Hemin ile eritroid farklılaştırılmış kronik miyeloid lösemi (K562) hücre  soylarının çoğalmasında beta adrenerjik reseptörlerin rolü
The role of beta adrenergic receptors on erythroid differentiated chronic myeloid leukemia cell lines K562 proliferation with hemin
Yazar: YİĞİT ANT UĞURDAĞ
Danışman: DOÇ. DR. HÜLYA CABADAK
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyofizik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyofizik = Biophysics ; Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: G proteinleri = G proteins ; Gen ifadesi = Gene expression ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Propranolol = Propranolol ; Reseptörler = Receptors ; İzopren = Isoprene

Özet:
Amaç: Bu çalışmada K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri hemin ile eritroid farklılaşmaya indüklenerek farklılaştırılmıştır ve farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinin çoğalmasında β-adrenerjik reseptörlerin rolünü belirlemek için izoprenalin ve/veya propranolol varlığında hücre sayım deneyleri yapılması amaçlanmıştır. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1 ve β2-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin de belirlenmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri çoğaltıldıktan sonra heminle eritroid farklılaştırılmıştır. Farklılaşmanın olup olmadığını belirlemek üzere benzidin boyama ve glikoforin A gen ekspresyonu çalışmaları yapılmıştır. Hemin ile farklılaştırılan K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde propranololün hücre çoğalmasına etkisini belirleyebilmek için farklı konsantrasyonlarda propranolol ve/veya izoprenalin ile 24 ve 48 saat muamele edilen hücreler, BrDU yöntemi ile sayılmıştır. Farklılaştırılmış hücre gruplarından hazırlanan kesimlerinde Lowry yöntemi ile protein tayini yapıldıktan sonra Western emdirimi yöntemi ile β1 ve β2 reseptör protein düzeyi belirlenmiştir.
Bulgular ve Sonuç: Bu çalışmada, eritroid farklılaşmaya indüklenen K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde β-adrenerjik reseptörlerin hücre çoğalmasındaki rolü saptanmıştır. β-adrenerjik agonist ve antagonistlerinin farklılaştırılmış hücre çoğalmasındaki rolü belirlenmiştir. Eritroid farklılaşmanın olup olmadığının göstergesi olan benzidin boyama ile pozitif hücreler, ayrıca glikoforin A gen ekspresyonu gösterilmiştir. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin β2-adrenerjik reseptörden fazla olduğu bulunmuştur.

Anahtar Sözcükler: G protein kenetli reseptörler, kanser, izoprenalin, propranolol, gen ekspresyonu

Abstract:
Objective: In the present study, K562 chronic myleoid leukemia cells induced erythroid differentiation with hemin. The aim of this study is to do the cell proliferation assay in the presence of isoprenaline and propranolol to evaluate the role of β1/β2-adrenergic receptors on proliferation of differentiated cells. Moreover, the expression level of β1/β2-adrenergic receptors are also aimed to be investigated on human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.
Materials and methods: After the K562 cells are proliferated, these cells are differentiated with hemin (50 μM). In order to detect if there is a differentiation or not, benzidine staining and detection of glycophorin A expression investigations are done. To understand the affect of propranolol on the proliferation of the hemin induced eritroid differentiated K562 cells, the cells are incubated with the different concentrations of propranolol and/or isoprenaline for 24 and 48 hours long and counted with BrDU method. The lysate of differentiated K562 cell groups are prepared. After the protein levels are detected with Lowry method. The β1, β2 reseptor protein level is detected by Western blotting.
Results and conclusion: In the present study, we detected that the role of β-adrenergic
receptors in erythroid differentiated cell proliferation. The effects of the nonselective antagonist and agonist β-adrenergic receptor on the proliferation of human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells are detected. Positive cells are shown with benzidine staining method which displays the erythroid differentiation. Moreover, the gene expression of glycophorin A is shown. The results showed that the expression level of β1-adrenergic receptors are higher than the expression level of β2-adrenergic receptors in human erythroid diffrentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.

Key Words: G protein coupled receptors, cancer, isoprenaline, propranolol, gene expression