hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
小都市の住環境リ・デザイン・システムに関する計画的研究-ウィンターシティの居住街区の再生と再編-

平成7年度及び平成8年度にかけて小都市の住環境リデザイン・システムに関して研究を進め、成果を次のように、まとめる。1.地方都市圏のリデザインを目的とした整備目標と将来像についての視点から、(1)中心市街地、(2)地方都市圏の既成市街地、(3)地方都市圏の中間市街地、(4)地方都市圏の住宅市街地の4つの地区別の整備目標とリデザインの計画論を考察した。2.地域生活拠点の計画的再編とネットワーク形成の視点から、(1)こども生活行動と生活拠点、(2)高齢者の生活行動と生活拠点、(3)小都市のネットワーク化の3つの対象別の生活拠点の計画的再編論を考察した。3.サスティナブルな住環境を目標とした視点から、(1)住環境計画の目標像、(2)地区住環境再編の計画情報のフレームワークの2つの側面について考察した。4.街区と建築群の秩序からみたリデザインの空間構成原理の視点から、(1)都市空間における建築集合、(2)都市パターンと建築群の2つの側面について考察した。5.地方都市圏のリデザインプログラムの展開プロセスに注目し、(1)地域別プロセスプラニング、(2)市民参加型のプラニングについて考察した。この5つの視点に基づきながら、地方都市圏のリデザインのために、現在までどのような傾向にあり、どのような主体に対し、どのようなプログラムが必要であるかについて、論考し成果を得た。平成7年度は帯広市と周辺3町(幕別、芽室、音更)に加え、釧路市、剣淵の2市町、計2市4町を対象に調査研究をすすめた。1:既成市街地のリ・デザインを目的として、(1)地方都市圏の地域コミュニティを形成する基礎となる住民の社会的ネットワーク形成の実態と生活拠点の把握。(2)住宅市街地の住環境に関する属地的な課題把握と世帯の分離傾向の把握、加え住宅政策への公的支援の方向性の検討。(3)こどもを取りまく住環境に関する考察。を行ない、住環境再編への視点と生活拠点のシステム化への基礎的な成果を得た。2:市街地中心部のリ・デザインを目的として、(4)地方小都市の市街地中心部の将来像に関する、内容性と空間性からの検討。(5)拠点的な市街地における高齢者の施設利用の実際と市街地再編の計画課題の把握。(6)高齢者の保健政策と住宅政策の連携化の必要性と可能性の検討。(5)地方小都市と周辺の農村との交流の実態把握。を行い、都市圏における拠点の方向性と構造化システム化への基礎的な成果を得た。平成8年度は、以下の内容の調査研究をすすめ、成果の概要を下記に整理する。1:地方都市圏のリデザインを目的とし、都市空間の整備目標と将来像の検討を、(1)地方小都市の中心市街地の整備目標とリ・デザインの方向性を社会性と空間性から整理検討し、(2)地方都市圏の既成市街地の整備目標とリ・デザインを地域コミュニティと住民の社会ネットワーク形成の実態把握を加え、(3)小都市からなる地方都市圏の中間市街地の整備目標形成とリデザインの重要性とを指摘し、(4)住宅市街地の整備目標とリ・デザインのパラダイムを提案した。2:地域生活拠点の計画的再編とネットワーク形成の提案を、(1)こどもの生活行動と住環境の実態把握から生活拠点の計画的再編の必要性と方向性を提示した。さらに、成熟社会の対応した市街地のリデザインを目的とし、(2)高齢者の生活行動と環境評価に基づく地域生活拠点の計画的再編の必要性と方向性を提案し、特に山間部の過疎小都市群を対象として(3)小都市のネットワーク化による地域の再編の方向性と手法を具体的に提案した。3:サスティナブルな住環境の計画目標とリ・デザインのパラダイムと計画枠組みについて、(1)計画的住宅地計画における住環境計画の目標像の変遷と動向を整理し、さらに(2)サスティナブルな計画を支える環境観を組み込んだ地区住環境再編の計画情報のフレームワークの設定の必要性と地域住民と行政が共有し得る、新たな内容についての計画枠組みを提案した。

4:街区と建築群の秩序からみたリデザインの空間構成原理。および5:地方小都市圏の住環境のリデザインプログラムの展開プロセスの検討を、(1)地域別プランニングと(2)市民参加型のプロセスプランニングの観点から行い、小都市住環境のリ・デザインのプログラムとシステム化について論じた。
盲導犬の適性気質に関わるゲノムマーカーの探索

前年度に“注意散漫"について有意差が認められなかったため,本年度はまず個体間の遺伝的距離が近いことを逆に利用して,同腹個体で“注意散漫"の高低が存在するペアをGWAS候補個体として抽出して解析することとした。新たな基準を設けて個体を抽出し,遺伝子型タイピングは理研ジェネシスに委託した。しかしながら,これまでに遺伝子型タイピングを得ていたものに加え,計30ペアの解析を行ったものの,“注意散漫"と有意に関連するSNPは存在しなかった。本研究では最終的に総計215頭分の遺伝子型データを入手できたため,それらを用いて品質管理(Quality Control:SNPマーカーのうち,タイピング率が99%以下のSNPやMinor Allele Frequencyが0.01以下のSNPなどは解析から除外し,最終的には120,108SNPを使用)後に再解析を行った。具体的には,近親個体による層化の影響を減らすため,各腹から1頭ずつ抽出した156頭を用いて解析したところ,有意水準を超えるSNPがみつかった。しかしながら,QQプロット描いて確認したところ,層化による偽陽性の可能性が考えられたため,採材場所(出生地)ごとに,層別解析を行うこととした。その結果,層化の問題は解決され,有意水準は超えないものの,関連の可能性が疑われるSNP(第4染色体のBICF2P907810など)が複数みつかった。また,本解析中に有意ではないものの,“注意散漫"が高い個体のみに出現するSNP(第17染色体のBICF2G630206039および第32染色体のBICF2P1054843)の存在が確認された。今後はこれまでにリストアップされたSNPについて新たな群を作って再現性について確認していくこととした。GWAS委託解析費用が高額であるため,他研究と合わせてサンプル数を揃えて解析することとした。結果として,委託解析開始が遅れ,最終的な結果を得たのが今年度になってしまった。現在,追試験を含め,解析を進めているところである。最終年度(期間延長済)であるため特に研究計画の変更はしない。速やかに研究を進め,公表準備を整えるつもりである。本研究には日本盲導犬協会で飼育された盲導犬候補個体のうち,ラブラドールレトリバー種を用いた。訓練開始3ヶ月目に実施した訓練士評価より,身体的要因でキャリアチェンジした個体や訓練士による評価率が低い個体などを除外し,最終的に766頭における19評価項目を用いて因子分析を行なった結果,“注意散漫",“感受性",“落ち着き"という3気質因子が抽出されたものの,注意散漫因子に含まれる項目が先行研究と異なっていた。よって,以降は先行研究において抽出された因子を注意散漫(旧),本研究により抽出された因子を注意散漫(新)として解析することとした。続いて全頭における注意散漫スコアの分布を調べ,注意散漫(旧)および(新)ともにスコアが高い個体をHH,低い個体をLLとし,また注意散漫(旧)もしくは(新)のどちらかでスコアが高い個体をH,低い個体をLとし,HHLL群及びHL群を合わせて198頭を選抜した。これらの個体についてShort Tandem Repeat検査法にて個体間の遺伝的距離を計測し,提供されていた血縁情報とともに考慮することで,最終的にGWAS対象個体として92頭を選抜した。遺伝子型タイピングは理研ジェネシスに委託した(Illumina,Canine Whole-Genome Genotyping BeadChip使用)。その結果,いずれの個体もSNPタイピング率が99%以上であった。SNPマーカーのうち,タイピング率が99%以下のSNPとMinor Allele Frequencyが0.01以下のSNPは解析から除外し,92頭の124,930SNPを用いて,線形混合モデルによる関連解析を行った。HH/H群(44頭)とLL/L群(48頭)間で解析したところ,残念ながら有意水準を超えるSNPは存在しなかったものの,関連の可能性が疑われるSNPがいくつかみつかった。研究自体は遅延なく進んでいるが,現時点では結果が有意ではないことから,「おおむね順調に進展している」と評価した。本研究結果を受けて,今後の推進方策を検討することとした。

その結果,層化の問題は解決され,有意水準は超えないものの,関連の可能性が疑われるSNP(第4染色体のBICF2P907810など)が複数みつかった。また,本解析中に有意ではないものの,“注意散漫"が高い個体のみに出現するSNP(第17染色体のBICF2G630206039および第32染色体のBICF2P1054843)の存在が確認された。今後はこれまでにリストアップされたSNPについて新たな群を作って再現性について確認していくこととした。GWAS委託解析費用が高額であるため,他研究と合わせてサンプル数を揃えて解析することとした。結果として,委託解析開始が遅れ,最終的な結果を得たのが今年度になってしまった。現在,追試験を含め,解析を進めているところである。当初より予測されたことではあったが,日本盲導犬協会における盲導犬候補個体コロニーでは,個体間の遺伝的距離がかなり近いために,GWAS候補個体の選抜が難航した。実際に有意な結果が得られなかったことから,今後は“注意散漫"に加えて,“感受性",“落ち着き"気質に関してもGWASを実施することとする。また,個体間の遺伝的距離が近いことを逆に利用して,同腹個体で“注意散漫"の高低が存在するペアをGWAS候補個体として抽出して解析することも検討する。最終年度(期間延長済)であるため特に研究計画の変更はしない。速やかに研究を進め,公表準備を整えるつもりである。本研究が科研費として採択される前より研究を開始しており,「1次GWAS費用」は他の経費より捻出していたため,当該年度の使用額が減ることとなった。この「前年度未使用額」については,「2次GWAS費用」もしくは,有意な結果が得られた際に関連がより強い感受性多型を探索するための「ターゲット領域シーケンス費用」として使用する予定である。GWAS委託解析費用が高額であるため,他研究と合併してサンプルを準備することとした。そのため,実際にデータを得るのが今年度に入ってしまった。その後解析をスタートしたものの,年度内に追試を含む実験を行うことが不可能であった。今後はこれまでの計画通り,追試験を行って結果の再現性などについて検討する予定である。
低分子量G蛋白質Rap1による細胞間接着制御機構とその生体内における役割の解析

全身の細胞に酸素や栄養を供給する血管の内腔は、血管内皮細胞によって覆われている。内皮細胞は互いに接着し血液が外に漏れないようにバリヤーとして機能しているが、炎症時や虚血によって新たに血管が形成されるときにはそのバリヤー機能は低下する。本研究では血管のバリヤー機能を制御するメカニズムを解明するため、内皮細胞間の接着を制御するVascularEndothelial(VE)-Cadherinに注目し、その接着活性を調節するシグナル伝達系を解析した。その結果、Rap1低分子量G蛋白質がアクチン細胞骨格系を制御することによりVE-cadherin接着を増強することが明らかになった。血管内皮特異的細胞間接着分子VE-cadherin(VEC)はアドヘレンスジャンクションの形成を介して血管のバリヤー機能を厳密に制御している。我々は今までに低分子量GTP結合タンパク質Rap1がVE-Cadherin接着を正に制御していることを明らかにしてきた。平成19年度はその分子メカニズムをさらに詳細に明らかにするために研究を行い,以下のような結果を得た。(1)Rap1によるアクチン細胞骨格系制御を介したVE-cadherin接着制御メカニズムサイクリックAMP(cAMP)はEpac-Rap1系を介して細胞間接着部位でアクチン線維の束化を促進し,VE-cadherin接着を安定化することがわかった。そのメカニズムとしてRap1は"VEC→α-catenin→myosinII→アクチン線維の束化→VEC接着の安定化"というポジティブフィードバック機構を活性化することによりVEC接着を増強することを明らかにした。(2)Rap1活性を時・空問的に制御するための系の確立とそれを用いたVE-cadherin接着制御機構の解析FRB(rapamycinbindingdomainofmTOR)とFKBP(FK506-bindingprotein)はrapamycin依存的に会合する分子である。そこでRap1活性を時・空間的に制御できる系の確立するため,FKBPとEpac1触媒領域の融合蛋白質(FKBP-Epac1)および膜移行シグナルを付加したFRBを細胞に発現させ,rapalnycin刺激した。ずると,FKBP-Epac1は細胞膜に移行し,そこでRap1を活性化した。この系を用いて解析したところ,細胞膜におけるRap1の活性化はエンドゾームに局在するVECの細胞膜への輸送を惹起することがわかった(1)(2)からRap1はアクチン細胞骨格系とVEC輸送の両方を調節することにより,VEC接着を増強することが示唆された。血管内皮特異的細胞間接着分子VE-cadherin (VEC)はアドヘレンスジャンクションの形成を介して血管のバリヤー機能を厳密に制御している。我々は今までに低分子量GTP結合タンパク質Rap1がVEC接着を正に制御していることを明らかにしてきた。平成20年度はその分子メカニズムをさらに詳細に明らかにするために研究を行い、以下のような結果を得た。(1)サイクリックAMP (cAMP)-Epac-Rap1シグナルは、内皮細胞間接着部位でアクチン線維の束化を惹起し、VECがそのアクチン線維に集積すること、さらにこのアクチン線の束化はVEC接着非依存的に起こることが示された。(3) VECの細胞内領域を欠損、あるいはα-cateninに置換したVEC-GFP変異体を用いてFRAP解析を行ったところ、cAMP-Epac-Rap1シグナルによる細胞間接着部位におけるVECの安定化には、β-catenin、α-cateninが必要であることが分かった。以上の結果から、Rap1は細胞間接着部位でアクチン線維の束化を惹起し、そこにβ-catenin、α-cateninを介してVECを固定することで、VEC接着を増強することが示された。
精漿中の免疫抑制物質と妊厚性に関する研究

人精漿中の免疫抑制物質の性状と作用機序を調べるため、recombinant interleukin 2(rIL-2)とIL-2依存性のNKC-3 cellを用い、より単純化したin vitroの系により検討した。1.精漿は、100°C15分、60°C15分の熱処理にほぼ安定であったが、autoclave15分処理では、抑制効果は著しく減弱した。2.各濃度の精漿において、凍結乾燥によっても、ほぼ抑制効果は維持された。3.pronase、papain、periodic acid処理した精漿では、著しく抑制効果が減弱したことから、精漿中の免疫抑制物質はglycoproteinであると考えられた。4.rabbit、boar、goatの精漿においても精漿濃度依存性の抑制効果がみられ、種特異的なものではないことが示唆された。5.精漿を105,000G、2時間の条件で超遠心を行なうと沈澱側に抑制活性が移動した。6.精漿をSephaepxb S-300でゲル濾過を行なうと、抑制活性は分子量74万以上に最も強く認められた。7.IL-2依存性のNKC-3 cellでは精漿濃度依存性の抑制がみられたが、IL-2非依存性のcell lineであるNS-1やYAC-1では抑制効果がみられなかった。8.培養開始時に精漿を加えた方は、精漿濃度依存性の抑制がみられたが、harvest6時間前つまりNKC-3 cellがIL-2で活性化された状態に精漿を加えても抑制はみられなかった。9.精漿存在下で培養したNKC-3 cellを3回洗浄後、精漿を除いた状態で培養するとIL-2に対する反応が回復した。10.^<125>I-rIL-2のNKC-3 cellへの結合は、精漿濃度依存性に抑制された。11.IL-2 receptorに対するモノクロナール抗体を用いたフローサイトメトリー解析ではIL-2 receptorのframe workを認識するといわれているTD4に比べIL-2のbinding siteのepitopeを認識している3CTの方でより蛍光強度が減弱していた。以上より、精漿のIL-2活性抑制の作用機序として、精漿中の免疫抑制物質が、IL-2のreceptorへの結合を阻害することが示唆された。人精漿中の免疫抑制物質の性状と作用機序を調べるため, recombinart interleukin2(rILー2)とILー2依存性のNKCー3 cellを用い,より単純化したin vitroの系により検討した.1.精漿は, 100°C15分,60°C15分の熱処理にほぼ安定であったが, autoclave15分処理では抑制効果は著しく減弱した.2.各濃度の精漿において,凍結乾燥によってもほぼ抑制効果は維持された.3.pronase,papain,periodic acid処理した精漿では著しく抑制効果が減弱したことから,精漿中の免疫抑制物質はglycoprateinであると考えられた.

4.rabbit,boar,goatの精漿においても精雫濃度依存性の抑制効果がみられ,種特異的なものではないことが示唆された.5.ILー依存性のNKCー3 cellでは精漿濃度依存性の抑制がみられたが, ILー2非依存性のcell lineであるNSー1やYACー1では,ほとんど抑制効果がみられなかった.6.培養開始時に精漿を加えた方は,精漿濃度依存性の抑制がみられたが, harvest6時間前つまりNKCー3 cellがILー2で活性化された状態に精漿を加えても抑制はみられなかった.7.精漿存在下で培養したNKCー3 cellを3回洗浄後,精漿を除いた状態で培養するとILー2に対する反応が回復した. 8.^<125>IーrILー2のNKCー3 cellへの結合は,精漿濃度依存性に抑性された. 9.ILー2receptorに対するモノリロナール抗体を用いたフローサイトメトリー解析では,精漿により3c7,7D4の両方で蛍光強度の減弱がみられたが, ILー2receptorのframeworkを認識するといわれている7D4に比べ, ILー2のbinding siteのepitopeを認識するといわれている3c7の方でより蛍光強度が減弱していた.以上より精漿のILー2活性抑制の作用機序として,精漿中の免疫抑制物質が, ILー2のreceptorへの結合を阻害することが示唆された.人精漿中の免疫抑制物質の作用機序と性状については、昨年度レセプターアッセイ、フローサイトメトリー、熱処理、凍結乾燥、酵素処理等により人精漿中のglycoproteinが、NKC-3 cellのIL-2receptorsideに作用してIL-2抑制効果を生じることを報告した。本年度は、人精漿中の免疫抑制物質の単離精製を試みるためゲル濾過を行なった。凍結乾燥により濃縮した精漿を、0.05M PBS(PH7.2)で平衡化したsephacryl S-300 column(5×77cm)でゲル濾過を行ない、各分画をNKC-3 cell cultureの系に添加することにより抑制効果の存在する分画を調べた。分画は、5つのピークに分かれ、幅広い抑制活性を示した。最も抑制活性の強い分画での推定分子量は74万以上であるが、低分子量のところにも抑制活性がみられた。ゲル濾過により、精漿中の免疫抑制物質は、ある程度巨大分子であることが推定されたので、精漿を4°Cにて6,800G、27,000G、60,000G、及び105,000G、2時間の条件で超遠心を行ない、上清部分、沈澱部分の抑制活性をみたところ、回転数を上げるにつれ沈澱側での抑制効果が強くなり、105,000Gでは、ほとんど沈澱側に抑制効果がみられた。このことより精漿中の免疫抑制物質は超遠心により沈澱する巨大分子であることが推定された。またrecombinant IL-2(γIL-2)と精漿を混合したものは、そのままNKC-3 cellの系に添加すると精漿によりIL-2活性が阻害されるため、NKC-3 cellは増殖することができないが、両者の混合液を10,5000G、2時間の超遠心を行なうと上清部分にほぼ100%IL-2活性が回収されたことより、精漿中の免疫抑制物質がIL-2そのものを中和したり、IL-2に結合したりすることにより阻害効果を発現するのではないということが示唆され、IL-2 receptor sideでの阻害であることを暗に示唆した。
シグナル伝達から見たT細胞の無反応状態(アナジー)の解析に関する共同研究

CD28刺激を行わずに、TCRシグナルのみを介してT細胞を活性化することによって無反応状態が誘導されるが、その際にはT細胞の増殖因子であるインターロイキン2の生産が見られない。そして、このような場合にはMAPKスーパーファミリーメンバーの中のERKのみが活性化される。一方、TCRとCD28を介して刺激することによってインターロイキン2を生産する場合には、ERKに加えてJNKとp38の活性化も観察される。様々な阻害剤や優性不能型変異体を駆使した研究から、JNKとp38の活性化経路はインターロイキン2の生産に対して相加的に作用し、ERKはこれらのキナーゼと相乗的に作用することを明らかにした。さらに、抗原刺激によるJNKとp38の活性化がサイクロスポリンAによって抑制されることを見いだした。浸透圧ショックなどのストレスによるJNKとp38の活性化はサイクロスポリンAによって抑制されないので、抗原刺激の下流には、ストレス系とは異なる、サイクロスポリンAに感受性のJNKとp38の活性化経路があることが予想される。サイクロスポリンAはカルシウム感受性の脱リン酸化酵素であるカルシニューリンを阻害することによってインターロイキン2プロモーターの転写に必須の転写因子でNFATの核移行を阻害する。従って、サイクロスポリンAはカルシニューリンの阻害を介してインターロイキン2の生産を阻害し、それによって末梢T細胞の自己寛容状態を作りだすと考えられてきた。一方、カルシニューリンはあらゆる細胞に発現しており、サイクロスポリンAが比較的特異的な免疫抑制剤として機能する理由は必ずしも明らかでなかった。本研究から、サイクロスポリンAの標的がカルシニューリン経路のみではなく、JNKとp38の活性化経路も標的であることが明らかになり、サイクロスポリンAが特異的な免疫抑制剤として機能する理由が明らかになった。今年度はITAMを介したシグナル伝達系の詳細な解析を行った。CD3ξ分子の最も膜側のITAMであるNQLYNELNLGRREEYDVLというアミノ酸配列をヒトCD8α分子のC端側に結合したキメラ分子を遺伝子導入によってT細胞株に発現し、細胞外ドメインを抗CD8α抗体によって架橋する方法を用いてシグナル伝達系を解析した。上記アミノ酸配列内の各アミノ酸に変異を導入した一連の実験から、1個のITAM中に見られる2個のYxxLが機能的に異なることを見いだした。すなわちN端側のYxxLに変異を導入するとITAMを介した全てのシグナルが伝達されなくなるのに対し、C端側のYxxLに変異を導入した場合にはIL2遺伝子の活性化は抑制されるが、カルシウムイオンの動員やPTK系の活性化は影響を受けないことを見いだした。すなわちN端側のモチーフのみによってある程度のシグナルが伝達される。さらに、細胞質内のモチーフの数やチロシンとロイシン以外のアミノ酸の配列の違いによって、受容体の細胞外ドメインの架橋の必要性に差が出ること、すなわち受容体の感受性に差が出ることを明らかにした。上記のキメラ分子を発現している細胞は、抗CD8α抗体を加えた後に2次抗体を加えてさらに架橋を行わないと活性化シグナルが伝達されないが、3個のITAMを持つCD3ξの細胞質部位全体をもつキメラ分子を発現している細胞の場合には2次抗体なしに細胞の活性化が誘導された。また、CD3ξ分子の最も膜側のITAM1個のみを持つ場合にも、N末側のYxxL(YNEL)のアスパラギンをアラニンに置換した場合(YAEL)にも2次抗体なしに細胞の活性化が誘導された。

これらの結果は受容体の細胞質内のITAMの数が多いほど感受性が高い、すなわちシグナルが伝達され易いこと、さらにITAMのチロシンとロイシン以外のアミノ酸配列も感受性に影響することを示す。CD28刺激を行わずに、TCRシグナルのみを介してT細胞を活性化することによって無反応状態が誘導されるが、その際にはT細胞の増殖因子であるインターロイキン2の生産が見られない。そして、このような場合にはMAPKスーパーファミリーメンバーの中のERKのみが活性化される。一方、TCRとCD28を介して刺激することによってインターロイキン2を生産する場合には、ERKに加えてJNKとp38の活性化も観察される。様々な阻害剤や優性不能型変異体を駆使した研究から、JNKとp38の活性化経路はインターロイキン2の生産に対して相加的に作用し、ERKはこれらのキナーゼと相乗的に作用することを明らかにした。さらに、抗原刺激によるJNKとp38の活性化がサイクロスポリンAによって抑制されることを見いだした。浸透圧ショックなどのストレスによるJNKとp38の活性化はサイクロスポリンAによって抑制されないので、抗原刺激の下流には、ストレス系とは異なる、サイクロスポリンAに感受性のJNKとp38の活性化経路があることが予想される。サイクロスポリンAはカルシウム感受性の脱リン酸化酵素であるカルシニューリンを阻害することによってインターロイキン2プロモーターの転写に必須の転写因子でNFATの核移行を阻害する。従って、サイクロスポリンAはカルシニューリンの阻害を介してインターロイキン2の生産を阻害し、それによって末梢T細胞の自己寛容状態を作りだすと考えられてきた。一方、カルシニューリンはあらゆる細胞に発現しており、サイクロスポリンAが比較的特異的な免疫抑制剤として機能する理由は必ずしも明らかでなかった。本研究から、サイクロスポリンAの標的がカルシニューリン経路のみではなく、JNKとp38の活性化経路も標的であることが明らかになり、サイクロスポリンAが特異的な免疫抑制剤として機能する理由が明らかになった。
日本人英語学習者の音声文理解における言語情報処理：聴解時のタスクに焦点を当てて

本研究は、外国語として英語を学習する日本人英語学習者を対象として、音声で提示される英文(音声文)を聞いて理解する際に、その理解に必要不可欠な言語情報(統語情報・意味情報など)をリアルタイムでどのように処理しているのか、また、文聴解時に与えられるタスク(課題)の種類によって、音声文の言語情報処理がどのように異なるのか、心理言語学的視点から検証を行うものである。日本人英語学習者の音声文理解における、言語情報のリアルタイムでの処理や、文聴解時に注意を向ける言語情報の種類による音声文理解プロセスの違い、また、音声文理解の経験・学習による、言語情報処理の脳内基盤の可塑性について、主に神経脳科学実験によって明らかにし、得られた結果から、学習者の音声文理解における言語情報処理の様相と、その処理プロセスのモデル化を試みる。平成30年度は、先行研究のさらなる調査を行い、実験デザインについて検討を行った。実験は令和元年度中にデザインを確定し、データ収集を実施する予定である。また、平成26-30年度科学研究費基盤研究(A)「学習による気づき・注意機能および相互的同調機能と第二言語情報処理の自動化プロセス」(研究代表者:横川博一(神戸大学・大学教育推進機構・教授)/研究課題番号:26244031)と連携して、これまでに日本人英語学習者を対象として実施された英文理解時における言語情報処理研究の成果と、今後の展望についてまとめ、日本ビジネスコミュニケーション学会2018年度第2回研究集会合同開催第152回次世代大学教育研究会合同開催教育の国際化研究会において発表を行った。平成29年度に実施した神経脳科学実験のデータ分析や、実験デザインの検討に時間を要し、平成30年度中に予定していた心理言語学実験・神経脳科学実験を開始することができなかったため。心理言語学実験・神経脳科学実験については、上述の平成26-30年度科学研究費基盤研究(A)での研究を通して、脳波測定装置を含めて、実験の準備がほぼ整っている。平成29年度に実施した実験のデータ分析・成果発表と並行して、令和元年度中に前述の実験を実施する予定である。次年度使用額が生じた理由:大学の業務の関係により、平成30年度に参加を予定していた国内学会・国際学会への参加ができなかったことや、実験デザインが確定していないことにより、購入物品の検討ができなかったことなどが原因である。使用計画:令和元年度は、実験に必要な物品の購入や実験参加者への謝礼、製品のアップグレードに伴う統計分析ソフトの購入、研究成果の発表を行うための旅費などに使用する予定である。
毛包に存在する神経堤由来細胞による低侵襲骨再生法の開発

胚発生の過程で神経堤から遊走した神経堤由来細胞の一部は、成長後も幹細胞の性質を維持し体内に潜伏することから、再生医療の新しい細胞ソースとして期待されている。本研究では、神経堤由来細胞をGFPで標識できる遺伝子改変成体マウスを用い、毛包の毛乳頭とバルジ領域に神経堤由来細胞が局在するのを明らかにした。毛包から採取した細胞はFGF含有培地によりGFP陽性細胞が選択的に増殖し、間葉系幹細胞マーカーの発現も上昇した。一方、BMP含有の誘導培地によって骨芽細胞様細胞へと分化した。低侵襲で容易に採取できる毛包の神経堤由来細胞は、骨組織再生の有効な細胞ソースとなり得ることが示唆された。本研究で用いたP0-Cre/CAG-CAT-EGFPダブルトランスジェニックマウスは、胚発生時期の神経堤細胞特異的に活性化するミエリンプロテインゼロ(P0)遺伝子のプロモーターによりCreリコンビナーゼが発現し、神経堤細胞がその後分化してもGFPが産生され、各組織に存在する神経堤由来細胞はGFP陽性細胞として検出できる。毛包全体の組織学的な解析からGFP陽性細胞は、特に毛乳頭とバルジ領域に存在することが認められた。バルジ領域は幹細胞が存在し、将来上皮のケラチノサイトや毛乳頭へ細胞を供給することが知られている。ダブルトランスジェニックマウスより採取した毛包細胞をFGF含有の幹細胞培地で培養すると、培養経過に伴いGFP陽性細胞の割合が高くなり、培養開始2週後には、全細胞数のおよそ95%を陽性細胞が占めた。それらの細胞をフローサイトメーターで解析すると、幾つかの間葉系幹細胞マーカーの発現が高いことから、未分化性を保持したまま増殖したと考えられる。GFP陽性細胞をBMP含有の骨芽細胞誘導培地で培養すると、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性が上昇した。ALP活性は、BMPの濃度に依存して上昇した。アリザリンレッド染色、Von Kossa染色も陽性を示し、GFP陽性の毛包細胞は骨芽細胞様細胞へと誘導された。さらにInsulin含有の分化誘導培地によってOil Red O染色陽性の脂肪細胞が出現した。これらの結果、成体マウスの毛包に存在する神経堤由来細胞は、未分化な状態で多分化能を有する細胞集団であることが明らかになった。本研究で用いたP0-Cre/CAG-CAT-EGFP遺伝子改変マウスは、胚発生時期の神経堤細胞特異的に活性化するミエリンプロテインゼロ(P0)遺伝子のプロモーターによりCreリコンビナーゼが発現し遺伝子組換えによって、神経堤細胞がその後分化してもGFPが産生されるため、各組織に存在する神経堤由来細胞はGFP陽性細胞として検出できる。毛包の組織解析から毛乳頭と、ケラチノサイトの幹細胞が存在するバルジ領域にGFP陽性細胞が局在した。遺伝子改変マウスより採取した毛包の全細胞数の僅か10%以下であったGFP陽性細胞は、FGFとEGF含有の幹細胞培地で培養すると割合が高くなり、培養2週後にはおよそ95%をGFP陽性細胞が占めた。同時にフローサイトメーターで解析すると、間葉系幹細胞マーカーの割合も増加した。以上の結果、毛包から未分化な神経堤由来細胞を、選択的に増殖させることに成功した。増殖させた神経堤由来細胞をBMP含有の骨芽細胞誘導培地で培養すると、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性が上昇し、その活性はBMPの濃度依存的に促進した。石灰化の指標であるアリザリンレッド染色、Von Kossa染色共に陽性を示し、OsteocalinとOsterixの遺伝子発現も上昇した。さらに骨髄細胞との共存培養で破骨細胞形成を支持することから、毛包の神経堤由来細胞は骨芽細胞様細胞へ分化したことが明らかになった。また、脂肪細胞誘導培地によって脂肪細胞様細胞に分化したことから、多分化能をもつことも証明された。これらの結果、低侵襲で容易に採取できる毛包の神経堤由来細胞は、骨組織再生の極めて有効な細胞ソースとなり得ることが示唆された。P0-Cre/CAG-CAT-EGFPダブルトランスジェニックマウスを用いて、神経堤由来細胞の毛包内の細胞分布、細胞表面マーカーの解析、細胞増殖を促す最適条件ならびに骨芽細胞分化誘導など多分化能についての解析が計画どおり達成された。一方、網羅的遺伝子発現解析から、毛包神経堤由来細胞特異的に発現する遺伝子を選抜する計画について未だ候補遺伝子を特定しておらず、発現抑制実験の実施に至ってないことから、総合的な研究全体の達成度区分を「やや遅れている」と評価した。口腔生化学P0-Cre/CAG-CAT-EGFPダブルトランスジェニックマウスの毛包から神経堤

由来細胞を純化・培養して、骨芽細胞培養シートを骨欠損部に移植する。あるいは、コラーゲンを主体としたスキャホールドに神経堤由来細胞を包埋後に、欠損部へ移植する。骨欠損モデルの他に、骨延長あるいは歯周病モデル動物を用いて、神経堤由来細胞が持つ骨組織誘導・骨再生能について解析する。解析法として、組織形態学的評価と高解像度mCTから評価する。なお、効率的に骨を誘導できるスキャホールドの組成について検討を加える。毛包神経堤由来細胞特異的に発現する遺伝子の特定が遅れたため、発現抑制実験あるいは細胞表面マーカーによる細胞純化実験が実施できず、平成26年度研究費を繰り越した。毛包神経堤由来細胞特異的に発現する遺伝子の検索に関わる費用以外には、骨欠損、骨延長あるいは歯周病モデル動物を用いた、骨組織誘導・骨再生能の評価・解析にあてる。
学校数学における「文字の式」の理解に関する組織的研究

本研究の目的は、学校数学における「文字の式」が数学的問題解決活動を展開する際に思考の道具として機能することを、規範的に教材を開発し、かつ授業実践を通して実証的に示すことにある。そのために、「文字の式」の利用のための教授課題を開発し、特に擬変数に焦点を当てたてインタビュー課題を開発し試行した。最終年度においてはこれまでのインタビューの結果を踏まえて授業指導案を作成しその実践を試みた。また、これまでの本研究における成果を整理して総括し、最終報告書を作成した。本研究の目的は、学校数学における「文字の式」が数学的問題解決活動を展開する際に思考の道具として機能することを、規範的に教材を開発し、かつ授業実践を通して実証的に示すことである。本年度は「文字の式」の利用のための教授課題を開発した。1)「文字の式」が思考の道具として利用できることを明示的に示す教材を開発した。[1]数のパターンの発見とその一般的証明の文脈具体的には平方数の和と差にみられる数パターンに着眼した教材を開発した。[2]関数の性質をグラフの形状とその式による特徴・変形から考察する文脈2次関数y=ax^2+bx+cについて、acを固定しbを変化させた場合や3次関数を3次式、2次式、1次式の和や差とみる見方を養うための教材を開発した。[3]図形を対象にした問題解決において、「文字の式」を活用する文脈積が一定となる場合を図的表現として視覚化し、これを具体的な問題解決に活用できることを示す教材を開発した。2)開発した教材を授業において実践できるように検討した。開発した教材の一部(上記[1][3])を大学学部の授業で試行し、中学校高等学校での実践のための基礎資料を得た。また[2]を実践するためにグラフ電卓の活用を考察した。来年度は、さらに新しい教材を開発するとともに、授業実践を試み、その結果を整理して「文字の式」が数学的問題解決過程で思考の道具として機能する様相を明らかにしていく。本年度は昨年度に引き続き「文字の式」の利用のための教授課題を開発するとともに、擬変数の重要性を明らかにし、擬変数に焦点を当てたてインタビュー課題を開発し試行した。開発したインタビュー課題は、2位数-1位数、3位数-1位数で繰り下がりがある場合で、減数を引かずに逆に足してから10を引くという方法の妥当性および一般性を問うものである。この課題をオーストラリアメルボルン大学のステフアン教授と共同で開発し、メルボルン市内の小学校第3学年および東京都小金井市の3年生に試行した。インタビュー調査の結果は、平成14年5月にシンガポールで開催される国際会議で発表することになっている。来年度は、さらに新しいインタビュー調査課題を開発するとともに、インタビューの成果を踏まえて授業指導案を作成しその実践を試みる。また、これまでの本研究における成果を整理して総括する。
ルーマニア・ドイツ語文学にみる二つの「過去の克服」―ナチズムと社会主義独裁―

1989年のチャウシェスク体制崩壊とともに、ルーマニア・ドイツ語文学は新たな局面を迎えた。大多数のドイツ系住民がルーマニアを出国したことに伴い、従来はルーマニア国内に限られていた創作と受容の主たる場がドイツやオーストリア等へ移ったのである。それとともに、同文学は二つの「過去」と対決せざるをえなくなった。一つはナチズムの過去であり、もう一つは社会主義独裁政権下での秘密警察による人権抑圧の過去である。本研究では体制崩壊直前から現在に至るルーマニア・ドイツ語文学の動向を整理し、同文学が二つの「過去の克服」とどのように向き合い、いかなる文学的表象を生み出しているかを解明した。本研究は、チャウシェスク体制崩壊直前から現在に至るルーマニア・ドイツ語文学の動向を整理し、同文学がナチズムと社会主義独裁という二つの「過去」とどのように向き合い、その「克服」を目指すなかで、どのような文学的表象を生み出しているかを解明しようとするものである。平成25年度は、主に以下の作業を行った。1)1980年代以降に発表された作品の収集と整理。ヘルタ・ミュラーやエギナルト・シュラットナーをはじめとするルーマニア出身のドイツ語作家のテクストを収集し書誌情報等の整理を進めた。2)ナチズムおよび社会主義独裁体制下での秘密警察に関わる作品の分析。ミュラー、シュラットナー、クラウス・シュテファーニのテクストを中心に分析を進めた。3)上記2)の分析と合わせて、ルーマニアにおけるナチズムおよび社会主義独裁体制とドイツ系住民との関わりについて、各作家が抱えている問題意識についても考察を行っている。なお、この過程で、第二次世界大戦中に5万人を超えるドイツ系ルーマニア人がナチ武装親衛隊に入隊し、ユダヤ系ルーマニア人の強制移送と殺戮に関わった歴史的事実の解明が現在もなお不十分であることを改めて認識せざるを得なかった。そのため、とりわけ積極的にナチズムに関わったトランシルヴァニア地方のドイツ系作家を担当する研究分担者が、当時トランシルヴァニアで刊行された新聞や文化雑誌を多く収蔵するオーストリア国立図書館で資料収集を行った。これらは、上記の作家たちが描く第二次世界大戦中の状況を分析する際に、重要な参考資料となるものである。本研究は、チェウシェスク体制崩壊直前から現在に至るルーマニア・ドイツ語文学の動向を整理し、同文学がナチズムと社会主義独裁という二つの「過去」とどのように向き合い、その「克服」を目指すなかで、どのような文学的表象を生み出しているのかを解明しようとするものである。平成26年度は、前年度に引き続き、1)1980年代以降に発表された作品の収集と整理、および2)武装親衛隊を中心とするナチ組織や社会主義独裁体制下の秘密警察との関わりを扱ったテクストの分析を進めた。先行研究において長年タブー扱いだったドイツ系マイノリティとナチズムとの関わりについては、更なる関連資料収集と分析の必要性が前年度の過程で明らかとなったが、今年度はこの点に関する研究成果の一端を発表するとともに、オーストリア国立図書館での調査を続けた。研究協力者は現在、戦間期のドイツ系マイノリティによるナチズムへの傾斜を扱ったシュラットナーの小説の分析をも進めている。ルーマニアのシビウの文書館に保管されているシュラットナーの書簡や原稿の調査も、全治3か月の骨折と校務で出張が不可能となった研究分担者に代わり、研究代表者が実施した。その際、シュラットナー本人とも面談し、今後の研究協力体制を確立するとともに、研究協力者の疑問を作家本人に質すことができた。研究代表者はミュラーやシュテファーニのテクストに関する分析を進めている。ドイツのミュンヘンでシュテファーニを訪問し、今後の資料提供や協力体制について相談し、確約を得た。この関係により、ドイツ国内で激しい様相を呈している「ルーマニア秘密警察への協力」をめぐる対立的言説や訴訟等に関わる一次資料確保が可能となる見通しである。またルーマニア独文学会会長の古稀記念論集にルーマニア・ドイツ語文学に関わる寄稿を行い、同学会やブカレスト大学外国語学部ドイツ文学科との協力関係を強化した。平成27年度も引き続き、1)1980年代以降のルーマニア・ドイツ語作家や詩人による著作の収集と整理、および、2)ナチ組織および社会主義独裁体制下の秘密警察にかかわる「過去」に関する作品分析を継続した。そのうえで、3)著作や未刊行資料の分析および面談を通しての、作家や評論家、研究者の問題意識に関する考察、4)2010年秋以降、秘密警察との関係をめぐって公の場で頻発しているルーマニア出身の作家、評論家、研究者相互の対立、5)作品や作家、4)で挙げた事態に対する読者層の理解と反応、に重点を置いて、分析と考察を進め、まとめの議論を行った。研究代表者は作家E.シュラットナーと2度にわたって面会し、研究協力者と共同で考案した質問事項を踏まえ、長時間のインタビューを行った。研究分担者はこのインタビュー内容を踏まえて、テクスト分析を行った。さらに研究代表者はルーマニア・ドイツ語文学の専門家であるベルリンのフンボルト大学ドイツ文学科研究員M.ノヴォトニク博士との研究協力体制を確立した。H.ミュラーのテクスト分析を行う一方、作家C.シュテファーニからの情報提供を受け、状況の分析を進めた。

なおノヴォトニク博士は2018年3月に東北大学を来訪し、本科研プロジェクトの公開研究会の一環として、講演を行った。研究分担者はオーストリア国立図書館でナチズムの過去に関わる資料の最終確認を行った。研究代表者は成果を7月に女性ドイツ文学研究者の会の招待講演として発表した。また論考が、東北ドイツ文学会学会誌で発表される見通しである。1989年のチャウシェスク体制崩壊とともに、ルーマニア・ドイツ語文学は新たな局面を迎えた。大多数のドイツ系住民がルーマニアを出国したことに伴い、従来はルーマニア国内に限られていた創作と受容の主たる場がドイツやオーストリア等へ移ったのである。それとともに、同文学は二つの「過去」と対決せざるをえなくなった。一つはナチズムの過去であり、もう一つは社会主義独裁政権下での秘密警察による人権抑圧の過去である。本研究では体制崩壊直前から現在に至るルーマニア・ドイツ語文学の動向を整理し、同文学が二つの「過去の克服」とどのように向き合い、いかなる文学的表象を生み出しているかを解明した。昨年度、ドイツ系ルーマニア人のナチズム関与の歴史が先行研究でいかにタブーとされてきたのかを新たに認識し、追加で調査を行ったため予定より進行が遅れていたが、今年度はその調査も含めて順調に経過した。11月末に研究分担者が骨折し全治3か月となったことで予定していた海外出張を延期し、ルーマニアでの調査は研究代表者が代行する等のアクシデントが生じたが、十分な情報共有により支障はなかった。また作家のシュテファーニ氏やシュラットナー氏等本人からの資料や情報提供の体制を確立できたことは大きな成果であった。ルーマニアで刊行されているドイツ語新聞「ルーマニア一般ドイツ新聞(Allgemeine Deutsche Zeitung fuer Rumaenien)」に掲載された作家C.シュテファーニによる研究代表者の長文インタビュー。日本におけるルーマニア・ドイツ語文学研究および本研究の遂行者2名の研究成果について詳述した。ヨーロッパ文学1)著作や資料の収集、2)作品分析を継続しつつ、3)ルーマニア出身のドイツ語作家や批評家、研究者間での「過去」に関わる意見の相違や相互の非難をめぐる状況に関わる情報の分析を進める。同時に、4)前項の事態に対するドイツ語圏読者層の理解と反応を考察し、まとめの議論を行う。研究協力者はとりわけシュラットナーについて、ナチズムへの同調および秘密警察協力の過去を扱った二つの作品の分析とシビウで収集した未刊行資料の調査との突合せを行う。なお未刊行資料の調査は継続する。研究代表者はとりわけ秘密警察との過去を巡りシュテファーニや詩人のパスティオール(ミュラーの協力者)等を巻き込み複数の関係者間で展開された激しい非難の応酬について情報を分析し、作品世界との関わりについても考察し、議論を整理する。研究代表者と研究分担者は、当初の計画を進めるなかで、第二次世界大戦中のドイツ系ルーマニア人のナチズム関与の歴史がルーマニアのドイツ系マイノリティやルーマニア出身のドイツ系研究者にとってタブーであったため、歴史的事実の解明が非常に遅れているとの認識を改めて確認することになった。
ＪＮＫ抑制による川崎病冠動脈瘤に対する退縮治癒療法の開発

カンジダ・アルビカンス標準株の菌体抽出物質4mgを、マウスC57BL/6雄の腹腔内に5日間連続投与を1週目と5週目の2クール行い、川崎病類似汎血管炎モデルマウスを作成した。またカンジダ投与開始前日にJNK阻害薬タブレットをマウス後頸部皮下に留置した。モデルマウス作成1ヶ月後に犠牲死させ、血管病変を解析した。以上をJNK投与群(J群)とし、J群10匹とプラセボ群(プ群)20匹とで比較検討した。J群では10匹中に1匹(10%)、プ群では20匹中に13例(65%)で血管病変を認めた(p<0.01)。JNKは川崎病冠動脈瘤形成に関与し、JNK阻害薬が瘤形成予防薬となりうる事が示唆された。本研究の目的は、川崎病冠動脈瘤の発症、病変進展におけるJNKの果たす役割を解明し、瘤退縮治癒療法を開発することであり、具体的には申請期間内に以下の4点の達成を目標とする。目標1;マウス川崎病モデルを作成し、冠動脈瘤病変のJNK活性化動態を解明する。目標2;ヒト川崎病冠動脈病変におけるJNK活性化とそれを反映するマーカー分子を検討する。目標3;マウス川崎病モデルにおいて、JNK阻害療法の冠動脈瘤形成予防効果を検証する。目標4;マウス川崎病モデルにおいて、JNK阻害療法の冠動脈瘤退縮治癒効果を検証する。平成24年度に行った実験の概要は、冠動脈病変形成予防効果の証明;1川崎病冠動脈病変モデルマウスを作成。2モデル作成処置直前にJNK阻害薬SP600125を投与、対照はプラセボを投与。モデル作成処置後8週目に犠牲死させ、組織標本と血液を採取し、血管最大径計測、炎症細胞浸潤,エラスチン線維破壊、テネイシンCの発現定量、血中テネイシンCの定量を行った。【結果】JNK群では10匹中に1匹(10%)、プラセボ群では20匹中に13例(65%)で血管病変を認めた(p<0.01)【考察】JNKは川崎病冠動脈瘤形成に関与し、JNK阻害薬が瘤形成予防薬となりうる事が示唆された。本研究の目的は、川崎病冠動脈瘤の発症•病変進展におけるJNKの果たす役割を解明し、瘤退縮治癒療法を開発することであり、具体的には申請期間内に以下の4点の達成を目標とする。本年度は目標4の実験を遂行する予定であったが、モデルマウスを作成する段階で、血管炎形成率が低下し、現在、マウスを血管炎を起こしやすいと言われるDBA/2に変更し、カンジダアルカリ抽出液作成法の再検討を行った上で、実験を再開している。Iモデルマウス確立(至適カンジダ抽出液量の決定)【方法】カンジダ抽出液を精製:カンジダ・アルビカンス標準株を用いてアルカリ抽出液を作成し、マウス6匹ずつにカンジダ抽出液2mg, 4mg, 10mg, 20mgのマウス腹腔内5日間連続投与を1週目と5週目に2クール行ない、2クール開始4週目に犠牲死させ肉眼的組織的観察を行った。【結果】カンジダ抽出液投与量2mg群では3例で大動脈病変が、2例で冠動脈病変が見られた。4mg群では4例で大動脈病変が見られ、冠動脈病変は見られなかった。組織的には外膜の著明な細胞浸潤と弾性板の破壊、及びTNCの発現が主な所見であった。10mg群、20mg群では投与開始翌日に全マウスが死亡したため、解析は行っていない。以上の結果より以降の実験においてカンジダ抽出液投与量は4mgで行うものとした。II瘤肉眼的解析の確立、血清TNC測定【方法】7匹ずつ3群にカンジダ抽出液4mgのマウス腹腔内5日間連続投与を1週目と5週目に2クール行い、4,8,12週目に犠牲死させ採血し心臓/大動脈を広範囲に摘出した。(1)血清TNC測定

(2)冠動脈肉眼的観察(墨汁ーゼラチン法)(3)大動脈肉眼的観察(4)組織的観察【結果】(1)血清TNC測定4週目474.1、8週目363.5、12週目167(2)冠動脈肉眼的観察;12週目に1/7匹で瘤形成あり。内腔の拡大はなし。(3)大動脈肉眼的観察;4週目;4/7匹で瘤形成あり、8週目;4/7匹で瘤形成あり、12週目;6/7匹で瘤形成あり。(4)組織的観察;4週目;外膜肥厚性炎症細胞浸潤、弾性板の直線化と断裂、新生内膜少し形成、全層及び外膜にTNC発現、8週目;全層肥厚性炎症細胞浸潤、弾性板ほとんどなし、全層にTNC発現、12週目;全層肥厚性炎症細胞浸潤、弾性板なし、新生内膜でほぼ腔内閉塞、TNCは新生内膜のみに発現当初の計画に遅れをとることなく、結果も順調に得られている。今回作成した血管炎モデルマウスにおいて主に大動脈に瘤所見を認め、冠動脈瘤は12週目に1匹のみであった。いずれも肉眼的には瘤であったが、実際に内腔の拡大はなく、外膜が著明に細胞浸潤し肥厚していた。今回のモデルマウスでは主に大動脈の外膜肥厚性炎症細胞浸潤であり、川崎病患児で見られる内腔が拡大する冠動脈瘤の所見とは異なるものであったが、血管炎モデルとしては十分であった。モデル作成後12週目になると組織は全て膠原繊維に置き換わっていた。テネイシンCは主に4週目、8週目で発現しており、12週目にはほぼ消失していた。これは血管炎発生後の組織修復過程における一過性の発現として矛盾しない結果であった。また血清テネイシンCも4週目をピークとし徐々に低下しており、組織所見と一致した血管炎組織修復過程を表すバイオマーカーとして有用であると思われた。上記研究目標の目標4;マウス川崎病モデルにおいて、JNK阻害療法の冠動脈瘤退縮治癒効果を検証する。を達成させる。方法は、川崎病冠動脈病変モデルマウスを作成し、汎血管炎および弾性繊維破壊は始まる4週後にJNK阻害薬または対照としてプラセボを投与し、さらに4週後、犠牲死させ、組織標本と血液を採取し、血管最大径計測、炎症細胞浸潤,エラスチン線維破壊、テネイシンCの発現定量、血中テネイシンCの定量を行う。JNK阻害薬を用いて瘤予防を見る;1ヶ月目投与群とプラセボ群10匹ずつ、3ヶ月目投与群とプラセボ群10匹ずつを用いる。モデルマウス作成1クール開始前日、2クール開始前日にJNK阻害薬を後頭部皮下に埋める。1ヶ月目と3ヶ月目に投与群とプラセボ群10匹ずつ解剖。心臓から第1分枝を含む全大動脈、腸骨動脈まで摘出する。墨汁ゼラチン法は3ヶ月目のみ行う。JNK阻害薬の購入が主になる。またアメリカ心臓病学会(AHA)学術集会での発表、格式ある雑誌に論文を投稿することを最終目標とする。繰越金;本年度繰越金728円が発生した理由として消耗品購入金額が見積もりよりも安価で購入できたことによる。この繰越金は次年度の消耗品購入に当てる。次年度研究費の使用計画;上記実験で用いるJNK阻害薬の費用として120万円を要する。他資金と合わせて購入可能である。
環境調和型不斉合成を指向するキラル有機分子触媒の簡便な合成法の開発とその実用化

不斉合成のための金属触媒は、有機化合物を変換するための優れた機能性物質であるが、一方で高価であり、環境を汚染する-人体に影響がある-可能性がある。このため、非金属触媒の創製を基盤とする実用的不斉合成法の確立が急務とされている。今年度はじめは、テキサス大学にて、キラルな分子とキラルレセプター間の分子間相互作用を調べるべく、センサーアレーを用いたパターンによる分子認識について研究を行った。すなわち、キラルな分子とキラルレセプター間での相互作用を調べる事で、プロキラルな基質とキラル相間移動触媒との相互作用を理解し、選択性発現の解明をすべく研究を行った。分析対象となったD-およびL-アミノ酸をそれぞれセンサーアレーに加えると、D-、L-アミノ酸およびアミノ酸の種類によって、異なる指示薬の色パターンが生じた。つまり、異なるアミノ酸を見分けられただけでなく、エナンチオマーであるD-体およびL-体を、パターン認識によって区別することができることを示せた。このパターン認識によるエナンチオマーの区別は、哺乳類の舌が味を感じ取る機構と同じであり、これを再現できた事になる。帰国後は、キラル相間移動触媒による不斉マイケル付加反応の研究を行った。これまでに、キラル相間移動触媒による高選択的不斉マイケル付加反応は、簡単ではなかった。また、基質を限定すると、アセチレンエステル類に対するα-シアノアセテートの不斉マイケル付加反応は、どのような触媒や条件でも難しいことが知られていた。しかし、触媒とプロキラルな基質との立体的な反発やキラル相間移動触媒の立体配座を精査し、アセチレンエステル類に対するα-シアノアセテートの高選択的不斉マイケル付加反応を可能とする相間移動触媒の開発に成功した。社会的にも環境にやさしい化学合成が求められているが、金属触媒は必ずしもこれを満たすものではない。こういった背景から、非金属触媒の創製を基盤とする実用的不斉合成法の確立が急務とされている。これを実現する有力な方法が、申請者の所属する研究室において開発された光学活性四級アンモニウム塩を相間移動触媒として用いた不斉合成である。しかし、この有機分子触媒は開発されたばかりであり、その詳細において、未だ解明されていない点も多い。そこで、本研究では、まず簡便なキラルアンモニウム塩の合成法を確立し、これら触媒の多様な不斉合成反応への適応性を検討することとしていた。さらに、この知見を活かした触媒分子の再設計に取組み、その構造と反応性、選択性の相関についての情報を集積し、実用化のための理想的な触媒の開発を目的としていた。上述のキラル相間移動触媒は、不斉源としてふたつの異なるビナフチル骨格を有する。従ってその合成には、市販されている試薬から多段階合成を余儀なくされる。この問題の解決のため、ひとつのビナフチル骨格のみを用いることで、本触媒合成の簡略化を行った。合成した触媒は、親水性が増すことによって界面でのイオン交換が効率的に行われることが予想され、触媒量を0.01mol%まで減らすことが可能であった。キラルアンモニウム塩が高価であることを考えると、これは優れた不斉合成法であり、より実用的な触媒を開発できたと考えられる。これを実現する有力な方法が、研究代表者の所属する研究室において開発された光学活性四級アンモニウム塩を相間移動触媒として用いた不斉合成である。今年度はこの触媒の実用性を向上させるために、高価な不斉元であるビナフチル部位をビフェニル骨格に変え研究を行った。ビフェニル誘導体の光学分割法はよく知られているため、容易に行うことができ、これを用いて光学活性四級アンモニウム塩を調製した。その結果、ビフェニル骨格を有するアンモニウム塩にしても優れた触媒活性と選択性を示し、効率よくアミノ酸誘導体の不斉アルキル化反応を行うことに成功した。