Doğal ortamlardan izole edilen alkalifilik toprak bakterilerinde plazmid kodlu Na-tellurit dirençliliği ve transformasyon olanaklarının araştırılması
Research of possibility the transformation and resistance Na-tellurite originated plasmide at the soil bacteria isolated from natural environment
Yazar: HURREM TURAN AKKOYUN
Danışman: Y.DOÇ.DR. NURSEL DOSTBİL
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalısmada Na-tellurit bilesiginin toprak bakterilerinden alkalifilik Bacillus spp.suslarında inhibitör etkisi arastırıldı. Bakteriler Na-tellurit bilesigine 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50,60, 70, 80, 90, 100, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 178 ve 180 ?g/ml artankonsantrasyonlara denendi. zolatların 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50 ve 60 ?g/mlkonsantrasyonlardaki Na-tellurit denemesinde çogunlukla dirençlilik gösterirken 70, 80, 90,100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 178 ve 180 ?g/ml olarak denenenkonsantrasyonlarda ise hassasiyet profili gösterdigi saptandı. Aynı sekilde 60, 70, 80, 90, 100,120, 130, 150 ve 160 ?g/ml konsantrasyonlarda da plasmid kodlu dirençlilik gözlendi. 80?g/ml konsantrasyon denemesinde en fazla plasmid kodlu dirençlilik gösteren 5 ayrı susbelirlendi. zolatlar için MICs degeri ve 0.8 ?g/ml olarak belirlendi. Diger parametrelerde iseplasmid kodlu dirençlilige rastlanmadı. 180 ?g/ml konsantrasyon denemesinde de denenenhiç bir izolatın üremedigi ve %100 hassasiyet gösterdigi bulundu.zolatların Na-tellurit bilesigine ve Chloramphenikol antibiyotigine plasmid kodludirençliliginin saptanması için Acridine orange (20 ?g/ml)ve Ethidium Bromid (10-5 M) ileplasmid eliminasyonu yapıldı. zolatlarda Bacillus spp.'ye ait %60.86 Na-tellurit bilesiginehassasiyet, %39.13 dirençlilik fenomeni ve %21.10 oranında plasmid kodlu Na-telluritdirençliligi bulundu. Na-tellurit bilesigine ve antibiyotige karsı dirençlilik genini tasıyanplasmidler (B. cereus T112-Na-TeR), Na-tellurit bilesigine ve antibiyotige hassasiyet gösterensusa (B. megaterium DSM 32-Na-TeS)transformasyonu yoluyla aktarıldı. zolatları arasındaprotoplast transformasyon yoluyla 108 transformant elde edildi. Agaroz jel elektroforezdeseperasyonu yapıldı. Na-tellurit bilesigine ve antibiyotige dirençli suslardan izole edilenplasmidin 22.514 bp moleküler agırlıga sahip oldugu saptandı.Anahtar Kelimeler: Na-tellurite, Alkalifilik Bacillus spp. Plasmid, ProtoplastTransformasyonui

Abstract:
In this study, researched the inhibitor effect at the Bacillus spp.strains from the soilbacteria of Na-tellurit compound. Bacteria treatmented at the remaining concentrations 1, 5,10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 178 ve 180 ?g/mlthe Na-tellurite compound. Isolates which was at the experiment Na-tellurite in the 1 5, 10,20, 30, 40, 50 ve 60 ?g/ml concentrations mostly showed resistant but determined thesensitiveness profile at the its experiment concentration as 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130,140, 150, 160, 170, 175, 178 ve 180 ?g/ml Na-tellurite compound. In the same way weobserved resistance originated plasmid at the 60, 70, 80, 90, 100, 120, 130, 150 ve 160 ?g/mlconcentrations. At the experiment of 80 ?g/ml concentration determined five differentsatrains showing most resistance originated plasmid. At the other parameter wasn?t happen atthe same and at the experiment of 180 ?g/ml concentration weren?t growth of any izolate too.However they determined to showing %100 sensitiveness. For Bacillus spp. determinedMICs of 0.8 ?g Na-tellurit. Of present izolate were maked to plasmid eliminate with fordetermine of the resistance originated plasmid with acridine orange (20 ?g/ml) and ethidiumbromid (10-5 M) with plasmid eliminated Na-tellurite compound and Chloramphenicolantibiotic. At the isolates were determined the Na-tellurite resistance originated plasmid atthe %21.10 ratio and the %39.13 resistance phenomenon, sensitive the % 60.86 Na-telluritecompound belong to Bacillus spp.. Plasmids B. cereus T112-Na-TeR carriering the resistancegene against to antibiotic and Na-tellurite compound were transfered by way of protoplasttransformation to B. megaterium DSM 32-Na-TeS strain showing sensitiveness to antibioticand Na-tellurit compound. From the soil izolates, 108 transformants via protoplasttransformation were obtained. The seperation of plasmid was made in the agarous gelelectrophoresis after the isolation. It was determined that the plasmids isolated from thestrains resistant to Na-tellurit and antibiotic had 22.514 bp molecular weight.Key Words: Na-tellurite, Alkalophilic Bacillus spp. Plasmide, Protoplast Transformation