Preeklamptik gebelerin maternal plazmalarında dolaşan mikroRNA'ların kantitatif analizi
Quantitative analysis of circulating microRNAs in maternal plasma of preeclamptic pregnants
Yazar: DİDEM ALTINDİREK
Danışman: DOÇ. DR. TUBA GÜNEL
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Genetik = Genetics ; Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Preeklampsi (PE), dünyadaki gebeliklerin %2-8'ini etkileyen, maternal ve fetal mortalite ve morbiditeye yol açan ciddi bir gebelik dönemi hastalığıdır. Doğumun indüklenmesi tek çözüm yoludur. Obstetrikteki en önemli hedeflerden biri, PE riski artmış olan hastaları tanımlayabilmektir.  Günümüzde, hastalığın teşhisi için serumda belirli protein belirteçleri kullanılmaktadır fakat bunlar etkili ayrım gücünden yoksundur.
MikroRNA'lar insan genomundaki ekspresyonun yaklaşık %30'unu regüle etmekte ve tüm temel hücresel süreçlerde yer almaktadır. Maternal plazmada dolaşımda bulunan miRNA ve RNA'lar (cell-free miRNA, cell-free RNA) geçtiğimiz on yıllarda tanımlanmış ve bu moleküllerin hücre sıvısında RNazlardan kaçarak stabilitesini koruduğu gösterilmiştir. Bu serbest moleküller plasentanın trofoblastlarından kökenlenir ve maternal dolaşıma katılırlar. Gebeliklerde potansiyel non-invaziv biyobelirteçler olarak değerlendirilmektedirler.
Grubumuzun PE hastalarında yaptığı mikrodizin çalışmasında, hsa-mir-1183 anlatımı değişiklik gösteren miRNA'lar içinde yer almıştır. Bu çalışmada, PE hastaları ve sağlıklı gebelerde maternal plazmada bulunan hsa-mir-1183 ekspresyonunun incelenmesi, bu molekülün aday hedef genlerinin in silico araçlar ile belirlenerek ekspresyonlarının araştırılması amaçlanmıştır. Hsa-mir-1183 ve aday hedef genlerin ekspresyonu 31'i PE 25'i sağlıklı gebe olmak üzere toplam 56 gönüllü gebenin plazma örneğinde RT-qPZR metoduyla incelenmiştir. Sentetik cel-mir-39 molekülü normalizasyon için kullanılmıştır. Hsa-mir-1183 ekspresyonu, PE hastalarında sağlıklı gebelere kıyasla anlamlı derecede artmıştır (p=0.0068). Aday hedef genler olarak seçilen XRN2 ve CHURC1'in ekspresyon profilleri incelenmiş; XRN2 ekspresyonunun anlamlı bir değişiklik göstermediği fakat CHURC1'in PE hastalarında sağlıklı gebelere kıyasla anlamlı derecede azalmış ekspresyonu gösterilmiştir (p<0.0001). hsa-mir-1183 ve CHURC1 arasındaki ters korelasyon ilişkisi, bu mikroRNA'nın CHURC1 gen ifadesini regüle ettiği fikrini doğurmuştur. 
Bu çalışma ile ilk kez, maternal plazmada serbest halde bulunan CHURC1'in preeklampsi hastalığının patogenezinde görev aldığı ve hsa-mir-1183'ün CHURC1 üzerinden fonksiyon göstererek hastalığın patogenezinde rol oynayabileceği gösterilmiştir. İleriki çalışmalarda, bu miRNA-mRNA etkileşimini fonksiyonel çalışmalarla doğrulanması ve daha geniş hasta kohortlarında bu biyobelirteçlerin test edilmesi gerekmektedir.

Abstract:
Preeclampsia (PE) is a serious pregnancy disorder affects 2-8% pregnancies worldwide and leads to maternal and fetal mortality and morbidity. The only solution is the termination of the pregnancy. Identification of patients with an increased risk for PE is one of the most important goals in obstetrics. Currently, testing for this disorder includes protein markers in serum but they are lack of sufficient discrimination. 
MicroRNAs regulate the expression of nearly 30% of all the human genes and participate in all fundamental cell processes. Circulating RNA and microRNAs (cff-RNA, cff-miRNA) were reported in recent decades in maternal plasma of pregnant women and they could be stabilized through its protection from degradation in plasma. They are originated from trophoblasts of placenta and released into maternal circulation. They are considered as potential noninvasive biomarkers in pregnancies. 
According to our previous microarray study;  hsa-mir-1183 was in some of differentially expressed microRNAs in preeclamptic pregnancies. This project's aim is to identify expression profile of hsa-mir-1183 and investigate its candidate target genes by in silico target identification tools and profiled these target genes expressions in maternal plasma. We measured expression levels of hsa-mir-1183 and its candidate target genes in 56 samples collected from 31 PE and 25 normal-term cases by RT-qPCR. Spike-in cel-mir-39 was used for normalization. The relative expression of hsa-mir-1183 was significantly increased in patients compare to healthy pregnancies (p=0.0068). Expression levels of XRN2 and CHURC1, which were selected as target genes of our microRNA, were measured. XRN2 expression did not change significantly but CHURC1 expression was dramatically decreased in PE samples compare to healthy pregnancies (p<0.0001). An inverse correlation between hsa-mir-1183 and CHURC1 expression was shown that our miRNA might regulate CHURC1 expression. 
In this study, for the first time it is shown that circulating CHURC1 can ben involved in preeclampsia pathogenesis and circulating hsa-mir-1183 could contribute to disease pathology functioning through regulating CHURC1. Future studies need to confirm this miRNA-mRNA relation via functional studies and these biomarkers need to be tested in larger cohorts.