hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
気管支平滑筋における静脈麻酔薬のインフラマソーム抑制作用

気管支喘息や慢性閉塞性肺疾患などの呼吸器疾患の既往を持った患者の周術期呼吸管理を行うにあたり,それらの患者に対する静脈麻酔薬の影響を検討することは,静脈麻酔薬の適正かつ有効な使用に貢献するものと思われる.本研究では,歯科領域で汎用されている静脈麻酔薬プロポフォールの抗炎症・免疫作用および抗アポトーシス作用のメカニズムについて解明するため,ヒト気管支平滑筋細胞および肺胞上皮細胞由来培養細胞を用いてAkt/GSK-3β/P21Waf1/Cip1 pathwayに対するプロポフォールの影響について検討した.Hydrogen peroxideのアポトーシス誘導に対するプロポフォールの影響を検討したところ,Hydrogen peroxideでクロマチン凝集を起こしたアポトーシス細胞の割合がプロポフォールによって減少した.また,プロポフォールはHydrogen peroxideによって誘導されたAkt (Ser473)のリン酸化とP21Waf1/Cip1の発現を抑制する一方で,GSK-3β(Ser9)のリン酸化を促進した.AktはGSK-3βに対して抑制的に作用し,さらにGSK-3βはCDK阻害因子であるP21Waf1/Cip1に対して抑制的に作用することから,プロポフォールはGSK-3βのリン酸化を促進することによって細胞周期を進行させ,その結果として抗アポトーシス作用を現す可能性が示唆された.さらに,プロポフォールはHydrogen peroxideによるBcl-2やBcl-xLの発現抑制に対して拮抗的に作用することから,NLRP1インフラマソームに対して抑制的に作用する可能性が示唆された.本年度はプロポフォールが肺由来上皮細胞においてMAP Kinase(p90RSK,Erk1/2,p38 MAPKなど)のリン酸化に抑制的に働くことによって抗炎症作用を示すことが示唆されたことから,おおむね順調に進展している。本年度はプロポフォールがヒト肺由来上皮細胞と線維芽細胞,いずれにおいてもATF-2のリン酸化を抑制することによって抗炎症・抗アポトーシス作用を示すことが示唆された。今後,上皮細胞と線維芽細胞のインターラクションについて検討する上で,本知見は重要なものであり,一定の成果を上げられたと思われる。したがって,おおむね順調に進展していると考えられる。プロポフォールは,作用時間が短く,投与後の蓄積効果が少ないことから,歯科領域でも広く使われている静脈麻酔薬である.近年,プロポフォールの抗炎症・免疫作用や抗アポトーシス作用が注目されており,それらの作用が急性肺傷害患者の予後を改善する可能性が示唆されている.しかしながら,その作用機序に関しては不明な点が多い.我々はこれまでに肺由来培養上皮細胞を用いてプロポフォールの抗アポトーシス作用について検討してきた.肺由来培養上皮細胞において,プロポフォールがSAPK/JNKとc-Jun(Ser73)のリン酸化を介してBcl-2 family memberの発現を調節することによって抗アポトーシス作用を示すことを報告している.一方,AktはサイクリンやCDK阻害因子に作用し細胞周期を調節すると共に,アポトーシス関連因子に作用し細胞の生存を媒介する主要なメディエーターであることが知られている.本研究ではAktシグナル伝達経路におけるプロポフォールの影響について検討した.Hydrogen peroxideは肺胞上皮細胞においてSub-G1相への細胞移行を促進したが,プロポフォールはHydrogen peroxideによるSub-G1相への細胞移行を抑制した。プロポフォールはHydrogen peroxideによって誘導されたAkt (Ser473)のリン酸化を抑制する一方で,GSK-3β(Ser9)のリン酸化を促進した.AktはGSK-3βに対して抑制的に作用し,さらにGSK-3βはCDK阻害因子に対して抑制的に作用する.したがって,プロポフォールはGSK-3βのリン酸化を促進することによって細胞周期を進行させ,その結果として抗アポトーシス作用を現す可能性が示唆された.本年度の結果として,プロポフォールはHydrogen peroxideによって誘導されたAkt (Ser473)のリン酸化を抑制する一方で,GSK-3β(Ser9)のリン酸化を促進したことから,プロポフォールはGSK-3βのリン酸化を促進することによって細胞周期を進行させ,その結果として抗アポトーシス作用を現す可能性が示唆された.今後,プロポフォールの抗アポトーシス作用の機序を検討する上で,本知見は重要なものであり,一定の成果を上げられたと思われる.したがって,おおむね順調に進展していると考えられる.気管支喘息や慢性閉塞性肺疾患などの呼吸器疾患の既往を持った患者の周術期呼吸管理を行うにあたり,それらの患者に対する静脈麻酔薬の影響を検討することは,静脈麻酔薬の適正かつ有効な使用に貢献するものと思われる.本研究では,歯科領域で汎用されている静脈麻酔薬プロポフォールの抗炎症・免疫作用および抗アポトーシス作用のメカニズムについて解明するため,ヒト気管支平滑筋細胞および肺胞上皮細胞由来培養細胞を用いてAkt/GSK-3β/P21Waf1/Cip1 pathwayに対するプロポフォールの影響について検討した.Hydrogen peroxideのアポトーシス誘導に対するプロポフォールの影響を検討したところ,Hydrogen peroxideでクロマチン凝集を起こしたアポトーシス細胞の割合がプロポフォールによって減少した.また,プロポフォールはHydrogen peroxideによって誘導されたAkt (Ser473)のリン酸化とP21Waf1/Cip1の発現を抑制する一方で,GSK-3β(Ser9)のリン酸化を促進した.AktはGSK-3βに対して抑制的に作用し,さらにGSK-3βはCDK阻害因子であるP21

Waf1/Cip1に対して抑制的に作用することから,プロポフォールはGSK-3βのリン酸化を促進することによって細胞周期を進行させ,その結果として抗アポトーシス作用を現す可能性が示唆された.さらに,プロポフォールはHydrogen peroxideによるBcl-2やBcl-xLの発現抑制に対して拮抗的に作用することから,NLRP1インフラマソームに対して抑制的に作用する可能性が示唆された.肺,気管または気管支平滑筋由来細胞を用いて,LPS,H2O2およびIL-1によって誘導されるBcl-2 family member,NF-κB,AP-1,NLRP3およびpro-IL-1に対するプロポフォールの影響について検討する。さらに,その下流にあるcaspase-1の発現と活性について検討することによって,静脈麻酔薬の抗炎症・免疫作用のメカニズムを探る。肺,気管または気管支平滑筋由来細胞を用いて,LPS,H2O2およびIL-1によって誘導されるインフラマソーム(NLRP1,NLRP3,pro-IL-1)に対するプロポフォールの影響について検討する。肺,気管または気管支平滑筋由来細胞を用いて,Lipopolysaccharide,Hydrogen peroxideおよびInterleukin-1(IL-1)によって誘導されるインフラマソーム(NLRP1,NLRP3,pro-IL-1)および細胞周期制御因子(P21 Waf1/Cip1,P27 Kip,cyclin D)やアポトーシス関連因子(Bcl-2 family member)に対するプロポフォールの影響について検討する.さらに,その下流にあるCaspase-1の発現と活性について検討することによって,静脈麻酔薬の抗炎症・免疫作用のメカニズムを探る.本年度に購入を予定していた気管平滑筋由来細胞の入手に時間がかかったため,当該予算を翌年度分に変更した。本年度の研究成果より,プロポフォールの細胞周期制御因子に対する影響が示唆されたため,より詳細な検討が必要となった.研究結果を精査し,さらに,炎症性因子によるNLRファミリー発現に対するプロポフォールの影響を確認するために,蛋白の発現とリン酸化に関する追加実験の必要があり,補助期間延長申請をし承認されている.したがって,次年度の研究に使用するために繰り越した.また、研究成果を学会発表すると共に論文投稿を行う予定である.昨年度予定していた気管平滑筋由来細胞と培養液の購入代に当てる。その細胞を用いて炎症性因子による蛋白発現とリン酸化における静脈麻酔薬の抑制作用について検討する。本年度予定していたHuman Inflammasomes RT Profiler PCR Arrayの購入代に当てる。
自主訓練を支える全方向移動型歩行訓練機の制御法

自主訓練、即ち能動的なリハビリテーションは、介護予防において非常に有効である。本研究は、高齢者が一人で自主訓練することを支える安全性・操作性の高い知能ロボットの開発を目的としている。自主訓練中の安全性を確保するため、歩行訓練機が傾いている状態の三次元モデルを導出した。歩行訓練機を三次元空間にある剛体として、自転運動だけではなく転倒する可能性もあるため、三次元空間における歩行訓練機の転倒問題を倒立振子として抽象し、歩行訓練機の三次元転倒モデルを構築し、転倒条件を示した。また、利用者の意図にしたがう自主訓練を実現する、利用者の前腕荷重と行きたい方向との関連性を計測した。この関連性に基づいて、前腕荷重より方向意図を推定するアルゴリズムを開発した。平成25年度は、自主訓練中の安全性を確保するため、歩行訓練機が傾いている状態の動力学モデルを構築した。この動力学モデルに基づく適切な制御法を開発すれば、自主訓練中の転倒を防ぐことができるようになる。また、自主訓練中の利用者の方向意図を能動的に理解するために、利用者の前腕荷重と方向意図との関連性を計測した。この関連性に基づいて、前腕荷重より方向意図を推定できることが示された。産前産後の休暇又は育児休業による中断産前産後の休暇又は育児休業の開始年月日及び終了予定年月日:平成25年12月1日平成27年1月23日研究再開予定年月日:平成28年1月1日自主訓練、即ち能動的なリハビリテーションは、介護予防において非常に有効である。休業前に,計画した項目を順調に進んだので,再開後も残りの課題を解決できると予想しているので,「おおむね順調に進展している」とした.研究再開後,計画通りに実施する.交付申請書にある平成25年度の研究計画では、1歩行訓練機が傾いている状態の3次元動力学モデルの構築、2転倒防止のための制御法の開発、3前腕荷重と方向意図との相関の計測を実施する予定であった。課題1と3は計画通りに完成し、想定の結果が得られました。課題2は、育児休暇中に文献を調査し、研究を再開するまでに適切な制御法を考案する予定である。平成26年度は、育児休暇で研究を中断している。
歯肉粘膜感染におけるT細胞活性化における上皮系サイトカインの役割の検討

上皮系サイトカインであるinterleukin-15(IL-15)は上皮細胞やマクロファージから産生され,NK細胞,γδT細胞の増殖,活性化因子として働くことが知られている.また,IL-15は慢性関節リウマチへの関与や,抗腫瘍効果など,様々な面で注目されている.これまで我々は,感染防御の第一線を担うγδT細胞の増殖活性化に上皮系のサイトカインであるIL-15が重要な役割を果たすことを解明した.さらに,Listeria monocytogenes経口感染モデルマウスの腸管上皮間リンパ球(i-IEL)の活性化における上皮系サイトカインの関与を検討し,感染後早期に腸管上皮(i-EC)からIL-15の産生がみられたのと一致して,i-IELのinterferon-γ(IFN-γ)産生が増加していることを見いだした.これより,IL-15がL.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化に関与する可能性が示唆された.局所におけるIL-15などの上皮系サイトカインの発現,産生能,リンパ系細胞の活性化を調べることは,上皮細胞とγδT細胞をはじめとするT細胞などの細胞間における相互作用の解明において重要であると考えられ,本研究では,歯肉上皮と歯肉単核球のインターラクションを解明する基礎的研究として,ヒト咽頭上皮細胞株であるKB細胞を用いて,LPSによるIL-15をはじめとする上皮系サイトカインの発現と,T細胞の活性化を検討し,歯周疾患における初期感染防御機構を解析することを目的とする.本実験の結果,リコンビナントIFN-γ処理したKB細胞において,LPSによるIL-15発現は亢進していた.また、その培養上清によってT細胞の増殖活性も亢進していた.これらのことより,LPS刺激により活性化したKB細胞から産生されたIL-15がT細胞活性化に関与する可能性が示唆された.上皮系サイトカインであるinterleukin-15(IL-15)は上皮細胞やマクロファージから産生され,NK細胞,γδT細胞の増殖,活性化因子として働くことが知られている.また,IL-15は慢性関節リウマチへの関与や,抗腫瘍効果など,様々な面で注目されている.これまで我々は,感染防御の第一線を担うγδT細胞の増殖活性化に上皮系のサイトカインであるIL-15が重要な役割を果たすことを解明した.さらに,Listeria monocytogenes経口感染モデルマウスの腸管上皮間リンパ球(i-IEL)の活性化における上皮系サイトカインの関与を検討し,感染後早期に腸管上皮(i-EC)からIL-15の産生がみられたのと一致して,i-IELのinterferon-γ(IFN-γ)産生が増加していることを見いだした.これより,IL-15がL.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化に関与する可能性が示唆された.局所におけるIL-15などの上皮系サイトカインの発現,産生能,リンパ系細胞の活性化を調べることは,上皮細胞とγδT細胞をはじめとするT細胞などの細胞間における相互作用の解明において重要であると考えられ,本研究では,歯肉上皮と歯肉単核球のインターラクションを解明する基礎的研究として,ヒト咽頭上皮細胞株であるKB細胞を用いて,LPSによるIL-15をはじめとする上皮系サイトカインの発現と,T細胞の活性化を検討し,歯周疾患における初期感染防御機構を解析することを目的とする.本実験の結果,リコンビナントIFN-γ処理したKB細胞において,LPSによるIL-15発現は亢進していた.また、その培養上清によってT細胞の増殖活性も亢進していた.これらのことより,LPS刺激により活性化したKB細胞から産生されたIL-15がT細胞活性化に関与する可能性が示唆された.これまで我々は,感染防御の第一線を担うγδT細胞の増殖活性化に上皮系のサイトカインであるinterleukin15(IL-15)が重要な役割を果たすことを解明した.さらに,Listeria monocytogenes経口感染モデルマウスの腸管上皮間リンパ球(i-IEL)の活性化における上皮糸サイトカインの関与を検討し,感染後早期に腸管上皮(i-EC)からIL-15の産生がみられたのと一致して,i-IELのinterferon-γ(IFN-γ)産生が増加していることを見いだした.これより,IL-15がL.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化に関与する可能性が示唆された.また,平成12年度には,IL-15トランスジェニックマウスを使用し、L.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化におけるIL-15の関与を明確にすべく,種々の実験を行なってきた.この結果,IL-15トランスジェニックマウスでは対照群に比べL.monocytogenes抵抗性が強い傾向が見られた.またi-IELにおいては感染後のIFN-γ遺伝子発現には差が見られなかったものの,transforming growthfactor-βの遺伝子発現に差が認められた.今後さらなる検討を加えIL-15の感染防御機構への関わりを解明していく予定である.このように我々は,L.monocytogenes経口感染によるゲノム機能の一過性変化を,マウスを用いて検討してきた.

そこで本研究では,ヒトの粘膜感染病巣局所においてこのようなゲノム機能の変化がみられるのかを検索するため,歯周病患者及び臨床的に歯周組織の健康な人の歯肉組織を用い,上皮系サイトカインの関与をPCR法応用の新定量システム等を用い検討を行い,歯周病病態の解明に寄与するとともに,ゲノム機能の一過性変化による生体防御機構の1部を解明していく予定である.現在までに我々は、歯周病患者において歯肉組織中のIL-15は健常者に比べ多く産生されていることを示唆する結果をえている。これまで我々は,感染防御の第一線を担うγδT細胞の増殖活性化に上皮系のサイトカインであるinterleukin 15(IL-15)が重要な役割を果たすことを解明した.さらに,Listeria monocytogenes経口感染モデルマウスの腸管上皮間リンパ球(i-IEL)の活性化における上皮系サイトカインの関与を検討し,感染後早期に腸管上皮(i-EC)からIL-15の産生がみられたのと一致して,i-IELのinterferon-γ(IFN-γ)産生が増加していることを見いだした.これより,IL-15がL.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化に関与する可能性が示唆された.また,平成12年度には,IL-15トランスジェニックマウスを使用し、L.monocytogenes経口感染においてi-IELの活性化におけるIL-15の関与を明確にすべく,種々の実験を行なってきた.この結果,IL-15トランスジェニックマウスでは対照群に比べL.monocytogenes抵抗性が強い傾向が見られた.またi-IELにおいては感染後のIFN-γ遺伝子発現には差が見られなかったものの,transforming growthfactor-βの遺伝子発現に差が認められた.今後さらなる検討を加えIL-15の感染防御機構への関わりを解明していく予定である.このように我々は,L.monocytogenes経口感染によるゲノム機能の一過性変化を,マウスを用いて検討してきた.そこで本研究では,ヒトの粘膜感染病巣局所においてこのようなゲノム機能の変化がみられるのかを検索するため,歯周病患者及び臨床的に歯周組織の健康な人の歯肉組織を用い,上皮系サイトカインの関与をPCR法応用の新定量システム等を用い検討を行い,歯周病病態の解明に寄与するとともに,ゲノム機能の一過性変化による生体防御機構の1部を解明していく予定である.現在までに我々は、歯周病患者において歯肉組織中のIL-15は健常者に比べ多く産生されていることを示唆する結果をえている。また、KB細胞あるいはヒト歯肉上皮細胞を用いてin vitroにおけるIL-15によるTLRの発現の変化を調べ、自然免疫における生体防御機能へのIL-15の関与を明らかにする予定である。上皮系サイトカインであるinterleukin-15(IL-15)は上皮細胞やマクロファージから産生され,NK細胞,γδT細胞の増殖,活性化因子として働くことが知られている.また,IL-15は慢性関節リウマチへの関与や,抗腫瘍効果など,様々な面で注目されている.これまで我々は,感染防御の第一線を担うγδT細胞の増殖活性化に上皮系のサイトカインであるIL-15が重要な役割を果たすことを解明した.さらに,Listeria monocytogenes
固・液電極界面における電気化学反応機構解明の基礎研究

電気化学反応中の固・液界面を中性子反射率測定により観測する技術を開発した。界面の構造を明らかにするために、in situ測定用の電気化学反応に対応した中性子反射率電気化学セルを設計した。そのセルを用いて、実際の電極試料を用いて界面の構造変化を観測した。その結果、電気化学反応に対応した変化が反射率プロファイルに現れ、電極内部のリチウム量の変化であると結論できる結果が得られた。本研究はエレクトロケミカルデバイスにおけるイオン導電体と電解質等の異なる物質で発生する界面を介して物質が移動する。これまで理論的には電気二重相モデルにて理解されてきた。本研究では実際のイオン移動や電荷交換などの電気化学反応を理解することを目的としている。本年度はモデル電極の作成と界面状態観察・分析手法用のその場観察用中性子反射率用電気化学セルの開発を行った。20x20mmのSTO(SrTiO_3)基板に対して、PLD方により電極材料をエピタキシャル成長させた薄膜を均一に成膜する条件を探索しだ。その結果、結晶方位を制御することに成功した。X線反射率測定のout plane, in plane測定によりエピタキシャル膜であることを確認し、条件により結晶方位、膜厚が制御できることを見出した。さらに中性子反射率用電気化学セルを開発した。ダイフロンと呼ばれるテフロンよりも透明度が高く硬く、加工性に優れながら、中性子散乱の妨げとなる軽水素を含まない材料を用いた。基本となる電気化学測定を試験したところ、基本的な電気化学反応応答が観測され、一般的なセルと同様の電気化学特性を得られることを確認した。また、中性子線を用いたテスト測定を実施した。その結果、セルの形状を微調整することが望ましいことが判明した。来年度、この加工を行う。概ね、本年度の期間で、モデル電極と中性子反射率測定用セルの両方の開発を行うことができ、来年度、その場観察が可能な環境を整えることができた。エレクトロケミカルデバイスでは、電極と電解質のような異なる物質で発生する界面を介して物質が移動することになる。その界面での現象は、理論的には研究されているが直接観測した研究は少ない。本研究では、リチウム二次電池でボトルネックとなっているヘテロ界面を想定して、界面での物質移動現象を解明することを目的にしている。その手法として、界面の構造情報が得られる反射率測定技術を採用した。その光源として軽元素の構造情報が得られ、物質透過性が高く、その場(in situ)測定に適した中性子線を利用することで、動作中のLiイオンが関係する現象を観測できると考えられる。本研究は、その基礎研究として測定セル開発とその実証実験を行うことである。本年度はJ-PARCおよびSNS(米国)において、昨年度試作した測定セルを用いた実証実験を行った。SrTiO3(STO)基板上にLi4Ti5O12(LTO)のエピタキシャル膜を製膜した。さらに表面にはLi3PO4(LPO)でコートした。この膜を正極とし、Li金属を負極にしたモデル電極を制作した。電解液にはエチレンカーボネート(EC)とポリエチレンカーボネート(pc)を1:1に混合し、電解質としてLiClO4を1mol/lを溶かした。この測定セルを利用して、正極電解液界面をq=0.070.15Å-1で反射率測定を行った。その結果、電気化学反応過程に伴う構造変化が得られた。LTO、LPOの膜厚および密度を見積もりことができ、現在、X線反射率測定も実施し、その変化と対応させた解析を実施ている。この結果から、このセルを用いることで、界面の変化が観測できることを実証できた。今後、様々な物質を測定し、構造変化と物質移動の関係を明らかにできることを期待できる。
日本のスポーツ応援文化の研究-プロ野球私設応援団を対象にして

1.私設応援団の参与観察:全国広島東洋カープ私設応援団連盟の関西支部に所属する私設応援団「神戸中央会」の参与観察を実施し、ビジターチームの私設応援団の文化を記述することを試みた。神戸中央会の会員の獲得は、集合的な応援行動という規格化され、他者に容易に転換できる二次的関係に基づく大衆行動がきっかけとなっていた。しかし、彼らの集団的応援行動は、単なる大衆行動ではなく、人々をある独自の意味を持つ世界に没入させる世俗的な儀礼の特徴を有しており、私設応援団のコミュニティを維持する文化的な仕掛けとなっていた。また、この応援団が所属する関西支部や近畿カープ後援会(会員数:約500名)は、大阪に住む広島県出身者の集合的アイデンティティ形成に関与していることが分かった。これらの結果は、2000年3月31日4月1日に米国エール大学で開催される国際会議"Sports and Body Culture on Modern Japan"において"The Ethnography of Baseball Fan Clubs"として発表される。2.質問紙調査法による観客調査:1999年6月26日に、グリーンスタジアム神戸で、当日オリックスのホームゲームを見に来ている観客を母集団とするアンケート調査を実施した。サンプリングは層化二段(性・年齢)無作為抽出法を用い、調査対象を自記式調査が可能な男女1,200人とした。回収した有効な質問票は、1,153票であり、有効回収率は96.1%であった。私設応援団員とその他の観客とを比較したところ、応援団員はチームへのロイヤルティが高く、自覚的ファン度の高い人ほど、今季の主催ゲームの相手チーム本拠地開催に対して否定的な回答が多く、今後のフランチャイズ制のあり方が問われるところである。なお、本研究結果の一部は、社団法人関西経済連合会編集の季刊誌(1999年、第59号、29頁)に掲載された。日本のプロ野球の私設応援団の下位文化を明らかにすることを研究目的とし、以下の調査を実施した。1.質問紙調査法による観客調査:1998年7月4日に、グリーンスタジアム神戸で、当日オリックスのホームゲームを見に来ている観客を母集団とするアンケート調査を実施した。サシプリングは層化二段(性・年齢)無作為抽出法を用い、調査対象を自記式調査が可能な男女918人とした。回収した有効な質問票は910票であり、有効回収率は99.1%であった。オリックスファンに限定して、私設応援団員とその他の観客とを比較したところ、応援団員はチームへのロイヤルティが高く、スタジアムへの来場回数が多いことが分かった。なお、今回実施した調査の結果の一部は、1998年9月9日付毎日新聞夕刊、12頁、3版に掲載された。2.私設応援団の参与観察:応援団員と出来事の体験を共有し、現場に流れる時間のリズムやテンポに身を添わせることを通して、私設応援団の社会と文化を丸ごと理解しようとする参与観察法を用いた。オリックス・ブルーウェーブ球団公認の私設応援団である「オリックス応援会」のスタジアムでの応援の観察、同会が主催するパーティ(1998年11月22日)への出席、会長の河内氏への数回に渡るインタビュー調査を実施し、「オリックス応援会」のメンバー構成、会の規約、阪急時代からの変遷などが明らかになった。私設応援団の参与観察のもう一つのフィールドとして、全日本広島東洋カープ私設応援団連盟の関西支部に所属する「神戸中央会」を取り上げた。1998年11月に同会に入会し、12月より定例会等の集会に出席し、聞き取り調査を実施している。来年度は応援活動に同行するなどして、更にこの集団に深く入り込むことによって情報を得、カルチュラルスタディの視点から、いかにして彼らの文化が再生産されているのかを検討したい。私設応援団員とその他の観客とを比較したところ、応援団員はチームへのロイヤルティが高く、自覚的ファン度の高い人ほど、今季の主催

ゲームの相手チーム本拠地開催に対して否定的な回答が多く、今後のフランチャイズ制のあり方が問われるところである。なお、本研究結果の一部は、社団法人関西経済連合会編集の季刊誌(1999年、第59号、29頁)に掲載された。
放射光を用いた逆格子空間直接観察によるナノ結晶体の迅速構造解析法の開発

超微細構造体がワイヤ形状の場合、結晶性超微細構造体から生じるブラッグ回折条件が逆格子空間でシート(有限の面積をもつ平面)形状であり、また、超微細構造体が薄膜形状の場合、その回折条件はロッド(有限の長さを有する棒)形状である。これらの独特な回折形状に着目することによって、波長0.1nm以下の単色高エネルギーX線を用い、、超微細構造体からの逆格子空間X線強度を一度の短時間測定で得られる方法を開発した。その方法をナノ結晶体の迅速構造解析法と名付けた。この方法は大気中で表面・界面構造を非破壊で調べられる特徴を有する。(1)サファイヤ単結晶(0001)上に作成した酸化ニッケル(NiO)の超微細ナノワイヤ(高さ0.5nm)を調べ、回折像の全体パターンから、その超微細ナノワイヤが六方晶構造を有することが分かった。また、1個の回折像の幅から、そのナノワイヤ中の結晶子サイズが15nmであることと、その回折像中のピーク、ピーク距離からナノワイヤ間の周期が46nmであることが見積もられた。(2)二酸化チタン(TiO_2)単結晶(101)単結晶上に酸化チタンビスマス(Bi_4Ti_3O_<12>)薄膜を厚さ50nmと3nm成長させたものを試料とした。その薄膜の結晶構造は単斜晶系であるど推測した。(3)シリコン(001)上に極微量のビスマス細線を成長後、その上にエピタキシャル・シリコンでキャップした試料について、ビスマス原子が細線を保持したまま埋め込まれていることを実験的に示すことができた。また、埋め込まれたビスマス原子細線中のビスマス原子がその細線に沿ってペア構造を作っていることが分かうた。シリコン内部に埋め込まれたビスマス原子数は、原子層1枚分の約1/10程度と極めて微量であるにもかかわらず十分な回折信号を得ることができた。最新のナノシミュレーションによって、埋め込み型ビスマス原子細線の構造も解明できた。これらの独特な形状に着目することによって、波長0.1nm(ナノメータ)以下の単色高エネルギーX線を用い、超微細構造体からの逆格子空間X線強度の全体像を試料を回転せずに一度の短時間測定で得られる方法を開発した。その方法をナノ結晶体の迅速構造解析法、あるいは、X線逆格子空間イメージング法と名付けた。あわせて、その方法に特化した装置を作成した。この方法は、大気中で表面・界面構造を非破壊で調べられる特徴を有する。(1)サファイヤ単結晶(0001)上に作成した酸化ニッケル(NiO)の超微細ナノワイヤ(高さ0.5nm)を調べ、回折像の全体パターンから、その超微細ナノワイヤが六方晶構造を有すること、さらに、そのナノワイヤがサファイヤ基板の[10-10]方向に垂直なことも分かった。また、1個の回折像の幅から、そのナノワイヤ中の結晶子サイズが15nmであることと、その回折像中のピーク、ピーク距離からナノワイヤ問の周期が46nmであることが見積もられた。

(2)二酸化チタン(TiO_2)単結晶(101)単結晶上に酸化チタンビスマス(Bi_4Ti_3O_<12>)薄膜を厚さ50nmと3nm成長させたものを2個を試料とした。その薄膜の結晶構造を仮定し、計算回折像と実験回折像を比較し、その酸化チタンビスマス薄膜は単斜晶系であると推測した。どちらの測定もX線波長は0.05nmを用いた。2次元X線検出器として、イメージングプレートを入射X線と垂直に設置して用いた。試料表面に対して、1)0.05°、(2)0.1°の角度でX線を入射させた。ナノメータ・スケールの1次元構造からの特徴的な回折図形を精度良く記録することに平成16年度に成功した。引き続き今年度は、別のナノ構造体を試料として用いナノ構造の迅速構造解析法の確立を目指し、成功した。シリコン(001)上に極微量のビスマス細線を成長後、その上にエピタキシャル・シリコンでキャップした試料について、ビスマス原子が細線を保持したまま埋め込まれていることを実験的に示すことができた。また、埋め込まれたビスマス原子細線中のビスマス原子がその細線に沿ってペア構造を作っていることが分かった。シリコン内部に埋め込まれたビスマス原子数は、原子層1枚分の約1/10程度と極めて微量であるにもかかわらず十分な回折信号を得ることができた。それにもかかわらず、数分の測定時間で広い逆格子空間の回折データの収集に成功した理由は、強力な放射光(高エネルギー単色X線)利用と組み合わせて、迅速かつ検出感度の高い回折図形の記録が可能である2次元検出器(イメージングプレート)を利用した測定手法(逆格子イメージング法)を開発できたからである。最新のナノシミュレーションによって、埋め込み型ビスマス原子細線の構造も解明できた。さらに、シリコン(001)上に極微量のビスマス細線を成長後、その上にアモルファス・シリコンでキャップした試料について調べた結果、ビスマス細線はほとんど埋め込まれていないことも分かった。このことから、原子細線の埋め込みに必要なプロセスが確認できた。
交差穴貫通部の曲面に発生するバリの効率的除去方法の研究

本研究は特に除去が困難な『交差穴貫通部の曲面に発生したバリ』の新しい除去方法に関する研究である。得られた成果は以下のようである。1.バリ除去方法簡便な円筒カム機構により貫通部曲面を自動追尾させてバリを効率的に除去する方法を提案し、理論的検討と実験装置の試作を行うとともに、詳細な実験によってこの方法の原理的有用性を実証した。2.装置の設計広範囲の実験が可能なように、切刃を交換できる方式とし、カムの形状を工夫して、主穴直径に合わせカムを自在に交換できる構造に設計試作した。すなわち、カム形状として(1)円筒ソリッドとピン、(2)円筒端面とローラ、(3)U字形カムとピンの3種を比較実験し(3)の形式を採用した。カム部分の耐久性について実験的検討を行い、多少の摩耗が発生するものの機能上差し支えないことを確認した。但し実用化に際しては耐摩耗性の優れたカム素材が望ましい。3.バリ除去実験(1)被削材:実験用被削材として炭素鋼(S10C相当)について種々のバリ除去実験を行った結果、(主穴径/交差穴径)比が1.4程度以上であれば、本研究で提案した方法は十分有用でバリ除去が容易にできる。またこの場合、従来のバリ除去工具では除去が非常に困難であることを確認した。黄銅、銅、アルミ等の被削材についても同様な結果である。(2)切刃角・切刃剛性:実験範囲では切刃角は5060°、切刃剛性は数十N/mm程度が適当であった。(3)斜交角・オフセット・穴径誤差:本方法は0.50.7mm程度のオフセットまたは穴径誤差、±数度程度の斜交角があっても、支障なく機能する。本研究は交差穴の鞍形曲面のバリの新しい除去方法に関する研究である。現在までの研究進捗状況と得られた結果は以下のようである。1.バリ除去実験装置の試作(1)設計方式:広範囲の実験が可能なように、切刃を交換できる方式とし、カムの形状を工夫して、主穴の径に合わせてカムを自在に交換できる構造に設計試作した。すなわち、カムの構造として(1)円筒ソリッドとピン、(2)円管端面とローラー(3)U字形カムとピンの3種類を比較実験し(3)の形式を採用した。(2)カム支持ばねの剛性:ばねの剛性は強いほど追尾特性は向上することが分かった。しかし、過大であるとカム部分の摩耗が問題となり得る。装置の耐久性については次年度に検討する予定である。2.バリ除去実験(1)被削材:実験用被削材としてS10C相当(引張強さ382MPa)の厚肉鋼管を選定し、直角交差穴径8mm主穴径1116mmの範囲において、バリ除去実験を行った。その結果、主穴径/交差穴径比が1・382・0程度までならば、本研究で提案した方法で容易にバリ除去が可能であり、十分有用であることが分かった。またこの場合、従来のバリ除去工具では除去が困難であることを確認した。(2)切削力:バリ除去実験におけるトルク・スラストは工具切刃の回転に同期して大きく変動するがバリ除去につれて次第に減少すること、また工具と交差穴の心ずれ(誤差)の影響が大きいこと等が判明した。(3)切刃角・切刃剛性:実験の範囲では切刃剛性は強いほど良く、切刃角は50゚60゚程度が適当である。本研究は交差穴の鞍形曲面に発生するバリの新しい除去方法に関する研究である。本年度の研究成果は以下の通りである。

1.直交交差穴について(1)前年度試作したカム機構によるバリ除去装置を炭素鋼以外の軟質材料(銅、アルミニューム、黄銅)のバリについて適用し実験を行った結果、炭素鋼の場合と同様に大変有効であることが確かめられた。切刃角は5060°、切刃支持剛性は数+N/mmが適当である。(2)本方式では交差穴径3mm程度までは十分可能であるが、2mm以下は困難と考えられる。(3)カム機構の耐久性について実験的に検討した。カムおよびフォロワはある程度摩耗するが、ほぼ均等な摩耗であり、曲面の追跡機能として大きな支障はない。しかし実用化するためにはカム材料の選定、耐摩耗処理等の対策が必要となろう。(4)交差穴径の誤差、軸心のオフセット等のバリ除去特性に及ぼす影響を実験的に調べた結果、これらの誤差は0.50.7mm程度以下ならば大きな悪影響を及ぼさないことが判明した。2.斜交差穴について(1)直交交差穴用のバリ除去装置のままでも斜交角が数度までならば十分有効にバリ除去が可能である。(2)各斜交角に合わせたカムと切刃を備えた斜交角用バリ除去装置を試作し斜交差穴のバリ除去実験を行った。この結果、30°までの斜交差穴に対し十分有効であることが確認された。
速筋に発現するmicroRNAの細胞局在性と機能の解明

ウシ骨格筋組織について、これまで先行知見を参考として凍結切片でmiR-196aのin situ hybridization(ISH)を行ってきたが、今年度はパラフィン包埋切片を用いた。まずマウス腎臓でscrambleプローブをコントロールとし、LNAのmiR-196aプローブにより特異的染色を確認した。次に、ヒトbeta-ACTINプローブを使ってISHを行い、目的のウシ骨格筋2サンプル(咬筋(MS)および半腱様筋(ST))のパラフィンブロックの品質を確認したところ、プローブに特異的な染色を確認できた。そこで、ウシ骨格筋2サンプルのパラフィン切片とmiR-196aプローブを用い、2条件(1ハイブリ温度:40°C/洗浄温度40°C、2ハイブリ温度:50°C/洗浄温度:50°C)の2条件のもとでISHを行った。その結果、いずれのサンプルでも主に血管系の細胞でmiR-196aプローブによる発色が確認されたが、発色強度については染色条件1および2において、骨格筋2サンプル間の差異がほとんど観察されなかった。この結果は、miR-196a発現がMSに比べてSTで高いという定量的PCRおよび次世代DNAシーケンサーで得られた発現傾向とは一致しない。今回のISH試験ではmiR-196aのプローブ、ハイブリダイゼーションの温度条件によりシグナル発色が非特異的に起こった可能性があった。しかし、複数の反応条件の組合せにより検討を行っており、miR-196aの極微な試料中発現量およびプローブ反応の不安定性がmiR-196aの特異的検出の限界を超えていると考えられた。以上より、MSおよびSTにおけるmiR-196aの発現の差異については、ISHによる検出で信頼性の高い結果が得られなかったものの、PCRおよび次世代シーケンサーで得られたMSに比べてSTで高いという結果が確からしいと結論した。生理学的特性が異なるウシ(ホルスタイン種)骨格筋部位におけるmiR-196aおよびmiR-885の発現様式を定量的PCRにより解析した。myosin heavy chainについては、速筋型isoformの発現割合が咬筋<横隔膜<半棘筋<最長筋<半腱様筋の順で高く、各筋の筋線維型の違いを反映していた。miR-196aの発現解析結果によると、miR-196aは速筋型部位に高く発現しており、中間型の横隔膜や半棘筋、特に遅筋型傾向の強い咬筋のような骨格筋部位では発現が認められなかった。一方、miR-885は半腱様筋で発現が高く咬筋では発現が認められないものの、miR-196aとは異なり中間型の部位でも発現していた。このことからmiR-196aの発現が速筋型筋線維に高く依存することが判明した。ウシ5頭の各種骨格筋部位を採材し、myosin heavy chain isoform、miR-196aおよびmiR-885の発現を解析し、myosin heavy chain isoformで規定される各骨格筋の筋線維型とmiR-196aおよびmiR-885の発現との相関を明らかにすることができた。また、miR-196aのin situ hybridizationを実施するためにプローブの作成を行い、検出のための標識ができたことを確認した。ウシ骨格筋切片での細胞マーカーの検出のため、Pax7、myosin heavy chain isoform(MyHC-slowおよびMyHC-fast)、collagen typeIVの各種抗体で反応条件を検討し、これらの抗原検出条件を決定することができた。28年度は、miR-196aのin situ hybridizationによる検出の条件、miR-196aの局在箇所の特定のために筋細胞や脂肪細胞のマーカータンパク質の検出条件を確立することをめざした。in situ hybridizationについては、現在までにU6snRNAをポジティブコントロールとしネガティブコントロールを併用しながら最適な検出条件について模索中である。組織切片の作製、固定、in situ hybridization前処理についてはほぼ条件を決定した。一方、筋組織中のマーカータンパク質の検出については、Pax7、C/EBPα、PRDM16等の市販抗体が有用であることを確認し、その検出条件を確立した。miR-196aの発現箇所として想定される褐色脂肪細胞は、mRNA発現解析アレイによるデータでUCP1の発現が筋組織に認められなかったことから、筋組織中には存在しない可能性が高いと考えられた。また、参考として黒毛和種牛の筋組織試料を用い、RT-PCRおよびマイクロアレイによりmiR-196aの発現を確認した。ウシ骨格筋を試料としたmivroRNAのin-situハイブリダイゼーションについて、凍結保存した骨格筋組織の切片を作製し、目的のmicroRNA検出の条件検討を行った。ProteinaseKによる前処理後、ハイブリダイゼーション工程の温度および時間、洗浄工程のバッファー組成や温度、時間について設定を変えながら各種条件を検討してきたが、これまでに良好な結果が得られていない。ProteinaseK処理の有無についても検討したが、検出は改善されなかった。ウシ骨格筋試料の入手が困難だったこともあり条件の改善が進まなかった。一方、目的のmicroRNAの標的遺伝子であるHox遺伝子群の一部について、免疫組織化学染色を行いタンパク質レベルでの発現を確認した。これらの遺伝子発現はマイクロアレイ解析等で発現の差異を確認した。

しかし、その他の一部標的遺伝子についてはmicroRNAの制御下にあるとされている場合でも発現が低レベルであったこと、または有意な速筋-遅筋間での差が認められなかったもあり、ターゲットとしたmicroRNAが骨格筋中で果たす役割についてはこれまでの仮説と異なる可能性がある。in-situハイブリダイゼーションについて各種条件を検討してきたが、これまでに良好な結果が得られず、引き続きさらなる条件または検出方法の変更を検討しているため。また、網羅的遺伝子発現解析による速筋・遅筋間比較の結果、miR-196aの制御下にあると考えられる遺伝子の発現に有意な差がみられなかったことから、実験計画の一部見直しを要したため。ウシ骨格筋組織について、これまで先行知見を参考として凍結切片でmiR-196aのin situ hybridization(ISH)を行ってきたが、今年度はパラフィン包埋切片を用いた。まずマウス腎臓でscrambleプローブをコントロールとし、LNAのmiR-196aプローブにより特異的染色を確認した。次に、ヒトbeta-ACTINプローブを使ってISHを行い、目的のウシ骨格筋2サンプル(咬筋(MS)および半腱様筋(ST))のパラフィンブロックの品質を確認したところ、プローブに特異的な染色を確認できた。そこで、ウシ骨格筋2サンプルのパラフィン切片とmiR-196aプローブを用い、2条件(1ハイブリ温度:40°C/洗浄温度40°C、2ハイブリ温度:50°C/洗浄温度:50°C)の2条件のもとでISHを行った。その結果、いずれのサンプルでも主に血管系の細胞でmiR-196aプローブによる発色が確認されたが、発色強度については染色条件1および2において、骨格筋2サンプル間の差異がほとんど観察されなかった。この結果は、miR-196a発現がMSに比べてSTで高いという定量的PCRおよび次世代DNAシーケンサーで得られた発現傾向とは一致しない。今回のISH試験ではmiR-196aのプローブ、ハイブリダイゼーションの温度条件によりシグナル発色が非特異的に起こった可能性があった。しかし、複数の反応条件の組合せにより検討を行っており、miR-196aの極微な試料中発現量およびプローブ反応の不安定性がmiR-196aの特異的検出の限界を超えていると考えられた。以上より、MSおよびSTにおけるmiR-196aの発現の差異については、ISHによる検出で信頼性の高い結果が得られなかったものの、PCRおよび次世代シーケンサーで得られたMSに比べてSTで高いという結果が確からしいと結論した。28年度は、ウシ骨格筋におけるmiR-196aのin situ hybridizationによる検出条件を確立すること、Pax7等の各種細胞マーカー検出による多重染色条件を確立することをめざす。29年度は、引き続きin situ hybridizationによる筋組織でのmiR-196aの検出条件の決定に取り組み、最終的に速筋、遅筋におけるmiR-196aの発現差異を組織で確認するとともに、発現箇所の特定をめざす。具体的には、in situ hybridizationにおいて組織のプロテアーゼ処理、hybridizationの温度やバッファー組成・濃度について、さらに詳細を検討する。
Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｕｍ属Ｈｏａｒｅａ節野生種の変異創出による新規優良品種の作出

本研究の目的は,Pelargonium属Hoarea節野生種のユニークな特性を持つ新品種の育成である.Hoarea節に属するP. rapaceumの葉片および葉片由来カルスのコルヒチン処理によって4倍体を作出した.これらの花は大型ではなかったが,4倍体作出の方法を初めて提示した.また,P. oblongataum(Hoarea節)とP. fulgidum(Liguralia節)との間で相互交雑を行い,種間雑種後代(F1,F2およびBC1)を得た.これら植物個体では,Hoarea節の特性(花色,花色素および草姿など)の導入が認めら,新規特性を持つ品種育成の育種素材としての活用が期待できる.Pelargonium属植物はこれまでに約300種の記載があり、これらは12-15節に分類されている。約70種から構成されるHoarea節は、多数の種を含有する大きな節であるものの、既存の栽培品種の成立に関与したとの報告は、これまでに見当たらない。Hoarea節は、花色・花形・草姿において、また、球根を持つ、開花後休眠するなど、現存の栽培品種には存在しない特異的な特性を示す。従って、Hoarea節は既存品種のイメージとは全く異なる栽培品種を作出する重要な遺伝資源となりうる。そこで、本研究では、Horea節に属する多数の野生種を育種素材に用いて、これらの間で相互交雑を行う事で変異拡大を図り、新規性・区別性に富み、かつ、優れた特性を持つ、鑑賞価値の極めて高い系統の創生を実現する。平成25年度の研究成果は次の通りである。2.染色体数の基本数および染色体数が同数であるP. fulgidum (x=11,2n=22)との種間交雑より得られた雑種個体の形質調査を行ったところ、P. fulgidumを種子親に用いた交雑により得られた個体は、両親の中間的形質を示し、雑種と推測できた。3.Pelargonium属植物の種子は一般に硬実で、通常の発芽法では発芽が極めて困難で、摩砕処理や傷つけ法などの前処理が必要である。しかし、Hoarea節に属する種の種子における硬実性の程度は、他節に属するよれより弱く、前処理は不用で、発芽適温は5-10°Cであることが分かった。本研究の目的は,Pelargonium属Hoarea節野生種のユニークな特性を持つ新品種の育成である.Hoarea節に属するP. rapaceumの葉片および葉片由来カルスのコルヒチン処理によって4倍体を作出した.これらの花は大型ではなかったが,4倍体作出の方法を初めて提示した.また,P. oblongataum(Hoarea節)とP. fulgidum(Liguralia節)との間で相互交雑を行い,種間雑種後代(F1,F2およびBC1)を得た.これら植物個体では,Hoarea節の特性(花色,花色素および草姿など)の導入が認めら,新規特性を持つ品種育成の育種素材としての活用が期待できる.Pelargonium属植物はこれまでに約300種が知られ、これらは12-15節に分類されている。約70種から構成されるHoarea節は、多数の種を含有する大きな節であるものの、既存の栽培品種の成立には全く関与していない。Hoarea節は、花色・花形・草姿・根形・休眠性など、現存の栽培品種には存在しない特異的ユニークな特性を多数持っている。従って、Hoarea節は既存品種のイメージとは全く異なる栽培品種を作出する重要な遺伝資源といえる。そこで、本研究では、Horea節に属する多数の野生種を育種素材に用いて変異拡大を図り、新規性・区別性に富み、かつ、優れた特性を持つ、鑑賞価値の極めて高い系統の創生を目的とする。平成24年度の研究成果は次の通りである。1.Hoarea節野生種P. rapaceumの葉片を用いて、すでに確立済みの植物体再生培地にコルヒチンを添加した培地を用い、植物体を再生させたところ、倍数体と推定される3系統が得られた。また、P.appendiculatumの種子をコルヒチン水溶液で浸漬処理することにより、倍加したと推定される個体が得られた。2.Hoare節の特性を導入し、既存品種とは大きな変異を持つ個体作出のため、Hoaere節とLigularia節間で種間交雑を行った所、通常の交雑で、正逆交雑共に、種子が多数得られた。また、Hoarea節内における種間交雑によっても、すべての交雑から種子が得られた。3.RAPD法を用いてHoarea節内における種間の類縁関係を推定した。Pelargonium属植物はこれまでに約300種の記載があり、これらは12-15節に分類されている。

そこで、本研究では、Horea節に属する多数の野生種を育種素材に用いて、これらの間で相互交雑を行う事で変異拡大を図り、新規性・区別性に富み、かつ、優れた特性を持つ、鑑賞価値の極めて高い系統の創生を実現する。平成26年度の研究成果は次の通りである。1.Hoarea節野生種P. rapaceumの葉片および葉片から誘導したカルスをコルヒチン添加培地上で培養することで、4倍体が作出できた。これら個体では、花弁の大きさや諸形質は2倍体のそれとほぼ同じで、有用形質は示さなかったものの、Hoarea節野生種において倍数体を作出する一方法を提示できた。この成果は国際園芸学会(オーストラリア・ブリスベン)で発表した2.Hoarea節野生種P. oblongatumとLigularia節野生種P. fulgidumとの相互交雑を行った。いずれを種子親に用いた場合にも、通常の交雑でF1雑種が得られた。さらに、これらの自殖によりF2個体を、また、P. oblongatumを戻し交雑してBC1個体を得た。これら雑種後代個体の諸特性には変異が認められた。花色における変異は、含有色素(アントシアニジンおよびカロテノイド)の種類と量(含有割合)の差異に起因すると推察された。農学〔本年度における研究の進捗状況〕現存の栽培品種が持たない特異的な形質を保有するHoarea節の野生種を用いて、節内及び節間における種間交雑により変異拡大を図り、様々な形質を持つ個体から優良形質を示す個体を選抜し品種育成に繋げたいと考えている。本年度は、P.fulgidum (x=11,2n=22)との種観交雑より得られたF1個体の形質調査結果より、これ等の後代が雑種であることが判明したこと、さらに、Hoarea節の種子が低温(5-10°C)条件下で容易に発芽することが明らかになった。〔現在までの達成度〕上述の進捗状況から判断して、「おおむね順調に進展いる」と判断した。〔本年度における研究の進捗状況〕微妙に異なる形質を保有するHoarea節の野生種を用いて、節内及び節間における種間交雑を行い、様々な形質を持つ個体を作出し、変異拡大を図り、優良形質を示す個体を選抜し品種育成に繋げたいと考えている。本年度は、Hoarea節における倍数性個体を作出し、学会発表を行った。さらに、自殖及び染色体数の基本数および染色体数が同数であるLigularia節のP. fulgidum(x=11,2n=22)との種間交雑を行い、多数の雑種個体を作出し、現在育成中である。今後これら個体の形質を調査し、優良個体を選抜する計画である。また、交雑に用いた両親のRAPD法による類縁関係の解明も行った。〔現在までの達成度〕上述の進捗状況から判断して、「おおむね順調に進展している」と判断した。1.Hoarea節とLigularia節との間の種間雑種についての特性調査を完了する。2.Ligularia節およびHoarea節に属する種間のRAPD解析を行い、類縁関係を明らかにする。3.今年度は、最終年度であり、得られた結果の公表につとめる。国際園芸学会でその成果を発表するとともに、花色と花色素との関連性に関する論文を執筆する。1.平成24年度に引き続き、染色体倍加個体の作出及び種間(節間)雑種(F2世代を含む)を作出する。2.倍加処理により得られた個体の倍数性を推定する。方法は、フローサイトメーターによる検定、花粉粒の大きさ・孔辺細胞の大きさの調査結果から、倍数性を検討する。3.作出個体の諸特性(香り葉、大輪、花色、四季咲き等)の調査を行う。