Glike lipoproteinlerin trombosit apoptozu ve diğer fonksiyonlarına etkileri
Native HDL and melatonin protect platelets from glycated-HDL and glycated-LDL induced apoptosis and activation triggering signals
Yazar: AYDAN DAĞTEKİN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. DERYA ÖZSAVCI
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Glikozilasyon = Glycosylation ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Melatonin = Melatonin

Özet:
Modifiye olmuş LDL, özellikle glike olmuş LDL aterogenezde önemli bir faktördür. Biz bu çalışmada glike LDL ve HDL'nin trombosit apoptozu, aktivasyonu, NO üretimi, oksidatif modifikasyonlara etkisi ve antioksidanların ve doğal HDL'nin inhibe edici etkilerini araştırdık. Kandan LDL ve HDL saflaştırıldı, her iki lipoprotein glike edildi, glike lipoproteinler trombositlerle muamele edilerek trombosit apoptoz markerleri kaspaz 3, kazpaz 9 ve NO üretimi kolorimetrik olarak ELISA okuyucusunda; annexin-V seviyeleri ve trombosit aktivasyonu (P-selektin) flov sitometre ile belirlendi. Oksidatif modifikasyonlar ise spektrofotometrik olarak değerlendirildi.Bulgularımızda G-LDL ve G-HDL ile inkübasyondan sonra trombosit P-selektin, Annexin-V ekspresyonları, kaspaz 3 aktivitesi, kaspaz 9 aktivitesi, propidyum iyodür pozitifliği, MDA ve protein oksidasyon seviyeleri anlamlı düzeyde arttı (p<0.01), bununla birlikte nitrit seviyeleri (p<0.01) anlamlı düzeyde azaldı. Melatonin ve doğal HDL ile preinkübasyon sonrası artan P-selektin, Annexin-V, propidyum iyodür pozitifliği, kaspaz 3, kaspaz 9 ve MDA düzeyleri anlamlı derecede azaldı (p<0.01), fakat nitrit seviyeleri anlamlı düzeyde arttı.Bu gözlemler, trombositlerde glike lipoproteinlerle indüklenmiş artmış apoptoz ve aktivasyon prosesi gibi anomalilerin diabetes mellituslu hastalardaki trombotik riski artırabileceğini ve ateroskleroz gelişiminde önemli bir rol oynayabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Modified LDL, especially glycated LDL, is a crucial factor in human atherogenesis. İn this study, we investigated the effects of glycated-LDL and glycated-HDL on platelet apoptosis, activation, lipid peroxidation and also to investigate the inhibiting effects of antioxidants and native HDL.LDL and HDL was isolated from plasma. Isolated LDL and HDL were glycated by glucose. Glycated lipoproteins were incubated with washed platelets. Annexin V binding, P-selectin expression were determined by flow cytometry and platelet caspase 3, caspase 9 activity and nitrite were determined with ELISA reader. Oxidative modifications were determined spectrophotometrically.After incubation with G-LDL and G-HDL, platelet P-selectin, annexin-V expressions, caspase 3, caspase 9, propidium iodide positivity, MDA and protein oxidation levels were significantly increased (p<0.01) respectively whereas nitrite levels were significantly decreased (p<0.01). After pre-incubation of melatonin and native HDL, elevated levels of P-selectin, annexin-V, propidium iodide positivity, caspase 3, caspase 9 activity and MDA significantly decreased (p<0.01) but nitrite levels significantly increased.These observations suggest that abnormalities like increased apoptosis and activation process induced by glycated lipoproteins in platelets may elevate thrombotic risk and may play an important role in the development of atherosclerosis in patients with diabetes mellitus.