hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
M(dmit_2)系錯体の圧力下における電子状態;^<13>C-NMRによる解析

常圧^<13>C NMR吸収線形はMe_4P塩、Et_2Me_2P塩ともにほぼ同じ形が得られた。また、緩和率の絶対値もほぼ同じであることが明らかになった。これは両者の電子構造がほぼ同じであることを示している。35K(Me_4P塩)、17K(Et_2Me_2P塩)で急激な吸収線幅の増大が観測された。この温度ではEPR測定でも異常が報告されている。しかし、両者の様子は大きく異なる。Me_4P塩では低温に向かって大きく線幅が増大し、同時に緩和率のピークが観測された。これは通常の反強磁性転移に期待される振舞いである。Me_4P塩ではダイマーに局在したモーメントが35Kで秩序化することを確認し、この系がモット絶縁体であることを証拠づけることが出来た。一方、Et_2Me_2P塩では異常のあった温度(17K)以下でも線幅の増大は緩やかである。緩和率は低温までほとんど一定値(Me_4P塩のそれとほぼ同じ値)を保っている。つまり、スピンのダイナミクスが低温まで残っている。このことよりEt_2Me_2P塩ではモーメントが局在しているのだが秩序化しきれずにいることが明らかになった。線幅の広がりは短距離秩序のためと考えればEPRの報告と矛盾しない。実際、Et_2Me_2P塩では重なり積分の異方性が小さいために、実効的な三角格子の葉になっており、局在スピンが磁気秩序しきれないと考えられる。圧力下Et_2Me_2P塩に7kbarの圧力を印可してNMRの測定を行った。この圧力は室温以下金属であり、50K付近で絶縁体に転移することがわかっている。この絶縁体相は超伝導相と接していると考えられる。金属状態では緩和率が温度に比例する、金属状態に特有の振舞いが観測された(Korringa則)。また、50Kで線幅の広がりと明瞭な緩和率のピークが観測された。線幅の広がりから秩序化したモーメントの大きさはMe_4P塩と比べてかなり小さいことがわかった。これらのことよりEt_2Me_2P塩の低温絶縁相はSpin Density Wave(SDW)相であろうと結論づけた。圧力により1次元性の強いLUMOバンドに電子が注入された為であると考えられる。
Atmと血管新生・EMTの関係および微小転移形成メカニズムについて

近年大腸癌罹患率は増加しておりそれに伴い死亡率も上昇している。その多くは転移に伴う死亡であり、転移に伴うメカニズムの解明が重要である。Atmは血管の安定性に関与する遺伝子であり、近年腫瘍新生のバリアとして働くことが報告された。また、癌細胞の浸潤・転移との関わりで注目されているEMT:上皮間葉移行との関係も示唆されているが、大腸癌におけるAtmとEMTの関係は示されていない。我々はAtm高発現大腸癌細胞株でEMTが亢進しAtmを抑制することでEMTが抑制されることを示し、大腸癌におけるAtmとEMTの関係が示唆された。TGF-βはEMTを誘導することが知られている。そこで、上記ヒト大腸癌細胞株にTGF-βを暴露させて、EMTが誘導されることを細胞形態、スクラッチアッセイによる細胞浸潤、EMT関連マーカーの発現変化に確認した。またこのEMT誘導によりATM自体の発現の変化をRT-PCRおよびWestern Blot法を用いて評価した。この実験は現在、進行中であり、2014年度には結果をまとめることができると考えている。今後はさらに、ATMをshRNAを用いてノックダウンした細胞を作製し、これにTGF-βを暴露させた際のEMT誘導に関して検証していく予定である。ーカーも比較的高い発現が見られた。また、SW480では、本来のATM発現は低いものの、TGF-βを暴露させてEMTを誘導するとATMの発現も増強された。さらに細胞形態やスクラッチアッセイによる細胞浸潤、EMT関連マーカーの発現変化に確認したところ、いずれもEMTによる変化を認めた。さらに、siRNAを用いてATMの発現を抑えたSW480では、TGF-β暴露によるATMの上昇は認めず、EMTの誘導も抑えられる結果であった。これらの結果は、大腸癌の悪性度に関与するEMTにおいてATMが重要な働きをしている可能性を示唆するものと考えている。今後はさらに臨床検体におけるATMの発現と大腸癌の悪性度や予後との関連について検討する予定である。外科ウェスタンブロットやPCRのマーカーの条件決めに時間を要した。また再現性の実験を現在行っているが、これにも時間を要している。また、shRNAを用いたヒト大腸癌細胞株へのATMノックダウン、HSV-1ウィルスベクターを用いた形質導入に際しての安定した条件が定まっていない。そのためATMノックダウン細胞やATM過剰発現細胞を用いた実験の進行が遅れている。ATM-/-トランスジェニックマウスの脾注転移モデルを作成し、肝重量および肝転移個数を評価する。微小転移周囲における血管新生を共焦点顕微鏡を用いて観察し、その血管増生の程度および血管構築の正常性を評価する。また血管新生マーカー・EMTマーカーの発現を検討する。手術切除検体を免疫染色法を用いてATMの発現を評価し、これと臨床病理学的背景因子(ステージ・TMN因子・組織型・脈管侵襲の有無など)との関連についても評価する。実験計画の遅延に伴い、試薬などの請求が年度を超えたなどの理由から、誤差が出たと考えられる。マウスの飼育や細胞培養に必要な消耗品、あるいは、免疫組織染色などに使用する抗体、PCRに使用する抗体などを購入する。
性染色体上のマイクロサテライトの多型性とその遺伝的安定性に関する研究

我々はこれまで検索の進んでいなかった性染色体上の種々のマイクロサテライトを検索対象として、以下の検討を加えた。1)無作為に選択した日本人集団とドイツ人を対象として血液を採取し、検討を加えた結果、DYS388、DYS389、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393でそれそれ6、10、8、10、6,6のアリルの存在が確認された。このうちDYS388、DYS391、DYS392、DYS393では特定の1つのアリルに頻度が偏在し、法医学的応用は難しい事が明らかになった。DYS384に関しては20近くもの多数のアリルが確認されたが、女性由来の試料からでもバンドの増幅が確認される事、男性で2つのアリルを所持するものが存在する事などから、完全なるY染色体特異性を有していない事が明らかとなった。2)X染色体上のSTR群に関しては、前記した実験で決定したアリル頻度を基にマイクロサテライトの不安定性が予想される種々の疾患由来の試料に応用した結果、特定の疾患で不安定性が顕著である事が明らかとなった。3)Y染色体上のSTR群に関しては、前記した実験で決定したアリル頻度を基に性犯罪試料、実際の親子判定など女性由来の影響を受けない男性試料由来のみでの判定を試みた。結果DYS390,DYS389-1,DYS392での判定がヘテロ接合率が高く有効である事が明らかになった。4)広くアジア人種を対象とした報告と我々のアリル分析の結果とを比較検討したところDYS388、DYS392は日本人のアリル頻度は中国人集団、モンゴル人集団、台湾少数民族集団(アミ族)のそれとは大きく異なっており、「日本人の起源、アジア諸国での遺伝子移行性」の検索などの人類遺伝学的応用が可能である事が明らかになった。我々はこれまで検索の進んでいなかった性染色体上の種々のマイクロサテライト、Y染色体上のDYS384、DYS388、DYS389 1/2、DYS390、DYS391、DYS288、DYS392、DYS393、DYS393とX染色体上のHUMARA(CAG)n、HUMARA(GGC)nのSTR部位を検索対象として、以下の検討を加えた。1)無作為に選択した日本人集団200人とドイツ人177人を対象として血液を採取し、DNAを抽出して試料とした。その結果、DYS388で6種、DYS389 1/2でそれぞれ5種と7種、DYS390で7種、DYS391で5種、DYS392で9つ、DYS393で5種のアリルを同定した。2)X染色体上のSTR群に関しては、前記した実験で決定したアリル頻度を基にガ-ゼ付着血痕、体液斑、腐敗死体、白骨死体など陳旧性の試料に応用し性別判定、個人識別を試みた。HUMARA(CAG)nでの判定ではヘテロ接合率が90近くにも上るため極めて正確な性別判定が可能となった。

今回我々は、これまで検索の進んでいなかったY染色体上の種々のマイクロサテライトを検索対象として、以下の検討を加えた。1)前年度同様、DYS388、DYS389、DYS392、DYS393では特定の1つのアリルに頻度が偏在し、法医学的応用は難しい事が明らかになった。2) Y染色体上のSTR群に関しては、前記した実験で決定したアリル頻度を基に性犯罪試料、実際の親子鑑定など、女性由来の影響を受けない男性試料由来のみで判定を試みた。結果はDYS390、DYS389-1、DYS392での判定がヘテロ接合率が高く有効であることが明らかとなった。3)広くアジア人種を対象とした報告と、我々のアリル分析の結果とを比較検討したところ、DYS388,DYS392は日本人のアリル頻度は中国人集団、モンゴル人集団、台湾少数民族集団(アミ族)のそれとは大きく異なっており、「日本人の起源、アジア諸国での遺伝子移行」の検索などの人類遺伝学的応用が可能である事が明らかとなった。4)親子鑑定への応用Y染色体上のマイクロサテライトを検索することより、子が男の場合には配偶者のアリルを考慮に入れる必要がなく、父子のY染色体上のSTRのみの検索により420%に該当者を絞り込むことが可能となり、多種類のDNA多型の検索を行うことなしに簡単でかつ、高い父子の肯定確率、父子の否定が可能となった。
アラブ古典音楽のタクスィーム（即興演奏）におけるマカーム（旋法）の構造

2018年度は、過去から現在までの代表的音楽家の、主としてウード・タクスィーム(即興演奏)の分析を継続し、マカーム(旋法)の構造と展開について資料調査と現地調査を中心に研究を進めた。マカーム(旋法)の分類と整理のためのウード教則本や研究書の収集が進み、それらの調査によって、マカームごとに、導入・開始・展開・転調・帰結等の行程に用いられる典型的なテトラコルドの構造が把握されてきた。現地調査としては、2018年4月ドーハにて行われたウード・フェスティバルに参加した。現在の代表的なウード奏者の演奏する優れたタクスィームを聴取し、演奏終了後には、聞き取り調査を実施した。それらの調査により、前述の資料調査によって把握された構造と現在の構造のつながりを確認することができた。また、2018年12月には昨年度後半から本年度にかけての研究成果展として、公開講座「マカームとラーガ3」(多摩美術大学)を開催した。「楽器学と奏法論」をテーマとし、東京音楽大学小日向英俊氏をはじめとする音楽家を講師陣として迎え、講義と実演によってアラブ音楽とインド音楽の比較検討を行った。アラブ音楽ではマカームを、またインド音楽ではラーガを表現するために、それに向いた楽器と奏法が発達していることがこれまでの調査で判明しており、その多様な在り方を、実演を通じて聴講者に理解が共有されるよう努めた。映像はDVD化して研究者等が閲覧できる形の記録を残した。計画どおり、資料調査により過去の大音楽家たちを中心にタクスィーム(即興演奏)を分析しており、マカーム(旋法)ごとに、導入・開始・展開・転調・帰結等の行程に用いられる典型的なテトラコルドの構造が把握されてきた。カタールのドーハで行われた「カターラ第2回ウード・フェスティバル」にウード奏者として出演し、自身の即興演奏を披露するとともに、現在の代表的音楽家の即興演奏に関する調査を行った。メフメット・ビットメッツ(トルコ)、ユルダル・トクジャン(トルコ)、ハイグ・ヤズジアン(ギリシャ)といった名手が出演していたので、彼らの秀逸な即興演奏を直接聴取した。演奏終了後には聞き取り調査を実施し、トルコやギリシャのウード音楽においても、アラブと同じようにタクスィームが至高の芸術の形であるとの知見を得た。特にトルコのマカームや奏法について、詳細な知見を得ることができ、アラブと他国との比較研究の面で進展があった。また、それらの調査により、前述の資料調査によって把握された構造と現在の構造のつながりを確認することができた。マカーム(旋法)の分類と整理のための、ウード教則本や研究書の収集も予定通り進んでいる。また様々な講演や公演を通じて、アラブ古典音楽の楽曲や即興演奏、その仕組み等を解説および実演する活動を継続している。録音やウェブ上の音源資料も含め、今後も引き続き優れたタクスィーム(即興演奏)を多く聴取する。20世紀の偉大な音楽家たちから現代に活躍する新しい音楽家たちまで、典型的なフレーズはどのように変化してきたのか、また国や楽派、個人によってどのような趣向や美学の違いがあるかを考察し、まとめる。文献・資料面からもタクスィームとマカーム(旋法)の関係の研究を進める。ウードに限らずカーヌーン、バイオリンなど他の楽器にも枠を広げる。可能であれば昨年度に計画していたチュニジアでの研究調査を実施する。スース高等音楽院教でイラク人ウード奏者アリ・イマームのタクスィーム聴取を実施する。また国立コンセルバトワールのハリッド・ベッサ教授に協力を仰ぎ、タクスィーム分析の精度を高める。講演や公演を通じて、解説および実演の活動を継続する。平成29年度は、アラブ古典音楽の即興演奏タクスィームに関し、特にマカーム(旋法)の構造と展開について研究を推進した。現地調査はマレーシアで行なった。研究成果展として公開講座「マカームとラーガ2」(多摩美術大学・平成29年12月)を開催した。東京音楽大学小日向英俊氏を講師に迎え音楽家による実演も伴いながら、今回はアラブ音楽の即興演奏「タクスィーム」とインド音楽の「アーラープ」の比較研究を行い、討議した。アラブ音楽ではマカームを転調しながら展開する点がインド音楽とは大きく異なり、観客にもその理解が共有された。他にも、「琵琶とシルクロード」(文京シビックホール・平成29年11月・薦田治子武蔵野音楽大学教授企画)を始めとする多くの公演や講演において、アラブ音楽の真髄であるマカームの構造を実演し解説することに努めた。平成30年3月、ビレン・イシュクタシュ博士を中心とするトルコの演奏家・研究者の企画によりマレーシアで開催されたインターナショナル・シェリフ・ムヒッディン・タルガン・ウード・フェスティバル(クアラルンプール・ユヌス・エムレ研究所)に出演し、自作曲とタクスィームを演奏し好評を博した。シェリフ・ムヒッディン・タルガンはアラブ音楽、トルコ音楽両方にとって重要な役割を果たした音楽家である。その名を冠したウード・フェスティバルでは、トルコ音楽とアラブ音楽の比較研究が行われ、タクスィームの表現や多様なプロセスを検討した。またマレーシア、シンガポール、インドネシアなど東南アジア諸国にウード音楽が浸透している現状を把握し、アラブ音楽圏の広がりについても認識を新たにする貴重な機会となった。平成29年度の計画どおり、過去の大音楽家たちのタクスィームを聴取しその分析に注力し、代表的なマカーム(旋法)について、伝統的に受け継がれてきた典型的フレーズ、展開しやすい方向性や行程等が見えてきた。

また、タクスィームを推進していくにあたって重要なのは一定の律動、リズムであることを確認した。タクスィームでは個人的な特徴や創造が尊ばれ、許容された自由度の中で様々な技巧や表現が革新されていくわけだが、安定したリズムなくしては何を行なっているのか理解しづらいものになる。マレーシアのウード・フェスティバルにおいてもトルコ人を始め様々な演奏家のタクスィームを聴取し、自身でもタクスィームを実践し評価されて、そのことを確信するに至った。2018年度は、過去から現在までの代表的音楽家の、主としてウード・タクスィーム(即興演奏)の分析を継続し、マカーム(旋法)の構造と展開について資料調査と現地調査を中心に研究を進めた。マカーム(旋法)の分類と整理のためのウード教則本や研究書の収集が進み、それらの調査によって、マカームごとに、導入・開始・展開・転調・帰結等の行程に用いられる典型的なテトラコルドの構造が把握されてきた。現地調査としては、2018年4月ドーハにて行われたウード・フェスティバルに参加した。現在の代表的なウード奏者の演奏する優れたタクスィームを聴取し、演奏終了後には、聞き取り調査を実施した。それらの調査により、前述の資料調査によって把握された構造と現在の構造のつながりを確認することができた。また、2018年12月には昨年度後半から本年度にかけての研究成果展として、公開講座「マカームとラーガ3」(多摩美術大学)を開催した。「楽器学と奏法論」をテーマとし、東京音楽大学小日向英俊氏をはじめとする音楽家を講師陣として迎え、講義と実演によってアラブ音楽とインド音楽の比較検討を行った。アラブ音楽ではマカームを、またインド音楽ではラーガを表現するために、それに向いた楽器と奏法が発達していることがこれまでの調査で判明しており、その多様な在り方を、実演を通じて聴講者に理解が共有されるよう努めた。映像はDVD化して研究者等が閲覧できる形の記録を残した。計画どおり、資料調査により過去の大音楽家たちを中心にタクスィーム(即興演奏)を分析しており、マカーム(旋法)ごとに、導入・開始・展開・転調・帰結等の行程に用いられる典型的なテトラコルドの構造が把握されてきた。カタールのドーハで行われた「カターラ第2回ウード・フェスティバル」にウード奏者として出演し、自身の即興演奏を披露するとともに、現在の代表的音楽家の即興演奏に関する調査を行った。メフメット・ビットメッツ(トルコ)、ユルダル・トクジャン(トルコ)、ハイグ・ヤズジアン(ギリシャ)といった名手が出演していたので、彼らの秀逸な即興演奏を直接聴取した。演奏終了後には聞き取り調査を実施し、トルコやギリシャのウード音楽においても、アラブと同じようにタクスィームが至高の芸術の形であるとの知見を得た。特にトルコのマカームや奏法について、詳細な知見を得ることができ、アラブと他国との比較研究の面で進展があった。また、それらの調査により、前述の資料調査によって把握された構造と現在の構造のつながりを確認することができた。マカーム(旋法)の分類と整理のための、ウード教則本や研究書の収集も予定通り進んでいる。また様々な講演や公演を通じて、アラブ古典音楽の楽曲や即興演奏、その仕組み等を解説および実演する活動を継続している。
ヒト子宮内膜ならびに内膜癌におけるエストロゲン受容体の遺伝子発現調節機構の解析

本研究の主目的は、正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌におけるエストロゲン受容体(ER)αならびにβの遺伝子発現の多重プロモーターによる調節機構を明らかし、子宮内膜癌の発癌・進展にこれらの遺伝子発現調節機構が果たす生理的ならびに病的意義を明らかにし、さらに、プロモーター活性の抑制による子宮内膜癌の発癌・進展の阻止の可能性を追求することである。本研究の遂行により、ERβの遺伝子調節機構を明らかにしただけでなく、ERと同様に子宮内膜癌の発癌・進展に関与していると考えられるプロゲステロン受容体(PR)にこれまで未報告のisoform cDNA (PR isoform S cDNA)を同定した。さらに、この知見を発展させるべく、ヒトERαならびにERβについてのcDNAの構造解析を行った結果、ヒトERαにこれまで未報告のisoform cDNA(ERαisoform S cDNA)を同定した。また、ヒトERβにもこれまで未報告のisoform cDNA(ERβisoform M cDNA)が存在することを明らかにした。さらに、ゲノム解析により、これらの新たなERαisoform mRNA、ERβisoform mRNAならびにPR isoform mRNAの新規配列部分はこれまでに報告されていなかったexon、すなわち、ERαexon S、ならびに、PR exon S、に由来することを明らかにした。本研究の遂行により同定されたヒトERα、ERβならびにPRにおける新たなisoform mRNAがコードするisoform受容体は、ホルモン結合領域は有するもののDNA結合領域を欠失するものと推定され、エストロゲンならびにプロゲステロンのnon-genomic作用との関連が注目されると同時に、正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌において何らかの生理的・病的機能を果たしている可能性がある。今後、これらのisoform mRNAならびにそれがコードするタンパクの正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌における発現機構について解析し、その生理的意義を明らかにする予定である。本年度の本研究の主目的は、ヒトのエストロゲン受容体β(ERβ)の遺伝子における多重第一エキソン機構が存在を解析することであった。子宮内膜より調製したtotal RNAを鋳型として、第二エキソン(開始コドンを含むエキソン)に設定したantisense primerを用いて5'-RACE法を施行し、得られたクローンの塩基配列を解析した。また、このクローンの新規配列部分の由来を、genomic cloningにより解析した。その結果、ヒト子宮内膜において、二種類の独立した単一の非翻訳第一エキソン、すなわちエキソン0Nならびにエキソン0K、に由来するmRNA isoformsの存在が明らかになった。これらのERβmRNA isoformsの子宮内膜、子宮筋層および肝臓における発現は相互に異なっていた。したがって、ヒトERβ遺伝子には、少なくとも二種類の5'-非翻訳第一エキソンが存在し、その組織特異的な発現調節に多重非翻訳第一エキソン機構が関与していることがはじめて明らかとなった。本研究では、今後、この成果に基づいて、子宮内膜癌の発癌に伴うERβの遺伝子発現の変化を中心に検討を開始する。本年度は、ヒト正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌におけるエストロゲン受容体を含む性ステロイドホルモン受容体cDNAのisoformに関する研究を展開することを主目的とした。その結果、エストロゲンにより誘導されるプロゲステロン受容体(PR)において、これまでに報告されていなかった新しいタイプのPR cDNA isoform(isoform S)を同定した。つづいて、このPR cDNA isoform Sは、これまで報告されていたPR遺伝子のエキソン4から8の上流に、新たなエキソン(エキソンS)がスプライスして合成されることを明らかにした。さらに、そのPR mRNA isoform Sの正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌における存在を確認し、報告した(裏面の雑誌論文1)。

このPR mRNA isoform Sは、これまでに判明していたプロモーターとは異なるプロモーターにより発現制御を受けており、子宮内膜の癌化に伴うPR mRNA isoform Sのプロモーター活性の変化に興味がもたれると同時に、PR mRNA isoform SがコードするPR isoform Sタンパクの子宮内膜癌の発癌ならびに進展との関連が注目される。次年度は、この点について研究を展開すると同時に、正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌においてエストロゲン受容体(ER)alphaならびにbetaの構造解析を行い、PR mRNAisoform Sと同様の遺伝子構造を持つER alphaならびにER beta cDNAのisoformの存在について検討する。本研究の主目的は、正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌におけるエストロゲン受容体(ER)αならびにβの遺伝子発現の多重プロモーターによる調節機構を明らかし、子宮内膜癌の発癌・進展にこれらの遺伝子発現調節機構が果たす生理的ならびに病的意義を明らかにし、さらに、プロモーター活性の抑制による子宮内膜癌の発癌・進展の阻止の可能性を追求することである。本研究は3年間の計画で遂行したが、当初の2年間の研究において、ERαの遺伝子調節機構を明らかにしただけでなく、ERと同様に子宮内膜癌の発癌・進展に関与していると考えられるプロゲステロン受容体(PR)にこれまで未報告のisoform cDNA(PR isoform S cDNA)を同定した。さらに、最終年の本年の研究においては、ヒトERαにこれまで未報告のisoform cDNA(ERαisoform S cDNA)を同定した。また、ヒトERβにもこれまで未報告のisoform cDNA(ERβisoform M cDNA)が存在することを明らかにした。さらに、ゲノム解析により、これらの新たなisoform mRNAsの新規配列部分はこれまでに報告されていなかったexon、すなわち、PR exon S、ERαexon S、ならびに、ERβexon Mに由来することを明らかにした。本研究の遂行により同定されたヒトERα、ERβならびにPRにおける新たなisoform mRNAの正常子宮内膜ならびに子宮内膜癌における発現機構についてさらに今後解析する予定である。
羊膜を基質として作製した犬角膜上皮細胞シートを用いた犬の角膜再生治療

犬の羊膜を基質として、犬角膜上皮シートの作製に成功した。さらに、基質にアテロコラーゲンゲルを用いることにより、犬羊膜基質よりも角膜上皮の未分化性がより維持された角膜上皮シート作製が可能であることを見出した。作製した犬角膜上皮シートを角膜上皮損傷モデルに移植したところ、移植により角膜混濁の縮小がみられ、病理組織学的には角膜上皮の主要な構成タンパクであるケラチン3や、未分化性の指標となるマーカーであるp63の発現が維持された、正常角膜上皮の再生が認められた。しかし、移植による角膜上皮の過形成を疑う所見が得られ、今後の臨床応用には、より長期的な移植の安全性・有効性を観察する必要があると考えられた。平成24年度はコラーゲンゲルおよび、温度応答性培養皿を用いた上での犬角膜上皮幹細胞シートの作製を試み、前年度に作製した犬羊膜上角膜上皮シートと形態学的・免疫組織学的に比較し、臨床応用に最適なシート作製法を検討した。まず、組織学的には、コラーゲンゲル上で作製した角膜上皮シートが犬羊膜上で作製した角膜上皮シートと比較し、より正常角膜に近い層構造を形成した。また、前年度にABCG2およびp63が犬角膜上皮幹細胞マーカー、あるいは犬角膜上皮の増殖能や分化の指標として有用であることを見出したことから、これらのマーカーを用いて免疫組織学的に評価したところ、コラーゲンゲル上角膜上皮シートの基底層でABCG2・p63発現が安定して認められた。医学領域ではp63を高発現する角膜上皮シートによる移植は良好な予後を期待できるとされていることから、現時点で最も有用性が高いものはコラーゲンゲル上角膜上皮シートであると判断し、平成24年度後半から角膜損傷モデルを用いた移植実験を行った。現在のところ、犬2頭を用いて移植実験を行ってるが、損傷部に適した厚みを持つコラーゲンゲル上角膜上皮シートの作製が必要とされ、現在はシートの厚みの調整を検討している。また、基質を用いずにシートを作製できる温度応答性皿を用いたシート作製は、臨床応用上もっとも簡便に移植ができると期待できることから、培養法を改良して作製方法の検討を継続している。具体的には、これまで3T3細胞をフィーダーとして作製を試みたが、フィーダーフリーでの作製や、犬骨髄間葉系幹細胞をフィーダーとして用いる培養法を試みた。結果、フィーダーフリーではシート状の培養に至らなかったが、間葉系幹細胞を低密度で播種した場合、コロニー形成が良好であった。昨年度までに犬羊膜に加え、アテロコラーゲンゲルおよび温度応答性培養皿を用いた犬角膜上皮シートの作製を試みた。本年度は各方法で作製したシートの性状比較を行い、アテロコラーゲンゲル上で作製した場合、最も高い効果が期待できる犬角膜上皮シートを作製できることを明らかにした。そこで本年度は犬角膜上皮損傷モデルを用い、アテロコラーゲンゲル上で作製した犬角膜上皮シート作製の安全性および有効性の検討を行った。結果、作製したシートは角膜損傷部に生着し、対照群と比較し角膜混濁の軽減がみられた。また、組織学的評価の結果、対照群は正常な上皮の再生が認められなかったのに対し、移植群ではケラチン3の発現、角膜上皮幹前駆細胞マーカーp63の発現の他、上皮の配列など、正常角膜と同様の特徴を示すまで修復が行われた。移植片による上皮の重層化亢進がみられたため、より長期的な観察が必要であると考えられたが、移植群では実質における組織修復も示唆され、角膜上皮シート移植により上皮のみならず角膜実質の修復にも貢献できる可能性が示された。さらに、より臨床応用への安全性を高めるため、フィーダー細胞として従来用いているマウス由来3T3線維芽細胞の代替として、犬骨髄間葉系幹細胞あるいは脂肪由来間葉系幹細胞を用いた角膜上皮シート作製を試みた。結果、犬角膜上皮シートはフィーダー細胞を用いずとも、移植可能なシートの作製が可能であり、さらに安全なシートの作製が可能であると考えられた。また、本実験を通し、犬輪部由来角膜上皮シートを繰り返し継代を行っており、現在80継代に達している。角膜上皮細胞の細胞株は他の動物種では報告されていないが、犬の口腔粘膜上皮で他の動物種と異なる増殖能力の維持が報告されており、角膜上皮細胞においても他の動物種にはない自己増殖能維持を示す結果ととらえており、今後より詳細な検討を加える予定である。

平成23年度は、犬角膜上皮幹細胞の性状解析(主に増殖能について)および犬羊膜上角膜上皮シートの作製を試みた。まず、RT-PCRおよび免疫染色により、犬角膜上皮におけるABCG2およびp63発現について調べたところ、ABCG2は角膜上皮幹細胞が存在するとされる輪部基底層に限局して見られた。一方、p63に関しては、角膜全層に発現していたが、輪部で発現が強い傾向がみられた。in vitroにおいて、輪部上皮の増殖能とこれらのマーカー発現を比較したところ、p63は犬角膜上皮の増殖能と相関していると考えられた。しかし、ABCG2においては、in vitroの発現が確認できず、培養環境下では発現を維持できないと考えられ、幹細胞の維持にはなんらかのフィーダー細胞等を用いる必要があると考えられた。犬羊膜上角膜上皮シートの作製においては、3T3細胞をフィーダーとして、羊膜上に輪部上皮細胞を播種し、air lift法を用いることで、正常犬角膜上皮に類似した羊膜を基質とする重層化上皮を得ることができた。免疫染色の結果、重層化上皮は角膜上皮マーカーであるK3を発現することから、犬角膜上皮細胞であることを確認した。さらに、シートに含まれる細胞は、p63を発現しており、基底層ではABCG2の発現も認められた。これらのことから、作製した羊膜上犬角膜上皮シートは増殖能をもつ角膜上皮で構成され、ABCG2陽性細胞を含むことから、犬角膜上皮幹細胞を含み、角膜再生に用いる移植材料として有用であることが示唆された。コラーゲンゲル上犬角膜上皮シートは安定して作製できており、移植実験も行うことができている点においては当所の計画通りである。しかし、移植実験においては、シートを安定して角膜損傷部に維持することができず、現在も縫合法やコンタクトレンズ、瞬膜フラップなど、いくつかの方法を検討中である。また、温度応答性培養皿を用いたシート作製ではフィーダー細胞上での培養は可能であったが、組織学的には正常角膜と類似したシートの作製には至っておらず、改良が必要であると考えている。まず、犬角膜上皮幹細胞マーカーの同定を行うことを目的に、犬正常角膜に手ABCG2おいおびp63の発現を調べたところ、ABCG2は輪部上皮基底層に限局し、p63は角膜全層において発現が見られた。このことから、ABCG2は角膜上皮幹細胞マーカーとして有用と考えられたが、in vitroにおいては発現を維持することが難しく、幹細胞特性とABCG2発現の直接的な関連を示すことはできなかった。一方、p63発現は、角膜上皮の増殖能と正の相関をもつことが示唆され、ある程度未分化で増殖脳の高い細胞、すなわち角膜上皮前駆細胞のマーカーであると考えられた。羊膜上犬角膜上皮シートの作製については当初の計画通り進展しており、さらに上記2つのマーカーの発現を見たところ、角膜上皮シートの基底層でABCG2が発現し、p63の発現もみられたことから、羊膜上犬角膜上皮シートは角膜上皮幹細胞を含む増殖能の高い細胞から構成されており、再生医療の材料として有望であると考えられた。当初の計画ではケラチンサブタイプの解析による犬角膜上皮分化マーカーを同定する予定であったが、人や実験動物で用いられているK3は未熟な角膜上皮細胞では発現が見られないため、これを分化マーカーとして用いている。同様にシートでの発現を調べたところ、特に基底部以外の細胞はK3を発現しており、正常角膜と同様に、シートは角膜上皮幹細胞、前駆細胞、分化した角膜上皮細胞で構成されていると考えられた。当初の計画では最終年度に臨床応用を遂行できる体制を実現する予定であったが、角膜損傷モデルでの移植実験において移植法を確立させることを第一に研究を推進する。具体的には、作製した角膜上皮シートを安定して損傷部位に生着させる方法として、1コンタクトレンズの併用
科学技術はいかなる条件下で「パワー」の生成につながるのか―意思決定プロセスの解明

科学技術はいかなる条件下で国際政治上の「パワー」の生成につながるのか。本研究では、デュアルユース技術の活用論が政策的に高まった1980年代以降の日米の事例分析を中心に、科学技術と実際に軍事力や経済力の形で表現されるパワーとの間にあるはずの、しかし分析上は捨象されがちであったプロセスを改めて開くことを目指す。このような作業を通じて、多くの研究でただちにパワーの構成要素とみなされがちな科学技術を国際政治上のパワー生成につなげる(または、そうしない)意思決定のメカニズムを解明し、さらに得られたモデルを多国間比較研究に展開するための理論的基盤の構築を目指す。
ナノテクノロジーを用いた新しい放射線治療の基礎的研究

本研究は従来のX線源(Thermionic emission type)とミニチュアX線源のもととなるField-emission typeとを用いX線を腫瘍細胞に照射し、照射後の腫瘍細胞の反応を分子生物学的に解析、比較検討しミニチュアX線源の抗腫瘍効果が従来のものと同等以上であることを証明することにより、ミニチュアX線源を使った新しい放射線治療(生体腔内照射など)の開発の意義を確立することを目的とする。当初、従来使われているX線照射装置(TE型)とミニチュアX線源を使って細胞の照射後の変化を調べる予定であったが、分子生物学的に解析をするにあたり試料となる細胞の量をある程度得るために、それなりの大きさのディッシュで照射をする必要があり、したがってミニチュアX線源ではなくある程度の大きさのX線源(もちろんFE型ではある)を使用する事になった。放医研から3SB細胞というマウスの胸線のリンパ腫の細胞を分譲して頂き、これで照射実験を開始した。1.FE型でもTE型同様照射後にDNAのDSBが生じることをH2AXのリン酸化で確認した。2.TUNEL染色による解析ではアポトーシスの定量は困難な点があったがTE型、FE型のいずれのX線管でもX線照射によってアポトーシスが誘導されて細胞が死に至る。両者に違いはみられなかった。3.フローサイトメトリーによる細胞周期の解析ではX線照射によって3SB細胞ではG1-arrestがおこらずG2/M-arrestが確認された。また細胞周期の進行はアポトーシスとあまり関係なかった。4.ウエスタンブロッティングによる蛋白の発現状況の解析ではP53,P21,Chk1,Chk2いずれも照射によって反応を示したが両者に違いはみられなかった。以上からFE型の生物学的効果はTE型と同等であることが分かった。本研究は従来のX線源(Thermionic emission type)とミニチュアX線源のもととなるField-emission typeとを用いX線を腫瘍細胞に照射し、照射後の腫瘍細胞の反応を分子生物学的に解析、比較検討しミニチュアX線源を使った新しい放射線治療(生体腔内照射など)の開発の意義を確立することを目的とする。当初、従来使われているX線照射装置(TE型)とミニチュアX線源(FE型)を使って培養腫瘍細胞の照射後の変化を調べる予定であったが、解析の都合上,ある程度の大きさのX線源(もちろんFE型ではある)を使用する事になった。装置も実験に必要な照射野が確保出来るように改造した。また、初めに骨肉腫細胞でTE型X線管を使って実験を開始したが骨肉腫自体もともとX線抵抗性であり、最初の実験としては不向きと思われた。その他の癌細胞をいくつか試してみたがアポトーシスを導くには高線量を要した。現段階ではFE型X線管はせいぜい50kvくらいの電圧でたとえば5Gy程度の低用量の照射にとどめており,ひとまずX線感受性が高い腫瘍細胞を使用することにした。最終的に放医研から3SB細胞というマウスの胸線由来のリンパ腫の細胞を分譲して頂き、これで照射実験を開始したところである。TUNEL染色による解析ではアポトーシスの定量は困難であるがTE型、FE型のいずれのX線管でもX線照射によってアポトーシスが誘導されて細胞が死に至る。1Gyくらいではあまり死なないが2-3Gyくらいからアポトーシスははっきりしてくる。今のところは両者に違いはみられていない。今後はフローサイトメトリーによる細胞周期の解析、ウエスタンブロッティングにて蛋白の発現状況の解析を行っていく予定である。
レセプターチャンネル間シグナル伝達のクロストーク

代謝型グルタミン酸、セロトニン2、TRH、ムスカリン3受容器応答はいずれもIP_3/Ca系という共通の2次メッセンジャー系を有するが、その詳細は必ずしも同一では無いこと、生体内ではこれらの情報はその入力順位が重要で、複数の情報入力に対して2次メッセンジャーレベルで情報の統合を行っていることが示唆された(赤池)。中枢神経細胞の興奮性は予想以上にグルコース代謝に依存し(赤須)、無酸素・無グルコース液中では5-6分で急峻な脱分極が生じる。これはNMDAとnon-NMDA受容器の活性と細胞内CaストアからのCa遊離により陽イオンの膜透過性が上昇することによる。また、低酸素により惹起される過分極はATP依存性Ca汲みだし機構の抑制により細胞内でのCa依存性Ca遊離が刺激され、カルモジュリンキナーゼIIとCキナーゼが活性化されるためと解った(東)。Ca依存性Ca遊離にはcyclicADP-riboseの合成が関与し、またミトコンドリアからのCa依存性Ca遊離機構が新たに発見された(久場)。細胞内Na濃度上昇が細胞内Ca濃度上昇を増強することも解った(反町)。シナプス前終末では上昇したCaと結合したカルモジュリンがミオシン軽鎖キナーゼを活性化して伝達物質の遊離に関与する(小林)。視床下部では体温調節中枢の温感受性ニューロンが高温域で内向き電流を惹起、それが“sleepy"チャネル様のNa電流であること、またPC-12細胞が温度感受性を持ち冷感受性ニューロンの特性解析のモデルになることも解った(清原)。そのほか神経系の初期発生過程(高橋)、膜電位依存性細胞内Ca遊離機構の獲得過程(井上)など進化・分化の側面、消化・吸収におけるイオンチャネルの役割(岡田、北里)、2次メッセンジャーによる軸索輸送の制御(竹中)、胃平滑筋の自動収縮の機構(富田)、血管平滑筋の内皮細胞依存性過分極(鈴木)、ヤリイカのClチャネル(山岸)、Naチャネル(瀬山、野間)、ギップ結合(外崎)についても検討し数々の新知見を得た。本研究初年度の目的は近年著しく進展したcDNAクローニング法、m-RNA注入法および種々の細胞内セカンドメッセンジャー解析法を用い、生体電気信号発生におけるレセプターチャネル間信号交換のクロストークについての、総合的解明の基礎を作る事であった。結果:プリン代謝物は神経のCa^<2+>チャネルのゲーティングを修飾しており(赤須)、ミトコンドリア内膜ではATPで制御されるK^+チャネルが存在する(井上)ことが判明した。ATPは、GABAa受容体のGABAとの結合親和性を修飾している(赤池)ことが発見され、プリン代謝物は、エネルギー供給面の他広く細胞内活性因子としてレセプターチャネル間シグナル伝達のクロストークに関与していることが明瞭になった。一方、上皮細胞には特殊なCl^-チャネル(岡田)、褐色脂肪細胞のミトコンドリアには特殊なH^+チャネル(北里)が、血管内皮にはヒスタミンで開く陽イオンチャネル(鈴木)があることが判明した。これらの特色を神経のCl^-チャネル(山岸)やNa^+チャネル(瀬山)心筋のCl^-チャネル(野間)との特性と比較検討したところ、代謝状態や細胞内因子への依存性、及びイオン透過過程に大きな差異があり、それぞれの組織における細胞内クロストークの多様性とその機能が明瞭になった。中枢及び末梢ニューロンでは、温度感覚性(清原)やムスカリン受容体性応答(赤池、小林)の分子機構が解明された。クロストークを支える細胞内装置としてCa^<++>ストアサイト(久場、反町、富田)やギャップ結合(外崎)の解析が進み、軸索輸送の制御因子(竹中)も明らかになった。これらのレセプターチャネルの一次構造を検討するため遺伝子工学の手法が導入された(高橋、東)。本研究は平成4年度11月に採択されスタートしたが、現在数々の新しい知見が得られており、その結果は既に各種ジャーナルに投稿中である。

視床下部では体温調節中枢の温感受性ニューロンが高温域で内向き電流を惹起、それが“sleepy"チャネル様のNa電流であること、またPC-12細胞が温度感受性を持ち冷感受性ニューロンの特性解析のモデルになることも解った(清原)。そのほか神経系の初期発生過程(高橋)、膜電位依存性細胞内Ca遊離機構の獲得過程(井上)など進化・分化の側面、消化・吸収におけるイオンチャネルの役割(岡田、北里)、2次メッセンジャーによる軸索輸送の制御(竹中)、胃平滑筋の自動収縮の機構(富田)、血管平滑筋の内皮細胞依存性過分極(鈴木)、ヤリイカのClチャネル(山岸)、Naチャネル(瀬山、野間)、ギップ結合(外崎)についても検討し数々の新知見を得た。今年度はまず平成4年度に得られた細胞内および細胞外の各種入力信号に応答するイオンチャンネルの分類と生理的役割の検討を以下のごとく行った。自律神経節細胞のMチャンネル(赤須、小林)、中枢神経細胞のイオノトロピックおよびメタボトロピック受容体刺激の電気的膜特性とそれに関連する細胞内2次メッセンジャー系の同定ならびに各受容器間の相互作用(赤池)、電位依存性Naチャンネル解放物質の構造特性(瀬山)、血管内皮細胞の内因性Kチャンネル活性化物質の生理的役割(鈴木)、平滑筋(富田)及び心筋(野間)細胞のイオン電流に対する物理的修飾機構、体温調節中枢の温度感受性ニューロン(清原)、小腸上皮細胞のメカノトランスダクションチャンネル(岡田)、イカ巨大神経軸索のClチャンネル(山岸)の電気生理学的分類と細胞内制御機構の同定、ミトコンドリア膜電位勾配の制御機構(北里)、細胞内Caシグナルのモニタリングとその放出・流入制御機構(井上,九場、反町)、神経分化の細胞内制御(高橋)、ギャップ結合の形成過程(外崎)、レセプターを介する軸索輸送の制御(竹中)。研究計画ではその上でさらに2次メッセンジャーを介したチャンネル・チャンネル間共同現象の発現メカニズムを解明することにしていたが、結果は必ずしも十分ではなかった。その原因は電気生理学的測定法の難しさにあると言って良い。たとえばイオンチャンネルの開閉を視覚的に正確に記録するためにはパッチクランプ法が不可欠であるが、それでは細胞内の2次メッセンジャー系は破壊されてしまう。ニスタチンはその有効な手助けとなるが、イオンチャネル開閉の解析はノイズ解析を用いざるを得なくなる。本研究の研究分担者はそれぞれの分野で日本を代表する専門家であり、今後ともさらに密に連絡を取り合い、問題点の克服と技術の普及に努める必要がある。
血管内皮イオンチャネル構成因子としてのTRPの分子薬理学的解析

TRPチャネルファミリーであり,store-operated channel (SOC;細胞内カルシウムストア枯渇時に細胞外液からカルシウムを流入させる経路)を構成するTRPC1が心肥大ラットモデルにおいて遺伝子発現が増加していること,さらにTRPC1発現をsiRNAにより抑制することで,心肥大発現を抑えることを示した(Ohba et al., J.M.C.C.,2007).TRPC1がNRSFにより発現調節されていること,さらにトランスジエニックマウスを用いて心肥大に関与することを報告した(Ohba et al., B.B.R.C.,2006).電位依存性カルシウムチャネルβ3サブユニットが,交感神経による心拍制御機構にかかわっていることを示した(Wu et al., Pharmacology,76, 170-179.2006).交感神経系の制御機構に異常を持つN型カルシウムチャネル欠損マウスの解析を通し,同欠損マウスにおける交感神経制御がR型カルシウムチャネルにより行われていることを,心超音波,ランゲンドルフ心,テレメトリー心電図等による解析により明らかにした(Murakami, et. al., B.B.R.C., 2007).循環器系における主要な電位カルシウムチャネルを構成するCaV1.2の心筋タイプ(CaV1.2a)および平滑筋タイプ(CaV1.2bおよびd)のcDNAを単離した.さらに心筋タイプがβ2サブユニットと選択的に結合することを見出した(Murakami et al., J.M.C.C. 2006).心筋においてはCaV1.2aとβ2がより選択的に結合することが,生理的に見られる,比較的長時間のカルシウム流入に寄与していると,考えられる.TRPチャネルファミリーであり,store-operated channel (SOC;細胞内カルシウムストア枯渇時に細胞外液からカルシウムを流入させる経路)を構成するTRPC1が心肥大ラットモデルにおいて遺伝子発現が増加していること,さらにTRPC1発現をsiRNAにより抑制することで,心肥大発現を抑えることを示した(Ohba et al., J.M.C.C.,2007).TRPC1がNRSFにより発現調節されていること,さらにトランスジエニックマウスを用いて心肥大に関与することを報告した(Ohba et al., B.B.R.C.,2006).電位依存性カルシウムチャネルβ3サブユニットが,交感神経による心拍制御機構にかかわっていることを示した(Wu et al., Pharmacology,76, 170-179.2006).交感神経系の制御機構に異常を持つN型カルシウムチャネル欠損マウスの解析を通し,同欠損マウスにおける交感神経制御がR型カルシウムチャネルにより行われていることを,心超音波,ランゲンドルフ心,テレメトリー心電図等による解析により明らかにした(Murakami, et. al., B.B.R.C., 2007).循環器系における主要な電位カルシウムチャネルを構成するCaV1.2の心筋タイプ(CaV1.2a)および平滑筋タイプ(CaV1.2bおよびd)のcDNAを単離した.さらに心筋タイプがβ2サブユニットと選択的に結合することを見出した(Murakami et al., J.M.C.C. 2006).心筋においてはCaV1.2aとβ2がより選択的に結合することが,生理的に見られる,比較的長時間のカルシウム流入に寄与していると,考えられる.TRPチャネルファミリーであり,store-operated channel(SOC;細胞内カルシウムストア枯渇時に細胞外液からカルシウムを流入させる経路)を構成するTRPC1が心肥大ラットモデルにおいて遺伝子発現が増加していること,さらにTRPC1発現をsiRNAにより抑制することで,心肥大発現を抑えることを示した(Ohba et al.,J.M.C.C.,2006).TRPC1がNRSFにより発現調節されていること,さらにトランスジェニックマウスを用いて心肥大に関与することを報告した(Ohba et al.,B.B.R.C.,2006).電位依存性カルシウムチャネルβ3サブユニットが,交感神経による心拍制御機構にかかわっていることを示した(Wu et al.,Pharmacology,76,170-179.2006).交感神経系の制御機構に異常を持つN型カルシウムチャネル欠損マウスの解析を通し,同欠損マウスにおける交感神経制御がR型カルシウムチャネルにより行われていることを,心超音波,ランゲンドルフ心,テレメトリー心電図等による解析により明らかにした(Murakami et al.,B.B.R.C.,in press).循環器系における主要な電位カルシウムチャネルを構成するCaV1.2の心筋タイプ(CaV1.2a),および平滑筋タイプ(CaV1.2bおよびd)のcDNAを単離した.さらに心筋タイプがβ2サブユニットと選択的に結合することを見出した(Murakami et al.,J.M.C.C.2006).心筋においてはCaV1.2aとβ2がより選択的に結合することが,生理的に見られる,比較的長時間のカルシウム流入に寄与していると,考えられる.交感神経系の制御機構に異常を持つN型カルシウムチャネル欠損マウスの解析を通し,同欠損マウスにおける交感神経制御がR型カルシウムチャネルにより行われていることを,心超音波,ランゲンドルフ心,テレメトリー心電図等による解析により明らかにした(Murakami, et. al., B.B.R.C., 2007).電位依存性カルシウムチャネルのβ3
ラット大脳皮質におけるアロマターゼmRNAの構造解析

本研究では、ラットの脳におけるアロマターゼの部位特異的発現調節機構を明らかにするそのためにラット大脳皮質におけるアロマターゼcDNAの構造解析を行った。この結果、これまでに報告されていない新しいタイプの選択的splicingが存在していること、この結果、wild typeアロマターゼをコードしていないアロマターゼmRNA variantが転写されていること、さらに、このアロマターゼmRNA variantは大脳皮質のみならず、脳内各部位に広汎に存在していることを明らかにした。これらの成績から、このアロマターゼmRNA variantがアロマターゼの部位特異的発現調節機構に重要な役割を果たしている可能性が強いことが明らかになった。このアロマターゼmRNA variantの生理的機能の詳細については今後の研究課題として残されているが、このようなタイプの遺伝子発現の部位特異的発現調節機構の報告は他の遺伝子にはいてはほとんどみられておらず、極めて興味深い成績である。なお、この研究成果については、J.Steroid Biochem.Molec.Biol.誌にすでにacceptされている。
心臓移植待機患者を支える医療者の実践の様相に関する研究

心臓移植が適応となった患者は、移植という新たな生と、待機中の合併症や心臓機能の悪化によっていつかは訪れるかもしれない死との間で待機している。このような過酷な状況下にある心臓移植を待機する患者を支えるためには、看護師個々での対応では限界があり、愚者に関わる医療者のチームアプローチが必要となってくる。本研究は、心臓移植待機患者を支えている医療者達が、アンビバレントな苦悩を抱えながら心臓移植を待機している患者の「病い」を、どのように認識し向き合っているのか、また患者の「病い」に対する認識が医療者達の実践をどのように形作っているのかを明らかにすることを目的に実施している。平成21年度は、(1)研究テーマに応じ左文献検索と研究方法論の検討と(2)米国の心臓移植実施施設における心臓移植医療チームの体制や活動の実態を知り、わが国の現状と比較検討するために研修を実施した。米国の研修はテキサス州ベイラー医科大学付属セント・ルーク病院にて実施した。米国は移植医療先進国であり、当該施設でも、一般的な医療として移植医療システムが確立していた。当該施設では、心臓移植患者の外来患者と入院患者各々に2名、計4名のCTCが活動していた。週に1回行われるカンファレンスで施設内での待機リストの更新が行われ、移植待機者の情報把握を徹底していた。CTCの活動は、移植前中後のスケジュールに沿って患者教育(免疫抑制剤等の内服薬について、術後の受診や検査予定、食事、運動、生活上の留意点等)を実施し、検査のオーダーと実施状況、結果の確認等を行っていた。また「移植者の精神的ケアについて、当該施設では移植待機中よりも、移植後に心理状態が不安定になることを問題視しており、移植を受けた患者達のボランティアや専門象等で構成されたサポートチームが、週1回入院患者の元へ赴き、患者の相談に対応したり、心理的サポートを行っていた。また、当該施設の心不全病棟では、医師、看護師、ソーシャルワーカー、チャプレン等で構成されたパリアティブケアサポートチームがあり、心臓移植を断念せざるを得ない患者のサポートや、移植待機者、移植者、ドナーファミリー等の精神的サポートを行っていた。