Subklinik mastitisli sığır sütlerinden izole edilen staphylococcus aureus izolatlarının virulens genleri ve koagulaz gen polimorfizmine göre moleküler tiplendirilmesi
Molecular typing of staphylococcus aureus isolated from subclinic bovine mastitic milk samples on the basis of virulence genes and goagulase gene polymorphism
Yazar: BESİME GÜNAYDIN
Danışman: Y.DOÇ.DR. ÖZKAN ASLANTAŞ
Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmada, subklinik mastitisli inek sütlerinden izole edilen Staphylococcusaureus izolatlarının toksin genleri ve koagülaz gen polimorfizmi yönündenkarekterizasyonunun yapılması amaçlandı.İncelenen 130 S. aureus izolatının 60 (% 46.2)'ı bir veya birden fazla toksin geniyönünden pozitif bulundu. Pozitif bulunan izolatların 18'inde seg - sei ve sec, 14'ünde sed- sej, 6'sında tst, 2'sinde sed - sej - seg - sei, 1'er izolatta ise sec - seg - sei ve sec - tstgenleri tespit edildi. sea, seb, see ve seh genleri yönünden ise tüm izolatlar negatifbulundu.S. aureus izolatlarının coa genine dayalı PZR analizinde 127 izolatta molekülerbüyüklükleri 730 - 970 bp arasında değişen tek band ve 3'ünde ise moleküler büyüklüğü810 + 1050 bp olan iki band tespit edildi. coa-PZR ürünlerine göre izolatlar 5 farklı tip (A,B, C, D, E) oluşturdu. coa pozitif PZR ürünlerinin AluI restriksiyon enzimi ile kesilmesisonucu toplam 9 farklı restriksiyon profili elde edildi. Tip B (B1 ve B2) ve Tip C (C1 veC2)'ye ait izolatlar iki, Tip D'ye ait izolatlar ise 3 alt tipe (D1, D2 ve D3) ayrıldı. Tip B(55 izolat) ve Tip E (42 izolat) en dominant tipler olarak belirlendi. Bu çalışmada, yaygıngenotiplere ait izolatların büyük kısmının toksin genleri yönünden pozitif olduğu tespitedilmesine rağmen, C, D1 ve D2 genotipine ait izolatlarda toksin genlerinin varlığıbelirlenemedi.Sonuç olarak, (i) Hatay ilinde subklinik inek mastitislerinin farklı S. aureusgenotipleri tarafından meydana getirildiği, ancak bir veya iki genotipin dominant olduğu,(ii) dominant genotiplerin enterotoksijenik olduğu, bu genotiplerin bir veya birden fazlaenterotoksin geni taşıdığı, (iii) S. aureus'un sığırlarda neden olduğu meme içiinfeksiyonların patogenezinin anlaşılması için farklı bölgelerden toplanan çok sayıda izolatile yapılacak daha kapsamlı çalışmaların yapılması gerektiği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
The aim of this study was to characterize Staphylococcus aureus isolates obtainedfrom subclinic bovine mastitic milk samples by coagulase gene polymorphism and toxingenes.Out of 130 S. aureus isolates, 60 isolates (46.2 %) were found positive for havingone or more toxin gene. Among positive isolates, it has been determined that 18 of theisolates containing seg - sei, 18 of the isolates containing sec, 14 of the isolates containingsed - sej, 6 of the isolates containing tst, 2 of the isolates containing sed - sej - seg - sei, 1of the isolates containing sec - seg - sei, and 1 of the isolates containing sec - tst genes. Nosea, seb, see and seh gene was detected among the isolates tested.PRC analysis of S. aureus isolates based on coa gene, a single band with amolecular weight of 730-970 bp was observed form 127 isolates, and two bands wereobserved in 3 isolates with molecular weight ranging from 810 + 1050 bp. Isolatesproduced 5 different type (A, B, C, D, E) according to coa-PRC products. Nine differentrestriction profile were obtained when coa positive PRC products were being cut with AluIrestriction enzymes. While Type B and Type C isolates were classified into two subgrups,as B1, B2, C1, C2; Type D isolates classified into three subgrups as D1, D2, D3,respectively. Type B (55 isolates) and Type E (42 isolates) were determined as the mostdominant types. In this research, although it was determined that most of the isolatesobtained from common genotypes were toxin gene positive, no toxin gene was determinedfrom isolates obtained from C, D1, and D2 genotypes.It was concluded that (i) subclinic cow mastitis caused by different S. aureusgenotypes in Hatay and only one or two of the genotypes were dominant, (ii) dominantgenotypes were enterotoxigenic and have one or more that one enterotoxin genes (iii) it issuggested that more comprehensive studies with more isolates obtained from differentregions to determine patogenicity of bovine mastitis caused by S. aureus need to beperformed.