Bacillus pumilus Y7 Katalaz (katX2) Geninin Klonlanması ve Açıklatılması
Bacillus pumilus Y7 Katalaz (katX2) Geninin Klonlanması ve Açıklatılması
Yazar: Yüzügüllü Karakuş, Yonca; Göç, Günce
Dergi: Afyon Kocatepe Üniversitesi Fen Ve Mühendislik Bilimleri Dergisi, Vol. 19 No. 1, 2018
Anahtar kelimeler: Engineering ; Mühendislik ; Katalaz,Peroksidaz,Oksidaz,Bacillus pumilus

Katalazlarantioksidan metalloenzimler sınıfına dahil olup başlıca işlevleri hidrojenperoksidin (H2O2) su ve moleküler oksijeneparçalanmasıdır. Temel fonksiyonlarının yanında düşük seviyede peroksidazve(ya) oksidaz aktivitesi göstererek izoniazid (antitüberküloz ilacı) sentezigibi tıbbi öneme sahip bazı bileşiklerin sentezini destekledikleribilinmektedir. Yakın bir geçmişte Bacilluspumilus tarafından üretilen 'Fe/hem' grubu içeren bir enzimin katalaz,peroksidaz ve penisilin oksidaz aktiviteleri gösterdiği yayınlanmıştır. Bununüzerine bu enzimin hem diğer katalaz, peroksidaz ve katalaz-peroksidazlar ilekarşılaştırılması hem de ikincil peroksidaz/oksidaz özelliğinin ayrıntılıolarak irdelenebilmesi için enzimi kodlayan katX2geninin klonlanması ve Escherichia coli’deüretimi gerçekleştirilmiştir. Restriksiyon enzimlerinden bağımsızgerçekleştirilen klonlama tekniğinde ilk olarak B. pumilus Y7’den elde edilen katX2geni kimerik primerler (5'katX2; 3'katX2) ile bir araya getirilerek megaprimeroluşturulmuş ve sonrasında bu megaprimer ekspresyon vektörüne başarılı birşekilde aktarılmıştır. 510 amino asitten oluşan olgun proteini kodlayan katX2 genini taşıyan pET28aTEV vektörü E. coli BL21 (DE3 star) hücrelerinetransforme edilmiştir. Transformantlarda katalaz aktivitesi için en yüksekdeğer (800 µmol ml-1 dak-1) 30ºC’de, IPTG (0,1 mM)varlığında, 120 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütüldüğü ekspresyonkoşullarında ulaşılmıştır.

Katalazlarantioksidan metalloenzimler sınıfına dahil olup başlıca işlevleri hidrojenperoksidin (H2O2) su ve moleküler oksijeneparçalanmasıdır. Temel fonksiyonlarının yanında düşük seviyede peroksidazve(ya) oksidaz aktivitesi göstererek izoniazid (antitüberküloz ilacı) sentezigibi tıbbi öneme sahip bazı bileşiklerin sentezini destekledikleribilinmektedir. Yakın bir geçmişte Bacilluspumilus tarafından üretilen 'Fe/hem' grubu içeren bir enzimin katalaz,peroksidaz ve penisilin oksidaz aktiviteleri gösterdiği yayınlanmıştır. Bununüzerine bu enzimin hem diğer katalaz, peroksidaz ve katalaz-peroksidazlar ilekarşılaştırılması hem de ikincil peroksidaz/oksidaz özelliğinin ayrıntılıolarak irdelenebilmesi için enzimi kodlayan katX2geninin klonlanması ve Escherichia coli’deüretimi gerçekleştirilmiştir. Restriksiyon enzimlerinden bağımsızgerçekleştirilen klonlama tekniğinde ilk olarak B. pumilus Y7’den elde edilen katX2geni kimerik primerler (5'katX2; 3'katX2) ile bir araya getirilerek megaprimeroluşturulmuş ve sonrasında bu megaprimer ekspresyon vektörüne başarılı birşekilde aktarılmıştır. 510 amino asitten oluşan olgun proteini kodlayan katX2 genini taşıyan pET28aTEV vektörü E. coli BL21 (DE3 star) hücrelerinetransforme edilmiştir. Transformantlarda katalaz aktivitesi için en yüksekdeğer (800 µmol ml-1 dak-1) 30ºC’de, IPTG (0,1 mM)varlığında, 120 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütüldüğü ekspresyonkoşullarında ulaşılmıştır.