Döngel bitkisi (Mespilus germanica L., Rosaceae) meyvelerindeki polifenol oksidaz aktivitesinin karakterizasyonu
Characterization of polyphenol oxidase activity from medlar fruits, (Mespilus germanica L., Rosaceae)
Yazar: BARBAROS DİNÇER
Danışman: DOÇ. DR. SAADETTİN GÜNER
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1999
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Difenolaz = Diphenolase ; Mespilus germanica = Mespilus germanica ; Mespilus germanica = Mespilus germanica ; Muşmula = Medlar ; Polifenol oksidaz = Polyphenol oxidase

Özet:
ÖZET Bu çalışmada, döngel bitkisi (Mespilus germanica L., Rosaceae) meyvelerinden hazırlanan ekstraklarda polifenol oksidaz (PFO) aktivitesi çeşitli biyokimyasal ve kinetik veriler açısından detaylı bir şekilde incelenmiştir. Katekol, 4-metil katekol, DOPA (dihidroksifenilalanin), DHPPA (3,4-dihidroksifenil propiyonik asit) ve epikatekin adlı fenolik substratlann oksidasyonunu etkin bir şekilde katalizleyen döngel PFO 0.96 mg protein/ml değerlerine kadar sabit bir artış göstermiş ve her bir substrat ile spesifik pH ve sıcaklık değerlerinde etkileşim sağlamıştır. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda döngel PFO in basit Michaelis-Menten kinetiğine uyduğu ve en yüksek derecede 4-metil katekol substratına ilgi duyduğu ve bu substrat ilgisinin sırasıyla 4-metilkatekol>DOPA>katekol>epikatekin>DHPPA şeklinde değiştiği gözlenmiştir. Ayrıca, kinetik verilerden elde edilen Hill grafiği her bir substrat için h<\ değerini vererek enzimin tek bir substrat bağlanma bölgesine sahip olduğu ve dolayısıyla kooperativite göstermediği tespit edilmiştir. Sistein, sodyum azid ve benzoik asit gibi genel PFO inhibitörleri enzim aktivitesini önemli derecede inhibe etmiştir. Tüm bu veriler, döngel meyvelerinde mevcut olan PFO m diğer bitki PFO aktivitelerinden oldukça yüksek olmasına rağmen benzer biyokimyasal ve kinetik davranışlar gösterdiğini desteklemektedir. Anahtar Kelimeler: Polifenol Oksidaz, difenolaz, döngel meyveleri {Mespilus germanica), DOPA, DHPPA IV

Abstract:
SUMMARY Characterization of polyphenol oxidase activity from medlar fruits, (Mespilus germanica L., Rosaceae) In this work, polyphenol oxidase (PPO) activity in the extracts prepared from medlar fruits (Mespilus germanica L., Rosaceae) was investigated in detail from the point of biochemical and kinetics data. Medlar PPO enzyme activity catalyzed efficiently the oxidation of phenolic substrates, catechol, 4-methyl catechol, DOPA (3,4-dihydroxyphenyl alanine), DHPPA (3,4-dihydroxlyphenyl propionic acid) and epicatechine, and the activity was linear up to 0.96 mg protein/ml. The enzyme showed different activities at specific pH and temperature values for each substrate. Kinetic studies have shown that the medlar PPO enzyme obeys the simple Michaelis-Menten kinetics with the greatest degree of affinity for 4-methyl catechol and the order of affinity was observed to be 4-methyl catechol>DOPA>catechol>epicatechin>DHPPA. Moreover, the Hill plots for each substrate with Hill constants lower than 1 have indicated that there is only one binding site for the substrates with no cooperativity. The three of the common inhibitors of PPO enzymes, cystein, sodium azide and benzoic acid, all inhibited the activity very effectively. All the data support that the PPO enzyme activity detected in medlar fruits, although it is relatively higher, has similar biochemical and kinetic characteristics to other plant PPO enzymes. Key words: Polyphenol oxidase, diphenolase, medlar fruits (Mespilus germanica), DOPA, DHPPA V