Çeşitli bitkisel özütlerin (Zingiber officinale, Urtica dioica, Nigella sativa) Toxoplasma gondii' ye etkinliklerinin in vitro ortamda primetamin-sulfadiazin ile karşılaştırması
In vitro comparasion of various vegetable extractives (Zingiber officinale, Urtica dioica, Nigella sativa) with primetamin-sulfodiazin on Toxoplasma gondii
Yazar: BARIŞ DÜZGÜN
Danışman: PROF. DR. MURAT HÖKELEK
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antimalaryallar = Antimalarials ; Nigella sativa L. = Nigella sativa L. ; Sulfadiazine = Sulfadiazine ; Toksoplazma = Toxoplasma ; Urtica dioica L. = Urtica dioica L. ; Zingiber officinale = Zingiber officinale ; İn vitro = In vitro

Özet:
Günümüz tıp hayatında artan bir hızla hastalıklar; teşhis ve tanı metodları, tedavi modaliteleri konusunda gelişmeler yaşanmaktadır. Tek hücreli ve ökaryotik bir tasarıma sahip olan Toxoplasma gondii ise hala kısıtlı tedavi imkanlarıyla özellikle de takizoit formuna etkili ilaçlarla tedavi edilmeye çalışılmaktadır.Yaş gurupları, immün sistemin durumu ve hamilelik durumu gibi çoklu faktörler önemli rol oynamaktadır. Paralelinde çevresel şartlar ve coğrafi yerleşimde parazitozda önemli kriterlerden sayılabilir. Günümüzde Primetamin-Sülfadiazin kombinasyonu halen tedavideki güncelliğini korusa da bir çok yan etkiye neden olmaktadırlar. Bu gibi durumlarda tedavi rejimi değişmekte ikincil ya da üçüncül ilaçlarla kombinasyon yoluna gidilmektedir. Alternatif ve geniş etkili olup Toxoplasma gondii'nin tüm formlarını kapsayabilecek farmokokinetik bileşiklerin arayışı tez konumuzda da olduğu gibi devam etmektedir.Çalışmamızda İnsan Epidermoid Larynx ca'sından elde edilen HEp2 hücreleri üzerinde in-vitro ortamda kullanılmıştır. Primetamin-sülfadiazini baz alarak 3 adet bitki ekstraktını T.gondii takizoitleri üzerinde etkinlik açısından değerlendirdik. 96 kucuklu kültür pleytinin kuyucukları HEp2 hücreleriyle 24 saat öncesinde yüklenerek ~%85-90 oranında monolayer katman oluşması beklendi. MTT testiyle ise ilaç, bitkisel ekstrakt ve T.gondii takizoitlerinin EC50 dozları belirlendi. Kuyucukların hücreyle kaplanmasını takiben T. gondii takizoitleri 6x103/kuyu konsantrasyonda blank hariç tüm kuyucuklara yüklendi. Enaz 4 saatlik süre sonunda kuyucuklar PBS ile yıkanıp süpernatant kısım uzaklaştırıldı. Pleytler enfekte edildikten sonra Primetamin, Sülfadiazin diğer gruplar ise Nigella sativa, Zingiber of ? cinale, Urtica dioica bitkisel ekstraktların her birinin değişik konsantrasyonlarıyla 48 ve 72 saatlik süreler boyunca +37 0C'de %5 CO2'li etüvde inkübe edildi.48 ve 72 saatlik iki ayrı inkübasyon grubundaki ilaç ve bitkisel ekstraktlara karşı T.gondii üremelerin değerlendirilmesi için indirekt ELISA yöntemi gerçekleştirildi. Kültür pleytindeki T. gondii miktarı Alkalen Fosfatazla işaretli ikincil antibadylerin ve pNPP (p-nitrophenyl phosphate)'ın kullanıldığı protokole göre 405 nm'de spektrofotometrik olarak araştırıldı ve anlamlı sonuçlara ulaşıldı.Günümüzde halen tıbbi tedavi ile hastalığı tam olarak eradike etmek mümkün olmamaktadır. Gerçekleştirilen bu çalışma ile T.gondii takizoitlerine karşı in-vitro olarak tedavide alternatif olabilecek bitkisel yapıların etkinliğini araştırılmıştır.

Abstract:
In today?s medicine life rapid advances are experienced in diseases, diagnosis ,diagnostic metods and treatment modalities. Toxoplasma, eukaryotic and single nucleus cell, has a limited treatment especially with drugs which is effective on tachizoit form.Age groups, immune status and pregnancy kompetans are multiple factors with environmental conditions and geographic location on parazitozis. Primetamin-Sulfadiazine combination is stil effective treatment but alternative and potent farmokokinetic compounds efficient in all forms of toxoplasma gondii are the subject of science like in our study.In our study HEp2cells ,derived from human epidermoid larnyx CA, were used for in vitro evaluation of primetamin- sulfadiazine and three plant extracts effciency on toxoplasma gondii. We used 96 well plate for HEp2cell culture and waited one day for the %85-90 complet. With MTT method we determinated the EC50 doses for drugs, plant extracts and T.gondii tachizoits. After the wells coated with cells, the T. gondii tachizoits were loaded in 6x103/well concentration to all wells except blank. At least four hours later wells were washed with PBS and supernatant were removed. Control groups were enfected with Primetamin-Sulfadiazin and the other groups were enfected with the varios concentration of each Nigella sativa, Zingiber of ? cinale, Urtica dioica extracts.Study plates were divided into two incubation groups as 48 and 72 hours. ELISA method were used for evaluation of profileration. The amount of T. gondii in culture plate were measured by spectrophotometrically (405 nm). As a protocol, ALP marked abtibodies and pNPP (p-nitrophenyl phosphate) were used.Currently with medical treatment the eradication of this disease is impossible. With this study we investigated plant extracts efficiency on T. gondii tachizoits in vitro for alternative treatment.