hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
視床下部傷害に着目したくも膜下出血の新たな予後決定病態の解明

くも膜下出血は、医療が発展した現在においても予後は改善していない。その理由として、二大合併症である早期脳損傷と脳血管攣縮だけでは説明できない病態があると考えられる。近年申請者は、くも膜下出血後急性期の中枢性交感神経活動を新たな予後決定病態と位置づけ、その上位中枢である視床下部傷害が大きな役割を持つことを発見した。本研究では、動物モデルを用いて、くも膜下出血後に修飾を受ける視床下部由来の交感神経活動関連因子Xを特定することを目指す。本研究成果は、くも膜下出血患者の予後と相関するバイオマーカー開発と初めてのくも膜下出血急性期治療薬開発へ展開できる基盤研究となることが期待される。
抗下垂体抗体を指標とした自己免疫性多臓器内分泌障害の成立機序に関する研究

抗下垂体抗体は,自己免疫性多臓器性内分泌障害の病因および発症の基本的メカニズムと密接に関与していると考えられている。我々はラット下垂体の細胞質分画を抗原としたWestern Blot法(WB法)により抗下垂体抗体の検出方法を確立し、その対応抗原を検索した。また,内分泌疾患を有する患者血清を用いて抗下垂体抗体を検索しその臨床的意義について検討した。WB法による各種内分泌疾患の抗下垂体抗体の検出率は,糖尿病のIDDM30例中12例(40.0%)に22kDaに陽性バンドが高率にみられ,また,NIDDM15例には認められなかった。甲状腺疾患では,バセドウ病53例中14例(26.4%),橋本病54例中12例(22.2%)に22kDaの陽性バンドがみられた。下垂体性疾患では,下垂体性小人病25例中11例(44.0%)と半数近い症例に検出されたが,ACTH単独欠損症3例、TSH欠損症1例には22kDaの陽性バンドは認められなかった。抗下垂体抗体の細胞質抗体は,22kDaのタンパクに対する抗体が主体であり,内分泌疾患と密接に関与して何らかの免疫学的発症性機序に関係しているものと考えられる。22kDaのタンパクは,可溶性細胞質分画の成長ホルモン(GH)関連タンパクと推定される。自己免疫機序による細胞損傷の過程においては細胞膜抗体のほうがより重要な役割を担っていると考えられている。我々の検討した症例の中には,明らかな細胞膜抗体陽性例は,確認できなかった。健常者50名中に22kDaに陽性バンドがみられた3名は何らかの内分泌疾患を思わせる臨床症状や臨庄検査値の異常を認めなかった。我々はラット下垂体細胞質分画をイオン交換高速液体クロマトグラフィにより抗下垂体抗体の対応抗原の分離分取を試みた結果,GH関連タンパクと思われる22kDaのタンパクが塩濃度200mM前後で溶出された。この試料を用いるWB法は,抗下垂体細胞質抗体を特異的に捉えることが可能となったが,細胞膜抗体を十分に捉えていない。今後,さらに検討すべき課題である。抗下垂体抗体は,ACTH欠損症,シーハン症候群,橋本病,グラーブス病,empty sella症候群などの患者血液中から検出され,これら病態における自己抗体の関与が示唆される。従って自己免疫性多臓器性内分泌障害の病態形成のうえで重要な役割を担っていると思われるが明かでない点が多い。我々はラット下垂体から細胞質分画を抽出し,これを粗抗原としてWestern-blot法(以下WB法)により抗下垂体抗体の対応抗原を検索し,その分子量を推定した。ラット下垂体組織を用いた高感度蛍光抗体法(以下IF法)陽性患者血清における抗下垂体抗体の対応

抗原は,IF法陽性パターン別に,Type Cの症例Aは97.5KD,Type Dの症例Bは65KD,47KD,Type Dの症例Cは65KD,49KD,47KD,22KD,Type Gの症例Dは22KD,Type Hの症例Eは22KD,14.5KDに陽性バンドがみられ,下垂体由来GH産生細胞の表面抗原に対して陽性を示した症例Fでは,84KD,22KDに陽性バンドがみられた。IF法陽性パターンの種類によって対応抗原が異なることがWB法でも明らかになり,それを裏付けるものとなった。また,我々は,WB法に使用したラット下垂体上清分画について各種抗ヒト下垂体ホルモン抗体を用いて対応するタンパク質抗原の検索を検討した結果,抗ヒトGH抗体と抗ヒトPRL抗体は,共に22KD付近に陽性バンドがみられ,WB法で抗下垂体抗体IF法陽性血清の成績でみられた22KDと一致するものであった。これは患者血清中に抗GH抗体,抗PRL抗体の存在を示唆するものであり,自己免疫性多臓器性内分泌障害の病態に関わる興味ある成績である。抗下垂体抗体は,自己免疫性多臓器性内分泌障害の病因および発症の基本的メカニズムと密接に関与していると考えられている。我々はラット下垂体の細胞質分画を抗原としたWestern Blot法(WB法)により抗下垂体抗体の検出方法を確立し,その対応抗原を検索した。また,内分泌疾患を有する患者血清を用いて抗下垂体抗体を検索しその臨床的意義について検討した。WB法による各種内分泌疾患の抗下垂体抗体の検出率は,糖尿病のIDDM30例中12例(40.0%)に22kDaに陽性バンドが高率にみられ,また,NIDDM15例には認められなかった。甲状腺疾患では,バセドウ病53例中14例(26.4%),橋本病54例中12例(22.2%)に22kDaの陽性バンドがみられた。下垂体性疾患では,下垂体性小人症25例中11例(44.0%)と半数近い症例に検出されたが,ACTH単独欠損症3例,TSH欠損症1例には22kDaの陽性バンドは認められなかった。抗下垂体抗体の細胞質抗体は,22kDaのタンパクに対する抗体が主体であり,内分泌疾患と密接に関与して何らかの免疫学的発症性機序に関係しているものと考えられる。22kDaのタンパクは,可溶性細胞質分画の成長ホルモン(GH)関連タンパクと推定される。自己免疫機序による細胞損傷の過程においては細胞膜抗体のほうがより重要な役割を担っていると考えられている。我々の検討した症例の中には,明らかな細胞膜抗体陽性例は,確認できなかった。健常者50名中に22kDaに陽性バンドがみられた3名は何らかの内分泌疾患を思わせる臨床症状や臨床検査値の異常を認めなかった。我々はラット下垂体細胞質分画をイオン交換高速液体クロマトグラフィにより抗下垂体抗体の対応抗原の分離分取を試みた結果,GH関連タンパクと思われる22kDaのタンパクが塩濃度200mM前後で溶出された。この試料を用いるWB法は,抗下垂体細胞質抗体を特異的に捉えることが可能となったが,細胞膜抗体を十分に捉えていない。今後,さらに検討すべき課題である。
コンピュ-タアニメ-ション画像による高次コミュニケ-ションに関する研究

本研究では、将来コミュニケ-ションの手段として頻繁に利用されるコンピュ-タアニメ-ションを使って、高度な知的情報通信を実現するための研究を行う。本年度の研究実施計画に沿って、研究成果を列挙する。(1)動画像の作成と表示(1)人間の顔の3次元デ-タの入力:人物の顔を、左右に2台並べたカメラによって撮影し、これらの画像間の対応付けによって三角測量を行うことにより、顔の3次元デ-タを入力する手法を開発した。(2)人間と自然物体の動画像の作成:人物の髪が、風に吹かれてなびく動画を作成する手法を開発した。また、従来の手法では表現が困難であった炎の動画像、および墨流し模様などの不規則なパタ-ンの動画像を計算機によって作成する手法を開発した。(2)動画像のデ-タ圧縮1(1)動画像中の移動物体の抽出:複数の人物の歩行動作などを撮影した動画像から、個々の人物を切り出し、追跡する手法を開発した。本手法によって、動画像中の移動物体の部分だけを切り出し、背景とは別に処理することによって、動画像のデ-タ圧縮を行うことができる。(2)時間的に不連続な画像の中割り手法の開発:時間的に不連続な2枚の画像間を内挿し、任意枚数の中間画像を自動的に作成する手法を開発した。本手法では、ブロックマッチングとテクスチャマッピングを用いた。本手法によって、動画像中の一定時間間隔の画像を伝送するだけで、受信側で滑らかな動画として再生できるため、動画像のデ-タ圧縮を行うことができる。
無限個の正則化場にもとづくカイラルゲージ理論の非摂動的定式化とその応用

平成7年度には、格子正則化にもとづいて、vacuum overlap formulaに本質的な無限和を有限和(体積)からの極限として定式化し、カイラルなスペクトラムやゲージ不変性がどの様に実現されるかを摂動的に調べた。その結果、以下のことが明らかになった。有限体積化のために、boundaryに逆のカイラリティをもつdoublerが現れ、overlap formulaのゲージ不変部分への寄与は、kink-massによるゼロモードとあわせてvector-likeになっている。しかし、subtractされるPauli-Villars場にも同様のdoublerが生じるため、総和として、ゲージ場有効作用のparity-even項はWeylフェルミオンのnormalizationを正しく再現していることがわかった。また、overlap formulaの位相部分は4次元においても、consistent anomalyを再現することが計算によって、確かめられた。この結果は、International Symposium on Lattice Field Theory, Lattice95(於University of Melbourne, Australia)において発表し、他の研究者との議論や情報交換を行った。一方、京都大学およびKEKのスーパーコンピュータVPP500を利用して行った計算により、このoverlap formulaに関連して、次の様な数値的結果が得られた。2次元torus上の(anomaly freeな)chiral Schwinger modelおいて、一様なゲージ場のゲージ軌道上でゲージ自由度の積分を行うと、overlap formulaによって与えられるフェルミオン行列式の複素位相はゼロになり、行列式は実数になる。これは、格子サイズのゲージ自由度の揺らぎによって、species doublerの寄与が顕著になり、摂動で得られるカイラルなスペクトラムの複素位相が相殺されるためと理解される。上記の計算は、このspecies doublerの影響をoverlap formulaについて直接、確かめたものである。この様なゲージ自由度の格子サイズの揺らぎを抑える方法として、ゲージ固定をする方法とゲージ場の連続極限への内挿と連続極限のフェルミオン行列式の定義にもとづく構成法が提案されている。この問題についても、ゲージ固定や、ゲージ場の内挿によって抑えられたゲージ自由度の揺らぎが、行列式の位相にあたえる影響を数値的に調べてきた。特に、ゲージ固定によって現れるGribov copyとそれに対応する格子サイズのtopological defectが行列式の位相に与える影響を考察し、大域的なゲージ固定処方として提案されている方法の有効性の評価を行っている。現在までに得られた結果によれば、Landauゲージへのゲージ固定においては、Gribov copyとそれに対応する格子サイズのtopological defectが位相を大きく変化させる。そのため、ゲージ軌道上で位相を一意に決めることは困難である。それに対し、Laplasianゲージ固定処方によれば、十分小さなゲージ結合定数の下で生成される配位について、格子サイズのtopological defectを含まないなめらかな配位が一意に得られることが明らかになった。しかし、大きなゲージ結合定数下では、ゲージ場の配位の揺らぎは大きく、Laplasianゲージ固定処方によっても、格子サイズのtopological defectが避けられていない。この点に関しては、より有効なゲージ固定処方を考案する必要がある。以上の数値計算による研究の成果は、現在、論文にまとめている段階である。

現在までに得られた結果によれば、Landauゲージへのゲージ固定においては、Gribov copyとそれに対応する格子サイズのtopological defectが位相を大きく変化させる。そのため、ゲージ軌道上で位相を一意に決めることは困難である。それに対し、Laplasianゲージ固定処方によれば、十分小さなゲージ結合定数の下で生成される配位について、格子サイズのtopological defectを含まないなめらかな配位が一意に得られることが明らかになった。しかし、大きなゲージ結合定数下では、ゲージ場の配位の揺らぎは大きく、Laplasianゲージ固定処方によっても、格子サイズのtopological defectが避けられていない。この点に関しては、より有効なゲージ固定処方を考案する必要がある。以上の数値計算による研究の成果は、現在、論文にまとめている段階である。
メラノーマ発症の新たな原因遺伝子-発症メカニズムから治療への展開

プロテインホスファターゼ6型(PP6)は、触媒サブユニット(Ppp6c)と数種類の制御サブユニットからなるホロ酵素である。申請者は、所属分野でこれまで行ってきた生化学的な解析から、Ppp6cががん抑制遺伝子であるという仮説を持った。その証明のために、マウス皮膚発がん実験の系を用いて、Ppp6cがDMBA化学発がんや紫外線発がんにおいて、抑制遺伝子として働くことを証明した。最新のがん組織の遺伝子変異データベースによると。メラノーマにおいて、約10%の症例においてPpp6c変異が存在し、その組織においてはNRASまたはBRAF変異が共存している。興味深いことには、その組織にはPTEN変異は存在しない。従って、PP6機能喪失がPTEN経路とは独立に、活性化型(変異型)NRASまたはBRAFと協調して、メラノーマ発症に関与することを示唆している。またヒト基底細胞がんでは、約20%の症例でPpp6c遺伝子変異が認められ、その多くがp53変異および複数のがん遺伝子と共存している。以上のことは、皮膚発がんにおいて、PP6の機能不全が、他の活性化がん遺伝子の腫瘍形成能に相乗的に働き、より悪性化していることを示唆する。本研究においては、扁平上皮特異的に2重変異(変異型Kras発現+Ppp6c欠損)、そしてメラノサイト特異的に2重変異(変異型Braf発現+Ppp6c欠損)を導入して、それらの腫瘍形成能を、それぞれ単独変異(変異型Kras発現、または変異型Braf発現)のそれと比較することで、KrasやBrafのdriver変異に依存する腫瘍発生に対する、Ppp6cのがん抑制遺伝子としての機能の解析を行っている。申請者は、これまで行われてきた生化学的な解析から、Ppp6cががん抑制遺伝子であるという仮説を持ち、マウス皮膚発がん実験の系を用いて、Ppp6cがDMBA化学発がんや紫外線発がんにおける抑制遺伝子であることを証明した。最新のCOSMIC(がん組織の遺伝子変異)データベースによると。本研究においては、扁平上皮特異的に2重変異(変異型Kras発現+Ppp6c欠損)、そしてメラノサイト特異的に2重変異(変異型Braf発現+Ppp6c欠損)を導入して、それらの腫瘍形成能を、それぞれ単独変異(変異型Kras発現、または変異型Braf発現)のそれと比較する。扁平上皮特異的に、タモキシフェン存在下で、2重変異(KRAS変異とPpp6c欠損)を導入可能なマウスを作製するために、我々が作製したPpp6cflox/floxマウス、KrasLSL-G12D/+マウス(ジャクソン研から購入)、およびK14Cre-CreERT2マウス(ジャクソン研から購入)を掛け合わせて、K14Cre-CreERT2:KrasLSL-G12D/+: Ppp6cflox/floxマウスの作製に成功した。メラノサイト特異的に、タモキシフェン存在下で、2重変異(Braf変異とPpp6c欠損)を導入可能なマウスを作製するために、我々が作製したPpp6cflox/floxマウスとTyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ptenloxp/+マウス(ジャクソン研から購入)を掛け合わせて、Tyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ppp6cflox/floxマウスの作製に成功した。

本研究においては、扁平上皮特異的に2重変異(変異型Kras発現+Ppp6c欠損)、そしてメラノサイト特異的に2重変異(変異型Braf発現+Ppp6c欠損)を導入して、それらの腫瘍形成能を、それぞれ単独変異(変異型Kras発現、または変異型Braf発現)のそれと比較することで、KrasやBrafのdriver変異に依存する腫瘍発生に対する、Ppp6cのがん抑制遺伝子としての機能の解析を行っている。メラノサイトにおける、変異型Brafによる腫瘍形成に対するPP6機能不全の影響に関しては、タモキシフェン投与後のTyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ppp6cflox/floxマウスと、タモキシフェン投与後のTyrosinase-CreERT2;B-rafF-V600E/+;Ppp6c+/+マウスのメラノーマ発生およびその転移能の比較によって検討する。消耗品費が当初の想定よりもわずかに少なく済んだため。次年度の消耗品費に上積みし、より迅速な計画進捗をねらう。
鼻腔誘導法による脳死状態の検討-脳波自動解析システムによる-

脳死の判定に当っては標準脳波の消長の他に脳幹部の脳波の消長をも重視するべきである。そこで、鼻腔誘導法によって標準脳波よりも一層脳幹部に近い脳底部からの脳波の誘導を試み、脳波自動解析システムを用いて解析を行った。脳波の採取は、仰臥位の被検者から、国際10/20電極配置法により頭頂・後頭・側頭の他に鼻腔誘導を加えた部位から、耳垂を不関電極にとって単極誘導で行った。(1)鼻腔誘導法によって咽頭後上壁に刺入した銀塩化銀電極針から誘導すると明白な脳波が得られた。標準脳波との違いを知るために、脳波自動解析システムをもちいて健常人のそれぞれの脳波パターンの差異を検討した。その結果、鼻腔誘導脳波では、標準脳波に比較して、δおよびθなどの徐波成分が多く、α成分が少なかった。また、光刺激法(周波数:5Hz、光の強さ:6J)を併用して脳波各型の出現率をみると、標準脳波ではα成分の減少、θ成分の増加が認められたのに対し、鼻腔誘導脳波では、それらに著明な変化が認められなかった。この様に標準脳波と鼻腔誘導脳波との間には明瞭な差のあることが認められたが、このことからすると、脳底部付近から誘導されたこの鼻腔誘導脳波が、頭皮表面からの脳波とは別の、例えば脳幹部付近に由来する脳波であることも考えられる。(2)標準脳波がほぼ平坦化し、聴性脳幹反応も消失して臨床的に脳死と推定された症例について、標準脳波と鼻腔誘導脳波とを脳波自動解析システムで解析・検討した。その結果、標準脳波の等価電位は、どの周波数領域においても健常人のそれより低かったのに対し、鼻腔誘導脳波では、すべての症例で、それぞれの何れかの周波数領域において、低電位ながら健常人の等価電位分布の範囲内に留まっていた。昭和53年以来、私が行って来た人体実験例ならびに動物実験の成績からみると、普通の脳波計によって脳死の判定が出来得るのではないかとの強い印象が持たれるが、それを一層確たるものとするために、更に一連の実験をなすことを志している。脳死判定に当っては標準脳波の消長の他に脳幹部のそれが重視されるべきであるのは当然である。そこで、鼻腔誘導法によって標準脳波よりも一層脳幹部に近い脳底部からの脳波の誘導を試み、且つ、その解析を行った。脳波の採取は、仰臥位の健常な被検者から、国際10/20電極配置法により頭頂・側頭・後頭の他に、鼻腔誘導を加えた左右計8部位から、耳垂を不関電極にとって、単極誘導で行なった。まず、鼻腔誘導法によって咽頭後上壁に刺入した銀塩化銀電極から誘導すると明白な波形が得られたので、その脳波と標準脳波との違いを知るために、脳波自動解析システムを用いて、健常人のそれぞれの脳波パターンの差異を検討した。また、光刺激法(周波数5Hz、光の強さ6J)を併用して脳波各型の出現率をみると、標準脳波ではα1(8.09.5Hz)の減少、θ1(3.56.0Hz)の増加がみとめられたに対し、鼻腔誘導脳波では、それらに著名な変化が認められなかった。

この様に、標準脳波と鼻腔誘導脳波との間には、明瞭な差のあることがみとめられたが、このことからすると、脳底部付近から誘導された此の鼻腔誘導脳波が、頭波表面からのそれとは別の、たとえば脳幹部付近に由来する脳波であると云うことも考えられる。昭和53年以来の人体実験例ならびに動物実験の成績から、普通の脳波形によって脳死の判定が出来得るとの強い印象が持たれるが、それを一層確たるものとするために、更に一連の実験をなすことを志している。脳死判定に当たっては標準脳波の消長の他に脳幹部脳波の消長をも重視すべきである。そこで、鼻腔誘導法によって標準脳波よりも一層脳幹部に近い脳底部からの脳波の誘導を試み、且つ、齋藤・橋本らの脳波自動解析システムを用いてその解析を行った。脳波の採取は、仰臥位の健常人な被検者から、国際10/20電極配置法により頭頂・側頭・後頭の他に鼻腔誘導を加えた部位から、耳垂を不関電極にとって単極誘導で行った。鼻腔誘導の電極は銀塩化銀電極針を使用した。まず、標準脳波が肉眼的にほぼ平坦化し、聴性脳幹反応も消失していた10症例(17歳66歳)について、それらの脳波を検討した。このうち、鼻腔誘導脳波は、6症例で標準脳波と同様に、ほぼ平坦化していたが、他の4症例では、1020muVの徐波がみとめられた。次に、脳波自動解析システムをもちいて磁気記録した脳波を解析したところ、各周波数領域で、標準脳波の等価電位は、全症例で健常人よりも低値を示したに対して、鼻腔誘導脳波では、何れかの周波数領域で低電位ながらも健常人の等価電位分布の範囲内に留まっていた。症例数が少ないので確たることは云えないにしても、これらの成績からみると、脳死の判定に当たって、通常実施されている脳波検査に加え、簡便な鼻腔誘導法、ならびに、脳波自動解析システムを使用して、標準脳波及び鼻腔誘導脳波の解析を行うことも考慮されるべきである。おわりに、鼻腔誘導法が多方面に利用されることを考え、タンシピンを用いてコードと電極針を分離・改良したところ、今までの電極針と同成績を得た。衛生面において注意を払う必要が生じたため、使用内訳を変更してオートクレイブを購入した。
イヌの赤血球系幹細胞と赤血球造血に関する研究

イヌの骨髄の赤血球造血機能を知るために、正常な新生子犬-幼犬-成犬-老犬の各世代のイヌの骨髄について、赤血球系幹細胞(CFU-E)の分化・増殖性ならびにその存在量について骨髄培養による赤芽球コロニー形成法を用いて検討した。はじめに、骨髄細胞の基本的な至適培養条件について検討し、培養液としてはalpha-mediumを使用し、メチルセルロースを加えて半流動性培地とし、ウシ胎子血清が30%含まれる条件下で、1plate0.5mlのplate培養とし、細胞数を4×10^4個/plateとなるよう調整して、これに0.02-0.2Uのエリスロポエチン(EPO)を添加して、5%CO_2の条件下にて37°C48時間の培養を行う方法が確立された。以上の方法で骨髄細胞を培養した結果、CFU-Eの分化・増殖性については、各種年齢層のイヌの骨髄細胞はいずれもEPOの添加量に用量依存的に反応し、その反応性は同程度と考えられた。一方、骨髄細胞中のCHU-Eの存在量に関しては、コロニーの形成数において、年齢が若いものほどコロニー数は多く、加齢とともに数が減少する傾向にあった。なお、いずれの年齢層においても種差ならびに性差は認められなかった。また、各種疾患のイヌの骨髄について同様の検索を行ったところ、CFU-Eの存在量に関しては特に疾患に原因すると考えられるような傾向の差異は認められなかったが、増殖性の面では、腫瘍性疾患(抗癌剤使用により骨髄抑制のあるものを含む)症例、貧血症例、腎不全症例では若干の増殖性亢進の傾向が、また内分泌疾患や異栄養性疾患の症例においてはやや増殖性低下の傾向が示唆された。
有害鞭毛藻の日周鉛直移動と乱流混合が赤潮形成に及ぼす影響

有害鞭毛藻の赤潮形成における日周鉛直移動と乱流混合の影響を調べるため、室内実験、現場調査、数値実験を行った。室内実験では鞭毛藻の日周鉛直移動に及ぼす塩分の影響を調べ、塩分成層が集積深度を変えることが示唆された。現場調査では八代海で昼夜連続観測を行い、鞭毛藻の遊泳速度に対して乱流混合が相対的に小さい環境で、栄養塩豊富な亜表層まで到達する日周鉛直移動が個体群維持に重要であることが示唆された。数値実験では乱流モデルを用いて混合条件下での鞭毛藻を模した粒子の振舞いを検討し、遊泳速度の大きさと海況条件次第で鞭毛藻の表層極大層の形成時間が長くなることが示唆された。植物プランクトンの一種である有害鞭毛藻Chattonellaantiquaの培養株を用いて、塩分成層が本種の日周鉛直移動に及ぼす影響を明らかにした。下層を高塩分水(塩分32)、上層を塩分条件を変えた低塩分水(塩分5、10、15、20、25、32)とした円柱水槽内の細胞密度鉛直分布の時間変化を観測した結果、上層の塩分が15以上の場合、昼間大部分の細胞が表層に集積したが、5および10の場合はそれぞれ塩分躍層の中部および上部に集積した。いずれの条件でも上昇・下降開始時刻に変化はなく、塩分成層が鉛直移動のリズムに影響しないことが示唆された。また、八代海を対象として、例年有害鞭毛藻赤潮が発生する夏季に、海洋微細構造を観測するための昼夜連続調査を実施した。流向流速・水温・塩分・蛍光強度・光強度・栄養塩・乱流シアーの鉛直分布の測定結果から、混合の指標である乱流エネルギー散逸率や鉛直渦拡散係数を算出するとともに、各種植物プランクトンの鉛直分布と海洋構造の対応関係を検討した。調査期間中には、低密度ながら渦鞭毛藻Ceratium furcaやC. fususが密度躍層を超えて活発に日周鉛直移動していた一方、10m深付近にChaetoceros spp.を主体とする珪藻類による顕著なクロロフィル極大層が形成されていた。本調査結果と簡易的な鉛直一次元モデルによる解析の結果、数日間のうちに珪藻類が栄養塩を取り込み、相対的に鉛直拡散係数の小さい亜表層に極大を形成したと推察された。上記の実験・観測結果は、植物プランクトン種遷移や赤潮形成過程を検討する上で重要な知見である。有害鞭毛藻Chattonellaantiquaの培養株を用いて、本種の遊泳速度を計測する室内実験を実施した。円柱水槽(水深85cm)内における分布深度から算出された上昇および下降速度はそれぞれ0.4m/hおよび0.5m/hであった。また、前年に引き続き、2014年夏季に八代海において昼夜連続観測を実施し、観測期間中に出現していた有害鞭毛藻Cochlodinium polykrikoidesの表層と約30m層を往復する日周鉛直移動を観察した。極大層深度の時間変化を基に算出された本種の遊泳速度は上昇・下降ともに36m/h程度となり、他の有害鞭毛藻類と比して高いことが判明した。今回の観測では成層強度および混合の指標である乱流エネルギー散逸率との明確な対応関係は認められず、その理由として本種の高い遊泳能力が考えられた。さらに数値実験として、乱流混合を精度よく再現可能なLESに遊泳特性(上昇・下降開始時刻や遊泳速度)の異なるC. antiquaとC. polykrikoidesを模した粒子を投入し、海洋構造と両種の集積度との関係を解析した。水温成層の条件下で風応力を変えたケース実験を行った結果、両種とも風応力が大きくなるほど表層での鉛直集積度は小さくなった。両種の結果の違いから、より遊泳速度の大きいC. polykrikoidesのほうが、鉛直混合の影響を受けにくく、高密度化しやすいことが示唆された。八代海西部の楠浦湾において、2015年夏季に48時間の昼夜連続観測を行った。観測期間中に有害鞭毛藻Karenia mikimotoiが優占しており、昼間に5m以浅、夜間に約25m深の海底付近に達する日周鉛直移動をしていた。K. mikimotoiの極大層の時間変化から算出された上昇・下降速度はそれぞれ2.6m/hと2.4m/hであり、既往知見で報告されている遊泳速度と同程度であった。一時的に極大層が不明瞭となり、対応する10m深付近で乱流エネルギー散逸率εが高かったことから鉛直混合が起こっていた可能性があるが、他の時間帯では明瞭な極大層を伴って能動的に鉛直移動しており乱流混合の影響が小さかったと考えられた。観測初日と二日目の日中の分布深度が異なっており、両日の光環境の違いに対してK. mikimotoiが応答していた可能性が見出された。また、数値実験として、有害鞭毛藻の鉛直移動と乱流混合の関係についてLarge Eddy Simulation(LES)を用いて検討した。海面で風速10m/sの一様な風を、初期条件として深さ40mの鉛直一様な混合層とその下の一様な密度成層をそれぞれ与え、定時に一定の速度(1.5mm/s)で上昇・下降する(鞭毛藻を模した)粒子の移動を追跡することで乱れが鉛直移動に与える影響を評価した。

混合層内の乱流は、粒子密度最大となる極大層深度の上昇・下降速度を自泳速度より増加させる結果となり、上昇時にはより多くの粒子が自泳速度から予想される時刻より早く海面に集積していた。本研究の観測および数値実験で得られた有害鞭毛藻の鉛直移動特性と極大層形成条件は、有害鞭毛藻の急激な密度増加によって引き起こされる赤潮を監視するうえで重要な知見となった。有害鞭毛藻の赤潮形成における日周鉛直移動と乱流混合の影響を調べるため、室内実験、現場調査、数値実験を行った。室内実験では鞭毛藻の日周鉛直移動に及ぼす塩分の影響を調べ、塩分成層が集積深度を変えることが示唆された。現場調査では八代海で昼夜連続観測を行い、鞭毛藻の遊泳速度に対して乱流混合が相対的に小さい環境で、栄養塩豊富な亜表層まで到達する日周鉛直移動が個体群維持に重要であることが示唆された。数値実験では乱流モデルを用いて混合条件下での鞭毛藻を模した粒子の振舞いを検討し、遊泳速度の大きさと海況条件次第で鞭毛藻の表層極大層の形成時間が長くなることが示唆された。有害鞭毛藻Chattonella antiquaの鉛直移動実験および八代海での現場調査は当初の予定通り実施でき、昼夜連続観測では有害鞭毛藻Cochlodinium polykrikoidesの日周鉛直移動と海洋微細構造のデータを取得した。昨年度未実施だったLESを用いた数値実験についても着手し、有害鞭毛藻を模した粒子に遊泳特性を組み込んだ計算を行った。沿岸海洋学過去2年間で海洋微細構造観測は順調に実施できたが、調査期間中に有害鞭毛藻赤潮が非発生であったため、最終年となる今年度も現場調査を実施する。これまで室内実験や現場調査で得られた有害鞭毛藻の遊泳特性および海洋微細構造のデータをもとに赤潮形成条件を特定するための数値実験を実施する。有害鞭毛藻Chattonella antiquaの鉛直移動実験は当初の計画に沿って順調に進んでいる。八代海での現場調査も予定通り実施でき、海洋微細構造と植物プランクトンの鉛直分布の関係について重要な知見を得た。一方、LESによる3次元乱流場とそれに伴う鉛直混合過程の再現は実施に至っておらず、計算機環境を整えるに留まった。今年度使用額は前年度からの繰り越し分を含めてほぼ予定通り使用した。未実施だったLESによる計算に着手するとともに、室内実験による有害鞭毛藻遊泳速度測定、および海洋微細構造を観測するための現場調査を引き続き実施する。主に調査・成果公表のための旅費や論文投稿等に使用する予定である。主な理由は、計算機使用料を計上していたが使用しなかったためである。次年度は当初の計画通り計算機使用料として使用する予定である。
パレート学習型自己組織化マップのマルチモーダル，大規模データ解析への応用

本研究では,研究者がマルチモーダルデータの解析のために開発したパレート型自己組織化マップを,ゲノム解析,パケット解析,講義履修者の履修状況の解析,株価等の時系列データの解析に応用する手法について研究を行った.研究としてはゲノム解析への応用を主なものとし,大規模ゲノムデータから,これまで解析で用いられた頻度情報に加え,より細かいコンテキスト情報や,塩基間の相関係数をマルチモーダルな特徴量用い,パレート型学習SOMで解析を行った.また,パケット解析に関しては大規模データ解析に有用であると考えられるCGH-SOMを用いた解析法を考案した.平成25年度には,以下のような研究を行った.(1)ゲノム解析への応用に関して,隠れマルコフモデルを用いた自己組織化マップの研究を進め,強化学習アルゴリズムを応用した高速学習アルゴリズムの開発,文字列の頻度を用いたマッピングと組み合わせて学習を高速化する方法について研究を行い,それぞれ,IEEEConference on Computational Intelligence in Bioinformatics and Computational Biology 2013, 14th International Symposium on Advanced Intelligent Systems (ISIS2013)の査読付き国際会議に投稿し,発表を行った.(2)同じくゲノム解析への応用に関して,ゲノム内の各塩基間の相関係数を入力ベクトルとして,パレート型自己組織化マップを用いて解析を行う方法を開発し,従来の頻度情報に基づく解析手法より低次元のベクトルを用いて高速に同等の解析が可能であることを示し,The IEEE International Conference on Bioinformatics and Biomedicine (BIBM2013)のポスターセッションに投稿し,発表を行った.(4)パレート型自己組織化マップを用いた大規模データ解析の1手法として,Computer Generated Hologram SOM: CGH-SOM)の研究を開始し,パケットデータの解析,および,ゲノムデータへの解析への応用に関して研究を進めているが,今のところ,発表には至っていない,本研究では,研究者がマルチモーダルデータの解析のために開発したパレート型自己組織化マップを,ゲノム解析,パケット解析,講義履修者の履修状況の解析,株価等の時系列データの解析に応用する手法について研究を行った.研究としてはゲノム解析への応用を主なものとし,大規模ゲノムデータから,これまで解析で用いられた頻度情報に加え,より細かいコンテキスト情報や,塩基間の相関係数をマルチモーダルな特徴量用い,パレート型学習SOMで解析を行った.また,パケット解析に関しては大規模データ解析に有用であると考えられるCGH-SOMを用いた解析法を考案した.まず,今年度の研究ではパレート型自己組織化マップを用いた大規模データ解析で必要となる2つの基礎研究を開始した.1つは隠れマルコフモデル(HMM)を記憶ユニットに用いた自己組織化マップ(HMM-SOM)の開発である.HMM-SOMに関しては,以前開発したアルゴリズムを改良し,球面自己組織化マップ(球面SOM)に適用したものと,大規模データ用に新たに開発したアルゴリズムを用いたHMM-SOMの2つの方向から研究を行っている.特にHMMはゲノム解析の分野において,シーケンスのモデル化に用いられており,本研究においてもDNAやアミノ酸の大規模シーケンス解析への適用を考えている.HMM-SOMに関しては博士前期課程の院生と共同で研究を行っており,ICAN2012において研究発表を行い,SpringerのLecture Note in Computer Scienceにも掲載された.もう1つは計算機合成ホログラムを記憶ユニットに用いた自己組織化マップ(CGH-SOM)を用いた大規模データ解析手法の開発である.大規模データ解析において,大規模データをそのまま学習させるのは困難であるため,何らかの前処理が重要となる.本研究においては,頻度情報を用いる方法を提案してきたが,頻度情報は1次元情報であり,頻度間の関連性はない.そこで,前処理用のSOMで大規模データを画像データに変換し,その画像データをCGH-SOMで解析することで,大規模データ間の関連性を視覚化する手法を提案し,DNAシーケンスデータ,IPパケットトラフィックデータに適用を行った.それに加え,新たな生体認証システムの開発に関しても研究を進めている.今年度は最終年度であり,パレート型自己組織化マップについて,その実際の応用に関して研究を行った.まず,最も重点的に研究を行ったのがDNAシーケンスデータの分類に関する研究である.メタゲノム解析などで得られた,複数の生物種が混合したDNAシーケンスから生物種ごとのシーケンスを取り出すことを考え,特に,次世代シーケンサーのシーケンス解読結果である,短い断片配列に対して判別を行う方法について研究を行った.パレート型自己組織化マップのマルチモーダルベクトルの統合,教師付き学習とアノーマリティ判別能力を応用することで,DNAシーケンス中のタプルの頻度,および、相関係数を用いることで,よりよい精度で判別が行えることを示し,国際会議で2件の発表を行った.また,隠れマルコフモデルを用いた自己組織化マップに関する研究を進め,株価データ等の時系列データを,時系列の発生順にマップできることを示し,1件の投稿論文を発表した.さらに,今回の研究テーマに関連して,今年度より,自己組織化マップを用いた深層学習方式について研究を開始し,すでに,プロトタイプのシステムを作成しており,現在実験を進めている段階である.ソフトコンピューティング25年度までの研究において,自己組織化マップ,および,パレート型自己組織化マップを,ゲノム解析,パケット解析,および,新たな分野として大規模プログラミング言語教育支援システムへの応用について研究を進めている.要素技術としては,隠れマルコフモデルを用いた自己組織化マップに関するアルゴリズムの開発が進んでおり,頻度情報と組み合わせて学習する手法や,強化学習的な学習法で高速化を行う手法について開発し,ゲノムデータの解析を対象に実験を進めている.

また,ゲノムデータ解析においては,これまでのシーケンスの頻度を用いた方法に対して,塩基間の相関係数を用いた方法を開発し,パレート型自己組織化マップを用いて,従来の自己組織化マップよりも良好な分類が行えることがを示している.また,昨年度研究を行った文脈情報を用いた場合や頻度情報を用いた場合と比較して,より小さな次元のベクトルで,同等以上の分類が行えることがわかり,相関係数を入力ベクトルとして用いる方法は,大規模データの解析には有用な手段であることがわかった.また.パケットデータやゲノムデータのような大規模データの解析に,大規模データを自己組織化マップを用いて画像データに変換し,その画像データをCGH-SOMを用いて処理することで,大規模データの大域的な特徴を解析する方法を提案し,実験を進めている.また,新たに,プログラミング言語の演習時の学生の状況を自己組織化マップを用いて視覚化する方法を提案し,大規模E-Learningシステムへの応用を考えている.現在の実験は1クラス程度で行っているが,学生の学習の進行状況や,学生間の依存関係等が2次元のマップ上に視覚化され,理論的に計算時間上は,そのまま大規模なクラスやオンラインの学習システムにも適用可能であると考えられる.HMM-SOM,CGH-SOMなどのマルチモーダルなパレート型SOMの開発に必要となる基礎的なアルゴリズムの開発は順調に進んでおり,新たに,CGH-SOMを用いた大規模データ解析手法についても開発を行い,アルゴリズム開発に関しては順調に行っている.応用に関しては,ゲノムデータ,IPパケットデータ,画像データなどの解析の実験を進めており,有用な結果が得られている.生体認証システムに関しても,自動的に特徴点を生成する新たな認証方式を提案し,実験を進めている.これまでの実験において,パレート型自己組織化マップは従来の自己組織化マップと比較して数倍から十数倍の計算時間を要することがわかった.また,入力データの分布により,類似したデータが多いほどパレート集合が大きくなり,計算時間を要することがわかった.この問題に対して,アルゴリズムの改良や,並列計算手法の適用が考えられる.平成25年度の研究費で超並列演算を行うXeon Phiを搭載したワークステーションを購入しており,パレート型自己組織化マップの並列化を行う予定である.また,現状では各要素技術の開発は進めているが,これらを統合したマルチモーダルな学習方式については不十分な状況である.
環境要因の生体影響への遺伝の関与に関する研究(高発がん性遺伝病の研究)

環境要因の人体影響に遺伝的要因がどのように関与しているかの研究は、DNA損傷と、その結果としての突然変異及びがんについての解明が進みつつある。染色体異常は、それ自体量的に把握することのできる遺伝物質の変化であり、発がん機構とも関連が深い。そこで、本研究では、染色体異常を伴う先天異常があり、特異な免疫機能をもち、老化の早い遺伝性高発がん疾患群の患児集団より得た細胞、ならびに常染色体性遺伝様式(優性及び劣性)を有する神経皮膚症候群で、高発がん疾患群の患児より得た細胞を用いて、(1)環境因子曝露の影響を末梢リンパ球の染色体異常、姉妹染色体交換(SCE)、細胞分裂能、遺伝子突然変異率等の遺伝影響と発がんに直接関連のある重要な変化を指標としてとらえる、(2)年齢及び遺伝要因との交絡について定量的検討を加える、(3)特異な免疫能の検討を行う。われわれは、高発がん性遺伝病であるダウン症候群、クラインフェルタ-症候群、レックリングハウゼン病患児より得たリンパ球由来細胞・皮膚線維芽細胞における光線療法用ブル-ライトならびにグリ-ンライト感受性とマイトマイシンC感受性の検討を行った。感受性の指摘としてSCEを用い、in vitroとin vivoの2系の実験系を組み、それぞれ歴年齢の一致した正常対象細胞を用意し比較した。ダウン症、クラインフェルタ-症候群では光線感受性が高かったが、レックリングハウゼン病では症例間での個体差がみられ、結論が得られなかった。今後さらに検討例数を増し、最終結論を出したいと考えている。クラインフェルタ-症候群は、男子600人に1人当りの出生頻度を有する性染色体異常で、性機能異常の他、乳がんや睾丸腫瘍などの悪性腫瘍の合併頻度が高いことで注目されている。ダウン症候群の患児由来リンパ球において、変異原に対する細胞感受性の研究が、姉妹染色分体交換(SCE)や染色体構造異常などを用いていくつか成されているが、他の染色体異常については、あまり報告が無い。本研究は、クラインフェルタ-症候群の患児4名より採取したリンパ球において、変異原であるマイトマイシンC(MMC)を負荷し、誘発されたSCEを分析することにより、変異原に対する感受性を調べた。また、異なる培養時間における細胞分裂回数およびマイトマイシンCを負荷しての細胞分裂回数を調べることにより細胞周期を、年令をマッチさせた男性と比較した。培養液に添加したMMCは最終濃度が、0.3×10^<-9>、1×10^<-8>、3×10^<-8>、1×10^<-7>Mになるように設定した。細胞分裂回数は、SCE観察と同じ培養液を用い、42時間から6時間毎に78時間までポイントの培養時間を設定した。4例の同症候群由来リンパ球におけるMMC誘発SCE頻度は、年令をマッチした健常者由来リンパ球に比較して、高濃度MMC(3×10^<-8>Mおよび1×10^<-7>M)において有意に高値を示した。細胞周期は、両者間に有意差は無かった。これは、本症候群由来リンパ球が健常者のリンパ球よりMMCに対して高感受性があることを示している。このことは、悪性腫瘍に羅患し易いということと相関があるかもしれない。なお、症候群由来細胞が正常コントロ-ルに比して、細胞分裂周期に有意差は認められなかったが、やや遅い傾向が見られたのは、ファイトヘモアグルチニンに対する感受性によるのか、MMCの影響によるものなのかは、今後の検討を要する。

そこで、本研究は、染色体異常を伴う先天異常があり、特異な免疫機能をもち、老化の早い遺伝性高発がん疾患群の患児集団より得た細胞、ならびに常染色体性遺伝様式(優性および劣性)を有する神経皮膚症侯群で、高発がん疾患群の患児より得た細胞を用いて、(1)環境因子暴露の影響を末梢リンパ球の染色体異常、姉妹染色分体交換(SCE)、細胞分裂能、遺伝子突然異率等の遺伝影響と発がんに直接関連のある重要な変化を指標としてとらえる、(2)年齢及び遺伝要因との交路について定量的検討を加える、(3)特異な免疫能の検討を行なう。本年度はダウン症侯群の新生児例が新たに2例加わり、4例より得たリンパ球由来細胞の、光線療法用ブル-・ライトならびにグリ-ン・ライト感受性の検討を行なった。感受性の指標としてSCEを用いた。in vitroとin vivoの2系の実験系を組み、それぞれ日令・月令の一致した正常対象細胞を用意し比較検討した。in vitroの系では、照射時間6時間と8時間とで有意差を認め、in vivoの系では光線療法を67時間受けた直後のダウン症新生児の細胞で有意差を認めた。今後さらに検討例数を増し、最終結論を出したいと考えている。環境要因の人体影響に遺伝的要因がどのように関与しているかの研究は、DNA損傷と、その結果としての突然変異及びがんについての解明が進みつつある。染色体異常は、それ自体量的に把握することのできる遺伝物質の変化であり、発がん機構とも関連が深い。そこで、本研究では、染色体異常を伴う先天異常があり、特異な免疫機能をもち、老化の早い遺伝性高発がん疾患群の患児集団より得た細胞、ならびに常染色体性遺伝様式(優性及び劣性)を有する神経皮膚症候群で、高発がん疾患群の患児より得た細胞を用いて、(1)環境因子曝露の影響を末梢リンパ球の染色体異常、姉妹染色分体交換(SCE)、細胞分裂能、遺伝子突然変異率等の遺伝影響と発がんに直接関連のある重要な変化を指標としてとらえる、(2)年齢及び遺伝要因との交絡について定量的検討を加える、等の検討を行った。新生児期に黄疸のため光線療法(blue lightとgreen light)を施行したダウン症児由来培養リンパ球におけるSCEについて、照射線量に対する量一効果関係の検討を行った。検討はin vivoとin vitroと両系について行ったが、前者においては正常対象との間に有意差が認められなかった。in vitroでは、正常対象・ダウン症いずれの群も照射時間の増加に伴い、SCE頻度に有意な上昇がみられた。blue lightとgreenlight両光源の比較では、正常対象では差が認められなかったが、ダウン症児群ではgreen lightの方がblue lightに比してSCE頻度が低い傾向がみられた。blue lightの方がgreen lightに比して、一般に細胞毒が強いといわれるところから、高発がん性遺伝病の一つであるダウン症由来細胞は変異原に対し感受性が高いことが示唆された。なお、同様の検討をレックリングハウゼン病由来細胞について検討したが、個体差が著しくみられた。その理由に関しては、今後変異原を種々変えて検討してみたい。
新規抗真菌薬創製を目指したRNA アプタマーの創製

全ての真核生物においてmRNAの5'末端に付加されるcap構造は蛋白質の合成に必須であり、その欠損は致死となる。cap構造は転写と連携してcapping酵素により付加される。哺乳動物のキャップ構造は1つの蛋白質で合成される。一方、原虫や真菌ではCet1、Ceg1の2つの異なる蛋白質が結合することで1つの酵素として機能し、cap構造を合成する。すなわち、ヒトと原虫・真菌類ではキャップ構造を異なる素過程で合成する。本研究課題では「新規抗真菌薬創製を目指したRNAアプタマーの創製」を実施してきた。そして、これまでにモデルとした出芽酵母のcapping反応を選択的に阻害するアプタマーを取得に成功した。加えて、カンジダ(C. albicans)由来の高純度Cet1およびCeg1蛋白質の調製に成功している。それぞれのTPase活性およびGTase活性を測定するin vitro系および、in vitro結合解析系も構築も行った。cap構造の合成方法は、真菌と高等真核生物では異なる。真菌では、RNAトリホスファターゼであるCet1(TPase)と、グアニル酸転移酵素であるCeg1(GTase)という2つの異なるタンパク質が結合することで1つの酵素として機能し、キャップ構造を合成する。一方、ヒトでは、2つの機能を持つ1つのタンパク質がキャップ構造を合成する。従って、Cet1のTPase活性阻害物質、Ceg1のGTase活性阻害物質、Cet1とCeg1の結合阻害物質の探索・創製は、有効な抗真菌薬候補の発見につながると考えられる。また、藤原は酵母を用いた遺伝学によりCet1とCeg1との結合を阻害することで、成熟mRNAを合成できず、死に至ることを証明している。今年度はCet1組換えタンパク質を用いた抗Cet1アプタマーの取得を試みた。その結果Cet1に高い親和性を有し、かつCet1の機能を強力に阻害するRNAアプタマー配列を得ることができた。そのCet1に対する親和性はnMオーダーの解離定数を示した。さらにCet1の有するTPase活性に対する阻害能力は既存の阻害試薬であるスラミンと比較して100倍以上低い濃度でIC50を示した。現在、ヒトのキャッピング酵素を活性のある組換えタンパク質として調製を試みており、ヒトのキャッピング反応に対する影響を検討しているところである。さらに、Cegとの結合阻害を示すアプタマー取得を開始した。Cet1に高い親和性を有し、かつCet1の機能を強力に阻害するRNAアプタマーを得ることができたため。従って、Cet1のTPase活性阻害物質、Ceg1のGTase活性阻害物質、Cet1とCeg1の結合阻害物質の探索は、有効な抗真菌薬候補の発見につながると考えられる。そして、申請者は酵母を用いた遺伝学によりCet1とCeg1との結合を阻害するこcet1とで、成熟mRNAを合成できず、死に至ることを証明している。前年度までの研究では真菌のモデルとして出芽酵母のCet1(TPase)タンパク質を用いたSELEXを実施し、これまでにnMの解離定数をもち、かつ既存の阻害剤と比して100倍以上低い濃度でIC50を示すRNA分子を取得した。本年度ではCeg1(GTase)を用いたSELEX方を実施した。具体的にはCeg1分子中のCet結合領域を大腸菌を用いた過剰生産精製系を用いて調製し、高い親和性を有するRNA分子の取得を試みた。しかしながら、得られたRNA分子は多様性に富み、Cet1に対して実施したSELEX法と比べて著しく異なる結果となった。一方、研究協力者との共同研究により、構築した生化学実験系を応用することにより、出芽酵母のCet1のTPase活性を阻害する低分子の取得に成功している。前年度までに出芽酵母Cet1に対して高い親和性を有し、かつCet1のTPase活性を特異的に阻害する分子の取得に成功している。そして、本年度ではCeg1分子中のCet1結合最小領域を決定し、そして組換えタンパク質として調製することに成功した。特異的に結合する分子種は得られていないものの、すでにSELEX法を改変して実施しており、想定よりもかなり順調に進展している。加えて、カンジダ(C. albicans)由来の高純度Cet

1およびCeg1蛋白質の調製に成功している。それぞれのTPase活性およびGTase活性を測定するin vitro系および、in vitro結合解析系も構築も行った。今後、ヒトのcapping酵素を阻害しないことを確認する予定である。さらに、Cegに対するRNAアプタマー候補を得ており、このRNAプールの中からCet1との結合を阻害するものを選択する予定である現在、ヒトのカンジダ症の原因であるC. albicans (カンジダ・アルビカンス)のcet1およびceg1を用いたSELEX法の準備を進めている。これまで蓄積されてきた研究成果の報告と次年度実施の準備に注力したため、物品を新たに購入する必要が無かったため。昨年度までに得られたRNA分子の条件検討の実験が多く、新たに作出するRNA分子の数が少なかったため新たにキット類を購入する必要が無かったため。薬品・キット類に使用する。