Yassı epitel hücreli dil kanserlerinde MEOX2 geninin epigenetik biyobelirteç potansiyelinin incelenmesi ve klinik anlamı
Investigation of the epigenetic biomarker potential of MEOX2 gene in tongue squamous cell carcinoma and its clinical meaning
Yazar: HALİME KILIÇ
Danışman: DOÇ. DR. MURAT ULUSAN ; PROF. DR. SEMRA DEMOKAN
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)

Özet:
Amaç: Yassı epitel hücreli dil kanserlerinde Meox2 geninin ekspresyon seviyeleri ve ilişkili epigenetik mekanizmalardan metilasyon seviyeleri incelenerek, dil tümörelerinin erken tanı ve tedavisinde invaziv/non-invaziv yöntemlerle Meox2 geninin potansiyel epigenetik bir biyomarker olarak kullanılabilirliğini araştırmak hedeflendi.

Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda İstanbul Üniversitesi İstanbul Tıp Fakültesi KBB ve BBC ABD'ye başvurmuş primer cerrahi tedavi uygulanan 30 dil tümörlü hastaya ait tümör dokusu, eşlenik normal doku, serum ve tükürük örnekleri ile 15 adet sağlıklı bireye ait normal mukoza, serum ve tükürük örnekleri kullanıldı. DNA izolasyonu ve takiben bisülfit modifikasyon işlemi sonrasında Lightcycler 480 cihazında kantitatif-metilasyon-spesifik gerçek zamanlı PCR (QMSP) yöntemi ile Meox2 geninin promoter bölgesindeki metilasyon durumu incelendi. Meox2 geninin ekspresyon düzeyleri gerçek zamanlı kantitatif PCR (QRT-PCR) yöntemi kullanılarak incelendi. Elde edilen metilasyon ve ekspresyon sonuçları ve hastalara ait klinik parametreler SPSS istatistik programı yardımıyla analiz edildi.

Bulgular: Nüksü olmayan hastaların eşlenik normal dokusundaki Meox2 ekspresyonu medyan değeri 2,86, nüksü olan hastaların eşlenik normal dokusundaki Meox2 ekspresyonu medyan değeri  2,0'dır ve medyan değerleri arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark vardır (p=0,011). Hastaların tümör dokusu/eşlenik dokudaki metilasyon değerleri için yapılan ROC analizinde kesim noktası 5,5 olarak bulunmuştur. Bu değere ait sensitivite %86,7, spesifite ise %50'dir (p=0,044). Diferansiasyon derecesine göre hastaların metilasyon ve tümör ekspresyon düzeylerine baktığımızda, diferansiasyonu az olan 2 hastanın %100'ünde metilasyon olup, ekspresyonda değişiklik görülmemiştir.

Sonuç: Nüksü olmayan hastaların eşlenik ve tümör dokusunda Meox2 gen ekspresyon artışının fazla olması, Meox2 gen ekspresyonunun dil skuamöz hücreli karsinom hastalarında prognoz üzerine olumlu etkisi olabileceğini düşündürmektedir. Az diferanisye tümörlerin tamamında metilasyon görülmesi tümörün diferansiasyon durumu ile metilasyon arasında pozitif bir ilişki olabileceğini düşündürdü.

Abstract:
Objective:  By examining the expression levels of the Meox2 gene and methylation levels in squamous cell tongue cancers, it was aimed to investigate the usability of the Meox2 gene as a potential epigenetic biomarker in the early diagnosis and treatment of tongue cancers.

Materials and Methods: Tumor tissue, conjugate normal tissue, serum and saliva samples obtained from 30 patients who applied to Istanbul University Istanbul Faculty of Medicine Department of ENT and underwent primary surgical treatment for tongue tumor, and normal mucosa, serum and saliva samples obtained from 15 healthy individuals were used. After DNA isolation and subsequent bisulfite modification, the methylation status in the promoter region of the Meox2 gene was examined with the quantitative-methylation-specific real-time PCR (QMSP) method on the Lightcycler 480 device. Expression levels were examined using the real-time quantitative PCR (QRT-PCR) method. The results were analyzed with the help of SPSS statistical program.

Results: The median value of Meox2 expression in the conjugate normal tissue of patients without recurrence is 2.86, with recurrence is 2.06 and the there is a statistically significant difference between the values (p = 0.011).  In the ROC analysis performed for the methylation values in the tumor tissue/conjugate tissue of the patients, the cut-off point was found to be 5.5. The sensitivity of this value is 86.7% and the specificity is 50% (p = 0.044). According to the degree of differentiation, 100% of the 2 patients with poorly differentiated tumor have methylation and no change in expression levels.

Conclusion: The higher increase in Meox2 gene expression in conjugate and tumor tissues of patients without recurrence suggests that Meox2 gene expression may have a positive effect on the prognosis in tongue cancer patients. The presence of methylation all of poorly differentiated tumors suggested that there may be a positive relationship between the differentiation status of the tumor methylation.