hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト黄体機能の調節機構に関する基礎的・臨床的研究

FSHはP、A、T産生に対して影響を与えなかった。B群において、estrogen産生能つまりaromatase活性は、Lの方が有意に高かった。FSHを付加した時、Aからの【E_1】+【E_2】産生はLで2028%の有意な増加を示したが、Sでは非添加群と差がなかった。hCGは、estrogen産生に対して影響を与えなかった。androgen産生はSの方が高くhCGにより有意に増加し、一方aromatase活性はLの方が高くFSHにより有意に増加するという結果が得られた。このことよりヒト黄体のL、S両細胞の性ステロイド生合成機能は、卵胞の2型細胞に類似し、黄体機能の正常な発現のためにはLHのみではなくFSHも必要であることが示唆された。
樹状細胞の抗原提示を制御するRabタンパク質の解析

主要組織適合抗原クラスII(MHC-II)は、抗原提示細胞に発現し、病原体成分をT細胞に提示することで病原体排除のための獲得免疫応答を誘導する。MHC-IIの細胞表面の発現量は免疫応答を調節する因子であるが、その調節の分子機構は明らかではない。本研究では、刺激によるMHC-II発現変化の分子機構を解析し以下の成果を得た。(1)細胞表面MHC-IIの架橋は細胞内にカルシウム流入を誘導し、MHC-IIのエンドサイトーシスを誘導することを見いだした。(2)リポ多糖(LPS)刺激によってRab11の発現が誘導されることを見いだした。樹状細胞は生体に侵入した病原体などの外来抗原を取り込み、それらに対する獲得免疫応答を誘導する。このとき主要組織適合抗原(MHC-II)が外来抗原由来ペプチドをT細胞に提示することで免疫応答を誘導する。本研究では、樹状細胞におけるMHC-IIの発現量の調節機構を明らかとすることを目的として、今年度は以下の結果が得られた1)樹状細胞においてLPS刺激はRab11の発現を誘導した。MHC-IIの細胞表面の上昇時にRab11の発現上昇がみられるため、MHC-IIの発現調節へのRab11の関与が示唆された。2) MHC-IIのクロスリンクはMHC-IIのエンドサイトーシスを誘導し、MHC-IIの細胞内への移行を促進するが、このエンドサイトーシスはクラスリン依存的に起こることが示唆された。計画した研究項目の中では、想定以上に進捗し結果が得られたものと、予想より遅れているものがあるが、全体としてはおおむね順調に進展していると判断している。このとき主要組織適合抗原クラスII(MHC-II)が外来抗原由来ペプチドをT細胞に提示することで免疫応答を誘導する。MHC-IIの細胞表面発現量は免疫応答調節において重要な因子である。そこで、本研究では、樹状細胞におけるMHC-IIの細胞表面発現量の調節機構を明らかとすることを目的として、今年度は以下の結果が得られた。1)樹状細胞においてLPS刺激は小胞輸送を制御する低分子量Gタンパク質であるRab11の活性化を誘導した。このとき、MHC-IIの細胞表面発現の発現上昇がみられるため、MHC-IIの発現調節へのRab11の関与が示唆された。2) MHC-IIを抗体によってクロスリンクするとMHC-IIのエンドサイトーシスが誘導されることを見いだしている。前年度は各種エンドサイトーシス阻害剤の効果を検討し、クラスリン依存的なエンドサイトーシスであることを示唆する結果を得ていた。今年度は共焦点顕微鏡による観察によって、MHC-IIがクラスリンと共局在する結果を得た。これはMHC-IIのエンドサイトーシス経路がクラスリン依存的であることを強く示唆するものである。3) MHC-IIのクロスリンクの誘導するエンドサイトーシスに対し阻害剤を用いてそのメカニズムを検討した結果、MHC-IIのクロスリンクは細胞内のチロシンキナーゼであるSykを活性化することで、カルシウム流入を誘導すること、このカルシウム流入がMHC-IIのエンドサイトーシスに必要であることを示唆する結果を得た。生物系薬学今年度は、一部の本年度研究計画を来年度前後させて進めたため、未使用の予算が生じた。未使用額に関しては、次年度の研究を遂行する上で適切に使用する。研究費は消耗品を中心に研究計画に沿って使用する予定である。
ニュージーランド「行政革命」と国立大学のエージェンシー化の憲法学的研究

2000年度より2002年度までの3年間、科研費補助金をうけ、「ニュージーランド行政革命と国立大学のエージェンシー化の憲法学的研究」を行った。その研究成果の一部として2001年9月に地域科学部の紀要に「国立大学の独立行政法人化?ニュージーランド国立大学のエージェンシー化から考える」を発表した。ニュージーランド国立大学のエージェンシー化の概観を行ったが、同時に資料としてニュージーランドビクトリア大学の政治学教授のスティーブン・レビン教授のニュージーランド国立大学のエージェンシー化に関する二つのきわめて重要な講演を翻訳し、付録として添付した。この研究の結果としてニュージーランドの大学改革が失敗であったことがわかった。なぜならば大学の研究者達がこの改革を全く支持していないからである。というのも、この改革が、研究者に利益の追求を求め、学生には授業料を払うように求めたからである。それはとても困難なことである。NZの大学は利益団体ではなく、学生達は1992年までは大学まで無償だったからである。レビン教授はNZがユネスコの宣言に逆行して学生から授業料を取っていることに危惧を示しており、ユネスコ(現在日本が事務局長を務めている)は、1998年の高等教育世界宣言で各国政府に大学教育の無償化を求めているからである。大学では弁護士でもあるロースクールの教授だけはこの改革を支持していたが、彼らは医学部教授と同じく学内でよりも学外で稼ぎが大きく、教授の肩書きを利用するために大学にも勤めているという側面もあろう。こういう人々を別とすれば大学の研究者はほとんどが研究で稼ぐなどということは不可能である。地震や天文学をふくむ地学、数学、生態学に稼げる道があるだろうか。これらの学間はニュージーランドの大学ではいまや消滅しつつある。この改革は改革ではなく、ニュージーランドの大学の破壊者であった。これがこの研究の傾向的結論であった。今後、さらにニュージーランド国立大学エージェンシー化の改革の意味を多面的に検討したい。新たな課題としては、大学改革がいかなる影響をNZの教育改革全体に及ぼしたのかについて検討が必要である。日本での国立大学の独立行政法人化が風雲急を告げている。ニュージーランド国立大学のエージェンシー化の研究は日本の大学に大きな教訓を与えうる。本研究が急がれる所以である。今年度は初年度だったので、資料収集に明け暮れた。主として情報源はインターネットであるが、このニュージーランド大学改革について北海道大学が研究に力を入れているので、昨年九月直接訪れて意見交換した。また日本の行革とニュージーランド行革の性格の違いも多面的に研究する必要がある。昨年六月建設省中部地方建設局(名古屋)にておよび今年二月東京での環境問題の研究会でもニュージーランド行革から見た日本国土交通省について報告したが、ニュージーランドの行革では建設省は解体され環境省の下に分属させられたが、日本と違って「全て開発は環境省のコントロールの下に」という思想で行革が貫かれている。ではニュージーランドの大学改革はいかなる理念により推し進められているか、そしてその実態はどうか。この問題の検討のためにニュージーランドの研究者を岐阜大学に招き何回かの研究会を持った。ビクトリア大学のスティーブン・レビン政治学教授を昨年二月と今年の一月に、またルーク・ノテジ九州大学法学助教授を昨年五月に招いた。私自身も、昨年四月三重大学の研究会でニュージーランドの大学改革について報告した。昨年末より冬期休暇を利用してニュージーランドに渡航し、資料収集とともに、ビクトリア大学調査に着手し、法学部でアントニー・アンジェロ憲法学教授と会い、またマッセイ大学のファリブ・ソス経営学講師にも会い、調査への協力を依頼した。

ニュージーランドでは特に重要な文献の収集に成功したので、来年度のための本格的な研究体制がかなり整った。今年八月の夏期休暇に予定しているニュージーランド調査ではビクトリア大学の経営責任者(Vice-chancellor)にインタビューする予定である。日本における国立大学の独立行政法人化の政府作業は、2004年度実施向けた法案の2003年国会提出のための準備が急ピッチで進んでいる。日本のモデルになっているNZ(ニュージーランド)国立大学のエージェンシー化は、実施後10年余が経過し、様々な教訓を日本に与えている。本研究「ニュージーランド『行政革命』と国立大学のエージェンシー化の憲法学的研究」は、現在二年目をほぼ終え、いよいよ成果を発表する段階に入った。まず、今年度は、2001年9月に、岐阜大学地域科学部の紀要に『国立大学の独立行政法人化?ニュージーランド国立大学のエージェンシー化から考える』を発表した。これは、NZの「行政革命」の原理となったエージェンシー理論を要約し、NZ国立大学におけるエージェンシー化の導入の結果を概略したものである。特に付録には、一昨年、昨年と二回にわたり、岐阜大学にお招きした、NZの高名な政治学者であるウェリントン・ビクトリア大学のスティーブン・レビン教授のNZの大学改革についての二つの講演録を翻訳資料として添付したが、これは極めて重要である。NZの大学改革の現状と問題点や国民党政権から労働党政権に代わっての大学に関する政策転換についても知ることができる。さらにレビン教授は2001年12月にも岐阜大学にお招きし、「現代ニュージーランドの憲法問題」と題し、現在の労働党政権下での国家改革の注目すべき動向について講演されたが、これも2002年5月までに翻訳入稿する予定である。私は2001年8月にはNZのビクトリア大学を再訪し、レビン教授の協力をえてジョナサン・ボストン教授とビクトリア大学ラッセル・マーシャル学長に会見して聞き取り調査を行なった。次回NZ訪問時には実務最高責任者の副学長と会見して聞き取り調査を行なう予定である。これらはいずれ報告書にまとめる予定である。今年度は本研究の3年目で最後の年であった。まず、海外調査を再び行った。7月にオーストラリアのシドニーのNSW大学で日本法国際シンポジウムがあり、様々な国と分野の日本法研究報告が二日間にわたり行われたが、私は招待を受けて環境法問題の比較研究について報告したが、大学の独立行政法人化の問題についても、国立シドニー大学のルーク・ノッテジ助教授(NZビクトリア大学元講師)らと意見交換した。
次世代車載ネットワークへの不正侵入を高速に検知する自己学習型システムの開発

本研究では,車載ネットワークへの不正侵入を高速に検知・防止するシステムを開発し,当該システムの詳細な性能評価により,その実用可能性を明らかにする.開発するシステムはランダムフォレストという機械学習に基づいているため,新たな不正侵入の手口をシステム自らが学習する自己学習機能を備えた自律システムを開発する.サイズやコスト,消費電力などの厳しい制約を満足するために,決定グラフを用いた設計手法により,ワンチップでの専用ハードウェアでシステムを実現する.本研究では,車載ネットワークへの不正侵入を高速に検知・防止するシステムを開発し,当該システムの詳細な性能評価により,その実用可能性を明らかにする.開発するシステムはランダムフォレストという機械学習に基づいているため,新たな不正侵入の手口をシステム自らが学習する自己学習機能を備えた自律システムを開発する.サイズやコスト,消費電力などの厳しい制約を満足するために,決定グラフを用いた設計手法により,ワンチップでの専用ハードウェアでシステムを実現する.
イネ科植物人工染色体の創出とカスタム化

本研究の目的は、イネとオオムギにおいて、多数の遺伝子の受け皿となる"植物人工染色体"を効率的に創出できる方法を開発することにある。新規にデザインされたT-DNAコンストラクトには二つのLoxP配列が含まれ、うち一つはトランスポゼースによりゲノム中に転移する。この転移はCreリコンビナーゼ遺伝子を発現させ、LoxP間の組換えを誘発することにより環状の染色体が創出されると想定された。実際このコンストラクトを導入したイネでには、染色体10番の欠失が観察され、期待通りにDNA分子の環状化が起きたと考えられた。この環状化DNAにセントロメア機能が付与されれば、人工環状染色体として機能するだろう。本研究の目的は、イネとオオムギにおいて、多くの遺伝子を含む巨大DNAの導入が可能な“植物人工染色体"を創出し、それらを広く利用できるようカスタマイズすることにある。そのため、まずイネ科植物において、人工環状染色体を創出できるコンストラクトを作成した。このコンストラクトでは、近接する2つのLoxPサイトがT-DNA(LBとRBで挟まれる領域)に組み込まれ、そのうち1つは非自律型トランスポゾンDs内に配置された。これに、プロモーター(PMAS)でドライブしたバスタ耐性遺伝子(BAR)とプロモーターをもたないハイグロマイシン耐性遺伝子(HYG)を加えた。さらに、イントロンを挿入したCreリコンビナーゼ遺伝子(CRE)を導入した。このコンストラクトを、自律型トランスポゾンAcのトランスポゼース(転移酵素)遺伝子を導入したイネに、アグロバクテリウムを介して導入し、複数の形質転換体を得た。得られた形質転換植物では、トランスポゼースの働きによりDs-LoxP-Dsカセットが他の領域に転移すると、CRE遺伝子の上流に、35Sプロモーター(P35S)が配置され、Creリコンビナーゼが発現することが想定された。発現したCreリコンビナーゼは、2つのLoxP間の組換えを特異的に触媒し、その間のDNAを環状化する。この結果、35Sプロモーターはハイグロマイシン耐性遺伝子の上流に位置することになり、ハイグロマイシン耐性が現れると考えられた。しかし、T0形質転換体においては、ハイグロマイシン遺伝子と35Sプロモーターとの融合は確認されなかった。今後、これら形質転換体を育成し、次代でのハイグロマイシン耐性個体を選抜する予定である。そのため、初年度で作成したイネ科植物用コンストラクトを用いて、イネ及びオオムギを形質転換した。このコンストラクトには、近接する2つのLoxPサイトがT-DNA内(LBとRBで挟まれる領域)に組み込まれており、そのうち1つは非自律性トランスポゾンDs内に配置されている。そのため、Acトランスポゼース(転移酵素)遺伝子が組み込まれ発現している個体では、LoxPを内部に持つDsがゲノム内の他の部位に転移する。この転移が起こると、CREリコンビナーゼ遺伝子の上流に、35Sプロモーター(P35S)が配置され、Creリコンビナーゼが発現する。発現したCreリコンビナーゼは、2つのLoxP間の組換えを特異的に触媒し、その部分のDNAを環状化することが想定された。実際に作成したイネ形質転換体のT1形質転換体においては、Creリコンビナーゼの組換えによって起こるハイグロマイシン遺伝子と35Sプロモーターとの融合は確認されなかったが、次代の自殖個体の中に、このイベントを示唆するものが得られた。そこで、この個体の染色体解析を行ったところ、第10染色体の短縮化が確認された。これは、LoxP間の組換えによって、染色体の一部が環状化したが、その中にセントロメアが含まれないため、細胞分裂時に失われた結果であると考えられた。イネでは、トランスポゼースを発現している個体を形質転換することができたが、オオムギでは、この様な個体が得られておらず、今後、作成する必要があり、交配などによる導入が必要であるため。本研究の目的は、イネとオオムギにおいて、多数の遺伝子を含む巨大DNAの導入が可能な"植物人工染色体"を創出し、それらを広く利用できるようカスタマイズすることにある。そのためイネ科植物用のコンストラクトpD(Lx)C(I)を作成し、イネへ形質転換した。このコンストラクトでは、近接する2つのLoxP配列がT-DNA領域内に組み込まれており、そのうち1つは非自律的トランスポゾンDs内に配置されている。Acのトランスポゼース遺伝子が発現している個体では、LoxPを内部に持つDsがゲノム中の他の部位に転移する。この転移により、Creリコンビナーゼ遺伝子の上流にCaMV35Sプロモーターが配置され、Creリコンビナーゼ遺伝子が発現する。Creリコンビナーゼは、2つのLoxP間の組換えを特異的に誘発し、2つのLoxP配列が同方向である場合はDNA分子の環状化が、逆方向の場合は逆位が誘導される。環状化したDNA分子は、内部にセントロメア活性配列が含まれないと細胞分裂時に消失するため、染色体の欠失が起こることが推測され、実際イネでは染色体10番の欠失が観察された。このことから、このシステムのイネ科植物での有効性が実証された。

そこで、同じコンストラクトをオオムギに導入し、複数の形質転換体を得た。TAIL-PCR法によりT-DNA挿入位置の特定を試みたが、確定は困難であった。これは、オオムギのゲノムサイズが大きく、使用したプライマーに類似した配列が多く存在するためである。今後オオムギに適したプライマーやPCR条件の再検討が必要である。また、Acトランスポゼース遺伝子をオオムギに導入し、10数個体の形質転換体を得た。これらの多くは、期待通りに発現していたため、オオムギでもゲノム再構成を起こさせることが可能となった。本研究の目的は、イネとオオムギにおいて、多数の遺伝子の受け皿となる"植物人工染色体"を効率的に創出できる方法を開発することにある。新規にデザインされたT-DNAコンストラクトには二つのLoxP配列が含まれ、うち一つはトランスポゼースによりゲノム中に転移する。この転移はCreリコンビナーゼ遺伝子を発現させ、LoxP間の組換えを誘発することにより環状の染色体が創出されると想定された。実際このコンストラクトを導入したイネでには、染色体10番の欠失が観察され、期待通りにDNA分子の環状化が起きたと考えられた。この環状化DNAにセントロメア機能が付与されれば、人工環状染色体として機能するだろう。作成したコンストラクトでは、思ったほど形質転換体が作出されてこない。形質転換法などの改良等を検討している。昨年度まで、イネ科植物用に作成した新規コンストラクトを用いて、イネ及びオオムギにおいて形質転換体を複数作出した。これらの形質転換体については、TAIL-PCR法等によりT-DNAの挿入位置を特定している。本年度は形質転換体の中から、T-DNAがセントロメア内またはその周辺に挿入された形質転換体を選抜し、それらを集中的に解析し効率をアップする。目的とする個体が得られた場合は、PCRとFISH法により詳細な解析を行い、植物人工環状染色体(Plant Artificial Ring Chromosome: PARC)創出の可能性を探る。PARCの存在が確認された場合は、次代への伝達をPCRから同様に調査する。安定なPARCが作出された場合は、その分子構造を明らかにするとともに、ベクターとしての利用を図る。オオムギについては、まだAcトランスポゼース遺伝子を含んだ形質転換体が得られていないため、選抜した個体にTPase遺伝子を導入し、Ds-LoxP-Dsの転移を誘発する。得られた形質転換体については染色体解析を行い、ゲノム構造の変化を確認する。28年度が最終年度であるため、記入しない。農学植物人工染色体を簡易的に作出するため、新たなコンストラクトを作成したが、効率が思ったほど上がらないため、シロイヌナズナで用いた方法も採用することとした。また、人工環状染色体への外来遺伝子の導入も検討している。消耗品の納入が遅れたため28年度が最終年度であるため、記入しない。研究を効率的に展開するため、次年度において同一人材を1ヶ月間雇用する必要があるため。納入が遅れた消耗品の費用等に使用した28年度が最終年度であるため、記入しない。形質転換体を作成するため、人件費として使用する。
個人識別・親子鑑定に有用なSNPのリアルタイムPCRによる検出法の開発

本研究において以下のような結果が得られた2.ABO式血液型糖転移酵素cDNAの261番の欠失の有無、703番、796番及び930番における塩基置換を識別できるMGBプローブを用いたTaqMan PCR法によるABO式血液型genotypingの系を構築することができた。3.ABO式血液型糖転移酵素cDNAの261番における欠失の有無、796、803番の塩基置換について融解曲線分析による検出法を構築した。蛍光色素標識変異プローブと変異のない領域にハイブリする蛍光標識アンカープローブを混和し、反応液の温度を徐々に上昇させ、変異の有無による変異プローブの解離を蛍光強度モニタリングによって検出し、261番においてはAA・AO・OOを、796、803番においてはBB及びAB・BOを識別することができた。4.ミスマッチプライマーを用いたMN式血液型genotypingについて検討した。M型にマッチしたprimerを設計し、PCRの立ち上がりのサイクル数の遅れを解析することにより、MM型、NN型、MN型を識別する系を構築した。NN型では反応が遅いサイクル数から立ち上がり、MM型、MN型明瞭に区別できた。MM型とMN型の立ち上がりの差は1サイクル程度であり、正確な判定のために、β-globinによる標準化を行ったところ、サンプル10ng当たりのコピー数の(GYPA/β-globin)値は、MN型では1前後、MN型では0.4前後となり、MM型、NN型、MN型を識別できた。更にGYPA遺伝子のexon2の22番目の塩基の置換を識別する融解曲線分析法によるMN式血液型genotyping法を構築することができた。平成14年度は3点について検討し、以下のような結果が得られた。1.親子鑑定・個人識別に繁用されている遺伝的多型poly marker検出システムPMキット(Applied Biosytems)で検出することのできるLDLR、GYPA、HBGG、D7S8、GCについてTaqMan-ASA法による検出法を構築した。各座位の塩基配列を基にプローブ、プライマーを設計し、PMキットの結果と比較しながら最適な組み合わせを選択した。また、SYBRGreen Iを用いる変法(プローブを使用しない)においても各座位の判定を行うことができた。PMキットは繁用され、遺伝子頻度データベースもあるが、昨年12月で販売が中止された。今回、確立した方法によりキットを使用しなくとも5座位の多型を迅速に判定することができ、これまでに蓄積された知見やデータベースが無駄とはならない。2.ABO式血液型遺伝子に存在する塩基置換、欠失の融解曲線分析法による検出法を確立した。糖転移酵素cDNAの261番における欠失の有無と、796、803番の塩基置換について検出法を検討した。3.ミスマッチプライマーを用いたMN式血液型genotypingについて検討した。MM型とMN型の立ち上がりの差は1サイクル程度であり、正確な判定のために、β-globinによる標準化を行ったところ、サンプル10ng当たりのコピー数の(GYPA/β-globin)

値は、MN型では1前後、MN型では0.4前後となり、MM型、NN型、MN型を識別できた。本年度はMGBプローブを用いたTaqMan PCR法によるABO式血液型genotypingについて検討を行った。TaqManプローブはPCR中、フォワードプライマーとリバースプライマーに挟まれたターゲット配列とアニールするが、伸長反応の際にTaq polymeraseの5'nuclease活性によって分解され、クエンチングされていた5'側の色素の蛍光強度が増加する。この蛍光はPCR産物の生成量に比例するため、template DNAがどちらのalleleであったかを判定できる。プローブの3'側にTm enhancerであるMinor Groove Binder(MGB)を結合することにより短い配列で高いTm値を得ることができる。ABO式血液型糖転移酵素cDNAの261番の欠失の有無、703番、796番及び930番における塩基置換^<3)>を識別するためのプライマー及びMGBプローブを設計、合成した。261番ではA=B型用プローブをFAMで、O型用プローブをVICで標識した。その他の3部位ではA=O型用をFAMで、B型用をVICで標識した。PCRはPRISM7700 Sequence Detector(Applied Biosystems)を使用して、リアルタイムで蛍光を検出しながら行った。261番A=B型用プローブでは、OOと他の5種類の遺伝子型を区別することはできたが、OOでもサイクル数を重ねると軽度の蛍光の増加がみられた。261番O型用プローブでは蛍光強度のパターンはOをホモで持つOO,ヘテロのAO,BO,Oを持たないAA,AB,BBの3つのパターンに分かれたが、Oを持たないAA,AB,BBでもサイクル数を重ねると軽度の蛍光の増加がみられた。703番、796番及び930番において、A=O型用プローブではBB以外の5種類の遺伝子型とBBを明瞭に識別することができた。また、B型用プローブではB遺伝子を持つBB,BO,ABとB遺伝子を持たないAA,AO,OOを明瞭に識別することができた。ただし、796番においてサイクル数を重ねるとB遺伝子を持たないAA,AO,OOでも軽度の蛍光の増加がみられる場合があった。
CO2を出さずに有用物質を生産する非遺伝子組換え微生物（non-GMO）の構築

微生物を用いた有用物質生産に代表されるバイオリファイナリーは、数々の利点を持つグリーン・イノベーションであり、社会からの要請は非常に強い。しかし、バイオマス原料を用いても、微生物によるモノづくりの過程でCO2を再排出したのでは全く意味がない。そこで本研究では、CO2バイパス・リサイクルを用いて、CO2を全く出さない微生物による物質生産プロセスの開発を目指し、低炭素社会および環境問題の解決への貢献を目指す。
モデリングと制御系設計の整合理論に関する総合的研究

動的システムの表現,モデリング,同定,制御系の設計法,数値計算法などを整合性の面から研究した.1)物理的システムに散在する寄生的エネルギー蓄積要素が状態方程式表現に与える影響をボンドグラフを用いて明らかにした.また,大型宇宙構造物を例にして,運動方程式に含まれる物理的バラメータの状態方程式表現への現れ方を解析し,その現れ方が制御系構成上困難をきたすこと,状態方程式表現より元の運動方程式表現の方が好都合であること,その表現上での制御系設計法の必要性を明らかにした.2)動物システムの同定に際しての整合性の面からの問題点を明らかにし,特に多入力多出力系の表現によっては可同定性,一意性に問題のあることが示された.3)制御対象の非線形性に整合性よく対処する制御系設計方式として,非線形制御対象を異なった動作点近傍で線形化した複数のモデリングを行ない,それら複数のモデルに同時に有効な制御系を設計する,マルチモデルによる制御系の設計法を構築した.4)制御対象のパラメータ変動の制御系に対する影響をLQR系について解析し,影響が連続的であるための条件を明らかにした.また,パラメータ変動に強いという意味で実システムと整合性の良いロバスト制御方式について研究し,ロバストモデルマッチング法による制御系設計法,サーボ系へのロバストなフィードフォワードの導入法を開発した.パラメータ変動への別の対処の方法として,適応制御方式を非線形対象へ拡張した.5)制御対象の離散時間モデリングと連続時間モデリングとの整合性を検討し,いわゆる不安定ゼロ点問題を回避する2ーDelay入力制御および2ーDelay出力制御の方法を開発した.6)数値計算法を制御系解析と設計の面から検討し,整合性の悪い問題を抽出した.今後に待たなければならない問題が多いが.部分的に解決しつつ,制御系設計計算用プログラムパッケージを作成した.前年度の研究に引続き、ダイナミカルシステムのモデリング、表現、同定そして制御系の設計法を整合性の面から研究した。モデリングの誤差の構造、モデリングと設計の不可分性を明らかにし、制御系設計との整合性の立場から制御対象のモデリングと同定の方法に要求される諸特性を検討した。ダイナミカルシステムのひとつの原始的表現として、蓄積された入出力データのみによるモデリングと制御の方式、常用の状態方程式とは対照的に物理的システムの実態と整合性のよい状態方程式表現、および同定と設計に整合性のよい、原点をずらしたインパルス応答のテイラー級数展開による表現などを提案し、新しい可能性の糸口を作った。サンプリング周期をゼロに近づけた極限で連続時間系と同等の制御効果を持つという意味で整合性のよい離散時間系の表現にも検討を加え、むだ時間系に対するスミスの補償法のロバスト性を解析し、積分型レギュレータ系の設計とその最適性を解明し、積分型最適レギュレータ系の漸近極の性質と評価関数の荷重係数行列の調整方法を検討し、ロバストな追従制御系の設計法を展開し、同定と設計を全自動で行う適応制御系に知識工学的アルゴリズムを採り入れて、要求される先験情報を緩和する方法を提案し、そのシステムにおけるモデリングと制御系設計の整合問題の所在を明らかにした。また、制御対象,補償要素,制御装置をパラメータ系列で表現し、あわせて設計目標とする望ましい制御系の仕様も系列化して、それらの系列間に適切な関係をもたせることによってモデリングと制御系設計との整合をとることができること、その際、多項式の四則演算の範囲内で行えるようにすることによって容易に設計計算ができることを明らかにした。さらに、制御にとどまらず、計測においてもモデリングと計測との整合性の問題があることを示し、整合理論が工学においても基礎的なものであることの一端を明らかにした。動的システムの表現,モデリング,同定,制御系の設計法,数値計算法などを整合性の面から研究した.1)物理的システムに散在する寄生的エネルギー蓄積要素が状態方程式表現に与える影響をボンドグラフを用いて明らかにした.また,大型宇宙構造物を例にして,運動方程式に含まれる物理的バラメータの状態方程式表現への現れ方を解析し,その現れ方が制御系構成上困難をきたすこと,状態方程式表現より元の運動方程式表現の方が好都合であること,その表現上での制御系設計法の必要性を明らかにした.2)動物システムの同定に際しての整合性の面からの問題点を明らかにし,特に多入力多出力系の表現によっては可同定性,一意性に問題のあることが示された.3)制御対象の非線形性に整合性よく対処する制御系設計方式として,非線形制御対象を異なった動作点近傍で線形化した複数のモデリングを行ない,それら複数のモデルに同時に有効な制御系を設計する,マルチモデルによる制御系の設計法を構築した.4)制御対象のパラメータ変動の制御系に対する影響をLQR系について解析し,影響が連続的であるための条件を明らかにした.また,パラメータ変動に強いという意味で実システムと整合性の良いロバスト制御方式について研究し,ロバストモデルマッチング法による制御系設計法,サーボ系へのロバストなフィードフォワードの導入法を開発した.パラメータ変動への別の対処の方法として,適応制御方式を非線形対象へ拡張した.5)制御対象の離散時間モデリングと連続時間モデリングとの整合性を検討し,いわゆる不安定ゼロ点問題を回避する2ーDelay入力制御および2ーDelay出力制御の方法を開発した.6)数値計算法を制御系解析と設計の面から検討し,整合性の悪い問題を抽出した.今後に待たなければならない問題が多いが.部分的に解決しつつ,制御系設計計算用プログラムパッケージを作成した.
無精子症の責任遺伝子の検索-重症組織型での網羅的遺伝子解析-

本研究の目的は,染色体異常など遺伝的な素因の強い疾患群であると考えられている一方で,その原因の30%は原因不明とされる非閉塞性無精子症(以下,NOA)を引き起こす責任遺伝子もしくは疾患感受性遺伝子を解明することである.世界各国で,分子遺伝学的検索も含めて原因の検索が行われているものの,十分な成果が得られていない.本研究ではNOA患者の精巣病理で,最重症組織型を持つ患者群で網羅的に分子遺伝学的検索解析を行うこととした.手法としては,次世代シークエンサーを用いた.結果として,解析当初から数百以上の疾患と関連するか否か不明な遺伝子変異を認めた.これらのunknown variantを,除外していく作業を行っていったものの,あまりにも膨大な数の変異であり,つぶさに検索を行っていくことは極めて困難であった.そこで,候補遺伝子を絞り,まずは既知の単一責任遺伝子解析を行いスクリーニングを行っていくこととした.次世代シークエンサーで得られたデータは次世代シークエンサー提供元イルミナ社にも協力頂き,これら疾患との関連が不明な遺伝子変異に関して,解析を進めた.これらの多重的な解析を行ったものの,NOAを引き起こす責任遺伝子の同定に至る十分な成果は得られていない.より特異的なデータを集積するために,患者群の選定をより明確にしていく必要があると考え,当院泌尿器科岡田教授とともに泌尿器科学・臨床遺伝学の両面から考察と今後の計画を随時進めていった.上記のように多重的かつ多方面からの解析を行っていたが,本研究者が平成30年2月28日をもって退職となり,転属先の施設は科研費指定機関以外の施設のために,研究の継続は不可となり,研究廃止申請を行い受理された.本研究の目的は,染色体異常など遺伝的な素因の強い疾患群であると考えられている一方で,その原因の30%は原因不明とされる非閉塞性無精子症(以下,NOA)を引き起こす責任遺伝子もしくは疾患感受性遺伝子を解明することである.現在までの所,非特異的な疾患であるNOAの責任遺伝子を効率よく解明することは,次世代シークエンザー等の網羅的かつ高度な遺伝子解析技術を持ってしても,世界的に十分な成果は得られていない.本研究において,数名に対し当院の次世代シークエンサーMiSeqを用いた網羅的遺伝子解析を行ったところ,数百以上の疾患と関連するか否か不明な遺伝子変異を認めた.網羅的遺伝子解析を行う際にはこのunknown variantを,除外していく作業が必要となるが,現時点で認められた数百以上の遺伝子変異を一つずつ関係性を解明していくことは困難である.よって,今後も次世代シークエンサーでの網羅的遺伝子解析を行うとともに,精子形成に関する既知責任遺伝子および疾患感受性遺伝子に関して,単一遺伝子解析を行いスクリーニングを行っている.また,次世代シークエンサーによる網羅的遺伝子解析で多くの業績を報告している横浜市立大学松本教授や,次世代シークエンサー提供元イルミナ社にも協力頂き,これら疾患との関連が不明な遺伝子変異に関して,現在解析を進めているところである.次世代シークエンサーと併行して,単一遺伝子解析によるスクリーニングを開始しており,本研究は概ね順調に経過していると考えられる.本研究の目的は,染色体異常など遺伝的な素因の強い疾患群であると考えられている一方で,その原因の30%は原因不明とされる非閉塞性無精子症(以下,NOA)を引き起こす責任遺伝子もしくは疾患感受性遺伝子を解明することである.世界各国で,分子遺伝学的検索も含めて原因の検索が行われているものの,十分な成果が得られていない.本研究ではNOA患者の精巣病理で,最重症組織型を持つ患者群で網羅的に分子遺伝学的検索解析を行うこととした.手法としては,次世代シークエンサーを用いた.結果として,解析当初から数百以上の疾患と関連するか否か不明な遺伝子変異を認めた.これらのunknown variantを,除外していく作業を行っていったものの,あまりにも膨大な数の変異であり,つぶさに検索を行っていくことは極めて困難であった.そこで,候補遺伝子を絞り,まずは既知の単一責任遺伝子解析を行いスクリーニングを行っていくこととした.次世代シークエンサーで得られたデータは次世代シークエンサー提供元イルミナ社にも協力頂き,これら疾患との関連が不明な遺伝子変異に関して,解析を進めた.これらの多重的な解析を行ったものの,NOAを引き起こす責任遺伝子の同定に至る十分な成果は得られていない.より特異的なデータを集積するために,患者群の選定をより明確にしていく必要があると考え,当院泌尿器科岡田教授とともに泌尿器科学・臨床遺伝学の両面から考察と今後の計画を随時進めていった.上記のように多重的かつ多方面からの解析を行っていたが,本研究者が平成30年2月28日をもって退職となり,転属先の施設は科研費指定機関以外の施設のために,研究の継続は不可となり,研究廃止申請を行い受理された.NOAと関連があるか不明のunknown variantを可能な限り除外するために,患者群の選定をより明確にしていく必要があると考えられ,当院泌尿器科岡田教授とともに泌尿器科学・臨床遺伝学の両面から考察と今後の計画を随時進めていく予定である.また,次世代シークエンサーと併行して,単一遺伝子解析によるスクリーニングを開始しており,プライマーやその他試薬および研究解析用の専用PCが今後必要となってくる.これらの支出は,次世代シークエンサーの試薬が期限3ヶ月および9検体で80万円程度と慎重な発注を行う必要があるために,本研究をより円滑に進めるために必須な支出であると考えられる.

次世代シークエンサーによる解析を行う際に,イルミナ社から機器の説明等を複数回にわたって研究代表者および共同研究室の研究員と複数銘の予定を調整する必要があり,これら講習時期の設定に時間を要した.また,次世代シークエンサーの運用を行っていた所,機器に故障が発生し解析データが得られない状況となった.このため,当初の支出計画にずれが生じ,残高が発生した.次世代シークエンサーの機器修理の時期は機器使用ができなかったが,この解析不能となった検体は残量が十分にあったために解析を行うことができ,また,試薬も同量の補填が行われたために,解析可能であった.これら解析および修繕などに時間を要し,次世代シークエンサー用の試薬購入が遅れたために残額が生じている.この残額は,慎重な患者選定を行った後に,今後の次世代シークエンサー試薬購入に充当する.
新概念「亡命の文化テキスト」の確立ー東アジアへの亡命研究を通して

a)第二次世界大戦中に東アジアへ亡命したユダヤ人の文献目録作成のため、文書館等にて資料収集を行い、前段階の研究を2011年に出版した。これに関連し、戦中の日本のユダヤ人に対する見解について分析した。b)文学研究・文化理論の観点では、「ハイブリッド性」と「超文化性」の概念について議論した。これまでの二分化された研究視点に対し、今日では異質なものが文化の要素と見なされ、亡命・移民文学はもはや文化的にマージナルな現象ではない。c)東アジアへの亡命テキストを文化的革新性という観点からポジティブに読み、「亡命の文化テキスト」として描き出した。本研究では、第二次世界大戦下、東アジア亡命中に書かれたテキストを例に、「亡命の文化テキスト」(ナレーション)という新概念の理論的構築と実践的検証を進めている。本概念は、ドイツ語で書かれた現代の移民文学にも適用される。以上の文脈において、以下の3点の検証を行なった。クリフォード・ギアツ、ロラン・バルト、スラヴェイ・ジジュクらのテキストにおける、「異文化について書く」という様々なコンセプトを分析し、これらのコンセプトを小泉八雲や新渡戸稲造らの日本に関する諸言説の関連において位置づけた。本検証の結果は、2012年6月にバンベルク大学で開催された学会「文化的テキストの生産についてÜber die Erzeugung kultureller Texualität」にて研究報告を行ない、その内容は本年、出版される予定である。狭義の亡命(第二次世界大戦中における東アジアへの亡命)を精神分析的観点から検証し、2013年3月にウィーンで開催されたオーストリア亡命研究学会「東アジア亡命における精神分析Die Psychoanalyse im ostasiatischen Exil」にて研究報告を行なった。この研究報告において、上海で発行されていた亡命雑誌「Gelbe Post」を取り上げた。本雑誌の一部はコピーの閲覧が可能であるが、その他の部分に関しては、上海図書館にてのみ閲覧可能であることが明らかになったため、今後、閲覧のための訪問を計画する。オーストリア亡命研究学会での研究報告も間もなく出版予定である。「文化的テキスト」という概念を理論的に深めるため、各地を訪れ、亡命・移民文学を専門分野とするベルリン自由大学のイルメラ・フォン・デア・リューエ教授、ミュンスター大学のモリッツ・バスラー教授、ギーセン大学のウヴェ・ヴィルス教授らと議論を重ねた。2013年度は主として以下の3つを行なった。3.「文化テキスト」の概念を理論的に深めるため国際情報交換を行った。夏、ドイツ語による亡命文学研究の責任者であるドエルテ・ビショッフ教授(ハンブルク大学)と2015年に上海で開催予定の学会にて移住と亡命に関するセクションを開設する話し合い。3月、ウルリケ・フェダー教授(フンボルト大学ベルリン)と文化理論および文化接触について議論a)第二次世界大戦中に東アジアへ亡命したユダヤ人の文献目録作成のため、文書館等にて資料収集を行い、前段階の研究を2011年に出版した。本年度は、「テキストとしての文化」という文化人類学の基礎概念を検証し、「亡命の文化テキスト」という概念を規定した。概念「文化テキスト」は、亡命や移住といった現象が文学作品に反映され、分析され得ることを意味している。本概念は、以下の二つの文脈から検証された。a)第二次世界大戦中、日本へ亡命し、ドイツ語で文学作品を発表した亡命者(カール・レーヴィット、クルト・バオホヴィッツ、クルト・ジンガー)の作品分析。成果については、論文„Kultur-Texte des japanischen Exils: Karl Löwith, Kurt Bauchwitz und Kurt Singer"に発表した。b)概念「文化テキスト」の移民文学への適用(その際、ドイツ語を母語としない作家によって書かれた現代ドイツ文学作品が扱われた。)これらについては、2012年3月にアムステルダムで開催された亡命研究学会で議論された。これらの分析により、亡命文学および移民文学において、概念「文化テキスト」が有用であることが実証された。一方で、亡命や移住が、ある一つの文化という枠組みを超えていく現象を伴うため、「文化テクスト」は「超文化テクスト(Transkulturalitätstext)」と言い換えられることが明らかになった。概念「文化テキスト」を「亡命」および「移民」という観点から具体的に検証し、超文化的現象については、異文化間、つまりテキスト相互のプロセスの観点(特に日独の文化接触の観点、また歴史的観点)において引き続き分析を行った。その際、文化人類学的観点から特に移民の移住と亡命の経験とを関連づけて考察した。なお、2014年度はサバティカルの年度であり、以下の研究活動を行った。a)資料収集:サバティカル中、ベルリンの国立図書館、オーストリア亡命図書館、ドルトムントのフリッツ・ヒューザー研究所、ロンドンのウィーナー図書館にて資料収集を行った。特に、フリッツ・ヒューザー研究所では、イタリアで生まれ、外国人労働者としてドイツへ移住し、後にドイツ語で出版したフランコ・ビオンディについて研究を進めた。

ドルトムント、ロンドンでの資料収集により、第二次世界大戦中のドイツ語圏からの移住および東アジアへの亡命に関する基礎資料を入手することができ、これらの収集と分析により、伝統的な亡命研究と新しく生じた移民研究との間の架け橋をすることができた。収集した資料は引き続き整理、分析され、研究成果として発表される予定である。b)学会発表:研究業績の欄で示す通り、シンポジウム「ドイツ、フランス、日本における戦争の英雄と英雄神話」および異文化間ドイツ文学国際学会にて口頭発表を行った。c)専門家との意見交換および出版: 2013年に開催したシンポジウムの結果を書籍として出版するため、「文化接触」研究グループと会議。また、シュテファン・ホーエ(ワイマールの音楽大学、文化マネージメント学科の責任者)およびモリッツ・バスラー(ミュンスター大学、教授)、ウヴェ・ヴィルス(ギーセン大学、教授)と意見交換を行い、計画通り出版することができた。人文学概念「文化的テキスト」を「亡命」および「移民」の観点から検証した。また、異文化研究の点では、特に日独の文化接触の観点から接触のプロセスを検証した。その結果、概念「文化的テキスト」は理論的により正確に定義された。しかしながら、第二次世界大戦下におけるドイツ語話者の東アジアへの亡命に関して、更に広範囲わたる資料の収集を行う必要がある。年度初めの計画通り、若手を含めた約12名による研究会を開催し、「文化コンテクスト」をテーマとした研究を進めた。また、その成果として予定通りに国際シンポジウムを開催(2013/9/14 & 15)することができた。具体的には、「亡命」および「移民」の観点から概念「文化的テキスト」を検証した。異文化現象については、(特に日独の文化接触の観点から)諸文化間、諸テキスト間の接触のプロセスの研究を進めた。第二次世界大戦中のドイツ語圏から東アジアへの亡命に関する資料収集に関しては、特に上海での収集で成果を挙げた。一方、本テーマ申請時に計画していたイスラエルでの文献収集ならびに移民テキストおよび亡命テキストを基にしたケーススタディとClassificationモデルの構築等は3年の期間内には収まりきらず、期間延長を行った。亡命と移住の観点から、概念「文化テキスト」を規定することができた:亡命と移住の両ケース共に、文学作品における文化的立地点が2つの(あるいは更に多くの)文化の中間、すなわち、亡命者が追放された故郷の文化と受け入れ側の新しい文化の中間にあることが明らかにされた。そのため、このような「超文化」的な立地点が、これまで十分に研究が進められていない、超文化研究の文脈で考察される必要がある。概念「文化テキスト」の解明は、国内の研究会での議論のみならず、ドイツ人研究者(D.バッハマン・メディク(上級研究フェロー、ギーセン大学、ドイツ)I.フォンデアルーエ(教授、ベルリン自由大学)と共同研究者)との議論の成果、また、ベルリンの国立図書館他における資料収集の成果である。
生物間相互作用に介在する小分子RNAの進化機構

本研究は、イネ科植物いもち病菌を材料として、特に植物との相互作用に関連する小分子RNAに焦点を当てた研究である。本年度は、昨年度の研究の中で見出した、RNAi経路に依存しない小分子RNAおよび菌体外に分泌される小分子RNAに着目して研究を進めた。RNAi経路に非依存性の小分子RNAとは、ゲノム上のすべてのRdRP、もしくはすべてのDicerを欠失させた変異体でも産生され、AGOに結合しない、ゲノムの狭い特定の領域にマップされるといった性質を持った一群のRNAである。今回、バイオインフォマティクス解析を進めた所、これらは通常のsiRNAよりも短い16-17nt程度の長さのものが大部分であった。また、5'および3'の塩基プレファレンスも、いもち病菌のsiRNAではUが多いが、このクラスの小分子RNAではAが大多数という特徴が認められた。これらの結果は、このクラスの小分生子RNAがこれまでに知られていない経路によって産生されていることを示唆している。また、現在までに、この新規クラスの小分子RNAが実際に細胞内に存在することを、ノーザン解析によりいくつかの分子種で確認した。今後、これらがマップされている領域を破壊したいもち病菌を作製し、その機能解析を行う予定である。細胞外に分泌される小分子RNAについても、解析を進めている。これらはゲノムの転写される領域から産生されている傾向が認められたが、それが含まれる転写RNAの発現量と、分泌性小分子RNAの検出量とは特に相関がなかった。つまり本研究で検出されている分泌性の小分子RNAは、転写されている長いRNAの単なる分解産物ではないと推測された。これらの小分子RNAは、これまでに報告がないものも含まれており、大変興味深いが、その生物学的な意義については、今後の検討が必要である。本年度は、いもち病菌の細胞内にどのような小分子RNAが存在しているのかを網羅的に探索した。特に小分子RNAの生合成に関与すると考えられるRNAi経路の遺伝子欠損株にも着目し、その遺伝子欠損により小分子RNAにどのような変化が現れるのかに注目した。その結果、いもち病菌には、ウイルスや転移因子など、これまでRNAiのターゲットと考えられてきた配列に対する小分子RNAが確かに存在し、それらはRNAi関連タンパク質の欠損株では著しく減少することなども確認できた。これらは既報の結果を裏付けるものとなった。しかし、驚くべきは、そういったRNAi経路に依存する小分子RNAは、全体からすれば数パーセントというごく少数であり、大部分はrRNAやtRNAなどの主要なRNAに由来するもの、そしてゲノム配列の様々な部分にマップされるものであった。特にゲノムにマップされる小分子RNAはRNAi経路に関与する遺伝子の欠損影響を受けないものがほとんどであり、これまで知られているsiRNAやmiRNAとは異なったクラスの小分子RNAであることが示唆された。また、細胞外に分泌される小分子RNAについても、次世代シークエンサーを用いた配列解析に供した。その結果、ゲノムの様々な領域から産生されたと考えられる小分子RNAを検出することが出来た。現在、ノーザン解析などを用いて、次世代シークエンスの結果を検証中である。今回、野生株、Dicer破壊株、RdRP破壊株、Argonaute破壊株における小分子RNAの網羅的な解析を行ったが、これまで予想していなかった新たなクラスの小分子RNAをいもち病菌が保有することが明白になったと思っている。これは、計画時には想定していなかった発見であり、この新しいクラスの小分子RNAの生物学的機能に関してこれから調査して行きたいと思っている。また、計画にあった細胞外へ分泌される小分子RNAの解析も進めており、これらが本当に分泌されたものなのか、死細胞から漏れ出たものなのか等、慎重な判断が必要とされる部分がまだ残っていると考えている。これらは今後の課題である。

これらはゲノムの転写される領域から産生されている傾向が認められたが、それが含まれる転写RNAの発現量と、分泌性小分子RNAの検出量とは特に相関がなかった。つまり本研究で検出されている分泌性の小分子RNAは、転写されている長いRNAの単なる分解産物ではないと推測された。これらの小分子RNAは、これまでに報告がないものも含まれており、大変興味深いが、その生物学的な意義については、今後の検討が必要である。ここまで研究は順調に進んでおり、得られているシークエンス情報のin Silicoでの解析を精力的に進めると共に、そこから得られた知見を実際のウェットな実験によって、確認・発展させていく方向で進めて行きたい。特に新しいクラスと考えられる小分子RNAの特徴づけと、植物との相互作用に関与することが期待される小分子RNAに焦点をあてて、今後の研究を進めていく予定である。
Behcet病に関与するエピゲノム制御の解析

Behcet病患者末梢血有核細胞において、健常者には認められない特徴的なヒストン修飾変化を確認出来た。さらに、活動性の高い時期と活動性の低い時期の血液において、高い時期でこの傾向は著明であった。低疾患活動期のヒストン修飾変化は健常者に近かった。変化の強いγδT細胞に焦点を絞り35名の患者血液から標的細胞をプール出来た。この患者血液を用いてトランスクリプトーム解析を行ったが、RNA量が少なく満足な結果が得られていない。本研究において治療標的遺伝子の解明には至っていないものの、難病であるBehcet病の病態に直結する新規治療戦略の開発への第一歩を踏み出す事が出来、今後の展開が期待出来る。ベーチェット病は、中年以降の患者が多く自己免疫の病態というよりは炎症制御に問題のある自己炎症症候群に近似の病態によると推定されることから、末梢血の好中球やT細胞受容体gamma/delta + T細胞、およびマクロファージ等の自然免疫系細胞にエピゲノム異常が見られると予想し、本研究においては特にヒストン修飾の変化を細胞分画毎に解析する新規検査法およびそれによる病態の把握法の開発を目指すことを目的とした。平成25年度にはまず、本学倫理委員会および大学病院IRBにより本研究の承認を得た後、同意取得後の健常者末梢血を用いて、細胞表面マーカにて好中球、CD4+T細胞、CD8+T細胞、T細胞受容体gamma/delta + T細胞、マクロファージおよびB細胞を染色した後、既報を基に申請者が改良した細胞内染色法によりヒストン(H)のH3K4、H3K9、およびH3K27のメチル化を染め分け、FACSにて解析した。その結果、再現性良くそれぞれの細胞群における健常者のヒストンメチル化パターンを得る事が可能となった。これを基に、当科外来通院中または入院中のベーチェット病患者に口頭および文書にて同意を得た上で臨床上必要な末梢血採血時に本研究用にも血液を戴く事にした。現在まで10名のベーチェット病患者の末梢血を用いて解析検討を行った。その結果では、ベーチェット病患者では、健常者に比して末梢血のT細胞受容体gamma/delta + T細胞において、H3K4me3の異常高値が認められている。一方、H3K27me3には健常者とベーチェット病患者間には相違は認められていない。今後患者数を増やして更なる検討を行う。また、機能との関係を検討する予定である。Behcet病の診断及び活動性把握のための有用な臨床マーカーは存在しない。当研究においては、Behcet病における新たなバイオマーカーの確立を目的として、末梢血有核細胞においてヒストンメチル化の網羅的な解析をフローサイトメーターを用いて行うものであり、当院IRBの承認を得た上で行っている。具体的には、Behcet病患者および健常者に同意を得た後、採血にて末梢血を得、有核細胞を対象に、ヒストンメチル化の状況をモニターする抗体(ヒストン3の第4リシン基および第27リシン基の3メチル化(H2K4me3およびH3K27me3)を検出出来る抗体)を用いて細胞亜分画毎のヒストン修飾状況をフローサイトメーターによって解析した。その結果、ベーチェット病においては、γδ陽性T細胞においてH3K4me3の平均蛍光強度(MFI)値が有意に上昇し、好中球とγδ陽性T細胞の両者においてH3K4me3/H3K27me3のMFI比が有意に上昇していた。また、活動期(眼病変、粘膜病変、皮膚病変などのベーチェット病特有な症状のいずれかが認められる)のベーチェット病患者では非活動期のベーチェット病患者と比較して、γδ陽性T細胞においてH3K4me3のMFI値とH3K4me3/H3K27me3のMFI比がともに有意に上昇していた。これらのことは、今まで報告が無く、新規バイオマーカーとして今後有用な可能性が高い。更に、患者数を増やして検討する必要がある。Behcet病患者の末梢血リンパ球及び好中球におけるヒストン修飾変化を解析した。本研究は当院IRBおよび本学倫理委員会にて承認された後に、患者および健常者に対して同意署名を取得した。Behcet病患者の末梢血中のリンパ球および好中球におけるヒストン修飾をflow cytometryにて解析した結果、活動期(眼病変、粘膜病変、皮膚病変などのBehcet病特有な症状のいずれかが認められる)のBehcet病患者では、非活動期のBehcet病患者と比較してγδ陽性T細胞においてH3K4me3/H3K27me3の平均蛍光強度(MFI)が優位に上昇していた。以上の結果より、Behcet病の病態との関係が期待されるγδ陽性T細胞におけるトランスクリプトーム解析を試みた。活動期のBehcet病患者から末梢血を採取し、マグネットビーズ法にてγδ陽性T細胞を採取したが、RNA量が少なく満足な結果が得られなかった。再度、患者血液を採取して確認を行う予定である。