hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規サイクリン様分子依存性キナーゼによる染色体複製及び減数分裂の制御機構の研究

Cdc7-Dbf4キナーゼ複合体は真核細胞の染色体複製開始を制御する。我々は、Cdc7キナーゼに類似する、キナーゼ複合体を分裂酵母、マウス、ヒトにおいて同定し、その機能解析を行ってきた。本研究により以下の事実が明らかとなった。1 Cdc7タンパク質の発現は細胞周期を通じてほぼ一定であるが、制御サブユニットDbf4/Askの発現はM-G2期で低く、S期に高い。これに従って、Cdc7キナーゼ活性も同様な細胞周期の変動をする。2 Cdc7キナーゼはMCM複合体のMCM2タンパク質を特異的にリン酸化する。3 MCM2はCdkによってもN端の特異的な部位をリン酸化され、このリン酸化により、MCM2のCdc7によるリン酸化が著しく促進される。すなわちMCMはCdlkとCdc7の共同作用によりリン酸化され、活性化されると考えられる。4 Cdc7遺伝子ノックアウトマウスは胎生3.5から6.5日の間に死亡する。また、Cdc7遺伝子欠損ES細胞は致死である。5 ES細胞においてCdc7を誘導的に欠失させると、直ちに細胞増殖とDNA合成が停止し、細胞はその後細胞死を起こした。これは、Cdc7欠損によるS期停止の結果、異常な複製構造が蓄積し、それがチェックポイント反応を誘導したと考えられる。このとき、p53蛋白質の蓄積も観察された。6 Dbf4/ASK活性制御サブユニットに保存された3つのモチーフ(N, M, C)を同定しこのうちMとCがそれぞれ独立に触媒サブユニットに結合し、ギナーゼ活性化に必要であることが明らかになった。Nはクロマチンとの相互作用に関与することが示唆された。今年度は、これまでに我々が単離した分裂酵母とヒトのCdc7キナーゼ触媒および活性制御サブユニット(それぞれHsk11/Him1およびhuCdc7/H7タンパク質)の機能について、遺伝学的生化学的に検討した。Hsk1/Him1の転写とタンパク質およびhuCdc7/H37の転写の細胞周期における変動を検討した結果、いずれの生物種においても、触媒サブユニットは細胞周期を通じてほぼ一定のレベルで発現されること、制御サブユニットの発現はG1期で低下しG1後期からS期にかけて上昇しS期を通じて高く保たれることが示された。hsk1(ts)株の解析および、him1変異体の解析から、分裂酵母のCdc7類似キナーゼのHsk1/Him1複合体は、体細胞分裂および減数分裂時のDNA複製の他に、ヒドロキシ尿素などによるDNA複製阻害時のチェックポイント制御にも関与することが明かとなった。G1期のヒト正常繊維芽細胞にH37の抗体を微注入すると、80%以上の細胞でDNA複製が阻害された。この事実はH37の機能がヒト細胞のDNA複製の開始に必須であることを示す。また、muCdc7遺伝子の2つのalleleを欠損したマウスは胎生3.5日から6.5日の間に死亡した。以上の結果はCdc7キナーゼ複合体の機能が動物細胞の増殖とくにDNA複製に必須であることを強く示唆する。一方ヒトCdc7/H37複合体を精製し、in vitroリン酸化反応による解析を行った結果、MCM複合体の中のMCM2サブユニットが特異的にリン酸化されin vivoで観察されるリン酸化パターンと類似したリン酸化パターンが得られた。リン酸化されたMCM2タンパク質は主に、可溶性画分に回収されることがらMCM2のリン酸化によりMCM複合体の集合状態が変化し、その結果MCM複合体(DNAヘリカーゼ活性?)が活性化され複製が開始するというモデルを提出した。

分裂酵母とヒトのCdc7類似キナーゼ複合体である、Hsk1/Him1およびhuCdc7/H37の転写とタンパク質の細胞周期における変動を検討した結果、いずれの生物種においても、触媒サブユニットは細胞周期を通じてほぼ一定のレベルで発現されること、制御サブユニットの発現はG1期で低下しG1後期からS期にかけて上昇しS期を通じて高く保たれることが示された。hsk1(ts)株の解析および、him1変異体の解析から、分裂酵母のCdc7類似キナーゼのHsk1/Him1複合体は、体細胞分裂および減数分裂時のDNA複製の他に、ヒドロキシ尿素などによるDNA複製阻害時のチェックポイント制御にも関与することが明かとなった。また、Hsk1キナーゼはRad 21コーヒーシンタンパク質を通じて、S期の姉妹染色分体の接着制御に関与することを示した。muCdc7遺伝子の2つのalleleを欠損したマウスは胎生3.5日から6.5日の間に死亡した。さらに、muCdc7遺伝子の不活性化を誘導できる変異E S株を作製し、muCdc7の機能が動物細胞のDNA複製に必須であることを証明した。一方ヒトCdc7/H37複合体を精製し、in vitroリン酸化反応による解析を行った結果、MCM複合体の中のMCM2サブユニットが特異的にリン酸化されin vivoで観察されるリン酸化パターンと類似したリン酸化パターンが得られた。またMCM2上のリン酸化部位の詳細な解析から重要なリン酸化部位をほぼ同定し、Cdc7はMCM2のリン酸化を通じてその複合体の組成を変化することによりヘリカーゼ活性を制御する可能性を指摘した。Cdc7-Dbf4キナーゼ複合体は真核細胞の染色体複製開始を制御する。我々は、Cdc7キナーゼに類似する、キナーゼ複合体を分裂酵母、マウス、ヒトにおいて同定し、その機能解析を行ってきた。本研究により以下の事実が明かとなった。1 Cdc7タンパク質の発現は細胞周期を通じてほぼ一定であるが、制御サブユニットDbf4/ASKの発現はM-G2期で低く、S期に高い。これにしたがって、Cdc7キナーゼ活性も同様な細胞周期の変動をする。2 Cdc7キナーゼはMCM複合体のMCM2タンパク質を特異的にリン酸化する。3 MCM2はCdkによってもN端の特異的な部位をリン酸化され、このリン酸化により、MCM2のCdc7によるリン酸化が著しく促進される。すなわちMCMはCdkとCdc7の共同作用によりリン酸化され、活性化されると考えられる4 Cdc7遺伝子ノックアウトマウスは胎生3.5から6.5日の間に死亡する。また、Cdc7遺伝子欠損ES細胞は致死である。5 ES細胞においてCdc7を誘導的に欠失させると、直ちに細胞増殖とDNA合成が停止し、細胞はその後細胞死を起こした。これは、Cdc7欠損によるS期停止の結果、異常な複製構造が蓄積し、それがチェックポイント反応を誘導したと考えられる。このとき、p53蛋白質の蓄積も観察された。6 Dbf4/ASK活性制御サブユニットに保存された3つのモチーフ(N,M,C)を同定しこのうちMとCがそれぞれ独立に触媒サブユニットに結合し、キナーゼ活性化に必要であることが明かになった。Nはクロマチンとの相互作用に関与することが示唆された。
含ケイ素小員環化合物の遷移金属錯体反応

本研究は、ケイ素-ケイ素結合をもつ小員環化合物の遷移金属錯体存在下における化学的挙動、特にその立体化学を明らかにする目的で行った。まず、シスおよびトランス-3,4-ベンゾ-1,2-ジ(t-ブチル)-1,2-ジメチル-1,2-ジシラシクロブト-3-エンを合成し、そのシス体およびトランス体を分離することに成功した。分離したシス体およびトランス体をパラジウム錯体触媒存在下、アセチレン類との反応を行い、ベンゾジシラシクロブテンの立体化学について検討した。その結果、立体特異的にそれぞれの付加物を高収率で与えることを明らかにした。1,2-ジメチル-1,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンの合成を行い、シス体およびトランス体を蒸留により分離した。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム錯体触媒存在下、シス体およびトランス体とアセチレン類との反応を行うと、立体特異的に反応が進行し、各々の付加物を与えることを明らかにした。また、ニッケル錯体触媒および白金錯体触媒存在下においても、立体特異的に反応が進行し、付加物が得られることを報告した。1,1-ジメチル-2,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンを合成し、パラジウムおよび白金錯体触媒存在下、末端アセチレンとの反応を行い、そのレジオケミストリーについての検討を行った。その結果、位置特異的に反応が進行し、常にジメチルシリル基側に末端アセチレンの水素部位が位置した付加物を与えることを明らかにした。我々はこれまでベンゾジシラシクロブテン類のニッケル、パラジウム、および白金錯体触媒存在下での反応を行い、生成する化合物の構造は触媒として用いた金属の種類に大きく依存することを報告した。本年度は、シスおよびトランス-3,4-ベンゾ-1,2-ジ(t-ブチル)-1,2-ジメチル-1,2-ジシラシクロブト-3-エンを合成し、そのシス体およびトランス体を分離することに成功した。触媒量のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム錯体存在下、シス-3,4-ベンゾ-1,2-ジ(t-ブチル)-1,2-ジメチル-1,2-ジシラシクロブト-3-エン(1a)とフェニルアセチレンとの反応を200°C、24時間の条件で行うと、シス-5,6-ベンゾ-1,4-ジ(t-ブチル)-1,4-ジメチル-2-フェニル-1,4-ジシラシクロヘキサ-2,5-ジエン(2a)が84%の収率で得られた。同条件下、トランス-3,4-ベンゾ-1,2-ジ(t-ブチル)-1,2-ジメチル-1,2-ジシラシクロブト-3-エン(1b)とフェニルアセチレンの反応を行うと、トランス体の付加物(2b)が唯一の揮発性生成物として収率良く得られた。また、化合物1aおよび1bを同条件下、1-ヘキシンやt-ブチルアセチレンと反応させると、立体特異的にそれぞれの付加物を高収率で与えることを明らかにした。また、1,2-ジメチル-1,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンの合成を行い、シス体(3a)およびトランス体(3b)を蒸留により分離した。3aおよび3bをテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム錯体触媒存在下、アセチレン類との反応を行うと、立体特異的に反応が進行し、各々の付加物を与えることを明らかにした。本年度は、ニッケル錯体および白金錯体触媒存在下、シス-またはトランス-1,2-ジメチル-1,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンとアセチレン類との反応を行い、シラシクロペンタンの立体化学について検討した。

触媒量のエチレンビス(トリフェニルホスフィン)白金錯体存在下、シス-1,2-ジメチル-1,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンとジフェニルアセチレンとの反応を150°C、24時間の条件で行うと、シス-1,4-ジメチル-1,2,3,4-テトラフェニル-1,4-ジシラシクロヘプト-2-エンが93%の収率で得られた。同条件下、トランス-1,2-ジメチル-1,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンとジフェニルアセチレンの反応を行うと、トランス体の付加物が唯一の揮発性生成物として89%の収率で得られた。また、1-ヘキシンやフェニルアセチレンと反応させても、立体特異的にそれぞれの付加物を与えることを明らかにした。触媒量のジクロロビス(トリフェニルホスフィン)ニッケル錯体存在下の反応においても、同様に立体特異的に反応が進行した。また1,1-ジメチル-2,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンを合成し、パラジウムおよび白金錯体触媒存在下、末端アセチレンとの反応を行い、そのレジオケミストリーについての検討を行った。1,1-ジメチル-2,2-ジフェニル-1,2-ジシラシクロペンタンを触媒量のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウムまたはエチレンビス(トリフェニルホスフィン)白金錯体存在下、フェニルアセチレンと反応させると、位置特異的に4,4-ジメチル-1,1,2-トリフェニル-1,4-ジシラシクロヘプト-2-エンが高収率で得られた。t-ブチルアセチレンおよび1-ヘキシンとの反応においても、同様に位置特異的に反応が進行することを明らかにした。
分散型方程式の解の性質

線形分散型方程式の解の諸性質と方程式の表象の幾何との関連を研究した。階数が2以上で、係数が非有界であるような変数係数分散型方程式に対するコーシー問題をユークリッド空間上で考え、コーシー問題が適切であるための必要条件および十分条件を得た。また波動方程式の計量に空間的にコンパクトな時間依存の摂動を加えたときの解作用素のノルムの時刻無限大での増大度について新しい結果を得た。分散型方程式は、KdV方程式、シュレディンガー方程式、薄板の方程式などを代表として含む偏微分方程式の重要なクラスであり、また着目する性質によってはスケール変換して考えることにより、双曲型方程式とも密接に関係していることが知られている。本研究では、線形分散型方程式、特にシュレディンガー方程式の解の諸性質を方程式の表象の幾何との関連から解明することを目標としている。まず偏微分方程式の記述する波動現象と表象の幾何との関連を調べるため、特性根の多重度が一定である対称双曲型擬微分方程式系の発展方程式を考察し、マイナス1階の作用素を法とした解の表示式を用いることにより、解のエネルギーの初期値に関する一様増大度の下からの評価が、方程式の主表象の陪特性曲線と副主表象を用いて記述できることがわかった。これは弾性方程式やマクスウェル方程式などにも適用できると考えられる。次に、ポテンシャルの零点集合が非有界であっても、零点集合の形状とそこから離れたときのポテンシャルの増大度によっては、シュレディンガー作用素のレゾルベントがコンパクトとなりうることに着目し、ポテンシャルの零点集合が必ずしも斉次ではない写像のグラフで表せる非有界集合であり、ポテンシャルがその零点集合からの距離に応じて増大していく場合に、シュレディンガー作用素のレゾルベントがコンパクトとなり、ワイル型とは限らない、固有値の漸近分布公式が成立することがわかった。分散型方程式は、シュレディンガー方程式を典型例とする偏微分方程式の代表的なクラスであり、注目する性質によっては尺度を変えて考えることにより、一見すると別の偏微分方程式のクラスである双曲型方程式とも密接に関係していることが知られている。本年度は、偏微分方程式の記述する波動現象と表象の幾何との関連を調べるため、ユークリッド空間上の定数係数波動方程式に対し、主要部であるシュレディンガー作用素に、空間的にコンパクトな集合上で、時空間に依存する摂動を加えたものを考え、その摂動をもつ波動方程式の解作用素のノルムが、与えられた増大度をもつようにすることが可能であるかどうか考察した。これまで高々1次の指数的増大度の場合にしか、解作用素が丁度同じ増大度をもつような例が構成されていなかったが、今回、任意のm次の指数的増大度(ただしmは1以上の実数)を含むような、より大きな増大度をもつ場合にも、解作用素が丁度同じ増大度をもつような例を構成することに成功した。証明の鍵は、特性曲線が空間的には周期的であるが、ハミルトニアン自身は陪特性帯に沿ってしかるべき増大度で無限大に発散し、さらに様々な技術的要請をみたすように主表象を構成することであり、それ以外の部分、つまり超局所解析的手法による解のエネルギーの下からの評価ならびに部分積分の方法による解のエネルギーの上からの評価は従来の方法に従った。分散型方程式は、シュレディンガー方程式や薄板の方程式などを代表例とする偏微分方程式の重要なクラスであり、スケール変換して考えることにより、波動現象を記述する偏微分方程式のもう一つのクラスである双曲型方程式とも密接に関係していることが知られている。今年度は、偏微分方程式の記述する波動現象と表象の幾何との関連を超局所的な観点から調べるため、主表象が相異なる実固有値をもつような正値対称偏微分方程式系のあるモデルに対する境界値問題を考え、境界値の滑らかさと境界値問題の解の滑らかさの関係、特に境界値の特異性が境界値問題の解の特異性にどのように伝播するか解析し、以下に述べるような結果を得た。まず、モデルとなる境界値問題に対して、境界条件として与える関数に、境界条件としては与えない、解の境界値を対応させる作用素は、同じ指数のソボレフ空間の間の有界作用素であり、この作用素は異なる正準変換に付随する2種類のフーリエ積分作用素の有限個の合成を展開項とするような漸近展開をもつ。次に、解の特異性に関しては、粗く表現すると、境界条件として与える関数がある点で超局所的特異性をもてば、その点を通過し、境界で反射するような古典軌道上で解は超局所的特異性をもち、その超局所的特異性のソボレフ指数の意味でので強さは境界で反射するごとに弱くなる。この解析を精密化することにより、境界条件として与える関数の波面集合は1点からなるが、対応する解はいたるところ滑らかでないような例を構成することができる。偏微分方程式の記述する波動現象と表象の幾何に関し、境界値問題のモデルに対しては一定の結果が得られたが、それ以外の部分に関しては予想以上に困難であり、一定の結果が得られたという段階ではないため、全体としてやや遅れているという評価となった。

分散型方程式は、KdV方程式、シュレディンガー方程式、薄板の方程式などを代表例とする偏微分方程式の重要なクラスであり、着目する性質によっては尺度を換えて考えることにより、一見すると異なる偏微分方程式のクラスである双曲型方程式とも密接に関係していることが知られている。本研究では、線形分散型方程式、特にシュレディンガー方程式の解の諸性質を方程式の表象の幾何との関連から解明することを目標としている。ユークリッド空間上で、変数係数の主要部をもつようなシュレディンガー作用素に対して、ポテンシャルの零点集合が必ずしも斉次ではない写像のグラフで表せる非有界集合であり、ポテンシャルがその零点集合からの距離に応じて増大していく場合に、レゾルベントがコンパクトとなる十分条件、半古典的極限でワイル型とは限らない固有値の漸近分布公式が成立する十分条件について研究した。ユークリッド空間上で優2次的に増大するポテンシャルをもつシュレディンガー方程式の解の特異性について研究した。1次元シュレディンガー方程式に関する谷島氏の結果の多次元版を目標としたが、多次元の場合は固有値・固有関数の詳しい性質が得られないため、予想以上に難しく、次年度も継続して取り組む予定である。滑らかな境界をもつ非有界領域において適当な境界条件の下、シュレディンガー作用素を考え、レゾルベントがコンパクトとなり、非ワイル型の固有値の漸近分布が成り立つための十分条件を領域の形状との関連で研究中で次年度も継続して取り組む予定である。退化したポテンシャルを持つ場合の固有値の漸近分布に関しては一定の結果が得られたが、それ以外の部分に関しては予想以上に困難であり、一定の結果が得られたという段階ではないため、全体としてやや遅れているという評価となった。分散型方程式は、KdV方程式、シュレディンガー方程式、薄板の方程式などを代表例とする偏微分方程式の重要なクラスであり、着目する性質によっては超局所的にスケール変換して考えることにより、双曲型方程式とも関係していることが知られている。その一環として時間変数に関しては1階であるが空間変数に関しては2階以上であるような変数係数の分散型方程式に対する初期値問題の適切性を2乗可積分関数空間をもとにした枠組みで研究し、以下に述べるような結果を得た。まず、主要部が楕円型と限らず、階数も2階とは限らない、一般の変数係数の分散型方程式に対して、初期値問題が適切であるためには、主表象に対する陪特性曲線に沿っての副主表象の積分の虚部の有界性が必要であることを示した。これは主要部が2階楕円型の場合についての既存の結果の自然な拡張となっている。次に、主要部が楕円型と限らず、階数も2階とは限らない、変数係数の分散型方程式に対して、主要部の係数は有界であるが、主要部の階数に応じて低階項の係数があるオーダーで増大することを許容するような枠組みで、初期値問題が適切であるための十分条件を与えた。これは係数が有界な場合の既存の結果の拡張になっている。また楕円型とは限らない分散型方程式に対して、その主表象のハミルトン流に関する非捕捉性条件とある種のリヤプノフ関数の存在とが同等であることを示した。線形分散型方程式の解の諸性質と方程式の表象の幾何との関連を研究した。階数が2以上で、係数が非有界であるような変数係数分散型方程式に対するコーシー問題をユークリッド空間上で考え、コーシー問題が適切であるための必要条件および十分条件を得た。
糖尿病患者の療養関連QOLの向上とその血縁者の予防行動促進に関する研究

糖尿病療養関連QOLを評価する尺度の作成にあたり、以下の2点を目的として、3070歳の2型糖尿病患者を対象に自記式質問紙調査を行った。1.糖尿病腎症患者にも適用拡大した糖尿病食事関連QOL尺度改訂版の信頼性・妥当性を検討し、さらに短縮版を作成すること。2.糖尿病運動関連QOL尺度の信頼性・妥当性を検討すること。糖尿病食事関連QOL尺度改訂版は、昨年度実施した医療者対象の調査に用いた原案を、昨年度の調査結果に基づいて一部修正し、調査に用いた。糖尿病運動関連QOL尺度は、昨年度の文献レビューと患者・医療者への面接結果を基に作成した原案を調査に用いた。対象となった都内2クリニック通院中の2型糖尿病患者202名のうち、181名から有効回答を得た。糖尿病食事関連QOL尺度改訂版は、因子分析の結果、原版と同様の3因子構造であることが確認された。内的整合性はクロンバックのα係数が0.7以上、再現性は級内相関係数が0.530.78と概ね良好であった。因子分析で因子負荷量の高かった項目は、昨年度の医療者対象の調査結果でも重要度が高いとの回答を得た項目であったため、これらの項目を用いて短縮版を作成した。糖尿病運動関連QOL尺度は、因子分析の結果、「運動の受益感(目常生活)」「運動の負担感」「運動の楽しさ」「運動の受益感(疾患管理)」の4因子構造が確認された。内的整合性はクロンバックのα係数が0.7以上、再現性は級内相関係数が0.690.79といずれも良好であった。本年度の調査結果から、糖尿病食事関連QOL尺度改訂版および短縮版と糖尿病運動関連QOL尺度は、いずれも糖尿病療養関連QOLを評価する尺度として、妥当性・信頼性を有することが示された。現在、これらの尺度を用いて糖尿病療養関連QOLを測定し、QOLに影響を与える因子を同定するための縦断調査を実施中である。本研究では平成19年度に食事関連QOL尺度改訂版および短縮版の作成,運動関連QOL尺度(案)の作成の2つの成果を挙げた。これらを合わせた糖尿病療養行動関連尺度が次年度はじめには完成され,糖尿病患者の療養生活におけるQOLを簡便に評価することが可能となる。それぞれの成果の詳細は以下のとおりである。1.食事関連QOL尺度改訂版および短縮版の作成本研究に先んじて作成した食事関連QOL尺度をさらに臨床的に有用なものとするため,糖尿病腎症にも適用範囲を広げた改訂版(案)を作成した。改訂版(案)は,日本糖尿病学会専門医,糖尿病看護認定看護師,糖尿病療養指導士の資格を持つ管理栄養士,各1名により表面妥当性,内容妥当性が確認された。さらに,尺度のアセスメントツールとしての利便性を向上させるべく,短縮版を作成することを計画した。日本糖尿病学会専門医,糖尿病看護認定看護師,糖尿病療養指導士の資格を持っ管理栄養士,計62名にDelphi法による2回の自記式質問紙調査を実施し,尺度の各項目の重要度を6段階で尋ねた。回答率は90.3%,対象者の7割以上が「非常に重要」「重要」と回答した項目は9項目であり,医療専門職が食事関連QOL評価として重要視する内容が明らかとなった。2.運動関連QOL尺度(案)の作成先行研究,文献レビューから尺度の項目案を収集し,糖尿病運動関連QOL尺度(案)を作成した。その後,医療専門職(医師,看護師,運動療法士)および患者,計10名を対象に,インタビューと実際に糖尿病運動関連QOL尺度(案)への回答を依頼し,尺度の内容妥当性,実施可能性を確認した。現在,東京都にある糖尿病患者を診療する2つのクリニックにおいて,20歳以上70歳未満の2型糖尿病患筆を対象として尺度の信頼性,妥当性を検証するための質問紙調査を実施中であり,中間解析では良好な結果を得ている。

糖尿病運動関連QOL尺度は、因子分析の結果、「運動の受益感(目常生活)」「運動の負担感」「運動の楽しさ」「運動の受益感(疾患管理)」の4因子構造が確認された。内的整合性はクロンバックのα係数が0.7以上、再現性は級内相関係数が0.690.79といずれも良好であった。本年度の調査結果から、糖尿病食事関連QOL尺度改訂版および短縮版と糖尿病運動関連QOL尺度は、いずれも糖尿病療養関連QOLを評価する尺度として、妥当性・信頼性を有することが示された。現在、これらの尺度を用いて糖尿病療養関連QOLを測定し、QOLに影響を与える因子を同定するための縦断調査を実施中である。
歯髄幹細胞の効率的回収と輸送中の歯髄組織培養を可能とする新規凍結保存法の開発

医療廃棄物である抜去歯の歯髄組織内に間葉系幹細胞が存在することが確認されている。この細胞はdentalpulp stem cells:DPSCsと呼ばれ、現在臨床応用されている骨髄および脂肪組織由来の幹細胞と同程度の分化能を有していながらそれらの幹細胞と比較して高い増殖能を持つこと、遺伝子変異の蓄積が少ないことから、最近、再生医療における重要な細胞ソースとして注目されるようになってきた。将来の再生医療に向けてより多くの歯髄幹細胞を確保する上では、低コストで簡便、且つ安全な細胞回収保存システムの構築が必要であると考えた。そこで、本研究では歯髄幹細胞の簡便な回収と確実な保存を可能とし、抜去歯より歯髄組織を採取後、培養を行いながら移送するシステムの構築を目指す。これにより、歯髄幹細胞による再生医療の裾野が拡大することが期待される。患者またはボランティアの抜去歯より歯髄組織を採取後、組織片を細切し、多孔性メンブレンで挟み、48時間培養を行う。そして、採取直後の歯髄組織と48時間培養後の歯髄組織をパラフィン切片にして、HE染色を行い、組織片内の細胞の挙動を確認する。尚、ポアサイズは細胞が通れないサイズである0.4μmのものを使用予定である。次に、サンド法で回収した組織片を1週間凍結保存後に解凍し、Explant法にて60mm-dishに再度培養し、コンフルエントに達するまでの時間をコントロール(未凍結の歯髄組織片)と比較する。最後に、分離した細胞の特性について検討する。具体的には細胞増殖能、骨芽細胞・脂肪細胞・軟骨細胞への分化能をコントロールの細胞と比較し、また、フローサイトメーターによる細胞表面マーカー(間葉系幹細胞マーカーと造血系幹細胞マーカー)の確認を行い、得られた結果をとりまとめ、成果の発表を行う。現在、採取した歯髄組織を多孔性メンブレンで挟んで培養することで、組織辺縁への幹細胞の遊走が確認された。多孔性メンブレンによる培養のと通常の培養法を比較検討予定。フローサイトメトリーを用いて細胞表面マーカーを調べるための抗体購入費用が当初の計画より多く発生したため。
自然発症糖尿病ラットにおける実験的歯周炎の病理組織学的研究

【方法】実験には、自然発症糖尿病(GK)ラット45匹と、JCLウイスター系ラット45匹の計90匹を用いた。動物は、上顎右側第1臼歯(M_1)と第2臼歯(M_2)の歯間部ら糸を挿入し、J-1,2,3群(JCLラット)、G-1,2,3群(GKラット)の6群(各群15匹)に分けた。J-1とG-1群は、普通食で飼育し、J-2群とG-2群は、糸挿入後3週より高シヨ糖食で飼育し、J-3群とG-3群は、糸挿入後3週より高シヨ糖溶液で飼育した。各群の動物は、糸挿入時、挿入後6,9,12週でブドウ糖負荷試験を行い、6,9,12週で各群5匹ずつ屠殺した。通法に従い臼歯部の近遠心方向の連続切片を作製し、HE染色を施してM_1とM_2の歯間部を組織学的に観察した。さらに、組織形態計測学的に、歯槽骨の高さを画像解析装置を使用して計測した。【結果】ブドウ糖負荷試験では、G群は、J群と比較して、有意に高い血糖値を示した。J-1,2,G-1群は、経時的な耐糖能の変化はみられなかった。しかし、G-2,3群は、シヨ糖投与後、経時的に耐糖能が悪化しており、G-2群よりG-3群のほうが耐糖能が悪かった。組織学的には、J群、G群は、ともに歯肉結合組織に軽度から中等度の炎症性細胞浸潤、経時的な歯槽骨の高さの減少が認められた。組織形態計測学的にM_1、M_2の長さに対する歯槽骨長比は、各群とも経時的に小さくなっていく傾向がみられ、G群では、G-1群、G-2群、G-3群の順で小さかった。【考察】GKラットの耐糖能を悪化させると、病理組織学的ならびに組織形態計測学的に歯周組織の破壊が促進されることが認められた。このことは、全身因子として糖尿病は歯周組織破壊に何らかの影響を与えている可能性が示唆された。さらに今後、ストレスの影響を加えて行く予定である。
極端環境を計測する小型慣性センシングデバイス

水晶の縦振動(内部歪み振動)を検出原理とした角速度センサを中心に、極めて高い加速度(>1000G)、角速度(10000deg/s)が印加される環境下で、正確に加速度・角速度を共に計測する慣性センシングデバイスおよびシステムを構築する。デバイス精密加工にはMEMS技術を用い、検出システムとしては早期にA/D変換を行い、ディジタル信号での信号処理を行うことによって安定で自由度の高いシステムを構築する。
泌尿器癌細胞に対する細胞外基質の影響と細胞接着受容体の発現に関する研究

1.ヒト正常尿路上皮細胞及び泌尿器癌細胞株を含む様々な培養細胞の、各種細胞外基質上、あるいは基質内部への包埋培養法を確立した。さらに標本の固定法、切り出し法、染色の方法を含め光学顕微鏡、蛍光顕微鏡、電子顕微鏡による形態学的観察法を確立した。2.MTT法を応用することにより、細胞外基質を用いた培養系における細胞増殖能を定量化する方法を確立した。これによって細胞外基質の量的、質的な違いによる細胞の増殖能の変化を評価することが可能になった。3.ICAM-1、インテグリンファミリー群などの細胞接着分子に対するモノクローナル抗体を用いて、まず実際の泌尿器系腫瘍表面へのこれらの分子発現を、外科的に切除した標本上で検討した。さらに培養癌細胞株表面への発現をフローサイトメトリーならびに免疫組織化学的方法によって解析した。4.培養細胞よりmRNAを抽出し、RT-PCR法、northern blotting法を用いて、インテグリンファミリー群を含む様々な細胞接着分子の遺伝子レベルでの発現を検討する方法を確立した。5.上記の実績をふまえて、現在、各種細胞外基質成分あるいは細胞接着分子に対するモノクローナル抗体、細胞外基質の特定のドメインより得られる生理活性ペプチドなどを用いて細胞と細胞外基質の接触阻止試験を行い、細胞形態、増殖能に及ぼす影響を検討しつつある。更に今後は各種増殖因子、サイトカインの細胞増殖、細胞外基質産生調節に対する影響、増殖因子受容体、細胞接着分子の発現に及ぼす効果などについても総合的な検討を加えてゆく予定である。
情報物理学でひもとく生命の秩序と設計原理

本領域は、生命現象を分子レベルから定量的に計測する技術の発展と、非平衡系の統計力学・情報熱力学理論の深化を背景とした、両者の融合領域である。生命現象の理解という具体的な課題に対して「情報を力、エネルギーと同列に物理的対象として議論する新しい物理学」を構築することで、生物学と物理学の間の新たな学際領域を開拓する。この目的を達成するために、本総括班は、領域内での生物系の実験研究と物理系の理論研究の学際融合研究を推進する本領域は、生命現象を分子レベルから定量的に計測する技術の発展と、非平衡系の統計力学・情報熱力学理論の深化を背景とした、両者の融合領域である。この目的を達成するために、本総括班は、領域内での生物系の実験研究と物理系の理論研究の学際融合研究を推進する
腫瘍幹細胞に立脚した悪性リンパ腫の性格付けに関する解析

悪性リンパ腫において腫瘍幹細胞としての役割をもつ細胞を同定するためには,リンパ腫細胞からマーカーを利用してソートされた細胞をNOD/SCIDマウスに移植する必要がある.悪性リンパ腫の一組織型であるホジキンリンパ腫の細胞株において活性酸素のレベルが低い細胞が小型単核細胞群の一部にみられ,高い細胞は大型多核細胞群に多くみられた。これらの小型単核細胞は大型多核細胞に比べて腫瘍形成能が高いことがin vitrocolony形成能およびNOD/SCIDマウスへの移植により確認された.以上より悪性リンパ腫においても腫瘍内に腫瘍形成能を有する一群が存在することが示唆された.悪性リンパ腫において腫瘍幹細胞としての役割をもつ細胞を同定するためには,リンパ腫細胞からマーカーを利用してソートされた細胞をNOD/SCIDマウスに移植する必要がある.悪性リンパ腫の一組織型であるホジキンリンパ腫の細胞株において活性酸素のレベルが低い細胞が小型単核細胞群の一部にみられ,高い細胞は大型多核細胞群に多くみられた。これらの小型単核細胞は大型多核細胞に比べて腫瘍形成能が高いことがin vitrocolony形成能およびNOD/SCIDマウスへの移植により確認された.以上より悪性リンパ腫においても腫瘍内に腫瘍形成能を有する一群が存在することが示唆された.悪性リンパ腫において腫瘍幹細胞としての役割をもつ細胞を同定するためには,リンパ腫細胞からマーカーを利用してソートされた細胞をNOD/Scidマウスに移植する必要がある.そのためには腫瘍幹細胞マーカーを検索しなければならない.本年度は,腫瘍幹細胞が多く含まれていると考えられるside-populationをソートし,その画分に回高発現する遺伝子を調べることで腫瘍幹細胞マーカーを検討した.まずside-population画分を多く含む肺腺癌細胞株よりside-populationで高発現する遺伝子として同定されたNR0B1を用いて,その発現と予後との関係を肺腺癌臨床検体を用いて検討したところ,NR0B1を高発現する細胞を多く含む症例では予後不良であった.また,外陰部扁平上皮癌の腫瘍幹細胞のマーカーの一つとして発現が報告されているpodoplaninについて,食道扁平上皮癌の臨床検体を用いてその発現と予後との関係について検討したところ,podoplaninの発現が高い症例の方が,低い症例に比較し有意に予後不良であった.これらのことから腫瘍幹細胞の存在の多寡が予後を決定することが示唆された.次に悪性リンパ腫の一組織型であるホジキンリンパ腫の細胞株より,造血幹細胞や乳癌細胞のside-populationにおいて除去能が高い活性酸素をマーカーとして用いて検討した結果、活性酸素の発現が低い細胞が小型単核細胞群の一部にみられ.発現が高い細胞は大型多核細胞群に多くみられた。これらの小型単核細胞は大型多核細胞に比べて腫瘍形成能が高いことがin vitrocolony形成能およびNOD/Scidマウスへの移植により確認された.以上より悪性リンパ腫においても腫瘍内に腫瘍形成能を有する一群が存在することが示唆された.悪性リンパ腫において腫瘍幹細胞としての役割をもつ細胞を同定するためには,リンパ腫細胞からマーカーを利用してソートされた細胞をNOD/Scidマウスに移植する必要がある.そのためには腫瘍幹細胞マーカーを検索しなければならない.本年度は,まず子宮内膜癌細胞株について腫瘍幹細胞を多く含むとされるALDH1発現と増殖能や浸潤能との関係を検討したところ,ALDH1の発現が高い細胞群において低い細胞群と比較して増殖能や浸潤能が高く,薬剤抵抗性を示した.次に予後との関係を子宮内膜癌の臨床検体を用いて検討したところ,ALDH1を高発現する細胞を多く含む症例では予後不良であり,腫瘍幹細胞の存在の多寡が予後を決定することが示唆された.また,悪性リンパ腫の一組織型であるホジキンリンパ腫の細胞株より,造血幹細胞や乳癌細胞のside-populationにおいて除去能が高い活性酸素をマーカーとして用いて検討した結果,活性酸素の発現が低い細胞が小型単核細胞群の一部にみられ,発現が高い細胞は大型多核細胞群に多くみられた。これらの小型単核細胞は大型多核細胞に比べて腫瘍形成能が高いことがin vitrocolony形成能およびNOD/Scidマウスへの移植により確認された.さらにホジキンリンパ腫細胞株ではALDH1を発現する細胞群が一部にみられ,それらは活性酸素が低い群の細胞と同様に腫瘍形成能が高いことが確認された.以上より悪性リンパ腫においても腫瘍内に腫瘍形成能を有する一群が存在することが示唆された.
超音波画像を用いた大腸の可視化による新しい便秘ケアの構築

便秘は多くの人が抱える障害であり、適切な排便ケアのためには貯留便の評価が最も重要となる。そこで、超音波検査装置(エコー)を用いて、適切な排便ケア方法の確立を目的とした。対象者は慢性便秘の患者で、調査手順は排便状態と大腸のエコー画像を比較検討した。結果は便貯留と大腸ガスの区別と便秘を直腸性便秘又は結腸性便秘に区別することが可能であった。よって、便秘者にエコーを行うことで、適切な排便ケアを行うことが可能ではないかと考える。・便秘は小児から高齢者まで多くの人が抱える一般的な障害であるが,時として深刻な腸疾患を発症する原因ともなる.特に、介護を必要とする高齢者の便秘は、当事者だけでなく介護者にも大きな負担となっている。したがって,排便の適切な治療やケアが必要であり、そのためには便性状の評価が最も重要となる.しかし、腹部触診や問診ではその区別は困難であり、適切なケアを提供できていない現状がある。そこで、申請者は利便性と安全性を兼ね揃えた超音波検査装置(エコー)を用いて大腸を可視化することでこの問題の解決を目指した。本研究では、便秘患者を対象とした排便ケアにおいて、エコーを用いた適切な排便ケア方法の確立を目的とした。・調査方法:エコーを用いた大腸内容物のアセスメント方法の有効性を検証するためには、対照群を設定し前向きに検討する必要がある。さらに、エコー以外の要因が排便ケアと便秘へ及ぼす影響を排除するため、介入群と対照群はランダムに割り付ける必要がある。そこで、エコーによる排便ケアの変化とそれにともなう便秘日数の短縮、適切な排便、薬剤による排便ケアの減少を示すことを目的としたランダム化比較対照試験を実施している。・対象者:排便困難でRomeIIIによる機能性便秘と判断し排便ケア実施が決まった患者とした。・調査手順:問診(既往歴、排便の頻度、排便時の困難感と下痢症状の有無、および排便方法)及び排便状態(King's stool char)と大腸のエコー画像を比較検討している。エコーは排便ケアの翌日から便秘が改善するまで1日1回実施している。したがって,排便の適切な治療やケアが必要であり、そのためには貯留便の評価が最も重要となる.しかし、腹部触診や問診ではその区別は困難であり、適切なケアを提供できていない現状がある。・調査方法:エコー検査で大腸内容物を評価し、排便ケアにおけるエコー検査の有効性を検証するためには、前向き観察研究を実施した。・調査手順:問診(既往歴、排便の頻度、排便時の困難感と下痢症状の有無、および排便方法)及び排便状態(King's stool chart)と大腸のエコー画像を比較検討している。エコーは排便ケア実施の前日から便秘が改善するまで1日1回実施した(入院期間中:最大14日を限度とした)。・結果:便貯留と大腸ガスの区別は可能で、便秘に対しては直腸性便秘又は結腸性便秘に区別が可能であった。さらには、貯留した便の硬さと貯留部位が確認できた。よって、排便困難な患者にエコーを行うことで、適切な排便ケア(下剤、浣腸、摘便、坐薬)、便秘日数の短縮、薬剤の減少による排便を行うことが可能ではないかと考える。・本研究課題の当初研究目的の達成度は現時点で65%である。・本研究の目的は、エコー検査以外の要因が排便ケアと便秘へ及ぼす影響を排除するため、介入群と対照群はランダムに割り付ける必要がある。現在、介入群と対照群のデータ収集のため、週に1名から2名の排便困難な患者に対してエコーを行っており、着実にデータ収集を実施している。・ただし、本研究は、排便困難なRomeIIIによる機能性便秘と判断し排便ケア実施が決まった患者を対象としており、研究実施前に患者又は家族からの承諾を得る必要がある。研究対象者の中には認知機能の低下があり意思決定が困難な患者も含まれており、家族から同意を得る前に排便ケアが行なわれ場合がある。

また、研究者が、排便ケアの翌日から便秘が改善するまで1日1回エコー検査を実施するが、患者の都合により継続的なエコー観察が困難な場合がある。・今後は、患者への十分な倫理的配慮を行いながら、エコーを用いた適切な排便ケア方法の確立を目指した更なる調査を行う予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。老年看護学超音波画像による排便ケアの適性や有効性の評価・対象:排便困難でRomeIIIによる機能性便秘と判断し排便ケア実施が決まった患者とする。・調査手順:問診(既往歴、排便の頻度、排便時の困難感と下痢症状の有無、および排便方法)及び排便状態(King's stool char)と大腸のエコー画像を比較検討している。エコーは排便ケアの翌日から便秘が改善するまで1日1回実施する。・排便ケアの適性や有効性の評価は、排便ケア実施後の排便状態から下剤又は浣腸を選択した排便ケア方法の適性と有効性を評価する。便秘症患者を対象に触診と聞き取り調査で推測される排便状態は、一般的に行われている看護アセスメントであるが、超音波画像を追加することで、ガス貯留か便塊かを区別することができ、より精度の高いアセスメントになると考える。そこで、排便ケアの前に超音波画像による評価を加えることが有益であると推測される。・研究が当初計画どおりに進まない時の対応:聞き取り調査及びエコー画像が計画通りに進まないときは、その時点までのデータを使用して研究を進める。又は、他の病院施設(金沢大学医学部付属病院、東京大学医学部附属病院、金沢市近郊の介護保険施設)での実施を依頼する。
ラノステロ-ルの生合成研究

1.まず高比放射活性の^3Hーオキシドスクアレンを化学合成し、閉環生成物であるラノステロ-ルの分離に逆相HPLCを導入することにより、簡便かつ高感度な生成物特異的アッッセイ法を確立した。2.コレスチラミン投与ラットの肝臓ミクロソ-ム画分に、ラノステロ-ル閉環活性を検出した。各種界面活性剤による可溶化を検討し、0.2%TritonXー100処理により効率良く可溶化することができた。また、可溶化酵素は、バッファ-に20%glycerol,1mM EDTAおよび1mM DTTを添加することにより比較的安定に取り扱えることを見出だした。3.ミクロソ-ム可溶化タンパクをHydroxylapatite,Isoelectric forcusing,Qーsepharose,高速ゲル濾過のカラムクロマトグラフィ-を組み合わせることにより、精製倍率1860倍、回収率28%でSDSーPAGE上単一なバンドとして精製することに成功した。4.精製酵素は、分子量75kDのサブユニットからなるhomodimerであり、等電点5.5,至適pH6.5ー8.0,基質に対するKm値55μMであった。アッセイバッファ-へのTritonXー100添加により約5倍活性化され、高塩濃度下で阻害を受けるなど、ブタ肝あるいは高等植物由来の閉環酵素とはかなり異なる性質を示した。5.精製酵素をLysーCで消化し、逆相HPLCにより2種のペプチドを単離した。アミノ酸配列分析の結果、このうちの1種ーAーHーEーFーLーRーLーSーQーVーTーDーNーNーPーDーYーQーKーはデ-タベ-スに見当たらないシ-クエンスであり、本酵素をコ-ドする遺伝子のクロ-ニングに際して用いるプロ-ブとして利用できる。以上のように、従来精製困難とされていたステロ-ル生合成における鍵酵素の精製に成功し、その性状を明らかにした。本研究の成果は、今後の活性部位探索研究を進める上で大きなステップとなるものである。
学術的文書作成のための文体差のある語の計量的分析

(1)「書き言葉的」と「話し言葉的」として示される語・表現をすでに約1,900語収集していたが,追加の文献調査を行った。現在,約2,500語。これについて,品詞の付与を行っている。語ではなく表現とすべきエントリーもある。それらは「品詞+品詞+品詞」や「連語(品詞&品詞&品詞)」といった形で記述している。また、特に長いものについては細かな分解を避けて、単に「名詞句」「動詞句」などとしている。テキストに書かれている品詞名と、実際の品詞名が異なる場合もあるが,誤りというよりは品詞判定のゆれの問題が出てくる。たとえば,「非常に」「絶対に」「同様に」などを副詞ととらえるか,ナ形容詞連用形ととらえるか,「更に」は接続詞ととらえるか,副詞ととらえるか,等々。(2) 2019年3月6日に研究打合せを行い,「白書・国会会議録を用いた話し言葉的な語と書き言葉的な語の抽出」「ベトナム人日本語学習者の卒業論文・修士論文の文末表現」「高校教科書で調査した文体差のある語の問題点」「大学生のアカデミックライティングにおける「話し言葉かもしれないと思う語」のアンケート」「日本語教育教科書で扱われている接続表現の調査分析」等について,議論した。文末表現に関し,特に,論文の指南書には「思う」の代わりに「思われる」や「考える」を使うとよいとするものがあるが,論文は自分の考えを書くものであるため,「思われる」「考える」も不要であるという点について確認,議論した。(3) 2019年3月22日に,早稲田大学にて開催された,第7回早稲田大学ライティング・フォーラムにて,「学術的文章作成時に留意すべき『話し言葉的な語』とは」(柏野和佳子)の講演を行った。今年度も,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』のレジスタ別の頻度調査と分析,ベトナムの日本語学習者の論文や,学習者作文コーパス「なたね」による,頻度調査と分析等は予定通り進めることができている。しかしながら,文献調査を追加で行うこととしたため,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』の発話アノテーション結果等との頻度調査が先延ばしになった。最終年度に実施する。(1)文献調査結果を利用しやすいのものにするよう,調査語の品詞情報の付与を仕上げる。(2)モニター公開のされた『日常会話コーパス』を利用し,頻度調査結果をデータベースに取り込み,データベースを完成させる。(3)調査・分析の過程で明らかになった文体差のある語の問題について学会発表を行う。(1)「書き言葉的」と「話し言葉的」として示される語・表現,約1,900語について,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』のレジスタ別頻度一覧表を作成した。また,科学技術論文の頻度情報も付与した。これにより,文体差を客観的に確認できる資料を一つ得ることができた。(2)2017年6月2日にハノイ貿易大学にて開催された,国際シンポジウム『ビジネス日本語教育とグローバル人材育成』にて,「日本語教育における音声言語と文字言語」(星野和子),「ベトナム人日本語学習者の卒業論文・修士論文に見られる話し言葉的な副詞」(NGUYEN THI BICH HA)以上2件の口頭発表を行った。(3)2018年2月26日に研究打合せを行い,接続表現の『現代日本語書き言葉均衡コーパス』のレジスタ別使用傾向,日本語教育教科書での扱われ方,ベトナム人学習者の論文の使用傾向,日本語学習者コーパスの分析について,議論した。(4)2018年3月19日に国語研にて開催された,シンポジウム「日常会話コーパス」IIIにて,「フォーマルな話し言葉に現れやすい書き言葉的な語」(柏野和佳子)以上1件のポスター発表を行った。『現代日本語書き言葉均衡コーパス』のレジスタ別の頻度調査と分析,ベトナムの日本語学習者の論文や,学習者作文コーパス「なたね」による,頻度調査と分析等は予定通り進めることができている。しかしながら,当初予定していた,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』の発話アノテーション結果,『名大会話コーパス』,『言語処理学会論文誌LaTeXコーパス』等による,頻度調査と分析が未着手である。順次取り組んでいく。(2) 2019年3月6日に研究打合せを行い,「白書・国会会議録を用いた話し言葉的な語と書き言葉的な語の抽出」「ベトナム人日本語学習者の卒業論文・修士論文の文末表現」「高校教科書で調査した文体差のある語の問題点」

「大学生のアカデミックライティングにおける「話し言葉かもしれないと思う語」のアンケート」「日本語教育教科書で扱われている接続表現の調査分析」等について,議論した。文末表現に関し,特に,論文の指南書には「思う」の代わりに「思われる」や「考える」を使うとよいとするものがあるが,論文は自分の考えを書くものであるため,「思われる」「考える」も不要であるという点について確認,議論した。(3) 2019年3月22日に,早稲田大学にて開催された,第7回早稲田大学ライティング・フォーラムにて,「学術的文章作成時に留意すべき『話し言葉的な語』とは」(柏野和佳子)の講演を行った。今年度も,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』のレジスタ別の頻度調査と分析,ベトナムの日本語学習者の論文や,学習者作文コーパス「なたね」による,頻度調査と分析等は予定通り進めることができている。しかしながら,文献調査を追加で行うこととしたため,『現代日本語書き言葉均衡コーパス』の発話アノテーション結果等との頻度調査が先延ばしになった。最終年度に実施する。(1)科研費の前課題で行っていた文献調査から時間がたったため,日本語の作文技術に関する文献及び,書き言葉と話し言葉の相互関係に関する文献の再調査を行う。(2)『現代日本語書き言葉均衡コーパス』の発話アノテーション結果,『名大会話コーパス』,『言語処理学会論文誌LaTeXコーパス』や,所内で構築の進む『日常会話コーパス』などによる,頻度調査と分析を進める。(1)文献調査結果を利用しやすいのものにするよう,調査語の品詞情報の付与を仕上げる。(2)モニター公開のされた『日常会話コーパス』を利用し,頻度調査結果をデータベースに取り込み,データベースを完成させる。(3)調査・分析の過程で明らかになった文体差のある語の問題について学会発表を行う。当初購入を予定していたソフト類の購入が不要になったこと,今年度の成果発表には出張費が伴わなかったこと,予定していた役務の発注量が少なかったことなどによる。国際会議の発表の予算を計上していたが,実施しなかった。最終年度にベトナムにてワークショップを開催し,成果の公開と普及を広く行う予定でいる。
涙液サイトカインと共焦点生体顕微鏡から考える角膜移植の新しい治療指針

今回の研究の意義は、角膜内皮移植術後の予後について涙液サイトカインの測定や共焦点生体顕微鏡といった新しい技術を用いて評価する事である。今回の研究にて、角膜内皮移植術後の患者26眼、水疱性角膜症の患者21眼、白内障手術予定の患者32眼の涙液と共焦点生体顕微鏡のサンプルを得ることができた。今後はこれらのサンプルの解析と結果を論文にまとめ、学会発表まで施行する予定である。平性29年度は必要な機器が納入されず、研究は進めれなかった。プロトコールの作成を終えて、検査機器が納入・実施できる体制が整ったため今後は対象患者をリクルートし、解析していく予定である。必要機器の納入が大幅に遅れたため今回の研究の意義は、角膜内皮移植術後の予後について涙液サイトカインの測定や共焦点生体顕微鏡といった新しい技術を用いて評価する事である。今後、機器は納入されたので、対象患者をリクルートし、解析をしていきたい。必要機材の納入が遅れたため、そのレンタル費用ならびに、サンプル解析に関わる試薬などの購入は控えていたため
日本語諸方言における中舌母音生成に関する通時論的研究

本研究においては、日本語諸方言における中舌母音生成に関して、研究代表者による調査資料が蓄積されている琉球諸方言を中心にして、主として以下の3点についで標記研究を遂行した。1)既存の音声資料の整理と音響分析的手法による分析2)新たな臨地調査による中舌方言資料の補完及び分析3)中舌母音生成に関する仮説作りと仮説の修正1)においては、「南琉球方言の中舌母音の音声実質」『音声研究4-1』(日本音声学会)に、「南琉球大神島方言の音対応と音変化」『岩手大学教育学部研究年報59-2』を発表した。2)に関して、平成11年度においては鹿児島県名瀬市における音韻体系調査およびDATによる良質のディジタル媒体録音を行った。平成12年度においては、沖縄県宮古郡伊良部町長浜および伊良部において音韻体系調査およびDATによる録音を、鹿児島県大島郡喜界町塩道等において音韻体系調査を行った。音声研究におけるマルチメディア媒体利用に関しては、「方言研究とマルチメディア」と題して日本音声学会300回例会において発表した。また、名瀬方言を中心に適宜音響分析による中舌母音の定量化を行っている。3)に関して、「日本語音韻史における琉球宮古方言」『日本語学18-5』を発表、その後の調査資料をもとに検討を継続している。舌先調音子音と結合するu母音の中舌化について、四つ仮名音声の消失過程と歴史的関係を有する可能性が喜界島調査によって明らかになった。また、青森の下北方言の歴史的資料であるタターリノフ『レキシコン』の検討から、東北地方の中舌母音が比較的新しい時代に生成されたものである可能性も明らかになってきた。平成11年度は、中舌母音方言を中心とする日本語諸方言音韻体系の通時論的研究を推進するためには、以下の段階に沿った諸方言音韻データの収集・整理・分析を行った。1)既存の音声資料の整理及び音響分析手法による分析2)新たな臨地調査による上記資料の補完および分析3)仮説IIIIに照らした諸方言音韻体系間の通時的関係の把握と、必要に応じた仮説の修正。1)においては、研究代表者の保有する南琉球方言における中舌母音関連の音声資料を中心に、音対応の観点から中舌母音の通時的特性を定位づける単著「南琉球大神島方言の音対応と音変化」『岩手大学教育学部研究年報59-2』(1999)と、音響分析の手法を用いて中舌母音の通時的多様性を論じた共著「南琉球方言の中舌母音の音声実質」『音声研究4-1』(2000刊行予定)を執筆した。また、中舌母音を含めて方言音声研究における○ティメディア利用の緊急性について「方言研究とマルティメディア」と題して日本音声学会第300回例会で共同研究発表を行った。琉球方言の中舌母音関係資料については謝金を用いた資料整理を2月に集中的に行った。2)においては、琉球方言調査の豊富なキャリアを持つ大学教員3名を調査補助員として、特質的な中舌母音を有する鹿児島県名瀬市方言の臨地調査を11月に行った。併せて、調査時にDAT録音した音声資料をコンピュータ上でディジタル編集しCD化するための設備を整えた。3)については、本土方言における中舌母音と琉球方言における中舌母音の生成の歴史を統合的に説明する仮説を構築中である。本年度においては、平成11年度の実績を踏まえ下記の3点について標記研究を遂行した。1)既存の音声資料の整理と音響分析的手法による分析2)新たな臨地調査による中舌方言資料の補完及び分析3)中舌母音生成に関する仮説作りと仮説の修正

1)においては、南琉球方言の中から中舌母音を有する八重山諸島新城下地島方言・宮古諸島大神島方言・宮古島狩俣方言を取り上げて、音響分析の手法を用いてそれらの中舌母音の音声実質を相対化した論考「南琉球方言の中舌母音の音声実質」を、日本音声学会の機関誌『音声研究4-1』に発表した。2)に関して、沖縄県宮古郡伊良部町長浜および伊良部において音韻体系調査およびDATによる録音を、また、鹿児島県大島郡喜界町塩道等において音韻体系調査を行った。このほか、岩手県内数地点において中舌母音関係の音韻体系調査を遂行した。これらの調査によって得られた音声資料は、CD-RWを用いてDATと同じディジタル媒本であるCD化を試行している。また、名瀬方言を中心に適宜音響分析による中舌母音の定量化を行った。3)に関して、研究開始当初の仮説を、その後の調査資料をもとに検討を継続した。ことに、舌先調音子音と結合するu母音の中舌化は、四つ仮名音声の消失過程と歴史的関係を有する可能性が喜界島調査によって明らかになった。また、青森の下北方言の歴史的資料であるタターリノフ『レキシコン』中に中舌母音の表記が舌先調音子音と結合する場合以外に見られないことから、東北地方の中舌母音が比較的新しい時代に生成されたものである可能性が見いだされた。