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メタロ-β-ラクタマーゼの分子構造と基質加水分解機構に立脚した阻害剤開発と創薬

現在臨床において感染症治療に使用されているカルバペネムを含むほぼすべてのβ-ラクタム剤が効かないメタロ-β-ラクタマーゼを産生する細菌が出現し、臨床で問題になっている。現在臨床で用いられているメタロ-β-ラクタマーゼ阻害剤はなく、その開発が緊急の課題となっている。本研究では、メタロ-β-ラクタマーゼ阻害剤開発を目的とし、メタロ-β-ラクタマーゼの構造に基づいて7種類の化合物を分子設計および合成した。近年、NDM-1(New Delhi Metallo-β-lactamase)と呼ばれる新型のメタロ-β-ラクタマーゼが出現し、世界各国の医療機関で問題になりつつある。これまでのメタロ-β-ラクタマーゼは、緑膿菌など日和見細菌から殆ど産生されていたのに対して、NDM-1は大腸菌や肺炎桿菌から分離され、市中感染して世界的に蔓延することが危惧されている。メタロ-β-ラクタマーゼは、ほぼ全てのβ-ラクタム剤を分解する。現在臨床使用されているクラブラン酸などのセリン-β-ラクタマーゼ阻害剤に対して全く感受性を示さず、臨床効果的な阻害剤がない。さらにNDM-1の出現もあり、薬剤耐性の化学反応機構の詳細や阻害剤開発が緊急の課題となっている。本研究では、クラスBに分類される種々のメタロ-β-ラクタマーゼの分子構造をX線結晶構造解析により決定し、そららの分子構造に立脚した全てのメタロ-β-ラクタマーゼを阻害する臨床的に有用なリード化合物を探索することが目的である。平成26年度では、Acinetobacter spp.由来のIMP-2メタロ-β-ラクタマーゼの分子構造を2.3Åの分解能で決定した。IMP-2の分子構造とMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ(アミノ酸配列相同性85%)のそれと比較した。68位のアミノ酸残基は基質認識に重要と考えられている可動性のループの根元に位置し、IMP-2ではセリン、一方、IMP-1ではプロリン残基となっている。両者の構造比較から、68位のアミノ酸残基の変異がループの可動性に大きく影響を与えていることが示唆された。特に、IMP-1では基質や阻害剤が存在しないときはopen型のみの構造を取るのに対し、IMP-2ではopen型またはclosed型のどちらの構造も取りえることがわかった。このようにIMP-2とIMP-1のループの可動性は大きく異なっていることがわかった本研究により明らかとなった。現在臨床において感染症治療に使用されているβ-ラクタム剤が効かない細菌が出現し、医療機関で大きな問題となっている。この細菌の耐性機構の一つとして薬剤を不活化する酵素であるmetallo-β-lactamase (MBL)の産生が挙げられる。MBLはβ-ラクタム剤のβ-ラクタム環を加水分解して抗菌活性を消失させ、薬剤耐性を引き起こす。しかしながら、臨床において有効なMBL阻害剤がないのが現状である。本研究では、種々のMBLsの立体構造を明らかにして、これらの構造に基づいたMBL阻害剤を開発することを目的としている。本年度はまず、昨年度に結晶化を行ったSerratia marcescens由来のIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ-クエン酸複合体の結晶構造を決定した。決定した構造から、クエン酸は活性中心に存在する亜鉛に結合していることがわかった。つぎに昨年度に合成した数種類のクエン酸誘導体のIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性を評価した。合成した化合物のIMP-1に対する50%阻害濃度(IC50値)は、いずれも数百μMであり、阻害活性としてはやや弱いことがわかった。しかしながら、クエン酸自身にはIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性はまったく認められなかった。そこで、なぜこれらの阻害活性の違いがみられたのかを明らかにするために決定したIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ-クエン酸複合体の立体構造を使って、ドッキングシミュレーションによりクエン酸誘導体の阻害様式を評価した。この結果、分子中のカルボン酸が活性中心付近にあるLys161およびAsn167と水素結合を形成し、安定化に寄与していることがわかった。従って、これらの水素結合は阻害活性発現に重要な働きを担っていると考えられる。本年度はIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ-クエン酸複合体の結晶構造を決定できたことと、クエン酸誘導体のIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性評価ができ、おおむね計画通りに進んでいると判断した。β-ラクタム剤は感染症治療において頻繁に用いられている抗菌剤であるが、この薬剤に対して耐性を獲得した病原菌が出現し、各国の医療施設で大きな問題となっている。その原因の一つにメタロ-β-ラクタマーゼの産生が挙げられる。しかし、メタロ-β-ラクタマーゼの現在臨床で用いられている阻害剤はなく、その開発が緊急の課題となっている。本研究では臨床で有効なメタロ-β-ラクタマーゼ阻害剤の開発を目指した。ごく最近、我々はIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ-クエン酸複合体の結晶構造を明らかにした。この結晶構造によれば、クエン酸の3つのカルボキシ基のうち、一つはどのアミノ酸残基とも相互作用せず遊離の状態で存在していた。残りのカルボキシ基の2つのうち一つはメタロ-β-ラクタマーゼ活性中心の亜鉛(II)と配位結合し、もう一つはアスパラギンやリジン残基と水素結合ならびに疎水性相互作用をしていた。そこでこの結晶構造を基に、7種類のクエン

酸類縁を分子設計した。つぎに、合成した化合物のIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性を酵素科学的に評価した。合成化合物の中で2-hydroxy-4-oxo-2-(2-oxo2-phenethoxylethyl)-4-phenethoxybutanoic acidは弱いながらも阻害活性(IC50 = 500 μM)が認められたが、メチレン鎖を一つ伸ばした2-hydroxy-4-oxo-2-(2-oxo-2-(3-phenylpropoxy)ethyl)-4-(3-phenylproposy)butanoic acidやdimethyl 3-aminopentanedioateではまったく阻害活性は認められなかった。この結果から、メチレン鎖の長さとベンゼン環が阻害活性発現に重要であることがわかった。現在臨床において感染症治療に使用されているカルバペネムを含むほぼすべてのβ-ラクタム剤が効かないメタロ-β-ラクタマーゼを産生する細菌が出現し、臨床で問題になっている。現在臨床で用いられているメタロ-β-ラクタマーゼ阻害剤はなく、その開発が緊急の課題となっている。本研究では、メタロ-β-ラクタマーゼ阻害剤開発を目的とし、メタロ-β-ラクタマーゼの構造に基づいて7種類の化合物を分子設計および合成した。平成26年度の研究計画では、ドッキングシミュレーションによる阻害剤のデザイン、合成と最適化であった。今回、Acinetobacter spp.由来のIMP-2メタロ-β-ラクタマーゼの分子構造決定に成功した。この分子構造を基にクエン酸誘導体がメタロ-β-ラクタマーゼの阻害剤候補になりえることを見出した。この理由により、おおむね順調に進展していると判断した。クエン酸誘導体のIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性評価並びにドッキングシミュレーションの結果を基に、阻害剤の化学構造の最適化を図る予定である。機器分析学すでに3つのクエン酸誘導体の合成に成功した。さらに、親化合物であるクエン酸とIMP-1メタロ-β-ラクタマーゼ複合体の結晶化にも成功している。平成27年度では、平成26年度の知見と今回のクエン酸ーIMP-1複合体構造の結果を基にドッキングシミュレーションによる阻害剤の化学構造の最適化と合成を引き続き行っていく予定てある。平成27年度ではX線結晶構造解析が予定通りに進行した。そのため結晶化に必要な試薬ならびにガラス類などの消耗品費がかからなかった。平成26年度ではIMP-2メタロ-β-ラクタマーゼの酵素の培養・精製、結晶化ならびにX線結晶構造解析が予想以上にうまく進行したため、試薬やガラス器具などの消耗品費がかからなかったためである。最終年度は阻害剤の合成を行い、それらの化合物のメタロ-β-ラクタマーゼに対する阻害活性を評価する。さらに、複合体の結晶化ならびにX線結晶構造解析を行う。分光化学的手法を用いて阻害活性評価を行うが、この実験では、温度を一定にする必要がある。この測定に必要不可欠な温度コントローラー(約40万円)を物品費で購入する予定である。
CD45のリガンド同定の試み

マウス未熟B細胞株から、分子篩クロマトグラフィーと2種のアフィニティークロマトグラフィーによって高度にCD45を精製し、CD45固定化カラムとビオチン化CD45を調製し、CD45と特異的に結合するタンパク質の検索を行った。まず、マウスの脾臓を可溶画分と膜画分に分画し、それぞれの画分からCD45固定化カラムに吸着したタンパク質をSDS-PAGEで分析した.それぞれの画分にはCD45に結合するタンパク質が複数存在したが、ビオチン化CD45をプローブとしてウエスタン解析により可溶画分では分子量約70kDのタンパク質、膜画分では分子量約66kD,60kD,54kDの3種のタンパク質がCD45と特異的に結合することが明らかとなった。次に、CD45と特異的に結合する4種類のタンパク質がCD45のPTP活性にどのような影響を与えるかを調べた結果、可溶画分から調製したタンパク質のみが45のPTP活性を上昇(150%)させることが示された。膜画分由来のCD45と特異的に結合するタンパク質がどの脾細胞集団に由来するのかを検討するために、ビオチン化CD45とThy-1によるFACS解析を行った。その結果、マウス脾細胞のうちT細胞の一部とThy-1抗原を持たない細胞(その多くはB細胞)の一部がビオチン化CD45と結合していることが明らかとなった。それらの結果から、膜画分から得られたCD45と特異的に結合する分子はT細胞およびB細胞の膜タンパク質由来であることが示唆された。今後、これらのタンパク質の性状を解析することにより、CD45の詳細な作用機序を解明していきたい。RABC型および、RO型のCD45のリガンドを同定することを目的とし、本年度は、RABC型および、RO型のCD45細胞外領域を含むコンストラクトを作成し、Sf9細胞へのトランスフェクションを行った。具体的には、まず、バキュロウイルスベクターpBlueBacHis CにCD45の細胞外領域をコードするcDNAを組み込んだ。効率よい発現を行うために、5'側から約130bpのCD45cDNAの非翻訳領域を除いたコンストラクトを作成する必要があり、このために、翻訳領域の5'側600bpをPCR法により増幅し、その下流の部分と繋いだ約1.2kbの断片をベクターに組み込みコンストラクトを作成した。現在、これをバクテリアにトランスフォームすることにより大量に得たDNAを精製し、Sf9細胞へのトランスフェクションを行っているところである。まだ、発現蛋白の確認まではいっていないが、糖鎖修飾が比較的正確な形で行われているバキュロウイルス/Sf9細胞の系を用いているため、細胞外領域に糖鎖が多いCD45蛋白の発現もネイティブに近い形で行われることが期待できる。平成7年度は、現在発現を行っているCD45蛋白を精製し、リガンドの同定を試みる予定である。具体的には、精製CD45をビオチンで標識し、CD45が結合する細胞をアビジン-FITCを用いたFACS解析で検索する。CD45結合細胞が見つかった場合、その細胞表面に発現する既知の分子に対する抗体の中から結合を阻害するものを選び出す。もし、既知の抗体の中に阻害抗体がない場合は、CD45の結合する細胞を免疫原にしてモノクローナル抗体を作成し、CD45の結合を阻害するクローンを選び出す。その抗体を用いて、リガンド蛋白の性状を明らかにする。マウス未熟B細胞株から、分子篩クロマトグラフィーと2種のアフィニティークロマトグラフィーによって高度にCD45を精製し、CD45固定化カラムとビオチン化

CD45を調製し、CD45と特異的に結合するタンパク質の検索を行った。まず、マウスの脾臓を可溶画分と膜画分に分画し、それぞれの画分からCD45固定化カラムに吸着したタンパク質をSDS-PAGEで分析した.それぞれの画分にはCD45に結合するタンパク質が複数存在したが、ビオチン化CD45をプローブとしてウエスタン解析により可溶画分では分子量約70kDのタンパク質、膜画分では分子量約66kD,60kD,54kDの3種のタンパク質がCD45と特異的に結合することが明らかとなった。次に、CD45と特異的に結合する4種類のタンパク質がCD45のPTP活性にどのような影響を与えるかの調べた結果、可溶画分から調製したタンパク質のみがCD45のPTP活性を上昇(150%)させることが示された。膜画分由来のCD45と特異的に結合するタンパク質がどの脾細胞集団に由来するのかを検討するために、ビオチン化CD45とThy-1によるFACS解析を行った。その結果、マウス脾細胞のうちT細胞の一部とThy-1抗原を持たない細胞(その多くはB細胞)の一部がビオチン化CD45と結合していることが明らかとなった。これらの結果から、膜画分から、得られたCD45と特異的に結合する分子はT細胞およびB細胞の膜タンパク質由来であることが示唆された。今後、これらのタンパク質の性状を解析することにより、CD45の詳細な作用機序を解明していきたい。
ATP合成酵素の一次構造に基づく立体構造と機能の相関の解明

βサブユニットの174残基がSerからPheに変換して機能を失った株から復帰変異株を分離し、第2の変異として、Gly149→Ser,Asn158→Tyr,Ala295→Pro,Leu400→Glnが見いだされた。つぎに第2の変異単独での活性に対する効果を調べたところ、Ala295→Proの変異では機能の欠損がおこるが他のものでは欠損は見られなかった。また、Ala295→Proの変異の復帰変異を分離したところ、174残基近傍に第2の変異が認められた。したがって、Ser174近傍に、Gly149,Asn158,Ala295,Leu400の残基が存在し、活性所現に必要な親水的な空間を形成しているものと推定された。次に、βサブユニットに結合する2種のモノクローナル抗体(β31とβ12)を単離した。エピトープを解析したところ、アミノ末端から45残基付近に存在が示唆された。さらに、この45残基目を含むペプチドに変異を導入し、抗体との結合能が失われるものを分離し、変異を同定した。この結果、結合活性を失ったのは、β31ではLeu40→Pro,Glu41→Lys,Gln43→Arg,Glu44→Arg,Leu46→Pro,Arg52→Cysであり、β12では、Tyr26→His,Arg52→Cys,Pro74→Glnであった。従って、この2つの抗体は45残基付近の立体構造を認識し、45残基近傍は、推定2次構造ではβシートを形成していると考えられた。これらの抗体は、F^1およびαβγ複合体には結合せず、エピトープ部分はサブユニットの分子集合に伴い、複合体内部に存在すると考えられる。現在抗体結合能を失った変異における機能欠損を解析中である。以上のアプローチにより構造の微小変化と機能の変化の相関を捉える新たな方法が確立できた。
海馬における虚血性神経細胞死と虚血耐性機構の解明

1)ベクターの開発:抗アポトーシス分子の海馬神経細胞への導入に際して、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの研究をすすめ、血清型及びプロモーターの違いによる導入効率を比較検討した。その結果、RSVまたはCAGプロモーターとAAV2型でRSVまたはCAGプロモーターが神経細胞導入に適しており、AAV5型ベクターがアストロサイトへの導入に適していることを確認した。ウイルスベクター血清型の導入効果の差としては、細胞の持つ糖鎖が原因のひとつと考えられ、組織化学的検討からMaackia amrensislectin II (MAL II)の分布が海馬細胞間で異なることを確認し、これらの成果をMethods 28(2):237-47,2002.,Method Enzymol 346:378-393,2002.,ブレインサイエンスレビュー2002.,Neurosci Lett 340(2):153-159,2003.に発表した。2)幼若な海馬の虚血耐性:生後10日のラット頭部異所性移植モデルをもちいて、超低体温下(脳温19°C)での虚血性神経細胞死を検討した。脳温19°Cでは2時間以上の完全虚血でも脳損傷は殆どみられず、生後発達も異常はみられなかった。超低体温下での虚血モデルの検討は長時間に及ぶ脳虚血による神経細胞死抑制への一つの可能性を示すものと考えられる。この成果はNeurosci Lett 325(1):37-41,2002.に発表し、この成果については新聞(日本経済新聞2002年12月2日号、下野新聞2002年12月2日号、科学新聞2003年1月17日号)にも報道された。平成13年度の本研究は、虚血性神経細胞死の抑制に関して、ベクター投与による遺伝子治療、RT-PCRによる遺伝子解析を重点的に行い、以下の実績を収めた。1)遺伝子導入法の研究開発:海馬に直接ベクターを注入する方法について研究工夫を重ね、その成果をMethods in Enzymology (研究発表の項参照)に発表した。2)海馬錐体細胞特異的なウイルスベクターの開発:アデノ随伴ウイルスは10種類の血清型のが報告され、2型の開発を皮切りに他の型も次々にベクターとして使われ始めている。ウイルスの型による感染の特徴をin vitro(primary culture)とin vivoで検討したところ、2型は海馬錐体細胞特異的な導入を特徴とし、5型は錐体細胞特異的ではないが導入効率は2型より高いことが判った。一方、プロモーターによる差ではCMVよりRSVのほうが神経細胞への導入効率が高いことを確認し、これらの結果を第24回日本分子生物学会で発表した3)虚血負荷海馬の遺伝子変化の解析:preconditioningにより虚血耐性を獲得させたラット海馬の遺伝子発現変化をDNAチップで解析し、虚血耐性に直結する遺伝子のスクリーニングを行った。さらに、Bc1-2ファミリーについてRT-PCRで検討し虚血耐性獲得時の抗アポトーシス分子の発現を確認し、これらを第24回日本神経科学・第44回日本神経化学合同大会で発表した。平成14年度は、虚血性神経細胞死の抑制に関して、遺伝子治療用ベクターの開発、超低体温による虚血性神経細胞死抑制の研究を行い、以下の実績を収めた。1.遺伝子治療用ベクターの開発:アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターによる神経細胞への遺伝子導入についてさらに研究をすすめ、AAV5の血清型及びプロモーターの違いによる導入効率を比較検討した。その結果、神経細胞にはRSVまたはCAGプロモーターとAAV2型でRSVまたはCAGプロモーターが適しており、アストロサイトにはAAV5型ベクターが適していることを確認した。

血清型による細胞への導入効果の差としては、細胞の持つ糖鎖が原因のひとつと考えられ、Maackia amrensis lectin II(MAL II)の分布に細胞間で差の有ることを確認した。さらに、ベクターの至適投与濃度は10^<10>particlesで発現は月単位で継続することも確認した。これらの成果を、Methods28(2):237-47,2002.,Method Enzymol 346:378-393,2002.,ブレインサイエンスレビュー2002.,Neurosci Lett340(2):153-159,2003.に発表した。2.超低体温による虚血性神経細胞死抑制の研究:ラット頭部異所性移植モデルをもちいて、19°Cに脳温19°Cでの虚血性神経細胞死を検討した。脳温19°Cでは2時間以上の完全虚血でも脳損傷は殆どみられず、長時間に及ぶ脳虚血による神経細胞死抑制への一つの可能性を示すものと考えられた。この成果はNeurosci Lett325(1):37-41,2002.に発表し、この成果については新聞(日本経済新聞2002年12月2日号、下野新聞2002年12月2日号、科学新聞2003年1月17日号)にも報道された。
MALT1による口腔癌の進展抑制遺伝子の機能解析

MALT1はリンパ球系において重要な役割をしているだけでなく、スキャフォールディング機能でNF-kBシグナル系に関与していることがわかっている。我々は口腔扁平上皮癌におけるMALT1の役割について研究してきた。最初の研究では、MALT1発現細胞株においてケラチン8/18とケラチン5/14の発現変動がプロテオミクス解析により、認められた。ケラチン5/14は腫瘍形成のプロセスにおいて重要なマーカーであり、ケラチン5/14の発現の減少は腫瘍形成と相関があると考えられる。本研究では、MALT1による細胞増殖能、浸潤・転移能を指標に関連遺伝子を含めた制御因子の探索と機能解析を行うことを目的とする。研究期間中にMALT1の各機能ドメインの欠失タンパク質発現ベクター(FLAG tagおよびGFP tagを導入済み)を細胞に導入し、免疫染色、ウエスタンブロット、蛍光顕微鏡にて観察し、核内・核外輸送に関連する部位を特定する。MALT1の3'-UTRを介したmiRNAの抑制効果について検証する。Tet(ON/OFF)制御システムで構築したMALT1発現制御癌細胞をマウスに移植し、細胞増殖能および浸潤・転移能の解析を行う。本年度は以下のようなMALT1の機能ドメイン欠失タンパク質発現ベクターの構築を行った。<完全長MALT1(WT)、deathドメイン欠失MALT1(IgG-CASPASE)、deathドメイン-IgGドメイン欠失(CASPASE)、caspase-likeドメイン欠失MALT1(D-IgG)、death/caspase-likeドメイン欠失MALT1(IgG)、IgG-caspase-likeドメイン欠失MALT1(D)>動物細胞発現ベクターのpCI-FLAG-neoおよびpCI-GFP-neoにMALT1能ドメイン欠失タンパク質遺伝子を導入した。MALT1の完全長cDNAをテンプレートにし、MALT1の機能ドメイン配列をPCRで増幅し、クローニングベクターのpCR2.1にサブクローニングした。次に目的の遺伝子フラグメントを制限酵素で切断し、pCI-FLAG-neoおよびpCI-GFP-neoに組み換えた。構築したプラスミドを精製し、HEK293細胞に導入後、ウエスタンブロット法により目的のタンパク質を確認した。WT、CASPASE、D-IgGの発現ベクターに関しては、HSC2細胞に導入し、発現安定株を樹立した。本研究では、MALT1による細胞増殖能、浸潤・転移能を指標に関連遺伝子を含めた制御因子の探索とその機能解析を目的としている。昨年度までにMALT1の機能ドメイン欠失タンパク質発現ベクター<完全長MALT1(wtMALT1)、deathドメイン欠失MALT1(Ig-caspaseMALT1)、deathドメインーIgドメイン欠失MALT1(caspaseMALT1)、caspaseドメイン欠失MALT1(d-IgMALT1)、death/caspaseドメイン欠失MALT1(IgMALT1)、Ig/caspaseドメイン欠失MALT1(dMALT1)>の構築を行い、口腔扁平上皮癌細胞(HSC2)の安定株を樹立した。wtMALT1を恒常的に発現するHSC2細胞とHSC2細胞のタンパク質量の変動をSDS-PAGEで解析した結果、大きく変動したタンパク質が10種類確認された。変動タンパク質は質量分析装置で解析したところ、転写因子(ZIC687)、DNA修復因子(RAD51)、ケラチン類(K5、K14、K17)などがwtMALT1の増加により減少することがわかった。さらにwtMALT1の増加によりケラチン類(K8、K18)が増加することが確認された。ケラチン類の変化は細胞増殖能との関連性が高いことから、xCELLigence(ROCHE製)を用いた細胞増殖解析を行なった。結果、wtMALT1を恒常的に発現するHSC2で増殖能の低下が認められた。ドミナントネガティブに作用するcaspaseMALT1を恒常的に発現するHSC2ではHSC2細胞より増殖能が亢進した。現在、二次元電気泳動を用いて、さらに変動するタンパク質を同定し、増殖能と変動タンパク質との関連性を解析中である。さらにcDNAを用いたマイクロアレイでも変動遺伝子の比較を行なっており、細胞周期、細胞骨格系の遺伝子が多く変動していることがわかってきた。今後、タンパク質、遺伝子の双方から細胞増殖能および浸潤・転移能を制御する因子の検索と機能解析を進めて行く予定である。本研究では、MALT1が口腔癌細胞の高度悪性形質を抑制する分子機構の解明を目指した。口腔癌細胞(mock-HSC2)にMALT1遺伝子を恒常的に発現する細胞(MALT1-HSC2)を樹立し、発現変動するタンパク質、mRNA、細胞動態などを検証した。発現変動タンパク質では、MALT1の発現上昇により、腫瘍マーカーとしても用いられるケラチン5と14が減少し、ケラチン8と18が上昇した。細胞動態では、MALT1の発現上昇により、細胞増殖速度が著しく低下した。

細胞周期を調べたところ、G1チェックポイントに関与するp21、p27の発現が著しく増加していることから、MALT1が何らかの因子を介して、細胞周期を抑制していることが示唆される。さらにmRNAの発現変動をDNAマイクロアレイおよびリアルタイムPCRを行ったのち、パスウェイ解析およびGO解析により、癌シグナル、細胞遊走などの機能に関わる遺伝子に大きく影響を与え、特に癌細胞の転移•浸潤に関係するSmadやRasなどのパスウェイに影響を与えていた。MALT1-HSC2ではWound-healingアッセイで創傷治癒速度が減少し、顕微鏡を用いたタイムラプス観察でも、著しく細胞の遊走能が低下している事が認められた。以上のことよ、上皮系細胞では、MALT1は癌の進展を抑制するように働いている事が示唆される結果となった。口腔癌の進展に関わる形質変化、分化、浸潤、増殖動態を抑制に働く因子の探索と機能について解析を進めている。MALT1の発現は細胞の増殖能、浸潤・転移能を著しく低下させることが明らかとなった。関係因子としてケラチン分子の存在が質量分析から明らかとなり、MALT1との関連性を調べているところである。24年度が最終年度であるため、記入しない。口腔扁平上皮癌では、MALT1の発現停止に伴い、浸潤・転移能および増殖能の顕著な増大が明らかとなった。一般に血球系におけるMALT1の機能とは全く逆の反応を示す。このことから上皮系細胞におけるMALT1はこれまでと異なる経路を有している可能性が示唆される。現在、行なっている網羅的な解析から、MALT1の新規の機能および反応経路が見つかると確信している。
Kabuki make-up症候群の分子細胞遺伝学的研究

2.上記の6例のr(X or Y)は何れもG染色体より小型で、セントロメアの蛍光染色では2例がX染色体、1例がY染色体起源だった。X染色体起源の4例についてX染色体の不活性化の指標となるXistの発現の有無を調べ、何れも陽性だった。従って、この4例のr(X)では、r(X)または正常Xが不活性化していると推定される。不活性、活性リングXがモザイクで存在する場合を想定してBrdU法を用いて不活性化Xの染め分けを試みた。X染色体のセントロメア近傍は比較的早期に複製するので、この方法では小型のr(X)の複製時期の判定は難しいことが判明した。3.Kabuki make-up症候群の臨床症状を呈するr(X)の例と、症状を持たないが重症の精神遅滞を呈するr(X)についてr(X)のmicrodissectionを試みた。r(X)から得たprobeを用いてpaintingを試み、X染色体のセントロメア近傍が染まった。以上の結果から、Kabuki make-up症候群の臨床症状をちするTurner症候群患者の大部分は小型のr(X or Y)を持つことが判明した。小型のr(X)がX活性化センターを失なって、活性を維持するために種々の症状を呈するとする仮説は否定的である。1.TurnerーKabukimake up,症候群の患児を13例収集した。リングXが8例,iso Xが2例,XXpー2例,45,X1例である。これに加えてKabuki make up症候群の男児でリングYの1例を収集した。Turner症候群に占めるリングXの割合は通常10%だから,リングX秤合は明らかに高い。リングXとそれ意外の症例と比割すると,前者でKabuki make up症候群の症状が定型的である。リングXの2例にIIーIII指,IIIーIV指の間の合指症を認めた。2.上記の14例中10例とその両親の未梢血Bリンパ球を株化した。これに加えて染色体異常を認めないKabukimake up症候群の患児20例について同様に株化した。3.リングXの5例,リングYの1例についてXー,Yーセントロメアプロ-ブを用いて,リングがXまたはYであることを確認した。4.リングXがX不活性化センタ-を失ない,活性を維持することがKabuki make up症候群の原因だとする假説に基いて,XISTの活性をRTーPCR法を用いて検定した。その結果,XIST由来のmRNAの存在を示するバンドは強弱の差はあるが全例で検出した。從って,リングXの少なくとも一部は不活性化していると推定される。不活性化,活性リングXがモザイクで存在する場合を想定して,BUDR法を用いて不活性化Xの染め分けを試みた。リングの多くはG群相当の小型で,セントロメア近傍から成るが,この部分は不活性化Xでも比較的早期に複製するために判定が難しい。この染め分けによる分類は統行中である。5.当初假定したpsendsautsomal regionにKabuki make up症候群の遺伝子が存在するとする假説は,これ以外にも少なくとも数カ所が不活性化Xでも活性を維持し,Yに桐同部分があることが判明したので修正せざるを得なくなった。1.Turner症候群の核型を示し、Kabuki make-up症候群の臨床症状を呈する12例を集収した。7例は定型的、5例は非定型的だった。前者のうち6例はリング(XorY)、1例はXp-だった。後者はリングX(大型)1例を含む程々の核型だった。母体となったTurner症候群118例中、リング(XorY)は16例だから、Turner-Kabuki-make up症候群にはr(XorY)が多い。2.上記の6例のr(XorY)は何れもG染色体より小型で、セントロメアの蛍光染色では2例がX染色体、1例がY染色体起源だった。

X染色体起源の4例についてX染色体不活性化の指標となるXistの発現の有無をしらベ、何れも陽性だった。従って、この4例のr(X)では、r(X)3hは正常Xが不活性化していると推定される。不活性、活性リングXがモザイクで存在する場合を想定してBUDR法を用いて不活性化Xの染め分けを試みた。X染色体のセントロメア近傍は比較的早期に複製するので、この方法では小型のr(X)の複製時期の判定は難しいことが判明した。3.Kabuki make-up症候群の臨床症状を呈するr(X)の例を、症状を持たないが重症の精神薄弱を呈するr(X)についてr(X)のmicrodisectionを試みた。r(X)から得たprobeを用いてpaintmsを試み、X染色体のセントロメア近傍が染った。以上の結果から、Kabuki make-up症候群の臨床症状を呈するTurner症候群患者の大部分は小型のr(XorY)を持つことが判明した。小型のr(X)がX不活性化センターを失なって、活〓を維持するために種々の症状を呈するとする〓説は否定的である。
自閉症スペクトラム障害児におけるナラティブと自己・他者理解の発達的因果関係の解明

ASD児におけるナラティブと自己・他者理解との発達関連を明らかにするという研究全体の目的を達成するために、平成27年度には大人(母親・実験者)のかかわり方によるASD児の発言の変化及び、母親のかかわり方とASD児の自己・他者理解課題の通過有無との関連について分析を行った。8歳から12歳までのASD児とその母親10組を対象とし、ASD児と母親との共同構成としてセリフのないアニメーションをみてもらい、どのようなストーリーなのかについてお話をしてもらう課題を実施した。その1週間10日後、ASD児には実験者との共同構成課題に参加してもらった。さらに、自己理解と他者理解の程度を測るための課題を実施した。結果、ASD児と母親との共同構成において、母親のかかわり方は2つのタイプに分類されたこと(精緻化タイプと非精緻化タイプ)、非精緻化タイプの母親と共同構成を行ったASD児群は精緻化タイプの母親と共同構成を行ったASD児群より、アニメーションの内容に関する発言が少なかったこと、非精緻化タイプの母親のASD児に対して実験者が精緻化タイプでかかわると、ASD児においてアニメーション内容に関する発言が多くなるなどの変化がみられたことが示された。これらの結果から、ASD児とナラティブを行う際には大人のかかわりが重要であること、大人のかかわりによってASD児のナラティブの発達を促すことが可能であることが示唆された。さらに、自己理解と他者理解の課題通過との関連を分析した結果、精緻化タイプの母親のASD児群の方が、そうではない母親のASD児群より自己・他者理解課題に通過する人数が多かった。この結果から、母親と質的に良い共同構成を行うことを通して、ASD児の自己理解や他者理解の発達を促進できることが示唆された。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、自閉症スペクトラム障害児におけるナラティブと自己・他者理解の発達的因果関係を解明することを目的としており、平成25年11月から研究を開始しており、まずナラティブと他者理解との因果関係を解明する研究に取り組んだ。主に調査方法を具体化・明確化し、質問紙を作成する作業を行った。調査方法としては、対象児(典型発達児及び自閉症スペクトラム障害児)の主養育者を対象に、日常生活におけるナラティブの様子と他者理解の様子に関する質問紙調査を行い、共分散構造分析を通して因果関係を示す。質問紙の項目を選定するにあたり、発達心理学や障害学での知見を整理し、どのような因果関係が想定されるのかの仮説をより明確に立て、これまでの先行研究(李・田中、2011 ; 2012 ; 2013等)を参考にし、質問項目を精選する作業を行った。子どものナラティブに関する質問紙の項目は、ナラティブの頻度や質(例:「その日あるいは以前あった出来事について自分から話す」「その日あるいは以前あった出来事について話す際、他人の気持ちについて言及する」)を問う項目を作成した。他者理解に関しては、Strengths and Difficulties Questionnaire (SDQ、Goodman, 2000)のうち、「仲間関係(例:仲の良い友達が少なくとも一人はいる)」「向社会性(例:自分からすすんでよく他人を手伝う(親・先生・子供たちなど))」に関する下位尺度を用いることとした。ナラティブと他者理解との因果関係を検討するにあたり、ナラティブを促す背景要因の一つである親との共同生成(co-construction)との関連も検討することとした。自閉症スペクトラム障害児においてナラティブを促すアプローチとしての共同生成の効果が示された事例が報告されており(李・田中、2012)、ナラティブと共同生成、他者理解との関連を示すことを通してナラティブを促進する方法としての共同生成の有効性を明らかにできると考えられるためである。したがって共同生成に関する質問紙も作成しており、今後これらの質問紙を用いて本調査を行う予定である。本研究は、自閉症スペクトラム障害(ASD)児を対象とし、空想の出来事あるいは自分の過去の経験を振り返り、意味づけるナラティブと自己・他者理解との発達的因果関係を明らかにすることを目的としている。この目的を達成するために、1.ASD児におけるナラティブの特性と自己・他者理解の特性との関連、及びその背景要因を検討すること、2.自己・他者理解が発達していないASD児(自己・他者理解を問う課題に未通過の者)を追跡調査し、ナラティブと自己・他者理解がどのように発達していくのかについて示すことが必要である。今年度は1.に関して2つの研究を行った。1つ目は、小学校のASD児(13名)と小学生の典型発達児(29名)のナラティブの特性を比較し、自己意識との関連について検討した。結果、ASD児は典型発達児に比べて自分の経験を振り返り、意味づけることに弱さが示されたとともに、ASD児のナラティブにおける自己意識的言及(所有格・自己意識的感情語)が少ないことが示され、ASD児のナラティブを行うことの弱さと自己意識の弱さとの関連が考察された。2つ目は、ナラティブと自己・他者理解の発達を促す背景要因として、母親のかかわり方に注目し、ASD児のナラティブにおける発言との関連を検討した。6歳から12歳までのASD児を対象とし、母親と一緒にナラティブを行う共同構成課題を行った結果、子どもの記憶をより掘り下げるかかわりを行う(精緻化タイプ)母親のASD児の方がそうではない母親のASD児に比べて、より多くの情報を想起していることが示された。

今後は、母親のかかわり方とASD児の自己・他者理解課題の通過との関連を明らかにするとともに、2.自己・他者理解の未発達児の追跡調査を行うことを通して、ナラティブの発達と自己・他者理解の発達との関連を示す予定である。ASD児におけるナラティブと自己・他者理解との発達関連を明らかにするという研究全体の目的を達成するために、平成27年度には大人(母親・実験者)のかかわり方によるASD児の発言の変化及び、母親のかかわり方とASD児の自己・他者理解課題の通過有無との関連について分析を行った。8歳から12歳までのASD児とその母親10組を対象とし、ASD児と母親との共同構成としてセリフのないアニメーションをみてもらい、どのようなストーリーなのかについてお話をしてもらう課題を実施した。その1週間10日後、ASD児には実験者との共同構成課題に参加してもらった。さらに、自己理解と他者理解の程度を測るための課題を実施した。結果、ASD児と母親との共同構成において、母親のかかわり方は2つのタイプに分類されたこと(精緻化タイプと非精緻化タイプ)、非精緻化タイプの母親と共同構成を行ったASD児群は精緻化タイプの母親と共同構成を行ったASD児群より、アニメーションの内容に関する発言が少なかったこと、非精緻化タイプの母親のASD児に対して実験者が精緻化タイプでかかわると、ASD児においてアニメーション内容に関する発言が多くなるなどの変化がみられたことが示された。これらの結果から、ASD児とナラティブを行う際には大人のかかわりが重要であること、大人のかかわりによってASD児のナラティブの発達を促すことが可能であることが示唆された。さらに、自己理解と他者理解の課題通過との関連を分析した結果、精緻化タイプの母親のASD児群の方が、そうではない母親のASD児群より自己・他者理解課題に通過する人数が多かった。この結果から、母親と質的に良い共同構成を行うことを通して、ASD児の自己理解や他者理解の発達を促進できることが示唆された。本研究の開始当初の研究計画では、横断的なデータから発達的因果関係について論じる方法を考えていたが、発達的因果関係を明確に示すためには時間軸による縦断的調査の必要性が考えられた。そのため、方法論を修正し、ナラティブ及び自己・他者理解が発達する時期である6歳から12歳までという年齢を選定し、対象児の募集を行った。しかし、6歳から12歳までの知的発達に遅れのないASD児という非常に限定的な対象児の募集に時間がかかり、データ収集において予定より遅れていたため、現在の達成度としてはやや遅れていると判断するのが妥当であると考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、以下のように研究を進めていく予定である。1.現在収集したASD児のデータから、母親のかかわり方とASD児の自己・他者理解に関する課題通過有無との関連を分析する。この結果に関しては、国内外の学会で発表する予定である。2.6歳12歳までのASD児のうち、自己・他者理解に関する課題に未通過の者を対象に、6か月後の追跡調査を行う。3.現在収集したデータに加え、さらにデータを集めていき、1.と2.に関する知見をより確かなものにしていく予定である。
アジュバント活性の多様性の解析とその応用

アジュバント活性の多様性、特にTh2アジュバント活性とTh17アジュバント活性ならびにその制御について研究を進め、エストロゲンが有するアジュバント活性、細胞内cAMP濃度の測定に基づくアジュバント活性の評価方法、樹状細胞から産生放出されるドパミンのTh2/17アジュバント活性、DC17上に特異的に高発現するjagged1の機能、などを明らかにした。さらに、母乳のTh2アジュバント活性の本態がcoenzymeAであることを明らかにした。今後はアトピー性皮膚炎との関連について研究を展開していく。平成20年度は以下の研究を遂行し成果を上げた。1)カンジダ抽出物に含まれるcurdlanがTh17アジュバント活性を有しており、curdlanで刺激された樹状細胞をNotch ligandのうちjagged1を特異的に発現することを明らかにした(in revision)。2)NODモデル(BBRC, inpress)および腎炎モデル(in revision)においてD1様ドパミン受容体アンタゴニストがTh17の分化抑制を介して効果を発揮することを明らかにした。3)アトピー性皮膚炎患児の母乳は健常児の母乳に比べて有意にTh2アジュバント活性が高いことを証明した。21年度以降も初期の研究計画に従って研究を遂行していく。「研究の目的」本研究は、1) Th17のヘルパー機能を解明すること、2) Th17アジュバントを物質として同定すること、3) DC17マーカーを解明すること、4) D1様ドパミン受容体アンタゴニストを数々の自己免疫病モデル動物に投与してその効果を確認し、その詳細な作用機構をin vitroのみならずin vivoでも解明すること、ならびに、5)アトピー性皮膚炎(AD)コホートを用いて胎便、母乳、皮膚黄色ブドウ球菌のTh2アジュバント活性を定量的に評価し疫学的作業仮説を立証すること、を目的とする。「本年度(平成22年3月31日)の研究実施内容」1)各種動物モデルにおけるD1様ドパミン受容体アンタゴニストの効果の解析EAEは松下が、NODは連携研究者粟田が、腎炎は連携研究者岡田が、CIAは連携研究者上阪(東京医科歯科大学)が解析した。Th17マーカーに対する抗体を用いた組織学検討(局所ならびに所属リンパ節)も同時に行った。2)アトピー性皮膚炎の疫学的検討皮膚擦過培養菌、母乳、胎便のTh2アジュバント活性を定量化し、「AD患者では皮膚擦過培養菌、母乳、胎便の一部または全部のTh2アジュバント活性が高い」という作業仮説を検証した(東,下条)。本研究は、1)Th17のヘルパー機能を解明すること、2)Th17アジュバントを物質として同定すること、3)DC17マーカーを解明すること、4)D1様ドパミン受容体アンタゴニストを数々の自己免疫病モデル動物に投与してその効果を確認し、その詳細な作用機構をin Vitroのみならずin卿0でも解明すること、ならびに、5)アトピー性皮膚炎(AD)コホートを用いて胎便、母乳、皮膚黄色ブドウ球菌のTh2アジュバント活性を定量的に評価し疫学的作業仮説を立証すること、を目的とした.。本年度は、生後6ヶ月の時点でのADあり群55例、ADなし群55例の生後4日目における母乳暴露によるDC内のcAMPを評価する方法を用いて、母乳の有するadjuvant活性の評価を行った。興味深いことに、ADあり群の一部にADなし群に比して明らかに細胞内cAMPを上昇させるものがあった。これは高いTh2アジュバント活性を有する母乳を飲んだ乳児にのみADがみられる可能性を示唆している。さらに、HPLCや質量分析を用いた解析により、母乳中の活性物質がCoenzymeAであることを同定した。CoenzymeAの経口投与により、マウスにAD様の炎症を惹起することにも成功した
非平衡環境下における化学反応の理論的研究

本研究は、環境が非平衡状態にある場合の凝縮相反応について、その動的な側面を統一的に扱える理論の構築を最終的な目的とし、本年度は以下の研究を行なった。1)1/f型揺らぎを受ける系の反応ダイナミックス:準安定領域から粒子が逃散する系において、1/f型のパワー・スペクトルを持つノイズが作用している場合の平均逃散率の時間変化をシミュレーションにより調べ、白色ノイズの場合と比較した。白色ノイズの場合、平均逃散率は速やかに一定値に収束するが、非白色ノイズの場合、平均逃散率は前者より数倍大きくかつ非定常的であることが見い出された。この結果は、1/f型ノイズでは一方向への力がある時間にわたって連続的に生成されるため、両方向の力がほぼ交互に生成される白色ノイズに比べ準安定状態から逃散し易くなるためと考えられる。2)凝縮相の有効反応ダイナミックスの研究:環境系の揺らぎが必ずしもGauss型のような単純なものにならないこと及び揺らぎ等が環境系の個性を反映していることを考慮しつつ凝縮相反応を扱うため、一般化されたFokker-Planck方程式の研究を行なった。全系のハミルトニアンが環境系部分、反応系部分及び相互作用部分の和で与えられる場合についてLiouville方程式をPρ≡e^<βw(x)>e^<-βV>ρ^<eq・>_e∫dXρで定義される演算子を用いて縮約することにより、射影演算子を陽に含まない反応系の発展方程式を導くことができた。3)非平衡状態に関する原理的研究:多重パイこね変換と呼ばれる数理モデルにおいて、拡散過程と密度分布関数の発展演算子の関係、Fick則に従う非平衡状態の研究を行い、可逆な力学と非可逆変化に伴う非平衡状態を両立させるためにフラクタルな分布が重要な役割を果たしていることが分かった。
会計基準とその経済的効果-「投資税額控除」会計基準について

わが国政府は、昭和63年度から海外油田の買収に対する促進税制として「石油供給安定化投資促進税制」を創設した。これは、日本の石油会社や商社などが海外で生産中の油田を買収した場合に、取得価額3.5%相当額の税額控除または初年度の取得価額の15%相当額の特別償却を選択できるというものである。日本鉱業(株)は、昭和63年3月末アメリカの大手石油会社コノコから石油鉱区権を買収し、約1,000億円にのぼる石油公団の投融資を受け一挙に11社の探鉱・開発会社を設立した。同社は将来、原油輸入量の三割の60,000バ-レルを自前原油にする計画で、その資金は10億ドルを越えるという。日本石油(株)、石油資源開発(株)、出光石油開発(株)も鉱区や生産井戸の買収を検討している。このような投資税額控除は、アメリカにおいて1962年歳入法によりはじめて導入され、その後67年、71年にも制度化している。税金が免除されるのでそれに相当する損益計算書上の税引後純利益が増加するが、問題は、その純利益は何時の時点で実現するかということである。これについては、基本的には二つの異なる見解がある。一つは、投資税額控除を税金の減額とみる立場(「即時繰入法」といわれる)であり、他は取得資産の減額とみる立場(「繰延法」といわれる)である。理論的には、井尻雄士教授は「繰延法」を支持し、ケラ-教授(T.F.Keller)は「即時繰入法」を支持している。ヘンドリクセン教授(E.S.Hendriksen)は、「どちらの方法を決定するかについて結論的な証拠を提供することができない」という。問題は「利益」とは何か、有形償却資産の「価値」とは何か、である。このような基本的問題の解決を中心にすえながら、会計基準の「経済的効果」を検討することが必要である。
芸術的感性におけるスピリチュアリティの占める位置に関する量的及び質的研究

スピリチュアリティと芸術やデザインの創作活動との関係を探求するために、美大学生を対象に大規模調査を実施した。スピリチュアリティ及び家族イメージに関する質問項目を設定した上で、本調査研究の特色として色彩を用いた回答を採用したことが挙げられる。調査の結果、母のイメージスペクトルは父のイメージスペクトルとほぼ補色残像関係にあること、及びスペクトル全体を眺めると、色選択比率の割合が母と父でほぼ逆転の関係になっていることの2点が明らかにされた。(219字)本研究は、芸術的感性なるものの実態を把握すべく、特にその中のスピリチュアルな感性や色彩感性等との連携的・総合的検討を試みんとする目的のものである。研究計画当初においては、平成25年度に色イメージについてのみの新規質問紙調査を実施する予定であったが、それでは色彩感性とスピリチュアリティの関係性を追究しにくくなると判断したため、計画を若干変更し、それらを総合して判定できうるような質問紙の作成を試みることとした。平成24年に報告した「生・死・死後の色のイメージ」の論考を拡大すべく、平成25年度前半期においては、色とスピリチュアリティとの双方を一度に研究する方法を目指して、新たに全88の問いから成る質問紙の開発に専念した。そして、平成25年12月から平成26年1月にかけて、予定通り、新規作成の「色・五感・心理等に関するイメージ調査」を印刷し、東北芸術工科大学、秋田県立大学及び山形大学の3大学において調査を実施することができた。因みに、この質問紙作成には、日本カラーデザイン研究所の杉山朗子先生の協力を得て、28色のカラーサンプル表を添付して回答できるように工夫を凝らした。質問紙の内容は、趣味・嗜好、感情と色、五感と色、人間関係と色、生育環境と色、死生観と色、スピリチュアリティ全般という7種の領域の構成から成る。東北芸術工科大学では、全学部生約2,000人のうち、1,272人の回答を、秋田県立大学では176人の回答を、山形大学では98人の回答を得ることができた。特に、東北芸術工科大学における約6割の回答率を得られたことは貴重なデータとして、今後の分析にさらなる強力な推進力となるであろう。上記3大学の回答結果の集計作業も平成25年度末ぎりぎりで終えることができた。昨年度はまず、調査結果の中から、父と母の色のイメージについての2つの質問項目に対する回答結果の整理と分析を行った。その研究報告を、印度学宗教学会(6月於種智院大学)と日本宗教学会(9月於同志社大学)のそれぞれの学術大会において口頭発表した。そして、それらを各学会の学会誌で論文掲載した。そこにおいては、特に、父と母の色のイメージが、ちょうど色相環における補色残像関係を示しているという特徴を指摘した。散布図を作成してみると、両親の色イメージの補色同士の組み合わせ型に大きく色相派と色調派の2つの集団が見て取られ、さらに、色相派には、純色群、明暗群、父性穏健群、重厚群という4つのグループが、また、色調派には、明暗群と強弱群と柔和群の3つのグループが確認された。つまり、イメージ色からの両親の関係として、〈明るい母:淡い父〉、〈濃い母:濃い父〉、〈淡い母:濃い父〉、〈やさしく穏やかな母:明るく鮮やかな父〉、〈淡い母:淡い父〉などというような夫婦像が推測されることを示唆した。最後に挙げた例(父母ともに淡い)の色イメージの色調派穏健群のグループは男性よりも女性に広範囲に分布していることも確認された。散布図の上では、色相派と色調派の2つの集団が上記のような7つのサブ・グループに分かれつつ、3つの領域に分布していることを示した。今後、このような分析が、新たな家族観の発見や創造につながっていくことを期待して論を置いた。詳細は『東北芸術工科大学紀要』第22号、2015年、pp.8-9、164-173にて論じた。今年度は6月の印度学宗教学会学術大会(於東北大学)と9月の日本宗教学会学術大会(於創価大学)において、主に、兄弟姉妹の色イメージについての分析を行い、研究発表を行った。前者は『印度学宗教学会論集』42号(2016)に論文を寄稿し現在校正中。後者は前者の要約として、『宗教研究』第89巻別冊(第74回学術大会紀要特集)pp.225ー226に掲載された。また、別途、「色彩評価に基づく人間関係イメージの分析」というタイトルの論文を執筆中である。そして、3年間の科研期間の一応の締めくくりとして、『東北芸術工科大学紀要』23号(2016、3)に「「色・五感・心理等に関するイメージ調査」(2013)結果第1次データ集」(pp.1-176)を公開することができた。これによって、まずは調査結果の全貌を自由記述部分も含めて被験者からも容易にアクセスできるようになった。

(219字)先述のように、昨年度はまず、家族関係の中の両親の色イメージの集計とその分析に終始した観がある。2つの質問項目のみの分析ではあるが、恐らくこれまで実証的かつ明確に指摘されたことがないと思われる父母の補色残像関係について指摘することができ、また、イメージの分布状況に関して7種のグループの存在にも気付くことができた。そして、このことを2つの学会で研究報告し、それらを3つの論文にて公表することができた点はよしとしたい。ただ、あまりにも分析範囲が限定されたため、その後に予定していた質的研究(インタビュー調査)に至ることができなかった。ある程度まとまった結果や分析を前提にすることによって、質的研究の性格や方向も決まってくることも次第に判ってきた。上記『東北芸術工科大学紀要』23号掲載の「「色・五感・心理等に関するイメージ調査」(2013)結果第1次データ集」収録インド思想、宗教学今後は、まず家族関係の色イメージについて、上記の研究に加え、兄弟姉妹の色イメージに関する研究を実施したい。それにより、はじめて家族関係の色イメージの全体像が把握できるだろう。両親に対して、兄弟姉妹への色イメージの選択に何らかの特徴的傾向性が指摘できるのかどうか、具体的に検証する。そして、それらの結果から、現代の家族関係の色の視点からの意味を析出したい。さらに、質問項目の後半部の、スピリチュアリティに関する分析についても、論文をまとめて、公表したい。どの項目についての分析にするかはこれから共同研究者と協議して決定する。質的研究に関しては、やはりそれらの基礎的結果の分析を出し終えた段階で改めて方法論そのものから再考したいと考えている。当初は平成25年度においては、色彩感性に特化した質問紙調査を予定していたが、上記のように、色のイメージとスピリチュアリティとの双方の関係を一度に分析・研究できる新規の質問紙の開発を行うことができた。そして、平成25年度内に、東北芸術工科大学等の3大学において、調査をかなり大規模なかたちで実施することができた。さらに、この調査の集計作業も年度内ぎりぎりで済ませることができた。したがって、今後に展開される分析や研究にとって十分な量の貴重なデータを獲得することができた。年度後半は質的調査を開始する予定であったが、いまだ量的調査(回答のグラフ化や分析)の一部のみが発表された進捗状況であったので、それは時期尚早であると判断したため。質的調査を開始するためには、もっと十分な回答分析結果の集積を前提として開始した方が妥当であると判断した。質問紙「色・五感・心理等に関するイメージ調査」の集計結果を十分に活用すべく、特定の領域ごとに分析を試みていく。今回の東北芸術工科大学における調査結果は、各学科・コースごとに提示しようとしているので、これから膨大な数の表やグラフ等の作成が必要になる。まずは、人間関係の色イメージの分析を実施する予定である。つまり、母や父などが何色のイメージで捉えられているのか、そして、家庭や学校における自分の色のイメージは何色なのかということなどの集計データの図表化と、それらに対するできうるかぎりの分析を学会において報告する予定。久保田が、まず6月に印度学宗教学会において、また、9月に日本宗教学会において研究発表を予定している。膨大な数のグラフや図表を個人で作成することは不可能なので業者に依頼しているところであるが、予算が大幅に不足する危惧を感じている。