hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
LC/MS/MS用高性能標識試薬の開発と生体分子の高感度分析への応用

近年、高速液体クロマトグラフィー(LC)とタンデム型質量分析器(MS/MS)を組み合わせたLC/MS/MS法が広く用いられている。本研究では、LC/MS/MS法における検出感度および選択性の向上を目的とした標識試薬を合成した。また、合成した標識試薬を用いて疾患のマーカーとなる生体分子の高感度な分析法を開発した。本研究で開発した分析法は、新生児のマススクリーニング法として海外で用いられている。近年、タンデム型質量分析器(MS/MS)が開発され、HPLCを組み合わせたLC/MS/MS法が、分析化学、生命化学、臨床化学、環境化学など広い分野で用いられるようになっている。本研究は、LC/MS/MS法における検出感度、選択性の向上のための標識試薬を開発することを第一の目的とした。そして、開発した標識試薬を用いて、疾患のマーカーとなる生体分子の高感度分析法の開発、さらには特定の官能基を有する生体分子の網羅的解析法を開発することを第二の目的とした。平成19年度は、LC/MS/MS法に適しか高性能標識試薬を開発することを目的として研究を行った。一般に、LC/MS/MS法に用いる標識試薬には、1)分析対象分子と高い反応性を有する、2)イオン化効率を高めるために容易にイオン化する構造を有している、3)イオン化抑制物質である塩や親水性化合物と逆相HPLCで分離するために適度な疎水性を有している、4)MS/MS法により特定の娘イオンを選択的に高い収率で生じる、などの条件を満たすことが必要である。まず、特定の娘イオンを効率よく生成する構造を見出すために、化合物の構造とMS/MS法による解裂様式との関係を詳細に検討した。その結果、標識試薬骨格として優れた性質を有するベンゾフラザン骨格と結合したスルホンアミド基の近傍で解裂が起き、選択的かつ高い収率で娘イオンを生じることが明らかになった。以上の結果を用いて、DAABD-AEをけじめとするカルボキシル基を分析対象としたLC/MS/MS用標識試薬を開発した。さらに、開発した試薬を用いて、有機酸代謝異常症のマーカー分子の高感度分析法を確立した。現在、新生児マススクリーニング法への応用研究を展開中である。平成20年度は、前年度に開発したDAABD-AEを用いて、LC/MS/MSによる血漿中極長鎖脂肪酸(炭素鎖2026)の高感度分析法の開発に取り組んだ。DAABD-AEによる脂肪酸の標識化は、縮合剤存在下、60°C、45分で行った。標識化した脂肪酸は逆相カラムで分離しESI-MS/MSにより検出した。標識化した脂肪酸はMS/MSによりm/z151のイオンを効率よく生じるため、SRM(selected reaction monitoring)による高感度な分析が可能であった。また、分析に要する時間は5分以下であった。本法は、従来のGC/MS(ガスクロマトグラフィー/質量分析法)による方法と比較して、前処理が簡便であり分析時間も大幅に短縮できた。この方法は、現在、先天性代謝異常症の一つであるペルオキシソーム病の新生児マススクリーニング法として海外で用いられるようになっている。また、カルボニル基を分析対象とした標識試薬DAABD-MHzを新たに開発した。この試薬を用いることにより、先天性副腎過形成症のマーカー分子である17-ヒドロキシプロゲステロンなどのケトン類の高感度分析が可能であった。
遺伝子導入法を用いた歯周組織細胞分化の分子機構の解明

エナメル抽出物は骨形成およびセメント質形成を誘導する。我々はマウス骨芽細胞様株細胞(ST2,C2C12,MC3T3-E1)とヒト歯根膜由来細胞(HPDL)を用いて、骨形成およびセメント質形成を誘導する生理活性物質の検索を行った。BMPおよびTGF-β特異的ルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いた実験で、これらのレポーター遺伝子がエナメル抽出物に反応する事から、この中にはBMPおよびTGF-βが含まれていることが分かった。BMPはマウス骨芽細胞のアルカリホスファターゼ(ALP)活性および石灰化を促進するが、TGF-βはこのBMPの作用を抑制する。他方HPDLではTGF-βはアルカリホスファターゼ(ALP)活性および石灰化を促進するが、BMPでは変化がない。マウス骨芽細胞様株細胞におけるBMPの作用はレチノイン酸で相乗的に促進される。これらの細胞内シグナル伝達経路を調べるため、siRNAを用いてシグナル伝達に関与している可能性のある遺伝子の発現を阻害した。レチノイン酸の伝達経路ではα、βおよびγレセプター(RARα,β,γ)のうちRARγを阻害した時シグナルが抑制された。またBMPのシグナル伝達物質として知られているsmad1の阻害でもALPおよび石灰化が抑制された。これらの結果からsmad1を介したBMPのシグナルとRARγを介したレチノイン酸のシグナルのクロストークが存在すると考えられる。MP阻害剤であるNogginやTGF-βの阻害剤であるSB431542を用いることにより骨芽細胞様株細胞およびHPDL細胞の分化に影響をあたえることからも、内在性のBMPやTGF-βが細胞分化に関与していることが示唆される。歯根膜中には骨、セメント質、歯根膜に分化する未分化間葉系細胞が存在し、BMP、TGF-βおよびレチノイン酸などの分化誘導因子は相互に影響しあいながらこれらの細胞に作用し、歯周組織への分化に強く関与していることが示唆された。これまでの研究から、歯根膜由来の培養細胞は骨由来の細胞に比べ、硬組織の分化に関与している分化誘導因子であるBMPおよびTGF-βに対する反応性が異なっていることが予想された。この事実を確認するため、BMPおよびTGF-β特異的レポーター遺伝子、アルカリホスファターゼ(ALP)活性および石灰化を指標にしてこれらの分化誘導因子の作用を調べた。その結果、骨芽細胞系の細胞ではBMPによりALP活性の上昇、石化化の促進が認められ、これらの作用はTGF-βによって強く阻害される。しかし、歯根膜由来の培養細胞はBMPとTGF-βの作用が骨由来の細胞とは全く逆で、TGF-βでALP活性が上昇し、石灰化が促進しする。そしてBMPはこれらのTGF-βの作用を強く抑制することが明らかとなった。また、これらの作用はTGF-βに特定的な阻害剤や中和抗体およびBMPに特異的な阻害物質Nogginを使用することでも確認された。硬組織の形成に関連のあるいくつかのマーカー遺伝子の発現をみると、骨芽細胞ではBMPで誘導されるこれらの遺伝子のいくつかが、歯根膜細胞ではTGF-βで誘導されることが判明した。さらにこの細胞にBMPを誘導する化学物質スタチンを添加すると、BMPのみならずTGF-βも誘導され、複雑な反応を示すことが明らかとなった。

現在計画に従って幾つかの挿入遺伝子を調整中であり、今後これらの遺伝子を使用して、これまでに確立した実権系でを用いBMPとTGF-βの分化誘導の分子機構を解明し、これらの分化誘導因子の歯周組織再生への応用を検討する予定である。歯周組織細胞を用いたこれまでの研究から以下のような結果が得られた。(1)ヒト培養歯根膜細胞の性質歯根膜由来の培養細胞は線維芽細胞ようの形態をし、アルカリホスファターゼ(ALP)活性が高く、β-グリセロリン酸存在下での長期培養で石灰化するなど、一見培養骨芽細胞と類似した性質を示す。しかしながら、さまざまな性質を検討した結果、BMPとTGF-βに対する反応性が著しく異なることが明らかとなった。すなわち、骨芽細胞系の培養細胞ではBMPでALP活性が上昇し、TGF-βでその活性が強く抑制するのに対し、歯根膜由来の培養細胞では逆にTGF-βでALP活性が上昇し、BMPはむしろその活性を抑制されることが明らかとなった。また長期培養における石灰化の促進作用も歯根膜由来の細胞ではBMPよりもTGF-βの方が効果的であった。(2)ヒト培養歯根膜細胞へのスタチンの作用スタチンはBMPを誘導する化合物として知られているが、TGF-βも同時に誘導することが明となった。その結果、骨芽細胞でも歯根膜細胞でもこの二つの分化誘導因子が競合し、複雑な作用を示す。株化された骨芽細胞系の細胞でこの分子機構の詳細を検討した。今後歯根膜細胞でもその機構を検討する。(3)歯根膜細胞の分化能とセメント質の分化マーカーラットを用いたチタンインプラントの実験から、歯槽骨との間に歯根膜組織を介して、移植物の表面にセメント質様の硬組織が形成される。形態学的にはこの硬組織はセメント質である可能性が高いと思われるが、現在のところ骨とセメント質を区別する有効なマーカーがない。そこで、現在セメント質、象牙質および骨からタンパク質を抽出し、質量分析機により、セメント質特有のタンパク質を検索中である。(4)BMPで誘導される遺伝子骨芽細胞および歯根膜細胞をBMP、TGF-βで分化誘導したとき発現する遺伝子をDNAチップで検索し、いくつかの遺伝子についてさらにPCRで発現を確認し、転写因子や未知の遺伝子をいくつか選択した。今後これらの遺伝子について、その役割を明らかにしてゆきたい。歯周組織はセメント質、歯根膜および歯槽骨からなる複雑な組織である。歯根表層のセメント質と歯根を取り巻く歯槽骨は石灰化した硬組織で、これらは丈夫な線維状の軟組織である歯根膜でつながっている。骨髄や歯根膜由来の培養細胞中には硬組織に分化する未分化間葉系細胞が存在する。骨髄中の未分化間葉系細胞はBMPによりアルカリホスファターゼ(ALP)が誘導され、長期培養では石灰化し硬組織に分化する。BMPによる初期のこれらの分化誘導はTGF-βにより強く阻害される。逆にヒト歯根膜由来の未分化間葉系細胞はBMPではなくTGF-βでALP活性が上昇し、TGF-β存在下で長期培養すると石灰化が促進し、硬組織へと分化する。骨髄由来細胞の骨芽細胞への分化誘導はBMP特定阻害剤であるNogginで抑制される。また歯根膜由来細胞の硬組織への分化はTGF-βの得的阻害剤であるSB431542で阻害される。常時活性型BMPレセプターをアデノウイルスで骨系の細胞に挿入するとBMPを添加したときと同様の結果が得られた。常時活性型TGF-β
クラスター的描像に基づく原子核の弱結合状態の研究

ラスター的描像の見地から安定原子核および不安定原子核の励起状態の構造を理論的に解明した。特に、クラスター構造をもつ励起状態の探索を行い、非常に発達した3体クラスター的状態の理論的予言を行った。さらに、中性子過剰な原子核の構造について微視的理論計算を行い、2中性子相関の解析を行い、スピンゼロに結合した中性子が原子核表面で空間的に強く相関を持つメカニズムを調べた。本研究は、原子核構造をクラスタ-的描像の見地から理論的に解明する。特に最近注目されている軽い安定核領域および不安定核領域の弱結合状態に注目し、「新しいタイプのクラスタ-的状態」、「クラスタ-化をともなって出現する多様な構造」、「クラスタ-的性質と平均場的性質の共存」に関する未知現象の解明と理論的予言を行う。最近、12Cの第二0+状態が3つのαクラスターが緩く束縛したクラスター気体的な状態であるという提案がTohsakiらによってなされ、他の原子核にもこのような励起状態が現れるかが注目された話題になっている。我々は、11Cや11Bなどの原子核の励起状態を系統的に研究し、励起エネルギー8MeV近傍に、非常に発達した3体クラスター的な構造が表れうることを予言した。理論計算でGamov-Tellar遷移やM1遷移の実験値を非常に良く再現でき、クラスター的状態とシェル模型的状態の混在を示唆する興味深い結果が得られた。さらに最近の非弾性散乱実験で、基底状態からこの励起状態へ強い単極子遷移が観測されたが、我々の理論計算においてその実験値を再現することに成功した。この3体クラスター的状態は強い単極子遷移に特徴づけられ、3つのクラスター(2α+t)が緩く束縛された状態であることを理論的に示し、12Cの第二0+状態に類似したクラスターの気体的な状態の候補と考えられるという新たな知見を得た。さらに13Cの励起状態に3体クラスター的な構造が出現しうるかを調べた結果、第三1/2-状態に3α+n的なクラスター状態が出現することを理論的に予言した。計算結果は、予言した状態はクラスターが自由に運動する気体的な状態ではなく、むしろ、3αが幾何学的な三角形配位をもつことが示唆している。また、13Bの励起状態の構造を研究し、励起状態に大きな変形構造が表れる可能性を提案した。この変形構造から構成される回転帯として、2つの中性子が励起した不パリティ回転帯と、2つの中性子と1つの陽子が励起した正パリティ回転帯を予言した。低いエネルギー領域にこのような多粒子-多空孔配位が現れることは驚くべきことであり、13Bにおける2αクラスター芯と分子軌道の形成が要因であると予想される。また、この理論結果は、最近、実験でみつかった1/2+状態に対応するものと考えられる。特に中性子過剰原子核において2中性子がスピンゼロの対を構成したクラスターが発達するかという問題は、α凝縮状態や2中性子凝縮問題として非常に興味深い問題である。我々は、中性子過剰なHe同位体の基底状態および励起状態を理論的に研究し、6Heや8Heにおいて2中性子相関について解析を行った。その結果、例えば6He基底状態において発達した2中性子クラスターは、8Heにおいてはスピン軌道力の効果で壊れやすいことがわかった。さらに注目すべき結果として、8Heにスピンパリティ0+の励起状態が出現することを理論的に予言し、この状態が2つの2中性子がαクラスターの周りを回るα+2n+2n構造が発達する可能性を示した。2つの中性子は非常に緩く束縛して密度の薄い気体的状態であることを示し、2中性子凝縮状態の候補であることを理論的に示唆した。中性子過剰な原子核において2中性子凝縮が起こる可能性を指摘した画期的な成果である。この変形構造から構成される回転帯として、2つの中性子が励起した負パリティ回転帯と、2つの中性子と1つの陽子が励起した正パリティ回転帯を予言した。負パリティに対する理論結果は、励起エネルギー10MeV近傍に最近の実験で見つかっている励起状態に対応するものと考えられる。最近、中性子過剰核での2中性子相関が注目されている。密度の薄い領域に強い2中性子すなわちスピンゼロの2核子相関が見られる可能性が指摘され理論・実験で注目された話題となっている。

注目すべき結果として、8Heにスピンパリティ0+の励起状態が出現することを理論的に予言し、この状態が2つの2中性子がαクラスターの周りを回るα+2n+2n構造が発達する可能性を示した。2つの中性子は非常に緩く束縛して密度の薄い気体的状態であることを示し2中性子凝縮状態の候補であることを理論的に示唆した。さらに中性子過剰な7Hの構造を研究し、2中性子クラスターが出現するかどうか調べた。その結果、7H基底状態における2中性子相関は、8He基底状態よりも強い可能性が示唆された。これは、7Hでは中性子が緩く束縛されていて密度の薄い中性子スキンが出現することが要因と考えられる。中性子過剰な原子核において2中性子凝縮が起こる可能性を指摘した画期的な成果である。また、ハドロン3体系の問題では、K中間子が1つの核子に非常に緩く束縛された系が存在しうることを指摘し、そのような系ではアイソスピンがゼロのK-N対における強い相互作用のために(K-N)クラスター構造が現れるという理論的示唆を得た。本年度は、C同位体およびNe同位体について、励起状態に出現するクラスター構造の理論的探索を行った。理論的手法としてはプログラムが完成している反対称化分子動力学法(AMD)を用いた。主に、拘束条件を課した変分計算に基づくAMD法を適用して基底状態および励起状態の構造計算を行った。四重極変形度に拘束をかけたAMD法を9Li,10Be,11B,12C原子核に適用し、この手法が有効であることを確かめた。またNe同位体については、クラスター間距離を拘束座標に採用した。C同位体おいて3つのαクラスターから形成されるクラスター気体的な状態およびポリマー状態を研究し、14C原子核における3αチェーン構造が励起状態に現れることを理論的に示唆した。Ne同位体に関しては、22Neの励起状態の構造を理論的に調べた結果、αクラスターの芯をもつαクラスター状態の他に、空間的な相関をもつ2αクラスターすなわち8Beクラスターが発達した14C+8Be構造が高い励起状態に現れる可能性を指摘した。これらの結果から、閾値エネルギー近傍に発達したクラスター構造が出現するという性質は安定原子核のみならず、不安定原子核においても普遍的に見られる性質であるという新しい知見を得た。さらに、中性子過剰核における2中性子相関に関するテーマとして、中性子過剰なHe同位体の2中性子密度の解析を行い、6Heおよび8Heの核表面には2中性子相関に起因した2中性子密度の増大が見られることを指摘した。
川崎病後の動脈硬化進展に関する冠動脈先端画像法とマルチバイオマーカーとの融合研究

川崎病は乳幼児期に好発する原因不明の急性有熱性疾患である。本疾患は全身の中小動脈血管炎が主病態であり、急性期炎症が鎮静化した後も存在し早期動脈硬化の発症と進展に関連する可能性が指摘されており、血管内皮障害・慢性炎症・酸化ストレスの3者による悪循環が関与するという仮説が提唱されている。我々は川崎病発症後5年以内にはすでに血管内皮形態の変化に先行し血管内皮機能障害が存在することを見出した(Ishikawa T, et al. JPediatr 2013)。さらに川崎病急性期における有熱期間が長期化するほど酸化ストレス誘発(oxidative stress-induced)血管内皮障害のリスクが高くなることを証明した(Ishikawa T, et al. BMC Cardiovasc Dis. 2017)。これにより川崎病後早期動脈硬化への進展に関する悪循環はすでに若年小児の段階から始まっていることが確認された。しかしながら現時点で川崎病遠隔期症例でのアテローム動脈硬化の存在は証明されておらず、川崎病既往例における冠動脈壁の形態・性状の詳細な評価は重要な研究テーマであるといえる。近年、先進的血管内画像診断装置である光干渉断層法(OCT)が開発され、より詳細な冠動脈の形態的観察が可能となった。しかしOCTを用いた評価は成人の虚血性心疾患に限定されており、川崎病後の動脈硬化についてOCTを用いた研究は現時点で皆無である。本研究では冠動脈先端画像評価を用い川崎病後の動脈硬化に関する画像解析・マルチバイオマーカーの融合研究を行うことにより川崎病後動脈硬化のメカニズムを解明し、その早期診断方法の確立と患者毎のリスク層別化ならびに川崎病の包括的治療戦略の構築を目指す。平成30年度は川崎病既往例に対する冠動脈造影ならびにOCTによる形態評価、各種バイオマーカーの測定を開始した。当初の予定であった川崎病既往例に対する冠動脈造影、OCTによる形態評価、各種バイオマーカーの測定を開始し研究の土台を構成する当院循環器内科との連携方法を確立することができた。現時点では目標症例数には及ばないものの、今年度はすでに数例のOCT検査が予定されており基礎データの収集をさらに進めてゆく。症例の蓄積については今後もリクルートを進めるとともに、必要に応じて内外の研究者および関連病院のネットワークも活用してゆく予定である。検討症例数が予定より少なくバイオマーカー測定試薬等の支出が少なかったため。
教材提示および教材作成支援システムの実現と教材作成法についての研究

計算機システムの低価格化などにより,教育現場に計算機システムを導入できるようになってきた.この場合の一つの問題は,この新しい教材提示のためのメディアの利用法である.本研究では,計算機システムを用いた教材作成支援,教材提示法について考察し,試作,実験,試用を通して多くの結果を得た.(1)教材作成・提示法についての研究(a)コンパイラトイウ複雑な変換系を例として,その内部動作を分かりやすく可視化する手法を提案し試作を行い,当学科の講義でその効果を確認した.(b)ソ-トという,計算機科学における基本的かつ重要なアルゴリズムを例として,それを効果的に説明するための可視化教材を試作した.(c)計算機システム間を接続するネットワ-ク上の電子メ-ルシステムを利用して,自動的にレポ-トを回収したり,学生への応答を自動的に返したりするシステムを試作し,実際に運用を行い,その有効性を評価した.(d)特定の教材の提示に限定されない,汎用の教材作成・提示システムを作成した.教官は自分の使い慣れたエディタを用いて教材を作成でき,組み込み編集機能ですばやく修正することもできる.本システムを当学科の講義で用いたり,放送大学の放送授業の中で使用し,その有効性を調べ,改良を重ねている.(2)教材提示におけるユ-ザインタフェ-スに関する基礎的研究(a)項目を縦書きにし,左右に並べた横配置型ポップアップメニュ-方式を提案し,その有効性を実験的に評価した.(b)従来効率が悪いと考えられてきたマルチカラムメニュ-方式が,実際にはプルダウンメニュ-方式よりも選択時間の点で優れていることを実験的に示した.(c)横配置型メニュ-方式を階層型ポップアップメニュ-方式に応用して,従来の縦配置型メニュ-方式よりも優れていることを示した.(d)リモ-トプルダウンメニュ-方式を提案し,本方式が,選択時間の点でも,使いやすさの点でもプルダウン方式よりも優れていることを示した.計算機システムの低価格化などにより,教育現場に計算機システムを導入できるようになってきた.この場合の一つの問題は,この新しい教材提示のためのメディアの利用法である.本研究では,計算機システムを用いた教材作成支援,教材提示法について考察し,試作,実験,試用を通して多くの結果を得た.(1)教材作成・提示法についての研究(a)コンパイラトイウ複雑な変換系を例として,その内部動作を分かりやすく可視化する手法を提案し試作を行い,当学科の講義でその効果を確認した.(b)ソ-トという,計算機科学における基本的かつ重要なアルゴリズムを例として,それを効果的に説明するための可視化教材を試作した.(c)計算機システム間を接続するネットワ-ク上の電子メ-ルシステムを利用して,自動的にレポ-トを回収したり,学生への応答を自動的に返したりするシステムを試作し,実際に運用を行い,その有効性を評価した.(d)特定の教材の提示に限定されない,汎用の教材作成・提示システムを作成した.教官は自分の使い慣れたエディタを用いて教材を作成でき,組み込み編集機能ですばやく修正することもできる.本システムを当学科の講義で用いたり,放送大学の放送授業の中で使用し,その有効性を調べ,改良を重ねている.(2)教材提示におけるユ-ザインタフェ-スに関する基礎的研究(a)項目を縦書きにし,左右に並べた横配置型ポップアップメニュ-方式を提案し,その有効性を実験的に評価した.(b)従来効率が悪いと考えられてきたマルチカラムメニュ-方式が,実際にはプルダウンメニュ-方式よりも選択時間の点で優れていることを実験的に示した.(c)横配置型メニュ-方式を階層型ポップアップメニュ-方式に応用して,従来の縦配置型メニュ-方式よりも優れていることを示した.(d)リモ-トプルダウンメニュ-方式を提案し,本方式が,選択時間の点でも,使いやすさの点でもプルダウン方式よりも優れていることを示した.研究実施計画に基づき,以下のように研究を行った.1.計算機を利用した教材提示システム用作成支援システムの問題点を検討し,それらを解決した作成支援システムの試作を行った.このようなシステムの問題点は,教材が画面に表示されるオブジェクトが時間軸上に展開されるという3次元構造を持っているため,教材を作成するための労力が大きすぎることである.本研究においてはこの問題点を考慮し,3次元デ-タを編集しやすくするための機能について考察し,試作システムを開発した.次年度においては,試作システムにおいてどの程度この問題が解決されたかを検証する予定である.2.半年間のコンパイラについての講義,演習を通じて,講義と演習を並行に行うために必要な教材配置,より効果的に教育を行うための可視化教材の開発を行い,実際に利用し評価した.計算機によるアルゴリズムアニメ-ションを用いた可視化教材が効果的なことがわかったが,これは一通りの実行を見せるという単なるデモプログラムでは不十分で,教材としては教えたいポイントに集中できるような機能を付加することが必要であることがわかった.また,同時にこの教材配置に対応した学生用テキストの作成も行った.3.ソ-ティングという重要なアルゴリズムを例にとり,アルゴリズムレベルの可視化シミュレ-タを開発した.従来のシミュレ-タは入力として極端な例やランダムな例しか行えなかったが,今回開発したシミュレ-タは数種類の整列度を指定することにより,いろいろな整列度の入力例を利用できる.このためアルゴリズムの振る舞いがよりよく理解できるようになった.

計算機システムの低価格化などにより,教育現場に計算機システムを導入できるようになってきた.この場合の一つの問題は,この新しい教材提示のためのメディアの利用法である.本研究では,計算機システムを用いた教材作成支援,教材提示法について考察し,試作,実験,試用を通して多くの結果を得た.(1)教材作成・提示法についての研究(a)コンパイラという複雑な変換系を例として,その内部動作を分かりやすく可視化する手法を提案し試作を行い,当学科の講義でその効果を確認した.(b)ソ-トという,計算機科学における基本的かつ重要なアルゴリズムを例として,それを効果的に説明するための可視化教材を試作した.(c)計算機システム間を接続するネットワ-ク上の電子メ-ルシステムを利用して,自動的にレポ-トを回収したり,学生への応答を自動的に返したりするシステムを試作し,実際に運用を行い,その有効性を評価した.(d)特定の教材の提示に限定されない,汎用の教材作成・提示システムを作成した。教官は自分の使い慣れたエディタを用いて教材を作成でき,組み込み編集機能ですばやく修正することもできる.本システムを当学科の講義で用いたり,放送大学の放送授業の中で使用し,その有効性を調べ,改良を重ねている.(2)教材提示におけるユ-ザインタフェ-スに関する基礎的研究(a)項目を縦書きにし,左右に並べた横配置型ポップアップメニュ-方式を提案し,その有効性を実験的に評価した.(b)従来効率が悪いと考えられてきたマルチカラムメニュ-方式が,実際にはプルダウンメニュ-方式よりも選択時間の点で優れていることを実験的に示した.(c)横配置型メニュ-方式を階層型ポップアップメニュ-方式に応用して,従来の縦配置型メニュ-方式よりも優れていることを示した.(d)リモ-トプルダウンメニュ-方式を提案し,本方式が,選択時間の点でも,使いやすさの点でもプルダウン方式よりも優れていることを示した.
唾液腺主導管上皮の機能的、形態的解析III.マウス顎下腺主導管上皮

唾液腺の研究は数多く行われているが、殆ど腺房部や導管系でも線条部と顆粒管の研究に限られ、主導管の研究は少なく未知のまゝ残されている点が多大である.そこで助回、今まで研究が皆無であったマウス主導管上皮の構造を明らかにし,その機能を解明する目的で研究を行い、次の事を明らかにした.1.雄性マウス主導管上皮はtypeーI,ーII,基底細胞から構成されていた。TypeーI細胞はミトコンドリア,滑面小胞体が豊富で,基底側に基底陥入を有していた.TypeーII細胞は西洋ナシ型をしていて、基底陥入はない。最も特徴的なことは、核の上下の細胞質に電子密度の高い顆粒が存在する事であった。組織細胞化学本研究(AcPase反応実験,複合糖質反応実験,脂質抽出実験)により,この顆粒の主成分は脂質である、顆粒周囲や内部に点状に水解酵素が存在する事が明らかになった.この顆粒はミトコンドリア由来であると考えられた。またこの顆粒が管腔内に存在する像も観察され,水分・イオン代謝よりむしろ何らかの物質を加えることにより、最終唾液形成に関与している事が示唆された.2.マウス導管系では介在部、顆粒性導管部で雌雄差があることがわかっていたが、今回の研究により主導管においても雌雄差がある事が明らかになった。上皮はtypeーI,ーII,ーIII,基底細胞より構成されていた。typeーI細胞は、雄のものと類似しているが基底陥入の発達は良い。typeII細胞は非常に電子密度が低い事、遊離リボゾ-ムが豊富な事、封入体を有するペリオキシソ-ムが多い事などが異っていた。typeーIIIは雌にのみ存在していた。脂質を有する顆粒も存在するが数が少ない事から、性ホルモンの影響を調べたが、雄での去勢実験や雌でのテストストロン投与実験でも大きく変動せず、性ホルモンの影響は無い様であった。雄の主導管より雌のものの方が、水分、イオン代謝に関与していると推測された。マウス主導管上皮の機能を考える目的で、以下の実験を行い、次の様な結果および今後の問題点を得たので、その概要を報告する。1.雄性マウスの顎下腺主導管上皮は、3種類の細胞から構成されている。TypeIとTypeIIの細胞頂部にある小胞内と管腔中のamorphousな物質がムコ多糖類である事とTypeII細胞の核上部と核下部にある電子密度の高い果粒にムコ多糖類があるかどうか調べる為に物理現像法を用い糖質の検出を行った。ダイアモンドナイフは切片の作成に使用された。TypeIとTypeIIの細胞頂部にある小胞と管腔中のamorphousな物質には反応は認められなかった。しかしTypeIIの細胞に見られる電子密度の高い果粒内には点状に反応が認められた。今後はこの糖がどういう性質か調べる為にレクチン法で免疫電顕的に調べる必要がある。2.TypeIIに認められる電子密度の高い果粒が糖脂質であるかどうか調べるためにαナフト-ル法を用いて研究を行った。αナフト-ル法で上皮内に反応が認められた。

しかしこの方法だと濃硫酸を使用する為に切片が溶けた様になり写真を取る事が出来なかった。3.TypeIの細胞には滑面小胞体が多く、lipidも観察され、ステロイド分泌細胞を思わせる。ステロイドが存在するかどうか調べる為に3αーHydroxysteroid反応を行ったが、上皮内に反応は認められなかった。精巣の組織を取り、positive controlの実験をやる必要がある。4.雄性と雌性マウス主導管の形態に差があるか検索した。雄性マウスTypeIIに認められる電子密度の高い果粒は、雌には認められず、雌マウス顎下腺主導管上皮は雄のそれと非常に異なっている事がわかった。雄のTypeIIに認められる電子密度の高い果粒がNGFとEGFと同じ様に男性ホルモンの影響下にあるかどうか研究する為に去勢等の実験を今後行う必要がある。マウス主導管上皮の機能を考える目的で,以下の実験を行い,次の様な結果および今後の問題点を得たので,その概要を報告する。1.マウス顎下腺上皮は3種類の細胞(TypeI,TypeII,基底細胞)から構成されている。TypeII細胞に電子密度が高く,大きい(12μm)の果粒が存在している。この果粒の性質を調べる為に,電顕レベルでの脂質抽出実験を行った。この高電子密度の果粒の内容物は全部抽出されていた。又Typeに見られるlipid滴も内容物は無くなっていた。この事から高電子密度果粒の主成分は脂質であると考えられる。2.酸性ホスファタ-ゼ反応実験リソソ-ムとTypeII細胞の高電子密度果粒の外層に反応が認められた。3.TypeI,II細胞頂部にある小胞内と管腔内物質又TypeII細胞の高電子密度果粒が糖質を有しているかどうか、物理現像法を適用した糖質電顕組織化学を行った。それぞれの細胞の小胞内,グリコ-ゲン,管腔内,ゴルジ装置,TypeII細胞の高電子密度の外層に反応が認められた。この事は主導管上皮の細胞が何らかの糖質を分泌している可能性を示している。又高電子密度の外層に反応が認められた事は,酸性ホスファタ-ゼの反応と一致するもので、この部分に水解酵素が存在している事を示している。又この高電子密度果粒はミトコンドリア由来と考えられる。4.TypeII細胞の高電子密度果粒の性ホルモンの影響について調べた。去勢後1,2,3ケ月後に組織を切り出し調べた。数において減少し,お互が癒合する傾向にあった。3ケ月でほとんで認められなくなっており,この果粒が性ホルモンの影響を受けている事がわかった。テストステロン(男性ホルモン)投与後,この果粒が再形成されるかどうか調べる必要有マウス主導管上皮の機能を考える目的で、以下の実験を行い、次の様な結果を得たので、その概要を報告する。1.雄性マウスと雌性マウスの主導管上皮は組織学的に異っている点がある事がわかった。雄性マウスにはType I Cell,Type II Cell,と基底細胞があり、Type II Cellには0.51μmぐらいの電子密度の高い果粒が存在している。Acpase反応実験により水解酵素を有している事、脂質抽出実験により脂質を有する事がわかった。雌性マウスには、Type I Cell,Type II Cell Type III Cellと基底細胞がある。Type I Cellは雄性のものと似ているが、Type II Cellは、細胞質電子密度が非常に低く、脂質を有する顆粒が少ないこと、ペリオキシゾ-ムが多い点等で異っている。Type III Cellは雄性のものには存在しない。
ホイスラー構造を持つAuCuAl合金の延性化機構の解明と生体機能材料への応用

本研究はホイスラー構造を持つAuCuAl合金の延性化機構の解明と生体機能材料への応用を目的とする.ホイスラー構造をもつ金属間化合物は,強磁性形状記憶合金,熱電変換材料などさまざまな機能材料としての応用が期待させるが,多結晶では非常に脆い.このためからAu2CuAl基合金の粒界脆化の機構を解明することで本合金の生体機能材料への実用化の可能性を検証すると共に,生体機能材料として使用するため,耐食性や体積磁化率の評価を行う.本年度は,(1)生体機能材料としての耐食性,体積磁化率の評価,(2)マイクロワイヤー材の作製,(3)双結晶のミクロンサイズ試験片の作製を行った.(1)0.9mass%NaCl溶液と反応を加速させるため,乳酸によりpHを調整した0.9mass%NaCl溶液内で電気化学的手法を用いて耐食性の評価を行った.腐食電位付近でCuの活性溶解が見られたもののいずれの溶液においても生体内での使用に問題の無い高い耐食性を示した.また,体積磁化率については人体の体積磁化率に近い値を示した.(2)FIBにより作製する角柱ミクロンサイズ試験片は板材を用いていたが,双結晶の試験片を作製するに当たり,Au2CuAl基合金は電解研磨が難しく,粒界を含む加工面を探すの非常に時間がかかるため,実際の血管内治療機器への応用も見据え,マイクロワイヤー材の作製を行った.本合金系は,脆く,引き抜き加工が困難であるため,Au-Cuチューブ内にAl線を挿入したクラッドワイヤーを作製し極細線化し,その後,熱処理を行うことで合金化させた.この手法により直径100μmのワイヤー材が作成可能であり,特許出願も行った.また,拡散挙動についても明らかにした.(3)作製したマイクロワイヤー材は断面に結晶粒を3個ほど含んであり,そこから圧縮軸方向に垂直に粒界を導入した双結晶の作製に成功した.当初の研究計画では,本年度は複雑な粒界形状の形成過程と粒界特性の変化は透過型電子顕微鏡を用いた組織観察と微小試験機を用いた双結晶の圧縮試験により解明する予定であったが,双結晶のマイクロサイズ試験片の作製が順調に進まなかったため,翌年度以降に行う予定であった,微小機器としての機械的性質の評価と生体機能材料としての耐食性の評価を先に行った.しかし,いずれにおいても研究計画通りに研究は順調に進展している.今後の研究は,まず,作製に方法の確立できた双結晶のミクロンサイズ試験片をもちいて,微小材料試験機により機械的性質,形状記憶・超弾性特性を明らかにしていく予定である.また,同様に,微小顕微試験により臨界き裂長さを求め,粒界特性を明らかにし,粒界脆性の抑制機構の解明も行っていく予定である.本研究はホイスラー構造を持つAuCuAl合金の延性化機構の解明と生体機能材料への応用を目的とする.ホイスラー構造をもつ金属間化合物は,強磁性形状記憶合金,熱電変換材料などさまざまな機能材料としての応用が期待させるが,多結晶では非常に脆い.このためからAu2CuAl基合金の粒界脆化の機構を解明することで本合金の生体機能材料への実用化の可能性を検証すると共に,生体機能材料として使用するため,耐食性や体積磁化率の評価を行う.本年度は,(1)生体機能材料としての耐食性,体積磁化率の評価,(2)マイクロワイヤー材の作製,(3)双結晶のミクロンサイズ試験片の作製を行った.(1)0.9mass%NaCl溶液と反応を加速させるため,乳酸によりpHを調整した0.9mass%NaCl溶液内で電気化学的手法を用いて耐食性の評価を行った.腐食電位付近でCuの活性溶解が見られたもののいずれの溶液においても生体内での使用に問題の無い高い耐食性を示した.また,体積磁化率については人体の体積磁化率に近い値を示した.(2)FIBにより作製する角柱ミクロンサイズ試験片は板材を用いていたが,双結晶の試験片を作製するに当たり,Au2CuAl基合金は電解研磨が難しく,粒界を含む加工面を探すの非常に時間がかかるため,実際の血管内治療機器への応用も見据え,マイクロワイヤー材の作製を行った.本合金系は,脆く,引き抜き加工が困難であるため,Au-Cuチューブ内にAl線を挿入したクラッドワイヤーを作製し極細線化し,その後,熱処理を行うことで合金化させた.この手法により直径100μmのワイヤー材が作成可能であり,特許出願も行った.また,拡散挙動についても明らかにした.

(3)作製したマイクロワイヤー材は断面に結晶粒を3個ほど含んであり,そこから圧縮軸方向に垂直に粒界を導入した双結晶の作製に成功した.当初の研究計画では,本年度は複雑な粒界形状の形成過程と粒界特性の変化は透過型電子顕微鏡を用いた組織観察と微小試験機を用いた双結晶の圧縮試験により解明する予定であったが,双結晶のマイクロサイズ試験片の作製が順調に進まなかったため,翌年度以降に行う予定であった,微小機器としての機械的性質の評価と生体機能材料としての耐食性の評価を先に行った.しかし,いずれにおいても研究計画通りに研究は順調に進展している.今後の研究は,まず,作製に方法の確立できた双結晶のミクロンサイズ試験片をもちいて,微小材料試験機により機械的性質,形状記憶・超弾性特性を明らかにしていく予定である.また,同様に,微小顕微試験により臨界き裂長さを求め,粒界特性を明らかにし,粒界脆性の抑制機構の解明も行っていく予定である.本年度は,既存の装置,実験器具の使用で研究を遂行できた為,物品の購入をほとんどせずに済んだため.次年度では,繰り越した資金と合わせ,主に,実験器具の購入に充てていく予定である.また,合金原料等の消耗品の購入に充てる
水チャネル蛋白質、アクアポリンの唾液腺細胞における発現と機能調節の分子機構

水輸送に関与する蛋白質アクアポリンの存在が1992年、Agre等によって明らかにされ、現在まで、多数の新規AQP遺伝子が報告されてきた。1995年にクローニングされた外分泌腺型アクアポリンAQP5はそのペプチド構造中に蛋白質リン酸化酵素Aの標的となる構造が含まれていることから、本チャネル蛋白質はリン酸化され、それにより細胞内の小胞から細胞膜への移動(トラフィッキング)が起こる可能性がある。実際、腎集合管ではAQP2のC末端に近いSer(256)がADH依存性にリン酸化され、このリン酸化がAQP2のトラフィッキングに関与することが示唆されている。しかし、唾液腺におけるAQP5のリン酸化とトラフィッキングについては詳細は知られていない。以上の状況をふまえ、本研究ではトラフィッキングに関係する細胞内のシグナル伝達系並びに各アクアポリンの発現調節をin vitro,in vitro実験系において明らかにしようとした。そして、外来遺伝子をトランスフェクトした培養唾液腺細胞において細胞内カルシウムの上昇がAQP5小胞のトラフィッキングを惹起し、小胞と細胞骨格の相互作用がトラフィッキングに関与する可能性を明らかにした。一方、大量に水の輸送を行っている消化管、特に胃と十二指腸においてAQP5が発現していることを見い出した。消化管組織に発現しているAQP5のmRNAおよび蛋白質のサイズは唾液腺や肺と同様それぞれ1.9kbp、および27kDであることを確認し、さらに免疫組織化学染色により、十二指腸ではAQP5はブルナー腺の腺腔側膜に発現していることを明らかにした。またアセチルコリンやVIPなどの刺激は本組織AQP5のトラフィッキングを惹起した。またブルナー腺ではAQP5に加えてAQP1も細胞膜に発現し、AchやVIPによってトラフィッキングが起ることを見いだし、現在研究中である。本研究では、in vivo、in vitroの実験系において外分泌腺型水チャネル蛋白質、アクアポリン-5(AQP-5)の発現と機能調節の分子メカニズムを明らかにすることを目的とした。本年はまず培養細胞を用いたin vitroの実験系においてAQP-5トラフィッキングのメカニズムを究明した。まず、AQP-5を発現する培養唾液腺細胞は知られていないため、ラット顎下腺よりクローニングしたラットアクアポリン-5(rAQP-5)cDNAをHSGヒト唾液腺培養細胞に遺伝子導入した。導入遺伝子はHSG細胞でrAQP蛋白質を安定に強発現することをウェッスタンブロットおよび免疫染色により確認した。本細胞(HSGAQP5細胞)に細胞内カルシウムイオン上昇薬のタプシガルジン(小胞体カルシウムATPase阻害剤)を作用させると細胞内の小胞に局在したrAQP-5は細胞膜へ移動し、コルヒチンおよびビンブラスチン前処理によりこの移動は阻害された。本研究から小胞体から細胞膜への移動は細胞内カルシウムイオン上昇により惹起され、AQP-5を担う小胞のトラッフィッキングには細胞骨格が関与している可能性が示唆された。AQP-5分子内には蛋白質リン酸化酵素標的配列が存在するが、この配列がトラフィッキングや水チャネル活性に関係するかどうかについて、in vitoro mutagenesisの技術を用いて現在検討を行っている。平成11年度に引き続き、12年度も水輸送に関与する蛋白質アクアポリン(AQP)の研究を行った。AQP存在が1992年、Agre等によって明らかにされ、現在まで、多数の新規AQP遺伝子が報告されてきた。

1995年にクローニングされた外分泌腺型アクアポリンAQP5はそのペプチド構造中に蛋白質リン酸化酵素Aの標的となる構造が含まれていることから、本チャネル蛋白質はリン酸化され、それにより細胞内の小胞から細胞膜への移動(トラフィッキング)が起こる可能性がある。実際、腎集合管ではAQP2のC末端に近いSer(256)がADH依存性にリン酸化され、このリン酸化がAQP2のトラフィッキングに関与することが示唆されている。11年度は培養唾液腺細胞に遺伝子導入によって発現させたAQP5の動態を観察しそのトラフッキングについて究明した。平成12年度は、大量に水輸送を行っている消化管におけるAQP5の発現、局在、および調節について研究し、以下の結果を得た。(1)AQP5は多くの消化管に発現し、とくに胃と十二指腸においてその発現は強かった。(2)十二指腸に発現しているAQP5のmRNAおよび蛋白質のサイズは唾液腺や肺と同様それぞれ1.9kbp、および27kDであった。(3)免疫組織化学により、十二指腸ではAQP5はブルナー腺の腺腔側膜に発現していた。(4)消化管ホルモン、VIPの刺激は十二指腸AQP5のトラフィッキングを惹起した。(5)ブルナー腺ではAQP5に加えてAQP1も細胞膜に発現することを明らかにし、AchやVIPによってトラフィッキングが起ることを見いだしている(未発表)。これらについて、現在研究続行中である。
コンピューター利用による仏教文献の研究

1.『倶舎論』玄弉訳を全文打ち出し、校正を終えた。目下その結果を入力中で一部分は完成している。なお、全部に頁・段落・行数を入れ、検索に便ならしめている。頁・行数入力ソフトも作ったが、手作業による部分が多く、さほど有力なツールではない。2.『倶舎論』真諦訳を一部入力中であるが、費用・労力の点で限界があり、年度内には完成しなかった。なお、小部の『大乗記信論』に続き『妄尽還源観』を入力し、校訂・和訳も一括変換を応用しつつ完成させた。これらの作業は今後も継続していく予定である。3.欠字問題は重要な課題である。『倶舎論』総字数約50万字に対し、欠字は100余字でおよそ五千分の一の確率である。梵語の音写がかなりの部分を占めるから頻度は低いといえよう。他のテキストは約三千分の一程度の確率で、このあたりがおよその欠字数の目途となる。なお、禪文献は俗語を多く用いるので、例えば『景徳伝灯録』で約500字と多い。ただし、これらをクリアすれば中国文学・哲学との共通性も多いから、広い射程でことが行える可能性が出てくる。なお、これらの場合、旧字と新字の統一の問題も考慮しておく必要がある。4.欠字問題回避のため、現在は半角アルファベト2字の組み合わせで2700余字のカテゴリーが出来るので、それを仮に用いている。全国的な統一ルールが必要である。個人的努力と全体の協力体制のバランスが必要であろう。その際、版権の問題も考慮されねばならない。学会レベルでの取組が要請される由縁である。5.索引作製用のソフトを簡易言語で作製してあるので、検索は容易であるが、それ以上の研究としては何が可能であるのか、人文科学の研究そのもののシミュレーション、プログラム化が課題となってくる。PCで何が可能なのか。難問であるが、じっくりと考えていきたい。
Zr-89標識イメージング技術に基づく次世代抗体医薬の創生プラットフォームの形成

本研究はドイツーヴュルツブルグ大学におけるニ重特異性を有する次世代の人工抗体作成技術を導入し、本国研究組織のイメージング技術と融合することで、複数のがん抗原を同時に標的とした革新的な放射標識低分子抗体プローブを作成し、がん特異性を飛躍的に向上させたイメージング基盤技術の創出を目的とする。この技術は、抗原選択を変えることで、さまざまながんに対する特異性の向上が見込まれ、かつ抗体に治療モダリティを搭載することで抗体治療への発展性をもつ中核的な基盤技術となるものである。
従属栄養性渦鞭毛藻類の摂餌生態に関する研究

東京湾および広島湾で採集した試料で、餌生物の捕食が観察された渦鞭毛藻はProtoperidinium属の種が最も多く、ついでディプロプサリス科に属する種が多かった。これらの中で、Protoperidinium pellucidumとOblea rotundataは、デトリタスを含む多種類の対象を捕食していたが、この他の渦鞭毛藻では捕食対象種が12種であるものが多かった。また、Protoperidinium属、Gyrodinium属の渦鞭毛藻では珪藻を捕食している細胞の比率が著しく高かった。この他に、PolykrikosによるScrippsiella捕食、ProtoperidiniumによるCeratium捕食など従属栄養性渦鞭毛藻による独立栄養性渦鞭毛藻の捕食も観察された。Protoperidinium属の4種とGyrodinium属の2種について、それぞれの種と培養珪藻1種との混合培養を行い、捕食行動と増殖の有無を観察した。実験対象とした渦鞭毛藻の種類と実験時期によって、捕食対象となるか否かを実験した珪藻の種類数は若干異なり、1014種であった。海域で採取した試料中では捕食が観察される種類の珪藻でも、培養細胞を用いると渦鞭毛藻による捕食はほとんど観察されなかった。また、いくつかのクロ-ンが培養珪藻を捕食して増殖したP.leonisでも、培養は4週間前後継続しただけであった。鞭毛藻を餌料として確立されているGyrodinium培養株から、Gyrodiniumのみを分離して培養珪藻に対する捕食実験を行ったが、実験に用いて12種の珪藻に対する捕食行動は観察されず、Gyrodiniumは1週間以内に死滅した。Gyrodiniumと珪藻の混合培養系では、珪藻が容器の底に沈んでいるのに対して、Gyrodiniumは培養液の表面近くに集中し、容器の底に接近する細胞はわずかであった。このため、今後の培養実験ではGyrodiniumを珪藻に接近させ、捕食の機会を高めるためには、容器の振盪などによって珪藻を培溶液中にに懸濁させる必要があると考えられる。
心筋ミオシン軽鎖キナーゼのアクチン結合を介した新しい収縮制御様式の検討

平滑筋ではミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)が収縮制御の主役をなし、これによりミオシンがリン酸化され、アクチン・ミオシン相互作用が開始されるとされている。私どもは、このMLCKにはアクチン結合性があり、ミオシンリン酸化とは独立に相互作用を抑制するという作用を検出した。そしてこれがCa^<2+>存在下のカルモジュリンにより解除されることを発表した。この抑制作用は強力で、類似の機能をもつ平滑筋カルデスモンの100倍近くなる。一方、トロポニン-トロポミオシン系はCa^<2+>が存在しない時にはアクチン・ミオシン相互作用に抑制をかけ、Ca^<2+>によりトロポニン経由で抑制が解除される。上のような結果から、カルモジュリン(CaM)-MLCK系がトロポニン-トロポミオシン系に対するCa^<2+>の作用と酷似するため、カルモジュリン-MLCK系が心筋でも収縮制御の一端を担っているのではないかという着想にいたった。平成7年度の本重点研究ではこの着想を証明する事ができた。平成8年度ではMLCKのアクチン結合部位の構造と機能を解析するのに成功した。平滑筋MLCKをコードするcDNAを利用し、アクチン結合部位に対するDNAをRT-PCRにて自由にデザインした。このDNAをpET発現ベクターに組込み組換体発現蛋白質として大腸菌よりアクチン結合蛋白質を得た。いくつかの組換体蛋白質のアクチン結合性とアクチン・ミオシン相互作用の抑制と比較し、N末端より41残基までの配列がアクチン結合とそれに起因する抑制現象に重要な働きをしている事が明かとなった。
戦後日本の農業協同組合による保健・医療・福祉活動の歴史社会学的研究

本研究は、農業協同組合(以下、JA)による農村における保健医療活動ならびに福祉活動の形成・展開過程を歴史社会学的に考察することを目的とし、文献研究とインタビュー調査を行っていくものである。今年度、文献資料の収集では、島根県立図書館担当者からの示唆を得て戦前期の『島根県農会報』を入手することができ、農家経済や女性労働、共同作業の実態について理解を深めることにつながった。これらは、戦後のJAの活動にいかに継承されたかを検討する際に有益な資料となった。インタビュー調査では、高齢者の通所介護事業を行っている中山間地域のJAにおいて、高齢者福祉活動の立ち上げから運用に携わっているJA職員と組合長に対してそれぞれ聞き取りを実施することができた。JA入職後の経歴やJAの高齢者福祉事業に対する考え、地域住民と地域社会の生活福祉面の課題の変化や捉え方等を中心に聞き取り、事例検討という形で国際農村医学会での発表につながった。今回のインタビュー調査によって、過去2年間に行った調査で確認された組合員や地域住民のニーズ、JAの存在意義の提示、農協事業の拡大という動機に加え、支店の統廃合による影響、スタッフの育成・定着率の向上といった管理的側面が見出された。インタビュー調査は3年間の研究期間中延べ11名に実施したが、対象者の所属や立場に偏りが生じ、分析に十分な数には至っていないことから、最終年度も引き続き実施していく。3年の研究期間で、JAの元職員、現職員、そして組合員、組合長の延べ11名にインタビュー調査を実施したが、本研究においては、同一のJAにおける福祉事業の第一線担当者と組合長との組み合わせで実態を把握することが重要であると考える。そのためインタビュー対象者の選定に苦労した。さらに、所属機関での教育その他の業務との兼ね合いで、インタビュー調査のための時間が十分捻出できなかった。結果的に限られた候補日の中では対象者との日程調整が難しく、分析に十分な数のインタビュー調査が行えなかった。以上の理由から、研究期間を1年間延長することで対応することとした。比較的柔軟な時間調整が可能な年度前半期に集中的にインタビュー調査を実施し、調査データをまとめていく。あわせて、研究成果を国内外に発信していく予定である。また、本研究の到達点と限界を示しながら、残された課題も整理していく。本研究は、農業協同組合(以下、JA)による農村における保健医療活動ならびに福祉活動の形成・展開過程を歴史社会学的に考察することを目的とする。そこで、本研究では、文献研究とインタビュー調査によってJAとその前身である産業組合の保健・医療・福祉活動の制度面ならびに実践面の検証を社会保障制度に関する局面ごとに行う。今年度に行った研究を整理すると、次の通りである。文献研究においては、全国厚生農業協同組合連合会において、全国および各県のJA厚生事業に関する沿革史を網羅的に収集した。病院運営や健康診査等の活動を中心に資料を読み込んだが、福祉活動については個別のJAや女性組織の沿革史で確認する必要を得た。インタビュー調査においては、JA厚生連が運営するへき地医療拠点病院の病院長と島根県内JAの(元・現)職員複数人を対象に実施することができた。これらより、JAが医療、保健、子育て、高齢者介護、そして生活全般にわたって、組合員に限定せず広くその地域に暮らす人々に行ってきた事業を生活問題の質的変化に沿って整理することができた。そして、地域のニーズや既存の資源の活用、当事者性、協同の精神という観点からは、JAが今後も地域社会における保健福祉事業の提供主体の一つとして大いに機能を発揮できることが推察された。さらに、平成28年度お茶の水女子大学「若手女性研究者支援」プロジェクトの助成を受け、シンポジウム「農業協同組合による保健福祉事業の歴史ー地域住民の生命と生活はいかに守られてきたか」を開催した(平成29年1月)。このシンポジウムは、本研究と密接に関わるものであり、企画・実施過程において、史的展開からみた農業協同組合による保健福祉事業の今日的意義に関する知見を得るとともに、研究者・実践者とのネットワークをつくることができた。史資料の収集と分析を計画的に遂行している。インタビュー調査に関しては、対象者の選定と依頼にあたって協同組合論を専門とする研究者からの支援を得て、島根県のJAの(元・現)職員複数人に実施し、本研究を推進する上での知見や資料を多く得ることができた。ただし、インタビュー対象者の活動時期が1990年代後半以降に限定されているため、次年度は時代を遡って活動内容を聴取できる対象を探していく必要がある。また、今年度の成果を国際学会で発表し、参加者とのディスカッションの中で、日本の農業協同組合の独自性への気づきや最新の研究動向を得ることができた。本研究は、農業協同組合(以下、JA)による農村における保健医療活動ならびに福祉活動の形成・展開過程を歴史社会学的に考察することを目的とし、3年間で文献研究とインタビュー調査を行っていくものである。2年目にあたる平成29年度は、前年度に引き続いて文献資料の収集と分析を行うとともに、インタビュー調査を精力的に実施した。文献研究においては、調査対象とした中国地方と関東地方の中山間地域にあるJAが発行する広報誌の通読、そして、インタビュー調査の過程で、保健・福祉活動の推進にあたってはJAの女性組織の活動や組織の変遷が切り離せないものであることが明らかとなり、女性組織に関する資料の収集を重点的に行った。また、JAによる保健・福祉活動の意義に立ち返って先行研究や報告書から整理を試みた。