hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
不確実性のもとでの均衡・最適化問題にする研究

均衡制約をもつ数理計画問題(MPEC)は工学や社会科学の様々な分野に応用をもつため、近年活発な研究が行われている。また、非線形相補性問題(NCP)は数理計画理論やゲーム理論など幅広い分野にしばしば現れる問題であり、重要な役割を担っている。MPECやNCPに対して、これまでにさまざまなアルゴリズムが提案されてきた。一方、実際の問題では不確定性が存在することはしばしば起こりうる。本研究の目的は、不確実性のもとでのMPECおよびNCP(SMPECとSNCP)に対する効率的なアルゴリズムを開発することにある。本研究課題のもとで、いくつかの成果を得た。具体的には、SMPECに対するモンテカルロシミュレーションによる離散近似に関する研究を行った。また、SNCPに対して、SMPEC問題との関係を調べ、ペナルティ法等を提案した。これらの研究成果は国際学術論文誌に投稿し、掲載済みまたは掲載予定となっている。本研究の目的は、MPECおよび不確実性のもとでのMPEC(Stochastic MPECあるいはSMPEC)に対する効率的なアルゴリズムを開発することにある。具体的には、MPECに対して非常に良い理論的性質を持つアルゴリズムを提案した。特に、有効制約同定を用いたハイブリッド法というアルゴリズムはある条件のもとで有限のステップで終了できるので、国際的に注目されている。一方、SMPECに関する研究は、世界にも他にほとんど例がない。今回の共同研究において、SMPECに対する方法の基本的な枠組みを完成させた。さらに、SMPECに対する平滑化陰的計画法、ペナルティ法、正則化法等を提案し、一般的な連続的確率変数を含むSMPECおよびモンテカルロシミュレーションによる離散近似に関する研究を行った。また、不確実性のもとでの非線形相補性問題(SNCP)も研究した。本研究の目的は、MPECおよび不確実性のもとでのMPEC(Stochastic MPECあるいはSMPEC)に対する効率的なアルゴリズムを開発をすることにある。一方、SMPECに関する基本的な枠組みを完成させた。さらに、SMPECに対する平滑化陰的計画法等を提案し、一般的な連続的確率変数を含むSMPECおよびモンテカルロシミュレーションによる離散近似に関する研究を行った。また、不確実性のもとでの非線形相補性問題(Stochastic NCPあるいはSNCP)に対して、SMPEC問題との関係を調べ、ペナルティ法等を提案した。
高温固体表面の動的挙動の計測によるnano-NEMCA効果の検証

高温で酸化物イオンを伝導する固体材料について,気相から酸素がその表面でナノイオニクス材料の熱力学的・化学的存在状態を動的に把握する手法を開発し,「ナノNEMCA」効果発現の可能性を探ることを目的とした。本年度は,気固相酸素交換反応の特異な促進効果を見いだしたLa-Co-O酸化物ヘテロ接合系について,類似の酸化物異相界面についても探索を行った。ヘテロ界面を形成が高酸素分圧下での安定性を向上させることを見いだした。イオン導電体からのイオンの流れによって,その表面に動的に生成する非平衡状態は「NEMCA」効果の原因とされる。本研究では,表面吸着種の存在状態を動的・定量的に把握する手法として化学ポテンシャルプローブ,電気化学in-situ PMIRRAS,イオンエミッション等,独自の手法を確立し「ナノNEMCA」効果発現の可能性を探ることを目的とする。本年は主に,測定装置の整備・改良を行った。表面化学ポテンシャル測定:微細な酸素センサプローブを用いた電気化学反応場の酸素ポテンシャル分布測定を高温で安定に行うため,試料加熱部および遮熱機構を改良した。さらに,近赤外線カメラを購入し,測定時の温度を正確に把握するための校正を行った。また,この近赤外線カメラを用いることで,電気化学反応場の局所的な温度変化をin-situ測定できることもわかった。この方法で,酸素電極の通電による温度変化を測定したところ,反応のエントロピー変化から予想される通り,酸素発生側に比べて酸素吸収側で大きな発熱があることが確認できた。高温電気化学PMIRRAS:高温で赤外吸収測定が可能なPMIRRAS(偏光変調高感度反射法)を用いて,電極表面吸着種の通電による変化を調べた。YSZ上の白金電極をモデル材料として選び,不純物ガスの影響を調べたところ,電極の活性は表面でのSi-O振動の出現と密接な関係がある事がわかった。測定系におけるSiの発生源の特定を進めている。イオンエミッション:真空中に設けた引出し電極にイオン導電体・電極系の表面を対向させて高電圧を印加することで表面吸着イオンを脱離させ,質量分析計で同定する。本年は,特定の共存ガスの存在下で,表面に生成するO-イオンの濃度が大きく変化する事を見いだした。さらに,イオンエミッションによって生成したO-が通常の酸素とは異なる反応性をもつことを示す結果を得た。イオン導電体の表面に動的に生成する非平衡状態を動的に把握することによりナノNEMCA効果発現の可能性を探ることを目的として以下の研究を行った。(1)表面酸素ポテンシャル測定:微細プローブを用いた表面酸素ポテンシャル測定のために試料保持部観察窓を改良し均熱性を高めた。また(La,Sr)CoO_3モデル薄膜電極についてのペレット型プローブによる測定結果を詳細に解析し,薄膜の粒子サイズが重要な因子であることを明らかにした。反応の特異点の存在が示唆された。(2)偏光変調高感度赤外吸収分光:(La,Sr)CoO_3モデル薄膜電極についてPMIRRAS測定を行い,バルクの振動の影響と思われる1000cm^<-1>付近の大きな吸収の他,表面吸着種に起因すると思われる1100cm^<-1>,1220cm^<-1>付近の小さな吸収を観察した。データの再現性およびピークの帰属についてさらに詳細な検討を加えている。(3)イオンエミッション:CeO_2ペレットから真空中へのイオン放出電流から電子の寄与を分離し,放出電流がO-イオンによることを明らかにした。真空中のCeO_2表面での主な吸着イオン種がO-であること,また,ZrO_2との比較から,酸素雰囲気での表面酸素交換とイオンエミッションとの間の相関性が示唆された。(4)(La,Sr)CoO_3の表面反応活性サイト:(La,Sr)CoO_3の表面反応活性サイトを探す目的で,同位体交換/SIMS分析を行い,熱分解によって生じた(La,Sr)_2CoO_4相と母相との界面近傍で表面反応が非常に活発に進行することが明らかになった。画像解析により,界面領域の気固反応速度が母相の約1000倍であることがわかった。当初計画の「ナノイオニクス修飾界面」のモデル系として,今後反応速度上昇の原因を探り,ナノNEMCAの可能性を検証したい。イオン導電体の表面に通電によって生成する非平衡状態を動的に把握する測定手法を整備し,これをヘテロ界面などのナノイオニクス系に適用することで,「ナノNEMCA」効果発現の可能性を探ることを目的として研究を行った。1.測定手法の整備放射光を利用したX線吸収微細構造(XAFS)測定を,高温の制御雰囲気下で電気化学反応を進行させながら行うための実験装置を開発した(A03班内本助教授・雨澤助手との共同研究)。

これにより,通電に伴う電極の酸化還元状態の変化を印加電圧と対応させることが可能となった。偏光変調高感度赤外反射吸収分光(PMIRRAS)を各種の系に適用し,この手法が特に金属電極上のCOの吸脱着の評価に効果的であることがわかった(A04班東北大八代助手との共同研究)。イオンエミッション法については,表面からのイオンの放出機構を検討し,表面評価手法として解決すべき課題を明らかにした2.酸化物イオン導電体系昨年度見出した(La, Sr)CoO_3/(La, Sr)_2CoO_4相界面での酸素気-固相交換反応の特異な促進効果について,これらの組成の薄膜を積層した試料をPLD法によって作製し,同位体イメージング,および,XAFS測定を行った。(La, Sr)CoO_3上に(La, Sr)_2CoO_4を積層した界面では,多結晶の混合相の場合と同様に,同位体交換が盛んに進行することがわかった。一方(La, Sr)_2CoO_4がCeO_2基板に直接接触する界面ではこのような促進効果はみられなかった。この膜の各部分について,マイクロXAFS測定で,Coの平均価数を評価した。基板に単独で製膜した(La, Sr)_2CoO_4膜と(La, Sr)CoO_3膜では,同一条件でのCoの価数が大きく異なるのに対し,積層部分の(La, Sr)_2CoO_4は,Co価数が変化し,(La, Sr)CoO_3に近づくことを見出した。高温ナノイオニクス材料表面におけるイオン種の非平衡状態を動的に把握し、nano-NEMCA効果発現の可能性を探索することを目的として以下の研究を行った。1.酸化物表面における酸素還元反応活性サイトの可視化:本研究で発見した酸化物ヘテロ界面での気固相反応促進効果について検証するため、(La,Sr)CoO_3/(La,Sr)_2CoO_4ヘテロ界面をPLD法によってセリア基板上に作製した。これについて酸素同位体交換を行い、同位体拡散プロファイルをSIMS分析した結果、(La,Sr)CoO_3/(La,Sr)_2CoO_4接合界面において酸素交換反応が顕著に促進されていることか確認された。また、(La,Sr)_2CoO_4かCeO_2基板に直接接触する界面ではこのような促進効果はみられなかった。酸素交換促進を電極反応に応用する際には、ヘテロ界面の存在、そして酸素高速拡散層としての(La,Sr)CoO_3層が不可欠であるという知見が得られた。2.ヘテロ界面導入電極における電極性能評価:同位体交換/SIMS分析の結果を踏まえ、(La,Sr)CoO_3多孔質電極層/(La,Sr)_2CoO_4緻密電極層からなる積層電極を作製し、高温電気化学測定を行った。この結果、ヘテロ界面効果を電極抵抗の減少として確認することができた。3.測定手法の整備と適用:FIB微細加工により(La,Sr)CoO_3/(La,Sr)_2CoO_4積層サンプルの断面を作製し、これについて高温・酸素分圧制御雰囲気下でX線吸収微細構造測定(in-situ μXAFS)を行った。(A03班内本助教授・雨澤助手との共同研究)位置分解能が1μm程度であることを利用し、酸化物ヘテロ界面近傍での遷移金属元素の電子状態について測定した結果、異相界面からの距離が約2μm以下で(La,Sr)_2CoO_4中のCo平均価数が(La,Sr)CoO_3中のCo平均価数に近づくことが分かった。
インドにおける経済自由化と都市労働者-長期的な生活設計構築のための社会学的研究-

新経済政策導入後のインドは、好調な経済成長を続ける一方で、企業の再編を促進している。その結果、大規模な合理化が進展し、フォーマル・セクターの労働者の雇用不安が増大している。安定的な雇用を失った労働者の多くは、階層の下降移動をしている。こうした状況の中で本研究では、(i)経済政策の転換により新たに誕生した「都市失業層」の新生活への適応策、(ii)「都市失業層」が、次世代を視野に入れた長期的な生活設計を構築する際に重要になる視点、(iii)それらをサポートする政策、以上の3点について考察することを目的としている。これを受けて、インド最大の都市ムンバイーの工場労働者に対するフィールド調査を実施した。そこから得られた知見は以下の通りである。(1)失業過程(早期退職、合法閉鎖、非合法的閉鎖などの失業要因)に着目した分析を行った結果、その相違は、失業後の経済状況だけではなく、失業意識の有無、求職意欲の強弱、就労意欲の有無とも強く関係している。失業過程の相違によって失業者の直面している問題が異なるため、将来設計の立て方にも異なったアプローチが必要である。(2)フォーマル・セクターでの就業経験を持たない「都市貧困層」と、近年フォーマル・セクターの職を喪失した新しい「都市失業層」とでは、インフォーマル・セクターで就労することに対する意識が大きく異なる。この差異が求職活動や就労意欲と強く関連するため、「貧困層」内の差異に着目した分析をする必要がある。(3)公的セーフティーネットが不十分なインドでは、企業や労組が社会的責任を果たさなければならない。(1)(2)の状況を認識した上で、労働者の失業意識、求職意欲、就業意欲を高めるための社会サービスの提供が求められている。経済自由化後のインドでは、リストラの進展により、フォーマル・セクターで雇用されていた労働者が失職するケースが増加している。安定的雇用を失った労働者の多くは、階層の下降移動を経験し、無力感などにより長期的な視点で将来設計が立てられない。短絡的な対応は、世帯の将来に重大な負の影響を与える可能性が高い。そのため、失職者に対する経済・社会・心理的側面からの複合的な実証研究を行うことにより、セーフティーネットが不備なインドで、労働者世帯の将来的な安定のために必要な方策について考察することが本研究の目的である。今年度は、(A)合法的に閉鎖するために2000年に全労働者を「希望」退職させた工場の労働者と、(B)同年に非合法に閉鎖した工場の労働者、各50名を対象にインタビューを実施し、下記の知見を得た。(1)(A)は経営側から閉鎖の説明がなされた上で「希望」退職の手続きがとられ、補償金を含む退職関連の費用をすべて受給しているため、失業を現実のものとして受容し、失業後の新しい生活を本気で模索している。それに対して(B)は、閉鎖後1年以上の間、経営側からは閉鎖について正式な説明がなく、閉鎖後に何も受給していないことから、労働者は失職したという意識が低く、再操業への期待感が非常に強かった。それゆえ、工場との雇用関係に心理的に束縛され、新しい生活をするための求職意識・活動が著しく低迷している。(2)(1)の現象のため、(B)は現実には失業状態であるにもかかわらず失業意識が低く、大半の者が従事せざるを得ないインフォーマル・セクターでの就業に対する耐性が低い。それが生計をより悪化させている。以上の点から、非合法の閉鎖は、補償や生計などの直接的な経済問題や労働法規上の問題を引き起こすだけでなく、労働者の求職意欲・就労意欲にもかかわる非常に重要な問題を発生させていることが明らかである。

本年度は、99年に実施した調査対象者のうち、追跡調査未実施の2グループ(104名)を対象にインタビューを行った。99年当時、(A)稼動工場で正規雇用されていた現役労働者、(B)(A)と同一工場の「希望」退職者が対象である。産業政策と都市政策の大幅な転換に伴い、対象工場も合理化を推進し、2004年10月に労使が閉鎖に合意した。閉鎖前から多くの労働者が「希望」退職し、就業中の労働者も所属部署の閉鎖と共に「希望」退職することになっている。こうした状況の中で、インタビュー調査などから得た知見は下記の通りである。(1)閉鎖に関する労使協定では、労働者は、(a)「希望」退職、(b)操業を続ける近隣の第2工場への移籍、のいずれかを自由選択できるとしている。しかし、経営側と労組の両方からの移籍希望に対する心理的圧力により、大半の労働者には事実上(b)の選択権はない。(2)(A)には厭世観と無力感が強く、さらに新たに就業するのが困難であるため、求職・就業意欲が低く、無気力になる傾向がある。退職直後は高額な退職関連の諸費用が支給されるため、相対的には経済的問題はないが、長的には経済問題が生じる可能性が高い。(3)(B)のうち、定年間際に退職した場合には社会経済的に大きな問題がみられない世帯が多い。しかし、退職強要や借金返済などの事情で退職した場合には、経済困難を抱える世帯が大半である。退職後に多く見られる永住帰郷は、居住環境のよい故郷で余生を過ごすため、または物価の高い都市では生活困難なためである。後者には帰郷後、現金収入を求めて都市に「出稼ぎ」にくるケースもみられる。(4)両グループとも、経済的状況は次世代に負うところが大きく、経済状況は子弟の教育水準や娘の就業と関係が深い。(A)の場合、退職関連金の運用方法による経済状況の差異が非常に大きく、運用に関する教育が必要である。インド最大の都市ムンバイーでは、急激な都市変容と産業構造の転換が進展している。本研究では、失業前後の生産労働者世帯の社会経済状況の変化についてインタビューを実施し、問題点と環境への対応策を検討し、以下の知見を得た。(1)失業の過程は多様であり、倒産や早期退職などの失業に至る過程の相違が、法的、経済的、心理的に大きな差異を発生させているため、失業過程の相違に着目する必要があること。(2)失業後は大半の労働者が最終的にはインフォーマル・セクターで就労するようになるが、失業後の一定期間は下降移動を心理的に認めがたく、同セクターでの就労に極めて消極的である。そのため、都市下層とは区分し、「新都市下層」として考える必要があること。(3)Voluntary Retirementではなく、多様な圧力をかけて退職を迫るCompulsory Retirementが横行し、それを経営側との交渉権をもつ代表労働組合が後押ししており、同組合は労働者に対してある種の圧力団体化していること。こうした状況の中で、都市変容により工場がホテルなどに生まれ変わる状況を目撃している労働者は厭世的になっていること。(4)失業後の将来設計についての教育が全くないため、資産運用に失敗するケースが少なくないこと。また、子弟の教育や労働者本人の老後などに関しての長期的・戦略的な生活設計が構築できないケースが多いこと。
固体NMR法によるマイクロ波励起分子機構のIn-Situ測定法の開発

液晶分子はマイクロ波のエネルギーを吸収して容易に加熱することができる。この液晶分子とマイクロ波との相互作用により、加熱される非平衡過程を分子レベルで観測する試みを行った。このマイクロ波加熱の分子機構を分子レベルで観測することを目的として、マイクロ波加熱固体NMR装置の開発を行い、液晶分子のマイクロ波加熱による非平衡局所分子構造変化および局所分子動力学変化を分子レベルでIn-Situ観測する実験システムの開発を目的とした。1)前年度に開発した固体NMR用マイクロ波加熱装置のラジオ波との分離を向上して、マイクロ波照射中にNMR信号が測定できる装置の開発を行った。さらにNMR分光器のパルスと同期したマイクロ波パルスを発生し、二次元NMRなどの高度なNMR測定が可能なNMR装置を開発した。2)完成したマイクロ波加熱固体NMRシステムを用いて液晶の系でパルスマイクロ波照射による温度ジャンプNMR実験を行い、マイクロ波照射直後の液晶のNMR信号のスナップショットを観測した。特に液晶ゲル相転移点付近では大きな相互作用変化が生じて等方相に変化するが、このとき大きなNMR信号の変化を観測することができた。この大きな信号の変化から液晶分子においてマイクロ波のエネルギーを吸収したマイクロ波励起状態を特定することが可能になった。マイクロ波加熱により液晶分子がマイクロ波のエネルギーを吸収する過程を原子分解能で観測するため、マイクロ波過熱を用いた、状態相関2次元NMR分光法を開発した。3)タンパク質の天然状態と変性状態の状態相関二次元NMRスペクトルの観測が可能となり、タンパク質のマイクロ波変性の観測という新しい分野を開いた。マイクロ波加熱の分子機構を分子レベルで観測することを目的として、マイクロ波加熱固体NMR装置の開発を行った。この装置により、マイクロ波加熱前後の液晶分子および蛋白質のNMR信号を観測して、非平衡局所分子構造変化を分子レベルでIn-situ観測することが可能になった。開発装置ではNMR装置に分光器外部のマグネトロンマイクロ波発信機(2.45GHz, 1.3kW)から発生させたマイクロ波を導波管を通してNMRプローブに導入した。マグネトロンから発生するマイクロ波はパルス状に発生することが可能であり、NMR分光器のラジオ波パルスと同期することにより、二次元NMRなどの高度なNMR測定が可能になった。液晶分子は分子中に極性基を含むためマイクロ波加熱効率が非常に高い物質である。液晶物質APAPAについてマイクロ波照射NMR装置によりマイクロ波照射による相状態の変化を観測したところ10msの照射時間で液晶相から等方相に相転移を起こすことが観測された。このように短時間でマイクロ波相転移が起こることを利用して液晶相-等方相の状態相関二次元NMRを観測することに成功した。蛋白質は生命現象の担い手となる生体高分子であり、ある蛋白質は生化学反応を制御する酵素としての働きをもっている。この蛋白質は立体構造を保っことが生理活性に重要であることが知られている。この蛋白質にマイクロ波を照射して立体構造が崩れてしまうと蛋白質は活性を失ってしまう。そこでRNAを分解する機能をもつRNAaseについてマイクロ波照射NMR装置でマイクロ波を照射する実験をおこない。天然-変性状態相関二次元NMRスペクトルの観測に成功した。このスペクトルから100msのマイクロ波照射により蛋白質が大きく変性することが明らかになった。
NRSF/NRSE系による転写制御機構の破綻と慢性心不全発症・進行機序の解明

2)上記の遺伝子群の、急性心筋梗塞や、大動脈縮窄モデル、さらにはDah1食塩感受性ラット等の心不全モデルにおける発現様式を検討した。その結果、これらの遺伝子は必ずしも一様のパターンで動くわけではなくNRSF/NRSE系のみで制御されていないことが証明された。3)NRSE配列の下流にLacZを結合させたレポーター遺伝子を作成し、それを発現するレポーターマウスを作製した。このマウスに心不全刺激を加えることにより、LacZが発現量が増加するかを検討して確認することにした。既にレポーターマウスは生まれてきており、・-MHC-dnNRSF-Tgマウスと交配することにより正常状態でもLacZが発現するかを確認している。心不全は、あらゆる心疾患の終末像でその原因疾患の病態的特徴に基づいて左心不全、右心不全、収縮不全、拡張不全等々に分類されている。しかし、いずれのタイプの心不全も進行性であり、末期にはポンプ失調あるいは致死性不整脈が原因と考えられる突然死によって不幸な転帰をとる予後不良の症候群である。この様な観点から、すべての心不全の進行過程には、ポンプ失調と催不整脈性の双方に陥る共通の分子基盤、あるいは両者の因果関係を有機的に繋げる分子基盤の存在が示唆される。我々は、胎児型遺伝子統合的転写調節機構であるNRSF/NRSE系を人為的に破綻させたマウス、すなわち、心筋細胞に特異的にdominant negative NRSFを過剰発現するマウスを作製すると、拡張型心筋症様の形態変化とVfに起因する突然死することを見いだした。本研究では、NRSF標的遺伝子の中から心不全あるいは催不整脈性とリンクしている遺伝子の検出を行った。DNAアレイの結果から、GalphaO(Gαo)、CACNA1Hを候補遺伝子とした。それぞれの遺伝子をαMHCの制御下過剰発現マウスを作製すると、Gαo過剰発現マウスは、正常に出産し、野生型マウスと成長の早さ体重変化等は差が無く、生後20週齢までは、早死にしない。心エコー上心肥大、心不全等も呈していない。また、CACNA1Hの心臓過剰発現マウスは出生頻度がメンデルの法則より逸脱しており、胎児期に何らかの異常が存在すると思われる。そこで、現在はテトラサイクリン誘導型過剰発現マウスを作成している。また、一般の心不全でNRSF/NRSE系が機能しているかを検討するためにヒト心不全組織やマウス心筋梗塞や大動脈縮窄モデルを作成してNRSFの標的遺伝子の発現を検討しているが、BNP遺伝子以外NRSFで制御されている遺伝子を見いだせていない。我々はANP/BNPがあらゆるタイプの心不全で遺伝子発現が亢進することより、ANP/BNP遺伝子の心不全時に於ける再発現機序を解明することが、その背後に存在する心不全発症の分子機序の解明に繋がるかとの仮説を立て研究を遂行してきた。その過程で興味深い転写調節系であるNRSE/NRSF系を同定した。NRSFはNRSE配列を有する遺伝子に結合し協力に転写を抑制するが、ANPやBNPなどの胎児遺伝子の多くはNRSE配列をその転写調節領域に有しており、NRSFによって転写抑制されている。心不全ではその抑制が回避されANP、BNP等の胎児型遺伝子の転写が亢進することが判っていた。優性劣性変異体であるdominant negativeNRSFを心筋細胞に特異的に波状発現したマウス(α-MHC-dnNRSF-Tgマウス)生後8周より心不全を呈し、心室性不整脈で死亡する。本研究ではNRSFの標的遺伝子のなかで、心不全や不整脈の発症に寄与している遺伝子を同定する目的で、a-MHC-dnNRSF-Tgマウスで野生型マウスより発現亢進している遺伝子でNRSE配列を有している、G蛋白質ファミリであるGalphaO(Gαo)、ドーパミン受容体のサブタイプであるD2受容体、Neuropeptideファミリーであるneurotensinに対する2型受容体(NTSR2)、さらにはHCN2,HCN4,HCN1,CACNA1Hなどのチャンネル遺伝子のなかから、Gαo、とCACNAIHの心筋特異的過剰発現マウスを作製した。α-MHC-Gαo-Tgマウスは、正常に生まれ、正常に発育する。また、大動脈縮窄とうの負荷を加えても野生型と比べて変化が認められなかった。α-MHC-CACNA1H-Tgマウスは、非常にF1が得られにくく、胎児死亡している可能性もあるが、1つだけ生まれてきた系統では、過剰発現は認められるものの、野生型と大きな差を認めなかった。蛋白の発現量の確定が未だ出来ていないが、これら二つの遺伝子はNRSFの標的遺伝子ではあるが、α-MHC-dnNRSF-Tgマウスの形質を説明する遺伝子ではないと考えられた。
光化学系II反応中心の分子構築とその動態の解析

本研究では,光化学系II反応中心の分子構築を,静的な化学構造としての側面と,機能発現および機能制御として動的な側面から解析した。この研究によって得られた主な成果は,以下のとおりである。光化学系II反応中心の中核を構成するD1タンパク質をコードするpsbA遺伝子のランダムな突然変異誘発による改変と,それに続く強光条件下および新しく開発したニトロフラントイン耐性を利用する選抜で,光耐性の機能を獲得した変異株および光化学系IIの電子伝達系の機能に欠損が生じたために光独立栄養性を失ったシアノバクテリアSynechocystissp.PCC6803の変異株を多数作出することに成功した。ついでこれらの変異株のD1タンパク質上のアミノ酸置換を同定するとともに,変異株から光化学系II標品を調製してその光化学的特性を解析した。これらの解析により,光化学系II反応中心の構造と機能において重要な役割を担っているアミノ酸残基が多数同定され,D1タンパク質の構造機能相関の解析に新しい途が拓かれた。一方,D1タンパク質の合成の過程における前駆体タンパク質のC-末端プロセシングに関与するプロテアーゼに関してその大腸菌内での大量発現系を開発し,活性をもつ状態で発現された酵素を大量に純化することに成功した。ついで,このようにして純化された酵素標品を用いる解析およびSynechocystisを用いる部位特異的アミノ酸置換の解析から,新規のセリン型プロテアーゼと考えられるこの酵素の活性中心,酵素・基質相互作用及び機能制御について数々の新知見を得て,今後の構造解析に足がかりを与えた。光化学系II反応中心における高電位形成は,生体を構成する有機分子の合成に必要な電子源として水分子を利用することを可能にすることにより,地球上の生物の独立栄養性を支える最も重要な反応である。本研究では,光化学系II反応中心の分子構築とその安定性を支える動態について解析を行い,以下の結果を得た。1.ランダム突然変異誘発による反応中心の分子構築の解析:ラン藻Synechocystissp.PCC6803株を用い,光化学系II反応中心D1タンパク質をコードするpsbA遺伝子にPCR法によりランダムな突然変異を誘発し,D1タンパク質の広範囲の領域にアミノ酸置換を持ち光化学系IIの機能に欠損を持つ変異株を,ニトロフラントイン処理その他のスクリーニング法により多数選別した。これらの変異株について,そのアミノ酸置換を解析して,光化学系II反応中心の分子構築解析のための準備を整えた。2.光化学系II反応中心の分子構築の動態の解析:(1)エンドウのin vitro翻訳系を用いる解析で,D1タンパク質翻訳の伸長段階の特定部位で,ストロマ中に存在するタンパク性の酸化還元因子を介した制御が行われていることを見出し,その因子の本体を解析した;(2)D1タンパク質C-末プロセシング機構に関して,大腸菌中で大量に発現したプロセシングプロテアーゼとScenedesmus LF-1変異株を用いる反応測定系を開発し,チラコイド膜上での活性制御機構を解析した。また,Synechocystisを用いる部位特異的突然変異法により,この酵素の活性中心を同定した。1光化学系II反応中心Dlタンパク質のランダムな改変による構造と機能の解析(1)形質転換の容易なSynechocystis sp.PCC6803を用いて,光化学系II反応中心のサブユニットの1つであるD1タンパク質を,それをコードする遺伝子psbAのin vitroにおけるランダムな突然変異誘発の手法により改変し,得られた変異株を光独立栄養性喪失を目安とするスクリーニング法(ニトロフラントイン処理)により選別して,光化学系II複合体は蓄積するが,その機能が欠損している変異株を多数作出した。(2)上記のようにして得られた光化学系IIの変異株について,psbA遺伝子の配列決定によりその変異部位を確定するとともに,部位特異的突然変異誘発により,光化学系IIの機能欠損に関係するアミノ酸置換を特定した。

(3)これらの変異株について,光化学系II活性の部分反応,蛍光誘導期現象,熱発光測定等の解析を行い,機能欠損部位を反応系の上で同定するとともに,構造変異と機能変異との間の相関関係を解析した。2光化学系II反応中心D1タンパク質前駆体のカルボキシル末端(C-末端)プロセシングに関する研究(1)大腸菌で発現させたホウレンソウのD1タンパク質前駆体C-末端プロセシング酵素の特性を,植物体から抽出した酵素のそれと比較して,両者が機能的に同一であることを明らかにした。(2)ついで,この酵素を用いて,in vitroのオリゴベプチド,in vitroで翻訳した前駆体タンパク質ならびに膜上の光化学系II複合体に組み込まれた前駆体タンパク質を基質として,C-末切断の機構,特に基質へのアフィニティーとpH依存性を解析して,反応の場における基質と酵素の間の特異的な相互作用の同定を試みた。1光化学系II反応中心D1タンパク質のランダムな改変による構造と機能の解析(1)形質転換の容易なSynechocystis sp.PCC6803株を用いて,光化学系II反応中心のサブユニットの1つであるD1タンパク質をコードする遺伝子psbAのランダムな突然変異誘発と,得られた変異株の光独立栄養性喪失を目安とするスクリーニングにより,150株に及ぶ光化学系II機能欠損株を作出した。(2)これらの変異株のアミノ酸置換部位の解析から,光化学系II反応中心の機能発現に必須なアミノ酸を推定した。(3)これらの変異株のうち,光化学系II複合体を蓄積し,アミノ酸置換部位が1ないし2ヶ所に限定されている株について,その機能欠損部位を詳しく解析して,水分解系に関与するアミノ酸残基を同定した。2光化学系II反応中心D1タンパク質前駆体のカルボキシル末端(C-末端)プロセシングに関する研究(1)大腸菌で発現させたホウレンソウのD1タンパク質前駆体C-末プロセシング酵素の大量精製を試み,新しいタイプのセリン型プロテアーゼと考えられるこの酵素の結晶化による活性中心の構造の解明のための準備を行った。(2)この酵素を用いて,機能膜上の光化学系II複合体に組み込まれた前駆体タンパク質を基質としたプロセシング反応の機構を解析するため,前駆体D1タンパク質を含む光化学系II反応中心を単離した。(3)Synechocystissp.PCC6803株のランダム突然変異誘発により作製されたC-末端近傍で翻訳が終了する変異株を用いて,C-末プロセシングの生理的意味を解析した。1 D1タンパク質のランダムなアミノ酸置換による光化学系II反応中心の構造と機能の解析これまでの研究で,形質転換の容易なSynechocystis sp.PCC6803株を用いて,光化学系II反応中心のサブユニットの1つであるD1タンパク質をコードする遺伝子psbA上の広領域にランダムな突然変異誘発を行い,得られた変異株の光独立栄養性喪失を目安とするスクリーニングにより,150株に及ぶ光化学系II機能欠損株を作出した。
標的化レトロウイルスベクターの開発

in vivo遺伝子治療では治療用遺伝子デリバリーの標的化が不可欠である。私はリガンド・エンベロープ蛋白質(Env)キメラ蛋白質を利用した標的化デリバリー可能なレトロウイルスベクター作製の一般的方法論の確立を目標とし、すでに先駆的な成功例を報告した。本研究においてはマウスエコトロピックレトロウイルスEnvの代わりにポリトロピック(MCF型)レトロウイルスEnvをキメラ蛋白質作成に用い、標的化デリバリーの遺伝子導入タイターの改善を目指した。フレンドMCFウイルスゲノムDNA分子クローンを用いて、SDF-1αリガンドを挿入したキメラEnv発現プラスミド4種と、非キメラ型Env発現プラスミドとを構築した。SDF-1αリガンド(68アミノ酸)はEnv膜表面ユニットの可変領域A内の4か所(アミノ酸83-84、90、95、および99-101)のいずれかに挿入された。53種類のEnvの1つを持ち、E.coli LacZを発現するレトロウイルスベクターの産生にはTELCeB6細胞を用いた。非キメラ型Envを持つベクターはマウスとミンク由来の細胞に遺伝子導入しポリトロピズムを示したが、導入タイターは10^2-10^3 CFU/mlと非常に低レベルでヒト由来細胞(HOSやNP2)には遺伝子導入しなかった。SDF-1αキメラEnv発現プラスミドを用いて得た4種のレトロウイルスベクターはSDF-1αの膜受容体であるCXCR4を過剰発現するHOSやNP2細胞に遺伝子導入しなかった。非キメラ型Env発現プラスミドをTELCeB6細胞に導入し一過性の発現を調べたところ、Env前駆体が検出されるが、その量は期待される量の1/10以下であった。以上より、5種類のEnvは正しく構築されているがTELCeB6細胞内での発現が極めて悪く、標的化遺伝子導入に必要なレベルのキメラEnvを持つウイルスベクターが産生されないと考えられる。
カイコの初期胚子発生に関与するカゼインキナーゼ2の役割

本研究は,カイコガの休眠卵と非休眠卵とで活性変動の異なるタンパク質リン酸化酵素の一種を見いだし,それがカゼインキナーゼ2(CK2)であることを同定し,CK2のαとβ両サブユニットをコードする完全長cDNAの構造を明らかにした。また,初期発生におけるCK2の活性変動の調節は転写レベルではなく,転写後の調節が重要であることも発見し,CK2の翻訳後修飾における活性調節機構の一部を明らかにした。本年度は,胚子発生初期に新規なRNAヘリケース様タンパク質(RHL)をリン酸化するキナーゼとして見いだしたカゼインキナーゼ2(CK2)の発生過程おける活性変動,卵内での分布と局在,活性調節機構解明の前段階であるリコンビナントCK2の調整などを主に行った。その実績の概要を以下の(1)(4)に示す。(1)産卵直後からおよそ60時間目までの休眠卵・非休眠卵を12時間おきにサンプリングし,それぞれからCK2を含むタンパク質標品を調整しその活性を比較したところ,非休眠卵ではステージが進むにつれて活性が増大し、休眠卵では産下後24時間で活性が最大となりその後は減少するという興味ある結果が得られた。(2)CK2を構成するαとβの両サブユニットをコードするcDNAをクローニングしRT-PCRによる遺伝子の発現解析を行ったところ,酵素活性の変動とは一致しなかった。この結果から初期胚におけるCK2の活性調節は転写レベルでは無い事が明らかとなった。(3)カイコCK2のαとβ両サブユニットをコードするcDNAを発現ベクター(pET14bやpColdI)に組み込み大腸菌(BL21)を形質転換しリコンビナントCK2αとβサブユニットを発現させたところ,αサブユニットは,可溶性画分に発現させる事に成功したが,βサブユニットは,不溶性画分に回収されたので,その精製とリフォールディング法等を検討したところ,順調に実験が進み可溶性タンパク質として得る事に成功した。(4)産下後1260時間の非休眠卵の切片と抗CK2α抗体を用いた免疫組織化学的解析では,RHLと同様に卵黄細胞の核周辺部に局在が認められた。また,それ以外に卵黄顆粒や胚の細胞中にも局在が認められた。また,次年度のために休眠卵の切片の作成等の検討を行った。本年度は,カイコ由来のリコンビナント・カゼインキナーゼ2(rBmCK2)用いた活性調節機構解明と休眠卵・非休眠卵を用いた免疫組織化学解析によるCK2αとCK2βの局在性の解明を行った。(2)タンパク質のC末端部分の配列が異なるショウジョウバエ由来のリコンビナント・カゼインキナーゼ2β(rDmCK2β)2種を用いてrBmCK2αの活性に対する影響を調べたところ, C末端部分の配列が長くなるほど, rBmCK2αの活性が減少する事が明らかとなった。(3)カイコガの休眠卵に多量に含まれている物質であるソルビトールと3-ヒドロキシキヌレニン(3-OHK)がrBmCK2の活性にどのように影響するのかも解析したところ,ソルビトールは影響を与えなかったのに対して,3-OHKは, rBmCK2α単独の活性に対して濃度が低いときには活性化剤として,また濃度が高いときには阻害剤としてはたらく興味深い結果が得られた。(4)休眠・非休眠卵(産卵後12,24,60時間)を免疫組織化学用に固定,包埋した切片と市販の抗CK2α抗体と今回作成した抗BmCK2β抗体を用いて,卵内でのCK2αとCK2βの分布と局在の観察を行った。その結果,産卵後12時間では休眠・非休眠卵では胚盤葉の細胞に局在が観察されたが,24時間目以降では非休眠卵では卵黄細胞の細胞質と核に局在が観察された。一方,休眠卵では,胚子に局在が観察され,その分布の違いが明らかとなった。
二次性リンパ浮腫の病態解明と新しい薬物治療法の開発

二次性リンパ浮腫は、四肢腫脹、皮膚硬化、皮下脂肪増加を生じ、患者の生活の質(Quality of Life: QOL)は著しく障害する。その病態は解明されておらず、有効な薬物治療法はない。我々はこれまでに蛍光リンパ管造影法を用いたリンパ浮腫診断方法の開発、ラットリンパ浮腫モデルの開発、リンパ浮腫による皮膚硬化の病態解明、ヒトリンパ浮腫皮膚の評価方法の開発について報告した。本研究ではラットモデルでの皮下脂肪細胞の病態への関与と、エイコサペンタエン酸(EPA)のリンパ浮腫治療効果を明らかにする。さらに、ヒトリンパ浮腫症例におけるエEPAの治療効果を明らかにする。
培養筋肉細胞に於けるATP活性チャネルの解析-パッチクランプ法を用いて-

神経筋接合部において,神経終末から放出されるシナプス小胞には,伝達物質のアセチルコリン(Ach)とともに,多量のATP(アデノシンアリン酸)が含まれており,更に,シナプス間隙に放出される事が明らかになっている.本研究は,細胞外のATPの筋細胞膜に存在するイオン,チャネルへの効果を検索する事を目的として,パッチクランプ法によりATPによって開口するチャネル電流の特性を調べた.用いた標本は,アフリカツメガエルの胎性19-22スティジから分離した筋肉を0.05%コラーゲナーゼ及び5mMEDTAにより単離し,コラーゲン外膜のカバースリップ上に接着培養し,培養後16日目のものを記録対象とした.筋肉細胞でATP活性チャネル電流は次の5点でAch,リセプタ,チャネル電流に相似していた. (1)1つのパッチ膜で必ず2種類のコンダクタンス(41と60pS)をもつチャネル電流が記録される.(2)この2種の電流は,反転電位がともに-10mV付近であり, 2050μMクラレにより抑制される. (3)2種のチャネル電流の出現比が培養日時とともに変化する.(4)ATP(0.110μM)とAch(0.1nM)の共存下では, ATP単独に比べてチャネル電流の出現頻度が2-3倍増加する-ATPはAchとともに筋肉細胞に対して共同作用をもつと考えられる.(5)2種のチャネル電流とも平均開口時間は,膜電位を過分極させることにより長くなる.即ちチャネル開口時間は膜電位依存性をもつ.これらの相似点から細胞外ATPがAchリセプタ,チャネルを開口する事が強く示唆される.ATPがAchリセプタチャネルにも開口させる作用機序は今のところ不明だが, ATPがリセプタに結合しチャネルを開口するか,もしくはチャネルに直接作用して開口する事が考えられる.前者の場合, ATPは伝達物質様の作用であり,後者はAchリセプタチャネルの変調物質と考えることができる.神経筋接合部において,神経終末から放出されるシナプス小胞には,伝達物質のアセチルコリン(Ach)とともに,多量のATP(アデノシンアリン酸)が含まれており,更に,シナプス間隙に放出される事が明らかになっている.本研究は,細胞外のATPの筋細胞膜に存在するイオン,チャネルへの効果を検索する事を目的として,パッチクランプ法によりATPによって開口するチャネル電流の特性を調べた.用いた標本は,アフリカツメガエルの胎性19-22スティジから分離した筋肉を0.05%コラーゲナーゼ及び5mMEDTAにより単離し,コラーゲン外膜のカバースリップ上に接着培養し,培養後16日目のものを記録対象とした.筋肉細胞でATP活性チャネル電流は次の5点でAch,リセプタ,チャネル電流に相似していた. (1)1つのパッチ膜で必ず2種類のコンダクタンス(41と60pS)をもつチャネル電流が記録される.(2)この2種の電流は,反転電位がともに-10mV付近であり, 2050μMクラレにより抑制される. (3)2種のチャネル電流の出現比が培養日時とともに変化する.(4)ATP(0.110μM)とAch(0.1nM)の共存下では, ATP単独に比べてチャネル電流の出現頻度が2-3倍増加する-ATPはAchとともに筋肉細胞に対して共同作用をもつと考えられる.(5)2種のチャネル電流とも平均開口時間は,膜電位を過分極させることにより長くなる.即ちチャネル開口時間は膜電位依存性をもつ.これらの相似点から細胞外ATPがAchリセプタ,チャネルを開口する事が強く示唆される.ATPがAchリセプタチャネルにも開口させる作用機序は今のところ不明だが, ATPがリセプタに結合しチャネルを開口するか,もしくはチャネルに直接作用して開口する事が考えられる.前者の場合, ATPは伝達物質様の作用であり,後者はAchリセプタチャネルの変調物質と考えることができる.神経終末より放出されるシナプス小胞には、伝達物質のほかに、多量のATP(アデノシン【5^1】-3リン酸)を含むことが報告されており、ATPが神経伝達物質と受容器との結合に重要な役割を担っていることが示唆される。ムスカリニックアセチルコリン(Ach)リセプタでは、ATP自身が一種の伝達物質とも考えられているが、骨格筋に存在するニコチニックリセプタでは、その機能は不明である。本研究は、アフリカツメガエルの胎性1922stageより得られた培養筋肉細胞を用いて、ATPを細胞外から与え、その際に得られる単一チャネル電流を、Cell-attached patch clamp法を用いて記録し、解析した。ATP(【10^(-7)】【10^(-3)】M)によって2種類のチャネル電流(60pSと40pS)が全ての培養日時(16日)で記録され、その平均開口時間は、各々、0.93msec,0.86msecと極めて短かく、2050uMクラレ(d-ツボクラリン)によって電流の出現頻度が顕著に減少した。更に、この2種のチャネル電流の反転電位は、双方とも-5-15mV付近にあった。近年、0.10.2uMAChによって60,40pSのコンダクタンスをもつ2種類のAChリセプタチャネル電流が報告されており、ATPによって〓活されるチャネル電流は、ニコチニックAChリセプタ電流によるものと結論される。2種のチャネル電流の平均開口時間は、アセチルコリンのときと比較して、有意に短くなっており、特に低コンダクタンスをもつチャネル電流でその差が顕著であった。

低濃度のアセチルコリンとATP共存下では、チャネル電流の出現頻度に、ATP単独下と比較して、増大する(即ち、促通効果)ことが予備実験で確認され、現在そのdataを記録・解析中である。
アジアにおける新種病原アメーバの分布とゲノム多様性に関する研究

新種の病原アメーバであるEntamoeba nuttalliは、ネパールやミャンマーのアカゲザル、タイのカニクイザル、スリランカのトクザル、中国のチベットモンキーなどの野生マカクの糞便から検出された。一方で、赤痢アメーバはこれらの野生マカクから検出されなかった。これまでに80株以上のE.nuttalliを分離培養した。セリンリッチ蛋白質遺伝子やtRNA関連縦列型反復配列の多型は、宿主マカクの地理的分布の違いと関連していた。また、E. nuttalli標準株(P19-061405)について、ドラフトゲノム配列を決定した。本研究では、新たに発見した病原アメーバEntamoeba nuttalliについて、アジア各地における分布を明らかにするとともに、ゲノムの多様性を比較解析することを目的としている。今年度は、これまでにネパールの4地域において野生アカゲザルより分離した15株について、tRNA関連の反復配列を6カ所の座位について解析した。座位A-Lでは8株において複数の遺伝子型が存在し、11タイプの遺伝子型が確認された。その他の座位では24タイプの遺伝子型が確認された。これらの組み合わせにより、15株は10タイプに分類できた。ネパールのアカゲザルから最初に分離したP19-061405株については、全ゲノムの解析を開始した。一方、タイ中央部の5地域において、野生カニクイザルの糞便を採取した。各種アメーバの感染状況を調べたところ、E.nuttalli感染が44%において見つかった。赤痢アメーバやE.disparは全く検出されず、4核の赤痢アメーバ様嚢子はE.nuttalliであることが判明した。田辺・千葉培地を用いた培養により、25株のE.nuttalliを分離した。野生カニクイザルからは初めての分離であり、このうちの4株は無菌培養に成功した。セリンリッチ蛋白質遺伝子の解析では、アミノ酸配列で9タイプ、塩基配列では11タイプが認められた。また、tRNA関連の反復配列の解析では、6座位においてそれぞれ610タイプが認められた。これらの遺伝子型の組み合わせにより、25株は15タイプに分類できた。遺伝子型の違いは分離株の地理的分布の違いをよく反映していたことから、今後、宿主の移動や拡散、進化と寄生アメーバの多型化との関係を解明できると考えられた。今年度は、ミャンマーのTaung Kalat (TK)とPho Win Taung (PWT)の寺院に生息する野生アカゲザルについて糞便を採取し、各種Entamoebaの感染率をPCR法によって調べた。E. nuttalliは、それぞれの地域で49%と31%の検体が陽性であった。一方で、赤痢アメーバは全く検出されず、E. disparはPWTのみで6%の検体から検出された。従って、これらのアカゲザルにみられる赤痢アメーバ様4核嚢子のほとんどは、E. nuttalliであることが明らかになった。細菌共棲培養によって、TKで6株、PWTで8株を分離し、このうちTKで分離した1株については完全無菌化に成功した。セリンリッチ蛋白質遺伝子の解析では、2つの地域で2タイプずつ、計4タイプが存在した。tRNA関連繰返し配列については6カ所の座位で解析を行ったところ、TK由来株でA-Lに2タイプが認められたのを除き、2つの地域で異なるタイプが1種類ずつ観察された。このことから、E. nuttalliの遺伝子型の違いは分離株の地理的分布の違いをよく反映しているものの、ミャンマー分離株の多型性は、ネパール分離株に比較して小さいと考えられた。また、無菌培養しているE. nuttalli P19-061405株のゲノムについて、第3世代のシーケンサーであるPacBio RSを用いた解読を試みた。培養栄養型虫体から抽出したゲノムDNAから10 kb断片のライブラリーを作成し、リード長1 kb以上のリードから約2Gbの塩基配列データを取得した。現在、そのアセンブルを進めている。今年度は、中国の峨眉山に生息する野生チベットモンキーについて糞便を採取し、各種Entamoebaの感染率をPCR法によって調べた。E. nuttalliは17%が陽性であったが、赤痢アメーバやE. disparは検出されず、4核の赤痢アメーバ様嚢子はE. nuttalliであることが明らかになった。6株を分離し、18S rRNA遺伝子の塩基配列を解析したところ、これまでに中国のアカゲザルから分離したE. nuttalli株と一致した。しかし、tRNA関連繰返し配列について6カ所の座位で解析を行ったところ、峨眉山のチベットモンキーに特異な配列が確認された。ネパールと中国のアカゲザルから分離したE.nuttalli株間では18S rRNA遺伝子の配列が異なることから、E.nuttalliの遺伝子型に関して、宿主の種よりも地理的な要因の方がより強く関連していることが示唆された。この他、タイのアッサムモンキーからもE. nuttalliを分離でき、一部は完全無菌化に成功した。

また、無菌培養しているE. nuttalli P19-061405株のゲノムについて、次世代シーケンサーと第3世代シーケンサーで得られたデータを用いてアセンブルを進めた結果、コンティグ数を約400まで減らすことができた。本研究では、新たに発見した病原アメーバEntamoeba nuttalliについて、アジア各地における分布を明らかにするとともに、ゲノム多様性を比較解析することを目的としている。今年度は、タイ南部のクラビー、ナコーン・シー・タマラート、パンガーにおいて野生カニクイザルの糞便を採取し、各種Entamoebaの感染率をPCR法によって調べた。E.nuttalliは半数以上の検体が陽性であったのに対し、赤痢アメーバやE. disparは検出されず、鏡検で観察される4核の赤痢アメーバ様嚢子はE. nuttalliであることが明らかになった。また、ナコーン・シー・タマラートでは飼育ブタオザルの糞便についても解析したところ、E. nuttalli陽性の検体は確認されたが、赤痢アメーバやE. disparはすべて陰性であった。培養によって、カニクイザルから6株、ブタオザルから1株のE. nuttalliを分離培養し、これまでに3株については完全無菌化した。18S rDNAの配列を調べた結果、これまでにタイ中央部のカニクイザルや北部のアッサムモンキーから分離されたE. nuttalliの配列と差異は認められなかった。一方、セリンリッチ蛋白質遺伝子の配列では、地域差を反映する多様性が確認された。新種の病原アメーバであるEntamoeba nuttalliは、ネパールやミャンマーのアカゲザル、タイのカニクイザル、スリランカのトクザル、中国のチベットモンキーなどの野生マカクの糞便から検出された。一方で、赤痢アメーバはこれらの野生マカクから検出されなかった。これまでに80株以上のE.nuttalliを分離培養した。セリンリッチ蛋白質遺伝子やtRNA関連縦列型反復配列の多型は、宿主マカクの地理的分布の違いと関連していた。また、E. nuttalli標準株(P19-061405)について、ドラフトゲノム配列を決定した。中国やタイにおける調査は予定通り実施できた。新たな分離株を確立でき、遺伝子多型の解析も順調に進行している。また、標準株の全ゲノムシーケンス解析についても、順調に進行している。27年度が最終年度であるため、記入しない。寄生原虫学調査対象の地域や宿主マカクの種をさらに増やすことにより、より多様なE. nuttalli分離株を確立し、地理的分布の違いや宿主の種の違いと遺伝子多型との関係を解析する。タイにおける調査は予定通り実施でき、新たな分離株を確立できた。遺伝子の解析は順調に進行している。ミャンマーにおける調査は予定通り実施でき、新たな分離株を確立できた。遺伝子多型の解析は順調に進行している。また、標準株の全ゲノムシークエンス解析も進行している。