hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
宇宙論的輻射シミュレーションで解明する宇宙再電離期の銀河形成史

宇宙論的輻射流体コードを開発し、これを用いて宇宙初期の銀河形成史とそれに伴う宇宙再電離過程を矛盾なく計算した。これにより、輻射性フィードバックが星形成率、電離光子脱出確率、銀河間物質の非一様性に重大な影響を与える事がわかった。これらの輻射流体力学的効果をモデル化し、ポストプロセスの輻射輸送計算による宇宙再電離シミュレーションに組み込む為のレシピの作成にも着手した。シミュレーションで得られた銀河のUV光度関数は、赤方偏移z>6で観測される光度関数と概ね一致し、再電離に主に寄与するのは、未だ観測されていない暗い銀河である事も示した。前年度に引き続き、自ら開発した輻射流体コードを用いて、宇宙再電離過程とその時期における電離光子源である銀河の形成過程を同時に解き明かす宇宙論的輻射流体シミュレーションを行った。シミュレーションによって形成された銀河の光度関数は、観測可能な明るい銀河の光度関数をよく再現し、未だ観測されていない暗い銀河が多数存在する事を予言する。また、それぞれの銀河から抜け出し銀河間空間の電離に使われる電離光子の割合(電離光子脱出割合)をシミュレーションボックス内の全ての銀河につて調査したところ、低質量の銀河は輻射性フィードバックによって高い電離光子脱出割合を示す事が明らかになり、これまでなされてきた再電離シミュレーションに比べてより暗い銀河が支配的な電離光子源となっている事を示した。この結果は、これまでの再電離シミュレーションと今回のシミュレーションでは電離構造が異なる事を意味し、今後の予定される再電離期のライマンアルファ輝線銀河の観測や中性水素の超微細構造遷移輝線・吸収線の観測による検証が期待される。また、宇宙で初めて形成される天体であり、宇宙ではじめての電離光子源として期待される第一世代ハロー中心で形成される第一世代星の形成過程解明の為の研究も行い、まずは、第一世代ハローが質量、角運動量などの物理量に関して様々な多様性を持つ事を示した。さらに、多様なハロー内で形成される第一世代星の形成過程を3次元輻射流体シミュレーションで調べる世界初の試みによって、第一世代星は典型的には10-100太陽質量程度である事、この質量は母ハローの角運動量と非常に強い相関を持つ事を明らかにした。第一世代星が典型的に大質量である事実は、再電離初期段階において、第一世代星が重要な役割を果たす事を示唆する。宇宙再電離期における銀河形成に関する宇宙論的輻射流体シミュレーションを行った。その結果、星からの紫外線が銀河内の星形成率や電離光子の脱出過程に大きく影響し、結果として銀河間物質の電離史にも重大な影響を与える事を示した(Hasegawa & Semelin 2013, Umemura et al. 2012)。上記の計算では超新星爆発による重元素汚染効果を考慮していなかったが、重元素汚効果は、冷却率の上昇、ダストによる紫外線光子の吸収、ダスト表面での水素分子形成といった過程により、銀河内での星形成率や銀河間物質の電離過程に影響を与える事が予想させるため、これらの効果を含めたシミュレーションも実行した。その結果、重元素の存在比が高い大質量銀河内では、重元素汚染効果が紫外線による星形成阻害を抑制する働きをし、それが主に冷却率の上昇に起因する事を示した。また、ダストは紫外線を効率よく吸収する事で、銀河から銀河間空間へ抜け出す電離光子数が減少させ、結果として銀河間空間の電離史はダストによる吸収効果を考慮しない場合に比べて遅く進む事も示した。さらに、紫外線による加熱は銀河間物質分布を平滑化する事で、従来のよく行われてきたポストプロセス的に銀河間物質の電離構造を解く手法に比べて約半分程度の電離光子数でも電離状態を維持できる事も明らかにし、正確な星形成率を計算する為だけでなく、銀河間物質の電離状態を正しく計算する為にも、輻射輸送と流体計算をカップルさせた輻射流体計算が必須となる事を示した(Hasegawa 2013,投稿準備中)。その他、より高速かつ大規模な並列化も可能な新たな輻射輸送計算アルゴリズムを開発も行い、より多くの粒子を扱った輻射流体シミュレーションの実行を可能とし、その結果を国際会議で発表した。当初の予定通り、重元素汚染効果を組み込んだ輻射流体シミュレーションを実行し、重元素汚染効果が紫外線フィードバックを和らげる役割を果たす事や、紫外線フィードバックが銀河の質量関数や銀河間空間の密度構造への影響を明らかにできた。しかし一方で、個々の銀河内部の詳細な密度構造への影響や電離光子の脱出確率の調査などについては、当初の予定より若干の遅れが生じ、十分に行えなかった。

これは、より高速に大規模な輻射流体計算を行う為に、当初の予定にはなかったK computer等の大規模並列計算機に適した新たな輻射輸送アルゴリズムの開発を行った為であるが、この開発した新手法により、今後実行するシミュレーションに要する時間の短縮が大いに期待できる。これらの状況を総合的に見て、研究達成度はおおむね順調に進展していると判断した。新たに開発した計算コードを用いて引き続きシミュレーションを行う。特に、これまでの結果に加えて、個々の銀河内の密度構造や電離光子の脱出過程における紫外線フィードバックの効果を詳細に調査する事で、「いつ」「どのように」宇宙再電離過程やその時期における銀河形成過程が進んだかの解明を試みる。また、個々の銀河のスペクトルエネルギー分布を輻射輸送計算によってシミュレートし、Hyper Suprime-Camで観測される銀河の紫外線・ライマンアルファ光度分布との直接比較を行う事で、私の宇宙再電離・銀河形成モデルの妥当性の検証や、今後、次世代の観測機器によって観測が期待されるより暗い銀河の光度関数の予言を行う。シミュレーションの実行は、主に京(K computer)を用いる予定であるが、その結果の解析や小規模な計算でのパラメータ依存性調査の為に、京都大学の計算機システムXE6を借用する。また、成果発表の為の旅費、及びデータ保存の為のハードディスクドライブ購入にも使用する。
学習の動機づけにおける課題価値とコスト認知の葛藤解決支援に関する研究

研究成果の概要(和文):学習内容に価値を見出すことと,学習に取り組むことで失われるもの(コスト)との葛藤に焦点を当て,学習しない理由についての文献研究および大学生を対象とした質問紙調査により価値とコストの関係を検討した。コストとして,学習に取り組むことで自分の能力の限界を自覚せざるを得ないことへの不安と,学習に取り組んでも意味がないかマイナスだと感じてしまうことの2側面が抽出され,特に前者は学習を継続する中で価値との共存が可能であることが示唆された。価値観の多様化や将来の不透明さ等によって,学校教育段階で「学ぶことの意味・価値」を実感することが難しくなると同時に,苦痛の回避(無痛化)や努力の忌避という時代の流れの中で「学習の回避」という傾向が意欲低下に拍車をかけていると考えられる。そこで,本研究では,課題価値(学ぶ理由)とコスト(学ばない理由)の両面に注目し,それぞれが心理・社会的発達の異なる段階に由来するというモデルを構築した上で,学習者が価値実現に向けてコストを受容する動機づけ過程およびその条件・支援策を明らかにすることを目的とする。今年度は,Ecclesら(1995)などを参考にコスト認知尺度項目を試作し,教員養成課程の学生約100名を対象として予備調査を実施した。12項目を因子分析した結果,2因子が抽出され,それぞれ「価値剥奪」「不安直面」と名付けられた。すなわち,課題に取り組んでも意味や価値がないと感じる側面と,課題に取り組むことで自己の能力の限界を感じる側面が心理的なコストとして取り出された。そして,学習意欲を捉える課題価値測定尺度(伊田,2003)との関連を検討した結果,「価値剥奪」は,興味価値(楽しさ)および利用価値(有用性)と負の相関関係にあり,楽しさや有用性を感じられないほど,課題の価値を否定していることが示された。また,「不安直面」は課題を通して自己成長したと感じているほど強い傾向にあることが明らかになった。ゆえに,「不安直面」は受容されたコストと換言することができる。今後,コストが受容される条件について検討を続けたい。本年度は,課題価値の否定とコストの回避のメカニズムについての実証的検討を目的として,課題コスト尺度の開発を行った。具体的には,コストの心理的背景として,Maslow,A.の指摘する「知ることへのおそれ」,そしてKernberg,O.F.の「脱価値化」の機制や社会学における「価値剥奪」の概念を参考にし,パーソナリティ発達を阻むと思われる感情に焦点を当てて項目化を行った。大学生を対象とした質問紙調査を実施し,因子分析(主因子法)により2因子を抽出した。その後,プロマックス回転を行い,第1因子を「脱価値化」,第2因子を「知ることへのおそれ」と名付け,それぞれ8項目と4項目からなる内的整合性(信頼性)の高い下位尺度を構成した。下位尺度間相関は中程度であった。課題価値との関連を検討した結果,脱価値化については,制度的利用価値(進学・就職時の有用性),興味価値(楽しさ・おもしろさ),実践的利用価値(就職後の有用性)との間に有意な負の相関が見られた。また,知ることのおそれについては,私的獲得価値(自己の成長)との間に弱い正の相関が認められた。以上の結果から,脱価値化については,床効果が顕著であり,各項目内容の再検討が必要であるが,課題価値との負の相関が見られ,学習を回避する程度の強いケースを捉えていると考えられる。知ることのおそれについては,課題価値の低下を招かず,自己の成長に伴う適応的な不安である可能性が示唆され,受容可能な心理的コストと考えられる。本年度は,研究計画最終年度にあたり,先行研究の展望および本研究課題の成果を踏まえ,課題価値(学ぶ理由)とコスト(学ばない理由)の両面に注目し,今後の研究の方向性についてまとめた。まず,昨年度の「課題コスト尺度」開発の成果を踏まえて,学習回避動機としての課題コストを概念化した。従来の成功恐怖や成功回避動機の研究において指摘されているアイデンティティと学業成績の関係についての知見を敷衍し,生き方や価値観および将来目標などアイデンティティの具体的な内容と現在の学習領域の内容とが葛藤する場合,そのアイデンティティが明確であるほど価値づけが低下すると考え,学業的成功が自分のアイデンティティを壊すと認知されている場合に積極的学習回避動機が発生し,課題コストが大きくなるという図式で理論的なまとめが行われた。また,パーソナリティ発達から見た課題コスト概念の特徴としては,心理社会的発達の観点から,児童期(第IV段階)の心理社会的危機に由来する「労働麻痺」「勤勉性の拡散」および「選択の回避」という側面,知識の獲得が不安を招く場合を指す「知ることのおそれ」,そして原始的防衛機制として「補償努力」「価値剥奪」「脱価値化」が重なると考えられ,大学生を対象とした調査結果から,「知ることのおそれ」については成長への志向性に伴う適応的な不安としての解釈可能性も示された。

課題価値と課題コストの葛藤解決に向けては,自らの学習動機づけがどのような葛藤解決段階にあるのかを図式化したセルフチェック用のモデルを開発した。学習場面における瞬間的な興味や楽しさを指す感情的側面と,持続的な興味や関心および価値の内面化を指す認知的側面の2軸から,紆余曲折を経て葛藤に折り合いをつけるプロセスを視覚化することに重点を置いた。今後,自己決定理論との関係についてさらなる実証的研究として展開することが課題である。課題コスト尺度の開発により,学習の回避につながる「脱価値化」の側面および「知ることへのおそれ」を捉えることができた。また,それらと課題価値との関連について検討することができ,特に知ることへのおそれについては課題価値との共存可能性が示唆された。研究の目的にある「コストを受容する動機づけ過程およびその条件」について明らかになりつつある。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初は中学生・高校生についても対象に含めることを想定していたが,動機づけ概念およびコスト概念の内容を精査すると,発達段階的に大学生以上において自覚的に捉えることができるようになるものと考えられる。よって,研究の目的(特に支援策を明らかにすること)を効率的に達成するために,大学生に焦点を絞って分析・考察を深めることとしたい。
写本の分布から見る西スマトラのイスラームに関する基礎研究

本調査によって、西スマトラにおいて、あらたに507点の古写本の書誌情報を収集した。写本は、スラウと呼ばれる宗教施設で多く保管されていた。発見された写本の種類としては、シャタリヤ派タレカットの教義書、アラビア語文法書、イスラーム法学書が多く、特に、ガザーリーのMinhaj Abidinが多く見つかった。また、コーヒー栽培地周辺で、比較的多くの学習者を抱えていたスラウではこれ以外に、歴史物語、慣習法、薬学、呪い、地震解説などの多様な写本が保管されており、これらのスラウが地域における知の中心地であったことがわかった。一方、これらの大きいスラウでは、多くの質入書も発見された(年代も質種も多様)。平成23年度は、まず9月に、インドネシアの国立アンダラス大学文学部講師陣の協力によって、西スマトラ南部のシジュンジュン地区において、イスラーム礼拝施設(スラウ)に保管されているイスラーム写本について基礎データ(書誌情報、写真)の収集をおこなった。基礎データは、エクセルに入力し、写真はすべてのページをデジタルカメラで撮影し、ハードディスクに保管した。これらのデータを一度、アンダラス大学(パダン)に持ち帰り、カタログを作成するために、調査参加者の間で、各写本の読解の担当を決め、各研究室に持ち帰った。読解の結果は3月に一度、研究代表者である菅原のもとに集められたが、来年度夏に、アンダラス大学でその調査結果を調査者全員で検討することになった。シジュンジュン地区では、改革派イスラーム・グループであるムハマディヤが勢力を伸ばしているために、かつて西スマトラでさかんであったイスラーム神秘主義の内容を含む写本はスラウの奥にしまい込まれ、人の目に触れないようになっていた。しかし、その内容は、非常に多様で、これまで実際の文字資料を使って十分に研究されてきていないスマトラ神秘主義信仰を研究する上で非常に興味深い資料となっている。マレー語の写本が数多く発見されたこと、またスマトラ北端のアチェとのつながりが非常に強いことがそれらの写本から明らかになった。平成25年度は、前年度同様に、9月にインドネシアの国立アンダラス大学文学部および国立イスラーム大学ジャカルタ校講師陣の協力により、西スマトラ南部パシシル・スラタン県で、イスラーム礼拝施設(スラウ)や旧王国の王族が保管する系譜等の文書の書誌データ及びデジタル画像を収集する調査をおこなった。この地区は、イスラーム流入前の小王国の慣習や伝統が記載された文書が散見された。収集した基礎データは、これまでと同様に、エクセルに入力し、写真はすべてのページをデジタルカメラで撮影し、ハードディスクに保管した。これらのデータをパダンのアンダラス大学に持ち帰り、カタログ執筆のための読解の担当を決めた。その後、24年度に決定したカタログの内容と出版予定の再検討をおこなった。カタログは、西スマトラの写本の概要部分と書誌情報の2部構成で、インドネシア語で執筆される。執筆分担者は担当部分を、12月までにアンダラス大学講師のズリアティ(Zuriati)氏に送付。全体の取りまとめと、言語の修正をズリアティ氏が担当。3月末までに菅原に送付し、その後、菅原をはじめとする数人が内容の精査をおこない、26年7月までに出版草稿を確定する予定とした。出版は、インドネシアの出版社から見積もりを取り、26年10月に科研に申請することが決まった。その後、26年度9月に予定している国際シンポジウムの開催方法(テーマ、パネル、発表者)についての検討会をおこなった。26年1月に、国際シンポジウムの予告がウェブサイト及びインドネシア写本学会メーリングリストによって公開された。そして、3月末に、ズリアティ氏からカタログ草稿が到着し、現在、その内容を精査しているところである。平成24年度は、昨年同様、まず9月に、インドネシアの国立アンダラス大学文学部講師陣の協力によって、西スマトラ北部のパサマン地区において、イスラーム礼拝施設(スラウ)に保管されているイスラーム写本について基礎データ(書誌情報、写真)の収集をおこなった。パサマンではルブック・ランドゥール(Lubuk Landur)とシェ・ボンジョール(Syekh Bonjol)宗教施設が主な対象地で、前者は現在までイスラーム神秘主義ナクシャバンディー教団の活動が盛んな土地であり、写本の記録とともに、彼らの活動も観察することができた。後者は、ミナンカバウにおけるイスラーム改革運動の起点となった地域であり、その影響を今も色濃く残していることが観察できた。これらのデータを一度、アンダラス大学(パダン)に持ち帰り、カタログを作成するために、調査参加者の間で、各写本の読解の担当を決めた。

読解の結果は3月に一度、研究代表者である菅原のもとに集めたが、24年度同様25年度夏に、アンダラス大学でその調査結果を調査者全員で検討する。9月調査終了後、最終成果である写本書誌カタログ執筆方法及び国際シンポジウムの開催方法について検討会を開いた。カタログについては、書誌情報とミナンカバウ写本の特徴を記述する2部構成とし、執筆担当者とスケジュールを決定した。シンポジウムについては、会議後、インドネシア写本学会の了承を取り付けることに成功し、26年度にパダンで国際シンポジウムを開催することが決まった。1平成26年9月1719日に西スマトラ州パダンのグランド・インナ・ムアラホテルにおいて、インドネシア写本学会と共催で、国際シンポジウム"Naskah dan relevansinyadalamkehidupan masa kini(現代における写本の存在と意義)"を行い、本科研で3年間収集してきたミナンカバウの写本の現状と、その歴史的意味についての発表を、本科研メンバーがおこなった。プロシーディング(Hidayat, Herry Nur; Pramono; Zuriati. ed. 2014. Naskah dan relevansinyadalamkehidupan dan masa kini; prodising.Padang: Pusat Studi dan Informasi Kebudayaan Minangkabau, Universitas Andalas)の出版も同時におこなった。どのような種類の写本が現在も西スマトラの一般社会に保管されているかを明らかにし、またこれまで欧米人研究者によっておこなわれてきた西スマトラの歴史叙述のなかにそれらの写本史料が十分に利用されてこなかったことを指摘した。また逆に、オランダ語史料による情報を現地での写本分析調査に生かしていくべきことも提言した。2カタログ出版準備23年度から25年度の3年間に渡り収集してきた西スマトラ、ミナンカバウ地域各地の写本と、本科研以外にアンダラス大学がおこなっていた調査によって集められた写本の書誌情報をまとめたカタログ草稿を作成し、アンダラス大学チームと検討をおこなった。訂正すべき項目がまだ多々見られたが、全データを報告書としてまとめ、年度末に印刷し、科研メンバー及びアンダラス大学チームと共有することにした。この草稿は、27年度に出版申請を行う予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。インドネシア近代史26年度が最終年度であるため、記入しない。計画通りに予定調査地において、調査をおこなうことができた。写本の読解についても、当初の予定通りである。計画通りに、調査をおこなうことができた。写本の読解、カタログの執筆・編集についても予定通りに行われている。国際シンポジウムの開催準備も予定通り進んでいる。前年度に引き続き、西スマトラ、ミナンカバウ地域各地のイスラーム礼拝所等に保管されているにイスラーム写本の書誌データ等を収集し、最終成果であるカタログの内容を増やしていく。
看護学生に効果的な学習方法を支援するための教育アプローチの構築

2018年度は、昨年度に面接調査により収集した質的データの分析と、2018年度に実施予定であった質問紙調査の準備を行った。まずA県内の3つの看護系大学に所属する24年次生23名を対象に、深層的学習アプローチを促進する因子について面接調査を実施した研究からは以下の結果が得られた。講義科目における促進因子として、次の5カテゴリー(『』で示す)が抽出された:『学生の注意を引く講義』『教員による学習活動の促進』『学生の理解を促進する説明』『学生の知識を拡大・深化させる知識の提供』および『熱意のこもった講義』。技術演習科目については6カテゴリーが抽出された:『技術修得の必要性』『臨床で活躍する看護師像』『学生間の意欲』『支持的な教員の関わり』『人的物的資源が整った学習に向かいやすい環境』および『客観的評価を受ける機会』。実習科目については、教員側の因子と臨床看護師側の因子が抽出された。教員側の因子は4カテゴリーから構成された:『学習活動の促進に資する言語的教示』『学習の方向付けに資する言語的教示』『教員が放つ支持的な教育姿勢』および『学生を尊重した公平で肯定的な教育介入』。また臨床看護師側の因子については4カテゴリーが抽出された:『看護師による丁寧で的確な言語的教示』『学習の方向付けに資する看護師の言語的教示』『指導上必要な厳しさ』および『学生の存在認知と気遣い』。質問紙調査の準備については、2018年度に倫理審査委員会の承認を得て、質問紙とウェブアンケートの作成まで実施した。2019年度の初めにデータを収集する予定である。初年度(2017年度)の研究実施が遅れたため(倫理審査に時間を要したため)、その後の研究も68か月程度遅れている。本年度は元々、次年度の研究のための教育プログラムの作成に充てていたため、この期間を短縮して、なるべく当初の研究計画通りに研究を実施していけるように努めたい。2019年度は、45月に収集予定のデータの分析と論文執筆、および研究結果に基づいた教育プログラムの作成を行う予定である。そして、作成された教育プログラムの評価を2020年度に行う予定である。【目的】本研究の目的は,看護実践能力の向上に寄与すると期待される学習アプローチ(つまりDeep Approach to Learning)の促進(または非効果的学習アプローチであるSurface Approach to Learningの抑制)に影響を与える前提要件を明らかにすることであった。【研究意義】看護実践能力の向上に寄与すると期待される学習アプローチを促進する前提要件が明らかになれば、その学習アプローチ(つまりDAL)を促進するための教育アプローチの構築が可能となる【研究方法】本研究では,半構成的面接法を用いた質的帰納的デザインを採用した。研究対象者は、H県にある国立・県立・私立大学の看護学科(もしくは看護学専攻)に所属する学部学生23名であった。BiggsのThe presage-process-product model of teaching and learning(3P Model)に基づいて作成されたインタビューガイドを活用し個別面接(半構成的面接)を実施した。面接では、講義、演習、及び実習科目における学生及び教員側(授業内容、評価方法、教員の授業に対する姿勢、授業雰囲気など)の学習促進因子を探求した。面接に要した時間は各自60分程度であった。その後、面接内容を逐語録化し、thematic analysisを用いて、Deep Approach to Learningを促進する前提要件を分析した。【結果】現在までに合計で600以上のコードが抽出された。今後は、講義、演習、実習科目ごとにコードを分類し、それぞれの授業形態における学習促進因子について、カテゴリー化を進めていく予定である。3大学の倫理審査を通過しなければならず、それに時間を要したため。

初年度(2017年度)の研究実施が遅れたため(倫理審査に時間を要したため)、その後の研究も68か月程度遅れている。本年度は元々、次年度の研究のための教育プログラムの作成に充てていたため、この期間を短縮して、なるべく当初の研究計画通りに研究を実施していけるように努めたい。平成30年度前半までに、平成29年度研究分のデータ分析を終了し、平成30年度後半に今年度実施予定の研究計画書作成及び倫理申請の準備を行う。そして平成31年度前半に、平成30年度分のデータ収集を行い、それに基づいた教育アプローチの構築を平成31年度後半に行い、その効果を平成32年度に検証予定である。2019年度は、45月に収集予定のデータの分析と論文執筆、および研究結果に基づいた教育プログラムの作成を行う予定である。そして、作成された教育プログラムの評価を2020年度に行う予定である。倫理申請に時間を要したため、研究の進捗がやや遅れている。そのため、本来平成29年度までに実施予定であったデータの分析が完了していない状態である。次年度使用額は今後データ分析に必要なソフトの購入と分析補助者への謝金に充てる予定である。2018年度の研究実施が遅れているため、当該研究データの分析に必要なコンピューターが未購入の状態である。そのため次年度使用額が生じた。2018年度のデータは2019年45月に収集予定であるため、今後物品を購入して、データの分析を進める予定である。
モリソン『神天聖書』を中心とした漢訳聖書の系譜とその文体論的研究

今回は「漢訳聖書」のうち、特にポアロの『古新聖経』について研究を深めることができた。そのうち満漢合壁版では、そこに見られる中国語と満州語の対応関係について一つの知見を示すことができた。また、「漢訳聖書」の周辺資料のうち,マテオ・リッチあるいはその周辺者の手によるものと思われる『拝客訓示』についても研究を進め、その語学的特徴や成立過程について一定の成果を得ることができた。なお、『古新聖経』に関しては2018年度中に『古新聖経の研究』(仮題、関西大学出版部)として公刊の予定である。今年度は特に漢訳聖書の新しい発見があったものを中心に研究を進めてきた。このうち、ポアロの『古新聖経』の影印版が台湾から、活字版が中国から、それぞれ出版され、私たちの研究に大きな手助けとなっているが、これに加えて台湾中央研究院の李&#22893;學博士から北堂版の古新聖経殘巻の提供を受け、研究代表者が以前に発見したサンクト・ペテルブルグ東方文献研究所所蔵の満漢合壁版との対照を行うことが出来た。その成果は『『古新聖経』満漢合壁版・北堂版ー影印與翻字』(游文舎、340ページ)という形で私家版として出版し、関係研究者に配布した。研究会は東西学術研究所の言語接触班の研究例会に合わせる形で、平成28年1月23日に、上述の台湾中央研究院の李Shi學博士を招請し、漢訳聖書に関する講演会と、研究代表者と分担者が研究発表を行った。なお、研究計画にある海外調査も平成27年9月13日から22日の期間にローマ大学、バチカン図書館を中心に行い、新しい資料の発掘を行った。バチカン図書館では幾つかのこれまで未発見の宣教師による官話資料を手にすることができ、今後の研究に役立つはずである。この他、本研究課題と密接に関連している漢訳聖書以外の域外漢語資料を利用した研究も着実に進行することができた。たとえば、カサナテンセ図書館蔵の宣教師による雍正帝の弾圧事件の供述書に関する研究代表者や分担者の研究は学界に対しても極めて大きな貢献をしていると考えている。本年度の中心課題である『古新聖経』に関する基本的な調査、整理、分析は順調に進行している。また、関連する研究も着実に遂行できた。海外調査も含めて、当初予定していた基本的な調査作業はほぼ完了している。研究会も実施し、本研究は概ね順調に進展していると結論づけることができる。今年度の主要な研究成果としては、「漢譯聖經研究的新的局面ー以『古新聖經』為主ー」(『關西大學中國文學會紀要』,第37号,1-13p,2016.3)と「有關《拜客問答》的若干問題及其他」(『東アジア文化交渉研究』第10号、2017,3,31,87-100p)がある。「漢譯聖經研究的新的局面ー以『古新聖經』為主ー」では、『古新聖経』満漢版という漢訳聖書の新しい資料の発見と今後の課題について述べたが、特にその満漢版と漢字版との対照による満文の中国語への影響について論じた。結果としては、蒙文直訳体ほどの影響は見られないことを指摘したが、こうした研究はこれまでの漢訳聖書の研究ではほとんど触れられていないものである。「有關《拜客問答》的若干問題及其他」も同様に筆者によって新しく発見されたバチカンでの資料を基にしており、その各版本間の異同やローマ字表記の問題、更には、カトリック宣教師であるマテオリッチとその関係者の手によると考えられる本資料が、実はモリソンなどのプロテスタント宣教師にも影響を与えたことを中心に論述したものである。なお、以上の論文の他、国際シンポジウムでの基調講演や研究発表や研究機関での口頭発表も行い、広く学術交流を進めることができた。研究代表者は着実に研究業績を挙げている。例えば、2016年度に於いては、著書2冊、論文3編の他、基調講演、口頭発表等も約10回行っている。同時に、研究分担者とも、常時,緊密な連携を保ち、国際シンポジウムや研究会にもほぼ全員が参加しており、研究は計画通り順調に進行していると言うことができる。最終年度の今年度は、これまでの2年間の研究成果を踏まえて、「漢訳聖書」を中心にそれを取り巻く他の欧文資料もその研究対象に加えて研究を進めてきた。特に、『古新聖経』の満漢版の成立とその言語的特徴については、国際学会等でも積極的に報告し、2019年の3月までには、『古新聖経』の満漢版と北堂版の影印を付した研究書を刊行する予定となっている。この他、マテオリッチの手になると思われる『拝客問答』に関する資料も多く収集し、その内容についても論文としてまとめてきた。なお、本研究は「文化交渉学」を基盤としており、「文化交渉学」に関してもその社会的認知度の向上と、方法論の優位性について多くの機会をとらえて発表を行ってきている。研究分担者も研究例会や国際会議では同じパネルで発表を行ってきており、多くの成果をあげてきた。

以上、本研究の所期の目的はほぼ達成されたものを考えているが、2018年度も新たに科学研究費(基盤研究C)を取得することができ、引き続き新しい課題に向けて取り組んでいくつもりである.今回は「漢訳聖書」のうち、特にポアロの『古新聖経』について研究を深めることができた。そのうち満漢合壁版では、そこに見られる中国語と満州語の対応関係について一つの知見を示すことができた。また、「漢訳聖書」の周辺資料のうち,マテオ・リッチあるいはその周辺者の手によるものと思われる『拝客訓示』についても研究を進め、その語学的特徴や成立過程について一定の成果を得ることができた。なお、『古新聖経』に関しては2018年度中に『古新聖経の研究』(仮題、関西大学出版部)として公刊の予定である。今後の研究については、2年目の平成28年度においては、研究代表者は(1)ポアロの『古新聖経』の文体的特徴を満漢版を元に明らかにする。(2)『古新聖経』とそれ以前のディアズ、バセとの継承関係を明らかにする。というこの2点をメインに進めていくつもりであるが、加えて、研究分担者によるモリソン漢訳聖書の位置づけや、江戸期における唐話資料の文体との比較等も同時に進めて行く予定である。なお、漢訳聖書以外の域外資料も取り扱い、研究に幅を持たせることは言うまでもないことである。今後は、これまでと同様に各自の研究分担に応じて、論文、国際シンポジウムや研究会の口頭発表などで確実に成果を発表していく。最終年度には、研究成果のまとめとして、論文集を出版することを企画している。文化交渉学・中国語学当初購入を予定していたパソコンとデジカメが適当な物品がなく、次年度の持ち越したことによる。また、書物も今年度はめぼしい古書等が出なかったため。当初計画していた出張が日程の関係で取りやめになったこと、また予定していた使用を次年度に回すことになったため。パソコン等の機材の購入と漢訳聖書関係の書籍の購入、また今年度も研究上の必要から海外出張(1回分)を計画している。研究関係の書籍の購入および旅費に充てる予定である。
体温の正常値が決定される機序に関する研究

本研究では、発生時の環境温度がマウスの体温に及ぼす影響について検討した。その結果、受精卵を38°Cで4日間培養して生まれた雄仔マウスの体温は、37°Cで受精卵を培養して生まれたコントロール群と比較して有意に低い体温を呈した。38°C群と37°C群を比較すると、視床下部(体温調節中枢)で複数の遺伝子転写に変動が観察された。本研究の結果から、発生時環境温度は視床下部の分子発現に影響を及ぼし、その結果、体温に影響することが示唆された恒温動物における体温の正常値決定の機序は不明であるが、発生時の環境温度と遺伝子が関与する可能性がある。平成27年度は、マウスの体外受精を行い、受精卵の培養温度を変化させて得た仔マウスの深部体温をテレメトリー法により測定した。その結果、受精卵を38°Cで4日間培養して生まれた雄仔マウスの体温は、37°Cで受精卵を培養して生まれたコントロール群と比較して有意に低かった。しかし、活動量に有意な差は認められなかった。また、体重に関しても2群間で差は無かった。次世代シークエンサーを用いて両群のマウスの脳の遺伝子発現を検討した。その結果、アラキドン酸のエポキシゲナーゼ系の酵素の発現が高温培養群で亢進した。エポキシゲナーゼ系は解熱に関与することが報告されている。高温培養群でのエポキシゲナーゼ系の活性化が、低い体温の原因である可能性が推察される。当初の計画では、発生時の環境温度の生後体温への影響を調べる為に、切断したプラナリアや鶏卵の培養温度を検討する予定であったが、その後のdiscussionで、ほ乳類の体温決定の機序を調べるのが最重要ということで、まず、マウスで検討を行った。その結果、受精卵の培養温度を高くすると生後体温の低い個体となることが立証できた。つまり、最重要の知見が早い段階で得られた。このことは、胎生期の環境温度が生後の体温に影響を与えることを意味している。発生初期に高い環境温度にさらされると体温を低下させる機序がより発達し、体温を上げる機序がより抑制されるとの解釈も可能である。これとよく似た現象として、低栄養の胎児は、生後低栄養状態でも生存できるように、酵素、生理活性物質の受容体、情報伝達系等の多様な代謝応答機構が変化してその結果、高栄養・成人病にかかりやすくなることが知られている。したがって、当初の計画以上に進展していると考える。恒温動物における体温の正常値決定の機序は不明であるが、発生時の環境温度と遺伝子が関与する可能性がある。次世代シークエンサーを用いて両群のマウス1匹ずつの脳と肝臓の遺伝子発現を検討した。その結果、アンドロジェン産生に関与するCyp17a1と、アラキドン酸のエポキシゲナーゼであるCyp2e1とCyp2c29の発現が高温培養群で高かった。しかし、1匹ずつの比較であるので定量性はない。そこで、平成28年度は、次世代シークエンサーで両群のマウスの発現に差があることが判明した遺伝子について、real-time RT-PCRにより定量化し、38°C培養群と37°C培養群で比較した。その結果、精巣Cyp17a1に関しては両群で有意な差は無かった。また、脳Cyp2e1にも有意の差は認められなかった。しかし、38°C培養群の脳Cyp2c29は37°C培養群のそれと比較して有意に高い発現を呈した。昨年度は、次世代シークエンサーにより、常温培養群と高温培養群の遺伝子発現をそれぞれ1匹ずつのみで比較検討した(測定にかかる費用が高いのが理由である)。その結果、アラキドン酸のエポキシゲナーゼ系の酵素2つとアンドロジェン産生に関与する酵素1つが高温培養群で高い発現を示した。しかし、1匹ずつの比較なので、定量性が無い。そこで、今年度はreal-time RT-PCRを用いてこれら酵素の定量を行った。「研究実績の概要」で記載したように、3つの酵素のうちエポキシゲナーゼの1つのみに差が検出された。解熱に関与するエポキシゲナーゼが高温培養群で亢進していることが確定できたのは満足できる結果と考える。恒温動物における体温決定の機序は不明であるが、発生時の環境温度が関与する可能性がある。具体的には、マウスの精子と卵子を取得後、媒精させた。受精卵を36.0°C、37.0°C又は38.0°Cのいずれかの温度で4日間培養して、偽妊娠マウスの子宮内に移植した。

得られた仔を25°Cの環境下で飼育した(しかし、36.0°Cの培養ではマウスの出産が認められなかった)。8週齢の成年マウスの腹腔内に体温測定用のテレメトリープローブを植え込んだ。手術より回復後(1週間後;9週齢)に安静時の体温測定を行った。その結果、受精卵を38°Cで培養して生まれた雄仔マウスの体温は、37°Cで受精卵を培養して生まれたコントロール群と比較して有意に低い体温を呈した。38°C培養群と37°C培養群を次世代シークエンサーによる解析を用いて比較すると、視床下部(体温調節中枢)で複数の遺伝子転写に変動が観察された。例えば、体温(解熱)に関連するものとして、アラキドン酸のエポキシゲナーゼであるCyp2e1とCyp2c29のmRNA発現が高温培養群で高かった。そこで、これらの遺伝子について、real-time RT-PCRにより定量化し、38°C培養群と37°C培養群で比較した。その結果、視床下部Cyp2e1に差は認められなかったが、38°C培養群のCyp2c29は37°C培養群のそれと比較して有意に高い発現を呈した。本研究の結果から、発生時環境温度は視床下部の分子発現に影響を及ぼし、その結果、体温に影響することが示唆された。本研究では、発生時の環境温度がマウスの体温に及ぼす影響について検討した。その結果、受精卵を38°Cで4日間培養して生まれた雄仔マウスの体温は、37°Cで受精卵を培養して生まれたコントロール群と比較して有意に低い体温を呈した。38°C群と37°C群を比較すると、視床下部(体温調節中枢)で複数の遺伝子転写に変動が観察された。本研究の結果から、発生時環境温度は視床下部の分子発現に影響を及ぼし、その結果、体温に影響することが示唆された今回の研究で、受精卵高温培養によりマウスの体温が37°C培養のコントロール群より低くなることが分かった。また、次世代シークエンサーによりアラキドン酸のエポキシゲナーゼ系の酵素の発現が高温培養群で亢進した。今後は、この体温変動の機序を調べるために、1)エポキシゲナーゼ系の酵素の発現上昇にepigeneticな変化が関与するか否かを究明する。2)エポキシゲナーゼノックアウトマウスを作成して体温がワイルドタイプのマウスより高くなるか否かを検討する。これらの実験により、発生初期の環境温度が生後体温に及ぼす効果の機序に、エポキシゲナーゼ系のupregulationが関与するか否かが解明される。今回の研究で、高温培養群の脳エポキシゲナーゼCyp2c29が常温培養群のそれと比較して有意に高い発現を呈することが分かった。今後は、1)Cyp2c29の発現上昇にepigeneticな変化が関与するか否かを究明する。2)Cyp2c29ノックアウトマウスを作成して体温がワイルドタイプのマウスより実際高くなるか否かを検討する。環境生理学研究実績の概要で記載したように、高温(38°C)での受精卵培養で生まれた仔マウスは常温(37°C)培養で生まれたコントロール群より低い体温を示した。また、この低い体温には、高温培養群でのエポキシゲナーゼ系の活性化が関与する可能性が推察された。そこで、低温(36°Cと36.5°C)培養も試みた。しかし、ほとんどマウスは誕生せず、生まれてもすべて12週間の内に死亡した。そのために低温培養の結果を得ることができなかった。長い月日をその実験に使用してしまった。そのため、一部の研究しかできなかったとともに、次年度使用額が生じた。
HCV IRESによるリボソーム・ハイジャックの分子機構

ヒト由来因子によって再構成した試験管内翻訳システムの大量反応系を用いて、クライオ電子顕微鏡を用いた立体構造解析のための試料を調製した。ヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック後複合体について、3.9Åの分解能で構造決定した。また、ヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック前複合体についても、3.9Åの分解能で立体構造を決定した。蛍光顕微鏡による一分子観察によって、確かにHCV IRESが翻訳中の80Sリボソームに結合していることを確認した。さらに生化学的な実験により、HCV IRESは空のリボソームよりも、翻訳中のリボソームの方がより効率よく下流の翻訳を誘導できることを明らかにした。これらの結果によりHCV IRESの宿主翻訳系のハイジャックシステムが明らかになり、Molecular Cell誌に報告した。HCV IRESによる翻訳開始と競合して翻訳開始に機能する翻訳開始因子eIF4Aについて、翻訳阻害剤RocAと連続プリン配列、ATPアナログの4者複合体の結晶構造解析に成功し、生化学的・計算科学的な結果と合わせてMolecular Cell誌に報告した。HCV IRESによる翻訳開始と競合して翻訳開始に機能する翻訳開始因子eIF2とeIF2Bについて、これらの複合体の立体構造をeIF2のリン酸化のある場合とない場合の両方について決定した。eIF2はリン酸化の有無に応じてeIF2Bとの結合様式を生産的あるいは非生産的結合という大きく異なる2つの形に変化させることが明らかになった。リン酸化eIF2のリン酸化セリンはeIF2内部のアルギニン、リジン、アスパラギン酸と静電的相互作用をすることで、C末端側のアルギニンに富む正に帯電したループを突き出す構造を取り、非生産的結合が可能になることを明らかにした。この結果をScience誌に報告した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。精製したヒト由来因子によって再構成した試験管内翻訳システムについて大量反応の系を構築した。リボソームの60Sおよび40Sサブユニット、翻訳開始因子eIF3、eIF2、翻訳伸長因子eEF2、tRNAミックスについては大量に培養したHeLa細胞から効率よく精製する系を構築した。また、eIF2BやeEF1、DHX29、アミノアシルtRNA合成酵素群などについては、FreeStyle 293-Fを用いた培養システムにより、大量に効率よく精製する系を構築した。eIF1やeIF1Aなどの因子については大腸菌を用いて大量精製した。これらのヒト由来因子の大量精製系の構築により、試験管内翻訳システムの大量反応が可能となり、これをリボソームの立体構造解析へと適用することが可能となった。このシステムを用いて試料を調製し、クライオEM法を用いてヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック後複合体の立体構造解析を進め、コンセンサスマップで4Åを切る分解能で構造決定した。これにより、解析開始時の粒子数を増やすことによって最終的には4Åを切る分解能で立体構造を決定することが可能であろうことが示された。また、ヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック前複合体の立体構造解析を目的とした試料の調製法についても検討を重ね、その準備を完了した。生物物理学的な手法により翻訳イベントの順序を解析するための準備として、40Sサブユニットの蛍光ラベル法の検討に入った。CRISPR/Cas9システムにより、RPS25リボソームタンパク質KO株の構築をHEK293T細胞を用いて開始した。解析に必要な試料や手法は整いつつあり、ほぼ計画通りに進行しているため。前年度までに確立した精製したヒト由来因子によって再構成した試験管内翻訳システムの大量反応系を用いて、クライオ電子顕微鏡を用いた立体構造解析のための試料を調製した。100 uLから200 uLの試験管内翻訳反応液で電子顕微鏡による測定に十分な試料を調製できることを見出した。クライオ電子顕微鏡法を用いてヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック後複合体について、3.9Åの分解能で構造決定した。また、ヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック前複合体についても試料の調製と電子顕微鏡による測定に成功し、3.9Åの分解能で立体構造を決定した。これらのハイジャック前複合体とハイジャック後複合体の考察により、HCV IRESによる宿主翻訳機構の乗っ取りメカニズムについて新しい説を提唱することが可能になった。この説を更に検証するために、生物物理学的な手法により翻訳イベントの順序を解析することを目指し、ヒト40SサブユニットのRPS25リボソームタンパク質に特異的に蛍光ラベルする手法を確立した。HCV IRESによる翻訳開始と競合して翻訳開始に機能する翻訳開始因子eIF4Aについて、翻訳阻害剤RocAと連続プリン配列、ATPアナログの4者複合体の結晶構造解析に成功した。本結晶構造によりRocAの翻訳阻害メカニズムの詳細を明らかにすることができた。さらに本研究で確立したヒト由来試験管内翻訳システムを用いて、その機能解析をすすめ、eIF4AにおけるRocAの感受性の鍵となる残基を検証した。目的としていた標的の構造解析にすでに成功しており、ほぼ計画通りに進行しているため。

また、ヒトリボソームとHCV IRESのハイジャック前複合体についても、3.9Åの分解能で立体構造を決定した。蛍光顕微鏡による一分子観察によって、確かにHCV IRESが翻訳中の80Sリボソームに結合していることを確認した。さらに生化学的な実験により、HCV IRESは空のリボソームよりも、翻訳中のリボソームの方がより効率よく下流の翻訳を誘導できることを明らかにした。これらの結果によりHCV IRESの宿主翻訳系のハイジャックシステムが明らかになり、Molecular Cell誌に報告した。HCV IRESによる翻訳開始と競合して翻訳開始に機能する翻訳開始因子eIF4Aについて、翻訳阻害剤RocAと連続プリン配列、ATPアナログの4者複合体の結晶構造解析に成功し、生化学的・計算科学的な結果と合わせてMolecular Cell誌に報告した。HCV IRESによる翻訳開始と競合して翻訳開始に機能する翻訳開始因子eIF2とeIF2Bについて、これらの複合体の立体構造をeIF2のリン酸化のある場合とない場合の両方について決定した。eIF2はリン酸化の有無に応じてeIF2Bとの結合様式を生産的あるいは非生産的結合という大きく異なる2つの形に変化させることが明らかになった。リン酸化eIF2のリン酸化セリンはeIF2内部のアルギニン、リジン、アスパラギン酸と静電的相互作用をすることで、C末端側のアルギニンに富む正に帯電したループを突き出す構造を取り、非生産的結合が可能になることを明らかにした。この結果をScience誌に報告した。ハイジャック後複合体の立体構造解析については、粒子数を増やして分解能の向上を目指す。ハイジャック前複合体の立体構造解析については、試料の調製法は整っているため、電子顕微鏡による測定から定法に従って解析へと進める。40Sサブユニットの蛍光ラベル体が調製できれば、翻訳イベントの順序の解析へと進める。ハイジャック後複合体とハイジャック前複合体について、さらなる考察を進める。生物物理学的手法を用いて、HCV IRESのハイジャックに関する翻訳イベントの順序の解析を進める。これまでの成果を原著論文として発表することを目指す。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
口腔レンサ球菌心内膜定着因子の同定・解析-モノクローナル抗体作製を通じて-

本年度は、昨年度に経過途中となっていたGranulicatella adiacensのFn表層物質の精製を継続して行った。アフィニティークロマトグラフィーで得られたタンパクをSDS-PAGEにて展開したところ、いくつかの主要な分子が検出された。そのうち、約80kDaと約100kDaの2つの分子はG.adiacensの超音波破砕上清中の主要な分子と一致した。同時にStreptocpccus pyogenesで同定されているFn結合タンパクの塩基配列を基に、G.adiacensのFn結合物質の同定を試みた。S.pyogenesのFn結合タンパクの一つであるPrtF1を鋳型として、PCRを行ったところ、prtF1-like geneとして、605 bpのPCR産物が得られた。ホモロジー検索の結果、streptococcus gordoniiのFn結合タンパクの一つであるCshA C末端のFn結合領域であるくり返し領域と高いホモロジーが得られた。この繰り返し領域について、発現プラスミドを作製した。得られたリコンビナントタンパクをG.adiacens5とともに反応させると、G.adiacensのFnに対する付着を3040%抑制した。以上のことから、本繰り返し配列は、Fn結合能を有し、Fn結合タンパクの一部であることが示唆された。しかし、付着抑制が十分でないことから、この繰り返し領域以外にも付着に関与する領域が存在することが予測され、上記の分子のいずれかが、本研究で同定された、くり返し配列を含むFn結合物質と考えられる。さらに、別のFn結合物質の存在も示唆され、これらの活性が検出されている可能性がある。今後これらを同定し、Fnへの結合能の解析を行う予定である。本年度の計画は、モノクローナル抗体(mAb)の作製、つまり1)免疫原(FnBP)の調整、2)抗体の調整を行うことである。1)免疫原(FnBP)の調整に関してはG.adiacensの超音波処理上清からFn結合性物質(FnBP)を粗精製し、これを免疫原に用いるために、Fnを固相化したアフィニティーカラムに、G.adiacensの超音波処理上清を添加し、結合した物質をpH8.5のバッファーで解離させ回収した。この粗精製FnBP画分の純度をSDS-PAGEで分析し、Fn結合活性はビオチン化G.adiacens菌体のFnへの結合を阻害する活性で確認した。この粗精製FnBP画分はG.adiacens菌体のFnへの結合を阻害した。この画分をSDS-PAGEで分析し銀染色による検出を試みた。検出反応はわずかであるため、この方法では目的とする粗精製FnBP画分の同定には至らなかった。同定に必要な容量を得るために、Fnをビーズにカップリングさせて、G.adiacensの超音波処理上清と反応させるbatch法にて同様にFnBPを回収し、SDS-PAGEにて分析を行った。その結果、複数の細かいバンドを含む4つの主なバンドが得られた。このうち高分子の2つのバンドはアフィニティーカラムで得られたメインバンドと一致した。この物質をイオン交換クロマトグラフィーに添加して、SDS-PAGEで展開後、目的とするバンドをウエスタンブロットにてPVDF膜に転写し、アミノ酸シークエンスを行った。しかし、それらは、N末端が修飾されており解析に至らなかった。そこで、G.adiacensの超音波処理上清を界面活性剤の有無や濃度を検討しながら、ゲルろ過クロマトグラフィーに添加し、同様の反応を解析した。その結果メインバンド数本程度までの精製には至らなかった。現在、G.adiacensの超音波処理上清を精製すべくさらに、疎水クロマトグラフィー等行っているところであり、2)抗体の調整は、現在進行中の結果を基に、検討していく。
ヒトiPS細胞から膵芽細胞への分化調節分子の同定とその役割の解明

移植医療や創薬への応用に向けて、ヒト幹細胞(ヒトES/iPS細胞)から膵細胞を作製する研究が精力的に進められている。発生学の知見に基づき、様々な膵細胞を分化誘導することが可能となってきたが、不安定な作製効率や、目的外細胞の混入など解決すべき課題が多くある。その原因の一つとして、膵臓の基となる膵芽細胞への分化機序の全貌が不明であることが挙げられる。本研究では、膵芽細胞に特異的なマーカー遺伝子NKX6.1を指標として、ヒトiPS細胞から膵芽細胞への分化を調節する分子を網羅的に探索・同定し、その役割を解明することを目的としている。まず、膵芽細胞への分化に関わる分子を同定するために、siRNA導入による網羅的な遺伝子発現抑制スクリーニング系の構築を試みた。蛍光色素が付加されたオリゴを用いて導入効率の改良・安定化した後、ポジティブコントロール・ネガティブコントロールを用いて評価系の安定性、検出感度を改良した。続いて、この系を用いて719種類の遺伝子を評価し、29種類の候補遺伝子を得た。現在、同一オリゴによる二度目の試行にて再現性良くNKX6.1+細胞への分化を抑制あるいは促進する候補遺伝子を確認している。また、網羅的解析の加速や、候補遺伝子の精査に向けて、NKX6.1の発現と相関して蛍光色素を発現するレポーターヒトiPS細胞株を樹立した。改変した遺伝子が正確に導入された細胞株を選別し、分化誘導することでNKX6.1の発現と相関して蛍光色素が発現する細胞株であることを確認した。本研究の目的である、膵芽細胞(NKX6.1+)への分化機序解明に関して、新規経路を同定するためのsiRNAスクリーニング系を構築し、候補となる遺伝子をいくつか得た。また、解析に有用なレポーター細胞株を樹立した。これらによって分化機序の解明が進展すると考えられるため、目標達成に向けて順調であると考える。候補遺伝子を絞り込むため、1次スクリーニングと同一のオリゴによる二度目の試行にて再現性良くNKX6.1+細胞への分化を抑制あるいは促進する標的遺伝子の候補を得る。続いて、これら候補遺伝子に対して、既報や遺伝子の情報(上流・下流分子との相関性など)から経路を推定し、優先順位を決定する。そして、優先順位の高いものから、同一遺伝子に対する別の配列を持ったオリゴを用いた発現抑制によって、その遺伝子の分化過程への関与を再検証し、以後の解析候補遺伝子とする。分化過程における候補遺伝子の役割を推定するため、様々な分化誘導因子、刺激タイミングなどに対する候補遺伝子の発現・活性への影響を検討する。また、平面あるいは細胞塊の浮遊培養など、異なる培養フォーマットを用いて、いずれの分化培養系においても関与することを示す。続いて、推定した役割を検証するため、任意のタイミングで目的遺伝子の発現量を調節できるヒトiPS細胞株を樹立する。そして、この細胞株から分化誘導した膵系譜の細胞に対して、標的分子のシグナルを直接活性化し(野生型あるいは活性型の発過剰現)、膵芽細胞への分化が促進あるいは阻害されるか検討する。細胞株樹立には、遺伝子が正確に導入され、遺伝子導入後も分化誘導効率が正常かつ、標的分子候補の活性調節可能な細胞株を選別する。候補分子の活性調節にて作製されるNKX6.1+細胞が膵芽細胞であることをin vitroやin vivoにて検証する。

続いて、これら候補遺伝子に対して、既報や遺伝子の情報(上流・下流分子との相関性など)から経路を推定し、優先順位を決定する。そして、優先順位の高いものから、同一遺伝子に対する別の配列を持ったオリゴを用いた発現抑制によって、その遺伝子の分化過程への関与を再検証し、以後の解析候補遺伝子とする。分化過程における候補遺伝子の役割を推定するため、様々な分化誘導因子、刺激タイミングなどに対する候補遺伝子の発現・活性への影響を検討する。また、平面あるいは細胞塊の浮遊培養など、異なる培養フォーマットを用いて、いずれの分化培養系においても関与することを示す。続いて、推定した役割を検証するため、任意のタイミングで目的遺伝子の発現量を調節できるヒトiPS細胞株を樹立する。そして、この細胞株から分化誘導した膵系譜の細胞に対して、標的分子のシグナルを直接活性化し(野生型あるいは活性型の発過剰現)、膵芽細胞への分化が促進あるいは阻害されるか検討する。細胞株樹立には、遺伝子が正確に導入され、遺伝子導入後も分化誘導効率が正常かつ、標的分子候補の活性調節可能な細胞株を選別する。候補分子の活性調節にて作製されるNKX6.1+細胞が膵芽細胞であることをin vitroやin vivoにて検証する。