TCVN10486:2014

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10486:2014 (AOAC 961.24) về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng amprolium bằng phương pháp quang phổ TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10486:2014 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AMPROLIUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ Animal f eeding stuffs - Determination of amprolium content by spectrophotometric method Lời nói đầu TCVN 10486:2014 được xây dựng dựa theo AOAC 961.24 Amprolium in Feeds. S pectrophotometric Method; TCVN 10486:2014 do Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, T ổ ng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng th ẩ m định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AMPROLIUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ Animal f eeding stuffs - Determination of amprolium content by spectrophotometric method 1 . Phạm vi áp dụng Ti ê u chuẩn này quy định phương pháp đo quang phổ để xác định h à m lượng amprolium trong thức ă n chăn nuôi. 2 . Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố th ì áp dụng phiên bản được nêu. Đối v ớ i các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố th ì áp dụng phiên b ả n mới nhất, bao gồm cả các sửa đ ổ i, bổ sung (nếu có). TCVN 6952 (ISO 6498), Thức ăn chăn nuôi - Chuẩn b ị mẫu thử. 3 . Nguyên tắc Amprolium được chiết ra khỏi thức ăn chăn nuôi bằng hỗn hợp metanol-nước. Dịch chiết được tinh sạch bằng sắc ký trên nhôm oxit, amprolium phản ứng với 2,7-naphthalenediol, kali f erixyanua [K 3 Fe(CN) 6 ], kali xyanua (KCN) và natri hydroxit (NaOH) trong metanol tạo thành hợp chất màu, đo đ ộ h ấ p thụ của hợp ch ấ t này ở bước sóng 530 nm. Các thành phần thường c ó trong thức ăn chăn nuôi thương mại, các vitamin, kháng sinh, picolin hoặc pyrimidin không gây nhiễu, c ò n nithia zi de, enheptin A và nitrofurazone có thể gây nhiễu đến phép thử. 4 . Thuốc thử và vật liệu thử Ch ỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khi ế t phân tích và nước c ấ t hoặc nước đã khử khoáng hoặc nước c ó độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác. 4.1 . Metanol loãng Trộn 2 thể tích metanol khan với một thể tích nước. Làm nguội đến nhiệt độ phòng trước khi sử dụng. 4.2 . Dung dịch natri hydroxit (NaOH) Hòa tan 2,25 g natri hydro xi t trong 200 m l nước. 4.3 . Dung dịch natri hydroxit trong alcol Pha loãng 15,0 ml dung dịch natri hydroxit (4.2) với metanol khan đến 200 ml. Đậy nắp bình và trộn kỹ. 4.4 . Dung dịch kali xyanu a (KCN) Hòa tan 1,0 g kali xyanua trong 100 ml nước. Khi được bảo quản trong b ì nh có n ắ p đậy kín th ì dung dịch này bền được trong 2 tuần. 4.5 . Dung dịch kali ferixyanua [K 3 Fe(CN) 6 ] Hòa tan 200 mg kali f erixyanua trong 100 ml nước. Khi được bảo quản trong bình có nắp đậy kín th ì dung dịch này bền được trong 2 tuần. 4.6 . Nhôm oxit (Al 2 O 3 ), loại dùng cho sắc ký, phải đạt yêu cầu của phép thử sau: Lắc mạnh 10 g nhôm oxit với 100 ml nước đựng trong b ì nh dung tích 250 ml có nắp đậy thủy tinh trong khoảng trên 2 min. Để lắng, gạn ch ấ t lỏng và xác định pH bằng cách đo điện thế. pH phải trong khoảng từ 9,5 đến 10,5. Độ thu hồi của amprolium có th ể thay đổi tùy thuộc vào các l oại nhôm oxit khác nhau. Kiểm tra độ thu hồi cột b ằ ng ph â n tích dịch chiết thức ăn chăn nuôi không chứa thuốc có bổ sung ch ấ t chuẩn. 4.7 . Dung dịch naphthalened i ol Hòa tan 25 mg 2,7-naphthalenediol trong 1 lít metanol khan. 4.8 . Thuốc thử hiện màu Cho 5 ml dung dịch kali f erixyanua (4.5) vào 90 ml dung dịch naphthalenediol (4.7) đựng trong bình cầu dung tích 250 ml c ó nắp đậy k í n và trộn kỹ. Thêm 5 ml dung dịch kali xyanua (4.4), đậy nắp và trộn kỹ rồi để yên từ 30 min đến 35 min. Thêm 100 ml dung dịch natri hydroxit trong alcol (4.3) và trộn. Lọc dung dịch thu được qua bộ lọc thủy tinh có độ xốp trung bình trước khi sử dụng, dùng dung dịch đã chuẩn bị trong vòng 75 min. 4.9 . Dung dịch chuẩn amprolium, 25 μg/ml Cân 25,0 mg chất chuẩn amprolium cho vào bình định mức 50 ml, hòa tan trong metanol loãng (4.1) thêm metanol đến vạch và trộn. Chuyển 5 ml dung dịch thu được vào bình định mức 100 ml, thêm metanol lo ã ng đến vạch. Dung dịch này c ó thể bền được một tuần. 5 . Thiết bị, dụng cụ Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và các thiết bị, dụng cụ sau đây: 5.1 . Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,1 mg. 5.2 . Bình cầu, dung tích 250 m l , có nắp thủy tinh đậy k í n. 5.3 . Pipet, có th ể phân phối các thể tích thích hợp. 5.4 . Ố ng ly tâm, dung tích 15 ml. 5.5 . Máy ly tâm. 5.6 . Gi ấ y lọc, c ó độ xốp trung bình, ví dụ W hatman No. 42 hoặc loại tương đương. 5.7 . Giấy lọc nhanh. 5.8 . Phễu Buchner. 5.9 . Bông thủy tinh, ví dụ Pyrex hoặc loại tương đương. 5.10 . Đũa thủy tinh. 5.11 . Máy đo quang phổ hoặc máy đo màu, có thể đo ở bước s ó ng 530 nm. 5.12 . Máy khuấy từ hoặc máy lắc cơ học. 5.13 . Cuvet, chiều dài đường quang 1 cm. 5.14 . Bơm hút chân không. 5.15 . Bình định mức, dung tích 50 ml, 100 ml, 200 m l , 250 ml. 5.16 . Ố ng thủy tinh hoặc cột sắc k í thủy tinh, chiều dài 40 cm, có đường k í nh trong khoảng 9 mm đến 10 mm. 6 . Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải đúng là mẫu đại diện. Mẫu không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá tr ì nh vận chuyển hoặc bảo quản. Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 4325 (ISO 6497) [1] . 7 . Chuẩn bị m ẫ u thử Chuẩn b ị mẫu thử theo TCVN 6952, (ISO 6498). 8 . Cách tiến hành 8.1 . Chiết m ẫ u C â n chính xác một lượng mẫu đã nghiền không l ớn hơn 15 g có chứa từ 1,5 mg đến 2,5 mg amprolium (kh ô ng quá 2,5 mg) rồi chuyển sang bình cầu dung tích 250 ml có nắp thủy tinh đậy k í n (5.2). Thêm 100 , 0 ml metanol loãng (4.1), đậy nắp bình và cho khuấy từ hoặc lắc cơ học trong 60 min. Lọc qua giấy lọc(5.6), loại bỏ từ 10 ml đến 15 ml dịch lọc đ ầ u tiên, thu l ấ y khoảng 25 ml đến 40 ml dịch lọc. Dịch lọc thu được phải trong, lọc lại qua giấy lọc mới hoặc ly tâm cho đến khi dịch lọc trong suốt, nếu cần. 8.2 . Sắc ký 8.2.1 . Chuẩn bị nhôm oxit Cho 1 lít nước v à o 200 g nhôm oxit (4.6). Khuấy hỗn hợp trong 30 min. Lọc hỗn h ợ p qua giấy lọc nhanh (5.7) trên phễu Buchner (5.8). Rửa nhôm oxit tr ê n bộ lọc ba l ầ n bằng metanol khan, m ỗ i lần dùng 100 ml. Làm khô bằng không khí trong điều kiện chân không cho đến khi nhôm oxit đạt đến nhiệt độ phòng. Nhôm oxit đã chuẩn bị cần phải có tính chảy tốt. Bảo qu ả n nhôm oxit trong cha i thủy tinh có n ắ p đậy kín. 8.2.2 . Chuẩn bị cột sắc k í Thu nh ỏ một đầu ống th ủ y tinh dài 40 cm, có đường kính trong khoảng 9 mm đến 10 mm (5.16) bằng cách xoay trong ngọn l ử a cho đến khi còn khoảng 4 mm đến 5 mm. Nút bông thủy tinh (5.9) vào đầu dưới của ống và nén bằng đũa thủy tinh (5.10) đến khi thu được bề dày của bông thủy tinh từ 2 mm đến 3 mm. Chuyển 5,0 g nhôm oxit đã chuẩn bị (8.2.1) sang ống khô và nhồi cột bằng cách g õ nhẹ ống. Chuẩn bị cột cho từng mẫu. CH Ú TH Í CH 1: Độ thu hồi của cột amprolium có thể khác nhau giữa các hãng khác nhau. Kiểm tra độ thu hồi của cột b ằ ng cách bổ sung chất chuẩn vào dịch chi ế t t ừ mẫu thức ăn chăn nuôi không chứa amprol i um. CHÚ TH Í CH 2: C ó thể sử dụng cột sắc k í th ủ y tinh, chiều dài 40 cm, đường kính trong khoảng 9 mm đến 10 mm (5.16). 8.3 . Sắc k ý d ị ch chiết mẫu thức ăn chăn nuôi Dùng pipet (5.3) lấy 25 ml dịch chiết trong suốt (8.1) sang cột (8.2.2). Loại b ỏ 3 ml dịch rửa giải đầu tiên v à thu lấy 5 ml tiếp theo đ ể hiện màu. 8.4 . Phép xác định Đánh dấu riêng rẽ ba ống ly t âm 15 ml (5.4) l à X, S và B. Cho vào ống X 4,00 ml dịch rửa giải trong suốt thu được từ cột (xem 8.3), cho 4,00 ml dung dịch chuẩn amprolium (4.9) vào ống S và cho 4,00 ml metanol loãng (4.1) vào ống B làm mẫu trắng. Cho vào mỗi ống 10,0 ml thuốc thử hiện màu (4.8), đ ậ y nắp, trộn rồi để yên 20 min. Ly tâm từ 2 min đến 3 min, gạn vào các cuvet 1 cm (5.13) và đ ậ y cuvet. Nếu các dung dịch không trong suốt th ì loại b ỏ các hạt lơ lửng bằng cách gạn qua nút bông thủy tinh (5.9) vào cuvet. Xác định độ hấp thụ của các dung dịch X và S trong máy đo quang phổ hoặc máy đo màu (5.11) ở bước sóng 530 nm, dùng dung dịch B làm dung dịch so sánh, trong khoảng từ 20 mm đến 25 min sau khi bổ sung thuốc thử hiện màu. 9 . Tính kết qu ả Hàm lượng amprolium trong mẫu thức ăn chăn nuôi, X 1 , tính bằng phần trăm khối lư ợ ng, theo c ô ng thức sau: (1) Hàm lượng amprolium trong mẫu thức ă n chăn nuôi, X 2 , tính bằng miligam trên kilogam, theo công thức sau: (2) Trong đ ó : A và A’ l à độ hấp th ụ đo được của dung dịch mẫu thử và dung dịch chuẩn tương ứng; C l à khối lượng amprolium trong phần dung dịch chuẩn đã sử dụng, tính bằng miligam (trong trường hợp này, C = 0,100 mg); V 1 là th ể tích phần mẫu thử sau khi pha loãng bằng metanol (xem 8.1), tính bằng mililit (trong trường hợp này, V 1 = 100,0 ml); V 2 là thể tích dung dịch th ử dùng cho phép xác định (xem 8.4), tí nh bằng mililit (trong trường hợp này, V 2 = 4,00 ml); 10 3 l à hệ số chuyển đổi từ gam sang miligam; W là khối lượng phần mẫu thử, tính bằng gam (g). 10 . Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi r õ : a) Mọi thông tin cần thi ết để nhận biết đ ầ y đủ v ề mẫu thử; b) Phương pháp lấy mẫu đ ã sử dụng, nếu biết; c) Phương pháp thử đ ã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) Tất cả các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy chọn cùng với các chi ti ế t bất thường nào khác có thể ảnh hưởng đến k ế t quả; e) Kết quả thử nghiệm thu được. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 4325 (ISO 6 497) Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu