hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
痴呆性高齢者のセルフケア及びコミュニケーション能力を高める看護プログラムの開発

入浴と、社会的交流は有意差があったが(p<0.05)、整容と排尿と問題解決は、p値が0.05-0.10の間にあり、その他の食事、歩行、移乗、などには有意差は見られなかった。多数の動作要素が組み合わさった複雑な動作は痴呆高齢者が自立して行うのは困難であり、看護介護者の見守り、声賭けを必要としていた。次年度以降は、痴呆性高齢者の介入群を選定し、基本的ADLおよび、コミュニケーション能力を向上させると考えられる看護ケアを実施し、それぞれ対照群と比較してケアの効果を明らかにする。【目的】痴呆症(認知症)高齢者の潜在能力を活性化する看護ケアの方法を明らかにすることを目的とした2年目の研究として,本年度は実際の食事介助場面を観察し,認知症をもつ高齢者の食事行動の援助に関わる援助を系統的に示すことを目的とした。【方法】Y市内の介護老人保健施設痴呆棟に入所中で,食事に何らかの介助が必要な20名を観察対象とした。対象の属性は,女性17名,平均年齢86.4歳,アルツハイマー型痴呆が35%,HDS-Rは10点以下が80%であった。先行研究から食事行動要素を,開始・食物および道具の操作・咀嚼と嚥下・食事行為の持続・終了の5つとし,それぞれについて介助内容を(1)言語誘導(2)視覚誘導(3)触覚誘導(5)環境整備の5つのカテゴリーに分けて観察の枠組とし,研究者5人が実際の食事(昼食)の介助場面を観察して記録した。研究者の討議により,介助内容をカテゴリー化した。信頼性を高めるために,施設職員に意見を求め,修正を加えた。【結果】言語誘導では,予告・動作の促し・妨げの排除・強化励ましの4種の援助が,また視覚誘導では,現物提示・モデル提示・表情による強化の3種の援助が,触覚誘導では,触れる・握らせる・身体ガイドの3種の援助が行われていた。環境整備では,食物の調整・食器の単純化・食器配置の調整・その他がみられた。これらは,「認知し易い状況を設定し,知覚刺激により,手続き記憶に基づく自動的な反応を誘発すること」という援助にまとめられると考えられた。また,時間要素を考慮すると,食事介助は,「構えや導入により動作ができる限りは見守る」というサイクルをくりかえし,自力摂取が困難になった時点でスプーン介助に移行するという援助が行われていた。【結論】認知症の食事介助において,様々な援助が行われていた。このような技術をわかりやすく提示することによって,適切な看護の提供機会が増えるだろう。1.研究目的認知症高齢者の看護・介護者が、高齢者の自立維持を目指した食事援助が行えるように、食事動作の過程に沿ったアセスメント項目と食事援助のマトリックス表(食事支援表)を作成し、実際に使用して妥当性を検討することを目的とした。2.対象と方法対象は、介護老人保健施設・介護老人福祉施設の職員34名ならびに施設職員が食事援助を行っている認知症高齢者57名である。施設職員に食事支援表の記入を依頼し、記入後に支援表の内容等に関する聴き取り調査を行った。3.研究成果施設職員による評価と、施設利用者を対象に試行した結果に基づき、食事支援表を修正した。施設職員による評価から、より具体的な状況を想起しやすい表現に修正した。施設利用者に実施した食事支援表の結果から、項目を追加し、表現を修正した。また、支援表の記入に慣れていない施設職員でも記載しやすい表にするため、全体的な構成についても検討し、修正を行い、改訂版を作成した。本研究で修正した表を再度試行し、項目の内容や表現についてさらに検討する必要がある。
ファジィ制御を用いた三本ロール曲げ加工機の知能化の開発

制御FEMシミュレーションによりロール移動軌跡の決定法:有限要素法シミュレーションに制御方法を導入し,各変形ステップにおいて計算結果をモニタリングしながら加工条件を決定する方法を提案した.この方法用いて三本ロール曲げ加工におけるロールの動きを決定することを試みした.制御方法としては,ファジィ推論を利用している.ファジィルールは有限要素法シミュレーションの結果により最適化している.CCDカメラにより加工中における板材の曲率分布の測定:CCDカメラにより加工中の板材の形状を撮影し,画像ボードを通じて数値化し,コンピュータにより画像処理を行い板材のエッジを検出する.検出された板材のエッジを用いて最小二乗法により近似する.そして,近似された曲線から板材の曲率分布を求める.求めた曲率分布を利用してロールの動きを制御する.三本ロール曲げ加工におけるロールの動きの制御:制御FEMシミュレーションによって求めたロールの動きで加工し,曲げられた板材の曲率分布をCCDカメラにより測定し,目標曲率との差を求めてロールの動きを修正する.修正では,微少のロール動きを与えてに対する曲げられた板材の曲率変化量の比を求め,この比でロールの動きを修正する.この方法を用いて,均一な曲率分布または不均一曲率分布を持つ製品を加工するためのロールの動きを決定した.目標形状によく近づく結果が得られた.制御FEMシミュレーションによりロール移動軌跡の決定法:有限要素法シミュレーションに制御方法を導入し,各変形ステップにおいて計算結果をモニタリングしながら加工条件を決定する方法を提案した.この方法用いて三本ロール曲げ加工におけるロールの動きを決定することを試みした.制御方法としては,ファジィ推論を利用している.ファジィルールは有限要素法シミュレーションの結果により最適化している.CCDカメラにより加工中における板材の曲率分布の測定:CCDカメラにより加工中の板材の形状を撮影し,画像ボードを通じて数値化し,コンピュータにより画像処理を行い板材のエッジを検出する.検出された板材のエッジを用いて最小二乗法により近似する.そして,近似された曲線から板材の曲率分布を求める.求めた曲率分布を利用してロールの動きを制御する.三本ロール曲げ加工におけるロールの動きの制御:制御FEMシミュレーションによって求めたロールの動きで加工し,曲げられた板材の曲率分布をCCDカメラにより測定し,目標曲率との差を求めてロールの動きを修正する.修正では,微少のロール動きを与えてに対する曲げられた板材の曲率変化量の比を求め,この比でロールの動きを修正する.この方法を用いて,均一な曲率分布または不均一曲率分布を持つ製品を加工するためのロールの動きを決定した.目標形状によく近づく結果が得られた.
フランス第二帝政期における修道院寄宿学校の盛衰と女子教育の変容

本研究の目的は、現代における教育と宗教の結びつきがまねく諸問題及び教育の行く末を探るにあたって、修道院寄宿学校が中心を占めていたフランスの女子教育を事例に、宗教と教育の関係性を考察することである。そこで本年度はまず、修道院寄宿学校における「競争」と「試験」の機能に着目した。その結果、修道院寄宿学校では「競争」を積極的に奨励し、生徒たちの学力の発達だけでなく、精神面の涵養も強く意識していたことがわかった。さらに「試験」については賞罰が体系化されており、頻繁な褒賞は「試験」と「競争」を補強し合う作用を有していたことが指摘できる。しかしその一方で、男子のための学校であったリセやコレージュとは異なり、修道院寄宿学校の「試験」と「競争」は淘汰や選出を意味するものではなかったことも明らかになった。次に、本年度は修道院寄宿学校で教育を受けた当事者たちによる学校へのまなざしを明らかにするために、フランス国立図書館所蔵の日記の分析を行った。主として第二帝政期に教育を受けた娘たちの日記からは、修道院寄宿学校側の史料では曖昧であった生徒の年齢層や在籍の様子を補足することができた。修道院寄宿学校で学んだ生徒たちは、卒業後も黙想会などで学校を訪れることで学校との交流を保ち、あるいは卒業後も学校に残り修道女を目指すなど、卒業後の生徒たちと学校の関わりも詳らかになった。またこれらの日記の記述からは、修道院寄宿学校が生徒たちの宗教心を涵養することで、修道女が増加するという第二帝政期のカトリック教会における現象の一端を担っていたことが窺われた。しかしその一方で、これら日記が聖職者や修道女また修道院寄宿学校から出版されたものが少なくなく、生徒たちの日記を広く出版することで、学校の広報を担うという側面も明らかになった。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、従来のフランス女子教育史研究において修道院寄宿学校の存在が看過され、第二帝政期の女子教育史研究は充分に行なわれていない状況を重視し、修道院寄宿学校への関心を阻んできた史料的制約を克服することを試みた。そこでまず、1860年に発行されたウルスラ会の『規則集』と、1852年に発行された聖心会の『学習計画』の分析を行った。女子修道院寄宿学校では宗教が教育の根幹にあり、そのことによって教科に制限がされ、男子教育とは大きく異なっていた。だが、修道院寄宿学校側にとっての知育は、即ち男子教育と同じものを意味していたわけではなく、女子教育にとっての知育は、宗教教育を根幹に据え、宗教的題材を用いてあらゆる科目を教えることが知育であり、宗教教育そのものが知育の役割を担うものであったことが明らかになった。次に、フランスの女子教育が公教育化される以前の第二帝政期における皇后ウージェニーと公教育大臣ヴィクトール・デュリュイによる女子教育の試みについて考察を行った。フランスの女子教育にとって、第二帝政期は女子教育の公教育化へとつながる重要な時期であるが、女子教育の最大の支援者であった皇后ウージェニーに着目し、女子中等教育講座の開設と女子医学校設立案という二つの女子教育の試みを検討した。その結果、以下のことが明らかになった。デュリュイは女子教育の改革として「講座」を開設し、ウージェニーの支援を得ながら女子教育の世俗化に取り組んだ。さらに、ウージェニー自身の提案による女子医学校設立の計画は、女性高等教育への接続を可能にする試みであり、これらはいずれも公教育化への一歩を示すものであったといえる。第二帝政期、さらに第三共和政期以降における女子教育の種々の発展にはデュリュイとウージェニーの作用が不可欠であり、第三共和政期の女子公教育化への流れを形作るものであったと位置づけられる。本研究が目指すのは、「1.修道院寄宿学校での女子教育のあり方はいかなるものであったか。2.修道院寄宿学校での女子教育が女子公教育へのいかなる影響を及ぼしたのか。3.19世紀フランスの女子教育の例にみる宗教が教育を担うことの意味。」という3点を明らかにすることである。従来のフランス女子教育史研究の多くは主として制度史研究であり、女子教育の実態及び「私」から「公」への変遷を論じた研究活動が活発であるとは言いがたく、19世紀の女子教育の中心であった修道院寄宿学校という制度に目を向けると、その存在に焦点をあてた研究例はほとんど見受けられない問題がある。特に、修道院寄宿学校の存在は看過され、第二帝政期の女子教育史研究は充分に行なわれていないが、本年度はこれら諸問題を克服し、研究課題について計画通りに取り組むことができた。具体的には、世界的な組織である女子修道会アーキビスト連盟に所属するシスターたちと定期的に連絡をとることで、貴重な修道会内部史料を入手し、修道院寄宿学校での女子教育のあり方について考察を行った。また、私的領域にて行なわれるべきとされた女子教育が公教育化によって教会の手から離れたことは、間違いなくフランス女子教育史における最も重要な変化であるが、この転換点について従来のデュリュイとその「講座」を中心とした考察ではなく、皇后ウージェニーにも焦点をあてることで、女子高等教育にも及ぶ幅広い議論を明らかにした。そのことによって、第三共和政期の女子公教育化への流れを明確に示し、修道院寄宿学校での女子教育の女子公教育化への影響を明らかにすることができたと考える。

本研究の目的は、現代における教育と宗教の結びつきがまねく諸問題及び教育の行く末を探るにあたって、修道院寄宿学校が中心を占めていたフランスの女子教育を事例に、宗教と教育の関係性を考察することである。そこで本年度はまず、修道院寄宿学校における「競争」と「試験」の機能に着目した。その結果、修道院寄宿学校では「競争」を積極的に奨励し、生徒たちの学力の発達だけでなく、精神面の涵養も強く意識していたことがわかった。さらに「試験」については賞罰が体系化されており、頻繁な褒賞は「試験」と「競争」を補強し合う作用を有していたことが指摘できる。しかしその一方で、男子のための学校であったリセやコレージュとは異なり、修道院寄宿学校の「試験」と「競争」は淘汰や選出を意味するものではなかったことも明らかになった。次に、本年度は修道院寄宿学校で教育を受けた当事者たちによる学校へのまなざしを明らかにするために、フランス国立図書館所蔵の日記の分析を行った。主として第二帝政期に教育を受けた娘たちの日記からは、修道院寄宿学校側の史料では曖昧であった生徒の年齢層や在籍の様子を補足することができた。修道院寄宿学校で学んだ生徒たちは、卒業後も黙想会などで学校を訪れることで学校との交流を保ち、あるいは卒業後も学校に残り修道女を目指すなど、卒業後の生徒たちと学校の関わりも詳らかになった。またこれらの日記の記述からは、修道院寄宿学校が生徒たちの宗教心を涵養することで、修道女が増加するという第二帝政期のカトリック教会における現象の一端を担っていたことが窺われた。しかしその一方で、これら日記が聖職者や修道女また修道院寄宿学校から出版されたものが少なくなく、生徒たちの日記を広く出版することで、学校の広報を担うという側面も明らかになった。今後の研究においても、第二帝政期の修道院寄宿学校の盛衰に着目しながら、第三共和政期へ女子教育が変容していく様を解明することを目的とする。第二帝政期には女子教育に関して特筆すべき法整備はなされていないが、女子教育をめぐる議論が交わされ、女子教育が私的領域から抜け出す変化をみせていった時期である。女子教育が私的領域を離れるという変化はその後の女子教育システムの整備に密接な関わりを持つものであり、種々の貴重な一次史料を用いてこの女子教育の変容を解明するのが本研究の最終目的である。そこで今後は、修道院寄宿学校の様相及び第二帝政期における立ち位置を明確にした上で、女子教育の変容を明確にするために、第三共和政下での女子教育の公教育化によって誕生する女子リセ、コレージュとの比較作業を試みる。そのために、フランス再度調査に行き、パリ国立公文書館、および国会図書館で史料の補填を行う。方法としては、女子教育の詳細な法整備を辿る他に、第三共和政が制定した教育カリキュラムの考察を行う。特に「宗教」の授業の代わりに登場した「道徳」の授業に注目し、その教科方法、教科書などを分析することで、女子教育と宗教の関係性を考察し、公教育に対する修道院寄宿学校の影響力を明らかにする。そうすることで、今まで欠落していた第二帝政期における女子教育に関する体系的な研究が完成すると思われる。研究の結果得られた知見を学会で発表し、論文にまとめる。28年度が最終年度であるため、記入しない。
環境条件によって重み付けされた距離に基づく迷惑施設の最適配置問題に関する研究

本研究の目的は、清掃工場や下水処理施設などのように、通常,周辺住民から好まれない施設<迷惑施設>を対象として、施設と住民の距離のみならず、自然・社会環境条件を考慮した配置問題の新たな解法を考案することである。研究過程としては,まず、迷惑施設に関する様々な情報を文献・新聞などの資料から抽出し、整理した。次に、最適化の目的関数によって迷惑施設の配置問題を類型化し,その定式化を行った.すなわち,(1)迷惑の総量を最小化する間題;居住地や環境保全地域と施設との距離の総和を最大化する問題,(2)最も迷惑を蒙る住民・地域を救済する問題;施設から最近隣の住民・地域までの距離を最大化する問題,(3)住民が蒙る迷惑の量を公平にする問題;住民と施設との距離の差,あるいはその平均値との差の総和を最小化する問題,である.さらに,これらに加えて,(4)環境条件を考慮した配置問題;大気汚染・電波障害などの被害を最小化する問題について定式化した.そこで,それぞれの目的関数自体に対する重み付けをパラメータとし,その総和によって最適な施設の位置を総合的に決定する方法を考案した.その具体的な適用事例として,東京都目黒区における清掃工場の配置問題を取り上げ,理論上の最適地と,かつて候補地として挙げられた場所,現状の場所との適性度を比較・評価し,考察を行った.本研究の目的は、清掃工場や下水処理施設などのように、通常,周辺住民から好まれない施設<迷惑施設>を対象として、施設と住民の距離のみならず、自然・社会環境条件を考慮した配置問題の新たな解法を考案することである。次に、最適化の目的関数によって迷惑施設の配置問題を類型化し,その定式化を行った.すなわち,(1)迷惑の総量を最小化する間題;居住地や環境保全地域と施設との距離の総和を最大化する問題,(2)最も迷惑を蒙る住民・地域を救済する問題;施設から最近隣の住民・地域までの距離を最大化する問題,(3)住民が蒙る迷惑の量を公平にする問題;住民と施設との距離の差,あるいはその平均値との差の総和を最小化する問題,である.さらに,これらに加えて,(4)環境条件を考慮した配置問題;大気汚染・電波障害などの被害を最小化する問題について定式化した.そこで,それぞれの目的関数自体に対する重み付けをパラメータとし,その総和によって最適な施設の位置を総合的に決定する方法を考案した.その具体的な適用事例として,東京都目黒区における清掃工場の配置問題を取り上げ,理論上の最適地と,かつて候補地として挙げられた場所,現状の場所との適性度を比較・評価し,考察を行った.本研究の目的は、ゴミ処理場や下水処理施設などのように、一般に周辺住民から好まれない施設(迷惑施設)を対象として、施設と住民の距離のみならず、自然・社会環境に基づく距離に対しても重み付けをした配置問題の新たな解法を考案することである。本年度は、まず、施設の必要性は認めるが自分の身の回りには設置してほしくないという、いわゆるNIMBY(Not In My Backyard)と呼ばれる迷惑施設に関する情報を文献・新聞などの資料から抽出し、用途・規模・問題点等の基本的なデータを整理した。次に、迷惑施設の配置問題を定式化するために、施設と住民の距離と忌避される度合いを表現する関数型をいくつか設定し、施設立地に影響を与える地形・気象条件などの非等方的な距離や歴史的・生態的な保全地域からの距離などに対しての重み付けの方法について考究した。目的関数に関しては、居住地や保全地域から迷惑施設までの重み付けされた距離の総和を最大にする関数(迷惑の総量を地域全体として最小化するWeber問題)と、施設に最も近い住民からの距離を最大にする関数(最大の被害者を救済するMAXMIN問題)、そして、周辺住民からの距離の平均値とその差の総和を最小にする関数(蒙る迷惑の量を公平にする問題)の、3種類を取り上げた。それぞれの配置問題の基本的な性質を把握するために、線分上あるいは平面上における簡単な施設配置モデルを対象として、目的関数と制約条件を変えながら、あるいは、隣接する区域で施設を統合した場合や、迷惑施設と快適施設を併設した場合などについて、最適化のシミュレーションを行った。その際、適性度を等値線として表現することに主眼を置き、候補地選定のための有効な表現方法となるように工夫を施した。また、パソコン上でも短時間に解けるようにアルゴリズムの効率化を図った。本年度はまず,配置問題の最も基本的な指標である距離について,ユークリッド距離・マンハッタン距離・放射環状距離を対象として,領域内における2点間の平均距離の計量的特性を比較した.次に,迷惑施設を領域内に一箇所設けるという条件のもとで,前年度3つに類型化した最適化問題を「反撥型」と「公平型」の2種類に集約し,最適地の解析的な導出やシミュレーションを行い,再度検討を加えた.その結果,一様かつ桐密に人口が分布する領域内においては,反撥型(住民と迷惑施設との距離の和または積を最大化する問題)においては最適地が領域の縁辺になるのに対して,公平型(住民と迷惑施設との距離の差の総和または平均距離との差の総和を最小化する問題)においては最適地が領域の中央部(Gimi指標の場合は中央部と縁辺付近)になることが確認された.

つまり,選択する目的関数によって全く相反する最適地が得られることがあり,迷惑施設の最適配置問題は,どの目的関数を選択し,また重視するかという問題に帰着することがわかった.そこで,それぞれの目的関数自体に対する重み付けをパラメータとし,その総和によって最適地を総合的に決定する方法を採用した.その具体的な適用事例として,東京都目黒区における清掃工場の配置問題を取り上げた.人口分布を基礎データとし,ユークリッド距離に基づいた目的関数(反撥型と公平型)に加え,環境条件を考慮した目的関数として,気象条件を加味した大気汚染,電波障害の被害の量,小学校・専用住宅地・文京地区などの保全地域や区外部に対する影響量,幹線道路からの利便性などを組み入れた.区内における任意の地点の適性度は,視覚的に理解可能なように等値線図として表現し,重み付けのパラメータの値を変えながら最適地のシミュレーションを行い,理論上の最適地,かつて候補地として挙げられた3地点,そして現状の場所の適性度を比較・評価した.
試験管内「血液脳関門」モデルの作製と新しい脳特異的輸送担体開発の試み

(1)試験管内「血液脳関門」モデルの作製に成功した。すなわち、周皮細胞、星状グリア細胞のフィーダー層上で血管内皮細胞を共存培養すると、多価陽イオン化アルブミンは取り込み天然型アルブミンやイヌリンは排除するという脳血管に選択的な物質透過能が本来の極性通りに再構成された。本モデルは今後中枢神経作用性物質の開発や脳内デリバリー検定上有用と考えられる。本研究ではまた、星状グリア細胞が非脳型内皮を脳型に「トランス分化」させうることが立証された。すなわち、星状グリア細胞と共存培養したヒト臍静脈内皮細胞でγ-glutamyl transpeptidase、transferrin receptor、P糖タンパク質などの脳血管内皮特異的遺伝子の発現やイヌリンに対するbarrier能が誘導された。さらに、本研究遂行の過程で山本らは、(2)後期糖化生成物(advanced glycation endproducts,AGE)がAGEレセプターとの結合を介して周皮細胞を選択的に傷害することを見い出し、糖尿病性細小血管症発症の新機序を提唱するとともに、(3)内皮細胞と血管平滑筋細胞が血圧調節に関係するステロイドであるアルドステロンの生成系と反応系を合わせもつこと、(4)低酸素下での血管細胞の増殖誘導は血管内皮増殖因子(vascular endothelial growth factor)のオートクリン作用を介することを発見し、高血圧症や血管新生の発生や進展のしくみに関する新しい考え方を提唱した。1.血液脳関門アッセイの基質として、多価陽イオン化したウシ血清アルブミンを精製後、NaB[ ^3H]_4を用いた還元法により^3H標識し、比活性0.25μCi/μgの標品を得た。2.ヒトおよびラット胎児脳から星状グリア細胞を初代培養した。初代培養細胞はglial fibrillary acidic protein陽性・A2B5陰性で脳血管内皮に隣接するI型星状細胞の特性を保持していた。3.ヒト剖検脳、スナネズミ、ラットおよびウシ脳から脳血管内皮細胞を培養化した。初代培養細胞はγ-グルタミルトランスフェラーゼ・vonWillebrand因子・アセチル化LDL取り込み陽性で脳血管内皮細胞の特性を保持していた。脳血管内皮細胞と星状グリア細胞とを"Snapwell"膜を挟んで重層培養した。4."Snapwell"拡散チェインバーに注入した[^3H]多価陽イオン化アルブミンと[^<14>C]アルブミンの移行度測定からは、しかし、内皮細胞と星状細胞とでは十分な関門形成に至らないものと推定された。5.そこで、細小血管を構成するもうひとつの細胞種である血管周波細胞をウシ網膜から分離し、内皮細胞との相互作用を調べた結果、周波細胞は内皮細胞の増殖を制御するのみならず、内皮細胞の特異機能であるプロスタサイクリン合成能を保持し、過酸化脂質による内皮傷害をも防止するという新知見を得た。したがって、血液脳関門機能の再構成にも血管周皮細胞の共存を必要とする可能性が考えられた。1.金子らにより調製された〔^3H〕標識多価陽イオン化アルブミンは血液脳関門アッセイ基質として有効に働き、脳血管内皮細胞層を選択的に透過した。2.〔^<14>C〕標識非修飾アルブミンに対するbarrier効果は、血管内皮細胞、血管周皮細胞、星状グリア細胞の三種の細胞を用いた場合に最大であった。3.Co-culture用メンブレンとしては3μm孔径のポリカーボネートフィルターが最良で、内皮細胞がbarrierとして働くためには血管周皮細胞、星状グリア細胞との物理的接触が必要であった。4.作製した「血液脳関門」モデルは生体内と同一の極性を示した。5.なお、本研究の経過中、ヒト動脈内皮細胞・平滑筋細胞がアルドステロン合成

酵素遺伝子を、平滑筋細胞がミネラルコルチコイドレセプター遺伝子を発現しており、アルドステロン拮抗剤がアンジオテンシンIIによる平滑筋細胞の肥厚を抑制しうることが発見された。これは、血管細胞自体がステロイドの生合成系と反応系とを合わせもつことをはじめて明らかにしたものであり、局所で産生されるアルドステロンがレニン-アンジオテンシン系と共役して血管のtonus調節や高血圧症の発症に関わっている可能性を示している。1.星状グリア細胞が血管内皮細胞を脳型に「トランス分化」させることが見い出された。すなわち、初代培養ラット胎児脳星状グリア細胞のフィーダー層でヒト臍静脈内皮細胞を培養すると、γ-glutamyl transpeptidase、transferrin receptor、P糖タンパク質といった脳血管内皮特異形質が誘導され、[^3H]イヌリンに対する「血液脳関門」脳も獲得された。2.これらの脳血管内皮特異形質の発現は、星状グリア細胞が産生する細胞外マトリックスタンパク質と分泌性タンパク質を介し、遺伝子の転写レベルで誘導されることが明らかにされた。3.ヒト肺動脈内皮細胞と平滑筋細胞でI型ミネラルコルチコイドレセプターをコードするmRNAが検出され、また、alternative splicingの結果生じたと推定される新しいミネラルコルチコイドレセプターmRNA分子種も発見された。さらに、アンジオテンシンIIによる血管平滑筋細胞の肥厚が、アルドステロンで増強され、I型ミネラルコルチコイドレセプターの特異的拮抗剤であるZK91587で抑制されることが見い出された。これらの知見から山本らは、「血管アルドステロン」が実際血管局所で機能し、血管壁の再構築や高血圧症の発症に関係している可能性を提唱した。
極性相互作用によって発現するポリシランの新規物性

ヒドロシリル化反応あるいはグリニヤール反応によりCl(RSi-R')Cl[ここでRまたはR'はアルキル、アリール、または次のようなエーテル性置換基[-(CH_2)_3-O-(CH_2CH_2O)_m-R,m=0-3,-(CH_2)_3-O-Ph,-(CH_2)_4-O-C_3H_7,-(CH_2)_5-O-C_2H_5,and-(CH_2)_6-O-CH_3]を合成し、これをナトリウムで縮合して対応する新規な極性ポリシランを合成した。殆どが極性を持ちTHF、アセトニトリル、アルコール類などの極性溶媒に可用性となり、これまで知られていなかった溶媒の極性に依存するUVスペクトル変化(ソルバトクロミズム)を示すことを明らかにした。特にオリゴエーテル基を持つポリシラン類は水溶性となり、水素結合を形成してこれまで知られていないソルバトクロミズムを示すことが解った。また、これらのポリシランは側鎖部でLiClO_4と錯体を形成する。固体状態で温度を低下させると、Li/Si比が小さな時には連続的な長波長シフトを、Li/Si比が大きな時は短波長シフトを示す(イオノクロミズム)。ポリ{ビス(4-プロポキシ)シラン}は水素結合を形成すると、その程度に応じた非連続的なスペクトルシフトを示す。サーモクロミズム挙動との比較によりこの変化は側鎖部のバルキーさが増大した結果、サーモクロミズム転移が固体状態の転移以上の室温にまで上昇した事に起因する事が解った。サーモクロミズムとソルバトクロミズムの比較検討をした結果、これまでに確立されたと思われていたポリジアルキルシランのサーモクロミズム現象には熱力学的な安定性だけでなく速度論的な準安定状態が多数あり、冷却速度を変化させることによって低温でのコンフォーメーションを制御できることも明らかにした。側鎖にオリゴエチレンオキシドを導入したポリシラン[{R-Si-(CH2)m-(OCH2CH2)n-OCH3}x,R=Me,Et,Bu,n=0,1,2,3],は極性が強くなり,アルコールだけでなく水にも溶解する.主鎖のシグマ電子の非局在化に起因するUV吸収スペクトルは,溶媒の影響を大きく受け水中の300nmから(CF3)2CHOH中の325nm間での変化を示した.ケイ素原子上に同じ側鎖を持つ[Si-{(CH2)m-O-R}2]x,[Si-{(CH2)m-O-(CH2CH2)-O-R}2]x型(R=アルキル基)のポリシランについても溶媒効果の検討を進め,前者が(CF3)2CHOHによりサーモクロミズムに対応したソルパトクロミズムを示すのに対して,後者は全くシフトを示さないことが明らかになった.同様に[Si-{(CH2)3-O-C6H5}2]x,[{CH3-Si-(CH2)3-O-C6H5}xを合成してその溶媒効果を調べた結果,共にスペクトルシフトを示さないことが明らかになった.さらに,(CF3)2CHOHを含む溶液へのサーモクロミズム変化は顕著でなく,[Si-{(CH2)m-O-R}2]x系でのサーモクロミズムとソルバトクロミズムが,非常に特殊なものであることが明らかになった.[{

R-Si-(CH2)m-(OCH2CH2)n-OCH3]x系ポリシランの熱,溶媒以外のエネルギー環境の変化に呼応するスペクトル変化を探る目的で,これまで殆どなされたことのない磁場の影響を調べた.吸収極大の位置は,磁界の変化に応じた変化は示さないが,吸収強度の磁場変化に応じて増減したが,その吸収強度の変化は遅く,磁場の変化に対して直ちに追随せず時間的遅れを示すことを明らかにした.上記極性ポリシランはSQUIDによる磁化率の測定により反磁性を示すことが明らかになり,磁界に対して主鎖が垂直に並ぶように振る舞うため上記の磁場応答性が出たものと考えた.昨年に引き続きエーテル性側鎖を有するポリシランを合成し,主にサーモクロミズムとソルバトクロミズム挙動を詳細に検討した.側鎖のエーテル性酸素と主鎖ケイ素原子間をメチレン鎖長を代えて調節した水溶性ポリシランのサーモクロミズム挙動は,メチレン鎖長に無関係に,溶液中においては温度の低下に伴い連続的なレッドシフトを示す.また,すべての水溶性ポリシランは上記メチレン鎖長の違いに無関係に,180Kにおいては322nmに吸収極大を示す.SiSiあたりのモル吸光係数も小さく,水溶液中だけでなくアルコール,THF中においても糸毬状の形態をとっていることが明らかになった.より広範な取り巻く環境との相互作用によるクロミズム現象が期待できるので,メチレン鎖長の異なるポリジアルキルシランを用いて媒体の粘度,誘電率の効果を調べている.側鎖にオリゴエチレンオキシドを導入したポリシラン[{R-Si-(CH_2)_m-(OCH_2CH_2)_n-OCH_3}_x,R=Me,Et,Bu,n=0,1,2,3],のUV吸収スペクトルの溶媒効果を調べ、水素結合のない時には非極性溶媒中で主鎖が伸びて長波長側に吸収があらわれること、水素結合のあるときには側鎖のバルキーさが増大するため長波長側に吸収があらわれること(ソルバトクロミズム)が明らかになった。いずれも固体状態、および溶液中では非連続的なスペクトル変化のサーモクロミズムを示すが、LiCLO_4をと錯体を形成するとLi/Si比により異なるサーモクロミズムを示し、Li/Si>4では温度低下に伴いブルーシフトが見られること(イオノクロミズム)を明らかにした。さらに[R-Si-(CH_2)_m-O-R]_x;[R-Si-{(CH_2)_m-(OCH_2CH_2)_3-O-R]_x型(R=アルキル基)のポリシランを合成し、サーモクロミズムとソルバトクロミズムの対応関係を調べて、水素結合形成が側鎖の見かけの大きてさを増してポリマー主鎖の運動性を制限するためにOrder-Disorder転移温度を異常に上昇させることが極性ポリシランのソルバトクロミズムの原因であることを解明した。極性相互作用によるサーモクロミズムの詳細を明らかにするため、非極性の[R-Si-R]_x(R=アルキル基)のポリシランを用いて溶媒との相互作用によるサーモクロミズムを検討し、媒体の粘性による主鎖、および側鎖の運動性がサーモクロミズム現象に大きな影響を与えることを明らかにした。この研究を発展させて[R-Si-R]_x型ポリシランの低温における安定なコンフォーメーションが、熱力学的な効果だけでなく速度論的な影響を大きく受けること、冷却速度を変化さるてこれまで知られていなかった準安定状態が多数存在すること証明した。これの知見をもとにポリシランの低温側にコンフォー目ションを速度論的にコントロールできることを明らかにした。
メディア・リテラシー教育に関する基礎的研究

3年間にわたるメディア・リテラシー研究は「文献レビュー」「フィールド調査」「教育プログラム提案」の3本柱で展開された。「文献レビュー」においては、現在までの内外の研究成果を概観し、まずはメディア・リテラシー概念の出自を確認すべくイギリスとカナダにおける研究の背景と潮流を整理し、メディア・リテラシー概念の戦略的定義を試みた。それは、「メディア機器を使いこなす能力」「メディアから送り出されるメッセージを批判的に受容する能力」「メディアを用いて自らが良き送り手になるための能力」の3点に集約された。そのうち、「メディア機器の操作能力」については「マンーマシン・インターフェース」という別次元の課題として今回はふれず、残りの2領域を「批判理論」「教育実践」という視点から詳しく精査した。特に「実践」の重要性を確認した上で、「フィールド調査」に進んだ。ここでは、「テレビドラマのテクスト(物語)分析」「テレビドラマの演出分析」「ドキュメンタリーの制作」という3つのフィールドに限定し、いずれも、実習参加学生とのインタラクティブな教育実践という側面から、メディア・コンテンツへの批判的=主体的関与を醸成しつつ、分析ならびに作品制作の成果をあげた。最後に「教育プログラム提案」については、おもに、小中学校の「総合学習」や高校の「情報」の時間に展開されている「メディア・リテラシー教育」の先駆的実践事例を調査し、現状の問題点ならびに課題を指摘した後、マスコミOB、特にこれからリタイアする団塊世代を活用した「出張授業」の可能性を模索した。そして、そこで構築された教育プログラム案を、「メディアリテラシー教育の実践プログラムOBとの連携とITによるサポートシステム」としいうタイトルで平成18年度「特色ある大学教育GP(学士課程)」に法政大学から申請した。本年度は3年計画の初年度にあたり、メディアリテラシー実証研究のための基本文献リサーチや調査のための関係機関との協力の可能性などを模索した。さらに、調査の前提として、テレビのニュース、スポーツ、ドラマ、バラエティ、情報番組の5ジャンルについて作業仮説データの収集を試みた。とりわけ、従来から研究されてきた番組内容面でのメッセージ分析にとどまらず、カット割り(総カット数のジャンルごとの比較、時代的推移など)やBGM(使用頻度、演出効果など)といった演出手法の分析、出演タレントやアナウンサーの類型分析(性、年齢、容姿、声質、好感度など)など、新しいリテラシー指標の確立を模索した。なかでもカット割り分析については、2003年夏クールの連続ドラマ14本の全カット数をカウントした結果、1時間ドラマで最高1000カット近いドラマがあり、平均3秒でカットが変わるという速さであった。比較のために20年前の連続ドラマでカウントしてみると、平均で300カット(1カット10秒)くりいであり3倍以上の開きがあった。また、現代においても時代劇などではカット数はせいぜい400カット程度であり、若者向けのドラマほど速いカット割りで構成されていることがわかった。次年度においては、こうしたカット割りの加速化が、メッセージ認識や思考スタイルにどのような影響を与えているかを検証してみたい。同時に、さまざまな番組ジャンルから複数の作業仮説を抽出し、受け手調査を実行する予定である。本年度は本研究3カ年の中間年として、主に2つの作業を行った。第1にメディア・リテラシーに関する既存の研究蓄積を批判的に検討し、複雑化し多元化する社会とメディア状況に即したメディア・リテラシー概念の定義と目標について考察した。この作業は本年度において、結論にまでは至らなかったが、メディア・リテラシーを上意下達の教育システムの一環とするのではなく、送り手と受け手、教師と生徒など、メディア社会を生きる人々の相互的な関係を考慮に入れたメディア・リテラシー概念の再構築が必要であるとの方向性を得た。第2には、資料を読解する作業を中心として行った。資料とはテレビ番組(昨年度収集したDVD等の映像資料を中心としている)であり、ドラマ・スポーツ・ニュースなどを取り上げている。

それら分析対象となる映像資料を視聴し、テーマごとに、セグメントの長さ・設定の特徴、登場人物や映像の流れ、カメラワークやカットなどの映像技法などの放送形態を分析する作業をおこなった。また、映像資料の物語の構造分析やメッセージ分析にも踏み込んでいる。これら映像資料の分析作業は視聴者の解釈過程の分析作業との比較検討を前提にしている。これら比較検討を行う補助的な作業として、アカデミズム以外のメディア・リテラシー観を検討した。つまり、メディアが現実を構成するとの視角から、メディア批判を行うジャーナリストなど専門家の意見を参考にするための資料収集を行い、次年度以降の研究の土台固めを行った。本年度は、研究の総括作業として、メディアリテラシー研究のレビューをまとめ、実践的なメディアリテラシー概念の構築をおこなった。また、実証的なドラマテクスト分析や学生の制作体験の参与観察などを経て、「メディアから送られてくるメッセージを批判的に受容すること」や「自らが送り手になってメッセージを発信すること」などの、能動的なメディアリテラシーに関する知見を獲得した。そうした基礎的データに基づき、小中学校の「国語」や「総合学習」、あるいは高校の「情報」で先進的におこなわれているメディアリテラシー教育の事例を集め、ユニークな成功ケースについてはヒアリング調査などを実施した。受験と直接関わらない教育プログラムではあるが、多くの生徒たちの関心を集め、高いモチベーションが生まれていた。ただ、教育現場においては経験ある指導者が不足しており、ある意味、生徒たちの感性や能力の方が進んでいる領域だけに、教師の力量が試されてしまっている。実は「2007年問題」と言われるように、団塊世代の大量定年がまもなくであるが、戦後急速に発展したマスコミ業界においても、多くの人材が現場を去っていく時期にさしかかっている。そこで、彼らの経験を次世代に伝え、健全なメディアリテラシーを育成する教育サポートシステムを構想してみた。実際、受け入れる学校側、ならびにマスコミ人にアンケート調査をおこなった結果、お互いにニーズが高く、たとえばボランティアで年に数回の特別授業(「自分広告」「地域ニュース」の制作指導)をおこなうといった可能性が十分にあることが確認された。今後の課題としては、実践的なメディアリテラシープログラムの構築とボランティア講師の組織化であるが、研究代表者を核に、法政大学社会学部において積極的に推進していく予定であり、あわせて平成18年度の「特色ある大学教育GP」に申請予定である。
状態式・グループ寄与法による超臨界流体を含む相平衡の推算に関する研究

超臨界流体を含む系の相平衡を溶液を構成する成分の化学式に基づいて推算する状態式・グループ寄与法の開発を目指している.本年度は先ずPeng-Robinson状態式中のエネルギーパラメータaとサイズパラメータbを圧力零における過剰自由エネルギーと統計力学的に厳密な第二ビリアル係数の組成依存性に関する条件とで求めるg^E_o型混合則を導出し,圧力零における還元容積を純物質の還元容積のモル分率加算で求める算出法を提案した.相平衡への適用はg^E_oをWilson式で表すことにより,常圧用パラメータを用いて高圧気液平衡の推算を行った.g^E_oをASOGとUNIFACで求める状態式・グループ寄与法を用いて,アルコール,ケトン,炭化水素などを含む系の高圧気液平衡の常圧パラメータによる推算を検討した.また,二酸化炭素,メタンなどを含む系にも適用できるように,二酸化炭素とメタンを含む系の相平衡データベースを構築し,1957年から現在までに報告されている1500データセットの気液平衡,気液液平衡,個気平衡の測定値を入力した.さらに状態式・グループ寄与法の推算に必要なグループ間相互作用パラメータをグループCO_2,CH_4とCH_2,OH,CO,COO,O_2,N_2からなるグループ対について決定し,超臨界成分を含む系の気液平衡と溶解度の推算を行った.超臨界流体を含む系の相平衡を溶液を構成する成分の化学式に基づいて推算する状態式・グループ寄与法の開発を目指している.本年度は先ずPeng-Robinson状態式中のエネルギーパラメータaとサイズパラメータbを圧力零における過剰自由エネルギーと統計力学的に厳密な第二ビリアル係数の組成依存性に関する条件とで求めるg^E_o型混合則を導出し,圧力零における還元容積を純物質の還元容積のモル分率加算で求める算出法を提案した.相平衡への適用はg^E_oをWilson式で表すことにより,常圧用パラメータを用いて高圧気液平衡の推算を行った.g^E_oをASOGとUNIFACで求める状態式・グループ寄与法を用いて,アルコール,ケトン,炭化水素などを含む系の高圧気液平衡の常圧パラメータによる推算を検討した.また,二酸化炭素,メタンなどを含む系にも適用できるように,二酸化炭素とメタンを含む系の相平衡データベースを構築し,1957年から現在までに報告されている1500データセットの気液平衡,気液液平衡,個気平衡の測定値を入力した.さらに状態式・グループ寄与法の推算に必要なグループ間相互作用パラメータをグループCO_2,CH_4とCH_2,OH,CO,COO,O_2,N_2からなるグループ対について決定し,超臨界成分を含む系の気液平衡と溶解度の推算を行った.
ヒトデ類の自切を誘導する生体成分の構造と機能に関する研究

日本に棲息するヒトデ類の中には、捕食者に襲われたり物理的に傷付いた時に、障害を受けた腕を切り離す能力をもつものがいる。マヒトデ(Asterias amurensis、キヒトデとも言う)はその代表的な例である。本研究では東京湾と陸奥湾のマヒトデを対象に、自切誘導の刺激が加えられてから腕が切り離されるまでの経過の観察、自切中のヒトデの切片標本の作成と光学顕微鏡観察、および自切を誘起する生体成分(自切誘導因子、APF)の分離を行った。東京湾のマヒトデは陸奥湾のものよりも自切しやすい。マヒトデをオートクレープバックに入れ、加熱して自切させて得られる体腔液を正常なマヒトデの腕に注射すると自切が誘導されるので、これを生物検定法に用いて研究を行った。マヒトデの腕にAPFを含む溶液を注射し、口側と反口側の両方からビデオ撮影して外部変化を観察した。また、開裂部の組織切片の顕微鏡観察を行った。外部観察より、自切の始めに反口側の体表のコラーゲン組織の軟化が起こり、次に口側の歩帯板が断裂することが分かった。この時、ヒトデは自切させる足を固定し、表皮のコラーゲン組織を引きちぎる行動を示した。組織切片の観察では、歩帯板をつなぐ筋肉の異常な収縮が観察された。このことから、歩帯板の断裂は、歩帯板間をつなぐ筋組織の逆向収縮により、コラーゲン組織からなるじん帯が引き割かれることによって起こると考えられる。加熱処理した体腔中に放出されるAPFの分離を行った。自切を観察する生物検定試験を指標にして、ゲルろ過クロマトグラフィー、次いで高速液体クロマトグラフィーを繰返すことによりAPFを分離した。ほぼ単一のピークを示すHPLCフラクションが自切を誘導することを突き止めた。この物質は超微量しか含まれていないため、HPLC分取を繰り返して^1H及び^<13>C NMRスペクトルを測定した。最終構造の決定は現在なお進行中であるが、この物質はニコチンアミドの誘導体と考えられる。ヒトデ類には捕食者による攻撃や物理的障害で傷ついた腕を自切する種類がいる。人為的に自切させたヒトデ体腔液中に、自切を誘導する物質、(自切促進因子,APF)があることが分かった。そこで、東京湾のキヒトデのAPFの単離を行った。生物検定は、キヒトデをプラスチック製のバットの中央に置き、海水を入れない状態で1本の腕に検定液を注入する方法で行った。幅長が約5cmのものを用い、試料は腕の先から約3分の1の位置に放射神経に触れない様に注意して注射した。熱水で自切させたキヒトデの体腔液を遠心分離して上清をとり、凍結乾燥してAPFを含む固体を得た。これをトヨパールHW-40でゲルろ過し、7つのフラクションに分けた。各フラクションの自切誘起活性を調べた結果、1つの溶出ピーク(Fr.6)のみに活性が見られた。

Fr.6はHPLCで主に4つのピークを与えたので、内径20mmのカラムで分取を繰り返し、ピークを別々に分取したフラクション(Fr.6-1Fr.6-4)と各ピークの前後を集めたフラクション(Fr.6-5)に分離した。各フラクションの生物検定を行おうとしたが、2003年の春に数回起こった赤潮と青潮の影響でキヒトデが沿岸から姿を消してしまったため、しばらく生物検定試験が行えなくなってしまった。そこで、その間にはFr.6のHPLCによる分離のみを行い、Fr.6-4が構造決定できるだけの量を単離することができた。構造解析の結果、Fr.6-4はxanthineと同定した。生物試験用のキヒトデが復活してから、Fr.6-4とxanthineの標品を用いて自切の誘起活性を調べたが、全く活性はなかった。そこで、HPLCで得たその他のフラクションの活性を調べた所、Fr.6-2が自切を誘起した。現在は、Fr.6-2の構造決定に向け、必要量の分取を行っている。ヒトデ類には捕食者による攻撃や物理的障害で傷ついた腕を自ら切り離す(自切する)種類がいる.熱などを掛けて人為的に自切させたヒトデの体腔液中に、自切を誘導する物質(自切誘導因子,APF)が分泌される。「本研究では、東京湾のマヒトデのAPFの単離を行った。生物検定は、マヒトデをプラスチック製のバットの中央に置き、海水を入れない状態で1本の腕に検定液を注入する方法で行った。幅長が約5cmのものを用い、放射神経に触れない様に注意して試料を注射した。熱水に漬けて自切させたマヒトデの体腔液を遠心分離、凍結乾燥してAPFを含む固体を得た。これを、トヨパールHW-40で、7つのフラクションに分離した。このうちのFr.6に自切誘起活性が見られたので、それをHPLCで5つのフラクションに細分した。自切誘起活性はそのうちの1つのフラクション(Fr.6-2)のみに見られた。今年度はこのフラクションをさらに分取し、単離の状況を分析用HPLCで検証した。その結果、このFr.6-2はさらに2つのピークに別れることが分かった。そこで、セミ分取用のHPLCカラムを使用してFr.6-2をFr.6-2-1とFr.6-2-2の2つのフラクションに分離した。2003年には赤潮と青潮、2004年は赤潮と度重なる台風および猛暑の影響で、2年続けて東京湾のマヒトデがダメージを受けたために、生物検定がうまく機能しなかった。特に今年度は春から秋に掛けて異常が続いたので、生物検定が出来なかった。気候が比較的安定する秋から春は、生殖巣の発達により、生物検定に使用できない。そこで、各フラクションの活性を調べる前に、NMRの測定を行った。単離できたのが超微量であったので、マイクロプローブでの測定を外部機関に依頼した。DMSO-d_6とD_2Oによる測定で^1H-NMRシグナルは検出できたが、^<13>C-NMRシグナルは観測できなかった。マヒトデは日本沿岸各地に棲息する種で、捕食者に襲われたり物理的に傷付いた時に障害を受けた腕を切り離す生態を持つ。本研究では、東京湾と陸奥湾に棲息するマヒトデを対象に、自切誘導の刺激が加えられてから腕が切り離されるまでの経過の観察、自切中のヒトデの切片標本の作成と光学顕微鏡観察、および自切を誘起する生体成分(自切誘導因子、APF)の分離を行った。1.自切過程の観察自切が起こる際の外部変化の観察と、組織の変化の過程を観察する為の組織切片の顕微鏡観察を行った。自切の経過の外部観察により、反口側の体表ではコラーゲン組織の軟化が起こり、口側では歩帯板の断裂が確認できた。それとほぼ同時にヒトデが自切させる足を固定して表皮を引きちぎる行動が見られた。組織切片の観察では、歩帯板をつなぐ筋肉の異常な収縮が確認できた。
γ-セクレターゼ非依存的なβAPP膜内切断機構の解析

γ-セクレターゼ非依存的なアミロイドβ前駆タンパク(βAPP)の膜内切断機構を調べるため、CRISPR/Cas9法でプレセニリン1と2をダブルノックアウトした細胞を作製した。この細胞に様々なプロテアーゼ阻害剤を作用させ、βAPPが膜内で分解されたときに生成すると考えられるオリゴペプチドを質量分析装置で定量した。その結果、リソソーム酵素阻害剤のクロロキンで8種類の3アミノ酸のペプチドが減少していた。これらのペプチドはリソソームの主要なプロテアーゼであるカテプシンの阻害剤では減少しない事から、タンパクを3アミノ酸ずつ切断するトリペプチジルペプチダーゼ1によって生成していることが示唆された。γ-セクレターゼ非依存的なβAPPの膜内切断メカニズムを解析するため、γ-セクレターゼの主要構成タンパクであるプレセニリン1(PS1)及びプレセニリン2(PS2)を欠損した細胞をCRISPR/CAS9法を用いて作成した。PS1とPS2のExon3またはExon4の中でCas9が認識するPAMモチーフを含む23塩基の配列を4カ所ずつ選び、このDNA配列に相補的なRNA(ガイドRNA)とCAS9タンパクを同時に発現するプラスミドを作製した。また、ターゲット配列がCas9で切断された指標として、目的の配列がCas9で切断されるとGFPが発現するプラスミド(Mashiko 2013)も作成した。これらのプラスミドをAβ産生が増加する家族性アルツハイマー病変異(スウェーデン変異)βAPPを恒常的に発現させたHEK293細胞(swAPP/HEK細胞)にトランスフェクションし、最もGFPの発現が多いプラスミドをPS1、PS2それぞれ1個ずつ選んだ。最初にPS1をノックアウトするため、PS1をノックアウトするプラスミドをswAPP/HEK細胞にトランスフェクションし、GFPが発現している細胞をFACSで分取した。細胞を希釈して播種し、増殖した細胞のコロニーから48個のクローンを選んだ。それぞれの細胞のゲノムDNAを調製してCas9で切断された部位の配列をシークエンスすると、32クローンでDNAの切断が見られ、そのうち21クローンでフレームシフトが起こっていた。フレームシフトが起こっている細胞を10個選び、PS1がノックアウトされているかをWestern Blotで確かめた。この中で完全にPS1が検出されないクローンを選び、同様の方法でPS2をノックアウトした。PS2はノックアウトの効率がPS1よりも悪かったが、1クローンのみPS1とPS2が完全に検出されない細胞が得られた。この細胞の培養上清中のAβをELISAで測定すると、検出限界以下であった。γ-セクレターゼ非依存的なβAPPの膜内切断メカニズムを解析するため、γ-セクレターゼの主要構成タンパクであるプレセニリン1(PS1)及びプレセニリン2(PS2)を欠損させたHEK293細胞をCRISPR/CAS9法を用いて作成した。1クローンのみPS1とPS2が完全に検出されない細胞が得られ、この細胞の培養上清中のAβをELISAで測定すると、検出限界以下であった。この細胞でAβが生成しない原因はPS1とPS2をノックアウトした為なのか、オフターゲット効果なのかを調べるため野生型のPS1またはPS2遺伝子をトランスフェクションすると、どちらもAβ産生が回復した。また、家族性アルツハイマー病変異のPS1を導入するとAβ42の割合が増加し、活性のないdominant negative変異のPS1ではAβ産生は回復しなかった。以上の結果からCRISPR/CAS9法で作製したPS1/PS2ダブルノックアウト細胞はPS1とPS2を欠損しているためにγ-セクレターゼ活性を持たない事が明らかとなった。この細胞のβAPPが膜内で切断されたときに生じる3から5アミノ酸の断片ペプチドを調製しLC-Msで測定すると、数種類のペプチドが検出された。以上の事からγ-セクレターゼ活性を欠損していても膜内でβAPPが切断されていることが示唆された。現在はPS1/PS2ダブルノックアウト細胞にタンパク分解酵素の阻害剤であるTPEN(膜透過性金属キレート剤)、Bafilomycin A(リソソーム酵素阻害剤)、Lactacystin(プロテアソーム阻害剤)を加え、断片ペプチドの解析を行っている。当初の目的通りCRISPR/CAS9法で作製したPS1/PS2ダブルノックアウト細胞にPS1及びPS2を発現させ、Aβが生成しない原因がγ-セクレターゼ活性の欠損である事を確かめた。PS1/PS2ダブルノックアウト細胞のβAPPが膜内で切断されたときに生じる断片ペプチドはノックアウトしていない細胞に比べてかなり量が少なく測定に手間がかかったが、測定方法を工夫することにより定量することができた。γ-セクレターゼ非依存的なβAPPの膜内切断メカニズムを解析するため、Aβ産生を増加させる家族性アルツハイマー病変異体(スウェーデン変異)のβAPPを発現させたHEK細胞(swAPP/HEK)を作製し、γ-セクレターゼの主要構成タンパクであるプレセニリン1及びプレセニリン2をCRISPR/CAS9法を用いてノックアウトした。この細胞(swAPP/PSDKO HEK細胞)の培養上清中のAβをELISAで測定すると、検出限界以下であった。また、γ-セクレターゼの基質となる、β-セクレターゼでβAPPが切断されたC末端断片(β-CTF)をウエスタンブロット法で定量すると、swAPP/HEKに比べて6.5倍増加していた。以上の結果から、この細胞はγ-セクレターゼ活性を欠損しているためAβを産生できないと考えられる。