Epilobium parviflorum Schreb. ekstraktının farklı kanser hücre hatları üzerindeki terapötik etkileri
Therapeutic effects of Epilobium parviflorum Schreb. extract on different cancer cell lines
Yazar: TEVHİDE SÜT
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET AYDIN AKBUDAK
Akdeniz Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics ; Ziraat = Agriculture

Özet:
Amaç: Literatürdeki çalışmalar gözden geçirildiğinde; Epilobium parviflorum'un kolon kanser hücre hattına (HT29) ve fibrobast hücre hattına (BJ) uygulanıp apoptotik genlerin ekspresyonunun incelendiği bir çalışmaya rastlanmamıştır. Bu çalışmanın amacı Epilobium parviflorum'un HT29 ve BJ hücreleri üzerindeki apoptotik özelliklerini araştırmaktır. 
Yöntem: HT29 ve BJ hücreleri 37℃'de 48 ve 72 saat Epilobium parviflorum etanol, su ve hekzan ekstraktları ile inkübe edilmiştir. IC50 değerleri belirlendikten sonra qRT-PCR yöntemi ile Caspase-3, Bax, Caspase-8 ve P53 genlerinin ekspresyonu incelenmiştir. Ekstrakt muamelesinden sonra hücrelerde, geç apoptoz evresinde oluşan DNA fragmentasyonu, TUNEL testi ile belirlenmiştir.
Bulgular: Epilobium parviflorum'un etanol, su ve hekzan ekstraktlarının uygulandıktan sonra yapılan MTT testi ile belirlenen IC50 değerleri BJ hücrelerinin canlılığını etkilemediği belirlenmiştir. Uygulanan ekstraktlar HT29 hücrelerinde Caspase-8 ve Bax genlerinin mRNA'larında önemli bir artış gözlenmiştir. TUNEL testi sonuçlarına göre etanol ve su ekstraktları uygulanan HT29 hücrelerinde DNA fragmentasyonunun daha fazla olduğu belirlenmiştir.
Sonuç: Epilobium parviflorum'un etanol, su ve hekzan ekstraktının HT29 hücreleri ile 48 saat inkübasyonu sonrasında belirlenen IC50 konsantrasyonu BJ hücrelerinin çoğalmasını etkilememiştir. Bu ekstraktlar aynı zamanda HT29 hücrelerinde apoptozda rol oynayan Caspase-8 ve Caspase-3 genlerinin ekspresyonunu arttırarak bu hücrelerde apoptoza neden olmuştur. FACS cihazı ile yapılan flow sitometri yöntemi incelemeleri sonucunda Epilobium parviflorum'un etanol ve su ekstraktları uygulanan HT29 hücrelerinde yüksek oranda DNA fragmentasyonu gözlenmiştir.

Abstract:
Objective: While reviewing the literature; we did not encounter any studies that practised the expression of apoptotic genes which is applied to the colon cancer cell line (HT29) and fibroblast cell line (BJ) of Epilobium parviflorum. The aim of this study is to determine the changes in the expression of apoptotic genes when administered to HT29 and BJ cells of Epilobium parviflorum. 
Method: HT29 and BJ cells were incubated with ethanol, water and hexane extracts of Epilobium parvilorum for 48 and 72 hours at 37°C. After determination of IC50 values, expression of Caspase-3, Bax, Caspase-8 and P53 genes were measured by qRT-PCR method. DNA fragments formed in the late apoptosis phase in cells after extract treatment were determined by TUNEL assay.
Results: It was determined from the IC50 values calculated by MTT test, which was performed after application of ethanol, water and hexane extracts of Epilobium parviflorum to cells, that it does not affect the viability of BJ cells. A significant increase was observed in mRNAs levels of Caspase-8 and Bax genes in HT29 cells when ethanol, water and hexane extracts of Epilobium parviflorum were applied. According to the TUNEL test, it was observed that DNA fragmentation was higher in HT29 cells treated with ethanol and water extracts.
Conclusion: The IC50 concentration determined after 48 hours incubation of ethanol, water and hexane extracts of Epilobium parviflorum with HT29 cells did not affect the cell viability of BJ cells. These extracts also induced apoptosis in these cells by increasing the expression of Caspase-8 and Caspase-3 genes involved in apoptosis in HT29 cells. As a result of the examination of the flow cytometry method using FACS, a high rate of DNA fragmentation was observed in HT29 cells of ethanol and water extracts of Epilobium parviflorum.