Sıçan primer karaciğer hücre kültürü üzerine deltametrinin apoptotik ve oksidatif etkilerinin incelenmesi
Investigation of apoptotic and oxidative effects of deltamethrine on primary cell culture of rat hepatocytes
Yazar: AYHAN GACAR
Danışman: PROF. DR. TOLGA GÜVENÇ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Deltametrin = Deltamethrin ; Hücre kültürü = Cell culture ; Karaciğer = Liver ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Deltametrin, tarım alanında ve Veteriner Hekimliğinde çeşitli preparatlar halinde sık olarak kullanılan piretroit insektisittir ve metabolizmasında karaciğer etkin bir rol oynamaktadır. Bu çalışmada deltametrinin in vitro olarak hepatositler üzerinde apoptotik ve oksidatif etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Çalışmanın ana materyalini kollejenaz perfüzyon tekniği ile elde edilen primer karaciğer hücre kültürü oluşturmaktadır. Hepatositlere 24, 48 ve 72 saat boyunca 1, 10, 100 μM konsantrasyonun deltametrin uygulandı. Hücreler üzerinde deltametrinin apoptotik etkilerinin incelenmesi amacıyla immunositokimyasal metodla caspase 3, caspase 8 ve caspase 9 aktivitesi ve TUNEL reaksiyonu, oksidatif etkilerinin incelenmesi amacıyla ise hem immunositokimyasal olarak hem de Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu kullanılarak ilgili Süperoksit Dizmutaz 1, Süperoksit Dizmutaz 2 ve Glutatyon Peroksidaz 1 aktiviteleri karşılaştırılmıştır.
Bulgular: Deltametrinin primer karaciğer hücre kültürü üzerine hem apoptotik hem de oksidatif etkilerinin olduğu ortaya konulmuştur. Buna karşın farklı zamanlarda ve farklı dozlarda deltametrine maruz kalan hücreler arasında apoptotik mekanizmada rol oynayan caspase 3, caspase 8, caspase 9 ve oksidatif mekanizmada rol oynayan SOD 1, SOD 2 ve GPx 1 ekspresyon seviyeleri arasında doz ve zamanla ilişkili istatistiksel olarak anlamlı bulgular elde edilmemiştir.
Sonuç: Deltametrinin primer karaciğer hücre kültürü üzerinde oksidatif ve apoptotik etkilerinin olduğu ortaya konulmuştur. Karaciğer hücrelerinin deltametrin toksikasyonunda olası oksidatif reaksiyonlar ve meydana gelen apoptotik süreç arasındaki ilişki açığa çıkarılmaya çalışılmış olmakla birlikte, söz konusu mekanizmalar arasında gerçekleşen etkileşimler üzerine çok sayıda çalışma yapılması gerektiği düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: Apoptozis; deltametrin; oksidatif stres; primer karaciğer hücre kültürü

Abstract:
Aim: Deltamethrin is a pyrethroid insecticide commonly used in various preparations in agriculture and Veterinary Medicine and liver plays an active role in its metabolism. In this in vitro study it was aimed to investigate the apoptotic and oxidative effects of deltamethrin on hepatocytes.
Material and Method: The main material of the study is primary hepatocyte culture obtained by the enzyme collagenase perfusion technique. 1, 10, 100 μM concentrations of deltamethrine was applied for 24, 48 and 72 hours to the hepatocytes. For the investigation of the apoptotic effects on cells of deltamethrin, caspase 3, caspase 8 and caspase 9 and TUNEL activity was determined immunocytochemically. To examine the effects of oxidative effects of deltamethrine on cells, datas of SOD 1, SOD 2 and GPx 1 enzymes obtained from immunocytochemical evaluations and Real Time Polymerase Chain Reaction analysis were compared.
Results: Oxidative and apoptotic effects of deltamethrine on primary hepatocyte cultures cells was demonstrated. However statistically dose and time-related significant findings could not be obtained from the data of apoptotic mechanisms involved in caspase 3, caspase 8, caspase 9 and oxidative mechanisms involved in SOD 1, SOD 2 and GPx 1 expression levels in primary hepatocyte cultures exposed different doses of deltamethrin for different time.
Conclusion: The oxidative and apoptotic effects of deltamethrin on primary hepatocyte culture cells has been demonstrated. Although relationship between potential oxidative reactions and apoptotic processes occurring in deltamethrin toxications of liver cells have tried to uncover, many studies must be done to understand the interactions that occur between these mechanisms.
Keywords: Apoptosis; deltamethrin; oxidative stress; primary hepatocyte cell culture
Ayhan GACAR, PhD Thesis
Ondokuz Mayıs University - Samsun, June – 2016