hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
サステイナブル伝統薬を志向した薬用資源植物の多様性の解析

刺五加の成分eleuteroside Bは、in vitroで神経突起萎縮抑制作用、in vivoで物体認知障害改善作用を示した。この成分は五加皮にも同程度認められたことから、ともに認知症への応用が期待できる。石菖蒲では、β-asarone含量が低いAcorus gramineusのgenotypeを見出した。中国産白芍と日本産芍薬はPaeonia lactifloraの南方系統、中国産赤芍は同種の北方系統に由来することを遺伝的・成分的に明らかにし、また、両分類群に属し薬用にも使用可能な園芸品種を数種類見出した。以上、安全で有効な生薬資源の確保に繋がる知見を得た。1.学術調査中国の重慶、湖南、湖北、安徽、江蘇、浙江省でAcorus属、Codonopsis属、Rheum属、Paeonia属、Acanthopanax属植物の資源調査を行い、144点の植物と80点の生薬を収集した。2.遺伝的・成分化学的多様性(1)芍薬:Paeonia属3種、P.lactifloraの薬用または園芸品種、日本産芍薬、中国産の白芍と赤芍の核ITS領域の解析から、P.lactifloraにおける系統間の交配が示唆された。同種は分子系統樹で2大別され、同種由来の白芍と赤芍は異なるサブクレードに属した。8成分の定量結果から、P.veitchii由来の赤芍はPaeoniflorin、Pentagalloylglucose、Gallic acidの含量が高く、P.lactiflora由来の赤芍ではPaeoniflorin、Catechinが白芍より高含量で、Paeonolが検出された。日本産芍薬は遺伝的・成分的に白芍と近縁であった。また、園芸品種の解析結果から、薬用の白芍または赤芍として使用可能な品種を見出した。(2)石菖蒲:32箇所で採集したAcorus属植物及び生薬のITS領域の塩基配列の比較及び分子系統樹から、Acorus属3種に固有な配列及び産地による遺伝子型の違いを明らかにした。3.抗認知症作用(1)石菖蒲:Amyloid-βを処置して神経突起の萎縮を誘発させたラット大脳皮質神経細胞に、メタノールエキスの分配画分を同時処置した結果、エーテル、酢酸エチル及び水可溶画分に神経突起伸展作用が認められた。また、β-asarone、α-asarone及び水画分から単離した4化合物をAβと同時または後から処置した結果、2化合物が濃度依存的に神経突起伸展作用を示した。(2)五加皮類:Calpain酵素活性に対する直接的な阻害作用をcell-free系のアッセイにより検討した結果、紅毛五加皮メタノールエキスは0.1mg/mlで比較的強いcalpain抑制活性を示した。4.生活習慣病改善作用STZ誘発糖尿病モデルラットを用いた実験で、芍薬及び牡丹皮の水エキスは、血小板活性化抑制作用を示さなかった。1.学術調査インドネシアのジャワ島中部とマドゥラ島でCurcuma属植物、中国の湖北省と甘粛省でCodonopsis属植物の栽培状況を調査し、同時に関連生薬を収集した。2.遺伝的・成分化学的多様性(1)芍薬:Paeonia lactifloraの園芸用30品種について、品種及び栽培年数の違いによる8成分の含量の差異調べた。栽培年数による変動は大きいものの、paeoniflorin及びpentagalloylglucoseを一定量以上含む品種を、核ITS領域の解析結果と合わせ、白芍系、赤芍系について選択した。(2)石菖蒲:Acorus tatarinowiiとA.gramineusはITS領域の塩基配列において種内多型を示したが、分子系統樹において明らかに区別され、さらにA.tatarinowiiは2大別された。それらは産地(安徽・浙江省と重慶市)と関連した。(4)麻黄:Ephedra属植物において、葉緑体trnK遺伝子と核18SrRNA遺伝子の塩基配列は種の同定に、ITS領域め配列は種間交雑の判定に有用であることを示し、モンゴル国における8種各遺伝子型の分布と交雑の状況を明らかにした。(5)党参:Codonopsis属2種1変種のITS領域における種内多型と分類に重要な塩基配列を明らかにした。3.抗認知症作用Amyloid-β(25-35)処置により萎縮したラット大脳皮質神経細胞において神経突起伸展作用を示した石菖蒲の成分のうち、1化合物の構造を推定した。また、刺五加のAβ(25-35)誘発神経突起萎縮抑制作用成分として、Eleutheroside B、Eleutheroside E、isfraxidin及びisofraaxidin7-O-glucosideを同定した。4.生活習慣病改善作用ジペプチジルペプチダーゼー

4阻害を介した抗糖尿病作用を黄連解毒湯、温清飲等に見出したが、菊薬の関与は低いと考えられた。牡丹皮を配合する八味地黄丸と六味丸に耐糖性発現抑制効果を見出した。1.学術調査ベトナムのサパ、イエンバイ、レニン、フバイ、チャーミィなどでAcanthopanax属、Salacia属、Cinnamomum属植物、インドのタミルナドゥ州、アンドラプラデシュ州、カルナタカ州でsalacia属植物の野生資源状況と栽培状況を調査し、関連生薬を収集した。2.遺伝的・成分化学的多様性(1)有薬:Paeonia lactifloraの41品種の遺伝子解析を行い、赤芍系と白芍系を区別する核rDNAのITS領域のマーカー配列を明らかにした。また、Paeoniflorin、pentagalloylglucoseの含量が多く栽培年数による変動が比較的少ない品種を薬用芍薬候補として選択した。(2)石菖蒲:Acorus属の根茎及び中国市場品のGC分析により、β-asarone他、数成分が検出され、その含有パターンはITS領域の遺伝子型と関連があることを明らかにした。(3)五加皮類:成分的多様性解析に用いる18化合物を単離し、またHPLC分析の条件を決定した。(4)Curcuma属植物:葉緑体trnk(遺伝子の解析とクルクミノイド生合成酵素遺伝子イントロン領域の解析を合わせることで精度良く同属植物が分類できることを明らかにした。(5)Salacia属植物:インド・スリランカ・タイ産8alacia属3種及び関連生薬のITS領域及びtrnK-rps16spacer領域に各々5タイプの塩基配列を見出し、これらの遺伝子型から関連生薬が同定できることを明らかにした。3.抗認知症作用山薬の主成分Diosgeninの連続腹腔内投与によりアルツハイマー病モデル5XFADマウスの記憶障害が顕著に改善され、また脳内のアミロイド斑蓄積と神経原線維変化が有意に減少し、かつアミロイド斑に限局した軸索変性が抑制されることを明らかにした。4.生活習慣病改善作用SalaciareticukataとS.chinensisのエキスの抗糖尿病作用をジペプチジルペプチダーゼ4阻害活性で評価した結果、メタノールエキスとその酢酸エチル画分に軽度の活性が見られ、活性はS.reticulataがやや強かった。同様の実験で、サフラン、黄連、黄柏の水エキスに非常に強い活性を見出した。
ディーゼルエンジン用コモンレールの超高圧化を可能とする低合金TRIP鋼の開発

超高圧コモンレール用の材料として,3000気圧の使用に耐える焼入れ性を高めた0.2-0.4%C-1.5%Si-1.5%Mn-0.05%Nb-Cr-Mo-Ni-B系低合金TRIP型ベイニテイックフェライト鋼(TBF鋼)とTRIP型マルテンサイト鋼(TM鋼)を開発した.また,それらTRIP鋼の強靭性と切欠き疲労強度に対して,(1)最適な合金組成,(2)熱間鍛造熱処理による超微細粒化技術,(3)ベイニテイックフェライト/マルテンサイト(BF/M)組織率の同定法と残留オーステナイト(γ_R)への炭素の濃化機構,を提案した.超高圧コモンレール用の材料として,3000気圧の使用に耐える焼入れ性を高めた0.2-0.4%C-1.5%Si-1.5%Mn-0.05%Nb-Cr-Mo-Ni-B系低合金TRIP型ベイニテイックフェライト鋼(TBF鋼)とTRIP型マルテンサイト鋼(TM鋼)を開発した.また,それらTRIP鋼の強靭性と切欠き疲労強度に対して,(1)最適な合金組成,(2)熱間鍛造熱処理による超微細粒化技術,(3)ベイニテイックフェライト/マルテンサイト(BF/M)組織率の同定法と残留オーステナイト(γ_R)への炭素の濃化機構,を提案した.1.供試鋼の合金設計と製造2.新規の鍛造熱処理(AFT処理)による超微細粒化技術の検討0.5%Cr-0.2%Moの複合添加は最も優れた強靭性を示した.そのときの熱間鍛造ひずみは50%,オーステンパー温度は350-375°Cであった.3.BF/M組織率の同定法の確立とγ_Rへの炭素の濃化機構の検討Ms点以下でオーステンパー処理を施し,BF/M組織率を低くすることにより,変形強度は著しく増加したが,残留γ中の炭素濃度は低下した.BF/M組織率が0.50.9の範囲において,シャルピー衝撃吸収値は高く,衝撃遷移温度は低くなった.このとき,残留γの安定性が高いことが重要であった.4.新規TRIP鋼(TM鋼)の開発γ域焼鈍後室温まで急冷後,炭素濃化処理を施したとき,残留γ中の炭素濃度は著しく増加する現象を発見し,これをベースに新規の低合金TRIP鋼(TRIP型マルテンサイト鋼;TM鋼)を開発した.また,TM鋼の炭素濃化機構をTEM観察によるセメンタイト析出挙動より提案した.1.最適合金設計(1)母相組織をベイニティックフェライトとしたTBF鋼において,0.5Cr-0.2Moを複合添加したとき,高い切欠き疲労強度と低い切欠き感受性が達成できた.一方,母相組織を焼鈍マルテンサイトとしたTAM鋼においては,20ppmBまたは0.5%Crを添加したとき,TBF鋼より硬さは低い(低強度レベルである)が,切欠き感受性はさらに低くなった.(2)TBF鋼,TAM鋼いずれの場合も,コモンレールに適用する為の耐用応力以上(500700Mpa)の切欠き疲労強度を達成した.(3)強靭性に対しては,CrまたはBの添加は高い衝撃値と低い遷移温度をもたらせた.また,TBF鋼において,最適BF/M比が存在すること,及びその改善メカニズムを提案した.2.熱間鍛造熱処理(1)0.25C-1.5%Si-1.5%Mn-0.05%Nb-0-1.0%Cr-0-0.2%Mo-0.002%Bの化学組成を有するTBF鋼において,熱間鍛造+オーステンパー処理(熱間鍛造熱処理)は組織の微細化とγ_R特性の改善を達成し,結果的に靭性を改善した.(2)合金元素添加は焼入れ性を高める反面,γR特性を低下させる.このトレードオフの関係より,強靭性に及ぼす合金元素添加の効果は小さかった.1.最適合金設計(1)母相組織をベイニティックフェライトとしたTBF鋼において,1%Cr,1%Cr-0.2%Moまたは1%Cr-0.2%M01.5%Niを添加したとき,高い切欠き疲労強度と低い切欠き感受性が達成できた.B添加鋼では,残留オーステナイトが結晶粒界に粗大に存在するため,改善効果は小さかった.(2)Ms温度とMf温度の間の温度でオーステンパー処理を施したTBF鋼,及び世温度以下まで冷却し,パーティショニング処理を施したTM鋼の破壊靭性は,既存の高強度鋼の中で最も高い破壊靭性値を示すマルエージ鋼と同等の値を示した.この破壊靭性値は,既存の構造用低合金鋼の約2倍であった.(3)TBF鋼の切欠き疲労強度特性,破壊靭性に対して,ベイニティックフェライトとマルテンサイトの混合組織が有用であることを見出した.2.熱間鍛造熱処理(1)020-0.40C-1.5%Si-1.5%Mn-0.05%Nb-0.002%Bの化学組成を有する蜘において,熱間鍛造+焼き入れ+パーティションイング処理(熱間鍛造熱処理)により,組織の微細化とγ_R特性の改善を達成し,結果的に靭性を改善した.

(2)このTM鋼の強靭性は,昨年度に行ったTBF鋼の強靭性と同等,またはそれ以上であり,コモンレール以外への応用が期待できた.3.新規TM鋼の開発(1)Mf温度以下に冷却してTM鋼を製造する際,Ms温度直上まで急冷したのち,Ms温度とMf温度の間での冷却速度を遅くすることにより,残留オーステナイト体積率を高め,かつ炭素を濃化できることを見出した.(2)さらに,その後のパーティショニング処理により,さらに残留オーステナイトの安定性を高め,成形性,強靭性を高めることができることを見出した.
糖尿病における口腔粘膜の微小循環-血管反応性と白血球動態-

正常群における細動脈は、アセチルコリン投与前の血管径の平均31.9【+-】15.7μmに対し,アセチルコリン投与後の血管径の平均は35.4【+-】17.4μmと有意に拡張が認められた。細静脈においてはアセチルコリン投与前の血管径平均24.7【+-】7.1μmに対し,アセチルコリン投与後の血管径平均は25.3【+-】7.6μmと有意差は認めなかった。また細動脈においてアセチルコリン投与後約30秒で血管径は最大になり,約2分で元に戻った。好中球粘着数は、1000μm2当たりに粘着した好中球の数を測定した。細動脈においてfMLP投与前は0,投与後も0でした。細静脈においてはfMLP投与前が0,投与後が11【+-】3であった。糖尿病群における細動脈ではアセチルコリン投与前の血管径の平均41.3【+-】8.2μmに対し,アセチルコリン投与後の血管径の平均は42.3【+-】8.4μmと有意差は認められなかった。細静脈においてはアセチルコリン投与前の血管径平均31.6【+-】7.2μmに対し,アセチルコリン投与後の血管径平均は33.1【+-】7.6μmと有意差は認めなかった。糖尿病群の好中球粘着数は、細動脈においてfMLP投与前は0,投与後も0でした。細静脈においてはfMLP投与前が0,投与後が3【+-】3であった。実験には雄性ゴールデンハムスターを用いた。ハムスターの微小循環観察は,ペントバルビタール麻酔下に頬袋を口腔外に引き出して行う。頬袋は血管周囲の結合組織を剥離除去した後に,プラスチックチャンバーに固定した。観察にはシステム生体顕微鏡(オリンパスBX50-33)を用い40倍では血管構築,100倍では血管径の変化,400倍では血球や血管壁の観察をした。投与薬物はアセチルコリン,fMLPを選択し,血管径の変化を測定,好中球のローリング,粘着をモニター上で単位面積当たりの数をカウントして解析した。対照群の細動脈におけるアセチルコリン1μM投与前の血管径平均40.7±4.8に対し,投与後の血管径平均は45.8±8.1であり,有意な拡張が認められた(P<0.05)。細静脈におけるアセチルコリン1μM投与前の血管径27.7±7.1μmに対し,投与後の血管径は25.3±7.6μmであり,有意差は認められなかった。次に好中球についてfMLP200μM細動脈投与前ではローリングも観察することもなく,fMLP投与後はローリングをするのみで膠着はみられなかった。細静脈ではfMLP投与前ではローリングが観察でき,膠着もほとんどみられない。そしてfMLP投与後より膠着を始める。その後膠着をした好中球のほとんどは血管外へ出て,結合組織へ遊走した。糖尿病群の細動脈におけるアセチルコリン1μM投与前の血管径平均31.6±3.3μmに対し,投与後の血管径平均は31.6±3.3μmであり,有意差は認められなかった。細静脈におけるアセチルコリン1μM投与前の血管径41.3±8.3μmに対し,投与後の血管径は42.3±8.4μmであり,有意差は認められなかった。現在,落射蛍光装置(オリンパスBX-FLA)を用いてFITCアルブミンを投与し血管透過性,アクリジンオレンジを投与し白血球動態の観察を行っている。実験には優性ゴールデンハムスター(生後10週齢、体重120140g)を用い対照群と糖尿病群で比較した。観察部位は左側頬袋である。

ハムスターの微少循環観察は、ペントバルビタール麻酔下に頬袋を口腔外へ反転、引き出して行う。頬袋は血管周囲の結合織を剥離除去した後にプラスチックチャンバーに固定する。プラスチックチャンバー内に固定した頬袋は、37°CのTyrode液で5ml/分の速度で環流した。微少循環は、光学顕微鏡を用い、40倍拡大率、100倍拡大率、400倍拡大率で観察し、から-TVカメラで撮影、ビデオテープに録画した。計測はモニター上でビデオテープをを再生して行った。標本作成後30分放置し安定した後に行う。観察血管は細動脈と細静脈とした。投与薬物はアセチルコロン(オビソ-ト、第一)、好中級遊走因子であるformylmethionylleucylphenylalanine(ペプチド研究所、以下fMLP)を選択し、血管径の変化を微小循環画像解析装置(IM-CapiFlow)を用いて、好中京のローリング、粘着をモニター上で単位面積あたり(1000μm2)の数をカウントして解析した。アセチルコリンは、局所血管拡張作用、末梢血管拡張作用を観察することができる。ハムスターの頬袋微少循環標本の作製やその維持も比較的容易で、標本の厚みも薄く血管構築もさほど複雑でないため透過型光学顕微鏡を用いてかんさつするのに適している。また標本を作製する上でのストレスも加わり工夫が必要となってくる。今回は主に血管径の変化について観察を行ったが、400倍拡大率では好中球の1つ1つも観察できた。糖尿病ハムスターにおいては、血流の遅延、血管反応性の低下白血球の毛細血管での補足が観察された。
受容体による軸索がイダンス分子の提示と抑制:軸索誘導の新原理

軸索ガイダンス分子Netrinの受容体がNetrin分布に及ぼす影響をショウジョウバエを用いて解析した.誘引性受容体Frazzled/DCCがNetrinを軸索膜上に提示するのに対し,反撥性受容体Unc5はNetrin提示を抑制することを示し,抑制活性に必要なドメインを同定した.先行軸索が発現するUnc5は提示抑制活性を用いて後続軸索のためのガイダンス場を作っていた.軸索ガイダンス受容体の軸索誘導活性(誘引vs.反撥)とリガンド分布制御活性(提示vs.抑制)の機能相関を軸索誘導の新しい原理として提唱する.軸索ガイダンス分子Netrinの受容体がNetrin分布に及ぼす影響をショウジョウバエを用いて解析した.誘引性受容体Frazzled/DCCがNetrinを軸索膜上に提示するのに対し,反撥性受容体Unc5はNetrin提示を抑制することを示し,抑制活性に必要なドメインを同定した.先行軸索が発現するUnc5は提示抑制活性を用いて後続軸索のためのガイダンス場を作っていた.軸索ガイダンス受容体の軸索誘導活性(誘引vs.反撥)とリガンド分布制御活性(提示vs.抑制)の機能相関を軸索誘導の新しい原理として提唱する.ガイダンス分子の分布を規定する新しいメカニズムとして「受容体による提示と抑制」を解析するために,進化的に保存されたガイダンス分子であるNetrinの反発性受容体であるUnc5に着目し,ショウジョウバエ胚の中枢神経系を用いてUnc5のNetrinの提示抑制機能について解析した.この系ではNetrinの誘引性受容体であるFrazzledがNetrinを軸索表面に提示し,他の軸索に対するガイダンス情報を提供している.特定の神経細胞でのみNetrinが提示されている実験系を構築し,Unc5がFrazzledによるNetrin提示を抑制できる条件を探った結果,Unc5の提示抑制作用はFrazzled発現細胞において発揮される,つまり細胞自律的であることが明らかになった.また,Unc5は細胞内ドメインを持たないFrazzledによるNetrin提示も抑制することができることを見いだし,FrazzledとUnc5の間には既知の分子相互作用とは異なる新たな相互作用があることが判明した.この提示抑制作用の軸索ガイダンスにおける働きをしらべるために,Unc5を発現する複数のニューロンがNetrinを反撥因子として利用しながら同じ道筋をたどる系に着目した.このような軸索束においてFrazzledによるNetrinの提示を抑制するためにはUnc5の機能が必要であることを実証した.この系でのNetrin提示抑制の意義を調べるために,Unc5依存的にこの軸索束に添って走行するモデルニューロン系を構築した.神経回路を作るには,軸索ガイダンス分子が適切に分布することが必要である.本研究では,ガイダンス分子の分布を規定する新しいメカニズムとして「受容体による提示と抑制」という活性を進化的に保存されたガイダンス分子であるNetrinをモデルにして解析している.Netrinの誘引性受容体であるFrazzledはNetrinを軸索上に提示するのに対し,Netrinの反発性受容体であるUnc5はNetrinの提示を抑制することを見いだしている.今年度は,FrazzledとUnc5のNetrinに対する作用の違いの分子基盤をあきらかにすることを目指した.Unc5によるNetrin提示抑制活性は細胞自律的に発揮される.細胞内ドメインを欠くFrazzledによって提示されたNetrinもUnc5によって抑制されるため,Unc5が既知のFrazzled-Unc5の相互作用とは異なる様式でFrazzledの提示作用を抑制することが予想される.そこで,FrazzledとUnc5のキメラを利用して,強制発現実験によってNetrin提示抑制を引き起こす領域を解析した.その結果,Unc5特異的なNetrin提示抑制作用は細胞外ドメインによって担われていることが明らかになった.Unc5の細胞外ドメインにはNetrin結合に関与する2つのIgモチーフのほかに2つのTSPモチーフを含んでいる.Netrin提示抑制に必要なモチーフを同定するために,特定のモチーフのみを欠くタンパク質を作成した神経回路を作るには,軸索ガイダンス分子が適切に分布することが必要である.本研究では,ガイダンス分子の分布を規定する新しいメカニズムとして「受容体による提示と抑制」を検討した.ガイダンス分子の代表例として進化的に保存されたガイダンス分子であるNetrinを取り上げ,ショウジョウバエを用いてNetrinの誘引性受容体であるFrazzledと反撥性受容体であるUnc5がNetrin分布に及ぼす影響を解析した.その結果,FrazzledがNetrinを軸索上に提示するのに対し,Unc5はNetrinの提示を抑制することを見いだした.Unc5特異的なNetrin提示抑制作用はUnc5の細胞外ドメインによって担われていることがわかり,Unc5は既知のFrazzled-Unc5の相互作用とは異なる様式でFrazzledの提示作用を抑制することが明らかになった.ドメインマッピング実験により,Netrin提示抑制に必要なモチーフとして細胞外ドメインのIgモチーフを同定した.さらに,Unc5によるNetrin提示抑制の生理的意義を解析するために,unc5変異系統を用いてUnc5が存在しないときに他の軸索のガイダンスにどのような細胞非自律的な影響が出るか調べた.ショウジョウバエ胚中枢神経系では,Unc5は中枢から末梢への出口の一つであるSNtと呼ばれる軸索束で高発現している.unc5変異系統ではSNt領域にNetrinの異所的局在が生じ,この状況下では,Unc5を発現する後続軸索が正常にSNt経路を伸長できないことを見いだした.
樹状細胞におけるIL-6依存性MHCcllassII分子の発現制御

抗原提示細胞内においてMHCクラスII分子の制御は、自然免疫のみならず獲得性免疫系の賦活化にとって重要である。本研究で、インターロイキン6(IL-6)とそのシグナル伝達による樹状細胞のMHCクラスII分子(MHCII)発現について検討した。C57BL/6マウス骨髄由来DC(BMDC)をIL-6で処理すると、DC中のMHCII α,β-dimerの総量が処理時間依存的に減少した。そこでIL-6のレセプターであるgp130分子内のチロシン残基をフェニールアラニンに置換した変異gp130を発現するBMDCを用いたところFxxQ BMDCでは、MHCIIの減少は見られず、F759 BMDCでは、より強く減少した。これらのことからIL-6によるMHCII α,β-dimer量の減少にはgp130を介するSTAT3の関与が強く示唆された。さらにこれらの原因因子を同定するために、MHCII分子のプロセッシングと深い関係があるリソソームプロテアーゼ、cathepsin(cat.)に着目した。F759BMDCをIL-6で処理することでcat. B, Lの遺伝子レベルおよびcat. Lの蛋白レベルの増加を確認した。またin vitro系で酵素活性を測定したところ、cat. L, Sの活性が増加することを確認した。さらにcat.Sの遺伝子をレトロウイルス法により、BMDCに強制発現させたところ、細胞内MHCII分子の低下、LPS刺激による細胞表面でのMHCII発現増強を阻害した。以上の実験からIL-6がDCのプロテアーゼを賦活化する作用を持つこと、DC内のMHCII α,β-dimer量を減少させることが分かった。またDCをIL-6処理することでLPS刺激による細胞表面へのMHCIIの発現増強が阻害されることから、獲得性免疫系の賦活化に対してもIL-6は影響することが示唆された。抗原提示細胞内において外来抗原の断片化をともなうクラスII分子のプロセッシング機能の制御は、自然免疫のみならず獲得性免疫系の賦活化にとって重要である。本研究で、インターロイキン6(IL-6)とそのシグナル伝達による樹状細胞(DC)のMHCクラスII分子(MHCII)発現に及ぼす影響について検討した。C57BL/6マウス骨髄由来DC(BMDC)をIL-6で処理すると、DC中のMHCII α,β-dimerの総量が処理時間依存的に減少することを発見した。そこでIL-6のレセプターであるgp130を介するシグナル伝達経路の役割を明らかするために、gp130分子内のチロシン残基をフェニールアラニンに置換した変異gp130を発現するノックインマウスより調製したBMDCを用いたところFxxQ BMDCでは、MHCIIの減少は見られず、F759 BMDCでは、より強く減少した。これらのことからIL-6によるMHCII-α,β-dimer量の減少にはgp130を介するSTAT3の関与が強く示唆された。さらにこれらの原因因子を同定するために、MHCII分子のプロセッシングと深い関係があるリソソームプロテアーゼ、cathepsin (cat.)に着目した。以上の実験からIL-6がDCのリソソームプロテアーゼを賦活化する作用を持つこと、DC内のMHCIIα,β-dimer量を減少させることが分かった。一方、DCをIL-6処理することでLPS刺激による細胞表面へのMHCIIの発現増強が阻害されることから、獲得性免疫系の賦活化に対してもIL-6は影響することが示唆された。

またDCをIL-6処理することでLPS刺激による細胞表面へのMHCIIの発現増強が阻害されることから、獲得性免疫系の賦活化に対してもIL-6は影響することが示唆された。
水熱鉱化処理による有害排水の無害化処理と再資源化

本研究では難処理性排水の一つに数えられる有害有価オキソアニオン含有排水からの資源回収による無害化の達成を目指し、流通型装置を用いた水溶液中のホウ素の鉱物化について検討した。CaCl_2溶液と塩基性に調整したホウ素含有溶液を混合させながら流通、水熱処理を施すことで、鉱化剤であるCa(OH)_2を連続的に生成、供給することが可能であり、ホウ素含有溶液の連続的な無害化とホウ素の資源回収が可能であることが明らかとなった。ホウ素含有溶液に対して水熱鉱化処理を施した際の、鉱物生成速度について検討した。その結果、鉱化反応は数秒で完了し、反応速度論的な解析を行うことは不可能であった。しかし、この結果は水熱鉱化処理を工業利用するにあたって流通型の処理が可能であることを示している。そこで、擬似的に流通処理を可能とする反応装置を作成した。装置には、試料導入管と試料採取管および送液ポンプが接続されており、試料導入管には予熱器が装着されている。この予熱器を用い、反応容器に所定の温度に設定した試料溶液を導入すると同時に反応後の溶液を連続的に採取することで連続的な処理を行う。この反応装置内に鉱化剤として水酸化カルシウムを充填後、容器内温度を150°Cに設定し、150°Cに加熱した500ppmのホウ素含有溶液を導入、さらに導入速度と同じ流速で反応装置から試料溶液を採取した。この結果、反応装置から得られた試料溶液中のホウ素濃度は、導入した試料溶液中のホウ素濃度と比較して1/10程度に減少した。また、処理効率を向上させるために、ホウ素含有溶液に塩化カルシウムを添加後、同様の処理を施したところ、同体積の鉱化剤によって処理可能な溶液量が大幅に増加した。これは、ホウ素含有溶液に溶存するカルシウムイオンが反応容器内で鉱化剤である水酸化カルシウムを生成し、鉱化反応が連続的に起こるためである。以上の結果より、本水熱鉱化廃水処理は、生成した天然鉱物と処理溶液の水熱平衡下における分離回収を達成する事ができれば、非常に容易に連続処理が可能であり、工業利用への適用可能性が大幅に広がったといえる。水熱鉱化処理の汎用性を確かめるため、ホウフッ化物イオンあるいはテトラフルオロリン酸イオンを対イオンとして含有するイオン液体(慣用名(BMI)BF_4あるいは(BMI)PF_6)含有排水の無害化およびホウ素、りん、フッ素資源の回収について検討した。この結果、水熱鉱化処理は、上記のようなイオン液体に含まれる有害物質の回収にも有効であることが明らかとなった。また、TiO_2光触媒による有機成分の分解処理を組み合わせることにより、さらに効率的な水溶液の無害化処理が可能であった。また、水熱鉱化処理を工業利用するにあたって流通型処理の可能性について検討した。予熱器が装着された試料導入管2本と試料採取管および送液ポンプを接続した耐圧反応装置を用い、擬似流通水熱鉱化処理を行った。予熱器を用い、反応容器に所定の温度に設定した試料溶液および鉱化剤含有溶液を反応装置に導入すると同時に反応後の溶液を試料採取管より連続的に採取することで連続的な処理を行う。鉱化剤種、圧力、温度などの詳細な検討を行った結果、水蒸気圧下にてCaCl_2溶液を鉱化剤として導入し、塩基性に調整したホウ素含有溶液を反応容器内において混合しながら処理を行うことで、In-Situで鉱化剤であるCa(OH)_2を形成させ、効率的にホウ素鉱物化が可能であることを明らかにした。以上の結果より、本水熱鉱化廃水処理は、生成した天然鉱物と処理溶液の水熱平衡下における分離回収を達成する事ができれば、非常に容易に連続処理が可能であることがわかり、工業利用への適用可能性が大幅に広がったと考えている。
朝鮮語古語辞典作成のための基礎的研究

代表者は、日本語で解説され、さらに日韓の言語交流史の情報を含んだ朝鮮語古語辞典を編纂することを企図し、そのための基礎的研究を行った。その成果は次の通りである。1)中期朝鮮語(15-16世紀)の文献から基礎語彙と関連語(身体語、衣服語等)を選定し、基礎語彙の初出例文、日本語による解説を付して公刊した。2)近世朝鮮語の口語資料『捷解新語』の対訳日本語付の朝鮮語語彙索引を作成した。3)本研究にかかわる新たな言語資料を発掘した。この研究をとおして、古語辞典編纂に対する基礎固めができ、問題点を整理することができた。さらに、この成果を踏まえ、日本語韓国語の類似性について、韓国での国際学会で講演を行った。本研究は,朝鮮語古語辞典作成のための基礎的研究を行うことにある。そのため25年度の計画に基づき,次の3点の研究を実施した。なお,古語は全時代を網羅することはできないので,15世紀の中期語と17世紀の『捷解新語』の語彙を中心とした。1.基礎的古語(中期語)の選定とその用例に基づく注釈と分析:諸種の基礎語彙表を検討し,「言語調査票2000年版」をもとに,全体として300語程度を抽出した。本年度は,その中から人体基礎語50語,数詞10語を取り上げ,中期語の原典から直接用例を抜出し,意味の分析と注釈および翻訳を行った。引用文献は,原則的に初出文献とし,用例は,すべて各文献に当たり適切な例を選んだ。この結果は,今後26年度に,他の関連人体語その他と合わせ,体系的に整理したうえで発表する。2.『捷解新語原刊本』と『倭語類解』の朝鮮語語彙集の作成:『捷解新語原刊本』については,文法的形態素も含んだ語彙索引はすでにほぼ全体が完成しているが,今回,各朝鮮語に対訳の日本語を添える必要があると判断し,その確認作業を行った。今年度は,その作業に終始し,約三分の一(約4千項目程度)の確認作業を終了した。同時に,朝鮮語形態素の丁数と対訳語の選定と入力を行っている。本年度は,約12割の実績であった。『倭語類解』については,朝鮮語本文の電子化はできており,その掲出語の選定を行っている。『捷解新語』を中心とする朝鮮王朝時代の日本語の研究と教育については,本研究の成果を含めてシンポジウムで発表した。3.未調査の言語交流資料の発掘:本年度は,東京都立中央図書館の中山久四郎旧蔵資料中の朝鮮語関係資料の調査を行った。その結果,『日観考要』,『草梁話集』,『朝鮮紀事』,『征韓録』,『御代々朝鮮人来朝』などの資料を発掘することができ,江戸時代の仮名書き朝鮮語(例:機張クチャン,京道ケントウ,大峙ハンタイなど)を蒐集することができた。本研究は,朝鮮語古語辞典作成のための基礎的研究を行うことにあるが,本年度は,26年度の計画および25年度積み残しの継続作業にもとづき,次の3点の研究を実施した。1)中期語基礎語彙集の作成:前年度選定した基礎語彙から身体語86語を取り上げ,中期語原典からの直接引用例(初出例を含む)を挙げたうえ,注釈と日本語訳の作業を行った。この作業は25年度からの継続であるが,今年度は,とくに各語の関連語を蒐集,網羅することに集中して作業を行ない,関連語204語を蒐集した。さらに16世紀の「日本資料」から語彙収集した結果の用例も加えて,身体語全体の基礎語彙集をまとめることができた。この研究結果は,岡山大学大学院社会文化研究科紀要39号に掲載した。2)「日本・朝鮮資料」による近世語語彙集の作成:『捷解新語』(原刊本)については,前年度に行った確認作業(訳語確定等)をもとに語彙集作成のための入力作業を行い,ほぼ5割程度進行した。他の資料については選定作業の過程にある。3)未調査の言語交流資料の発掘:本年度は,前年度に引き続き,東京都立中央図書館の特殊文庫の調査を行い,一部に傍点を付した写本『訓蒙字会』(石峰系)を発見し,また近世語資料『啓蒙篇諺解』の調査を行った。また酒井家文庫所蔵の朝鮮関係資料の調査を行い,『朝鮮記』(大河内秀元)等に見える仮名書き朝鮮語(全羅テルラ;アヤン川;西生セツカ,サス;永川エグセン等)を蒐集した。本研究は,とくに次の3点を中心に研究を実施した。1)中期朝鮮語(15-16世紀)基礎語彙の記述、2)「日本・朝鮮資料」による対訳付き近世朝鮮語語彙集の作成、3)言語交流資料の調査・発掘1)については、25年度に予備選定作業、26年度に身体語および関連語をまとめ公刊した。最終年度には、衣服に関する中期語の基礎語彙研究をまとめ公刊した。これは、衣服を表す基礎的語彙45語を選定し、それぞれに原典からの引用例文(初出例と確実な傍点を含む)、注釈および日本語訳を付した上で、網羅的に収集した関連語(117語)と訳を付し、さらに16世紀の「日本資料」からの用例も加えてまとめたものである。

以上の研究をとおして、古文献による基礎語選定と注釈のありかた、関連語の収集、日本語訳の問題等、古語辞典編纂の基礎となる成果と問題点を明らかにすることができた。2)については、近世語文献『捷解新語』(原刊)の語彙を中心に、対訳日本語付の全実質語索引を作成してきた。対訳日本語の確定作業が難航したことで、全体のほぼ8割程度は作業が終わったものの完成には至らなかった。しかし、本研究の意義の一つ「日朝言語交渉史を取り込んだ」辞典のための基礎固めはある程度達成できた。3)については、25、26年度は、東京都立中央図書館、酒井家文庫等で新たな日朝言語交渉資料、中期語資料を調査した。最終年度には、蓬左文庫、長浜高月観音の里歴史民俗資料館等で調査を行った。前者では『内訓』、『救急方』等、後者では、雨森芳洲関係の資料『全一道人』、『吏文大師』を調査した。とくに『吏文大師』は、これまで調査されたことがないが、言語史研究に貢献できる資料と見られる。以上の研究成果を踏まえ、最終年度には、韓国の国際学会で、韓国語と日本語の語彙・語法の類似性について研究発表を行い、両言語には類似とともに大きい乖離性があることを指摘した。代表者は、日本語で解説され、さらに日韓の言語交流史の情報を含んだ朝鮮語古語辞典を編纂することを企図し、そのための基礎的研究を行った。その成果は次の通りである。1)中期朝鮮語(15-16世紀)の文献から基礎語彙と関連語(身体語、衣服語等)を選定し、基礎語彙の初出例文、日本語による解説を付して公刊した。2)近世朝鮮語の口語資料『捷解新語』の対訳日本語付の朝鮮語語彙索引を作成した。3)本研究にかかわる新たな言語資料を発掘した。この研究をとおして、古語辞典編纂に対する基礎固めができ、問題点を整理することができた。さらに、この成果を踏まえ、日本語韓国語の類似性について、韓国での国際学会で講演を行った。「研究の目的」は,3つあり,1.古語の選定とその用例に基づく注釈と分析,2.『捷解新語』原刊本と『倭語類解』の朝鮮語語彙集の作成,3.未調査の言語交流資料の発掘,である。1については,本年度から基礎語彙だけで500語程度としたが,基礎語彙集をまとめるにあたり,前年度の積み残し作業を処理しつつ,各用例の分析,注釈などに非常な労力がかかり,身体語86語と関連語200語余りの分析とまとめに終わった。これは,前年度にも書いたが,中期朝鮮語文献の索引が不備である点も研究の進捗を妨げている。2については,『捷解新語原刊本』の入力が遅れており,語彙索引集の半分しかできなかった。見出し語のあり方はほぼ確立したものの,カードからの転写を手作業でしている点と語彙の考証に手間取っていることが遅延の原因である。『倭語類解』については,解釈と分析に予想外に時間がかかっている。3については,本年度は,東京都立中央図書館と酒井家文庫を行ったが,調査の範囲や時間の関係で,豊富な成果が得られたとは言えない。以上により,全体的な達成度としては,若干遅れているものと自己評価した。東アジアの諸言語に関する歴史言語学的研究:日本・朝鮮資料による朝鮮語史・日本語史研究;漢字音の研究本研究における今後の推進課題としては次のようなものがある。1.最終年度として,数を絞り基礎語500語程度(拡張スワデシュのようなもの)のものをまとめるか,カテゴリー(例えば衣食住)を絞って基礎語彙をまとめるかの2方向があるが,語彙の体系性を考えると,次年度は,後者の方向で課題を進めることにしたい。2.『捷解新語』の索引については,これまで,文法的,機能的な要素も含めて作業を行ってきたが,このような要素は膨大な数があり,作業の進捗を遅らす要因となっている。今後は実質語に絞り,まとめていく方針とする(1の作業での中期語語彙が実質語に限定している点とも合うであろう)。
地域高齢者におけるfear of falling 測定尺度の開発

地域高齢者の転倒恐怖感(fearoffalling)をストレス-コーピングの視点から測定するために、二段階の分析過程を経て、構成概念の検討をした。分析結果から転倒に関する経験は単独ではなく他の要因との複合体として、転倒に対する脅威としての認識(転倒脅威)に影響を及ぼすと考えられた。また、転倒脅威に続いて形成される転倒に対する対処方略は情動焦点型と問題解決型の二つが存在し、自己効力感が関与していると考えられた。これらの分析結果をもとにfearoffallingの仮説モデルを修正した。本研究は地域高齢者の心理社会的課題が影響しているとされる転倒恐怖感(fear of falling)に焦点をあて、高齢者の転倒対策を支援者側の視点ではなく当事者である高齢者側の視点に立った介入方法を検討するためにfear of fallingを測定する尺度を開発することを目的としている。尺度を開発するにあたって平成2223年度はLazarusの「認知・動機づけ・関係理論」を参考にしてストレス・コーピングの視点からfear of fallingの概念整理を行った。まず平成22年度はLazarus理論を参考にして作成した仮説モデルのうちfear of fallingを導く転倒についてのネガティブな認識(以下;転倒脅威)に関して先行調査データを用いて関連要因を検討した。その結果、老性自覚に加えてつまずき経験や転倒に関する教育的な機会が転倒脅威に関連するという結果を得た。また高齢者の転倒に関する感情は脅威の対象が明確である恐怖感と抑うつに近い漠然とした不安感に大別できる可能性があることが示唆された。これらの結果からfear of fallingという現象は単一の概念ではなく、高齢者個々の経験による認識の違いが複雑に影響した概念であると考えられた。したがって転倒対策を視野にいれてfear of fallingを測定する尺度を作成するにあたっては個々の要因の相互関係や恐怖感が生じるプロセスに着目する必要があると考えられた。そこで尺度を開発する前段階として質問紙調査を行う前に平成23年度は転倒脅威から対処行動に至るプロセスを検討することを目的に転倒予防教室受講者に対するインタビュー調査を実施することとしインタビューガイドの作成、倫理審査申請、調査協力機関の確保を行った。平成24年度はインタビュー調査を実施し、分析結果をふまえて尺度作成に向けた質問紙調査の準備、実施をしていく予定である。本研究は地域高齢者の心理社会的課題が影響しているとされる転倒恐怖感(fear of falling)に焦点をあて、ストレス・コーピングの視点からfear of fallingを測定する尺度を開発することを目的としている。平成23年度は、前年度に行った転倒に対する脅威としての認知評価(転倒脅威)とfear of fallingに関する概念整理の結果から、fear of fallingは単一の概念ではなく、高齢者個々の認識の違いが複雑に影響したプロセス全体を示す概念であるという結論を導いた。このためfear of fallingをストレス・コーピングの視点から測定するためには、転倒脅威だけでなく、転倒に対する対処方略も含めた包括的なモデルを作成し、測定可能な変数を明らかにすることが必要であると考えた。このため当初の計画を修正し、fear of fallingを単一概念として測定する尺度を開発するのではなく、fear of fallingをめぐる要因間の相互関係や転倒脅威から対処方略を導くプロセスを想定したモデルを作成することを目的とした。そこで、fear of fallingにまつわる詳細な文脈を探るために老人クラブに所属する地域在住高齢者10名を対象に転倒に対する脅威と対処方略に関する半構造化面接を行った。その結果、すでに作成した転倒脅威尺度の項目内容には一定の妥当性があることを確認し、転倒に対して明確な恐怖感が存在していなくても脅威としての認識は存在し対処行動に至るということがわかった。また、転倒に対する対処方略の形成過程には自己効力感が影響していると考えられた。これらの結果をもとに当初の仮説モデルの修正を行った。今後はストレス・コーピングという視点からfear of fallingを解明していくために、転倒脅威と対処方略の関係性を定量的に検証していく予定である。24年度が最終年度であるため、記入しない。
急性肺傷害における肺組織幹細胞系細胞を用いた細胞治療開発への基礎研究

ラットの肺に対してトリプシン処理を長時間行い、生存した細胞を増殖させることで得られる培養細胞について、1CD29+CD90+の形質が維持され、骨分化能を有する、2タンパク分解酵素の阻害因子を発現している、3Keratinocyte Growth Factorの発現量が多い、4サーファクタントプロテインの発現は極めて低い、5in vitroの実験において、肺胞様構造の形成を誘導する働きがあるなどの特徴があり、in vivoの実験において、マウスの急性肺傷害を軽減する作用があることを明らかにした。今後、急性肺傷害における組織の再生を促す治療手段としての可能性を引き続き検討していきたいと考えている。ラットの肺より得られた間葉系の培養細胞株を確立し、その性質を検討した。この細胞は、自己増殖能を有し、軟骨細胞や脂肪細胞への分化誘導は難しいものの、容易に骨細胞への分化が誘導できることが示され間葉系幹細胞としての性質を部分的に持っていることが示されている。この細胞と肺胞上皮細胞を共培養した場合に、培養開始後28日を経過した後にもII型上皮の形質を持つ細胞が集合する構造や、上皮による胞状構造が維持されることが示された。こういった性質について、骨髄より分離した間葉系幹細胞や、肺組織から分離したサイドポピュレーションとの比較を行っている。さらに、実験系にマウスの実験系を加え、異種間で同じ現象がみられるかどうかの検討について着手した。今後、共培養の条件下で、どのような因子がこのような性質に関与するのかを含めて検討を進めていく予定である。今回、ヒトで同様な培養細胞を得るために、ラットにおける培養細胞の採取方法について、検討を加えた。ラットの肺組織をエラスターゼ処理することで得られた細胞に対して、16時間トリプシン処理を加えても生存し続ける細胞について、CD90およびCD29陽性の細胞をソーティングにより採取し培養した。その結果、こうして得られた細胞は、上記の細胞と同様に容易に骨細胞への分化が誘導できることが示されており、同じ細胞集団で構成されている可能性が示唆された。さらに、こうして得られた細胞について、エンドトキシン肺傷害モデルに投与した場合の治療効果について、検討した。イソフルラン麻酔下に、LPSを5mg/kg経気道的に投与し、18時間後にfMLPとNeutrophil Elastase 680 FASTというin vivoイメージ用の蛍光色素を経気道投与し、その6時間後に好中球エラスターゼの肺内での活性を,IVIS撮影装置で定量評価した。上記細胞を投与したマウスでは、非投与マウスと比較して、好中球エラスターゼ活性が有意に抑制されることが示された。こういった性質について、関与する因子の同定を目指した研究を展開した。骨髄より分離した間葉系幹細胞は、肺胞上皮に対して、リン脂質を多く含有する細胞を増加させ、サーファクタントプロテインの発現を増加させるが、siRNAによりKGFをノックダウンした場合には、サーファクタントプロテインの発現を減少させるものの、3次元構造の形成・維持には影響がないことが示された。現在、肺由来の細胞についても同様の性質があるかどうかを検討中であり、これらの3次元構造の構築においては、少なくともKeratinocyte Growth Factorの関与は少ないことが予想される。我々が用いた培養細胞系は肺組織に対して長時間トリプシン処理を行い、生存した細胞を増殖させることで得られる培養細胞であり、以下、Lung derived trypsin resitant (LTR)細胞と記述する。この細胞は、SDラットに対して、ペントバルビタールの大量投与を行い安楽死の後、肺を摘出し、気道にエラスターゼ処理の後、細断し、フィルター処理によって得られた細胞をトリプシン存在下に16時間培養し、生細胞をMEMα+10%FBS培地で培養したものである。LTR細胞には、1CD29陽性CD

90陽性の形質が維持され、骨分化能を有するが、軟骨組織や脂肪組織への分化を誘導してもこれらの組織への分かは弱いか全く見られない。2TIMP1,4(プロテアーゼインヒビター)およびα1アンチトリプシンのmRNAの発現量は多く、タンパク分解酵素絵の態勢との関係が考えられる3KGFの発現量が多く、肺胞II型上皮の形質維持または誘導に関与している可能性がある4細胞自身のSP-A,B,C,Dの発現は極めて低い5in vitroの実験において、BMSCと同様に、肺胞様構造の形成を誘導するはたらきがあるなどの特徴があり、in vivoの実験においてLTR細胞は、マウスの急性肺傷害を軽減する作用があることが示された。今回ヒトの組織において、同等な細胞が存在するか、実証を行うことができなかったが、今後検討を進めることで、急性肺傷害における組織の再生を促す治療手段としての可能性を引き続き検討していきたいと考えている。26年度が最終年度であるため、記入しない。麻酔蘇生学26年度が最終年度であるため、記入しない。初年度は、基本的な実験系の確立に重点を置いており、動物種をラットのみならずマウスも追加することで、特に細胞の表面抗原の検討などにおいて、多様な研究が可能となることを目指した。次年度は本年度の成果をさらに発展させ、実際の成果が得られるよう対応する。初年度(平成23年度)は、交付時期が年度後半となったため、基本的な実験系の確立に重点を置き、動物種をラットのみならずマウスも追加することで、特に細胞の表面抗原の検討などにおいて、多様な研究が可能となることを目指した。24年度は2年目に当たり、3次元構造形成にかかわる因子の候補として、Keratinocyte Growth Factorの関与について検討したが、関与が低いことが予想される結果となっており、他の因子の関与を考えなければならない結果となった。25年度はin vivo実験を開始し、肺由来の細胞の治療効果についても検討したが、現在より多角的な検討を加えている状況である。また、ヒトでの細胞の採取を目指すために、ヒトで同様の細胞を得るための手段を獲得する方法論についても検討した。次年度はin vivo実験を開始し、肺由来の細胞の治療効果についても検討するものとする。次年度は細胞の性質の特定についての結果を明らかにして、我々が用いている細胞について、上皮細胞に対する機能維持や増殖促進作用の有無、そしてそれらのキーファクターについての検討を行う予定である。それらの結果を踏まえて、ヒトの組織を使った実験系についても倫理委員会への申請をはじめとする準備に着手する予定である。
非ステロイド性抗炎症薬による小腸粘膜傷害でのガレクチン－３および腸内細菌の役割

本研究は痛み止めによって起こる副作用の消化管潰瘍でも特に小腸潰瘍におけるガレクチン-3の役割を明らかにすることを目的とした。ガレクチン-3欠損マウスを使った研究から、痛み止め服用によって起こる小腸潰瘍をガレクチン-3が悪化させることが分かった。そのメカニズムは主に2つの可能性が考えられる。1つは活性化されたマクロファージが危険シグナルとしてガレクチン-3を産生し、これが過剰な炎症反応を引き起こしていることである。もう1つは、小腸に多く分泌されるガレクチン-3による腸内細菌の相違である。これらの変化が相まって、小腸潰瘍形成にガレクチン-3が影響を及ぼす可能性が示唆された。本研究は消化管表面に発現しているガレクチン-3の生体防御的な役割を明らかにする事を目的としている。NSAIDの1つであるインドメタシンをマウスに投与すると急性小腸炎が起こる。この炎症は腸管バリアの低下とそれに伴う細菌の侵入によるが、ガレクチン-3欠損マウスでより強く惹起される。このことから、ガレクチン-3が腸管に保護的な役割を持つことが考えられた。そこで、細胞レベルでのガレクチン-3のバリア機能への影響を明らかにするため、培養細胞株を用いた実験を実施した。膜透過性への影響を明らかにする目的でガレクチン阻害剤であるラクトース存在有無でローズベンガル色素の取り込みを検討した。その結果、コントロールと比較して取り込み能に変化は無かった。次に、siRNAを用いてガレクチン-3をノックダウンさせ、インドメタシンを添加した際の細胞数を検討した。その結果、ガレクチン-3ノックダウンのみでは細胞数に影響は見られなかったが、インドメタシン添加によって細胞数の減少が見られた。これらの結果から、細胞レベルでもガレクチン-3がインドメタシンによる傷害に対して保護的に働いている事が分かった一方で、膜透過性には関係していない可能性が示唆された。今後は類似の実験を野生型およびガレクチン-3欠損マウスから単離培養を実施した小腸細胞を用いて検討を行うと共に、マウス個体における腸管免疫の関与を調べる。本研究課題に関連する研究としてこれまで実施してきた「ガレクチン-3のピロリ菌感染に対する保護的役割」に関する論文執筆及びrevise実験を優先的に実施したため、当初の計画よりもやや遅れている。このピロリ菌感染の研究論文はInfection and Immunityに受理された。この論文で実施したピロリ菌感染実験では、ガレクチン-3欠損マウスが野生型に比べ感染が成立し易い事が分かった。また半年間の長期感染では野生型マウスに比べて摂餌量の低下や体重減少が認められた。さらに、ピロリ菌に対してガレクチン-3が直接結合することで抗菌作用を示すことが分かった。この作用は大腸菌では認められなかった事から菌種によって異なる影響を持つ事が分かった。ガレクチン-3が胃のみならず腸管全体の表面に発現していることは生体への細菌の侵入を防ぐバリアの1つとしてガレクチン-3が機能している可能性を示唆するものと考えている。ピロリ菌感染研究で得た知識を生かし、本研究課題である小腸炎におけるガレクチンー3の役割に関する研究を実施していき、遅延を解消していく予定である。本研究は消化管表面に発現しているガレクチン-3や腸管免疫に働くケモカインのNSAIDs(Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs)に対する生体防御的役割を明らかにする事を目的としている。NSAIDの1つであるインドメタシンによって急性小腸炎が起こるが、この炎症は腸管バリアの低下とそれに伴う細菌の侵入による。申請者はガレクチン-3欠損マウスやケモカインレセプター9(CCR9)欠損マウスでより強く炎症が惹起されることを発見した。ガレクチン-3やCCR9が腸管に保護的な役割を持つことが考えられたことから、そのメカズムの解明を目的に研究を進めている。これまでインドメタシンの投与から腸管の回収までの一連の方法は既報に基づいて実施してきた。しかし、独自の高感度な血便検出方法を確立し、モデル動物を生体のままで経時的に血便を調べることで間接的に炎症の状況を把握することが可能となった。その結果、これまではインドメタシン投与後24時間を調べていたが、実際には数時間という早い段階で血便が検出され、この時期の方がより炎症が強いこともわかった。またCCR9欠損マウスでは野生型マウスに比べて血便が早く排出されることなども分かった。このことから、早い段階での炎症に着眼し、研究を進めている。近年、腸内細菌が宿主と相互作用し、ホメオスタシスや疾患に関わっていることが多数報告されている。腸管はまさに腸内細菌が存在する場であり、その影響を非常に受けやすい。今回炎症に違いが見られたガレクチンー3欠損マウスやCCR9欠損マウスで腸内細菌が野生型と異なる可能性が強く考えられる。そのため、これらのマウスから糞便及び回腸内容物を回収し、細菌の同定を実施するサンプルを調製した。当初は自ら次世代シーケンサーを用いて解析する予定にしていたが、より正確な情報を得るため外注する事にした。本研究で使用するマウスの1つであるガレクチンー3欠損マウスが一時的に繁殖しない状態になり、この問題の解消に当たっていたためガレクチンー3欠損マウスを用いる実験が遅延した。