İmmunokemilüminometrik yöntem ile çalışılan intakt parathormon için metod değerlendirme çalışmasının yapılması /
Yazar: ÖZLEM ÇAKIR MADENCİ
Danışman: DOÇ. ASUMAN ORÇUN KAPTANAĞASI
Sağlık Bakanlığı / Dr. Lütfi Kırdar Kartal Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Biyokimya ve Klinik Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2004
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
6. OZET
Parathormon, paratiroid bezinden sentezlenen 84 aa'lik bir peptidtir. Kana sekrete edildikten sonra başlıca  karaciğer ve böbreklerde 34-37 aa'lik bölgeden yıkıma uğrar. Arninoterminal fragmanlar kandan hızla temizlenirken karboksi terminal ve mid-molekül fragmanlar daha uzun süre dolaşımda kalır. Başlıca glomeruler filtrasyonla temizlendiğinden, karboksiterminal fragmanların dolaşımdaki yarı ömrü renal fonksiyona bağımlıdır ve renal fonksiyon bozukluklarında  karboksiterminal ve mid molektül fragmanların konsantrasyonu artar. PTH molekülünün fonksiyonel aktivitesi molekülün aminoterminal kısmı tarafindan sağlandığından, PTH'nın biyolojik aktivitesini ölçen testlerin, ortamdaki karboksil ve mid molekül fragmanlardan etkilenmeden, molekülün özellikle intakt ve fonksiyonel aminoterminal fragmanlarını ölçüyor olması gerekir. İntakt ve aminoterminal PTH dolaşımda cok düşük miktarda bulunduğundan ve yarı ömürleri de cok kısa olduğundan, PTH'yı doğru olarak ölçecek yöntemin, PTH 'nın cok düşük konsantrasyonlarını ölçebiliyor olması gerekir. Tersine bazı araştırmacılar ise dolaşımda karboksiterminal fragmanlann daha stabil olduğunu, dolaşımda hızla değişen ve biyolojik aktif komponent olan PTH ölçümünün çok doğru sonuçlar vermeyeceğini söylemektedir.
Görüldüğü gibi PTH ölçümünde, farklı ölçüm yöntemlerinin birbirine karşı avantajları vardır. Biz de çalışmamızda laboratuvarımızda çalıştığımız ICMA yöntemini metod değerlendirme kriterlerinden olan doğrusallık (Linearite), kesinlik (presizyon tekrarlanabilirlik), interferans açısından değerlendirmeyi gerekli gördük. Ayrıca intakt PTH'nın oda ısısı ve dolaptaki stabilitesini ve sağlıklı erişkinlerdeki referans aralığını da araştırdık.
İntakt PTH'nın linearitesini belirleyebilmek için yaptığmız çalışmda, PTH'nın 13.4-1711 pg/m1 arasında linear olduğunu bulduk (r=0.9999)
Saklama koşulların etkisini değerlendirmek icin yaptığımız çalışmada oda ısısında saklanan serumların 4. saat sonundaki değeri %93.5 bulunurken, dolapta saklananların 4. saat sonundaki değeri %107.7 olarak buldu. O.saatteki PTH değerleri diğer saatlerlerdeki değerler ile karşılaştırıldığında, 20-25°C'de saklanan serumların  0. saat ile 5. saat PTH değerleri arasmdaki farkı anlamh bulduk (P=0.0391). 2-8 °C'de 
saklanan serum örneklerinde de 0. saat ye 5. saat PTH değerleri arasındaki fark 
anlamlı  bu1undu(p=0.0117). Bu sonuclar bize intakt PTH çalışılacak serumları oda ısısı veya dolapta 4 saatten fazla bekletmenin doğru olmayacağını gösterdi. Ayrıca PTH çalışılacak serumlar için örneklerin saklanması konusunda tüm laboratuvarlar ortak bir protokol geliştirilmelidir
İntakt PTH'nın presizyonunu saptarnak için yaptığımız çalışmada within-run presizyonun CV'sini düşük seviyeli kontrol serumu için %3.48, yüksek seviyeli kontrol serumu içn de %3.9 olarak bulduk.
Hemolizin intakt PTH düzeylerine olan etkisini araştırmak için 3 farkı kan örneği alınarak, serumlardaki eritrositler fiziksel olarak farkh düzeylerde travmatize edildi. Farkh hemoliz düzeylerinde PTH değerindeki % azalmalar hesaplandı ye hemoliz düzeyi attıkça PTH düzeylerinde azalma olduğu sonucuna varıldı.
Örnekleme tipinin intakt PTH üzerindeki etkisini araştırmak için hem tripotasyum EDTA' h vakumlu tüpe hem de katışıksız vakumlu tüpe aynı  hastaların kan örnekleri alındı. Her iki örnek tipi de bekletilmeden hemen çalışıldı. Sonuçlar karşılaştırıldığında örnekleme tipinin PTH değerlerini etkilemediği görüldü (P=0,1757).
Yaş ortalaması 45.7 olan 42 kadm ve yaş ortalaması 51.2 olan 38 erkek toplam 80 kişi üzerinde referans arahk calışması yapıldı. Kadınların intakt PTH değerlerinin ortalaması 32.7 pg/m1 bulunurken erkeklerinki 35.2 pg/mL bulundu. Kadın ye erkekler arasmda intakt PTH değerleri açısından anlamh fark bulunamadı (p=0.3458). Tüm grup için PTH referans aralığı %2.5-%97.5 persentil hesaplanarak 10.9-64 pg/ml olarak bulundu.

Abstract:
7.SIJMMARY
Parathhormon is a 84 as peptid synthesized in parathyroid glands. After secretion to blood, it is degraded mostly in liver and kidneys by cleavage in 34-37. aa region. Amino terminal fragments are cleared rapidly whereas the carboxyl-terminal and mid-molecule fragments remain in circulation longer. The circulatory half-life of carboxyl-terminal fragments depends on renal function because they are cleared mainly by glomeruler filtration. On this occasion, the circulating concentration of carboxyl-terminal and mid-molecule fragments is greater especially in patients with compromised renal function. The functional activity of the molecule is related to the amino-terminal portion of the molecule, so assays for monitoring the biological activity of PTH should reliably measure both intact and functional amino-terminal fragments without interference from carboxyl-and mid-molecule fragments. Because of the short half life and low concentration of intact and aminoterminal PTH fragments in the circulation, the accurate methods measuring PTH, should detect lower concentrations of the PTH. In adverse some researchers advocate that, carboxyl terminal fragments are more stable in the circulation, and detecting rapidly changing biologically active component won't give reliable results.
As seen, different analyzing methods have advantages at each other. We required to evaluate ICMA method, which we use in our laboratory, for method evaluation criterias as linearity, precision, and interferance. Also we investigated the effect of storing conditions in intact PTH and the referance interval in healthy adults.
In our linearity study we found that PTH is linear in 13.4-1711 pg/ml PTH concentration r=0.9999)
In our study which we organized in order to evaluate the effect of storage conditions in intact PTH, we found the value as %93.5 at 4.th hour for the sample we stored at 20-25°C. The value was %107.7 at 4.th hour for the samples we stored at 2-8°C. These results showed us that we can store samples maximum 4 hours at room temperature or at refrigerator before analyzing for intact PTH. Also between laboratorias a common protocole should be performed for storing PTH before analyses.
In our precision study, the CV of within-run precision for low control sample was %3.48 and %3.9 for the high one. In order to investigate the effect of hemolysis in analyzing intact PTH, we took 3 different blood samples and eriythrocytes were physically travmatized. % decreasing for different hemolysis degrees were calculated and It was seen that PTH values decrease as hemolysis degrees increase. In order to investigate the effect of sampling type in analyzing intact PTH blood samples of same patients were drawn both to tripotassium EDTA vacuataner tube and to tubes without additive. Both samples were analyzed immediately and when the results were compared, It was seen that different sampling types don't affect PTH values (p=0.1757)
Reference interval study was organized on 80 individuals, 42 of them were women mean of whose age was 45.7 and 38 of them were men with mean age 51.2. Mean of intact PTH value for women was 32.7 pg/ml while 35.2 pg/rnl for men. There was no significant difference between women and men for intact PTH (p=0.3458). Referance interval was found 10.9-64 pg/rni for total group by calculating %2.5-%97.5 percentile.