TCVN9333:2012

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9333:2012 về Thực phẩm - Xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật bằng sắc ký khí khối phổ và sắc ký lỏng khối phổ hai lần - Phương pháp Quechers TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9333:2012 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT BẰNG SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ VÀ SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN - PHƯƠNG PHÁP QUECHERS Foods - Determination of pescitides residue by gas chromatography mass spectrometry and liquid chromatography tandem mass spectrometry - QuEChERS method Lời nói đầu TCVN 9333:2012 được xây dựng trên cơ sở AOCA 2007.01 Pesticide residues in foods by acetonitrile extraction and partitioning with magnesium sulfate. Gas chromatography/mass spectrometry and liquid chromatography/tandem mass spectrometry; TCVN 9333:2012 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT BẰNG SẮC KÝ KHÍ KHỐI PHỔ VÀ SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN - PHƯƠNG PHÁP QUECHERS Foods - Determination of pescitides residue by gas chromatography mass spectrometry and liquid chromatography tandem mass spectrometry - QuEChERS method 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp QuEChERS 1) để xác định dư lượng các thuốc bảo vệ thực vật sau trong thực phẩm có nguồn gốc thực vật: atrazine, azoxystrobin, bifenthrin, carbaryl, chlorothalonil, chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, λ -cyhalothrin, cyprodinil, o,p ’-DDD, dichlorvos, endosulfan sulfat, ethion, imalazil, imidachlorprid, kresoxim-methyl, linuron, methamidophos, methomyl, permethrins, procymidone, pymetrozine, tebuconazole, thiabendazole, tolylfluanid và trifluralin. Phương pháp này đã được đánh giá trong một nghiên cứu liên phòng trên rau diếp, nho và cam. Các thuốc bảo vệ thực vật là đại diện được chọn trong một số nền mẫu đại diện và phương pháp có thể áp dụng đối với các thuốc bảo vệ thực vật khác và nền mẫu khác tương tự. Giới hạn định lượng của phương pháp nhỏ hơn 10 ng/g theo kết quả các thử nghiệm liên phòng được nêu trong Phụ lục A của tiêu chuẩn này. 2. Nguyên tắc Phương pháp QuEChERS dựa trên chiết một lần bằng axetonitril đã được đệm hóa và tách khỏi nước có trong mẫu bằng phân bố lỏng lỏng nhờ muối magie sulfat (MgSO 4 ). Quá trình làm sạch bằng chiết phân tán pha rắn (d-SPE) được dùng để loại các axit hữu cơ, nước còn dư và các thành phần khác nhờ phối hợp chất hấp phụ amin bậc 1 và bậc 2 (PSA) và MgSO 4 ; dịch chiết được tách bằng sắc ký lỏng (LC) hoặc sắc ký khí (GC) và phân tích bằng kỹ thuật khối phổ (MS). CHÚ THÍCH: Vì nhiều nguyên nhân khác nhau, cả hai kỹ thuật GC/MS và LC/MS/MS đều có thể bị ảnh hưởng của nền mẫu khi phân tích thuốc bảo vệ thực vật. Để loại trừ các ảnh hưởng này, đường chuẩn được thực hiện trên nền mẫu (đường chuẩn trong dung môi có thể được dùng nếu chứng minh được không có ảnh hưởng của nền). Sử dụng kỹ thuật bơm mẫu thể tích lớn (LVI) với thể tích 8 m l để thu được giới hạn phát hiện nhỏ hơn 10 ng/g. Nếu không dùng LVI, dịch chiết có thể được cô đặc và chuyển sang dung môi toluen (1 ml/4 g) và sử dụng chế độ bơm mẫu không chia dòng với thể tích bơm 2 m l. 3. Thuốc thử và vật liệu thử Tất cả các thuốc thử được sử dụng phải là loại tinh khiết phân tích, nước được sử dụng là nước cất hai lần hoặc nước không chứa các tạp chất ảnh hưởng đến LC/MS/MS và GC/MS, trừ khi có quy định khác. 3.1. Magie sulfat (MgSO 4 ) khan , dang bột, độ tinh khiết lớn hơn 98 %, được nung ở 500 0 C trong thời gian lớn hơn 5 h để loại phthalat và nước. 3.2. Axetonitril (CH 3 CN), không chứa các chất gây nhiễu. 3.3. Axit axetic (CH 3 COOH) băng , không chứa các chất gây nhiễu. 3.4. Dung dịch axit axetic 1 % thể tích trong axetonitril (ví dụ: dung dịch gồm 10 ml CH 3 COOH và 990 ml axetonitril). 3.5. Dung dịch axit axetic 0,1 % thể tích trong axetonitril (ví dụ: dung dịch gồm 1 ml CH 3 COOH và 999 ml axetonitril). 3.6. Natri axetat (CH 3 COONa) khan , dạng bột (có thể dùng CH 3 COONa.3H 2 O nhưng với mỗi gam mẫu cần 0,17 g CH 3 COONa.3H 2 O thay vì 0,1 g CH 3 COONa khan). 3.7. Chất hấp phụ amin bậc 1 và bậc 2 (PSA) , có cỡ hạt 40 µm 2) . 3.8. Chất hấp phụ C18 (tùy chọn), có cỡ hạt 40 µm, dùng cho mẫu chứa nhiều hơn 1% chất béo. 3.9. Chất hấp phụ than chì (GCB) (tùy chọn), có cỡ hạt 120/400 mesh, được dùng nếu mẫu không chứa các thuốc bảo vệ thực vật cấu trúc phẳng. 3.10. Toluen (tùy chọn), không chứa các chất gây nhiễu; chỉ cần thiết nếu không sử dụng LVI trong GC/MS. 3.11. Metanol , không chứa các tạp chất ảnh hưởng đến LC/MS/MS. 3.12. Dung dịch axit formic , 6,7 mM Cân chính xác 0,308 g axit formic, hòa tan trong nước đến 1 lít. 3.13. Hỗn hợp magie sulfat (MgSO 4 ) và natri axetat (CH 3 COONa) Lấy 0,6 g ± 0,3 g MgSO 4 khan (3.1) và 1,5 g ± 0,1 g CH 3 COONa khan (3.6) (hoặc 2,5 g ± 0,2 g CH 3 COONa.3H 2 O) vào ống chứa phù hợp. Ống chứa cần được đậy kín trong quá trình bảo quản và có thể tái sử dụng mà không cần phải rửa sạch giữa các lần dùng khác nhau. 3.14. Hỗn hợp chiết phân tán pha rắn (d-SPE) Lấy 0,05 g ± 0,01 g chất hấp thụ PSA (3.7) và 0,15 g ± 0,03 g MgSO 4 khan (3.1) vào ống ly tâm 2 ml có nắp. Nếu GC/MS không có bộ LVI thì sử dụng ống ly tâm từ 10 ml đến 15 ml có chứa 0,40 ± 0,08 g chất hấp thụ PSA và 1,20 g ± 0,24 g MgSO 4 khan. Có thể sử dụng các ống chuẩn bị sẵn. Đối với mẫu có hàm lượng chất béo lớn hơn 1%, thì cần thêm 0,05 g ± 0,01 g chất hấp phụ C18 (3.8) cho mỗi mililit dịch chiết. Nếu mẫu thử không chứa thuốc bảo vệ thực vật cấu trúc phẳng (ví dụ: thiabendazole, terbufos, quintozene và hexachlorobenzen) thì thêm 0,05 g ± 0,01 g GCB (3.9) cho mỗi mililit dịch chiết. 3.15. Các chất chuẩn thuốc bảo vệ thực vật , có độ tinh khiết lớn hơn 97 %, bao gồm atrazine azoxystrobin, bifenthrin, carbaryl, chlorothalonil, chlorpyrifos, chlorpyrifos-methyl, λ -cyhalothrin, cyprodinil, o,p ’-DDD, dichlorvos, endosulfan sulfat, ethion, imalazil, imidachlorprid, kresoxim-methyl, linuron, methamidophos, methomyl, permethrins, procymidone, pymetrozine, tebuconazole, thiabendazole, tolylfluanid, trifluralin và triphenyl phosphat (TPP). 3.16. Các dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật 3.16.1. Các dung dịch chuẩn gốc , 1000 µg/ml Cân chính xác khoảng 0,1 g từng thuốc bảo vệ thực vật (3.15) bằng cân phân tích (4.4), hòa tan và định mức đến 100 ml bằng dung dịch axit axetic 0,1% trong axetonitril (3.5). Nồng độ chính xác của dung dịch được hiệu chuẩn theo khối lượng cân thực tế và theo độ tinh khiết. CHÚ THÍCH: Có thể cân 0,01 g trên cân phân tích có độ chính xác 0,01 mg để pha trong bình 10 ml. Khi bảo quản các dung dịch này trong tủ lạnh đông sâu ở nhiệt độ bằng hoặc nhỏ hơn âm 20 o C thì có thể bền được trong 1 năm. 3.16.2. Dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp , 40 µg/ml Lấy các thể tích phù hợp của các dung dịch chuẩn gốc để pha được dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp có nồng độ 40 µg/ml trong dung dịch axit axetic 0,1 % trong axetonitril (3.5) Khi bảo quản các dung dịch này trong tủ lạnh đông sâu ở nhiệt độ bằng hoặc nhỏ hơn âm 20 o C thì có thể bền được trong 1 năm. 3.16.3. Dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp , 4 µg/ml (chỉ chuẩn bị khi GC/MS không có bộ LVI) Lấy 100 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. Khi bảo quản các dung dịch này trong tủ lạnh đông sâu ở nhiệt độ bằng hoặc nhỏ hơn âm 20 0 C thì có thể bền được trong 1 năm. 3.16.4. Dung dịch nội chuẩn hỗn hợp , 40 µg/ml Chuẩn bị dung dịch hỗn hợp d 10 -parathion và d 6 - a -HCH trong axetonitil có nồng độ 40 µg/ml. Khi bảo quản các dung dịch này trong tủ lạnh đông sâu ở nhiệt độ bằng hoặc nhỏ hơn âm 20 0 C thì có thể bền được trong 1 năm. 3.16.5. Dung dịch triphenyl phosphat (TPP), 2 µg/ml Pha loãng dung dịch gốc TPP 1000 µg/ml trong dung dịch axit axetic 0,1 % trong axetonitril (3.5) để thu được dung dịch chất đồng hành TPP có nồng độ 2 µg/ml. Khi bảo quản các dung dịch này trong tủ lạnh đông sâu ở nhiệt độ bằng hoặc nhỏ hơn âm 20 0 C thì có thể bền được trong 1 năm. 3.16.6. Dung dịch chuẩn làm việc (trường hợp GC/MS có bộ LVI) 3.16.6.1. Dung dịch chuẩn làm việc 1 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 20 µg/ml trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 % Cho 5ml dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.6.2. Dung dịch chuẩn làm việc 2 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 5 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 1,25 ml dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1 ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.6.3. Dung dịch chuẩn làm việc 3 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 2 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 500 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1 ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.6.4. Dung dịch chuẩn làm việc 4 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 1 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 250 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1 ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.6.5. Dung dịch chuẩn làm việc 5 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,2 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1%. Cho 50 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1 ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.6.6. Dung dịch chuẩn làm việc 6 , nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,1 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 25 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 1 ml dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 10 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7. Dung dịch chuẩn làm việc (trường hợp GC/MS không có bộ LVI) 3.16.7.1. Dung dịch chuẩn làm việc 1, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 20 µg/ml trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 500 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.2. Dung dịch chuẩn làm việc 2, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 5 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 125 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.3. Dung dịch chuẩn làm việc 3, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 2 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 50 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.4. Dung dịch chuẩn làm việc 4, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 1 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 250 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 4 µg/ml (3.16.3), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.5. Dung dịch chuẩn làm việc 5, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,2 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1%. Cho 50 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 4 µg/ml (3.16.3), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.6. Dung dịch chuẩn làm việc 6, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,1 µg/ml mỗi chất trong CH 3 CN và CH 3 COOH 1 %. Cho 25 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 4 µg/ml (3.16.3), 100 µl dung dịch CH 3 COOH 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào bình định mức 1 ml và thêm CH 3 CN đến vạch. 3.16.7.7. Dung dịch chuẩn làm việc 7, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 20 µg/ml trong toluen Cho 5 ml dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 3.16.7.8. Dung dịch chuẩn làm việc 8, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 5 µg/ml trong toluen Cho 1,25 ml dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 3.16.7.9. Dung dịch chuẩn làm việc 9, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 2 µg/ml trong toluen Cho 500 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 3.16.7.10. Dung dịch chuẩn làm việc 10, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 1 µg/ml trong toluen Cho 250 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 3.16.7.11. Dung dịch chuẩn làm việc 11, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,2 µg/ml trong toluen Cho 50 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 3.16.7.12. Dung dịch chuẩn làm việc 12, nồng độ mỗi thuốc bảo vệ thực vật 0,1 µg/ml trong toluen Cho 25 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) vào bình định mức 10 ml và thêm toluen đến vạch. 4. Thiết bị, dụng cụ Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và các thiết bị, dụng cụ cụ thể sau: 4.1. Máy sắc ký khí khối phổ (GC/MS) . Có thể sử dụng các thiết bị khối phổ loại bẫy ion, tứ cực, thời gian bay (TOF) hoặc các loại khác với chế độ ion hóa va chạm điện tử, bộ bơm mẫu tự động và hệ thống thu nhận dữ liệu bằng máy tính. Sử dụng chế độ bơm mẫu thể tích lớn (LVI) hoặc các chế độ bơm mẫu tương đương có thể bơm đến 8 µl (nếu có) hoặc chế độ bơm mẫu không chia dòng. 4.2. Máy sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC/MS/MS) . Có thể sử dụng hệ thống khối phổ ba tứ cực, bẫy ion hoặc các thiết bị LC/MS/MS khác nếu có nguồn ion hóa phun điện tử (ESI), chế độ ion dương, bộ bơm mẫu tự động. 4.3. Máy ly tâm , có khả năng dùng ống ly tâm hay lọ thể tích 50 ml và ống ly tâm chia độ từ 10 ml đến 15 ml hoặc ống nhỏ 2 ml sử dụng trong quá trình làm sạch bằng hỗn hợp d-SPE. Xác định tốc độ quay để thu được lực ly tâm cần thiết mà không vượt quá tốc độ tối đa của máy ly tâm, ống và rotor. 4.4. Cân phân tích , có thể cân chính xác đến 0,1 mg. 4.5. Cân , có thể cân chính xác đến 0,01 g. 4.6. Tủ lạnh đông , có thể hoạt động liên tục ở nhiệt độ thấp hơn âm 20 o C. 4.7. Lò nung , có thể hoạt động ở 500 0 C. 4.8. Máy cắt , tốt nhất là loại cắt dọc. 4.9. Máy đồng hóa. 4.10. Bộ làm bay hơi dung môi (tùy chọn), dùng bay hơi axetonitril, khi GC/MS không có bộ LVI. 4.11. Ống ly tâm , dung tích 50 ml, bằng nhựa etylen propylen flo hóa (FEP). 4.12. Ống ly tâm , dung tích từ 10 ml đến 15 ml (tùy chọn), dùng cho quá trình bay hơi và/hoặc làm sạch bằng hỗn hợp d-SPE. 4.13. Ống ly tâm, dung tích 2 ml (tùy chọn), dùng cho hỗn hợp d-SPE (sử dụng ống với nắp có vòng đệm để tránh rò rỉ). 4.14. Bơm tiêm hoặc pipet, dùng để lấy chính xác 2 µl hoặc 8 µl mẫu đưa vào GC/MS và lấy các thể tích thích hợp mẫu thêm chuẩn, nội chuẩn và các dung dịch chuẩn làm việc (từ 12,5 µl đến 300 µl) 4.15. Pipet tự động hoặc pipet định mức , có khả năng lấy chính xác từ 0,5 ml đến 8 ml dung môi. 5. Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1999) Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với các giới hạn dư lượng tối đa (MRL). Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải là mẫu đại diện. Mẫu không được hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá trình bảo quản và vận chuyển. 6. Chuẩn bị mẫu thử Mẫu cần được làm nhỏ bằng máy cắt (4.8) và đồng nhất kỹ bằng máy đồng hóa (4.9). Lượng mẫu mang đi đồng nhất nên lấy tối thiểu 200 g để đảm bảo tính đại diện. Để thu được mẫu đồng nhất, cần chú ý điều kiện bảo quản, thời gian nghiền và cỡ mẫu phù hợp với quá trình nghiền. Việc bảo quản mẫu đông lạnh làm giảm sự phân hủy và bay hơi đối với một số thuốc bảo vệ thực vật. Trong trường hợp này, cắt nhỏ mẫu thành các phần từ 2 cm 3 đến 5 cm 3 bằng dao và bảo quản trong tủ lạnh đông trước khi thực hiện quy trình. Các dụng cụ xay đông lạnh, nitơ lỏng, hoặc đá khô có thể được dùng (nhưng phải đảm bảo đá khô thăng hoa trước khi cân mẫu và đảm bảo sự ngưng tụ nước là tối thiểu, đặc biệt là trong môi trường ẩm). 7. Cách tiến hành Chú thích an toàn: Lấy dung môi trong tủ hốt và mang các phương tiện bảo hộ phù hợp như kính, áo choàng và găng tay. Khi ly tâm, không vượt quá giới hạn của ống hoặc rotor, nếu cần phải cân bằng các ống về khối lượng tương đương để thu được sự cân bằng tốt nhất khi ly tâm. 7.1. Chiết mẫu Cân 15,0 g ± 0,1 g mẫu thử đã chuẩn bị (xem Điều 6) vào ống ly tâm FEP (4.11). Thêm vào ống lần lượt 15 ml dung dịch axit axetic 1 % trong CH 3 CN (3.4) và 75 µl dung dịch nội chuẩn (3.16.4) (nồng độ nội chuẩn thu được tương đương 200 ng/g). Thêm toàn bộ hỗn hợp muối MgSO 4 và CH 3 ­COONa (3.13) vào ống ly tâm (dịch chiết sẽ có nhiệt độ trong khoảng từ 40 o C đến 45 o C) và đậy kín ống. Lắc ống mạnh bằng tay trong 1 min (lắc cùng lúc từ 3 ống đến 5 ống mỗi tay), đảm bảo dung môi tương tác tốt với mẫu và các tinh thể muối bị vỡ ra khi lắc (có thể sử dụng máy lắc khi dung các lọ FEP với lượng mẫu lớn). Ly tâm với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min. CHÚ THÍCH: Lực ly tâm càng lớn, càng thu được dịch chiết sạch hơn. 7.2. Xử lý dịch chiết 7.2.1. Phương án tùy chọn A (trường hợp GC/MS sử dụng bộ LVI) Lấy 1 ml dịch chiết trong CH 3 CN (lớp trên) thu được từ 7.1 cho vào ống ly tâm dung tích 2 ml (4.13) chứa hỗn hợp d-SPE (3.14). Đậy kín nắp và lắc bằng tay (hoặc lắc bằng máy Vortex) trong 30 s. Ly tâm ống d-SPE với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min. Lấy 500 µl dịch chiết cuối từ ống d-SPE vào lọ (vial) dùng cho LVI/GC/MS. Thêm 50 µl dung dịch TPP (3.16.5) và 25 µl CH 3 CN (3.2) vào lọ. Đậy nắp lọ, lắc kỹ sau đó mở nắp và chuyển 150 µl dịch lỏng vào các lọ mẫu khác dùng cho LC/MS/MS. Thêm 450 µl dung dịch axit formic 6,7 mM (3.12) để thu được nồng độ axit và dung môi hữu cơ như tỷ lệ ban đầu của pha động. Đậy nắp hai lọ mẫu trên, thực hiện phân tích trên LVI/GC/MS và LC/MS/MS. CHÚ THÍCH: Đảm bảo kim bơm mẫu được cài đặt đủ thấp để lấy được lượng mẫu nhỏ trong lọ đựng. 7.2.2. Phương án tùy chọn B (trường hợp GC/MS không sử dụng bộ LVI) Lấy 8 ml dịch chiết (lớp trên) thu được từ 7.1 cho vào ống ly tâm dung tích 10 ml đến 15 ml (4.12) chứa hỗn hợp d-SPE (3.14). Đậy kín nắp và lắc bằng tay (hoặc lắc bằng máy Vortex) trong 30 s. Ly tâm ống d-SPE với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min. Lấy 250 µl dịch chiết trong CH 3 CN từ ống d-SPE vào lọ dùng cho LC/MS/MS. Thêm 25 µl dung dịch TPP (3.16.5) và 12,5 µl CH 3 CN (3.2) vào lọ. Thêm 860 µl dung dịch axit formic 6,7 mM (3.12) để thu được nồng độ axit và dung môi hữu cơ như tỷ lệ ban đầu của pha động. Đậy nắp lọ và thực hiện phân tích trên LC/MS/MS. Lấy 4 ml dịch chiết từ ống d-SPE vào ống ly tâm dung tích từ 10 ml đến 15 ml (4.12). Thêm 400 µl dung dịch TPP (3.16.5) và 1 ml toluen (3.10) vào ống. Cho bay hơi dịch chiết trong thiết bị thổi khô dùng khí N 2 ở 50 o C cho đến thể tích còn lại khoảng 0,3 ml đến 0,5 ml. Thêm toluen (3.10) đến 1 ml, thêm MgSO 4 khan (3.1) đến vạch 0,2 ml và xoay ống để rửa đến vạch 6 ml. Ly tâm với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min và chuyển 0,6 ml dịch chiết cuối vào lọ thích hợp, đậy nắp và thực hiện phân tích GC/MS. 7.3. Mẫu trắng thuốc thử Tiến hành như mẫu thử nhưng thay mẫu bằng 13 ml nước. Thực hiện tối thiểu một mẫu trắng thuốc thử trong một lô mẫu. 7.4. Mẫu kiểm soát Cân 15 g mẫu trắng (mẫu đã được xác định không chứa các thuốc bảo vệ thực vật), thêm 75 µl dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 40 µg/ml (3.16.2) để thu được nồng độ mẫu kiểm soát là 200 ng/g, sau đó tiến hành như mẫu thử. Thực hiện tối thiểu một mẫu kiểm soát trong một lô mẫu. 7.5. Dựng đường chuẩn 7.5.1. Chiết mẫu trắng Cân 2 mẫu trắng (trường hợp GC/MS sử dụng bộ LVI) hoặc 6 mẫu trắng (trường hợp GC/MS không sử dụng bộ LVI), mỗi mẫu 15 g, cho vào các ống ly tâm (4.11). Thêm 15 ml dung dịch axit axetic 1 % trong CH 3 CN (3.4) vào ống. Thêm toàn bộ hỗn hợp muối MgSO 4 và CH 3 COONa (3.13) vào ống ly tâm và đậy kín ống. Lắc ống mạnh bằng tay trong 1 min. Ly tâm với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min. Gộp các dịch chiết trong CH 3 CN của các mẫu trắng. Lấy các thể tích 1 ml dịch chiết trong CH 3 CN cho vào 7 ống chiết d-SPE (3.14). Đậy kín nắp và lắc bằng tay (hoặc lắc bằng máy Vortex) trong 30 s. Ly tâm ống d-SPE với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min. 7.5.2. Xử lý dịch chiết mẫu trắng 7.5.2.1. Phương án tùy chọn A (trường hợp GC/MS sử dụng bộ LVI) Lấy 500 µl dịch chiết trong CH 3 CN từ ống d-SPE thu được từ 7.5.1, cho vào các lọ dùng cho LVI/GC/MS. Thêm 50 µl dung dịch TPP (3.16.5) vào tất cả 7 lọ; 25 µl CH 3 CN (3.2) vào mẫu chuẩn “0” và 25 µl các dung dịch chuẩn làm việc tương ứng (từ 3.16.6.1 đến 3.16.6.6) vào 6 lọ tương ứng để thu được các dung dịch chuẩn có nồng độ thuốc bảo vệ thực vật tương ứng trên mẫu là 1000, 250, 100, 50, 10 và 5 ng/g. Đậy nắp lọ, lắc kỹ sau đó mở nắp và chuyển 150 µl vào các lọ khác dùng cho LC/MS/MS. Thêm 450 µl dung dịch axit formic 6,7 mM (3.12) để thu được nồng độ axit và dung môi hữu cơ như tỷ lệ ban đầu của pha động. Đậy nắp các lọ trên, thực hiện phân tích trên LVI/GC/MS và LC/MS/MS. 7.5.2.2. Phương án tùy chọn B (trường hợp GC/MS không sử dụng bộ LVI) Lấy 250 µl dịch chiết trong CH 3 CN từ ống d-SPE thu được từ 7.5.1, cho vào các lọ dùng cho LC/MS/MS. Thêm 25 µl dung dịch TPP (3.16.5) vào các lọ, 12,5 µl CH 3 CN (3.2) vào mẫu chuẩn “0” và 12,5 µl các dung dịch chuẩn làm việc tương ứng (3.16.7.1 đến 3.16.7.6) vào các lọ thích hợp. Thêm 860 µl dung dịch axit formic 6,7 mM (3.12) để thu được nồng độ axit và dung môi hữu cơ như tỷ lệ ban đầu của pha động. Đậy nắp lọ và thực hiện phân tích trên LC/MS/MS. Lấy 4 ml dịch chiết từ ống d-SPE vào ống ly tâm dung tích từ 10 ml đến 15 ml (4.12). Thêm 400 µl dung dịch TPP (3.16.5) và 1 ml toluen (3.10) vào ống. Cho bay hơi dịch chiết trong thiết bị thổi khô dùng khí N 2 ở 50 o C cho đến thể tích còn lại khoảng 0,3 ml đến 0,5 ml. Thêm 200 µl mỗi dung dịch chuẩn làm việc (từ 3.16.7.7 đến 3.16.7.12) vào các lọ thích hợp. Thêm toluen (3.10) đến 1 ml, thêm MgSO 4 khan (3.1) đến vạch 0,2 và xoay ống để rửa đến vạch 6 ml. Ly tâm với gia tốc lớn hơn 1500 g trong 1 min và chuyển khoảng 0,6 ml dịch chiết cuối vào lọ thích hợp, đậy nắp và thực hiện phân tích GC/MS. 7.5.3. Dựng đường chuẩn Đường chuẩn được xây dựng dựa trên diện tích píc của chất phân tích và nồng độ của chất. Giá trị hệ số chặn nên gần giá trị 0 và hệ số tương quan hồi quy (r 2 ) phải lớn hơn 0,995. Diện tích píc sắc ký (hoặc tỷ lệ diện tích píc sắc ký và diện tích pic nội chuẩn, nếu có sử dụng chất chuẩn nội) là giá trị tín hiệu S. Có thể sử dụng chiều cao píc sắc ký diện tích píc có vấn đề. Nồng độ tính trên mẫu (nanogam trên gam) của chất phân tích trong các chuẩn dùng xây dựng đường chuẩn trên nền mẫu có thể xác định bằng cách nhân thể tích vào dịch chiết (microlit) với nồng độ của các dung dịch chuẩn làm việc (microgam trên mililit) và chia cho khối lượng mẫu trong dịch chiết cuối (1 g/ml đối với dịch chiết trong CH 3 CN và 4 g/ml đối với dịch chiết trong toluen). 7.6. Điều kiện phân tích bằng LVI/GC/MS và LC/MS/MS 7.6.1. Yêu cầu chung Thực hiện bảo dưỡng LVI/GC, LC và MS để đảm bảo thiết bị hoạt động tốt. Bơm chuẩn trên 10 ng/g nền mẫu trong điều kiện được sử dụng. Trong GC, đảm bảo píc sắc ký có dạng phân bố Gauss, độ rộng píc tại nửa píc nhỏ hơn 5 s và thu được tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu S/N lớn hơn 10 cho ion định lượng được chọn tại thời gian lưu t R phù hợp. Có một vài chất phân tích có vấn đề ở nồng độ 10 ng/g, nhưng LC/MS/MS thường cho kết quả tốt hơn đối với những chất khó phân tích bằng GC. Cần bảo dưỡng thiết bị đúng để đảm bảo loại trừ các vấn đề đối với những chất khó phân tích bằng GC và không phân tích được bằng LC/MS/MS. Sử dụng ion thay thế hoặc bổ sung thêm ion nếu S/N không đáp ứng hoặc có ảnh hưởng nền xảy ra. Trong trường hợp này, cần bơm mẫu chuẩn “0” để xác định xem có tạp chất ở tại vị trí t R của chất phân tích hay không. Thực hiện đánh giá tính phù hợp tương tự đối với LC/MS/MS cho các chất phân tích. Chọn thể tích bơm mẫu phù hợp để thu được tối thiểu độ nhạy S/N lớn hơn 10 cho chuẩn có nồng độ 10 ng/g và píc dạng phân bố Gauss, với độ rộng nhỏ hơn 30 s ở nửa chiều cao píc. Khi tính tương thích của hệ thống được đáp ứng, thực hiện bơm mẫu theo thứ tự đề nghị như sau: mẫu trắng; dung dịch chuẩn 250 ng/g; dung dịch chuẩn 10 ng/g; các mẫu thử từ 1 đến 4; dung dịch chuẩn 5 ng/g; dung dịch chuẩn 50 ng/g; các mẫu thử từ 5 đến 7; mẫu kiểm soát (7.4); dung dịch chuẩn 100 ng/g; dung dịch chuẩn 1000 ng/g và mẫu trắng thuốc thử (7.3) không được có hiện tượng thừa mẫu trong mẫu trắng thuốc thử. Bảo quản dịch chiết ở nhiệt độ thấp hơn âm 20 o C nếu không phân tích ngay sau khi chiết, nhưng khi bảo quản lâu sẽ có hiện tượng phân hủy một số thuốc bảo vệ thực vật. Tiêu chuẩn này đưa ra hai điều kiện phân tích LC/MS/MS và GC/MS. Phòng thử nghiệm có thể thay đổi các điều kiện phù hợp nhưng phải đáp ứng các yêu cầu nêu trên. 7.6.2. Ví dụ và điều kiện phân tích bằng LC/MS/MS a) Điều kiện đối với HPLC - Thiết bị HPLC: LC-20AD XR của Shimadzu 3) , có thể đạt áp suất tối đa 600 bar; - Cột phân tích: loại C18 (dài 15 cm, đường kính 2,1 mm, cỡ hạt nhồi 3,5 µm) và tiền cột C18 (dài 2 cm, đường kính 4,6 mm, cỡ hạt nhồi 5 µm); - Nhiệt độ cột: nhiệt độ môi trường; - Thể tích bơm mẫu: 10 µl. - Pha động: gradient hai kênh như Bảng 1. kênh A: dung dịch axit formic 6,7 mM (3.12). kênh B: metanol (3.11). Bảng 1 - Điều kiện gradient cho hệ thống HPLC Thời gian, min Kênh A, % Kênh B, % Tốc độ dòng, ml/min 0 75 25 0,5 12 10 90 0,5 18 10 90 0,5 20 75 25 0,5 25 75 25 0,5 b) Điều kiện đối với MS - Thiết bị MS: ABI 5500 QQQ của AB Sciex 3) ; - Nguồn ion hóa: ion hóa phun điện tử ESI, chế độ ion dương; - Chế độ MRM: theo các điều kiện như Bảng 2. Bảng 2 - Điều kiện khối phổ phân tích bằng hệ thống LC/MS/MS Tên thuốc bảo vệ thực vật Ion mẹ, m/z Ion định lượng, m/z (năng lượng, eV) Ion định tính, m/z (năng lượng, eV) Atrazine 216 174 (14) Azoxystrobin 404 372 (15) 329 (33) Carbaryl 202 145 (13) 127 (37) Chlorpyrifos 350 97 (39) 290 (21) Chlorpyrifos-methyl 322 125 (25) 281 (9) Cyprodinil 226 108 (30) 77 (42) Dichlorvos 221 127 (18) 109 (23) Ethion 385 199 (22) Imalazil 297 159 (24) 201 (18) Imidachlorprid 256 209 (21) 175 (27) Kresoxim-methyl 314 206 (20) 222 (14) Linuron 249 160 (18) 182 (17) Methamidophos 142 125 (13) 94 (15) Methomyl 163 88 (13) 106 (13) d-10 parathion 302 88 (33) 106 (33) Procymidone 284 256 (18) Pymetrozine 218 105 (22) 78 (44) Tebuconazole 308 125 (39) 151 (31) Thiabendazole 202 175 (20) 131 (40) Tolylfluanid 247 238 (16) Triphenylphosphat 327 77 (57) 152 (47) 7.6.3. Ví dụ về điều kiện phân tích bằng GC/MS a) Điều kiện đối với GC - Thiết bị GC: 7890A của Agilent 4) - Cột: DB-5MS (chiều dài cột 30 m, đường kính 0,25 mm, độ dày pha tĩnh 0,25 µm); - Chương trình nhiệt độ: Nhiệt độ đầu 75 o C, tăng 25 o C/min lên 150 o C và tăng 10 o C/min lên 280 o C, giữ trong 10 min. - Bộ bơm mẫu SSL: chế độ bơm mẫu không chia dòng, thể tích bơm mẫu 2 µl, nhiệt độ 250 o C; - Bộ bơm mẫu PTV: thể tích bơm mẫu 8 µl, nhiệt độ 75 o C tăng 200 o C/min lên 275 o C; - Khí mang: heli (He), tốc độ 1,0 ml/min; - Nhiệt độ bộ phận kết nối khối phổ: 280 o C. b) Điều kiện đối với MS - Thiết bị MS: 7000 QQQ của Agilent 4) ; - Nguồn ion hóa : EI, chế độ ion dương, nhiệt độ nguồn ion 230 o C; - Chế độ: chọn lọc ion (SIM) theo Bảng 3. Bảng 3 - Điều kiện GC/MS phân tích thuốc bảo vệ thực vật Thuốc bảo vệ thực vật M + Ion chính Các ion khác Atrazine 215 200 173, 217, 202 Azoxystrobin 403 344 372, 388 Bifenthrin 422 181 165, 166 Carbaryl 201 144 115, 116 Chlorothalonil 264 266 268 Chorpyrifos 349 97 197, 199, 314, 316 Chorpyrifos-methyl 321 286 288, 125, 197, 109 λ -Cyhalothrin 449 197 181, 208 Cyprodinil 225 224 210 Dichlorvos 220 109 185, 79, 145 o,p’-DDD 318 235 237, 165, 199 Endosulfan sulfat 420 272 274, 387, 229, 239 Ethion 384 231 153, 97, 125 d6- a -HCH 294 224 222, 226, 185, 189 Imalazil 296 215 173, 217, 175 Kresoxim-methyl 313 131 116, 206 Methamidophos 141 94 95 d10-parathion 301 301 156, 187, 237, 269 Permethrins 390 183 163, 165 o-phenylphenol 170 170 169, 141, 115 Procymidone 283 283 96, 285, 255 Tebuconazole 307 250 163, 125 Thiabendazole 201 201 174 Tolylfluanid 346 137 238, 240, 181 Triphenylphosphat 326 325 233, 215, 169, 170 Trifluralin 335 306 264, 290, 248 8. Tính kết quả Nồng độ thuốc bảo vệ thực vật trong mẫu thử, C, được biểu thị bằng nanogam trên gam (ng/g) và được tính theo công thức sau: C= S là giá trị tín hiệu của mẫu thử (diện tích píc sắc ký hoặc tỷ lệ diện tích píc sắc ký và diện tích pic nội chuẩn, nếu có sử dụng chất chuẩn nội); y là giá trị hệ số chặn của đường chuẩn (xem 7.5.3); a là giá trị độ dốc của đường chuẩn (xem 7.5.3). CHÚ THÍCH: Nếu các kết quả cho thấy có mối quan hệ bậc hai thì có thể sử dụng đường chuẩn bậc hai. 9. Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết; - phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất cả các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy chọn cùng với các chi tiết bất thường nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả; - kết quả thử nghiệm thu được. Phụ lục A (Tham khảo) Kết quả thử nghiệm liên phòng Bảng A.1 - Kết quả thử nghiệm liên phòng thử nghiệm đối với các thuốc bảo vệ thực vật có trong nền mẫu (và chlorpyrifos-methyl) Chất phân tích Nền mẫu Nồng độ trung bình, ng/g s r a) , ng/g RSD r b) , % s R c) , ng/g Độ thu hồi, % RSD R d) , % HorRat Số phòng thử nghiệm Các phòng thử nghiệm ngoại lệ e) Chlorpyrifos-methyl Nho 165 14 8,5 35 83 21 1,00 11 6-C, 4-C Rau diếp 178 20 11 30 89 17 0,81 10 11-SG Cam 174 25 14 36 87 20 0,98 12 Kresoxim-methyl Nho 9,2 1,9 21 f) 3,2 - 35 f) 1,09 12 Cyprodinil Nho 112 - g) - 18 - 16 0,73 13 λ -cyhalothrin Rau diếp 58 6,1 11 11 - 20 0,80 9 11-C Permethrins Rau diếp 112 9,8 9,8 41 - 36 f) 1,63 9 6-C, 1-C Imidachlorprid Rau diếp 12 ­- - 1,6 - 14 0,44 11 Ethion Cam 198 23 23 36 - 18 0,89 11 11-C Thiabendazole Cam 53 3,8 3,8 7,6 - 14 0,58 12 Imalazil Cam 13 - - 4,7 - 35 f) 1,15 8 7-SG a) s r : Độ lệch chuẩn lặp lại; b) RSD r : Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại; c) s R : Độ lệch chuẩn tái lập; d) RSD R : Độ lệch chuẩn tương đối tái lập; e) C: ngoại lệ Cochran, SG: ngoại lệ Grudds đơn; f) RSD r > 15 %; Rec. > 70 % hoặc Rec. > 120 %; RSD R > 25 %; HorRat > 1,2 và có ít hơn 8 phòng thử nghiệm tham gia; g) Không áp dụng được. Bảng A.2 - Kết quả thử nghiệm liên phòng thử nghiệm đối với các thuốc bảo vệ thực vật thêm vào mẫu nho Chất phân tích Nồng độ trung bình, ng/g s r , ng/g RSD r , % s R , ng/g Độ thu hồi, % RSD R , % HorRat Số phòng thử nghiệm Các phòng thử nghiệm ngoại lệ a) Atrazine 9,3 0,6 6,9 2,0 93 21 0,65 13 45 3,2 7,1 5,7 90 13 0,49 13 365 23 6,2 71 91 19 1,04 13 Azoxystrobin 9,4 0,6 6,6 2,0 94 21 0,64 13 95 8,7 9,4 11 92 12 0,51 12 8-SG 182 17 9,2 26 91 14 0,70 12 8-SG Bifenthrin 7,8 0,8 11 2,3 78 30 b 0,89 11 2-C, 10-C 86 5,9 6,9 14 86 17 0,73 12 6-C 923 71 7,7 136 92 15 0,91 13 Carbaryl 12 1,2 11 2,8 104 27 b 0,85 12 5-SG 50 6,4 13 11 100 22 0,87 13 1003 70 7,0 189 100 19 1,18 12 5-C Chlorothalonil 6,3 0,9 14 2,1 63 b 33 b 0,97 8 10-C 59 8,3 14 13 79 23 0,93 10 140 19 13 38 70 27 b 1,27 b 10 Chlorpyrifos 8,1 1,5 19 b 3,0 81 37 b 1,12 12 68 8,3 12 14 84 20 0,84 13 396 25 6,4 50 79 12 0,68 12 11-SG Cyprodinil c) 123 13 10 26 101 21 0,95 13 240 20 8,3 63 92 26 b 1,32 b 13 581 42 7,3 110 95 19 1,09 13 o,p’-DDD 8,9 1,4 16 b 3,2 89 36 b 1,09 12 42 3,1 7,3 7,0 84 17 0,65 12 445 32 7,1 47 89 10 0,58 11 6-C Dichlorvos 7,2 1,0 14 1,3 72 18 0,53 11 8-SG 85 7,4 8,7 15 85 18 0,77 11 4-C 294 25 8,5 62 98 21 1,10 12 Endosulfan sulfat 8,6 0,9 10 1,5 86 17 0,52 7 b 10-C 115 14 12 21 77 18 0,81 11 415 56 14 111 83 27 b 1,47 b 11 Imalazil 7,6 0,8 9,8 3,1 76 41 b 1,22 b 11 50 2,5 4,9 15 67 b 30 b 1,19 10 8-C 432 53 12 161 78 37 b 2,06 b 11 Imidachlorprid 8,8 0,8 8,9 3,0 88 34 b 1,04 13 45 3,5 7,7 8,9 99 21 0,78 13 218 18 8,2 24 97 11 0,56 12 8-SG Linuron 9,9 1,7 17 b 2,9 99 29 b 0,90 11 99 7,4 7,4 15 99 15 0,67 12 971 65 6,7 191 97 20 1,23 b 12 methamidophos 10 2,9 29 b 3,0 101 30 b 0,95 9 5-SG 80 8,0 10 14 80 18 0,77 12 850 72 8,4 119 85 14 0,85 11 8-SG Methomyl 9,3 1,2 12 2,9 93 32 b 0,98 12 50 3,3 6,7 9,3 100 19 0,74 13 204 10 4,9 26 102 13 0,63 13 Procymidone 8,2 0,7 8,2 2,0 82 24 0,74 11 5-SG 64 6,0 9,4 16 85 24 1,01 13 428 16 3,8 70 86 16 0,90 12 9-C Pymetrozine 6,2 1,2 20 b 1,6 62 b 27 b 0,77 11 47 3,1 6,7 9,6 62 b 20 0,81 11 341 20 5,8 59 68 b 17 0,92 11 Tebuconazole 9,2 1,1 12 1,2 92 13 0,41 12 3&4-DG 63 5,5 8,7 8,8 84 14 0,58 13 439 29 6,7 84 88 19 1,06 13 Tolylfluanid 7,9 1,0 12 3,1 79 39 b 1,19 13 34 4,3 13 13 67 b 37 b 1,41 b 13 144 13 8,8 42 72 29 b 1,37 b 13 Trifluralin 7,8 0,7 8,5 1,8 78 23 0,68 12 10-C 58 3,7 6,4 14 77 25 1,02 13 379 19 5,1 48 76 13 0,69 10 6-C, 4-C, 11-SG a) C: ngoại lệ Cochran, SG: ngoại lệ Grubbs đơn, DG: các ngoại lệ Grubbs kép; b) RSD r > 15 %; Rec. > 70% hoặc Rec. > 120%; RSD R > 25%; HorRat > 1,2 hoặc có ít hơn 8 phòng thử nghiệm tham gia; c) Cyprodinil có mặt trong nho và ảnh hưởng đến sự định lượng. Bảng A.3 - Kết quả thử nghiệm liên phòng đối với các thuốc bảo vệ thực vật thêm vào mẫu rau diếp Chất phân tích Nồng độ trung bình, ng/g s r , ng/g RSD r , % s R , ng/g Độ thu hồi, % RSD R , % HorRat Số phòng thử nghiệm Các phòng thử nghiệm ngoại lệ a) Atrazine 9,9 1,5 15 1,8 99 18 0,56 11 70 7,9 11 15 93 21 0,88 12 930 50 5,4 166 93 18 1,11 11 5-C Azoxystrobin 10 0,8 7,6 1,8 102 18 0,56 12 47 2,4 5,2 6,5 93 14 0,55 12 531 32 6,1 88 106 17 0,94 12 Bifenthrin 9,1 0,8 9,1 1,4 91 16 0,48 11 66 8,0 12 9,4 88 14 0,59 11 217 27 12 33 87 15 0,77 11 Carbaryl 9,4 1,1 12 2,0 94 22 0,67 12 92 6,1 6,7 9,0 92 9,8 0,43 11 8-SG 589 38 6,4 127 98 22 1,24 b 12 Chlorothalonil 6,2 0,8 14 2,0 62 b 32 b 0,93 6 b 28 10 37 b 14 70 48 b 1,77 b 7 b 684 134 20 b 205 68 b 30 b 1,77 b 6 b Chlorpyrifos 9,0 2,1 24 b 2,3 90 26 b 0,79 9 12-SG, 10&11-DG 86 9,4 11 20 86 23 1,01 11 11-SG 179 18 10 30 90 17 0,82 11 11-SG Cyprodinil 9,7 1,0 10 1,4 97 14 0,44 11 11-SG 44 2,7 6,1 8,9 89 20 0,79 11 11-SG 848 61 7,2 117 85 14 0,84 10 8-SG o,p’-DDD 8,9 0,6 7,0 1,9 89 21 0,66 8 81 4,8 5,9 12 81 15 0,63 9 11-C 214 19 8,7 27 86 13 0,62 10 Dichlorvos 5,2 1,0 20 b 2,4 52 b 45 b 1,29 b 12 58 6,6 11 12 77 20 0,81 12 838 50 6,0 224 84 27 1,63 b 11 Endosulfan sulfat 5,6 3,3 59 b 2,5 56 b 45 b 1,28 b 2 b 38 9,6 25 b 15 75 39 b 1,48 b 7 b 769 330 43 b 312 77 40 b 2,44 b 7 b Imazalil 7,6 0,3 3,5 3,5 76 39 b 1,18 8 2-C 72 3,7 5,2 24 57 b 33 b 1,39 b 11 589 4,7 7,9 229 59 b 39 b 2,25 b 11 Imidachlorprid c) 22 1,31,3 6,2 1,7 100 7,9 0,28 11 8-SG 84 6,2 7,4 8,1 97 9,6 0,41 12 515 21 4,2 53 101 10 0,58 11 5-C Linuron 8,6 1,1 12 1,5 86 17 0,53 11 46 2,2 4,9 7,4 91 16 0,63 10 2-C 234 14 5,8 25 94 10 0,53 11 Methamidophos 8,8 0,8 8,5 1,3 88 15 0,46 8 6-C 66 4,5 6,9 12 82 18 0,72 11 538 37 6,8 63 84 12 0,67 9 5-C, 8-SG Methomyl 9,7 0,8 8,6 1,0 96 10 0,32 10 99 8,0 8,1 6,4 99 6,5 0,29 10 2-SG 10 24 2,4 168 100 17 1,05 11 Procymidone 92 0,6 6,2 2,2 101 22 0,68 8 2-C 967 8,5 9,2 15 92 17 0,73 11 6,9 118 12 129 97 13 0,83 11 Pymetrozine 6,9 0,4 6,1 1,4 69 b 20 0,59 10 33 1,6 4,7 4,6 67 b 14 0,51 9 11-C 127 8,5 6,7 17 63 b 13 0,61 10 Tebuconazole 9,7 0,7 6,9 1,2 97 13 0,40 11 4-C 89 6,8 7,7 11 89 12 0,52 12 948 42 4,4 226 95 24 1,48 b 11 4-C Tolylfluanid 3,7 1,1 30 b 2,2 37 b 59 b 1,59 b 4 9,3 3,7 40 b 4,1 9,3 b 44 b 1,37 b 8 3-SG, 8-SG 142 22 15 86 14 b 61 b 2,84 b 8 12-C, 3&8-DG Trifluralin 10 1,4 13 1,7 103 17 0,54 11 42 4,5 11 9,0 84 22 0,83 11 169 25 15 30 84 18 0,84 11 a) C: ngoại lệ Cochran, SG: ngoại lệ Grubbs đơn, DG: các ngoại lệ Grubbs kép; b) RSD r > 15 %; Rec. > 70% hoặc Rec. > 120%; RSD R > 25%; HorRat > 1,2 hoặc có ít hơn 8 phòng thử nghiệm tham gia; c) Imidachlorprid có mặt trong rau diếp không được tính vào SD. Bảng A.4 - Kết quả thử nghiệm liên phòng đối với các thuốc bảo vệ thực vật thêm vào mẫu cam Chất phân tích Nồng độ trung bình, ng/g s r , ng/g RSD r , % s R , ng/g Độ thu hồi, % RSD R , % HorRat Số phòng thử nghiệm Các phòng thử nghiệm ngoại lệ a) Atrazine 8,9 1,0 11 1,9 89 21 0,65 11 2-C 90 8,2 9,1 12 90 13 0,57 12 187 19 10 27 93 14 0,69 12 Azoxystrobin 8,4 1,3 16 b 1,8 84 21 0,65 11 65 5,2 8,0 8,1 86 12 0,52 12 853 35 4,1 82 85 9,6 0,59 11 11-C Bifenthrin 9,7 2,3 24 b 2,3 97 24 0,75 10 9-SG 45 2,5 5,6 6,8 91 15 0,59 10 2-C 488 51 10 76 98 16 0,87 12 Carbaryl 8,4 0,6 7,3 2,1 84 25 0,77 10 66 5,0 7,5 14 88 21 0,88 11 172 8,8 5,1 34 86 20 0,95 12 Chlorothalonil 4,8 0,8 16 b 2,7 48 b 56 b 1,57 b 3 b 70 14 20 b 29 70 42 b 1,74 b 6 b 330 137 42 b 131 66 b 40 b 2,09 b 7 b Chlorpyrifos 11 1,6 14 5,0 111 45 b 1,58 b 9 2-C 82 4,5 5,6 12 82 15 0,64 10 9-C 953 97 10 284 95 30 b 1,85 b 12 11-C Cyprodinil 8,7 0,9 10 2,0 87 23 0,72 12 56 4,5 8,0 9,0 75 16 0,65 12 199 12 6,2 35 80 18 0,86 12 o,p’-DDD 9,1 0,6 7,2 1,8 91 20 0,60 9 9-C 74 5,1 6,9 9,8 99 13 0,56 10 10-C 967 81 8,4 191 97 20 1,22 b 11 Dichlorvos 9,3 0,8 8,1 1,0 93 11 0,35 7 b 12-C 43 2,2 5,2 8,0 85 19 0,73 8 12-SG 446 22 5,0 54 89 12 0,68 10 Endosulfan sulfat 12 5,4 44 b 5,4 124 b 43 b 1,40 b 4 b 3-SG 83 19 23 b 19 83 23 1,01 10 240 35 15 61 80 25 1,28 b 10 Imazalil c) 22 1,7 7,7 6,2 96 28 b 0,98 8 7-C 58 4,3 7,4 13 92 22 0,91 9 186 9,7 5,2 41 87 22 1,06 10 Imidachlorprid 10 1,1 10 2,8 104 27 b 0,86 11 93 6,5 7,0 12 93 13 0,57 11 989 64 6,5 124 99 13 0,78 11 Linuron 7,8 1,3 17 b 2,7 78 35 b 1,04 11 60 3,0 5,0 13 86 21 0,86 11 387 26 6,6 42 79 11 0,59 9 11,1-DG Methamidophos 9,2 1,1 12 1,5 92 16 0,49 8 9-C 42 3,5 8,2 5,6 85 13 0,52 8 4-C 211 12 5,5 31 85 15 0,73 9 4&9-DG Methomyl 8,5 0,8 8,9 2,8 85 33 b 0,99 9 7-C 68 4,8 7,0 8,7 91 13 0,54 12 492 19 3,9 60 98 12 0,69 12 Procymidone 11 0,9 8,1 3,9 108 36 b 1,15 8 12-C 43 3,5 8,0 5,8 86 14 0,53 10 10-C 170 16 9,7 25 85 15 0,71 11 Pymetrozine 7,5 1,3 18 b 2,1 75 28 b 0,82 10 77 5,9 7,7 10 77 14 0,57 10 789 38 4,8 117 79 15 0,89 9 12-C Tebuconazole 8,7 0,7 8,0 1,2 87 14 0,42 11 41 2,2 5,4 6,2 82 15 0,58 12 177 14 7,9 28 88 16 0,76 12 Tolylfluanid 5,8 1,2 20 b 1,4 58 b 24 0,69 9 11-SG 46 7,5 16 b 14 61 b 31 b 1,21 b 11 9-C 356 54 15 134 71 38 b 2,02 b 12 Trifluralin 8,6 0,4 4,5 2,4 86 28 b 0,87 9 9-C 92 8,6 9,4 11 92 12 0,54 12 915 60 6,5 194 92 21 1,31 b 11 6-C a) C: ngoại lệ Cochran, SG: ngoại lệ Grubbs đơn, DG: các ngoại lệ Grubbs kép; b) RSD r >15 %; Rec. > 70% hoặc Rec. > 120%; RSD R > 25%; HorRat > 1,2 hoặc có ít hơn 8 phòng thử nghiệm tham gia; c) imalazil có mặt trong cam không được tính vào SD. Bảng A.5 - Kết quả trung bình thử nghiệm liên phòng phân tích thuốc bảo vệ thực vật bổ sung và sẵn có trong mẫu a) Nền mẫu Độ thu hồi, % RSD r, % RSD R, % HorRat Số phòng thử nghiệm tham gia Nho 86 ± 11 10 ± 4 22 ± 8 0,90 ± 0,29 12 ± 1 Rau diếp 87 ± 12 10 ± 7 20 ± 9 0,83 ± 0,45 10 ± 1 Cam 87 ± 15 10 ± 6 20 ± 8 0,84 ± 0,37 10 ± 2 Tổng số 87 ± 11 10 ± 6 21 ± 8 0,86 ± 0,37 11 ± 2 Sẵn có - b) 12 ± 4 22 ± 8 0,92 ± 0,30 11 ± 2 a) Các dữ liệu từ ít hơn 7 phòng thử nghiệm đã loại trừ ngoại lệ; b) Không áp dụng được. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1999) Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với các giới hạn dư lượng tối đa (MRL) 1) Viết tắt của tiếng Anh: Quick - Easy - Cheap - Efficient - Rugged - Safe (nhanh - dễ - rẻ tiền - hiệu quả - ổn định - an toàn) 2) Có thể sử dụng sản phẩm Varian Part No. 12213024 hoặc tương đương. Thông tin này tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn và tiêu chuẩn này không ấn định phải sử dụng sản phẩm nêu trên. 3) Tiêu chuẩn này không ấn định sử dụng thiết bị này, có thể sử dụng các thiết bị tương đương của các nhà sản xuất khác. 4) Tiêu chuẩn này không ấn định sử dụng thiết bị này, có thể sử dụng các thiết bị tương đương của các nhà sản xuất khác.