hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
手術侵襲下の微小循環系における血管内皮ー多核白血球相互反応

手術侵襲下の微小循環系、特に血管内皮と多核白血球の相互作用について、ヒト血液から分離した多核白血球とヒト臍帯静脈およびイヌ大動脈より採取培養した血管内皮細胞を用いて研究を進めた。多核白血球は、TNFやGーCSFによって著明な活性化をうけ、エラスターゼ産生能や活性酵素産生能が上昇する。また、補体レセプターも細胞膜表面に出現し、より反応性が亢進しうる準備状態ができあがる(priming効果)。事実、手術侵襲期において、GーCSFやILー6などのサイトカインが血中に上昇し、多核白血球自体の活性酵素産生能や補体レセプターの発現が亢進していることを臨床的にも明らかにすることができた。一方、侵襲によってホルモン変動も著しくなるが、正常人より分離した多核白血球には、ホルモンによるPriming効果は認められず、活性酵素産生能も亢進しなかった。しかし、術後患者から分離した白血球のホルモンに対する代謝反応は亢進していることから、侵襲によって分泌される生理活性物質の違いによって多核白血球の反応が大いに異なることが明らかになった。一方、血管内皮細胞は、このようなPriming効果をうけた多核白血球によって障害され(in vitro)、また血管自体をTNFなどのサイトカインで前処置を行なっても血管内皮細胞は障害され、接着因子を含めた多核白血球と血管内皮細胞の相互作用について研究を進める必要がある。さらに手術侵襲の種類や時期によって大きく反応が異なると考えられ、実験モデルも含めての研究がさらに必要である。in vivoにおいて,手術侵襲によって,術中からcyto kine(1Lー6,OーGSF)が上昇し,流血中の顆粒白血球(PMN)が活性化する。PMNは,活性酸素産生能,殺細菌能が上昇しており,これが肺胞上皮細胞や血管内皮細胞障害の原因と考えられた。一方,健常人より採取したPMNは,ホルモンによっては活性化されず,TNFやCーGSFなどのサイトカインによって活性化され,これは濃度依存的であった。また,PMN活性化を抑制する試みとして,術前にステロイドあるいは蛋白分解酵素阻害剤を投与したところ,蛋白分解酵素阻害剤には効果が認められなかったが,ステロイドには,サイトカイン分泌抑制作用(1Lー6,C-GSF)やホルモン分泌低下作用(成長ホルモン,グルカゴン),cyclic AMP上昇抑制などの効果とともに,循環系の安定(脈拍),水分・電解質代謝の改善などがみられ,PMNも活性化が抑制された。以上の結果から,侵襲によるサイトカインの分泌がPMNの活性化やホルモン分泌を介して生体に多大な影響を与えていると考えられ,この初期のプロセスが,手術開始直後の皮膚切開とこれにともるう局所の単球あるいはPMNの活性化とサイトカイン分泌を励起し,さらにPMNを介して,血管内皮を障害していると考えられた。この血管内皮の障害には細胞接着因子が大きくかかわっていると考えられ,接着因子の抗体を用いて、PMN活性化の阻害や血管内皮細胞の保護の実験を継続する予定である。さらに,混合培養系を用いて,in vitroにおける細胞障害の過程とその防御について,接着因子抗体や薬剤(ステロイド)の効果を実証し,臨床例におけるステロイドのPMN活性化阻害効果について,実験的に研究をすすめるつもりである。
AHPを用いた臨床ナースの倫理的意思決定プロセスに関する研究

平成16年度は、前年度の研究結果をふまえ、臨床ナースの倫理的問題場面における対処行動のプロセスとヒューリスティックな要因との関係について、詳細に解析することを目的として研究を行なった。まず、関連の研究として臨床ナース204名を対象に看護倫理問題を含むアンケート調査を実施し、以下の3つが明らかになった。1.臨床ナースの倫理に関する認識と年齢・臨床経験年数との関係、2.臨床ナースの倫理に関する認識の構造、3.臨床ナースの倫理にかかわる認識に関する研究論文の年代的推移と傾向。これらの調査結果は、それぞれ第8回日本看護研究学会学術集会(1月)、日本健康科学学会第20回学術大会(9月)、第6回日本看護医療学会学術集会(9月)において発表した。さらに、平成15年度から引き続き実施している、卒後38年目のナース12名を対象にしたインタビュー調査およびグラウンデットセオリー法によるデータ分析において、臨床ナースの倫理的意思決定プロセスの基本パターンといくつかの非常に興味深い意思決定要因の特徴が明らかになった。特に注目すべき点は、ナースが倫理的な意思決定を行う際には、専門職としてとるべき行動は理解しているものの、自律性が不充分であるためにジレンマに陥っている実態が明らかになった点であろう。この結果は2nd Asia Pacific Nursing Congressにおいて発表し、会場から国や地域の違いを示唆する貴重な意見を多数いただいた。今後は、この結果を一般化すること目指して、AHPを用いた再調査を実施し、臨床ナースの倫理的意思決定プロセスを体系化する予定である。本研究は臨床ナースが業務上遭遇する倫理的な問題とその対処行動における意思決定プロセスの解明を目的としている。平成15年度においては、関連の研究として臨床ナース140名を対象に看護倫理問題を含むアンケート調査を実施し、日本健康科学学会第19回学術大会において結果を発表した(10月)。この調査結果と看護倫理に関する文献レビューをもとに、意思決定プロセスのアウトラインを構築するため、臨床ナース5名を対象に聞き取り調査を行った(11月)。この結果、臨床ナースが倫理的な問題場面に対処する行動には、予測した以上にそれまでの経験やヒューリスティックな要因の比重が大きいことが分かった。そこで、AHP法を用いた調査を行う前に、グラウンデットセオリー法を用いた質的研究方怯を実施した。この調査では『A model of factor influencing the decision-making process』を参考にしたインタビューガイドに則って、卒後38年目のナース12名にインタビュー調査を行った(10月翌2月)。これにより、臨床ナースの倫理的意思決定プロセスの基本パターンといくつかの興味深い意思決定要因の特徴が明らかになった。ここで注目すべき点として「ナースは不可解な患者(了解不能な患者)に対応する場面では、その患者の理解が得られないことに苛立ち、専門職としての役割遂行よりもむしろ個人的な感情を優先させ、その患者に対するケアを断念している」といったケースが多く存在することがある。つまり、ナースが倫理的な意界決定を行う際には、専門職としてとるべき行動は理解しているものの、自律性が不充分であるためにジレンマに陥り、結果として自分のケアに不全感を抱いていると考える。平成15年度の研究において、臨床ナースの重要な倫理的問題を抽出できたと考える。この研究成果は2nd Asia Pacific Nursing Congressにおいて発表する予定である(11月)。
骨芽細胞の分化誘導シグナルの解明とその骨形成促進治療法の開発への応用

(1)AP-1/L-11シグナルカスケードの解析力学的負荷はin vivoで骨形成促進能を有するdeltafosBの発現を誘導することからその分子機構を詳細に解析した。その結果、fosB遺伝子の発現は細胞内外めCa、ERK, CREBに依存性で、プロモーター上のCRE配列を介した転写促進によることが明らかとなった。2.AP-1とSmadとのクロストークSmad1/5は骨形成誘導能を有するBMPの下流で作用する転写因子である。骨芽細胞に対する力学的負荷はAP-1転写因子の誘導と同時にSmad1のリン酸化・活性化をもたらし、両者はIL-11遺伝子プロモーターのAP-1結合部位で物理的に結合し、協調的に作用してIL-11遺伝子の転写を促進することが示された。(2)ステロイド骨粗鬆症におけるIL-11の役割1.IL-11の抗アポトーシス作用PTHおよびIL-11はデキサメタゾンやエトポシドで誘導される骨芽細胞のアポトーシスを約50%抑制した。また、アポトーシスに伴うbcl-2発現の低下はPTHおよびIL-11により阻止され、さらにPTHの効果はIL-11の中和抗体で部分的に抑制された。2.デキサメタゾンによるIL-11遺伝子転写のメカニズムPTHはIL-11遺伝子転写を促進し、デキサメタゾンはこれを抑制する。これらの効果はともにIL-11遺伝子プロモーター上のAP-1結合部位に依存していた。以上より、IL-11はデキサメタゾンのアポトーシス誘導の機序およびPTHのアポトーシス抑制効果の両方に関与していることが示唆された。(1)AP-1/IL-11シグナルカスケードの解析力学的負荷はERK依存性にfosfamily遺伝子およびIL-11mRNAを誘導する。そこでfosfamilyのうちin vivoで骨形成促進能を有するdeltafosBの誘導機構を詳細に解析した。まずfosBプロモーターをクローニングし、力学的負荷がその活性を促進する事を示した。さらにこの作用は細胞内外のCa、ERK, CREBに依存性で、プロモーター上のCRE様配列を介して発揮されることが明らかとなった。2.AP-1とsmadとのクロストーク力学的負荷が通常BMPシグナルの下流に位置するsmad1/5/8を活性化することを見出した。この効果はin vitroにおける骨芽細胞に対するshear stressのみならず、マウスへの運動負荷によってもin vivoの骨において観察された。力学的負荷により活性化されたsmadはdeltafosB/JunDなどのAP-1と協調して、さらにIL-11遺伝子の転写を促進することが明らかとなった。(2)IL-11による骨芽細胞アポトーシスの制御機構の解析PTHはデキサメタゾンやエトポシドで誘導される骨芽細胞のアポトーシスを約50%抑制した。PTHはアポトーシスに伴うbcl-2の発現低下を抑制したことから、PTHの抗アポトーシス作用にbcl-2発現促進の関与が示唆された。PTHはIL-11の発現を誘導するが、IL-11もPTHと同様の抗アポトーシス作用とbcl-2発現低下阻止作用を示した。IL-11は単独でもbd-2の発現をmRNAおよび蛋白レベルで促進した。さらにPTHの抗アポトーシス効果はIL-11の中和抗体で部分的抑制されたことから、一部はIL-11の誘導を介していると考えられた。(1)AP-1/IL-11.シグナルカスケードの解析力学的負荷はERK依存性にfosfamily遺伝子およびIL-11mRNAを誘導する。

まずfosBプロモーターをクローニングし、力学的負荷がその活性を促進する事を示した。さらにこの作用は細胞内外のCa、ERK, CREBに依存性で、プロモーター上のCRE配列を介して発揮されることが明らかとなった。2.AP-1とSmadとのクロストーク力学的負荷が通常BMPシグナルの下流に位置するSmad1/5/8をPKC依存性に活性化することを見出した。この効果はin vitroにおける骨芽細胞に対するshear stressのみならず、マウスへの運動負荷によってもin vivoの骨において観察された。力学的負荷により活性化されたsmadはdeltafosB/JunDなどのAP-1と協調し、さらにIL-11遺伝子の転写を促進することが明らかとなった。(2)IL-11による骨芽細胞アポトーシスの制御機構の解析PTHはデキサメタゾンやエトポシドで誘導される骨芽細胞のアポトーシスを約50%抑制した。PTHはアポトーシスに伴うbcl-2の発現低下を仰制したことから、PTHの抗アポトーシス作用にbcl-2発促進の関与が示唆された。PTHはIL-11の発現を誘導するが、IL-11もPTHと同様の抗アポトーシス作用とbcl-2発現低下阻止作用を示した。lL-11は単独でもbcl-2の発現をmRNAおよび蛋白レベルで促進した。さらにPTHの抗アポトーシス効果はIL-11の中和抗体で部分的抑制されたことから、一部はlL-11の誘導を介していると考えられた。(1)AP-1/IL-11シグナルカスケードの解析力学的負荷はERK依存性にfosfamily遺伝子およびIL-11mRNAを誘導する。そこでfosfamilyのうちin vivoで骨形成促進能を有するdeltafosBの誘導機構を詳細に解析した。2.AP-1とSmadとのクロストーク力学的負荷が通常BMPシグナルの下流に位置するSmad1をPKC依存性に活性化することを見出した。またこのように力学的負荷により活性化されたsmadは、特にdelta-fosBと効率よく協調的に作用してIL-11遺伝子などのAP-1依存性の転写を増強することにより骨形成促進に関与していることが示された。PTHはアポトーシスに伴うbcl-2の発現低下を抑制したことから、PTHの抗アポトーシス作用にbcl-2発現促進の関与が示唆された。さらにPTHの抗アポトーシス効果はIL-11の中和抗体で部分的に抑制されたことから、一部はIL-11の誘導を介していると考えられた。
重力波源候補となる中性子星の状態と機構の研究

重力波源の候補となる中性子星で起こる物理現象でいくつかの成果をあげた。相対論的な星のまわりの磁気圏構造パルサー(回転する中性子星)からの電磁気的エネルギーの放出機構の解明はその物理過程や計算手法においても重力波放出の理解の重要な鍵になる。また、現実的モデルにおいて、中性子星に存在する強磁場が重力波放出にいかに影響を与えるかを検討する必要もある。定常、軸対称でforce-free条件の場合にパルサー磁気圏の大局的構造を数値計算により求め、その性質を明らかにした。また、回転する星が外部に及ぼす相対論的効果を明らかにし、磁気双極子が回転する場合に外部に生じる電磁気的構造をほぼ解析的に求められる解法を考察した。これらの問題に共通する重要な数学的側面は、定常性の仮定から生じる光円柱での物理量の振る舞いが全空間領域の様相を支配することである。ある意味で類似している連星中性子星の合体前の準定常状態での重力波放出問題への応用を今後の課題とした。外部重力波と星との共鳴の可能性超新星爆発直後に誕生した中性子星や連星中性子星の合体過程において、星の振動が励起される可能性がある。現在進行中の課題であるが、共鳴的に星の振幅が増大する可能性を探るため、重力波の吸収と放出考慮した、簡単なモデルでその条件を求めている。ある種の条件下で指数関数的振動の増大がみられることがわかり、今後、より広範なパラメータ空間を網羅することにより、その条件を明確にする。中性子星(コンパクト星)からの重力波放出が関係する現象で部分的であるが、いくつかの成果が得られた。我々から約100パーセクの距離にある天体はX線衛星の観測から、星の半径が通常の中性子のものに比べて小さく、クォーク星であるという報告がなされている。それでは、中性子星クォーク星とではそこから発生する重力波においてどのような差が生じるだろうか。四重極動における特徴的な振動数と重力波放出による減衰時間を計算した。その結果、振動数と減時間は星の半径と質量に異なる依存性を示すので、それら二つの情報を得ることができれば、強い制限になることがわかった。回転中性子星において軸性振動の不安定モードが重力波放出に関係すると思われている。最近の研究では、多自由度の影響を考えると不安定モードの振幅が抑えられるいうが報告がなされており、その原理の理解を深めるモデルを考案した。重力波は背景時空上の摂動として扱われ、それは曲った時空での電磁場と似通っている。回転中性子星が外部の電磁場におよぼす一般相対論的効果を系統的に研究した。これまでは、電磁場を記述するマックスウェル方程式において、回転速度の2次以上を無視するという近似が採用されていたが、それを緩め、定常な電磁場を導出する、ひとつの定式化を得た。その有用性等を現在検討中である。
グリオ-マ由来マクロファ-ジ遊走因子の作用機序解明とその臨床的応用

既に私達はグリオ-マ細胞の培養上清から単球遊走因子(Monocyte chemoattactic protein:MCPー1)を分離精製し、その性状について検討してきた。今回、私達はMCPー1に対するモノクロ-ナル抗体を作成しその特異性について検討した。BALB/cマウスに3回に分けて免疫し、脾細胞と骨髄腫細胞と細胞融合を行い、得られたハイブリド-マの培養上清中の抗体活性を測定した。得られた抗体は5種類でいずれもサブクラスはIgG1であった。免疫沈降反応を行うとこれらの抗体に共通の単一のバンドが得られ、好中球遊走因子であるNAPー1や正常ウサギIgGとは交叉性は認められなかった。また他のサイトカインとの交叉性についてELISAにて検討すると、これら5種類のモノクロ-ナル抗体はMCPー1以外のサイトカインとの交叉は認められなかった。またこれらの抗体はMCPー1のもつ生物活性つまり単球遊走活性を著明に抑制したが、抗体によりその程度に違いが見られた。ヒトグリオ-マ細胞U105MGを蛍光抗体法にて染色するとすべての抗体によって染色され、特に細胞内の核周囲に局触して陽性所見を示す蛍光が見られた。現在、これらの抗体をもちいてグリオ-マの手術時摘出組織におけるMCPー1の局在、更にELISA法によりグリオ-マ患者の髄液や嚢胞内容などの臨床サンプルにおけるMCPー1の定量化にむけて進行中である。またMCPー1のDNA probeを用いてノザ-ンブロット法にてヒトグリオ-マ細胞株におけるMCPー1mRNAの発現を検討すると、55%の細胞株で強い発現がみられた。現在、手術時摘出グルオ-マ組織にて検討中である。
遷移金属化合物におけるX線吸収端近傍微細構造およびその磁気円二色性の第一原理計算

本年度は、主にX線吸収端近傍微細構造(XANES)の磁気直線偏光二色性(MLD)や磁気円偏光二色性(MCD)を計算するためのプログラム開発を行った。まず、これまでの相対論配置間相互作用計算プログラムにおける多電子系ディラクハミルトニアンにZeeman項を加えて計算するルーチンを付け加えることにより、磁場を加えた場合の電子状態計算が可能なプログラムの開発を行った。このプログラムを用いてNiO中のNiについて、磁場中での多重項準位構造の計算を行ったところ、Zeeman効果による分裂が再現された。また、Zeeman分裂した時の最低エネルギー状態のみを遷移の初期状態としてNi L_<2,3>端におけるXANESを計算することにより、入射X線の偏光方向が磁場に平行か垂直かで異なるスペクトルが得られ、MLDが再現された。次にMCDの計算を可能にするために、相対論配置間相互作用計算によって得られた多電子波動関数を用いて入射光が円偏光の場合の吸収スペクトルを計算するためのプログラムを開発した。これを用いて、CrO_2について、同様にZeeman分裂した最低エネルギー状態を初期状態として、Cr L_<2,3>端におけるXANESの計算を行ったところ、光の入射方向が磁場に平行か反平行かによって異なるスペクトルが得られ、MCDが再現された。さらに、CO_2においては、磁場の方向によってMCDの符号が変化するという、特徴的なMCDの異方性が実験的に報告されているが、磁場の方向を変化させた計算を行うことにより、この特徴的な異方性を、パラメーターを一切用いることなく再現できることがわかった。本年度は研究代表者が独自に開発した第一原理相対論配置間相互作用計算プログラムを活用して、種々の遷移金屑化合物におけるX線吸収スペクトル吸収端近傍微細構造(XANES)や電子線エネルギー損失スペクトル励起端近傍微細構造(ELNES)の非経験的解析を行った。特にLiNiO_2はリチウムイオン二次電池の正極材料としても検討されている重要な物質であるが、この化合物中のNiの電子状態についてはこれまで明確な理解が得られていなかった。例えば、小槻らは磁化率の測定結果および結合距離に基づく検討により、LiNiO_2中のNiは-Ni^<3+>(d^7)の低スピン状態であると報告しているのに対して、MontoroらはNi L_<2,3>吸収端XANESの測定結果およびパラメーターを用いた経験的な理論解析からNi^<2+>(d^8)の高スピン状態であると報告しており、互いに矛盾していた。そこで第一原理相対論配置間相互作用計算プログラムによってLiNiO_2中のNi周辺の電子状態計算を行ったところ、基底状態はNi^<3+>(d^7)の低スピン状態となり、小槻らの考えを支持する結果が得られた。また、この状態を始状態としてNi L_<2,3>吸収端XANESの理論スペクトルの計算を行ったところ、小山らによって測定されたNi L_<2,3>励起端ELNESの実験スペクトルを非経験的に再現できることが解った。したがって、本研究によってLiNiO_2中のNiの電子状態について初めて矛盾のない結論を得ることに成功したと考えられる。
西洋中世における社会思想の発展

前年度の研究に引き続き、本年度は13世紀初頭から16世紀初頭にかけての社会思想、とくに中世末期を重点において研究を行った。まず4月に本年度の研究方法を再検討し、各研究者の課題と各研究者の課題相互の関連を確かめた。同時に当該年度の設備備品費による図書購入について検討した。5月から7月までは13世紀の社会思想のさまざまな流れを研究課題とし、研究者を以下の3つのグループに分けた。1.フランシスコ会に代表される社会思想、2.アリストテレスの社会思想を中心とした学派(トマス・アクィナス)、3.13世紀末のアウグスティヌス学派。8月から12月までは1416世紀の社会観と社会理論を研究し、またその研究を3つのグループの分かれて行った。1.オッカムなどのドイツ・イギリス唯名論の社会思想、とくにその国家と教会関係を検討するとともに、14世紀における新しい自由意識による社会思想の変化を研究した。2.中世末期の歴史記述・世俗的社会哲学に見られる社会思想、とくに初期イタリア・ルネサンスと後期スコラ学との関係を吟味し、イタリア都市の思想家たちによる市民理念と15世紀の君主理念との緊張関係を検討した。3.16世紀スコラ学の社会理論・社会倫理学、とくに国家観に及ぼした影響を検討し、宗教改革による国家の強化の思想的背景、新大陸の発見による国際法思想のスコラ学的展開とその双方の中世末期における起源との関係を探った。1月から3月までは総合研究を行い、中世末期の社会思想の全体的構造とそれが近世の社会論に及ぼした影響を検討し、本研究全体をまとめた。西洋中世の社会思想を古代末期の教父思想から16世紀の初期近世思想に至るまでを解明する本研究は、本年度12世紀半ばまでの時代を研究テ-マとした。4月から7月は、全体的計画を立てた。その際、当時の社会組織論、特に教会一国家・政治関係の諸問題は、研究が多少あるため中心的研究課題から外し、思想史的研究方法を重視することが決った。8月から12月までの研究では研究者をグル-プに分け、1.教父思想とその影響、2.カロリング・ルネサンス時代、3.11ー12世紀の研究に取り組んだ。1.教父時代に関して、(1)エウセビウスに見られるキリスト教的国家理念、(2)ノラのパウリヌスの友愛論、(3)アウグスティヌスの二重的社会理論、(4)大グレゴリウス一世における政治的責任感と聖職者理念の結合に関して研究を進めた結果、11ー12世紀の多様な社会思想の原点を見極め、キリスト教的国家論と世俗社会論の緊張関係を理解することができた。2.カロリング・ルネサンス期に関して、新しい君主理念における古典古代からの学びと旧約聖書、またのちに終末思想の多大な影響とともに「君主の鏡」などに見られる教育論・君主像の倫理的高揚の試み、また支配者像の生活・社会政策に対する様々な批判が浮彫になり、新社会のキリスト教的基礎付けをめぐる努力・諸論争が分析された。3.11ー12世紀に関して、社会思想の人間論的な裏付けつまり人間尊厳論の登場とともに人間関係論・友愛論への新しい洞察において古典古代のヒュ-マニズム受容の自発的努力が発見され、当時創立された新修道会における共同体と個人の創造的な緊張関係が教会と社会の関係を再構造化する原動力の一つとして注目された。1月ー3月まで12世紀のサン=ヴィクトル派における宗教的社会位階論説とシャルトル学派における世俗的社会論の相違、また大学設立による研究者像の変遷を研究し、平成4年度に予定する13世紀以降の社会思想の研究の基礎研究ができた。

同時に当該年度の設備備品費による図書購入について検討した。5月から7月までは13世紀の社会思想のさまざまな流れを研究課題とし、研究者を以下の3つのグループに分けた。1.フランシスコ会に代表される社会思想、2.アリストテレスの社会思想を中心とした学派(トマス・アクィナス)、3.13世紀末のアウグスティヌス学派。8月から12月までは1416世紀の社会観と社会理論を研究し、またその研究を3つのグループに分かれて行った。1.ォッカムなどのドイツ・イギリス唯名論の社会思想、とくに国家と教会関係を検討するとともに、14世紀における新しい自由意識による社会思想の変化を研究した。2.中世末期の歴史記述・世俗的社会哲学に見られる社会思想、とくに初期イタリア・ルネサンスと後期スコラ学との関係を吟味し、イタリア都市の思想家たちによる市民理念と15世紀の君主理念との緊張関係を検討した。3.16世紀スコラ学の社会理論・社会倫理学、とくにその国家観に及ぼした影響を検討し、宗教改革による国家の強化の思想的背景、新大陸の発見による国際法思想のスコラ学的展開とその双方の中世末期における起源との関係を探った。1月から3月までは総合研究を行い、中世末期の社会思想の全体的構造とそれが近世の社会論に及ぼした影響を検討し、本研究全体をまとめた。
GGCT阻害分子を用いた尿路上皮癌治療の開発

(1)膀胱癌手術標本における免疫組織化学的検討:当科で経尿道的切除術を施行した初発筋層非浸潤性膀胱癌130症例(Ta 98例,T1 32例)のパラフィン包埋切片を試料として,われわれが樹立した抗GGCTモノクローナル抗体(6.1E)による免疫染色を行った.臨床情報を知らない2名の研究者により染色強度を評価し,低発現と高発現に分類した.GGCT高発現77例(59%),低発現63例(41%)であった.高発現の割合は深達度ではTa 57%,T1 66%,異型度ではG1 52%,G2 62%,G3 77%で,悪性度に比例して高発現の比率が上昇した.膀胱内非再発率は病期Taにおいて高発現群が低いものの統計学的有意差は得られなかった(p=0.08, Logrank).(2)尿路上皮癌細胞株における増殖抑制活性の確認:尿路上皮癌由来の細胞株RT112, T24, UMUC3を用い,GGCTノックダウンおよびわれわれが開発したGGCT阻害剤pro-GAの増殖抑制効果を検討した.96穴プレートで培養し,WST-8アッセイで生細胞数を比較した.また,筋層非浸潤性膀胱癌に標準的に用いられているマイトマイシンC(MMC)との併用効果も検討した.すべての細胞種においてsiGGCT投与,pro-GA投与のいずれでも強い増殖抑制を呈した.MMCとの併用ではpro-GA+MMCにおいて,各単剤の効果に比べ顕著に生細胞率が低下した.筋層非浸潤性膀胱癌の手術標本におけるGGCT発現と臨床所見(病期,異型度,非再発率)との関連を明らかにし,また,複数の細胞株を用いてGGCT阻害剤「pro-GA」の増殖抑制効果を明らかにすることが出来たため.ヒト膀胱癌細胞株を正所性または皮下に移植したモデルマウスの樹立を目指し,それらに対するpro-GAによる治療実験を行う.また,引き続き尿路上皮癌細胞株を試料として,GGCT標的治療における抗癌メカニズムの解明を行っていく.(1)膀胱癌手術標本における免疫組織化学的検討:当科で経尿道的切除術を施行した初発筋層非浸潤性膀胱癌130症例(Ta 98例,T1 32例)のパラフィン包埋切片を試料として,われわれが樹立した抗GGCTモノクローナル抗体(6.1E)による免疫染色を行った.臨床情報を知らない2名の研究者により染色強度を評価し,低発現と高発現に分類した.GGCT高発現77例(59%),低発現63例(41%)であった.高発現の割合は深達度ではTa 57%,T1 66%,異型度ではG1 52%,G2 62%,G3 77%で,悪性度に比例して高発現の比率が上昇した.膀胱内非再発率は病期Taにおいて高発現群が低いものの統計学的有意差は得られなかった(p=0.08, Logrank).(2)尿路上皮癌細胞株における増殖抑制活性の確認:尿路上皮癌由来の細胞株RT112, T24, UMUC3を用い,GGCTノックダウンおよびわれわれが開発したGGCT阻害剤pro-GAの増殖抑制効果を検討した.96穴プレートで培養し,WST-8アッセイで生細胞数を比較した.また,筋層非浸潤性膀胱癌に標準的に用いられているマイトマイシンC(MMC)との併用効果も検討した.すべての細胞種においてsiGGCT投与,pro-GA投与のいずれでも強い増殖抑制を呈した.MMCとの併用ではpro-GA+MMCにおいて,各単剤の効果に比べ顕著に生細胞率が低下した.筋層非浸潤性膀胱癌の手術標本におけるGGCT発現と臨床所見(病期,異型度,非再発率)との関連を明らかにし,また,複数の細胞株を用いてGGCT阻害剤「pro-GA」の増殖抑制効果を明らかにすることが出来たため.ヒト膀胱癌細胞株を正所性または皮下に移植したモデルマウスの樹立を目指し,それらに対するpro-GAによる治療実験を行う.また,引き続き尿路上皮癌細胞株を試料として,GGCT標的治療における抗癌メカニズムの解明を行っていく.高額試薬(GGCT阻害剤pro-GAおよびGGCT抗体)に関して,以前よりわれわれが所蔵していた分量で賄うことができ,新規購入が不要であったため.
口腔癌における微小環境と頸リンパ節移転

前年度までの検討で、口腔扁平上皮癌の増殖局所におけるlamininの発現が少ない腫瘍に頸部リンパ節転移が多いことを明らかにしたそこで、lamininに対する分解酵素であるcathepsin Dならびにcathepsin Gの発現とlamininの局在様式との関連について、口腔扁平上皮癌18例を対象に検討した。cathepsin Dは腫瘍細胞の細胞質に細顆粒状の反応物として観察された。cathepsin Dの発現とlamininの局在様式との間には関連性は認められなかった。cathepsin Gの発現は腫瘍細胞には観察されず、間質の巨細胞様細胞の細胞質とリンパ球に顆粒状反応物として観察された。lamininの局在様式との関連では、癌胞巣内リンパ球浸潤がみられlamininの線状反応が断裂している腫瘍ではcathepsin Gの発現が認められた。第8因子関連抗原の免疫組織学的検索による癌の増殖局所における脈管数の程度と頸部リンパ節との関連について口腔扁平上皮癌37例を対象に検討した。脈管数の程度別の症例数は、+:13(35.1%),++:9(24.3%),+++:15(40.5%)であった。原発巣進展度(T分類)と脈管数の程度との間には一定の傾向はみられなかった。対象37例の頸部リンパ節転移頻度は37.8%(14/37)で、T分類別ではT1,T2(n=23):17.3%(4/23),T3,t4(n=14):71.4%(10/14)であった。これを脈管数の程度別にみると、T1,T2では+(n=9)のみに44.4%(4/9)と転移がみられ、T3,T4では+(n=4):75.0%(3/4),++(n=3):66.7%(2/3),+++(n=7):71.4%(5/7)であった。以上のように、原発巣非進展例(T1,T2)に限ると、脈管数の少ない腫瘍に頸部リンパ節転移が高率にみられた。
海馬障害モデル動物のストレス下における神経細胞死と細胞新生について

トリメチルスズ(TMT)投与による海馬傷害モデルラットについて、海馬における細胞死と細胞新生を検討した。TMTモデルにおける細胞死は、TMT投与後1日日から海馬CA1,3領域の錐体細胞層、歯状回顆粒細胞層で認められ、投与後5日目に最大となり、以降は減少した。神経再生はおおむね神経細胞死(アポトーシス)の生じる部位を覆う様な形で、時間的にも神経細胞死の発生より1-2日遅れて観察された。TMT投与と副腎摘除術(ADX)を併用し、グルココルチコイドがTMTの海馬傷害を増悪させることを確認した。TMTによる神経細胞死はグルココルチコイドのタイプ2受容体アゴニストで軽減されたが、神経再生には変化がみられなかった。次に、TMT投与による海馬傷害の予防について検討した。免疫抑制剤をTMT投与後に投与し、細胞死について検討したところ、明らかに細胞死を抑制することが明らかになった。しかしながら免疫抑制剤はCA1領域の細胞死を抑制するにとどまり、CA3領域の細胞死には影響がなかった。免疫抑制剤が有機スズによる海馬神経細胞死を一部であれ、抑制することは、細胞死にどのようなメカニズムが働いているかを解明する手がかりとなりうると考え、有機スズ投与、免疫抑制剤投与、それぞれでどのような遺伝子発現が変化するかをマイクロアレイを用いて解析した。TMT投与により1)グリオサイトーシスにかかわる遺伝子発現がコントロールに比べて上昇しており、炎症反応が起こっていること、2)アポトーシスを抑制する遺伝子発現が減少しており、細胞死が誘発されていることが明らかになった。免疫抑制剤投与後は逆に、神経保護効果のある遺伝子の発現が上昇、グリオサイトーシスに関わる遺伝子の発現が減少していた。免疫抑制剤は神経保護作用を持つ因子の遺伝子発現の上昇を促すことで神経細胞死を抑制し、一方でグリオサイトーシスを促進させる因子の遺伝子発現を抑制することで炎症反応を抑制し、結果として細胞保護作用を発揮すると考えられた。初年度である本年度は、トリメチルスズ(TMT)投与による海馬傷害モデルラットの、海馬における細胞死と細胞新生を経時的に検討した。また、TMT投与と副腎摘除術(ADX)を併用し、グルココルチコイドが細胞死と細胞新生に及ぼす影響についても同様に経時的に検討を進めた。動物屠殺24時間前にbromodeoxyuridineを投与し、新生した細胞に取り込ませて、二重免疫染色を容易にすることができた。細胞死の検討に用いたTUNEL法とBrdUの免疫染色との二重染色で、次のような結果が得られた。1)TMT投与群で、投与後1日目から海馬CA1, 3領域の錐体細胞層、歯状回顆粒細胞層、梨状葉に著明な神経細胞死を認め、5日目に最大となり、以降は減少した。2)細胞新生は投与後2日目力ら門部、顆粒細胞層の内外に点在していたが、細胞層そのものにはほとんど認められなかった。3)細胞新生はTMT投与後2日目から出現し、14日目もほぼ動揺の状態で継続していた。4)ADXは単独では若干の細胞死を認めるのみであったが、TMT投与による細胞死、細胞新生いずれの変化も増大させた。次に、新生した細胞がなにであるかを検討した。マーカーとして、幼弱ニューロンに発現するPSA-NCAM、astrocyteのマーカーであるGFAP, vimentinを用いた。

結果、1)TMT投与群において、投与後1日目から歯状回顆粒細胞層、梨状葉にPSA-NCAMが出現しており、以後14日目まで出現を認めた。2)PSA-NCAM出現量については、ADXによる変化を認めなかった。3)vimentinは、投与後14日目まで、TMT投与群、ADX単独群、TMT+ADX群すべてにおいて梨状葉、海馬門部、海馬CA1, 3領域に大量に出現しており、特にADX群において著明であった。4)vimentinの出現は、まず梨状葉、次いで海馬門部、次にCA3, CA1という経過をたどることが明らかになった。これらの結果は、日本神経科学学会、北米神経科学学会、国際神経精紳薬理学会においてポスター癸表し、現在投稿準備中である。昨年度に引き続き、トリメチルスズ(TMT)投与による海馬傷害の機序について検討した。特にグルココルチコイドの関与について、両側副腎摘除術(ADX)を施したものと、酵素阻害剤であるメチラポンをTMT投与後7日間にわたって投与した2種類の系を作り、海馬部位別に細胞死の経過を観察し、同時に細胞新生を観察した。TMT投与ラットでは、海馬歯状回顧粒細胞層に始まり、CA3領域、CA1領域と時間を追って細胞死が起こることが明らかになった。ADXでは海馬領域すべてで細胞死が悪化した。一方、メチラポン投与では、TMT投与後28日後には海馬CA1領域と歯状回においては細胞死が抑制されたが、CA3領域では抑制されなかった。これはメチラポンはTMT投与後4-5日目に起こる血中グルココルチコイドの一過性増加を抑制しただけであるのに対し、ADXはグルココルチコイドを完全に抑制したという違いによるものと考えられる。また、部位による違いは海馬におけるステロイド受容体の分布によるものと推測された。TMT投与単独でも、海馬歯状回においては細胞新生が起こり、TMT投与後14日目には対照群と同等にまで回復することがわかった。メチラポン投与群では、歯状回で一過性に細胞新生が促進され、CA1領域でも細胞新生が認められた。これらの結果を、日本神経科学会学会のシンポジウム、北米神経科学学会で発表した。本年度は、主として有機スズによる海馬障害を予防する免疫抑制剤について検討した。免疫抑制剤を有機スズ投与後に投与し、細胞死について、免疫染色、TUNEL法を用いて計測したところ、明らかに細胞死の抑制効果が認められた。しかしながら、有機スズによるラット海馬神経細胞脱落は、歯状回、CA3,CA1と経時的に進行するのに対して、免疫抑制剤の後投与は、CA1の細胞脱落を抑制するにとどまり、CA3の細胞脱落には効果がなかった。免疫抑制剤が有機スズによる海馬神経細胞死を一部であれ、抑制することは、細胞死にどのようなメカニズムが働いているかを解明する手がかりとなりうると考え、有機スズ投与、免疫抑制剤投与、それぞれでどのような遺伝子発現が変化するかをマイクロアレイを用いて解析した。ラット海馬を取り出し、totalRNAを抽出し、マイクロアレイに供した。結果、有機スズ投与により1)グリオサイトーシスにかかわる遺伝子発現がコントロールに比べて上昇しており、炎症反応が起こっていること、2)アポトーシスを抑制する遺伝子発現が減少しており、細胞死が誘発されていることが明らかになった。免疫抑制剤投与後は逆に、神経保護効果のある遺伝子の発現が上昇、グリオサイトーシスに関わる遺伝子の発現が減少していた。
神岡鉱山地下における原子核乾板を用いた中性子フラックスの測定

原子核乾板は、高速中性子による反跳陽子を3次元飛跡として検出することにより、その飛来方向やエネルギーの測定が可能であるが、ガンマ線起因の電子飛跡がバックグラウンドとなる。本研究では、原子核乾板の受光素子である臭化銀結晶に電子トラップとして働くロジウムをドープして感度制御を行う事で、高いシグナルノイズ比で中性子起因の反跳陽子飛跡の解析が可能な原子核乾板の開発に成功した。本研究において開発した原子核乾板を用いた高速中性子検出技術は、神岡鉱山やイタリア・グランサッソ研究所などにおける地下の高速中性子フラックス測定に用いる事が可能である。本研究は、原子核乾板による高速中性子検出技術の開発である。本技術は、検出器本体である原子核乾板の開発とその読み取り技術からなる。検出器の開発は、OPERAフィルムを基に名古屋大学乳剤製造装置により新たに開発・合成した原子核乳剤の開発により行った。14MeV中性子の測定は、14MeV核融合中性子ビームラインにおいてOPERAフィルムに照射を行い、S-UTSにより読み取り評価を行った。MeV領域の中性子については、OPERAフィルムは膨大なバックグラウンドが蓄積されているために数MeVの環境ガンマ線による反跳電子飛跡との識別が困難であった。これに対処するために、現像手法の開発、及び新たに製造した乳剤の感度の調整を行った。中性子は2.4MeV核融合中性子ビームラインによる単色中性子を用いる予定であったが、故障により使用出来ず、カリフォルニウム照射により行った。更に、より短い飛跡数ミクロンの飛跡読み取りのために、S-UTSの読み取りアルゴリズムの改良を行い、5ミクロン程度の飛跡の自動読み取りに成功した。本来行う予定であった2.4MeV中性子ビームの照射による検出器の検出効率・応答特性評価はビームラインの復旧次第行う予定である。これらの開発により、原子核乾板により高速中性子検出の実用化を達成した。本研究は、素粒子実験のみならず、核融合中性子計測、医療用などの加速器からの中性子線量評価、宇宙等の様々な環境における中性子測定に原子核乾板を用いる事を可能とした。神岡鉱山などの地下実験施設における素粒子実験を行う上で、主要なバックグラウンドの1つとなる高速中性子フラックスの測定を目的とした原子核乾板を用いた測定技術の開発を進めてきた。原子核乾板は、高速中性子による反跳陽子を3次元飛跡として検出することにより、その飛来方向やエネルギーの測定が可能である。しかし、同様にガンマ線による散乱電子の飛跡も記録する。特に、数MeV領域の中性子による反跳陽子の飛跡長は数ミクロンから数十ミクロン程度と短いため、ガンマ線起因の電子飛跡が主要なバックグラウンドとなる。このような電子飛跡との識別能力を向上させるため、原子核乾板の受光素子である硝酸銀結晶に電子トラップとして働くロジウムをドープして感度制御を行う事で、高いシグナルノイズ比で中性子起因の陽子飛跡を記録しつつ、ガンマ線起因の電子飛跡を記録しない原子核乾板の開発を行った。開発した原子核乾板の感度評価を電子に対してはガンマ線源Am-241線源を用い、中性子に対してはCf-252線源を用いて評価を行った。その結果、MeV中性子に対する感度を維持したまま、1平方センチあたり10の9乗のガンマ線バックグラウンド下での使用が可能となった。更に、原研の核融合中性子源FNSを用いて2.8MeV中性子を開発した原子核乾板へ照射した。この飛跡を解析し、エネルギー分解能、及び検出効率の測定を行い、シミュレーションとの比較を行い両者とも良い一致を得た(エネルギー分解能は10%)。現在、エネルギー測定精度向上のため、これまで開発してきたS-UTSとは異なる新しい認識アルゴリズムによる自動測定技術の開発も進めている。本研究において開発された原子核乾板を用いた高速中性子検出技術は、神岡鉱山やイタリア・グランサッソ研究所などにおける地下の高速中性子フラックス測定に用いる事が可能である。地下実験における検出器の高感度化に伴い精密な中性子フラックスの理解が非常に重要となってきている。特に、暗黒物質探索実験に於いては、その検出原理は同じであるため、主要なバックグラウンド源となり、その理解は不可欠である。このような中で、これまでに行われていない測定手法である原子核乾板を使った中性子フラックスの理解は他の検出手法による測定値との比較の意味においても、極めて重要である。中性子の原子核乾板による検出原理は、乳剤を構成する要素である水素原子核を中性子が散乱する事で記録される反跳陽子の飛跡を検出である。しかし、対象とする数MeVのエネルギーの中性子の飛跡の長さは原子核乳剤中で数十ミクロン程度と短い。また、このような短い飛跡においてはガンマ線による反跳電子がバックグラウンドとなってしまう。これらを解決するために、読み取りアルゴリズムの改良、及び中性子検出に最適化した原子核乳剤の開発を行う。新たな乳剤の開発は、名古屋大学F研究室にある乳剤製造装置を用いる。

従来の原子核乾板による中性子認識アルゴリズムの開発、及び新しい乳剤の評価を、これまで我々が開発してきた超高速自動飛跡読み取り装置S-UTSを用いて行う。更に、本技術の実証として、FNSや産業総合技術研究所などの中性子ビームライン上での照射、地上での環境中性子への照射などを行い、中性子検出効率の導出、及び中性子フラックス測定を行う。これらを実施する事で、将来的な地下での測定へと繋げる。14MeV中性子からカリフォルニウム線源による数MeV中性子による数ミクロンの飛跡の検出を達成し、おおむね順調に進展しているが、当初の予定で行う事が出来なかったものとしては、2.4MeV中性子による検出器の検出効率の導出と応答特性の評価である。これについては、ビームラインが復旧次第、次年度行う事とし、これと14MeV中性子の結果を総合的に評価する事で、高速中性子検出のエネルギー依存性を評価を行う予定である。これまでにFNS2.4MeV中性子ビームラインで照射を行い、その反跳陽子飛跡の自動読み取りテストを行った。乾板中には環境放射線によるバックグラウンド飛跡も大量に蓄積されており、それらも全て読み出されるために、飛跡の濃さと相関がある飛跡の出力信号の大きさで閾値を設定し中性子起因の反跳陽子のみを選び出す処理を確立した。また、同様に、産業総合技術研究所の中性子標準場において14MeV中性子の照射を行い、飛跡長と散乱角度の関係を実測し、エネルギー測定の可能性の検証を行った。現在、これらの検出効率を求めるための新たな測定実験の実施を計画している。これらの技術開発と共に、本技術手法の検証として、イタリアグランサッソ地下で行われているOPERA実験において、地下に数年間設置されていた原子核乾板の現像を行い、その解析を開始した。今後の課題としては、高速中性子検出に最適な原子核乾板構造や組成の最適化、現像手法の開発、及びそれに最適な読み取りアルゴリズムの開発を行う事でより短い飛跡に対して高い検出効率の向上を目指す。また、飛跡の角度と飛程情報の高精度化を目指す。更に、原子核乾板を地上、地下、高空などで照射を行い、それらの環境における中性子の測定、及びその他宇宙線種識別技術の開発を行う。読み取り技術の開発をこれまでのOPERAフィルムのみではなく、新しい乳剤においても開始する。今年度は、新しい乳剤への単色中性子ビームの照射を行い、その応答の理解に努める。特に、読み取り技術に関しては、これまでの40ミクロン程度の飛跡を対象とした読み取りアルゴリズムを、更に短い10ミクロン程度まで引き下げることを考えている。また乳剤については、いくつか異なった組成のものを試作し、それらについて、ガンマ線と中性子の識別能及び感度についての評価を行う。実測としては、地上に一定期間原子核乾板を設置し環境中性子の測定を行う。また、現在、原子核乾板を用いたニュートリノ振動実験OPERAを行っているために、すでに乳剤取り扱い施設を地下に持つイタリア・グランサッソ研究所の地下施設において、乳剤の塗布から現像、更に日本へ持ち帰り読み出しを行い、地下施設における中性子測定技術の実証を行う。
生体分子イメージングを用いた川崎病血管炎の解析

全身の血管炎である川崎病では、合併症として約1%の患者に冠状動脈瘤が残存する。この冠状動脈瘤は、その壁が肥厚して狭くなり、虚血性心疾患に至ることが知られている。機序として、成人の動脈硬化と同様に高脂血症や血管の慢性炎症が示唆されているが、実際の冠状動脈瘤の局所でどうなっているかは不明であった。本研究において、のべ24人の川崎病既往患者でポジトロンエミッショントモグラフィーとX線CT検査により、冠状動脈の炎症を可視化した。その結果、冠状動脈瘤の残存する患者では川崎病り患遠隔期においても冠状動脈瘤壁に炎症が持続していることが分かった。また、薬物療法によりこの炎症が軽減される可能性も認められた。現在までに川崎病後の巨大冠動脈瘤を有す患者のべ6人(うち3人は2回)、冠動脈瘤の退縮例5人に対して、冠動脈のPET/CTを行った。それぞれの患者の冠状動脈局所の炎症の程度を確定し、今後さらに症例数を増やし、血液検査上のバイオマーカーの相関の有無、内頸動脈の内中膜厚と血管硬度、上腕動脈のFlow mediated dilationによる血管内皮機能の相関について検討する予定である。本研究では、1)川崎病遠隔期の冠状動脈炎の解析:巨大冠状動脈瘤を有す川崎病遠隔期の患者で、18F-FDG-PET/CT装置を用いて、冠状動脈の形態と照合して、生体分子イメージングを行い、冠状動脈局所の炎症局在評価とその程度を定量化する。2)川崎病遠隔期の冠状動脈炎とバイオマーカー・血管内皮機能:18F-FDG-PET/CTにより定量的に評価した冠状動脈局所の炎症の程度と、血液検査上のバイオマーカーの相関の有無、内頸動脈の内中膜厚と血管硬度、上腕動脈のFlow mediated dilationによる血管内皮機能の相関について調べる。本年度は、a)巨大冠状動脈瘤を有す川崎病遠隔期患者3例と、b)冠状動脈瘤の退縮した川崎病遠隔期患者1例において、冠状動脈のPET/CT検査を施行し、同時に採血と、血管内皮機能と内頸動脈硬化度の測定を行った。現時点では症例が集積しておらず、バイオマーカーや血管内皮機能との相関は解析できないが、冠動脈瘤の退縮例では冠動脈瘤壁への18F-FDGの集積を認めなかったが、巨大冠動脈瘤の残存している例では冠動脈瘤壁への18F-FDGの集積を認めた。このように、冠動脈瘤の残存している例では、冠動脈壁での炎症が起きている可能性が示唆される。年間1万4000人の小児科罹患する全身の血管炎である川崎病では、治療後も合併症として約1%の患者に冠状動脈瘤が残存する。この冠状動脈瘤を残した多くの例において、その壁が肥厚し、狭窄性病変から虚血性心疾患に至ることが知られているが、その機序は不明である。成人の動脈硬化と同様に、機序として高脂血症や慢性の炎症が示唆され、実際冠状動脈瘤の残存する例では、血液中の炎症性物質が上昇していることは報告されていたが、実際の冠状動脈局所でどうなっているかは不明であった。本研究の目的は、「PET/CTを用いた生体分子イメージングにより、冠状動脈の炎症の局在・活動性を評価し、川崎病後の冠動脈瘤のリモデリング機構を解明すること」である。本研究期間において、冠状動脈瘤の残存した15例と、冠状動脈瘤の退縮(血管造影上正常化)した9例、のべ24例の川崎病既往患者で、PET/CTを用いた分子イメージングを行った。そして、冠状動脈瘤の残存する例においては、川崎病り患後40年を経た遠隔期においても、その冠状動脈瘤壁に炎症が持続していることを、世界で初めて発見した。現在、データ解析中であるが、冠状動脈瘤退縮例では冠状動脈壁の炎症はほとんど認めなかった。また、冠状動脈瘤壁に炎症のある症例に対して薬物治療を行い、2年後の検査で、この炎症が軽減されることも見出した。これらの知見は、新規の発見であり、川崎病遠隔期における冠動脈壁のリモデリングの機序の解明につながるとともに、その治療法の開発に端緒を開くものである。小児循環器冠動脈瘤退縮例のPET/CT件数はあと1例で予定の患者数であるが、巨大冠動脈瘤を有す患者のPET/CTの件数が、現在のところ予定の半分である。、外来で定期フォロー中の巨大冠動脈瘤を有す患者にはコンタクトが取りやすく、研究への参加を得やすかったが、冠動脈瘤退縮後の患者の受診予定が不明なため、これらの患者の研究への参加が少なかった。

まだPET/CTの検査を受けていない巨大冠動脈瘤を有す患者さんに研究参加への説明・依頼を積極的に行っていく。外来で定期フォロー中の巨大冠動脈瘤を有す患者にさらに研究に参加してもらうとともに、過去の患者データベースから冠動脈瘤退縮後の患者ピックアップし研究への参加を得ることで、目標症例数に近づける。研究参加者数が予定よりも少なかったため、本年度使用額が予定よりも少なくなり、次年度使用額が生じました。より積極的に研究参加者を募り、予定数の患者に研究に参加してもらう。次年度は、巨大冠動脈瘤を有す例6例、冠動脈瘤の退縮した例3例を目標に、FDG-PET/CT検査を行い、この検査試薬代、廃棄費用等として使用する。その他、血液検査、内皮機能検査の検査費用と消耗品費や、バイオマーカー(高感度CRP、IL-6、血清アミロイドA、MMP-3, MMP-9)の測定用キットの購入等に使用する。また、国内学会や国際学会に参加する出張経費として使用する。
超高感度化学発光検出によるmRNAのマイクロアレー解析

本研究では、核酸のハイブリダイゼーションアッセイおいて分子数レベルのmRNAの検出を可能にする新手法を開発することを目的としている。そこで本研究では、当研究室で既に見い出している核酸の新しい発光試薬TMPGによる化学発光反応を適用して、特定遺伝子テロメアの高感度ハイブリダイゼーションアッセイ検出法の開発研究を行った。TMPG試薬はグアニン塩基を特異的に発光性に導くので、グアニン塩基を含まないテロメアのcDNA[(CCCTAA)n]を膜に固定し、テロメアDNAとハイブリダイズさせれば、テロメアDNAを特異的に検出できるものと想定した。さらに、この方法では、ゲノムDNAを電気泳動せずに直接テロメアDNAを測定することが可能で、細胞分裂によって短縮するテロメアDNAの長さに応じて、それに比例した発光シグナルを得ることも期待できた。そこで、TMPG試薬によるテロメアDNAのハイブリダイゼーションアッセイ系の感度を増大させるために、アビジンタンパク質とピオチン化長鎖DNAを用いて、テロメアDNAのシグナル増幅反応について検討した。これはTMPG試薬の特性を活かした増幅反応で、ターゲットDNAにさらに多量のグアニン塩基を含む長鎖DNAを連鎖的に結合させ、発光強度を増大させることを期待したものである。検討の結果、ハイブリダイゼーションアッセイによるテロメアの検出感度を約千倍増幅することが可能であった。これにより、mRNAや特定DNAのマイクロアレー解析に対する新規の超高感度化学発光検出法の開発が期待できる。
若年者における歯周疾患の発現と成因に関する疫学的研究

若年者における歯周疾患の発現と成因を究明するために、男子高校生、中学生、女子高校生、中学生および本学小児歯科来院児合わせて約8000名を対象に、歯周疾患実態調査ならびにアンケ-トによる歯周囲疾患に対する自覚の有無等の調査を行い、幾つかの知見を得た。男子高校生については、約30%の者に出血傾向がみられ、PL-I値の平均は約1.0で、ほとんどの者が程度の差こそあれ、何らかの歯周疾患を有していた(有病者率97.5%)。C.P.I.T.N.値でみると学年が上がるに従い、疾病の程度が進行する傾向がみられ、P.M.A指数でみた歯肉炎の状態は、軽度のものを含めるとほぼ全員が何らかの炎症を呈していた。つぎに、3年間の経時的変化についてみてみると、PL-I値は有意に低下する傾向がみられたもののC.P.I有病者率は、全体としてほぼ一定で高率に推移しており、歯肉の炎症は、一時的に改善されることはあっても、経年的に蓄積される歯石や中等度、重度の歯周組織の疾患はさらに進行していることが示唆された。一方、女子中学生は女子高校生に比較して、PL-I値、C.P.I.T.Nとも高く、歯周疾患が比較的進行した者の割合が高い傾向にあった。アンケ-トによる意識調査の結果では、男子高校生と女子高校生の間で、歯磨行動や歯周疾患の自覚の点で、差がみられた。以上の如く、若年者の歯周疾患の実態調査ならびにアンケ-ト調査の結果などの総合的研究により、この時期の若年者の歯周疾患の現状とそれに関連した意識の概要を知るとともに、経年的追跡調査から歯周疾患の変化の推移をうかがうことができ、本調査が今度の歯周疾患の早期発見、予防方策の確立の一助に寄与するものであると確信する。神奈川県某私立男子高校生のうち、無作為に抽出した626名について、歯周疾患実態調査を行うとともに、同高校全校生徒2383名および都内某女子高校全校生徒2383名について思春期の歯周疾患に対する意識調査を行った。その結果、唾液潜血反応については、(-)の者3.5%、(±)の者57.6%、(+)の29.6%、(++)の者6.4%、(+++)の者2.9%であった。また、PL-I値は、平均0.95±0.65で、部位別にみると大臼歯部が比較的高い値を示した。つぎに、C.P.I.T.Nを調査したところ、コード0の者3.4%、コード1の者24.3%、コード2の者49.3%、コード3の者22.7%、コード4の者0.3%で、全体の有病者率は96.6%であった。意識調査については、歯磨き回数1日2回の者75.0%、歯磨きの時間帯は朝食後と就寝前の者が多かった。歯周疾患の自覚についての結果は、歯肉から出血すると答えた者が、47.3%みられ、その他食片圧入79.2%、口臭16.9%、歯ぎしり13.0%、口呼吸38.6%の者がその自覚を訴えた。以上の結果より、若年者とくに思春期にある高校生では、硬組織(齲蝕)疾患はもとより歯周疾患の罹患率も高いことが示唆された。また、色彩計による歯肉色の測定は、機器の標準化を設定するため、健常小児3名および成人2名についてその歯肉色を検索した。これら得られたデータを本学所蔵のコンピューターに接続、処理を遂行している。