Farmasötik analizde sıvı kromatografik(LC) dedektörlerin performanslarının karşılaştırılması
Comparison of performances of liquid chromatographic(LC) detectors in pharmaceutical analysis
Yazar: FATMA GÜLAY DER
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA EMRAH KILINÇ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid

Özet:
Farmasötik analizlerde etkin madde tayinleri için "altın standart yöntem" olarak da adlandırılan sıvı kromatografi  (LC) yöntemlerinden yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile ilaç etkin maddelerinin miktar tayinleri standart analitik LC yöntemlerinin kullanımıyla 1970'li yıllardan beri yapılmaktadır. Sıvı kromatografide son yıllarda genel eğilim olarak analiz süresi onlarca dakika sürebilen HPLC yöntemlerinin yerini artık toplam analiz süresi 1-2 dakika civarında olan ultra performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) yöntemleri almaktadır. 
Tez çalışmalarımızın ana hedefi olan model bileşikler için farklı LC dedektörlerinin yanıtlarının elde edilmesi ve mukaye edilmesi hususunda HPLC'ye bağlı elektrokimyasal (ECD), UPLC'ye bağlı sıralı fotodiyot (DAD) ve kütle (MS ve MS/MS) dedektörleriyle fenilefrin hidroklorür (PE) ve parasetamol (PA) etkin maddelerine ait veriler, standart koşullar altında uygun LC yöntemleriyle elde edilmiştir. Bu sayede ECD, DAD, MS ve MS/MS dedektörlerinin iki etkin maddenin tayinlerindeki eş-zamanlı performansı kıyaslanabilecektir. ECD ve DAD dedektörler ile her iki mobil faz olan MF1 (%75-25, h/h, MeOH-50mM PBS) ve MF2 (%30-70, h/h, Ach-50mM PB) ile çalışılmıştır. MS ve MS/MS dedektörleriyle de aynı etkin maddeler için iyonlaştırma yönteminin (ESI) gereği olarak farklı bir mobil fazda kütle kromatogramları, birincil ve ikincil parçalanma ürünlerine ait iyon pikleri ve bu piklerin alanlarına dayalı kalibrasyon eğrileri elde edilmiştir. MS ve MS/MS çalışmalarında MF3 mobil fazı (%10-90, h/h, B-D. B: 4mM amonyum asetat + %0,1, ağ/h, formik asit + MeOH, D: 4mM amonyum asetat + %0,1, ağ/h, formik asit + H2O ) kullanılmıştır. Ancak her çalışılan tüm dedektörlerle aynı koşullar altında analitik geçerlilik (validasyon) çalışmalarının tamamlanması uygun olacaktır. Hali hazırda elde edilen veriler bu anlamda çok az ve kısmi veriler içermektedir. Ayrıca daha fazla sayıda deneysel parametrenin deneysel değişkenler olarak kullanılmasıyla daha fazla sayıda deney yapılarak daha kesin ve anlamlı veriler elde edilmelidir.

Abstract:
With the use of standardized analysis methods, the determination of drug substances with high performance liquid chromatography (HPLC), one of the methods of the "golden standard method"; liquid chromatography (LC), is a on-going application area since 1970s. In liquid chromatography the trend in the latest years is the replacement of HPLC methods with UPLC methods as an effort of decreasing the total run time from 10 folds of minutes to 1-2 minutes range.
Data for paracetamol (PA) and phenylephrine hydrochloride (PE) drug substances is obtained under standard conditions with appropriate LC methods with electrochemical (ECD) dedector connected to HPLC, diode array (DAD), tandem mass (MS and MS/MS) dedector connected to UPLC, to obtain and compare the results of various LC dedectors for the model drug substances, which is the main goal of our thesis studies. Thus the simultaneous performances of ECD, DAD, MS and MS/MS dedectors in the determination of both drug substances may be compared. With ECD and DAD both mobile phases (MF1 ? 72/25%, v/v, MeOH/50mM PBS, pH 6.0 and MF2 ? 30/70%, v/v, Ach/50mM PBS, pH 4.0) are employed. With MS and MS/MS dedectors for both drug substances because of the need for charge transfer in the mobile phase (for ESI ionisation) another mobile phase was used and ion peaks of the primer and seconder fragments and calibration plots out of these data were obtained. For MS and MS/MS studies MF3 mobile phase (MF3 ? 10/90%, v/v, B/D, B: 4mM amonium acetate and 0.1%, w/v, formic acid in MeOH and D: : 4mM amonium acetate and 0.1%, w/v, formic acid in H2O) is used. But to make an accurate comparison exactly the same operation conditions should be achieved during the analytical method validation studies with the all used dedectors (including the mobile phase and seperation conditions). Regarding that, the current data obtained may be accepted as partial small in run number. Also performing consecutive experiments with the use of more experimental parameters should be achieved to obtaine more acquire and precise data.