Okült HBV enfeksiyon varlığının HBSAG negatif farklı paternlerde real-time PCR yöntemiyle saptanması
The detection of occult HBV ınfection in patients with HBSAG negative pattern by real-time PCR method
Yazar: SENA İZMİRLİ
Danışman: PROF. DR. BEKİR KOCAZEYBEK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Hepatit B = Hepatitis B ; Hepatit B virüsü = Hepatitis B virus ; Hepatit B yüzey antijenleri = Hepatitis B surface antigens ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Virüsler = Viruses

Özet:
Hepatit B virus (HBV) enfeksiyonlarının tanısında sıklıkla kullanılan serolojik testlerde bazen tanısal sorunlar yaşanmakta ve HBsAg testi negatifleşen bazı hastaların plazma ve karaciğer dokusunda HBV varlığı devam edebilmektedir. Bu durum hepatit B serolojisi yönünden seronegatif (tüm hepatit belirteçleri negatif) ve seropozitif (Anti HBc +/- ve Anti HBs +) olarak iki paternde Okült (gizli) HBV enfeksiyonu olarak tanımlanmakta ve bu durum aynı zamanda izole Anti-HBc olgularında da görülmektedir. Bu klinik tabloya sahip kişilerin HBV bulaştırıcılığı yönünden toplumda potansiyel risk oluşturmaları nedeniyle tespit edilmeleri çok önemlidir.Bu çalışmada; dört farklı grupta [1) 20 HBV; izole Anti-HBc, 2) 23 HBV;doğal bağışık, 3) 20 HBV; seronegatif, ALT miktarı yüksek, 4) 23 HBV;aşılı kişi] HBV-DNA varlığının belirlenmesiyle, gizli (okült) HBV enfeksiyon oranlarının saptanması amaçlanmıştır. HBsAg negatif, ancak farklı serolojik paternlerdeki bu olgulardan HBV-DNA çalışılmak üzere plazma örnekleri alınmıştır. Bu örneklerde, okült HBV enfeksiyon varlığını araştırmak üzere analitik duyarlılığı yüksek (?3,8 IU/ml) Real-Time PCR kitleri kullanılmış ve kullanılan moleküler yöntemin güvenirliği internal ve eksternal kontroller ile pozitif kontrollerin kantitasyon standartlarının artışı ile sağlanmıştır. Araştırmaya aldığımız dört farklı gruba ait 86 kişide HBV-DNA pozitifliği saptanamamıştır.Sonuç olarak; farklı dört grupta okült HBV enfeksiyon varlığını destekleyecek bir sonuç bu çalışmadan elde edememiş olsak da bu olgularla yapılan geniş serili ve analitik duyarlılığı yüksek moleküler yöntemlerin kullanıldığı uluslar arası ve bazı ulusal çalışmalarda değişik oranlarda okült HBV enfeksiyon varlığının saptanabildiği görülmektedir. Her ne kadar çalışmalarda okült HBV enfeksiyonunun saptandığı bildirilse de ve bizim çalışmamızda okült HBV enfeksiyonunu saptayabilecek performansta moleküler yöntem kullanmış olsak da okült HBV enfeksiyon varlığını saptayamamızın araştırmaya alınan olguların azlığı ile ilişkili olabileceğini düşünmekteyiz. Bundan dolayı, bu konu ile ilgili yeni, geniş serili çalışmaların yapılmasının yararlı olabileceği kanaatindeyiz. Bu sonuçlarla birlikte kan transfüzyonuyla HBV bulaşının engellenmesine dönük analitik duyarlılığı yüksek nükleik asit teknolojisinin (NAT) kan bankalarında kullanılmasının hem maliyet hem tanısal yarar açısından tartışmalı olduğu varsayılsa da özellikle organ transplantasyonu gibi özel klinik önemi olan girişimler öncesi organ vericilerinde okült HBV enfeksiyonunun araştırılmasının yararlı olabileceği kanısındayız.

Abstract:
Diagnostic problems may be encountered in Hepatit B virus (HBV) infections by serological tests and HBV DNA can be detectable in plasma and liver tissue while HbsAg test is negative. This situation can be defined as occult or isolated Anti-HBc HBV infections. Occult HBV infections may be divided two categories by using hepatitis markes. One of them is that being of all hepatit markers are negative and the other situation is having Anti HBc +/- and Anti HBs + patterns. The detection of individuals who have this patterns is very important because of these people pose a potential risk for transmission of HBV in society.In this study, we aimed to detect the ratio of occult HBV infections by investigating HBV DNA in four different groups. These groups are;1) 20 isolated Anti-HBc positive individuals 2) 23 naturally immune individuals to HBV infection, 3) 20 individiuls with seronegative hepatites markers and ALT levels are high 4) 23 vaccinated individuals to HBV. Plasma samples were collected from the individuals with seronegative HBsAg in order to study HBV DNA. Real-Time PCR kit with high analytical sensitivity (?3,8 IU/ml) was used in these plasma samples to investigate the presence of occult HBV infections. The reliability of the molecular methods was applied by increasing quantitation standards of internal and external and also positive controls. No HBV DNA was detected in any of the 86 individuals consisting of four study groups.In conclusion, although, we did not detect any occult HBV infection in any of four study groups but occult HBV infections with various frequencies were detected in other large, serial international and some national studies which the molecular methos with high analytical sensitivity were used for similiar study groups. Although, we used high standart molecular kit to detect occult HBV infections, we suggest that the reason of no detection of occult HBV infections may be due to the small number of cases included in this study. Therefore, we are thinking new, large serial studies related with this topic will be usefull. Hovewer, It was assumed that the use of nucleic asid technology (NAT) with high analytical sensitivity in blood banks to prevent HBV transmission by blood transfusion is controversial for both costs and diagnostic efficacy, we suggest that to detect occult HBV infections in organ donors may be usefull before special invasive clinically important procedures as organ transplantation.