Sıçanlarda prekonsepsiyonel folik asit takviyesinin implantasyon üzerine etkilerinin immunohistokimsal yöntemlerle değerlendirilmesi
Immunohistochemical analysis of the effect of preconceptional folic acid supplementation on embryonic implantation in rats
Yazar: ELİF SEDA ÖZDEMİR
Danışman: PROF. DR. ÇİĞDEM ELMAS
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo implantasyonu = Embryo implantation ; Folik asit = Folic acid ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Reseptörler-östrojen = Receptors-estrogen ; Sıçanlar = Rats ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry ; İntegrinler = Integrins

Özet:
İmplantasyon, gebelik oluşumunda önemli aşamalardan biridir. Yardımcı üreme tekniklerindeki gelişimlerle birlikte infertilite sebepleri içinde implantasyon başarısızlıkları ön plana çıkmaya başlamıştır. İmplantasyon uterus endometriyumu ile embriyo arasında karşılıklı etkileşimi içeren kısa bir süreçte gerçekleşir. Bu süreçte embriyo ve endometriyumun implantasyona hazır olması gerekmektedir. İmplantasyon sürecine endometriyumda ve embriyoda ifade edilen birçok molekül aracılık eder. Folik asit (FA), gebelik oluşmadan takviye olarak kullanılması önerilen, eksikliğinde konjenital anomalilere sebep olabilen bir vitamindir. Gebelikte farklı dozlarda kullanım önerileri bulunmaktadır. Bu çalışmada folik asitin embriyo implantasyonuyla ilişkisinin değerlendirilmesi hedeflendi.
Çalışmamızda 6-8 haftalık 32 adet wistar albino cinsi dişi sıçan kullanıldı. Sıçanlar kontrol, eksiklik modeli oluşturulan, düşük doz (5mg/kg) FA takviyesi verilen, yüksek doz (40mg/kg) FA takviyesi verilen olmak üzere 4 gruba ayrıldı. 5 haftalık takviye ve eksiklik model oluşumunun ardından erkek sıçanlarla çiftleştirilen dişiler, çiftleşmeyi takiben 5. günde implantasyon değerlendirilmesi için sakrifiye edildi ve implantasyon alanları toplandı. Alınan dokular histolojik olarak ve gen ifade düzeyinde değerlendirildi. 
Vaskuler endotelyal büyüme faktörü-A (VEGF-A), Östrojen Reseptörü- alfa (ER-α), İntegrin αVβ3 açısından değendirilen gruplarda, eksiklik grubunda tüm belirteçlerde anlamlı azalma izlenirken, düşük doz  ve yüksek doz gruplarında tüm belirteçler açısından immunohistokimya ve RT-PCR ile artış tespit edildi. 
Çalışmamız sonucunda gebelik öncesi folik asitin takviye edilmesinin bilinen diğer neonatal etkilerinin yanında gebeliğin oluşum ve sürdürülmesi aşamasında da olumlu etkilerinin olduğu, eksikliğinde implantasyon aşamasında bozukluklara yol açabileceği ortaya konmuştur. İleride yapılacak ara yolak çalışmalarıyla embriyo implantasyonundaki etkileri daha açık şekilde ortaya konabilir.

Abstract:
Implantation is one of the important stages in pregnancy formation. With the improvements in assisted reproductive techniques, implantation failures have started to come to the fore among the causes of infertility. Implantation takes place in a short period of interaction between the uterine endometrium and the embryo. In this process, the embryo and endometrium must be ready for implantation. The implantation process is mediated by many molecules expressed in the endometrium and embryo. Folic acid (FA) is a vitamin recommended to be used as a supplement before pregnancy occurs, and its deficiency can cause congenital anomalies. There are recommendations for use in different doses during pregnancy. In this study, it was aimed to evaluate the relationship of folic acid with embryo implantation.
In our study, 32 female wistar albino rats, 6-8 weeks old, were used. The rats were divided into 4 groups as control, deficiency model was created, low dose (5mg/kg) FA supplement was given, and high dose (40mg/kg) FA supplement was given. After 5 weeks of supplementation and deficiency pattern formation, females mated with male rats were sacrificed and implantation sites were collected for implantation evaluation on day 5 following mating. Tissues taken were comparatively evaluated histologically and at the level of gene expression.
In the groups evaluated for vascular endothelial growth factor-A (VEGF-A), Estrogen Receptor-alpha (ER-α), integrin αVβ3, all markers were significantly decreased in the deficiency group, while in the low-dose and high-dose groups, an increase was observed in all markers with IHC and RT-PCR.
As a result of our study, it has been revealed that supplementation of folic acid before pregnancy has positive effects in the formation and maintenance of pregnancy as well as other known neonatal effects, and its deficiency may lead to disorders in the implantation stage. The effects on implantation can be revealed more clearly with future pathway studies.