hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膀胱癌に対するp53蛋白導入法および蛋白置換療法の開発

1)膀胱癌由来細胞に対する蛋白質導入法による野生型p53蛋白導入11個のアルギニンからなるポリアルギニン(11R)を野生型p53蛋白に付加した(11R-p53)。様々な濃度の11R-p53をJ82およびT24細胞に導入し、その導入効率および発現持続時間について検討した。0.1,1および10μM 11R-p53を導入した場合、ほぼすべての細胞に導入されることが明らかになった。また、T24細胞内において、11R-p53は急速に分解されその半減期は、12時間以内であった。一方、J82細胞では、11R-p53の半減期は、24時間以内であった。2)11R-p53の膀胱癌細胞増殖抑制効果0.1,0.5および1μMの11R-p53をJ82あるいはT24細胞に導入し、その細胞増殖抑制効果についてアデノウイルスベクターを利用したp53遺伝子治療と比較検討した。両方の細胞において、11R-p53は有意に増殖抑制効果を示した。また、その効果は濃度依存的であり、アデノウイルスベクターによるp53遺伝子治療法と同程度であった。C3Hマウス膀胱内に11R-GFPを経尿道的導入を試みたが,全く膀胱組織内に導入されなかった。一方,膀胱をトリプシンで処理し,ムチン層とアンブレラ細胞のみを除去すると,効率よく移行上皮細胞に導入された。また、同マウス膀胱内に癌細胞を植立し、11R-GFPを導入すると、癌細胞に特異的に導入させることが明らかになった。本研究成果より、p53蛋白導入法が膀胱癌治療法として有用であることが示唆された。膀胱癌は,膀胱上皮内癌(CIS)の標準的な治療法として、BCG膀胱内注入療法が行われているが、約50%で無効あるいは治療抵抗性となり膀胱全摘除術が余儀なくされる。また再発率が高く、浸潤性膀胱癌に移行しやすいG3表在性膀胱癌においてはBCG膀胱内注入療法の有効性は確立されていない。これらCIS、G3膀胱癌では高頻度にp53の変異が認められる。本研究では,P53変異膀胱癌に対して、ポリアルギニンを利用したp53蛋白導入法による癌細胞増殖抑制を目的とし,以下の研究を実施し明らかにした。1)11個のポリアルギニンをコードするcDNAをp53cDNAに付加し,発現ベクターに組み込んだ。2)1)で作製したプラスミドを,大腸菌にトランスフォームし,11R-p53蛋白の発現に成功した。3)大腸菌で発現させた11R-p53をニッケルカラム等で精製し,同精製蛋白を膀胱癌患者由来でp53遺伝子の変異が認められるT24,J82細胞に導入した。11R-p53は,効率よく同細胞に導入されることが確認された。4)T24およびJ82細胞に導入された11R-p53蛋白の局在について,蛍光免疫染色法にて検討したところ,核内に導入されることが確認された。5)11R-p53の膀胱癌細胞増殖抑制効果について検討するため,T24およびJ82細胞に11R-p53を導入し,その増殖抑制効果についてWSTアッセイにて検討した。11R-p53は,有意にすべての癌細胞において,その増殖を抑制した。また,その増殖抑制効果は,既存のアデノウイルスを利用した遺伝子導入法と同程度であった。6)また,11R-p53には,シスプラチンによる癌細胞アポトーシス誘導作用を有意に促進した。以上の結果より,ポリアルギニンを利用したp53直接蛋白導入法が,膀胱癌に対して,新しい癌治療法として有用であることが確認された。
体制変動期における正統性調達に関する理論的・実証的研究

体制変動によって生まれた新体制がいかにして正統性を調達するかについて、分析を行う。具体的には、第一に、クーデタや市民革命の際にどのような価値/レトリックを掲げたのかを網羅的にデータ化する。第二に、国際的選挙監視の招致による正統性調達の傾向があることを示す。さらには、それらの「効果」として体制の定着や国際的な制裁/褒賞の有無との因果関係を示す。
変異型GDF11を添加した歯髄幹細胞導入法による象牙質再生促進

歯髄創傷治癒過程においては、象牙質基質あるいは歯髄組織の細胞外基質に蓄積されているBMPs/GDFsをはじめとする様々な細胞・分化因子はMatrix Metalloproteinases(MMPs)により活性が調節されると考えられる。例えば歯髄創傷治癒に重要な役割を有することが知られているGDF11/BMP11は、成熟型はプロドメインと非共有結合して潜在型となり、プロドメインにMMPsが作用すると潜在型からプロドメインがはずれ成熟型に変化するといわれている。しかしながら、歯髄創傷部位において発現するMMPsはいまだ明らかではない。よって、歯髄創傷部位において発現するMMPsを検索し、MMP3が生活歯髄切断24時間後に発現が上昇し、血管周囲にMMP3の発現がみられ、MMP3は血管内皮細胞の増殖・遊走を促進し、アポトーシスを抑制することを明らかにした。次にリコンビナントMMP3をラットおよびイヌの生活歯髄切断面上に応用すると、血管内皮細胞の増殖および血管新生が促進され、潜在型GDF11/BMP11を作用させた場合より短期間に骨様象牙質が形成された。よって、MMP3の歯髄創傷治癒、象牙質再生促進への関与が示唆された。また、イヌ歯髄幹細胞とMMP3を併用した場合、より大量の骨様象牙質が形成され、MMP3添加細胞治療法の象牙質再生への有効性が示唆された。例えば歯髄創傷治癒に重要な役割を有することが知られているGDF11/BMP11は、成熱型はプロドメインと非共有結合して潜在型となり、プロドメインにMetalloproteinasesが作用すると潜在型からプロドメインがはずれ成熟型に変化するといわれている。しかしながら、歯髄創傷部位において発現するMetal loproteinaseはいまだ明らかではない。よって、本年度は、歯髄創傷過程て発現するMMPsの発現と機能を解析した。まず、歯髄創傷モデルとしてラット切歯に生活歯髄切断を行い、さまざまなMMPsのmRNA発現の経時的変化をReal-time RT-PCRにて検討したところ、MMP3mRNA発現は生活歯髄切断後24時間の細胞増殖期において8倍のピークを示した。MMP9は処置直後から2倍の上昇がみられ、その発現はその後も維持されていた。他のMMPsの変化は特に見られなかった。蛍光免疫染色では切断後24時間の歯髄切断面下の血管周囲にMMP3の発現がみられた。また、MMP3は培養血管内皮細胞の増殖、遊走を促進し、アポトーシスを抑制した。リコンビナントMMP3をラット切歯生活歯髄切断面上に応用すると、細胞の増殖が促進され、大量の骨様象牙質が形成された。よって、MMP3の歯髄創傷治癒への関与が示唆された。
エレクトロマイグレーションによるナノギャップの原子移動制御と単電子機能発現

本研究課題では、以下の研究成果を達成した。(1)ナノギャップでのエレクトロマイグレーションにより駆動される原子移動機構を用いた単電子トランジスタ(SET)作製技術の開発:電流源の極性を交互に変化させたアクティベーション手法を提案・検討した。極性変化を行う事で、ナノギャップ電極の双方から原子の移動が生じ、ナノギャップのより微細な構造制御や狭窄化に成功した。(2)複数のナノギャップを直列に接続した集積型ナノギャップでのSET構造の一括作製・特性制御・集積化技術の開発:アクティベーションにより2つのSET構造の一括作製および集積化を達成した。集積した2つのSETはほぼ同一の特性を有し、アクティベーション条件によりナノギャップ系SETの素子特性を同時に制御・調節しながら、SETを集積化することが可能であることが明らかとなった。さらに、本手法において得られたラテラル型Ni/真空障壁/Ni系磁性トンネル接合単体でのトンネル磁気抵抗効果(TMR)から、室温にて10%程度のTMRの観測に成功した。本研究ではこれまでに、予め用意した数十nmのナノギャップに対し、電界放射電流によって誘起されるエレクトロマイグレーション(EM)現象を利用することでギャップ間にて原子移動を発生させ、ギャップ幅を狭窄化させる技術(アクティベーション法)を提案してきた。また、従来手法の電圧源を用いたアクティベーション法に代わり、電流源を用いた直接的な通電を行うことによる、より効率的かつ安定的なナノギャップの特性制御に関する検討を行ってきた。初年度(平成22年度)では、電流源の極性を交互に変化させたアクティベーション技法を開発し、実際にナノギャップの狭窄化と作製制御の検討を行った。はじめに、電子線リソグラフィーを用いて、ギャップ幅数十nmのNiナノギャップを作製した。次にこれらの初期ナノギャップに対し、電流源を用いて、通電毎に印加電流の極性を変化させた極性変化型アクティベーションを複数回適用した。電流源の極性変化を行う事で、双方の電極から交互に原子の移動を生じさせることが可能となり、より微細なナノギャップの作製が期待できる。実際に、室温での極性変化型アクティベーション時におけるナノギャップのI-V特性より、通電電流を増加させていくにつれ、アクティベーション停止時の電圧値が連続的に減少していくことが確認できた。これは、極性変化型アクティベーションでの通電によりナノギャップが安定的に狭窄化されていることを示唆している。さらに、100μAの通電強度により移動した原子の個数は10^5個程度と見積もられた。これより、電流源の極性を通電毎に交互に変化させても連続的にナノギャップの特性制御が可能となり、極性変化型アクティベーション手法はナノギャップの抵抗制御および微細構造制御の制御性向上に寄与するものと考えられる。本研究では、強磁性単電子トランジスタ(FMSET)の作製手法として、電界放射電流誘起型エレクトロマイグレーション法(アクティベーション法)を提案している。本手法は、ナノギャップ電極(初期ギャップ幅:数十nm程度)に対して、電界放射電流により誘起されたエレクトロマイグレーション(EM)を発現させることで、ギャップ近傍の原子を移動させてギャップ間隔を狭窄化すると同時に、ギャップ内に原子を堆積させることによりSET構造でのアイランド電極の形成をも可能とする技術である。昨年度では、電流源の極性を交互に変化させたアクティベーション技法を開発し、ナノギャップの抵抗制御および微細構造制御の制御性向上に関する検討を行った。最終年度(平成23年度)は、複数のナノギャップを直列に集積接続し、同時にアクティベーションを適用することで、SET構造の一括作製・持性制御・集積化について検討した。設定電流ls=10μAで同時にアクティベーションを行った後のそれぞれのナノギャップのSEM像から、ギャップ内にドット状の原子(アイランド電極)の形成が確認でき、2つのSET構造の一括作製および集積化が達成された。

さらに、低温下(16K)にて詳細に電気的特性の検討を行った結果、ほぼ同一の特性を有する2つのSETを同時に作製することができた。また、集積した2つのSETの帯電エネルギーは設定電流lsの増加に伴い2つのデバイスにて一様に減少した。以上より、本手法は、複数のナノギャップ電極のトンネル抵抗を同時に制御することができ、さらに、ナノギャップからなるSETの素子特性を制御・調整しながらSETを集積化することが可能であることが明らかとなった。さらに、本手法において得られたラテラル型Ni/真空障壁/Ni系磁性トンネル接合単体での室温におけるトンネル磁気抵抗効果(TMR)特性を詳細に検討した結果、室温にて、10%程度のTMRの観測に成功した。また、室温でのバイアス電圧依存性からはVhalf=200-300mVが得られ、これは、SET動作時に必要とされるドレイン電圧とほぼ同じ設定電圧条件であることから、強磁性単電子トランジスタにおいても室温においてトンネル磁気抵抗効果の観測が可能であることが示唆された。(2)複数のナノギャップを直列に接続した集積型ナノギャップでのSET構造の一括作製・特性制御・集積化技術の開発:アクティベーションにより2つのSET構造の一括作製および集積化を達成した。集積した2つのSETはほぼ同一の特性を有し、アクティベーション条件によりナノギャップ系SETの素子特性を同時に制御・調節しながら、SETを集積化することが可能であることが明らかとなった。さらに、本手法において得られたラテラル型Ni/真空障壁/Ni系磁性トンネル接合単体でのトンネル磁気抵抗効果(TMR)から、室温にて10%程度のTMRの観測に成功した。
非線形分光法を用いた中高密度流体中での溶媒和のダイナミクスの研究

本研究では、超臨界流体中で見られる局所揺らぎのダイナミクスを検討するために、ブロードバンドの超短パルス光を用いた光Kerr効果[OKE]の実験を適用し、純溶媒ならびに溶質を溶かした超臨界流体での低振動領域のラマン散乱を測定することを計画した。今回我々は、実験装置の立ち上げから行ない、チタンサファイアレーザーの基本波(820nm,半値幅80fs程度)を光源とした、ヘテロダイン検出のOKE (OHD-OKE)測定の光学系を構成した。超臨界流体に対する測定を行なうための高圧光学容器は、耐圧50MPa以上の一般的な2方窓付き(8mm厚の合成石英窓、光路長4mm)のものを用いた。その結果、超臨界二酸化炭素および亜酸化窒素に対してOKE信号の密度変化を、臨界密度付近からその2倍程度の領域にかけて測定することに成功した。実験の結果、両流体中でのOKE信号は、電子応答ならびに分子間振動をしめす部分と、回転緩和をしめすテ-ルの部分から構成されることが明らかとなった。回転緩和部分の解析から、両流体の回転緩和時間はほぼ同程度であり(臨界密度の2倍の密度領域付近で、0.3ps)、二酸化炭素においてはDepolarized Rayleigh scatteringより求められた回転相関関数の減衰定数にほぼ一致しており、本測定の妥当性を示すものと考えられる。また同一の条件下での四塩化炭素液体からの信号との比較により、短時間領域において集団的な分子振動を示す応答が得られていることが示された。ただし、短時間応答の成分は、現状では高圧容器の光路長の制限により十分な時間分解能が得られておらず、現在高圧容器の改良を行い、時間分解能を向上させた条件下での測定を進めているところである。
口腔領域における診断用抗体アレイの作成

4NQO誘発舌がん発生において、Dark-Agouti系(DA)ラットは舌がん発生に高感受性を示し、一方Wistar/Furth系(WF)ラットは低感受性である。さらに、これら両系統のラットを用いて舌がん発生に関連する5つのQTL(tongue squamous cell carcinoma15:Tscc15)が見出だされている。今回DAラットのTscc1領域とTscc4領域をWFラットに別々に導入した2系統のコンジェニックラットを作成した。これら2系統のラットに4NQO投与による発がん実験を行った結果、基準のWFおよびDAラットに比較して有意な発がん頻度差を示すことが確認された。さらに、これらの領域にある候補遺伝子のmRNA発現とタンパク質発現を調べる目的でマイクロアレイと抗体アレイ解析を行った。舌発がんが見られたDAラットの舌がん組織と4NQO無投与のDAラットの舌粘膜組織を用いてこれらの発現を比較検討した。その結果、舌がん組織と無投与のDAラットの舌粘膜組織とのシグナル比が大きく異なる遺伝子とほとんど差異の見られない遺伝子など、遺伝子ごとの変動は多様であったが、Tscc1とTscc4領域における候補遺伝子の多くはシグナル比が有意に高かった。以上のように現時点では、Tscc1領域にあるNQO1遺伝子とTscc4領域にあるPthrp遺伝子については、舌発がんへの関連の有無を3方向から(コンジェニックラット、抗体アレイ、トランスジェニックラット)検討を行っている。前2者の検索結果の範囲から、2つの遺伝子は舌発がんへの感受性に高い関連性を有することが認められたと考えている。今後トランスジェニックラットによる検索を含めた研究解析を行うことで、同様の結果が得られるのではないかと期待しております。我々はDark-Agouti系(DA)ラットは4NQO誘発ラット舌がん発生に高感受性を示し、一方Wistar/Furth系(WF)ラットは低感受性であり、これら両系統のラットを用いて舌がん発生に関連する5つのQTL(tongue squamous cell carcinoma15:Tscc15)を見出している。今回、舌がんに関連する候補遺伝子を検索する目的で、マイクロアレイを用いた解析およびこれの中で有力な候補遺伝子の解析も行なった。まず、DAラットのがん組織と無投与のDAラットの組織を用いてアレイ上の遺伝子発現を解析した結果、シグナル比が、3以下または1/3以上に減弱した337遺伝子、3以上または1/3以下に減弱した220遺伝子が見出された。なおシグナル比が2以上では804遺伝子、1/2以下では467遺伝子であった。次にWFラットの舌がん組織と無処置のWFラットの組織を用いてアレイ上の遺伝子発現を解析した結果、シグナル比が3以上または1/3以下に減弱した遺伝子は、それぞれ182遺伝子と81遺伝子が見出された。なおシグナル比が2以上では656遺伝子、1/2以下では169遺伝子であった。我々が舌がん感受性遺伝子に強く関連していると考えている5QTL(Significant level)に加えてSuggestive levelに達している5カ所のQTLに対応する候補遺伝子のうち21遺伝子についても、それらのシグナル比を解析したところ、舌がん感受性を示すDAラットと感受性の極めて低いWFラットに関して、シグナル比が明らかに相反する遺伝子と同じ傾向を示す遺伝子など、遺伝子ごとにその変動は多様であったが、上に述べたマイクロアレイによる解析結果も、我々が行ってきたQTL解析の結果を支持しているのではないかと考えている。今後はさらに、これらの候補遺伝子による抗体アレイの作成を行う予定である。

前回、舌がんに関連する候補遺伝子を検索する目的で、マイクロアレイを用いた解析およびこれらの中から有力な候補遺伝子の解析を行い以下のような結果が得られた。まず、DAラットのがん組織と無投与のDAラットの組織を用いてアレイ上の遺伝子発現を解析した結果、シグナル比が、3以下または1/3以上に減弱した337遺伝子、3以上または1/3以下に減弱した220遺伝子が見出された。なおシグナル比が2以上では804遺伝子、1/2以下では467遺伝子であった。次にWFラットの舌がん組織と無処置のWFラットの組織を用いてアレイ上の遺伝子発現を解析した結果、シグナル比が3以上または1/3以下に減弱した遺伝子は、それぞれ182遺伝子と81遺伝子が見出された。なおシグナル比が2以上では656遺伝子、1/2以下では169遺伝子であった。我々が舌がん感受性遺伝子に強く関連していると考えている5QTL(Significant level)に加えてSuggestive levelに達している5カ所のQTLに対応する候補遺伝子のうち21遺伝子についても、それらのシグナル比を解析したところ、舌がん感受性を示すDAラットと感受性の極めて低いWFラットに関して、シグナル比が明らかに相反する遺伝子と同じ傾向を示す遺伝子など、遺伝子ごとにその変動は多様であったが、上に述べたマイクロアレイによる解析結果も、我々が行ってきたQTL解析の結果を支持しているのではないかと考えている。今回はさらに、これらの候補遺伝子による抗体アレイの作成を行った結果マイクロアレイ同様な結果を得ることが出来た。したがってこれらのタンパクを用いて、対応する抗体アレイを作成して、診断に有用なアレイの作成が可能になった。
ケミカルジェネティクスによるシロイヌナズナの葉の極性確立の分子機構の解明

シロイヌナズナの葉の形態形成の鍵遺伝子である、AS1とAS2遺伝子は、葉の軸に沿った形態形成に関わる。これらの遺伝子と共に葉の軸性の決定に関わる新奇な因子の機能解明を進めるため、ケミカルジェネティクスを適用した。その結果、特定のアルカロイド化合物、DNA損傷試薬が、葉の初期分化を著しく阻害することを初めて示した。さらに、これらの作用機作を解析した結果、DNA複製の停止や細胞周期の進行が停止したために、発生分化の異常が起こった可能性が示唆された。葉は、茎頂メリステムから分化する地上部の器官であり、基部-先端部軸、中央-側方軸、裏-表軸という軸性を持つ。我々は、これまでに、シロイヌナズナのAS1とAS2遺伝子が、これらの軸に沿った形態形成に関わっていることを明らかにしてきた。さらに、我々はAS1とAS2遺伝子の変異体にケミカルジェネティクスを適用して、これらの遺伝子と共に葉の軸性の決定に関わっている新奇な因子の同定を進めている。これまでの研究により、as1とas2変異体にアルカロイド化合物であるベルベリンと9-ヒドロキシカンプトテシンを添加すると、葉の裏側化が著しく亢進することがわかった。本研究では、第一に、カンプトテシン誘導体やDNA損傷試薬を投与した時にas1とas2変異体に特異的に、裏-表軸に異常を示した。DNA複製の停止や細胞周期の進行が停止したために、発生分化の異常が起こった可能性が考えられる。このことは、細胞分裂周期の進行のタイミングが葉の発生分化において重要であることを示唆している。さらに、I型トポイソメラーゼの変異体と、as2の二重変異体において、as2単独変異体にカンプトテシンを加えた場合と同じように、発生異常の棒状の葉を形成したことから、I型トポイソメラーゼの機能不全の結果であると考えられた。第二に、ベルベリンは、グアニン四重鎖に特異的に結合し、グアニン四重鎖配列のある近傍の遺伝子発現に影響与えると考えられた。シロイヌナズナにはグアニン四重鎖配列が約1200カ所あることがわかった。これらのうち、AS1やAS2と共に、葉の裏-表の分化に関わっている遺伝子の近傍のグアニン四重鎖配列が影響したと考えられた。それらのうちのひとつリボソームRNA遺伝子発現に影響を与えた可能性が考えられる。このようにケミカルジェネティクスは、同様な機能を持つ複数の遺伝子が作用する仕組みの解明に有効であることがわかった。これまでに、as1とas2変異体にアルカロイド化合物であるベルベリンと9-ヒドロキシカンプトテシンを添加すると、葉の裏側化が著しく亢進することがわかった。(1)ブレオマイシン等のDNA損傷に関わる因子を加えた場合に、カンプトテシンと同様にas1とas2変異体に特異的に、裏-表軸に異常を示した。(2)DNA複製の停止や細胞周期の進行に影響を与える、種々の低分子化合物を加えた時の表現型を調べた。その結果、複数のDNA損傷誘導試薬がAS1、AS2遺伝子が関わる葉の分化に特異的に強い阻害効果を示したことから、これらが関与する葉の発生分化において、DNA損傷応答経路が重要な役割を持つと考えられた。(3)DNA損傷応答反応系の鍵因子であるATMまたはATR遺伝子の機能欠損変異体と、as1またはas2変異体の交配を行い、それぞれの二重変異体を得ることが出来た。また植物体の表現型解析を行い、変異による形態学的変化の観察を行った。その結果、DNA損傷ストレスを与えない通常の栽培条件下では、ATMまたはATR遺伝子のいずれもAS1、AS2遺伝子とは遺伝学的相互作用がないことがわかった。以上の結果から、DNA複製や細胞周期の進行のタイミングが発生分化において重要であると考えられた。このようにケミカルジェネティクスは、関与する因子が多い葉の発生分化の仕組みの解明に有効であることがわかった。我々は、これまでに、シロイヌナズナのAS1/AS2遺伝子が、葉の裏側化因子と茎頂メリステム維持遺伝子の発現を抑制することによって、これらの3つの軸に沿った形態形成に関わっていることを明らかにしてきた。

また、AS1/AS2遺伝子と共に葉の軸性の決定に関わっている新奇な因子が多数報告されてきたものの、その作用機作は全く不明であった。そこで我々は、AS1/AS2遺伝子の変異体にケミカルジェネティクスを適用して、統一的な作用機作を明らかにすることを目的とした。これまでに、as1とas2変異体にアルカロイド化合物であるベルベリンやカンプトテシン、DNA損傷試薬等を添加すると、葉の裏側化が著しく亢進することを明らかにした。(1)ベルベリンを投与した時の葉の形成に関わる遺伝子の発現解析を行った。その結果、茎頂メリステム維持遺伝子群とETTIN等の裏側化遺伝子群の発現が上昇している事が分かった。一方、表側遺伝子群の発現レベルには特に変化は認められなかった。(2)カンプトテシンのターゲットであるトポイソメラーゼIαの遺伝子の変異体とas1/as2との二重変異体、または、as1/as2変異体にカンプトテシンやDNA損傷試薬をを投与した時の遺伝子発現解析を行ったところ、ほぼ、ベルベリンと同じ結果が得られた。(3)特に共通に発現レベルに変化が大きかった、ETTIN遺伝子の変異とas1またはas2との二重変異体に、カンプトテシンを加えたところ、野生型に近い葉の形態を示した。以上の結果から、葉の棒状化は、主に、ETTIN遺伝子の異所的発現上昇が原因と考えられた。棒状化を引き起こすケミカルは、ETTIN遺伝子の表側における恒常的な発現抑制に必要な因子の特異的機能阻害をしている可能性が考えられた。扁平な葉の形成は、光合成機能にとっても、極めて重要であり、AS1/AS2によるETTIN遺伝子の抑制機構の分子レベルでの解析が今後重要であると考えられる。
脂質および糖代謝動態の探索による子宮体癌分子機構の解明

本研究は子宮体癌と生活習慣病発症に共通して潜在する遺伝因子と環境因子を統合的に解釈し、子宮体癌と生活習慣病の個別化予防法に結びつけることを目的とした。検討の結果、1)子宮体癌例ではBSO施行時期が閉経前後のいかんにかかわらず、高TG血症と診断された例が有意に高頻度であった。2)非子宮体癌例では骨粗鬆症と高TG血症と相関するものの、子宮体癌例では高TG血症を有する骨粗鬆症は有意に低頻度であった。3)BSO施行例を対象に、エストロゲン代謝関連遺伝子多型(ESR1, UGT2B17, UGT1A1)と骨粗鬆症との関連を検討したところ、遺伝子多型と骨粗鬆症の有無に相関を認めなかった。多くのがんは多因子遺伝疾患であり、遺伝因子と環境因子の双方がその発症に関与していることが判明している。元来より子宮体癌は閉経前後での発症が高頻度で、肥満、糖尿病、脂質異常症などの生活習慣病を背景を有する例が多いと考えられてきた。このことは子宮体癌が生活習慣病とがんとの関連を探るモデル疾患となりうることを意味する。一方で近年は若年発症の子宮体癌例も増加しており、従来から提唱されている疫学的特徴から逸脱するケースも多い。そこで本研究は子宮体癌発症に関わる遺伝因子と環境因子を統合的に解釈し、その分子病態を明らかにすると共に、ドラッグリポジショニングを含めた子宮体癌治療候補薬を同定を試みることで、最終的に子宮体癌発症例のQOL維持に貢献することを目的とした。子宮体癌の危険因子として生活習慣病の関与が示唆されている。子宮体癌治療では両側卵巣卵管摘出術(bilateral salpingo-oophorectomy:BSO)が標準治療に含まれており、BSO施行後のがんサバイバーではエストロゲンが欠乏することにより脂質異常症や骨粗鬆症罹患率が上昇し、将来的にはそれらに起因する寝たきりの高危険群となる。子宮体癌罹患数の増加と集学的治療法の進歩は、将来におけるBSO施行後の婦人科がんサバイバーが増加することを意味しており、このような症例に対して系統的に早期介入する体勢を確立することは喫緊の課題であるといえる。本研究は子宮体癌サバイバーを対象に、血清脂質値や骨密度の特徴などの疫学因子およびエストロゲン代謝に関連した遺伝因子の解析について検討し、BSO施行例の将来的なQOL低下に対する個別化予防法に結びつけることを目的とした。慶應義塾大学病院産婦人科女性健康維持外来に受診した女性を対象として、疫学的因子の聴取とともに、血清脂質値、甲状腺機能、ヘモグロビンA1c(HB-A1c)、骨密度および骨代謝マーカーを測定した。遺伝因子はエスロトゲン代謝関連遺伝子の多型を測定した。また若年子宮体癌の妊孕性温存希望例に対しては、高用量MPA(medroxyprogesterone acetate)療法が行われているが、その奏効は個人差が大きい。そこで慶應義塾大学病院産婦人科バイオバンク(Keio Women's Health Biobank)に保管されているがん組織DNAとgermlineDNAのペアサンプルを用いて、次世代シーケンサーを用いて体細胞ゲノム異常を検出し、子宮体癌と生活習慣病に共通するパスウェイを検出して、生活習慣病治療薬を用いた子宮体癌に対するドラッグリポジショニングの可能性につき検討した。婦人科腫瘍学1年目は膨大な臨床データの解釈を中心に行い、その結果を公表することができた。子宮体癌例における骨密度の特性、およびエストロゲン代謝関連遺伝子多型の関与について検討中である。さらに若年発症子宮体癌関連遺伝子の探索を行う予定である。平成25年度は臨床データ解析が主であり、消耗品への充当が少なくなった。平成26年以降は成果発表のための国外旅費にも充当予定である。
喘息COPDオーバーラップ症候群のフェノタイプ分類とバイオマーカーの探索

まず、閉塞性気道疾患における1秒量低地に関与する炎症タイプを検討した。未治療過去喫煙喘息例において好酸球性炎症および好中球性炎症の両者の重要性を示した。次に、喫煙喘息例における好酸球性炎症を反映するバイオマーカーを探索した。喫煙喘息例で非喫煙喘息例より黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシン(SE)感作率が高いこと、SEへの感作が喫煙喘息例における好酸球性炎症および気流閉塞、治療強度と相関すること、禁煙期間が長いほどSE感作率が低くなることを見出し、報告した。以上より、SEへの感作は閉塞性肺疾患における喫煙および好酸球性炎症に関与し、閉塞性気道疾患病態に関わっている可能性を示した。まず、閉塞性気道疾患例における1秒量低値に関与する炎症タイプを検討した。非喫煙喘息例では好酸球性気道炎症が、喫煙非喘息例では好中球性気道炎症が、気流閉塞と関連するが、喫煙喘息における炎症タイプと気流閉塞との関連は不明であった。そこで、過去喫煙喘息例を対象とし、血液像と呼吸機能検査との関連を検討した。そして、以下の結果を得た。過去喫煙喘息例は、年齢および性別をマッチさせた非喫煙喘息例に比べ、呼吸機能が低かった。また、過去喫煙喘息例は、末梢血好酸球数および末梢血好中球数がそれぞれ独立してFEV1低値に寄与した。過去喫煙喘息例において末梢血好酸球数はFeNO/CANO、FVC、R5-R20/Fres/AX、末梢血好酸球数はFEF25-75%と、有意に相関した。以上より、未治療過去喫煙喘息例において、好酸球性炎症および好中球性炎症の両者の重要性が示された。次に、閉塞性気道疾患例における好酸球炎症を反映するバイオマーカーを検討した。成人喫煙喘息患者において、登録時の黄色ブドウ球菌の感作の有無とIgE/好酸球性炎症を含めたさまざまな臨床指標との関連を検討した。その結果、過去喫煙および現喫煙において、黄色ブドウ球菌感作群は非感作群に比し、他の吸入抗原に対する特異IgE値および血清総IgE値、末梢血好酸球数が高く、より重症であった。閉塞性気道疾患例において、黄色ブドウ球菌が好酸球性炎症および重症度を反映するバイオマーカーである可能性が示唆された。症例数不足。喫煙歴のある閉塞性気道炎症例の検討として、喫煙喘息例における好酸球性炎症を反映するバイオマーカーを探索した。黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシンは、一般人口における現喫煙例やCOPD例でその感作率が高いことが既報で知られていたが、喫煙喘息例で非喫煙喘息例より黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシン感作率が高いこと、黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシンへの感作が喫煙喘息例における好酸球性炎症および気流閉塞、治療強度と相関すること、禁煙期間が長いほど黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシン感作率が低くなることを見出し、報告した(Nagasaki T, et al. Ann Allergy Asthma Immunol. 2017)。以上より、黄色ブドウ球菌由来エンテロトキシンへの感作は閉塞性肺疾患における喫煙および好酸球性炎症に関与し、ACOS病態に関わっている可能性を示した。このように病態を明らかにしたことで、より個別化した管理への応用が期待される。症例数を集積。症例集積に時間を要し、バイオマーカー測定に遅延が生じたため引き続き、症例集積を行い、有用なバイオマーカーを探索する。
皮膚悪性腫瘍に対する組織特異的プロモーターを用いた遺伝子導入の検討

皮膚由来の悪性腫瘍,(皮膚扁平上皮ガン,悪性黒色腫)の培養細胞株に対して,組織特異的プロモーター(tissue specific promoter)により発現されるanti-senseribozymeの抗腫瘍効果について検討した。悪性黒色腫についてはチロジナーゼプロモーターを用いた場合,CMVプロモーターと同等へそれ以上のribozyme発現を認めた。tissue/cell specificityに関してはメラノサイト以外の正常細胞(角化細胞など)について検討中である。又,角化細胞特異的プロモーターとしてのAP-2などはクローニングの段階にとどまっている。表皮細胞(Keratinocyte)に対する遺伝子導入はアプローチしやすいこともあり数多くの検討がなされている。実際的には細胞増殖も正常の表皮細胞では緩徐なものであることからin vivoのモデルでの導入効率は低い。現在のところ、腫瘍細胞株を用いて、in vitroでの遺伝子導入を主としてliposomeによる方法で試みている。ベクターとしてGreen Fuluolesein proteinをコードするシークエンスを含むものを使用し、Fusion proteinの量、持続時間をあわせて検討している。あわせて来年度はGene Gunなどより実際的な方法を試みたい。
慢性閉塞性肺疾患におけるフェノタイプ解析と分子病態解析による新規診断治療法の確立

慢性閉塞性肺疾患(COPD)の表現型として特に臨床的に重要な「肺機能急速減衰」と「増悪難治化」の表現型に関与する分子細胞因子を検討した。肺機能急速減衰は全身性炎症指標のTNF-a値が初期の低値から高値へ増高する際におこりやすく、増悪難治化は増悪の引金が宿主常在GNRである場合におこりやすいことが示された。さらに、COPD、喘息(BA)、両者合併(ACOS)における「全身性炎症」と「酸化ストレス」について検討した。その結果、全身性炎症は喫煙病態をもつCOPD/ACOSがBAに比して強く、また酸化ストレスは抗酸化能がCOPDで極端に低下しているためBA/ACOSに比して亢進していることが示された。COPDの臨床表現型の中でも増悪(Exacerbation)は、予後および医療コストの観点からも重要である。今回我々は、COPD増悪の重症度と難治度を規定するリスク因子を検討した。分子マーカーとしては、炎症(WBC, CRP)、栄養(Alb)、に加えて、遺伝子レベルで検索した増悪原因微生物(ウイルス、細菌等)とした。増悪に絞った解析を行うため、今回はCOPD増悪により受診した患者50名を対象とし(2012年8月から1年)、受診時に鼻咽頭スワブと喀痰を用いてMultiplex Real-time PCR(細菌6種、ウイルス11種)および培養等従来法により起因微生物を検討した。次に、重症増悪(死亡、ICU入室、人工呼吸器装着)および難治性増悪(死亡、2週間を超えた入院)と各種因子との関連を検討した。各種因子としては、年齢、性別、肺機能の他、HOT使用、WBC、CRP、Alb、起因微生物等を候補とし、単変量解析の結果と合わせて選択した。結果、COPD増悪例は50症例(男47例)、平均年齢76.4歳、起因微生物の同定は43例(86%)で行われ、ウイルスの関与は16例(33%)に認められた。検出微生物中では、S.pneumoniae、H.influenzae、Influenza virusの順に多く認められたが、P.aeruginosaやS.aureusなども検出された。次に、重症増悪は9例、難治性増悪は20例であった。これに対する、多変量解析の結果、重症増悪に対する有意なリスク要因は認められなかったが、難治性増悪に対しては、HOT使用(重度呼吸不全の存在)がOR= 6.1 (95%CI= 1.5-24.9) P=0.01、喀痰からのP.aeruginosaや腸内細菌等GNRの検出がOR=5.5 (95% CI= 1.1- 27.9) P=0.04であった。これらGNRは定常時の喀痰からも検出されており、宿主に常在していると考えられる。したがって、重症呼吸不全の存在と下気道のGNR常在はCOPD増悪の際に難治化する要因として重要と考えられる。慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、喫煙を主因とし気道炎症から進行性の気流閉塞を呈する病態である。これまで我々は、ヒト手術検体を用いた細胞レベルの検討や当院外来COPD患者のコホート研究を行ってきた。これらを発展させ、血液サンプル等による分子細胞レベルの表現型とCOPDの臨床表現型の関連を検討することが課題である。臨床表現型の中でも早期に肺機能が低下する群(Rapid Decliner:肺機能早期減衰群)は、予後の観点からも重要である。今回我々は、COPDのRapid Decliner群を規定するリスク因子を検討した。当院呼吸器内科を受診しているCOPD患者45名について、肺機能の減衰と各種因子との関連を検討した。各種因子としては、年齢、性別、肺機能の他、BMI、Smoking index、治療薬、併存症、さらに全身炎症指標(TNF-a、hrCRP)、酸化ストレス指標(8-OHdG/Cr)を調べた。1年後に肺機能の再検し、FEV1の年間減少量が60mL以上の場合を肺機能早期減衰群、それ以外を非肺機能早期減衰群とした。結果、肺機能早期減衰群は15名、非肺機能早期減衰群は30名であった。多変量解析の結果、肺機能早期減衰に関与する因子としてはチオトロピウムの使用がOR= 0.095 (95%CI= 0.012- 0.725)

P=0.023、TNF-a初期値<1.0pg/mLであることがOR=20.8 (95% CI= 1.77- 250.0) P=0.016であった。即ち、チオトロピウムによる治療は早期減衰を予防する可能性が示され、TNF-a初期値が高値でない方が早期減衰となる可能性が示された。後者についてさらに検討すると、肺機能早期減衰群はTNF-a初期値は低値であるが、1年後には高値となっており、将に全身性炎症が発現しようとしている状態であることが示唆された。慢性閉塞性肺疾患(COPD)は、喫煙を主因とし気道炎症から進行性の気流閉塞を呈する病態である。また近年では、COPDと気管支喘息(BA)の合併症(ACOS)が重要な臨床表現型として、強調されている。COPDの発症、増悪には、喫煙による酸化ストレスの存在が重要とされる。本研究では、分子細胞表現型と臨床表現型の関連を検討することが課題であり、今回は酸化ストレスを惹起するメカニズムを解明するために、COPD、BA、ACOSにおける抗酸化力の分子細胞レベルの表現型を検討した。当院通院中のCOPD、BA、ACOSと診断されている安定状態の患者59名(各17/30/12)に対し、全身炎症指標(WBC、CRP)、酸化ストレス指標(8OHdG/Cr、OH-1)を検討した。医歯薬学これまで我々は、ヒト手術検体を用いた細胞レベルの検討や当院外来COPD患者のコホート研究を行ってきた。これらを発展させ、血液サンプルや喀痰等による分子レベルの表現型とCOPDの臨床表現型の関連を検討することが課題である。COPDの臨床表現型の中でも増悪(Exacerbation)は、肺機能予後、生命予後および医療コストの観点からも重要とされる。また、一度増悪をおこすと1ヶ月を経ても10%程の症例で肺機能の低下や症状が持続することが示されており、増悪の難治化は重要な医療課題の一つである。今回我々は、Multiplex Real-time PCRと培養等従来法を組み合わせることで、86%の症例に起因を想定させる微生物を同定し得た。また、ウイルスの検出も33%に認めた。さらに、難治性増悪のリスク因子を検討したことで、重症呼吸不全の存在と下気道のGNR常在が難治化のリスクとなる可能性が示唆された。GNRの中には、S.marcescens、A.baumannii、Ecoli等が含まれており、免疫力の低下、院内感染の既往、不顕性誤嚥の存在等が示唆される。呼吸機能の維持のみでなく、口腔ケア、誤飲予防、免疫力の賦活等が重要と考えられる。これは増悪から見たCOPDの治療戦略において重要なポイントであり、研究目的の一つの領域(難治性増悪と云う表現型に関する解析)の達成ともいえる。これまで我々は、ヒト手術検体を用いた細胞レベルの検討や当院外来COPD患者のコホート研究を行ってきた。これらを発展させ、血液サンプル等による分子細胞レベルの表現型とCOPDの臨床表現型の関連を検討することが課題である。臨床表現型の中でも早期に肺機能が低下する群(Rapid Decliner:肺機能早期減衰群)は、予後の観点からも重要である。今回我々は、COPDの肺機能早期減衰群を規定するリスク因子を検討することで、全身性炎症が将に発現する時に肺機能の早期減衰が起こる可能性が示唆された。全身性炎症が顕在化していないCOPD患者にチオトロピウム等LAMAの治療介入をするとで、肺機能早期減衰を回避できる可能性が示唆されたと云える。これはCOPDの治療戦略の考察において重要なポイントとなる事象であり、研究目的の一つの領域(肺機能早期減衰と云う表現型に関する解析)の達成ともいえる。現在、さらなる分子レベルの表現型として、疲労と細胞老化を検討している。
Braarudosphaera属化石1億4千万年の歴史と系統進化

現生Braarudosphaera属の形態と遺伝学的多様性の関連を調べ,サイズの違いが遺伝学的な違い(種分化)を反映していることを示した.北西大西洋から採取された深海底コア試料中のBraarudosphaera化石のサイズ変化の変遷を調べた結果,円石藻群集の多様性が減少する2.7Ma1.7Maにおいて,Braarudosphaera属のサイズの多様性が増大していることを明らかにした.現生Braarudosphaera属の形態と遺伝学的多様性の関連を調べ,サイズの違いが遺伝学的な違い(種分化)を反映していることを示した.北西大西洋から採取された深海底コア試料中のBraarudosphaera化石のサイズ変化の変遷を調べた結果,円石藻群集の多様性が減少する2.7Ma1.7Maにおいて,Braarudosphaera属のサイズの多様性が増大していることを明らかにした.Braarudospahera bigelowiiは,現生の円石藻のなかでは最も古い歴史をもち,その化石記録は約1億4千万年前まで遡ることができる. K/T境界の大絶滅事件の直後やOligocene Diversity Minimumに世界中の海洋で大繁栄した歴史があり,古生物学的に非常に重要な種である.しかしながら形態が単純で分類基準が整理されていなかったために,これまで複数の種がB. bigelowiiの名の下にまとめられてきた.そのため,この長い歴史を持つ生物群の多様性の変遷ならびに,系統進化と古環境変動との関連は不明な点が多い.本研究の目的は, 1)化石記録と結晶の微細構造に基づいてBraarudosphaera属の1億4千万年の歴史と系統進化を解明すること, 2)現生種の細胞構造や分子情報に基づいて同種の石灰化システムや分類体系の整理を行うこと,の2点である.本年度は,日本近海におけるB. bigelowii個体群の形態情報と分子情報の比較を行い,その結果, B. bigelowii個体群の分類にはサイズが重要なファクターであることを明らかにした.この結果を,第2回国際ナノプランクトン学会において研究発表した.さらに,北西大西洋から採取されたODP Leg164試料中の新生代Braarudosphaera属化石のサイズの変遷を調べ,その結果,第三紀・第四紀境界において10ミクロン以上の大型のBraarudosphaera属が存在し,それらが過去200万年以内のいずれかの時点で絶滅したことを発見した.Braarudosphaera bigelowiiはK/T絶滅の直後やOligocene Diversity Minimumに世界中の海洋で大繁栄した歴史があり,貧多様性海洋植物相の議論の上で重要な種である.Takano et al (2006)によるSSU rDNAの解析の結果,現行の分類基準による「B.bigelowii」が複数の種の集合体である可能性が示された.しかしながら,形態が単純で分類基準が整理されていないため,この系統の多様性と環境事変との関連は不明である.本年度は1)化石記録とコッコリス微細構造に基づいてBraarudosphaera属の歴史と系統進化を解明すること,2)現生種の細胞構造や分子情報に基づいて同種の石灰化システムや分類体系の整理を行うこと,を目的に以下の研究を行った.a)日本近海におけるB.bigelowii個体群の形態情報と分子情報の関連を調べた.その結果,ペンタリスのサイズがB.bigelowiiの種の分類基準として有効であることを明らかにした.この結果を,Marine Micropaleontologyに論文発表した.b)鳥取県東伯郡湯梨浜町の沿岸でB.bigelowiiの生細胞を多数採集し,細胞の内部構造の観察を行った.d) ODP leg 164で採取された深海底柱状堆積物試料を用いてBraarudosphaera属化石の顕微鏡観察を行い,新生代におけるBraarudosphaera属化石のサイズの変遷と地球環境変動との関連を調べた.e)九州大学で行われた日仏二国間交流事業「生物学に基づく古海洋学の新展望」と,プランクトン学会シンポジウム「原生生物の多様性と生態的機能」において講演を行い,他分野の研究者と研究議論を行った.Braarudospahera属は沿岸生の円石藻だが,K/Pg絶減の直後やOligocene Diversity Minimumのような多様性が著しく下がった期間に限って,外洋でも大繁栄した歴史がある.そのためBraarudospahera属は,貧多様性海洋を特徴づける種群である可能性が高い.本年度は,1)Braarudospahera属の多様性と環境変動の関係を化石紀録に基づいて解明すること.2)Braarudospahera属の起源を細胞構造に基づいて検証すること,を目的に以下の研究を行った.1)北西大西洋の外洋域から採取されたODP leg 164深海底コア試料中のBraarudospahera属化石の形態測定を行い,Braarudospahera属化石のサイズ組成の変遷を詞べた.そして,2.5-1.7Maにかけて,Braarudospahera属化石のサイズレンジが大幅に拡大していたことを明らかにした.Braarudospahera属のサイズの違いと遺伝学的多様性(種分化)には密接な関係があることが知られている(Hagino et al.2009).そのため本研究で観察されたサイズの多様化は,Braarudospahera属が2.5-1.8Maの間に種分化していたことを示唆している.

2.5-1.8Maは,第三紀を代表する様々な円石藻の種が絶減し,外洋の円石藻の多様性が低下した時期である.よって,この時期におけるBraarudospahera属の多様化は,外洋の貧多様化と関連づけられると可能性が高い.以上の結果を論文発表に向けて準備中である.2)鳥取県東伯郡湯梨浜町において現生Braarudospaheraを採集し,透過型電子顕微鏡観察を行った.以上の結果を論文発表に向けて準備中である.
人間の言語処理過程に立脚した自然言語処理方式の研究

本年度は下記のような成果を上げ、当初の目標を達成した。1.人間の言語処理過程のモデルに基づく自然言語理解システムの構築に関しては、未知語句処理を含むように人間の言語理解モデルを拡張し、これに基づく理解システムを構築し、大量の新聞記事データを素材としてその性能評価し、基本的有効性を確認した。2.人間の言語理解における難解文章の処理過程のモデル化に関しては、前年度までに構築した眼球運動計測装置を用いて、日本語において文の処理過程の難易に関する実験を行い、日本語処理のモデルを構築した。3.人間の言語理解における曖昧文章の処理過程のモデル化に関しては、前年度の成果に基づき、談話理解における辞書的多義性の解消と、翻訳における言語的知識と内容的知識について実験し、種々の知見を得た。4.人間の言語理解における相手の意図推察過程のモデル化に関しては、対話システムの対象領域を計算機利用支援システムとし、時間的に可変なユーザの知識状態に動的に応ずるユーザモデル管理機構を作成した。5.人間の言語理解における文章の文脈構築過程のモデル化に関しては、前年度の成果に基づき、物語文章の意味を構造的に表現する枠組みを提案し、その心理的妥当性を実験を通じて検証した。6.人間の言語理解における推論過程のモデル化に関しては、人間の心象現象に基づく自然言語意味記述、人間の心象現象の形式化とその実装、自然言語文の理論構造の分析、人間の言語理解過程の分析を行った。7.人間における文章生成過程のモデルに基づく自然言語生成システムの構築に関しては、人間における文章生成過程のモデルに基づき、計算機による日本語文章生成のための新しいアルゴリズムを作成・実装した。8.誤解を避ける文章表現上の工夫に関する実証的研究に関しては、狭義の伝達と教育的伝達の特徴を、実地調査により、比較・検討した。
消化管及び膵臓カルチノイド腫瘍における神経系中間径線維の発現様式と悪性度の検討

消化管・膵臓カルチノイド腫瘍は、稀ならずリンパ節や肝臓に転移を示すが、その悪性度の指標は確立されているとはいい難い。ペリフェリンやαインターネキシンは細胞骨格を形成する中間系線維であり、主に神経組織で発現しているため、神経系中間径線維と呼ばれている。転移陰性直腸カルチノイド腫瘍では、全例でびまん性にペリフェリンが発現していたのに対し、転移陽性症例ではペリフェリンの発現が喪失又は減弱していた。αインターネキシンは転移陰性例の約半数の症例に陽性であった。虫垂カルチノイド腫瘍では、びまん性に両者の発現を認めた。以上の結果から、ペリフェリン発現の喪失を検討することが、直腸カルチノイド腫瘍の悪性度診断に有用であり、またカルチノイド腫瘍の発生部位により神経系中間径線維の発現様式が異なることを明らかにした。本邦で消化管カルチノイド腫瘍の多くを占める直腸カルチノイド腫瘍における神経糸中間径線維の発現について検討した。転移の見られない直腸カルチノイド腫瘍では、びまん性にIII型神経系中間径線維であるペリフェリンの発現が観察されるが、転移を示した直腸カルチノイド腫瘍ではペリフェリンの発現が喪失する症例が多いことを報告した。また、直腸とともに下部消化管カルチノイド腫瘍の好発部位のひとつである虫垂カルチノイド腫瘍では、IV型神経系中間径線維であるαインターネキシンが、ペリフェリンとともにびまん性に共発現していることを新たに見出した。直腸では転移の見られないカルチノイド腫瘍では全例でペリフェリンの発現が見られるのに対し、αインターネキシンは約半数程度の症例の一部の腫瘍細胞にしか発現が見らない。以上のことから、カルチノイド腫瘍の発生部位により、神経系中間径線維の発現パターンが異なることが判明した。また、直賜カルチノイド腫瘍におけるtight junction構成分子であるclaudinの発現について検討した。直腸カルチノイド腫瘍ではclaudin-2,-3,-4の発現が全例で観察された。膵臓内分泌腫瘍ではclaudin-3の発現が観察されるものの、claudin-2, -4は陰性であり、また肺カルチノイド腫瘍の多くはclaudin-2, -3, -4のいずれの発現もみられないことから、内分泌腫瘍においてclaudinの発現パターンが発生部位により異なることを明らかにした。Claudin-3,-4は細胞障害性を示すClostridium perfringensのenterotoxinの受容体であることが判明している。これらの受容体を発現している腫瘍において、このenterotoxinが新たな治療のターゲットになるのではないか、最近考えられている。直腸カルチノイド腫瘍は直径1cm未満の小さな病変であっても、肝臓などに転移を示す症例が稀ではなく、われわれの直腸カルチノイド腫瘍におけるclaudin分子発現の知見は新たな治療につながる可能性があるものと考えられる。以上のことから、カルチノイド腫瘍の発生部位により、神経系中間径線維の発現パターンが異なることを明らかにした。また、膵臓カルチノイド腫瘍では、αインターネキシンの発現が見られるのに対し、ペリフェリンの発現は見られないことを明らかにした。また、直腸カルチノイド腫瘍におけるtigh junction構成分子であるclaudinの発現について検討した。直腸カルチフイド腫瘍ではclaudin-2, -3, -4の発現が全例で観察された。

これらの受容体を発現している腫瘍において、このenterotoxinが新たな治療のターゲットになるのではないかと、最近考えられている。直腸カルチノイド腫瘍は直径1cm未満の小さな病変であっても、肝臓などに転移を示す症例が稀ではなく、われわれの直腸カルチノイド腫瘍におけるclaudin分子発現の知見は新たな治療につながる可能性があるものと考えられる。
複素多様体からの群の表現の解析

今年度においては、次のような結果が新しい知見として得られた。まず、志賀によって、有限次元ユークリッド空間におけるHardy空間H^1とBMOの間の双対関係が理想境界がParabolicであるRiemann面のEndでも成立することが示された。換言すれば、Riemann面を表す群に関して保型的なある調和関数のクラス間の双対性を示すものであり、これまで、種数及び境界成分が有限のRiemann面でしか証明されていなかった事実の拡張になっている。大鹿はトポロジーの立場から3次元双曲的多様体とそれに関する不連続群(Klein群)を考察し、その幾何学的、代数的収束と不連続領域のCaratheodory convergenceとの関連性を明らかにした。松崎はSchottky型のKlein群の特徴付けを行った。これは古典的なSchottky群に対してMaskitが得た結果の拡張になっている。また、その応用として生成元の個数が2であるKlein群に対してAhlfors予想を肯定的に解決した。最近はタイヒミュラー空間の構造に関する研究がある。野口は多変数函数の値分布論を活用し、複素双曲的多様体間の正則写像を研究してその有限性定理を導いた。これはLang予想の肯定的解決にあたる。また、宍倉は最近の論文(未発表)においてマンデルブロー集合の境界のHausdorff次元が2であることの証明に成功している。これは複素力学系における一つの重要な予想の解決として学会の注目を集めている。吹田は古典的なRadoの定理に新しいしかも簡便な別証明を与えた。