Servikal kanserde Resveratrol'ün apoptozdaki rolü
The role of resveratrol in cervical cancer in apoptosis
Yazar: SELİN DEĞİRMENCİ
Danışman: PROF. DR. FİLİZ ÖZDEMİR
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hela hücreleri = Hela cells ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Resveratrol = Resveratrol ; Sisplatin = Cisplatin ; Uterin servikal hastalıklar = Uterine cervical diseases ; Uterin servikal neoplazmlar = Uterine cervical neoplasms

Özet:
Kanser, normal genlerin mutasyona uğrayarak, işlevlerinin bozulması ya da tamamen kaybolması sonucu ortaya çıkan hastalık türlerinden biridir. Rahim ağzı kanseri, kadınlar arasında en sık görülen ikinci kanser türü olup kadın sağlığı için büyük bir tehdit oluşturmaktadır. Kemoterapötik ajanlar, hücrelerin biyokimyasal süreçlerini değiştiren, doğrudan ya da dolaylı yollardan hücrenin çoğalmasını engelleyen ve tümör gelişimini baskılamak gibi belirtileri kontrol altına almak amacı ile kullanılan biyokimyasal bileşiklerdir. Cisplatin, rahim, meme, testis ve beyin kanseri gibi pek çok kanser türüne karşı sıklıkla uygulanan bir kemoterapötik ajandır. Doğal bir antioksidan olan Resveratrol (RSV) kanser hücreleri üzerinde antiproliferatif ve apoptotik etkilere sahip olduğu bilinmektedir. Birçok çalışma, doğal ürünler ve kemoterapi ajanlarının birlikte kullanımının kemoterapi ajanlarının duyarlılığını ve sitotoksisitesini artırabileceğini de göstermiştir. Bu tez çalışması kapsamında, CDDP ve RSV'nin kombinasyon halinde kullanımının, HeLa servikal kanser hücreleri üzerindeki apoptotik etkileri ele alınmıştır. CDDP ve RSV'nin HeLa hücreleri üzerindeki sitotoksik etkilerinin belirlenmesi amacı ile MTT yöntemi kullanılmıştır. MTT sonuçları doğrultusunda CDDP ve RSV'nin IC50 değerleri sırasıyla 30±12 µM ve 60±16 µM olarak hesaplanmıştır. Elde edilen IC50 değerlerinin yüzdeleri üzerinden kombinasyon 50 (KM50) (15 µM CDDP, 30 µM RSV) ve kombinasyon 40 (KM40) (12 µM CDDP, 24 µM RSV) olmak üzere CDDP ve RSV kombinasyonları oluşturulmuştur. CDDP, RSV ve kombinasyonların hücreler üzerindeki apoptotik etkileri, Annexin-V FITC/PI, kaspaz-9 yöntemleri ile belirlenmiştir. Annexin-V FITC ile çalışılan yöntemde, 60 µM RSV'nin HeLa hücresine uygulandığı grup, CDDP'ye ve kombinasyonlara göre daha yüksek oranda apoptoza neden olmuştur. HeLa hücrelerinde (%83,8) negatif kaspaz-9, (%16,0) pozitif kaspaz-9 aktivitesi gözlemlenmiştir. CDDP ve RSV ayrı ve kombine uygulamalarında pozitif kaspaz-9 yüzdelerinde düşme meydana gelmiştir. Sonuç olarak düşük doz CDDP ve RSV içeren KM50 ve KM40 kombinasyonları, apoptotik ölümü indükleyerek HeLa hücre büyümesini sinerjistik bir şekilde inhibe etmiştir.

Abstract:
Cancer is one of the types of diseases that occur as a result of the normal genes being mutated and their functions impaired or completely lost. Cervical cancer is the second most common type of cancer among women and poses a great threat to women's health. Chemotherapeutic agents are biochemical compounds that change the biochemical processes of cells, prevent the proliferation of cells directly or indirectly, and are used to control symptoms such as suppressing tumor development. Cisplatin is a chemotherapeutic agent that is frequently applied against many types of cancer such as uterine, breast, testicular and brain cancer. Resveratrol (RSV), a natural antioxidant, is known to have antiproliferative and apoptotic effects on cancer cells. Many studies have also shown that the combined use of natural products and chemotherapy agents can increase the sensitivity and cytotoxicity of chemotherapy agents.In this thesis, the apoptotic effects of CDDP and RSV in combination on HeLa cervical cancer cells were discussed. MTT method was used to determine the cytotoxic effects of CDDP and RSV on HeLa cells. Based on the MTT results, the IC50 values of CDDP and RSV were calculated as 30±12 µM and 60±16 µM, respectively. Combinations of CDDP and RSV were formed based on the percentages of the IC50 values obtained, as combination 50 (KM50) (15 µM CDDP, 30 µM RSV) and combination 40 (KM40) (12 µM CDDP, 24 µM RSV). Apoptotic effects of CDDP, RSV and combinations on cells were determined by Annexin-V FITC/PI, caspase-9 methods. In the method studied with Annexin-V FITC, the group in which 60 µM RSV was applied to HeLa cell caused a higher rate of apoptosis than CDDP and combinations. Negative caspase-9 activity (83,8%) and positive caspase-9 activity (16,0%) were observed in HeLa cells.A decrease in the percentages of positive caspase-9 occurred in separate and combined treatments of CDDP and RSV. In conclusion, combinations of KM50 and KM40 containing low dose CDDP and RSV synergistically inhibited HeLa cell growth by inducing apoptotic death.