TCVN8400-19:2014

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-19:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 19: Bệnh phó thương hàn lợn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8400-19:2014 BỆNH ĐỘNG VẬT - QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN - PHẦN 19: BỆNH PHÓ THƯƠNG HÀN LỢN Animal diseases - Diagnostic procedure - Part 19: Salmonellosis in pig Lời nói đầu TCVN 8400-19:2014 do Trung tâm Ch ẩ n đoán Thú y Trung ương - Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố. BỆNH ĐỘNG VẬT - QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN - PHẦN 19: BỆNH PHÓ THƯƠNG HÀN LỢN Animal diseases - Diagnostic procedure - Part 19: Salmonellosis in pig CẢNH BÁO - Việc áp dụng tiêu chuẩn này có th ể liên quan đến các vật liệu, thiết bị và các thao tác gây nguy hiểm. Tiêu chuẩn này không thể đưa ra đ ược hết tất cả các vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng. Người sử dụng tiêu chuẩn này phải tự thiết lập các thao tác an toàn sức kh ỏ e thích h ợ p và xác định khả năng áp dụng các giới hạn quy định trước khi sử dụng tiêu chuẩn. 1. Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn này quy định quy trình chẩn đoán bệnh phó thương hàn do vi khu ẩ n Salmonella gây ra ở lợn. 2. Thuật ngữ và định nghĩa Trong tiêu chu ẩ n này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau: Bệnh phó thương hàn lợn (Salmonellosis i n p i g) Là bệnh truyền nhiễm do vi khuẩn Salmonella gây ra với các thể bệnh ch ủ yếu l à bại huyết do Salmonella choleraesuis (S. choleraesuis) chủng Kunzendorf và viêm ruột do Salmonella typhimur i um (S. typhimurium). Ngoài ra, Salmonella typhisuis (S. typhisu i s), Salmonella enteritidis (S. enteritidis), Salmonella dublin (S. dublin), Salmonella derby (S. derby), Salmonella heidelberg (S. heidelberg) cũng có thể gây bệnh nhưng bệnh thường biểu hiện t hoán g qua hoặc ở dạng nhiễm khu ẩ n cục bộ như viêm phổi, viêm màng não, ỉa chảy, hoặc viêm hạch lâm ba. Đặc biệt các chủng S . typhimurium, S . enteritidis có khả năng gây bệnh trên người. Vi khuẩn Salmonella thuộc họ Enterobacteriaceae, là vi khuẩn gram âm, có khả năng di động, hiếu khí hoặc yếm khí tùy tiện và không hình thành nha bào. Dựa vào cấu trúc kháng nguyên, chủ yếu là kháng nguyên thân O (kháng nguyên O), kháng nguyên lông H (kháng nguyên H). Vi khu ẩ n Salmonella được chia thành các nhóm và các typ huyết thanh. Hiện nay đã phát hiện được trên 2400 typ huyết thanh. 3. Thuốc thử và vật liệu thử Ch ỉ sử dụng thuốc th ử loại tinh khiết phân tích v à sử dụng nước cất hoặc nước đã khử k hoán g, trừ khi có quy định khác. 3.1 . Môi trường thạch m á u: Thạch máu cơ bản được bổ sung từ 5 % đến 7 % máu cừu, máu bê, hoặc máu thỏ (pha chế thạch theo hướng dẫn của nhà sản xuất). 3.2 . Môi trường nước thịt 3.3 . Thạch MacConkey hay thạch Brilliant green (BG) hoặc môi trường thạch XLD (xylose-lysine-deoxycholate agar). 3.4 . Nước peptone (peptone w ater). 3.5 . Bộ kháng huyết thanh chuẩn đơn giá và đa giá đ ị nh typ kháng nguyên vi khuẩn Salmonella. 3.6 . Nguyên liệu hóa ch ấ t cho các phản ứng sinh hóa (Phụ lục A). 3.7 . Nguyên liệu cho PCR (Phụ lục B). 3.8 . Môi trường tetrathionate 4. Thiết bị, dụng cụ Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thí nghiệm sinh học và một số thiết bị, dụng cụ cụ thể như sau: 4.1 . Tủ ấ m, duy tr ì nhiệt độ 37 ° C . 4.2 . Tủ ấm, duy trì nhiệt độ 42 ° C . 4.3 . Nồi hấp, duy tr ì ở nhiệt độ 115° C , 121 ° C . 4.4 . Phiến kính , sạch. 4.5 . Que cấy, vô trùng. 4.6 . Ống nghiệm, sạch, vô trùng 4.7 . Màng lọc, có k í ch thước lỗ lọc 0,45 μm. 4.8 . Que cấy chích sâu , vô trùng. 5. Cách tiến hành 5.1 . Ch ẩ n đoán lâm sàng 5.1.1 . Đặc điểm dịch tễ - Bệnh xảy ra chủ yếu ở lợn con sau cai sữa. - Lợn khỏe có thể mang mầm bệnh và vi khu ẩ n thường cư trú tại hạch amidan và các tổ chức lâm ba - Nguồn lây nhiễm chủ yếu là qua phân của lợn bệnh và lợn mang mầm bệnh. - Bệnh có t í nh ch ấ t lây lan cục bộ địa phương. 5.1.2 . Triệu chứng lâm sàng Thể bại huy ế t - Th ể bệnh này thường gặp ở lợn con cai sữa dưới 2 tháng tuổi. - Dấu hiệu đầu tiên của bệnh l à lợn ủ rũ, bỏ ăn, nằm rúc đầu vào góc chuồng, một vài lợn chết c ó biểu hiện tím tái ở bốn chân và vùng bụng. - Lợn s ố t cao từ 40,5 ° C đến 41,5 ° C . - Ho nhẹ, khó th ở . - T ỷ lệ chết cao. - Lợn trưởng thành khi mắc thể bệnh này thường chết đột ngột hoặc sảy thai. Thể viêm ruột - Thể bệnh này thường gặp ở lợn con từ cai sữa đến 4 tháng tuổi. - Lợn ỉa ch ả y phân loãng m à u vàng có khi dính máu, màng nh à y và f ibrin, có thể bị đi bị lại vài lần và kéo dài đến vài tuần. - Lợn mất nước, gầy, sốt từng cơn. - Tỉ lệ chết thấp và chỉ xảy ra sau khi đi ỉa chảy v à i tuần, còn ph ầ n lớn các lợn có thể hồi phục và trở thành vật mang trùng. 5.1.3 . Bệnh tích đại th ể Thể bại huyết - T í m tái ở tai, chân, đuôi, bụng. - Lách, hạch màng treo ruột sưng to. - Gan c ó các điểm hoại t ử nh ỏ . - Phổi xung huyết, xuất huyết. - Có khi có xuất huyết điểm ở miền vỏ thận, hoại t ử ở ruột non. Thể viêm ruột - Tổn thương ch ủ yếu là hoại tử điểm hay tràn lan ở ruột già (kết tràng hoặc manh tràng). Hoại tử có khi có dạng loét cúc áo. - Niêm mạc ruột dày lên phủ dịch nhày màu đ ỏ có những mảnh màu v à ng xám. - Hạch màng treo ruột và đặc biệt là hạch hồi mang tràng sưng to. 5.2. Chẩn đoán trong phòng th í nghiệm 5.2.1 . L ấ y mẫu Lợn chết nghi mắc bệnh thể bại huyết lấy bệnh phẩm là: máu, lách, gan, phổi. Mỗi loại bệnh phẩm được l ấ y vô trùng từ 50 g đến 100 g. Lợn chết nghi mắc bệnh thể viêm ruột lấy bệnh phẩm là ruột hoặc chất chứa ruột vùng hồi tràng, hạch lympho vùng hồi manh tràng. Lợn sống: lấy mẫu là phân trực tràng (lấy khoảng 10 g), dịch ngoáy họng vùng amidan. Cho mỗi loại bệnh phẩm vào từng lọ hay túi ni lon vô trùng riêng biệt, đậy kín, b ả o quản trong điều kiện lạnh từ 2 ° C đến 8 ° C và gửi về phòng thí nghiệm chậm nhất 24 h sau khi lấy mẫu. Gửi kèm theo bệnh phẩm gi ấ y yêu cầu xét nghiệm có ghi r õ triệu chứng, bệnh tích và đặc điểm dịch tễ. 5.2.2 . Phân lập vi khuẩn Bệnh ph ẩ m được c ấ y vào các môi trường: môi trường nước thịt (xem 3.2), môi trường thạch máu (xem 3.1), môi trường chọn lọc (thạch MacConkey, thạch Brillian green, thạch XLD (xem 3.3)), nuôi c ấ y hiếu khí trong tủ ấ m ở 37 ° C (xem 4.1) trong 24 h. Với những bệnh ph ẩ m là phân, dịch ruột, dịch ngoáy họng hoặc bệnh phẩm phủ tạng nghi b ị nhiễm tạp khu ẩ n, cấy vào môi trường tăng sinh như môi trường tetrathionate (xem 3.8), nuôi c ấ y hiếu khí trong t ủ ấm ở 42 ° C (xem 4.2) từ 36 h đến 48 h. Sau đó cấy chuyển vào môi trường thông thường và môi trường chọn I ọ c. Sau 24 h nuôi cấy, h ì nh thái khuẩn lạc Salmonella trên các môi trường phân lập như sau: Trên môi trư ờ ng thạch máu (xem 3.1): kh uẩn lạc có hình tròn, trơn, mặt vồng và màu trắng hơi đục. Trên m ô i trường thạch MacConkey (xem 3.3): khuẩn lạc có h ì nh tròn, trơn, hình vòm màu trắng hơi đục. Trên môi trường thạch Brillian green (xem 3.3): khuẩn lạc có h ì nh tròn, trơn, màu hồng đậm. Trên môi trường thạch XLD (xem 3.3): khuẩn lạc có hình tròn, trơn, màu đỏ có nhân đen. Chọn khu ẩ n lạc nghi ngờ cấy vào môi trư ờ ng thạch máu (xem 3.1), nư ớ c peptone (xem 3.4) hoặc môi trường nước thịt (xem 3.2), nuôi trong tủ ấ m ( xem 4.1) từ 18 h đến 24 h để kiểm tra đặc tính sinh hóa hay giám định vi khuẩn bằng phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) (xem Phụ lục B). 5.2.3 . Xác định vi chuẩn 5.2.3.1 . Kiểm tra các đặc tính sinh hóa Bảng 1- Một số đặc t í nh sinh hóa đặc trưng của vi khuẩn Salmonella Tính ch ấ t Salmonella Sp. S. choleraesuis chủng Kunzendorf S. choleraesuis S. typhisuis Indol - - - - Lactose - - - - H2S (TSI) + + - ± Glucose + + + + Citrate + + + - Lysine + + + - Mannitol + + + - Chú thích : Dương t í nh: + ; Â m t í nh: -; Phản ứ ng thay đổi: ( ± ) Kiểm tra các đặc tính sinh hóa theo quy định tại Phụ lục A. Có thể sử dụng kit sinh hóa thương mại để định danh vi khuẩn Salmonella spp theo hướng dẫn của nhà sản xuất. 5.2.3.2 . Xác định vi khuẩn Salmonella b ằ ng phương pháp PCR Có thể sử dụng phương pháp PCR để xác định vi khuẩn Salmonella với các cặp mồi đặc hiệu và chu trình nhiệt trình bày ở B ả ng 2. B ả ng 2 - Các cặp mồi và chu trình nhiệt cho PCR Gen đích Kí hiệu Trình tự mồ i (5 ’ -3 ’ ) K í ch c ỡ sản phẩm (bp) Chu trình nhiệt invA 139 (m ồ i xuôi) GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA 284 94 ° C , 5 min; 30 chu trình : (94 ° C , 1 min; 55 ° C , 1 min; 72 ° C, 1 min) 72 ° C trong 7 min. Giữ ở 4 ° C 141 ( mồi ngược) TCATCGCACCGTCAAAGGAACC Ti ế n hành phản ứng PCR theo quy định tại Phụ lục B. 5.2.3.3 . Định typ huyết thanh Cấ y vi khuẩn đã được xác định l à Salmonella bằng xác định sinh hóa hay phương pháp PCR vào m ô i trư ờ ng thạch máu (xem 3.1), nuôi trong t ủ ấm (xem 4.1). Sau từ 18h đến 24h tiến hành định typ huyết thanh. Định typ kháng nguyên theo nhóm và kháng nguyên O bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính (xem 4.4) với kháng huyết thanh chuẩn đa giá và đơn giá (xem 3.5). Các bước tiến hành phản ứng và đọc kết quả theo ch ỉ dẫn của nhà sản xuất kháng huyết thanh. Định typ kháng nguyên H thường sử dụng phản ứng ngưng kết chậm trong ống nghiệm (xem 4.6). Các bước tiến hành phản ứng và đọc kết quả theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. Bảng 3 - Tính kháng nguy ê n của một số typ huyết thanh Salmonella Typ huyết thanh Salmonella Nhóm Kháng nguyên th â n O Kháng nguyên lỏng H Pha 1 (Phase 1 ) (Pha 2) Phase2 S . typhimurium B 1 , 4 , (5), 12 i 1 , 2 S . choleraesuis C1 6, 7 c 1 , 5 S . choleraesuis chủng Kunzendorf C1 6, 7 ( c ) 1 , 5 S . typhisuis C1 6, 7 c 1,5 S . d ublin D1 1 , 9, 12 g.p S . hei d elberg B 1, 4, (5), 12 r 1 , 2 S. enteritidis D1 1 , 9, 12 g,m (1,7) 6. Kết luận Lợn được xác định là mắc bệnh phó thương hàn khi có đặc điểm dịch tễ, triệu chứng lâm sàng, bệnh tích điển hình của bệnh v à phân lập được vi khu ẩ n Salmonella trong phòng th í nghiệm thuộc các typ huyết thanh có khả năng gây bệnh cho lợn tại Bảng 3. PHỤ LỤC A ( Quy định ) Phương pháp kiểm tra các đặc tính sinh hóa A.1 . Phản ứng sinh lndol A.1.1 . Thu ố c thử Kovac’s Thành phần Paradimetylaminobenzaldehyde 5g Cồn amylic 75 ml HC l đậm đặc 25 ml Cách pha: H òa dung dịch paradimetylaminobenzaldehyde vào cồn amylic cho tan hết và để trong tủ tạnh 4 ° C . Th ê m từ từ 5ml đến 10 ml HC l h òa đều r ồ i để tủ lạnh, sau đó lại tiếp tục đổ HC l cho đủ lượng. Bảo quản thuốc thử trong lọ tối màu, ở 4 ° C . A.1.2 . Cách ti ế n hành Dùng que c ấ y (xem 4.5) lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào môi trư ờ ng nước peptone (xem 3.4) hoặc môi trường nước peptone (xem 3.4) có bổ sung tryptophan, nuôi trong tủ ấm (xem 4.1). Sau 24 h nuôi cấy, nhỏ từ 0,2 đ ế n 0,3 ml dung d ị ch thuốc thử Kovac’s vào môi trường, lắc nhẹ. Đọc kết quả như sau: - Phản ứng dương tính: có vòng màu đ ỏ xuất hiện tại nơi tiếp giáp giữa thuốc thử và môi trường (sinh Indol). - Phản ứng âm t í nh: kh ô ng có vòng màu đỏ xuất hiện tại nơi tiếp giáp giữa thuốc thử và môi trường. A.2 . Sử dụng Citrate Pha chế môi trường (thạch simon citrate) theo qu y đ ị nh của nhà sản xuất. Dùng que cấy (4.5) lấy k huẩn lạc nghi ngờ cấy vào thạch simon citrate, nuôi trong tủ ấm (xem 4.1) từ 18 h đến 24 h. Vi khuẩn sử dụng citrate (dương tính) làm môi trư ờ ng chuyển từ màu xanh lá cây sang m à u xanh nước biển. Âm tính khi môi trường giữ nguyên màu xanh lá c â y. A.3 . Đặc t í nh lên men đường glucose, lactose, sinh H 2 S Chuẩn bị môi trường TSI hoặc Kligler (theo hướng dẫn của nhà sản xuất). Dùng que cấy chích sâu (xem 4.8) lấ y chuẩn lạc nghi ngờ cấy thẳng (chính giữa phần thạch đứng) xuống đáy ống nghiệ m chứa môi trường TSI hoặc Kligler, rút dần que c ấ y lên và tiếp tục c ấ y trên bề mặt nghiêng, nuôi trong t ủ ấm (xem 4.1), sau 24 h kiểm tra. L ê n men đường lactoza: - Dương t í nh: Mặt nghiêng màu vàng. - Âm tính: Mặt nghiêng màu hồng. Lên men đường glucose: - Dương tính: Phần thạch đứng màu vàng. - Âm tính: Phần thạch đứng m à u hồng. Khả năng sinh H 2 S: - Dương tính: Đáy ống nghiệm có màu đen. - Âm t í nh: Đáy ống nghiệm không có m à u đen. A.4 . Đặc t í nh phân h ủy lysine Sử dụng môi trường có lysine như môi trường lysine decarboxylase broth hoặc lysine- iron agar. Sử d ụ ng môi trường lysine- iron agar: - Pha chế thạch nghiêng chế từ môi trường Lysine- iron agar theo hướng dẫn của nhà sản xuất. - Dùng que cấy (xem 4.5) lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào môi trường đã pha chế, nuôi trong t ủ ấm (xem 4.1), sau từ 18 đến 24 h kiểm tra. - Đọc kết quả: theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. Sử dụng môi trường canh thang lysine decarboxylase: - Pha chế theo hướng dẫn của nhà sản xuất - Dùng que cấy (xem 4.5) lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào môi trường đã pha chế, nuôi trong t ủ ấm (xem 4.1), sau từ 18 đến 24 h kiểm tra. - Đọc kết quả: theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. A.5 . Lên men đường Manit o l Chuẩn bị môi trư ờ ng Pha nước peptone theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. Chuẩn b ị chỉ thị màu andrade: - Thành phần: Axit f ucsin 0, 5 g Nước cất 100 ml NaOH 1N 16 ml - Cách pha chế: Nghiền f ucsin, h òa v à o nước cất cho tan hết. Cho từ từ lượng NaOH 1N, vừa cho vừa lắc đến khi chuyển màu từ đỏ tươi sang đỏ nâu, đến vàng úa, vàng thẫm thì dừng (thường từ 12 đến 17 ml). Đ ể lắng từ 1 đến 2 h, lọc qua giấy lọc. Hấp tiệt trùng trong nồi hấp (xem 4.3) ở 120 ° C trong 15 min Cho 1 ml chỉ thị màu Andrade vào 100 m l nước peptone (xem 3.4), chia 4 ml vào mỗi ống nghiệm (xem 4.6). Hấp tiệt trùng trong nồi hấp (xem 4.3) ở 120 ° C trong 30 min. Chu ẩ n bị đường: pha đường thành dung dịch 10% (trong nước c ấ t vô trùng), hấp tiệt trùng trong n ồ i hấp (xem 4.3) ở 110 ° C từ 15 đến 20 min hoặc hấp cách qu ả ng 3 lần 100 ° C trong 30 min hoặc lọc qua màng lọc (xem 4.7). Pha môi trường nước pepton-đ ườ ng: cho 0,3 ml dung dịch đường 10% vào ống nghiệm chứa 4ml nước pepton đã được hấp tiệt trùng. Cách tiến hành Dùng que cấy ( xem 4.5) lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy vào các ống môi trường nước peptone-đường, nuôi trong tủ ấ m (xem 4.1), sau 24 h đọc kết quả . Đọc kết quả : - Phản ứng dương tính: môi trường chuyển màu đỏ. - Phản ứng âm tính: môi trường không đổi màu. PHỤ LỤC B ( Quy định ) Phát hiện vi khuẩn Salmonella bằng phương pháp PCR B.1 Nguyên liệu PCR B.1.1 Taq PCR Master Mix Kit (kit thương mại) B.1.2 Cập mồi (primers): mồi xuôi và mồi ngược (B ả ng 2). B.1.3 Nước tinh khiế t không có nuclease B1.4 Dung dịch đệm TAE hoặc TBE B.1.5 Ethidi bromua hoặc chất nhuộm màu SYBR green B.1.6 Loading dye B.1.7 DNA chuẩn (Ladder, marker) B.2 . Chuẩn b ị mẫu Mẫu kiểm tra là vi khuẩn nghi là Salmonella đ ã nuôi cấy thuần khiết trên thạch máu nuôi trong tủ ấm (xem 4.1) từ 24 h đến 48 h. Đối chứng dương: chủng vi khuẩn đã được giám định l à Salmonella hoặc sử dụng các chủng Salmonella chuẩn. B.3 . Tách chi ế t DNA Các vi chuẩn phân lập được từ mẫu bệnh ph ẩ m và các mẫu đối chứng dương được tách chiết DNA bằng các kit thương mại hay bằng phương pháp sốc nhiệt. Nếu sử dụng kit th ì các bước tiến hành theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. Tách chiết b ằ ng phương pháp shock nhiệt: Lấy từ 3 khuẩn lạc đến 4 khuẩn lạc, hòa vào 100 μ l nước v ô trùng không chứa nuclease (nuclease free water). Đun sôi cách thủy trong 10 min rồi làm lạnh nhanh huyễn dịch trong đá 5 min. Ly tâm huyễn dịch với gia tốc 12 000 g trong 4 min. Thu hoạch phần nước trong phía trên để thực hiện ph ả n ứng PCR. B.4 . Phản ứng PCR Sử dụng cặp mồi ở Bảng 2 và chuẩn b ị mồi ở nồng độ 20 μM. Hỗn hợp phản ứng được chu ẩ n bị trong ống 0,2 ml. Thành phần cho 1 phản ứng (theo hướng dẫn của Kit Taq PCR master mix Kit-Qiagen) như sau: - Taq PCR Master Mix K i t 12,5 μl - M ồ i xuôi 20 μM 1 μl - Mồi ngược 20 μM 1 μ l - Nước không có nuclease 8,5 μ l - Mẫu DNA 2 μ l Tổng thể tích 25 μ l Chu trình nhiệt trong Bảng 2. Đối chứng dương: DNA tách chiết từ vi khu ẩ n Salmonella (xem B.2). Đối chứng âm: gồm đầy đủ thành phần của một phản ứng PCR, nhưng không có DNA của vi k huẩn. B.5 . Chạy điện di Sản ph ẩ m PCR được chạy điện di trên thạch agarose từ 1,5 % đ ế n 2 % trong dung dịch đệm TAE hoặc TBE. Cho 2 μl dung dịch loading dye vào 8 μl s ả n phẩm PCR, trộn đều cho vào từng giếng trên bản thạch. Cho 10 μl thang chuẩn (marker) vào một giếng. Bản thạch được điện di trong môi trư ờ ng dung dịch đệm TAE hoặc TBE (tùy thuộc vào loại đệm sử dụng khi pha thạch), trong thời gian từ 30 min đến 40 min, ở 100 V , sau đó nhuộm bản thạch (sản ph ẩ m PCR) bằng dung dịch ethidium bromide 0,2 mg/100 ml. Có thể d ùng chất nhuộm màu khác như SYBR green để nhuộm b ả n thạch (s ả n phẩm PCR) và sử dụng theo quy định của nhà sản xuất (v í dụ: SYBR safe DNA gel stain của Invitrogen). B.6 . Đọc kết quả Phản ứng dương tính khi: - Mẫu đối chứng dương: Có một vạch duy nhất đ ú ng kích cỡ của s ả n ph ẩ m. - M ẫ u đối chứng âm: Không xuất hiện vạch. - Mẫu kiểm tra: Có vạch giống mẫu đối chứng dương. Phản ứng âm t í nh khi: - Mẫu đối chứng dương: Có một vạch duy nhất đúng kích c ỡ của sản phẩm. - Mẫu đối chứng âm: Không xuất hiện vạch. - Mẫu kiểm tra: Không xuất hiện vạch. THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] P.J.Quin, M.E.Cater, B. Markey, G.R.Cater, 1994. Clinical veterinary microbiology. [2] JICA- Third edition, 2003. Standard Diagnostic Manual for livestock diseases in Thailand. [3] Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Đỗ Ngọc Th úy . 2012. Bệnh phó thương hàn lợn - Gi á o trình bệnh truyền nhiễm gia súc. Trang 299 - 305 [4] Sổ tay bệnh dịch động vật. Copyright text Archie Hunter, 1994, 1996. Text Arc h ie Hunter and SVSV pr oj ect, 2000 [5] Sc h wartz, K.J., 1999. Salmonellosis . In: S tra w , B.E., D'Allaire, S ., Mengeling, W.L., Taylor, D.J. Diseases of Swine, Ames, USA: lowa State University Press, pp. 535-552 [6] Leigh A.Co rn er, Trevor J. Bagust, 1993. Australian Standard Diagnostic Technique for animal di seases. S t anding committee agr i culture and resource management. [7] SALMONELLOSIS . Version adopted by the World Assembly of Delegates of the OIE in May 2010. [8] Rahn K, De Grandis SA, Clarke RC, McE w en SA, Galán JE, Ginocchio C , Curtiss R 3rd, Gyles CL. 1992. Ampli f ication of an invA gene sequence of Salmonella typhimurium by po l ymerase c hain reaction as a speci f ic method of detection of Salmonella . Mol Cell Probes. 6(4):271-9 [ 9] Oliveira SD, Rodenbusch CR, Cé MC, Rocha SL, Canal CW . 2003. Evaluation of selective and non-selective enr i chment PCR procedures for Salmonella detection . Lett Appl Microbiol. 36(4):217-21. [10] Akiba M, Kusumoto M, lwata T. 2011. Rapid identi f ication o f Salmonella enter i caserovars, Typhimur i um, Choleraesuis, In f antis, Hadar, Enter i tidis, Dublin and Gallinarum, by multiplex PCR. J Microbiol Methods. 85(1):9-15