Koyun pulmoner adenokarsinomlarında primer ve metastatik kitlelerde epitelyal hücre markırları, surfaktan proteinler ve lenfositik fenotiplerin immünohistokimyasal olarak araştırılması
Immunohistochemical investigation of epithelial cell markers, surfactant proteins and lymphocytic phenotypes in primary and metastatic masses in sheep pulmonary adenocarcinomas
Yazar: BETÜL KAVAS
Danışman: PROF. DR. ENVER BEYTUT
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Adenokarsinom = Adenocarcinoma ; Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Histopatoloji = Histopathology ; Koyunlar = Sheep ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Patoloji = Pathology ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Bu çalışmada OPA'lı akciğer ve metastazlı lenf düğümlerinde gelişen neoplastik proliferasyonların histopatolojik ve immünohistokimyasal yöntemlerle araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı arşivinde bulunan ve bölge mezbahalarında kesilen koyunlardan alınan toplam 20 OPA'lı akciğer ile metastazlı 3 adet mediastinal lenf düğümü materyal olarak kullanıldı. Rutin olarak hazırlanan parafin bloklardan alınan 4 µm kalınlığında seri kesitler normal ve Poly-L-Lysine kaplı lamlara alındı. Normal lamlara alınan kesitler hematoksilen eozin (HE) ile boyanarak histopatolojik olarak incelendi. Poly-L-Lysine kaplı lamlara alınan seri kesitler ise Avidin-Biotin Compleks Peroksidaz (ABC-P) tekniği ile sürfaktan proteinler (SP) (SP-A, SP-B, SP-C), Multi-Cytokeratin (MCK, AE1/AE3), Pan-Cytokeratin-26 (PCK-26), CD3 ve CD79αcy primer antikorları kullanılarak immünohistokimyasal olarak değerlendirildi. OPA'lı akciğerlerde makroskobik olarak değişen boyutlarda düzensiz, grimsi ve sert odaklar tespit edildi. Histopatolojik incelemelerde klasik OPA olarak belirlenen olgularda alveollerde bezsel ya da papiller tarzda tümör hücre proliferasyonlarının akciğer parankimine yayıldığı dikkati çekti. Atipik OPA olgularında ise neoplastik proliferasyonların daha çok nodüler halde parankime yayıldıkları görüldü. Ayrıca her iki OPA tipinde peritümöral alveoler lümende çok sayıda alveoler makrofaj ile nötrofilik eksudasyon izlendi. Üç olguda tümörün mediastinal lenf düğümlerine metastaz yaptığı, subkapsüler, kortikal ve medullar bölgede tümöral proliferasyonların oluştuğu saptandı. Sürfaktan proteinler için yapılan immün boyamalarda hem klasik hem de atipik OPA olgularında tümör hücrelerinin sitoplazmasında immünopozitif reaksiyon oluştuğu ancak matür SP-B reaksiyonun SP-A ve SP-C'ye kıyasla daha şiddetli oluştuğu saptandı. SP karşı reaksiyonun özellikle hücrelerin apikal sitoplazmasında şekillendiği görüldü. Ayrıca tümör hücrelerinin yanı sıra normal parankimde tip II pnömositler ile alveoler makrofajlarda SP-A ve SP-B pozitif reaksiyon gözlendi. Sitokeratin ekspresyonlarını değerlendirmek için yapılan boyamalarda akciğerlerde yine hem klasik hem de atipik OPA'da neoplastik odaklarda tümör hücrelerinin sitoplazmasında şiddetli pozitif reaksiyon görüldü. Tümör hücrelerine ilaveten tüm bronş ve bronşial epiteller ile non neoplastik tip I ve tip II pnömositlerde de açık olarak MCK ve PCK-26 immün pozitif şiddetli reaksiyon tespit edildi. Metastazlı lenf düğümlerinde akciğerlere benzer biçimde tümör hücrelerinin şiddetli MCK ve PCK-26 pozitif oldukları belirlendi. SP-B ve MCK için yapılan indirekt immünofloresan (IF) boyamalarda OPA'lı akciğer ve metastazlı lenf düğümlerinde neoplastik ve normal akciğer epitellerinde pozitif reaksiyon saptandı. Akciğerlerde her iki formdaki neoplastik proliferasyonlarda tümör mikro çevresinde gelişen hücresel infiltrasyonlarda CD3+ T ve CD79αcy+ B lenfositlerin bulunduğu ancak T hücrelerin daha baskın olduğu saptandı. Sonuç olarak bu çalışmada koyun pulmoner adenokarsinomlu akciğerler ve metastazlı lenf düğümlerinde neoplastik hücrelerin sürfaktan proteinleri sentezlediği belirlenmiş ve tümör hücre orjinin belirlenmesinde sürfaktan proteinlerin spesifik olması nedeniyle diagnostik öneme sahip olduğu tespit edildi. Yine hem akciğerler hem de metastazlı lenf düğümlerinde neoplastik hücrelerin MCK ve PCK-26 immün pozitif reaksiyon gösterdikleri ve SP antikorlara kıyasla reaksiyonun daha şiddetli olduğu belirlendi. Ancak sitokeratin boyamalarında akciğerlerde tümör hücrelerinin yanı sıra bronşial mukoza ve bez epitelleri ile tip I pnömositlerin de pozitif reaksiyon göstermeleri nedeniyle, sürfaktan proteinlerin tip II pnömositlerin ortaya konulmasında daha spesifik olabileceğini gösterdi. Dolayısıyla, elde edilen bulgular, Jaaksiekte tip D Retrovirüsünün tip II pnömositleri enfekte ederek neoplastik transformasyona neden olduğu ve özellikle tümörün akciğerlerde yaygın olduğu vakalarda bölge lenf düğümlerine mestastaz potansiyelinin bulunduğu tespit edildi. Sitokeratin markırlarının tüm akciğer epitellerinde pozitif reaksiyon vermesi ile birlikte, tümörün daha çok tip II pnömosit kökenli olması ve sürfaktan ekspresyonlarının sadece bu hücrelere spesifik olması, primer ve metastatik kitlelerde tümör hücre orjinin araştırılmasında SP'lerin daha spesifik olabileceğini ortaya koydu. Ayrıca tümör mikro çevresinde özellikle T lenfosit infiltrasyonun bulunması tümöre karşı hücresel immüniteye işaret etti.

Abstract:
In this study, the research of neoplastic proliferation developing in the lungs and metastatic lymph nodes of sheep with adenocarcinoma by histopathological and immunohistochemical methods was aimed. Taken from the archives of the Pathology Department of the Veterinary Faculty of Kafkas University and from the sheep slaughtered in regional slaughterhouses, a total of 20 lungs with OPA and 3 metastatic lymph nodes were used as the material in the study. The serial sections with 4 µm thickness taken from routinely prepared paraffin-embedded blocks were transferred to normal and Poly-L-Lysine-coated glass slides. The sections transferred to normal glass slides were evaluated histopathologically after being stained with hematoxylin-eosin (HE). The serial sections transferred to glass slides coated with Poly-L-Lysine were evaluated immunohistochemically with Avidin-Biotin Complex Peroxidase (ABC-P) technique using surfactant proteins (SP) (SP-A, B, SP-C), Multi-Cytokeratin (MCK, AE1/AE3), pan-Cytokeratin 26 (PCK-26), CD3 and CD79αcy primary antibodies. In the lungs with OPA, irregular, grayish hard focuses were grossly detected in different sizes. In the histopathological examinations, the fact that glandlike or papillary tumoral cell proliferations spread to lung parenchyma drew attention. In the atypical OPA cases, it was seen that neoplastic proliferations spread to the parenchyma more in nodular form. Also in both OPA types, numerous alveoler macrophages and neutrophilic exudations in peritumoral alveoler lumen were monitored. It was determined that the tumor metastasized in three cases in mediastinal lymph nodes and tumoral proliferations occured in subcapsular, cortical and medullary regions. It was determined that, in the immunostaining of surfactant proteins, in all classical and aytpical OPA cases immunopositive reaction in the cytoplasm of tumor cells occured, yet SP-B reaction was more severe compared to SP-A and SP-C. The reaction against these proteins were seen especially in the apical cytoplasm. Moreover, in addition to tumor cells, type II pneumocytes in parenchyma and SP-A and SP-B positive reaction were observed in alveoler macrophages. In the stainings practised for the purpose of evaluation of cytokeratin expressions, severe positive reaction was observed in the cytoplasm of tumor cells in neoplastic focuses in both classical and atypical OPA types. In addition to tumor cells, severe immune-positive MCK and PCK-26 reactions were detected in all bronchi and bronchiolar epithelia and non-neoplastic type I and type II pneumocytes. The tumor cells were also determined to be severe MCK and PCK-26 positive in metastatic lymph nodes similar to the lungs. Indirect immunofluorescent (IF) staining for SP-B and MCK revealed a positive reaction in the neoplastic and normal lung epithelium of the lung with OPA and lymph nodes with metastases. In the cellular infiltrations developing around tumor-micro especially in both classical and neoplastic proliferations in the lungs, it was determined that CD3+ T and CD79αcy+ B lymphocytes existed, yet T cells were more dominant. In conclusion, it was found that neoplastic cells synthesized surfactant proteins in the lungs and metastatic lymph nodes with OPA and it was identified that they had diagnostic importance due to the fact that the surfactant proteins were specific in the determination of the origin of tumor cells in this study. It was also detected that in both lungs and metastatic lymph nodes, neoplastic cells showed immüne-positivity for MCK and PCK-26 and gave more severe reactions compared to the surfactant proteins. However, in addition to the tumor cells, as the bronchial mucosa and glandular epithelium and type I pneumocytes in the lungs showed immüno positive reaction in the cytokeratin stainings, the surfactant proteins may be more specific in the detection of type II pneumocytes. Therefore, as a result of the findings it was determined that Jaagsiekte type D Retrovirus infected type II pneumocytes and caused neoplastic transformation resulting in tumors, and it metastasized to regional lymph nodes especially in the cases that the tumor is prevalent in the lung. Although all lung epithelium showed a positive reaction against cytokeratin markers, the fact that the tumor was mostly type II pneumocyte and the surfactant expressions were specific to these cells, revealed that SPs could be more specific in investigating tumor cell origin in primary and metastatic masses. In addition, the presence of T lymphocyte infiltration in the tumor microenvironment indicated cellular immunity against the tumor.