Meme tümörlü köpeklerde metastazik potansiyelin, preoperatif dönemde alınan periferal kandan prognostik tümör belirleyicilerin (marker) tayini ile belirlenmesi.
Determining the metastatic potential of canine mammary tumors with prognostic tumor markers in peripheral blood, on preoperative term
Yazar: ZEYNEP GÜNAY UÇMAK
Danışman: DOÇ. DR. KAZIM GÜVENÇ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Meme tümörleri, köpeklerde görülen neoplazilerin %13,4'ünü oluşturmaktadır ve mortalitenin çoğunlukla metastazlarından kaynaklandığı bilinmektedir. Günümüzde makrometastazları belirlemek için radyografi ve bilgisayarlı tomografi gibi tekniklerden faydalanılmaktadır. Mikrometastazların tayini için, moleküler tekniklerle dolaşımdaki tümör belirleyiciler (markerlar) saptanabilmektedir. 
Çalışmamızda 45 adet epitelyal tip meme tümörlü ve 9 adet sağlıklı köpekten preoperatif dönemde alınan kanlarda epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR), klaudin7 (CLDN7), epitelyal hücre adhezyon molekülü (EPCAM) markerlarının klinik parametreler üzerine etkisi değerlendirilerek, meme tümörlü köpeklerdeki prognostik öneminin ortaya konulması amaçlandı. Bu amaçla alınan periferal kanlardan öncelikle RNA izole edildi ve sonrasında cDNA sentezlendi. Son aşamada rt-PCR yöntemiyle bu markerların ekspresyon düzeylerine bakıldı. Elde edilen sonuçlar, Oneway-Anova, t-testi, Pearson korrelasyon ve ki-kare istatistik metotlarıyla değerlendirildi. Buna göre, çalışma ve kontrol grubunda EGFR ve CLDN7 genlerinin ekspresyonu açısından farkın önemli olduğu ve tümörlü köpeklerde bu markerların ortalama değerlerinin daha yüksek miktarlarda ölçüldüğü saptandı. Ayrıca EGFR, CLDN7 ve EPCAM markerları arasında pozitif korrelasyon tespit edildi. Çalışma grubundaki köpeklerin kanlarında yüksekten düşüğe sırasıyla EPCAM, EGFR ve CLDN7 markerlarının eksprese olduğu saptandı. Kanda EPCAM markerı kitle büyüklüğü arttıkça daha yüksek oranda ölçülürken, EGFR markerının ise kitle büyüklüğü azaldıkça daha yüksek miktarda ölçüldüğü belirlendi. Bunun yanısıra ülserasyon varlığında ve metastazik meme tümörlü köpeklerde CLDN7 markerının saptanabildiği ve ekspresyon düzeyinde artış olduğu tespit edildi. 
Sonuç olarak; bu tez çalışmasıyla, EGFR, CLDN7 ve EPCAM genleriyle klinik parametreler arasındaki ilişki değerlendirilerek, meme tümörlü köpeklerde preoperatif dönemde kandan bu markerların ölçülebildiği ve köpeklerdeki etkinliği ortaya konuldu. Böylece meme tümörlü köpeklere erken teşhis ve tedavi şansı sunuldu. 
Anahtar Kelimeler: Köpek, meme tümörü, dolaşımdaki tümör belirleyiciler, rt-PCR, metastaz.
Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 31510

Abstract:
Mammary tumors are 13.4% of neoplasms in dogs and the mortality usually arise from the metastasis. Nowadays, radiography and computed tomography are used for determining the macrometastasis. For determining the micrometastasis, circulating tumor cells can be arranged by molecular techniques.
	 In our research, epidermal growth factor receptor (EGFR), claudin7 (CLDN7), epithelial cell adhesion molecule (EPCAM) markers are investigated in blood of 9 healthy dogs and 45 dogs with epithelial tumor on preoperative term. The aim of our study is to evaluate the effects of the markers on clinical parameters and reveal the prognostic importance on dogs with mammary tumor. For this purpose, firstly RNA was isolated from peripheral blood and cDNA was synthesized. After, expression levels of this markers were determined by rt-PCR method. The results were investigated statistically by Oneway-Anova, t-test, Pearson correlation and chi-quare methods. According to this, there was statistically significiant differences on EGFR and CLDN7 expression between study and control groups. Mean values of this markers were measured higher in study group than control group. Also there was positive correlation between EGFR,CLDN7, EPCAM markers. In study group, EPCAM, EGFR and CLDN7 markers were highly expressed, respectively. In addition to this, EPCAM was highly expressed in increased tumor size but EGFR was highly expressed in decreased tumor size. Otherwise, CLDN7 was highly expressed in metastatic and ulcerative tumors.
	In conclusion; efficiency and measurability of EGFR, CLDN7, EPCAM markers in peripheral blood of the dogs with mammary tumor on preoperative term were proved. Thus, early diagnosis and treatment chance is presented for dogs with mammary tumor.
Key Words: Canine, mammary tumor, circulating tumor cells, rt-PCR, metastasis.
The present work was supported by the Research Fund of Istanbul University. Project No. 31510