İnfertil olgularda, yoğunluk sıralayıcı (Gradyen) ve PICSI ile seçilmiş spermler ile elde edilen embriyoların FISH yöntemi ile genetik analizi
The chromosomal evaluation of Embryos using the FISH method where embryos obtained are produced with the use of ICSI and sperm are selected on basis of gradient and PICSI and the evaluation of its overall effects on infertility
Yazar: NAZMİ SELMAN KAL
Danışman: PROF. DR. TÜLAY İREZ
Yeni Yüzyıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo = Embryo ; FISH = FISH ; Genetik = Genetics ; Gradyent = Gradient ; Kromozomlar = Chromosomes ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Sperm = Spermatozoa ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
ÖZET
Kal N.S. İNFERTİL OLGULARDA, YOĞUNLUK SIRALAYICISI (GRADYEN) VE PICSI İLE SEÇİLMİŞ SPERMLER İLE ELDE EDİLEN EMBRİYOLARIN FISH YÖNTEMİ İLE GENETİK ANALİZİ Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Klinik Embriyoloji programı. Yüksek Lisans Tezi. İstanbul  2017.

Amaç: Bu çalışmada önceki uygulamalarında kromozom anormalliği olan    ve IVF sonuçları başarısız olan genç hastalarda  yoğunluk gradiyent ile  veya PICSI ile seçilmiş spermler kullanılarak elde edilen embriyolarda aneuploidi oranlarının karşılaştırılması amaçlandı.
 
Materyal ve metod: Bu çalışma U.K.C.F.A. IVF merkezinde uygulaması yapılan, önceki uygulamalarında kromozom anormaliği saptanan 27 hastanın embriyo biopsisi sonucu elde edilen verilerin analizi ile yapılmıştır. Bu çalışmaya PCO, endometriosis ve ileri kadın yaşı faktörlü hastalar ve akraba evliliği dahil edilmemiştir. 27 hasta üzerinde yapılan bu çalışmada toplam 471 oosit kullanılmıştır. Bunlardan 236 adet oosit gradyen metodu ile seçilmiş spermlerle döllenmiş, 235 adet oosit ise PICSI yöntemiyle seçilen spermlerle döllenmiştir. Çalışmada 223 blastokist gelişmiş ve bunlardan 97'sı gradyen yöntemi ile elde edilen spermlerle ICSI yapılmış 129'una PICSI yöntemi ile elde edilen spermler kullanılarak ICSI yapılmıştır. Elde edilen blastokistlere trofektoderm biopsisi yapılmış ve FISH yöntemi ile 13, 18, 21, X ve Y kromozomları incelenmiştir. Sonuçların değerlendirilmesi için Chi-Square testi kullanılmıştır.

Bulgular: Kadınlardan OPU (oosit pick-up) yöntemi ile toplanan oositlerin (471) ortalama değerleri 21,8 ± 5,0 (µ±σ)'dir.  Denüdasyon (ayıklama) işlemi sonrası elde edilen M2 (metafaz II) matür oosit ortalama değeri 17.4 ± 3,9 (µ±σ)'dür. Ortalama sperm konsantrasyonu 54,1(milyon) ml/sayı ±32,4 (µ±σ),  total motilite 50,4%±12,4(µ±σ)'dür. Gradyen yöntemiyle elde edilen spermlerin ortalama konsantrasyonu 21,9 ml/sayı (milyon)±11,2 (µ±σ), total motilite 77,6(%)±9,3(µ±σ)'dür. PICSI yöntemiyle seçilen spermler ile yapılan ICSI'nin, gradyen yöntemiyle seçilmiş spermlere göre gelişen embriyolarda 2PN (pronükleus) oranları anlamlı farklı görülmüştür. (p=0,003) Embriyo gelişim takibinde ikinci gün embriyo hücre sayısı >=4, blastomerde tek çekirdek varlığı, embriyo fragmantasyonu ve blastomer parlaklığı incelenmiş ve anlamlı bir fark gözlenmemiştir. (p=0,346, p=0,100, p=0,717, p=0,297) .  Üçüncü gün embriyolarında her iki grup karşılaştırıldığında hücre sayısı >=8 olduğu durumda, blastomerde tek çekirdek varlığı, fragmantasyon ve blastomer parlaklığı değerlerinin istatistiki anlamlılığı bulunmamıştır. (p=0,383, p=0,341, p=0,487, p=0,932). Embriyolardan blastokist gelişimi gösterenlere yapılan trofektoderm biyopsisi sonrası FISH yöntemiyle 13, 18, 21, X ve Y kromozomlarında anöploidi oranları incelenmiş, Gradyen veya PICSI ile seçilen spermlerle yapılan ICSI işlemi ile elde edilen blastokistlerin kromozom anomalisi açısından her iki grubun farklı olmadığı görülmüştür(p=0,065). 27 hastaya yapılan sağlıklı embriyo transferinde gebelik oranları gradyen yöntemiyle seçilen spermlerle elde edilen veya PICSI işlemiyle seçilen spermlerle elde edilen embriyo transferi işlemi ile karşılaştırıldığında istatistiki olarak anlamlı bir fark görülmemiştir (p=0,075).  

Tartışma: Bu çalışmada elde edilen sonuçlar PICSI ile ve gradyen yöntemi ile seçilen spermler ile elde edilen embriyoların aneuploidy oranlarının ve gebelik oranlarının benzer olduğunu göstermiştir.  Çalışmanın elde edilen sonucuna bağlı olarak PICSI yönteminin yararının tartışmalı olabileceği kanısına varılmıştır. Çalışmanın bu nedenle geniş hasta gruplarında tekrarlanması uygun bulunmuştur.  

Anahtar kelimeler: PICSI, Gradyen, kromozom, FISH, ICSI

Abstract:
ABSTRACT
Kal N.S, The chromosomal evaluation of Embryos using the FISH method where embryos obtained are produced with the use of ICSI and sperm are selected on basis of gradient and PICSI and the evaluation of its overall effects on infertility. Yeni Yüzyıl Üniversitesi, Health Sciences Institute, Clinical Embryology Program, Masters Thesis. Istanbul, 2017.

Purpose: In this study, it was aimed to compare the aneuploidy rates of embryos obtained with density gradients or PICSI-selected sperm in young patients with chromosome abnormality related to Y chromosome in the past.

Material and Methods: This work was carried out by U.K.C.F.A. IVF center, embryo biopsy of 27 patients diagnosed with Y chromosome abnormality in family history was performed by analysis of the results obtained. PCO, endometriosis and advanced female age-related patients and relatives marriage were not included in this study. A total of 471 oocytes were used in this study on 27 patients. Of these, 236 oocytes were fertilized with selected sperm by gradient method and 235 oocytes were fertilized with sperm selected by PICSI method. In the study, 223 blastocysts were developed and ICSI was performed using sperm obtained by PICSI method for 129 and gradient selection for 97 embryos. Obtained blastocysts were biopsied with trophoectoderm and 13, 18, 21, X and Y chromosomes were examined by FISH method. Chi-Square were used to evaluate the results.

Results: The mean value of oocytes collected from women by OPU (oocyte pick-up) method is 21.8 ± 5.0 (μ ± σ). The mean value of the M2 (metaphase II) mature oocyte obtained after the experiment (extraction) is 17.4 ± 3.9 (μ ± σ). The mean sperm concentration is 54.1 (million) ml / number ± 32.4 (μ ± σ), total motility is 50.4 ± 12.4 (μ ± σ). The average concentration of the spermatozoa obtained by the gradient method 21.9 ml / number (in millions) ± 11.2 (μ ± σ), total motility 77.6 (%) ± 9.3 (μ ± σ), respectively. PICSI is made with the selected sperm in the ICSI method, gradient method with the selected sperm in the developing embryo by 2PN (pronuclei) had significantly different rates. (P = 0,003) were examined in the second day of embryo development and the embryo cell number >=4. There was no statistically significance (p = 0,346, p = 0,100, p = 717, p = 0,297). in the blastomer nucleus, fragmentation and blastomer brightness values on the third day when the number of cells >=8. There was no statistically significance (p = 0,383, p = 0,341, p = 0,487, p = 0,932) After that trophoectoderm biopsy to show the development of the blastocyst from embryos FISH method with 13, 18, 21, examined aneuploidy in the X and Y chromosomes, gradient or PICSI and were found not to be different as chromosomal the blastocyst obtained made ıcsı'yl with the selected sperm (p = 0,065). 27 patients were seen made healthy embryos Transfer Man in pregnancy rates gradient with the selected PICS sperm with made ICSI treatment methods a significant statistical difference compared to ICSI transactions with the selected sperm (p = 0.075).

Discussion: The results of this study showed that the aneuploidy and pregnancy rates of embryos obtained with PICSI and gradient method sperm were similar. It has come to the conclusion that the benefit of the PICSI method may be controversial, depending on the outcome of the work. For this reason, it was found appropriate to repeat the study in large study groups.

Key words: PICSI, Gradient, Chromosome, FISH, ICSI.