hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒーリングシートと咀嚼・咬合等の開閉口運動を利用した骨延長法の開発

顎骨の延長部位へ持続したmechanical stressを加えることで延長部位の新生骨が良好に形成される点を考慮し、開閉口運動や咀嚼運動の力学的エネルギーを延長力へ応用することを想定して持続的延長作用を有する骨延長器の開発に着手した。また、延長骨の評価についてはマイクロCTを用いて評価を行った。さらに、ヒーリングシートに関する実験動物を用いた検討については、骨組織が介在しない軟組織のみに対する創傷治癒効果について免疫染色法を用いて検討した。本年度では、研究目的の一つである延長部位へ持続したmechanical stressを加えることで延長部位の新生骨が良好に形成される点について、開閉口運動や咀嚼運動の力学的エネルギーを延長力へ応用することを想定した持続的延長作用を有する骨延長器の開発に着手した。具体的には、マイクロアクチュエーターとステッピングモータを導入したチタン製の小型骨延長器を同大学工学研究科扇谷准教授御教示にて作製し、単位時間当たりの延長量を数千から数万分の1mmで連続した顎骨延長様式を可能とし、1日当たりの咀嚼回数を想定・具現化した。また、プログラミングソフトをインストールしたコンピュータ制御の下でUSBにて接続し、延長スピードを調節可能とした。これを、ウサギ(日本白色種)を実験動物とした下顎骨へ装着し、手動で1日当たり1回だけ1mm下顎骨を延長した群を対照群とした実験を行った。問題点としては、延長器との接続部分が脆弱であり実験動物の動きにより接続部分が断線される場合があるので当該部分について十分な補強が必要であることが挙げられる。対照群における延長部分の新生骨に関する評価に関して、マイクロCT(以下μCT)を用いた画像評価を施行した。延長後2週における下顎骨ではμCTによる3D画像を分析した結果、元来の顎骨から骨延長によって形成された新生骨には不規則な石灰化像が認められ、連続した部分の新生骨と不連続な部分が混在していた。これは、断続的なmechanical stressでは新生骨形成が元来の顎骨周囲に一様には形成されないことが示唆された。また、ヒーリングシートに関しては軟組織の創傷治癒効果が高い生体材料について考慮し、ウサギ(日本白色種)を実験動物とした舌などの軟組織の治癒経過を含めた効果について計画ではコラーゲンを成分とした材料であったが、フィブリン、ポリグリコール酸、トロンビン等幅広く考慮し、次年度に引き続き施行した。本年度では前年度の研究結果を踏まえた上で、ヒーリングシートに関し実験動物を用いた検討を引き続き施行した。実験動物は、ウサギ(日本白色種)を用い初めに骨組織が介在しない軟組織のみに対する創傷治癒効果について検討した。実験方法は、体重約3-3.5kgの雄性日本白色家兎を用い全身麻酔下で舌縁部に大きさ約10×10×2mmの切除を施行した。その後切除後の創部に対しフィブリンとトロンビンの混合溶液とポリグリコール酸シートを使用した群と一次縫縮を施行した群に分け、術後1週、2週、4週においてH-E染色、抗Cytokeratin AE1/AE3(以下AE1/AE3)、抗FGF-2抗体(以下FGF-2)ならびに抗VEGF抗体(以下VEGF)の免疫組織化学染色による形態学的観察ならびに肉眼的観察を行った。結果は、フィブリンとトロンビンの混合溶液とポリグリコール酸シートを使用した群と一次縫縮を施行した群では術後1週、上皮全体でAE1/AE3に強陽性を示し、上皮層と結合組織層でFGF-2に強陽性を示し、VEGFの発現により血管新生が認められた。術後2週では、基底膜層の形成がさらに進みAE1/AE3に陽性を示したが、上皮層とその直下の結合組織層ではFGF-2の発現がやや減少した。術後4週では創面の組織修復が更に進み、上皮基底層においてAE1/AE3に陽性を示し、FGF-2、VEGFで陰性を示したことで正常に上皮化されたことが示唆された。一方、一次縫縮を施行した群では、術後1週で同様に上皮層にAE1/AE3に強陽性を示し、結合組織層でFGF-2とVEGFに陽性を示した。また、術後2週ではAE1/AE3では上皮層に発現を認め、FGF-2における陽性発現が減少し、術後4週でFGF-2に陰性を示し瘢痕形成を認めた。これらの結果より、フィブリンとトロンビンの混合溶液とポリグリコール酸シートを創傷治癒材として有用であり、少なくとも軟組織の治癒効果があることが示された。骨延長時における骨膜治癒の促進を含めた効果を今後さらに検討する必要がある。
ビーチコーミングを通して環境問題及び地域の歴史について触れ、学力三要素を育てる。

○研究目的科学部の研究としてビーチコーミングに取り組み、海岸の観察及び採集してきたものや海のゴミなどから環境問題や歴史について考察し、校内及び校外に発表していく。また、その過程を通して、学力三要素(本校では基礎的な知識や技能=【知識・技能】、思考力・判断力・表現力・その他の能力=【能力】、学習意欲=【態度】とそれぞれ呼び、これらを総合して学力三要素と呼ぶことにした。)をバランス良く育てることを目的とする。○研究方法科学部の活動の中で専門家を招き、「ビーチコーミングとは何か。取り組む上での視点」についての講演会を行い、その後はフィールドワークとして定期的にビーチコーミングに取り組んだ。海岸での収集物を持ち帰り、存在した歴史的・物理的な背景について考察した。○研究成果先ず初めに専門家による講演を行った。砂浜には色々なもの(鎌倉の海岸では、動植物の死骸・貝殻、鎌倉時代と思われる馬の歯や、かわらけと呼ばれる陶器のかけら。また、明治・大正・昭和の時代に使われていたガラス瓶・おもちゃ。海外の文字の書かれた漁具やプラスチック。ゴミ。その他いろいろ。)を見つけることができると知り、生徒たちに基礎知識が加わり意欲も高まった。その後、フィールドワークに取り組み、講演で聞いたものを実際に採集することができた。生徒はフィールドワークを重ねるごとに、始める前に比べて砂浜を見る目が変わっていき、採集物を見つける視点も多くなってきた。また、採集したものがどのような歴史的・物理的な背景があるのかを考察することができた。定期的にフィールドワークを行うことにより、季節による漂着物や採集物の違い、ゴミなどによる環境問題についても感じることができた。採集物については、校内での行事において展示・発表することができた。参加者は、身近に海がありながら、そのような漂着物や採集物があるということを知らない人が多く、興味・関心をとても多くもってもらえた。研究を通して、海岸の漂着物や採集物には今までに気づかなかった事が多くあり、その歴史的・物理的な背景を調べていくことは、とても奥が深く神秘的であった。この過程は生徒にはとても新鮮であり、学力三要素を育てる上でとても良い教材となった。この学習については、一年間ではなく今後も継続していくことでより多くの発見ができそうである。ゴミ。その他いろいろ。
ヨーロッパ中世の音風景

テレビもラジオもなければ、文字さえ一般民衆にとってはほとんど目にする機会がなかった時代においては、音だけが、唯一に近いメディアであり、音から歴史を探る意義は大きい。本研究においては、それらの音のうち、鐘と喇叭の音にとりわけ着目して、西欧中世における信号音の意義を考察した。史料としては、都市のさまざまな条例、規約やギルド、信心会、修道院関係史料、さらに会計史料などを用い、それらのところどころに記載されている「音」の記述を拾い集めたが、それととともにより広い背景を知るために、中世・ルネサンスの文化史・社会史関連の研究書を入手熟読して、さまざまな角度から検討を重ねた。さらに、それぞれの音のメッセージの象徴的な意義を、音の鳴る環境および周囲に張り巡らされた力関係とともに探るためには、実際にいかなる「場」で音が鳴っていたかを確認する必要があるため、中世・ルネサンス期の市民と貴族にとっての音の「場」として、北イタリアの都市の広場および教会、そして都市周辺の農村に作られたヴィラを訪れ、綿密に観察し、その姿を写真に収めた。これらの調査研究により、地域・年代ごとの音の用途別分布の差異が、ある程度明らかになった。具体的な成果としては、盛期中世のコミューン運動における鐘の役割、十字軍などの際の銀のラッパの合図、王権による鐘の没収、中世末の下層民反乱(フィレンツェのチョンピの乱など)での糾合の音、音のリレー、さらには王侯の入市式をはじめとする儀礼における楽師の音楽などの実態を解明し、それらに表れた社会関係ならびに支配・被支配関係を明らかにできた。本年度は、日本にない史料を収集して、そこに見出される音関係の記述を分類しながらカードに記入してゆく作業を始めた。都市のさまざまな条例、規約やギルド、信心会、修道院関係史料、さらに会計史料などのところどころに記載されている「音」の記述を拾い集めたが、それとともにより広い背景を知るために、中世・ルネサンスの文化史・社会史関連の研究書を入手して、熟読した。テレビもラジオもなければ、文字さえ一般民衆にとってはほとんど目にする機械がなかった時代においては、音だけが、唯一に近いメディアであり、音から歴史を探る意義は大きい。だが、それぞれの音のメッセージの象徴的な意義を、音の鳴る環境および周囲に張り巡らされた力関係とともに探るためには、実際にいかなる「場」で音が鳴っていたかを確認する必要がある。本年度は、中世・ルネサンス期の市民と貴族にとっての音の場として、北イタリアの都市の広場および教会、そして都市周辺の農村に作られたヴィラを訪れ、綿密に観察し、写真に収めた。本年度は、前年度に収集し、整理・分類した史料のうち、まだ分析の終わっていないものについて、検討を進めた。まず、古文書史料については、音の種類(鐘、鈴、ラッパ、角笛、カスタネット、太鼓、叫び声)別にカードにとった該当箇所を、今度は、それぞれの音が鳴らされた状況と突き合わせながら、その機能・役割を明らかにした。それにより、地域・年代ごとの用途別分布の差異が、ある程度明らかになった。文化と社会における意味の考察に際しては、ヨーロッパ中世、およびルネサンス期にかんする最新の研究書を追加で収集し、さまざまな角度から検討を重ねた。図像という表象における音と、実際に鳴らされる音の「文法」とは無関係ではない、という前提から、図像史料の分析も始めた。「音」の表現が、他の諸場面の表現といかなる関わりをもつかについて、文字からは推知できない事実が判明した。たとえば写本挿絵において、「音」は、漫画の符牒のような記号で表されているが、その規則を突き止めるべく、中世のイコノグラフィーおよび、「身振りの文法」についてのフランスの美術史家の業績などを参考に、集まった図像を分類して整理する作業を行った。本年度は、前年度までに計画・遂行された研究成果の総合をはかるべく、音をめぐる社会関係、権力関係についての解明を試みた。

具体的には、盛期中世のコミューン運動における鐘の役割、十字軍などの際の銀のラッパの合図、王権による鐘の没収、中世末の下層民反乱(フィレンツェのチョンピの乱など)での糾合の音、音のリレー、さらには王侯の入市式をはじめとする儀礼における楽師の音楽などにとりわけ注意を払って、それらに表れた社会関係ならびに支配・被支配関係を明らかにした。さらに、音を鳴らす専門家、すなわち鐘撞き、角笛吹き、ラッパ手、楽師についても、その地位、社会的位置を検討してみた。その結果、鐘撞きについては特定の「家系」が存在すること、またラッパ手をはじめとする楽師には、遍歴し差別される楽師と、都市や王室に雇われ、いわば高級役人のような立場に登りつめる楽師がいることが判明した。3年にわたる研究の結果、ヨーロッパ文化を、文字どおり目に見えないところで規定していた深層の世界の重要な側面が解明され、ヨーロッパと日本やアジア、イスラム世界などとの、新たな比較史的研究への門戸を開く鍵をひとつ見っけたと言える。
母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の予防に及ぼす効果

本研究の目的は、母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の予防に及ぼす効果について検討することであった。幼稚園および保育所の園児とその母親を主たる対象に研究を行った結果、母親の対人的楽観性と幼児の対人的問題行動との間には負の相関があり、母親の対人的楽観性は幼児の対人的問題行動に負の影響を及ぼしていることが明らかになった。さらに、母親の対人的楽観性の変容は幼児の対人的問題行動の予防に一定の効果を及ぼすことが示唆された。平成22年度においては、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動にどう影響するのか、その因果関係を明らかにすることを目的とし、本研究を実施した。具体的内容としては、(1)性別、月齢、発達程度などは同じだが、一方は母親の対人的楽観性が高い幼児の群、他方は母親の対人的楽観性が低い幼児の群の2群を抽出し、(2)各群の幼児の発達プロセスを、ビデオ録画や自然観察の分析などによって比較し、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響について検討を行った。また、幼児の母親に対しては、楽観的帰属様式尺度(沢宮・田上、1997)、養育態度尺度(鈴木ほか、1985)などを実施した。さらに、各群の幼児について、幼児の通う幼稚園の担任教諭を対象に、幼児用社会性尺度(沢宮、1998)などを実施した。以上の研究は次年度も継続して行う予定である。親から幼児に及ぶ影響を論じる場合、過保護・過干渉、放任などといった親の養育態度からアプローチすることが通常であるが、本研究は「親の自己認知のあり方」が幼児に及ぼす影響に焦点を当てている点に独創性がある。現場の心理臨床実践では、さまざまな制約により、幼児と直に接することなく、幼児の問題を母親のみを介して解決せざるを得ないケースも少なくない。母親の対人的楽観性を変容させる本研究のアプローチは、そのようなケースにおいても有効性が期待できることから、大きな意義をもつと考えられる。本研究の目的は、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の予防に及ぼす効果」について明らかにすることである。具体的には、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響、さらに母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の改善に及ぼす効果などについて、検討を行う予定であった。当該年度においては、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動にどう影響するか、その因果関係を明らかにすることを目的としていた。具体的には、(1)性別、月齢、発達程度などは同じだが、一方は母親の対人的楽観性が高い幼児の群、他方は母親の対人的楽観性が低い幼児の群の2群を抽出する。(2)各群の幼児の発達プロセスを、ビデオ録画や自然観察の分析などによって比較し、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響について検討を行う予定であった。なお、幼児の母親に対しては、楽観的帰属様式尺度(沢宮・田上、1997)、養育態度尺度(鈴木ほか、1985)などを実施、また、各群の幼児について、幼児の通う幼稚園の担任教諭を対象に、幼児用社会性尺度(沢宮、1998)などを実施する予定であった。しかし、東日本大震災による被災および放射能汚染の影響によって、予定していたエリアから協力が得られないなどの問題が生じたため、幼児の母親に対する個別面接にウェイトを移し、研究を継続した。本研究の目的は、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の予防に及ぼす効果」について明らかにすることであった。具体的には、期間内に、「母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響」、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の改善に及ぼす効果」、さらに、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動を予防するうえでいかなる効果をもつか」、などについて検討を行うことを、目的とした。最終年度にあたる本年度は、特に「母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響」、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の改善に及ぼす効果」などについて、研究の総括を行った。本研究においては、母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人行動の改善および対人的問題行動の予防に及ぼす効果について確かめ、対人的問題行動に対しては楽観性等のポジティブな側面に焦点を当てながら予防的援助を行うことが重要であることを明らかにした。これらの結果は、研究協力園が東日本大震災により被災し放射能汚染の影響を受けたことから、研究代表者が継続して行っている園児の母親に対する心理的支援活動のなかから得られた、臨床実践におけるレジリエンスやポスト・トラウマティック・グロース(PTG)等、人間のポジティブな側面にかかわる概念の重要性についての認識とも一致している。なお、本研究は、ポジティブ心理学においても重要な概念である、楽観性という「認知的変数」に介入することによって不適応のリスクを未然に抑えるという発想に基づくものである。これは「予防的認知行動療法」のアプローチとしても、きわめて独創的なものである。

予防・開発を目的とする健康教育プログラムとしての発展も視野に入れながら、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動を予防するうえでいかなる効果をもつか」について、研究の総括を行った。本研究の目的は、「母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の予防に及ぼす効果」について明らかにすることであった。具体的には、期間内に、母親の対人的楽観性が幼児の対人的問題行動に及ぼす影響、さらに母親の対人的楽観性の変容が幼児の対人的問題行動の改善に及ぼす効果などについて、検討を行った。なお、本研究は昨年度より継続して実施しているものであるが、今年度は、特に対象児の母親に対する個別面接を重ね、質的研究を行った。東日本大震災による被災および放射能汚染の影響によって、予定していたエリアから協力が得られなくなったり、予定していた実験、調査が実施できなくなったりした。25年度が最終年度であるため、記入しない。協力園が震災および放射能災害の影響を受けており、母親に対する個別面接を実施していても、災害への不安を訴える保護者がきわめて多かった。研究条件としては良好なものとはいえなかったものの、保護者の不安軽減を促進するうえで、個別面接自体には大きな意義があったと考える。東日本大震災による被災および放射能汚染の影響によって、予定されていたグループでのアプローチは現実的に困難となったが、幼児の母親に対する個別面接を通して、一人ひとりへのアプローチを行うことにウェイトを移すことによって、本研究課題を推進させていきたいと考える。協力園が震災および放射能災害の影響を受け、当初の見込み以上の対象者のドロップアウトが出ている。1一定数の対象者の補充を行う、2並行して他協力園においても実施する、などの対応も考えられたが、協力園の強い要望もあったことから、3対象児の母親に対する個別面接を重ね、質的研究を行う、という対応策をとることになった。当初の研究目的が達せられるように対応していきたい。
高次補食者をプラットフォームとした海洋環境変動のモニタリング

微細スケールでの海洋環境変動研究が海洋汚染評価や魚群動態などの生物過程の解明には重要である。海洋環境モニタリングは調査船および観測衛星によって実施され、大スケールでの分析が進んでいる。自由生活する海鳥を観測プラットフォームとすることによって、微細環境をモニタリングすると同時に動物の行動・生理的反応を測定し、環境モニターとしての評価および保全生物学への応用を検討した。飛翔潜水性海鳥であるウ類およびウミスズメ類は水中、空中、陸上と多様で広範囲な生活の場をもち、海中も含めた3次元での微細な環境変動に反応する。彼らにデータロガーと電波発振器を装着し、これらテレメトリーシステムによって物理環境、位置及び潜水行動を記録した。その結果、1)飛翔性ウミスズメ類の方が潜水専門のペンギン類よりも2倍長く潜っており、彼らを環境モニターとして利用する際、異なる生理的制約を考慮する必要があること、2)ウミウの採食場所には大きな個体変異が観察され、浮魚資源量の年変動に対する餌のシフトにともなって個体毎にこの採食パターンをスイッチしている可能性が示唆されたため、個体レベルでの研究が必要とされること、3)浮魚専門食のウトウ雛は、暖水塊が早く形成され良い餌であるカタクチイワシが早く出現した年に、速く成長し繁殖成功率も高く、その繁殖パラメターは海水温に依存した浮魚資源の季節的変動と年変動に密接に関連すること、4)ハシブトウミガラスの潜水行動と周辺海水温をマイクロデータロガーで測定することで、彼らの採食海域とその利用パターンを推定でき、大型動物をプラットホームとした海洋環境と動物の相互作用を研究するためテレメトリー技術が有効であることが確認された。ウ類は高い潜水能力をもち底魚を捕食する。彼らは大型であるため餌要求量が大きく、繁殖期中は採食範囲が限定される。そのため、沿岸海洋生態系の環境変動に依存して大きく採食行動を変えると同時に、沿岸海洋資源に与える地域的なインパクトはかなり高くなると推定されているが、その採食場所を直接測定した研究は少ない。彼らの採食場所の変動性を明かにするため、北海道天売島に繁殖するウミウ材料として、育雛期における採食場所を、2ヵ所に八木アンテナを設置したラジオトラッキングシステムによって測定した。1997年の6月に野外実験を実施し、観察時間の90%以上でウミウの採食位置が特定できた。ウミウは島の東側の北海道本土までの水深60m以下の浅い海域で主に採食し、西側の大陸だな斜面には出かけていなかった。コロニーから採食場所までの最大距離は30kmほどで、本土沿岸に達していた。採食場所は、島周辺と本土沿岸部に集中する傾向があった。1回の採食トリップではほぼ1ヵ所でのみ採食し、その場所を変えることはまれであった。採食場所に個体変異がみられ、島からそれぞれ北東方向あるいは南東方向の本土沿岸部で採食する個体、島周辺部で採食する個体、特定の採食場所を持たない個体が観察された。このように、ウミウの採食場所は水深と繁殖地からの距離に制限されており、個体毎に固定されている傾向がみられた。また1996年におこなわれた同様の調査と比較すると、比較的よく底魚を捕食した1996年には全ての個体が本土沿岸部で採食したが、浮魚も捕食した1997年には半数の個体が島周辺で採食した。したがって、採食場所の変化は浮魚資源の変動を反映しているらしいこと、採食場所の変化は個体レベルでおこることの2点が明かとなった。

自由生活する海鳥を観測プラットフォームとすることによって、微細環境をモニタリングすると同時に動物の行動・生理的反応を測定し、環境モニターとしての評価および保全生物学への応用を検討した。飛翔潜水性海鳥であるウ類およびウミスズメ類は水中、空中、陸上と多様で広範囲な生活の場をもち、海中も含めた3次元での微細な環境変動に反応する。彼らにデータロガーと電波発振器を装着し、これらテレメトリーシステムによって物理環境、位置及び潜水行動を記録した。その結果、1)飛翔性ウミスズメ類の方が潜水専門のペンギン類よりも2倍長く潜っており、彼らを環境モニターとして利用する際、異なる生理的制約を考慮する必要があること、2)ウミウの採食場所には大きな個体変異が観察され、浮魚資源量の卑変動に対する餌のシフトにともなって個体毎にこの採食パターンをスイッチしている可能性が示唆されたため、個体レベルでの研究が必要とされること、3)浮魚専門食のウトウ雛は、暖水塊が早く形成され良い餌であるカタクチイワシが早く出現した年に、速く成長し繁殖成功率も高く、その繁殖パラメターは海水温に依存した浮魚資源の季節的変動と年変動に密接に関連すること、4)ハシブトウミガラスの潜水行動と周辺海水温をマイクロデータロガーで測定することで、彼らの採食海域とその利月パターンを推定でき、大型動物をプラットホームとした海洋環境と動物の相互作用を研究するためテレメトリー技術が有効であることが確認された。
遺伝子改変による糖輸送担保の構造と機能およびインスリン作用の解析

すべての哺乳動物細胞にはグルコ-スを細胞外から取り込む糖輸送活性が認められるが、水溶性のグルコ-スがリン脂質の二重層である細胞膜を通過する際には、グルコ-ストランスポ-タ-(糖輸送担体)と呼ばれる膜蛋白の介在が必要である。我々は糖輸送担体のサブタイプであるGLUT1の412位のトリプトファンをロイシンに置換した変異糖輸送担体の遺伝子を作製し、CHO細胞に発見させ、その糖輸送活性およびグルコ-ス結合を検討した。サイトカラシンBによる標識は、正常トランスポ-タ-の約60%と低下しているものの認められ、412位がトリプトファンでなくても共有結合は生じたのであった。しかし、このミュ-タントでは糖輸送活性が著明に低下しており、その活性低下は2ーデオキシグルコ-ス0.1mMのみならず、10mMでも同様に認められた。なお、細胞膜への発現量は、正常トランスポ-タ-の発現量とほぼ同様であることが、Cell surface labelingの方法により確認できた。種々のグルコ-スアナログを用いた検討から、このミュ-タントのグルコ-ス結合能は細胞内から結合する場合に低下しており、412位のトリプトファンがトランスポ-タ-が内開きの形をとった時のグルコ-ス結合部位、あるいはその近傍に存在することを示唆していた。さらに糖鎮の役割を検討するため、45位のアスパラヂンをチロシンなど他のアミノ酸に置換した糖輸送担体を発現させて、糖鎖のない場合の糖輸送活性を検討した。この結果、糖鎖は糖輸医担体のグルコ-スに対する親和性を高めて高い糖輸医活性に寄与していることが明らかとなった。
心筋における細胞増殖抑制因子の測定法の開発

心筋症の発症因子として、家族性肥大型心筋症患者では遺伝子異常があると報告されている。また拡張型心筋症における心筋細胞内のCa^<++>の異常,beta-Recepterの異常なども指摘されている。しかし心筋細胞外マトリックスが心筋症の発症、進展にどのように関与するか検討した報告は少ない。コラーゲン線維の心臓に対する生理的役割はつぎのようなものが考えられる。1)心筋細胞や血管を支持しささえる働き。2)心筋細胞や筋線維をつなぎ、心筋細胞の収縮により生じる力を伝える働き。また、3)コラーゲン線維による張力・弾力は心筋の拡張時や収縮時の心筋の強度に影響を与える。これは心臓の変形を避け、形状・厚さを維持し、心室瘤や心破裂を避ける働きがあると考えられる。一方、病態生理的にはコラーゲンの過度の造成は心筋収縮力の減少および心筋拡張障害を引き起こすと考えられる。本研究では2系統の心筋症のモデルハムスター(BI053.58,BI014.6)を用いて心筋症の進行の過程に伴う心筋細胞外マトリックスの変化をその主要な成分であるコラーゲンに注目し心筋症の発症、進展に細胞外マトリックスがどのように関与するかを検討した。心筋症モデルハムスター(BI014.6,BI053.58)の心筋細胞外マトリックスのコラーゲンを分析して以下の結果を得た。1)心筋組織の線維化の進行に伴い週齢が進行するにつれBI014.6,BIO53.58ともにコラーゲンが有意に増加していた。また、酸可溶性コラーゲンがBIO14.6・BIO53.58とも減少していた。3)BIO53.58の還元姓架橋分析の結果、心筋組織が線維化するにつれ還元性架橋が減少する傾向にあった。4)組織学的には心筋症の線維化の進行に伴い太いコラーゲン線維が増加していた。こうしたコラーゲンの生化学的(量・型・架橋)・形態学的変化が心筋組織を硬い組織へ変化させ、心臓の収縮能・拡散能を障害し心筋症の病態生理的な変化を起こす原因のひとつとなっていると考えられた。今回の結果より、心筋症の進行においてはその初期においてはコラーゲンはIII型コラーゲンの多い幼弱な組織であるが、進行した時期においては硬組織に近い組織(I型コラーゲンが多く、可溶性が減少し、非還元性の成熟架橋が多い組織)へと変わることが考えられる。こうした強固な結合をした太いコラーゲン線維が心筋組織内に彌慢性に増えることは、心筋細胞が変性・壊死し失われることと共に心臓の収縮能・拡張能をいっそう障害していると考えられる。特に線維化の強い拡張型心筋症で早期に収縮・拡張障害を起こし心不全になりやすいとものと考えられる。

こうした強固な結合をした太いコラーゲン線維が心筋組織内に彌慢性に増えることは、心筋細胞が変性・壊死し失われることと共に心臓の収縮能・拡張能をいっそう障害していると考えられる。特に線維化の強い拡張型心筋症で早期に収縮・拡張障害を起こし心不全になりやすいとものと考えられる。【研究目的】心筋細胞は新生児時期より分裂せず、成長につれて細胞の大きさのみ大きくなる。また心臓原発性の癌の報告も、転移癌の報告も少ない。このことから、心臓に何か強力な細胞増殖抑制因子の存在することが想像される。近年、肝腎においては線維芽細胞の細胞増殖を促進し、また実質細胞の細胞分裂を抑制し、さらにまた血管新生を促進させるtransforming growthfactor β(TGFβ)が心筋梗塞のさいに心筋細胞に発現する事が報告され、心筋壊死層に於ける線維化促進に関与していると考えられる。しかし正常心筋細胞ではその発現が非常に弱く、TGFβとは違う抑制因子が心臓にあるのではないかと考えられる。本年度の研究計画は細胞増殖抑制因子に着目し、c-myc oncogeneを培養心筋細胞にlipofection法を用いてtransfectionし、transfectionされない細胞と比較検討し細胞分裂を起こさず肥大することを確認する。さらに、その細胞増殖抑制因子を精製、同定する事にあった。【研究成果】本年度は予備実験として、心筋細胞を用いず血管平滑筋細胞、線維芽細胞にc-myc、h-rasをlipofection法にてtransfectionした。transfectionされた細胞ではいずれもPLC活性が上昇し、細胞ないへのCa取り込みも増加していた。DNA合成もtransfectionされた細胞で亢進していた。こんねんどは更に心筋細胞をもちい検討するとともに、更に細胞増殖抑制因子を同定する。ホルモンおよび細胞増殖因子等の細胞外からの刺激が細胞表面の受容体よりGTP結合蛋白質を介してPI-PLCを活性化しDGとIP3という二つのsecond messengerを産生しプロテインキナーゼCを活性化し蛋白のリン酸化を起こす経路はliposomeを用いGTPおよびPLCを再構成させる実験より明らかになりつつある。心節細胞は新生児時期より分裂せず、成長につれて細胞の大きさのみ大きくなる。本研究計画は細胞増殖抑制因子に着目し、c-myc oncogeneを培養心筋細胞にlipofection法を用いてtransfectionし、transfectionされない細胞と比較検討し細胞分裂を起こさず肥大することを確認する事にあった。本年度は血管平滑筋細胞、線維芽細胞にc-myc、h-rasをlipofection法にてtransfectionした。現在、更に心筋細胞をもちい検討するとともに、更に細胞増殖抑制因子の同定が進行中である。
戦後内戦期の華北農村社会における中国共産党の支配確立過程

本研究では、まず1940年代華北農村における農民の社会関係や価値観を分析した。ここでは、当時の華北農民の規範意識における「面子」観念の重要性を指摘した。つぎに内戦期の土地改革の資料を分析し、共産党のどのレベルの党員も「現実」の解釈権(農民が望んでいることは何か?など)を安定的に持っていたわけではないことを明らかにした。この理解を踏まえ、中国共産党の支配の正当性は、「もっとも正しく人民の意志を理解できる者」としての毛沢東に全面的に依拠していたとする仮説を立て、全国的学会で発表した。平成20年度は、本研究の一環として、『中国農村慣行調査』を読み解いて1940年代華北農村における農民の社会関係や価値観を再構成して成稿し、学術雑誌に投稿した。この論文では、(1)1940年代の華北農村社会における村民の規範意識には「面子」観念が大きな役割を果たしていたこと、(2)「面子」意識の繋がりは知人同士で意識されるものであるために「村」という枠組みと密接な関係を持ったが、「同村民」という集合と完全に重なるものではなかったこと、(3)「村費・税金徴収」という公的な性格を持つ業務も「面子」を損なうものとして意識されていたこと、そして(4)「面子」意識の連なりによる村落の凝集は、村落内外の「力(暴力)」を前にして脆弱だったことなどを指摘した。このうち(1)(2)(3)は近代中国農村社会史研究の進展において意義を持つ知見であり、(4)は本研究の主題である中国共産党と農村社会との関連を考えていく上で極めて重要な基礎となる。なお、この論文は現在審査中であるため、下記の研究成果のリストには挙げていない。また、このような1940年代の華北農村社会における人的結合の在り方に関する知見を念頭に、これまでに収集してきた共産党の工作隊報告を慎重に分析した。この研究の成果は、平成21年6月に予定されているシンポジウムにおいて発表する予定である。またさらに、平成20年度は、長期休暇を利用して台湾に渡航し、法務部調査局資料室で内戦期共産党の関連資料の調査と収集にあたった。平成21年度は、1940年代の華北農村における農民の規範意識や社会関係を明らかにした論文(前年度に学術雑誌に投稿)を、査読意見に応じて改稿・再投稿し、掲載が決定した(ただし掲載号未定)。この論文では、当該時期の華北農村社会における村民の規範意識には「面子」観念が大きな役割を果たしていたこと、またこの「面子」観念によって保たれる社会秩序は、外部の力の前には極めて脆弱であったことなどを指摘した。特に後者の知見は、本研究の主題である中国共産党と農村社会との関連を考えていく上で極めて重要である。また、本研究の主たる課題である内戦期の共産党土地改革の資料を分析するなかで、「現実」の解釈権(農民が望んでいることは何か?など)を党組織のどのレベルも安定的に持っていたわけではないことが分かった。この理解を敷衍して、中国共産党の支配の正当性が、「もっとも正しく人民大衆の意志を理解できる者」としての毛沢東に全面的に依拠していたとする仮説を立て、全国的な学会の関西部会大会でパネラーとして報告するとともに、同学会の全国大会においてこの仮説を意識しつつ「歴史・法律分科会」を組織した。さらに、本研究のテーマに関する日本の研究状況を整理した文章を執筆し、中国の学術雑誌に投稿し、査読を経て掲載された。なお平成21年8月9月には、台湾の中央研究院近代史研究所に赴き、現地の研究者と交流するとともに資料調査を行った。
鉄筋コンクリートの通電によるひび割れ閉そくと内部鉄筋の機能回復に関する研究

(1)適当な外部溶液を介して通電を行うことにより、鉄筋コンクリートのひび割れを閉塞させることができた。また、健全なコンクリート表層部の改質を行うこともできた。(2)適当な外部溶液を介して通電を行うことにより、ひび割れ部コンクリートの物質透過性は抑制された。例適当な外部溶液を介して通電を行うことにより、鉄筋コンクリートのひび割れを閉塞させることができた。えば、透水性に関しては、1日間の電着で、ひび割れ部の透水係数が健全部より減少した。中性化に関しては、MgCl_2水溶液を用いた場合、3日間の通電で、ひび割れ部の中性化深さが健全部より減少した。塩化物イオン浸透性に関しても、同様の効果が得られた。(3)ひび割れが生じた陸上コンクリート構造物に対して、物質透過の抑制を主目的とする補修の場合、電着工法は充分な機能回復を期待できる。(4)外部溶液の溶質種類は、電着物の析出状況に影響を及ぼした。例えば、外部溶液にZnSO_4水溶液を用いた場合、ひび割れ深部でも電着物が析出した。また、MgCl_2水溶液を用いた場合、暴露面に近いひび割れ内部でのみ析出した。さらに、AgNO_3水溶液を用いた場合、ひび割れ部表面でのみ析出し、健全部コンクリート表面では析出しなかった。(5)通電の電流密度をコンクリート表面に対して0.25A/m^2、0.50A/m^2および0.10A/m^2とした。この範囲では電流密度が低いほど、電着物の細孔は減少した。その結果、物質透過性は、電流密度が低いほど抑制された。(6)適当な外部溶液を介して通電を行うことにより、健全部コンクリート表層部の細孔量が減少し、ビッカース硬さが増加した。(7)通電後に乾湿繰返し作用を部材が受けた場合も、透水抵抗性に関しては、通電による機能回復効果の持続が確認された。(8)電着物とコンクリートの付着強度は、コンクリートの引張強度の80%を超える。(9)通電により、コンクリート内部の再アルカリ化および脱塩も可能であった。(10)適当な外部溶液を介して通電を行うこと、コンクリート部材の曲げ剛性は向上した。本年度の業績は、11研究成果に示す論文にまとめてある。(1)ひび割れ部およびコンクリート内部の鉄筋表面において折出する物質の同定に関する基礎的な検討:種種の外部溶液(硫酸銅、硫酸カルシウム、硝酸マグネシウム、硫酸亜鉛、など)を電着によりひび割れに、折出させることに成功した。とくに、硫酸カルシウム、硫酸亜鉛、硝酸マグネシウムの場合の折出物を分析したところ、炭酸カルシウム、酸化亜鉛、水酸化マグネシウムであることが確認された。(2)ひび割れを有する鉄筋コンクリート部材中でのイオンの電気的移動に及ぼすひび割れの影響に関する検討:通電直後イオンは、ひび割れ部を優先的に通過するが、外部溶液の種類によっては、早期にひび割れの外面のみ(鉄筋近傍ではない)が折出物によって塞がるが、例えば、硫酸亜鉛においては、鉄筋近傍も折出物で閉塞されることが認められた、また、ひび割れ部以外のコンクリート中も折出物により改質されることが認められた、(1)適当な外部溶液を介して通電を行うことにより、鉄筋コンクリートのひび割れを閉塞させることができた。
セミパラチンスク旧ソ連核実験場周辺住民の骨髄異形成症候群(MDS)と白血病

セミパラチンスクの被曝様式は、低線量でかつ慢性の外部及び内部被曝であり、広島の被爆様式とはまったく異なっていることから、血液腫瘍の発生様式も異なっている可能性がある。我々は、原爆被爆者ではMDS発症のリスクが高く、遺伝子レベルでは造血幹細胞の分化増殖に重要な役割を果たしている転写因子AML1遺伝子の点突然変異を高率に見出した。またAML1変異を有する症例では、受容体チロシンキナーゼ(RTK)-RASシグナル伝達経路の遺伝子変異を高頻度に同定した。そこで、MDSと白血病の遺伝子レベルにおける原爆被爆者との比較を行い、被爆様式の違いによる異同を明らかにしようと試みた。最近10年間に収集したMDS・白血病125例の中で、MDS/AMLと診断した38症例を対象とした。AML1点突然変異は、骨髄あるいは末血よりDNAを抽出し、PCR-SSCP及び塩基配列解析により同定した。線量は現地のカザフ放射線環境医学研究所及び広島大学原医研星教授グループの個人線量のデータを参考にした。被曝線量別発生頻度は高線量群(300mSv以上)、中線量群(50300mSv)、低線量群(0.150mSv)で、それぞれ2/2(100%)、0/4(0%)、5/12(42%)であった。一方非被曝(コントロール)群では0/11(0%)であり、有意な被曝(0.30.6mSv以上)を受けた18例中7例(39%)にAML1点変異を認め、非被曝対照群に比し有意に高頻度であった。従って本点変異は原爆被爆者に関する結果と合わせて、放射線被曝関連のMDS/AML診断のバイオマーカーとなることを明らかにした。しかし低線量でも変異の頻度は比較的高く、線量反応関係に関してはさらなる症例の集積が必要であると考えられた。また見出されたAML1変異の局在はすべてN末領域であった。この結果よりセミパラチンスクの被曝においても原爆被爆と同様な遺伝子変異を造血幹細胞に誘発し、MDS/AMLの発症をもたらすことが推測された。セミパラチンスクの被曝様式は、低線量でかつ慢性の外部及び内部被曝であり、広島の被爆様式とはまったく異なっていることから、MDS、白血病など血液腫瘍の発生様式も異なっている可能性がある。我々は、原爆被爆者ではMDS発症のリスクが高いことを明らかにしている。さらに遺伝子レベルでは、造血幹細胞の分化増殖に重要な役割を果たしている転写因子AML1遺伝子の点突然変異を、ハイリスクMDSに高率に見出した。かつ変異は、放射線誘発及び化学療法による二次性MDSでは本遺伝子内のN末領域に集中していた。この結果MDS, RA, AML, ALL, CMLには変異を認めなかったのに対し、MDSの中で特にMDS/AML(RAEB, RAEB-T, MDS-AMLをまとめて呼ぶ)14例中4例に変異を認めた。変異を認めたのは37才男性(変異部位はpre176Arg),36才男性(Gly138fsX187)、68才女性(Arg177Gln)、60才女性(Arg177Gln)の4例であり、変異部位はすべてN末側に見出された。また3例目はN-RAS変異も認めた。なお1例目、2例目は大気圏核実験が実施された19491963年に被曝を受けたと考えられる。これらの例では、造血幹細胞にAML1変異による血球分化の異常と、RTK-RAS経路の変異による増殖シグナルの亢進が付与されることにより、MDS/AMLが発症したものと考えられる。4例と少数例ではあるが、AML1 N末側に変異を見出したことから、セミパラチンスクの被曝においても原爆被爆と同様な遺伝子変異を誘発し、MDS/AMLの発症をもたらすことが推測された。セミパラチンスクの被曝様式は、低線量でかつ慢性の外部及び内部被曝であり、広島の被爆様式とはまったく異なっていることから、MDS、急性骨髄性白血病(AML)など血液腫瘍の発生様式も異なっている可能性がある。さらに遺伝子レベルでは、造血幹細胞の分化増殖に重要な役割を果たしている転写因子AML1遺伝子の点突然変異を、MDS/AML(RAEB, RAEB-T, MDS-AMLをまとめて呼ぶ)に高率に見出した。最近10年間に収集したMDS・白血病の中で、遺伝子解析が可能であった症例を対象とした。AML1点突然変異は、骨髄あるいは末血よりDNAを抽出し、PCR-SSCP(single strand conformation polymorphism)及び塩基配列解析により同定した。線量は現地のカザフ放射線環境医学研究所のデータを参考にした。

個々人の生年月日や居住歴等から計算され、外部被曝が総線量の8090%を占めている。MDS/AML18例中7例に変異を認めた。被曝線量別発生頻度は高線量群(300mSv以上)、中線量群(50300mSv)、低線量群(0.150mSv)で、それぞれ2/2(100%)、0/4(0%)、5/12(42%)であった。一方非被曝(コントロール)群では0/11(0%)であった。また見出されたAML1変異の局在はすべてN末領域であった。この結果よりセミパラチンスクの被曝においても原爆被爆と同様な遺伝子変異を造血幹細胞に誘発し、MDS/AMLの発症をもたらすことが推測された。セミパラチンスクの被曝様式は、低線量でかつ慢性の外部及び内部被曝であり、広島の被爆様式とはまったく異なっていることから、血液腫瘍の発生様式も異なっている可能性がある。我々は、原爆被爆者ではMDS発症のリスクが高く、遺伝子レベルでは造血幹細胞の分化増殖に重要な役割を果たしている転写因子AML1遺伝子の点突然変異を高率に見出した。またAML1変異を有する症例では、受容体チロシンキナーゼ(RTK)-RASシグナル伝達経路の遺伝子変異を高頻度に同定した。そこで、MDSと白血病の遺伝子レベルにおける原爆被爆者との比較を行い、被爆様式の違いによる異同を明らかにしようと試みた。最近10年間に収集したMDS・白血病125例の中で、MDS/AMLと診断した38症例を対象とした。AML1点突然変異は、骨髄あるいは末血よりDNAを抽出し、PCR-SSCP及び塩基配列解析により同定した。線量は現地のカザフ放射線環境医学研究所及び広島大学原医研星教授グループの個人線量のデータを参考にした。一方非被曝(コントロール)群では0/11(0%)であり、有意な被曝(0.30.6mSv以上)を受けた18例中7例(39%)にAML1点変異を認め、非被曝対照群に比し有意に高頻度であった。従って本点変異は原爆被爆者に関する結果と合わせて、放射線被曝関連のMDS/AML診断のバイオマーカーとなることを明らかにした。しかし低線量でも変異の頻度は比較的高く、線量反応関係に関してはさらなる症例の集積が必要であると考えられた。
樹木細根系の物質循環と共生微生物の機能

樹木のほとんどの細根には菌根菌が共生している。菌根が枯死・脱落することで年間に土壌中に供給される有機物の量は、地上部から供給される落葉や落枝の量を上回ると考えられているが、その分解課程についてはほとんど分かっていない。本研究では、樹木の菌根をメッシュバックに入れて林地に埋設し、その後の分解過程を2年間にわたって追跡調査した。その結果、菌根は葉に比べて分解速度が何倍も遅く、95%分解されるまでには約20年必要であると推定された。また、分解に伴って重量や炭素量は減少したものの、窒素量は逆に増加する傾向を示した。また、菌根の分解過程においてどのような微生物が関与しているのかについても新規知見を得た。森林に生育する樹木のほとんどの細根には菌根菌が共生し、大量の炭水化物を樹木から受け取っている。しかし、至要なカーボンシンクである菌根や菌糸体(菌根から土壌中に伸びる無数の菌糸)が脱落した後の分解過程や、それにともなう物質循環についてはほとんど分かっていない。そこで本研究では、菌根や菌糸体がどのような微生物によって、どれくらいの速度で分解されるのか、分解過程でどれくらいの養分がどのようにして再利用されるのかなど、樹木細根系の物質循環に関する重要な学術的知見を得ることを目的とする。得られる成果は、樹木個体レベルから森林全体の炭素・窒素収支モデルに不可欠なものであり、地球温暖化防止対策における森林吸収源の再評価など応用的価値も高い。初年度である今年度は、分解実験に使用する菌根を大量に生産することを行った。まず、アカマツ実生に20種の菌根菌を接種した。菌根の形成が確認できた10種については、感染した菌根苗をプランターに移植した後、その周りに滅菌したアカマツの種子を播種し、大量の菌根苗を生産した。森林に生育する樹木のほとんどの細根には菌根菌が共生し、樹木が必要とする養分のほとんどを菌根菌が供給している。一方、その代償として、樹木は光合成産物の約2割を菌根菌に供給している。このため、菌根菌の菌糸と樹木の細根は、地上部の落葉を遥かに上回る有機物を毎年土壌中に供給していると考えているものの、その分解過程についてはほとんど分かっていない。菌根菌を含めた樹木細根系という大きなカーボンシンクの動態は、森林の物質循環だけでなく、地球規模の炭素動態を考える上でも明らかにしなければ行けない課題であると考えられる。本課題では、樹木の菌根をメッシュバッグにつめて森林土壌中に埋設し、分解過程を追跡するという手法を採用する。今年度は、予定している調査地の土壌を採取し、そこにどのような菌根菌が存在しているのかについて、成木の菌根と土壌中の埋土胞子の両面から検討した。また、根圏に存在するバクテリアの群集についても調べた。現在までに、予定している調査地の土壌中には数多くの菌根菌が存在していること、成木に共生して菌根として存在している菌種と、埋土胞子の形で存在している菌種はその組成が大きく異なること、樹木の細根には数多くのプロテオバクテリアが生息していることなどが明らかとなった。今後は分解過程を詳細に検討していく予定である。このため、多くの光合成産物が菌根菌の菌糸や細根(菌根)などの地下部の生産に投資され、その多くが数ヶ月の間に脱落し、土壌中の分解生態系に供給されている。その総量は地上部の落葉を遥かに上回り、森林の炭素循環において主要な要素であるものの、地中の見えない部分で一連の生産と分解が行われるためその詳細な過程はほとんど分かっていない。菌根菌を含めた樹木細根系という大きなカーボンシンクの動態は、森林の物質循環だけでなく、地球規模の炭素動態を考える上でも明らかにしなければいけない課題であると考えられる。そこで本研究では、菌根や菌糸体がどのような微生物によって、どれくらいの速度で分解されるのかなど、樹木細根系の物質循環に関する重要な学術的知見を得ることを目的とする。昨年度から、樹木の菌根をメッシュバッグにつめて森林土壌中に埋設し、その分解過程を追跡調査をおこなった。乾燥重量や養分含量、安定同位体比などの分析を行った。

また、次世代シーケンサーを用いた分解微生物(菌、バクテリア)の種組成などを明らかにした。調査の結果、葉の試料に比べて菌根試料の分解は遅く、モデルを用いた推定では95%分解までには約20年必要であることが示唆された。また、分解前の菌根菌の種類は分解速度や分解微生物に大きな影響を与えないことが明らかにされた。乾燥重量や炭素重量は分解に伴って減少したが、窒素重量は埋設前に比べてほとんどの試料で増加していた。一部の試料には窒素固定活性が見られたものの、多くのサンプルでは窒素固定活性が確認できなかったため、試料の分解に伴う窒素増加は、微生物の付着による持ち込み量が分解に伴う消失量を上回ったためであると考えられる。森林に生育する樹木のほとんどの細根には菌根菌が共生し、樹木が必要とする養分のほとんどを菌根菌が供給している。一方、その代償として、樹木は光合成産物の約2割を菌根菌に供給している。このため、菌根菌の菌糸と樹木の細根は、地上部の落葉を遥かに上回る有機物を毎年土壌中に供給していると考えているものの、その分解過程についてはほとんど分かっていない。菌根菌を含めた樹木細根系という大きなカーボンシンクの動態は、森林の物質循環だけでなく、地球規模の炭素動態を考える上でも明らかにしなければ行けない課題であると考えられる。そこで本研究では、菌根や菌糸体がどのような微生物によって、どれくらいの速度で分解されるのか、分解過程でどれくらいの養分がどのようにして再利用されるのかなど、樹木細根系の物質循環に関する重要な学術的知見を得ることを目的とする。本年度は、樹木の菌根をメッシュバッグにつめて森林土壌中に埋設し、分解過程を追跡調査している。乾燥重量や養分含量、安定同位体比などの分析を進めている。また、次世代シーケンサーを用いた分解微生物の同定手法の検定を行っている。研究代表者の異動により、研究環境が大きく変わり、課題実施のために必要なスペースや機材の確保などに、時間、労力、予算をさくことになったため。25年度が最終年度であるため、記入しない。研究計画に一部の修正点はあるものの、基本的には当初の予定どおりに研究を進めている。当初の研究目的は変更しないものの、一部の実施内容は変更することで、予定されている研究予算で研究期間内に十分な成果が挙げられるようにする。予定している研究項目を粛々と実行する。
神経麻痺性角膜症に対する TRP チャネルを標的とした新規治療法の開発

神経麻痺性角膜症マウスモデルを作成した。定位脳手術装置を使用し、頭蓋外から20Gのジアテルミー電極を挿入し、三叉神経第1枝を凝固する。このマウスモデルは、角膜の透明性は維持されるものの、瞬目反応や、角膜知覚計を用いた検査で、角膜知覚の低下を確認している。またこのマウスモデルは角膜上皮欠損の創傷治癒が遅延する。頭蓋外からこの障害三叉神経第1枝にTRPV4 AAVを注入し、角膜上皮欠損の創傷治癒速度がが改善されることを確認した。この時、三叉神経及び角膜でTRPV4が過剰に発現したことを確認している。角膜Whole mountでTuj1を染色しても角膜神経の再生は求められなかった。この時の角膜は、real time RT-PCRや免疫染色でNGFの発現上昇が認められたが、神経に関連すると報告があるサブスタンスPやCGRPの発現上昇は認めなかった。神経麻痺性角膜症では、角膜及び障害三叉神経でTRPV4を過剰発現することで、角膜上皮欠損の創傷治癒遅延を改善することができた。TRPV4はこの時、角膜のNGF発現の上昇が関与していると考えられた。マウスで神経麻痺生角膜症モデルを作成には定位脳手術の方法で、頭蓋外から1820Gのジアテルミー電極を挿入し、三叉神経第1枝を凝固することで、凝固の程度に応じたマウス神経麻痺生角膜症モデルを安定して作成が可能となった。そのモデルを用いた角膜創傷治癒反応を検討しており、同モデルでは角膜上皮創傷治癒が遅延することを確認した。神経麻痺生角膜症モデルを安定して作成が可能となった。同モデルでは角膜上皮創傷治癒が遅延することを確認した。定位脳手術の手法で頭蓋外から20Gのジアテルミー電極を挿入し、三叉神経第1枝を凝固する。三叉神経凝固し、三叉神経障害マウスモデルを作成した。このモデルマウスは、角膜知覚は低下するものの角膜の透明性や形態は維持している。このマウスの角膜のホールマウントでニューロンを標識するマーカーであるneuron specific Class III β-tubulin (TUJ1)の免疫染色を行なった。正常角膜に比べ三叉神経障害角膜ではTUJ1陽性神経が減少し、角膜周辺部に認められるのみであった。このモデルマウスの頭蓋骨を切除、大脳を摘出し、三叉神経を観察後、三叉神経を摘出し、ヘマトキシリン&#8226;エオジン染色ならびにクリューバー・バレラ染色での神経障害の程度を確認した結果、障害部では神経細胞が線維化していた。この三叉神経障害角膜及び正常角膜に直径2mmの角膜上皮欠損を作成し、欠損部の閉鎖速度を比較した結果、三叉神経障害角膜で角膜上皮欠損の閉鎖が遅延することを確認した。上記三叉神経障害マウスの角膜の同様の上皮欠損(2mm)作成し、その前後で角膜創傷治癒に関わるとされている神経ペプチド炎症性サイトカインのmRNAの発現をreal-time RT-PCR法を用いて検討した。正常角膜では、角膜上皮欠損作成後にTRPV4, TRPA1及びNGFの発現が上昇するが、三叉神経障害マウスの角膜ではこれらの発現上昇を認めなかった。三叉神経障害マウスを安定して作成し、そのマウスを用いた研究を行なっている。このマウスの角膜のホールマウントでニューロンを標識するマーカーであるneuron specific Class III β-tubulin (TUJ1)の免疫染色で正常角膜に比べ三叉神経障害角膜では陽性神経が減少し、角膜上皮欠損の創傷治癒が遅延する。この障害三叉神経にDs-RedでラベルしたTRPV4 AAVを注入すると、4週間後に角膜の残存三叉神経でDs-Redが発現する。この角膜に直径2mmの角膜上皮欠損を作成し、欠損部の閉鎖速度を比較した結果、TRPV4AAVを注入し、角膜でTRPV4を強制発現した角膜では、control AAVを注入したものに比べ、上皮欠損が早く治癒した。またこの時、角膜のNGFの発現が上昇していた。三叉神経障害マウスを安定して作成でき、TRPV4 AAVを障害三叉神経に注入し、角膜で発現させることに成功した。

この時の角膜は、real time RT-PCRや免疫染色でNGFの発現上昇が認められたが、神経に関連すると報告があるサブスタンスPやCGRPの発現上昇は認めなかった。神経麻痺性角膜症では、角膜及び障害三叉神経でTRPV4を過剰発現することで、角膜上皮欠損の創傷治癒遅延を改善することができた。TRPV4はこの時、角膜のNGF発現の上昇が関与していると考えられた。マウスで神経麻痺性角膜症モデルを用いて、角膜創傷治癒反応やTRPチャネルとの関係を解明していく。角膜上皮創傷治癒の遅延がTRPチャネルのアデノ随伴(AAV)ウイルスベクターを三叉神経に注入やTRPチャネルのアゴニスト投与で回復できないか否かを確認していく。三叉神経障害マウスを用い、TRPチャネルを標的とした治療効果を確認していく。三叉神経障害マウスを用い、TRPチャネルを標的とした治療効果とメカニズムを解明する。留学をしたため、日本に滞在している期間が短かったため。29年度に、AAV作成などで使用する見込みである。