hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ワインツーリズム推進策の国際比較的見地からの政策人類学的な分析

2018年度における研究調査活動を通して、ワインツーリズム・ワイン産業における地域ブランド情報の発信に関する動的な力学をより明確に浮き彫りにしていくために、類似する酒類産業やその他フード産業・フードツーリズム産業における地域ブランド情報の発信に関する産・官・学・民の相互関係との比較考察を実施することの重要性を認識した。ついては、2019年度においては、ワインツーリズム・ワイン産業における地域ブランド情報の創造・発信に関する政策・制度・仕組みと、その他の多様なフードツーリズム分野やフード産業分野における地域ブランド情報の創造・発信に関する政策・制度・仕組みを比較考察し、それら政策・制度・仕組みにおける産・官・学・民の動的な相関関係について、相違点や共通点、問題点、将来に向けた課題、解決策などを明らかにしていく。そしてこうした研究調査活動から、ツーリズム研究、地域ブランド研究における新しい研究視座を模索していく。2018年度に発表した「日本のウイスキーに関する国産・地域ブランドの推進求められる法的基準」(「国際貿易と投資」115号)では、ワイン及び日本酒に関する国産・地域ブランドの推進策とウイスキーに関する国産・地域ブランドの推進策の比較考察が軸となっており、今後とも、こうした比較的視座を発展・拡充させながら、鋭意研究調査を進めていく。2019年3月8日- 4月15日にかけて欧州の関連箇所を訪問し、現地調査及び3つの国際学会での研究成果発表を行なったが、その欧州訪問における2018年度に該当する期間(3月8日- 3月31日)に関する旅費等については、当該欧州訪問からの帰国後に精算手続きを行い、結果として当該金額(685,215円)については「次年度使用額」として取り扱われているため。
異種感覚統合としての自己身体表象の発達メカニズムの解明

自己身体表象は主に体性感覚と視覚,さらに言語という三つのモダリティで表象される.本研究では,それらの感覚情報がどのように統合されて身体表象を形成するのかを幼児を対象とした実験により検討した.幼児がよく知らない身体部位のラベルを繰り返し呈示し,その後,鏡を通した自己身体部位の探索課題を行ったところ,探索の正答率が向上した.このことから,ラベルの導入による身体部位カテゴリの精緻化が視覚-体性感覚の身体表象の統合を促すことが示された.異なる感覚で表現される自己身体表象の統合は自己認識の発達にとって重要である.しかし,異なる感覚がどのように単一の身体表象に統合されるのか,そのメカニズムは明らかでない.本研究では幼児期における自己身体表象発達メカニズムの解明を目指す.具体的にはマークテストにおける幼児の不思議な振る舞い(後ろ探し現象)を手掛かりとして構築した自己身体表象の統合モデルの精緻化・妥当性の検証を試みている.マークテストにおける後ろ探し現象とは,気づかぬうちに前頭部に貼られたマークを2歳児が鏡を通して取り除く際に,後頭部から探し始めるというエラーである.平成24年度は,前年度に引き続き,言語ラベルの覚醒化による体性感覚性の身体表象の精度向上についての検討を実施した.「おでこ」「鼻」「あたま」という身体部位について,語りかけ遊びを通じて各身体部位に注意を向けさせた後,マークテストを実施し,言語ラベル付与によるカテゴリ精緻化の効果を検討した.その結果,「おでこ」条件のみ後ろ探し現象の出現率が有意に減少した.この結果は,言語ラベル付与によるカテゴリ精緻化によって視覚性・体性感覚性の統合が促進された可能性を支持する.また,体性感覚性身体表象と後ろ探し現象の関係を検討するための実験を進めた.極小・軽量の振動子を縫い込んだ帽子を幼児にかぶってもらい,マルチアングルからの映像参照によるマークテストを行い,マークの探索を実施する際に無線装置でマーク位置の身体部位を振動させることによって,体性感覚性身体表象の覚醒度をコントロールする.平成23年度に開発した振動マーク帽子を実際の幼児を対象とした実験場面で使用できるよう検討した.実用化にはまだ時間を要するが,これを用いて体性感覚性身体表象の覚醒化が後ろ探し現象の出現に及ぼす影響の検討を引き続き進める.自己身体表象は主に体性感覚と視覚,さらに言語という三つのモダリティで表象される.本研究では,それらの感覚情報がどのように統合されて身体表象を形成するのかを幼児を対象とした実験により検討した.幼児がよく知らない身体部位のラベルを繰り返し呈示し,その後,鏡を通した自己身体部位の探索課題を行ったところ,探索の正答率が向上した.このことから,ラベルの導入による身体部位カテゴリの精緻化が視覚-体性感覚の身体表象の統合を促すことが示された.異なる感覚で表現される自己身体表象の統合は自己認識の発達にとって重要である.しかし,異なる感覚がどのように単一の身体表象に統合されるのか,そのメカニズムは明らかでない.本研究では幼児期における自己身体表象発達メカニズムの解明を目指す.具体的にはマークテストにおける幼児の不思議な振る舞い(後ろ探し現象)を手掛かりとして構築した自己身体表象の統合モデルの精緻化・妥当性の検証を試みている.マークテストにおける後ろ探し現象とは,気づかぬうちに前頭部に貼られたマークを2歳児が鏡を通して取り除く際に,後頭部から探し始めるというエラーである.平成23年度は,言語ラベルの覚醒化による体性感覚性の身体表象の精度向上についての検討を実施した.これまでの研究成果から,マークを鼻に付けた場合に比べてマークを前頭部に付けた場合に,2歳児の後ろ探し現象の出現率が有意に上昇することが分かっている.今年度の実験では「おでこ」という身体部位について,語りかけ遊びを通じて言語ラベルの覚醒化を図ったのちにマークテストを実施し,言語ラベル覚醒化の効果を検討した(【研究項目1】).その結果,後ろ探し現象の出現率が有意に減少した.この結果は,言語ラベル覚醒化によって視覚性・体性感覚性の統合が促進された可能性を支持する.現在,統制実験として「鼻」という身体部位の言語ラベル覚醒化の影響を検討中である.【研究項目2】として,視覚性・体性感覚性の身体表象の統合に関する処理についての実験を進めている.本年度は体性感覚性身体表象を覚醒化させるための振動マーク帽子を開発した.極小・軽量の振動子を縫い込んだ帽子を幼児にかぶってもらい,マークテストにおける探索を実施する際に無線装置でマーク位置の身体部位を振動させることにより,体性感覚性の身体表象の覚醒化を図る.体性感覚性身体表象の覚醒化が後ろ探し現象の出現に及ぼす影響の検討を進める.交付金の3割の支給が遅れたことにより備品の購入が遅れ,当初の研究計画の順序を変更しなくてはならなかったが,計画はおおむね順調に進展している.平成24年度は,前年度に実施した【研究項目2】視覚性・体性感覚性の身体表象の統合に関する処理についての実験,に関連して,下記の2つの研究項目を実施する.【研究項目2-1】として,前年度に開発した振動マーク帽子を使用し,視覚性・体性感覚性の身体表象の統合に関する処理における体性感覚性の身体表象の役割を明らかにする実験を実施する.振動マーク帽子とは,極小・軽量のバイブレータが埋め込まれた幼児用の帽子で,無線で振動を生じさせることが可能である.この振動マーク帽子を用い,体性感覚性の身体表象に対する覚醒度を操作した状態でマークテストを応用した身体マッピング課題を実施する.

【研究項目2-2】として,幼児の自己身体部位表象に関するトポグラフィの記述を試みる.これまで鼻とおでこに焦点を当てた身体マッピングを検討してきたが,バーチャルリアリティ技術を用いることによって,全身の身体部位に検討対象を広げることにより,身体部位表象のトポグラフィに関する精度の違いを明らかにする.■設備備品費昨年度購入したビデオスイッチャーへ複数アングルから映像の入力を行うため,撮影用のビデオカメラが必要である.また,実験刺激作成,実験施行(刺激呈示),のためにノートパソコンを購入する予定である.450,000円を計上する.■消耗品費記録データは映像が中心でかなりの容量を要するため,記録媒体として大容量HDD・バックアップ用DVDメディア等が必要である.100,000円を計上する.■旅費国内学会・国際学会での成果発表を積極的に行うため,300,000円の旅費を計上する.■謝金等謝金は刺激,装置の作成のための学生アルバイト,実験の実施補助,データコーディングに必要である.特に幼児実験の実施に際しては,少なくとも同時に2人が必要である.必要な被験者数が1実験あたり60名とすると,失敗率30%を加味した必要被験児数は1実験につき78名となり,1実験の実験補助には時給860円換算で134,160円の実験補助謝金が必要である.また論文の投稿は国際誌を標準とするため,校閲料が必要となる.合計250,000円を計上する.■その他幼児実験の協力者募集のためのチラシ作成の必要費として,100,000円を計上する.
秘匿された個票データのリスク評価法の確立と官庁統計データの公開への応用

個票データのリスク評価で用いられる種々の超母集団モデルについての性質を明らかにした。2時点以上で得られた標本から作られた複数の個票データや,層化抽出された標本から作られた個票データをリスク評価するために,寸法指標の多重寸法指標への拡張が提案され,ノンパラメトリック推定法についての理論構築がほぼ完成した。また,表形式データの秘匿措置の一つであるスワッピングに応用されるマルコフ基底を用いた手法についても進展があった。2007年5月23日に新統計法が公布され,2009年10月1日の完全施行に向け準備が進められているが,改訂の柱の1つは「統計データの利用促進と秘匿措置」である。本研究はその実現に向けて,個票データの秘匿と公開のリスク評価,表形式データの秘匿と自動秘匿プログラム作成,秘匿データの有用性の評価を目的としている。個票データのリスク評価方法としては,標本寸法指標から母集団寸法指標を推定することが一般的で,その推定に用いられる種々の確率分割モデルについて,性質や相互関係について研究が深められた。また継続調査で得られた個票データのリスク評価に用いることのできる多重寸法指標が提案され,そのノンパラメトリック推定法についても理論構築が進んだ。確率分割モデルの多重指標への拡張についても検討が行われたが,その議論は始まったばかりである。表形式データの秘匿方法では,特にグレブナー基底を用いたスワッピングの理論について研究に大きな前進が見られた。これらの研究成果については統計関連学会連合大会や応用統計学会などで報告するとともに,2007年9月8日,2008年2月21日に開催した本研究の研究会でも互いに報告し合い,共通認識を持った。また2007年11月16日,17日には,統計数理研究所において研究集会「官庁統計データの公開における諸問題の研究」を開催し,この分野に関係する研究者や実務家と意見交換を行った。参加者は51名であったが,総務省など官庁からも15名の参加があり,官庁統計データの公開に関するリスク評価の報告を始めとして,新統計法の下でのデータ提供システムの提案,個票データを用いた分析の有用性を示す報告などが行われた。統計法改訂の大きな柱である統計データの利用促進と秘匿措置の実現のために必要となる,「個票データの秘匿と公開のリスク評価方法」,「表形式データの秘匿と自動秘匿プログラム作成方法」,「秘匿データの有用性の評価方法」の確立を本研究の目的としている。個票データは推定された母集団寸法指標を基にリスク評価されることが多いが,本年度もその推定のための新たなモデルが提案され,モデル間の相互関係についての研究も深められた。また,本研究グループによって,複数時点の個票データを同時にリスク評価するための多重寸法指標の利用が提案されていたが,母集団多重寸法指標のノンパラメトリック推定法についても理論構築が順調に進み,確率分割モデルの多重指標への拡張についても検討が行われた。表形式データの秘匿と公開のリスク評価についても昨年度に引き続き研究が行われ,秘匿措置の一つであるスワッピングについて進展が見られた。このようにして構築された理論の有用性を検証するために,労働力調査の個票データについて目的外使用申請を行い,実際の官庁統計データに対して種々の検討を行っているところである。研究成果については,統計関連学会連合大会などで報告を行うとともに,国際シンポジウムや研究集会などでも報告,討論を行った。また,2008年10月23日,24日には,統計数理研究所において研究集会「官庁統計データの公開における諸問題の研究」を開催し,本研究に関連する研究者,官庁統計の実務者とも意見交換を行った。新統計法が2009年4月に完全施行された。改訂の柱の一つである統計データの利用促進と秘匿措置の実現のために,1.個票データの秘匿と公開のリスク評価方法の確立,2.表形式データの秘匿と自動秘匿プログラム作成方法の確立,3.秘匿データの有用性の評価方法の確立を本研究の目的としていた。個票データのリスク評価では推定された母集団寸法指標を用いることが多いが,本年度もパラメトリック推定に関する新たな知見が数多く見いだされた。2時点以上で得られた標本から作られた複数の個票データや,層化抽出された標本から作られた個票データをリスク評価するために,既に本研究グループによって多重寸法指標の利用が提案されていたが,多重母集団寸法指標のノンパラメトリック推定法についての理論構築が順調に進み,ピットマンモデルを2次元に拡張したモデルについても,実データへの適用の可能性が報告された。昨年度,目的外使用を行った労働力調査の個票データから得られた種々の統計量について,時系列データとしての観点から新たな分析がなされた点も成果の一つである。また,表形式データの秘匿措置の一つであるスワッピングに応用されるマルコフ基底を用いた手法についても進展が見られた。更に,個票データ利用の有用性を示す分析結果も報告された。

これらの研究成果については,同志社大学で開催された統計関連学会連合大会などの学会で報告を行うとともに,各種研究集会や研究会などでも報告を行った。2009年10月22日,23日には,統計数理研究所において研究集会「官庁統計データの公開における諸問題の研究」を開催し,本研究に関連する研究者,官庁統計の実務者とも意見交換を行った。
リポソーム型ブリ連鎖球菌症ワクチンによるインネートイムニティーの誘導と感染防御

Lactococcus garvieaeに起因するブリのレンサ球菌症は,養殖ブリの重要疾病のひとつである。多くの病原細菌が腸管の糖脂質に結合することにより感染の足場を作り,深部臓器に侵入すること,また本疾病において,起因菌が罹患魚の脳組織に高率に検出されることを踏まえ,腸管および脳におけるL.garvieaの結合分子を明らかにすることを目的として実験を行った。ブリ腸管ならびに脳の糖脂質を解析し,これら糖脂質に対するL.garvieaの結合性を調べた。また,腸管におけるL.garviea結合分子の局在と,その部位への菌の結合性を調べた。薄層クロマトグラフィー(TLC)により,腸管では中性糖脂質7種,酸性糖脂質4種,脳では中性糖脂質,酸性糖脂質ともに3種の糖脂質が検出された。また,ウサギ抗L.garviea抗体を用いたTLC免疫染色により,腸管・脳の両者ともに,酸性糖脂質であるGM3と同一の移動度の位置にL.garvieaの結合を認めた。蛍光色素で染色した菌を腸管凍結組織切片に反応させると,粘膜上皮に強い結合が観察された。グリコシダーゼ処理により,この結合は濃度依存的に抑制された。続いて,ホルマリン不活化L.garviea菌体を種々の組成のリポソームに再構成して,リポソーム封入抗原の酸(胃液),消化管ならびに膵臓の消化酵素,および胆汁に対する安定性を検討した。その結果をもとに,ブリへの経口投与に最も適したリポソームを選択した。さらに,リポソーム封入抗原の経口免疫による,ブリにおける感染防御の誘導を試みた。リポソーム封入超音波処理L.garvieaを飼料に混合投与してブリに経口免疫した。免疫したブリ,ならびに対象として抗原のみを経口投与したブリに対する攻撃試験を,強毒菌を用いて行った。実験結果から,免疫誘導に必要なL.garviea抗原量,免疫回数と防御との関連を検討した。これらの予備試験の結果に基づき,現在本試験の実施準備を行っている。目的Lactococcus garvieaeに起因するいわゆるブリのレンサ球菌症は,養殖ブリの重要疾病のひとつである。多くの病原細菌が腸管の糖脂質に結合することにより感染の足場を作り,深部臓器に侵入すること,また本疾病において,起因菌が罹患魚の脳組織に高率に検出されることを踏まえ,腸管および脳におけるL.garvieaeの結合分子を明らかにすることを目的として実験を行った。ブリ腸管ならびに脳の糖脂質を解析し,これら糖脂質に対するL.garvieaeの結合性を調べた。また,腸管におけるL.garvieae結合分子の局在と,その部位への菌の結合性を調べた。材料・方法と結果腸管および脳より総脂質を抽出し,さらに中性糖脂質画分と酸性糖脂質画分に分離した。また,ウサギ抗L.garvieae抗体を用いたTLC免疫染色により,腸管・脳の両者ともに,酸性糖脂質であるGM3と同一の移動度の位置にL.garvieae KG9831株の結合を認めた。

蛍光色素で染色した菌を腸管凍結組織切片に反応させると,粘膜上皮に強い結合が観察された。グリコシダーゼ処理により腸管糖脂質の糖鎖を切断後に菌を反応させると,この結合は濃度依存的に抑制された。結論今回,L.garvieaeに結合性を示す糖脂質がブリの腸管ならびに脳に発現していることが明らかとなった。L.garvieaeは腸管粘膜に結合することから,この糖脂質が主として粘膜に発現していることが示唆された。Lactococcus garvieaeに起因するいわゆるブリのレンサ球菌症は,養殖ブリの重要疾病のひとつである。多くの病原細菌が腸管の糖脂質に結合することにより感染の足場を作り,深部臓器に侵入すること,また本疾病において,起因菌が罹患魚の脳組織に高率に検出されることを踏まえ,腸管および脳におけるL. garvieaeの結合分子を明らかにすることを目的として実験を行った。前年度に引き続きL. garvieae接着リセプターの解析を行うと同時に,抗原を封入したリポソームの評価を行った。また,リポソーム封入抗原の経口免疫による,ブリにおける感染防御能の誘導を試みた。引き続きL. garvieae接着リセプターの解析:薄層クロマトグラフィーで展開した糖脂質画分にL. garvieaeを反応させ,菌が糖脂質に結合することを明らかにした。また,ブリ腸管の凍結切片において,菌は粘膜糖脂質に接着することを明らかにした。これらの菌の結合性は,材料を糖分解酵素で前処理することにより阻止された。抗原封入リポソームの評価:ホルマリン不活化L. garvieae菌体を種々の組成のリポソームに再構成して,リポソーム封入抗原の酸(胃液),消化管ならびに膵臓の消化酵素,および胆汁に対する安定性を検討した。その結果,これらの影響を受けず,抗原を保護するタイプのリポソームを選択することが出来た。これらの結果をもとに,ブリへの経口投与に最も適したリポソームを選択した。経口免疫による感染防御能の誘導:リポソーム封入超音波処理L. garvieaeを飼料に混合投与してブリに経口免疫した。免疫したブリ,ならびに対象として抗原のみを経口投与したブリに対する攻撃試験を,強毒菌を用いて行った。実験結果から,免疫誘導に必要なL. garvieae抗原量,免疫回数と防御との関連を検討した。これらの予備試験の結果に基づき,現在本試験の実施準備を行っている。
双子老人の生活環境の比較からみた精神老化・痴呆の危険因子の研究:成人双生児2,500組の追跡健康調査

60歳以上の成人双生児185組について総合的健診調査を実施した。またかねてより協力を得ている成人双生児2,500組について、郵送質問紙調査を実施した。検査項目は血液化学、WAIS成人知能検査、人類学的身体計測、卵性診断、DNAテロメア分析、および生活環境要因である。これら調査結果について計量遺伝学の手法を用いた分離比、ロッド解析、ポリジーンモデルへの適応、浸透率等の分析を実施した。また双生児研究法独自のデータ解析手法(級内相関係数、遺伝寄与率、別離年齢別解析等)も実施した。精神老化の最も強い危険因子として血清アポタンパクE濃度が推定された。血清アポタンパクEについては、一卵性の級内相関係数0.468、二卵性-0.048と算定され、遺伝寄与率は0.468と推定された。血清アポタンパクEとWAIS得点との関連性については、WAIS(符号、数唱、積木問題)得点のうち、符号得点と積木得点で血清アポタンパクEとの有意な関連が認められた。また、ライフスタイル要因との関連では、飲酒量がペア内で多い者、職業がペア内で重労働に就いている者のほうが、有意に血清アポタンパクEが低い傾向が示唆された。MPIテスト得点についてはN軸得点がWAIS符号得点と関連する傾向がみられた。DNAテロメアについては、一卵性ペアにおいて測定値が非常に近似することが判明し、遺伝的コントロールが極めて強いことが示唆された。また,既に把握している成人双生児2,500組について郵送質問紙調査を実施した。検査項目は血液化学,WAIS成人知能検査,人類学的身体計測,卵性診断,DNAテロメア分析、および生活環境項目である。DNAテロメア分析については老化指標としてのみでなく、発癌およびアポトーシスに関連する重要項目になってきていることから、テロメアーゼ分析についても分析手技の検討を開始した。精神老化については、血清アポタンパクE濃度とWAIS知能検査得点について分析した。その結果、アルツハイマー型老年痴呆と関連が深いとされる血清アポタンパクEについては,一卵性双生児においてもペア内で血清濃度に大きな差異(級内相関係数0.44)が見られた。このことから環境要因の影響が強いことが示唆された。郵送質問紙調査の対象例のうち、痴呆症状を呈していることが判明したもの11例であった。全例ともペアの片方でのみ痴呆症状がみられた。これらケースについては脳血管性老年痴呆、アルツハイマー型老年痴呆、等の型別ではアルツハイマー型と思われるものであった。双生児検査データ(血液化学、WAIS知能検査、MPI性格テスト、心電図、DNAテロメア長、人類学的計測値、など)について実験的及び計量遺伝学的手法を用いた分離比、ロッド解析、ポリジーン・モデルへの適応、浸透率、等の分析を実施した。調査協力を得ている双生児のうち自宅訪問調査が必要と思われたもの20組について自宅訪問調査を実施した。また、対象双生児全例について郵送質問紙調査を実施した。調査データについては解析中であるが、知的機能の老化指標として適切と考えられているWAIS符号検査については血清アポタンパクE濃度との関連が強く示唆される成績を得ている。DNAテロメア長について双生児ペア内で極似した数値となる傾向がみられた。前年度までに実施した60歳以上の成人双生児185組の総合的健診調査データを解析した。解析手法として双生児研究法で有用とされる級内相関係数、遺伝寄与率、環境寄与率、別離年齢別解析等を用いた。また老化指標として近年国際的に注目されつつあるDNAテロメア分析を実施した。DNAテロメアについてはサザンハイブリダイゼーション法にて測定した。

血清アポタンパクEについては、一卵性の級内相関係数0.468、二卵性-0.048と算定され遺伝寄与率は、0.468と推定された。血清アポタンパクEとWAIS得点との関連性については、WAIS(符号、数唱、積木問題)得点のうち符号得点と積木得点で、血清アポタンパクEとの有意な関連が認められた。また、ライフスタイル要因との関連では、飲酒量がペア内で多い者、職業がペア内で重労働の仕事に就いている者のほうが、有意に血清アポタンパクEが低い傾向が示唆された。DNAテロメアについては一卵性ペアにおいて測定値が非常に近似することが判明し、遺伝的コントロールが極めて強いことが示された。
加齢に伴う不正咬合の発現機序の解明に関する総合的研究

非線維性マトリックス歯根膜におけるプロテオグライカンの分布を免疫組織学的に検討したところ、ラットの咬合機能低下モデルにおいては、プロテオグライカンの減少が認められ、これらの非線維性マトリックスは咬合機能と密接に関連しており、組織の恒常性維持機構や組織のリモデリングに重要な役割を果たしていることが示唆された。微小血管系歯根膜の微小循環系について、ラットの咬合機能低下モデルを用いて咬合力という機械的刺激が及ぼす影響について検討したところ、低機能下では歯根膜幅の狭窄とともに血管径が小さくなり、血管数も減少した。そのメカニズムの一つとして、機械的刺激の低下による血管収縮因子であるエンドセリンの増加、また、拡張因子であるNOの関与が示唆された。歯根膜機械受容器ラットin vitro下顎-神経標本を用いて電気生理学的手法に従い、歯根膜機械受容器の生理学特性を定量的に解析した結果、咬合機能低下により歯根膜支配神経の応答が低下したものが、機能回復に伴い再賦活されることが明らかとなった。また、成長にともなう変化も明らかにされた。骨形成活性機械的刺激による骨組織リモデリングのメカニズムを解明するために、細胞レペルでの検討を行った。その結果、培養骨芽細胞様細胞においてshear stressを与えた際にみられる細胞内Caイオン濃度の上昇には、細胞膜の伸展により活性化されるstretch-activated channelが関与し、アクチンフィラメントなどの細胞内骨格も影響を与えていることが明らかにされた。また、咬合機能低下モデルにおける歯根の状態および歯槽骨の再構築の、歯の生理的移動の様相も解明された。同様に機能低下歯の矯正力による移動や、咬合力を排除したモデルの実験的歯の移動により、より弱い力が矯正の歯の移動においては、健全な歯周組織が維持されることが明らかとなった。・非線維性マトリックスラット臼歯歯根膜から抽出・精製した各種プロテオグライカンの定量的分析やそのmRNAの同定から合成及び分解量を比較した。その結果、咬合機能の低下により、歯根膜プロテオグライカンは減少傾向を示した。これにより、歯根膜中のプロテオグライカンは咬合機能と密接に関連しており、組織の恒常性維持機構や組織の改造現象に重要な役割を果たしていることが示唆された。・微小血管系歯根膜の微小循環系について、ラットを用いた動物実験系を作製し、咬合機能を低下させたモデルを作製、咬合力という機械的な刺激が及ぼす影響について検討した。その結果、低機能下では歯根膜幅の狭窄とともに血管径が減少、また機能低下の期間が長期におよぶと血管数の減少が認められた。今後は、この現象のメカニズムの解明を図り、血管収縮因子としてのエンドセリンおよび、NOの拡張因子としての関与を検討する。・機械受容器ラットin vitro下顎-神経標本を用いて電気生理学的手法に従い、歯根膜機械受容器の生理学的特性を定量的に解析した。まず歯根膜支配神経の生理学的応答特性を、咬合機能低下時の変化と成長に伴う変化を検討している。今後は、老年期を想定した加齢モデルでの生理学的変化を捉える。・骨形成活性機械的負荷を骨組織に与えた時の、リモデリングのメカニズムを解明する為に、細胞レベルでの検討を行った。その結果、培養骨芽細胞様細胞においてshear stressを与えた際に見られる、細胞内カルシウムイオン濃度の上昇には、細胞膜の伸展により活性化されるstretch-activated channelが関与し、アクチンフィラメントなどの細胞内骨格が関与していることが示めされた。今後は、咀嚼力に対応した顎骨の骨形成活性測定のための動物実験モデルを作製し、機械的刺激と歯槽骨の恒常性との関係や、加齢による応答変化を検討する。

・非繊維性マトリクスラット臼歯歯根膜における各種プロテオグライカンの分布を免疫組織学的に検討したところ、咬合機能喪失動物モデルにおいては、歯根膜プロテオグライカンの減少が認められ、これらの非繊維性マトリクスは咬合機能と密接に関連しており、組織の恒常性維持機構や組織のリモデリングに重要な役割を果たしていることが明らかとなった。・微小血管系歯根膜の微小循環系について、ラットの咬合機能低下モデルを用いて咬合力という機械的刺激が及ぼす影響について検討したところ、低機能下では歯根膜幅の狭窄とともに血管径が小さくなり、血管数も減少した。そのメカニズムの一つとして、機械的刺激の低下による血管収縮因子であるエンドセリンの増加、また、拡張因子であるNOの関与が示唆された。・歯根膜機械受容器ラットin vitro下顎-神経標本を用いて電気生理学的手法に従い、歯根膜機械受容器の生理学特性を定量的に解析した結果、咬合機能低下により歯根膜支配神経の応答が低下したものが、機能回復に伴い再賦活されることが明らかとなった。また、成長にともなう変化も明らかにされた。・骨形成活性機械的刺激による骨組織リモデリングのメカニズムを解明するために、細胞レベルでの検討を行った。その結果、培養骨芽細胞様細胞においてshear stressを与えた際にみられる細胞内Caイオン濃度の上昇には、細胞膜の伸展により活性化されるstretch-activated channelが関与し、アクチンフィラメントなどの細胞内骨格も影響を与えていることが明らかにされた。また、咬合機能低下モデルにおける歯根の状態および歯槽骨の再構築の、歯の生理的移動の様相も解明された。同様に機能低下歯の矯正力による移動や、咬合力を排除したモデルの実験的歯の移動により、より弱い力が矯正の歯の移動においては、健全な歯周組織が維持されることが明らかとなった。
TIMP3 による骨破壊性腫瘍での免疫抑制の病態解明と新規免疫治療法の開発

形質細胞の悪性腫瘍である骨髄腫(MM)では、破骨細胞(OC)分化と活性化が亢進し広範な骨破壊病変を来す。その一方で樹状細胞(DC)の数、機能は抑制されている。我々はこれまで単球のTNFαconverting enzyme (TACE)の活性化が単球表面のM-CSFRを切断することにより、単球からのOC分化を抑制することを報告した(Blood, 2009)。この成果を発展させ今回、骨髄間質細胞はTACEの内因性阻害因子であるTIMP3を多量に産生し、TACEによる単球からのDC分化を抑制し、OC分化が誘導されることを明らかとした。この結果MM骨病変部では、骨髄間質細胞からのTIMP3の産生が亢進し単球からの分化がよりOC側に偏っていると考えられ, TIMP3はMM骨病変の治療標的となりうると考えられた。腫瘍進展の抑制と骨病変の進行防止・改善のために、腫瘍抑制効果をもたらすより効果的な破骨細胞抑制法と樹状細胞分化誘導法の開発を目的とし研究を遂行した。そこで、免疫抑制をもたらす原因因子として骨髄間質細胞の産生するTIMP3が破骨細胞と樹状細胞の共通の前駆細胞である単球のMーCSF受容体発現に対する役割に焦点を絞り、以下の点を明らかにした。1)骨髄間質細胞との共培養により破骨細胞と樹状細胞の前駆細胞である単球でのM-CSF受容体発現は促進された。2)一方で、培養上清中の可溶性M-CSF受容体は濃度低下を示した。この結果TACEを介したM-CSF受容体の切断が骨髄間質細胞によって抑制されることが示唆された。3)骨髄間質細胞によるM-CSF受容体の切断抑制が、骨髄間質細胞のTIMP3が原因であるかをsiRNA導入によるTIMP3発現抑制系において検証した。その結果、骨髄間質細胞へのTIMP3 siRNA導入により、骨髄間質細胞による樹状細胞分化抑制や破骨細胞分化誘導は認められなくなった。4)骨髄間質細胞へのTIMP3 siRNA導入により、単球のM-CSF受容体発現上昇も認められなくなり、培養上清中のM-CSF受容体の濃度は低下した。この結果骨髄間質細胞による樹状細胞分化抑制と破骨細胞分化誘導には、骨髄間質細胞のTIMP3による単球のM-CSF受容体切断の制御が関与することが確認された。5)さらに、骨破壊を伴う腫瘍モデルとして、SCID-rab多発性骨髄腫モデルを構築した。今後、効率よく単球のTACE活性を上昇させるreagentの選択を行いその治療効果を検討する予定である。我々はこれまでに破骨細胞・樹状細胞の新たな分化調節機序として、蛋白分解酵素であるTNFαconverting enzyme (TACE)が前駆細胞のM-CSF受容体およびRANKを切断することにより、破骨細胞分化に必須因子のM-CSFおよびRANK ligandのシグナルを遮断し破骨細胞分化を抑制し、樹状細胞分化を誘導することを示した(HiasaM,etal. Blood 114:4517-4526, 2009)。TACEは膜結合型として合成されるTNFα、β-APP、TGFα、L-セレクチン等を細胞外で切断・遊離する多機能酵素であり、炎症性疾患、アルツハイマー病や白血球のローリング・浸潤に関与する可能性が指摘されている。その活性を直接制御する因子については不明のままであったが、近年Tissue inhibitors of matrix metalloproteinase 3(TIMP3)がTACEを効果的に抑制する因子としての機能をもつことが見いだされ脚光をあびている(Black et al, Nat Genet. 36(9):934-5, 2004)。骨破壊性悪性腫瘍での骨髄微小環境は骨髄間質細胞が豊富に存在し、その産生するIL-6やTGF-β等のサイトカインにより腫瘍増殖に適した環境を形成している。我々は予備的検討により骨髄微小環境を構成する細胞群の中で、骨髄間質細胞がTIMP3を発現し多量に産生することを見いだしている。そこで本研究計画ではTACEを中心とした破骨細胞・樹状細胞分化制御機構に対して、骨髄間質細胞が豊富に産生するTIMP3の担う役割を明らかとし、骨破壊性悪性腫瘍の形成する骨髄微小環境や免疫抑制の病態解明を行うことで、これを分子標的とした新規治療の開発・評価を行う。

本研究では、これまでの研究成果を基盤とし腫瘍進展の抑制と骨病変の進行防止・改善のために、腫瘍抑制効果をもたらすより効果的な破骨細胞抑制法と樹状細胞分化誘導法の開発を、免疫抑制をもたらす原因因子として骨髄間質細胞の産生するTIMP3の役割に焦点を絞り、以下の点を明らかにした。1)マウスおよびヒト検体の骨髄間質細胞がもたらす樹状細胞分化抑制効果について検討したところ、マウスおよびヒト骨髄間質細胞との共培養により単球からの樹状細胞分化は有意に抑制された。2)骨髄間質細胞の産生するTIMP3との樹状細胞分化抑制との関連性の検討として、骨髄間質細胞のTIMP3をsiRNAでノックダウンする実験系用いた。単球のTACE活性を蛍光色素を用いたenzyme activity assayにて計測すると骨髄間質細胞と共培養すると単球のTACE活性の低下を認めたが、TIMP3 siRNAを導入した骨髄間質細胞との共培養では単球のTACE活性の低下が認められかった。さらにTIMP3 siRNAを導入した骨髄間質細胞との共培養では単球からの樹状細胞分化抑制は認められなくなった。3)上記と同様の実験をTIMP3 KOマウス間質細胞を用いて行ったところ、同様の結果を得た。4)骨破壊性腫瘍に対するTIMP3抑制の優位性が考えられたため、in vivoでの腫瘍進展に対する治療効果を動物モデルで評価することを目的に多発性骨髄腫のin vivoモデルの構築を行った。治療効果については現在検討中である。骨代謝に関連するデータの総括、臨床的示唆については当大学生体情報内科学松本俊夫教授、安倍正博准教授にご協力頂く。大学院生による各実験の人的支援と研究体制は構成されており、各実験に必要な設備(PCRマシン、プレートリーダー、軟エックス線撮影装置、マイクロCT等)についても学内施設として既に整備されている。学外施設とも必要に応じて研究協力による効率的な支援を受け遂行する。消耗品ついては本研究計画・方法で述べた実験を遂行するにあたり必要不可欠な品目に使用する。これら消耗品の積算金額については、研究期間を通じて使用できる十分な量を確保するための金額を積算した。本研究計画は、各種サイトカインを用い、siRNAの導入試薬や各種抗体も必要である。そのために、研究年を通じ必要な量を確保するため必要な金額を計上した。マウスを用いた実験計画を含むため、研究年を通じた動物の飼育費用、購入費用等が必要である。至適投与量の決定などに実験を4から5回繰り返すことが見込まれる。旅費、印刷費用等に関しては、年間数回の海外発表と国内調査・研究費を考慮し使用する。
薬物療法に依存しない慢性疼痛緩和法の確立

神経障害性疼痛は難治性の慢性疼痛が長期化するとうつ病を併発する可能性が高い。現在、この治療では三環系抗うつ薬を代表とする薬物療法が第一選択となるが、うつ病を併発した神経障害性疼痛の場合においては投与量が多く、服用期間も長期に及ぶため、悪心やふらつき等の副作用の出現するリスクが非常に高くなるという数多くの臨床報告がある。近年、臨床において難治性の慢性疼痛緩和にはレーザー装置を使用した低反応レベルレーザー治療(Low reactive Level Laser Treatment;LLLT)が有効であると言われている。しかし、LLLTによる疼痛緩和効果に関する基礎的研究はほとんどない。本研究の目的はLLLTによる疼痛緩和効果の神経化学的機序を明らかにし、簡便で副作用のない治療法を確立することである。平成30年度は神経損傷後に即座に修復機構として働くマイクログリアやアストロサイトなどのグリア細胞について免疫組織学的検討を行った。今回使用したモデルラットに神経損傷させた翌日から1週間連続でLLLTを照射を行い、そのLLLT照射群とLLLT非照射群と比較検討を行ったところ、マイクログリア陽性タンパクであるIba1とアストロサイト陽性タンパクであるGFAPの発現がLLLT照射群において増加していることが認められた。また、経時的な免疫染色の組織像の定量により、このマイクログリアやアストロサイトが徐々に減少していることが認められた。平成29年度に行った行動学的検討により非LLLT照射群に比べてLLLT照射群の方が疼痛閾値の上昇をみとめることと併せて考察し、論文の作成を行っていく予定である。平成30年度は免疫組織学的検討が当初の計画より順調に進み、論文作成のための免疫組織学的検討のデータ解析と統計処理まで着手することができた。当初予定していた三叉神経脊髄路核でのグリア細胞の動態について免疫組織学的検討はほぼ終了し順調に進んでいるが、神経障害性疼痛に関与している炎症性サイトカイン、抗炎症性サイトカインに関しては現在免疫染色データ収集中である。今後は論文作成のためのデータ解析とサイトカインの免疫染色を同時にすすめ、論文作成を行っていく予定である。平成29年度は下歯槽神経障害モデルラットを用いて行動学的検討を行ったところ、LLLT照射群はLLLT非照射群と比較して有意に疼痛閾値の上昇を認めた。さらにまた神経損傷後に即座に修復機構として働くマイクログリアやアストロサイトなどのグリア細胞について免疫組織学的検討を行った。今回使用したモデルラットに神経損傷させた翌日から1週間連続でLLLTを照射を行い、そのLLLT群とLLLT非照射群と比較検討を行ったところ、マイクログリア陽性たんぱくであるIba1とアストロサイト陽性たんぱくであるGFAPの発現がLLLT照射群において増加していることが認められた。この発現増加が、グリア細胞数の増加によるものか、またはグリア細胞の細胞体の肥大によるものであるのかは現在定量を行っているところである。平成29年度は度は神経障害性疼痛モデルラットの行動学的検討を行う予定であったが、当初の計画より実験が順調に進んだことにより、今年度予定していた免疫組織学的検討に着手することができた。

平成30年度は免疫組織学的検討が当初の計画より順調に進み、論文作成のための免疫組織学的検討のデータ解析と統計処理まで着手することができた。当初予定していた研究計画はおおむね順調に進展しているが、今後は免疫組織学的検討において、神経障害性疼痛発症の抑制に関与しているとみられる抗炎症性サイトカインであるIL-4やIL-10や神経障害性疼痛の発症に関与しているとされる炎症性サイトカインであるIL-1βやIL-18の発現動態を観察していく予定である。また得られたデータを分析し論文作成の準備を行っていく予定である。当初予定していた三叉神経脊髄路核でのグリア細胞の動態について免疫組織学的検討はほぼ終了し順調に進んでいるが、神経障害性疼痛に関与している炎症性サイトカイン、抗炎症性サイトカインに関しては現在免疫染色データ収集中である。今後は論文作成のためのデータ解析とサイトカインの免疫染色を同時にすすめ、論文作成を行っていく予定である。平成29年度は行動学的検討とグリア細胞の発現動態を免疫組織学的検討を行った。今後抗炎症性サイトカイン、炎症性サイトカインの発現動態を免疫組織学的に確認していく予定である。平成30年度は神経障害性疼痛に対するLLLT照射による三叉神経脊髄路核におけるグリア細胞の動態を免疫組織学的に検討した。今後はこの結果のデータ解析を行い論文作成を行うにあたり、論文校正や投稿などに費用が必要と考える。
「多国籍企業デ-タベ-ス」のための各種統計書の入力システムの開発研究

本年度は最終年度であり、特に図形ファイリングシステム及び図形通信システムを開発し、完成することにある。図形ファイリングシステムは大容量の補助記憶を必要とし、企業系譜図及び地図情報に関するメタデ-タのデ-タベ-スをUNIFY上に構築し、図形ファイルを管理することとした。図形通信システムは、図形ファイルシステムから抽出された図形情報を、イ-サネットによりファイル転送を行うシステムであり、そのプログラムを作成し、実験テストを行った。両システムを独立して作動させることはできた。しかし、両システムを連動させて図形の検索から通信までを自動化させる統合システムの実験には、更に時間が必要である。現在、「多国籍企業データベース・システム」では、各種のデータを手作業により入力している。この手作業による入力では、入力できるデータ量に限度があり、各方面からの要求に答えられないのが現状であった。しかし本年度DISCOVER 7320を導入し、各種入力データを直接入力することが可能になった。このため多国籍企業データベースに追加すべきデータの種類および書式を調査し検討した。この結果各種データの読み取りについては、満足のいく結果を得ることができた。さらにこの読み取りデータの信頼性を完全なものとするために、各種統計資料が持っているサブトータル等の情報を利用してデータを検証する方法を考えた。本年度はこのためこの検証プログラムのためのデータを各種統計資料から調査収集した。この実績を用いて、次年度は検証プログラムを作成する予定である。統計書より手作業でデ-タを入力するのではなく、必要なペ-ジのコピ-をとり、適切な大きさに拡大または縮小し、そのままスキャナ-に読み込ませて機械入力させる。これが、DISCOVER 7320による機械入力である。現在のところ、この方法で入力できる文字は、英字、数字、記号、特殊文字に限られ、漢字及び仮名などの日本文字は対象外である。統計書に特有な記号、誤読しがちな文字などは、ユ-ザ-定義の辞書を整備することによって、機械読みとりの精度を高めることができる。昨年度は、種々の実験を行い、主として、ユ-ザ-定義レキシコン機能の充実をはかった。本年度は、このユ-ザ-定義レキシコン機能を用いて、種々の統計書の読みとりシステムの開発を行った。特に、有価証券報告書、SNA年報の各表の自動読みとりシステムの開発を行った。単にデ-タを機械読みとりするのではなく、正しく読みとられているか否かを検証するチェックサムを、縦計、横計など統計表り書式に則して自動的に行うようにした。また、SNA統計書のデ-タの読みとりには、正常コピ-によるサイズでは、文字のパタ-ン判別に予想外の時間がかかり、しかも誤読も多いことがわかり、適切な拡大コピ-にして入力する方が効率的であることがわかった。しかし、誤読の度合いはあまり改善されなかった。これは、拡大前の文字のサイズが小さすぎて判別し難い(0と6と9、5とS、3と8、2と?など)ことに起因している。
ＨＤＬ形成に関与するＡＢＣタンパク質の機能解析

コレステロールは生体膜の構成成分であると共に、各種ホルモンの前駆体となる重要な化合物である。しかし過剰なコレステロールは細胞にとって有害であることから、生体のコレステロール恒常性は厳密に保たれている。本研究では善玉コレステロール形成に関与するABCG1について大量発現・精製系の開発を行い、ABCG1が能動的な脂質輸送体であることを明らかにした。また、基質特異性の検討を行い、ABCG1がコレステロールとスフィンゴミエリンを直接認識し輸送していることを突き止めた。さらに、ABCG1と高い相同性を持つABCG4がコレステロール選択的な輸送体であることを明らかにした。研究2年度目には解析の対象をヒトABCG1からABCG4へと拡大し、基質特異性を明らかにする研究を行った。本年度の研究成果は国際学会で発表し高い評価を得た。ABCタンパク質はATP依存的な能動輸送を行う輸送体で、生理的に重要なさまざまな反応を仲介する。近年ABCタンパク質による脂質恒常性の維持が関心を集めており、中でもHDL形成における中心的役割が脚光を浴びている。研究初年度にはこのHDL形成にかかわるABCG1がコレステロールとリン脂質を選択的に輸送することを明らかにしたが、研究2年度目においてはABCG1ときわめて類似性の高いABCG4について解析を行った。この結果、ABCG4はABCG1とは異なり、コレステロールを選択的に輸送するトランスポーターであることが明らかとなった。本研究はABCG4が活性なトランスポーターであることを世界に先駆けて明らかにしたものであり、基質特異性にも踏み込んだ議論をしていることから国際学会にて発表を行い、高い評価を得た。研究初年度に当たる平成24年度においてはコレステロール恒常性に関与するヒトABCG1を中心に研究を遂行し基質特異性を明らかにするなど重要な成果を得た。ABCタンパク質ファミリーは生物界で最も大きな遺伝子ファミリーの一つで、その多くがATP結合/加水分解のエネルギーを利用した能動的な輸送体として機能する。ABCG1は脂質恒常性、特に善玉コレステロールと称される高密度リポタンパク質(HDL)形成において重要な役割を果たすと考えられていたが生化学的な研究はなされておらず、基質の選択性など機能の根幹は不明であった。まずヒト培養細胞発現系を用いてヒトABCG1を大量に発現・精製する実験系の構築を達成した。次いで精製標品を用いて生化学的解析を行った。精製ヒトABCG1はATP加水分解活性を有し、その値は報告されている他の輸送体型ABCタンパク質に匹敵するものであったことからABCG1が活性な輸送体として機能する事が確認できた。次いで輸送基質の検討を行ったところ、ヒトABCG1はコレステロール、スフィンゴミエリン、フォスファチジルコリンを輸送基質として認識する事が明らかとなった。スフィンゴミエリンとフォスファチジルコリンは親水基としてフォスフォコリン基を共通して持つことからABCG1はリン脂質の親水性部分を認識している事が示唆された。またスフィンゴミエリンをフォスファチジルコリンよりも強く認識するという特徴から脂肪酸の結合部位にある水酸基が認識を補助する事も明らかとなった。本研究はヒトABCG1が活性な輸送体であり、輸送基質の選択性を世界で初めて明らかにしたものであり、今後の高脂血症研究において重要な位置を占める。本成果を研究初年度に得られた事は当初の予定をうわまわる進捗状況である。今後においては同じく脂質輸送に関連すると考えられるヒトABCタンパク質の生化学的解析を行う。研究初年度ではヒトABCG1の精製および生化学的解析系を確立し、重要な知見を得た。本研究の成果は初年度終盤に論文としてJournal of Lipid Research誌に報告した(Hirayama et al. J Lipid Res. 2013Feb;54(2):496-502.)。研究開始当初はABCG1の実験系の整備、データーの取得に1年以上はかかると予想されていたが、研究初年度にまたまった結果を得る事が出来、論文として発表できたのは予想をはるかに上回る進捗状況である。研究2年度目においては、初年度に確立したヒトABCG1の生化学的解析手法をHDL形成に関与する他のABCタンパク質に適用し、HDL形成におけるABCタンパク質の役割解明を行う。また、ABCG1の基質特異性を更に検討し、より詳細な基質認識、輸送機構を明らかにする。その他、生理的に重要でありながら基質が特定されていないABCタンパク質について、精製標品を用いた解析を実施し輸送気質および生理機能を明らかにする。本研究費は実験に必要な消耗品、成果発表のための学会参加旅費、論文の英文校正等の経費として用いる。本研究ではタンパク質の大量発現系としてヒト培養細胞発現系を用いるため、高額の培地が継続的に必要である。また精製においては高価な界面活性剤やカラムを使用することから経費の7割程度を消耗品費として使用予定である。
オイルボディが担う菌感染防御機構の解明

植物は脂質を貯蔵するために,オイルボディと呼ばれるオルガネラを発達させる.オイルボディは種子や葉など,様々な器官の細胞に存在する.しかしながら,葉のオイルボディに生理学的役割は分かっていなかった.本研究では,葉のオイルボディ膜タンパク質・カレオシン3 (CLO3)に着目した研究を行う,私は新規の葉のオイルボディ局在タンパク質として, α-ジオキシゲナーゼ1(α-DOX1)を発見した.α-DOXlとCLO3は両方酵素活性を持ち,協調して2-hydroxy-octadecatrienoic acid (2-HOT)というオキシリピンの合成に関わっていた.2-HOTは炭疽病菌に対して抗菌活性を示し,また炭疽病菌感染により蓄積が誘導されることから,シロイヌナズナの新規ファイトアレキシンであることが明らかになった,葉のオイルボディは酵素と基質をともに近くに置くことで,ファイトアレキシンを効率よく合成していることが示唆された.この研究を論文として発表した.葉のオイルボディの形成機構は明らかになっていない.そこで,葉のオイルボディマーカーとして, CLO3-GFPを用い, CLO3-GFP蛍光が異常に蓄積する変異体(leaf oil-body-protein accumulating, loa)をスクリーニングした.現在までに3系統が単離されている.そのうちloa1では,野生型ではオイルボディが少ない若い葉で,オイルボディが大量に蓄積していた.リピドーム解析の結果, loa1ではステロールエステルが異常蓄積していた.このことがら, LOA1はステロールの合成を負に制御する因子であることが示唆された.この研究から,新たなステロール制御因子が明らかになった.葉のオイルボディがファイトアレキシン合成に関わるという新たな知見を発見した.初めて葉のオイルボディの機能を明らかにすることができた.この成果は論文として発表した.また,オイルボディを異常蓄積するloa1変異体の機能解析についても,大きく進展した.この結果を学会にて報告した.オイルボディを異常蓄積するloa1変異体に関して,論文を投稿する予定である.また,他のloa変異体について,原因遺伝子の同定を目指す予定である.原因遺伝子がわかることにより,新たな脂質関連因子の同定にっながると期待している.オイルボディは多くの植物に存在し,脂質を蓄積するための重要なオルガネラである.オイルボディは種子や葉など様々な器官に存在している.しかし葉のオイルボディに関する知見は少ない.私は葉のオイルボディと病原糸状菌応答に注目した研究を行っている.カレオシンはオイルボディ膜タンパク質ファミリーのひとつである.私はカレオシン3(CLO3)とGFPの融合タンパク質を用い,葉のオイルボディのプロテオミクス解析を行い,新規オイルボディタンパク質を同定した.このタンパク質とカレオシンのリコンビナントタンパク質による酵素反応により,α-リノレン酸から酸化脂肪酸(オキシリピン)が合成されることを見出した。このオキシリピンは炭疽病菌に対する抗菌活性を持つことを見出した.このことから,オイルボディは基質(脂肪酸)と酵素を集積し,効率よく抗菌物質を産生すると考えている.CLO3とオイルボディは様々なストレスで誘導されてくることが知られている.しかしその誘導機構はほとんど明らかでない.私はCLO3とGFPの融合遺伝子をCLO3プロモーター下で制御する形質転換シロイヌナズナをマーカーラインとし,葉型オイルボディ形成に異常を示す変異体をスクリーニングした.この変異体をLeafoil-body-protein accumulating(loa)変異体とし,現在までに5ラインを単離した.オイルボディは多くの植物に存在し,脂質を蓄積するための重要なオルガネラである.オイルボディは種子や葉など様々な器官に存在している.しかし葉のオイルボディに関する知見は少ない.私は葉のオイルボディと病原糸状菌応答に注目した研究を行っている.カレオシンはオイルボディ膜タンパク質ファミリーのひとつである.私はカレオシン3(CLO3)とGFPの融合タンパク質を用い,葉のオイルボディのプロテオミクス解析を行い,新規オイルボディタンパク質を同定した.このタンパク質とカレオシンのリコンビナントタンパク質による酵素反応により,α-リノレン酸から酸化脂肪酸(オキシリピン)が合成されることを見出した.このオキシリピンは炭疽病菌に対する抗菌活性を持つことを見出した.また,炭疽病菌の感染により,このオキシリピンが増加することから,このオキシリピンは,シロイヌナズナのファイトアレキシンであることが明らかになった.CLO3とオイルボディは様々なストレスで誘導されてくることが知られている.しかしその誘導機構はほとんど明らかでない.私はCLO3とGFPの融合遺伝子をCLO3プロモーター下で制御する形質転換シロイヌナズナをマーカーラインとし,葉型オイルボディ形成に異常を示す変異体をスクリーニングした.この変異体をleaf oi1-body-protein accumulating (loa)変異体とし,現在までに5ラインを単離した.そのうち,3ラインについては,変異部位の特定まで終了している.また,そのうちのさらに2ラインについては,原因遺伝子の特定まで終了している.loa1変異体では葉にオイルボディが異常蓄積していた.植物は脂質を貯蔵するために,オイルボディと呼ばれるオルガネラを発達させる.オイルボディは種子や葉など,様々な器官の細胞に存在する.しかしながら,葉のオイルボディに生理学的役割は分かっていなかった.本研究では,葉のオイルボディ膜タンパク質・カレオシン3 (CLO3)に着目した研究を行う,私は新規の葉のオイルボディ局在タンパク質として, α-ジオキシゲナーゼ1(α-DOX1)を発見した.