TCVN11039-7:2015

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11039-7:2015 về Phụ gia thực phẩm - Phương pháp phân tích vi sinh vật - Phần 7: Phát hiện và định lượng Staphylococcus aureus bằng kỹ thuật đếm có xác suất lớn nhất (MPN) TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 11039-7:2015 PHỤ GIA THỰC PHẨM - PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VI SINH VẬT – PHẦN 7: PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS BẰNG KỸ THUẬT ĐẾM CÓ XÁC SUẤT LỚN NHẤT (MPN) Food aditive - Microbiological analyses - Part 7: Detection and enumeration of staphylococcus aureus by most probable number (MPN) technique Lời nói đầu TCVN 11039-7:2015 được xây dựng tr ê n cơ sở tham kh ả o J E CFA 2006, Combined compendium of foo d additiv e speci f ications, Volume 4: Analytical methods, test procedures and laboratory solutions used by and reterenced in the food additive speci f ications ; TCVN 11039-7:2015 do Ban kỹ thuật tiêu chu ẩ n TCVN/TC/F4 Gia vị và phụ gia th ự c ph ẩ m biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng th ẩ m định, Bộ Khoa học và Công nghệ c ô ng bố; Bộ tiêu chu ẩ n TCVN 11039 Phụ gia thực phẩm - Phương ph á p phân tích vi sinh vật gồm các phần sau: - TCVN 11039-1:2015, Phần 1: X á c định tổng số vi sinh vật hiếu kh í bằng kỹ thuật đ ế m đĩa; - TCVN 11039-2:2015, Phần 2: Xác đ ị nh tổng số vi sinh vật hiếu khí bằng kỹ thuật đếm đ ĩ a xoắn; - TCVN 11039-3:2015, Phần 3: Phát hiện và định lượng coliform và E. coli bằng kỹ thuật đếm số có xác su ấ t lớn nhất (Phương pháp chuẩn); - TCVN 11039-4:2015, Phần 4: Phát hiện và định lượng coli f orm và E. coli bằng kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất (Phương pháp thông dụng); - TCVN 11039-5:2015 , Ph ầ n 5: Phát hiện Salmonella; - TCVN 11039-6:2015, Ph ầ n 6: Phát hiện và đ ị nh lượng Staphylococcus aureus bằng kỹ thuật đếm khu ẩ n lạc; - TCVN 11039-7:2015, Phần 7: Phát hiện và định lượng Staphytococcus aureus bằng kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nh ấ t (MPN); - TCVN 11039-8:2015, Phần 8: Định lượng n ấ m men và nấm mốc. PHỤ GIA THỰC PH Ẩ M - PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VI SINH VẬT – PH Ầ N 7: PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG STAPH Y LOCOCCUS AURE U S B Ằ NG KỸ THUẬT ĐẾM CÓ X Á C SU Ấ T LỚN NH Ấ T (MPN) Food aditive - Microbiological analyses - Part 7:Detection and enumeration of staphylococcus aureus by most probable number (MPN) technique 1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp phát hiện và định lượng Staphylococcus aureus trong phụ gia thực phẩm bằng kỹ thuật đếm số có xác suất lớn nhất (MPN). Phương pháp MPN thường được sử dụng cho các sản phẩm có số S. aureus dự kiến nhỏ và trong mẫu thử dự kiến có chứa quần thể lớn các loài vi sinh vật cạnh tranh. 2 Thuật ngữ và định nghĩa Trong tiêu chu ẩ n này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau đây: 2.1 Staphylococcus aureus ( Staphylococcus aureus ) Vi khuẩn hình thành khuẩn lạc điển hình và/hoặc không điển hình tr ê n bề mặt của môi trường cấy chọn lọc và cho phản ứng coagulase dương tính khi tiến hành thử nghiệm theo phương pháp quy định trong tiêu chuẩn này. 3 Nguyên tắc 3.1 Cấy lên bề mặt của môi trường cấy chọn lọc một lượng huyền phù ban đầu quy định. 3.2 Cấy l ê n bề mặt môi trư ờ ng Baird-Parker và ủ 48 h ở 35 ° C . 3.3 Các khuẩn lạc điển h ì nh và/hoặc không điển h ì nh được khẳng định bằng phép thử nhận biết. 3.4 Số có xác suất lớn nhất của các Staphylococcus có phản ứng coagulase dương t í nh trong một gam s ả n phẩm tính được bằng cách đối chi ế u với các b ả ng số có xác suất lớn nh ấ t cho các độ pha lo ã ng khẳng định. 4 Môi trường cấy, dịch pha loãng và thuốc thử 4.1 Môi trường Baird-Parker (xem A.1). 4.2 Canh thang trypt i case (tryptic) đ ậu tương ( TSB), chứa natri clorua 10 % và natri pyruvat 1 % (xem A.2). 4.3 Thạch trypticase (trypton) đậu tương (TSA) (xem A.3). 4.4 Thạch tolui d ine xanh-axit deoxyribonucleic (ADN) (xem A.4). 4.5 Canh thang pheno l đỏ cacbohydrat (xem A.5). 4.6 Coagulase plasma (từ th ỏ ) chứa EDTA, vô trùng (có bán sẵn). 4.7 Dung dịch lysostaphin (xem A.6). 4.8 Dung dịch hydro peroxit, 3 % thể tích (xem A.7). 4.9 Dung dịch đ ệ m muối phosphat, 0,02 M, chứa natri clorua 1 %. 4.10 D ầ u para fi n , vô trùng. 5 Thiết bị và dụng cụ thủy tinh Có thể d ùng d ụng cụ th ủy tinh sử dụng một lần thay thế cho các dụng cụ thuỷ tinh sử dụng nhiều lần nếu chúng có các đặc tính thích hợp. S ử dụng các thi ế t bị của phòng thử nghiệm vi sinh và cụ thể là: 5.1 Bu ồ ng s ấ y , có dòng kh í m ỏ ng hoặc phòng được thông khí tốt, không có bụi và dự kiến mật độ vi sinh vật trong không kh í ở khu vực làm việc không lớn hơn 15 khuẩn lạc trên mỗi đĩa sau 15 min phơi nhiễm. 5.2 Đĩa Petri , bằng chất dẻo (15 mm x 90 mm) hoặc thủy tinh (15 mm x 100 mm). 5.3 Pipet , có thể phân phối 1, 5 và 10 ml, chia vạch đến 0,1 ml. 5.4 T ủ ấm , có thể duy trì nhiệt độ 35 °C ± 1 °C. 5.5 Que c ấ y vòng. 5.6 Que c ấ y gạt , bằng thủy tinh, đường kính từ 3 mm đến 4 mm, dài từ 15 cm đến 20 cm, có một đầu được uốn cong một đoạn dài từ 45 mm đến 55 mm. 5.7 Ống nghiệm vô trùng , kích thước 13 mm x 100 mm. 5.8 N ồi cách thủy , c ó thể đun đến sôi. 5.9 Máy trộn Vortex. 6 Lấy mẫu Mẫu gửi đ ế n phòng thử nghiệm phải là mẫu đại diện. Mẫu không bị hư hỏng hoặc biến đ ổ i trong suốt quá tr ì nh vận chuyển hoặc bảo quản. Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu chu ẩ n này. Xem tiêu chu ẩ n cụ thể có liên quan đến sản phẩm. Nếu chưa có tiêu chu ẩ n cụ thể liên quan đến sản phẩm th ì các bên có liên quan n ê n thoả thuận với nhau về vấn đề này. 7 Chuẩn bị mẫu thử M ẫ u được trộn đều đ ể thu được các phần mẫu thử đồng nhất. 8 Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị dung dịch pha loãng Trong các điều kiện vô trùng, chuẩn bị dãy dung d ị ch pha loãng thập phân bằng cách chuyển 10 ml dung dịch mẫu thử đã pha loãng trước đó vào 90 ml dung dịch pha loãng (4.9), s ử dụng các pipet (5.3) riêng cho từng nồng độ. Không làm mẫu nổi bọt. Lắc tất cả các dung dịch pha loãng 25 lần với biên độ 30 cm trong vòng 7 s. 8.2 Xác định bằng MPN Cấy vào 3 ố ng TSB chứa natri clorua 10 % và natri pyruvat 1 % (4.2) mỗi ống 1 ml dung dịch pha loãng (8.1). Lựa chọn các độ pha loãng sao cho độ pha loãng cao nhất cho kết quả âm tính . Ủ các ống 48 h ± 2 h ở 35 °C trong t ủ ấm (5.4). Dùng que cấy đường k í nh 3 mm (5.5) để chuyển một vòng đầy từ mỗi ống có vi s i nh vật phát triển (bị đục) vào đĩa môi trường Baird-Parker (4.1) đã được làm khô thích hợp. Trộn Vortex các ống trư ớ c khi cấy nếu vi sinh vật phát triển chỉ quan sát được ở đáy hoặc rìa ống. Ria chất cấy để c ó được các khu ẩ n lạc riêng r ẽ . Ủ 48 h ở 35 °C trong tủ ấ m (5.4). Từ mỗi đ ĩ a có vi sinh vật phát triển, chuyển ít nhất 1 khuẩn lạc nghi ngờ là S. aureus v à o canh thang TSB và thực hiện theo 8.3. 8.3 Nhận biết S. aureus 8.3.1 Phép th ử coagulase Chuyển các khuẩn l ạc S. aureus nghi ngờ vào các ố ng nhỏ chứa từ 0,2 ml đến 0,3 ml canh thang TSB chứa natri clorua 10 % và natri pyruvat 1 % (4.2), nghiền cho đến khi đục đều. Cấy một vòng đầy huyền phù TSB lên ống môi trường thạch nghiêng thích hợp, ví dụ TSA (4.3). Ủ ống huy ề n phù nuôi cấy trong TSB và ống thạch nghiêng đã cấy trong thời gian từ 18 h đến 24 h ở 35 °C. Giữ các chủng cấy tr ê n bề m ặ t nghiêng ở nhiệt độ phòng, thực hiện các phép thử lặp lại trong trường hợp nghi ngờ kết quả của phép thử coagulase. Thêm 0,5 ml plasma coagulase ho à n nguyên với EDTA (4.6) vào ống huyền phù nuôi cấy trong TSB và trộn đều. Ủ ở 35 °C và kiểm tra định kì sự đông tụ sau mỗi 6 h. Ph ả n ứng coagulase ch ỉ được coi là d ương tính khi đông tụ hoàn toàn và khối đông tụ không di chuyển khi nghiêng hoặc úp ngược ống. Trong trường hợp đông tụ một phần, trước đây đánh giá là phản ứng coagulase dương tính 2+ và 3+, cần được phân tích tiếp (xem Tài liệu tham khảo [7 ] ). Thử nghiệm đồng thời các chủng cấy đã biết là dương tính và âm tính với các chủng cấy nghi ngờ, chưa rõ về hoạt tính coagulase. Nhuộm Gram tất cả chủng c ấ y nghi ngờ v à quan sát hình thể. Phép thử ngưng kết latex c ó thể thay thế cho phép thử coagulase nếu cần thử nhanh. 8.3.2 Các ph ả n ứng sinh hóa nhận bi ế t bổ sung 8.3.2.1 Phép thử catalase Nhỏ một giọt hydro peroxit 3 % (4.8) lên phiến k í nh sạch. Lấy một ít sinh khối nuôi cấy trong ống thạch nghiêng TSA nghiền đều vào giọt hydro peroxit 3 %. Nếu sinh bọt khí th ì phản ứng catalase dương tính. Phản ứng tiến hành đồng thời với chủng c ấ y â m tính v à dương tính. 8.3.2.2 Sử dụng glucose trong đ iề u kiện kị khí Cho vòng cấy đầy vào đáy ống canh thang phenol đỏ cacbohyđrat chứa glucose (0,5 %) (4.5). Để cho chất cấy chạm đến đáy ống. Phủ bề mặt canh thang bằng l ớ p dầu parafin vô trùng (4.10) với chi ề u d à y ít nhất 25 mm. Ủ 5 ngày ở 35 °C trong t ủ ấm (5.4). Nếu chất chỉ th ị đ ổ i sang màu vàng trên toàn bộ ống thì có axit sinh ra trong điều kiện kị khí, nghĩa là có mặt S. aureus . Thực hiện phép thử kiểm chứng đồng thời (kiểm ch ứ ng ch ủ ng cấy dương t í nh, âm t í nh và môi trường). 8.3.2.3 Sử dụng o f mannitol trong điều k iện kị kh í Tiến hành theo 8.3.2.2, sử dụng mannitol làm cacbohydrat trong môi trường, S. aureus thường dương tính nhưng một số chủng âm tính. Thực hiện phép thử kiểm soát đồng thời. 8.3.2.4 Nhạy cảm với lysostaphin Dùng que cấy lấy khuẩn lạc được phân lập từ đĩa thạch vào 0,2 ml dung dịch đệm muối phosphat (4.9) và nghiền đều. Chuyển một nửa huyền phù vào ống thứ hai (13 mm x 100 mm) và trộn với 0 , 1 ml dung dịch đệm muối phosphat (4.9) làm đối chứng. Thêm vào ống ban đầu 0,1 ml dung dịch lysostaphin (4.7) (đã hòa tan trong 100 ml dung dịch đệm muối phosphat 0,02 M chứa natri clorua 1 % đ ể có nồng độ lysostaphin cuối cùng là 25 µg/ml). Ủ c ả hai ống ở 35 °C Không quá 2 h. Nếu ống thử nghiệm trong thì phép th ử được coi là dương tính. Phép thử âm tính nếu ống thử nghiệm đục. S. aureus thường cho kết quả dương tính. 8.3.2.5 Sinh nucl e ase bền nhiệt Khi phản ứng coagulase không cho kết quả rõ ràng th ì cần thực hiện phép th ử sinh nuclease bền nhiệt để quan sát sự đ ổ i màu từ xanh lam sang hồng tươi. Đây không phải là phép thử thay thế cho phản ứng coagulase mà là phép thử bổ trợ, đ ặc biệt đối với các phản ứng dương t í nh 2+. Chu ẩ n bị các lam kính bằng cách dàn 3 ml thạch toluidin xanh-axit deoxyribonucleic (4.4) trên bề mặt lam k í nh. Khi thạch đông đặc thì khoan các giếng đường k í nh 2 mm (từ 10 đến 12 giếng trên mỗi lam k í nh) trên bề mặt v à loại b ỏ các nút thạch. Nhỏ khoảng 0,01 ml huyền phù vi khuẩn đã gia nhiệt (đun sôi cách th ủ y 15 min) s ử d ụng cho phản ứng coagulase vào giếng trên mặt thạch . Ủ các lam kính trong t ủ ấ m 4 h ở 35 °C. N ế u xuất hiện quầng màu hồng tươi rộng ít nhất 1 mm bao quanh giếng thì phản ứng dương tính. 8.3.3 Các đặc tính Một số đặc tính điển hình của hai loài Staphylococcus và các loài Micrococcus được n ê u trong Bảng 1. Bảng 1 - Các đặc tính điển hình c ủ a S. aureus , S. ep id ermi d is và Micrococcus Đặc tính S. aureus S. epidermidis Micrococcus Hoạt t í nh catalase + + + Sinh coagulase + - - Sinh thermonuclease + + - Nhạy cảm với lysostaphin + + - Sử dụng glucose trong điều kiện kị kh í + + - Sử dụng mannitol trong điều kiện kị khí + - - (+) H ầ u hết (≥ 90%) các chủng dương t í nh; ( - ) Hầu h ế t (≥ 90%) các chủng âm t í nh. 9 Biểu thị kết quả Số có xác suất lớn nhất của các Staphylococcus có ph ả n ứng coagulase dương t í nh trong một gam sản phẩm tính được bằng cách đối chiếu với các bảng số có xác suất lớn nhất cho các độ pha lo ã ng khẳng định. Tham kh ả o TCVN 6404 (ISO 7218 ) [4] . 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải chỉ rõ: a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đ ủ về mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu bi ế t; c) phương pháp thử nghiệm đã dùng, viện dẫn tiêu chu ẩ n này; d) mọi chi tiết thao tác không được quy định trong tiêu chuẩn này hoặc những điều được coi là tuỳ chọn cũng như các sự cố bất kỳ có thể ảnh hư ở ng đến kết qu ả ; e) kết quả thử nghiệm thu được. Phụ lục A (Quy định) Thành phần và chuẩn bị môi trường và thuốc thử A.1 Môi trư ờn g Baird-Parker A.1.1 Môi trường cơ bản A.1.1.1 Thành phần Trypton 10 g Ch ấ t chiết thịt bò 5 g Chất chiết nấm men 1 g Natri pyruvat 10 g G l ycin 12 g Liti clorua ngậm sáu phân tử nước (LiCI . 6H 2 O ) 5 g Thạch 20 g Nước cất 1 lít A.1.1.2 Chuẩn bị Hấp áp lực 15 min ở 121 °C. pH cuối cùng đạt 7,0 ± 0,2. Nếu cần sử dụng ngay thì duy trì m ô i trường đ ã tan ch ả y ở nhiệt độ t ừ 48 °C đến 50 °C trước khi bổ sung t ă ng sinh. Nếu không cần sử dụng ngay th ì bảo quản m ô i trường đ ô ng đặc ở 4 °C ± 1 °C đến 1 tháng. Làm tan ch ả y môi trường trước khi sử dụng. A.1.2 Dung dịch kali telurit A.1.2.1 Thành ph ầ n Kali telurit 1) (K 2 TeO 3 ) 1,0 g Nước 100 ml 1) Ch ỉ sử dụng kali telurit sẵn có phù hợp đối với ph é p thử này (xem A.1.2.2). A. 1.2.2 Chuẩn bị Hoà tan hoàn toàn kali telurit trong nước b ằ ng cách đun nóng rất nhẹ. Bột kali telurit phải dễ tan. Nếu có mặt chất không hoà tan màu trắng trong nước thì loại b ỏ bột đó. Lọc qua màng lọc cỡ lỗ 0,22 µm để khử trùng. Dung dịch có thể được bảo quản tối đa một tháng ở nhiệt độ + 3 °C ± 2 °C. Loại bỏ dung d ịch nếu có kết tủa màu trắng. A.1.3 Dung d ịch nhũ t ươ ng lòng đ ỏ trứng (nồng độ khoảng 20 % hoặc theo chỉ dẫn c ủ a nhà sản xuất). A.1.4 Môi trư ờ ng hoàn ch ỉ nh A.1.4.1 Thành ph ầ n Môi trường cơ bản (A.1.1) 100 ml Dung dịch kali teluril (A.1.2) 1,0 ml Nhũ tương lòng đỏ trứng (A.1.3) 5,0 ml A.1.4.2 Chuẩn b ị Làm tan ch ả y môi trường cơ b ả n, sau đ ó làm nguội trong nồi cách th ủy đến khoảng 47 °C. Dưới các điều kiện vô trùng, thêm dung dịch kali telurit và nhũ t ương lòng đỏ trứng, cả hai đã được làm ấ m trước trong nồi cách thuỷ ở 47 °C, lắc kỹ sau khi thêm từng dung dịch. A.1.5 Chuẩn bị các đĩa thạch Đổ một lượng thích hợp m ô i trường hoàn ch ỉ nh (A.1.4) vào đĩa Petri vô trùng để thu được môi trường thạch dày khoảng 4 mm và để cho đặc lại. Trước khi làm khô, các đĩa có thể được bảo quản đến 24 h ở nhiệt độ + 3 °C ± 2 °C. CHÚ TH Í CH: Đối vớ i các đĩa sản xuất c ô ng nghiệp, cần tuân thủ các chỉ d ẫn c ủ a nhà sản xu ấ t v ề thời gian bảo qu ả n. Trước khi sử dụng, làm khô các đĩa, tốt nhất là m ở nắp ra và úp bề mặt thạch xuống dưới, đặt vào t ủ ấ m ở nhiệt độ từ 25 °C đến 50 °C, cho đến khi các giọt nước biến mất trên bề mặt của môi trường. A.2 Canh thang trypticase (tryptic) đậu tương chứa natri clorua 10 % và natri pyruvat 1 % A.2.1 Thành ph ầ n Tryp ticase hoặc tryptose 17 g Phyton pepton 3 g Natri clorua 100 g Kali hydro phosphat (K 2 HPO 4 ) 2,5 g Dextrose 2,5 g Natri pyruvat 10 g Nước cất 1 lít A.2.2 Chuẩn bị Chỉnh đ ế n pH 7,3. Đun nhẹ nếu cần. Phân phối 10 ml vào các ống nghiệm 16 mm x 150 mm. Hấp áp lực 15 min ở 121 °C. pH cuối cùng đạt 7,3 ± 0,2. B ả o quản t rong một tháng ở 4 °C ± 1 °C. A.3 Thạch trypticase (tryptic) đậu t ư ơng A.3.1 Thành phần Tryp ticase pepton 15 g Phyton pepton 5 g Natri clorua 5 g Thạch 15 g Nước cất 1 lít A.3.2 Chuẩn bị Gia nhiệt có khuấy để h ò a tan thạch. Đun sôi 1 min. Phân phối vào các ống hoặc bình thích hợp. Hấp áp lực 15 min ở 121 °C. pH cuối cùng đạt 7,3 ± 0,2. A.4 Thạch toluidine xanh-ADN A.4.1 Thành phần Axit deoxyribonudeic (ADN) 0,3 g Thạch 10 g Canxi clorua (dạng khan) 1,1 mg Natri clorua 10 g To l uidine xanh O 83 mg Tris(hydroxymethyl)aminometan 6.1 g Nước cất 1 lít A.4.2 Chuẩn b ị Hòa tan tris(hydroxymethyl)aminometan trong 1 lít nước cất. Ch ỉ nh pH đến 9.0. Bổ sung các thành phần còn l ại, trừ toluidine xanh O và đun đến sôi để hòa tan. Hòa tan toluidine xanh O v à o môi trư ờ ng. Phân phối vào các b ì nh nón có nút cao su. Nếu sử dụng ngay th ì không cần khử trùng. Môi trường vô trùng bền ở nhiệt độ phòng trong 4 tháng. A. 5 Canh thang phenol đỏ cacbohyđrat A.5.1 Thành phần Trypticase hoặc proteose pepton No.3 10 g Natri clorua 5 g Chất chiết bò (tùy chọn) 1 g Phenol đỏ (7,2 ml dung dịch 0,25% phenol đỏ) 0,018 g Glucose 5 g Nước cất 1 lít A.5.2 Chuẩn b ị Hòa tan glucose vào canh thang cơ b ả n này. Phân phối các phần 2,5 ml vào các ống nghiệm 13 mm x 100 mm chứa các ống lên men 6 mm x 50 mm đã lật ngược. Hấp áp lực 10 min ở 1 18 °C. pH cuối cùng đạt 7,4 ± 0,2. Cách khác, hòa tan các thành phần trên, trừ glucose, trong 800 ml nước cất có đun và thỉnh thoảng khuấy. Phân phối các phần 2,0 ml vào các ống nghiệm 13 mm x 100 mm chứa các ống lên men đã lật ngược. Hấp áp lực 15 min ở 118 °C và để nguội. Hòa tan glucose trong 200 ml nước cất v à khử trùng b ằ ng c á ch cho dung dịch qua bộ l ọc giữ vi khu ẩ n. Thêm vô trùng 0,5 ml dịch lọc v à o mỗi ống canh thang đã khử trùng sau khi làm nguội đến 45 °C. Lắc nhẹ để trộn. pH cuối cùng đạt 7,4 ±0,2. A.6 Dung dịch lysostaphin Hòa tan 2,5 mg lysostaphin trong dung dịch muối đệm phosphat 0,02 M chứa natri clorua 1 %. A.7 Thuốc thử hydro peroxit Dung dịch chứa khoảng 2,5 g đến 3,5 g hydro peroxit (H 2 O 2 ) trong mỗi 100 ml. Dung dịch này có thể chứa các chất bảo quản thích hợp nhưng tổng nồng độ không quá 0,05 %. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 4830-1:2005 (ISO 6888-1:1999, With Amd. 1:2003) Vi sinh vật trong thực ph ẩ m và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp định lượng S taphylococci có phản ứng dương t í nh coagulase (Staphylococcus aureus và các loài khác) trên đĩa thạch - Phần 1: Kỹ thuật sử dụng môi trường thạch Baird-Parker [2] TCVN 4830-2:2005 (ISO 6888-2:1999, With Amd. 1:2003) Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn ch ă n nuôi - Phương ph á p đ ị nh lượng S taphylococci có phản ứng dương tính coagulase (Staphylococcus aureus và các loài khác) trên đ ĩ a thạch - Phần 2: Kỹ thuật sử d ụng môi trường thạch f ibr i nogen huyết tương thỏ [3] TCVN 4830-3:2005 (ISO 6888-3:2003) Vi sinh vật trong thực ph ẩ m và th ứ c ăn chăn nuôi - Phương pháp định lượng Staphylococci có phản ứng dương tính với coagulase (Staphylococcus aureus và các loài khác) trên đĩa thạch - Phần 3: Phát hiện và dùng kỹ thuật đ ế m số có xác suất lớn nh ấ t (MPN) để đếm số lượng nhỏ [4] TCVN 6404 (ISO 7218) Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung và hướng dẫn ki ể m tra vi sinh vật [5 ] TCVN 7927:2008 T h ực phẩm - Phát hiện và định lượng Staphylococcus aureus bằng phương pháp tính số có xác suất lớn nhất [6] FDA, Bacter i ological Analytical Manual, Chapter 5, Salmonella [7] Sperber, W.H. and Tatini, S.R. 1975. Interpretation of the tube coagulase test for identif i cation of Staphylococcus aureus. Appl. Microbiol. 29:502-505