hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新科目「公共」とつながる家庭科シティズンシップ教育のカリキュラム・マネジメント

第一に、授業開発研究では、小学校家庭科で自分の成長を振り返り自己認識と他者認識を深めて、他者への配慮ができる生徒を目指した。具体的には、小学校6年生が小学校1年生と一緒におやつをつくる単元の開発をした。まず、自分の成長を振り返り、目の前の低学年の児童に自分を重ねる試みをしたうえで試し調理をする。1年生と一緒に作業を進めるとき、どこで楽しんでもらうか、どこを気を付けるかを意識化し、安全で楽しい共同調理ができる対話的な授業を授業者と協議実施した。学内公開研究会で他教科の教師たちに公開し家庭科の学びの面白さと深さを研究指導者として講演することができた。高等学校の家庭科の被服の授業開発では、実技の授業の間に、実技を振り返り意識化する対話授業を開発した。公開研究会で共同研究者として、広く家庭科教師や関係者に、家庭科の本質的学びと持続可能性を論じることができた。第二に、理論研究として家庭科と公共のつながりとして探求した。世界の市民性の教育と衣・食・住・家族の教育に関する研究動向を国際学会に参加して、グローバルな研究動向を得ることができた。第三に、家庭科教師が学校カリキュラム改革に果たす役割をオランダの教育哲学者ガード・ビースタの主体化という概念で論じて著書にすることができた。家庭科では選択的別姓に関する生徒の生活実感を伴う主体的・対話的な深い学びができたことがホームルームの民主主義的実践と結びついて展開していることが解明された。家庭科の本質的学びが主体的・対話的な深い学びであること、それが学校カリキュラムにおいて重要であることを理論化できる準備が整った。また家庭科知恵の輪という家庭科教師が気軽に授業の悩みを交流できるサイトを立ち上げ研究交流を深めることができた。家庭科と新科目公共がどのように子どもの道徳性と市民性を育むのか、特に家庭科の本質が子どもの道徳性と市民性をどのように育むのかを国際的研究動向に位置づけた論文を作成し批評を得たい。本研究の目的は、新科目「公共」等のつながりに着目した高校家庭科シティズンシップ教育カリキュラム・マネジメントモデルを構築することである。2016年の日本学術会議、心理学・教育学委員会の「提言18歳を市民にー市民性の涵養をめざす高等学校公民科の改革ー」に続き、2017年、日本学術会議政治学委員会の「提言高等学校新設科目「公共」にむけてー政治学からの提言ー」が公表された。心理学教育学委員会からは、セクシュアリティの多様性とジェンダー平等、政治学委員会からは、グローバルな社会で「生きる」こと、「考える」こと、我が国の社会保障、ジェンダー問題やエイジング社会などを「コミュニティ参加カリキュラム」とすることなどが提言された。本研究は、新科目「公共」との連携で18歳選挙権と市民性の涵養という観点で、第一に実践研究、第二に理論研究を実施した。実践研究では、地歴、英語、美術、国語の授業実践記録をアクティブ・ラーニングの観点で分析し、その可能性と危機を18歳を市民にする文脈で論じた。分析対象としたどの教科も生徒が市民性を獲得するうえで重要であり、地歴の授業では、いまを相対化できる歴史認識が、英語の授業では、批判的リテラシー教育、美術の授業では生徒間の支配的で同調的な文脈をほぐす効果、国語の授業では政治的な言葉を獲得できることが明らかになった。また、学校カリキュラム・マネジメントについて、研究協力校で、「選択的夫婦別姓を考える」家庭科の授業を校内公開し、他教科の教員や校長から批評を得た。理論研究では、社会科のシティズンシップ教育と家庭科のシティズンシップ教育の違いを探究し、ケアを含むジェンダー平等を目指す家庭科シティズンシップ教育について、学会誌に英語論文として発表した。実践研究と理論研究を並行して実施し、その成果を2本の論文と大学生や教員用のテキストの分担執筆として刊行できた。

また家庭科知恵の輪という家庭科教師が気軽に授業の悩みを交流できるサイトを立ち上げ研究交流を深めることができた。家庭科教師と研究者による日常的なネットワークを構築したので、研究対象校だけでなく、授業開発と授業研究を進める。理論研究は、コミュニティ参加カリキュラムをCritically Engaged Learningとイタリアレッジョ・エミリアの教育思想から接近を試みる。家庭科と新科目公共がどのように子どもの道徳性と市民性を育むのか、特に家庭科の本質が子どもの道徳性と市民性をどのように育むのかを国際的研究動向に位置づけた論文を作成し批評を得たい。次年度物品費として予定している。授業実践の談話分析のために音声を文字に起こす作業と授業空間分析のために機器が必要であったが作業が遅れたため残額が発生した。文字起こし作業のために謝金と授業空間分析のためのiPat購入に使用予定である。
マッスルシートの開発

本研究では、筋繊維の機能を模した微小超音波モータを用いて貼付型マッスルシートの基礎技術を開発した。マッスルシートとは、腕や腰、膝などアシストを必要とする関節に貼付することで関節アシストを行うものである。本研究では、このマッスルシートのコア技術となるアクチュエータとして超小型の超音波モータを開発した。これは3.5mm四方の立方体にΦ2mmの貫通穴を設けたものである。設計値通りの並進運動を実現することができた。また、モータの駆動と停止のタイミングをとるために筋電情報を利用した。筋肉の等張運動と定尺動作を判別することで、モータの駆動停止を行う事ができた。マッスルシートの基礎技術を確立した。本研究の目的は、筋繊維の機能を模した微小超音波モータ(TRモータ)を用いて貼付型のアシストデバイス(マッスルシート)を開発することである。これは腕や腰、膝などのアシストを必要とする関節に貼付することで関節アシストするものである。出力トルクを大きくするため、真鍮3mm立方体の有限要素法振動解析より駆動力の大きな振動モードを求め、新たにTRモータを設計した。さらに、出力トルクを増大のためステータにバルク型のPZTを貼り付けた。ロータは円筒状のコマをジョイントで接続し、フレキシブルな構造とした。ロータには接触面方向にバネを組込、ステータとの押しつけ力を調整できるようにした。これより、従来のTRモータに比べ、一桁大きな推進力を得ることできる可能性を示した。さらに薄型の筋電センサーを利用し、筋肉の起動と停止(それぞれ、等張運動と定尺運動)を検出することで、モータのオンオフを実現できることを示した。例えば、持ち上げ動作では重量物の把持から始まるため、モータをONにするための測定部位は腕部の筋肉から選定することになる。関節運動及び要する筋肉は手指関節の屈曲(深指屈筋、浅指屈筋)、手関節の屈曲(撓側手根屈筋、長掌筋など)、肘関節の屈曲(上腕二頭筋、腕橈骨筋)であるが、腕部では長掌筋、腕橈骨筋、上腕二頭筋から選定することにする。また、持ち上げ動作は上体を起こし終えるか、上体を起こす動作を途中でやめたときが持ち上げ動作の終了と言えるので、モータをOFFにするための測定部位は、腰椎の伸展に関わる脊柱起立筋とした。このように選定することで、モータのオンオフを実現出来る可能性を示すことができた。最終的に、薄型のバッテリーと組み合わせてシート状のマッスルシートの有効性を示すことができた。ロボット工学
歯周病原性細菌の細胞内侵入に及ぼす口腔内連鎖球菌の影響

ヒト口腔上皮細胞様細胞に、P. gingivalisの細胞付着・細胞内侵入による生物活性に関するS. oralisの影響を検討することを考えた。まず、P. gingivalisの生物活性を検討した結果、IL-6の発現を誘導した。このIL-6発現は、本菌付着因子41kDa線毛の抗血清で抑制された。しかし、本菌線毛は、IL-6を誘導しなかった。また、このIL-6発現は、Nocodazole等の細胞内侵入阻害剤で抑制された。従って、このIL-6発現は、P. gingivalisの細胞内侵入が密接に関与すると考えられた。今後、このIL-6の発現へのS. oralisの影響を検討する。Cell line化されたヒト口腔上皮細胞様細胞KB細胞にP. gingivalisを感染させることによりIL-6等の炎症性サイトカインが誘導されることを、Northern blot assay法で確認している。即ち、P. gingivalisは、KB細胞のIL-6遺伝子発現を強く誘導し、その誘導作用は、細胞培養の培地に抗生剤を添加することによって、細胞外の本菌を殺滅しても、消去されなかったことから、細胞内への親友が関与する可能性を考えた。実際、本菌の精製LPSを作用させても、そのサイトカイン発現は誘導されなかった。また、本菌の細胞内侵入を抑制すると報告されている物質(細胞内侵入阻害剤)であるMonodansylcadaverine、Ouabain、Colchicines、Cytochalasin D、並びにNocodazoleは、P. gingivalis誘導性IL-6発現を強くブロックする結果を得た。これらの知見から、歯周病原性細菌P. gingivalisは、口腔上皮細胞内侵入することによって、IL-6を誘導することが示された。さらに、このIL-6の遺伝子発現の情報伝達経路について検討する目的で、MAP kinaseの阻害剤を使用した。その結果、p38の阻害剤であるSB202190が,IL-6遺伝子発現を強く抑制することが明らかとなった。また、KB細胞において、p38の活性剤であるanisomycinが、IL-6遺伝子発現を強く誘導した。これらのことから、P. gingivalis細胞内侵入によるIL-6発現の誘導には、p38が強く関与することが示された。Cell line化されたヒト口腔上皮細胞様細胞KB細胞やHSC-2細胞にS. oralisとP. gingivalisを感染させ、P. gingivalisの細胞付着能と細胞侵入能について検討するための予備的実験として、S. oralisが細胞にどのような作用を示すかについての基本的な検討を行う予定であった。また、S. oralisの研究が推進できなかった時には、P. gingivalisによるIL-6の遺伝子発現に関する情報伝達機能を解析予定でいた。P. gingivalis 33277株は、KB細胞のIL-6遺伝子発現を強く誘導し、上清中に、そのサイトカインタンパク質が増加する。これらのことを、昨年度までに、明らかにしている。また、その誘導作用は、p38の阻害剤SB202190により特異的に阻害される可能性を示すデータを得ていたので、その点を確認した。さらに、Phospho-p38、p38、Phospho-ERK、並びに、ERKを認識する抗体を用いたWestern blotの結果から、p38のリン酸化が強く誘導されることが示された。P. gingivalisの粘膜上皮細胞への付着と細胞内侵入に、41-kDa線毛と67-kDa線毛が必須であることを、それぞれの抗血清を用いて確認した。また、このIL-6誘導作用は、坑本菌41-kDa線毛抗血清で阻害された、興味あることに、坑本菌67-kDa線毛坑血清を本細胞に処理すると、本菌誘導性IL-6遺伝子は抑制された。これらの結果から、P. gingivalisは、KB細胞において、41-kDa線毛を用い細胞に付着し、その後、67-kDa線毛を用い、細胞内に侵入する。さらに、その細胞内侵入に伴い、細胞内情報伝達系を刺激することによって、サイトカイン発現などの生物学的活性を発揮することが示された。・P. gingivalisによる口腔粘膜上皮細胞におけるサイトカイン誘導の作用についてCell line化されたヒト口腔上皮細胞様細胞KB細胞にP. gingivalisを感染させることによりIL-6等の炎症性サイトカインが誘導されるか否か、Northern blot assay法で検討した。その結果、P. gingivalisは、KB細胞のIL-6遺伝子発現を強く誘導した。また、その誘導作用は、細胞培養の培地に抗生剤を添加することによって、細胞外の本菌を殺滅しても、消去されることはなかった。

また、本細胞に、細菌を破壊した菌体成分を作用させても、IL-6の発現は認められず、さらに、本菌の精製LPSを作用させても、そのサイトカイン発現は誘導されなかった。また、既報によって、本菌の細胞内侵入を抑制すると報告されている物質(細胞内侵入阻害剤)を、実際に、私たちの研究グループの実験条件でも検討した。その結果、Monodansylcadaverine、Ouabain、Colchicines、Cytochalasin D、並びにNocodazoleは、P. gingivalisをの細胞内侵入を強く抑制した。そこで、これらの阻害剤を細胞に処理した後、P. gingivalisをKB細胞に作用させ、その細胞内侵入を抑制すると、本菌誘導性IL-6発現は、強くブロックされる結果を得た。これらの知見から、歯周病原性細菌P. gingivalisは、口腔上皮細胞内侵入することによって、炎症性サイトカインIL-6を誘導し、歯周炎の発症に強く貢献する可能性が示された。Cell line化されたヒト口腔上皮細胞様細胞KB細胞やHSC-2細胞にS. oralisとP. gingivalisを感染させ、P. gingivalisの細胞付着能と細胞侵入能について検討するための検討を行う予定であった。また、この研究が推進できなかった時には、P. gingivalisによるIL-6の遺伝子発現に関する情報伝達機能を解析することを、昨年度の実績報告書に記述した。そこで、P. gingivalisによるIL-6の遺伝子発現に関する情報伝達機能を解析した。P. gingivalis 33277株が、口腔上皮細胞様細胞であるKB細への細胞内侵入によるIL-6の発現について、Real time PCR法で検討した。P. gingivalisは、KB細胞のIL-6遺伝子発現を強く誘導することを示した。P. gingivalisの粘膜上皮細胞への細胞内侵入に、本菌の付着が重要であることから、本菌の付着を司る41-kDa線毛の抗血清を用いて、付着を抑制したところ、本菌誘導性IL-6の発現は、強く抑制された。また、本細胞に、本菌の精製LPSを作用させても、そのサイトカイン発現は誘導されなかった。その結果、口腔衛生学・口腔保健学機器の不具合や培養の不具合のために、実験の進行が思うに任せない状態が続いた。また、研究代表者の置かれている状況に変化があったためと思われる。機器の不具合や培養の不具合のために、実験の進行が思うに任せない状態が続いた。また、研究代表者の置かれている状況に厳しいためであると思われる。当初の目標としていた「歯周病原性細菌P. gingivalisが、上皮細胞内に侵入することによって炎症性サイトカインIL-6を誘導する」ことについての知見を得ることができたので、自己点検による評価は、「(2)おおむね順調に進展している。」という「区分」に該当すると考えている。
2色低コヒーレンス光干渉計を用いた,ドラッグデリバリーシステム定量画像評価法

本研究では薬剤とその光吸収特性の異なる2波長帯のOCTを用い,生体組織内の薬量マイクロ断層分布を検出する2C-OCD法を提案してきた.しかし,2C-OCDの生体適用能力に関する検討が不十分であること,5分以上の計測時間を有すること,検出感度の向上といった課題があった.そこで(1)生体組織に対する2C-OCDの効果検証,(2)プローブの改良による計測システムの高時間分解能化,(3)超音波印加による2C-OCDの高SN化を研究目的とし,研究を遂行した.本年度は(1),(2)に対して成果が得られたため,以下にその内容について報告する.(1)生体組織に対する2C-OCDの効果検証に関して,動脈硬化症兎大動脈血管(高コレステロール食型及び遺伝子欠損型)と皮下腫瘍植え込みマウスモデルを用いたex vivo動物実験を実施した.専門医師の所見に基づいた病理画像診断結果とt検定による統計処理により,2C-OCDを用い動脈硬化プラーク及び癌組織を有意(p<0.001)にマイクロ断層検出可能であることが実証された.これより,日本人の死因の大半を占める血管疾患,悪性新生物に対する新たなマイクロ断層画像診断法として,2C-OCDが有用であることを示した.また,様々な疾患の発症メカニズムに関係を持つマクロファージと,2C-OCDより計測した薬量分布が類似傾向を示したことから,2C-OCDによるマクロファージ断層検出が示唆される付加的成果も得られた.なお,これら成果は論文投稿2件(内1件査読中),国内発表2件,国際発表1件にて成果発表を行った.(2)のプローブの改良による計測システムの高時間分解能化に関して,ガルバノミラーを用いた高速スキャニングシステムの構築を行った.これにより,従来5分以上を有した計測時間が1分以内に短縮されたため,2C-OCDの臨床適用性を飛躍的に向上することができた.(3)の超音波印加による2C-OCDの高SN化に関しては,本年度中に実験系の構築及びファントムを用いた基礎実験を実施予定であったが,(1)及び(2)の実施に伴う問題発生のため,計画通りの研究成果は得られなかった.本研究では薬剤とその光吸収特性の異なる2波長帯のOCTを用い,生体組織内の薬量マイクロ断層分布を検出する2C-OCD法を提案してきた.しかし,2C-OCDの生体適用能力に関する検討が不十分であること,5分以上の計測時間を有すること,検出感度の向上といった課題があった.そこで(1)生体組織に対する2C-OCDの効果検証,(2)プローブの改良による計測システムの高時間分解能化,(3)超音波印加による2C-OCDの高SN化を研究目的とし,研究を遂行した.本年度は(1),(2)に対して成果が得られたため,以下にその内容について報告する.(1)生体組織に対する2C-OCDの効果検証に関して,動脈硬化症兎大動脈血管(高コレステロール食型及び遺伝子欠損型)と皮下腫瘍植え込みマウスモデルを用いたex vivo動物実験を実施した.専門医師の所見に基づいた病理画像診断結果とt検定による統計処理により,2C-OCDを用い動脈硬化プラーク及び癌組織を有意(p<0.001)にマイクロ断層検出可能であることが実証された.これより,日本人の死因の大半を占める血管疾患,悪性新生物に対する新たなマイクロ断層画像診断法として,2C-OCDが有用であることを示した.また,様々な疾患の発症メカニズムに関係を持つマクロファージと,2C-OCDより計測した薬量分布が類似傾向を示したことから,2C-OCDによるマクロファージ断層検出が示唆される付加的成果も得られた.なお,これら成果は論文投稿2件(内1件査読中),国内発表2件,国際発表1件にて成果発表を行った.(2)のプローブの改良による計測システムの高時間分解能化に関して,ガルバノミラーを用いた高速スキャニングシステムの構築を行った.これにより,従来5分以上を有した計測時間が1分以内に短縮されたため,2C-OCDの臨床適用性を飛躍的に向上することができた.(3)の超音波印加による2C-OCDの高SN化に関しては,本年度中に実験系の構築及びファントムを用いた基礎実験を実施予定であったが,(1)及び(2)の実施に伴う問題発生のため,計画通りの研究成果は得られなかった.
ポリシランの光、放射線分解過程の吸収スペクトル法による解析

ポリシランの主鎖を構成するSiーSi結合は近紫外領域に吸収をもつため、従来のCーC結合をもつ高分子では困難であった主鎖の電子状態に関する情報を紫外吸収スペクトル法により、容易に得ることが期待される。すなわち、高分子主鎖の持続長、重合度あるいはコンホメ-ションなど主鎖の電子状態に反映される情報を、紫外吸収スペクトル法により解析することの可能性がでてきている。本研究では、ポリスチレンのCーC結合がSiーSi結合に置きかわったポリシラスチレンの合成を試みた。すなわち、ジメチル基とメチルフェニル基を側鎖に持つポリシラスチレン換算で分子量約6万7千、分子量分布はブロ-ドであった。このポリシラスチレンについてその放射線分解過程を吸収スペクトル法により解析することを試みた。ポリシラスチレンのラジカルイオンの吸収スペクトルをγ線照射、77k,剛性溶媒法及び室温におけるパルスラジオリシス法により測定した。ラジカルアニオンの吸収は2ーメチルテトラヒドロフラン中で、365nm、ラジカルカチオンの吸収は、nーブチルクロライド中で、358、2000nmに観測された。近赤外線領域における吸収は側鎖のフェニル基間の相互作用により生成したダイマ-ラジカルカチオンによるものと同定される。近赤外部の吸収は昇温により1700nmにブル-シフトした。このことはダイマ-ラジカルカチオンのコンホメ-ション変化によるものと考えられる。さらに、パルスラジオリシス法により、ラジカルアニオンラジカルカチオンの寿命をそれぞれ30、85μsecと求めた。これらの結果より、ポリスラスチレンの放射線分解過程においては、ラジカルイオンが何らかの関与をしている可能性が考えられる。今後は、分子量分布のブロ-ドなポリシラスチレンをGPC分取することにより、単分散試料を得ることを目指す。
色彩感情の成り立ちに関わる感情の典型色と表情認知における顔色の関連

色彩が心理に影響を与えること(以下、色彩感情とする)は一般的に受け入れられており、その概念はファッションやインテリアなどに広く活用されている。しかし、色彩感情の具体的な成り立ちや色彩と感情を関連づける要因は科学的に示されていない。本研究では、色彩と感情の関連性を、認知心理学的実験課題を用いて潜在意識的な反応からも科学的に検証する。その結果に基づいて、色彩感情の成り立ちおよび構造を認知心理学モデルを用いて示すことを目的とする。実験に用いる認知心理学的課題は、特定の感情にはそれにふさわしい色(以下、典型色とする)があること、色彩感情が人間の色覚進化と関連があるという2つの仮説をもとに考案する。
患者血清のプロテオミクス解析による漢方医学診断基準(証)の客観的評価法の構築

1.桂枝茯苓丸投与前後のリウマチ患者血漿のプロテオミクス解析桂枝茯苓丸により「オケツ」病態であるリウマチが改善するいわゆるレスポンダー群と非改善のノンレスポンダー群を予測する血漿中のタンパク質を検索するために、リウマチおいて桂枝茯苓丸(ケイシブクリョウガン)の服用による48症例のリウマチ患者血漿に対して、プロテインチップシステムを使用して、血清のプロテオミクス解析を行った。その際に、リウマチ改善・非改善の指標は国際基準であるACRコアセットを基に判定した。その結果、シングルマーカーのみでは、レスポンダー群とノンレスポンダー群を判定することは困難であったが、数種類のマーカを用いることで、両者を予見できることが明らかとなった。現在、このマルチマーカーの同定作業を行っている。2.2種類の駆「オケツ」薬前後の糖尿病発症ラットにおけるプロテオミクス解析WBN/Kobラットは、糖尿病を自然発症し、それに伴い、腎症などの合併症を併発する。糖尿病も漢方の証においては、「オケツ」病態に含まれる。本モデルを使用して、駆「オケツ」薬である桂枝茯苓丸と当帰芍薬散投与により血漿プロテオミクス解析を行った。その結果、血流改善を伴う2種類の駆「オケツ」薬においては、異なる血漿タンパク質変動のパターンを示した。1.駆「オケツ」薬により、「オケツ」病態が顕著に改善した患者血清の確保これまでに、「オケツ」病態であるリウマチおいて、駆「オケツ」薬として用いられる桂枝茯苓丸(ケイシブクリョウガン)の服用による60症例の「オケツ」病態の改善および非改善の患者血清を確保できた。この症例は、リウマチの改善状況を示す生化学的検査に加え、科学技術庁研究班による「オケツ」診断基準の作成したオケツスコアー情報も保持している。そのため、漢方医学診断基準(証)の客観的評価法の構築に関しては、非常に質の高い臨床サンプルである。2.桂枝茯苓丸投与前後の血清のプロテオミクス解析上記患者血清に関してプロテインチップシステムを使用して、桂枝茯苓丸(ケイシブクリョウガン)の服用により「オケツ」病態が顕著に改善した患者(オケツスコアーにより判定)の、桂枝茯苓丸投与前後の血清のプロテオミクス解析を行い、情報を解析中である。3.八味地黄丸投与前後の糖尿病発症ラットにおけるプロテオミクス解析WBN/Kobラットは、膵内分泌および外分泌系の障害により糖尿病を発症する。糖尿病が発症すると、多飲、多尿、尿糖、高血糖、耐糖能低下、痩せの一途をたどり、白内障、腎症、神経症などの合併症を併発する。本モデルを使用して、八味地黄丸投与前後の糖尿病発症ラットにおけるプロテオミクス解析を行った。その結果、腎障害の改善を基準に、八味地黄丸投与による糖尿病改善および非改善群において、明らかに発現量の異なる数種類のタンパク質を確認することができた。現在、このタンパク質を同定中である。1.駆「オケツ」薬により、「オケツ」病態が顕著に改善した患者血清の確保昨年までに、オケツ」病態であるリウマチおいて桂枝快茯丸(ケイシブクリョウガン)の服用による60症例の「オケツ」病態の改善および非改善の患者血清を確保できた。今年度は、更に、西洋医学的には疾病領域が異なるが東洋医学的には同一の「オケツ」病態である婦人科領域での更年期障害患者において、種々の駆「オケツ」薬の服用による50症例の「オケツ」病態の改善および非改善の患者血清を確保できた。2.種々の駆「オケツ」薬投与前後の血清のプロテオミクス解析上記患者血清に関してプロテインチップシステムを使用して、種々の駆「オケツ」薬の服用により「オケツ」病態が顕著に改善した患者(オケツスコアーにより判定)の、血清のプロテオミクス解析を行い、情報を解析中である。3.八味地黄丸投与前後の糖尿病発症ラットにおけるプロテオミクス解析WBN/Kobラットは、糖尿病を自然発症し、それに伴い、腎症などの合併症を併発する。本モデルを使用して、八味地黄丸投与により腎症の改善効果が確認され、そのメカニズムとして、腎臓でのフィブロネクチン沈着の低下とTGF-β1の産生の低下が考察できた。現在、腎障害の改善を基準に、八味地黄丸投与による糖尿病改善および非改善群において、明らかに発現量の異なる数種類のタンパク質を同定中である。2.2種類の駆「オケツ」

薬前後の糖尿病発症ラットにおけるプロテオミクス解析WBN/Kobラットは、糖尿病を自然発症し、それに伴い、腎症などの合併症を併発する。糖尿病も漢方の証においては、「オケツ」病態に含まれる。本モデルを使用して、駆「オケツ」薬である桂枝茯苓丸と当帰芍薬散投与により血漿プロテオミクス解析を行った。その結果、血流改善を伴う2種類の駆「オケツ」薬においては、異なる血漿タンパク質変動のパターンを示した。
子宮頸部腺癌におけるHPV感染と遺伝子異常の検討－胃型形質との関係を含めて－

子宮頸部腺癌89例でのHPV検索の結果、HPV感染は47例(53%)で、うちHPV16型が27例(30%)、HPV 18型が20例(22%)であった。16,18型以外のHPV型は検出されなかった。HPV陰性例は42例(47%)であり、うち11例は胃型腺癌であった。免疫組織学的な胃型形質は,非胃型腺癌でもしばしば陽性であり、HPV感染の有無に関係なく頸部腺癌に広く認められた。HPV陰性腺癌は、消化器の発癌と共通する種々の遺伝子異常(TP53、RAS、GNAS、STK11など)が関連する、ヘテロな集団と考えられ、特定の遺伝子異常を有していないことが明らかとなった。近年、子宮頸部腺癌の一部に特徴的な形態像と胃型の粘液形質を有する胃型腺癌の概念が提唱されている。胃型腺癌はHPV陰性例が多く予後不良と報告されているが、その詳細について結論は出ていない。今回、子宮頸部腺癌での胃型形質の発現率、胃型形質とHPVの関連性について検討した。子宮頸部腺癌72例から胃型腺癌の組織学的診断基準(豊富で淡明な細胞質と明瞭な細胞境界)を満たし、かつ胃幽門腺粘液に特異的に反応する抗体である、HIK1083に陽性となることをを条件として胃型腺癌を抽出した。さらにmultiplexーPCR法を用いてHPV感染の有無を検討した。他の消化管への分化傾向を見るため、、MUC6(胃幽門腺粘液に対する抗体)、TFF1(胃粘液に関連して発現する因子に対する抗体)、CDX2(腸粘膜への分化とともに発現するhomeobox geneに対する抗体)、PDX1(胃幽門部や膵への分化とともに発現するhomeobox geneに対する抗体)およびp16、p53、HER2、ki-67等の免疫組織化学的検討を行った。胃型腺癌は10/72例(14%)で、非胃型腺癌と比べ有意に進行例が多かった。HPV陽性率は非胃型腺癌63%に対し胃型腺癌0%であった。胃型、非胃型間でMUC6、TFF1、CDX2の陽性率に有意差はなく、HPV陽性、陰性間でもMUC6、TFF1、CDX2、PDX1の陽性率に有意差は認められなかった。胃型腺癌はすべてHPV陰性であったが、胃型形質自体は胃型腺癌に特異的ではなく、HPV感染の有無に関わらず子宮頸部腺癌の全体にしばしば認められることが明らかとなった。子宮頸部腺癌の中から胃型腺癌を抽出する過程で、一部の腺癌や腺扁平上皮癌の上皮内病変中に粘液杯細胞の混在する、分化傾向の不明な病変が存在する症例を経験した。これらは子宮頸部移行帯に発生するStratified mucin-producing intraepithelial lesions (SMILE)と言われ、異型を伴う重層扁平上皮内に粘液杯細胞が混在するまれな上皮内病変であり、腺系と扁平上皮系の両方向への分化を示すことを特徴とする。SMILEとHPVとの関連について詳細はこれまで明らかではなかった。そこで、In situ hybridization (ISH)法にてHPVの存在の有無と局在を検討し、SMILE病変中の粘液の性質、分化傾向等を解析した。症例は2例で、いずれも30歳代で、円錐切除検体でSMILEを伴う微小浸潤癌と、SMILEを伴うCIN3と診断された。それぞれHPV16型とHPV18型が陽性であった。組織学的にはいずれもCIN3病変の上皮内及び腺侵襲部分の一部で、細胞質内粘液を有し印環細胞様の形態をとる異型細胞が上皮の全層にわたり増殖していた。異型粘液杯細胞を含め病変全体にp16強陽性であった。p40とAlcian blueの重染色では、異型粘液杯細胞はp40陰性であるが、粘液細胞以外にもp40陰性の細胞が多数認められた。よって、SMILE病変内には、明らかに粘液を産生する腺系細胞、扁平上皮系細胞のほかに、腺系への分化を示す腫瘍細胞もしくはいずれにも分化していない未分化な腫瘍細胞が混在している可能性が示唆された。粘液杯細胞は胃型形質を示さなかった。HPV16/18型に対するISH法を行ったところ、異型扁平上皮細胞核と、粘液杯細胞の核に陽性シグナルが確認された。今回のISH法の結果より、SMILE病変内の粘液杯細胞はHPV感染を示す腫瘍細胞であることが明らかとなった。ISH法にてSMILEの粘液杯細胞核にHPV signalを証明できたのは今回の2例が初めてと思われる。子宮頸癌のうち扁平上皮癌はほぼ100%HPVが関与している腫瘍である一方、腺癌はすべてがHPV関連で無く、HPVと無関係に発癌する症例が知られている。今回、ヒト子宮頸部腺癌89例を対象に、多数のHPV型が検出できるmultiplex PCR法にてHPV感染の有無と型判定を行った。結果、HPV感染は47例(53%)であり、うちHPV16型が27例(30%)、HPV 18型が20例(22%)であった。

HPV陰性例は42例(47%)であり、うち11例は胃型腺癌と呼ばれる特殊型であった。つづけてHPV陰性例における遺伝子異常を解析するため、HPV陰性例中の20例で、次世代シーケンサーを用いての遺伝子解析を行った。これまで、子宮頸部腺癌で報告されている癌遺伝子(KRAS、GNAS、EGFR、STK11、TP53)をQIAGEN社のCancerPanel GeneReadシステムを用いて解析した。この20例には7例の胃型腺癌が含まれている。結果20例中4例はDNAの劣化が強く、解析が困難であった。16例中いずれの遺伝子異常も認めなかった症例が6例であった。結果、5例がTP53の変異、STK11の変異とGNAS変異がそれぞれ2例ずつ、KRAS変異を1例認めた。胃型腺癌7例に限ると、TP53,STK11, GNASの変異がそれぞれ1例ずつ認められ、残り4例はいずれの変異も認められなかった。一部症例での解析であるが、HPV陰性腺癌は遺伝子異常の観点からみると、種々の遺伝子異常によっておこる、ヘテロな集団と考えられ、特定の遺伝子異常を有していないものと考えられる。また、胃型腺癌という組織型に限局しても、この傾向は同じであった。HPV陰性の子宮頸部腺癌は、消化器の発癌と共通する種々の遺伝子異常によって起こることが明らかとなった。子宮頸部腺癌89例でのHPV検索の結果、HPV感染は47例(53%)で、うちHPV16型が27例(30%)、HPV 18型が20例(22%)であった。16,18型以外のHPV型は検出されなかった。HPV陰性例は42例(47%)であり、うち11例は胃型腺癌であった。免疫組織学的な胃型形質は,非胃型腺癌でもしばしば陽性であり、HPV感染の有無に関係なく頸部腺癌に広く認められた。HPV陰性腺癌は、消化器の発癌と共通する種々の遺伝子異常(TP53、RAS、GNAS、STK11など)が関連する、ヘテロな集団と考えられ、特定の遺伝子異常を有していないことが明らかとなった。当初の計画どおりに、胃型腺癌の抽出と、免疫組織学的な検討が完了している。また、腺癌と扁平上皮癌の両方に分化する可能性のある前駆病変としてSMILEの解析を行った病理学胃型腺癌、腺扁平上皮癌、SMILEを含め、その発生原因と考えられる遺伝子異常(LKB1、RAS、GNAS等)の検索を行う予定である。また、ALDH1以外の腫瘍幹細胞マーカーの発現を検討することも予定している。当初の計画どおりに、胃型腺癌の抽出と、第一段階の免疫組織学的な検討が完了している。今年度は、遺伝子解析にまで至らなかったため。今後、胃型腺癌を含め、その発生原因と考えられる遺伝子異常(LKB1、RAS、GNAS)の検索を行う予定である。また、腫瘍幹細胞マーカーの発現を免疫組織学的に検討することも考えている。今後の遺伝子解析、腫瘍幹細胞マーカーの免疫染色に使用する予定である。今後の遺伝子解析に使用予定である。
連結会計情報に基づく企業価値の国際比較

会計数値に基づく企業評価モデル(EBOモデル)を取り上げ、EBOモデルに基づき、連結会計情報に基づく企業価値の関連性(value relevance)に関する実証的検証を行った。EBOモデルでは説明できない要因があるため、まずEBOモデルを改良した企業評価モデルを構築した。なお、モデル構築のため、夏期にイギリスのウォリック大学のAnthony Steel教授とRob Bryer助教授に有益なコメントを頂いた。さらに、この改良されたモデルにより、親会社の個別会計情報と企業集団の連結会計情報を用いて回帰分析を行い、個別会計情報と連結会計情報のいずれが企業価値に関連しているのかを明らかにした。企業評価モデルの実証結果から、1996年以降は連結会計情報の方が個別会計情報よりもわずかではあるが株価説明力(調整済R^2)が高いことがわかった。したがって、1995年までは個別会計情報と連結会計情報の企業価値関連性に大きな差はなかったが、最近になって、連結会計情報の企業価値関連性が徐々に高まってきているといえる。ただし、1996年以降の連結会計情報と個別会計情報の株価説明力(調整済R^2)の差異が有意であるか否かは微妙であり、連結会計情報の相対的重要性がどのように変化していくかを引き続き検証する必要があることがわかった。会計数値に基づく企業評価モデル(EBOモデル)を取り上げ、EBOモデルに基づき、日本の企業の価値関連性(value relevance)について検証した。さらに、この改良されたモデルにより、日本における個別会計情報と企業集団の連結会計情報を用いて回帰分析を行い、わが国において親会社の個別会計情報と連結会計情報のいずれが企業価値に関連しているのかを明らかにした。企業評価モデルの実証結果から、1996年以降は連結会計情報の方が個別会計情報よりもわずかではあるが株価説明力が高いことがわかった。したがって、個別会計情報と連結会計情報の企業価値関連性に大きな差はなかったが、最近になって、連結会計情報の企業価値関連性が徐々に高まってきているといえる。また、経済的単一体概念に基づく連結会計情報は、親会社概念に基づく連結会計情報よりも企業価値関連性が必ずしも高いということはなかった。これは、少数株主持分および少数株主利益の金額が連結純資産簿価や連結利益の金額と比べて極めて小さいことによるものであろう。研究成果は平成11年9月に京都学園大学で開催された日本会計研究学会第58回大会において報告を行った。
炎症抑制と組織修復を促す細胞シグナルの解明

免疫システムは正負のシグナルがバランスを保って進行することで恒常性が維持され、この破綻がアレルギー疾患などの免疫疾患につながる。本研究はこのような免疫応答の恒常性を支えるサイトカインとそのシグナル制御の基本原理の解明し、疾患治療に応用することを目的とする。本研究では免疫を負に制御し炎症応答を収束させる3つの重要な因子を見出した。第一は核内オーファン受容体NR4aで制御性T細胞の発生維持に必要である。第二はSmad転写因子で免疫抑制因子であるTGFβの産生制御を行う。第三は修復性マクロファージで死細胞より放出される因子を処理し炎症を収束させる。本年度は脳梗塞モデルを用いて新たな炎症制御システムの探索を行った。近年、脳梗塞後の過剰な炎症が神経細胞死や梗塞領域の拡大に寄与することが明らかとなってきた。脳虚血再還流によりマイクログリアやアストロサイトおよび浸潤マクロファージは様々なサイトカインやケモカインを産生する。その中でもインターロイキン1β(IL-1β)の増加は血液脳関門の破綻や他の炎症細胞の浸潤を誘導し、神経学的予後を悪化させることが報告されている。IL-1βの活性化にはインフラマソームによるプロセシングが必要であり、脳虚血障害時ではNLRP3インフラマソームが関与することが報告されている。NLRP3インフラマソームは痛風、動脈硬化、ウイルス・細菌感染等においても様々な刺激で活性化されることが知られているが、その分子機構については不明の点が多かった。我々は阻害剤スクリーニングの過程で非受容型チロシンキナーゼであるBTKがNLRP3インフラマソームの活性化に重要な役割を果たすことを見出した。BTK阻害剤はNALP3やASCの重合を阻害し、その結果caspase-1の活性化やIL-1βのプロセシング、放出が抑制されることを明らかにした。さらにマウスを用いて脳虚血障害へのBTK阻害剤ibrutinibの効果を検討したところ、ibrutinib投与により脳梗塞領域の減少・神経症状の改善が認められた。また、実際に脳組織中のIL-1β放出はibrutinib投与によって抑制された。脳虚血障害時でも、BTK阻害剤がインフラマソーム活性化、IL-1β放出を抑制することにより脳梗塞の予後を改善すると考えられた。iburutinibは、慢性リンパ性白血病やマントル細胞リンパ腫の治療薬として米国で承認された薬で、関節リウマチや自己免疫疾患の治療薬としても期待されており、脳虚血後の神経障害の改善にも有効である可能性が示唆された。免疫システムは正負のシグナルがバランスを保って進行することで恒常性が維持される。その維持は主にサイトカインや増殖因子によって制御される。実際には(1)Foxp3Creを用いたTreg特異的NR4a欠損マウスの解析を行った。このマウスは加齢とともに自己抗体の産生を伴う自己免疫疾患で死亡した。マイクロアレイ解析を行ったところNR4a欠損TregはIL-4,IL-5,IL-13などのTh2サイトカイン、およびTfh関連サイトカインIL-21の産生が更新し、さらにCD25,CTLA4, Ikzf4(EOS)の発現が低下していた。(2)クロストリジウム属菌による樹状細胞からのTGFβシグナルによるiTreg誘導制御機構の解明を行なった。消化管におけるTregの多くはTGFβによって誘導されるiTregである。iTregの誘導には腸内細菌、特にクロストリジウム属菌が重要であることが知られている。そこでClostridium Butyricum (CB)菌の芽胞をマウスに2週間投与したところiTregの増加とDSS誘導性腸炎の抑制が見られた。このときにTGFβ抗体を投与するとiTregの増加やDSS腸炎抵抗性は見られなくなった。よってCBはTGFβを介してiTregを誘導していると考えられた。(3)新規インフラマゾーム活性化因子BTKの発見と脳梗塞後の炎症ににおける役割の解明を行なった。BTKチロシンキナーゼ阻害剤がNLRP3インフラマゾームの活性化を抑制することでIL-1β産生を抑制するを発見した。BTK欠損マウスではインフラマゾームの活性化が低下していた。生化学的な解析からBTKは酵素活性依存的にNLRP-ASC複合体の重合を促進しcaspase1の活性化を誘導することがわかった。脳虚血による炎症や脳梗塞体積や神経炎症の程度を評価したところBTK阻害剤投与によってIL-1βの産生が抑制され、また脳梗塞体積は減少し、神経症状の改善も見られた。NR4a遺伝子のTregでの機能を明らかにするとともに、Tregの可塑性に重要な役割を果たしていることを明らかに出来た。またクロストリジウム属菌がどのようなメカニズムでTregを誘導するのかを世界で初めて明らかにした。さらに脳組織傷害にBTKが積極的に関与することを明らかにし、BTKが脳梗塞の治療ターゲットになりうることを見出した。このように複数の顕著な成果が得られつつある。一方でこのバランスにはある程度の弾性があり、免疫シグナルの強度が免疫応答の性質を決定する。

本研究課題ではシグナルネットワーク制御の観点から免疫シグナル間相互作用を解析することで複雑な免疫応答制御をより単純化して理解し、他の疾患制御系にも通じる新たなパラダイムの確立をめざす。本研究課題では(1)NR4aによるTregの維持機構の解明を行なった。NR4aはTregにおいてFoxp3とEosの発現を正に制御し、一方でTh2,Tfhエフェクター機能に重要なIL-4やIL-21などの炎症促進分子の発現を抑制する機能があることがわかった。(2)クロストリジウム属菌による樹状細胞からのTGFβシグナルによるiTreg誘導制御機構について解析を行った。本研究によってクロストリジウムの菌体成分ペプチドグリカンがTLR2-ERK-AP1を活性化しTGFβプロモーターの転写開始を進めること、さらにTGFβそのものの刺激(オートインダクション)も必要でSmad3がヒストンアセチル化を促進するがSmad2は逆に抑制的に作用することを明らかにした。(3)新規インフラマゾーム活性化因子BTKの発見と脳梗塞後の炎症ににおける役割の解明を行なった。BTKは酵素活性依存的にNLRP-ASC複合体の重合を促進しcaspase1の活性化を誘導することがわかった。さらにこの発見を脳梗塞おける組織傷害モデルに適応した。BTK阻害剤投与によってIL-1βの産生が抑制され脳梗塞体積は減少し、神経症状の改善も見られた。(1)当初計画していたNR4aによるTreg制御に関してはNr4aの新たな標的遺伝子の同定するとともに、NR4a欠失によるTregからのTh2とTfhの分化の分子レベルでのメカニズムを明らかに出来た。さらにNR4a結合分子についても解析を進めており、NR4aによる免疫と転写の制御の全体像を描くことが出来ると思われる。(2)これまで全く知られていなかった樹状細胞におけるTGFβの産生制御機構が明らかになった。これを利用して様々な免疫疾患の治療への応用が可能となる。(3) NR4aの研究で中心的な役割を果たした研究協力者の関谷が2013年12月に日本免疫学会奨励賞を授賞。またインフィラマゾームとBTK阻害剤の研究で研究協力者で大学院生の伊藤美菜子が2015年度育志賞を、T細胞分化の研究で同じく研究協力者で大学院生の近藤泰介が第43回日本免疫学会優秀演題賞を授賞するなど若手研究者の育成にも成功している。本基盤S研究目標のひとつは炎症の収束過程の分子基盤とそれに関与する細胞の性質を明らかにして疾患治療に役立てることである。我々はマウス脳梗塞モデルを用いて炎症の促進と組織傷害の拡大に寄与する分子細胞レベルでのメカニズムを明らかにして来た。組織破壊によって死細胞より放出されるDAMPs(Damage-associated molecular patterns)としてペルオキシレドキシン(Prx)を同定した。Prxはマクロファージに添加すると急速に細胞内に取り込まれてリソゾームによって分解された。そこでPrxに特異的な受容体が存在すると考えてPrx受容体遺伝子のクローニングを試みた。ENU処理したマクロファージRaw株細胞よりPrxを取り込めなくなった変異クローン株を単離した。複数の独立株で様々なスカベンジャー受容体といくつかの転写因子の発現が低下していることがわかった。
破骨細胞系譜におけるABCトランスポーターの時空間的定量解析

骨粗鬆症等の骨疾患に関与する破骨細胞において、48種類中9種類のABCタンパク質の発現が上昇し、4種類のABCタンパク質の発現が低下することを明らかにした。一方、破骨細胞に発現が認められたABCタンパク質の一つABCG2の発現量と細胞内分布が個人差を規定する因子やタンパク質に付加される糖鎖等によって制御されることも明らかにした。この研究成果は、国際学会において高く評価された(Special ABC2010 Poster Recognition Award受賞)。ATP-bindingcassette(ABC)トランスポーターの視点から破骨細胞系譜の生命現象を解明するために、破骨細胞におけるABCトランスポーターの発現解析を行った。ヒト骨髄細胞及びマウス骨髄細胞を用い、それぞれの細胞からヒト破骨細胞とマウス破骨細胞を調製した。これらの細胞からtotal RNAを単離し、cDNAを調製した。破骨細胞の調製と平行して、ABCトランスポーターの発現解析用PCRプライマーを設計した。48種類のヒトABCトランスポーターを対象として発現解析を行った結果、31種類のABCトランスポーターの発現がヒト破骨細胞に認められた。また、ヒト破骨細胞、ヒト骨髄細胞、ヒトCD34陽性細胞、ヒト白血球、ヒトCD71陽性細胞におけるABCトランスポーターの発現量を比較することにより、8種類のABCトランスポーターの発現が破骨細胞への分化と伴に上昇することが示唆された。また、2種類のABCトランスポーターの発現が破骨細胞への分化に伴い低下することが示唆された。これらの結果は、マウス破骨細胞を用いた解析においても同様に認められた。一方、破骨細胞に発現が認められたABCG2を対象として、細胞内分布の変化に関する解析を行った。その結果、アミノ酸変異を伴う一塩基多型バリアントABCG2(F208S)とABCG2(S441N)に関して形質膜への移行率が低いことが見出された。形質膜への移行率が低いことの原因を追究した結果、これらの一塩基多型バリアントがユビキチンープロテアソーム分解系において速やかに分解を受けていることを明らかにした。これは、ABCG2の細胞内存在量が遺伝子によって規定されていることを示す新たな知見である。平成19年度は、コーディング領域の塩基配列がABCトランスポーターの時空間分布を制御する因子の一つであることを明らかにした。具体的には、マウス骨髄細胞から調製した破骨細胞よりtotal RNAを採取し、cDNAに変換した後にPCR(RT-PCR)を行い、発現解析を行った。48種類のABCトランスポーター遺伝子を対象にRT-PCRを行い、32種類のABCトランスポーターの発現が破骨細胞への分化に伴って上昇することを明らかにした。そして、32種類中7種類のABCトランスポーターの発現が、破骨細胞の発生に不可欠であるサイトカインRANKLのシグナル依存的に誘導されることを明らかにした。一方、破骨細胞に発現が認められたABCG2を対象として、平成19年度に引き続き、細胞内存在量の変化に関する解析を行った。その結果、アミノ酸変異を伴う一塩基多型バリアントABCG2(Q141K)とN結合型糖鎖付加を受けない変異体ABCG2(N596Q)に関して、細胞内存在量が野生型の約半分となることが見出された。この原因を追究した結果、これらの変異体がユビキチン-プロテアソーム分解系において速やかに分解を受けていることを明らかにした。これらは、ABCG2の細胞内存在量が遺伝子によって規定されている(平成19年度研究実績参照)ことを支持する結果であり、また、ABCG2の細胞内存在量がN結合型糖鎖付加によって規定されていることを示す新たな知見である。平成20年度は、翻訳後修飾がABCトランスポーターの時空間分布を制御する因子の一つであることを明らかにした。ATP-bindingcassette (ABC)トランスポーターの視点から破骨細胞系譜の生命現象を解明するために、破骨細胞におけるABCトランスポーターの発現解析を行った。そして、破骨細胞の発生に不可欠であるサイトカインRANKLのシグナル依存的に48種類中9種類のABCトランスポーターの発現が上昇し、4種類のABCトランスポーターの発現が低下することを定量PCR解析において明らかにした。これら13種類中6種類のABCトランスポーターのmRNA量は、破骨細胞の発生に伴って変化した。さらに、13種類中2種類のABCトランスポーターに関しては、当該ABCトランスポーターのタンパク質量が破骨細胞の発生に伴って変化することを明らかにした。これらの結果は、破骨細胞系譜の生命現象に影響を及ぼすABCトランスポーターが存在することを示唆する重要な知見である。
ティーチング・エクスペリエンスの理論化と算数・数学科の授業改善への有効性の検討

新学習指導要領において主体的・対話的で深い学びを実現することを目指し,授業を改善していくことが求められているが,教師が授業改善にどの程度積極的に関与するかは,個々の教員によって大きく異なる.本研究では,ティーチング・エクスペリエンス(TX)の概念を確立し,TXの違いにより,教師の授業改善への取組にどのように影響するかを検討するものである.TXの理論化は,インストラクショナル・デザイン(ID)の分野において,ラーニング・エクスペリエンス(LX)が注目されており,それを参考にする.また,本研究では,特に算数・数学の授業改善を中心に検討を行っていく.新学習指導要領において主体的・対話的で深い学びを実現することを目指し,授業を改善していくことが求められているが,教師が授業改善にどの程度積極的に関与するかは,個々の教員によって大きく異なる.本研究では,ティーチング・エクスペリエンス(TX)の概念を確立し,TXの違いにより,教師の授業改善への取組にどのように影響するかを検討するものである.TXの理論化は,インストラクショナル・デザイン(ID)の分野において,ラーニング・エクスペリエンス(LX)が注目されており,それを参考にする.また,本研究では,特に算数・数学の授業改善を中心に検討を行っていく.
細胞周期を制御する遺伝子群の研究

本年度はこれまでに我々の研究室で分離し貯蔵しているハムスター由来のBHK21細胞株の細胞増殖に関する温度感受性変異株、tsBN2,tsBN7、tsBN67、tsBN250、tsBN462を用いて研究を行い、主な成果としては次の事が挙げられる。1)アポプトーシス抑制変異遺伝子の分離。昨年度の成果に基づきアポプトーシスを起こす他の変異が我々の持っている温度感受性変異株の中に、あるか調べた。その結果、相当数の変異がアポプトーシスを高温で起こすことが判明した。その中で、最も顕著なDNA分子の切断像を示すtsBN269を取り上げその変異を相補するヒト遺伝子の分離を開始した。既に、ヒトDNAを持つ第一次形質転換株が分離されており、現在、第二次形質転換を行なっている。2)新たなG1期進行必須遺伝子のクローニング。高温でG1期停止をするtsBN67変異株を相補するヒト遺伝子の分離を進めているが、逐に変異を相補するヒト遺伝子DNA断片を分離するのに成功した。現在、2kbのORFを持つcDNA断片が分離されており、これが変異を相補するか否か調べている。cDNAの塩基配列が正しいとするとこれまでに分離されていない新しいタンパク、それも特殊な構造をしたタンパクをコードしているようである。分離されたcDNAはX染色体の遺伝子に由来していた。3)tsBN7遺伝子DAD1の解析。DADIタンパクの機能の消失がアポプトーシスを起こしたことを証明するため、DAD1を多量に発現したときに他の細胞系、ならびに線虫の系のアポプトーシスが現実に抑制されるか否かを調べている。4)CCG1遺伝子の機能。この遺伝子産物がTBP結合タンパクのTAF250であることが他に研究者の報告により判明した。我々はtsBN462株がCCG1に変異を持つことを、変異部位を決定することにより確認した。さらに、この株が高温でアポプトーシスを起こすことがわかった。
メラトニン代謝産物AMKによる加齢性記憶障害改善の神経分子機構の解明

加齢に伴う記憶能力の低下(加齢性記憶障害)はヒトでも昆虫でも見られる現象である。研究代表者は、フタホシコオロギにおいて、平均寿命を超えた加齢コオロギでは長期記憶の形成に加齢性記憶障害がみられることを報告した。さらに、メラトニンの脳内代謝産物であるAMKがこの加齢性記憶障害を改善することや、AMKが長期記憶の形成を増強できることを発見した。ただしその作用機序は全く分かっていない。そこで本研究は、行動薬理、LCMSによる質量分析、分子生物学的手法を用いて、コオロギの長期記憶の形成過程におけるAMKの分泌制御機構と修飾機構、および加齢性記憶障害の改善におけるAMKの作用機序の解明を目指す。
接着分子の発現様式に基づいた口腔癌頚部リンパ節転移の診断と治療に関する研究

口腔扁上皮癌の生検組織におけるE-カドヘリン、α-カテニンの発現様式と頸部リンパ節転移との関連性について免疫組織学的に検討を行った。対象50例のうち、口腔扁平上皮癌組織の発育先進部におけるE-カドヘリン非減弱型は14例、減弱型は36例であったのに対し、α-カテニン非減弱型26例、減弱型24例とほぼ半々の発現様式を示した。また、50例中19例がpN+であった。pN±とE-カドヘリン、α-カテニン発現様式との関係をみると、pN+例は発育先進部においてE-カドヘリン非減弱型はわずか1例のみであり、他の18例(94.7%)は減弱型であった。以上の所見より発育先進部の癌細胞がE-カドヘリンの減弱を示す症例は頚部リンパ節転移を来す症例の多いことが明らかとなった(p=0.0051)。この関係は、臨床的に頸部リンパ節転移を認めなかったN0症例31例を対象とした検討でも認められた(p=0.0169)。一方、α-カテニン非減弱型はpN+19例中9例であり、推計学的有意差を示さなかった。E-カドヘリン、α-カテニンの非減弱型、減弱型の組み合わせを行うと、E-カドヘリン非減弱型/α-カテニン非減弱型は10例、E-カドヘリン非減弱型/α-カテニン減弱型は2例、E-カドヘリン減弱型/α-カテニン非減弱型は9例、E-カドヘリン減弱型/α-カテニン減弱型は10例であった。E-カドヘリン、α-カテニンのいずれもが非減弱型を呈した症例といずれかあるいはいずれもが減弱型を呈した症例に分け、pN±との関係を検討した結果、ともに非減弱型の症例にはpN+症例が認められなかった(p=0.0056)。さらに、N0症例について同様の検討を行ったところ、推計学的に有意の関係が示された(p=0.038)。以上の結果より、原発癌組織の発育先進部におけるE-カドヘリン、α-カテニン発現様式の検索は頸部リンパ節転移の有無を予測する上で有用であることが示唆された。口腔扁平上皮癌一次症例のうち、切除術が行われた50例を対象にカドヘリン-カテニン複合体の発現の有無と頸部リンパ節転移の有無(pN±)との関係を検索した。50例中pN+は18例で、評価部位を癌の浸潤先進部で行ったところ、臨床病期の進行に伴ってE-カドヘリン、α-カテニンともに減弱を呈する傾向が認められた。