İneklerin meme başlarında görülen lezyonlarda bovine papillomavirus varlığının virolojik yönden araştırılması
Virological investigation of the presence of bovine papillomavirus in lesions on the nipples of cows
Yazar: GÜRSEL ÖZMEN
Danışman: PROF. DR. MEHMET KALE
Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı / Viroloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Meme = Breast ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme uçları = Nipples ; Papillomavirüsler = Papillomaviridae ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; Viroloji = Virology ; Virüsler = Viruses ; İnekler = Cows

Özet:
Burdur-Merkez ve ilçelerinde halk elinde bulunan çeşitli işletmelerden meme başlarında farklı görünümde lezyon bulunan holstein ırkı, 2-8 yaş arası, 106 adet dişi inekten kan ve doku (siğil) örnekleri toplandı. Kan serumu örneklerinin 59 (%55,66) adedinde BPV (antijen) pozitiflik ve 47 (%44,34) adedinde BPV (antijen) negatiflik belirlendi. Doku (siğil) örneklerinde BPV varlığı tespitinde PCR testinde konsensüs primerler FAP59/64 ve MY11/09 kullanıldı. 106 örneğin 24 (%22,64) adedinde FAP59/64 pozitiflik belirlenirken, MY11/09 hiçbir örnekte varlığı tespit edilmedi. BPV tip spesifik primerleri açısından genel olarak 106 örneğin hepsinde BPV pozitiflik bulunurken, hiçbir örnekte BPV-14 pozitiflik tespit edilmedi. Meme siğillerinde tek ve miks tiplerin birlikte görüldüğü genel dağılımda; BPV-2 (40 adet, %37,7), BPV-6 (28 adet, %26,4), BPV-8 (30 adet, %28,3), BPV-9 (36 adet, %34), BPV-10 (32 adet, %30,3) ve BPV-12 (22 adet, %20,8) daha yaygın olduğu belirlendi. Meme lezyonlarının makroskobik görünümüne göre tiplerin dağılımı; Düz ve Yuvarlak formlarda en yüksek pozitiflik BPV-2 ve BPV-10, Pirinç Tanesi formlarda en yüksek pozitiflik BPV-6, BPV-10, BPV-12, BPV-8+BPV-9 ve BPV-3+BPV-6+BPV-8+BPV-11, Saplı ve Sivri formlarda en yüksek pozitiflik BPV-9 görüldü. Yaşa göre BPV tiplerinin dağılımı; 2 yaş grubunda en fazla BPV-2 tipine, 3 yaş grubunda en fazla BPV-10 tipine, 4 yaş grubunda en fazla BPV-9 tipine, 5 yaş grubunda en fazla BPV-8+BPV-12 tiplerine, 6-8 yaş grup aralığında en fazla miks tipler olduğu tespit edildi. Yaş ilerledikçe, BPV tiplerinin miks görülme olasılığının arttığı belirlendi. Düz ve yuvarlak form siğillerin saplı ve sivri form siğillere göre daha genç yaşta görüldüğü belirlendi (p=0,003). Pirinç tanesi formda bulunan siğillerin görüldüğü yaş ile diğer form siğillerin görüldüğü yaş arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmadı (p>0,05). Çalışmada BPV tip spesifik primerleri ile pozitif belirlenen tüm örneklerde, meme lezyonlarından yapılan histopatolojik incelemelerde ve immunohistokimyasal testlerde pozitiflik bulundu. Buna göre, her üç test ve uygulamanın arasındaki ilişki (korrelasyon) benzer bulundu. BPV tip spesifik primerleri ile pozitif belirlenerek seçilen örneklerde (en az bir adet inceleme yapıldı) yapılan elektron mikroskobi incelemelerinde virus varlığı görüntülendi. Ancak, ELISA (antijen) testinin kan serumu örneklerinden BPV tespitinde daha az duyarlı olduğu belirlendi. Çalışmada, meme lezyonları papillomlarında tespit edilen tüm tiplerde otolog aşı uygulaması sonucunda %100 (12/12) başarı sağlanırken; BPV tip 1, 2, 4, 6, 9, 10 ve 11'de tespit edilen papillomlarda, NDV La Sota suşu uygulamaları sonucunda %41,7 (5/12) başarı sağlandı. Örneklemenin yapıldığı işletmelerde çevre koşullarının BPV tiplerinin yayılımında etkisi incelendiğinde, meme lezyonlarında BPV varlığı en yüksek düzeyde; 1-49 adet hayvan sayısı bulunduran küçük ve yarı-açık işletmelerde, hayvan bakım-besleme koşullarının ve ahır temizliğinin orta düzeyde olduğu işletmelerde, sağımın makine ile yapıldığı ve sağım öncesi ve sonrası temizlik ve dezenfektan kullanımının yapıldığı işletmelerde belirlendi.

Abstract:
Blood and tissue (warts) samples were collected from Holstein breeds with lesions of different appearances on their nipples, and 106 female cows aged between 2 and 8 years from various public-owned enterprises in Burdur-Center and its districts. Of the blood serum samples, 59 (%55,66) were positive for BPV (antigen) and 47 (%44,34) were positive for BPV (antigen). Consensus primers FAP59 / 64 and MY11 / 09 were used in PCR test to detect the presence of BPV in tissue (wart) samples. FAP59 / 64 positivity was detected in 24 (%22,64) of 106 samples, while MY11 / 09 was not detected in any of the samples. In terms of BPV type specific primers, in general, all 106 samples were positive for BPV, while no BPV-14 was positive. In the general distribution where single and mixed types are seen together in breast warts; BPV-2 (40 pieces, %37,7) BPV-6 (28 pieces, %26.4), BPV-8 (30 pieces, %28,3), BPV-9 (36 pieces, %34), BPV-10 (32 pieces, %30,3) and BPV-12 (22, % 20,8) were found to be more common. Distribution of types according to macroscopic appearance of breast lesions; The highest positivity in Flat and Round forms BPV-2 and BPV-10, the highest positivity in Rice Grain forms BPV-6, BPV-10, BPV-12, BPV-8 + BPV-9 and BPV-3 + BPV-6 + BPV -8 + BPV-11, BPV-9 had the highest positivity in stalked and pointed forms. Distribution of BPV types by age; The most BPV-2 type in the age group of 2, the most BPV-10 type in the 3-year-old group, the most BPV-9 type in the 4-year-old group, the most BPV-8 + BPV-12 in the 5-year-old group, the 6-8 age group It was determined that there were the most mixed types. It was determined that the possibility of mixed occurrence of BPV types increased with increasing age. It was determined that flat and round form warts were seen at a younger age than stalked and pointed warts (p = 0,003). There was no statistically significant difference between the age at which the warts in the rice grain form were seen and the age at which the other form warts were seen (p> 0,05). In the study, positivity was found in all samples positive with BPV type-specific primers, in histopathological examinations performed from breast lesions and in immunohistochemical tests. Accordingly, the correlation between all three tests and applications was found to be similar. The presence of virus was observed in electron microscopy examinations performed on samples selected positively with BPV type specific primers (at least one examination was performed). However, ELISA (antigen) test was found to be less sensitive in detecting BPV from blood serum samples. In the study, 100% (12/12) success was achieved as a result of autologous vaccine application in all types of breast lesions papillomas; In papillomas detected in BPV types 1, 2, 4, 6, 9 ,10 and 11, success was achieved by 41,7% (5/12) as a result of NDV La Sota strain applications. When the effect of enviromental conditions on the spread of BPV types in sampling businesses is examined, the presence of BPV in breast lesions is at the highest level; ıt was determined in small and semi-open farms with a number of 1-49 animals, in enterprises where animal care-feeding conditions and barn cleaning are moderate, in enterprises where milking is done by machine and cleaning and disinfectant is used before and after milking.