Anti-CD3&anti-CD28 tabanlı iki farklı CD19 spesifik CAR(CD28)-t ve CAR(4-1BB)-t hücre üretiminin in vitro ve in vivo etkinliklerinin araştırılması
Investigation of the in vitro and in vivo activities of two different CD19 specific CAR(CD28)-t and CAR(4-1BB)-t cells based on Anti-CD3 & Anti-CD28
Yazar: GAMZE GÜLDEN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ CİHAN TAŞTAN
Üsküdar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Genetik modifikasyon tekniklerinin gelişmesi, kemoterapi gibi geleneksel tedavilerle sınırlı kalan kanser tedavilerinde yeni bir dönemin açılmasını sağlamıştır. Kanserli olmayan hücrelerin yok edilmesini önlemek amacıyla kansere yönelik tedavilerin geliştirilmesi için yoğun çaba sarf edilmektedir. En umut verici yaklaşımlardan biri genetiği değiştirilmiş CAR-T hücre tedavisidir. CAR-T hücre popülasyonunda merkezi hafıza T hücresi (Tcm) ve kök hücre benzeri hafıza T hücresi (Tscm) oranlarının yüksek olması immünoterapinin etkinliğini artırmaktadır. Bu nedenle, CAR-T hücrelerinin uzun süreli kalmasını ve sitotoksik (anti-tümör) etkinliğe sahip olmasını sağlamak için CAR eksprese eden Tcm ve Tscm hücrelerinin popülasyonunun arttırılması önemlidir. Bu tezin temel amacı, efektör ve hafıza kapasitesi birbirinden farklı olan CD28 ve 4-1BB ko-stimülatör domainlerini kullanarak oluşturulan C19+ CAR-T hücrelerinin, efektör ve hafıza kapasiteleri arasında bir denge olup olmadığını incelemektir. Böylelikle her C19+ Akut Lenfoblastik Lösemi (ALL)'ye karşı CAR-T hücre tedavisinin zamana bağlı etkinliğinin ve stabilitesinin iyileştirilmesi, hayatta kalma süresinin arttırılması ve kanser hücresi büyüme olasılığının azaltılması amaçlanmıştır. Çalışmanın ilkaşamasında iki farklı tipte CAR eksprese eden T hücreleri üretilmiştir ve bunların immünojenik fenotipi, tükenmiş fenotipi, Tcm-Tscm popülasyonları ve sitotoksik aktiviteleri belirlenmiştir. In vitro sitotoksisite çalışmalardan elde edilen bulgularla in vivo etkinlik aktiviteleri, kan analizi çalışmaları ve histokimya analizleri yapılmıştır. Bulgularımız, CD28 ile oluşturulan CAR-T hücre popülasyonlarındaki T hücresi hafıza fenotip oranının 4-1BB ile oluşturulan CAR-T hücrelerine kıyasla daha düşük olduğunu göstermektedir.

Abstract:
The development of genetic modification techniques has opened a new era in cancer treatments. Previously, traditional treatments such as chemotherapy were the only option. Currently, intensive efforts are being made to develop cancer therapies that prevent the destruction of non-cancerous cells. One of the most promising approaches is genetically modified CAR-T cell therapy. The effectiveness of immunotherapy is increased by the high proportion of central memory T cells (Tcm) and stem cell-like memory T cells (Tscm) in the CAR-T cell population. To ensure that CAR-T cells persist for a long time and have anti-tumour activity, it is important to increase the population of CAR-expressing Tcm and Tscm cells. The aim of this thesis is to investigate whether there is a balance between the effector and memory capacities of C19+ CAR-T cells generated using CD28 and 4-1BB co-stimulatory domains, which have different effector and memory capacities. The objective is to enhance the time-dependent efficacy and stability of CAR-T cell therapy against C19+ Acute Lymphoblastic Leukaemia (ALL), increase survival time, and reduce the possibility of cancer cell growth. During the initial phase of the study, two distinct types of CAR-expressing T cells were produced and evaluated for their immunogenic and depleted phenotypes, Tcm-Tscm populations, and cytotoxic activities. In addition, in vivo efficacy activities, blood analysis studies, and histochemistry analyses were conducted based on the results obtained from in vitro cytotoxicity studies. The results indicate that the proportion of T cell memory phenotype in CAR-T cell populations generated with CD28 is lower compared to those generated with 4-1BB.