Normospermik vakalarda siprofloksasin in vitro sperm DNA fragmantasyonu ve sperm mitokondriyal aktivitesi üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of ciprofloxacin on in vitro sperm DNA fragmentation and sperm mitochondrial activity in normospermic cases
Yazar: ESRA SOLAK
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÖKSUN DEMİREL
Biruni Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Klinik Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: DNA = DNA ; DNA hasarı = DNA damage ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Mitokondriler = Mitochondria ; Siprofloksasin = Ciprofloxacin ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
12 ay veya daha uzun süreli korunmasız ilişkiye rağmen gebelik oluşmaması durumu infertilite olarak tanımlanır. Erkek infertilitesi üreme çağına ulaşmış çiftlerin %15' ini etkilemekte iken tüm infertil olguların yarısını oluşturur. İnfetilite, çiftlerin hem ruh sağlığını hemde sosyal yaşamlarını etkileyen önemli bir sebeptir. İnfertilite %50 kadın, %40 erkek faktörüne bağlı olarak gelişmektedir. Toplam infertil vakaların %10 luk kısmı açıklanamayan infertilite olarak belirtilmektedir. Anormal veya düzensiz kromatin paketlenmesi sperm DNA hasar mekanizmasının en önemli belirtecidir. Spermlerdeki gelişimsel anormaliler kromatin kondensasyon sürecine bağlıdır. Sperm DNA fragmantasyon indeksi ve maturasyon defekti oranları fertilizasyon öncesi sperm seçiminde çok önemlidir. Sperm DNA fragmantasyonu ile birlikte spermin hareket ederek oosite ulaşması için gerekli olan enerji deposu mitokondrinin aktivitesi günümüzdeki araştırma konularında önem taşımaktadır. Bu çalışmada siprofloksasin antibiyotiğinin sperm DNA fragmantasyonu ve sperm mitokondiyal aktivitesi üzerindeki etkileri belirlenmek üzere Biruni Üniversitesi Hastanesine rutin kontrol amacıyla başvuran 30 erkek hastadan elde edilen örnekler kullanılmıştır. Öncelikle semen analizi gerçekleştirilen sperm hücreleri, siprofloksasin antibiyotiğinin farklı dozları uygulanmak üzere ve kontrol grubu oluşturmak üzere 3'er eşit porsiyona bölündü. Siprofloksasin, gruplara ayrılan sperm hücrelerine 7,4 ve 14,8 mikrolitrelik dozlar halinde uygulanarak iki saat boyunca 36,5 C0 inkübe edildi. İlaç dozları uygulandıktan sonra her grupta semen analizleri tekrarlanarak fark gözlemlendi. Semen numunesi yayma preparat halinde hazırlanarak acridin orange boyama tekniği ile floresan mikoskobu kullanılarak DNA hasarı belirlendi. Yüksek doz siprofloksasin antibiyotik ile inkübe edilen numunede DNA hasar oranlarında kontrol grubuna kıyasla anlamlı olarak artış tespit edildi. MTT canlılık testi ile farklı antibiyotik dozlarında inkübe edilen sperm numunelerinin mitokondriyel aktivitesi tespit edildi. Yüksek doz antibiyotiğe maruz bırakılan semen numunesinde düşük doz ve kontrol grubuna kıyasla anlamlı derece canlılık kaybının olduğu tespit edildi.

Abstract:
Infertiliy is defined as occurence of no pregnancy despite having unprotected sexual intercourse over a time period of 12 months or more. Male infertility affects the 25% of the young couples and it forms the half of the all infertility cases. Infertility is a very important issue affecting both mental state and the social life of couples. İnfertility develops by 50% of female factors and %40 of male factors. 10% of all the infertiliy cases are defined as unexplainable infertility. Abnormal or irregular chromatin packaging is the main determinant of sperm DNA damage mehanism. The developmental abnormalities of sperms are related to chromatin condensation time. The sperm DNA fragmentation index and the maturation defect raitos very important in sperm selection before the time of fertilization. The activity of mitochondria, the energy store which is needed for sperm to move and reach the oocyte, along with the sperm DNA fragmentation are carrying utmost importance at the current research topics. In this study, to determine the effects of an antibiotic known as ciprofloxacin on the sperm mitochondrial activity and sperm DNA fragmentation, the samples obtained by the 30 male patients that visited the Biruni University Hospital for routine control procedures are used. First, the semen analyzed sperm cells are divided into three equal portions to apply ciprofloxacin in different doses and to form the control group. Ciprofloxacin applied to the divided sperm groups at 7.4 and 14.8 microliters doses then incubated with the temperature of 36.5 celcius for two hours. After the application of doses, the semen analyzes are repeated and the differences are monitored. The DNA damage is determined by using the fluorescent microscope with acridine painting tecnique and by preparing as semen sample spreading preperation. It is detected that the group which incubated with high dose of ciproflaxacin had more DNA damage compared to the control group. The mitochondrial activity of the sperm samples that are incubated with the different doses of antibiotic are detected with MTT test it is determined that the semen sample exposed to the high dose of antibiotic lost its vitality more compared to the semen sample of low dose and the control group.