Hypericum perforatum (St. John' s wort)' un burkitt lenfoma hücre dizilerinde (Daudi ve Namalwa) sitotoksik, antiproliferatif ve apoptotik etkileri
The cytotoxic, antiproliferative and apoptotic effects of hypericum perforatum (St. John? s wort) on burkitt lymphoma cells (Namalwa and Daudi)
Yazar: ÖZLEM ÖZ
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA BİRİNCİOĞLU
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hypericum perforatum = Hypericum perforatum ; Hücre dizisi = Cell line ; Lenfoma = Lymphoma ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Hypericum perforatum L. (St. John's wort) peptik ülser, cilt yanıkları, infeksiyonlar, respiratuar ve inflamatuar hastalıkların tedavisinde geleneksel tıpta yüzyıllardır yaygın olarak kullanılmaktadır. H. perforatum naftodiantronlar; hiperisin ve psödohiperisin, flavonoidler ve floroglusinoller; hiperforin ve adhiperforin olmak üzere çok sayıda biyolojik aktiviteleri saptanmış bileşik içermektedir. Yapılan son çalışmalarda, H. perforatum' un farklı insan kanser hücre dizilerinde antitümöral etkileri kanıtlanmıştır. Bu çalışmada, H. perforatum ekstraktının Burkitt Lenfoma hücreleri (Namalwa ve Daudi) üzerine antiproliferatif, sitotoksik ve apoptotik etkileri araştırılması planlanmıştır.Bu amaçla, H. perforatum ektraktının altı farklı dozu (0,01-0,025-0,05-0,1-0,25-0,5 mg/ml) 24, 48 ve 72 saat süresince hücrelere uygulandı. Tripan mavisi boyama yöntemi ile viabilite, canlı hücreler tarafından tetrazolium tuzunun parçalanmasına dayanan WST-1 testi ile metabolik aktivite değerlendirildi. LDH (laktat dehidrogenaz) salınım testi ile sitotoksisite ve BrdU testi ile hücre proliferasyonu değerlendirildi. Erken apoptozis Annexin V testi ve geç apoptozis Tunel (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP nick-end labeling) testi ile flouresan mikroskopta incelendi.Tripan mavisi boyama yöntemine göre elde edilen viabilite değerlerinin H. perforatum ekstraktının 0,5 mg/ml konsantrasyonunda, 72 saat inkübasyon sonrası Namalwa hücrelerinde % 32 ve Daudi hücrelerinde % 5' e indiği, bu gruplar kontrol grubuyla karşılaştırıldığında anlamlı farklılık olduğu tespit edilmiştir (p<0.05). Sonra H. perforatum ekstresinin hücrelerdeki metabolik aktivite üzerine etkisi araştırılmıştır. Elde edilen sonuçlara göre metabolik aktivitenin 0,5 mg/ml konsantrasyonda, 72 saat inkübasyon sonrası Namalwa hücrelerinde % 5 ve Daudi hücrelerinde % 1' e düştüğü saptanmıştır. Metabolik aktiviteye paralel olarak her iki hücrede LDH aktivitesi de ölçülmüştür. En yüksek LDH aktivitesi Namalwa hücrelerinde 72. saatte H. perforatum ekstraktının 0,01 mg/ml konsantrasyonunda ve Daudi hücrelerinde ise 72. saatte H. perforatum ekstraktının 0,25 mg/ml konsantrasyonunda saptanmıştır. Hücre proliferasyonu metabolik aktivite sonuçlarına benzer şekilde doz ve zamana bağımlı olarak azalmıştır. Erken apoptozis Annexin V testi ile 24 saat inkübasyon süresinin sonunda ve geç apoptozis Tunel testiyle 48. saatte H. perforatum ekstraktının 0,5 mg/ml konsantrasyonunda fluoresan mikroskopta apoptotik hücreler gözlenerek saptanmıştır.Sonuç olarak H. perforatum ekstraktının Namalwa ve Daudi hücrelerinin her ikisinde de doz ve zamana bağımlı olarak antiproliferatif ve sitotoksik etkilerinin olduğu ortaya çıkarılmıştır. H. perforatum ekstraktının 0,028 mg/ml IC50 dozunda Namalwa ve Daudi hücrelerinin çoğalmasını inhibe ettiği saptanmıştır. H. perforatum ekstraktının en yüksek konsantrasyonunda (0,5 mg/ml) Burkit Lenfoma hücrelerinde 24 ve 48. saatlerde olmak üzere erken ve geç apoptozisi uyardığı bulunmuştur.Anahtar kelimeler: Hypericum perforatum, Burkitt Lenfoma, apoptozis

Abstract:
Hypericum perforatum L. (St. John?s wort) is widely used for treatment of pectic ulcers and skin wounds, infections, respiratory and inflammatory diseases in traditional medicine for centuries. Hypericum perforatum contains numerous compounds such as naphthodianthrones hypericin and pseudohypericin, flavonoids, and the phloroglucinols hyperforin and hyperforin with documented biological activity. In recent studies, H. perforatum has been proven to have antitumoral effects on several human cancer cell lines. In this study we aimed to investigate the antiproliferative, cytotoxic and apoptotic effects of H. perforatum extract on human Burkitt Lymphoma cells (Namalwa and Daudi).For this purpose, six different doses of H. perforatum extract (0,01-0,025-0,05-0,1-0,25-0,5 mg/ml) is experimented in cells for 24, 48 and 72 hours. Viability was measured by tripan blue dye exclusion method, metabolic activity was measured by WST-1 assay which analyze the number of viable cells by the cleavage of tetrazolim salts. Cytotoxicity was assessed by LDH (lactate dehydrogenase) release test and cell proliferation was assessed with BrdU test. Early apoptosis was assessed by Annexin V assay and late apoptosis was assessed by tunel (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP nick-end labeling) assay with fluorescent microscopy.Viability values which are gained according to tripan blue exclusion method, showed that after 72 hours incubation with 0,5 mg/ml concentration of H. perforatum extract was decreased the viability to % 32 in Namalwa cells and % 5 in Daudi cells which were found to be significantly different compared with control groups (p<0.05). Next, the effect of H. perforatum extract on the metabolic activity of cells were determined. According to the results metabolic activity was decreased to % 5 in Namalwa cells and % 1 in Daudi cells after 72 hours incubation with 0,5 mg/ml concentration of H. perforatum extract. In parallel LDH activity was also determined in both cells. The highest level of LDH activity was observed at 0,01 mg/ml concentration after 72 hours in Namalwa cells and 0,25 mg/ml concentration after 72 hours in Daudi cells. Similar to metabolic activity results, cell proliferation was decreased in a time and dose dependent manner. Early apoptotic cells were observed by Annexin V test after 24 hours and late apoptotic cells were observed by Tunel test after 48 hours treatment with 0,5 mg/ml concentration of H. perforatum extract by fluorescent microscopy.According to our results, we have shown that H. perforatum extract showed antiproliferative and cytotoxicity effects on both of Namalwa and Daudi cells in a time and dose dependent manner. H. perforatum extract inhibited the growth of Namalwa and Daudi cells with IC50 value of 0,028 mg/ml. It was found that the highest concentration of H. perforatum extract (0,5 mg/ml), induced early and late apoptosis on Burkitt Lymphoma cells within 24h and 48h, respectively.Key words: Hypericum perforatum, Burkitt Lymphoma, apoptosis