In vitro ortamda Iris unguicularis, Iris suaveolens ve Iris histrio bitki ekstraktlarının MCF7 meme kanseri hücre hattı üzerindeki antikanser aktivitesinin araştırılması
In vitro  investigation of anticancer activtiy on breast cancer cell lines MCF7 the plant extracts of Iris unguicularis, Iris suaveolens and Iris histrio
Yazar: AYŞE FATMA OĞUZCAN
Danışman: DOÇ. DR. SERDAR ÖZTUZCU
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre döngüsü = Cell cycle ; Iris L. = Iris L. ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; İris = Iris

Özet:
Iris bitki türleri daha çok sıcak ve ılıman bölgelerde yetişmektedir. Iris türleri aktif bileşenleriyle ilgili immünoloji, enfeksiyon hastalıkları, ülser ve onkoloji gibi çeşitli araştırma alanlarında yeni tedavi olasılıkları bulmayı hedefleyen çok sayıda çalışma bulunmaktadır. Kimyasal analizler gösteriyor ki Iris türleri 250'den fazla bileşim içermektedir. Bu bileşimler; flavonoidler, izoflavonoidler ve onların glikozitleri, benzokininleri ve triterpenoitleri içermektedir. Bu nedenle olası toksik ve terapötik etkileri öngörmek açısından Iris türlerinin ekstraktlarının etki mekanizmalarını incelemek önemlidir. Özellikle Türkiye'de yetişen Iris türleri ile ilgili çok fazla çalışma yoktur. Iris familyasından olan Iris unguicularis, Iris suaveolens ve Iris histrio bileşenlerinin hücrenin içine girişini maksimuma çıkartabilmek için dimetil sülfoksit (DMSO) ile ekstresi kullanılmıştır. DMSO, bitki ekstraktlarımız için iyi bir çözücüdür. Bu çalışmanın amacı kanser hücreleri üzerinde Türkiye'de yetişen Iris unguicularis, Iris suaveolens ve Iris histrio bitkilerinin DMSO ekstrelerinin antikanser etkilerini araştırmaktır. Çalışmada Türkiye'nin farklı yerlerinden toplanan bitki ekstraktlarının insan meme kanseri (MCF7) hücrelerinin büyümesi üzerindeki azaltıcı etkileri incelendi.
MTT (3-[4,5 – dimethylthiazol -2-il] -2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) yöntemi ile MCF7 hücre hatları üzerindeki sitotoksik etkileri incelendi ve IC50 değerleri belirlendi (IC50  değerleri sırasıyla 50.8 µM, 49.40 µM ve 50.8 µM). Sonuçlar bitki ekstraklarının doza bağımlı bir şekilde sitotoksik olduğunu gösterdi. %50 hücre ölüm oranının  (IC50) neden olduğu konsantrasyon değeri Iris unguicularis ve Iris suaveolens bitkileri için 150 µg/ml, Iris histrio bitkisi için de 100 µg/ml olarak belirlenmiştir. Sonraki deneyler bu konsantrasyonlara göre devam etmiştir. Bitki ekstraktlarımızın apoptozise etkisi Anneksin V boyama ile hücre döngüsüne etkileri ise Propidium iyodür (PI) ile boyandıktan sonra akım sitometrisi tarafından analiz edilmesiyle incelendi. Sonuçlar; bitki ekstraktlarıyla muamele edilen MCF7 hücreleri, kontrol olarak belirlenen DMSO ile muamele edilmiş MCF7 hücreleriyle karşılaştırıldığında anlamlı bir farkın olmadığını göstermektedir. Değerler birbirine çok yakın değişimler göstermektedir. Hücre döngüsü sonuçlarına bakıldığında ise Iris unguicularis, Iris histrio ve Iris suaveolens bitki ekstraktının kontrol grubuyla G1, S ve G2/M fazları ayrı ayrı karşılaştırıldığında anlamlı bir farkın olmadığını göstermektedir(p˃0.05). Bu sonuçlar bize bitki ekstraktlarının kanser kemoterapisi veya önlenmesinde faydalı olabilecek güçlü bir anti- tümörijenik bileşenlere sahip olmadığını düşündürmektedir.

Abstract:
The Iris genus grows especially in hot and warm temperate areas. There are many studies conducted on Iris genus or their active components aiming to find new treatment possibilities in diverse research fields such as immunology, infectious diseases, allergy, diabetes, ulcers and oncology. Chemical analysis indicated that Iris genus have more than 250 compounds. They include flavonoids, isoflavonoids and their glycosides, benzoquinones and triterpenoids. Therefore it is important to investigate the Iris genus extracts mechanisms of action in order to predict possible cytotoxic and may be therapeutic effects for cancer. There are not many investigations about Iris genus which are grown especially in Turkey. Iris unguicularis, Iris suaveolens and Iris histrio which are from the family of Iris L. were extracted with dimethyl sulfoxide (DMSO) which can maximize the penetration of compounds from plants extracts to the cells. DMSO is a good solvent for our plant extracts. The aim of this study was to investigate the anticancer effects of DMSO etracts of Iris unguicularis, Iris suaveolens and Iris histrio which are grown in Turkey. In our study, inhibitory effects of Iris unguicularis, Iris suaveolens and Iris histrio extracts collected from different regions of Turkey were analyzed on growth of the human breast carcinoma cells(MCF7).
 Their cytotoxic effects of breast carcinoma cell line(MCF7) was examined ussing the MTT 3-[4,5 – dimethylthiazol -2-yl] -2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) assay. IC50 values were determined (IC50 values respectively 50.8 µM, 49.40 µM and 50.8 µM). The results showed that  our  plant extracts are cytotoxic in dose-dependent manner.
The concentration rates that was why % cell death ratios (IC_50) are determined as 150 µg/ml  for Iris unguicularis and Iris suaveolens, as 100 µg/ml for Iris histrio. Next assays were continued according to these concentrations. The effects of plant extracts on apoptosis  with Annexin V,the effects of plant extracts on cell cycle with flow cytometer after stainig the cells with Propidium iodide (Pl) was analyzed. The results were indicated that there are not a meaningful difference on apoptosis when the effects of plant extracts treated cells were compared to control DMSO treated MCF7 cells. The rates show very close variation to one another. In case we look the results of cell cycle, it is observed that there are not a meaningful difference when the effects of extracts of Iris unguicularis, Iris histrio and Iris suaveolens on cell cycle were compared separately to control group on G1, S and G2 phases (p˃0.05). In conclusion, you are thought that Iris unguicularis, Iris histrio and Iris suaveolens extracts don't have potent anti-tumorigenic compoundsthat may be useful in cancer chemoprevention or therapy.