hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
書の構造分析評価に基づく書風の抽出と書法のモデリング

手書き文字,文書が与える美しさのような感覚的印象,感性情報の評価実験を試しみた。ここでは,人間の受ける直感的感覚に近い高次レベルから,文字パターン処理に基づく低次レベル評価の構造を仮定して,感性評価実験を試みた。万葉集の一首を年代,経験の異なる人たちに筆記してもらい,約50サンプルの手書き文を用意した。書き手は学生,児童から日本語が少し書ける外国人等をも含んでいる。収集した文書のうち,美しい,ていねい,稚拙,乱暴など,代表的な印象特徴をもつものを選び,検討,分析した。手書き筆跡,文書から受ける美しさのような印象的審美感が,いかなる判断基準に基づくかを明確に知るのは困難である。多くの場合,最初は文書の行並びや紙面中の文字配置具合のような文書の大域的,全体的な印象で文書の審美的質を判断する。ついで,文字個々の字形や各点画の形の好し悪しなどの局所的,部分的な特徴で判断すると考えられる。本研究では,文書の審美的判断基準として,上記で述べた判断基準を利用する。つまり,文書中の行並びや文字配置のようなマクロな大域特徴と,個々の文字字形や各点画の形状などのミクロで部分的特徴に基づく感性情報の抽出を試しみた。文書の与える全体的印象を探る為に,濃度の周辺分布特性とフーリエ直交変換を使って文書の大域的な特徴抽出を試しみた。行並びの特性は濃度周辺分布に現れ,行の乱れ方を検出できる。フーリエ変換係数のヒストグラムの幅から,濃淡のはっきりしたきれいな文書や,ぼやけて鈍い文書などの相違が検出できた。個々の文字字形や各点画形状解析を通して,角張った直線的な文字,右上がりで癖のあるものなどの特徴抽出ができることを確かめた.直感的感覚に近い高次レベルの感覚的評価との関係などは今後の課題である。
生体内糖タンパク質の構造情報を利用した糖鎖認識機構解析のための手法の開発と応用

タンパク質の糖鎖認識における詳細な相互作用情報を得るためのシミュレーション法の開発を目的として研究している.まず,高マンノース型糖鎖との親和性が異なるPGT抗体四種の結合特性データを収集した.糖鎖に結合する抗体の各複合体結晶構造(PDB:4TVP,5T3S,3TWC,3TV3)を出発構造として古典分子動力学シミュレーションを行い,複合体の構造変化を解析した.また,量子化学計算により詳細な抗体ー糖鎖間の相互作用を解析した.得られた相互作用エネルギーや結合自由エネルギーは,抗体の高マンノース型糖鎖への親和性実験結果と良い相関が見られ,さらに抗体の糖鎖認識では,水素結合だけでなく,適度な疎水相互作用を再現する分散相互作用の重要性が明らかになった.この結果を第37回日本糖質学会年会で発表し,現在学術雑誌に投稿中である.次にシアル酸含有二本鎖複合型糖鎖への親和性が異なる三種のPGT抗体の解析に着手した.この複合型糖鎖に結合するPGT抗体の結晶構造(PDB:4JY4)を参照してドッキングシミュレーションを行い,他の二つの抗体との複合体構造を得た.これを出発構造として古典分子動力学シミュレーションを行ったところ,結合自由エネルギーが親和性実験結果を定性的に再現することが明らかになり,第12回分子科学討論会にて報告した.しかし,この方法で得た複合体構造は各抗体間でばらつきが大きく,さらなる系統解析には不十分であったため,解析方法を改良した.糖タンパク質と結合するPGT抗体の結晶構造(PDB:5FYL)の20個の糖鎖の一つをシアル酸含有二本鎖複合型糖鎖に修正した後,抗体部分のみを別の抗体に置換して複合体構造を三種作成し,それぞれを出発構造にして分子動力学シミュレーションにより安定化したところ,系統解析に適した構造を作成することができた.結果を日本化学会第99春季年会で報告した.平成30年度は,当初の研究計画の通り,順調に研究が進み学会発表を行うと共に,学術論文を投稿することができた.このため,概ね順調に進展していると考える.今年度は前年度に改良した解析手法を使い,抗体の糖鎖認識機構を探求する.まず,シアル酸含有二本鎖複合型糖鎖を介して糖タンパク質に結合するPGT抗体の複合体三種におけるダイナミクスを比較解析する.原子数が16000を超える複合体の分子動力学シミュレーションを行うため,前年度に購入したGPU搭載の並列計算機を駆使して行う.シミュレーションで得られるスナップショット構造について,量子化学計算を行い,糖鎖ー抗体間の相互作用の詳細な解析を行う.解析には,抗体ー糖鎖複合体,抗体,糖鎖リガンドを個別に,溶媒効果を考慮した量子化学計算を行なって相互作用を見積もるSubsystem Analysisを適用する予定である.次に,上記解析で用いた構造の糖タンパク質部分に結合する糖鎖の型を,高マンノース型のみ,複合型のみ,複数種類の糖鎖が混在する場合に分けて,各抗体の糖鎖認識がどのように変化するのかを,分子動力学シミュレーションによって系統的に確認する.ヒト免疫不全ウィルスの外被糖タンパク質の表面を覆う糖鎖の分布には偏りがあることが明らかになっており,生体内で糖鎖が個別に特異的に認識されているのか,あるいは複数糖鎖の模様として認識されているのか,そのメカニズムは実験的にも明らかになっていないことから,抗体による複数糖鎖認識に関する解析結果は,新規糖鎖機能性分子の設計指針となる基礎的な情報となると考えている.得られた結果は,国内外の学会(国際複合糖質シンポジウム(Glyco25),日本糖質学会年会,日本化学会年会)で発表し,学術雑誌に論文を投稿する.タンパク質の糖鎖認識における詳細な相互作用情報を得るためのシミュレーション法の開発を目的として研究している.まず,高マンノース型糖鎖との親和性が異なるPGT抗体四種の結合特性データを収集した.糖鎖に結合する抗体の各複合体結晶構造(PDB:4TVP,5T3S,3TWC,3TV3)を出発構造として古典分子動力学シミュレーションを行い,複合体の構造変化を解析した.また,量子化学計算により詳細な抗体ー糖鎖間の相互作用を解析した.得られた相互作用エネルギーや結合自由エネルギーは,抗体の高マンノース型糖鎖への親和性実験結果と良い相関が見られ,さらに抗体の糖鎖認識では,水素結合だけでなく,適度な疎水相互作用を再現する分散相互作用の重要性が明らかになった.この結果を第37回日本糖質学会年会で発表し,現在学術雑誌に投稿中である.次にシアル酸含有二本鎖複合型糖鎖への親和性が異なる三種のPGT抗体の解析に着手した.この複合型糖鎖に結合するPGT抗体の結晶構造(PDB:4JY4)を参照してドッキングシミュレーションを行い,他の二つの抗体との複合体構造を得た.これを出発構造として古典分子動力学シミュレーションを行ったところ,結合自由エネルギーが親和性実験結果を定性的に再現することが明らかになり,第12回分子科学討論会にて報告した.しかし,この方法で得た複合体構造は各抗体間でばらつきが大きく,さらなる系統解析には不十分であったため,解析方法を改良した.糖タンパク質と結合するPGT抗体の結晶構造(PDB:5FYL)の20個の糖鎖の一つをシアル酸含有二本鎖複合型糖鎖に修正した後,抗体部分のみを別の抗体に置換して複合体構造を三種作成し,それぞれを出発構造にして分子動力学シミュレーションにより安定化したところ,系統解析に適した構造を作成することができた.結果を日本化学会第99春季年会で報告した.

平成30年度は,当初の研究計画の通り,順調に研究が進み学会発表を行うと共に,学術論文を投稿することができた.このため,概ね順調に進展していると考える.今年度は前年度に改良した解析手法を使い,抗体の糖鎖認識機構を探求する.まず,シアル酸含有二本鎖複合型糖鎖を介して糖タンパク質に結合するPGT抗体の複合体三種におけるダイナミクスを比較解析する.原子数が16000を超える複合体の分子動力学シミュレーションを行うため,前年度に購入したGPU搭載の並列計算機を駆使して行う.シミュレーションで得られるスナップショット構造について,量子化学計算を行い,糖鎖ー抗体間の相互作用の詳細な解析を行う.解析には,抗体ー糖鎖複合体,抗体,糖鎖リガンドを個別に,溶媒効果を考慮した量子化学計算を行なって相互作用を見積もるSubsystem Analysisを適用する予定である.次に,上記解析で用いた構造の糖タンパク質部分に結合する糖鎖の型を,高マンノース型のみ,複合型のみ,複数種類の糖鎖が混在する場合に分けて,各抗体の糖鎖認識がどのように変化するのかを,分子動力学シミュレーションによって系統的に確認する.ヒト免疫不全ウィルスの外被糖タンパク質の表面を覆う糖鎖の分布には偏りがあることが明らかになっており,生体内で糖鎖が個別に特異的に認識されているのか,あるいは複数糖鎖の模様として認識されているのか,そのメカニズムは実験的にも明らかになっていないことから,抗体による複数糖鎖認識に関する解析結果は,新規糖鎖機能性分子の設計指針となる基礎的な情報となると考えている.得られた結果は,国内外の学会(国際複合糖質シンポジウム(Glyco25),日本糖質学会年会,日本化学会年会)で発表し,学術雑誌に論文を投稿する.予算計上して購入したGPUを搭載する並列計算機が,当初予定していた金額よりも安価に手に入れることができたため,その分の物品費が剰余金となった.次年度は,この並列計算機を活用して得られる研究成果を積極的に発表するために,国際学会等に参加する予定である.そのための旅費及び,学術雑誌投稿準備のための英文校正代として使用する予定である.
自己免疫性膵炎モデルにおける全身性硬化病変の免疫学的研究

WBN/Kobラットにおける多臓器障害病変はTh1/Th2およびTregの活性化やこれらが産生するIL-4、IL-10によってIgG2bへのクラススイッチが促進されると考えられ、WBN/Kobの病態形成および進展に関与していることが示唆された。(1) WBN/Kobラットを2ヶ月令より雄性、雌性一ヶ月間隔でELISAを用いて血清学的検査を行ったところ、2ヶ月齢より高IgG2b血症、6ヶ月齢から甲状腺機能障害を認め、10ヶ月齢より肝機能障害・腎機能障害が出現した。(2)膵臓、肝臓、腎臓、甲状腺の組織を採取しHE染色を行ったところ、いずれの臓器においてもリンパ球を中心とした炎症細胞浸潤を認め、膵臓腺房細胞変性・肝門脈域線維化・腎間質線維化・甲状腺濾胞の破壊を病理組織学的に認めた。それぞれの障害臓器においては抗IgG2b抗体沈着を認め、病期によってCD8優位(Th1)からCD4優位(Th2)へと変遷していた。また後期病期においては抗B220抗体陽性B細胞浸潤も目立った。以上よりWBN/Kobラットにおける多臓器障害病変はTh1/Th2およびTregの活性化やこれらが産生するIL-4、IL-10によってIgG2bへのクラススイッチが促進されると考えられ、WBN/Kobの病態形成および進展に関与していることが示唆された。WBN/Kobラットを2ヶ月令より雄性、雌性一ヶ月間隔でELISAを用いて血清学的検査を行ったところ、2ヶ月齢より高IgG2b血症、6ヶ月齢から甲状腺機能障害を認め、10ヶ月齢より肝機能障害・腎機能障害が出現した。膵臓、肝臓、腎臓、甲状腺の組織を採取しHE染色を行ったところ、いずれの臓器においてもリンパ球を中心とした炎症細胞浸潤を認め、膵臓腺房細胞変性・肝門脈域線維化・腎間質線維化・甲状腺濾胞の破壊を病理組織学的に認めた。同時に臓器内における炎症細胞の発現マーカー(IgG2b,CD4,CD8,B220,Foxp3,icos)細胞内サイトカイン(IL-4,IL-12,IL-10,TGF-β,IFN-γ)を蛍光多重染色にて同定確認したところ、Th17について有意亢進はみられなかったが、Th1からTh2へ炎症バランスが変化しておりTregの発現も亢進していた。さらにIL-10とIgG2bの産生に正の相関が認められた。(1)WBN/Kobラットを2ヶ月令より雄性、雌性一ヶ月間隔でELISAを用いて血清学的検査を行ったところ、2ヶ月齢より高IgG2b血症、6ヶ月齢から甲状腺機能障害を認め、10ヶ月齢より肝機能障害・腎機能障害が出現した。(2)膵臓、肝臓、腎蔵、甲状腺の組織を採取しHF染色を行ったところ、いずれの臓器においてもリンパ球を中心とした炎症細胞浸潤を認め、膵臓腺房細胞変性・肝門脈域線維化・腎間質線維化・甲状腺濾胞の破壊を病理的組織学的に認めた。以上よりWBN/Kobラットにおける多臓機障害病変はTh1/Th2およびTregの活性化やこれらが産生するIL-4、IL-10によってIgG2bへのクラススイッチが促進されると考えられ、WBN/Kobの病態形成および進展に関与していることが示唆された。
古生代前期の島弧・海溝系の復元-----ゴンドワナ東縁を例に

オーストラリアは東ゴンドワナの東に位置し,古大西洋に面している.ここに形成された最初の島弧一海溝系の研究,言い換えれば,太平洋の最初のsubduction zoneの形成が本研究の課題であった.Daliziel(1992)のロディニア復元図ではオーストラリアに接していたのは北米の北西部とシベリアである.しかし,オーストラリアに接していた地塊に関する見解はあまりにも分散しすぎている.これまでの研究者の主張する古地理図に振り回されていては,ゴンドワナ東縁の成立史を追及する地帯を見失いかねない.そこで,取り敢えず,古生代前期の島弧-海溝系が知られているシベリア縁辺部とオーストラリアのそれとの比較研究を開始した.その結果,岩石化学と地帯構造論の比較研究から,800Maから600Maにかけてシベリアからオーストラリアヘmantle plumeの活動の関係した火成活動による大陸分裂が進行したと考えられることが明らかとなった.また,570-590MaにはTasman Lineの東縁で分裂が起きていること,そこには,Continental LithosphereとOceanic Litjosphereから由来したmagma形成がMt.Arrowsmith地域でみられ,その東方にはsubduction zoneが発達していたと考えられることが明らかとなってきた.このtectonic settingは現在のフィリッピン海モデルに近いものであろう.このsubduction zoneはoneanic islamd arcをともなったであろうが,その構成要素はニューイングランド褶曲帯では蛇紋岩メランジ中に散在しているに過ぎない.しかし,そこからは530Maの島弧地殻下部物質(火成活動によって溶け残った物質由来のamphibolite)が存在するらしいことがわかってきた.これは530Maへかけて島弧が進化した結果ではないかと思われる.そして,前期古生代には幾重かの島弧が発達し,原フィリッピン海とでもいうべき構造が造られた.オーストラリアは東ゴンドワナの東に位置し,古大西洋に面している.ここに形成された最初の島弧一海溝系の研究,言い換えれば,太平洋の最初のsubduction zoneの形成が本研究の課題であった.Daliziel(1992)のロディニア復元図ではオーストラリアに接していたのは北米の北西部とシベリアである.しかし,オーストラリアに接していた地塊に関する見解はあまりにも分散しすぎている.これまでの研究者の主張する古地理図に振り回されていては,ゴンドワナ東縁の成立史を追及する地帯を見失いかねない.そこで,取り敢えず,古生代前期の島弧-海溝系が知られているシベリア縁辺部とオーストラリアのそれとの比較研究を開始した.その結果,岩石化学と地帯構造論の比較研究から,800Maから600Maにかけてシベリアからオーストラリアヘmantle plumeの活動の関係した火成活動による大陸分裂が進行したと考えられることが明らかとなった.また,570-590MaにはTasman Lineの東縁で分裂が起きていること,そこには,Continental LithosphereとOceanic Litjosphereから由来したmagma形成がMt.Arrowsmith地域でみられ,その東方にはsubduction zoneが発達していたと考えられることが明らかとなってきた.このtectonic settingは現在のフィリッピン海モデルに近いものであろう.このsubduction zoneはoneanic islamd arcをともなったであろうが,その構成要素はニューイングランド褶曲帯では蛇紋岩メランジ中に散在しているに過ぎない.しかし,そこからは530Maの島弧地殻下部物質(火成活動によって溶け残った物質由来のamphibolite)が存在するらしいことがわかってきた.これは530Maへかけて島弧が進化した結果ではないかと思われる.そして,前期古生代には幾重かの島弧が発達し,原フィリッピン海とでもいうべき構造が造られた.今年度はクイーンズランド州北部のグレイ・クリーク周辺の原生代後期-古生代初期の蛇紋岩メランジ帯,クイーンズランド州中部の古生代前期以前の岩石の分布地域,ニューイングランド州の蛇紋岩メランジ帯(ニューイングランド摺曲帯およびラクラン摺曲帯)の変成岩類の産状調査を行なった.これらの採集した岩石の基礎的岩石記載を行ない,さらに一部の地域について主成分および微量元素の分析を行なった.また,Ar-Ar年代測定の準備とRb-Sr,Sn-Nd同位体の分析を開始した.このうち,ニューイングランド摺曲帯の蛇紋岩メランジ中から採集されたエクロジャイト(産地はアタンガとポート・マッコウリー)について岩石化学および鉱物化学的検討が詳しく行なわれた.ポート・マッコウリーのエクロジャイトは白雲母-藍閃石片岩中の一部のレイヤーに残っているにすぎないが,残存鉱物としてザクロ石,ローソン石,オンファス輝石などがdiscrete grainとして自雲母-藍閃石片岩中に残っていることも多いことが明らかとなった.アタンガのエクロジャイトはハンレイ岩中にいくつもの小岩片として取り込まれ,両岩相の接触部は漸移的である.ハンレイ岩中にはエクロジャイトと同組成のザクロ石,オンファス輝石を残すことがある.エクロジャイトはMORB組成であって,ハンレイ岩はエクロジャイトに似るがY含有量の少ないものから順次ボニナイトまたはバハイト組成に近いものが認められる.エクロジャイトは570Maのハンレイ岩は460MaのジルコンSHRIMP年代を示すので,原生代末期に沈み込み高圧変成作用を受けた海洋地殻が古生代初期にプリミティブな島弧のマグマ形成の場に持ち込まれたものと考えられる.

オーストラリアにおける古生代前期のGondwana超大陸東縁の島弧一海溝系の復元は,すでにCambrian-Ordovicianの年代の知られている,New England Fold Bel中の蛇紋岩メランジに産するオルドビス紀の高圧変成岩やクイーンズランド北東部の島弧火山岩の産状や周辺地質の研究を出発点として企画され,さらに古い原生代のテクトニクスとの関係へ踏み込むこととなった.それは1)蛇紋岩メランジの研究,2)Rodiniaの分裂からGondwanaの成立の研究に分けることができる.1)について:U-Pb SHRIMP年代学の詳しい再検討から,エクロジャイトの形成年代は570Maで,このエクロジャイトが部分溶融し,ハンレイ岩にとりこまれた時代が460Ma,エクエクロジャイトのプロトリスの形成年代が660Maと考えられる.Port Maoquarieのエクロジャイトは670MaのSm-Nd年代を与えた.また,古生代の初期から中期の年代(534Ma:Sm-Nd法,430Ma,340Ma:Rb-Sr法)の変火成岩ブロックの存在も明らかとなった.しかし,Ar-Ar法による火成岩年代には200-230Maの年代を与えるものがあることも明らかになった.2)について:新期原生代のエクロジャイトの存在はRodinia超大陸分裂(約700Ma)に沈み込み帯の形成を想定させる.この沈み込み帯のクラトン側にはContinental Lithospheric MantleとOceanic Lithosphereの混合したmagmasourceをもったmagmatismがあったことが,Kanmantoo褶曲帯中のMt Arrowsmith volcanicsの地球化学の研究はから明らかになった.このような島弧一縁海システムは,オーストラリアに接していた可能性のあるシベリアの周辺の褶曲帯にも認められる.シベリア・サヤン山地の原生代後期のオフィオライトの研究はこの地域も,大陸地殻と海洋地殻の混合地域での活動であることを明らかにした.今後は南北の中国のブロックとの関係を視野にいれた研究が課題となる.
日独若者語対照研究-メディアとのリンケージと語彙集編纂に向けて-

日独両言語における若者語および若者語研究の最新状況を文献調査や国際レベルでの情報収集を通してつねに把握しながら、とりわけ携帯メールのテクストに現れた若者語の特性と相違点を明らかにすることを試みた。具体的には、アンケート調査に基づく日独携帯メールテクストコーパスの作成と対照比較分析により、まず共通点として話し言葉の特性が書き言葉に浸透していく様子が観察された。他方、ドイツ語においては、文字(言語記号)中心のいわば「単線的コミュニケーション」につながる表現形態が目立つのに対して、関西方言の関東方言との偏差をも視野に入れて収集を進めた日本語の文例を分析した結果、顔文字・絵文字が頻繁に出現するほか、(疑似)方言語法、古語語法、幼児語法(ベビートーク)も現れることが分かった。これらの語法に限定するかぎり、日本語ではメールテクストにおいて日常語の「話し言葉性」からの意識的シフトが行われることがあり、ドイツ語ではそれがないものと暫定的に推論することができる。これらの特徴はひとり言語現象としてとらえることができるのみならず、言語行動のあり方の特性として把握可能であるばかりか、全角入力が基本となる日本の携帯メールで顔文字・絵文字が頻出するなど、メディアや(メディア)テクノロジーのあり方とも関連していること、それらの規制を受けていることも明らかとなった。メディアジャンルとしては、研究分担者が電子掲示板に注目して、その言語的特徴を調査したことが研究の裾野を広げるのに大いに役立った。さらに、資料として「日独若者語対照基礎語彙表」をまとめることができた。この語彙表は、日常語にまでおよぶ日独の若者語語彙の意味機能的な対応づけの試みであるとともに、収集した携帯メールテクストのコーパスとも合わせて今後の日独若者語対照研究の基礎資料として裨益するものと思われる。研究代表者は研究開始期からSchlobinski教授との情報交換を一層緊密にして,6月にはドイツのウェブサイト上に,氏との共著としてショートメール・コミュニケーションについての対照研究の成果となる論考をドイツ語で発表することができた。以後研究分担者との協議と連絡のもと若者語研究の最新の動向を把握するための文献・資料調査に重点を置く一方で,7月以降は「社会と行為から見たドイツ語」研究会において関連分野の諸研究を俯瞰し,問題提起や討論に付す機会を設けた。8月にはドイツを訪れ,Schlobinski教授やAndroutsopoulos教授との討議,問題点の整理を行った。新たにチューリヒ大のDurscheid教授とも対照研究の可能性について協議した。その後,文献・資料調査を続ける一方で,とりわけ1月には,それまでに行った日本での若者語アンケート調査(ショートメール関係)の集計を大学院生の協力のもとに行った。この資料は次年度の研究進展の土台ともなるものである。さらに,若者語の用例と意味記述,用例についてのコメントを含む簡易語彙集を大学院生の協力のもと作成し,とりわけ日本語の若者語の地域差(関西方言・関東方言)を考察する手がかりとした。語彙数は30程度にとどまったが,語彙数を増やし,精度を高めることが次年度の課題である。3月にはSchwitalla教授を日本に招待し,立教大学では「会話分析と若者語」に関する公開講演会を開催し,関西大学では「電報とショートメール」についての講演を聞く機会を設けた。後者は研究分担者との連携のもと語学コロキウムとして企画され,料理本の分析やチャットコミュニケーションに関する大学院生のドイツ語報告も行われた。この2つの催しは専門知識の提供,意見・情報交換の絶好の機会となったと同時に,若者語研究を日本人(研究者)にとってより身近なものとするきっかけにもなった。

平成16年度の全体にわたって、若者語対照研究の最前線に触れるため文献講読による知識の補給に意を注ぎつつ、日独両言語における若者語の音声的・語彙的・文法的・機能的特徴を、とりわけその類似性・共通性に注目しながら明らかにすることを試みた。また、携帯電話のメールテクストのコーパスを日独両言語について集積し、その分析を進めた。9月には海外共同研究者のP.Schlobinski教授と専門討議・意見交換を行って、ショートメールの日独比較に関する共同執筆原稿を完成させることができた。その過程で、話し言葉の特性が書き言葉に浸透していく様子が浮き彫りにされるとともに、全角入力を基本とする日本語携帯メールにおける顔文字の頻出にも見られるように、メディアテクノロジーが言語的特徴を条件づけていく機制が明らかとなった。上述のコーパスについては、とりわけ関西方言の関東方言との偏差を特定すべく、現在研究分担者とも協力して、その言語的特性抽出作業を行っている。研究分担者は、インターネットの掲示板における言語に注目し、日独での共通点と相違点の抽出を行う作業を進めている。研究代表者は2月にスイス連邦での国際若者語会議に出席し、ショートメールの日独テクストの比較対照と、そのメディア的規制についての報告を行った。あわせて、ブログをはじめとするニューメディアのありようが若者語に与える影響や話し言葉研究の一部でもある談話分析と若者語研究の交叉点についての概観を得た。以上のような一連の研究活動を生かして、日本語による若者語の基礎語彙表をも含む研究成果をまとめているところである。
間葉系幹細胞ニッチという観点から見た歯槽骨創傷治癒メカニズムの解明

創傷治癒過程において、周りの組織から遊走した幹細胞が重要な働きを担っていることが知られている。そこで我々は、抜歯窩創傷治癒部位に多くの幹細胞が集まると推測し、抜歯三日後の抜歯窩より細胞の単離し、骨髄由来間葉系幹細胞と比較検討した。その結果、抜歯窩由来細胞は、骨髄由来間葉系幹細胞と同様に骨芽細胞、脂肪細胞分化能を有している細胞群であった。また興味深いことに、抜歯窩由来細胞は歯根膜組織を再生可能な細胞群であることが、イヌ歯根膜再生モデルにおいて明らかとなった。本結果は、歯根膜組織に抜歯窩由来間葉系幹細胞のニッチが存在する可能性が示唆している。本申請書は,抜歯窩の創傷治癒をモデルに,骨再生における分子細胞生物学的幹細胞誘導メカニズムを明らかにする事を目的に計画した.平成26年度は,ビーグルイヌの小臼歯を抜歯し,抜歯3日,10日目に抜歯窩から肉芽組織を採取し,組織の細片化と酵素処理によって単一細胞を得て,コロニー形成能を指標に幹細胞を分離した.その結果,抜歯3日目の肉芽組織から十分な細胞増殖能を有した細胞が分離可能であったが,抜歯10日目の肉芽組織からは分離できなかった.次に,抜歯3日目の抜歯窩肉芽組織から分離した細胞を用い,それらの多分化能の検討した.実際には,骨芽細胞,脂肪細胞,軟骨細胞分化誘導培地にて培養した.その結果,骨髄由来間葉系幹細胞と同程度の分化能を有していることが確認できた.また,フローサイトメトリーを用い,CD34, CD45, CD14, CD44, CD90, CD271の幹細胞表面マーカーの発現について,骨髄由来間葉系幹細胞と比較検討した.その結果,抜歯窩由来間葉系細胞,骨髄由来間葉系幹細胞共に,CD34, CD45陰性,CD14, CD44, CD90, CD271陽性であり,両者に大きな差は認めなかった.また,興味深い事に,抜歯窩由来間葉系細胞は,骨髄由来間葉系幹細胞と比較し,コロニー形成能,細胞遊走能,細胞増殖能は有意に高かった.さらに,抜歯窩由来間葉系細胞をイヌの歯周病モデルに移植し,歯周組織形成能をin vivoにて検討した.現在切片を作製し,解析の準備を進めている.本申請は,抜歯窩の創傷治癒をモデルに,骨再生における分子生物学的幹細胞誘導メカニズムを明らかにする事を目的に計画した.平成26年度は,抜歯窩創傷治癒部位より幹細胞の分離に成功し,細胞の表現型を骨髄由来間葉系幹細胞と比較検討することで明らかにしてきた.平成27年度は,抜歯窩創傷治癒部位より,colony forming unit assayを用い,single細胞を単離し,細胞の表現型を解析してきた.そして,骨髄由来間葉系幹細胞と比較し,抜歯窩由来幹細胞の方が,細胞増殖能,骨芽細胞分化能が高い細胞であることが明らかとなった.また,骨髄由来間葉系幹細胞,抜歯窩由来幹細胞を骨補填材のひとつであるbeta-TCPと混和し,ヌードマウス背部皮下に移植した.その結果,両細胞群において,硬組織形成を認め,興味深いことに,抜歯窩由来幹細胞移植群において,シャーピー線維様の繊維組織が硬組織内に入り込んでいる像が観察された.更に,抜歯窩由来幹細胞をイヌ歯周病モデルに移植し,歯周組織形成能をin vivoにて検討した.その結果,細胞移植群において,セメント質,シャーピー線維様組織が再生されている像が観察された.本研究結果より,抜歯窩由来幹細胞は,骨髄由来間葉系幹細胞と同等以上の幹細胞としての性質を持ち,さらに歯周組織再生に適した細胞を有している細胞群であることが明らかとなった.創傷治癒過程において、周りの組織から遊走した幹細胞が重要な働きを担っていることが知られている。我々は既に大型動物を用いた実験系を実施しており,実際,既に細胞の単離,培養,フェノタイプの確認まで終了している.また,すでにイヌにおいて,移植モデルも実施している.然し,マウスのコンストラクト作製に少し時間を要しており,本件は来年度の課題である.そのため,研究全体としては,概ね順調に研究が進んでいると考えている.歯科補綴学来年度は,マウスモデルを構築し,幹細胞のトレッキングを実施する予定である.そのためにはPLAP-1 Cre- ERマウスのDNAコンストラクトを完成させなければならない.本件に関しては,共同研究先のNIHのMarian Young先生と綿密な計画を立て直し,実施する予定にしている.イヌ歯周病モデルはすでに構築しており,平成26年度に引き続き実施していく予定である.

実際には移植8週後に,骨形態学的(micro-CT),組織学的(HE染色,in situ hybridization法:ペリオスチン,オステオカルシン)に評価する.また,整形外科領域での応用も考え,膝関節骨軟骨欠損モデルも作製し検討する予定にしている.
タンパク質の分子内・分子間コミュニケーションによる構造転移の基礎理論

タンパク質のアロステリック転移を記述する基礎理論として、前年度に構築したカメレオンGoモデルを用いて、アデニル酸キナーゼの構造転移についてランジュバンダイナミクスによる分子動力学計算を行った。パラメータの変化による振る舞いの変化を調べたところ、適切なパラメータのもとでは二状態的な構造転移がみられ、実験と同様のbimodalな距離分布が再現できた。このときの自由エネルギーランドスケープをエネルギーとエントロピーの成分に分解すると、これら二つの成分はそれぞれ単調に変化するにもかかわらず、微妙なバランスにより途中に自由エネルギー障壁が出来ていることがわかった。このような自由エネルギー障壁のできかたはフォールディング・アンフォールディングと類似しており、興味深い。また、アデニル酸キナーゼ以外の6種類のタンパク質に対してもこのモデルを適用した計算を行ったところ、構造変化がヒンジ状のときはアデニル酸キナーゼと同様に二状態的な構造転移がみられるのに対して、構造変化がずり運動状のときは場合によりさまざまな自由エネルギーランドスケープが得られ、その結果、二状態的になる場合とならない場合があることがわかった。これらのタンパク質における構造変化の比較から、動きを大きく制限するようなコンタクトの形成が伴っているかどうかが二状態的になるかどうかを決めており、アデニル酸キナーゼのようなヒンジ状の構造変化ではより二状態的になりやすくなっているものと推測される。さらに多量体タンパク質に対しても計算が出来るようにプログラムの拡張を行い、ヘモグロビン四量体の構造転移についても予備的な計算を行った。タンパク質フォールディングの基礎理論としての郷モデルに匹敵するような、タンパク質のアロステリック転移における二状態間構造転移のダイナミクスの基礎理論の構築を目的として、タンパク質の各アミノ酸残基を代表するCα原子をビーズ状につなげてポリペプチドを表現する、いわゆるOff-Latticeモデルに基づく研究を行った。今年度は郷モデルに類似した新奇な近距離相互作用を考案し、それに基づく分子動力学計算のプログラムを実装した。同様の目的を持つモデル計算はこれまでにもいくつか行われているが、本研究におけるモデルは、相互作用するアミノ酸残基の周囲の環境の変化に連動して変化するような関数形を持つ近距離相互作用を用いることにより、リガンド結合に伴う構造変化の伝播を記述できる点が特徴的である。これにともなって1ステップあたりの計算量は増大するが、アルゴリズムの工夫により必要な計算量は5倍程度に収まっている。このモデルに基づくプログラムを用いて、比較可能な先行研究において用いられているアデニル酸キナーゼを対象として、リガンドなし・ありの2つの構造の間を移り変わる様子についての予備的な計算を行った。計算結果が安定な振る舞いを示すパラメータ範囲を調べたのち、多数の構造転移トラジェクトリの比較を行ったところ、構造転移にともなって構造が大きく変わる部分は構造全体の中では限られているが、その中でも構造転移の進行が早い構造上の部分は比較的よく定まっていることが観察された。また以上の研究と関連して、KaiCのリン酸化レベルの概日振動が生み出されるメカニズムについてジレスピーアルゴリズムに基づく確率シミュレーションを行い、KaiCの協同的なアロステリック転移と最近実験的に同定されたシャッフリングとの相乗効果により、KaiCのリン酸化レベルの概日振動が生み出されることがわかった。
多重リサンプリングを用いたモデル信頼集合の構成法の開発とその応用

確率モデルに基づいてデータから仮説を選択すること(統計的モデル選択)が広く行われている.本研究では特に多重リサンプリングという独自のアイデアを基礎に,多くの候補となるモデルについてその妥当性をデータに照らし合わせて定量的に評価し,それぞれのモデルについて確率値として表現する方法を開発している.非妥当性が有意に示されないモデルを選び出してきて列挙したものがモデル信頼集合であり,データから予想されるシナリオの一覧と解釈できる.本年度の具体的な成果はつぎのとおり.1.マルチスケールブートストラップ法をさらに発展させたマルチステップ=マルチスケールブートストラップ法について,その統計的性質をEdgeworth展開とWeyl-tube法をもちいて詳しく調べた.昨年度までにThree-stepmultiscale bootstrap法によって,指数型分布族の任意の分布関数では漸近的に3次の不偏性をもつ確率値が計算できることが確認されたが,本年度は4次の不偏性を持つための条件が一部明らかになった.2.多重リサンプリング法の有効性をコンピュータシミュレーションによって数値的に確認した.またバイオインフォマティクス(分子進化系統樹分析,マイクロアレイ分析)に応用するためのソフトウエアの開発をおこなった.このうち一部を新たに公開した.3.DNA配列データやマイクロアレイデータへ本手法を実際に応用し,その有効性も実証することができた.クラスタコンピュータによって膨大な計算が必要になるような応用をおこない,数十種の哺乳類の系統樹の推定と,遺伝子ネットワーク推定に,マルチスケールブートストラップ法を適用した.系統樹推定では,MCMC法とブートストラップ法を併用する手法を提案し実装した.遺伝子ネットワーク推定では,GGM(グラフィカルガウシアンモデル)の構造推定とその信頼性評価を行った.確率モデルに基づいてデータから仮説を選択すること(統計的モデル選択)が広く行われている.本研究では特に多重リサンプリングという独自のアイデアを基礎に,多くの候補となるモデルについてその妥当性をデータに照らし合わせて定量的に評価し,それぞれのモデルについて確率値として表現する方法を開発している.非妥当性が有意に示されないモデルを選び出してきて列挙したものがモデル信頼集合であり,データから予想されるシナリオの一覧と解釈できる.本年度の具体的な成果はつぎのとおり.1.多重リサンプリングによる確率値の計算の数理統計的な性質を,漸近展開の一種であるEdgeworth展開の手法を用いて明らかにした.数式変形が非常に複雑になることから数式処理ソフト(Mathematica)を用いた.結果として,多重リサンプリングの基本形として本研究で提案しているマルチスケールブートストラップ法が漸近的に3次の不偏性をもつ条件が明らかになった.2.マルチスケールブートストラップ法より一般的な条件で機能する多重リサンプリング法としてマルチステップ=マルチスケールブートストラップ法のアイデアを新たに得て,この数理統計的な性質をEdgeworth展開の手法で明らかにした.3.多重リサンプリング法の有効性をコンピュータシミュレーションによって数値的に一部確認した.本年度導入したクラスタコンピュータでも利用できる予備的なソフトウエアを作成した.また一部機能を特にバイオインフォマティクス(分子進化系統樹分析,マイクロアレイ分析)に応用するためのソフトウエアの開発を継続し,一般に公開した.4.統計数理研究所や東大医科学研究所などとの研究協力により,DNA配列データやマイクロアレイデータへ本手法を実際に応用し,その有効性も実証することができた.確率モデルに基づいてデータから仮説を選択すること(統計的モデル選択)が広く行われている.本研究では特に多重リサンプリングという独自のアイデアを基礎に,多くの候補となるモデルについてその妥当性をデータに照らし合わせて定量的に評価し,それぞれのモデルについて確率値として表現する方法を開発している.非妥当性が有意に示されないモデルを選び出してきて列挙したものがモデル信頼集合であり,データから予想されるシナリオの一覧と解釈できる.本年度の具体的な成果はつぎのとおり.1.マルチスケールブートストラップ法をさらに発展させたマルチステップ=マルチスケールブートストラップ法について,その統計的性質をEdgeworth展開とWeyl-tube法をもちいて詳しく調べた.昨年度までにこれを一部おこなっていたが,今年度は数学的証明のすべてのプロセスを数式処理ソフトウエア(MathematicaとMathTensor)を用いて再構築した.Three-stepmultiscale bootstrap法によって,指数型分布族の任意の分布関数において,漸近的に3次の不偏性をもつ確率値が計算できることが確認された.2.マルチステップ=マルチスケールブートストラップ法を安定させて動作させるための工夫として,リッジ回帰法を導入することを提案した.3.多重リサンプリング法の有効性をコンピュータシミュレーションによって数値的に一部確認した.またバイオインフォマティクス(分子進化系統樹分析,マイクロアレイ分析)に応用するためのソフトウエアの開発を継続した.4.DNA配列データやマイクロアレイデータへ本手法を実際に応用し,その有効性も実証することができた.本年度は特に,クラスタコンピュータによって膨大な計算が必要になるような応用をおこなった.数十種の哺乳類の系統樹の推定と,遺伝子ネットワーク推定に,マルチスケールブートストラップ法を適用した.確率モデルに基づいてデータから仮説を選択すること(統計的モデル選択)が広く行われている.本研究では特に多重リサンプリングという独自のアイデアを基礎に,多くの候補となるモデルについてその妥当性をデータに照らし合わせて定量的に評価し,それぞれのモデルについて確率値として表現する方法を開発している.非妥当性が有意に示されないモデルを選び出してきて列挙したものがモデル信頼集合であり,データから予想されるシナリオの一覧と解釈できる.本年度の具体的な成果はつぎのとおり.1.マルチスケールブートストラップ法をさらに発展させたマルチステップ=マルチスケールブートストラップ法について,その統計的性質をEdgeworth展開とWeyl-tube法をもちいて詳しく調べた.昨年度までにThree-step

multiscale bootstrap法によって,指数型分布族の任意の分布関数では漸近的に3次の不偏性をもつ確率値が計算できることが確認されたが,本年度は4次の不偏性を持つための条件が一部明らかになった.2.多重リサンプリング法の有効性をコンピュータシミュレーションによって数値的に確認した.またバイオインフォマティクス(分子進化系統樹分析,マイクロアレイ分析)に応用するためのソフトウエアの開発をおこなった.このうち一部を新たに公開した.3.DNA配列データやマイクロアレイデータへ本手法を実際に応用し,その有効性も実証することができた.クラスタコンピュータによって膨大な計算が必要になるような応用をおこない,数十種の哺乳類の系統樹の推定と,遺伝子ネットワーク推定に,マルチスケールブートストラップ法を適用した.系統樹推定では,MCMC法とブートストラップ法を併用する手法を提案し実装した.遺伝子ネットワーク推定では,GGM(グラフィカルガウシアンモデル)の構造推定とその信頼性評価を行った.
ヒト不安定粥腫類似病変を持つミニブタを用いたステント留置後合併症メカニズムの検討

LDLR-/-ミニブタに高脂肪食負荷4ヶ月後、冠動脈に冠動脈造影、血管内超音波(IVUS)で三枝冠動脈を観察したところ、動脈硬化不安定プラーク病変を確認した。薬剤溶出性ステント(DES)と生体吸収性スキャフォールド(BVS)を留置後、3ヶ月間と12ヶ月間を観察した。留置3日前から実験終了まで抗血小板薬として、アスピリンとクロピドグレルを経口投与した。ステント留置3ヶ月後、冠動脈造影では、どちらのステント留置部位にも著明な狭窄を認めなかった。IVUSで観察したところ、DESとBVSともにステントの内側に薄い新生内膜が被覆していて、血栓を認めなかった。BVSはまだ吸収されていなかった。さらに、血管内視鏡で観察したところ、どちらのステントの上にも新生内膜が被覆していて、血栓を認めなかった。病理学的解析では、DESとBVSともに平滑筋細胞が主成分とした新生内膜が形成されていて、新生内膜の中には炎症性細胞浸潤、ステントのストラット周囲のフィブリン蓄積、断片化された石灰化、泡沫状マクロファージなどが観察され、DESとBVS両群の間に新生内膜の成分は類似していた。DESとBVS両群ともに、ステント内血栓が認められなかった。ステント留置12ヶ月後、冠動脈造影では、両方のステント留置部位に軽度狭窄を認められた。IVUSで観察したところ、ステント内新規動脈硬化粥種があり、ステントの上に線維被膜と脂質コアの特徴なエコー減衰を伴う低エコー領域となっていた。血管内視鏡で観察したところ、ステントの上に凸凹や隆起がある新生内膜が観察され、血栓を認めなかった。平成30年度に、3ヶ月間観察群のミニブタ2頭は肺炎により死亡したので、進捗はやや遅れている。12ヶ月間観察群のミニブタ2頭を解剖した。さらにミニブタ2頭は4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製し、12ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置した。3ヶ月間観察群のミニブタ2頭は肺炎により死亡したので、新たにミニブタ1頭は4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製し、3ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置した。また、ミニブタ1頭は高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製している(3ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置する予定)。平成30年度に肺炎により2頭死亡したので、今後抗生剤投与などで予想外の死亡を防ぐ。また、引き続きLDLR-/-ミニブタを作製し、4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製後、DESまたはBVSを留置する。前年度と同様に、ステント留置後ミニブタを飼育しながら、経時的に採血し、冠動脈造影、IVUS、OCTと血管内視鏡を用いて留置部位のステントと血管の密着性、血管径、血管の拍動、内腔径、ステント内新規動脈硬化の量と成分、壁在血栓、血管内膜変化などを経時的に観察する。観察期間終了後、ミニブタを安楽死させ、留置部位の冠動脈を切り出し、樹脂包埋(DES留置部位)またパラフィンブロックを作成し、H&E染色、マッソン・トリクローム染色、EVG染色、また免疫染色などを用いて病理学的検討を行う。観察項目は血管面積、内腔面積、血管内皮の損傷、新規動脈硬化の面積と成分、平滑筋細胞の遊走及び増殖、栄養血管、壁在血栓、DESまたはBVSのストラット周囲のフィブリン蓄積などである。BVSの場合は、完全吸収が2年間かかるが、3ヶ月観察群と12ヶ月観察群と比較しながら、吸収サイトの組織変化などを検討する。3ケ月齢のLDLR-/-ミニブタに4ヶ月、1日1キロの高脂肪食負荷で、冠動脈プラークモデルを作製することが出来た。4ヶ月間高脂肪食負荷後、ブタ冠動脈に冠動脈造影、血管内超音波(IVUS)で三枝冠動脈を観察し、不安定プラーク病変の特徴と部位を確認した。一頭のLDLR-/-ミニブタに薬剤溶出性ステント(DES)1本、生体吸収性スキャフォールド(BVS)1本を留置した。また、血栓閉塞を予防するために、留置三日前から実験終了まで抗血小板薬として、アスピリンとクロピドグレルを経口投与した。ステント留置後の観察期間を3ヶ月、6ヶ月、また12ヶ月と設定し、冠動脈造影、OCT、IVUSと血管内視鏡を用いてステント内の血栓、血管内膜変化を定性、また定量的に観察した。実験終了後、ミニブタを安楽死させ、ステント留置部位の冠動脈と周りの組織を切り出し、樹脂包埋またパラフィンブロックを作成し、各種染色で組織病理学的に検討した。3ヶ月間観察群では、DESとBVSともに留置直後ステントと血管壁密着し、内腔の表在性血栓を認めなかった。冠動脈造影では、ステント留置部位に軽度狭窄が認められた。IVUSで観察したところ、DESとBVSともにステントの内側に新生内膜が観察され、血栓を認めなかった。解剖したところ、心筋梗塞巣を認めなかった。冠動脈を摘出後、BVS留置部位の冠動脈をパラフィン切片、DES留置部位の冠動脈を樹脂包埋切片で染色し、ステント留置後の血管反応を観察した。DESとBVSともに平滑筋細胞が主成分とした新生内膜が形成された。

新生内膜の中に炎症性細胞浸潤、ステントのストラット周囲のフィブリン蓄積、断片化された石灰化、泡沫状マクロファージなどが観察され、DESとBVS両群の間に新生内膜の成分が類似した。DESとBVS両群ともに、ステント内血栓を認められなかった。平成29年度に、8頭のLDLR-/-ミニブタを作製し、4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製した。3ヶ月間観察群の3頭の内2頭実験終了した。12ヶ月間観察群は3頭にDESまたはBVSを留置して、その内1頭を2018年4月に解剖、2頭を9月に解剖予定である。6ヶ月間観察群の3頭の内2頭は平成30年5月にDESまたはBVS留置予定であり、1頭は6月にDESまたはBVS留置予定である。LDLR-/-ミニブタに高脂肪食負荷4ヶ月後、冠動脈に冠動脈造影、血管内超音波(IVUS)で三枝冠動脈を観察したところ、動脈硬化不安定プラーク病変を確認した。薬剤溶出性ステント(DES)と生体吸収性スキャフォールド(BVS)を留置後、3ヶ月間と12ヶ月間を観察した。留置3日前から実験終了まで抗血小板薬として、アスピリンとクロピドグレルを経口投与した。ステント留置3ヶ月後、冠動脈造影では、どちらのステント留置部位にも著明な狭窄を認めなかった。IVUSで観察したところ、DESとBVSともにステントの内側に薄い新生内膜が被覆していて、血栓を認めなかった。BVSはまだ吸収されていなかった。さらに、血管内視鏡で観察したところ、どちらのステントの上にも新生内膜が被覆していて、血栓を認めなかった。病理学的解析では、DESとBVSともに平滑筋細胞が主成分とした新生内膜が形成されていて、新生内膜の中には炎症性細胞浸潤、ステントのストラット周囲のフィブリン蓄積、断片化された石灰化、泡沫状マクロファージなどが観察され、DESとBVS両群の間に新生内膜の成分は類似していた。DESとBVS両群ともに、ステント内血栓が認められなかった。ステント留置12ヶ月後、冠動脈造影では、両方のステント留置部位に軽度狭窄を認められた。IVUSで観察したところ、ステント内新規動脈硬化粥種があり、ステントの上に線維被膜と脂質コアの特徴なエコー減衰を伴う低エコー領域となっていた。血管内視鏡で観察したところ、ステントの上に凸凹や隆起がある新生内膜が観察され、血栓を認めなかった。平成30年度に、3ヶ月間観察群のミニブタ2頭は肺炎により死亡したので、進捗はやや遅れている。12ヶ月間観察群のミニブタ2頭を解剖した。さらにミニブタ2頭は4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製し、12ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置した。3ヶ月間観察群のミニブタ2頭は肺炎により死亡したので、新たにミニブタ1頭は4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製し、3ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置した。また、ミニブタ1頭は高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製している(3ヶ月間観察群としてDESまたはBVSを留置する予定)。今後、引き続きLDLR-/-ミニブタを作製し、4ヶ月間の高脂肪食負荷により冠動脈プラークモデルを作製後、DESまたはBVSを留置する。また、各血管内イメージングを用いて、経時的に冠動脈留置部位と周辺部位を観察する。また、ステント留置後に異なる環境を作るため、通常食と高脂肪食の2群に分けて観察する。高脂肪食群はステント留置前後で継続して1.5%コレステロールと15%牛脂を含む高脂肪食を与える。通常食群はステント留置後より市販の普通餌を食べさせる。
声帯におけるビタミンＡの分布と動態

2017年度に行なった超高速液体クロマトグラフィーを用いたビタミンA分画の定量のデータ追加および各タイムポイントにおけるビタミンA関連タンパク(星型細胞のマーカー、肝臓から血中に放出されたビタミンAとビタミンA輸送蛋白の複合物に対する受容体Stimulated by retinoic acid 6 (STRA6)、細胞内でのビタミンA輸送蛋白であるCellular Retinol Binding Protein 1 (CRBP1)、リポ蛋白リパーゼの局在と発現量について免疫染色およびウェスタンブロットで評価した。声帯では星型細胞に特異的に発現するとされているGFAPは星型細胞の他、声帯粘膜上皮、披裂軟骨などにも発現していた。声帯星型細胞は上記ビタミンA関連タンパクは全て発現していた。αレチノール投与後のクロマトグラフィーにてエステル型ビタミンAの声帯星型細胞への取り込みを確認していたが、今年度の研究実績にてエステル型のほか、アルコール型ビタミンAの取り込み能もあることが示唆された。αレチノールを正常ラットに投与する実験についてはほぼ終了し予定以上のペースで終了した。しかし、2019年度に予定している声帯瘢痕モデルについては手技の難易度から遅滞している。声帯瘢痕モデルに対するαレチノール投与実験および実験成果の論文発表F-344ラット(オス5週齢)65匹を対称とし、3週間ビタミンAフリーの食餌を与え欠乏させた後、αレチノール7.0μmolを経口的に単回投与した。αレチノールはビタミンA輸送タンパクであるRBP(retinol binding protein)と結合しない性質をもち、そのため、腸管での吸収直後に脂質とともにカイロミクロンによってのみ輸送され、一旦貯蔵されるとその臓器に留まり代謝される。投与の直前、投与の1,3,5,7,9、11、24、72時間後に下腿より採血し、7、72時間後には安楽死処理の後に喉頭、肝臓、腎臓、脾臓、肺を採取した。超高速液体クロマトグラフィーにてビタミンAの分画および量の定量を行った。その結果、血漿中のαレチノールは3時間後にピークとなり、その後11時間にはほぼ消失した。肝臓では7時間から72時間にかけてαレチノール濃度は増加しており、体内のビタミンAを集積し続けていた。声帯内では7時間後から7時間後にかけて著明に減少しており、腎臓、脾臓と同様にであった。分画については、声帯、肺、腎臓、脾臓では輸送型のアルコールであるαレチノールが優位であり、肝臓内では貯蔵型のエステルであるαレチノールエステルが優位であった。以上から、ラットにおいて経口的に投与されたビタミンAは3時間で血中に出現し、声帯を含む種々の臓器に分布された。声帯では貯蔵されたビタミンAはその他の臓器と比較して素早く代謝されていることが判明した。ラットへのαレチノール投与実験は終了し、平成30年度に行う予定であった超高液体クロマトグラフィーでのビタミンAの分画および量の定量は終了し、組織学的評価を残すのみとなった。引き続き今年度に行う予定の組織学的評価を行い、学会などで発表する予定である。来年度の声帯瘢痕ラットモデル作成についても具体的に計画する。声帯瘢痕モデルに対するαレチノール投与実験および実験成果の論文発表液体クロマトグラフィーの使用料が未払いであること、学会発表がまだ行われていないことから、来年度以降に残った予算を繰り越し使用する予定である。声帯瘢痕モデルの作成とその評価については遅滞しており持ち越したため