Farklı sulandırıcılarla dondurulan koç spermasının in-vitro fertilite yeteneğinin tespiti
Determining the in vitro fertilizing ability of ram semen frozen with different extenders
Yazar: RAMAZAN ARICI
Danışman: PROF. SERHAT ALKAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Kolesterol = Cholesterol ; Koçlar = Rams

Özet:
Çalışmada, koç sperma sulandırıcısına kolesterol (2 mg CLC/120x106 spermatozoon) ve iodiksanol (%5, Visipaque 320TM) ilavelerinin donma eritme sonrası spermatolojik özelliklere ve in vitro fertilizasyon sonuçlarına etkileri incelendi. Kıvırcık ırkı 5 baş koçtan elektro-ejakülatörle alınan spermalar, pooling sonrası 4 eşit hacime ayrılarak gruplar oluşturuldu. Final gliserol oranı %5 olan Tris sulandırıcısına kolesterol (CLC, grup 1), iodiksanol (grup 2), kolesterol-iodiksanol kombinasyonu (grup 3) ilave edildi ve 4. hacim kontrol grubunu oluşturdu. Minipayetlerde donma sonrası, faz kontrast mikroskopta motilite ve HOST, bilgisayar destekli sperma analiz cihazında (CASA) ise total motilite ve progresif motilite incelendi. HOST, sıvı fikzasyon ve floresan boyama sonrası spermatolojik özellikler incelendi. 37oC'de 4 saatlik inkübasyon sonrası ve 46oC'de 15 dakikalık termal stres testi (TST) sonrası spermatolojik özellikler CASA yardımıyla incelendi. Her gruba ait eritilmiş spermalarla IVF sonrası yarıklanma ve 8 günlük kültür sonrası blastosiste ulaşma oranları saptandı. Spermatolojik incelemelerde 10 tekrar gerçekleştirildi ve toplam 806 oosit IVF çalışmalarında kullanıldı. Çalışmada kolesterol (1. Grup) ve kolesterol-iodiksanol kombinasyonunun (3. Grup), gliserolizasyon ve ekilibrasyon sonrası spermatozoon motilitesine zarar verdiği, eritme sonrası membran bütünlüğünü ve viabiliteyi, inkübasyonun 4. saatinde ise motiliteyi ve progresif motiliteyi koruduğu bulundu. Ancak kolesterol içeren gruplarda (1. ve 3. gruplar) inkübasyon başlangıcında ve TST sonrası progresif motilite ve fertilize olmuş oosit oranları düşük bulundu. İnkübasyon başlangıcında ve TST sonrası progresif motiliteler ve ayrıca IVF çalışmalarında  başarılı sonuçlar iodiksanol grubunda (2, grup) saptandı.Koç spermasının dondurulmasında gerçekleştirelecek yeni çalışmalar için sulandırıcılarda CLC veya CLC-iodiksanol kombinasyonunun "daha düşük gliserol oranlarında" kullanılmasının önerilebileceği sonucuna varıldı. 

Anahtar Kelimeler: Koç sperması, donma, kolesterol, iodiksanol, IVF.

Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 43724

Abstract:
Effect of adding cholesterol (2 mg CLC/120x106 spermatozoon) and iodixanol (Visipaque 320TM) to ram semen extenders on post thaw spermatological traits and in vitro fertilization results were investigated in this study. The study groups were established by pooling and splitting into 4 equal parts of semen collected by electro-ejaculator from 5 Kivircik rams.  Cholesterol (CLC, group 1), iodixanol (group 2), cholesterol-iodixanol combination (group 3) were added to tris extender with a final 5% glycerol rate and the last group served as the control (group 4). Total and progressive motility were observed by CASA and motility value by using phase contrast microscope. Spermatological properties were evaluated by HOST and fluorescent staining. After incubating at 37oC for 4 hours and at 46oC for 15 minutes for Thermal Stress Test (TST), spermatological traits were observed by CASA. With semen samples of each group, IVF was performed. Cleavage and blastocyst rates after 8 days of culture were determined. Spermatological examinations were repeated 10 times and 806 oocytes were used in IVF studies Group 1 and group 3 were observed to deteriorate spermatozoa motility after glycerolisation and equilibration but improved post-thaw motility, progressive motility, membrane integrity and viability at the fourth hour of incubation. However in the cholesterol groups (Group 1 and 3), fertilized oocytes and progressive motility rates at the beginning of incubation and after TST were low. These values were most successful in iodixanol containing group (Group 2).
 In conclusion, CLC or CLC-iodixanol combination could be used in extenders at lower glycerol concentrations in new studies to freeze ram semen.

Key Words: Ram semen, cryopreservation, cholesterol, iodixanol, IVF.

The present work was supported by the Research Fund of Istanbul University. Project No. 43724