hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
段階的な負荷と継続的な負荷を考慮した創造性育成実験教材の開発とその検証

ロボカップサッカー競技ロボットの作製と開発を段階的かつ継続的な負荷と捉え,より高い課題を学生に課すことで創造性育成教育を行い,その効果をアンケート調査により検証した。その結果,ロボカップ参加学生の問題解決能力や思考方法などの顕著な向上を確認した。一方,世界大会に参加する上で必要な英語運用能力は学生自身が十分でないことを認識した結果となった。今後も学生の興味を引きつける教材・課題を通して,創造性や英語コミュニケーション能力の向上が期待される継続的な機会と環境を学生に提示することが有効であることが示された。H20年度,創造性教育の効果の検証の場として継続参加しているロボカップ小型リーグジャパンオープン2008,世界大会2008において全て予選敗退であった.昨年までジャパンオープン準優勝などの優秀な成績を残してきたが,今年度が学生の入れ替わりの年ということもあって十分な引継と対応ができなかったことがその要因と考えている.従来,競技場では一定の照度が確保されていたが徐々に屋外での競技を意識して,照度が不安定な会場が用意されるようになった.そのため,画像認識技術のより高性能化および,より多様な戦略が行えるプログラムの開発が求められている.そこで,本年度は創造性育成実験教材であるロボカップマシン(サッカーロボット)の制御に必要な,画像処理と戦略プログラム(人工知能)の開発を主として学生に取り組ませた.また,小型サッカーロボットと並行して,今年度予算で購入した2足歩行ロボットの組み立てと動作確認を行った.その後,3月に豊田高専においてラジコンによる2足歩行ロボットのサッカー競技「とよたこうせんCUP」を創造性教材の一つとしてオープン開催した.この競技は無線操縦による2足歩行ロボット3台を1チームとしてサッカーを行うもので,学外強豪チーム(参加全8チームのうち,学外7チーム)にプレゼンテーションを依頼し,参加者相互の技術交流を目的として行った.大会は60名以上の参加・観戦者,26台のロボットが出場し,成功裏に終了した.競技形式にしたことでロボットのハードウェア、ソフトウェアに関する工夫を促した.また学外チームによるプレゼンテーションは学生の創造力向上に大きな寄与を与える機会となった.以上の成果のうち,一部は学会誌に掲載された.2足歩行ロボット教材を用いた,学生の創造力に関する評価を来年度実施する予定である.本年度,創造性教育効果の指標の一つと考えている,ジャパンオープン小型リーグ(車輪部門)で準優勝,同(ヒューマノイド部門)で優勝という素晴らしい成果を上げた。昨年度は全て予選敗退であったことから,なぜ一つも勝てなかったのかをメンバー全員で議論し,問題点を一つ一つクリアした創造力向上の成果と考えている。ロボットの全体的な改良と開発を行った上で,特に画像処理の高精度化の効果が大きかったといえる。昨年度の研究開始当初,専攻科生を対象として7年間の創造性教育の実践を計画していた。購入した2足歩行ロボットは専攻科特別実験として利用する予定であった。しかしながら,文科省科学技術振興調整費による「ものづくり一気通観エンジニアの養成」プログラム(社会人と専攻科生による共同実験を通したエンジニア教育プログラム)が導入されることとなり,結果として専攻科特別実験はそのプログラムで用意された2年間の実験に置き換わることになった。そのため,専攻科生向け2足歩行ロボットの実験の導入は困難になった。そこで,用意した2足歩行ロボットは,ロボコン経験学生のみならず未経験者の希望学生も含めた本科および専攻科生向け創造性開発教材として,ロボットの高性能化というテーマで取り組ませることに方針を修正した。ロボコン未経験者についてはやや高い段階的な負荷となるが,集中的な指導と経験者の積極的なサポートで対応した。その結果,本教材は昨年度末より10名以上の学生を対象とした創造性育成実験用として用いている。また海外および近隣で行われるロボカップデモの依頼に積極的に参加させることでプレゼンテーションやコミュニケーション能力の向上を狙った。学生のコミュニケーション能力や創造力に関する意識調査結果から,特に英語コミュニケーション能力では障壁感を取り除くことに,また思考方法や問題解決能力の修得に十分効果的であったことが示された。研究最終年度となるH22年度,創造性教育効果の指標の一つと考えている,ロボカップジャパンオープンサッカー小型リーグ車輪部門および同ヒューマノイド部門両部門において優勝という快挙を達成した。加えてロボカップ世界大会では過去最高成績となる4位入賞を果たした。本年度,車輪型ロボットを新設計,作製し,従来よりも大幅なハードウェアの性能向上を図った。その上で,ソフトウェアの見直しによる高速化と戦略システムの多様化による防御,攻撃のバランスが良かったことがその要因と考える。高専ロボコン未経験者を含む経験者10数名による作業は,毎年継続的に開かれるロボカップへの出場と入賞という目標が原動力となっている。ハードおよびソフトウェアの各パートに分かれた実験課題は横の連係からくる要求によって段階的に高くなるため,連日の実験と研究は長時間に及ぶ。

この過程での協調作業と与えられた課題をこなさなければならないという責任感が創造力向上に大きな効果をもたらすことが裏付けられた。現在,2足歩行ロボットは上記ヒューマノイド部門に出場するため,高性能化に向けて継続的に実験,改良を行わせている。H22年度ジャパンオープンにおける試合運びと安定した走行性能がロボカップ日本委員会に評価され,日本ロボット学会賞を受賞した。そのことは学生に自信とやる気をもたせると共に,自ら進んで取り組む姿勢をさらに高め,思考方法や問題解決能力を大きく向上させた。市内外から依頼されるサッカーロボットのデモンストレーションに積極参加させることで学生のリーダーシップ,プレゼンテーション能力の向上を図った。その結果,要点を整理し,効果的な説明が行える力がついた。また,英語苦手意識を持つ多くの参加学生にとって,共通のテーマを通して議論できる世界大会への参加は,英語コミュニケーションに対する障壁感を打破するために極めて有効であることが示された。
スキル支援を行うインテリジェントウェアの開発

近年、虚弱高齢者および身体障害者の身体機能を支援するメカトロニクス技術に期待が寄せられている。しかし、その実用化には、対象となる身体運動の科学と厳しい実時間性・環境適応性・安全性を満足する高度なロボット技術が不可欠である。そこで、申請者らが培ってきたタイミングスキルの知見と最先端ロボット技術((1)実時間で環境変化に適応できるタイミング制御技術、(2)次世代アクチュエータとしての人工筋肉技術)を駆使して、人との親和性に優れた運動スキル支援ロボット「スキルアシスト」の開発を行った。しかし、その実用化には、(1)対象となる身体運動の科学と(2)厳しい実時間性・環境適応性・安全性を満足する高度なロボット技術が不可欠である。そこで、申請者らが培ってきたタイミングスキル(身体運動の動作タイミングを決定する技能)の知見と最先端ロボット技術((1)実時間で環境変化に適応できるタイミング制御技術、(2)次世代アクチュエータとしての人工筋肉技術)を駆使して、人との親和性に優れた装着型身体支援ロボット「スキルアシストウェア」の開発を行う。本課題では、患者の身体特性に適合するように制御器が学習を進め、環境変化に応じて支援するタイミングや力を自動調節するインテリジェントシステムの構築を目指す。本研究は、人工筋肉で駆動されるソフトロボティックデバイスを身体機能を支援する部位に装着し、日常生活に不可欠なマニピュレーションや歩行動作などの支援を行う新しい身体機能支援システムの開発を目指すものである。平成19年度は、マニピュレーションの支援を行うデバイスおよび歩行動作を支援するデバイスについて理論と実験の両面から検討を行った。前者については、アクチュエータとして用いる空気圧駆動人工筋肉の特性を解析するとともに、その制御性能を向上させるためのメモリーベースドタイミング制御法について検討し、ダイナミックな運動を正確に生成する手法を考案した。また、運動支援するパターンを変え、このときのタイミングや力と実際に運動支援された動作に関するセンサ情報を入出力ペアとしてライブラリー化する手法を考案し、身体機能支援システムのコア要素となり得ることを確認した。後者については、歩行動作の支援を行うデバイスとして回転型空気圧受動要素を用いたインテリジェント足関節装具を開発し、評価実験を行った。この装具は、歩行中の装着者の足関節角度と床半力のセンサ情報に基づいてリアルタイムで足関節まわりの拘束トルクの調整を行うものである。擬似麻痺状態で装具を装着し、トレッドミル上で歩行する評価実験を通し、装具歩行によって動的な立脚安定性が向上することを確認した。すなわち、歩行が進むにつれて回転型空気圧受動要素の開放時間が自動調整され、足関節と膝関節の運動範囲が健常歩行に近づき、それに伴って腰と肩の動揺が減少した。この結果は、歩行動作の支援を行う新しい身体機能支援システムの開発に向けた重要な第1歩と考えられる。本研究は、人工筋肉で駆動されるソフトロボティックでバイスを身体機能を支援する部位に装着し、日常生活に不可欠なマニピュレーションや歩行動作などの支援を行う新しい身体機能支援システムの開発を目指すものである。平成20年度は、マニピュレーションの支援を行うデバイスおよび歩行動作を支援するデバイスについて理論と実験の両面から検討を行った。前者については、マニピュレーション支援システムと人の協調運動について、特に動力学的役割分担の観点から考察し、クランク協調運動に関して以下の2つの仮説を実証した。(1)駆動力と位置調整の役割を分担することで円滑な協調運動が実現できること、(2)接線力と法線力が独立であるため、相手と細かくタイミングを合わせる必要がなくなること。また、運動支援するパターンを変え、このときのタイミングや力と実際に運動支援された動作に関するセンサ情報を入出力ペアとしてライブラリー化する手法を用いることによって、新規のパターンを瞬時に合成し得ることを実証下。後者については、歩行動作の支援を行うデバイスとして開発した回転型空気圧受動要素を用いたインテリジェント足関節装具を評価するために、人工筋肉駆動の下肢ロボットを製作した。また、人の骨格筋の制御方法にならい、筋長の変化をフィードバックするローカルなサーボ系およびその指令値を上位レベルで操作する階層制御系によって、人と同様の滑らかな歩行パターンが実現できることを確認した。□研究目的近年、虚弱高齢者および身体障害者の身体機能を支援するメカトロニクス技術に期待が寄せられている。

本課題では、患者の身体特性に適合するように制御器が学習を進め、環境変化に応じて支援するタイミングや力を自動調節するインテリジェントシステムの構築を目指す。□研究成果今年度の研究成果は大きく以下の3点にまとめられる。(1)筋協調性に基づく運動評価システムの開発運動時における複数筋群に働く筋電位から筋協調度を測り、これを指標とする運動評価システムを開発した。本システムにより運動支援時の状況および目標達成までの支援量を定量的に把握することが可能となる。これらの成果は特許出願の形でまとめられている。(2)運動支援ロボットの性能を評価する筋骨格ロボットの開発人を模した筋骨格構造のロボット(アーム型、レッグ型)を開発した。駆動源である空気圧人工筋群を先述の筋協調指標に基づき制御することでタスクに応じた目標運動が実現可能である。今後はこのロボットを被験者の代替として用いることで、開発した運動支援ロボットの定量評価に活用する予定である。(3)空気圧式人工筋アームデバイスのマスタースレーブ制御被験者の筋電位情報を用いて、空気圧式人工筋アームデバイスをマスタースレーブ制御することに成功した。手法は(1)(2)の成果に基づくもので、その実現には実時間制御技術、人工筋肉技術を含む先端ロボット技術が駆使されている。今後は装着型へ展開を図り、スキルアシストウェアの実現を目指す。【研究目的】近年、虚弱高齢者および身体障害者の身体機能を支援するメカトロニクス技術に期待が寄せられている。しかし、その実用化には、対象となる身体運動の科学と厳しい実時間性・環境適応性・安全性を満足する高度なロボット技術が不可欠である。そこで、申請者らが培ってきたタイミングスキル(身体運動の動作タイミングを決定する技能)の知見と最先端ロボット技術(1.実時間で環境変化に適応できるタイミング制御技術、2.次世代アクチュエータとしての人工筋肉技術)を駆使して、人との親和性に優れた装着型身体支援ロボット「スキルアシストウェア」の開発を行う。【研究成果】今年度(最終年度)の研究成果は、以下の3点である。(1)身体運動の理解を目的とする筋骨格ロボットの開発人を模した筋骨格構造を有する3種類のロボット(ハンド型、アーム型、レッグ型)を開発した。いずれのロボットも駆動源となる空気圧人工筋を巧みに協調させることにより、精度良い運動制御が可能である。これらのロボットは、身体の運動支援を行う際の筋協調の意味を工学的に理解し、適切な運動支援方法を開発/評価する上で良いテストベッドとなる。(2)筋協調性に基づく運動評価システムの開発とその洗練化昨年度、複数筋群に働く筋電位から筋協調度を測り、これを指標とする運動評価システムの開発を行った。
細胞分化にともなうクロマチン変動メカニズムの解明

本研究は、我々が本領域研究開始当時に同定した新規ヒストンH3遺伝子を中心に細胞分化におけるゲノムワイドな遺伝子発現を制御するクロマチン構造変換機構の解明を目指した。まず、全貌が明らかでなかったヒストン遺伝子の網羅的同定をin silicoにおいて行い、H2A, H2B, H3について新規ヒストン遺伝子を同定した。新たに同定されたヒストン遺伝子は多くが組織特異的な発現を示した。代表的な解析事例として、骨格筋幹細胞に高発現しているH3mm7が骨格筋再生を転写レベル調整により制御することを報告した。本研究では、計57報以上の論文発表成果につながった。マウスC2C12細胞の骨格筋分化をモデルとして、各ヒストンバリアントの機能とバリアントの多様性が生み出すヒストン修飾、局所的なクロマチン構造、空間的な染色体配置を体系的に明らかにすることを目指した。これまでに、マウス新規ヒストンH3バリアント遺伝子群の同定とクローニングを行い、各バリアントのGFP融合蛋白質の発現を誘導できるマウスC2C12株を樹立した。この発現株を用いて、各GFP融合ヒストンバリアントのクロマチンへの安定的な取り込みを大阪大学木村宏先生のグループとの連携によりFRAP(光褪色後蛍光回復法)により明らかにした。解析は全17クローンについて行った。更に、分化前後でのGFPタグ抗体を用いたChIP-seq(クロマチン免疫沈降と塩基配列解析)により、各バリアントのゲノム上の分布を明らかにした。但し、発現の安定性からFRAPによりクロマチン領域への取り込みが確認されたクローンについてのみ解析を行った。未知ヒストンバリアントアミノ配列情報は、早稲田大学胡桃坂仁志先生のグループによるヌクレオソーム構造解析に供された。ついで、各種バリアントに対する抗体を作製し、内在性バリアントの局在とマウス組織での蛋白質発現プロファイルを明らかにした。現在4種の新抗体の作出を行っており、固有の発現パターンを確認している。また、各バリアントの過剰発現株を分化誘導し、遺伝子発現変化、核と細胞の形態変化、骨格筋マーカーの発現などの解析を行った結果、H3バリアントの細胞分化における機能は大きく3群に分けられることが明らかとなった。骨格筋分化遺伝子のプロモーター領域がヒストンバリアントH3.3により予めマーキングされることが、その後の遺伝子発現のために必須であることを報告した。また、骨格筋分化においてH3.3の発現は未分化状態で高く、分化に伴い低くなることが明らかになっている。そこで、骨格筋未分化段階でH3.1とH3.3の骨格筋遺伝子上での取り込みバランスを強制的に変化させることにしたを試みた。未分化段階の骨格筋芽細胞C2C12細胞にGFP-H3.1を強制発現させ、分化誘導を刺激すると、骨格筋分化が抑制されることが明らかとなった。ChIP-seq解析の結果、GFP-H3.1強制発現細胞ではGFP-H3.1が取り込まれ、内在性H3.3のクロマチンへの取り込みが減少していることが明らかとなった。一方でH3.3を強制発現させた場合、骨格筋分化が亢進することが明らかとなった。そこで、骨格筋遺伝子の制御領域に、H3.3あるいはH3.1が取り込まれることで、どのようなヒストン修飾の変化が生じたかChIP-seqにより解析を行った。その結果、GFP-H3.1の取り込みによりH3K4me3修飾が減少しH3K27me3修飾が上昇していた。これらにより双極性修飾の状態から抑制性修飾の状態に偏ることで分化能抑制を招いたことを示唆していた。(Harada et al Nuclei. Acids,Res 2014)。また、未分化段階では骨格筋遺伝子座が近接しており、この近接が未分化段階での遺伝子活性化抑制に寄与していることが示唆された(Harada et al Nuclei. Acids, Res 2015)。以上の結果により、未分化段階で骨格筋遺伝子座が近接している領域へのヒストンバリアントの集積が、単に遺伝子発現のON/OFFではなくゲノムワイドな同調的制御に関わっていることを明らかとした。平成27年度では、研究領域当初より予備検討を行っていたマウス及びヒトヒストンバリアントの網羅的同定を論文成果として発表を行った。概要としてマウスにおいて14種、ヒトでは3種の新たなヒストンH3バリアント遺伝子を同定した。更に転写産物の解析を行った結果、そのうちマウスについては6種、ヒトについては3種全てのmRNAレベルでの発現を確認した。タンパク質レベルにおいては少なくとも4種について確認した。更に、それぞれの細胞生物学的、生化学的な特性の解明を行った結果、精巣特異的に発現するH3バリアントH3tをはじめ、7種はクロマチンに安定的に取り込まれることからヌクレオソーム構成因子として機能しうることが示唆された。また、ヒトH3バリアントについても領域内の共同研究を展開し、H3.Y及びH3.5の解析を行い論文発表を行った(Kujirai et al. Nucleic Acids Res. 2016, Urahama et al. Epigenetics Chromatin 2016)。また、ゲノムワイドなヌクレオソーム配置及びその特性についても解析を行った。特に転写因子結合周囲のヌクレオソーム配置パターンが主に5種に大別されることを明らかにし、転写活性化状態がヌクレオソーム配置パターンより予測可能であることを示し論文発表を行っている(Maehara et al, Sci Rep. 2016)。現在個別のヒストンバリアントの機能解析を進めており研究は極めて順調に推移している。

2015年に,コンピュータを用いた新規手法により未知ヒストンバリアント遺伝子の網羅的探索に成功し,マウスゲノムに存在する未知のヒストンH3様のバリアント遺伝子を14種同定した.本年度も継続的に,新たに同定したヒストンH3バリアントが構成するクロマチン構造が,遺伝子発現をどのように制御しているのか解明を進めた.特に,本年度では精巣特異的ヒストンバリアントH3tの解析を展開した.ヒストンH3tを破壊したノックアウトマウスは、見かけ上正常に発育する一方で,雄が無精子症となり,完全に不妊になることが明らかとなった(Ueda et al, Cell Reports 2017).組織特異的に発現する他のヒストンH3バリアントについても、トランスクリプトーム、エピゲノム解析を用いて解析を進めている.また、これらヒストンバリアントを認識する分子の解析も進めた.従来我々はChd2が転写因子やヒストンH3バリアントH3.3と結合し転写制御を行うことで,骨格筋分化を制御することを明らかにした.そこで様々な分化系での機能を明らかにするため,初期発生におけるChd2の機能を解析した.本年度はマウスES細胞株を用いてChd2遺伝子破壊株(Chd2KO)を樹立し表現型を解析した.結果,Chd2KO細胞では,増殖段階では野生型と比較してトランスクリプトームと形態に大きな差異がないにも関わらず,分化能を失っていた.エピゲノム解析の結果,Chd2が分化後発現する遺伝子周囲において転写因子Oct3/4と結合し,クロマチン構造を特定のパターンに変化させることを明らかにした.このことから,マウスES細胞株においてChd2が転写誘導前からクロマチン構造を支配することで細胞分化を制御していることが示唆された.研究計画にあった細胞、生化学レベルでの解析を既に終え、本年度はノックアウトマウスを用いた生体内での機能解析に着手し進めた。昨年度に引き続き、組織特異的クロマチン構造を形成する機能未知ヒストンH3群の解析を行った.本年度は、H3mm7は骨格筋再生過程において,特定の時期に発現し機能するヒストンである(Harada A et al., Nature Communications, 2018)ことを報告した.本知見はヒストンバリアントは,各々の組織に特徴的な転写状態をもたらす働きを持つことを示唆している.今後は様々な組織において特異的に機能するヒストンバリアントの機能解明が期待される.また,特定のヒストン修飾とヒストンバリアントを認識して,クロマチン構造を変化させ転写制御を行うATP依存的なクロマチンリモデリング酵素分子(SWI/SNFファミリー)に着目し、組織特異的に形成されるクロマチン構造の機能解明を行った。これまでにクロマチンリモデリング酵素Chd2が転写因子やヒストンH3バリアントH3.3と結合し転写制御を行うことで,骨格筋分化を制御することを明らかにしていた.
発生分化過程におけるスプライシング因子SR蛋白質群の機能解析

SR蛋白質群は広範囲な生物種において高度に保存されているスプライシング必須因子であり、また選択的スプライシングにおいても大きな役割を持っていると考えられている。申請者はこれまでに線虫を用いた解析により、線虫のSR蛋白質が普遍的に発現し、いくつかのSR蛋白質が胚発生や生殖巣の形成、生殖細胞の分化や形成過程に重複した機能を持つ可能性を示した。そこで生体内で相互作用する蛋白質やRNAの探索を試みた。このため目的蛋白質にprotein Aタグが付加された融合蛋白質を線虫内で発現させ、この蛋白質が形成する複合体をprotein AとIgGとの結合により精製する方法を採用した。また、構築したプラスミドの線虫への導入には、通常の手法による生殖細胞での発現抑制を回避するために、近年開発されたmicroparticle bombardment法を利用した。テストケースとして、SR蛋白質と類似した表現型を示すスプライシング関連蛋白質遺伝子を今回構築したベクター系に挿入し線虫に導入した。その結果、生殖細胞でも導入遺伝子が発現することを確認した。次にこの導入遺伝子が内在性遺伝子の機能を相補できることを内在性遺伝子のみを標的とした発現抑制によって確認した。また相互作用する蛋白質をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離したところ、結合が予想される蛋白質の分子量に近似したバンドが確認された。この蛋白質をペプチドマスフィンガープリンティング法により同定し生体内での機能解析を行ったところ、実際にこの相互作用が生体内で重要な機能を持っていることが強く示唆された。これらのことから、今回構築した手法はSR蛋白質の機能を解析する上で有効な手段を提供すると考えられる。
安全・安心に資する表面増強ラマン分光を用いた脱法ハーブ成分の新規同定法の開発

乱用薬物の拡散を抑止するため、現場で行える新しい同定法の開発が求められている。表面増強ラマン分光(SERS)は、金属ナノ粒子を用いた高感度な手法である。本研究では、SERS用いて様々な乱用薬物に適用し、その有用性を評価した。その結果、様々な乱用薬物について、高い増強効果が認められた。薄層クロマトグラフィーや固相抽出を組み合わせることで、良好なSERSスペクトルを取得できた。脱法ハーブの乱用は、大きな社会問題になっている。脱法ハーブの取り締まり・抑止には、有効成分(合成カンナビノイド類)の現場同定が不可欠である。本研究では、レーザーラマン装置に新たに開発する専用液体セルを導入し、最適化した銀ナノ粒子試薬を加えることで、表面増強ラマン(SERS)スペクトルの高感度化を図る。犯罪現場で行うことができる簡便な脱法ハーブの抽出法を開発し、将来的に現場で高感度に合成カンナビノイド類のSERSスペクトルを取得して成分同定ができるよう基礎データを蓄積する。簡便な抽出法ーSERSスペクトルによる脱法ハーブの新規同定法を開発することが本研究の目的である。本年度は本法に適した専用液体セルを作成した。石英セルをサンプルホルダーとした。サンプル背面に湾曲ミラーを設置し、サンプルホルダー中心からのラマン散乱と前方散乱を集光することで、従来より高感度なSERS分析が可能になった。次に作成したセルを使用した場合の銀ナノ粒子試薬濃度の最適化を行った。SERS用に合成した試薬の銀ナノ粒子径は約50nmのものが最適であった。最適な希釈率を検討したところ、5mMの濃度で合成し、5倍希釈して用いたものが最も高感度であることを明らかにした。収集した試料について、GC-MS分析を行い、成分の同定・定量を行った。ラマン測定条件を最適化した後、いくつかの試料について、SERS分析を行った。今後、解析が必要だが、増強効果が認められた。近年、麻薬や覚せい剤の代用として、脱法ドラッグと呼ばれる様々な化学物質や植物が法律の規制枠を逃れて乱用されている。容易に入手可能であることから、特に青少年の間で蔓延し、大きな社会的問題となっている。脱法ドラッグのうち、近年最も流通しているのが脱法ハーブである。脱法ハーブ成分は、いずれもカンナビノイド受容体のアゴニストであり、「合成カンナビノイド」と呼ばれ、これらを摂取することで大麻と同様の薬理作用を引き起こす。合成カンナビノイドは人工的に合成されており、規制が強化されると構造が酷似した新たな合成カンナビノイドが出現する。薬物を取締まる上で重要なのが、現場検査法の開発である。表面増強ラマン分光分析(SERS)は金属ナノ形状体に吸着した分子のラマン散乱強度が増大することを利用した高感度分析法である。高い増強効果が得られる薬物であれば、小型ラマン装置により現場における高感度分析が可能になる。そこで本研究では、SERSを用いた脱法ハーブ等の薬物の現場同定法の開発を目的とした。まず、金属ナノ粒子試薬の最適化を行った。その結果、直径約50nm程度の銀ナノ粒子で、濃度5mM程度の試薬が最も高感度であることが明らかになった。抽出法には、液-液抽出と固相抽出を検討した。固体試料の場合は液-液抽出が、尿試料の場合は固相抽出が有効であった。尿試料の分析にはニコチン等の夾雑物の影響があったが、最適化の結果、分離し目的薬物のSERSスペクトルを取得できた。100050000倍の増強効果が認められ、高感度分析が可能であった。本年度は目的を達成するため、3つの検討を実施した。1つ目は、高感度化を図るためのユニット作成である。作成したユニットにより、ラマン光を2倍程度高感度に分析することができた。2つ目は、銀ナノ粒子試薬の最適化である。合成法と希釈率を検討したところ、5mMの濃度で合成し、5倍希釈して用いると最も高感度であった。3つ目は、標準試料のGC-MS分析である。標準試料を収集し、分析条件を確定し、データベース化を進めている。以上の理由から、当初の計画は順調に進展している。法化学更なる高感度化を図るため、ユニットの改良を行う。現場で簡便に実施できる抽出法・前処理法の検討を行う。GC-MS、LC-MSによって同定・定量された成分が、SERSスペクトルにどのように反映されるか解析を行い、新規分析法として確立する。
児童虐待発生に関するリスク要因の探究-地域をベースにした縦断研究-

I.目的地域保健で日常的に使用されている乳幼児健康診査の問診票、健康診査結果を活用して、児童虐待の発生状況と虐待のリスク要因を明らかにすることを目的に研究を実施した。不適切な養育(以下、要支援家庭とする)については、担当保健師が関係機関からの情報等から判断し、分析は「要支援家庭」と「問題なし」の2郡に分けて行った。II.3歳6か月児問診票を活用しての要支援家庭のリスクに関する研究1.健診受診児は2,245人(受診率71.2%)で、受診児中の要支援家庭は56人であった。2.ロジステック回帰分析の結果、要支援家庭と関連があった項目は、「育児がしんどい・不安が多い」「相談・協力者がいない」「健診結果では要フォローが多い」「健診のフォロー理由として精神発達、父母の健康、兄弟の問題」「朝食時間8時以降」「仕上げ磨きをしていない」であった。3.経済状況、夫婦関係等社会・家族に関する要因については把握が困難であるが、現在実施している健診からリスク要因が把握できることがわかった。III.4か月児・18か月児健診問診票をリンクしての要支援家庭のリスクに関する研究1.4か月児健診受診児1942人(受診率92.3%)、18か月児健診受診児1847人(受診率91.2%)で、受診児中の要支援家庭は48人であった。2.単変量解析の結果、要支援家庭と関連があった項目は、(1)4か月児では「健診未受診」「母乳をあげていない」「飲みにムラがある」「相談者・協力者がいない」「育児がしんどい」「うつ伏せで遊ばせていない」「外に連れ出していない」「遊ぶ機会がない」「健診結果では要経過観察が多い」「フォロー理由として育児、運動発達、父母の健康、兄弟の問題」、(2)18か月児では「健診未受診」「ほ乳瓶使用」「生活習慣が決まっていない」「食事回数、時間が決まっていない」「相談者・協力者がいない」「育児がしんどい」「楽しく遊ぶことがない」「育てにくい」「手がでる」「健診結果で要経過観察が多い」「フォローの理由として発育、育児、父母の健康、精神発達」「自分で歯磨きしない」「仕上げ磨きしない」「歯の親子教室の希望が少ない」などであった。3.4か月児、18か月児と同じリスク要因もあったが、成長に伴い変化するリスク要因と18か月児に新たに把握できる育児のリスク要因が増加していた。I.目的地域保健において何処でも使用されている乳幼児健康診査の問診票あるいは健康診査カードを利用して、養育状況に関するデータの収集を行い、児童虐待の発生状況と虐待のリスク要因を明らかにし、予防対策を行う対象者を明確にすることを目的に行う。

なお、調査対象者は4か月児健康診査から3歳6か月児健康診査までの3年2か月間の間観察を行う。平成16年度は本研究の初年度であり、研究の行う基盤づくりとして「虐待発生に関するリスク要因についての文献検討」「調査対象地域であるN市との連絡・調整」「パイロット調査としてI市の乳幼児健康診査のデータの収集・分析」を行う。II.結果1.虐待発生に関するリスク要因についての文献検討発表されている国内外の書籍、文献の検索を行い、虐待発生に関するリスク要因について、親、子ども、家庭のリスクに分類し、整理を行う。2.調査対象地域であるN市との連絡・調整N市の保健師を含めて班会議を開催し、会議では研究を円滑に推進するための打ち合わせと調査の手順、把握すべきリスク要因について検討をおこなう。さらに調査対象該当市においてデータの提供を受けるため、個人保護条例に基づき、個人情報外部提供申請書を提出し、承認を待って状況である。3.パイロット調査としてI市の乳幼児健康診査のデータ収集を行う。本研究のパイロット調査として、1年間の出生数500人であるI市の4か月児、1歳6か月児、3歳児健康診査の問診票と健康診査後のフォロー状況のデータの提供を受けるため、個人情報外部提供申請書を提出した。次年度は、当初の研究計画に基づき、I市のデータの分析とN市の1歳6か月児までのデータの分析と健康診査未受診の状況の把握を行う。I.目的全国何処でも実施されている乳幼児健康診査で用いられている問診票あるいは健康診査カードを利用して、養育状況に関するデータの収集を行い、児童虐待の発生状況と虐待のリスク要因について分析することで、児童虐待予防対策の対象を明確にすることを目的に行う。なお、調査対象者は4か月児健康診査から1歳6か月児健康診査までの1年6か月間の間観察を行う予定である。平成17年度は2年目であり、初年度に行った個人情報外部提供の承認が得られ、研究環境が整った。そこで、今年度はパイロット的に、N市の3歳6か月健康診査の対象のデータを用いてリスクについて分析を行った。II.結果1.調査対象地域であるN市における3歳6か月児健康診査の分析:平成16年4月から16か月間の3歳6か月児健康診査対象児3113人を対象に分析を行う。その結果、虐待は17人で出生千対5.46人であった。平成13年に実施された全国調査の虐待発生率は出生千対1.54人であることより、N市では虐待児の把握率は高かった。さらに、虐待を含めた不適切な養育は99人で、出生千対31.80人となり、リスク分析が充分可能であることがわかった。虐待を含む不適切な養育に関連があったのは、健診の受診状況、育児をしていて楽しいと感じるか、育てにくさを感じるか、育児の相談や協力者の有無などであった。しかし、データを収集する場合には、分析対象者に未受診者を含めること、虐待を含む不適切な養育の状況を適切に把握することなど研究を遂行する上での課題が明らかになった。2.比較として行ったI市の乳幼児健康診査の分析:I市の4か月児、1歳6か月児、3歳児健康診査の811か月分のデータを収集したが、児童虐待、不適切な養育の発生は無く、育児不安が4か月児では7.8%、1歳6か月児では11.5%、3歳児では6.4%であり、出生数の少ない地域ではリスクの軍籍は困難であった。次年度は、当初の研究計画に基づき、N市の、4か月児、1歳6か月児までのデータの収集と分析を行い、さらに健康診査未受診の状況の把握を行う予定である。I.
群と多元環とこれら代数系の応用について

1.今回の研究課題の第一番目の研究目的であった、群と多元環の研究に関して、研究代表者である越谷重夫による、二つの結果について述べる。まず、群の表現について、次のような定理が得られた。有限群Gと標数3の体F上の群多元環FGを考える時、F上の自明なGの表現に対応する主直既約加群のルヴィー列がある状況の下では、最低5で押えられる。この結果は、イギルスの学術雑誌Proceedings of the Royal Society of Edinburghに掲載された。次に、多元環の表現についてであるが、これに関しては、やはり越谷がある条件を満たす有限群の群多元環の基本多元環を筒と関係式で完全に記述し、以前には単純群の分類に依存していた証明法から、それ無しでの証明法へ、大きく前進させた。この結果は、京都大学数理解析研究所での研究集会で発表され、そこでの講究録にも掲載された。2.群とそれの応用に関して、研究分担者の一人である野澤宗平による有限群の鋭指標の顕著な結果も得られた。これは、アメリカ合衆国の学術雑誌Communications in Algebraに発表された。3.また、代数系の応用として、やはり研究分担者の一人である、西田康二による二つの大きな結果が得られた。一つ目はコーエン・マッコウレ-環に関するもので、日本数学会では一番著明な学術雑誌であるJournal of the Mathematical Society of Japanに掲載された。更に、アメリカ数学会の大変有名な学術雑誌である、Memoir of American MathematicalScietyのある巻1冊すべてを使って、代数系の応用になっている。ゴレンシュタイン・リ-ス多元環についての大論文を書き上げ発表した。4.最後に研究分担者である高木亮一による超曲面の型番についての結果も得られた。これは、群などの代数系の微分幾何学への応用として、なかなか重要な主張(定理)が含まれている。
次世代型電子カルテシステムによる癌診療工程のプロセス解析とその最適化

本研究は,病院内の全てのデータを電子的に一元管理した病院(インテリジェント・ホスピタル)において,ミニセット型パスと呼ばれる新規開発した独自の効率的な診療工程表(クリニカルパス法)を利用することにより,電子化されたあらゆるデータをもとに既存の癌化学療法のさらなる成績向上・効率化・標準化などを行う手法開発のためのものである。臨床の現場では予定していた診療計画が必ずしも一律にこなせるわけではない。逆にそこで生じるバリアンスから経験的に,真に効率的・効果的な診療がみつかることも少なくない。我々が開発したミニセット型パスは,経時的または同時に複数のパスを走らせることが出来る画期的な物であるが,この際に生じるバリアンスを集計・解析するためのソフトウエアの開発を行った。本研究の目的は,病院内の全てのデータを電子的に一元管理した病院(インテリジェント・ホスピタル)において,ミニセット型パスと呼ばれる新規開発した独自の効率的な診療工程表(クリニカルパス法)を利用することにより,電子化されたあらゆるデータをもとに既存の癌化学療法のさらなる成績向上・効率化・標準化などを行う手法の開発を目指すものである。臨床の現場では患者の個人差が大きいため,予定していた診療計画が必ずしも一律にこなせるわけではない。我々が開発したミニセット型パスは,経時的または同時に複数のパスを走らせることが出来る画期的な物であるが,この際に生じるバリアンスを集計・解析する手法がまだ確立していない。そのため,そのバリアンス分析を簡便に行うためのソフトウエアを開発中である。基本コンセプトは固まり,詳細な内部設計に入る段階である。このソフトウエアの良し悪しを検討するために,現在先行して人と紙でかなりの労力を掛けてバリアンス分析を実施中である。この結果とソフトウエアを利用した際の結果を比較することにより,その評価が可能になると思われる。また,がん患者における診療プロセス標準化ががん診療の均てん化にも繋がる重要なことと思われるが,なかなかに進んでいかないのが現状である。岐阜地域の二次医療圏においてこれを統一し,その効果を判定しようという試みをスタートさせている。これについても次年度以降次第に具体的な効果が測定できるものと期待される。そのため,本年度はそのバリアンス分析を簡便に行うためのソフトウエアの開発を行った。どのようなパスに問題があり,どのパスの見直しが急務かを視覚的にすぐ把握できるようにするツール,実際のパスの内容を比較検討するためのツールなどを開発した。また重要なクリティカル・インディケーターを検討する際に使用するアウトカムのマスタ化を行い,このツールによりデータを蓄えることが出来るようにマスタ上の整備を行った。次のステップとしてこれらが実際の臨床の場で有効に機能するのかどうかを検証する必要がある。このツールによってクリティカル・インディケーターの最適化を図るプロジェクトが進行中であり,今後このようなツールを利用してパスの効率化・標準化の議論を促進していく。本研究は,病院内の全てのデータを電子的に一元管理した病院(インテリジェント・ホスピタル)において,ミニセット型パスと呼ばれる新規開発した独自の効率的な診療工程表(クリニカルパス法)を利用することにより,電子化されたあらゆるデータをもとに既存の癌化学療法のさらなる成績向上・効率化・標準化などを行う手法の開発を目指してきた。そのため,そのバリアンス分析を簡便に行うためのソフトウエアの開発を行った。

臨床上の重要なアウトカム(クリティカル・インディケーター)にポイントを絞り,それを中心としてバリアンス情報を詳細に収集する方法であると共に,その事項が本当にクリティカルな事柄になっているのかどうかを評価しようというものである。クリティカル・インディケーターの分析を終え,すでに試験的に院内で稼働し始めており,さらに標準的なアウトカムマスタが今年度末に公表されることより,それを採用して標準的な分析を開始する準備も整った。またレジメン機能の高機能化についても医療安全の観点から検討を進め,いくつかの改良点を含んだ設計を行った。今後このような技術を応用したシステムを実際に実装してその効果を検証していく予定である。
特別なニーズをもつ子どもへの教育・福祉戦略に関する比較調査研究

本研究は、研究目的にしたがって、特別なニーズをもつ子どもへの教育および福祉保障の動向と課題について、先進国と発展途上国という「社会開発パラダイム」、アジア、ラテンアメリカ、ユーラシア・東欧等という「地域パラダイム」から、比較検討を行った。国際社会における子どもの権利保障および障害者の権利保障は、理念としては着実に展開してきているが、「特別なニーズをもつ子ども」への教育・福祉については、様々な課題を内包していることが明らかになった。研究2年目である本年度は、昨年度の研究成果を踏まえ、特別なニーズをもつ子どもへの教育・福祉に関する先行研究・資料収集とその分析、本調査に向けた共同研究会を引き続き実施した。具体的には、(1)社会開発パラダイム研究、すなわち特別なニーズをもつ子どもに関する社会開発、貧困対策、国際連合、国際機関による報告資料、文献研究にもとづく研究であり、(2)地域パラダイム研究、すなわち特別なニーズをもつ子どもに関するアジア、ラテンアメリカ、ユーラシア・ヨーロッパにおける文献・資料等に基づく研究を進めた。さらに本年度は、本調査Bを実施し、ユーラシア・東欧の訪問調査(ロシア、ドイツ(旧東ドイツ地域含む))を行った。調査では、特別なニーズをもつ子どもへの教育・福祉に関する行政担当者へのヒアリング調査、障害児学校、障害児福祉施設等への訪問調査、研究者へのヒアリングを実施した。各機関・学校の調査では、活動目的・内容等へのヒアリングととともに、活動の観察を行った。本年度は、特別なニーズをもつ子どもへの教育・福祉に関する先行研究・資料収集とその分析、本調査に向けた共同研究会を実施した。具体的には、(1)社会開発パラダイム研究、すなわち特別なニーズをもつ子どもに関する社会開発貧困対策、国際連合、国際機関による報告資料、文献研究にもとづく研究であり、(2)地域パラダイム研究、すなわち特別なニーズをもつ子どもに関するアジア、ラテンアメリカ、ユーラシア・ヨーロッパにおける文献・資料等に基づく研究を進めた。さらに平成21年度は、新型インフルエンザの世界的流行や外務省渡航情報による危険情報が発令されたため、その実施を断念し、平成22年度に予算を繰り越し、平成22年度に本調査A・ラテンアメリカ訪問調査(キューバ)を実施した。
ノンスパイキングニューロンを経由するパラレル回路の神経行動学的意義

ザリガニの3つの運動制御系において、ノンスパイキング介在ニューロンが形成する並列回路を同定し、その行動制御での役割を調査した。(1)尾扇肢平衡反射制御系平衡胞からの感覚情報は、運動ニューロンに直接伝えられると同時にノンスパイキング介在ニューロンにも伝えられ、其処から運動ニューロンに到る。介在ニューロンは同時に腹部姿勢制御系からも興奮性入力を受ける。尾扇肢平衡反射発現には平衡胞以外に腹部姿勢制御系の情報が必要であることが知られているが、ノンスパイキング介在ニューロンはこれら両情報を統合する働きをしている。(2)回避行動制御系尾扇肢の機械刺激に対してザリガニは回避行動を示す。この行動は鋏脚、歩脚、尾扇肢等の運動を伴い、成長と共に変化する。尾扇肢に着目して機械感覚毛から尾扇肢運動ニューロンまでの神経接続を調べ、前運動性のノンスパイキング介在ニューロンによる並列回路を同定した。個個の介在ニューロンから運動ニューロンへの出力は興奮、脱仰制のみならず脱興奮、仰制も見られ、互いに相殺しあう介在ニューロンが並列接続していることが判明した。成長時の尾扇肢運動の変化は、これら並列回路活動のバランスの変化に其づくと推定される。(3)腹部姿勢制御系腹部姿勢運動ニューロンの活動を制御するノンスパイキング介在ニューロン並列回路を同定した。これらは腹部伸展運動発現に際して、その拮抗的な動きである屈曲運動を仰制する。腹部伸展系を直接活動させる介在ニューロンは見られなかった。以上3つの運動系において、ノンスパイキング介在ニューロンの並列回路は運動を直接制御するのではなく、動物の行動状態、成長段階などに応じて基本的な運動パターンを修飾する働きをすることが判明した。ザリガニの逃避行動に見られる尾扇肢運動を発現させる運動パターン形成回路をモデルに、ノンスパイキングニューロンと、これを含むパラレル回路の役割について検討した。まず、運動パターン形成回路を構成する神経要素を生理学的に調査するとともに構造的に同定した。生理学的調査はスパイキング、ノンスパイキングの別、シナプス接続の性質について主として行った。構造はルシファーイエロー蛍光色素の細胞内注入による標識によった。1)尾扇肢外側の接触刺激情報は、一次感覚神経によって、腹部第6神経節へもたらされる。同側では直ちにノンスパイキングニューロンに伝達され、ついで運動ニューロンに伝達される。反対側へはいったん両側性のスパイキング局在ニューロンに伝達された後、ノンスパイキングニューロンを経由して運動ニューロンに伝達される。2)この接続は単一回路ではなく、複数の並列回路であることが明らかになった。しかもその接続は、興奮性、抑制性シナプス接続の可能な組合わせがすべて存在することが明らかになった。基本的には2シナプス性接続である同側について見ると、尾扇肢閉筋についてはa)両方とも興奮性、b)両方とも抑制性、c)興奮ー抑制性、d)抑制ー興奮性の組合わせが存在することが明らかになった。このうちa)とb)は若令ザリガニで観察される尾扇肢の動きに合致し、残り2つはこれに反する作用を持つことになる。3)このような相反する作用を持つ神経接続が並列に存在するとき、何故いずれかの方向の接続の効果のみが運動出力として選択され、発現するかについて、ひとつの仮説を考え、今後これを検証する研究を計画している。ザリガニの逃避行動のさいに見られる尾扇肢運動の神経回路をモデルにして神経系における並列情報処理回路の動作についての解析の継続した.

本年はレーザ光細胞破壊装置,および情報科学理論に基いた回路解析の両方を利用した研究に着手した.1),まず被刺激側から神経節の反対側ノンスパイキングニューロン群に感覚情報を伝達する両側性スパイキング介在ニューロンの形態学的,生理学的解析,同定を行った.これはノンスパイキングニューロンを含む尾扇肢運動神経系の全容を把握するためである.両側性スパイキング局在ニューロンはやはり複数個存在し,刺激側の第一次感覚ニューロンから入力を得て,神経節内反対側に分布する単側性ノンスパイキング局在ニューロンにその情報を分配する役割を果たす.この反対側ノンスパイキングニューロンは尾扇肢閉筋運動ニューロンと上記のスパイキングニューロンとの間に複雑な並列回路を形成している.この間の接続形態は基本的には2シナプス性の経路を形成し,その符号は可能なすべての組合わせ,すなわちa)興奮ー興奮接続, b)興奮ー抑制, c)抑制ー興奮そしてd)抑制ー抑制から成っている.2),このような並列でしかも作用上相互に相反する接続を持っているにも拘らず,尾扇肢運動が一義的に発現するのは何故か?この疑問に答えるのは本研究の最終的な課題である.このためには従来の単純な刺激対応答の個別的な解析では殆んど不可能であることが判明した.そこで新しい解析手段として,全体の回路内から特定の回路要素,すなわち1ヶのニューロンまたはその部分を選択的に破壊,除去するレーザ細胞破壊法を開発し,さらにその前後における回路の機能を評価比較する方法として,ニューロンへの白色雑音刺激とその出力のウィーナー理論による解析法を導入,解析実験を行なった.ノンスパイキング介在ニューロンが形成する並列回路は、これまでの2年間の研究でザリガニ平衡反射系及び回避行動系においてその存在が確認された。これらの行動はいずれも尾扇肢を含み、調べられた介在ニューロン並列回路も尾扇肢運動ニューロンに対して前運動性のものであった。本年度は新たに、ザリガニの腹部姿勢制御系における並列回路の有無およびその働きを調べた。実験は単離腹髄標本を用いて腹部第4神経節で行った。蛍光色素(Lucifer yellow)を充填した硝子管微小電極を用いて神経節内を探り、細胞内通電によって腹部姿勢運動ニューロンに影響を持つニューロンを検索した。その結果42個の、ノンスパイキング介在ニューロンを得た。これらはいずれも通電効果に差異は認められなかったが、形態的に2群に大別された。各群には少なくとも2個以上のニューロンが存在し、これらは腹部姿勢運動ニューロンに対して前運動性の並列回路を形成している。全体標本を用いて腹部姿勢運動遂行中のこれら介在ニューロンの活動を調べた結果、腹部姿勢制御系から興奮性入力を受けることが判明した。これら介在ニューロンの運動出力はは、腹部運動を抑制する方向に働く。従って今回同定したノンスパイキング介在ニューロン群は、腹部姿勢運動発現を促進する働きをしていると考えられる。今回腹部第4神経節で得られた介在ニューロンは、形態的には最終神経節のLDSニューロンと相同と見られるが、機能的に異なっており、今後の検討が必要である。
希土類錯体による酸素分子の活性化とアルケンの部分酸化

既に我々は、塩化ユウロピウム触媒系(塩化ユウロピウム・亜鉛粉・酢酸・塩化メチレン溶媒)が、酸化を酸化剤としてアルカンの部分酸化に活性であることを見出している。このユウロピウム触媒系を種々のアルケンのエポキシ化反応に適用し、希土類錯体触媒の反応特異性を明らかにすることを目的とした。その結果、学術的にも工業的にも重要な、プロピレンのエポキシ化反応が常温で選択的に進行することを見いだした。プロピレンのエポキシ化反応の最適反応条件(プロピレン圧、酸素圧、反応温度、溶媒効果など)を検討した結果、プロピレンオキサイド選択率95%、ターンオーバー数は1時間で17を越え、極めて効率良く反応が進行した。さらに、シス-,トランス-2-ヘキセン、1-ヘキセン、そしてスチルベンのエポキシ化反応の生成物選択性から、ユウロピウム触媒系の活性酸素種は球電子的、かつラジカル的性格が強いことが解った。また、ユウロピウム触媒系に回転リングディスク電極を用いて電気化学的測定法を適用することにより、エポキシ化反応が進行している際に反応に係わるユウロポウム種および酸素種の電気化学的特性を検討した。その結果、添加した3価のユウロピウムは亜鉛により還元され2価となり、このユウロピウム(II)と酸素の1電子還元により生成したスーパーオキサイドが相互作用して活性酸素を発生し、エポキシ化反応を進行させていることが明らかとなった。
運動ニューロンに対する筋由来栄養因子cDNAのクローニング

運動神経細胞の生存や機能維持はその支配標的筋との結合に依存する。この現象は、運動神経細胞の生存を促進する標的筋由来栄養因子によって規定されていると仮定されているがその実体は未だ不明である。従って、運動神経細胞の生存機能維持研究のフロンティアはこの因子の同定であることは疑いない。我々は、鶏胚下肢筋よりmRNAを抽出し、これをアフリカツメガエル卵母細胞に注入することで発現する分泌性の翻訳蛋白が、in vivoとinvitroの鶏胚運動神経細胞の生存を促進することを明らかにした。この結果は、運動神経細胞の生存を規定する筋由来の拡散性因子のmRNAが、事実、胎生期の下肢筋で産生されていることを示唆する。次に、このmRNAを蔗糖密度勾配遠心法により得た栄養因子活性分画mRNAからcDNAライブラリーを作成し、このcDNAからcRNAを作成し上記の卵母細胞に注入して得られた翻訳蛋白も上記の運動神経細胞の生存を促進した。この結果は、ライブラリー中に栄養因子cDNAが存在することを意味する。このライブラリーcDNAを先ず、40分画(10000pfu)に分画し、それぞれの分画cDNAよりcRNAを作成した。これを、上記の卵母細胞翻訳系に投与して得られた分泌蛋白が運動神経細胞の生存を促進するかを指標にして活性分画をスクリーニングした。得られた活性分画cDNAをさらに、細分画(3000pfu)して同様の方法で活性分画を求めた。さらに、1000pfu分画し、現在600pfuまで絞り込めた。同様の作業を繰り返すことで単一cDNAが得られることは疑いないと考えられた。