Hiperhomosisteineminin, endotelyal protein C reseptörü (EPCR) üzerine etkisi
Effect of hyperhomocysteinemia on endothelial protein C receptor (EPCR)
Yazar: GÜLİZAR AYDOĞDU
Danışman: PROF. DR. EMİNE SÜMER ARAS ; DOÇ. DR. ERKAN YILMAZ
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Poliklonal antikor = Polyclonal antibody

Özet:
Hiperhomosisteinemi; felç, periferal damar hastalıkları, iskemik kalp hastalıkları gibi kardiyovasküler  hastalıklar için bağımsız bir risk faktörüdür. Birçok çalışmada hiperhomosisteinemin endoplazmik retikulum stresini indüklendiği gösterilmiştir. Endotelyal protein C reseptörü gerek pıhtılaşma mekanizmasındaki rolü gerekse inflamatuar durumlardan organizmayı koruyan özelliği gereği çok önemli bir faktördür. Bu çalışmada endotelyal protein C reseptörünün hiperhomosisteinemi durumundaki artan ER stresin yarattığı olası zararlı etkilerden hücreyi koruyucu bir role sahip olup olmadığını araştırmak amaçlanmıştır. İnsan göbek kordonu endotel hücrelerinin (HUVEC) EPCR kodlayan vektör ile transfeksiyonu sonucu EPCR ifadesinin arttırıldığı bir hücre modeli oluşturulmuştur. Ayrıca HUVEC?lerde RNA interferans yöntemi kullanılarak EPCR?nin ifadesinin engellendiği başka bir hücre modeli oluşturulmuştur. Bu hücre modellerine farklı zaman aralıklarında ve farklı dozlarda LPS ve homosistein muamele edilip EPCR?nin ve endoplazmik retikulum stres belirteçlerinin protein seviyelerindeki değişim incelenmiştir. Ayrıca western blot deneylerinde kullanılan EPCR poliklonal antikoru tarafımızca laboratuvarımızda üretilip saflaştırılmıştır. Elde ettiğimiz verilere göre normal HUVEC?lerde homosistein muamelesi sonucunda EPCR seviyesinde ve ER stres belirteçlerinde doza bağlı bir artış gözlemlenmiştir. EPCR ifadesinin arttırıldığı hücre modelinde ise homosistein muamelesi sonucunda normal hücrelere kıyasla ER stres belirteçlerinden GRP78 oldukça yüksek iken XBP1 seviyesinde artış olmadığı tespit edilmiştir. Sonuç olarak EPCR ekspresyonunun homosisteinden etkilendiği ve artan EPCR seviyesinin hücredeki stresi azaltarak hücreyi homosisteinin zararlı etkilerinden koruduğu gözlemlenmiştir. Bu durum EPCR ile vasküler hastalıklar için bir risk faktörü olduğu düşünülen hiperhomosisteinemi arasında ilişki kurmaktadır. Böylece EPCR'nin, hiperhomosisteinemi durumda gözlenen koruyucu etkisinin endoplazmik retikulum stresini azaltarak ortaya çıkmış olabileceği sonucuna varmak mümkündür

Abstract:
Hyperhomocysteinemia is an independent risk factor for cardiovascular diseases such as paralysis, peripheral vascular diseases and ischemic heart diseases. In many studies, it has been shown that hyperhomocysteinemia induces endoplasmic reticulum stress. Endothelial Protein C Receptor is an important protein which has a role in clotting mechanism and protective character against to inflammatory cases. This study aims to investigate whether Endothelial Protein C Receptor has a role to protecting the cell from possible harmful effects caused by growing endoplasmic reticulum stress in hyperhomocysteinemia cases or not. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were transfected with EPCR coding plasmid thus over expression EPCR cell model was created. Additionally another cell model was created İn this cell model EPCR was blocked by RNA interference. All cell models were exposed homocysteine with different concentration and intervals. At the end of the experiment, the change in the levels of stress indicators of endoplasmic reticulum and EPRC levels were examined. Additionally, for western blotting, EPCR polyclonal antibody was produced and purified in our laboratory. According to the data, HUVEC cells have showed a dose dependent increase in both EPCR and endoplasmic reticulum stress indicators' levels after treatment with homocystein (hcy). We observed an increase in the levels of ER Stress indicator GRP78 in the homocystein treated EPCR overexpressed cells but XBP1 levels didn?t change. As a result, expression level of EPCR is affected by homocystein exposure and the increased levels of EPCR expression can protect the cells against harmful effects of homocystein by decreasing the ER stress. This observation revealed a link between EPCR activity and hyperhomocysteinemia which is a possible risk factor for vascular diseases. So it is possible to have a conclusion that the protective effect of EPCR on hyperhomocysteinemia maybe related with its ability to lower the ER stress levels.