Balık örneklerinden izole edilen Staphylococcus'ların bazı virulans ve teknolojik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of some virulence and technological properties in the Staphylococcus isolated from fish samples
Yazar: GOLCHIN MEMARI
Danışman: PROF. DR. NESLİHAN GÜNDOĞAN BAKIRCI
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada, Ankara'da tüketime sunulan 95 balık örneği (40 tatlı su, 55 tuzlu su) materyal olarak kullanılmıştır. Çalışılan 95 balık örneğinden Staphylococcus izolasyonu gerçekleştirilerek, tür seviyelerindeki tanımlamaları yapılmıştır. Tanımlamaları yapılan Staphylococcus türlerinde; 4°C'de, 20°C'de ve 37°C'de proteolitik ve lipolitik enzim aktivite, slime varlığı, biyofilm üretimi, DNaz aktivite, hemolizin aktivite gibi bazı virulans özellikleri ve Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi ile antibiyotik dirençlilikleri araştırılmıştır. Balık örneklerinden izole edilen 217 Staphylococcus izolatının, 83'ü (%38,2) S.warneri, 40'ı (%18,3) S.haemolyticus, 18'i (%8,3) S.simulans, 15'i (%6,9) S.intermedius, 13'ü (%6) S.saprophyticus, 10'u (%4,6) S.aureus, 10'u (%4,6) S.capitis, 9'u (%4,1) S.xylosus, 7'si (%3,2) S.caprae, 4'ü (%1,8) S.epidermidis, 4'ü (%1,8) S.schleiferi subsp.schleiferi, 2'si (%0.9) S.cohnii subsp.cohnii, 2'si (%0,9) S.cohnii subsp. urealyticum olarak tanımlanmıştır. Araştırmamızda balık örneklerinden izole edilen 217 Staphylococcus izolatının, 175'i (%80,6) slime (+),149'u (%68,7) DNaz (+) ve 139'u (%64,1) hemoliz (+)'dir. Staphylococcus izolatlarının mikroplate kullanılarak yapılan biyofilm değerlendirmesinde; Triptic Soy Broth (TSB)'da 24 saat inkübasyon sonrası izolatların %11,1'i kuvvetli pozitif, %48,4'ü orta pozitif, %37,8'i zayıf pozitif ve %2,8'i negatif biyofilm oluşumu gösterdiği tespit edilmiştir. Aynı izolatların %2 glikoz içeren TSB'de 24 saat inkübasyon sonrası %19,3'ünün kuvvetli pozitif, %59,4' ünün orta pozitif, %16,6'sının zayıf pozitif ve %4,6'sının ise negatif biyofilm oluşturduğu gözlenmiştir. Balık örneklerinden izole edilen 217 Staphylococcus izolatnın 13'ü (%6) gentamisin, 79'u (%36,4) eritromisin, 75'i (%34,6) tetrasikilin, 29'u (%13,4) klindamisin, 58'i (%26,7) metisilin, 14'ü (%6,5) amikasin ve 7'si (%3,2) kloromfenikol'e karşı dirençli bulunmuştur. Vankomisin'e herhangi bir direnç saptanmamıştır. Staphylococcus izolatlarının 37°C'de 3'ü (%1,4) kuvvetli pozitif, 10'u (%4,6) orta pozitif, 50'si (%23) zayıf pozitif ve 154'ü (%71) negatif proteolitik aktivite, 20°C'de 12'si (%5,5) kuvvetli pozitif, 30'ü (%13,8) orta pozitif, 41'i (%18,9) zayıf pozitif ve 134'ü (%61,7) negatif proteolitik aktivite, 4°C'de 3'ü (%1,4) kuvvetli pozitif, 9'u (%4,1) zayıf pozitif ve 205'i (%94,5) negatif proteolitik aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Lipolitik enzim aktivitesi için Staphylococcus izolatının 37°C'de 112'si (%51,6) kuvvetli pozitif, 46'sı (%21,2) orta pozitif, 37'si (%17,1) zayıf pozitif ve 22'si (%10,1) negatif lipolitik aktivite, 20°C'de 137'si (%63,1) kuvvetli pozitif, 32'si (%14,7) orta pozitif, 28'i (%13) zayıf pozitif ve 20'si (%9,2) negatif lipolitik aktivite, 4°C'de 94'ü (%43,3) kuvvetli pozitif, 52'si (%24) orta pozitif, 40'ı (%18,4) zayıf pozitif ve 31'i (%14,3) negatif lipolitik aktivite elde edilmiştir.

Abstract:
In this study, 95 fish samples (40 freshwater, 55 seawater) which are provided for consumption in Ankara, were used as material Staphylococcus species were isolated from fish samples and identified. Identified Staphylococcus species were analysed for proteolytic and lipolytic activity at 4°C, 20°C and 37°C, some virulence properties as slime and biofilm formation, DNase and hemolysis activity, and antibiotic resistance with Kirby-Bauerdisk diffusion method were researched. The distribution rates among 217 Staphylococcus isolated from fishes were 38.2% S.warneri, 18.3% S.haemolyticus, 8.3% S.simulans, 6.9% S.intermedius, 6% S.saprophyticus, 4.6% S.aureus, 4.6% S.capitis, 4.1% S.xylosus, 3.2% S.caprae, 1.8% S.epidermidis, 1.8% S.schleiferi subsp.schleiferi, 0.9% S.cohnii subsp.cohnii, 0.9% S.cohnii subsp. urealyticum. In our research, 175 (80.6%) slime (+), 149 (68.7%) DNase (+) and 139 (64.1%) hemolysis (+) are in 217 Staphylococcus isolated from the fish samples. By using microplate method all Staphylococcus isolates after 24 hours of incubation on Tryptone Soy Broth (TSB) 11.1% strong biofilm, 48.8% medium positive, 37.8% weak positive and 2.8% negative biofilm formation have been identified. On the same isolates 2% glucose containing the TSB after 24 hours of incubation in 19.8% strong biofilm, 59.4% medium positive, 16.6% weak positive and 4.6% negative biofilm formation have been identified. In this study, the 6% of identified Staphylococcus strains are resistant to gentamycin, 36.4% resistant to erythromycin, 34.6% resistant to tetracycline, 13.4% resistant to clindamycin, 26.7% resistant to meticillin, 6.5% resistant to amikacin and 3.2% resistant to chloramphenicol. Among studied stain there is no strain results resistant to vancomycin. From 217 Staphylococcus isolates 3 (1.4%) of the isolates strong positive, 10 (4.6%) medium positive, 150 (23%) weak positive and 154 (71%) negative have been identified proteolytic activity at 37°C.  We have been identified proteolitic activity at 20°C, 12 (5.5%) of the isolates strong positive, 30 (13.8%) medium positive, 41 (18.9%) weak positive and 134 (61.7%) of isolates negative. 3 (1.4%) of the isolates strong positive, 9 (4.1%) weak positive and 205 (94.5%) negative have been identified proteolytic activity at 4°C. From 217 Staphylococcus isolates, 112 (51.6%) of the isolates strong positive, 46 (21.2%) medium positive, 37 (17.1%) weak positive and 22 (10.1%) negative have been identified lipolytic activity at 37°C. We have been identified lipolytic activity at 20°C, 137 (63.1%) of the isolates strong positive, 32 (14.7%) medium positive, 28 (13%) weak positive and 20 (9.2%) negative. 94 (43.3%) of the isolates strong positive, 52 (24%) medium positive and 40 (18.4%) weak positive and 31 (14.3%) negative have been identified lipolytic activity at 4°C.