hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ジャワ原人の年代に関する総合的再検討

3.サンギラン遺跡およびモジョケルト遺跡から,昨年度と本年度に採取した計約70層準の古地磁気分析用試料について測定を進め,予備的ながら現在までに,サンギランに関しては従来の結果を補足・補間するデータが,モジョケルトに関しては従来の結果を支持するデータが得られている。また,サンブンマチャン遺跡の2つの層準についても予備的な古地磁気分析を実施した。4.ガジヤマダ大学に保管されているジャワ島産古人類化石の年代学的分析について関係者と協議し,2つの重要な人類化石から,主要成分および少量・微量成分元素の多元素分析を実施するための骨試料を採取した。本研究の目的は,インドネシアにおける原人の変遷史の年代的枠組を明らかにすることである。本年度は以下の研究調査を実施した。1.中部・東部ジャワ島の古人類遺跡において本研究にかかる現地調査にて採取した凝灰岩等堆積物試料について,総合的にテフラ(火山灰)分析を行い,放射年代測定(フィッション・トラック法およびアルゴン40/アルゴン39法)用試料としての適正および層序的鍵層としての有用性に関する検討を行った結果,それぞれいくつかの層準における適正や有用性が追加確認された。2.フィッション・トラック法に関しては,年代を測定する過程における技術的な問題の解決のため,特殊なポリカーボネイト(DAP)を外部検出器として用いた場合の較正作業と国際的な公表手続を行った。3.上記の凝灰岩等堆積物試料について,アルゴン40/アルゴン39法による年代分析を進めた結果,火山性二次堆積物の影響に関する考察を,従来以上に慎重に行う必要のあることが示唆された。4.ジャワの古人類遺跡に関する古地磁気分析を進めた結果,サンギラン地域に関しては従来の結果を補足・補間するデータが,モジョケルト(プルニン)に関しては従来の結果を支持するデータが補充された。また,サンブンマチャンについても予備的な測定結果が得られた。5.いくつかのジャワ原人化石について,骨を構成する主要成分および少量・微量成分元素の多元素分析を行い,それらの化石の本来の出土層準に関する考察を進めた。
感性による疾走の熟達と言語化

平成30年度は,研究計画に従って,主に研究データの分析,論文投稿,学会発表を中心に課題に取り組んだ.はじめに,ドイツ・サッカーリーグに所属するクラブチームの疾走トレーニングキャンプに帯同し,ランニングコーチから指導を受けた選手の認知変容を明らかにすることを目的とした.その結果,(1)新しい疾走動作の指導を受けた際の気づき,(2)腕振りの動作による疾走スピードの体感,(3)腕振りの動作による足(下肢)の動作との連動,が共通した認知変容として示唆された.疾走に対する選手の主観的な認知とは,個人固有性の高いものである一方で,共通する認知変容が示されたことにより,選手の言語報告を指標としたコーチングや,疾走の熟達過程を予測できる可能性が開かれた.なお本研究は,電子情報通信学会論文誌和文A(査読有)に掲載された.次に,ラグビー高校日本代表チームで使用された疾走に関する集団語に注目し,集団語が指示する意味の成立過程について,明らかにすることを目的とした.その結果,集団語は,集団語に関する動感の概念から,応用的な概念へと段階的に連関することが示され,これら2つの概念との連関は,集団語の動感の得易さに関係する可能性が示唆された.本研究から明らかにされたような集団語の成立過程のモデルは,身体動作の分析から解明することは難しく,認知的側面に焦点を当てることによって可能となるものであるため,当該領域で注目される記号コミュニケーションの性質を解明に寄与すると考えられる.なお本研究は,ヒューマンインタフェース学会論文誌(査読有)に掲載されてた.これらの研究は,認知科学会,電子情報通信学会,ヒューマンインタフェース学会において学会発表を行った.さらに,静岡大学創造科学技術大学院の博士論文「疾走スキルの伝達における選手の認知過程に関する情報学的研究」にまとめ,博士(情報学)の学位を取得した.平成28年度は,研究計画にしたがって,主に次の2課題に取り組んだ(A)立位と歩行の熟達と学習者の言語化に関する研究(B)疾走の熟達と学習者の言語化に関する研究課題(A)に関しては,疾走の熟達に有効とされる立位および歩行の熟達に注目し,大学で女子バスケットボール部に所属する学習者の言語化を身体的(知覚と行為に関する着眼点)と,思考的(不安・疑問・願望に関する記述)の2つのパラメータに分け,熟達との関連性について実証を行った.その結果,身体的パラメータに対する教授者の評価と,立位と歩行に熟達に関連性が示唆された.また,熟達しなかったと評価された学習者は,思考的パラメータの記述が多いことが明らかとなった.次に,課題(B)に関しては,課題(A)の発展として,同じく大学女子バスケットボール部に所属する学習者の言語化を物理的(動作・行為に関する着眼点),思考的(不安・疑問・願望などに関する着眼点),身体知的(身体感覚・体感に関する着眼点)の3つのパラメータに分け,疾走の熟達との関連性を実証した.その結果,学習者の疾走の熟達は,学習者の身体感覚や体感に関する言語化に表れる可能性が示唆された.これらの研究成果を踏まえて,平成29年度では,研究計画通り,対象スポーツをラグビーに設定し,競技特性に応じた疾走の熟達と,学習者の言語化の関連性について取り組む.研究計画通り進捗しており,期待している成果も徐々に得つつある.平成29年度は,研究計画にしたがって,次の課題に取り組んだ(B)疾走の熟達と学習者の言語化に関する研究課題(B)に関して,主にデータ取得および分析を行った.調査対象としては,アイルランド遠征を目的とした第42期および第43期ラグビー高校日本代表チームに帯同し,言語化データを取得した.第42期ラグビー高校日本代表チームから得られた言語化データに関しては集団語に着目し,相関分析と共起分析を行った.その結果,指導者から選手へと伝えられる集団語は,段階的にその集団語が意味する動作から体感へと意味が構築され,その後に,他の行為へと応用されることが示された.一方,この集団語の意味構築の過程は,集団語が意味する動作の難易度と関連することが示唆された.また,サッカー世界ランキング1位(2018年1月時点)のドイツのリーグに所属するチームが実施した疾走トレーニングキャンプ(2018年1月実施)に帯同し,同じく言語化データを取得した.言語化データを分析・考察した結果,(1)新しい疾走動作の指導を受けた際の気づき,(2)腕振りの動作による疾走スピードの体感,(3)腕振りの動作による足(下肢)の動作との連動,が共通した認知変容して示唆された.この結果から,当該領域で注目される身体と言語の関係性を明らかにしただけでなく,球技選手の言語報告から,熟達度合を予測できる可能性が生まれるなど,コーチングや人工知能への応用も期待できる結果となった.これらの研究成果を踏まえて,最終年度の平成30年度では,研究計画通り,第43期ラグビー高校日本代表チームから得られた言語化のデータを分析し,その現象をモデル化することに取り組む予定である.研究計画通り進捗しており,期待している成果も徐々に得つつある.平成30年度は,研究計画に従って,主に研究データの分析,論文投稿,学会発表を中心に課題に取り組んだ.はじめに,ドイツ・サッカーリーグに所属するクラブチームの疾走トレーニングキャンプに帯同し,ランニングコーチから指導を受けた選手の認知変容を明らかにすることを目的とした.

その結果,(1)新しい疾走動作の指導を受けた際の気づき,(2)腕振りの動作による疾走スピードの体感,(3)腕振りの動作による足(下肢)の動作との連動,が共通した認知変容として示唆された.疾走に対する選手の主観的な認知とは,個人固有性の高いものである一方で,共通する認知変容が示されたことにより,選手の言語報告を指標としたコーチングや,疾走の熟達過程を予測できる可能性が開かれた.なお本研究は,電子情報通信学会論文誌和文A(査読有)に掲載された.次に,ラグビー高校日本代表チームで使用された疾走に関する集団語に注目し,集団語が指示する意味の成立過程について,明らかにすることを目的とした.その結果,集団語は,集団語に関する動感の概念から,応用的な概念へと段階的に連関することが示され,これら2つの概念との連関は,集団語の動感の得易さに関係する可能性が示唆された.本研究から明らかにされたような集団語の成立過程のモデルは,身体動作の分析から解明することは難しく,認知的側面に焦点を当てることによって可能となるものであるため,当該領域で注目される記号コミュニケーションの性質を解明に寄与すると考えられる.なお本研究は,ヒューマンインタフェース学会論文誌(査読有)に掲載されてた.これらの研究は,認知科学会,電子情報通信学会,ヒューマンインタフェース学会において学会発表を行った.さらに,静岡大学創造科学技術大学院の博士論文「疾走スキルの伝達における選手の認知過程に関する情報学的研究」にまとめ,博士(情報学)の学位を取得した.研究計画通り,進めていく予定である.平成29年度の予算としては,旅費(研究調査,学会,研究会)や,本研究を遂行する上で必要となる物品(ビデオ機器を予定)の購入を予定している.今年度も昨年度と同様に研究の進捗に応じて研究発表を行うこと予定であり,昨年度の繰越し予算に関しては,その旅費に用いる予定である.現在では,発表先は未定であるが国内の学会(人工知能学会,認知科学会)・研究会(思考と言語研究会,身体知研究会)などが発表先として考えられる.研究計画通り,進めていく予定である.平成30年度の予算としては,旅費(研究調査,学会)および,論文投稿費を予定している.今年度も昨年度と同様に研究の進捗に応じて研究発表を行うこと予定している.電子情報通信学会およびヒューマンインターフェイス学会が発表先として発表先として予定しているおおむね,研究計画通り,遂行されているが,研究分担者の支出にそれぞれ残金があり,少額の残金が残った.3月18日26日にアイルランドへ出張した際、旅費精算が年度内にできなかったため,残金が生じた.4月に旅費精算を行う.次年度と合算して,研究計画通り,実施する予定である.
トニ・モリスン文学テクストにおけるおとぎ話深層構造の分析

トニ・モリスンの文学テクストにはおとぎ話・民話・歴史等の物語の枠組みが見られる。しかし、表面的な枠組みはやがて換骨奪胎され、まったく異なる物語の枠組み、すなわち物語の深層構造が現れてくる。このような物語構造の特徴は、物語内容と深い関係をもっている。つまりそれは人と人との関係性の暗喩なのである。モリスンの小説において、血縁、人種、性、階級等に拠る通常の関係が無効にされ、まったく新しい関係が取り結ばれてゆくさまを検証した。本研究の目的は、トニ・モリスンの文学テクストにおけるおとぎ話深層構造を明らかにすることである。おとぎ話構造の抽出をモリスンの小説、評論、絵本等において行い、それが何故隠蔽されているのか、および、それとホモエロティシズムの関係を究明し、アフリカ系アメリカ文学研究に寄与しようとするものである。類似の研究はまだ見られないので、本研究の意義は大きいと考える。本年度の研究は、ほぼ研究実施計画どおりに実行された。[1.文献とテクストの読込み]必要な文献を整備し、文献リストを作成し、文献を読み進めた。[2.研究発表]21年9月、黒人研究の会例会、および、22年2月、日本アメリカ文学会中部支部例会で上記研究成果の一部を研究発表した。また22年11月にパリ第8大学で開催される予定のThe 6^<th> Biennial Conference of the Toni MorrisonSocietyでの研究発表に応募し、受理された。パリ大学での研究発表を通じて日本での研究を世界に発信することができると思う。[3.研究論文]22年2月、Seijo English Monographs 42号、および、22年3月、『黒人研究』79号に、研究論文を投稿し、刊行された。また、22年3月末に発行された共著書『バード・イメージ-鳥のアメリカ文学』(金星堂)において「廃屋のカナリア-トニ・モリスンの『マーシイ』における愛の構図」と題する論文を寄稿した。なお、上記研究発表と研究論文はすべて「鵜殿えりか」の筆名で行われ、執筆されている。当初謝金を使って文献リストを作成しようとしたが、本務校より補助があり謝金を使わずにすんだ。21年度の研究は22年度の研究への準備としての役割を果たした。本研究の目的は、トニ・モリスンの文学テクストにおけるおとぎ話の深層構造を明らかにすることである。深層に隠蔽されているおとぎ話構造とエロティシズムとの関係を究明し、モリスン研究のみならずアフリカ系アメリカ文学研究に寄与しようとするものである。本年度の研究は以下のとおりほぼ研究実施計画どおりに実行された。1.文献とテクストの読込み必要な文献を整備し、文献リストを作成し、文献を読み進めた。2.研究発表平成22年11月3日から6日にかけてパリ第8大学で開催されたトニ・モリスン学会第6回隔年次国際大会で研究発表(英語)を行った。発表時には21年度に本補助金にて購入したノート型パソコンを持参し、パワーポイントによる提示を行った。研究発表に対して出席者複数から好意的な意見が得られた。発表の成果に加え、参加した各国の研究者と交流し貴重な情報を集めることができ、大きな成果があった。3.研究論文・24年に予定している海外での学会発表に向けて英語論文の執筆を進めた。これと同時に博士論文の執筆も進めた。博士論文については、本年度の執筆が遅れ23年度に持ち越すことになった部分もあるが、鋭意執筆を続けるつもりである。深層に隠蔽されている物語構造とエロティシズムとの関係を究明し、モリスン研究のみならずアフリカ系アメリカ文学研究に寄与しようとするものである。本年度の研究は、シンポジウムの実施時期が翌年度の4月にずれこんだこと以外は、ほぼ研究実施計画どおりに実行された。2.学会シンポジウムの企画本年度始め「ハーレム・ルネサンスのアフリカ系アメリカ女性作家再考」と題するシンポジウムを企画し、アメリカ文学会中部支部第29回大会(平成24年4月22日開催)がその発表の場となった。気鋭のアフリカ系アメリカ文学研究者三名をオーガナイズし、年間を通じて相互に連絡をとりあい、発表内容を深めていった。シンポジウムでは鵜殿が司会・講師をつとめた。ハーレム・ルネサンスの女性作家の再評価を行うとともに、彼女たちとモリスンら現代作家との影響関係に注目した。21年度に科研費補助金にて購入したノート型パソコンを使用しパワーポイントによる提示を行った。3.研究論文・上記シンポジウムと研究論文と並行して、博士論文の執筆を進めた。博士論文については完成の目処をつけることができた。

本研究の目的は、トニ・モリスンの文学テクストにおけるおとぎばなしや民話の深層構造を明らかにすることである。テクストの深層に隠された物語構造を見いだし、それがモリスンの文学世界とどのような関係をもつのかを分析することを試みた。隠された物語構造は表面的な物語風景を逆転させ、新しい解釈の世界へと導いてくれる。平成25年度の研究は以下のとおり、ほぼ研究実施計画どおりに実行された。1.文献のテクストの読み込み:本年度も、前年度どおり、必要な文献を読み進めた。2. 25年度末、博士予備論文の執筆を終え、当該研究機関に提出した。3.学会シンポジウム:24年4月22日に開催された日本アメリカ文学会中部支部第29回大会(於愛知淑徳大学)において、「ハーレム・ルネサンスのアフリカ系女性作家再考」と題するシンポジウムを企画し、司会・講師を務めた。3名のアフリカ系アメリカ文学研究者を講師に招き、1920年代黒人女性作家とモリスンら現代作家たちとの影響関係について討論した。また、10月27日に開催された日本英文学会九州支部第65回大会(於九州産業大学)において、「トニ・モリスンの描くアメリカー植民地時代から公民権運動まで」と題するシンポジウムの講師となり、モリスンの短編小説「レシタティーフ」について発表した。いずれのシンポジウムにおいても、好意的な評価を得た。4. 25年3月23日から30日にかけて渡米し、ニューヨーク公立図書館、ションバーグ黒人文化研究センター等において文献調査を行った。おおむね研究計画に沿って調査・研究がおこなえているため、おおむね順調に進展しているといえる。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後の研究の推進方策であるが、研究当初に作成した研究計画に基づく調査及び資料収集等をおこなっていく予定である。
多成分生体防御機構としての補体系の起源と進化

有顎脊椎動物に限定される獲得免疫とちがって、未だに起源の明らかでない自然免疫の進化を解明する目的で、補体系の進化的な起源を解析した。補体系の中心成分であるC3を含むチオエステル含有タンパク遺伝子に汎用できる縮退プライマーを設計し、数種類の前口動物、刺胞動物を解析し、イソギンチャクからはC3とα2Mの両者を、ヒドラ、カタツムリ、ホシムシからはα2Mを同定した。この結果はC3とα2Mの起源及びお互いへの分化は刺胞動物の出現以前にまで遡れること、及びα2Mは多くの動物群に保持されているが、C3は進化の過程で何度も失われたことを示している。ホヤ補体系の解析により、α鎖、β鎖よりなるインテグリン型の補体受容体の存在を明らかにし、それがC3と結合することにより異物の貧食に働いていることを証明した。また、ホヤ補体遺伝子のゲノム構造の解析では、C3とBf遺伝子が連鎖していないことを明らかにし、脊椎動物MHCにみられるクラスIII補体領域は脊椎動物の系統内で形成された可能性が高いことを示唆した。さらに、数種類のサメを用いた解析により、C3,C4,C5遺伝子が存在すること、ただしC5は種によっては擬遺伝子化していることを明らかにし、これら遺伝子間の遺伝子重複を軟骨魚類の出現以前に位置付けた。以上の結果より、補体系の中枢部分は10億年以上前に確立され、その後、後口動物の系統でほとんどの成分がそろい、さらに有顎脊椎動物の出現に際して更なる遺伝子重複により今日哺乳類に見られるような高度に組織化された系に進化したことが示唆された。すでに補体系の存在が確認されている尾索動物のホヤを用いて、補体B因子の遺伝子、タンパク両面の解析を行った。その結果B因子遺伝子はカタユウレイボヤゲノム中には隣接して3コピー存在し、いずれも発現していることが確認された。染色体FISH解析により、ホヤB因子遺伝子はC3遺伝子とは連鎖していないことが示され、これらの遺伝子間の連鎖は脊椎動物の系統で確立されたことが明らかになった。これまでホヤの補体系について確認された機能は、貪食の促進のみであったが、マボヤ体腔液をもちいた溶血アッセイにより、膜障害成分の存在が確認された。この膜障害活性を担う候補遺伝子を単離し、組み換えタンパクに対する抗体を作成して、この成分の部分精製を行った。また、補体系の起源が前口動物まで遡る可能性を検討する目的で、C3とその祖先遺伝子とされるアルファ2マクログロブリンとの遺伝子重複の時期を指標に、補体系の起源を探った。両者は機能的に重要な部分のアミノ酸配列を共有するため共通のプライマーで増幅することが可能で、これまでに行われたゲノム解析、RT-PCRの結果は後口動物には両者が、ショウジョウバエ、線虫にはアルファ2マクログロブリン(α2M)のみが存在することを示している。しかしながらこの結果はC3遺伝子が二次的に脱皮動物のゲノムから脱落した可能性を否定しない。そこで、カタツムリ、プラナリア、ヒドラ、イソギンチャク等のRNAからRT-PCRにより両者の有無を検討した結果、カタツムリ、プラナリア、ヒドラからはα2Mのみが、イソギンチャクからはα2MとC3の両者が得られ、C3の起源は刺胞動物までさかのぼることが示された。ほ乳類の補体系は、30以上の成分からなる高度に組織化された生体反応系で、侵入した異物に標識をつけ、処理することを担当する自然免疫の主要構成員である。最近の系統発生学的な研究からは、補体系が広く後生動物に存在することが明らかになりつつあり、ここでは補体系中心成分のC3を指標にその起源を探る解析を行った。

海綿動物のダイダイイソカイメン、オカダケツボカイメンからはC3も、C3の姉妹分子で非補体系のプロテアーゼインヒビターであるアルファ2マクログロブリン(α2M)も見つからなかった。一方、刺胞動物のタテジマイソギンチャクからは両者共に確認され、cDNAクローニングによりその全一次構造を決定した。アミノ酸配列をもちいた系統樹解析の結果は、C3とα2Mの間の遺伝子重複は、刺胞動物の出現以前、真性後生動物の出現初期であったことを示唆した。アミノ酸配列の比較からは、イソギンチャクC3,α2Mは、哺乳類で各々の活性に必須であることが知られている特徴的なアミノ酸残基をよく保存しており、またin situ hybridizationの結果は、イソギンチャクC3は触手内胚葉で、イソギンチャクα2Mは隔膜内胚葉で主に発現していることを示し、これらの分子間の機能分化も刺胞動物の出現以前に完了していたことが示された。以上の結果より、補体中心成分のC3とその姉妹分子α2Mは、海綿動物が分岐した後の真性後生動物の系統で、生じ、お互いの間の遺伝子重複、機能分化を刺胞動物の出現以前に完了していたことが示された。補体系の中心成分であるC3、及び同族に属しながらプロテアーゼインヒビターとして働くa2Mの進化的な起源を追求して、刺胞動物のタテジマイソギンチャクには両者が存在し、発現部位を異にすることを明らかにした。この結果、両者間の遺伝子重複も、その後の機能分化も刺胞動物の出現以前に完了していたことが示唆された。一方、前口動物の、ツノヒラムシ、オトヒメゴカイ、ホシムシ、アオウミウシなどを調べたところ、a2Mのみが検出されC3は検出されなかった。これまでにC3の存在が報告されている前口動物はカブトガニのみで、解析の終了したセンチュウ、ショウジョウバエのゲノム中にもC3遺伝子は見いだされないことから、前口動物の多くの系統においてC3遺伝子の二次的な消失が起こっていると考えられた。後口動物では尾索動物の補体系の解析を、マボヤ、カタユウレイボヤをもちいて発展させ、膜傷害に関わる可能性のある補体後期成分と思われるマボヤ遺伝子を組み換えタンパクとして昆虫細胞に発現させ、ウサギに免疫して抗体を作成した。この抗体をもちいて、当該成分をマボヤ体腔液より精製することに成功した。以上の結果より、補体系はC3およびごく少数の成分からなる生体反応系として、10億年以上前に出現し、その後、後口動物で系統で多くの遺伝子をリクルートすることにより、多成分からなる多機能な生体防御システムとして確立したと思われる。さらに昨年度までの成果をあわせると、脊椎動物の系統で独自の発展を遂げ、今日哺乳類に見られるような高度に組織化された反応系として完成したと思われる。
超伝導超格子_3端子デバイスの開発

本研究は、ジョセフソン接合が内在する(Bi,Pb)_2Sr_2CaCu_2O_y単結晶を用いた信頼性の高い超格子_3端子デバイスの開発を目的として,(i)同結晶の加工技術の確立,(ii)同結晶に内在する固有ジョセフソン接合の発現機構の解明,(iii)超格子_3端子デバイスの特性評価等を行った結果,以下の成果を得た。(i)同結晶の加工技術の確立同結晶は、_C軸方向に内在する多数のジョセクソン接合に起因して,ヒステリシスのある多数の枝構造をもつ電流・電圧特性を示すが,フォトエッチング技術により同結晶を加工することにより、臨界電流の揃った特性を得ることができた。(ii)同結晶に内在する固有ジョセフソン接合の発現機構の解明同結晶に内在する固有ジョセフソン接合の発現機構を解明するために,同結晶にマイクロ波を照射するとマイクロ波電力及び結晶寸法に依存するマイクロ波誘起ステップが観測された。特に,寸法的共振周波数と一致するマイクロ波を照射すると,印加マイクロ波と固有接合内の磁束量子の同期現象が生じ,明瞭なステップが観測された。これより,固有ジョセフソン接合は金属的CuO_2層間のジョセフソン結合によると考えられる。(iii)超格子_3端子デバイスの特性評価同結晶を(i)の技術を用いて,デバイス形状に加工し,超格子_3端子デバイスを試作した。試作した_3端子デバイスのゲート電極に-100V+100Vの電圧を印加した結果,60Kにおいて電界効果によると思われる約±5%の臨界電流,常伝導抵抗の変化が見られた。以上,本研究で得られた成果は,(Bj,Pb)_2Sr_2CaCu_2O_y単結晶自身の電界効果形_3端子デバイスへの応用の可能性を示すものである。また、同結晶で得られたマイクロ波応答特性は新しい量子効果デバイスの足掛りとなりうるものであり,本分野の今後の進展が期待される。
静脈奇形の発症・増大にかかわる病態生理の解明

本研究は、同一ドナーの余剰正常組織を比較対象とした静脈奇形組織の網羅的遺伝子解析および静脈奇形由来の初代培養血管内皮細胞、間葉系細胞の解析を端緒として、分子生物学的病態生理について明らかにし、治療的介入の余地をさぐることを目的としており、研究の対象である静脈奇形の手術検体の収集を行った。初年度の目的として想定していた5症例から、静脈奇形組織の採取を行い、採取した組織から酵素分散法、磁気による細胞セレクションを介して病変局所の血管内皮細胞を収集した。また、静脈奇形の病変の主座は血管および血管内皮細胞にあると考えられるのが通常であるが、臨床経験から、血管周囲の間葉系組織、間葉系細胞の機能異常も、その病態生理に深く関連していると感じていていたため、局所の線維芽細胞、間葉系細胞も同時に収集した。静脈奇形由来の血管内皮細胞は、現状部位の血管内皮細胞に比較して、増殖能に劣る印象を得ているため、今後はこれを解析していく予定である。他方、特に今後の機能的解析の中心となる予定であったtube formation assayについては、Matrigelを用い方法を導入し、定量的な解析方法を確立した。今後は、収集した検体から静脈奇形、余剰健常組織からレーザーマイクロダイゼクションを用いて血管内皮および周囲間葉組織を分けて各々total RNAを採取の上、マイクロアレイを用いた網羅的遺伝子解析を行い、静脈奇形病態のマスターレギュレーターとなっている候補遺伝子群を選択し、静脈奇形、健常組織由来の初代培養血管内皮細胞、間葉系細胞を用いたtube formation assayを用いて、候補遺伝子の機能的解析を行い、治療的介入の端緒を探っていく予定である。
深層海洋大循環の解明に向けた乱流ホットスポットの定量化

深海乱流計TurboMAP-Dを使用して、北太平洋の53地点における乱流拡散強度の直接観測を行った。その結果、20°N-30°Nでの乱流拡散強度は、局所的に得られる半日周期の内部潮汐波エネルギー密度のオーダーに比例して大きくなり、特に、伊豆-小笠原海嶺では10^<-4>m^2s^<-1>以上にも達することがわかった。これに対して、30°Nより高緯度側、および、20°Nより低緯度側では局所的に得られる半日周期の内部潮汐波エネルギー密度の大きさに関わらず、乱流拡散強度は10^<-5>m^2s^<-1>程度にとどまることが示された。これらの観測事実は、Hibiya eta1.(2006)によってまとめられた乱流ホットスポットのグローバルマップと整合的なものであることが確認できた。次に、この乱流ホットスポットが太平洋の深層海洋大循環に与える影響について、簡略化した海洋大循環モデルを用いて考察した。その結果、乱流ホットスポットにおける湧昇量は、深層水の形成量とバランスするには不十分であり、赤道を北向きに通過する深層水の流量は、係留流速計および船上観測から推定された流量と比較すると明らかに小さくなった。この計算結果は、係留流速計および船上観測に基づく循環流量が過大評価である可能性を示しており、この流量を再現するために鉛直乱流拡散係数をチューニングしている現在の海洋大循環モデルの有効性に対して警鐘を鳴らしたものといえる。なお、雇用を予定していた研究支援者の突然の人事異動により平成18年度内に実施が不可能となった「アリューシャン海域での深海乱流観測とそのデータを組み込んだ数値計算」という本研究計画の重要部分は、平成19年度に経費を繰り越し、研究代表者と研究分担者とが協力することで、無事完了することができた。深層海洋大循環モデルの高精度化には鉛直乱流拡散係数のグローバル分布の解明が不可欠な課題となる。海洋物理学に残されたこの最大の不確定要素を解決するため、研究代表者らは、投棄式流速計を用いて北太平洋の広範囲に展開した乱流観測の結果とグローバルな内部潮汐波モデル/大気起源慣性重力波モデルとをリンクさせることで、鉛直乱流拡散係数のグローバルマップを提唱した(Hibiya et al.,2006)。本年度は、このグローバルマップの有効性を検証するため、我が国では初となる深海乱流計(アレック電子(株)製)を用いて、北太平洋の代表的な地点における乱流強度の直接観測を行った。観測は北海道大学水産学部・おしょろ丸の北洋航海(2005年7-8月)と父島航海(2005年11月)において、どちらも振幅の大きな内部潮汐波の発生域でありながら、グローバルマップ上では鉛直乱流拡散係数が10^<-5>m^2s^<-1>オーダーとなるアリューシャン海嶺付近と、10^<-4>m^2s^<-1>オーダーとなる伊豆小笠原海嶺おローバルマップ上では鉛直乱流拡散よびハワイ海嶺付近で行われた。観測の結果、ハワイ海域や伊豆小笠原海域においては、鉛直シアー分布に多数のパッチ構造がみられ、鉛直乱流拡散係数は10^<-3>m^2s^<-1>に達していることがわかった。特に、1000m以深で鉛直乱流拡散係数を平均してみると0.8×10^<-4>m^2s^<-1>となった。

一方、アリューシャン海域においては、鉛直シアー分布に顕著な構造は認められず、鉛直乱流拡散係数は、全深度にわたって10^<-5>m^2s^<-1>のオーダーで、0.2×10^<-4>m^2s^<-1>を超える値はみられなかった。他の地点での乱流観測からもグローバルマップと整合的な結果が得られ、その有効性が確認された。今後は、深海乱流計による観測をさらに広範囲に展開し、鉛直乱流拡散係数のグローバルマップの有効性を、より詳細に検証していく予定である。昨年度に引き続き、深海乱流計TurboMAP-Dを使用して、北太平洋の代表的な地点における乱流強度の直接観測を行い、Hibiya, et. al.(2006)による鉛直乱流拡散係数のグローバルマップの有効性を詳細に検証した。具体的には、乱流の主要なエネルギー源となる内部潮汐波の代表的な励起域である伊豆-小笠原海域、ハワイ海域、アリューシャン海域のほか、地球磁場の鉛直成分が極端に小さくなってしまうために投棄式流速計(XCP)による間接的な乱流強度の見積もりさえ不可能であった赤道海域にも注目して観測を実施し、Hibiya, et. al.(2006)によってまとめられた乱流ホットスポットのグローバルマップの有効性を確認することができた。さらに、このグローバルマップから得られる「乱流ホットスポット」の空間分布を、太平洋を対象とする簡略化した海洋大循環モデルに組み込むことで、現実的な鉛直乱流拡散の強度の観点から可能な深層海洋大循環の流量を見積もった。その結果、潮汐起源の乱流ホットスポット、大気擾乱起源の乱流ホットスポット、境界混合域における乱流ホットスポットの効果をすべて組み込んでも、地衡流計算に匹敵する流量の深層海洋大循環は得られず、鉛直乱流拡散の強度の観点から見た深層海洋大循環の流量には限界値が存在することが示された。この結果は、地衡流計算に基づいて見積もられた流量の循環を得るために鉛直乱流拡散係数をチューニングしている現在の海洋大循環モデルの有効性に対する警鐘として位置付けることができる。なお、雇用を予定していた研究支援者の突然の人事異動により平成18年度内に実施が不可能となった「アリューシャン海域での深海乱流観測とそのデータを組み込んだ数値計算」という本研究計画の重要部分は、平成19年度に経費を繰り越し、研究代表者と研究分担者とが協力することで、無事完了することができた。
Ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ制御によるｉＰＳ細胞由来造血幹細胞作製法の開発と免疫寛容誘導

以上のことより、iPS細胞由来造血幹細胞様細胞は細胞周期の違いにより、分化能に差異があることが判明した。今後、さらなる検討を進めることにより、より効率的なiPS細胞製剤の生産に繋がることや、生体に生着しうる造血幹細胞の作製に繋がることが期待される。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究はiPS細胞を用いた再生医療時代における拒絶反応の制御を目的とし、mixed chimerismの誘導可能なiPS細胞由来造血幹細胞の作製を目指している。既存のプロトコルで作製した造血幹細胞は、生体への生着の点で問題があったため、高効率に生体に生着する造血幹細胞を誘導する方法としてcell cycle制御に着目した。cell cycle動態の観察簡便化のためfucci (fluorescent ubiquitination based cell cycle indicator)システムトランスジェニックマウスよりiPS細胞を作製した。Oct4、Sox2、Klf4、c-Mycをfucciマウス皮膚繊維芽細胞に導入し、iPS細胞様コロニーの形成が認められた。この細胞をsingle cell sortingして、line化し、アルカリフォスファターゼ染色や各種遺伝子発現を検討している。並行して造血幹細胞誘導プロトコルの改善を行った。C57BL/6-Ly5.1マウス由来iPS細胞を用い、添加するサイトカインや低分子化合物の量や期間を再検討し、以前より生体由来の造血幹細胞に近い表現型を示す細胞の誘導に成功した。in vitroでの多分化能測定試験では、多系列の血球分化がみられた。コンジェニックマウスへの移植実験では、移植から1カ月後に末梢血においてiPS細胞由来の血球が確認されたが、キメラ率は著しく低かった。fucci-iPS細胞を樹立し、再検討した誘導プロトコルで造血幹細胞を誘導し、cell cycleの制御を試み、キメラ率の改善を今後検討していく。当初の予定より、fucci-iPS細胞の樹立に少し時間がかかってしまっている。しかし、樹立まで目前であり、並行して行った誘導プロコルの改善で望ましい結果が出ているため、おおむね順調に進展していると判断した。本年度は、昨年度に確立したfucciシステムトランスジェニックマウス線維芽細胞由来iPS細胞を用い、造血幹細胞への分化誘導条件を検討した。あらかじめ他のiPS細胞で検討していた条件で分化誘導したところ、若干の効率の悪さはあったが、目的としているCD45+ cKit+の両方を呈する細胞集団が得られた。分化誘導効率の悪さはiPS細胞の株間差だと考えられた。Fucci-iPS細胞から分化誘導したCD45+ cKit+の造血幹細胞様細胞の多分化能を検討するため、セルソーターでこの分画を集め、OP9/DL1フィーダー細胞との共培養を行った。その結果、T細胞系列への分化能、および、ミエロイド系列への分化が見られた。次に、fucci-iPS細胞由来造血幹細胞様細胞をfucciシステムの蛍光発現を参考に、G0/G1期とS/G2/M期で分けて多分化能の解析を行った。その結果、S/G2/M期の細胞集団の方が有意にT細胞系列への分化能が高いことが判明した。当初の予定では、G0/G1期に位置している細胞の方がT細胞系列への分化能が高く、造血幹細胞に近い形質を有していると予想していたが異なる結果が得られた。現在は、このような現象となる要因の探索を行っている。また、並行してそれぞれの細胞周期の細胞をマウスへの移植を行い、生着能に差異がありか検討している。本年度は、前年度より続けているfucciシステムトランスジェニックマウス線維芽細胞由来iPS細胞の確立を精力的に行った。このfucci-iPS細胞を用いて、分化誘導した造血幹細胞様細胞の細胞周期間の機能解析を行い、移植実験まで行う予定であったが達成は出来ていない。当初の想定と異なり、S/G2/M期に位置している細胞集団の方がT細胞系列への分化能が高いことが判明したためである。ただし、複数の先行研究と比べる、S/G2/M期に位置している細胞集団は高い比率でT細胞への分化能を有していることが示唆され、効率的なiPS細胞由来T細胞の作製に繋がる可能性が判明した。fucci-iPS細胞が樹立出来次第、改善した誘導プロトコルで造血幹細胞を誘導してcell cycle制御を試みる。cell cycleに関連していることが知られている、p38MAP kinase pathwayやTgfβsignaling pathwayを検討する予定である。cell cycle動態に期待される変化が観察されたら、マウスに移植し、mixed chimerismが誘導されるか検討する。

fucci-iPS細胞から分化誘導した造血幹細胞様細胞の細胞周期のことなる細胞集団で、T細胞系列への分化能に差が生じる要因を検討する。qPCRや次世代シーケンサーでの解析も視野に入れ、S/G2/M期に位置している、より細胞周期が亢進している細胞集団がT細胞系列への分化能が高い要因を探る。また、生体への生着能に差異があるか検討するため、それぞれの細胞周期の細胞分画をマウスへ移植し、mixed chimerismが誘導されるか検討する。並行して、免疫寛容の評価に使用する、iPS細胞由来インスリン産生細胞の作製と1型糖尿モデルの構築を行う。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
HER2をターゲットとした子宮内膜癌の新たな分子標的治療の開発

子宮内膜癌検体の免疫組織染色法で、HER2発現は、p-AKT発現とは相関が認められなかったが、p-mTOR発現と負の相関が認められ、優位な予後不良因子であった。子宮内膜癌細胞株でHER2を抑制すると、p-AKTの発現低下とMPAや抗癌剤への軽度の感受性増強を認めた。抗HER2モノクローナル抗体のTrastuzumabは、低用量PTXの感受性増強に効果が認められ、HER2をターゲットとした分子標的薬の有効性を推測できた。子宮内膜癌の若年女性への発生が増加しており、子宮温存可能な子宮内膜癌の治療の開発が求められている。子宮内膜癌において、HER2発現が、細胞内のシグナル伝達にどのように関わり、また、抗がん剤感受性、ホルモン療法、予後に影響しているのかについて検討し、分子標的治療薬の役割について検討することを目的とした。今後は、子宮内膜癌1a期G1の症例をさらに集積して、HER2発現、p-mTOR発現、PTEN遺伝子変異について解析していく予定である。子宮内膜癌において、HER2発現が、細胞内のシグナル伝達にどのように関わり、また、抗がん剤感受性、ホルモン療法、予後に影響しているのかについて検討することを目的とした。in vitro系で、子宮内膜上皮不死化細胞(EM-E6/E7/TERT cell)、子宮内膜癌細胞株(Ishikawa cell、HEC1A cell)において、siRNAを用いてHER2抑制系モデルを作成した。それぞれの細胞株においてのHER2抑制は、ウエスタンブロット法にて確認した。HER2の下流の細胞内シグナルとしてリン酸化AKTやFOXO1Aを候補として検討し、その発現の変化をウエスタンブロット法にて検討した。さらに、子宮温存療法として臨床的に使用されているホルモン剤のMPA及び抗癌剤(Paclitaxel、Cisplatin等)の感受性に影響しているのかについて、cell countおよびWST-1 assayにて検討した。また、HER2をターゲットとした分子標的治療薬(Trastuzumab)とMPAや抗癌剤等の併用療法の効果を評価した。HER2を抑制したところ、上記細胞株において、リン酸化AKTの発現低下を認めたが、FOXO1Aの発現の変化は有意には認められなかった。また、HER2の抑制系でのMPAや抗癌剤の感受性は軽度増加した。Trastuzumabは、単独では上記細胞株において有意な増殖抑制効果は認められなかったが、Paclitazelの低用量使用下では増殖抑制の増強効果が認められた。これらの事から、子宮内膜癌において、HER2が、抗癌剤の感受性に関与する可能性、およびHER2をターゲットとした分子標的薬の抗癌剤併用療法の有効性を推測できた。RT-PCR実験は行えなかったが、計画の予定がおおむね進行しているため。再実験や確認実験を行い、実験の精度をあげて、報告に耐えられるものにすること。また、臨床症例を集積して、臨床データも追加する予定である。当初は、細胞内シグナル伝達確認のために、RTーPCR法による実験を行う予定であったが、その実験が出来なかったために差額が生じた。その差額分は、次年度のRTーPCR法による実験などの試薬や消耗品等に充当する予定である。
ユビキチンプロテアソームシステムの破骨細胞分化における役割

ユビキチン経路の破骨細胞分化における役割について、必須分化シグナルであるNF-kBシグナル分子であるNFkB2/p100がNIK/IKKaの活性化にともないb-TRCPによりユビキチン化され、NFkB2/p52に部分的分解される事が破骨細胞分化に重要である事を報告してきた。今回、このNFkB2の部分的分解にはAkt/Cot-IKKa活性化にともなう経路が存在する事を明らかにした。さらにNFkB2には、GSK3依存的にp100そのものをFBW7がユビキチン化し分解する経路が存在する事が明らかになった。以上のことから、NFkB2は複数のユビキチン化による制御を受けている事が明らかになった。タンパク分解に関わるユビキチン経路の破骨細胞分化における役割について、破骨細胞分化において重要な役割をしているNF-kBシグナルの分子の1つであるNFkB2のユビキチン化による制御機構に着目し検討を行った。NFkB2はこれまでに、NIK/IKKaによるリン酸化にともないユビチンリガーゼであるb-TRCPによりユビキチン化され、NFkB2/p100がNFkB2/p52に部分的分解される事がNF-kBシグナルの非古典的経路の活性化に重要である事が知られているが、その破骨細胞の分化に対する役割は明らかになっていなかった。これまでに我々は、NIKに機能欠失型の変異を持つaly/alyマウスを用いて、NFkB2/p100は破骨細胞を負に制御しており、部分的分解を受けたNFkB2/p52が破骨細胞分化を正に制御している事を明らかにしてきた。今回の検討で我々は、破骨細胞分化におけるNFkB2の部分的分解にはNIK非依存的なAkt-Cot経路を介しIKKaを活性化させ、NFkB2を部分分解する経路が存在する事を明らかにした(Taniguchi R, et.al. JBC. 2014)。さらにNFkB2には、GSK3依存的にNFkB2/p100そのものをFBW7がユビキチン化し分解する経路が存在する事が明らかになった(Fukushima H, et.al. Cell Rep 2012)。これらのことから、NFkB2は様々なユビキチン化による制御を受けている事が明らかになった。今後は、b-TRCPとFBW72つのユビキチン化経路によるによるNFkB2制御の生理的役割の違いについて検討を行って行きたいと考えている。平成24年度は、破骨細胞の分化において重要な役割を果たしているユビキチンライゲースの同定を行った。破骨細胞分化における遺伝子発現の変化をマイクロアレイ解析を行ったところ、いくつかのユビキチンライゲースの発現の上昇が見られた。それらのユビキチンライゲースを、マクロファージ由来細胞株であるRAW264.7および骨髄細胞に、shRNAを用いてノックダウンを行った結果、SCF型ユビキチンライゲースであるFBW7が破骨細胞の分化を負にレギュレートしている可能性が示唆された(この研究結果を第54回歯科基礎医学会にて発表を行った)。さらにFBW7の新規標的分子としてNFkB2を同定した。NFkB2はこれまでに同じSCF型ユビキチンライゲースであるb-TRCPによるプロセシング制御を受ける事が破骨細胞分化に重要であることを報告してきたが、FBW7はNFkB2そのものの量的制御を行っている事が明らかになった(この研究結果をCell Report誌に論文発表を行った)。またSCF型ユビキチンライゲースであるbTRCPによって制御を受けるNFkB1が、非加重状態の骨代謝の変化に重要な役割を果たしている事が明らかになった(この研究結果をJ Bone Miner Res誌に報告を行った)。現在in VivoにおけるFBW7の破骨細胞における役割を明らかにするために、破骨細胞のマーカー遺伝子であるカテプシンKプロモーター依存的にCreリコンビネースを発現するマウス(CatK-Cre)マウスと、FBW7遺伝子にloxp配列が挿入されたマウス(FBW7-loxp)の交配を行い、破骨細胞特異的にFBW7を欠損するマウス(OC-FBW7KO)の作出を行っている。平成24年度の破骨細胞分化において重要なユビキチンライゲースの同定を行った結果、破骨細胞分化にはFBW7が重要な役割を果たしている事を明らかにできた。また、FBW7の新規基質としてNFkB2を同定し論文で発表する事ができた。これらのことから研究はおおむね順調に進展していると考えている。

現在、平成24年度の結果をもとにモデルマウスの作出を行っており、平成25年度には解析を行う事が可能な状態になると考えられる事から、平成25年度の準備もおおむね順調に進展していると考えている。今後は作出したマウスの骨形態計測などのin Vivo解析を行うとともに、同マウスの骨髄から破骨細胞の形成を行い、破骨細胞分化課程におけるFBW7ユビキチンライゲースの役割を明らかにして行きたいと考えている。また、FBW7以外の候補としてあがってきたユビキチンライゲースのなかにも興味深い分子が幾つか見られるのでそれらの分子についても並行して解析を進めて行きたいと考えている。平成25年度の研究費の使用計画としては、作出するOC-FBW7KOマウスの維持・解析費用を大きな経費として計上する予定である。具体的には骨切片の作成およびマイクロCT解析を行い、骨形態計測を行う予定であり、これらの解析は共同研究先への旅費もしくは外注による解析を予定している。また、当大学の動物実験施設におけるマウスの維持・管理料も計上する予定である。また、OC-FBW7KOマウスの破骨細胞分化シグナルの解析を行い基質分子の同定ために、抗体およびタンパク解析やクローニングなどの分子生物学的解析の試薬などを消耗品として計上する予定である。その他、研究成果の発表および研究打ち合わせなどのための旅費、論文発表のために投稿料なども計上する予定である。
極紫外域(60nm〜20nm)における高反射率多層膜鏡の開発

本研究では極紫外光を用いた顕微鏡、極紫外光によるプラズマ計測・天体観測、極紫外レーザーの開発等から要請されている高い直入射反射率の得られる多層膜鏡の開発を行った。開発を計画した波長領域は60nm20nmの領域であり、代表的な波長としてHeI共鳴線58.4nm,HeII共鳴線30.4nmおよびNiの3p内殻吸収端近傍の20nmを選んだ。はじめにそれぞれの波長において高い反射率が得られるものを理論的に設計し、次いでそれらを実際に作製・評価した。多層膜鏡の作製にはマグネトロンスパッタ装置およびイオンビームスパッタ装置を用いた。界面粗さを減少させるため、購入した赤外線加熱装置で基板の温度を制御した。反射率の測定には、我々の研究室のレーザープラズマ光源を用いた斜入射分光器およびHeIランプを用いた瀬谷・波岡型分光器を利用した。測定の結果、波長58.4nmにおいて最高21.6%の反射率のもの(Si/W)、波長30.4nmにおいて最高27%のもの(Sc/Mg)および波長およそ20nmにおいて最高17%のもの(Mo/Si)が得られ、おおむね目標は達成できた。本研究の発展として、我々は特に回折格子の高効率化に注目し、開発したものからMo/Si多層膜を選んで回折格子に蒸着し、30nmにおいて直入射で5%もの回折効率を得られるものを製作した。これは直入射分光器で従来困難であった30nm近傍の分光を可能にする画期的なものである。上記の反射率は、まだ理論値までは到達しておらず、今後、さらに高反射率の実現を試みる。また分子線エピタキシ-成膜装置(電子ビーム蒸着)を用い、反射高速電子線回折装置で確認しながら結晶性の多層膜成膜を作る試みは、まだ成功していないのでこれを追求する。一方、これらの試みとは別に球面鏡に多層膜を蒸着させてHeII共鳴線30.4nmの集光系を作り、顕微光電子分光装置を製作する予定である。現在まず取り組むべき課題である光学定数の測定を,レーザプラズマ光源を用いた斜入射分光器に付帯した反射率計を使って行っている.試料はSiO_2,LiF,BN,Si,C,Cu,Mo,A1,Mg等である.光学定数のデータの蓄積はまだ多くない.しかし,膜質について次のような注意すべき点が判明した.すなわち,マグネトロンスッパタで薄膜を作製する際,スパッタに用いるアルゴンが薄膜に極めて微量であるが埋め込まれることが分った.このことが,多層膜の性能に関して大きな影響を与えるのか,或いは与えないのか今後多層膜の反射率測定を通じて判断していく予定である.また,LiF膜上にSi膜をのせる場合には,Siが通常のバルクの性質のものでも非晶質のものでもない第三の相のものになっていることが分った.この相のものが何であるかを本年度納入された反射高速電子線回折装置(RHEED)解明するとともにこのことを十分考慮して多層膜を設計・製作する予定である.また理論的検討を行い,高い反射率を得るには消衰係数が小さく屈折率の差の大きい物質を組み合せる必要があるということをすでに見出している.さらに一定の周期構造を持つものの他に,非周期構造を持つものも検討している.実際の多層膜の作製においては物質の組み合せとしてまずA1/

C系をとりあげた.A1とCの種々の膜厚の組み合せのものを作製し,現在波長30.4nmにおいて非偏光に対する入射角30°の反射率(s-偏光とp-偏光の反射率の平均)が12%のものを得ている.通常の物質のこの波長における反射率は数%であり,それより十分高い反射率であるが,目標は30%以上でありまだ十分とは言えない.今後他の組み合せ,膜の粗さの減少等を行い反射率を向上させていく予定である.本研究では極紫外光を用いた顕微鏡、極紫外光によるプラズマ計測・天体観測、極紫外レーザーの開発等から要請されている高い直入射反射率の得られる多層膜鏡の開発を行った。開発を計画した波長領域は60nm20nmの領域であり、代表的な波長としてHeI共鳴線58.4nm,HeII共鳴線30.4nmおよびNiの3p内殻吸収端近傍の20nmを選んだ。はじめにそれぞれの波長において高い反射率が得られるものを理論的に設計し、次いでそれらを実際に作製・評価した。多層膜鏡を作製にはマグネトロンスパッタ装置およびイオンビームスパッタ装置を用いた。界面粗さを減少させるため、購入した赤外線加熱装置で基板の温度を制御した。反射率の測定には、我々の研究室のレーザープラズマ光源を用いた斜入射分光器およびHeIランプを用いた瀬谷・波岡型分光器を利用した。測定の結果、波長58.4nmにおいて最高21.6%の反射率のもの(Si/W)、波長30.4nmにおいて最高27%のもの(Sc/Mg)および波長およそ20nmにおいて最高17%のもの(Mo/Si)が得られ、おおむね目標は達成できた。本研究の発展として、我々は特に回折格子の高効率化に注目し、開発したものからMo/Si多層膜を選んで回折格子に蒸着し、30nmにおいて直入射で5%もの回折効率を得られるものを製作した。これは直入射分光器で従来困難であった30nm近傍の分光を可能にする画期的なものである。上記の反射率は、まだ理論値までは到着しておらず、今後、さらに高反射率の実現を試みる。また分子線エピタキシ-成膜装置(電子ビーム蒸着)を用い、反射高速電子線回折装置で確認しながら結晶性の多層膜成膜を作る試みは、まだ成功していないのでこれを追及する。一方、これらの試みとは別に球面鏡に多層膜を蒸着させてHeII共鳴線30.4nmの集光系を作り、顕微光電子分光装置を製作する予定である。
関節リウマチによる動脈硬化病変の形成促進メカニズムの解明と危険因子の網羅的探索

関節リウマチ(RA)は疾患修飾薬が新たに開発され、関節炎を制御できるようになったが、生命予後を改善するまでには至っていない。RAの予後規定因子は動脈硬化とそれに起因する心血管系疾患であり、その克服が課題となっている。動脈硬化は免疫系が関与する血管の慢性炎症として認識されているが、その病態生理学的な特徴はRAの滑膜と類似し、RAが動脈硬化病変の形成を促進させていると推測されるが、十分な知見はない。本研究では動脈硬化を発症し関節炎を誘導できるAPO-EノックアウトSKGマウスを作成する。このマウスを用い慢性関節炎が動脈硬化病変の形成促進に関わる分子や細胞を解析し、そのメカニズムを解明し、危険因子を網羅的に探索する。また、治療的介入を行い関節炎および動脈硬化への影響を調べた。本研究において動脈硬化モデルAPO-E(-/-)マウスと慢性関節炎モデルSKGマウスを交配させ、APO-E(-/-)SKGマウスを作成した。このマウスはAPO-E(+/-)SKGマウスと同様に関節炎を誘導でき、動脈硬化病変も認めることを確認した。APO-E変異マウスはコラーゲン誘導性関節炎に対して抵抗性であると報告されており、モデルマウスにより異なる結果となった。APO-E(-/-)SKGマウスを用い、関節炎を誘導した場合としない場合とで動脈硬化面積を比較したところ、関節炎を誘導した方が有意に面積が拡大していることが明らかになった。このことから、関節炎が動脈硬化を促進させることを示した。また、治療介入することにより関節炎および動脈硬化ともに改善する可能性が示唆された。また、治療的介入を行い関節炎および動脈硬化への影響を調べる。本年度はAPO-E(+/-)をもつ慢性関節炎モデルSKGマウスに関節炎を誘導させ、関節炎および動脈硬化を組織学的に評価し、評価する部位、時期など最適に評価できる条件を決めた。また、APO-E(+/-)SKGマウス同士を交配させ、APO-E(-/-)SKGマウスを作成した。このマウスはAPO-E(+/-)SKGマウスと同様に関節炎を誘導でき、動脈硬化病変も認めた。APO-E変異マウスはコラーゲン誘導性関節炎に対して抵抗性であると報告されており、異なる結果となった。本研究においてAPO-E(+/-)をもつ慢性関節炎モデルSKGマウス同士を交配させ、APO-E(-/-)SKGマウスを作成した。動脈硬化面積をAPO-E (-/-)マウスと比較したところ、有意に面積が拡大していることが明らかになり、関節炎が動脈硬化を促進させることをモデルマウスで示した。APO-E(-/-)SKGマウス作成に関して論文作成中で、本マウスを安定的に供給できるように維持している。本マウスを用いて治療介入による関節炎および動脈硬化への影響を解析している。

APO-E変異マウスはコラーゲン誘導性関節炎に対して抵抗性であると報告されており、モデルマウスにより異なる結果となった。APO-E(-/-)SKGマウスを用い、関節炎を誘導した場合としない場合とで動脈硬化面積を比較したところ、関節炎を誘導した方が有意に面積が拡大していることが明らかになった。このことから、関節炎が動脈硬化を促進させることを示した。また、治療介入することにより関節炎および動脈硬化ともに改善する可能性が示唆された。APO-E(-/-)SKGマウスを用いて関節炎を誘導し、関節炎および動脈硬化を組織学的に評価し、マクロファージやリンパ球などの免疫担当細胞に発現するCD4・CD8など、炎症性メディエーターであるIL-6、TNF-αなど、コラーゲン分解に関わるマトリクスメタロプロテイナーゼ、新生血管形成に関わるVEGFに対する標識モノクローナル抗体にて免疫染色し、関節および血管での発現を調べる。同時に採取した血清を用いて、CRP、IL-6、TNF-α、MMP-3・9、VEGFなどの血清マーカーを測定する。また、分子標的薬などにより治療的介入を行い関節炎および動脈硬化への影響を明らかにする。APO-E(-/-)SKGマウスを用いて関節炎を誘導し、関節炎および動脈硬化を組織学的に評価する。旅費等の予算を計上していたが、使用しなかったため(理由)旅費等の予算を計上していたが使用しなかったため(使用計画)論文作成時の謝金として使用する論文作成時の謝金として使用する