İnsan Kemik İliği Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin Otolog Serum ile Kültüre Edilmesi
Autologous Serum for Expansion of Human Bone Marrow Derivated Mesenchymal Stem Cell
Yazar: Kozanoğlu, İlknur; Boğa, Can; Maytalman, Erkan; Sözer, Oktay; Özdoğu, Hakan
Dergi: Balkan Medical Journal, Vol. 2010 No. 5, 2014
Anahtar kelimeler: Mesenchymal stem cell; autologous serum; bone marrow; fetal bovine serum ; Mezenkimal kök hücre, otolog serum, kemik iliği, fetal buzağı serum

Amaç: Mezenkimal kök hücreler (MKH) en sık kemik iliğinden elde edilen ve bir çok dokuya farklılaşma yeteneğine sahip çok yönelimli öncü hücrelerdir. MKH&amp;#39;ler %10 fetal bovin serumlu (FBS) besiyerinde üretilirler. Bu çalışmada amaç FBS&amp;#39;un olası risklerinden uzaklaşılması için otolog serum kullanarak klinik kullanım için uygun MKH üretimini sağlamaktır.          Gereç ve Yöntemler: Yaşları 28-34 arasında değişen 10 kemik iliği donoründen yazılı onamları alınarak 10 mL kemik iliği ve 500 mL periferik kan örneği alındı. Kemik iliğinden fikol yoğunluk derecelendirme yöntemiyle mononükleer hücreler izole edildi. Eşit sayıda hücre (1x106/mL) RPMI-1640 medium kullanılarak %10 FBS, otolog serum (OS), %10, %5, %3 ve %1 konsantrasyonlarında kültüre edildi. Her pasaj arasında morfolojik değerlendirme, hücre sayımı ve akım sitometrik yöntemler kullanılarak immunfenotipik analizler yapıldı. Üçüncü pasaja ulaşan gruplarda yağ dokusuna farklılaştırma gerçekleştirildi.          Bulgular: Hücre sayımı ve izolasyon açısından en iyi grubun %10 OS grubu olduğu gösterildi. Buna ilave olarak %5 OS ve %10 FBS gruplarındaki sonuçların benzer olduğu gözlemlendi. Akım sitometrik sonuçlar değerlendirildiğinde gruplar arasında istatistiksel fark yoktu. Yağ dokusuna farklılaştırma açısından %3 OS ve %1 OS dışında diğer gruplarda farklılaşma sağlandı.          Sonuç: Sonuç olarak özellikle %10 OS ve %5 OS kullanılarak MKH kültürleri yapılabileceği saptandı.

Objective: Mesenchymal stem cells (MSC), mostly derivated from bone marrow, are capable of differentiating into many tissues. In the culture medium consisting of 10% fetal bovine serum (FBS), MSCs can grown easily. To obtain insights into their ex-vivo expansion, the role of the autologous serum (OS) on growth and differentiation capacity of human bone marrow MSCs in comparison to cells grown in FBS was studied.         Material and Methods: MSCs were cultured by using a RPMI-1640 medium consisting of 10% FBS, and OS 10%, 5%, 3% and 1%. Equally, 1x106/mL cells were incubated into each flask. Cell count, viability, and flow cytometry studies were done at every passage after completing detachment in the cultures.         Results: 10% OS group was found to be superior compared to the other study groups as regard to cell count and isolation. In addition, it has been observed that similar resuts were found in 5% OS and 10% FBS groups. Immunophenotyping analysis of the cells revealed no statistical difference between the groups. MSCs isolated from all study groups were successfully differentiated into adipogenic lineages except 3% and 1% OS groups.         Conclusion: The expansion potency from bone marrow-derived MSCs was maintained in culture media using 10% and 5% OS.                Turkish         Başlık:    İnsan Kemik İliği Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin Otolog Serum ile Kültüre Edilmesi         Anahtar Kelimeler:    Mezenkimal kök hücre; otolog serum; kemik iliği; fetal buzağı serum         Amaç: Mezenkimal kök hücreler (MKH) en sık kemik iliğinden elde edilen ve bir çok dokuya farklılaşma yeteneğine sahip çok yönelimli öncü hücrelerdir. MKH&amp;#39;ler %10 fetal bovin serumlu (FBS) besiyerinde üretilirler. Bu çalışmada amaç FBS&amp;#39;un olası risklerinden uzaklaşılması için otolog serum kullanarak klinik kullanım için uygun MKH üretimini sağlamaktır.         Gereç ve Yöntemler: Yaşları 28-34 arasında değişen 10 kemik iliği donoründen yazılı onamları alınarak 10 mL kemik iliği ve 500 mL periferik kan örneği alındı. Kemik iliğinden fikol yoğunluk derecelendirme yöntemiyle mononükleer hücreler izole edildi. Eşit sayıda hücre (1x106/mL) RPMI-1640 medium kullanılarak %10 FBS, otolog serum (OS), %10, %5, %3 ve %1 konsantrasyonlarında kültüre edildi. Her pasaj arasında morfolojik değerlendirme, hücre sayımı ve akım sitometrik yöntemler kullanılarak immunfenotipik analizler yapıldı. Üçüncü pasaja ulaşan gruplarda yağ dokusuna farklılaştırma gerçekleştirildi.         Bulgular: Hücre sayımı ve izolasyon açısından en iyi grubun %10 OS grubu olduğu gösterildi. Buna ilave olarak %5 OS ve %10 FBS gruplarındaki sonuçların benzer olduğu gözlemlendi. Akım sitometrik sonuçlar değerlendirildiğinde gruplar arasında istatistiksel fark yoktu. Yağ dokusuna farklılaştırma açısından %3 OS ve %1 OS dışında diğer gruplarda farklılaşma sağlandı.         Sonuç: Sonuç olarak özellikle %10 OS ve %5 OS kullanılarak MKH kültürleri yapılabileceği saptandı.