Ankara keçilerinde embriyo transfer uygulamaları
Embryo transfer in Angora goats
Yazar: KÜBRA KARAKAŞ
Danışman: PROF. DR. İSMAİL HAKKI İZGÜR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Ankara = Ankara ; Ankara keçisi = Angora goat ; Embriyo = Embryo ; Embriyo nakli = Embryo transfer ; Keçiler = Goats ; Süperovülasyon = Superovulation ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Bu çalışmanın amaçları, Ankara Keçileri'nde aşım sezonu başı (Ekim 2013; Grup 1) ve aşım sezonu sonunda (Aralık 2013; Grup 2) yapılan süperovulasyon protokolüne bağlı olarak embriyo elde etme oranını karşılaştırmak ve taze olarak ya da dondurulup-çözdürüldükten sonra transfer edilen embriyoların canlılığını ve hayatta kalma oranını değerlendirmekti. Bu amaçla, 5 Ankara Keçisi tekesi ile çiftleştirilen 9 Ankara Keçisi keçisi verici ve 30 Ankara Keçisi keçisi ise alıcı olarak kullanıldı. Çalışma Ankara Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu'nun etik kurul onayı ile Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Eğitim, Araştırma ve Uygulama Çiftliği'nde gerçekleştirildi.
Verici keçilere geleneksel senkronizasyon ve süperovulasyon protokolleri uygulandı ve fertil tekelerle çiftleştirildi. Geleneksel süperovulasyon protokolünde 11 gün süreyle 0.33 gr progesteron içeren preparat (CIDR® , Eazi-Breed, Animal Health) intravaginal yolla uygulandı ve bunu takip eden 9. günden başlayarak altı kez azalan doz halinde FSH (Folltropin-V®, Bioniche Animal Health, 200 mg)kas içi enjekte edildi. Protokolde FSH uygulaması ile birlikte bir kez prostaglandin (Dalmazin®, Vetaş; 150 µg kloprostenol), progesteron kaynağını uzaklaştırdıktan 24 saat sonra ise bir kez GnRH analogu (Receptal®, Intervet; 8,4 µg) uygulandı ve GnRH enjeksiyonunu takip eden 6-16. saatlerde keçiler fertilitesi belirlenmiş tekelerle çiftleştirildi. Çiftleşme sonrası 156. saatte in vivo üretilen embriyolar cerrahi yöntemle toplandı ve stereo mikroskop altında bulunan embriyolar IETS (Uluslararası Embriyo Transfer Topluluğu) tarafından belirtilen kriterlere uygun olarak değerlendirildi. Sezon başında yapılan uygulamada 9 keçiden 49 Expanded Blastosist (ExpBl), 18 Blastosist (Bl), 27 Hatched Blastosist (HtcBl), 9 Dejenere Embriyo ve 5 fertilize olmamış oosit (UFO) olmak üzere toplam 108 adet hücre; sezon sonunda ise aynı keçilerden 15 ExpBl, 27 Bl, 14 HtcBl, 7 Dejenere Embriyo ve 8 UFO olmak üzere toplam 71 hücre elde edildi. Taze ya da dondurulup çözdürülmüş embriyolar cerrahi yöntemle transfer edildi. Grup 1'de taze / dondurulmuş çözdürülmüş embriyolar sırasıyla 15 / 15 keçiye ve Grup 2'de ise taze / dondurulmuş çözdürülmüş embriyolar sırasıyla 8 / 8 keçiye transfer edildi. Her bir alıcının ovaryumundaki korpus luteum varlığına bağlı olarak bir ya da iki embriyo ipsilateral olarak transfer edildi. Transferin 30. gününde, keçiler transrektal ultrasonografi ile muayene edildi, taze / dondurulup çözdürülmüş transfer edilmiş embriyo için gebelik oranları sırasıyla grup 1'de %73,3 / %20 ve grup 2'de %100 / %37,5 olarak belirlendi. Transferin 90. gününde, keçiler tekrar transrektal ultrasonografi ile muayene edildi, taze / dondurulup çözdürülmüş transfer edilmiş embriyo için gebelik oranları sırasıyla grup 1'de %46,6 / %0 ve grup 2'de %37,5 / %0 olarak belirlendi. 
Sezon başında ve sezon sonunda elde edilen toplam embriyo sayısı SPSS® (Version 14.01, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) paket programından yararlanılarak ve minimum %5 hata payı ile değerlendirildi. Değişkenlere ait tanımlayıcı ölçüler, "aritmetik ortalama ± standart sapma" şeklinde hesaplandı. Önemlilik testlerine geçilmeden önce veriler parametrik test varsayımlarından normallik yönünden Shapiro Wilk ile varyansların homojenliği yönünden ise Levene testi ile incelendi. Zaman içerisinde yapılan ölçümler arasında istatistiksel açıdan anlamlı farklılığın incelenmesinde paired sample t test kullanıldı. Yapılan analizler sonrası Ankara Keçileri'nde sezon başında elde edilen embriyo sayısı ile sezon sonunda elde edilen embriyo sayısı arasındaki fark, istatistiksel açıdan anlamlı bulunmasıyla birlikte transfer edilebilir/dondurulabilir embriyo kalitesinde değişikliğe rastlanmadı (p<0,05).
Sonuç olarak, Ankara Keçileri'nde hem sezon başında hem de sezon sonunda süperovulasyon protokolleriyle embriyo toplanabileceği, fakat toplanan embriyo sayısında bir azalma olabileceği ve bunun sadece mevsimsel faktörlere bağlı olmadığı aynı zamanda ve daha önceki süperovulasyon protokollerine bağlı olabileceği sonucuna varıldı. Taze embriyoların transferine bağlı olarak elde edilen gebelik oranları tatmin ediciydi fakat gebe olarak belirlenen keçilerin hepsi doğurmadığı için alıcıların doğum oranında azalamaya neden oldu. Dondurulup çözdürülen embriyoların transferine bağlı olarak elde edilen başarı oranları genel olarak düşüktü ve tatmin edici değildi. Kriyoprezervasyon tekniklerinin ve Ankara Keçiler'inde embriyo yaşam oranlarının geliştirilmesi için daha fazla araştırma yapılması gerektiği kanısına varıldı.

Abstract:
The aims of this study were to compare the embryo recovery rate in Angora Goats based on application timing; at the beginning (October 2013; Group 1) and end (December 2013; Group 2) of the breeding season and to evaluate the viability and survivability of fresh or vitrified-thawed embryos when transferred. For this purpose, nine Angora Goats, mated with five fertile Angora Goat Bucks, were used as donors and thirthy Angora Goats were used as recipients. The study performed at the Ankara University Faculty of Veterinary Medicine Education and Research Farm according to the Ankara University Animal Experimentation Ethics Committee ethical approval.
Donor goats were synchronized and superovulated with traditional protocol and were mated with fertile bucks. In traditional superovulation protocol; 0.33 gr progesterone containing device (CIDR®, Eazi-Breed, Animal Health) were applied intravaginally for 11 days, and FSH (Folltropin-V®, Bioniche Animal Health, 200 mg) was injected intramuscularly as six decreasing doses subsequent 9th day. In the protocol, one dose prostaglandin (Dalmazin®, Vetaş; 150 µg kloprostenol) was injected with FSH injection and one dose GnRH analog (Receptal®, Intervet; 8,4 µg) 24 hour after removing the progesterone containing device. Then goats were mated with fertile bucks 6-16 hours later following the GnRH injection. At the 156. hour of the mating, embryos were collected surgically and evaluated under a stereo microscope according to the criteria of the IETS (Internatioanl Embryo Transfer Society). 
At the beginning of the breeding season (Group 1), a total of 108 cells (49 Expanded Blastosist (ExpBl), 18 Blastosist (Bl), 27 Hatched Blastosist (HtcBl), 9 Degenerate Embryo and 5 unfertilised oocyte (UFO) were collected. On the other hand at the end of the breeding season (Group 2) 71 cells (15 Expanded Blastosist (ExpBl), 27 Blastosist (Bl), 14 Hatched Blastosist (HtcBl), 7 Degenerate Embryo and 8 Unfertilised oocyte (UFO) were collected in total from nine goats. Fresh or vitrified-thawed embryos were transferred surgically to synchronized recipients. In Group 1 fresh / thawed embryos were transferred to 15 / 15 goats and in group 2, fresh / thawed embryos were transferred to 8 / 8 goats, respectively. Each recipient received one or two embryos ipsilateral to the ovary containing one or more corpora lutea. On the 30th day of the transfer, goats were examined by transrectal ultrasonography, pregnancy rates of fresh / thawed embryos were 73.3% / 20% for group 1 and 100% / 37.5% for group 2. On the 90th day of the transfer, goats were examined again by ultrasonography, pregnancy rates were 46,6% / 0% for group 1 and 37,5%/0% for group 2, respectively.  
The total number of collected embryos at the beginning and end of the breeding season were analyzed using SPSS® (Version 14.01, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) and for all comparisons, differences were considered with a minimum of %5 significance level. Descriptive statistics of all data were calculated and shown as 'mean ± standard error of mean'.  Paired sample t test was used to evaluate the significant differences of means among the groups, after testing normality using Shapiro Wilk test and homogeneity of variances using Levene test as parametric test assumptions. After statistical analyses, the numbers of collected embryos at the beginning and at the end of the breeding season were compared. There was no difference in freezable/transferable embryo quality and this difference was found to be statistically significant (p<0,05).
As a result, embryos could be collected after superovulation protocols in Angora Goats both at beginning and end of the breeding season, however there might be a decrease in numbers of collected embryos and the reasons for this might not be only the seasonal factors but also the previous superovulation protocols. The pregnancy rate following transfer of fresh embryos was satisfactory but not all does confirmed pregnant kidded - hence reducing the number of recipients kidding. The pregnancy rate following transfer of vitrified-thawed embryos was generally low and unsatisfactory. Further research is warrented in improving the cryopreservation techniques and thus the embryo survival rate of Angora Goat embryos.