TCVN11108:2015

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11108:2015 (ISO 17094:2014) về Gốm mịn (gốm cao cấp, gốm kỹ thuật cao cấp) - Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn của vật liệu bán dẫn xúc tác quang trong môi trường ánh sáng trong phòng TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 11108:2015 ISO 17094:2014 GỐM MỊN (GỐM CAO CẤP, GỐM KỸ THUẬT CAO CẤP) - PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA VẬT LIỆU BÁN DẪN XÚC TÁC QUANG TRONG MÔI TRƯỜNG ÁNH SÁNG TRONG PHÒNG Fine ceramics (advanced ceramics, advanced technical ceramics) - Test method for antibacter i al activity of semiconducting photocatalyt i c materials under indoor li ghting environment Lời nói đầu TCVN 11108:2015 hoàn toàn tương đương với ISO 17094:2014. TCVN 11108:2015 do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC206 Gốm cao cấp biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. Lời giới thiệu Phương pháp thử đối với vải hoặc v ả i dệt không được đề cập trong tiêu chuẩn này v ì không có vải hoặc vải dệt có xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong ph ò ng. Nếu vải hoặc vải dệt có xúc tác quang hoạt t í nh với ánh sáng trong phòng được phát triển, th ì phương ph á p thử phù hợp sẽ được xây dựng với phương pháp kết dính thủy t i nh đã đưa ra trong TCVN 8555 (ISO 27447). GỐM MỊ N (GỐM C A O C Ấ P, GỐM KỸ THUẬT CAO C Ấ P) - PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG KHU Ẩ N CỦA V Ậ T LIỆU BÁN DẪN XÚC TÁC QUANG TRONG M Ô I TRƯỜNG ÁNH SÁNG TRONG PHÒNG Fine ceramics (advanced ceramics, advanced technical ceramics) - Test method for antibacter i al activity of semiconducting photocatalyt i c materials under indoor li ghting environment CẢNH B Á O - Xử lý và thao tác các v i sinh vật có ti ề m năng độc hại yêu c ầ u có khả năng kỹ thuật ở trình độ cao. Ch ỉ những ng ườ i đ ược đào tạo v ề kỹ thuật vi sinh mới được thực hiện thử ngh iệ m. 1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hoạt t í nh kháng khuẩn của vật liệu c ó ch ứ a vật liệu xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng hoặc có màng xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng trên bề mặt bằng cách đo v i khuẩn còn sống s ó t sau khi chiếu s á ng bằng ánh sáng trong phòng. Tiêu chuẩn này áp dụng cho nhiều loại vật liệu xúc tác quang bán dẫn hoạt tính với ánh sáng trong phòng khác nha u được sử dụng làm vật liệu xây dựng, t ấ m phẳng, vách ngăn, dạng t ấ m hoặc sợi là cơ sở tạo thành vật liệu cho các ứng dụng khác nhau. Tiêu chuẩn này không áp dụng cho các loại vật liệu xúc tác quang bán dẫn hoạt tính với ánh sáng dạng bột, hạt hoặc dạng xốp, cũng không áp dụng đối với vải hoặc sợi dệt. Tiêu chuẩn này áp dụng đối với các loại vật liệu xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng được sản xuất cho ứng dụng kháng khuẩn. Các loại t í nh năng kh á c của các loại vật liệu xúc t ác quang hoạt t í nh với ánh sáng trong phòng, như phân hủy các chất nhiễm bẩn nước, tự làm sạch, chống m ờ và làm sạch không khí không thể xác định bằng phương pháp này. 2 Tài liệu viện dẫn Các t à i liệu viện dẫn sau đây rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện d ẫn ghi năm công bố th ì áp dụng bản được nêu. Đối v ớ i các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố th ì áp d ụ ng phiên b ả n mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu c ó ). TCVN 7870-1:2010 (ISO 80000-1:2009), Đại lượng và đơn vị - Ph ầ n 1: Tổng quan. TCVN 8555 ( ISO 27447), Gốm mịn (gốm cao cấp, gốm kỹ thuật cao cấp) - Phương pháp thử hoạt tính kh á ng khuẩn của vật liệu b á n d ẫ n xúc tác quang. TCVN 11105 (ISO 14605), Gốm mịn (gốm cao cấp, gốm kỹ thuật cao cấp) - Nguồn s á ng để th ử nghiệm vật liệu bán dẫn xúc t á c quang được sử dụng trong m ô i trường ánh s á ng trong nhà 3 Thuật ngữ và định nghĩa Tiêu chuẩn này áp dụng các thuật ngữ và định nghĩa sau. 3.1 Ch ấ t xúc tác quang (photocatalyst) Ch ấ t thực hiện nhiều chức năng dựa trên ph ả n ứng oxy hóa và ph ả n ứng khử dưới chiếu xạ tử ngoại (UV), gồm sự phân hủy và loại bỏ các chất nhiễm b ẩ n không kh í và nước, khử mùi và hoạt tính kháng khu ẩ n, tự l àm sạch và ch ố ng mờ. 3.2 Chất quang xúc tác ánh sáng với hoạt tính trong phòng (indoor light active photocatalyst) Ch ấ t xúc tác quang hoạt động dư ớ i chi ế u sáng bằng á nh sáng nhân tạo được sử dụng cho mục đích chi ế u sáng chung. 3.3 Môi trường ánh sáng trong phòng (indoor lighting environment) Chiếu sáng bằng nguồn sáng nhân tạo được sử dụng cho mục đích chiếu sáng chung và không bao gồm ánh sáng mặt trời. 3.4 Vật liệu xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng (indoor light active photocatalytic material) Vật liệu mà trong đó hoặc trên đó chất xúc tác quang hoạt t í nh với ánh sáng trong phòng được b ổ sung bằng cách phủ, ngâm, trộn, v.v... 3.5 Kháng khuẩn (antibacterial) T ì nh trạng ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn trên bề mặt của vật liệu hoặc vải bề mặt phẳng. 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn v ậ t liệu xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng (indoor light active photocatalyst antibacterial activity value) Độ chênh lệch giữa các giá tr ị loga của tổng số vi khuẩn còn sống trên bề mặt phẳng đã được xử lý chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng và chưa được xử lý chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng sau khi chiếu xạ ánh sáng trong phòng. CHÚ TH Í CH: Giá trị n à y bao gồm sự giảm số l ư ợng vi khuẩn kh ô ng có chi ế u xạ ánh sáng trong phòng. 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn vật liệu xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng v ới chiếu xạ ánh sáng trong phòng (indoor light active photocatalyst antibacterial activity value with indoor lighting illumination) Chênh lệch bằng số giữa các giá trị loga của tổng số vi khuẩn còn sống t rên vật liệu được xử lý chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng sau khi chi ế u ánh sáng trong ph ò ng và vật liệu tương tự được giữ trong bóng tối. 4 Ký hiệu A là s ố lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của mẫu chưa được xử lý, chỉ sau khi cấy ghép B D là s ố lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của mẫu chưa được xử lý, sau khi được giữ trong khu vực bóng tối B L là s ố lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của mẫu chưa được xử lý, sau khi chiếu xạ ánh sáng trong phòng với cường độ L C D là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của mẫu đã được xử lý xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng, sau khi được giữ trong khu vực tối C L là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của mẫu đã được xử lý xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng, sau khi chiếu xạ ánh sáng trong phòng với cường độ L D F là hệ số pha loãng L là cường độ chiếu xạ ánh sáng trong phòng L max l à giá trị logarit lớn nhất của vi khuẩn c ò n sống L mean là giá trị logarit trung bình của vi khuẩn còn sống đối với 3 mẫu thử L min là giá trị logarit nhỏ nhất của vi khuẩn còn sống N l à số lượng vi khuẩn còn sống P là nồng độ vi khuẩn R L l à giá trị hoạt tính kháng khuẩn của chất xúc tác quang hoạt tính á nh s á ng trong phòng, sau kh i chiếu xạ tại cường độ không đổi ( L ) trên vật liệu xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng ∆R l à giá trị hoạt tính kháng khuẩn của xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng có chiếu xạ ánh sáng trong phòng V là thể tích của nước phân hủy cazein đậu nành với lexithin và môi trường polysobat 80 đ ể rửa Z là số lượng trung b ì nh của khuẩn lạc trong hai đ ĩ a Petri 5 Nguyên lý Phương pháp này được sử dụng để thu được hoạt tính kháng khuẩn của vật liệu xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng bằng cách cho tiếp xúc mẫu thử với vi khuẩn, dưới điều kiện ánh sáng trong ph ò ng. Phương pháp bao ph ủ t ấ m màng c ó s ẵ n đối với vật liệu tấm phẳng, vách ngăn, dạng tấm. Mẫu thử được đặt nằm trong đĩa Petri và thể huyền phù vi khuẩn được chảy nhỏ giọt vào mẫu thử. Khi đó màng bao phủ được đặt lên trên thể huyền phù v à kính giữ độ ẩm được đặt lên trên đĩa Petri. Đĩa Petri có chứa mẫu được phơi ra ngoài ánh sáng. Sau khi phơi, vi khuẩn thử nghiệm được r ử a ra khỏi mẫu và màng bao phủ. Dung dịch rửa huyền phù này được đo bằng phương pháp đếm vi khuẩn còn sống. 6 Vật liệu 6.1 Chủng vi khuẩn và chuẩn bị thử nghiệm 6.1.1 Ch ủ ng vi khuẩn Chủng vi k huẩ n được sử dụng trong phép thử là giống hoặc tương đương với chủng vi khuẩn được mô tả trong B ả ng 1 và được cung c ấ p theo thực thể đã được đăng ký ở Liên đoàn th ế giới về bộ sưu tập chủng cấy hoặc Hiệp hội Nhật bản v ề bộ sưu tập chủng cấy. Bảng 1 - Các chủng vi khuẩn đư ợ c sử dụng trong thử nghiệm Các loài vi khuẩn Mã W DCM Staphylococcus aureus Eschrichia coli WDCM 00195 WDCM 00196 CHÚ THÍCH: tham chiếu WDCM (Trung tâm dữ liệu th ế giới về vi sinh vật) và trang mạng điện tử: http://www.wdcm.org/. CH Ú THÍCH: Nếu c ầ n thiết, thử nghiệm bổ sung với vi khuẩn khác có thể được phép thực hiện. 6.1.2 Chuẩn bị vi khuẩn Các thao tác vô trùng sử dụng vi sinh vật có thể được tiến hành trong khoang an toàn. Nuôi cấy từng ch ủ ng trong môi trường cấy sinh học (môi trường thạch dinh dưỡng), ủ từ 16 h đến 24 h ở 37 °C ± 1 °C và sau đ ó b ả o quản trong tủ lạnh ở 5 °C đến 10 °C. L ặ p lại nuôi cấy phụ trong một tháng bằng cách lập lại quy trình n à y. Số lượng tối đa của các vi khuẩn từ chủng g ố c được truyền bởi sự thu gom vi khuẩn là 10. Vi khuẩn cấy không được sử dụng nếu tồn chứa sau một tháng. CHÚ THÍCH 1: Trong trường hợp vi khuẩn được b ả o qu ả n ở nhiệt độ lạnh sâu, số lượng tối đa của các vi khuẩn từ chủng gốc được truy ề n bởi sự thu gom vi khuẩn là 10. CHÚ THÍCH 2: N ế u c ầ n, c ó th ể cho phép các phép b ổ sung với các vi khuẩn khác. 6.2 Hóa ch ấ t và cách dùng 6.2.1 Tổng quát C ó thể sử dụng môi trường bán sẵn có cùng thành phần được quy định dưới đây. Th ể tích c ủ a môi trường đã được chuẩn bị phải được điều ch ỉ nh theo số mẫu thử. 6.2.2 N ướ c dinh dưỡng 1/500 (1/500 NB) Đối với 100 mL nước tinh khiết, lấy 3,0 g dịch chiết thịt, 1,0 g pepton và 0,5 g natri clorua, cho vào b ì nh và hòa tan thật kỹ. Khi hỗn hợp đã được hòa tan hoàn toàn, sử dụng dung dịch natri hydroxit hoặc axit clohydric đ ể chỉnh pH về (7,1 ± 0,1) ở 25 °C. L ấ y 2 mL môi trường này v à pha loãng khoảng 500 lần b ằ ng nước tinh khiết và đạt đến độ pH (7,0 ± 0,2) sử dụng dung dịch axit clohydric hoặc dung dịch natri hydroxit. Khử trùng trong n ồ i hấp tại 121 °C ± 2 °C trong ít nhất 15 min. Sau khi chuẩn bị, nếu nước dinh dư ỡ ng 1/500 không được sử dụng ngay, lưu giữ ở nhiệt độ 5 °C đến 10 °C. Không sử dụng nước dinh dưỡng đã pha ch ế quá một tháng. 6.2.3 Thạch dinh dư ỡ ng Đối với 1000 mL nước tinh khiết, lấy 0,3 g dịch chiết thịt, 5,0 g peptone, cho v à o trong bình và hòa tan thật kỹ. Khi hỗn hợp đã được hòa tan hoàn toàn, sử dụng dung dịch natri hydroxit hoặc axit clohydric để đạt được độ pH (6,8 ± 0,2) tại 25 °C. Cho 15,0 g bột thạch v à o môi trường n à y và gia nhiệt b ì nh trong bồn cách thủy đang sôi đ ể hòa tan hoàn toàn bột thạch. Đậy bằng nút cotton và khử trùng trong n ồ i hấp (xem 6.2.2). Sau khi ch uẩ n bị, nếu thạch dinh dưỡng không được sử dụng ngay, lưu giữ tại nhiệt độ 5 °C đến 10 °C. Không sử dụng thạch dinh dưỡng đã pha chế quá một tháng. Giữ nhiệt độ môi trường trong khoảng 45 °C và 48 °C khi trộn với huyền phù vi khuẩn. 6.2.4 Nước phân hủy đậu nành-cazein với lexith i n và polysorbat 80 (SCDLP) Đối với 1000 mL nước tinh khiết, lấy 17,0 g pepton cazein, 3,0 g pepton đậu nành, 5,0 g natri clorua, 2,5 g di-kali hydrophosphat, 2,5 g gluco và 1,0 g lexithin, cho hỗn hợp v à o bình và hòa tan hỗn hợp. Thêm 7,0 g polyoxyetylen sorbitan monooleat và hòa tan nó. Sử dụng dung dịch natri hydroxit hoặc axit clohydric đ ể chỉnh pH về (7,0 ± 0,2) ở 25 °C. Kh ử trùng trong nồi hấp (xem 6.2.2). Nếu cần, định lượng hỗn hợp trong ống thử, đậy bằng nút cotton và khử trùng trong nồi hấp (xem 6.2.2). Sau khi chuẩn bị, nếu SCDLP không được sử dụng ngay, bảo quản ở 5 °C đến 10 °C. Không sử dụng SCDLP đã pha chế quá một tháng. 6.2.5 Dung dịch muối sinh lý Đối với 1000 mL nước tinh khiết, lấy 8,5 g natri clorua, cho vào bình và hòa tan hoàn toàn. Kh ử trùng trong nồi hấp (xem 6.2.2). Nếu cần, định lượng trong ống thử và khử trùng trong nồi hấp (xem 6.2.2). Sau khi chuẩn bị, nếu dung dịch muối sinh lý không sử dụng ngay th ì bảo quản ở 5 °C đến 10 °C. Không sử dụng dung dịch mu ố i sinh lý đã pha chế quá một tháng. 7 Thiết bị, dụng cụ 7.1 Tổng quát Thiết bị, dụng cụ thử nghiệm cho phép xác định hoạt tính kháng khuẩn của vật liệu xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong ph ò ng khi cho chiếu xạ ánh sáng trong ph ò ng để kích hoạt ch ấ t xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng. Thiết bị bao gồm nguồn sáng và khoang chứa mẫu thử. Ví dụ về hệ thống thử nghiệm chỉ ra trong Hình 1. CHÚ DẪN 1 ngu ồ n sáng 2 bộ lọc ngư ỡ ng UV 3 m à ng bao phủ 4 tấm k í nh giữ ẩm 5 đĩa Petri 6 ống thủy tinh hoặc đũa thủy tinh 7 giấy lọc 8 mẫu thử Hình 1 - Sơ đồ thiết bị thử nghiệm 7.2 Màng bao phủ Màng bao phủ phải trơ, không hấp thụ nước và có tính chất kết dính tốt, có mức độ truyền quang trên 85% trong dải 380 nm đến 780 nm. Những tấm này được cắt thành hình vuông với kích thước (40 ± 2) mm x (40 ± 2) mm. 7.3 Tấm kính giữ ẩ m Kính giữ ẩm bao gồm tấm k í nh có chiều dày nhỏ hơn 1,1 mm, có mức độ truyền quang trên 85% trong d ả i 380 nm đến 780 nm. Các tấm kính được cắt với kích thước đ ủ để che hoàn toàn đĩa Petri. 7.4 Ống thủy tinh hoặc đũa thủy tinh Ố ng thủy tinh hoặc đũa th ủ y tinh được quy định trong TCVN 8555 (ISO 27447). Ố ng thủy tinh hoặc đũa th ủ y tinh được chu ẩ n bị bằng cắt ống hoặc đũa có chiều dài từ 10 cm đến 15 cm v à uốn thành hình chữ U hoặc V. 7.5 Nguồn sáng Nguồn sáng đối với điều kiện ánh sáng trong phòng được quy định trong TCVN 11105 (ISO 14605). Phải sử dụng nguồn sáng từ đèn huỳnh quang halophosphat có nhiệt độ màu tương quan trong khoảng 3800 K đến 4500 K. Khi không có sẵn đèn hu ỳ nh quang halophosphat, có thể sử dụng đèn huỳnh quang ba dải, có nhiệt độ màu tương qu a n trong kho ả ng 3800 K đến 4500 K và chỉ số hoàn màu (Ra) cao hơn 80. 7.6 Bộ lọc cắt UV Bộ lọc cắt UV quy định trong TCVN 11105 (ISO 14605) phải được sử dụng theo điều kiện ngưỡng UV (đi ề u kiện A hoặc điều kiện B). Bộ lọc cắt UV phải được gắn ngay dưới đèn. Điều kiện A (theo điều kiện ngưỡng 400 nm) Bộ lọc cắt UV loại A được quy định trong TCVN 11105 (ISO 14605). Điều kiện B (theo điều kiện ngư ỡ ng 380 nm) Bộ l ọc cắt UV loại B được quy định trong TCVN 11105 (ISO 14605). 7.7 Đồng hồ đo độ rọi Đồng hồ đo độ rọi được quy định trong TCVN 11105 (ISO 146 0 5). 8 Mẫu thử Cắt phần phẳng của vật liệu h ì nh vu ô ng kích thước (50 ± 2) mm x (50 ± 2) mm. Độ dày của vật liệu không lớn hơn 10 mm. Sử dụng vật liệu làm mẫu thử c ó h ì nh dạng được tiêu chuẩn h ó a. Chuẩn bị 9 mi ế ng của mẫu không xử lý và 6 miếng của mẫu đã xử lý xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng. Nếu không thể c ó các mẫu không xử lý thì sử dụng c á c t ấ m kính thay thế. C ẩ n thận tránh nhiễm vi sinh vật và lây nhiễm chéo các mẫu. CH Ú THÍCH: N ế u khó hoặc không thể cắt h ì nh vuông có chiều dài (50 ± 2 ) mm (chiều dầy đến mm), có thể chấp nhận sử dụng k í ch c ỡ mẫu khác miễn l à b ề mặt mẫu có thể che ph ủ màng c ó diện tích 400 mm 2 đến 1600 mm 2 . Nếu b ề mặt mẫu bị nhiễm tạp chất h ữ u cơ, có thể chấp nhận trước tiên lo ạ i b ỏ chất nhiễm b ẩ n bằng cách phơi dưới nguồn sáng 1,0 mW/cm 2 trong thời gian 24 h. Nếu cần, mẫu có thể được t ẩ y trước kh i thử ( có nghĩa là bằng cách rửa với etanol hoặc 70% etanol trong nước). 9 Cách tiến hành 9.1 T ổ ng quát Bi ể u đồ phương pháp thử nghiệm được thể hiện trong H ì nh 2. Hình 2 - Biểu đ ồ của ph ươn g pháp thử 9.2 Phương pháp màng bao ph ủ 9.2.1 Cho vi khuẩn đã được lưu giữ vào ống thạch dinh dưỡng sử dụng vòng bạch kim và ủ tại (37 ± 1) °C trong thời gian 16 h đến 24 h. Cho vi khuẩn đ ã được ủ vào ống thạch dinh dưỡng mới và ủ tại (37 ± 1) °C trong th ờ i gian 16 h đến 20 h. Phân tán đồng đ ề u một lượng nh ỏ vi khuẩn thử nghiệm trong NB 1/500 bằng vòng bạch kim, và đo đếm vi khuẩn sử dụng phương pháp quan sát kính hiển vi quang học hoặc bất kỳ phương pháp thích hợp nào khác. Pha loãng thích hợp huyền phù vi khuẩn này với NB 1/500 để đạt được phép đếm 6,7 x 10 5 tế bào/mL đến 2,6 x 10 6 tế b à o/mL và sử dụng kết quả là huyền phù vi khuẩn đối với thử nghiệm. Nếu huyền phù vi khuẩn thử nghiệm không được sử dụng ngay, lưu giữ tại nhiệt độ 0 °C và sử dụng trong 4 h. 9.2.2 Đặt bộ giấy lọc Kiểm soát hơi ẩm đ ã khử trùng trong đáy đĩa Petri đã được khử trùng, cho một lượng th í ch hợp nước đã khử trùng, để tránh tiếp xúc giữa mẫu thử và bộ lọc giấy đã được t ẩ m ướt, để que hoặc ống thủy tinh đã được uốn, như được mô tả trong 7.4, trên bộ lọc giấy và đặt mẫu thử trên nó với bề mặt đ ã được xử lý quang xúc tác. Lấy 0,15 mL huyền phù vi khuẩn thử nghiệm bằng pipet đã khử trùng và cho vào trên mẫu thử. Đặt một mi ế ng màng bao phủ trên ph í a trên huyền phù được nh ỏ và đ ẩ y nhẹ để huyền phù lan rộng ra toàn bộ bề mặt màng bao phủ, trong khi chú ý không để huyền phù rò rỉ ra cạnh màng bao phủ. Sau đ ó d ùng kính giữ ẩ m đậy đĩa Petri. Lặp l ạ i quy trình này đối với từng mẫu thử đã được xử lý quang xúc tác và chưa được xử lý quang xúc tác được sử dụng trong thử nghiệm (sáu mẫu thử đối với mẫu xử lý xúc tác quang và 9 miếng đối với mẫu chưa được xử lý xúc tác quang). Ngoại tr ừ ba mẫu thử chưa được xử lý đối với phép đếm tế bào có thể sống sót được được thực hiện chỉ sau khi huyền phù vi khuẩn thử nghiệm được ủ, tiến hành với thử nghiệm chi ế u sáng trong 9.3. CH Ú THÍCH 1: Đ ể ngăn kính giữ ẩm che mờ, cho 4 mL đến 6 ml nước đã khử trùng vào đĩa Petr i (đư ờ ng k í nh 90 mm). CHÚ THÍCH 2: Số lượng huy ề n phù được điều hòa có thể tạo ra sự rò r ỉ huyền phù từ cạnh t ấ m m à ng bao ph ủ hoặc có thể không đ ủ để làm huyền phù lan ra đồng đều. Trong trường hợp như vậy, có thể chấp nhận để giảm một nửa số lượng huyền phù hoặc t ă ng g ấ p đôi số lượng huyền phù. Tuy nhiên, thậm chí khi số lượng huyền phù vi khuẩn để ủ đã bị thay đổi, phép đếm trên mẫu thử phải như mẫu thử cỡ tiêu chuẩn, c ó 1,0 x 10 5 t ế bào đến 4,0 x 10 5 tế bào. Số lượng huyền phù vi khu ẩ n thử nghiệm đ ể ủ trong tr ườ ng hợp mẫu thử có c ỡ không tiêu chu ẩ n (mẫu thử có c ỡ khác nhau, khác với cỡ được mô tả trong Điều 8) phải tương ứ ng với diện tích màng bao phủ được sử dụng. 9.2.3 Đối với ba mẫu thử được ủ huyền phù vi khuẩn chưa qua xử lý dùng để thử nghiệm (mẫu thử sau khi ủ của v i khuẩn thử nghiệm), đặt màng bao phủ v à mẫu thử chưa được xử lý trong túi Stomacher sử dụng kẹp đã được khử trùng, chú ý tr á nh l à m rò r ỉ huyền phù vi khuẩn từ màng bao phủ và mẫu thử chưa được xử lý. Cho 10 mL SCDLP, ch à xát k ỹ mẫu thử và màng bao phủ từ bên ngo à i túi stomacher bằng tay và làm sạch vi khuẩn thử nghiệm. Nhanh chóng mang dung dịch rửa này để thực hiện phép đo số tế bào sống sót. 9.3 Điều kiện ánh sáng trong phòng 9.3.1 Phụ thuộc vào điều kiện thực tế mà vật liệu quang xúc tác hoạt tính ánh sáng trong phòng được sử dụng, chọn điề u kiện ngư ỡ ng UV từ hai điều kiện được đề cập trong 7.6. Duy trì nhiệt độ xung quanh mẫu thử tại nhiệt độ 25 °C ± 5 °C trong suốt thời gian trong 9.3.4 và 9.3.5. 9.3.2 Đặt đ ồ ng hồ đo độ rọi trên đế thiết bị chiếu sáng. Đặt màng bao phủ và đĩa thủy tinh được sử dụng cho thử nghiệm trên ph í a trên của bộ phận c ả m ứng. 9.3.3 Điều chỉnh cường độ đèn để đạt được chiếu sáng 1000 Ix ± 50 Ix tại bề mặt của mẫu thử. CHÚ THÍCH: Độ chiếu sáng này có thể được thay đ ổ i trong khoảng 100 Ix ± 5 Ix và 3000 Ix ± 150 Ix có tính đến điều kiện thực tế mà vật liệu quang xúc tác hoạt tính ánh sáng trong ph ò ng được sử dụng hiệu quả. 9.3.4 Phơi sáng các đĩa Petri có chứa mẫu thử (ba mẫu thử chưa được xử lý v à ba mẫu thử đ ã được xử lý x ú c tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng) bằng huyền phù vi khuẩn trong 8 h. CHÚ THÍCH: Thời gian phơi nhiễm c ó th ể thay đổi trong khoảng từ 4 h và 24 h có tính đến điề u kiện thực tế m à vật liệu quang x ú c tác hoạt tính ánh sáng trong phòng được sử dụng hiệu quả. 9.3.5 Giữ đĩa Petri có chứa mẫu thử (ba mẫu thử chưa được xử lý và ba mẫu thử đã được xử lý xúc tác quang hoạt tính ánh sáng trong phòng) bằng huyền phù vi khuẩn, trong nơi tối trong khoảng thời gian như được sử dụng trong 9.3.4. 9.3.6 Đối với mẫu thử 9.3.4 và 9.3.5 thực hiện việc rửa theo cùng cách như trong 9.2.3. 9.4 Phép đo số vi khuẩn còn sống 1) Lấy 1 mL dung dịch rửa (xem 9.2.3) bằng pipet đã khử trùng. Cho (9 ± 0,1) mL dung dịch muối sinh lý v à o trong ống thử nghiệm v à lắc mạnh. 2) Lấy 1 mL dung dịch [xem 1) ] bằng pipet mới đã khử trùng. Cho ống thử nghiệm khác có chứa (9 ± 0,1) mL dung dịch muối sinh lý và lắc mạnh. Quá trình này được l ặp lại để đạt được một loạt dung dịch pha loãng, theo phương pháp pha loãng gấp 10 lần. 3) Lấy 1 mL dung dịch từ các ống của từng dãy [xem 9.2.3 và 1) và 2) ] bằng pipet mới đã được khử trùng và cho 1 mL dung dịch v à o hai đĩa Petri. 4) Cho 15 mL đến 20 mL thạch d inh dưỡng được giữ tại nhiệt độ 45 °C đến 48 °C trong từng đĩa Petri [xem 3) ] . Đ ể yên trong 15 min tại nhiệt độ phòng. 5) Úp ngược các đĩa Petri xuống, khi môi trường thạch đông chắc . Ủ trong khoảng thời gian từ 40 h đến 48 h tại nhiệt độ (37 ± 1) °C. 6) Đếm số lượng khuẩn lạc trong loạt đĩa Petri có từ 30 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc. Nồng độ của vi khuẩn của chất l ỏ ng rửa đạt được bằng công thức (1) với hai con số có nghĩa. P = Z x D F (1) trong đ ó P là nồng độ của vi khuẩn (tế bào/mL); Z l à số trung bình các cụm trong hai đĩa cấy vi khuẩn; D F là hệ số pha loãng. Khi số lượng vi khuẩn còn sống sót ít hơn 30 trong các đĩa Petri có 1 mL dung dịch rửa, số lượng tế bào này được sử dụng để t í nh số lượng trung b ì nh. Khi số lượng vi khuẩn sống sót í t hơn một trong đĩa Petri có 1 mL dung dịch rửa, số lượng trung bình được lấy là 1. 10 Tính kết quả 10.1 Tổng quát Kết quả thử nghiệm được tính như sau. Các giá trị tính được luôn luôn được làm tròn đến dấu thập phân thứ hai theo TCVN 7870-1 (ISO 80000-1). 10.2 Công nhận hoàn thành yêu cầu thử nghiệm Sử dụng nồng độ vi khuẩn nhận được trong 9.4 và áp dụng công thức (2) để tính số lượng vi khuẩn còn sống. N = P x V ( 2 ) trong đó N là số lượng t ế b à o của vi khuẩn còn sống; P là nồng độ vi khuẩn nhận được trong 9.4 (t ế b à o/mL ) ; V là thể tích của môi trường SCDLP để rửa (mL). Phép thử được coi l à có giá trị nếu hoàn thành tất c ả 4 hạng mục sau. N ế u một hoặc nhiều hơn các hạng mục này không được h oàn thành, phép thử được coi là không có giá tr ị và ph ả i tiến hành làm lại. 1) Giá trị logarit của số lượng vi khuẩn còn sống chưa đ ượ c xử l ý sau khi nuôi cấy được lấy từ công thức (3) (L max - L min )/(L mean ) ≤ 0,2 ( 3 ) trong đó L max là giá trị logar i t lớn nhất của vi khuẩn c ò n sống; L m i n l à giá trị logarit nh ỏ nhất của vi khuẩn còn sống; L mean là giá trị logarit trung bình của vi khuẩn còn sống đối với 3 mẫu. 2) Giá trị l ogarit của vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý sau khi nuôi cấy phải nằm trong dải t ừ 1,0 x 10 5 đến 4,0 x 10 5 tế bào. 3 ) Vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý sau khi phơi ngoài ánh sáng phải nhi ề u hơn 1 , 0 x 10 3 tế bào đối với tất cả 3 mẫu. Tuy nhiên, nếu sử dụng tấm kính làm mẫu chưa được xử lý th ì số lượng vi khuẩn còn sống sau khi phơi ngoài ánh sáng ph ả i nhiều hơn 1,0 x 10 4 tế bào . 4) Sau khi được giữ ở nơi tối, vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý phải nhiều hơn 1.0 x 10 3 tế bào đối với t ấ t cả 3 mẫu. Tuy nhiên, nếu sử dụng tấm kính làm mẫu chưa được xử l ý thì số lượng vi khuẩn còn sống sau khi phơi ngoài ánh sáng phải nhiều hơn 1,0 x 10 4 tế bào. 10.3 Tính giá trị hoạt tính kháng khuẩn của chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng Sử dụng công thức (4) v à (5) để tính giá trị hoạt tính kháng khuẩn của chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng sau khi phép thử được hoàn thành. Bỏ dấu thập phân thứ hai và biểu thị giá tr ị với một dấ u thập phân. R L = [log 10 (B L /A) - log 10 (C L /A)] = log 10 [ B L /C L ] ( 4 ) trong đó R L là giá trị hoạt tính kháng khuẩn của chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng, sau khi chiếu xạ UV với cư ờ ng độ L; L là cường độ chiếu xạ ánh sáng trong phòng (Ix); A là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý, chỉ sau khi nuôi cấy; B L là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý , sau khi chiếu xạ ánh sáng trong phòng với cường độ L; C L là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của các mẫu đã xử lý xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng, sau khi chiếu xạ ánh sáng trong phòng với cường độ L. ∆R = log 10 [ B L / C L ] - [log 10 ( B D / A ) - log 10 ( C D / A )] =log 10 ( B L / C L ] - log 10 ( B D / C D ] ( 5 ) trong đó ∆R là giá trị hoạt tính kháng khuẩn của chất xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong phòng với chiếu xạ ánh sáng trong phòng; B D là sá lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của các mẫu chưa được xử lý, sau khi được giữ ở nơi tối; C D là số lượng trung bình của vi khuẩn còn sống của các mẫu đã xử lý xúc tác quang hoạt tính với ánh sáng trong ph ò ng, sau khi được giữ ở nơi t ố i . 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm các thông tin sau: a) Viện dẫn tiêu chuẩn n à y [TCVN 11108 (ISO 17094)]; b) Mô t ả loại, kích cỡ, hình dạng v à độ d ày của chất xúc tác quang hoạt tính ánh sáng t rong phòng v à các mẫu thử chưa được xử lý; c) Mô t ả các điều kiện trước khi áp dụng việc phơi ánh sáng; d) Loại vi khuẩn thử nghiệm và số chủng vi khuẩn; e) Nhà sản xuất đèn huỳnh quang UV và s ố sản ph ẩ m; f) Loại bộ lọc ngưỡng UV (nhà sản xu ấ t, số s ả n phẩm); g) Nhà sản xuất đồng hồ đo chiếu xạ và số sản ph ẩ m; h) Các điều kiện ánh sáng bao gồm cường độ chiếu xạ và thời gian phơi ngoài ánh sáng; i) Loại và kích cỡ màng bao phủ và k í nh giữ ẩm; j) số lượng huyền ph ù vi khuẩn thử nghiệm được nuôi cấy; số lượng vi khuẩn c ò n sống trong huyền phù thử nghiệm; k) các giá trị A, B L , C L , R L , B D , C D , ∆R trong 10.3;