Kırım-kongo kanamlı ateş tanısı alan hastalarda tip ı (alfa, beta) interferon ve viral yük arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between type i (alpha, beta) interferon and viral load in patients with crimean-congo hemorrhagic fever (CCHF)
Yazar: İBRAHİM BÜYÜKHAN
Danışman: PROF. DR. MEHMET BAKIR
Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Hemorajik ateş-Kırım = Hemorrhagic fever-Crimean ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Tedavi = Treatment ; Virüsler = Viruses ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
Bu çalışmada KKKA hastalarında tip I interferon (IFN-a ve IFN-b) seviyeleri, viral yük seviyeleri, viral yük ve tip I interferonlar arasındaki ilişki, interferon seviyeleri ile hastalığın şiddeti ve mortalite arasında ilişki olup olmadığı araştırılmıştır.Bu çalışmaya Nisan-2010-Eylül-2011 tarihleri arasında KKKA hastalığı tanısı alan 100 erişkin hasta ve kontrol grubu olarak da herhangi bir şikayeti bulunmayan 74 sağlıklı birey seçilmiştir. Hastalardan, ilk örnek başvuru anında, ikincisi yatışının 5. gününde olmak üzere iki kez kan örneği alındı. Hasta serumlarındaki IFN-a ve IFN-b seviyeleri ELISA yöntemi ile, viral yük seviyeleri ise Real-Time PCR yöntemi ile çalışıldı. Hasta grubundaki bireyler, Swanepoel ve arkadaşlarının tanımladığı kriterlere göre ağır(grup1) ve hafif(grup2) hasta olarak sınıflandırıldı. Takibi sırasında ağır gruptaki hastalardan 25'i kaybedildi. Ağır grupta olup ölen hastalar grup1a ve ağır grupta olup yaşayan hastalar ise grup1b olarak adlandırıldı.Çalışmamızda KKKA hastalarının INFa ve b düzeyleri kontrol grubundan anlamlı düzeyde yüksekti (p<0,05). Çalışmamızda grup1'deki olgularda tespit edilen IFN-a ve IFN-b seviyeleri grup2 ve kontrol grubuna göre anlamlı derecede yüksek bulundu (p<0,05). Aynı şekilde, grup1a ve grup1b'deki IFN a ve IFN b seviyeleri grup2 ve kontrol grubundaki IFN a ve IFN b seviyeleri karşılaştırıldığında anlamlı bir şekilde yüksek bulundu (p<0,05).Grup1 ile grup2'deki hastalarda tespit edilen viral yük seviyesi karşılaştırıldığında istatistiksel fark önemsiz bulundu (p>0,05). Grup1a ile grup1b'deki olgularda tespit edilen viral yük seviyesini kıyasladığımızda fark önemli bulundu (p<0,05). Aynı şekilde grup1a'daki hastaların viral yük seviyesi grup2'de yer alan hastalardan anlamlı şekilde yüksekti (p<0,05).Hastaların ilk kan örneklerinde saptanan interferon a düzeyleri bakımından yapılan ROC analizinde mortaliteyi tahmin etmek için cut off değeri 250,42 pg/ml bulundu. Bu analizde IFN-a için eğri altında kalan alan 0.713 ve istatistiksel olarak anlamlı idi (p<0,05). IFN-a'nın sensitivitesi %64, spesifitesi ise %26.7 olarak saptandı. IFN-b için belirlenen cut off değeri 475,95 pg/ml, eğri altında kalan alan 0.607 ve istatistiksel olarak önemli değildi (p>0,05). Viral yük için bulunan cut off değeri 84455,00 kopya/ml, eğri altnda kalan alan 0,870 ve istatistiksel olarak anlamlı idi (p<0,05). Viral yükün sensitivitesi %88, spesifitesi ise %22,7 olarak bulunmuştur.Grup1a'daki olgularda IFN-a ile IFN-b arasında anlamlı ve pozitif yönlü bir korelasyon varken (r=0.551, p<0.05), grup1b ve grup2'deki olgularda IFN-a ile IFN-b arasında negatif yönlü korelasyon vardı ve fark önemsizdi (p>0.05). Grup1a (r=0.032), grup1b (r=0.310) ve grup2'de (r=0.389) viral yük ile IFN-a arasında pozitif yönlü fakat anlamlı olmayan (p>0.05) bir korelasyon vardı. Viral yük ile IFN-b arasında grup1a (r= -0.030) ve grup1b'deki (r= -0.229) olgularda negatif, grup2 olgularında ise pozitif (r= 0.117) yönlü fakat anlamlı olmayan (p>0.05) bir korelasyon vardı.Sonuç olarak, biz bu çalışmada KKKA hastalarında interferon ve viral yük seviyelerini yüksek bulduk. Bu durum bize KKKA hastalarında yüksek seviyede interferon salındığını ancak salgılanan interferonun viral replikasyonu yeterli bir şekilde önleyemediğini düşündürmüştür. KKKA virüsünün interferonun etkisinden kurtulmak için çeşitli kaçınma mekanizmalarına sahip olması muhtemeldir. Bu durumun netleştirilmesi/kesinleştirilmesi için daha ileri çalışmalara ihtiyaç vardır.Anahtar Kelimeler: Kırım Kongo Kanamalı Ateş, interferon a, interferon b, viral yük

Abstract:
In this study, type I interferon (IFN-a and IFN-b) levels in patients with CCHF, viral load levels, relationship between viral load and type I interferons, and whether there is a relationship between interferon levels and severity of illness and mortality have been investigated.A hundred adult patients diagnosed as CCHF between April 2010-September-2011 and as control group, 74 healthy subjects who have any complaint were selected for the current study. Blood samples were taken from patients two times, the first sample on admission and the second sample fifth day of admission. IFN-a and IFN-b and viral load levels in patient?s serum were assayed by ELISA and real-time PCR method, respectively. Individuals in the patient group were classified as severe (group 1) and mild (group 2) patients according to the criteria described by Swanepoel et al. During follow-up, 25 patients died in the severe group. Died patients and living patients who are in the severe group are called as grup1a and grup1b respectively.In our study, INF-a and b levels of CCHF patients were significantly higher than that of the control group (p <0.05). IFN-a and IFN-b levels detected in grup1patients were found as significantly higher than that of grub 2 and the control group (p <0.05). Similarly, IFN-a and IFN-b levels of group1a and group1b were significantly high compared to IFN-a and IFN-b levels of control group and group 2 (p <0.05).When viral load levels were compared between group 1 and group 2, statistical difference was insignificant (p>0.05). When viral load levels were compared between group 1a and group 1b, statistical difference was significant (p <0.05). Similarly, viral load levels of grup1a patients were significantly higher than group2 patients.In the ROC analysis which is carried out in terms of the interferon-a levels detected in first blood samples of patients, cut-off value, used for to predict the mortality, was determined as 250.42 pg/ml. In this analysis, the area under the curve for IFN-a was 0.713 and was statistically significant (p <0.05). IFN-a sensitivity and specificity was detected as 64% and 26.7%, respectively. Cut-off value determined for IFN-b was 475.95 pg/ml, area under the curve was 0. 607 and it was not statistically significant (p> 0.05). The cut off value found for viral load was 84455.00 copies/ml, area under the curve was 0,870, and was statistically significant (p <0.05). Viral load sensitivity and specificity were 88% and 22.7%, respectively.When there was a significant and positive correlation between IFN-a and IFN-b levels in group1 cases (r = 0.551, p <0.05), there was a negative correlation between IFN-a and IFN-b levels in group1b and group2 cases and the difference was statistically insignificant (p> 0.05). There was positive but insignificant correlation between viral load and IFN-a in group1a (r = 0.032), group1b (r = 0.310) and group2 (r = 0.389). Between viral load and IFN-b, there was a negative correlation in group1a of (r = -0030) and group1b (r = -0 229) and there was positive but insignificant correlation in group 2 (r = 0 117) patients (p> 0.05).As a result, in this study we found high levels of interferon and viral load in patients with CCHF. This suggests to us that high levels of interferon are secreted in patients with CCHF but secreted interferon cannot adequately prevent viral replication. It is probable that CCHF virus has various avoidance mechanisms to escape the effects of interferon. Further studies are needed to clarify this situation.Keywords: Crimean-Congo Haemorrhagic Fever, interferon-a, interferon-b, viral load