TCVN11397:2016

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11397:2016 về Vi sinh vật trong thực phẩm – Phát hiện E.coli O157:H7 – Phương pháp 8h Trypton 20,0 g Muối mật số 3 1,12 g Natri clorua 5,0 g Sorbitol 20,0 g Thuốc thử 4-methylumbelliferyl- β -D-glucuronide (MUG) 0,1 g Bromocresol tía 0,015 g Thạch 15,0 g Nước 1,0 lít 3.4.2 Chuẩn bị Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun nóng có khuấy. Hấp 15 min trong nồi hấp áp lực ở 121 o C. pH cuối cùng phải l à 7,2 ± 0,2. 3.5 Môi trường thạch sinh màu Biosynth (BCM) O157:H7(+) , có sẵn từ Biosynth International, Inc (1665 W. Quincy Ave, Suite 155, Naperville, IL 60504, Hoa Kỳ) 1) 3.5.1 Thành ph ầ n BCM O157: H7(+) 80,0 g N,N-dimethylformamide (DMF, Sigma, Cat. No. D4254.) 1 ) 5,0 ml ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 5,0 ml Kali tellurit (dung dịch 0,1 %, Sigma, Cat. No. P0677.) 1) 0,2 ml Nước 1 lít 3.5.2 Chuẩn bị Cho DMF vào nước cất, sau đó thêm bột BCM v à đun sôi để hòa tan. Chỉnh pH đến 6,8 ± 0,1. Không hấp áp lực. Làm nguội đến nhiệt độ từ 50 o C đến 55 o C trong nồi cách thủy. Lọc qua xyranh (4.3) để khử trùng novobiocin và kali tellurit riêng rẽ và bổ sung vào môi trường một cách vô trùng. 3.6 Môi trường CHROMagar™ O157 , c ó sẵn từ CHROMagar Microbiology (Paris, Pháp) 1) 3.6.1 Thành phần ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 29,2 g Nước 1 lít 3.6.2 Chuẩn bị Hòa bột từ từ vào trong nước bằng cách xoay b ì nh. Đun đến sôi (100 o C) trong khi vẫn xoay bình và thỉnh thoảng khuấy. Nếu sử dụng nồi hấp áp lực, th ì không dùng áp lực. Không làm nóng quá 100 o C. Làm nguội đến khoảng 45 o C đến 50 o C trong nồi cách thủy. 3.8 Dung dịch natri hydroxit (NaOH) , 1 M 4 Thiết bị, dụng cụ S ử dụng các thiết bị, dụng cụ thông thường của ph ò ng thử nghiệm và cụ thể các thiết bị, dụng cụ sau: 4.1 Tủ ấm , có thể duy tr ì nhiệt độ từ 36 o C đến 38 o C và từ 42 o C đến 43 o C ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 4.3 Xyranh , được trang bị bộ lọc cỡ lỗ nhỏ hơn hoặc bằng 0,45 μ m. 4.4 Ống nghiệm , kích thước 16 mm x 100 mm bằng thủy tinh bo silicat. 4.5 Pipet. 4.6 Micropipet , có thể phân ph ố i ch í nh xác 0,12 ml. 4.7 Túi nhu động. 4.8 Bình định mức , dung tích 1 lít. 4.9 Bình nón , dung tích 500 ml, có nắp vặn. 5 Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị huy ề n phù m ẫ u thử ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Cắt mẫu rau một cách vô trùng và chuyển 50 g sang túi vô trùng. Thêm 50 ml chất pha loãng BPB (3.3), đ ó ng nắp túi và lắc bằng tay 15 min. Gạn lấy 25 ml cho vào bình nón 500 ml (4.9) c ó chứa sẵn 225 ml m ô i trường 8 h (3.1). Nới lỏng nắp bình, lắc nhẹ đ ể trộn và ủ 8 h ở 42 o C đến 43 o C trong tủ ấm (4.1). Lấy 5 ml môi trường cho v à o ống nghi ệ m (4.4). Đặt ống nghiệm vào nồi cách thủy (4.2) ở 100 o C trong 10 min. Làm nguội đến nhiệt độ phòng. 5.1.2 Đối với thịt nguyên liệu và thịt xay C â n vô trùng khoảng 25,0 g phần mẫu thử cho vào túi nhu động (4.7) có chứa sẵn 225 ml môi trường 8 h (3.1). Bóp bằng tay để trộn đều và ủ 8 h ở nhiệt độ từ 42 o C đến 43 o C trong t ủ ấ m (4.1). Đối với mẫu thử l à khối thịt nguyên liệu hoặc khối thịt xay có khối lượng 375 g, cân vô trùng 375 g phần mẫu thử cho v à o vật ch ứ a vô trùng có dung tích thích hợp. Thêm 3,375 lít môi trường 8 h (3.1) đã làm ấm đến nhiệt độ 42 o C ± 1 o C. Bóp bằng tay để trộn đều và ủ 12 h ở nhiệt độ 42 o C ± 1 o C trong t ủ ấ m (4.1). Đối với cả hai trường hợp nêu trên, sau khi ủ, chuyển 5 ml mới trường vào ống nghiệm (4.4). Đặt ống nghiệm vào nồi cách thủy (4.2) ở 100 o C trong 10 min. Làm nguội đến nhiệt độ phòng. 5.2 Xác định Mở túi chứa bộ thử (3.2). Sử dụng một bộ thử cho mỗi phép thử. Dùng pipet (4.6) chuyển 0,12 ml chủng cấy đã xử lý nhiệt từ ống nghiệm đã chuẩn bị trong 5.1, đưa mẫu vào cổng của bộ thử. Ủ 15 min ở nhiệt độ phòng. 5.3 Đọc kết quả Kiểm tra bộ thử ngay sau khi phát triển được 15 min. ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Kết quả âm tính nếu chỉ có một vạch duy nhất trong vùng phía trên (vùng đối chứng) trong ô đọc kết quả. K ết q uả không hợp lệ nếu không có vạch nào trong vùng phía trên (vùng đối chứng) của ô đọc kết qu ả , cho dù v ẫ n có một vạch trong vùng phía dưới (vùng thử nghiệm). 5.4 Khẳng định kết qu ả Phép thử dương tính giả định (xem 5.3) phải được khẳng định. a) Đối với mẫu thử là rau, thịt nguyên liệu và thịt xay Chuẩn bị các dung dịch pha loãng thích hợp từ chủng cấy tăng sinh trong môi trường 8 h và dàn đều vào thạch HC (3.4) và thạch BCM (3.5). Các khuẩn lạc âm tính với thuốc thử sorbitol và MUG được phân lập từ thạch HC cần được khẳng định về mặt huyết thanh học với các kháng hu yế t thanh O157 và H7. b) Đối với mẫu thử là khối thịt nguyên liệu hoặc khối thịt xay có khối lượng 375 g C ấ y đĩa các chủng cấy tăng sinh trong môi trường 8 h vào môi trường CHROMagar™ O157 (3.6) và ủ 24 h ± 1 h ở nhiệt độ 37 o C ± 1 o C trong t ủ ấm (4.1). Các khuẩn lạc E. coli O157:H7 sẽ có màu tím hoa cà trong khi các vi khuẩn co li form khác có màu xanh, màu xám hoặc không màu. Tiếp tục thực hiện phép thử khẳng định về mặt huyết thanh học. Khuẩn lạc nghi ngờ được khẳng định nếu đáp ứng ít nhất một trong các tiêu chí sau: ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 - dương tính với phép thử gen độc tố Shiga “stx ” ; - được xác đ ị nh về gen là “H7 ” . 6 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm ít nhất phải bao g ồ m các thông tin sau đây: a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử; b) phương pháp thử đã sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; c) kết quả thử nghiệm; d) ngày kết thúc thử nghiệm; e) mọi chi tiết thao tác không được quy định trong tiêu chuẩn này hoặc những điều được coi là tùy chọn có thể ảnh hưởng đến kết quả. ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Phụ lục A (Tham khảo) Kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm Bảng A.1 - Kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm đối với E. coli O157:H7 trên rau diếp và sản phẩm thịt bò Mẫu Mức MPN/g Tổng số mẫu Kết quả dương t í nh trên Hệ thống thử 8 h ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Độ nhạy d , % Tỷ lệ âm tính giả e , % Độ đặc hiệu f , % T ỷ lệ dương t í nh gi ả g % Giả định a Khẳng định b Thử 8 h Đối chứng Thử 8 h ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Thử 8 h Đối chứng Thử 8 h Đối chứng Rau di ế p Thấp 0,03 75 48 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 0,17 61,3 57,3 38,7 42,7 - - - - ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 1,1 75 59 52 0,54 69,3 76 30,7 24 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 - - - Đối chứng 75 1 0 0 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 - - - 100 100 0 0 Thịt bò nguyên liệu Thấp ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 70 55 48 15,4 68,6 32,9 31,4 67,1 - ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 - - Cao 2,92 70 67 63 21,46 90,0 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 10,0 50 - - - - Đối chứng 70 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 0 0 - - - - 100 100 0 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Thịt bò xay nguyên liệu Thấp 0,07 75 67 56 0,8 74,7 66,7 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 33,3 - - - - Cao 0,28 75 74 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 3,86 96,0 85,3 4 , 0 14,7 - - - - ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 75 8 0 0 - - - - ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 100 0 0 CH Ú D Ẫ N: MPN: S ố đơn vị hình thành khuẩn lạc c ó xác suất lớn nh ấ t, t í nh theo CFU/g (giới hạn tin cậy 95 %). a) Bộ thử cho kết qu ả dương t í nh với canh thang t ă ng sinh 8 h. b) Các chủng c ấ y tăng s i nh của mẫu dương t í nh giả định được khẳng định theo 5.4a c ) Khi b ì nh phương đối với hai mẫu độc l ậ p: X 2 = N x Trong đó: ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 b: l à số mẫu dương tính trong phép thử khẳng định (5.4), c: l à s ố mẫu â m t í nh trong phép thử 8 h, d : l à số mẫu dương t í nh trong phép thử khẳng định (5.4), N: l à tổng số mẫu đ ã thử với cả hai phương pháp. Giá trị X 2 > 3,84 cho th ấ y sự kh á c biệt đ á ng kể ở mức xác su ấ t 5 %. d) Độ nhạy l à t ỉ lệ phần trăm của t ổ ng số phần mẫu thử dương tính với phép thử khẳng định (5.4) so với tổng số mẫu c ấ y. e) T ỷ lệ âm tính giả bằng (100 - độ nhạy) . Số phép thử dương t í nh khẳng định là thấp sẽ cho tỷ lệ âm tính gi ả cao. f) Độ đặc hiệu là t ỉ lệ phần trăm của tổng số phần mẫu thử âm tính với phép thử khẳng định (5.4) so với tổng số mẫu chưa cấy. Có thể t í nh trên số mẫu đối ch ứ ng chưa c ấ y. g) Tỷ lệ â m dương gi ả bằng (100 - độ đặc hiệu). ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Mẫu Chủng MPN/g a MPN/ phần mẫu thử (375 g) a Tổng số mẫu Kết quả trên Hệ th ố ng thử 8 h X 2 d Thử 8 h Giả định b ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 Độ nhạy e , % Tỷ lệ âm tính gi ả f , % Độ đặc hiệu g , % Tỷ lệ dương tính giả h , % Thịt bò xay nguyên liệu ATCC 35150 0,015 (0,0037 ÷ 0,042) 5,6 (1,4-16) ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 19 19 3,06 100 0 - - <0,003 (0 ÷ 0,0095) <1,1 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 5 0 0 - - - 100 0 Thịt bò nguyên liệu ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 <0,003 (0 ÷ 0,0095) <1,1 (0-3,6) 20 18 18 3,49 100 0 - ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 <0,003 (0 ÷ 0,0095) <1,1 (0-3,6) 5 0 0 - - - 100 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 CHÚ DẪN: a) MPN: Số đơn vị h ì nh th à nh khuẩn lạc có xác suất l ớ n nh ấ t, t í nh theo CFU/g hoặc CFU/375 g (giới hạn tin cậy 95 %). b ) Bộ thử cho kết quả dương tính không được khẳng định tiếp theo. c ) Bộ thử cho kết quả dương tính được khẳng định tiếp theo. d ) Khi b ì nh phương đối với hai mẫu độc lập: X 2 = ( N - 1) x , Trong đó: a: là s ố mẫu dương tính trong phép thử 8 h, b : l à số mẫu â m t í nh trong phép thử 8 h, c: là số mẫu dương tính trong phép th ử khẳng định (5.4), ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 N: là tổng số mẫu đã thử với c ả hai phương pháp. Giá trị X 2 > 3,84 cho thấy sự khác biệt đáng k ể ở mức xác su ấ t 5 %. e) Độ nhạy l à t ỉ lệ phần trăm của tổng số phần m ẫ u thử dương t í nh với phép thử khẳng định (5.4) so với tổng số mẫu cấy. f ) Tỷ lệ â m t í nh giả bằng (100 - độ nhạy). g) Độ đặc hiệu là t ỉ lệ phần trăm của tổng số phần mẫu thử âm t í nh với phép thử 8 h so với tổng s ố mẫu âm t í nh. C ó thể t í nh trên số mẫu đố i chứng chưa khẳng định. h) Tỷ lệ âm dương giả bằng (100 - độ đặc hiệu). Thư mục tài liệu tham khảo [1] United States Food and Drug Administration - Center for Food Safety & Applied Nutrition, Bacteriological Analytical Manual, Chapter 4 : Escherichia coli and the Co li form Bacteria , 2001 ... ... ... Bạn phải đăng nhập hoặc đăng ký Thành Viên TVPL Pro để sử dụng được đầy đủ các tiện ích gia tăng liên quan đến nội dung TCVN. Mọi chi tiết xin liên hệ: ĐT: (028) 3930 3279 DĐ: 0906 22 99 66 1) V í dụ v ề sản phẩm thích hợp có bán sẵn. Thông tin n à y được đ ưa ra nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định sử dụng các s ả n phẩm này. Có th ể sử dụng các sản phẩm tương tự nếu cho kết quả tương đương.