방향적 진화에 사용될 수 있는 것과 같은 관심 서열의 변이체의 라이브러리를 생성하는 효율적인 방법이 본원에 개시된다. 한 실시양태에서, 방법은 관심 서열의 이중 가닥 DNA (dsDNA) 변이체를 생성하기 위한 증폭 반응, 예를 들어 오류-유발 PCR을 포함하며, 이후에 dsDNA 변이체의 하나의 가닥을 선택적으로 분해하여 단일 가닥 DNA (ssDNA) 변이체를 생산한다. ssDNA 변이체를 ssDNA 중간자, 예를 들어 우라실화 원형 ssDNA 중간자에 혼성화시켜 헤테로듀플렉스 DNA를 형성할 수 있고, 이를 세포, 예컨대 이. 콜라이 세포 내로 형질전환시켜 변이체의 라이브러리를 생산할 수 있다. 이 방법은 다수의 종래 방법에서 요구되었던 비효율적인 서브클로닝 단계 및 고비용의 프라이머 세트에 대한 필요성을 제거한다.