Ürün depolarından izole edilen Bacillus thuringiensis izolatlarının karakterizasyonu ve depo zararlısı böcekler üzerine toksik etkisi
Characterization of Bacillus thuringiensis isolates obtained from storage silos and their toxic effect on stored product insects
Yazar: NURETTİN DEMİREZEN
Danışman: DOÇ. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Bacillus thuringiensis = Bacillus thuringiensis ; Depolanmış ürün zararlıları = Stored product pests ; Ephestia kuehniella = Ephestia kuehniella ; Plodia interpunctella = Plodia interpunctella

Özet:
Bacillus thuringiensis (Bt) izolatlarını belirlemek için yapılan bu çalışmada Kayseri ve Nevşehir'in farklı yerlerindeki ürün depolarından alınan numunelerden 54 farklı izolat elde edilmiştir. İzolatların total DNA'ları izole edildikten sonra cry1Ad171, cry1Ac180, cry1A216, cry1B367 ve cry1D290 primerleri kullanılarak PZR analizleri yapılmıştır. 54 izolattan 5'nin cry1 geni taşıdığı tespit edilmiştir. Kontrol suşu ve ND7-3 izolatı cry1Ac 180, cry1B367 ve cry1D290 primerleri ile yapılan PZR sonucu aynı büyüklükte bant vermiştir. Ephestia kuehniella ve Plodia interpunctella larvaları üzerinde kontrol suşu ile ND8-2 ve ND11-3 izolatlarının yakın toksik etki gösterdiği bunun yanı sıra ND7-3 izolatının P. İnterpunctella uygulamalarında kontrol suşundan daha etkili olduğu tespit edilmiştir. İzolatların P. interpunctella larvaları üzerinde, kontrol suşunun ise E. kuehniella larvaları üzerinde daha yüksek öldürücü etki gösterdiği tespit edilmiştir. Belirlenen izolatlardan E. kuehniella ve P. interpunctella için en etkilisinin ND8-2 ve ND11-3 olduğu ve bu izolatların uygulanan 2000 ve 4000 ppm'lik dozlarda larvaların çoğunu öldürdüğü gözlenmiştir. Biyoassay çalışmaları sonucunda elde edilen izolatlardan en etkilisinin ND11-3 olduğu anlaşılmıştır. Spor-kristal karışımı uygulanan larvaların kontrol larva grubu ile kıyaslaması yapıldığında larval gelişim periyodunun belirgin bir şekilde zayıfladığı görülmüştür. İzolatların plazmit profilleri bakımından standart suş ve kıyaslanan diğer örnekler arasında farklılık gözlenmiştir. İzolatların kristal protein profilleri 25 ile 140 kDa arasında değişiklik göstermiştir.

Abstract:
In this study, 54 Bacillus thuringiensis (Bt) isolates were obtained from storage silos in Kayseri and Nevşehir. After total DNA isolation PCR analysis were carried out by using primers designed for cry1Ad, cry1Ac, cry1A, cry1B and cry1D genes. Fifty four Bt isolates were screened by PCR and 5 of them were positive for cry1 gene. The reference strain and ND7-3 isolates gave expected size bands after PCR, by using cry1Ac180, cry1B367 and cry1D290 primers. ND8-2 and ND11-3 isolates showed smilar toxicity with reference strain against Ephestia kuehniella ve Plodia interpunctella larvae. ND7-3 isolate was found to be more effective compared to reference strain against P. interpunctella larvae. Our isolates were found to be more toxic agains P. interpunctella larvae than E. kuehniella. ND8-2 and ND11-3 isolates produced the most effective toxins of all the isolates tested against the larvae, increasing doses of these toxins caused increasing mortality of the larvae. Spore-crystal mixture of the isolates delayed the developmental periods of the larvae. Plasmid profiles of the isolates were different from standart strain and each other. The protein profiles of five B. thuringiensis isolates as well as reference strain of this species at sporulation were analyzed by SDS-PAGE. The protein profiles of Bt isolates were separated into several proteins were in the range of 25-140 kDa on the basis of molecular mass.