Altın nanopartiküllerle zenginleştirilmiş elektrokimyasal DNA biyosensörüile influenza B (kuş gribi) virüsünün tayini
Detection of influenza B (bird flu) virus with an enriched gold nanoparticles electrochemical DNA biosensör
Yazar: ŞEYMA AYDINLIK
Danışman: PROF. DR. MEHMET E. ŞENGÜN ÖZSÖZ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Çok eski yıllardan beri bilinen bir infeksiyon hastalığı etkeni olan influenza virüsleri, akut üst solunum yolu enfeksiyonlarına yol açmaktadır. Moleküler Biyolojik tanı yöntemleri olan nükleik asit hibridizasyon veya polimeraz zincir reaksiyonu ile de virüs genetik maddesinin saptanması daha sıklıkla klinik tanıda tercih edilmektedir. AuNp 'lerin indirgenme özellikleri nükleik asit tayininde elektrokimyasal işaretleyiciler olarak geniş bir alanda kullanılmalarına olanak sağlamaktadır.Elektrokimyasal ölçümlerde koloidal altın tercih edilir. Bir elektrodun üzerine bağlı oligonükleotid ile hibridize olmuş kolloidal altınla işaretli DNA, diferansiyel akım voltametresi ile tayin edilebilir. Altın nanopartiküller sahip oldukları geniş yüzey alanı ve yüksek serbest yüzey enerjisi sayesinde DNA'yı güçlü bir şekilde adsorbe edebilirler. Ayrıca yüzey alanını arttırmak amaçlı çalışmalar yapılmıştır.Tez kapsamında indikatörlü dizi algılama yöntemi kullanılarak Influenza B virüsünün tayini için tasarlanacak genosensör de optimizasyon koşullarının bulunması ve yüzeyin AuNp ile kaplanması, bu koşullar doğrultusunda PCR ürünü örneklerin analizlenmesi hedeflenmiştirAltın nanopartiküllere (AuNps) ve işaretlemeye dayalı influenza B virüsünün elektrokimyasal tayinine yönelik yeni bir metot geliştirildi. Tiyol işaretli influenza B probları adsorpsiyon yoluyla elektrot yüzeyine tutturulmadan önce elektrot yüzeyi altın nanopartiküllerle kaplanmıştır. Prob tutturulmuş elektrot yüzeylerine hedef dizi (influenza B hedef) ve tüm bazı hedef diziden farklı bir sentetik diziler ve PCR ürünleri tutturuldu. Hibridizasyon olayından sonra her bir elektrot Meldola mavisi ile tek tek etkileştirildi. Prob, hibrit ve tüm bazları hedeften farklı diziden alınan meldola mavisinin indirgenme sinyali yanıtları incelendi ve bu çalışma sonucunda elektrot yüzey alanının AuNp ile arttığı gözlendi.

Abstract:
Influenza viruses that are known as a infectious disease since an ancient time cause acute respiratory tract infection. Nucleic acid hybridization or polymerase chain reaction that are molecular biological diagnostic methods is preferred frequently in clinical diagnosis for detection of the virus genetic material. Redox properties of AuNp 's enable to use as electrochemical nucleic acid markers in a large area. Coloidal gols is prefered in electrocehemical measurement. Thiol labelled DNA that is hybridized with target oligonucleotid can be determined by differential current voltammetry. Gold nanoparticles can be adsorbed the DNA strongly because of their large surface area and high free surface energy. They can also enhanced the electrot surface. İn this thesis using a strand detection methot with indicator Influenza B viruses were detected. To design a genosensor, samples of PCR products were aimed to analyze according to optimum conditions and coverage the electrode surface with AuNp. We offer a novel method about Electrochemical detection of DNA hybridization of İnfluenza virus based on gold nanoparticles (AuNps) and labelling. Before probe oligonucleotides (ınfluenza probe) with thiol grups linked on AuNp coated electrode surface with adsorbtion way, gold nanoparticles (AuNps) has been modified to the electrode surface. Hybridization was detected according to the MDB response. MDB response obtained from prob, hybrit, noncomplementary modified AuNp coated electrodes respectively. Genosensor showed excellent sensivity for detecting noncomplementary and hybrit response. We observed in this article electrode surface area can be enhanced with Gold nanoparticles (AuNps).