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ホメロスの運動文化思想に関する研究

本研究は、ホメロスの英雄叙事詩における運動競技を研究し、人間の幸福に結びつく運動文化思想を解明することである。この研究を達成するためには、時代と地域を越える本質理解ための鍵概念;「競争」「力」「勇気」「知性」「普遍的存在」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の解明が必要である。平成29年度は「『オデュッセイア』におけるメノスに関する研究ー神々と英雄の関係を中心としてー」(新潟県体育学会平成29年度大会)の研究発表を行なった。運動競技で活躍する英雄の特性に関して、命懸けの「競争」と命が尊重されるその場面において、「力(メノス)」「身体」「魂」等の関係性を論考し、英雄の個性及び共通性を分析・検討し、時代と地域を超越する運動競技に関する本質解明の基礎的研究を行った。命懸けの「競争」場面において、神々が影響する「力」の発揮があり、命の安全性が確保された「競争」場面においては、英雄の「力」に関するそのような直接的記述はなかった。平成30年度は「『オデュッセイア』の運動競技に関する研究ー知性と身体力の関係を中心としてー」(日本体育学会第69回大会、2018年8月、徳島大学)の研究発表を行なうと共に、その研究成果は『新潟体育学研究』(新潟県体育学会、2019年3月)に掲載された。この研究では、命の安全性が確保された「競争」として、パイエケス人との運動競技、乞食イロスとの拳闘、弓射競技の代表的場面が再確認されると共に、それらの場面における「知性」(ヌース、メーテス)と「身体力」(メノス、ステノス、アレテー)の関係性が明らかにされた。以上が研究実績の概要である。研究の目的に対する平成30年度における研究達成度は、研究全体の2分の1程度であると判断する。理由は以下の通りである。本研究の目的は、ホメロスの英雄叙事詩における人間の競争を研究し、人間の幸福に結びつく運動文化思想を解明することである。この目的を達成するためには、時代と地域を越える本質理解ための鍵概念である「競争」「力」「勇気」「知性」「普遍的存在」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の解明が必要である。平成29年度は、『オデュッセイア』の戦場と運動競技場面における「闘争」「競争」状況を分析・探究し、英雄の「力」「身体」「魂」と神々の関係を再検討し、時代と地域を超越する運動競技に関する「力(メノス)」の基礎的研究を行った。この叙事詩における身体的競争場面の「力」は、「魂」と「身体」に関係しつつ、戦場・闘争と運動競技場面に分けることが理解された。平成30年度の研究においては、命の安全性が確保された「競争」場面として、パイエケス人との運動競技、乞食イロスとの拳闘、弓射競技の代表的運動競技が再確認されると共に、それらの場面における「知性」(ヌース、メーテス)と「身体力」(メノス、ステノス、アレテー)の関係性が明らかにされた。しかし、『オデュッセイア』の戦場と運動競技場面における「競争」「闘争」状況を探究しつつ、人間の幸福に結びつく「勇気」の検討・分析と、「普遍性」「知性」「力」等に関する構造化と関係性の解明は今後の研究課題である。以上が進捗状況に関する理由である。令和元年度(4月までは平成31年度)の研究の推進方向は、『オデュッセイア』を中心に、「普遍的存在」と「競争」「闘争」という観点から、「知性」「身体力」を探究しつつ、「勇気」と「知性」「力」等の関係性を分析・把握し、時代を超越する人間の幸福に繋がる運動文化の基本的要素と関係性の解明に向けて研究を進める。この目的を達成するためには、時代と地域を越える本質理解ための鍵概念;「競争」「力」「勇気」「知性」「普遍的存在」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の解明が必要である。平成29年度は、『オデュッセイア』の戦場と運動競技場面における「闘争」「競争」状況を分析・探究し、英雄の「力」「身体」「魂」と神々の関係を再検討し、時代と地域を超越する運動競技に関する「力」:メノスの基礎的研究を行った。平成30年度の研究では、命の安全性が確保された「競争」として、パイエケス人との運動競技、乞食イロスとの拳闘、弓射競技の代表的場面が再確認されると共に、それらの場面における「知性」(ヌース、メーテス)と「身体力」(メノス、ステノス、アレテー)の関係性が明らかにされた。令和元年度は、平成30年度までの研究成果を踏まえ、『オデュッセイア』を中心として、戦場と運動競技場面の「競争」「闘争」を探究しつつ、「勇気」に関する原語の分析と再検討し、この概念と「普遍性」「知性」「力」等の関係性の解明に向けて研究を進める。

本研究は、ホメロスの英雄叙事詩における運動競技を研究し、人間の幸福に結びつく運動文化思想を解明することである。この研究を達成するためには、時代と地域を越える本質理解ための鍵概念;「競争」「力」「勇気」「知性」「普遍的存在」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の解明が必要である。本研究の特性は、西洋最初の代表的古典、ホメロス作品の運動競技を探究し、人間の幸福と関連させつつ、時代・地域を超越する運動文化の思想を解明しようとするところにある。ホメロス作品に関する本研究の視点、人間の幸福と関連する運動文化思想の解明は、身体教育学分野における新たな研究である。平成29年度の研究実績は「『オデュッセイア』におけるメノスに関する研究ー神々と英雄の関係を中心としてー」(新潟県体育学会平成29年度大会、新潟大学、10月21日)の研究発表である。運動競技で活躍する英雄の特性に関して、命懸けの「競争」と命が尊重されるその場面において、「力(メノス)」「身体」「魂」等の関係性を論考し、英雄の個性及び共通性を分析・検討し、時代と地域を超越する運動競技に関する本質解明の基礎的研究を行った。『オデュッセイア』の身体的競争場面における「力」:メノスは、「魂」と「身体」に関係しつつ、戦場・闘争と運動競技場面に分けることが可能である。命懸けの「競争」場面において、神々が影響する「力」の発揮があり、命の安全性が確保された「競争」場面においては、英雄の「力」に関するそのような直接的記述はなかった。以上が研究実績の概要である。研究の目的に対する平成29年度における研究達成度は、研究全体の4分の1程度であると判断する。理由は以下の通りである。本研究の目的は、ホメロスの英雄叙事詩における人間の競争を研究し、人間の幸福に結びつく運動文化思想を解明することである。この目的を達成するためには、時代と地域を越える本質理解ための鍵概念;「競争」「力」「勇気」「知性」「普遍的存在」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の解明が必要である。平成29年度は、『オデュッセイア』の戦場と運動競技場面における「闘争」「競争」状況を分析・探究し、英雄の「力」「身体」「魂」と神々の関係を再検討し、時代と地域を超越する運動競技に関する「力」:メノスの基礎的研究を行った。この叙事詩における身体的競争場面の「力」は、「魂」と「身体」に関係しつつ、戦場・闘争と運動競技場面に分けることが可能である。命懸けの「競争」場面において、神々が影響する「力」の発揮があり、命の安全性が確保された「競争」場面においては、『イリアス』に描写されるような英雄の「力」に関する直接的記述はなかった。しかし、『オデュッセイア』の戦場と運動競技場面における「競争」「闘争」状況を分析・探究し、知恵、才覚、思慮の本質と、これらの概念と「力」の関係性については、これからの研究課題である。また、以上の研究成果を基本として、ホメロス作品における「勇気」「普遍的存在」「魂」等の再検討、これらの構造化と関係性の解明に基づく運動競技の本質把握、及び、人間の幸福に結びつく運動競技の精神性の解明も、今後の研究課題である。以上が進捗状況に関する理由である。
ナノ磁性粒子の自己組織化過程に現れる規則的配列とその発現機構

ナノグラニュラー磁性体は、次世代の高密度・高機能磁気記録媒体として大きな期待を集めている。磁気特性を含め、これらの材料の諸性質は組織に強く依存すると考えられてきたが、X線回折法などの平均的手法が中心で磁性体の組織と物性に関する詳細な検討が十分になされていなった。本研究では、透過型電子顕微鏡とSQUID装置を組み合わせるとともに、バルク材料からナノ磁性体形成の方法を用いることにより、いろいろな磁性体分布の試料を作成して磁性体の構造、組織、組成と磁気特性の対応関係を明らかにした。また、従来流布してきた解釈の問題点を指摘し、磁気抵抗効果の新しい考え方を提出した。微細な磁性粒子を含むナノグラニュラー磁性体には磁性体特有の複数の相互作用が働き、それらの微妙な均衡によって構造や物性が実現される。それらのバランスがどのように実現されているかの詳細を知る事は、物性に関する基本的理解を更に進めるためにも、効率の良い実用デバイスを創製するためにも有用な情報となり得る。本研究で採用する固相相変態を用いる試料調整法では、粒子径や粒子間距離を連続的に変化させて磁気特性と組織を調べることができる等、他の方法では達成できない重要な利点を有している。本研究では、固相相変態法のこのような利点を利用して、ナノ磁性粒子の組成や分散状態を系統的、連続的に変えながら、組織と磁気的相互作用の詳細な対応関係を明らかにすることを目指す実験を実施した。熱処理条件を系統的にかえて新たに作製した3元系合金の組織形成を調べた。その結果、これまでにCu-Co合金やCu-Fe合金で確認されている磁性微粒子の1次元配向より更に顕著な粒子配向が発生することが明らかになった。この配向については従来の弾性論による説明が困難であり、今後の研究課題である。ローレンツ顕微鏡低角電子回折法により、Cu-Fe合金の磁化の向きと大きさの変化を粒子成長過程の中で調べた。これによると粒子成長に伴ってFe粒子は、ある大きさになるとfccからbccに向かって構造変化を起こし、ベイン格子変形のモデルを用いるとc/a=1.2付近で強磁性的になることがKKR法ならびに密度汎関数計算から推定された。実験的にもローレンツ顕微鏡低角電子回折法により、これと矛盾のない結果が得られた。PPMSを用いた磁気抵抗測定で顕著なMR効果がみられる試料条件があった。この結果予想と異なる傾向を示しており、詳細な検討は次年度の課題として残された。析出を用いたナノグラニュラー磁性体は、組成や処理温度、時間を変化させることにより、種々の条件でナノ磁性粒子を自己形成させることができる。この手法を用いるとナノ磁性粒子が最も安定な相変態経路をどのように取るかが分かるので、スパッタ等、非平衡性の高い手法では取得が困難な情報が得られる。これまで我々は、本手法を用いて、銅中でのコバルト、鉄及び両者共存の条件下での組織形成とそれぞれの段階の磁気特性を調べて来た。今年度は、特に銅中に鉄とニッケルとを固溶させた合金でのナノ磁性粒子形成を調べた。銅-鉄合金にニッケルを添加し、その量を増加させて873Kで焼鈍すると、低濃度では銅-鉄2元系合金と同様、粒子の双対化は顕著に見られなかったが、15at%以上のニッケル添加量になると顕著な双対化が生じ、20at%添加では、5-10個以上の粒子対が観察された。また焼鈍温度を変えてナノ磁性粒子対の自己形成の過程を調べた所、1073Kでは、粒子は873Kの粒子に比べて粗大かつ単独で分散しており、873Kでの粒子形成とは大きく異なる粒子形成と分布を示した。ナノ粒子の組成が温度によって異なる可能性があるため、EDXによる組成分析を行った所、1073Kで銅濃度がやや高いものの鉄とニッケルに関してはほぼ同じ比率であることが分かった。これらの試料について低温から常温に掛けての磁気抵抗も測定した。その結果、磁気抵抗低下は873Kでは数%であったが、1073Kでは15%に近い値を得た。今年度の研究結果については、以下の2点が重要である。従来、鉄やコバルト粒子の析出に関して粒子と銅母相間の格子間隔の違いから粒子形成を解釈する立場が主流であったが、本研究の結果は明らかにこの解釈の限界を示している。理論的には、磁性粒子の相互作用について双極子相互作用とRKKY相互作用の関与が提起されていたが、これまでに実例が報告されていない。本研究で得られた構造的特徴はRKKY相互作用に起因している可能性を示唆しており、理論と実験結果の詳細を検証する好事例になると考えられる。

ナノグラニュラー磁性体は優れた応用性を有しており、硬磁性体材料、軟磁性体材料として新機能を付与する手段として研究されている。ナノグラニュラー磁性体は本質的に複合相から成り立っており、ナノレベルの組織の違いによって特性に大きな違いが出ると考えられている。しかしながら組織と磁気特性の基礎的な研究な必ずしも十分行われていると言い難い現状である。組成や処理温度、時間を変化させて自己形成させたナノグラニュラー磁性体は、いろいろな構造・形態の組織を示し、制御が可能である。組織や物性変化を系統的に調べればナノ磁性粒子がどのような相変態経路を取るか、どのような相互作用が働くか追跡が可能である。我々は銅中でのコバルト、鉄及び両者共存め条件下での組織形成とそれぞれの段階の磁気特性を調べて来た。今回の科研費支援を受けた研究では、特に銅中に鉄とニッケルとを固溶させた合金でのナノ磁性粒子形成を調べ、Ni添加が磁性微粒子形成に顕著な変化をもたらすことを明らかにした。銅-鉄合金にニッケルを添加すると平衡状態図の観点からはFeNi_3相が出現すると推測される。しかし、等温焼鈍における組織と磁気特性の時間的変化は単なるFeNi_3相の形成から予想されるような単調な推移を示さないことが明らかになった。Cu-Co合金にNiを添加しても組織と磁気特性に複雑な変化が見られた。このような変化から考えると、従来使われていた平衡状態図の磁気変態温度だけでは本研究で得られた結果を説明できない。析出によって形成したナノ磁性粒子では、粒径や組成の変化が起きると考えるべき実験結果が得られた。このような変化が起きるとナノグラニュラー磁性粒子は磁気的にも複雑な挙動を示す可能性が有る。並行して行った熱磁気天秤法によりこれらの合金の磁気変態点を測定した。この結果によると、Cu-Ni-Co合金には複数の磁気変態点が見られることが分かった。
超短時間就労を通じた就労困難な発達障害者への教育・社会参加支援法の開発

本研究では超短時間就労という従来の就労支援とは異なるアプローチを適用し,労働を通じた教育・学習の機会を提供することで,社会参加に至る可能性をエビデンスと共に探索的に検討することを目的とした.本研究では(1)一般就労が困難な発達障害者に対し,既存の資料から対象者の困難を簡便にアセスメントし,支援策を提案する方法論,(2)身の回りにある入手しやすいデバイスを支援技術として利用する方法論,(3)実際の支援場面で,言語によるコミュニケーションが困難な人がデバイスを用いて表現手段を変えてコミュニケーションするための方法論,(4)就労の支援のための社会的資源活用,の4つの観点から研究成果を報告した.本研究は現在3年計画の2年目を終えたところである.本研究のテーマは発達障害者の超短時間雇用である.しかしながら,1年目は所属機関が新設大学院初年度のため,超短時間雇用を実施するための規定や基準がなく,その作成に時間を要したため,研究の開始が大幅に遅れてしまった.2年目の24年度は,ようやく雇用規定を設け,研究に着手することができた.発達障害当事者5名,発達障害同様の認知的困難のある高次脳機能障害者1名の計4名が研究に参加してもらうことができたが,うち2名が生活上の理由によって現在継続的に参加できなくなってしまった.そのため,研究計画を修正する必要が生じた.24年度(2年目)の後半からは,参加者を多く集めた数量的評価よりもむしろ,個別ケースの縦断的な評価,個別ケースの合理的配慮の状況,就労側ではなく雇用側をターゲットとした調査に切り替えている.2年目は個別事例をもとに,近年就労および就学場面でニーズが高まっている合理的配慮を提供するプロセスの検討方法について,ケーススタディを実施した.その結果,従来一般的な知能検査によるアセスメントだけではなく,在学中の成績および日常生活における困り感の聞き取りが,合理的配慮のアセスメントとして有効に機能することが示唆された.このプロセスについてまとめ,ヒューマンインタフェース学会コミュニケーション支援研究会にて報告した.なお,本発表は研究会賞の受賞対象に選ばれた.本研究は現在3年計画の3年目を終えたところであるが,研究の実施において研究代表者が所属機関を異動したため,研究の進捗が遅れており,1年延長することとなった.本研究のテーマは発達障害者の超短時間雇用である.本研究は進捗の遅れから,24年度(2年目)の後半から,研究計画を変更している.具体的には参加者を多く集めた数量的評価よりもむしろ,個別ケースの支援や合理的配慮に関する効果の評価,就労側および雇用側をターゲットとした就労支援のあり方に関する調査に切り替えている.3年目となる25年度は,就労支援に関して,上記を検討し,部分的なデータを活用して2つの研究発表を行った.ひとつは,障害者雇用に関する合理的配慮の一環として,携帯情報端末アプリケーションがどのように障害支援技術として活用できるか検討したものである.1000を越える数のアプリケーションを分類し,障害に起因する就労上での困り感に応じた支援アプリを整理した.なお,この成果は,ヒューマンインタフェース学会研究会で報告した.つづいて,本研究参加者の個別ケースの分析として,インターネットでのソーシャルネットワーキングサービスの活用が,コミュニケーションが困難な発達障害のある人の支援に役立つ事例を分析し,論文としてまとめた.本研究成果は「コミュニケーションが困難な発達障害のある人のキュレーティング・コミュニケーション」として認知科学, 21(1), 45ー61.に掲載された.本研究では超短時間就労という従来の就労支援とは異なるアプローチを適用し,労働を通じた教育・学習の機会を提供することで,社会参加に至る可能性をエビデンスと共に探索的に検討することを目的とした.本研究では(1)一般就労が困難な発達障害者に対し,既存の資料から対象者の困難を簡便にアセスメントし,支援策を提案する方法論,(2)身の回りにある入手しやすいデバイスを支援技術として利用する方法論,(3)実際の支援場面で,言語によるコミュニケーションが困難な人がデバイスを用いて表現手段を変えてコミュニケーションするための方法論,(4)就労の支援のための社会的資源活用,の4つの観点から研究成果を報告した.本研究の核となる発達障害者を対象とした超短時間雇用を実施するためインフラ作りに注力した.新設大学院初年度のため,超短時間雇用を実施するための規定や基準がなく,その作成に時間を要した.組織の対応として問題になったことは,労務管理,安全管理,倫理,の問題であった.現在も未解決の部分も有り,次年度以降に対応する.続いて超短時間雇用参加者の募集を実施した.ゼロからのインフラ作りのため,研究参加希望の障害当事者を集めるのに時間を要した.発達障害当事者3名,発達障害同様の認知的困難のある高次脳機能障害者1名の計4名が参加した.超短時間雇用による教育活動の効果を検討するため,以下の項目をアセスメントした.これは次年度以降,定期的に同様の項目を測定し,研究参加前後で比較する.1)就業に関する困り感の程度(本人側および環境側の要因の聞き取り),2)WAIS-IIIによる認知特性の把握,3)支援技術及び,合理的配慮としての環境調整の有無による,働きやすさの違い,4)コミュニケーション能力に関係する困り感,5)特性的自己効力感,を確認した.以上の聞き取りや認知機能検査,パイロットスタディー的に取得した作業状況のデータを元に,日本特殊教育学会,通信情報工学研究会,日本職業リハビリテーション学会,関西心理学会にて4件の発表を行った.

インフラ整備に時間を要し,研究の遂行が計画より遅れたため,次年度以降に挽回したい.本研究の目的は,一般就労が困難な発達障害者における新しい社会参加手法の開発であった.超短時間就労(週に数十分・数時間程度の作業補助)という従来の就労支援とは全く異なるアプローチを適用し,労働を通じた教育・学習の機会を提供することで,社会参加に至る可能性をエビデンスと共に探索的に検討することを目的とした.上記目的の達成のため,本研究では以下の4つの観点から研究を実施した.(1)一般就労が困難で悩んでいる発達障害者に対して,どのように既存の資料から対象者の困難を簡便にアセスメントし,困難解消策や支援策を提案できるか,(2)身の回りにある入手しやすいデイバイス(例えばタブレット端末)を困難解消のための支援ツールを使うにはどうすればよいか,(3)実際の支援について,言語によるコミュニケーションが困難な人が,どのようにして自分の意思を表現する方法を獲得し得るのか,(4)就労の支援について,どのように組織や外部の社会的資源を活用するか,の4つの観点から研究成果を報告した.なお,論文としてはまだ報告できていないものの,本研究に参加した発達障害のある当事者4名のうち3名は地域の生活・就労支援センターや支援事業所の社会的資源を通じて企業や事業所に就労し,残る1名は在学中である.本研究は探索的な研究であるため,一般就労が困難な発達障害者全てに対して有効な社会参加手法を開発できたということはできないが,従来の方法とは異なる簡便な支援策のアセスメント法や,身近にあるテクノロジーを活用した支援方法の提案は,一般就労が困難な発達障害のある当事者やその支援者に対する有益な方法になると考えられる.また言語によるコミュニケーションが困難と考えられている人が,実は別手段を介することで自分の意思を表出する手段を確立しているということを示した成果は学術的にも重要な成果をもたらしたと考えられる.特別支援教育学23年度より,所属機関を変更した.そのため,研究インフラの整備にまず時間を要してしまった.また,本研究は障害者雇用をテーマとしているが,所属機関が関東から関西に変わったため,まず研究対象フィールドの開拓と関係性の構築に時間がかかってしまった.また,現所属機関が新設初年度で有り,研究のために必要な研究倫理委員会が設立されておらず,その設立と研究倫理審査に時間がかかった.さらに,研究参加者が個別の理由により参加継続が困難になり,データの取得がうまくいっていない.以上より,研究の遂行が遅れているため,次年度以降の研究計画を修正し,最終年度に向けて調査を準備している段階である.研究代表者の異動により,新しく研究フィールドを開拓するのに時間がかかったため,初年度と2年目に大きく研究が遅れた.2年目後半に研究計画を変更し,少しずつ成果があがってきたものの,予定していた成果を出すまでにはやや遅れている.研究年度を1年延長し,目標を達成する予定である.23年度より,所属機関を変更した.そのため,研究インフラの整備にまず時間を要してしまった.また,本研究は障害者雇用をテーマとしているが,所属機関が完答から関西に変わったため,まず研究対象フィールドの開拓と関係性の構築に時間がかかってしまった.
母体腸内細菌叢の変化を介した小児期肥満発症メカニズムの解明

胎児期における子宮内環境が、成人期の健康障害に関与していることが示唆されている。これは、Developmental Origin of Health and Disease(DOHaD)説として知られている。そのような疾患の中で成人期の肥満においてもDOHaD説のように胎児期環境が関与していることが報告されており、胎児期からの肥満発症メカニズムの解明が必要とされている。成人の肥満は小児期の肥満と関連することが示されており、胎児期環境因子→小児期肥満→成人期肥満といった一連の流れとして解析あるいは対策を行なっていく必要がある。一方、腸内細菌叢の変化が肥満の発症に深く関与するとの報告もあり、肥満の環境因子としての腸内細菌叢にも注目が集まっている。本研究は環境化学物質を含む母親の環境要因が妊娠中の腸内細菌叢に与える影響、さらにその変化が児の体重変化あるいは肥満発症に与える影響を明らかにすることを目指すものである。具体的には、コホート調査により得られた妊娠女性の血液中PCBを含めた環境要因、妊娠中の母体腸内細菌叢、出生体重や臍帯血レプチン・インスリンとの関連を明らかにするとともにコホートの追跡により、小児の肥満との関連を検討する。本年度に昨年度に行なった母体の腸内細菌叢解析および本年度引き続き行なった糞便メタボローム解析の結果を用いた検討を行なった。本年度の解析では母親の妊娠中腸内細菌叢の多様性が男児では出生時の頭囲と相関することが示された。また、菌叢を属レベルで解析したところ、一部の属が出生時の頭囲や体重と関連することが見出された。この影響は男女差があり、胎児期環境に対する反応性の男女差が示唆された。本年度は、母体妊娠中腸内細菌叢および糞便メタボローム解析、母体および臍帯血PCBレベル、臍帯血アディポカイン濃度といった分析項目の取得を完了することができた。これらの分析結果を用いて出生時の体格との関連を検討したところ、母体腸内細菌叢が出生時の体格に影響すること、この影響には男女差があることが明らかとなった。この結果は国際誌に論文として投稿し、現在印刷中の状態にある。また、母体血中PCBレベルと関連する腸内細菌叢についても予備的な検討を行い、一部の属が関連している可能性が得られている。以上より、順調と判断した。本年度は母体の腸内細菌叢と出生時の体格との関連を解析し、論文化することができた。次年度は今年度までに取得が完了している分析データを用い、さらに解析を進める計画である。児の出生時体格に加え臍帯血インスリン、レプチンなどとの関連を解析する。また、母体環境要因と腸内細菌叢との関連についてもさらに検討を進める。一部はすでに予備的な検討を行なっており、次年度は結果を確定し論文化を目指す。次年度は3歳半の調査票データも取得できる予定であり、妊娠中の状況と3歳半における体重やBMIとの関連も検討を試みる計画である。胎児期における子宮内環境が、生後の健康障害に関与していることが示唆されている。これは、the Developmental Origin of Health and Disease(DOHaD)仮説として知られている。肥満は、様々な疾患の基礎となることが知られている。成人の肥満にはDOHaD説のように胎児期環境が関与していることが報告されており、胎児期からの肥満発症メカニズムの解明が必要とされている。一方、腸内細菌叢の変化が肥満の発症に関与するとの報告もあり、肥満の環境因子としての腸内細菌叢にも注目が集まっている。具体的には1)コホート調査により得られた妊娠女性の血液中PCBを含めた環境要因を測定・評価し、2)腸内細菌叢変化との関連を解析し、3)前記因子と出生体重や臍帯血レプチン・インスリンとの関連を明らかにするとともにコホートの追跡により、小児の肥満との関連を検討する。本研究により妊娠中母体因子および腸内細菌叢と児の体重・肥満に関連が認められた場合、それぞれの段階における栄養学的あるいはプレバイオティクス/プロバイオティクス的な予防的介入の可能性が広がってくる。本年度に母体の腸内細菌叢の解析を進められた。糞便メタボローム解析に関しては、順次進めている。また、臍帯血のレプチン及びインスリン濃度に関しても測定を行った。母体血液のメタボローム解析も順次進めることができた。予備的な解析では、母親の腸内細菌叢の多様性は出生時の体重や身長と関連しないことが示唆された。また、妊娠中の母親の食事状況については質問票を用いた評価を行っており一部結果を取得した。研究計画において、本年度に行う予定であった腸内細菌叢の分析は完了することができた。腸内細菌叢は数千種類の細菌(OUT)を含むデータであり、この解析には高度な統計解析技術が必要である。本年度においては多様性を指標として解析を行ったが、門レベルあるいは属レベル、OUTレベルといったさらに詳細な解析までは行えなかった。しかし、多様性と出生時の児の身体計測値との関連を調べることができた。また、母親の食事摂取状況に関しては質問票データの取得までは行えたが詳細な食品群の摂取状況などの解析までは行えなかった。一方で、メタボローム解析などは前倒しで進められている部分もある。そのため、やや遅れていると判断した。

胎児期における子宮内環境が、成人期の健康障害に関与していることが示唆されている。これは、Developmental Origin of Health and Disease(DOHaD)説として知られている。そのような疾患の中で成人期の肥満においてもDOHaD説のように胎児期環境が関与していることが報告されており、胎児期からの肥満発症メカニズムの解明が必要とされている。成人の肥満は小児期の肥満と関連することが示されており、胎児期環境因子→小児期肥満→成人期肥満といった一連の流れとして解析あるいは対策を行なっていく必要がある。一方、腸内細菌叢の変化が肥満の発症に深く関与するとの報告もあり、肥満の環境因子としての腸内細菌叢にも注目が集まっている。本研究は環境化学物質を含む母親の環境要因が妊娠中の腸内細菌叢に与える影響、さらにその変化が児の体重変化あるいは肥満発症に与える影響を明らかにすることを目指すものである。具体的には、コホート調査により得られた妊娠女性の血液中PCBを含めた環境要因、妊娠中の母体腸内細菌叢、出生体重や臍帯血レプチン・インスリンとの関連を明らかにするとともにコホートの追跡により、小児の肥満との関連を検討する。本年度に昨年度に行なった母体の腸内細菌叢解析および本年度引き続き行なった糞便メタボローム解析の結果を用いた検討を行なった。本年度の解析では母親の妊娠中腸内細菌叢の多様性が男児では出生時の頭囲と相関することが示された。また、菌叢を属レベルで解析したところ、一部の属が出生時の頭囲や体重と関連することが見出された。この影響は男女差があり、胎児期環境に対する反応性の男女差が示唆された。本年度は、母体妊娠中腸内細菌叢および糞便メタボローム解析、母体および臍帯血PCBレベル、臍帯血アディポカイン濃度といった分析項目の取得を完了することができた。これらの分析結果を用いて出生時の体格との関連を検討したところ、母体腸内細菌叢が出生時の体格に影響すること、この影響には男女差があることが明らかとなった。この結果は国際誌に論文として投稿し、現在印刷中の状態にある。また、母体血中PCBレベルと関連する腸内細菌叢についても予備的な検討を行い、一部の属が関連している可能性が得られている。以上より、順調と判断した。本年度は母体の腸内細菌叢(16S rRNA)解析を行うことができた。次年度はこのデータをもとに児の出生児体格あるいは臍帯血インスリン、レプチンなどとの関連を解析する予定である。さらに母体血メタボロームあるいは糞便ネタボロームの解析も進めていき、児の出生児体格や臍帯血のホルモン値との関連も合わせて検討する予定である。腸内細菌叢の詳細な解析には多変量解析を含めた統計解析が必要であり、必要に応じて新たな統計解析ソフトなどを用いて解析を行っていく。糞便メタボロームの解析などには煩雑な工程が伴うため、計画の進捗状況に応じて短期的に技術的な補助を導入することも考慮して研究を進めていくことを考えている。本年度は母体の腸内細菌叢と出生時の体格との関連を解析し、論文化することができた。次年度は今年度までに取得が完了している分析データを用い、さらに解析を進める計画である。
オーエスキー病抵抗性品種の分子育種法の開発

1.オーエスキー病ウイルス(ADV)の前初期(IE)蛋白IE180の機能ドメインを解析した結果、初期および後期遺伝子の転写活性化に関与する領域、IE遺伝子の転写抑制に関与する領域および核への移行シグナルが明らかになった。2. ADVの初期蛋白EP0が感染細胞の核に局在し、IE、初期TKおよび後期gX遺伝子の転写を増強することが明らかになった。この転写増強作用には、EP0分子のN末端に存在するRINGfinger領域が必須であり、酸性アミノ酸を多く含む領域も関与することが判明した。3.蛋白工学手法によって、ADVのIE遺伝子の転写抑制因子を作出した。これら因子の転写調節作用を解析し、以下の成績を得た。1) IE180のDNA結合ドメインとヒト単純ヘルペスウイルスのトランスアクチベータ-VP16の結合ドメインとのキメラ蛋白は、ADVのIE遺伝子の転写を抑制した。このキメラ蛋白はウイルスの増殖を著しく阻害した。2) IE180およびEP0のdominant-negativemutantはウイルスの増殖を抑制した。4.ウイルスの増殖を最も強く抑制した3-1)キメラ蛋白遺伝子をC57BL/6マウス受精卵にマイクロインジェクション法によって導入した。1系統のF1マウスに本遺伝子が導入されたことを確認した。現在、このF1マウスを用いてトランスジェニックマウスの系統を確立しつつある。今後、系統化されたマウスが本遺伝子を発現していることを確認してウイルス感染実験を行う予定である。1.オーエスキー病ウイルス(ADV)前初期(IE)蛋白の自己のIE遺伝子に対する転写抑制領域を決定した。この領域のみを発現するプラスミドをCPK細胞にトランスフェクトして得られた遺伝子導入細胞がADV感染に対して抵抗することが明らかとなった。2.ADVの初期蛋白の1つであるEPOはADVの前初期、初期および後期遺伝子の転写ならびにADVの複製を促進することが明らかとなった。3.ADVのEPOの種々の欠失遺伝子を作製し、各々の発現蛋白がIE遺伝子の転写に及ぼす影響を解析した。アミノ末端から111番目までのアミノ酸残基からなる蛋白はIE遺伝子の転写を抑制する作用をもつことが明らかとなった。さらに、この遺伝子を導入した細胞株がADV感染に対して抵抗することも示された。4.ADV IE蛋白は、ネコ免疫不全ウイルスのLTRからの転写および複製を阻止することならびに、その標的はC/EBP結合配列であることが明らかとなった。5.ES細胞を用いた遺伝子ターゲット法によりTNFα遺伝子欠損マウスを作出した。6.ADV IE遺伝子の転写抑制因子として構築したヒト単純ヘルペスウイルスのαトランス活性化誘導因子の結合ドメインとADV IE蛋白のDNA結合ドメインとのキメラ蛋白遺伝子をマイクロインジェクション法でマウス受精卵に導入しトランスジェニックマウスを作出するため、この遺伝子をヒトのポリペプチド鎖延長因子EF-1αおよびマウスMx遺伝子のプロモーターの下流に挿入し、導入遺伝子の構築を行った。現在、この転写抑制遺伝子のマウス受精卵への導入を行っている。1.ヒト単純ヘルペスウイルスのαトランス活性化誘導因子の結合ドメインとオーエスキー病ウイルス前初期蛋白のDNA結合ドメインとのキメラ蛋白がオーエスキー病ウイルス前初期遺伝子の転写を抑制することが判明したので、このキメラ遺伝子をヒトのポリペプチド鎖延長因子1α遺伝子のプロモーターとヒトG-CSFのポリAシグナルの間およびマウスMx1遺伝子のプロモーターとマウスβ-グロビンのポリAシグナルの間に挿入した。これらのDNA断片を、マイクロインジェクション法で各々1514および350個のC57BL/6Jマウス受精卵に導入した。このうちそれぞれ820および198個の受精卵をマウスに移植し、最終的に96および33匹の産仔を得た。2.これらの産仔から目的の遺伝子が導入されたマウスをサザンブロット法およびPCR法を用いて、選抜し、計25匹の疑陽性マウスを得た。

これらのマウスと正常マウスを交配し、得られたF1マウスについて、同様にスクリーニングを行っている。3.オーエスキー病ウイルス遺伝子の転写制御機構の解明を目的として、オーエスキー病ウイルス前初期蛋白の転写活性化、転写抑制および核への局在化に必要な領域を決定した。4.ヒトのインターフェロン-αで処理した細胞において、オーエスキー病ウイルス前初期遺伝子の転写が抑制されることを明らかにし、この転写抑制に関わるプロモーター領域を決定した。1.ヒト単純ヘルペスウイルスのαトランス活性化誘導因子の結合ドメインとオーエスキー病ウイルス(ADV)前初期(IE)蛋白のDNA結合ドメインのキメラ蛋白がADVのIE遺伝子の転写を抑制すること、ならびにこれを発現する細胞がADV感染に対して抵抗することが判明した。この成績をin vivoのintracellular immunizationに応用するため、ヒトポリペプチド鎖延長因子EF-1αまたはマウスMx1遺伝子プロモーターで駆動されるように設計したキメラ蛋白遺伝子を調製した。これをマイクロインジェクション法でC57BL/6マウス受精卵に導入し、キメラ蛋白を発現するトランスジェニックマウスの作出を試みた。EF-1αプロモーターで駆動するキメラ蛋白遺伝子を導入した受精卵から計96匹のマウスが得られ、その中の1匹の体細胞に導入遺伝子を検出した。一方、Mx1遺伝子プロモーターで駆動するキメラ蛋白遺伝子を導入した受精卵から計33匹のマウスが得られ、その中の4匹に導入遺伝子が検出された。これらマウスから得たF1マウスの中で1系統のみに導入遺伝子が確認された。現在、このF1マウスの系統を確立することを試みている。2.オーエスキー病ウイルス(ADV)の初期蛋白E90は、ADV遺伝子の転写を増強する。EP0の機能ドメインを決定するために、種々の欠失EP0遺伝子を作出し、これらが発現する蛋白の転写調節作用を検討した。その結果、EP0の転写増強作用にはRING finger領域を含むN末端から84番目までのアミノ酸配列および酸性アミノ酸領域を含む114から242番目までの配列が関与することが判明した。また、N末端から113番目までのアミノ酸残基からなるEP0変異体は、IEおよびTK遺伝子の転写を抑制し、EP0のdominant-negative mutantであることが判明した。
確率的層状フィードフォーワードネットワークの統計力学的研究

平成7年度の成果相対エントロピー(カルバック測度)の最小原理を用いてデジタルユニット(ニューロン)が確率的に離散値をとる層状フィードフォーワードネットワークの学習過程を定式化した.この確立的層状フィードフォーワードネットワークの学習過程をモンテカルロシミュレーションによって調べ,確立的デジタルユニットを用いた相互対称結合ネットワークであるボルツマンマシンの学習過程と比較した.さらに決定論的なアナログユニットよりなるフィードフォーワードネットワークにバックプロパゲーションアルゴリズムを用いた学習過程と比較しそれぞれのモデルの学習能力を調べ比較した.結果として次のことが明らかになった.1.パターンに相関のない学習に対しては,バックプロパゲーションアルゴリズムを用いたアナログフィードフォーワードモデルの学習スピードは他のモデルに比べて圧倒的に早い.2.しかし,相関の強いモデルに対しては,バックプロパゲーションアルゴリズムは無力で,確立的デジタルユニットを用いたモデルが優れている.3. 2つのデジタルユニットモデルを比較した場合,簡単な問題に対してはボルツマンマシンの方が学習スピードが早い.しかし,与えられた問題が複雑になると,多くの中間層ユニットが必要になり,ボルツマンマシンでは平衡状態に達するまでに要する緩和時間が飛躍的に増大し,実用時間内に学習を終えることが困難になる.この点,確立的層状フィードフォーワードモデルではこの様な困難は生じない.以上の結果より,次世代のニューロコンピュータの設計に確立的層状フィードフフォーワードネットワークは大変有望と思われるが,現在この方面の研究はほとんど行われていない.さらに確率的層状フィードフォーワードネットワークは損失回復,汎化,最適化構造の自動構築等の能力を持っているように見える.これらは,実際の脳においても重要な能力であるが,ニューロコンピュータの設計においても必要不可欠な能力と思われる.これらの能力をモンテカルロシミュレーションによる数値計算によって現在詳しく調べている.平成7年度の成果相対エントロピー(カルバック測度)の最小原理を用いてデジタルユニット(ニューロン)が確率的に離散値をとる層状フィードフォーワードネットワークの学習過程を定式化した.この確立的層状フィードフォーワードネットワークの学習過程をモンテカルロシミュレーションによって調べ,確立的デジタルユニットを用いた相互対称結合ネットワークであるボルツマンマシンの学習過程と比較した.さらに決定論的なアナログユニットよりなるフィードフォーワードネットワークにバックプロパゲーションアルゴリズムを用いた学習過程と比較しそれぞれのモデルの学習能力を調べ比較した.結果として次のことが明らかになった.1.パターンに相関のない学習に対しては,バックプロパゲーションアルゴリズムを用いたアナログフィードフォーワードモデルの学習スピードは他のモデルに比べて圧倒的に早い.2.しかし,相関の強いモデルに対しては,バックプロパゲーションアルゴリズムは無力で,確立的デジタルユニットを用いたモデルが優れている.3. 2つのデジタルユニットモデルを比較した場合,簡単な問題に対してはボルツマンマシンの方が学習スピードが早い.しかし,与えられた問題が複雑になると,多くの中間層ユニットが必要になり,ボルツマンマシンでは平衡状態に達するまでに要する緩和時間が飛躍的に増大し,実用時間内に学習を終えることが困難になる.この点,確立的層状フィードフォーワードモデルではこの様な困難は生じない.以上の結果より,次世代のニューロコンピュータの設計に確立的層状フィードフフォーワードネットワークは大変有望と思われるが,現在この方面の研究はほとんど行われていない.さらに確率的層状フィードフォーワードネットワークは損失回復,汎化,最適化構造の自動構築等の能力を持っているように見える.これらは,実際の脳においても重要な能力であるが,ニューロコンピュータの設計においても必要不可欠な能力と思われる.これらの能力をモンテカルロシミュレーションによる数値計算によって現在詳しく調べている.
ボランティア・ツーリズムによる地域活性化に関する実証的研究

本研究は、岩手県釜石市で、災害被災地へのボランティア・ツーリズムと復興・地域活性化の関連性について実証的に研究するものである。平成25年度は、1使用概念の理論的検討、2釜石市の文献資料・統計資料の収集・分析、3関係者へのインタビュー調査・参与観察、の三点を実施した。特に1を主要な作業として進めた。被災地への外部からの交流には複数の用語が使用されることから、実態を適切に表現しうる概念の把握を目指した。具体的には、A)復興ツーリズム、B)ダークツーリズム、C)ボランティア・ツーリズムの3つが頻繁に使用される。A)は国際的でなく、時限的という限界がある。B)は被災地住民の感情にそぐわない。C)はこれらの問題が少ない。国際的には"Disaster tourism"が使用されることも多いが、B)と同様の問題がある。これらから、「ボランティア・ツーリズム」が適切と考えられる。概念の比較検討は例が少なく、本領域の研究を進展させるための作業として意義があったといえる。2、3に関しては、3回の調査旅行により資料収集、参与観察、インタビュー調査を実施し、対象である「三陸ひとつなぎ自然学校」の活動の把握に努めた。釜石市でも震災後のボランティア活動者は減少傾向にある。その中で「三陸ひとつなぎ自然学校」によるボランティアの受け入れは、地域の復興に一定程度寄与している。この団体が受け入れを継続できている背景には、意欲的な受け入れプログラムの開発がある。参与観察では、ボランティアと団体が協働でプログラム開発を行う現場を調査した。こうした手法がボランティア活動者の満足を高めている可能性がある。またインタビュー調査では、外部組織と連携しプログラム開発を行っていることを確認した。総じて柔軟にプログラムを開発しており、その柔軟性が活動継続に寄与している。この点を明らかにしたことが、今年度の研究の意義である。
尿中バイオマーカーと循環器疾患リスクに関する疫学研究

本研究は日本人を対象として、尿に含まれる各種のバイオマーカーと循環器疾患との関連を疫学手法を用いて検討してきた。本研究では、地域住民において、非肥満者(Body Mass Index<25.0kg/m2)ではスポット尿(単回尿)中のナトリウム濃度が高いことが将来の収縮期血圧値の上昇につながることが明らかとなった。また、横断調査ではあるが、スポット尿中C-ペプチド濃度から推定されるC-ペプチドの1日排泄量が、糖尿病の者ではそうでない者よりも有意に高いことが明らかとなった。平成24年度は、前年に引き続き、平成17年の調査をベースラインとした、スポット尿中Na、K、尿素窒素と循環器疾患のリスクファクターの前向きコホート研究(研究1)とスポット尿中のC-ペプチド、Na、K、尿素窒素濃度と循環器疾患リスクファクターの横断研究を進めた(研究2)。また、平成24年度は茨城県C市の別の地区でスポット尿検査を、IRCS研究に含まれる秋田県I町でスポット尿検査・蓄尿検査を行い、地域によってスポット尿と蓄尿検査の関係が異なるか、内的妥当性を調査した(研究3)研究1については、ベースライン時に高血圧を示さなかった1,915人の中から、平成23年度に新たに43人の追跡を行うことができた。その結果、追跡者数は1,152人、追跡率は60%となった。このうち、高血圧の治療を行っていない者について、前年度と同様にスポット尿中Na濃度と追跡期間中の血圧値の上昇について分析を行った。結果は、収縮期血圧値のみNa濃度と正の関連を示した。この結果は再度論文にまとめ直し、専門誌に投稿中である。研究2については、スポット尿中C-ペプチドと糖尿病の関連について横断的な分析を行った。その結果、スポット尿中C-ペプチド値から推定されるC-ペプチドの1日排泄量が糖尿病患者群で非患者群より高いことが明らかとなった。この結果は第71回日本公衆衛生学会総会において発表した。研究3については、平成24年の健康診断のデータセットの完成次第分析を開始する予定である。また、先行研究に比べ、平成24年にI町で蓄尿を実施した者が少ないため、平成25年度に再度蓄尿検査を実施し、データセットを大きくしてから再度検討する予定としている。本研究は平成23年度より日本人を対象として、尿に含まれるバイオマーカーと循環器疾患との関連を疫学手法を用いて検討してきた。平成25年度も前年に引き続き、平成17年度に行ったスポット尿検査の成績をベースラインとした、スポット尿検査の結果(Na、K、尿素窒素、クレアチニンを測定)と循環器疾患のリスクファクターの関連についての前向きコホート研究(研究1)と平成2325年度に改めて健康診断と合わせて実施した、スポット尿検査の結果(C-ペプチド(平成23年度のみ)、Na、K、尿素窒素、クレアチニンを測定)と循環器疾患リスクファクターの関連についての横断研究・前向きコホート研究(研究2)を行った。平成24年度に計画したスポット尿と蓄尿検査の関連についての研究は、両検査を同時に実施した人数が少なく中止した。研究1については、ベースライン時に高血圧・腎機能障害を示さなかった1,890人のうち、追跡調査に参加し、かつ降圧薬治療を受けていなかった891人において、食塩摂取の指標となるスポット尿中Na濃度と長期的な収縮期血圧値の上昇の間に正の関連を認めた。研究2については、横断研究として、空腹時採血を行った1,117人において、糖尿病罹患者とそうでない者の間のC-ペプチドの推定1日排泄量(スポット尿中C-ペプチド値、クレアチニン値から推定)の比較を行った。分析の結果、糖尿病群では非糖尿病群よりもC-ペプチドの推定1日排泄量が高値であることを認めた。同じく横断研究として、高血圧の治療を受けていない4,386人の間で、食塩摂取の指標となるスポット尿中Na濃度やNa/クレアチニン比と血圧値の関連を分析し、両者の間に正の関連を認めた。前向きコホート研究としては、C-ペプチドの推定1日排泄量とその後のHbA1cの変化について2年間の追跡を実施できた626人のデータを分析したが、C-ペプチドの推定1日排泄量とHbA1cの変化量の間に有意な関連は認めなかった。平成23年度は、平成17年の調査をベースラインとした、スポット尿中Na、K、尿素窒素と循環器疾患リスクファクターの前向きコホート研究(研究1)とスポット尿中のC-ペプチド、Na、K、尿素窒素濃度と循環器疾患リスクファクターの横断研究(研究2)について、研究を進めた。研究1については、平成17年度に茨城県C市K地区において健康診査を受診した一般男女3,247人のうち、この時に高血圧を示さなかった1,915人について、平成20年度平成22年度の健康診査の受診状況を調査した。

1,915人中、1,109人がこの期間中に健康診査を再受診していた(追跡率58%)。さらに、ここから降圧薬の内服を開始していた61人を除いた1,048人について、平成17年度のスポット尿検査の成績と、その後の血圧値の変化量の関連を調べた。結果は、全対象者において、スポット尿中Na濃度が高いと追跡期間中の収縮期血圧値の上昇幅が大きくなることが示された。また、この関係は非肥満者でより強く、非肥満者ではスポット尿中Na濃度が高いと追跡期間中の収縮期・拡張期血圧値の両方の上昇幅が大きくなることが示された。この結果は第22回日本疫学会総会で発表し、論文としてまとめ、現在専門誌に投稿中である。研究2については、自治体の同意確認や研究に関する倫理委員会の審査が早期に終了したことから、茨城県C市K地区住民に対するスポット尿検査を本年度に施行した(平成23年11月、同12月、平成24年2月)。スポット尿検査の受診者数は1,961人であった。検査の受診率は99%であった。現在、平成24年2月の健康診査を受診した者のデータも含めたデータセットを作成中であり、これが完成次第分析を開始する予定である。本研究では、地域住民の尿を用いて、その中に含まれるバイオマーカーと循環器疾患のリスク因子の関連を検討している。本年度は、スポット尿を用いた前向きコホート研究、横断研究について前年より引き続き研究を進めた。また、地域によらずスポット尿検査が有効であるかについても検討し、前述の研究結果を一般化できるかについても分析を開始した。このように、昨年度に引き続き、本年度も研究は順調に進展している。当初の研究目的は、コホート内症例対照研究、前向きコホート研究、横断研究の手法を用いて、尿中に含まれる物質が循環器疾患のバイオマーカーとして有用であるかを検討するものである。本年度は、スポット尿を用いた前向きコホート研究、横断研究について研究を進めた。これは予定より早めになっている部分があるが、データセットの作成にかかる時間などを考えると、順調に進展している範囲内に収まるものと考えられる。スポット尿に含まれる物質が循環器疾患のバイオマーカーとして有用であるか、今後も疫学的手法を用いて分析を進めていく。それに関連して、平成25年度もこれまでに追跡調査を行えなかった者について、健康診断の受診勧奨を行い、データの収集を進めていく。また、成果の一般化のために、スポット尿検査と蓄尿検査の関連をより深く分析していく予定である。スポット尿に含まれる物質が循環器疾患のバイオマーカーとして有用であるか、今後、横断調査、追跡調査の手法を用いて分析を進めていく。これと並行して、平成23年度にスポット尿検査を行えなかった健診の未受診者について、データの収集を進めていく予定である。これに加えて、本研究のフィールドとしている茨城県C市K地区が周辺地区と比べて、その尿中物質の構成に違いを有するかどうかについても、検討していく予定である。主として、これまでに収集したデータの分析、学会発表、論文化に研究費を使用する予定である。また、少しでも追跡調査の対象者数を増加させるため、健康診断の受診勧奨などにも研究費を使用していく予定としている。スポット尿検査の施行およびデータセットの作成を進めていく予定である。そのため、研究費の多くは尿検体の測定費用として使用する計画である。同時に、昨年度得たデータから随時分析を開始し、学会発表なども進めていく予定である。その旅費などにも研究費を充てる計画である。
リーシュマニアの薬剤耐性の分子機構と薬剤耐性遺伝子の解析

リーシュマニアの薬剤耐性の分子機構において、P-糖タンパク質遺伝子は、薬剤耐性遺伝子として中心的役割を果たしていることが明らかになってきた。しかしP-糖タンパク質遺伝子は多重遺伝子であるため、リーシュマニアでは種に応じて機能の異なるP-糖タンパク質遺伝子が存在すると考えられる。これまでに2つの異なるタイプのP-糖タンパク質遺伝子(Ldmdr1とLtpgpA)が単離されているが、本研究では、Leishmania amazonesisに焦点をあて、本種のP-糖タンパク質遺伝子の特性を明らかにすることを目的とした。そこでまず、P-糖タンパク質遺伝子に共通なATP結合部位を分離するため、これをPCR法で増幅しクローン化した。アミノ酸のホモロジー検索の結果、Ldmdr1と68%、LtpgpAとは37%の相同性しか示さないDNA断片を得た。これは、新しいタイプのP-糖タンパク質遺伝子の一部であると考えられた。そこで、この遺伝子の全長をクローニングするため、ゲノムライブラリーをLambda GEM-11を用いて作製した。上記のDNA断片をプローブとして、ライブラリーをスクリーニングし、得られた陽性クローンをSacIで切断の後、pUC19などにサブクローニングした。1005塩基対のSacI断片についてはその塩基配列を決定したが、目的の遺伝子は4kbを越えると推定されるため、現在残りのDNA断片について引き続きシークエンシングを行っている。また、サザンハイブリダイゼイションとパルスフィールド電気泳動による解析の結果、L.amazonensisには、Ldmdr1やLtpgpAに相同の遺伝子ならびに上記の新しい遺伝子を含めて、少なくとも3つのタイプのP-糖タンパク質遺伝子が存在することが強く示唆され、LtpgpA相同遺伝子は他の2つの遺伝子とは異なる染色体上に位置することが明かとなった。膜輸送蛋白質であるP-糖タンパク質は、ヒトやマウスでは薬剤を選択的に排出するポンプとして機能し、その遺伝子が薬剤耐性遺伝子であることが知られている。リーシュマニア原虫においても、このP-糖タンパク質と構造的に相同な遺伝子が存在することが報告され、薬剤耐性における同蛋白質の役割が注目されるようになった。しかし、リーシュマニアのP-糖タンパク質の構造特性や機能およびその発現機構について詳細は不明である。そこで本研究では、P-糖タンパク質遺伝子が多重遺伝子であることに着目し、まずリーシュマニアのP-糖タンパク質遺伝子の多型性について検討を行った。P-糖タンパク質にはATP結合部位が存在する。ATPとの結合には約100アミノ酸残基を隔てた2つの部位が重要とされ、それらの塩基配列は生物種を越えて強く保存されている。そこで、この2箇所の塩基配列に基づいてプライマーを作製し、PCR法によってそれらに挟まれた部分を増幅し、増幅DNAをクローン化した。Leishmania amazonensisについて、いくつかのクローンの塩基配列を決定し、推定される136のアミノ酸配列についてホモロジー検索を行った。その結果、マウスのP-糖タンパク質遺伝子と相同性が高い(約60%)2つのクローンが得られた。両クローン間の相同性は67%であったが、リーシュマニアのP-糖タンパク質遺伝子として唯一報告されているL.tarentolaeのものとは36%および37%と低い相同性しか示さなかった。以上の結果から、リーシュマニアのP-糖タンパク質遺伝子の多型性、つまり既知のP-糖タンパク質遺伝子分子種とは異なる分子種の存在が示唆された。今後、ゲノムDNAライブラリーからのクローニングを行うとともに、各遺伝子の発現誘導に関する特性を明らかにする予定である。しかしP-糖タンパク質遺伝子は多重遺伝子であるため、リーシュマニアでは種に応じて、機能の異なるP-糖タンパク質遺伝子が存在するものと考えられる。