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银魂角色列表 幕府
12月13日出生，22歲，身高175cm，體重68kg。原著第百五十八訓；動畫第101話初登場。
真選組參謀。為奪取真選組而背叛近藤並和鬼兵隊聯手，卻被鬼兵隊有機可趁藉此削弱真選組的勢力。與其兄鷹久為雙胞胎，但母親卻只疼愛體弱多病的鷹久，將他視為累贅，幼年時不被人所重視，導致其孤癖的性格和期望有所作為的慾望。頭腦相當聰明，自小被稱為神童。盡得「北斗一刀流」免許皆傳的人才。
一開始只是為了讓母親的目光轉移到自己身上，最後則是要在同儕之中備受矚目，卻只得到反效果。被近藤尊稱為老師，甚至近藤一度想让伊東接任真選組局長之位。仇視土方，甚至利用土方持得妖刀後的怪異表現進而迫使他離開真選組。尝试拉拢總悟未果。真正想法其實只是需要同伴，希望有人陪伴。在生命的最後一刻才真正知道自己一直在追求的夥伴一直在身邊。之後真選組組員為了不讓其背负叛徒汙名死去，決定用武士道的對決方式，由副長土方向伊東發起挑戰。最後在眾目睽睽之下被土方击败，但伊东也真正地了解了追求的東西其实一直都在身邊，只是自己的傲視遮住真實的世界。弥留之际被真選組成员重新承认為夥伴，在對他们道謝之後死去。
银魂角色列表 幕府
角色源自於新選組參謀伊東甲子太郎和新選組第一任局長芹澤鴨。
篠原進之進（，Shinohara Shinnoshin）
配音：桑原敬一（日本）；江志倫（台灣）
真選組監察員，伊東派。12月22日出生，身高170cm，體重58kg。
角色源自於新選組的監察員篠原泰之進。
稻山（，Inayama）
配音：平野俊隆（日本）；賀宇傑（台灣）；梁志達（香港）
真選組隊士。曾經在真選組屯所的納涼怪談大會，描述過有關「穿著紅色和服的女人」的怪談。
角色源自於日本的知名怪談專家稲川淳二。
隈無清藏（，Kumanaku Seizō）
配音：楠大典（日本）；馬國堯（台灣）；梁志達（香港）
真選組一番隊隊士。額頭上有顆痣，有潔癖。曾為了廁所的事而跟總悟向土方要求改革。
神山五郎（，Kamiyama Gorō）
配音：關俊彥（日本）；江志倫（台灣）；葉振聲（香港）
真選組一番隊隊士。曾參與二年前的六角事件，且與沖田隊長和四名同隊隊員聯合殺掉攘夷組織「創界黨」多數成員，是當年事件的唯二幸存者之一。對總悟很仰慕，甚至有些變態行為。
角色源自於新選組隊士平山五郎。
银魂角色列表 幕府
佐佐木鐵之助（，Sasaki Tetsunosuke）
配音：伊藤健太郎（日本）；馬國堯（台灣）；劉奕希（香港）
來自幕府中人才輩出的名門佐佐木家，卻是位不務正業的紈绔子弟，《薔薇流氓篇》裡初登場被受不了的家人丟給真選組託管，擔任土方十四郎的小姓。拥有戴上墨镜就长出胡子、摘下墨镜失去胡子的特技，其墨镜之下是一双非常正太化的眼睛。行事採美式嘻哈風，喜歡以RAP方式來敘述或對決。從A Boy（Akiba Boy）進化成B Boy（Breakin' boy）再退化成C Boy（Cherry Boy）。一開始雖然不做正事，但在土方為自己與兄長佐佐木異三郎對峙時受到啟發而決定努力上進，讓自己能夠成為獨當一面的武士。在真選組之後的整體出場中都有露臉，並在《再見真選組篇》目睹異三郎墜下飛船；其後跟近藤離開江戶，並在《銀之魂篇》再次回歸。
角色源自於土方歲三的小姓市村鐵之助。
幕府所屬的另一武裝警察隊，成員幾乎都是從名門的子女中精挑細選出來極度有才華之人，職權與真選組相當，與真選組管理的領地無重疊。組織源自於京都見迴組。
佐佐木異三郎（，Sasaki Isaburō）
银魂角色列表 幕府
配音：森川智之（日本）；陳幼文（台灣）；潘文柏（香港）
見迴組局長，习惯自稱「小三郎」。名門佐佐木家長男，鐵之助同父異母的哥哥，有「三天的怪物」（拿劍如「二天」，拿筆如「天神」）之稱。戰鬥時使用一支手槍和一把刀，利用手槍射擊迫對方避開子彈，再用刀攻擊，令對方被迫避開子彈而無法避開刀的攻擊。
有嚴重的「短信依賴症」，在執行任務時會不斷傳短信，並且希望對方能快點回覆他。但在过去曾是个手机白痴，打字速度慢得惊人。
是首個提出把武士們收編作幕府用的人物，「真選組」的成立可以說跟他息息相關，當幕府想把真選組作為政治鬥爭犧牲掉時，其與松平片栗虎合作保下了真選組，卻導致天照院奈落派包括骸在内的一众刺客下來殺掉佐佐木異三郎及他的妻女。雖然悲痛莫名，作為精英的他敏銳地洞悉骸並沒有殺害自己妻女，反而試圖保護她們。事件之後收留了骸並成立見迴組，把原本給女兒的名字「信女」給了骸。
雖然在出場時被認為是真選組的敵人，實際上非常欣賞他們；基於之前的經歷對幕府的統治並沒有信心，認為要改變社會一定要所有東西都被重置，包括腐朽的幕府，以及在它上面天照院及天導眾。
银魂角色列表 幕府
明面上將弟弟視為累贅並將他送入真選組，因此與土方在《薔薇流氓篇》裡對立並發生衝突。
《傾城篇》中幫助銀時等人殺入幕府推翻德川定定的勢力。
前將軍德川茂茂遭暗殺身亡後，被現任將軍德川喜喜提拔為警察廳長官，取代了松平片栗虎的位置。《再見真選組篇》中故意安排桂和近藤共處同一監獄使二人俱能逃走，並帶領見迴組引出了幕後的大boss天照院奈落、天導眾和虛，並在關鍵時候與真選組化敵為友，共同抗敵。一行人從黑繩島撤退時，異三郎為了救信女和鐵之助從飛船墜落，死在黑繩島之役中。
角色源自於見迴組局長佐佐木只三郎。
今井信女（，Imai Nobume）
配音：平野綾（日本）；郭怡心（台灣）；張頌欣（香港）
原見迴組副長，在佐佐木異三郎死後獨自行動。。生日：1835年10月2日（20歲、天秤座）、身高：1.65（5英尺5英寸）、血型：O型
黑髮（動畫是紺色）姬髮式暗紅色眼的少女，有著殺手眼神。其性格冷漠淡然，有著跟沖田總悟一樣的抖S性格，與神樂和微微公主被新八合稱為「抖S女子三人組」。攜帶長刀，其實是刀鞘尾端另藏一把刀，碰到難纏對手就會改為二刀流。
银魂角色列表 幕府
喜歡吃甜甜圈，曾被佐佐木異三郎用甜甜圈從廢墟中釣出。另外有著模仿他人聲音的特技。
曾為奈落的一員，過去是曾被稱為「死神的私生子」的神童，與朧並稱奈落三羽，代號為骸，後頸有八咫鳥的刺青。在擔任獄卒時曾拜松陽為師並且習字，是以對他其他學生頗有興趣。在刺客時期曾試圖援救異三郎妻女，但沒有趕上。之後異三郎沒有殺她，约定二人互相为仇敌并与仇敌活下去；信女的名字就來自於佐佐木為未出生的女兒所起的名字。自此，她對異三郎一直十分忠心。
《薔薇流氓篇》時曾和沖田在舊大樓中一對一單挑，並砍斷了許多水泥柱，但最後被其所打敗並埋在廢墟中，接著佐佐木異三郎將她從廢墟裡用甜甜圈釣出來。
《再見了真選組篇》逮捕了真選組局長近藤勳，在黑繩島大戰中再次受傷。在結束時親眼看見異三郎的消失而悲傷不已，在甲板上用手機寫下最後的簡訊後將手機朝天擲出，與慢一步到場的近藤與其他真選、見迴組傷員向異三郎敬禮致敬，眼中透出了未曾出現的光芒。（簡訊的內容為「異三郎，謝謝你給我這麼棒的名字。」）
银魂角色列表 幕府
《烙阳决战篇》找到銀時並告訴銀時一眾人很多關於銀時過去的老師吉田松陽（虛）的真實身份和真相，自稱亦是松陽的徒弟。带领來島又子求助万事屋一起去救援晉助。
在《銀之魂篇》中把公主交托給六轉舞藏之後加入戰鬥，對抗天人入侵。兩年之後成為新任警察廳長官，暗中保護真選組等人進入江戶，並在最後之戰中加入支援萬事屋的行列。
角色源自於曾參予殺害坂本龍馬的今井信郎，長相可能參考日本著名女演員栗山千明。
過去服待將軍及幕府的忍者團隊「御庭番」。
服部全藏（，Hattori Zenzō）
配音：藤原啓治〈電視動畫〉→森川智之〈劇場版3〉、熊井統子〈少年時代〉（日本）；賀宇傑〈第一季〉→陳幼文〈第二季〉→何志威〈劇場版3〉（台灣）；陳永信／黃麗芳〔童年〕（香港）
生日：8月22日（狮子座）　身高：1.75（5英尺9英寸）　體重：
银魂角色列表 幕府
被稱為「摩利支天（）」的忍者，原御庭番眾的精英，猿飛菖蒲的前同學及頭領。伊賀三大忍者家族中的服部家的現任當家。曾為幕府效力，現在是自由身，忍法在出過場的伊賀忍者裡數一數二。對自己的能力很有信心，同時認為自己作為忍者並沒有盡忠之人，為的只是利益。然而在後面當要在利益和情誼之間選擇時，其毫不猶豫地選擇了後者。
空知英秋原本計劃在《將軍暗殺篇》將他寫死，但後面又改變主意，稱是「因為猿飛太努力」之故。
父親號稱是「御庭番最強的男人」，亦是現在活躍於江戶的忍者之恩師，因為其貪玩的性格，令全藏覺得父親總是爲他人帶來麻煩。
超級漫畫迷，與銀時爭購JUMP而結下樑子，稱銀時為「Jump武士（）」。患有嚴重痔瘡，身受其苦，因此全藏的搞笑劇情多與痔瘡有關。被神樂稱為「痔瘡忍者（）」。喜歡醜女，曾說過:「比起高樓大廈（美女），我更喜歡廢墟（醜女）。」
小時候與德川茂茂和猿飛菖蒲等一同受訓，把對方都視為朋友。御庭番眾在幕府被天人控制後被逼解散，他成為自由業忍者後，接了不少奇怪的活，如替邪教教主服務，又或替幕府官員誘抓桂，以及保護天眼通阿國等等。當中他與銀時時而對決時而合作，因而與萬事屋等人逐漸熟絡。
银魂角色列表 幕府
《紅蜘蛛篇》中當銀時被地雷亞打成重傷丟進海裡之後將他救起送回吉原，並揭露地雷亞的真正身份。當銀時率眾前往營救月詠時，為其解決一大群小嘍囉。
《後宮篇》聯同一眾女角整蠱銀時，以逼使其立定決心去戒酒。
《眼鏡篇》中為了保護猿飛被萬事屋等人使用其屋子對抗忍者殺手們，但結果自己家也遭到不小的破壞。
《將軍暗殺篇》裡為了保護好友茂茂精心策劃了三重計謀：一早帶走茂茂往伊賀村並在江戶安插多個分身分薄對手兵力、在六轉舞藏前把自願的替死鬼影丸斬首扮作出賣茂茂、聯合百地亂破引出並殺死內奸。孤軍深入的他一人奮戰整隊鬼兵隊，擊倒多名敵人，但自己亦身受重傷。在快被鬼兵隊圍攻至死時，猿飛率領其他御庭番眾將之救下，並帶其去到出口。不過，在那裡二人被高杉及神威伏擊，猿飛被捅至重傷。危急之際全藏再次出手，救下猿飛之餘以苦無雨拖住眾人，並亮出了自己的最後王牌 - 「萬事屋三人組」。隨著喜喜出賣高杉和神威與天照院奈落大軍殺到，事情也已脫離他的計劃，不過茂茂還是安全地離開戰場回到京都。
《再見了真選組篇》得知茂茂之死後感到非常悲傷，認為自己愧對影丸以及茂茂，是一個罪人。因之前身受重傷全篇基本下線。
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《銀之魂篇》裡再次出現保護微微公主，原想送她離開地球，卻被其留下的決心所影響，回到猿飛身邊與其一同率領御庭番眾對抗天人大軍。在地球保衛戰中作為戰力、打探情報並參與戰前計劃。此戰勝利之後，再次與眾人不辭而別。兩年後天導眾飛船下墜後，回到江戶與猿飛共同行動，攻入能量塔中支援銀時。
角色源自於安土桃山時代德川家康的家臣服部半藏。
猿飛菖蒲（，Sarutobi Ayame）
配音：小林優、興津和幸〈性別轉換篇〉（日本）；郭馨雅、吳佳樺〈劇場版3〉（台灣）；曾秀清→陳皓宜、楊善諭（代配）、鄧港文〔性別轉換篇〕（香港）
演員：夏菜（台灣配音：傅其慧）
出生6月2日（雙子座）　身高：1.69（5英尺61⁄2英寸）　体重：
通稱（，，又译作「」）
紫色長直髮，右眼角有一顆淚痣。嚴重近視，沒有眼鏡就甚麼都看不清，但憑藉天份以及懂得運用其餘四感彌補先天不足，加上配戴的伊賀特製眼鏡，仍能成為江戶一流的女忍者。擁有令貧乳神樂羨慕的豐滿上圍，是本作中數一數二的巨乳眼鏡娘。亦是著名的殘念美女（）。
原御庭番眾的精英，現為自由身僱傭殺手。擅長使用自己愛吃的納豆進行攻擊，自創忍術“納豆束縛”。
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任務中偶然闖入萬事屋，迷戀上坂田銀時，其跟蹤狂的程度絕對不亞於近藤对阿妙，經常可以在假天花﹑地板下﹑衣櫃，甚至電視機之內發現她的蹤影，坂田銀時等人對此亦已經習以為常。而潛藏的M屬性亦在遇上坂田銀時後隨之覺醒，每當面對坂田銀時便會不期然化身成「抖M」，因此會被對方稱作「（）」或「女色魔」﹑而本人對於這些稱呼亦相當受落，甚至還會以「」自居。但跟坂田銀時和沖田總悟（♀）以外的人相處時則與普通正常人無異，甚至還會顯露出「抖S」的一面。視阿妙為情敵，兩人經常有惡言與肢體衝突。
雖然經常遭到銀時藐視，但緊急關頭還是非常相信她的能力。很在意月詠在人氣排名中位置比自己高，但與月詠似乎因同為忍者的关系而成為朋友。
《忍者篇》訓練萬事屋和桂等人去對抗自己之前的隊友，對決以全藏為首的五人組。
《眼鏡篇》中銀時因弄壞了她的眼鏡卻買了一副完全不適合她的眼鏡彌補結果任務出錯差點被忍者處理隊解決，但在全藏和萬事屋的幫助下化險為夷。
《人氣投票篇》中是眾主要女角色裡排名最低，但仍與妙、月詠、九兵衛等人組成Diamond Perfume隊伍以拉高自己排名。此隊伍在《HDZ48篇》再次登場幫助寺門通對抗天人偶像團。
银魂角色列表 幕府
《性轉換篇》變成與一個穩重冷靜的美男子（但在本質上仍是變態抖M），幫助銀子破壞攝影機與入侵凹凸教的根據地。
《靈魂轉換篇》銀時跟土方交換靈魂之後，被銀時(土方)嚴加管理，自身也成為「萬事屋五番隊隊長」，旗下成員皆為忍者。
《將軍暗殺篇》中率領御庭番眾保護將軍，救下全藏之後一直在奮戰之中，直至被高杉捅至重傷。大戰後成功安全回到江戶但仍改變不了茂茂被殺的命運。
《銀之魂篇》再次出場和全藏和其他忍者一起對抗天人聯軍。地球保衛戰之後因全藏又一次消失接管了御庭番眾並成為其首領，公器私用發動所有忍者找尋銀時，以求跟之結婚。兩年後當星芒教太空般又撞入能量塔時，再次協助萬事屋等人對抗虛。
姓氏源自於真田十勇士之一的忍者猿飛佐助。
全藏的父親（）
配音：西村知道（日本）；陳幼文（台灣）；林保全→張炳強（香港）
生日10月21日（天秤座）；身高157（515英尺1英寸）；體重。
银魂角色列表 幕府
動畫第48話初登場，已故。幕府裡最強的忍者。樣子總像在笑，性格樂天，生性貪玩，一年到頭都在處遊玩，曾為全藏帶來過不少麻煩。號稱是「庭番最強的男人」，亦是現在活躍於江戶的忍者之恩師。最喜歡玩踢罐遊戲，甚至在過世之時都以“靈體”形式與偶然路过的萬事屋一行玩了一次。
《紅蜘蛛篇》裡被全藏回憶，曾經以將軍的影武者身分擋下地雷亞的刺殺。
脇薰（，Waki Kaoru）
配音：新井里美（日本）；曾允凡→吳佳樺（台灣）；許盈→謝潔貞（香港）
忍者，被稱為「辯財天」。本名瑪丹娜脇薰，講話惡毒，能使出咒縛旋花（凡是聞到毒玫瑰香味的人將無法動彈），但被猿飛菖蒲的納豆臭味破解，最後被猿飛菖蒲拿納豆砸臉而敗。有開一家花店。《暗殺將軍篇》中参与保護茂茂。
剛（，Gō）
配音：羽多野渉（日本）；林協忠（台灣）；雷霆（香港）
忍者，被稱為「韋駄天」。會使出分身之術，但本尊的情況不會顯現在分身上，被新八看穿而打敗。《暗殺將軍篇》中参与保護茂茂。
修輪（，Shuwa）
配音：江川央生（日本）；賀宇傑（台灣）；招世亮（香港）
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忍者，被稱為「毘沙門天」。會使出怒品愚（能類似戶愚呂使肌肉膨脹），但鼓錯地方，被新八打敗。《暗殺將軍篇》中参与保護茂茂。
松尾（，Matsuo）
配音：松尾貴司（日本）；黃乾師（台灣）；馮錦堂（香港）
忍者，被稱為「廣目天（，）之松尾」。擅長計算，被新八跟桂打敗。名字取自于著名俳句大师松尾芭蕉。《暗殺將軍篇》中参与保護茂茂。
才藏（，Saizō）
配音：大塚明夫（日本）；陳幼文（台灣）；潘文柏（香港）
4月9日出生，身高176cm，体重67kg。
忍者。對他而言，全藏就等於痔瘡的存在。在《天眼通篇》出場並被全藏打敗，之後便沒有再現身。
角色源自於著名忍者霧隱才藏。
影丸（，Kagemaru）
配音：小野友樹（日本）
御庭番衆的一人，影武者，從小就與茂茂、全藏、小猿一同訓練，小時候被抓走幾乎被幕府犧牲掉，但在茂茂等人營救之下撿回一命。於《將軍暗殺篇》為了保護將軍而自愿被全藏給砍下首級，以欺騙天下將軍已死。
代代侍奉幕府的名門家族，使用「柳生陳陰流」的劍術流派，有眾多門生前來習劍；而「柳生四天王」為柳生家服侍的門生裡面實力最強的四人。四人的名字都是參照《草莓100%》的四位女主角的名字。
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柳生九兵衛（，Yagyū Kyūbee）
配音：折笠富美子（日本）；郭馨雅（台灣）；陳凱婷→曾秀清→陸惠玲（香港）
4月20日出生，17歲。身高157cm，体重45kg。
侍奉幕府之名門劍豪柳生家的千金暨下任當家。因母親生產後去世，家族又習慣讓男孩當家，父親和祖父決定將她當成男孩扶養（若是續弦生了兒子，九兵衛為長女則在家族無法立足）。平時為綁著馬尾的男裝打扮，实际上是隐形巨乳。
童年時比較懦弱，並受到青梅竹馬阿妙的保護，因為保護阿妙且與前來志村家討債的流氓打架，導致左眼失明，之後一直佩帶眼罩，為此苦修劍術，劍術突飛猛進。被阿妙稱呼為「九仔（）」。
雖受男性教育，平時充滿男子性格，內心仍有女孩子個性的一面，會想玩家家酒、花繩、打扮、逛街，或是穿哥特蘿莉裝。
對人情世故很不熟悉，會做出很天真的行動。若有男性碰到她，會使用過肩摔甩出去，在作品裡除了家人，只有銀時可以偶爾免疫其過肩摔。討厭蕈類，原因純粹是覺得形狀噁心。
《九兵衛篇》中初登場想要將阿妙娶進柳生家，但後來因為新八、近藤等人的阻止而作罷，正視了自己的性別，但依然保持著對於阿妙的愛慕。
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《尾美一篇》中雖對理論上的情敵近藤抱有殺意，但當阿妙的初戀尾美一出現時，兩人一度聯手合作。
《性轉換篇》因一時與非法新興宗教〈凹凸教〉的教主交集，在意見不一致下引發歌舞伎町性轉換事件，同時自己也成為真正的男兒身。後來以男兒身跟阿妙相處的過程裡感到猶豫，最後在銀子的促使下決定以原來的女兒身討伐凹凸教。
《人氣投票篇》中與其他女角色組成Diamond Perfume，並於《HDZ48篇》中登場幫助寺門通。
《銀之魂篇》中以協助者的身份參與兩次龍脈戰爭，結局中不時在妙的夜店裡兼職，希望可以減少對男性的抵觸。
角色源自於獨眼劍豪柳生十兵衛，因此作品設定為女性，故此「十」兵衛-「一」（男性生殖器官）=「九」為此名。
柳生敏木齋（，Yagyū Binbokusai）
配音：龍田直樹（日本）；陳幼文（台灣）；黃子敬（香港）
5月30日出生，身高88cm，体重24kg。
柳生家前任當家，九兵衛的祖父。被譽為是柳生家歷代當家中最強的劍豪，也是九兵衛的劍術師父。能若無其事吃下阿妙做出的燒焦食物，但之後導致嚴重腹瀉。總是從別的地方撿垃圾回來，所以家裡出現了垃圾屋。
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性格飄忽不定、難以捉摸，讓人不知道他的想法。非常珍視九兵衛。擅用身形瘦小特點的俐落行動，在擺佈敵人後再給予猛烈一擊。
《九兵衛篇》中與作為柳生家的大將決戰萬事屋等人，在廁所心理戰裡脫穎而出，但於最後大戰中被銀時和新八的合作打敗。
《銀之魂篇》中再次出場跟柳生一族對抗天人聯軍，大展身手。
角色源自於安土桃山時代的劍豪、柳生新陰流的開祖柳生石舟齋和「寒酸」（）。
柳生輿矩（，Yagyū Koshinori）
配音：黑田崇矢（日本）；何志威（台灣）；張炳強（香港）
5月10日出生，身高122cm，体重38kg。
柳生家現任當家，九兵衛的父親。執着於守護柳生之劍以及名流血統。寧可忍受過敏之苦也要抱著波斯貓，拼命地要表現出名流的模樣。在作品裡沒有展露過身手。
對九兵衛如何稱呼自己十分在意，常要求九兵衛叫較為西式的「爸爸大人（）」，而不是傳統的「父親大人（）」。
角色源自於德川家康的劍術師範柳生宗矩。
東城步（，Tōjō Ayumu）
配音：遊佐浩二（日本）；江志倫（台灣）；劉昭文（香港）
1月14日出生，身高178cm，体重66kg。
银魂角色列表 幕府
柳生四天王之首，負責護衛及照顧九兵衛，有容易擔心的性格。因為將保護九兵衛視為一生的任務，為了不讓她遭遇任何危險而時常做出過火的保護行動，或是匪夷所思的變態行為。無視銀時等人和柳生家的死鬥等等發生於柳生家的重大事件，只顧寫著《少主成長記錄》，對九兵衛的愛和變態程度與日俱增。
實力次於九兵衛，在維持柳生一族的大小事務上深受器重。基本上只有遇到與九兵衛相關的事，才會拔刀。
平時總是瞇著眼睛，一旦怒氣到達最高點，就會從雙眼發射出光線。喜歡跟女孩子洗泡泡浴，是風俗店的常客。
一心朝著讓九兵衛喜歡上男人的方向努力，為達目的甚至會不將其他人的安危放在心上，對九兵衛適合穿哥特蘿莉裝堅信不疑。對九兵衛的狂熱絕對不亞於「近藤勳追求阿妙」和「猿飛菖蒲对銀時」。
主線裡在《九兵衛篇》中著名的廁所心理戰中敗北，一直到《銀之魂篇》中才再度出場帶領四天王對抗天人聯軍。然而，在日常搞笑裡基本只要九兵衛在他就會出場，比其他三人要多得多。
名字源自於《草莓100%》的女主角之一，東城綾。
北大路齋（，Kitaōji Itsuki）
配音：浜田賢二（日本）；陳幼文（台灣）；翟耀輝（香港）
银魂角色列表 幕府
5月3日出生，身高175cm，体重65kg。
柳生四天王之一，實力次於東城。對道場劍術懷有驕傲，相信只要比有才能的人更加努力練習，就能在戰鬥中獲勝。因為這個緣故，大量食用原本最討厭的蕃茄，將蕃茄醬變成喜歡的東西，如此這般地在日常生活中也進行精神上的修煉。此外，還具備能馬上看出對手弱點的超群洞察力及冷靜判斷力，擅長出人意表的攻擊。因為生性冷漠，說話不留情面，經常出現和南戶鬥嘴的場面。透過鏡片是細長的眼睛，不載眼鏡時眼睛變成鯽魚眼。
名字源自於《草莓100%》的女主角之一，北大路五月。
西野摑（，Nishino Tsukamu）
配音：園部好德（日本）；馬國堯（台灣）；朱子聰（香港）
9月16日出生，身高208cm，体重113kg。
柳生四天王之一。與劍術相較，更擅長肉搏戰。講話時都使用謙卑的代稱以稱呼自己。但是當南戶受傷用手機拍照來當作紀念時，又會一邊說「幼稚」一邊卻把提議者推開。擁有不遜於神樂的怪力。还有與他龐大的身軀不符合的特點：似乎喜歡兒童餐，若被吐嘈還會生氣。在《銀之魂篇》中與天人大戰時被砍掉一隻手臂退下火線。
名字源自於《草莓100%》的女主角之一，西野司。
银魂角色列表 幕府
南戶粹（，Minamito Sui）
配音：綠川光（日本）；何志威（台灣）；馮錦堂（香港）
3月31日出生，身高173cm，体重63kg。
柳生四天王之一。對自己的外表相當有自信（自戀），以美男子自稱。穿著隨性再加上首飾，與其說是武士更像是個花花公子。似乎擅長對女人花言巧語，安慰了許多曾被阿瀧淩虐的女傭。在四天王中經常負責吐嘈，但每次只要吐嘈其他人，就被回敬「臉蛋像生殖器」。雖然帶著天下第一的柳生一門光環，但因為怠於鍛煉，劍術是四天王中最弱的。
名字源自於《草莓100%》的女主角之一，南戶唯。
瀧婆（，Otaki）
配音：巴菁子（日本）；郭怡心（台灣）；雷碧娜（香港）
12月8日出生，身高124cm，体重28kg。
長年侍奉於柳生家，負責指導其他女傭。通稱「老太婆」（）。擅長整人，只要是有她看不順眼的傭人，就會想盡辦法虐待對方至精神衰弱，不過對志村妙毫無辦法。
（）<簡稱>
配音：白石涼子（日本）；郭馨雅（台灣）
银魂角色列表 幕府
《壽限無篇》中登場，是微微公主為玩賞而飼養的母猴所生，之後送給了將軍的姪子德川盛盛。由於非常頑皮難以管教，因此交給柳生家訓練。好丟糞，尤其是往坂田銀時的臉上扔。頭腦似乎非常好。非常喜歡九兵衛。被盛盛起名叫悟空后悶悶不樂而失蹤。找到之後，盛盛將牠送給了九兵衛。。
名稱由來是來至落語的段子「寿限無」：一個和尚幫人家的小孩子取名字，眾人紛紛向他介紹吉祥的話語，結果把這些話全部串起來的一個故事。
全名為「」（原文：）。
代代擔任幕府公儀處刑人的家族，專長於利落的斬斷首級。家主之位不是世襲，而是由家中選出劍法最為高強的人擔任。家主都會繼承夜右衛門之名。
池田朝右衛門（，Ikeda Asaemon）
配音：井上麻里奈（日本）；吳佳樺（台灣）；曾秀清（香港）
帶著骷髏面具的少女，池田家斬首絕技「淨靈」的傳人。劍術高超，精通斷首連皮技巧而被稱為“死神”的處刑人。前代・池田夜右衛門的養女，具有優秀的劍術才華。從小與夜右衛門如兄妹般一起長大，兩人彼此競爭也彼此激勵，希望未來能夠一同守護池田家。
银魂角色列表 幕府
原是前代（第十七代）池田夜右衛門選定的繼任人，但因發生了前代私放罪犯，親手為前代介錯。後為向幕府隱瞞這件事，自己背上殺師奪位的汙名離開了池田家。對身為法律執行者的自己，卻殺死相當於自己法律的導師而感到迷惘。由於介錯時的猶豫，斬首時產生了失誤，認為是自己害了養父，讓他的靈魂不會安息。意志消沉下一心求死時遇上銀時，要求他為自己介錯。
親生父親是參與過姊古源戰役的攘夷志士，該戰使得一橋派的權力威望受到重創，戰後便大肆抓捕相關人士，甚至連坐了無數無辜的老弱婦孺。而他的父親為明哲保身，將同伴出賣給一橋派，甚至到最後還打算獻出自己的女兒。幸好這被路過的銀時出手阻止，並以束手就擒為代價保下其性命。後來成為池田家養女的朝右衛門遇到身在監獄中的銀時，在不知道其實是她救命恩人的情況下，跟銀時立下約定，當自己成為了不起的處刑人時，會親手讓他毫無痛苦的死去。所以，不同的角度來說，銀時既是朝右衛門的殺父仇人，也是救命恩人。
曾數次斬下銀時的乳頭。事件結束後表面上為負起事件責任而自殺，實際上繼承了池田家主之位，成為第十九代夜右衛門。原型為日本江戶時代公家御用的刀劍試斬者，山田家當家代代繼承的工作與名字山田淺右衛門。
池田夜右衛門（，Ikeda Yaemon）
配音：千葉一伸、齋藤綾〈少年〉（日本）；麥皓豐（香港）
第十八代池田夜右衛門，前代・池田夜右衛門的親生兒子。劍術高超，與朝右衛門親如如兄妹般一起長大，但沒有血緣關係。深愛自己的家族和劍術，但只重技巧而沒有鍛煉心靈，被父親認為他的劍不能淨化人的靈魂而沒有傳位給他。不過，因前代被私下處決而朝右衛門離開，他也就成為了池田家的首領。
為了讓池田家在幕府獲得穩固的地位而投靠一橋派，暗中殺死過去在攘夷戰爭時令一橋派打敗仗的攘夷志士。在沖田和土方的攪局下，被銀時和朝右門衛合力擊敗，承認了自己的敗北。認為既然自己失敗的話，就必須讓朝右衛門活下來保護池田家，選擇獨自留下斷後，讓銀時和朝右門衛他們能順利撤離。為此，被到來的一橋喜喜給梟首。
前代・夜右衛門
配音：石田圭祐（日本）；黃子敬（香港）
前代池田家家主，朝右衛門與夜右衛門的父親。池田家斬首絕技「淨靈」的傳人。認為將罪惡深重的鬼在最後還原為人，是自己作為公儀處刑人的職責，絕不扭曲將犯人視為人類的信念。因私放囚犯而被池田家處決。而他之所以這麼做，是因為他認為那些人都是政治犧牲品，實際上並無過犯。在被他私放的犯人名單中，就包括銀時在內。
小錢形平次（）
配音：石塚運昇（日本）；陳幼文（台灣）；梁志達→李錦綸（香港）
生日：5月16日（金牛座）；身高1.83（6英尺0英寸）；體重。
自稱Hard Boiled捕快（）。總是戴着墨鏡、抽着雪茄，以一副十分能幹的樣子示人，可實際上辦事效率極差，常在當值期間到夜店或居酒屋消遣。在初登場篇章裡和萬事屋一同追捕著他視為勁敵的怪盜「狐狸」，及後真相大白後與其惺惺相惜。
在後面基本只在正篇中才偶爾出場，包括在《四天王篇》中以援軍身份助銀時對抗人妖和黑幫的聯軍。在《再見真選組篇》作為土方的現任上司，掩護他和真選組去黑繩島，並在大戰中受傷。於《銀之魂篇》中亦奮勇加入對抗天人大軍。
角色取材自錢形平次。
（，Hadj）
配音：比嘉久美子（日本）；郭馨雅（台灣）；雷碧娜→何寶珊（香港）
生日：8月5日（獅子座）；身高1.63（5英尺4英寸）；體重。
捕快。小錢形的少女下屬兼搭檔，年紀比小錢形要小很多，但明顯更加可靠。在《四天王篇》、《再見真選組篇》和《銀之魂篇》都有跟隨小錢形出場。
角色取材自《錢形平次》的八五郎（阿八，）。
六轉舞藏（，Rotten Maizō）
配音：千葉繁、徳本英一郎〈年輕〉（日本）；陳曙光→朱子聰、鄧志堅〈年輕〉（香港）
過去是前任將軍德川定定的側眾，現任工作則是負責教育微微公主，雖然口氣嚴厲，但卻是個有著受虐癖的糟老頭，特別喜歡別人踢他的屁股，對此公主給他取個討厭爺()的綽號。因為茂茂和公主幼年失去雙親時是由他一手帶大的，所以很受兩兄妹的尊敬。雖然有衣物遮蔽而不明顯，於《傾城篇》初登場時他並沒有左臂。
是與花魁鈴蘭訂下約定的人，過去作為定定的部下時在櫻花樹下看見因被定定給利用而傷心落淚的鈴蘭，過去安慰她並最終與之相愛。然而，礙於身分的緣故兩人總是暗中私會，並約定好要在下一個滿月之日帶鈴蘭離開吉原。但此事被早已知曉二人关系的定定發現，砍下舞藏的左手臂做為懲戒並且以鈴蘭的命作為威脅嚴禁二人見面。舞藏也因為自身對於幕府的忠誠，所以與鈴蘭的約定一直無法兌現。
在定定嫁禍給銀時等人被以要求責任承擔為由，命令他切腹，但他並沒有跟從。定定因此給砍下其右臂，因失血過多差點喪命。事件結束後在茂茂及銀時等人的幫忙下回到吉原，並在當年櫻花樹種植的地方見到鈴蘭的最後一面。他也在櫻花飛舞的幻想中回到年輕的時期，抱著鈴蘭走向滿月。
《將軍暗殺篇》中與公主再次登場，後被服部全藏點穴，並在其面前殺掉影丸。因為自小與茂茂認識，舞藏在離開前便知道死去並非茂茂。與公主等人離開後，送重傷的沖田前往急救。在《再見了真選組篇》和《銀之魂篇》均留在公主身邊。
名字參考自《小天使》（海蒂）中克拉拉家裡的女管家羅曼亞。
禽夜（，Kin'ya）
配音：坂口候一（日本）；黃乾師（台灣）
幕府的高官（官僚）。被真選組稱為「蛤蟆（）」。動畫中會在語尾加上「ケロ（Kero）」。把地球人類當成垃圾般下賤，並嘲諷為「猴子（）」。電視動畫第66話再度登場。跟宇宙海盜「陀絡」勾結，協助非法藥物的買賣能順利進行，從中得到部分的收益。因而成為攘夷志士的暗殺目標，故需由真選組保護。但對於冒著生命危險保護自己的真選組，甚至是以身軀掩護自己而受傷的近藤，毫不感激。山崎私自行動於其大屋進行過各種調查，結果在倉庫找到大量「轉生香」。
遠山珍太郎（，Tōyama Chintarō）
配音：渡部猛（日本）；林保全（香港）
南町奉行所的極悪奉行。為了拿下桂小太郎的人頭，從而鞏固自己在幕府裡的地位，因此故意製造出艾利撒比斯的棉花，並聘請服部全藏等人，引桂主動現身。
角色取名自《遠山的金先生》的遠山金四郎。
友之助（）
配音：山口惠（日本）
茂茂原家臣，因家人被抓取当人质而被迫刺杀茂茂，后立刻服毒自杀。
银魂角色列表 攘夷志士
攘夷志士在20年前因對抗天人的襲擊而聚集，是有排外思想的、因幕府受到天人的壓破而開國所以為此感到危機感的武士，也有一部分被称为攘夷浪士。攘夷志士從江戶時代起便蜂擁起事，轟轟烈烈地與天人戰鬥。攘夷戰爭戰敗後天人完全掌控了幕府政權，他们便被幕府當成恐怖份子。
於攘夷戰爭後期活躍的桂小太郎所領導的攘夷組織。過去屬於激進派，但後期桂認為應該用和平的方式來攘夷，因此在「紅櫻事件」後轉為穩健派。雖然桂常以「我們『攘夷黨』成員」稱呼，在漫畫公式書《》，其組織名稱為「桂一派」。
桂小太郎（，Katsura kotarō）
日本配音：石田彰、甲斐田幸（少年時期）
台灣配音：黃天佑（第一季其之壹）→梁興昌（劇場版1）→何志威（第一季其之貳起、劇場版2～3）
香港配音：梁偉德、何承駿（代配）、謝潔貞（少年時期）
演員：岡田將生（台灣配音：何志威）
銀時以前的盟友，攘夷志士中的存活者之一。企劃討伐天人及幕府，重整腐敗的國家，建立武士之國。
从激進派逐步轉變為穩健派。口頭禪是「不是假髮，是桂！」（“假发”和“桂”日语发音相同）
人稱狂亂貴公子（）或逃跑小太郎（）。
在《銀之魂篇》的最後當選為首任內閣總理大臣。
银魂角色列表 攘夷志士
艾利撒比斯（，，）
日本配音：高松信司（第15～230話、劇場版1）→神谷明（劇場版2、銀之魂篇）／栗山千明（銀魂精選集第27話）
台灣配音：江志倫
香港配音：潘文柏
演員：山田孝之（配音）（台灣配音：魏德）
生日：9月7日（處女座），身高：1.80（5英尺11英寸），體重：
坂本辰馬送給桂小太郎的外星生物，是桂引以為傲的寵物，現已成為他的攘夷夥伴。形似全身白色的企鹅，外表與「宇宙怪獸史蒂芬（）」一樣。白色公仔服之內的臉從沒有給觀眾知道過，唯一不時外露的，就只有腿，上有長像大叔般的腳毛。
武力功底挺強，也有一定的決策能力，平時宛如桂一派二號領袖般的存在。動作十分敏捷，甚至可以把迎面而來的火箭砲踢回去。眼部可發射光線，嘴裡可伸出火箭炮、加農砲、鑽子等。當桂遇到緊急狀況時，能化身成降落傘協助對方逃脫。雖然都是以寫字板和人進行交流（举牌表达自己的意思十分像高桥留美子《亂馬1/2》主角早乙女乱马的父亲早乙女玄马的熊猫状态），但其實能說話。
银魂角色列表 攘夷志士
身分分為正式與替班。替班的真實身分為來自蓮蓬族的江蓮，只在星期一過來代班。而正式真正身份則為央國星第一王子多拉公尼亞，在失憶後輾轉至此。動畫為了戲劇效果，有時衣服底下的真實身分為《銀魂》動畫版的導演高松信司（之後轉任監修）。
《春雨篇》裡因為桂暫時與萬事屋行動，被遺棄之後墮落成街頭乞丐。
《忍者篇》裡有傳被幕府官員抓走，當桂和萬事屋等去到後發覺是假情報。最終依然被桂所尋回。
《紅櫻篇》裡桂被攻擊後去找萬事屋幫忙尋人，但因為一直不肯開口說話，萬事屋成員花了好大勁才理解情況。後與新八行動被似藏襲擊，幸被銀時所救。回到桂一派之後，組織所有成員人前往鬼兵隊的船上拯救桂，當紅櫻被毁而春雨加入之後，把新八和神樂帶離現場。
《告解篇》中桂把失憶的德川茂茂招入攘夷志士之中，艾力撒比斯假裝被其吸引架空桂的權力，在推翻將軍失敗後跟隨桂撤退。
《再見了真選組篇》中與桂分開行動，帶領桂一派和真選組餘黨一同殺入黑繩島，最後成功營救桂離開。
《烙陽決戰篇》跟隨桂及辰馬去到烙陽星，大戰天照院奈落和被虛操控的春雨大軍，後跟桂一同留在辰馬的船上。
银魂角色列表 攘夷志士
《銀之魂篇》與桂一同行動，後揭露真實身分是央國星的第一王子多拉公尼亞，因失憶才流落至地球，並與其兄弟紫雀提督及哈塔王子相認。在與圓翔皇子的決戰中，為保護桂而重傷。兩年之後依然跟隨桂行動。
江蓮（）
配音：古谷徹（日本）；江志倫（台灣）；潘文柏（香港）
幻之傭兵種族「蓮蓬」的諜報部隊隊長，因為在蓮蓬族的地球潛伏調查中有功而升格為將軍。另一個身分為「週一替班的伊麗莎白」，受桂的影響對人類產生感情反而對抗自己母星，最後離開眾人帶同剩下的族人開拓新的家鄉。
「鬼兵隊」（）原本為攘夷志士的義勇軍之一，戰後重組為一個激進派的攘夷浪士恐怖组织。組織名稱參照高杉晉作率領的「奇兵隊」。
高杉晉助（，，Takasugi Shinsuke）
日本配音：子安武人、桑島法子（少年時期）
台灣配音：賀宇傑（第一季、劇場版1、劇場版3）；陳幼文（第二季起、劇場版2）
香港配音：馮錦堂、伍秀霞（少年時期）
演員：堂本剛（台灣配音：黃天佑）
鬼兵隊的首領。銀時以前的盟友，攘夷戰爭中的存活者之一。與銀時和桂自學生時代便認識的朋友，與銀時性格不合。
银魂角色列表 攘夷志士
經常煽動、策劃或製造動亂，曾殺害多名幕吏，因而被稱為「攘夷浪士中最過激、最危險的男人」並遭到幕府通緝。曾說自己的心中有一隻蠢蠢欲動的黑色怪獸，多次與幕府的反動分子結盟，原想利用一橋喜喜推翻一切但最後被其出賣。
故事的最後，坂田銀時為阻止寄宿高杉晉助體內的虛被迫將其斬殺，最終死在銀時懷中。後來在松陽的力量下，以嬰兒的型態在某處龍穴中重生，被來島又子發現。
河上萬齊（，，Kawakami Bansai）
配音：山崎巧（日本）；賀宇傑〈第一季、劇場版1〉→陳幼文〈第215話〉→何志威〈第252話〉（台灣）；陳欣（香港）
演員：窪田正孝（台灣配音：何志威）
5月20日出生，身高179 ㎝，体重67 ㎏。
鬼兵隊的成員之一，人稱「（）」，鬼兵隊實質上的副手，也是隊上的穩健派。
稱呼高杉為「晉助」。自謙「在下（）」，經常戴著耳機、墨鏡，揹著三味線，語尾常附上「」，說話頗有古風，。喜歡用「音樂」來形容一個人的靈魂。
另一個身份是著名音樂製作人「（）」，作風大膽，才華出眾，可以說是當今樂壇的教父。由他所創作的歌曲、監製的唱片一張比一張暢銷，常為寺門通作曲。
银魂角色列表 攘夷志士
是《銀魂》本篇中少數較無喜劇成分的角色，但來島用暴力吐嘈武市時，萬齊會一同加入。
《紅櫻篇》作為鬼兵隊代表與春雨談判，成功與之聯盟。
在《真選組動亂篇》中參與由高杉所主持的針對真選組的內部瓦解作戰，對銀時與山崎退的「音樂」產生認同感，是以沒有殺死山崎，只是令他重傷。在篇章之末跟銀時一戰，使用琴弦攻擊但反被銀時利用而遭擊敗。
《將軍暗殺篇》追隨高杉，欲把茂茂的餘黨斬盡殺絕，但因被喜喜出賣鎩羽而歸。
《烙阳决战篇》神威反攻春雨慘遭大敗，第七師團與鬼兵隊的太空船盡毀，跟高杉等人失散，並被坂本救起。後來見證桂、坂本、銀時一行人的風采，成功擒住喜喜後向眾人分享鬼兵隊的祕密集合地 — 烙陽。
到達烙陽之後，與银时一起對付春雨。在混戰中，再次被銀時救起，隨後成功回歸鬼兵隊離開烙陽星。
在《銀之魂篇》與高杉等人攻入天人的母艦裡，孤身一人掩護高杉晉助等人離開，力戰而亡。
角色取材自幕末四大人斬之中的河上彥齋；藝名則源自於淳君。
（，，）
配音：早水理沙（日本）；郭馨雅（台灣）；鄭麗麗（香港）
演員：菜菜緒（台灣配音：魏晶琦）
1月8日出生，身高165 ㎝，体重48 ㎏。
银魂角色列表 攘夷志士
鬼兵隊的唯一女性幹部成員，有「紅色子彈（）」之稱的雙槍手。語尾常附上「」。被武市稱為「豬玀」，她則稱武市為「武市變態」或「蘿莉控」。服裝為迷你的和服。對高杉非常忠誠，並抱持著愛慕之情。實際上，攘夷戰爭後的新鬼兵隊的成立是以她為契機開展的。
《紅櫻篇》中與武市一同擒住神樂，但在紅櫻暴走後被其攻擊，最後與鬼兵隊一同離開。
《同學會篇》與武市一同設局欲抓走桂、坂本和銀時，但因黑子野的出現而失敗。
《烙陽決戰篇》裡因為鬼兵隊被春雨擊敗，跟武市逃回地球，在信女穿針引線下跟萬事屋相見。為了尋找高杉前往烙陽星，並帶上神樂同行。在重遇高杉後跟虛的部下大戰，最後跟隨高杉與朧相見。
《銀之魂篇》與高杉一同攻入天人太空船內，最後與高杉失散。在高杉與圓翔決戰時趕到並開槍保護高杉。地球保衛戰之後一直在尋找高杉，不果。最後決戰結束後，為了找尋有可能重生的高杉，走遍各個龍脈，並找到一個很像高杉的嬰兒。
角色取材自於幕末引發禁門之變的長州藩士來島又兵衛。
武市變平太（，，Takechi Henpeita）
配音：茶風林（日本）；何志威〈電視版〉／梁興昌〈劇場版1〉／馬國堯〈劇場版3〉（台灣）；李錦綸→葉振聲（香港）
银魂角色列表 攘夷志士
演員：佐藤二朗（台灣配音：黃天佑）
9月27日出生，身高178 ㎝，体重68 ㎏。
鬼兵隊的策略家，綽號「怪人謀略家」。武力值不高。雖然自言「我不是「蘿莉控」，只是一個女權主義者」，被來島又子稱為「變態」或者「蘿莉控」。
過去擔任幕府的官職，且位階不低。但在關押高杉期間被其話語所感動，隨後便協助高杉、河上等攘夷志士脫逃。
對來島又子和蘿莉的神樂完全抱持兩種態度。曾指神樂「在兩三年後就會到達頂峰」。致力於反對「大江戶青少年健全育成條例修正案」。會擅自亂入他人的回憶或獨白，有時會裝扮得與高杉一樣，而被周圍的人暴力吐槽。
《紅櫻篇》中初出場，與來島合作擒下神樂，並推斷她是夜兔族人。決戰時對戰新八但非常狼狽，而似藏暴走時想阻止卻反被其擊暈。
《同學會篇》與來島設計坑害桂、坂本和銀時，但因黑子野的出現而失敗。
《將軍暗殺篇》和《烙陽決戰篇》俱在鬼兵隊作為後部指揮支援高杉。被虛和春雨擊潰後和來島一同回到地球求助於信女，在回到烙陽後跟高杉重聚。
银魂角色列表 攘夷志士
《銀之魂篇》為了拖延大炮的發射與鬼兵隊小隊準備捨身撞向天人母艦，幸好因猩覺的行動而獲救。後找到與大隊失散的來島並將之救出，在圓翔與高杉的對決時趕到，但隨著母艦降落地球而再與高杉失散。兩年後繼續與鬼兵隊餘黨找尋高杉，並在其死後支援來島走訪各地龍穴。
角色取材自幕末的土佐勤王黨的盟主武市半平太。
岡田似藏（，，Okada Nizō）
配音：青山穰（日本）；林協忠〈第一季其之壹〉→陳幼文〈第一季其之貳、劇場版1〉（台灣）；潘文柏（香港）
演員：新井浩文（台灣配音：曹冀魯）
12月23日出生，身高180 ㎝，体重68 ㎏。
有「（）」之稱的失明劍士，由於失去視力而靠著嗅覺來砍人，愛用鼻孔清淨器來暢通鼻子。
《紅櫻篇》裡的主要反派，以村田鐵矢製作的機械武士刀「紅櫻」接連擊敗桂和銀時。持刀的手臂在河邊與銀時戰鬥時，被新八砍掉。回去鬼兵隊之後被眾人怪責鬧出太大動靜打草驚蛇之餘，亦令原本都是攘夷志士的桂一派與鬼兵隊對立。高杉曾想一刀解決他，但被紅櫻自動擋格，轉而下令其殺掉銀時和桂作為補償。在最後與銀時的大戰裡，他被紅櫻附身，意識亦被其吞噬，最終戰敗身亡。
角色取材自幕末四大人斬之中的岡田以藏。
银魂角色列表 攘夷志士
八留虎（，HARUKO）
配音：檜山修之〈太郎〉、保村真〈次郎〉、羽多野涉〈三郎〉（日本）；李錦綸〈太郎〉、蘇強文〈次郎〉、張錦江〈三郎〉（香港）
八留虎三兄弟是不隸屬於任何派系的攘夷浪士，三人為了幫被真選組拘捕了的同伴報仇，同時在攘夷黨裡爭取更高地位，而計劃暗殺作為真選組大腦的土方十四郎，令失去大腦的真選組無力再與攘夷志士戰鬥。
田中古兵衛（，Tanaka Kohē）
配音：勝杏里（日本）；陳永信（香港）
人稱『人斬古兵衛』。名字取自于幕末四大人斩之一的田中新兵卫。
天堂蒼達（）
配音：小西克幸（日本）；林協忠（台灣）；伍博民（香港）
創界黨的現任首領，激進派攘夷組織創界黨的已故首領紅達之弟。在二年前六角事件的發生時，因要執行暗殺將軍的計畫被真選組揭發，除了蒼達僥倖地躲避於櫥櫃中，其餘成員在旅店「六角屋」被真選組殲滅。為了報復沖田總悟殺掉兄長的仇恨及摧毀真選組，而讓創界黨再度重現。接著利用霧江作誘餌，但因她擅自對總悟行刺，遂決定把她和總悟一起處置。不過，因真選組和萬事屋等人的介入，造成計劃失敗。
楢崎幸（）
配音：大原沙耶香（日本）；陸惠玲（香港）
银魂角色列表 攘夷志士
有一個身份為“兇惡的攘夷志士”名為鈍兵衛的弟弟，酒屋“飲兵衛”的女主人。四年前父親去世後一直經營守護者酒屋的孝女。在利用幸引出鈍兵衛作戰一環中被山崎退暗中監視保護。
楢崎鈍兵衛（）
某攘夷志士組織所屬的兇惡攘夷志士，楢崎幸的弟弟。以前是在街上擁有惡名的小混混，在姐姐繼承父親的酒屋後也是時常來向姐姐要錢。實際在與姐姐一起謀奪組織的資金意欲潛逃後被真選組和組織兩方追查。在姐姐忽悠了山崎退以及真選組之後和姐姐一起出逃，和姐姐一起被獨自潛追的山崎一網打盡。
厭魅眠藏（）
配音：園部好徳（日本）；陳欣（香港）
攘夷派「知恵空党」的首領。
黑子野太助（，Kurokono tasuke）
配音：小野賢章（日本）；曹啟謙（香港）
於《同學會篇》中由桂及坂本提及，被二人稱之為「幻之第五人」，是銀時、高杉、桂、坂本等人在攘夷時期所認識的戰友。為人低調，雖然實力深不可測但在隊裡極為不顯眼，在背後刷了無數助攻。自認實力平庸，因而甘願擔當銀時等人的輔助并自稱為銀時等人的影子。曾向銀時約定只要大家有難便會回來保護眾人。從與銀時等人相識到分別，也僅有寥寥幾人記住了他，甚至在篇章開首時銀時也已忘記了他的存在。
然而，在武市變平太設下圈套幾乎成功除掉銀時等人時，黑子野太助再次登場，以劍術擊敗了整隊鬼兵隊並恫嚇來島真多子把桂和坂本等人放掉。雖然沒有畫出來，但有暗示他和銀時趁桂和坂本還在睡時相敍了一會。
名字是惡搞黑子的篮球的日文原名《》，角色原形則取材自該動畫的主角黑子哲也，動畫版聲優有特意选取黑子哲也的配音員小野賢章为该角色配音。
百夜叉（）
配音：檜山修之（日本）
是坂田銀時在攘夷時期的戰友，崇拜著銀時所以跟其服裝很相似。因為他不適合在前線打仗，銀時一直讓他在後勤部工作，戰爭完結後生還，並開起了各種小店。
银魂角色列表 吉原
紅燈區，原為鳳仙所建的地下遊廓。鳳仙死後名義上是由神威接手管轄，實際上已經沒有任何人在幕後操控吉原了。原型為吉原遊廓。
月詠（，Tsukuyo）
配音：甲斐田裕子、星野貴紀〈性別轉換篇〉（日本）；郭馨雅、鄧瑋德〈劇場版3〉（台灣）；劉惠雲、李凱傑〈性別轉換篇〉（香港）
2月9日出生，身高170cm，体重52kg。
吉原民兵「百華」的現任首領，外號「死神太夫」，保護吉原的遊女不被騷擾及防止逃跑。以苦無和短刀為武器。
小時候被賣到吉原，並被日輪所救，繼而產生保護其的意願。經常會以冷酷的面容隱藏自己內心柔弱的一面。左臉和額頭上各有一道刀疤，若没有两刀刀疤，其容貌足以成為花魁。此刀疤實際上是地雷亞之命令以避免成為花魁。身著開高衩、裁去右袖的特製和服與過膝網襪，但基本上不把自己當女人看。面對銀時會使她的決心動搖，視晴太為自己的兒子照顧，並會當其家庭教師。相當體貼，容易看穿對方心思，並會為他們圓場。
喜歡銀時，但一直因害羞而無法正常表達心意（說白了就是傲嬌）。曾多次在意外中遭銀時碰觸胸部、臀部等吃豆腐行為，月詠雖然認為自己沒有女人的自覺而沒有關係，但是下場當然是銀時被揍。
银魂角色列表 吉原
初登場《吉原炎上篇》時屬於較為正經的角色，協助晴太找尋母親日輪並參與推翻鳳仙的大戰。在《蜘蛛篇》之後漸漸開始有了喜劇要素，並在《人氣投票篇》開始和萬事屋以外角色有所互動。和猿飛為擁有許多共通點的損友，亦於人氣投票篇被強行加入其和阿妙及九兵衛所組成的偶像組合「Diamond Perfume」，並於《HDZ48篇》再次以成員身份登場。酒量和酒品都極差，即使是含酒的巧克力也會醉，發酒瘋時極為恐怖，新八對此吐槽「從酒精中抽取未知的力量」、「简直和大叔没有区别」。
《後宮篇》為銀時六個後宮的其中一人，说自己赎身价為2亿日元。事後被指出她和喝醉的銀時一同破壞酒館。
《傾城篇》中為完成鈴蘭的心願，於是聯同萬事屋三人及信女對抗前將軍定定及奈落。被日輪說「你最近變得愈來愈像銀時」而臉紅。
《性轉換篇》變成相當英俊的完美硬漢。與變成男性的猿飛菖蒲聯手幫助大家破壞攝影機與入侵並凹凸教的根據地，因為身處地下基地裡面所以沒被凹凸教發射的光束影響，之後回歸正常生活，打算與變成男性的手下們一起將吉原拓展成牛郎帝國。
银魂角色列表 吉原
《愛染香篇》吸入愛染香的濃煙，因此對銀時產生瘋狂的愛意，但還是成功一同擊潰瑩利用愛染香的計劃。最後表示自己只要能在銀時身邊便會感到幸福。
《銀之魂篇》原本在吉原接收在地上的老弱婦孺到地下避難，後聽日輪及晴太勸勉後率領百華小隊到地面協助銀時，前往歌舞伎町對抗天人解放軍。地球保衛戰兩年後改外號為「天道太夫」，並接下日輪的工作，成為吉原的新領導人。
名字源自於日本神話中的月讀尊。
日輪（，Hinowa）
配音：櫻井智→井上喜久子、仁後真耶子〈童年〉（日本）；林佑俽（台灣）；曾秀清→凌晞（香港）
1月8日出生，身高164cm，体重44kg。
《吉原炎上篇》出場，是吉原的第一花魁，如太陽一般的存在。年幼時即在吉原工作，總是對鳳仙說「叔叔的頭頂上一定也有能夠化開您冰冷的心的太陽」。為了保護晴太，被鳳仙威脅留下，為避免她逃走鳳仙甚至把其腳筋挑斷，以致後面日輪都需要以輪椅代步。
晴太的養母，個性帶有天然呆和略為腹黑的一面，但對其照顧無微不至。鳳仙死後現正在吉原擔任一家贩卖成人用品的茶屋的老闆娘。
银魂角色列表 吉原
《傾城篇》裡再次出場委託萬事屋幫助鈴蘭找尋當年的戀人，及後也在《銀之魂篇》再次關上吉原的天窗保護老弱婦孺，並著月詠到地面支援銀時。兩年後已經可以站起來用拐杖行走，依然與晴太生活在一起。
晴太（，Seita）
配音：三瓶由布子（日本）；曾允凡（台灣）；黄玉娟（香港）
5月10日出生，8歲，身高133cm，体重21kg。
《吉原炎上篇》出場，為過去一位吉原妓女違反規定生下的孩子。其母亡故後，日輪试图收養，但出逃吉原计划失败。日輪为了保住晴太的性命无奈只能将他交給他人照顧，自己則被鳳仙禁錮。晴太為了去吉原只能變成小偷並結識了萬事屋，在其幫助下潛入吉原。在篇章的最後成功打開天窗，使鳳仙接觸陽光而實力大減。事件後與日輪及月詠同住，在吉原幫忙售賣成人玩具。生活自此之後變得舒心多了，但當然還是得面對這個年紀的男孩子會遇上的情況。
《銀之魂篇》裡和天人交戰結束後兩年已經能夠在街上找客人了，依然與日輪生活在一起。
鳳仙（）
配音：銀河万丈（日本）；陳幼文（台灣）；招世亮（香港）
8月10日出生，身高183cm，体重76kg。
银魂角色列表 吉原
來自宇宙最強的天人戰鬥民族夜兔族，春雨的幹部之一，綽號「夜王」。春雨第七師團的創始人，神威的師父。實力極為強大，只有同為夜兔的星海坊主才能打成平手。因夜兔體質無法接受日曬的關係，從而在地下建造了吉原桃源乡。曾對讓自己親近太陽的日輪有近乎病態的糾結感，並通過囚禁試圖讓日輪屈服自己。《吉原炎上篇》與銀時和百華眾展開激烈死鬥，以巨傘作為武器，是少數战力碾压銀時的角色之一，右眼在戰鬥中被銀時所傷。最後大家利用陽光對夜兔膚質之傷害，加上他已多年未接觸過陽光的弱點才將他擊敗，在日輪的懷抱裡安然逝去。
鈴蘭（）
配音：一龍斎貞友、內山夕實〈年輕時期〉（日本）；林丹鳳、吳羨婷〈年輕時期〉（香港）
有著「傾城鈴蘭」（）之稱的吉原前任花魁，喜歡六转舞藏，二人曾有段不為人知的約定，但她被前代將軍德川定定作為奪權、排除異己藉以登上將軍之位的道具利用。
地雷亞（，Jiraia）
配音：屋良有作（日本）；陳幼文（台灣）；潘文柏（香港）
3月12日出生，身高180cm，体重68kg。
银魂角色列表 吉原
月詠的師父，初代百華首領，被眾人以為已命喪於兩年前的吉原大火。本名為鳶田段藏（）。被稱為「蜘蛛手地雷亞」，前御庭番眾成員，過去為幕府肅清大量異己。後來因意圖殺害將軍，與當時作為影武者的全藏父親交戰，在身受瀕死重傷的情況下躲過御庭番眾的追殺。對自己的獵物有無比的忠誠心，會給予飼食讓其壯大，然後在其最壯大時將其殺害。雖然似乎作惡多端，但是其實是一個因為天才而被命運忌妒的可憐人。
出生於伊賀，自懂事時才能出眾而被稱為神童。家世顯赫卻因遭到妒忌而惹來殺身之禍，在家族被滅的期間中只有自己和妹妹存活下來。由於妹妹被當作人質只能順從主人的命令，向最憎恨的滅族仇人宣示忠誠，其心智也從此時開始扭曲。妹妹結果無法繼續看著自己為她而受苦選擇跳崖自盡。此後，地雷亞便陷入扭曲之中，以自己最厭惡的方式來手刃自己作為無法保護妹妹的絕望，而獲得解脫。
後來跟月詠相遇並教導她忍術，甚至把其視為自己的藝術品，希望她成為一個不需要同伴的忍者。在打算把月詠信賴的銀時加以殺害前被月詠所殺，最後獲得其對自己的諒解，彷彿在她身上看到妹妹生前的微笑，最後對著一輪明月含笑死去。
角色源自於戰國時代的忍者加藤段藏（人稱「鳶加藤」），而名字则参照火影忍者中的自來也日文發音與《火影忍者》自來也（じらいゃ，Jiraiya）基本相同。
银魂角色列表 組織
以主艦快臨丸與四艘護衛艦及一艘偵察艦所組成的宇宙超商船隊，大部分的成員都曾經是千鳥販賣的奴隸。為了能與某些巨大星人做生意，於是將船改造能合體成「宇宙超商船隊機甲－快援機器人」（頭頂附有小膿包）。
宇宙超級商人心得
商業的基本是營業，錢是要靠雙腳賺出來的，就算遭到客人無數的責罵批評也不要放棄，不要流淚，不要止步，在心靈達到商業之魂的境界之前，不停奔跑吧。
就算是深入內心的交涉，客人的心也不會輕易向你敞開，無論承受多少懷疑的目光，無論提案被否決多少次，不要放棄，不要流淚，不要封閉內心，答案就在那絕境之中，於狂風血雨之中，努力尋出一線光明吧。
如果想要打開別人的內心，首先要敞開自己的心胸，不是用寫字版，也不是用人造的繪畫劇，而是以自身真誠的言語。
原形為坂本龍馬所設立的「海援隊」。
坂本辰馬（，Sakamoto Tatsuma）
日本配音：三木真一郎
台灣配音：黃天佑（第一季其之壹）→梁興昌（劇場版1）→何志威（第一季其之貳起、劇場版2）→馬國堯（劇場版3）
香港配音：陳廷軒→鄧志堅
11月15日出生，20多歲。身高181cm，体重70kg。
银魂角色列表 組織
私設艦隊「快援隊」隊長，往來星球之間進行貿易，買賣貨品致富。銀時以前的盟友，攘夷志士中的存活者之一。人稱「桂濱之龍」（）。因為說話聲音很大，曾被稱為「聲音很大的人」。
希望能通過貿易，給天人與地球人帶來利益，謀求雙方關係的調和。認為是因為銀時留在地球（支持自己），自己才能放心的出去宇宙闖出一番事業。因為自己熱衷宇宙的緣故，所以才成立了快援隊。且對開宇宙船也有極高的興趣，但是腦子卻出乎意料的空空如也，且十分沒有神經。雖然如此，在重要關頭卻是能言善辯，並且很懂得甚麼才是真正有價值的東西。
十分樂觀，無論遇到甚麼情況，都能哈哈大笑。戴着一副墨鏡。十分喜歡船，但很容易暈船，常嘔吐不止，在過去篇初次登場時曾因為暈船把正在爭執的銀時和高杉吐了滿身都是穢物。基本上，辰馬把工作都交給陸奧打理，伊利莎白就是坂本托陸奧送給桂的。經常記錯別人的名字，並稱「銀時」為「金時」（「ぎんとき」為日文中清音跟濁音之差別）。
银魂角色列表 組織
因與銀時等人志同道合，加入攘夷大軍，並充當後勤部的主力。雖然外表看不出來，當年的劍術也很強，目前主要武器是手槍，槍法也相當好。之所以他再無法使用劍術，是因為是在過去攘夷戰爭中拯救敵方的傷員時遭被馬董從背後突襲被刺傷右手腕，以後已無法握劍。自此，他放眼於更遠的天空，並在戰爭結束前便離開了大伙。他離開銀時等人之後不久便被宇宙海盜擄走，但仍憑著個人魅力和言語技巧把海盜千鳥的副船長陸奧以及船上所有的奴隸都收為己用，並把原本的船長推翻，創立「快援隊」。
相較於銀時和桂與高杉反目成仇，坂本則認為高杉還是以前的高杉，並不認為他有何改變，並表示必要時會再一次調停銀時和高杉之間的關係。對志村妙所在的酒店中的一名陪酒女阿龍有好感但求婚總被拒。
《蓮蓬篇》中帶著桂和萬事屋一行人去和蓮蓬星人談判，並成功阻止他們侵略地球。
《同學會篇》裡跟桂一同出場相約銀時和高杉相會，卻回憶起當年可能弄死了黑子野太助；在去廁所時被鬼兵隊弄暈，第二天才醒轉過來。
《快援隊篇》交待了他和陸奧的認識經過以及創立快援隊的事情。
银魂角色列表 組織
《烙陽決戰篇》使計扣下了喜喜，和春雨的決戰中戰勝范堺，並成功影響了喜喜的心態；後在《銀之魂篇》中與喜喜一起出席與紫雀提督的會談，在取得初步成果之後因圓翔皇子的發難使自己被扣留，但仍與桂和高杉一起擊倒圓翔奪回主船的控制權。兩年後協助神樂回到地球，並在太空船上幫助銀時攻入能量塔，以及在其被毁滅時協助疏散群眾及幫忙搜尋生還者。
名字是參照幕末土佐藩士兼著名志士「坂本龍馬」。
陸奧（，Mutsu）
配音：渡邊明乃（日本）；郭馨雅（台灣）；張頌欣（香港）
7月7日出生，身高158cm，体重44kg。
坂本辰馬的女性副手。由於坂本經常不在艦隊到處鬼混，因而商隊面臨危機時快援隊大小事務皆由陸奧一人承擔，坂本捅出的婁子也基本都要陸奧去善後，常被下屬直接稱為艦長。
與神樂同樣出身自宇宙最強戰鬥民族—夜兔族，所以長年帶著防曬的斗笠，同其他夜兔一样具有極高的戰鬥能力，可以單手逼停太空船的巨大力量以及單槍匹馬解決一支部隊。同樣懼怕陽光，但是和其他夜兔不同，陸奧並不用傘遮擋太陽，而是帶戴著斗篷和斗笠；也不用傘來戰鬥，基本上使用手槍，《快援隊篇》改用左輪手槍。
银魂角色列表 組織
沉默寡言，面相冷酷，少有表情，在大方針上對坂本的決定很服從。有土佐口音。為人處事穩重，經常給坂本辰馬的短線行為善後，在坂本犯傻的時候教訓坂本。精於算計，有傲嬌性格，略有暴力傾向，稍有不順就喜歡對人又踢又打，或者用槍威脅別人。有極高的辦事效率和超強的執行力，執行力強到完全瞞過坂本，自己制定方針計劃，然後執行到位。
曾是宇宙海賊「千鳥」的第二師團副團長，人稱「鑽石姬陸奧」，厭倦被作為一個海盜集團的繼承者來培養。自称在少女時期的梦想是当個去咖啡館和蛋糕店收保護費的不良少女，但是被作為千鳥海賊團提督的父親逼迫當了海賊。其父亲與星海坊主是老友的关系。
在《蓮蓬篇》中把快援隊的太空船變成可以合體的機械人，協助銀時等人戰勝米墮卿。
在《烙陽決戰篇》中追隨辰馬去烙陽並跟春雨展開決戰，被范堺控制了身體但仍保持清晰在重要關頭救下了辰馬，使之可以擊敗范堺。
在《銀之魂篇》為保護坂本辰馬而被圓翔皇子擊至重傷，後成功降落地球。之後因快援隊元氣大傷不得不做一些灰色地帶的勾當，暗中幫助神樂回到地球。
名字是參照曾經是海援隊隊員的日本著名外交家陸奧宗光。
老婆婆（）
配音：上田優子（日本）
银魂角色列表 組織
快援隊的一員的老太婆。曾經是千鳥上待售的奴隸。在坂本和陸奧快被處刑時率領其他奴隸起義救出他們。
在銀魂的銀河系中，是個大規模的犯罪集團，共有十二個師團。
元老（）
配音：さかき孝輔、仗桐安（日本）
春雨的首領們，在虛的介入之下在《烙陽決戰篇》中遭到殺害。
阿呆提督（）
配音：星野充昭（日本）；陳幼文（台灣）；黃子敬（香港）
春雨中的元老院之一，微胖的中年天人。被其他人私下通稱「（）」。察覺到己身地位受到神威的威脅而和第八師團長勾狼計畫除掉第七師團、斬殺神威，並意圖利用鬼兵隊。計畫失敗後被神威擊敗。
由戰鬥部族「夜兔」為骨幹所組成的第七師團，是春雨中最精銳的部隊。曾因師團長鳳仙鋒芒太露而差點遭到剿滅。現時由春雨首屈一指的好戰派團長神威率領。
鳳仙（，Hōsen）
春雨第七師團的前任團長。傭兵三大部族「夜兔族」之王。
神威（，Kamui）
配音：日野聰、安濟知佳〈童年時期〉（日本）；賀宇傑〈第一季、劇場版1〉→何志威〈第二季〉／余宗翰〈劇場版3〉（台灣）；李致林、曾秀清〈童年時期〉（香港）
18歲，6月1日出生，身高170cm，体重55kg。
银魂角色列表 組織
春雨第七師團的現任團長。星海坊主和江华的長子，神樂的哥哥。在《吉原炎上篇》中首次登場。雖然不怎麼顯露出來，但相當珍惜自己的家人。外貌為橘髮藍眼的少年，綁著長辮子，頭上有條呆毛。
在烙陽星出生，原本在幸福之下成長，但隨著神樂出生，江華的身體也一步步走向衰退。從此母親被周遭的天人稱之為病原體，使其感到相當氣憤，經常與人發生打鬥，卻被常年不在家的父親訓斥不可胡亂使用力量。自此便立志要為成為最強的人活在這世界上，對家庭、師徒、屬下等情誼均不屑一顧。因不理解父親的行動和告誡而對其很不滿，二人後來大打出手。在爭執之下他打斷星海坊主一臂，當快要被其殺害時被神樂勸止。神威隨即出逃投靠鳳仙，自此便沒有再回過家，是以對當年拋下重病的母親離開感到內疚。在加入春雨的一段時間後，因鳳仙把自己關在吉原，他便順理成章成為第七師團的團長。
非常喜歡打鬥，對好對手非常珍視，打架時常帶著笑容。由於女性有機會能夠生育實力強大的孩子，而孩子則有可能成長為實力強大的成年人，因此對婦孺和看順眼的人比較留手。是《銀魂》本篇中少數沒有喜劇成分的角色。