Karaciğer sirozu modeli oluşturulmuş sıçanlarda VEGF reseptör-2 inhibitörü su 1498' in anjiyogenez ve apoptozis üzerine etkisi
Effect of VEGFR-2 inhibitor, su-1498 on angiogenesis and apoptosis in model of liver cirrhosis in rats
Yazar: GONCA MENGÜÇ
Danışman: DOÇ. DR. NECMİYE CANACANKATAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Anjiyogenez = Angiogenesis ; Apoptozis = Apoptosis ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer sirozu = Liver cirrhosis ; Reseptörler = Receptors ; Sıçanlar = Rats ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Karaciğer sirozu diffüz fibroz, skar doku ve regeneratif nodüller ile karakterize yaygın bir karaciğer hastalığıdır. VEGF başlıca proanjiyogenik mediyatörlerden birisidir. Bu çalışmada, karsinojen bir ajan olarak bilinen N-nitrozodietilamin ile deneysel karaciğer sirozu oluşturuldu. Bu çalışmada; VEGFR-2 inhibitörü; SU 1498' in anjiyogenez ve apoptozis üzerine etkisinin karaciğer sirozunda araştırılması amaçlanmıştır. Kontrol, Siroz, DMSO, Siroz+SU 1498 (I) (250μg/kg/hafta), Siroz+SU 1498 (II) (500μg/kg/hafta), Siroz sonrasında+SU 1498 (I) (300μg/kg/hafta) olmak üzere 6 grup oluşturuldu. Kontrol, Siroz, DMSO, Siroz+SU 1498 (I) (250μg/kg/hafta), Siroz+SU 1498 (II) (500μg/kg/hafta) gruplarındaki sıçanlar; siroz grubundan rastgele seçilen sıçanlarda histopatolojik olarak siroz oluşumu saptandıktan sonra öldürülmüşlerdir. Siroz sonrasında+SU 1498 (I) (300μg/kg/hafta) grubundaki sıçanlara ise 8 hafta SU 1498 uygulaması yapıldıktan sonra bu gruptaki sıçanlar da öldürüldü. Karaciğer sirozunda anjiyogenez belirteci olarak VEGFR-2 gen ekspresyonu ve apoptozis yol izi belirteci olarak kaspaz -3, -8 ve -9 gen ekspresyon düzeyleri RT-PCR yöntemi ile belirlendi. Antioksidan kapasitenin araştırılması için ise redükte glutatyon (GSH) ve lipit peroksidasyonunu araştırmak amacı ile malondialdehit (MDA) düzeyleri kolorimetrik yöntemlerle belirlendi. VEGFR-2, kaspaz -3, -8 ve -9 gen ekspresyonunda ve GSH düzeylerinde anlamlı bir farklılık gözlenmezken; lipit peroksidasyonunda tüm gruplar kontrol grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı bir artış bulunmuştur. Ancak ilginç olarak histopatolojik incelemeler sonucunda Siroz+SU 1498 (I) (250μg/kg/hafta) grubunda siroz oluşumunun engellendiği gözlenmiştir. Sonuç olarak SU 1498 karaciğer sirozunda antifibrogenik bir ajan olarak kabul edilebilir ve mekanizmanın tam olarak aydınlatılması için karaciğere daha spesifik hücrelerde farklı doz ve zaman aralıklarında çalışmalar sürdürülebilir.

Anahtar kelimeler: Karaciğer sirozu, anjiyogenez, apoptozis, kaspaz, SU-1498, VEGFR-2

Abstract:
Cirrhosisis a common and consequence of chronic liver disease that characterized by the diffuse fibrosis, scar tissue and regenerative nodules. VEGF is one of the major proangiogenic mediators which takes part in the development of liver cirrhosis. In this study, experimental liver cirrhosis had been developed by N-nitrozodietilamin which known as a carcinogenic agent. In this study, we aimed to determine the effect of the VEGFR-2 inhibitor, SU 1498 on angiogenesis and apoptosis in liver cirrhosis. 6 groups were included as Control, Cirrhosis, DMSO, Cirrhosis+SU 1498 (I) (250μg/kg/week), Cirrhosis+SU 1498 (II) (500μg/kg/week), After Cirrhosis+SU 1498 (I) (300μg/kg/week). Control, Cirrhosis, DMSO, Cirrhosis+SU 1498 (I) (250μg/kg/week) and Cirrhosis+SU 1498 (II) (500μg/kg/week), groups were killed when cirrhosis was established by evaluation of histopathological investigations in rats which were chosen randomly from the Cirrhosis group. After cirrhosis was established SU 1498 was administered for 8 weeks to rats After Cirrhosis+ SU 1498 (300μg/kg/week) group. Angiogenesis was evaluated by measurement of VEGFR-2 gene expression and apoptosis was evaluated by caspase -3, -8 and -9 gene expression by RT-PCR. Antioxidant capacity was evaluated by measurement levels of reduced glutathione (GSH) and lipid peroxidation was evaluated by malondialdehyde (MDA) by colorimetric methods. Histopathological investigations were also carried out. VEGFR-2 levels, caspase -3, -8 and -9 enzyme activities and GSH levels did not point out any statistically difference and also increased lipid peroxidation was observed in all groups compaired with control. But suprisingly histopathological findings indicated that cirrhosis development was significantly reduced by SU 1498 (250μg/kg/week) (I).  In conclusion; SU 1498 may be considered as a promising antifibrotic agent in liver cirrhosis and the mechanism should be investigated in more special cells, different doses and intervals.

Key Words: Liver cirrhosis, angiogenesis, apoptosis, SU 1498, VEGFR-2, caspase