hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞内スフィンゴ脂質選別輸送の分子機構と生体膜ドメイン形成にはたす役割

膜脂質の細胞内選別輸送のメカニズムはほとんど未解明のままである.主要膜リン脂質の一つであるスフィンゴミエリン(SM)の生合成では,小胞体で合成されたセラミドがゴルジ体に移行してSMへと変換される.我々は、細胞内セラミド選別輸送の欠損CHO細胞変異株を分離・解析し、その欠損を回復する遺伝子をクローニングする手法を通じて、セラミド選別輸送を担う特異的因子CERTの同定に成功した。CERTは、小胞体に会合するドメイン、ゴルジ体に会合するドメイン、およびセラミドを脂質膜から特異的に引き抜くドメインを持つことを昨年度までに明らかにした。本年度は、人工膜を用いた膜間脂質転移アッセイによってCERTの基質認識選択性を詳細に解析した。その結果、CERTは、(1)セラミドの4つの立体化学異性体のうち、天然型のD-erythoro-セラミドのみを認識し、(2)スフィンゴシン、SM、コレステロールなどの他の脂質は認識できない。ただし、ジアシルグリセロールはわずかに認識する一方、(3)ジヒドロ型およびファイト型セラミドは認識し、また、様々なアミド鎖長のセラミドも認識することが明らかとなった。また、CERTとセラミド基質の結合比は、1対1であることも明らかにした。さらに、我々が以前開発したセラミド輸送阻害剤・HPA12は、CERTのアンタゴニストであることも示した。一方、海外の研グループとの共同研究によって、酸化ストレスによる細胞死において新合成のセラミド蓄積が重要であることや、ジフテリア毒素の侵入に宿主細胞スフィンゴ脂質が必要であることなどを示唆した。セラミド(Cer)は小胞体で合成された後、ゴルジ体へ輸送され、スフィンゴミエリン(SM)やグルコシルセラミドに変換される。我々は、チャイニーズハムスター卵巣由来CHO細胞を親株として、SM生産に欠損のある変異株(LY-A株)を得、この変異株の性質が小胞体-ゴルジ体間のATP依存性Cer輸送の欠損によることを見いだしている。今回、Cer輸送の詳細を明らかにする目的で、無傷細胞で観察されるCer輸送の性質を反映するin vitro再構成系の樹立した。このin vitro再構成系において、CHO細胞野生株由来ののsemi-intact細胞と細胞質画分を用いると、Cer→SM変換がみられ、ATP依存性を示した。LY-A株由来のsemi-intact細胞と細胞質画分の場合は野生型に比べCer→SM変換活性が低く、ATP依存性はみられなかった。さらに、細胞質を相互に交換すると、LY-A semi-intact細胞ではATP依存性のCer→SM変換活性が野生型まで回復し、野生型のsemi-intact細胞ではLY-A株のレベルまで低下した。semi-intact細胞におけるSM合成酵素活性自体はATP、細胞質依存性を示さなかった。また、これらの結果から、小胞体-ゴルジ体間Cer輸送には細胞質因子が必要であること、LY-A細胞のCer→SM変換活性低下は細胞質因子の欠損によることが明かとなった。細胞をTriton X-100などの界面活性剤で処理すると、脂肪酸付加型タンパク質がスフィンゴ脂質やコレステロールとともに難容性の複合体として回収されることから、この複合体を反映するような膜マイクロドメインが生体膜に存在していると考えられつつある。スフィンゴ脂質合成に欠損を有するCHO細胞変異株を用いた解析から、スフィンゴ脂質が界面活性剤難容性膜ドメインの形成に重要な役割をしていることを我々は示した。セラミド(Cer)は、小胞体の細胞質表面で合成された後、ゴルジ体の内側に移行して主要膜リン脂質の一種であるスフィンゴミエリン(SM)へと変換する。前年度までに、Cer輸送欠損細胞変異株を分離し、さらに、小胞体-ゴルジ体間Cer輸送のin vitro再構成系をも樹立し、これら実験系を用いた解析から、「小胞体-ゴルジ体間Cer輸送の主経路はATPおよび細胞質依存性である」ことを明らかにしている。細胞内Cer輸送機構を解明していくには、本機能を特異的に阻害する薬剤が貴重な材料となると期待されるが、このような薬剤は知られていなかった。本年度は、化学合成した新規Cer構造類似体群のなかから、Cer-SM変換を阻害する化合物(HPA-12)を見いだし、本化合物がATPおよび細胞質依存性の小胞体-ゴルジ体間Cer輸送過程を選択的に阻害することを明らかにした。この結果は、Cerを選択的に認識する因子がCer輸送過程に関与していることを示唆している。細胞表面膜タンパク質が細胞内に取り込まれて再分泌する際に、GPI-アンカー型蛋白質は、そうでない膜蛋白質に比べて、長い時間リサイクルエンドソームに遅滞する。この遅滞は、コレステロールおよびスフィンゴ脂質に依存していることを他研究室との共同研究によって明らかにした。前年度までに、Cer輸送欠損細胞変異株(LY-A株)を分離し、さらに、小胞体-ゴルジ体間Cer輸送のin vitro再構成系や阻害剤を開発した。これら実験系を用いた解析から、「小胞体-ゴルジ体間Cer輸送の主経路はATPおよび細胞質依存性であり、Cer認識因子が関与している」ことを明らかにしている。平成14年度に入り、LY-A株を相補する遺伝子の同定にも大きな前進がみられた。

すなわち、cDNAライブラリーを高頻度かつ安定にLY-A株に導入後、SM含有量が野生株レベルに回復した形質転換株を単離し、そこから導入遺伝子を回収することに成功した。この遺伝子は二次導入でもLY-A株を相補することを確認しており、相補遺伝子cDNAのクローニングはほぼ達成した状況にある。現在、この遺伝子産物の性状をさらに解析中である。スフィンゴ脂質生合成の初発反応は、セリンパルミトイル転移酵素(SPT)によって触媒される。我々は、SPT活性の欠損した動物培養細胞変異株を分離・解析し,この酵素はLCB1,LCB2と名付けられた二つのサブユニットから成る複合体膜酵素であることを明らかにしてきた。最近、下肢の知覚神経が緩慢に退縮する常染色体優性遺伝病である遺伝性知覚神経障害I型(HSN1)はSPTLC1/LCB1遺伝子に特異的なミスセンス点突然変異を伴っていることが国外の複数の研究グループによって示された。本年度は、(1)LCB2の安定維持にはLCB1との会合が必要であること、(2)HSN1型変異LCB1はLCB2と不活性型の複合体を形成することでSPT活性を抑制することを明らかにした。膜脂質の代謝には細胞内の異なる部位で起こる複数のステップを経ることがしばしば必要であり,そのためには,脂質分子が目的の部位に的確に移動しなければならない.ところが,膜脂質の選別輸送メカニズムはほとんど未知のままである.主要膜リン脂質の一つであるスフィンゴミエリン(SM)の生合成では,小胞体で合成されたセラミドがゴルジ体に移行してSMへと変換される.我々は,セラミドの細胞内輸送が欠損した哺乳動物培養細胞変異株(LY-A株)を分離・解析し,「小胞体-ゴルジ体間セラミド輸送の主経路はATPおよび細胞質依存性である」ことなどを明らかにしてきた.また、SM含量の減少した細胞はコレステロール引き抜き試薬・メチルシクロデキストリンに高感受性になることを見いだし,この知見をもとにして、LY-A細胞の機能回復株選択法を構築していた.本年度は、レトロウイルスベクターを用いたヒトcDNAライブラリーを導入と機能回復株の選択を通じてLY-A株で欠損している遺伝子を同定することに成功した.本遺伝子産物CERTは,約70kDaの細胞質タンパク質であり,1)プレクストリン・ホモロジー(PH)ドメイン,2)おそらく小胞体との相互作用に関わるドメイン,3)脂質転移を司ると推測されるSTARTドメインという三つのドメインから形成されている.CERTのPHドメインは,ホスファチジルイノシトール4リン酸を認識してゴルジ体にターゲットする活性を有するが,LY-A細胞由来のCERTは,PHドメイン中にミスセンス変異が起こり,ゴルジ体ターゲット機能が損なわれていた.また,CERTのSTARTドメインはセラミドを脂質膜から特異的に引き抜き,膜間転移させる活性を有していた.これらの結果から,CERTは,特異的にセラミドを小胞体膜から引き抜き,ゴルジ体膜に選択的に到達して受け渡すと提唱している.膜脂質の細胞内選別輸送のメカニズムはほとんど未解明のままである.主要膜リン脂質の一つであるスフィンゴミエリン(SM)の生合成では,小胞体で合成されたセラミドがゴルジ体に移行してSMへと変換される.我々は、細胞内セラミド選別輸送の欠損
共振器増強位相整合コヒーレント反ストークスラマン散乱分光法の開発

本研究提案では、これまでの共振器増強ラマン分光法の検出感度を飛躍的に倍向上させるための新しい手法として、共振器増強位相整合コヒーレント反ストークスラマン分光法の開発に取り組んだ。共振器に水素・アルゴン混合気体を共振器に充填した場合、誘導ラマン散乱による熱の発生により共振状態が不安定になるという問題点を明らかにした。共振器への基本光成分とストークス光成分(外部共振器型半導体レーザー)の2波長レーザー共振制御のためのフィードバック光学系を構築した。これら成果は分析対象となるラマン活性分子を封入した共振器で位相整合条件を満足した共振器増強CARS分光による新規高感度分析法の実現へ貢献するであろう。本研究の目的となる連続発振レーザーを用いた共振器増強位相整合CARS分光法の実現に向けて、初年度は1レーザー光の共振器へのモードマッチング、2TEM00モードでの共振、3水素とアルゴンによる群遅延分散の計算、4水素のみを共振器に充填した場合および、アルゴンを混合気体を共振器に充填した場合のアンチストークス光・ストークス光強度比の水素圧依存性の測定を実施した。ミラーの位置で波面の曲率半径がミラーの曲率半径に合うように集光されるようなレンズの位置を決めた。次に、共振器の中心にビームウェストが位置するような位置に共振器を設置し、最後に光軸と共振器長を調整することによってTEM00モードでの共振を確認することができた。水素のみを充填した場合と水素とアルゴン200kPaの混合気体を充填した場合の両方で分散補償の達成を確認できた。この結果から、より低い水素分圧でも分散補償が可能であり、CARS過程によってアンチストークス光が発生へ向けた展望が得られた。水素・アルゴン混合気体を共振器に充填した場合、水素のみを充填した場合と比べて共振状態が不安定になるという問題点が明らかになった。これは、誘導ラマン散乱による熱の発生が原因であると考えられる。現在、1色のレーザー光を励起光として共振器に入射させており、誘導ラマン散乱によってストークス光を発生させ、励起光と発生したストークス光によって四光波混合を起こしているため、誘導ラマン散乱に伴い熱が発生する。また、水素はアルゴンと比べて熱伝導率が低いため熱がたまりやすくなっており、熱レンズ効果の影響がより大きくなると考えられる。よって、今後、2色のレーザー光を励起光として共振器に入射させ、誘導ラマン散乱を用いずにアンチストークス光を発生させることで熱の発生を抑える。本研究の目的となる連続発振レーザーを用いた共振器増強位相整合CARS分光法の実現に向けて、本年度は、(1)共振器への2波長レーザー結合制御のためのフィードバック光学系の構築(2)基本光成分レーザーの共振状態の安定化(3)ストークス光成分レーザーの共振状態の安定化、を実施した。まず、共振器増強位相整合CARS分光法で必要となるラマンシフト周波数だけ離調した2波長同時共振を実現するために、Pound-Drever-Hallシステムを構築した。共振器入射ビーム(単一周波数Ti:sapphireレーザー)に対して位相変調器(変調周波数:12MHz)を導入し、共振器からの戻り光成分を復調するためのロックイン増幅器を組み込んだ。復調された信号が、共振器状態からの逸脱に比例する誤差信号となっていることをオシロスコープによって確認した。この誤差信号を周波数領域で整形するためのサーボを導入し、最適なゲインおよび位相条件を決定した。これによって発振を抑制した状態で共振器の安定化を実現した。続いて、このフィードバック系を維持したまま、ストークス光成分となる外部共振器型半導体レーザーを導入するための光学系を追加した。ダイクロイックミラーによって2波長のレーザー光を合成し、周波数変調を施したストークス光成分の共振器戻り光のみを復調することによって、ストークス光成分に対する誤差信号を取得した。この誤差信号を外部共振器型半導体レーザーの制御器にフィードバックすることによってストークス光成分の共振状態の安定化を達成した。今後、この構築した光学系によって、ラマンシフト周波数だけ離調した2波長を同時に共振させることで、分析対象となるラマン活性分子を封入した共振器で位相整合条件を満足した共振器増強CARS分光による新規高感度分析法を実現する。次年度に共振器位相整合コヒーレント反ストークスラマン散乱を実現するための、最初のステップとして、誘導ラマン散乱過程を介した位相整合四光波混合による反ストークス光の発生に成功した。

また、ラマン非活性気体としてアルゴンを混合した条件下においても、同様の反ストークス光の発生を初めて確認し、これは、微量なラマン活性分子の検出方法として、本手法が有望であることを示した意義のある実験結果である。以上より、本研究はおおむね順調に進展していると考えている。応用分析化学1.2波長励起光の共振器結合と反ストークス光の観測2台の連続発振レーザー(ω1、ω2)を、非測定対象となる分子のラマン遷移周波数(Ω)だけ離れた波長に設定する。この2波長ビームを同軸上に重ねた状態で、共振器横モードにマッチングするように共振器へ入射する。共振器の長さをピエゾアクチュエータによって最適化し、2波長が同時に共振させる。ここで、共振器内のラマン活性分子の充填圧力をkPaのオーダーで微調整微調整することによって、正味の共振器内分散をゼロにする。これによって、ωCARSを共振器モードに一致させ、CARS過程を高効率に誘起させる。2.軽水素分子の定量分析と検出限界の決定分析対象となる微量(≦ppm)の軽水素分子を共振器チャンバーに導入した状態で、軽水素分子のラマンシフト周波数(587cm-1)だけ離れた2波長励起光を共振器へカップリングし、CARS過程を励起する。ここで、共振器チャンバー内に、励起レーザーと相互作用のない希ガス(Xe等)を導入することによって、軽水素分子の濃度を変化させることなく、共振器分散だけを制御し、位相整合条件を満たしたCARS過程が励起される条件を見出す。軽水素濃度を変化させながらCARS信号の強度を計測し、この新分析手法の定量性と、検出されたCARS信号の信号/ノイズ比より、軽水素分子の検出限界を決定する。3.水素同位体分子の選択的リアルタイム検出の実現被測定対象としてD2、HDを用い、これらの混合ガスをそれぞれの分子の検出感度を考慮した上で共振器チャンバーへ導入する。CARS信号を得るためにラマン回転遷移を利用し、2波長励起光の一方の波長をスキャンしながら、ラマンシフト周波数だけ離れた2波長で観測されるCARS信号を記録する。水素同位体の分圧を変化させながらCARS信号強度の変化を計測し、水素同位体のリアルタイム検出性能を実証する。初年度に導入予定であった外部共振器型連続発振半導体レーザー(Tholabs社製SAF-850P)およびテーパ付き半導体増幅器(Tholabs社: TPA850P10)の製品リリースが予定より遅延し、次年度となった。そのための費用を繰越したため、次年度使用額が生じた。上記外部共振器型連続発振半導体レーザー(Tholabs社製SAF-850P)およびテーパ付き半導体増幅器(Tholabs社: TPA850P10)がリリースされ次第直ちにこれを導入する。差額はこれによりほぼ使いきれると予想している。
21番目のアミノ酸の翻訳に関与する新規RNA結合因子の研究

セレノシステイン(Sec)はmRNAの読み取り枠内の終止コドンUGAでコードされており,翻訳され得る21番目のアミノ酸である.真核生物では,どのようなメカニズムでSecが取り込まれるかは現在,不明である.Sec含有蛋白のmRNAの3′-非翻訳領域にstem-loop構造をとり得る特異配列(Sec insertion sequence ; SECIS)が認められ,この配列の存在がUGAをSecとして取り込むために必要なことが示されている.今回,我々はこのSECISに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA stem-loop部分89 baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーにより解析したところ,約55KDaの位置に単一のバンドが検出された.しかし,フリーに対する複合体の割合は著しく低かった.そこで他の種々Sec含有蛋白のSECISのついてゲルシフト法で解析を行った.その結果,ヒト血漿セレン含有蛋白Selenoprotein P (SeP)のSECISをプローブとした場合最も強い結合活性が認められた.現在,biotin化したSePのSECISを合成し,これを出発材料と反応後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子の分離を試みている.この精製に成功したら,その生化学的性質を調べ,遺伝子をクローニングし構造を決定する予定である.セレノシステイン(Sec)はmRNAの読み取り枠内の終止コドンUGAでコードされており,翻訳され得る21番目のアミノ酸である.真核生物では,どのようなメカニズムでSecが取り込まれるかは現在,不明である.Sec含有蛋白のmRNAの3′-非翻訳領域にstem-loop構造をとり得る特異配列(Sec insertion sequence ; SECIS)が認められ,この配列の存在がUGAをSecとして取り込むために必要なことが示されている.今回,我々はこのSECISに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA stem-loop部分89 baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーにより解析したところ,約55KDaの位置に単一のバンドが検出された.しかし,フリーに対する複合体の割合は著しく低かった.そこで他の種々Sec含有蛋白のSECISのついてゲルシフト法で解析を行った.その結果,ヒト血漿セレン含有蛋白Selenoprotein P (SeP)のSECISをプローブとした場合最も強い結合活性が認められた.現在,biotin化したSePのSECISを合成し,これを出発材料と反応後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子の分離を試みている.この精製に成功したら,その生化学的性質を調べ,遺伝子をクローニングし構造を決定する予定である.
炭素‐炭素結合の生成を伴う二酸化炭素の触媒的固定化反応の開発

二酸化炭素は豊富に存在する炭素資源であり、これと炭素-炭素結合を形成させる反応はカルボン酸を与える重要な有機合成手法である。しかし、二酸化炭素は高い安定性を有しているため、高効率な変換法の開発は今なお困難と言える。中でもアルキンやアレンなど炭素-炭素多重結合に対するカルボキシル化反応では、反応の選択性制御や多成分連結反応への展開などより高度な反応開発が求められる。本研究の目的は、遷移金属触媒を用いることで二酸化炭素を炭素源としたカルボキシル化反応を開発することであり、これを通じで、反応の化学・位置・立体選択性を制御する手法を開拓することにある。本年度は、銅触媒とヒドロシランから系中で発生させた銅ヒドリドを二酸化炭素存在下でアレンと反応させ、反応条件によって異なる酸化度にあるふたつの化合物をつくり分けることに成功した。すなわち、(1)アレンに対してヒドリドとカルボキシル基が付加するヒドロカルボキシル化反応によってβ,γー不飽和カルボン酸を、(2)このカルボキシル基が形式的に更にヒドリド還元を受ける、ヒドローヒドロキシメチル化反応によってホモアリルアルコールを、それぞれ得ることに成功した。従来、二酸化炭素をアルコールに変換する還元的反応では、炭素ー炭素結合の形成を含まないメタノールへの変換がほとんどであった。本研究は二酸化炭素からアルコールの酸化度にある化合物を選択的に合成した初めての例であり、この成果はChemical Communication誌に掲載された。27年度が最終年度であるため、記入しない。しかし二酸化炭素は高い安定性を有しているため、高効率な変換法の開発は今なお困難といえる。本研究の目的は、遷移金属触媒を用いることで二酸化炭素を炭素源としたカルボキシル化反応を開発することであり、これを通じて、反応の化学・位置・立体選択性を制御する手法を開拓することにある。本年度は銅またはニッケルを触媒金属に用いた2つのカルボキシル化反応と、その研究において得た知見を生かした位置および立体選択的なケトンおよびアルデヒドの2-シリルアリル化反応を開発することに成功した。中でも銅触媒を用いたアレンのシラカルボキシル化反応では、2つの異なる置換基を一挙に導入し、かつ2種類の異性体のそれぞれを高選択的につくり分ける極めて高効率な触媒系の構築に成功した。すなわち、(1)カルボキシル基とシリル基を同時に導入し、(2)異性体Aにおいては現代の合成化学においても構築困難な四置換二重結合部位を位置および立体選択的に構築すると同時にアリルシラン構造を付与、(3)異性体Bにおいては全炭素四級中心およびビニルシラン構造を有する不飽和カルボン酸を得ることに成功している。安定な二酸化炭素を取り込む反応では高い反応性が必要であるため、選択性の制御は一般に困難である。実際二酸化炭素を用いたカルボキシル化において複数の異性体をつくり分けた例はなかったが、申請者は当初の計画通り、銅の触媒作用を利用することでこれを達成し、論文として報告した。さらに、当該反応で構築される全炭素四級中心をエナンチオ選択的に合成する展開を見据え、多くの不斉配位子が知られる二座リン配位子を用いた触媒系の開発に成功している。これに加え、本研究で得られた銅触媒に関する知見を利用することで、ケトンおよびアルデヒドのアリル化において従来と異なる選択性を発現させることに成功するなど、当初の計画を越えて研究の進展がみられた。これまでの研究過程において従来にない反応形式による二酸化炭素の固定化を見出しており、これを追究し論文にまとめる。また、得られた知見に基づいた選択性制御を鍵とする新反応開発にも取り組む。なお学位取得に伴って所属研究室および受け入れ研究者を変更し、異なるアプローチによっても研究課題に取り組むこととした。
登山における月経周期を考慮した水分補給方法の提案

月経周期に応じた水分補給方法を提案するための基礎的知見を得ることを目的とし,月経周期が体液調節および生理応答に及ぼす影響を検討した。黄体期の登山活動では,アルドステロン分泌増加による血漿量増大に加え,深部体温の上昇により心拍数の増加など循環器系への負荷が増大する可能性が示唆された。以上の結果から,黄体期に登山を行う際は,身体を冷却するための水分補給方法なども併せて検討していく必要性が考えられた。本研究は、女性登山者の熱中症を予防するため、月経周期に応じた水分補給方法に関する知見を得ることを目的とし、次の2点について検討する。1卵胞期と黄体期の登山時の発汗量及び脱水状態を比較し、月経周期ごとの登山に必要な水分量を数値により標準化する。2卵胞期及び黄体期において口渇感に依存した水分補給方法が適切であるかを確認する。2014年度は、正常月経周期を有する女性8名を対象にフィールド調査に行った。卵胞期と黄体期の両条件において、登山中の発汗量、飲水量および登山前後の尿比重、尿pHを比較した。黄体期において、登山後の尿比重が高値を示す傾向にあった。これまでの研究成果と本研究の結果から、黄体期には発汗量に対する水分補給率が低く、脱水症状に陥りやすい可能性が考えられた。発汗量は、月経周期の違いだけでなく、運動習慣の有無や暑熱馴化などにも影響を受ける。このため、2015年度は、対象者数を増やし、運動習慣の有無や年齢など細分化し検討を行っていく。加えて、人工気象室内でのシミュレーション実験を行い、フィールド調査の結果と併せて評価を行う。女性登山者の熱中症を予防するため、月経周期に応じた水分補給方法のガイドライン作成のための基礎的研究を行った。2015年度は、トレッドミルを用いた登山シミュレーション調査を行った。対象者は、正常月経を有する女性10名とした。このうち基礎体温および排卵検査薬で月経周期を確認できた7名について検討した。対象者は、卵胞期および黄体期に、傾斜15%、速度2km/時で歩行を行った。担架重量は、体重の約5%で調節した。歩行15分ごとに5分間の休息を行い、45分間の歩行を行った。水分補給は、登山前および休息時に自由飲水を行った。歩行中の心拍数は、両条件間において有意な差がなく、いずれも100120拍/分で推移した。発汗量は、卵胞期が381±93g,黄体期が388±129gであり、黄体期が卵胞期に比較し有意に高く(p < 0.05)、2014年度のフィールド調査と同様の結果であった。黄体期の尿比重は、登山前に比較し登山後に有意に低下した(p < 0.05)。120拍/分以下および発汗量が500g以下の登山活動であれば、両条件とも口渇感に依存した水分補給方法で熱中症に陥る危険性は少ないと考えられた。2016年度は、環境および負荷を変更したシミュレーション調査を行い、負荷条件ごとの水分補給方法について検討していく。女性登山者の水分補給方法のガイドライン作成のためには、環境条件を統一したシミュレーション実験と、環境を含めたフィールド調査を併せて評価することが不可欠である。今年度は、登山シミュレーション調査を行い、昨年度までに行ったフィールド調査と併せて評価することで、ガイドライン作成の方向性が明確になった。2016年度は、月経周期の違いが体液調節および生理応答に及ぼす影響を検討した。対象者は、正常月経周期を有する女性8名(年齢21±1歳、BMI 20.6±2.3)とした。基礎体温と排卵検査薬から排卵日を特定し、月経終了後から排卵2日前までを卵胞期条件(Follicular phase : F条件)、排卵2日後から月経開始までを黄体期条件(Luteal phase : L条件)とし、対象者はF条件とL条件の2条件の測定を行った。本研究は、基礎体温および排卵検査薬で月経周期を確認できた6名について評価した。歩行2時間前から絶食し、1時間前に水200mlを摂取した後、測定終了まで飲水を制限した。体重の10%重量のザックを負荷し、20分間の歩行を1セットとし、5分間の休憩を挟み2セット行った。発汗量は、両条件間に有意な差がみられなかった。歩行前後の舌下温は、いずれもL条件がF条件に比較し高かった(p < 0.05)。一方、運動中の末梢部位の皮膚温は、F条件がL条件に比較し高かった(p < 0.05)月経周期による発汗部位や発汗能の違いが熱放散に影響した可能性が考えられた。L条件の歩行時の心拍数は、F条件と比較し高い値で推移した(p < 0.05)。尿中アルドステロンおよび血圧は、両条件間に有意な差がみられなかった。黄体期における歩行時の心拍数増加は、深部体温の上昇が影響したと考えられた。飲水を制限した歩行では、月経周期による体液調節の違いが顕著にみられなかった。しかしながら、月経周期は循環器系に影響を及ぼし、黄体期は、運動時の心拍数上昇など循環器系への負荷を増大させる可能性が示唆された。

月経周期に応じた水分補給方法を提案するための基礎的知見を得ることを目的とし,月経周期が体液調節および生理応答に及ぼす影響を検討した。黄体期の登山活動では,アルドステロン分泌増加による血漿量増大に加え,深部体温の上昇により心拍数の増加など循環器系への負荷が増大する可能性が示唆された。以上の結果から,黄体期に登山を行う際は,身体を冷却するための水分補給方法なども併せて検討していく必要性が考えられた。本研究は、基礎体温と排卵検査薬の結果から月経周期を確認し測定日の設定を行っている。しかし、月経周期のずれなどにより測定日の変更や天候による調査の延期が多くあり、データの収集および解析が当初の予定に比べ少し遅れている。フィールド調査では、発汗量は環境条件や登山時間に大きく影響した。一方、環境条件を一定にしたシミュレーション調査においては、月経周期による発汗量の違いが明確にみられた。これらのことから、2016年度は、シミュレーション調査の条件を変更し、環境条件を含めた水分補給方法のガイドライン作成のための基礎的研究を行う。運動生理学健康教育学人工気象室とトレッドミルを用いたシミュレーション実験を行い、以下の2点について検討する。1飲水量を統一し、黄体期と卵胞期の発汗量および尿中成分を比較する。2卵胞期と黄体期の両条件において、自由飲水を行った際の発汗量、発汗量に対する飲水補給率と口渇感との関連性を明らかにする。対象者の月経周期のずれ等により、2015年に計画していた測定の一部を2016年度4月5月に行った。このため、尿検査費用が、2016年度の計上となった。当初、2014年度に20名の対象者の測定を予定していたが、天候や土砂災害などによる大幅な延期があり8名の測定となった。このため、12名分の交通費、謝金、人件費などの支出を2015年度に計上する。また、シミュレーション実験のプロトコール作成が当初の予定より遅れたため、シミュレーション実験に必要な機材の購入が遅れ、2015年度に計上する。対象者の尿検査費用として計上する。シミュレーション実験に必要な機材の購入とデータを取り込むためのパソコンを購入する。
王政復古期演劇と政体の危機

今年度は、王政復古期に上演された演劇を、1640年代の内乱、王位継承排除危機と名誉革命という三度にわたる政体の危機への介入という観点から再検討し、ときどきの政治的な状況に対応して役割を果たしていた重要な政治的メディアとしての役割に焦点を当てた。特に、演劇が、1640年代の内乱、共和国やオリヴァー・クロムウェルによる護国卿体制をどのように直接、間接に表象したのか、そして1678年におけるタイタス・オーツの教皇主義陰謀事件以降、王位継承排除危機が進行していく中で、演劇が、1640年代の内乱の表象のヴォキャブラリーを再利用し、ときに新たなイメージを創造することで、この政体の危機に介入しようとしたのかを分析した。これまでに、王政復古期演劇が内乱期の忌まわしい記億をあえて呼び覚まし、その記憶を茶化し、風化させるという機能を果たしていた点で、ときに理性的でときに排他的で党派的でもあった、18世紀の文芸的公共圏の先駆であったことを明らかにしてきたが、従来の研究では非政治的とみなされてきた王位継承排除危機が勃発する1678年の演劇にも政治的な意味が確認できることを研究した。今年度は、研究の総括の一環として、劇作家ウィリアム・ウィッチャリー(1641-1716年)の第3作の喜劇『田舎女房』(1675年1月12日初演)を取り上げ、王政復古期のコメディ・オヴ・マナーズに見られるアンビヴァレンスが、ロンドンのタウン(後にウェスト・エンドと呼ばれる空間)においてどのような政治的な機能を果たしていたのかについて考察し、論文にまとめた。研究成果は、2020年4月に刊行される論文集『コメディ・オヴ・マナーズの系譜ー王政復古期から現代イギリス文学まで』に掲載される予定である。平成27年度は、王政復古期の1660年代から1678年までに上演された演劇について、1640年代の内乱、共和国やオリヴァー・クロムウェルによる護国卿体制をどのように直接、間接に表象したのかを検討した。具体的には、時系列に沿ってその日に上演された興業の情報を記しているThe London Stage, 1660-1800に従って、日々上演された芝居を精読しながら、そこに書き込まれた政治的表象を分析した。とくに注目したのは、1642年以前に上演された芝居の改作や再演、王政復古期になってからのレパートリーの再演である。旧作と新作の組み合わせによってどのように新たな政治的含意が現出したのか考察した。さらに、1678年におけるタイタス・オーツの教皇主義陰謀事件以降、王位継承排除危機が進行していく中で、演劇が、1640年代の内乱の表象のヴォキャブラリーを再利用し、ときに新たなイメージを創造することで、この政体の危機に介入しようとしたのかを分析した。この時代については、Susan J. OwenのRestoration Theatre and Crisis (1996)やRichard BravermanのPlots and Counterplots: Sexual Politics and the Body Politics in English Literature, 1660-1730のような優れた先行研究があるが、従来は、特定の芝居について、トーリーあるいはホイッグのイデオロギーのプロパガンダもしくはその諷刺とみなすことで、政治的危機の演劇的表象の意味を単純化しがちであった。そこで、本研究では、演劇的テクストの中に、党派性への偏重の批判や、さらにはトーリーとホイッグのイデオロギーのいずれの諷刺にも解釈される得る重層性を読み取ろうとした。公務のために、国内及び国外の調査に行けなかったために、王政復古期の図版などの視覚的資料が揃っておらず、演劇テクストと視覚的資料を関係づけた上で、王政復古期演劇と政治の関係を考察するまでには至っていないため。平成28年度には、ジェイムズ二世が国王として即位した1685年から1695年頃までの時代の演劇に注目した。とくに、名誉革命という未曾有の政変について演劇はどのように表象したのかを具体的に検討した。とくに名誉革命後の1690年代に上演された芝居を包括的に取り上げ、政治的な機能の分析を行う。この時期に上演された演劇には、トマス・サザンの『妻たちの言い訳』のように、結婚生活の危機や破綻をドラマ化したものが数多く見られるが、そこで前景化されている夫もしくは妻の変節という主題が、当時は、ハリファックス初代伯爵が名誉革命を擁護して「変節漢」(trimmer)と非難されたように、名誉革命と関連して政治的な意味を帯びる可能性もあったことを検討した。さらに、この時代にもうひとつ人気を博した主題として、トマス・シャドウェルの『ベリー市』のように、親子の確執と和解という主題があるが、父と息子の和解というプロットも、名誉革命後には、父である君主と子である臣民の歩み寄りという政治的意味作用を帯びていた可能性を検討する。公務のために、国内及び国外の調査に行けなかったために、王政復古期の政治資料や図版などの視覚的資料が揃っておらず、演劇テクストと王政復古期の政治状況との相関関係を、演劇テクストや視覚的資料の分析を通じてじゅうぶんに検討するまでには至っていない。昨年度に引き続き、ジェイムズ二世が国王として即位した1685年から1695年頃までの時代に注目し、演劇と政治との関係を検討した。

名誉革命については、近年、Steven Pincusの1688: The First Modern Revolution (2009)のような優れた著作が刊行され、「非革命的な」革命であったという従来の見方を覆し、国際的な事件であったことが注目されている。しかしながら、名誉革命が文学にどのような影響を及ぼし、文学、とくに演劇がこの政変にどのように介入したのかについてはまったく等閑視されている。そこで、本研究では、とくに名誉革命後の1690年代に上演された芝居を包括的に取り上げ、政治的な機能の分析を行った。この時期に上演された演劇には、トマス・サザンの『妻たちの言い訳』のように、結婚生活の危機や破綻をドラマ化したものが数多く見られるが、そこで前景化されている夫もしくは妻の変節という主題が、当時は、ハリファックス初代伯爵が名誉革命を擁護して「変節漢」(trimmer)と非難されたように、名誉革命と関連して政治的な意味を帯びる可能性もあったことを検討した。さらに、この時代にもうひとつ人気を博した主題として、トマス・シャドウェルの『ベリー市』のように、親子の確執と和解という主題があるが、父と息子の和解というプロットも、名誉革命後には、父である君主と子である臣民の歩み寄りという政治的意味作用を帯びていた可能性を検討した。王政復古期後期の演劇テクストの分析は進められた。しかし、公務のために、国内及び国外の調査に行けなかったこともあって、王政復古期の政治資料や図版などの視覚的資料が揃っておらず、演劇テクストと王政復古期の政治状況との相関関係を、演劇テクストや視覚的資料の分析を通じてじゅうぶんに検討するまでには至っていない。今年度は、王政復古期に上演された演劇を、1640年代の内乱、王位継承排除危機と名誉革命という三度にわたる政体の危機への介入という観点から再検討し、ときどきの政治的な状況に対応して役割を果たしていた重要な政治的メディアとしての役割に焦点を当てた。特に、演劇が、1640年代の内乱、共和国やオリヴァー・クロムウェルによる護国卿体制をどのように直接、間接に表象したのか、そして1678年におけるタイタス・オーツの教皇主義陰謀事件以降、王位継承排除危機が進行していく中で、演劇が、1640年代の内乱の表象のヴォキャブラリーを再利用し、ときに新たなイメージを創造することで、この政体の危機に介入しようとしたのかを分析した。これまでに、王政復古期演劇が内乱期の忌まわしい記億をあえて呼び覚まし、その記憶を茶化し、風化させるという機能を果たしていた点で、ときに理性的でときに排他的で党派的でもあった、18世紀の文芸的公共圏の先駆であったことを明らかにしてきたが、従来の研究では非政治的とみなされてきた王位継承排除危機が勃発する1678年の演劇にも政治的な意味が確認できることを研究した。今年度は、研究の総括の一環として、劇作家ウィリアム・ウィッチャリー(1641-1716年)の第3作の喜劇『田舎女房』(1675年1月12日初演)を取り上げ、王政復古期のコメディ・オヴ・マナーズに見られるアンビヴァレンスが、ロンドンのタウン(後にウェスト・エンドと呼ばれる空間)においてどのような政治的な機能を果たしていたのかについて考察し、論文にまとめた。研究成果は、2020年4月に刊行される論文集『コメディ・オヴ・マナーズの系譜ー王政復古期から現代イギリス文学まで』に掲載される予定である。平成28年度以降は、国内及び国外の調査を積極的に行い、演劇テクストと視覚的資料の関連についての比較検討を深めたい。
ダム湖における魚類・餌料生物の群集構造と生息環境場の創造に関する研究

本研究は,河道内の主要構造物としてダムを取り上げ,湖内や河川構造物内の流れ場の構造と生息魚類や餌料生物(細菌・プランクトンを含めた微生物や水生生物)の生態を調査・分析し,ある種の生態系にとって必要な性能の抽出,機能強化の技術開発およびその検証方法を見出すことを目的としている。まず,わが国の魚類生息場としてのダム湖の特性(湖盆形態・湖流・水位変動・夏季水温の鉛直分布・水質・魚類の餌料生物・主要魚種の放流量と捕獲量など)について基礎資料の収集・解析して,ダム湖の現況と課題を明らかにした。次いで,主な現地調査の対象としたダム湖は,建設省や水産試験場などによる調査・協力が得られやすいなどの理由から,魚類および餌料生物調査を王泊ダム(広島),養殖魚(河ふぐ:アメリカナマズ)の調査を下小鳥ダム(岐阜)について実施した。さらに,人工産卵河川や浮き産卵床の整備について先駆的に取り組んでいる琵琶湖(安曇川・姉川など),ダム湖と同様に人工的な湛水域である長良川河口堰を対象にして,その水質・底質調査に加えて魚類の餌料生物の基礎となる微生物相(細菌・藻類・プランクトン類)に関する調査・分析も行い,ダム湖・自然湖沼・河口堰の情報を踏まえた調査研究を行った。また,現地調査と並行して,河川構造物内の魚類の遡上行動の把握を主な目的とした魚道実験を行った。対象魚種は,稚アユ(琵琶湖・姉川),ウキゴリ(長良川),渓流魚:イワナ・ヤマメ・アマゴ(人工種苗)であり,流れ場(流量・流速・乱れなど)と魚類の遡上行動(遡上速度・経路・休憩状況など)の関係について実験的な検討を行った。これらの調査研究によって,水流や土砂の連続した流れをダムが制限することにより,物理的に魚類や小型動物の移動を困難にすること,下流の河川から沿岸域までの様相を時間的にも空間的にも余り変化のないものとして,優占種を含めた出現生物相を変化させること,また,ダム湖の出現による新たな環境のもとでそれに適応できる生物が出現することなどが明らかにされた。見方を変えると,ダム湖の出現は新たな環境創造であり,環境保全・修復・創造に,対象空間を流域から沿岸部まで拡大しなければならないことや時間的な変動も考慮する必要が指摘された。さらに,ダム湖では,水位変動が宿命的に生物の生息環境に大きな影響を与えており,この「影響の一部を緩和するもの」として湖面に浮かぶ人工浮島の効用が論議され,水位変動の影響を受けずに生物の生息環境を創出したり,望ましい景観形成や水質浄化,波浪対策など複合的な効果が期待できる反面,人工浮島を環境復元の技術として過大評価することは危険であることなどが指摘された。

本年度は調査対象ダム湖の水質環境,魚群・餌料生物の群集構造を明らかにするための観測を行い,魚類生態環境場を考える上で重要な水生植物の基盤整備について検討を行った.1.ダム湖の水質特性と餌料生物環境:ダム湖の水深が大きい方へ向かうにつれて水質は悪化し,底層は有機汚濁化している現状である.この傾向はダム湖中央付近で顕著に見られ,支川流入域では比較的水質が良好である.植物プランクトンは,光条件がよく適度な栄養塩類の含まれている浅い層に多く分布し,それを捕食する動物プランクトンや魚類の分布層も浅いことから,食物連鎖のつながりを示している.また,魚類,動植物プランクトンは,季節ごとだけではなく日周期で天然湖沼と類似の浮上移動をしていることが明らかとなった.2.生態環境場の創造:自然湖沼の浅瀬では,水生植物が繁茂し,二枚貝などの大型底生動物が生息し,水質浄化作用,さらには魚類の再生産の場として重要である.水位が著しく変動するダム湖において,浮体を利用すれば水生植物帯の再現が可能であり,すでにそのような植栽基盤が製品化されている.ただし,市販品はヨシなどの抽水植物を対象にした人工浮島に限られている.浮葉植物や沈水植物を対象とした水面下の生息基盤があれば,甲殻類休眠卵の捕捉や二枚貝の生息基盤としての機能をもつことが期待できるなどから,多様な生物を取り込むことによって人工浅瀬の開発を検討している.本年度は調査対象ダム湖の水質環境,魚群・餌料生物の群集構造を明らかにするための観測を継続しながら,河川および底泥中の微生物相の変化についての調査を開始した.1.ダム湖の水質特性と餌料生物環境:ダム湖の水深が大きい方へ向かうにつれて水質は悪化し,底層は有機汚濁化する.この傾向はダム湖中央付近で顕著に見られ,支川流入域では比較的水質が良好である.植物プランクトンは,光条件がよく適度な栄養塩類の含まれている浅い層に多く分布し,それを捕食する動物プランクトンや魚類の分布層も浅いことから,食物連鎖のつながりを示している.また,魚類,動植物プランクトンは,季節ごとだけではなく日周期で天然湖沼と類似の浮上移動をしていることが明らかとなった.2.水中・底泥中の微生物群集構造:ダムや堰によって堆積した底質・水質環境と微生物の動態がどのように異なるかを明らかにするために、分離・培養を必要とせず微生物の群集構造の解析が可能な新しい方法、キノンプロファイル法を河川や底泥に適用して、微生物群集の量・質的な評価を行った.その結果,キノン濃度(微生物量)や多様性指標は季節によって大きく変動すること,それらは底質の特性(平均粒径・強熱減量など)に依存することなどが明らかにされた.河川・底泥中の微生物相と水質・底質の特性との相関が認められ、キノンプロファイル法が河川底泥中の微生物相変化の解析や新たな環境指標として利用できることが明らかにされた.本年度は最終年度であり,現地調査・水理実験の継続と総括が中心となる.まず,ダム湖と同様に人工的な湛水域である長良川河口堰を対象にして,その水質・底質調査に加えて魚類の餌料生物の基礎となる微生物相(細菌・藻類・プランクトン類)に関する調査・分析を行った.活性汚泥などにおける微生物群集構造の変化の解析に利用されているキノンプロファイル法を,長良川河口堰周辺における河川水や底泥に適用して,微生物群集の量・質的な評価を行い,底質や水質特性などの環境条件とどのように関わっているかを把握した.
トランス・スプライシングによる抗体多重アイソタイプ同時発現とその分子機構

本研究ではまず、1)ヒト膜型μ鎖遺伝子導入マウスの脾細胞において、内在性μ鎖遺伝子の発現が排除されているにもかかわらず、LPSとIL-4の刺激によって、導入遺伝子であるヒトIgMと内在性のマウスIgGが同時に発現される。2)このとき、導入遺伝子のヒト可変部と内在性マウス定常部(γ1)からなるトランスmRNAが産生される。また、この遺伝子導入マウス由来のProB細胞リンパ腫において、導入遺伝子由来のヒトμ鎖mRNAとトランスmRNA(γ2a)が同時に産生されている。3)トランスmRNAは遺伝子(DNA)レベルでの組換えなしに産生されている。等が明らかにされ、少なくともこの遺伝子導入マウスの系統においては、トランス・スプライシングによって、抗体の多重アイソタイプが発現されているものと考えられた。続いて、この現象が特定の系統の遺伝子導入マウス、あるいは限られたアイソタイプの遺伝子においてのみ見られる特殊なものではなく、正常Bリンパ球でも起こる一般的なものであることを示す目的で、マウス発現型μ鎖遺伝子導入マウスの系統について検討するとともに、ヒト模型μ鎖遺伝子導入マウスにおいて髀細胞の刺激方法を検索して、既に検出されているもの以外のアイソタイプを持つトランスmRNAの検出を試みた。その結果、1)トランスmRNAの発現は特定の系統に限られたものではない、即ち導入遺伝子の可変部の種類や挿入位置には因らないものである。2)クラススイッチの標的となる全てのアイソタイプについてトランスmRNAが産生される。3)トランスmRNAの産生調節は、クラススイッチのそれと概ね類似しているが、細部については異なる特徴を有している。等が明らかとなった。この成果により、抗体の多重アイソタイプ同時産生は、トランスmRNAの産生、即ちトランス・スプライシングによっていることがほぼ判明した。等が明らかとなった。ヒト膜型μ鎖遺伝子導入マウスにおいて、内在性(マウス)の抗体H鎖遺伝子の組換えならびに発現がほぼ完全に排除されているのにもかかわらず、LPSとILー4により刺激・培養された脾臓細胞の28%がヒトIgMとマウスIgGの二重アイソタイプを同時発現しうること、またこの脾臓細胞集団中に導入遺伝子(ヒト)可変部と内在性(マウス)定常部が結合したmRNA(トランスmRNA)を発現するものが存在することを発見した。この実験結果は、この遺伝子導入マウスにおいては異なった染色体間におけるクラススイッチ組換え、もしくはトランス・スプライシングが起きていることを示している。次に、この二重アイソタイプ産生細胞を二色蛍光抗体による同時染色によって検出し、セルソ-タ-によって分取した。また、この遺伝子導入マウスとcーmyc発癌遺伝子を導入されたマウスとの交配によって生まれた子孫に生じたリンパ腫(12種)を収集した。これらから、DNA及びRNAを抽出し、RNA中のトランスmRNA発現をPCR法、RNase protection法によって検討したところ、分取した二重アイソタイプ産生細胞ならびにproーB細胞リンパ腫の一つにおいてヒト導入遺伝子と同時にトランスmRNAの発現が確認された。さらにこれらの細胞のDNAのサザンブロット法による解析の結果、このトランスmRNAの発現は遺伝子の組換えを伴っていないことが判明した。以上の結果は、トランスmRNAが遺伝子の組換えなしに発現していることを示しており、トランス・スプライシングによって抗体の多重アイソタイプ同時発現が起こっているとの仮説にほぼ証明が与えられた。昨年度に得られた成果により、1)ヒト膜型μ鎖遺伝子導入マウスの脾細胞において、LPSとIL-4の刺激によって、導入遺伝子であるヒトIgMと内在性のマウスIgGが同時に発現される。

また、この遺伝子導入マウス由来のProB細胞リンパ腫において、導入遺伝子由来のヒトμ鎖mRNAとトランスmRNA(γ2a)が同時に産生されている。3)トランスmRNAは遺伝子(DNA)レベルでの組換えなしに産生されている。等が明らかにされ、少なくともこの遺伝子導入マウスの系統においては、トランス・スプライシングによって、抗体の多重アイソタイプが発現されているものと考えられた。今年度は、この現象が特定の系統の遺伝子導入マウス、あるいは限られたアイソタイプの遺伝子においてのみ見られる特殊なものではなく、正常Bリンパ球でも起こる一般的なものであることを示す目的で、マウス発現型μ鎖遺伝子導入マウスの系統について検討するとともに、ヒト膜型μ鎖遺伝子導入マウスにおいて髀細胞の刺激方法を検索して、既に検出されているもの以外のアイソタイプを持つトランスmRNAの検出を試みた。その結果、1)トランスmRNAの発現は特定の系統に限られたものではない、即ち導入遺伝子の可変部の種類や挿入位置には因らないものである。2)クラススイッチの標的となる全てのアイソタイプについてトランスmRNAが産生される。3)トランスmRNAの産生調節は、クラススイッチのそれと概ね類似しているが、細部については異なる特徴を有している。等が明らかとなった。この成果により、抗体の多重アイソタイプ同時産生は、トランスmRNAの産生、即ちトランス・スプライシングによっていることがほぼ判明した。
モヤモヤ病発生における遺伝的要因の関与の検討-Highly polymorphic DNA markerを用いて-

家族生モヤモヤ家系につきMR-angiograghyを行い、確かにモヤモヤ病であるか否かの確信をえた。すなわち、臨床的にモヤモヤ病を呈した者とMRAの異常所見との間に相異はなかった。また、同時に、家系全員に協力を依頼して採血を行った。3世代まで採血可能であったのた2家系であった。末梢血より白血球成分を分離し、DNAの抽出を行った。highly polymorphic DNA markerであるD4S174 locusとinterleukin-2 receptor beta geneについて解析を行った。まず両遺伝子座をprimer pair;5'-AAGAACCATGCGATACGCAT-3',5'-CATTCCTAGATGGGTAAAGC-3'及び5'-GAGAGGGAGGGCCTGCGTTC-3',5'-CACCCAGGGCCAGATAAAGA-3'を用いてPCRで増幅した。PCR産物がうまくamplifyされているか否か2%アガロースゲルにて確認した。PCR増幅産物のバンドが1本であることを確認した後、増幅産物とstop solutionとを等量混合した後、6%アクリルアミドゲル上で泳動を行った。この結果、同一家系内でモヤモヤ発症者同士は、他の同胞よりも、遺伝的には近い関係にあった。家系1、2の区別なくD4S 174 locus,及び、IL-2-beta Rの4つのハロタイプを見ると、全く同一であるものが5名中の3名であり、他の2名についても、3つのハロタイプが一致していた。ちなみに3つのハロタイプが一致する確率はおよそ10万分の1であり、ハロタイプが4つともに一致する確率は、およそ1000万分の1であるから、2家系のモヤモヤ病の患者のハロタイプの表現型を見る限り、極めて希な現象が起こったことになる。このようなことから、家族性に発症するモヤモヤ病はそれぞれ独立に起こったというよりは、共通の遺伝的背景をもった個体に生じやすいものと思われた。以上の事実を踏まえ、今後はモヤモヤ病の病因に係わる遺伝子座の同定を連鎖解析により決定していくことが必要であろう。