Nöroblastom ve hippo sinyal yolağı
Neuroblastoma and hippo signaling pathway
Yazar: SELEN KUM ÖZŞENGEZER
Danışman: PROF. DR. HATİCE NUR OLGUN ; PROF. DR. ZEKİYE SULTAN ALTUN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı / Temel Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Onkoloji = Oncology

Özet:
Amaç: Nöroblastom (NB) çoğunlukla erken çocukluk döneminde görülür. Sempatik sinir sisteminden kökenlenen malign bir tümördür. Sisplatin (CDDP), NB tedavisinde uygulanan bir kemoterapötik ajandır. Hippo sinyal yolağı, hücre farklılaşması ve organ büyümesinde etkin olmasıyla, kanser kök hücrelerin gelişiminden ve tümör oluşumundan sorumludur. Bu yolağın transkripsiyon ko-aktivatörü olan YAP da yolakdaki tüm mekanizmaların önemli bir parçasını oluşturmaktadır. Verteporfin (VP), ışığa duyarlı bir benzoporfirin türevi olup, güçlü ve seçici bir YAP inhibitörüdür. YAP-TEAD etkileşimlerini bozmaktadır. Verteporfin ve farklı benzoporfirin türevlerinin farklı kanserlerde hücre proliferasyonu azalttığı gösterilmiştir. Retinoik asit (RA), A vitamininden sentezlenen doğal olarak oluşan bir retinoiddir. RA'nın 18 aylıktan küçük bebeklerde NB tedavisi için etkili olan diferansiye edici bir tedavi ajanıdır. Bu çalışmanın amacı nöroblastomda VP, CDDP, RA ve bu ajanların kombinasyonlarının in-vitro ve in-vivo koşullarda hippo yolak bileşenleri üzerinden potansiyel anti-proliferatif etkinliğinin ortaya konması dır. 
Gereç ve Yöntem: Çalışmada N-MYC(-) SH-SY5Y ve N-MYC(+) KELLY nöroblastom hücrelerinde VP, CDDP, RA ve ajanların kombinasyonlarının apoptoz üzerine etkisi Anneksin-V/PI  testi ile akış sitometrik olarak değerlendirilmiştir. Ayrıca KELLY hücreleri kullanılarak nude farelerde NB ksenograft model oluşturularak ajanların in-vivo anti-tümoral etkinlikleri tümör boyutları üzerinden incelenmiştir. Ajanların hippo yolağı ve kök hücre diferensiyasyon belirteçleri üzerindeki ilişkisi OCT, SOX, Nestin, YAP ve LATS-1 gen ve protein ekspresyonlarının RT-PCR ve immünohistokimyasal boyama analizi yardımı ile in-vitro ve in-vivo koşullardan elde edilen örneklerde değerlendirilmiştir. 
Bulgular: Verteporfin ve sisplatinin hücre canlılığını azaltıcı ve özellikle in-vivo da NB tümör volümünü azaltıcı etkisi saptanmıştır. Hippo sinyal yolağının çekirdek proteinlerinden özellikle YAP-1 ve LAT-2'nin, VP ve CDDP uygulama gruplarında kontrole göre ekspresyonlarında azalma olduğu saptanmıştır. Bu da YAP'ı özellikle potansiyel bir terapötik hedef olarak ortaya koymaktadır. 
Sonuç: Bu in-vitro ve in-vivo NB çalışma sonuçlarımız hippo sinyal yolağının, nöroblastom tedavisi için alternatif bir terapötik hedef olarak değerlendirilmesinde fayda sağlayabileceğine işaret etmektedir.

Abstract:
Objective: Neuroblastoma (NB) is a malignant tumour originating from the sympathetic nervous system and is frequently seen in early childhood. One popular chemotherapeutic drug for the treatment of NB is cisplatin (CDDP). The Hippo signaling system is crucial for the development of tumors, cancer stem cells, and stem cells involved in organ growth and differentiation. An essential component of this process is YAP, the transcription co-activator of this route. A strong and specific YAP inhibitor is Verteporfin (VP), a derivative of benzoporphyrin that is photosensitive. It ruins the YAP-TEAD connections. There have been reports that derivatives of verteporfin can slow the proliferation of several types of cancer. 
Retinoic acid (RA) is a naturally occurring retinoid that is derived from vitamin A. When used to treat NB in babies under the age of 18 months, RA is said to be quite effective and to provide full remission in nearly all cases. The purpose of this work was to demonstrate, both in-vitro  and in-vivo , the possible anti-tumor efficacy of VP, CDDP, RA, and combinations of these drugs in neuroblastoma through components of the hippo pathway.
Materials and Methods: The Annexin-V/PI test was used to flow cytometrically assess the effects of VP, CDDP, RA, and combinations of drugs on apoptosis in N-MYC(-) SH-SY5Y and N-MYC(+) KELLY neuroblastoma cells. Furthermore, KELLY cells were used to create an NB xenograft model in naked mice, and the drugs' in-vivo  anti-tumoral actions were investigated across a range of tumor sizes. RT-PCR and immunohistochemistry labeling examination of OCT, SOX, Nestin, YAP, and LATS-1 gene and protein expressions in samples acquired from in-vivo and in-vitro settings were used to assess the association between the agents and stem cell differentiation markers and the hippo pathway. 
Results: Particularly when used in-vivo , verteporfin with cisplatin reduced tumor bulk and cell viability. The key proteins of the Hippo signaling system, YAP-1 and LAT-2, were expressed less in the VP and CDDP groups than in the control group. This implies that YAP could be a useful target for therapy.
Conclusion: The results of this study suggest that the hippo signalling pathway may be useful in its evaluation as an alternative therapeutic target for neuroblastoma treatment.