TCVN11284:2016

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11284:2016 về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng aklomide - Phương pháp đo quang phổ TIÊU CHU Ẩ N QUỐC GIA TCVN 11284:2016 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AKLOMIDE - PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ Animal f eed i ng stuffs - Determ i nation o f aklomide c o ntent - Spectrophotome t r i c method L ờ i nói đầu TCVN 11284:2016 được xây dựng trên cơ sở tham kh ả o AOAC 969.53 Aktomide in f ee d s. Spec tro photometric metho d; TCVN 11284:2016 do Viện Chăn nuôi bi ê n soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề ngh ị , Tổng cục Tiêu chu ẩ n Đo lường Ch ấ t lượng th ẩ m định, Bộ Khoa học v à Công nghệ công bố. THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AKLOMIDE - PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ Animal f eed i ng stuffs - Determ i nation o f aklomide c o ntent - Spectrophotome t r i c method 1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp đo quang phổ đ ể xác định hàm lượng aklomide trong thức ăn ch ă n nuôi. C HÚ THÍCH: T iê u chuẩn này cũng có thể áp dụng để x á c định aklomide trong các mẫu thức ăn chăn nu ô i có chứa sul f a ni tran hoặc roxarso n e. 2 Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau r ấ t cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm c ô ng b ố th ì áp dụng phiên b ả n được nêu. Đối vớ i các tài liệu viện dẫn không ghi năm công b ố t hì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồ m c ả các s ử a đ ổ i, bổ sung (nếu có). TCVN 6952 (ISO 9498), Thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử. 3 Nguyên tắc Aklomide trong mẫu được tách bằng metanol nóng, axit hóa dung dịch bằng axit clohy dri c, tạo dẫn xuất màu với amoni sul f amat và phát triển màu bằng thuốc thử liên kết, đo cường độ màu ở bước s ó ng 545 nm. 4 Thuốc th ử và vật liệu thử Chỉ sử dụng các thuốc thử tinh khiết phân tích và nước cất hoặc nước đ ã loại ion, trừ khi có quy định khác. 4.1 Titan (III) clorua (TiC l 3 ), dung dịch 4% (khối lượng/ t hể tích) Chuẩn bị dung dịch titan (III) clorua 4% (khối lượng/th ể tích) từ dung dịch titan (III) clorua 20% (khối lượng/thể tích) hoặc từ titan (III) clorua dạng rắn. Chuẩn bị dung dịch mới trong ngày sử dụng. 4.2 Natri nitrit (NaN O 2 ), d ung dịch 0,1% (khối lượng/thể tích) Chuẩn bị d u ng dịch mới trong ngày sử dụng. 4.3 Amoni suifamat (NH 4 SO 3 NH 2 ), dung d ị ch 0,5% (khối lượng/thể t í ch) C â n 500 mg amoni sulfamat, ch í nh xác đến 0,1 mg, hòa tan trong nước và th ê m nước đến 100 ml. Chu ẩ n bị dung d ịch này trong ngày sử dụng. 4.4 Thuốc thử liên kết, dung dịch N -naphthylethylendiamin dihydroclorua (C 10 H 7 NHCH 2 CH 2 NH 2 . 2HC l ) 0,1% (kh ố i lượng/th ể tích) Thuốc t hử này chỉ sử dụng trong v ò ng một tuần sau kh i chuẩn b ị và b ả o quản trong chai tố i màu, đ ể trong t ủ lạnh. 4.5 Dung dịch chuẩn aklom i de (2-chloro-4-nitrobenzamide, C 7 H 5 CIN 2 O 3 ) 4.5.1 Dung dịch chuẩn gốc, 1 mg/ml Cân 100 mg chất chu ẩ n aklomide tinh khiết, chính xác đến 0,1 mg, cho vào b ì nh định mức 100 m l và h ò a tan trong khoảng 75 ml metanol (4.6), th ê m metanol đến vạch và trộn đều. 4.5.2 Dung dịch chuẩn trung gian , 10 μg/ml Dùng pipet chuyển 10 ml dung dịch gốc (4.5.1) sang b ì nh định mức 100 ml (5.2), pha lo ã ng bằng metanol (4.6) đến vạch và trộn. D ù ng pipet chuyển 5 ml dung dịch thu đ ư ợc sang b ì nh định mức 50 ml (5.2). Làm bay hơi đến khô tr ê n n ồ i cách th ủ y (5.6) sử dụng dòng không khí và đ ể nguội đến nhiệt độ ph ò ng. Cho th ê m khoảng 30 ml dung dịch axit clohydric 0,15 M (4.7), lắc trong 10 m i n, thêm axit clohydric 0,15 M đến vạch và trộn đều. 4.5.3 Dung dịch chuẩn làm việc, 0, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6 và 2,0 μg/ml Chuyển 0, 1, 2, 3, 4 và 5 ml d ung d ịch chuẩn trung gian (4.5.2) vào cá c b ì nh định mức 25 ml (5.2) v à pha loãng bằng dung dịch ax i t clohydric 0,15 M (4.7) đến vạch. 4.6 Metanol (CH 3 OH). 4.7 Axit clohydric (HC l ), dung dịch 0,15 M. 4.8 Axit clohydric đặc , nồng độ lừ 36,5 % đến 38 % (khối lượng/thể tích). 4.9 Natri hy d roxit (NaC l ), dung dịch 10 M. 5 Thiết b ị , dụng cụ Sử dụng các thiết b ị , dụng cụ thông thường của phòng thử nghiệm v à cụ thể nh ư sau: 5.1 Máy đo màu hoặc máy đo quang phổ, đo ở bước sóng 545 nm. 5.2 B ì nh định mức, dung tích 25 ml, 50 ml, 100 ml. 5.3 B ình nón, dung t í ch 125 ml. 5.4 Ố ng đ o màu. 5.5 Pipet, có th ể phân phối được các lượng 1 ml, 2 ml, 3 m l , 4 ml v à 5 ml. 5.6 Nồi cách thủy, c ó thể duy trì được nhiệt độ ở 60 °C. 5.7 Giấy lọc W hatman s ố 4 . 5.8 Cân ph â n tích, có thể cân chính xác đến 0,1 mg. 6 L ấ y mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải đúng l à mẫu đại diện . Mẫu không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá trình vận chuyển hoặc bảo quản . Việc lấy m ẫ u không quy định trong tiêu chuẩn này, n ê n lấy mẫu theo TCVN 4325 (ISO 6497) Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu. 7 Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử theo TCVN 6952 (ISO 9498). 8 Cách t iế n hành 8.1 Chuẩn bị đ ườ ng chuẩn Chuyển 4 ml mỗi dung d ị ch chu ẩ n làm việc (4.5.3) vào các ống đo màu riêng rẽ (5.4) và t hực hiện phép đo màu theo 8.3. Các ống chứa lần lượt 0; 1,6; 3,2; 4,8; 6,4 và 8,0 μg aklomide, t ương ứng với hàm lượng aklomide tro ng m ẫ u l à 0; 0,008; 0,016; 0,024; 0,032 và 0,040% (khối lượng) khi phần mẫu thử được l ấ y là 5 g. Dựng đường chuẩn của độ hấp thụ theo phần trăm khối lượng aklomide. 8.2 Chu ẩ n bị dung dịch thử Cân 5 g ph ầ n mẫu thử, ch í nh xác đến 1 mg, có chứa hàm lượng aklomide khoảng 0,025%, cho vào bình đ ịnh mức 100 ml (5.2), thêm 75 m l metanol (4.6) và l à m nóng 30 min ở 60 o C trên nồ i cách thủy (5.6), th ỉ nh thoảng lắc bình. Lấy b ì nh ra khỏi nồi cách thủy, để nguội đến nhiệt độ phòng và thêm metano) (4.6) đến vạch. Trộn kỹ và để yên 40 min để cho phần hạt lắng xuống. Dùng pipet lấy 5 m l phần ch ấ t lỏng trong suốt phía tr ê n cho vào b ị nh đ ị nh mức 50 ml (5.2) và thêm dung dịch axit clohydric 0,15 M (4.7) đến vạch. Lắc kỹ rồi lọc qua giấy l ọc Whatman số 4 (5.7) v à o b ì nh nón 125 ml (5.3). Lọc lại, nếu dịch lọc vẫn đục. 8.3 Phép xác định Dùng pipet lấy dịch lọc cho v à o 2 ố ng nghiệm, mỗi ống 4 ml, th ê m 2 giọt titan (III) clorua 4% (4.1), trộn và đ ể y ê n 2 min. Th ê m 2 giọt dung d ị ch natri hydroxit 10 M (4.9), l ắc trộn cho đến khi có kết tủa bền màu trắng, sau đó axit hóa bằng 2,0 ml axit clohydr i c đặc (4.8). Trộn rồi để yên cho dung d ị ch trong suốt. Cho vào một ống nghiệm 0,5 m l dung dịch natr i nitrit (4.2) và cho vào ống còn lạ i 0,5 ml nước làm mẫu trắng, lắc đ ể trộn đều. Sau 3 min, bổ sung vào mỗi ống 0,5 ml amoni su lf amat 0,5% (4.3) v à trộn. Sau 2 min, cho vào mỗi ống 0,5 ml thu ố c thử liên kết (4.4), trộn và để phát triển màu trong 15 min. Đọc độ hấp thụ A của dung dịch ở bước sóng 545 nm trong máy đo màu hoặc máy đo quang ph ổ (5.1). L ấ y số đo độ hấp thụ của mẫu thử tr ừ đi độ hấp thụ của mẫu trắng và dựa vào đường chuẩn (xem 8.1) để tính hàm lượng aklomide có trong mẫu thử. 9 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo th ử nghiệm phải ghi rõ: a) Mọi thông tin c ầ n thiết để nhận biết đầy đ ủ v ề mẫu thử; b) Phương pháp lấy mẫu đ ã sử dụng, nếu bi ế t; c) Phương pháp thử đ ã dùng, viện dẫn tiêu chu ẩ n này; d) Tất cả các chi tiết th a o tác không quy định trong tiêu chu ẩ n này, hoặc tùy chọn cùng với các chi tiết bất thường nào khác có thể ảnh hưởng đến k ế t quả; e) Kết quả thử nghiệm thu được.