Deneysel hayvan modelinde oluşturulan invaziv aspergilloz enfeksiyonu tanısında kültür dışı tanı yöntemlerinin değeri
The value of noncultural methods in the diagnosis of invasive aspergillosis in an experimental animal model
Yazar: SİBEL AYDOĞAN
Danışman: PROF.DR. SEMRA KUŞTİMUR
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2007
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada, deneysel hayvan modelinde oluşturulan invaziv aspergillozenfeksiyonunun tanısında antijen testleri (galaktomannan, Î²-D glukan), moleküler yöntem(gerçek zamanlı PZR) ve lizis santrifügasyon kan kültür sisteminin erken tanıya katkılarınınayrıca dokuda kitin ölçümünün enfeksiyonun doğrulanmasına katkısının değerlendirilmesiamaçlanmıştır.Bu amaçla testler sağlıklı kontrol grubu (Grup I), nötropeni kontrol grubu (Grup II) veaspergilloz grubu (Grup III)' ndan alınan kan (serum, tam kan), BAL sıvısı ve akciğer dokuörneklerinde çalışılmıştır.Grup I ve II' de çalışılan tüm testler negatif bulunmuştur. Aspergilloz grubundanalınan 22 akciğer doku örneğinin 20' sinde kültürde üreme olmuştur. Grup I ve III' ten alınanakciğer doku örneklerinde çalışılan kitin ölçümleri arasında anlamlı derecede farkbulunmuştur (p<0.05). On adet aspergillozlu sıçandan alınan kan örnekleri lizissantrifügasyon kültür sistemiyle çalışılmış, hiçbir örnekte üreme olmamıştır. Gerçek zamanlıPZR ile 12 BAL sıvısının yedisinde (%58.3), 19 kan örneğinin yedisinde (%36.8), 22 akciğerdoku örneğinin ise dördünde (%18) pozitiflik elde edilmiştir. PlateliaÂ® Aspergillus testi ilegalaktomannan antijeni araştırılan 20 serum örneğinin yedisinde (%35) pozitif sonuçbulunmuştur. Î² glukan tespiti için serum ve bronkoalveolar lavaj sıvıları FungitellTM kiti ileçalışılmıştır. Yirmiiki serum örneğinin 11' inde (%50), 17 BAL sıvısı örneğinin dokuzunda(%52.9) pozitiflik elde edilmiştir.Sonuçta kültür dışı tanı yöntemlerinin hiçbirisi tek başına invaziv aspergilloz içinyeterli duyarlılık gösterememiştir. Diğer çalışmalarda da İA' un tanısında standartyöntemlerin bulunmamasıyla birlikte mikroorganizmanın doğası, hastalığın seyri veyaprofilaktik ya da ampirik antifungal ilaç verilmesinin etkisi sonucunda kültür dışı tanıyöntemlerinin performansı önemli derecede değişkenlik göstermiştir.Testlerin tarama amaçlı birarada kullanılabilmesi için kan örnekleri en uygun klinikörnek olarak değerlendirilmiştir. Bu sayede biyopsi gibi daha invaziv olan yöntemlereihtiyaçta önlenmiş olacaktır. Ayrıca kültür dışı tanı yöntemlerinin performanslarınıkarşılaştırabilecek ve en uygun birlikteliğin belirlenmesini sağlayacak daha geniş klinikçalışmalara ihtiyaç olduğu kanısına varılmıştır.

Abstract:
In the present study, the value of the molecular method (Real-Time PCR), antigendetection (galactomannan, glucan), and Lysis Centrifugation blood culture system(ISOLATORTM) was investigated in the diagnosis of invasive aspergillosis in the animalmodel. In addition, the determination of tissue chitin levels which was used for theconfirmation of the presence of infection was studied.These tests were studied in the blood (serum, whole blood), BAL fluid, and pulmonarytissue samples of different groups, named Group I as control group, Group II as neutropeniacontrol group, and Group III as aspergillosis group.All of the tests were found negative in Group I and II. A total of 20 of 22 pulmonarytissue samples yielded Aspergillus colonies in the aspergillosis group. There were asignificant difference between Group I and III (p<0.05) in terms of chitin levels of pulmonarytissue samples. A total of 10 rats with aspergillosis were tested using lysis centrifugationculture system and no growth was detected in any specimen. Aspergillus DNA was detectedin 7 of 12 BAL fluid samples (58.3%), 7 of 19 blood samples (36.8%), and 4 of 22 pulmonarytissue samples (%18) using Real-Time PCR method. Galactomannan antigen was detected in7 of 20 serum samples (35%) using PlateliaÂ® Aspergillus Galactomannan ELISA Assay.Quantitative detection of Î²-glucan levels were investigated by using FungitellTM assay inserum and bronchoalveolar lavage fluid samples. It was found to be positive in 11 of 22 serumsamples (%50) and 9 of 17 BAL fluid samples (%52.9).In conclusion, none of the non-culture-based diagnostic tests were shown as adequatein the diagnosis of invasive aspergillosis, individually. The confused nature of themicroorganism and the aspergillosis is related to the variability of the performance of non-culture-based diagnostic methods as reported in the literature.The blood samples were evaluated as the most valuable clinical sample for thescreening of suspected patients. Therefore, there will be no need for other invasive diagnosticmethods such as biopsy. Future clinical studies are required for comparing the performance ofthe different non-culture based diagnostic methods and the optimal integration aproaches ofthem.