Perflorooktan sülfonat (PFOS)'ın embriyonel orjinli hücre serilerindeki etkisinin in-vitro araştırılması
An in vitro investigation of the effect of perfluorooctane sulphonate on cell lines of embryonic origin
Yazar: SEVİM KARAKAŞ ÇELİK
Danışman: DOÇ. DR. NURCAN ARAS ATEŞ
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Embriyo = Embryo ; Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Kaspazlar = Caspases ; Perflorooktan sülfonat = Perfluorooctane sulphonate ; İn vitro = In vitro

Özet:
Perflorooktan sülfonat ve perflorooktan asit gibi florin organik komponentler stabil kimyasallar olup, endüstriyel alanda oldukça yaygın olarak kullanılmaktadır. Yapılan son çalışmalar bu çevresel kontaminantların nehir sularında ve yabani hayvanlarda bulunduğunu göstermiştir.Perflorooktan sülfonat ve perflorooktan asitin potansiyel toksisitesi henüz çok iyi karakterize edilememiş ve hatta toksik etkilerinin altında yatan moleküler mekanizma ile ilgili çok az şey bilinmektedir. Perflorooktan sülfonatın mitokondrial membran permeabilitesini değiştirmesi potansiyel toksisite mekanizması olarak kabul edilmektedir. Mitokondrial membran permeabilitesinin değiştirmesi sonucu hücrenin apoptoz süreci başlamaktadır. Ancak perflorooktan sülfonat ve perflorooktan asitin toksisitesinin altında yatan apoptotik moleküler mekanizma ile ilgili bir çalışma bulunmamaktadır.Bu çalışmada, amniyon hücre serilerinde perflorooktan sülfonat ve perflorooktan asitin hücreyi apoptoza götüren Apaf-1 ve kaspaz-3 genlerinin ekspresyonuna etkisi araştırılmıştır. Amniyon hücrelerindeki apoptotik gen ekspresyonunu belirlemek için Ankara Şap Enstitüsü Hücre Kültür Kolleksiyonundan (Hükük) sağlanan amniyon hücreleri kültüre edilmiştir. Değişik konsantrasyonlarda perflorooktan sülfonat ve perflorooktan asit uygulanan amniyon hücrelerinden total RNA kiti kullanılarak total RNA izolasyonu yapılmıştır. Apaf-1 ve kaspaz-3'ün ekspresyonları RT-PCR kullanılarak belirlenmiştir.Yapılan çalışmada 500 µM perflorooktan asit uygulanan hücrelerde 48 ve 72. saatlerde kaspaz-3 ekspresyonunda anlamlı derecede artış gözlenmiştir (p<0.05). Ayrıca 100 µM PFOS uygulanan hücrelerde de 48. saatte Apaf-1 ekspresyonunun anlamlı derecede arttığı (p:002) görülmüş diğer dozlarda anlamlı bir artış görülmemiştir.Sonuç olarak; perflorooktan sülfonat uygulanan hücrelerde apoptotik gen ekspresyonunun doza bağlı olarak arttığı tespit edilmiştir. Bu çalışmanın perflorooktan sülfonatın apoptotik etkisini inceleyen ilk çalışma olması nedeni ile bu konuyla ilgili yapılacak diğer çalışmalara yol gösterici olacaktır.

Abstract:
Fluorinated organic compounds, such as perfluorooctane sulfonate, are stable chemicals with a wide range of industrial applications.The potential toxicity of perfluorooctane sulfonate is not well characterized, and even less known are the mechanisms underlying its toxic effects. Perfluorooctane sulfonate change of inner mitochondrial membrane permeability has been implicated as a potential mechanism of toxicity. But there has been no study about apoptotic molecular mechanisms underlying toxicity of perfluorooctane sulfonate.In this study, we research that perfluorooctane sulfonate effects the expression of Apaf-1 and caspase-3 genes in the amnion and fetal lung cell line that initiate the cells to undergo apoptosis. To determine the apoptotic gene expression in amnion cell line, amnion and fetal lung cells that obtained from Ankara Foot-and-Mouth Disease Institute collection of cell culture (Hükük) was cultured. Total RNAs of amnion and fetal lung cells exposed to different concentration perfluorooctane sulfonate was purified and the expression of caspase 3 and Apaf-1 determined by using RT-PCR.In the study there is significant increase in expression of caspase-3 and Apaf-1 in amnion and fetal lung cell line exposed to high dose. Also there is significant increase in expression of Apaf-1 and caspase-3 in cell lines exposed for along time perfluorooctane sulfonate. But no significant increase was seen in the low doses and exposed for a short time.In conclusion, apoptototic gene expression is increase in cells exposed perfluorooctane sulfonate by dose dependent manner was determined. So this work is the first study examine the apoptotic effects of perfluorooctane sulfonate it will lead the way to the other topical studies.