Otolog periferik kök hücre toplanmasında bakteri kontaminasyon riski ve aşamasının saptanması
Bacterial contamination risk in autologous stem cell collection and to determine of this phase
Yazar: AHMET YILMAZ
Danışman: DOÇ. DR. MUTLU ARAT
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Hematoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Hematoloji = Hematology ; Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Periferik kan kök hücreleri (PKKH), otolog kök hücre naklinde kullanılan en büyük kök hücre kaynağıdır. Toplanan PKKH'de bakteriyal kontaminasyon nadir olarak meydana gelen büyük bir problemdir. Otolog periferik kök hücre toplama işleminde infüzyona kadar birçok aşamada bakteriyal kontaminasyon meydana gelmektedir. Bakteriyal kontaminasyon hakkında yayınlanmış birkaç çalışma vardır fakat bunların mortalite ve morbidite üzerine olan etkileri nadiren bildirilmiştir. Biz tek merkezli prospektif kontrolsüz çalışmamızda tüm OPKH toplanması aşamalarında bakteriyal kontaminasyonun kaynağını ve bunun klinikle olan ilişkisini araştırmayı amaçladık.Merkezimiz her yıl 100 den fazla lökoferez işlemi ve kök hücre transplantasyonu yapmaktadır. Bu çalışmada otolog periferik kök hücre transplantasyonu için karar alınmış, yaş ortalaması 52 (25?68) olan myeloma ve lenfoma tanısına yönelik tedavi gören 18 hastanın 30 lökoferez işlemi bakteriyal kontaminasyon açısından değerlendirildi. Aseptik koşullar altında lökoferez öncesi ve sonrası perifer veya kateter yolundan, toplanan PKKH ürününden, saklama torbalarından kriyoprezervasyon (dondurma) öncesi ve infüzyon aşamasında ürünün çözülmesinden sonra BD BACTEC Ped/Plus Aerop ve Anaerop kan kültür şişelerine 1'er ml örnek alındı. Bakteriyal incelemeler BACTEC 9050 kan kültür sisteminde inkübe edildi. Pozitif üreme saptanan kan kültür şişelerindeki mikroorganizmalar konvansiyonel identifikasyon yöntemleri ve Gram Pozitif Crystal ID Kit (BBL) ile tanımlandı.Çalışmamız sonucunda 10 hastanın 12 lökoferez işleminde mikroorganizmalar tespit edildi. Tespit edilen MO %77,7 gram pozitif kok ve %22,3 oranında gram negatif basiller oluşturmaktadır. Gram (+) mikroorganizmaların %85,7' si S.epidermidis ve %14,3 S.haemolyticus iken gram (-) basillerin tamamı P.aeruginosa olarak saptandı. Bakteriyal kontaminasyonun meydana geldiği esas aşama lökoferez aşamasında, kriyo solüsyonunun hazırlanması esnasında ve ürünün çözülmesi aşamasında meydana gelmektedir. İlk aşamalarda üreyen MO'ların çoğu ürünün çözülmesinden sonra tespit edilmedi. Sadece 30 lökoferez işleminin 4 `nde infüze edilen PKKH ürününde MO saptandı. Bu ürünlerin infüzyonundan sonra transplantasyonla ilişkili hiçbir komplikasyon gözlenmediOPKH toplanması ve transplantasyon süreci bakteriyal kontaminasyonun meydana gelebileceği birçok aşamayı kapsamaktadır. Lökoferez aşamasında kontaminasyon riski beklenenden daha yüksekti ve çoğunluğunu gram (+) MO oluşturmaktaydı. Kriyoprezervasyondan sonra infüzyonların sadece birkaçında aynı MO sebep olduğu klinik enfeksiyon ataklarının gelişmediği bakteriyal kontaminasyon tespit edildi.Anahtar Sözcükler: bakteriyal kontaminasyon, lökoferez, otolog periferik kökhücre nakli, kateter ilişkili bakteriyemi, kalite kontrol.

Abstract:
Peripheral blood stem cells (PBSC) are the major stem cell source for autologous stem cell transplantation. Bacterial contamination (BC) of the collected PBSC is a major problem, which is seldomly reported. The multi-stage processing of autoPBSC till infusion incapacitates hazards for BC. There are several published reports about BC but its impact on mortality and morbidity is seldomly shared. In our single center prospective non-controlled study we aimed to determine the source of contamination at all possible stages and its clinical relevanceOur center is performing more than 100 leukopheresis and SCT per year. Candidates for autoPBSC transplantation are consecutively entered into this study. We analyzed 30 completed leukopheresis procedures on 18 patients, whose median age was 52 y (range, 25-68) with diagnoses of lymphoma and myeloma. One ml. samples were collected into the BD Bactec Ped/Plus Aerobic&Anaerobic blood culture bottles at the following stages in aspetic conditions: before and after leukopheresis from peripheral vein or from both catheter arms, in collected PBSC, just before cryopreservation from the cryobags, just after thawing at the time of infusion. Bacteriological examination was performed by BACTEC 9050 blood culture system. Growing microorganisms (MO) were identified using conventional methods and gram (+) crystal ID KitWe identified MO in 12 PBSC procedures of 10 patients. The majority was gram (+) cocci (%77.7) as expected and gram (-) bacilli (%22.3). Gram (+) MO were Staphylococcus epidermidis (%85.7), Staphylococcus heamolyticus (%14.3) and all of the gram (-) bacilli isolated were Pseudomonas aeruginosa. The stages of bacterial growth are depicted in table 1. The major stage for contamination was leukopheresis procedure, followed by preparation of cryosolution and thawing. The majority of the MO grown at the primary stages were not identified after thawing. Only in 4/30 procedures we identified MO in infused PBSC. They did not develop any relevant infectious complications during peritransplant periodCollection of autoPBSC and transplantation are multistage consecutive procedures, which are prone to bacterial contamination. The contamination risk during leukopheresis was higher than expected and gram (+) MO in the majority. After cryopreservation only in a minority of infusions we detected bacterial contamination which did not develop significant clinical infectious episodes of the same MO.Key Words: Bacterial contamination, leukopheresis, autologous stem cell collection, catheter-related bacterimia, quality control.