Anti-KIR ile aktive edilmiş NK-92 hücrelerinin meme kanseri hücreleri üzerindeki öldürücü etkisinin araştırılması
Investigation of the killer effect of anti-KIR activated NK-92 cells on breast cancer cells
Yazar: NİL KILIÇ
Danışman: PROF. DR. İRFAN KANDEMİR ; ÖĞR. GÖR. MOHAMMADREZA DASTOURI
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antagonistler = Antagonists ; Antikorlar = Antibodies ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; İmmünoterapi = Immunotherapy

Özet:
Meme kanseri kadınlar arasında en sık görülen sağlık sorunudur. Her yıl binlerce kadını etkilemektedir. Meme kanseri tedavisinde kullanılan kemoterapi ve radyoterapi gibi geleneksel yöntemler komplikasyonlara neden olmaktadır. Bu durum yeni bir tedavi modeli arayışını zorunlu kılmaktadır. İmmün hücre alt grubu NK hücreleri sitotoksik özellikleri ile dikkat çekmektedir. Kanser hücreleriyle savaşmada çok etkilidirler. NK hücrelerinin en sitotoksik olanı NK-92'dir. Bu tezde, aktivatör reseptörü KIR2DL4 anti-KIR2DL4 mAb 33 ile sitotoksik NK-92 hücreleri uyarılarak NK-92 hücrelerinin aktivasyonu sağlanmıştır. Aktive edilmiş NK-92 hücreleri ile meme kanseri hücre hatlarına karşı sitotoksik etki artırılmaya çalışılmıştır. Ayrıca trastuzumab ve anti-KIR2DL4 mAb antikor kombinasyonunun HER2+ meme kanseri hücrelerine karşı öldürme etkinliği değerlendirilmiştir. İndüklenmiş ve indüklenmemiş NK-92 hücreleri, 1:1, 1:5 ve 1:10 hücre oranlarında meme kanseri MCF-7, SK-BR-3 ve normal meme MCF-12A ile birlikte kültürlendi. Antikor ve/veya trastuzumab ile birlikte kültürlenen hücreler, en etkili hücre oranını belirlemek için WST-1 ile sitotoksisite analizi yapılmıştır. Etkili hücre oranı belirlendikten sonra, apoptoz yolundaki Caspase 3, Caspase 9 ve Bax proteinlerinin sentezi immün boyama ve western blot ile analiz edilmiştir. Elde edilen sonuçlarda indüklenen NK-92 hücreleri MCF-12A normal meme hücreleri üzerinde herhangi bir etki göstermemektedir. Bununla birlikte, MCF-7 ve SK-BR-3, meme kanseri hücreleri üzerinde önemli sitotoksik etkiler göstermektedir. HER2+ SK-BR-3 için trastuzumab ve agonistik antikor kombinasyonu sonuçlarında hücre ölümü vardır. Fakat bu sonuçlar istatistiksel olarak anlamlı degildir. Agonistik antikor anti-KIR2DL4 mAb 33 ile indüklenen tüm NK-92 hücre gruplarında etkili olmasına rağmen, en etkili sonuç meme kanseri hücre hatlarına (MCF-7 ve SK-BR-3) karşı 1:10 oranında elde edilmiştir. (Hedef: Efektör). Elde edilen immün boyama ve western blot sonuçlarına göre, indüklenmiş NK-92 hücreleri ile birlikte kültürlenen gruplarda apoptoz yolundaki proteinler önemli ölçüde artmıştır. Elde edilen veriler yeni bir tedavi modeli sunabilme özelliğine sahiptir ve faz çalışmaları ile klinik çalışmalara yön veren temel bilgileri içermektedir.

Abstract:
Breast cancer is the most common health problem among women. It affects thousands of women every year. Traditional methods such as chemotherapy and radiotherapy used in the treatment of breast cancer cause complications. This situation necessitates the search for a new treatment model. Immune cell subgroup NK cells attract attention with their cytotoxic properties. They are very effective in fighting cancer cells. The most cytotoxic of NK cells is NK-92. In this thesis, activation of NK-92 cells was achieved by inducing cytotoxic NK-92 cells with activator receptor KIR2DL4 anti-KIR2DL4 mAb 33. It was tried to increase the cytotoxic effect against breast cancer cell lines with activated NK-92 cells. In addition, the killing efficiency of trastuzumab and anti-KIR2DL4 mAb antibody combination against HER2+ breast cancer cells was evaluated. Induced and uninduced NK-92 cells were co-cultured with breast cancer MCF-7, SK-BR-3 and normal breast MCF-12A at cell ratios of 1:1, 1:5, and 1:10. Cells co-cultured with antibody and/or trastuzumab were performed cytotoxicity assay with WST-1 to determine the most effective cell ratio. After determining the effective cell ratio, the synthesis of Caspase 3, Caspase 9 and Bax proteins in the apoptosis pathway was analyzed by immunostaining and western blot. In the results obtained, the induced NK-92 cells do not show any effect on MCF-12A normal breast cells. However, MCF-7 and SK-BR-3 show significant cytotoxic effects on breast cancer cells. For HER2+ SK-BR-3, the combination of trastuzumab and agonistic antibody results in cell death. However, these results were not statistically significant. Although it was effective in all groups of NK-92 cells induced by agonistic antibody anti-KIR2DL4 mAb 33, the most effective result was obtained against breast cancer cell lines (MCF-7 and SK-BR-3) at a ratio of 1:10 (Target: Effector). According to the obtained immunostaining and western blot results, proteins in the apoptosis pathway were significantly increased in groups co-cultured with induced NK-92 cells. The data obtained are capable of presenting a new treatment model and contain basic information that guides phase studies and clinical studies.