hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
表皮細胞接着分子・細胞骨格構築制御シグナル伝達と自己免疫性水疱症の分子医学的解析

以上、我々のこれまでの研究成果は、細胞間接着分子の接着制御と天疱瘡の水疱形成機序に関する新しい視点を開き、海外でも追試され、さらに展開されつつある。、その独創性と重要性が強く示唆されることから本研究を展開開始した。とくに今後はdesmogleinを中心にしたdesmocollin,desmoplakin,p120cateninの分子機能と集合分散機序およびその細胞骨格との制御シグナル伝達が重要であると推察した。これらから、今後も水疱症をモデルとした我々の分子病態細胞生物学的研究が妥当であることが認められ、さらに本研究を発展させ、その診断と治療の論理的開発を目指したい。表皮ケラチノサイトは細胞外からのシグナルに対応して細胞骨格-細胞接着系の構造分子の集合と離脱を動的に繰り返し、細胞の分化(角化)と増殖を制御している。本研究は自己免疫水疱症の水疱形成機序をデスモソーム、ヘミデスモソーム構成接着分子に対する自己抗体の結合に起因するoutside-inシグナルの観点から明かにすることを目的とする。尋常性天疱瘡抗体が細胞表面desmoglein 3と結合することがoutside-in刺激になって細胞内に燐酸化反応を生じ、デスモソーム構成分子のdesmoglein 3のリン酸化とplakoglobinのリン酸化の増強と、その分子間結合の離開を培養ヒト癌細胞と正常ケラチノサイトを用いて発見した(投稿中)。さらにその結果、desmoglein 3の崩壊が生じ、desmoglein 3が天疱瘡抗体刺激20分後には膜画分から、30時間後には細胞骨格(含デスモソーム)画分から消失し、desmoglein 3欠損デスモソームが形成されるごとを見出した(J.Invest.Deramt ol ..112:67-71.1999)。また、desmoglein 3はケラチノサイト表面で小凝集斑として存在し、尋常性天疱瘡抗体結合によって、スプリットしたデスモソームでなく、デスモソームに組み込まれる前のdesmoglein 3がエンドサイトーシスされることを免疫電顕で示した(1999年5月米国研究皮膚科学会で発表受理)。一方、類天疱瘡では、ヘミデスモソームの構成分子であるBP180がその自己抗体標的抗原である。我々は培養ヒト癌細胞を用いて培地中に患者抗体を添加すると、ヘミデスモソームに組み込まれる前の膜上に遊離の状態でプールされているBP180に自己抗体が結合して細胞内にエンドサイトーシスされることを既に報告している。今年度はそれが患者皮膚においても起きていることを示めした(Br.J.Dermatol.138:71-76.1998)。本研究は天疱瘡抗体、類天疱瘡抗体が細胞接着分子である抗原に結合した後、細胞間接着離解を生じるまでのシグナル伝達と分子生物学的な機序を明らかにし、これをモデルとし細胞接着-細胞骨格系分子の集合と分散の動的制御と、表皮細胞の増殖と角化機序を解明することである。先に我々は天疱瘡抗体がデスモグレイン3(Dsg3)に結合するとCキナーゼが活性化されることを報告したが、本年度は細胞内のホスホリパーゼ(PL)DではなくPLCが活性化されることを見いだした(Arch Dermatol Res 291:606-613,1999に発表)。一方、このCキナーゼとは独立したセリンキナーゼが活性化され、Dsg3をリン酸化し、分解に導くことを見いだした(Eur J Immunol Dermatol 29:2233-2240,1999)。さらにDsg3欠損デスモソームの形成を生じることを報告した(J Invest Dermatol 112:67-71,1999)。以上の結果から、現時点では天疱瘡抗体が結合すると、Cキナーゼ系でデスモソームの形成分解回転が亢進し、別のキナーゼ系でDsg3がリン酸化され、分解し、正常デスモソームがDsg3欠損デスモソームに置き換えられることが水疱形成に関与すると推察し、レビューした(J Invest Dermatol Symp Pro 4:138-144,1999)。類天疱瘡の研究で、180KD抗原が分解し120KDになり、これが新しい抗原になり得ること(J Biol Chem 273:9711-9717,1999)、また、類天疱瘡の一型である妊娠性疱疹では、皮疹が消失しても数ヶ月その自己抗体が残ること(Br J Dermatol 140:119-123,1999)などを報告した。また、BP180がCキナーゼの活性化によって細胞質から細胞膜に転移することを見いだした(投稿中)。

以上、我々のこれまでの研究成果は、細胞間接着分子の接着制御と天庖瘡の水庖形成機序に関する新しい視点を開き、海外でも追試され、さらに展開されつつある。とくに今後はdesmogleinを中心にしたdesmocollin、desmoplakin、p120cateninの分子機能と集合分散機序およびその細胞骨格との制御シグナル伝達が重要であると推察した。これらから、今後も水庖症をモデルとした我々の分子病態細胞生物学的研究が妥当であることが認められ、さらに本研究を発展させ、その診断と治療の論理的開発を目指したい。
没入型ディスプレイ環境における視線誘導に関する研究

ユーザの周囲を映像で覆ってしまう没入型ディスプレイにおいて,頭部運動を伴った視線誘導を目的とする.一般に視線誘導では,瞬時に視線の移動ができる有効視野の範囲において,注視点を変えることで無意識的に行われている.しかし,ヒトの視野は有効視野の外に周辺視があり,周辺視においても視線誘導できる可能性がある.本研究では,頭を動かしてでも周りが見たくなるような視線誘導ができないか,没入型ディスプレイ環境を用いて検証する.ここでは,できるだけ元の映像を変質させないよう,被写界深度の変化,歪みの分布による誘導手法を検討する.2018年度の研究概要は次の通りである.1.映像の収縮歪みによる視線誘導:映像の一部や全体を収縮させ,その収縮の中心点に視線を誘導することができるかどうかを調べた.眼球運動のみでの誘導を確認するため,曲面モニタを使用して視線誘導の可否を確認した.ここでは歪みの形状や勾配,大きさなどを変えながら,視線の誘導が顕著に観察される条件を調べた.個人差や視線の追従に時間遅れが見られたものの,おおむね視線誘導ができていることが確認された.2.不自然さを伴わない映像の歪みの許容限界:前述の環境において視線誘導が可能であっても,表示されている内容に違和感を与えてしまうと,情報が変質してしまったり,観察者に不快さを与えたりする恐れがある.そこで,表示されている内容に違和感を与えない限度の歪みがどの程度かを調査した.こちらも個人によって好みがわかれるが,歪みとして知覚されないケースや,単なる拡大縮小として認識されるパターンがあることがわかった.映像の収縮歪みによる視線誘導:曲面モニタにおいて,提案手法により視線誘導が可能であることを確認した.ただし,個人差が大きく,逆効果になることもあった.また,周波数分解能が低い画像に歪みを与えても,映像にはほとんど変化が見られないため,視線誘導効果が乏しくなることがわかった.動きのある映像に対しても,視線誘導の効果が低下することがわかった.上記の理由により,おおむね順調に進展していると言える.1.没入映像環境における頭部運動を伴った視線誘導:没入型ディスプレイ環境において,被写界深度や映像の収縮歪みによる視線誘導がどの程度可能か調べる.眼球運動のみならず頭部運動を同時に誘発させることが目的であるため,視線誘導が行われたかの検証には,カメラが内蔵されたウェアラブルなアイトラッカーを用いる.2.理想視点を外したときの視線誘導:没入型ディスプレイ環境では,同時に多人数で観察することも想定される.没入型ディスプレイ環境では,映像の見え方がもっとも正確である理想視点が定められている.しかし,多人数で観察する場合は理想視点から逸脱してしまい,歪みや見切れによって映像を正しく観察できない可能性がある.そこで,任意の観察位置において,視線誘導がどの程度可能であるのか調べる.ユーザの周囲を映像で覆ってしまう没入型ディスプレイにおいて,頭部運動を伴った視線誘導を目的とする.一般に視線誘導では,瞬時に視線の移動ができる有効視野の範囲において,注視点を変えることで無意識的に行われている.しかし,ヒトの視野は有効視野の外に周辺視があり,周辺視においても視線誘導できる可能性がある.本研究では,頭を動かしてでも周りが見たくなるような視線誘導ができないか,没入型ディスプレイ環境を用いて検証する.ここでは,できるだけ元の映像を変質させないよう,被写界深度の変化,歪みの分布による誘導手法を検討する.2018年度の研究概要は次の通りである.1.映像の収縮歪みによる視線誘導:映像の一部や全体を収縮させ,その収縮の中心点に視線を誘導することができるかどうかを調べた.眼球運動のみでの誘導を確認するため,曲面モニタを使用して視線誘導の可否を確認した.ここでは歪みの形状や勾配,大きさなどを変えながら,視線の誘導が顕著に観察される条件を調べた.個人差や視線の追従に時間遅れが見られたものの,おおむね視線誘導ができていることが確認された.2.不自然さを伴わない映像の歪みの許容限界:前述の環境において視線誘導が可能であっても,表示されている内容に違和感を与えてしまうと,情報が変質してしまったり,観察者に不快さを与えたりする恐れがある.そこで,表示されている内容に違和感を与えない限度の歪みがどの程度かを調査した.こちらも個人によって好みがわかれるが,歪みとして知覚されないケースや,単なる拡大縮小として認識されるパターンがあることがわかった.映像の収縮歪みによる視線誘導:曲面モニタにおいて,提案手法により視線誘導が可能であることを確認した.ただし,個人差が大きく,逆効果になることもあった.また,周波数分解能が低い画像に歪みを与えても,映像にはほとんど変化が見られないため,視線誘導効果が乏しくなることがわかった.動きのある映像に対しても,視線誘導の効果が低下することがわかった.上記の理由により,おおむね順調に進展していると言える.1.没入映像環境における頭部運動を伴った視線誘導:没入型ディスプレイ環境において,被写界深度や映像の収縮歪みによる視線誘導がどの程度可能か調べる.眼球運動のみならず頭部運動を同時に誘発させることが目的であるため,視線誘導が行われたかの検証には,カメラが内蔵されたウェアラブルなアイトラッカーを用いる.2.理想視点を外したときの視線誘導:没入型ディスプレイ環境では,同時に多人数で観察することも想定される.没入型ディスプレイ環境では,映像の見え方がもっとも正確である理想視点が定められている.しかし,多人数で観察する場合は理想視点から逸脱してしまい,歪みや見切れによって映像を正しく観察できない可能性がある.

そこで,任意の観察位置において,視線誘導がどの程度可能であるのか調べる.購入した視線検出装置やHMDが,当初想定していたより安価に入手できたため.2019年度の助成金は,ウェアラブルアイトラッキングシステムの購入と実験環境構築のための消耗品,実験協力者謝金に充当する予定である.
広宿主域を持つ新たな結核菌群菌の遺伝学的解析

広い宿主域を持つと考えられる新たな結核菌群菌Mycobacterium orygisを、バングラデシュ及びネパールの複数の動物種の肺結核病変から分離した。その遺伝学的解析により、この飛沫感染を起こすと考えられる結核菌群菌が、これらの国々の野生動物の間で保持されている可能性が示唆された。また、ネパールにおいてゾウから分離されたヒト型結核菌の遺伝子解析を行ったところ、トランスポゾンの活性化によると考えられるゲノムの小規模な構造変化が観察された。これらの異種動物感染例から得られた菌株の遺伝学的解析により、結核菌群菌の宿主指向性に関与するゲノム上の領域が同定できる可能性がある。Mycobacterium orygisは、2012年に新種として独立させることが提唱された結核菌群菌の一亜種であり、系統樹上では結核菌とウシ型結核菌(M. bovis)の間に位置する。主としてレイヨウの仲間からの分離が報告されているが、その例数は少なく、人を含めた宿主域や地理的な分布域等は明らかとなっていない。近年、我々はバングラデシュの牛およびサルの結核病変からこの菌株を複数分離・同定し、この地域において少なくとも2系統の菌株が蔓延していることを見出したが、昨年度はこれに加え、この菌がネパールの野生動物の間で蔓延している可能性を示唆する新たな知見を得た。当該飼育施設では国内の野生のシカを捕獲して長年に亘り飼育していたが、斃死個体にしばしば結核病変が観察されており、今回、1頭の肺病変から分離された結核様菌の遺伝子解析を行ったところ、欠損領域や点変異の特徴よりM. orygisであることが証明された。スポリゴタイピングによる型別結果は、バングラデシュ株を含む既存のM. orygisに一致したが、MLVA型別結果はいずれの報告例とも異なり、ネパールの固有蔓延株であることが示唆された。これらのシカが野外から導入されたことを考えると、ネパールの野生動物の間でM. orygisが保持されている可能性は高いと考えられる。バングラデシュでの種の壁を越えた伝播、同一地域内における株の多様性、また、人からの分離例の多くも南アジアに起因することを考え併せると、この広い宿主域を示す結核菌群菌の主な分布域はこれらの国々を含む南アジアであろう。現在、ネパールにおいて、この感染群を含む他の個体からも分離を試みている。この他に、ゾウから分離された菌は解析の結果、人型結核菌であることが判明したため、これらの株のゲノムを合わせて解析することによって、結核菌群菌の宿主域を決定する因子を探る。結核菌群菌は結核菌に近縁の一群の菌種により構成され、生存に必須な遺伝子配列はほぼ同一である。現在報告されている動物指向性の菌種は、系統樹上では全て、ヒト型の結核菌と共通の先祖から分岐した1本の枝に乗っていると考えられている。昨年新種登録されたMycobacterium orygisは、動物指向性の菌種の中では最もヒト型結核菌に近く、他の動物指向性菌が失った人型結核菌の遺伝子学的特徴を残している。従って、この菌のゲノム配列上の特徴を、ヒト型の結核菌やウシ型結核菌(M. bovis)等の動物指向性菌と比較することにより、菌の宿主指向性に係る因子を特定することが可能であると考えた。我々はまず、バングラデシュで動物から分離された結核菌群菌を遺伝子解析によりM. orygisと同定した後、その型別を行った。首都ダッカ市内の動物園で斃死したアカゲザル2頭および酪農家のウシ18頭の肺結核病変から分離された菌株を用いてVNTR (variable number of tandem repeat)による疫学解析を行ったところ、ほとんどの個体が同じ株に感染していたことが示唆された。2頭のサルを含む計17頭の個体由来株では、解析可能であったVNTR24カ所のローカス全てが一致しており、1頭の牛では1カ所のみ異なっていた。残る2頭の牛株では4カ所が異なり、この2頭のパターンは一致していた。また、いずれも肺病変から菌が分離されており、この地域では飛沫感染を起こす新種の結核菌群菌が少なくとも2株、動物の種の壁を越えて蔓延している可能性が示唆された。次いで我々はサル由来株、ウシ由来株を各々1株用いて次世代シークエンサーによる全ゲノムシークエンシングを試みた。現在、ドラフト配列が得られたところである。結核菌群は人の結核の起因菌であるMycobacterium tuberculosisと、その近縁の遺伝的に非常に近似した一群の菌種によって構成されている。

各菌種は各々の宿主動物へ適応した結果、異なる宿主嗜好性を持った系統(種)へ分化していったと考えられているが、菌種によってはM. bovisの様に広い感染宿主域を持つものもあり、2012年に新種として独立させることが提唱されたM. orygisもその一つであると考えられる。我々は以前にバングラデシュでアカゲザル2頭と牛18頭の結核病変から結核菌様の菌を分離していたが、それらがM. orygisであることを証明し、VNTR解析によって動物の種の壁を越えて同じ株が感染していることを見出した。また、2012年から2014年にかけてはネパールのシカおよびレイヨウ(blue bull)の肺結核病変よりM. orygisを分離し、VNTR解析によってバングラデシュとは異なる系統であることを示した。バングラデシュの分離株を用いて次世代シークエンサーによる全ゲノム配列解析を行い、報告されている結核菌の基準株(H37Rv)と比べたところ、ゲノム構造の一部に小規模な組換えと転移が起きていることが判明した。また、データベース上の人結核から分離されたM. orygisのゲノムと比べると、マッピング不能な変異箇所の大半は菌体表面抗原であるPE-PGRSをコードしていた。この他に我々はネパールにてゾウの肺結核病変から分離された菌も解析したが、これらは全て人型の結核菌であった。ネパールの患者から得られる地域特有の結核菌株も検出されたが、いずれも人から得られた株とは異なり、IS(トランスポゾン)の数が増えて型別結果にも影響を与える程ゲノムの構造が変化している様子が見られ、異なった宿主への適応の結果であることが示唆された。人獣共通感染症学当初の予定では、バングラデシュで既に分離されていた株のみを用いて解析を行い、2年目以降はゲノム解析とインビトロの試験に移行する予定であった。しかし、スタート時点の計画には入っていなかったネパールの共同研究者より、動物由来の複数の検体を譲り受けることができ、このうちシカ由来の株がM. orygisであることが判明した。また、ゾウから分離された3株は、解析の結果いずれも人型の結核菌であった。このうちの1株はgyrA遺伝子上に過去に報告の無い特異的な点変異を持っていたため、我々がこの地域で別に行っている人結核疫学調査株データと比較したところ、蔓延している株の一部に同じ変異が観察され、感染源が地元の人間であったこと示唆された。また、M. orygisにおいては文献的にもスポリゴタイプが安定しており、異なる動物種から得られた株もほぼ全て同一の型を示していたが、ゾウから得られた3株はMLVA等の他の型別法により非常に近縁であることが証明されたにも係らず、スポリゴタイプが全て異なっていた。即ち、人に高度に適応した結核菌が他の動物に感染したときには、そのゲノム上の恐らくは特定の部位に高度の構造変化が起こる可能性が示唆されていると考える。当初の計画とは異なった展開となったが、最終目的である結核菌群菌の宿主指向性や順応性に関与するゲノム上領域を調べるための有力な検体を複数確保することができた点で、昨年度の収穫は大きく、達成度は大であったと考える。現在までのところ、目的とした動物由来株20頭の型別解析を終え、バングラデシュにおいて新種の結核菌群菌であるMycobacterium orygisが、動物の間で飛沫感染により蔓延している可能性を示すことができた。また、サルおよびウシという異なる動物宿主から得られた株より全ゲノムDNAを抽出し、次世代シークエンサーによる解析を開始した。最終目的である結核菌群菌の宿主指向性に関与する遺伝子領域の決定に必要な材料は、概ね揃ったと考える。新たに入手したシカ
19世紀オーストリア小説における個人の発展と崩壊についての史的研究

本研究においては,19世紀オーストリアの主要な小説の分析を通じて,この時期のオーストリア小説に描かれた個人が,はじめから安定した単位ではなく,むしろつねに不安を抱え込んでいたものであることが明らかにされた。シールズフィールドから,グリルパルツァー,シュティフタ-,アンツェングルーバー,エーブナ-=エッシェンバッハ,そしてさらに世紀転換期の作家の作品に至るまで,繰り返し人間の自我が実体を欠いている様子と,その欠落を暴力的に埋めようとする文学的な試みが行われたことが明らかにされた。これは特殊オーストリア的な問題として理解されるだけではなく,ゲーテ以来の近代ドイツ小説の展開それ自体と密接な関係を持つ問題である。特に,従来正当な評価を受けることのなかったシールズフィールドとエーブナ-=エッシェンバッハについて詳細な検討を試み,彼らの作品を抜きにして,近代オーストリア小説,またドイツ小説の歴史の正当な評価があり得ないことを論証した。成果の一部は,日本独文学会において口頭で発表され,日本語の論文としてまとめられただけではなく,海外の研究者との交流の便を考えドイツ語の二編の論文にまとめられた。世紀転換期にマッハによって端的に指摘されのちの近代オーストリア小説のきわめて重要な課題となる「救いがたい自我」の問題が,19世紀においてすでにきわめて変化に富んだかたちで顕在化したことが,これらの論文で明らかにされている。さらに今後,こうした成果に基づき,今世紀の前半に至る近代ドイツ小説の流れが,新しい視点から書き直されることが期待される。19世紀オーストリアに関する一次、二次文献の収集につとめ、また同時にテキスト・データベース化のためのハード面での整備も行った。データベース化は遅れているが、今年度の主たる課題である三月前期のオーストリア小説については、我が国ではほとんど未知といってよいチャールズ・シールズフィールドのほぼすべての作品の検討を終え、仙台クライストの会における研究会でその概略を口頭で発表し、現在シールズフィールドに関する論文を準備中である。また同じく、グリルパルツァーの作品についても、戯曲を含めほぼ全作品の検討を終了した。作品の検討という点では、三月期以後のアンツェングルーバー、エーブナ-=エッシェンバッハについてもある程度の進捗を見た。また、学内の特別経費の補助を受けた共同研究「社会と文化における中心と辺境」の研究成果として刊行予定の論文、「都市の中の島-近代オーストリア小説にみる楽園幻想--」は、近代オーストリア小説全体の見直しを図る本研究の全体の概略を描いたものでもあり、その意味で、本研究全体を完成する上での基礎的な考え方をまとめたものである。さらに、20世紀の側からオーストリア小説の問題を考えるために、ム-ジルの政治的な態度を分析した論文「1935年パリのム-ジル-作家のアイデンティティー」も、本研究のテーマと関連する成果の一つである。理論的な面では、最近のドイツにおける小説論を収集検討し、本研究が全体として、現代のドイツ小説論の欠落を埋める役割を果たすものであることを確認した。本年度も、19世紀オーストリア小説に関する一次、二次文献の収集に努めた。予定通り、19世紀中葉以降の作家の作品の検討を主たる課題として研究を進め、特に、我が国ではほとんどまったく研究の行われていないマリ-・フォン・エーブナ-=エッェンバッハの作品について、論文をまとめ(「偉大なオーストリア小説(2)マリ-・フォン・エーブナ-=エッェンバッハ)、この論文は本年度末までに、公表される。ドイツ語圏に限らず、英語圏の研究の動向にも目を配り、フェミニズム文学批判など、最近の文学理論の成果を踏まえ、同時に、19世紀ヨーロッパの社会及び文化についてのさまざまな研究の成果を参照して、時代背景を分析した上でテキストの具体的な分析を行い、そこから、この女流作家の作品の持つ意味の再評価を行った。あわせて、前年度より引き続いて、シールズフィールド、グリルパルツァーさらにシュティフタ-らの作品の歴史的な位置づけと評価に関しても、従来とは異なる視点を提示した。

個別の研究の成果は、たとえば、特に国内外を問わず正当な評価を十分に受けていない作家シールズフィールドに関して、来年度に向けてさらにいくつかの論文や、学会での発表のかたちで公表する予定である。こうした研究によって当初の目標通り、オーストリア小説研究の欠落を埋める作業は、さらに進展させられた。また成果の一部に関しては、ドイツ語でも発表するべく準備を進めた。こうした19世紀小説の分析は、世紀末文学の研究にも大きな寄与をなすものであることが確認された。本研究においては,19世紀オーストリアの主要な小説の分析を通じて,この時期のオーストリア小説に描かれた個人が,はじめから安定した単位ではなく,むしろつねに不安を抱え込んでいたものであることが明らかにされた。シールズフィールドから,グリルパルツァー,シュティフタ-,アンツェングルーバー,エーブナ-=エッシェンバッハ,そしてさらに世紀転換期の作家の作品に至るまで,繰り返し人間の自我が実体を欠いている様子と,その欠落を暴力的に埋めようとする文学的な試みが行われたことが明らかにされた。これは特殊オーストリア的な問題として理解されるだけではなく,ゲーテ以来の近代ドイツ小説の展開それ自体と密接な関係を持つ問題である。特に,従来正当な評価を受けることのなかったシールズフィールドとエーブナ-=エッシェンバッハについて詳細な検討を試み,彼らの作品を抜きにして,近代オーストリア小説,またドイツ小説の歴史の正当な評価があり得ないことを論証した。成果の一部は,日本独文学会において口頭で発表され,日本語の論文としてまとめられただけではなく,海外の研究者との交流の便を考えドイツ語の二編の論文にまとめられた。世紀転換期にマッハによって端的に指摘されたのちの近代オーストリア小説のきわめて重要な課題となる「救いがたい自我」の問題が,19世紀においてすでにきわめて変化に富んだかたちで顕在化したことが,これらの論文で明らかにされている。さらに今後,こうした成果に基づき,今世紀の前半に至る近代ドイツ小説の流れが,新しい視点から書き直されることが期待される。
生体分子素構造の人工的組織構造化による新機能発現

遺伝子工学的方法などを駆使し、機能性タンパク質の特定部位に自己組織化能を導入し、本来の機能を保持し、さらに自己組織化可能な機能性タンパク質を創製するとともに、種々の界面に生体分子系超構造を実現した。1)自己組織化能を有する機能性タンパク質の自己組織化によるタンパク質分子系超構造の実現・プロテインA/抗体分子/抗原分子のヘテロ分子超構造を固体基板上に構築し、その機能評価を行なった。・自己組織化カルモジュリン/ホスホジエステラーゼ系超構造を構築し、タンパク質分子間の機能連携を検証した。・遺伝子光学的方法によって、抗体分子の特定部位に脂質分子を導入する方法を開発し、自己組織化による抗体分子超構造を実現した。2)コアーシェル型ナノ会合体と生体分子系との超構造の構築・リゾチーム系超構造の外部刺戟感応性、活性安定性を検証・DNA系超構造を構築し、DNA合成ベクターシステムとしての有用性を実現3)アパタイト/高分子へテロ高次構造体の合成・各種有機高分子基板をシランカップリング剤処理し、擬似体液中でアパタイト形成し、アパタイト/高分子超構造を実現し、その生物的・力学的評価を行なった。4)バクテリオロドプシンとH^+-ATP合成酵素系のタンパク質超構造を脂質分子膜内に構築・脂質分子膜系でのバクテリオロドプシンモノマーとATP合成酵素間のエネルギー伝達機構を解明する。5)運動制御系タンパク質超構造を内部に構築したリポソームの実現・タリン等の細胞骨格タンパク質の超構造を構築し、リポソームの変形・融合・分裂を実現した。1電子機能酸化還元酵素の電極表面における分子系超構造酸化還元酵素は生体内において分子間電子移動をきわめて効率的に行うが、多くの酵素は電極との電子移動を行い難い。ところが、バイオセンサなどバイオ素子の研究開発においては、電極表面で直接電子移動をスムーズに行う電子機能タンパク質の実現が強く望まれている。本研究では、バイオセンサ材料としてもっとも代表的なグルコース酸化酵素に着目し、分子内の電子移動経路を構築するとともに、自己組織化能を付与し、電極と電子移動可能なグルコース酸化酵素超構造を実現した。2プロティンA/抗体系ヘテロ分子系超構造抗体IgG分子はFab鎖末端に抗原認識部位を有するので、固体表面に抗体分子の超構造を構築するためには、IgG分子の分子配向の制御がきわめて重要な課題である。しかし、抗体分子の配向制御については抜本的方法が開発されていなかった。本研究では、抗体分子の配向制御法を多角的に検討した結果、プロティンAの分子認識能を利用した新しい方法を創出するに至った。3 GST-カルモジュリン融合タンパク質の合成生体内のタンパク質超分子系では、微妙なコンホメーション変化が分子間で相互移動可能である。すなわち超分子系のある分子にコンホメーション変化が誘起される。コンホメーション変化を介して生物機能が制御され、高度な機能発現に結びついている例は数多い。しかし、コンホメーション変化が連動するような柔軟なタンパク質分子系超構造は生体外でまだ構築されていない。本研究では、典型的な細胞内制御因子であるカルモジュリン系の超構造を設計し、固体表面に構築した。生体内には、精巧緻密な機能を発現する「分子系超構造」が非常に多く見られる。これら分子集団の機能性分子は自己組織化能を有し、それぞれの機能が分子間で連携できるように高次組織構造を形成している。しかし生体分子の自己組織化のメカニズムは余りにも複雑であり、自己組織化能を制御する設計コンセプトに基づき生体分子系の高次組織体を構築する試みはほとんど行われていない。本研究は、機能性生体分子、特に機能性タンパク質に自己組織化能を付与し、複数種類の機能性タンパク質を自己組織化させることによって、人工設計系の生体分子系超構造を実現し、新機能の発現を目的として、次の諸成果を挙げた。1)自己組織化能を有する機能性タンパク質の合成および自己組織化(相澤)グルタチオンシンセターゼ(GST)とカルモジュリンとの融合タンパク質の遺伝子を設計し、GST/カルモジュリン融合タンパク質を合成するとともに、自己組織化能を検証した。2)運動制御系を内部に構築したリポソームの構築技法および評価測定系の確立(宝谷)運動性タンパク質を内包した分子系超構造リポソームを形成し、その形態形成能および動的変換能を蛍光顕微鏡等によって定量的に解析した。3)アパタイト/高分子ヘテロ高次構造体の合成(小久保)擬似体液中での各種シリコーンゴム表面におけるアパタイト結晶生成過程を解析した。4)光駆動リン酸化システムの人工構築(樋口)バクテリオロドプシンとH^+ATP合成酵素系とのタンパク質超構造を脂質分子膜内に構築し、その特性を解析した。5)コアーシェル型ナノ会合体と生体分子系との超構造の構築(片岡)ヘテロニ官能性オリゴマーを分子設計し、単分散ナノ会合体を調製した。さらに、リゾチームおよびオリゴアミノ酸とナノ会合体との分子系超構造を構築し、そのキャラクタリゼーションを行った。

・自己組織化カルモジュリン/ホスホジエステラーゼ系超構造を構築し、タンパク質分子間の機能連携を検証した。・遺伝子光学的方法によって、抗体分子の特定部位に脂質分子を導入する方法を開発し、自己組織化による抗体分子超構造を実現した。2)コアーシェル型ナノ会合体と生体分子系との超構造の構築・リゾチーム系超構造の外部刺戟感応性、活性安定性を検証・DNA系超構造を構築し、DNA合成ベクターシステムとしての有用性を実現3)アパタイト/高分子へテロ高次構造体の合成・各種有機高分子基板をシランカップリング剤処理し、擬似体液中でアパタイト形成し、アパタイト/高分子超構造を実現し、その生物的・力学的評価を行なった。4)バクテリオロドプシンとH^+-ATP合成酵素系のタンパク質超構造を脂質分子膜内に構築・脂質分子膜系でのバクテリオロドプシンモノマーとATP合成酵素間のエネルギー伝達機構を解明する。5)運動制御系タンパク質超構造を内部に構築したリポソームの実現・タリン等の細胞骨格タンパク質の超構造を構築し、リポソームの変形・融合・分裂を実現した。
バイオリファイナリー産業を加速化するソルガム高糖性遺伝子の同定

バイオリファイナリーにおいて発酵原料となる糖は重要であり、糖生産作物の高糖性遺伝子はその鍵遺伝子である。我々のこれまでの研究から、スイートソルガムSIL-05は高糖性遺伝子座(qBRX-6)によって、稈に多量の糖を蓄積することが明らかになっている。しかし、その近傍に開花遺伝子Ma1/SbPRR37が座乗するため育種の障害となっていた。そこで、この2つの遺伝子の物理位置関係を明らかにすることを目的に本研究を行った。染色体部分置換系統SL-6を用いた連鎖解析の結果、qBRX-6の座乗領域を190kbに絞り込むことに成功し、これらを切り分けて導入することが可能なDNAマーカーを樹立した。スイートソルガム(Sorghum bicolor (L.) Moench)は草丈が3.5 mにもなる高バイオマス作物であり、サトウキビのように稈に糖を蓄積する。我々はこれまで神戸大との共同研究によってスイートソルガムの搾汁糖液を原料とし、バイオエタノール発酵やバイオプラスチックの原料となるフェニル乳酸の発酵に成功してきた。そこで本研究では、バイオリファイナリーに最適化したスイートソルガム育種を行うための基盤研究としてソルガムの高糖性に関するQTL解析を行った。本研究では、スイートソルガム品種SIL-05の高糖性に関するQTL解析を行った。まず、SIL-05と74LH3213(低糖性品種)(F1)の雑種集団から染色体部分置換系統「SL-6」を作出した。この派生系統「SL-6ヘテロ」(候補領域がヘテロの系統)を活用し、候補領域に染色体組換えを起こした8系統をDNAマーカによって選抜した。この後代で候補ヘテロ領域がSIL-05ホモ型、または74LH3213ホモ型に固定した8個体を選抜し連鎖解析に供試した。この形質評価では、精密な圃場試験を行うために潅水を制御できる精密圃場を設置し行うこと降雨などの環境要因の低減に努めた。この結果、責任遺伝子の候補領域を190 Mb内に絞り込むことに成功した。この領域内には概日リズムの遺伝子sbPRR37が座乗していたことから、原因遺伝子について、(1)sbPRR37である可能性と、(2)sbPRR37の近傍に座乗する遺伝子である可能性が示唆された。今後はSL-6ヘテロの後代でsbPRR37領域を固定し、それ以外の候補領域がヘテロの系統を活用することでsbPRR37が原因遺伝子であるか明らかにすることを基盤研究Bで行うことを予定している。植物分子育種
幼稚園における子どもの学びと保育者の援助を支援する情報端末アプリケーションの開発

「ASCA」は、幼稚園など限られた環境の中で、写真撮影機能とアルバム機能、録音機能とプレゼンテーション機能が簡単に使える統合アプリである。さらに、保育者が評価に活用できるよう幼児の写真にタグの付与とタグによる検索・整理を可能としている。この「ASCA」を、それぞれの園の特性とねらいに応じて活用してもらうことで評価を試みた。結果、幼児にも使いやすいが、幼児の生活の「今、ここ」に柔軟に対応できるという視点が重要であること、課題としては、保育者にとっては特にタグ付与について検討が必要であることが明らかになった。本研究では、技術の「商品化」が先行する現状において、幼稚園等における幼児の育ちに寄与するタブレット用アプリケーションの開発を中心に、幼児教育現場における望ましいメディア環境のあり方を提案することが目的である。平成26年度の研究概要と結果は以下のとおりである。(1)海外(主に米国)の幼児とメディアに関する理論や提言をまとめた。その結果、アプリケーションを評価する専門機関が存在し機能しており、タブレットを活用した学習については個人の育ちに注目している点が見出された。(2)日本国内の幼稚園等におけるタブレットを活用した保育現場への訪問調査を行った。結果、幼児への保育のねらいに即して活動が構成され、その中でタブレットを活用する意義を探っていた。幼児にはタブレットを活用した活動に偏ることのないよう、他の全ての保育全体のカリキュラムの中でも活動日数や時間配分を意識していることが明らかになった。活動のテーマも表現活動、発表活動、遠隔交流、知育、絵本、パズル、食育など多種多様であった。認可外の保育現場及び幼児(親子)を対象にしたワークショップでは、プログラミングや英語教育なども見られた。(3)平成26年時点に日本の市場にある幼児を対象とした無料アプリケーション約200種について調査を行った。海外の評価規準及び日本の保育現場におけるメディア活用に関する先行研究をもとに、アプリケーションの専門家ではなく、保育の知識を持つ者が評価できる評価シートを開発し評価を行った。その結果のうち、保育のねらいである5領域との関連や扱っているテーマ、保育者のアプリケーション評価観点については、平成27年度の日本保育学会及び日本教育工学会で明らかにする。平成27年度の研究概要と結果は以下のとおりである。(1)平成26年度の調査結果をもとに、幼稚園で子どもの発達を援助するアプリケーションのあり方について検討した。乳幼児期のアプリケーションの中でも評価の高いアプリケーションは、アプリケーションで遊ぶことのみに完結せず、より現実世界での経験や体験に興味をもって取り組めるような工夫がなされているなど、日本の幼児教育現場にも応用できる点があることが明らかになっている。そのような汎用性のあるアプリケーションを、多忙な保育現場の保育者及び多様な興味・関心に基づいたあそびを通した学びを展開する幼児の双方が活用しやすいアプリケーションであることが重要であるという結論に至った。(2)上記のような結果をまとめ、研究分担者と協力して策定した上記の仕様書をもとに、アプリケーション開発を行っている企業に技術支援を受け、アプリケーションを開発した。開発しているアプリケーションは、1)子ども及び保育者双方にとって使いやすい、2)タブレット端末のアプリケーション内のみのあそびに留まらないようにし、多様な保育のねらい及び幼児自らの興味や関心に応じた活用ができる、3)幼児の思いを言葉にすることや幼児どうしが互いの思いを共有したり、発表しあったりすることへの援助となる、4)保育者が実践や幼児の発達の姿の振り返りと次の保育を再構成するにあたっての効率化、また幼児の学びの可視化ができるようなデータの整理を想定したデータ構築を可能にしている、という点を重視した設計になっている。平成27年度は、研究計画のうち以下の2点について研究を遂行した。(1)幼稚園への実地観察及び聞き取り調査(26年度より継続)実際にタブレットを活用して保育を実践している保育現場を訪問し、実地観察及び保育者への聞き取り調査を行った。その結果のうち、幼稚園で実際に使用されていたアプリケーションの検討や保育方法について検討し、整理し、学会発表を行った。(2)幼稚園における保育の中で活用されるタブレット向けアプリケーションの検討と開発平成26年度にまとめた先行研究からの知見、幼稚園等の保育現場でのタブレット活用の実際から見えた課題、さらに、幼稚園教育要領が定める5領域のねらい・内容に準拠し、タブレットの活用が有効だと考えられる保育内容について研究分担者と検討し、子ども及び保育者双方にとって使いやすく、保育の援助となるアプリケーションの仕様書を策定し、アプリケーション開発を行っている企業に技術支援を受け開発を行った。本研究では、保育現場におけるタブレット端末の活用の在り方を先行研究より整理した知見を踏まえながら、実際にアプリケーション(以下、アプリ)を開発し、保育実践を行うことで、日本の保育現場におけるメディア活用、特にタブレット端末の活用の方向性を確認することを目的とする。アプリ開発にあたり、先行研究や先行事例の概観、既存の幼児向けアプリの調査や保育者になる予定の学生へのアンケートの結果などをもとに考察した。その結果、幼稚園などの集団保育で活用されるという特性、幼児期に育てたい興味や関心に基づく自主性や自立性、表現力等への発達への寄与につながるアプリケーションが有効であることが明らかになった。この結果をもとに、幼児の興味や関心を可視化し、表現力や自主性の発達を援助し、かつ保育者の保育の援助となる統合型アプリケーションの仕様を検討し、「ASCA(Archives Sharing and Creating Anytime for preschool)」を開発した。

「ASCA」は、幼稚園など限られた環境の中で、写真撮影機能とアルバム機能、録音機能とプレゼンテーション機能が簡単に使える統合アプリである。さらに、保育者が評価に活用できるよう幼児の写真にタグの付与とタグによる検索・整理を可能としている。平成28年度には、この「ASCA」を、幼稚園(大阪、奈良)、保育所(奈良)の3園で、それぞれの園の特性とねらいに応じて活用してもらうことで評価を試みた。結果として、幼児にも使いやすいが、幼児の生活の「今、ここ」に柔軟に対応できるという視点が重要であること、課題としては、保育者にとっては特にタグ付与について検討が必要であることが明らかになった。保育現場でのねらいや活用期間に関係なく、共通してアプリに必要な機能や視点を3園の実践結果をもとに明らかにしながら、実践事例を積み重ねていきたいと考えている。この「ASCA」を、それぞれの園の特性とねらいに応じて活用してもらうことで評価を試みた。結果、幼児にも使いやすいが、幼児の生活の「今、ここ」に柔軟に対応できるという視点が重要であること、課題としては、保育者にとっては特にタグ付与について検討が必要であることが明らかになった。平成26年度は、(1)乳幼児を対象としたアプリの調査・整理・分析、(2)国内の幼稚園等におけるタブレットを活用した保育の調査、(3)海外の幼児とメディアに関する理論や提言のまとめ、の3点について研究計画としていた。(2)(3)については共同研究者とともに主要な調査を行い、幼稚園等への訪問、理論のまとめなどを行うことができた。(1)についても、平成26年時点に市場に出ていた無料アプリ約200種について、(3)における海外のアプリに関するレビューや日本での先行研究をもとに、保育の知識を持つ者が評価できる評価シートを開発し、評価を終えた。結果等の分析及び学会発表は平成27年度に行う。(1)開発したアプリケーションを活用した保育現場での保育実践タブレットを活用した保育を実施可能な幼稚園において、子どもへの配慮事項に留意したうえでアプリケーションを活用した保育を実践する。また、その保育の評価を行うとともにその中でアプリケーションの評価を行う。幼稚園でタブレットを用いることで、子どもの興味や関心がどのように深まったり広がったか、また、態度にどのような変化が生じたか、その教育効果と課題について、幼児教育の視点、発達心理学の視点、教育工学の視点で考察する。
非アポトーシス性心筋細胞死制御機構の解明

ネクローシス性細胞死はシクロフィリンD(CypD)依存性ミトコンドリア膜透過性遷移(MPT)を介している。本研究では、アポトーシスとネクローシスとのシグナルクロストークが存在するとの仮説に基づき、それらの心筋細胞死ならびに心不全への細胞内情報伝達機構を、アポトーシス性細胞死に重要な役割を果たすapoptosis signal-regulating kinase 1(ASK1)とCypDに注目して検討した。両者間に分子間結合を認め、CypD依存性MPT誘導機構にASK1が関与し、両者のクロストークが心不全進展へ関与する可能性が示唆された。アポトーシス性心筋細胞死が心不全発症進展に影響を及ぼしているが、これまでにネクローシス性心筋細胞死が心不全発症進展に影響を及ぼしていることを明確に証明した研究は殆ど無い。そこで、本研究では、アポトーシス性刺激とネクローシスとのシグナルクロストークが存在するとの仮説に基づき、ネクローシス性心筋細胞死の細胞内情報伝達機構の解明と心不全進展への関与を明らかにすることを目的とする。ネクローシス性細胞死は、シクロフィリンD(CypD)依存性ミトコンドリア膜透過性遷移(MPT)を介していることが明らかになっている。そこで、CypDノックアウトマウスを用いて圧負荷による心不全モデルを作製し、CypD依存性非アポトーシス性心筋細胞死の心不全発症への関与について検討した。圧負荷1ヶ月後の時点において、野生型マウスに比して、CypDノックアウトマウスでは、心機能が保たれていた。CypDノックアウトマウスではネクローシス性心筋細胞心減少により、心不全発症が抑制されたと考えられる。野生型、CypDノックアウト、Apoptosis Signal-regulating Kinase1(ASK1)ノックアウト成獣マウスから心筋細胞を単離培養し、過酸化水素負荷によるMPT誘導を検討した。野生型マウス心筋細胞ではMPT誘導を認めるものの、CypDノックアウトマウス心筋細胞、ASK1ノックアウトマウス心筋細胞では、MPT誘導を認めなかった。また、IKKβ/NF-κB経路は圧負荷に対して心筋細胞保護に関わること、MTK1の活性化はアポトーシス、心不全を誘導することを明らかにした。本研究では、アポトーシス性刺激とネクローシスとのシグナルクロストークが存在するとの仮説に基づき、ネクローシス性心筋細胞死の細胞内情報伝達機構の解明と心不全進展への開与を明らかにすることを目的とする。野生型、シクロフィリンD(CypD)ノックアウト、Apoptosis Signal-regulating Kinase 1(ASK1)ノックアウト成獣マウスから心筋細胞を単離培養し、過酸化水素負荷によるミトコンドリア膜電位遷移(MPT)誘導を検討した。野生型マウス心筋細胞ではMPT誘導を認めるものの、CypDノックアウトマウス心筋細胞、AsK1ノックアウトマウス心筋細胞では、MPT誘導を認めなかった。すなわち、CypD依存性MPT誘導機構にASK1が関与の可能性が示唆されたが、ASK1が直接的には関与していない可能性も否定できない。そこでCypDをタイトとしてyeast two-hybrid法によりCypD結合タンパク質の検索を行い、候補タンパク質を同定しているところである。今後、候補タンパク質の発現ベクターを作製し、直接的結合の有無ならびにCypD依存性MPT誘導の可否について検討していく。ASK1がCypDと分子間相互作用に必須のASK1のミトコンドリアへの移行を確認するため、ASK1-GFP融合蛋白質を作成した。また、心筋特異的オートファジーが抑制されたAtg5ノックアウトマウスでは加齢とともに心機能が低下し心不全に至ったことから、オートファジーは細胞死ではなく、細胞機能保持に関わることを明らかにした。本研究では、アポトーシス性刺激とネクローシスとのシグナルクロストークが存在するとの仮説に基づき、ネクローシス性心筋細胞死の細胞内情報伝達機構の解明と心不全進展への関与を明らかにすることを目的とする。免疫沈降法にてCypDとApoptosis Signal-regulating Kinasel (ASK1)との分子間結合を認め、その結合は過酸化水素負荷依存性に結合が増強されることがわかった。また、CypDとASK1ドミナントネガティブ体(AsK1DN)との間では、分子間結合を認めなかったことから、活性型AsK1がCypDと結合すると考えられた。過酸化水素負荷にて野生型成獣マウス単離培養心筋細胞ではMPT誘導を認めるものの、CypDノックアウト(KO)マウス心筋細胞、ASK1 KOマウス心筋細胞では、MPT誘導を認めなかった。しかしながら、CypD Koマウス心筋細胞にアデノウイルスにて恒常活性体AsK1(AsK1△N)を過剰発現させるとMPTが誘導されたことから、cypD依存性MPT誘導機構にAsK1が関与する可能性が示唆された。

In vivoでは、圧負荷にてCypD KOマウスでは野生型に比して心不全が抑制される。薬剤誘導性にAsK1△Nを心筋特異的に過剰発現させると約2週間で心不全に陥るが、CypD Koにて薬剤誘導性にASK1△Nを心筋特異的に過剰発現させるとその心不全発症が抑制された。さらに、新規CypD結合タンパク質の検索を試み、検討を続けている。また、心筋特異的カルパイン4 KOマウスを用いて、カルパインは心筋保護的に働き、膜の修復に重要な役割を果たすことを明らかにした。
近代北海道におけるアイヌ民族と地域社会―有珠郡・幌別郡を中心に―

本研究は近代日本における植民地支配(主義)と地域社会との関係について、19世紀後半から20世紀初頭の時期におけるアイヌ民族と移住者を中心とした和人社会との衝突と共生を分析対象とするものである。2018年度は、2018年5月19日に第1回目の会議を開催し、共同執筆論文集の構成・編纂スケジュールや田村顕允関係文書(伊達市内田村家所蔵)の目録化作業について討論を行った。現地での調査に関しては、2018年8月2日から6日まで北海道での調査を実施し、北海道博物館での松浦武四郎展の見学、及び鎌田新三郎関係文書(壮瞥町教育委員会所蔵)の粗整理作業(史料群毎の封筒詰め作業、仮IDの付与と階層化準備作業、於伊達市噴火湾文化研究所)等を実施した。また、2018年10月1日から3日には釧路市及び厚岸町で、土生良吉氏資料(海事記念館所蔵、金沢・前田家家臣団移住関係資料)、本庄・柿崎家資料(太田屯田記念館寄託、米沢・酒井家家臣団移住関係資料)及び鳥取百年館で鳥取藩池田家家中の釧路移住関係資料の調査を実施した。2019年1月12日・13日には宮城県亘理町で亘理伊達家の北海道への移住に際して現地亘理に残留し北海道開拓移住武士団との連絡・調整役を務めた志賀忠雄に関する資料調査(亘理町所蔵志賀家文書)の調査を実施した。2019年2月1日から4日には、有珠郡関係文書(有珠郡・虻田郡引継書、製糖所関係資料等)の調査を法華道立文書館で、岩田文庫(明治初年の北海道布教関係資料)の調査を浄土真宗大谷派北海道教務所で実施した。また、代表者及び分担者久留島浩は伊達市が編纂した『北の大地と生きる・海を渡った亘理伊達家臣団』(2019年4月刊行)に監修として加わり、本課題の研究成果をもとに助言を行った。現地での調査、目録作成等順調に進捗している。引き続き北海道を中心に資料調査を実施する。第一には壮瞥町教育委員会が所蔵する鎌田新三郎関係文書の撮影及び目録化作業を進めていく。第二は、北海道開拓をめぐる地域社会と寺院との関係に着目し、浄土真宗大谷派北海道教務所所蔵資料の調査を継続する。第三には研究成果の公開として、共同研究図書の執筆編纂作業をすすめ、2020年度の刊行を目指す。
樹枝状細胞の抗アカントアメーバー作用の研究

Monoccyteによる抗アメーバ作用の検討健康正常人の末梢血から分離したmonocyteとアカントアメーバ栄養体を培地RPMI(10%FBS入り)で共培養したが、アメーバの数は不変であり、むしろmonocyteの数がむしろ減少した。このことより、37°C、5%CO_2の条件下では、monocyteや樹状細胞といった免疫担当細胞による単純な抗アカントアメーバ療法では直接的な効果は得られにくいと思われた。Monocyteに対するアポトーシスの誘導次に、我々は、このmonocyteの減少結果に着目し、以前に報告したアカントアメーバによる角膜上皮細胞のアポトーシス誘導現象がmonocyteにも生じているか否かを検討した。もし、monocyteにアポトーシスが誘導されるのであれば、アカントアメーバ角膜炎でみられる輪状浸潤の病態解明の糸口となる可能性がある。そこで、共培養したmonocyteを遠沈してスライドガラス上にスメアを引き、tunel染色によりアポトーシス誘導の有無を検討中である。アカントアメーバの温度感受性の検討アカントアメーバによる病変が一定期間、実質表層に止まる傾向が強い事実は温度に対する感受性を有する可能性を示唆する。そこで、アカントアメーバを25°C、30°C、37°C、40°Cの条件で単独培養し、その成育曲線を検討したところ、40°Cにおいて若干の発育阻止効果を認めた。今後、温熱療法の可能性について検討を進める予定である。Monocyteから樹状細胞への分化・培養樹状細胞での検討前に、まず、monocyteの抗アメーバ作用を評価した。6-well plateにmonocyteとアメーバを培地RPMI(10%FBS入り)にして共培養し、inverted microscopeにてアメーバの数の増減を観察した。アメーバと細胞の混和ratioは1:1,1:10或いは1:100としたが、24時間後、48時間後ともにアメーバの数の減少が認められた。次に、培地としてPBS、RPMI(10%FBS入り)の2種類を用い、アメーバと細胞の混和ratioは1:10、培養チューブを24時間攪拌しながら共培養したところ、PBSではアメーバ数は有意に減少したが、RPMIでは軽度な減少に留まった。この理由は現在検討中であるが、RPMI自体がアメーバの栄養源となっている可能性もある。平成17年度は、上記の研究に加えて、in vivo研究として末梢血樹状細胞の抗アメーバ作用をハムスターアメーバ角膜炎モデルを用いて検討する予定である。