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お雇い教師ヘンリー・ダイアーを介した日本・スコットランド間の教育連鎖の研究

(4)同展は「2005年日・EU市民交流年」におけるイベントとしてグラスゴウ市の主催で開催され,日本・グラスゴウ間の歴史的関係を象徴するものであった,などという諸点を明らかにした。2については,(1)ダイアーの著作物は,印刷・刊行された図書・冊子42点,雑誌・新聞における論文・論説70点から成る,(2)その主題は工学教育,工学研究,教育改革,社会改革,日本研究に大別できる,(3)19世紀末から世界における日本関心の高まりと日英協力の進展のなか,日本研究を精力的に推し進め特色ある成果を残した,(4)日本あるいはヨーロッパとの比較という方法を随所で駆使し考察を深めている,(5)日本についてはモデル国として位置づけ,日本から学んだ教訓を英国の改革に役立てようとした,(6)日本研究ではお雇い教師としての日本体験と日本観察を存分に生かし,日本が国際社会の一員として台頭してきた原動力の分析とおして,停滞する英国産業社会への教訓をさし示した,などという諸点を明らかにした。本年度は,H.ダイアー(Henry Dyer)がお雇い教師の職務を終えて帰国してから取り組んだ活動のうち,1.日本研究,および2.明治政府の帝国財務及工業通信員としての活動(日本の経済社会事情の英国への紹介)をめぐって,考察した。1については,(1)ダイアーの著作112点を収集し,著作一覧の作成と研究主題の動向分析をとおして,日本研究は晩年に精力的に進められたことを明らかにした。また,(2)研究内容を工学教育,工学研究,教育改革,社会改革,日本研究に大別し,(3)日本研究の背景として,19世紀末から世界における日本関心の高まりと日英協力の進展を指摘した。(4)日本研究の特色として,母国英国との比較のなかでの日本研究,日本近代化における教育(とくに国家的教育制度)の役割に対する着目,日本を教訓にした英国の社会改革の提案という3点を,具体的に明らかにした。(5)日本研究のなかでも,とくに『大日本・東洋の英国』(1904),『世界政治のなかの日本』(1909)という二大著作の内容の考察,ならびに諸種の新聞・雑誌上での書評の調査・分析をとおして,ダイアーの日本研究の特色と意義について考察を深めた。2については,(1)同通信員制度を明治34(1901)年11月26日に発案し最適任者としてダイアーを推薦したのは,駐英ロンドン領事・荒川巳次(工部大学校出身)であったこと,(2)ダイアーは明治35年3月に同通信員を委嘱されたことで日本政府を介して多くの日本情報・資料を自在に活用できるようになり,つねに日英両国の動向を観察しつつ分析したこと,(3)日本研究のための主要資料は政府が準備したものであったことと好意的な日本像の形成との関連性,などについて解明した。
神経可塑性メカニズムの解明～抗うつ薬の創薬を目指して～

抗うつ薬の神経可塑性に対する効果が注目されている。しかし、抗うつ薬が神経可塑性に与える影響の詳細は未だ不明な点が多い。抗うつ薬投与を行ったマウス海馬でBubR1の発現を調べたところ、BubR1のmRNAが抗うつ薬投与群で減少していることが分かった。また、培養神経細胞のBubR1を減少させると神経突起伸展が促進され、逆にBubR1を過剰発現させると神経突起伸展が抑制されることから、抗うつ薬がBubR1を介して神経可塑性を制御している可能性が示唆された。まず、Neuro2A細胞の神経突起伸展に対するBubR1の役割を調べた。BubR1を外在性に発現させ、All-trans Retinoic Acid (ATRA)による神経突起伸展を調べたところ、BubR1過剰発現群で有意に神経突起伸展が抑制された。次に細胞を変えてSH-SY5Y細胞でBubR1が神経突起伸展に与える影響を調べた。BubR1のタンパク量をウェスタンブロット法で調べたところ、ATRAで刺激し神経突起伸展を起こした状態では、コントロール群に対しBubR1が減少していることが分かった。またBubR1の下流であるId1のタンパク発現量が、ATRA処置によって減少することが分かった。次に免疫蛍光法を用いて、ATRAで処置したSH-SY5Y細胞のBubR1局在を調べた。ウェスタンブロットの結果に矛盾せず、ATRA処置群ではBubR1の蛍光強度が少ない像が見られたが、BubR1の細胞質への局在については変化がなかった。さらにSH-SY5Y細胞でsiRNAを用いてBubR1をノックダウンさせた。ウェスタンブロット法でノックダウンできていることを確認した。BubR1ノックダウン群とコントロール群の細胞にATRAを添加したところ、BubR1ノックダウン群で神経突起伸優位に増加した。このことから、BubR1の減少がSH-SY5Y細胞の神経突起伸展を促進することが示唆された。初代培養神経細胞での軸索伸展、樹状突起伸展に対する役割を調べるために、E18胎児マウス海馬ニューロンを培養する系を確立させた。うつ病モデル動物としてSocialDefeatストレス実験系を確立させた。BubR1が海馬のPrimary Neuronの神経突起伸展に及ぼす影響を調べるため、E18胎児マウス海馬Neuronを培養し、BubR1をGFPと同時に外在的に発現させて、神経突起伸展をShollPlot法を用いて測定したところ、BubR1を発現させた神経細胞では神経突起伸展が抑制されていることが分かった。次に、ストレス脆弱性を有するBALB/cマウスに慢性ストレス負荷したうつ病モデルマウスを用いて、慢性ストレス負荷後の海馬BubR1mRNAの発現を調べたところ、予想に反してBubR1の減少が認められた。また、慢性ストレス負荷群に抗うつ薬を投与した時にはBubR1がさらに減少することが分かった。また、Neuro2a細胞に直接イミプラミンを添加してもBubR1mRNA減少は認められなかった。これらの結果から、BubR1の減少と神経の形態学的な変化が、直接抗うつ効果を引き起こしている仮説を確かめることは出来なかった。BubR1との相互作用が指摘されているTAO1をはじめ、13種類のキナーゼについて慢性ストレス負荷後と抗うつ薬投与後のmRNA発現量を調べたが、ストレス依存的あるいは抗うつ薬依存的にBubR1と同様の変化が見られる因子を見つけることは出来なかった。一方で、うつ病モデルマウス海馬におけるFox03やNoxaなどの他因子の発現変化をとらえることが出来た。神経細胞の細胞死に対する役割を調べるため、Neuro2a細胞を用いてエトポシドによる細胞死をPropidium iodide染色によって調べたところ、BubR1やTA01をノックダウンさせると細胞死が抑制されることが分かった。
歯根膜由来血管内皮細胞前駆細胞を利用した血管新生促進技術の確立と矯正治療への応用

我々は、牽引や圧迫刺激が歯根膜由来血管内皮前駆細胞の血管新生能力を活性化するために働くキー遺伝子を同定すべく研究を開始した。牽引刺激による血管周皮細胞への分化マーカーであるα-SMAの発現の上昇に伴い、血管内皮細胞への分化マーカーであるTie-2の発現の低下が認められた。一方、圧迫刺激を加える系でも、上記血管構成細胞マーカー遺伝子の発現調査を試みたところ、牽引刺激とは異なり血管周皮細胞マーカーの発現の低下とともに、血管内皮細胞マーカーの発現上昇が認められた。現在、この細胞の血管新生能力を活性化するために働くキー遺伝子の同定に向けて調査を継続中である。歯科矯正治療による歯の移動時の歯根膜周囲組織では、牽引側歯槽骨周囲の骨形成や圧迫側歯槽骨の骨吸収に加え、歯根膜組織中の線維組織や血管組織ならびに神経組織のリモデリングが顕著である。これらのリモデリングを担う間葉系幹細胞などの組織形成性細胞や破骨前駆細胞などの組織吸収性細胞が、骨髄から血流を介して歯根膜周囲組織に効率良く供給されるためには、歯根膜周囲での旺盛な血管新生が必要である。しかし、牽引ならびに圧迫刺激が歯根膜周囲の血管新生を担う細胞にどのように影響するか明らかではない。そこで、牽引や圧迫刺激が歯根膜由来の血管内皮前駆細胞endothelial progenitor cell(EPC)の血管新生能力を活性化するために働くキー遺伝子を同定するために以下の調査を開始した。歯根膜由来EPCとして確立されたSCDC2細胞にI型コラーゲン塗布磁気ビーズを付着させ、永久磁石による牽引力や圧迫刺激を掛けた場合に起こる血管形成に関わる遺伝子発現変化の調査を開始した。まずは、我々が以前に報告したmyofibroblastの分化マーカーであるalpha-smooth muscle actin (α-SMA)の発現が牽引刺激で上昇するかどうかについて確認をすると共に、その際に血管形成関連遺伝子の発現にも変化が生じるかどうかについてqRT-PCRを用いて調査した。その結果、牽引力が作用する時間を変化させてα-SMAの発現レベルを変化させると、血管形成関連遺伝子のいくつかの発現レベルは、それと相関して変化することが判明した。この事実は、歯根膜由来細胞に外力が作用した際に、血管形成関連遺伝子の発現が変化することを意味しており、歯根膜由来EPCに対する機械的刺激が、この細胞の血管構築能力に影響する事を示唆するものであり、たいへん興味深い。歯科矯正治療による歯の移動時の歯根膜周囲組織のリモデリングを担う間葉系幹細胞などの組織形成性細胞や破骨前駆細胞などの組織吸収性細胞が、骨髄から血流を介して歯根膜周囲組織に効率良く供給されるためには、歯根膜周囲での血管新生が必要である。本研究では、牽引や圧迫刺激が歯根膜由来の血管内皮前駆細胞(EPC)の血管新生能力を活性化するために働くキー遺伝子を同定するために各調査を実施した。昨年度より開始しているI型コラーゲン塗布磁気ビーズを用いた牽引刺激による血管構成細胞マーカー遺伝子発現変化パターンの特徴について調査を進めた。興味深いことに、牽引刺激による血管周皮細胞への分化マーカーであるalpha-smooth muscle actin (α-SMA)の発現の上昇に伴い、血管内皮細胞への分化マーカーであるTie-2の発現の低下が観察され、歯根膜由来EPCの各血管構成細胞への分化がメカニカルストレスにより制御されることが強く示唆された。現在、その他の血管周皮細胞マーカーや血管内皮細胞マーカー遺伝子の発現パターンの変化についても幅広く調査を進めているが、その他の細胞分化マーカーの発現が必ずしもα-SMAやTie-2と同様な発現変化をしない場合があることから、牽引刺激の作用強度や作用時間についての条件設定を変えながら安定した結果が得られるように調整中である。一方、圧迫刺激を加える系でも血管構成細胞マーカー遺伝子の発現調査を試みたところ、牽引刺激とは異なり血管周皮細胞マーカーの発現低下とともに、血管内皮細胞マーカーの発現上昇が認められた。このように、圧迫刺激における血管構成細胞分化調節機構の発現が再現性良く認められる傾向にあることがわかり、今後のEPCの血管新生能力を活性化するために働くキー遺伝子を同定するために用いる実験系としては、まずは圧迫刺激モデルが適していることを明らかとした。26年度が最終年度であるため、記入しない。口腔生化学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度の実験計画に従い、歯根膜由来EPCの牽引刺激に応答する血管形成制御遺伝子の同定を目的として、I型コラーゲン塗布磁気ビーズを用いた牽引刺激を歯根膜由来EPC(SCDC2細胞)に作用させたところ、複数の血管形成関連遺伝子の発現レベルが変化することが確認できた。加えて、牽引時間の変化により、これらの発現レベルが変化することも確認できた。このように、我々の実験系の動作確認ができ、機械的刺激が血管形成関連遺伝子の発現レベルも調節しうることを見出した。

一方、圧迫刺激による上記遺伝子発現レベルの変化についても予備実験レベルで実施している。こちらも、myofibroblastの分化マーカーの発現変化や血管形成関連遺伝子の発現レベルの変化が確認された。以上のように、概ね遺伝子発現調査の段階までは実験基盤が確立されつつあるが、機械刺激に伴う細胞内シグナル伝達系の調査については開始したところであり、若干の進行の遅れが生じている。若干の遅れを生じている歯根膜由来EPCの機械的刺激に伴う血管形成関連遺伝子発現変化をもたらす細胞内シグナル伝達経路の検索を進めると共に、この細胞の血管形成関連遺伝子発現レベル調節遺伝子としての候補遺伝子ピックアップを早期に完了したい。次いで、平成26年度の実験計画に従い、in vivo実験による歯根膜由来EPCの血管形成制御遺伝子の同定に進みたい。
ケモカインの造血、リンパ球形成における作用機構に関する研究

発生過程において、細胞の臓器間、臓器内の移動と局在は重要であるがその制御機構は十分明らかでなかった。血液系細胞は、胎生期の発生過程で臓器間をダイナミックに移動することが知られている。私たちは、遺伝子改変マウスと競合下造血再構築アッセイなどを用いて、血管内皮細胞周囲のCXCL12が、発生過程における、末梢血管から骨髄への造血幹細胞、骨髄球のホーミングに必須であることを明らかにし、CXCL12産生細胞は胎児骨髄での造血幹細胞のニッチ(特定の機能を担う特定の微小環境)である可能性を示した。一方、成体においては、主たる造血臓器である骨髄での発生過程における血球の移動と局在は明らかでなかった。私たちは、Bリンパ球の発生において、最も初期の前駆細胞(プレプロB細胞)は、CXCL12を必要とし、プレプロB細胞の次の発生段階であるプロB細胞はIL-7を必要とすることから、骨髄のCXCL12発現細胞とIL-7発現細胞に注目し、これらの細胞を可視化した。その結果、CXCL12発現細胞は、ストローマ細胞の一部で、IL-7発現細胞とは異なる細胞で、両者は離れて分布することを見出した。さらに種々の造血前駆細胞をも可視化し、多能性前駆細胞の大部分は、CXCL12発現細胞の突起に結合し、プレプロB細胞は、その細胞体に結合していること、プロB細胞はCXCL12発現細胞を離れ、IL-7発現細胞に結合していることを明らかにした。これより、CXCL12発現細胞、IL-7発現細胞が、Bリンパ球の分化段階特異的なニッチとして機能すること、血球前駆細胞の分化に伴う局在とニッチ間の移動が明らかとなり、その局在と維持をCXCL12が正に制御することが示唆された。以上の成果は、血液系・免疫系細胞の発生における臓器間、臓器内での細胞の移動と局在及びその制御機構の理解を大きく進めたと考えられる。1.造血の場は、胎生期、ダイナミックに移動し、大動脈壁から胎児肝に移り、末梢血管を経て、骨髄に至る。CXCL12欠損マウス胎児の造血幹細胞数を機能的に定量したところ、正常マウスと比較して、胎児肝で著差なかったが、骨髄で著明に減少しており、末梢血では著増していた。次に、CXCL12欠損マウスの血管内皮細胞のみにCXCL12を発現させたところ、造血幹細胞の骨髄への定着が完全に回復した。CXCL12発現細胞は、胎児骨髄の血管に隣接して分布していた。以上より、血管内皮周囲のCXCL12が、発生過程における、末梢血管から骨髄への造血幹細胞のホーミングを支持することが明らかとなった。この研究は、造血幹細胞の生理的動態制御の分子機構の一つを明らかにしたと共に、CXCL12発現細胞が、長らく謎とされている造血幹細胞ニッチである可能性を示した。2.始原生殖細胞も、発生過程でダイナミックに移動し生殖腺に至る。正常マウスと比較して、CXCL12欠損マウスの始原生殖細胞は、尿膜基部での出現、腸間膜での移動において著差は認められなかったが、生殖腺へのホーミングが三分の一以下に減少していた。以上より、CXCL12は、造血以外でも、発生過程における臓器への細胞のホーミングの制御に必須のサイトカインであることが明らかとなった。

3.CXCL12欠損マウス胎児の詳細な解析により、CXCL12は、Tリンパ球発生において胎児胸腺への移入後T前駆細胞の増幅に関与していることが明らかとなった。この機能は、CXCR4欠損細胞を移植したキメラマウスの解析により、成体胸腺においても確認された。4.CXCL12の生理的標的細胞であるBリンパ球前駆細胞およびCXCL12産生細胞を可視化することにより、骨髄での、Bリンパ球前駆細胞の発生過程における特定のストローマ細胞(ニッチ)間の制御された移動を初めて明らかにした。哺乳動物の発生過程において、細胞の臓器間、臓器内の移動と局在およびその制御は重要であるがその分子機構は十分明らかでなかった。血液系細胞は、胎生期の発生過程で臓器間をダイナミックに移動することが知られている。私たちは、遺伝子改変マウスを用いて、血管内皮細胞周囲のCXCL12が、発生過程における、末梢血管から骨髄への造血幹細胞、骨髄球のホーミングに必須であることを明らかにし、CXCL12産生細胞は胎児骨髄における造血幹細胞のニッチである可能性を示した。一方、成体で血液細胞が産生される臓器である骨髄において、Bリンパ球の発生における最も初期の前駆細胞(プレプロB細胞)、最終分化した形質細胞は、ケモカインCXCL12を必要とする。骨髄のCXCL12発現細胞とIL-7発現細胞を可視化すると、CXCL12発現細胞は、ストローマ細胞の一部であり、IL-7発現細胞とは異なる細胞で、両者は一定の間隔をあけて分布していた。多能性前駆細胞の大部分は、CXCL12発現細胞の突起に結合し、プレプロB細胞は、CXCL12発現細胞の細胞体に結合していた。さらに、プレプロB細胞の次の発生段階であるIL-7を必要とするプロB細胞は、CXCL12発現細胞を離れ、IL-7発現細胞に結合しており、次のプレB細胞はIL-7発現細胞から離れていた。以上より、CXCL12発現細胞、IL-7発現細胞は、Bリンパ球の分化段階特異的なニッチ(特定の機能を担う特定の微小環境)として機能する細胞で、血球前駆細胞の分化に伴う局在とニッチ問の移動がはじめて明らかになり、その局在と維持をCXCL12が正に制御することが示唆された。
食品の着色反応を利用したクロム染料代替技術の開発

前年度では、グルコースなどの還元糖を酸化することによって得られる糖酸化物を利用することによって、羊毛や牛革のようなタンパク質繊維の着色時間を従来の還元糖と比較して劇的に短縮することに成功した。さらに、羊毛の着色条件を詳細に検討することによって、2時間程度の反応時間で黒色に近い茶褐色に着色できる興味深い結果も得られた。しかしながら、新たな課題として、還元糖を酸化する際には、副生する塩酸によって溶液が強酸性になるため、羊毛タンパクの加水分解や変性が起こる可能が挙げられる。その結果、羊毛の優れた特徴である機械強度、吸湿性、はっ水性が着色後に影響を受ける可能性が高い。そこで、本年度の前半では、先程の羊毛を濃色で着色する条件でのこれらの繊維物性に対する影響について調べた。はじめに、機械強度への影響を調べたところ、予想に反して検討した反応時間において機械強度の低下はほとんど認められなかった。通常のメイラード反応と同様に、タンパク質のアミノ基や水酸基の間で架橋反応が進行したと推測できる。次に、着色後の羊毛のはっ水性と吸湿性について調べた。はっ水性に関しては、着色時間とともに減少したが、濃色に着色させた羊毛でもはっ水性を維持する結果が得られた。同様に、着色による吸湿性への影響が無いことも確認することができた。結果として、副生した酸による加熱による羊毛繊維の表面および中心部へのダメージは小さいことが明らかとなった。研究の後半では、還元糖以外の化合物として、トレハロースなどの非還元糖やキシロトールやグリシトールなどの糖アルコールを用いて着色実験を行った。興味深いことに、環状ポリオールであるイノシトールを用いた場合、劇的に着色濃度が大きくなる結果が得られた。この結果は、従来のクロム染料を用いた着色の代替技術となりうる可能性を示している。本年度では、還元糖であるグルコースの酸化物で着色した羊毛の繊維物性について評価を行ったところ、羊毛の機械強度、吸湿性、はっ水性への影響が小さいことが確認することができた。この結果は、糖質の酸化物を利用した着色技術が、従来の染料を用いた着色の代替技術となりうる可能性を示している。さらに、炭素鎖長や水酸基の立体配置の異なる還元糖や糖アルコールを利用して、グルコースと同様の実験を行ったところ、炭素数6の環状のポリオールであるイノシトールを利用した場合、クロム染料に匹敵する黒色に羊毛を着色することができた。実用化に向けて、色移りや色落ちなどの染色堅ろう度の検討や、さらなる着色時間の短縮が必要となるが、科研費研究の本年度に予定していた目的を概ね達成することができた。今後、以下の3点を中心に研究を進める。はじめに、1グルコース酸化物で着色した羊毛の色落ちや色移りなどの染色堅ろう度について評価する。次に、2羊毛以外のタンパク質材料として皮革の着色について検討する。研究の初期段階では、耐熱性の高いクロムなめしを行った牛革の着色について調べる。この場合でも羊毛よりも耐熱温度が低いため、着色時の処理温度についても十分に検討する必要がある。これまでの研究結果から、還元糖による着色反応では、タンパク質のアミノ基間で色素を形成するため、結果としてタンパク質間の架橋効果(なめし効果)も期待できる。研究の後半では、なめし皮より耐熱温度の低い生皮を用いて、着色となめし効果の両方について検討する。1および2の研究が順調に進んだ場合、3着色効果の高い環状ポリオールであるイノシトールを用いた羊毛や皮革の着色実験を詳細に行う。当研究室では、食品のメイラード反応を利用した繊維材料の着色について研究を行っており、グルコースなどの還元糖と羊毛などのタンパク質繊維を反応させることによって、繊維を黄色や茶色に発色できることを報告している。しかしながら、一般的な染料を用いた染色方法と比較した場合、濃色時の着色時間が長い問題点を残している。例えば、羊毛を茶色に着色する場合には、反応性の高い還元糖であるキシロースを用いても8時間以上の反応時間が必要となる。着色反応の遅い原因の一つとして、還元糖の空気酸化で得られるオソン類の生成が考えられる。本研究では、還元糖をフェントン反応によって短時間で酸化し、得られた還元糖の酸化物を用いて着色実験を行った。予備実験として、フェントン反応後のグルコース水溶液を用いて羊毛の着色実験を行ったところ、2時間程度の短時間で茶褐色の着色が認められた。この原因として、還元糖の酸化によって上記のオソン類の生成が予測できる。一方、グルコースのみで着色を行った系では、4時間の反応でも淡黄色の僅かな着色しか認められなかった。さらに、羊毛以外の汎用繊維の着色についても検討した。これまでの還元糖を用いた着色反応と同様に、化学構造にアミノ基を持つ絹やナイロンの着色は認められたが、一方、アミノ基を持たないポリエステル、綿、レーヨン、アクリルでは、グルコース酸化物による着色が認められなかった。この結果からも、還元糖の酸化物においてもメイラード反応が進行したと考えられる。同様に、グルコース以外の還元糖を着色原料に用いて、羊毛の着色実験を行った結果、糖水酸基の立体配置ではなく、分子中の水酸基の数に大きく影響を受ける結果も得られた。最後に、各種反応条件を詳細に検討した結果、2時間程度の反応時間においても羊毛を黒色に近い濃色に着色することが可能となった。本年度では、還元糖の代わりに還元糖であるグルコースの酸化物を利用した羊毛の着色の可否について検証した。

その結果、従来の還元糖を利用した系と比較して、羊毛の着色時間の大幅な短縮が可能となった。従来の染料を用いた系と同様の条件で羊毛を着色したところ、茶色から茶褐色までの濃色で羊毛を着色することができた。しかしながら、クロム染料での羊毛の着色である黒色と比較すると、得られた羊毛は青みが不足しており茶系統の色相を示している。そこで、還元糖の酸化反応であるフェントン反応および羊毛の着色反応であるメイラード反応の条件を詳細に検討した結果、やや青みが不足しているものの、目視では黒色と判断できる濃色に羊毛を着色することも可能となった。以上の理由から、現段階での達成度としては、おおむね順調に進展していると考えられる。前年度では、グルコースなどの還元糖を酸化することによって得られる糖酸化物を利用することによって、羊毛や牛革のようなタンパク質繊維の着色時間を従来の還元糖と比較して劇的に短縮することに成功した。さらに、羊毛の着色条件を詳細に検討することによって、2時間程度の反応時間で黒色に近い茶褐色に着色できる興味深い結果も得られた。しかしながら、新たな課題として、還元糖を酸化する際には、副生する塩酸によって溶液が強酸性になるため、羊毛タンパクの加水分解や変性が起こる可能が挙げられる。その結果、羊毛の優れた特徴である機械強度、吸湿性、はっ水性が着色後に影響を受ける可能性が高い。そこで、本年度の前半では、先程の羊毛を濃色で着色する条件でのこれらの繊維物性に対する影響について調べた。はじめに、機械強度への影響を調べたところ、予想に反して検討した反応時間において機械強度の低下はほとんど認められなかった。通常のメイラード反応と同様に、タンパク質のアミノ基や水酸基の間で架橋反応が進行したと推測できる。次に、着色後の羊毛のはっ水性と吸湿性について調べた。はっ水性に関しては、着色時間とともに減少したが、濃色に着色させた羊毛でもはっ水性を維持する結果が得られた。同様に、着色による吸湿性への影響が無いことも確認することができた。結果として、副生した酸による加熱による羊毛繊維の表面および中心部へのダメージは小さいことが明らかとなった。研究の後半では、還元糖以外の化合物として、トレハロースなどの非還元糖やキシロトールやグリシトールなどの糖アルコールを用いて着色実験を行った。興味深いことに、環状ポリオールであるイノシトールを用いた場合、劇的に着色濃度が大きくなる結果が得られた。この結果は、従来のクロム染料を用いた着色の代替技術となりうる可能性を示している。本年度では、還元糖であるグルコースの酸化物で着色した羊毛の繊維物性について評価を行ったところ、羊毛の機械強度、吸湿性、はっ水性への影響が小さいことが確認することができた。この結果は、糖質の酸化物を利用した着色技術が、従来の染料を用いた着色の代替技術となりうる可能性を示している。さらに、炭素鎖長や水酸基の立体配置の異なる還元糖や糖アルコールを利用して、グルコースと同様の実験を行ったところ、炭素数6の環状のポリオールであるイノシトールを利用した場合、クロム染料に匹敵する黒色に羊毛を着色することができた。
日本人の大腸癌発生・進展への女性ホルモンの関与-エストロゲンは善玉か?悪玉か?-

75歳未満の日本人大腸癌症例685例および対照778例につき、エストロゲン受容体β遺伝子(ESR2)シトシン-アデニン(CA)repeat多型を調べた。閉経後女性結腸癌ではESR2 CA repeat長鎖がリスク因子であり、このリスクは、エストロゲン関連因子である、イソフラボン摂取量およびbody mass index(BMI)の影響を受けることがわかった。直腸癌、男性、閉経前女性では、この関係は認められなかった。日本人大腸癌とエストロゲンの関係を明らかにする目的で、日本人の人体材料を用い、エストロゲンに関連した多方面からの解析を行っている。これまで東京都健康長寿医療センターの高齢者剖検例の解析から、女性の大腸癌とESR2 CA repeat遺伝子多型の関係が示唆された。短鎖を持つことが大腸癌リスクを高めていたが、欧米では長鎖がリスク因子という、逆の報告がなされており、これまでの我々の結果が、高齢女性の特徴か日本人女性の特徴かを明らかにする必要があった。そのため、通常年齢層の大規模な日本人大腸癌case-control群である"福岡大腸癌研究"例につき、これまでと同様の検討を行っている。大腸癌症例約700例、対照約800例につき、ESR2 CA repeat多型の解析が終了した。現在、イソフラボン摂取量、肥満度(両者ともエストロゲンに関連する)等を考慮し、性別、年齢別の大腸癌リスクを検討している。(共同研究者:九州大学・古野純典教授、山本健准教授、大中佳三講師他)遺伝子多型解析と並行して、大腸癌組織におけるエストロゲンの臨床病理学的意義の検討を行っている。臨床病理学的情報の完備した大規模症例群についてER-β、エストロゲン代謝酵素群、ミスマッチ修復遺伝子産物等の免疫染色が進行中である。また、大腸癌は老年病という側面もあるため、高齢者大腸癌についての検討を目的として、東京都健康長寿医療センターの大腸癌症例63例から、大腸癌および非癌部組織を収集し、凍結材料とした。そのうち、女性大腸癌症例の一部につき、癌部・非癌部組織の性ステロイドホルモン濃度測定を行った。これまで東京都健康長寿医療センターの高齢者剖検例の解析から、女性の大腸癌とestrogen receptor-β遺伝子(ESR2)CA repeat多型の関係が示唆された。そのため、通常年齢層の大規模な日本人大腸癌case-control群につき、これまでと同様の検討を行うことを計画した。74歳以下の大腸癌case-control群である"福岡大腸癌研究"を対象とした。大腸癌症例約700例、対照約800例につき、ESR2 CA repeat多型の解析を行い、性・年齢別の大腸癌リスクとの関係を検討した。閉経後女性結腸癌では長鎖がリスクという欧米と同様の結果が示され、上記の高齢者剖検例の結果は高齢女性に特徴的なものであることが判明した。直腸癌、男性、閉経前女性では、ESR2 CA repeat多型と大腸癌リスクの関係は認められなかった。上記症例群については、イソフラボン摂取量、肥満度(両者ともエストロゲンに関連する)等の情報が完備しているため、これらがESR2 CA repeatと大腸癌リスクの関係に及ぼす影響についても検討を加えている。(共同研究者:九州大学・古野純典教授、山本健准教授、大中佳三講師他)日本人大腸癌とエストロゲンの関係を明らかにする目的で、日本人の人体材料を用い、エストロゲンに関連した多方面からの解析を行ってきた。これまで東京都健康長寿医療センターの高齢者剖検例の解析から、女性の大腸癌とestrogen receptor-β遺伝子(ESR2) CArepeat多型の関係が示唆された。短鎖を持つことが大腸癌リスクを高めていたが、欧米の閉経後女性では、長鎖がリスク因子という逆の報告がなされており、これまでの我々の結果が、高齢女性の特徴、日本人女性の特徴、どちらを示しているのか、明らかにする必要があった。74歳以下の大腸癌case-control群である“福岡大腸癌研究"を対象とした。大腸癌症例約700例、対照約800例につき、ESR2 CA repeat多型の解析を行い、性・年齢・部位(結腸/直腸)別の大腸癌リスクとの関係を検討した。閉経後女性結腸癌では、長鎖がリスクという欧米と同様の結果が示され、上記の高齢者剖検例の結果は高齢女性に特徴的なものであることが判明した。

直腸、男性、閉経前女性では、ESR2 CA repeat多型と大腸癌リスクの関係は認められなかった。また、イソフラボン摂取量、body mass index(BMI)(両者ともエストロゲンに関連する)が、ESR2 CA repeatと大腸癌リスクの関係に及ぼす影響についても検討したところ、短鎖を有する閉経後女性ではイソフラボン摂取による結腸癌予防効果が高いことがわかった。低BMI閉経後女性では、ESR2 CA repeat多型による結腸癌リスクの差が顕著だった。(共同研究者:九州大学・古野純典教授、山本健准教授、大中佳三講師他)ESR2 CA repeat多型と大腸癌リスクの関係は、閉経後女性結腸癌でのみ極めて重要であり、しかも年齢によりリスクが逆転するという現象を明確にすることができた。肥満度やイソフラボン摂取量の影響についての検討は当初予定していなかったが、いずれもエストロゲンと密接に関係するものであり、閉経後女性結腸癌の病態におけるエストロゲンの意義がより明確になると期待している。24年度が最終年度であるため、記入しない。ESR2 CA repeat多型と女性結腸癌リスクの関係が、年齢により逆転することより、結腸癌病態メカニズムを、エストロゲンシグナルと加齢という観点から調べる必要が出てきた。臨床病理学的情報の完備した症例群の手術材料について、ER-β、エストロゲン代謝酵素群、ミスマッチ修復遺伝子産物等の免疫染色および癌部・非癌部組織の性ステロイドホルモン濃度測定を行っている。このような解析を通じ、大腸癌において、エストロゲンが善玉として働くのか、悪玉として働くのかを明らかにしたいと考えている。
平滑筋細胞内でのミオシン線維安定化因子の機能解析

1.我々が平滑筋より単離したミオシン線維安定化因子(38k蛋白質)はヒトp32のホモログである。p32はミトコンドリア内に取り込まれる際にN端の約70アミノ酸配列が消化されることが知られている。我々は平滑筋が形質変換すると細胞内でのp32の分布が細胞質から核へと変化することを見い出した。ニワトリ平滑筋から得た38k蛋白質のcDNAはシグナル配列よりも下流の配列しか含んでおらず、cDNAライブラリーを作製しシグナル配列をも含む全長のCDNAを得ようとしたが、いずれのクローンもシグナル配列の付近がGC-richで、cDNA合成が停止していた。すでに配列のわかっているヒトp32の全長の配列を単離するため、市販HeLa細胞cDNAライブラリーをテストしたが、いずれのライブラリーにもp32の全長をコードするcDNAがなかった。そこでHeLa細胞のcDNAより、RT-PCRによってヒトp32の全長のcDNAを単離した。今後このシグナル配列を認識する抗体を作製する予定である。2.マウス大動脈平滑筋由来の細胞株AC01を使って、分化のレベルを調節する実験を行った。すでに培養液の血清濃度を低下させることによって平滑筋特異的な蛋白貧すなわちα-アクチン、高分子量型カルデスモン、デスミンの発現レベルが増加することがわかった。また逆にPDGFの添加によりこれらの蛋白質の発現レベルが著しく低下し、細胞骨格が消失した脱分化の状態になることが確かめられた。38k蛋白質の分布は脱分化の状態では細胞骨格から核小体に変わることがわかり、この蛋白質が分化のマーカーになることがわかった。我々はこの数年間平滑筋細胞内のミオシン線維を安定化する因子(38kDa蛋白質)の研究を行ってきた。この蛋白質の性質を解析するために平成12年度には以下の様な実験を行った。(1)ニワトリ38kDa蛋白質のシグナル配列の解析:この38k蛋白質はヒトp32のホモログであることがクローニングによってわかっている。p32はミトコンドリアにも分布する蛋白質で、ミトコンドリア内に取り込まれる際にN端の約70アミノ酸配列が消化されることが報告されている。すなわちp32は70アミノ酸残基のシグナル配列をもつことになる。我々がニワトリ平滑筋からRT-PCR法で得ていた38k蛋白質のcDNAはシグナル配列よりも下流の配列しか含んでいなかったので、シグナル配列をも含む全長のcDNAを得ようと努力した。cDNAライブラリーを作製しスクリーニングを行ったが、いずれのクローンもシグナル配列の付近でGC-richになっていて、cDNA合成がストップしていた。そこですでに配列のわかっているヒトp32の全長の配列をpETベクターにサブクローニングし大腸菌で発現する実験が進行中である。今後この発現蛋白質とミオシンとの結合実験をおこないシグナル配列のミオシンの性質に及ぼす影響を調べる予定である。(2)38kDa蛋白質の細胞内分布と平滑筋分化との相関:マウス大動脈平滑筋由来の細胞株ACO1を使って、分化のレベルを調節する実験を行った。すでに培養液の血清濃度を低下させることによって平滑筋特異的な蛋白質すなわちα-アクチン、高分子量型カルデスモン、デスミンの発現レベルが増加することがわかった。ニワトリ平滑筋から単離したミオシン線維を安定化する因子38k蛋白質のアミノ酸配列から、この蛋白質はヒトp32のホモログであると考えられる。

ヒトp32はミトコンドリアにおいても機能することが知られていて、N端から72アミノ酸残基がミトコンドリア内膜への取込みのシグナル配列として機能している。我々は平滑筋が形質変換すると、細胞内でのp32の分布が細胞質から核へと変化することを見い出した。細胞内でp32が移動するときにシグナル配列がどのような機能をしているのかを明らかにし、平滑筋の形質変換におけるp32の役割を解明することを目標のひとつとしている。平成12年度にはニワトリ砂嚢のmRNAからcDNAライブラリーを作製して、ニワトリp32の全長のcDNAを得ようと努力したが、目標を達成できなかった。その原因としてシグナル配列が極めてGC-richのためにシグナル配列の部分をコードするcDNAの合成が困難であることがわかった。そこで平成13年度ではHeLa細胞よりヒトp32の全長をコードするcDNAを単離することを試みた。市販のHeLa細胞のcDNAライブラリーを3種類購入し、さらに共同研究者から1種類のライブラリーを得て抗体によるスクリーニングをした。しかしいずれのライブラリーにもp32の全長をコードするクローンは含まれていなかった。最も長いクローンでも全長より約60bp短い配列であることがわかった。そこでHeLa細胞を培養してmRNAを単離し、RT-PCRによってヒトp32の全長のcDNAを合成することにした。この際GC-richな配列のcDNAの合成をするために、高温(50-60°C)でも機能する逆転写酵素を使用することにした。最近になってようやく850bpのp32の全長のcDNAが得られるようになった。現在これをもとにシグナル配列を大腸菌で発現しシグナル配列を認識する抗体を作製する準備をおこなっている。さらにシグナル配列を変異化させたp32の配列をp3FFLAG-CMV7.1にサブクローニングする。これを平滑筋細胞内に遺伝子導入し、その挙動をFLAG抗体を使って調べる実験が進行中である。またシグナル配列をもつp32と、その部分を欠失しているp32とを大腸菌で発現し、ミオシンとの結合性を比較する予定である。
リラクタンストルクを利用したACモータの高度駆動制御法の研究

本研究は、同期リラクタンスモータを主たる対象に、同モータの特色が最も活かせ、しかし最も技術的難度が高い駆動制御技術と言われているセンサレス(位置センサを要しない)ベクトル制御技術の確立を目指し、当初、以下の研究計画を立てた。1)磁束飽和を考慮した、、または磁束飽和にロバストな動的数学モデルの構築。2)同動的数学モデルに基づく低中速度域で有効な、状態オブザーバまたは外乱オブザーバによる回転子位置推定法の確立。3)2)項の推定法を利用した低中速度域で有効なセンサレスベクトル制御法の確立。4)同数学モデルに基づくゼロ速を含む低速度域で有効な、高周波信号印加による回転子位置推定法の確立。5)4)項の推定法を利用したゼロ速を含む低速度域で有効なセンサレスベクトル制御法の確立。6)3)、5)項の制御法を周波数ハイブリッド結合し、全速度領域で動作可能なセンサレスベクトル制御法の確立。これに対して、以下の成果を得た。研究課題1)3)に関しては、概ね計画通りの成果を上げた。ただし、第3項に関しては、供試用の同期リラクタンスモータの入手に手間取り、研究期間終了時点では、実機実験のデータ取得が未完であり、終了後も継続してデータを取得している。研究課題4)、5)項に関しては、概ね計画通りの成果を上げた。ただし、供試モータの入手が手間取ったため、入手し易い永久磁石同期モータ(リラクタンストルクを利用したもの)を用意し、本研究を遂行した。研究課題6)は、実験主体の研究であり、この遂行には、上記3)項に関連した実験完了を待つ必要がある。このため、研究期間終了時点では、未実施である。なお、継続中の第3)項に関する実験終了後に、計画通り、第6)項の研究を遂行する所存である。1.年度当初の計画概容年度当初、以下の計画を立てた。1)動的数学モデルの再構築モータの数学モデルの構築に際しては、先ず、モータ物理量を表現するための2軸座標系の基軸を決定しなければならない。同期リラクタンスモータに関しては、このための基軸として、正突極と逆突極の2種が存在し得る。これらの選定の特質を検討・解明する。この上で、動的数学モデルの再構築を目指す。2)低中速度用の位相推定法の検討再構築の動的数学モデルに基づき、低中速度域で有効な状態オブザーバまたは外乱オブザーバによる回転子位置推定法の検討し、この確立を目指す。2.年度実績以下の実績を得た。1)動的数学モデルの再構築同期リラクタンスモータに関し、所期の動的数学モデルの再構築に成功した。成果は電気学会論文誌に掲載された。2)低中速度用の位相推定法の検討再構築の同期リラクタンスモータの動的数学モデルに基づき、低中速度域で有効な外乱オブザーバによる回転子位置推定法の検討し、従来より簡単な新方法を確立した。本成果を学会大会等で公開すると共に電気学会論文誌に投稿をした。1)動的数学モデルの再構築初年度に確立した数学モデルをベースに、磁気飽和を考慮した数学モデルの構築を目指す。2)低中速度用の位相推定法の検討低中速度域で有効な回転子位置推定法して、初年度構築した外乱オブザーバに加えて、状態オブザーバによる回転子位置推定法の検討し、この確立を目指す。また、外乱オブザーバ、状態オブザーバが、磁気飽和の下でも利用できるように、その改良を目指す。

2.年度実績以下の実績を得た。1)動的数学モデルの再構築同期リラクタンスモータに関し、一軸方向への磁気飽和を持つ動的数学モデルを構築した。ただし、両軸の相互干渉磁気飽和をもつ動的数学モデルは未完。2)低中速度用の位相推定法の検討昨年度から継続である同期リラクタンスモータのための外乱オブザーバに関する成果が計測自動制御学会論文集に採録・掲載された。また、低中速度域で新たな回転子位置推定法して、最小次元状態オブザーバ(D因子状態オブザーバ)を構築し、固定座標系上及び回転座標系上での正常動作をシミュレーションで確認した。1.年度当初の計画概容年度当初、以下の計画を立てた。研究最終年度である本年度は、中核センサレスベクトル制御技術の公開と完成を図る。余力があれば、磁気飽和を考慮した数学モデル上のパラメータの同定方法を検討する。1)中高速域用の位相推定法の完成中高速域用で有効な回転子位置推定法として構築した最小次元状態オブザーバ(D因子状態オブザーバ)に関し、学会発表を通じ、この概要を公開する。また、この実機実験を遂行し、詳細なデータを揃えた上で、論文投稿を行なう。2)磁気飽和を考慮した数学モデル上のパラメータ同定構築した数学モデル上のパラメータ同定方法を実験を含め検討し、数学モデルに関する一連技術の完成を目指す(努力目標)。2.年度実績以下の実績を得た1)中高速域用の位相推定法の完成最小次元状態オブザーバ(D因子状態オブザーバ)に関し、フルペーパーに準じた6頁の原稿を用意し、学会発表を行なった。また、実機実験のための実験システムを構築したが、詳細なデータを揃えるまでには、至らなかった。2)磁気飽和を考慮した数学モデル上のパラメータ同定第1目標である1)項の完遂に尽力したため、努力目標である本項に関しては、未実施となった。
連鎖地図に基づくタマネギとネギのゲノムシンテニーの解明

ネギとタマネギのゲノムシンテニーを利用した比較マッピングを行うために、タマネギにおいて11連鎖群からなる連鎖地図を構築した。地図上のマーカーの座乗染色体推定を通して、10連鎖群を8染色体に対応付け、染色体レベルではネギ連鎖群との矛盾は認められなかった。QTL解析により、葉身折径および抽苔株率に関するQTLは、対応するネギ連鎖群においても検出されていることから、両種に共通のQTLの存在が示唆された。また、球および葯の着色に関しては、Chr. 7上に主要なQTLが存在し、同領域に存在するアントシアニン合成に関与するDFRが原因遺伝子である可能性が強く示唆された。ネギおよびタマネギにおいて、各種DNAマーカーの開発及び連鎖地図の作成が進んだことから、両種のゲノムシンテニーを利用した比較マッピングへの展開が期待される。しかし、これまでタマネギにおいて構築されている連鎖地図には、共通のマーカーがほとんどないことからネギとのゲノム比較は行われていない。その一方で、細胞遺伝学的研究からは、ネギとタマネギの種間雑種において、両種間で転座や挿入のような染色体変異が生じていることが示唆されている。そこで、タマネギにおいて連鎖地図を構築して、共通マーカーによりネギとのシンテニーの程度を明らかにすることを目的とする。材料にはタマネギF2分離集団(黄タマネギ×赤シャロットの135個体)を用いた。F2集団における球外皮の着色程度は連続的な分布を示したが、着色の有無に関しては3:1の分離比を示したため、形質マーカー座(Pg)とした。タマネギESTおよびネギSSR(計660マーカー)を用いて、162の多型マーカーを選抜し、JoinMap ver.4.0を用いて122マーカーが座乗する基本的な連鎖地図を構築した。Pg座は連鎖群LG03にマップされた。ネギおよびシャロット染色体との関係から、Pg近傍マーカーの領域は7番染色体に対応することが推定された。そこで、アントシアニン合成に関与する遺伝子のうちシャロット7番染色体に座乗することが知られているF3'HおよびDFRについてSNPマーカーを得た。その結果、DFRの遺伝子型がタマネギ型のF2個体はすべて着色が認められず、ヘテロ型、シャロット型の順に着色程度が有意に高くなった。このことから、本分離集団における着色性にはDFRが深く関与していることが示唆された。材料にはタマネギF2分離集団(黄タマネギ×赤シャロットの135個体)を用い、新たに1038のESTマーカーについてスクリーニングとF2集団での多型解析を行い、11連鎖群、165マーカーが座乗する全長1040cMの連鎖地図を再構築した。地図上のマーカーの座乗染色体推定ならびにタマネギ・ネギ連鎖地図との比較により、10連鎖群を8染色体に対応付け、染色体レベルではネギと矛盾する組合せは認められず、ゲノムレベルでは両種が高い保存性を有することが推定された。また昨年度秋まきマルチ栽培した各F3系統群について、5月下旬に収穫し、葉および球の一般形質を調査するとともに、分球性、着色性、抽苔性を評価し、QTL解析を行った。その結果、DFR遺伝子がタマネギの着色に深く関与していることが強く示唆された。また、葉身折径および抽苔性に関するQTLの一部は、これまでネギにおいて見出したQTLと同じ連鎖群上で検出されたことから、両種において共通のQTLによる効果である可能性が示唆された。
ヒトゲノムの不安定性に関与する遺伝的要因の検索と分子機序

近年、Fragile X症候群、ハンチントン病などの遺伝性疾患及び癌にゲノムの不安定性が大きく関与していることが明らかになってきた。しかし、不安定性そのものを規定する遺伝的要因に関しては未だほとんど明らかにされていない。我々は、これら不安定性を示す領域が全てリピート領域であることに注目し、積極的にリピートの安定性に関与する遺伝的要因を明らかにすることを試みた。まず、リピート領域を含む酵母人工染色体(YAC)を用いて、不安定性を抑制する酵母菌宿主変異株の単離に成功した。つぎに、リピートの安定性に関与する酵母遺伝子の単離を試みた。新しい変異株は親株に比べ増殖速度が遅いという性質を利用して発現クローニングを行い、候補遺伝子を15クローン単離した。各クローンを変異株に再導入し、コロニーカラーアッセイおよびサザンブロット法により、再度不安定性を獲得するか否かを検討した結果、2クローンについて再現性が得られた。塩基配列の決定とデータベース検索により、1クローンはAストレッチシークエンスを含む機能未知領域、1クローンはトポイソメラーゼIIのコード領域を含むことが明らかとなった。トポイソメラーゼIIはトランスに、また、Aストレッチシークエンスはトランス因子の競合結合によりシス領域に作用することによって、リピートの不安定性に関与しうることが示唆された。今後、変異株におけるトポイソメラーゼII変異部位の同定と、未知遺伝子のヒトホモログ単離を行い精神疾病、癌、またその他の遺伝疾病で、不安定化遺伝子の発現変化及び変異と疾病との関連性について検討することが必要と考えられた。既にリピート領域を含む酵母人工染色体(YAC)を用いて、不安定性を抑制する酵母菌宿主変異株の単離に成功している。本年度はこれをさらに発展させ、リピートの安定性に関与する酵母遺伝子の単離を試みた。新しい変異株は親株に比べ増殖速度が遅いという性質に利用して発現クローニングを行い、候補遺伝子を15クローン単離した。各クローンを変異株に再導入し、再度不安定性を獲得するか否かを検討した結果、2クローンについて再現性が得られた。塩基配列の決定とデータベース検索により、1クローンは未知遺伝子、1クローンはトポイソメラーゼIIであることが明らかとなった。今後、変異株におけるトポイソメラーゼII変異部位の同定と、未知遺伝子のヒトホモログ単離を行う。しかし、不安定性そのものを規定する遺伝子要因に関しては未だほとんど明らかにされていない。トポイソメラーゼIIはトランスに、また、Aストレッチシークエンスはトランス因子の競合結合によりシス領域に作用することによって、リピートの不安定性を関与しうることが示唆された。

今後、変異株におけるトポイソメラーゼII変異部位の同定と、未知遺伝子のヒトホモログ単離を行い精神疾病、癌、またその他の遺伝疾病で、不安定化遺伝子の発現変化及び変異と疾病との関連性について検討することが必要と考えられた。
保育士，幼稚園教師，小学校教師の視線移動と語りによる実践的思考の解明と熟達化

本研究の目的は,教師の実践的思考の解明と熟達化について調べることである。そのために,On- and Off-line monitoringが測定している内容を定量的に示すことにより,monitoringの役割を明確にすること,教師の経験による実践的思考の違いや多様性について明らかにすることであり,これらの2つの結果をもとに教師教育について考察することである。その結果,既存の研究で多く行われてきたビデオ視聴後に考察するのではなく,本研究で用いたビデオを途中で止めずに視聴しながら気づいたことを自由に話すという方法は,教師の実践的思考を育むうえで有効であることがわかった。本研究の目的は,保育所・幼稚園の保育者や小学校教員が保育・授業場面の映像刺激を視聴した際の視線移動と語りを併せて調べることにより,以下の4点について明らかにすることを目的としている。1)保育・授業場面の映像視聴時における視線移動パタンの解明,2)保育者・教員の語りと視線移動との関連,3)保育者が授業場面,あるいは小学校教員が保育場面の映像刺激を視聴した際の語りと視線移動,4)若手,中堅,熟練の保育者・教員を比較することによる実践的思考の熟達化。研究協力者や手続きに関する方法は,平成24年度と同様である。平成25年度は,研究協力者への調査を主として行い,各施設の保育室や教室あるいは大学の施設内で,保育者や教員に対して個別に調査を行った。ディスプレイに保育や授業の映像刺激を再生し,研究協力者に視聴しながら自由に発言してもらった。そして,得られたデータについて,秋田他(1991)を参考に,1)発話量と発話箇所,2)発話の各命題の内容分析,3)発言の関連性把握の有無の3観点から,保育者や教師の発話データのプロトコル分析を行った。なお,得られた研究成果は日本発達心理学会にて発表を行い,海外の学会誌に現在投稿している。平成24年度は観察対象となる保育や授業場面の映像刺激の収集を行い,予備観察として若手,中堅,熟練の教員それぞれ2名ずつに視聴してもらいながら映像刺激の調整を行った。まず,研究協力者に映像刺激として視聴してもらうための保育や授業を選定する必要がある。本研究では,保育者や小学校教員の多くが経験していること,子どもと保育者・教員の直接的な関わりがより明確に現れること,若手から熟練の保育者・教員にとって様々な捉え方ができること,さらに保育所・幼稚園と小学校において類似した活動であり双方にとって連続的なイメージが持ちやすいことなどを考慮し,幼稚園と小学校において中堅の教員が行う造形表現と図画工作を観察対象となる保育・授業として選定した。そして,映像データを適度な長さに編集した。次に,予備観察として各施設の保育室や教室あるいは大学の施設内で,保育者や教員に対して個別に調査を行った。得られた映像刺激と発話データをもとに,学会発表の準備を行っている。本研究の目的は,保育所・幼稚園の保育者や小学校教師が保育・授業場面の映像刺激を視聴した際の視線移動と語りを併せて調べることにより,以下の4点について明らかにすることを目的としている。1)保育・授業場面の映像視聴時における視線移動パタンの解明,2)保育者・教師の語りと視線移動との関連,3)保育者が授業場面,あるいは小学校教師が保育場面の映像刺激を視聴した際の語りと視線移動,4)若手,中堅,熟練の保育者・教師を比較することによる実践的思考の熟達化。研究方法については,平成24,25年度と同様である。平成26年度は,前年度から継続しているデータ収集を実施すると共に,得られたデータを用いてmonitoringが実践的思考の何を測定しているのかというmonitoringの役割,そして若手,中堅,熟練の保育者・教師を比較することによる実践的思考の熟達化について分析を行った。なお,得られた研究成果をInnovative Teachingに投稿し,受理された。本研究では保育所・幼稚園の保育者や小学校教師が保育・授業場面の映像刺激を視聴した際の視線移動と語りを併せて調べることにより,以下の4点について明らかにすることを目的としている。平成24年度26年度のデータ収集及び分析は順調に進み,特に教師や保育者を対象とした授業場面のビデオを用いた発話内容の分析は,今後の校内・園内研修に活用できる有用なデータを得ることができた。教師の実践的思考の多様性に関する成果を,日本心理学会において発表した。