Eribulin mesilatın T98 insan glioblastoma hücrelerinde proliferasyon ve apoptoz üzerine etkilerinin in vitro olarak değerlendirilmesi
In vitro evaluation of eribulin mesylate efficacy on proliferation and apoptosis of T98 human glioblastoma cells
Yazar: AYŞENUR AYKAN
Danışman: PROF. DR. ZELİHA YAZICI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Apoptozis = Apoptosis ; Eribulin mesylate = Eribulin mesilat ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Amaç: Glioblastoma Multiforme'de potansiyel yeni tedavi ajanı olarak, eribulin mesilatın olası antikanserojen etkilerini saptamak için, T98 insan glioblastoma hücre hattında antiproliferatif ve apoptotik etkileri araştırıldı.
Materyal ve Metod: Eribulin mesilatın T98 insan glioblastoma hücre hattı ile oluşturulan in vitro modelde, antiproliferatif etkisini değerlendirmede BrdU ve CCK-8; apoptotik etkiyi değerlendirmede Annexin V ile işaretleme metodları kullanıldı. Ayrıca, apoptotik etki mekanizmasına yönelik olarak SMAD sinyalizasyon yolağı ile ilişkisi kapsamında, eribulinin SMAD2/3 ve p-SMAD2/3 ekspresyonları üzerine etkisi değerlendirildi. 
Bulgular: 24 ve 48 saatlik inkübasyon sonrası, eribulin tüm tedavi gruplarında CCK-8 indeksini kontrole göre azalttı, ancak doza bağlı anlamlı bir etki saptanmadı. En yüksek antiproliferatif etki en düşük uygulama dozu olan 5 nM'lık dozda görüldü. Hücrelerin erken ve geç apoptozunu belirlemek için Annexin V ile yapılan floresan boyamada, eribulin 24 saatlik inkübasyonda 10 nM'dan itibaren kontrol grubuna göre doza bağlı olarak apoptozu anlamlı olarak artırdı. 48 saatlik inkübasyonda en yüksek apoptotik etki 5 nM'da saptandı. SMAD2/3 ve p-SMAD2/3 ekspresyonları tedavi gruplarında, inkübasyon süresi ile ilişkili olarak, anlamlı olarak artı. CCK-8, Annexin V, SMAD ve p-SMAD parametreleri arasında anlamlı korelasyon saptandı.
Sonuç: Bu sonuçlar bize eribulinin T98 insan glioblastoma hücrelerinde apoptotik ve antiproliferatif aktivitesinin varlığını ve bu aktivitenin SMAD2/3 ve p-SMAD2/3 ekspresyonlarındaki artış ile ilişkili olabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Objective: Eribulin mesylate, a potential new therapeutic agent for Glioblastoma Multiforme treatment, was investigated to identify possible anticancer effect with its antiproliferative and apoptotic effects on T98 human glioblastoma cell line.
Material and Methods: In vitro model of T98 human glioblastoma cell line was used to identify antiproliferative and apoptotic effects of eribulin mesylate. BrdU and CCK-8 methods were applied to evaluate the antiproliferative effect and Annexin V marking method was used to determine the apoptotic effect. Additionally, eribulin's effects were evaluated on SMAD2/3 and p-SMAD2/3 expressions due to the relationship between SMAD signaling pathway and apoptosis. 
Results: After 24 and 48 hours of incubation period, eribulin reduced the CCK-8 index in all treatment groups compared to the control group but no significant effect was observed dependent to dosage. Maximum antiproliferation effect was established at the lowest dosage group (5 nM). In the fluorescent staining, Annexin V used to determine early and late apoptosis of the cells. After 24 hours incubation period, eribulin significantly increased apoptosis on 10 nM and higher dosage groups comparing to control group and this effect was related to dosage. After 48 hours incubation period, the highest apoptotic effect was detected at 5 nM dosage group. SMAD2/3 and p-SMAD2/3 expressions significantly increased in all treatment groups in line with the incubation period. Significant correlations were determined between CCK-8, Annexin V, SMAD and p-SMAD parameters.
Conclusion: These results demonstrate that Eribulin mesylate has apoptotic and antiproliferative effect on T98 human glioblastoma cells and this may be associated with increasing of SMAD2/3 and p-SMAD2/3 expressions.