Dental folikül kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (DF-MKH) ev tozuna duyarlı astım hastalarından elde edilen naive t lenfositlerin in vitro TH1 ve TH2 farklılaşması üzerine etkisi
Effects of dental follicle derived mesenchymal stem cells on TH1 and TH2 differentiation of naive t lymphocytes of house dust mite sensitive asthmatic patients in vitro
Yazar: DENİZ GENÇ
Danışman: PROF. DR. TUNÇ AKKOÇ
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Alerji-İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; Astım = Asthma ; Kök hücreler = Stem cells ; T lenfositleri = T lymphocytes ; İmmünomodülasyon = Immunomodulation

Özet:
Amaç: Bu çalışmada ağız bölgesinde diş folikül dokusundan elde edilen mezenkimal kök hücrelerin (DF-MKH) astım hastalığında CD4+ T hücreleri üzerindeki etkisinin immünoterapi almış astım hastalarıyla karşılaştırılarak tedavi edici etkinliğinin in vitro ortamda araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Diş folikülünden mezenkimal kök hücre izolasyonları, karakterizasyonları ve farklılaşma analizleri yapıldı. Ev tozu akarına duyarlı astım tanısı almış ve sağlıklı bireylerin venöz kanlarından periferal kan mononüklear hücreler izole edildi. Lenfositlerin MKH' lerle birlikte anti-CD3/anti-CD28, Der p1 ve IFN-γ uyarımlı ve uyarımsız koşullarda 3 gün kültürleri yapıldı. Kültür sonrasında lenfosit proliferasyonu, CD4+FoxP3+ T regülatör hücre, Annexin/7AAD ile lenfosit apoptozu, naive, efektör ve bellek CD4+ T hücre oranları, antijen sunucu hücrelerde kostimülasyon oranları, kültür süpernatantlarında IL-4, IL-10 ve IFN-γ düzeyleri ve hücrelerde GATA3, Tbet ve FoxP3 protein ifadesi analiz edildi.
Bulgular ve Sonuçlar: DF-MKH'ler astım hastalarından elde edilen periferal kan mononükleer hücrelerde CD4+CD25+FoxP3+ T regülatör hücre oranlarını istatistiksel anlamlı arttırarak CD4+ T hücrelerde proliferasyonu baskıladı, apoptozu baskılayarak hücre canlılığını arttırdı. DF-MKH'ler astım hastalarında efektör ve bellek CD4+ T hücre oranlarını azaltırken naiv T hücre oranlarını rölatif olarak arttırdı. DF-MKH, Monosit ve dendritik hücrelerde kostimülasyonu baskıladı. Bunun yanı sıra DF-MKH'ler astım hastalarında IL-4 miktarı ve GATA3 protein ifadesini anlamlı azaltırken IFN- miktarı ve Tbet ifadesini, IL-10 miktarı ve FoxP3 ifadesini anlamlı arttırdı. DF-MKH'nin astım hastalarında CD4+ T hücre üzerindeki immün modülatör etkisinin immünoterapi almış astım hastalarının CD4+ T hücre yanıtlarına yakın olduğu gözlemlenmiştir.

Abstract:
Objective: In this study, the immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells isolated from dental follicle tissue on CD4+ T lymphocytes of asthmatic patients was evaluated by comparing with immunotherapy subjects in vitro.
Material and Method: Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) from dental follicle tissue was performed before coculture assays. Perpheral blood mononuclear cells were isolated from house dust mite sensitive asthmatic patients, immunotherapy subjects and healthy volunteers. Lymphocytes were cultured in the presence and absence of MSCs, by stimulating with anti-CD3/anti-CD28 or Der p1 or IFN- for 3 days. After culture period Lymphocyte proliferation, CD4+CD25+FoxP3+ T regulatory cell frequency, apoptosis by AnnexinV/7AAD, naive, effector, and memory CD4+ T lymphocyte ratio, costimulation on antigen presenting cells, supernatant cytokine levels (IL-4, IFN-, IL-10), GATA-3, Tbet and FoxP3 expressions of cultures cells were analyzed.
Results and Conclusion: DF-MSCs suppressed lymphocyte proliferative responses by enhancing CD4+CD25+FoxP3+ T reg frequency, and also reduced apoptotic ratio of CD4+ T lymphocytes.  DF-MSCs reduced ratio of effector and memory T cell subsets in favor of naive T lymphocytes. Costimulatory molecule expression was reduced on monocytes and dendritic cells in the presence of DF-MSCs. In addition, DF-MSCs decreased IL-4 levels and GATA-3 expression and increased IFN-, and IL-10 levels, Tbet and FoxP3 expressions in asthmatic patients cocultures. We observed that DF-MSCs modulate T lymphocyte responses close to immunotherapy subjects.