Tiopürin S-Metil Transferaz (TMBT) genotiplerinin belirlenmesi
Identification of Thiopurine S-Methyltransferase genotypes
Yazar: AHMET GENÇ
Danışman: DOÇ. DR. M.AKİF ÇÜRÜK
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Tiopürin S-Metil Transferaz (TPMT) aromatik ve heterosiklik sülfidril bileşiklerin S-metilasyonunu katalizleyen sitoplazmik bir enzimdir. TPMT enzim aktivitesi bir erişkinden diğerine önemli değişiklikler göstermektedir. Bu farklılık genetik olarak belirlenmektedir. Toplumun yaklaşık %89'u yüksek TPMT aktivitesine sahiptir. Geri kalan yaklaşık %11'i kısmi veya tümden TPMT eksikliği vardır. TPMT eksikliği olan bireyler 6-merkaptopürin veya azatiopürin gibi tiopürin grubu ilaçlara tölerans gösterememekte olup hematopoeitik toksisite veya bazen ölüme neden olmaktadır. Farklı popülasyonlarda yapılan birçok çalışmada TPMT enzim aktivitesi ve genotipi arasında >%98 ilişki olduğu gösterilmiştir. TPMT geninde 3 nokta mutasyonu düşük TPMT aktivitesinden sorumludur. Wild-tip allel TPMT*1 olarak adlandırılmakta ve yaygın mutant alleler TPMT*2 (G238C), TPMT*3A (G460A ve A719G), TPMT*3B (G460A) ve TPMT*3C'den (A719G) oluşmaktadır. Bu çalışmada, beyaz kan hücrelerinden DNA izole edildi. TPMT*2, TPMT*3B ve TPMT*3C nokta mutasyonları PCR'a dayalı ARMS ve RFLP ile analiz edildi. DNA dizi analizi G460A ve A719G mutasyonlarını doğrulamak için kullanıldı. Toplam 64 Pemfigus hastası analiz edildi ve iki farklı mutant TPMT alleli tanımlandı. Hastalardan biri TPMT*3A için heterozigot olup, tüm aile bireyleri TPMT*3A taraması yapıldı. Proband annesinden mutant alleli almış ve iki kızına kalıtım yoluyla aktarmıştır. Diğer hasta TPMT*2 için heterozigot olarak tanımlandı.

Abstract:
Thiopurine S-Methyltransferase is a cytoplasmic enzyme that catalyzes the S-methylation of aromatic and heterocyclic sulfhydryl compounds. TPMT enzyme activity varies considerably from one individual to another and this variation is genetically determined. About 89% of people have relatively high TPMT activity. The remaining ~11% have partial or complete TPMT deficiency. TPMT deficient individuals can not tolerate thiopurine drugs such as 6-mercaptopurine or azathioprine, resulting in haematopoeitic toxicity or sometimes death. Several studies among different populations have demonstrated a >98% concordance between TPMT enzyme activity and genotype. Three point mutations in the TPMT gene are responsible for low TPMT activity. The wild-type allele is named as TPMT*1 and the common mutant alleles include TPMT*2 (G238C), TPMT*3A (G460A and A719G), TPMT*3B (G460A) and TPMT*3C (A719G). In this study, DNA was isolated from white blood cell. TPMT*2, TPMT*3B and TPMT*3C point mutations were analyzed by PCR based ARMS and RFLP. DNA sequencing was used for verification of G460A and A719G mutations. A total of 64 Pemfigus patients were analyzed and two different mutant TPMT alleles was identifed. One of the patients was heterozygote for TPMT*3A and all the family members were screened for TPMT3A. The proband had the mutant allele from her mother and inherited it to her two daughters. The other patient was identified as heterozgotes for TPMT*2.