Çeşitli hematopoietik dokularda mezankimal kök hücrelerin nicel olarak gösterilmesi
Quantitative examination of mesenchymal stem cells in various hematopoietic tissues
Yazar: HAKAN ERSOY
Danışman: PROF.DR. MERAL BEKSAÇ
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Fizyopatoloji = Physiopathology ; Hematoloji = Hematology
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Mezankimal Kök Hücrelerin önemi farklı doku veya hücreye dönüşebilme yeteneklerine sahip olmalarından kaynaklanmaktadır. MKH'leri tanımlayan bazı monoklonal antikorlar geliştirilmiş olmakla beraber, kök hücreden zengin örneklerde akım sitometrik ve immunhistokimyasal olarak yoğunluk ölçümleri henüz standardize edilmemiştir. Araştırmamızın amacı: MKH'i, immünohistokimyasal ve Akım Sitometrik olarak belirleyen en iyi antikorları saptayarak farklı kök hücre örneklerinde MKH yoğunluğunun saptanmasıdır.Göbek Kordon Kanı ( n:15 ), Uyarılmış Periferik Kan ( n:8 ), MKH Kültürü ( n:6 ), Erişkin Kemik İliği ( n:8 ), Pediatrik Kemik İliği ( n:2 ) ve Kordon Kesitleri ( n:13 ) İmmünohistokimyasal ve Akım Sitometrisi ile değerlendirilmiştir. Akım sitometrisi için hem pozitif hem de negatif antijen panelleri kullanılmıştır. Kullanılan MKH spesifik MoAb'ler: CD29, CD45, Stro-1, HLA-DR, CD73, CD34, CD90, CD105 ve CD44'dır. MKH olduğunu gösteren bulgular CD45 negatif, CD90, CD105, CD73, CD29 pozitif reaksiyon vermesidir. Çalışma sonucunda Akım sitometrisi ile elde edilen sonuçlarda en yüksek afinite CD105, CD29, CD90 ve CD105 olduğunu göstermiştir.Göbek Kordon Bağı kesitlerinin immünohistokimyasal çalışmasında Stro-1 ve CD44 antikorları kullanılmıştır. Subamniyotik alanda MKH varlığı gözlenmemiştir. Bu alanda mezodermal kaynaklı olan MKH'lerin gözlenmemesi normal karşılanmaktadır. Perivasküler alanda, kullanılan MKH spesifik Stro-1 ve CD44 antikoru yoğun bir şekilde gözlenmiştir. Aynı şekilde intervasküler alanda seyrek de olsa mezodermal kaynaklı olan MKH'ler gözlenmektedir.MKH incelenen örneklerde Kemik İliğinde en yüksek %0,69 sıklıkla saptanırken, bunu Uyarılmış Periferik Kan %0,085 ve en az MKH varlığı Göbek Kordon Kanında %0,025 oranda izlenmektedir. Çalışmaların sonucunda MKH kaynağı olarak en iyi materyal Kemik İliği olarak bulunmuştur.Anahtar Sözcükler: Mezankimal Kök Hücre, Akım Sitometrisi, Monoklonal Antikorlar, İmmünohistokimya

Abstract:
Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are important because of having the ability to differentiate different cell and tissue types. Although specific monoclonal antibodies defining MSCs have been developed, there are no standardized methods to measure the density of MSCs in samples by flow cytometry and immunohistochemical methods. The aim of this study is to determine the best antibody to be used in density measurement studies of MSCs found in samples by flow cytometry and immunohistochemical methods.Umbilical cord blood (n:15), stimulated peripheric blood (n:8), culture of MSC (n:6), adult bone marrow (n:8), pediatric bone marrow (n:2) and the section of umbilical cords (n:13) was evaluated by flow cytometry and immunohistochemical methods. In subamniotic area MSC availability was observed. The used MSC specific MoAb?s are: CD29, CD45, Stro-1, HLA-DR, CD73, CD34, CD90, CD105 and CD44. The findings that prove the MSC existence are negative reactions of CD45 and positive reactions of CD90, CD105, CD73, and CD29. After the study, the highest affinities in the flow cytometry were for CD105, CD29, CD90 and CD105. MSC specific Stro-1 and CD44 antibodies were observed in perivascular area densely.Stro-1 and CD44 antibodies were used in immunohistochemical study of umbilical cord blood samples. No MSC existence was observed in sub amniotic area. Not observing mesoderm sourced MSC is accepted as normal in this area. MSC specific Stro-1 and CD44 antibodies were observed in perivascular area densely. Similarly, mesoderm based MSCs were observed rarely in intervascular area.The maximum amount of MSCs in bone marrow was found in the rate of 0,69%, in stimulated peripheric blood was found in the rate of 0,085% and the lowest MSCs concentration was observed in Umbilical Cord Blood as 0,025%. As a result, bone marrow was found as the best MSC resource.Key Words: Mesencymal Stem Cell Flow Cytometry, Monoclonal Antibodies, Immunohistochemistry.