Malakit yeşili ve meldola mavisinin papaine etkisi
Interactions of malachite green and medola's blue with papain
Yazar: ZUHAL YAZICI GÖKBULUT
Danışman: PROF.DR. İNCİ ÖZER
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
ÖZETYazıcı Gökbulut, Z. Malakit yeşili ve meldola mavisinin papaine etkisi. HacettepeÜniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Doktora Tezi, Ankara,2006. Triarilmetan (TAM) grubu boyalardan malakit yeşili (MG+) ile fenoksazin yapılıboyalardan, meldola mavisi (MB) ve nil mavisinin (NB) papain (E.C. 3.4.22.2) aktivitesiüzerine etkisi araştırıldı. Ticari kristal papain (sp.akt. 25 U/mg) 50 mM 3-N-morfolinopropansülfonik asit-2 mM etilendiamin tetraasetik asit tamponunda (MOPS-EDTA,pH 8), 50 ÂµM ditiyotreitol (DTT) ile 25 0C' de 10 dk. preinkübe edilerek aktive edildi.Aktivite, MOPS-EDTA tamponunda, substrat olarak 1.6 mM NÎ± -benzoil-D,L-arg-p-nitroanilid (BAPNA) ile 410 nm'deki absorbans değişimi takip edilerek tayin edildi. Boyaetkisi 0-200 ÂµM aralığında incelendi. Her 3 boyanın yatışkın-durum enzim aktivitesine ılımlıtersinir etkisi olduğu bulundu. Dixon grafiklemesi (boya derişimine karşı 1/Î½i), Kideğerlerinin > 1 mM (MG+ için ), 427Â±55 ÂµM (MB için), 360Â±80 ÂµM (NB için) arasındaolduğunu gösterdi. Boyalarla uzun süreli inkübasyon, enzim inaktivasyonu ile sonuçlandı.MG+ , MB ve NB'nin neden olduğu inaktivasyonun enzim-boya kompleksi oluşumuüzerinden geliştiği görüldü. MG+- aracılı inaktivasyona ait parametreler, Ki = 104 Â± 17 ÂµM vetÂ½ = 34,7Â±6,9 dk. MB- ve NB- aracılı inaktivasyona ait parametreler ise, sırasıyla, 34Â±17 ÂµMve 6,2Â±1,7 dk ile 127Â±73 ÂµM ve 62Â±18 dk idi. MG+, MB ve NB tarafından gerçekleştirilenyatışkın-durum inhibisyonuna ve uzun-dönemde gelişen inaktivasyona ait Ki değerleriarasındaki fark, boyaların papain üzerinde birden fazla bağlanma bölgesi olduğunudüşündürdü. Bu çalışma sonuçlarının, boyaların biyolojik sistemler üzerine etkisini konu alantıbbi araştırmalarda yararlı olacağı düşünülmektedir.Anahtar Kelimeler: Triarilmetan boyalar, fenoksazin boyalar, malakit yeşili, meldola mavisi,nil mavisi, sistein proteazlar, papain, enzim inhibisyonu.Destekleyen Kurumlar: H.Ü. Bilimsel Araştırmalar Birimi (06T03102004)TÜB TAK (TBAG-2124)

Abstract:
ABSTRACTYazıcı Gökbulut, Z. Interactions of malachite green and meldola?s blue with papain.Hacettepe University Institute of Health Sciences, Ph.D. Thesis in Biochemistry, Ankara,2006. The aim of this study was to investigate the effects of a triarylmethane (TAM) dye(malachite green, MG+) and phenoxazine dyes (meldola?s blue, MB; nile blue, NB) on theactivity of papain (E.C. 3.4.22.2). Commercial crystalline papain (sp. act. 25 U/mg) wasactivated by preincubation with 50 ÂµM dithiothreitol (DTT) in 50 mM 3-N-morpholinopropanesulfonic acid-2 mM ethylenediamine tetraacetic acid (MOPS-EDTA, pH8) for 10 minutes at 25 0C. Activity was determined in MOPS-EDTA buffer, with 1.6 mM, NÎ±-benzoyl-D,L-arg-p-nitroanilide (BAPNA) as substrate and 0-200 ÂµM dye, by monitoring thechange in A410. All three dyes were found to have a modest effect on steady-state enzymaticactivity. Dixon plots of 1/Î½i versus [dye] yielded Ki values which ranged between > 1 mM (forMG+), 427Â±55 ÂµM (for MB), 360Â±80 ÂµM (for NB). Prolonged incubation with the dyesresulted in enzyme inactivation. The inactivation by MG+, MB and NB appeared to involvethe formation of an enzyme-dye complex. The parameters relating to MG+- mediatedinactivation were Ki = 104 Â± 17 ÂµM and tÂ½ = 34,7Â±6,9 min. The corresponding parameters forMB- and NB-mediated inactivation were 34Â±17 ÂµM and 6,2Â±1,7 min.; 127Â±73 ÂµM and 62Â±18min., respectively. The difference between the Ki values relating to steady-state inhibition andlong-term inactivation by MG+, MB and NB suggests that the dyes bind at more than one siteon papain. The result of this study should be useful for medical research on dye effects onbiological systems.Key words: Triarylmethane dyes, phenoxazine dyes, malachite green, meldola?s blue, nileblue, cysteine proteases, papain, enzyme inhibition.Supported by: H.U. Unit of Scientific Research (06T03102004)The Scientific and Technical Research Council of Turkey (TBAG-2124)