Iğdır İlinin Yerel Üzümü Kırmızı Kişmişi (Vitis vinifera L.) Çeşidinden Polifenol Oksidazın Kısmi Saflaştırılması ve Karakterizasyonu
The Partial Purification and Characterization of Polyphenol Oxidase in Native Grape Kirmizi Kismisi Cultivar (Vitis vinifera L.) Grown in Iğdır Province
Yazar: Kaya, Elif Duygu; Türkhan, Ayşe; Eyduran, Sadiye Peral; Akın, Melekşen
Dergi: Iğdır Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi, Vol. 8 No. 4, 2018
Anahtar kelimeler: Chemical Engineering ; Kimya Mühendisliği ; Characterization,Kirmizi Kismisi,polyphenol oxidase,partial purification,inhibition ; Kırmızı kişmişi,kısmi saflaştırma,karakterizasyon,polifenol oksidaz,ïnhibisyon

Yerel üzüm çeşidi Kırmızı Kişmişi, Türkiye’nin Iğdır ilinin Necefali köyünden toplandı ve daha sonralaboratuvara taşındı ve -20 °C’de dondurularak saklandı. Kırmızı Kişmişi’den polifenol oksidaz aseton çöktürmesiyöntemi kullanılarak 5.45 kat kısmi olarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. 50 gr Kırmızı kişmiş üzümü hücrezarlarını parçalamak için porselen havanda dövüldü. Dondurulmuş Kırmızı kişmişi üzümü %1 polietilen glikol(PEG) içeren 100 mL 50 mM sodyum asetat tamponuyla (pH 5.0) homojenize edildi. Daha sonra homojenat, 4katlı tulbentten süzüldü ve elde edilen süzüntü 4°C’de 30 dakika 10 000 rpm’de santrifüjelendi. Santrifüjden sonraelde edilen süpernatant, buz banyosunda süpernatanın hacmine kadar soğuk aseton eklendi ve karışım proteinlerinçökeltilmesi için gece boyunca 4°C’de inkübe edildi. 4°C’de 30 dakika 10 000 rpm’de santrifüj edildikten sonra,çökelti 20 mL 50 mM sodyum asetat tamponu (pH 5.0) içinde yeniden çözündürüldü. Protein konsantrasyonuLowry yöntemine göre belirlendi. Ham enzim özütü ve aseton çöktürmesi sonrası protein konsantrasyonlarısırasıyla 7.04 ve 3.83 mg/mL olarak belirlendi. Katekol substratı kullanılarak, optimum pH ve sıcaklık değerlerisırasıyla 6.0 ve 20°C bulundu. Buna ek olarak, Km ve Vmaks değerleri gibi bazı biyokimyasal özellikler araştırıldı.PFO enzimi için askorbik asit, sitrik asit, sodyum metabisülfit ve benzoik asit ile inhibisyon çalışmaları yapılmış,herbir inhibitör için IC50 hesaplanmıştır. Bu çalışmadan elde edilen veriler, bu enzimin gıda endüstrisi için yararlıolabileceğini gösterdi.

The native grape Kirmizi Kismisi cultivar was gathered from the Necefali village of Igdir provincein Turkey, and then caried into the laboratory and stored in deep-frozen at -20°C. Polyphenol oxidase (PPO) waspartial purified 5.45 times using the cold acetone precipitation from Kirmizi Kismisi Grape and was characterized.50 gr of Kirmizi Kismisi Grape were placed in a porcelain mortar and pestled in order to decompose cell membranes.The frozen Kirmizi Kismisi Grapes were homogenised by using a porcelain mortar in 100 mL of 50 mM sodiumacetate buffer (pH 5.0) containing 1% (w/v) polyethylene glycol (PEG). Then homogenate was percolated through4-fold muslin and the resulting filtrate was santrifuged for 30 minutes at 10,000 rpm at 4°C. The supernatantobtained after centrifugation was mixed with cold acetone as much as the volume of the supernatant in the icebath and the mixture was incubated overnight at 4°C for precipitation of proteins. After centrifugation at 10,000rpm for 30 min at 4°C, the precipitate was redissolved in 20 mL 50 mM sodium acetate buffer (pH 5.0). Proteinconcentration was determined according to the Lowry method. Protein concentrations of crude extract and acetoneprecipitation were determined as 7.04 and 3.83 mg/mL, respectively. Optimum pH and temperature values werefound to be 6.0 and 20°C, respectively, using catechol as a substrate. In addition, some biochemical propertiessuch as Km and Vmax values were investigated. PPO activity was inhibited from ascorbic acid, citric acid, sodiummetabisulfite and benzoic acid and the IC50 for each inhibitor was calculated.The data obtained from this studyshowed that this enzyme could be useful for food industrial purposes.