hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
国際放射線保護委員会の定義に基づく実効線量の簡易測定計算法の研究

実効線量は、放射線加重係数と組織加重係数の二重の生物学的不確かさがあるため科学的な量としては不安が残る.さらに実効線量を計算するには、計算に関係する体内臓器ごとの平均吸収線量が必要で、それは大変困難で殆ど実測不可能である.一方、エネルギー付与は国際放射線単位と測定委員会により定義された科学的な物理量であり、生物学的なバラメータに依存しない.数学ファントムとモンテカルロ法によるコンピュータ・シミュレーションによって歯科口内X線撮影によるエネルギー付与、および実効線量を求め、エネルギー付与と実効線量の関係を調べ、エネルギー付与から実効線量を評価する方法とその妥当性を検討した。結果1)歯科口内撮影法のコンピュータ・シミュレーションから、エネルギー付与は0.11.0mJの範囲、実効線量は一部の例外を除き110μSvの範囲に分布しているデータが得られた.2)エネルギー付与のリスク係数は0.00020.00023J^<-1>と報告(1978、1985)されている.そこで、実効線量の確率的影響の名目的発生確率として職業被曝グループの4.6x10^<-2> Sv^<-1>(1991、ICRP)を利用すれば、エネルギー付与と実効線量の間の係数として0.00023/0.046=5μSv/mJが得られた.3)両対数方眼紙の縦軸に実効線量を、横軸にエネルギー付与をとり1)のデータをプロットした結果、2)による係数5μSv/mJの直線が一つの基準として利用できることが判明した.考察文献上のエネルギー付与の値は20枚法の平均で0.48mJ/exp(1986、スエ-デン)、実効線量は14枚法の平均で1.86μSv/exp(1993、英)、17.7μSv/exp(1994、日)と報告されており、後者の開きは大きい.エネルギー付与の簡易測定法が未完成で、さらに継続研究が必要となった.実効線量は、放射線加重係数と組織加重係数の二重の生物学的不確かさがあるため科学的な量としては不安が残る.さらに実効線量を計算するには、計算に関係する体内臓器ごとの平均吸収線量が必要で、それは大変困難で殆ど実測不可能である.一方、エネルギー付与は国際放射線単位と測定委員会により定義された科学的な物理量であり、生物学的なバラメータに依存しない.数学ファントムとモンテカルロ法によるコンピュータ・シミュレーションによって歯科口内X線撮影によるエネルギー付与、および実効線量を求め、エネルギー付与と実効線量の関係を調べ、エネルギー付与から実効線量を評価する方法とその妥当性を検討した。結果1)歯科口内撮影法のコンピュータ・シミュレーションから、エネルギー付与は0.11.0mJの範囲、実効線量は一部の例外を除き110μSvの範囲に分布しているデータが得られた.2)エネルギー付与のリスク係数は0.00020.00023J^<-1>と報告(1978、1985)されている.そこで、実効線量の確率的影響の名目的発生確率として職業被曝グループの4.6x10^<-2> Sv^<-1>(1991、ICRP)を利用すれば、エネルギー付与と実効線量の間の係数として0.00023/0.046=5μSv/mJが得られた.3)両対数方眼紙の縦軸に実効線量を、横軸にエネルギー付与をとり1)のデータをプロットした結果、2)による係数5μSv/mJの直線が一つの基準として利用できることが判明した.考察文献上のエネルギー付与の値は20枚法の平均で0.48mJ/exp(1986、スエ-デン)、実効線量は14枚法の平均で1.86μSv/exp(1993、英)、17.7μSv/exp(1994、日)と報告されており、後者の開きは大きい.エネルギー付与の簡易測定法が未完成で、さらに継続研究が必要となった.
ラット系統を用いた脂質代謝異常の血中バイオマーカの探索と妥当性の検証

本研究では、食事性高コレステロール血症を引き起こす、系統を通常系統と掛け合わせ,第二世代を兄妹交雑で作り出し、親世代の変化が、第二世代にどのように伝わるかを血清中のリン脂質脂肪酸で検討した。その結果、肥満のモニターバイオマーカである、ジホモ-γ-リノレイン酸の値は体重増加化に伴って高くなり、DHAは低くなる。しかし、ジホモ-γ-リノレイン酸の値は連鎖解析の結果、遺伝子は同定されないが、DHAはその合成酵素である遺伝子の変が発見された。これらの結論から、血清の脂肪酸組成は、遺伝的変異が原因である変化と、環境要因である変化が見られることがわかった。肥満により血清脂肪酸組成に特有の変化が生じることが断面研究によって明らかとなってきている。しかし、疫学研究において、その変化が遺伝的要因によるものか、環境要因によるものかを特定することは難しい。一方、食事誘導性高コレステロール血症(ExHC)ラットは対象系統であるBNラットと比較して、肥満の表現型をもつことが示された。ExHCラットとBNラットを交配させ、得られた仔ラット(F1世代)同士をさらに交配させると、組み換えによってExHCラットとBNラットのDNA配列が様々に入り交じった染色体を持つF2世代ラットが得られる。このF2世代を遺伝的多様性集団と考え、QTL解析によって白色脂肪組織(WAT)重量を規定する遺伝子座を同定し、同定した遺伝子座とF2世代ラットの血清脂肪酸組成との関連性を調査することで肥満のバイオマーカの探索を行った。F2世代ラット集団を作製し、血清、WATを採取した。また、ゲノムワイドに遺伝子型を決定した。体重あたりのWAT重量を量的形質とし、LODスコアを算出した。解析の結果、皮下、腸間膜および腎臓周囲のWAT重量については有意な連鎖を示す遺伝子座が同定された。さらに、F2世代ラットの血清リン脂質中の脂肪酸組成を定量し、量的形質として同様にLODスコアを算出した。その結果、WAT重量規定遺伝子座と一致するものはなかった。そこで、体重あたりの腸間膜、皮下WAT重量の大きさでそれぞれF2世代ラットを4群に分けて、最も高い群の脂肪酸組成を最も低い群と比較した結果、腸間膜WATについては有意水準0.01以下でジホモ-γ-リノレン酸が有意に高く、皮下WATについては有意水準0.001以下でパルミチン酸が有意に高かった。以上の結果により、血清リン脂質中のジホモ-γ-リノレン酸、パルミチン酸が遺伝的要因の影響を受けない肥満バイオマーカ候補として挙げられた。前年度、ExHCラットとBN系ラットの交雑2世代(F2)の約200匹において血清リン脂質の脂肪酸組成で脂肪組織重量と関係のある脂肪酸を2種類同定した。同時に連鎖解析の結果、また別の脂肪酸が、脂肪組織重量と連鎖しており、その遺伝子を本年度同定した。さらに前年度明らかにしたExHCラットにおける脂肪酸合成の異常が、基質となる糖質代謝に影響を与える可能性がある。ExHCラットの糖代謝の評価を目的として、起源系統であるSD系ラットとの比較実験を行った。4週齢雄ExHC及びSDラットを高スクロース食もしくは高デンプン食で2週間飼育した。ExHCラットは、HOMA-IR値が高く、インスリン抵抗性を呈していることが明らかとなり、その値は高スクロース食の方が高かった。肝グリコーゲン量もExHCラットが有意に高い値を示し、高スクロース食で有意に減少した。一方、筋のグリコーゲン量は、ExHCラットが減少傾向を示し、高スクロース食で有意に減少した。以上のことから、ExHCラットの糖代謝は、肝臓TAG代謝の低下を原因としてインスリン抵抗性を呈しており、高デンプン食よりも高スクロース食によって悪化することが明らかとなった。以上により、脂肪酸組成の変化は、高コレステロール血症と独立であり、他の病態とも関連がない。先の2種類の脂肪酸は独立のバイオマーカである。つまり、肥満とその予備軍ではこのバイオマーカは遺伝と独立な脂肪酸である。しかし、本年度同定の脂肪酸は、本年度同定の遺伝子、高コレステロール血症および軽度のインスリン抵抗性は以前同定したSmek2が原因であると考えられるので、遺伝性の因子である。疫学研究および動物実験の結果、疾患との関係が疑えそうな脂肪酸および酸化コレステロールが同定された。糖尿病モデル動物において、脂肪組織中での4b-hydoroxycholesterolが上昇することを見いだした。一方で肝臓では低下する。さらに、その合成酵素の発現は臓器において違っており、それは糖新生臓器では低く、糖を蓄積する臓器では高いことがわかり、何らかの糖尿病病態とこの酸化コレステロールの代謝が関わることがわかった。脂肪酸組成については、大きな違いはなかった。動脈硬化症患者では疫学調査から25-hydoroxycholesterolの血清中濃度が低下していることを、別研究でapparentlyした。

従って本研究では、動脈硬化症モデル動物に25-hydoroxycholesterolを腹腔内に、投与ししたが、動脈硬化症の進展には影響が見られなかった。肥満、脂肪肝においては、dihomo-g-linoleinic acidの血中濃度が上昇することがわかった。この、状況はラット集団においても、同様な結果であった。以上のことから、病態によって変化する、バイオマーカは妥当性のあるものもあると考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。栄養化学26年度が最終年度であるため、記入しない。既に当初計画の肥満に関する、脂肪酸バイオマーカは発見された。脂肪酸組成のF2連鎖解析の結果よりから、脂肪酸組成の変化をもたらす遺伝子を同定した。この遺伝子は現在、内外の研究者が、肥満との関係をヒト集団で検証している遺伝子であった。さらに、高コレステロール血症と糖尿病の合併症の一つのメカニズムが提示できた。以上のことより、本来の計画の進行以上に、副次的な、バイオマーカへの可能性が提示できた。今後は、コレステロール誘導物質および植物ステロール講導物質の単離納製、同定を行い、生理的意義の発見を行う。疫学調査を進めるにあたり、バイオマーカの妥当性を与えるのに実際のモデル集団で検討されることはなく、バイオマーカの妥当性はかなりの数の公表論文のメタ解析により保障される。この妥当性の検討モデルとしてゲノム情報が入手可能な2系統(ExHCラットおよびBNラット)を用いて交雑し、F2集団をモデル集団として、申請者が長年研究してきた血清中脂質の中で新規バイオマーカの探索と連鎖解析対象集団においてバイオマーカの妥当性と脂質代謝異常症発症とバイオマーカの妥当性と脂質代謝異常症発症とバイオマーカの関連からメカニズムの解明を行ってきた。前年度のまで肥満のバイオマーカとしてリン脂質中の脂肪酸を同定した、また、酸化コレステロール中では動脈硬化発症を抑制する、バイオマーカを2種類同定した。次に、学習能低下のバイオマーカを次年度から同定する。これらが明らかになることによって、モデル動物が模索されている糖尿病から痴呆症を合併する病態の解析におよび創食・創薬に重要な知見を与えることができる。実験動物の飼育をするために、維持管理費を継続させるため。実験動物の飼料代
日中両国の教育開発に関する比較研究

教育開発は発展途中国にとって非常に重要な課題である。本研究では日、中両国における現代化の中で教育が果たした意義や機能について歴史と現状の両面から比較検討を行い、さらに韓国の状況も適宜視野に入れつつ、東アジアにおける教育開発ないし発展のパダーンを解明し、教育開発の構築を目指す。今年度は以下の手順で研究を進めてきた。1.昨年度に引き続き、関係文献・資料を中国国家教育発展研究センター、清華大学、北京大学等で収集し、こちらで研究した成果を出版するために、関係出版社も訪問した(2003年7月25日から8月3日まで)。2.学術交流並びに調査研究の一環として、名古屋市立神丘中学校を訪問し、当該センターの専門家にも訪れた。(2003年7月20-21日)。3.研究成果の一端として「百年学府の新生:筑波大学」は「清華大学教育研究」誌2003年第三期に受理され、掲載された(頁88-94)。そして、「発展教育論」という本を江蘇教育出版社に受理され、出版された。4.国際援助と教育開発の関係についての歴史・現状・今後の行方を考査し、UNESCO・UNDP・UNICEFなど国際援助組織とOECD諸國(特にアメリカ、フランス、日本、ドイツなど)及びNGOの援助理念・政策と現状を検討した。5.昨年度に引き続き、90年代以降、日本とアメリカ、フランス等先進諸國と中国、韓国等開発途中諸國におけるグローバリゼーションと知識経済対応の教育改革について検討した。6.日本の小学校と中学校における道徳教育について考察した。教育開発は発展途中国によって非常に重要な課題である。本研究では日、中両国の現代化の中で教育が果たした意義や機能について歴史と現状の両面から比較検討を行い、さらに韓国の状況も適宜視野に入れつつ、東アジアにおける教育開発ないし発展のパターンを解明し、教育開発の構築を目指す。1.昨年度に引き続き、関係文献資料を東京大学教育学部及びJICA、広島大学高等教育研究センター、九州大学教育学部、北京大学教育学院、北京師範大学教育系、中国国家教育発展研究センター、北京市教育研究院等で収集した。2.学術交流並びに調査研究の一環として、日本高等教育学会(2002年5月、愛知学院大学)、日本比較教育学会(2002年6月、九州大学)の各年次大会及び国際教育協力シンポジウム(2002年12月、国際交流基金国際会議場)に参加し、北京市において國家教育発展研究センター、北京市教育研究院等の専門家を訪問した。3.研究成果の一端として「東京大学の奮い立つ」、「百年学府の新生:筑波大学」、「冷厳な現実:発展途中国の教育開発における問題点」を執筆し、前の2篇は清華大学で編集された「世界著名大学の奮い立つ」という本の中に掲載予定され、後の1篇は「清華大学教育研究」誌2003年第一期に受理され、掲載された。4.社会開発に関する理論:近代化論、従属理論、世界システム論、ベーシックヒューマンニーズアプローチ、内発的発展論等及びこれらの理論が教育開発に与えた影響について体系に考査し整理した。5.教育開発の諸段階に理論的考査を行い、各発展段階を特徴づける指標についての検討を行った。この指標に基づいて、開発途上国と先進諸國との間の教育開発上のギャップを検討し、その要因について分析した。6.90年代以降、日本とアメリカ、フランス等先進諸國と中国、韓国等開発途中諸國におけるグローバリゼーションと知識経済対応の教育改革について検討した。
フランスにおける黎明期の録音技術：その誕生と受容の文化的起源を求めて

1.録音技術の先駆的機器とされるスコット・ド・マルタンヴィルの「フォノートグラフ」が普及していく過程を見るために、資料調査をおこなった。とりわけ興味を引いたのは、音の振動を視覚的に記録するこの機器が、同時代に見られた言語学の刷新と密接に関連していたということである。すなわち、言語におけるリズムやアクセントを検討するために、書かれた文字ではなく、実際に発話された音声、ないし、当の音声を生みだした身体運動そのものを観察しようとする傾向がこの当時生じており、この傾向のさなかで上述した「フォノートグラフ」に端を発するグラフィックな記録機器たちが活用された。こうした事象を同時代のより大きなコンテクストに位置づけるために、Robert Michael Brainの書籍をはじめとする先行研究を参照し、本研究の成果が持ちうる歴史的射程を再検討する作業を行なった。2.フランスにおける録音技術の普及過程のいち側面として、同技術を取り込んだ世紀末の文学作品を検討し、その想像力に迫った。とりわけ、ヴィリエ・ド・リラダンの『未来のイヴ』に描かれる人造人間と、その身体描写に占める録音技術の位置づけを再考すべく、この作品の精読に加えて、19世紀フランスの哲学・生理学の主要著作を概観し、人間の身体をめぐる同時代の認識の変容を跡づける作業を行なった。『未来のイヴ』の人造人間の描写を支える身体観は、神経系に関する知識や連関説といった発想など、同時代の哲学・生理学において見られた刷新を視野に収めることなくしては把握できないものである。この関連性をいっそう明瞭にするために、本研究ではヴィリエと密接な交流があったシャルル・クロ周辺の知的文脈を参照することにより、録音技術を「人間身体のあり方を新たな仕方で表象するためのツール」として活用しようとする当時の想像力の一端を捉えることができた。「概要」に記した二つの系列の調査結果を包括的に捉える研究発表(「シャルル・クロ周辺から見るシュルレアリスム:無意識概念の周縁をめぐって」)をおこなったことで、最終年度となる次年度に向け、本研究の成果をまとめ上げるための展望を開くことができた。また、上述の二つの研究成果のそれぞれを公表するための手段についてもすでに目処が立っているが、スケジュールの関係からこれらを年度内に公表することは叶わなかった。以上に鑑み、本年度の進捗状況を「やや遅れている」と判断した。最終年度であることに鑑み、以下のような成果報告の機会を持つために、必要な準備を進めていく。(1)スコット・ド・マルタンヴィルの「フォノートグラフ」の歴史的意義をめぐる研究。国際日本文化研究センターによる研究プロジェクト「音の聴覚の文化史」の成果刊行物の一部として発表予定。(2)『未来のイヴ』をはじめとする、19世紀末のフランス文学に現れた録音技術の意味を再考するための研究。所属研究機関の紀要に発表予定。(3)本研究の現代的意義を問うための、シンポジウムの開催。国内外の研究者やサウンド・アーティストと連携を進めている。フランスに存在した録音技術のパイオニアの業績について、収集した一次資料をベースに調査を行なった。とくに年度前半では、スコット・ド・マルタンヴィルによるフォノトグラフ(音の振動を視覚的に記録する装置)の発明とその普及過程についての調査を行い、その結果を国際日本文化研究センターの研究グループ(「音と聴覚の文化史」)の研究会で報告した。具体的には、スコット・ド・マルタンヴィル当人の業績や足跡を整理したのち、発明の背景(神経生理学)、同時代の科学「場」との関係(在野の科学者/技師たち/アカデミシャンたちの間のギャップ)、フォノトグラフの受容(物理学・心理学・音声学)等について考察を行なった。年度後半は、次年度に予定していた録音技術の受容についての調査を一部先取りして行い、録音技術と同時代の諸科学、また芸術運動とを相互に連接させるパースペクティブを得ることができた。とりわけ、当時のフランス詩壇にみられた「自由詩」運動を、録音技術の普及史という観点から捉え直すための調査を行い、二つの研究発表を通じてその途中経過を報告した(関西シュルレアリスム研究会、シンポジウム「フランス音声詩をめぐって」)。目下のところ、録音技術を取り込むことによって音声言語の客観的観察に着手した同時代の実験音声学が、同じ時代に現れた自由詩運動の実践者たちによって参照されていた可能性がある、との仮説を得るところまで調査が進展している。これまで韻律法の面から論じられるばかりであった自由詩を、「録音技術を介した音声の再発見」という観点から再考することによって、聴覚文化論とフランス文学研究双方に新たな展望を開くことができそうである。以後継続して調査をすすめていきたい。以上に加え、本研究の成果の一端を、国立国際美術館にて開催された公開レクチャーにて一般の聴衆に報告できたことも、本研究の進展にとって有意義な機会であった。年度前半から半ばにかけて想定以上のスピードで研究が進み、本年度の目標としていた録音技術のパイオニアたちの調査については、予定していた調査を順調に遂行することができた。そのため、次年度の調査内容の一部を先取りし、予備的な考察を二つの研究発表を通じて公表することができた。一方で、年度末に多くの用務が重なったために、これらの成果を文書化する時間を取ることができなかったのは想定外だった。以上二点に鑑み、全体としては標準的な進度とした。

とりわけ興味を引いたのは、音の振動を視覚的に記録するこの機器が、同時代に見られた言語学の刷新と密接に関連していたということである。すなわち、言語におけるリズムやアクセントを検討するために、書かれた文字ではなく、実際に発話された音声、ないし、当の音声を生みだした身体運動そのものを観察しようとする傾向がこの当時生じており、この傾向のさなかで上述した「フォノートグラフ」に端を発するグラフィックな記録機器たちが活用された。こうした事象を同時代のより大きなコンテクストに位置づけるために、Robert Michael Brainの書籍をはじめとする先行研究を参照し、本研究の成果が持ちうる歴史的射程を再検討する作業を行なった。2.フランスにおける録音技術の普及過程のいち側面として、同技術を取り込んだ世紀末の文学作品を検討し、その想像力に迫った。とりわけ、ヴィリエ・ド・リラダンの『未来のイヴ』に描かれる人造人間と、その身体描写に占める録音技術の位置づけを再考すべく、この作品の精読に加えて、19世紀フランスの哲学・生理学の主要著作を概観し、人間の身体をめぐる同時代の認識の変容を跡づける作業を行なった。『未来のイヴ』の人造人間の描写を支える身体観は、神経系に関する知識や連関説といった発想など、同時代の哲学・生理学において見られた刷新を視野に収めることなくしては把握できないものである。この関連性をいっそう明瞭にするために、本研究ではヴィリエと密接な交流があったシャルル・クロ周辺の知的文脈を参照することにより、録音技術を「人間身体のあり方を新たな仕方で表象するためのツール」として活用しようとする当時の想像力の一端を捉えることができた。「概要」に記した二つの系列の調査結果を包括的に捉える研究発表(「シャルル・クロ周辺から見るシュルレアリスム:無意識概念の周縁をめぐって」)をおこなったことで、最終年度となる次年度に向け、本研究の成果をまとめ上げるための展望を開くことができた。また、上述の二つの研究成果のそれぞれを公表するための手段についてもすでに目処が立っているが、スケジュールの関係からこれらを年度内に公表することは叶わなかった。以上に鑑み、本年度の進捗状況を「やや遅れている」と判断した。本年度末にフランスで収集した資料をもとに、録音技術の普及に関わる調査を継続する。具体的には以下三点の目標を設ける。(1)録音技術が同時代の諸科学(とくに実験言語学と心理学)の実践のうちがわでいかに使用されていたのかを調査する。(2)「自由詩」運動の実践者たちが如何様に実験言語学や心理学を参照していたのかを調査する。(3)ヴィリエ・ド・リラダン『未来のイヴ』を精読し、作中に描かれる録音技術の機能を当時の科学的コンテクストのうえで再考する。加えて、本年度行なった録音技術のパイオニアに関する研究資料のうち、一部入手できなかったものがあるので、それらを入手するために継続的に調査を行う予定である。最終年度であることに鑑み、以下のような成果報告の機会を持つために、必要な準備を進めていく。(1)スコット・ド・マルタンヴィルの「フォノートグラフ」の歴史的意義をめぐる研究。国際日本文化研究センターによる研究プロジェクト「音の聴覚の文化史」の成果
HRM解析による法医学に有用なSNPマルチゲノタイピング法の確立

本研究は、法医学に有用なSNPの解析にHRM(High Resolution Melting)法を適用し、正確で簡便・迅速なゲノタイピング法を作ることを目的とした。その結果、血小板血栓形成を制御するADAMTS13の遺伝子に存在するc.C1423T変異をHRM法で解析することが可能となった。また、ABO血液型遺伝子のc.G261delとc.G803Cについて同時にタイピングできるシステムを作った。これにより、ABO遺伝子型を一度の解析で同定することが可能となった。法医学分野におけるDNA鑑定では高度に変性・分解した試料も多く、変性に対し抵抗性を示す一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphism :SNP)はその解析に適している。自然災害の増加により多くの犠牲者が出る可能性もあり、多数のそれも変性した微量の試料を迅速に鑑定できる方法の開発が望まれる。本研究ではリアルタイムPCR装置を用いたHRM(High Resolution Melting)解析によるSNPのマルチゲノタイピング法の確立を目指す。対象とする遺伝子領域は、法医学分野でも多型マーカーとして用いられているABO血液型遺伝子の3ヶ所のSNPと、そのほか3部位を選択した。まず試料DNAの収集と、ABO血液型遺伝子の3ヶ所のSNPの解析・確認をAPLP法により行った。また、他のSNP部位についても従来法で解析を行った。HRM解析によるSNPタイピング法には1プローブを用いない方法と、2いずれか一方のアリルに特異的なプローブを一種用いる方法がある。まず1の方法によるABO遺伝子の解析法を確立することを目指した。すでに報告されている論文を参考に、アリル特異的プライマーを準備し、かつ増幅産物の長さに差が生じるようそれぞれのプライマーの5'末端に長さの異なる配列を付加した。ここまではAPLP法の原理とも同じである。論文では増幅産物の長さを変えることでTm値が異なり融解曲線に差が生じると述べてある。このプライマーによるHRM解析を行ったが、アリルごとの融解曲線の区別が難しいため、プライマー設計および解析条件について検討を重ねている。法医学分野におけるDNA鑑定では高度に変性・分解した試料も多い。また、ひとたび大規模な自然災害が起きれば微量の変性試料を多数鑑定せねばならないことも予想される。そのような変性試料の場合、変性の影響を受けにくい一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphism:SNP)を解析対象とするのが適している。本研究ではリアルタイムPCR装置を用いたHRM(High Resolution Melting)解析による正確で迅速なSNPのマルチゲノタイピング法の確立を目指す。検討する遺伝子のSNPは、ABO血液型遺伝子における3部位、アルコール代謝に関するアルコール脱水素酵素(ADH)およびアセトアルデヒド脱水素酵素(ALDH)遺伝子について1部位ずつ、その他4遺伝子4部位である。HRM解析によるSNPタイピング法には1プローブを用いない方法、2いずれか一方のアリルに特異的なプローブを1種作成し用いる方法がある。本研究では1による解析法を目指しており、共通プライマーで両アリルを増幅してHRM解析を行ったが融解温度(Tm値)の差が小さく判定が困難である。両アリルのTm値に差を生じさせるには増幅産物の長さを変えることが有効である。アリル特異的に増幅し、かつ増幅産物の長さが異なるようなプライマーの作成、つまりAPLP(Amplified product-length polymorphism)法の原理を応用したHRM解析が明確にタイピングを行うため良いと考え現在検討中である。ただし、アリル特異的なプライマーを用いると1SNPに3つのプライマーが必要となり、マルチプレックスで行う場合プライマーの数がさらに増える。今後は共通プライマーで増幅する方法と、アリル特異的プライマーを用いる方法の両法を検討しながら、より正確で迅速かつ安価なタイピング法を確立していこうと考えている。法医学分野におけるDNA鑑定では高度に変性・分解した試料も多いため、その場合影響を受けにくい一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphism : SNP)を解析対象とするのが適している。本研究は、リアルタイムPCR装置を用いたHRM(High Resolution Melting)解析による正確で迅速なSNPのマルチゲノタイピング法の確立を目的とし、2つの遺伝子領域についてその方法を確立することができた。まず、ADAMTS13の遺伝子に存在するc.C1423T(p.P475S)変異の解析である。ADAMTS13は、血液凝固に働くvon Willebrand factorの特異的切断酵素として血小板血栓形成能を制御するが、本変異はADAMTS13活性を低下させるといわれている。ADAMTS13活性が低下すると血栓性血小板減少性紫斑病を誘発するため臨床的にも重要である。またこの変異が大動脈解離患者で高頻度にみられたという報告や、アジア人特異的な分布を示すという報告もあり、この変異の解析はさまざまな方面に有益であると考えられる。次に、ABO血液型遺伝子のタイピングである。この遺伝子の同定は法医学分野でも多用され、A型遺伝子と比較すると、O型遺伝子は261番の塩基が欠失しており、B型遺伝子は803番に塩基置換がみられる。本研究ではこの2箇所のSNPを同時に解析するマルチゲノタイピング法を確立した。マルチプレックスで解析することでさらにサンプルの少量化、時間と労力の削減が可能となった。

今回の方法は、いずれも高価なプローブなどは必要とせずPCR増幅に用いるプライマーと飽和型DNA結合色素を用い、約1時間半で96サンプルのタイピングを行うことができる安価で簡便・迅速な方法である。これらの方法は今後法医学分野や臨床における解析に役立つものと考える。本研究は、法医学に有用なSNPの解析にHRM(High Resolution Melting)法を適用し、正確で簡便・迅速なゲノタイピング法を作ることを目的とした。その結果、血小板血栓形成を制御するADAMTS13の遺伝子に存在するc.C1423T変異をHRM法で解析することが可能となった。また、ABO血液型遺伝子のc.G261delとc.G803Cについて同時にタイピングできるシステムを作った。これにより、ABO遺伝子型を一度の解析で同定することが可能となった。ABO遺伝子やADHおよびALDH遺伝子などのSNPについてHRM解析を行っているが、改善はされてきているもののアリルごとの融解曲線の判定がまだ難しいところがある。誤ったタイピングを行わないため、もう少し明確に判定できる方法がよいと考える。正確性、再現性を高めるためさらに検討・改良を行っていきたい。方法の確立にはまだ達していないが、少しずつ改善されており、よい結果が得られると考える。APLPの原理を利用したPCR増幅によりHRM解析の精度を上げていきたいと考える。HRM解析に関する文献を見ると、目的の増幅産物よりTm値が低いDNAと、高いDNAを温度補正コントロールとして加えるという報告がある。コントロールを基準にすれば機器や試薬のコンディションがかわっても目的産物の波形を正しく判定することが出来る。本研究でもこのコントロールを用いる方法を検討する。ABO血液型遺伝子のSNPについてHRM解析を行った結果、アリルごとの融解曲線を判定することが難しく、また再現性においてもまだまだ改善の余地がある。はっきりと正確に判定できるよう改良していきたいと考える。26年度は、初年度に購入した試薬や、従来から有していた消耗品によりある程度実験が行えたため、購入物品が少なく残額を次年度に繰り越した。良好な結果は得られていないが、少しずつ改善されてきている。さらに他の論文などを集め知識を集約し、さまざまな面から工夫を重ねて解析法を確立したいと考えている。持ち越していた試薬および消耗品も26年度に使用したため、27年度は新たに試薬・消耗品を購入する必要があり繰越額をあわせた27年度分の予算から購入する予定である。
体・肺動脈短絡手術における人工血管血流量の段階的調節法に関する実験的研究

実験方法ビ-グル犬9頭に、φ5mmのexpandedpolytetrafluoroethylene人工血管(ePTFE)を用い左modifiedBlalock-Taussig(mB-T)手術を施行し、ポリディオキサノン吸収性結紮クリップ(クリップ)で人工血管を挟み狭窄を加え短絡流量の制限を行った。狭窄作成後4週目に再開胸し、短絡路が開存していた実験犬を以下のA、B群に分けた。A群;開存確認後、経皮的血管形成後バルーン(以下、PTAバルーン)で狭窄解除を試み、短絡流量、造影上の狭窄部形態の変化を調べた。さらに、狭窄解除後8週目に人工血管を摘出した。B群;開存確認後、人工血管を摘出した。また、このほかにC群として3頭を加え、mB-T手術後狭窄を加えることなく閉胸し、12週後に人工血管を摘出し組織学的検討に供した。結果狭窄作成前の流量の30.1、40.7、44.6%まで制限を行った3頭は、再開胸時、短絡路が閉塞していた。一方、66.8から85.4%まで制限を行った6頭は、開存が認められた。6頭の内3頭をA群とし、径7mmのPTAバルーンで拡張術を行うと容易にクリップが壊れ、狭窄作成時、80.0、66.8、78.4%まで制限された流量が、それぞれ54.1、33.2、30.7%増加した。また、造影上狭窄は、ほぼ完全に解除されており、解除後8週目でも再狭窄はなかった。短絡流量の変化と造影所見から、クリップを用いたePTFEに対する狭窄は、バルーン拡張術を併用することにより4週後に狭窄解除に成功し、短絡流量の増加が可能であることが示された。摘出した人工血管の組織所見では、A群の狭窄部周辺はB群よりも仮性内膜形成過程が進行しているが、C群の中央部より遅れている傾向が見られた。また、A群の狭窄部周辺は肉眼的に仮性内膜肥厚は無いものの、組織学的には、C群よりも仮性内膜が厚い傾向にあった。実験方法;体重9.3^11.6kgの成犬9頭に、口径5mmのexpanded polytetrafluoroethylene人工血管(ePTFE)を用い左modifiedBlalock-Taussig手術を施行した.短絡流量の制限は、ポリディオキサノン吸収性結紮クリップ(クリップ)で人工血管を狭窄を加えるをことにより行なった.狭窄作成後4週目に全例を再開胸し、クリップの状態を観察、必要に応じて経皮的血管形成術バルーン(PTAバルーン)で拡張術を行うことにより狭窄の解除を試みた.さらに、狭窄解除後8週目に人工血管を摘出し組織学的に検討を行った.1.術後早期の短絡流量制限の限界について狭窄作成前の流量の38.5【.+-。】7.5%まで制限を行った3頭は、術後早期に短絡路の閉寒が確認された.

一方、77.4【.+-。】6.2%まで制限を行った6頭は、術後4週目の時点でも短絡路の開存が認められた.明らかな短絡流量制限の限界は示せなかったが、70^80%では、4週目までの短絡流量制限が安全に行えると考えられた.2.術後4週間目のクリップの状態と狭窄解除について術後4週目に短絡路の開存が認められた6頭では、クリップは全てほぼ原型を留めており、狭窄の自然解除は得られなかった.その内、3頭にPTAバルーンで拡張術を行い、径7mmのバルーンを用い容易にクリップが壊れ短絡流量の増加が得られた.造影所見では狭窄はほぼ解除されていた.以上より、クリップを用いたePTFEに対する狭窄作成は、バルーン拡張術を用いることにより4週目に狭窄解除が可能なことが示された.3.狭窄部の組織学的変化についてePTFEに対するクリップによる狭窄作成とその解除により、狭窄部周辺でePTFEの仮性内膜形成過程が遅延し、仮性内膜が肥厚する傾向が見られた.実験方法9頭のビ-グル犬を3頭ずつ3群に分けて行った。A群;直径5mmのexpanded polytetrafluoroethylene人工血管(以下、ePTFE)を用い左modifiedBlalock-Taussig(以下、mB-T)手術を行なった。V字型形状のポリディオキサノン吸収性クリップ(以下、クリップ)でePTFEを挟んで狭窄を作成し、短絡流量を制限した。狭窄作成4週後に経皮的血管形成術バルーン(以下、PTAバルーン)で狭窄解除を試み、短絡流量の変化を調べると共に、短絡路造影で狭窄解除前後の狭窄部の形態を比較した。さらに、狭窄解除後8週目に、短絡路造影の後、犠牲死させ人工血管を摘出した。B群;mB-T短絡路造設後は、A群と同様に狭窄を加えるが、4週後に犠牲死させ人工血管を摘出した。C群;mB-T短絡路造設後、短絡路に狭窄を加えることなく閉胸し、12週後に人工血管を摘出し組織学的に検討した。結果A群3頭では狭窄作成時、短絡流量はそれぞれ80.0、66.8、78.4%に制限された。4週後の狭窄解除時は、バルーン径7mmのPTAバルーンで拡張術を行うことにより容易にクリップが壊れ、狭窄解除前に比べ短絡流量は54.1、33.2、30.7%増加した。また、短絡路造影では、狭窄はほぼ完全に解除されており、解除後8週目でも再狭窄はなかった。短絡流量の変化と造影所見から、クリップを用いたePTFEに対する狭窄は、バルーン拡張術を併用することにより4週後に狭窄解除に成功し、短絡流量の増加が可能であることが示された。摘出した人工血管の組織所見では、A群の狭窄部周辺はB群よりも仮性内膜形成過程が進行しているが、C群の中央部より遅れている傾向が見られた。また、A群の狭窄部周辺は肉眼的に仮性内膜肥厚は無いものの、組織学的には、C群よりも仮性内膜が厚い傾向にあった。
不動産業の発達に関する総合的研究

本研究は明治期から今日までの不動産業について、経営業(賃貸業)と開発業に重点を置きつつ、都市化の進展にともなうオフィス・住宅の需要の高まりに対し、これらがどのように供給されていたのかを、歴史具体的に分析した。江戸時代においても、商家が地面や建物を賃貸することは都市において広くみられた。賃貸される建物も商家(店舗兼住宅)であったり、都市下層民の住居であったりと、バリエーションに富んでいた。明治維新を経て、土地所有が法認され、不動産登記システムが整備されるなど、不動産業をめぐる基本的な仕組みが急速に整えられていき、また工業化・都市化が急速に進展するなかで、不動産業のあり方は急速に変化していった。とくに近代建築が、高層化によって都市における所有地の有効利用を可能とし、かつ高層化によるエレベータなどの付帯設備は、一定の面積による開発を有利とするようになる(規模の経済性がより発揮されるようになった)という状況の出現は、都市のオフィスの供給のあり方を変化させた。また鉄道とくに電気による郊外鉄道が発達すると、住宅供給のあり方も根本的変化し、職と住が分離した。さらに重化学工業化が進展すると、外国からの原料の搬入と消費地への近接性から、東京湾などでの沿岸立地の有利さが際だつようになり、沿岸での工業用地の開発が促進された。さらに日中戦争が勃発し、不動産価格が資産・賃貸ともに強度に統制されるなかで、工業化の進展に応じて、多くの農地が転用されていった。高度成長期には都市に流入する人口のために、都市周辺農村の宅地への転換がさらに進み、多くの工業用地が供給された。オイルショック以降は、不動産は都市再開発などで発達したが、バブルによって大きな痛手を受けることになった。不動産は極めて個別性の高い資産であり、取引所を通じた市場価格が形成されない。それにともなって不動産市場の動向は、地価調査などが継続的に公表されるようになった戦時期以前は、ほとんど知ることができない。そのため土地取引がいかにおこなわれたのかについて、大阪を事例に、登記所の登記状況を調査した。現在はそのデータの整理をおこなっている。また日本の最初の本格的なオフィスビルである丸ビルの賃貸の状況を調査した。当時の最先端の企業や事務所が入居していることが確認された。また不動産関係の法制度の変遷についての調査を開始した。都市計画の実施が不動産の開発のあり方にいかなる変化を及ぼしたのかについて、調査を進めている。地主が組合を作り、不動産価格を高める方向で努力していること、および鉄道会社や不動産企業がそれと密接な関わりを持っていることも明らかとなった。また不動産と金融の関わりについても調査をおこなっている。長期金融市場が十分に発達していなかった戦前期において、不動産金融がいかなる主体によって担われていたのかについて、当時の有力な不動産金融機関であった府県農工銀行の分析をおこなった。その結果、融資を自主的におこなった戦間期に、府県ごとの業務のばらつきが大きくなっており、大阪などの都市型の農工銀行で業務が伸張していることが確認されている。これは都市近郊鉄道が発展し、都市への通勤客を集客し、沿線開発をおこなっていったことと整合的な減少なのではないか、という仮説が導かれつつある。明治維新の結果、江戸(東京)と大阪をはじめとする大都市(城下町)は、武士の帰郷などの要因によって衰退した。しかし社会が安定し、諸産業が勃興して来るにともない、都市への人口集中が始まるようになる。東京や大阪ではほぼ明治20年前後のことである。こうした人口圧力を受けて、既存の市街地の外延部に住宅地が開発されるようになる。しかし東京と大阪ではそのスタイルが異なっていた。

東京は市内に旧大名の庭園が数多く存在していたため、それらが漸次住宅地として開発されていったのに対し、大阪は市内にそういう用地がほとんど存在せず、大阪市の外に住宅地が開発されることになった。その主たる担い手が、電気軌道会社であった。電鉄会社は鉄道業の採算性を向上させるために、住宅地を開発して、利用者の増加をはかるのみでなく、電気供給事業を兼業し、配電をおこなった。さらには不動産を開発し、そこからの開発利益を獲得することまでおこなったのである。関東ではこうした動きがおきるのは、戦間期となるが、明治20年以降、本郷や赤坂といった当時の市街地(日本橋・神田周辺)の外延部に、住宅地の開発が進んでいった。そこでは大資本というよりは、大小の地主、さらには土地を持たずに借地して、借家を建設するものが入り乱れて土地開発をおこなった。横浜や新潟といった遠隔地に居住する資本家が土地投資をおこなっており、資産の運用先としても、極めて有望なものであった。これを支えた金融システムは、近代的な金融機関としては、普通銀行が不動産担保の融資をおこなったほかは、専門の金融機関が整備されるのは、1910年代に入ってからであり、在地の金融がこれを支えていたものと推測される。本研究は明治期から今日までの不動産業について、経営業(賃貸業)と開発業に重点を置きつつ、都市化の進展にともなうオフィス・住宅の需要の高まりに対し、これらがどのように供給されていたのかを、歴史具体的に分析した。江戸時代においても、商家が地面や建物を賃貸することは都市において広くみられた。賃貸される建物も商家(店舗兼住宅)であったり、都市下層民の住居であったりと、バリエーションに富んでいた。明治維新を経て、土地所有が法認され、不動産登記システムが整備されるなど、不動産業をめぐる基本的な仕組みが急速に整えられていき、また工業化・都市化が急速に進展するなかで、不動産業のあり方は急速に変化していった。とくに近代建築が、高層化によって都市における所有地の有効利用を可能とし、かつ高層化によるエレベータなどの付帯設備は、一定の面積による開発を有利とするようになる(規模の経済性がより発揮されるようになった)という状況の出現は、都市のオフィスの供給のあり方を変化させた。また鉄道とくに電気による郊外鉄道が発達すると、住宅供給のあり方も根本的変化し、職と住が分離した。さらに重化学工業化が進展すると、外国からの原料の搬入と消費地への近接性から、東京湾などでの沿岸立地の有利さが際だつようになり、沿岸での工業用地の開発が促進された。さらに日中戦争が勃発し、不動産価格が資産・賃貸ともに強度に統制されるなかで、工業化の進展に応じて、多くの農地が転用されていった。高度成長期には都市に流入する人口のために、都市周辺農村の宅地への転換がさらに進み、多くの工業用地が供給された。オイルショック以降は、不動産は都市再開発などで発達したが、バブルによって大きな痛手を受けることになった。
肝脂肪における移植後早期肝無機能の抑制と再生促進

1.exvivoでadenovirous遺伝子導入法を用い、Stat3の遺伝子導入が成功し、強い蛋白質表現も確認した:Western blot分析で、20%部分肝移植後24時間後、肝組織内Stat3蛋白質発現が増加し、その発現Peakは三日目に観察された。移植後肝組織内Stat3蛋白質発現の増加は免疫染色法でも確認された。2.Stat3の遺伝子導入が移植後のグラフトの再生を促進した:まず、我々は、Mouseの部分肝切除モデルでStat3の肝再生促進効果を検討した。その結果は、Stat3蛋白質がウイルスの量に、比例して、肝臓重量の増加を示した。次ぎに、ラート20%部分肝移植モデルでStat3の肝再生促進効果を検討した。Controlと比べ、Stat3治療群には急速なグラフトの重量回復が確認された。3.病理組織の検討:移植後5日目、門脈周囲の単球細胞浸潤が観察された。しかし、これは、Stat3導入群では観察されなかった。肝組織の構造は、普通として保存され、そして、明らかな壊死あるいは出血が、グループと関係なく、観察されなかった。4.肝障害の改善、およびStat3による肝機能:部分肝移植後三日目、血清中のALTとTbilのLevelを測定した。ALTは肝障害の指標として、Control群と比べ、Stat3が血清中ALTの増加を著しく減少させた(P<0.05)。肝機能の指標として、TbilがControl群より、Stat3導入群では低い水準を示した(P<0.05)。5.20%部分肝移植後Stat3DNA-bindingアセイ:部分肝移植後三日目で、Control群とくらべ、Stat3導入群では著しく高いStat3DNA-binding活性が確認された。7.adenovirous遺伝子導入法を用い、Zuker脂肪肝へのStat3遺伝子導入が成功し、強い蛋白質表現も確認した:Western blot分析で、Zuker fatty to Zuker Lean肝移植後24時間後、肝組織内Stat3蛋白質発現が増加し、その発現Peakは三日目に観察された。8.病理組織の検討:Zuker fatty to Zuker Lean肝移植グラフトの脂肪染色を用い、Stat3治療群では非治療群と比べ脂肪肝細胞の数は有意に減少したことを確認した。9.Stat3による肝機能の改善:日治療群に比べStat3治療群はより早い(17日対40日)肝機能の改善を認めた。1.ex vivoでadenovirous遺伝子導入法を用い、Stat3の遺伝子導入が成功し、強い蛋白質表現も確認した:Western blot分析で、20%部分肝移植後24時間後、肝組織内Stat3蛋白質発現が増加し、その発現Peakは三日目に観察された。
翻訳後修飾としてのチロシン硫酸化とその機能解明(タンパク質の分泌および選別輸送機構におけるチロシン硫酸化の役割)

タンパク質によっては、単なるポリペプチド鎖に翻訳されただけでは十分な機能を持たないが、翻訳後、様々な修飾を受けることによって初めてタンパク質としての機能を有するようになる。この様な翻訳後修飾の一つに、チロシン残基および糖鎖の硫酸化がある。タンパク質のチロシン残基および糖鎖の硫酸化は分泌タンバクにおいて主としておこり、タンパク質の分泌におけるシグナルとなるのではないかと考えられている。そこで、分泌タンパク質の細胞内輸送におけるチロシンおよび糖鎖の硫酸化の役割を研究する上で、硫酸化チロシンおよび糖鎖に特異的結合性を持つ分子量175kDaの膜結合性糖タンパク質を牛肝臓ミクロソーム膜画分において見いだした。この硫酸化チロシン残基および糖鎖に対して特異的に結合するタンパク質を硫酸化チロシンおよび糖レセプター(TyrS-Receptor)と呼ぶ。TyrS-Receptorは肝臓中で硫酸化チロシンおよび糖タンパク質と結合し、その細胞内輸送を媒介していると考えられている。TyrS-Receptorの機能として、生合成された新しい硫酸化チロシンタンパク質の運搬、または、外因性硫酸化チロシンタンパク質のエンドサイトシスが挙げられる。このTyrS-Receptorの研究を行うにあたって、遺伝子解析を行いアミノ酸配列を決定した結果、補体C3と非常に高いホモロジーを示した。また、抗TyrS-Receptor抗血清と抗補体C3抗血清を用いての交差性の検討の結果、この2つのタンパク質は同一のタンパク質であることが示唆された。このことより我々は、TyrS-Receptorはトランスゴルジネットワークからリガンドと共に輸送小胞中にパッケイジングされ、CURL小胞や細胞膜のような低pH領域でリガンドを解離した後、遊離の状態になったTyrS-Receptorは細胞外に分泌され、何らかの免疫機能を持つのではないかと考え、TyrS-Receptorの細胞内移動経路について考察した。生体内での硫酸化反応が発見されて以来、その役割は生体に取り込まれた薬物や異物の解毒代謝反応とみなされてきた。本硫酸化反応は食品や含硫アミノ酸の分解由来の無機硫酸がATPと酵素反応して活性硫酸となり硫酸転移酵素によって行われる。現在までに、タンパク質の硫酸化には、チロシン残基のみ報告されている。本年度の研究では、タンパク質に特有な硫酸化されたチロシン残基に特異的結合性を持つ分子量175kの膜結合性糖タンパク質硫酸化チロシンレセプター(TyrSR)をイヌ肝臓より精製し、補体成分C3とのホモロジー、特異性及び交差性について検討した。イヌ肝臓を材料として、ホモジナイズと遠心分離を繰り返し、ミクロソーム膜画分を得た。それを界面活性剤により可溶化し、内在性膜タンパク質(含TyrSR)を得た。その後、硫酸化チロシンをリガンドとしたAffi-Gel-10により精製した。次に、イヌ血清中より補体成分C3の精製を行った。精製したTyrSRとC3の硫酸化チロシンへの結合特異性をバッチ法により確認し、さらに、それぞれに対する抗血清を用いてウエスタンブロッティング法及びELISA法によって交差性を検討した。イヌ硫酸化チロシンレセプターはSDS-PAGEを行うと、ウシ硫酸化チロシンレセプターと同じ分子量175180kの位置にバンドが見られたが、ウシ硫酸化チロシンレセプターとは少し異なり、2本のバンドが確認された。アミノ酸配列はm-RNAの塩基配列より決定した。ウシ硫酸化チロシンレセプターは、マウス及びラットの補体成分C3やヒトの補体成分C3に対して、どのペプチドも70%以上の非常に高いホモロジーを示した。

結合特異性については、補体成分C3も硫酸化チロシンSepharoseに結合した。各種抗血清によりウエスタンブロッティング法及びELISA法による交差性について検討したところ、TyrSRと補体成分C3の交差性が見られ同一性が示唆された。タンパク質によっては、単なるポリペプチド鎖に翻訳されただけでは十分な機能を持たないが、翻訳後、様々な修飾を受けることによって初めてタンパク質としての機能を有するようになる。この様な翻訳後修飾の一つに、チロシン残基および糖鎖の硫酸化がある。タンパク質のチロシン残基および糖鎖の硫酸化は分泌タンパクにおいて主としておこり、タンパク質の分泌におけるシグナルとなるのではないかと考えられている。そこで、分泌タンパク質の細胞内輸送におけるチロシンおよび糖鎖の硫酸化の役割を研究する上で、硫酸化チロシンおよび糖鎖に特異的結合性を持つ分子量175kDaの膜結合性糖タンパク質を牛肝臓ミクロソーム膜画分において見いだした。この硫酸化チロシン残基および糖鎖に対して特異的に結合するタンパク質を硫酸化チロシンおよび糖レセプター(TyrS-Receptor)と呼ぶ。TyrS-Receptorは肝臓中で硫酸化チロシンおよび糖タンパク質と結合し、その細胞内輸送を媒介していると考えられている。今年度は、昨年度報告した「イヌTyrS-Receptorがイヌ補体C3であることの証明」を裏付けるために、イヌTyrS-Receptorの細胞内の移動経路について検討を行った。輸送小胞と細胞膜、両分泌拠点においてTyrS-Receptorの存在が確認されたことによって、これまで、あくまで仮説であったTyrS-Receptorの細胞内移動経路が明らかになったと同時に、補体C3がらみの研究だけでなく、翻訳後修飾としてのチロシン硫酸化の研究にも一つの役割を果たしたと言えるだろう。今後の研究課題としては、TyrS-Receptorが補体C3であることを明らかにするためにも、TyrS-Receptorのゴルジ体への局存性とTyrS-Receptorの細胞外への分泌についての検討を行う予定である。また、補体C3欠損症などの様々な疾患におけるTyrS-Receptorの役割についても検討したいと考えている。
炎症性 microRNA が司る皮膚創傷治癒及び生命恒常性維持機構の解明

microRNAは、標的mRNAに結合し蛋白質翻訳を調節する非コードRNAである。本研究では、miR-142ノックアウト(KO)マウスを作製し、黄色ブドウ球菌感染皮膚創傷治癒がmiR-142 KOマウスにおいて有意に遅延することを示した。さらにmiR-142 KO好中球は、細胞極性・走化性の変化に伴って、黄色ブドウ球菌貪食が遅延した。さらにmiR-142は、細胞骨格調節関連small GTPase遺伝子群の発現制御を担っていることが明らかとなった。本研究によってmiR-142は、黄色ブドウ球菌感染に対する生体防御反応に必要不可欠であることが実証された。平成28年度は、下記の成果を得た。(3)共焦点顕微鏡を用いた細胞の形態学的・運動機能学的な解析(トラッキング解析)では、miRNA KOマウスから採取した好中球の明らかな形態変化と、遊走能の変化を認めた。また採取した好中球の遊走時におけるSmall GTPasefamilyタンパクの発現量の明らかな増加を認めた。(4)ルシフェラーゼアッセイを用いて結合実験を行ったところ、タンパク発現量の増加を認めたsmall GTPase familyがmiRNAのターゲット遺伝子であることが確認できた。平成28年度は、感染創におけるmiRNAの機能解析を主な目的としていた。具体的には、(1)肉眼的、組織学的な創治癒解析、(2)in vivoイメージング装置を用いた炎症細胞の機能解析、(3)miRNAのターゲット遺伝子の解明である。実績概要に記したように、全体的な研究の流れは予定通りに進行している。今後は、通常の皮膚創傷治癒過程だけでなく、KOマウスのその他の表現系解析を目指す(現在進行中)。以上、これまでの進行状況を考えて、「2概ね順調に進展している」と判断した。平成29年度は、下記の成果を得た。(1)miR-142が司る皮膚創傷治癒過程・炎症・生命恒常性維持機構の詳細な解明を目的とし、CRIPR/Casシステムを用いて全身性miR-142遺伝子欠損(KO)マウスの作製・繁殖を行った。一方、組織特異的miR-142 KOマウス作製のため、miR-142にfloxを導入した2系統のマウスの作製に成功した。現在のところ、目立った異変は認められず問題なく生存可能であると考えている。(2)炎症関連miR-223の機能解析を行った。まずin situ hybridizationを用いて皮膚創部におけるmiR-223発現細胞の同定を行った。その結果、好中球に有意に発現していることが確認された。次に、黄色ブドウ球菌認識時における好中球活性化の分子メカニズム解明に取り組んだ。その結果、黄色ブドウ球菌を認識した好中球は、転写因子C/EBPalphaの発現が減弱することが明らかとなった。C/EBPalphaは、miR-223の発現を促進することが明らかとなっている。一方、miR-223は、炎症性サイトカインであるインターロイキン6(Il6)を翻訳抑制する。上記メカニズムを統合すると、黄色ブドウ球菌を認識した好中球は速やかにC/EBPalpha発現を減弱させ、miR-223発現減少を誘導する。その結果、Il6発現上昇を誘導させ、黄色ブドウ球菌排除に寄与していると判断された。本研究成果は、miR-223を標的とした黄色ブドウ球菌感染創改善効果を有する新規治療法の開発に寄与すると考えられる。平成29年度は、作出している種々の遺伝子改変マウスを用いて、皮膚創傷治癒解析、表現系解析、組織学的解析、原因遺伝子の解析を行う。そして実際に、遺伝子改変マウスや臨床サンプルを用いた解析・情報発信を行うことにより、研究成果の応用と問題点の克服を目指したい。形成外科学論文掲載料を支払うために確保していたため。4月20日現在、請求書をまだ受け取っていない。論文掲載料として支払う予定である。