Parkinson hastalığı sıçan modelinde motor aktivite ve inflamatuvar sürecin epigallokateşin gallat ile modülasyonu
Modulation of motor activity and inflammatory process by epigallocatechin gallat in the rat model of parkinson's disease
Yazar: MERİÇ DEMELİ
Danışman: DOÇ. DR. BİLGE PEHLİVANOĞLU
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Antiparkinson ajanlar = Antiparkinson agents ; Epigallokateşin gallat = Epigallokatechin gallate ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kateşin = Catechin ; Motor beceriler = Motor skills ; Nöroinflamatuar hastalıklar = Neuroinflammatory diseases ; Parkinson hastalığı = Parkinson disease ; Sıçanlar = Rats ; İnflamasyon = Inflammation ; İnterlökin 1 = Interleukin 1

Özet:
Santral sinir sisteminin yaygın görülen dejeneratif bir hastalığı olan Parkinson hastalığı (PH)'nın günümüzde kesin bir tedavisi olmadığı gibi kullanılan ilaçlar hastalığın ilerlemesini veya nöronal dejenerasyonu da engelleyemedikleri için PH gelişimini ve/veya ilerlemesini durdurabilecek stratejilerin araştırılması kritiktir. Çay, dünyada sudan sonra en çok tüketilen içeceklerden birisi olup özellikle içerdiği kateşinlerin PH modelinde proinflamatuar sitokinleri azalttığı ve periferal bağışıklığı düzenlediği gösterilmiştir. Bu çalışmada, 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ile oluşturulan PH modelinde kateşin türevlerinden birisi olan epigallokateşin gallatın (EGCG) hastalık modeli oluşmadan ve oluşturulduktan sonra hastalığın gelişimine ve meydana gelen inflamatuvar cevaba etkisini incelemeyi, ayrıca oluşan nöroinflamasyonda kompleman sistemin katkısını ve EGCG'ın bu sistem üzerindeki olası etkisini araştırmayı amaçladık. 6-OHDA kullanılarak PH modeli oluşturulan hayvanlar, cerrahi öncesi 5 gün 25 mg/kg EGCG p.o verilen PreKş (n=10), cerrahi sonrası 4 gün 25 mg/kg ve sonraki 10 gün 10 mg/kg EGCG p.o. verilen PostKş (n=11) ve tedavi almayan P (n=8) gruplarına ayrıldı. PH modeli oluşturulmayan hayvanlar yalancı-ameliyat ve çözücü alan K (n=9) ve PostKş grubu ile aynı dozda kateşin tedavisi uygulanan Kş (n=10) gruplarına yerleştirildi. Cerrahi işlemden önce ve 14 gün sonra motor testler yapıldı. Motor skorlar ve apomorfin testi ile PH gelişimi belirlendi. Protokol sonunda sakrifiye edilen hayvanlardan alınan kan örneklerinde lökosit, nötrofil ve lenfosit sayımı, serum IL1-B ve TNF a ölçümleri yapıldı. Beyin dokularında kompleman sistemin bileşenlerinden C3, CR3 ve MAC proteinlerinin miktarları çalışıldı Beyin dokularından alınan kesitler immunohistokimya yöntemi ile tirozin hidroksilaz için boyandı. P grubundaki hayvanlarda dopaminerjik nöronların sayısı azaldı, EGCG tedavisi alanlarda azalma daha azdı. Motor testlerin değerlendirmelerine göre P grubunda motor aktivite, rotarod çubuğu üzerinde kalma süresi ve yatay çubuk testi parametreleri azalmıştı (p<0,05). EGCG tedavisi alan hayvanlar PH modeli oluşturulmayan gruplardan farklı iken, P grubuna göre iyileşme gösterdi (p<0,05). PMN/lenfosit oranlarında P grubunda görülen artış EGCG tedavisi sonrasında azaldı (p<0,05). PreKş ve PostKş gruplarında IL1-B ve TNF a seviyeleri P grubuna göre düşüktü (p<0,05). Sonuç olarak çalışmamızda kateşin pre- veya postflaktik olarak uygulandığında PH'nin motor belirtilerini azalttığı, periferik inflamasyonu hafiflettiği ve nörodejenerasyonu azalttığı gösterilmiştir. Kateşinlerin potansiyel etkileri ve mekanizmalarının incelenmesi özellikle PH'nin ilerlemesini engelleyecek bir yaklaşımın oluşmasını sağlayabilir.

Abstract:
Parkinson's disease (PD) is a common degenerative disease of the central nervous system. As, there is no cure for the disease currently, and the drugs used for symptomatic improvement neither prevent the progression of the disease nor neuronal degeneration, it is crucial to investigate approaches that can prevent development and/or progression of the disease. The catechins which are among the natural constituents of tea, one of the most frequently consumed beverages following water all over the world, reduce proinflammatory cytokines and regulate peripheral immunity in PD models. We aimed to investigate the effect of epigallocatechin gallat (EGCG), one of the catechin subspecies, on the development of PD and inflammatory response when applied before or after the application of PD model in rats, in addition to the role of the complement system in neuroinflammation and its modulation by EGCG. The animals which underwent PD model with 6-hydroxydopamine were allocated to PreCatechin (n=10) group which was given 25 mg/kg EGCG p.o. for 5 days before the surgery, PostCatechin (n=11) group which was treated with 25 mg/kg p.o. for 4 days and 10 mg/kg p.o. for the next 10 days after the surgery and P (n=8) group which received only the vehicle. The control groups were sham operated as C group (n=9) and Catechin group (n=10) which received either vehicle or catechin at the regimen and dose applied to the PostCatechin group. Before and 14 days after the surgery motor tests were performed. PD was verified with motor scores and apomorphine tests. The animals were sacrificed after the experimental protocol is completed and blood samples were collected for leucocyte, neutrophil and lymphocyte counts and serum IL1-a and TNF B measurements. The amounts of complement components, C3, CR3 and MAC proteins, were determined from brain tissues. Brain slices were stained by tyrosine hydroxylase immunohistochemically. The decreased dopaminergic neurons in P group, became closer to control groups in EGCG treated animals. The results of motor tests indicated decrease in motor activity, duration on the rotarod and the parameters of horizontal rod test in P group (p<0.05). The EGCG-treated groups were also worse than the sham-operated groups (p<0.05), but exhibited improvement compared to P group (p<0.05). The increased PMN/lymphocyte ratio in P group was lowered with EGCG treatment (p<0.05). The IL1-B and TNF a levels were lower than P group in pre-and post-catechin groups (p<0,05). As a result, our results showed that catechin improved the motor symptoms of PD when administered pre or postphylactically, reduced peripheral inflammation and attenuated neurodegeneration. The investigation of the potential effects and mechanisms of catechins may provide insights especially about the progression of PD.