hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
関節炎に対する抗Tim-1抗体の治療戦略への応用について

関節リウマチ(RA)の発症・病態形成において炎症性サイトカインは関与し、これらを標的とする生物学的製剤の登場によりRA治療はパラダイムシフトを遂げた。また基礎実験では制御性T細胞の病態形成の関与も報告されている。しかし現在の治療法では抵抗性を示す症例も存在し、新たな作用機序をもつ治療薬の登場は必要である。今回の実験では、我々の基礎実験で炎症性サイトカイン産生抑制及び制御性T細胞の発現亢進効果を示している抗Tim-1抗体(RMT1-10)を関節炎モデルマウスへ投与し、どのような免疫応答を介して関節炎発症・病態形成へ影響するか検討した。平成30年度は関節炎モデルマウス(Collagen Induced Arthritis; CIA mice)を用いた実験を行った。関節炎発症モデルを確立し、炎症程度も安定していることから投与実験を繰り返し施行することが可能となった。投与実験においてRMT1-10投与群ではコントロール群に比べて関節炎スコア改善の再現性が確認された。血清TNF、IL-6抑制効果も認めており、RMT1-10は炎症性サイトカイン伝達経路に影響することが確認された。今後において炎症性滑膜部位における炎症性サイトカインmRNA発現、FACS法における脾細胞CD4+ T細胞内IL-6・TNF染色を施行し、リンパ球サブセットやマクロファージにおける影響や、pSTAT4/6発現をWestern Blot法で細胞内伝達経路について検討する。今回の実験では、我々の基礎実験で炎症性サイトカイン産生抑制及び制御性T細胞の発現亢進効果を示している抗Tim-1抗体(RMT1-10)を関節炎モデルマウスへ投与し、どのような免疫応答を介して関節炎発症・病態形成へ影響するか検討する計画を立案している。平成28年度は関節炎モデルマウス(Collagen Induced Arthritis; CIA mice)を用いた実験を行った。予備実験として関節炎モデルマウスへのRMT1-10投与による治療効果を比較検討する。関節炎の誘導方法として雄DBA/1Jマウス(N = 10)に尾部にアジュバンド化したBovine type II collagen (100μg)を投与し、ブースターとして21日後に再投与を施行した。毎週関節腫脹の程度をスコア化し(0-4)、35日後に処分し関節炎程度を検討した。想定していたより関節炎程度が弱く、本実験に影響を及ぼすと考え、First immunization投与後にLPS(リポ多糖類)投与し、急性関節炎を誘発した。またブースター法も皮下注射部位を尾根部位など工夫することにおいて安定した急性関節炎を誘発し得た。しかしこの2つの実験方法は興味深いことにブースター法は亜急性、LPS法は超急性関節炎を誘発することが確認し得た。以上から予備実験は終了し、RMT1-10投与実験に適した関節炎誘条件で本年度は投与実験を開始する予定である。上記に記載した通り、予備実験が終了したため。予備実験における関節炎発症モデルを確立し、炎症程度も安定した。昨年度においてRMT1-10投与群ではコントロール群に比べて関節炎スコアは改善していることが認められた。さらに脾臓細胞を刺激(LPS+タイプIIコラーゲン)したところ炎症性サイトカイン(TNF・IFN-γ・IL-

6)抑制効果も証明されており、今後関節軟骨におけるmRNA発現を検討する。関節リウマチ(RA)の発症・病態形成において炎症性サイトカインは関与し、これらを標的とする生物学的製剤の登場によりRA治療はパラダイムシフトを遂げた。また基礎実験では制御性T細胞の病態形成の関与も報告されている。しかし現在の治療法では抵抗性を示す症例も存在し、新たな作用機序をもつ治療薬の登場は必要である。今回の実験では、我々の基礎実験で炎症性サイトカイン産生抑制及び制御性T細胞の発現亢進効果を示している抗Tim-1抗体(RMT1-10)を関節炎モデルマウスへ投与し、どのような免疫応答を介して関節炎発症・病態形成へ影響するか検討した。平成30年度は関節炎モデルマウス(Collagen Induced Arthritis; CIA mice)を用いた実験を行った。関節炎発症モデルを確立し、炎症程度も安定していることから投与実験を繰り返し施行することが可能となった。投与実験においてRMT1-10投与群ではコントロール群に比べて関節炎スコア改善の再現性が確認された。血清TNF、IL-6抑制効果も認めており、RMT1-10は炎症性サイトカイン伝達経路に影響することが確認された。今後において炎症性滑膜部位における炎症性サイトカインmRNA発現、FACS法における脾細胞CD4+ T細胞内IL-6・TNF染色を施行し、リンパ球サブセットやマクロファージにおける影響や、pSTAT4/6発現をWestern Blot法で細胞内伝達経路について検討する。予備実験における関節炎発症モデルを確立し、炎症程度も安定した。よって今年度からRMT1-10, ControlであるrIgG投与実験を開始し、関節炎程度をスコア化し、サイトカインなどの詳細な検討を開始する。上記に記載したとおり、炎症性サイトカインmRNA発現、FACS法における脾細胞CD4+ T細胞内IFN-γ・TNF染色を施行する予定である。
RalGDSのシグナル伝達系におけるRasとRalの翻訳後修飾の重要性

Rasのシグナルの一部は、低分子量G蛋白質Ralに対するGTP/GDP交換反応促進蛋白質RalGDSを介してRalに伝達される。RasとRalは脂質によるC末端の翻訳後修飾を介して細胞膜上に局在する。Rasと相同性の高いRap1はRalGDSと結合するがRalを活性化せず、Rasとは異なるC末端の翻訳後修飾を受けて核周囲に存在する。そこで、RalGDSを介したRalの活性化におけるRasやRalの翻訳後修飾の役割を解析するため、RasのN末端とRap1のC末端のキメラ(C1)と、Rap1のN末端とRasのC末端のキメラ(C4)を作製し、細胞内局在とRalの活性化作用を検討した。その結果、RasとC4は細胞膜に局在し、Rap1とC1は核周囲に局在した。RalGDSは単独では細胞質に発現するが、RasやC4と共発現すると細胞膜にトランスロケートし、Rap1やC1と共発現すると核周囲に認められた。RalGDSによるRalの活性化現象はRasまたはC4と共発現した場合に認められた。さらに、RalGDSのC末端にRasのC末端20アミノ酸を融合させたキメラは、Rasの非存在下で細胞膜にトランスロケートし、Ralを活性化した。したがって、RalGDSは、Rasと結合して細胞質から細胞膜上にトランスロケートしてRalを活性化することが明らかとなった。また、Ralの下流に存在するRalBP1やPOB1が、エンドサイトーシスの制御に関わる事や、細胞に翻訳後修飾を受けない変異型のRalを導入するとEGFレセプターのエンドサイトーシスが抑制される事を見出した。したがって、RalGDS/Ral/RalBP1/POB1を介するシグナル伝達経路は、EGFレセプターのエンドサイトーシスの制御に関わり、その際Ralの翻訳後修飾が重要であることが明らかとなった。Rasに代表される低分子量G蛋白質は、細胞の増殖や分化など多彩な細胞機能を制御することが明らかになっている。Rasの標的蛋白質は、蛋白質リン酸化酵素RafやRalGDSをはじめ複数見出されており個々の標的蛋白質がそれぞれ固有の細胞内情報伝達系を介して細胞機能を制御することが明らかになりつつある。RalGDSは別種の低分子量G蛋白質Ralに対するGDP/GTP交換反応促進蛋白質である。Ralの生理機能は不明であったが、私共は、Rasのシグナルの一部がRalを介してRalGDSに伝えられることを見出した。RasのC末端側は脂質による翻訳後修飾を受けており、翻訳後修飾を受けたRasはRalGDSと強く結合し、RalGDSを細胞質から細胞膜へトランスロケーションさせる。本年度は、Rasと相同性が高くRalGDSとも結合しうる別種の低分子量G蛋白質Rapを用いてRasの中央部のエフェクター領域や特異的な翻訳後修飾を受けるC末端側をRapに組み替えたキメラ遺伝子を作製して動物細胞で発現させRalに対する活性化作用を検討した。その結果、RasとC末端がRas型になったキメラでのみRalが活性化されRalGDSの活性には、RasのC末端の構造が重要であることが明らかになった。また、RalGDSのC末端にRasのC末端側の20アミノ酸を付加すると、RalGDSの細胞内局在が細胞質からRalの存在する細胞膜へトランスロケーションし、活性化された。したがって、RalGDSの活性化の本質はRasの結合によるアロステリックな構造の変化ではなく、トランスロケーションであることが示唆された。

したがって、RalGDS/Ral/RalBP1/POB1を介するシグナル伝達経路は、EGFレセプターのエンドサイトーシスの制御に関わり、その際Ralの翻訳後修飾が重要であることが明らかとなった。
生命保険金受領権買取契約の法的研究-保険金受取人変更権を制限する必要性の提唱-

本研究は,近年提起された訴訟((1)東京地判平成17年11月17日判時1918号115頁=東京高判平成18年3月2日判時1928号133頁,(2)東京地裁八王子支判平成17年5月20日金判1234号25頁,(3)静岡地判平成17年1月28日判例集未搭載=東京高判平成17年6月2日判例集未搭載)の事案から,保険金受取人変更権に一定の制限を設ける必要性を検討した。平成18年度の秋に,事例研究((2)の裁判例)を行い,生命保険金受取人変更権に関する文献を集めあるいは複写し読み込み,九州大学産業法研究会において報告した。平成19年度冬に,事例研究会に出席し(3)の裁判例の報告に接した。たしかに商法上は保険金受取人変更権に対して制限が設けられていないが,保険実務では,モラルハザード誘発を懸念して,保険契約引受時には引受基準を内規として設たり,保険金受取人変更の保険者に対する対抗要件としての承認裏書の際モラルハザード的な要素がないかもチェックしている。ここに商法と保険実務との間の乖離が認められる。折しも保険法の見直しの機運が高まり,複数の保険法の見直しに関するシンポジュームにも参加する機会を得た。法務省法制審議会保険法部会で保険法改正要綱案がまとめられ,その結果現在国会に提出されている保険法改正案によれば,保険金受取人の変更は保険者に対する意思表示とされ(43条2項),この意思表示はその通知が保険者に到達したときは当該通知を発した時に遡及的に効力が発生するが,その到達前に行われた保険給付の効力を妨げない(同3項)とされている。本改正案は,保険金受取人変更行為の法的性質を従来の多数説,すなわち「相手方のない一方的な意思表示」という見解を修正するものである。本研究は,これらの新しい規律の合理性を検討し,結論として,商法の規定と従来の保険実務のあり方との間隙を埋め保険金受取人変更権に対し一定の制限を加えたという意味では,評価し得ると考えている。平成18年度の研究は,まず,事例研究から着手した。すなわち,東京高判平成18・1・18金判1234号17頁の裁判例である。生命保険金受取人変更権については,相手方のない一方的な意思表示である形成権であるとされている(判例)。ところが,上記裁判例の事案によれば,定期付終身保険約款には,保険金受取人指定を変更するには,保険契約者は保険会杜の定める書類を提出し保険証券に裏書を受けることを要するという条項が定めてあったところ,保険金受取人の変更手続は,保険会社に対する保険証券等の書類が提出されておらず,保険証券の裏書もされていなかった。このような事案を観察すると,見方によれば,生命保険金受取人変更権のあり方について一定を枠をはめ制限していると解する余地もある。そこで,平成18年度の秋に,本事例研究を行い,生命保険金受取人変更権に関する文献を集めあるいは複写し読み込み,九州大学産業法研究会において報告した。研究会の場において,さまざまな批判を受け貴重な示唆を受けた。思うに,生命保険金受取人変更権と保険会社に対する対抗要件との関係も問題となったが,モラルハザード防止策として対抗要件が必要であるならば,対抗要件を厳格に求めることもあり得るだろう。

しかし問題は,生命保険金受取人変更権自体に一定の枠をはめ制限しようとするあり方を選択した場合に生じる。すなわち,保険金受取人変更権自体に制限を加える場合,遺言による保険金受取人変更を行う途が閉ざされる可能性があるという点にある。今後は,生命保険金受取人変更権に対する制限を加えた場合に影響し得る問題を調査し生命保険受領権買取契約全体に着目し整合性のある結論を導きたいと考えている。本研究は、近年提起された訴訟((1)東京地判平成17年11月17日判時1918号115頁=東京高判平成18年3月2日判時1928号133頁、(2)東京地裁八王子支判平成17年5月20日金判1234号25頁、(3)静岡地判平成17年1月28目判例集未搭載=東京高判平成17年6月2目判例集未搭載)の事案から、保険金受取人変更権に一定の制限を設ける必要性を検討した。平成18年度の秋に、事例研究((2)の裁判例)を行い、生命保険金受取人変更権に関する文献を集めあるいは複写し読み込み、九州大学産業法研究会において報告した。平成19年度冬に、事例研究会に出席し(3)の裁判例の報告に接した。たしかに商法上は保険金受取人変更権に対して制限が設けられていないが、保険実務では、モラルハザード誘発を懸念して、保険契約引受時には引受基準を内規として設けたり、保険金受取人変更の保険者に対する対抗要件としての承認裏書の際モラルハザード的な要素がないかもチェックしている。ここに商法と保険実務との間の乖離が認められる。折しも保険法の見直しの機運が高まり、複数の保険法の見直しに関するシンポジュームにも参加する機会を得た。法務省法制審議会保険法部会で保険法改正要綱案がまとめられ、その結果現在国会に提出されている保険法改正案によれば、保険金受取人の変更は保険者に対する意思表示とされ(43条2項)、この意思表示はその通知が保険者に到達したときは当該通知を発した時に遡及的に効力が発生するが、その到達前に行われた保険給付の効力を妨げない(同3項)とされている。本改正案は、保険金受取人変更行為の法的性質を従来の多数説、すなわち「相手方のない一方的な意思表示」という見解を修正するものである。本研究は、これらの新しい規律の合理性を検討し、結論として、商法の規定と従来の保険実務のあり方との間隙を埋め保険金受取人変更権に対し一定の制限を加えたという意味では、評価し得ると考えている。
身体拡張のダークサイド: ウェアラブルロボット装用者に対する非人間的認知の生起

(1)問題意識近年,ウェアラブルロボットの試験的導入が急速に進みつつある。ウェアラブルロボット装用時のように人間と機械が一体化したとき,その対象(装用者)は,他者から「人間」として認識されるのだろうか,それとも「機械(物体)」として認識されるのだろうか?(2)目的本研究の目的は,ウェアラブルロボットを装用することで,装用者に対する非人間的認知が生起するか(装用者が物体化されて認識されるか)を検証することである。(3)発展性本研究は,ウェアラブルロボットの利用浸透にともなう,将来予想される新しい種類の認知バイアス・偏見生起に関する先駆的な基礎研究となりうる。
ムギネ酸顆粒の形成，輸送機構の解明

イネ科植物の鉄吸収機構の解明を目的とし、細胞内でのムギネ酸類生合成過程を解析するため、生合成に関わる3つの酵素(OsNAS1、OsNAAT1、OsDMAS1)を蛍光タンパク質との融合タンパク質としてイネ培養細胞内で発現させ各酵素の細胞内での局在性を解析した。各酵素とGFPとの融合タンパク質の局在解析では、NAS-GFPは小胞に、NAAT-GFPは小胞の周囲に局在していたがDMAS-GFPは細胞質全体で蛍光が観察され、他の二つとは異なり局在性を示さなかった。これらの結果は、これまで考えられてきた小胞内でのムギネ酸類の生合成とは異なっており、イネの鉄吸収機構の全貌解明に寄与するものと考える。ムギネ酸類生合成関連酵素タンパク質と蛍光タンパク質の融合タンパク質をイネの培養細胞内で発現させて局在解析を行った。前年度にも同様の実験を行ったが、融合タンパク質の蛍光が弱い、自家蛍光が強いなどの問題があり形質転換された細胞の確認が困難な状態であったため遺伝子の導入法、培養法等について改めて検討を行った。形質転換の方法として、エレクトロポレーション法とPEG法を用いたが、いずれの場合に置いてもベクターを含まない処理のみで、遺伝子導入処理の数時間後から自家蛍光の顕著な増加が観察された。また遺伝子導入処理後から経時的に観察を行い、57時間後に融合タンパク質由来の高い蛍光を持つ細胞が確認された。この条件下ではムギネ酸類生合成関連酵素の一つであるNASとGFPの融合タンパク質が小胞への局在が観察された。同様にNAATとGFPの融合タンパク質についても細胞内での局在が観察されたが、NAS-GFP融合タンパク質とは異なる局在が示唆された。強い蛍光を発する細胞の確認はできたが、その細胞数は少なく安定した局在解析結果を得るために、導入条件、別の蛍光タンパク質の発現解析を行っている。オオムギからのムギネ酸顆粒の精製では、遠心分画の各画分から抽出したタンパク質を用いてウエスタンブロット解析を行った。しかしながら遠心上清の画分でも同様にタンパク質が検出されること、また酵素タンパク質の濃縮効率が非常にひくいことから、連続あるいは不連続の密度勾配遠心法による精製を試みたが、ムギネ酸顆粒の精製には至っていない。一方で、遠心上清の可溶区では酵素タンパク質分解が顕著に認められ、沈殿では同様の傾向が認められないことからムギネ酸顆粒内などの分解を受けにくい部位に存在する酵素タンパク質が得られていると考える。ムギネ酸類生合成酵素タンパク質と蛍光タンパク質の融合タンパク質を用いた解析に用いるベクターの構築の準備として、イネの培養細胞を蛍光タンパク質のみを発現させるベクターを用いて形質転換し、蛍光タンパク質の安定した発現と発現したタンパク質の蛍光強度について評価を行った。ベクターには、RFP、CFP、GFPあるいはmCherryを蛍光タンパク質遺伝子として組み入れたものを準備した。プロモーターには過剰発現用のカリフラワーモザイクウィルス35Sプロモーターを用いて検討を行ったが、いずれも蛍光が弱い、あるいは自家蛍光との判別が難しかった。形質転換に用いる細胞の調整法、発現制御のためのプロモーターを変更し、再度発現量の解析を行っている。ムギネ酸顆粒を単離し解析するためにオオムギからの顆粒分画を行った。オオムギは、イネと比較してムギネ酸類を大量に生合成、放出するため、ムギネ酸顆粒の調整に適している。水耕栽培し鉄欠乏処理を行ったオオムギから、夜明け前に根を回収し細かく切断した後、一般的な細胞内小器官の分画法に従い、遠心分離を用いて粗分画を行った。各画分からタンパク質を抽出して、ムギネ酸類の生合成関連酵素であるNAS、NAAT、IDS3についてウエスタンブロッティングに供した。その結果、少なくともNASとNAATについては小胞画分での存在が確認された。また粗画分であるため、現在はムギネ酸顆粒の精製を進めている。高等植物の鉄吸収機構にはStrategy IとStrategy IIが存在し、イネ科植物はムギネ酸類を介したStrategyII機構で土壌中の鉄を吸収している。これまでの研究で、StrategyIIに関わる遺伝子群が単離されているが、細胞内におけるムギネ酸類の生合成の局在性、分泌へと至る経路については解明されていない。形態観察からオオムギの根において鉄欠乏条件下で形成される小胞の存在が示唆され「ムギネ酸顆粒」と名付けられたが詳細な解析はなされていない。

本研究ではムギネ酸類の生合成部位の解明を目的とし、ムギネ酸類生合成に関わる3つの酵素タンパク質を蛍光タンパク質との融合タンパク質としてイネの培養細胞で一過的に発現させ、それぞれのタンパク質の局在解析を行った。ムギネ酸類は、S-アデノシルメチオニンを基質としてニコチアナミン合成酵素(NAS)、ニコチアナミンアミノ基転移酵素(NAAT)、デオキシムギネサン合成酵素(DMAS)の触媒を経て生合成される。これらの酵素タンパク質とGFPの融合タンパク質の局在解析の結果、NAS-GFPとNAAT-GFPはともにイネ培養細胞内の小胞への局在が認められたが異なる局在を示した。NAS-GFPでは小胞の全体で蛍光が観察され、NAAT-GFPは主に小胞の周囲で蛍光が認められた。一方でDMAS-GFPは、他の2つのタンパク質とは異なり細胞質全体で蛍光が観察され、局在性は認められなかった。波長の異なる蛍光タンパク質を用いて1つの細胞内で融合タンパク質を発現させると、NAS-GFPとNAAT-CFPは同じ小胞に局在することが示唆された。これらの結果から、ムギネ酸類の生合成部位として考えられてきたムギネ酸顆粒では、生合成の最初の段階であるニコチアナミンの合成が行われ、その後の反応は顆粒の周囲で行われていることが示唆された。植物無機栄養イネの培養細胞を用いた発現系について、鉄欠乏誘導によるムギネ酸形成機構の解析を行うには至っていないが、遺伝子導入による誘導タンパク質の発現と蛍光観察に目処がたったことから詳細な観察ができるものと考える。また、複数の遺伝子を同時に導入する事で、ムギネ酸類生合成に関わる酵素の詳細な局在解析ができるものと考える。一方、ムギネ酸顆粒の形成、輸送に関わるタンパク質群の解析については、顆粒の粗精製までは順調であったが、濃縮度、精製度の向上が進んでおらず、プロテオーム解析には至っていない。計画では、ムギネ酸類生合成関連酵素タンパク質と蛍光タンパク質との融合タンパク質ベクターを作るはずであったが、安定的に発現する蛍光タンパク質の選定に時間がかかっている。また、他のプロモーターを探すための時間が必要であり、培養細胞の系での進展は遅れている。一方で、オオムギ根からのムギネ酸顆粒の精製については、粗画分ではあるが顆粒画分が得られている。ウエスタンブロッティング法での確認が有効であったことから、プロテオーム解析について早めに着手できるものと考える。鉄欠乏状態とムギネ酸類顆粒の形成について、イネ培養細胞の形質転換による融合タンパク質の発現が改善されたことで解析が可能となる。具体的には融合遺伝子の発現に用いるプロモーターを酵素遺伝子自身のプロモーターに変更し、培養細胞を鉄欠乏に曝すことでムギネ酸顆粒の形成過程を解析する。また、複数のタンパク質を同時に発現させることで、ムギネ酸顆粒の形成段階に応じた酵素タンパク質の発現や局在の相違などの解析を行う。ムギネ酸顆粒の精製については、オオムギから単離した小胞画分の精製にこだわらず、イネの培養細胞からの単離についても同様に精製を試みる。この場合には、組織を破砕する必要がなく純度の高いプロトプラストが得られること、蛍光を指標としてムギネ酸顆粒の精製が可能であること等の利点がある事から推進の起点として有意義であると考える。精製が完了し次第、順次プロテオーム解析に供する。イネの培養細胞で効果的に発現、解析可能な蛍光タンパク質、プロモーターを決定し、融合タンパク質を発現する細胞について,詳細な観察を行う。発現が安定した後に、鉄欠乏によるムギネ酸顆粒の形成量の変化,細胞内での挙動,鉄の再施肥による変化など,様々な条件下で観察を行う。
紅藻スサビノリの環境(栄養・温度)応答の分子機構の解明

紅藻スサビノリ葉状体の栄養塩類の取込みに重要な役割を果たすと考えられる4種類のトランスポーター遺伝子を同定し,栄養環境変化に対する各遺伝子の発現応答性を明らかにした.また,スサビノリ葉状体の環境応答や葉状体栄養細胞の生殖細胞への分化に関与していると考えられる5種類の候補遺伝子を同定し,環境(水温および光周期)変化にて生殖細胞分化を誘導した葉状体における各遺伝子の発現変動を明らかにした.紅藻スサビノリ葉状体の栄養塩類の取込みに重要な役割を果たすと考えられる4種類のトランスポーター遺伝子を同定し,栄養環境変化に対する各遺伝子の発現応答性を明らかにした.また,スサビノリ葉状体の環境応答や葉状体栄養細胞の生殖細胞への分化に関与していると考えられる5種類の候補遺伝子を同定し,環境(水温および光周期)変化にて生殖細胞分化を誘導した葉状体における各遺伝子の発現変動を明らかにした.紅藻スサビノリ葉状体の窒素取込み・同化に重要な役割を果たすと考えられる硝酸イオントランスポーター(NRT),アンモニウムイオントランスポーター(AMT),尿素トランスポーター(UT),硝酸レダクターゼ(NR),亜硝酸レダクターゼ(NiR),14-3-3タンパク質のcDNAクローニングを行った.その結果,NRT及びAMTについてはそれぞれ,479及び483アミノ酸残基をコードするcDNAが得られた.一方,UT及び14-3-3タンパク質については異なる演繹アミノ酸配列をコードする2種類のcDNAが得られ,UTの場合は740及び680アミノ酸残基をコードするUT1及びUT2 cDNA,14-3-3タンパク質の場合は260アミノ酸残基をコードする14-3-3-Pl及び14-3-3-P2 cDNAが得られた.なお,NR及びNiRの全一次構造は決定できなかったが,NRについては798アミノ酸残基,NiRについては552アミノ酸残基をコードするcDNAを得ることができた.天然海水(溶存無機態窒素:DIN=140μg/L)500mLに対してスサビノリ葉状体(平均10cm)5枚を室内培養して色落ちを誘導させたところ,培養開始24時間後に海水DINが最小値(約10μg/L)となり,96時間後に藻体の色落ちが認められた.また,スサビノリ葉状体の成熟応答に関与することが示唆されているheat shock protein (HSP) 82, HSP90, mitogen-activated protein kinase (MAPK), SNF1-related protein kinase (SNF1-PK)及びGタンパク質のcDNAクローニングを行い,各分子はぞれぞれ757,887,387,417及び203アミノ酸残基からなることを明らかにした.紅藻スサビノリ葉状体の栄養塩類の取込みに重要な役割を果たすと考えられる硝酸イオントランスポーター(NRT),アンモニウムイオントランスポーター(AMT),尿素トランスポーター(UT1及びUT2)遺伝子を対象として,色落ち誘導した葉状体における各遺伝子発現を調べた.その結果,各遺伝子発現は色落ち誘導後2日で急増し,その後も高い発現レベルを維持し続けることが明らかとなった.なお,色落ちにより特に著しく発現誘導されるUT2遺伝子は,貧栄養環境に対する応答・適応に特に重要な役割を果たしていることが考えられた.次に,色落ち葉状体に種々の窒素源を添加し,各遺伝子の発現応答性を調べた.その結果,各遺伝子は有機態窒素源よりも無機態窒素源に対して顕著な発現応答性を示し,無機態窒素源添加後26時間で,各遺伝子発現が大きく抑制されることが明らかとなった.
19世紀のイギリス心霊主義の社会精神史的意義に関する研究

本研究の目的は、19世紀における心霊主義の展開を骨相学、社会主義(社会改革)、神智学、心霊研究協会などを中心に検討していくことにより、超自然・非合理に軸足をおく現象と一般に考えられている心霊主義が、それとは逆に理性主義的な思考法に基づく「合理宗教」という側面が強く見られることを検証することにあった。平成15年度においては、ジョージ・クームの骨相学を中心に検討し、ヒプノティズムと融合して骨相ヒプノティズムとなって心霊主義の潮流に合流する経緯をたどった。平成15年7月31日から8月29日まで夏季休暇期間を利用してロンドンとチューリヒに滞在してブリティッシュ・ライブラリー、心霊研究協会などの諸機関で同主題に関する資料調査を実施した。平成16年度においては、ブラヴァツキー夫人やアニー・ベサントなどの神智学、フレデリック・マイヤーズ(心霊研究協会)の心理学を中心に検討し、心霊主義が霊的進化論や心理学へと展開していく経緯をたどった。平成17年1月4日から1月12日まで冬季休暇期間を利用してシドニー大学フィッシャー図書館及びニューサウスウェールズ州立図書館で同主題に関する資料調査を実施した。平成15年度から平成16年度の2年間にわたる研究期間において、研究課題「19世紀のイギリス心霊主義の社会精神史的意義に関する研究」をほぼ当初計画通りに実施し、その成果を研究報告書(全48頁)にまとめることができた。平成15年度においては「19世紀のイギリス心霊主義の社会精神史的意義に関する研究」の当初計画にそって、心霊主義をヒプノティズム(催眠術)・骨相学・骨相磁気学などイギリス社会精神史的な文脈に位置付ける作業を行った。研究の中心をなすジョージ・クームの基本資料は現在国内にはなく、平成15年7月31日から8月29日まで夏期休暇期間を利用してロンドン(連合王国)とチューリッヒ(スイス)に滞在して文献収集を行った。とくにロンドンにおいては、British Library、London University Library、Society for Psychical Research、College of Psychic Studiesなどの諸機関において、同主題に関する研究者との意見交換を行うとともに、日本では入手することのできない図書や定期刊行物などの資料の閲覧及び複写等の作業を精力的に実施した。国内においては、Roger Cooter編のPhrenology in Europe and America (8vols)等の基本資料を名古屋大学図書館に設置することができた。こうして収集した資料は現在も分析中であるが、骨相学や心霊主義が「科学」主義的な思考法に基づく体系であり、遡及的な分析では得られない知見が19世紀の社会精神史的な視点から見直すことにより初めて得ることができることを確認した。平成16年度においては「19世紀のイギリス心霊主義の社会精神史的意義に関する研究」の当初計画にそって、心霊主義をブラヴァツキー夫人とアニー・ベサントの神智学及びフレデリック・マイヤーズ(心霊研究協会)の心理学に焦点を当てて考察し、それをイギリス社会精神史の文脈に位置づける作業を実施した。その結果、神智学は心霊主義から出発し、ヴィクトリア時代の物質文明への批判的立場を堅持しながら、西洋神秘思想とインド神秘思想に接合することにより独自の霊的進化論にたどり着いたこと、マイヤーズの心理学は、同じように物質文明への反撥と精神的な危機感から心霊主義に共感しながら、それをイギリスの伝統である経験主義的な手法を駆使して心理学的に読み替えたものであるという結論に達した。いずれの場合にも心霊主義という一見「非合理」主義の代表とも見える思考の背景には、「合理」主義的な思考法が息づいているという知見を得ることができた。平成17年1月4日から1月12日まで冬季休暇期間を利用してシドニー大学フィッシャー図書館及びニューサウスウェールズ州立図書館において神智学及びマイヤーズに関する図書や定期刊行物などの資料の閲覧及び複写等の作業を精力的に実施した。年度末には平成15年度から16年度まで2年にわたる研究を「研究成果報告書」(全48頁)にまとめることができた。
コレステロール合成酵素遺伝子欠損病と遺伝子調節機構に関する研究

1.ルシフェラーゼアッセイ及びEMSAの結果から、ステロールによるSE遺伝子の制御にはステロール感受性エレメント結合タンパク質(SREBP)とNF-Yの少なくとも二つの転写因子が必要であることがわかった。2. HeLa細胞において、酸化ステロールをリガンドとする核内受容体LXRを大量発現させると、LXRE(LXR-response element)は強く誘導されるが、SEプロモーターは強く抑制された。また、様々な酸化ステロールのLXREに対する誘導能と、SEプロモーターに対する抑制能は相関していた。これらの結果はLXRによりSEがネガティブに制御されていることを示唆している。また、LXREのもっとも誘導能の高いリガンドはエポキシコレステロールであったことから生理的リガンドである可能性が高いと考えられる。エポキシコレステロールはSEとその後に位置するラノステロール合成酵素の活性比によって生成量が変化するため、これらの遺伝子mRNAの組織特異性を調べたところ全く異なっていることがわかった。特にステロイドホルモン産生臓器で蓄積していると考えられ、酸化ステロールをリガンドとするもう一つの核内受容体SF-1の生理的リガンドである可能性を示している。3.酵母のMetabolic Interferenceを用いて、先天奇形の一つSmith-Lemli-Opitz(SLO)症候群の原因遺伝子と推定されているステロールΔ^7還元酵素cDNAの単離に成功し、現在解析を進めている。またSE遺伝子は8q24.1に位置することを見出し、その位置にマップされるLanger-Giedion症候群、trichorhinophalangeal症候群typeI、遺伝性multiple exostosesとの関係についても解析を進めている。現在二つの遺伝子ノックアウトマウスの作製に向け準備中である。まず、酵母のMetabolic Interferenceを用いて、先天奇形の一つSmith-Lemli-Opitz(SLO)症候群の原因遺伝子と推定されているストロールΔ7還元酵素cDNA候補の単離に成功し、現在解析を進めている。またスクアレンエポキシダーゼ(SE)遺伝子のゲノム遺伝子を単離し、連鎖解析及びFISH法を用いてその染色体上の位置を特定したところ、第8染色体q-24.13に位置することがわかった。この位置にはSLO症候群と似た先天奇形を示すLanger-Giedion(LG)症候群の変異部位が位置していた。SE遺伝子とLG症候群との関係についても現在解析を進めている。またSE遺伝子の全長は約17kbであり、11のエクソンから構成されていることがわかった。次にSE遺伝子の調節機構について解析を行った。5′から順次欠失させたヒト及びラット変異プロモーターのルシフェラーゼアッセイを行い、ステロールによる転写制御に重要な領域を明らかにした。またこの領域をプローブとしてHeLa細胞抽出物を用いてEMSAを行い、この領域にはステロール感受性エレメント結合タンパク質(SREBR)が結合することを示した。またSREBPをHeLa細胞内で大量に発現させると、このプロモーターの活性が著しく上昇することから、SREBPが実際にSE遺伝子の制御に関わっていることが示唆された。さらに3′側から順次欠失させたプロモーターをβ型インターフェロン遺伝子のプロモーターに接続してルシフェラーゼアッセイを行った結果、もう一つの別の領域も必要であることが明らかになった。この領域にはファルネシル二リン酸合成酵素やスクアレン合成酵素遺伝子の制御に関わっていることが知られている転写因子NF-Yの結合配列が存在していた。
レーザー光を用板電子加速器の基礎的研究

本研究の目的は,レーザー加速器の候補のひとつである逆スミス・パーセル(ISP)効果を,サブミリ波領域で実験的に検証し,次期世代加速器設計のための基礎的データを得ることである.以下に本研究で得た成果について述べる.1.理論解析ISP効果のサブミリ波領域での電磁界の解析を行い,電子とレーザー光との相互作用が最大となる金属回析格子(くしの歯断面)の格子定数を,種々のレーザー波長に対し決定した.更に, ISP効果の計算機シミュレーションを実験情況に近い条件で行い,波長496μm,ピーク出力1Wのサブミリ波レーザーを用いて,電子に10eV以上のエネルギー変化を与えることができることを明らかにした.2.実験装置1)回析格子の製作:理論的に設計された値を基に,種々のレーザー波長に合わせて±2μmの精度で金属回析格子(銅またはアルミ合金製)の製作を完了した.2)高出力サブミリ波レーザー(波長496μm)の製作:サブミリ波レーザー励起用CO_2レーザーとして,新しい方式であるメカニカルチョッパー方式EQスイッチ法の研究開発を行った.このCO_2レーザーを励起光源として使用することによって,ピーク出力46W,最大繰り返し周波数9.2kHzの安定なパルス出力を持つCH_3F2ガスレーザーを製作した.3.ISP効果の実験1)ISP効果の実験的検証を世界に先駆けて成功した.2)ISP効果の種々の特性を詳細に測定し,その結果,理論結果と良く一致することを確認した.本研究の目的は,レーザー加速器の候補のひとつである逆スミス・パーセル(ISP)効果を,サブミリ波領域で実験的に検証し,次期世代加速器設計のための基礎的データを得ることである.以下に本研究で得た成果について述べる.1.理論解析ISP効果のサブミリ波領域での電磁界の解析を行い,電子とレーザー光との相互作用が最大となる金属回析格子(くしの歯断面)の格子定数を,種々のレーザー波長に対し決定した.更に, ISP効果の計算機シミュレーションを実験情況に近い条件で行い,波長496μm,ピーク出力1Wのサブミリ波レーザーを用いて,電子に10eV以上のエネルギー変化を与えることができることを明らかにした.2.実験装置1)回析格子の製作:理論的に設計された値を基に,種々のレーザー波長に合わせて±2μmの精度で金属回析格子(銅またはアルミ合金製)の製作を完了した.2)高出力サブミリ波レーザー(波長496μm)の製作:サブミリ波レーザー励起用CO_2レーザーとして,新しい方式であるメカニカルチョッパー方式EQスイッチ法の研究開発を行った.このCO_2レーザーを励起光源として使用することによって,ピーク出力46W,最大繰り返し周波数9.2kHzの安定なパルス出力を持つCH_3F2ガスレーザーを製作した.3.ISP効果の実験1)ISP効果の実験的検証を世界に先駆けて成功した.2)ISP効果の種々の特性を詳細に測定し,その結果,理論結果と良く一致することを確認した.我々は、本年度当初の研究計画に従い、まず逆スミス・パーセル(ISP)効果のサブミリ波帯(波長496μm)における理論的検討をより詳細に行い、その結果に基づいて、C【O_2】レーザー励起サブミリ波レーザーの製作,レーザー光を回折格子まで導く光学系(レンズ等)の組み立て、そして電子エネルギーの測定系の最適化を行った。以上の準備のもとに、ISP効果の検証実験を行い、本年度後半、世界で初めてこの効果の観測に成功した。以下に、今年度実施した研究の結果と今後の研究方針について述べる。1.実際の実験条件を考慮したISP効果の計算器シミュレーションの実施。2.4W以上の単一ピークパルス出力及び基本ガウスモード発振するC【O_2】レーザー励起サブミリ波レーザーの製作:1.の計算結果より、ISP効果の検証実験で使用するサブミリ波レーザーに要求される性能として、特に基本ガウス形の発振横モードを得ることが、電子とレーザ光との効率的な相互作用を実現する上で不可欠であることがわかった。そこで、サブミリ波レーザーの励起源として、新しくメカニカルチョッパー式にEQスイッチC【O_2】レーザーの研究開発を進め、ISP効果検証に十分使用可能な性能を持つ【CH_3】Fガスレーザー(波長496μm)の製作を終了した。3.サブミリ波レーザー光を回折格子面上まで導く光学系の製作完了。以上述べた通り、ISP効果の実験的検証に成功し、当初の目標を逹成した。今後、すでに開発済みである高安定EQスイッチC【O_2】レーザーによる注入同期を行い、動作の確認を終えたTEAC【O_2】レーザーの単一モード化を実現し、サブミリ波レーザー出力を1桁以上大きくすることによって、ISP効果に関する理論と実験結果との照合を精密に行う予定である。
アルゴリズムのエルゴード理論的研究

数論に現れるアルゴリズムを中心にその可測力学系としての性質を研究し、エルゴード理論、ディオファンタス近似論、一様分布論の新しい研究成果を導き出した。とりわけ、非アルキメデス的数体上の非同次ディオファンタス近似論、非アルキメデス数体を係数とする多項式に対するユークリッドアルゴリズムの計算回数の評価、区間交換に対するRauzy inductionのエルゴード理論的性質、実数に関する多次元連分数アルゴリズム、一様分布の誤差の広がりに関して新しい所見を得た。本年度は当初の研究計画に従い特にユークリッドアルゴリズムのエルゴード理論に関していくつかの研究成果を得た。ユークリッドアルゴリズムは、単純連分数展開を始めとする多くの数展開の理論で基本的なアルゴリズムである。また、コンピュータ理論の中では有限体を係数とする複数の多項式の最大因子を計算するアルゴリズムとしても重要な役割を果たしている。今年度の研究の中では、まず、d次元のpositive coneの中でユークリッドアルゴリズムのひとつであるfully subtractive alrogithmに関するSchweigerにより提起された未解決問題をほぼ解決した。すなわち、このアルゴリズムが一つの場合を除き(この部分は未解決)エルゴード的でないことを示した。また、すべての場合でSchweigerの指摘した領域が予想通り非再帰的であることを示した。この成果は、Israel Journal of Mathematicsより出版されることが確定している。有限係数をもつ多項式に関するユークリッドアルゴリズムの手順の回数に関する問題についても、その回数の漸近挙動についていくつかの成果があり、これについてはさらに研究を進めている(伸田、夏井、Berthe)。連分数展開と実数の近似問題についてはBrjuno数の特徴付けに関してつぎのような研究成果を得た。片側からの近似の性質によりsemi-Brjuno数の概念を導入し、付随するBrjuno関数を定義した。そして、xと-xがsemi-Brjuno数になることが、xがBrjuno数であることの必要十分条件であることを示すのに成功した。これの研究成果は、Journal of Approximation Theoryに公表されている。本年度の研究では以下のテーマについて重要な成果を挙げることができた。2)interval exchange mapの研究に関する基本的algorithmであるRauzy inductionに対してDaring Kac集合の存在を示した。これにより、renormalized Rauzy inductionが強いエルゴード性を持つことを証明した(Tokyo J. Mathematicsより公刊)。3)仲田(研究代表者)とDong Han Kim(海外研究協力者)の共同研究により、非斉次ディオファンタス近似に関するKurzwiel型定理を、正標数を持つ体の場合について証明しさらに精密な評価を与えた(Acta arithmeticaより公刊)。本年度は前年度の研究成果をさらに発展させて、特に以下のような成果を挙げた。1)三つの多項式に対するユークリッド型アルゴリズムのコスト関数を考えると、単純なステップ数、bit complexity、fine bit complexityによる評価で効率的なアルゴリズムの順位が変動することを証明することができた。また、それぞれのコスト関数について大数の弱法則が成立していることを証明した。このことは、theoretical computer scienceにおけるアルゴリズムの有効性の理論に大きな意義を持つ。さらに同様な結果が四つ以上の多項式の場合に成立することが期待されることを裏付ける結果を得ている。2)Rauzy inductionのdual algorithmがcircle上のpiecewiser otationから構成されることを証明した。その過程で、interval exchange mapから構成されるzippered rectangleとCurz-daRochaの意味でのpiecewise rotationの作るcastleの関係を明確にした。さらに、castleの構成法とそれにより生成されるflat surfaceの特異点の構造についても新たな知見を与えることに成功した。この成果はflat surfaceの構成とエルゴード理論の係わり合いに新しい視点を与えることにつながる。3)正標数を持つ体上の非斉次Diophantus近似のmetrictheoryにおけるKurzweilの定理の詳細化において前年度得た成果をさらに発展させた。特に、対象となる超越関数の特徴づけがいっそう明確になった。4)gap seriesのmetrictheoryにおいて従来のdiscrepancyに関する評価を改良することができた。
牛疫ウイルス膜蛋白の病原性発現機構における役割

本研究の目的は牛疫ウイルス(RPV)のウサギ馴化株であるRPV-L株の膜蛋白Hの病原性発現への関与の有無と細胞親和性に必要な部位を検索することである。RPVの実際の宿主であるウシを用いた感染実験は世界的にも数少ない特殊施設でしか行うことができないが、RPV-L株はウサギでの感染実験系において牛疫の病態を忠実に再現する優れたウイルス株である。昨年度にウシでのワクチン株でウサギに対して病原性を示さないRPV-RBOK株のH遺伝子をL株と入れ換えた組換えRPV-RBOK(Lap-H)の作製に成功した。この組換えウイルスとRBOK、L株との3種のウイルスを用いてウサギの感染実験を行った。L株感染ウサギが激しい臨床症状(体重減少、体温上昇、白血球減少)を示したのに対し、RBOK株と1apH株感染ウサギでは臨床症状は全く見られなかった。病理組織学的には、L株感染ウサギの盲腸、リンパ節では重度の炎症性変化を認めたが、RBOK株感染ウサギでは病変は見られなかった。LapH株感染ウサギでは、リンパ節に僅かながら反応性変化を認めた。またウイルス接種3週間後の血清中の抗体価をELISA法により測定したところ、RBOK株接種ウサギでは有為な抗体価の上昇は認められなかったが、L株接種ウサギおよび1apH株接種ウサギにおいては有為な抗体価の上昇が認められた。またin vitroでのウイルス増殖を調べてみると1apH株はRBOK株とL株の中間型であることがわかった。以上の結果から、H蛋白が宿主細胞への侵入に重要であり、これをウサギ馴化株に変えたことによって種を越えてウサギの細胞内への侵入は成立したと考えられるが、その後の増殖能を規定するのは他のウイルス蛋白の影響が大きく、宿主内各臓器でのウイルス増殖が十分でないために種を越えた病原性発現に至らなかったと考えられた。RPVの実際の宿主であるウシを用いた感染実験では世界的にも数少ない特殊施設でしか行うことができないが、RPV-L株はウサギでの感染実験系において牛疫の病態を忠実に再現する優れたウイルス株で、これまでに我々は感染ウサギ体内での病態の詳細な解析を行ってきた。本年度はまずRPV-L株のウイルスクローニングを行い最終的に10クローンを得た。それぞれについてウサギの感染実験を行った結果、1クローンを除き4日目をピークとして体重は100200g減少し、体温は40°Cを越え、白血球数は約2000/μlまで減少した。一部は4日目までに死亡し、残りは体重・体温・白血球数ともに4日目以降回復傾向を示し、クローニング前のRPV-L株と同様の症状を再現することが確認された。それらの中で特に2つのクローンは感染ウサギ3例とも3日目に死亡し、再現性が高く病原性が強いウイルスクローンであることが明らかになった。一方、別な1クローンは病原性を示さない弱毒株であることがわかった。それぞれのクローンについて現在遺伝子解析を行っており、強毒株では全長の70%以上にあたる塩基配列を決定した。またH遺伝子については、ウシでのワクチン株でウサギに対して病原性を示さないRPV-RBOK株のH遺伝子と入れ換えた組換えRPV-RBOK(Lap-H)の作製に成功した。
急性内耳障害とセロトニン3A受容体の関連

5-HT3A受容体が外有毛細胞の遠心性線維に発現していることを踏まえ、その機能を解明するためいくつかの内耳障害モデルを用い実験を行った。音響外傷モデルを用いた実験では野生型マウスと5-HT3A受容体ノックアウトマウス間で内耳における形態学的差を見出すことができた。また、歪成分耳音響放射を用いて聴力評価を行った結果、聴性脳幹反応検査では見出すことができなかった、両者間での聴力の差が確認できた。さらにシスプラチンによる内耳障害モデルでは一般的にマウスを用いたシスプラチンによる内耳障害モデルは困難なことが先の報告から言われていたが、投与量の詳細な検討により安定したモデル作成が確立できた。シスプラチンによる内耳障害モデルを作成後、野生型マウスと5-HT3A受容体ノックアウトマウス間で聴力を比較検討したところ、聴性脳幹反応検査において両者間での差を確認できた。このようにこの受容体が1種類のみならず複数の内耳障害モデルに深く関与していることは非常に興味深い結果と言える。今後の展開として、それぞれのモデルにおけるこの受容体の果たす役割やその分子生物学的メカニズムを検討したい。さらには受容体刺激薬および阻害薬投与といった薬理学的アプローチも行いたいと考える。動物モデルにおいて薬理学的作用が確認、検証可能となれば、ヒトでの内耳障害に対する予防法ならびに治療法の確立も視野に入れた展開も期待できると思われる。5-HT3A受容体の発現部位の同定から始まり、当初予定していた内耳障害モデルマウスを用いて、その役割の解明の手がかりを見出すことができた。しかしながら分子生物学的実験や薬理学的検討があまりできなかった点が課題と考えられた。薬理学的観点から5-HT3A受容体を刺激もしくは阻害することで生理学的検査結果および形態学的結果に変化が生じるかを検討したい。野生型マウスおよび5-HT3A受容体KOマウスにおいて内耳における形態的変化を評価したところ、両者の間で有意な差は認めなかった。また聴性脳幹反応検査および歪成分耳音響放射を用いて定常状態における聴力を比較したが、こちらについても両者の間で有意な差は認められなかった。次に5-HT3A受容体の詳細な発現部位を同定するために5-HT3A-GFPトランスジェニックマウスの蝸牛組織標本を用いて免疫染色を行った結果、この受容体が有毛細胞の遠心性神経に特異的に発現している可能性が高いことを同定した。さらに神経トレーサーの鼓室内投与を行い詳細に評価したところ、外有毛細胞の遠心性線維に特異的に発現していることを確認できた。以上のことから、5-HT3A受容体が聴覚感度調整等に関与するとされる外有毛細胞の遠心性線維に発現しているもの定常状態ではKOマウスにおいてもその機能に低下が見られないことから何らかの内耳障害下においてのみ機能を呈するのではないかと推察された。セロトニン受容体の内耳に対する働きについてはほとんど報告がなく、その発現部位の同定ができたことは大いに評価できると考えられる。次年度は先に述べた内耳障害時における評価を行うため、内耳障害モデルとしてシスプラチンおよび音響外傷モデルを採用し形態的および聴覚機能の評価を行う予定にしている。内耳障害時に機能を呈することを確認できれば、この受容体を活性化もしくは抑制させることが内耳障害への治療につながる可能性も期待できると思われる。今年度は5-HT3A受容体の発現部位を同定できたことが最大の成果と言える。定常状態において野生型マウスと5-HT3A受容体KOマウス間で有意な差はなかったが、数あるセロトニン受容体の中で唯一イオンチャネル型である3A受容体の特性を考えると特殊な条件下で機能を呈することが期待される。シスプラチン投与後の評価は次年度に充分施行可能であり全体としては概ね順調な進展と思われる。

内耳障害下における5-HT3A受容体の機能を、シスプラチンや音響外傷モデルを用いて評価したいと考えている。この受容体が中枢から末梢を支配する遠心性線維に発現していることから、脳内での神経活動と受容体の機能を合わせて評価することも行いたい。薬理学的観点から5-HT3A受容体を刺激もしくは阻害することで生理学的検査結果および形態学的結果に変化が生じるかを検討したい。当初導入予定であった歪成分耳音響放射装置を他施設から借りることができたため、予定よりも経費を抑えることが可能であった。次年度は装置を返却する予定のため同装置の導入予算として使用予定である。研究計画で当初予定していた受容体刺激薬および阻害薬を用いた薬理学的検討が今年度できなかったため、その施行目的で次年度に繰り越して助成金を使用する予定のため。