Deneysel omurilik yaralanmasında ürolitin A ve nar ekstresinin mitofaji ve inflamasyon üzerine etkisi
The effect of urolithin A and pomegranate extract on mitophagy and inflammation in experimental spinal cord injury
Yazar: SELÇUK YAPAR
Danışman: DOÇ. DR. MUSTAFA NAMIK ÖZTANIR
Bezm-i Alem Vakıf Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Beyin-Sinir ve Omurilik Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery
Dizin: Bitki özütü = Plant extract ; Mitofaji = Mitophagy ; Nar suyu = Pomegranate juice ; Spinal kord yaralanmaları = Spinal cord injuries ; Spinal yaralanmalar = Spinal injuries ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries ; Ürolitin A = Urolithin A ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Giriş: Ratlarda oluşturulan deneysel spinal kord yaralanması sonrasında uygulanan Ürolitin A ve Nar Ekstresinin mitofaji ve inflamatuar parametreler üzerine etkilerinin araştırılması.
Yöntem: Çalışmamız Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi Deney Hayvanları Laboratuarı'nda, immünhistokimya çalışmaları Bezmialem Vakıf Üniversitesi Histoloji Laboratuarı'nda, elisa ve Western blot testleri Bezmialem Vakıf Üniversitesi Beykoz Araştırma Merkezi Beyin ve Sinir Cerrahisi Laboratuarı'nda gerçekleştirilmiştir. Çalışmamız 4 gruptan oluşup tüm gruplarda 8'er adet olmak üzere toplamda 32 adet Sprague Dawley cinsi sıçanlar kullanıldı. Tüm deney gruplarına T9- T10 laminektomi yapıldı. Sham grubu dışındaki gruplara laminektomiyi takiben dura ortaya kondu ve Yaşargil Anevrizma Klibi ile omuriliğe kompresyon uygulanarak hasar oluşturuldu. Travma sonrası sham ve travma grubuna tedavi verilmezken Ürolitin A grubuna 12, 24 ve 36. saatlerde 50 mg/kg dozunda Ürolitin A gavaj ile verildi. Nar Ekstresi grubuna ise yine 12, 24 ve 36. saatlerde 1 ml Nar Esktresi verildi. Denekler daha sonra 48. saatte sakrifiye edilerek immünhistokimya, Elisa ve Western blot incemelesi için spinal kordlarındaki hasarlı doku örnekleri alındı.
Bulgular: İnflamasyon markerlarından IL–6 ve TNF-α seviyesinin ELİSA ile değerlendirilmesinde istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar elde edilemedi. İmmunohistokimyasal incelemede hematoksilen eozin ile boyanmada sham grubu histolojik yapısı en iyi korunan grup olurken Nar Ekstresi grubu sham grubuna en yakın grup oldu. Nix ile immun boyanmada Nar Ekstresi grubu travma grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede düşük olarak görüldü (p = 0,020). Ürolitin A grubu da aynı şekilde nix ile daha az reaksiyon vermesine rağmen istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı (p=0,769). Nix'in Western blot ile değerlendirmesinde de bu immünhistokimya sonuçlarına paralel bir sonuç elde edildi. Parkin ise her ne kadar mitofajide önemli bir molekül olsa da gerek immünhistokimya ile gerekse Western blot ile değerlendirmede anlamlı sonuç vermedi.
Sonuç: Çalışmamızdaki verilerin neticesinde travmatik spinal kord hasarında Ürolitin A ve özellikle de Nar Ekstresinin aşırı mitofajiyi azaltarak tedavide etkili olduğu saptandı.
Anahtar Kelimeler: Travmatik spinal kord hasarı, Ürolitin A, Nar Ekstresi, mitofaji, inflamasyon

Abstract:
Introduction: To investigate the effects of urolithin a and pomegranate extract applied after experimental spinal cord injury in rats on mitophagy and inflammatory parameters.
Method: Our study was carried out in Bezmialem Vakif University Medical Faculty Experimental Animals Laboratory, immunohistochemistry studies in Bezmialem Vakif University Histology Laboratory, elisa and Western blot tests in Bezmialem Vakif University Beykoz Research Center Brain and Nerve Surgery Laboratory. Our study consisted of 4 groups and a total of 32 Sprague Dawley rats, 8 in each group, were used. T9-T10 laminectomy was performed in all experimental groups. The dura was exposed following laminectomy in groups other than the sham group, and damage was created by applying compression to the spinal cord with the Yaşargil Aneurysm Clip. While no treatment was given to the sham and trauma groups after trauma, urolithin a group was given 50 mg/kg urolithin a by gavage at 12, 24 and 36 hours. The pomegranate extract group was given 1 ml of pomegranate extract at 12, 24 and 36 hours. Subjects were subsequently sacrificed at 48 hours and damaged tissue samples from their spinal cords were obtained for immunohistochemistry, ELISA, and Western blot examination.
Results: Statistically significant results were not obtained in the evaluation of IL-6 and TNF-α levels, which are inflammation markers, by ELISA. In immunohistochemical examination, the sham group was the group whose histological structure was best preserved in hematoxylin-eosin staining, while the pomegranate extract group was the closest group to the sham group. In immunostaining with Nix, the pomegranate extract group was statistically significantly lower than the trauma group. (p=0.020) Urolithin a group. Similarly, although it gave less reaction with nix, it was not found statistically significant. (p=0.769) A result parallel to these immunohistochemistry results was obtained in the evaluation of Nix with Western blot. Parkin, on the other hand, although an important molecule in mitophagy, did not yield significant results in the evaluation either by immunohistochemistry or Western blot.
Conclusion: As a result of the data in our study, it was determined that urolithin a and especially pomegranate extract were effective in the treatment of traumatic spinal cord injury by reducing excessive mitophagy.
Keywords: Traumatic spinal cord injury, urolithin a, pomegranate extract, mitophagy, inflammation