hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
首都圏方言の実態に関する基礎的研究

本研究は、現代共通語の基礎となる首都圏の方言の現状をその伝統的な方言との対比の中で見ようとしたものである。今回は、神奈川県・山梨県・埼玉県そして隣接する静岡県東部において調査を実施した。その結果、共通語化・東京語化がかなり進行しているが、東京語の古層と考えられるアクセントや音声事象・文法事象が現在でも見られることを確認した。また、都内の大学に通う大学生に対するアンケート調査を実施し、青年層のことばの実態を見た。本研究は、現代日本共通語の基盤となっている首都圏方言の調査・分析を目的とし、東京および東京周辺地域において、音声・アクセントを中心とする質問法調査および自然談話の収録、そしてその分析を行っている。平成21度は、山梨県上野原市、埼玉県南埼玉郡白岡町、静岡県賀茂郡松崎町、静岡市において、調査を実施した。上野原市は、東京都に隣接しているが、アクセントには東京方言で古いとされる発音が聞かれ、イントネーションにも、東京とは異なる特徴が見られることを確認した。埼玉県白岡町は、埼玉特殊アクセントとして有名な地域の中にあるが、若年層においてはすでに、その特徴はあまり目立たなくなっている。しかし、老年層は、従来のアクセントを今も保持していることを、読み上げ式調査および自然談話から確認し、自然談話については文字化作業を行った。静岡県松崎町では、周辺地域とは様相を異にするアクセントについて調査を行うとともに方言語彙の調査を行った。静岡市においては、談話の収録とおよそ35年前に実施した言語地理学的調査の結果と対比するための調査行った。その結果、現在70歳代の人々は語頭のP音をはじめ、伝統的な方言を使用していることが確認された。これら採取した資料は現在分析中である。また、松崎町で収録された自然談話の資料から、準体助詞と準体法の用法の分析を行った。今回調査した地点の方言については、少数を除きほとんどなされていない上、いずれの地域においても伝統的な方言は現在の老年層以下の世代には見られなくなってきている。その点で、この記録は今後の研究のためにも有用であると考える。また、現在の若い世代における首都圏方言を見るため、東京にある大学の学生を対象とするアンケート調査を行い、その結果を分析した。現在首都圏で起こりつつある変化の一端を記述分析することができたと考える。神奈川県小田原市において方言調査を行った。調査はアクセント、文法(推量の助動詞べーの用法が中心)、食に関する語彙についてが主である。アクセントは昨年度実施した山梨県上野原市と同様、類別語彙と複合語などの調査を行い、東京語の古い発音が確認された。べーは東日本方言に広く見られる形式であるが、その用法は地域によって異なる。今回はべーの使用地域でも最も西に近い方言での用法を確認したものである。また食に関する語彙は山梨県上野原市、静岡県賀茂郡松崎町等でも調査してきたが、来年度これらの地点との比較を行う予定である。この他に、一人称代名詞としての「自分」の使用について、歴史的に見た。この語は軍隊用語そして現代では階級社会的な組織にいる人やその出身者が用いる語であるが、日本において軍隊が組織された明治期の文献にはあまり見られない。それがいつ頃から用いられるようになったのか、また陸軍軍人に広く用いられるようになった理由について推測を行った。さらに、現代の首都圏の大学に在学する学生と対象とする調査を行い、若者のアクセントに対する意識や首都圏の特に若年層広まりつつある終助詞「し」や「普通に」の用法及びその広まりについて考察を行った。また、松崎方言の談話資料により、そのアクセントについて分析を行っている。この方言は東京式アクセントではあるが、これまでもその特殊性で有名であるが、これまでの研究は名詞を中心としていた。今回は、動詞や形容詞など他の品詞についても考察を広げている。本年度は、神奈川県小田原市穴部において多人数調査を行った。調査項目はアクセント55、音韻36、文法9,語彙4項目で、調査協力者は86歳から11歳までの72名である。この調査によって、アクセントには東京語の古い型が老年層を中心に発音されることが確認できた。また、音声項目のうち、連濁については現在の東京語ではあまり見られなくなった形が用いられていることも確認できた。このように、東京より古い姿が見られる一方で、若年層を中心に東京語と同じ変化を示すものの存在も認められた。さらに、「雰囲気」のフインキ、「原因」のゲーイン、「体育」のタイクといった発音は高年層にも見られ、首都圏方言の伝統的方言に既に存在していた可能性を示唆する可能性があることも示すことができた。また、ラ行音の撥音化は、関東全域はじめ全国に広く見られる現象であるが、神奈川県小田原市の方言では他の方言より多くの環境で撥音化が見られる。この撥音化の現象の現状も、多人数調査によって確認した。

その結果、小田原市方言では、他の関東方言によく見られる、n音で始まる形式の前だけではなく、他の音で始まる形式が後接する場合にも撥音化すること、この現象は現在の若い世代においても見られること、その使用には性差があること、その原因として撥音化した発音に対する意識が関与していることを明らかにした。これらの事象については東京語についても詳細な調査研究がないものであり、東京および東京周辺の言葉を考えていくときの、基礎となるものと考える。
ヒト高病原性新型ブニヤウイルスの病原性発現メカニズムの解明

1SFTSフレボウイルス(SFTSV)は2011年に中国で発見され、その後我が国でも発見された、新規のフェニュイウイルス科フレボウイルス属に属する新興ウイルスであり、重症熱性血小板減少症候群の原因ウイルスである。SFTSVはヒトには病原性があるが、実験動物であるマウスには病原性を示さず、マウスはSFTSVを自然免疫依存的にその病原性を抑制していることがわかっている。そこで、その病原性の差異を理解することはSFTSVの制御につながると考え、その原因を探索することを目的とした。前年度では、IFNシグナル阻害活性を有するSFTSVのNSsタンパクがヒトでは機能するが、マウスでは機能しないことを見出した。また、それはNSsがIFNシグナルにおいて重要な役割を担う、宿主タンパクであるSTAT2と結合できないためであることを見出した。今年度はマウスに加えて、SFTSV非感受性であるハムスターでも同様な現象がみられることを確認した。その結果、NSsはハムスター細胞においてマウスと同様にIFNシグナルを阻害できず、NSsはハムスターSTAT2と結合できなった。そのため、ハムスターもマウスと同様の機構でSFTSVを抑制していると考えられる。このことから、NSsの抗STAT2活性が病原性を規定し、その宿主特異性を規定していると強く言えると考えている。この結果から、NSsとSTAT2がSFTSVの治療標的になりうると推察している。これらの結果をまとめ、現在論文投稿準備中である。2昨年度に引き続きSFTSVのリバースジェネティクスの開発を進めた。その結果、一定の成果が得られた。29年度が最終年度であるため、記入しない。1血小板減少症の原因ウイルスとしてブニヤウイルス科のsevere feverwith thrombocytopenia syndrome(SFTSV)が有名であるが、その詳細なメカニズムはいまだに不明である。一方、自然科学研究機構生理学研究所の動物施設にて典型的な血小板減少症の症状により複数のニホンザル個体が死亡する事例があった。そこで、メタゲノム解析を行ったところ、SFTSVとは異なるサルレトロウイルス5型(SRV5)と強い相関がみられた。本実験ではSRV-5のウイルス分離及び全長配列の同定に成功した。また、ニホンザルに実験感染することで病気を再現することに成功した。即ちSRV-5がニホンザル血小板減少症の原因ウイルスであることを同定した。2宿主のA3タンパクはレンチウイルスの感染を抑制することが分かっている。一方、レンチウイルスがコードするVifタンパク質は、A3タンパク質を分解することにより、その抗ウイルス活性を拮抗阻害する。近年、イエネコのA3の一つであるA3Z3遺伝子には多型があり、少なくとも7つのハプロタイプ(Hap I-VII)があることが報告された。しかしながら、このイエネコAPOBEC3Z3の多型とネコのレンチウイルスであるFIVのVifの機能的・進化的関連については不明であった。本研究ではHapVがFIV Vifに対して抵抗性であることを示し、HapVが進化的に正の進化を遂げてきたことを初めて実証したものである。つまり、イエネコの進化過程において、A3Z3 Hap Vが正に選択されてきたこと、またその進化が祖先のFIV Vifタンパク質によって駆動されたことが強く示唆された。今年度は新たに血小板減少症の原因ウイルスがSRV-5という新規のウイルスであることを証明できた。加えてウイルスと宿主の共進化についても実験科学として実証し、進化学的にも大変有意義な研究が遂行できた。故におおむね順調に進展しているといえる。SFTSウイルス(SFTSV)は2011年に中国で発見された、新規のブニヤウイルス科フレボウイルスであり、重症熱性血小板減少症候群の原因ウイルスである。SFTSVはヒト特異的に病原性を示すウイルスとされており、実験動物として一般的であるマウスには感染するが病原性を示さないことが知られている。一方、自然免疫で重要とされているI型インターフェロン受容体欠損しているマウス(IFNar KOマウス)やSTAT2を欠損させたマウス(STAT2KOマウス)に対しても高い感受性を示す。このことから、マウスはSTAT2依存的な自然免疫によってSFTSVを制御していると考えられる。SFTSVのゲノム中にはNSsがコードされている。NSsはヒトSTAT2と結合しリン酸化を阻害することでI型IFN反応を抑制する。そこで、SFTSVのNSsはマウスSTAT2の機能を抑制できず、SFTSVはマウスで病原性を示さないのではないかと仮説を立てた。本研究ではNSsのマウスSTAT2に対する感受性を調べることを目的とする。様々な分子生物学的手法を用いて検証したところ、NSsはマウス細胞でI型IFN反応を抑制できず、マウスSTAT2と結合できないことがわかった。また、NSsはマウスSTAT2のリン酸化を抑制できないことも解明した。以上の結果からSFTSVのNSsはマウスSTAT2と結合できないために、そのリン酸化を阻害できず、I型IFN反応を抑制できないと考えられる。そのため、通常のマウスにおいてはSFTSVが感染した際にNSsがマウスのI型IFN反応を抑制することができず、ヒトで見られるような病原性を示さないと考えられる。このことから、SFTSVのNSsと宿主のSTAT2の関係性がSFTSVの宿主特異性を決定している一つの要因であると推察できる。

本年度の計画通り、SFTSVの宿主特異性はウイルスのNSsと宿主のSTAT2の関係性が規定していると推察されるデータが取れた。加えてSFTSVのリバースジェネティクスシステムの開発に必須である全ウイルスゲノムのクローニングに成功している。故におおむね順調に進展していると言える。1SFTSフレボウイルス(SFTSV)は2011年に中国で発見され、その後我が国でも発見された、新規のフェニュイウイルス科フレボウイルス属に属する新興ウイルスであり、重症熱性血小板減少症候群の原因ウイルスである。SFTSVはヒトには病原性があるが、実験動物であるマウスには病原性を示さず、マウスはSFTSVを自然免疫依存的にその病原性を抑制していることがわかっている。そこで、その病原性の差異を理解することはSFTSVの制御につながると考え、その原因を探索することを目的とした。前年度では、IFNシグナル阻害活性を有するSFTSVのNSsタンパクがヒトでは機能するが、マウスでは機能しないことを見出した。また、それはNSsがIFNシグナルにおいて重要な役割を担う、宿主タンパクであるSTAT2と結合できないためであることを見出した。今年度はマウスに加えて、SFTSV非感受性であるハムスターでも同様な現象がみられることを確認した。その結果、NSsはハムスター細胞においてマウスと同様にIFNシグナルを阻害できず、NSsはハムスターSTAT2と結合できなった。そのため、ハムスターもマウスと同様の機構でSFTSVを抑制していると考えられる。このことから、NSsの抗STAT2活性が病原性を規定し、その宿主特異性を規定していると強く言えると考えている。この結果から、NSsとSTAT2がSFTSVの治療標的になりうると推察している。これらの結果をまとめ、現在論文投稿準備中である。2昨年度に引き続きSFTSVのリバースジェネティクスの開発を進めた。その結果、一定の成果が得られた。28年度は長崎大学の安田二朗教授のご協力のもと、SFTSVの病原性メカニズムを様々な宿主因子をノックアウトしたマウスを用いて解析する予定である。また、動物間での病原性の違いのメカニズムを解析する予定である。29年度は現在申請中の第二種使用等拡散防止措置確認申請書が受理された暁には組換えウイルスの作製に取り掛かる。その後、様々な変異体を作出し、その機能を細胞及び個体レベルで確認する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。
経済危機後のアセアン諸国におけるコメ政策の変革に関する研究

本研究では、東南アジアの米輸出国、輸入国(タイ、インドネシア、フィリピン)について、為替レートの過大・過小評価を考慮に入れた上で国際競争力を推計し、自由化した場合におけるそれぞれの国における米産業への影響と、今後の経済発展による国際競争力の変化の予測を行い、それぞれの国に適した米政策の改革方向を検討しようとした。そこで得られた成果は、以下のとおりである。1)タイについては、国際競争力を依然保持しているものの、経済発展にともなう労働賃金の上昇などにより、競争力が低下する傾向にあること、および、稲作面積の多くを占める東北タイを中心とする天水田地帯において、とくに労賃上昇の影響が深刻であることを明らかにした。2)インドネシアについては、現行為替レートの水準においては、依然、国際競争力があるものの、現在の為替レートは過小評価されており、もしこれが是正されたなら必ずしも競争力があるとはいえないこと、および、地力の低下により病虫害の被害を受けやすく、生産が不安定になり農民の米増産意欲が削がれるなど、今後国際競争力を維持するには多くの問題を抱えていることが明らかとなった。3)フィリピンについては、為替レートの過大評価を是正すれば、従来指摘されているほど、国際競争力が低下しているとはいえないにもかかわらず、今後、経済発展にともない労賃が上昇した場合には、国際競争力を失う可能性が高い段階に達していることを明らかにした。以上の研究成果により、アセアン先進3カ国における食料農産物の国際競争力・供給力が低下する可能性が高いことが示された。今年度は、インドネシア、タイ、フィリピン、ベトナムを訪問し、コメ政策の現況についての情報を収集すると同時に、各国における国際競争力の指標である、DRC(Domestic Resource Cost)を推計するために必要な、生産費、生産物・生産要素の価格、生産要素の輸出・輸入統計、名目為替レート、CPI、国際収支、国民所得統計などの統計資料を収集した。また、タイにおいては、東北部スリン県で、Jasmine Riceの生産と流通に関する実態調査を実施した。以上の調査・研究活動によって得られた知見にもとづき、フィリピン、タイについては、国際競争力の推計を行い、コメ政策の方向について考察した。フィリピンについては、90年代に入って国際競争力が低下しているという従来の指摘に反して、依然、国際競争力を保持しているが、今後については、労働節約的技術進歩の進展如何で、競争力が低下する可能性のあることを、明らかにした。一方、タイについては、通貨危機以降のバーツ安により、タイ米の国際競争力が向上していること、およびJasmine Riceについては、その技術的特性から、何らかの労働節約的技術革新が無ければ、競争力の低下が見込まれることを、明らかにした。インドネシア、ベトナムについては、来年に分析を行い、4カ国の比較をすることによって、AFTA、WTO体制下での東南アジアにおけるコメの貿易体制を予測したい。今年度は、フィリピン、インドネシア、タイを訪問し、米政策についての最新情報を収集した。フィリピンについては、国家食糧公社(NFA)の分割・民営化が実施されず、関税化が2005年まで先延ばしされたのに対して、インドネシアでは、食糧庁(BULOG)による米の輸入が禁止され輸入が民間部門に委ねられることとなった。また、タイにおいては、生産性は高いが低品質のJasmine Riceの新品種が配給され、Jasmine Riceの価格が急落するという事態が発生した。このような情勢の中で、タイ、インドネシアから研究者を招聘し、彼らとの共同研究という形で、フィリピンを加えた3ヶ国における米の国際競争力の変化を、前年度収集した統計資料を利用してDRC(Domestic Resource Cost)を推計した。その結果、1)経済危機後、名目為替レートが大幅に減価したのもかかわらず、実質均衡為替レートで計ったDRCは高くなる傾向を示し、3ヶ国とも米の国際競争力は低下していること、2)DRCは、雇用労賃の上昇、米価・収量により敏感に反応することが明らかになった。

また、インドネシアにおいては、ジャワ農村における実態調査の結果から、米穀管理政策の自由化が価格や収量の不安定性を招き、それが農民の生産意欲を削減し米生産を停滞させている、という分析結果を得た。以上の分析から、米の国際競争力が低下し国際価格も低下傾向にあるアセアン諸国において、今後とも稲作部門の発展を持続させてゆくには、生産性を向上させるような技術革新、あるいは政府による保護政策の実施、のいずれかの施策が不可欠であると結論づけることができる。
ゴッフマン理論の基盤研究と応用可能性-現代社会における戦略的相互行為の分析

本研究の目的は、1)ゴッフマン理論研究者であるイヴ・ヴァンカン教授(エコール・ノルマル・シューペリウール文学・人文科学校、以下ENS LSHと表記する)所有のアーカイブス調査研究を継続的に行うことを通じて、ゴッフマン理論の総合的・基盤的研究を進めること、そして2) ENSLSHとリヨン第二大学との共同研究チーム「相互行為・身体・学習そして表象」に参加することを通じて、ゴッフマンの相互行為論を理論的フレームワークとした経験調査である「日常的相互行為におけるイメージコンサルタントの介入-日仏比較研究」を進めること、以上の二点にある。これら二つの研究を総合的にまとめた著作(単著)の出版には、未だ至っていないが、以下に示すように、論文として学術雑誌や著作(共著)として部分的にまとめつつある段階にある。平成21年度の研究実績本研究は、1.アメリカ社会学者E.ゴッフマン理論の総合的・基盤的研究を行うこと、及び2.同理論を分析枠組みとしつつ、現代社会における女性の身体統制に関わる比較文化研究を行うこと、にある。平成21年度は、主に以下の活動を通して研究の促進に努めた。4月から6月にかけては、日本(東京)を拠点に女性の身体統制に関わる調査研究を進め、同時に関西社会学会をはじめとした各学会に参加した。7月には、神戸大学において開催された、香港大学・神戸大学合同コロキウムにおいて、女性の身体統制に関する調査報告を行った。9月には、女性の身体統制に関する比較調査を行うために台湾(国立台湾大学)に渡航した。滞在中、イメージコンサルタントにたいしてインタビュー調査を実施した。10月には、日本社会学会をはじめとした各学会に参加した。11月にはリヨン高等師範大学人文科学校Y.ヴァンカン教授所有のゴッフマン・アーカイブスの調査に従事した。滞在中、同教授とのゴッフマン理論に関するディスカッションを進めると同時に、ゴッフマンが中期にゲーム理論を踏まえて展開した、戦略的行為論の理論的フレームワークを詳細に分析した。具体的には、ゴッフマンのハーバード大学国際問題研究所においての滞在記録、およびその際にゴッフマンによって進められたフィールドワークの記録や、ヴァンカン教授が1997年から98年にかけてペンシルバニア大学客員教授として滞在した際に収集したゴッフマン・アーカイブスの記録、および同僚へのインタビューの記録等である。(平成22年)1月には、女性の身体統制に関する比較調査を続行するために、再度台湾(国立台湾大学)に渡航した。滞在中、台湾における一般女性にアンケート調査を実施した。2月から3月にかけては、リヨン高等師範大学での研究成果をまとめること、及び女性の身体統制に関する一連の調査をまとめることに従事した。平成22年度の研究実績本研究は、1.アメリカ社会学者E.ゴッフマン理論の総合的・基盤的研究を行うこと、及び2.同理論を分析枠組みとしつつ、現代社会における女性の身体統制に関わる比較文化研究を行うこと、にある。平成22年度は、主に以下の活動を通して研究の促進に努めた。4月から8月にかけては、日本(東京)を拠点に女性の身体統制に関わる調査研究を進め、同時に関西社会学会をはじめとした各学会に参加した。10月には、フランスに渡航し、高等師範大学リヨンヴァンカン教授のもとで、アーカイブス調査に従事した。この度の渡航を通じて、アーカイブスにおける未公刊資料を検討するとともに、同教授とのセッションを通じた、現代社会における女性の身体統制を分析するための理論的フレームワークを構築することに従事した。11月には再度台湾に渡り、国立台湾大学において女性の身体統制に関する学会報告を行った。また、日本社会学会においては、ゴッフマン理論とエスノメソドロジーの関係性に関わる報告を行った。(平成23年)1月には、香港大学において、女性の身体統制に関する学会報告を行い、東アジアにおける同研究の比較検討を行うことが可能になった。また2月には、大阪府立大学において開催された第3回社会構築主義の再構築プロジェクト研究会(略称RSC研)に参加し、アーカイブス調査を踏まえたゴッフマン理論とガーフィンケルの関係性についての研究報告を行った。平成23年度の研究実績本研究は、1.アメリカ社会学者E.ゴッフマン理論の総合的・基盤的研究を行うこと、及び2.同理論を分析枠組みとしつつ、現代社会における女性の身体統制に関わる比較文化研究を行うこと、にある。本年度は、主に以下の活動を通して研究の促進に努めた。全体を通じては、女性の身体統制に関わる調査研究を洗練させつつ、継続していくこと、そしてそれらのデータを分析するための理論構築を行うことに従事してきた。

また、本年度は本科研費受給最終年度ということもあり、今後も研究を継続していくために必要であると思われる、国際的な研究者ネットワークを形成することにも尽力した。その活動の一環として、5月には、浙江大学において、日本文化研究者の王勇教授のもとを訪問し、同氏が企画したワークショップに参加することなどを通じて、東アジア社会における社会規範と身体統制の関係について考察を深めた。9月には、女性の身体統制に関する比較調査を行うために台湾(国立台湾大学)に渡航した。本渡航期間中に、インタビュー調査と文献収集を行うことが可能になった。また、国立台湾大学におけるジェンダー研究所を訪問し、国際的な研究者ネットワークを構築することにも努めた。11月には、韓国ヨンセイ大学において開催された社会学(東アジア研究)関連のシンポジウム(組織者:同大学キム・ドンノ教授)に参加し、東アジア地域における社会学者やジェンダー研究者とのネットワーク構築に従事した。3月には、インディアン・ハビタットセンター(デリー)において、これまでの調査データをもとにした研究報告を、IIS(国際社会学機構)国際学会において行った。
卵巣表層上皮をもちいた上皮性卵巣癌発生過程に関与する因子の同定・解析

【目的】予後不良例が多いために臨床的に大きな問題である上皮性卵巣癌の発癌機序の分子レベルでの解析をめざした。本研究ではまず卵巣癌との関連が示唆される遺伝子を、発生母地とされる卵巣表層上皮(OSE)細胞に遺伝子導入して癌化を誘導し、発癌モデルの確立を試みた。【方法及び結果】培養OSE細胞にSV40largeT抗原(LT)、テロメラーゼ活性を誘導するhTERT、癌遺伝子であるmutant Ha-rasまたはc-erbB-2各遺伝子をリポフェクション法にて導入し、クローニングした。各遺伝子の発現はWestern blotting法等にて確認した。LT、hTERTの導入によりOSE細胞は100代以上の継代が可能となり不死化した。しかしこの細胞はマウスでの腫瘍形成は示さなかった。この不死化OSE細胞にmutant Ha-rasまたはc-erbB-2を導入すると、軟寒天培地中での足場非依存性増殖能が亢進し、さらにBALB/Cヌードマウス皮下ないしBALB/C SClDマウス腹腔内注入にて腫瘍形成を認め、悪性転化したことが確認された。形態学的には未分化な上皮性腫瘍であったが、1例、分化した上皮様形態を示した。この1例は卵巣癌腫瘍マーカーCA125の発現も示した。次に癌化していない不死化細胞と癌化細胞における遺伝子発現の差異をmicroarray法で解析し、これまで卵巣癌との関連が報告されていない、複数の新しい遺伝子の発現異常を見い出した。【結論及び本研究の意義】ras、c-erbB-2癌遺伝子が卵巣癌の発癌過程に関与することが示唆された。また卵巣表層上皮細胞の不死化細胞株、癌化細胞株を確立した。この細胞株のmicroarray法による解析で見い出した遺伝子異常をさらに検討中であるが、この細胞株は他にも応用範囲が広く、今後の卵巣癌発癌過程の解析に貢献しうるものと考えられる。
ミジンコ類の表現型可塑性と化学物質による攪乱影響の評価

「様々な環境ストレスに対して生物が見せる表現型可塑性の優先性を明らかにすること」および,「表現型可塑性の攪乱を介した有害化学物質の生態影響の評価」を目的とし,ミジンコ(Daphnia pulex)を用いた研究を進めている.ミジンコは酸素欠乏,被食リスク,餌不足等の環境ストレスに対して,それぞれ特徴的な形態的・生化学的応答(体液中ヘモグロビン濃度の上昇,防御形態への変化,ろ過スクリーン面積の拡大)を見せる.一方で,農薬類や重金属類を始め,多くの化学物質がそれらの応答の発現を撹乱し,低濃度の汚染であっても生態系構造や機能に影響を及ぼし得ることが懸念されている.本研究では,複合的な環境ストレスに対して変化する表現型の発現パターンを精査するとともに,環境ストレスと化学物質による複合的な生態影響の評価を目指して研究を進めている.上記の環境ストレスの単独もしくは複合的な曝露に対する表現型の応答パターンはH29年度に検証した.これに加え,H30年度は人為的汚染物質の影響を明らかにするため,(1)金属類(銅,ニッケル)がミジンコの繁殖率に影響する濃度を調べ,銅については表現型の発現パターンの解明も試みた.その結果,銅はミジンコのろ過スクリーン面積の変化には影響を及ぼさないことがわかった.体液中ヘモグロビン濃度については現在分析を進めている.また,(2)ミジンコの防御形態の発現を促進する有機リン系殺虫剤(ダイアジノン)と抑制する金属(銅)の個体群レベル影響影響をマイクロコズム実験により検証したところ,ダイアジノンによる防御形態の発現促進が捕食者(フサカ幼虫)による被食率を低下させた可能性が示唆された.さらに,(3)ミジンコが生息する2つの貯水池(古洞池と綿内池)で定期調査を行い,池の水質やプランクトン群集構造とミジンコの表現型の関係を調べた.(3)については現在サンプルの分析を進めている.H30年度は,1人為汚染物質による表現型の発現撹乱パターンの解明(室内実験)および2野外個体を用いた環境評価に関する研究(野外調査とサンプル分析)を計画していた.どちらも十分に実験を進めることができた.ミジンコの体液中ヘモグロビン濃度の分析が一部完了していないが,データが揃い次第,解析を進める.また,H31年度に実施予定であった「表現型可塑性の撹乱による個体群動態への影響」についても,先行して実験を実施することができた.このように,当初の予定以上に順調に研究を進めることができている.H30年度は当初の予定以上に研究を進めることができた.H31年度は最終年度にあたるため,これまでに得られた結果の精査(データ解析)を進めるとともに,必要に応じて再現性の確認と不足部分を補うための実験を行う.それらの結果をふまえ,生態学的知見に基づく化学物質の生態影響評価の必要性を検証する.昨年末には,ミジンコの防御形態を誘導する情報化学物質(捕食者であるフサカが放出するカイロモン)の化学構造(N-Linoleoyl L-glutamine等の複数の物質)がドイツ・オランダの研究グループによって解明された(Weiss et al., 2018,Nature Chemical Biology 14: 1133-1139).カイロモンそのものは市販されていないが,同等の活性を持つと確かめられている物質(N-Linoleoyl glycine)は入手可能であるため,本研究でもこれを使ってこれまでに得られた結果の再現性を検証する予定である.「様々な環境ストレスに対して生物が見せる表現型可塑性の優先性を明らかにすること」および,「表現型可塑性の攪乱を介した有害化学物質の生態影響の評価」を目的とし,研究を進めている.化学物質の生態影響評価において標準試験生物として使用されるミジンコ類は,酸素欠乏,被食リスク,餌不足等の環境ストレスに対して,特徴的な形態的・生化学的応答(表現型可塑性)を見せる.一方で,農薬類や重金属類を始め,多くの化学物質がそれらの応答の発現を撹乱し,低濃度の汚染であっても生態系構造や機能に影響を及ぼし得ることが懸念されている.本研究では,知見が断片的である複合的な環境ストレスに対して変化する表現型の発現パターンを精査するとともに,環境ストレスと化学物質による複合的な生態影響の評価を目指して研究を進めている.H29年度は,予備実験で環境条件などの検討を行った後に,主に上記の環境ストレスの複合曝露に対して変化する表現型の発現パターンを明らかにするための実験を実施した.捕食者(フサカ幼虫)から放出される情報化学物質(カイロモン),及び餌の密度,溶存酸素濃度を2段階のレベルで制御し,全ての組合せでミジンコのクローン個体を培養した.これらの条件下で体成長,防御形態の発現度合い,ろ過スクリーン面積の変化,体液中のヘモグロビン濃度の変化を調べた結果,貧酸素条件や低餌密度条件では形態変化が抑制されること,捕食者の存在下(カイロモン有り)では濾過スクリーン面積の増大率が抑制されることがわかった.体液中のヘモグロビン濃度の上昇については現在サンプルの分析中であるが,異なる環境ストレスに複合的に曝露されることで,特定の表現型応答が制限(あるいは優先的に調節)されることが明確に示唆された.また,低濃度の金属(Ni)曝露と餌密度の複合ストレスによるミジンコの個体群増殖への影響についても,予備的な実験を行った.

H29年度は,1表現型可塑性における発現の優先性の解明(室内実験)および2野外個体を用いた環境評価に関する研究(野外調査とサンプル分析)を計画していた.1については,十分に実験を進めることができた.貧酸素条件下におけるミジンコ(Daphnia pulex)のヘモグロビン生産については,現在サンプルの分析中である.2については,D. pulexの出現時期が春から初夏までのため,本課題の採択・予算配分後の調査では間に合わなかった.そのため,2はH30年度から代表者(坂本)の研究室学生の卒研テーマに設定し,本格的に開始している.「様々な環境ストレスに対して生物が見せる表現型可塑性の優先性を明らかにすること」および,「表現型可塑性の攪乱を介した有害化学物質の生態影響の評価」を目的とし,ミジンコ(Daphnia pulex)を用いた研究を進めている.ミジンコは酸素欠乏,被食リスク,餌不足等の環境ストレスに対して,それぞれ特徴的な形態的・生化学的応答(体液中ヘモグロビン濃度の上昇,防御形態への変化,ろ過スクリーン面積の拡大)を見せる.一方で,農薬類や重金属類を始め,多くの化学物質がそれらの応答の発現を撹乱し,低濃度の汚染であっても生態系構造や機能に影響を及ぼし得ることが懸念されている.本研究では,複合的な環境ストレスに対して変化する表現型の発現パターンを精査するとともに,環境ストレスと化学物質による複合的な生態影響の評価を目指して研究を進めている.上記の環境ストレスの単独もしくは複合的な曝露に対する表現型の応答パターンはH29年度に検証した.これに加え,H30年度は人為的汚染物質の影響を明らかにするため,(1)金属類(銅,ニッケル)がミジンコの繁殖率に影響する濃度を調べ,銅については表現型の発現パターンの解明も試みた.その結果,銅はミジンコのろ過スクリーン面積の変化には影響を及ぼさないことがわかった.体液中ヘモグロビン濃度については現在分析を進めている.また,(2)ミジンコの防御形態の発現を促進する有機リン系殺虫剤(ダイアジノン)と抑制する金属(銅)の個体群レベル影響影響をマイクロコズム実験により検証したところ,ダイアジノンによる防御形態の発現促進が捕食者(フサカ幼虫)による被食率を低下させた可能性が示唆された.さらに,(3)ミジンコが生息する2つの貯水池(古洞池と綿内池)で定期調査を行い,池の水質やプランクトン群集構造とミジンコの表現型の関係を調べた.(3)については現在サンプルの分析を進めている.H30年度は,1人為汚染物質による表現型の発現撹乱パターンの解明(室内実験)および2野外個体を用いた環境評価に関する研究(野外調査とサンプル分析)を計画していた.どちらも十分に実験を進めることができた.ミジンコの体液中ヘモグロビン濃度の分析が一部完了していないが,データが揃い次第,解析を進める.また,H31年度に実施予定であった「表現型可塑性の撹乱による個体群動態への影響」についても,先行して実験を実施することができた.このように,当初の予定以上に順調に研究を進めることができている.H29年度中に,環境ストレス(被食リスク,餌不足,酸素欠乏)の複合曝露に対して変化するミジンコの表現型の発現パターンについては十分に研究を進めることができた.そのため,当初の計画通り,H30年度は人為汚染物質(殺虫剤,金属)によるこれらの表現型の変化の攪乱パターンを明らかにするための実験を行う.
ヒスチジンを含むサイクリックペプチドの試作と大脳活性化物質の開発

脳内視床下部で生産される脳下垂体ホルモン放出ホルモンには、現在のところ哺乳類で知られているものとしてTRH、LHRH、CRH、およびGRH等がある。これらのうち低分子ペプチドであるTRHおよびLHRHは化学構造上大変似ている点がある。どちらもアミノ末端はピログタミン酸で始まりヒスチジンを含みカルボキシ末端はアミノ酸のアミドである。申請者らはすでに哺乳類のラット脳内にピログロタルミルペプチダーゼが存在し、この酵素によってサイクリックペプチドであるヒスチジルプロリンジケトピペラジンが生成し、このペプチドが大脳活性化物質としての働くことと微量定量法であるRIAによる脳内局在とを報告した。これら生理活性ペプチドの多彩な生理作用は、その代謝産物であるサイクリックペプチドによって発揮されているものとも推定される。上記のような背景から本研究では、まず存在が推定される4種のヒスチジンを含むサイクリックペプチドを化学合成した。さらにこれらペプチドに特異性の高い抗体の作製に成功し、微量定量法の確立を行っている。次いで、これら抗体を用いる免疫組織化学的手法を使用して大脳内における分布局在を調べている。さらに、これらペプチドとアイソトープラベルアミノ酸とを添加しての脳下垂体器官培養とその後の電気泳動(Westen blot法)によって脳下垂体ホルモンの生産能を調べている。2年間ではまだここまでしか進展していない。最終的には、生物有機化学的および神経化学的視点から大脳活性化物質としての可能性を各種の動物実験を通して推察して開発を試みようと計画している。当初の計画では4名の研究者であったが、2名が配置換えや転勤によって参加できなくなったため、2名の研究者(途中で1名が加わる)で研究を進めた。大変遅れてしまったが、現在進行中である。ヒスチジンを含むサイクリックペプチドを4種類化学合成した。これらの合成に成功したことを機器分析により確認した後、高分子タンパク質と反応させ抗原の調整を行った。現在これらの抗原を用いてウサギ8羽に抗体を作製させている最中である。抗体の作製には少なくとも4ケ月以上必要である。抗体の作製に成功したら、微量定量法の確立と免疫組織化学的手法により、生体成分としての可能性の追求を行う予定である。さらに現在確立しつつある器官培養法によって生理作用の解明に研究を進めていく予定である。当初の計画では4名の研究者であったが、2名の配置換えや転勤によって参加できなくなったため、2名の研究者で研究を進めている。やや遅れているが、平成8年度も継続であるので遅れをとり戻したい。どちらもアミノ末端はピログロタミン酸で始まりヒスチジンを含みカルボキシ末端はアミノ酸のアミドである。申請者らはすでに哺乳類のラット脳内にピログロタミルペプチターゼが存在し、この酵素によってサイクリックペプチドであるヒスチジルプロリンジケトピペラジンが生成し、このペプチドが大脳活性化物質としての働くことと微量定量法であるRIAによる脳内局在とを報告した。

さらに、これらペプチドとアイソトープラベルアミノ酸とを添加しての脳下垂体器官培養とその後の電気泳動(Western blot法)によって脳下垂体ホルモンの生産能を調べている。2年間ではまだここまでしか進展していない。最終的には、生物有機化学的および神経化学的視点から大脳活性化物質としての可能性を各種の動物実験を通して推察して開発を試みようと計画している。当初の計画では4名の研究者であったが、2名が配置換えや転勤によって参加できなくなったため、2名の研究者(途中で1名が加わる)で研究を進めた。大変遅れてしまったが、現在進行中である。
現代カナダ西海岸文学：「多文化主義」、「人種主義」、「植民地主義」のポリティクス

21世紀転換期以降カナダのマイノリティ文学が、それまでの被害者であることを伝える自伝的要素の強い伝統的移民物語から変化し、より実験的な手法を用いるようになった。多文化主義論争を踏まえて考えると、それは白人優位社会がより巧妙な形で維持されている社会構造に対して問題提起する必要性によるものだと考えられる。本研究は「多文化主義」政策がカナダのマイノリティ文学に与えた影響を踏まえながら、ウェイド・コンプトン、ラリッサ・ライ、マドレン・ティエン、イーデン・ロビンソンといった現在カナダ西海岸で活躍する作家たちの作品にみられる「人種主義」と「植民地主義」に抵抗する物語手法を明らかにした。本研究の目的は、「多文化主義」政策が現代カナダ西海岸文学に与えた影響を踏まえながら、現代カナダ西海岸の非白人(ビジブル・マイノリティおよび先住民)文学における「人種主義」と「植民地主義」に抵抗する物語手法および言語行為を明らかにすることにある。26年度は、21世紀転換期以降のカナダ西海岸の非白人文学が、従来の伝統的移民物語から変わったことに着目し、ラリッサ・ライとウェイド・コンプトンの作品がどのように1支配者側の設定した枠組みに揺さぶりをかけ、2不平等を維持するその権力構造に問題提起し、3植民地化と経済の動きが人種主義と深く関わっているということを浮き彫りにしているかを検証した。研究成果は6月に中京大学で開催された日本カナダ文学会全国大会および9月に開催されたアメリカ文学会中部支部例会にて発表した。8月にはカナダのバンクーバーのUBCにて資料収集、カルガリー大学にて講演を行った。またそれらの研究成果は、『黒人研究』84号に「人種主義に抵抗する言葉を求めてーブリティッシュコロンビア州黒人作家ウェイド・コンプトンの『パフォーマンスの連帯』」、『カナダ文学研究』22号に"Smell and Transformation in Larissa Lai's Salt Fish Girl and Yoko Tawada's The Bridegroom Wasa Dog"の二編の論文として発表した。27年度は、NielBissoondathのSelling Illusions: The Cult of Multiculturalism in Canada (1994)やSunera ThobaniのExalted Subjects: Studies in the Making of Race and Nation in Canadaを始めとしたこれまでの「多文化主義」の議論をレビューした上で、カナダ人作家Madeleine Thienの小説における「人種主義」と「植民地主義」に抵抗するレトリックを考察した。研究成果は2015年4月26日に名城大学名駅サテライトで開催された日本アメリカ文学会中部支部大会にて発表。また、研究成果は、「『我々』と『彼ら』は存在しないーマドレン・ティエンの『境界線の犬』における『他者』」、と題して『カナダ文学』23号に掲載。2015年6月24日には、カナダ作家のラリッサ・ライとヒロミ・ゴトーを本務校に招聘し、「歴史、神話、フォークロア」と題した国際シンポジウムを開催した。27年度に予定していたカナダから作家を招聘し、国際シンポジウムを開催し、有意義な意見交換ができた。また、多文化主義の論争のレビューした上で、マレーシア系カナダ人作家マドレン・ティエンの作品における「人種主義」と「植民地主義」に抵抗する言語行為と物語手法を明らかにした。ティエンの『境界線の犬』は、自己主張型の従来の移民物語ではなく、他者理解および他者への「共感」の物語であることを指摘し、それによって、ビスーンダスの指摘するマイノリティ文学の陥る「ゲットー化」や、ロイ・ミキの指摘する大きな物語へマイノリティの物語が取り込まれてしまうという問題を回避することが可能となることを論証した。予定通り研究成果を論文として発表することができた。当初予定していたイーデン・ロビンソンの作品研究は次年度に行うことになったのを除けば、おおむね順調に進展していると考えられる。28年度は、カナダの現代先住民作家による作品がどのように支配者側の設定した枠組みに揺さぶりをかけ、不平等を維持するその権力構造に問題提起し、植民地化と経済の動きが人種主義と深く関わっているということを浮き彫りにしているかを検証した。具体的にはハイスラ作家のイーデン・ロビンソンの作品に着目し、500年におよぶユーロカナディアンによる植民地支配が忘れ去ろうとしてきた負の歴史がどのように描き出されているか、とりわけ「文化的ジェノサイド」と呼ばれる寄宿学校制度が奪っていた先住民の言葉と歴史と文化の記憶がどのように描かれているかを分析した。そしてこの物語が、「死者について語る物語」であることを指摘し、それが国家の正史が忘れようとしてきた負の過去がどうのように描き出しているかを考察した。今年度の研究調査は8月にカナダのバンクーバーのUBCを中心に資料収集を行い、Festival of the Written Artsに出席し、現在活躍するカナダ作家との意見交換を行った。成果発表は、12月には名古屋大学で開催された日本比較文学会の中部支部大会のシンポジウム「戦争(争い)における記憶と忘却ー和解に向けて」のパネリストとして参加し、イーデン・ロビンソンの『モンキー・ビーチ』の研究発表を行った。

28年度に出版した業績には、共訳の『ケンブリッジ版カナダ文学史』(第4部・18章)および3月に金星堂より出版された論文集『新たなるトニ・モリスンーその小説世界を拓く』の2点がある。21世紀転換期以降カナダのマイノリティ文学が、それまでの被害者であることを伝える自伝的要素の強い伝統的移民物語から変化し、より実験的な手法を用いるようになった。多文化主義論争を踏まえて考えると、それは白人優位社会がより巧妙な形で維持されている社会構造に対して問題提起する必要性によるものだと考えられる。本研究は「多文化主義」政策がカナダのマイノリティ文学に与えた影響を踏まえながら、ウェイド・コンプトン、ラリッサ・ライ、マドレン・ティエン、イーデン・ロビンソンといった現在カナダ西海岸で活躍する作家たちの作品にみられる「人種主義」と「植民地主義」に抵抗する物語手法を明らかにした。26年度に予定していた多文化主義の論争のレビューを行なうことができた。また、ブリティッシュ・コロンビア州黒人作家ウェイド・コンプトンの作品における「人種主義」と「植民地主義」に抵抗する言語行為と物語手法を明らかにし、予定通り研究成果を論文にまとめることができた。その中で、BC州における黒人史を記したAfter Canaan(Compton 2010)およびカナダ西海岸の黒人文学アンソロジーBluesprint: Black British Columbian Literature andOrature(2001)を中心に西海岸の黒人の歴史および文学の動向をレビューした上で、「多文化主義」によって黒人が組織的に不可視化されるプロセスをコンプトンの作品がどのように可視化し、反人種差別と反植民地主義のディスコースをどのように展開しているかを検証することができた。当初予定していイーデン・ロビンソンの作品分析はできなかったが、その代わりに次年度に予定していたラリッサ・ライの小説の分析を行い、口頭発表および論文として研究成果を発表することができた。最終年度である28年度は、カナダ西海岸の先住民ハイスラ作家イーデン・ロビンソンの小説において植民地の歴史とその記憶がどのように刻まれているかを考察する。その後、植民地主義や人種主義の歴史が現代白人作家側からはどのような実験的手法で描かれているかを、メリディス・クゥオーターメインの『バンクーバー・ウォーキング』とダフニー・マーラットの『ステーヴストン』を中心に検証する予定である。その上で、前年度まで行ってきたビジブル・マイノリティの文学の考察と比較し、誰が誰を表象するのかというオーセンティシティの問題も含めて分析する。本研究の最終年度に当たる当該年度は、これまでの研究成果も踏まえ、比較考察することで、現代カナダ西海岸文学における「多文化主義」、「人種主義」、「植民地主義」のポリティクスを明らかにする。
複合型糖鎖生合成に必須なＮ-アセチルグルコサミン転移酵素IIの立体構造解析

本研究は、複合型糖鎖生合成に重要なN-アセチルグルコサミン転移酵素IIの構造と機能の相関を解明することを目的とし、ヒトおよびカイコ由来酵素を研究対象とした。それぞれを大腸菌またはカイコを宿主とした発現系を構築し、カイコで発現させた場合に優位に高い活性を有する組換え酵素を取得することができた。カイコ由来酵素はヒトと同等の基質特異性および活性を有していた。いずれの酵素も自身にN結合型糖鎖が付加した糖タンパク質であり、ヒトよりカイコ由来酵素の方が糖鎖が多く付加していたが、糖鎖を切断しても酵素活性が変化しないことから、糖鎖は酵素活性や構造安定性に重要でないことが示唆された。本年度はヒトおよびカイコ由来N-アセチルグルコサミン転移酵素II(GnTII)を大腸菌またはカイコを宿主として組換え発現を行った。大腸菌発現系ではいずれの組換えタンパク質のほとんどが不溶性の封入体に存在していたが、発現ベクターおよび大腸菌株の検討により可溶性タンパク質として得ることができた。ヒト由来GnTII(GnTII)についてはUDP-N-アセチルグルコサミンをドナー基質、ピリジルアミノ化による蛍光標識を施したGlcNAcMan3GlcNAc2糖鎖をアクセプター基質としたときに糖転移反応を示した。さらにX線結晶構造解析を行うため結晶化条件のスクリーニングを行ったが、有望な結晶が得られていないため、引き続き条件検討を行っている。また分泌シグナルを付加したhGnTIIまたはカイコ由来GnTII(BmGnTII)をコードする組換えBmNPVバクミドを構築し、カイコ幼虫に注射したところ、体液中に組換えGnTIIの発現を確認した。カイコで発現させた酵素はいずれも大腸菌で発現させた酵素より分子量が大きく、N結合型糖鎖切断酵素PNGaseFを作用させることにより分子量が小さくなったことから、N結合型糖鎖が付加していることが考えられた。活性測定の結果、組換えBmGnTIIはhGnTIIと同様にMn2+イオンを補因子とした糖転移反応を触媒することが明らかになった。また、カイコで発現させた酵素は大腸菌で発現させた酵素より高い活性を有することがわかった。本年度の目標は、ヒトおよびカイコ由来Nアセチルグルコサミン転移酵素の大腸菌またはカイコ宿主発現系の構築・精製・結晶化条件検討であったため、結晶化には至っていないものの、おおむね目標は達成しているものと考えられる。本年度はヒトおよびカイコ由来N-アセチルグルコサミン転移酵素II(GnTII)の構造機能相関を目的とし、大量発現および精製方法の検討、また酵素学的諸性質の解析、X線結晶構造解析のため結晶化条件の検討を行った。1)ヒトGnTIIについては、N末端またはC末端側にHisタグおよびFLAGタグを付加し、N末端側領域を数段階欠損させた変異体を構築し、カイコーBombyx mori nucleopolyhedrovirus(BmNPV)バクミド発現系により可溶性タンパク質として発現させた。2段階のアフィニティークロマトグラフィーにより、カイコ幼虫の体液から簡便に精製することができた。この系により、カイコ幼虫数十頭の体液からミリグラムオーダーで精製タンパク質を得ることが可能になったが、有望な結晶は得られなかった。ヒトGnTIIに付加している糖鎖を切断し活性を測定したところ、切断前と比較して至適温度、pH、温度安定性に顕著な差が見られなかったことから、糖鎖は酵素活性や安定性に重要でないことが明らかになった。2)カイコGnTIIも同様にカイコーBmNPVバクミド発現系により、体液に分泌発現させ、ポリエチレングリコール沈澱と1段階のアフィニティークロマトグラフィーにより単一に精製した。本酵素の基質特異性はヒトGnTIIと同様に厳密であり、温度依存性、pH依存性、金属イオン依存性はいずれもヒトGnTIIや他のオルソログと類似していた。カイコGnTIIはヒトGnTIIより多くのN結合型糖鎖が付加しているが、糖鎖の有無は酵素活性に影響しないことがわかった。今後は結晶化に適したコンストラクトの作製を中心に遂行する。大腸菌を用いて発現させる酵素については活性に必須な最小単位のN末端またはC末端欠損変異体の作製などを行い、引き続き結晶化条件のスクリーニング行う。カイコで発現させる酵素については体液中の発現量を向上させるため、タグの種類やシグナル等を検討する。またBmGnTIIについては機能を明らかにするため、組換え酵素を用いた詳細な酵素学的諸性質や基質特異性の解析を行う予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。酵素学29年度が最終年度であるため、記入しない。
慢性骨髄性白血病に対する遺伝子治療に向けのての基礎研究

がんは、そのがんに特異的な原因により生じるので、その特異的な原因を、特異的な方法で、除去、消失させれば、治療させうると考えられる。慢性骨髄性白血病(CML)では、bcr-abl fused geneproductがCMLを引き起こすので、このproductの不活性を目指した遺伝子治療が、根本的な、特異的治療法として、今後、必須の治療法になると考えられる。本研究目的は、CMLの遺伝子治療に向けて、そのモデル系を作り上げることである。現時点では、以下の成果を得ている。1.bcrのexon2とc-ablのexon3のfused geneをtargetにする55bpのribozymeを合成。このribozymeをプラスミド・ベクターに挿入し、ribozyme vectorを構築した。2.bcrのexon2とc-ablのexon3のfused geneを持つことが知られている3種類のCML由来の細胞株(K562、SAM1、KU812)のbreakpoint領域をcloning→sequencingし、これらの細胞株は、bcr exon2とc-abl exon3のfused geneをもち、かつ、breakpoint付近にmutationをもたないことを確認した。3.これらのcell lineから、クローニングしたbreakpoint領域をinsertしたvectorから、T_3、T_7プロモーターを用いてRNA transcriptを合成。このRNA treancriptをribozymeが切断しうるかを、目下in vitroで検討中である。
G蛋白質が関与する味覚シグナル伝達機構の解析

味細胞に発現するGαqについて検討した。既知のGqファミリーに共通なアミノ酸配列であるFE(HN)(QP)YV(ND)AIK、KI(ML)(YH)SHLVDにしたがって2種類のプライマーを作製し、RT-PCRを行った。この結果、得られた2種類のDNA断片はGαqとGα15の一部分をコードするものであった。さらに、これらをプローブとして舌上皮cDNAライブラリーよりスクリーニングし、各々の全長を含むクローンを得た。Gαqに関してはラットの諸組織に広く発現しているGαqと同一のものであった。しかし、Gα15はマウスGα15と94%の相同性を示すことから、ラットにおけるマウスGα15のカウンターパートである可能性は高いものの、5′および3′非翻訳領域が大きく異なることから、別の遺伝子とも考えられ、Gα15-likeと名付けた。Gα15-likeは既知のGαqクラスのものと高い相同性(Gα16と85%、Gαqと56%、Gα11と55%、Gα14と53%)を示した。一方、他のクラスであるGαsとは34%、Gαi2と42%、Gαo1と42%、Gαtと41%の相同性を示した。次にGα15-likeの局在をしらべた。in situハイブリダイゼーションの結果、有郭乳頭および茸状乳頭では味蕾を含む上皮全体が染色された。ついで、Gα15-likeの部分アミノ酸配列ARYLDEIQLL対する特異抗体を作製し染色した。その結果、味蕾に強いシグナルが観察され、しかも抗原で吸収処理した後にはこのシグナルが消失することから、Gα15-likeは味細胞に発現していることが明らかになった。