Deneysel rat omuriliği yaralanma modelinde siklosporin tedavi edici ve koruyucu etkilerinin değerlendirilmesi
Assessment of therapeutic and preservative effects of cyclosporine in experimental rat spinal injury model
Yazar: GÜVEN KILIÇ
Danışman: DOÇ. DR. ALİ RIZA GEZİCİ
Abant İzzet Baysal Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery
Dizin: Laminektomi = Laminectomy ; Siklosporinler = Cyclosporins ; Spinal kord kompresyonu = Spinal cord compression ; Spinal stenoz = Spinal stenosis ; Spinal yaralanmalar = Spinal injuries ; Sıçanlar = Rats ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries

Özet:
Giriş: Spinal kordun yaralanmaları ekonomik ve sosyal ciddi sorunlara yol açması ve halen kabul görmüş bir tedavi şemasının olmaması nedeniyle önemini korumaktadır. Primer ve sekonder hasarlanma olarak iki grupta incelenir. Primer hasarlanma travma esnasında ortaya çıkan kompreson kontüzyon ve laserasyonu içerir. Buradaki hasarlanma miktarı travmanın büyüklüğüne, etki süresine ve absorbe edilen enerji miktarına bağlıdır. Sekonder hasarlanma ise primer hasarlanmanın tetiklediği dakikalar içinde ortaya çıkan günlerce devam eden metabolik ve biyokimyasal olayları içeren bir süreçtir. Bu alanda yapılan klinik ve deneysel araştırmalar çok büyük oranda sekonder hasarlanmayı önlemeye yöneliktir.
Method: Bu çalışmada klip kompresyon yöntemi kullanılarak meydana getirilen omurilik yaralanmaları histopatolojik (Luxol fast blue, hematoksilen –eozin ve TUNEL boyama yöntemi) ve hasar skoru muayene yöntemleri (eğik düzlem, motor muayene) kullanılarak siklosporin-A 'nın ikincil hasar üzerindeki koruyucu ve tedavi edici etkinliği araştırıldı. Çalışmada 18 adet Sprague Dawley cinsi dişi erişkin rat kullanıldı. Anesteziyi takiben T7-T9 (Torakal vertebra) mesafesinden yapılan cilt insizyonu ile paravertebral adaleler sıyrıldı grup 1 (kontrol grubu), grup 2 ( laminektomi+ kord basısı ) ve grup 3 (laminektomi+kord basısı + siklosporin-A) verilen 6'şar rattan oluşan toplam üç grup oluşturuldu. Denekler 10 gün boyunca izlenerek nörolojik fonksiyonları 1. 3. 5. ve 10. günlerde kaydedildi. Histopatolojik inceleme için 10. günde sakrifiye edildi.  
Bulgular: Histopatolojik incelemede Siklosporin-A (sandimmün-Novartis IV ampül)'nın kullanıldığı grupta travma grubuna göre hasar alanının daha küçük çapta olduğu, beyaz maddede bozulmuş aksonların daha az olduğu, yapısal bütünlüğün korunduğu nekroz ve apoptotik hücrelerin de az olduğu izlenirken travma grubunda ise hasar alanında yaygın ödem, inflamatuar hücrelerinde artış, beyaz maddede de vakuolize akson yapıları vardı. Mann Whitney-U istatiksel değerlendirmesinde ise apoptotiz ve nekrozun grup 3 de grup 2 ye göre anlamlı olarak azaldığı izlendi (p<0.05).
Kruskal Wallis testi ile tüm gruplar arasında eğik düzlem ve motor fonksiyon skorlarında istatiksel olarak anlamlı bir fark olup bu fark eğik düzlemde 10. günde (p:0.001; p<0.05) motor fonksiyon skorunda ise 5. ve10. günlerde daha da belirginleşmiştir (p:0.00;p<0.01). Grupların Mann-Whitney U ile ikili karşılaştırması değerlendirildiğinde ise eğik düzlemde 5.günden itibaren fark olup 10. günde istatistiksel olarak anlamlı bir farka ulaşmıştır (p:0.012; p<0.05), Motor fonksiyon skoru değerleri ise 5.günden itibaren anlamlı bir fark göstermiş nihayetinde 10. günde bu fark daha da artmıştır (p:0.002; p<0.001). 
Sonuç: Deneysel rat omurilik yaralanma modeli çalışmamızda siklosporin –A nın sekonder omurilik yaralanması üzerine hem koruyucu (nöroprotektif)( nekroz /apopitozis verilerinin siklosporin-A verilen grub lehine ), hem de tedavi edici (rejeneratif)( eğik düzlem ve motor skor verilerinin siklosporin-A verilen grub lehine ) etkilerini, istatistiksel olarak ortaya koyduğumuzu düşünmekteyiz. 
Anahtar kelimeler: Laminektomi, rat, omurilik basısı, siklosporin A, travma

Abstract:
Introduction: Spinal cord injuries still conserve their importance due to their serious socio-economic problematical results; and no consensual treatment algorythm has yet been concluded. They are assessed under two subtitles as primary and secondary injuries. Primary injury includes compressions, contusions and lacerations which have emerged during the trauma. The amount of damage at this stage is correlated to the magnitude, duration and the impact of energy absorbed. On the other hand, secondary injury is a process ( which is ) composed of metabolic and biochemical facts that arise during the very first minutes, those were triggered by the primary injury, and lasts for days after. Majority of the clinical and experimental trials about this issue is aimed at preventing the secondary injury.
Method: In this trial preservative and therapeutic effects of cyclosporine A in secondary injury condition; were studied -by the help of histopathological (Luxol fast blue, hematoxilene-eosinophil and TUNEL dying method) and damage scoring physical examination (inclined plane, motor examination) methods- over the spinal injury model, which was created with clip compression procedure. 18 Sprague Dawley breed mature female rats were exploited in this study. Following the anaesthesia, with a skin incision through the space between  T7-T9 (thoracal vertebras), paravertebral muscles were dissected; and three groups, 6 rats in each, were comprised: group 1 (the control group), group 2 (laminectomy + cord compression)  and group 3 (laminectomy + cord compression + cyclosporine-A). Subjects were observed for 10 days and neurophysiological functions were recorded on days 1, 3, 5 and 10. All were sacrificed at day 10 for the histopathological examination.
Findings: In histopathological examination, it was shown that the trial group (which was) exposed to Cyclosporine-A (Sandimmune-Novartis IV vial) had a less area of damage -in diameters-, fewer number of degenerated white matter axons, apoptotic cells and necrosis; and in contrast to the trauma group, the structural unity was preserved better whereas the trauma group had a wide edema on the injury site with an increase in the inflammatory cells and vacuolized axonal structures in the white matter. 
Mann Whitney-U statistical analysis showed  a significant diminution at group 3 in comparison to group 2 regarding apoptosis and necrosis (p<0.05).
With Kruskal Wallis test, a significant statistical difference between all groups, in terms of motor function scores and inclined plane results, was seen; and this difference got prominence for inclined plane in day 10 (p:0.001; p<0.05), in 5th and 10th days fort he motor function scores (p:0.00; p<0.01). When two groups were compared with Mann-Whitney U test, there was a distinction after day 5, in inclined plane, and this difference reached a statistical  significance at the 10th day (p:0.012; p<0.05). Values of motor function scores presented a significant difference by day 5 and at last the significance became bigger on day 10 (p:0.002; p<0.001).
Results: In our study of experimental, rat spinal injury model; we are convinced that we are able to present both the preservative [neuroprotective, (necrosis/apoptosis datas are in favour of the group received Cyclosporine-A)] and therapeutic effects [regenerative, (inclined plane and motor function score datum are in favour of the group received Cyclosporine-A)] of Cyclosporine-A on the  secondary spinal injury, which is statistically significant.

Key words: Laminectomy, rat, spinal compression, cyclosporine A, trauma