Metakrilik asit aşılanmış kitosan kürelerin karakterizasyonu ve lizozim enziminin saflaştırılmasında kullanılması
Characterization of metacrylic acid grafted chitosan beads and the use of them in the purification of the lysozyme enzyme
Yazar: GÜLSÜM EKİCİ
Danışman: PROF. DR. NECATİ BEŞİRLİ
Uludağ Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalısmada, yumurta beyazından doğrudan lizozim enziminin saflastırılması içinyeni bir kromatografik matriks gelistirildi. Destek materyali olarak, kitosan-g-pMAAküreleri kullanıldı. Kesikli sistemde bu afinite adsorbentleri üzerine farklı pH'lardafarklı miktarda lizozim içeren sulu ortamdan lizozim adsorpsiyonu davranısı incelendi.Lizozimim iyon değistirici kürelere adsorpsiyonu için optimal pH değeri 4.0- 8.0değerleri arasında arastırıldı. Sıcaklık ve iyonik siddetin, adsorbentlerin, adsorpsiyonkapasiteleri üzerindeki etkisi belirlendi. Kitosan-g-pMAA iyon değistirici kürelerinlizozim adsorpsiyon kapasitesi, sırasıyla 65.7 mg/g olarak belirlendi. ?mmobilizelizozim enziminin baslangıçtaki aktifliğini koruyarak 7 kez tekrar kulanılabildiğibelirlendi. Yumurta beyazından doğrudan lizozim enzimi saflastırması sonuçları YBSKile tayin edildi. Kitosan-g-pMAA iyon değistirici kürelerin, lizozim enziminin yumurtaakından saflastırılmasında kullanılmasından sonra, lizozim enziminin 1.0 M KSCN ileelüsyonları yapıldı. Kitosan-g-pMAA iyon değistirici kürelerden elüe edilen lizoziminsaflık derecesi ve geri kazanımları sırasıyla %94.16 ve %87.30 olarak belirlendi.Kitosan-g-pMAA küreler ile saflastırılan lizozimin spesifik aktivitesi 40486 U mg-1olarak belirlendi.Ayrıstırma ve saflastırma islemlerinde lizozim aktivitesi, substratolarak Micrococcus lysodeikticus bakterisi kullanılarak belirlendi.Anahtar Kelimeler: Kitosan küre, lizozim, immobilizasyon, iyon değisim, yumurtabeyazı, Ası Kopolimer, metakrilik asit

Abstract:
In this study, for direct purification of lysozyme enzyme from egg white, a newchromatography matrixs was developed. Chitosan-g-pMAA ion-exchange beads wereused as support material.Behaviour of lysozyme adsorption onto these ion-exchangebeads, from Aqueous solutions containing different amounts of lysozyme at differentpH, investigated in a batch system. The optimal pH values for adsorption of lysozymeon the affinity adsorbents, were investigated in the pH range of 4.0-8.0. The effects oftemperature and ionic strenght,on the adsorption capacities of the adsorbents, weredetermined. The lysozyme adsorption capacity of the chitosan-g-pMAA ion-exchangebeads was found as 65.7 mg/g, respectively. It was determined that the orginial activitywas preserved when immobilized lysozyme was used repeatedly 7 times. The results ofdirect lysozyme enzyme purification from egg white were determined by HPLC. Afterusage of chitosan-g-pMAA ion-exchange beads the lysozyme enzyme from the eggwhite, lysozyme enzyme was eluted by 1.0 M KSCN solution. The purity and therecovery of the eluted lysozyme, were 94.16% and 87.30 % for chitosan-g-pMAAion-exchange beads, respectively. The specific activity of the lysozyme purified withKitosan-g-pMAA beads 40486 Umg-1. Separation and purification was monitored bydetermination of lysozyme activity using Micrococcus lysodeikticus as substrate.Key Words: Chitosan bead, lysozyme, Immobilization, Ion-exchange, metacrylic acid,Graft copolymer, Egg white