hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＩＬ－１Ｒａ欠損マウスを用いた歯周組織破壊におけるＩＬ－１Ｒａの影響

その結果、IL-1RaKOマウスは野生型マウスに比べ、明らかに歯槽骨吸収が進行していることがCT検査でも病理組織学的観察においても明らかとなった。さらにそのメカニズムをIL-1RaKOマウス骨芽細胞を採取し調べたところ、骨吸収関連遺伝子の発現抑制と骨形成遺伝子の発現促進に深く関与していることを明らかとした。上記の結果をInfection and immunity, 82: 1904-1913, 2014に公表した。通常、モデル動物を利用しての実験的歯周炎ではヒトの歯周炎のような付着の喪失を観察されにくい傾向であるが、IL-1Ra KOマウスでは歯肉頂部に辺縁不整な上皮と結合組織線維の走行の乱れ,上皮直下に炎症性細胞浸潤,付着の喪失が観察された。そこで骨吸収だけでなく上皮の付着の制御にもIL-1Raは関与しているのではないかと考え、最終年度はヒト株化上皮細胞をRNA干渉によりIL-1Ra遺伝子発現を抑制した場合、どんな接着分子発現に影響を及ぼすかPCRアレイにより解析したところ、高いコラゲナーゼ3(MMP-13)遺伝子発現が観察され、IL-1RaがMMP-13発現についても制御していることが確認できた。そこで、今後、IL-1RaのMMP-13発現に与える影響について、今回の研究課題で利用した実験動物を引き続き利用して検討していく予定である。歯周治療系歯学25年度までで研究目的の70%以上は達成でき公表できることとなったため課題申請時24年度に計画した4つの実験系はほぼ予定どうり実施することができ、2つの計画は論文投稿とアクセプトされた。実験的歯周炎の病態評価と骨芽細胞の骨関連分子の発現については、投稿準備を行いながら、歯周病原菌に対する血清抗体価の測定、骨関連分子のタンパクレベルでの産生、IL-1Raによる転写因子の活性化、は結果妥当性を向上させると考え追加実験として実施しているところである。しかし,24年度中期以降,遺伝子改変マウスの繁殖が少し低下しており,現在その状況改善を行っている点が研究計画にはなかった所である.以上のことから研究計画はおおむね順調に進展していると判断した。26年度は25年度に実施したIL-1Raの上皮細胞に対する影響についての結果の公表に向けてのまとめと追加実験を実施していく予定である。申請時25年度計画の接着分子発現にかかわるIL-1Raの影響については、RNA干渉による遺伝子ノックダウンが比較的簡便な方法であるため、24年度中に行ったところ、実験系はほぼ確立することができ,現在,結果の再現性を検討している。マウスの口腔内からの上皮細胞採取についての方法確立に向けて検討中である。繰り越し分次年度の研究費はRNA干渉試薬とPCRアレイキットの購入に使用する予定である.ただし遺伝子改変マウスの繁殖状況により実験に適切な週齢のマウスが確保でき十分できた場合,IL-1Ra,IL-1受容体補助タンパク,等IL-1調節タンパクのリコンビナント標品を購入し,動物実験での効果を検討する.
糸状菌由来PKS-NRPS生合成制御機構の解明および生合成酵素を利用した物質生産

カビ由来の二次代謝産物であり、動物細胞においても顕著な生理活性を示す、chaetoglobosin A(ケトグロボジンA、CHG-A)生合成機構の酵素レベルでの解明を目指して研究を行ってきた。平成21年度においては、CHG-Aの骨格合成を行うと推定したポリケタイド合成酵素(PKS)遺伝子から、アミノ酸認識に関与するドメイン(Aドメイン)の機能解析およびCHG-A骨格構築において大変重要なDiels-Alder反応を触媒すると推定した還元ドメイン(Rドメイン)の機能解析を行った。放射性同位体標識ピロリン酸を用いたアミノ酸の活性化実験では、数あるアミノ酸のうち、L-トリプトファンを用いたときに最も高い活性を示すことを確認した。CHG-Aは、L-トリプトファン由来の部分構造を持つため、この実験結果は、発現した遺伝子がCHG-A生合成遺伝子クラスターの一部であることを強く支持した。CHG-A骨格構築に関与すると予想されたRドメインは、前年度までに目的タンパク質の可溶化に成功したので、基質アナログを用いた酵素反応を行い、詳細な解析を行った。しかし、LC-MSでは、基質アナログチオエステルのアルデヒドへの還元体およびその環化体は検出されなかった。現在、別種のカビが生産するCHG-A類縁体のPKS遺伝子に関し、Rドメインの機能解析を行い、LC-MSにおいて還元体および環化体に相当する質量数を持つ生成物の検出に成功しているので、この系に関して研究を進めていき、CHG-AのPKSに関する研究にフィードバックしていけることを期待している。カビが生存環境に適応するために代謝するケトグロボジンA(以下CHG-Aと略す)は、動物細胞に対しても顕著な生理活性を示すことが知られている。CHG-Aの構造は5-6-13員環が縮環した非常に特徴的な構造を有しているが、生体内で如何にしてその骨格が構築されているのか、その詳細は未だ未解明である。本研究では、CHG-A生合成機構の酵素レベルでの解明を目指している。平成20年度においては、CHG-Aを生産するカビのゲノム情報からすでに推定したCHG-A生合成遺伝子群のうち、骨格構築に関与する遺伝子をターゲットにその機能解析に着手した。遺伝子の異種株発現の方法としては大腸菌を用いるのが一般的であるが、真核生物であるカビの遺伝子を原核生物の大腸菌で発現するのは当初困難であると予想していた。しかし、発現方法を充分に検討することで、目的タンパク質の可溶化に成功した。発現したタンパク質の機能は、CHG-A鎖状前駆体をアルデヒドとして酵素から還元的に切り出し、その後の5員環形成、そして有機合成化学においても大変重要な反応であるDiels-Alder反応という6員環形成反応を触媒する、多機能性を有した酵素であると推定した。そこで、機能解明の第一歩として還元反応が進行することを確認するために、有機合成した基質アナログを用いて酵素反応を検討した。酵素添加時に基質アナログの変換が確認され、現在変換された化合物の同定を行っている。還元反応が進行したとなると、発現した酵素が推定した機能を有していることが強く示唆されることとなり、CHG-A生合成機構の解明に向けた大きな前進であるカビ由来の二次代謝産物であり、動物細胞においても顕著な生理活性を示す、chaetoglobosin A(ケトグロボジンA、CHG-A)生合成機構の酵素レベルでの解明を目指して研究を行ってきた。
ヘテロ原子転位反応の研究

アクリル酸誘導体の有機合成への利用研究の一環として、強リン酸エステル(PPE,PPSE)存在下、カルボン酸と縮合閉環させることにより、チアジン誘導体を合成する。この反応の際に転位反応(ヘテロ原子転位;O,N-転位,N,N-転位,S,N-転位)が起る。反応機構解明研究より、本反応は、1,3-ヘテロ原子転位を伴うリッター反応と解釈することが出来、ヘテロ原子としては、硫黄,セレン原子において観察された。この反応は、芳香族カルボン酸のみならず、脂肪族カルボン酸にも拡張することが出来る。また強リン酸エステルの代りにパラトルエンスルホン酸の存在下でも反応を行うことが出来る。従って、種々の1,3-チアジン,1,3-オキサジン,ピリミジン誘導体の合成方法として有用であることを示した。
縄文時代伊豆諸島における資源活用と遺跡の機能解明のための研究

縄文時代の伊豆諸島において、活発に利用されたとみられる資源に石鏃などの石器石材に充てられた黒曜石と貝輪素材に充てられたオオツタノハなどがある。前者は、伊豆諸島北部の神津島がその原産地として古くから知られ、近年の蛍光X線分析など理化学的な研究の進展により、各地遺跡での利用状況がかなり明らかになりつつある。一方、後者については、伊豆諸島南部の島との推定がされているものの、その原産地の特定は未だに明らかにされていない。現生貝の確認が伊豆諸島南部のいずれの島でもおこなわれていないためである。今回、オオツタノハの資源利用の実態をつかむ目的で、以下の調査をおこなった。(1)伊豆諸島南部における生息実態の把握2001年8月、筆者らの調査の結果ようやく明らかになった、八丈島におけるオオツタノハの生息状況をより確実なものとするため、八丈島南東部石積ケ鼻での現生貝調査をおこなった。このポイントは、過去の調査の結果、八丈島において最も当該貝類の生息頻度が高いとみられる場所であることから、集中的に調査を敢行した。その結果、これまでに採集されたものでは最大となる殻長95mmの個体の捕獲に成功し、生息する磯の状態(波当たりの激しい転石上)、捕獲可能な時期(春から初夏の最干潮時がベスト)、殻の状態(海藻などに激しく覆われた老成個体)等を把握できた。(2)三宅島における弥生期貝塚の調査と現生貝調査ココマ遺跡の貝層の発掘調査とサンプル分析をおこなった結果、当該遺跡が弥生時代にオオツタノハの捕獲と貝輪加工をおこなった遺跡であることが明らかになった。縄文期のものではないものの、この調査成果は縄文時代における当該貝類利用の実態を明らかにする上で極めて重要である。さらに三宅島本島及び西側の離島(大野原島)において現生貝調査をおこない、その生息の可能性をつかんだ。(3)縄文および弥生期のオオツタノハ製貝輪の調査茨城・千葉・東京・神奈川の遺跡出土資料を調査し、その加工の特徴から縄文・弥生期のオオツタノハ製貝輪生産体系が異なる可能性が高いこと、素材貝獲得の方法を明らかにした。
形態認知過程の色彩情報による分析

視覚情報は、桿体・錘体の光受容によって発現し、網膜の興奮・抑制的神経回路によって3種の並列情報(明暗情報、赤-緑反対色情報、黄-青反対色情報)に符号化される。大脳に送られた情報はさらに分析統合され、形態、色、運動などの知覚が形成される。本研究では、低次の水準から高次のの水準までの各段階にあると考えられる知覚現象を選び、明暗・色彩情報とこれらの知覚現象への影響を実験的に究明することによって、形態知覚がどのような階層構造によって形成されるかを、また、形態知覚、色知覚、運動知覚が相互作用を検討した。本研究の結果は次のようにまとめられる。(1)錘体過程・反対色過程・空間二重対立過程における情報変換機序網膜から視覚皮質に至る視覚情報処理過程を、情報の抽出と効率的符号化という観点から検討した。光受容器である3種の錘体では、S錘体に比べL錘体とM錘体の受容する情報量は格段に大きい。この情報量の非対称性は、第一次媒介神経系である反対色過程で赤-緑系と黄-青系の構造の違いとして現われる。赤-緑系の情報処理過程では、predictive codingを基本とする並列処理により、形態と色彩情報の同時抽出を行なう。反対色過程の出力は、次段の空間二重対立過程で分析され、形態特性、色相特性、彩度特性に分離される。(2)形態知覚、色知覚、運動知覚の相互作用(1)形態知覚の基本要素の一つである輪郭線の知覚は、飽和度弁別特性と類似の特性を示し、赤-緑軸では生じやすく、黄-青軸で生じにくい。(2)運動知覚の形成に、空間周波数要因が大きく影響する。光源ー分光器ーアパチャー、及び、フレームバファー、カラーCRTによる色彩パターン刺激提示・反応測定システムを作製し、光学的較正を行った。刺激の光強度、色度、提示時間はコンピュータによって制御され、被験者の反応はコンピュータに読み込まれる。カラーCRTシステムは、分光器システムに組み込むことによりマックスウェル視提示ができ、又、単独で用いることにより自然視提示が可能である。研究計画の初年度は、カラーCRTシステムを用いて、主観的輪郭線知覚の検討を行った。輪郭線は図一地分化の基底をなす刺激要素であり、輪郭線の知覚がどのような機構で成立するかということは、形態認知に関する基本的問題の1つである。本研究では、主観的輪郭線の知覚について、色度、空間変数の効果を検討した。その結果、以下のことが明らかとなった。1.等輝度色彩パターンによって主観的輪郭線知覚が生じ、これは色処理系の関与による。2.色彩パターンによる主観的輪郭線の知覚への色度の効果は、飽和度弁別と類以の特性を示し、赤ー緑軸で生じやすく、第3色盲混同軸で生じにくい。このことは、赤ー緑反対色彩の関与を意味し、実際の色差境界線検出の場合と対応する。3.パターンの線の幅は主観的輪郭線の知覚に効果をもつが、線の間隔は影響しない。これは、同様の刺激パターンを用いたサルの皮質18野の電気生理学的測定結果と対応する。以上のことから、輪郭線は、網膜ーLGNでの赤ー緑反対色系による色ー形態同時処理過程により抽出され、この情報がより高次のレベルで統合されることにより輪郭線の知覚が成立すると考えられる。本研究は、人間の形態認知機構を、視覚情報処理の並列性・階層性に注目して実験心理学的に、情報論的に解析することを目的とする。昨年度は、空間的・時間的に精密に制御できる視覚刺激提示システムを作製した。本年度はこれを使用し、形態認知の諸特性を測定し分析した。

また、従来までに蓄積してきた資料を総合的に分析して、形態認知の基礎となる色覚モデルを構築した。(1)形態知覚の時間特性の解析:明暗格子パタ-ンに対する単純反応時間を空間周波数と順応輝度をパラメ-タ-とし、コントラストを変数として測定した。結果を分析することにより、単純反応時間の情報処理モデルを構成した。(2)形態知覚と運動知覚の相互作用の分析:形態認知の時間的特性を運動知覚との関連で分析した。すなわち、形態要因が運動知覚にどの様に影響するかを仮現運動を指標として分析した。ここで得られた結果は次のようにまとめられる。(1)空間周波数の高低は仮現運動特性に大きく影響する。(2)運動知覚の形成効率は、同一空間周波数間では高いが、異空間周波数間では低い。(3)形態認知の基礎となる色覚モデル:情報の効率的符号化という視点から、形態認知の基礎過程である色覚機構を検討した。光受容器である3種の錐体では、S錐体に比べL錐体、M錐体の受容する情報量は格段に大きい。この情報量の非対称性は、反対色過程で、赤ー緑系と黄ー青系の構造の違いとして現れる。赤ー緑系の情報処理機構は、rreーdietime codingを基本とする並列処理により、形態・色情報の同時抽出を行なう。黄-青系の処理は色情報の抽出のみを行なう。これら反対色過程の出力は、次段の空間二重対立過程で、諸知覚属性、すなわち、形態特性、色相特性、彩度特性に分離される。
ネガティブインパクトの発生時期と就学・就業への影響

本研究は、幼年期および青年期における外生的に起きるイベントがその後の人生を大きく変更させる過程を分析した。主に生活環境の変化がその後に強い影響を持つと思われる時期の絞り込みと、外生的ショックが発生した後の学歴や職業キャリアを追跡し、影響の大きさを測定することに焦点が当てられた。特に前者に関しては、遺伝や家庭的背景を同一にしても小学校高学年時の差異がその後の人生に大きな影響を及ぼすことを統計的に明らかにした。平成25年度は、5年間継続する調査・研究を推進できるための環境を整えることを主に行なった。主な点は、調査対象の確定と聞き取り項目の絞り込みに関する作業である。まず、聞き取り調査の準備として、震災からの復興過程と被災地域のその後の経過を詳細に把握するために研究会を開催し、かつ、実際に震災を経験した者たちからの予備的聞取りを行なった。また、オーラルヒストリー関係の研究成果を集め、聞き取りの進め方を学んだ後、聞き取り対象者のライフヒストリーに関わると思われる事項を整理し、聞き取り調査に使用する設問の流れを明確にしたフォーマットを作成した。特に、聞き取り対象者からの予測される回答をまとめ、それぞれの場合に応じた聞き取り項目のチャートを作成した。本研究は、子供の頃の大きな不幸、例えば、親を失うことや家が破産するなどの深刻な事態はその後の人生を激変させるというライフヒストリーにおけるネガティブインパクトの問題を取り扱う。特に、阪神淡路大震災などの災害において親を失った子供たちと被災を免れた子供たちのその後を調査し、年少ほど外生的な負のショックが引き起こす影響が大きいとの仮説を検証する。手法としては、オーラルヒストリーやキャリアヒストリーの調査方法を応用し彼らのライフヒストリーを聞き出すことで、不利な状態から容易に回復できない理由を探り、通常の調査では見逃がされがちな影響力のあるイベントや環境要因を捉え、それらが人々の人生を変えていく過程を学術的に明らかにする。平成26年度は、これまでに集められた情報を整理・検討するとともに、その結果に基づいて最終年度の調査に向けて調査の改善を検討した。また、助成期間終了後の調査継続の可能についても検討し、調査規模および調査体制のあり方についても議論を重ねた。また、入手すべき情報に関してより深く掘り下げる必要のある点を整理し、聞き取りフォーマットの改善を検討した。一方、被災の影響とは別に社会の変化や経済環境の変化の影響が大きい点に注目し、個人を取り巻く状況の変化に関しても調査を進めた。マクロ的な把握ができるデータの分析と検討を行っただけでなく、政府や自治体の一般的な社会政策の影響も個人のヒストリーには影響をおよぼすことから、それらの変遷と当該地域にのみ特徴的な社会状況も検討した。本研究では、子供の成長過程で生じたクリティカルな出来事や環境要因、それらの質的側面、あるいは、それらが相互に影響を及ぼす過程を特定することを目的として行われた。特に、キャリア研究において、ある時期における教育・訓練や、職業獲得における運不運がその後のキャリア形成に大きな影響を与えることが明らかになってきている点を踏まえ、人生の初期において発生する格差や差異がライフパスにおいてどのような差を生み出すかを追った。最終年度は、以下の2つの論文として成果をまとめた。2.「大学教員との関わりが早期の就職決定に与える影響」日本キャリアデザイン学会、2015年9月5日、北海学園大学豊平キャンパス(共同発表)1.は、遺伝的差異や成長期における家庭環境における影響を排除したうえで、少年期に発生する差がどの程度教育歴に差を生み出すかを分析したものである。2.は、教員を外部環境の一つと考え、教育の最終段階での影響を分析した。聞き取りを中心としたインタビューの推進に関しては、調査対象者の確保および継続的かつ定期的なインタビューの実施に関して予定通りに進まない点もある。また、彼らを取り巻く社会・経済環境の影響が大きく、個人の履歴だけでなく外的環境の変化に関する情報の入手と吟味が当初予想したよりも求められることが分かり、予定外の作業が必要となった。一方、それらを調べる過程で入手したデータ分析や質的情報の分析に関しては当初計画していた以上に研究を進めることが可能となった。教育の経済学個人に関しては聞き取り調査を継続し、現状とこれまでの変化を整理しヒストリーをまとめる。また、外的環境の変化に関してもヒストリーをまとめ、それらが個人に与えた影響を分析する。後者の分析は、個人のヒストリー分析とは独立して進められる部分も多いことから、災害後の社会・経済の復興過程の研究としてまとめる。さらに、助成期間終了後の調査の継続性に関しても検討する。平成25年度は、聞き取り項目の絞り込みと調査対象の確定を行なうことが主な目標であった。前者に関しては必要な準備を行なうことができ目標が達成された。後者に関しては、被災が深刻であった学校区やコンタクト対象機関の抽出までは行ったが、十分な数の調査対象者を探し出す作業と彼らへの聞き取り調査が年度を越えて継続されることとなった。一方、関連する研究課題を分析できる全国をカバーする統計を入手したために、計画以上にマクロ的状況を把握するための研究を進めることができた。

聞き取りの継続が、住居の移動、スケジュール調整の困難さゆえに次年度に持ち越さなければならない状況が複数生じた。また、使用しているデータベースソフトのヴァージョンアップも予期したよりも遅くなったために当初の計画よりも予算の執行が遅れた。調査対象者を探し出す作業を継続じ、インタビューを随時実行していくことが今後の最も大きな課題である。ただし、聞き取り内容が個人の経験の仔細に及ぶ場合があるために、カウンセラーおよび関係者との協議をより蜜に進める必要があることが明らかになり、対応できる体制を構築する。単純な事実を聞き出す技術だけでなく、本研究で行なうようなインタビューに必要とされる特別な技術を修得し、特に聞き取り対象者への十分な配慮を行ないながらのインタビューの訓練を受ける必要がある。この点を解決した後、当初の計画通りに聞き取り対象者を追跡して聞き取り調査を行う。持ち越された聞き取りを行うこと、また、回想的方法によって対象者数を補完する。データベースソフトおよび統計解析ソフトのヴァージョンアップを行う。聞き取り内容が個人の経験の仔細に及ぶ場合があるために、聞き取り調査を行う調査員とカウンセラーや関係者との協議を当初予定したよりも時間をかけて協議する必要性が生まれた。また、聞き取り調査の内容に関しても、より詳細に検討する必要があることが明らかになった。当該分野で行われる単純な事実を聞き出す技術だけでなく、聞き取り対象者への十分な配慮を行ないながらインタビューを行うための留意事項の理解や必要とされる技術を修得する必要があり、計画以上にそれらに時間を費やすることになった。これにより、聞き取り調査の実施が次年度に持ち越されたため、それに関係する調査費用を次年度に移すこととなった。持ち越された聞き取り調査は、次年度前半に行う。聞き取り調査を行える時間が圧縮される問題に関しては、調査頻度を増加させることによって対応する。また、聞き取り時期にずれが問題とならない調査項目に関しては、そのままの形で追跡調査を行い。調査が継続される各年度に関しても、調査時期を遅らせて調整を行う。聞き取り時期のずれが問題となる調査項目に関しては、回想法により聞き出すことになるが、正確な情報を聞き出すために調査フォーマットの再検討を行う。
イタリアの図書館に所蔵される漢籍の研究

十六世紀末葉から、イエズス会をはじめとするカトリック各会派は精力的に中国布教を開始した。ローマ及びイタリア各都市には彼ら宣教師によって中国からもたらされた、明清代の漢籍が数多く保存されている。しかしこれらはほとんど手つかずのまま放置されているのが実状である。これらの書物は、それ自身が東西文化交流史の貴重な財産であるばかりか、中には学術的価値の高い資料も含まれ、その調査は、中国学の各方面に新たな材料を提供するものであることは確実である。今回の国際学術研究のプロジェクトにおいては、主としてイタリアの公共図書館に所蔵される中国書を調査し、それを目録化するための基礎研究を行うことであった。ローマの国立中央図書館をはじめとして、全国に散在する中国書を徹底して調査するため、アンケート調査を行いつつ、カード採取を実施した。その結果、公共図書館の所蔵漢籍については、ほぼすべての調査を完了し、現在コンピュータ入力中である。その作業の終了を待って、冊子目録の刊行の運びとなる。調査によって明らかになった要点は以下のごとくである。(1)16世紀末あるいは17世紀初頭にヨーロッパにもたらされたと思われる明版本が少数ながら存在する。これらのほとんどが未報告の書物で、研究に資するところが大きい。(2)ローマ国立中央図書館には、義和団事件の時にイタリア軍によって持ち帰られた殿版が相当数存在することで、これも今まで知られなかった事柄である。(3)同じくローマの図書館には広東の曲本の古い刊本が大量に存在し、俗文学研究の上に貴重な資料を提供する。(4)古く伝来した書物の中には、宣教師による書き込みが見られ、ヨーロッパにおける中国学の発展史を知る上での参考となる。本年度は、まず9月にローマ國立圖書館東洋資料部長のマリ-ナ・バッタリーニ女史を京都大學人文科学研究所に招へいし、漢籍目録の編纂について理解を深めてもらうとともに、イタリアにおける漢籍總合目録作成上の諸問題について共通認識を得た。この時期に調査表の策定を終えることが出來た結果、11月に高田・森賀がイタリアを訪れた際には順調に調査に取り掛かることが出來た。イタリアではローマ國立圖書館およびナポリ國立圖書館において調査表の調査項目ごとに原物に當たって調査を行った。ローマ國立圖書館所臧の漢籍は約三千タイトルを數えるが、その半數近くの調査を終了し、ナポリ國立圖書館所藏分に關してはすべての登記を完了した。ナポリの所藏中にはかつてイタリアの貴族ファルネ-ゼ家の書庫中の刊本が存在し、調査の結果、十六世紀末にスペイン人によりヨーロッパにもたらされたものの一部であることが判明した。これは最も古くヨーロッパに渡來した中國書のひとつであり、文化史上貴重なものである。またローマ教皇廳附屬のグレゴリオ大學においても所藏漢籍の檢分と準備工作をおこなった。本年度の調査で書き込みの終わった調査表は千數百枚に及び、現在それらをコンピュータに入力し整理中である。これらは各年度の調査終了後すみやかに入力を終え、そのまま印字して册子目録を作成する基礎としたいと考えている。またイタリア國立東洋學研究所に寄贈される豫定のロス文庫(現在スリランカのコロンボにあり)について調査と整理を行った。最後に形になった成果につき一言すると、イタリア半島では最も豐富な蒐集を誇るヴァチカン圖書館について、未刊のペリオ目録を高田の増補改訂により正式に出版した。その後の増加分についても高田の原稿が出來上がっており、刊行を豫定している。今年度は昨年度に引き続きローマ国立中央図書館を拠点として調査を行った。ローマではさらにヴァチカンの補充調査を行うとともに、アンジェリカ、リンチェイ学士院、ローマ大学東洋部、中極東研究所などの図書館において中国書の調査を行った。

ローマ大学の蔵書は主にイノチェンティーニ教授の蒐集で、中極東研究所所蔵のものはほとんどが故ジュゼッペ・トゥッチ教授の旧蔵書である。それぞれおよそ百点ほどであるが、清末から民国初期の刊本がほとんどを占め、書誌の上で注目すべきものは少ない。一方、アンジェリカ、リンチェイ学士院はその起源が中国ミッションと密接な関係を有するため、所蔵数量は多くないものの、明末の貴重な刊本を見出し得た。ローマ以外では、今年度は北イタリアに足を伸ばし、フィレンツェ国立中央図書館、ボロ-ニャ大学図書館、ベネツィア国立図書館などにおいて調査を行った。所蔵数量はどこも多くないが、間々興味ある未紹介の明末刊本などを発見できた。フィレンツェの万暦刊本三国志演義、同列女伝などはその一例である。またボロ-ニャ大学所蔵の広東刊本ロバート・トム訳「意拾秘伝」は、明治初年にわが国に伝わり絶大な影響を与えた「意拾喩言」(イソップ物語)の初刻本であり、「意拾喩言」の序文によれば広東官憲によって焼棄されたと言われる本であることが判明した。この興味ある刊本については近く紹介の豫定である。目録作成の基礎工作の進捗状況についていえば、最大收蔵量を誇るローマ中央図書館所蔵分はほぼ三分の二について書誌事項調査を終了し、現在コンピュータに入力中であり、また調査済みの小蒐集については、ローマ大学および中極東研究所の一部が調査表未記入である以外はすべて調査完了し、これも逐次コンピュータ入力を行っている。ただ通信による全国アンケートの返事が現在続々と帰ってきており、小蒐集の要調査個所は増加が見込まれる。今年度はローマ、フィレンツェ、ミラノ、ジェノヴァ、パレルモの各地で調査を行ったが、その研究実績は以下の通りである。(1)ローマ国立図書館において補足調査を行い、未整理の広東曲本の刊本数百点を確認した。現在知られている曲本類刊本は清末以降のものがほとんどであるが、これらは恐らく乾隆期にまでさかのぼるもので非常に貴重なものと言い得る。(2)フィレンツェのラウレンティアーナ圖書館およびミラノ國立圖書館で調査を行い、明末の戯曲集「新選合併明朝三春演義大全」と水滸伝の圖像藪十葉を新に發見した。とくに前者はまったくの新發見で、戯曲史の資料として貴重なものである。(3)ジェノヴァにあるキヨソネ美術館で、明治の御雇い外國人キヨソネの蒐集した漢籍の調査をおこなった。分量からいえば二〇〇點余りの手ごろなコレクションで、古い刊本は多くないが、中國で得たと思われる寧波方言によるローマ字本のキリスト教關係書が何點か含まれる。これは中國語史の資料として興味深い。(4)最後に目録作成の状況を報告すると、イタリアの公共圖書館所藏漢籍についてはほぼ調査を終え、コンピュータ入力中である。整理次第、刊行を豫定している。ただし教會關係圖書館の藏書についてはヴァチカン圖書館の漢籍目録・同補編をすでに刊行し得たものの、イエズス會文書館などの機關所藏分については、おおよその収藏状況を把握し得たに止まった。これらは將來的に繼續して調査する必要がある。
骨粗鬆症性骨折予防のためのビタミンＢ群による骨質低下の制御と骨強度規定因子の解析

本研究は、骨粗鬆症性骨折予防のためのビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と骨強度規定因子の解析を行うことを目的とした。平成29年度10月(初回測定)と平成30年度7月(9ヶ月後測定)の2回測定した女性11名を対象に、骨強度、食事摂取頻度調査を行い、ビタミンB群の摂取状況と骨強度規定因子の変化を検討した。超音波骨密度測定装置AOS-100SA(日立アロカメディカル株式会社)を用い、音響的骨評価値(osteosono-assessment index: OSI)、音速(speed of sound: SOS)、超音波減係数(broadband ultrasound attenuation: BUA)で評価した。初回測定後にビタミンB群が多く含まれている食品と料理法を記載した小冊子を配布し、食事に取り入れるように指導した。小冊子の利用をアンケート調査し、ほぼ毎日利用した・週に3回以上利用したと答えた女性6名を介入群とし、週に2回以上利用した・あまり利用しなかったと答えた女性5名をコントロール群とした。初回測定時の年齢は、コントロール群77.1±4.8歳、介入群77.0±4.8歳で差はなかった。初回測定時と9ヶ月後測定の身長、体重に2群間の差はなかった。初回測定OSIと9ヶ月後測定OSIを比較すると、コントロール群では減少していたが、介入群は変わらなかった。9ヶ月後測定時のビタミンB6、B12、葉酸の摂取量は、介入群が有意に多かった。ビタミンB6、B12の摂取量は、SOSとの関連は見られなかったが、OSI、BUAとは正の相関があった。介入群は、コントロール群に比べOSIが維持されていた。ビタミンB6、B12摂取が要因と示唆された。本研究は、骨粗鬆症性骨折予防のためのビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と音響的骨評価値、骨代謝マーカーおよびホモシステイン濃度などの骨強度規定因子の解析を行うことを目的とする。平成28年度は、1ビタミンB群の摂取状況と音響的骨評価値との関連、2ビタミンB群摂取状況と10年以内の骨折発生リスクとの関連について横断研究を行った。対象者(3名:女性)は、平均年齢65.2±2.2歳、身長153.6±3.6 cm、体重46.3±6.2 kgであった。音響的骨評価値は、2.263±0.561であり、同年齢の女性の平均値(2.283)と比較しても差はなかった。簡易型自記式食事歴法質問票によるビタミンB群摂取量は、ビタミンB6 1.13±0.26 mg/day、ビタミンB12 6.2±3.2 microgram/day、葉酸322±165 microgram/dayであり、平成27年度国民健康・栄養調査の6069歳女性の平均値と同程度であった。アンケートによる生活習慣調査では、被験者は健康に対する意識が高く、魚介類や野菜類の摂取を積極的に行っていた。この先10年間で当該骨折を起こす危険率を計算するWHO骨折リスク評価ツールFRAXでは、おもな骨粗鬆症骨折の危険率(脊椎、前腕、股関節部あるいは肩部の臨床的な骨折)は、14.3±1.15%、大腿骨近位部骨折の危険率は、2.63±0.42%であった。被験者は、家族で骨折した人はいるが被験者本人の骨折歴がなく、喫煙・ステロイドの服薬がないため、将来の骨折を起こす危険率が低かったと思われる。平成29年度は、対象者を増やし、血液検査を行い、さらにビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と骨強度規定因子の関連について検討を行う。平成28年度においては、骨強度の測定の超音波骨密度測定装置AOS-100SA(日立アロカメディカル株式会社)の購入、及び、本研究の倫理審査委員会の審査が必要であった。超音波骨密度測定装置は、前払い支払い請求を申請しないと購入できなかったため、骨強度の測定が予定より遅れ12月以降となった。本研究について倫理審査は、福岡学園倫理審査委員会で承認されたため、研究を行う体制は整ったといえる。今年度は、対象者の増加(特に要支援・要介護高齢者)と簡易型自記式食事歴法質問票によるビタミンB群摂取量の調査を継続して行う。さらに血液検査を行い、血中ビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)の測定および、血中の骨代謝マーカー(骨吸収マーカーのTRACP-5b・骨形成マーカーのBAP)の測定と骨質低下の指標となるホモシステイン濃度を測定し、血中ビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)との関連を検討する。またビタミンB12が豊富な「鮭」、葉酸が豊富「枝豆」を6ヶ月間、毎日摂取してもらう介入研究のパイロットスタディを開始し、血中ビタミンB12、葉酸の濃度変化を検討し、音響的骨評価値、骨代謝マーカーおよびホモシステイン濃度などとの関連を評価する。本研究は、骨粗鬆症性骨折予防のためのビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と骨強度規定因子の解析を行うことを目的とする。平成29年度は、1ビタミンB群の摂取状況と骨強度規定因子との関連、2ビタミンB群摂取状況と10年以内の骨折発生リスクとの関連について横断研究を行った。

対象者は福岡市の在宅で自立した生活をする65歳以上の者18名(男性6名、女性12名)で、骨強度・10年以内の骨折発生リスク(FRAX)・血液検査・食事摂取頻度調査を行った。骨強度の測定は、超音波骨密度測定装置AOS-100SAを用い、音響的骨評価値(osteosono-assessment index: OSI)で評価した。対象者の年齢は78.3±4.1歳で身長153.3±9.3 cm、体重54.7±10.6 kgであった。OSIは2.314±0.461で、女性1名に骨粗鬆症の疑いが認められた。FRAXは、75歳未満が1名であったため解析できなかった。OSIと骨代謝マーカーおよび骨質低下の指標となるホモシステイン濃度との関連は見られなかった。血中ビタミンB6(ピリドキサール)、ビタミンB12、葉酸は、OSIとの関連は見られなかった。しかしビタミンB6・ビタミンB12・葉酸の摂取量は、OSIと正の相関が認められた。ビタミンB6とビタミンB12の摂取量は推奨量を満たしていたが、葉酸摂取量は推奨量を満たしていなかった。在宅で自立した生活を送っている高齢者においても、葉酸の不足が認められ、これらの変化は骨強度の低下に関連していることが示唆された。平成30年度は、要介護者の対象を増やし、ビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と骨強度規定因子の関連について検討を行うと共に骨質低下を制御するビタミンB群の摂取量について検討するパイロット研究を行う。平成30年度においては、対象者の増加(特に要支援・要介護高齢者)と簡易型自記式食事歴法質問票によるビタミンB群摂取量の調査を継続して行う。さらに血液検査を行い、血中ビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)の測定および、血中の骨代謝マーカー(骨吸収マーカーのTRACP-5b・骨形成マーカーのBAP)の測定と骨質低下の指標となるホモシステイン濃度を測定し、血中ビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)と骨強度規定因子の関連についての検討する横断研究を行う。またビタミンB12、葉酸の豊富な「鮭」と「枝豆」を3ヶ月間、毎日摂取してもらう介入研究のパイロットスタディを開始し、血中ビタミンB12、葉酸の濃度変化を検討し、骨強度規定因子の関連を評価する。本研究は、骨粗鬆症性骨折予防のためのビタミンB群(ビタミンB6、B12、葉酸)による骨質低下の制御と骨強度規定因子の解析を行うことを目的とした。平成29年度10月(初回測定)と平成30年度7月(9ヶ月後測定)の2回測定した女性11名を対象に、骨強度、食事摂取頻度調査を行い、ビタミンB群の摂取状況と骨強度規定因子の変化を検討した。超音波骨密度測定装置AOS-100SA(日立アロカメディカル株式会社)を用い、音響的骨評価値(osteosono-assessment index: OSI)、音速(speed of sound: SOS)、超音波減係数(broadband ultrasound attenuation: BUA)で評価した。初回測定後にビタミンB群が多く含まれている食品と料理法を記載した小冊子を配布し、食事に取り入れるように指導した。小冊子の利用をアンケート調査し、ほぼ毎日利用した・週に3回以上利用したと答えた女性6名を介入群とし、週に2回以上利用した・あまり利用しなかったと答えた女性5名をコントロール群とした。初回測定時の年齢は、コントロール群77.1±4.8歳、介入群77.0±4.8歳で差はなかった。初回測定時と9ヶ月後測定の身長、体重に2群間の差はなかった。初回測定OSIと9ヶ月後測定OSIを比較すると、コントロール群では減少していたが、介入群は変わらなかった。
古代アメリカ文明の高精度編年体系の確立と環境史復元

(調査)ペルー,ナスカ台地での年輪試料の調査,ペルー中部以北での堆積物試料の探索,グアテマラ・マヤ低地南部のセイバル遺跡周辺の環境考古学調査を実施し,試料点数を充実した。(分析)収集した堆積物試料,樹木年輪試料のC-14年代,理化学分析を継続した。その結果,グアテマラ・マヤ低地南部・ペテシュバトゥン湖の年縞堆積物の年縞編年が完了し,世界最高レベルの年代決定精度(+/-4年)を有する試料であることが確定した。また,元素分析の結果,過去の降水量の高時間分解代理データが得られ,当該地域の降水量変動が北半球レベルの気温とリンクした変動を示すことを明らかにした。計画研究A02,A03の調査地周辺の立地環境調査,地形データ解析に協力した。マヤ低地南部の遺跡で収集した植物遺体の分析を継続し,セイバル遺跡周辺地域の植生変動と人類活動との関連を明らかにした。また,計画研究A02のメンバーと協力して,大型ドローンと3次元スキャナX線スキャナを用いて,メキシコ・チョルーラ遺跡の高解像度地形データの作成と,十分な踏査がなされてこなかった壁画を含む地下坑道の探索と壁画復元に成功した。この成果,同種の調査として従来用いられてきた航空レーザー測量に比して,遥かに安価で,同等・またはより高い精度を有することを実証するものである。近赤外分光法によるアンデス出土の古材の非破壊・非採集年代測定を試み,新規の年代測定技術としての有効性が確立した。高精度の年輪画像解析装置の開発・改良を継続し,本研究で対象とした年輪解析が極めて困難な樹種の年輪年代学的解析を可能とした。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では,樹木年輪と湖沼堆積物を用いて,中米メソアメリカと南米アンデスの古代文明の高精度編年体系を確立する。そのために(1)年輪年代法と放射性炭素年代法により古環境試料と遺跡出土遺物の高精度編年,(2)湖沼堆積物・樹木年輪試料から高精度で環境史復元を実施する。本年度は以下の項目を実施した。(調査)南米・ペルー南部のナスカ台地において樹木年輪試料の調査を行い,試料を収集した。中米・グアテマラ,マヤ低地南部の湖沼調査を行った。(分析)既存試料の理化学分析と年代測定を実施した。グアテマラでは考古植物調査を開始した。また,グアテマラ,ペルー南部の高精度標高データの解析に着手し,航空測量データの処理法を検討した。その結果,中米グアテマラ・マヤ低地南部の湖沼において,6m10mの良好な年縞堆積物を5本,表層の精密な分析が可能なコア試料を2本,採取することができた。これは予定よりも長期の古環境記録である。試料のサブサンプリングを現地で実施し,問題なく持ち帰った。その後の堆積物の岩層解析により,コア試料間の対応関係を詳細に検討した結果,マヤ文明成立以前から近現代までを完全にカバーする古環境試料が得られたことが明らかとなった。ペルー・ナスカ地域では現生木年輪試料を18個体収集した。これまでに収集した試料と合わせて,ナスカ地域での年輪年代学的解析の基礎試料として十分な個体数が得られた。ナスカ台地周辺の以降から得られた木材試料の電子顕微鏡画像を撮像し樹種構成に関する情報が得られた。また,本科研費により年輪の木部密度と同位体測定用試料の高精度調整装置の開発と実用化に成功した。その結果,試料調製にかかる時間が従来よりも50分の1程度に短縮され,従来に無い高精度の試料作成が可能となった。今後の大量試料の処理を迅速にこなす目処が立った。本研究では樹木年輪と湖沼堆積物を用いて,中米メソアメリカと南米アンデスの古代文明の高精度編年体系を確立することを目的としている。H27年度は(調査)中米・グアテマラ・マヤ低地南部の湖沼調査,考古植物学調査,湖沼及び遺跡周辺の地形調査を実施した。(分析)グアテマラ・ペテシュバトゥン(GPB15)湖堆積物の年縞解析,理化学分析を実施した。ナスカ台地周辺で採取した現生木,遺跡出土木の木材組織,年輪構造の分析を実施した。また,計画研究A02が実施した航空測量による地形データの解析を実施した。(主な成果)(1)グアテマラ湖沼調査では,年度前半に国内湖沼(福井県水月湖等)で試料の採取法と採取直後の試料処理法について綿密に検討を重ね,湖底最表面(2015年)までの完全な表層堆積物試料の採取に成功した。これはH26年度に採取した長い堆積物試料と現代の環境データを連結させるものであり,現代の正確な観測データと,古環境データとの定量的な対比を可能とするものである。一方,調査国では昨年は大統領選挙のため政情が極めて不安定であり,ラスポサス湖の調査について近隣住民と交渉を重ねたが合意が得られず,H28年度に改めて調査の交渉を開始することとした。(2)堆積物の分析では,英国・アベリストウィス大学との国際共同研究でXRF法による高時間分解の元素分析を実施し,このデータを用いた年縞データ解析に着手した。また年代測定試料を多数発見した。測定結果はH28年6月までに得られる。(3)ペルー・ナスカ台地で収集した試料の木材分析を進め,組織・年輪構造を明らかにした。

また,出土材のC-14年代測定を実施した。(4)航空測量データの解析では3次元地形モデルと赤色立体図を作成した。その結果,森林植生の被覆を除去した高精度の地形情報が得られ,400平方kmの広範囲で新たな遺跡を探索するための情報の提供が可能となった。調査:中米で対象としている一つの湖沼でやや遅れがあるが,全体的にはおおむね順調に進展している。グアテマラ・ペテシュバトゥン湖では非常に良好な堆積物試料が得られている。セイバル等,マヤ文明の遺跡の考古植物調査ではペルー・ナスカ台地では,周辺の植生や現生木の生育環境調査を複数回,実施し,当該地域での年輪年代学研究に必要な基礎的な情報はすでに十分得ている。また,遺跡出土木についても計画研究A03から試料の提供を受けて,分析を継続している。試料分析:中米湖沼での調査を延期したため,本計画研究で必要となる分析機器(高精度連続年輪自動撮像装置,同位体分析用薄片作成装置)の開発を前倒しで完成させた。ペルーで対象とする樹種は組織構造が複雑なため,年輪年代学的研究では最も分析が難しいものの一つであり,これらの新規装置開発によって,初めてナスカ出土木の分析が可能となった。湖沼堆積物では,蛍光X線法(μXRF)高時間分解の元素分析データが完備した。年輪年代法を応用して,堆積物の縞状葉理の対比にも成功した。また,C-14年代測定試料も多数得られ,年代測定を実施中である。計画研究A02が実施した航空測量のデータ解析では,赤色立体図が,植生密度の高いセイバル遺跡周辺でも,広範囲の新規遺跡探査に有用な情報が提供出ることが明らかとなった。成果発表:本計画研究の成果の本格的な発表はH28年度から予定されているが,関連する成果を国際誌等で発表した。また,中学,高等学校などでの出前授業や一般向け公開講座でも成果の普及に務めた。本計画研究では,古代アメリカ文明の高精度編年を確立し,環境史を復元する。そのため,以下の3項目を目標としている。(1)年輪年代法と放射性炭素年代法による古環境試料と遺跡出土遺物の高精度編年,(2)湖沼堆積物・樹木年輪試料を用いた高時間分解の環境史復元,(3)セイバル遺跡(メソアメリカ)・ナスカ(アンデス)の高精度の3次元地形モデルの作成による新たな遺構の痕跡や地上絵の探索。本年度は,中米・グアテマラ・マヤ低地南部では,湖沼調査,考古植物学調査,湖沼及び遺跡周辺の地形調査,現生樹木年輪試料の調査を実施した。グアテマラ・ペテシュバトゥン(GPB15)湖沼堆積物の年縞解析,理化学分析を継続的に実施した。その結果,試料の分析が進展し,完全な連続した堆積物試料であることがほぼ確実となった。現代観測データと,古環境データとの定量的な対比が可能となった。一方,調査国では湖沼調査について交渉が進展せず,GPB15の追加資料を得ることはできなかった。そのため,予備調査で収集したラスポサス湖の堆積物での環境復元を進めた。また,当該地域でのC-14年代のズレを実証的に把握するために現生樹木年輪試料の調査を行い,良好な試料を得た。また,計画研究A02が実施した航空測量による地形データの解析を実施した。ナスカ台地周辺で採取した現生木,遺跡出土木の木材組織,年輪構造の分析を実施し,最適な試料の処理法を検討した。高解像度の年輪画像撮像装置の開発を行った。
トロンボポエタン非依存性の巨核球成熟を担う細胞内分子機構の系統的解析

【目的】造血幹細胞から巨核球が分化・成熟する過程には、系統特異的サイトカインであるthrombopoietin (TPO)が重要な役割を果たすが、後期の巨核球造血および血小板産生はTPO非依存性に進むことが知られている。しかしながら、この間の巨核球成熟、血小板産生がどのように制御されているかは、今日まで明らかにされていない。本研究はこの過程に関与する巨核球細胞内情報伝達系、接着因子などを明らかにすることを目的とした。【方法】p38MAPK, caspase-3および接着因子CD226(DNAM-1)の関与を、特異的阻害剤、特異抗体、遺伝子改変マウスを用いて検討した。巨核球成熟能を、核ploidyの変化、巨核球からのproplateletformation、超微形態、および抗ガン剤投与マウスにおける血小板数の回復などで評価した。【結果】Bim KO, vav-Bcl-2 TGマウスを用いた検討などより、(1)巨核球系細胞におけるapoptosisはantiapoptotic proteinであるBcl-xLとproapoptotic proteinであるBimのバランスによって制御されていること、(2)caspase-3の活性化は従来言われているような血小板産生には関与せず、幹細胞から巨核球へと分化する段階で分化を制御すること、(3)Bcl-xLの持続的発現が巨核球成熟に重要であることを明らかにした。またp38MAPKに関しては、inhibitorを用いた実験ではあるが、巨核球からの血小板産生に重要な役割を果たすことを見いだした。さらに、CD226に対する特異抗体を用いた実験より、巨核球と血管内皮細胞の細胞間相互作用に巨核球表面のC226が関与し、CD226からのシグナルが入っている状態ではproplatelet formationが阻害されていることを見いだした。【考察】これらの結果より、caspase-3活性化、Bcl-xLの発現は巨核球の初期成熟・分化に重要であり、TPOが関与しなくなった後期の巨核球造血を、接着因子CD226、p38MAPKが制御している可能性が示唆された。現在、p38MAPK、CD226それぞれのKOマウスを導入済みであり、今後はこのような遺伝子改変動物を用いた検討を進める予定である。巨核球から血小板が産生される細胞学的メカニズムに関しては、巨核球が胞体突起を形成しその先端が断裂することによって血小板が産産されるという仮説が有力である。トロンボポエチン非依存生に進行する胞体突起形成の分子機構を明らかにすることが本研究の目的であり、平成16年度は以下の3点を検討した。1.生内における巨核球胞体突起形成の観察実際に生体内で巨核球胞体突起形成が観察されるか否かを知るために、マウスに抗血小板抗体を投与し、血小板回復期の骨髄中巨核球を、共焦点顕微鏡、電子顕微鏡によって観察し、生体内における巨核球胞体突起形成を証明した。

2.巨核球胞体突起形成に関与する細胞内情報伝達物質の検討巨核球胞体突起形成能を観察するために、(1)マウス骨髄細胞から精製した巨核球を無血清条件下で培養する、(2)マウス骨髄造血幹細胞(c-kit+,Lin-)を、トロンボポエチン存在下で培養し巨核球へと誘導する、という2つの実験系を用いた。阻害剤を用いた検討より、何れの実験系を用いた場合においても、p38MAPK, calpain, PKCが、胞体突起形成に関与する可能性が示唆された。今後、これらの情報伝達物質が巨核球胞体突起形成に如何にして関与するかを、造血幹細胞に遺伝子導入をする実験系(下記#3参照)を用いて確認する予定である。さらに、apoptosisが胞体突起形成に関与するか否かを検討したが、生体内および培養系での巨核球胞体突起形成に伴い、apoptosis関連タンパクが活性化されることはなかった。3.遺伝子導入巨核球観察のための実験系の確立平成17年度以降は、造血幹細胞にレトロウイルスベクターを用いて細胞内情報伝達物質遺伝子を導入し、巨核球に分化させた時のphenotypeを解析する予定であり、現在、効率的に遺伝子導入を行うための実験系を確立している。後期巨核球成熟に関与する情報伝達系を明らかにすることを目的として、マウス培養巨核球および遺伝子改変マウスを用いた実験を遂行中である。現在、(1)巨核球からの血小板産生にapoptosisが関与するか、(2)巨核球からの血小板産生にp38MAPKが関与するか。(3)巨核球と血管内皮細胞の相互作用にCD226が関与するか、という3点を中心的な課題としている。(1)に関しては、培養巨核球を用いた実験では、caspaseが血小板産生に関与するという証拠は得られなかった。一方で、Bcl-2 KOマウス、Vav-Bcl-2 TGマウスにおいては、血小板数が正常の半分程度に減少しているので、今後はこれらのマウス巨核球のphenotypeの解析を行う予定である。(2)に関しては、培養巨核球を用いた実験で、proplatelet formation (PPF)に先だって、p38MAPKの活性化が認められること、p38MAPK阻害剤存在下では、PPFが阻害されること、p38MAPK(+/-)マウスでは巨核球のPPF、血小板数ともに正常の1/2程度まで低下していることを確認した。p38(-/-)マウスは、胎生致死となるために解析がやや困難ではあるが、今後はp38(-/-)巨核球のPPFおよび血小板数が低下しているか否かを明らかにする。(3)に関しては、血小板産生に際して巨核球が骨髄血管内皮細胞下に移動することに注目し、巨核球・血小板に発現されている接着因子CD226が、巨核球と内皮細胞の細胞間相互作用、巨核球胞体の血管内腔への移動に関与するか否かを検討中である。現在は阻害抗体を用いた実験を行っているが、CD226KOマウスを準備中である。以上より、あと1年の研究期間において、充分な成果が得られるごとが期待できる状況である。【目的】造血幹細胞から巨核球が分化・成熟する過程には、系統特異的サイトカインであるthrombopoietin(TPO)が重要な役割を果たすが、後期の巨核球造血および血小板産生はTPO非依存性に進むことが知られている。しかしながら、この間の巨核球成熟、血小板産生がどのように制御されているかは、今日まで明らかにされていない。
Th17細胞分化におけるMenin/TrxG複合体の機能解析

我々は、Th2細胞の機能維持にMeninが重要な役割を果たしていることをすでに報告している。本研究では、IL-17A産生においてMeninがどの部分を特異的に制御しているのか、どの分子と一緒に作用しているのか、Menin欠損により標的遺伝子への影響がいつ現れるのかを明らかにし、アレルギー性喘息モデルマウスを用いて多面的に病態形成への関与の解析を目指した。今年度は下記の実験を行った。Meninの直接的な遺伝子発現制御を検討するため、遺伝子発現の調節を行なうRNAポリメラーゼII(RNAPII)のリン酸化状態(2P,5P)との関連性をChIPを用いて検討した。その結果、Menin欠損型ではRNAPIIの集積が障害されていることが分かった。2.MeninによるTh17細胞関連転写因子への影響IL-6の下流のSTAT3を欠損したTh17細胞を用いてIll7a遺伝子座へのMeninの結合能の変化をChIPにて検討した。その結果、Meninの結合はSTAT3に依存して起こることが判明した。3.Meninによるマスター転写因子Rorc発現維持への影響MeninはRorc (RORgtをコードしている遺伝子)の遺伝子座にも結合するが、野生型とMenin欠損Th17細胞のRorc遺伝子発現量は同程度であった。そこで、Th17細胞を長期培養し、Rorcの遺伝子発現を経時的に観察したところ、Menin欠損型では発現レベルが徐々に低下していた。4.Menin欠損TL17細胞におけるアレルギー性喘息への影響Menin欠損Th17細胞移入による喘息モデルマウスの肺胞洗浄液を調べると、野生型に比べ浸潤好中球数やサイトカイン濃度の減少が見られ、Menin欠損によりアレルギー性喘息が軽減されると結論づけた。