Mycobacterium tuberculosis' e ait ESAT-6 ve CFP-10 proteinlerinin ekspresyonu, farklı hasta gruplarında IFN-γ ve IL-10 yanıtlarının saptanması
Ekspression of Mycobacterium tuberculosis proteins ESAT-6 and CFP-10 and measurement of IFN-γ and IL-10 cytokine responses at different patient groups
Yazar: HÜSEYİN ÇOBAN
Danışman: DOÇ.DR. NURAN ESEN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2007
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Mycobacterium tuberculosis = Mycobacterium tuberculosis ; İnterlökin 10 = Interleukin 10

Özet:
Son yıllarda latent tüberküloz hastalığının tanısında Mycobacterium tuberculosis'e aitantijenlerin yer aldığı IFN-? testleri kullanılmaya başlanmıştır. Bu testlerde kullanılan ESAT-6, CFP-10 ve PPD gibi antijenik uyaranlara karşı, çoğu yardımcı T lenfositler tarafındansentezlenen IFN-? düzeyleri ölçülmektedir.M. tuberculosis'e ait RD1 operonu tarafından sentezlenen ESAT-6 ve CFP-10antijenlerinin birlikte kullanıldığı IFN-? testlerinin duyarlılık ve özgüllüklerinin, tüberkülinderi testine kıyasla daha yüksek olduğu saptanmıştır. Ayrıca bu testlerde, BCG aşısı vegeçirilmiş tüberküloz dışı mikobakteriyel enfeksiyonlara bağlı yanlış pozitiflik oranları dahadüşüktür. Latent tüberküloz hastalığının tanısında kullanılan tüberkülin deri testine kıyasla,daha iyi sonuçlar elde edilse de bağışıklık sistemi baskılanmış bireylerde, çocuklarda, akciğerdışı tüberküloz olgularında ve tüberküloz hastalığının endemik olduğu bölgelerde, IFN-?testlerinin duyarlılık ve özgüllükleri azalmaktadır. Hastaların klinik bulgularına bağlı olarakIFN-? yanıtlarında değişkenlik olması, bu testlerin kullanım alanını latent tüberküloz hastalığıtanısıyla sınırlamaktadır. Bu nedenle özellikle tüberküloz hastalığının endemik olduğuülkelerde yaygın olarak kullanılamamaktadır.Bu çalışmada M. tuberculosis'e ait ESAT-6 ve CFP-10 proteinleri klonlandı ve M15Esherichia coli suşunda eksprese edildi. Ni-NTA agaroz afinite kromatografi tekniği ilesaflaştırıldı. Elde edilen ESAT-6 ve CFP-10 proteinlerine karşı farklı hasta gruplarında ortayaçıkan IFN-? ve IL-10 yanıtları ile ?IFN-? / ?IL-10 oranları saptandı. İyileşen tüberkülozhastaları, fibronodüler lezyonu olanlar, plevral efüzyonu olanlar, kaviter lezyonu olanlar,çoklu kaviter lezyonu olanlar, milier tutulumu olanlar ve nükseden tüberküloz hastaları olarakgruplandırılan 78 hastanın sonuçları 34 kişiden oluşan sağlıklı kontrol grubuyla karşılaştırıldı.Ayrıca sonuçlar, kontrol gurubu içerisinden ülkemizin tüberküloz enfeksiyonu prevalansınauygun oranda IFN-? yanıtları yüksek olan 10 kişinin çıkartılmasıyla elde edilen 2. kontrolgrubuyla da tekrarlandı.?IFN-? ve ?IL-10 yanıtları ile ?IFN-? / ?IL-10 oranlarının, prognostik değeri olduğubilinen klinik, radyolojik ve laboratuvar bulgularıyla uyumlu oldukları saptandı. IFN-?testlerine ek olarak IL-10 gibi sıvısal ya da regülatör yanıtın göstergesi olan sitokininölçülmesinin, ayrıca tüberküloz basiline karşı geliştirilen bağışık yanıt durumunu göreceliolarak ortaya koyan ?IFN-? / ?IL-10 oranlarının belirlenmesinin testin duyarlılık veözgüllüğünü arttırdığı saptandı.

Abstract:
IFN-? tests as an alternative to tuberculin skin test, for the diagnosis of latent tuberculosisdisease. IFN-? levels synthesized by T lymphocytes which are accessory in high proportionagainst the antigenic stimulations are measured.It was established that the sensitivity and specificity of the IFN-? tests in which concomitantlyused with M. tuberculosis-specific ESAT-6 and CFP-10 synthesized by RD1 operon was highercompared to the tuberculin skin test. In addition, the false positivity rates related with BCGvaccination and previous nontuberculous mycobacterial infections were lower in these tests.Although better results were obtained in the diagnosis of latent tuberculosis disease comparedto tuberculin skin test, the sensitivity and specificity of the IFN-? tests decreased inimmunosuppressed individuals, children, cases with extra-pulmonary tuberculosis and endemicplaces for the tuberculosis disease.Application area of the test may remain limited with the diagnosis of latent tuberculosisdisease due to the variety of IFN-? response related to patient clinic; hence this test is not usedwidely particularly in regions where tuberculosis disease is endemic.In this study M. tuberculosis-specific ESAT-6 and CFP-10 proteins were cloned and wereexpressed in M15 Esherichia coli strain. These proteins were purified by using Ni-NTA agaroseaffinity chromatography technique. IFN-? and IL-10 responses and ?IFN-? / ?IL-10 rates wereobtained occurring in different patient groups against ESAT-6 and CFP-10 proteins.The results of 78 patients referred as a group including the patients with fibronodular lesions,pleural effusion, cavity lesions, multiple cavity lesions, miliary involvement, recurrenttuberculosis, and recovered tuberculosis disease were compared with healthy control groupconsists of 34 person. These results were also compared with a second control group after theexclusion of 10 patient whose IFN-? responses were high, according to the tuberculosis diseaseprevalence in our country.It was obtained that the ?IFN-? and ?IL-10 responses and ?IFN-? / ?IL-10 rates wereconcordant with the clinical, radiological and laboratory findings having the prognostic value. Inaddition to the IFN-? tests, it was also established that the measurement of a cytokine, theindicator of such IL-10 humoral or regulator response, determination of ?IFN-? / ?IL-10 ratesreflecting the immune response status against the tuberculosis bacillus increased the sensitivityand specificity.