TCVN6505-1:2007

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6505-1:2007 (ISO 11866-1:2005) về Sữa và sản phẩm sữa - Định lượng Escherichia coli giả định - Phần 1:Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất sử dụng 4-metylumbelliferyl-beta-D-glucuronit (MUG) TCVN 6505-1:2007 ISO 11866-1:2005 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - ĐỊNH LƯỢNG ESCHERICHIA COLI GIẢ ĐỊNH – PHẦN 1: KỸ THUẬT ĐẾM SỐ CÓ XÁC SUẤT LỚN NHẤT SỬ DỤNG 4 -METYLUMBELLIFERYL--D-GLUCURONIT (MUG) Milk and milk products - Enumeration of presumptive Escherichia coli – Part 1 Most probable number technique using 4 me thylu m b e llif e ryl b - D glucuroride ( MUG ) L ờ i nói đ ầ u TCVN 6505-1:2007 thay thế TCVN 6505-2:1999; TCVN 6505-1 : 2007 hoàn toàn tư ơ ng đ ươ ng với ISO 11866-1 : 2005 / IDF 170-1:2005; TCVN 6505-1:2007 do Ban kỹ thuật ti ê u chuẩn TCVN/TC/F12 Sữa và sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất l ượ ng đ ề nghị, Bộ Khoa học và C ô ng nghệ công b ố . TCVN 6505:2007 (ISO 11866:2005) Sữa và sản phẩm sữa - Định lượng Escherichia coli giả định, bao g ồ m các ph ầ n sau: - Ph ầ n 1: Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất sử dụng 4-metylumbelliferyl- -D- glucuronit (MUG) - Phần 2: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 44 o C sử dụng màng lọc. S Ữ A VÀ SẢN PHẨM S Ữ A - ĐỊNH LƯỢNG ESCHERICHIA COLI GIẢ ĐỊNH – PHẦN 1: KỸ THUẬT ĐẾM SỐ CÓ XÁC SUẤT L Ớ N NHẤT SỬ DỤNG 4 - METYLUMBELLIFERYL- b - D-GLUCURONIT (MUG) Milk and milk products - Enumeration of presumptive Escherichia coli – Part 1 Most probable number technique using 4 me thylu m b e llif e ryl b - D glucuroride ( MUG ) 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này qui định phương pháp kết hợp để định lượng E.co li giả định và co li form giả định bằng kỹ thuật nuôi cấy trong môi trường lỏng với MUG, và tính số lượng E.co l i và/hoặc coliform c ó trong 1 gam hoặc có trong 1 mililit bằng kỹ thuật đếm s ố có xác suất lớn nhất (MPN) sau khi nuôi ấm ở 30 o C. Phương pháp này nhanh h ơ n phương pháp qui định trong TCVN 6846 (ISO 7251) vì giảm bớt th ờ i gian nuôi ấm (bỏ qua một số giai đoạn tăng sinh). Phương pháp này có thể áp dụng cho: - sữa và các sản phẩm sữa dạng lỏng; - sữa bột, whey bột. buttermilk bột và lactoza; - casein axit, casein lactic và casein rennet; - caseinat, whey bột axit; - phomát và phomát chế biến; - bơ ; - sản phẩm sữa đông l ạnh (bao gồm cả kem l ạnh thực phẩm) ; - custard, món tráng miệng và cream. Phương pháp này thích hợp đối với các mẫu có số lượng E.coli và/ho ặ c coli fom giả định khác dự đoán tương đối thấp (ít hơn 100 E.coli và/hoặc Colifom trong một gam, hoặc ít h ơ n 10 E.coli và/ho ặ c Coli f om trong một mililít). CHÚ Ý - Khả năng áp dụng của phương pháp này bị hạn ch ế bởi độ nhạy của nó đối v ớ i độ biến thiên lớn. Do đó, phương pháp này nên sử dụng và giải thích kết quả theo thông tin nêu trong điều 12. CH Ú THÍCH Các phương pháp được mô t ả trong TCVN 4882 (ISO 4831) áp dụng để định lượng co li form với các mục đích đối chứng. 2. Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện d ẫn sau là rất c ầ n thiết cho việc á p dụng tiêu chuẩn. Đối v ớ i các tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành th ì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm c ả các sửa đổi. TCVN 6404 (ISO 7218), Vi sinh vật trong thực phẩm và trong thức ăn gia súc - Yêu cầu chung và hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật. TCVN 6263 ( ISO 8261), Sữa và các sản phẩm sữa - Hướng dẫn chung về chuẩn bị mẫu thử huy ề n ph ù ban đ ầ u và các dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật. 3. Thuật ngữ và định nghĩa Trong tiêu chuẩn này sử dụng các thuật ngữ và định nghĩa sau đây: 3.1 E.coli giả định (presumptive Escherichia col i ) vi khuẩn ở nhiệt độ 30 o C tách 4-metylumbelliferyl - -D-glucuronit (MUG), tạo huỳnh quang và sinh indol từ tryptophan trong các đi ề u kiện qui định trong tiêu chuẩn này. 3.2 coliform (coliforms) vi khuẩn ở nhiệt độ 30 o C lên men lactoza kèm theo sự sinh khí trong các đi ề u kiện qui định trong tiêu chuẩn này. 4. Nguyên tắc 4.1. Cấy một lượng mẫu thử xác định nếu sản phẩm ban đầu dạng lỏng, hoăc vớ i một lượng xác định huyền phù ban đầu trong trường hợp sản phẩm dạng khác vào ba ống nghiệm chứa môi trường l ỏ ng tăng sinh chọn lọc nồng độ kép. 4.2. Cấy một lượng mẫu thử xác định nếu sản phẩm ban đầu dạng lỏng, hoặc với một lượng xác định huyền phù ban đầu trong tr ườ ng hợp sản phẩm dạng khác vào ba ống nghiệm chứa môi trường tăng sinh lỏng chọn lọc nồng độ đơn. Sau đó, cấy các lượng xác định của các dung dịch mẫu thử pha loãng thập ph â n ho ặ c huyền phù ban đầu vào môi trường nồng độ đơn trong cùng điều kiện trên. 4.3. Nu ô i ấm các ố ng nghiệm chứa m ô i trường nồng độ kép và nồng độ đơn ở 30 o C từ 24 giờ đến 48 giờ. 4.4. Các ống cho thấy huỳnh quang và sinh indol được coi là các ống dương tính về E.coli giả định. 4.5. Các ống nghiệm cho sinh khí được coi là các ống dương tính về co li form gi ả định. 4.6. Ch ỉ số MPN được xác định từ số ống dương tính (4.4) của các dung dịch pha loãng chọn lọc bằng cách sử dụng bảng MPN (phụ lục A) và tính được số có xác suất lớn nhất (MPN) của E.co l i giả định trong một gam hoặc một mililit mẫu ban đầu. 4.7. Chỉ số MPN được xác định từ số ống dương tính (4.5) của các dung dịch pha loãng chọn lọc bằng cách sử dụng bảng MPN (phụ lục A) và tính được số có xác suất lớn nhất (MPN) của coliform trong một gam ho ặ c một mililit mẫu ban đầu. 5. Dịch pha loãng, môi trường cấy và thuốc thử 5.1. Khái quát Đối với các phòng thử nghiêm hiện hành, xem TCVN 6404 (ISO 7218) và TCVN 6263 (ISO 8261). Đ ố i với m ô i trường và thuốc thử đã chuẩn bị nhưng không sử dụng ngay, nếu không có qui định khác, phải b ả o qu ả n nơi tối ở nhiệt độ từ 0 o C đến + 5 o C kh ô ng quá 1 th á ng, trong các điều kiện không làm thay đổi thành phần của chúng. 5.2. Dịch pha loãng Xem TCVN 6263 (ISO 8261). 5.3. Môi trường cấy 5.3.1. Canh thang tryptoza lauryl sunfat c ả i biến (môi trường tăng sinh chọn lọc) 5.3. 1 .1 Thành phần a) Môi trường nồng độ kép b) M ô i trường nồng độ đơn Tryptoza 40,0 g 20,0 g Lactoza 10,0 g 5,0 g Dikali hydro phosphat (K 2 HP O 4 ) 5,5 g 2 , 75 g Kali dihydro phosphat (KH 2 P O 4 ) 5 , 5 g 2,75 g Natri clorua 10 , 0 g 5 , 0 g Natri lauryl sunfat [CH 3 ( CH 2 ) 11 OSO 3 Na] 0 , 2 g 0,1 g 4-Metylumbelliferyl- -D-glucuronit (MUG) 0,2 g 0,1 g Tryptophan 2,0 g 1 , 0 g Nước 1 000 ml 1 000 ml 5.3.1.2. Chuẩn bị Hoà tan trong nước các thành phần hoặc môi trường hoàn ch ỉ nh khô, đun s ô i khi cần. Nếu cần, chỉnh pH để sau khi khử trùng pH phải là 6,8, ở nhiệt độ 25 o C . Ph â n phối m ô i trường này theo từng lượng 10 ml vào các ống nghiệm có kích thước 16 mm x 160 mm (6.2) có chứa ống Durham lộn ngược (6.3) trong tr ườ ng hợp môi trường nồng độ đơn và ph â n phối vào các ống nghiệm có kích thước 20 mm x 200 mm (6.2) có chứa ống Durham lộn ngược (6.3) trong trường hợp m ô i tr ườ ng nồng độ kép. Khử trùng 15 phút ở nhiệt độ 121 o C trong nồi hấp áp lực (6.1). Ống Durham lộn ngược kh ô ng được chứa bọt khí sau khi khử trùng. 5.4. Thuốc thử indol (thuốc thử Kovacs) 5.4.1. Thành ph ầ n 4-Dimetylaminobenzaldehyt 5,0 g 2-Metylbutan-1-ol hoặc pentan-1-ol 75 , 0 ml Axit clohydric ( p 20 từ 1,18 g/ml đến 1,19 g/ml) 25,0 ml 5.4.2. Chuẩn bị Hoà tan 4-Dimetylaminobenzaldehyt trong cồn bằng cách đun nhẹ đến khoảng từ 50 o C đến 55 o C trong n ồ i cách thuỷ (6.5). Để nguội và thêm axit clohydric. B ả o qu ả n tránh á nh sáng ở nhiệt độ khoảng 4 o C . Màu sắc của thuốc thử phải có màu vàng sáng đến màu nâu sáng. 5 .5. Dung dịch natri hydroxit . c (NaOH) » 0.5 mol/l. 5.5.1. Thành ph ầ n Natri hydroxit 2 g Nước 100 ml 5.5.2. Chuẩn bị Hoà tan natri hydroxit trong nước. 6. Thiết bị và dụng cụ thuỷ tinh Đối với các yêu c ầ u chung, xem TCVN 6404 (ISO 7218) và TCVN 6263 (ISO 8261). Dụng cụ thu ỷ tinh phải bền khi khử trùng lại. Sử dụng các thiết bị phòng thử nghiệm vi sinh th ô ng th ườ ng và cụ thể là: 6.1. N ồ i hấp áp lực , có thể duy trì nhiệt độ ở 121 o C ± 1 o C . Về chi tiết xem TCVN 6404 (ISO 7218). 6.2. Ố ng nghiệm , có kích thước 16 mm x 160 mm và 20 mm x 200 mm, hoặc bình c ầ u ho ặ c chai có dung tích thích hợp. Trước khi sử dụng c ầ n kiểm tra các ống nghiệm để biết chắc các ống không tự phát huỳnh quang. 6.3. Ố ng Durham , có kích thước thích hợp cho việc sử dụng trong ống nghiệm (6.2). 6.4. Tủ ấm , có thể duy tr ì nhiệt độ 30 o C ± 1 o C ở bất kỳ điểm nào trong tủ. 6.5. Nồi cách thuỷ , có thể duy tr ì nhiệt độ từ 50 o C đến 55 o C . 6.6. Đèn cực tím (UV) sóng dài , có bước sóng từ 360 nm đến 366 nm, tốt nhất là để trong t ủ UV hoặc trong phòng tối, hoặc được bọc trong hộp cactông đảm bảo điều kiện tối. CHÚ THÍCH Đèn tia cực t í m uv sóng ngắn không thích hợp cho việc sử dụng 6.7. pH-met , có độ chính xác đến ± 0,1 đ ơ n vị pH ở 25 o C . 6.8. Pipet xả hết , có dung tích danh định là 1 ml và 10 ml. 6.9. Máy trộn Vortex. 7. Lấy mẫu M ẫ u g ử i đến phòng thử nghi ệ m phải là mẫu đại diện. Mẫu không bị thay đổi hoặc suy giảm chất lượng trong quá tr ì nh b ả o quản và vận chuyển. Việc lấy mẫu không qui định trong tiêu chuẩn này. Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) 8. Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn b ị mẫu thử theo TCVN 6263 (ISO 8261). 9. Cách tiến hành 9.1. Ph ầ n mẫu thử, huyền phù ban đ ầ u và các dung dịch pha loãng Chuẩn bị phần mẫu thử, huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng đầu tiên) và các dung dịch pha loãng thập ph â n tiếp theo, theo TCVN 6263 (ISO 8261). Pha đ ủ s ố lượng các dung dịch pha loãng để đảm bảo rằng tất cả các ống nghiệm ứng với độ pha lo ã ng cuối cùng cho kết qu ả âm tính. 9.2. Cấy môi trường tăng sinh chọn lọc 9.2.1. Lấy ba ống nghiệm đựng m ô i trường tăng sinh nồng độ kép [5.3.1.1 a)]. Dùng pipet vô trùng (6.8) cho vào mỗi ống 10 ml mẫu thử dạng lỏng, hoặc 10 ml huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng đ ầ u tiên) mẫu thử dạng khác. 9.2.2. Lấy ba ống nghiệm đựng môi trường tăng sinh nồng độ đơn [5.3.1.1 b)]. Dùng một pipet (6.8) v ô trùng cho vào m ỗ i ống 1 ml mẫu thử dạng lỏng, hoặc 1 ml huy ề n phù ban đầu (dung dịch pha loãng đ ầ u tiên) khi mẫu thử dạng khác. 9.2.3. Đối với mỗi một dung dịch pha lo ã ng tiếp theo, tiến hành theo qui định trong 9.2.2. S ử dụng một pipet v ô trùng mới cho mỗi độ pha loãng. 9.2.4. Trộn cẩn thận chất cấy với môi tr ườ ng bằng cách dùng bộ trộn (6.9). Tránh tạo bọt kh í vào trong ống Durham (6.3). 9.3. Nuôi ấm Nu ô i ấm các ống nghiệm đã cấy (từ 9.2.1 đến 9.2.3) trong tủ ấm (6.4) ở 30 o C trong 24 gi ờ ± 2 giờ. Nếu ở gi a i đoạn này không quan sát thấy sinh kh í thì nuôi ấm tiếp đến 48 giờ ± 2 giờ. 9 .4 Thử khẳng định về E.coli giả định Tiến hành thử kh ẳ ng định đối với E.coli giả định tr ê n tất cả các ống nghiệm đã nuôi ấm như trong 9.3. Cho vào mỗi ống nghiệm 0,5 m l dung dịch natri hydroxit (5.5). Kiểm tra các ống nghiệm về việc p h át huỳnh quang dưới đèn UV (6.6). Thêm 0,5 ml thuốc thử indol (5.4) vào các ố ng có phát huỳnh quang. Tr ộ n kỹ và kiểm tra sau 1 phút. Màu đỏ trong pha cồn cho thấy sự có mặt của indol (ống dương tính). 9.5. Giải thích 9.5.1. Thử nghiệm v ề E.coli giả định Nhận biết các ống nghiệm đã được cấy ban đ ầ u theo 9.2.1 đến 9.2.3, cho thấy có phát huỳnh quang và sinh indol trong 9.4 là các ống dương tính có E.coli giả định. Đếm s ố ống dương tính đối với mỗi độ pha loãng. 9.5.2. Thử nghiệm v ề coliform Nhận biết các ống nghiệm đã được cấy theo 9.2.1 đến 9.2.3, cho thấy sinh khí trong 9.3 là các ống dương tính có co li form giả định. Đếm số ống dương tính đối vối mỗi độ pha loãng. 10. Chọn độ pha loãng CHÚ THÍCH Huy ề n phù ban đ ầ u (dung d ịch pha loãng đầu ti ê n) và mẫu thử được coi là các dung dịch pha lo ã ng. 10.1. Đối với mỗi mẫu c ầ n kiểm tra, chọn ba độ pha loãng liên tiếp theo 10.2, 10.3 hoặc 10.4 để thu được chỉ số MPN. 10.2. Trong tr ườ ng hợp khi chỉ có ba độ pha loãng, thì sử dụng cả ba độ pha loãng này để thu được chỉ số MPN. 10.3. Trong tr ườ ng hợp có nhiều hơn ba độ pha loãng, việc chọn ba độ pha loãng như thế sẽ cho các tổ hợp có các xác suất khác nhau. Điều này có thể biểu thị trong các cấp hạng trong bảng A.1 (phụ lục A). Giải thích các cấp hạng này được đưa ra trong bảng A.2 ( phụ lục A). 10.4. Chọn tổ hợp của ba độ pha loãng liên tiếp với cấp hạng 1 để thu được chỉ số MPN; nếu thu được nhiều hơn một tổ hợp v ớ i cấp hạng 1 thì sử dụng tổ hợp có số ống dương t í nh lớn nhất. Nếu không có tổ hợp với cấp hạng 1 thích hợp, sử dụng một tổ hợp với cấp hạng 2; nếu thu được nhi ề u hơn một tổ hợp với cấp hạng 2 th ì sử dụng tổ hợp có số ống dương tính lớn nhất (xem ví dụ ở B ả ng 1). Nếu kh ô ng có tổ hợp vớ i cấp hạng 2 thích hợp, sử dụng một tổ hợp v ớ i cấp hạng 3; nếu thu được nhiều hơn một tổ hợp với cấp hạng 3 thì sử dụng tổ hợp có số ống dương tính lớn nhất (xem ví dụ ở bảng 1). B ả ng 1 – Ví dụ về cách chọn các kết qu ả d ươ ng tính để tính giá trị MPN Ví dụ S ố ống nghiệm dương t í nh thu đ ượ c từ ba ố ng nghiệm nuôi ấm đã cấy các lượng mẫu/ống sau đâ y a MPN b Sản phẩm dạng lỏng 10 ml 1 ml 10 -1 ml 10 - 2 ml 10 - 3 ml Các s ả n phẩm khác 1 g 10 - 1 g 10 - 2 g 10 -3 g 10 - 4 g Sản phẩm dạng l ỏng ml - 1 S ả n phẩm dạng khác g -1 1 3 3 2 1 0 1,1 X 10 1 1,1 X 10 2 2 3 3 3 0 2,4 X 10 1 2,4 X 10 2 3 2 2 1 1 0 7,4 7,4x10 1 4 3 3 0 0 0 2 , 4 2,4 X 10 1 5 2 2 0 1 0 2 , 1 X 10 -1 2,1 a Ch ữ in đậm : tổ hợp đ ược chọn. b Gi á trị t í nh đ ược sử dụng ch ỉ số MPN đ ố i với ba ố ng nghiệm (Bàng A.1). 11. Xác dịnh, tính và biểu thị kết quả 11.1. Xác định chỉ số MPN [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] 11.1.1. Xác định ch ỉ số MPN của E.coli giả định từ s ố ống nghiệm khẳng định dương tính (9.5.1) đối v ớ i mỗi độ pha loãng đã chọn (điều 10), sử dụng b ả ng A.1 (phụ lục A). 11.1.2. Xác định ch ỉ số MPN của coliform từ số ống nghiệm khẳng định dương tính (9.5.2) đối với mỗi độ pha loãng đã chọn (điều 10), sử dụng bảng A.1 (phụ lục A). 11.2. Tính số có xác xuất lớn nhất (MPN) [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] Nhân chỉ số MPN (11.1) v ớ i tỷ lệ nghịch c ủ a độ pha loãng thấp nhất được chọn (nghĩa là có nồng độ mẫu thử cao nhất) cho ra số có xác suất lớn nhất (MPN) c ủ a E.coli và/ho ặ c coliform có trong 1 mil i lit hoặc trong 1 gam sản phẩm. Khi độ pha loãng thấp nhất được chọn tương ứng với các ống đã cấy v ớ i m ô i trường nồng độ kép (cấy vào 10 ml) thì tr ướ c hết chia chỉ số MPN cho 10. CHÚ THÍCH Việc chia chỉ số MPN cho 10 ch ỉ cần thiết đối với s ả n phẩm dạng lỏng, khi phân phối 10 ml mẫu thử s a ng ống nghiệm chứa m ô i trường n ồ ng độ kép. Còn đối với s ả n phẩm dạng khác, th ì chuyển 10 ml huyền phù ban đ ầ u chứa 1 g mẫu thử v à o ống nghiệm chứa môi tr ườ ng nồng độ kép. 11.3. Biểu thị kết qu ả Biểu thị kết quả theo số có xác suất lớn nhất (MPN) của E.coli gi ả định hoặc của con li form giả định có trong 1 mililit (sản phẩm dạng lỏng) hoặc trong 1 gam (sản phẩm dạng khác) theo một số trong khoảng từ 1,0 đến 9,9 nh â n với luỹ thừa tương ứng của 10. N ế u MPN nhỏ hơn 0,3 E.coli giả định hoặc co li form giả định trong 1 mililit hoặc trong 1 gam và nếu sử dụng qui tr ì nh thích hợp đối với s ố E.coli gi ả định hoặc co li form giả định có s ố lượng thấp, thì kết quả được biểu thị như sau: “ Không có E.coli ho ặ c coliform giả định trong 1 ml hoăc trong 1 g sản phẩm”. 12. Độ chụm Thực nghiệm cho thấy rằng khi sử dụng kỹ thuật MPN kết quả có thể xảy ra sai số lớn. Do đó, phải thận trọng khi sử dụng các kết quả thu được bằng phương pháp này. Các giới hạn tin cậy được đưa ra trong b ả ng A.1 (phụ lục A). 13. Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - mọi thông tin cần thiết về nhận biết đ ầ y đủ về mẫu thử ; - phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết; - phương pháp thử đã sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất c ả các chi tiết về điều kiện thao tác không qui định trong tiêu chuẩn này, hoặc được xem là tuỳ ý, cùng với mọi t ì nh huống bất th ườ ng có thể ảnh h ưở ng đến kết quả; - kết quả thử nghiệm thu được, nêu rõ phương pháp biểu thị kết quả. Phụ lục A (qui định) Xác định số có xác suất lớn nhất Bảng A.1 - Chỉ số MPN và các giới hạn tin cậy S ố lượng ống dương t í nh Chỉ s ố MPN a C ấ p hạng b Giới hạn tin cậy ở mức 95 % a, c Dưới Trên 0 0 0 0 , 30 0,00 0,94 0 0 1 0 , 30 3 0 , 01 0 , 95 0 1 0 0,30 2 0,01 1,00 0 1 1 0 , 61 0 0,12 1,70 0 2 0 0,62 3 0 , 12 1 , 70 0 3 0 0 , 94 0 0,35 3,50 1 0 0 0 , 36 1 0,02 1,70 1 0 1 0 , 72 2 0,12 1 , 70 1 0 2 1 , 1 0 0,4 3,5 1 1 0 0,74 1 0,13 2,00 1 1 1 1 , 1 3 0 , 4 3,5 1 2 0 1 , 1 2 0,4 3 , 5 1 2 1 1,5 3 0,5 3,8 1 3 0 1 , 6 3 0,5 3,8 2 0 0 0 , 92 1 0,15 3,50 2 0 1 1,4 2 0 , 4 3 , 5 2 0 2 2,0 0 0 , 5 3 , 8 2 1 0 1 , 5 1 0,4 3 , 8 2 1 1 2 , 0 2 0 , 5 3 , 8 2 1 2 2,7 0 0,9 9 , 4 2 2 0 2 , 1 1 0 , 5 4,0 2 2 1 2,8 3 0 , 9 9,4 2 2 2 3,5 0 0 , 9 9,4 2 3 0 2,9 3 0,9 9 , 4 2 3 1 3 , 6 0 0 , 9 9 , 4 3 0 0 2,3 1 0,5 9 , 4 3 0 1 3 , 8 1 0,9 10,4 3 0 2 6,4 3 1,6 18 , 1 3 1 0 4,3 1 0 , 9 18 , 1 3 1 1 7,5 1 1 , 7 19,9 3 1 2 12 3 3 36 3 1 3 16 0 3 38 3 2 0 9 , 3 1 1,8 36,0 3 2 1 15 1 3 38 3 2 2 21 2 3 40 3 2 3 2 9 3 9 99 3 3 0 24 1 4 99 3 3 1 46 1 9 198 3 3 2 110 1 20 400 3 3 3 > 110 a Từ Tài liệu tham khảo [4 ] b Xem B ả ng A.2 c Các gi ớ i hạn tin cậy đưa ra trong bảng này l à ch ỉ đưa ra một số ý kiến của ảnh h ưở ng sai số thống kê l ê n kết quả . Tuy nhi ê n v ẫ n có các nguồn gốc sai số khác đ ô i khi còn quan tr ọng hơn Bảng A.2 - Giải th í ch các cấp hạng v ề các kết quả Cấp hạng a Đ ị nh nghĩa 1 Khi số lượng vi khuẩn trong mẫu thử bằng số MPN tìm được, th ì k ế t quả nằm trong số các khả n ă ng cao nhất thu được. H ầ u như ch ỉ có 5 % khả năng nh ậ n được kết quả nhỏ hơn giá trị nhỏ nhất ở cấp hạng này. 2 Khi số lượng vi khuẩn trong mẫu thử bằng số MPN tìm được, th ì kết quả l à một trong s ố khả năng nh ậ n được í t hơn cả số có khả n ă ng x ả y ra nhỏ nhất trong cấp hạng 1, nhưng tối đa chỉ có 1 % khả năng thu đư ợ c một kết quả có thể thấp hơn kết quả nhỏ nhất có thể xảy ra ở cấp hạng này. 3 Kh i số lượng vi khuẩn trong mẫu thử bằng số MPN tìm được , thì kết quả là một trong số có khả năng nh ậ n được í t hơn cả giá trị nhỏ nhất trong cấp hạng 2, nh ư ng tố i đa chỉ có 0,1 % khả năng thu đ ượ c một k ế t quả có thể thấp hơn giá trị nh ỏ nh ấ t ở cấp hạng này. 0 Khi số lượng vi khuẩn trong mẫu thử bằng số MPN t ì m được, thì kết quả là một trong s ố có khả năng nhận được í t hơn cả giá trị nhỏ nhất tr ong cấp hạng 3, chỉ có 0,1 % khả năng thu được một kết quả ở c ấ p hạng này, nếu như không có một sai sót nào. a Trước khi bắt đ ầ u thử nghiệm, c ầ n quyết định xem cấp hạng nào sẽ được chấp nhận, nghĩa là: chỉ cấp hạng 1 , 1 và 2 hoặc thậm ch í 1, 2 và 3. Nếu quyết định dựa tr ê n c á c kết quả có tầm quan trọng, th ì chỉ chấp nhận kết quả c ủ a cấp hạng 1 hoặc tối đa kết quả của c ấ p hạng 1 và cấp hạng 2. Kết quả của c ấ p hạng 0 c ầ n được xem xét hết sức cẩn thận. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707) Sữa và sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu. [2] TCVN 4882 (ISO 4831) Vi sinh vật học. H ướ ng dẫn chung về định lượng coliform. Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất. [3] TCVN 6846:2007 (ISO 7251:2005) Vi sinh vật học - Hướng dẫn chung về định lượng E.coli gi ả định. Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất. [4] De Man, J.C., Eur.J.Appl. Biotechnol., 17,1983, pp. 301-305.