hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
選択的エストロゲン受容体調節薬の子宮内膜間質および平滑筋における造腫瘍能の解析

選択的エストロゲン受容体調節薬の子宮内膜間質および平滑筋における造腫瘍能の解析のために,正常子宮内膜,ポリープ,子宮内膜癌,タモキシフェンに関連したポリープ,子宮内膜癌について免疫組織学的な検討を進めている。SWI/SNFクロマチン再構成複合体の主要な構成単位の一つであり,estrogenreceptor(ER)を介し転写を調節することが報告されているBrg1-associated factor57(BAF57)の蛋白質発現について,2006年10月より2007年12月までに,増殖初期5例,増殖中期7例,増殖後期3例,分泌期初期から中期6例,分泌後期7例,Arias-Stella反応5例,ピル内服内膜3例,子宮内膜癌15例を免疫組織学的に検討した。本研究は当大学倫理委員会の承認を受けている。BAF57は腺上皮では,核より細胞質に強く発現を認めた。月経周期では増殖初期では発現は弱く,増殖後期に向けてその発現は上昇し,分泌後期で強い発現を認めた。間質細胞は増殖期初期より,核に染色され,増殖中期から分泌期にかけてその発現が増強した。分泌期後期で偽脱落膜反応を起こしている部分では,核と共に細胞質にも染色された。Arias-Stella反応腺上皮は細胞質に強染し,脱落膜では核と細胞質共に強染した。子宮内膜癌では核,細胞質とも発現を認めた。この結果の一部は第44回日本婦人科腫瘍学会での発表を予定している。また間質系腫瘍との関係が指摘されているHMGB1またその関連蛋白質の発現についても検討し,第60回日本産科婦人科学術講演会に発表する。平成20年2月9日11th BREAST CANCER UP-TO-DATE Meeting(神戸)にてタモキシフェンに関連した子宮内膜癌の発症についての演題で講演を行った。選択的エストロゲン受容体調節薬(SERM)の子宮内膜間質および平滑筋における造腫瘍能の解析を行っていたが、SERMによる細胞の形態学的変化についてまとめActa Cytologicaに掲載待ちである。また、正常子宮内膜、ポリープ、子宮内膜癌、タモキシフェンに関連したポリープ、子宮内膜癌について免疫組織学的な検討を進めている。そのなかでHMG(high mobility group)蛋白質がエストロゲン受容体や腫瘍化に対して重要な役割を果たしている可能性が示唆された。特にSWI/SNFクロマチン再構成複合体の主要な構成単位の一つであり、estrogen receptor(ER)を介し転写を調節することが報告されているBrgl-associated factor 57(BAF57)の蛋白質発現について、子宮内膜癌111例について検討したところBAF57が子宮内膜癌の独立した予後因子であることがわかった。また子宮平滑筋肉腫でも高発現を認めており、今後症例を増加して検討する予定である(2009年4月第61回日本産科婦人科学会で報告予定)。また同様にHMG蛋白質であるmitochondrial transcription factor A(mtTFA)についても検討を加えた。mtTFAはミトコンドリアのDNAの転写活性に関与していると考えられているが、この蛋白も子宮内膜癌の有意な予後因子であった(2009年4月第61回日本産科婦人科学会で報告予定)。このことは子宮内膜の造腫瘍能の形成には、ミトコンドリアの異常が関与している可能性も示唆された。今後はSERMによる造腫瘍能におけるHMG蛋白質の関与についてさらに検討を進めることを予定している。
ディラック方程式の境界値逆問題について

3次元空間の滑らかな有界領域上で、電磁場に対応するポテンシャルをもつディラック作用素を考える。適当なポテンシャルの仮定のもと、標準的な表現の場合、定義域の4成分のうち、第1,2成分にディリクレゼロの境界条件をつけた適当な定義域で自己共役作用素になる。これより、第1,2成分のディリクレ境界値を与える境界値問題が一意的に解けるとき、その解の第1,2成分の境界値に対し、第3,4成分の境界値を対応させる写像(D-D map)が定義される。ここでは境界値逆問題のひとつとして、一意性、すなわちポテンシャルからこのD-D mapの対応の単射性を調べた。境界値の関数空間をCarderon projectorを用いて厳密に構成し、この順境界値問題が自然な関数空間で解けるようになり、D-D mapの定義も自然になった。ポテンシャルに滑らかさを仮定し、複素幾何光学解(複素の周波数をもつ遠方で指数的に増大する解)の構成においてintertwining propertyといわれる性質を用い、一意性が証明された。また境界でスカラーポテンシャルが消えていないとき、D-D mapの表象の漸近展開を書きくだすことができ、境界において磁場とスカラーポテンシャルの同定が可能となった。また散乱逆問題と我々の境界値逆問題との関係を明らかにした。更に、一般の条件の下では、伝導体の逆問題における方法を応用しディラック方程式の特異解を構成し、その解の特異点を境界に近づける極限操作により境界のその点での同定が行われる。特異性を強くするに従い同定される導関数の次数も増える。ここでは境界値逆問題のひとつとして、一意牲、すなわちポテンシャルからこのD-Dmapの対応の単射性を調べた。前年度、ポテンシャルに滑らかさを仮定し、複素幾何光学解〈複素の周波数をもつ遠方で指数的に増大する解)の構成においてintertwining propertyといわれる性質を用い、一意性が証明された。また境界でスカラーポテンシャルが消えていないとき、D-D mapの表象の漸近展開を書きくだすことかでき、境界において磁場とスカラーポテンシャルの同定が可能となった。
アナンダマイドと静脈麻酔薬との関係に注目した敗血症性ショックの治療法の開発

<背景と目的>前年度、血中アナンダマイドの測定を高速液体クロマトグラフィーで行い定量化できずに終了した。今年度Gas chromatograph/Mass spectrometerにより血中アナンダマイドを測定し、ラットを用いたエンドトキシンショックに対する各種静脈麻酔薬におよぼす影響を検討した。<方法>Wister系ラットを用いペントバルビタールを腹腔内投与することにより麻酔した後に、気管切開、動静脈路を確保し、15分程安定させた。その後、エンドトキシンを静脈内投与してショツクモデルを作成し、経時的に循環動態、呼吸状態を観察した。さらに、サイトカインおよびアナンダマイドを測定のために採血を行い、アナンダマイドはGas chromatograph/Mass spectrometerにより測定を試みた。静脈麻酔薬としては、ケタミンとプロポフォールを用いエンドトキシン投与と同時に各麻酔薬を投与し、その影響を検討した。評価としては、循環動態の変動と血中アナンダマイドの変動との関係を検討した。<結果と考察>エンドトキシン静注後、ラットは5時間以内にショック状態に陥った。その時のサイトカインはTNF-alphaは2時間目をピークに上昇し、IL-6は上昇し続けた。Gas chromatograph/Mass spectrometerによりアナンダマイドはエンドトキシン投与後5時間で489±258ng/mlまで上昇することが判明したが、ばらつきが大きく、静脈麻酔薬(ケタミン、プロポフォールとも)による影響を評価することは困難であった。今回、アナンダマイドの定量測定は可能であり、エンドトキシン投与後血中アナンダマイドは上昇することが判明したが、ばらつきが大きくエンドトキシン血症時の静脈麻酔薬の効果を判定するにはさらなる検討が必要と思われた。<背景と目的>これまでに敗血症と各種麻酔薬に関する研究を行い、麻酔薬の一部に抗炎症作用を有するものがあることを見い出し、敗血症時の鎮静薬として有用な麻酔薬を指摘している。近年、敗血症性ショックにおいて内因性マリファナであるアナンダマイドが早期に惹起され、ショックに大きく関与されていることが判明した。そこで、ラットを用いた敗血症性ショックモデルにおいて血中アナンダマイド濃度の変化を測定した。<方法>Wister系ラットを用いペントバルビタールを腹腔内投与することにより麻酔した後に、気管切開、動静脈路を確保し、15分程安定させた後にエンドトキシンを静脈内投与してショックモデルを作成する。経時的に循環動態、呼吸状態を確認し、サイトカインおよび、アナンダマイドを測定した。アナンダマイドは高速液体クロマトグラフィー(HPLC)にて測定を試みた。しかしながら、アナンダマイドはHPLCを利用した測定では単一のピークを形成せず定量化することができなかった。そのため、エンドトキシン投与後にアナンダマイドが上昇するのかどうかさえ判明しなかった。今回の結果を踏まえ、アナンダマイドの定量をHPLCからGas chromatograph/Mass spectrometerによる測定法に変更し、検討していくつもりである。
寄生原虫におけるプロスタグランジン合成酵素の分子生物学的解析と医薬品開発への応用

我々は、アフリカ睡眠病の病原寄生虫であるTrypanosoma brucei、リーシュマニア症の病原寄生虫であるLeishmania major、シャーガス病の病原寄生虫であるT.cruziが、哺乳類の代謝系とは薬剤感受性の異なるプロスタグランジン(PG)生合成系を持つことを発見した。そして、これらの寄生原虫のPGF合成酵素のcDNAをクローニングし、大腸菌を用いて遺伝子組換え型酵素の発現と精製を行なった。その結果、T.bruceiとL.majorのPGF合成酵素は、共に、アルド・ケト還元酵素遺伝子ファミリーに属する分子量34,000蛋白質であり、T.cruziのPGF合成酵素は旧黄色酵素遺伝子ファミリーに属する分子量42,000のフラビン蛋白質であることを証明した。そして、大腸菌を用いて発現したT.bruceiとT.cruziのPGF合成酵素の結晶化に成功し、T.bruceiのPGF合成酵素については、大型放射光施設SPring8でのX線回折データの収集を行ない、2.6Å分解能の結晶構造を決定した。さらに、住血吸虫Schistsoma mansoniのPGD合成酵素がグルタチオン転移酵素遺伝子ファミリーに属する分子量28,000の蛋白質(Sm28GST)であることを証明した。そして、S.mansoniが宿主の皮膚での寄生を持続させるために、PGD_2を分泌して、宿主のPGD_2受容体(DP受容体)を刺激し、皮膚の抗原提示細胞(ランゲルハンス細胞)のリンパ節への移動を抑制し、宿主の免疫系による攻撃から逃れることを、DP受容体遺伝子欠損マウスへの感染実験により証明した。
質量分析装置を用いたＳｍａｌｌ－ｃｏｌｏｎｙ　ｖａｒｉａｎｔｓの菌種同定法の検討

本研究では、様々な菌種において持続的な細胞内での代謝不活性状態から生じる小型コロニー変種であり、様々な栄養素を要求する栄養要求性変異株の総称であるBacterial small-colony variants(SCVs)について、生化学的性状と必要としない菌種同定検査方法である質量分析計を用いた菌種同定の検討を行い、その有用性について検討を行った。本検討では、対象として2008年2014年の間に臨床材料から分離されたStaphylococcus属、Enterococcus属、腸内細菌科のチミジン要求性菌29株、ヘミン要求性菌7株、オレイン酸要求性菌5株、CO_2ガス要求性菌3株菌計44株を用い、分子生物学的同定検査法と質量分析計を用いた同定検査を行い、その結果を比較した。本検討の結果、分子生物学的同定と質量分析計を用いた同定にて挙げられた菌名は全て一致した。しかしMALDI法での前処理をOn plate法で実施した場合、全て同定スコアが≧2.00となり菌種レベルでの同定となったが、エタノール・ギ酸抽出法によるオレイン酸要求性Staphylococcus epidermidisとヘミン要求性Staphylococcus capraeの同定スコアはそれぞれ平均1.83、1.91となり、挙げられた菌種は正しい結果であったものの属レベルでの同定と判定された。質量分析計を用いた同定でのエタノール・ギ酸抽出法にて同定スコアが若干低くなる菌株が見られたが、SCVsの菌種同定が可能と考えられた。SCVsは細胞内代謝が不活性な状態であるが、質量分析計を用いた同定におけるリボソーム蛋白を主とするマススペクトルパターンに影響を与えないと考えられた。質量分析計による細菌同定検査はSCVsの同定検査にも有用である。
標準的分割を用いたカスプ付き3次元双曲多様体の可視化

今年度は,昨年度までの研究成果として得られていた,一点穴あきトーラス群の研究を一般種数に拡張することを目標とした.McShaneの恒等式と呼ばれるタイヒミュラー空間上で定値となる無限級数は,一点穴あきトーラスの場合にはBowditchにより擬フックス空間上の恒等式へと拡張されていた.そこに現れる級数の部分級数を考えることで,極限集合の幅を表す恒等式を昨年度までの研究で発見したていたが,それを一般種数の穴あき曲面へと拡張することを目標とした.2003年7月21日から8月15日の期間,ケンブリッジ大学ニュートン研究所(イギリス)で行われた研究プログラム「クライン群と双曲的3次元多様体の空間」へ参加し,ウォーリック大学のSeries氏,カリフォルニア工科大学のBromberg氏らと議論を重ねることで,その目標を達成することができた.同時に,一点穴あきトーラスの場合にBowditchが発見した異なる部分級数で,円周上の曲面束のカスプトーラスのモデュラスを表す式を,一般の種数の場合に拡張することにも成功した.その成果を,作間誠,宮地秀樹の両氏との共著論文としてまとめた.上記の研究の過程で,双曲多様体に含まれる滑らかな閉曲線と,その曲線に自由ホモトピー同値な測地線との距離を,共変微分の絶対値という局所的な量を用いて評価した.私は,その結果が実は一般の負極率多様体に対しても同様に正しいということに気づき,証明することに成功した.昨年度までの研究で,穴あきトーラスの擬フックス空間とその境界に含まれる群(穴あきトーラス群)のフォード基本領域の組み合わせ構造の記述が得られている.今年度,5月6日から6月28日までイギリスのWarwick大学にし,同大学のSeries氏らと議論をしたことにより,組み合わせ構造の記述のために用いた不変量が,穴あきトーラス群による3次元双曲空間の商空間として得られる双曲多様体の無限遠境界に現れるリーマン面の等角構造を用いて定義される,よく知られた不変量と関係を持つことを証明することができた.その応用として,境界群における組み合わせ構造の実現可能性が導かれる.また,逆に,等角不変量から多様体の構造をより具体的に知ることも可能となった.同様の考察を一般の種数の曲面群へと拡張するために,3次元球面内のファイバー結び目のある無限族を考察した.この族は,A'Campo氏によるある種のファイバー結び目の記述の中で最も基本的な族とされていると同時に,ファイバーとして現れる曲面の種数が発散する族でもある.その標準的分割の記述には,昨年度得られた標準的分割のデーン手術理論が適用でき,すでに組み合わせ構造の記述は得られている.今年度は,標準的分割とファイバー構造との関連を考察した.その結果,円周上の穴あきトーラス束の標準的分割の組み合わせ構造の記述から,最初に期待される「ファイバー曲面は標準的分割の2次元骨格にアイソトピックであろう」という性質は満たされないことが判明した.標準的分割とファイバー構造との関連の解明は来年度の課題である.今年度は,昨年度までの研究成果として得られていた,一点穴あきトーラス群の研究を一般種数に拡張することを目標とした.McShaneの恒等式と呼ばれるタイヒミュラー空間上で定値となる無限級数は,一点穴あきトーラスの場合にはBowditchにより擬フックス空間上の恒等式へと拡張されていた.そこに現れる級数の部分級数を考えることで,極限集合の幅を表す恒等式を昨年度までの研究で発見したていたが,それを一般種数の穴あき曲面へと拡張することを目標とした.2003年7月21日から8月15日の期間,ケンブリッジ大学ニュートン研究所(イギリス)で行われた研究プログラム「クライン群と双曲的3次元多様体の空間」へ参加し,ウォーリック大学のSeries氏,カリフォルニア工科大学のBromberg氏らと議論を重ねることで,その目標を達成することができた.同時に,一点穴あきトーラスの場合にBowditchが発見した異なる部分級数で,円周上の曲面束のカスプトーラスのモデュラスを表す式を,一般の種数の場合に拡張することにも成功した.その成果を,作間誠,宮地秀樹の両氏との共著論文としてまとめた.上記の研究の過程で,双曲多様体に含まれる滑らかな閉曲線と,その曲線に自由ホモトピー同値な測地線との距離を,共変微分の絶対値という局所的な量を用いて評価した.私は,その結果が実は一般の負極率多様体に対しても同様に正しいということに気づき,証明することに成功した.
子宮頸部腺癌の発現遺伝子解析と分子標的治療の開発

1.子宮頸部腺癌の発現遺伝子解析まず手術摘出10症例の子宮頸部腺癌および正常子宮頸部組織からRNAを抽出し、profiling PCR法(iAFLP法,ATAC-PCR法)により約20000種類の遺伝子の発現を検索。この結果とこれまでに報告されている癌関連遺伝子の文献的考察から、子宮頸部腺癌に関係のある遺伝子を約2000種類に絞り込んだ。現在この約2000種類の遺伝子について、レーザーマイクロダイセクションシステムLCMによりコンタミネーションなく回収した子宮頸部腺癌病変・正常頸部腺管から抽出したRNAを用いて、profiling PCR法でその発現を解析している。これまでの解析データから頸部腺癌に関わる遺伝子の候補としてp16やRASSF1Aなど数十種類の遺伝子が挙げられる。2.遺伝子ごとのスコアリング(重み付け)による診断システム・治療法選定システムの確立現時点では、LCMにより回収したRNAを用いたprofiling PCR法による解析症例数が少なく、統計学的検討は行えておらず、今後解析を進めていく予定である。3.子宮頸部腺癌の前癌病変に対する検討子宮頸部腺癌の前癌病変はAIS(adenocarcinoma in situ)とされている。今回の検討により、AIS7症例中5症例(71%)において子宮頸部扁平上皮癌の前癌病変CINの合併が認められたが、HPV感染・クロナリティー・p16・RASSF1Aなどの解析から、AISとCINは同じ型のHPVによりそれぞれ独立して形成されることが判明した。この知見については第57回日本産科婦人科学会の口演で報告する。
心血管病における心臓周囲脂肪ミトコンドリアの役割

心臓周囲脂肪(EAT)は異所性脂肪の一種であるが、近年EAT量の増加が冠動脈硬化の重症度と関連があることが報告された。一方、EATの質的変化が冠動脈硬化に及ぼす影響については明らかにされておらず、本研究では心臓手術で採取されるEATを用いて脂肪組織の代謝能などを評価した。非動脈硬化性心疾患患者と比べて冠動脈疾患患者ではEATミトコンドリア呼吸能が低下しており、EAT由来のアディポネクチン産生量と正の相関を、冠動脈疾患の重症度と負の相関を示した。したがって、EATにおけるミトコンドリア機能障害が少なくとも一部はアディポネクチン産生能低下を介して、冠動脈硬化の進行に寄与する可能性が示唆された。まず心大血管手術で採取される心臓周囲脂肪組織のミトコンドリア呼吸能およびミトコンドリア由来の活性酸素種産生能を高感度ミトコンドリア呼吸能測定装置および付属の蛍光吸光度計で安定して測定できることが確認された。冠動脈疾患(Coronary artery disease; CAD)群では、Control群と比較して心臓周囲脂肪組織におけるミトコンドリア呼吸能が低下しており、心臓周囲脂肪組織ミトコンドリア機能異常を認める可能性が示唆されている。また心臓周囲脂肪組織におけるミトコンドリア由来の活性酸素種産生能についても、CAD群で増加傾向にあり、CADでは心臓周囲脂肪組織の酸化ストレスが亢進している可能性がある。今後はさらに症例数を増やし、心臓周囲脂肪ミトコンドリア機能に関する各種指標と疾患重症度、心臓周囲脂肪体積、炎症マーカー、酸化ストレスマーカーなどとの相関を調べ、心臓周囲脂肪ミトコンドリア機能異常が心血管病の発症・進展に及ぼす影響について、詳細な解析を行う予定である。これらの解析の後、学会発表および論文投稿を行い、内外に結果を発信していく。2015年6月4日に北海道大学病院自主臨床試験審査委員会で承認され、これまでにCAD群13例・AS群3例・Control群3例が試験参加した。心大血管手術で採取したサンプルを使用して心臓周囲脂肪におけるミトコンドリア機能解析を行っているが、安定した測定結果が得られており、研究は概ね順調に進行している。近年内臓脂肪や筋内脂肪などの異所性脂肪の蓄積がインスリン抵抗性や臓器障害の原因となりうることが報告されるようになり、様々な疾患・病態における異所性脂肪の役割に注目が集まっている。冠動脈や心臓を取り巻くように分布する心臓周囲脂肪組織(EAT; epicardial adipose tissue)も異所性脂肪の一種であるが、最近冠動脈疾患(CAD; coronary artery disease)患者では心臓周囲脂肪が蓄積していることが報告された。しかし、EATの蓄積が冠動脈病変の進行にどのように関与するか詳細なメカニズムは明らかにされていない。本研究では、『EATの量のみならず質の変化が冠動脈硬化の進行に関与する』という仮説を立て、EATミトコンドリアの役割に着目し、心大血管手術で採取されるEATを用いて、EATにおけるミトコンドリア機能障害が冠動脈硬化の進行に関与することを明らかにする。冠動脈バイパス術などの心大血管手術を受けるCAD患者をCAD群、動脈硬化のない心疾患(弁膜症など)に対して心大血管手術を受ける患者をcontrol群とし、2群で比較検討を行うこととした。すでに北海道大学病院・手稲渓仁会病院の倫理委員会で承認され、これまでにCAD群14名・control群11名が参加し、各種検査・評価を実施した。CAD群では、control群と比較してEATにおけるミトコンドリア呼吸能が低下していた。さらにEATミトコンドリア呼吸能低下がCADの重症度と相関を認めることが明らかとなった。北海道大学病院および手稲渓仁会病院の倫理委員会で承認され、臨床研究を実施中である。これまでにCAD群14例・Control群11例が試験参加した。心大血管手術で採取したサンプルを使用してEATにおけるミトコンドリア機能解析を行っているが、安定した測定結果が得られており、研究は概ね順調に進行している。現在論文投稿へ向けて準備中である。本研究では、冠動脈バイパス術などの心臓手術を受ける際に採取されるEATを利用し、CAD患者におけるEATミトコンドリア機能を評価することにより、冠動脈硬化の進行におけるEATミトコンドリアの役割を調査した。なお、動脈硬化と関連のない心疾患(弁膜症など)に対する心臓手術を受ける患者を対照群(non-CAD群)に設定した。CAD群(n=14)では、non-CAD群(n=11)と比較して、EATミトコンドリア呼吸能が有意に低下していた。また、EATミトコンドリア呼吸能は、冠動脈狭窄の重症度(Gensiniスコア)と負の相関を認めた。一方、CAD群では、CT上EAT体積が有意に増加していた。さらにEATにおいて、CAD群では抗動脈硬化作用を有するアディポネクチン産生量が低下しており、EATミトコンドリア呼吸能とアディポネクチン産生量は正の相関を認めた。

本研究の成果により、EATにおけるミトコンドリア機能障害がアディポネクチンの産生能低下を介して冠動脈硬化の進行に寄与する可能性が示唆された。心臓周囲脂肪(EAT)は異所性脂肪の一種であるが、近年EAT量の増加が冠動脈硬化の重症度と関連があることが報告された。一方、EATの質的変化が冠動脈硬化に及ぼす影響については明らかにされておらず、本研究では心臓手術で採取されるEATを用いて脂肪組織の代謝能などを評価した。非動脈硬化性心疾患患者と比べて冠動脈疾患患者ではEATミトコンドリア呼吸能が低下しており、EAT由来のアディポネクチン産生量と正の相関を、冠動脈疾患の重症度と負の相関を示した。したがって、EATにおけるミトコンドリア機能障害が少なくとも一部はアディポネクチン産生能低下を介して、冠動脈硬化の進行に寄与する可能性が示唆された。CAD群と比較して、AS群およびControl群の患者数の割合が少なく、AS群・Control群の参加者数を増やすことが今後の課題である。この課題を克服するために、平成28年度よりASを含む心大血管手術件数の多い手稲渓仁会病院が本研究に参加することとなり、準備を進めている。これまで概ね順調に研究を遂行できている。今後症例数をさらに増やすとともに、EATの組織学的評価や炎症性サイトカインなどの遺伝子発現・蛋白合成量の測定を行い、EATの質の低下が冠動脈硬化の進行に及ぼす影響についてより詳細に調べる予定である。ミトコンドリア生理学心臓周囲脂肪組織におけるミトコンドリア機能に関連する分子の遺伝子発現量を当該年度にまとめて行う予定だったが、サンプル数が十分ではなく、次年度に測定を行う予定となった。心大血管手術で採取された心臓周囲脂肪組織を用いて、ミトコンドリア機能に関連する分子の遺伝子発現量を測定する。
細胞膜脂質フリップフロップ促進ペプチドの開発

細胞膜のフリップフロップ(リン脂質分子が二重層を横切る移動)が促進されることによるホスファチジルセリン(PS)の細胞表面への露出は、貪食細胞がアポトーシス細胞を認識するためのシグナルである。最近、人為的にPSを露出させた場合でも、貪食細胞がPS露出細胞を消化することが明らかになった。そこで、細胞膜のフリップフロップを促進できれば、貪食細胞を利用して細胞を除去できるのではないかと考えた。本研究では、細胞に添加するだけでフリップフロップを促進するペプチドの開発を目指す。本研究により、細胞膜フリップフロップを促進できることを検証できれば、将来的にがんをターゲットにした治療法の開発に繋がる。
２１世紀の学校運動部活動の在り方に関する探求

日本の運動部活動(もしくは部活動、部活、学校スポーツ)は、世界的にみて珍しいシステムである。20世紀まで、部活動は色々な問題を孕みながらも、学校教育に貢献してきた。しかし、21世紀となった今日、部活動の役割を大きく見直す時期にきている。運動部活動の1番の問題は、勝利至上主義とどのように向き合っていくかである。本研究は、スポーツにおいて勝利至上主義は批判されるものではないことを明らかにした。むしろ問題は、運動部活動の設計である。いくつかの事例を引きながら、運動部活動が進むべき途を提言した。今年度は、日本における学校と社会の関係性を把握するため、学習指導要領の系譜と社会の変容を俯瞰的に史観しながら、部活動の歴史的な役割と機能を再整理した。すでに筆者の先行研究では、体育教師のエートスに着目しながら、部活動の課題を明らかにしている。しかし、この研究には、同時にいくつかの課題もある。1つは、20世紀と21世紀の体育教師像が同じで良いのかどうかが論じられていないこと、2つめは部活動と社会との関係性が論じられていないこと、3つめは、部活動を考察する上での新たな視座の提出に留まり、これからの部活動の在り方が論じられていないこと、であった。これらの三つの指摘を分析することによって、20世紀の部活動の役割や機能を再整理することが今年度の研究目的であった。これまでの研究姿勢は、どちらかと言うと部活動を社会から独立した存在と捉え、とりわけ産業社会との関連性を考慮した論考が少ないことは否めなかった。すなわち、部活動が主体であり、学校が客体と成り、社会までを守備範囲とする視点が不足していたといえる。そこで今年度は、社会から学校を俯瞰し、部活動までを見通す視点を計画し、研究を進めることにした。20世紀の社会といってもそれを一括りにはできるものではないため、いくつかの断片に展開し分析する必要があった。その手掛かりとして、「学習指導要領」、「学徒(生徒)の対外試合について」などをもとに、戦後を「5つの時代」に区分した。第1の時代(1946年1960年)、第2の時代(1961年1978年)、第3の時代(1979年2000年)、第4の時代(2001年2010年)、第5の時代(2011年以降)である。「5つの時代」において、部活動と社会がどのように関係し、またどのように部活動が展開され運営(マネジメント)が成されてきたのか、進化論的な立場から考察し明らかにした。本研究では、比較文明論に依拠しながら、スポーツを単なる歴史的な要素として処理することではなく、むしろスポーツを人間の生活活動の「内殻」、精神活動(文化)の一つとして捉えなおし、ある一定地域の生活圏(文明)という「外殻」から通観しようとするものである。人間の自由な生活活動や精神活動という観点から、スポーツや教育を文明的な要素として捉えてみた場合、要素を問題とするよりは要素間の関係性の方が問題ということが示唆できる。文明の要素をどのように組み合わせ、プログラミングするのかという点にアイデンティティのかなりの部分が存在する。つまり、欧米のスポーツという文明要素を抽出し、それを、日本文明の中に投げ入れても機能しない。なぜならば、教育制度、家庭環境、社会福祉制度などがあまりに違いすぎるからである。そこで、日本、日本人にとってのスポーツ、特に学校スポーツというものが、日本文明の中でどのような役割や意味をもっていたのか考察を行ってきた。まずは、文明装置としてのスポーツについて整理しながら、スポーツがもつ文明的意味を理解するために、哲学、倫理学などの視点も加えて考察し、近代スポーツが日本へ移入した際、日本に対し、どのような影響を及ぼしたのか検討してきた。続いて、国際的に、子どもたちのスポーツ制度を、学校や地域社会との関係で類型化し、「学校型」「地域型」「学校地域型」を抽出した。日本は、アメリカなどとともに、「学校型」に分類されるが、中学・高校生に全国大会があるなどの点で、アメリカとも異なっているが分った。そして、21世紀の日本の学校スポーツの方向性について検討し、21世紀は知識基盤社会といわれているが、部活には一定の教育的な意義が認められているが、今のままでは「勝利至上主義」から脱却することもまた困難であるとも考えられる。こうした新しい視点から、今後の方策が徐々にみえてきた。日本の運動部活動は、世界的にみても独創的な学校スポーツの制度設計をつくった。この制度の注目すべきところは、人件費(教員)、施設整備(学校体育施設)、物品(生徒会)という元からある資源を最大限に活かしたことである。近代化をめざす貧しい時代であったがゆえ、「知恵」を働かせた日本的なシステムが出来上がったとみてよい。しかし、翻って「一高野球」が誕生し、日本的な「勝利至上主義」が登場することになった。戦後、アメリカは日本的な「勝利至上主義」を修正しようと指導する。学齢期の国民であれば誰もが自由に学校スポーツへ参加することを保障し、一部の選手のみが参加するのではなく、広く生徒が競技へ参加することができ、多額の経費を費やすようなことがないような制度づくりが進められることになる。それは、隠れたカリキュラムの一部として日本の学校教育に大きく貢献していくことになる。民主化した運動部活動へは多くの生徒たちが集まった。

同時に手狭な学校施設であるがゆえに大所帯となり、多くの補欠選手が誕生することになる。日本の学校スポーツは、基本的には自主性・自発性を尊重するものであるから門前払いはできない。そのため、「勝利至上主義」と「補欠選手」をどのようにマネジメントするかが重要となるが、そこは学校教育という場の利点が最大効果をうむ。「補欠選手」を単なる正選手(レギュラー選手)の競技力をサポートするだけの立場には置かない。正選手になれなかったとしてもバックアップ選手としての役割(応援、スカウティング)を与えることによって、教育の機会を提供したのである。運動部活動は学校スポーツである以上「勝利至上主義」を完全に避けることは出来ないが、勝利至上主義の「閾値を下げる」ための制度設計はいくらでも可能である。運動部活動は、学校、社会にとって新たな「智」を創造する機会となる可能性を秘めていることを提言した。日本の運動部活動(もしくは部活動、部活、学校スポーツ)は、世界的にみて珍しいシステムである。20世紀まで、部活動は色々な問題を孕みながらも、学校教育に貢献してきた。しかし、21世紀となった今日、部活動の役割を大きく見直す時期にきている。運動部活動の1番の問題は、勝利至上主義とどのように向き合っていくかである。本研究は、スポーツにおいて勝利至上主義は批判されるものではないことを明らかにした。むしろ問題は、運動部活動の設計である。いくつかの事例を引きながら、運動部活動が進むべき途を提言した。部活動あるいは学校スポーツは、戦後、広範に日本のスポーツを支え、ワールドカップやオリンピックの選手供給源として機能し、野球の甲子園大会などを通して人気を博してきたが、実は、国際的には極めて珍しいシステムであることを、ほとんどの日本人は知らない。平成25年度、平成26年度の調査から、今日まで形成されてきたわが国の部活動システムの全体像を明らかにすることができた。そして、これまでの部活動システムに対するアンチテーゼともいえる貴重な学校事例を俯瞰しつつ、21世紀の部活動が目指すべき理想像の輪郭が少しずつ見えつつある。経営学、教育学今年度の研究計画は以下の12の手続きで進めていく予定である。1平成26年度までに設計することができた「21世紀型部活動システムモデル」と、これまでの筆者の研究成果を比較検討する。比較検討の方法としては、平成26年度に提起した設計モデルの概念が筆者の先行研究である「部活動のない公立学校」と、どの程度の適合性があるのかについて検討する。2実用可能な21世紀型部活動システムモデルの構築として、研究協力校へ21世紀型部活動システムモデルについて報告を行う。そして、研究協力校がシステムモデルと不適合する部分、つまり役割不足や機能不全なところを教育現場と意見交換することにより、実用可能な21世紀型部活動システムモデルを最終的に構築していく。今年度の研究成果を学位博士論文(経営学)の1部(第2章)としてまとめることができた(2013/3/21、受理)。当初の計画通りに研究を進める。本年度は2年目であるため、これまでの分析と考察より知識基盤社会が求める部活動の更なる探求を行うことが究極的なねらいとなる。具体的には、研究協力校へ出向き、フィールドワークを通じた部活動と教科教育外の課外活動の取り組みについて検討する予定である。
モデル動物を用いた糖・脂質代謝調節における異所性脂肪蓄積の病態生理的意義の解明

肥満症は、糖尿病、脂質異常症、高血圧症などの脳心血管病リスクファクターを合併する解決すべき健康障害である。最近の研究の進展により、「異所性脂肪」蓄積が注目されている。現在のところ、糖・脂質代謝調節における異所性脂肪蓄積を検討するための良いモデル動物が存在するとは言えない。ヒト肥満症の病態に則した異所性脂肪蓄積モデル動物が開発され、異所性脂肪蓄積の病態生理的意義が明らかにされることが望まれている。平成29年度は、食餌性肥満ラットをゴールデンスタンダードとして、全身性脂肪萎縮症モデルラット(セイピン欠損ラット)、肥満症ラット(レプチン欠損ラット)における異所性脂肪蓄積および糖・脂質代謝パラメータの関連などを検討し、異所性脂肪蓄積モデル動物としての妥当性を示した。平成30年度は、セイピン欠損ラットに対してニコチンの持続皮下投与を行い、摂食量、体重増加を起こさずに、随時血糖値、随時インスリン値、総コレステロール値、中性脂肪値が上昇すること、さらに、肝臓脂質含量の増加とともに肝臓が腫大し、肝中心静脈周囲の線維化が促進、炎症マーカー(IL6、TNFα)、線維化マーカー(Col1A1)の遺伝子発現が上昇することを見出した。このことから、ニコチンは脂肪肝を非アルコール性脂肪肝炎へ進展させる作用を有すると考えられた。また、肝膵臓β細胞増殖作用を有すると報告されたAngiopoietin-like protein (ANGPTL) 8のノックアウトラットの解析を通じて、ANGPTL8遺伝子をノックアウトすることで、リポプロテインリパーゼを活性化し、心筋、骨格筋における脂肪酸β酸化を亢進させ、血中中性脂肪TG濃度を低下させることを明らかにした。セイピン欠損ラット、レプチン欠損ラットはいずれも、通常食飼育下でも著しい脂肪肝を呈し、異所性脂肪蓄積の良いモデル動物になると考えられた。高脂肪食で飼育したセイピン欠損ラットにニコチンを4週間持続皮下投与し、摂食量、体重増加を起こさずに、随時血糖値、随時インスリン値、総コレステロール値、中性脂肪値が上昇すること、さらに、肝臓脂質含量の増加とともに肝臓が腫大し、肝中心静脈周囲の線維化が促進、炎症マーカー(IL6、TNFα)、線維化マーカー(Col1A1)の遺伝子発現が上昇することを見出した。また、肝膵臓β細胞増殖作用を有すると報告されたAngiopoietin-like protein (ANGPTL) 8のノックアウトラット(KO)を作製し、解析を行った。Angptl8 KOラットは、野生型ラットと比較して体重減少、脂肪組織における脂肪蓄積の低下が認められ、ANGPTL8は脂肪細胞での脂肪合成を増強させ、体脂肪量を増加させる可能性が示された。また、Angptl8 KOラットの血中TG濃度は低下が認められ、心筋でLPL活性の上昇と、心筋、骨格筋で脂肪酸β酸化の亢進が認められ、ANGPTL8はLPL活性の抑制因子として作用し、心筋、骨格筋における脂肪酸β酸化を亢進させることで、血中TG濃度を低下させると考えられた。Angptl8 KOでは、異所性脂肪蓄積の増加、糖代謝異常は観察されなかった。以上のように、異所性脂肪蓄積モデルになりうる動物について、解析がおおむね順調に進展している。1)異所性脂肪蓄積モデル動物の確立平成29年度、平成30年度と同様に、セイピン欠損ラットとレプチン欠損ラットを用いて、肝臓、骨格筋、膵臓における遺伝子発現変化をマイクロアレイを用いて網羅的に解析する。2)糖・脂質代謝調節における異所性脂肪蓄積の病態生理的意義の解明セイピン欠損ラットとレプチン欠損ラットの2種類の異所性脂肪蓄積モデルラットを用いて、肝臓、骨格筋におけるインスリンシグナル、膵臓におけるインスリン分泌能を、個体レベル、細胞レベルで評価する。最近、糖尿病や肥満症におけるサルコペニア(骨格筋量減少や筋力低下)は、病態の悪循環を形成することが注目されている。糖尿病や肥満症においてサルコペニアが進展する分子メカニズムは十分には解明されていない。そこで、これら異所性脂肪蓄積モデルを用いて、骨格筋脂肪蓄積がサルコペニアに及ぼす影響についても解析を加える。また、これら異所性脂肪蓄積モデル動物に対して、摂餌制限やレプチン治療による治療介入を行い、異所性脂肪蓄積および糖・脂質代謝パラメータ、サルコペニア関連指標(骨格筋量、筋力)に及ぼす影響を検討する。異所性脂肪蓄積に関わる鍵分子を明らかにすることで、新規創薬ターゲットを見出すことを目標とする。肥満症は、糖尿病、脂質異常症、高血圧症などの心血管病リスクファクターを合併する解決すべき健康障害である。最近の研究の進展により、皮下脂肪、内臓脂肪の区別だけではなく、脂肪組織以外の臓器(肝臓、骨格筋、膵臓など)への脂質蓄積、すなわち「異所性脂肪」蓄積が注目されている。高脂肪食による食餌性肥満動物が用いられることがあるが、肝臓や骨格筋に異所性脂肪蓄積をきたすのに時間がかかる点や、餌として用いる高脂肪食(45%60%)が実際の肥満臨床とはかけ離れている点などの問題がある。ヒト肥満症の病態に則した異所性脂肪蓄積モデル動物が開発され、異所性脂肪蓄積の病態生理的意義が明らかにされることが望まれる。申請者らは、脂肪萎縮症という希少疾患の研究および診療を通じて、異所性脂肪蓄積の重要性を早くから指摘してきた。

さらに脂肪萎縮症患者を対象としたレプチン補充治療により、異所性脂肪蓄積の減少が、インスリン感受性の改善、インスリン分泌能の改善に寄与する可能性を見出した。本研究では、異所性脂肪蓄積の新規モデル動物を確立し、それらを用いることで、これまで解析困難であった異所性脂肪蓄積の糖・脂質代謝調節における病態生理的意義を明らかにすることを目指す。平成29年度は、食餌性肥満ラットをゴールデンスタンダードとして、全身性脂肪萎縮症モデルラット(セイピン欠損ラット)、肥満症ラット(レプチン欠損ラット)における異所性脂肪蓄積および糖・脂質代謝パラメータの関連などを検討し、異所性脂肪蓄積モデル動物としての妥当性を評価した。異所性脂肪蓄積モデルラットとして、セイピン欠損ラットとレプチン欠損ラットを検討した。セイピンは先天性全身性脂肪萎縮症の原因遺伝子として知られており、セイピン欠損ラットは生下時より全身の著しい脂肪組織減少が認められる。またレプチンは、遺伝性肥満の原因遺伝子として知られており、レプチン欠損ラットは過食と伴に著しい肥満が認められる。セイピン欠損ラット、レプチン欠損ラットはいずれも、通常食飼育下でも著しい脂肪肝を呈し、対照ラットに対して肝臓重量で2-3倍、肝臓脂質含量で5-8倍になることを確認した。また両者ともに、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血症等を合併することから、異所性脂肪蓄積の良いモデル動物になると考えられた。また野生型ラットおよびセイピン欠損ラットを、通常食あるいは高脂肪食で飼育し、糖・脂質代謝パラメータ、肝臓組織像、肝臓脂質蓄積、肝臓線維化等を比較検討した。セイピン欠損ラットに対する高脂肪食負荷では、通常食と比較して明らかな体重増加、肝臓のさらなる腫大は観察されなかった。しかし、高脂肪食飼育下セイピン欠損ラットにニコチンを持続皮下投与したところ、脂肪肝の悪化、肝臓の線維化の進行が認められた。これらのことは、生活習慣における喫煙が脂肪肝のNASH進展に寄与する可能性を意味しており、今後の更なる検討に繋がる知見と考えている。肥満症は、糖尿病、脂質異常症、高血圧症などの脳心血管病リスクファクターを合併する解決すべき健康障害である。最近の研究の進展により、「異所性脂肪」蓄積が注目されている。現在のところ、糖・脂質代謝調節における異所性脂肪蓄積を検討するための良いモデル動物が存在するとは言えない。ヒト肥満症の病態に則した異所性脂肪蓄積モデル動物が開発され、異所性脂肪蓄積の病態生理的意義が明らかにされることが望まれている。平成29年度は、食餌性肥満ラットをゴールデンスタンダードとして、全身性脂肪萎縮症モデルラット(セイピン欠損ラット)、肥満症ラット(レプチン欠損ラット)における異所性脂肪蓄積および糖・脂質代謝パラメータの関連などを検討し、異所性脂肪蓄積モデル動物としての妥当性を示した。平成30年度は、セイピン欠損ラットに対してニコチンの持続皮下投与を行い、摂食量、体重増加を起こさずに、随時血糖値、随時インスリン値、総コレステロール値、中性脂肪値が上昇すること、さらに、肝臓脂質含量の増加とともに肝臓が腫大し、肝中心静脈周囲の線維化が促進、炎症マーカー(IL6、TNFα)、線維化
誤差を含む代数問題に対する信頼性の高い数値数式融合計算の研究

データが誤差を含むいくつかの代数問題について,数値数式融合計算を用いた信頼性の高い計算方式を提案した.主な成果は以下である.(1)多項式の整除性判定アルゴリズム.(2)安定化理論の新しい利用法.(3)連立代数方程式について解の種々の性質を保つような係数の摂動限界の計算アルゴリズム.そのほか,与えられた一変数実係数多項式に一番近く,与えられた複素領域に零点を持つ一変数実係数多項式を求める計算時間を評価した.データが誤差を含むいくつかの代数問題について,数値数式融合計算を用いた信頼性の高い計算方式を提案した.主な成果は以下である.(1)多項式の整除性判定アルゴリズム.(2)安定化理論の新しい利用法.(3)連立代数方程式について解の種々の性質を保つような係数の摂動限界の計算アルゴリズム.そのほか,与えられた一変数実係数多項式に一番近く,与えられた複素領域に零点を持つ一変数実係数多項式を求める計算時間を評価した.本年度の成果は以下の三点である。(1)基本的な問題である多項式の整除性判定について、係数に誤差のある場合に新しい手法を提案した。係数に誤差のある実係数多項式p、fを、係数の誤差範囲を区間で表した実区間多項式P、Fで表すこととし、Pに含まれる多項式q、Fに含まれる多項式gが存在してqがgで割り切れることをもってpがfで割り切れる、と解釈し、区間解析を基にした反復アルゴリズムを用いる整除性判定手法を提案した。(2)重要な問題である近似因数分解に利用可能な、与えられた因子を持つ多項式列の性質を解明した。多項式fのEuclidノルムを||f||で表し、多項式f、g間の距離を||f-g||で定義する。pとf_0を与えられた実係数多項式、ただし、||f_0||=1とする。p_1=f_0g_1を、f_0を因子とするpに一番近い多項式、p_2=c_1f_1g_1を、g_1を因子とするpに一番近い多項式、ただし、||f_1||=1かつc_1>0、p_3=f_1g_2を、f_1を因子とするpに一番近い多項式、...としたとき、多項式列{p_j}、{f_j}、{g_j}、数列{c_j}の性質を解明した。この性質は、pに近く因数分解可能な多項式を求める問題、すなわち、近似因数分解を求める問題に利用可能である。(3)本研究における主要な計算手段である安定化理論について、新しい利用法を提案した。区間係数に、計算履歴を記録するシンボルを追加したInterval with Symbol(IS)を係数としたデータに対し安定化理論を適用、ゼロ書換えの正しさをISによって確かめながらアルゴリズムを実行し、最後にISのシンボルを用いて正確な出力を得る手法(ISCZ法)を提案し、グレブナ基底計算について実験を行った。さらに、どのような問題に対しISCZ法が有効となるか確かめるため、いくつかの指標を提案し、実験を行った。本年度の成果のうち、研究実施計画における第一の目標、すなわち、昨年度の結果を進展させる研究に関わるものは以下の通りである。1.本研究における主要な計算手段である安定化理論について、昨年度提案した新しい利用法であるISCZ法(係数を区間とシンボルのペアとし、ゼロ書き換えの正しさをチェックする手法:Interval-Symbol Method with Correct Zero Rewriting)を凸包構成アルゴリズムに適用した実験を行い、有効性を確認した。2.重要な問題である近似因数分解に利用可能な、与えられた因子を持つ多項式列の性質の解明について、実数係数の場合に昨年度得た結果を複素数係数の場合に拡張した(投稿中)。研究実施計画における第二の目標、すなわち、係数に誤差のある場合の連立代数方程式に関わる成果は以下の通りである。1.二変数で式が二本の連立代数方程式f(x,y)=g(x,y)=0に解があると仮定する。f、gの係数をどれ程動かすと解が存在しなくなるか、その限界を、fとgの終結式を用いて評価する手法を提案した。2.f_i(x^1,...,x_n)(1≦i≦n)を実数係数のn変数多項式とする。連立代数方程式f_1=...=f_n=0において単純な孤立実数解が存在する場合に、f_iの係数をどれ程動かすと単純な孤立実数解が存在しなくなるか、その変動の限界を評価する手法を提案した。具体的には、f_1=...=f_n=0の単純な孤立実数解のうち、注目しているものをx^<(o)>とするとき、x^<(0)>を初期値とするNewton法が単純な孤立実数解に収束するような係数変動の限界を、Kantorovichの定理を利用して評価する。孤立解の存在する連立一次方程式を、行列Aとベクトルx、bを用いてAx=bと書くとき、孤立解が存在するような係数変動の限界は行列Aのノルムと条件数を用いて表現できるという、数値線形代数における既知の結果がある。本成果は、この結果の拡張にあたるといえる。本年度の成果のうち、研究実施計画における第一の目標については、そのうちの一つである、係数に誤差のある場合の連立代数方程式の扱いに関して以下の成果を得た。1.f_1、...、f_nをn変数実係数多項式とする。

連立代数方程式f_1=...=f_n=0において単純な孤立実数解が存在する場合に、f_1、...、f_nの係数をどれ程動かすと単純な孤立実数解が存在しなくなるか、その変動の限界を、Kantorovichの定理を利用して評価する手法を昨年度提案したが、その手法を改良した。2.n変数複素係数多項式f_1、...、f_nが与えられているとする。このとき、連立代数方程式f_1=...=f_n=0について、f_1、...、f_nの係数をどれ程動かすと、どの変数の値もゼロではない解の個数が変化するか、その変動の限界を、BKK(Bernshtein、Kuskmirenko、Khovanskii)限界の等式が成り立つ条件を用いて計算する方法を提案した。研究実施計画における第二の目標、すなわち、係数に誤差がある場合のグレブナ基底については以下の成果を得た。上記2の成果を得る過程で、グレブナ基底が{1}であるn変数複素係数多項式f_1、...、f_nに対し、適当なノルムで測ったとき(f_1,...,f_n)に一番近いn変数複素係数多項式の組(g_1,...,g_n)であって、そのグレブナ基底が{1}ではないものを求める問題の解が利用できることを示した。これは、一種の近似グレブナ基底を求める問題と見ることができる。このほか、関連する以下の成果も得た。一変数実係数多項式fと複素領域D(fはDに零点を持たない)に対し、無限大ノルムで測ってfに一番近くDに零点を持つ一変数実係数多項式gを求める問題につき、gは多項式時間で計算可能、という以前の結果を詳細化し、計算時間のオーダーを具体的に評価した。
イネαアミラーゼ遺伝子のホルモンによる発現調節に関わる調節遺伝子の探索

イネにおいては植物ホルモン、ジベリン(GA)が発芽初期の発生制御の主要な役割を担う。そこでGA誘導型αアミラーゼ遺伝子RAmylAをターゲット遺伝子として、トランスポゾン・タッギングによるGA情報伝達系に関与する調節遺伝子の探索を行った。RAmylA/GUS遺伝子とトウモロコシ由来のトランスポゾンA_Cを持つトランスジェニック・イネ系統を交配し、本年度、両遺伝子を持つF2植物体を選抜した。まず無胚半切種子をジベレリン処理後、GUS活性の有無を調べ、胚側は生育させて自殖F3種子を得た。また、葉からDNAを抽出し、A_Cの存在をPCR法によって調べた。このスクリーニング法では、3つの制御系に関わる変異の検出が可能である。1)GA生合成の変異では、発芽のみが抑制され、GA処理した無胚半切種子でのGUS活性は正常、2)GAシグナルをうけてから、RAmylA転写までに関わる変異の場合、無胚半切種子の糖化遅延、GUS活性の低下、3)RAmylA産物の翻訳や分泌にのみ関わる変異の場合、無胚半切種子のGUS活性は正常であるが胚乳糖化が起きない。本研究では、上記のようなこれまでの生理学、生化学的知見から予想されるGA誘導型α-アミラーゼ遺伝子の制御機構を裏付ける変異を多数検出した。まず、不発芽、GUSネガティブであり、胚乳が糖化しない個体が検出された。次に、発芽の遅延を示すものがF2集団のうち約20%に観察された。そのなかでも、GUS活性は正常であるが胚乳糖化が遅延したもの、胚乳糖化は正常だがGUS活性がやや弱いもの、GUS活性が無く糖化も遅延したものなど、表現型は様々であった。また、発芽が正常な個体にもGUS活性が弱い、胚乳糖化の遅延、糊粉層ではなく胚乳でGUS活性があるもの等も観察された。変異の出現頻度の高さから、当該変異の内には、遺伝的ではないものが含まれていると考えられる。これらが遺伝的な変異であるのか、またはエピジエネティックなものなのか、現在F3集団でのA_Cとの連鎖を含め、解析を進めている。