hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
チロシン脱リン酸化系シグナル分子の遺伝子改変マウスを用いた腎炎発症機序の解明

解析対象としたのはSHP-1と呼ばれる、非受容体型チロシンキナーゼである。SHP-1は血球系細胞に発現しており、造血細胞や免疫応答細胞の分化・増殖や活性化を抑制する働きを有することが知られている。我々は免疫応答の司令塔的役割を演じる樹状細胞特異的にSHP-1を欠損するマウスを樹立し、このマウスの腎における免疫病態を解析した。既に、本マウス(SHP-1-CKO)では抗核抗体や抗DNA抗体が血中に出現し、間質性肺炎や糸球体腎炎などの自己免疫病を発症することが我々のグループから明らかにされている(J Immunol 188:5397, 2012)。この事実は、樹状細胞に発現するSHP-1が免疫寛容の維持に重要な役割を果たしていることを示唆する。そこでSHP-1-CKOの腎病態をさらに詳細に解析したところ、Shp1-CKOは40週齢より尿中Na排泄の増加を伴った多尿を認め、60週齢では腎機能の低下を認めた。FCM解析では加齢に伴い腎臓内にCD11c、F4/80、CD4陽性細胞の増加がみられた。特にCD11c+F4/80+ダブルポジティブ細胞の増加を認め、これらの細胞では高頻度に増殖マーカーであるKi67が陽性であった。F4/80+細胞ではTNFα、IL-6などの炎症性サイトカイン産生亢進を認め、CD4+T細胞はメモリータイプのTh1細胞が主体であった。DC特異的Shp1欠損によりCD11c+F4/80+細胞増加とTh1細胞の集簇を伴う自己免疫性腎炎が惹起され、尿細管障害が引き起こされた。本研究課題によって示された事実より、DC特異的Shp1欠損によりCD11c+F4/80+細胞増加とTh1細胞の集簇を伴う自己免疫性腎炎が惹起されると考えられた。樹状細胞特異的にShp-1を欠損するマウスの解析は進んでいるが、SIRP-αを上皮細胞特異的に欠損する遺伝子改変マウスの樹立のその解析が遅れている。次年度もSHP-1-CKOマウスの解析に焦点を絞って進める。全身性エリテマトーデスでは免疫複合体型の糸球体腎炎を発症するが、同時に尿細管間質障害も高頻度に伴い、腎予後には間質障害の程度がより関係するとの成績もある。しかし、一般にはループスの尿細管間質障害は糸球体障害による二次的変化と捉えられ、そのメカニズムも十分には明らかにされてこなかった。これまでの解析では、本モデルの間質に浸潤する細胞は、CD11b+、F4/80+のマクロファージ系の細胞である。近年、腎臓局所には血中の単球とは発生学的に異なる組織常在マクロファージの存在が明らかにされており、局所における炎症や組織修復への関与が注目されている。本モデルは自己寛容の破綻に基づく尿細管間質腎炎モデルであり、腎局所でこれらのマクロファージが免疫応答と組織障害にどのように関与しているのか、今後解明していく予定である。Shp-1 cKOの解析に焦点を絞って進める。特に、近年SLE(全身性エリテマトーデス)においては、樹状細胞から分泌されるI型IFNにより賦活化される遺伝子の発現が強く認められるなど、SLEにおける病態形成にI型IFNが関与している事が強く示唆されている。従って本研究では、Shp-1 cKOから産生されるI型IFNなどのサイトカインに関して解析を進める。pDCは細菌に由来する特定の配列を有するDNA(ODN)によりTLR9が刺激されることにより、多量のIFNαを産生するので、Shp-1 cKOからpDCを単離してODNで刺激することにより産生されるIFNαを測定する。また、一部の古典的DCはウィルスの核酸代謝物のアナログであるPoly (I:C)によりTLR3が刺激されることによりI型IFNを産生するが、本研究ではPoly (I:C)をShp-1 cKOに投与しI型IFNの産生を確認する。
マイクロアロイング鋼の組織制御に関する熱力学的解析

Fe-C-Ti、Fe-C-NbおよびFe-C-V系における液相、オーステナイト、フェライトさらにNaCl型炭化物(TiC、NbC、VC)との相平衡と明らかにするために、各相の熱力学パラメータを推定し、コンピュータ計算を行った。オーステナイト中の各炭化物の溶解度積は、いづれも炭素濃度に依存するが、これはオーステナイトとNaCl型炭化物の平衡を2相分離として解析する事によりうまく説明出来た。2.Fe-C-Nb-V系におけるNbCとVCの2相分離の決定:鋼中にNbとVを複合添加すると、NbCとVCはお互いにあまり固溶しない事が予想それたので、実験的に2相分離線を決定した。各々の炭化物を電解抽出し、格子定数より組成を決定した結果、約1500°Cの臨界温度を有したほぼ対称の2相分離を有することがわかった。3.オーステナイト中のV炭化物の固溶度に及ぼす合金元素の影響:オーステナイト中のV炭化物の固溶度に対する合金元素の影響について、熱力学解析を行うとともに、実用的にも重要なSi、Ni、Crについては実験による確認も行った。その結果、オーステナイト中で、原子と反撥する傾向を有するSi、Ni、Al、Coは、VCの固溶度を減少させ、逆に引き合う傾向を持つCr、Mo、W、Mnは固溶度を増加させる事が予想された。これらの熱力学的な計算結果は、Si、Ni、Crの実験事実とも良く一致する事がわかった。Bは鋼の焼入性を高め、またアモルファス形成元素として重要であるが、固溶度が小さいために実験が困難であり、正確な相関係が必要とされている。そこで、Fe-B系とFe-C-B系の熱力学解析を行い、安定及び準安定状態図のコンピュータ計算を行った。鋼中にNbとVを複合添加すると、NbCとVCはお互いにあまり固溶しない事が予想それたので、実験的に2相分離線を決定した。マイクロアロイング鋼における代表的な合金元素Nb,Ti,V,Bを含む鋼の複雑な相平衡を明確に,予測するためのソフトウェアーを作成する事を目的として,状態図の熱力学的解析と実験的検討を行い次の結果を得た.1.FeーCーTi系の相平衡の熱力学解析FeーCーTi系における液相,オーステナイト,フェライトおよびNaCl型TiC炭化物との相関係を明らかにするために,各相の熱力学パラメータを推定しコンピュータによる計算を行った.マイクロアロイング鋼として重要なオーステナイト中のTiCの溶解度積は.炭素濃度に依存するが,これはオーステナイトとTiCの平衡を2相合離と考えて解析する事によりうまく説明出来た.さらに,0.3%Tiの添加によってオーステナイト単相領域は消失し,TiCが析出する事も明らかになった.これらに結果は,Calphad誌に印刷中である.2.FeーCーB系の相平衡の熱力学解析Bは鋼の焼入性を高め.またアモルファス形成元素として実用的にも重要であるが,固溶度が小さいために実験が困難であり,正確な相関係が必要とされている.そこで,FeーB系とFeーCーB系の熱力学解析を行い,相平衡を計算した結果,微量のB添加によってAcm線が低C側へ移行すること,1wt%B添加による液相線の試下は50000°Cと極めて大きいこと,Fe_<23>(C,B)_6は750°から1000°Cの温度範囲に安定に存在する事などが明らかになった.これらの結果を, 62年5月ドイツで行われた状態図の国際会議Calphadで発表した.3.FeーCーNbーV系におけるNbCとVCの2相分離の決定

鋼中にNbとVを複合添加するとNbCとVCはお互いにあまり固溶しない事が予想されたので,実験的に2相分離線を決定した.各々の炭化物を電解抽出し,格子定数より組成を決定した結果,約1500°Cの臨界温度を有したほぼ対称の2相分離を有する事がわかった.マイクロアイロング鋼における代表的な合金元素Nb,Ti,V,Bを含む鋼の複雑な相平衡を明確にするために、熱学的解析と実験的検討を行い次の結果を得た。Fe-C-Nb系における液相、オーステナイト、フェライト及びNbC炭化物との相平衡を明らかにするために、各相の熱学パラメータを推定し、コンピュータ計算を行った。オーステナイト中のNbCの溶解度積は、炭素濃度に依存するが、これはオーステナイトとNbCの平衡を2相分離と考えて解析する事によりうまく説明出来た。さらに、0.2%Nbの添加によってオーステナイト単相領域が消矢し、NbCが折出する事がわかった。2.オーステナイト中のV炭化物の固溶度に及す合金元素の影響オーステナイトやVCの固溶度に対する合金元素の影響について、熱力学解析を行うとともに、実用的にも重要なSi,Ni,Crについては実験による確認も行った。その結果、オーステナイト中でC原子と反発する傾向を有するSi,Ni,Al,Coは、VCの固溶度を減少させ、逆に引き合う傾向を持つCr,Mo,W,Mhは固溶度を増加させる事が予想された。これらの熱力学的な計算結果はSi,Ni,Crの実験事実とも良く一致する事がわかった。3.Fe-C-B系の平衡状態図を熱学的に解析したパラメータを用いて、準安定状態図を研鑽した。これらの結果は、この系のアモルファス相の結晶化過程をよく説明し、また低合金鋼におけるボロカーバイドの折出過程を理解する上で、非常に有用である事がわかった。
農薬に依存しないマイクロバブルオゾン水利用による環境保全型農業の構築

農薬に頼らない安全な野菜や果実の供給が求められており、新たな殺菌方法としてオゾンが注目されている。しかし、安全性の面から気体でオゾンを利用するには問題があり、オゾンを水と反応させて利用することが有効と考え本研究を行った。マイクロバブルオゾン水は水中でゆっくりと浮上し、オゾンを完全に水中へ溶かし込んで、オゾンが空気中に排出されることがないため安全性が高い。マイクロバブルを用いた場合、水中オゾン溶解濃度は温度が高くなるにつれ低下したが、常に高い溶解能力を示した。水中溶存オゾン濃度の半減期は既存技術と比較すると3倍も長く維持できた。マイクロバブルオゾン水の作物への茎葉への散布ではなんら障害は認められなかった。養液栽培では循環式養液栽培の普及が求められ、培養液のリサイクルでは一部でも病害虫に汚染されると、培養液が循環しているためすべての植物が最悪の場合全滅する恐れがある。マイクロバブルオゾン水によるトマトの青枯れ病予防試験ではオゾン5ppm処理の低濃度接種区で発病を完全に抑制した。なおトマト根部へのオゾン水に対する耐性試験では18ppmの高濃度に対し生育障害は認められなかった。オゾン水の土壌灌注が雑草の発生と生育に及ぼす影響ではオゾン水の土壌灌注回数が増えるにつれ雑草の発芽と生育は抑制された。チンゲンサイの養液哉培(NFT)におけるマイクロバブルオゾン水の利用で生育は促進された。マイクロバブルオゾン水のイチゴへの茎葉散布では生育と果実の収量・品質収量の増加が認められた。これらのことより、マイクロバブルオゾン水を利活用による、農薬に依存しない安心・安全な環境保全型農業の構築への展望が得られた。マイクロバブルオゾンは水中でゆっくりと浮上していく間にナノレベルまで縮小し,気泡内のオゾンを完全に水中ぺ溶かし込んで気泡が消滅し,オゾンが空気中に排出されることがないため安全性が高い.さらにマイクロバブルの優れた溶解力は,高効率でオゾンを処理水中に短時間で溶解させることが可能であった.トマト根部へのオゾン水に対する耐性試験では18ppmの高濃度に対し根部の成育障害は認められず,地上部への散布試験でもオゾン14ppmまでの濃度に対し茎葉への障害は認められず健全な成育を示した.また,トマトめ養液栽培におけるマイグロバブルオゾン水を用いた青枯れ病の予防効果について,青枯れ病の発生率:1回目の試験においてオゾン水無処理でぽ青枯れ病の接種が無処理,低濃度,高濃度でそれぞれ10.0,33.3,83.3%となった.オゾン5ppm処理では低濃度接種区の発病を完全に抑制したが,高濃度接種区ではその効果は小さかった.2回目の試験では1回目同様低濃度接種区のオゾン5ppm処理で発病が完全に抑制され,10ppmによる抑制効果も認められた.3回目の試験では低濃度接種区の発病はオゾン5ppm,10ppm処理でともに抑制効果が高かったが,高濃度接種区では抑制効果は小さくなった.しかし高濃度接種区は現実には考えられないほどの高濃度である.ただ特定の処理区で抑制効果が認められないところがあり,その要因として,オゾンと菌の接触め微妙な時間的ずれが考えられたので,今後実用に耐えられるようにオゾン濃度がー定時間維持可能なNFT栽培での検証を計画している.環境保全の面から排培養液を栽培施設外に出さない循環式養液栽培への移行が望まれている今日,病害防除の観点から,長期利用に耐え得る養液栽培を目指し,マイクロバブルオゾン水による効果的利用法の確立に努める.オゾンは強力な酸化力有し、この強力な酸化力(殺菌力)は、19世紀頃からヨーロッパを中心に様々な分野に於いて利用されており、日本では上下水道を始めとし、医療、食品等でも利用されその効果を発揮している。しかし気相でオゾンを利用するには危険を伴う。

本提案課題で使用装置から発生するマイクロバブルは、オゾンを水中に投入するとオゾンが空気中に排出されることがないため安全性が高く、高効率でオゾンを処理水中に短時間で溶解させることが可能である。また液相オゾン濃度の半減期が60分と従来と比較して3倍も長い。このマイクロバブルオゾン水製造技術を応用することで、強力な殺菌効果を農業において利活用した結果、養液栽培で防除がもっとも困難とされているアオガレ病菌に対し強力な殺菌効果を発揮した。しかし特定の処理区で抑制効果が認められないところがあり、その要因として、オゾンと菌の接触の微妙な時間的ずれが考えられた。またマイクロバブルオゾン水のイチゴの茎葉散布や培養液へ溶解で茎葉野菜の生育促進が認められた。環境保全の面から排培養液を栽培施設外に出さない循環式養液栽培への移行が望まれている今日、病害防除と生育促進の観点から、養液栽培における長期利用に耐え得る培養液利用の可能性が示唆された。また土耕栽培にあってはマイクロバブルオゾン水の散布で殺ダニ効果が認められ、多潅水による雑草の防除効果も得られ、地上部の殺虫、殺菌効果と土壌殺菌効果とあわせ、今後の利活用に大いなる希望が得られている。
参画型公共事業計画における理論と実践

本研究では,過去2年間で市民参画型の公共事業計画に必要な理論とコミュニケーション技術等について整理をしてきた.最終年度にあたる本年は,これまでに得た知見を実証的に検証し,市民参加の実務へ適用するにあたっての課題を整理した.つぎに,「中京圏における行政の政策等課題に関する住民参画手法調査」を実施し,中京圏で展開されている行政への住民参加・参画の実態を探り,事例・当事者が抱えられている課題を収集し,その共有化される課題や解快への手法等を整理した.【実務担当者の課題整理】また,市民参加で求められる教育手法として,市民を対象とした道路事業に関する基礎的知識を共有する手法を提案した.具体的には「南信州ひと・みち住民フォーラム」が主催した「道路事業を知る勉強会(2005年2月24日開催)」を事例とした.まず市民の疑問や関心事項を聞き、専門家が回答するというアプローチを取ることで、市民のニーズに応じた効率的な情報提供が可能になったといえる.【教育手法の提案】さらに,岐阜市の総合交通体系を考える市民交通会議に学識者という立場で参画し市民参加のプロセス設計及び実行を行った.松本市では,公平な市民意向確認方法等を提言しプロセスを司る第三者の立場(松本・四賀直結道路市民意向確認研究会)から道路建設可否に対する市民の意向を確認した.これら参画型公共事業計画の実践を通じて得られた知見を整理して発表する予定である.【実務への適用】これらは,今後の市民参加や社会的合意形成実務に寄与するものと思われる.本研究の研究実績として、以下の2点を挙げる。(1)国内のコミュニケーションの専門家へのヒアリングによる現状把握パブリック・インボルブメント(PI)、社会的合意形成等の実務者8名に、「土木事業に必要なコミュニケーション」に関してヒアリングを行ったものを、「土木とコミュニケーション(印刷中)」として、一般の方へも分かりやすいようにインタビユー形式でまとめている。これより、土木とコミュニケーションの実情、成功事例、合意形成の理論とテクニック、ファシリテーターのノウハウ、PI技術者の育成、コミュニケーションの発想・仕組みづくり、参加協働型社会における土木技術者の在り方などの現状が断片的ではあるが分かった。(2)PI技術者養成プログラム・プロトタイプの構築PI技術者養成プログラムのプロトタイプを構築し、ある建設系コンサルタント会社において試行を重ねた。具体的には、受講者14名、計12回のワークショップにおいて、海外のPI技術者のコアバリュー・倫理の紹介、PIの理論、コミュニケーションツールの体験、ワークショップの運営、ニュースレターの作成、情報収集を参画型で行った。これより、PIに関する知識・技能がほとんどなかったプログラム受講者が、最終的には社内でオープンハウスとワークショップを開催(PIツールを活用)することが出来るようになった。さらに、社内で自主的な勉強会が立ち上がる、データベースが整備されるなどの付加的な成果も得られた。これらは、今後論文として整理し発表する予定である。また、研究テーマの一つである参画型公共事業計画におけるITツールの利用に関して、研究代表者も関与しているNPO法人PI-Forumがナレッジマネジメントシステム(http://pi.pi-forum.org/)を立上げた。今後は、活用→改善プロセスにおける問題解決を図る予定である。参画型公共事業計画においては,市民,行政,企業,大学,NPO等の協働が必須である.今年度は,各組織の現状と課題を明らかにし,今後の対応策を検討した.まず,行政機関に対しては,「中京圏における行政の政策等課題に関する住民参画手法調査結果」に基づき,中京圏の行政機関が展開している住民参加の実施状況と担当職員の意識を分析した.これより,住民参加の実務担当者として,既に現場を多数経験し知識も技術も豊富な職員がいる一方,体系的な参加の理論・技術を体得する機会を必要している初心者的職員も多いことが分かった.また,土木系の建設コンサルタントの技術者を対象とした市民合意形成プロデューサー養成プログラムの開発を行った.ここでは,学習者同士で協力して問題を発見し解決する参画力を養うため,教育学の分野で研究されている参画教育を導入した.これより,学習者が,(1)合意形成プロデューサーに必要なコミュニケーション技術の一部を体験しそこから学びを得ること,(2)学習者同士で協力して問題を発見し解決する参画力を養うこと,が可能なプログラムとなった.さらに,構想段階において市民参加(パブリック・インボルブメント;PI)が導入された三重・津市自転車ネットワーク検討事例をもとに,PI初動期のPIプロセスや合意形成技術についての研究を行った.ここでは,PI初動期における利害関係者の集中的なミーティングとファシリテーションの重要性が確認された.この他,岐阜市の総合交通体系を考える際の市民参加に学識者という立場でファシリテーションを行った.また,NPO法人PI-Forumを研究対象とし,参画型公共事業計画におけるNPOの役割を模索している.今後は,これら参画型公共事業計画の寒践を通じて得られた知見を整理して発表する予定である.本研究では,過去2年間で市民参画型の公共事業計画に必要な理論とコミュニケーション技術等について整理をしてきた.最終年度にあたる本年は,これまでに得た知見を実証的に検証し,市民参加の実務へ適用するにあたっての課題を整理した.つぎに,「中京圏における行政の政策等課題に関する住民参画手法調査」を実施し,中京圏で展開されている行政への住民参加・参画の実態を探り,事例・当事者が抱えられている課題を収集し,その共有化される課題や解快への手法等を整理した.【実務担当者の課題整理】

また,市民参加で求められる教育手法として,市民を対象とした道路事業に関する基礎的知識を共有する手法を提案した.具体的には「南信州ひと・みち住民フォーラム」が主催した「道路事業を知る勉強会(2005年2月24日開催)」を事例とした.まず市民の疑問や関心事項を聞き、専門家が回答するというアプローチを取ることで、市民のニーズに応じた効率的な情報提供が可能になったといえる.【教育手法の提案】さらに,岐阜市の総合交通体系を考える市民交通会議に学識者という立場で参画し市民参加のプロセス設計及び実行を行った.松本市では,公平な市民意向確認方法等を提言しプロセスを司る第三者の立場(松本・四賀直結道路市民意向確認研究会)から道路建設可否に対する市民の意向を確認した.これら参画型公共事業計画の実践を通じて得られた知見を整理して発表する予定である.【実務への適用】これらは,今後の市民参加や社会的合意形成実務に寄与するものと思われる.
大腸癌の予後に関連するnon-cording RNA FTXに関する検討

タンパク質をコードする遺伝子領域以外の非コードDNA領域の割合はヒトでは全ゲノムの98%にも達するが、その大半がnon-cording RNAに転写されている。近年、分化,がん化,アポトーシスや細胞老化に関与する癌関連long intervening noncoding RNA (lincRNA)が多数報告されている。われわれは先行研究で大腸癌の遺伝子発現マイクロアレイによるPublicデータベースからのin silico解析および臨床検体を用いたreal time PCR解析から、大腸癌の予後に深く関連することが予測されるlincRNAとしてX染色体上のXq13.2に存在するFTXを同定し、本研究ではFTXの腫瘍発生における機能解析および大腸癌のバイオマーカー、治療標的としての可能性を検証している。大腸癌におけるFTXの機能解析ではsiRNAによるFTXのノックダウンで細胞増殖能の抑制(WST assay)および浸潤能の抑制(Invasion assay)が誘導されることを示した。FTX高発現群は悪性度が高く有意に予後不良であった。FTXは大腸正常粘膜ではほとんど発現が見られず、大腸癌組織において発現が見られる症例の多くはわずかな発現上昇にとどまっていた。さらに微量RNAの発現およびわずかな差を検出可能なシステムが必要と考え、より検出感度の高いdigital PCRを用いた定量解析を施行中である。これまでの検討でFTX発現は大腸癌腫瘍内でも部位により異なり、大腸癌原発巣におけるgenetic heterogeneityとFTX発現について検討中である。またFTXの大腸癌悪性度に関するメカニズムを検討するため、大腸癌原発巣の複数部位におけるタンパクアレイを施行し、FTX発現とgenetic heterogeneity,それぞれに対応するタンパク発現について検討中である。大腸癌組織のバルクサンプルから抽出したRNAを用いた遺伝子発現解析(TaqMan PCR)では、先行研究と同様にFTX高発現群は悪性度が高く有意に予後不良であった。FTXは大腸正常粘膜ではほとんど発現が見られず、また大腸癌組織において発現上昇が見られる症例でもその多くはわずかな発現上昇とどまっていた。したがってさらに微量RNAの発現およびわずかな差を検出可能なシステムが必要と考えられ、より検出感度の高いdigital PCRで定量解析を行い、real time PCRで検出されなかった症例でも正常組織と比較してFTXの発現が見られる症例が存在していた。大腸癌原発巣におけるFTX発現のheterogeneityとその機能を解析するため、大腸癌12例14腫瘍で原発巣3ヶ所ずつからmultiregional samplingを施行し検討を進めている。がん関連151遺伝子を標的とした遺伝子パネルClearseqSScomprehensive panelを用いた変異解析を行った。3ヶ所で共通する変異(Founder mutation)は1腫瘍用に平均3.7個、1,2ヵ所のみで見られる変異(non-founder mutation)は平均8.4個と個々の腫瘍のgenetic heterogeneityを明らかにした。それぞれの部位における遺伝子変異状況とFTX発現について関連を検討中である。同採取部位における281の特異的抗体を用いた逆相タンパクアレイでは、遺伝子変異パターンとタンパク発現パターンには相関が見られず、変異からタンパク発現を予測することは困難なことを明らかにした。今年度の研究推進方策として大腸癌原発巣のheterogeneityとFTX発現の関係をさらに検証するため大腸癌30例を追加して検証する。変異解析については、効率の良い40遺伝子を対象とした大腸癌遺伝子パネルを用いて行っている(解析済み)。各部位の変異状況とFTX発現を同様に解析中である。これまでの検討で遺伝子変異とタンパク発現の関連が小さいことから、遺伝子発現レベルでの悪性度や予後予測、治療効果予測は重要と考えられる。腫瘍内部位別のFTX発現レベルとタンパク発現状況から、FTXの標的となる分子の探索を中心に行っていく。研究室では患者採血検体を用いた癌診断、予後診断、治療効果判定も重要なプロジェクトとしている。3部位からの組織採取と血液検体採取を行っている症例は70症例以上にのぼる。血漿中の癌細胞由来のDNA (Circulating tumor DNA)の解析からliquid biopsyに関する多くのノウハウを有しているが、FTX発現は正常大腸組織では発現が見られないことから、血中のFTX発現定量による大腸癌診断・予後診断というliquid biopsyの可能性についても検討したい。にFTX高発現群は悪性度が高く有意に予後不良であった。

したがってさらに微量RNAの発現およびわずかな差を検出可能なシステムが必要と考えられ、より検出感度の高いdigital PCRを用いた定量解析を施行中である。大腸癌原発巣におけるheterogeneityとFTX発現について、原発巣3ヶ所ずつから組織を採取、がん関連151遺伝子を標的とした遺伝子パネルを用いた変異解析、281の特異的抗体を用いた逆相タンパクアレイを施行し、腫瘍部位別のFTX発現の差およびFTX発現が大腸癌発生や不良な予後に影響するメカニズムを検証中である。大腸癌におけるFTXの機能解析ではsiRNAによるFTXのノックダウンで細胞増殖能の抑制(WST assay)および浸潤能の抑制(Invasion assay)が誘導されることを示した。大腸癌組織のバルクサンプルから抽出したRNAを用いた遺伝子発現解析(TaqMan PCR)では、先行研究と同様にFTX高発現群は悪性度が高く有意に予後不良であった。FTXは大腸正常粘膜ではほとんど発現が見られず、また大腸癌組織において発現上昇が見られる症例でもその多くはわずかな発現上昇とどまっていた。したがってさらに微量RNAの発現およびわずかな差を検出可能なシステムが必要と考えられ、より検出感度の高いdigital PCR (QuantStudio 3D digital PCR system, ThermoFisher Scientific社)を用いた定量解析を行い、real time PCRで検出されなかった症例でも正常組織と比較してFTXの発現が見られる症例が存在していた。FTXの微量な発現が大腸癌の悪性度に寄与している可能性が示唆されたが、大腸癌原発巣における全細胞(全領域)がサンプル採取部位と同等のFTX発現を示すとは考えづらく、大腸癌原発巣におけるheterogeneityとFTX発現について解析している。大腸癌12例14腫瘍で原発巣3ヶ所ずつから組織を採取し、がん関連151遺伝子を標的とした遺伝子パネルを用いた変異解析、281の特異的抗体を用いた逆相タンパクアレイを施行した。3ヶ所の組織採取部位で共通する変異(Clonal mutation)は78.6% (11/14)で見られたが、すべての腫瘍で1あるいは2採取部位にのみに見られる変異(Subclonal mutation)が確認された。これらの変異情報のある部位別のFTX発現を検証中である。タンパク質をコードする遺伝子領域以外の非コードDNA領域の割合はヒトでは全ゲノムの98%にも達するが、その大半がnon-cording RNAに転写されている。
気候変動に伴う亜高山針葉樹林帯の分布変化の検出

本研究の目的は、気候の変動にともなう植生の変化を検出することである。我が国の山地では気温の上昇に伴って、温暖な低標高域の植生が、寒冷な高標高域へ分布を拡大していることが予想される。そこで、本年度は比較的低標高域で2つの異なった植生タイプが接している筑波山での植生の変化を検出した。その結果、筑波山では低標高域に分布していたアカガシを主体とする常緑広葉樹林が高標高域に分布を拡大していた。この植生変化の要因をアカガシの生態的特性と気象観測データの双方から検討したところ、冬期の日最低気温の月平均値が上昇していることが主な要因であることが明らかとなった。この結果については、3月に口頭で発表した。また、昨年度研究を行って成果を得られた多雪山地(北アルプス)の植生変化を定量化し、8月に国際学会で口頭で発表した。本研究の目的は気候の変動による植生の変化を検出することである。我が国の山岳の高標高域では積雪によって植生種が規定されている場所が多く、近年山岳地の積雪の量が気候の変動によって変化しているという報告も見られる。これらのことから、本年度は積雪と亜高山針葉樹林の分布限界の関係性を中心に検討した。その結果、次の3点を明らかにすることができた。1.亜高山針葉樹林と高山植生(湿原)の分布境界の決定要因について、群馬県と新潟県に跨がる奥只見地域で検討し、積雪分布と亜高山針葉樹林内の湿原分布が正確に対応すること、つまり、多雪地域では亜高山針葉樹林の分布は積雪に規定されていることを明らかにした。2.亜高山針葉樹林の上限域の植生構成種の経年変化について、北アルプス黒部川源流域で空中写真による調査および現地での植生調査を行った結果、亜高山針葉樹林上限域では積雪量の変化よりも積雪が消失する時期の変化が植生の変化に影響を及ぼしていることを明らかにした。3.上記の1,2で得られた植生変化と積雪量変動の対応を検討するために、奥只見地域および黒部川流域の各関係機関に要請して積雪量観測記録を入手して積雪量の変動を追跡した結果、積雪量変動と植生変化の関連性を明らかにした。以上の3点から我が国の多雪地域に分布している亜高山針葉樹林の上限域では積雪量が減少しているために、亜高山針葉樹林の上限が上昇している事が明らかになった。本年度は研究開始年であったが、事前の準備などにより研究が早期に進展したため、年度内に研究成果を盛り込んだ論文を学術誌に投稿・掲載することができた。また、それを踏まえた新しい展開を含んだ内容を年度末の学会で発表することができた。そのため、当初の計画以上に進展していると評価した。本年度は研究開始年であったため、機材の準備などにやや手間取った。そのため、本格的なフィールドワークは次年度以降に行うこととなる。次年度以降はフォールドワークによる詳細なデータを盛り込んた詳細な研究成果を発表することが期待される。少額残金が生じたことから、次年度に繰り越して有効活用することにしたため。次年度予算に繰り込んで旅費等の調査費用として使用する予定。
免疫処理腎炎自然発症マウスでの人腎炎モデル誘発に関する免疫組織学的研究

2年間にわたり実施した本研究では、40週齢以降の雌ddYマウスに、腸管(バイエル板)抗原感作+肝臓細網内皮系機能抑制操作を行なう事によって比較的効率良く殆どの動物にIgA免疫複合体の糸球体沈着を惹起させうる事ができた。しかしながら、ヒトIgA腎炎で必ず見られる血尿は殆どの例で認められず、幼若410週齢の雌や雄ddYマウスでは、前記の様な所見は惹起されずヒトIgA腎炎モデルとしては、まだまだ、解決すべき問題点を多く残している。これらの問題点のうち、63年度研究では、成獣雌ddYマウスにしばしば報告されているレトロウィルス起因の乳腺癌と血清IgA値の高値に注目し、上記の腸管抗原感作+肝臓細胞内皮系機能抑制操作の比較の意味で、乳腺抗原感作+肝臓細網内皮系機能抑制操作を行ない、腎糸球体へのIgA沈着を調べた。その結果、腸管抗原感作例のようなIgA免疫複合体の糸球体沈着はみなかった。この所見は腸管IgA由来免疫複合体がIgA腎炎発症に主として関与するものとして注目される。肝細網内皮系もまた、今回のIgA沈着に重要な役割を担っている事が示されたが、肝障害モデル動物など用い、今後、検索を続けたい。今回の一連の研究では、電顕観察可能なパーオキシダーゼ(HRP)を単独抗原として用いたが、少しでも高率にヒトIgA腎炎に近い発症を惹起させるため、hanptenなどの併用の検討も、今後追試したい。老齢(40週令以降,雌)のddyマウスでは稀にIgA腎炎を自然発症することが報告され(今井ら, 1985)ヒトIgA腎炎モデルとしての可能性が注目されている.本研究課題では,生後550週令ddyマウス(雌)を用い,腸管に抗原感作し抗体産生(IgAを中心とした)惹起,それら特異抗体の腎糸球体への沈着機構について免疫組織学的な検索を光顕並びに電顕を用いて行った.〔実験方法〕抗原はバーオキシダーゼ(HRP)(東洋紡社)を用いFreuno完全アジュバンドと共に注射針にて空腸並びにバイエル板に感作し, 23週間後追加免疫を行い,更に1週間経由した動物の腎臓を摘出,それら臓器での, HRP抗体の局材を酵素抗原法とDAB法により調べた.一群の動物は腎臓摘出の3日前に尾静脈よりペリカンインクを局注し肝網内系機構抑制したものを用いた.また, HRP抗体とIgA抗体の相関については,一部電気泳動法により両者の交差を調べた.〔結果と考察〕最も強く腎糸球体にHRP抗体の沈着を見たのは老齢マウスの肝網内系機構抑制を行った例であった.それらでは糸球体のparamesangial regionに一致してHRP抗体の沈着を認め,部分的なmesangial matrixの増生像など病変も認められた.FITG標識IgA抗体で反応を行ったところ,それらHRP抗体の沈着部に一致してIgA抗体の沈着を認めた.しかしながら,ヒトIgA腎炎に特徴的な血尿は,これらddyマウスでは認められなかった.また肝網内系機能抑制を行わなかった例でもIgA抗体の沈着を示す例もあった.他方, 810週令ddyマウスでも,老齢マウス同様肝網内系機能抑制例に, HRP抗体の沈着を認めた.しかしながら特異抗体沈着の程度は老齢マウスに比べ弱いものであった.本年度は,これら所見に加えNZW/F_1マウスを用い同様の実験を行い,これらの観察結果でのヒトIgA腎炎モデルとしての考察を行う.2年間にわたり実施した本研究では、40週齢以降の雌ddYマウスに、腸管(バイエル板)抗原感作+肝臓細網内皮系機能抑制操作を行なう事によって比較的効率良く殆どの動物にIgA免疫複合体の糸球体沈着を惹起させうる事ができた。稀に雌ddYマウスにみるIgA腎炎がヒトIgA腎炎モデルとして注目され、一連の研究を進めているが、特に乳癌の発症をみる老齢雌に高い割合で発症していることから、本年度は乳腺腫瘍由来免疫複合体に関連するかどうかについて、下記Iの如く実験を行ない検討した。

また、ヒト血清腎炎モデルとして、食虫目スンクス口蓋扁桃に着目し、下記IIの如く実験を行ない検討した。〔実験I〕4060週齢雌ddYマウス(20匹前後)を用い、パーオキシダーゼ(HRP)/Freund完全アジュバント混合液(2mg/ml)を乳腺部に0.01ml局注し、2週間後、追加免疫しさらに4日後にペリカンインク/生理食塩水(2mg/ml)を尾静脈より注入し、肝臓の細網内皮系機能抑制を行ない、さらに、3日後の動物での腎糸球体のHRP免疫複合体沈着を酵素抗原法を用い検索した。〔結果〕乳腺部HRP抗原感作動物では、昭和62年度の腸管HRP抗原感作例のような典型的なHRP抗体の糸球体沈着は殆ど観察することができなかった。したがって、乳腺部由来のIgA抗体というより、むしろ腸管由来IgA抗体の沈着の可能性が高い。〔実験II〕免疫処理腎炎モデルとして、スンクス口蓋扁桃をHRP/Freund完全アジュバント混合液で感作し、2、3、4週後追加免疫を行ない、血清HRP抗体価を上昇させた後、それら動物の腎臓を摘出し、実験I同様HRP免疫複合体の糸球体沈着を調べた。〔結果〕約1/3の割合で、それらスンクス腎糸球体に扁桃由来HRP抗体のsubmesangial域での沈着とmesangial matrixの軽度増生を認めた。HRP抗体のIgM、IgG、IgAパターンについては現在、解析中である。この所見は、スンクス扁桃を免疫処理することによって、ヒト扁桃原発血清腎炎モデルとして使える可能性を示したものとして注目される。
レトロウイルス感染阻止をめざした遺伝子治療モデルの確立

レトロウイルス誘発性疾患のモデルとしてマウスフレンド白血病ウイルス(FLV)の系を用いて遺伝子治療モデルを確立する目的で実験を行った。導入遺伝子は野生マウスより見いだされた宿主遺伝子の一つでecotropicマウス白血病ウイルス(MuLV)に抵抗性を示すFv-4^r遺伝子である。平成11年度には発現効率の良い遺伝子導入骨髄キメラマウス作製条件を検討し、遺伝子導入マウスのウイルス抵抗性について明らかにした。平成12年度では遺伝子導入を行った際のFv-4^r遺伝子の作用機序について検討した。FLV-ENV-GFPを用いた実験から、Fv-4^r遺伝子産物はレセプター干渉作用によって抵抗性を発現していることが示された。平成13年度はヒトのレトロウイルス感染性疾患への応用という観点から、免疫系の作用とウイルス抵抗性について検討を行った。免疫系が抑制された宿主においても遺伝子導入が有効であるかどうかを検討するため、胸腺摘出を行った宿主マウスに骨髄移植を行って、ウイルス抵抗性が得られるかどうかを検索した。胸腺摘出骨髄移植マウスはT細胞系の機能不全のため著明な免疫抑制状態に陥るが、Fv-4^r遺伝子を導入した骨髄細胞を移植すると、通常のマウスへの骨髄移植と同等の抵抗性を発現することがわかった。即ち、Fv-4^r遺伝子を用いた遺伝子治療ではレセプター干渉作用によってウイルスの感染が阻止されているので、宿主が免疫抑制状態にあっても十分な治療効果が得られる。このことはエイズをはじめとするヒトのウイルス感染性疾患においても、レセプター干渉を目指した遺伝子治療が有効となりうることを示している。以上、本研究の遂行によってレセプター干渉作用によりウイルス抵抗性を誘導しようとする遺伝子治療モデル系は有効であるとともにヒトの疾患への応用も可能であり、有意義なレトロウイルス治療モデルを確立することができた。レトロウィルス誘発性疾患のモデルとしてマウスフレンド白血病ウィルス(FLV)の系を用いて遺伝子治療モデルの確立をめざして実験を行った。導入遺伝子はecotropicマウス白血病ウィルス(MuLV)に抵抗性を示すマウス宿主遺伝子の一つであるFv-4^r遺伝子である。1)発現効率の良い遺伝子導入キメラマウスの作製C3Hマウス(Fv-4^r遺伝子をもたないマウスでFLV感受性)の骨髄細胞にFv-4^r遺伝子を導入した後、同系のC3Hマウスに骨髄移植することによってFv-4^r-C3H->C3H骨髄キメラマウスを作製した。遺伝子導入に用いるベクターとしてはレトロウィルス(SFFV)ベクターを用い、骨髄細胞との混合培養条件を至適化することによって、効率の良い遺伝子発現を起こす条件を決定した。その結果、本来このFv-4^r遺伝子を持っているC4Wマウスと同等に近いレベルの発現を造血系の細胞で示すキメラマウスを得ることに成功した。また、この遺伝子発現は1年以上の長期にわたって持続することも確認された。2)遺伝子導入マウスのウィルス抵抗性さらに、このキメラマウスにおける抵抗性発現のメカニズムについて検討する実験を進めている。レトロウイルス誘発性疾患のモデルとしてマウスフレンド白血病ウイルス(FLV)の系を用いて遺伝子治療モデルを確立することを目的として実験を行った。前年度までに発現効率のよい遺伝子導入骨髄キメラマウスの作製、遺伝子導入マウスのウイルス抵抗性については報告した。今年度は導入遺伝子の作用機序を探る目的で実験を行い、以下の成果を得た。1)遺伝子導入骨髄

キメラマウスの血球系細胞へのウイルス結合性の検討:Fv-4^r遺伝子産物は細胞表面に存在するウイルスレセプターに結合することによって新たなウイルスの感染を阻害する可能性が考えられている。そこで、FLV-ENV-GFP(FLVのENV蛋白にGFPを結合させたもの)をvaculovirusの系を用いて作製し、様々な程度にFv-4^r遺伝子産物を発現した遺伝子導入マウスの細胞に結合させた。その結果、Fv-4^r遺伝子産物の発現量に逆相関する形でFLV-ENV-GFPの結合が認められ、レセプター干渉作用が起こっていることが実証された。Fv-4^r遺伝子産物を様々な濃度で結合させた血球細胞にFLV-ENV-GFPを結合させたところ、やはり同様にレセプターへの結合における競合が認められた。さらに、遺伝子導入マウスにおける免疫系の作用とウイルス抵抗性について検討する予定である。レトロウイルス誘発性疾患のモデルとしてマウスフレンド白血病ウイルス(FLV)の系を用いて遺伝子治療モデルを確立する目的で実験を行った。導入遺伝子は野生マウスより見いだされた宿主遺伝子の一つでecotropicマウス白血病ウイルス(MuLV)に抵抗性を示すFv-4^r遺伝子である。平成11年度には発現効率の良い遺伝子導入骨髄キメラマウス作製条件を検討し、遺伝子導入マウスのウイルス抵抗性について明らかにした。平成12年度では遺伝子導入を行った際のFv-4^r遺伝子の作用機序について検討した。FLV-ENV-GFPを用いた実験から、Fv-4^r遺伝子産物はレセプター干渉作用によって抵抗性を発現していることが示された。平成13年度はヒトのレトロウイルス感染性疾患への応用という観点から、免疫系の作用とウイルス抵抗性について検討を行った。免疫系が抑制された宿主においても遺伝子導入が有効であるかどうかを検討するため、胸腺摘出を行った宿主マウスに骨髄移植を行って、ウイルス抵抗性が得られるかどうかを検索した。胸腺摘出骨髄移植マウスはT細胞系の機能不全のため著明な免疫抑制状態に陥るが、Fv-4^r遺伝子を導入した骨髄細胞を移植すると、通常のマウスヘの骨髄移植と同等の抵抗性を発現することがわかった。即ち、Fv-4^r遺伝子を用いた遺伝子治療ではレセプター干渉作用によってウイルスの感染が阻止されているので、宿主が免疫抑制状態にあっても十分な治療効果が得られる。このことはエイズをはじめとするヒトのウイルス感染性疾患においても、レセプター干渉を目指した遺伝子治療が有効となりうることを示している。以上、本研究の遂行によってレセプター干渉作用によりウイルス抵抗性を誘導しようとする遺伝子治療モデル系は有効であるとともにヒトの疾患への応用も可能であり、有意義なレトロウイルス治療モデルを確立することができた。
知的障害特別支援学校におけるスクールカウンセリングの実態と適用上の課題の検討

知的障害のある子どものメンタルヘルスの不調は、一般の子どもと同じか、それ以上の割合で発生している。特別支援学校(知的障害)においてもカウンセリングなどの教育相談のニーズがあると考えられるが、スクールカウンセラーは配置が少ない状況である。そこで本研究は、特別支援学校におけるスクールカウンセリングの実態を明らかにし、そこから課題について検討する。研究結果から、知的障害のある子どもたちのメンタルヘルスの増進と不調の予防に貢献し、特別支援学校における教育相談体制の充実と発展に貢献するための提言をまとめる。
食道癌幹細胞を標的とした新しい集学的治療体系の確立

食道癌幹細胞マーカー候補因子としてCYHR1 (cysteine/histidine-rich1)を同定した.食道癌細胞株によるCYHR1遺伝子の減弱は、癌細胞の増殖能低下、浸潤能低下を引き起こし、マウス皮下における腫瘍形成能を低下させた.また、ヒト食道癌組織におけるCYHR1mRNA発現の検討では、高発現群がリンパ節転移を高率に有し、生存率が有意に低く、腫瘍深達度、リンパ節転移、病期などの因子を含めた変量解析において、独立した予後因子であった.以上の結果からCYHR1は、食道癌における新規予後因子マーカーのみならず、治療ターゲットとなりうる因子であることが示された.昨年度に、食道癌細胞を用いたスフェア形成能を調べるSpheroidcolony assayに成功し、スフェア形成細胞およびスフェア非形成細胞間におけるDNAマイクロアレイにより食道癌幹細胞マーカー候補因子を同定することができた.各々の因子について、食道癌細胞株による増殖能、浸潤能評価を含めた機能解析、を行い、結果が良好である3つの因子についてさらにノックアウト細胞の樹立による親株との比較実験、DNAストレス下の活性酸素産生能および抗癌剤を用いた薬剤感受性実験、マウス背部への腫瘍細胞移植による腫瘍形成能の評価、手術標本での各因子発現と臨床病理学的因子との関連性評価を行った.全体としての計画はほぼ予定通りに進行している.スフェア形成細胞においてはFhitタンパクと共役しているFdxr蛋白発現、DNA障害後のROS産生,アポトーシス誘導状態の評価,抗癌剤を用いた薬剤耐性実験を行い,E-cadherinやVimentinの発現を含む間葉系マーカー、EMTマーカーおよび幹細胞マーカー発現の評価を行った.新規共役蛋白であるALDH2の解析は現在進行中であるが、一定の結果は得られていない.食道癌組織におけるFhit, Fdxr発現と食道癌症例における治療抵抗性の関連性についての評価も終了しているが、治療抵抗性症例に対する克服法の開発に関連する実験は進行中であり結果が確認されていない状況である.現在は食道癌患者の組織標本における幹細胞マーカーの発現を基にした、治療前の効果予測の前向き試験を準備している.食道癌幹細胞マーカー候補因子としてCYHR1 (cysteine/histidine-rich1)を同定した.食道癌細胞株によるCYHR1遺伝子の減弱は、癌細胞の増殖能低下、浸潤能低下を引き起こし、マウス皮下における腫瘍形成能を低下させた.また、ヒト食道癌組織におけるCYHR1mRNA発現の検討では、高発現群がリンパ節転移を高率に有し、生存率が有意に低く、腫瘍深達度、リンパ節転移、病期などの因子を含めた変量解析において、独立した予後因子であった.以上の結果からCYHR1は、食道癌における新規予後因子マーカーのみならず、治療ターゲットとなりうる因子であることが示された.食道癌細胞を用いて幹細胞の特長であるスフェア形成能を調べる.Spheroidcolony assayは正常な神経幹細胞の培養方法として確立されたものであり,プレート表面を特殊加工して上皮細胞が決して接着しない条件で,血清無添加培地にepidermal growthfactorおよびbasicfibroblast growthfactorを加えて,数週間培養して球状のコロニーが形成されるかどうかを調べるアッセイである.本年度中に、当初の最大目的であった食道癌細胞を用いて幹細胞様の機能を有するスフェア形成細胞の樹立に成功した。現在、EMTマーカーおよび間葉系マーカーの発現確認実験によりVimentin発現上昇、上皮マーカー発現低下の確認が行われた。また細胞による薬剤感受性試験を施行中である。また、スフエア形成細胞における遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレイにより評価終了し、現在その解析に入っている。特に大きく発現が変化した約10個の遺伝子については臨床検体による発現状況を確認している。最終年度は、6種類の食道癌幹細胞マーカー候補因子を同定することができた.各々の因子について、食道癌細胞株による増殖能、浸潤能評価を含めた機能解析を行い、結果が良好である因子についてさらにノックアウト細胞の樹立による親株との比較実験、マウス背部への腫瘍細胞移植による腫瘍形成能の評価、手術標本での各因子発現と臨床病理学的因子との関連性評価を行い、極めて重要な結果を得ることができた.その中でも、食道特に良好なデータを示すことができた因子は、CYHR1 (cysteine/histidine-rich1)であった.食道癌細胞株によるCYHR1遺伝子の減弱は、癌細胞の増殖能低下、浸潤能低下を引き起こし、マウス皮下における腫瘍形成能を低下させた.また、ヒト食道癌組織におけるCYHR1mRNA

発現の検討では、高発現群がリンパ節転移を高率に有し、生存率が有意に低く、腫瘍深達度、リンパ節転移、病期などの因子を含めた多変量解析において、独立した予後因子であることを解明した.以上の研究成果については、論文作成を行いすでに投稿中である.また、食道癌患者の組織標本における治療感受性因子および耐性因子発現と、治療前効果予測に対する研究においては、7種類の候補因子について治療効果との相関を検討し、最終的には、癌抑制遺伝子産生蛋白、遺伝子修復因子、薬剤耐性因子、活性酸素調節因子の4種類の因子に関して治療効果との良好な相関状況を確認し得た.現在はその因子による最良の組み合わせを基にした効果予測に関しての論文を作成中である.腫瘍外科学H24年度の計画である、癌幹細胞マーカーの解明におけるEMTマーカーおよび間葉系マーカーの発現確認、Spheroid colony assay、Microarray、細胞および組織における食道癌幹細胞マーカー発現、化学放射線療法感受性因子の動物実験による検証の各項目については施行済みである.H25年度の計画である癌幹細胞シグナル経路と治療抵抗性のメカニズム解明およびその克服法の開発のおけるFHIT蛋白の共役蛋白として同定された他の蛋白についての機能解析についてはそのFdxrについての解析は終了しているが、新規共役蛋白であるALDH2の解析は現在進行中である.治療抵抗性克服法の開発に関する実験は進行中である.ただし、H26年度計画の、組織検体を用いたマーカー発現による奏功例,非奏功例の予測確認についてはすでに評価が進行しており、感受性因子の有無による治療感受性症例の予測前向き試験に対する準備も着実に行われている状況である.以上から全体としては、計画通りの進行状況と考えている.食道癌細胞を用いて幹細胞の特徴を有するスフェア形成細胞の樹立に成功した.スフェア形成細胞と親細胞との間におけるDNAマイクロアレイを行い、マーカーとなりうる標的遺伝子検索を行った.アレイにより指摘された幹細胞マーカー候補分子の発現確認を蛋白,RNAレベルで開始している.培養細胞および臨床検体での評価を進めている。EMTマーカーおよび間葉系マーカー発現との関連性も確認中であり、幹細胞マーカーとしての整合性を評価している。H24年度の計画である、癌幹細胞マーカーの解明、H25年度の計画である癌幹細胞シグナル経路と治療抵抗性のメカニズム解明に関する一連の評価は終了することができたので、以上の結果をふまえたH26年度計画の、幹細胞マーカーよる治療感受性症例の予測および治療抵抗性症例に対する治療法の開発を行う方針に変更の必要はない状況である.組織検体を用いたマーカー発現による奏功例,非奏功例の予測確認は現在までに化学放射線療法後切除された症例の術前生検組織および切除標本の残存がん細胞における幹細胞マーカー因子の蛋白発現を、治療前生検組織を用いた免疫染色法により確認し、術前化学放射線療法の効果と対比する.感受性因子の有無による治療感受性症例の予測前向き試験は、そのマーカー発現の有無による治療感受性症例の予測前向き試験を行い、治療感受性症例と判断された症例中に奏功症例の割合が増加することを目標にする.現在までに化学放射線療法後切除された症例の術前生検組織および切除標本の残存がん細胞において最も幹細胞マーカーとして有力な因子の遺伝子および蛋白発現を、治療前生検組織を用いてreal-time RT-PCR法および免疫染色法により確認し、術前化学放射線療法の効果と対比する.組織発現の変化が著名なものに関しては治療前後の血液でも発現を検討するその後感受性因子の有無による治療感受性症例の予測前向き試験を行う.治療感受性症例と判断された症例中に奏功症例の割合が増加することを目標にする.治療抵抗性症例と判断された症例に耐性克服治療施行後CRTを行う予定である.遺伝子導入療法による癌幹細胞の除去,阻害剤投与によるROS産生能増強法になるかなど今後の研究結果で検討する予定である。またマウスによる腫瘍形成能の評価も行う。