hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Cablesが誘導する新たなアポトーシス機構

研究者がヒトでの完全長クローニングに成功した「Cables」は、過剰発現すると細胞のアポトーシスを引き起こすこと、がん部位にCablesが無いことを報告してきた。このことから、Cablesは細胞が悪性化すると過剰発現し、悪性化細胞のアポトーシスを引き起こし、細胞のがん化を抑制すると推定し、Cablesには「がん抑制化機能がある」と仮説を立てた。またCablesタンパク発現のスイッチである「プロモーター」ががん細胞でメチル化していたことより、プロモーター活性にも注目した。その結果プロテインキナーゼC経路がCablesプロモーター能力を遺伝子レベルで高めることを確認した。研究者は本研究を申請する以前より、卵巣がんや大腸がんにおいてCables発現が減少していることを確認してきた。「がん部位でCables発現が抑制していた」事実と、「Cablesがアポトーシスに関与する」複数の報告から、細胞がん化への過程で、Cables発現が上昇してアポトーシスを誘導し、暴走化する細胞をなくす「がん抑制化機能」があると仮設を立て、この仮説を証明しようと研究をすすめた。Cablesの発現機序とアポトーシスの関係を解析することで、Cablesが関与するアポトーシスメカニズムを明確にしようと、初年度は卵巣がん培養細胞を用い、細胞内でCables発現を任意に調整できる実験系の確立を目指した。26年度にはCablesの発現量の違いにより、Cablesがもたらすアポトーシスと密接に関わると仮定したp53の機能、または量的変化があるかを確認するため、発現薬剤濃度依存的にCablesタンパク質発現量を細胞内で任意に調整可能な実験を作成した。この細胞系を用い、p53発現量の変化またはp53リン酸化能の変化を追跡する系を組み立てた。このシステムを作成するのに時間はかかったが、薬剤濃度依存的にCablesタンパク質の発現量が変化する卵巣がん由来の培養細胞クローンを作成できた。細胞内Cables発現調節細胞系を用い、Cables発現量依存的にp53の発現量が変化するか検討を始めたが、現時点では再現性ある明瞭な結果を得るには至っていない。そこでこの細胞系を用い、細胞内でのCables発現上昇はどのような変化を細胞に与えるか、特にアポトーシス関連物質との関連を現在は行っている。研究者の仮説である、ヒトCablesには「がん抑制化機能」を証明するため、細胞が悪性化した際にCablesの過剰発現でアポトーシスを誘導し悪性化細胞を死滅化させ、これまでに細胞内Cablesの過剰発現でアポトーシスを誘導することを証明してきた。Cablesが単独でアポトーシスを誘導するとは考えずらく、Cables以外の物質との関連も含め、Cablesによるアポトーシス誘導の機序について明らかにしようと研究を進めている。Cablesによるアポトーシス誘導の機序解明のため、平成26年度より卵巣がん培養細胞を用い、細胞内でのCables発現を任意に調節できる実験系の確立を始めた。その後、卵巣がん培養細胞内でのCables発現調節系を用い、p53発現量の変化及びp53リン酸化の研究を進めていたが、薬剤依存的なCables発現の再現性がなかなか得ることが出来ず、実験系を見直す事にした。各種データベースの情報を元にp53が発現していると報告された細胞を収集し、研究を進めた。具体的には卵巣腫瘍由来のOVK-18、副腎髄質由来のGOTO、乳癌由来のMCF-7、腺癌由来のLOVO、副腎髄質由来のNH-12、子宮内膜癌由来のHEC-151、HEC-108、HEC-265を入手しCablesとp53の発現スクリーニングをウエスタンブロット法で行った。p53が発現していると報告された卵巣腫瘍由来のOVK-18、副腎髄質由来のGOTO、乳癌由来のMCF-7、腺癌由来のLOVO、副腎髄質由来のNH-12、子宮内膜癌由来のHEC-151、HEC-108、HEC-265を細胞バンクより入手し、Cablesとp53の発現スクリーニングをウエスタンブロット法でまず行った。そこで、特にp53の発現が高いHEC-151とHEC-265を用い、Cables発現プラスミドを導入し、p53の修飾について確認を行った。多数あp53の就職の中でもアポトーシスに関与するリン酸化部位であるアミノ酸配列46番目のセリン(Ser46)のリン酸化に着目したが、ウエスタンブロットではp53量の変化及びSer46リン酸化量の明確な上昇につき、安定した再現性をまだ得てない。細胞が異なるものの、予備実験では明らかなSer46リン酸化を確認しており、現在はウエスタンブロット法の条件を変更するなどし、Cablesが要因のp53の修飾部位を再度確認中である。細胞内でCablesが過剰に発現することによるアポトーシス誘導機序に、p53のリン酸化が関わっているとの仮説を証明しようと、Cables及びp53が発現していることを確認した子宮内膜癌由来のHEC-151、HEC-265細胞に焦点をあて、Cables発現プラスミドの導入から、p53の修飾について確認を行った。特にp53でアポトーシスに関与するリン酸化部位である46番目のセリン(Ser46)のリン酸化に着目して研究を継続した。細胞内へCables遺伝子導入の量及び経時的長さ等の条件を変更しながら、p53リン酸化量の変化をウエスタンブロットで確認したが、残念ながらp53のリン酸化に関して再現性ある結果はまだ得られてない。

このことから、研究仮説に修正の必要があると判断した。そこで、まずはCablesの発現調節メカニズムに焦点を絞り、研究を進めた。HEC-151、HEC-265細胞はともに卵巣腫瘍由来であるが、その生育状況と外見的な形態が異なる。そこで両細胞の違いからCables発現調節に関する情報を得ようと、自身が作成したCablesプロモーター遺伝子を含むレポーターベクターを用い、レポーター遺伝子アッセイを行った。具体的にはCablesプロモーター遺伝子を含むレポーターベクターを導入した培養細胞中にレポーター活性に影響を与えると予想される各種薬剤を投与し、レポーター活性の変動を観察した。その結果、プロテインキナーゼCを特異的に活性化するPhorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA)でHEC-151のみ、プロモーターレポーター活性の上昇を確認した。この活性上昇はプロテインキナーゼC活性阻害剤で劇的に抑制され、Cablesプロモーター活性上昇にプロテインキナーゼCが関わっている事を強く示唆した。研究者がヒトでの完全長クローニングに成功した「Cables」は、過剰発現すると細胞のアポトーシスを引き起こすこと、がん部位にCablesが無いことを報告してきた。このことから、Cablesは細胞が悪性化すると過剰発現し、悪性化細胞のアポトーシスを引き起こし、細胞のがん化を抑制すると推定し、Cablesには「がん抑制化機能がある」と仮説を立てた。またCablesタンパク発現のスイッチである「プロモーター」ががん細胞でメチル化していたことより、プロモーター活性にも注目した。その結果プロテインキナーゼC経路がCablesプロモーター能力を遺伝子レベルで高めることを確認した。細胞内Cables発現調節細胞系の作成に予想外に手間どったが、目的導入遺伝子誘導剤に反応し、目的遺伝子であるCablesタンパク発現量が増強するクローンを得た。ただし目的導入遺伝子発現薬剤濃度との再現性が芳しくなく、p53との関連性を明瞭に示すことがまだ出来て無い。この点については目的遺伝子であるCablesによるリーキー発現の可能性も否定できず、時間をかけても再現性ある系を確立できるよう明示できるよう調整中である。当初の予定ではCablesによるp53リン酸化部位をの特定まで行う計画であったが、まだその過程であり、やや遅れていると認めざるを得ない。当初の予定では27年度中にクロマチン免疫沈降法(ChIP法)を利用し、Cablesが結合する部位を同定することまで行う予定であったが、現段階ではまだ同定まで至っていない。そこで申請書の「研究が当初計画通りに進まない場合の対応」に記載したように、成果発表費用を実験助手の人件費にあて実験そのものの加速化、または研究効率を促進するようなキットの購入などを行い研究の効率化を図り、以下のことを推進予定である。Cables発現プラスミドの培養細胞へのトランスフェクション量を変動し、細胞内でのCables発現量を変動する。この際、免疫沈降法pull down法も用いてCablesと結合するタンパク質の増減に伴い結合する物資の同定を試みる。候補としてp300が挙げられるが、このp300はp53とも結合する事が知られており、Cablesがp53と結合することから、Cablesがp300及びp53とセチル化
プリオン病原体増殖機構の分子生物学的解析

スクレイピー罹患マウスの脳および対照として非罹患健常マウスの脳を採取し、テフロンホモジナイザーで処理した。低速遠心条件で細胞分画を行い、宿主核酸が含まれる核およびミトコンドリアを除去した。次に超遠心条件で細胞分画を行い、ミクロソーム画分を除去した。超遠心上清に、RNaseを加え、宿主由来の核酸を加水分解した。その後、核酸分解酵素を特異的に不活性化し、SDSとプロテネースKで処理した。罹患した動物組織の感染性を不活性化する方法として、強アルカリ処理、長時間プロテアーゼ処理などがあり、実験に使われた器具類は全てこの方法で処理した。得られた核酸画分をもとに、遺伝子ライブラリーを作成した。また、この画分をテンプテートとしたディファレンシャルディスプレイを、9種の下流プライマーと24種の上流プライマーを使って行った。結果をPAGEで解析し、バンドは放射性同位元素で標識した。この結果、スクレイピー罹患マウス脳で発現の増幅を認めた遺伝子断片を約100種同定した。この核酸断片を乾燥させたゲルから抽出し、特異的プライマーによる再増幅のあと、TAクローニングによるサブクローン化を行い、うち30クローンについて核酸配列を解析した。一方、プリオンタンパク質の生理学的存在意義を解析するため、プリオンタンパク質と同じく酸性pH凝集性を持ち、GPIアンカー型タンパク質であるGP2/THPの膜遊離機能を解析した。その結果、特異的なプロテアーゼが関与していることを明らかにした。また、脳変性疾患のモデルとして、キノリン酸毒性に関与する酵素ACMSDをクローン化し構造を決定した。今後、さらに残りの断片のクローン化と配列解析を行い、さらにPCRを用いて罹患と同調して変動する遺伝子の動態を解析する。
ソーシャルメディア利用における「実名」とアイデンティティの再定義

第一に「実名」の定義は国や地域により異なることが分かった。第二に若年層はソーシャルメディア利用において実名を利用する意向があることが見えてきた。第三に、実名を含めた本人確認は、利用者本人の死という場面において必要となることがわかり、仮名による利用の際にどのように死亡者を確認するのかという課題が残った。第四に、実名を含めた情報開示コントロールの実効性について実証分析を行った結果、現状では実効的なコントロールはなされていないことが見えてきた。最後に、旧姓使用者および事実婚者を対象に調査を行った結果、本名とは必ずしも戸籍名ではなく、社会的文脈におけるふさわしい名前が該当する場合があることが分かった。本年度は、(1)若年層を対象としたアンケート調査(2)ソーシャルメディアと利用者の「死」の取り扱いについての現状の調査ならびに関連研究という二つの柱を中心に研究を実施した。(1)に関しては、大学生を対象としたソーシャルメディア利用における名乗り、実名利用およびプライバシー意識についてアンケート調査を実施した。その結果、サービスの利用目的は主に友達との連絡手段であり、かつ3割前後の回答者が日常的に実名を開示している傾向が見えてきた。TwitterとLINEといったサービスの違いによって、若干の傾向の違いはあるものの、自らに関するさまざまな情報を提供していることが見えてきた。なお、得られた知見は、国内学会および海外招待講演によって発表した。(2)に関しては、仮名利用を許容するソーシャルメディアサービスであっても、必ず実名による本人確認を求められる場面として、利用者の「死」がある。これについて、現状のサービスについて調査した結果、日本発のサービスでは死後の情報利用やプライバシーに関する規定はないが、米国のサービスでは準備されつつあることが分かった。特に、Google社は生前に本人が情報の扱いを選べるオプションを提供している。また、関連研究としては、法律分野における相続、知的所有権という見方、「オンライン墓地」として故人を悼むという見方、人の残したデータは歴史的アーカイブであるという見方など、さまざまな見方があることが見えてきた。調査をまとめたものは、国内学会で発表した他、関連研究に関する議論は、Internet Identity WorkshopやICISのワークショップなど、海外の研究者とともに行った。2012年度は、日本および海外諸国において、特にインターネット上では「実名」がどのように定義され、かつどのような要件が求められているのかについて、現状および関連研究の調査を行った。具体的には、国内外のワークショップなどにおいて、研究者や実務家と議論の機会を持ったほか、各国のアイデンティティと身元確認、当人確認の制度について調査を行った。その結果、インターネット上にかぎらず、身元確認および当人確認、そして社会的な信用を担保するという意味での「実名」は、国によって多義的であった。複数の氏を持っていたり、あるいは名のみであったりという「実名」の定義の多義性や、自分で氏名を変えられるか否かといった国民登録制度と名乗りの自由度にも大きな違いがあった。この他、実名には、文化的な名乗りという側面と、社会における個人の識別子という側面があるものの、これらが混同されている状況が見えてきた。実名であることが求められる場面として、利用者が死亡したときがある。死亡時の身元確認と情報コントロールについても併せて考察した。上記の調査の結果は、国内で学会発表した他、国外のワークショップにてセッションを主催し、アイデンティティに関する専門家らと議論をする機会を持った。本年度は、若年層を対象としたアンケート調査(継続)と、名前とプライバシーに関する関連研究の調査を中心に行った。アンケート調査は、昨年度に引き続き行ったものであり、ソーシャルメディアの利用状況とその上での名乗りに状況について明らかにするために行った。その結果、昨年度とほぼ同様の結果ではあったものの、名乗り分けについての男女差では違う結果が出た。関連研究に関しては、欧州および米国の制度の現状を見つつ、実名にひもづけられる情報がどのように扱われているかを調べた。その結果、ただ実名というだけで即プライバシー侵害になるわけではなく、むしろ仮名や偽名であっても本人に関する情報が集められることについて問題が起こりうることが分かった。特に子どもや青少年が発信する情報とプライバシーについて問題意識を持つに至り、昨年度調べた死後のプライバシーと本人確認との関連から、「実名」を軸に生涯のプライバシーとは何かという問いが浮かび上がってきた。なお、研究発表活動としては、情報社会学会における学会発表、ならびに書籍の分担執筆、Internet Identity Workshopにおけるセッション主催などを行った。本年度は、「実名」の位置付けと「名乗り」という行為を中心に、生まれてから死後までのプライバシーとは何かという観点からの調査と考察を行った。実名というものを個人がどこまでコントロールできるのかは国によって異なり、本人の意図に反して変えなければならない(継続できない)、あるいは変えることができないという状況から、プライバシーのコントロールにつながる可能性も見えてきた。具体的な調査活動としては、Internet Identity Workshopにおけるセッション開催、ならびにWeb調査委託を行った。前者のセッションでは、「ゆりかごから墓場までのプライバシー」として、名前に紐付けられる情報はライフステージにおいて誰がどのようにコントロールするのか意見を集めることができた。後者のWeb調査では、旧姓使用者および事実婚実践者を対象に、インターネット上で利用する名前、コミュニケーション相手による使い分けについてアンケート調査を行い、実生活上での名前の同一性を志向する人はネット上でも同様に振舞っていること、敢えて旧姓と戸籍姓を併記せず片方のみの開示に留める人がいること、また人間関係によって名乗り方を変えている人がいることなどが明らかになった。研究発表活動としては、情報社会学会におけるジャーナル発表、経営情報学会の大会およびICIS2015のWorkshopにおける口頭発表、書籍の分担執筆を行った。

2015年12月に夫婦別姓に関する最高裁判決があり、これをめぐる報道から「実名」の位置付けについて考察できる資料が多く入手できる状況となった。そのため、これらを整理した上で改めて問題設定し、Web調査を実施した。そのため、実施結果の成果発表はやや遅れることとなったが、具体的な問題設定が明確になったという意味では予想以上の進捗となったとも言える。本年度は、繰り越し研究費によって、昨年度実施したWeb調査結果を元にした外部発表と論文執筆を行った。まず、米国で開催されたInternet Identity Workshopにおいて日常生活と名前に関するセッションを開催し、討議を行った。日常生活における名乗り分けについて、調査結果を紹介しながら各国の事例を聞いたところ、生活の場面によってはlegal nameとbirth nameの使い分けがあるということがわかった。実名の定義については、legal nameのことだという回答が多数であった。次に、昨年度の調査結果を分析した。旧姓使用者および事実婚者を対象とした調査結果の分析結果は次の通りである。旧姓使用者については、オフラインの人間関係では、職場では旧姓を使用する人が7割を超えたものの、人間関係特に親戚づきあいでは戸籍姓を使っている人が多い。戸籍姓と旧姓を併記する設定のFacebookでは旧姓のみを掲示している割合が最多であった。事実婚者については、生来の名前が戸籍姓であるにも関わらず、人間関係においてはオンラインでもオフラインでも通称として相手の姓を名乗っている人達もいた。両者において、日常生活で名前を使い分けている人は、オンラインでも複数の名前を使い分ける傾向があった。また、実名の定義を問うたときには、旧姓使用者は旧姓も実名に含めていた。上記の内容は国内の学会で研究発表を行った。発表で得られたフィードバックも含めて英語論文を執筆し、国際会議に投稿した。第一に「実名」の定義は国や地域により異なることが分かった。第二に若年層はソーシャルメディア利用において実名を利用する意向があることが見えてきた。第三に、実名を含めた本人確認は、利用者本人の死という場面において必要となることがわかり、仮名による利用の際にどのように死亡者を確認するのかという課題が残った。第四に、実名を含めた情報開示コントロールの実効性について実証分析を行った結果、現状では実効的なコントロールはなされていないことが見えてきた。
「選択」思想の意義にかんする倫理学的基礎研究

近年様変わりしつつある中世仏教の研究においても,転換点の主軸をなす法然の「選択」思想にかんして,その成立基盤を中国浄土教や天台教義との関連にたずねる一方で,法然門下においてその思想が分岐し,ひいては親鸞の「他力」思想へといわば純化していったことの思想史的意味を考究することによって,「中世仏教」から「中世宗教」ひいては「日本仏教」の全体像を解明する手がかりにするとともに,そこに見られる人間観の倫理学的意義を問うことが本研究の課題であったが,本年は善導からの法然にいたる浄土教における思想継承の意味を,とりわけ法然独自の「選択」思想や「凡愚」観に焦点をあてつつ究明した。諸行の実践を説く教説をすべて『観無量寿経』所説の「散行」へと収斂させたうえで、それを「廃捨」し、念仏への帰命を説く法然の「選択」思想は,いわば「(仏)法」の多様性を一様性へ変換するものであった。が,それには「法」を受けとめる衆生(「機」)の側においても「凡愚」という人間観を措定せざるをえなかった。そうした意味において法然の「選択」思想は,「凡愚」という一様性ゆえに平等な人間観を前提にするものであったが,なお天台出身の法然にとって「愚者になる」という課題を残しもする思想であったことを明らかにした。善導『観経疏』における「二河白道喩」受容の問題もまた,善導自身の人間観・世界観の枠をこえ,以上のような法然の人間観・世界観を背景にして受けとめられていることを明らかにするとともに,まさにその意味において,後の弟子親鸞による「二河白道喩」理解,ひいては他力思想の礎石をなすものと考えることが出来た。
比較遺伝子競合法(CGH)法を用いたグリオーマの遺伝子学的解析

全染色体のDNAコピー数の異常を一度に検出し、これを染色体上にマッピングできる比較遺伝子競合(CGH)法を用いてgliomaの染色体・遺伝子異常を解析した。対象は、手術により摘出したastrocytoma,As,7(1)、anaplastic astrocytoma,AA,3(1)、glioblastoma,GB,24(9)例の合計34例[()は再発例数]である。これらより凍結切片を作成し、まずHE染色で腫瘍部位を同定したのち、隣接切片よりDNAを抽出した。腫瘍ならびに正常DNAをそれぞれ緑色および赤色蛍光で標識し、ヒト正常分裂中期染色体に競合的にハイブリダイズさせ、染色体・遺伝子解析システム(PowerGene^<TM> Probe System,PSI,Nikon)を用いて解析した。結果:染色体・遺伝子異常は34例中32例(94%)に認められた。As例では1.1±0.9(mean±S.D.)本、AA例では1.7±1.2本の染色体に欠失が認められた。一方、GB例では、4.3±2.2本の染色体に異常が認められ、そのうち、欠失は3.5±1.8本、増幅は0.8±1.1本であった。異常はAs/AA例と比べGB例で有意(p<0.01)に多く認められた。特に、1p(41%)、10(29%)、19q(44%)、および22q(38%)の欠失が高頻度にみられた。また、GB例を初発例(15例)と再発最悪性化した例(9例)とに分け比較検討したところ、染色体異常数や欠失には差がみられなかったが、増幅は初発例に多く認められた(p<0.01)。結論:(1)グリオーマの染色体異常は欠失が主体をなすものと考えられ、(2)染色体欠失数と組織学的悪性度との間には負の相関がみられることが明らかとなった。また、(3)GBのうち再発悪性化例(definitely secondary glioblastoma)では主に欠失しかみられなかったが、初発例のなかには欠失、増幅の両者がみられるものが認められた。このことより、GBには少なくともDNA増幅のみられる例とそうでない例の2つのsub-typeが存在し、これらが、それぞれprimary(de novo)およびsecondary GBに相当する可能性が示唆された。これらの遺伝子学的情報と臨床情報との対比など、今後の検討が必要である。複数の遺伝子、あるいは染色体の異常に基づき腫瘍化ならびに悪性化すると考えられているグリオーマの全染色体における遺伝子コピー数の異常を種々の悪性度を示すアストロサイト系腫瘍から得た凍結切片標本を用いて検討した。その結果、染色体欠失領域の数は組織学的悪性度の増加と共に増加することが示された。これらの欠失は、染色体1p、19q、そして22qで最も多く認められた。

また、星細胞腫や退形成星細胞腫に比べ、最も悪性である膠芽腫では遺伝子異常の領域は大きく、また多数の部位にみられ、これには統計学的に有意差が認められた(p<0.01)。膠芽腫を初発膠芽腫(primary glioblastoma)と退形成星細胞腫から再発して膠芽腫となった再発膠芽腫(secondary glioblastoma)とに分類し検討すると、両者では組織形態学的に違いは認められなかったが、初発膠芽腫では染色体増幅が高い頻度で認められた。一方、再発膠芽腫では染色体増幅は認められなかった。また、実際の臨床経過・転帰との関連につき検討したところ、組織学的悪性度分類と生存期間とはよく関連していたが、しかしながら、染色体異常の数あるいは部位と生存期間との間には明らかな関連性は見出すことはできなかった。CGH法は腫瘍DNAの異常を包括的に検討するのに有用であることが示唆され、特にグリオーマの生物学的特徴を検討するのに強力な武器となりうると考えられた。全染色体のDNAコピー数の異常を一度に検出し、これを染色体上にマッピングできる比較遺伝子競合(CGH)法を用いてgliomaの染色体・遺伝子異常を解析した。対象は、手術により摘出したastrocytoma,As,7(1)、anaplastic astrocytoma,AA,3(1)、glioblastoma,GB,24(9)例の合計34例[()は再発例数]である。これらより凍結切片を作成し、まずHE染色で腫瘍部位を同定したのち、隣接切片よりDNAを抽出した。腫瘍ならびに正常DNAをそれぞれ緑色および赤色蛍光で標識し、ヒト正常分裂中期染色体に競合的にハイブリダイズさせ、染色体・遺伝子解析システム(PowerGene^<TM>Probe System,PSI,Nikon)を用いて解析した。結果:染色体・遺伝子異常は34例中32例(94%)に認められた。As例では1.1±0.9(mean.±S.D.)本、AA例では1.7±1.2本の染色体に欠失が認められた。一方、GB例では、4.3±2.2本の染色体に異常が認められ、そのうち、欠失は3.5±1.8本、増幅は,0.8±1.1本であった。異常はAs/AA例と比べGB例で有意(p<0.01)に多く認められた。特に、1p(41%)、10(29%)、19q(44%)、および22q(38%)の欠失が高頻度にみられた。また、GB例を初発例(15例)と再発最悪性化した例(9例)とに分け比較検討したところ、染色体異常数や欠失には差がみられなかったが、増幅は初発例に多く認められた(p<0.01)。結論:(1)グリオーマの染色体異常は欠失が主体をなすものと考えられ、(2)染色体欠失数と組織学的悪性度との間には負の相関がみられることが明らかとなった。また、(3)GBのうち再発悪性化例(definitely secondary glioblastoma)では主に欠失しかみられなかったが、初発例のなかには欠失、増幅の両者がみられるものが認められた。このことより、GBには少なくともDNA増幅のみられる例とそうでない例の2つのsub-typeが存在し、これらが、それぞれprimary(denovo)およびsecondaryGBに相当する可能性が示唆された。これらの遺伝子学的情報と臨床情報との対比など、今後の検討が必要である。
中国財務ディスクロージャーと監査制度論-社会的なアプローチ-

本研究は,制度を考察する際に,社会的アプローチを提唱している。社会的アプローチは,特定の国の制度を形成する際,制度がその国の社会基盤に依存して変容すると考え、すなわち制度の歴史依存性,政治依存性,文化依存性などを重視しながら,制度の有効性を解明することによって,制度の多様性を明らかにし,最適な制度の構築することを探求し、結果的に制度の社会的機能を向上させるというものである。これらの社会的依存性分析は,本研究全体のベースを提供する。以上のアプローチをベースに中国財務ディスクロージャーと監査制度を考察した結果,中国の監査制度は政治行政主導型であるといえる。このような制度が形成された要因は次の6つがある。(1)歴史上、中国型エージェンシー関係は徴税法をもとに、納税者、徴税者と国家検査機関で、構成されている。この基本的な関係は今日までつづいている。(2)中国の政治,経済,社会は,官僚主導であり、行政と政治(政党)が一体となって中央集権的である。(3)エリートは国の大学,研究所,行政機関などに集中しているのに対して,プライベートセクターの形成はこの構造に制限されている。(4)人間意識も歴史的・政治的な要因に制限され,国民は政府に依存しがちであるため、自治権などに対応する政治勢力の生成温床はない。(5)市場経済の発展による民間資本はいまだ不十分で,国家資本が会社を支配するコーポレートガバナンスの構造である。民間主導型の会計監査制度が生成する資金提供源は形成されていない。(6)一般に中国人は儒教を中心とする多元的な道徳倫理感を用いるが,経済のグロバール化につれて国外の思想も中国人の文化的行動パターンに影響をあたえている。先行研究は、中国の会計・監査思想について歴史的に調査した。その結論は、固有の中国式簿記は一種の農業経済に適する簿記である。1949年以降、農業を中心とする計画経済に適する会計は中国式簿記が改良されたもので、本質的には農業経済に適する会計である。これに対して、西洋会計は商業・工業経済に適する会計である。最近中国の現代化(工業化)に伴い、会計は必然的に西洋会計へ変革しなければならなくなった。また、ほぼ一世紀の歴史を見ると、中国会計監査思想は、政治のイデオロギーにより左右されがちである。イデオロギーは中国会計監査思想に決定的な影響を与えたといえる。以上の研究は、制度の政治的依存性、歴史的依存性、文化的依存性などがあることを明らかにした。制度の形成はそれらの相互依存性に制約され独自な形で変容している。このように、特定の国の制度を観るべきである。いわゆる社会的アプローチはそれらの依存性を明らかにし、その制度のあり方を研究するものである。このような視点から,平成14年度の9月には、中国監査事件を中心に現地調査を行った。その結果、監査システムが有効に機能するためには,精神的な面において監査人の人格や,独立性,正当な懐疑心など,技術的な面おいてリスクアプローチや,監査品質管理や,継続的専門教育など等々,法規整備の面において法,会計基準,監査基準,職業倫理基準,財務情報開示基準などをそろえるだけでは,不十分である。制度そのもののあり方とその社会と合致する合理的な制度を探り出すのが重要だと主張している。そして制度の有効的な機能は,法規制約のほかに、社会における良好な倫理,道徳規範をもつ環境が不可欠であり、そしてその環境の構築は、経済の成長とともに社会文化、人々の「精神的文明」も成長しなければいけない。それを実現するには教育が重要な役割を果たすべきである。また、平成14年度の2月には、中国改革開放後の財務ディスクロージャー制度の構築を中心に現地調査を行った。

調査は90年代の初期から、中国証券取引市場の成立に伴い、特定の会社を選別してその財務諸表の変遷に対して研究し、財務諸表の面において、その政治的依存性、歴史的依存性、文化的依存性を明らかにすることである。1961年マウツ&シャラフの『The Philosophy of Auditing』が公刊されて以来,監査論の研究は,様々なアプローチで展開し,発展してきた。ほぼ同時期の1963年,フランシス・L・K・シュー(Francis L.K.Hsu)の『CLAN, CASTE, AND CLUB』も公刊された。シューは人類学者の立場から,アメリカ人,中国人,インド人,日本人それぞれの社会的文化的パターンを研究し,異なる国における人間の行動パターンとその制度との関連性を詳細に分析しており,本著作は不朽の名著といえよう。そして,1990年代スタンフォード大学発の「比較制度分析(Comparative Institutional Analysis)」という経済学の新たなアプローチは,制度分析に対して以前にも増して研究が盛んである。また,近年,監査制度のモデルとされているアメリカにおけるエンロンなどの会計不正事件の頻発,そして中国でも似たような会計不正事件の多発など,このような監査制度を揺るがす出来事に対して,ふたたび監査制度のあり方が問われている。本研究は,監査制度を考察する際に,社会的アプローチを提唱している。社会的アプローチとは,特定の国の制度を考察する際,制度の歴史的依存性,政治的依存性,文化的依存性などを重視しながら,その制度の有効性を解明することによって,制度の多様性を明らかにし,最適な監査制度の構築を目指している。結果的に監査制度の社会的機能を向上させるというものである。これらの社会的依存性分析は,本研究全体のベースを提供する。以上のアプローチをベースに中国財務ディスクロージャーと監査制度を考察した結果,中国の監査制度は政治行政主導型であるといえる。このような制度が形成された要因は次の6つがある。(1)中国財務ディスクロージャーと監査制度は徴税法から起点に形成されたものである。(2)歴史から見ると,中国の政治,経済,社会は,官僚主導であり、行政と政治(政党)が一体となって中央集権的である。(3)エリートは国の大学,研究所,行政機関などに集中しているのに対して民間の人材は,この構造に制限されている。(4)人間意識も歴史的・政治的な要件に制限され,国民は政府に依存しがちであるため、自治権などに対応する政治勢力の生成温床はない。(5)市場経済の発展による民間資本はいまだ不十分で,民間主導型の会計監査制度が生成する資金提供源は形成されていない。(6)一般に中国人は儒教を中心とする多元的な道徳倫理感を用いるが、経済のグロバール化につれて国外の思想も中国人の文化的行動パターンに影響をあたえている。
能の詞章の文字化に伴う作品・作者概念の成立の研究―世阿弥自筆能本の文字表記から

研究実施計画に記した三点の作業過程に分けて述べる。(一)については、東京大学史料編纂所所蔵の観世元忠章句謡本(元忠本)を中心に調査を行った。昨年度は、観世元頼章句本(元頼本)とされた謡本のうち、『安達原』が元忠本であることを明らかにした。今年度はさらに、元頼本と書誌的特徴を共有する元忠本として『舞車』『鳥追船』『錦木』『反魂香』『生贄』を挙げることができた。さらに、元忠本・元頼本の両本が存在する『生贄』の詞章が、どちらも書写された時点での詞章は共通していることを明らかにした。それにより、従来指摘されていた詞章本文の差異の発生を、謡本の作成の経緯によって裏付けることができた。(二)については、仏教歌謡の譜本の形態的研究に先立ち、その謡本への影響関係を論ずる前提として、猿楽者が記した能をめぐる言説について明らかにすることを主眼とした。まず、世阿弥と金春禅竹の能楽論における「字・文字」の用例を総合的に検討し、音曲論に親和的な概念として「文字」が用いられたことを明らかにした。その中で梵字悉曇をめぐる言説を禅竹が摂取していることを確認し、仏教歌謡の影響を想定する根拠を得られた。さらに、能楽論の仏教的背景を明らかにすべく、金春禅竹の『明宿集』において従来等閑視されてきた「当意即妙」という表現の注釈的研究を行った。その結果、おもに天台宗の法華経の講釈や口伝法門の伝達といった場で用いられた「当位即妙」や、和歌の注釈書等に現れる「当位即妙」を『明宿集』の背景に想定する必要があることも明らかになった。(三)については、近世期の作者付等についての十分な進展は得られなかったが、その前提として、能勢朝次『能楽源流考』を補う室町期演能記録の集成作業を行った。これは野上記念法政大学能楽研究所の依頼型共同研究「能作品の仏教関係語句データベース作成と能の宗教的背景に関する研究」に関連し公開予定である。研究計画の段階で想定した書誌・形態の研究については一定の成果を得られたと考える。また、能楽伝書の中の音曲論において、研究課題であるところの詞章の文字化をめぐる猿楽者の認識を明らかにできたことも一定の成果である。また、当初予想していなかったような能楽論の仏教的背景を明らかにすることができたので、研究は着実に進展していると考える。最終年度に入るにあたり、それまで触れられなかった書誌・形態的な影響関係について明らかにしていきたい。とくに書誌の点で特徴的な戦国期の金春流謡本の研究に着手し、版行以前の時期の謡本の全体像について考究したい。2018年度の成果の一部は2019年度刊行予定の論文集に掲載が決定しているが、その他の成果を雑誌論文として公表すべく論文化も進めていく。研究実施計画に記した四点の作業過程に分けて述べる。(一)修士学位論文の内容の整理・公表は、能楽学会第16回大会での研究発表およびその論文化によって達成できた。また内容の一部を科研プログラム「東アジア古典学の次世代拠点形成」の一環で公表することができた。(二)早歌テクストの分析は、当初計画していた室町期写本の調査・研究について、競合する研究成果が平成29年度に入って刊行されたことにより(岡田三津子(編)『早歌の継承と展開』三弥井書店、2017年5月)、変更を余儀なくされた。ただし、該書の挙げた関連史料の補遺となる記述の存在、三手文庫本『玉林苑』下の沙弥宗光の花押の写しによって『玉林苑』奥書の従来の解釈の対立を解決可能であること、といった些末な事実確認は行うことができた。(三)室町時代後期観世流脇系謡本の分析は、観世元頼章句本(以下「元頼本」)の調査を実施することで大きな進展が見られた。まず、先行研究が注目する元頼本の特徴的な奥書について、文言や写式の相違点といった事項に従来指摘のない時期的な推移を認められることを“発見"した。さらに、東京大学史料編纂所・永青文庫(熊本大学文学部寄託)・法政大学能楽研究所鴻山文庫の所蔵本の書誌調査により、一部の料紙の違いが奥書の日付と対応すること等を確認した。さらに、元頼本とは系統の異なる東京大学史料編纂所所蔵の観世元忠署名本『舞車』との関連から、やはり従来指摘のない二点の事実を“発見"した。まず該本は元頼本と同一の装訂であり、従来の系統分類と伝来の経緯とが必ずしも対応しない可能性がある。また該本の書入と永青文庫所蔵『安達か原』の書入は同筆と認められ、元頼本と考えられてきた『安達か原』は元忠章句本と捉える必要がある。(四)能楽伝書・研究資料の読解は、世阿弥伝書における用例集成と、小中村清矩『歌舞音楽略史』の成立過程の確認を行うことができた。研究実績概要にも記した通り、早歌関係の研究計画は、競合する研究成果の刊行により変更を余儀なくされたものの、戦国期謡本の研究については当初の予想を超える成果を得られた。その他の研究計画についても、着実に進展している。

(一)については、東京大学史料編纂所所蔵の観世元忠章句謡本(元忠本)を中心に調査を行った。昨年度は、観世元頼章句本(元頼本)とされた謡本のうち、『安達原』が元忠本であることを明らかにした。今年度はさらに、元頼本と書誌的特徴を共有する元忠本として『舞車』『鳥追船』『錦木』『反魂香』『生贄』を挙げることができた。さらに、元忠本・元頼本の両本が存在する『生贄』の詞章が、どちらも書写された時点での詞章は共通していることを明らかにした。それにより、従来指摘されていた詞章本文の差異の発生を、謡本の作成の経緯によって裏付けることができた。(二)については、仏教歌謡の譜本の形態的研究に先立ち、その謡本への影響関係を論ずる前提として、猿楽者が記した能をめぐる言説について明らかにすることを主眼とした。まず、世阿弥と金春禅竹の能楽論における「字・文字」の用例を総合的に検討し、音曲論に親和的な概念として「文字」が用いられたことを明らかにした。その中で梵字悉曇をめぐる言説を禅竹が摂取していることを確認し、仏教歌謡の影響を想定する根拠を得られた。さらに、能楽論の仏教的背景を明らかにすべく、金春禅竹の『明宿集』において従来等閑視されてきた「当意即妙」という表現の注釈的研究を行った。その結果、おもに天台宗の法華経の講釈や口伝法門の伝達といった場で用いられた「当位即妙」や、和歌の注釈書等に現れる「当位即妙」を『明宿集』の背景に想定する必要があることも明らかになった。(三)については、近世期の作者付等についての十分な進展は得られなかったが、その前提として、能勢朝次『能楽源流考』を補う室町期演能記録の集成作業を行った。これは野上記念法政大学能楽研究所の依頼型共同研究「能作品の仏教関係語句データベース作成と能の宗教的背景に関する研究」に関連し公開予定である。研究計画の段階で想定した書誌・形態の研究については一定の成果を得られたと考える。また、能楽伝書の中の音曲論において、研究課題であるところの詞章の文字化をめぐる猿楽者の認識を明らかにできたことも一定の成果である。また、当初予想していなかったような能楽論の仏教的背景を明らかにすることができたので、研究は着実に進展していると考える。平成29年度の研究を持続させる形で、早稲田大学演劇博物館安田文庫所蔵の元頼本の書誌調査を行い一通りの元頼本の調査を終えると、本文詞章の系統について総合的に検討したい。さらに、元頼本の性格を明らめるためにも観世元忠(宗節)関連の資料について、基礎的な調査・研究を行う必要が生じたため、そちらの調査にも着手したい。また上記の基礎的作業と並行して、文字・表記という観点から唱導や声明のような仏教歌謡と世阿弥時代の能楽との関連についても考察していきたい。最終年度に入るにあたり、それまで触れられなかった書誌・形態的な影響関係について明らかにしていきたい。とくに書誌の点で特徴的な戦国期の金春流謡本の研究に着手し、版行以前の時期の謡本の全体像について考究したい。2018年度の成果の一部は2019年度刊行予定の論文集に掲載が決定しているが、その他の成果を雑誌論文として公表すべく論文化も進めていく。
高反応性活性種の立体制御を基盤とする立体選択的多置換環骨格構築法の開発と応用

多置換環構造は生体機能分子に広く見られる構造的特徴であり、立体選択的環骨格構築法の開拓は有機合成化学の中心的挑戦課題の一つである。多置換環構造の効率的構築法の開拓および開発した方法論の生理活性物質合成への応用を目的として研究を行い、以下の成果をあげた。1キラルアミノアルコール配位子制御によるジンクアセチリドのニトロオレフィンに対する高選択的不斉付加反応を開発した。2キラルアミノアルコール配位子制御によるジンクアセチリドのアルデヒドに対する不斉付加を開発し、トランス配置キラルアミノアルコール配位子の有用性を示した。3キラルオキサゾリン配位子制御による触媒的不斉分子内ヒドロアミノ化反応を開発した。4キラルアミドホスファン配位子制御によるジアルキル亜鉛のニトロオレフィンに対する触媒的不斉付加を開発した。5キラルアミドホスファン配位子制御による5-アリールシクロヘキセノンの触媒的不斉合成法を開発した。6ジメチル亜鉛-酸素を開始剤とする一級アルキルラジカルの発生とイミンへの付加を開発した。7ジメチル亜鉛-酸素を開始剤とする一炭素単位ラジカルのイミンへの不斉付加を開発した。8キラルジエーテル配位子制御による不斉Mannich反応を開発し、Taxol側鎖前駆体の不斉合成に成功した。9キラルジエーテル配位子制御によるタンデム連続Michael反応を鍵反応とする(+)-β-lycoraneの全合成および(-)-1-deoxylycorineの形式全合成を達成した。10キラルジエーテル配位子制御によるタンデムMichael-アルキル化反応を鍵工程とする(+)-halichlorineの形式全合成を達成した。
アディポサイトカインと卵胞発育ー多嚢胞性卵巣症候群の治療成績向上を目指してー

若年女性に多く見られ、排卵障害の原因となる多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)の原因究明のため、マウス卵胞体外培養系を作成し、実験を行った。アディポサイトカインはPCOSの一因と考えられているインスリン抵抗性を惹起する物質である。アディポサイトカインの一種であるTNF-αは卵胞発育を直接抑制することが分かった。そこにインスリン抵抗性改善薬を投与すると、TNF-αの抑制を改善した。以上の研究成果をまとめ、学会や国際的に評価の高い雑誌に投稿した。本年は、前年度に確立したマウス前胞状卵胞体外培養系を用いていくつかの実験を行った。まず、アディポサイトカインの一つであるTNF-αによる卵胞発育、ステロイド産生抑制系に対し、フィブラート系脂質異常症改善薬であるベザフィブレートが与える影響について検討した。ベザフィブレートはTNF-αによる卵胞発育、ステロイド産生の抑制を有意に改善した。さらに、TNF-αによる抑制系に、ベザフィブレートとともにPPAR-γantagonistを添加したところ、ベザフィブレートによる改善効果を抑制した。以上よりベザフィブレートはPPAR-γを介してTNF-αによる卵胞発育、ステロイド産生の抑制作用を改善することが示唆された。同様にチアゾリジン系薬であり、PPAR-γ作動薬でもあるピオグリタゾンを使用し、PPAR-γ作動薬の卵胞発育に対する直接効果を調べた。ピオグリタゾンもベザフィブレートと同様、TNF-αによる卵胞発育、ステロイド産生の抑制を有意に改善した。TNF-αなどのアディポサイトカインは、多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)の卵胞発育障害に関与していると考えられている。本研究はPCOSに対するベザフィブレートやピオグリタゾンなどのPPAR-γ作動薬の卵胞への直接作用を証明するものであり、今後臨床の場でも役立つと考えられる。アディポサイトカインは脂肪細胞から分泌されるサイトカインであり、インスリン抵抗性(IR)を惹起することが知られている。また不妊症の原因の1つである多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)の卵胞発育障害に、アディポサイトカインが関与している可能性がある。今年度我々は、アディポサイトカインの1つであり、PCOS患者で血中、卵胞液中の高値との報告があるTNF-αの卵胞に与える影響について、そして臨床的に効果のあったベザフィブレートやピオグリタゾンなどのIR改善薬が卵胞発育に与える影響について検討した。アディポサイトカインの卵胞発育に及ぼす影響を調べるために、まずはマウス卵胞体外培養系を確立した。予備実験と同様、マウス卵胞体外培養系にFSH(100 mIU/ml)を添加すると、卵胞発育、E2濃度ともに有意に促進された。次に、FSHを添加した卵胞培養系にTNF-αを添加し、卵胞発育およびステロイド産生に及ぼす影響について検討したところ、それぞれに対し有意に抑制効果が認められた。そこでTNF-αによる卵胞発育抑制系にベザフィブレートを投与したところ、TNF-αによる抑制を有意に改善した。ピオグリタゾンを用いてベザフィブレートと同様の検討を行ったが、やはりTNF-αによる抑制を有意に改善した。今後、KGN細胞を用いて、アディポサイトカイン、そしてIR改善薬の細胞増殖に与える影響、その分子機構について検討する予定である。実験計画とほぼ同様の実験が遂行でき、そのデータも順調に集計できているため。KGN細胞を用いた実験の継続、データ集計を行う。有意な結果が得られれば、結果をまとめ、学会(国際学会、国内学会)や国際的に評価の高い雑誌に投稿する予定である。研究費としては、細胞培養用の培養液やディッシュ類などの消耗品、蛋白、遺伝子発現の解析をするための抗体の購入に使用する予定である。
インターフェロン誘導遺伝子の新たな発現制御機構

以前我々が単離した二本鎖RNA結合タンパク質NF90の生体内機能はほとんどわかっていない。昨年度我々は、以前報告されたNF90によるIFN誘導遺伝子(ISGs)の発現促進は、特定の細胞株を用いた時のみみられ、一般的な現象ではないと結論づけた。本年度は、引き続きNF90の機能解析を行なうために、これまでに同定したNF90の相互作用因子に着目し、解析を行なった。そのひとつであるTRBPは、近年注目されているマイクロRNA (miRNA)の生合成経路において細胞質における前駆体miRNA (pre体)から成熟型miRNAの変換に関与することが知られている。また、pre体の核外輸送を担っているEXP-5はNF90と相互作用することがわかっている。さらに、核内においてmiRNA遺伝子の初期転写産物であるprimary-miRNA (pri体)をpre体に変換するDrosha/DGCR8を中心としたマイクロプロセッサーにNF90とそのパートナーであるNF45が含まれることが示されている。従って我々は、NF90/NF45がmiRNAの生合成経路において、pre体の産生と核外輸送に関与しているのではないかと作業仮説をたて、その検証を行なった。その結果、NF90/NF45はpre体の産生のためのDrosha/DGCR8によるpri体の切断活性を抑制することがわかった。また、これらの蛋白質を高発現した293T細胞ではpri体の蓄積が確認された。従って、NF90/NF45はpre体の産生において抑制的に働くことがわかった。pre体の核外輸送に関しては、薬剤刺激時に特定のmiRNAが発現するようなHela細胞株を作成中で、この細胞株を用いる事で、これらの蛋白質がpre体の核外輸送に関与するか否かを明らかにできると考えている。(結語)本研究助成の支援で行なった研究により、NF90/NF45複合体がこれまで全く報告されていないmiRNA生合成経路の負の調節因子として機能する可能性を示唆することができた。1.以前我々はIFNγによって誘導されるMHC class II.遺伝子のDNase I Hypersensitive Site(DHS)に結合する因子としてNuclear Factor 90(NF90)を単離した。また、酵母Two-hybridスクリーニングを行い相互作用因子を検索したところ、IFNシグナリングに対し負に作用するProtein Inhibitor of Activated Stat1(PIAS1)がbindingpartnerのひとつであることがわかった。さらにNF90は選択的スプライシングにより5つの異なる因子でファミリーを構成しており、その中のNF90cをCXCR4を発現させた骨肉腫細胞やT細胞cell lineであるCEM12D7で高発現させるとIFN誘導遺伝子群(ISGs)が発現し、HIV-1の感染が抑制されることがわかってきた。そこで我々はNF90family全てを遺伝子導入効率の高いBOSC細胞やHela細胞で高発現させ、ISGsの発現を調べた。その結果、NF90cを含む全てのfamilyにおいてISGsの発現増加は確認できなかった。NF90は通常核内でNF45とヘテロダイマーを形成し存在していると考えられている。そこで、NF90ファミリーとNF45を共発現させてISGsの発現量を測定したが、それでも増加はみられなかった。このことよりNF90cによるISGsの発現増加は特殊な条件下でのみみられる現象であると考えられる。2.我々はこれまでにNF90のbindingpartnerとしてPIAS1以外にもいくつかの興味深い因子を単離してきている。そのひとつがTRBPである。TRBPの機能としては近年注目されているmicroRNAの産生経路においてDicerとRISCの橋渡し的な働きをすることが知られている。さらにmicroRNAの産生の初期段階で重要な働きをするDrosha複合体にNF90family/NF45が含まれることがわかってきた。そこでNF90 familyの主たる機能はmicroRNAの産生機構に関わるのではないかと考えその解析を行った。これまでの解析で、(1)NF90familyはDrosha及びDicerと相互作用する。(2)NF90family/NF45複合体はmicroRNAの初期産物であるpri-microRNAの産生を促進する。ことがわかってきた。そこで現在は、microRNA産生経路におけるNF90family/NF45,Drosha, Dicer, TRBPの関係を明らかにするために解析を急いでいる。

従って我々は、NF90/NF45がmiRNAの生合成経路において、pre体の産生と核外輸送に関与しているのではないかと作業仮説をたて、その検証を行なった。その結果、NF90/NF45はpre体の産生のためのDrosha/DGCR8によるpri体の切断活性を抑制することがわかった。また、これらの蛋白質を高発現した293T細胞ではpri体の蓄積が確認された。従って、NF90/NF45はpre体の産生において抑制的に働くことがわかった。pre体の核外輸送に関しては、薬剤刺激時に特定のmiRNAが発現するようなHela細胞株を作成中で、この細胞株を用いる事で、これらの蛋白質がpre体の核外輸送に関与するか否かを明らかにできると考えている。(結語)本研究助成の支援で行なった研究により、NF90/NF45複合体がこれまで全く報告されていないmiRNA生合成経路の負の調節因子として機能する可能性を示唆することができた。