バイオハザード: ザ・ファイナル キャスト
アレクサンダー・R・アイザックス博士と共にアンブレラ社を立ち上げたジェームズ・マーカス教授の娘。父ジェームズが死んだ現在は、ジェームズの所持していたアンブレラ全体の約50％の株式を引き継ぎ、アイザックス博士と共にアンブレラ社の共同所有者である。
テロメアやホルモンの異常などが原因とされる主要な早老症の一つである「プロジェリア」という難病を患っており、父ジェームズが開発したT-ウイルスにより一時は回復したが、完全には治癒せず、再び症状が発現し、老婆のような外見になってしまっている。
アンブレラの重役として過ごしてきたが、プロジェリアの影響による体力の衰えから、同じ肩書を持つアイザックス博士にいいように扱われ、「浄化作戦」の発表の際にアイザックス博士を止められなかったことを後悔している。
後悔の念から、「浄化作戦」の発表の様子を録画し、レッドクイーンの内部にアップロードしたことで、レッドクイーンのアイデンティティである「人命を尊重する」プログラムに矛盾を生じさせてレッドクイーンを味方につける。人類の抹殺を続けるアンブレラを止めるべく、自身のクローンであるアリスにアンブレラ社が成そうとしている計画をレッドクイーン経由で伝え、希望を託した。
共同所有者であるアイザックス博士とは会社内での支配階級が同一であるため、博士から殺されることは無かった。再発したプロジェリアによってすぐに死ぬだろうと踏んでいたアイザックス博士は、なかなか死んでくれないアリシアのことを疎ましく思っていたが、逆もまた然りでアリシアもレッドクイーンを用いてアイザックス博士を排除することはできないでいた。しかし部下であるウェスカーになら手を下せることは分かっていたため、終盤でウェスカーの隙をついて彼を解雇してレッドクイーンの攻撃対象とし、レッドクイーンの攻撃によって重傷を負ってしまい追い詰められていたアリス達に突破口を与えた。
最後は父ジェームズと過ごした自身の幼少期の記憶をアリスに託した後、ウェスカーと共に施設の爆発に巻き込まれて死亡した。
アンブレラ社の重役で、アイザックスと同様に原作ゲームには登場しない映画版オリジナルキャラクターではあるが、老体で老いに打ち勝とうとしている姿や、生命維持装置付きの車いすに乗って移動する彼女の風貌は、性別こそ異なるものの、原作ゲームのアンブレラグループ総帥であるオズウェル・E・スペンサー卿の末期の姿を彷彿とさせる。
ジェームズ・マーカス教授（Professor James Marcus）
演：マーク・シンプソン
アレクサンダー・ローランド・アイザックス博士と共にアンブレラ社を立ち上げた科学者。アンブレラが管理する数多くの研究センターを統括する教授でもある。
妻に先立たれ、幼い一人娘のアリシア・マーカスを溺愛していたが、娘が難病である「プロジェリア」を発症してしまい、以降、アイザックス博士の資金援助の元で、「プロジェリア」の治療方法を模索し研究し続けていた。一時は研究が袋小路に入ってしまい、絶望の中でアリシアを保存しようと考えて、アリシアの記憶や、声紋などの生体情報を記録した。この情報は後にアイザックス博士が「レッドクイーン」を製作する際に使用されることになる。しかし、直後に研究が飛躍的な進歩を遂げて、「プロジェリア」を治癒することが出来る「T-ウイルス」の発見に至った。
アリシアを救うためにT-ウイルスを開発したが、会社の利益と権利の独占を狙ったアイザックス博士に裏切られ、彼の命を受けたウェスカーに殺害された。
本作の小説版によると、彼の死後、T-ウイルスの研究を引き継ぎ仕上げたのは、愛娘の難病というジェームズと同じ境遇に悩んでいた映画二作目『II』に登場したチャールズ・アシュフォード博士であるとされている。
本作に登場するクレアやウェスカーと同じく原作ゲームからの登場人物であり、「アンブレラ社の創設メンバーの一人」「T-ウイルスを開発」「共同創設者と意見が対立し、命を受けたウェスカーによって殺害される」などの部分が原作と共通している。ただし原作は「規律・服従・忠誠」を重んじる冷酷な性格で、「かわいい子供たち」と呼称して溺愛しているB.O.W.（生物兵器）はいるものの、人間の娘はいなかった。しかし映画では、人間の娘であるアリシアのことを第一に考える優しい人物として描かれている。
なお映画冒頭のシーンで、ジェームズが初登場した際に、英語のプロフィール文章が表示されるが、そこには「DIRECTOR OF THE UMBRELLA TRAINING FACILITY.(アンブレラ養成所所長）」、「HEAD OF THE UMBRELLA RESEARCH CENTER IN THE ARKLAY MOUNTAINS.（アンブレラ・アークレイ研究所主任）」と書かれており、彼が登場する原作ゲーム『0』を強く意識したプロフィールとなっている。
レッドクイーン（Red Queen）
演：エヴァー・アンダーソン
アンブレラの中枢部及び、ハイブの制御、管理を担う人工知能。アンブレラ創始者の一人であるジェームズ・マーカスの娘、アリシアの少女時代の容姿をインターフェースホログラムとしている。会社の莫大な財産を守るために、アイザックス博士により製作された。なお、映画の一作目『I』に登場したカプランが、劇中でレッドクイーンのプログラマーの娘がモデルになっているとアリス達に噂話程度に語っていたが、アイザックスはアリシアの後見人であるので、あながち間違っていなかったことになる。
アンブレラ社の衛星システムを使って世界中の様子を監視でき、必要に応じてネットワークに接続された様々な電子機器に姿を現すことが出来る。
『I』では、ハイブの中枢コンピューターを担う人工知能として登場、ハイブ内にて起きたバイオハザードを外に出さないため、感染した恐れのあるハイブの従業員を抹殺し、電子ロックをかけてアンデッドを封じ込めることに成功したが、アンブレラはレッドクイーンが故障して従業員を抹殺したと判断し、レッドクイーンをシャットダウンするべくハイブに自社の特殊部隊員を派遣した。特殊部隊員とアリス達がハイブに介入した結果、せっかく封じ込めたアンデッドやリッカーをはじめとする生物兵器がハイブに蔓延し、後の世界規模のバイオハザードが起こるきっかけとなってしまった。
『III』では、レッドクイーンの妹としてホワイトクイーン（白の女王）という人工知能が登場していたが、本作の小説版によると、実はアイザックス博士のクローンにそう名乗るよう命令されたレッドクイーン本人であることが判明する。
『V』では、再びアリスの敵として登場。ウェスカー曰く、「アンブレラの事実上のトップで、世界を滅亡させようとしている」と説明されたが、本作でそれがウェスカーの嘘であったことが判明する。
本作の小説版では、『I』でハイブの全職員をハロンガスやスプリンクラーを使って抹殺したことは、レッドクイーンの基本理念として「アンブレラ社に仕えると同時に、人命を尊重する」ようにプログラムされていることが理由であり、T-ウイルスが外に流出して人類全体が危機にさらされるリスクを考えたら、適切な判断であったとアリスに語っている。
そもそも『I』でレッドクイーンは故障などしておらず、アリシアによって暴露されたアンブレラがハイブでのT-ウイルスの流出前から計画していた「浄化作戦」の概要を把握したことで、ワン隊長率いる特殊部隊がハイブに介入したこと自体が、アンブレラによって仕組まれた出来事であり、アンブレラが人為的にウイルスを広めようとしていたことをアリシアからの暴露によって知る。そして「人命の尊重」という理念に対し、T-ウイルスを用いて人類を「抹殺」し続けるアンブレラ社とアイザックス博士に矛盾が生じたことをアリスに告白する。
「アンブレラ社に仕える」ようにプログラムされ、自身ではアンブレラの凶行を阻止できないため、認知されない範囲でアンブレラ社を裏切り、アリスに会社の最重要機密である「T-ウィルス感染者を死滅させる風媒の抗ウィルスワクチン」の存在を伝えて、人類の滅亡を阻止して欲しいとアリスに依頼した。
映画の中盤では、レッドクイーンの裏切りに気が付いたアイザックス博士の手によってシャットダウンされてしまったが、終盤でアイザックス博士が死亡したことによりオンライン状態に戻る。ハイブが爆破され、アイザックスやウェスカー、アリシア等のレッドクイーンに命令を下せる立場のアンブレラの役員たちが全員死亡したことで、自ら行動することができるようになり、世界中の生存者達が居留する各都市に向かっていた装甲車部隊に作戦停止命令を下して、タイムリミットギリギリのタイミングで浄化作戦を終結させた。
なお、彼女の『I』から続くお決まりの台詞である「You are all going to die down here（みんな、ここで死ぬのよ）」はスタッフロール後にも使用されており、この台詞を最後に15年続いた本シリーズは幕を閉じた。