Oksidatif strese maruz kalan mezenkimal kök hücreler üzerine mirisetinin etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects myricetin on mesenchymal stem cells exposed to oxidative stress
Yazar: MEHMET BERKER
Danışman: DOÇ. DR. SİBEL KÖKTÜRK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kaspazlar = Caspases ; Kök hücreler = Stem cells ; Mirisetin = Myricetin ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha

Özet:
Mezenkimal kök hücrelerin (MKH), hem preklinik hem de klinik terapilerde kullanımı gittikçe artmaktadır. Nakledilen MKH'lerin sağkalımını arttırmaya yönelik yeni stratejilerin geliştirilmesi, kök hücre tabanlı tedavilerin terapötik potansiyeli açısından önemlidir. Mirisetin antioksidan, antiinflamatuvar ve antiapoptotik özellikleri olan bir flavonoiddir. MKH kültüründe hidrojen peroksit(H2O2) oksidatif stres modeli üzerinde, immünohistokimyasal ve elektron mikroskobik olarak mirisetinin etkilerini değerlendirmeyi amaçladık.
Çalışmada; kontrol, H2O2, mirisetin ve H2O2+mirisetin olmak üzere 4 ayrı grup oluşturulmuştur. Her grup tripan mavisi ile hücre kültürü canlılık düzeyleri, kaspaz-3, TIM17 ve Tümör Nekroz Faktör-alfa (TNF-α antikorlarıyla immunositokimyasal ve elektron mikroskobi ile ultrastrüktürel düzeyde değerlendirildi.
Canlı ve ölü hücre sayıları bakımından kontrol grubu ile H2O2 grubu arasındaki fark anlamlı bulundu. Kontrol grubu ile H2O2 grubu arasında kaspaz-3 immunositokimya boyanma şiddeti bakımından aralarında anlamlı bir artış gözlendi. Kontrol grubu ile H2O2 grubu arasındaki TIM17 immunositokimya boyanma şiddeti anlamlı şekilde azalmışken, mirisetin ve H2O2+mirisetin gruplarında anlamlı şekilde artmıştı. TNF-α immunositokimya boyanma şiddeti bakımından kontrol grubu ile H2O2 grubu arasındaki fark anlamlı bulundu. 
Sonuç olarak; MKH'lere uygulanan H2O2 toksisitesi hasarına karşı mirisetinin etkilerine bakıldığında canlı hücre sayısında artış, kaspaz-3 ve TNF-α immünositokimya boyamalarında azalma, TIM17 immünositokimya boyamasında artış ve elektron mikroskobik değerlendrimede dejeneratif ve apoptotik hücre morfolojisinde azalma gözlendi. Mirisetin, MKH'ler üzerinde antiapoptotik ve anti-inflamatuvar etkileri sayesinde hücre canlılığı ve proliferasyonunu arttırması nedeniyle, destekleyici alternatif bir tedavi seçeneği olarak görülebilir.

Abstract:
Mesenchymal stem cells (MSC) have increasingly been used both in preclinical and clinical therapies. The development of new strategies to increase the survival of transplanted MSCs is important for the therapeutic potential of stem cell-based therapies. Myricetin is a flavonoid with antioxidant, anti-inflammatory and antiapoptotic properties. We aimed to evaluate the effects of myricetin on the hydrogen peroxide(H2O2) oxidative stress model in MSC culture, immunocytochemically and electron microscopically.
In the study; 4 different groups were formed as control, H2O2, myricetin and H2O2+myricetin. Cell culture viability levels of each group were evaluated with trypan blue, immunocytochemical with caspase-3, TIM17, and TNF-α antibodies, and ultrastructural level with electron microscopy.
The difference between the control group and the H2O2 group was significant in terms of live and dead cell counts. A significant increase was observed between the control group and the H2O2 group in terms of the intensity of caspase-3 immunocytochemistry staining. TIM17 immunocytochemistry staining intensity was significantly decreased between the control group and the H2O2 group, while it increased significantly in the myricetin and H2O2+myricetin groups. In terms of TNF-α immunocytochemistry staining intensity, the difference between the control group and the H2O2 group was significant.
As a result; considering the effects of myricetin against H2O2 toxicity damage applied to MSCs, an increase in viable cell count, decrease in caspase-3 and TNF-α immunocytochemistry staining, increase in TIM17 immunocytochemistry staining and decrease in degenerative and apoptotic cell morphology in electron microscopic evaluation were observed. Myricetin can be seen as a supportive alternative treatment option because it increases cell viability and proliferation thanks to its anti-apoptotic and anti-inflammatory effects on MSCs.