Premature retinopatisi olan hastalarda KDR gen polimorfizm taraması ve bazı hücre yüzey reseptörlerin ekspresyon düzeyi
The screenıng of kdr gene polymorphısm and the expressıon level of the reseptors of cell surface ın patient wıth retınopathy of prematurıty
Yazar: SEVİL ÖZSOY
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA YAVUZ KÖKER
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Endotelyum = Endothelium ; Genler = Genes ; Hücre zarı = Cell membrane ; Hücreler = Cells ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Prematüre retinopatisi = Retinopathy of prematurity ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Amaç: Prematüre retinopatisi (ROP) gelişen bebeklerde vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörü (VEGFR) KDR- gene ekpresyon analizi ve KDR- gen polimorfizmlerinin araştırılması ve bu polimorfizminin hastalık gelişimine etkisini değerlendirmektir.
Materyal ve Metod: Bu çalışma için 35-38 hafta aralığındaki hasta ve kontrol grubu, Erciyes Üniversitesi Göz Hastalıkları ABD prematüre retinopatisi (ROP) polikliniğinde takip edilen ayaktan hastalar ve Pediatri ABD yenidoğan servisinde yatarak tedavi gören üç grup hasta arasından seçildi. Akım sitometri ile immatür monositer endotelyal hücre sayımı ve karakterizasyonu (markır taraması) yapıldı. ROP gelişen bebeklerde vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörü (VEGFR) KDR- gene polimorfizm ve KDR gene ekpresyon analizi taraması yapıldı. Kan VEGF düzeyleri, anti-VEGF tedavinin immatür monositer endotelyal hücreler ve VEGF üzerindeki etkileri ölçülemesi ile sonuçların VEGF'in etki ettiği VEGFR-2 reseptör ekspresyonu paterni ve genetiği (KDR geni) ile ilişkisi değerlendirildi. Akım sitometrik analiz ile immatür monosit hücrelerinin ekspresyonlarındaki değişimi gösterildi ve bu değişimle hücrelerin aktivasyon düzeyi ölçüldü. 
Bulgular: Bu çalışmada endotel hücre öncüsü olarak CD116 hücre yüzeyi markırını akım sitometrik gen ekspresyonu analiz sonuçları hasta grubunda kontrol grubuna göre immatür monositlerin azalış gösterdiği bulundu. Ayrıca ROP hastalarındaki CD146 ekspresyonunun kontrollerdekine göre azalış bulundu. Real time PCR ile yapılan KDR gen polimorfizmi taraması için rs 34231037 snp'li mutasyonunun 11 hasta grubunun tamamında KDR geninde en sık görülen p.cys482arg polimorfizmine rastlanmadı ve hasta grubunun tamamının homozigot normal allellere sahip olduğu bulundu. Ayrıca real time PCR yöntemi ile KDR geninin ekspresyonu b-aktin ekspresyonu referans alınarak ölçülmesi ile ROP hasta grubunda 11 hastadan 7'sinde KDR gen ekspresyonunun artmış olduğu ve kontrol grubunda ise 8 kişiden 3'ünde KDR gen ekspresyonu artışı gözlendi.
Sonuç: Çalışmamızda bir parametre olarak daha geniş kapsamlı araştırma yapılmasının ROP hastalarının tedavisinin izlenmesinde katkı sağlayabileceği düşünüldü ve endotel kök hücre göstergesi olan KDR gen ekspresyonun premature bebeklerde rutin analizi, ROP hastalarının daha kolay fark edilmesine ve erken tanı ve tedavi fırsatlarına erişerek görme kaybı oluşumunu önlemeye katkı sağlayabileceği düşünüldü.
Anahtar Kelimeler:	VEGF, Endotelyal progenitor hücre, Prematüre retinopatisi; ROP, KDR-geni

Abstract:
Purpose: To investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR) expression and CRDR gene expression in infants with premature rhegmatogenous retinopathy (ROP) and to evaluate the effect of this polymorphism on disease progression.
Materials and Methods: Patients and control groups between the ages of 35-38 weeks were selected among the three patients who were followed up in the outpatient clinic of the Department of Ophthalmology of the Ophthalmology of the Erciyes University of America (ROP) and inpatient treatment in the Pediatric US Newborn Service. Immuno-monocytic endothelial cell counting and characterization (scanning of the markers) was performed by flow cytometry. In infants with ROP, vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR), KDR gene polymorphism, and KDR gene expression analysis screening were performed. Measurements of blood VEGF levels, anti-VEGF treatment, immune monocyte endothelial cells, and effects on VEGF were assessed in relation to VEGFR-2 receptor expression pattern and gene (KDR gene), the results of which were influenced by VEGF. Flow cytometric analysis showed the change in the expression of immune monocyte cells and the level of activation of the cells was measured by this change.
Findings: In this study, the results of flow cytometric gene expression analysis of CD116 cell surface markers as endothelial cell precursors showed that immature monocytes decreased in the patient group compared to the control group. There was also a decrease in CD146 expression in ROP patients compared to controls. For the detection of the KDR gene polymorphism by real-time PCR, none of the 11 patients with rs 34231037 SNP mutation had the most common P.cys482arg polymorphism in the KDR gene, and all of the patient group had homozygous normal alleles. In addition, when the expression of the KDR gene was measured by using real-time PCR method with reference to b-actin expression, the expression of KDR gene was increased in 7 of 11 patients in the ROP group and in 3 of 8 in the control group.
Conclusıon: A more extensive study as a parameter in our study was thought to contribute to the follow-up of the treatment of ROP patients and routine analysis of the KDR gene expression, endothelial stem cell markers, in premature infants, helps ROP patients to be more easily identified and early detection and treatment opportunities to prevent visual loss thought it could provide.
.
Key Words:	VGEF, Endothelial progenitor cell, Retinopaty of Prematurity, ROP, KDR gene