Sıtma aşısında alternatif kombinasyon: Plasmodium falciparum Circumsporozoite protein ve MF59
An alternative combination for malaria vaccine: Plasmodium falciparum Circumsporozoite protein and MF59
Yazar: YUNUS UYAR
Danışman: PROF. DR. SALİH KUK
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Genler = Genes ; Plasmodium = Plasmodium ; Plasmodium falciparum = Plasmodium falciparum ; Sıtma = Malaria ; Sıtma = Malaria ; İmmünite = Immunity

Özet:
Sıtma, paraziter hastalıklar arasında en fazla ölüme neden olanıdır. Sıtmaya, Plasmodium cinsine ait protozoan parazitler sebep olmaktadır. Hastalık dişi Anofel sivrisineğin insanlardan kan emmesiyle bulaşmaktadır. Hızlı ve etkin bir biçimde teşhis ve tedavisi gerçekleştirildiğinde, sıtma iyileştirilebilir bir hastalıktır. Sıtmaya karşı kullanılan ilaçların hemen hepsine karşı direnç gelişmiş durumdadır ve günümüzde sıtmaya karşı etkili bir aşı henüz geliştirilememiştir. 40 yıl önce, radyasyon uygulanmış 1000 sivrisineğe maruz bırakılan kişilerde falciparum sıtmasına karşı steril immünite oluşturulmasıyla çalışmalar başlamıştır. Plasmodium'ların kompleks yapıları ve karmaşık hayat döngüleri aşı çalışmalarını zorlaştırmaktadır ve çok fazla antijenik yapıları bulunmaktadır. Üzerinde en fazla çalışılan Circumsporozoite Protein, günümüzde lisans almaya en yakın aday olan RTS,S'in de yapısında bulunmaktadır. Pre-eritrositer dönem aşıları daha fazla çalışılmıştır. Bunun yanında, günümüzde birçok protein ve DNA aşısı geliştirilmeye çalışılmaktadır. Dünya Sağlık Örgütü'ne göre önümüzdeki 20 yıllık periyodda sıtma aşısının yapılabilmesi mümkündür. Bu çalışmada P.falciparum CSP'nin rekombinant olarak üretilmesi ve MF59 adjuvanı ile kombine edilmesi amaçlanmıştır. Öncelikle P.falciparum genomik DNA'sından 1.182 bp'lik CSP geni PCR ile çoğaltılmıştır. CSP geni pJET vektörüne klonlandı. Daha sonra pET100 protein ekspresyon vektörüne subklonlanarak rekombinant CSP (rCSP) eksprese edildi. Western Blot ile gösterilen rCSP, Probond Purification System kiti ile saflaştırılması sonrası endotoksinlerinden arındırılmış ve MF59 ile kombine edilmiştir.
Sıtmaya karşı aşı çalışmalarında yeni bir yaklaşım olan rCSP + MF59 formülasyonunun etkinliğinin sonraki çalışmalarda farklı deney hayvanlarında araştırılması ile bilimsel birikime katkı sağlanabilecektir.

Abstract:
Malaria is the leading cause of death, amongst the parasitic diseases. Malaria is caused by parasitic protozoans belonging to the genus Plasmodium. The disease is transmitted to the human by the biting of female Anopheles mosquitos. Malaria is a curable disease if diagnosed and treated promptly and correctly. Drug resistance has developed against almost all anti-malarial drugs and currently an effective vaccine against malaria has not yet been developed. Vaccine studies initiated 40 years ago by sterile immunity against falciparum malaria through immunization by exposure to 1000 irradiated mosquitoes. Complicated structures and complex life cycle of Plasmodium makes it difficult to vaccine studies and a lot of antigenic structure belonging to Plasmodium species. Most extensively studied circumsporozoite protein is also present in the structure of the vaccine candidate RTS,S which is currently closest to get licensing. Pre-erythrocytic stage vaccines were studied further. Furthermore, nowadays many DNA, RNA and protein vaccine candidates are being developed. According to the World Health Organization, in the next 20 year period, malaria vaccine can be made. In this study we aimed to produce recombinant CSP (rCSP), then combine it with MF59 adjuvant. Initially, 1.182bp P.falciparum CSP gene was amplified by PCR. CSP gene was cloned into the pJET cloning vector. And then subcloned to the pET100 protein expression vector and rCSP was expressed. rCSP was verified with Western Blot method. Once purified with Probond Purification System kit, endotoxin free rCSP was combined with MF59 adjuvant. 
rCSP + MF59 formulation is a new approach to the vaccine against malaria, will be able to contribute to scientific knowledge by working subsequent studies in different animal experiments.