hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
市町村合併と広域行政化に関する時間的・空間的視点からの比較研究

さらに、『年報・中部の経済と社会』(愛知大学中部地方産業研究所)に「特集・『平成の大合併』と残された諸課題」として、公表した本研究の目的は、「平成の大合併」を中心に、わが国の市町村合併を歴史軸から時間的に、また地域軸から空間的に比較研究することによって、道州制を含む、今後のあるべき国一地方の政府間関係のあり方について追究することにある。本年度の研究実績は、以下の通りである。(1)平成の大合併の特筆すべき特徴の1つである、合併した市域内での都市内分権制度と地域自治制度及び住民自治との関係について、合併タイプの異なる宮崎県宮崎市、岐阜県恵那市、愛知県豊田市、静岡県浜松市について、行政の合併担当部局より聞取り調査と資料収集を行った。(2)上記の調査の際行政当局や機関だけでなく、市民組織や自治会,NPOなど、地域の住民自治を底辺で支える組織や個人からの情報や資料の収集をも特に重視し、客観的かつ多面的な検証となるよう配慮した。(3)また、合併市町村の周辺に位置しながら、現実には合併を選択しなかった市町村の非合併要因、合併しない選択に関する行政と住民との対応の差、非合併後の域内自治と自治組織の再構築の実態についても、比較分析の視点から、調査研究の範囲を拡充した。(4)それぞれの県・市町村・団体・個人等から収集した資料、情報についてデータ・ベース化し、今後の分析に役立てるとともに、HPで公開する準備をしている。(5)以上の成果の一部は、日本地方自治学会などの学会報告、愛知県内の合併志向の市町村での公開講演会のほか、愛知大学中部地方産業研究所のワーキングペーパーシリーズとして公表している。本研究の目的は、「平成の大合併」を中心として我が国の市町村合併を歴史軸から時間的に、また地域軸から空間的に比較研究することによって、今後のあるべき国-地方の政府間関係の姿と基礎自治体内部の地域自治組織のあり方を究明することである。本年度の研究実績は下記のとおりである。(1)「平成大合併」の際だった特徴の1つである、合併市域内での都市内分権と地域自治組織及び住民自治組織との複合的関係について、合併タイプの異なる三重県・四日市市、岐阜県・高山市、飛騨市、白川村、新潟県長岡市について、行政の合併関係部局から聞き取り調査及び資料収集を行った。(2)上記調査と並行して、住民自治組織や自治会・町内会、NPOなどのコミュニティ組織からの情報及び資料収集を行い、多角的な検証に配慮した。(3)合併タイプの差異の実態とその発生の根拠、また、周辺の多数の市町村が合併する中で非合併を選択した市町村の実態とその根拠について、たんに行財政的な要因にとどまらず、地域自治組織と住民自治のあり方にまで遡って解明した。(4)以上の成果の一部は、本科学研究費補助金における研究成果報告書として、合計8件の論文及び共著としてまとめ、発表した。なお、未発表の調査研究については、引き続きその成果を公表するとともに、これまでの成果をまとめ、著書として刊行する予定である。
フェアネス理論に基づく高度中継ルータによるネットワーク資源制御

ネットワーク制御およびネットワークフェアネスの設計について,一般的なアプローチの観点から,ネットワークモデルに関する検討,インテリジェントルータの概念設計およびプロトコルの考察,インテリジェントルータの制御に関する検討,ネットワークフェアネスの数学的考察を行った.また,メタヒューリスティクス手法の開発について,ネットワークフェアネス関係に基づくメタヒューリスティクス手法の開発,進化的計算手法における考察,計算論的効率の検討を行った.さらに,ワイヤレスチャンネルアロケーション問題についてオープンアクセス可能なベンチマークテストによって,提案手法の有効性を検証した.これにより,パラボリックフェアネスのためのメタヒューリスティクスアルゴリズムについて,ネットワークシミュレータを用いた実験環境において実験的なプロトタイプを設計できた.ネットワーク制御およびネットワークフェアネスの設計について,一般的なアプローチの観点から,ネットワークモデルに関する検討,インテリジェントルータの概念設計およびプロトコルの考察,インテリジェントルータの制御に関する検討,ネットワークフェアネスの数学的考察を行った.また,メタヒューリスティクス手法の開発について,ネットワークフェアネス関係に基づくメタヒューリスティクス手法の開発,進化的計算手法における考察,計算論的効率の検討を行った.さらに,ワイヤレスチャンネルアロケーション問題についてオープンアクセス可能なベンチマークテストによって,提案手法の有効性を検証した.これにより,パラボリックフェアネスのためのメタヒューリスティクスアルゴリズムについて,ネットワークシミュレータを用いた実験環境において実験的なプロトタイプを設計できた.ネットワーク制御およびネットワークフェアネスの設計について,一般的なアプローチの観点から,ネットワークモデルに関する検討,インテリジェントルータの概念設計およびプロトコルの考察,インテリジェントルータの制御に関する検討,ネットワークフェアネスの数学的考察を行った.また,メタヒューリスティクス手法の開発について,ネットワークフェアネス関係に基づくメタヒューリスティクス手法の開発,進化的計算手法における考察,計算論的効率の検討を行った.さらに,ワイヤレスチャンネルアロケーション問題についてオープンアクセス可能なベンチマークテストによって,提案手法の有効性を検証した.これにより,パラボリックフェアネスのためのメタヒューリスティクスアルゴリズムについて,ネットワークシミュレータを用いた実験環境において実験的なプロトタイプを設計できた.
BAP1遺伝子変異を基盤とした悪性中皮腫の発生機序および病態の解析

悪性中皮腫には、BAP1変異やCDKN2A欠失などの遺伝子異常がみられ、BAP1変異は肉腫型中皮腫よりも上皮型中皮腫に高頻度に検出される。悪性中皮腫におけるBAP1機能を明らかにするために、野生型BAP1を持つ上皮型中皮腫細胞株(MM26)にpLenti-U6-BAP1 sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puroを導入し、BAP1-KO上皮型中皮腫細胞株を作製した。また、野生型BAP1を持つ肉腫型中皮腫細胞株にpLenti-U6-BAP1 sgRNA-SFFV-Cas9-2A-Puroを導入し、BAP1-KO肉腫型中皮腫細胞株を作製した。これらのBAP1-KO中皮腫細胞株は、親株と比較して、通常の培養条件では増殖能に明らかな差を認めなかった。現在、遊走、浸潤、薬剤耐性などの生物学的特性について解析を進めている。不死化中皮細胞(Met5A)を親株として作製したBAP1-KO中皮細胞と対照細胞(コントロール)との遺伝子発現プロファイルを比較すると、BAP1-KO中皮細胞において発現が増強する遺伝子あるいは発現が低下する遺伝子が検出された。発現が増強する分子には細胞遊走因子や細胞接着因子などが含まれ、発現が低下する分子には転写因子やホメオボックス蛋白質などが含まれていた。今後、これらの分子について解析を進める。CRISPR-Cas9システムを用いて、野生型BAP1を持つ上皮型中皮腫細胞株(MM26)を親細胞として、BAP1-KO上皮型中皮腫細胞株(6クローン)の作製に成功した。また、野生型BAP1を持つ肉腫型中皮腫細胞株(MM46)を親細胞として、BAP1-KO肉腫型中皮腫細胞株(2クローン)の作製に成功した。これらのBAP1-KO中皮腫細胞株と親細胞との生物学的特性を比較し、悪性中皮腫におけるBAP1機能の解析を進めている。昨年度に作製したBAP1-KO中皮細胞を用いて、BAP1欠失により発現変動する遺伝子を検出した。CDKN2A-KO中皮細胞、BAP1-KO中皮細胞、CDKN2A & BAP1-KO中皮細胞の生物学的特性の解析を続け、中皮細胞の腫瘍化におけるCDKN2AおよびBAP1の役割を明らかにする。BAP1-KO上皮型中皮腫細胞株およびBAP1-KO肉腫型中皮腫細胞株の生物学的特性の解析を進め、上皮型中皮腫および肉腫型中皮腫におけるBAP1機能を明らかにする。必要に応じて、移植モデルを使用してBAP1の生物学的作用を解析する。また、BAP1欠失により発現変動する分子について解析を進める。また、BAP1免疫染色を用いて、臨床検体におけるBAP1発現を調べたところ、BAP1をヘテロに発現する中皮腫が存在することを確認した。腫瘍組織では、部位によってBAP1の性状が異なる可能性がある。CRISPR-Cas9システムを用いて、不死化中皮細胞(Met5A)を親細胞として、CDKN2A-KO中皮細胞およびBAP1-KO中皮細胞の作製に成功し、これらのKO中皮細胞の生物学的特性について解析を進めている。また、CDKN2A & BAP1-KO中皮細胞の作製にも成功し、CDKN2A欠失とBAP欠失による相加的あるいは相乗的効果の可能性についても解析を進めている。BAP1の性状が異なると考えられる腫瘍細胞から混成される中皮腫が存在しうることを確認した。

これらのBAP1-KO中皮腫細胞株と親細胞との生物学的特性を比較し、悪性中皮腫におけるBAP1機能の解析を進めている。昨年度に作製したBAP1-KO中皮細胞を用いて、BAP1欠失により発現変動する遺伝子を検出した。CDKN2A-KO中皮細胞、BAP1-KO中皮細胞、CDKN2A & BAP1-KO中皮細胞の生物学的特性の解析を続け、中皮細胞の腫瘍化におけるCDKN2AおよびBAP1の役割を明らかにする。野生型BAP1中皮腫細胞株からBAP1-KO中皮腫細胞株を樹立し、生物学的特性を比較して、中皮腫におけるBAP1の役割を明らかにする。必要に応じて、移植モデルを使用してBAP1の生物学的作用を解析する。BAP1-KO上皮型中皮腫細胞株およびBAP1-KO肉腫型中皮腫細胞株の生物学的特性の解析を進め、上皮型中皮腫および肉腫型中皮腫におけるBAP1機能を明らかにする。また、BAP1欠失により発現変動する分子について解析を進める。計画していた物品(消耗品)を変更したこと、物品の価格が変更したこと等により、総額6,018円の次年度使用額が生じた。次年度使用額については研究を円滑に進めるための消耗品の購入に充てる。計画していた物品(消耗品)を変更したこと、物品の価格が変更したこと等により、総額63,173円の次年度使用額が生じた。
動脈硬化症における血管壁物性の超音波無侵襲計測

1.血管壁厚の超音波計測に関する検討欠陥壁の物性的硬さの評価に必要な欠陥壁の厚み情報を,血管壁エコー波形の信号処理により高精度に産出する手法を検討した.手法として,ケプストラム法,ケプストラム平均化法,スペクトルディップ法などを提案し,これらの算出精度を計算機シミュレーションとin vitro実験で比較検討し,スペクトルディップ法が簡便性と精度に最も優れ,周波数5MHzまで,最小検出厚み0.3mm,厚み測定精度3μmを達成できることを示した.2.血管内留置型超音波トランスデューサの開発血管内から大動脈各部位の局所的硬化度を計測できる血管内留置型超音波トランスデューサを開発した.超音波振動仔,超弾性合金腺,血左側定用カテーテルから構成されており,硬化度測定に必要な血管径,拍動性径変化,壁厚,血左波形が同計測可能である.動物実験を行い,胸部大動脈から腹部音動脈末梢側に至り血管弾性率は35倍にも著増し,その大半が血管壁の材質的硬さの増加に起因していることを明らかにできた.3.血管弾性率の臨床計測同一年齢分布(4060歳)の健常者707月,冠動脈疾患患者317月,高血圧症患者367月を対象に,腹部大動脈の圧力弾性率を無侵襲法で計測した.健常者に比して圧力弾性率は冠動脈疾患群で, 1.8倍,高血圧症群で1.9倍と,明らかな有意差が認められ,本計測法の有用性を示し得た.4.今後の研究の転回侵襲的ではあるが精密検診用のカテーテル検査法のひとつとして血管内超音波トランスデューサの臨床的実用化を図ること,および加齢に伴う動脈硬化症が壁厚の増加と壁の物性的硬化のいずれに起因するかなど動脈硬化進行期の病態を無侵襲法にて把握すること.1.血管壁厚の超音波計測に関する検討欠陥壁の物性的硬さの評価に必要な欠陥壁の厚み情報を,血管壁エコー波形の信号処理により高精度に産出する手法を検討した.手法として,ケプストラム法,ケプストラム平均化法,スペクトルディップ法などを提案し,これらの算出精度を計算機シミュレーションとin vitro実験で比較検討し,スペクトルディップ法が簡便性と精度に最も優れ,周波数5MHzまで,最小検出厚み0.3mm,厚み測定精度3μmを達成できることを示した.2.血管内留置型超音波トランスデューサの開発血管内から大動脈各部位の局所的硬化度を計測できる血管内留置型超音波トランスデューサを開発した.超音波振動仔,超弾性合金腺,血左側定用カテーテルから構成されており,硬化度測定に必要な血管径,拍動性径変化,壁厚,血左波形が同計測可能である.動物実験を行い,胸部大動脈から腹部音動脈末梢側に至り血管弾性率は35倍にも著増し,その大半が血管壁の材質的硬さの増加に起因していることを明らかにできた.3.血管弾性率の臨床計測同一年齢分布(4060歳)の健常者707月,冠動脈疾患患者317月,高血圧症患者367月を対象に,腹部大動脈の圧力弾性率を無侵襲法で計測した.健常者に比して圧力弾性率は冠動脈疾患群で, 1.8倍,高血圧症群で1.9倍と,明らかな有意差が認められ,本計測法の有用性を示し得た.4.今後の研究の転回侵襲的ではあるが精密検診用のカテーテル検査法のひとつとして血管内超音波トランスデューサの臨床的実用化を図ること,および加齢に伴う動脈硬化症が壁厚の増加と壁の物性的硬化のいずれに起因するかなど動脈硬化進行期の病態を無侵襲法にて把握すること.本研究は血管壁の硬化度を無侵襲に診断しうる超音波計測法の開発をねらいとするもので、本年度は以下の成果を得た。1.血管壁厚の超音波計測に関する基礎的検討血管壁の材質的硬さを知るには、その厚みの情報が必要である。そこで、血管壁の超音波エコー波形をケプストラム法で処理し、血管壁の厚みを高感度に計測する手法に関し検討した。計算機シミュレーションとin vitro実験から超音波周波数が5MHZでは、計測可能な最小厚みは0.20.3mm,測定精度は0.02mmであり、ヒト主幹動脈の計測に十分な精度を確保できる見通しを得た。なお、ケプストラム算出には短区間データの移動平均法を用い測定精度の向上をはかった。2.血管内留置型超音波トランスデューサの開発と血管内からの硬化度計測小型の血管内留置型超音波トランスデューサを試作し、イヌ大動脈における局所的な圧力弾性率,壁厚,およびヤング率を測定部位を変えながら計測した。圧力弾性率は胸部大動脈から末梢に至るにしたがい34倍に増加し、これまでに我々がヒト大動脈で得た無侵襲計測値とよい対応が見られた。また、壁厚値からヤング率を算出し、圧力弾性率増加に対する両者の寄与率を評価したところ、その大半はヤング率すなわち壁の材質的硬さに起因していることが明らかとなった。3.無侵襲法と血管内法との同時計測無侵襲法と血管内法の同時計測をイヌ大動脈にて行い、体表から無侵襲に計測する際の壁エコー同定法の基礎資料を得るとともに、無侵襲法で得られる計測値の妥当性を検証した。次年度は以上の成果を基に無侵襲法にて、加令による動脈硬化を対象に研究を進める。
4〜5世紀百済の対外関係研究―対中国・対倭交渉を中心として―

本年度は、研究分担者が日本で本格的な調査を進めるために、必要な設備や書籍などを買いそろえつつ、両研究者が研究課題にそって資料調査を開始した。研究代表者の吉井は、長野県・東京都・千葉県で百済系文物の調査をおこなった。特に長野県では、浅川端遺跡出土の馬形帯鉤や、八丁鎧塚2号墳出土獣面帯金具などを実見し、製作技術の面から韓国での類例との比較検討を進めた。また、こうした遺物が長野盆地にもたらされた歴史的背景について、地元研究者と意見交換をおこなった。研究分担者のSeong Jeong Yongは、福岡県を中心とする北九州と愛媛県、および中国で現地調査をおこなった。北九州では、古代交通路との関係に留意しつつ、百済の影響下、この地域に集中的に築造された古代山城を踏査した。また、その周辺に分布する古墳出土土器や馬具などの百済系文物の分布状況も調査した。愛媛県では、大分県と海を間において近接する宇和町から出土した鳥足文土器を実見し、この地域と韓半島西南部地域との関係を確認した。中国では、南京市博物館・南京博物院・南京大学校博物館・尚州博物館などを訪問し、陶磁器と金工品を中心として、東晋・南朝の墳墓から出土した副葬品を調査した。その結果、百済地域から出土した中国文物の編年を行うために役立つ資料を見いだすことができた。また、百済地域に移入された文物が、その源流となる地域でどのような脈絡で用いられたのかを確認した。次に、南京の鐘山遺跡・上下定林寺・西霞寺千仏洞などの遺跡を踏査して、それらの地理的立地・出土遺物・南朝仏像様式の変化様相を調査し、南朝の仏教や精神世界が百済にどのような影響をあたえたのかを検討した。さらに、南朝文化研究を専攻する南京大学・賀雲〓羽先生、南京師範大学・周裕興先生らと意見交換を行った。
GeVブレーザーの放射機構

ブレーザーは活動的銀河中心核の一種であり、短時間(数時間から数日程度)でX線やガンマ線の強度が大きく変動することや可視光スペクトルにラインが見られないことで知られている。この天体の中にはガンマ線のピークがGeV領域にあるものが知られている(例えば3C279など)。このガンマ線放射機構として考えられているのは相対論的な速度で観測者の方向に運動するジェットからの放射である。ジェット内には相対論的な非熱的分布にしたがう電子(陽電子)が存在しており、ジェットの外部からくる低エネルギー光子を逆コンプトン散乱によってガンマ線に変えると考えられている。この研究では、ジェット内での逆コンプトン散乱がKlein-Nishina領域で生じた場合に放射スペクトルと電子のエネルギースペクトルがどのようになるかを定量的に調べた。その結果、Klein-Nishina領域で主な散乱がおこるため、トムソン領域での散乱に比べて散乱に寄与する電子の割合は減少し、散乱に寄与しなかった電子が電子のエネルギースペクトル上で高エネルギー側のピークとして生じることがわかった。また散乱量が減少するにもかかわらず、GeV領域に強い放射が生じることを見つけた。GeVブレーザーでは外部からくる低エネルギー光子が紫外線領域にあると考えられるが、相対論的ジェットの電子にとってはドップラー効果によって更に高エネルギーを持つように見える。そのため逆コンプトン散乱がKlein-Nishina領域で起こりやすくなるので、ジェットからの放射を観測することによってジェット内の電子スペクトルを推定する場合、この研究で得られた効果を考慮する必要があることがわかった。ブレーザーは電波からTeVガンマ線までの広い領域にわたって放射を出していることが知られている活動銀河中心核の一種である。特にガンマ線領域での放射がIuminosityの大部分を占めていることから、その放射機構が注目されている。ブレーザーは他の活動銀河中心核と同じく、放射のエネルギー源が大質量ブラックホールと関連していると考えられている。またX線からガンマ線にわたる高エネルギーの放射は相対論的速度で運動するジェットからの放射と考えられている。本研究のテーマであるGeVブレーザーとは、ガンマ線放射のピークがGeV領域にある天体である。この天体はガンマ線をジェットの外部からくる低エネルギー光子の逆コンプトン散乱で放射していると考えられている。この研究では多波長にわたる観測データが豊富な天体3C 279についてモデルをつくり、ジェットの放射領域にあるプラズマの物理状態を調べた。その結果、3C 279では、ジェットのバルクなローレンツ因子が25、磁場の強さが0.3G程度であることがわかった。また、逆コンプトン散乱ではクライン-仁科領域での散乱が重要な役割を果たし、電子のスペクトルに大きな影響を与えていることがわかった。すなわち、電子のスペクトルは従来のモデル計算でよく仮定されるようなもbroken power law(トムソン領域で散乱がおこった場合に高エネルギー側の電子スペクトルが冷却のため折れ曲がる)ではなく、高エネルギー側のスペクトルがhardになることがわかった。また、ジェットの構成要素が電子・陽電子対プラズマなのか、あるいは電子・陽子プラズマなのかということについても考察を行った。その結果、冷たい電子の密度がある程度(非熱的電子の100倍程度)までなら、ジェットが電子・陽電子対で構成されているとしても観測と矛盾しないことがわかった。
健康食品・健康法はなぜ効くのか-健康に関する民間理論の形成と変遷

1.目的:近年の健康ブームとともに、「健康」の維持増進を目的としたいわゆる「健康食品」市場の伸びが著しい。本研究では、以下の方法をもちいて現代人の健康観を探るため「健康食品」の広告の分析をおこなった。2.対象と方法:「健康食品」を製造する524社を対象に調査協力依頼を送付し、うち107社から166の製品について資料を得ることができた。資料から、製品を主成分、製法から分類し、それぞれでうたわれている効能や広告の表現・キャッチフレーズ・キイワードを分析した。以下、結果と考察を簡略に記す。3.結果:1)「健康食品」は主原料によって次のように分類された。微生物、小動物、植物の果実・胚芽・小植物、調味料、野菜、栄養素・生体物質、漢方薬、蜂蜜類。2)キーワードから抽出されたイメージはおおまかに次のようである。1)生命力、2)天然・自然、3)伝統文明、4)長時間、5)秘密。4.「健康食品」が提示する健康理論は科学的理論で補強する一方で、呪術的類推を中心として構成されている。呪術的類推とは、たとえば「活力あるあしたばを食べるとあしたばのように元気になります」というように、そのものを摂取することでそのものと同じ属性を獲得できるという考え方である。このような「健康食品」は、「健康」になるための手段を決定するのも自分、その手段に没入するのも自分、自分自身を対象化して「健康」かどうか判断するのも自分という自己解釈の環にわれわれを導く。それこそが現代の「健康主義」(ヘルシズム)にほかならない。
血中NAP-1〜4測定の開発と肥満症の進展機構に関する研究

核内ホルモン受容体PPARγactivatorで刺激される分泌性のnatural PPARγ-inducedsecreted protein(nPGIS)をクローニングした。この蛋白は3T3-L1細胞(脂肪細胞)にも発現している。このnPGISは脂肪細胞から分泌され、人血中で認められるLeptinやAdiponectinとは構造的に全く異なるものである。Sequence解析により、この蛋白はprohormone convertasによりposttranslatlonal processingを受けるKR/RRが3カ所存在する事が判明し、4種類の異なった構造を有する分泌蛋白が生ずる可能性があり、nPGIS-associated peptide(NAP-14)と命名した。これらの部位に一致するpeptideまたは蛋白を合成し、ラット脳内に投与したところ、NAP-1のみに一致するpeptide投与が摂食抑制作用を示し、NAP-2/3/4に一致するpeptideおよび蛋白の脳内投与では摂食に影響を及ぼさなかった。またNAP-1抗体由来IgGの脳内投与は摂食亢進を示したが、NAP-2/3/4抗体由来IgGの脳内投与は摂食に影響を与えなかった。そこで、NAP-1抗体由来IgGを用いてラット視床下部抽出液、ラット髄液のWestern blotを行い、NAP-1が存在することを確認した。さらにこのNAP-1抗体由来IgGとBiotin標識NAP-1 peptideを用いてcompetitive ELISAを開発し、5ng/tube NAP-1 peptideを測定する系を確立した。この系を用いて測定したところ、正常ラットでの髄液中NAP-1濃度は0.22μg/mlで、血中濃度は4.82μg/mlを示し、18時間の絶食でのラット血中NAP-1は6.72μg/mlと増加していた。またZucker obeseラットでの血中NAP-1は9.27μg/mlとさらに増加していた。血中NAP-1濃度の変化と摂食量との関係はまだ不明の段階であるが、これらの予備実験の成績から、NAP-1はラット髄液中、血中に存在し、肥満と関連することを示唆しており、NAP-1の測定系の確立は肥満症に関わる病態の解明に有用であることを示唆している。脳視床下部と脂肪細胞に発現し、中枢性の摂食抑制作用を示す新たな分泌蛋白であるNAPに対する抗体作成を試みた。prohormone convertase(PC)はLys-Arg/Arg-Argを認識してprocessingを行うが、NAPはラット脳視床下部でPC-1/3およびPC-2と共存していることが判明した。そこで、PCによりprocessingを受ける可能性のあるNAP構造を、そのN端側からNAP-1,NAP-2,NAP-3,NAP-4と命名し、それぞれの部位を特異的に認識する各ポリクロナル抗体を家兎より得た。これらの認識部位はラット、人と相同性が非常に高い。まずラット視床下部抽出物サンプルおよびラット髄液サンプルのWestern blotをこれらの抗体を用いて行うと、47.5kDaの全長NAPに一致する明瞭なバンドを両サンプルで認めた。一方、NAP-1抗体により、10kDaに相当するバンドを認めたが、NAP-2,NAP-3,NAP-4の各抗体ではこのバンドは認めなかった。またNAP-1抗体により認められたバンドは合成NAP-1の混在により消失した。これらの事実は全長のNAPとprocessingを受けたNAP-1が脳内で存在することが明らかになった。人血液蛋白のWestern blot解析では、全長のNAPに一致する47.5kDaのバンドを認めている。これらの成績より、摂食抑制作用を示すNAPとNAP-1がラット脳内と髄液中でも確認され、NAPが人血中にも存在することが認められた。

この系を用いて測定したところ、正常ラットでの髄液中NAP-1濃度は0.22μg/mlで、血中濃度は4.82μg/mlを示し、18時間の絶食でのラット血中NAP-1は6.72μg/mlと増加していた。またZucker obeseラットでの血中NAP-1は9.27μg/mlとさらに増加していた。血中NAP-1濃度の変化と摂食量との関係はまだ不明の段階であるが、これらの予備実験の成績から、NAP-1はラット髄液中、血中に存在し、肥満と関連することを示唆しており、NAP-1の測定系の確立は肥満症に関わる病態の解明に有用であることを示唆している。
ルソン島カガヤン流域でのガリー侵食多発と除草剤耐性トウモロコシ普及との関係

本研究の目的は、フィリピン、ルソン島北部で近年多発しているガリー侵食と除草剤耐性トウモロコシ品種の急速な普及との因果関係を解明することである。本研究の結果、ガリーの多発した年は、極端な大雨のあった時期に当たり、本品種の普及がガリー侵食の多発をもたらした直接的原因とは証明できなかった。しかしながら、本品種の普及は、除草剤の不必要な多用により土壌表面を保護する雑草が極端に減少し、土壌の受食性を高めていること、また、当品種の利便性により、従来利用されていなかったよりより傾斜地への耕地化が進行したことが明らかにされ、ガリーを含む土壌侵食を引き起こしやすい条件を生み出していることが明らかになった。対象地であるルソン島北部のイラガン市、サンロレンソ村における9つのガリーシステムにおいて、ガリー全長は平均383m、ガリー容積は平均612m^3で、総重量で7,345tonの土壌が失われたと見積もられる。本地域一帯の丘陵地帯は、地滑り(?)に伴う急斜面と緩斜面からなる斜面形が多く、地質(Sandstone/shale)を反映していると考えられる。また、広域聞き取り調査の結果から、1)イザベラ州では除草剤耐性品種が近年急速に普及し、ほとんどのMuniciparityで本品種が広く利用され、高く評価されている、2)トウモロコシ残渣はトラクターにより鋤き込まれるか、焼却される。どちらの場合でも作付け時期は裸地状態となる。そのため、土壌侵食は深刻であると広く認識されているものの、サンロレンソの様にガリーが近年頻発していると認識されているMuniciparityは少ない、ということが分かった。高空間分解能衛星データによるガリー侵食の判別、抽出について調査した。空間分解能が0.5mであるWorld Viewパンクロマティックデータを画像化し、現地におけるガリー計測情報との比較を行ったところ、画像上で黒く線状に表現される部分とガリーとが良く対応し、対象地域において目視判読によるガリー抽出が可能であることが示された。ガリーによる線状のパターンを抽出するため、傾斜方向、ノイズ除去、テクスチャ解析、差分処理等を組み合わせる手法を試験的に構築した。ガリー発生圃場では8種(一年生6種、多年生2種)、未発生圃場では27種(一年生18種、多年生9種)の雑草が観察された。地上部の雑草乾物重総量ではガリー発生圃場では未発生圃場の1/10であった。乾物重割合ではガリー発生圃場は多年草が13%しかなかったのに対して、未発生圃場では52%であった。パナイ島の3郡、5村、計50戸の農家を対象に、除草剤耐性品種の利用、評価、導入前後の作付け体系などについて、聞き取り調査を実施した結果は以下のように要約される。1) 2014年調査の時点で、農家の97.7%が除草剤耐性品種を導入している。2001年から導入が始まり、導入のピークは2006年であった。本品種を70%が高く評価し、30%がある程度評価した。高評価の理由は収量が高い(82%)、管理が容易である(82%)、労働が節約できる(68%)、ことがあげられた(複数回答)。2)しかし、本品種の導入を機に、作付けを拡大したのは、30%にとどまった。その原因は拡大可能な農地がないことであった。一方、その作付けが拡大された土地のそれまでの土地利用形態は草地が56%を占め、その土地の傾斜は、急傾斜(10-30%)が56%、傾斜地(5-10%)が33%を占めており、山地の傾斜地に作付けが拡大したことがわかる。3)土壌侵食について、多くの農家が、リル、シート、およびガリー侵食を経験しており、ガリー侵食が自分の農地での発生を経験しているのは、54%に上った。この調査結果は昨年度実施したルソン島イザベラ州での調査結果と同様であった。イザベラ州内の地域を対象とした、衛星データを用いたガリー侵食域の抽出手法の改良を行った。これは、谷筋等に存在する植生等による分光データのハイコントラスト域が誤判別されていたのに対し、多時期のデータより推定した森林残存域を除外することにより、誤判別の低減化を実現した。また、複数年時の衛星データを解析し、土地利用の履歴を推定したところ、対象地域では2000年頃より顕著に森林が減少して耕地化したことが示された。

耕地化は、斜面上部から中部の比較的緩斜面から広がったが、近年では斜面下部にある比較的傾斜度の大きい部分へ展開したことが解析により示され、さらに、現地調査によってもこうした現象が確認された。1)イザベラ州の5郡、10村、計100戸の農家を対象に、除草剤耐性品種の利用、評価、導入前後の作付け体系などについて、聞き取り調査を実施した。その結果、除草剤耐性品種は圃場管理が容易であり、その導入後、開墾可能な土地がある場合には、作付地を拡大したこと、そして開墾可能な残された土地は丘陵地の急斜面であったことが分かった。同様な例が、近隣州や他の島(Panay島)でも観察された。この急傾斜地の開墾が原因で、土壌侵食、および降雨の表面流出を増大させている可能性が高い。降雨の表面流出はその斜面下部において、水の集中を引き起こしガリー形成を引き起こす要因になったと考えられる。2)空間分解能が0.5mであるWorldViewのパンクロマティックデータより、ノイズ除去処理し、エッジ検出したものと、傾斜方向別のテクスチャ値からガリー侵食域の候補を抽出し、さらに、数種類の画像処理によって除外域を設定して、ガリー侵食域の抽出を試みた。その結果、植生との混在地や崖の部分での誤判別はあるが、広域に対し、ガリー侵食密度分布を迅速に求めることに対する有効性が確認された。3)ガリーが顕著に認められたのは2009年で、台風に伴う例外的な豪雨があった年である。この年の豪雨がガリーの多発をもたらした、と考えることもできる。本研究では、降水量とガリー発生時期との関係を明らかにするため、過去の降水量の時空間変動の特徴を調べた。月別降水量の平年値に対する比を年ごとに求めた結果、TuguegaraoとIlaganでは、2009年の2月と4月に平年値の4.7-6.4倍の降水量があり、これがガリーの形成に影響した可能性が高いと考えられた。フィリピン、ルソン島北部カガヤン川沿いの丘陵地帯で近年多発したガリー侵食の原因として、除草剤耐性トウモロコシ品種の普及が、従来利用されていなかったより急峻な傾斜地の開墾が進んでいること、また、除草剤の多用により土壌を被覆する雑草が、種類、量とともに減少していることが強く関連していると考えられた。本研究の成果の一つとして、「ガリー侵食の発生域を衛星データの画像解析によって抽出する」と題する成果情報に選定された(国際農林水産業研究センター)。ガリー侵食の発生実態の把握のため、高空間分解能衛星データの画像解析によりガリー発生域を抽出する手法を開発したものである。これにより、現地調査が行われない地域を含めた広域のガリー侵食の分布を迅速に把握することが可能となった。最終年度として、5月13日にカガヤン流域研究所において、"Impact of inappropriate cultivation of new corn variety in sloping land, Philippines"と題してワークショップを開催した。本ワークショップの目的は、その研究成果を広く公表し、除草剤耐性トウモロコシ利用に関する問題点を関係当局に周知する、本問題を契機とした農業省水保全局(BSWM)、種子生産業者らの土壌保全の取り組みについて報告する、および、今後の対策を考えることである。参加者総数は51人であった。本ワークショップを通じて、除草剤耐性品種利用の問題点と傾斜地における土壌保全の重要性が参加者全体に良く理解された。そして、その技術対策活動の中心的組織としてカウンターパートであるBSWMが再認識されたことは大変良かったと思う。本WSの成果はプロシーデイングとして刊行した。26年度が最終年度であるため、記入しない。土壌保全26年度が最終年度であるため、記入しない。
水を舞台とするDNAの高次構造相転移

数十kbp(キロ塩基対)以上のサイズのDNA分子は、膨潤したコイルと折り畳まれたコンパクトな凝縮状態との間で、密度差が数万倍に及ぶ不連続な転移(一次相転移)を示すことを見出し、系統的な研究を進めてきている。特に最近、我々のDNA単一分子計測の実験より、3-4価の多価カチオン存在下において温度の上昇により折り畳み転移が促進されることが明らかになった。これは、折り畳み転移がエントロピーを大きくさせていることを意味しており、水溶媒ならではの特殊性が現れていることを示している。DNAにとって水は良溶媒であるので、その温度依存性は全く異なるメカニズムによると考えられる。そこで、これまでの単一分子鎖の構造転移に関する実験を更に展開するとともに、水媒質の特異性を取り入れた理論的なモデルを作り上げることを目的として次の研究を進めた。1.水溶液の誘電率を変化させながらDNA凝縮転移に関する実験を行うことにより、DNAの凝縮転移が起こる際にDNA分子鎖の負電荷の約8788%が中和されていることが明らかになった。また、水溶液中に含まれるカチオンのイオン半径が大きく寄与していることも明らかになった。すなわち、原子番号の大きいカチオンの方がイオン半径が大きいためPNAとの結合能は小さくなると考えられるが、実際には、水和により実効的なイオン半径が逆転するため原子番号が小さいカチオンの方がDNAとの結合能が小さくなる。その結果、原子番号の大きいカチオンの方がDNAの凝縮能が高くなると考えられる。2.真核細胞の中では、DNAはヒストンと結合しクロマチンと呼ばれる複合体を形成して存在している。そこで、正電荷を帯びたナノ粒子をヒストンに見立てて、DNAとナノ粒子との複合体の形成に関して実験を行った。その結果、ナノ粒子を加えることによって、DNAはより凝縮しやすくなることを明らかにした。数十キロ塩基対以上のサイズのDNA分子は、膨潤した状態と折り畳まれた状態との間で、密度差が数万倍に及ぶ不連続な転移(一次相転移)を示す。細胞内の長さにして数cmにもおよぶ巨大DNAのこのような高次構造転移に関する研究は、その一次、二次構造研究に比して著しく立ち遅れている。そこで、単一分子鎖の構造転移に関する実験を更に展開するとともに、水媒質の特異性を取り入れた理論的なモデルを作り上げ、理解することを目的として研究を進めてきた。本年度は、主に、DNAの折り畳み転移が水溶液中のイオン環境にどのように依存しているかについての実験的研究および理論的解析を行い、以下の成果を得た。1.多価カチオンをDNAの凝縮剤として用いる際、DNAの負の電荷に対して、多価カチオンの幾何学的配置の違いが、凝縮体の安定性に大きな変化をもたらすことを、光学活性な凝縮剤を用いた光学活性依存性の観察、および、電荷密度、立体構造をデザインした2価カチオン(ジアンモニウム(2+))を用い、凝縮転移に与える影響を観察した。その結果、凝縮剤の構造の違いにより、対イオン間の特徴的な相関が変化し、不整合を生じ、それが折り畳み転移の様相を劇的に変化させることを明らかにした。2.これまでにわれわれは長鎖DNAが単分子レベルでコイル状態から凝縮状態へと不連続に折り畳まれるものであることを明らかにしてきた。本研究では、単一分子内にコイルと凝縮状態が安定に共存するという新奇な状態を見出した。この分子鎖内相分離状態に関して、自由エネルギーをもとにした理論的考察を行い、水溶液中に存在する低分子イオンの並進エントロピー項の寄与が、単一分子鎖内に凝縮状態とコイル状態を安定に共存させる因子となっていることを明らかにした。
自殺ハイリスク者を対象とした臨床研究ガイドラインの策定

本研究の目的は、我が国での自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究ガイドライン策定のための検討を行うことである。国内外の実態把握のため、臨床試験登録データベースを用い、関連研究の解析を行った。真の評価項目である自殺企図を主要な指標にした研究はまれであり、リスク評価の問題が明らかになった。米国ガイドラインの日本語訳を作成した。日本の制度面を考慮し、専門家の意見を交え、我が国でのガイドライン案を策定した。我が国では,1998年以降,毎年3万人を超える人が自殺により命を落としている。そのため,我が国では有効な自殺対策の実施が強く求められている。効率的で効果的な政策立案のためには,実証的な根拠(エビデンス)を構築する臨床研究が必要不可欠である。本研究は,自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究でのリスクマネージメントにおける課題を検討し,我が国において自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究ガイドラインを策定することを目的としている。本年度は,策定のために必要な問題点の俯瞰,そのための情報の収集,整理を行った。国内,国外の論文,報告書等をレビューし,研究の科学性,倫理性に関する系統的な情報の蓄積を行い,議論の整理を行った。またインタビュー調査に必要な議論すべき項目の抽出を行った。NIMH(米国,国立精神衛生研究所)が策定した「Issues to Consider Intervention Research with Persons at High Risk for Suicidality(自殺ハイリスク者への介入研究において考慮すべき問題点)」をNIMHから承諾のもと,日本語への翻訳作業を行った。治験を含む国内外での自殺ハイリスク者の臨床研究の実施状況を把握するため,Clinical.gov(米国),Controlled-trials.com(欧州),UMIN(日本)等の臨床試験データベースを用いて調査した。国内調査として,自殺対策研究を実際に行っている病院等を訪問,研究者に対してインタビュー調査を行い,日本の研究現場における課題等を調査した。また,国外調査として,スウエーデンのNASP(国立自殺予防研究所)を訪問し,スウエーデン国内および欧州での自殺予防および関連する研究の実態と課題についてインタビュー調査を行った。我が国では、1998年以降、毎年3万人を超える人が自殺により命を落としている。そのため、我が国では有効な自殺対策の実施が強く求められている。効率的で効果的な政策立案のためには、実証的な根拠を(エビデンス)構築する臨床研究が必要不可欠である。本研究は、自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究でのリスクマネージメントの課題を検討し、我が国における自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究ガイドラインの策定を目的とした。本年度は、前年度に継続し、研究の科学性、倫理性に関する系統的な情報の蓄積、議論の整理を行った。治験を含む国内外での自殺ハイリスク者の臨床研究の実施状況を把握するために臨床試験登録データベースを用い、自殺に関連した国内、国外の臨床試験を抽出し、その解析を行った。その結果、世界的にも、自殺リスクがある対象にもかかわらず、精神医学的代替指標を利用する研究がほとんどであり、真の評価項目である自殺企図を主要な指標にした試験はまれであることが解明された。NIMH(米国、国立精神研究所)が策定した「Issues to Consider in Intervention Research with Persons at High Risk for Suicidality : NIMHガイドライン」の日本語への翻訳作業を行った。さらにNIMHガイドラインと日本精神神経学会の臨床研究における倫理綱領及びの「臨床研究に関する倫理指針(2008年7月改訂, 2009年4月施行」」との対比を行い、日本における適用可能性の検討を行った。その結果、データ安全性モニタリング委員会の設置、モニタリング方法の強化など日本の事情にあわせた対応が必要である事項が明確となった。複数の領域の専門家の意見を交え、自殺ハイリスク者を対象とする臨床研究ガイドライン案の策定を行った。
地方の研修医不足を是正する医師臨床研修マッチング制度の設計

日本の医師臨床研修マッチングにおいて,研修医の好みを尊重した結果,研修医が都市部に集中した.それにより,地方での研修医不足が深刻な社会問題となっている.地方の研修医不足を解消しつつ,研修医・病院の好みを可能な限り尊重するマッチング制度はどのようなものだろうか.本研究はこの問題に対しメカニズムデザインの観点から分析を行い,最善のマッチング制度の解明を試みる.日本の医師臨床研修マッチングにおいて,研修医の好みを尊重した結果,研修医が都市部に集中した.それにより,地方での研修医不足が深刻な社会問題となっている.地方の研修医不足を解消しつつ,研修医・病院の好みを可能な限り尊重するマッチング制度はどのようなものだろうか.本研究はこの問題に対しメカニズムデザインの観点から分析を行い,最善のマッチング制度の解明を試みる.
メタボリックシンドロームの改善による尿路結石症予防効果の検討

2005年尿路結石症全国疫学調査のデータから結石成分別に、メタボリックシンドロームと疾患重症度および尿化学異常との関連性について検討しました。蓚酸カルシウム結石ではメタボリックシンドロームの因子の集積よって疾患重症度が高くなり、高カルシウム尿が多くなることから、メタボリックシンドロームは蓚酸カルシウム結石形成にも関連していることが示唆されました。メタボリックシンドロームの改善は、尿路結石症の大部分を占める蓚酸カルシウム結石を予防する可能性があると考えられました。アメリカ泌尿器科学会2017で発表し、論文を投稿中です。現在、肥満患者をリクルートして、減量による尿路結石予防効果について検討中です。本年度は、減量による尿路結石予防効果の検討については、本学附属病院泌尿器科外来を受診した肥満を合併した尿路結石患者および内分泌内科を受診した肥満/糖尿病患者を対象として、1身体情報:年齢、性別、身長、体重、BMI、腹囲、血圧、2結石情報:部位、サイズ、数、初発/再発、結石成分、3既往歴:高血圧、高脂血症、糖尿病、高尿酸血症、薬歴、結石歴(初発年齢、再発回数)を調査した上で、食事療法や運動療法による減量プログラムの開始前および開始後に1身体情報:体重、BMI、腹囲、血圧、2血液検査:T-Chol、TG、HDL-C、FBS、HbA1c、インスリン、UA、Ca、Na、K、P、Cr、324時間尿検査:尿量、pH、クエン酸、シュウ酸、UA、Ca、Mg、Na、K、P、Crを測定し、データ集積を行っております。メタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討については、ヒトのメタボリックシンドロームに類似した病態を呈するOLETF (Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty)ラットと対照のLETO (Long-Evans Tokushima Otsuka)ラットを用いて、実験を開始するところです。研究代表者は、OLETFラットではチアゾリジン誘導体であるpioglitazoneによって酸性尿の有意な改善がみられることを報告しており、高脂血症治療薬や降圧剤でも検討を行う予定です。これらの研究を遂行することにより、減量や薬物療法によるメタボリックシンドローム/インスリン抵抗性の改善によって尿路結石リスクが低下することを示すことが可能であると考えております。本年度は、減量による尿路結石予防効果の検討については、本学附属病院泌尿器科外来を受診した肥満を合併した尿路結石患者および内分泌内科外来を受診した肥満/糖尿病患者を対象として、1身体情報:年齢、性別、身長、体重、BMI、腹囲、血圧、2結石情報:部位、サイズ、数、初発/再発、結石成分、3既往歴:高血圧、高脂血症、糖尿病、高尿酸血症、薬歴、結石歴(初発年齢、再発回数)を調査した上で、食事療法や運動療法による減量プログラムの開始前および3カ月、6カ月後、12カ月後に以下の項目を測定する。1身体情報:体重、BMI、腹囲、血圧、2血液検査:T-Chol、TG、HDL-C、FBS、HbA1c、インスリン、UA、Ca、Na、K、P、Cr、324時間尿検査:尿量、pH、クエン酸、シュウ酸、UA、Ca、Mg、Na、K、P、Crを測定しデーター集積を行っております。メタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討については、動物実験を開始するところです。研究代表者は、OLETFラットではチアゾリジン誘導体であるpioglitazoneによって酸性尿のみ有意な改善がみられることを報告しており、高血圧治療薬や降圧剤でも検討を行う予定です。これらの研究を遂行することにより、減量や薬物療法によるメタボリックシンドローム/インスリン抵抗性の改善によって尿路結石形成リスクを低下させることを証明できると考えております。本年度も減量による尿路結石予防効果の検討(計画1)とメタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討(計画2)を並行して行う予定でしたが、時間的な問題から計画1に重点をおくことにしました。計画2は遅れ気味です。本年度は、減量による尿路結石予防効果の検討については、本学附属病院泌尿器科外来を受診した肥満を合併した尿路結石患者および内分泌内科を受診した肥満/糖尿病患者を対象として、1身体情報2結石情報3既往歴を調査した上で、食事療法や運動療法による減量プログラムの開始前および開始後に1身体情報:体重、BMI、腹囲、血圧2血液検査:T-Chol、TG、HDL-C、FBS、HbA1c、インスリン、UA、Ca、Na、K、P、Cr、324時間尿検査:尿量、pH、クエン酸、シュウ酸、UA、Ca、Mg、Na、K、P、Crを測定し、データ集積を行っております。患者登録数が少ないことから、近隣の特定健診にも参加し、肥満患者をリクルートしております。2005年尿路結石症全国疫学調査のデータから結石成分別に、メタボリックシンドロームと疾患重症度および尿化学異常との関連性について検討し、蓚酸カルシウム結石ではメタボリックシンドロームの因子の集積よって疾患重症度が高くなり、高カルシウム尿が多くなることから、メタボリックシンドロームは蓚酸カルシウム結石形成にも関連していることが示唆されました。American Urological Association2017で発表予定であり、現在論文を投稿中です。

メタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討については、研究代表者は以前にヒトのメタボリックシンドロームに類似した病態を呈するOLETFラットと対照のLETOラットを用いて、OLETFラットではチアゾリジン誘導体であるpioglitazoneによって酸性尿の有意な改善がみられることを報告しておりますが、その他の薬剤でも検討する予定でしたが大幅に遅くれております。今後も引き続き検討していく予定です。2005年尿路結石症全国疫学調査のデータから結石成分別に、メタボリックシンドロームと疾患重症度および尿化学異常との関連性について検討しました。蓚酸カルシウム結石ではメタボリックシンドロームの因子の集積よって疾患重症度が高くなり、高カルシウム尿が多くなることから、メタボリックシンドロームは蓚酸カルシウム結石形成にも関連していることが示唆されました。メタボリックシンドロームの改善は、尿路結石症の大部分を占める蓚酸カルシウム結石を予防する可能性があると考えられました。アメリカ泌尿器科学会2017で発表し、論文を投稿中です。現在、肥満患者をリクルートして、減量による尿路結石予防効果について検討中です。減量による尿路結石予防効果の検討(計画1)とメタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討(計画2)を並行して行う予定にしていましたが、時間的な問題から計画1に重点をおくことにしました。そのため計画2についてはやや遅れ気味となりました。減量による尿路結石予防効果の検討(計画1)については、引き続き症例の集積と観察を継続していく予定です。メタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討(計画2)については、可能な範囲で早めに実験を開始したいと考えています。泌尿器科学減量による尿路結石予防効果の検討(計画1)については、引き続き症例の集積と観察を継続していく予定です。メタボリックシンドロームに用いられる薬物による尿路結石予防効果の検討(計画2)については、動物実験をすすめていくとともに、動物実験で有効性が確認された薬物を投与する患者を対象として、治療開始前および3ヵ月後、6ヵ月後、12ヵ月後に計画1と同様の項目を調査し、尿路結石形成リスクの低下がみられるかを検討していく予定です。計画2の動物実験の進行がおくれていることから、本年度の使用額が少なくなりました。計画2の動物実験を遅れている分も含め行う予定であり、必要となる助成金です。
T細胞分化に必須な分子themisの機能解析

themis欠損マウスの胸腺では成熟T細胞が激減している。この原因を探るべく、我々はTCRα鎖のJαセグメントの使用頻度を検証した。themis欠損マウスではT細胞は正常マウスのものと比べて明らかに5'側のJαを使用する傾向がみられた。このことは、themis欠損マウスでは2回目以降のα鎖の組み替えに異常があるために成熟T細胞が減少していると考えられる。原因としてはダブルポジティブ段階にとどまる時間が十分でないことなどが考えられるが、今後詳細に調べる必要がある。in vitroでの遺伝子導入と培養を組み合わせた系では、遺伝子導入の効率の悪さによりthemisの分子機構の解明が困難であることから、変異遺伝子のノックインマウスの樹立を試みた。まず、SPOTRマウスで置換されているトレオニン残基のリン酸化が必須であるのか調べるためこのトレオニン残基をアルギニン酸残基に置換したthemisをノックインした遺伝子改変マウスを作成した。これは現在キメラマウスの段階であり、遺伝すれば次世代のマウスで結果が判明する。さらに、themisには核移行シグナル、プロリン残基に富む領域があり、これら各々の部位を欠失させたthemisをノックインしたマウスもキメラマウスが得られている。これらのマウスの解析によりまだ全くわかっていないthemisの機能解析と分子機構が明らかになると期待できる。これまで、themisの欠損マウスでは成熟CD4T細胞が成熟CD8T細胞よりも顕著に減少しており、themisはこれらのT細胞の胸腺での系列決定に関与しているのではないかという報告があった。そこで、われわれはCD4T細胞の系列決定に必須の転写因子ThPOKのthemis欠損マウスでの発現をThPOK-GFPリポーターマウスを用いてしらべた。前述のとおり、themis欠損マウスでは成熟CD4T細胞は数は少ないながらも、ThPOKの発現は野生型マウスと同等であることがわかった。このことより、themisはCD4とCD8の系列決定そのものに関与しているのではないことが明らかになった。新規遺伝子themisを欠損させたマウスの胸腺では成熟T細胞が激減している。これは正の選択がうまくいっていないことや負の選択が亢進している可能性が考えられるがそのメカニズムはほとんど不明である。そこで我々はT細胞受容体のα鎖の組み替えに異常がないかJαセグメントの使用頻度を検証した。TCRα鎖の組み替えは5'側のJαから起こる傾向があり、失敗するとさらに3'側のJαを使って組み換えを試みる。このことは、themis欠損マウスでは2回目、あるいは3回目のα鎖の組み替えに何らかの異常があるために成熟T細胞の減少が起こっていると考えられる。もう一つの成果はthemisの作用気序にかかわる部位の探索である。これまでに核移行シグナルとプロリン残基に富む部位をそれぞれ欠失した変異エクソンをノックインしたマウスの解析を行った。どちらの遺伝子改変マウスも完全な欠損マウスをほぼ同等の表現型を示した。つまり、どちらの部位もthemisの機能に重要と推測される。しかし、前者に関してはthemisタンパクそのものの発現量も顕著に減少しているため、タンパク質の安定発現に核移行シグナルが重要である可能性が高い。さらに、生体内でのthemisの働きを明らかにする目的でFLAGタグをノックインしたマウスを作製した。これにより、細胞内局在、会合しているタンパクの同定、もし、リン酸化されているならばその部位の同定等が一気に進むと考えられる。このマウスのホモ接合体ではT細胞は正常に成熟することから、themisのN末端にFLAGを付加しても機能を阻害することはない、ということを確認できた。