İn vitro trofoblast modelinde kalsitoninin etkileri
Effects of calcitonin in in vitro trophoblast model
Yazar: BİRSEN ÖZDEMİR
Danışman: PROF. DR. MERAL KOYUTÜRK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kalsitonin = Calcitonin ; Katenin = Catenin ; Protezler ve implantlar = Prostheses and implants ; Protezler ve implantlar = Prostheses and implants ; Trofoblastlar = Trophoblasts ; İn vitro = In vitro

Özet:
İmplantasyon penceresi sürecinde endometriyumdan eksprese edilen kalsitoninin endometriyum epitel hücrelerinde otokrin etki göstererek kalsiyum aracılı bağlantı komplekslerini etkilediği bilinmektedir. İmplantasyon aşamalarında endometriyumla etkileşimde olan trofoblastik hücrelerin kalsitonin reseptörü içerdiği gösterilmiştir ancak; kalsitoninin trofoblast hücrelerindeki etkisi bilinmemektedir. Çalışmamızda olası etkilerinin incelenmesi hedeflenmiştir.
Kalsitoninin etkileri, trofoblastik JAR hücreleriyle oluşturulan in-vitro modelde, progesteron-östrojen hormonları içeren ve içermeyen deney gruplarında incelenmiştir. Kalsitonin 10 nM (K10) ve 250 nM (K250) dozlarında uygulanmıştır. Kalsitoninin,  β-katenin, fosfo β-katenin ve Wnt-7a/b protein ekspresyonlarına etkisi immünositokimya ve western blotlama teknikleriyle incelenmiştir. Geçirmeli elektron mikroskobunda JAR sferoidlerinde hücre yapıları ve komşulukları değerlendirilmiştir.
JAR hücrelerinde Wnt-7a/b protein ekspresyonu görülmemiştir. β-katenin ve fosfo β-kateninin hücre membranındaki immünositokimyasal ekspresyonları HSCORE analizi yapılarak değerlendirilmiştir. Skorlama sonrasında 10nM kalsitonin uygulanan hücrelerde kontrole göre β-katenin membran ekspresyonunun arttığı, 250nM kalsitonin uygulamasıyla azaldığı izlenmiştir. Sadece progesteron-östrojen (PÖ) hormonları varlığında β-katenin membran ekspresyonun arttığı ancak; PÖ ile birlikte 10 nM ve 250 nM kalsitonin uygulanan gruplarda azaldığı tespit edilmiştir. Western blotlama ile yapılan incelemede toplam β-katenin ekspresyonlarının sırasıyla  K10, K250, PÖ, PÖ(K)10 ve PÖ(K)250 gruplarında kontrol grubuna göre artış gösterdiği izlenmiştir. Hücre membranındaki fosfo β-katenin immünreaktivitesi, gruplar arasında anlamlı bir değişiklik göstermemiştir. Sadece K250 grubunda K10'a göre bir azalma saptanmıştır. Toplam fosfo β-katenin protein ekspresyonları değerlendirildiğinde de gruplar arasında anlamlı bir fark görülmemiştir. Elektron mikroskobik incelemelerde hücre komşuluklarında membran protein ekspresyonlarıyla ilişkili değişiklikler gözlenmiştir. 
Çalışmamızda trofoblastik JAR hücrelerinde kalsitoninin, farklı konsantrasyonlarda ve progesteron-östrojen varlığında değişiklik gösteren etkileri olduğu sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Calcitonin that is expressed from endometrium during the implantation window, affects calcium-mediated adhesion junctions of the endometrial epithelial cells by autocrine effect. Trophoblastic cells which is interacted with endometrium in implantation stages were demonstrated to have calcitonin reseptors.  How the calcitonin affects trophoblast cells is unknown. We have aimed to investigate that probable effects.
The effects of calcitonin have observed experimental groups which are desined with or without progesteron and estrogen in cultured JAR cell line. Calcitonin concentrations were 10nM(K10) and 250nM(K250). Effects of calcitonin to protein expressions of β-catenin, phospho β-catenin and Wnt-7a/b have observed by immunocytochemistry and western blotting. Cell structure and neighbourhood of JAR spheroids have monitored by using transmission electron microscope.
There was no immunocytochemical expression of Wnt-7a/b protein. Immunocytochemical expressions of β-catenin and phospho β-catenin in cell membranes have analysed by HSCORE. These scores demonstrated that membrane expressions of β-catenin increased in group that contains 10nM calcitonin, according to control group. On the contrary, expressions of β-catenin decreased in group that contains 250nM calcitonin. Expressions of β-catenin have increased in cell membranes of only progesteron and estrogen given groups. But, they have decreased when added 10nM or 250nM calcitonin. According to western blotting results, total expression levels of β-catenin have increased respectively in K, K10, K250, PÖ, PÖ(K)10 and PÖ(K)250 groups. There was no significant change between the immunoreactivity of phospho β-catenin in cell membranes. Just a decrease was determined in K250 group according to K10. Significant change has not observed on total phospho β-catenin levels. Changes with regard to membran protein expressions have discovered neighbourhood of cells by the electron microscopic investigation.
In our research, we have deduced that calcitonin effects on trophoblastic JAR cells show alterations when calcitonin has been on different doses and in the presence of progesteron and estrogen.