MCP-1 (A-2518G) ve CCR2 (G190A) polimorfizmlerinin ve MCP-1 gen ekspresyonunun FMF kliniği/MEFV gen mutasyonlarıyla ilişkisinin araştırılması
Investigation of the relationship  between MCP-1 ((A-25186) and CCR2 (6190A) gene polymorphisms as well as MCP-1 gene expression  and  FMF clinic / MEFV gene mutations
Yazar: ŞENOL ÇİTLİ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. NADİR KOÇAK ; PROF. DR. İLHAN SEZGİN
Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics

Özet:
Çalışmamızda inflamatuar bir hastalık olan Ailesel Akdeniz Ateşi hastalığında farklı klinik bulguların varlığı ve bu duruma neden olabilecek mekanizmaları araştırmayı hedefledik. Bu amaçla inflamatuar sürecin önemli elemanları olan ve inflamatuar süreci yöneten kemokinler üzerine eğildik. Ailevi akdeniz ateşi hastalığında kritik rolleri üstlenen monosit/makrofajların üzerinde esas etkili kemokinler olan MCP-1 ve onun reseptörü CCR2 üzerine yoğunlaştık. Bu moleküllerin en sık çalışılan ve fonksiyonları üzerinde etkili olan MCP-1 (A-2518G) ve CCR2 (G190A) polimorfizmlerini ve promotor bölgede yer aldığı için MCP-1 (A-2518G) ekspresyon düzeylerini araştırmayı amaçladık. 
Bu amaçla 125 erkek ve 104 kadın toplam 229 birey çalışmaya dahil edilmiştir. Bunlardan 75 tanesi MEFV geni açısından homozigot mutant, 77 tanesi heterozigot mutant bireyler iken 77 tanesi MEFV geninde mutasyon taşımıyordu. Ayrıca bunların tel hashomer kriterlerine göre yapılan klinik değerlendirmesinde ise 120 bireyin FMF kliniği mevcuttu, 107 bireyin ise FMF kliniği yoktu. Geri kalan iki bireyde ise şüpheli klinik durum söz konusuydu. 
Vakalardan alınan kan örneklerinden DNA ve RNA izole edildi. PCR-RFLP tekniği ile genotiplendirme analizi yapıldı. Ayrıca Real-time PCR yöntemiyle de ekspresyon analizleri çalışıldı. Çıkan sonuçlar istatistiksel olarak değerlendirildi.
Yapılan değerlendirmede FMF hastalığı/genetiği ile MCP-1 (A-2518G) ve CCR2 (G190A) genotipleri ve allel frekansları arasında anlamlı bir ilişki bulanamamıştır. Yapılan ekspresyon analizinde ise fmf kliniği olanlarda olmayanlara göre MCP-1 ekspresyonunun arttığı tespit edilmiştir. Ayrıca MEFV geni heterozigot mutant olan grupta MEFV geninde mutasyon taşımayan gruba göre MCP-1 ekspresyonu artarken MEFV geni homozigot olan grupta bu artış daha fazla tespit edildi. Bunun yanında, MCP-1 (A-2518G)  homozigot mutant grupta daha yüksek olmak üzere MCP-1 homozigot ve heterozigot mutant grupta da MCP-1 ekspresyonu artmış olarak bulundu. 
Bu bulgularla MCP-1 ekspresyonunun FMF hastalığında önemli olduğu, FMF hastaları arasındaki klinik farklılıkları açıklayabileceği ve şüpheli durumlarda bir gösterge olabileceği sonucuna varıldı. Ayrıca MEFV mutasyonlarıyla MCP-1 ekspresyonunun ilişkili olduğu, MEFV mutasyonlarının MCP-1 transkripsiyonunu arttırarak inflamasyonu şiddetlendirebileceği düşünüldü. Bunun yanında MCP-1(A-2518G) mutasyonlarıyla MCP-1 ekspresyonlarının artması FMF hastalığına ayrıca katkıda bulunduğu şeklinde yorumlandı.

Abstract:
In thIs study we aimed to investigate the presence of clinical symptoms of familial Mediterranean fever which is an inflammatory disease and different mechanisms that may cause this situation. For this purpose, we have investigated the important components of the inflammatory process and inflammatory chemokines that is govern this process. We have been focusing on MCP-1 that these is effective chemokines on monocytes / macrophages undertaking a critical role in Familial Mediterranean Fever Disease and its receptor CCR2. We aimed to investigate the MCP-1 (A-2518G),  which is the most commonly studied and the most effective of these functions, and CCR2 (G190A) polymorphisms as well as the MCP-1 (A-2518G) expression levels because it is in the promoter region. 
For this purpose, a total of 125 male and 104 female 229 individuals were included in the study. Of these, 75 were homozygous for the mutant gene MEFV,  77 of them did not carry mutations in the MEFV gene while 77 of them were the heterozygous mutant individuals.  120 people have FMF clinic while 107 people did not have the FMF clinic when they are also clinically evaluated according to the criteria in Tel Hashomer. The remaining two individuals had the suspect clinical situation.
DNA and RNA was isolated from blood samples from subjects. Genotyping analysis was performed by PCR-RFLP technique. Expression analysis method also worked with real-time PCR method. The results were statistically analyzed.
 	MCP-1 (A-2518G) and CCR2 (G190A) genotypes and allele frequencies of them with  FMF disease / genetics were no significant relationship in the evaluation of what we do. Also This increase was higher in the MEFV homozygous groups while The group with heterozygous mutant MEFV MEFV gene mutation increased the expression of MCP-1 according to the group don't have MEFV gene mutation. In addition, MCP-1 expression in homozygous and heterozygous mutant groups were found to be increased that is being higher in the group homozygous mutant. It was concluded that the expression of MCP-1 with these findings that is important FMF disease, may explain the clinical differences between FMF patients and may be an indication of suspicious circumstances. We also thought that the expression of MCP-1 mutations associated with MEFV mutations and MEFV mutations may exacerbate inflammation by increasing the transcription of MCP-1. Furthermore interpreted that MCP-1 (A-2518G) mutations to increase expression of MCP-1 also contribute to disease in the FMF.