TCVN11282:2016

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11282:2016 về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng ethoxyquin - Phương pháp đo huỳnh quang TIÊU CHUẦN VIỆT NAM TCVN 11282:2016 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ETHOXYQUIN - PHƯƠNG PHÁP ĐO HUỲNH QUANG Animal f eeding stuffs -Determinat i on of ethoxyquin content- Fluorometr i c met h od Lời nói đ ầ u TCVN 11282:2016 được xây dựng tr ê n cơ sở tham khảo AOAC 963.07 Ethoxyquin in animal feed. F luorometric metho d; TCVN 11282:2016 do Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ N ô ng nghiệp và Ph á t triển nông thôn đề ngh ị , Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Ch ấ t lượng thẩm định, Bộ Khoa học v à Công nghệ c ô ng bố. THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ETHOXYQUIN - PHƯƠNG PHÁP ĐO HUỲNH QUANG Animal f eeding stuffs -Determinat i on of ethoxyquin content- Fluorometr i c met h od 1 Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định phương pháp đo huỳnh quang đ ể xác định hàm lượng ethoxyquin trong thức ăn chăn nuôi. 2 Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố th ì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố th ì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm c ả các sửa đổi, bổ sung (nếu có). TCVN 6952 (ISO 9498), Th ứ c ă n chăn nuôi- Chuẩn bị mẫu th ử . 3 Nguyên tắc Ethoxyquin có trong mẫu thử được chiết bằng metanol và ete dầu m ỏ . Dịch chiết được đo huỳnh quang ở bước sóng thích hợp. 4 Thuốc thử và vật liệu thử Ch ỉ sử dụng các thuốc thử tinh khiết phân tích, trừ khi có quy định khác. 4.1 Dung dịch so sánh quinin sul f at (C 40 H 50 N 4 O 8 S), 1 µg/ml trong axit sul f uric 0,05 M Cân 0,100 g quinin sul f at đã được s ấ y khô 3 h ở 120 ° C , chính xác đến 0,1 mg, hòa tan trong 1 lít dung dịch axit sulfuric (H 2 S O 4 ) 0,05 M. Pha loãng 10 ml dung dịch này đến 1 lít bằng dung dịch axit sul f uric 0,05 M. Sử dụng dung dịch này đ ể hiệu chuẩn máy đo huỳnh quang. 4.2 Dung dịch chu ẩ n ethoxyquin (C 14 H 1 9 NO) 4.2.1 D u ng dịch chuẩn gốc, n ồ ng độ 1 µg/ ml Cân 100,0 mg ethoxyquin lỏng, chính xác đến 0,1 mg, cho vào bình định mức 100 ml và thêm ete dầu mỏ đến vạch. 4.2.2 Dung dịch chuẩn trung gian 1, nồng độ 50 µg/ml Chuy ể n 5 ml dung d ịch chuẩn gốc (4.2.1) vào b ì nh định mức 100 ml và th ê m ete dầu m ỏ đến vạch. 4.2.3 Dung dịch chuẩn trung gian 2, nồng độ 2,5 µg/ml Chuyển 5 ml d ung d ịch chuẩn trung gian 1 (4.2.2) vào bình định mức 100 ml và thêm ete dầu mỏ đến vạch. 4.2.4 Dung dịch chuẩn làm việc, nồng độ 1,25 µg/m l và 0,50 µg/ml Chuyển 10 ml dung dịch chu ẩ n trung gian 2 (4.2.3) vào bình định mức 20 ml và thêm ete dầu mỏ đến vạch để thu được dung dịch có nồng độ 1,25 µg/ml; chuyển 5 ml dung dịch chu ẩ n trung gian 2 (4.2.3) vào b ì nh định mức 25 m l và thêm ete dầu mỏ đến vạch đ ể thu được d ung d ịch có nồng độ 0,50 µg/ml. 4.3 Ete d ầ u m ỏ . 4.4 M etanol (CH 3 OH). 4.5 Bông thủy tinh. 4.6 Natri clorua (NaC l ), dạng tinh thể. 5 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng các thiết bị, dụng cụ thông thường của phòng thử nghiệm và cụ thể như sau: 5.1 Cốc có mỏ, dung tích 100 ml và 250 ml. 5.2 Bình định mức, dung tích 20 ml, 25 ml, 100 ml, 250 ml và 1 000 m l . 5.3 Cân phân tích, có th ể cân chính xác đến 0,1 mg. 5.4 Bộ lọc. 5.5 Bình chiết, dung tích 250 ml. 5.6 Pipet. 5.7 M á y đ o huỳnh quang, c ó bước sóng kíc h thích 365 nm và bước sóng phát xạ từ 420 nm đến 500 nm. 6 Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải đúng là mẫu đại diện. Mẫu không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá trình vận chuyển hoặc bảo qu ả n. Việc lấy mẫu không quy định trong ti ê u chuẩn này, nên l ấ y mẫu theo TCVN 4325 (ISO 6497) Thức ă n chăn nu ô i - Lấy mẫu. 7 Chuẩn bị mẫu thử Chu ẩ n bị mẫu thử theo TCVN 6952 (ISO 9498). 8 Cách tiến hành 8.1 Dựng đường chu ẩ n Chỉnh máy đo huỳnh quang (5.7) đến số đọc 0 bằng ete d ầ u m ỏ (4.3) và đến số đọc 100 b ằ ng dung dịch so sánh quinin sul f at (4.1). Ghi lại các số đọc huỳnh quang đối với các dung dịch chuẩn ethoxyquin (4.2.4) nồng độ từ 0 µg/ml đến 2,5 µg/ml. Dựng đường chu ẩ n củ a các số đọc huỳnh quang theo nồng độ ethoxyquin (microgam trên m i lilit). Nếu có sẵn mẫu chưa xử l ý (không chứa ethoxyqu i n) th ì dựng đường chuẩn từ dãy mẫu thêm chuẩn ethoxyquin với nồng độ từ 0 µg/g đến 250 µg/g. 8.2 Xác định C â n 10 g ± 0,1 g ph ầ n mẫu thử đã nghiền mịn, ch í nh xác đến 1 mg, cho vào cốc có mỏ 100 ml (5.1) và hòa thành bột nhão với 50 ml metanol (4.4). Khu ấ y trộn và đ ể y ê n 10 min. Gạn qua nút b ô ng th ủ y tinh (4.5) vào b ì nh định mức 250 ml (5.2). D ù ng hai phần, mỗi phần 50 ml metanol (4.4) để hòa lại ph ầ n c ặ n, gạn và lọc rồi gộp tất cả các phần dịch lọc. Thêm metano l đến vạch. Chuyển 25 ml dịch lỏng sang bình chiết 250 m l (5.5), thêm 100 ml nước và trộn đề u . Th ê m 50 ml ete dầu mỏ (4.3), đậy nút bình và lắc nhẹ trong 1 min. Đ ể yên vài phút cho tách lớp. Nếu tạo thành nhũ tương th ì th ê m khoảng 100 mg tinh thể natri clorua (4.6). Sau khi hệ nhũ tương bị phá vỡ, cho lớp chất lỏng phía dưới vào cốc có mỏ 250 ml (5.1). Chuyển lớp chiết bằng ete d ầ u mỏ vào bộ ch i ết 250 ml thứ hai, cho ph ầ n nước quay tr ở lại bộ chiết thứ nhấ t v à chiết lại 2 lần, mỗi l ần dùng 25 ml ete dầu mỏ. Cho 50 m l nước vào phần dịch chiết bằng ete dầu mỏ đã gộp trong bộ chiết, đậy nút v à lắc mạnh. Đ ể cho tách lớp, tháo và loại bỏ lớp nước phía dưới. Chuyển l ớ p chiết b ằ ng ete dầu m ỏ sang b ì nh định mức 100 ml (5.2) và thêm ete d ầu mỏ đến vạch. Ch ỉ nh máy đo hu ỳ nh quang (5.7) như trong 8.1 và ghi lại các số đọc huỳnh quang ở bước sóng kích thích 365 nm và bước sóng phát xạ từ 420 nm đến 500 nm. 9 Tính và biểu thị kết quả Hàm lượng ethoxyquin trong phần mẫu th ử , X tính bằng microgam trên gam (µg/g) theo công thức sau: X = X 0 x 100 Trong đó: X 0 l à nồng độ ethoxyquin có trong dịch pha loãng cuối cùng, xác định từ đường chuẩn (xem 8.1), tính bằng microgam trên mi l ilit (µg/ml); 100 là hệ số pha loãng ph ầ n mẫu thử đến dịch pha loãng cuối cùng, tính bằng mililit trên gam ( ml /g). 10 B á o cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi r õ : a) Mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ v à mẫu thử; b) Phương pháp lấy mẫu đ ã sử dụng, nếu biết; c) Phương pháp thử đã d ùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) Tất c ả các chi tiết thao tác kh ô ng quy định t rong tiêu chu ẩ n này, hoặc tùy chọn cùng với các chi tiết bất thường nào khác c ó thể ảnh hưởng đến kết quả; e) K ế t quả thử nghiệm thu được.