TCVN10493:2014

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10493:2014 (AOAC 961.26) về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng zoalene bằng phương pháp quang phổ TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10493 : 2014 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ZOALENE BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ Animal feeding stuffs - Determination of zoalene content by spectrophotometric method Lời nói đầu TCVN 10493:2014 được xây dựng dựa theo AOAC 961.26 Zoalene in Feeds . Spectrophotometric Method ; TCVN 10493:2014 do Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng th ẩ m định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ZOALENE BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ Animal feeding stuffs - Determination of zoalene content by spectrophotometric method 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp đo quang phổ để xác định hàm lượng zoalene trong thức ăn chăn nuôi. Phương pháp này có khoảng định lượng từ 40 mg/kg đến 250 000 mg/kg. Tiêu chuẩn này không áp dụng được khi thức ăn chăn nuôi có chứa furazolidone, nitrofurazone và nihydrazone. 2. Tài liệu viện dẫn Các t à i liệu viện dẫn sau r ấ t cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện d ẫ n ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện d ẫn k hông ghi năm công b ố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có). TCVN 6952 (ISO 6498), Thức ăn chăn nuôi - Chuẩn bị mẫu thử. 3. Nguyên tắc Zoalene được chiết ra khỏi mẫu thức ăn chăn nuôi, premix và thức ăn đậm đặc bằng axetonitril 85 %. Đ ối với mẫu chứa ít hơn 10 000 mg/kg th ì bổ sung nhôm oxit. Sau khi lọc, pha loãng rồi phản ứng với etylendiamin, zoa l ene được xác đ ị nh bằng phương pháp quang phổ. 4. Thuốc thử và vật liệu thử Ch ỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khi ế t phân tích và nước c ấ t hoặc nư ớ c đã khử k hoán g hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác. 4.1. Axeton, 95 % (thể tích) Trộn 5 ml nước với 95 ml axeton. 4.2. Axetonitril (CH 3 CN), 85 % (thể tích) Trộn 850 ml axetonitril khan với 150 ml nước. CHÚ Ý: Axetonitril là ch ấ t độc, c ầ n xử lý với chất này trong t ủ hút, tránh tiếp xúc với da. 4.3. Nhôm oxit, đ ã hoạt hóa Sử dụng nh ô m oxit loại Alcoa F 20 hoặc tương đương, cỡ từ 80 mesh đến 200 mesh. 4.4. Dimethyl f ormamid (DMF) , 95 % (thể t í ch) Cho 5 ml nước vào 95 ml DMF kỹ thuật. Chu ẩ n bị dung dịch mới trong ngày sử dụng, vì dung dịch đã chuẩn bị để lâu có thể bị v ẩ n đục. 4.5. Etylendiamin , từ 98 % đến 100 %, không màu. CHÚ Ý: Etylendiamin l à chất độc, c ầ n xử lý với ch ấ t này trong tủ hút, tránh tiếp xúc v ới da. 4.6. Dung dịch chuẩn zoalene , 40 m g/ml Cân 40,0 mg chất chuẩn zoalene cho vào bình định mức 1 lít , pha loãng đến vạch bằng axetonitril 85 % (4.2) và trộn. 5. Thiết bị, dụng cụ Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và các thiết b ị , dụng cụ sau đây: 5.1. Cân phân tích , có thể cân chính xác đến 0,1 mg. 5.2. Bình định mức , dung tích 100 ml. 5.3. Bình nón , dung tích 250 ml. 5.4. Bể ổn nhiệt , duy tr ì nhiệt độ ở 50 °C ± 5 °C. 5.5. Bộ lọc có bộ phận hút chân không , có phễu thủy tinh xốp đường kính 40 mm cỡ lỗ nh ỏ hoặc trung bình hoặc loại tương đương. 5.6. Cốc có mỏ , dung tích 50 ml. 5.7. Pipet , có thể phân phối các thể tích thích hợp. 5.8. Máy đo quang phổ hoặc máy so màu , có th ể đo ở bước sóng 560 nm. 5.9. Cuvet , chiều dài đường quang 1 cm. 5.10. Giấy lọc mịn , Reeve Angel số 804 hoặc loại tương đương. 5.11. Tủ hút. 6. Lấy mẫu M ẫ u gửi đến phòng thử nghiệm phải đúng l à mẫu đại d iện. M ẫ u không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá trình v ậ n chuyển hoặc bảo quản. Việc lấy mẫu kh ô ng quy định trong tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 4325 (ISO 6497) [ 1] . 7. Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị m ẫ u thử theo TCVN 6952 (ISO 6498). 8. Cách tiến hành 8.1. Chiết m ẫ u Cân 10,0 g phần mẫu thử cho vào b ì nh nón 250 ml (5.3) và thêm 65 ml axetonitri l (4.2). Làm ấm trên bể ổn nhiệt (5.4) ở 50 °C ± 5 °C, thỉnh thoảng xoay b ì nh. Để nguội đ ế n nhiệt độ phòng trong khoảng 30 min. Thêm 20 g nhôm oxit (4.3) và xoay b ì nh trong khoảng 3 min. CHÚ T HÍ CH: Đối với mẫu thức ă n chăn nuôi đậm đặc chứa hàm lượng zoalene b ằ ng hoặc lớ n hơn 10 000 mg/kg th ì không c ầ n bổ sung nhôm oxit. Lọc hỗn hợp trên bộ lọc có bộ phận hút (5.5), chuyển càng nhiều chất rắn lên phễu lọc c à ng tốt. Chuyển phần ch ấ t rắn lưu lại bằng một thể tích tối thiểu của axetonitril (4.2) và hút đến khô. Tạo huyền phù đối với ph ầ n chất rắn đã đóng bánh trên phễu lọc bằng một thể tích tối thiểu của axetonitril (4.2) và khu ấ y nhẹ mà kh ô ng h ú t. Sau đ ó lọc có hút và l ặp lại việc tạo huyền phù và lọc, giữ tổng thể t í ch luôn nh ỏ hơn 100 ml. Chuyển hỗn hợp phần dịch lọc sang b ì nh định mức 100 ml (5.2) (có thể dùng b ì nh định mức để thu nhận trực tiếp dịch lọc), thêm axetonitril 85 % (4.2) đến vạch và trộn. 8.2. Phép xác định Dựa vào nồng độ zoalene, chuẩn bị các dung dịch pha loãng bằng axeton 95 % với các lượng như trong B ả ng 1. Bảng 1 - Dung dịch mẫu thử dùng cho phép xác đ ị nh Hàm lư ợ ng zoalene có trong mẫu, mg/kg Độ pha loãng L ư ợng sử dụng, ml Hệ s ố nhân, M Từ 40 đến 120 Không 4 1 Từ 120 đến 250 Không 2 2 Từ 250 đến 500 Từ 10 thành 100 10 4 Từ 500 đến 1 000 Từ 10 thành 100 5 8 Từ 1 000 đến 2 500 Từ 10 thành 100 2 20 Từ 2 500 đến 5 000 Từ 1 th à nh 100 10 40 Từ 5 000 đến 10 000 Từ 1 thành 100 5 80 Từ 10 000 đến 25 000 Từ 1 thành 100 2 200 Từ 25 000 đến 50 000 Từ 1 thành 1 000 10 400 Từ 50 000 đến 100 000 Từ 1 thành 1 000 5 800 Từ 100 000 đến 250 000 Từ 1 thành 1 000 2 2 000 Dùng pipet (5.7) lấy các lượng quy định trong Bảng 1 cho vào ba cốc có mỏ (5.6) tương ứng X, Y và Z đối với các nồng độ nhỏ hơn 0,25 % (< 2="" 500="" mg/kg).="" bỏ="" qua="" cốc="" x="" đối="" với="" các="" mẫu="" chứa="" lớn="" hơn="" 0,25="" %="" (=""> 2 500 mg/kg). Dùng pipet (5.7) l ấ y 1 ml dung dịch chuẩn (4.6) cho vào cốc Z và cho bay hơi tất cả các dung dịch đến khô dưới d ò ng không khí. CHÚ TH Í CH: Có thể làm nóng để cho bay hơi dung dịch nhưng nhiệt độ không được vượt quá 60 °C. Dùng pipet (5.7) lấy 10 ml DMF 95 % (4.4) cho vào cốc X và cho v à o hai cốc Y và Z mỗi cốc 2 ml. Th ỉ nh thoảng xoay cốc trong khoảng 5 min để hòa tan zoalene. Dùng pipet lấy 8 ml etylendiamin (4.5) cho vào cốc Y và cốc Z rồi t rộn. Sau 2 min nếu vẫn thấy đục th ì lọc qua giấy lọc mịn (5.10). Đ ọ c độ hấp thụ của các dung dịch ở bước sóng 560 n m trong cuvet 1 cm (5.8) so với DMF 95 % (4.4) sau khi bổ sung etylendiamin 5 min. Giữ khoang đựng cuvet của máy đo quang phổ ở nhiệt độ nhỏ hơn 30 °C để tránh bạc màu nhanh. Nếu độ hấp thụ lớn hơn 1 th ì phân tích lại, sử dụng dung dịch pha loãng hơn hoặc sử dụng lượng dung dịch nhỏ hơn. 9. T í nh kết quả Hàm lượng zoalene trong mẫu thử , X 1 , tính bằng phần trăm khối lượng mẫu, theo công thức sau: Hàm lượng zoa l ene trong mẫu thử, X 2 , tính bằng miligam trên kilogam mẫu, theo công thức sau: Trong đó: A X , A Y và A Z l à độ h ấp thụ đo được của các dung d ị ch mẫu thử tương ứng trong các cốc X, Y và Z; M l à hệ số nh â n, xác định được theo Bảng 1. 10. Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) Mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đ ủ về mẫu thử; b) Phương pháp lấy mẫu đ ã sử dụng, nếu biết; c) Phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chu ẩ n này; d) Tất c ả c á c chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chu ẩ n này, hoặc tùy ch ọ n cùng với các chi tiết bất thư ờ ng nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả; e) Kết quả th ử nghiệm thu được. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 4325 (ISO 6497) Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu