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EBウイルス抗体陰性キャリアにおけるウイルス感染及び免疫応答に関する研究

小児伝染性単核症様疾患におけるEBウイルス(EBV)感染の解析[目的]我が国に於けるEBV感染実態を明らかにし、EBV関連疾患の診断、予防、治療に役立つことを目指す。我々はEBV初感染で発症する伝染性単核症(IM)と類似症状の小児において、EBV抗体陰性感染キャリアを見出し、EBV感染の病因としての関りを解析する。[方法]末梢血を、Ficol-Conray法でリンパ球を単離し、DNA及びRNAを抽出し、PCR法によりEBV DNAを、RT-PCRによりEBV RNAを解析した。血漿を用いEBV抗体価を蛍光抗体間接法で測定した。[成績]IM様患児(03歳)の8割はEBV抗体陰性であった。その抗体陰性者の6割において末梢リンパ球からEBV DNAが検出された。EBV DNA量はいずれも有意に高値を示した。EBVサブタイプはほとんどI型であった。これら患児の3例は半年後も抗体陰性を呈し、1例では7ヶ月後に陽転化し、EBV DNA II型が認められた。サイトメガロウイルスDNAは全症例に於いて検出されなかった。[考察]我々は、EBV抗体が陰性のためEBV未感染と診断された患児の末梢リンパ球にEBV DNAが検出されることを明らかにした。患者はいずれもIM様症状を呈することから、EBV感染が原因と考えられるが、成人IMと異なりEBVに感染しているが抗体が上昇しない免疫寛容機構が存在する。欧米諸国で見られるIMでのEBV感染と抗体応答における常識に対し、新知見を加えた。日本人の幼児期におけるEBV初感染の1疾患の病態を反映すると考えられる(Ikuta et al.,2003)。EBウイルス(EBV)抗体陰性で伝染性単核症(IM)様症状を呈する小児の末梢リンパ球におけるEBV DNAの証明[目的]我々は、生体に於けるEBV感染及び免疫を理解し、種々のEBV関連疾患について、その診断、予防、治療の研究を目指している。我々はEBV抗体陰性健常成人の唾液及び末梢リンパ球に多量のEBVが存在するという意外な事実を見出した(Microbes and Infection 2:115,2000)。今回は、EBV初感染によって起こるIM様症状を伴った小児(12歳)症例において、EBV抗体が陰性のため未感染と考えられた患児の末梢リンパ球にもEBV DNAが検出されることを明らかにした。[方法]患児末梢血を、Ficol-Conray法でリンパ球を単離した。フェノールクロロホルム法でDNAを抽出し、PCR法によりEBV DNAを検出した。EBV抗体価測定は、蛍光抗体間接法を用いた。[成績]IM様患児、17例中14例ではEBV抗体が陰性であったが、8例においては末梢リンパ球からEBV DNAが検出された。EBV DNA量はいずれもEBV抗体陽性健常成人の末梢リンパ球におけるEBV DNA量よりも多量であった。これら患児の3例は半年後も抗体陰性であった。1例は7ヶ月後に抗体の陽転化(抗VCA-IgG 1:160;抗EA-IgG<5;抗EBNA<5)が認められた。全ての症例に於いてサイトメガロウイルスDNAは検出されなかった。[考察]我々は、健常成人についてEBV抗体陰性キャリアの存在を、更に本研究では、EBV抗体陰性でIM様症状を呈する多数の患児を見出した。その末梢リンパ球でEBV抗体陰性キャリアと同様に多量のEBV DNAが検出された。小児IMは成人IMと異なり、抗体が上昇せず末梢リンパ球にEBV DNAが検出されると考えられる。

これら患児及び抗体陰性健常成人キャリアの存在は、EBV感染と抗体応答における常識を越えた新たな課題を提起した(第49回日本ウイルス学会発表;論文投稿準備中)。小児伝染性単核症様疾患におけるEBウイルス(EBV)感染の解析[目的]我が国に於けるEBV感染実態を明らかにし、EBV関連疾患の診断、予防、治療に役立つことを目指す。我々はEBV初感染で発症する伝染性単核症(IM)と類似症状の小児において、EBV抗体陰性感染キャリアを見出し、EBV感染の病因としての関りを解析する。[方法]末梢血を、Ficol-Conray法でリンパ球を単離し、DNA及びRNAを抽出し、PCR法によりEBVDNAを、RT-PCRによりEBVRNAを解析した。血漿を用いEBV抗体価を蛍光抗体間接法で測定した。[成績]IM様患児(03歳)の8割はEBV抗体陰性であった。その抗体陰性者の6割において末梢リンパ球からEBVDNAが検出された。EBVDNA量はいずれも有意に高値を示した。EBVサブタイプはほとんどI型であった。これら患児の3例は半年後も抗体陰性を呈し、1例では7ケ月後に陽転化し、II型が認められた。サイトメガロウイルスDNAは全症例に於いて検出されなかった。[考察]我々は、EBV抗体が陰性のためEBV未感染と診断された患児の末梢リンパ球にEBV DNAが検出されることを明らかにした。患者はいずれもIM様症状を呈することから、EBV感染が原因と考えられるが、成人IMと異なりEBVに感染しているが抗体が上昇しない免疫寛容機構が存在する。欧米諸国で見られるIMでのEBV感染と抗体応答における常識に対し、新知見を加えた。日本人の幼児期におけるEBV初感染の1疾患の病態を反映すると考えられる(Ikuta et al.,2003)。
生命時間と場を連携する細胞内在性のスプライシング時計による脳サイズ制御

子どもなどの若い個体では、脳を含めた臓器は成長能力をもつが、大人になると喪失する。成長能力の分子メカニズムが解明されれば、難病の治療戦略として役立つ可能性がある。本研究では、若年期に特有の遺伝子発現コントロール機構に着眼する。遺伝子は、オルタナティブ・スプライシングにより、1つの遺伝子がいくつもの姿に形を変えて機能する。本研究では、成長期の脳がオルタナティブ・スプライシングによって全く異なる遺伝子発現プロファイルを示す可能性を検証する。この研究が完遂すれば、若年期に特有の成長能力を引き出すことにより、難病の治療に役立てる新しい技術として活用できる可能性がある。
環境教育のための教科教育で使用する地形・地質・植生に関するテキスト・映像教材の開発

北海道の地形・地質・植生と自然環境保全の問題は環境教育の教材として整備する段階になり地史・地形の特徴・地質分布と構造.植生の変遷.湖沼河川の現状や動物の棲息状況等を資料として収集することとなった.スライド・OHP・Videoテープなどの視聴覚映像資料として野外観察・調査の基礎知識を学習するための教材である.これらの視聴覚資料は使用者の学習教育目的に応じて取捨選択し目的・学齢・年代のレベルに合わせて選択できる.自然破壊・汚染と環境倫理は画像を通して荒廃した自然景観を目の当たりにして切実に感じられ、深く考えるような刺激を画面から受けるような効果を盛り込んだ映像とし構成してある.勿論,環境に親しむ美しい良い状態を学習から選ぶことが出来るように自然に馴染んだ自然観の形成と荒廃した自然に危機感を感じる自然観はどうじに形成されるという考え方で資料収集を行った.収集資料は環境の広域的は把握・凡地球規模の環境理念・小地域や郷土に渉る色々な規模の視野をもつことから始める.郷土の自然環境教材研究では標本採集整理作製の方法や鑑定の手順などを説明した.北海道の地形・地質・植生と自然環境保全の問題は環境教育の教材として整備する段階になり地史・地形の特徴・地質分布と構造.植生の変遷.湖沼河川の現状や動物の棲息状況等を資料として収集することとなった.スライド・OHP・Videoテープなどの視聴覚映像資料として野外観察・調査の基礎知識を学習するための教材である.これらの視聴覚資料は使用者の学習教育目的に応じて取捨選択し目的・学齢・年代のレベルに合わせて選択できる.自然破壊・汚染と環境倫理は画像を通して荒廃した自然景観を目の当たりにして切実に感じられ、深く考えるような刺激を画面から受けるような効果を盛り込んだ映像とし構成してある.勿論,環境に親しむ美しい良い状態を学習から選ぶことが出来るように自然に馴染んだ自然観の形成と荒廃した自然に危機感を感じる自然観はどうじに形成されるという考え方で資料収集を行った.収集資料は環境の広域的は把握・凡地球規模の環境理念・小地域や郷土に渉る色々な規模の視野をもつことから始める.郷土の自然環境教材研究では標本採集整理作製の方法や鑑定の手順などを説明した.北海道北部紋別・稚内・礼文・利尻,中央部大雪・日高,東部釧路,松前,上ノ国周辺の地形映像を収集した.礼文の稀少植物について保存対策を立てるために,生育条件を中心にデータをとり,特別保護の指定の根拠とし,指定に至った.釧路湿原の周辺丘陵の森林植生について調査をすすめ植生図と樹木生育量について,保水蓄積の状況と湿原の水質汚濁との関係を調べた.紋別興部・下川の植物化石の採集では,中新世-鮮新世に森林植生の解析に役立ち,新生代後期から洪積世・現世に至る日本周辺に森林分布について貴重な資料をえた.これは今後,森林保護対策のために重要なデータとして活用できる.礼文利尻の気象観測データが得られたので,北海道北部の寒冷気候と北方系植物の生育環境についての特殊条件を解析するデータとして有効である.収集した映像のうち,TVテープの映像はビデオプリンターによってテキスト用図版にする.また,OHPフイルムとしてプリントして,研修講座や教養講座で使用して,学習効果を調べる教材の作製をする.樹木・野鳥・昆况・海虫・地質地形・植生などの望遠は光学機材の活用によって調査能率を高め,詳細な観察を可能にした.豪雪の発生機構についてと,雪の形成と降雪や雪の結晶,酸性雨に付いての教材の収集が進み,この分野については新しい環境教育教材となる.北海道北部・東部を主として調査した.礼文島はレブンアツモリソウの保護について具体策をたてるために地形と気象条件について観測できる方法と立ち入り禁止の対策を協議した.この種の北半球の類似種・近縁種の調査は別の研究プロジェクトで進められているので,礼文島に於ける分布の特性についての他地域との関連性は追って明らかになる.北見紋別から斜里にかけてのオホーツク海沿岸湖群の微生物の調査については試料採集と地形・植生写真撮影を行い,とくの湧別から小向・沙留にかけての湖沼調査は自然保護の対策の立案の上で重要である.興部・雄武地域の山地の自然林に関する地形地質の調査は花粉・珪化木・小型有孔虫の分析により古環境復元と環境の変遷が明かになり,北海道北部の森林植生の成立過程の基礎資料が整った.原生植生の調査は帯広周辺の平原・十勝川・利別川・十弗(十勝川河口)・札内川・音更川に沿って映像収集をした.ケショウヤナギ・ヤチカンバ・ヒダカヤエガ・アポイカンバ・エゾシラカンバ等の樹木分布特性の解析を草本類の分布で解析した.大雪連峰の石狩岳からトムラウシ岳にかけての高山植物,特にコマクサの分布と多角形土分布との相関性については新知見を得た.また,旭岳・黒岳・赤岳・白雲岳・有毒温泉周辺の映像教材をあらたに収集した.この研究によって,北海道の高山・寒冷地・北部低湿地・湖沼の自然環境の保護に関する資料を得た.この資料は自然の組み立てを多様性の観点から分析するためのもので,今後,多様性の構造的な地学・生物学の相互の関係を考察する上で役立てる.1.北海道北東部紋別・興部・常呂・網走・浜頓別地域の湖沼環境調査・プランクトン調査映像教材の収集,調査観察法の手引きと解説.2.北海道東部釧路・標茶町地域の地形・地質の調査と教材の収集および地形解説ガイドブック

.3.釧路湿原周辺丘陵の雑木林の伐採跡の植林実験における二次林の陽樹の成長と火山灰の幼樹の発育調査.市内小学校の植樹運動の協力によるドングリ(ミズナラ)の実の植え込みと自然学習の指導.達古武沼の水質検査と簡易水質検査試薬の作業指導4.釧路湿原流入河川の水質調査5.北海道興部・紋別地域新第三系植生の調査:花粉・葉・幹の種類と組織の研究.地質年代の植生の現代化の経過とその遷移及び植生の成立.本州中西部の新第三系植生の鑑定と暖帯林の変遷:クリ帯・ブナ帯の植生及び温帯林への遷移.北海道の地形・地質・植生に関する映像の整理と活用の手法の検討採集標本の整理と撮影
結晶形態を制御した連続鋳造用緩冷却モールドフラックスの開発

鋼の連続鋳造工程において伝熱の支配因子であるモールドフラックスの結晶化制御は重要である。本研究では,実験中の組成変動を抑えたホットサーモカップル法の装置を開発し,特にカスピダイン(3CaO・2SiO2・CaF2)結晶の組織形成と,組成依存性と添加物がカスピダイン結晶化挙動に及ぼす影響を評価した。カスピダインは急冷されたガラスにおいては広い組成範囲で中心的な析出相として結晶化するが,融液からの結晶化は状態図に準じた晶出が起きており,カスピダイン晶出量は析出量と比べ少なくなる傾向がある。添加物は融点や粘性を下げることにより結晶化を促進するが,多量の添加はFの配位状態を変えてしまうため逆効果である。初年度の計画では装置の作成と手法の確立を目的としており,反応容器の材質,形状を見直すことにより当初計画していた密閉性を確保し,試料からの揮発を抑えた装置を作ることができた。この装置を用いて試料の結晶化率を評価し,試薬合成によるCaO-SiO2-CaF2系ならびにCaO-SiO2-CaF2-R2O系(R=Li,Na,K)スラグの結晶化に関するTTT図を作成に成功した。融点近傍の高温域においては状態図に従った結晶化がおこるが,低温域においてはカスピダインが優先的に析出するため,高温域と低温域で2つのC字型のカーブを描くことが確認された。また,TTT図の作成には映像による結晶化開始時間と,試料全面を結晶が覆った時間を結晶化終了時間として記録しているが,実験後試料の粉末X線回折を用いた定量分析の結果,見かけの結晶化率よりも実際の結晶化率は低いことが確認された。これは結晶形態や結晶化箇所の違いにより映像では正確に識別できないことによることが分かった。そのため,XRDによる定量を併用して研究を進める必要がある。アルカリ金属酸化物による結晶化促進の効果に比較に関して,TTT図作成の結果,カスピダイン結晶化量への寄与はK2O>Na2O>Li2Oであり,結晶加速度に関してはLi2O>Na2O>K2Oであり,いずれも急冷ガラスの焼鈍による結晶析出実験で得られた知見と一致していた。アルカリ金属酸化物を単独で添加するとFの置換によりカスピダインの結晶化量が減る傾向があるため,複数のアルカリ金属酸化物を混合添加すると,添加成分の活量の上昇を抑えることができるが,Li2Oは結晶化量を抑える働きが強く,K2Oは結晶化促進の効果が小さいため,双方の負の影響力が大きく劇的な向上は望めないことが分かった。本研究で用いた組成域では,6mass%Na2O+1mass%Li2Oの混合添加が最も効果的であった。これまでの研究では等温保持によるTTT図の作成を行なってきたが,連続鋳造機内でのスラグフィルム形成は水冷鋳型による冷却により外周から冷却によってなされるため,厳密には連続冷却による結晶生成挙動を評価する必要がある。そこで,26年度では異なる熱履歴を与えた際の結晶化挙動の比較として,冷却速度を変化させて連続冷却による結晶形態の評価を行った。連続冷却測定において,オラストナイト(CaO.SiO2)は加熱用熱電対の周囲から異質核生成することが多く,カスピダイン(3CaO.2SiO2.CaF2)は均質核生成として等軸晶が生成しやすいことがわかった。生成した結晶はデンドライト状であり,2次のデンドライトアーム間隔(DASII)を測定し,冷却速度との相関を確認した。冷却速度が遅くなるほどDASIIの間隔は大きくなる傾向があり,岡本の式として提案されているDASIIは冷却速度の-1/2乗に比例することが確認された。デンドライト全体の太さは岡本の式では記述できないが,冷却速度が遅くなるとデンドライトの太さが太くなる傾向があることが確認できた。平成26年度に引き続き,溶融状態から冷却過程における結晶化挙動を比較するため,ホットサーモカップルでの連続冷却実験により結晶化挙動を観察し,晶出相の形態の評価を行なった。実験装置の改善により,カスピダインは実機同様に一方向のデンドライト結晶を形成するようになったが,連続冷却過程においても高温域では初晶のオラストナイトが晶出し,現在の組成設定では実用モールドフラックスの実機鋳型内のスラグのようにカスピダインのみが晶出する状況を再現できていない。また,カスピダインのデンドライト全体の太さと冷却速度の関係において,デンドライトアームスペーシングに関する岡本の式のように明確な相関が見えづらく,注目しているカスピダイン結晶の適切な太さを実現する条件と言うものを明らかにすることはできなかった。一方,浸漬実験による組織形成の検証を行うための準備として,スラグ溶融炉を自作したため,次年度において鋳型を模した温度勾配を設けた際の結晶組織の組成依存性について検証を行う。等温保持におけるTTT図作成の成果について,5月に北京で行われた第6回世界製鋼会議(ICS2015)においてKeynoteとして講演した。ホットサーモカップルの連続冷却による試験を継続して行ったが,冷却速度とデンドライトの太さに関する明確な相関が実験において見えづらく,注目しているカスピダインの適切な結晶形態の制御に難航している。以上のように,実際の鋳型環境に近い浸漬実験による組織形成とホットサーモカップル下での組織形成との相関を十分に取る必要が生じたため,遅れていると評価した。

鋼の連続鋳造工程において伝熱を支配する因子であるモールドフラックスの結晶化,特にカスピダイン(3CaO.2SiO2.CaF2)結晶の組織形成機構を明らかにするため,ホットサーモカップル法によりモールドフラックスの結晶化の評価を行なった。モールドフラックスの成分系はSiF4蒸気の揮発により組成変動を起こし,正確な評価を行うことは困難である。本研究では装置の改良により系内に予めSiF4蒸気を充満させ,組成変動を抑えた条件下での実験を可能にした。実用フラックスと合成スラグにおけるTTT図を作成した。特にフラックス添加元素において最も重要なアルカリ金属がカスピダインの結晶化に及ぼす影響を評価した。融点近傍の高温域では状態図に従った晶出が起こるが,低温域においてはカスピダインが優先的に析出するため,高温域と低温域で異なるCカーブを描く。アルカリ金属酸化物は結晶化速度,結晶化量に影響を及ぼし,結晶化量を増やす効果はK2O>Na2O>Li2Oであるが,結晶化速度を上昇させる効果はLi2O>Na2O>K2Oである。アルカリ金属酸化物はFとの親和性が高いため,過剰な添加はカスピダインを不安定化させ結晶化量を減らしてしまう。混合添加により各成分の活量上昇を抑えることができるが,Na2O以外の成分は結晶化量あるいは速度に及ぼす負の影響が強すぎるため,実機フラックス設計においてはNa2O添加を中心とし,他成分を少量添加するに留めた方が良い。鋳型内での結晶化に近づけるため,連続冷却過程における結晶化挙動の評価も行った。カスピダインは融液からデンドライト状結晶を形成するが,2次のデンドライトアーム間隔は岡本の式で表される通り,冷却速度の-1/2状に比例する。しかしながらスラグの光学特性に影響を与えるデンドライト全体の太さに関しては本研究では相関を得ることはできなかったため,引き続き研究が必要である。鋼の連続鋳造工程において伝熱の支配因子であるモールドフラックスの結晶化制御は重要である。本研究では,実験中の組成変動を抑えたホットサーモカップル法の装置を開発し,特にカスピダイン(3CaO・2SiO2・CaF2)結晶の組織形成と,組成依存性と添加物がカスピダイン結晶化挙動に及ぼす影響を評価した。カスピダインは急冷されたガラスにおいては広い組成範囲で中心的な析出相として結晶化するが,融液からの結晶化は状態図に準じた晶出が起きており,カスピダイン晶出量は析出量と比べ少なくなる傾向がある。添加物は融点や粘性を下げることにより結晶化を促進するが,多量の添加はFの配位状態を変えてしまうため逆効果である。申請時の計画では,1実用フラックスのTTT図と結晶化挙動の評価,2中田の報告に基づく冷却速度と結晶の形状の評価を計画していた。しかしながら,1については少数のフラックスしか検証できていないこと,2については中田が指摘しているように,岡本の関係が成立することは確認できたが,本来目標としていた連続鋳造用スラグフィルムの組織形成まで考察できるほどの結果を得ることがで来ておらず,引き続き広い組成範囲での検証が必要であると判断したため,やや遅れていると評価した。27年度において実現できなかったカスピダインのみの晶出を実現するため,添加成分を増やしてより実機組成に近づけた試薬による合成スラグを設定し,オラストナイト晶出を抑える成分を特定するとともに,冷却速度とカスピダインのデンドライトの太さとの関係について継続して調査する。
若年者における靴着時の靴内圧測定と実態調査

1.研究目的近年、成人だけでなく、若干者における外反母趾やハンマートゥが報告されている。適せな靴着用に関する基礎的研究が、成人を対象とするばかりでなく、若年者を対象として行われることが切望されている。本研究の目的は、若年者の靴の着量実態を明らかにすることと、靴内圧の実態を明らかにすることにある。2.研究方法(1)若年者の靴の着用実態調査を、愛知県内の若年者群(平均年齢8歳)を調査対象として行った。対照に同県の大学生群(同20歳)を用いた。調査項目は、所持している靴の種類、靴の種類別着用頻度、足の形態的特等等である。(2)靴内圧の実態を調査するため、若年者が着用している靴の靴内圧を、第1趾側、第5趾側、第1趾足蹠部、および踵について測定した。さらに、靴着用時の圧迫感、快適感等の自覚症状調査も同時に行った。3.研究結果靴のサイズを知っている保護者、および靴購入時に費やす時間が30分以内の者の割合は、若年者群は70%であり、対照群の3043%に比較して高値であった。若年者群は試し履きよりもサイズを目安に購入していると推測された。若年者が所有している靴は、運動靴が73%、ロ-ファーが6%、ブ-ツが5%であった。若年者群の40%が足爪先に圧迫感を自覚しており、10%が外反母趾であると回答した。若年者群の靴内圧は、第1趾側0.11kg/cm^2、第5趾側0.29kg/cm^2、1趾足蹠部0.53kg/cm^2、および踵0.57kg/cm^2であった。若年者の足の健康確保のためには、保護者による客観的管理が重要であると思われた。
「読解力」育成材としての絵本の有効性に関する基礎的研究

(1)「読解力」(Reading Literacy)育成のために、絵のない本や文章と比べて、絵本の場合、読みの過程を読者がメタ認知しやすいということがわかった。読みの過程を学習者に意識化させることで「読解力」育成の基礎がつくられる。(2)主として米国の文献の調査によって、「読解力」の根幹となる、「理解するための方法」の学習においても、絵本を教材として使用することが効果的であることが明らかになった。(3)読み書きカリキュラムで、絵本が、多モードのメディアとして大きな役割を果たしうること、そしてその有効性を生かすためにはワークショップ型の授業展開をさらに工夫する必要あるという提言を行った。研究課題に即しながら、国語科学習のとくに「読むこと」の領域における絵本活用の可能性と有効性を、理論と実践の両面から考察した。絵本活用の場として有効なものと考えられる、リテラチャー・サークルやブッククラブで、実際にどのようなかたちで絵本を活用していくことができるのかということを、英米の先行研究・先行実践の検討を通じて明らかにした。その成果の一部を、各種研修で応用して一定の成果を挙げることができた。また、絵本を活用したリテラチャー・サークルの授業書を全訳・刊行し、本研究の成果を国語科をはじめとした教育現場での実践において活用する具体的な方策を提案した。平成24年度の研究では、主として英米の理解方略指導論・絵本論・絵本教育論の検討を行った。全国大学国語教育学会筑波大会では「理解方略指導の具体的展開ーThe Comprehension Toolkitを手がかりとしてー」という題目で、米国における理解方略(comprehension strategies)指導のための道具箱(toolkit)の内容を分析した。「推論する(inferring)」という方略について、その指導の実際を翻訳し、分析・考察した。理解方略指導の具体的なありように迫ることができた。この理解方略指導の研究成果を中学校国語科教師とともに応用しながら授業研究を行い、絵本『おおきな木』などを学習材として読書活動に生かす道を探った。また、全国大学国語教育学会富山大会では「「読解力」育成に果たす絵本の役割ー米国における実践的提案を手がかりにしてー」と題して研究発表を行い、米国の新しい学習指導要領に対応しながら、絵本を使った理解指導を提案した文献を分析・考察した。米国の新しい学習指導要領に取り上げられている「文学的要素」の指導を、円滑にすすめるためのアイディアを取り上げ、そこに提案されている指導法の分析・検討を行った。いずれも本年度の研究で明らかになったことの一端を公表したものである。米国の読み・書き教育において絵本を活用することを提案した文献も、上記考察で取り上げた以外に収集し、さらに考察を加えている。さらに、機会を得て、韓国の国際フォーラムで、附属学校の教師・児童の協力を得て行った絵本『スイミー』を扱った授業研究方法について、招待講演を英語で行い、研究交流を行うこともできた。本年度は研究のまとめとして、わが国児童・生徒の「読解力」(Reading Literacy)育成のための教材として絵本(とくに現代絵本)がどのような有効性を持つのかということを検討した。次のような成果が得られた。(1)現代社会で必要な「読解力」(Reading Literacy)育成のために考えていかなくてはならない諸課題を必要な理論、教材・学習材論、指導論それぞれの角度から多角的に議論し、単著としてまとめた。(2)米国の最新の文献をくわしく調べながら、「読解力」の根幹となる、「理解する」(わかる)ための方法とそれを使った成果に関する研究を行い、全国学会等で発表した。それらの研究をもとにしてA5版113頁の報告書をまとめた。(3)「読解力」育成材としての絵本の有効性を生かす指導方法論については、日本の中学校国語科における実践的な研究を行い、日本の国語科において活用可能な新しいアプローチについての提案を行った。さらに、当該領域で、国際的に評価の高い「理解するための方法」(comprehension strategies)指導に関する文献を翻訳・出版した。「理解するための方法」指導を進める上での課題をより明確にした。国語教育学研究計画に即して、先行研究の把握と、その内容についての学会等での紹介、その成果についての、教育現場や各種研修における実際的な活用を行っているから。先進的な国・地域における代表的な研究書の多くを学会に紹介していると考えることができるから。当初の研究計画に従いながら、国内外の国語教育学や読書教育学における絵本研究関連の文献をもとに、主として絵本に関する読者反応研究の成果を「読解力」育成の手がかりとして分析・考察し、その成果の一部を学会等で発表した。また、研究の成果を教育現場での読書活動の方法の開拓に生かし、その成果の一部を発表した。

日本の国語科のカリキュラム・授業のなかで、推進してきた研究の成果を生かしていく方策をさらに具体的に検討する。学校現場での調査研究、授業研究を行い、その成果を評価しながら、「読解力」育成のための方法としてより洗練していくことが課題である。また、ヴィジュアル・リテラシーやマルチモーダル・リテラシー研究との関連性についても状況を把握することにつとめていきたい。絵本が「読解力」育成材として持つ有効性を探るための調査や授業実験を実施し、その内容の分析・考察を行う。その分析・考察のために国語科授業論・教育方法学・教育心理学に関する文献が一定量必要になる。また、調査及び授業のためには、調査協力者に行き渡るだけの絵本が複本として必要となる。調査及び授業の成果をもとにしながら、「読解力」育成材としての絵本の有効性を探ることになる。そのために絵本に関する読者反応研究や読書教育研究の最新の文献を入手し、考察を進めたい。またブッククラブやリーディング・ワークショップに関する授業書を入手して検討、分析する。絵本と子ども読者との関係性に着目し、そのかかわりあいの実相を明らかにし、絵本が「読解力」育成に果たす役割を考察しようと考えている。米国の絵本研究に関する最新の研究書を入手するつもりであったが、刊行が年度をまたがることになってしまい、入手することができなかったため。平成26年度に当該文献を含め、必要な文献の購入に充てる予定である。「理解方略」を子どもの身につけさせるために絵本を学習材として取り上げ、その経験を生かしたプログラムを提案した文献を収集してきた。本科研のテーマにかかわって興味深い内容であり、分析・考察を進めているところであり、次年度以降研究成果を公表したいと考えている。文献は継続して収集しているため、とくに外国文献は年度内に入手が間に合わなかったものがあり、そのため次年度以降使用予定の研究費が生じた。次年度以降購入予定の文献のための研究費とあわせて、文献収集を継続し、その分析・考察を進めたい。
DT-MRIによる脳神経繊維の経路解明に関する研究

本研究では、以下2点の研究目標を掲げた。I.拡散テンソル磁気共鳴像(DTI)から拡散特異領域を抽出し,描画する.また,拡散識別子の組み合わせにより,拡散能の分布を分かりやすく表示する描画システムを開発する.II.脳白質神経線維束類似度評価手法を用いて,正常脳同士および正常脳と患者脳の定量的比較を試みる.上記2点の研究目標において、得られた結果と残存課題を以下に示す。(I)固有値分解を必要としない計算速度の大きい「退化テンソル識別子」を提案した.神経線維束の「Crossing Fiber Problem」の部位特定において,DA(T)とDS(T)の組合せを利用する手法が現在のところ有用ことを示した.「ボクセル内分割内挿法」により,ボクセル内でのテンソル分布を詳細に推定することが可能である.この手法を用いることにより,「Crossing Fiber Problem」の中心となる拡散退化位置付近のtractographyを詳細に検討することが可能となる.また、拡散テンソルMRIから得られたデータを解析し,その結果を二次元表示するシステム「DTI-MAPPER」を提案した.DTI-MAPPERは,拡散識別子をユーザが自ら設計することを可能にし,マッピング結果を比較検討することによりその効果を確認することができるという特徴を有する.(II)tractographyによって得られた神経線維束形状を,定量的に評価する手法の実現を目的として、2つの異なる脳MRI撮像データに対して,それぞれtractographyを行うことで2対の脳神経線維束を描出し,両者の形状を比較して類似度を算出するシステムを開発した.また,提案手法を各種データに適用して比較を行うことで,tractographyによる脳神経線維束形状の定量的比較の有効性や問題点について検証し,明らかにした.問題点は,以下の2点に大別された.「tractographyアルゴリズムの改善により克服できると思われるもの」および「tractography手法自体に付随するもの」である.今後の展望として,様々なtractographyアルゴリズムの検証を行い,本論文で挙げた問題点に対する有効性を確かめることが挙げられる.本研究の詳細な内容は、「科学研究費補助金(若手B)報告書DT-MRIによる脳神経線維の経路解明に関する研究g」(冊子)としてまとめている。拡散テンソル核磁気共鳴像(Diffusion Tensor-Magnetic Resonance Imaging ;DT-MRI)は、脳内水分子の拡散状態を計測し、脳梗塞、脳腫瘍、ワーラー変性などさまざまな症例の解明や研究に役立っている。一方、脳白質内の神経線維流れの情報は、解剖学的に得られる以外にはDT-MRIにより水分子の拡散方向を流れとして捉えるしか方法がない。脳白質内の神経線維の流れは、tractographyやelipsoid表示として提案されている。本研究では、DT-MRIから得られるデータセットを用いてテンソル場における特異領域を算出し、神経線維の基点情報を可視化する手法を提案した。さらに、特異領域付近より始まる神経の流れを脳内の特定部位において可視化した。その結果、神経線維が互いに交叉することにより生じる神経線維流れの予期しない停止や分岐に一つの解決案を与えた。しかしながら、適切な神経線維路を定めるためには解剖学的な知見を必要とし、拡散特異領域において一つ一つ適切な経路を選択しなければならないという問題が残っている。そこで、拡散特異領域をより高速に求める拡散識別子を提案した。拡散識別子はFractinal AnisotropyやApparent Diffusion Coefficientにより代表される水分子の拡散状態を表す数値であるが、DTIにおいて、拡散特異領域をより高速に求める手法は提案されていなかった。我々は、拡散テンソルの二重退化点(DA ; Diffusion-Anisotropic)および三重退化点(DS ; Diffusion-Spherical)を固有値分解を経ずに算出することにより、より高速に拡散退化点を求める手法を提案した。(I)固有値分解を必要としない計算速度の大きい「退化テンソル識別子」を提案した.神経線維束の「Crossing Fiber Problem」の部位特定において,DA(T)とDS(T)の組合せを利用する手法が現在のところ有用ことを示した.「ボクセル内分割内挿法」により,ボクセル内でのテンソル分布を詳細に推定することが可能である.この手法を用いることにより,「Crossing Fiber Problem」の中心となる拡散退化位置付近のtractographyを詳細に検討することが可能となる.また、拡散テンソルMRIから得られたデータを解析し,その結果を二次元表示するシステム「DTI-MAPPER」を提案した.DTI-MAPPERは,拡散識別子をユーザが自ら設計することを可能にし,マッピング結果を比較検討することによりその効果を確認することができるという特徴を有する.(II)tractographyによって得られた神経線維束形状を,定量的に評価する手法の実現を目的として、2つの異なる脳MRI撮像データに対して,それぞれtractographyを行うことで2対の脳神経線維束を描出し,両者の形状を比較して類似度を算出するシステムを開発した.また,提案手法を各種データに適用して比較を行うことで,tractographyによる脳神経線維束形状の定量的比較の有効性や問題点について検証し,明らかにした.問題点は,以下の2点に大別された.

「tractographyアルゴリズムの改善により克服できると思われるもの」および「tractography手法自体に付随するもの」である.今後の展望として,様々なtractographyアルゴリズムの検証を行い,本論文で挙げた問題点に対する有効性を確かめることが挙げられる.本研究の詳細な内容は、「科学研究費補助金(若手B)報告書DT-MRIによる脳神経線維の経路解明に関する研究g」(冊子)としてまとめている。
脱離を伴う開環重合を基盤とした自発的ブレンド形成能のある高分子材料の開発

1研究の目的と本年度の目標本研究では、1,3-オキサチオラン部位を有する高分子を合成し、これに開環重合を適用することによって生成するポリマーの構造を解析することを目的とする。昨年度までに、1,3-オキサチオラン部位を有するポリスチレン型の高分子上でのカチオン開環重合が、固相で起こることがわかっている。今年度はその詳細な重合挙動について検討した。2本年度の研究成果の概要側鎖にオキサチオラン環を有するポリスチレン型の高分子を用いて、高分子上でのオキサチオランのカチオン重合を、熱カチオン開始剤を用いた固相で検討した。昨年度は新たに生成したポリプロピレンスルフィドと脱離したポリ(4-ビニルベンゾフェノン)の分離が十分に行なえなかったため、脱離が完全に起こっているか確認できなかった。そこで新たに5位にメチル基を持たないポリマーを合成し、新たに生成するポリマーを不溶性のポリエチレンスルフィドとすることで両者の分離を行ない、それぞれの構造解析から脱離が完全に起こっていることを確認した。また、重合温度、重合時間、開始剤量について検討した。その結果高い重合温度、長い重合時間、過剰な開始剤は生成したポリプロピレンスルフィドを熱分解し、収率の低下をもたらすことがわかった。さらに、高分子量のポリマーを用いた最にSECでピークの分裂が見られ、低分子量成分で3万程度の分子量であることがわかった。これは溶液重合系に比べて非常に大きく、また生成ポリマーの分子量は原料ポリマーの分子量に依存しないことも示唆された。本年度はこのうち以下の2点について検討することを目的とした。(1)重合性に対する脱離基の構造の影響を検討することを目的として、2位に様々な置換基を導入した1,3-オキサチオラン化合物を合成し、その重合挙動を検討する。(2)(1)の結果をもとにして1,3-オキサチオランの2位に重合性を有する基を導入して、1,3-オキサチオラン部位を有する高分子を合成する。2本年度の研究成果の概要(1)2位の置換基の構造が重合性に及ぼす影響について検討を行うため、ベンゾフェノンのかわりに(a)4,4'-ジメトキシベンゾフェノン、4,4'-ジクロロベンゾフェノンのようなパラジ置換ベンゾフェノン、(b)アセトン、シクロヘキサンなどの脂肪族ケトン、(c)アセトフェノン、ベンズアルデヒドのような非対称カルボニル化合物、を用いて1,3-オキサチオランを合成し、それぞれの重合性を検討した。いずれの重合も対応するカルボニル化合物を脱離しながら進行し、ポリアルキレンスルフィドが得られた。このことから本研究で取り扱った重合反応が、2,2-ジフェニル体に限られたものではなく広く一般性を有するものであることがわかった。(a)の検討ではベンゼン環上に電子供与性基が結合すると重合性が増大することがわかった。(b)、(c)での検討のように芳香環を減らして行くと順次重合が遅くなり、開環重合を促進するためには、反応中間体において2位の置換基による共鳴安定化が重要であることが示唆された。(2)(1)の知見をもとに、オキサチオラン環の2位に4-ビニルフェニル基を有する化合物を合成し、これをラジカル重合することにより側鎖にオキサチオラン環を有するポリスチレン型の高分子を合成することに成功した。1.研究の目的と本年度の目標本研究では、1,3-オキサチオラン部位を有する高分子を合成し、これに開環重合を適用することによって生成するポリマーの構造を解析することを目的とする。(昨年度よりの継続)(2)昨年度合成した1,3-オキサチオラン部位を有するポリスチレン型の高分子上でのカチオン開環重合について検討する。2.本年度の研究成果の概要(1)2位の置換基の構造が重合性に及ぼす影響について検討を行うため、2位にアルコキシ基を導入したオキサチオランの開環重合も検討した。この場合には対応するエステルの脱離が観測され、脱離成分としてケトンやアルデヒドのみではなくエステルも利用可能であることが示唆された。(2)昨年度合成した側鎖にオキサチオラン環を有するポリスチレン型の高分子を用いて、高分子上でのオキサチオランのカオチン重合について検討した。まず、ジクロロメタン溶媒中での溶液重合を行ったところ、低分子のオキサチオランの場合と同様に定量的にポリ(4-ビニルベンゾフェノン)が脱離しながら重合し、ポリ(4-ビニルベンゾフェノン)とポリプロピレンスルフィドの混合物が得られることがわかった。さらに熱潜在性カチオン開始剤を加えた原料高分子のフィルムを作製し、それを加熱したところ同様の重合の進行が固相で起こることが確認できた。

昨年度までに、1,3-オキサチオラン部位を有するポリスチレン型の高分子上でのカチオン開環重合が、固相で起こることがわかっている。今年度はその詳細な重合挙動について検討した。2本年度の研究成果の概要側鎖にオキサチオラン環を有するポリスチレン型の高分子を用いて、高分子上でのオキサチオランのカチオン重合を、熱カチオン開始剤を用いた固相で検討した。昨年度は新たに生成したポリプロピレンスルフィドと脱離したポリ(4-ビニルベンゾフェノン)の分離が十分に行なえなかったため、脱離が完全に起こっているか確認できなかった。そこで新たに5位にメチル基を持たないポリマーを合成し、新たに生成するポリマーを不溶性のポリエチレンスルフィドとすることで両者の分離を行ない、それぞれの構造解析から脱離が完全に起こっていることを確認した。また、重合温度、重合時間、開始剤量について検討した。その結果高い重合温度、長い重合時間、過剰な開始剤は生成したポリプロピレンスルフィドを熱分解し、収率の低下をもたらすことがわかった。さらに、高分子量のポリマーを用いた最にSECでピークの分裂が見られ、低分子量成分で3万程度の分子量であることがわかった。これは溶液重合系に比べて非常に大きく、また生成ポリマーの分子量は原料ポリマーの分子量に依存しないことも示唆された。
聴覚障害児における文脈からの意味理解に関する基礎的研究

話し手と聞き手が伝達内容を相互に理解するためには、文内部の構造に関する知識だけでなく、文とそれが話された状況、話し手や周囲との関係についての知識が必要になる。この観点から聴覚障害児の「文脈からの意味理解」への接近を試みようとした。文脈から意味を理解するために必要な知識は種々考えられ、前年度の研究においては会話における語の省略の問題を取り上げたが、本研究では「会話における含意・発話の意図」に焦点を合わせて検討した。一般に話された文には直接的に表現される意味の他に、そこに含まれている意味、言外の意味が存在する場合が多く、会話が円滑に進められるためには、聞き手には文に含意されている事柄や話し手がその表現に込めようとした意図の把握が必要になってくるからである。含意について林部ら(1989)は、便宣的に助詞、副詞、視点動詞、願望文、反語等によるものに分類し、健聴児においてそれらの習得順序を検討している。本研究においては健聴児・者や聴覚障害児・者同士の会話を収集・分析し、含意の表れ方やそれに対する聞き手の解釈を実際の会話場面から探ろうと試みた。現在までに整理した資料からは、上述の助詞や副詞等による含意が会話の中でも表れ、また実際には定義上は含意とは異なるが、話し手のことばから聞き手が物や事象を類推しなければならない場合も多く見られた。聞き手の側に注目すれば、聴覚障害児・者同士の会話では、話し手の意図を聞き手の側が確認する作業が比較的多く見られた。今後引き続き、聞き手の側の解釈の様相を探るべく分析作業を進めていくが、どのような文脈のもとでも成り立つような含意を除けば、多くは話し手と聞き手の事情が左右しており、そうした両者の内面の共有とも言うべき事象をどのように言語学的に整理していくかが今後のコミュニケーション研究の課題であろう。
イオンペア協奏機能触媒によるカルボン酸を原料とするファインケミカル合成

αアミノ酸やヒドロキシ酸は、医薬品をはじめとする高機能性材料の構成成分として広く用いられており、ユビキタスなカルボン酸を原料として、α位にヘテロ原子を直接導入できれば、非天然型αーアミノ酸およびヒドロキシ酸合成法として理想的である。そこで本申請課題では、独自のイオンペア協奏機能触媒を用いることでカルボン酸の活性化を基盤としたラジカル型のヘテロ原子導入反応によるαーアミノ酸およびヒドロキシ酸合成法の確立を目的とする。
リウマチ・炎症性疾患における炎症制御蛋白ヘムオキシゲナーゼ-1の役割

本研究ではリウマチ性疾患を対象とし、heme oxygenase(HO)-1の病態における役割、治療標的としての有用性、診断マーカーとしての可能性を検討し、以下の成果をあげた。2)成人スティル病、血球貪食症候群の疾患活動期にはその高フェリチン血症と相関して血清HO-1の異常高値が観察されるのに対し、頻回輸血や肝疾患患者ではフェリチン高値であってもHO-1は正常を示した。成人スティル病、血球貪食症候群でみられる高サイトカイン血症とは関連なかった(Kirino Y, Takeno M etal, Arthritis Research Therapy,2005)。また、in vitroで単球を炎症性サイトカインで刺激してもHO-1の発現は誘導されない。高HO-1血症患者末梢血単核細胞で、HO-1mRNA発現亢進が確認されるのは一部にすぎず、主たるHO-1の産生源は骨髄やリンパ節などの病変部のマクロファージと想定される。3)関節リウマチ滑膜組織にはHO-1蛋白は豊富に発現していた。さらに、患者由来滑膜細胞株の炎症性サイトカイン産生はHO-1発現増強により低下し、発現抑制により増加したことから、病変局所のHO-1はリウマチ炎症の進展に対し制御的な役割を果たしていると考えられる。抗リウマチ薬の中ではauranofinにHO-1誘導作用があり、その薬理効果発現に関与していると考えられた。以上より、HO-1は関節リウマチにおける新しい治療標的として期待できる(Kobayashi H, Takeno M, et al, Arthritis Rheum,2006)。本研究では、抗炎症作用を持つheme oxygease(HO)-1のリウマチ炎症性疾患における発現とその治療応用について検討しており、以下の知見を見出し、報告している。1)HO-1はヘム分解酵素であり、フェリチン代謝と密接に関連している。我々は成人発症スティル病、血球貪食症候群において血清HO-1が上昇し、そのレベルが血清フェリチン値と相関し、疾患活動性と並行することを見出した。しかし、高フェリチン血症をきたしても頻回輸血、肝疾患によるでは血清HO-1の上昇は見られなかった。2)関節リウマチ(RA)病変局所にHO-1が過剰に発現していた。RA由来滑膜細胞株にヘミン、金剤などでHO-1発現を誘導すると、炎症性サイトカインの産生、COX-2の発現が抑制され、siRNAを用いてHO-1発現を阻害すると、炎症反応の促進がみられた。このことはRA病変局所に発現するHO-1が疾患制御に機能している可能性を示唆している。3)MRL/lprマウスにHO-1誘導剤であるヘミンを継続に投与すると、腎炎の進展が抑えられた。これには抗DNA抗体産生抑制、IFN-γの産生抑制、局所のiNOS発現抑制など複数の機序が関与していると考えられた。以上のようにHO-1は炎症性疾患の診断ツールとしてできるだけでなく、炎症性リウマチ疾患、自己免疫疾患の治療標的としても有望であることが実験的に検証された。本研究では関節リウマチをはじめとしたリウマチ性疾患におけるheme oxygenase-1(HO-1)の病態における意義を解析し、以下の成果をあげた。1)血清中HO-1蛋白をELISA法により測定した結果、高フェリチン血症をきたす成人スティル病、血球貪食症候群の活動期に異常高値を認め、病勢と一致して変動した。これらの疾患の患者では、HO-1値はフェリチンと相関していたが、頻回輸血や肝疾患により高フェリチン血症を呈する患者においては、血清HO-1値の異常を認めなかった。

また、血清HO-1高値を示す患者において、末梢血単核細胞のHO-1 mRNAの発現をreal time PCR法により定量的に解析したが、高発現を示す患者は一部にすぎず、多くは健常者と差異がなかった(Kirino Y, Takeno M et al, Arthritis Research Therapy,2006)。予備実験の段階であるが、血中HO-1の源は骨髄やリンパ節などの病変部のマクロファージと想定される。2)関節リウマチ滑膜組織にはHO-1蛋白は豊富に発現していることを見出した。関節リウマチ患者より滑膜細胞株を樹立し、HO-1を遺伝子的に強制発現させると、あるいはヘミンや金剤でHO-1発現を誘導すると、炎症性サイトカイン産生は低下した。逆にsiRNAでHO-1の発現を抑制するとサイトカイン産生は増強した。以上の結果より、HO-1はリウマチ炎症の進展に対し制御的な役割を果たしており、金剤の抗リウマチ効果の一部にはHO-1誘導作用が関与していると考えられた。したがって、HO-1は関節リウマチにおける新しい治療標的として期待される(Kobayashi H, Takeno M, et al.,Arthritis Rheum, in press)。
神経伝津物質の脊髄侵害刺激における役割-特に近年発見されたPACAP・nociceptinなどの神経伝達物質を中心に-

1)電気生理学的検討:選択的なPAC1受容体の作動薬であるMaxadilanとPAC1受容体の拮抗薬であるMax.d.4及びPACAP(6-38)を用いて、新生児ラット摘出脊髄を用いた電気生理学的方法によりPAC1受容体の役割を検討した。Maxadilanにより投与量依存性に前根から長期に持続する脱分極が記録された。L3-L5の後根を刺激し、前根から記録するslow ventral root potential (slow VRP)は、Max.d.4及びPACAP(6-38)により投与量依存性に抑制された。また後根にその支配領域の皮膚をつけて作成した標本を用いた検討では、皮膚をC-fiberを選択的に刺激するcapsaicinで刺激したときの前根の反応を、Max.d.4は投与量依存性に抑制した。以上のことから、PAC1受容体は、脊髄後角において侵害刺激伝達を担う受容体であることが分かった。2)行動学的検討及び形態学的検討: ORL1の内因性作動薬であるnociceptinの髄腔内投与による効果と、脊髄後角におけるFos蛋白の発現を検討した。フォルマリンテストを用いた検討では、nociceptin 30μgを髄腔内投与すると、morphine 1μg髄腔内投与と同程度の鎮痛効果を示し、また同程度に脊髄後角第I-II層のFos蛋白の発現を抑制した。坐骨神経部分結紮モデルと絞扼性損傷モデルを用いた検討では、nociceptin 30μgを神経損傷前に髄腔内投与すると、絞扼性神経損傷モデルではthermal hyperalgesiaの発症が抑制され、脊髄後角第I-II層のFos蛋白の発現を抑制したが、部分神経損傷モデルではthermal hyperalgesiaの発症も変わらずFos蛋白の発現にも影響しなかった。生後1-3日のラットを麻酔下に断頭、下位胸髄以下を第3,4,5腰髄前後根を残したまま摘出、半切し、人工脊髄液にて潅流した。吸引電極にて後根を電気刺激し、同側同髄節の前根から細胞外記録を行った。同様に、脊髄・末梢神経(伏在神経)及び皮膚が機能的に連絡した標本を作製し、第3腰髄前根から細胞外記録を行った。PACAP type1受容体の拮抗薬であるM65(0.1-1μM)は、濃度依存性に後根電気刺激による侵害反射電位を抑制した。また、摘出脊髄-末梢神経-皮膚標本では皮膚にC-線維の選択的刺激薬であるカプサイシンを適用して起こる侵害反射電位□◇M65 1μMにて抑制された。さらに、PACAP38(10-500nM)を脊髄に潅流適用すると数十秒持続する時間経過の緩徐な前根脱分極反応を誘発し□Aこの反応はM65(0.3-1μM)により抑制された。このような事実より、PACAPは新生ラット脊髄において侵害刺激によりC-線維が活性化して誘発される前根脱分極に関与するペプチド性神経伝達物質であることが示唆された。この事実をさらに確認するために、新生ラットにおけるPACAPの存在部位を、組織免疫染色を用いて確認した。この結果、PACAPは、後根神経節・脊髄後角に存在することが確認できた。以上のことより、PACAPが侵害刺激伝達に深く関わっていることが示唆された。本年度は、特にnociceptinに関して行動学的な検討と形態学的検討を進めた。疼痛モデルとしては、ラットフォルマリンテスト・ラット術後痛モデル・Neuroopathic painモデルとしてBennett modelとSeltzer modelを用いた。

まず、nociceptinと同一の前駆物質から産生され、nociceptinの作用と拮抗すると報告されているnocistatinの効果を検討したところ、nocistatin髄腔内投与によりフォルマリンテストで鎮痛効果が確認できたが、nocistatinは同時投与してもnociceptinの効果を拮抗しなかった。フォルマリンテストを用いてnociceptin髄腔内投与による脊髄後角におけるFos蛋白の発現に対する効果を検討したが、脊髄後角第I-II層のFos蛋白の発現を抑制した。ラット後肢の足底部の皮膚を切開して作成する術後痛モデルでは、nociceptin髄腔内投与によりmechanical allodyniaが投与量依存性に有意に抑制された。Neuropathic Painモデルでは、Bennett modelにおけるnociceptin髄腔内投与によるtherml hyperalgesia発症の予防効果を確認し、またFos蛋白の発現の抑制効果を見いだした。一方Seltzer modelではnociceptin髄腔内投与は何ら効果を示さなかった。このように、nociceptinは脊髄において侵害刺激伝達を抑制する作用を有していることがわかった。
SCIDマウスにおけるATL細胞の増殖と制御

成人T細胞白血病(ATL)の適切な動物モデルは、その発症機構や有効な治療法の開発のため有用と思われる。申請者らはNK活性を抑制する抗アシアロGM1抗体(AAGM)によるSCIDマウスでのHTLV-I感染細胞の接種、増殖に対する影響を検討した。HTLV-I感染細胞株MT-2のSCIDマウスに接種に際して、無処置のマウスに比してAAGM処置マウスで有意に高率に、しかも早期に腫瘤形成が認められ、またPCRで肺などの臓器にHTLV-I感染細胞の存在が示唆されたという結果をふまえて、平成6年度においては、ATL患者およびHTLV-Iキャリアー細胞のSCIDマウスにおける接種、増殖を試み、また接種前後でのHTLV-Iウイルスゲノムの組み込みをサザン法およびPCR法により検討した。ATL患者5名の末梢血液単核球を接種した結果では、1名において腫瘤の形成を認めた。この腫瘤はHTLV-I陽性ではあったが、T、B細胞のキメラであり、単クローン増殖を認めなかったため、ATL細胞の直接の増殖を確定できなかった。またキャリアー1名の末梢血液単核球を8匹に接種した結果では、1匹のみが、肺、その他の臓器においてHTLV-I陽性であったが、腫瘤の形成は認めなかった。上記の結果より、AAGM処理はHTLV-I感染細胞のSCIDマウスにおける移植実験に有用であり、ATL発症にNK活性の低下が重要である可能性を示した。ヒトT細胞白血病ウイルスI型(HTLV-I)持続感染者から成人T細胞白血病(ATL)が発症する機構や危険因子の鮮明、ならびに有効な治療法の発見における動物実験モデルの開発を目的として、SCIDマウスへのATL細胞移植を行なった。平成5年度は、SCIDマウスにおけるATL細胞の移植成功率に及ぼす因子を解析した。その結果、HTLV-I感染ヒトT細胞株(MT-2)は6-7週齢の無処置のSCIDマウス30匹の大腿筋内に接種したところ15匹(50%)で腫瘍が発生した。すなわち、無処置のSCIDマウスでも移植可能であるが、その基本的条件はマウスの週齢で、6-7周齢までであることが判明した。これは、SCIDマウスの加冷に伴うNK活性の上昇によると推定された。そこで、既に報告した抗アシアロGM-1抗体処理をしたSCIDマウスの場合の成功率と比較するため、22匹の抗アシアロGM-1抗体処理をしたSCIDマウスに同数のMT-2細胞を接種したところ移植の成功率は90%に達し、腫瘍形成までの期間は早期35週、後期79週と二峰性の腫瘍発生時期が観察され、発生時期の短縮と、腫瘍の大きさの増大が認められた以上の結果から、SCIDマウスに株化ATL細胞も移植が可能であること、ATL発病におけるNK活性との関連が危険因子のとして重要なことを明かにした。これらと平行してHTLV-ImRNAのRT PCR法による測定を行なっており、さらに分子生物学的レベルで解析が可能であると考えている。