TCVN10490:2014

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10490:2014 (AOAC 971.47) về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng roxarsone bằng phương pháp quang phổ TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10490:2014 THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ROXARSONE B Ằ NG PHƯƠNG PHÁP QUANG PH Ổ Animal feeding stuffs - Determination of roxarsone content by spectrophotometric method Lời nói đầu TCVN 10490:2014 được xây dựng dựa theo AOAC 971.47 Roxarsone in Feeds and Premixes. Spectrophotometric Method ; TCVN 10490:2014 do Viện Chăn nuôi biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đề nghị, T ổ ng cục Tiêu chu ẩ n Đo lường Chất lượng th ẩ m định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. THỨC ĂN CHĂN NUÔI - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ROXARSONE B Ằ NG PHƯƠNG PHÁP QUANG PH Ổ Animal feeding stuffs - Determination of roxarsone content by spectrophotometric method 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chu ẩ n này quy định phương pháp đo quang phổ để xác định hàm lượng roxarsone trong thức ăn chăn nuôi. Tiêu chuẩn này không áp dụng cho các loại thức ăn chăn nuôi dạng viên có chứa chất chiết hemice l lulose. 2. Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm c ô ng bố th ì áp dụng phiên b ả n được nêu. Đối với các t à i liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phi ê n b ả n mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu c ó ). TCVN 6952 (ISO 6498), Thức ăn chăn nuôi - Chu ẩ n bị mẫu th ử . 3. Nguyên tắc Roxarsone được chiết ra khỏi mẫu thức ăn chăn nuôi bằng dung dịch dikali hydrophosphat 2 %. Các protein được làm kết tủa ở điểm đẳng điện v à được tách ra bằng ly tâm. Chất chiết được xử lý b ằ ng than hoạt t í nh ở pH 12 để loại bỏ các chất gây nhiễu v à roxarsone được xác định bằng đo quang phổ ở bước sóng 410 nm. 4. Thuốc thử và vật liệu thử Ch ỉ sử dụng thuốc thử loại t i nh khiết phân tích và nước cất hoặc nước đã khử khoáng hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định kh á c. 4.1. Dung d ị ch dikali hydrophosphat (K 2 HPO 4 ) , 2 % (khối lượng/thể tích) Hòa tan 2 g dikali hydrophosphat trong 100 ml nước. 4.2. Axit clohydric (HC l ) đậm đặc , n ồ ng độ từ 36,5 % đến 38 %. 4.3. Axit clohydric loãng Pha loãng 45 ml axit clohydric đặc (4.2) trong 200 ml nước. 4.4. Dung dịch natri hydroxit (NaOH) Hòa tan 24 g natri hydroxit trong 100 ml nước. 4.5. Than h ấ p phụ (than hoạt tính) Than đ ã được hoạt hóa. Ví dụ: có thể sử dụng G-60 hoặc loại tương đương. 4.6. Dung d ị ch chuẩn roxarsone , 300 m g/ml C â n chính xác 300 mg chất chuẩn roxarsone cho vào bình định mức 1 lít. Hòa tan và pha loãng đến vạch bằng d ung dịch dikali hydrophosphat (4.1). 5. Thiết b ị , dụng cụ Sử dụng các thiết b ị , dụng cụ c ủ a phòng thử nghiệm thông thường và các thiết bị, dụng cụ sau đây: 5.1. Cân phân tích , c ó thể cân chính xác đến 0,1 mg. 5.2. B ì nh định mức , dung tích 100 ml, 200 ml và 1000 ml. 5.3. Bình nón , dung tích 50 ml và 125 ml. 5.4. Máy lắc cơ học. 5.5. Ố ng ly tâm chia vạch , dung tích 50 ml và 100 ml. 5.6. Máy ly t â m , có thể vận hành ở tốc độ 3000 r/min. 5.7. Giấy lọc g ấ p nếp , ví dụ W hatman số 42. 5.8. Pipet , có thể phân phối các thể tích thích hợp. 5.9. Máy đo quang phổ , c ó thể đo ở bước sóng 410 nm. 5.10. Máy trộn t ố c độ cao. 5.11. Sàng số 20. 6. Lấy mẫu M ẫ u gửi đến phòng thử nghiệ m ph ả i đúng là mẫu đại diện. M ẫ u không bị hư hỏng hoặc thay đổi trong suốt quá tr ì nh v ậ n chuyển hoặc b ả o quản. Việc lấy mẫu không quy định trong tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 4325 (ISO 6497) [1] . 7. Chuẩn bị mẫu thử Chu ẩ n bị mẫu thử theo TCVN 6952 (ISO 6498). Nghiền mẫu thử bằ n g m á y trộn tốc độ cao (5.10) trong khoảng 3 min, cho đi qua sàng số 20 (5.11) và trộn kỹ. 8. Cách tiến hành 8.1. Dựng đường chu ẩ n Dùng pipet (5.8) lấy các lượng 0, 1, 3, 5, 7 và 10 ml dung dịch chu ẩ n roxarsone (4.6) cho v à o các bình định mức 100 ml (5.2) riêng rẽ v à thêm d ung dịch dikali hydrophosphat (4.1) đến vạch. Từ mỗi bình dùng pipet (5.8) lấy 30 ml cho sang các b ì nh nón (5.3) riêng rẽ, thêm vào mỗi b ì nh 1 ml d ung dịch axit clohydric loãng (4.3) rồi trộn. Dùng pipet (5.8) lấy các lượng 25 ml cho vào các bình nón 50 ml (5.3) riêng rẽ, thêm 1 ml dung dịch natri hydroxit (4.4) rồi trộn kỹ. Chuyển 3 ml dung dịch từ bình nón sang các cuvet riêng rẽ và xác định độ h ấ p thụ ở bước sóng 410 nm so với nước làm mẫu trắng. Dùng ống nh ỏ giọt thêm 2 giọt axit clohydric đậm đặc (4.2) (hoặc bằng pipet loại 5 ml), trộn và đọc lại giá trị độ hấp thụ. Dựng đường chuẩn theo chênh lệch độ hấp thụ của các dung dịch chuẩn tương ứng với nồng độ roxarsone là 0, 10, 30, 50, 70 và 100 mg/kg mẫu thức ăn chăn nuôi khi sử dụng 15 g phần mẫu thử. 8.2. Chiết mẫu Cân 15,0 g mẫu thử đã nghiền (xem Điều 7) cho vào bình nón 125 ml (5.3), thêm 50,0 ml dung dịch dikali hydrophosphat 2 % (4.1), đặt b ì nh lên máy lắc cơ học (5.4) và lắc 5 min ở nhiệt độ phòng. Chuyển ngay sang ống ly tâm 100 ml (5.5) và cho ly tâm 10 min ở tốc độ 3000 r/min. Tiến hành chiết ngay sau khi ly tâm. CHÚ TH Í CH: Đối với một số n ề n mẫu để thu được 30,0 ml chất chiết, th ì c ầ n tăng gấp đ ô i lượng m ẫ u thử , th ể t í ch chất chiết phosphat và dung t í ch b ì nh chiết. Gạn 30 ml phần dung dịch phía trên sang ống ly tâm chia độ 50 m l (5.5), dùng pipet (5.8) thêm 1 ml axi t clohydric loãng (4.3), đậy nắp ống ly tâm v à trộn kỹ. Để yên phần mẫu thử cho đến khi protein kết tụ (khoảng 15 min) và cho ly tâm 10 min ở tốc độ 3000 r/min. 8.3. Tinh sạch Dùng pipet (5.8) lấy 25 ml phần dung dịch trong suốt phía trên (xem 8.2) cho vào bình nón 125 ml (5.3). Dùng pipet thêm 1 ml dung dịch natri hydroxit (4.4) và trộn kỹ. Thêm 2,0 g than hoạt tính (4.5), để yên trong khoảng thời gian 30 min, xoay b ì nh vài lần. Lọc qua giấy lọc gấp nếp (5.7) vào bình nón 50 ml (5.3). Lặp lại việc xử lý với 2,0 g t h an hoạt tính. 8.4. Phép xác định đối với thức ăn chăn nuôi Cho 3 ml dịch lọc (xem 8.3) vào cuvet và xác định độ hấp thụ ở bước sóng 410 nm so với nước làm mẫu trắng. Thêm 2 giọt axit clohydric đậm đặc (4.2), trộn và đọc lại giá trị độ hấp thụ. Chênh lệch độ hấp thụ củ a các phần mẫu thử trong môi trư ờ ng kiềm và axit cho thấy sự có mặt của roxarsone. Xác định hàm lượng roxarsone từ đường chuẩn. 8.5. Phép xác định đối với prem i x Cân một lượng mẫu thử thích hợp, cho vào bình định m ứ c 200 ml (5.2), thêm 50 ml dung dịch dikali hydrophosphat 2 % (4.1) v à 4,0 ml dung d ị ch natri hydroxit (4.4). Để yên 20 min, thỉnh thoảng lắc, sau đó thêm dung dịch dikali hydrophosphat 2 % (4.1) đến vạch và để yên cho các hạt lắng xuống trong 30 min. Gạn 30 ml phần dịch phía trên sang ống ly tâm chia độ 50 ml (5.5), dùng pipet (5.8) th ê m 1 ml axit clohydric loãng (4.3), đậy nắp ống ly tâm và trộn kỹ. Để yên phần mẫu thử cho đến khi protein kết tụ (khoảng 15 min) và cho ly tâm 10 min ở tốc độ 3000 r/min. Sử dụng các thể tích dịch chiết và các mức pha lo ã ng thích hợp để c ó được các nồng độ cuối cùng nằm trong phạm vi c ủ a đư ờ ng chuẩn. V Í DỤ: Đối với premix 5 %, cho 5 g premix đ ã trộn đ ề u vào bình định mức 200 ml và chiết như trên. Chuyển 10 ml dịch chiết sang b ì nh định mức 100 ml và thêm nước đến vạch rồi trộn đều. Chuyển một lượng 10 ml d ung dịch n à y sang một bình định mức 100 ml khác v à thêm nước đ ế n vạch. Hệ số pha lo ã ng đối với premix này là 1200. Sau khi pha lo ã ng, chuyển 30 ml sang b ì nh nón 125 ml (5.3). Dùng pipet (5.8) thêm 1 ml axit clohydric loãng (4.3) và trộn. Chuyển 25 ml dung dịch này sang bình nón 125 ml khác, thêm 1 ml dung dịch natri hydroxit (4.4), trộn đều, thêm 2,0 g than hoạt tính (4.5), lắc v à i lần trong thời gian 30 min và lọc. Lặp l ạ i việc xử lý bằng than hoạt tính. Đọc độ hấp thụ c ủ a dịch lọc và xác định n ồ ng độ roxarsone như trong 8.4 nhân v ớ i hệ số pha loãng. 9. Biểu thị kết qu ả Biểu thị hàm lượng roxarsone trong mẫu thức ăn chăn nuôi, t í nh được theo 8.4 hoặc 8.5, bằng miligam trên kilogam. 10. Báo cáo thử nghiệm Báo cáo th ử nghiệm phải ghi r õ : a) Mọi thông tin c ầ n thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu th ử ; b) Phương pháp lấy m ẫu đã s ử dụng, nếu biết; c) Phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) Tất cả các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này , hoặc t ùy chọ n cùng với các chi ti ế t bất thường nào khác có t hể ảnh hư ở ng đến kết qu ả ; e) Kết quả th ử nghiệm thu được. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 4325 (ISO 6497) Thức ăn chăn nuôi - Lấy mẫu