Polivalan aşıda In Vitro olarak beta toksin etkinliğinin saptanması
Determination of beta toxin activity In Vitro in polyvalent vaccine
Yazar: ASLI ADIYAMAN
Danışman: PROF. DR. GÜVEN ÖZDEMİR
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aşılar = Vaccines ; Beta = Beta ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Potens = Potency

Özet:
Clostridium perfringens tip C tarafından salgılanan beta toksin başta koyun keçi ve sığırlarda enteroroksemiye neden olan bir enfeksiyon çeşididir. Hastalığın mücadelesinde en etkili yol aşılamadır. Çeşitli klostridial etmenlerin bir araya gelmesiyle polivalan olarak hazırlanmış aşıların potens testleri, deney hayvanlarının kullanımını esas alan toksin nötralizasyon testi ile yapılmaktadır. Tnt'nin hem hayvan refahı ve temini açısından hem de hayvan test sonuçlarının tutarsız olabileceği göz önüne alınarak, alternatif metotların geliştirilmesi ve uygulanması gerektiği sürekli vurgulanmaktadır. Serolojik tabanlı bir test olan ELISA, polivalan klostiridial aşıların potens testlerinde uygulanması daha mümkün olan ihtimaller içinde görülmektedir.
Bahsedilen bu ihtimaller gözetilerek beta toksoid içeren polivalan aşıyla immunize edilen tavşan serumları ile beta antitoksin Elisa yöntemi uygulamalar yapılmıştır. Uygulamalar sonucunda platelerde görülen renk gradientleri ile sayısal sonuçlar birbiriyle uyum göstermektedir. Çalışma sonuçlarında immunize tavşan serumlarının OD'sinin sırasıyla 9,72 ve 9,98 olması serumu geçerli kılmıştır. Ardından uygulanan aşının referans serum OD'lerine oranı sırasıyla 1,45 ve 1,83 olması ile yöntemin geçerli olduğu görülmüştür. Bu sonuçlar beta toksin içeren polivalan aşıların potens testlerinde Tnt yerine, beta antitoksin ELISA testinin validasyonlarının da yapıldıktan sonra kullanılabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Beta toxin secreted by Clostridium perfringens type C is a type of infection that causes enteroroxemia in sheep, goats and cattle. The most effective way to control the disease is vaccination. Potency tests of vaccines prepared as polyvalent by combining various clostridial factors are performed by toxin neutralization test based on the use of experimental animals. It is constantly emphasized that alternative methods should be developed and applied, both in terms of animal welfare and supply of Tnt and considering that animal test results may be inconsistent. ELISA, a serological-based test, seems to be more likely to be applied in potency tests of polyvalent clostridial vaccines.
Considering these possibilities, rabbit sera immunized with beta toxoid containing polyvalent vaccine and beta antitoxin Elisa method were applied. As a result of the applications, the color gradients seen on the plates and the numerical results are in harmony with each other. In the results of the study, the OD of immunized rabbit sera was 9.72 and 9.98, respectively, which made the serum valid. It was seen that the method was valid, with the ratio of the administered vaccine to the reference serum ODs being 1.45 and 1.83, respectively. These results show that polyvalent vaccines containing beta toxin can be used instead of Tnt in potency tests after the validation of beta antitoxin ELISA test.