hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
磁性物理モデルを用いたR&Dプロジェクトの定量的解析とマネジメントに関する研究

従来の研究開発の評価は概念モデルに基づく定性的な説明、質問表とその結果の主成分分析、又は財務指標から求められる定量評価がそれぞれ、単独で評価されていた。本研究は、財務指標から得られる定量的要素と「ヒト」「情報」「組織力」といった定性的な要素の両方が重要な役割を果たすと考えている。定量的要素・定性的要素は独立ではなく相互作用し、相互作用を定量的に導出・解析することが重要だと考えた。これら定量的指標と定性的指標の両方に関する相互関係について、定量的に評価可能な研究開発モデルを構築し、更にその結果を可視化し、問題点を明確化することで、研究開発プロジェクトを効率的にマネジメントする研究を行っている。研究開発プロジェクトの状態は、さまざまな要因による相関相互作用の合計であると考え、磁性物理モデルを応用した6次元モデルでの、研究開発プロジェクトの定量的解析と効果的なマネジメントに関する研究を行っている。モデルの普遍化・精緻化が一つの課題である。特に従来、同一企業または、同一産業内ということで、研究開発プロジェクトの外的環境は同じということで、外部環境に関しての考慮を除外してきた。昨年度はモデルの精緻化にフォーカスし、研究開発プロジェクトの外部環境に着目し、複数の企業組織のコンソーシアム型で行う実用技術の研究開発プロジェクトにおいて、それぞれ独立した価値観と思惑を持つ組織がバリューチェーンを構築する。そのため、それらのプロジェクトのバリューチェーンはネットワーク構造となる。「ネットワーク型バリューチェーンに基づくコンソーシアムプロジェクトに成果がある」という仮説をNEDOプロジェクトのアンケート結果で検証した。ノード数4以上の複数コンソーシアム型プロジェクトのバリューチェーンをネットワーク分析し、その結果における上市プロジェクト群と中止プロジェクト群の差の検定をおこなった。その結果は中止プロジェクトではスター型の傾向が高く、上市プロジェクトではネットワーク型の傾向が高い結果となり、それが上市と中止を分ける特徴であることが統計的に検証されたといえる。また、モデルは、定量的および定性的の2つの部分から構成されています。既にNEDOプロジェクトにおける研究開発プロジェクトの成功と失敗を特定の分野で検証し、それらを区別することができていた。これに加えて、定性的部分に焦点を当て、テキストマイニングによる簡単な定性分析を分析し、その内容に適したものを見つけました。その結果、テキストマイニングによる定量的データ分析に基づく新たな知見を従来の評価方法に追加できる可能性があることを見出した。研究開発プロジェクトの外部環境を理解するため、複数の企業組織のコンソーシアム型で行う実用技術の研究開発プロジェクトの解析を試みた。コンソーシアム型プロジェクトではそれぞれ独立した価値観と思惑を持つ組織がバリューチェーンを構築する。コンソーシアム型プロジェクトの上市と中止プロジェクトでは、ネットワーク構造が異なると考えられ、「スター型ネットワーク型バリューチェーンに基づくコンソーシアムプロジェクトの成果に課題があり、ネットワーク型バリューチェーンに基づくコンソーシアムプロジェクトに成果がある」を検証するため。NEDOプロジェクトのアンケート結果をネットワーク分析することで検証した。ノード数4以上複数コンソーシアム型プロジェクトのバリューチェーンをネットワーク分析し、その結果における上市プロジェクト群と中止プロジェクト群の差の検定をおこなった。この結果はデータから実証したとも言える。また、磁性物理モデルを応用した6次元モデルは、定量的および定性的の2つの部分から構成されています。人工知能における統計的機械学習やネットワーク分析といった手法を用いての解析を組み合わせる事で研究開発プロジェクトの状態を6次元モデルで可視化できると考えている。本年度は、企業内の個々の研究開発プロジェクトに焦点をあてて、6次元モデルを使って典型的な研究開発プロジェクトの上市と中止のパターン分類とフィードバックとしての改善点のフレームを作成することとしたい。このフレームを構築するために、実際に企業内での事業化に成功したプロジェクト、事業化に失敗したプロジェクトに対して、プロジェクトリーダー等に直接インタビューすることで、フレームワークの有効性を再確認し、インタビューの内容を自然言語処理することで、キーとなる用語を抽出することで、現在定性分析に使用する質問票の200項目にわたる質問項目の減縮を行うこととする。また、特定事例での考察として、成功事例のネットワーク構造から、可視化された個々の企業内プロジェクトの状態を比較し、どのような外部の影響があるのかを、既に実施したインタビューから考察を行いたい。1)インタビューの結果が、過去に概説された成功要因と一般的な方向性と一致しているかを確認する。2)磁性物理モデルシュミレーションの結果との適合性を解析する。3)特定事例から得られた考察結果を複数の企業が参加するコンソーシアム型の研究開発プロジェクトに応用し、その適合性を解析する。このことにより、研究開発マネジメントに於いてある程度実用的なレベルを達成することができると期待する。

定量的要素・定性的要素は独立ではなく相互作用し、相互作用を定量的に導出・解析することが重要だと考えた。これら定量的指標と定性的指標の両方に関する相互関係について、定量的に評価可能な研究開発モデルを構築し、更にその結果を可視化し、問題点を明確化することで、研究開発プロジェクトを効率的にマネジメントする研究を行っている。研究開発プロジェクトの状態は、さまざまな要因による相関相互作用の合計であると考え、磁性物理モデルを応用した6次元モデルでの、研究開発プロジェクトの定量的解析と効果的なマネジメントに関する研究を行っている。モデルの普遍化・精緻化が一つの課題である。特に従来、同一企業または、同一産業内ということで、研究開発プロジェクトの外的環境は同じということで、外部環境に関しての考慮を除外してきた。昨年度はモデルの精緻化にフォーカスし、研究開発プロジェクトの外部環境に着目し、複数の企業組織のコンソーシアム型で行う実用技術の研究開発プロジェクトにおいて、それぞれ独立した価値観と思惑を持つ組織がバリューチェーンを構築する。そのため、それらのプロジェクトのバリューチェーンはネットワーク構造となる。「ネットワーク型バリューチェーンに基づくコンソーシアムプロジェクトに成果がある」という仮説をNEDOプロジェクトのアンケート結果で検証した。ノード数4以上の複数コンソーシアム型プロジェクトのバリューチェーンをネットワーク分析し、その結果における上市プロジェクト群と中止プロジェクト群の差の検定をおこなった。その結果は中止プロジェクトではスター型の傾向が高く、上市プロジェクトではネットワーク型の傾向が高い結果となり、それが上市と中止を分ける特徴であることが統計的に検証されたといえる。また、モデルは、定量的および定性的の2つの部分から構成されています。既にNEDOプロジェクトにおける研究開発プロジェクトの成功と失敗を特定の分野で検証し、それらを区別することができていた。これに加えて、定性的部分に焦点を当て、テキストマイニングによる簡単な定性分析を分析し、その内容に適したものを見つけました。その結果、テキストマイニングによる定量的データ分析に基づく新たな知見を従来の評価方法に追加できる可能性があることを見出した。研究開発プロジェクトの外部環境を理解するため、複数の企業組織のコンソーシアム型で行う実用技術の研究開発プロジェクトの解析を試みた。コンソーシアム型プロジェクトではそれぞれ独立した価値観と思惑を持つ組織がバリューチェーンを構築する。
英語小説における近代表象の比較的研究--インドの英語作家を中心に--

本研究は、市民の近代化の過程を映し出す指標としてのイギリス社会小説に個人の近代化と社会の近代化の過程が見いだしうるように、同様の過程がインド英語小説のなかでどのように展開したかを検証した。かつての宗主国大英帝国から独立し、英語による社会小説を排出した旧植民地でも、イングランドの社会小説のたどった道を反芻するかのような現象が起きた。ナイポール研究、オクリ研究、シン研究を通じ、かつての英国最大の植民地インドにおいて近代化がいかに表象されたかを明らかにした。平成22年度は、「英語小説における近代表象の比較的研究-インドの英語作家を中心に-」という三年間にわたる研究課題を遂行するため、まず英語小説の起源としてのイギリス小説という表象の基盤をなすイギリス近代について考察した。これは平成22年4月に『WEB英語青年』4月号発表の書評村岡健次著『イギリスの近代、日本の近代』の執筆の準備段階にその萌芽を持つ。さらにこの書評を契機にイギリス近代についての考察を『エリザベス・ギャスケルとイギリス小説の伝統』(大阪教育図書)所収の論文「自然が救うギャスケルの男性たち-『妻たちと娘たち』のロジャーを追いながら」で深化させた。他方、イギリスから英語圏に近代考察を広げ、その過程で、木村茂雄・山田雄三編著『英語文学の越境』(英宝社、2010年)の書評、入子文子編著『英米文学と戦争の断層』(『図書新聞』、2011年4月23日)の書評を行った。さらに考察対象をイギリスから日本、インドへと展開し、共編著『現代インド英語小説の世界-グローバリズムを超えて』(鳳出版、2011年)を出版した。研究代表者は、「知らぬ間に非近代にのみこまれる近代について-クシュワント・シンの『デリー』と『水葬』から」と題する論文を寄せ、イギリスの近代、日本の近代をめぐる時代区分に諸説のあることに触れたのち、イギリス近代の圧倒的支配下にありながらも、時にその近代そのものをも無効にしてしまうかのようなインド社会がいかに英語小説というかたちで表象されているかを、『デリー』と『水葬』というシンの代表作二作を題材に考察した。(1)ベン・オクリにおける近代ベン・オクリの近代は、初期のリアリズム的作品にその典型が見られる。しかし、オクリの作品の真価はマジック・リアリズム的作品にあり、その代表作が『飢えたる道』以下の三部作である。ここでは、主人公の少年個人の成長の物語としての近代現象とナイジェリアの独立という近代現象が同時並行的に提示される。それが「道」という表現に凝縮されているが、一方、その道は、ただ単に目的地を持ち、前へと進む道ではなく、住人を喰らいつくすおそろしい、非近代的な道でもある。本年度はオクリの両義的近代の特質を、具体的な作品に沿って検証した。オクリの「道」の特徴を共著『ヨーロッパ文化の光と影』所収「近代はざまの『完璧な一日』」で考察した。(2)クシュワント・シンにおける近代ナイポール、オクリについては、それぞれ全体像の把握が終了しているが、シンについては未読の作品もある。社会小説については『パキスタン行き列車』、『デリー』、『水葬』を中心に据えつつ、その周辺にある作品の整理に努めた。評論についても、一作品ずつ検証し、シンの近代観を明らかにした。特に、インドの英字新聞等に発表のコラムなどの収集と読解に力点をおいた。『デリー』において明らかなように、シンの近代観が直線的なものでない。近代を検証しつつ、その枠組みからもれる部分を柔軟に捉えることが本研究成功の重要な鍵と認識している。インドの歴史、政治、社会、宗教、教育などさまざまな分野の文献を渉猟した。シンの近代観の一面を共編著『現代インド英語小説の世界』所収「いつの間にか非近代にのみこまれる近代について」で考察した。なお今年度は、当初の予定から若干の変更を行い、出張を控え、資料の収集と読解に力点をおいた。本研究では、三人の作家の近代表象を研究した。まずトリニダードの作家V.S.ナイポールを中心に据え、テキストを丹念に検証し、問題群の抽出を試みた。平成22年度は、四つの作風に整理されるV.S.ナイポールの作品のなかから、特に『世の習い』という複数の時間軸を持つ作品を検討し、近代の複数のかたちをあきらかにした。次に、ベン・オクリ。その近代は、初期のリアリズム的作品にその典型が見られる。本研究ではオクリの両義的近代の特質を、具体的な作品に沿って検証した。

第三番目の作家は、クシュワント・シンである。ここでは、『パキスタン行き列車』、『デリー』、『水葬』を中心に据えつつ、その周辺にある作品の整理に努めた。三作家の近代観の具体例を追う作業は、近代論一般に対する理解と並行して進めた。近代論をめぐる文献の収集と読解が、この作業の中心を占めた。近代論に内包される近代文学論、現代文学論、さらに近代小説論、現代小説論をひろく渉猟の上、いまだ整備されていないV.S.ナイポール、ベン・オクリ、クシュワント・シンの近代観と既存の近代論とを結びつけた。社会小説というジャンルが、近代化の過程にある特定の時代の特定の地域に移動しつつ発達したという仮説に基づき、この点を三作家の具体的作品を中心に明らかにした。本研究では、およそさまざまな作品に現われる近代表象を精査し、それぞれを相対的な位置におき、それぞれの特質を明らかにした。近代論一般と個別作家の近代観との往復によって、既存の近代観にない、新たな近代を提示しえた。V・S・ナイポール、ベン・オクリ、クシュワント・シンそれぞれについての論考が一通り完成し、さらなる問題点を発見する段階へと進展しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。今年度はクシュワント・シンの研究をさらに進める。シンが『デリー』で実践したオムニバス形式の起源を、インド、さらにインド西方のペルシャ等にまで射程を延ばして考察する。
肛門病変検体を用いたT細胞不活化によるクローン病新規免疫療法探求

厚生労働省指定難治性炎症性腸管障害クローン病は長期間の慢性経過を辿り再燃寛解を繰り返す原因不明の炎症性腸疾患で関節リウマチ類縁疾患とされる.近年治療目標は抗TNF-α抗体(infliximab,adalimumab)に代表される生物学的製剤での「長期間の深い寛解維持」となっているが,根本的治療方法は確立しておらず,根治療法開発は急務である.今回PD-1抗体の副作用(irAE)を起点にT細胞Negative pathwayを標的とした新規免疫療法に着目した.検体取得法として腸管切除手術や消化器内視鏡検査という侵襲的処置を行わずとも採取できるクローン病肛門病変を検討対象とする.厚生労働省指定難治性炎症性腸管障害クローン病は長期間の慢性経過を辿り再燃寛解を繰り返す原因不明の炎症性腸疾患で関節リウマチ類縁疾患とされる.近年治療目標は抗TNF-α抗体(infliximab,adalimumab)に代表される生物学的製剤での「長期間の深い寛解維持」となっているが,根本的治療方法は確立しておらず,根治療法開発は急務である.今回PD-1抗体の副作用(irAE)を起点にT細胞Negative pathwayを標的とした新規免疫療法に着目した.検体取得法として腸管切除手術や消化器内視鏡検査という侵襲的処置を行わずとも採取できるクローン病肛門病変を検討対象とする.
代理親効果による配偶子特性の改変

本年度は、代理親効果を実証するため、胚の発生率が極めて低く脆弱な系統として知られているゼブラフィッシュ系統(Casper)をドナーとし、野生型(AB系統)胚へ始原生殖細胞(PGCs)を割球移植法により移植することにより「生殖系列キメラ」を作出した。移植にあたっては、野生型ゼブラフィッシュ宿主胚に、Dnd遺伝子に対するモルフォリノオリゴを顕微注入することにより不妊化処理を施した。通常飼育でのcasper系統の親魚までの生残率はおよそ5%と極めて低かったが、キメラ化することにより、Casper生殖細胞をもつ生殖系列キメラのうちおよそ70%を生残させることが可能であった。これらの生殖系列キメラは正常に成熟し配偶子形成を行い、交配実験より、casper系統の配偶子のみを生産していることが確認された。キメラ同士の交配により、生殖系列キメラを経由したcasper個体の作出が可能であった。極めて興味深いことに、生殖系列キメラを経由したcasper系統の生残率は32%であった。また、通常casper系統よりも卵膜が強固で、排精量が多く、CASA解析により運動精子率が高いことが明らかとなった。以上のことから、本申請の目的であった「配偶子への代理親効果を評価するための精密なキメラ作出実験系」を確立した上で、これまで全く知られていなかった「配偶子への代理親効果」を明らかにすることができた。これらの結果は論文としてまとめ投稿準備中である。加えて、本知見を他魚種に応用すべく、チョウザメおよび海産魚をモデルとし、効率的に生殖系列キメラを作出するための新規移植法を開発した。新規移植法を用いることで、これまで報告されたどの方法よりも高い効率でドナー細胞を宿主胚に導入することが可能であることが明らかとなった。現在、本手法を用いた海産魚生殖系列キメラを飼育中であり、今後代理親効果の検証を行う予定である。一年目の大きな目的は、2年目以降に用いる「生殖系列キメラ」を大量に作出することであった。本実験では、体細胞の違いによる生殖細胞への影響、すなわち「代理親効果」を明らかにするため、生殖系列キメラおよびその作出に用いたドナーそれぞれを飼育し、成熟させる必要がある。今年度は、この目的のため、パールダニオの始原生殖細胞(Primordial germ cells: PGCs)を移植したゼブラフィッシュ生殖系列キメラを作出した。ドナーであるパールダニオのPGCsをGFP-buc mRNAを顕微注入した後、顕微鏡下でdnd遺伝子に対するモルフォリノオリゴの顕微注入により不妊化したゼブラフィッシュ宿主胚に移植した。蛍光顕微鏡によりドナーPGCsの局在を観察したとこと、移植されたPGCsの一部は、宿主の生殖腺へ到達し定着していた。現在、このようにした作出したドナーおよび宿主双方を飼育し、配偶子を採取すべく継続飼育中である。また、セルソーターを用いてGFP-buc標識されたPGCsを効率的に分取する方法も検討し、分取細胞した細胞を宿主に移植することにより生殖系列キメラを作出できることを明らかにした。ただし、生産したキメラおよびドナー個体の生残率が低いことから、さらなる移植実験を行うことで必要なサンプル数を確保する必要がある。貴重なキメラからの精子および未受精卵を採取する手法について検討し、親個体を殺すことなく安定的に採取できる手法を確立した。1年目の大きな目的であった生殖系列キメラの作出は行えているものの、実験の実施回数が比較的少なかったことと、キメラ及びドナーの生存率が低く、想定していたよりもサンプルが少ない状態にある。原因の一つとして、飼育水槽のコンディションが悪化し、実験遂行が困難になった時期があったことが挙げられる。特にドナーであるパールダニオの採卵が芳しくなかった。今後は飼育体制を見直すとともに、更に移植実験を追加することで、解析に用いるための生殖系列キメラの確保に努める。ゼブラフィッシュ飼育システムでの予期せぬ魚病発生のため、平成28年度に作出したゼブラフィッシュ宿主キメラおよびゼブラフィッシュ・パールダニオ系統を失ってしまった。それらキメラからは十分なデータを得ることができなかった。現在は、飼育条件を見直すとともに、新規に飼育要員を採用し、再セットアップを行っている。一方、今年度まですでに、「異種間チョウザメ類生殖系列キメラ」および「コイ生殖細胞を移植したキンギョ生殖系列キメラ」も作出していたため、それが成熟すれば配偶子の各種測定を行える予定ではあったものの、残念ながら今年度はそれらキメラからの配偶子は得ることができなかった。したがって、研究実施計画に記載していた実験を計画通りに進めることはできなかった。とはいえ、キメラ作出実験等を通して「代理親効果」につながる新しい知見も得られたので、今年度はそれを成果として報告する。dead end遺伝子に対するモルフォリノオリゴヌクレオチドを顕微注入し、不妊化したゼブラフィッシュ宿主への、パールダニオ生殖細胞の移植を行った。移植実験条件は1)胞胚期への始原生殖細胞(PGCs)の移植、および2)孵化仔魚への精原細胞の移植、を行った。コントロールとしては、同条件でゼブラフィッシュ→ゼブラフィッシュ生殖系列キメラを作出した。その結果、1)の条件では、生殖腺にPGCsの定着が確認された個体のうち、およそ9割の個体が妊性を回復しドナー由来の配偶子を生産したものの、2)の条件で作出したキメラではおよそ1割の個体しか妊性を回復しなかった。

コントロールではどちらの条件でも9割以上の妊性の回復が確認された。これらの結果は、移植するドナー生殖細胞のステージ、あるいは宿主の発生段階によって種間のミスマッチが増加する可能性を示唆している。飼育室での予期せぬ魚病の発生による、作出した生殖系列キメラおよびゼブラフィッシュ、パールダニオ系統の喪失により、ゼブラフィッシュ宿主生殖系列キメラからの配偶子採取計画に遅れが生じている。他の魚種でも異魚種間生殖系列キメラを作出しているものの、実験モデル魚種よりも配偶子生産に達するまでに長時間を要するため、予定していた研究を完遂することはできなかった。本年度は、代理親効果を実証するため、胚の発生率が極めて低く脆弱な系統として知られているゼブラフィッシュ系統(Casper)をドナーとし、野生型(AB系統)胚へ始原生殖細胞(PGCs)を割球移植法により移植することにより「生殖系列キメラ」を作出した。移植にあたっては、野生型ゼブラフィッシュ宿主胚に、Dnd遺伝子に対するモルフォリノオリゴを顕微注入することにより不妊化処理を施した。通常飼育でのcasper系統の親魚までの生残率はおよそ5%と極めて低かったが、キメラ化することにより、Casper生殖細胞をもつ生殖系列キメラのうちおよそ70%を生残させることが可能であった。これらの生殖系列キメラは正常に成熟し配偶子形成を行い、交配実験より、casper系統の配偶子のみを生産していることが確認された。キメラ同士の交配により、生殖系列キメラを経由したcasper個体の作出が可能であった。極めて興味深いことに、生殖系列キメラを経由したcasper系統の生残率は32%であった。また、通常casper系統よりも卵膜が強固で、排精量が多く、CASA解析により運動精子率が高いことが明らかとなった。以上のことから、本申請の目的であった「配偶子への代理親効果を評価するための精密なキメラ作出実験系」を確立した上で、これまで全く知られていなかった「配偶子への代理親効果」を明らかにすることができた。これらの結果は論文としてまとめ投稿準備中である。加えて、本知見を他魚種に応用すべく、チョウザメおよび海産魚をモデルとし、効率的に生殖系列キメラを作出するための新規移植法を開発した。新規移植法を用いることで、これまで報告されたどの方法よりも高い効率でドナー細胞を宿主胚に導入することが可能であることが明らかとなった。現在、本手法を用いた海産魚生殖系列キメラを飼育中であり、今後代理親効果の検証を行う予定である。生殖系列キメラおよびそのドナーが成熟すれば、ただちに配偶子を採取し、各種解析を行う。それまでは、生殖系列キメラの飼育と、キメラの作出を継続して行う。メスよりもオスの成熟が早いことが考えられるため、まず、オスのキメラ個体から得られる精子の解析を行う予定である。Computer assistes sperm analysis (CASA)により精子の運動性を実験群とコントロール群で比較したのち、走査電子顕微鏡により形態の違いを詳細に観察する。精子が採れる限り複数回の実験を行い、その結果を取りまとめる。出来るかぎり早く飼育システムを復旧するとともに、生殖系列キメラの作出を急ぐ。
非双曲力学系の不安定周期軌道解析に関する大規模数値解析

力学系は大きく双曲力学系と非双曲力学系に分類される。双曲力学系は、相空間の各点で“伸びる方向と縮む方向に分離可能な系"であり、少なくとも幾何学的立場ではSmale以降の研究によってかなり理解が進んでいた。本研究では双曲性が崩れた力学系を系に埋め込まれた不安定周期軌道解析を用いて特徴づけた。(1)非双曲性が強い状況(力学系のクライシス現象が発生する近傍)(2)双曲型構造が徐々に壊れる様な状況、を調べ、そこで得られた知見に基づいて(3)非双曲力学系に対する不安定周期軌道展開の構築を行った。双曲力学系(写像・微分方程式)の理解はSmaleならびにその周辺の研究者を中心におこなわれた1960年前後からの研究によって記号力学系などを通じて,ある程度整備されている.一方,非双曲力学系の理解はあまり進んでおらず,力学系分野においてその理解は大きな問題として認識されている.カオスを示す力学系(写像・微分方程式)には一般に無限個の周期軌道が埋め込まれていることが知られており、カオスが現れる様々な分野ではカオスと不安定周期軌道の対応関係が明らかになることが期待されている.本研究課題では,よく調べられている離散時間力学系,連続時間力学系であるエノン写像,ローレンツ系などに関して,パラメタを変えながら安定多様体,不安定多様体の構造変化を周期軌道を用いて調べた.そして,それらの力学系に関し,パラメタ変化に伴う非双曲構造,特に安定多様体と不安定多様体の接構造の発生は,サドルノード分岐のノード周期軌道が周期倍分岐するとともに生まれる不安定周期軌道の系列の極限で捉えられることを明らかにした.特に,周期軌道系列の安定多様体と不安定多様体がなす角度の減衰レートに一定の法則があることを見出した.非双曲構造(多様体の接構造)がこの様に捉えられることの具体的な数値計算例を与えたという意味で重要な結果であると考えている.また,すでに数学的に双曲的, (特異)双曲的であることが知られているパラメタからあるパラメタを動かしていった際に系がはじめて接構造をもつパラメタ値はカオス的な軌道に対するリアプノフベクトル計算によって推定できるが,そのパラメタ値は,系に埋め込まれた不安定周期軌道を用いることによってより精密に得られることを確認した.安定多様体と不安定多様体が接構造をもつことによって双曲性を破綻させている非双曲力学系に対する不安定周期軌道展開をおこなった。1990年頃よりカオス力学系に埋め込まれた不安定周期軌道を用いて、系の物理的な不変測度などを特徴づける不安定周期軌道展開の試みがなされてきた。しかし、それらはいずれも双曲的な構造を意識した展開公式であったため、非双曲力学系への適用に限界があることが知られていた。実際、安定多様体と不安定多様体が接構造をもつエノン写像で従来の展開公式を適用すると、双曲的な場合に比べて収束の速度が遅くなることが確認されている。従来の不安定周期軌道展開においては、各周期軌道の周期と不安定性のみが用いられてきた。一方、接構造をもつ非双曲力学系においては、安定多様体と不安定多様体がなす角度が小さい不安定周期軌道が接構造に集積していることを研究代表者らは平成24年度までに見出していた。すなわち、多様体の角度が狭い領域には不安定周期軌道が多く存在するため、双曲性の弱い不安定周期軌道の貢献度は相対的に小さくなると予想した。そこで、研究代表者らは、接構造をもつエノン写像を例に、埋め込まれた不安定周期軌道の安定多様体と不安定多様体のなす角度を計算して各不安定周期軌道の双曲性の程度を捉え、双曲性の程度が低い不安定周期軌道の貢献を相対的に低くすることによって不安定周期軌道展開の収束速度を改良できることを見出した。平成23年度は力学系の大域的な構造変化であるクライシス現象に対する不安定周期軌道解析をおこなった。アトラクタ・マージング・クライシスやインテリア・クライシスは力学系の構造を大きく変える普遍的な現象であり、非双曲構造があらわれる例である。本年度は時空カオスを示す偏微分方程式として有名な蔵本・シバシンスキー方程式に対し、まずアトラクタ・マージング・クライシスをおこすパラメタを調べ、その前後のパラメタにおいて多数の不安定周期軌道を数値的に同定した。これらを分類することによってクライシス現象を捉えなおすことに成功した。クライシスの前後では、カオスアトラクタの構造がドラスティックに変わるが、それと共に存在する周期軌道もドラスティックに変化することが見出された。すなわち、クライシス後には新たな種類の不安定周期軌道群がサドルノード分岐によって発生する。サドルノード分岐に対応して周期窓が存在するが、周期窓がクライシス点に向かって集積していくことに対応している。一方、クライシス前後で不変な構造も存在する。クライシス前はカオスアトラクタ、後はカオティックサドルとなる不変集合は安定性こそ変化するが、埋め込まれた不安定周期軌道は共通であることも確認された。

カオティックサドルにはギャップ領域が存在するが、そのギャップ領域を新しく生まれた周期軌道群が埋めている。以上のようにクライシス前後で存在する不安定周期軌道の分類をおこなうことにより、大域的構造変化の背後にある骨格が理解できた。予定通り、リアプノフベクトルを数値的に同定することによって系のパラメタ変化によって双曲構造が徐々に崩壊する過程を不安定周期軌道の観点で研究することが進展しているため。当初の予定通り、力学系の大規模構造変化であるクライシス前後で不安定周期軌道を数値的に多数検出することができ、それらを分類することによってクライシスの背後に存在する構造を明瞭に説明することに成功したため。不安定方向が2次元以上ある力学系について不安定周期軌道ならびにリアプノフベクトルを用いた研究をする予定である。この種の力学系は24年度までに扱ってきた不安定方向が1次元の力学系に比べて考え得る構造が多様であり、流体乱流やカオス遍歴をおこすダイナミクスの理解などにも繋がると考えられるため、興味深い。一方、不安定周期軌道の検出、リアプノフベクトルの同定とも、より困難さは増す。しかし、これまでに得た経験と知見を基にそれらの困難さは克服できると考えている。リアプノフベクトルを数値的に同定することによって系のパラメタ変化に伴う多様体間の接構造発生が同定できるようになったので、平成24年度はパラメタ変化によって双曲構造が徐々に崩壊する例を不安定周期軌道の観点で研究する。平成23年度の問題と比べて、現象に非双曲構造の影響が少しずつしかあらわれないと考えられる状況に対応している。23年度分の一部研究費の支給が延期されたため、当初予定されていた研究打ち合わせのための出張が24年度にずれこみ、24年度に当初予定していた一部出張を25年度に行うことになっている。25年度には不安定周期軌道の統計について山田道夫氏(京都大学数理解析研究所)と京都大学にて、不安定周期軌道展開について寺本央氏、佐藤譲氏(北海道大学電子科学研究所)、荒井迅氏、横山知郎氏(北海道大学大学院理学研究院数学部門)らと北海道大学にて、リアプノフベクトルの同定に関して小林幹氏(東北大学AIMR)と東北大学にて、力学系の予測不可能性に関して中野直人氏(東北大学AIMR)と東北大学にて研究打ち合わせを行う予定である。また、不安定方向が2次元以上ある高次元力学系の計算をおこなうための計算機サーバーを用意する予定である。23年度分の一部研究費の支給が延期されたため、当初予定されていた研究打ち合わせのための国内出張が24年度にずれ込んで未使用額が発生した。24年度に出張予定である。
マウス顎顔面発生におけるリンパ管内皮細胞の移住とガイダンスの分子制御機構

本研究では、主静脈を起点として遠隔の下顎突起までのリンパ管内皮細胞の移住とその誘導に関わるガイダンス機構の解明を目的として、移住経路近傍の諸細胞およびゴールとなる下顎突起内の細胞等から発せられるガイダンス因子とその分子制御の仕組みを明らかにする。これらの制御因子を発現する細胞を特定するとともに、リンパ管内皮細胞との位置関係と組織内局在の解析によりリンパ管内皮細胞を中心とした細胞間の連携ネットワークを究明する。2019年度においては、ガイダンス因子を含むリンパ管形成に関わる遺伝子の発現について網羅的に列挙するために、ICRマウス胎仔(E9.511.5)のリンパ管内皮細胞の下顎突起までの移住経路において、リンパ管内皮細胞を含む領域の組織を採取し、DNAマイクロアレイ、ならびにmicroRNAマイクロアレイの解析を行った。IPA等を使ったデータ処理を行い、発現プロファイルを作成した。これらの分析結果はリアルタイムRT-PCRによりガイダンス因子と受容体とマイクロアレイ解析で新たに抽出された分子種の遺伝子・microRNA発現を検証した。その結果、Gene Ontology(GO)解析から、胎生9.5日からは血管新生に関わる遺伝子群の有意な発現変動がみられるが、リンパ管発生に関連する遺伝子群は胎生11.5日から14.5日にかけて発現上昇することが明らかとなった。DNAマイクロアレイとリアルタイムPCRによる定量解析では、リンパ管内皮分化の初期段階で寄与しProx1の発現誘導するSox18はE12.5で発現上昇した。静脈内皮マーカでありProx1と協働してリンパ管分化に寄与するCoupTF2では、静脈分化にともなってE13.5でピークを示し、リンパ管内皮細胞分化の中心的な役割を持つ制御因子であるProx1はE14.5でピークを示した。体幹部主静脈近傍のリンパ管発生において、BalloonモデルとBuddingモデルの2つの仮説が提唱されている(Chenら, 2015)。Balloonモデルは主静脈からリンパ管内皮細胞が風船のように連なってリンパ嚢を生じ、Buddingモデルは主静脈の複数箇所から出芽したリンパ管内皮細胞の連なりが互いに連結や切断によりリンパ嚢を形作るものである。これらのモデルとは別に、主静脈からリンパ管内皮細胞が直接、出芽して遊走する場合があること(移住モデル)も報告されている。顎顔面領域でのリンパ管構築では、1“体幹部と同様に、顎顔面領域の静脈からリンパ管内皮細胞が分化しリンパ管が出芽する"、2“体幹部で構築されたリンパ管が顎顔面領域まで伸長してくる"、3“体幹部の主静脈で分化したリンパ管内皮細胞が顎顔面領域まで個々に遊走してきてリンパ管を構築する"の3つの仮説が想定できた。初年度から継続しているマウス初期の顎顔面領域のリンパ管構築過程の解析から、顎顔面領域のリンパ管内皮細胞の起源は体幹部主静脈であり、体幹部主静脈で分化したリンパ管内皮細胞は出芽・遊走し、顎顔面領域まで決まった経路を辿って移動すること、顎顔面領域では、リンパ管内皮細胞同士が接着し、リンパ嚢形成を経て、リンパ管が形成されることが明らかとなった。このことから、3の“体幹部の主静脈で分化したリンパ管内皮細胞が顎顔面領域まで個々に遊走してきてリンパ管を構築する"ことが仮説として最も有力であることがわかった。次年度以降、移住途上にあるリンパ管内皮細胞と体幹部や下顎突起内の細胞との相互作用に働く新規のガイダンス因子候補を網羅的に列挙するために行ったDNAマイクロアレイ、ならびにmicroRNAマイクロアレイの解析からの発現プロファイルの作成と遺伝子発現の検証を継続する。静脈内皮細胞Endomucin、血管内皮細胞Pecam1の抗体、線維芽細胞S100A4、神経軸索NFP, GAP43、上皮細胞pan-Cytokeratin、筋前駆細胞Desmin等の特異抗体を使用した免疫組織化学等によるタンパク質レベルの分析と組織内局在の検討は開始しており、それぞれの抗体と組み合わせで空間的な位置関係を明らかにしていく。初年度においては、マウス胎仔の顎顔面領域での多重免疫染色と組織立体構築法による解析を対象とする胎生時期の追加を含めて再度行い、(1)顎顔面領域のリンパ管内皮細胞の起源は体幹部主静脈であること、(2)体幹部主静脈で分化したリンパ管内皮細胞は出芽・遊走し、顎顔面領域まで決まった経路を辿って移動すること(図2)、(3)顎顔面領域のなかで下顎突起に最も早く到達すること(E10.5)、(4)下顎突起を含む顎顔面領域では、リンパ管内皮細胞同士が接着し(E11.5)、リンパ嚢形成(E12.513.5)を経て、管腔を有するリンパ管が形成されること(E14.5以降)を確認するとともに、詳細な観察と記述を行った。さらに、移住途上にあるリンパ管内皮細胞と体幹部や下顎突起内の細胞との相互作用に働く新規のガイダンス因子候補を網羅的に列挙するために、ICRマウス胎仔(E9.511.5)のリンパ管内皮細胞の下顎突起までの移住経路において、リンパ管内皮細胞を含む領域の組織を採取し、DNAマイクロアレイ、ならびにmicroRNAマイクロアレイの解析を行った。

IPA等を使ったデータ処理を行い、発現プロファイルを作成している。これらの分析結果はリアルタイムRT-PCRによりガイダンス因子と受容体(Cxcl12、Cxcr4を含む)とマイクロアレイ解析で新たに抽出された分子種の遺伝子・microRNA発現の検証を行っている。初年度では、マウス胎仔の顎顔面領域での多重免疫染色と組織立体構築法による解析を対象とする胎生時期の追加を含めて再度行うことによって、顎顔面領域のリンパ管内皮細胞の起源や移住経路、顎顔面領域でのリンパ管の形態形成の過程を詳細に解析することができた。このことによって、今まで明らかにできていなかった部分の記述を明確にすることができた。たとえば、体幹部主静脈から遊走を開始したリンパ管内皮細胞は胎生10.5日では下顎突起の入り口付近、胎生11.5日では下顎突起の先端部近くまで遊走していることが突き止められた。注目される事実として、顎顔面領域でのリンパ管形成では、体幹部に形成されたリンパ管から分枝して顎顔面領域に挿入してくるのではなく、個々に移住したリンパ管内皮細胞が凝集→リンパ嚢形成→管腔を有するリンパ管の形成の過程を経て発生することが明らかとなった。本申請課題の主たる目的であるリンパ管内皮細胞が的確に顎顔面領域に移住するためのガイダンス因子候補を探索するための最初のステップであるDNAマイクロアレイ、ならびにmicroRNAマイクロアレイの解析を予定通り行うことができた。現在、分析結果として発現プロファイルの作成と遺伝子発現の検証を継続している。これらの解析から、Gene Ontology、パスウエイ解析、ヒートマッピングはほぼ完了した。個々の遺伝子発現プロファイリングの整理もできており、有力なガイダンス因子候補の列挙を行っているところである。本研究では、主静脈を起点として遠隔の下顎突起までのリンパ管内皮細胞の移住とその誘導に関わるガイダンス機構の解明を目的として、移住経路近傍の諸細胞およびゴールとなる下顎突起内の細胞等から発せられるガイダンス因子とその分子制御の仕組みを明らかにする。これらの制御因子を発現する細胞を特定するとともに、リンパ管内皮細胞との位置関係と組織内局在の解析によりリンパ管内皮細胞を中心とした細胞間の連携ネットワークを究明する。2019年度においては、ガイダンス因子を含むリンパ管形成に関わる遺伝子の発現について網羅的に列挙するために、ICRマウス胎仔(E9.511.5)のリンパ管内皮細胞の下顎突起までの移住経路において、リンパ管内皮細胞を含む領域の組織を採取し、DNAマイクロアレイ、ならびにmicroRNAマイクロアレイの解析を行った。IPA等を使ったデータ処理を行い、発現プロファイルを作成した。これらの分析結果はリアルタイムRT-PCRによりガイダンス因子と受容体とマイクロアレイ解析で新たに抽出された分子種の遺伝子・microRNA発現を検証した。その結果、Gene Ontology(GO)解析から、胎生9.5日からは血管新生に関わる遺伝子群の有意な発現変動がみられるが、リンパ管発生に関連する遺伝子群は胎生11.5日から14.5日にかけて発現上昇することが明らかとなった。
情動反応を抑制する前頭前野マイクロサーキットの解明

快もしくは不快な記憶を抑制する神経回路には前頭前野という脳部位が関与していると考えられている。しかしながら、よりミクロなレベルでは前頭前野は他の脳部位への繋がりによって分類できる異なる神経群が存在している。そこで本研究では、よりミクロレベルで異なる神経群を分類し、それぞれが快・不快感情の抑制にどう関係するかを最新の方法を用いて検討を行う。
身体、アーティファクトを用いた効果的コミュニケーション過程の分析とFDへの応用

本研究では、まずHough & Duncanの開発したObservational System for Instructional Analysis(OSIA)を用いて、大学の講義、小学校英語授業を録画したものを記述し、マトリックス、タイムラインに転記した。同時に、教室内発語をすべて書き起こし、さらに教員の表清分析を行ない解析した結果、以下の諸点が明らかになった。1)大学の授業のインターアクションのレベルは講義型の場合、単調な教師の説明が圧倒的に多く、小学校の授業は、教師、児童間のインターアクションのレベルは、英語授業の場合、とりわけ高く、児童の反応が多いことが、記述データの分布図(マトリックス)から再確認された。2)小学校授業でのALTは、教育経験の有無により、発語、発問と児童の解答のタイミングに違いがあり、経験の浅いALTは、絵を見せていきなり反復練習に入るのに対し、小学校での教育経験のあるALTは、提示->児童の発語という児童からの主体的な発語を中心に授業を行っており、それが、授業の活性化につながっていることが確認された。3)小学校授業において、教員の表情の緩急が授業の活性化につながっており、児童の参加態度の積極性、動機づけにも影響を与えていることが、データ、授業観察、ビデオ録画からも読み取れた。4)長い英語のフレーズよりも、短い発問、説明がより児童の学習態度には効果的である。5)褒める、ポジティブなフィードバックが英語授業のような言語教育場面においては、特に効果的である。6)アーティファクトの使用は、タイミングが合う限りにおいては、授業のテンポアップにつながる。本年度は、分析対象の授業を、所沢市の小学校の英語授業とした。11月と2月の授業を録音、録画し、現在も継続して解析を行っている。最初の方針として、音声言語学、身体表象学、コミュニケーション学、授業学の観点から、それぞれの分野の専門家が、「授業担当教員への授業改善(FD)のためにアドバイスする」という課題で解析を行っている。授業担当教員は、AET(Assistant English Teacher), JET(Japanese English Teracher), HRT(Homeroom Teacher)の3人でありる。現時点では、全員からの分析が集まっていないが、アドバイスとして以下の点が既に指摘されている。これから総合的なまとめとして授業内のコミュニケーション活動の活性化と授業の効果という切り口で解析を継続する計画である。JETへのアドバイス1)対象英語表現の定着指導時に、情報源がAETなのか、JETなのかという転換がスムーズに行われる必要がる。学習者の視線、発語にいくらかのばらつきが観察される。2)使用英語表現の統一を図る必要がある。例:単数複数3)発語が積極的でない学習者への働きかけにさらに工夫が必要である。例:個別の指名、ペアでの活動4)ペア活動で、3年生あたりでも、同性のペアの活動に偏りがちである点は、工夫の余地があるようである。5)教員の授業中の動きと立ち位置が授業の活性化につながるのではないかということが、録画テープから推測される。3人という数のバランスと2人(通常のTT)の場合は、厳密な意味では、連携に差異が必要ではないか。6)学習者の発語がオウム返しになる部分と自由発語のバランスに工夫が必要であろう。7)3者の役割分担と連携が学習者の活動に影響(とまどいと安心感)しているとも観察されるので、きちんと説明しておくことも必要ではないか。本研究は、1)小学校英語活動の様相を分析、2)新しい教授法を試行、教員、生徒の反応を確認、3)公立小学校が「総合的な学習の時間」内で行うことのできる英語活動を模索すること、の3点であった。実施したことは、1)授業担当教員、教育センター指導主事との打ち合わせの後、授業を3回録画した。(2004年11月、2005年2月、2005年11月)学年は、3、4年生、カメラ2台で1授業を録画した(教員の動き、表情と子供らの反応)。

2)録画した授業は、担当教員が事後視聴し、反省会を行い、改善点などについて意見交換した。その結果、授業者は、授業を第3者として観察することができ、授業中の動き、発語などに関して、確認した。3)授業中の全対話を記述し、使用言語量(日本語と英語)の比較をした。3回目の授業になって、かなりスムーズな授業になったことが確認された。4)合科制の授業(英語で算数を教える)を2005年度から始め、11月の研究授業では、かなりの成果を観察することができた。3回目の授業では、英語母語者による算数の授業を行った。児童は積極に参加した。小学校英語授業は、近未来に科目化することが予想されるが、どこまでの習得を目標にし、中学校の英語授業にどのようにつなげて行くのか、という点が重要である。本研究では、もし、小学校英語活動において、従来のJET,AET,HRTの3者での授業から、最終的にはHRT一人で行うということを目指すのであるならば、1)英語力をつける2)教材のバリエーションを充実させる3)英語教授法(TESOL)を必修化4)教員養成を確立というようなことが不可欠である。本研究では、主に教員の研修(FD)に焦点を合わせ、養成と現職研修のあり方が重要であるとの結論を実証的に示したが、今後は、2)の教材研究と合わせて学習環境(英語の部屋:e-room)について発展して行くと予定される。
活性型GPCRマーカーを用いたGPCRシグナルの制御機構の解析

Gタンパク質共役型受容体(GPCR)は創薬の主要な標的分子である。本研究において、GPCRシグナルのエンドサイトーシスによる下方制御に異常がみられる変異体を探索し、195種類の関連遺伝子の同定に成功した。さらに、これらの遺伝子から酵母Rab5について解析を進め、Rab5がGPCRの下方制御に重要であること、またAP3経路を介した新しいGPCRのエンドサイトーシス経路が存在することを明らかにした。本年度計画に沿って以下の研究を実施した。「活性化GPCRの選択的エンドサイトーシス機構」については、酵母Ste2受容体のクラスリン被覆小胞への取り込みについて、蛍光標識および放射標識リガンドを用いて活性化GPCRのエンドサイトーシス機構を解析したクラスリン被覆小胞を可視化するために、エンドサイトーシスの初期過程で働くタンパク質を蛍光標識し、クラスリン被覆ピットの可視化を行った。次に、エンドサイトーシス部位に局在することが知られているタンパク質について、その遺伝子欠損変異体を作製し、クラスリン被覆への集積に異常がみられる変異体の同定を試みた。この結果、細胞膜の構成脂質であるホスファチジルセリン(PS)の合成酵素であるCho1の変異体において顕著な異常を認めた。現在、GPCRのエンドサイトーシスにおけるPSの役割について詳細な解析を行っている。「活性化GPCRのリソソームへの輸送機構(分解機構)の解明」については、本年度の計画通り、蛍光標識マーカーを用いた酵母遺伝子欠損変異体ライブラリーのスクリーニングを完了した。蛍光マーカーの液胞/リソソームへの輸送に異常の見られる変異体を探索した結果、5154種の酵母遺伝子欠損変異体より252種をエンドサイトーシス異常変異体として単離した。これらの中から、GPCRのリガンドへの結合に異常が生じている変異体を除く195種に対してin silicoでのタンパク質間相互作用の解析、脂質蛍光マーカーであるFM4-64の輸送解析を行った。これらの解析の結果, 32種の機能未知タンパク質と, 15種の機能は既知であるがエンドサイトーシスへの関与は未報告であるタンパク質の単離に成功した。現在、これらの単離した変異体について、それらのGPCRのリソソームへの輸送機構における役割について詳細に解析を行っている。「活性化GPCRの選択的エンドサイトーシス機構」については、酵母のGPCRであるSte2受容体を用いて、そのクラスリン被覆小胞への取り込みについて蛍光標識および放射標識により活性化GPCRのエンドサイトーシス機構を解析した。昨年度の研究により同定したホスファチジルセリン(PS)の合成酵素であるCho1の変異体について、その局在と機能について詳細に解析した。さらに、フォスファチジルイノシトールキナーゼであるStt4について、その遺伝子の欠損により活性化GPCRのクラスリン被覆小胞への取込みに著しい異常が生じることを明らかにした。現在、Stt4pおよびCho1による細胞膜脂質成分のエンドサイトーシスに与える影響を解析している。「活性化GPCRのリソソームへの輸送機構(分解機構)の解明」については、本年度の計画通り、昨年度の蛍光標識マーカーを用いた酵母遺伝子欠損変異体ライブラリーのスクリーニングにより同定した変異体の解析を行った。昨年度のスクリーニングにより、活性化GPCRのリソソームへの輸送に異常がある195種類の変異体について、アクチン骨格、細胞膜内リン脂質等の細胞内分布が野生型と比べて異常であるものについて、詳細に解析を行った。この結果、約10種類の変異体で細胞内のアクチンフィラメントの形成が減少もしくは増加しているものが得られた。また、細胞膜内リン脂質については、リソソームでのPI3Pの発現量が著しく増加している変異体を同定した。これらの結果より、細胞内アクチンフィラメント、およびリソソーム内PI3PがGPCR輸送に関与していることが示唆された。現在、これらの変異体の遺伝子について、そのGPCR輸送における役割について解析を行っている。「活性化GPCRの選択的エンドサイトーシス機構」については、PI4キナーゼであるStt4について、その遺伝子の欠損により活性化GPCRのクラスリン被覆小胞への取込みに著しい異常が生じることを明らかにした。今年度は、さらにStt4遺伝子のノックダウンによるエンドサイトーシス機構に与える影響を解析し、Stt4遺伝子のノックダウンは細胞膜内のPI(4)PとともにPI(4,5)P2レベルを著しく低下させ、この結果、クラスリン被覆タンパク質の集積の遅延が起こることが明らかになった。特に、PI(4,5)P2結合活性のあるENTH/ANTHドメインを持つ被覆タンパク質群のエンドサイトーシス部位への集積に遅延が生じることを明らかにした。「活性化GPCRのリソソームへの輸送機構(分解機構)の解明」については、酵母遺伝子欠損変異体ライブラリーの6000種類全てのスクリーニングを完了し、異常の見られた変異体について、データーベース解析により、細胞内小胞輸送に関わる可能性のある遺伝子を99種類抽出した。これらの変異体について、蛍光α-factorが蓄積している部位をもとに分類した結果、細胞膜に蓄積している変異体(クラスA)、輸送小胞に蓄積している変異体(クラスB)、液胞前領域に蓄積している変異体(クラスC)、蛍光α-factorの細胞表面への結が低下している変異体(クラスD)に分類した。これら99種類の変異体については、さらに細胞膜へのα-factor受容体のリサイクリングに障害のある変異体を放射標識したα-factorの結合量を指標に同定することに成功した。

この結果、α-factor受容体のリサイクリングに関わる因子として、アクチン骨格の制御に関わるもの、PIのリン酸化代謝に関わるもの、エンドソームからゴルジへの逆行性輸送に関わるものを複数同定した。Gタンパク質共役型受容体(GPCR)は創薬の主要な標的分子である。本研究において、GPCRシグナルのエンドサイトーシスによる下方制御に異常がみられる変異体を探索し、195種類の関連遺伝子の同定に成功した。さらに、これらの遺伝子から酵母Rab5について解析を進め、Rab5がGPCRの下方制御に重要であること、またAP3経路を介した新しいGPCRのエンドサイトーシス経路が存在することを明らかにした。これまでの研究において、本研究計画で特に重要であったGPCRの輸送異常を示す変異体のスクリーニング完了し、いくつかの変異体の単離に成功した。さらに、得られた変異体について研究計画に従い解析中であり、これまでにそれらの機能分類、および機能未知タンパク質の解析が進行している。本研究課題は来年度(H27年度)が最終年度であるが、当初の目的を達することが可能であると思われる。細胞生物学今後も今年度に引き続き、スクリーニングにより同定したタンパク質の機能解析を中心に行う。スクリーニングにより同定したタンパク質については同じ表現型クラスに含まれるものについて、物理的、遺伝学的相互作用をさらに詳細に調べ、新しい機能的複合体の同定を試みる。さらに、個々の機能未知のタンパク質についても、それらの細胞内局在、ドメイン構造、および遺伝子変異体の詳細な解析を行い、GPCRのリソソームへの輸送における役割を明らかにする。また、スクリーニングにより同定した変異体の中でリサイクリング経路にも異常を示す変異体の同定に成功したため、来年度はこれらのタンパク質によるGPCRのリサイクリング経路における輸送についても解析を行う。また、Stt4pおよびCho1による細胞膜脂質成分(イノシトールリン脂質、PS等)の代謝がGPCRの輸送にどのような影響を与えるかについて明らかにする。これまでに、Stt4遺伝子の変異体ではGPCRのクラスリン被覆小胞への取り込みに異常があることを明らかにしているため、その分子機構を明らかにする。Cho1変異体では、特にGPCRのリサイクリングに異常生じていることを見出しており、細胞膜内のPSのリサイクリング経路における役割について解析を進める。現在までの研究において、本研究計画で特に重要であったGPCRの輸送異常を示す変異体のスクリーニング完了し、いくつかの変異体の単離に成功した。この成果は、本研究計画の成否の鍵であったため、今後の計画も順調に進むと考えられる。25年度に作製予定であったDNA合成が予定より若干少なかったため。今後は、スクリーニングにより同定したタンパク質の機能解析を中心に行う。スクリーニングにより同定したタンパク質については同じ表現型クラスに含まれるものについて、物理的、遺伝学的相互作用を調べ、新しい機能的複合体の同定を試みる。