L929 fibroblast hücrelerinde hidrojen peroksit ile oluşturulan oksidatif stres hasarında oksiresveratrolün etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of oxyresveratrol on oxidative stress damage caused BY hydrogen peroxide in l929 fibroblast cells
Yazar: FATİH MEHMET ATEŞ
Danışman: PROF. DR. YASİN BAYIR
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Fenolik maddeler = Phenolic matters ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Hidrojen peroksit = Hydrogen peroxide ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Hücreler = Cells ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Oksiresveratrol = Oxyresveratrol

Özet:
L929 Fibroblast Hücrelerinde Hidrojen Peroksit ile Oluşturulan Oksidatif Stres 
Hasarında Oksiresveratrolün Etkilerinin Araştırılması
Amaç: L929 fibroblast hücrelerinde H2O2 kaynaklı hücresel hasarın telafisinde 
oksiresveratrolün proliferatif etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Oksiresveratrolün total antioksidan kapasitesi, total oksidan 
kapasitesi, oksidatif stres indeksi ve toplam fenolik madde seviyeleri değişen 
konsantrasyonlarda ölçüldü. Oksiresveratrol'ün L929 hücreleri üzerine IC50 değeri MTT 
testi ile belirlendikten sonra 12.5-400 µM derişimlerinde H2O2 ile oluşturulan oksidatif stres 
hasarındaki proliferatif etkisi in-vitro hücre proliferasyonunun ölçümünde anlık empedans 
ölçüm yöntemi (xCELLigence) ile belirlendi. Ayrıca hücre hasarındaki yara iyileşme 
seviyelerini tespit etmek amacıyla (3.125-25µM) doz aralığında migrasyon (scratch) testi 
yapıldı.
Bulgular: Oksiresveratrol'ün 0.5 mg/ml'de total antioksidan kapasitesi 3.00±0.3 ve 
total oksidan kapasitesi 0.77±0.52, OSİ değeri ise 0.02±0.09 olarak bulundu.
Oksiresveratrol'ün 0.625 mg/mL'den 10 mg/ml'ye değişen dozlarındaki toplam fenolik 
madde içerikleri düşük derişimden yüksek derişime doğru gidildikçe daha yüksek toplam 
fenolik maddeye sahip olduğu gözlemlendi. Oksiresveratrol'ün L929 Fibroblast hücrelerinde
IC50 değeri 214.2 μM, H2O2'e maruz bırakılmış L929 Fibroblast Hücrelerinde hücre hattında 
oksiresveratrolün IC50 değeri ise 109.7 μM olarak belirlendi. Oksiresveratrol'ün 12.5 
μM'lık dozu xCELLigence cihazındaki ölçümde en yüksek hücre proliferasyonunu sağladı.
Scratch testi için H2O2 ile hasarlı hücrelerde 12.5 μM oksiresveratrol dozunda 24. saatte 
%62, 48. satte ise %88'lik bir hücre proliferasyonu ile diğer dozlardan daha fazla iyileşme 
gözlendi. 12.5 μM dozu hem proliferasyon, hem de scratch testinde en etkili doz olarak 
tespit edildi. 
Sonuç: Oksiresveratrol; düşük dozlarda gösterdiği antioksidan kapasite ile H2O2
tarafından oluşturulan hücresel hasarda, L929 hücre hattını oksidatif stresten korumuş, 
fibroblast canlılığında ve migrasyonda güçlü bir etki göstermiştir. Bu sonuçlar 
oksiresveratrolün; serbest oksijen radikallerinin meydana getirdiği akut veya kronik 
hastalıkların önlenmesinde hücresel seviyede etkili olabileceğini göstermektedir. Hücresel 
sevieyede yapılacak daha ayrıntılı çalışmalar ve in-vivo çalışmalarla Oksidatif strese bağlı 
etkenlerden kaynaklanan hastalıkların tedavisinde oksiresveratrol potansiyel bir molekül 
olarak değerlendirilebilir.
Anahtar Kelimeler: ROT, TFM, L929, oksiresveratrol, proliferasyon

Abstract:
Investigation of the Effects of Oxyresveratrol on Oxidative Stress Damage Caused 
by Hydrogen Peroxide in L929 Fibroblast Cells
Aim: It was aimed to determine the proliferative effect of oxiresveratrol in the 
compensation of H2O2-induced cellular damage in L929 fibroblast cells.
Material and method: Total antioxidant capacity, total oxidant capacity, oxidative 
stress index and total phenolic substance levels of oxiresveratrol were measured at varying 
concentrations. After the IC50 value of oxiresveratrol on L929 cells was determined by the MTT 
test, the proliferative effect of oxidative stress damage induced by H2O2 at 12.5-400 µM 
concentrations was determined by the instantaneous impedance measurement method 
(xCELLigence) in the measurement of in-vitro cell proliferation. In addition, the migration test 
was performed in the dose range (3.125-25µM) to determine the wound healing levels in cell 
damage.
Results: The total antioxidant capacity of oxiresveratrol at 0.5 mg/ml was 3.00±0.3, the 
total oxidant capacity was 0.77±0.52, and the OSI value was 0.02±0.09. It was observed that the 
total phenolic content of oxiresveratrol at doses ranging from 0.625 mg/mL to 10 mg/ml had 
higher total phenolic content as it went from low concentration to high concentration. The IC50
value of oxiresveratrol in L929 Fibroblast cells was determined as 214.2 μM, and the IC50 value 
of oxiresveratrol in the cell line was determined as 109.7 μM in L929 Fibroblast Cells exposed 
to H2O2. The 12.5 μM dose of oxiresveratrol provided the highest cell proliferation as measured 
on the xCELLigence instrument. For the scratch test, a cell proliferation of 62% at the 24th hour 
and 88% at the 48th hour in the damaged cells with H2O2 at a dose of 12.5 μM oxyresveratrol 
was observed more than the other doses. The 12.5 μM dose was found to be the most effective 
dose in both proliferation and scratch test.
Conclusion: Oxyresveratrol; with its antioxidant capacity at low doses, it protected the 
L929 cell line from oxidative stress in cellular damage caused by H2O2, and showed a strong 
effect on fibroblast viability and migration. These results indicate that oxiresveratrol; shows that 
it can be effective at the cellular level in the prevention of acute or chronic diseases caused by 
free oxygen radicals. Oxiresveratrol can be considered as a potential molecule in the treatment 
of diseases caused by oxidative stress-related factors, with more detailed studies at the cellular 
level and in-vivo studies.
Key Words: ROS, TPC, L929, oxyresveratrol, proliferation