Deneysel otoimmün ensefalomiyelit immünopatogenezinde nötrofillerin katkısı
The role of neutophils in the immunopathogenesis of experimental autoimmune encephalomyelitis
Yazar: AHMET KASIM KILIÇ
Danışman: DOÇ. DR. MERYEM ASLI KURNE ; PROF. DR. RANA KARABUDAK
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Ensefalomiyelit = Encephalomyelitis ; Multipl skleroz = Multiple sclerosis ; Nötrofiller = Neutrophils ; Otoimmünite = Autoimmunity

Özet:
Multipl skleroz hakkındaki güncel bilgilerimizin önemli bölümü deneysel otoimmün ensefalomiyelit (DOE) modelinden elde edilen verilere dayanmaktadır. Hastalığın immünpatogenezinde edinsel bağışıklığın önemli görevler üstlendiği bilinmektedir. Doğal bağışıklık sisteminin bu otoimmün süreçteki etkisi sınırlı olup bu konuyu sorgulayan az sayıda çalışma vardır. Nötrofiller doğal immünitenin elemanları olup inflamasyonun erken döneminde rol almakta ve edinsel bağışıklık yanıtlarının düzenlenmesinde katkıda bulunmaktadır. Bu çalışmada C57BL/6 farelerde MOG35-55 peptidi ile DOE modeli oluşturulmuş ve bu modelde formilmetionil-lösil-fenilalanin (fMLP) ile nötrofil indüksiyonu yapılarak klinik, immünolojik ve histopatolojik sonuçları değerlendirilmiştir. DOE ve DOE varlığında fMLP verilen her iki grupta klinik skor ortalama 1 dir. Histopatolojik olarak skor 3 olan bir hayvanda spinal kord örneklerinde meningeal perivasküler infiltrasyongörülmekle birlikte skor 1 düzeyindeki hiçbir hayvanda santral sinir sisteminde inflamatuar infiltrasyon görülmemiştir. İmmünolojik değerlendirmede nötrofilik yanıt dalak hücre eldesinde çalışılmış ve nötrofiller Gr-1, CXCR1, CXCR2 ve Ly7/4 antikorları ile ikili (Gr-1,Ly7/4) ve üçlü (Gr-1,CXCR1,CXCR2) işaretlenerek akımsitometrede hücre oranları değerlendirilmiştir. Seçici olarak nötrofilleri temsil eden Gr-1hi Ly7/4hi paterni fMLP verilen grupta DOE ve kontrol grubuna göre anlamlı olarak yüksek saptanmıştır (p<0.05). DOE grubuyla kontrol grubu arasında anlamlı fark görülmemiştir. Üçlü boyamalarda Gr-1hiCXCR1+CXCR2+ifadesi ve total Gr-1hiCXCR1+ ifadesi taşıyan hücre oranı fMLP uygulanan grupta anlamlı olarakyüksek saptanmıştır (p<0.05). Total Gr-1hi CXCR2+ ifadesinde ise gruplar arasında fark yoktur. Bu sonuçlar fMLP uygulanmasının seçici CXCR1 ifadesine neden olduğunu gösterse de bu durumun klinik ve histopatolojik karşılığı saptanmamıştır. Elde edilen bulgular doğal immünitenin bir elemanı olan nötrofillerin hastalığa katkısının sınırlı olduğunu göstermiştir.

Abstract:
Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the major origin of the recent data about multiple sclerosis. Acquired immunity is crucial in immunopathogenesis of the disease. On the other hand, innate immunity is believed to have a limited role in this autoimmune process and there is inadequatedata in the literature. Neutrophils are one of the members of innate immunity. They have a major role in the early phase of inflammation and can regulate acquired immune responses. In this study C57BL/6 mice were immunized with MOG35-55 peptide to form experimental autoimmune encephalomyelitis model. N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP) was used to induce neutrophils. Clinical, immunological and histopathological findings of the model was evaluated. EAE and fMLP induced-EAE groups had average clinical score as 1. In histopathological evaluation, spinal meningeal perivascular inflammatory cellinfiltration was documented in an animal having clinical score 3 whereas no inflammatory infiltration have been detected in animals with clinical score 1. Immunological data was obtained from spleen samples and neutrophils were stained with Gr-1, CXCR1, CXCR2, and Ly7/4 antibodies as double (Gr-1, Ly7/4) and triple (Gr-1,CXCR1,CXCR2) staining. Flow cytometric analyses were made for cell ratios. GR-1hiLy7/4hipattern, an expression highly spesific for neutrofils, was significantly high in fMLP-induced EAE group when compared with EAE and control groups (p<0.05). No difference were seen between EAE and control groups. In triple stainings, Gr-1hi CXCR1+CXCR2+ pattern and cells expressing total Gr-1hiCXCR1+pattern were significantly high in fMLP-induced EAE (p<0.05). Total Gr-1hiCXCR2+ expression did not reach any significancy between groups. Although these results show there is a selective CXCR1 expression after fMLP induction, no clinical and histopathological correlate have been found. Briefly, our data shows that neutrofils only have a limited effect on disease progress in this model.