hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
進化の観点からのインスリン作用のトランスクリプトーム/プロテオーム解析による検討

【結果】Western blottingにより、NT3刺激によるキメラ受容体の自己リン酸化を確認した。また、インスリンにより誘導されるEGR1遺伝子の発現量増加が、キメラ遺伝子発現細胞でNT3刺激でも起こることが認められた。Microarrayにより、0,90分、3,6,24時間の遺伝子の発現量変化を比較したところ、3時間刺激により最多の遺伝子の発現変動が見られた。そこで、3時間のNT3刺激にてキメラ受容体によって制御される遺伝子をMicroarrayにより網羅的に解析した.【考察】インスリン/IGF受容体を同一の細胞に発現させて遺伝子発現を比較することによって、インスリン/IGF受容体が2つの制御系に分岐した意義の解明が期待される。脊椎動物においてインスリン受容体に類似したIGF1受容体が存在し、IGF情報伝達系は癌細胞の増殖、浸潤、転移、アポトーシス抑制等に関与する。また、インスリン/IGF情報伝達系は進化の上で海綿等の原始多細胞生物以降の無脊椎動物、脊椎動物に共通に存在し、無脊椎動物にて成長、加齢を制御している。体研究では、インスリン/IGF受容体下流のシグナルによる代謝及び増殖シグナルの差異の機序を解明するために、インスリン/IGF受容体が分岐していないヒドラ、ハエのインスリン様受容体と比較することによって検討した。【方法】TrkCの細胞外ドメインとIR,IGFIR,Hydra IR,Drosophila IRの細胞内ドメインのキメラ受容体を作製し、TrkCリガンドであるNr3刺激によりキメラ蛋白の自己リン酸化を検討した。次に、各種キメラ受容体を安定的に高発現させたHepG2クローンを作製し、これらの細胞にてmicroarrayを用いてこれらのキメラ受容体によって制御される遺伝子を網羅的に解析した。また、NT3刺激後の蛋白発現プロファイルの変化を二次元電気泳動でのディファレンシャル解析(2D-DIGE法)にて検討した。【結果】NT3刺激によるキメラ受容体の自己リン酸化、インスリン応答性のEGR1遺伝子発現量増加がキメラ遺伝子発現細胞でNT3刺激でも起こることを確認した。Microarrayによる解析では3時間刺激により最多の遺伝子の発現変動が見られ、キメラ受容体間の比較では、ヒドラ・インスリン様受容体細胞内ドメイン発現にてメタロチオネイン遺伝子群の発現増加が認められた。2D-DIGE法での検討では、各細胞にてNr3刺激による有意な蛋白変動はほとんど認められなかった。【考察】インスリン/IGF受容体キメラ蛋白を発現した肝細胞での遺伝子発現プロファイル比較でメタロチオネインに差異があったことから、これらの受容体のストレス反応性に差異があるものと考えられる。
19世紀の演奏文化における前奏演奏

本研究課題は、19世紀における前奏演奏の役割と演奏方法を探るものであり、次の3種類の「前奏」について調査・分析する。つまり、1演奏会などで楽譜に書かれた部分の前に演奏者が自作して付加した前奏演奏、2作品の序奏部分として記譜された前奏、そして3独立した作品として書かれた前奏曲の3種類である。これら異なる3種類の「前奏」を、比較分析したり、あるいは関連させて捉えることで、演奏の際にどのような意味合いの元にどのような前奏が演奏されたか、作品の序奏部分と続く作品本体部分の関係はどのようなものであったか、そして出版された前奏曲が演奏会でどのように活用されていたか、を明らかにする。
アンテナを集積化したCMOS準ミリ波帯無線通信フロントエンドの研究

本研究は、1m以内の極短距離を超低消費電力で無線データ転送できる装置の開発を目的に、パルス伝送方式の超広帯域無線(UWB)通信方式を採用、送受信回路設計、ICパターン設計、試作を行った。また、プリント基板上に平面アンテナを実現し、試作ICをベアチップ実装して、送受信器のプロトタイプを構成した。伝送実験を行い、以下の結果を得た。(1)伝送速度:500Mb/s(1秒間に5億ビットのディジタル・データを送受信できる)(2)消費電力:送信電力1mW、受信電力11mW(送信器は従来技術の1/30)(3)ICチップ占有面積:送信回路0.07mmxmm、受信回路0.29mmxmm(受信器は従来技術の1/3)以上のように、今回考案したオンチップ・トランスを利用したバイアス電流フリー・送信回路、完全平衡回路と低インピーダンスブロック間結合レイアウトを採用した受信回路の性能を実証した。本年度は、ミリ波アンテナをIC上に積層するため、極めて小型化できるCMOSミリ波通信システムの実現に向けて、以下のことを実施した。(1)ICチップ上に積層可能なミリ波パッチアンテナの設計方法を確立するため、3次元電磁界シミュレータを用いて、アンテンの設計パラメータと入力インピーダンスの周波数特性や放射効率などの性能指標との対応関係を明らかにした。(2)上記アンテナを放射器のみではなく、共振器としても利用する放射型発振器を標準的なCMOS製造技術で実現すべく、上記アンテナの解析結果を用いたyパラメータによる発振条件を導き、回路設計の方法を確立した。(3)送信だけではなく受信の場合も、上記の放射型発振器を多重使用できるように、超再生検波器として利用する。そのためのゲイン制御方法や受信状態に応じてバイアス電圧を適応化する回路技術を考案した。(4)以上の内容を実証するため、0.18umCMOS製造技術を用いて、回路設計およびレイアウト設計を行い、評価実験のためのテストチップを、東京大学VDECを利用して製造した(現在納品待ちである)。(5)テストチップを評価するための測定方法や測定環境を、アンテナ計測装置を基本にして考案した。また、評価ボードの設計に加えて、ICチップ上にパッチアンテナを積層する方法を確立した。来年度は、テストチップの納品後、評価システムにより通信システムとしての性能評価を行い、シミュレーション結果との比較検討から、考案した超小型ミリ波通信システムおよびその設計方法を実証するべく研究を進める予定である。本年度は、超低消費電力、短距離・広帯域RF-CMOSフロントエンド回路を開発すべく、以下の2つのアプローチを評価、検討した。1.IC上に積層化したパッチアンテナを用いたCMOSミリ波放射型発振器について、設計方法の詳細を検討した。(1)3次元電磁界シミュレータを用いて、パッチアンテナの誘電体の厚さとアンテナ入力アドミッタンスの実数部、虚数部の関係を明らかにし、標準的なCMOS製造技術で発振可能な条件を導いた。(2)アンテナの放射効率およびCMOS発振回路の電力効率を同時に検討する協調設計を検討して、無線システム全体で効率の最適化が行える設計法を開発した。(3)on/offキーイング変調を放射型発振器で実行できるように発振、非発振を制御するスイッチ・トランジスタを導入し、さらに高速データ伝送を実現するため、発振、非発振を高速に切替えることのできるスイッチング技術を開発した。2.集積化トランスを利用したパルス伝送方式のRF-CMOS回路を考案して、評価システムにて動作検証をおこなった。(1)集積化トランスによって、直流電力から高周波パルスパワーに変換できる非常にシンプルな回路を考案。(2)フリップチップ実装技術によってプリント・アンテナを集積化トランスに直接接続できる。(3)受信回路では、過渡応答解析により設計した多段・短パルス増幅器および非同期レベル再生回路によって低消費電力化を実現した。以上により、伝送距離50cmの評価システムにおいて、500Mbps/10mWの非同期・無線データ転送を実証できた。平成19年に試作した送信器は、オンチップ・トランスの自己共振周波数偏差が設計予想値より大きく、送信電力の周波数特性が規格を満たさなかった。平成20年度は、不具合の原因解析と対応策を取り込んだ再設計を行った。具体的には、オンチップ・トランスの2次側に直接接続される平面アンテナ(PCB基板上にパターンとして描いたダイポール・アンテナ)の周波数特性を詳細に解析し、チップ部品を利用して、整合条件の最適化を行った。設計結果に基づきICチップの2次試作を行い、アンテナ・パターンを描いた評価用PCB基板上にベアチップを実装して、性能評価を実施した。

設計値に等しい送信電カスペクトルが得られ、また、整合条件の最適化から時間領域特性(パルス・パターン特性)も良好な波形が得られている。無線規格では、混信や他の無線システムへの干渉を低く抑えるため、送信電力スペクトルに関する制限は厳しいが、本研究成果の整合最適化法は一般化でき、様々な無線規格への送信スペクトル整形に応用できるため、その意義は大きい。
ナノケミカルレセプター修飾センサーチップを用いる環境ホルモン測定システムの開発

天然の生体分子に代わる人工レセプターとして、人工的に分子認識能を賦与したモレキュラーインプリントポリマー(MIP)が注目されている。本研究では、分子認識にMIPを利用し、検出用トランスデューサとして電極を用い電気化学測定する測定システムを構築することを試みた。レセプターMIP調製には、鋳型としてCATを用い、機能性モノマーとしてメタクリル酸(MAA)、架橋性モノマーとしてBDMAを使用して調製しCATおよび他のトリアジン化合物の結合特性を、CATを加えずに調製したNon-MIPと比較して調べた。まず、分子認識に関するNMR測定を、MAAのカルボキシル基、およびCATのアミノ基についてDMF,クロロホルムの両溶媒で行い比較した。その結果、クロロホルム、DMFいずれの溶媒中でも、カルボキシル基のプロトン、およびアミノ基のプロトンのケミカルシフトは、CATに対するMAAの比率が上がるにつれて一定方向に変化し、MAA/CATが7程度までは変化し続けたが、これ以上では変化が見られなくなり、7程度で両者の結合が飽和することが分かった。次に両溶媒中でCATに対するMIPを調製した。クロロホルム中で調製したMIPでは、CATの結合にNon-MIPとの差が見られなかったが、DMF中で調製したものでは、CAT-MIPにより多くのCATが結合した。CAT-MIPの選択性評価は、CAT, Atrazine, Propazineの3種類の除草剤に対し、CAT-MIPからNon-MIPの結合量の差を比較して行ったところ、結合量は、CATが4.8%、Atrazineが1.8%、Non-MIPより多く、PropazineではNon-MIPと同等だった。従ってCAT-MIPはCATを対して特異的な結合させるが、Atrazine, Propazineは非特異的に吸着していると考えられる。また、AtrazineやPropazineの結合はCATより少なく、CATを選択的に結合させることが示された。また、CATの電気化学測定についても、これまで使用してきた金電極に加え、水銀と金のアマルガム電極についても検討した。アマルガム電極は、還元側に電位窓が金に比べて広いため、金よりも明確に還元電流が測定でき、CATに対する応答電流も大きくなることが確認できた。本研究では、モレキュラーインプリントにより作成したナノケミカルレセプターポリマー(MIP)の特性を利用した環境ホルモン・アトラジンの電気化学センサーの構築を目的とした。MIPにLiClを含浸させたアトラジンセンサーを用いて測定した、アトラジンのCVから-0.8V付近において還元電流が見られ、この還元電流のアトラジン濃度依存が見られた。次にアトラジンセンサーの選択性については、CATとMCC測定対象とし、これらはアトラジンの還元電流と比較して小さい値となったことから、アトラジンセンサーは、充分アトラジンを選択的に測定できるセンサーと考えられる。さらにチップ化により、微小モニタリングデバイス化できるかを検討した。チップは大きさが1.5mm×13mmの長方形でガラス基盤上にスパッタリングした、ポリイミドで被覆して作用極開口を0.6mm×1.8mmのものを使用した。より安定した還元電流を得るために、膜厚の制御を行うことにし、スピンコート処理を行った。回転数と膜厚の関係を調べたところ、その膜厚の範囲は1365μmだった。

回転数を高めるほど、膜厚は薄くなるという結果を得た。このヤンサーチップでアトラジン濃度110μMにおいて測定を行い、電流値は小さくなったが、還元電流のアトラジン濃度依存性が見られた。電極面積が小さくても充分に測定が可能だったことから、低濃度での測定を行い、nMオーダーにおいても、その電極応答による濃度依存を測定することができた。検出限界は50nM(10.8ppb)だった。またNMR測定においても、MAA/CATが1から7まで増加するにつれ、CATのアミノ基とMAAのカルボキシル基の化学シフトがともに、徐々に変化し、MAA/CATが7以上ではほとんど変化しなかった。この事はポリマーの最適配合比の結果と一致したため、CAT1分子の周囲には7のMAAが配置していることが確認された。また、CATに対して架橋性モノマーであるEDMAの比を変化させても、化学シフトに変化は見られず、CATがMAAとのみ水素結合を形成していることが確認された。CATの吸着等温線をCAT-MIPとNon-MIPで測定したところ、CAT-MIPはNon-MIPよりも多くのCATを結合させる能力を有している事がわかった。また、MIPs調製時にテンプレートとして使われたCAT量から、MIPs中に存在する結合部位の数を見積もり、今回得られた最大結合量と比較すると、鋳型部位に3050%程度が結合すると考えられる。CAT-MIPの選択性評価は、CAT, Atrazine, Propazineの3種類の除草剤に対し、CAT-MIPからNon-MIPの結合量の差を比較して行ったところ、結合量は、CATが4.8%、Atrazineが1.8%、Non-MIPより多く、PropazineではNon-MIPと同等だった。従ってCAT-MIPはCATを対して特異的な結合させるが、Atrazine, Propazineは非特異的に吸着していると考えられる。天然の生体分子に代わる人工レセプターとして、人工的に分子認識能を賦与したモレキュラーインプリントポリマー(MIP)が注目されている。本研究では、分子認識にMIPを利用し、検出用トランスデューサとして電極を用い電気化学測定する測定システムを構築することを試みた。レセプターMIP調製には、鋳型としてCATを用い、機能性モノマーとしてメタクリル酸(MAA)、架橋性モノマーとしてEDMAを使用して、調製しCATおよび他のトリアジン化合物の結合特性を、CATを加えずに調製したNon-MIPと比較して調べた。まず、分子認識に関するNMR測定を、MAAのカルボキシル基、およびCATのアミノ基についてDMF,クロロホルムの両溶媒で行い比較した。その結果、クロロホルム、DMFいずれの溶媒中でも、カルボキシル基のプロトン、およびアミノ基のプロトンのケミカルシフトは、CATに対するMAAの比率が上がるにつれて一定方向に変化し、MAA/CATが7程度までは変化し続けたが、これ以上では変化が見られなくなり、7程度で両者の結合が飽和することが分かった。これは、主に水素結合によるものと言える。
ヒト胎盤絨毛細胞の機能的分化と胎盤血管系新生の調節因子に関する研究

一方、胎児仮死(hypoxia)では胎児血中のETやナトリウム利尿ペプチドであるANPおよびBNPの濃度が著しく増加していた。また胎盤組織中には極めて高濃度(23ng/gr.tissue)のETー1が存在することや、ヒト胎盤組織にはA、B両typeのET受容体が存在することも判明した。これらの結果に基づいて、trohoblast培養系を低酸素条件下で培養したり、各種濃度のETー1とETー3を添加して、hCGの産生と5ーbromoー2'ーdeoxyuridine(BrdU)の取り込みに及ぼす影響を検討した。ETー1,ETー3何れもhCGの分泌が促進され、しかも、BrdUの取り込み量も増加する成績が得られた。これは、胎盤局所においては、高濃度のETー1がcytotrophoblastの増殖とhCG、hPL分泌を促進する方向に作用している可能性が示唆している。この作用はETー1、ETー3何れでも見られたので、ETB receptorを介していると考えられる。酸素濃度5%の条件下では、trophoblastは増殖能、分泌能いずれも酸素濃度20%群より抑制された。酸素濃度10%群では、増殖は殆ど影響されないが、hCG、hPL分泌は逆に酸素濃度20%群より促進されていた。この促進効果が、上記のETおよびET受容体を介したものか否かについては、今後の検討課題であるが、妊娠中毒症を合併した母体および仮死(hypoxia)を合併した胎児の血中ETー1濃度が高値を示したこととも関連して興味深い。以上、trophoblastの増殖や機能の発現にエンドセリンが密接に関与している可能性が示された。血管内皮細胞の培養系についてはヒト臍帯静脈から採取した内皮細胞が、vimentin、cytokeratin、第VIII因子等の免疫染色からほぼ純粋な内皮細胞であると考えられ、また、機能的にも内皮細胞の特徴であるendothelinの活発な産生が認められた。一方、trophoblastに関しては、hCGやhPLなど各種染色により約6070%のpurityが得られ、また培養上清中のhCG濃度を測定したところ、6001,000mIU/mlとhCGの産生能も保たれておりtrophoblastの培養系として実験に供することが可能であると考えられた。但し、3040%は血管内皮細胞とfibroblastが存在するので、これらの細胞の培養中の増殖を抑制する必要がある。血管内皮細胞については、低酸素濃度条件下で培養すると増殖が抑制されるがtrophoblastは抑制されないことが判明し、適度の低酸素濃度条件下で培養すれば更にtrophoblastの純度を増すことが可能であると思われた。一方、fibroblastは低酸素条件下でも増殖抑制がみられなかったので、Strausらの方法を参考にして、Lーvaline(ー),Dーvaline(+)の培養液を用いたところ完全ではないがその増殖が抑制された。今後は、これらを組み合わせた培養条件下で、trophoblastの機能的分化ならびに血管内皮細胞とtrophoblastの相互作用を検討する予定である。一方、胎児仮死や胎児発育遅延症例では胎児血中のendothelinが上昇し、またナトリウム利尿ペプチドであるANPおよびBNPが著しく増加していることも明らかにした。これらの物質は胎児の循環を直接的に調節する作用だけでなく、胎盤での水分や電解質輸送を調節することによって間接的に胎児側での循環調節に寄与している可能性もある。この点を明らかにする目的で、絨毛細胞培養系を用いて、絨毛細胞に対するendothelin,ANPあるいはBNPの生理作用についても検討を加える予定である。我々はこれまでに、妊娠中毒症妊婦や胎児仮死(hypoxia)を合併した新生児の血中には、高濃度のエンドセリン(ET)やナトリウム利尿ペプタイド(ANP,BNP)が存在することを報告した。

今年度の研究では、胎盤組織中には極めて高濃度(23ng/gr.tissue)のETー1が存在することが判明した。さらに、胎盤組織膜成分を用いた標識ETー1とETー3の結合実験およびET受容体(ETR)のcDNAを用いたNorthern blot法による検討で、ヒト胎盤にはA、B面typeのET受容体が存在することを明らかにした。これらの結果に基づいて、各種濃度のETー1,ETー3存在下あるいは低酸素条件下でttohoblastを培養し、hCGの産生ならびに5ーbromoー2'ーdeoxyuridine(BrdU)の取り込みに及ぼす影響を検討した。ETー1,ETー3何れでもhCGの分泌が促進され、しかも、BrdUの取り込み量も増加した。この結果は胎盤局所においては、高濃度のETー1がcytotrophoblastの増殖とhCG分泌を促進する方向に作用している可能性を示唆してる。この作用はETー1、ETー3何れでも見られたことから、ETB receptorを介していると考えられる。酸素濃度5%の条件下では、trophoblastは増殖能、hCG分泌能いずれも酸素濃度20%群より抑制された。酸素濃度10%群では、増殖能は殆ど変わらなかったが、hCG、hPL分泌は逆に酸素濃度20%群より促進されていた。この促進効果が、上記のETおよびET受容体を介したものが否かについては、今後の検討課題であるが、妊娠中毒症を合併した母体および仮死(hypoxia)や子宮内胎児発育遅延(IUGR)を合併した胎児の血中ETー1濃度が高値を示したこととも関連して興味深い。以上のように、trophoblastの増殖や機能の発現にエンドセリンが密接に関与している可能性が示されたが、今回の研究過程で確立した胎盤血管内皮細胞の培養系は、ET以外にも成長因子など様々な生理活性物質を日泌しているので、trophoblastと内皮細胞との共培養等による検討も必要であると考えられる。
フィチン酸ナトリウム投与とZn欠乏がラット小腸粘膜フィターゼ活性に及ぼす影響

ラット小腸粘膜のフィターゼ活性は基質であるフィチン酸の投与によって低下するが、これはフィチン酸が亜鉛の吸収を阻害することにより亜鉛を必要とする酵素の活性が低下するためではないかと考え、フィチン酸投与による小腸のフィターゼ活性低下と亜鉛欠乏状態の関係について調べた。成長中ラットにフィチン酸ナトリウム添加飼料(1%および2%)、または亜鉛欠乏飼料(飼料中の亜鉛含有量は3μg/kg)を投与し、骨中亜鉛が有意に低下した亜鉛欠乏ラットを得た。ラットの小腸は上部1/3の上皮粘膜からホモジネートを調整した。粘膜ホモジネートのフィターゼ活性は、フィチン酸添加飼料を投与したラットで低下したが、亜鉛欠乏飼料を投与したラットでは活性の低下は認められなかった。そこで粘膜ホモジネート中の亜鉛含有量を測定し、小腸粘膜の亜鉛の栄養状態について調べた。さらに、アルカリフォスファターゼ活性を測定し、フィターゼ活性との相関について検討した。粘膜ホモジネート中の亜鉛含有量は、通常の飼料を与えたラットでは0.241(μg/mg Protein)であったが、フィチン酸ナトリウム添加飼料または亜鉛欠乏飼料を与えて得た亜鉛欠乏ラットでも0.2140.286となり、粘膜中の亜鉛含有量には明らかな差は認められず、骨中亜鉛が有意に低下(欠乏が一番強いものでは通常群の約30%)しても、小腸粘膜中の亜鉛含有量は保たれていることが解った。また、粘膜ホモジネートのアルカリフォスファターゼ活性でも各群間に有意な差は認められず、小腸粘膜の亜鉛含有量に差がなかったこととあわせて、フィチン酸投与によるフィターゼ活性の低下は亜鉛欠乏を介するものではないと考えられる。小腸の内容物から求めたフィチン酸の分解率は7279%で、フィターゼ活性との相関は認められなかった。ラット小腸粘膜のフィターゼ活性は基質であるフィチン酸の投与によって、適応が起こらず、逆にその活性が低下する(Shinoda&Yoshida、1990)。この原因の1つとして、フィチン酸の吸収阻害作用を受け易い亜鉛が欠乏し(事実、骨中亜鉛含有量の低下が見られる。Shinoda&Yoshida、1989)、二次的に、亜鉛を必要とする酵素の活性が低下するのではないかと考え、フィチン酸投与による小腸のフィターゼ活性低下と生体内の亜鉛欠乏状態の関係について調べた。成長中ラットに、フィチン酸ナトリウム添加飼料(1%および2%)、またはフィチン酸無添加の亜鉛欠乏飼料(飼料中亜鉛含有量3mug/kg)を3週間投与した。ラットは解剖時に右大腿骨を取り出し、体内亜鉛の栄養状態の指標として、骨中亜鉛含有量について調べたところ、1%および2%のフィチン酸添加飼料、亜鉛欠乏飼料共に、骨中亜鉛の有意な低下が確認された。さらに、これらラットの小腸上部(1/3)から上皮粘膜を採取し、ホモジネートを調製した。小腸粘膜のフィターゼ活性は、これまでに著者らが確認した結果と同様に、フィチン酸添加飼料を投与したラットで低下した。本研究の一つの目的は、このフィチン酸投与によるフィターゼ活性の低下が亜鉛欠乏の二次的結果か否かを検討することにある。しかし、亜鉛欠乏飼料を投与したラットでは、フィターゼ活性の低下は認められなかった。そこで、粘膜ホモジネート中の亜鉛含有量を測定し、小腸粘膜での亜鉛の栄養状態について調べている。さらに、アルカリフォスファターゼ活性について検討し、フィターゼ活性との相関について検討を加える予定である。ラット小腸粘膜のフィターゼ

活性は基質であるフィチン酸の投与によって低下するが、これはフィチン酸が亜鉛の吸収を阻害することにより、亜鉛を必要とする酵素の活性が低下するのではないかと考え、フィチン酸投与による小腸のフィターゼ活性低下と亜鉛欠乏状態の関係について調べた。平成5年度には、成長中ラットにフィチン酸ナトリウム添加飼料(1%および2%)、または亜鉛欠乏飼料(飼料中亜鉛含有量3μg/kg)を投与し、骨中亜鉛が有意に低下したラットを得た。ラット小腸上部(1/3)の上皮粘膜から調製したホモジネートのフィターゼ活性は、フィチン酸添加飼料を投与したラットで低下したが、亜鉛欠乏飼料を投与したラットでは活性の低下は認められなかった。そこで平成6年度は、粘膜ホモジネート中の亜鉛含有量を測定し、小腸粘膜での亜鉛の栄養状態について調べた。さらに、アルカリフォスファターゼ活性を測定し、フィターゼ活性との相関について検討した。粘膜ホモジネート中の亜鉛含有量は、通常の飼料を与えたラットで0.241(μg/mg Protein)であったが、フィチン酸ナトリウム添加飼料または亜鉛欠乏飼料を与えて得た亜鉛欠乏ラットでも0.2140.286となり、粘膜中の亜鉛含有量には明らかな差が認められず、骨中亜鉛が有意に低下(欠乏が一番強いものでは通常群の約30%)しても、小腸粘膜中の亜鉛含有量は保たれていることが解った。また、粘膜ホモジネートのアルカリフォスファターゼ活性でも各群間に有意な差は認めらず、小腸粘膜の亜鉛含有量に差がなかったこととあわせて、フィチン酸投与によるフィターゼ活性の低下は亜鉛欠乏を介すものではないと考えられる。小腸の内容物から求めたフィチン酸の分解率は7279%でフィターゼ活性との相関は認められなかった。
胎内サイトメガロウイルス感染症のハイリスク群抽出法と児の予後に関する研究

宮崎県の地域フィールドを利用して1151名の妊婦を対象に、児の神経学的予後予測を含めたサイトメガロウイルス胎内感染のハイリスク妊婦の効果的な抽出法について検討した。この結果、1151名の妊婦においてIgG抗体陽性率は、80.9%、IgG抗体陰性率は16.7%であった。IgM抗体陽性率は2.4%であり、4名に胎内感染が確認された。IgM抗体価、IgG avidity index (AI)および妊娠週数と関連では、妊娠1221週でIgM5.5以上かつAI30以下の症例で感染が成立していた。神経学的予後との関連では、この週数で、胎児超音波所見に異常を認めた症例に神経学的予後不良症例があった。さらに、胎内感染児の新生児経過と尿中ウイルス量、抗原血症およびIgG AIとの関連について検討した。この結果、抗原血症は、胎内感染の診断法としての意義は少ないが、網膜炎や肺炎を示す新生児に陽性となることがわかり、出生時のウイルス活動性を示す指標として有効であることを明らかとした。このことは、胎内CMV感染症の新生児期の治療開始基準のひとつとして抗原血症が有効である可能性を示唆したものである。また、新生児治療とIgG AIとの関連を検討した結果では、IgG AIは生後6週頃までは低下傾向を示し、その後に上昇した。IgG AIの上昇とともに、感染の再燃はみられなくなった。このことから、CMV IgG AIの上昇時期が、抗ウイルス剤を中止するひとつの目安となる可能性があると考えられる。抗原血症は、臓器移植の分野では臨床症状に先行して陽性となることから、臓器移植患者においてサイトメガロウイルス(CMV)感染症に対する治療開始の基準となっている。このことは、臓器移植の成功率をあげることにも繋がった。一方、胎内CMV感染においては、胎児・新生児では抗原血症は陽性となりにくく、診断検査法としての意義は少ないといわれている。本年度、我々は胎内CMV感染児における抗原血症の意義を明らかにした。すなわち感染児15名のうち、6名が抗原血症陽性で9名が陰性であった。抗原血症と感染児の臨床所見(胎児心拍数モニタリング・CMV網膜炎・CMV肺炎・神経学的後遺症・子宮内胎児発育遅延・上衣下嚢胞・点状出血斑・肝腫大・血小板減少・肝機能障害)との関係を検討した。その結果、CMV網膜炎、CMV肺炎、胎児心拍数モニタリング、神経学的後遺症との間に有意な相関関係があった。特にCMV網膜炎とCMV肺炎において顕著であった。このことは、抗原血症は胎内感染児において出生時のCMVの活動性と関連があることを示唆するものである。すなわち、抗原血症は、新生児治療を開始するための指標となりうる検査であることを示した。また、宮崎県地域フィールドを利用して妊婦に対してCMVIgG抗体、CMVIgM抗体測定を行った。現在のところ368人の妊婦に協力を得ている。CMVIgG抗体陽性率は86%、CMVIgM抗体陽性率は4%である。1人の妊婦に胎内感染が成立しており、この妊婦の妊娠21週でのCMVIgG24.3, IgM 6.98, avidity index 29.3%である。妊娠22週に羊水穿刺を施行し、羊水中のCMV量は1×10^8 copy/mlであった。現在も引続き宮崎県地域フィールドを利用した検討を行っている。

本年度、我々は胎内CMV感染児における抗原血症の意義を明らかにし、論文発表した。すなわち感染児15名のうち、6名が抗原血症陽性で9名が陰性であった。抗原血症と感染児の臨床所見(胎児心拍数モニタリング・CMV網膜炎・CMV肺炎・神経学的後遺症・子宮内胎児発育遅延・上衣下嚢胞・点状出血斑・肝腫大・血小板減少・肝機能障害)との関係を検討した。その結果、CMV網膜炎、CMV肺炎、胎児心拍数モニタリング、神経学的後遺症との間に有意な相関関係があった。特にCMV網膜炎とCMV肺炎において顕著であった。このことは、抗原血症は胎内感染児において出生時のCMVの活動性と関連があることを示唆するものである。すなわち、抗原血症は、新生児治療を開始するための指標となりうる検査であることを示した。
日本における間主観性の倫理学的研究

本研究の目的は、日本における倫理判断に関わる間主観的な理解の在り方を明らかにすることにある。日本の社会におけるいわゆる集団主義的特徴を、倫理学の議論のなかに指摘することができるのか、わけても応用倫理学の議論において、文化的背景によって説明される立場による相違を見いだすことができるのかが検討の対象となる。この目的のために、第一段階として、胚性幹細胞をめぐるドイツと日本における生命倫理学の関連文献をレビューすることを通じて、胎児の道徳的地位および「ヒトhuman being」と「人格person」の概念に関して、日独における異同を明らかにすることを試みた。第二段階として、この二つの概念をより広い文脈において検討した。その際に、日本の哲学界を代表する西田幾多郎と和辻哲郎の倫理学における関連概念に、わけても西田の「自我」と和辻の「人間」の概念に注目した。これらの概念に言語分析の方法によって検討を加えるとともに、社会・文化心理学の研究をも援用した。さらに、この考察の所産について、メタ倫理学の観点からも考察を加えた。日本とドイツ、それぞれにおける議論に共通することとして、人格概念を段階的に捉えようとするのを避けようとする志向を指摘することができる。ドイツにおける胎児を巡る議論では、キリスト教的文脈に、あるいはカント哲学に依拠して、その絶対的不可侵性が主張されている。日本の議論においても、カントにおける尊厳、目的と手段の概念への言及が見られるが、人間の生命の萌芽という表現もしばしば使われている。こうしたことから、ヒトと人格の関係については、両者を区別することは共通しているが、日本の議論ではその区別が和らげられていると見ることができた。(抄録なし)本研究の目的は、日本における倫理判断に関わる間主観的な理解の在り方を明らかにすることにある。この目的のために、平成24年度後半には、第一段階として、胚性幹細胞をめぐるドイツと日本における生命倫理学の関連文献をレビューすることを通じて、胎児の道徳的地位および「ヒトhuman being」と「人格person」の概念に関して、日独における異同を明らかにすることを試みた。またこれと並行して、文献研究を補うために、日本の生命倫理学の研究者に面接し、これらの概念の理解に関して意見を交換した。日独に共通することとして、人格概念を段階的に捉えようとするのを避けようとする志向を指摘することができる。こうしたことから、ヒトと人格の関係については、両者を区別することは共通しているが、日本の議論ではその区別が和らげられていると見ることができる。この研究の成果は、胎児概念については英文で、人格概念に関しては独文で論文にまとめ、公刊が進められている。文献レビューと研究者への面談は、計画通り順調に進められた。その成果を、当初は一つの論文にまとめる予定であったが、さらに一つ追加することができた。平成25年度前半においては、本研究の第二段階へ進む。これまでに明らかにしたヒトと人格の概念に関する理解を、より広い関連において検討する。その際に、西田幾多郎における自我と和辻哲郎における人間の概念について言語分析的に考察するとともに、社会・文化心理学の研究をも援用する。(抄録なし)
膵臓外分泌細胞中のミトコンドリア内膜ポテンシャルと呼吸活性

膵膜房細胞の酸素消費については、酸素電極にレコーダを接続した実験装置により、連続的に記録することができるようになった。ただし、膵腺房の酸素消費率は比較的低いために、細胞密度の高い腺房懸濁液を用いる必要があった。腺房からの酵素分泌を、高用量の刺激物質で促進したときには、酸素消費の増大が認められたが、その増大の程度は僅かであった。細胞外液へのCaイオンの過剰な添加は酸素消費に変化をもたらさなかった。また、酸素消費速度の細胞外Caイオンへの依存性については、明らかにするには至らなかった。これは、酸素消費率の変化がごく僅かであったためである。膵腺房細胞にミトコンドリア内膜のポテンシャルローブであるRhodamine123(Rh)を負荷したところ、核周囲と、核の腺腔側に蛍光が強く分布することから、ミトコンドリアがその部分に局在することが確かめられた。Rhの540nmにおける蛍光強度は、細胞外液へのハイドロサルファイト(S_2O_4)添加による低酸素処置では増大した。このことは、ミトコンドリア内膜が脱分極したこと示すが、しかし、窒素ガス通気した細胞外液による低酸素処置ではRh蛍光にほとんど変化が見られないことから、S_2O_4の直接の効果とも疑われ、検討中である。一方、酸化還元状態の指標であるNAD(P)H蛍光については、窒素ガス通気では蛍光強度は上昇したものの、S_2O_4の添加によっては蛍光強度は大きく減少し、S_2O_4の添加は低酸素処置とは矛盾した結果をもたらした。高用量の分泌刺激によってはNAD(P)H蛍光の増大が認められたが、この現象が、酸素供給不足によるものなのか、呼吸基質の酸化が促進したことによるものかは確かめられなかった。膵臓小葉を使っての蛍光プローブ負荷については、種々の条件について検討を続けているが小葉内の細胞にまで負荷することが困難であり、十分な知見を得るに至っていない。
自己表現力育成を目指す英語ライティング授業の構築：英語俳句を用いての実証研究

本研究は,日本人英語学習者が俳句を使ってどのように自己表現力を育成できるかを検証し,日本人に適した英語ライティング指導法を提案することを目的に実施された.特に本研究では,(1)日本人大学生が作成した英語俳句の言語学的特徴と感情表現のパターン,(2)俳句ライティングの可能性と限界,(3)学習者の俳句作成活動に関する見解に焦点を当てて調査を行なった.1つ目の調査では,研究参加者738名が作成した7,348個の英語俳句から言語学的特徴を調査した.結果として,英語俳句は1句につき平均13 (4-5-4) wordsで構成され,使用されている単語の90%が,英語母語話者が日常生活で使用する上位2,000語に一致していた.人称代名詞においては,1人称が最も頻繁に使われており,2人称や3人称の使用は非常に限られていた.感情表現に関しては大きく6パターンに分類され,学習者は自己表現する際,「体の部位」「色」「感情」「気温」「身体的反応」「知覚過程」を表す単語を使用することがわかった.2つ目の調査では,738名から無作為に選ばれた133名を対象にアンケートを実施した.本調査より,学習者の81.4%が俳句作成は有意義な活動であり,83.1%が俳句は興味の持てる活動であると考えていることがわかった.また,学習者は俳句作成により新たな語彙を習得でき,言語意識も高まると考えていることも明らかになった.その一方で,俳句作成が書く力の向上に役立つと考える学習者は75%にとどまった.3つ目の調査では,前調査の対象者である133名が作成したリフレクション・エッセーをコーディング手法により分析した.分析結果から,「俳句の難しさ」「英語学習への意識変化」「スキル向上」「感情表現」「振り返り」「日本語と英語の違い」の6つの主題が検出され,俳句の学習効果や学習者が俳句作成時に遭遇する問題点が明らかになった.本研究は、日本人英語学習者が英語で俳句を作成することにより、どのように自己表現力を養うことができるかを実証的に検証し、日本人に適したライティング授業を構築することを目的としている。本研究は、3つの段階から構成されており、初年度である平成27年度は、その第一段階であるデータ(英語俳句)の収集とデータの転写作業を実施した。平成23年度から27年度までに収集した約4500個の俳句の転写作業は完了したが、本格的なデータの分析(言語学的特徴・感情表現のパターン)は次年度以降に行われる。初年度は、データ収集・集計を行う一方で、これらのデータの一部を使用してパイロット研究を実施した。大学1年生164名を対象に実施したこのパイロット研究により、日本人英語学習者によって作成された俳句は、(1)平均13単語で構成されている、(2)容易な英単語が使用されている、(3)感情を表す英単語(例えば、like, hot, cold, heart)が直接的に使われている、等の言語学的特徴が明らかになった。非常に限られたデータではあるがこれらの分析結果から、日本人英語学習者によって作成された英語俳句は、「短く、直接的かつ主観的なテクスト」であると言うことができる。また、この結果より、外国語としての英語(EFL)を学ぶ日本人大学生が、俳句を作成するのに十分な英語(ライティング)力を身につけていることも明確となり、本研究の遂行可能性が非常に高くなった。本研究1年目の平成27年度は、過去5年間に被験者から収集した約4000個の俳句の転写作業を完了することができた。また、この一部のデータを使用してパイロット研究を実施した。このパイロット研究を通じて、これらの膨大なデータを統計解析ソフトできちんと分析できることを確認し、パイロット研究の分析結果を国内の学会(The 7th Liberlit Conference)で発表することができた。その一方で、研究参加辞退者が出たこともあり、当初予定していた目標数のデータを集めることができなかった。そこで、データ収集期間を1年間延長する必要があるという点で、「おおむね順調に進展している」と総合的に評価した。本研究は、日本人英語学習者が英語で俳句を作成することにより、どのように自己表現力を養うことができるかを実証的に検証し、日本人に適した英語ライティング授業を構築することを目的としている。本研究2年目の平成28年度は、データの追加収集を行う一方で、過去6年間(平成23年度ー28年度)に収集したすべての俳句の転写作業が完了した。結果として、日本人大学生638名によって作成された6328個の俳句を集めることができた。次年度以降、このデータを用いてコーパスを作成し、本格的な統計(言語学的特徴・感情表現のパターン)分析を実施する。また、今年度は転写作業が完了している一部のデータを用いて、研究初年度とは違う視点から、新たなパイロット研究を試みた。今回は、大学1年生95名を学部別(教育学部、医学部保健学科、理工学部)に分け、研究参加者が作成した俳句の中で言語学的特徴に違いが見られるかを分析した。この3グループにおいては、全体的に見てほぼ同じような傾向が見られたが、理工学部生が作成した俳句は、教育学部・保健学科の学生が作成したものに比べると、人称代名詞の使用頻度が少なかった。特に1人称(I, my, me, mine)を用いる傾向が少なかった。

また、このパイロット研究では、日本人大学生が俳句で自分の気持ちを表現する際に、体の部位を表す単語(face, eyes, hand, heart)を使用したり、色を表す単語(white, read, blue)を用いたりすることが明らかになった。本研究2年目は、データの追加収集を実施したため、約6000個の俳句の転写作業を完了するにとどまり、本格的な分析を開始することはできなかった。しかし、収集したデータを用いてコーパスを作成することができたので、今後の分析作業は円滑に進むことが予想される。また、今年度は、初年度実施の研究とは違う視点から新たなパイロット研究が実施でき、その成果報告を国際学会(IGEL 2016 Conference)・国内学会(The 8th Liberlit Conference)で発表できたので、総合的に「おおむね順調に進展している」と評価した。本研究は、日本人英語学習者が英語で俳句を作成することにより、どのように自己表現力を養っていくことができるかを実証的に検証し、最終的には日本人に適した英語ライティング指導法を構築することを目的としている。本研究3年目である平成29年度は、追加でデータ収集を行う一方で、過去6年間(平成23年度ー28年度)に収集したすべてのデータの転写作業を完了した。結果として、日本人大学生738名によって作成された7348個の英語俳句からなるコーパスを作成することに成功した。また、今年度はデータ収集・集計作業を進める一方で、転写作業が完了している一部のデータを用いて、日本人英語学習者の「感情表現のパターン」を言語学的に分析した。大学1年生95名が作成した英語俳句に注目し、研究参加者が俳句の中でどのように自分の気持ちを表現するのかを検証した。結果としては、感情表現のパターンは6種類に分類され、日本人英語学習者が自分の気持ちを表現する際、体の部位を表す単語(e.g., heart, body, hand)、色を表す単語(e.g., white, blue, red)、感情を表す単語(e.g., cheer, happy, pleasant)、気温を表す単語(e.g., hot, warm, cold)、身体的な反応を表す単語(e.g., smile, cry, laugh)、知覚過程を表す単語(e.g., feel, look, see)を使用することがわかった。特に、この研究では、日本人英語学習者は、俳句の中で体の部位を表す単語を頻繁に使用する傾向が見られた。本研究は,日本人英語学習者が俳句を使ってどのように自己表現力を育成できるかを検証し,日本人に適した英語ライティング指導法を提案することを目的に実施された.特に本研究では,(1)日本人大学生が作成した英語俳句の言語学的特徴と感情表現のパターン,(2)俳句ライティングの可能性と限界,(3)学習者の俳句作成活動に関する見解に焦点を当てて調査を行なった.1つ目の調査では,研究参加者738名が作成した7,348個の英語俳句から言語学的特徴を調査した.結果として,英語俳句は1句につき平均13 (4-5-4) wordsで構成され,使用されている単語の90%が,英語母語話者が日常生活で使用する上位2,000語に一致していた.人称代名詞においては,1人称が最も頻繁に使われており,2人称や3人称の使用は非常に限られていた.
出土資料より見た『周易』の形成に関する研究

昨年度の三回の研究報告を踏まえて、調査・考察した成果を、主に以下の二篇の論文に纏めた。1「王家臺秦墓竹簡『歸藏』の研究」2「無小と無大、善と不善-『帛書周易』二三子篇に關する考察二則」上記の論文に纏めた内容の概要は次の通りである。戰國末期以降の『周易』卦爻辭への卜辭の添附・追加は、單に注解のためだけではなかったようだ。阜場漢簡『周易』の形態は、卜に使う龜の入手困難や卜筮の普及と簡易化などの要因のために、筮が(簡便に)卜の代用にもなり得るような形態であり、より實用的な占書の形態を呈しているのかもしれない。それはいわば、卜筮併用から卜筮代用へという趨勢である。(そしてそれは、もう一つの趨勢である馬主堆帛書『周易』のような、多くの傳を附されて思想・哲學の書へと変貌する形態とは、まるっきり異なる方向である。)王家臺秦簡『歸藏』の場合は、『周易』の六十四卦の卦臺(及びその卦名)を兆形の代用としている、と考えられるのである。これも卜筮併用から卜筮代用へという趨勢を示す形態の一種と言えよう。傳本『歸藏』に惑わされなければ、秦簡『歸藏』、阜陽漢簡『周易』、帛書『周易』の卦臺・卦名はすべて同じ一つの『周易』に由來するものであると言える。秦簡『歸藏』が一見、『周易』とは異質なものに見えたのは、すでに論じたような卜筮代用の構造になっていたからである。秦簡『歸藏』も阜陽漢簡『周易』も、ひいては帛書『周易』も、そしてきっと上海博物館所蔵戰國楚簡『周易』も、現在までに確認されている『易』に関係するすべての出土資料は、同じ『周易』の流れを汲むものである。それらの出土資料は、戰國期から漢初にかけての『周易』が一方では實用的な占卜・占筮に、一方では思想・哲学にと様々な形態で利用され、決して今本『周易』の形態だけに固定していたわけではないことを物語る。けれども、その源泉は一つであると言える。今のところ、『連山』『歸藏』などの別の源泉からの流れを考える必要はない。本年度の研究実績として、主に三回の研究報告を行った。1「王家台秦簡『帰蔵』与阜陽漢簡『周易』」、周易与科学文化2001年国際学術研討会(於北京・西山飯店、2001年4月24日26日)、分組学術報告、同26日2「竹簡帛書『周易』研究」、長沙三国呉簡曁百年来簡帛発現与研究国際学術研討会(於長沙・湖南賓館、2001年8月16日19日)、分組学術交流、同17日3「簡帛易の卜辞と筮辞」、日本中国学会第五十三回大会(於福岡大学、2001年10月6日7日)、同7日上記の研究報告を通して、或いはその後の考察で、明らかになったことは次の通りである。王家台秦簡『帰蔵』の占筮の術語「枚占」は、『左伝』昭公十二年の「枚筮」に相当し、算籌で以て(数取りによって)占うという意味である(但し「謀占」の可能性もある)。なお、『左伝』哀公十七年の「枚卜」は、本来「枚占」だったものが「枚卜」と書き改められた可能性がある。「枚占」とは即ち「筮」であから、王家台秦簡『帰蔵』は先に卜を記し、後に筮を記す。それに対して、阜陽漢簡『周易』は先に筮を記し、後に卜を記す。但し、両者は、卜と筮とを説く順序は異なるが、包山楚墓出土卜筮祭祷簡に見えるような卜筮併用の伝統的慣習を襲っている点では共通している。さらに阜陽漢簡『周易』の構造の検討を進めてみると、ほぼ『史記』亀策列伝と共通する卜辞及び記述形式が、『周易』卦爻辞の下に附加されていることがわかる。この事実は、卜筮併用から発展した卜筮代用(卦画や卦爻辞が卜兆や卜辞の代用となること)の状況を示していると考えられる。次年度は、この考察の詳細を論文に纏める予定である。

戰國末期以降の『周易』卦爻辭への卜辭の添附・追加は、單に注解のためだけではなかったようだ。阜場漢簡『周易』の形態は、卜に使う龜の入手困難や卜筮の普及と簡易化などの要因のために、筮が(簡便に)卜の代用にもなり得るような形態であり、より實用的な占書の形態を呈しているのかもしれない。それはいわば、卜筮併用から卜筮代用へという趨勢である。(そしてそれは、もう一つの趨勢である馬主堆帛書『周易』のような、多くの傳を附されて思想・哲學の書へと変貌する形態とは、まるっきり異なる方向である。)王家臺秦簡『歸藏』の場合は、『周易』の六十四卦の卦臺(及びその卦名)を兆形の代用としている、と考えられるのである。これも卜筮併用から卜筮代用へという趨勢を示す形態の一種と言えよう。傳本『歸藏』に惑わされなければ、秦簡『歸藏』、阜陽漢簡『周易』、帛書『周易』の卦臺・卦名はすべて同じ一つの『周易』に由來するものであると言える。秦簡『歸藏』が一見、『周易』とは異質なものに見えたのは、すでに論じたような卜筮代用の構造になっていたからである。秦簡『歸藏』も阜陽漢簡『周易』も、ひいては帛書『周易』も、そしてきっと上海博物館所蔵戰國楚簡『周易』も、現在までに確認されている『易』に関係するすべての出土資料は、同じ『周易』の流れを汲むものである。それらの出土資料は、戰國期から漢初にかけての『周易』が一方では實用的な占卜・占筮に、一方では思想・哲学にと様々な形態で利用され、決して今本『周易』の形態だけに固定していたわけではないことを物語る。けれども、その源泉は一つであると言える。今のところ、『連山』『歸藏』などの別の源泉からの流れを考える必要はない。
慢性的エネルギー飢餓環境におけるDNA脱メチル化経路を介したがん転移機構の解明

がん原発巣におけるがん細胞のエピゲノム変化と転移との関連解明実験において、腫瘍微小環境においてがん細胞で発現誘導されるDNA脱メチル化酵素が、解糖系関連酵素遺伝子の発現誘導に関与していることを見出した。現在、DNA脱メチル化酵素をノックダウンしたがん細胞株を用いた移植実験を実施しており、がん原発巣における低酸素環境がDNA脱メチル化酵素を介したエピゲノム変化やこれに伴う細胞代謝の変化を引き起こし、がん細胞の増殖や生存に寄与している可能性を検討している。移植前のがん細胞と移植後に肺転移したがん細胞間で細胞代謝を比較したところ、肺転移したがん細胞では、解糖系が亢進していることを見出した。さらに、移植前のがん細胞に比べ移植後に肺転移したがん細胞では解糖系関連酵素遺伝子の発現が亢進していることが明らかとなった。そこで、肺転移したがん細胞における解糖系関連酵素遺伝子の発現亢進のメカニズムを検討したところ、肺転移した骨肉腫細胞ではMEK-ERK-HIF経路が活性化し、細胞代謝が解糖系にシフトしていることが明らかとなった。また、移植前のがん細胞と移植後に肺転移したがん細胞をそれぞれ経静脈的にマウスに投与し、肺におけるがん細胞の増殖を検討すると、移植前のがん細胞ではほとんど増殖が認められないのに対し、肺転移したがん細胞では肺組織における増殖が認められた。以上より、原発巣におけるがん細胞のエピゲノム変化とこれに伴う細胞代謝変化が転移したがん細胞においても記憶として維持され、その増殖や生存に寄与している可能性が示唆された。27年度が最終年度であるため、記入しない。我々はこれまでの研究成果として、低酸素や低栄養といったがん微小環境によってヒト骨肉腫細胞株SaOS2におけるDNA脱メチル化関連酵素の発現が誘導されることを明らかにした。平成26年度では、がん微小環境におけるDNA脱メチル化とヒストン修飾パターンの連関を解析する目的で、SaOS2細胞を用いた移植モデルを作製し、移植後5週目の原発巣から単離したがん細胞におけるH3K9me3やH3K27me3の脱メチル化に関わるヒストン脱メチル化酵素の発現解析を行い、低酸素や低栄養といったがん微小環境によって複数のヒストン脱メチル化酵素の発現が誘導されることを見出した。さらに、がん微小環境におけるDNA脱メチル化経路の詳細を解析する目的で、DNA脱メチル化酵素であるTETをノックダウンしたSaOS2細胞を樹立し、移植実験を開始したところである。また、現在、移植前のSaOS2細胞、低酸素・低栄養下で培養したSaOS2細胞、移植後に肺移転したSaOS2細胞のRNAサンプルを用いてRNA-seq解析を実施中である。平成26年度では、低酸素や低栄養といったがん微小環境によって、がん細胞におけるH3K9me3やH3K27me3の脱メチル化に関わる複数のヒストン脱メチル化酵素の発現が誘導されることを見出した。また、DNA脱メチル化酵素であるTETをノックダウンしたSaOS2細胞の樹立と移植実験、さらに、移植前のSaOS2細胞、低酸素・低栄養下で培養したSaOS2細胞、移植後に肺移転したSaOS2細胞のRNAサンプルを用いたRNA-seq解析などを実施しており、当初予定していた実験計画を順調に進めることができていると考えられる。TETをノックダウンしたSaOS2細胞を用いた移植実験において、原発巣における遺伝子発現解析、DNAメチル化レベル解析、がん細胞を移植した個体の生存期間を検討し、がん微小環境におけるTET依存的なDNA脱メチル化経路とがん転移との連関を明らかにする。また、平成26年度において見出した低酸素や低栄養といったがん微小環境によって発現誘導される複数のヒストン脱メチル化酵素とがん細胞における各ヒストン修飾およびDNAメチル化レベルとの連関を解析する。さらに、現在実施しているRNA-seq解析に加え、ゲノムワイドなDNAメチル化レベルの変化を解析し、がん微小環境において脱メチル化が生じるゲノム領域および当該領域の脱メチル化によって発現誘導される標的遺伝子を解明する。

同定した遺伝子については、TETノックダウン細胞を用いた移植実験サンプルにおける発現およびDNAメチル化レベル、前述の各ヒストン修飾を検討する。27年度が最終年度であるため、記入しない。