İnsan embriyonal karsinom hücre hattında küçük VCP ile etkileşen protein (SVIP) ve etkileşimde olduğu ubikütin proteazom sistem proteinlerinin ekspresyonlarının belirlenmesi
Determination of expression of small VCP interacting protein (SVİP) and  interacting ubiquitin proteasome system proteins in human embryonal carcinoma cell line
Yazar: ŞEYMA KİPEL
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ HİLAL NAKKAŞ
Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
SVIP, endoplasmik retikulumla ilişkili protein yıkımında görevli olan 
p97/VCP 'ye bağlanarak fonksiyonunu ve otofajiyi düzenleyen bir proteindir. SVIP'in 
sinir sistemi harici diğer hücre ve dokulardaki ekspresyonu hakkında literatürde çok 
az çalışma vardır. SVIP ile ilgili yapılan son çalışmalar SVIP'ın androjene duyarlı bir 
protein olduğunu ve ekspresyonunun androjenler tarafından düzenlendiğini 
göstermiştir. Androjenler, önemli steroid hormonlardır ve ikincil cinsiyet özellik 
gelişiminde etkileri büyüktür. Ayrıca erkek üreme sisteminde spermatogenezin 
başlaması ve devam etmesinde de rolleri vardır. Androjen reseptörlerinin mutasyonları 
genellikle erkek üreme gelişimi bozukluğu olan hastalarda görülür ve erkek 
infertilitesine neden olabilir. İnfertilite popülasyonun yaklaşık %7'sini etkileyen 
patolojik bir durumdur. Testis tümörleri 15-34 yaş arası erkeklerde en sık görülen 
malign tümörlerdir. Testis tümörlerinin yaklaşık %95'i germ hücrelerinden 
kaynaklanır. Erkek üreme sisteminde ubikütin proteazom sisteminin (UPS), infertilite 
üzerinde etkisi olduğuna dair çalışmalar vardır. Bu nedenle UPS'in bileşenleri olan 
USP26 ve UXT ekspresyonlarının araştırılması testis biyolojisi için önemlidir.
Bu bilgiler ışığında tezimde insan testis embriyonal karsinom hücrelerinde 
(CRL-2073) SVIP ve etkileşimde olduğu UPS proteinlerinin ekspresyonlarını 
belirlemek için ve SVIP siRNA transfeksiyonu sonrası baskılanan SVIP 
ekspresyonunun diğer proteinler üzerindeki etkilerini görmek için SVIP, AR, 
Ubikutin, USP26 ve UXT ekspresyonları immunofloresan, western blot ve qRT-PCT 
yöntemleriyle analiz edilmiştir. Ayrıca kontrol grubu olarak daha önce SVIP 
ekspresyonu gösterilmiş olan insan Leydig ve fare Sertoli hücre hattları kullanılmıştır. 
CRL-207 hücrelerinde kontrol siRNA ve SVIP siRNA grupları karşılaştırıldğında 
immunofloresan ve western blot sonuçlarına göre SVIP, AR ve USP26 ve Ubikutin 
ekspresyonları azalmış, UXT ekspresyonu ise artmıştır. qRT-PCR sonucuna göre ise 
SVIP siRNA verilen grupta SVIP gen ekspresyonu azalmış, AR,Ubikutin, USP26 ve 
UXT gen ekspreyonları artmıştır.
Sonuç olarak bu çalışma ile insan testis embriyonal karsinom hücrelerinde ilk 
defa SVIP ve etkileşimde olduğu UPS proteinlerinin ekspresyonu gösterildi ve 
literatüre önemli bir katkı sağlandı.
Anahtar kelimeler: Embriyonal karsinom, SVIP, UPS, AR.

Abstract:
SVIP is a protein that regulates its function and autophagy by binding to 
p97/VCP, which is involved in protein degradation associated with the endoplasmic 
reticulum. There are very few studies in the literature about the expression of SVIP in 
cells and tissues other than the nervous system. Recent studies on SVIP have shown 
that SVIP is an androgen-sensitive protein and its expression is regulated by 
androgens. Androgens are important steroid hormones and have great effects on the 
development of secondary sex characteristics. They also play a role in the initiation 
and continuation of spermatogenesis in the male reproductive system. Mutations of 
androgen receptors are often seen in patients with disorders of male reproductive 
development and can cause male infertility. Infertility is a pathological condition that 
affects approximately 7% of the population. Testicular tumors are the most common 
malignant tumors in men between the ages of 15-34. Approximately 95% of testicular 
tumors arise from germ cells. There are studies showing that the ubiquitin proteasome 
system (UPS) in the male reproductive system has an effect on infertility. Therefore, 
investigating the expressions of USP26 and UXT, which are components of the UPS, 
is important for testicular biology.
In the light of this information, in my thesis, to determine the expressions of 
SVIP and the UPS proteins with which it interacts in human testicular embryonal 
carcinoma cells (CRL-2073) and to see the effects of suppressed SVIP expression on 
other proteins after SVIP siRNA transfection, the expressions of SVIP, AR, Ubiquitin, 
USP26 and UXT were analyzed by immunofluorescence, western blot and qRT-PCT 
methods. In addition, human Leydig and mouse Sertoli cell lines, which have 
previously been shown to express SVIP, were used as control groups. When control 
siRNA and SVIP siRNA groups were compared in CRL-207 cells, SVIP, AR, USP26 
and Ubiquitin expressions decreased, while UXT expression increased, according to 
immunofluorescence and western blot results. According to the qRT-PCR results, 
SVIP gene expression decreased and AR, Ubiquitin, USP26 and UXT gene 
expressions increased in the group given SVIP siRNA.
As a result, this study demonstrated the expression of SVIP and its interacting 
UPS proteins in human testicular embryonal carcinoma cells for the first time, making 
a significant contribution to the literature.
Keywords: Embryonal carcinoma, SVIP, UPS, AR.