Brucella spp.'ye karşı kullanılan antibiyotiklerin etest kombinasyon metodu ile sinerjik, aditif ve antagonist etkilerinin araştırılması
Investigation of synergistic, additive and antagonist effect of antimicrobial combinations used for Brucella spp., with etest combination method
Yazar: HALİM KAYSADU
Danışman: DOÇ. DR. YUSUF YAKUPOĞULLARI
İnönü Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antagonistler = Antagonists ; Antibiyotikler = Antibiotics ; Antibiyotikler-kombine = Antibiotics-combined ; Brusella = Brucella ; Bruselloz = Brucellosis ; Rifampin = Rifampin

Özet:
Özellikle retiküloendotelial sistem hücreleri içinde yerleşerek süregen infeksiyonlara neden olan brusellalar, insanlar için önemli bir morbidite ve bazen de mortalite nedenidir. Klinikte brusellozis tedavisi için genellikle ikili veya üçlü antibiyotik kombinasyonu uygulanmakla birlikte bu kombinasyonların in vitro etkinlikleri hakkında yeterince bilgi mevcut değildir. 
Bu çalışmada, Brucella spp. türlerine karşı kullanılan antibiyotik kombinasyonlarının in vitro etkinliklerinin araştırılması amaçlanmıştır.    
Çalışmamıza 2010-2012 yılları arasında İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi Turgut Özal Tıp Merkezi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarında kan kültürlerinden izole edilen 40 Brucella spp. suşu alındı. Bu suşlara karşı doksisiklin, rifampin, ko-trimoksazol, streptomisin ve siprofloksasin olmak üzere toplam 5 farklı antibiyotiğin etkinliği Etest ile çalışıldı. Bu antibiyotiklerden klinik uygulamada en sık kullanılmakta olan doksisiklin-rifampin; rifampin-kotrimoksazol; doksisiklin-streptomisin; siprofloksasin-kotrimoksazol ve siprofloksasin-streptomisin olmak üzere toplam 5 farklı kombinasyonun in vitro aktivitesi Etest kombinasyon yöntemi ile araştırıldı. Elde edilen sonuçlar fraksiyone inibitör konsantrasyon İndeksi (FIC) kullanılarak değerlendirildi ve sinerjistik, aditif ve antagonist etkileri hesaplandı.
Çalışmamıza alınan 40 izolata karşı MIK düzeyi en düşük antibiyotik kotrimoksazol (0.016 ?g/ml) olarak bulunurken, MIK düzeyi en yüksek antibiyotik rifampin (1.5 ?g/ml) olarak saptandı. MIK50 ve MIK90 değerleri dikkate alındığında suşlara karşı çalışılan antibiyotiklerden en etkin bulunandan en az etkin olana doğru sıralama şöyle bulundu: Ko-trimoksazol 0.032 ?g/ml ve 0.064 ?g/ml; doksisiklin 0.064 ?g/ml ve 0.094?g/ml; siprofloksasin 0.094 ?g/ml ve 0.75 ?g/ml; streptomisin 0.25 ?g/ml ve 0.50 ?g/ml; ve rifampin 0.50 ?g/ml ve 0.75 ?g/ml. Doksisiklin-rifampin kombinasyonu çalışılan tüm suşlarda (%100) sinerjistik etki gösterirken, rifampin-kotrimoksazol kombinasyonu iki suşta antagonist (%5) etki gösterdi. Siprofloksasin-streptomisin ve rifampin-kotrimoksazol kombinasyonlarının suşlara karşı sinerjistik etki oranları sırasıyla %57.5 ve %52.5 olarak saptandı. Doksisiklin-streptomisin ve siprofloksasin-kotrimoksazol kombinasyonlarının sinerjistik etki oranları ise sırasıyla %32.5 ve %25 olarak saptandı.  
Çalışmamızda in vitro en etkin antibiyotik olarak kotrimoksazol saptanmışken en yüksek MİK düzeyleri rifampinde görülmüştür. Ancak, kotrimoksazolün diğer antibiyotiklerle olan kombinasyonlarında sinerjistik etkisi düşük olarak saptanmış, aksine, rifampinin doksisiklin kombinasyonu ise tüm suşlara karşı sinerjistik etki göstermiştir. Bu bağlamda brusella türlerine karşı antimikrobiyal duyarlılık testlerinde tekli antibiyotik duyarlılığının yanında kombinasyon aktivitelerinin in vitro saptanması faydalı olabilir.

Abstract:
The genus Brucella causing chronic infections via involving the reticuloendothelial system cells is a significant morbidity and sometimes mortality reason for human. In routine clinical practice, antimicrobial combinations consisting two or three antibiotics are used, however, there is less data about the in vitro activity of these combinations.
In this study, in vitro activity of antimicrobial combiantions those are used against to Brucella spp. was aimed.     
A total 40 Brucella spp. strains were included in this study, which were isolated from blood cultures in Medical Microbiology Laboratory of Inonu University Tugut Ozal Medical Center between 2010 and 2012. In vitro activities of five antibiotics such as doxycycline, rifampin, cotrimoxazole, streptomycine and ciprofloxacin were studied with Etest strips. From these drugs, in vitro activities of five commonly-used combinations including doxycycline-rifampin, rifampin-cotrimoxazole, doxycycline-streptomycine, ciprofloxacin-cotrimoxazole and ciprofloxacin-streptomycine were investigated with Etest combination method. The obtained data was evaluated with FIC index, and synergistic, additive and antagonsit effects of these drugs were calculated.    
While the lowest MIC of the drug against to studied strains was detected as cotrimoxazole (as, 0.016 ?g/ml), the highest MIC of the drug was detected as rifampin (as, 1.5 ?g/ml). Regarding the MIC50 and MIC90 values, the most effective and less effective rank of the antibiotics was listed as fellows: cotrimoxazole 0.032 ?g/ml and 0.064 ?g/ml; doxycycline 0.064 ?g/ml and 0.094?g/ml; ciprofloxacin 0.094 ?g/ml and 0.75 ?g/ml; streptomycine 0.25 ?g/ml and 0.50 ?g/ml; and rifampin 0.50 ?g/ml and 0.75 ?g/ml. The combination of doxycycline-rifampin showed synergistic activity to all studied strains (%100), and the combination of rifampin-cotrimoxazole exhibited antagonist activity for two strains (5%). The ratio of synergistic activities of ciprofloxacin-streptomycine and rifampin-cotrimoxazole combinations were found as 57.5% and 52.5%, orderly.   
In this study, cotrimoxazole was found as the most active antibiotic, but rifampin was associated with the highest MIC levels. However, lower ratios of synergistic activity was observed with the combiantions of cotrimoxazole. In contrast, rifampin showed excellent synergistic activity to all studied strains, particularly in the combination of doxycycline. In this contex, in addition the antimicrobial susceptibility test performed for each antibiotic, it will be benefit to measure in vitro activity of the combinations against to brucella.