TCVN6134:2009

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6134:2009 (EPA Method 8321A) về Chất lượng đất - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao/nhiệt phun/ khối phổ (HPLC/TS/MS) hoặc Detector cực tím (UV) để xác định hợp chất không bay hơi có thể chiết trong dung môi TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6134 : 2009 CHẤT LƯỢNG ĐẤT - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO/NHIỆT PHUN /KHỐI PHỔ (HPLC/TS/MS) HOẶC DETECTOR CỰC TÍM (UV) ĐỂ XÁC ĐỊNH HỢP CHẤT KHÔNG BAY HƠI CÓ THỂ CHIẾT TRONG DUNG MÔI Soil quality - Solvent e xtractabl e nonvolatil e compounds by high per f ormance liquid chromatography/th e rmospray/mass spectrometry (HPLC/TS/MS) or ultravio le t (UV) d e t e ction Lời nói đ ầ u TCVN 6134 : 2009 thay thế cho TCVN 6134 : 1996. TCVN 6134 : 2009 ho à n toàn tương đương với Method 8321A c ủ a Cơ quan bảo vệ môi trường Hoa Kỳ (EPA Method 8321A). TCVN 6134 : 2009 do Ban kĩ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC 190 Chất lư ợ ng đ ất biên soạn, Tổng cục Ti ê u chuẩn Đo lường Chất lượng đ ề nghị. Bộ Khoa học và Công nghệ c ô ng bố. CHẤT LƯỢNG ĐẤT - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO/NHIỆT PHUN /KHỐI PHỔ (HPLC/TS/MS) HOẶC DETECTOR CỰC TÍM (UV) ĐỂ XÁC ĐỊNH HỢP CHẤT KHÔNG BAY HƠI CÓ THỂ CHIẾT TRONG DUNG MÔI Soil quality - Solvent e xtractabl e nonvolatil e compounds by high per f ormance liquid chromatography/th e rmospray/mass spectrometry (HPLC/TS/MS) or ultravio le t (UV) d e t e ction 1. Phạm vi và áp dụng 1.1 Phương pháp này đề cập đến việc sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) cặp khối phổ-nhiệt phun (TS-MS) và/hoặc tia cực tím (UV) để xác định thuốc nhuộm azo, hợp chất phospho hữu cơ và tris(2.3-dibromopropyl) phosphat, hợp chất axit phenoxy clo hóa và các este của chúng, cacbamat trong nước thải, nước ngầm và nền mẫu đất/trầm tích. Các dữ liệu phân tích tro bay của các loại thuốc trừ cỏ axit phenoxy clo hóa cũng được trình bày (Bảng 15), tuy nhiên độ thu hồi của phần lớn các hợp chất là rất thấp nên có thể thấy các phân tích dùng quy trình chiết xuất theo phương pháp này sẽ có hiệu quả thấp. Phương pháp này có thể áp dụng cho các hợp chất không bay hơi khác mà có thể chiết bằng dung môi và phân tích bằng HPLC, và có thể ion hóa dưới điều kiện nhiệt phun để xác định khối phổ hoặc có thể được xác định bằng detector UV. Có thể xác định được các hợp chất dưới đây bằng phương pháp này. Tên hợp chất Số CAS a Thuốc nhuộm azo Disperse R ed 1 2872-52-8 Disperse Red 5 3769-57-1 Disperse Red 13 126038-78 6 Disperse Yellow 5 6439-53-8 Disperse Orange 3 730-40-5 D i sperse Orange 30 5261-31-4 Disperse Brown 1 17464-91-4 Disperse Red 3 6 535-42-8 Disperse Re d 23 85-86-9 Thu ố c nhuộm Anthraquinon Disperse Blue 3 2475-46-9 Disperse Blue 14 2475-44-7 Disperse Red 60 17418-58-5 Thuốc nhuộm comarin (hợp chất be nz opyrone) Hợp chất làm sáng vải Hợp chất làm sáng vải 61 8066-05-5 Hợp chất làm sáng vải 236 3333-62-8 Hợp chất Alkaloid Caffein 58-08-2 Strichnin 57-24-9 Hợp chất phospho hữu cơ Methomyl 16752-77-5 Thiofanox 39796-18-4 Famphur 52-85-7 Asulam 3337-71-1 Diclorvos 62-73-7 Dimethoat 60-51-5 Disulfoton 298-04-4 Fensulfothion 115-90-2 Merhos 150-50-5 Methyl parathion 298-00-0 Monocroctophos 919-44-8 Nled 300-76-5 Phorat 298-02-2 Trichlorfon 52-68-6 Tris(2.3-dibromopropyl) phosphat (tris-BP) 126-72-7 Hợp chất axit phenoxy clo hóa Dalapon 75-99-0 Dicamba 1918-00-9 2,4-D 94-75-7 MCPA 94-74-6 MCPP 7085-19-0 Dichforprop 120-36-5 2,4,5-T 93-76-5 Silvex (2,4,5-TP) 93-72-1 Dinoseb 88-85-7 2,4-DB 94-82-6 2,4-D, butoxyethanol ester 1929-73-3 2,4-D, ethylthexyl ester 1928-43-4 2,4,5-T, butyl ester 93-79-8 2,4,5-T, butoxyethanol ester 2545-59-7 Cacbamat Aldicarb 116-06-3 Adicarb sulfone 1646-88-4 Aldicarb sulforxide 1646-87-3 Aminocarb 2032-59-9 Barban 101-27-9 Benomyl 17804-35-2 Bromacil 314-40-9 Bendiocarb 22781-23-3 Carbaryl 63-25-2 Carben d azim * 10605-21-7 3-Hydroxycarbofuran 16655-82-6 Carbo f ur a n * 1563-66-2 Chloroxuron 1982-47-4 Ch l oropropham 101-21-3 Diuron * 330-54-1 Fenuron 101-42-8 Fluometuron 2164-17-2 Linuron* 330-55-2 Methiocarb 2032-65-7 Methomyl * 16752-77-5 Mexacarbate 315-18-4 Monuron 150-68-5 Neburon 555-37-3 Oxamyl * 23135-22-0 Propachlor 19 1 8-16-7 Propham 122-42-9 Propoxur 114-26-1 Siduron 1982-49-6 Tebuthiuron 34014-18-1 CHÚ THÍCH * Số đăng ký hóa chất * Các chất cacbamat n à y được thử trong đánh giá liên phòng th í nghiệm: tất c ả các c h ất khác được thử khi đánh gi á đơn phòng thí nghiệm. 1.2 Phương p há p n à y có thể áp dụng để phân tích các hợp chất không bay hơi ho ặc nửa bay hơi khác. 1.3 Tris-BP đã được ph â n loại là chất g â y ung thư. Vật liệu chuẩn tinh khiết và dung dịch chuẩn gốc ph ả i được xử lý trong tủ hút. 1.4 Tiêu chuẩn n à y đ ược thiết kế để phát hiện các h ợ p chất axit phenoxy c l o hoá (dạng axit tự do) và các este của chúng m à kh ô ng sử dụ ng bước th ủy ph â n v à este ho á trong qu i tr ì nh chiết, tuy nhiên việc thuỷ phân thành dạng axit sẽ định lượng một cách đơn giản. 1.5 Các hợp chất được chọn để ph â n tích bằng HPLC/MS là những h ợ p chất có th à nh ph ầ n rấ t khó phân tich bằng ph ươ ng ph á p sắc ký truyền thống (v í dụ sắc ký kh í ). Độ nhạy của phư ơ ng pháp nà y ph ụ thuộc v à o mức độ cản trở trong nền mẫu và thay đổi theo các nhóm hợp chất v à thậm ch í khác nhau giữa c á c h ợ p chất trong cùng mộ t nhóm. Ngo à i ra , giới hạn phát hiện (LOD) phụ thuộc v à o đi ề u ki ệ n v ậ n hành của máy đo khối phổ. Ví dụ, LOD đ ố i với ca f ein trong chế độ monitoring ph ả n ứng chọn l ọ c: (SRM) l à 45 pg dung dịch chuẩn được b ơ m (bơm 10 m L) , trong khi đối v ớ i Disperse Red 1 th ì LOD l à 180 pg. LOD của ca f ein trong điều kiện quét mạch tứ cực đơn là 84 pg và 600 pg đối với Disperse Red 1 trong điều kiện quét tương tự. 1.6 Giới hạn xác định từ t hực nghiệm (LOD) đối v ớ i các chất c ầ n ph â n tích được tr ì nh bày trong Bảng 3, 10, 13 và 14. Đ ể nh ậ n dạng thêm các hợp chất, có thể dùng MS/MS (CAD- ph â n ly hoạt tí nh xung) làm phương ph á p t ùy chọn của phương pháp này. 1.7 Phương pháp n à y chỉ được sử dụng ho ặ c đư ợ c giám sát b ởi các nhà ph â n tích có kinh nghi ệ m trong vi ệ c sử dụng sắc ký lỏng hiệu nâng cao có dùng detector khối phổ ho ặ c detector UV. Người ph â n tích cũng c ầ n có kỹ năng diễn giải sắc đổ l ỏn g và khối phổ. Mỗi người phân tích phải chứ n g minh được khả năng đ ưa ra các kết qu ả c ó thể chấp nhận được theo phương pháp n à y. 2. Tóm tắt phương pháp 2.1 Phương pháp này tr ì nh b à y phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP/HPLC) v à đi ề u ki ệ n khối phổ (MS) phun nhiệt (TS) v à ho ặ c đi ề u kiện tia cực tí m (UV) để phát hiện các chất c ầ n ph â n tích. Phân tích định lượng được thực hiện bằng TS/MS, sử dụng phương pháp nội chuẩn hoặc ngoại chuẩn. Dịch chiết mẫu được ph â n tích b ằ ng cách bơm trực tiếp vào bề mặt phun nhiệt hoặc lê n trên bề m ặ t nhiệt phun sắc ký lỏng. Chương tr ì nh rửa giải gradien được dùng trong sắc ký để ph â n tách các hợp ch ất . Có thể phát hiện được cả bằng ion ho á ion â m (điện cực phóng điện) và ion hoá ion dương, với khối ph ổ t ừ cực đ ơn. V ì phương pháp n à y dựa trên kỹ thuật HPLC, n ê n sử dụng detector tia cực tím (UV) là t ùy ch ọ n khi ph â n tích mẫu thườn g nhật . 2.2 Trước khi sử dụng phương pháp n à y, phải sử dụng các kỹ thuật chuẩn b ị mẫu phù hợp. 2.2.1 M ẫ u để ph â n tích các hợp chất axit phenoxy clo hoá được chuẩn bị bằng Method 8151 sửa đổi (xem 7 1.2) Nói chung, một lít mẫu nước ho ặ c 50 g mẫu đất được đi ề u ch ỉ nh pH, chiết bằng dietyl ete , làm c ô đặc và đưa v ề d ung m ô i axeton i tril. 2.2.2 M ẫ u để ph â n tích các chất phân tích khác được chuẩn bị bằng kỹ thuật chiết đã có. Nói chung, mẫu nước đ ược chiết ở pH trung tí nh b ằ ng metylen clorua , dùng Method 3500 phù hợp. Method 3500 thích h ợ p sử d ụ ng metylen clorua/axeton (1 : 1) đ ược dùng cho các mẫu rắn. K ỹ thuật vi chiết cũng áp dụng với chiết Tris-BP t ừ các nền m ẫ u lỏng và kh ô ng lỏng. 2.2.3 Đ ố i với cacbamat một lít mẫu nước hoặc 40 gam mẫu chất rắn được chiết bằng metylen clorua (tham khảo Method 3500 thích hợp), c ô đặc (nên sử dụng máy c ô quay có adapter) và đưa v ề d ung m ô i metanol. 2.3 Phương pháp kh ẳ ng định tuỳ ch ọ n khối phổ-nhiệt phun/khối phổ (TS-MS/MS) cũng được quy đị nh. Việc kh ẳ ng đ ị nh có thể thu được bằng sử dụng MS/MS Ph â n tách hoạt ho á va chạm (CAD) hoặc d â y kỵ n ư ớc CAD . 3. Viện dẫn 3.1 Tham khảo Method 3500, 3600, 8000 và 8151. 3.2 V ới m ộ t s ố h ợ p ch ấ t trong phương pháp n à y, sử dụng cột làm sạch dùng cột f lorisil (Method 3620) đã cho kết qu ả độ thu h ồ i nhỏ hơn 85 % , vì vậy không n ê n áp dụng phương pháp này v ớ i tất cả mọi hợp chất. Tham khảo B ả ng 2 của Method 3620 v ề độ thu h ồ i các hợp chất phospho hữu cơ như l à một hàm số của ph ầ n chiết fl orisil . 3.3 C á c hợp chất có ái lực proton cao có th ể che lấp một số chất c ầ n ph â n tích, Do vậy HPLC phải đư ợ c sử dụng như l à một bộ tách s ắ c ký đ ể phân t ích định lượng. 3.4 Những khó kh ă n v ề phân t í ch g ặ p phải với các hợp chất phospho hữu c ơ cụ thể khi áp dụng phương pháp n à y có thể bao g ồ m như sau (nhưng không phải là tất c ả ): 3.4.1 Metyl parathion cho thấy một s ố ph â n hu ỷ nhỏ khi phân tích. 3.4.2 Naled có thể bị khử br ô m h o á tạo th à nh dạng dichlovos. 3.4.3 Merphos thường chứa các chất nhiễm bẩn từ oxit merphos. Quá tr ì nh oxy hoá merphos c ó thể xảy ra trong khi lưu giữ và trong quá tr ì nh đưa v à o máy khối phổ. Tham kh ả o Method 8141 v ề các v ấ n đ ề với các h ợ p chất khác do liên quan đến c á c phương pháp chiết khác nhau . 3.5 Hợp chất axit phenoxy clo hoá, l à axit hữu cơ mạnh, phản ứng ngay với các chất ki ề m v à có thể mất tr o ng khi phân tích. Do vậy, dụng cụ thuỷ tinh v à b ô ng thuỷ tinh phải được rửa b ằ ng axit v à nat ri sunphat phải được axit hoá b ằ ng axit sun f uric trư ớ c khi dùng để tránh hiện tư ợ ng n à y. 3.6 Do tính ph ả n ứng của thuốc trừ cỏ clo, các dung dịch chuẩn phải được chuẩn bị trong axeto ni tril . Quá tr ì nh metyl hoá sẽ xảy ra chậm nếu được chuẩn bị trong metanol. 3.7 Benomyl đ ư ợc biết là chất ph â n huỷ nhanh thành carbendazim trong môi trường (Tài liệu tham kh ả o 21). 3.8 Dung m ô i , thu ố c thử, d ụ ng cụ thuỷ t inh và một s ố dụng cụ chuẩn bị mẫu khác có thể ảnh hưởng làm kết qu ả thu đư ợ c rời rạc hoặc đường n ề n cao, ho ặ c c ả hai, dẫn đến diễn giải nh ầ m sắc đ ồ ho ặ c phổ. Tất c ả c á c vật liệu n à y phải chứng minh được không có chất cản trở trong các đi ề u kiện ph â n tích b ằ ng cách ph â n tích thuốc thử tr ắ ng . Cầ n phải lựa chọn thuốc thử v à độ tinh khiết c ủ a dung m ô i b ằ ng cách chưng cất trong hệ thống b ằ ng thuỷ tinh. 3.9 Các chất c ả n t rở cùng chiết t ừ m ẫ u sẽ thay đ ổi theo các ngu ồ n. Thời gian lưu c ủ a chất ph â n t ích phải được kiểm chứng b ằ ng cách sử dụng các chất chuẩn đối ch ứ ng 3.10 L ự a chọn sử dụng phương pháp HPLC/MS/MS nhằm mục đích trong kh ẳ ng định chất ph â n tích c ụ t hể. Các phư ơ ng pháp n à y ít phụ thuộc vào b ả n chất ho á học hơn là các phương pháp khối phổ khác. 4. Thiết bị và vật liệu 4.1 HPLC/MS 4.1.1 Sắc ký lỏng hiệu n ă ng cao (HPLC): Hệ thống ph â n tích có hệ ph â n phối dung môi được lập chương trình và tất cả các phụ kiện yêu c ầ u bao gồm vòng bơm mẫu (có dung tích v ò ng tối thi ể u 10 m L. c ộ t phân tích, bộ làm sạch kh í . v.v... Hệ th ố ng ph â n ph ố i dung m ô i tối thiểu phải là h ệ thống dung m ôi đôi. Hệ thống sắc ký phải có khả n ă ng hoạt động tr ê n khối phổ (MS). 4.1.1 . 1 Bơm bổ sung sau cột HPLC: Có thể dùng một bơm bổ sung sau cột. B ơ m n à y c ầ n phải là một bơm xylanh và không cần phải có chương tr ì nh d ung m ô i. 4.1.1.2 N ê n dùng các c ộ t HPLC- Cầ n có c ộ t b ả o vệ v à cột phân t í ch. 4.1.1.2.1 Cột bảo v ệ - C 18 cột bảo v ệ pha đ ả o, 10 mm x 2 , 6 mm ID thuỷ tinh, 0,5 m m ho ặ c tương đương. 4.1.1.2.2 Cột ph â n tích - C 18 cột pha nghịch, 100 mm x 2 mm ID. cỡ hạt ODS-hypersil 5 m m; hoặc c ộ t pha đảo C 6 , 100 m m x 2 mm ID, cỡ hạt MOS2-hypersil 3 m m: ho ặ c tương đương 4.1.2 Giao diện HPLC/MS 4.1.2.1 Bộ vi trộn - 10 m L, tương thích với hệ thống c ộ t HPLC có hệ th ố ng bổ sung d ung m ô i sau c ộ t . 4.1.2.2 Mặt phân gi ớ i : B ề m ặ t tiếp xúc ion ho á nhiệt phun và ngu ồ n sẽ cho t í n hiệu tr ả l ờ i chuẩn chấp nh ậ n đư ợ c cho mỗ i chất c ầ n ph â n tích ở n ồ ng đ ộ y ê u c ầ u . Nguồn này phải có khả n ă ng giải phóng ra cả i on dương v à i on â m v à có điện cực ho ặ c dãy phóng đi ệ n . 4.1.3 Hệ th ố ng khối phổ : Là khối phổ tứ c ự c đơn có khả n ă ng quét t ừ 1 amu đến 1000 amu. Máy đo ph ổ n à y cũng phải có khả n ă ng quét t ừ 150 amu đến 450 amu trong 1 , 5 gi â y, ho ặ c ít hơn , sử d ụ ng năng lư ợ ng electron 70 von (danh đị nh) trong các trư ờ ng hợp t ương t ác eletron dương và â m. Ngo à i ra khối phổ phải có khả n ă ng tạo ra phổ khối lượng hiệu chuẩn đ ối với PEG 400, 600 ho ặ c 800 (xem 5.14) ho ặ c các chất khác đư ợ c dùng làm chất hiệu chuẩn . 4.1.3.1 Khối phổ tứ c ự c ba tuỳ chọn có khả n ă ng phát ra phổ i on con khi có kh í va chạm trong t ứ c ực thứ hai và v ậ n h àn h trong ch ế độ tứ cực đơn. 4.1.4 Hệ th ố ng dữ liệu : Hệ th ố ng m á y t í nh cho phép thu nhận liê n tục v à lưu giữ trên thiết bị có thể đọc đượ c tất cả phổ kh ối l ượng thu đư ợ c trong su ố t thời gian của chương tr ì nh s ắ c ký và phải tương thích với máy đo khối phổ. Máy tính phải có ph ầ n mềm cho phép mọi file d ữ liệu MS được t ì m kiếm đối với các ion của từng khối lư ợ ng xác đ ị nh và các i on n à y đư ợ c vẽ đ ồ thị theo thời gian ho ặ c số quét. Lo ạ i đ ồ thị n à y được đị nh nghĩa là đ ường i on chiết xuất hiện tai (EICP). Ph ầ n m ề m cũng phải có khả n ă ng t ổ ng hợp số lư ợ ng i on c ủ a mỗi EICP trong t ừ ng khoảng thời gian ho ặ c s ố lần quét nhất đ ị nh. Phải c ó ph ầ n m ề m máy tính v ậ n hành riêng cho từng thiết bị đo khối phổ. 4.2 HPLC có detector UV : H ệ th ố ng ph â n tích c ó hệ t h ốn g bơm dung m ô i đư ợ c l ậ p tr ì nh cho í t nh ấ t m ộ t h ệ dung môi đ ôi , v à tất c ả các phụ kiện đ ược yêu cầu bao gồm bơm tiêm, vòng bơm 10 m L , c ộ t ph â n tích, b ộ l à m s ạ ch khí. v.v .. . Bơm t ự đ ộ ng là tùy chọn, nhưng phù h ợ p khi ph â n t ích nhi ề u m ẫ u . Cộ t đư ợ c qui định trong 4.1 . 1 . 2 cũng đươc sử dụng cho h ệ thống n à y. 4.2.1 N ế u dete c tor UV đư ợ c dùng trong bộ đ ô i thiết b ị ph â n tích với giao diện nhiệt phun, th ì dete c tor phải có khả n ă ng chịu đư ợ c áp suất cao (tới 6000 psi). Tuy nhiên dete ct or UV có thể gần độc l ậ p với HPLC của HPLC/TS / MS v à t rong trường hợp n à y áp suấ t HPLC tiêu chuẩn có thể đư ợ c chấp nh ậ n . 4.3 Thiết bị l à m tinh khiết thu ố c nhuộm azo chu ẩ n 4.3.1 Thiết bị chiết Soxhlet 4.3.2 Vòn g chiết , độ dày đơn. 43 mm x 123 mm. 4.3.3 Gi ấ y lọc , 9 , 0 cm ( W hatman chất lượng lo ạ i 1 ho ặ c tương đương) 4.3.4 Cột silica -gel 3 in x 8 in nh ồ i silica gel (Loại 60. thuốc thử EM 70/230 m ắt lưới). 4.4 Thiết bị chiết dùng cho hợp chất axit phenoxy clo hoá 4.4.1 B ì nh Erl e nmeyer 500 mL mi ệ ng r ộ ng Pyrex. 500 mL Pyrex, có khớp n ố i thuỷ tinh m à i c ỡ 24/40. 1000 m L Pyrex 4.4.2 Phễu tách 2000 mL 4.4.3 Ống đong có chia v ạ ch 1000 mL 4.4.4 Phễu đư ờ ng kính 75 m m 4.4.5 Máy lắc W rist - Burrell Model 75 ho ặ c tương đ ương. 4.4.6 Máy đo pH. 4.5 Thiết bị cô m ẫ u Kuderna-Danish (K-D) (t ùy chọn). 4.5.1 Ố ng c ô 10 rnL- có chia vạch (Kontes K-570050-1025 hoặ c tương đương). Dùng nút thuỷ tinh m à i để tránh bay h ơ i dịch chiết . 4.5.2 Bình bay hơi 500 mL (Kontes K-570001-500 h oặ c tương đương) . Đi kèm theo b ì nh c ô l à lo xo, k ẹ p ho ặ c tương đương. 4.5.3 Cộ t Snyder hai bi nhỏ (Kontes K-569001-0219 hoặc tương đương) 4.5.4 Lò xo 1/2 in (Kontes K-6 6 2750 hoặc tương đương) CHÚ THÍCH Nên dùng các dụng cụ thủy tinh sau đây để thu hồi dung môi trong quá trình có yêu cầu sử dụng bình cô bay hơi Kuderna Danish. Qui định của địa phương hoặc nhà nước về sử dụng các thiết bị này giúp cho việc quản lý khí thoát ra của các chất hữu cơ dễ bay hơi. EPA khuyến nghị sử dụng các hệ thống tái sử dụng này như là biện pháp thực hiện chương trình giảm thải. Thu hồi dung môi là biện pháp để phù hợp với biện pháp giảm thiểu chất thải và ngăn chặn ô nhiễm bước đầu 4.5.5 Hệ thống thu h ồ i hơi dung m ô i (Kontes K-545000-1006 ho ặ c K-547300-0000, Thu ỷ tinh Ace 6 6 14-30, ho ặ c tư ơ ng đương). 4.6 Pipet huyết thanh dùng một l ầ n 5 mL x 1/10, 5,5 mm ID. 4.7 Ố ng thu gom 15 mL h ì nh nón, có chia vạch (Kimble No. 45465 hoặc tương đương) 4.8 Lọ 5 mL h ì nh nón, bằng thuỷ tinh có nút polytetra f luoroetylen (PTFE)-n út xoáy hoặc nắp trên ấn ch ặ t. 4.9 Bông thuỷ tinh Supelco No. 2-0411 ho ặ c tương đương. 4.10 Bơm tiêm micro 100 m L, 50 m L, 10 m L (Hamilton 701 N hoặc tương đương) v à 50 m L (Blunted, Hamilton 705SNR ho ặ c tương đương). 4.11 Máy bay hơi quay/máy c ô quay có lắp th ê m bình nh ậ n 1000 ml. 4.12 C â n ph â n tích, 0,0001 g, mức tối đa là 0 , 01 g. 4.13 B ì nh định mức, Loại A 10 mL đến 1000 mL. 4.14 Ố ng đong chia vạch 100 mL. 4.15 Phễu tách 250 mL. 4.16 Phễu tách 2 l í t, có nút PTFE. 4.17 Biến áp dùng cho máy c ô (tuỳ chọn - dùng cho q u á tr ì nh chiết cacbamat). 5. Thuốc thử 5.1 Hoá chất cấp độ tinh khiết hoá học c ầ n được sử dụng trong tất c ả phép thử. Ngoại trừ có nh ữ ng chỉ đ ị nh khác, tất c ả thuốc thử phải phù hợp vói các y ê u c ầ u của U ỷ ban thuốc thử ph â n tích thuộc Hiệp hội hoá chất Hoa K ỳ . Các cấp độ khác có thể được sử dụng nếu chắc chắn các thuốc thử có đ ủ độ tinh khiết để cho phép sử dụng m à không làm giảm t í nh ch í nh xác của phép ph â n tích. 5.2 Nước dùng cho thuốc thử không có chất h ữ u cơ. Tất cả những viện d ẫ n tới nước trong phương ph á p này là nước thử kh ô ng có chất hữu , như qui định trong Chương một. 5.3 Natri sunphat (hạt , khan), Na 2 SO 4 . L à m tinh khi ết bằng cách sấy ở 400 o C trong 4 gi ờ trong một khay n ô ng, hoặc bằng cách làm sạch trước natri sunphat với metylen clorua. 5.4 Amo ni axetat, NH 4 OOCCH 3 , dung dịch (0,1 M). Lọc qua màng lọc 0,45 micron (HA Millipore ho ặ c tương đương). 5.5 Axi t axetic, CH 3 CO 2 H. 5.6 Dung d ị ch axit sun f uric. 5.6.1 (1:1. v/v) Rót từ từ 50 mL H 2 S O 4 (sp. Gr. 1,84) vào 50 mL nước. 5.6.2 (1:3, v/v) Rót t ừ từ 25 m L H 2 SO 4 (sp. Gr. 1,84) v à o 75 mL nước. 5.7 Kh í argon, tinh khiết 99 +%. 5.8 Dung m ô i 5.8.1 Metylen clorua. CH 2 CI 2 - loại dùng cho thu ố c bảo vệ thực v ậ t ho ặ c tương đương 5.8.2 Toluen. C 8 H 5 CH 3 - loại d ù ng cho thuốc bảo vệ thực v ậ t hoặc tương đ ương. 5.8.3 Axeton, CH 3 COCH 3 - loại d ù ng cho thuốc b ả o vệ thực v ậ t ho ặ c tương đương. 5.8.4 Die t yl Ete, C 2 H 5 OC 2 H 5 - loại dùng cho thuốc bảo vệ thực vật hoặc tương đương. Phải ch ắ c ch ắ n kh ô ng có peroxit b ằ ng phép thử chiết (Định lượng EM hoặc tương đương). Qui tr ì nh để loại b ỏ peroxit được thực hiện v ớ i phép thử chiết. Sau khi làm sạch, thêm vào mỗi lít ete 20 mL etyl alcohol b ả o qu ả n . 5.8.5 Metanol. CH 3 OH - loại dùng cho HPLC ho ặ c tương đương. 5.8.6 Axeto ni tril, CH 3 CN - loại dùng cho HPLC hoặc tương đương. 5.8.7 Etyl axetat CH 3 CO 2 C 2 H 5 - loại dùng cho thuốc bảo vệ thực vật ho ặ c tương đương. 5.9 V ậ t liệu chuẩn - Vật liệu chuẩn tinh khiết hoặc dung dịch c ủ a từng chất phân tích đ ã được ch ứ ng nhận dùng cho phép ph â n tích. Thuốc nhuộm azo phải được làm tinh khiết trước khi sử dụng theo 5.10. 5.10 Làm sạch thuốc nhuộm azo 5.10.1 Qu á trình n à y g ồ m hai bước: Đ ầ u ti ê n, chiết Soxhlet thuốc nhuộm trong 24 giờ bằng toluen v à sử dụng máy cô quay l à m bay hơi dịch chiết lỏng đến kh ô hoàn toàn. Sau đó, chất rắn làm kết tinh l ạ i từ to l uen v à đư ợ c sấy kh ô trong lò ở khoảng 100 o C . Nếu bư ớ c này không đạ t độ tinh khiết y ê u c ầ u, c ầ n thực hiện sắc ký cột. Cho chất r ắ n vào cột silica gel 3 x 8 in (4.3.4) và rửa giải b ằ ng d ietyl ete. Tách ph ầ n chưa tinh khiết qua sắc ký v à thu lại phần thu ố c nhuộm ch í nh . 5.11 Dung dịch chuẩn gốc: Có thể chuẩn b ị từ v ậ t liệu chuẩn ho ặ c c ó thể mua dung dịch đã đ ượ c ch ứ ng nhận. Dung dịch chuẩn gốc mua ngoài thị trường có thể được sử d ụ ng nếu các dung d ị c h n à y được kiểm định đạt tiêu chuẩn EPA. Nếu các chuẩn EPA không có sẵ n đ ể kiểm chứng th ì có t h ể s ử dụng các dung d ị ch chuẩn đã đ ược nh à sản xuất ki ể m định và kiểm chứng với dung dịch ch uẩ n đư ợ c chuẩn bị từ vật liệu tinh khiết. 5.11 . 1 Chuẩn bị dung dịch ch u ẩn gốc b ằ ng cách c â n ch í nh xác 0 , 0100 g vật liệu tinh khiết. Hoà tan v ậ t liệu này trong metanol hoặc d ung môi phù hợp khác (ví dụ chuẩn bị Tris-BP tr o ng etyl axetat) , v à pha loãng đến thể tích đã biết trong b ì nh định mức. CHÚ THÍC H Vi tính phản ứng của thuốc trừ c ỏ c l orin, các dung dịch chuẩn phải được chuẩn b ị trong axe tonitri l . Sự metyl hoá sẽ x ả y ra nếu chuẩn b ị trong me t ano l . Nếu độ tinh khiết của hợp chất được ch ứ ng nhận đạt 96 % hoặc cao hơn , c ó t hể sử dụng lượng c â n m à không c ầ n hiệu ch ỉ nh để tính toán nồng độ c ủ a dung dịch chuẩn gốc. Có thể sử dụng dung d ịch chuẩn gốc mua ngo à i th ị trường ở bất kỳ nồng độ nào nếu các dung dịch này được nhà sản xuất ho ặ c b ê n thứ ba ch ứ ng nh ậ n. 5.11.2 Chuyển dung dịch chuẩn gốc v à o lọ thuỷ tinh có nút PTFE nút v ặ n ho ặ c n ắ p trên ấn ch ặ t. Bảo qu ả n ở 4 o C v à tránh ánh sáng. Dung dịch chuẩn gốc cần phải kiểm tra thường xuyên các dấu hiệu ph â n hu ỷ ho ặ c bay hơi, đ ặ c biệt trước khi chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn. 5.12 Dung dịch chuẩn hiệu chuẩn - cần được chuẩn bị bằng cách pha loãng dung dịch chuẩn gốc bằng metanol (hoặc dung môi phù hợp khác) với tối thiểu n ă m nồng độ khác nhau tương ứng với từng th ô ng s ố quan tâm. Một trong những nồng độ này cần phải g ắ n với MDL, nhưng nằm trên MDL. Các n ồ ng độ c ò n lại cần phải tương ứng với khoảng n ồ ng độ dự kiến t ì m được trong các mẫu thực hoặc c ầ n phải định ra khoảng hoạt đ ộng của HPLC-UV/VIS hoặc HPLC-TS/MS. Các dung dịch chuẩn phải được thay thế sau một hoặc hai tháng, hoặc sớm hơn nếu thấy hỏng khi so sánh với dung dịch chuẩn kiểm tra. 5.13 Dung dịch chu ẩ n thay thế - Người ph â n tích cần phải giám sát thực hiện quá trình chiết, làm s ạ ch ( khi sử dụng), và h ệ thống ph â n tích v ề hiệu quả của phương ph á p đối với mỗi n ề n mẫu b ằ ng cách th ê m một hoặc 2 chuẩn thay th ế và o từng mẫu, dung dịch chuẩn và dung dịch trắng (v í dụ hợp chất phospho hữu cơ hoăc h ợ p chất axit phenoxy clo hoá không được có trong m ẫ u). 5.14 Dung dịch chuẩn đi ề u chỉnh HPLC/MS - Polyetylen glycol 400 (PEG-400), PEG-600, hoặc PEG- 800 n ê n đư ợ c dù ng làm dung dịch chuẩn đi ề u chỉnh. Tuy nhiên , người ph â n tích có thể sử dụng dung d ị ch chuẩn đi ề u ch ỉ nh khác do nhà s ả n xuất thiết bị hoặc các ngu ồ n đã được l ậ p thành tài liệu khuyến nghị . Pha loãng đến 10 % (v/v) trong metanol nếu dùng dung dịch PEG. Việc sử dụng PEG phụ t huộc vào khoảng khối lượng phân tử chất phân tích: m.w. 500. th ì dùng PEG-400; m.w. > 500, dùng PEG- 600 hoặc PEG-800. 5.15 Dung dịch nội chuẩn: Nếu dùng chuẩn nội chuẩn thì người phân t í ch nên sử dụng hợp chất đồng vị b ề n vững của cùng loại hoá chất nếu các chất này có sẵn (v í dụ 13C6-cacbofuran có thể được dùng l à m dung dịch nội chuẩn trong ph â n tích cacbama t ). 6. Lấy, bảo quản và xử lý mẫu 6.1 Xem nội dung giới thiệu của phần này, chất phân tích hữu cơ, 4.1. 7. Qui trình 7.1 Chu ẩn bị mẫu : M ẫu để phân tích thuốc nhuộm azo phân tán v à hợp chất phospho hữu cơ phải được chuẩn bị b ằ ng Method 3500 thích hợp trước khi ph â n t ích HPLC/MS. Mẫu để ph â n tích Tris(2,3-dibromopropyl) phosphat nước thải phải được chuẩn bị theo 7.1.1 trước khi ph â n tích HPLC/MS. M ẫ u đ ể phân tích hợp chất clo ri n phenoxyaxit v à các este của chúng cần phải được chu ẩ n b ị theo 7.1.2 trước kh i ph â n tích HPLC/MS. 7.1.1 Vi chiết cho Tris-BP 7.1.1.1 M ẫ u rắn 7.1.1.1.1 C â n 1 g m ẫ u cho v à o cốc m ỏ. Nếu mẫu còn ẩm , th ê m m ộ t lư ợ ng tương đương natri sunfat khan v à tr ộ n đ ề u. Th ê m 100 m L Tris-BP ( nồ ng đ ộ khoảng 1000 mg/L) v à o m ẫ u đ ã chọn để th ê m chuẩn . Thêm sao cho n ồ ng độ cu ố i c ù ng phải l à 100 ng/ m L trong 1 mL d ị ch chiết. 7.1.1.1.2 Lấy b ô ng thu ỷ tinh ra khỏi pipet huyết thanh dùng một l ầ n. Chèn 1 cm nút b ô ng thu ỷ tinh đ ã đư ợ c silan h ó a v à o đáy (đ ầ u h ẹ p) c ủ a pipét. Nh ồ i 2 cm natri sunfat khan l ê n tr ê n b ô ng thuỷ tinh Tráng r ử a pip é t v à các th à nh ph ầ n trong pip é t b ằ ng 3 mL đ ế n 5 mL metanol. 7.1.1.1.3 Cho m ẫ u v à o pipet đã được chuẩn bị theo 7.1.1.1 . 2 . Nếu v ậ t liệu đượ c nh ồ i trong pipét n à y b ị khô th ì trước tiên l à m ẩ m b ằ ng vài mL metanol , s au đó cho m ẫ u v à o pipé t . 7.1.1.1.4 Chiết mẫu bằng 3 mL metanol đã chuẩn b ị bằng 4 mL metanol/metylen clorua 50 % (v/v) (rửa cốc mẫu b ằ ng t ừ ng lư ợ ng dung m ô i chiết trước khi th ê m ch ú ng v à o pipet có chứa m ẫ u). Thu l ấ y d ị ch chiết vào ố ng thuỷ tinh chia vạch 15 mL. 7 .1. 1.1.5 Dùng kỹ thuật thổi dòng nit ơ làm bay h ơ i dịch chiết đến 1 mL (7.1.1 . 1 . 6) Ghi lại thể t í ch n à y . Một s ố mẫu bùn có thể không làm bay hơi được đến nồng độ hợp lý. 7.1.1.1.6 Kỹ thu ậ t thổi dòng ni tơ 7.1.1.1.6.1 Đ ặ t ống c ô trong bếp cách thuỷ ấm (khoảng 35 o C) và dùng dòng ni t ơ kh ô, sạch, t hổ i nh ẹ (đ ã l ọ c qua cột than hoạt tính) làm bay hơi thể tích dung môi đến mức yêu c ầ u. CH Ú Ý Kh ô ng dùng ống nhựa t ừ bẫy cacbon đến mẫu. 7.1 . 1.1.6.2 Th à nh trong của ống phải đư ợ c rửa và i l ầ n b ằ ng metyl clorua trong khi t hao tác . Trong qu á tr ì nh bay hơi , mức d ung m ô i trong ố n g phải được định vị đ ể ng ăn ng ừ a n ướ c ng ưng t ụ v à o m ẫ u (V í d ụ mức dung m ô i ph ả i dưới mức nước bếp cách thu ỷ ). Không đư ợ c để d ịch chiết b ị khô trong đi ề u ki ệ n v ậ n hành b ì nh thường . Tiến hành theo 7 . 1 . 1 . 1.7 7.1.1.1.7 Chuyển dịch chiết v à o lọ thuỷ tinh có nút PTFE v à bảo qu ả n trong t ủ lạnh ở 4 o C . Tiến hành phân t ích với HPLC 7.1.1.1.8 Xác đ ị nh ph ầ n tr ă m trọng lư ợ ng kh ô. Trong một v à i trường h ợ p nhất định, kết qu ả c ủ a mẫ u được y ê u c ầ u d ự a theo tr ọ ng lư ợ ng kh ô . Nếu y ê u c ầ u các s ố liệu như vậy th ì m ộ t ph ầ n m ẫ u dùng cho p hé p x á c định n à y c ầ n phải đ ược c â n cùng thời điểm khi cân phần dùng cho phép ph â n tích . Cảnh báo Lò sấy c ầ n phải đặt trong tủ hút hoặc đ ược thông gió. Ph ò ng thí nghiệm có th ể bị nhiễm b ẩ n đáng k ể khi sấy mẫu chất thải nguy hại bị nhiễm b ẩ n nặng. 7.1.1.1.9 Ngay sau khi c â n m ẫ u đ ể chi ế t, cân 5 g đ ến 10 g mẫu cho vào chén nung. Xác đ ị nh ph ầ n tr ă m tr ọ ng lượng kh ô của m ẫ u b ằ ng cách sấy qua đêm ở 105 o C . Để mát trong b ì nh hút ẩ m trước khi c â n: % trọng lượng kh ô = x 100 7.1.1.2 M ẫ u nước 7 . 1.1.2.1 Sử dụng ống đong chia vạch 100 mL, lấy 100 mL mẫu và chuyển mẫu vào ph ễ u tách 250 mL. Thêm 200 m L Tris-BP (nồng độ xấp x ỉ 1000 mg/L) vào m ẫ u đã chọn đ ể thêm chuẩn; lượng th ê m v à o c ầ n phải có nồng độ cuối cùng là 200 ng/ m L trong 1 mL dịch chiết. 7.1.1.2.2 Thêm 10 mL metylen clorua vào phễu tách. Đậy k í n v à l ắ c phễu tách ba lần, m ỗ i l ầ n khoảng 30 gi â y, m ở n ắ p sau mỗi lần lắc để giải phóng áp suất vượt quá. CHÚ THÍCH Me t ylen clorua tạo áp suất cao rất nhanh; do vậy , c ầ n phải thông hơi tr ước ngay sau khi phễu t ách đã được g ắ n k í n và lắc m ộ t l ầ n. Metyl clorua là chất có khả năng gây ung thư, sử dụng các biện pháp phòng ngừa an toàn cần thiết. 7.1.1.2.3 Để lớp hữu cơ tách khỏi pha nước trong t ố i t hiểu 10 phút. Nếu b ề mặt phân tách nh ũ tương giữa các lớp nhiều hơn một phần ba độ dày lớp dung môi, th ì người ph â n t ích phải tiến hành kỹ thuật c ơ h ọ c đ ể cho việc tách pha hoàn toàn. Xem 7.5, Method 3510. 7.1.1.2.4 Thu lấy dịch chiết vào ống thuỷ tinh c ó chia vạch 15 m L. Tiến hành như 7.1.1.1.5. 7.1.2 Chiết hợ p chất cl o rin phenoxyaxit: Chuẩn bị mẫu đất, tr ầ m tích và mẫu chất rắn khác phải theo Method 8151, trừ trường hợp không có sự thu ỷ ph â n hoặc este hoá. (tuy nhiên, nếu người phân tích mong muốn xác định tất c ả phenoxyaxit do axit, có thể thực hiện quá tr ì nh thuỷ phân). Điều 7.1.2.1 đưa ra sơ lược qui trình với các thay đổi c ầ n thiết phù hợp để xác định bằng Method 8321. Điều 7.1.2.2 mô t ả qui tr ì nh chiết đối với các mẫu nước. 7.1.2.1 Chiết các mẫu rắn 7.1 . 2.1 . 1 Cho 50 g mẫu r ắ n/t rầ m tích vào bình Erlenmeyer 500 mL miệng rộng. Th ê m dung dịch đã th ê m chuẩn nếu y ê u c ầ u , l ắ c đ ề u và để yên trong 15 ph út . Thêm 50 mL nước thử không có chất hữu c ơ và khuấy trong 30 phút. Xác định pH của mẫu bằng điện cực thuỷ tinh và pH me t trong khi v ẫ n khuấy. Đi ề u ch ỉ nh pH đến 2 bằng H 2 SO 4 lạnh (1 : 1), vừa khuấy, vừa kiểm tra pH trong 15 phút. Nếu c ầ n, thêm H 2 SO 4 cho đến khi pH đạt 2. 7.1.2.1.2 Th ê m 20 mL axeton vào b ì nh v à lắc đ ề u các thành phần bằng má y khuấy trong 20 phút. Th ê m 80 mL dietyl ete v à o cùng b ì nh và lắc lại trong 20 ph út . Gạn dịch chiết và đo thể tích dung m ô i thu hồi. 7.1.2.1.3 Dùng 20 mL axeton sau khi dùng 80 mL dietyl ete để chiết mẫu thêm hai l ầ n. Sau khi thêm từng dung môi, hỗn hợp cần phải lắc bằng máy l ắ c trong 10 phút và gạn dịch chiết axeton-ete. 7.1.2.1.4 Sau khi chiết l ầ n thứ ba, t hể tích dịch chiết thu được c ầ n phải ít nhất bằng 75 % thể tích dung m ô i th ê m v à o. N ế u kh ô ng thực hiện đư ợ c th ì có t h ể cần phải chiết thêm. Cho dịch chiết v à o ph ễ u t ách 2000 mL có chứa 250 m L nat ri sun f at 5 % đ ã được axit hoá. Nếu có dạng nh ũ tương, thêm từ t ừ 5 g nat ri sun f at đã axi t hoá (khan) cho đến khi hỗn h ợ p dung m ô i-nư ớ c tách ho à n to à n. Nếu c ầ n. lượng na t ri sunfat đ ã được axit hoá được đưa vào tương đương với lư ợ ng mẫu. 7.1.2.1 . 5 Kiểm tra pH của dịch chiết. Nếu pH của dịch chiết £ 2 , th ì th ê m HCI đậm đặc cho đến khi dịch chiết ổn định ở tại pH yêu c ầ u. L ắ c nhẹ các thành ph ầ n trong phễu tách trong khoảng 1 phút v à để cho các lớp tách hoàn toàn. Thu lấy pha nư ớ c vào trong b ì nh m ỏ sạch v à chiết pha (lớp tr ê n cùng) v à o trong bình Erlenmeyer thu ỷ tinh 500 mL. Rót pha nước vào lại ph ễ u tách và chiết l ạ i dùng 25 mL dietyl ete. Để cho các lớp tách hoàn to à n v à lo ạ i bỏ lớp nước . Gộp dịch chiết ete vào b ì nh Erlenmeyer 500 mL ở tr ê n 7.1.2.1 .6 Thêm 45 g đ ế n 50 g natri sun f at khan đ ã được axit hoá v à o hỗn hợp dịch chiết ete . Để d ị ch chiết ti ế p xúc với na t ri sun f at trong khoảng 2 giờ. CHÚ TH Í CH Bước làm khô có t í nh quyết d ị nh. Hơi ẩm còn lại trong ete s ẽ dẫ n đến độ thu h ồ i thấp . L ư ợ ng n atri sunfat được dùng là vừa đủ nếu nh ì n thấy một s ố tinh thể tự do dưới đáy khi khuấy b ì nh. Nếu tất c ả natri sunfat đóng r ắ n th à nh một bánh, thì thêm v à i gam natri sun f a t đã axit hoá và kiểm tra lại bằng cách khu ấ y đ ề u. Th ờ i gian l àm khô 2 gi ờ l à tối thi ể u, tuy nhiên, dịch chiết c ó thể để qua đ ê m t rong khi làm kh ô b ằ ng natri sun f at 7.1.2.1.7 Chuyển dịch chiết ete bằng ph ễ u lọc có nhồi bông thuỷ tinh đã rửa axit vào bình K-D 500 m L có l ắ p ống ngưng 10 mL. Dùng que thuỷ tinh để khuấy hoà natri sun f at trong khi chuyển. R ử a b ì nh Erlenmeyer và cột bằng 20 mL đến 30 mL dietyl ete để chuyển định lượng hoàn toàn. Giảm th ể tích dịch chiết dùng kỹ thuật vi K-D (xem 7.1.2.1.8). 7.1.2.1.8 Thêm một hoặc hai mảnh sỏi sạc h vào b ì nh v à gắn v à o cột Snyder ba bóng. Gắn b ì nh t h uỷ tinh thu h ồ i hơi dung m ô i (thiết bị ngưng và thu h ồ i) (xem 4.5.5) v à o cột Snyder của thiết b ị K-D theo hướng d ẫ n của nh à sản xuất. Làm ướt cột Snyder trước bằng cách th ê m khoảng 1 mL dietyl ete từ đ ỉ nh xuống. Đ ặ t thiết bị trong bếp cách thuỷ nóng (60 o C đến 65 o C ) sao cho một ph ầ n của ống c ô được nhúng trong nước nóng v à toàn bộ mặt dưới bình được tiếp xúc với hơi nước. Đi ề u chỉnh nhiệt độ nước và vị trí c ủ a thiết bị theo chi ề u t hẳng đứng như yêu cầu cho đến khi quá tr ì nh cô hoàn thành trong 15 phút đến 20 phút. Tại tốc độ chưng cất phù hợp, bóng c ủ a cột sẽ phát tiếng, nhưng buồng sẽ không bị ch ả y tràn. Khi thể t í ch chất l ỏ ng đạt 5 mL, lấy thiết bị K-D khỏi bếp cách thu ỷ v à đ ể cho ráo nư ớ c v à đ ể nguội trong ít nhất 10 phút. 7.1.2.1.9 Thay dung môi của dịch chiết bằng axetonitril bằng cách chuyển định lượng dịch chiết dùng axetonitril vào thiết bị phun xu ốn g. Th ê m 5 mL axetonitril . Giảm thể tích dịch chiết theo 7.1.1 . 1 . 6 v à điều chỉnh th ể tích cuối cùng xuống 1 mL. 7.1.2.2. Chuẩn bị mẫu nước 7.1.2.2.1 Dùng b ì nh hình trụ có chia vạch 1000 mL, đong 1 lít mẫu , ghi thể tích mẫu ch í nh xác đ ế n 5 mL và chuyển chúng vào phễu tách. Nếu dự đoán n ồ ng độ cao , c ó thể sử dụng thể tích nhỏ h ơ n v à sau đ ó pha loãng bằng nước kh ô ng có chất hữu cơ đến 1 lít. Đi ề u ch ỉ nh pH đến nhỏ hơn 2 b ằ ng axit s u n f uric (1:1). 7.1.2.2.2 Th ê m 150 mL dietyl ete v à o chai mẫu , đậy kín và lắc trong 30 giây để rửa thành lọ. Chuyển dung môi rửa vào phễu tách và chiết mẫu b ằ ng cách lắc phễu trong 2 ph ú t có th ô ng hơi để giảm áp suất vượt quá. Để yên cho lớp hữu cơ tách khỏi lớp nư ớ c trong khoảng thời gian t ối thiểu 10 phút. Nếu b ề m ặ t phân tách nhũ tương giữa các lớp nhi ề u hơn mộ t phần ba độ dày lớp dung môi , th ì người phân tích phải tiến hành kỹ thuật cơ học để tách pha hoàn toàn. Kỹ thuật tối ưu phụ thuộc v à o mẫu và có thể bao gồm c ả kỹ thu ậ t khuấy, loc nhũ tương qua b ô ng thu ỷ tinh, ly tâm ho ặ c các phương pháp vật lý khác. Th á o pha nước v à o bình thót cổ Erlenmeyer 1000 mL. 7.1.2.2.3 Lặp lạ i q ui tr ì nh chiết thêm hai l ầ n, mỗi l ầ n dùng 100 mL dietyl ete. Gộp tất cả các dịch c hiết v à o b ì nh Erlenmeyer 500 mL. (Rửa b ì nh 1000 mL bằng t ừng lượng dung m ô i chiết để tạo thành dung dịch chuyển đ ị nh lượng). 7.1.2.2.4 Tiến h à nh theo 7.1.2.1.6 (làm khô, cô mẫu K-D, thay đổi dung m ô i v à điều ch ỉ nh thể tích cuối cùng). 7.1.3 Chiết cacbamat: Chuẩn bị m ẫ u đ ấ t, tr ầ m tích v à m ẫ u chấ t rắn khác phải theo Method 3500 phù h ợ p 7.1.3.1 Sử dụng Method 3500 phù h ợ p để chiết 40 g mẫu bằng mety l clorua. 7.1.3.2 Thực hiện các bước c ô đặc bằng cách sử dụng m á y c ô quay hoặc K-D, đến thể tích 5-10 mL. 7.1.3.3 Nên sử dụng bộ chuyển đổi trên máy cô quay để đạt n ồ ng độ cuối cùng và dung m ô i thay đổi đ ến 1 mL thể tích cuối cùng metanol. Nếu bộ chuyển đổi không có sẵn, có thể sử dụng dòng nit ơ thổi nh ẹ tron g tủ hút để đ ạt được n ồ ng đô cu ố i c ù ng n à y. 7.1.4 Chiết cacbamat: Chuẩn bị m ẫ u nước phải theo Method 3500 phù hợp. 7.1.4.1 Dùng Method 3500 phù hợp để chiết một lít mẫu bằng metyl clorua. 7.1.4.2 Cô mẫu và đổi sang metanol giống như áp dụng theo 7.1.3.2 v à 7.1.3.3. 7.2 Trư ớ c khi ph â n tích HPLC, dung m ô i chiết phải được thay bằng metanol ho ặ c a xetonit r il (7.1.2.1.9 ) . Việc thay đổi được thực hiện bằng việc sử dụng qui trình K-D đã nêu trong tất cả các phương pháp chiết. 7.3 Đi ề u kiện sắc ký HPLC 7.3.1 Đi ề u kiện sắc ký ph â n tích các chất đặc thù đ ược tr ì nh b à y trong B ả ng 1. Các đi ề u kiện sắc ký không phải l à ph â n t í ch các chất đ ặ c trưng như sau Tốc đ ộ dò ng 0.4 m L/ min Pha động sau c ộ t : 0,1 M amoni axetat (1% metanol) (0,1 M amoni axe t at đối với hợp ch ất phenoxyaxit) Tốc độ dòng sau cột: 0 , 8 mL/min 7.3.2 Nếu có v ấ n đề s ắ c ký t ừ hợp chất còn giữ lại khi ph â n tích đối với thuốc nhu ộ m azo, hợp chất phospho hữu cơ và tris(2 , 3-dibromopropyl)phosphat , có thể áp dụng dòng ổn định metylen clorua 2 % nếu c ầ n. Dung d ị ch metylen clorua/metanol phải được dùng cẩn thận như là dung dịch rửa giải HPLC . Axit axetic (1 %) , pha động loại kh á c c ó th ể được dùng với h ợ p chất có nhóm chức axit. 7.3.3 Tốc đ ộ dòng tổng s ố 1 , 0 mL/ min đến 1,5 mL/min l à c ầ n thiết để duy tr ì sự io n ho á phun nhiệt. 7 . 3.4 Thời gian lưu đối với hợp chất phospho hữu cơ trên cột phân tích đặc trưng đư ợ c trình bày trong B ả ng 9. 7.4 Các điều kiện v ậ n hành HPLC/Phun nhiệ t/ MS n ê n áp dụng: Trước khi ph â n tích mẫu , ngư ờ i phân tích phải đánh giá độ nhạy tương đ ố i của các hợp chất c ầ n phân tích đối với chế đ ộ i on hoá để tìm ra ch ế độ cho độ nhạy tốt hơn trong quá tr ì nh phân tích. Việc đ á nh gi á này dựa trên cấu trúc c ủ a chất ph â n tích ho ặ c bằng các phân tích đang tiến hành trong từng cặp chế độ ion hoá. Xem thêm 7.5.2.6 v ề vấn đ ề này. 7.4.1 Chế độ ion hoá dương Chất xua đuổi (dây ho ặ c đĩa, tu ỳ chọn): 170 V đến 250 V (độ nh ạ y đã được tối ư u hoá) Xem Hình 2 v ề sơ đ ồ c ủ a nguồn có chất xua đuổi dây. Điện cực phóng: t ắ t Dây b ậ t hoặc tắt (tu ỳ chọn, phụ thuộc chất ph â n tích) Khoảng khối lượng : 150 amu đến 450 amu (phụ thuộc chất phân tích, dự đoán cao h ơ n kh ố i lượng phân tử của hợp chất từ 1 amu đến 18 amu) Thời gian quét: 1 , 50 giây/1 lần quét 7.4.2 Chế độ ion hoá â m Đi ệ n c ự c phóng: bật D â y: tắt Khoảng khối lượng: 135 amu đến 450 amu Thời gian quét: 1,50 gi â y/1 l ầ n quét 7.4.3 Nhiệt độ phun nhiệt Bộ kiểm soát hơi: 110 o C đến 130 o C Đ ầ u phun hơi: 200 o C đến 215 o C . Dòng. 210 o C đến 220 o C . Khối nguồn: 230 o C đến 265 o C (M ộ t s ố hợp chất có thể phân huỷ trong khối ngu ồ n ở nhiệt độ cao, người vận h à n h c ầ n có kiến thức về đặc t í nh hoá học để đánh giá nhiệt độ ngu ồ n phù hợp). 7.4.4 Thể tích m ẫ u bơm: Thường sử dụng thể tích 20 đến 100 m L . Nếu thực hiện bằng tay, vòng bơm phải được bơm đầy tối thiểu là hệ s ố của 2 (ví dụ 20 m l mẫu được dùng để bơm đ ầ y vòng bơm 10 m l). Nếu ch ấ t r ắ n có trong dịch chiết, để các chất r ắ n n à y lắng ho ặ c ly tâm dịch chiết và lấy thể t í ch để bơm từ lớp sạch. 7.5 Hiệu chuẩn 7.5.1 H ệ thống phun nhiệt/MS: Phải l à phần m ề m d ò trên b ố n cực 1 (v à bốn cực 3 đối với quét bốn cực 3 l ầ n) để cho chính xác khối lượng, độ nhạy v à độ ph â n giải. Nên tiến hành dùng polyetylen glycol (PEG) 400, 600 hoặc 800 (xem 5.14) có khối lượng phân tử trung b ì nh tương ứng l à 400, 600 v à 800. Người ph â n tích có thể d ù ng dung dịch chuẩn khác theo khuyến nghị của nhà s ả n xuất thiết b ị hoặc các nguồn t à i liệu khác. Nếu dùn g PEG , hỗn hợp các PEG có thể đư ợ c t ạ o thành sao cho hỗn hợp có khối lư ợng xấp xỉ b ằ ng kh ố i lượng c ầ n có sử d ụ ng trong c á c phân tích . Dùng PEG 400 cho phân tích hợp chất clo ri n phenoxy a xit PEG được đưa v à o qua b ề m ặ t phun nhiệt, phá v ỡ HPLC . 7.5.1.1 Các t h ô ng số hiệu chuẩn k h ố i lượng n hư sau: Đ ố i với PEG 400 và 600 . Đ ố i v ớ i PEG 800 Khoảng khối lượng : 15 amu đến 765 amu Khoảng khối I ượ ng: 15 amu đến 900 amu Thời gian quét: 0 , 5 giây đến 5 , 0 g iây/1 l ầ n quét Thời gian quét: 0,5 giây đến 5,0 gi â y/1 lần quét Với 2 đến 3 lần b ơ m cần phải thực hiện khoản g 100 lần quét. Kết quả quét phù hợp nhất với bảng khối lư ợ ng ch í nh xác (xem Bảng 7 và 8) phải được dùng như là bảng hiệu chuẩn. Nếu sử dụng chất hiệu chuẩn không phải PEG, khoảng khối lượng c ầ n phải cao h ơ n kh ố i lượng cao nhấ t đã dùng đ ể hi ệ u chuẩn t ừ 15 amu đến khoảng 20 amu . Th ờ i gian quét c ầ n được chọn sao cho sẽ có ít nhất 6 l ầ n quét dọc t heo pic hiệu chuẩn . 7.5.1.2 Khoảng khối lượng thấp t ừ 15 am u đến 100 amu bao gồm các ion trong dung d ị ch đ ệ m amonium axetat đ ược dùng trong qu á tr ì nh phun nhiệt: NH 4 + (18 amu), NH 4 +H 2 O (36), CH 3 OH NH 4 + (50) (metanol), hoặc CH 3 CN NH 4 + (59) (axetonitril) v à CH 3 OOH NH 4 + (78) (axit axetic ) . Sự xu ấ t hi ệ n s ố khối ion m / z 50 ho ặ c 59 phụ thu ộ c v à o việc sử d ụ ng me t anol hay axetonitril làm ch ấ t hữu cơ b ổ sung . Khoảng kh ố i lư ợ ng cao hơn sẽ bao g ồ m các ion a m oni gắn vào các etylen glyco l (v í d ụ H ( OCH 2 CH 2 ) n OH nếu n =4, cho ion H(OCH 2 CH 2 ) 4 OH NH 4 ' t ạ i số khối m / z 212). 7.5.2 Sắc ký lỏng 7.5.2.1 Chuẩn b ị dung d ị ch chuẩn như tron g 5.12 7.5.2.2 Lựa chọn các đi ề u ki ệ n ion hoá phù h ợ p như trong 7 4. Bơm từn g dung d ị ch chu ẩ n vào HPLC, s ử d ụ n g các đi ề u ki ệ n sắc ký như trong Bảng 1 . Tham kh ả o đi ề u 7 của Method 8000 v ề hướng d ẫ n lự a ch ọ n nội chuẩn v à ngoại chuẩn v à các tiêu chí hiệu chuẩn cho phép. Hệ s ố tương quan đi ề u ch ỉ nh (r 2 ) ít nhất 0,97 cần đư ợ c sử dụng cho chất ph â n tích clorin phenoxyaxit. Trong ph ầ n lớn trường hợp c á c i on k ép ( M' H)’ v à (M'NH 4 )' l à nh ữ ng ion chiếm đa số. V í dụ , B ả ng 9 liệt kê th ờ i gian l ư u và các ion ch í nh ( > 5%) có trong phổ tứ cực đ ơ n nhiệt phun ion hoá dương của các hợp chất phospho hữu cơ. 7.5.2.2.1 Sử dụng giám sát ion có chọn lọc (SIM) được chấp nh ậ n trong các trường hợp yêu c ầ u giới hạn phát hiện nằm dưới khoảng th ô ng thư ờ ng của phân tích phổ đ ầ y đủ. Tuy nhiên, SIM có thể cho độ tin c ậ y thấp hơn trong nhận dạng hợp ch ấ t trừ khi các đa ion được giám sá t/ monitoring đối với từng hợp ch ấ t. 7.5.2.2.2 Việc sử dụng monitoring ph ả n ứng có chọn lọc (SRM) cũng đ ược ch ấ p nhận khi dùng MS/MS 3/4 v à c ầ n phải nâng cao đ ộ nhạy. 7.5.2.3 Nếu sử dụng HPLC-UV, phải hiệu chuẩn thiết bị bằng cách chuẩn b ị dung d ịch chuẩn theo 5.12 và bơm từng d ung d ị ch chuẩn vào HPLC dùng các đi ề u kiện s ắ c ký như trong Bảng 1. H ợ p nh ấ t tất cả các vùng có sắc ký cao nhất cho từng nồng độ. Định lượng bằng HPLC-UV có thể đư ợ c thực hiện nếu đã biết cản trở mẫu v à /ho ặ c chất phân tích cùng rửa giải kh ô ng có ảnh hưởng. 7.5.2.4 Đối với các phương pháp đã qui định trong 7.5.2.2 và 7.5.2.3, th ời gian lưu pic sắc k ý l à một bi ế n s ố quan trọng trong nhận dạng chất ph â n t í ch. Do vậy , t ỉ số giữa thời gian lưu của mẫu ph â n t ích v ớ i ch ấ t chuẩn cần phải bằng 1,0 đến 0,1. 7.5.2.5 Nồng độ của mẫu ph â n t í ch sẽ được xác định bằng cách dùng đường ch uẩ n theo 7.5.2.2 và 7.5.2.3. C á c đường chuẩn này phải được d ự ng trong cùng ngày với từng mẫu đư ợ c phân tích . Các m ẫ u có n ồ ng độ vượt quá khoảng chuẩn c ầ n phải được pha loãng để nồng độ nằm trong khoảng n à y. 7.5.2.6 Khi sử d ụ ng MS ho ặ c MS/MS , và nếu phù hợp với các chất cần ph â n tích và mục t iê u ph â n tích, việc xác định c ả ion hoá ion dương v à i on â m có th ể được thực hiện tr ê n từng d ịc h chiết m ẫ u. Tuy nhi ê n , một số nhóm hợp chất quan t âm sẽ cho độ nhạy tốt hơn nhiều khi chỉ ion hoá ion dương ho ặ c i on â m, dẫn đến ph â n tích đ ơ n (v í dụ cacbamat nhạy hơn với chế độ ion hoá ion dương và phenoxyaxit th ì nhạy hơn với ch ế đ ộ ion hoá i on âm). Tr ướ c khi ph â n tích mẫu, người ph â n tích c ầ n đ á nh giá đ ộ nhạy tư ơ ng đối của các hợp chất c ầ n ph â n tích v ớ i từng chế độ ion hoá để xác định chế độ nào có thể cho độ nhạy tốt hơn trong ph â n tích. Việc đánh giá này có thể dựa trên cấu trúc chất phân tích ho ặ c bằng t iến hành ph â n tích trong t ừ ng cặp chế độ ion hoá. 7.5.2 . 7 Tham khảo Method 8000 về thông tin tính toán nồng độ mẫu và các th ô ng s ố QC như độ chuẩn và độ chụm. 7.5.2.8 Độ chuẩn cũng có thể đ ược tính t ừ t ỉ số cho t í n hiệu (diện tích) với lượng bơm v à o . Tỉ s ố này được định nghĩa l à hệ số hiệu chuẩn (CF) đối với từ ng nồng độ chuẩn. Nếu độ lệch chuẩn tương đối theo phần trăm (% RSD) của CF nhỏ hơn 20 % của khoảng làm việc, có thể giả định độ tuyến tính qua g ố c toạ độ , và hệ số hiệu chuẩn trung bình có thể được d ùng trong khoảng của đ ường chuẩn. CF v à % SRD có thể được tính nh ư sau: CF = Tổng d iện t í ch của pic/ kh ố i lượng bơm v à o (ng) Trong đó SD là độ lệc h chuẩn các giữa CF l à gi á t rị CF trung b ì nh 7.6 Ph â n tích m ẫ u 7.6.1 Vi ệ c ph â n tích m ẫ u được thực hi ệ n sau khi h ệ thống LC/MS đư ợ c hiệ u chuẩn như các bước trong 7.5. M ẫ u trước tiên nên được phân t ích trong chế đ ộ ion hoá ion âm. Nếu dự đoán mức h ợ p ch ấ t th ấ p th ì mẫu c ầ n phải quét trong ch ế đ ộ i on hoá ion dương. 7.6.1.1 Bơm mẫu t r ắ ng (metanol) c ầ n được ph â n t í c h sau khi ph â n tích dung d ị ch chuẩn, để xác định b ấ t cứ s ự nhiễm b ẩ n n à o còn l ạ i trong hệ th ố ng P hun nhi ệ t/HPLC/MS. 7.6.1.2 Nếu th ự c h iệ n bơm m ẫ u th ủ c ô ng, lấ y ph ầ n m ẫ u phù h ợ p như 7.4.4. Khởi dộng rửa giải gradien HPLC , tả i và bơm ph ầ n m ẫ u v à b ắ t đ ầ u phân tích h ệ thống dữ li ệ u ph ổ kh ố i lư ợ ng . 7.6.1.3 N ế u dùng bơm t ự động, đảm b ả o rằng thiết b ị đ ượ c cài đ ặ t phù hợp với hướng d ẫn của nh à s ả n xu ất v à t ất c ả các mẫu v à dung dịch chuẩn được đưa vào theo thứ tự phù hợp. Kh ở i đ ộ ng bộ bơm m ẫ u t ự đ ộ ng, rửa giải gradien HPLC và h ệ th ố ng dữ li ệ u gh i phổ. 7.7 T í nh toán 7.7.1 Dùng qui tr ì nh hi ệ u chuẩn n ộ i chuẩn h o ặ c ngo ạ i chuẩn (Method 8000). xác đị nh nh ậ n d ạ ng v à định lư ợ ng từng pic thành ph ầ n trong sắc đ ồ ion của mẫu t ương ứng với hợp ch ấ t được dùng cho qui tr ì nh hi ệ u chuẩn. Xem Method 8000 v ề còng thức t í nh t oán. 7.7.2 Thời gian lưu của pic sắc ký l à thông số quan tr ọ ng đối với nhận dạng chất ph â n tích . Tuy nhiên do n ề n m ẫ u có thể thay đổi đi ề u ki ệ n c ộ t s ắ c ký n ê n thời gian lưu kh ô nq có ý nghĩa, và vi ệ c xác nh ậ n phổ khối l ượ ng l à tiêu ch í quan tr ọ ng trong nh ậ n dang chất ph â n t í ch. 7.8 Ph â n t í ch xác nh ậ n phun nhiệt HPLC/MS/MS t ù y ch ọ n 7.8.1 Tương ứn g với phương pháp n à y , MS/MS c ầ n phải đ ược coi là va chạm ion con đ ã đư ợ c ho ạ t t í nh ph â n ly t ừ t ứ cực m ộ t trên một kh ố i lư ợ ng (ion m ẹ ), t ừ c ự c hai áp l ự c v ớ i argon v à với đi ệ n th ế l ớ n hơn b ì nh t hườ ng, t ử c ự c ba quét trên phạm vi kỳ vọng 7.8.2 V ì qui tr ì nh phun n hiệt ch ỉ phóng ra một ho ặ c hai ion trên một h ợ p ch ấ t n ê n sử d ụ ng MS / MS có ch ệ đ ộ v ậ n h à nh c ụ thể hơn th u được thông tin cấu trúc phân tử. Trong chế độ này, quét nhanh mẫu có thể thực hiện thông qua việc bơm trực tiếp mẫu vào phun nhiệt 7.8.3 Đối với th í nghiệm MS/MS, t ứ cực thứ nhất c ầ n phải được đặt đ ể hút các phân tử proton ho ặ c các ammoni của các chất ph â n tích quan tâm. T ứ cực thứ ba c ầ n phải quét từ 30 amu đến kho ả ng tr ê n của các ph â n t ử proton. 7.8.4 Áp suất k h í va c hạ m (Ar) c ầ n được đặt khoảng 1,0 m Torr và n ă ng lư ợ ng va chạm ở 20 eV . Nếu các t h ô ng số này không đủ để t ạo ra đáng kể sự phá vỡ ra từng mảnh, thì c ó thể t ă ng giá trị thông số nà y l ê n tr ê n giá tr ị đã đ ặ t để tạo ra sự va chạm nhiều và mạnh hơn n ữ a. 7.8.5 Đối với các ph é p ph â n tích xác định, pic cơ b ả n của phổ va chạm cần phải được xác định như l à i on đ ị nh lượng. Đ ố i với c á c ph â n tích đ ặ c biệt hơn , nên chọn một ion thứ hai l à m ion định lượng bổ sung. 7.8.6 D ự ng đường hiệu chuẩn nh ư trình bày trong 7.5.2. 7.8.7 Sự nhiễm b ẩ n và cản tr ở MS/MS 7.8.7.1 Nếu ch ế độ MS/MS được dùng không có sự ph â n tách sắc ký (quét nhanh), phương pháp ph â n tích mẫu tr ắ ng phải chứng t ỏ việc chuẩn bị mẫu và qui tr ì nh ph â n tích l à không bị nhiễm bẩn b ở i các chất c ầ n ph â n tích hoặc các hợp chất cản tr ở . Tham khảo đi ề u 8 của Method 8000 v ề hướng dẫn qui trình phương pháp mẫu tr ắ ng được chấp nh ậ n. Nếu sự nhiễm bẩn được phát hiện trong phương pháp mẫu tr ắ ng vượt giới hạn cho phép, th ì c ầ n thiết phải chuẩn bị lại và ph â n tích lại các m ẫ u b ị ả nh hư ở ng 7.8.7.2 Phổ MS/MS của dung dịch chuẩn và mẫu có thể được so sánh và kiểm tra t ỉ s ố của ba i on ch í nh (nồng độ lớn nhất). Các tỉ s ố này cần phải xấp xỉ như nhau trừ khi có cản trở. Nếu xuất hi ệ n c ả n t r ở, sắc ký phải đư ợ c sử d ụ ng. 7.8.7.3 T í n hi ệ u của chất c ầ n ph â n t í ch trong mẫu có thể bị k ì m hãm bởi các chất cản tr ở cùng chiết m à các i on được quan tr ắ c sẽ không cho tín hiệu. Để giám sát sự k ì m hãm t í n hiệu này, có thể th ê m dung dịch nội chuẩn v à o tất cả các dung dịch chuẩn, mẫu trắng và dịch chiết mẫu ở nồng đ ộ ph ù hợp trước khi phân tích . Dung d ịch nội chuẩn có thể là bất kỳ hợp chất n à o có phản ứng tốt trong ch ế đ ộ i on hoá tương ứng và không tì m thấy trong tự nhiên. (Chú thích: d5-atrazin được dùng rất thành c ô ng k h i ph â n tích ion dương, còn d3-2,6-dinitrotoluen lại rất thành công khi phân tích ion â m). Lượng thêm v à o c ầ n phải chọn sao cho t í n hiệu sinh ra ít nhất bằng 100 l ầ n mức nhiễu đối với từng ion. T í n hiệu của dung dich nội chuẩn c ầ n phải được giám sát. Yêu c ầ u phải phân t í ch lại với bất kỳ mẫu nào m à chiều cao pic dung dịch nội chuẩn thay đổi nhiều hơn 30 % so với chi ề u cao trung b ì nh nội chuẩn thu được t rong quá tr ì nh hiệu chuẩn năm đi ể m. Nếu kết qu ả ph â n tích lại khẳng định sự thay đổi n à y t rong t í n hiệu, phải ph â n tích lại mẫu bằng tá ch sắc ký. Có t h ể sử dụng nội chuẩn n à y để định lượng n ồ ng đ ộ chất ph â n tích. Việc định lượng ngoại chuẩn cũng được cho phép. 7.8.8 Với các nồng độ chưa biết, tổng diện tích của (các) ion được t í nh và sử dụng đường chuẩn đưa ra như trong 7.5 để thu được số lượng bơm. 7.8.9 Kỹ thuật MS/MS cũng có thể được dùng để thực hiện phân t í ch cấu trúc trên các ion đ ại diện bởi tỉ s ố m / z không xác đ ị nh được. Qui tr ì nh đ ố i với hợp chất chưa biết c ấ u trúc l à thiết lập một th í nghi ệ m CAD l ê n ion quan t âm. Phổ được h ì nh thành từ t h í nghiệm này biểu th ị cấu trúc của hợp chất qua sự v ỡ ra từng mảnh của nó. Những người có chuyên môn v ề phổ khối lượng và một số thông tin v ề lịch sử của mẫu l à c ầ n thiết khi diễn giải phổ. (thí nghiệm CAD về tiêu chuẩn thực s ự v ề các h ợ p chất d ự đoán là c ầ n thiết để kh ẳ ng định hoặc ph ủ nhận c á c chất này). 7.9 Xác nhậ n CAD dùng dây xua đuổi t ùy chọn. 7.9.1 Xem H ì nh 3 v ề vị trí chính x á c dây xua đuổi dạng vòng trong ngu ồ n phun nhiệt. 7 . 9.2 Khi d â y xua đuổi dạng v ò ng được lắp v à o dòng phun nhiệt, điện thế có thể t ă ng tới xấp x ỉ 500 V đến 700 V. C ầ n phải có điện thế đủ lớn để tạo ra c á c ph â n đo ạ n ion nhưng cũng kh ô ng được quá lớn làm rút ng ắ n quá tr ì nh 7.9.3 Ti ế p tục t heo các bước trong 7.6. 8. Kiểm soát chất lượng 8.1 Tham khảo Chương một và Method 8000 v ề qui trình kiểm soát chất lượng cụ thể (QC). Mỗi ph ò ng thí nghiệm c ầ n phải duy tr ì chương tr ì nh đ ả m b ả o chất lượng ch í nh thức. Phòng th í nghi ệ m c ũ ng c ầ n lưu giữ các kết qu ả để l ậ p thành tài li ệ u ch ấ t lượng các dữ liệu. 8.2 Qui tr ì nh kiểm suất chất lượng c ầ n cho đánh giá vận hành hệ thống HPLC được tr ì nh b à y trong Method 8000 ph ầ n 7 và bao g ồ m cả đánh giá thời gian lưu , kiểm định hiệu chuẩn và ph â n tích s ắ c ký của mẫu. Kiểm tra qui tr ì nh thực hiện của t oàn bộ hệ thống phân tích h ằ ng ngày sử dụng dữ liệu thu đư ợ c từ c á c ph â n tích trắng, chuẩn và mẫu nhắc lại. 8.2.1 Xem 7.5.2.8 v ề các thông s ố HPLC/MS đối với đư ờ ng chuẩn giới hạn RSD%. 8.2.2 Xem 7.5.2.4 về giới hạn QC th ờ i gian lưu 8.2.3 Nếu không đ á p ứng đ ược bất k ỳ gi ớ i hạn QC sắc ký nào, người phân tích c ầ n phải kiểm tra h ệ thống LC đối với: - R ò rỉ - Ph â n phối á p suất phù hợp, - Cột bảo vệ b ị bẩn, có thể cần thay th ế hoặc nh ồ i lại, và - S ự bít phun nhiệt từng ph ầ n có thể xảy ra. Nếu mộ t trong các trường hợp kể trên xảy ra cần phải ngừng hệ thống HPLC/TS , sửa chữa v à ho ặ c thay thế, và sau đó b ắ t đ ầ u lại ph â n tích . Dung d ị ch chuẩn hi ệ u chuẩn c ầ n phải được phân t í ch lạ i trước kh i phân tích mẫu , như m ô t ả tron g 7.5. 8.2.4 Kinh nghi ệ m của người phân tích th ự c hiện s ắ c kỷ l ỏ ng l à v ô cùng quý gi á cho s ự th à nh c ô ng của phương ph á p n à y c ầ n phải đánh gi á hi ệ u chuẩn h ằ ng ng à y để xác đ ị nh h ệ thốn g s ắ c ký đ ượ c v ậ n h à nh ph ù hợ p cho m ỗ i ng à y th ự c hiệ n p hâ n t í ch . Nếu hệ thống có b ấ t kỳ thay đổi n à o ( ví d ụ thay đ ổ i cột), th ì hệ th ố ng phải được hiệu chuẩn lại . 8.3 Ch ứ ng minh ban đ ầ u v ề tính hi ệ u quả . Mỗi phòng t h í nghiệm phải chứng t ỏ hi ệ u qu ả ban đ ầ u với từng việc chuẩn b ị mẫu v à phương pháp kết hợp xác định để d ữ liệu thu được từ các ch ấ t c ầ n ph â n tí ch trong m ộ t n ề n m ẫu sạch có đ ộ chuẩn v à đ ộ c hụ m cho phép . Phòng thí nghi ệ m cũng ph ả i l ặ p lại các thao tác tương tự khi có các nhân viên mới được đào tạo hoặc có những thay đổi đáng kể trong các thiết bụ đo. Xem Phương pháp 8000 phần 8.0 về thông tin hướng dẫn việc chứng minh. 8.4 Ki ể m soát chất lượng mẫu đ ể chuẩn b ị và phân tích: phòng th í nghiệm cũng ph ả i có th ủ tục đ ể l ậ p thành t à i liệu các ảnh hư ở ng của n ề n m ẫ u l ê n phư ơ ng pháp thực hiện (độ ch ụ m, độ ch í nh xác v à giới h ạ n phát hiện) . Tố i thiểu ph ả i bao g ồ m phân tích QC các m ẫ u kể cả m ẫ u trắ ng, m ẫ u đ ã th ê m chuẩn, mẫu đ ú p và mẫu k iểm soát ph ò ng thí nghiệm (LCS) trong t ừng mẻ ph â n tích v à thêm chuẩn thay th ế v à o từng mẫu hi ệ n trường v à mẫu QC. 8.4.1 Th à nh l ậ p t ài liệu v ề các ả n h hư ở ng của nền mẫu c ầ n phải bao g ồm í t nhất các ph â n tí ch: m ộ t mẫu đ ã th ê m chuẩn v à m ộ t m ẫ u kép chưa t h ê m chuẩn hoặc một mẫu n ê n thêm chuẩn / m ẫ u k é p th ê m chuẩn. Quyết định chuẩn bị và ph â n tích m ẫ u kép hay mẫu đã thêm chuẩn/ m ẫ u kép đã th ê m chuẩn phải đư ợ c dựa tr ê n những th ô ng ti n v ề mẫu trong l oạt mẫu. Nếu mẫu được dự đoán có ch ứ a các ch ấ t cần ph â n tích, th ì ph ò ng t hí nghiệm có thể dùng m ộ t m ẫ u n ề n th ê m chuẩn v à ph â n tí ch m ẫ u ké p của một mẫu hiện tr ườ ng chưa thêm chuẩn. Nếu mẫu dự đoán kh ô ng chứa chất cần phân tích t h ì phòng th í nghi ệ m c ầ n phải sử d ụ ng một m ẫ u n ền t hê m chu ẩ n v à c ặ p m ẫ u k é p th ê m chu ẩ n . 8.4.2 M ẫ u k iểm soát ph ò ng th í nghiệm (LCS) c ầ n phải có trong t ừ ng lo ạ t phân tích LCS có ch ứ a ph ầ n mẫu th ử c ủ a n ề n m ẫ u s ạ ch (đối chứng) tương tự với n ề n m ẫ u v à có c ù ng trọng lư ợ ng v à th ể tích LCS đư ợ c thêm chuẩn với cùng chất ph â n tích tại c ù ng n ồ ng độ với nền thêm chuẩn . Nếu k ế t qu ả của n ề n mẫu t h êm chu ẩ n cho thấy có thể có vấn đề ch í nh tại n ề n mẫu th ê m chuẩn th ì k ế t qu ả LCS được d ù ng để kiểm đ ị nh phòng th í nghi ệ m c ó thể th ự c hi ệ n ph â n t í c h t r ong m ộ t n ề n m ẫu s ạ ch 8.4.3 Xem Method 8000. đi ề u 8 v ề chi tiết t iến hành th ủ t ụ c kiểm so á t ch ấ t lư ợ ng mẫu trong chu ẩ n b ị v à ph â n t í ch 8.5 Đ ộ thu h ồ i chất thay t hế : Phòng th í nghiệ m phải đ á nh giá dữ liệu đ ộ thu h ồ i ch ấ t thay t h ế từ t ừ ng m ẫu so với giới hạn kiểm soát chất thay thế được xây dựng bởi phòng thí nghiệm. Xem Method 8000, điều 8 để có thông tin đánh giá dữ liệu thay thế và xây dựng, cập nhật các giới hạn thay thế. Phòng thí nghiệm nên có các bước thực hiện đảm bảo chất lượng bổ sung đôi khi sử dụng phương pháp này. Các bước thực hành cụ thể phụ thuộc vào nhu cầu của phòng thí nghiệm và bản chất của mẫu. Nếu cần, phòng thí nghiệm cần phải phân tích vật liệu chuẩn tham khảo và tham gia vào các nghiên cứu đánh giá đặc tính tương ứng. 9. Phương pháp tiến hành 9.1 C á c nghi ê n cứu độ ch í nh xác và độ chụm của người thao tác đã được tiến hành với m ẫ u tr ầ m tích thêm chu ẩ n, mẫu nước thải, mẫu bùn và mẫu nước . Kết quả được tr ì nh bày ở Bảng 4 , 5, 6, 11, 12 , 15, 20 và 21. B ả ng 4, 5 và 6 đưa ra các dữ liệu của phòng thí nghiệm cho Red disperse 1, B ả ng 11 đưa ra dữ li ệ u cho hoá chất b ả o vệ thực vật phospho hữu cơ, Bảng 12 cho Clo tris-BP, Bảng 15 cho thuốc trừ cỏ axit clorophenoxy và Bảng 20, 21 cho cacbamat. 9.2 LOD c ầ n ph ả i tính đối với các chất phân tích đã biết, trên từng thiết bị được sử dụng. B ả ng 3, 10 v à 13 li ệ t k ê gi ớ i hạn phát hiện (LOD) và/hoặc gi ớ i hạn đ ị nh lượng ước lượng (EQL) điển hình với phương pháp n à y. 9.2.1 LOD tr ì nh bày trong phương pháp này đ ược tính dựa trên phân tích lặp lại 3 lần với bốn n ồ ng độ chu ẩ n với nồng độ thấp nhất n ằ m gần giới hạn phá t hiện của thiết bị. Phép h ồ i qui tuyến t í nh được thực hiện trê n dữ li ệ u t ính toán độ dốc v à điểm c ắ t. Ba lần độ lệch chuẩn (3 s ) của lư ợ ng chuẩn thấp nhất theo đ ộ dốc và điểm cắ t t í nh t oá n được sử dụng để t ì m LOD. LOD không được tí nh toán theo các chi tiết trong Chương m ộ t, nhưng theo hướng d ẫ n ACS qui định trong Tài liệu tham khảo 4. 9.2.2 Bảng 17 trình b à y so sánh c á c LOD theo Method 8151 và Method 8321 đối với hợp chất axit p h enox y clo hoá 9.3 Bảng 16 tr ì nh bày s ố liệu độ chuẩn và độ chụm của phép thử liên ph ò ng thí nghiêm đối với thuốc t rừ c ỏ axi t clorophenoxy. Dữ liệu tổng h ợ p n à y được dựa trên s ố liệu từ ba phòng th í nghiệm ph â n t ích dung d ị ch dung m ô i lặp lại hai lần tại từng nồng độ được quy định trong b ả ng. 9.4 B ả ng 22 v à 23 tr ì nh bày số liệu độ chuẩn v à độ chụm của phép thử liên phòng thí nghiệm đ ố i với cacbamat. Dữ liệu tổng h ợ p này được dựa trên s ố liệu từ ch í n phòng thí nghiệm đã phân tích các dung d ị ch dung m ô i lặp lại ba l ầ n tại từng n ồ ng đ ộ được quy định trong các bảng. B ả ng 1 – Đi ề u kiện s ắ c ký HPLC nên dùng Pha động ban đầu (%) Thời gian ban đ ầ u (min) Gradien cuối cùng (tuyến tính) (min) Pha động cu ối cùng (%) Thời gian (min ) Chất ph â n t í ch : ỉ H ợ p chất phospho hữu c ơ 50/50 (nước/metanol) 0 10 100 (metanol) 5 Thuốc nhuộm azo (v í dụ Red disperse 1) 50/50 (nước/CH 3 CN) 0 5 100 (CH 3 CN) 5 Tris(2.3- dibromopropyl) phosphat 50/50 ( nước/metanol) 0 10 100 (me t anol) 5 H ợ p ch ất clorin phenoxyaxit 75/25 (A/metanol) 2 15 40/60 (A / metanol) 5 40/60 (A/metanol) 3 5 75/25 (A / metanol) 10 Trong đó A = 0 , 1 M amoniu m axetat (1 % axit axetic) Cacbamat L ụ a ch ọ n A Thời gian (min) Pha động A ( ph ầ n tr ă m) Pha động B ( ph ầ n tr ă m) 0 95 5 30 20 80 35 0 100 40 95 5 45 95 5 Trong đ ó A = 5 m M amo ni um axetat với 0 , 1 M axit axetic, v à B = metanol Có cột tu ỳ chọn th ê m 0 , 5 M amonium axeta t Lựa chọn B: Th ờ i gian (min) Pha động A (ph ầ n tr ă m) Pha đ ộng B (ph ầ n tr ă m) 0 95 5 30 0 100 35 0 100 40 95 5 45 95 5 Trong đó A = nước có 0 , 1 M amonium axetat với 1 % axit axetic. B = metan o l có 0,1 M amonium axetat v ớ i 1 % axit axetic . Có cột tuỳ chọn thêm 0,1 M amonium axeta t . Bảng 2 - Các hợp chất thay đổi phổ khối lượng nhiệt phun Thuốc nhuộm Disperse Azo Alkaloit Thuốc nhuộm Metyl Ure thơm Aromatic ureas T h uốc nhuộm Arylmetan Amid Thuốc nhuộm Coumarin Amin Thuốc nhuộm Anthraquinon Amino axit Thuốc nhuộm Xanten Hợp chất phospho hữu cơ F la m e retardants Hợp chất axit phenoxy clo hoá Carbamat Bảng 3 - Giới hạn ph á t hiện v à độ nhạy phư ơ ng pháp của Red disperse 1 và caffein Hợp chất Chế độ LOD pg EQL (7s) pg EQL (10s) pg Red disperse 1 SRM 180 420 600 Quad đơn 600 1400 2000 CAD 2000 4700 6700 Caffein SRM 45 115 150 Quad đơn 84 200 280 CAD 240 560 800 EQL: giới hạn đ ị nh lượng ước lượng. B ả ng 4 - So sánh độ chuẩn và độ chụm của MS và MS/MS với HPLC/UV trong nước th ử không có chất hữu cơ với Red disperse 1 Mẫu Ph ầ n trăm thu hồi HLP/UV MS CAD SRM Th ê m chuẩn 1 82,2 ± 0,2 92,5 ± 3,7 87,6 ± 4,6 95,5 ± 17 , 1 Thêm chuẩn 2 87 , 4 ± 0,6 90,2 ± 4,7 90.4 ± 9,9 90 , 0 ± 5.9 RPD 6 , 1 % 2,5 % 3 , 2 % 5 , 9 % D ữ liệu trong tài liệu tham khảo 16. B ả ng 5 - So sánh độ chuẩn và độ chụm của MS và MS/MS với HPLC/UV trong nước th ả i đô thị v ớ i Red disperse 1 M ẫ u Phần trăm thu hồi HLP/UV MS CAD Thêm chuẩn 1 93 , 4 ± 0,3 102 , 0 ± 31 82 , 7 ± 13 Th ê m chuẩn 2 96 , 2 ± 0,1 79,7 ± 5 83 , 7 ± 5,2 RPD 3,0 % 25% 1 , 2% Số liệu trong t à i li ệ u tham khảo 16. Bảng 6 - Kết qu ả phân t í ch b ù n hoạt ho á trong xử lý nước th ả i Thu h ồ i Red disperse 1 (mg/L) M ẫ u HLP/UV MS CAD 5 mg/L th ê m chuẩn Nồng đ ộ 1 0,721 ± 0,003 0,664 ± 0 , 030 0 , 796 ± 0,008 1-D 0 , 731 ± 0,021 0 , 600 ± 0 , 068 0 , 768 ± 0 , 093 2 0 , 279 ± 0,000 0 , 253 ± 0 , 052 0 , 301 ± 0,042 3 0 , 462 ± 0 , 001 0,449 ± 0,016 0 , 510 ± 0.091 RPD 1 , 3% 10 , 1% 3 , 6 % 0 mg / L th ê m chuẩn N ồ ng độ 1 0 , 000 0 , 005 ± 0 , 0007 0 , 001 1 - D 0 , 000 0,006 ± 0 , 001 0 , 001 2 0,000 0,002 ± 0,0003 0 , 001 3 0,000 0 , 003 ± 0,0004 0 , 00 1 RPD - 18,2 % - S ố li ệ u trong t à i li ệ u t ham khảo 16 B ả ng 7 - Khối lượng hiệu chuẩn và % mật độ tương đối của PEG 400 Khối lượng % mật độ tương đối a 18 , 0 32 , 3 35 , 06 13,5 36 , 04 40 , 5 50,06 94 , 6 77,04 27 , 0 168 , 12 5 , 4 212,14 10 , 3 256,17 17 , 6 300,20 27,0 344 , 22 45 , 9 38 8, 25 64,9 432,28 100 476,30 94,6 520,33 81,1 564,35 67,6 608,38 32 , 4 652,41 16,2 653,41 4,1 696 , 43 8,1 697 , 44 2 , 7 a cư ờ ng đ ộ đư ợ c chuẩn v ề khối l ư ợ n g 432. Bảng 8 - Khối lượng hiệu chuẩn v à % mật đ ộ tương đ ối của PEG 600 Sự phân bố cực đạ i % tương đối 18,0 4,7 36,04 11 , 4 50 , 06 64,9 77,04 17,5 168,12 9 , 3 212,14 43,9 256,17 56 , 1 300,20 22,8 344,22 28 , 1 388,25 38,6 432 , 28 54 , 4 476 , 30 64,9 520 , 33 86,0 564 , 35 100 608,38 63,2 652 , 41 17,5 653,41 5,6 696,43 1 , 8 a cường độ được chuẩn v ề khối lượng 564 Bảng 9 - Thời gian duy tr ì v à khối ph ổ nhiệt phun của các hợp chất phospho hữu cơ Hợp chất Th ờ i gian lưu (min) Kh ố i phổ (% Sự phân b ố tương đ ố i) a Monocrotophos 1:09 241 (100), 224 (14) Trichlor f on 1:22 274(100) , 257(19) , 238(19) Dimethoate 1:28 230 (100), 247 (20) Dichlorvos 4:40 238 (100) , 221 (40) Naled 9:16 398 (100) , 381 (23) , 238 (5) , 221 (2) Fensulfothion 9:52 326(10) , 309(100) Methyl para t hion 10:52 281 (100) , 264 (8) , 251 (21) , 234 (48) Phorate 13:30 278(4), 261 (100) Disulfoton 13:55 292(10), 275(100) Merphos 18:51 315(100), 299(15) a V ớ i các ph â n tử chứa Cl, Br và S ch ỉ thống k ê các pic cơ bản của nh ô m đ ồ ng vị. S ố liệu trong tài liệu t ham khảo 17. B ả ng 10 - Độ chuẩn v à gi ớ i hạn phát hiện các hợp chất phosphor hữu cơ chu ẩ n Hợp chất lon N ồ ng độ chất lượng chu ẩ n (mg/L) % RSD MDL (ng) Dichlorvos 238 2 , 0 16 , 0 4 12 , 5 13 , 0 25 , 0 5 , 7 50 , 0 4 , 2 Dimethoat 230 2,0 2 , 2 2 12,5 4 , 2 25 , 0 13 , 0 50 , 0 7 , 3 Phorat 261 2 , 0 0 , 84 2 12 , 5 14 , 0 25 , 0 7 , 1 50,0 4 , 0 D i sul f oton 275 2 , 0 2 , 2 1 12 , 5 14 , 0 25 , 0 6,7 50 , 0 3 , 0 Fensufothion 309 2,0 4 , 1 0 , 4 12 , 5 9 , 2 25 , 0 9 , 8 50 , 0 2 , 5 Naled 398 2 9 , 5 0 , 2 12 , 5 9 , 6 25 ,0 5 , 2 50 ,0 6 , 3 Merphos 299 2 5 , 5 1 12 , 5 17 25 3 , 9 50 5 , 3 Methyl Parathion 281 2 - 30 12 , 5 7 , 1 25 4 , 8 50 1 , 5 Số liệu trong tài liệu tham khảo 17. B ả ng 11 - Độ ch í nh xác và độ chu ẩ n của nước uống n ồ ng độ th ấ p (A), đất n ồ ng độ thấp (B), nư ớ c uống n ồ ng độ trung b ì nh (C), tr ầ m t í ch n ồ ng độ trung b ì nh (C) Hợp ch ấ t Độ thu hồi trung b ì nh ( %) Độ lệch chuẩn Khối lượng Khoảng thu h ồ i (%) S ố mẫu ph â n t í ch A m g /I Dimethoat 70 7 , 7 5 85-54 15 Dichlorvos 40 12 5 64-14 15 Naled 0 , 5 1 , 0 5 2-0 15 Fensulfothion 112 3 , 3 5 119-106 15 Methyl parathi on 50 28 10 105-0 15 Phora t 16 35 5 86-0 15 Disulfoton 3,5 8 5 19-0 15 Merphos 237 25 5 287-187 15 B m g/g Dimethoat 16 4 50 24-7 15 Dich f orvos Không phá t hi ệ n đư ợ c 50 15 Naled Không phá t hi ệ n đư ợ c 50 15 F ensulfo t hion 45 5 50 56-34 15 Methyl parathion Không phát hiện được 100 15 Phorat 78 15 50 109-48 15 Disu lf oton 36 7 50 49-22 15 Merphos 118 19 50 155-81 15 C m g/ l Dimethoat 52 4 50 61-43 12 Dichlorvos 146 29 50 204-89 12 Naled 4 3 50 9-0 12 Fens u l f othion 65 7 50 79-51 12 Methyl parathion 85 24 100 133-37 12 Phorat 10 15 50 41-0 12 Disulfoton 2 1 50 4-0 12 Merphos 101 13 50 126-75 12 D mg/kg Dimethoa t 74 8 , 5 2 91-57 15 Dichlorvos 16 6 25 2 216-115 15 Na l ed Không phát hiện được 2 15 Fensulfothion 72 8, 6 2 90-55 15 Methyl parathion 84 9 3 102-66 15 Phorat 58 6 2 70-46 15 Disul f oton 56 5 2 66-47 15 Merph os 78 4 2 86-70 12 Số liệu trong tài liệu tham khảo 17 Bảng 12 - Đ ộ chính xác và độ chuẩn của nước th ả i đô thị (A), nước uống (B), bùn thải hoá chất (C) Hợp ch ấ t Độ thu h ồ i trung b ì nh (%) Độ lệch chuẩn Lượng thêm chu ẩ n (ng/ m L) Khoảng % thu h ồ i Số mẫu ph â n tích Tris-BP (A) 25 8 , 0 2 41-9 , 0 15 (B) 40 5 , 0 2 50-30 12 (C) 63 11 100 84-42 8 Số liệu trong tài liệu tham khảo 18. B ả ng 13 - Vận hành đơn EQL cho TRIS-BP N ồ ng đ ộ (ng/ m L) Diện tích trung b ì nh Độ lệch chuẩn 3 * đ ộ l ệ ch chu ẩ n 7* đ ộ l ệ ch chu ẩ n 10 * đ ộ lệch chu ẩ n 50 2675 782 2347 5476 7823 100 5091 558 150 7674 2090 200 8379 2030 LOD (ng/ m L) EQL dưới (ng/ m L) EQL tr ê n (ng/ m L) 33 113 172 EQL: Giới hạn định lượng ước lượng Số liệu trong tài liệu tham khảo 18. B ả ng 14 - Giới hạn phát hiện trong ch ế đ ộ ion â m v à ion dương đối với thuốc trừ cỏ clorin phenoxyaxit v à bốn este Chế độ ion dương Định lượng LOD Chế độ ion âm Định lượng LOD Hợp chất Ion (ng) Ion (ng) Dalapon Không phát hi ệ n đư ợ c 141 (M - H) - 11 Dicamba 238 (M + NH 4 ) + 13 184 (M - H Cl ) - 3 , 0 2 , 4-D 238 (M + NH 4 ) + 2,9 184 (M - H Cl ) - 50 MCPA 218 (M + NH 4 ) + 120 199 (M - 1) - 28 Diclorprop 252 (M + NH 4 ) + 2,7 235 (M - 1) - 25 MCPP 232 (M + NH 4 ) + 5 , 0 213 (M - 1) - 12 2,4,5-T 272 (M + NH 4 ) + 170 218 (M - HCl ) - 6 , 5 2 , 4 , 5-TP (Silvex) 286 (M + NH 4 ) + 160 269 (M - 1) - 43 Dinoseb 228 (M + NH 4 - NO) + 24 240 (M) - 19 2 , 4-DB 266 (M + NH 4 ) + 3 , 4 247 (M - 1) - 110 2,4-D.Butoxy etanol este 321 (M + H ) + 1,4 185 ( M - C 6 H 13 O 1 ) - 2,4,5-T.Butoxy etanol este 372 (M + NH 4 ) + 0,6 195 ( M - C 6 H 15 O 3 ) - 2,4 , 5-T.Butyl es t e 328 (M + NH 4 ) + 8 , 6 195 ( M - C 6 H 11 O 2 ) - 2,4-D. etyl- hexyl este 350 (M + NH 4 ) + 1 , 2 161 (( M - C 10 H 19 O 3 ) - Số liệu trong Tài liệu tham khảo 19. B ả ng 15 - Độ ch í nh xác v à độ chu ẩ n của phép thử đơn phòng th í nghiệm của các thu ố c trừ cỏ axit phenolxy clo hoá Hợp chất Đ ộ thu h ồ i trung b ì nh a (%) Độ lệch chu ẩ n Lượng th ê m chu ẩ n Khoảng thu h ồ i (%) S ố mẫu ph â n t í ch Nước uống mức thấp m g /L Dicamba 63 22 5 86-33 9 2 , 4-D 26 13 5 37-0 9 MCPA 60 23 5 92-37 9 MCPP 78 21 5 116-54 9 Dichl o rpr o p 43 18 5 61-0 9 2,4,5-T 72 31 5 138-43 9 Silvex 62 14 5 88-46 9 2 , 4-DB 29 24 5 62-0 9 Dinoseb 73 11 5 85-49 9 Da l apon ND ND 5 ND 9 2,4-D, ester 73 17 5 104-48 9 Nước uống mức cao m g/L I Dicamba 54 30 50 103-26 9 2 , 4-D 60 35 50 119-35 9 MCPA 67 41 50 128-32 9 MCPP 66 33 50 122-35 9 Dichlorprop 66 33 50 116-27 9 2,4,5 - T 61 23 50 99-44 9 Silvex 74 35 50 132-45 9 2 , 4-DB 83 25 50 120-52 9 Dinoseb 91 10 50 102-76 9 Dalapon 43 9 ,6 50 56-31 9 2 , 4-D. ester 97 19 50 130-76 9 Cát mức th ấ p m g/g Dicamba 117 26 0 , 1 147-82 10 2 , 4-D 147 23 0 ,1 180-118 10 MCPA 167 79 0 , 1 280-78 10 MCPP 142 39 0 ,1 192-81 10 Dichlorprop ND ND 0 ,1 ND 10 2 , 4 , 5-T 134 27 0 ,1 171-99 10 Silvex 121 23 0 ,1 154-85 10 2 , 4-DB 199 86 0 ,1 245-0 10 D in oseb 76 74 0 ,1 210-6 10 Dalapon ND ND 0 ,1 ND 10 2 , 4-D . ester 180 58 0 ,1 239-59 7 Cát mức cao m g/L Dicamba 153 33 1 209-119 9 2,4-D 218 27 1 276-187 9 MCPA 143 30 1 205-111 9 MCPP 158 34 1 226-115 9 Dichlorpr o p 92 37 1 161-51 9 2 , 4,5-T 160 29 1 204-131 9 Silvex 176 34 1 225-141 9 2 , 4-D B 145 22 1 192-110 9 Dinoseb 114 28 1 140-65 9 Dalapon 287 86 1 418-166 9 2,4-D. ester 20 3 , 6 1 25-17 7 Tro của đ ô th ị mức thấp m g/g Dicamba 83 22 0,1 104-48 9 2 , 4-D ND ND 0,1 ND 9 MCPA ND ND 0 , 1 ND 9 MCPP ND ND 0 , 1 ND 9 Dichlorprop ND ND 0 , 1 ND 9 2 , 4 , 5-T 27 25 0 , 1 60-0 9 Silvex 68 38 0 , 1 128-22 9 2 , 4-DB ND ND 0,1 ND 9 Dinoseb 44 13 0,1 65-26 9 Dalapon ND N D 0 , 1 ND 9 2 , 4- D. ester 29 23 0 , 1 53-0 6 Tro của đô thị mức cao m g/g Dicamba 66 21 1 96-41 9 2,4- D 8 , 7 4 , 8 1 21-5 9 MCPA 3 , 2 4 , 8 1 10-0 9 MCPP 10 4 , 3 1 16-4,7 9 Dichlorprop ND ND 1 ND 9 2,4,5-T 2,9 1 , 2 1 3,6-0 9 Silvex 6,0 3 , 1 1 12-2,8 9 2 , 4-DB ND ND 1 ND 9 Dinoseb 16 6 , 8 1 23-0 9 Dalapon ND ND 1 ND 9 2 , 4-D. ester 1 , 9 1 , 7 1 6,7-0 6 a Độ thu hồi tổng số là của chế độ ion âm, trừ trường hợp ete 2,4-D ND: Không phát hiện được Bảng 16 - Dữ liệu độ ch í nh xác v à độ chuẩn của phép thử liên ph ò ng th í nghiệm đối v ớ i thuốc trừ c ỏ axit phenoxy clo ho á Hợp chất Nồng độ thêm chuẩn Giá trị trung b ì nh (% Độ thu h ồ i) a % độ lệch chuẩn tương đối b 500 mg/L 2 , 4,5-T 90 23 2 , 4,5-T, butoxy 90 29 2 , 4-D 86 17 2,4-DB 95 22 D alapon 83 13 Dicamba 77 25 Dichlorprop 84 20 Dinoseb 78 15 MCPA 89 11 MCPP 86 12 Silvex 96 27 50 mg/L 2 , 4,5-T 62 68 2 , 4,5-T, butoxy 85 9 2 , 4-D 64 80 2,4-DB 104 28 D alapon 121 99 Dicamba 90 23 Dichlorprop 96 15 Dinoseb 86 57 MCPA 96 20 MCPP 76 74 Silvex 65 71 5 mg/L 2,4,5-T 90 28 2,4,5-T, butoxy 99 17 2 , 4-D 103 31 2,4-DB 96 21 Dalapon 150 4 Dicamba 105 12 Dichlorprop 102 22 Dinoseb 108 30 MCPA 94 18 MCPP 98 15 Silvex 87 15 a Giá trị trung b ì nh kết quả th í nghiệm ph â n t ích hai l ầ n của ba phòng thí nghi ệ m. b % RSD kết quả th í nghiệm phân tích hai l ầ n của ba ph ò ng th í nghiệm . Số liệu trong tài liệu tham khảo 20. B ả ng 17 - So sánh LOD: Phương pháp 8151 với Phương pháp 8321 H ợp c hất ion h o á Phương pháp 8151 M ẫ u nước GC/ECD EDL ( m g/L) a Phương pháp 8321 M ẫ u nước HPLC/M S/TS LOD ( m g/L) Ch ế độ Dalapon 1 , 3 1 , 1 (-) Dicamba 0,081 0,3 (-) 2,4-D 0,2 0,29 (+) MCPA 0, 056b 2 , 8 (-) Dichlorprop 0 , 26 0 , 27 (+) MCPP 0 , 09 0,50 (+) 2 , 4 , 5-T 0 , 08 0,65 (-) 2,4,5-TP (Silvex) 0 , 075 4 , 3 ( - ) 2 , 4-DB 0 , 8 0,34 (+) Dinoseb 0 , 19 1 , 9 (-) a EDL Giới hạn phát hiện ước t í nh, đư ợ c quy đ ị nh như MDL ho ặ c nồng độ ch ấ t ph â n tí ch trong m ẫ u th u đư ợ c m ộ t pic t rong dịch chiết cuối cùng có t ỉ s ố giữa đ ộ nhiễu v à t í n hi ệ u x ấ p x ỉ 5. b 40 CFR Ph ầ n 136 , Ph ụ l ụ c B ( 4 9 FR 43234). Sắc k ý dùng cột mao quản lõi d â y. B ả ng 18 - Xác định giới hạn phát hiện phương pháp đơn ph ò ng th í nghiệm v à kết qu ả đ ộ chụm - nước c Chất ph â n t í ch Độ thu h ồ i trung bình % Độ lệch chuẩn % RSD MDL b m g/L Aldicarb sulfoxid a 7 , 5 0,27 72 , 4 0 , 8 Aldicarb sul f on 88,4 0,44 50 , 3 1,3 Oxamyl 60,7 0 , 10 16 , 6 0 , 3 Methomyl 117 0,49 41 , 5 1, 5 3-Hydroxycarbofurana 37 , 4 0,25 65,4 0 , 8 Fenuron 104 0,20 19 , 3 0 , 6 Benomyl/Carbendazim 67,3 0 , 13 19 , 7 0,4 Aldicarb 93 , 7 0 , 46 49 , 6 1, 4 Aminocarb 117 0,53 44 , 9 1 , 6 Carbofura n 94,2 0 , 17 17 , 7 0,5 Propoxur 106 0,32 30 , 4 1 , 0 Monuron 95 , 6 0 , 24 25,6 0 , 7 Bromaci l 86,4 0,12 14 , 1 0 , 4 Tebuthiuron 106 0,17 16 ,1 0,5 Carbaryl 85 , 1 0,29 34,1 0 , 9 Fluometuron 89 , 1 0,19 21,7 0 , 6 Propham 84,2 0,15 17,3 0 , 4 Propachlor 98,5 0 , 16 16,0 0 , 5 Diuron 95 , 6 0 , 14 14 , 7 0 , 4 Siduron 105 0 , 27 25 , 9 0 , 8 Methiocarb 92,4 0 , 16 17,5 0 , 5 Barban 90 , 5 0 , 79 17 , 4 2 , 4 Linuron 97,7 0,19 19 , 5 0,6 Chloropropham 89,1 0,68 15,2 2 , 0 Mexacarbat 80 , 0 1 , 41 35 , 1 4 , 2 Chloroxuron 109 0,32 29 , 2 1 , 0 Neburon 92,5 0,14 14,9 0 , 4 a Giá trị thu được từ tính toán hệ số tương ứng nội bộ. b Việc xác định giới hạn phá t hiện của phương ph á p được dựa trên 20 dịch chiết nước. M ứ c chu ẩ n thêm Aldicarb sul f oxit, barban, Cloropropham v à mexacacba l à 5 m g/L. Tất cả c á c chất phân tích khác được th ê m chu ẩ n ở mức 1 m g/L. Gi ớ i hạn phát hiện của phương pháp được xác định khi nh â n độ lệch chu ẩ n với 3. Việc định l ư ợng đư ợ c tiến hành sử dụng giá tr ị h ồ i qui tuyến t í nh trung b ì nh, t rừ khi c ó các chỉ định khác. c Số liệu từ Tài liệu tham khảo 22. Bảng 19 - Xác định giới hạn phát hiện phương pháp đơn phòng th í nghiệm và kết quả độ chụm - đất b Chất phân t í ch Độ thu h ồ i trung bình % Độ lệch chu ẩ n % RSD MDL a m g/g Aldicarb sul f oxid 66,9 0,0492 58 , 9 0,15 Aldicarb sul fo n 118 0 , 0076 25 , 7 0 , 023 Oxamyl 8 9, 6 0 , 0049 21 , 9 0 , 015 Methomyl 86 , 8 0 , 0051 23 , 6 0,015 3-Hydroxyca r bofuran 103 0 , 0116 45 , 0 0 , 035 Fenuron 91 , 2 0 , 0049 21 , 6 0 , 015 Benomyl/Car be ndazim 68 , 0 0 , 0082 47 , 0 0 , 025 Aldicarb 72 , 0 0 , 0056 30 , 1 0 , 017 Aminocarb 8 4,4 0 , 0082 38 , 7 0 , 025 Carbo f uran 102 0 , 0083 32 , 7 0 , 025 Propoxur 95 , 2 0 , 0091 38 , 2 0 , 027 Monuron 107 0 , 0077 28 , 8 0 , 023 Bromacil 99 ,6 0 ,0 069 27 , 5 0 , 021 Tebuthiuron 96 , 8 0 , 0071 29 , 5 0 , 021 Carbary l 99 , 6 0,0054 21 , 7 0 , 016 Fluometuron 92 , 8 0 , 0035 15 , 1 0 , 011 Propham 100 0 , 0039 15 , 7 0 , 012 Propachlor 11 4 0,0037 13 , 0 0 , 011 Diuron 101 0 , 0060 23 , 8 0 , 018 Siduron 107 0 , 0063 23 , 7 0 , 019 M e thiocarb 124 0 , 0054 17 , 5 0 , 016 Barban 108 0 , 0333 24 , 8 0,10 Linuron 113 0 , 0037 13 , 0 0 , 011 Chloropropha m 104 0 , 0217 16 , 6 0 , 065 Mexacarbat 62,2 0 , 0119 15,3 0 , 036 Chloroxuron 97 ,6 0 , 0031 12 , 6 0 , 009 Neburon 110 0 , 0044 16 , 0 0 , 011 a Việc xác định giới hạn phá t hiện của phương pháp được dựa trên 20 dịch chi ết đất . M ứ c chu ẩ n th ê m Aldicarb sul f oxit , barban, Cloropropham v à mexacacba l à 0 , 125 m g/g. Tất c ả c á c ch ất phân tích khác đ ược th ê m chuẩn ở mức 0 , 025 m g/ g. Giới h ạ n phát hi ệ n c ủ a phương ph á p đượ c xác đị nh khi nh â n độ l ệ ch chuẩn với 3. Việc đ ị nh lượng đư ợ c ti ế n hành sử d ụ ng giá trị h ồ i qui tuy ế n t í nh trung bình, tr ừ khi có các chỉ đ ị nh khác . b S ố li ệ u từ Tài liệu tham khảo 22. B ả ng 20 - Đ á nh gi á đ ơn phòng th í nghiệm v ề độ thu h ồ i trung b ì nh và đ ộ chụm - nước c Chất phân tích Độ thu h ồ i trung b ì nh b % Độ lệch chuẩn % RSD Aldicarb sul f oxid 7 , 6 2,8 37,0 Aldicarb sul fo n 56,0 27,1 48,5 Oxamyl a 38 , 9 17,9 45,9 Methomyl 52,0 19,6 37,7 3-Hydroxyca r bofuran 22,2 9,3 41,7 Fenuron 72,5 22,0 30,3 Benomyl/Car be ndazim 47 , 3 14,7 31,0 Aldicarb 81,0 13,7 16,9 Aminocarb 109 38,3 35,1 Carbo f uran 85,5 10,0 11,7 Propoxur 79,1 13 , 7 17,3 Monuron 91,8 11 , 3 12,3 Bromacil 87 , 6 12 , 1 13,8 Tebuthiuron 87,1 9 , 0 10,3 Carbary l 82,1 13 , 5 16,5 Fluometuron 84,4 8,3 9,8 Propham 80,7 13,8 17,1 Propachlor 84,3 10,0 11,9 Diuron 90,8 14,1 15,6 Siduron 88,0 9,5 10,8 M e thiocarb 93,3 12,8 13,8 Barban 88,1 11 , 2 12,7 Linuron 87 , 1 16 , 8 19,3 Chloropropha m 94 , 9 15 , 3 16,1 Mexacarbat 79,8 12,9 16,2 Chloroxuron 106 24,9 23,5 Neburon 85,3 12 , 6 14,8 a Gi á trị thu đ ược từ tính toán hệ s ố đáp trả nội bộ. b Tiến hành ph â n tích 9 mẫu đ ã thêm chuẩn với 3 mức nồng độ. Nồng độ của Aldicarb sul f oxit, barban, Cloropropham và mexacacba tương ứng là 25 m g/L, 50 m g/L v à 100 m g /L . T ấ t cả c á c nồng độ phân tích khác ở mức 5 m g/L, 10 m g/L và 20 m g/L. Một mẫu vượt kh ô ng coi nh ư nằm ngoài. Tổng s ố mẫu đã phân t í ch l à 2 6 m ẫ u. Việc định lượng đư ợ c tiến hành sử dụng giá trị h ồ i qui tuyến tính trung b ì nh, tr ừ khi có các ch ỉ định kh á c. c S ố li ệ u từ T à i li ệ u tham khảo 22. B ả ng 21 - Đánh giá đơn phòng thí nghiệm v ề độ thu h ồ i trung b ì nh v à độ chụm - Đ ấ t b Chất ph ân tích Độ thu h ồ i tru n g b ì nh b % Độ lệch chuẩn % RSD Aldicarb sul f oxid 66,9 31 , 3 46 , 7 Aldicarb sul fo n 162 51 , 4 31,7 Oxamyl a 78 , 9 46 , 1 58,5 Methomyl 84 , 9 25,8 30 , 4 3-Hydroxyca r bofuran 105 36,3 34 , 5 Fenuron 91,9 16 , 7 18 , 1 Benomyl/Car be ndazim 95,6 18 , 2 19 , 0 Aldicarb 97,9 17 , 0 17 , 4 Aminocarb 133 44,7 33 , 6 Carbo f uran 109 14 , 4 13 , 2 Propoxur 104 16 , 5 15,9 Monuron 101 12 , 4 12 , 3 Bromacil 100 9 , 0 9 , 0 Tebuthiuron 104 11,9 11 , 5 Carbary l 102 15,5 15 , 2 Fluometuron 94 , 5 15 , 7 16 , 7 Propham 92 , 8 12,0 12 , 9 Propachlor 94 , 6 10,3 10 , 9 Diuron 107 17 , 4 16 , 2 Siduron 100 12 , 0 12,0 M e thiocarb 107 14 , 2 13 , 2 Barban 92,3 15,6 16 , 9 Linuron 10 4 13,6 13 , 1 Chloropropha m 105 9,3 8 , 9 Mexacarbat 77,2 9 , 8 12 , 7 Chloroxuron 121 27,3 22,5 Neburon 92 , 1 16,5 17 , 9 a Tiến hành phân tích 9 mẫu đã thêm chuẩn với 3 mức nồng độ. Nồng độ của Aldicarb sulfoxit, barban, Cloropropham và mexacacba tương ứng là 0,625 m g/g; 1,250 m g/g và 2,5 m g/g. Tất cả các n ồ ng độ ph â n tí ch kh á c ở mức 0,125 m g/g . 0,25 m g/g và 0,5 m g/g . Một mẫu v ượ t kh ô ng coi nhu n ằ m ngo à i . Tổng số m ẫ u đã ph â n tích là 26 m ẫ u. Vi ệ c định lượng đư ợ c tiến hành sử d ụ ng giá tr ị h ồ i qui tuyến tính trung b ì nh, trừ kh i có các ch ỉ đị nh khác. b S ố li ệ u từ T à i liêu tham khảo 22 B ả ng 22 - Đánh giá liên ph ò ng t hí nghiệm độ chính xác của phương pháp (Sau khi loại bỏ phần t ử ngoại biên) d Chất phân tích M ẫu c ó nồng đ ộ cao a M ẫ u có n ồ ng đ ộ trung b ì nh b Mẫu có nồng độ thấp c Aldicarb 98,7 110 52,0 Bendiocarb 81,4 95 , 0 52 , 0 Carbaryl 92,0 108 62 , 0 Carbendazim 125 138 128 Carbo f uran 87,8 92,3 72 , 0 Diuron 79,9 98,8 66 , 0 Linuron 84 , 8 93,0 82,0 Methom yl 93,3 90,8 90,0 Oxamyl 83,8 88,0 98,0 a Mỗi phòng th í nghiệm lặp lại 3 lần, tiến hành tại 8 - 9 phòng th í nghiệm (Bảng 26 của t à i liệu tham khảo 23). Mỗi hợp chất có n ồ ng độ ch í nh xác l à 90 mg/L, trừ trư ờ ng hợp Carbendazim là 22,5 mg/L; b M ỗ i phòng th í nghiệm l ặ p lạ i 2 lần, t iến hành tại 8 - 9 phòng thí nghiệm (Bảng 26 của tài liệu tham khảo 23). Mỗi hợp chất có nồng độ ch í nh xác là 40 mg/L , tr ừ trường h ợ p Carbendazim l à 10 mg/L ; c Mỗi phòng thí nghiệm lặp lại 3 l ầ n, tiến hành tại 8 - 9 ph ò ng th í nghiệm (B ả ng 26 của tài liệu tham khảo 23). M ỗ i hợp chất có n ồ ng độ ch í nh xác là 5 mg/L , trừ trư ờ ng hợp Carbendazim là 1,25 mg/L; d Số liệu từ T à i liệu tham khảo 23. Bảng 23 - Đánh giá liên phòng thí nghiệm v ề đ ộ ch í nh xác của phương pháp (Sau khi loại bỏ phần tử ngoại biên) a Ch ấ t ph â n tích Nồng độ cao Nồng độ trung bình Nồng độ thấp Trung bình S r S R % RS D R % RSD R Trung bình S r S R % RS D r % RSD R Trung bình S r S R % RS D r % RSD R A ld icarb 88 , 8 11,4 34 , 4 12,9 38,8 44,1 7 , 7 17,0 17,5 38 , 5 2 , 6 0 , 9 2 , 6 33 , 1 98 , 2 Bendiocarb 73 , 3 16 , 1 39,3 21 , 9 53 , 6 38 , 0 6 , 6 16 , 6 17,3 43 , 7 2 , 6 0 ,6 1 , 6 21 , 3 61 , 9 Carbaryl 82,8 11 , 7 34,0 14 , 2 41 , 1 43,1 3 , 0 15 , 7 7 , 0 36,4 3 , 1 0,7 2,3 23,3 75 , 8 Car b endazim 28 , 1 5 , 6 15,3 19 , 9 54 , 4 13 , 8 1 , 4 8 , 9 10 , 4 64,2 1 , 6 0,4 1, 1 26,1 68 ,2 Carbo f uran 79 , 0 16 , 7 35 , 2 21 , 2 44 , 5 36 , 9 5 , 0 16 , 3 13 , 6 4 4 , 3 3 , 6 0 , 9 3 , 3 25 , 2 91 , 6 Diuro n 71 , 9 13 , 1 26 , 1 18 , 2 36,3 39 , 5 2 , 6 11 , 8 6 , 5 29 , 8 3 , 3 0 , 5 2 , 6 16,2 77 , 9 Linuron 76 , 3 8,3 32 , 5 10 , 9 42,6 37,2 3,9 13 , 4 10 , 5 35 , 9 4 , 1 0 , 6 2 , 1 15 , 7 51 , 4 Me t hom y l 84 , 0 10 , 8 29 , 4 12,9 35 , 0 36 , 3 2,8 15,0 7 , 8 41 , 2 4 , 5 0 , 7 4 , 1 15 , 3 92 , 9 Oxamyl 75 , 5 12 , 4 37 , 0 16 , 4 49 , 1 35 , 2 3 , 7 20,8 10,4 59,1 4,9 0 , 5 4,6 9,7 93 , 6 Trung b ì nh 16 , 5 43 , 9 11 , 2 43 , 7 20 , 7 79 , 1 Đ ộ l ệ ch chuẩn 4 , 0 7 , 1 4 , 1 11 , 2 7 , 1 16 , 3 S r v à S R là độ lệch chuẩn của độ l ặ p lạ i v à độ tái lập, tương ứn g. RSD r v à RSD R là độ lệch chuẩn tương đố i của đ ộ lặp lại và độ tái l ậ p, tương ứng. Đơn vị của giá trị trung b ì nh s r và S R là mg/L. a Số liệu từ T à i li ệ u tham khảo 23. H ì nh 1 - Sơ đ ồ đ ầ u dò nhiệt phun và ngu ồ n ion H ì nh 2 - Ngu ồ n phun nhiệt có d â y xua đuổi (cấu h ì nh độ nhạy cao) H ì nh 3 - Ngu ồ n phun nhiệt có d â y xua đuổi (cấu h ì nh CAD) H ì nh 4 - Lưu đ ồ quy tr ì nh THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Voyksner. R.D., Haney. C.A., " Optimization and Application of Thermospray High-Performance Liquid Chromatography/Mass Spec t rometry". Anal. Chem. , 1985 , 57, 991-996 [2] Blakley, C.R. , Vestal, M.L., "Thermospray Interpace for Liquid Chromatography/Mass Spectrometry" Anal Chem., 1983, 55 , 750-754. [3] Taylor, V., Hickey, D.M. , Marsden , P.J " Single Laboratory Validation of EPA Method 8140 " EPA- 600/4-87/009 , U.S . Environmental Protection Agency. Las Vegas, NV, 1987, 144 pp [4] " Guide l ines f or Data Acquisition and Data quality Evaluation in Environmental Chemistry" , Anal , Chem., 1980, 52 , 2242-2249. [5 ] Betowski. L.D. , Jones. T.L., ‘‘The Analysis of Organophosphorus Pesticide Samples by HPLC/MS and HPLC/MS/MS" , Environmental Science and Technology , 1988. [8] U.S. EPA 2 nd Annual Repo rt on Carcinogens. NTP 81-43, Dec. 1981 , pp. 236-237. [9] Blum, A., Ames, B.N., Science 195, 1997, 17. [10] Zweidinger, R.A., Cooper, S.D., Pellazari. E.D., Measurements of Organic Pollutan t s in W ater and Wastewater, ASTM 686. [11] Cremlyn. R., Pesticides: Prepara t ion and m ode of Action, Joh n Wiley and Sons , Chichester, 197 8 , p. 142 [12] Cotterill, E.G., Byast , T.H., “HPLC of Pesticide Resi d ues in E n vironmental Sample" , i n Liqui d Chromatography i n Environmental Analysis , Laurence, J.F., Ed., Humana Press , Cli f ton. NJ , 19 8 4. [13] Voyksner, R.D. , "Thermospray HPLC/MS for M on i toring the Environment” i n Applications of Ne w Mass Spectrometry Tech ni ques in Pestici d e Chemistry: Rosen, J.D. , Ed. , John Wiley and Sons. New York. 1987. [14| Y inon, J., Jones, T.L. , Betovvski, L.D. , Rap. Comm. Mass Spec t rom. , 1989. 3. 38. [15] Shore, F.L. , Amick, E.N., Pan, S.T., Gurka, D.F ., " Single Laboratory Validation of EPA Me th od 8150 for the Analysis of Chlorinated Herbicides in Ha z adous Waste " , EPA / 600 / 4-85/060. U.S. Environmental Protection Agency , Las Vegas , NV, 1985 [16] " Development and Evaluations of an LC/MS/MS Protocol" , EPA/600/X-86/328, Dec. 1986 . [17] “A n LC/MS Per f ormance Evaluation S tudy of Organophosphorus Pesticide" EPA / 600/X-89/ 0 06 , Jan.1989 [18 ] "A Per f ormance Evaluation Study of a Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Meth o d f or Tris- (2,3-Dibromopropyl) Phosphate", EPA/600/X-89/135, June 1989 . [19] " Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Per f ormance Evalua t ion of Chlorinated Phenoxyacid Herbicide and Their Es t ers” , EPA/600/X-89/176, July 1989. [20] "An Interlaboratory Comparison of an S W -846 Method for the Analysis of the Chlorinated Phenoxyacid Herbicides by LC/MS” EPA/600/X-90/133, June 1990. [21] Somasun d aram, L. , and J.R. Coates, Ed. , “Pesticide Trans f ormation Products Fate and Significance in the Environment", ACS Symposium Series 495, Ch.13. 1991. [22] Single-Laboratory Evaluation of Carbamates, APPL, Inc., Fresno, CA. [23] "Inter l aboratory Calibration S tudy of a Thermospray-Liquid Chromatography/Mass Spectrometry (TS-LC/MS) Method for Selected Carbamate Pesticide", EPA/600/X-92/102, August 1992.