hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
AE計測による土のせん断帯発生機構の研究

室内土質試験において、供試体が変形し破壊に至る過程で、均一な変形が次第に局所的なものに発達し、最後には滑り層が形成され、強度低下が観測される場合がある。このようなせん断帯発生の問題は、土の強度を評価する上で非常に重要であり、そのメカニズムの究明については最近研究が始まったばかりである。本研究では、微視的な土粒子の移動などを反映する計測方法として、アコ-スティック・エミッション(AE)計測に着目し、せん断帯発生問題を検討している。研究手法としては、相馬砂を用いた平面ひずみ試験であり、せん断中のAEを計測している。供試体作成法としては、異方圧密後に所定の過圧密比に除荷し、側圧一定・ひずみ速度一定条件でせん断している。なお、せん断帯発生の研究に関しては、平面ひずみ供試体の側面よりビデオ撮影も併せて行っており、着色した砂粒子の微小変位を測定している。これらビデオ録画に必要な画像処理機器は、科学研究費により購入したものである。以上の研究により、次のよう結論が得られている;ビデオ撮影より砂粒子の変位を解析すると、応力ひずみ曲線がピ-ク強度を示す付近で、供試体内部のひずみ分布は非常に不均一なものとなる。一方、ピ-ク強度付近では、下図に示すように、AE計数と供試体が外部になす仕事量との関係に不連続な変化が生じる。従って、AE計測から供試体内部のひずみ分布変化を推定する可能性が示された。
臓器セシウム蓄積に関わる細胞膜セシウム輸送経路の解明

セシウムの臓器蓄積モデルとしてHeLa細胞を使用した。HeLa細胞に対してCsが増殖抑制効果を示すことを明らかにし、学術論文(FEBS Lett. 2017 Mar;591(5):718-727)として発表した。本研究で細胞内へのCsの流入が実際に起きていることが示され、Csにより解糖系酵素の発現抑制や機能抑制が起きている可能性が示された。HeLa細胞と他の細胞株のCs感受性の違いからCsの透過経路となる遺伝子を調べたところ、TRPC1、TRPM7がCsの透過経路と予想できた。本年度は培養細胞HeLa細胞に対して、培養液中にCs+イオンを添加し、1日培養した細胞の細胞内環境をキャピラリー電気泳動法により評価を行った。この手法により、HeLa細胞に実際にCs+イオンが流入していることが明らかになった。厳密な濃度については、更にキャリブレーション方法に工夫の余地が残されているものの、細胞外にCs+イオンを添加することにより、細胞内液にCs+イオンのシグナルが観察された。同時に記録される細胞内Mg2+イオンを表すシグナルを利用してCs+イオンの増減を評価する方法を開発した。細胞内Mg2+イオンについては、細胞外Cs+イオン負荷により細胞内濃度が変化しないことを細胞内Mg2+イオン感受性色素であるMAG-FURA2により確認を行った。また、細胞内pHの変化をpH感受性色素BCEGFを用いて観察し、Cs+イオン負荷時には、細胞内アルカリ化が起きていることを見出した。これらの結果については、既に論文投稿中である。RIを用いる実験については、未だ、準備段階であり、実験については次年度としたい。Cs+イオンを輸送する輸送体の候補については、現在、いくつかの遺伝子に絞り込みクローニングを行っている段階である。完全長のDNAを得ることができたら、発現実験へと移行する予定である。動物個体を対象にした実験については、平成27年度移行に実施する予定であったが、前倒しを行った。平成26年度は、ウサギに対してCs+イオンの急性投与実験を行い、大動脈内カテーテル法により循環動態をモニタした。Cs+イオンは、濃度依存的に不整脈(2段脈)を引き起こし、その後、心停止をもたらした。この結果についても単独の論文として論文投稿を行う予定である。本年度は、昨年得られたCs+イオン添加によるHeLa細胞における細胞増殖抑制の結果と細胞内Cs+イオンの流入についての論文を海外学術誌に投稿した。レフェリーからCs+イオンの定量についての改善を求められた。キャピラリー電気泳動法を行う前の細胞処理方法によって細胞内イオン濃度が大幅に変化することを突き止め、処理方法の改善を行うことにより、Cs+イオンの細胞内流入についてより正確な情報を得ることが出来るようになった。その結果にもとづいて、改訂した論文を投稿予定である。キャピラリー電気泳動法が確立したことにより、RIを用いた実験については実施しない方向で研究を進めることとした。Cs+イオンを輸送する輸送体の候補について、現在、様々な種類のトランスポータ・イオンチャネルの発現について、数種類の細胞株を用いて調べている。それらの細胞株は、Cs+イオンによる細胞増殖抑制効果が異なることから、その効果と輸送体の発現を関連付けることにより、Cs+イオンを輸送する輸送体を絞り込む予定である。Cs+イオンを透過する輸送体の候補となる分子が予定より多く見つかったため、絞り込む作業に時間がかかっている。投稿した論文がまだアクセプトされていないことから、その改訂に時間がかかっている。特にキャピラリー電気泳動法により細胞内へのCsの流入が実際に起きていることが示された。また、Csにより、解糖系酵素の発現抑制や機能抑制が起きている可能性が示された。HeLa細胞以外に、HUEhT-1、HEK293、HSC-1に対してCsの細胞増殖に与える影響を調べたところ、HUEhT-1で最も低濃度でCsが細胞増殖を抑制することが分かった。また、各細胞について、Csの透過経路の候補となるKCNHファミリー、TRPCファミリー、TRPMファミリーの遺伝子発現を調べた。その結果、KCNH3、TRPC1、TRPC4、TRPM4、TRPM7がCsの透過経路の候補として予想できた。HeLa細胞に対して、Cs添加によりCsの透過経路候補の発現変化が起こるかどうか調べたところ、TRPC1、TRPM7でCs添加による発現の亢進が認められた。最終的にそれらがCsの透過経路であることの証明にはまだ至っていないが、今後も探索を続けたい。

初年度にCs輸送体の候補分子の発現実験まで行う予定であったが、完全長DNAのクローニングに時間がかかり、発現実験に至っていないことが、やや遅れていると判断した理由である。ただし、動物実験については、まずCsを急性に投与した効果を明らかにしたことで。当初の予定より進んでいる。なるべく早く最初の論文のアクセプトを目指し、Cs+イオンを透過する輸送体についての論文作成にとりかかる予定である。細胞分子生理学本年度は、HeLa細胞より、Cs輸送体の候補分子の完全長DNAのクローニングを試みたが、予定より時間がかかったため、市販のDNAを購入して利用することも検討したい。キャピラリー電気泳動法を用いたCs+イオン濃度測定について、投稿論文の査読結果に従った追加実験並びに条件検討を行う必要があり、その結果、分子生物学実験を行える時間が少なくなり、分子生物学実験に用いる試薬や、細胞培養に必要な培地・血清の使用する分量が減った。次年度に持ち越されたセシウム輸送体の候補の同定に必要な分子生物学的実験を行うための試薬と細胞培養に必要な培地・血清の購入に利用する。
食品中の水の存在状態に関する研究(糊化でんぷん系の結合水に及ぼす添加物の影響)

1.糊化でんぷん-水系における結合水に及ぼす添加物の影響:米でんぷんに0.5, 1.5, 2.5倍量のグリコース,フルクトース,マルトース,スクロースをそれぞれ加えて糊化し,種々の含水量領域における結合水量をパルスNMRによる水プロトンの緩和時間から推定した.その結果,いずれの糖を添加した系においてもほゞ2gH_2O/g乾燥物以下の含水量では結合水量の水分の減少と共に増加し,これ以上の含水量では結合水量はほゞ一定となり糊化でんぷん単独の系と同様の蛍光を示したが,この混合系の結合水量はでんぷんと糖とがそれぞれ独立に示す結合水量の和より小さく,でんぷんと糖との間に何等かの相互作用の生じることが示唆された.そしてこの相互作用は糖の比率の高い領域で明瞭に現われることもわかった.一方,塩類添加の効果については,塩水溶液についてスピンースピン緩和時間の測定が拡散効果によって阻害され,明確な結果が得られないのでスピンエコー法に代えてCPMG法(装置もミニスペックに変更)で検討することとした.イオン水和水に対する従来の解析法の適用に問題はあろうが,この方法によれば塩1g当りの結合水量は0.05g以下であり,塩の種類及び濃度によって異なることがわかった.またNaClを糊化でんぷんに添加した場合, 1M程度の水溶液ではでんぷんの結合水量をほとんど変化させなかった.2.-20°Cにおける不凍水測定のための対策とその実用的意義の検討:精度の向上を期待して購入(校費)したミニスペックがモデルチェンジし-10°C以下では精度が落ち,予期した成果が得られないことが判明した.したがって従来の装置(プラクシス社PR-103)での測定精度の向上の工夫が必要となった.この点の解決にはまだ時間を要するものと思われ,この多重層吸着水の挙動を追跡するために水分活性の検討が有効ではないかと考え,若干の試料について測定し,なお継続中である.1.糊化でんぷん-水系における結合水に及ぼす添加物の影響:米でんぷんに0.5, 1.5, 2.5倍量のグリコース,フルクトース,マルトース,スクロースをそれぞれ加えて糊化し,種々の含水量領域における結合水量をパルスNMRによる水プロトンの緩和時間から推定した.その結果,いずれの糖を添加した系においてもほゞ2gH_2O/g乾燥物以下の含水量では結合水量の水分の減少と共に増加し,これ以上の含水量では結合水量はほゞ一定となり糊化でんぷん単独の系と同様の蛍光を示したが,この混合系の結合水量はでんぷんと糖とがそれぞれ独立に示す結合水量の和より小さく,でんぷんと糖との間に何等かの相互作用の生じることが示唆された.そしてこの相互作用は糖の比率の高い領域で明瞭に現われることもわかった.一方,塩類添加の効果については,塩水溶液についてスピンースピン緩和時間の測定が拡散効果によって阻害され,明確な結果が得られないのでスピンエコー法に代えてCPMG法(装置もミニスペックに変更)で検討することとした.イオン水和水に対する従来の解析法の適用に問題はあろうが,この方法によれば塩1g当りの結合水量は0.05g以下であり,塩の種類及び濃度によって異なることがわかった.またNaClを糊化でんぷんに添加した場合, 1M程度の水溶液ではでんぷんの結合水量をほとんど変化させなかった.2.-20°Cにおける不凍水測定のための対策とその実用的意義の検討:精度の向上を期待して購入(校費)したミニスペックがモデルチェンジし-10°C以下では精度が落ち,予期した成果が得られないことが判明した.したがって従来の装置(プラクシス社PR-103)での測定精度の向上の工夫が必要となった.この点の解決にはまだ時間を要するものと思われ,この多重層吸着水の挙動を追跡するために水分活性の検討が有効ではないかと考え,若干の試料について測定し,なお継続中である.
高圧力下中性子回折実験による超伝導と競合する重い電子反強磁性状態の研究

多くの物質中では磁性と超伝導は水と油の関係の様にお互い排他的に発生し、共存状態を示す物質は殆どありません。CeNiGe3は、高い圧力をかけることで超伝導と共存する磁性状態が、競合する磁性状態へと変化するため、磁性と超伝導の関係を調べる上で非常に興味深い物質のひとつです。磁性状態は中性子回折実験により調べることができますが、高い圧力下で実験を行うには技術的な難しさがあるため、これまでに精度良い実験はできていません。我々は専用の圧力容器を開発することで、CeNiGe3の圧力下の磁性状態の解明を目指しています。
ホスホリパーゼCβの関与する小脳の記憶・学習機構

小脳に非常に強く発現する酵素、ホスホリパーゼCβ4(PLCβ4)の小脳連合学習系における役割を明らかにするため、この遺伝子欠損マウスを用い、瞬目反射学習とその基礎メカニズムと考えられている小脳長期抑圧現象(LTD)に与える影響を検討した。その結果、1.平行線維-プルキンエ細胞間の興奮性シナプス後電流(EPSC)の電流波形、つまり、立ち上がり、立ち下りの時定数に関し、野生型と欠損型では有意差はなかった。2.2回刺激によるEPSCの増大の割合にも相違がないことから、この欠損型マウスでは、平行線維-プルキンエ細胞間の速通性のシナプス伝達には異常がないことがわかった。3.イオンチャネル結合型グルタミン酸受容体のアゴニストであるAMPAを投与し、Ca^<2+>上昇を測定したところ、野生型、欠損型で違いはなかった。これはAMPA型受容体チャネルやCa^<2+>チャネルの働きに異常がないことを示唆した。4.代謝調節型グルタミン酸受容体の1型(mGluR1)を活性化したところ、欠損型では、小脳の前葉(第1から第6小葉)ではほとんどCa^<2+>応答が見られなかったものの、後葉では第10小葉に近づくにつれCa^<2+>応答が大きくなることがわかった。5.ウサギの脳破壊実験では、第6小葉が瞬目反射学習に重要であるという報告がなされている。そこで、第6小葉を中心にLTD形成を調べたところ、mGluR1刺激応答を示さない細胞(全体の80%)ではLTD形成が有意に阻害された。同様のLTD形成阻害は前葉でみられた。6.PLCβ4遺伝子欠損マウスでは、瞬目反射学習に障害が見られた(東京大学大学院薬学系研究科神経生物物理学教室との共同研究)。以上より、瞬目反射学習には第6小葉を含めた小脳前葉でのLTD形成が必要であり、PLCβ4は前葉LTDに必須の分子であることがわかった。これらの結果は、本年度の日本神経科学大会および北米神経科学大会で発表し、現在論文を投稿中である。
培養細胞と単離視床下部ニューロンを使った温度受容機構解析

1.PC-12細胞を使った冷受容機構解析未分化あるいは分化させた細胞のいづれにおいても、脱分極刺激時にみられる内向き電流の大きさが、細胞温度の下降により増大し、冷感受性を示すが、その増大の程度は3638°Cで顕著であった。細胞内記録法で観察したPC-12細胞の静止膜電位は、灌流液温を38°Cから32°Cに低下させると約5mV脱分極し、入力抵抗は増加して、PC-12細胞が冷感受性を持つことを確認した。2.温度刺激時の細胞内カルシウム濃度の動態解析未分化あるいは分化24日のPC-12細胞のいづれにおいても細胞の温度上昇あるいは下降時には細胞内カルシウム濃度は一過性に増加した。温度刺激により増加する細胞内カルシウム濃度は、細胞外のカルシウムを取り除いても変化しなかったことから、その大部分は細胞内ストアに由来していることが推測された。3.寒冷環境適応過程における脳内c-fosの発現成熟ラットを用いて、寒冷環境に暴露した時の中枢神経内でのc-fos発現を調べ、更に寒冷環境に適応させた時のc-fos発現部位の変化を検討した。寒冷暴露の結果、いくつかの部位で特異的なc-fosの発現がみられた。また、c-fosの発現に時間的消長の差異が認められ、大まかには(1)寒冷暴露の初期に発現する部位、(2)寒冷暴露中持続的に発現が認められる部位、(3)寒冷暴露初期には発現しないか、非常に少ない発現しかしないのに、寒冷に適応すると顕著な発現が認められる部位の3つのタイプに分類できた。本研究は、従来皮膚の温度受容器について提唱されていた仮説や、細胞外記録による間接的証拠で説明されていた温度受容機構を、我々の最近の知見を基に、(1)末梢交感神経モデルとしての培養細胞PC-12による冷受容機構の解析、(2)体温調節中枢である視床下部視索前野の単離ニューロンを使った温度受容機構の解析、(3)温度受容機構におけるカルシウムイオンの役割解明の3方向から追求し、温度受容機構の基本的原理をイオンチャネルあるいは細胞レベルで解明することであり、以下の点を明らかにした。1、PC-12細胞における冷受容機構の解析未分化の、あるいは神経成長因子を作用させて分化させたPC-12細胞の温度応答をホールセルクランプ法あるいはグラミンジンパッチクランプ法で記録した。膜電位固定下に細胞外液温を30-39°Cの温度範囲で変化させ、温度刺激応答時のシオン電流のkinetics解析と、分化の過程における温度応答性の変化とイオン電流との関連を調べると、未分化あるいは分化させたPC-12細胞のいづれの細胞においても、脱分極刺激時にみられる内向き電流の大きさが細胞温度の下降により増大し、冷感受性を示すが、その増大の程度は36-38°Cで顕著であった。2、温度刺激ときの細胞内カルシウム濃度の動態解析蛍光性カルシウム指示薬fura-2をPC-12細胞に負荷し、温度刺激応答時の細胞内カルシウム濃度の動態を測定した。培養液温を34°Cから変化させると、温度上昇、下降のいずれの場合も細胞内カルシウムは一過性に増加した。細胞内ストア-由来のこのカルシウムどのように温度受容機構に関与しているかを明らかにする予定である。主な研究成果1、PC-12細胞における冷受容機構の解析未分化あるいは分化させたPC-12細胞のいづれの細胞においても、脱分極刺激時にみられる内向き電流の大きさが細胞温度の下降により増大し、冷感受性を示すが、その増大の程度は36-38°Cで顕著であった。細胞内記録法で観察したPC-12細胞の静止膜電位は、灌流液温を38°Cから32°Cに低下させると、約5mV脱分極し、入力膜抵抗は増加して、PC-12細胞が冷感受性を持つということを確認できた。

2.温度刺激時の細胞内カルシウム濃度の動態解析未分化あるいは分化2-4日のPC-12細胞のいずれの細胞でも温度上昇、下降のいずれの場合も細胞内カルシウムは一過性に増加した。温度刺激により増加する細胞内カルシウム濃度変化は、細胞外のカルシウムを取り除いても保持されることから、その大部分は細胞内ストア-に由来していることが推測された。3、寒冷環境適応過程における脳内c-fosの発現成熟ラットを用いて、寒冷環境に暴露した時の中枢神経系各部位でのc-fos発現を調べ、更に寒冷環境に適応させた時のc-fos発現部位の変化も併せて検討した。寒冷暴露の結果、いくつかの部位で特異的なc-fosの発現が見られた。また、c-fosの発現部位に時間的消長の差異が認められ、大まかには1)寒冷暴露3時間、24時間に顕著なc-fosの発現が認められるが、14日間暴露後には発現が無い部位、2)寒冷暴露3時間、24時間から14日間まで比較的持続して発現が認められる部位、3)寒冷暴露3時間でわずかにc-fosの発現が認められるが、24時間暴露ではほとんど発現していないのに、14日間暴露では顕著に発現が増加する部位の3つのタイプに分類できた。
新しい統計科学としての量子情報論

情報科学あるいは情報学として新しい学問領域が、旧来の研究分野を横断する形で形成されてきているが、基礎理論も無限次元解析や量子確率の融合を受けて大きく発展している。本企画調査では、これまでに確立している量子確率論における手法に基づき量子情報論を構築し、統計科学に新しい方向性を与えることと、境界諸分野における非線形現象・散逸・ゆらぎの認識・計算量・量子系の観測などの課題を整理することにあった。研究代表者・分担者ともに多くの研究会を主催・または参加し、外国から多数の研究者を招聘し、研究を遂行した。その結果、次の研究課題の重要性を認識するに至り、そのための研究組織を構築することとなった。1.量子ホワイトノイズ解析。確率変数の量子分解の確立、複素ホワイトノイズによる作用素の表現、ホワイトノイズの高次冪の定式化などによって、幅広い応用が期待できる。特に、新しい量子確率解析として量子情報論の基礎を担うためには、情報力学の定式化や新しい情報モデルの構築が課題となる。2.量子情報論の実験的側面が急速に発展していることから、「量子性と散逸」の問題を理論的に掘り下げてゆく必要がある。量子計算における困難であるデコヒーレンスなどがその典型例である。非平衡熱場理論に示唆される有限温度における量子確率解析やフィルタリングの手法などで制御する理論の構築は興味深い。量子アルゴリズムの高速化・計算量の問題などについては今後の課題である。3.代数的確率論。統計解析における最も重要な概念である「独立性」および中心極限定理について新しい高い観点から統一することを試みた。離散グラフの隣接作用素の漸近的スペクトル解析への応用され、新しいノイズに基づく確率モデルの構成への道が拓かれた。3.代数的確率論。
パルスELDOR法を用いた新しいタンパク質構造解析法の開拓

最近分子間距離を測定する方法としてパルスESR法が大きく発展している。特にパルスESR法の技術の一つであるパルスELDOR法を用いれば長距離のラジカル間距離を高感度で測定することができる。(原理的には150Åまでのラジカル対を1Å以下の精度で観測することが可能)パルスEPRを用いた距離の測定法は非常に有効な方法でありながら測定対象が不対電子間のみに限られるという制約がある。これを測定技術面及び試料の面より改善し新たな方法を開拓するのが本研究の狙いである。一つの解決法として遺伝子操作によるタンパク質アミノ酸の装飾によりタンパク質上の任意の位置に金属の結合サイトを人工的に作成し距離を測定する方法を試みている。この手法をもちいれば遺伝子配列として既知のアミノ酸間の立体構造上での距離を求めることが可能になる。単純に任意のアミノ酸位置についてこのプロセスを繰り返すことにより、アミノ酸位置の相対的な距離は求まると考えられる。本年度はクラミドモナスにhistidine-tag(5つのイミダゾール基の連なったもの)を挿入した試料を大量に作成し、ESR測定に最適なhistidine-tagに配位させる金属の選定を行った。パルスELDOR法を用いて光合成光化学系II内のアミノ酸残基やクロロフィル分子等の位置の特定を行うことができた。本年度はクラミドモナスにhistidine-tag(5つのイミダゾール基の連なったもの)を挿入した試料を大量に作成し、ESR測定に最適なhistidine-tagに配位させる金属を選定している。目下のところCu^<2+>が、ESRとしてはもっとも良い信号を示している。本年度は主に科学研究費補助金を利用して装置の拡充、また本年度所属研究室に納入予定のパルスESR装置のための予備的実験を行った。次年度では実際にpulsed ELDORの測定を行いながら解析法の確立をめざす。
代替医療素材を目指したプロポリスのウイルス感染症に関する研究

プロポリスは、諸外国ではすでに代替医療素材として使用されている天然物質である一方、国内ではその科学的知見が低いことから健康食品としての使用に留まっている。本研究では、プロポリスの様々なウイルス感染症に対する有用性を動物レベルで証明し、一部作用機序も併せて検討した。さらに、異なる週齢層のマウスによる評価を加え、プロポリスがウイルス感染症に対して治療効果を有することを明らかにし、幅広い有用性と適用についての科学的知見の蓄積の一助とした。このことからプロポリスがウイルス感染症に対して代替医療素材として利用可能であることを示した。プロポリスは、その多様な生理活性と広範な用途性から、近年、代替医療への使用に高い支持を得ている健康食品の一つである。一方、ウイルス感染症は、免疫機能の低下や亢進が、原因ウイルスの増殖に影響し、発熱や疼痛といった様々な防御すべき生体シグナルを生みだす疾患の一つである。本研究は、こうしたウイルス感染症の予防・改善に効果を有するプロポリスを見出すために様々な生体シグナルを加味した実験、すなわち動物レベルにおいて、それらプロポリスの新たな有用性を見出すことを目的とした。培養細胞を用いた実験から、プロポリスの1種に免疫賦活作用を有し、ウイルス感染症に対して予防効果が期待されるプロポリスを見出した。一方、これまでに致死系マウスモデルで強いウイルス感染症への改善効果を持ち、ウィルス増殖の抑制効果を有したプロポリスの免疫系への関与と比較したところ、異なる影響が見出された。免疫系での働きに差異が見出される週齢差(4週齢および6ヶ月以降)および種差のあるマウスを用いて、プロポリスのインフルエンザウイルス感染症に対する改善効果を検討したが、感染に伴う経時的な病態変化(体重の増減、生存率)については大きな影響が見られなかった。これらの結果から、インフルエンザウィルス感染症に対して、ウイルス増殖抑制作用のみならず、免疫賦活作用から改善効果が期待できるプロポリスの発見とその有効性を見出した。これらは、プロポリスの代替医療に利用可能な新たな有効性と用途を見出すものとなった。動物モデルでのこれら2つのプロポリスのウイルス感染に対する改善効果は明らかに認められなかったものの、免疫系の関与が考慮されにくい致死系モデルでの結果を一部示唆した。プロポリスは、諸外国ではその多様な生理活性から、すでに代替医療素材として使用されている医薬品である一方、国内ではその科学的知見が低いことから健康食品としての使用に留まっている。著者はこれまでに、プロポリスがインフルエンザウイルス感染症に対して有効性な治療効果を持つことをマウス感染モデルを用いて見出した。本研究では、プロポリスのウイルス感染症に対するさらなる有用性を作用機序も併せて動物レベルにて明らかにし、プロポリスが代替医療素材として利用可能な食品であることを明らかにしていくものである。平成20年度までに、数種のプロポリスのうち、直接抗ウイルス作用を有するものの他、マウス脾細胞を用いた実験から免疫賦活作用を有するものを見出した。これらプロポリスを用い、週齢(4週齢および6週以降)および種差の異なるマウスに経口投与したところ、それら効果に差が見られた。特に高齢のマウスでは、免疫賦活作用を有するプロポリスの投与により、脾細胞の増殖、Th1細胞に関わるサイトカイン産生促進、また、CTL活性の増強が見られ、インフルエンザウイルス感染症の重症化が軽減。ていることがわかった。さらに、これらプロポリスにはヘルペスウイルスに対しても抗ウイルス作用を有することを明らかにした。特に免疫賦活作用を有するプロポリスの投与は、ヘルペスウイルスの増殖抑制に関わるIFN-γを増加することによって抗ウイルス作用を示していることがわかった。以上から、プロポリスが一部のウイルス感染症に対して治療効果を有することがわかり、代替医療素材として利用可能であることを示した。異なる週齢層のマウスを用いて評価したことからも、プロポリスの幅広い有用性と適正使用についての評価の一助となったと考える。
高解像度３次元血管壁ＭＲＩによる頭蓋内動脈硬化性・解離性病変の無侵襲診断法の確立

独自に開発した高解像度3次元血管壁MRIを用い、頭蓋内動脈壁病変の検出法の確立を試みた。中大脳動脈領域の急性期非心原性脳梗塞では、ほぼ全例で中大脳動脈にプラークと考えられる壁肥厚を認めた。プラーク信号は責任血管やアテローム血栓性梗塞において高値を呈し、脆弱プラークを示唆していると考えられた。急性期脳動脈解離では、従来の撮像法に比し解離の存在診断・質的診断を正確かつ短時間に行うことが可能であった。本手法は頭蓋内動脈壁病変の無侵襲診断法として有効であり、病型鑑別や予後予測に寄与すると考えられた。1.独自に開発したT1強調3次元撮像法を用い、中大脳動脈領域の非心原性急性期脳梗塞患者22名を対象に、1.5T MRIによる3次元血管壁イメージングおよびMR血管造影(MRA)を撮像した。MRAでは1例のみで責任血管に有意狭窄を認めたが、血管壁イメージングでは21例においてプラークと考えられる三日月型・全周性の壁肥厚を認めた。プラーク信号の白質信号に対するコントラスト比は、責任血管(中央値50.0%)においては、健側血管のプラーク(中央値44.9%)と比較して有意に高信号を呈しており(P=0.02, Wilcoxon test)、脆弱プラーク(脂質・出血主体)を示唆していると考えられた。一方で、プラーク形状やMRAの狭窄率には左右差を認めなかった。本成果によって、アテローム血栓性梗塞や分枝粥腫型梗塞の責任病変となりうる頭蓋内動脈硬化性病変の質的診断が脳卒中イベントの予測に有望であることが示唆された。2.急性期脳動脈解離疑い患者12名を対象に、1.5T MRIによる3次元血管壁イメージング、および従来の推奨撮像法(MRA, BPAS,造影3D-T1強調画像)を経時的に撮像した。3次元血管壁イメージングは従来の撮像法に比し解離の存在診断・質的診断を正確かつ短時間に行うことが可能であった。さらに、壁内血腫の信号変化を検出することも可能であった。本成果によって、本手法が脳動脈解離の診断法・経過観察法として有効であることが明らかになった。3.上記で用いた3次元血管壁イメージング撮像法を3 Tesla装置に移植し、最適化を行った。1.独自に開発したT1強調3次元撮像法を用い、中大脳動脈領域の非心原性急性期脳梗塞患者40名を対象に、1.5 Tesla MRIおよび3 Tesla MRIによる3次元血管壁イメージングおよびMR血管造影(MRA)を撮像した。1.5 Teslaによる検討では、MRAにて責任血管に有意狭窄を認めないにも関わらず、血管壁イメージングにてほぼ全例で両側中大脳動脈近位部(M1)にプラークと考えられる壁肥厚を認めた。プラークの正常白質に対するコントラスト比は、責任血管(中央値50.0%)において健側血管(中央値44.9%)と比し有意に高信号を呈しており(p=0.02, Wilcoxon test)、脆弱プラーク(脂質・出血主体)を示唆していると考えられた。3 Teslaによる検討でも同様の傾向を認め(患側52.8%,健側42.6%, p=0.001,Wilcoxontest)、更にアテローム血栓性脳梗塞においてラクナ梗塞に比し有意に高信号を呈していた(p=0.02, Mann-Whitney test)。プラークの造影効果は患側・健側ともに認められ、脆弱プラークの指標としては不十分と考えられた。本成果によって、非心原性脳梗塞の責任病変となりうる頭蓋内動脈硬化性病変の質的診断が脳卒中イベントや病型の予測に有望であることが示唆された。2.急性期脳動脈解離疑い患者16例を対象に、1.5 Tesla MRIによる3次元血管壁イメージング、および従来の推奨撮像法(MRA, BPAS, T1強調画像)を経時的に撮像した。1.独自に開発した3次元血管壁イメージング法(flow-sensitized T1-weighted variable flip-angle 3D fast spin-echo)を用いた頭蓋内血管壁の信号強度の定量評価法を考案した。本成果によって、動脈硬化性プラークや動脈解離の客観的質的診断が可能となった。

2.非心原性急性期脳梗塞患者18名を対象に、1.5T MRIによる3次元血管壁イメージングおよびMR血管造影(MRA)を撮像した。MRAでは1例のみで梗塞の責任血管に有意狭窄を認めたが、血管壁イメージングでは17例においてプラークと考えられる三日月型・全周性の壁肥厚を認めた。責任血管のプラークは、対照血管のプラークと比較して有意に高信号を呈しており、脆弱プラーク(脂質・出血主体)を示唆していると考えられた。本成果によって、アテローム血栓性梗塞や分枝粥腫型梗塞の責任病変の直接評価が可能であることが明らかとなるとともに、高信号を呈する脆弱プラークが脳卒中イベントの危険因子となりうることが示唆された。3.急性期脳動脈解離疑い患者6名を対象に、1.5T MRIによる3次元血管壁イメージング、MRA,造影3D-gradient echo, basiparallel anatomical scanを経時的に撮像した。3次元血管壁イメージングは他の撮像法に比し解離の存在および範囲を正確に特定することが可能であった。解離腔(壁内血腫)の信号は発症2日以内は中等度信号、3日以降は高信号を呈する傾向にあった。本成果によって、本手法が脳動脈解離の診断法および経過観察法として有望であることが明らかになった。1.共同開発先の企業(米国本社)の研究契約方針変更に伴い独自の3次元血管壁イメージング用シークエンスが使用不能となっていたが、契約更新が無事終了し、平成24年5月から使用が可能となった。2.対象患者のMRI検査を追加施行して対象者数をさらに増やし、脳梗塞に関する英文論文を作成して国際雑誌に投稿した。3.東日本大震災の影響で稼働不能となった研究用3 Tesla MRI装置に代わり、附属病院に臨床用3 Tesla装置が稼働を開始したため、3次元血管壁イメージング用シークエンスの移植および最適化を行った。7 Tesla MRIへの移植も試みたが、装置のバージョンアップが必要であることが明らかとなった。1.企業と共同開発した独自の3次元血管壁イメージング用シークエンス(1.5 Tesla MRI用)が、企業(米国本社)の共同研究契約方針の変更に伴い、平成23年10月から平成24年3月まで使用不能となった。2.東日本大震災の影響で、3 Tesla MRIがに故障し復旧不可能となり、7 Tesla MRIの運用にも支障をきたしたため、3次元血管壁イメージング用シークエンスの移植・最適化が困難となった。1.脳動脈解離の成果をまとめた英文論文を速やかに完成させ、国際雑誌に投稿する。3. 7 Tesla MRIのRF送信系のバージョンアップが進行しており、調整後速やかに3 Teslaで最適化した専用シークエンスをさらに改良・最適化したものを移植するとともに、非心原性急性期脳梗塞患者のMRI撮像を開始する。1.初年度の成果をまとめた英文論文を速やかに完成させ、国際雑誌に投稿する。2.企業との契約更新が3月末に終了し、付属病院の新3 Tesla MRI装置が5月より稼働を開始するため、速やかに専用シークエンスを移植・最適化するとともに、非心原性急性期脳梗塞患者のMRI撮像を開始する。3. 7 Tesla MRIの順調稼働が可能となったため、3 Teslaで最適化した専用シークエンスをさらに改良・最適化したものを移植するとともに、非心原性急性期脳梗塞患者のMRI撮像を開始する。4.患者撮像および画像解析を迅速に進めるため、新たに若手医師、若手医用工学研究者を研究協力者に加える。1.画像データ・解析データの整理・保存用HDDおよびデータ処理用ソフトウエアを購入する。2.論文の英文校閲代として使用する。3.国内学会発表の旅費として使用する。
パリトキシンによるナトリウムポンプのチャネル化機構の構造生物学

パリトキシン(PTX)はナトリウムポンプの能動輸送を阻害し、チャネル化する毒物である。その作用機序を明らかにするために、PTXと結合したナトリウムポンプの構造解析に取り組んでいる。E2P状態でPTXと思われるナトリウムポンプの結晶構造について、既に低分解能の回折データを得ていた。結合したPTXの構造の全容解明を目指して、昨年度に引き続き、1E2P状態の高分解能データの収集、2重原子を用いた実験位相の決定による構造決定、3異なる状態でのPTX複合体の結晶構造解析に取り組んだ。1については結晶化条件の最適化の他に、出来た結晶の脱水処理条件の最適化を行った。特に脱水処理についてはこれまでも様々な方法で試みていたが、いずれもうまくいかず困難であったが、今回、エチレングリコールで脱水処理後に高濃度PEGでさらに脱水処理という二段階で行ったところ、ようやく分解能3Åを得られるようになり、より結合したPTXの構造を解像できるようになった。2について、これまでに4種類の重原子置換体結晶のデータ収集に成功したが、実験位相の決定には至っていなかった。その原因として、結晶化に用いている塩濃度が高すぎて、タンパク質に重原子が十分結合できないと考えられたため、結晶中の塩濃度を下げたところ、複数の重原子置換体を調製することができた。現在、その実験位相の決定を試みている。3について昨年度、大きな成果であったE1.nNa+状態の結晶化についてはPTX非結合状態でも十分大きな学術的意義があるため、本課題から切り離して別課題として取り組んでいる。その他に、既に結晶化条件が決まっているE2.2K+.MgF状態やE1.AlF.ADP.3Na+状態について、パリトキシンとの共結晶化を試みたが、今のところ、PTXと結合した構造は得られていない。パリトキシンはナトリウムポンプの能動輸送を阻害し、チャネル化する海産毒物である。その作用機序を明らかにするために、パリトキシンと結合したナトリウムポンプの構造解析に取り組んでいる。逆反応から得たE2P状態でパリトキシン(PTX)と結合したナトリウムポンプの結晶構造解析について、既に低分解能の回折データを得ていた。平成28年度では結合したパリトキシンの構造の全容解明を目指して、1高分解能データの収集、2パリトキシンと結合していないE2P状態の結晶化及び構造解析、3重原子を用いた実験位相の決定による構造解析、4E2P状態とは異なる状態でのパリトキシン複合体の結晶構造解析に取り組んだ。1について結晶化条件の最適化を継続して行い、わずかな改善はみられるものの、3 Åを超える回折データの収集には至っていない。2については結晶化に成功し、同程度の分解能を得ることができた。Fo(PTX-bound) - Fo(PTX-unbound)電子密度マップの結果、PTX結合に伴うNa+ポンプの構造変化が明瞭になり、PTXと思われる電子密度マップが確認できた。現在、パリトキシンの部分的なモデリングに成功している。3については重原子置換体の調製に困難を極めたが、これまでに4種類の重原子置換体結晶のデータ収集に成功した。4について、いくつかの状態との複合体の結晶化を目指していたところ、当初、困難と予想された、より学術的に重要なNa+結合状態の結晶化と低分解能での構造決定に成功した。当初の計画では28年度中に逆反応から得たE2P状態でPTXと結合したナトリウムポンプの結晶構造の決定を目指していたが、上記のように結合したPTXの構造全体の解明には至っていない。その大きな原因は、蛋白質試料を供給してくれていたデンマークAarhous大学のBente Vilsen教授らで実験設備が故障し、また技術職員の入れ替えで不慣れな試料調製により28年度前半は試料の供給が停止してしまい、実験ができなかったことである。現在では安定的に試料を供給してもらっており、当初の計画にはまだ追い付いていないものの、実験自体は順調に進んでいる。パリトキシンはナトリウムポンプの能動輸送を阻害し、チャネル化する毒物である。結合したパリトキシンの構造の全容解明を目指して、昨年度に引き続き、1E2P状態の高分解能データの収集、2重原子を用いた実験位相の決定による構造決定、3異なる状態でのパリトキシン複合体の結晶構造解析に取り組んだ。1について結晶化条件の最適化を継続して行った。塩の種類をMgCl2からNaCl2に変えたことにより、これまでとは異なる結晶格子を持つ結晶が得られたが、3 Åを超える回折データの収集には至っていない。2これまでに4種類の重原子置換体結晶のデータ収集に成功したが、実験位相の決定には至っていない。その原因は重原子の占有率が低く、十分な重原子シグナルが得られていないためと考えられる。3について昨年度、パリトキシン存在下で新たにE1・nNa+状態の結晶化に成功した。当初、パリトキシンとの複合体を念頭に置いて開始したものだが、E1・nNa+状態は輸送機構を考える上で極めて重要な状態であることから、パリトキシン非存在下でも結晶化を試みた。

その結果、同様にE1・nNa+状態の結晶が得られ、結晶化条件の最適化により分解能を大幅に向上することができた。パリトキシンと結合したE2P状態の結晶構造解析については結晶性の改善が見られず、また重原子の結合も貧弱であるために、結合したパリトキシンの全容を明らかにできず、やや遅れている。一方、反応機構を考える上でより学術的に価値の高いE1・nNa+状態と考えられる結晶が得られ、想定以上に大幅な分解能の向上に成功した。また、高濃度のNa存在下でE2P状態の結晶化に成功した。これはE2Pより1つ前の中間状態E2P・nNa+の構造である可能性があり、パリトキシン結合のみならず、能動輸送機構の理解に大きく役立つものである。パリトキシン(PTX)はナトリウムポンプの能動輸送を阻害し、チャネル化する毒物である。その作用機序を明らかにするために、PTXと結合したナトリウムポンプの構造解析に取り組んでいる。E2P状態でPTXと思われるナトリウムポンプの結晶構造について、既に低分解能の回折データを得ていた。結合したPTXの構造の全容解明を目指して、昨年度に引き続き、1E2P状態の高分解能データの収集、2重原子を用いた実験位相の決定による構造決定、3異なる状態でのPTX複合体の結晶構造解析に取り組んだ。1については結晶化条件の最適化の他に、出来た結晶の脱水処理条件の最適化を行った。特に脱水処理についてはこれまでも様々な方法で試みていたが、いずれもうまくいかず困難であったが、今回、エチレングリコールで脱水処理後に高濃度PEGでさらに脱水処理という二段階で行ったところ、ようやく分解能3Åを得られるようになり、より結合したPTXの構造を解像できるようになった。2について、これまでに4種類の重原子置換体結晶のデータ収集に成功したが、実験位相の決定には至っていなかった。その原因として、結晶化に用いている塩濃度が高すぎて、タンパク質に重原子が十分結合できないと考えられたため、結晶中の塩濃度を下げたところ、複数の重原子置換体を調製することができた。現在、その実験位相の決定を試みている。3について昨年度、大きな成果であったE1.nNa+状態の結晶化についてはPTX非結合状態でも十分大きな学術的意義があるため、本課題から切り離して別課題として取り組んでいる。その他に、既に結晶化条件が決まっているE2.2K+.MgF状態やE1.AlF.ADP.3Na+状態について、パリトキシンとの共結晶化を試みたが、今のところ、PTXと結合した構造は得られていない。引き続き、3 Åを超える分解能が得られるように結晶化条件の最適化に取り組むと同時に、3で得られている重原子置換体のデータを解析、また2で得られたEP単独状態との構造比較からPTX全体の構造決定を目指す。また、4で得られたNa+結合状態の結晶化について、PTXと結合したものは勿論だが、単独状態でも学術的価値が非常に高いため、それらの結晶化条件の最適化と構造決定にも同時に取り組んでいく。パリトキシンと結合したE2P状態の結晶構造解析については結晶化に用いている高塩濃度が重原子結合の障害になっていることが予備実験から明らかになった。そこで、重原子ソークする際の塩濃度を下げることで、十分な重原子シグナルを得らえるようにし、結合したパリトキシンの全容を明らかにする。
肝癌に対するビーズTACEにおけるIVR手技の標準化を目指した基礎研究

In vivo実験において、ウサギVX2肝腫瘍モデルに対して、薬剤溶出性ビーズを用いた肝動脈化学塞栓療法(DEB-TACE)を行い、生体内薬物動態、ビーズの腫瘍内到達レベルおよび抗腫瘍効果を評価した。この結果、VX2腫瘍のような非多血性肝腫瘍においては、ビーズサイズが小さい方が腫瘍内部までビーズが到達しやすく、さらに、高い腫瘍内抗がん剤濃度が維持されることが示された。ビーズTACEにおける種々のビーズ注入条件(造影剤濃度、希釈倍率、注入速度を調整)が、注入後のビーズの挙動に与える影響を血管モデルを用いたex vivoの実験で評価する。カテーテル先端から排出されるビーズ粒子の個数を光ファイバーセンサーを用いたビーズカウンターで検出し凝集の程度を定量評価する。ビーズ粒子の凝集の程度は、シリンジ内、カテーテル内、カテーテルから排出後の3ヵ所において評価する。マイクロカテーテルは素材が透明で内腔が観察可能なものを使用する。カテーテルから排出後の評価は、今回我々が開発した粒子測定器を用いる。検出器には光ファイバーセンサーを使用し通過したビーズ粒子の検出を行う。その後、検出器で得た電気信号(アナログ)をADコンバーター用いてデジタル変換を行いPCに入力、専用解析ソフトを用いて一定の時間に通過したビーズ粒子の平均数値化を行う血管モデルを用いたビーズの挙動に関する研究は、現在進行中です。ex vivostudyにおいて、ビーズカウンターを用いてカテーテル先端から排出されるビーズ粒子の検出を行うため、ビーズカウンターの光ファイバーセンサーの精度を調整中です。また、血管モデルに関しては、生体により近い拍動性血管モデルを準備中です。血管モデルを用いたビーズの挙動に関する研究は、現在進行中です。まず、Ex vivo実験において、血管モデルを用いてビーズの挙動を評価した。この結果、エピルビシン(抗がん剤)を100-300μmのサイズのディーシービーズ(球状塞栓物質)に含侵させた薬剤溶出性ビーズ(Drug eluting beads)の場合、ヨード濃度が約200 mgI/mLのヨード造影剤と混和すれば、薬剤溶出性ビーズの浮遊や沈殿が抑制されて良好な拡散が得られることが示された。次に、In vivo実験において、ウサギVX2肝腫瘍モデルに対して、薬剤溶出性ビーズを用いた肝動脈化学塞栓療法(DEB-TACE)を行い、生体内薬物動態、ビーズの腫瘍内到達レベルおよび抗腫瘍効果を評価した。腫瘍の壊死率に関しても、ビーズサイズが小さい方が、高い腫瘍壊死が得られたが、統計学的な有意差は示されなかった。臨床においても、転移性肝癌のような非多血性肝腫瘍に対しては、サイズの小さいビーズを用いたDEB-TACEの方が、より効果的である可能性が示唆された。今後の研究の展開としては、さらに小さなサイズのビーズや、多血性肝腫瘍である肝細胞癌(HCC)モデルを用いたIn vivo実験において、ビーズの腫瘍内到達レベルおよび抗腫瘍効果を評価することが必要と思われる。ビーズ注入前のシリンジ内およびカテーテル通過中の凝集の程度が、カテーテル先端から排出後のビーズの挙動に反映されているかを評価する。また、カテーテルから排出後のビーズの凝集の程度を数値化することで、凝集を抑制するために最も最適な注入条件定量評価する。これらより、ビーズの到達深度の評価を行い、最適なビーズTACEの手技を確立させる。ex vivostudyは現在進行中であり、前年度においては予定していた経費が必要となりませんでした。実験データ解析のためのパソコンおよび周辺機器の購入、国際学会発表や英語論文作成のための経費などを計画しています。
環境教育による持続可能な環境配慮型への変容に関する研究

環境教育とは,個人が自らの行動の長期的影響を考慮し,理解を深め,合理的な行動を行うように変容することを想定しているものと考えられる.しかしながら,新古典派経済学では合理的な個人を仮定していることから,ここでの個人はそもそも個人の長期的影響を考慮した行動を行っており,環境教育を施すことによって厚生が上昇することも,行動を変容させることもないという論理的な矛盾が生じている.そこで,本研究では,実験経済学および行動経済学において議論されている「自制問題」に着目し,環境問題を現在偏重型選好により生ずる時間不一致性の問題として捉え,その際の環境教育の効果について検討した.環境教育とは,個人が自らの行動の長期的影響を考慮し,理解を深め,合理的な行動を行うように変容することを想定しているものと考えられる.しかしながら,新古典派経済学では合理的な個人を仮定していることから,ここでの個人はそもそも個人の長期的影響を考慮した行動を行っており,環境教育を施すことによって厚生が上昇することも,行動を変容させることもないという論理的な矛盾が生じている.そこで,本研究では,実験経済学および行動経済学において議論されている「自制問題」に着目し,環境問題を現在偏重型選好により生ずる時間不一致性の問題として捉え,その際の環境教育の効果について検討した.中央環境審議会が平成11年12月に取りまとめた答申「これからの環境教育・環境学習:持続可能な社会をめざして」においては,多様化・深刻化する環境問題に対応していくためには,国民一人ひとりが人間と環境との相互作用について理解と認識を深め,環境に配慮した生活・行動を行っていくことが必要であり,行政,事業者,民間団体,個人が連携を図りつつ,幼児から高齢者までのそれぞれの年齢層に対して,学校,地域,家庭,職場,野外活動等の多様な場において,環境教育・環境学習を総合的に推進することが重要であると指摘している.すなわち,ここで言う環境教育(Environmental Education)とは,教育を施すことによって,個人が自らの行動の長期的影響を考慮し,理解を深め,合理的な行動を行うように変容することを想定しているものと考えられる.本研究では,個人自らの最適計画を自ら変更してしまうような自己矛盾的行動を,動学的不整合性の問題として捉え,これまでの標準的な動学理論が仮定する割引率一定の指数関数型の割引関数ではなく,時間の減少関数である双曲線型割引関数に着目した意思決定モデルを構築する.一方,本研究では,自己矛盾的行動を回避する手段として,財・サービス消費のあり方に対する環境教育を考え,環境教育により動学的不整合が解消するという合理化への態度・行動変容モデルを構築した.さらに,本研究では,現在偏重型選好,すなわち,個人は遠い将来よりも近い将来を偏重する傾向を個人の主観的割引率に関するアンケート調査を実施することにより,定量的に明らかにする.この際,プロトコル分析を行うことにより,如何なる環境教育の方法およびあり方が有効であるかを検討する.このことにより,本研究で構築した理論モデルの適用可能性を吟味する.本研究では,現在偏重型選好,すなわち,個人は遠い将来よりも近い将来を偏重する傾向を個人の主観的割引率に関するアンケート調査を実施することにより,定量的に明らかにした.この際,プロトコル分析を行うことにより,如何なる環境教育の方法およびあり方が有効であるかを検討する.このことにより,本研究で構築した理論モデルの適用可能性を吟味することができた.(1)環境教育におけるプロトコル分析アンケートの調査結果データを用いて,環境教育と行動変容に関する心理プロセスモデルとの因果関係を明らかにするためにプロトコル分析を実施した.本研究におけるプロトコル分析の手順は,分析可能な文の選別,命題の抽出,行為命題の抽出の3段階からなる.特に,環境ボランティアの経験の有無や環境に関する情報の理解と認知が行動変容に与える影響が明らかになった.(2)調査結果の統計解析プロトコル分析結果に基づき,本研究において構築した環境教育による態度・行動変容を説明し得る態度・行動変容モデルの構造推定を行った.その結果,財・サービスの消費方程式の構造推定を行い,また,モデルの説明変数の感度分析および数カ所で実施した事例分析の計測結果を比較し,することにより,本研究の実証的有効性および頑強性を吟味した.過年度におけるプロトコル分析結果に基づき,本研究において構築した環境教育による態度・行動変容を説明し得る態度・行動変容モデルの構造推定を行った.すなわち,財・サービスの消費方程式の構造推定を行う.また,モデルの説明変数の感度分析および数カ所で実施した事例分析の計測結果を比較することにより,本研究の実証的有効性および頑強性を吟味した.(1)政策ミュレーションの実行構造推定により得られたパラメータを用いて,長期の政策シミュレーションを実施した.さらに,本研究の論点である環境教育が,如何に環境配慮型行動に変容することに寄与できるか,すなわち,環境教育により部分的に洗練された個人が如何に合理的個人に変容し得るかを検討することにより,効率的かつ有効な環境教育のあり方を示した.(2)政策シミュレーションの実行と政策提言これまでの研究成果についてヒアリングおよび学会発表を行い,本研究における態度・行動変容モデルを修正・拡張するために,更なる統計解析および政策シミュレーションをおこなった.さらに,その結果をとりまとめ,環境教育を実施する上において具備すべき点を具体的に提示し,我が国における環境政策への提言を行った.(3)成果の公表以上の,研究計画による成果をとりまとめ,専門誌,或いは,学会等で発表した.なお,その成果の一部については,次頁以降に示す.