TCVN9330-2:2012

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9330-2:2012 (ISO 14461-2:2005) về Sữa và sản phẩm sữa - Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật - Phần 2: Xác định độ tin cậy số đếm khuẩn lạc của các đĩa song song và các bước pha loãng liên tiếp TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9330-2:2012 ISO 14461-2:2005 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG TRONG PHÒNG THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT - PHẦN 2: XÁC ĐỊNH ĐỘ TIN CẬY SỐ ĐẾM KHUẨN LẠC CỦA CÁC ĐĨA SONG SONG VÀ CÁC BƯỚC PHA LOÃNG LIÊN TIẾP Milk and milk products - Quality control in microbiological laboratories - Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps Lời nói đầu TCVN 9330-2:2012 hoàn toàn tương đương với ISO 14461-2:2005; TCVN 9330-2:2012 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố; Bộ tiêu chuẩn TCVN 9330:2012 Sữa và sản phẩm sữa - Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật gồm có các phần sau đây: - TCVN 9330-1:2012 Sữa và sản phẩm sữa - Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật - Phần 1: Đánh giá năng lực thực hiện đếm khuẩn lạc; - TCVN 9330-1:2012 Sữa và sản phẩm sữa - Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật - Phần 2: Xác định độ tin cậy số đếm khuẩn lạc của các đĩa song song và các bước pha loãng liên tiếp. Lời giới thiệu Mỗi phương pháp vi sinh vật bao gồm một số bước kế tiếp theo trình tự cụ thể (lấy mẫu con, pha loãng mẫu, đổ đĩa và đếm khuẩn lạc). Độ không đảm bảo đo của kết quả cuối cùng được xác định bởi tính biến thiên của tất cả các bước liên quan trong quy trình phân tích. Để thu được các kết quả có độ không đảm bảo đo không quá lớn so với kết quả dự kiến khi thực hiện đúng phương pháp, người phân tích cần tuân thủ của quy định của Thực hành phòng thử nghiệm tốt (GLP). Có ba yếu tố quan trọng nhất để đạt được số đếm đĩa chính xác là: - tính đồng nhất của vật liệu mẫu, - tính chính xác của các bước pha loãng, - kỹ thuật cấy và/hoặc đếm khuẩn lạc ở các đĩa nuôi cấy. Có thể đánh giá khả năng thực hiện kỹ thuật đếm khuẩn lạc của phòng thử nghiệm và đưa ra độ biến thiên mong muốn của phương pháp bằng cách đồng hóa kỹ vật liệu mẫu, tạo nhiều dãy dịch pha loãng và cấy một số đĩa từ cùng một dịch pha loãng. Độ biến thiên quá lớn cho thấy ít nhất một trong các bước khi thực hiện phương pháp nằm ngoài tầm kiểm soát. Xác định các bước này bằng cách so sánh các đĩa nuôi cấy lặp lại, các dịch pha loãng khác nhau và các dãy pha loãng khác nhau. Khi phát hiện các bước của phương pháp phân tích có sự biến thiên quá lớn, phải tiến hành các biện pháp cần thiết để kiểm soát các bước trên. SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG TRONG PHÒNG THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT - PHẦN 2: XÁC ĐỊNH ĐỘ TIN CẬY SỐ ĐẾM KHUẨN LẠC CỦA CÁC ĐĨA SONG SONG VÀ CÁC BƯỚC PHA LOÃNG LIÊN TIẾP Milk and milk products - Quality control in microbiological laboratories - Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này mô tả quy trình thường xuyên để đánh giá kết quả định lượng vi sinh vật bằng phương pháp đếm khuẩn lạc với các bước pha loãng thập phân liên tiếp và cấy một đĩa hoặc hai đĩa song song ở mỗi nồng độ pha loãng. Quy trình này được áp dụng định kỳ trong các phòng thử nghiệm thực hiện kỹ thuật đếm khuẩn lạc. Quy trình này đưa ra tiêu chí chấp nhận sự khác nhau giữa các kết quả thu được ở các đĩa song song và ở các bước pha loãng liên tiếp, như sau: a) So sánh kết quả (số đếm khuẩn lạc) thu được từ các đĩa song song với các giới hạn trong bảng với số đếm tương ứng. Nếu vượt quá giới hạn thì có thể đã xảy ra một lỗi kỹ thuật nào đó khi tiến hành xác định song song. b) So sánh kết quả (tổng số đếm khuẩn lạc) của hai đĩa song song ở hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với các giới hạn trong bảng với tổng số đếm tương ứng. Nếu vượt quá giới hạn thì có thể đã xảy ra một lỗi kỹ thuật nào đó trong quá trình pha loãng. c) Nếu số trường hợp vượt quá các giới hạn nêu trên nhiều hơn dự kiến thì quy trình thử nghiệm đó có thể thiếu độ tin cậy. CHÚ THÍCH: Công thức tính các giá trị trong Bảng 1 và Bảng 2 được nêu và giải thích trong Điều 7. 2. Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có). TCVN 9330-1 (ISO 14461-1) Sữa và sản phẩm sữa - Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật - Phần 1: Đánh giá năng lực thực hiện đếm khuẩn lạc. 3. Thuật ngữ và định nghĩa Trong tiêu chuẩn này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau: 3.1. Số đếm khuẩn lạc (colony count) Số lượng các vi sinh vật đếm được bằng phương pháp nêu trong TCVN 9330-1 (ISO 14461-1). CHÚ THÍCH: Số lượng vi sinh vật được biểu thị theo gam hoặc mililit mẫu thử. 4. Nguyên tắc So sánh kết quả đếm thu được với các giới hạn trong bảng cho từng số đếm cụ thể. Đánh giá kết quả dựa vào sự vượt quá các giới hạn. Tính và giải thích các giá trị trong bảng. 5. Cách tiến hành 5.1. Yêu cầu chung Quy trình này phải được áp dụng thường xuyên trong các phòng thử nghiệm sử dụng kỹ thuật đếm khuẩn lạc. Trong mọi trường hợp, phải áp dụng phương pháp chuẩn hóa cho kỹ thuật đếm khuẩn lạc. Nếu phương pháp được sử dụng không phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế hoặc tiêu chuẩn được chấp nhận khác thì phải mô tả chi tiết phương pháp và tuân thủ đúng phương pháp. Trong trường hợp phương pháp được tiến hành với chỉ một đĩa trong mỗi bước pha loãng thì quy trình được mô tả ở 5.2 phải được thực hiện với một tần số tối thiểu nhất định (ví dụ như một lần trong một trăm đơn vị mẫu được phân tích.) 5.2. Kết quả đếm hai đĩa song song So sánh kết quả (số đếm khuẩn lạc) của hai đĩa song song với giới hạn trong Bảng 1. So sánh số đếm cao và số đếm thấp của một cặp kết quả thu được với số đếm khuẩn lạc tương ứng trong Bảng 1. Sử dụng số đếm cao trong Bảng 1 làm căn cứ so sánh. Sau đó, so sánh số đếm thấp trong Bảng 1 với số đếm thấp thu được. Nếu số đếm thấp thu được nhỏ hơn số đếm thấp trong Bảng 1 thì khả năng không chấp nhận sự khác nhau giữa kết quả của hai đĩa song song thu được là cao. (Xem kết quả của bước pha loãng thứ nhất ở Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7). Nếu số đếm thấp thu được lớn hơn hoặc bằng số đếm thấp trong bảng thì sự khác nhau giữa kết quả của hai đĩa song song được chấp nhận. (Xem kết quả của bước pha loãng thứ hai ở Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7). 5.3. Tổng của các kết quả số đếm của các bước pha loãng liên tiếp 5.3.1. Sử dụng để kiểm tra tiếp theo các số đếm khuẩn lạc của hai dãy đĩa song song đạt phép thử trong 5.2. So sánh các tổng của các số đếm khuẩn lạc từ các đĩa song song qua hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với giới hạn trong Bảng 2. Đối với tổng số đếm thu được ở bước pha loãng 10 -x , so sánh tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -(x+1) với giới hạn dưới trong bảng cho tổng đó. Các tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -(x+1) có giá trị nằm trong khoảng giới hạn nêu trong Bảng 2 được chấp nhận. Các tổng số đếm thu được nằm ngoài các giới hạn này cho thấy tỉ lệ các số đếm khuẩn lạc thu được qua hai bước pha loãng thập phân có độ chệch đáng kể so với tỉ lệ dự kiến. 5.3.2. Sử dụng để kiểm tra tiếp theo các số đếm khuẩn lạc của các đĩa song song mà không được phép thử trong 5.2 hoặc các số đếm của một đĩa trong mỗi bước pha loãng. So sánh các số đếm của các đĩa qua hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với các giới hạn trong Bảng 2. Đối với số đếm thu được ở bước pha loãng 10 -x , so sánh số đếm thu được ở bước pha loãng 10 -(x+1) với giới hạn dưới trong bảng cho số đếm đó. Các số đếm thu được ở bước pha loãng 10 -(x+1) có giá trị nằm trong khoảng giới hạn của Bảng 2 được chấp nhận. Các số đếm thu được nằm ngoài những giới hạn này cho thấy tỉ lệ các số đếm khuẩn lạc thu được qua hai bước pha loãng thập phân có độ chệch đáng kể so với tỉ lệ dự kiến. (Hai phép so sánh kết quả được nêu trong Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7). Xem Hình 1 về lưu đồ của quy trình. CHÚ THÍCH: Dấu (-) biểu thị kết quả được chấp nhận có giá trị thuộc giới hạn. Dấu (+) biểu thị kết quả nằm ngoài giới hạn do lỗi kỹ thuật. Hình 1 - Biểu đồ mô tả sự kiểm tra quy trình đếm khuẩn lạc và đánh giá kết quả 6. Đánh giá 6.1. Các bảng kết quả Đối với mỗi phép thử được mô tả trong 5.3.1 và 5.3.2, các kết quả nằm ngoài các giới hạn trong Bảng 1 hoặc Bảng 2 thường không được xảy ra nhiều hơn một lần trong 100 lần thử. Nếu các kết quả nằm ngoài các giới hạn này xảy ra thường xuyên hơn thì phải rà soát lại quy trình thử nghiệm vi sinh. Bảng 1 - Các giới hạn quy ước cho số đếm khuẩn lạc của hai đĩa Petri song song (với xác suất 99 % đối với mỗi phép so sánh) Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc cao thấp tổng cao thấp tổng cao thấp tổng 10 2 12 54 31 85 98 66 164 11 3 14 55 32 87 99 67 166 12 3 15 56 32 88 100 67 167 13 4 17 57 33 90 101 68 169 14 4 18 58 34 92 102 69 171 15 5 20 59 35 94 103 70 173 16 5 21 60 36 96 104 71 175 17 6 23 61 36 97 105 71 176 18 6 24 62 37 99 106 72 178 19 7 26 63 38 101 107 73 180 20 7 27 64 39 103 108 74 182 21 8 29 65 39 104 109 75 184 22 9 31 66 40 106 110 76 186 23 9 32 67 41 108 111 76 187 24 10 34 68 42 110 112 77 189 25 11 36 69 43 112 113 78 191 26 11 37 70 43 113 114 79 193 27 12 39 71 44 115 115 80 195 28 12 40 72 45 117 116 81 197 29 13 42 73 46 119 117 81 198 30 14 44 74 46 120 118 82 200 31 14 45 75 47 122 119 83 202 32 15 47 76 48 124 120 84 204 33 16 49 77 49 126 121 85 206 34 16 50 78 50 128 122 86 208 35 17 52 79 50 129 123 86 209 36 18 54 80 51 131 124 87 211 37 19 56 81 52 133 125 88 213 38 19 57 82 53 135 126 89 215 39 20 59 83 54 137 127 90 217 40 21 61 84 54 138 128 91 219 41 21 62 85 55 140 129 91 220 42 22 64 86 56 142 130 92 222 43 23 66 87 57 144 131 93 224 44 24 68 88 58 146 132 94 226 45 24 69 89 58 147 133 95 228 46 25 71 90 59 149 134 96 230 47 26 73 91 60 151 135 96 231 48 27 75 92 61 153 136 97 233 49 27 76 93 62 155 137 98 235 50 28 78 94 62 156 138 99 237 51 29 80 95 63 158 139 100 239 52 29 81 96 64 160 140 101 241 53 30 83 97 65 162 141 102 243 Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc cao thấp tổng cao thấp tổng cao thấp tổng 142 102 244 188 142 330 234 182 416 143 103 246 189 143 332 235 183 418 144 104 248 190 144 334 236 184 420 145 105 250 191 144 335 237 185 422 146 106 252 192 145 337 238 186 424 147 107 254 193 146 339 239 186 425 148 107 255 194 147 341 240 187 427 149 108 257 195 148 343 241 188 429 150 109 259 196 149 345 242 189 431 151 110 261 197 150 347 243 190 433 152 111 263 198 151 349 244 191 435 153 112 265 199 151 350 245 192 437 154 113 267 200 152 352 246 193 439 155 113 268 201 153 354 247 194 441 156 114 270 202 154 356 248 194 442 157 115 272 203 155 358 249 195 444 158 116 274 204 156 360 250 196 446 159 117 276 205 157 362 251 197 448 160 118 278 206 158 364 252 198 450 161 119 280 207 158 365 253 199 452 162 119 281 208 159 367 254 200 454 163 120 283 209 160 369 255 201 456 164 121 285 210 161 371 256 202 458 165 122 287 211 162 373 257 202 459 166 123 289 212 163 375 258 203 461 167 124 291 213 164 377 259 204 463 168 125 293 214 165 379 260 205 465 169 125 294 215 165 380 261 206 467 170 126 296 216 166 382 262 207 469 171 127 298 217 167 384 263 208 471 172 128 300 218 168 386 264 209 473 173 129 302 219 169 388 265 210 475 174 130 304 220 170 390 266 210 476 175 131 306 221 171 392 267 211 478 176 131 307 222 172 394 268 212 480 177 132 309 223 172 395 269 213 482 178 133 311 224 173 397 270 214 484 179 134 313 225 174 399 271 215 486 180 135 315 226 175 401 272 216 488 181 136 317 227 176 403 273 217 490 182 137 319 228 177 405 274 218 492 183 138 321 229 178 407 275 218 493 184 138 322 230 179 409 276 219 495 185 139 324 231 179 410 277 220 497 186 140 326 232 180 412 278 221 499 187 141 328 233 181 414 279 222 501 Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc Số đếm khuẩn lạc cao thấp tổng cao thấp tổng cao thấp tổng 280 223 503 309 249 558 338 275 613 281 224 505 310 250 560 339 276 615 282 225 507 311 251 562 340 277 617 283 226 509 312 251 563 341 278 619 284 226 510 313 252 565 342 278 620 285 227 512 314 253 567 343 279 622 286 228 514 315 254 569 344 280 624 287 229 516 316 255 571 345 281 626 288 230 518 317 256 573 346 282 628 289 231 520 318 257 575 347 283 630 290 232 522 319 258 577 348 284 632 291 233 524 320 259 579 349 285 634 292 234 526 321 260 581 350 286 636 293 234 527 322 260 582 351 287 638 294 235 529 323 261 584 352 287 639 295 236 531 324 262 586 353 288 641 296 237 533 325 263 588 354 289 643 297 238 535 326 264 590 355 290 645 298 239 537 327 265 592 356 291 647 299 240 539 328 266 594 357 292 649 300 241 541 329 267 596 358 293 651 301 242 543 330 268 598 359 294 653 302 243 545 331 269 600 360 295 655 303 243 546 332 269 601 361 296 657 304 244 548 333 270 603 362 297 659 305 245 550 334 271 605 363 297 660 306 246 552 335 272 607 364 298 662 307 247 554 336 273 609 365 299 664 308 248 556 337 274 611 366 300 666 6.2. Các ví dụ kiểm tra các đĩa song song 6.2.1. Ví dụ 1 Giả sử (24,12) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 24 là giới hạn trên và 10 là giới hạn dưới. Vì 12 ³ 10 nên những số đếm này có thể được xem xét. 6.2.2. Ví dụ 2 Giả sử (97, 65) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 97 là giới hạn trên và 65 là giới hạn dưới. Vì 65 = 65 nên những số đếm này có thể được xem xét. 6.2.3. Ví dụ 3 Giả sử (193, 142) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 193 là giới hạn trên và 146 là giới hạn dưới. Vì 142 < 146 nên những số đếm này không được xem xét. 6.3. Các ví dụ kiểm tra các tổng của hai bước pha loãng liên tiếp 6.3.1. Ví dụ 1 Giả sử 232 là một số đếm/tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -x thì 12 là giới hạn dưới của số đếm/tổng ở bước pha loãng 10 -(x+1) và 37 là giới hạn trên của tổng / số đếm ở bước pha loãng 10 -(x+1) . Nếu 15 là số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai nồng độ có thể được xem xét, vì 12 < 15 < 37. 6.3.2. Ví dụ 2 Giả sử 357 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -x thì 21 là giới hạn dưới của số đếm/ tổng ở bước pha loãng 10 -(x+1) . Nếu 18 là số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai bước pha loãng này không được xem xét, vì 18 < 21. 6.3.3. Ví dụ 3 Giả sử 151 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -x thì 26 là giới hạn trên của số đếm/tổng ở bước pha loãng 10 -(x+1) . Nếu 31 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10 -(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai bước pha loãng không được xem xét, vì 31 > 26. Bảng 2 - Các giới hạn quy ước cho tổng số đếm của hai đĩa song song hoặc số đếm từ một đĩa trên mỗi bước pha loãng của hai bước pha loãng thập phân liên tiếp (với xác suất 99 % đối với mỗi phép so sánh) 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 10 0 1,0 4 51 1 5,1 12 11 0 1,1 5 52 1 5,2 12 12 0 1,2 5 53 1 5,3 12 13 0 1,3 5 54 1 5,4 12 14 0 1,4 5 55 1 5,5 13 15 0 1,5 6 56 1 5,6 13 16 0 1,6 6 57 1 5,7 13 17 0 1,7 6 58 1 5,8 13 18 0 1,8 6 59 1 5,9 13 19 0 1,9 6 60 1 6,0 13 20 0 2,0 7 61 1 6,1 14 21 0 2,1 7 62 1 6,2 14 22 0 2,2 7 63 1 6,3 14 23 0 2,3 7 64 2 6,4 14 24 0 2,4 7 65 2 6,5 14 25 0 2,5 8 66 2 6,6 14 26 0 2,6 8 67 2 6,7 14 27 0 2,7 8 68 2 6,8 15 28 0 2,8 8 69 2 6,9 15 29 0 2,9 8 70 2 7,0 15 30 0 3,0 8 71 2 7,1 15 31 0 3,1 9 72 2 7,2 15 32 0 3,2 9 73 2 7,3 15 33 0 3,3 9 74 2 7,4 16 34 0 3,4 9 75 2 7,5 16 35 1 3,5 9 76 2 7,6 16 36 1 3,6 9 77 2 7,7 16 37 1 3,7 10 78 2 7,8 16 38 1 3,8 10 79 2 7,9 16 39 1 3,9 10 80 2 8,0 16 40 1 4,0 10 81 2 8,1 17 41 1 4,1 10 82 2 8,2 17 42 1 4,2 11 83 2 8,3 17 43 1 4,3 11 84 2 8,4 17 44 1 4,4 11 85 3 8,5 17 45 1 4,5 11 86 3 8,6 17 46 1 4,6 11 87 3 8,7 17 47 1 4,7 11 88 3 8,8 18 48 1 4,8 11 89 3 8,9 18 49 1 4,9 12 90 3 9,0 18 50 1 5,0 12 91 3 9,1 18 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 92 3 9,2 18 136 6 13,6 24 93 3 9,3 18 137 6 13,7 24 94 3 9,4 18 138 6 13,8 25 95 3 9,5 19 139 6 13,9 25 96 3 9,6 19 140 6 14,0 25 97 3 9,7 19 141 6 14,1 25 98 3 9,8 19 142 6 14,2 25 99 3 9,9 19 143 6 14,3 25 100 3 10,0 19 144 6 14,4 25 101 3 10,1 19 145 6 14,5 26 102 3 10,2 20 146 6 14,6 26 103 4 10,3 20 147 6 14,7 26 104 4 10,4 20 148 6 14,8 26 105 4 10,5 20 149 6 14,9 26 106 4 10,6 20 150 6 15,0 26 107 4 10,7 20 151 6 15,1 26 108 4 10,8 20 152 7 15,2 27 109 4 10,9 21 153 7 15,3 27 110 4 11,0 21 154 7 15,4 27 111 4 11,1 21 155 7 15,5 27 112 4 11,2 21 156 7 15,6 27 113 4 11,3 21 157 7 15,7 27 114 4 11,4 21 158 7 15,8 27 115 4 11,5 21 159 7 15,9 27 116 4 11,6 22 160 7 16,0 28 117 4 11,7 22 161 7 16,1 28 118 4 11,8 22 162 7 16,2 28 119 4 11,9 22 163 7 16,3 28 120 5 12,0 22 164 7 16,4 28 121 5 12,1 22 165 7 16,5 28 122 5 12,2 22 166 7 16,6 28 123 5 12,3 23 167 8 16,7 29 124 5 12,4 23 168 8 16,8 29 125 5 12,5 23 169 8 16,9 29 126 5 12,6 23 170 8 17,0 29 127 5 12,7 23 171 8 17,1 29 128 5 12,8 23 172 8 17,2 29 129 5 12,9 23 173 8 17,3 29 130 5 13,0 24 174 8 17,4 29 131 5 13,1 24 175 8 17,5 30 132 5 13,2 24 176 8 17,6 30 133 5 13,3 24 177 8 17,7 30 134 5 13,4 24 178 8 17,8 30 135 5 13,5 24 179 8 17,9 30 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 180 8 18,0 30 224 11 22,4 36 181 8 18,1 30 225 12 22,5 36 182 9 18,2 31 226 12 22,6 36 183 9 18,3 31 227 12 22,7 36 184 9 18,4 31 228 12 22,8 36 185 9 18,5 31 229 12 22,9 37 186 9 18,6 31 230 12 23,0 37 187 9 18,7 31 231 12 23,1 37 188 9 18,8 31 232 12 23,2 37 189 9 18,9 31 233 12 23,3 37 190 9 19,0 32 234 12 23,4 37 191 9 19,1 32 235 12 23,5 37 192 9 19,2 32 236 12 23,6 38 193 9 19,3 32 237 12 23,7 38 194 9 19,4 32 238 12 23,8 38 195 9 19,5 32 239 13 23,9 38 196 10 19,6 32 240 13 24,0 38 197 10 19,7 32 241 13 24,1 38 198 10 19,8 33 242 13 24,2 38 199 10 19,9 33 243 13 24,3 38 200 10 20,0 33 244 13 24,4 39 201 10 20,1 33 245 13 24,5 39 202 10 20,2 33 246 13 24,6 39 203 10 20,3 33 247 13 24,7 39 204 10 20,4 33 248 13 24,8 39 205 10 20,5 34 249 13 24,9 39 206 10 20,6 34 250 13 25,0 39 207 10 20,7 34 251 13 25,1 39 208 10 20,8 34 252 14 25,2 40 209 10 20,9 34 253 14 25,3 40 210 10 21,0 34 254 14 25,4 40 211 11 21,1 34 255 14 25,5 40 212 11 21,2 34 256 14 25,6 40 213 11 21,3 35 257 14 25,7 40 214 11 21,4 35 258 14 25,8 40 215 11 21,5 35 259 14 25,9 40 216 11 21,6 35 260 14 26,0 41 217 11 21,7 35 261 14 26,1 41 218 11 21,8 35 262 14 26,2 41 219 11 21,9 35 263 14 26,3 41 220 11 22,0 35 264 14 26,4 41 221 11 22,1 36 265 14 26,5 41 222 11 22,2 36 266 15 26,6 41 223 11 22,3 36 267 15 26,7 41 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 268 15 26,8 42 312 18 31,2 47 269 15 26,9 42 313 18 31,3 47 270 15 27,0 42 314 18 31,4 47 271 15 27,1 42 315 18 31,5 47 272 15 27,2 42 316 18 31,6 48 273 15 27,3 42 317 18 31,7 48 274 15 27,4 42 318 18 31,8 48 275 15 27,5 42 319 19 31,9 48 276 15 27,6 43 320 19 32,0 48 277 15 27,7 43 321 19 32,1 48 278 15 27,8 43 322 19 32,2 48 279 16 27,9 43 323 19 32,3 48 280 16 28,0 43 324 19 32,4 49 281 16 28,1 43 325 19 32,5 49 282 16 28,2 43 326 19 32,6 49 283 16 28,3 43 327 19 32,7 49 284 16 28,4 44 328 19 32,8 49 285 16 28,5 44 329 19 32,9 49 286 16 28,6 44 330 19 33,0 49 287 16 28,7 44 331 19 33,1 49 288 16 28,8 44 332 20 33,2 50 289 16 28,9 44 333 20 33,3 50 290 16 29,0 44 334 20 33,4 50 291 16 29,1 44 335 20 33,5 50 292 16 29,2 45 336 20 33,6 50 293 17 29,3 45 337 20 33,7 50 294 17 29,4 45 338 20 33,8 50 295 17 29,5 45 339 20 33,9 50 296 17 29,6 45 340 20 34,0 51 297 17 29,7 45 341 20 34,1 51 298 17 29,8 45 342 20 34,2 51 299 17 29,9 45 343 20 34,3 51 300 17 30,0 46 344 20 34,4 51 301 17 30,1 46 345 20 34,5 51 302 17 30,2 46 346 21 34,6 51 303 17 30,3 46 347 21 34,7 51 304 17 30,4 46 348 21 34,8 52 305 17 30,5 46 349 21 34,9 52 306 18 30,6 46 350 21 35,0 52 307 18 30,7 46 351 21 35,1 52 308 18 30,8 47 352 21 35,2 52 309 18 30,9 47 353 21 35,3 52 310 18 31,0 47 354 21 35,4 52 311 18 31,1 47 355 21 35,5 52 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 356 21 35,6 53 400 25 40,0 58 357 21 35,7 53 401 25 40,1 58 358 22 35,8 53 402 25 40,2 58 359 22 35,9 53 403 25 40,3 58 360 22 36,0 53 404 25 40,4 58 361 22 36,1 53 405 25 40,5 58 362 22 36,2 53 406 25 40,6 59 363 22 36,3 53 407 25 40,7 59 364 22 36,4 53 408 25 40,8 59 365 22 36,5 54 409 25 40,9 59 366 22 36,6 54 410 26 41,0 59 367 22 36,7 54 411 26 41,1 59 368 22 36,8 54 412 26 41,2 59 369 22 36,9 54 413 26 41,3 59 370 22 37,0 54 414 26 41,4 60 371 23 37,1 54 415 26 41,5 60 372 23 37,2 54 416 26 41,6 60 373 23 37,3 55 417 26 41,7 60 374 23 37,4 55 418 26 41,8 60 375 23 37,5 55 419 26 41,9 60 376 23 37,6 55 420 26 42,0 60 377 23 37,7 55 421 26 42,1 60 378 23 37,8 55 422 27 42,2 61 379 23 37,9 55 423 27 42,3 61 380 23 38,0 55 424 27 42,4 61 381 23 38,1 56 425 27 42,5 61 382 23 38,2 56 426 27 42,6 61 383 23 38,3 56 427 27 42,7 61 384 24 38,4 56 428 27 42,8 61 385 24 38,5 56 429 27 42,9 61 386 24 38,6 56 430 27 43,0 62 387 24 38,7 56 431 27 43,1 62 388 24 38,8 56 432 27 43,2 62 389 24 38,9 57 433 27 43,3 62 390 24 39,0 57 434 27 43,4 62 391 24 39,1 57 435 28 43,5 62 392 24 39,2 57 436 28 43,6 62 393 24 39,3 57 437 28 43,7 62 394 24 39,4 57 438 28 43,8 62 395 24 39,5 57 439 28 43,9 63 396 24 39,6 57 440 28 44,0 63 397 25 39,7 58 441 28 44,1 63 398 25 39,8 58 442 28 44,2 63 399 25 39,9 58 443 28 44,3 63 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 444 28 44,4 63 488 32 48,8 68 445 28 44,5 63 489 32 48,9 69 446 28 44,6 63 490 32 49,0 69 447 29 44,7 64 491 32 49,1 69 448 29 44,8 64 492 32 49,2 69 449 29 44,9 64 493 32 49,3 69 450 29 45,0 64 494 32 49,4 69 451 29 45,1 64 495 32 49,5 69 452 29 45,2 64 496 32 49,6 69 453 29 45,3 64 497 33 49,7 70 454 29 45,4 64 498 33 49,8 70 455 29 45,5 65 499 33 49,9 70 456 29 45,6 65 500 33 50,0 70 457 29 45,7 65 501 33 50,1 70 458 29 45,8 65 502 33 50,2 70 459 29 45,9 65 503 33 50,3 70 460 30 46,0 65 504 33 50,4 70 461 30 46,1 65 505 33 50,5 70 462 30 46,2 65 506 33 50,6 71 463 30 46,3 65 507 33 50,7 71 464 30 46,4 66 508 33 50,8 71 465 30 46,5 66 509 33 50,9 71 466 30 46,6 66 510 34 51,0 71 467 30 46,7 66 511 34 51,1 71 468 30 46,8 66 512 34 51,2 71 469 30 46,9 66 513 34 51,3 71 470 30 47,0 66 514 34 51,4 72 471 30 47,1 66 515 34 51,5 72 472 31 47,2 67 516 34 51,6 72 473 31 47,3 67 517 34 51,7 72 474 31 47,4 67 518 34 51,8 72 475 31 47,5 67 519 34 51,9 72 476 31 47,6 67 520 34 52,0 72 477 31 47,7 67 521 34 52,1 72 478 31 47,8 67 522 35 52,2 73 479 31 47,9 67 523 35 52,3 73 480 31 48,0 68 524 35 52,4 73 481 31 48,1 68 525 35 52,5 73 482 31 48,2 68 526 35 52,6 73 483 31 48,3 68 527 35 52,7 73 484 31 48,4 68 528 35 52,8 73 485 32 48,5 68 529 35 52,9 73 486 32 48,6 68 530 35 53,0 73 487 32 48,7 68 531 35 53,1 74 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 532 35 53,2 74 576 39 57,6 79 533 35 53,3 74 577 39 57,7 79 534 36 53,4 74 578 39 57,8 79 535 36 53,5 74 579 39 57,9 79 536 36 53,6 74 580 39 58,0 79 537 36 53,7 74 581 39 58,1 79 538 36 53,8 74 582 39 58,2 80 539 36 53,9 75 583 40 58,3 80 540 36 54,0 75 584 40 58,4 80 541 36 54,1 75 585 40 58,5 80 542 36 54,2 75 586 40 58,6 80 543 36 54,3 75 587 40 58,7 80 544 36 54,4 75 588 40 58,8 80 545 36 54,5 75 589 40 58,9 80 546 36 54,6 75 590 40 59,0 81 547 37 54,7 75 591 40 59,1 81 548 37 54,8 76 592 40 59,2 81 549 37 54,9 76 593 40 59,3 81 550 37 55,0 76 594 40 59,4 81 551 37 55,1 76 595 41 59,5 81 552 37 55,2 76 596 41 59,6 81 553 37 55,3 76 597 41 59,7 81 554 37 55,4 76 598 41 59,8 81 555 37 55,5 76 599 41 59,9 82 556 37 55,6 77 600 41 60,0 82 557 37 55,7 77 601 41 60,1 82 558 37 55,8 77 602 41 60,2 82 559 38 55,9 77 603 41 60,3 82 560 38 56,0 77 604 41 60,4 82 561 38 56,1 77 605 41 60,5 82 562 38 56,2 77 606 41 60,6 82 563 38 56,3 77 607 42 60,7 83 564 38 56,4 77 608 42 60,8 83 565 38 56,5 78 609 42 60,9 83 566 38 56,6 78 610 42 61,0 83 567 38 56,7 78 611 42 61,1 83 568 38 56,8 78 612 42 61,2 83 569 38 56,9 78 613 42 61,3 83 570 38 57,0 78 614 42 61,4 83 571 39 57,1 78 615 42 61,5 83 572 39 57,2 78 616 42 61,6 84 573 39 57,3 79 617 42 61,7 84 574 39 57,4 79 618 42 61,8 84 575 39 57,5 79 619 43 61,9 84 10 -x 10 -(x+1) 10 -x 10 -(x+1) Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Số đếm/ tổng quan sát được Dự kiến Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên Giới hạn dưới Số đếm/ tổng Giới hạn trên 620 43 62,0 84 644 45 64,4 87 621 43 62,1 84 645 45 64,5 87 622 43 62,2 84 646 45 64,6 87 623 43 62,3 84 647 45 64,7 87 624 43 62,4 85 648 45 64,8 87 625 43 62,5 85 649 45 64,9 87 626 43 62,6 85 650 45 65,0 88 627 43 62,7 85 651 45 65,1 88 628 43 62,8 85 652 45 65,2 88 629 43 62,9 85 653 45 65,3 88 630 43 63,0 85 654 45 65,4 88 631 43 63,1 85 655 45 65,5 88 632 44 63,2 85 656 46 65,6 88 633 44 63,3 86 657 46 65,7 88 634 44 63,4 86 658 46 65,8 89 635 44 63,5 86 659 46 65,9 89 636 44 63,6 86 660 46 66,0 89 637 44 63,7 86 661 46 66,1 89 638 44 63,8 86 662 46 66,2 89 639 44 63,9 86 663 46 66,3 89 640 44 64,0 86 664 46 66,4 89 641 44 64,1 87 665 46 66,5 89 642 44 64,2 87 666 46 66,6 89 643 44 64,3 87 7. Công thức tính và các ví dụ 7.1. Trong Bảng 1 Xác suất, P , phù hợp với giới hạn C dưới và C trên­ được tính xấp xỉ: trong đó: C dưới là giới hạn dưới từ các đĩa song song; C trên là giới hạn trên từ các đĩa song song. 7.2. Trong Bảng 2 Xác suất phù hợp P giữa số đếm/tổng quan sát được S 1 ở bước pha loãng 10 -x và S dưới được chọn ở bước pha loãng 10 -(x+1) hoặc giữa số đếm/tổng quan sát được S 1 ở bước pha loãng 10 -x và giới hạn S dưới ở bước pha loãng 10 -(x+1) hoặc giữa số đếm/tổng quan sát được S 1 ở bước pha loãng 10 -x và giới hạn S dưới ở bước pha loãng 10 -(x+1) được tính xấp xỉ: hoặc trong đó S 1 là tổng hai số đếm của các đĩa song song hoặc kết quả của số đếm từ một đĩa ở bước pha loãng 10 -x ; S dưới là giới hạn thấp hơn được chấp nhận ở bước pha loãng 10 -(x+1) ; S trên là giới hạn cao hơn được chấp nhận ở bước pha loãng 10 -(x+1) . 7.3. Ví dụ 7.3.1. Ví dụ 1 Bước pha loãng Đĩa 1 Số đếm khuẩn lạc Đĩa 2 Số đếm khuẩn lạc 10 -x 100 200 10 -(x+1) 5 9 Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1. Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1. Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2. Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2. Do đó, số đếm 200 ở bước pha loãng 10 -x không so sánh được với kết quả song song 100 và các kết quả song song 5 và 9 ở bước pha loãng 10 -(x+1) . 7.3.2. Ví dụ 2 Bước pha loãng Đĩa 1 Số đếm khuẩn lạc Đĩa 2 Số đếm khuẩn lạc 10 -x 50 90 10 -(x+1) 10 20 Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1. Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1. Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2. Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2. Số đếm 90 ở bước pha loãng 10 -x không so sánh được với kết quả song song 50. Các kết quả song song 10 và 20 ở bước pha loãng 10 -(x+1) có thể so sánh được, 50 và 90 ở bước pha loãng 10 -x là có thể so sánh được, nhưng 50 và 90 là các kết quả không chấp nhận được khi so sánh với 20. Báo cáo tất cả các kết quả đơn lẻ.