hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
肝細胞移植による肝不全治療を目的とした基礎的研究

〔背景〕肝不金に対する治療法として肝幹細胞移植により肝での肝細胞置換を行い肝機能の改善を図ろうとするものである、併せて肝幹細胞に一時的な特殊能力を付与し、肝不全治療のための強化も計画するものである。〔目的〕肝幹細胞として位置付けられている小型肝細胞を用いて、(1)in vivo条件下で肝細胞置換の可能性、(2)肝幹細胞である小型肝細胞にインスリン産生遺伝子の導入により細胞機能の多角化の可能性、を検討する。〔方法〕上記の目的を達するために、以下の3種の実験に大別した.(1)ラット成熟肝実質細胞・小型肝細胞へのイスリン産生遺伝子導入法の確立【triple bond】【triple bond】PDX遺伝子をアデノウィルスベクタを用いて感蟻させ、その後転写因手の解析、内分泌ホルモン産生性についての免疫染急分析、そしで肝実質細胞としての機能解析を行う。(2)in vivoでのインスリン産生遺伝子導入肝細胞の機能発現の検討【triple bond】【triple bond】免疫染色法によってインスリンの産生性を確認し、各種タンパク賓のmRNAの発現性、蛋白分子産生量および導入細胞の生存期間や機能維持性を検討する。(3)in vivoでの肝組織への幹細胞(小型肝細胞)と遺伝子導入細胞の移植を脾臓を介して当該細胞を注入する方法で行った。〔結果〕研究成果については、以下の如くであった。(1)PDX-1遺伝子導入後、各種転写因子の発現を確認でき、さらにインスリン、ゲノレカゴン、ソマトスタテン、ppなどの産生も確認した。しかし、導入の困難性は著明であった。(2)遺伝子導人効率は極めて低かったが、成熟型肝細胞においてはより良好な効率であることを確認した。しかし、獲得機能の維持性二については限界があった。(3)遺伝子非導入小型肝細胞においては、高度な肝細胞置換は可能であった。脾においても小型肝細胞の増殖は可能であった。〔結論〕実用化へ向けての充分な手ごたえのPilot研究であったと考える。平成13年度中にラット肝臓より小型肝細胞を採取し、それを増殖させてミニ肝組織を形成させることについては安定した技術として繰り返し可能であった。このほか最終的な細胞移植応用段階で必要となるであろう肝非実習細胞(Kupffer細胞、血管内皮細胞、胆管上皮細胞など)や成熟肝実質細胞の分離採取も安定した技術として完成した。次にこれら細胞の移植において臨床応用のために必要となる凍結保存、解凍後培養を試みたところ2週間、1ヵ月、3ヵ月の保存のいずれにおいても可能であった。そこでこれを同系動物種の門脈内注入による肝内への移植を行い一定期間後の移植細胞の同定を試みたが、明瞭なfoci形成などの所見を得ることができていない状況にある。生着していない危険率は高いと想定しているが、同定および移植後の肝内での増殖の確立を早急に行うことが要求されている。現在レシピエントとドナー間の関係について異性間での相互移植、すなわち分離細胞と被移植肝に性差を設定して容易な同定について検討中である。一方、遺伝子導入についてはリポフェクチン法を用いてインスリン産生に関わる遺伝子を小肝細胞に遺伝子導入を試みている。

当初、導入直後、小肝細胞に増殖が止まるなどのトラブルを生じていたが最近では変性死することはなくなりつつあるが、分泌蛋白としてインスリンを同定しえていないのが現状である。さらなる努力を続けたい。本年度は前年度で課題として挙げた遺伝子導入と小型肝細胞移植方法の検討を行った。最初に遺伝子導入に関しては、インスリン分泌細胞の分化に重要なmouse IPF-1cDNAの組み込まれたプラスミドをDNA配列を読み込んで確認したのち確保した。リポフェクチンによる遺伝子導入は肝細胞に対しては低効率であった。ましてや細胞移植には耐え得るものではないと判断した。そこで、ウイルスベクターを用いた遺伝子導入法を検討した。β-galレポーター遺伝子ではあるが、アデノウイルスを用いた小型肝細胞への導入効率は90%以上であり導入方法としては十分と判断した。さらに、β-galを導入したDPPIV(+)雄の小型肝細胞をDPPIV(-)雌の肝臓実質に移植したところ、1ヶ月後でもb-galおよびDPPIV陽性の肝細胞集塊を少量ではあったが確認できた。さらに性差を利用した移植細胞の追跡法をもちいて蛋白とDNAレベルで細胞源の同定中である。IPF-1 cDNAはリポフェクチン法によるHela細胞に導入した実験で蛍光染色を用いてIPF-1の蛋白発現を核内に確認している。以上の結果から、現在はIPF-1をアデノウイルスベクターに組み込む準備をしている。平行してストレプトゾシンを用いた糖尿病ラットを作成し、肝細胞移植のみの影響を確認中である。移植方法は、現在のところウイルスの特徴上、肝臓実質を予定している。脾臓からの方法も検討中であるが、これまでの実験からは脾臓で小型肝細胞の生着を確認できていないのが現状である。次年度中に小動物糖尿病モデルでの本方法の有効性を示したい。肝不全治療に関しては、外科的および放射線照射による肝不全モデルを作成中である。将来の肝細胞移植による肝臓置換療法を確立させるためには、放射線照射は現在のところもっとも有効な方法と考えられている。体外照射に加え選択的門脈結紮などの外科的手術の組み合わせで肝障害の程度を評価中である。さらに上述している小型肝細胞を移植し、肝機能補助の可能性に関して次年度中に検証したい。本年度は前年度の課題であったmouse IPF-1をアデノウイルスベクターに組み込んだ組み替え体の作製を行った。実際にHela細胞に導入し、核抽出蛋白分画よりIPF-1タンパク質の発現をWestern blot法で確認した。しかしながら小型肝細胞への発現効率は低値でありストレプトゾシン誘導糖尿病ラットモデルを使用した小型肝細胞移植において血糖コントロールを得るまでには至っていない。そこで、大阪大学;宮崎純一教授の御協力を得てアデノウイルスベクターを変更し発現効率の改善化を検証中である。一方、肝不全治療に向けた肝臓置換療法に関する基礎研究を行った。新鮮分離肝細胞の脾内細胞移植を用いて放射線体外照射を加えさらに選択的門脈分枝結紮術による肝再生刺激を付加した高効率の肝臓置換療法確立の可能性に関して研究した。平行して小型肝細胞の脾内細胞移植を行い同様の検討を行った。
DNAメチル化解析を基盤とした幹細胞の骨芽細胞分化誘導技術の創生

近年,組織幹細胞を用いた再生医療の試みが盛んに行われるなか,骨髄に存在する間質細胞(BMSC)は、多分化能を有する間葉系幹細胞源として注目され,その分化機構の解明に関心が集まっている。本研究では、BMSCを骨系分化誘導した場合のゲノムDNAメチル化の変化を検索し、BMSCの骨系分化とエピジェネティックな機構の関与を検討した。その結果,ゲノムDNAのメチル化状態を網羅的に解析できるRLGS法に, Virtual RLGS法を用いることで, BMSCの骨系分化誘導時に変化するDNAメチル化部位を同定する方法を確立した。また,その候補部位の一つがpalladin遺伝子座に関与していることを示した。本研究の目的は,骨関連遺伝子のDNAメチル化状態と骨分化の関与を検索し,さらに放射性同位体を使用した2次元電気泳動を用いた手法でゲノムDNA全域における骨分化とDNAメチルの関与を網羅的に検索することである。マウス骨髄間葉系幹細胞を骨系に分化させ、骨関連遺伝子群のプロモーター領域のDNAメチル化の変化を調べた結果、マウスOsteocalcinおよびOsteopontin遺伝子の発現機構には,翻訳開始部位上流の特定のCpG部位のメチル化状態が関与している可能性が示唆された。また、RLGS法(メチル化特異的酵素により切断されたDNA断片に放射性物質を結合させたのち,2次元電気泳動することでゲノムDNA全領域のメチル化状態を網羅的に解析する方法)によりマウスBMSCのゲノムDNA全領域にわたるNotI酵素感受性CpG部位のメチル化状態は,骨系分化によって部分的に変化することが明らかとなった。さらに、RLGS法に,Virtual RLGS法を用いることで,BMSCの骨系分化誘導時に変化するDNAメチル化部位を同定する方法を確立した。細胞治療に用いる幹細胞に対して,標的組織固有の記憶情報に関わる重要なDNAメチル化部位をターゲットとした操作を行うことができれば,効率的かつ確実に分化の標的化が行える可能性がある。今後,BMSCの骨系分化前後におけるメチル化変化部位をより詳細に検討することで,成体幹細胞のより確実な骨系分化につながることが期待される。本研究計画の目的は、ゲノム上のDNAメチル化状態と骨芽細胞分化の関連を解析することから、DNAメチル化の制御が骨芽細胞分化の制御に繋がる可能性を探索することである。本年度は、マウス大腿骨骨髄から間葉系幹細胞を分離培養し、これを骨芽細胞に分化誘導した場合の、骨芽細胞分化特異的遺伝子であるOsteocalcinおよびsteopontinのプロモーター領域のDNAメチル化状態を、bisulfiteシークエンス法で解析した。その結果、分化に伴うこれら遺伝子の転写レベルと,翻訳開始部位上流の特定のCpG部位のメチル化状態に有意な関連性を認めた。また、マウスiPS細胞を骨芽細胞へ分化誘導した場合のOsteocalcinのプロモーター領域のDNAメチル化状態を、同様に解析したところ、同様の傾向を示すことが示唆されている。なお、前年度までに、マウス骨髄由来間葉系幹細胞のゲノムDNA全域におけるDNAメチル化の状態を分化前後で比較するためにRLGS法を行い、その結果、マウス骨髄由来間葉系幹細胞のゲノムDNA全領域にわたるメチル化状態が、骨芽細胞分化によって部分的に変化することを明らかにしている。本年度は、肌GS法で得られた結果に、in silicoのVirtual RLGS法を用いることで、マウス骨髄由来間葉系幹細胞の骨芽細胞分化時に変化するDNAメチル化CPG部位の同定を試みた。現在のところ、候補部位の一つがpalladin遺伝子座に存在している可能性を示す結果を得ており、詳細を検討していく予定である。
新規血管炎症性マーカーPTX3の意義

我が国のみならず心血管障害による死亡は先進諸国では最も多いことが知られております。そのため正しい診断、予後の測定、治療効果等を専門医以外でも可能にあることが期待されます。診断に汎用されております心電図や心臓超音波検査などを含めた生理学的検査結果は判読にはやはり専門能力を必要とされます。我々が開発したPentraxin 3は血液わずか20μLで測定できるマーカーで血管の炎症状況を反映すると考えられています。本研究を投資急性冠症候群の予後判定、睡眠時無呼吸症候群での治療効果判定に有効など多くの知見が得られました。先進国の死亡原因第一位は脳血管障害です。その病態である動脈硬化は炎症性疾患と位置付けられます。その炎症の程度を示すバイオマーカーとしてCRPが広く知られていますが、ここで申し上げますバイオマーカーとは少量の血液検体で測定できうるタンパクを意味します。しかし現実の臨床ではCRPは、その特異性が低いため、あまり使用されておりません。PTX3はCRPと同じファミリーに属しますが発現部位は動脈硬化巣に認める細胞ということで血管特異性の強い炎症性タンパクです。そこで研究者らはPTX3に着目し、高感度測定系を開発しました。我々の開発した系は従来の測定系に比し約7倍感度が改善しております。本研究計画はこの高感度測定系を活用し、以下の項目を検証することを目的としています。1)正常値(カットオフ値)の設定2)慢性動脈硬化症でのPTX3測定の意義:。3)冠動脈CT検査施行症例でのスクリーニングマーカーとしての意義4)整形外科疾患での肺梗塞予測因子としての意義5)急性冠症候群での予後判定マーカーとしての意義6)胸痛患者における新規鑑別診断マーカーとしての意義我が国のみならず心血管障害による死亡は先進諸国では最も多いことが知られております。本年度は1)正常値の規定、2)慢性動脈硬化患者での測定意義、3)冠動脈CT検査との補完マーカーとしての意義、4)整形外科疾患での肺梗塞予測因子としての意義の4点を明らかにすることを目的とした。そのうち、1)、2)について以下の点がわかった。1)正常値(カットオフ値)の設定。カットオフ値決定のため、正常郡数をより増やし、データ解析後正常値を規定する。長崎県上五島の集団健診受診者、2514名(平均年齢60.3歳、男性47%)を対象に測定されたPTX3値を用い、PTX3の正常値、カットオフ値を設定する。2619名の受診者から、除外項目に該当した症例を除き、最終的には1749名(平均年齢59.6歳、男性46.8%)を対象に解析した。PTX3は男性1.87mg/Lに対し、女性は2.12mg/Lで有意に女性で高いことがわかった(P<0.0001)。また高齢者ほど、その値は高くなる。しかし中性脂肪や肥満度には逆に減少傾向になる。そのため、それらを診断基準の要素とするメタボリック症候群では有意に低い値をとることがわかった(非メタボリック症候群:1.82mg/L、メタボリック症候群2.11mg/L(P=0.021))。2)冠動脈CT検査施行症例でのスクリーニングマーカーとしての意義64列冠動脈CT装置(MDCT)は冠動脈硬化症診断に対し、感度95%,特異度9095%程度(Mollet, Circulation2005)と陰性的中率のすぐれた検査であることが知られている(98-99%)が陽性的中率は75-90%と低い。血漿PTX3値がMDCTの疑陽性をどこまで減らせるかを検討する。我々はこれまで、434連続症例(37歳-90歳、男性60.6%)を解析している。29.6%に冠動脈疾患が疑われ、冠動脈造影検査を全例施行された。そのうち約37%には有意狭窄を認めず、いわゆる疑陽性に分類され。一方残り63%は冠動脈治療を必要とした群(インターベンション群)になる。これらのPTX3値を調べますと、インターベンション群:2.17ng/mL,疑陽性群1,74ng/mLと優位で疑陽性群でPTX3値は低く、そのオッズ比は3.42倍だった。以上より冠動脈CTに血漿PTX3値を考慮すると約3.4倍の疑陽性群を減らすことができるという結論になる。我々は新規血管炎症性マーカーPTX3の意義について研究をしている。1)本年度は急性冠症候群での予後判定マーカーとしての意義2)胸痛患者における新規鑑別診断マーカーとしての意義上記が本年度の解析目標であった。胸部不快感を主訴に救急車要請し、来院した計524名に対して、PTX3を含む、各種バイオマーカーを採血、比較検討した。

対象バイオマーカーには高感度CRP(hsCRP),NT-proBNP, Myeloperoxidase(MPO), CPK, WBCをとった。エンドポイントには1)入院中死亡、2)心原性ショック(IABP, PCPS挿入を必要として症例)、3)重症肺水腫(気管内挿管し人工呼吸管理を必要とした症例)をとった。そうすると、上記のような重症患者さんで、有意に値の増加をみたバイオマーカーはPTX3,NTproBNP、それとCPKであった。また多変量解析をした結果、もっとも重症患者を入院時採血で予測したマーカーはPTX3であった。この傾向は胸痛患者さんの急性冠症候群診断マーカー、TroponinT陽性患者さんのみを対象としてもやはりPTX3がもっともすぐれた予測マーカーであった。Receiving Operating Character曲線よりカットオフ値を算出し、入院中の生存曲線を描くとカットオフ値以上のPTX3値を示す症例郡では有意に死亡率が増加することがわかった。本内容は今年度夏に開催されましたヨーロッパ心臓病学会で口頭発表し、今年度末3月に開催される日本循環器学会でも口頭発表演題として採択されており、また現在英文誌に投稿準備中の状態である。我々は新規血管炎症性マーカーPTX3の意義について研究をしています。本年度は1)本年度は胸痛患者における新規鑑別診断マーカーとしての意義2)睡眠時無呼吸症候群(OSA)患者における新規鑑別診断マーカーとしての意義について解析いたしました。1)は昨年から継続解析中です。胸部不快感を主訴に救急車要請し、来院した計524名に対して、PTX3はもっとも重症患者を予測するマーカーでカットオフ値以上のPTX3値を示す症例郡では有意に死亡率が増加します。これまでの救急トリアージスコアでありますSOFA, APACHE IIと比較検討を行っております。2)OSAは炎症を引き起こし、血管障害から動脈硬化を引き起こすことがしられております。50人のOSAと25人の正常群のPTX3を測定、これまで動脈硬化マーカーとして使用されているCRP値と比較いたしました。PTX3は中等度以上のOSAで有意に上昇し(2.36ng/mL vs 1.53ng/mL)、脈波と非独立性に有意に相関しておりました。OSAの治療法でありますCPAP療法でPTX3値も有意に改善することが示されました。以上よりPTX3はOSAによる動脈硬化の程度を反映し、治療効果マーカーになることを見出しました。その結果をAmerican Journal of Hypertensionに報告しています。本年度は1)本年度は胸痛患者における新規鑑別診断マーカーとしての意義
起立性低血圧の予防に関する研究(二度起こし法の条件反射的効用の開発)

二度起こし法(平成89年度科学研究費補助金研究成果報告済)時に、個々人に合った心地よい条件設定を習慣づけると要介護者に,今から起きるという心の準備(条件反射様の)ができ自発的離床が可能な上,起立性低血圧を予防しつつ楽に起こすことができる。今回はこの基盤研究をゼミの学生と(地域担当医師の許可を頂き)夏期休暇中、高齢在宅要介護者6名に(8日間連日・7490歳・寝たきり期間93年・介護度53・3名が痴呆)実施し以下の知見を得た。1.初日は事前訪問(情報収集・症状観察・医師の許可・意志の疎通他)し、翌日から二度起こし法で起床時間をのばし継続する。初日3日間程は不安・緊張感等が感じられるが次第に笑顔や言葉数がでて歓迎的にかわる。次に対象者の得意としていること,好きなことをしり起床時に活用する。心が動けば体が動く。毎回同じ条件設定が望ましい(好きな歌をうたう,聞く,孫,動物がたちあう,心地よい言葉かけ等)。2.対象者(臥床期間39年)6名中、今迄離床出来なかった3名が車椅子で摂食可能となりむせなくなった。また、痴呆で足腰が弱り臥床がちの3名が散歩,買物,編み物(あえて教えて頂く形をとり)などが出来るようになった。その上、HDS-Rポイントの上昇がみられた。3.薬剤で治癒しなかった褥創部が起床させることと、創部にムートンを(二組用意し、23日で交換)使用して軽快した(2名)。4.毎日同じ条件設定で、また簡単な二度起こし法で起立性低血圧を予防しつつ、自発的離床を習慣ずけるため対象者、介護者ともに不安感が少なく今迄より楽に療養生活が可能となりQOLの向上が得られた。心が動けば体が動く。私が永年試みてきた起立性低血圧を防ぐ「二度起こし法」は、個々人に合った快い声かけをして上半身をゆっくり起こす再び静かに寝かせる更に起こして床に足をつける、簡単で誰でも出来る方法です。H8年に科学研究費の助成を受けさせて頂いたため、H9年9月6日の朝日新聞全国版に掲載され、試行された介護者から楽に離床できた旨の電話を受けました(H8年家族看護学研究vo1.2/1「寝たきり老人の起立性低血圧を防ぐ試み-二度起こし法-」参照)。当時この他いくつかの問題点や知見を得ておりました.そこで、この度再び科研費を申請し許可されました。その問題点は、寝たきり者の多くがはじめ離床を促すと躊躇されることで、介護者の積極性と、起こす自信がないとそのまま寝たきり者になります。つまりベッドに腰掛けられて微笑まれる前迄は、遠慮や不安感をもった精神・身体状況で自発的離床ではありません。故に起こす時、自然に自主性を引き出す条件設定を試み、連日継続ケアー(1W10日間)で習慣化させると「今から起きる」という心身の準備ができ条件反射的効用となって楽に起こせるという知見を得ました。具体的には、要介護者の起座時に偶人の好まし状況をイメージさせたり、実際好きな音楽をかける、可愛い孫や、子供、動物が立ち合う、やさしい声掛けをするなど個々人に合った精神的安定が得られる条件設定をし習慣化させます

今回の研究目的は、上記のような条件を見つけ、二度起こし法の実施毎に習慣化してその時の血圧、脈拍、血流、精神身体状況の測定、分析、随伴症状の観察をし、その有効性を実証することでした。測定機器の変更,機器への習熟に時間がかかった、1W間継統測定日程が得られないなどでH11年度研究計画予定が大幅に未達成のため次年度にむけて努力する覚悟です。現時点では、健常成人(20才台学生)12名と健常高齢者(6070才台)2名の測定(研究目的に従い)を終え調査、分析中です。今回はこの基盤研究をゼミの学生と夏期休暇中、高齢在宅要介護者6名(7490歳・寝たきり期間93年・介護度53・内3名が痴呆)に地域担当開業医師の許可を得た後、事前訪問を加え8日間連日継続ケアーを実施し、以下の知見を得た。1.対象者(臥床期間39年)6名中、今迄離床出来なかった3名が車椅子で摂食可能となりむせなくなった。2.痴呆で足腰が弱り臥床がちの3名が散歩,買物,編み物(あえて教えて頂く形をとり)などが出来るようになった。その上、HDS-R(改訂版長谷川式簡易知能評価スケール)ポイントの上昇がみられた。3.薬剤で治癒しなかった褥創部が起床させることと、創部にムートンを(二組用意し、23日で交換)使用して軽快した(2名)。4.毎日同じ条件設定で、また簡単な二度起こし法で起立性低血圧を予防しつつ、自発的離床を習慣ずけるため対象者、介護者ともに不安感が少なく今迄より楽に療養生活が可能となりQOLの向上が得られた。5.8日間以降もヘルパー・家族介護者にケアーの継続を依頼した。6ケ月過ぎた現在訪問し、継続事例では明らかな改善がみられた。
看護系大学教育における小児看護学カリキュラムの開発

平成7年度は、CINAHL(1990年1995年6月)、最新看護索引(1985年1995年)、国民衛生の動向・白書類等の統計により、文献検索を行った。子どもと家族及びその環境に関する文献は多く発表されており、その課題が明らかにされた。一方、課題が多いのにもかかわらず、小児看護学のカリキュラム及び教育に関する文献は少なかった。平成8年度は、前年度に実施した文献検討に基づき、4年制大学の小児看護学教育カリキュラムの実態について調査をする質問紙を作成し、看護系の学科を持つ全国46の4年制大学に質問紙調査を依頼した。各大学の小児看護学を担当している教員宛に質問紙を発送し、32校(回収率69.6%)から回答を得、そのデータを統計学パッケージ〔HALBAU〕を用いて分析した。記述された内容については、内容分析を行った。平成9年度は、前年度に実施した質問紙調査の結果及び米国の看護教育などの文献をもとに、看護系大学における小児看護学の授業、技術演習、実習に関する分析を行い、21世紀における小児看護学のカリキュラムを有識者と共に検討した。その結果、変化する社会に対応した授業、学生が自ら学ぶ姿勢を持って実習に臨むことを助ける技術演習などが求められた。また、少子化の影響で実習施設が得られにくくなっているが、「病気を持つ子どもと家族の援助」の実習施設として、病院ばかりでなく、外来やサマーキャンプへの参加なども今後検討していく必要があることが明らかになった。最新看護索引(1985年1995年7月)、CINAL(1990年1995年6月)、国民衛生の動向・白書類などの統計により、文献検索を行った。子どもと家族、及びその環境に関する文献は多く発表されており、その課題が明らかにされていた。外国の文献では、学校形態(大学教育と専門学校)による教育の違いはタイトルにも明示されるほど明らかであるが、日本の文献では形態の違いによる教育は明らかにされていなかった。小児人口の減少、短期入院の奨励、重症な患者の増加、小児病棟の閉鎖などにより基礎教育の学生が受け持てる患児が少ないと明らかにされているにもかかわらず、それに対する対策(授業や実習の展開など)は、ほとんど述べられていない。国内外の急速な変化に応じて求められる役割、今後予測される役割、また小児看護では看護婦に言語能力・認知能力の未熟な子どもを理解することが要求されるが、これらに関してはほとんど述べられていない。さらに、教員が小児看護学の講義を担当していない学校もあると報告されているが、その学校の形態は明らかではない。看護系大学で小児看護学を担当している教員23名に現行の小児看護学カリキュラムについて面接したところ、カリキュラムの変更に伴い"小児看護学"という名称が他の名称に変更されたり、"小児看護学"の科目が他のいくつかの科目の中に組みこまれ存在しない大学もあることが明らかになった。パイロットスタディの結果をもとに、質問紙の内容の検討をしているところである。平成7年度に実施した子どもを取り巻く現状、小児看護の課題、小児看護学教育カリキュラムに関する文献検討に基づき、4年制大学の小児看護学教育カリキュラムの実態について調査をする質問紙を作成した。看護系の学科を持つ全国46校の4年制大学に質問紙調査を依頼した。各大学の小児看護学を担当している教員宛に質問紙を発送し、32校(回収率69.6%)から回答を得、そのデータを統計学パッケージ[HALBAU]を用いて分析した。看護系大学における小児看護学の学習目標には、対象の理解、援助のみならず、専門職の姿勢を身につけることも含まれていた。さらに、講義内容では子どもの権利と倫理を重視し、家族も看護の対象として明確に位置づけているという特徴が見られた。

一方、少ない授業時間に多くの内容を組み込むことや多くの学生に授業を行うことの困難さ、小児と接した体験の少ない学生に対して、対象の理解を促すことの難しさが指摘されていた。実習では実習期間の短さが目立ち、少子化による小児病棟の閉鎖などの影響を受け、実習施設が他の看護学校などと重複していたり、実習施設が遠い、対象患児が重症化しているなどの現状があった。新設大学などでは、実際にまだ実習を行っておらず、今後実習施設や対象患児の確保の困難さがさらに深刻化していくと考えられた。また、米国のイリノイ大学、マドナ大学の小児看護学カリキュラムについて調査を行った。平成8年度に実施した質問紙調査の結果及び米国の看護教育などの文献をもとに、看護系大学における小児看護学の授業、技術演習、実習に関する分析を行い、21世紀における小児看護学のカリキュラムを有識者と共に検討した。1)21世紀における小児看護学の授業時代の変化を予測し、社会におけるヘルスケアのニードに応じた授業を展開する。また、実際に子どもを観察したり、インタビュー等をとおして子どもを理解し、ロールプレイや事例検討によって、子どもと家族の求めている援助を学び、状況に応じた看護ができる看護者を育成することが必要である。2)小児看護学における技術演習技術演習は、学生が実際の看護場面の状況をイメージし、自ら学ぶ姿勢を持って隣地実習に臨むことを助ける。基礎的な看護技術の他、実習施設の特徴の合わせて行う。3)小児看護学の実習小児看護学の実習環境は、早急に検討しなければならない課題が多い。少子化の影響で実習施設が得られにくくなっているが、「健康な子どもとかかわる」実習(保育園など)と、「病気を持つ子どもと家族の援助」の実習(病棟の他に、外来やサマーキャンプへの参加なども考える)が必要である。少ない時間数で効果的な学びができるように、実習目的の検討が重要である。ひとりの教員が指導することができる学生数は、6人までである。指導者や教員は臨床経験が豊かで、かつ効果的に学生にかかわることができることが望まれる。実習の評価は記録だけでなく、学生の子どもや家族との実際のかかわりを評価する必要がある。
新生児期の薬物代謝能を考慮した薬物投与設計に関する研究

新生児期における適正な薬物投与設計を可能にするための基礎的データを得ることを目的に、新生児期の薬物代謝において特に重要と考えられるCYP3Aによる薬物代謝酵素活性について検討を行った。その結果を以下に要約する。1.発現CYP3A4とCYP3A7による薬物および内因性ステロイド代謝酵素活性は、DHEA、DHEA-Sの代謝でCYP3A7による代謝酵素活性がCYP3A4を上回ったが、その他の基質ではすべてCYP3A7による活性がCYP3A4のそれを下回った。また、CYP3A7の部位指向変異酵素による検討より、CYP3A7に特異性の高いDHEA-S 16α-水酸化機能には、224番目および244番目のリジンが重要である可能性が示唆された。2.CYP3A7によるCBZ10,11-エポキシ化、NVP2-、12-水酸化は、DHEA-Sをはじめとする3位の硫酸抱合ステロイドにより顕著に活性化を受けた。特にDHEA-Sは新生児期に高濃度に存在することから、この時期の薬物代謝活性に影響を及ぼす可能性が示唆された。また、分子力場計算と密度汎関数理論を用いた検討より、活性化の機序として活性ポケット内での薬物と内因性ステロイドの相互作用による安定化の寄与が考えられた。3.尿中6β-OHF/C比および16α-水酸化DHEA/CRE比をそれぞれCYP3A活性、CYP3A7活性の指標とした検討より、出生後1週間までの期間はCYP3A7活性の低下のみが起こり、生後1週間以降はCYP3A7活性が緩やかに低下を続けると同時にCYP3A4活性が徐々に上昇してくると考えられた。以上の結果より、新生児期のCYP3Aによる薬物代謝活性およびその出生後の変化は、対象薬物のCYP3A7および3A4による代謝活性の大小や、DHEA-Sによる影響の受け方の違いにより大きく異なるものと考えられた。本年度は、主にin vitroの系を用い、胎児型CYP3A7、成人型CYP3A4の薬物代謝能を明らかにする目的で以下の2点について検討を行った。1.発現CYP3A4とCYP3A7の各種薬物および内因性ステロイド代謝における基質特異性の差異5種類の薬物(カルバマゼピン: CBZ、ネビラピン: NVP、トリアゾラム: TZM、エリスロマイシン: EM、ゾニサミド: ZNS)および5種類の内因性ステロイド(テストステロン: TES、コルチゾール、アンドロステンジオン: AND、DHEA、DHEA-S)の両酵素による代謝酵素活性を測定し、速度論的パラメータの算出を行った。両酵素による薬物および内因性ステロイド代謝酵素活性は、DHEA、DHEA-Sの代謝でCYP3A7による代謝酵素活性がCYP3A4を上回ったが、その他の基質ではすべてCYP3A7による活性がCYP3Mのそれを下回った。また、Kmは薬物、内因性ステロイドとも両酵素間で大差は認められなかったが、Vmaxは両酵素間で顕著な差異が認められたことより、CYP3A7とCYP3A4の代謝酵素活性の違いは基質と酵素の親和性の差よりも、最大代謝活性の違いによるものと考えられた。2.発現CYP3A4とCYP3A7による薬物代謝活性に及ぼす各種内因性ステロイドの影響発現CYP3A4によるCBZエポキシ化、NVP 2-、12-

水酸化は、AND、TES、DHEAといったアンドロゲンにより活性化を受けたが、EM N-脱メチル化、ZNS還元化は逆にこれらのアンドロゲンにより強い阻害を受けた。一方、CYP3A7によるCBZエポキシ化、NVR 2-、12-水酸化は、DHEA-Sをはじめとする3位の硫酸抱合ステロイドにより顕著に活性化を受けた。これらの硫酸抱合ステロイドは新生児期に高濃度に存在することから、この時期の薬物代謝活性に影響を及ぼす可能性が示唆された。本年度はまず、CYP3A7の基質特異性に影響を及ぼすアミノ酸残基の特定および内因性ステロイドによるCBZエポキシ化酵素活性化の機序について検討を行った。次に、尿中6β-OHF/C比および16α-水酸化DHEA/CRE比をそれぞれCYP3A活性、CYP3A7活性の指標とし、CYP3A4および3A7活性が出生後如何に変化するかについて検討を行い以下の結果を得た。1.CYP3A7の活性部位と考えられるアミノ酸のうちCYP3A4と異なる箇所をCYP3A4のアミノ酸に置換した部位指向変異酵素による検討より、CYP3A7に特異性の高いDHEA-S 16α-水酸化機能には、224番目および244番目のリジンが重要である可能性が示唆された。2.分子力場計算と密度汎関数理論を用いた検討より、CYP3A4および3A7によるCBZ10,11-エポキシ化酵素活性がそれぞれ、アンドロステンジオン、DHEA-Sにより活性化された原因として、活性ポケット内でのCBZとこれら内因性ステロイドの相互作用による安定化の寄与が考えられた。3.尿中6β-OHF/C比および16α-水酸化DHEA/CRE比は共に出生後7日目までほぼ同様のパターンで経日的に低下したことから、出生後1週間まではCYP3A7活性の低下のみが起こり、CYP3A4活性の上昇は起こっていないと考えられた。さらに生後1週間以降は、16α-水酸化DHEA/CRE比は緩やかに減少を続ける一方、6β-OHF/C比は増加に転じたことから、CYP3A7活性が緩やかに低下すると同時にCYP3A4活性が徐々に上昇してくると考えられた。前年度および本年度の結果より、新生児期のCYP3Aによる薬物代謝活性およびその出生後の変化は、対象薬物のCYP3A7および3A4による代謝活性の大小やDHEA-Sによる影響の受け方の違いにより大きく異なる可能性が示唆された。
20世紀前半ドイツにおける家族扶助システムの史的研究-福祉と救貧のはざまで

20世紀前半の家族扶助システムの発展においては、誰が支援対象か?が重要な問いであった。社会全体で母子保護を行なうとする母性保険構想では、婚外子の包摂要求は激しく拒絶され、法律婚にもとづく核家族が規範化された。人的喪失の大きかった第一次世界大戦中には、兵士遺家族支援の対象者には、婚外子を含めたすべての母子が包摂されるようになった。しかしヴァイマル期には、戦前の家族イメージがふたたび理想化されて、兵士遺家族支援をもとにして家族扶助が構築された。最終年度には、第一次世界大戦以前の家族の保護をめぐる議論のひとつ、母性保険構想を取り上げ、母子保護に関する施策要求の内容を論者ごとに分析してとりまとめた。そのうえで、ドイツ連邦文書館、プロイセン州立図書館およびドイツ国立図書館において同時代の行政史料と文献を調査し、必要なものについて複写した。これらの調査ののち、大戦中とその後の戦争寡婦への援護について、同時代の戦争犠牲者団体が発行した雑誌記事や行政資料の分析を進めた。寡婦の場合、本人の年齢のほかに、子どものあるなしや子どもの年齢にもよるが、支給される遺族年金額は生活をカバーすることを想定していなかったため、職業教育を受けさせて就労させることが重視された。遺児に関しても、学校卒業後の生計手段を身につけさせる職業教育に大きな力点が置かれていたことが明らかになってきた。いずれも、戦争という大きな社会変動による生存危機に対して、あらたに帝国援護法を制定して、遺族年金の請求権認定という福祉の論理にもとづく支援が示されたのである。兵士遺家族支援の対象者として、死亡した兵士の両親にも年金請求権が与えられていたが、雑誌記事を分析すると、「家族」支援の内容はほとんどが妻と子どもを想定していたことが明らかとなった。ここからは、19世紀から20世紀の転換期以降に理想化された男性の稼ぎ手と専業主婦に子どもからなる核家族が、援護すべき「家族」とされたヴァイマル期の状況が浮かび上がってくる。並行して進めていた第二次世界大戦後の戦争障害者支援においても、彼らが一家の扶養者となるべきだという世論にそって援護法も構築されたことを確認した。世界大戦は、核家族をあるべき家族像とみなす傾向をいっそう強めたのである。これらの研究成果の一部は、2014年に発行予定の京都大学人文科学研究所が編集する第一次世界大戦研究の総括論文集に発表するよう準備を進めている。家族扶助システムの形成過程を明らかにする本研究課題の目的を達成するために、当該年度以前から取り組んでいた女性の戦時支援活動に関する調査結果を、経年的な変遷を追う視点から研究ノートにまとめた。ここにおいて、兵士遺家族支援の萌芽が19世紀半ばに生じたことを明らかにできた。そのうえで当該年度の調査テーマを、20世紀初頭のドイツで大きな議論を呼んだ「母性保険」構想の展開に設定し、その成果を研究ノートとしてとりまとめた。「母性保険」構想とは、母親とその子どもの保護を社会保険として国の制度に組み込む要求である。しかし男性労働者を受給者に想定する社会保険の枠内では、女性の母性を保護する名目の「母性保険」構想は、最終的には独立した制度とはならなかった。政策に結実しなかったとはいえ、母子保護をめぐってさまざまな見解が提示された「母性保険」議論を追うことで、第一次世界大戦中に拡充された母子保護事業、さらには第一次世界大戦中から戦後に構築される兵士遺家族支援といった、家族扶助システムの一部をなす諸政策の前史をとらえることができたといえる。また太平洋戦争中の日本の社会政策に関する著書の書評をしたことで、日本のシステムにドイツの第一次世界大戦前後に実施された、あるいは議論された政策の片鱗がいくつも見られたことを再確認できた。とくに乳児保護が兵役検査合格者の増加につながるという議論や、子どもの体格をよくするための母乳哺育の推奨、青少年の身体鍛錬促進などの政策が、戦争開始以前から推し進められていた点は、20世紀初頭のドイツの事例と著しい類似性が指摘できる。当該年度の在外調査では、第一次世界大戦後の兵士遺家族支援に関する史資料を閲覧し、必要なものに関して複写し、もしくは複写を依頼し、あるいはデジタルカメラでデータを取得した。これらの史資料を読解する作業には、まさに着手したところである。当該年度以前に開始していた女性の戦時支援活動の歴史的発展に関する調査からは、戦争中に行なわれる公的・私的な家族支援が、第一次世界大戦以前から系統的に実践されていたことを確認できた。そして第一次世界大戦以前の家族支援策の一つである母子保護事業の実態をふまえて、その改善要求を出すなかで議論された「母性保険」構想について整理したことで、戦争の経験から家族扶助システムが形成されていく際の基盤を明らかにした。これらの研究成果は、本研究課題の達成に必要な前提部分をなし、今後調査・分析が必要な部分を明確にする役割を果たしたものである。

またドイツでの史資料調査に際して収集した同時代の文献や社会政策家たちの会議議事録などから、第一次世界大戦中および戦後の兵士遺家族援護について、当時の具体的な状況を確認する作業を開始した。これは第一次世界大戦後に制度化される家族扶助システムの形成過程解明に直接つながる作業領域であり、本格的な検証・分析作業を行なうための準備が整いつつあることを示す。まず当該年度に着手した第一次世界大戦中の兵士遺家族援護制度や扶助実践の調査・分析に関して、史料や文献などを利用してさらに進める。次に、家族援護の具体的な状況を史資料から明らかにするべく、ドイツでの文書館調査を引き続き行なう。具体的には、分析対象とするフランクフルト市の市立文書館および同市にあるドイツ国立図書館のほか、ベルリンの連邦文書館、州立図書館を訪れて史資料を調査する。国家レベルの史料としては労働局の文書や統計、市レベルのものは参事会、救貧局、福祉局、住宅局、市議会議事録などの文書を閲覧し、また図書館では同時代の出版物を閲覧したうえで、それぞれ必要に応じて複写する、もしくは複写を依頼する。こうして得られたあらたな史資料を含めて集中的に読解・分析して、兵士遺家族援護制度のアウトライン、その実践状況の経年的な変遷を把握することに努める。これらの新しい知見と、すでに明らかにしている諸点、つまり19世紀半ばに原初的な形態で行なわれるようになった兵士遺家族支援の実践や、20世紀初頭の母子保護事業を基盤として、第一次世界大戦中に形成された兵士遺家族支援制度の様相とその意義、そしてそれらが組み合わされてヴァイマル期に家族扶助としてシステム化されていく過程を明らかにすることを目指す。ドイツでの史資料調査のための渡航費用のほか、現地での史資料の複写代などとして計50万円程度を見込んでいる。その他には研究文献の購入代金として5万円程度、研究成果を報告する際の旅費および他の研究者との懇談のための旅費として5万円程度をそれぞれ見込んでいる。
医学歯学教育における術者目線３Ｄムービー作成・供覧・遠隔指導システムの開発と評価

術者目線のオリジナル3Dムービー作成・供覧システムを用いて、歯科治療における手技を撮影し、実際の講義において活用して学生からの評価を得た。3D触力覚入力装置を現システムに導入し、3Dムービー撮影装置を装着している術者の立体視野の中に、3D触力覚入力装置から入力された熟練者の器具を重ね合わせて、それを録画する機能(3Dスーパーインポーズ録画機能)を開発した。また、再生時に奥行き感の調整ができるように改修した。研究期間を通して、臨床手技を適切に撮影する方法を検討し、録画・再生を安定して実施できるようになった。市販のメガネ型モバイルビューアーとウェアラブルカメラを本システムに活用することを検討した。前年度に引き続き、新たに作成した術者目線の3Dムービーの評価を行い、明らかになった問題点の改良を進めた。平成25年度では、3Dスーパーインポーズ録画機能の拡張を行った。1.録画機能の追加:既存ソフトに録画機能を実装し、3Dスーパーインポーズで指導している3D映像をそのまま録画できるように改良した。(1)録画の形式はSidebySide形式で出力する事とする。L・R形式での出力は行わない。(2)録画時にファイル名を指定出来るようにする。(3)キー操作だけでなくマウス操作で録画の開始・終了が行えるようにする。(4)録画したものを既存ソフト上で再生出来るようにする。その際スーパーインポーズも同時に行う事が出来るようにする。2.機種を選ばず再生できるよう再生機能の追加を行った:既存ソフトにSideBySide形式での再生機能を追加し、時分割方式で再生するかSideBySide形式で再生するかを選択できることとした。3.奥行き感が正しく見えるように立体感の調整を行った:(1)既存ソフトに視差調整機能を追加し、撮影前に被写体距離や撮影条件に合わせて上下左右の視差を手動で調整できるように改良した。(2)既存ソフトの奥行パラメータを検証、修正し、学生に提示する想定環境において、奥行感が最も自然になるように修正した。「術者目線のオリジナル3Dムービー作成・供覧システムの歯学科う蝕制御学講義への応用と評価」について、第38回教育システム情報学会全国大会にて成果報告を行った。実際の講義において教材として活用できるような術者目線の3Dムービーを撮影し、現有のシステムの評価、および改良を進めた。次に現システムに3D触力覚入力装置を組込むための開発を行い、導入を実現した。1.実際の講義で活用できるような術者目線のムービー作成:むし歯の治療における充填(歯に白い詰めものをする)の手技を撮影し、実際の講義において作成した3Dムービーを学生に供覧させ、評価を得た。また、歯科医師向けの講習会において、同ムービーをデモンストレーション用動画として試用した。2.現システムの改良:これまでのヘッドマウント装置は、前後のバランスが悪く、撮影時の首の負担が大きかった。カメラ部の軽量化、後頭部への重りの付与による前後バランスの改善等により、ヘッドマウント装置の前後のバランスを大きく改善することができた。それによって装着感が向上し、術者の負担が軽減したため、撮影時間の延長が可能になった。3. 3D触力覚入力装置の導入:現システムの術者目線3Dムービー撮影装置に3D触力覚入力装置を接続し、3Dムービー撮影装置を装着している術者の立体視野の中に、3D触力覚入力装置から入力された熟練者の器具を重ね合わせて、それを録画する機能を開発した。ここで表示される器具は、タービン(むし歯を削る器械)・メス・歯周ポケットプローブ(歯茎の腫れ具合を測る器具)の3種とし、特定部位を示すための「矢印」マークも追加した。今年度は導入のみにとどまったが、次年度は具体的な活用方法を検討し、試用して評価を得ることを目指す。平成24年度は、現有システムの評価、および改良を進めるとともに、3D触力覚入力装置の導入を実現した。また、実際の講義において教材として活用できるような術式に関する術者目線の3Dムービーを作成した。平成25年度は、本システムを活用して作成した術者目線の3Dムービーを歯学科う蝕制御学講義へ応用し、その評価結果について第38回教育システム情報学会全国大会にて成果報告した。また、3Dスーパーインポーズ機能に録画機能を追加し、3Dスーパーインポーズで指導している3D映像をそのまま録画できるように改良した。平成26年度は、これまでに開発してきた機器で撮影、作成した3Dムービーを厳選して、歯学部歯学科1年、大学院修士課程・博士課程の講義において学生に供覧し、学生から肯定的な評価を得ることができた。研究期間全体を通じて、撮影・再生のシステムを改良した結果、作成したムービーの再生および講義室での供覧は安定して実施できるようになった。

また、比較的安価な市販のメガネ型シースルーモバイルビューアーとウェアラブルカメラを、術者目線3Dムービー作成・供覧・遠隔指導システムに活用することを検討した。具体的には、1.これまで作成した術者目線3Dムービーのモバイルビューアーでの供覧・活用方法の検討、2.ウェアラブルカメラを用いた新たな術者目線映像の撮影および、モバイルビューアーでの供覧方法の検討、3.各機器と術者目線3Dムービー作成・供覧・遠隔指導システムとの連携に関する検討を行った。しかし、現段階で安価に入手できる市販のメガネ型シースルーモバイルビューアーやウェラブルカメラでは、録画・再生画像とも画質が粗いため、教材として活用できるレベルには至らなかった。今後は、市販の各機器と術者目線3Dムービー作成・供覧・遠隔指導システムとの連携をさらに検討し、システムを実際の教育現場で活用し、評価する。教育工学平成25年度は、現システムの改良を中心に研究を推進し、システムの改良だけでなく、これまでの研究から得られた評価をもとに撮影方法の検討も行った。これらの成果をもとに、義歯の製作過程における筋形成(義歯床辺縁位置や厚さなどを口腔内の筋肉の動きに調和させるために行う印象採得方法)の術者目線3Dムービーの撮影をしたところ、通常のビデオでは表現しづらい印象採得における手技や材料の用い方など、これまでより、見やすく、安定した画質で、長時間の視聴が可能なムービーを作成することができた。歯学科1年生や大学院生への講義で活用したところ、良好な評価を得た。講義室内での映像の見え方に差があった意見もあったが、有効な撮影方法が確立できたと思われる。平成24年度においては、1.現システムの改良、2.3D触力覚入力装置の導入を計画していた。1.の現システムの改良のために、実際の講義において教材として活用できるような術者目線の3Dムービーを作成し、学生や歯科医師に供覧させ、学生からは教材としての3Dムービーに対する評価を得た。得られた評価によって、撮影方法や、ムービー編集に関する今後の改善点など新たな課題が明らかとなった。また、ヘッドマウント装置の改良を行った結果、術者の負担が軽減し、長時間の撮影が可能となった。負担軽減により、術者が手技に集中できるので、ブレが少なく、質の良い画像の撮影が期待できるようになった。2.の3D触力覚入力装置の導入においても、ほぼ計画通りに実現できた。しかし、画面上に表示される器具の大きさ・奥行感等の改善点も多く、活用方法も含めて次年度の課題としたい。以上のことより、研究計画はおおむね順調に進展したが、同時に次年度への新たな課題も明らかとなった。学生に教材として提供するには、質の高い3Dムービーの作成が必要である。今年度は、システムの改良を進め、有効な撮影方法を確立することができた。今後は、口腔衛生・歯周病分野での術者目線3Dムービー教材を作成し、3D触力覚入力装置を活用した映像の撮影を行い、それらを学生に活用し、評価を得たい。学生からの評価結果より、教材として活用するには、より質の高い3Dムービーが要求されることがわかった。
乳腺分化機構に関与するマイクロRNA(miRNA)の機能解析

哺乳動物は妊娠すると、ミルクを作るために乳腺細胞の増殖、分化そして退行を繰り返す。その遺伝子発現は精密に制御されているが、逸脱が生じるとミルク合成量の低下や乳癌の発生などにつながる。本研究により、近年注目を集めているマイクロRNAの一つが、細胞増殖を刺激する遺伝子発現を抑制させ、間接的にマウス乳腺細胞の増殖を制御する事が明らかとなった。今後、より詳細な研究を行うことで、乳腺機構の理解を深めることが可能となろう。本研究の目的は、乳腺組織において時期特異的に発現するmiRNAを同定し、ターゲット遺伝子群を明らかにすることで、乳腺分化機構の理解を深めることである。本年度の成果として以下に報告する。1.乳腺分化誘導前後においてmiRNAマイクロアレイを行い、分化に関与する候補miRNAを得た。2.上記候補miRNAについて、リアルタイムPCRを用いて絞り込みを行った結果、分化誘導に伴いmir-10la、mir-141およびmir-200aの発現が上昇することが明らかとなった。3.上記3種のmiRNAについて、ノックダウンおよび強制発現を行った結果、mir-101aのみ乳腺分化に影響を及ぼした。すなわち、乳腺細胞においてmir-101aをノックダウンさせると分化マーカーであるカゼインmRNAの発現上昇が見られ、逆に強制発現させると発現が低下した。これは、分化時に上昇するmir-101aは細胞分化に抑制的に働く可能性を示唆している。現在、そのメカニズム機構について解析を進めている。4.一方、乳腺分化にはmRNA結合タンパクAUF1が関与することを明らかにした。ホルモン刺激によりAUF1タンパクの局在が細胞質から核に変化し、この変化をノックダウン法で再現すると乳腺分化が促進された。また、AUF1はc-myc mRNAの安定化に関与することを明らかにした。すなわちAUF1は、c-mycを制御することで細胞増殖および分化調節に重要な役割を担う。本研究により、乳腺分化過程において、転写後調節に関わるmiRMAやAUF1といった新しいプレイヤーの存在が明らかとなった。今後より詳細な解析を行い、新しいメカニズムを提唱していく。1.昨年度に行ったmiRNAマイクロアレイにより得られた候補miRNAの内、特にmir-101aについて詳細な解析を行った。2. mir-101a発現は分化誘導時より強制離乳による乳腺退行時に著しく増加する事が明らかとなった。また、mIr-101aの強制発現により、ミルク合成の指標であるカゼイン発現が低下した。3. mir-101aの強制発現においてSTAT5のリン酸化解析、およびルシフェラーゼ遺伝子の下流にカゼインmRNAの3'UTRを組み込んだベクターを用いたレポーターアッセイの結果、mir-101aはカゼイン発現を直接制御しない事が明らかとなった。4.乳腺分化および退行過程に深く関与する細胞増殖について検討をおこなったところmir-101aが細胞増殖を抑制することが明らかとなった。5.細胞増殖に関与する因子として知られるcyclooxygenase-2(Cox-2)発現は乳腺退行時に低下することを突き止め、mir-101aの強制発現によりCox-2発現が低下することを確認した。以上の結果から、mir-101aはCox-2の発現を抑制することで細胞増殖を制御し、乳腺分化および退行過程に重要な役割を担っていることが明らかとなった。
折り返し歪み除去用ローパスフィルタの提案と波動数値解析への適用

近年、超音波診断装置の画質改善のための手法としてハーモニックイメージングが注目されている。我々の研究室でも、凹面探触子から放射される非線形音場の測定と超音波Bモード像の計算機合成の組み合わせにより、2次高調波による超音波Bモード像のコントラスト改善の評価を試みている。生体不均質層が超音波Bモード像に与える影響についても考慮し、様々な介在媒質を挟んで、解析を行った。またBモード像上の関心領域と周囲媒質の相対エコーレベルによるコントラスト改善度の定量的評価も試みた。さらに、S/N比の劣化の影響を考慮し、ハーモニックイメージングにより画質改善について検討した。超音波像中のスペックルによる組織の変位の検出が試みられている。これらの測定における精度を検討するために従来生体近似ファントム等を用いて実験的に行われていたが、現実のファントムでは変形を正確に設定することが困難であるため、測定精度の定量的評価は難しかった。そこで我々は先に提案している三次元エコーシミュレーションモデルを用いて超音波Bモード像を作成し、スペックル像の二次元相関により変位量を検出し、相関の極大を正確に再現するためには、標本化定理を満足させる必要があることを示した。媒質中の散乱点が一様に変位する場合には、相関の極大と変位の間の関係は直観的に理解できる。実際の組織は回転運動を含む複雑な運動を行い、そのような場合の相関の極大と変位量の間の関係は必ずしも明らかでなかった。本研究では、三次元エコーシミュレーションモデルの相関について検討した。近年、超音波Bモード像の合成や波動伝搬の時間領域での解析においては広く用いられている。連続関数を離散格子上で表現するためには、標本化定理を満たさなければならない。すなわち、連続信号を遮断周波数がサンプリング周波数の1/2のローパスフルタに通して、折り返し歪みが生じないようにする。しかし従来のローパスフィルタのインパルス応答は、複雑な形になるか、あるいは継続時間が非常に長くなるので、連続時間領域で処理するのは困難であった。その結果不完全安な特性をもったローパスフィルタを用いるので折り返し歪みが生じ、歪みを目立たないようにするために必要以上にサンプリング周波数を高くしなければならないという問題点があった。本研究では、正規分布型の周波数特性をもつローパスフィルタを折り返し歪み除去用フィルタとして用いることを提案している。このフィルタのインパルス応答はsinc関数と指数関数の積で表現できるので、任意の入力波形に対して、ローパス処理された出力波形を容易に精度よく計算できる。波動数値解析への適用は超音波開口の音場のインパルス応答の解析、超音波Bモード像の合成、超音波診断装置の画質改善、回折波の解析等を考えている。例えば、回折波の時間領域での厳密解を用いて、正規分布型ローパスフィルタを適用し、フーリエ変換で周波数応答を求めた。その結果と厳密解は非常によく一致したので、提案したローパスフィルタの有効性も確かめることができた。