諸機関を訪問調査し、どのようなかたちでの職業情報の提供が就業および自己実現に向けた目標形成とそのための行動設定に有効かを検討した。具体的には職業教育が特に必要であると思われる、学校に通わず、仕事もしておらず、職業訓練を受けていない若者をNEET(Not in Education, Employment, or Training)と定義し、その実情について図書を刊行した上で、それらに該当する若者への職業教育という観点から、聞き取り調査を全国すべてのジョブ・カフェ(43箇所)ならびに若年就業支援を行っているNPO(非営利機関)に対し行った。さらにNEETにいち早く着目し、若年就職支援にも先進的なイギリスに訪問調査し、情報収集も実施した。そのなかで職業教育には、個別の事情に応じたカウンセリングと、個人と企業の接点を形成するコンサルティングの重要性を再確認した。あわせて若年本人の主体的なキャリア形成行動を発起する上では、カウンセリング機能とコンサルティング機能について、分化型ではなく統合型が有効であるという仮説を見出した。従来の職業教育のでは、求人側の事情に応じてそれに適合する求職者の適職ならびに適性発見が当然とされてきた。しかし、求職者ならびに求人側のマッチングについての満足度を高めるためには、むしろ求職側の能力および選好を同一化した上で、それに応じた個別の求人開拓を行うことがより有効である可能性が高い。今後は仮説の妥当性を実証的に検証し、学校における職業教育の有効性を評価する基準の構築を目指す。併せて本年度は、実際にいくつかの高校や中学を訪問調査し、実際の職業教育もしくはキャリア教育を実施する際のポイントならびに課題を個別に聞き取り調査した。

それらの調査に基づき研究グループ内での綿密な討議と検討を踏まえ、本年は学校における職業ならびにキャリアについての具体的な教育資料として「14歳からの仕事道」(理論社)を刊行した。来年度は、これらの資料を利用しながら、上記の仮説を前提に、実際に若年に対して有効な職業教育の内容を具体化することを目指したい。学校におけるキャリア教育の意義と効果が問われている。1990年代から2000年代初頭を通じ、若年就業はさまざまな困難に直面してきた。若年完全失業率は上昇し、非正規雇用として離転職を繰り返す「フリーター」増加も社会問題となった。近年はフリーターと異なって就業をしておらず、かつ失業者のように求職活動もしていない無業者である「ニート」の増加も問題化している。これらの安定した能力開発や就業機会が得られない若者の増加は、将来の日本社会を不安定化させるものとして危惧されている。特にニート状態にある若者の実態を調査すると、やりたいことがみつからず、働く自分の能力に希望を見出せないために就業出来ないといった特徴がみられる。現在、キャリア教育として職業意識の涵養を学校段階で実施することの必要性が高まっている。今年度の研究では、「職業と希望に関するアンケート調査」と「仕事と生活に関するアンケート調査」を実施し、学校における望ましい職業教育プログラムの骨格づくりを検討した。2049歳に行ったアンケート調査によると、過去の小学6年、中学3年時点でなりたい職業を持っていたのは、6070%にのぼっていたが、実際、希望する職業に就いた経験があるのは、それぞれ8%、15%にすぎないことがわかった。しかし、その一方で労働経済学の実証分析手法を用いて、仕事にやりがいを経験したことがある割合を求めると、小中学生時代に職業希望を持っていなかった場合に比べ、希望を持っていた場合の方が、その割合は有意に高くなっていることが確認された。さらに当初の希望を断念した後も、状況に応じて別の希望に軌道修正してきた場合ほど、やりがいを経験しやすいことも統計的に確認された。上記の結果から統計的事実として踏まえた上で実践的な指導を行うことにより、キャリア教育の効果を高めることが示唆された。本研究は、学校で実施される職業教育について、その効果を経済学的観点から評価し、より良い職業生涯の形成に効果的な教育プログラムを提案することを目的とした。そこで学校における職業教育について、効果的なプログラムを構築するための基礎となる実証的論拠を収集することを主眼に、インターネット調査ならびに全国郵送調査を実施した。調査に基づく本研究の知見からは、現状までの学校教育は所得増加に寄与するといった、積極的な経済的効果を見出すことは出来なかった。ただし、適切な職業教育の実施は、中途退学の抑制及び正社員就業の促進といった学校から職業への移行を円滑化する他、就業後のやりがいや満足度などの主観的評価を高める可能性を有することが、複数の調査から実証的に支持されるところとなった。職業教育については、それが客観的な付加価値の増大に結びつかない以上、不必要といった見解もあり得よう。しかし本研究の検証は、そのような意見とは異なる解釈を行っている。
化学修飾ミオグロビンのシトクロームCペルオキシダーゼ活性

シトクロームcペルオキシダーゼ(CCP)はシトクロームc(cyt c)の過酸化水素による酸化反応を触媒するへム酵素であり,その活性中心にはメトミオグロビン(metMb)と同じプロトヘムが存在しヘム鉄はヒスチジンイミダゾールと水分子を配位している。したがって,metMbもCCP活性を示すが,その反応速度が遅いためヘムの酸化によりその活性を容易に失う。本研究ではmetMbの表面に存在するリシン残基の一つにジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)を修飾して酸性蛋白質に改変しcyt cと複合体を形成させることにより電子移動反応を促進させて,活性の改善を図ることを目的とした。1)化学修飾メトミオグロビン(metMb-(DTPA)_n)を調整しDTPAの結合位置を特定した。metMbDTPAではLys87に,metMb(DTPA)_2ではLys87とLys145に,metMb(DTPA)_4ではLys47,Lys87,Lys145,Lys147に,metMb(DT-PA)_5ではLys47,Lys50,Lys87,Lys145,Lys147にそれぞれ結合していることがわかった。2)化学修飾メトミオグロビン(metMb(DTPA)_n)のCCP活性の測定を行い,反応活性とDTPAの結合数との関係を検討した。また,metMb(DTPA)_nと過酸化水素との反応で生成するFerrylMb(DTPA)_nとcyt cとの反応でも複合体生成定数と複合体内電子移動反応速度定数の両者が、DTPAの結合数が増すにつれて大きくなることがわかった。cyt c(II)からFerrylMb(DTPA)_nヘの電子移動は次のような経路を通して行われているものと推定される:Fe(II)in cyt c(II)→Lys13 and/or Lys73 in cyt c(II)→DTPA-modified Lys87,145,147 in FerrylMb→Tyr146→His93→Fe(IV)in FerrylMb.この電子移動距離は約35Åにも及びその反応速度定数は6.5×10^<-2>s^<-1>(25°C)であった。3)亜鉛ミオグロビン(Zn-Mb(DTPA)_n)とcyt c(III)との複合体内光誘起電子移動反応を検討し,その反応機構を明らかにした。シトクロームcペルオキシダーゼ(CCP)はシトクロームc(cyt c)の過酸化水素による酸化反応を触媒するヘム酵素であり,その活性中心にはメトミオグロビン(metMb)と同じプロトヘムが存在しヘム鉄はヒスチジンイミダゾールと水分子を配位している。

本研究ではmetMbの表面に存在するリシン残基の一つにジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)を修飾して酸性蛋白質に改変しcyt cと複合体を形成させることにより電子移動反応を促進させて,活性の改善を図ることを目的とした。1)ジエチレントリアミン五酢酸無水物によるメトミオグロビンの修飾と分離・精製を行い、DTPAの結合数を決定するためマススペクトル測定を行った。この結果に基づき、DTPAが5個、4個、および2個結合したmetMbDTPAを同定し、それぞれの結合位置を特定した。また、DTPAが1個結合したmetMbDTPAについては結合位置の特定を現在進めている。2)metMbDTPAのCCP活性の測定を行い、反応活性とDTPAの結合数との関係を検討した。cyt cの過酸化水素による酸化反応は遅いが、metMbを共存させると酸化反応速度が大きくなるが、metMbDTPAはさらに反応速度を増大させ、DTPAの結合数が増加するに伴い反応活性が大きくなった。これはmetMbDTPAとcyt cとの複合体生成定数および複合体内電子移動反応速度定数の両者が、DTPAの結合数が増すにつれて大きくなることが原因であることがわかった。また、metMbDTPAと過酸化水素との反応で生成するFerrylMb-DTPAとcyt cとの反応でも複合体生成定数と複合体内電子移動反応速度定数の両者が、DTPAの結合数が増すにつれて大きくなることがわかった。今後、metMbDTPAとcyt cとの複合体の生成定数の決定やcytcの結合位置を特定する必要がある。シトクロームcペルオキシダーゼ(CCP)はシトクロームc(cytc)の過酸化水素による酸化反応を触媒するヘム酵素であり,その活性中心にはメトミオグロビン(metMb)と同じプロトヘムが存在しヘム鉄はヒスチジンイミダゾールと水分子を配位している。したがって,metMbもCCP活性を示すが,その反応速度が遅いためへムの酸化によりその活性を容易に失う。本研究ではmetMbの表面に存在するリシン残基の一つにジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)を修飾して酸性蛋白質に改変しcytcと複合体を形成させることにより電子移動反応を促進させて,活性の改善を図ることを目的とした。1)化学修飾メトミオグロビン(metMb(DTPA)_n)を調製しDTPAの結合位置を特定した。metMbDTPAではLys87に,metMb-(DTPA)_2ではLys87とLys145に,metMb(DTPA)_4ではLys47,Lys87,Lys145,Lys147に,metMb-(DTPA)_5ではLys47,Lys50,Lys87,Lys145,Lys147にそれぞれ結合していることがわかった。2)化学修飾メトミオグロビン(metMb(DTPA)_n)のCCP活性の測定を行い,反応活性とDTPAの結合数との関係を検討した。また,metMb(DTPA)_nと過酸化水素との反応で生成するFerrylMb-(DTPA)_nとcytcとの反応でも複合体生成定数と複合体内電子移動反応速度定数の両者が、DTPAの結合数が増すにつれて大きくなることがわかった。cytc(II)からFerrylMb(DTPA)_nヘの電子移動は次のような経路を通して行われているものと推定される:Fe(II)in cytc(II)→Lys13 and/or Lys73 in cytc(II)→DTPA-modified Lys87,145,147 in FerrylMb→Tyr146→His93→Fe(IV)in FerrylMb.この電子移動距離は約35Åにも及びその反応速度定数は6.5×10^<-2>s^<-1>(25°C)であった。
市民科学活動との協働による在来・外来オオサンショウウオの環境DNA調査

特別天然記念物であるオオサンショウウオの環境DNA検出手法を確立し、分布域全域である西日本の河川で検出試験を行った。12水系の331地点で調査を行った結果、111地点でオオサンショウウオのDNAを検出した。この結果をもとに、生息適地モデルを作成したところ、既知の生息地とほぼ一致するモデルが得られ、環境DNA分析を用いた希少種の生息適地探索が可能であることが示された。研究の過程では市民団体や高等学校との協働も行い、お互いにとって意義のある連携が可能であることが明らかとなった。本研究では、在来・外来のオオサンショウウオのDNAを河川水から検出する手法を用い、一般の環境保全団体、中学校・高校等の科学部活動などと連携して、国内の分布域全域にわたって、在来・外来オオサンショウウオの分布調査を行うことを目的とする。平成26年度には、兵庫・岡山・三重・奈良・大分の5県において8水系の合計194地点(兵庫県:佐用川を中心とする千種川水系43地点・羽束川水系16地点・市川水系40地点・円山川水系31地点、岡山県:高梁川水系23地点・旭川水系5地点、三重県:名張川水系18地点、大分県:駅館川水系18地点)で採水を行った。それぞれから環境DNA抽出を行い、既存のリアルタイムPCR法によるオオサンショウウオおよびチュウゴクオオサンショウウオの環境DNA検出を試みた。また、核DNAをマーカーとした新たな検出系の開発も行った。環境DNA検出の結果、調査した8水系全てにおいて少なくとも1地点以上でオオサンショウウオのDNAを検出する事ができた。オオサンショウウオDNAガ検出されたのは調査した194地点中44地点であった。一方チュウゴクオオサンショウウオのDNAはいずれの地点からも検出されなかった。調査河川のうち名張川水系はすでにチュウゴクオオサンショウウオの侵入が知られており、今回は非検出であったが継続調査が必要である。新たに開発した核DNAマーカーは3河川でテストした結果、既存のミトコンドリアDNAマーカーよりも検出感度が高い事が明らかになった。市民団体等の連携に関しては、兵庫県において「佐用川のオオサンショウウオを守る会」および篠山市内の高等学校生物部、大分県の安心院高等学校生物部とともに環境DNA調査を行った。環境DNA調査で陽性反応が出た地点で実際に個体が発見されるなど、協働の効果が現れている。今後も西日本全域における調査を継続する予定である。本研究では、在来及び外来のオオサンショウウオの分布を「環境DNA分析」を用いて明らかにする手法を用いて、一般の環境保全団体、中学校、高校等の科学部などと連携して、国内の分布域全域にわたって在来及び外来オオサンショウウオの分布域を明らかにすることを目的とする。平成27年度には、岐阜、兵庫、岡山、広島、鳥取、島根の5県において7水系の合計187地点に(岐阜県:長良川水系30地点、飛騨川水系6地点、兵庫県:羽束川水系21地点、岡山県:旭川水系39地点、広島県:太田川水系28地点、鳥取県:日野川水系14地点、島根県:江の川水系49地点)で採水を行った。核DNAをマーカーとした環境DNA検出系でオオサンショウウオ属の環境DNAを検出した結果、全ての河川においてオオサンショウウオのDNAが検出された。前年度の調査結果とあわせて、366地点で合計454回の採水を行った結果、127地点でオオサンショウウオのDNAが検出された。なお、外来のオオサンショウオDNAは既に報告済みである京都府の桂川水系以外では検出されなかった。市民団体や高校等との連携については、兵庫県において「佐用川のオオサンショウウオを守る会」および篠山市内の高校生物部との連携を継続し、環境DNA調査を行っている。また、環境DNA分析を用いた高校の科学教育支援や高校生の研究活動支援として、11件の高大連携事業(実習体験や講義)を行うとともに、兵庫県立農業高校および兵庫県立加古川東高校の生物部の活動支援を行った。平成27年度には6県で8水系の約160地点の調査を予定していたが、実際には5県で7水系の187地点での調査を行った。一水系あたりの調査地点数を増やしたために水系の数としては予定より減ったが、調査地点数は予定より増やすことが出来たので、概ね予定通りに実行できたと考えている。市民団体や高校等との連携については、兵庫県と大分県での連携が順調である。他府県における連携が予定より進んでいないが、独自の調査も行っており、プロジェクト全体には影響を与えていない。これらのことから、おおむね順調に進展していると自己評価する。本研究では、在来・外来オオサンショウウオのDNAを河川水から検出する環境DNA分析手法を用い、一般の環境保全団体、中学校・高校等の科学部活動などと連携して、国内の分布域全域にわたって、在来・外来オオサンショウウオの分布調査を行うことを目的とした。検出系の最適化では、核DNAをマーカーとした新たな検出系を開発し、オオサンショウウオの生息域をより精度良く検出できる系の開発に成功した。野外調査では、平成26年度から28年度の3年間で、岐阜、三重、奈良、大阪、兵庫、岡山、広島、鳥取、島根、徳島、高知、愛媛、大分の17水系430地点で採水調査を実施し、うち124地点で在来オオサンショウウオのDNAが検出された。また、1水系の2地点においてチュウゴクオオサンショウウオのDNAが検出された。