मलेरिया एंटीजन डिटेक्शन टेस्ट
मलेरिया एंटीजन डिटेक्शन टेस्ट, रैपिड एंटीजन टेस्ट प्रकार के व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रैपिड डायग्नोस्टिक परीक्षणों का एक समूह है जो मलेरिया के निदान के लिए पारंपरिक प्रयोगशाला तकनीकों में अन्यथा कुशल नहीं हैं या ऐसी स्थिति में जहां ऐसे उपकरण उपलब्ध नहीं हैं, उन्हें मलेरिया का त्वरित निदान करने की अनुमति देता है। वर्तमान में 20 से अधिक ऐसे परीक्षण व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं (WHO उत्पाद परीक्षण 2008)। इस तरह के परीक्षण के लिए लक्ष्य के रूप में उपयुक्त पहला मलेरिया प्रतिजन एक घुलनशील ग्लाइकोलाइटिक एंजाइम ग्लूटामेट डिहाइड्रोजनेज था। रैपिड टेस्ट में से कोई भी वर्तमान में एक मोटी रक्त फिल्म जितना संवेदनशील नहीं है, और न ही उतना सस्ता है। सभी मौजूदा डिपस्टिक विधियों के उपयोग में एक बड़ी कमी यह है कि परिणाम अनिवार्य रूप से गुणात्मक है। उष्णकटिबंधीय अफ्रीका के कई स्थानिक क्षेत्रों में, हालांकि, पैरासिटिमिया का मात्रात्मक मूल्यांकन महत्वपूर्ण है, क्योंकि जनसंख्या का एक बड़ा प्रतिशत किसी भी गुणात्मक परख में सकारात्मक परीक्षण करेगा।
मलेरिया एक इलाज योग्य बीमारी है यदि रोगियों के पास शीघ्र निदान और शीघ्र उपचार हो। एंटीजन-आधारित रैपिड डायग्नोस्टिक टेस्ट (आरडीटी) की स्वास्थ्य सेवाओं की क्षमता की परिधि में एक महत्वपूर्ण भूमिका है क्योंकि कई ग्रामीण क्लीनिकों में रक्त फिल्मों का मूल्यांकन करने के लिए माइक्रोस्कोप और प्रशिक्षित तकनीशियनों की कमी के कारण साइट पर मलेरिया का निदान करने की क्षमता नहीं है। इसके अलावा, उन क्षेत्रों में जहां रोग स्थानिक नहीं है, प्रयोगशाला प्रौद्योगिकीविदों के पास मलेरिया परजीवियों का पता लगाने और उनकी पहचान करने का बहुत सीमित अनुभव है। हर साल समशीतोष्ण क्षेत्रों से यात्रियों की बढ़ती संख्या उष्णकटिबंधीय देशों की यात्रा करती है और उनमें से कई मलेरिया संक्रमण के साथ लौटते हैं। आरडीटी परीक्षणों को अभी भी पारंपरिक माइक्रोस्कोपी के पूरक के रूप में माना जाता है लेकिन कुछ सुधारों के साथ यह माइक्रोस्कोप को अच्छी तरह से बदल सकता है। परीक्षण सरल हैं और प्रक्रिया को क्षेत्र की परिस्थितियों में मौके पर ही किया जा सकता है। ये परीक्षण फिंगर-स्टिक या शिरापरक रक्त का उपयोग करते हैं, पूर्ण परीक्षण में कुल 15-20 मिनट लगते हैं, और किसी प्रयोगशाला की आवश्यकता नहीं होती है। इन रैपिड डायग्नोस्टिक परीक्षणों द्वारा पता लगाने की दहलीज मोटी फिल्म माइक्रोस्कोपी द्वारा 5 की तुलना में 100 परजीवी / रक्त के μl की सीमा में है।
मेजबान एंटीबॉडी द्वारा अवक्षेपित प्लास्मोडियम ग्लूटामेट डिहाइड्रोजनेज (pGluDH) प्लास्मोडियम फाल्सीपेरम के बढ़ते प्रतिरोध और क्लोरोक्वीन के विकल्पों की उच्च कीमत को देखते हुए एक सटीक निदान अधिक से अधिक महत्वपूर्ण होता जा रहा है। एंजाइम pGluDH मेजबान लाल रक्त कोशिका में नहीं होता है और Picard-Maureau et al द्वारा प्लास्मोडियम प्रजातियों के लिए एक मार्कर एंजाइम के रूप में अनुशंसित किया गया था। 1975 में। मलेरिया मार्कर एंजाइम परीक्षण नियमित काम के लिए उपयुक्त है और अब मलेरिया से निपटने वाले अधिकांश विभागों में एक मानक परीक्षण है। pGluDH की उपस्थिति परजीवी व्यवहार्यता का प्रतिनिधित्व करने के लिए जानी जाती है और एंटीजन के रूप में pGluDH का उपयोग करते हुए एक तेजी से नैदानिक ​​परीक्षण में मृत जीवों से जीवित अंतर करने की क्षमता होगी। चीन में एंटीजन के रूप में pGluDH के साथ एक पूर्ण RDT विकसित किया गया है और अब इसका नैदानिक ​​परीक्षण चल रहा है। ग्लूडीएच सर्वव्यापी एंजाइम हैं जो कार्बन और नाइट्रोजन चयापचय के बीच एक महत्वपूर्ण शाखा-बिंदु पर कब्जा कर लेते हैं। प्लास्मोडिया में निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (एनएडी) [ईसी 1.4.1.2] और निकोटीनैमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड फॉस्फेट (एनएडीपी) पर निर्भर ग्लूडीएच [ईसी 1.4.1.4] एंजाइम दोनों मौजूद हैं; NAD-निर्भर GluDH अपेक्षाकृत अस्थिर है और नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए उपयोगी नहीं है। ग्लूटामेट डिहाइड्रोजनेज एक ऑक्सीकरण योग्य कार्बन स्रोत प्रदान करता है जिसका उपयोग ऊर्जा के उत्पादन के साथ-साथ एक कम इलेक्ट्रॉन वाहक, एनएडीएच के लिए किया जाता है। ग्लूटामेट बाद के संक्रमण प्रतिक्रियाओं में अन्य अमीनो एसिड के लिए एक प्रमुख अमीनो दाता है। नाइट्रोजन संतुलन में ग्लूटामेट की कई भूमिकाएँ इसे मुक्त अमोनिया और अधिकांश अमीनो एसिड के अमीनो समूहों के बीच प्रवेश द्वार बनाती हैं। इसकी क्रिस्टल संरचना प्रकाशित हो चुकी है।. P.vivax, P.ovale और P. मलेरिया में GluDH गतिविधि का कभी परीक्षण नहीं किया गया है, लेकिन एक शाखा बिंदु एंजाइम के रूप में GluDH के महत्व को देखते हुए, प्रत्येक कोशिका में GluDH की उच्च सांद्रता होनी चाहिए। यह सर्वविदित है कि उच्च आणविक भार (जैसे ग्लूडीएच) वाले एंजाइमों में कई आइसोजाइम होते हैं, जो तनाव भेदभाव (सही मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को देखते हुए) की अनुमति देता है। मेजबान परजीवी एंजाइम के खिलाफ एंटीबॉडी का उत्पादन करता है जो कम अनुक्रम पहचान का संकेत देता है।
हिस्टिडाइन-समृद्ध प्रोटीन II (HRP II) एक हिस्टिडीन- और अलैनिन-समृद्ध, पानी में घुलनशील प्रोटीन है, जो परजीवी साइटोप्लाज्म सहित कई सेल डिब्बों में स्थानीयकृत होता है। प्रतिजन केवल पी. फाल्सीपेरम ट्रोफोजोइट्स द्वारा व्यक्त किया जाता है। पी. फाल्सीपेरम के एचआरपी II को परजीवी द्वारा उत्पादित फेरिप्रोटोपोर्फिरिन IX (Fe(3+)-PPIX) के एक निष्क्रिय, क्रिस्टलीय रूप हेमोज़ोइन के जैव क्रिस्टलीकरण में फंसाया गया है। एचआरपी II की एक पर्याप्त मात्रा परजीवी द्वारा मेजबान रक्तप्रवाह में स्रावित होती है और एंटीजन को एरिथ्रोसाइट्स, सीरम, प्लाज्मा, मस्तिष्कमेरु द्रव और यहां तक ​​​​कि मूत्र में एक स्रावित पानी में घुलनशील प्रोटीन के रूप में पाया जा सकता है। पैरासिटिमिया के साफ हो जाने या बहुत कम हो जाने के बाद भी ये एंटीजन परिसंचारी रक्त में बने रहते हैं। एचआरपी 2-आधारित परीक्षणों के नकारात्मक होने में सफल उपचार के बाद आम तौर पर लगभग दो सप्ताह लगते हैं, लेकिन इसमें एक महीने तक का समय लग सकता है, जो सक्रिय संक्रमण का पता लगाने में उनके मूल्य से समझौता करता है। रूमेटोइड-कारक-पॉजिटिव रूमेटोइड गठिया वाले मरीजों में झूठी सकारात्मक डिपस्टिक परिणाम रिपोर्ट किए गए थे। चूंकि एचआरपी-2 केवल पी. फाल्सीपेरम द्वारा व्यक्त किया जाता है, इसलिए ये परीक्षण केवल पी. विवैक्स, पी. ओवले, या पी. मलेरिया वाले नमूनों के साथ नकारात्मक परिणाम देंगे; इसलिए गैर-फाल्सीपेरम मलेरिया के कई मामलों को मलेरिया नकारात्मक के रूप में गलत निदान किया जा सकता है (कुछ पी.फाल्सीपेरम उपभेदों में एचआरपी II भी नहीं होता है)। pHRP2-आधारित RDTs के परिणामों में परिवर्तनशीलता लक्ष्य प्रतिजन में परिवर्तनशीलता से संबंधित है।
पी. फाल्सीपेरम लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (पीएफएलडीएच) एक 33 केडीए ऑक्सीडोरक्टेज [ईसी 1.1.1.27] है। यह ग्लाइकोलाइटिक मार्ग का अंतिम एंजाइम है, जो एटीपी पीढ़ी के लिए आवश्यक है और पी। फाल्सीपेरम द्वारा व्यक्त सबसे प्रचुर एंजाइमों में से एक है। पी. विवैक्स, पी. मलेरिया, और पी. ओवले से प्लास्मोडियम एलडीएच (पीएलडीएच) पी. फाल्सीपेरम से पीएफएलडीएच को 90-92% पहचान प्रदर्शित करता है। एचआरपी2 की तुलना में उपचार के तुरंत बाद रक्त में पीएलडीएच का स्तर कम होता देखा गया है। इस संबंध में, pLDH, pGluDH के समान है। फिर भी, कॉफ़ेक्टर बाइंडिंग साइट पर लक्षित अवरोधकों के लिए गतिज गुण और संवेदनशीलता महत्वपूर्ण रूप से भिन्न होती हैं और अवरोधकों के लिए पृथक्करण स्थिरांक को मापकर पहचाने जाते हैं, जो 21-गुना तक भिन्न होते हैं।
फ्रुक्टोज-बिस्फोस्फेट एल्डोलेस [ईसी 4.1.2.13] ग्लाइकोलाइसिस और ऊर्जा उत्पादन में एक महत्वपूर्ण प्रतिक्रिया उत्प्रेरित करता है और सभी चार प्रजातियों द्वारा निर्मित होता है। P.falciparum aldolase एक 41 kDa प्रोटीन है और ज्ञात यूकेरियोटिक aldolases के लिए 61-68% अनुक्रम समानता है। इसकी क्रिस्टल संरचना प्रकाशित हो चुकी है।. मलेरिया से आंशिक रूप से प्रतिरक्षित मानव वयस्कों के सीरा में p41 के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति से पता चलता है कि p41 परजीवी के खिलाफ सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में निहित है।