hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
有機ハロゲン系環境汚染物質代謝物による内分泌かく乱作用の評価法の開発

高分解能GC/MSを用いて、ポリ塩素化ビフェニール(PCB)川のアイソマー分析を行い、母乳中濃度の経年変化(1973年から2000年)を測定した。測定に用いた乳脂肪は、1973年以降冷凍保存していたもので、年齢2529才初産婦のみを対象とし、母乳採取年度別に等量混合(各年度1932人)し、四、五、六、七塩化のPCBアイソマー分析を行った。その結果、母乳中のPCB濃度は、70年代をピークに急激に減少していたが、その検出パターンは年々変化しており、塩素数の少ない四、五塩化PCBが大きく減少しているのに対し、六、七塩化PCBの減少度は少ない。また、塩素の結合位置により、体内への残留度の差が見られた。これらの詳細については、摂取源および代謝の両面から現在考察中である。水酸化PCBの高感度分析を目的とした誘導体化について検討を行った。PFBBrによる誘導体化は水酸基に隣接した塩素による立体障害のため、水酸基の誘導体化が安定しないことがわかった。そこで、誘導体化の方法をメチル化に限定した。メチル化は、TMAHによる誘導体化を用いた。本法はGCの注入口内で高温(300°C)で誘導体化するため、実験者に比較的安全な上、操作として非常に簡便である。抽出した脂肪をゲル浸透クロマトグラフィー(GPC)に負荷、目的フラクションを分取し、脂肪等を除去したが、溶出時間に分子サイズによる影響が大きいことが明かになった。精製法としては、マルチモードの固相カートリッジを用いた結果、メタノールによる溶出により良好な結果が得られた。生体試料から検出される異性体と、主要な摂取源である魚介類から検出される異性体と比較した結果、低塩素化PCB及び4位に塩素を持たない異性体が生体試料で低いことが分った。これらを比較的、代謝を受けやすい異性体と考え、S-9処理を施して代謝物のエストロジェン様作用を酵母Two-Hybrid法で評価している。代謝物のエストロジェン様作用は、塩素化が高度になるにつれて低下する傾向が認められた昨年に引き続きPCBsのアイソマー分析を行った。母乳と食品(食事)中のアイソマー別のPCBs濃度を分析・考察した結果、2位と4位に塩素を持ち、かつ塩素数の多い、mono-ortho、di-ortho PCBs異性体が、体内に吸収・蓄積されやすいことがわかった。GC/MSによる生体試料中の水酸化PCBs (OH-PCBs)の高感度かつ簡易な分析法について検討した。一般にOH-PCBsの分析法としては、L.Hovander et al.の方法(J.Anal.Toxicology,24,696-699(2000))が用いられることが多い。これは血漿中のフェノール性物質を分析する方法であるが、クロロフォルムやジクロロメタン等、有機溶剤を多量に使用するため、環境への負荷の観点からこれらを用いない方法が望ましい。また、誘導体化についても危険性の高いジアゾメタンを発生させ用いることから、実験者への安全性が問題である。今回、OH-PCBsのみにターゲットを絞ることで、これらを用いない方法を開発した。酵母Two-Hybrid法の操作過程にS-9 mix処理を組み込み、代謝物のエストロゲン様作用を評価する方法を確立した。本法を用いて代謝が速いと考えられる18塩素化ビフェニルのS-9 mix代謝物のエストロゲン様作用を評価した。13塩素化ビフェニルにエストロゲン様作用が認められた。
結び目群の指標代数多様体を用いたファイバー性と種数の研究

本研究は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目の幾何学的性質をある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることを目標としている.得られた成果の概要は以下の通りである.(1) 2橋結び目を含む広範な結び目のクラスに対して,指標代数多様体の1次元既約成分上でのねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目のファイバー性と種数が決定できることを示した.(2)双曲結び目のファイバー性と種数に関するDunfield-Friedl-Jackson予想を,2橋結び目のある無限系列に対して肯定的に解決した.本研究の目的は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目およびその外部空間の幾何学的情報を,ある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることである.より具体的には,結び目群のSL(2,C)-指標代数多様体の適当な複素1次元既約成分(代数曲線)と,結び目のファイバー性(あるいは種数)を特徴づける代数曲線との交差を考察し,それら交差数の有限性によって,結び目のファイバー性(あるいは種数)を決定する手法を開発することを目標とする.大別すると次の2点を明らかにすることが目標となる.1.SL(2,C)-指標代数多様体上の関数としてのねじれアレキサンダー不変量の明示公式を与える.2.得られた関数の性質と結び目のファイバー性および種数との関係を明らかにする.上述の研究目的に対して,平成23年度に得られた結果を基にして,本年度は1.と2.の橋渡しに係る部分に焦点を絞って研究を行った.特に,2橋結び目の一種である3次元球面内の双曲的ツイスト結び目と呼ばれる重要な結び目のクラスに対して,Dunfield,Friedl,Jacksonの3氏によって提唱された予想(DFJ予想)を肯定的に解決することに成功した.この予想は,それ自身解決が望まれる大変重要なものであるが,さらに本研究との関わりで見てみると,DFJ予想から上記2.の一つの定式化が直接導かれるという意味において,興味深い成果と言える.また,Friedl-Kim-Kitayamaによるねじれアレキサンダー不変量の次数のパリティに関する結果の最善性を示した.本研究の目的は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目およびその外部空間の幾何学的情報を,ある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることである.より具体的には,結び目群のSL(2,C)-指標代数多様体の適当な複素1次元既約成分(代数曲線)と,結び目のファイバー性(あるいは種数)を特徴づける代数曲線との交差を考察し,それら交差数の有限性によって,結び目のファイバー性(あるいは種数)を決定する手法を開発することを目標とする.大別すると次の2点を明らかにすることが目標となる.1.SL(2,C)-指標代数多様体上の関数としてのねじれアレキサンダー不変量の明示公式を与える.2.得られた関数の性質と結び目のファイバー性および種数との関係を明らかにする.上述の研究目的に対して,前年度までに得られた結果をもとにして,本年度は2.に焦点を絞って研究を行った.特に,平成23年度中に得られていた2橋結び目に関する研究成果を,2橋結び目よりも真に広い結び目のクラスに拡張することに成功した.具体的には,3次元球面内の「小さい結び目」であって,その結び目群から以下の結び目の群に全射が存在するときに,指標代数多様体の1次元既約成分の情報から,結び目のファイバー性と種数を決定できることがわかった:(1)非ファイバー2橋結び目,(2)単根をもち,かつ,非モニックであるアレキサンダー多項式をもつ結び目,(3)非モニックアレキサンダー多項式をもち,かつ,同変結び目符号数が恒等的に零でない結び目.また,関連する成果として,Friedl-Kim-Kitayamaによるねじれアレキサンダー不変量の次数のパリティに関する結果の最善性を,閉3次元多様体に対して証明した.本研究は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目の幾何学的性質をある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることを目標としている.得られた成果の概要は以下の通りである.(1) 2橋結び目を含む広範な結び目のクラスに対して,指標代数多様体の1次元既約成分上でのねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目のファイバー性と種数が決定できることを示した.(2)双曲結び目のファイバー性と種数に関するDunfield-Friedl-Jackson予想を,2橋結び目のある無限系列に対して肯定的に解決した.本研究の目的は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目およびその外部空間の幾何学的性質を,ある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることである.より具体的には,結び目群のSL(2,C)-指標代数多様体の適当な複素1次元既約成分(代数曲線)と,結び目のファイバー性(あるいは種数)を特徴づける代数曲線との交差数を考察し,それら交差数の有限性によって,結び目のファイバー性(あるいは種数)を決定する手法を開発することを目標とする.大別すると,次の2点を明らかにすることが目標となる.(1) SL(2,C)-指標代数多様体上の関数としてのねじれアレキサンダー不変量の明示公式を与える.

(2)得られた関数の性質と結び目のファイバー性および種数との関係を明らかにする.上述の研究目的に対し,本年度は(1)に焦点を絞り,特に,3次元球面内の2橋結び目とよばれる性質のよい結び目のクラスに対して主として研究を行った.実際,2橋結び目は「小さい結び目」と呼ばれる結び目の一種で,そのSL(2,C)-指標代数多様体の次元が1であることが知られている.この状況下で,当初の目標であったねじれアレキサンダー不変量の明示公式は得られなかったものの,指標代数多様体のある既約成分上で,結び目のファイバー性に対応した指標の個数の有限性を示すことができた.この結果,2橋結び目のファイバー性をねじれアレキサンダー不変量の情報で特徴づけることに成功した.また,同時に,この既約成分上の情報から,2橋結び目の結び目種数が決定できることもわかった.本研究の目的は,結び目群の指標代数多様体とその上の関数であるねじれアレキサンダー不変量の情報を用いて,結び目およびその外部空間の幾何学的情報を,ある種の「有限性」で捉える枠組みを与えることである.より具体的には,結び目群のSL(2,C)-指標代数多様体の適当な複素1次元既約成分(代数曲線)と,結び目のファイバー性(あるいは種数)を特徴づける代数曲線との交差を考察し,それら交差数の有限性によって,結び目のファイバー性(あるいは種数)を決定する手法を開発することを目標とする.大別すると次の2点を明らかにすることが目標となる.1.SL(2,C)-指標代数多様体上の関数としてのねじれアレキサンダー不変量の明示公式を与える.2.得られた関数の性質と結び目のファイバー性および種数との関係を明らかにする.上述の研究目標に対して,これまでに得られていた結果をもとにして,最終年度である今年度は,2.に焦点を絞って研究を行った.特に,平成24年度中に得られていた,Dunfield-Friedl-Jackson予想をツイスト結び目に対して肯定的に解決した研究成果を,より広範な2橋結び目のクラス(これは種数1の2橋結び目をすべて含む)に対して,やはり肯定的に解決することに成功した.この成果は米国オハイオ州立大学のAnh T. Tran氏との共同研究に基づいている.一方,ファイバー結び目のモノドロミー写像を研究する観点から,曲面の写像類群のNielsen-Thurston理論と3次元多様体のエータ不変量との関係についても研究を行い,種数の小さいHurwitz曲面の自己同型に対して,可約性とエータ不変量の消滅との同値性を示した.低次元トポロジー結び目理論の代数的研究における「2橋結び目」や「双曲的ツイスト結び目」の位置づけは極めて重要で,これに対して研究目的がおおむね達成できたことは,さらなる一般化に向けて,よい指針を与えるものと考えられるため.結び目理論の代数的研究における「2橋結び目」や「小さい結び目」の位置づけは極めて重要で,これらの結び目に対して研究目的がおおむね達成できたことは,さらなる一般化に向けて,よい指針を与えると考えられるため.結び目理論における「2橋結び目」の位置づけは極めて重要で,これに対して研究目的がおおむね達成できたことは,さらなる一般化に向けて,よい指針を与えるものと考えられるため.本研究課題最終年度の今年は,平成24年度までに得られた結果を基にして,前項2つの具体的目標のうち,2.に焦点を絞って研究を行うことにする.より具体的には,2橋結び目とは限らない
対照修辞学に立脚した日本人向け英文ライティング教授法とモデル教材開発のための研究

日本語母語者の大学生向けに英文アカデミック・ライティング教授法を構築する目的から、文章作成のプロセスとしてアウトラインを重視した教育プログラムをデザインした。教養教育の英語科目(必修)履修者を対象にプログラムを実施し、アウトラインから第1稿を経て最終原稿に至るまでの学生のライティングのデータを収集し、その効果を分析した。結果として以下の点を明らかにした。基本となるパラグラフ・ライティングの段階からアウトライン作成を導入することで、既得の日本語文章作成法を英語での文章作成に学生が転用させてしまう点について学生自身の気付きを促すことができる。特に、日本語小論文で用いる自分の体験に言及して個性を表す書き方や、文章全体の最後の部分で自分の見解を明らかにする書き方が、英語の文章作成では問題となることを意識化させる効果がある。同時に、パラグラフ内で抽象から具体への階層的な情報構造を構築させる訓練により、具体的な情報をカテゴリー化していく分析的視点・思考力を育成する教育効果が期待できる。また、複数パラグラフからなるエッセイ・ライティングでのアウトライン作成重視は、導入部で論旨を表明しそれを本論部で裏づけるという英文エッセイの標準的な論理構成を定着させるのに有用である。これにより学生は、長さのある文章作成の際に、全体を見渡した論理構成を整えてから細部の英語表現を充実させるという1つの方略を獲得できる。エッセイ全体の論理の組み立てを図ることは、具体的な論拠をもとに一般化できることを導出していく思考面の鍛錬にもつながる。アウトライン作成を中心に据えた本教育プログラムは、日本語母語者の大学生が英文パラグラフやエッセイに求められる論理構成に習熟することを念頭に開発したものであるが、今後プログラムを充実させていく上で、言語面と思考面の鍛錬の相互作用を視野に入れることが求められる。英語圏および国内で刊行されている非英語母語話者用英文ライティング教科書に見られる教授法の特徴を概観した結果、パラグラフ構造についてはその構成要素としてトピック・センテンスやサポーティング・センテンスの役割を知識として与えることに終始するものが多い。また複数パラグラフからなるエッセイ・ライティングの場合は、英語文化(主として米国)での伝統的修辞法にそって、比較・対照や原因・結果というカテゴリーを前提とするものが大半である。しかし日本語母語話者の大学生が、英文のパラグラフやエッセイに求められる論理構造に適った形で実際に書けるよう習熟していくためには、そうした従来型の教授法では不十分である。その理由の根幹には日英語の文章作成における具体的な差異として、英語での論理的文章作成においては、一つのパラグラフを構成する一連の文は一般性(generality)のレベルにおいて階層性を有して関連し合っていることが前提となっている点が挙げられる。したがってパラグラフ内の連続する文と文との論理的関係が等位、あるいは従属の関係にあるのかを明確化した文章を作成するよう学生の意識を高めることが指導上重要である。日本語母語話者の大学生へのアンケート調査から、日英語での文章作成上、論理構成として結論を示す行程の差異に戸惑う場合が多いことが示された。学生が大学入学以前に学んだ日本語による小論文構成方法としては、対照修辞学上指摘されてきた起承転結型はごく一部であって序論・本論・結論型が多いが、英文エッセイ・ライティングの構成と合致するわけではないことから混乱を招きやすいと言える。よって全体を見渡した論理構成を整えてから書くという姿勢を学生の間に徹底させることが重要であり、先にパラグラフ構造に関して挙げたgeneralityの階層への意識をふまえたアウトラインの構築を指導していくことが有効であると考えられる。(799字)日本語母語者の大学生向けに英文アカデミック・ライティング教授法を構築する目的から、文章作成のプロセスとしてアウトラインを重視した教育プログラムをデザインした。
全身性炎症反応に対する新たなる臓器障害戦略：新規若返り因子GDF11の有効性

全身性炎症反応は、敗血症などの過大侵襲により引き起こされ、しばしば制御困難となる。GDF(growth differentiation factor)11は、新規若返り因子としてミトコンドリア機能や再生能を保つ。本研究の目的は、全身性炎症反応に対する新たな制御法として、GDF11投与の有効性を評価することである。盲腸結紮穿刺によるマウス敗血症モデルに対して、GDF11(1mg/kg)を腹腔内に単回投与、連日7日間投与、もしくは経静脈的に単回投与した。GDF11非投与群と投与群の生存率を比較した。その結果、GDF11投与による生存率の有意な改善は得られず、有効性を示すことはできなかった。本研究の目的は、全身性炎症反応に対する新たな制御法として、新規若返り因子GDF11(growth differentiation factor 11)投与の有効性を評価することである。全身性炎症反応に対するGDF11投与の効果を明らかにするために、まず敗血症患者における血中GDF11値の推移と予後、他の炎症マーカーとの関連性を検討した。研究対象は敗血症患者15名、年齢中央値は71歳であった。そのうち生存10名、死亡5名で、APACHEII、SOFAスコアの中央値は各21点と9点であった。敗血症患者のGDF11値(中央値34.23pg/mL)は健常人(中央値94.84ng/mL)と比較して有意差を認めなかった。予後を目的変数としたCox比例ハザード回帰分析、ロジスティック回帰分析(AUC値=0.51)では、敗血症診断日の血中GDF11値はいずれも有意な説明因子とはならなかった。1、2日目における血中GDF11値は、HMGB-1値と有意な相関を認めた。血中GDF11値は、HMGB-1値以外のDMAPsやサイトカインと、各日とも相関は認めなかった。全身性炎症反応に対するGDF11投与の効果を明らかにするために、研究の焦点を以下の3点に絞り実施する予定である。1)全身性炎症反応(敗血症、熱傷、熱中症)各モデルにおいて、発症急性期にGDF11の投与を行い、各週齢別に臓器障害・生存率の改善が得られるか評価する。2) GDF11投与群、非投与群において各幹細胞機能、各臓器の細胞障害・細胞死を免疫染色等により群間で評価し、週齢別に治療効果のメカニズムを明らかにする。3)GDF11投与の有無により、全身性炎症反応に伴う各臓器における炎症、再生応答遺伝子、細胞死の制御遺伝子発現に差が生じるか、マイクロアレー法を用いて解析する。本年は、まず敗血症患者における血中GDF11値の推移と予後、他の炎症マーカーとの関連性を検討し、GDF11の臨床患者における動向を明らかにした。今後、これらの知見を基に、各全身性炎症反応モデルにおいて発症急性期にGDF11の投与を行い、その有効性を検討する。したがって、研究ペースとしておおむね順調に進展している。平成27年度は、全身性炎症反応に対するGDF11投与の効果を明らかにするために、研究の焦点を以下の2点に絞り実施を進めた。1)全身性炎症反応(敗血症、熱傷、熱中症)各モデルにおいて、発症急性期にGDF11の投与を行い、各週齢別に臓器障害・生存率の改善が得られるか評価した。2)全身性炎症反応における炎症・再生応答を明らかにするため、重症救急患者におけるサイトカインプロファイルの推移とその制御の方向性を評価した。まず、敗血症モデルにおけるGDF11投与の有効性を評価するため、盲腸結索穿刺モデルに対して盲腸結索穿刺直後にGDF11(1mg/kg)を腹腔内に単回投与して効果を検証した。その結果、単回投与のGDF投与群の死亡率は4/12、非投与群の死亡率は2/12であった。以上の結果から、GDF投与による生存率の有意な改善は得られなかった。複数日に分けてGDF11の投与を複数回行うなど有効性発揮する条件を考慮する必要性を示す。一方、敗血症患者の急性期(1日4日目)において、密接なサイトカインネットワーク(IL-6、IL-8、IL-10、MCP-1)を認めた。これらのサイトカインネットワークは、重症度(SOFA、DIC)と予後(28日死亡)に関連した。したがって、密接なサイトカインネットワークが敗血症の病勢を司る可能性を示しており、今後のGDF研究を進める上で一つのターゲットとなりうる。全身性炎症反応に対するGDF11投与の効果を明らかにするために、研究の焦点を以下の3点に絞り実施する。

2) GDF11投与群、非投与群において各幹細胞機能、各臓器の細胞障害・細胞死を免疫染色等により群間で評価し、週齢別に治療効果のメカニズムを明らかにする。3)GDF11投与の有無により、全身性炎症反応に伴う各臓器における炎症、再生応答遺伝子、細胞死の制御遺伝子発現に差が生じるか、マイクロアレー法を用いて解析する。平成28年度は、GDF11投与を開始し、有効性を発揮する投与法の検討に入っており、順調に進んでいる。本研究の目的は、全身性炎症反応に対する新たな制御法として、新規若返り因子GDF11(growth differentiation factor 11)投与の有効性を評価することである。前年度、盲腸結索穿刺による敗血症モデルにおけるGDF11投与の有効性を評価するため、盲腸結索穿刺モデルに対して盲腸結索穿刺直後にGDF11(1mg/kg)を腹腔内に単回投与して効果を検証した。その結果、GDF11投与群の死亡率は4/12、非投与群の死亡率は2/12であり、生存率の有意な改善は得られなかった。そこで、平成29年度は、14週齢の同モデル(N=49)において、GDF11投与の方法を工夫してさらに効果を検証した。まず、盲腸結索穿刺直後からGDF11(1mg/kg)を連日7日間腹腔内投与してコントロール群と比較検討した結果、GDF11投与群の死亡率は9/18、非投与群の死亡率は5/18であり、生存率の有意な改善は得られなかった。さらに盲腸結索穿刺直後にGDF11(1mg/kg)を尾静脈内に単回投与してコントロール群と比較検討した結果、GDF11投与群の死亡率は3/6、非投与群の死亡率は4/7であり、生存率の有意な改善は得られなかった。以上より、盲腸結索穿刺モデルにおけるGDF11投与の有効性を示すことができず、本研究からは全身性炎症反応に対する新規若返り因子の抗炎症効果を明らかにすることができなかった。全身性炎症反応は、敗血症などの過大侵襲により引き起こされ、しばしば制御困難となる。GDF(growth differentiation factor)11は、新規若返り因子としてミトコンドリア機能や再生能を保つ。本研究の目的は、全身性炎症反応に対する新たな制御法として、GDF11投与の有効性を評価することである。盲腸結紮穿刺によるマウス敗血症モデルに対して、GDF11(1mg/kg)を腹腔内に単回投与、連日7日間投与、もしくは経静脈的に単回投与した。GDF11非投与群と投与群の生存率を比較した。その結果、GDF11投与による生存率の有意な改善は得られず、有効性を示すことはできなかった。今後の研究の焦点を以下の3点に絞り実施する。1)全身性炎症反応(敗血症、熱傷、熱中症)各モデルにおいて、発症急性期にGDF11の投与を行い、各週齢別に臓器障害・生存率の改善が得られるか評価する。具体的には、既に確立したマウスの全身性炎症反応(敗血症、熱傷、熱中症)各モデルにおいて、発症急性期にGDF11の投与を行い、各年齢別に臓器障害・生存率の改善が得られるかを評価する。
非平衡な超高強度光反応場による複合機能ハイブリッドナノ微粒子の創製

本研究では,フェムト秒パルスレーザー光を液体中に強く集光することで発生する高密度プラズマと,その後の超高速な冷却過程による非平衡な反応場における物質創製プロセスを用いて多元系合金ならびに非金属-金属ハイブリッドナノ微粒子を作製することを目的とし研究を行った.複数種の貴金属イオンを含む溶液からは貴金属合金ナノ粒子の作製に成功し,その組成は溶液中へのイオン混合比に応じて自由に選択できることが分かった.一方,非金属-金属ハイブリッドナノ微粒子作製のためには,安定な溶液の調整かつ共還元のための検討が必要であることが分かった.本研究では,フェムト秒パルスレーザー光を液体中に強く集光することで発生する高密度プラズマと,その後の超高速な冷却過程による非平衡な反応場における物質創製プロセスを用いて多元系合金ならびに非金属-金属ハイブリッドナノ微粒子を作製することを目的とし研究を行った.複数種の貴金属イオンを含む溶液からは貴金属合金ナノ粒子の作製に成功し,その組成は溶液中へのイオン混合比に応じて自由に選択できることが分かった.一方,非金属-金属ハイブリッドナノ微粒子作製のためには,安定な溶液の調整かつ共還元のための検討が必要であることが分かった.フェムトパルスレーザー光を回折限界まで集光することで極めて強いレーザー場を生成することができる.研究代表者は,これまでこの非平衡な超高強度光反応場を金属イオンを含む水溶液体中に発生させ,発生するラジカルによる還元反応を介して,単分散のシングルナノ微粒子が生成できることを実証した.本研究では,実験対象を混合水溶液へ拡張し,合金ナノ微粒子,ならびに酸化物と金属から成る新しいハイブリッドナノ微粒子の創成を目的とし研究を行った.まず,研究過程において同手法を用いて金ナノ粒子だけでなく白金(T.Nakamura,K.Takasaki,and S.Sato,J.Appl.Surf.Sci.,225(2009)9630-9633)ならびに銀超微粒子の作製に成功した.さらに,二種類の金属イオンを所定の割合で混合した混合水溶液をへのレーザー照射により,組成を制御した金-銀合金ならびに金-白金合金超微粒子の作製も容易に可能であることを明らかにしている.この結果は,複数種の金属イオンを含む水溶液への高強度レーザー照射により,様々な化学物質や複雑なプロセスを経ることなく容易に組成が制御された合金ナノ粒子の作製が可能であることを示唆しており,今後その研究範囲を三元系をはじめとした多元系合金ナノ粒子の作製に拡張する予定である.一方,酸化物・金属ハイブリッドナノ粒子の作製については,同手法を用いた酸化物ナノ粒子の作製に関する研究過程において,「卑」な金属イオンが安定に存在する水溶液が必要であることが分かった.通常の金属塩水溶液ではなく,有機分子などにより水溶液中で安定化した金属イオン水溶液へのレーザー照射により酸化物ナノ粒子の作製が可能であることが分かっており,引き続き研究を進めている.フェムトパルスレーザー光を光の回折限界まで強く集光することで焦点付近において極めて強い光の場を形成することができる.研究代表者は,この非平衡な超高強度光反応場を各種金属イオンを含む溶液体中に形成し,非線形光学効果により発生する溶媒分子のラジカルによる還元反応を介して,シングルナノメートルオーダーの金属粒子が生成されることを実証した.本研究では,対象を二種類以上のイオンを含む混合溶液へと拡張することで,合金粒子ならびに酸化物と金属から成る新しいハイブリッド粒子の創成を目的とし研究を行ってきた.その結果,金ならびに銀イオンを含む溶液への高強度レーザー照射により,溶液中に含まれるイオンの混合比を変えるだけで組成を制御した金-銀合金ナノ粒子を作製できることを明らかにした(Y.Herbani,T.Nakamura,S.Sato,Jounal of Nanomaterials,(2010)154210-1-9).この結果は,複数種の金属イオンを含む水溶液への高強度レーザー照射により,還元剤などの化学物質や反応時の設定温度変化など複雑なプロセスを経ることなく,所望する組成の合金ナノ粒子を極めて容易に作製することができることを示唆しており,今後その研究範囲を三元系をはじめとした多元系合金ナノ粒子の作製に拡張する予定である.一方,酸化物・金属ハイブリッドナノ粒子の作製については,同手法を用いた酸化物ナノ粒子の作製に関する研究過程において,「卑」な金属イオンが安定に存在する水溶液が必要であることが分かった.現在のところ,塩化亜鉛水溶液と塩化白金水溶液を所定の割合で混合した混合水溶液へのレーザー照射により,酸化亜鉛と金のハイブリッドナノ粒子の作製を示唆する結果が得られており,引き続き反応メカニズムの解明を含めた詳細な検討を行っていく予定である.
Fibrous long-spacing collagenの発生機序と腫瘍転移

Fibrous long-spacing collagen(FLS)の形態形成と起源を調べる目的で、コラゲナーゼ処理したマウス皮膚に形成されたFLS、神経鞘腫内に形成されたFLSおよび培養線維芽細胞の間質中に形成されるFLSの組成を免疫電顕法を用いて、間質に広く存在するI、III、IV、V、VI型コラーゲン、ラミニン、そしてファイブロネクチンが、FLSに局在するか調べた。酵素処理したマウス真皮に生じたFLSには、VI型コラーゲンとラミニンの局在を認めた。VI型コラーゲンの局在は、基底板の周囲と膠原線維の周囲の直径約6nmの細線維と膠原線維や基底板の周囲に見られる無定型物質の一部とFLSを長軸に走る細線維上に認められた。ラミニンについては、血管や基底層細胞の基底板に強い局在を示し、基底板周囲に認められたFLSの横紋状の高電子密度物質(暗帯)に観察された。神経鞘腫中のFLSには、ラミニンの局在が一部に観察され、その他の抗体に対する反応産物は、観察されていない。ラミニンの局在は、血管の基底板と一部のシュワン細胞の基底板に反応産物が観察され、若干観察されたFLSの暗帯部に一致して同様の反応産物が観察された。培養線維芽細胞中の間質に形成されたFLSには、VI型コラーゲン抗体に対して陽性の反応を観察している。この結果は、Brunsの報告と一致している。ラミニンに関しては、現在研究中ではあるが、陽性反応は観察されない。この結果は、コラゲナーゼ処理により生じるFLSが、真皮の細胞間質に存在するVI型コラーゲンの細線維であり、コラゲナーゼにより分解された基底板のラミニンが一定周期でこの線維に沈着して形成されたことを示す。コラゲナ-ゼ処理したマウス皮膚に形成されたFibrouslongーspacing collagenの形態形成と起源について電子顕微鏡観察、計測学的方法、組織化学的染色法、免疫電顕法を用いて調査した。この酵素処理によりマウス真皮に多量のFibrous longーspacing collagenの形成と基底板の破壊が観察された。Fibrous longーspacing collagenは、血管や基底層直下の基底板近傍に多く形成されていた。Fibrous longーspacing collagenは、約91nmの周期を持つ横紋状の高電子密度物質(暗帯)とこの暗帯に直交する約6.5nmの細線維からなる特殊な形状の線維性構造帯である。Fibrous longーspacing collagenの暗帯は基底板と形態的に連続しているのがしばしば観察され、さらにこの暗帯は、各種の組織化学的染色法により基底板に含まれるものと類似の多糖類を有していた。免疫電顕法でラミニンとVI型コラ-ゲンの局在を調べてみると、ラミニンの局在はFibrous longーspacing collagenの暗帯に認められ、VI型コラ-ゲンはFibrous longーspacing collagenの細線維上に陽性像を示した。この結果は、Fibrous longーspacing collagenの細線維は、VI型コラ-ゲンを含む線維からなり、コラゲナ-ゼにより分解された基底板の成分が約91nmの周期でこの線維に沈着して形成されたことを示す。また、酵素処理したマウス皮膚で形成されたFibrous longーspacing collagenとヒト悪性神経鞘腫に出現したFibrous longーspacing collagenを計測学的に比較したが、構造的相違はなく類似の型の線維であることが分かった。

ミラゲナーゼ処理したマウス皮膚に形成されたFibrous long-spacing collagenの形態形成と起源を調べる目的で、免疫電顕法を用いてFibrous long-spacing collagenの組成を調査した。そこで、本研究において、間質に広く存在する、I、III、IV、V、VI型コラーゲン、ラミニン、そしてファイブロネクチンが、Fibrous long-spacing collagenに局在するか調べた。酵素処理したマウス真皮に生じたFibrous long-spacing collagenに局在していたのは、VI型コラーゲンとラミニンであった。VI型コラーゲンの局在を示す金コロイド粒子は、基底板の周囲と膠原線維の周囲に認められた。高倍観察すると、直径約6nmの細線維と膠原線維や基底板の周囲に見られる無定型物質の一部に金コロイド粒子の局在が認められた。さらに、Fibrous long-spacing collagenを長軸に走る細線維上にも局在していた。ラミニンについては、血管や基底層細胞の基底板に強い局在を示していた。酵素処理により、基底板が部分的に消失している部位では、ラミニンが局在しておらず、近位の間質に高電子密度の無定型物質として局在が観察された。また、基底板周囲に認められたFibrous long-spacing collagenの横紋状の高電子密度物質(暗帯)にもラミニンが局在しているのが観察された。この結果は、コラゲナーゼ処理により生じるFibrous long-spacing collagenが、真皮の細胞間質に局在するVI型コラーゲンの細線維であり、コラゲナーゼにより分解された基底板のラミニンが一定周期でこの線維に沈着して形成されたことを示す。Fibrous long-spacing collagen(FLS)の形態形成と起源を調べる目的で、コラゲナーゼ処理したマウス皮膚に形成されたFLS、神経鞘腫内に形成されたFLSおよび培養線維芽細胞の間質中に形成されるFLSの組成を免疫電顕法を用いて、間質に広く存在するI、III、IV、V、VI型コラーゲン、ラミニン、そしてファイブロネクチンが、FLSに局在するか調べた。酵素処理したマウス真皮に生じたFLSには、VI型コレーゲンとラミニンの局在を認めた。VI型コラーゲンの局在は、基底板の周囲と膠原線維の周囲の直径約6nmの細線維と膠原線維や基底板の周囲に見られる無定型物質の一部とFLSを長軸に走る細線維上に認められた。ラミニンについては、血管や基底層細胞の基底板に強い局在を示し、基底板周囲に認められたFLSの横紋状の高電子密度物質(暗帯)に観察された。神経鞘腫中のFLSには、ラミニンの局在が一部に観察され、その他の抗体に対する反応産物は、観察されていない。ラミニンの局在は、血管の基底板と一部のシュワン細胞の基底板に反応産物が観察され、若干観察されたFLSの暗帯部に一致して同様の反応産物が観察された。培養線維芽細胞中の間質に形成されたFLSには、VI型コラーゲン抗体に対して陽性の反応を観察している。この結果、Brunsの報告と一致している。ラミニンに関しては、現在研究中であるが、陽性反応は観察されない。
新規Maf群転写因子関連糖尿病性腎症モデルマウスの作製および解析

本研究では、新規糖尿病性腎症モデルの確立を目的に行い、インスリンの産生を制御するMaf群タンパク質を遺伝子改変し、MafAKO/MafKTgマウスを作製した。MafAKO/MafKTgマウスは、生後より糖尿病を発症し、腎障害が進行することを確認した。また片腎摘出を行った結果、マウスモデルでは再現が困難と考えられていたヒト糖尿病性腎症の典型的な3つの所見(結節性病変、滲出性病変、びまん性病変)を呈し、糖尿病性腎症モデルとして有用であることを確認した。本研究では以下3項目を研究目的としている.1.新規転写因子関連糖尿病腎症モデルの確立,2.新規転写因子関連酸化ストレス負荷糖尿病腎症モデルの確立,3.糖尿病性腎症治療における前記転写因子の機能解析.平成19年度はMafAノックアウトマウス(MafAKO)およびMafKトランスジェニックマウス(MafKTg)の糖尿病性腎症の評価を行った.(1)糖尿病,腎障害の評価:MafAKOおよびMafKTgと対照群(Wild)の採血と蓄尿を行い血糖値,血清クレアチニン,尿タンパクを測定し,腎障害を評価.腎機能データは以下の通りであった。10週におけるMafAKO,MafKTg,Wildの随時血糖値は167.8±19.8mg/dL,193.6±29.4mg/dL,173.0±23.3mg/dL,血清クレアチニン0.40±0.00mg/dL,0.34±0.06mg/dL,0.32±0.05mg/dL,尿蛋白4.38±3.00mg/day,3.73±2.33mg/day,3.45±1.39mg/dayであった。20週におけるMafAKO,MafKTg,Wildの随時血糖値は252.3±70.3mg/dL,158.0±37.5mg/dL,159.8±76.7mg/dL,血清クレアチニン0.23±0.05mg/dL,0.27±0.06mg/dL,0.23±0.06mg/dL,尿蛋白3.85±3.05mg/day,5.65±1.42mg/day,4.85±2.81mg/dayであり、10週におけるMafAKOの尿蛋白の高値以外は3群間では、有意差は認められなかった。(2)腎組織の評価:また同時に腎組織評価を10週および20週にて行った。腎重量の変化の有無、糸球体腫大の有無の検討を行ったが、有意な差は認められなかった。(3)平成19年度では、同時にMafAKOとMafKTgを掛け合わせ,MafAKO/MafKTgマウスの糖尿病性腎症の検討を行った。初期評価では,糖尿病および糖尿病性腎症の発症が認められ,引き続き検討する予定である。本研究では以下の項目を研究目的としている。1.新規転写因子関連糖尿病腎症モデルの確立、3.糖尿病性腎症治療における前記転写因子の機能解析.平成19年度はMafAノックアウトマウス(M,afAKO)およびMafKトランスジェニックマウス(MafKTg)の糖尿病性腎症の評価を行い、10週におけるMafAKOの尿蛋白の高値以外は3群間では、有意差は認められなかった。また、10週および20週にて行った腎組織関連評価では、腎重量の変化の有無、糸球体腫大の有無の検討を行ったが、有意な差は認められなかった。平成20年度では、MafAKOとMafKTgを掛け合わせ,MafAKO/MafKTgマウスの糖尿病性腎症の検討を行った。MafAKO/MafKTgマウスは、5週齢ですでに、高血糖を発症し、20週の随時血糖値は853.3±64.1mg/dL、血清クレアチニン0.48±0.04mg/dL、尿蛋白8.8±2.3mg/dayであった。いずれも、MafAKO、MafKTg、Wildマウスより高値を示し、また腎組織でもメサンギウム領域の拡大が認められ、糖尿病による腎症の進展が認められた。以上の結果より、MafAKO/MafKTgマウスは新規糖尿病性腎症マウスとして、十分期待が出来るマウスと考えられる。また、一層糸球体負荷を行い、腎組織の障害が進展するか否かを検討するため、マウスの片腎摘除を行う予定である。さらに、アンジオテンシンII受容体拮抗薬の投与により、糖尿病性腎症治療の有効性についても引き続き検討する予定である。1.新規転写因子関連糖尿病腎症モデルの確立、2.糖尿病性腎症治療における前記転写因子の機能解析。

平成19年度はMafAノックアウトマウス(MafAKO)およびMafKトランスジェニックマウス(MafKTg)の糖尿病性腎症の評価を行い、10週におけるMafAXOの尿蛋白の高値以外は3群間では、有意差は認められなかった。また、10週および20週にて行った腎組織関連評価では、腎重量の変化の有無、糸球体腫大の有無の検討を行ったが、有意な差は認められなかった。平成20年度では、MafAKOとMafKTgを掛け合わせ,MafAKO/MafKTgマウスの糖尿病性腎症の検討を行った。MafAKO/MafKTgマウスは、5週齢ですでに、高血糖を発症し、20週の随時血糖値は853.3±64.1mg/dL、血清クレアチニン0.48±0.04mg/dL、尿蛋白8.8±2.3mg/dayであった。いずれも、MafAKO、MafKTg、Wildマウスより高値を示し、また腎組織でもメトンギウム領域の拡大が認められ、糖尿病による腎症の進展が認められた。平成21年度では、MafAKO/MafKTgマウス片腎摘除を行い、その結果ヒト糖尿病性腎症の典型的な3つの所見、増殖性病変、硬化性病変、浸出性病変を確認することができ、本マウスがヒト糖尿病性腎症モデルとして有用であることが確認できた。以上の内容を2009年に論文報告を行った。
細胞融合による歯髄幹細胞創生法の開発

組織幹細胞は全細胞中の約0.3%前後しか含まれておらず、ヒトの自己の組織幹細胞を大量に得ることは困難であり、組織幹細胞の増殖能・多能性を維持したまま大量に増殖させる培養法の開発はむずかしいといわれている。したがって、本研究は、歯髄の形質を維持したままヒトの自己の歯髄幹細胞を大量に得る新しい技術の開発を目的とした。まず、今回、ブタの歯胚から酵素消化で得られた歯髄細胞をHoechst33342でラベルし、色素を多く排出する画分、SP細胞をフローサイトメトリーにて分取した。このSP細胞は全細胞中の約0.2%であった。このSP細胞は自己複製能と多能性をもつという幹細胞の特徴を示していた。ついで、細胞融合装置を用いて、歯髄SP細胞と歯髄から得られた全細胞の細胞融合を試みた。等量の細胞を融合用培地(0.25Mグルコース、0.1M酢酸カルシウム、0.01mg/ml BSA)に懸濁し、4mmギャップの電極を用いて、交流を1MHz、50V、20秒かけると、顕微鏡下で15個ぐらいの細胞が繋がったパールチェーンが観察された。ついで、直流で、700V、20マイクロ秒2回かけるとその4倍体歯髄融合細胞が形成され、その融合効率は20%、生存率は30%以下であった。この細胞を培養し、細胞の自己複製能の維持と多能性(脂肪、軟骨、神経、筋肉、象牙質などへの分化能)の検索を行い、幹細胞と歯髄の性質両方を合わせ持つかどうかの検討を行った。
低酸素誘導性因子HIFの活性化による肺胞上皮細胞保護効果の検討

プロリルヒドロキシラーゼ(PHD)阻害剤であるジメチルオキサリルグリシン(DMOG)によるHIF-1の活性化が肺胞上皮細胞のFasL誘導性アポトーシス与える影響を検討した.DMOGはFasLによるMLE12細胞のアポトーシスを抑制した.HIF-1のDNA結合阻害剤であるエキノマイシン,もしくはsiRNAによるHIF-1経路の阻害はDMOGの抗アポトーシス効果を消失させた.FasLを気管内投与した動物においてもDMOG投与が肺胞上皮細胞のアポトーシスを減少させ,肺胞バリアーの破綻,組織学的変化を抑制した.PHD阻害はFasL誘導性アポトーシスを抑制し,肺傷害を軽減する可能性が示された.肺胞上皮細胞株MLE15を用いて,HIF-1 alphaの分解を抑制するDMOGの投与がFasL/Fas系によるアポトーシスにどのような影響をあたえるのかを検討した.DMOGが1mMの濃度で十分にHIF-1 alphaを増加させることをELISA法で確認するとともに,下流遺伝子の増加が見られることを定量的PCR法で確認した.FasLを細胞に投与した際のアポトーシスの抑制についてcaspase 3/7の活性,さらにTUNNELフローサイトメトリーによって検討した.DMOGはこれらの指標を全て,低下させ抗アポトーシス作用があることが示された.次に,HIF-1が実際に抗アポトーシス作用を示すのかどうかを調べるために,HIF-1 alphaのsiRNAによるノックダウン及びHIF-1のDNA binding inhibitorであるEchinomycinを用いて,DMOGの抗アポトーシス作用への影響を調べた.HIF-1 alphaノックダウン,またEchinomycinによる阻害はアポトーシスを増加させたことからHIF-1が抗アポトーシス作用を示すことが示された.一方でDMOGの抗アポトーシス作用はHIF-1阻害条件下においても示され,HIF-1 independentな効果をDMOGが持つことが示唆された.昨年度に引き続きin vitroでの細胞培養実験においてPHD阻害薬DMOGの抗アポトーシス効果を検討するとともに,動物にFasリガンドを投与した肺傷害モデルにおいてもDMOGの抗アポトーシス効果を検討した.in vitroでは昨年度用いていたMLE15細胞株では細胞膜表面のFasの発現量が少なかったため,MLE12細胞株に細胞を切り替えて実験を行った.MLE12細胞株においても1mM濃度のDMOGがFasリガンドによるアポトーシスを抑制することをCaspase3/7活性,細胞生存率の2つの面から確かめた.またその背景メカニズムとして,細胞全体及び細胞膜のFasの発現をELISA法及びフローサイトメトリーにて測定した所,DMOGの投与によりFasの発現が低下することが確かめられた.Fasの減少は特に膜表面の発現において強く認められた.動物モデルにおいてはFasリガンド気管投与前から後にかけてDMOG8mg/bodyを計3回腹腔内投与することで,肺ホモジネート中のCaspase3/7活性が低下すること,またTUNNEL陽性細胞の増加を抑制できることを確かめた.さらに肺胞血管バリアーの指標であるBAL中の高分子(IgM)増加の抑制を認め,DMOGによる抗アポトーシス効果が肺水腫の低減につながる可能性が示唆された.前年度に引き続きマウス肺胞上皮細胞株MLE12に対するFasL誘導性アポトーシスの実験系を用いて,プロリルヒドロキシラーゼ阻害剤DMOGによる抗アポトーシス効果のメカニズムについてさらに研究を進めた.また,当該年度の途中で論文投稿を行い,Reviewerの指摘をうけてさらに実験を行ったHIF-1経路への依存性を検討するためにHIF-1のDNA結合阻害剤であるエキノマイシン投与を予め行った上で,DMOGによるFasL誘導性アポトーシスに対する作用を検討した所,DMOGの抗アポトーシス作用が消失した.また,siRNAを用いてHIF-1αをノックダウンしたところ同様にDMOGの抗アポトーシス作用が消失することが確かめられた.これらから,DMOGによる抗アポトーシス効果はHIF-1依存性であることが明らかになった.また,PHD阻害,HIF-1経路による抗アポトーシス作用のメカニズムの一つとして,デスレセプターFasの挙動を詳細に検討した.PHD阻害により,FasのmRNA発現量が低下し,また膜分画のタンパク量が低下していた.さらにHIF-1αノックダウンによってFasのmRNA発現量が増加,タンパク量も増加することを確かめた.これらの結果から,FasがHIF-1αによって転写レベルにおいて負に制御されていることが明らかになった.さらに,PHD阻害薬DMOGがFasL誘導性肺傷害モデルマウスにおいて抗炎症作用を示すことも明らかにした.プロリルヒドロキシラーゼ(PHD)阻害剤であるジメチルオキサリルグリシン(DMOG)によるHIF-1の活性化が肺胞上皮細胞のFasL誘導性アポトーシス与える影響を検討した.DMOGはFasLによるMLE12細胞のアポトーシスを抑制した.HIF-1のDNA結合阻害剤であるエキノマイシン,もしくはsiRNAによるHIF-1経路の阻害はDMOGの抗アポトーシス効果を消失させた.FasLを気管内投与した動物においてもDMOG投与が肺胞上皮細胞のアポトーシスを減少させ,肺胞バリアーの破綻,組織学的変化を抑制した.PHD阻害はFasL誘導性アポトーシスを抑制し,肺傷害を軽減する可能性が示された.当初の予定通り,PHD阻害薬DMOGによる抗アポトーシス効果を細胞実験,動物実験両面から示すことが出来ている.集中治療医学今後,PHD阻害からFasの発現低下,アポトーシス抑制に至るシグナルカスケードについて詳細な検討を行う.

HIF1またはHIF2への依存性,PHD1ー3への依存性を中心に,阻害剤及びsiRNAを用いた検討を行う予定である.当初の計画通りIn vitroでのDMOGの抗アポトーシス効果を示すことが出来た.年度当初予定していた,抗アポトーシス作用のHIF1への依存性について検討するためのconstitutive active form HIF-1αをoverexpressionさせる実験について,予備的検討を行ったものの下流遺伝子の発現増加があまり見られず,一旦休止することとしたため,次年度使用額が生じた.昨年度の実験を踏まえ1. DMOGの抗アポトーシス効果のメカニズムの検討,2.動物モデルにおけるDMOGの抗アポトーシス効果の検討の2つの面から実験を進める.DMOGの抗アポトーシス効果メカニズムについてはFasL/Fas系のアポトーシスに関わる,Fas,FADD,FLIP,capase8及びcaspase3のタンパク量の変化についてWestern blottingもしくはフローサイトメトリーによって評価を行う.さらにこれらの背景に細胞代謝の変化がみられるか調べるために,ATPの定量を行うとともに2-デオキシ-d-グルコースの投与による解糖系阻害がどのような変化をもたらすのか検討する.動物モデルにおいてはまず,FasLの経気管投与による肺傷害モデルを確立する.その上で,DMOGの全投与が肺のcaspase3やTUNNEL染色による肺胞上皮細胞のアポトーシスの定量に対してどのような影響をあたえるのか検討を行う.今年度はまず,HIF-1の阻害剤を用いるアプローチを行うとともに,consititutive active formのHIF-1αのoverexpression系がきちんと働くようにトラブルシュートを行う予定である.生じた次年度使用額はその際の阻害剤の購入,ベクター構築のための費用として用いる予定である.物品発注や購入は極めて計画的に行っているが、最終的に端数が発生した。次年度の物品購入の一部として使用する予定である。
アポトーシス標的アイソトープ治療による動脈硬化不安定プラーク制御法の開発

本研究計画は、α線標識薬剤アスタチン-211により頚動脈の不安定プラークの制御を試み、本邦初のアイソトープ治療に基づく脳血管障害の発症阻止への展開を目指すものである。当該年度においては、不安定プラークの治療適応例検出や治療効果の判定を目的として画像診断用薬剤の開発、および、そのPETイメージング法の開発を行い、以下の研究実績を得た。PET画像診断用標識薬剤として、動脈硬化病変アポトーシス発現部位への選択的薬剤の開発としてアポトーシス発現細胞に結合するAnnexin-A5 (ANXV5)とトランスローケータプロテイン(TSPO)に特異的に結合する性質を持ったFEDACをフッ素-18 (18F)により標識し合成を行った。頚動脈の動脈硬化症モデルウサギに対し、動物用ポジトロン断層撮像を用い血管壁プラークへの薬剤集積を検討し、プラークイメージング薬剤として報告例のある18F-FDGとの対比を行った。18F-Annexinに関しては血管内から血管壁への移行が不良であり、目立った集積は認められなかった。一方、18F-FEDACでは全例で動脈硬化病変の血管壁への集積が観察可能であった。よって18F-FEDACはより集積特異性が高いものと考えられた。18F-FEDACについてPET画像SUV値、オートラジオグラフィー、血管壁厚をそれぞれ比較したところ、オートラジオグラフィーと血管壁厚では強い相関が認められた。PET画像SUV値とオートラジオグラフィー、PET画像SUV値と血管壁厚については、患側と健側の比をとることでやや相関が認められた。本イメージング法の開発により、治療適応患者の適切な選択や治療効果判定につながり、次年度の方針であるα線標識薬剤を用いたアイソトープ治療に基づく脳血管障害の予防治療へ展開する予定である。研究実施計画における、1画像診断用薬剤の開発、2治療用薬剤の開発、3治療適応例検出のための不安定プラークイメージングの開発に関しては、研究実績の概要で述べた通り、検討の余地は残るもののおおむね完了しており、次年度にまたがり施行していく予定である。1.α線標識薬剤の開発及び合成(昨年度より継続)2.不安定プラークイメージングの開発(昨年度より継続)3.動脈硬化モデル動物を用い、α線標識薬剤のプラーク集積性や集積機序の検討結果をもとにし、不安定プラークの安定化を目指した治療のための基礎研究を行う。1)治療効果評価のためのイメージング法の開発雄性日本白色ウサギで右頸動脈の動脈硬化モデル動物を形成しフッ素18F-FEDACによりイメージングを行い、治療効果評価の画像的指標の開発を行う。2)病理組織および免疫染色による炎症指標により開発した画像マーカーの検証を行う。4.動脈硬化モデルの治療効果評価イメージング開発で確立した日本白色ウサギの動脈硬化モデルを用い1α線標識薬剤群2HMG-CoA阻害薬(スタチン)混餌群3無治療群・通常食群に分け急性期の治療効果を画像、病理組織検討により行う。

2)病理組織および免疫染色による炎症指標により開発した画像マーカーの検証を行う。4.動脈硬化モデルの治療効果評価イメージング開発で確立した日本白色ウサギの動脈硬化モデルを用い1α線標識薬剤群2HMG-CoA阻害薬(スタチン)混餌群3無治療群・通常食群に分け急性期の治療効果を画像、病理組織検討により行う。