TCVN12474:2018

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12474:2018 về Thuốc bảo vệ thực vật - Xác định hàm lượng hoạt chất Chlorpyrifos ethyl TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 12474 : 2018 THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HOẠT CHẤT CHLORPYRIFOS ETHYL Pesticides - Determination of chlorpyrifos ethyl content Lời nói đầu TCVN 12474:2018 được xây dựng theo CIPAC MT 221. TCVN 12474:2018 do Cục Bảo vệ thực vật biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. THUỐC BẢO V Ệ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HOẠT CHẤT CHLORPYRIFOS ETHYL Pesticides - Determination of chlorpyrifos ethyl content 1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp sắc ký kh í và sắc ký lỏng cao áp để xác định hàm lượng hoạt chất chlorpyrifos ethyl trong sản phẩm thuốc bảo vệ thực vật có chứa chlorpyrifos ethyl. 2 Tài liệu viện dẫn Các t à i liệu viện d ẫ n sau l à rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn n à y. Đ ố i với các tài liệu viện dẫn gh i năm công bố th ì áp dụng phiên b ả n đ ược nêu. Đối với t à i liệu viện dẫn không ghi n ă m công bố th ì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đ ổ i (nếu có). TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng đ ể phân tích trong phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử TCVN 12017:2017 Thuốc bảo vệ thực vật - Lấy mẫu 3 Thuốc thử Chỉ sử dụng các thuốc thử t i nh khiết phân tích, nước dùng trong quá trình phân tích đạt loại 3 của TCVN 4851 (ISO 3696) hoặc có độ tinh khiết tương đương. 3.1 Chất chuẩn chlorpyrifos ethyl (C 9 H 11 Cl 3 NO 3 PS), đ ã biết hàm lượng. 3.2 Acetonitrile (C 2 H 3 N), dùng cho HPLC. 3.3 Ch ấ t nội chuẩn dioctylphatalat ( D OP) (C 24 H 38 O 4 ), 99 %. 3.4 Axeton (C 3 H 6 O), dùng cho sắc ký khí. 3.5 Khí nitơ (N 2 ), có độ tinh khiết không nh ỏ hơn 99,9 %. 3.6 Khí hydro (H 2 ), có độ tinh khiết không nhỏ hơn 99,9 %. 3.7 Không kh í nén, dùn g cho máy sắc ký kh í . 3.8 Dung dịch nội chuẩn, n ồ ng độ 8,8 mg/ml. Dùng cân phân tích (4.7) cân khoảng 0.8 g ch ấ t nội chuẩn DOP (3.3) chính xác tới 0,0001 g vào b ì nh định mức 100 ml (4.2), hòa tan và định mức tới vạch bằng axeton (3.4). Siêu âm trong 5 min, để nguội đến nhiệt độ phòng. 4 Dụng cụ, thiết bị Sử dụng các thiết b ị , dụng cụ thông thường của phòng th ử nghiệm cụ thể như sau: 4.1 Cốc thủy tinh, dung tích 1000 ml. 4.2 Bình đ ị nh m ứ c, dung t í ch 10ml; 20 ml; 100 ml. 4.3 P i pet, dung tích 1 ml 4.4 Xyranh bơm m ẫ u, dung tích 50 μl , chia vạch đến 1 μl . hoặc bơm mẫu tự động 4.5 Màng lọc PTFE, c ó kích thước lỗ 0,45 μm . 4.6 Máy siêu âm. 4.7 C â n phân tích, có độ chính xác đến 0,00001 g. 4.8 Thiết bị sắc k ý lỏ ng hiệu năng cao, được trang b ị như sau: - Máy sắc k ý l ỏ ng hiệu năng cao với detector tử ngoại (UV) - Hệ thống bơm cao áp - Máy t í ch ph â n hoặc máy vi tính - Cột RP C18,250 mm, đư ờ ng kính 4,6 mm, c ỡ hạt pha tĩnh 5 μm hoặc loại tương đương - Bộ bơm m ẫ u t ự động hoặc bơm mẫu bằng tay. 4.9 Thiết b ị sắc k ý khí, được trang bị như sau: - detector ion h óa ngọn lửa (FID); - injector chia dòng v à không chia d ò ng; - cột mao quản HP5-MS, có chiều dài 30 m, đường kính trong 0,32 mm, chiều dày pha tĩnh 0,25 μm hoặc loại tương đương; - bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng tay; - Máy tích phân kế hoặc máy vi tính. 5 Lấy mẫu L ấ y mẫu theo tiêu chu ẩ n TCVN 12017:2017. 6 Cách tiến hành 6.1 Xác đ ị nh hàm tượng hoạt chất Chlorpyrifos Ethyl bằng phương pháp sắc ký lỏ ng hiệu năng cao (HPLC) 6.1.1 Nguyên tắc H à m lượng chlorpyrifos ethyl được xác định bằng phương pháp sắc ký l ỏ ng hiệu năng cao (HPLC), sử dụng cột pha đảo với dete ct or t ử ngoại (UV) ở bước sóng 300 nm và dùng phương pháp ngoại chuẩn. Kết quả được tính dựa trên sự so sánh giữa số đo diện tích píc mẫu th ử và số đo diện tích píc chuẩn. 6.1.2 Chuẩn bị mẫu Mẫu cần được l à m đ ồ ng nhất trước khi cân: đ ố i với mẫu dạng l ỏ ng phải lắc đề u, nếu bị đông đặc do nhiệt độ th ấ p cần được làm tan ch ả y ở nhiệt độ 30° C ± 2°C; đ ố i với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều. 6.1.3 Dung d ị ch chuẩn làm việc Dùng cân phân tích (4.7) cân khoảng 0,01 g chất chu ẩ n chlorpyrifos ethyl (3.1), ch í nh xác đến 0,00001 g vào b ì nh định mức 20 ml (4.2), hòa tan và định mức đến vạch bằng acetonitrile (3.2), siêu âm trong 5 min để đuổi bọt khí, để nguội đến nhiệt độ phòng, lọc qua màng lọc 0,45 μm (4.5) trước khi bơm vào máy. CHÚ TH Í CH: - Ch ấ t chuẩn bảo quản trong tủ lạnh ph ả i được đưa về nhiệt độ phòng trước kh i cân. - Nếu sử dụng cân có c ấ p ch í nh x á c 0.0001 g th ì khối lượng mẫu và chuẩn c ầ n tăng l ê n 10 lần 6.1.4 Chuẩn bị dung dịch mẫu th ử Dùng cân phân tích (4.7) cân mẫu thử chứa khoảng 0,01 g hoạt chất chlorpyrifos ethyl, chính xác đến 0,00001 g vào bình đ ị nh mức 20 ml (4.2), hòa tan và đ ị nh mức đến vạch bằng acetonitrile (3.2), siêu âm trong 15 min để đuổi bọt kh í , để nguội đến nhiệt độ phòng, lọc qua màng lọc 0,45 μm (4.5) trước khi bơm vào máy. 6.1.5 Xác định hàm lượng hoạt chất 6.1.5.1 Điều kiện phân tích Pha động: Acetonitrile: H 2 O = 80:20 (theo thể tích) Bước sóng: 300 nm Tốc độ d ò ng: 1.5 ml/min Thể tích bơm mẫu: 20 μl Nhiệt độ bu ồ ng cột: 45° C 6.1.5.2 Xác định Dùng xyranh (4.4) bơm dung dịch chuẩn làm việc (6.1.3) cho đến khi số đo diện tích của pic chất chuẩn thay đổi không l ớ n hơn 1 %. Sau đó , bơm lần lượt dung dịch chu ẩ n làm việc (6.1.3) và dung dịch mẫu thử (6.1.4), lặp lại 2 lần (số đo diện tích của pic chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 % so với giá trị ban đầu). 6.1.6 Tính kết quả H à m lượng hoạt ch ấ t chlorpyrifos ethyl trong mẫu, X, biểu thị bằng phần trăm khối lượng (%) được tính theo công thức: Trong đó: S m là số đo diện tích của pic mẫu thử; S c là số đo diện tích của pic chuẩn; m c là khối lượng chất chuẩn, t í nh bằng gam (g); m m là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g); P là độ tinh khiết của chất chuẩn, tính bằng phần trăm (%). Chênh lệch giữa hai kết quả xác định song song không lớn hơn 0,33 %, tại mức 98% Chênh lệch giữa hai kết quả xác định song song không lớn hơn 0,28 %, tại mức 46% 6.2 Xác định hàm lượng hoạt chất chlorpyrifos ethyl bằng phương pháp sắc ký kh í 6.2.1 Nguyên tắc Hàm lượng chlorpyrifos ethyl được xác định bằng phương pháp sắc ký khí, với detector ion h óa ngọn lửa (FID). Dùng dioctylphtalat (DOP) làm chất nội chu ẩ n 6.2.2 Chu ẩ n bị mẫu Mẫu cần được l à m đ ồ ng nh ấ t trước khi c â n: đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu b ị đông đặc do nhiệt độ th ấ p cần được làm tan ch ả y ở nhiệt độ 30° C ± 2°C; đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều. 6.2.3 Dung dịch chuẩn làm việc Dùng cân ph â n tích (4.7) cân khoảng 0,01 g chất chu ẩ n chlorpyrifos ethyl (3.1) vào b ì nh định mức 10 ml (4.2), dùng pipet (4.3) thêm ch í nh xác 1 ml dung dịch nội chuẩn (3.8), h òa tan và định mức đến vạch bằng axeton (3.4). Đặt vào máy lắc siêu âm (4.6) siêu â m trong 5 min, để nguội đến nhiệt độ ph ò ng. CHÚ TH Í CH: Ch ấ t chuẩn chuẩn bảo quản trong tủ lạnh phải được đưa về nhiệt độ phòng trước kh i cân. Nếu sử dụng cân có c ấ p ch í nh xác 0.0001 g th ì lượng mẫu và chuẩn tăng l ê n 10 lần 6.2.4 Chu ẩ n bị dung dịch mẫu thử Dùng cân phân tích (4.7) cân mẫu thử c ó chứa khoảng 0,01 g hoạt chất chlorpyrifos ethyl vào b ì nh định mức 10 ml (4.2), dùng pipet (4.3) thêm chính x á c 1 ml dung dịch nội chuẩn (3.8), định mức đến vạch bằng axeton (3.4), đặt vào máy lắc siêu â m (4.6) siêu âm trong 10 min đ ể hòa tan mẫu, đ ể nguội đến nhiệt độ phòng. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 μm (4.5) trước khi bơm vào máy. 6.2.5 Xác đ ị nh hàm tượng hoạt chất 6.2.5.1 Điều kiện phân tích - chương t rì nh nhiệt độ cột: Nhiệt độ đ ầ u: 170° C Nhiệt độ cuối: 280° C Tốc độ tăng nhiệt độ: 25° C /min Thời gian giữ nhiệt độ đầu: 0,5 min Thời gian gi ữ nhiệt độ cuối: 5 min - nhiệt độ bu ồ ng bơm mẫu: 250 ° C - nhiệt độ detector: 300 ° C - khí mang nitơ: 1,0 ml/min - khí hydro: 35 ml/min - khí nén: 280 ml/min - khí nitơ bổ trợ cho detector : 30 ml/min - thể tích bơm mẫu: 1 μl - tỷ lệ chia dòng: 50 : 1 6.2.5.2 Xác định B ơ m dung dịch chu ẩ n làm việc (6.2.3) cho đến khi tỉ số của số đo diện tích của pic chuẩn và píc nội chu ẩ n thay đổi kh ô ng lớn hơn 1 %. Sau đó, bơm l ầ n lượt dung dịch chuẩn làm việc (6.2.3) v à dung dịch mẫu thử (6.2.4), lặp lại 2 lần (t ỷ số của số đo diện tích của pic chuẩn với pic nội chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 % so với giá trị ban đầu). 6.2.6 Tính kết quả Hàm lượng hoạt chất chlorpyrifos ethyl trong mẫu, X, biểu thị bằng phần trăm (%) được t í nh theo công thức: Trong đó: F m là giá tr ị trung b ì nh của t ỉ số số đo diện tích của pic mẫu thử với pic nội chuẩn; F c là giá trị trung bình của t ỉ số số đo diện tích của pic chuẩn với pic nội chuẩn; m c là kh ố i lượng chuẩn, tính bằng gam (g); m m là kh ố i lượng mẫu thử, t í nh bằng gam (g); P là độ tinh khiết của ch ấ t chu ẩ n, t í nh bằng phần trăm (%). Chênh lệch giữa hai kết quả xác định song song không lớn hơn 0,53 %, tại mức 98% Chênh lệch giữa hai kết quả xác định song song không lớn hơn 0,44 %, tại m ứ c 46% 7 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) mọi th ô ng tin cần thiết về việc nhận biết đầy đủ mẫ u thử; b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng; c) phương pháp thử đã sử dụng và viện dẫn tiêu chuẩn này; d) mọi thao tác không được quy đ ị nh trong tiêu chuẩn này, hoặc những điều được coi là tự chọn, và bất kỳ chi tiết nào có ảnh hưởng tới kết quả; e) kết quả thử nghiệm thu được. Phụ lục A (Tham khảo) Giới thiệu hoạt chất chlorpyrifos ethyl A1 Công thức cấu tạo: chlorpyrifos ethyl A2 T ê n hóa học: O , O-diethyl O -(3,5,6-trichloro-2-pyridyl) phosphorothioate A3 Công thức phân tử: C 9 H 11 Cl 3 NO 3 PS A4 Khối lượng phần tử: 350.62 A5 Độ hòa tan ở 25° C trong Nước 2mg/1 Methanol 450 g/kg Xylen 4000 g/kg Benzen 7900g/kg Acetone 6500g/kg A6 Dạng bên ngoài: Dạng tinh thể không màu A7 Độ bền: B ề n trong điều kiện môi trư ờ ng b ì nh thư ờ ng Thư mục tài liệu tham khảo [1] C I PAC HANDBOOK 1 C , MT 221 page 2028 [2] TCCS 30:2011/BVTV thuốc trừ sâu chứa hoạt chất chlorpyrifos ethyl- Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử [3] CDS Tomlin, The Pesticide Manual, 17th Edition, 2015 .