Levosimendan'ın NB2A hücre kültürü üzerine etkileri
Effects of levosimendan on the NB2A cell culture line
Yazar: TÜLÜN ÖZTÜRK
Danışman: PROF. DR. KAMİL VURAL
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Hücre canlılığı = Cell survival ; Hücre kültürü = Cell culture ; Hücreler = Cells ; Levosimendan = Levosimendan ; Nörotoksinler = Neurotoxins ; Toksisite testleri = Toxicity tests ; İn vitro = In vitro

Özet:
Amaç: Bu projenin amacı, levosimendan'ın (LVS) fare nöroblastoma kanser hücre dizininde (NB2a) nörotoksik etkilerinin olup olmadığının araştırılmasıdır. LVS' nın çeşitli  mekanizmalar aracılığı ile etki ettiği bilinmektedir.  Fosfodiesteraz III'ü inhibe ettiği ve  mitokondride K+ duyarlı ATP kanallarını açtığı, böylece kardiyoprotektif etkili olduğu iyi bilinmektedir. Levosimendan,  kalbin kasılma gücünü oksijen tüketimini artırmadan kuvvetlendirir ve  anti-oksidan, anti-inflammatuar, inotropik ve vazodilatatör özelliklere sahiptir. Levosimendan, kalp cerrahisi sırasında kalbin pompa gücü azalmış olgularda kullanımı tercih edilmektedir. Levosimendan'ın nöronları indirek olarak koruduğu gösterilmiştir, ancak direct neuronlar üzerine etkisi bilinmemektedir. Bu çalışmada, LVS'nın nörotoksik etkileri olup olmadığı fare kaynaklı Nöroblastoma (NB2a) dizin hücrelerinde araştırıldı. 
Gereç ve Yöntem: Bu amaçla LVS' nın (0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30 ve 100 µM)  toksik etkileri Nörotoksisite Tarama Testi (NTT) ile, apopitotik etkileri TUNEL yöntemi ile ve hücre canlılık testi MTT yöntemi ile incelendi.  
Bulgular: NTT testinde, Levosimendanın tüm konsantrasyonlarında (0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30 ve 100 µM)  ılımlı nörotoksik etkileri saptanmadı. İlaveten,  1 µM konsantrasyonda nörit inhibisyonu yapmadığı gibi nörit uzamasını anlamlı bir derecede artırdı. Hücre proliferasyonunu olumsuz yönde etkilemedi ve apopitotik hücre sayısı kontrol grubundan farklı değildi ( p>0.05). 
Sonuçlar: Levosimendanın direk nöroprotektif etkileri K+ açıcı kanallar üzerinden yaptığı olumlu etkiler, genetik transkripsiyon mekanizmalarını düzenleyerek gösterdiği hipotezleri ile açıklanabilir. Ayrıca fosfodiesteraz inhibisyonu, kalsiyum desensitizasyonu ile de nöronal koruyucu etkiye sahiptir.  
Levosimendan, kalp cerrahisi anında kalbin pompa gücü azalmış olgularda özellikle tercih edilir. Levosimendan,  hasatlığın doğasına bağlı olarak veya işlemin kendisinden kaynaklanan risklere bağlı olarak beyin hasarı riskine sahip hastalarda güvenle kullanılabilir.

Anahtar Sözcükler: Nörotoksisite, in vitro, levosimendan, NB2a, MTT

Abstract:
Aim: The aim of this project is to explore whether the levosimendan (LVS) has the neurotoxic effect on mouse neuroblastoma cancer cell lines (NB2a).  It's known that the LVS effects through various mechanisms.  It's also very well known that LVS inhibits Phosphodiesterase III and opens the ATP-sensitive K+ channels (KATP ), so it has the cardioprotective effect.  Levosimendan strengthen contractions of myocardium without increasing consumption of oxygen and it is anti-oxidant, anti-inflammatory, inotropic and vasodilatory. Levosimendan is preferred to use in patients who have decreased ejection fraction during cardiac surgery.  It is shown that LVS protects neurons indirectly, but it doesn't know the effect on neurons directly. 
In the present study, we examined whether Levosimendan has neurotoxic effects using neuroblastoma cell line of mouse origin (NB2a). 
Material and Method: For this aim, the toxic effects of  LVS (0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30 ve 100 µM) has been tested by Neurotoxicity Screening Test (NST) and apoptotic effects of LVS has been tested TUNEL method and MTT cell viability test. 
Results: There were no descript moderate neurotoxic effects in all concentrations ( 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30 ve 100 µM),  on NTT test. Additionally, LVS with 1 µM concentration didn't inhibit the neuritis and also it significantly increased the length of neuritis. Levosimendan didn't affect the cell proliferation negatively and the number of apoptotic cells didn't different than those control cells (p>0.05). 
Conclusion: These direct neuroprotective effects of LVS might be explained by the hypothesis that LVS effects positively on ATP-sensitive K+ channels and adjusts the mechanisms of genetic transcription. Additionally,  LVS  has neuronal protective effect by inhibiting Phosphodiesterase III and decreasing exaggerated Ca 2+ influx. 
Levosimendan is especially preferred in patients who have decreased ejection fraction during cardiac surgery. Levosimendan can use securely in patients that have a risk of a brain injury due to the nature of the disease or the procedure itself.

Keywords : Neurotoxicity, in vitro, levosimendan, NB2a, MTT