MOLEKÜLER VE GELENEKSEL YÖNTEMLERLE TANIMLANARAK UZUN SÜRE SAKLANMIŞ STOK CANDİDA KÖKENLERİNİN MALDI-TOF MS İLE ANALİZİ
MALDI-TOF MS ANALYSIS OF LONG-TERM STORED STOCK CANDIDA STRAINS IDENTIFIED BY MOLECULAR AND CONVENTIONAL METHODS
Yazar: Hoşbul, Tuğrul; Şahiner, Fatih; Gümral, Ramazan; Kaya, Sinem; Bektöre, Beyhan; Tekin, Kemal; Yıldıran, Şinasi Taner
Dergi: İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi, Vol. 84 No. 1, 2020
Anahtar kelimeler: Health Care Administration ; Sağlık Kurumları Yönetimi ; Candida,MALDI-TOF MS,identification ; Candida,MALDI-TOF MS,tanımlama

Amaç: Son yıllarda Candida türlerine bağlı enfeksiyon oranlarında artış gözlenmesi ve antifungal duyarlılık sonuçlarının türlere göre farklılıklar sergilemesi gibi nedenlerle, Candida izolatlarının hızlı ve doğru bir şekilde tür düzeyinde tanımlanması gerekli hale gelmiştir. Bu çalışmada, MALDI-TOF MS yönteminin, geleneksel ve moleküler yöntemler ile tür düzeyinde tanımlanmış ve uzun süre -20°C’de saklanmış Candida klinik izolatlarını tanımlamadaki etkinliğini araştırmak amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmaya, 10 yıldan daha uzun süredir -20°C’de saklanan, canlandırma işlemi yapılmamış ve API® ID 32C, CHROMagar Candida ile PCR-RFLP gibi çeşitli yöntemlerle tanımlanmış 28 Candida izolatı dahil edildi. İzolatlar yeniden pasajlandı ve MALDI-TOF MS ile analiz edildi. Daha önce tür düzeyinde tanımlanamayan bir izolat ile MALDI-TOF MS skoru düşük olan diğer bir izolat ITS dizileme ile analiz edildi. Ayrıca çalışma izolatlarımız ile rutin kültürlerden izole edilmiş 57 Candida suşuna ait MALDI-TOF MS skorları karşılaştırıldı. Bulgular: MALDI-TOF MS analizinde 11 (%39,3) izolat için tür düzeyinde ve 15 (%53,6) izolat için cins düzeyinde güvenilir tanımlama elde edilirken, iki izolat güvenilir tanımlama sınırlarının dışında kalmıştır. Çeşitli yöntemlerle ile tanımlanan 28 izolatın tamamında, MALDI-TOF MS yöntemi ile farklı skorlar elde edilse de tür düzeyinde doğru tanımlama yapılmıştır. Sonuç: MALDI-TOF MS uzun süre saklanmış stok Candida izolatlarının tanımlanmasında geleneksel ve RFLP gibi moleküler yöntemler ile kıyaslandığında kolaylıkla kullanılabilecek, düşük maliyetli, hızlı ve güvenilir bir yöntemdir. Çalışmaya alınan izolatlar sınırlı sayıda olmakla birlikte, MALDI-TOF MS ile yapılan analizlerde Candida türleri için alınan düşük skor değerlerinin tanımlamada yararlı olabileceğini düşünüyoruz.

Objective: In recent years, the rapid and accurate identification of Candida isolates at species level has been of great importance for reasons such as increased incidence of infections due to Candida species and differing antifungal susceptibilities by species. Herein, we aimed to investigate the efficacy of the MALDI-TOF MS method in the identification of Candida clinical isolates stored at -20°C for years. Material and Method: Twenty eight Candida strains stored at -20°C for more than 10 years without any recultivation and identified by various methods such as API® ID 32C, CHROMagar Candida and PCR-RFLP were included in the study. Isolates were subcultured and analysed by MALDI-TOF MS. An unidentified isolate at the species level previously and another isolate with low MALDI-TOF MS score were analyzed by ITS sequencing. Additionally, MALDI-TOF MS scores of 57 Candida strains isolated from routine cultures were compared with study isolates. Results: Of them, 11 (39.3%) isolates were identified at the species level and 15 (53.6%) were identified at the genus level, while two isolates were outside the reliable identification limits by MALDI-TOF MS. MALDI-TOF MS yielded an accurate identification at the species level in all 28 isolates identified by various methods even though different scores were obtained. Conclusion: MALDI-TOF MS is a cost effective, easy to use, fast and reliable method compared with the conventional and molecular methods for identification of stock Candida isolates preserved for many years. In conclusion, although a limited number of stock Candida isolates were included in the study, low identification scores for Candida isolates may be valuable in the MALDI-TOF MS analysis.