hotchpotch/wikipedia-multilingual-ir-pairs huggingface dataset:
المملكة المصرية القديمة المؤسسات والإدارة
أخيرًا، تهتم القوة المركزية أيضًا بعلاقاتها خارج مساحاتها الهامشية، نحو المناطق الأخرى حيث غالبًا ما توجد كيانات سياسية متطورة ولكنها ضعيفة جدًا أو بعيدة جدًا بحيث لا تشكل تهديدًا. نقطة الاتصال الرئيسية مع مصر في الشرق الأوسط هي ميناء جبيل (في لبنان)، حيث يتم تنظيم الشحنات التجارية بانتظام ؛ لكن تم العثور على مزهريات باسم ملوك الأسرة المصرية السادسة حتى إيبلا في وسط سوريا. شهدت هذه الفترة انطلاق بعثات طموحة إلى الخارج، بتوجيه من كبار الشخصيات، أشهرها أوني. في الجنوب، انطلقت عدة رحلات استكشافية من إلفنتين إلى النوبة لشراء المواد الخام القيمة (ذهب، ديوريت، إلخ). في نهاية الفترة ظهر كيان سياسي قوي في كرمة. شهدت هذه الفترة أيضًا اتصالات مع أرض بونت البعيدة (التي لا يزال موقعها موضع نقاش)، حيث أعاد هيرخوف قزمًا الذي أبهج الملك الشاب.
يشير وصف إدارة الدولة القديمة إلى أن أعلى المناصب كانت تشغلها الفئة الاجتماعية التي احتلت قمة المجتمع. نظرًا لأن هذا الأخير يتميز بقوة بثقل الدولة، فإن التسلسل الهرمي الإداري يتداخل مع التسلسل الهرمي الاجتماعي، حيث لم يكن من الممكن الحصول على السلطة والثروة دون الارتباط بالسلطة الملكية. تعكس السير الذاتية العديدة لكبار الشخصيات هذا: فهم مدينون بإثرائهم لأداء وظائف مهمة نيابة عن الملك، مما يؤدي إلى امتلاك أنواع مختلفة من الكرامات والامتيازات التي تسمح لهم ببناء تراث مهم، على وجه الخصوص تبرعات الأرض. منح الحق في تشييد نصبه الجنائزي، الذي منحه دخلاً بموجب ميثاق ملكي، توج مسيرة مهنية جيدة وضمن لعائلة الشخصية المرموقة تراثًا ودخلًا للأجيال القادمة  · .
حالة نموذجية للإثراء بعد حياة قضاها في خدمة الملك هي حالة متجن، عند مفترق طرق الأسرة المصرية الثالثة والأسرة المصرية الرابعة، أقدم قائمة ببليوغرافيا لشخصية مرموقة معروف. بالفعل وريثًا للمجالات بفضل والده الذي كان قاضيًا وكاتبًا، هذه الشخصية نشطة في إدارة المقاطعات، حيث تدير مختلف المجالات الزراعية للتاج والعديد من المقاطعات في صعيد مصر العليا والسفلى  · .
مع ضعف السلطة الملكية في ظل الأسرة المصرية السادسة وفي بداية الفترة الانتقالية الأولى، اعتمدت هذه الأرستقراطية على مناطقها التي كانت أكثر تركيزًا في مناطق جغرافية محددة، حيث كانت يمارس مسؤوليات في إدارة الأسماء. ينتهي الأمر بتشكيل أرستقراطية إقليمية حقيقية، مما يعزز تراجع السلطة المركزية.
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
تشير الوثائق المتعلقة بالمملكة القديمة قبل كل شيء إلى مسائل المصلحة العامة. لذلك فإن الأنشطة الاقتصادية الموثقة تتم بشكل رئيسي في المجال العام. ومع ذلك، لم يعد من الممكن اعتبار الدولة مهيمنة على جميع قطاعات الاقتصاد، مع وجود القطاع «الخاص» للاقتصاد. لكن استخدام هذه المفاهيم الحديثة ليس بالأمر السهل في السياق القديم، وغالبًا ما يحجب حقائق هذا الوقت. على أي حال، يهيمن النشاط الزراعي على الاقتصاد المصري، حيث تحتل نطاقات التاج وتلك المخصصة للطقوس الجنائزية مكانًا رئيسيًا. تخضع القوى العاملة التي تعمل في الحقول أو في مواقع البناء أو في ورش الحرف أو في المناجم والمحاجر لرقابة صارمة من قبل الجهاز البيروقراطي للدولة، دون أن يكون من الممكن اعتبارها ذليلة..
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
كان لدى الدولة شبكة من الوحدات الاقتصادية الموزعة في جميع أنحاء المملكة، وهي مراكز للعمليات الزراعية، تخدمها إدارة وتخزين البضائع. كانت هذه المناطق بمثابة أولوية لاحتياجات الدولة، وبالتالي كانت تدار من قبل إدارة المقاطعة وفي نهاية المطاف الإقامة. يبدو أن هذه العقارات قد تم تقسيمها إلى عدة وحدات تشغيل محلية، وجمعت معًا عدة قرى فلاحية. يمكن للملك أيضًا التنازل عن الدخل من مزارعه، مع الموظفين الذين يعززونها وأحيانًا الإعفاءات الضريبية. كان المستفيدون الرئيسيون من هذه التبرعات المعابد، ولا سيما المعابد الجنائزية الملكية ولكن أيضًا الخاصة، وذلك لضمان تقديم عبادة المتوفى هناك بطريقة دائمة. أعيد توزيع دخل المعابد الجنائزية للأفراد جزئيًا على أحفادهم الذين نقلوا هذا الحق لبعضهم البعض بطريقة وراثية، وبالتالي ضمان وسيلة مريحة للإثراء. كما تلقت معابد الآلهة مثل هذه التبرعات، كما يتضح من مراسيم قبطس المؤرخة بـ الأسرة المصرية السادسة، والمخصصة لمعبد الإله العظيم المحلي مين. تم الإشراف على عقارات المعابد الإقليمية من قبل حكام المقاطعات وإدارتهم، مما منحهم بمرور الوقت سلطة أكبر على المستوى المحلي. على أي حال، فإن مصادر هذه الفترة، مثل بردية أبوسير الأسرة المصرية الخامسة  · ، تشير إلى أن المعابد لا تتمتع باستقلالية في إدارة المجالات الممنوحة لها، الدولة الحفاظ على إدارتها وتكليفها بتوزيع دخلها على النحو المنصوص عليه في نصوص التبرعات الملكية. يمكن للملوك أيضًا منح الأرض لموظفي الخدمة المدنية خلال حياتهم لمساعدتهم على تمويل ممارسة وظيفتهم أو كمكافأة على خدماتهم، وهي مذكورة عادة في السير الذاتية لكبار الشخصيات. لذلك من المفهوم أن الحد الفاصل بين المجالين العام والخاص ليس واضحًا أو حتى غير ذي صلة في هذا السياق، لأن صاحب السيادة يحافظ على نوع من الملكية البارزة على جميع الأراضي. ولكن من ناحية أخرى، تميل الشخصيات البارزة إلى السعي إلى وراثة الدخل من مختلف أنواع الأراضي التي يُمنح الدخل منها لهم، ويمكنهم حتى ممارسة السيطرة على دخل المعابد الإلهية في المقاطعات. ومع ذلك، طالما أن السلطة الملكية قوية، فإن الاقتصاد الزراعي للإمبراطورية القديمة يقدم صورة شخصية تديرها الدولة  · .
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
كان إنتاج الثروة، سواء كان نابعًا من المجالات العامة أو الخاصة، خاضعًا للضرائب وإعادة التوزيع التي تنظمها الدولة. كان مكتب الخزانة هو المسؤول عن الإشراف على هذه العمليات. كان لها مكاتب ومراكز تخزين مختلفة في جميع أنحاء المملكة، وتم توفير النقل عن طريق القوارب. أجرى المسؤولون الإداريون بانتظام عمليات تعداد تهدف إلى تقييم الثروة المتوفرة في أجزاء مختلفة من المملكة، وخاصة الماشية. الضرائب تثقل كاهل البضائع العينية: الثروة الحيوانية وإنتاج الحبوب قبل كل شيء. ثم تولت الإدارة المركزية وإدارة النطاقات مسؤولية إعادة توزيع ما تم سحبه على العديد من المستفيدين. أولاً، خدمات الدولة، حيث يتقاضى الموظفون حصصًا عينية (الخبز والبيرة بشكل أساسي) والتي كانت بمثابة رواتب في اقتصاد غير نقدي. ذهب جزء كبير من البضائع الموزعة إلى الجنائز والعبادات الإلهية التي قدمت لها القرابين، وحصص الإعاشة التي كانت تكافئ الكهنة الذين يرأسون هناك. وهذا يعني وجود جهاز بيروقراطي يستخدم الكتبة الموزعين في الخدمات المركزية والمحلية، ويكتب العديد من الوثائق الإدارية التفصيلية، والتي يمكن للمرء أن يلمحها من قبل الأرشيف الإداري للمعابد الملكية أبو صير. كان لابد من إجراء عمليات تفتيش منتظمة لتجنب الأعطال، وخاصة الاحتيال  · .
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
إلى جانب الخصومات العينية من العقارات الزراعية، كان النوع الآخر من الموارد الأساسية لدولة المملكة القديمة هو العمل البشري، في نظام يتميز بأنه عمل روتيني بسبب الإدارة الملكية من قبل المواضيع. قمنا بتعبئة الحرفيين المتخصصين وكذلك العمال غير المتخصصين الذين تم البحث عن قوة عملهم قبل كل شيء وليس قدرات محددة. هنا مرة أخرى، كان على البيروقراطية أن تقوم بعمل محدد لضمان حسن سير العمل في مواقع الأشغال العامة التي كانت هدف هذه التعبئة: كان من الضروري تقييم الاحتياجات المادية والبشرية اللازمة في المنبع، لتوفير المواد اللازمة للإنشاءات والحصص التي سيتم توزيعها. للعمال، ثم توجيه ومراقبة التنفيذ اليومي للعمل، من المحتمل أن يكون لكل عامل أو مجموعة من العمال حصة من العمل لأداءها. بعد منظمة قائمة منذ فترة الثنيت، يتم تنظيم العمال عادة في فرق مؤهلة، الذين يتناوبون على خدمتهم على مدار شهر واحد أو أكثر. لذلك لا يمكننا أن نقول إن العمال الذين عملوا في مواقع الإمبراطورية القديمة، ولا سيما أهم من شهد بناء الأهرامات، كانوا عبيدًا ؛ لقد كانوا رعايا شاقين تم تعبئتهم موسميًا في خدمة الدولة كمواطنين. من المستحيل معرفة ظروف العمل لأن هذه العمليات الكبيرة لم يتم توثيقها جيدًا. على أي حال، من الواضح أن هذا يتطلب قدرًا كبيرًا من التحكم من جانب الجهاز الإداري: ضمان نقل الكتل الحجرية إلى المواقع، وتعبئة القوى العاملة (ربما قالب:الوحدة في قالب:Unit لـ هرم خوفو) وصيانته في الموقع  · . تم إخلاء ورش العمل (خاصة المخابز، مصانع الجعة لصنع الخبز والبيرة) والمكاتب والمتاجر وأماكن الإقامة بالقرب من أهرامات الجيزة، مما يدل على أن هذه المواقع الاستثنائية من حيث حجمها وطولها يتطلب إنشاء مساكن للعمال في الموقع  · .
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
من بين الأنشطة المهمة الأخرى لإدارة الثروات من قبل إدارة الدولة القديمة، يجب أن نذكر حملات فتح واستغلال المحاجر الموجودة على الهامش (في سيناء، الصحراء الليبية، في النوبة)، والذي كان يتطلب أيضًا تعبئة العديد من العمال والموارد اللازمة لصيانتهم وتنفيذ الأعمال. تم توثيق هذه الرحلات الاستكشافية من خلال النقوش الموجودة في المواقع الملغومة.
المملكة المصرية القديمة التنظيم الاقتصادي
لا يبدو أن هناك أي عملة في حد ذاتها. تم جمع الدخل عينيًا وتمت التبادلات إما في شكل مبادلات العمل مقابل السلع، أو في شكل مقايضة مع اللجوء إلى وحدات حسابية على أساس المعدن الثمين، مما جعل من الممكن قياس قيمة الكائنات ذات الطبيعة المختلفة. على سبيل المثال، في حكم يعود تاريخه إلى حوالي 2600 قبل الميلاد، يقرأ:
لطخة ويسترن
في التقنيات الحيوية، لطخة ويسترن (بالإنجليزية: Western Blot)‏ (تعرف أيضا باللطخة المناعية Immunoblot) هي طريقة اكتشاف بروتين معين في عينة أو مستخلص أنسجة، وهي من التقنيات الحيوية المخبرية. تستخدم الفصل الكهربائي للهلام لفصل البروتينات الطبيعية native proteins أو البروتينات المُتَمَسِّخة denatured proteins حسب طول السلاسل البروتينية (ظروف مفككة) أو حسب الشكل الثلاثي الأبعاد للبروتين (ظروف قومية/غير مفككة). يتم، في ما بعد، نقل البروتينات إلى غشاء (عادة ما يكون الغشاء مصنوعا من مادة النيتروسيليلوز أو ثنائي فلوريد متعدد الفينيليدين)، حيث يتم التحقق (الاكتشاف) باستخدام أضداد مخصصة للبروتين الهدف. هناك الآن العديد من شركات المواد التي تتخصص في تجهيز أضداد (مستنسخة ومتعددة النسائل) ضد آلاف البروتينات المختلفة. وقد قام هذا بتقليل الوقت الذي تحتاجه لعمل لطخة بصورة كبيرة.
لطخة ويسترن
كان يجب، سابقًا، تلقيح الحيوانات الكبيرة (مثل: الخرفان، العنز - يحتويان على الكثير من المصل) بالبروتين المستهدف مرتين (حيث أن الاستجابة المناعية الثانية تنتج أضدادا أكثر). ومن ثم إما يتم تصفية المصل واستخدامه (أضداد متعددة النسائل - Polyclonal -) أو يمكن فصل الخلايا البائية من الحيوان ودمجها خارج الجسم in vitro مع خلايا فأر سرطانية لتوليد خلايا هيبريدوما التي تستطيع في ما بعد إنتاج أضداد وحيدة النسيلة (Monoclonal).
الأضداد التجارية عادة ما تكون مكلفة، ولكن يمكن إعادة استخدامها (استخدام ما يتبقى من الأجسام المضادة غير الملتصقة) بين التجارب. هذه الطريقة تستخدم في الأحياء الجزيئية والكيمياء الحيوية وعلم الجينات المناعية Immunogenetics وعدد آخر من علوم الأحياء الجزيئية.
لطخة ويسترن
من التقنيات الأخرى المتعلقة هي استخدام الأجسام المضادة لاكتشاف البروتينات في الأنسجة أو الخلايا باستخدام الصبغة المناعية Immunostaining والإلايزا ELISA.
تم صنع هذه الطريقة في مختبر جورج ستارك في جامعة ستانفورد عام 1981. قام وولتر نيل بورنيت بتسميتها باسم «لطخة ويسترن»،

وهو مشتق من اسم اللطخة الجنوبية (Southern Blot بالإنكليزية، من Southern وهي نسبة إلى إدون ساذرن Edwin Southern، والتي تعني أيضا الجنوبي بالإنكليزية. فسميت التقنية الجديدة بـويسترن، تلاعبا بالمعنى). واللطخة الجنوبية تقنية لاكتشاف الحمض الريبي النووي منقوص الأكسجين DNA، قام إدون ساذرن Edwin Southern بصنعها عام 1975. تسمى طريقة اكتشاف الحمض الريبي النووي RNA باسم اللطخة الشمالية.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
يمكن أخذ العينات من أنسجة كاملة أو من زراعة الخلايا. يتم كسر الأنسجة الصلبة ميكانيكيًا، في أغلب الأحيان، باستخدام خلاّط (لإحجام عينات كبيرة)، باستخدام مجنس homogenizer (للأحجام الأصغر)، أو بالصوتنة Sonication. يمكن كسر وفتح الخلايا بإحدى الطرق المذكورة أعلاه أيضًا.
يمكن توظيف العديد من المنظفات والأملاح والمحاليل لتشجيع التكسر الخلوي ولإذابة البروتينات. يتم أيضًا إضافة مثبطات (موانع) البروتييزات والفسفاتازات Protease and Phosphatase Inhibitors وذلك لمنع تآكل العينة بإنزيماتها الخاصة.
يتم استخدام مجموعة من التقنيات الميكانيكية والكيمياحيوية (البايوكيميائية) من ضمنها أيضًا العديد من أنواع التصفية والطرد المركزي لفصل أجزاء أو عضيات معينة من الخلايا.
يتم فصل بروتينات العينة باستخدام الفصل الكهربائي. فصل البروتينات قد يكون باستخدام النقطة متوازنة الكهربية Isoelectric point (pI)، الوزن الجزيئي، الشحنة الكهربائية، أو مجموعة من هذه العوامل. طبيعة الفصل تعتمد على طريقة معالجة العينة وطبيعة الهلام.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
إلى حد الآن، الطريقة الأكثر شيوعاً للفصل الكهربائي للهلام توظف هلامات متعدد الأكريلامايد polyacrylamide ومحاليل تحتوي على كبريتات دوديكل الصوديوم Sodium Dodecyl Sulfate (SDS).
إس دي إس بايج أي (الفصل الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعدد الأكريلامايد SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) تحافظ على سلسلة البروتيات في حالة مفككة denatured state حالماً يتم معالجتهم مع عوامل اختزال قوية للقضاء على الأشكال الثانوية والثالثية. (مثل تحويل الروابط ثنائية الكبريت S-S إلى SH وSH) وبذلك يسمح لفصل البروتينات حسب وزنهم الجزيئي. يتم تغطية البروتينات في العينة بكبريتات دوديكل الصوديوم السالبة الشحنة ونقلها إلى القطب الكهربائي الموجب الشحنة خلال شبكة الأكريلامايد في الهلام. البروتينات الصغيرة تهاجر أسرع خلال هذه الشبكة وبذلك يتم فصل البروتينات حسب الحجم (عادة ما يتم قياسها بالكيلودالتون، kD، kiloDaltons). تركيز الأكريلامايد يحدد دقة الهلام - كلما زاد تركيز الأكريلامايد كلما زادت دقة البروتينات ذات الأوزان الجزيئية العالية. البروتينات تهاجر ببعد واحد خلال الهلام لأغلب اللطخات.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
يتم تحميل العينات في آبار في الهلام. يتم حفظ إحدي الأسطر للـ درج أو العلامات، وهما خليط متوفر تجارياً من عدة بروتينات معروفة الوزن الجزيئي، عادة ما تكون مصبوغة لكي تُظهر حزم ملونة مرئية. أحد الأمثلة على الدرج، هو درج الأوزان الجزيئية الكامل المدى لشركة GE (كما في الشكل). عندما يتم تطبيق فرق الجهد على الهلام، تهاجر البروتينات ضمنه بسرعات مختلفة. هذه المعدلات الزمنية المختلفة للتقدم (حركات الفصل الكهربائي المختلفة) تُفصل إلى حُزم ضم كل سطر.
من الممكن أيضاً استخدام الفصل الكهربائي ثنائي الأبعاد الذي يفصل البروتينات من عينة واحدة في بُعدين. البروتينات تفصل بحسب النقطة متوازنة الكهربية (تركيز أيونات الهيدروجين pH الذي تكون فيه الشحنة متعادلة) في البعد الأول، وبحسب الوزن الجزيئي في البعد الثاني.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
من أجل جعل الوصول للبروتينات أسهل للاكتشاف بالأجسام المضادة، يتم نقلهم من الهلام إلى غشاء مصنوع من النيتروسيليوز أو الـPVDF. يتم وضع هذا الغشاء فوق الهلام، ووضع مجموعة من طبقات أوراق الترشيح فوق ذلك. ثم يتم وضع الطبقات كلها في محلول يقوم بالتنقل إلى الأعلى عبر الأوراق بالخاصية الشعرية Capillary action، جالباً البروتينات معه إلى الغشاء.
ومن الطرق الأخرى لنقل البروتينات تدعى اللطخة الكهربائية وتستخدم تياراً كهربائياً لسحب البروتينات من الهلام إلى الغشاء.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
البروتينات الآن نُقلت من داخل الهلام إلى سطح غشاء من النيتروسيليلوز أو PVDF مع ثباء الترتيب التي كانت البروتينات عليه داخل الهلام. ويكون ناتج هذه العملية، هو عرض البروتينات على سطح رقيق للاكتشاف (انظر أسفلاً). كلا نوعي الغشاء (نيتروسيليلوز أو PVDF) يتم اختيارهم لخاصية الالتصاق غير المحدد بالبروتينات (أي أنهم يلتصقون بأي بروتين بصورة متساوية). التصاق البروتينات مبني على تفاعلات مصابة بفوبيا الماء hydrophobic interactions)، بالإضافة إلى التفاعلات المشحونة بين الغشاء والبروتين. إن أغشية النيتروسيليلوز تكون أقل كلفة من الـ PVDF، ولكنها هشة أكثر ولا تستطيع الوقوف لتحقيقات مجددة reprobes كثيرة.
التأثير الكلّي والموحّد لنقل البروتين من الهلام إلى الغشاء يمكن التأكد منه بصبغ الغشاء بصبغة كوماسي Coomassie أو بونسو س Ponceau S. كوماسي هي الصبغة الأكثر حساسية من الصبغتين، بالرغم من أن سهولة ذوبان بونسو س في الماء تجعله أسهل للإزالة لاحقاً والتحقق من الغشاء كما في أدناه.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
بما أنه تم اختيار الغشاء لقابليته على الالتصاق بالبروتينات، وكلاً من الأجسام المضادة والأهداف هما بروتينات، يجب إتخاذ إجراءات خاصة لمنع التفاعلات بين الغشاء والجسم المضاد المستخدم لاكتشاف البروتين الهدف. يتم سد الالتصاق غير المحدد عن طريق وضع الغشاء في محلول مخفف من بروتين - عادة ما يكون هذا البروتين هو ألبومين مصل البقر Bovine Serum Albumin المعروف بالـ BSA أو حليب من غير دهون (كلاهما ليسا مكلفان)، مع مقدار صغير من منظف مثل توين 20 Tween. البروتين في المحلول المخفف يلتصق بالغشاء في كل الأماكن الغير محتوية على البروتينات الهدف. وبهذا، عندما يتم إضافة الجسم المضاد، لن يكون هناك مكان له ليلتصق غير على مواقع الالتصاق على البروتين الهدف المحدد. هذا يقلل «التشويش» في النتيجة النهائية للطخة ويسترن، ويؤدي إلى نتائج أوضح، ويقضي على النتائج الإيجابية المزيفة.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
خلال عملية الاكتشاف، يتم التحقق من وجود البروتين المطلوب على الغشاء عن طريق جسم مضاد معدل مرتبط بإنزيم مراسل، الذي عند وضع مادة معينة عليه يسبب تفاعل لوني ويقوم بإنتاج لون معين. ولعدة أسباب، فإن هذه الخطوة تتم بخطوتين، بالرغم من أن الآن يوجد طرق اكتشاف ذات خطوة واحدة لبعض الاستخدامات.
يتم تكوين الأجسام المضادة عندما يتم عرض البروتين المطلوب (أو جزءاً منه) على المستضيف أو خلايا المناعة المزروعة. عادةً، يكون هذا جزءاً من الاستجابة المناعية، ولكن هنا يتم حصد الأجسام المضادة واستخدامها كأدوات اكتشاف دقيقة وحساسة تلتصق بالبروتين مباشرة.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
بعد عملية السد، يتم احتضان الغشاء في محلول مخفف من الجسم المضاد الأولي (عادة بتركيز بين 0,5 ميكروغرام/مل إلى 5 ميكروغرام/مل) مع التحريك الخفيف. بشكله النموذجي، يحتوي المحلول على محاليل ملحية مع نسبة صغيرة من المنظفات، وأحياناً مسحوق حليب أو ألبومين مصل البقر BSA. يمكن وضع محلول الجسم المضاد والغشاء معاً واحتضانهما لأي فترة بين 30 دقيقة إلى عبر الليل. ويمكن أيضاً احتضانهما في درجات حرارة مختلفة، حيث تكون الدرجات الدافئة أكثر محفزة على الالتصاق (لكلا نوعي الالتصاق، الالتصاق المحدد والالتصاق الغير محدد «التشويش»).
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
بعد تنقيع الغشاء أو غسله لإزالة الأجسام المضادة الأولية الغير ملتصقة، يتم إضافة جسم مضاد آخر للغشاء، موجه نحو جزء خاص-لنوع species-specific الجسم المضاد الأولي. وهذا يعرف بالجسم المضاد الثانوي، وبسبب خواصه المستهدِفة، يتم تسميته بـ«ضد-الفأر»، «ضد-العنز»، «ضد-الجرذ»، الخ. الأجسام المضادة تأتي من مصادر الحيوانات (أو زراعة خلايا هيبريدوما حيوانية)؛ فالجسم المضاد الثانوي ضد-الفأر سيلتصق لأي جسم مضاد أولي مصدره الفأر. وهذا يسمح لتوفير المصاريف بالسماح لكل المختبر من استخدام مصدر واحد من جسم مضاد منتج بكثرة، ويوفر نتائج منسقة أكثر بكثير. عادة ما يكون الجسم المضاد الثانوي مرتبط بجزيئة بايوتين أو إلى إنزيم مراسل مثل فسفاتاز قلوي Alkaline phosphatase أو بيروكسيداز الفجل الحار Horseradish peroxidase. هذا يعني أن عدة أجسام مضادة ثانوية ستلتصق بجسم مضاد أولي واحد وتقوم بتعزيز الإشارة للاكتشاف.
لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن
غالباً ما يتم استخدام جسم مضاد ثانوي مرتبط ببيروكسيداز الفجل مع عامل مضيء كيميائي، وينتج التفاعل بينهما ضوءاً بمقدار كمية البروتين. يتم استخدام طبقة حساسة من الفيلم الفوتوغرافي لخلق صورة للأجسام المضادة الملتصقة باللطخة.
كما في إجراءات الإيلايزا الإيلايزبوت، يمكن تزويد الأنزيم بجزيئة التي يحولها الإنزيم إلى ناتج تفاعل ملون يمكن رؤيته على الغشاء.
البديل الثالث هو استخدام علامة مشعة بدل إنزيم متصل بالجسم المضاد الثانوي، مثل ربط بروتين يلتصق بالأجسام المضادة (مثل بروتين أ من العنقودية Staphylococcus) بنظير مشع من اليود. ولكن بما أنه الطرق الأخرى هي أكثر أماناً، وأسرع وأرخص، قلّ ما يتم استخدام هذه الطريقة الآن.
تأريخياً، كانت عملية التحقق تُجرى بخطوتين وذلك بسبب السهولة النسبية لإنتاج أجسام مضادة أولية وثانوية من ناحية المرونة، وأيضاً يضيف خطوة تكبير للإشارة لعملية الاكتشاف.
لطخة ويسترن الفصل الكهربائي للهلام ببعدين
إس دي إس بايج ثنائي الأبعاد يستعمل المبادئ والتقنيات المُشار إليها اعلاه. كما يشير الاسم، فإن هذه الطريقة تشمل هجرة سلسلة البروتينات في بعدين. في البُعد الأول تقوم السلسلة البروتينية بالأنفصال حسب نقطة التعادل الكهربي. أما في البعد الثاني تنفصل السلسلة البروتينية حسب وزنها الجزيئي. تُقاس نقطة التعادل الكهربي لبروتين مُعين بواسطة الرقم النسبي للأحماض الأمينية الموجبة (كاللايسين) والسالبة (كالجلوتاميت)، وتقوم الأحماض الأمينية السالبة بتزويد أعلى نقطة تعادل كهربي، ومن جهة أخرى تقوم الأحماض الامينية الموجبة بتزويد أقل نقطة تعادل كهربي.
تسمح هذه الطريقة بفصل كل البروتينات الخلوية على هلام مفرد وكبير. من الفوائد المهمة لهذه الطريقة هي التمييز بين الأشكال المُختلفة لبروتين مُعين (مثلاَ البروتين الذي تمت فسفرتهُ، أي إضافة المجموعة السالبة الشُحنة). يُمكن قطع البروتين الذي تم فَصله من الهُلام وبعدها يتم تحليله بواسطة جهاز تحليل الكتلة mass spectrometry الذي يقوم باكتشاف البروتين وتحديد هويته.
لطخة ويسترن الاستخدامات في الفحص الطبي
إحدى اختيارات الكشف على فيروس نقص المناعة البشرية توظف لطخة ويسترن لاكتشاف الجسم المضاد للفيروس فيروس العوز المناعي البشري في عينة مصل الإنسان. بروتينات من خلايا معروفة الإصابة بفيروس HIV يتم فصلها وبقعها على غشاء كما في أعلاه. ثم، يتم تجربة المصل بصورة جسم مضاد أولي؛ ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير الملتصقة، ويتم وضع جسم مضاد ثانوي ضد-بشري مرتبط بإنزيم الإشارة. الحزم المصبوغة تدل على البروتينات التي تتعرف عليها الأجسام المضادة في مصل المريض.
سونام غياتسو
سونام غياتسو (1543 – 1588) الدالاي لاما الثالث وأول دالاي لاما معلن عنه رسمياً من قبل المغول والذين أعطوا هذا المعلم لقب دالاي لاما، حيث تعني كلمة دالاي باللغة المغولية «المحيط» ولاما بالتبتية «المعلم»، فيكون معنى اللقب «المعلم محيط الحكمة».
كان سونام غياتسو راهبا في جماعة القبعات الصفر البوذية، وكان مسؤولاً عن إيجاد حامٍ أجنبي لجماعته الرهبانية وكان ذلك الرجل هو ألتان خان أحد زعماء المغول الذي أمر شعبه باعتناق البوذية التقليدية ومنح سونام غياتسو لقب «دالاي لاما».
التحالف مع المغول أثبت فائدته لاحقاً حيث أصبحت جماعات القبعات الصفر مهيمنة على التبت خصوصا في زمن الدالاي لاما الخامس العظيم.
مجلس المستشارين (المغرب)
مجلس المستشارين المغربي (أمازيغية: ⴰⵙⵇⵇⵉⵎ ⵏ ⵉⵏⵙⴼⴰⵡⵏ) هو الغرفة الثانية من البرلمان المغربي بعد مجلس النواب.
مجلس المستشارين (المغرب) السياق التاريخي
بناء على ما ورد في الفصل 63 من دستور المملكة المغربية لسنة 2011 الجديد فإنه يتم تجديد المجلس عبر انتخابات حسب الأحكام الانتقالية للدستور الجديد وخصوصا الفصل 176.
مجلس المستشارين (المغرب) المجلس
يتكون مجلس المستشارين من 90 عضوا على الأقل، و 120 عضوا على الأكثر، ينتخبون بالاقتراع العام غير المباشر، لمدة ست سنوات، على أساس التوزيع التالي:
ثلاثة أخماس الأعضاء يمثلون الجماعات الترابية، يتوزعون بين جهات المملكة بالتناسب مع عدد سكانها، ومع مراعاة الإنصاف بين الجهات. ينتخب المجلس الجهوي على مستوى كل جهة، من بين أعضائه، الثلث المخصص للجهة من هذا العدد. وينتخب الثلثان المتبقيان من قبل هيئة ناخبة تتكون على مستوى الجهة، من أعضاء المجالس الجماعية ومجالس العمالات والأقاليم.
خمسان من الأعضاء تنتخبهم، في كل جهة، هيئات ناخبة تتألف من المنتخبين في الغرف المهنية، وفي المنظمات المهنية للمشغلين الأكثر تمثيلية، وأعضاء تنتخبهم على الصعيد الوطني، هيئة ناخبة مكونة من ممثلي المأجورين.
مجلس المستشارين (المغرب) المجلس
ويبين قانون تنظيمي عدد أعضاء مجلس المستشارين، ونظام انتخابهم، وعدد الأعضاء الذين تنتخبهم كل هيئة ناخبة، وتوزيع المقاعد على الجهات، وشروط القابلية للانتخاب، وحالات التنافي، وقواعد الحد من الجمع بين الانتدابات، ونظام المنازعات الانتخابية.
يُنتخب رئيس مجلس المستشارين وأعضاء المكتب، ورؤساء اللجان الدائمة ومكاتبها، في مستهل الفترة النيابية، ثم عند انتهاء منتصف الولاية التشريعية للمجلس.
ينتخب أعضاء المكتب على أساس التمثيل النسبي لكل فريق.
مجلس النواب (المغرب)
مجلس النواب المغربي هو أحد غرفتي برلمان المغرب ويُنتخب أعضائه بالاقتراع العام المباشر لمدة خمس سنوات، وتنتهي عضويتهم عند افتتاح دورة أكتوبر من السنة الخامسة التي تلي انتخاب المجلس، (الفصل 37 من الدستور).
مجلس النواب (المغرب) تكوين المجلس
وقد بين القانون التنظيمي المتعلق بتأليف مجلس النواب أمورا منها:
عضوا، ينتخبون بالاقتراع العام المباشر عن طريق الاقتراع باللائحة، وفق الشروط التالية:
مجلس النواب (المغرب) هياكل مجلس النواب
مكتب مجلس النواب هو مكتب ينتخبه أعضاء مجلس النواب ومن مهامه الإشراف على مناقشات المجلس وتنظيم المصالح التابعة له وإدارتها و إعداد جدول الأعمال وهو المنسق الفعلي بين مصالح المجلس ويتكون هذا المكتب من
- الرئيس
- ثمانية نواب للرئيس : النائب الأول، والنائب الثاني، ....
- محاسبان اثنان
- ثلاث أمناء
كما تقدم فرق المعارضة أسماء مرشحيها لمنصب محاسب واحد أو أمين واحد ولا يحق الترشح لأحدهما أو لهما إلا نائبة أو نائب من المعارضة .
ونص القانون المغربي في الفصل 62 على أن رئيس مجلس النواب ينتخب مرتين، الأولى في مستهل الفترة النيابية، والثانية في دورة أبريل للسنة الثالثة من هذه الفترة، وذلك لما تبقى منها.
مجلس النواب (المغرب) هياكل مجلس النواب
وينتخب أعضاء مكتب المجلس لمدة سنة على أساس التمثيل النسبي لكل فريق. وقد بيّن النظام الداخلي لمجلس النواب مما يتألف المكتب وقد سبق لنا ذكر ذلك، كما فصل في كيفية انتخاب الرئيس وفي حال خلو منصبه، وكذا في كيفية انتخاب المكتب، وذلك كما يلي: ينتخب الرئيس عن طريق الاقتراع السري كتابة بالأغلبية المطلقة للأعضاء الذين يتكون منهم المجلس في الدور الأول؛ وبالأغلبية النسبية في الدور الثاني؛ وعند تعادل الأصوات، يعتبر المرشح الأكبر سنا فائزا؛ فإن انتفى فارق السن مع التساوي في الأصوات يتم اللجوء إلى القرعة لتعيين الفائز. في حالة خلو منصب رئيس مجلس النواب لسبب من الأسباب، يتم انتخاب رئيس جديد لما تبقى من الفترة الأولى أو الثانية في أجل حسب الحالة، حيث إذا وقع الشغور وكانت الدورة منعقدة، ففي مدة أقصاها خمسة عشر يوما، أما إذا وقع خارج الدورات يتعين عقد دورة استثنائية في مدة أقصاها 15 يوما، من تاريخ شغور منصب الرئيس. وإلى حين انتخاب رئيس جديد يقوم مقامه أحد نوابه بحسب ترتيبهم ويمارس هذا الأخير كل اختصاصات الرئيس باستتناء الاختصاصات المنصوص عليها في الفصول 44 و 54 و 55 و 59 و 67 و 79 و 96 و 104 و 132 من الدستور .