Deneysel enfekte koyunlarda kistik hidatidozun ELISA ve IFAT ile teşhisi
Diagnosis of cystic hydatidosis in experimentally infected sheep by ELISA and IFAT
Yazar: NERMİN IŞIK
Danışman: PROF. DR. FEYZULLAH GÜÇLÜ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Parazitoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Parazitoloji = Parasitology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Echinococcus = Echinococcus ; Enfeksiyonlar = Infections ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Koyunlar = Sheep

Özet:
Kistik hidatidoz, Echinococcus granulosus'un metasestod formunun neden olduğu ve önemli ekonomik kayıplar ile sağlık sorunlarına neden olan zoonotik bir enfeksiyondur. Kistik hidatidozda klinik bulgulara dayanarak tanı koymak çok zordur. Bu nedenle tanıda spesifik antikor yanıtının belirlenmesini amaçlayan serolojik yöntemler kullanılmaktadır.Bu araştırma deneysel enfekte koyunlarda kistik hidatidozun serolojik teşhisinde ELISA ve IFA testlerinin duyarlılıklarını belirlemek ve hastalığın erken teşhisinin mümkün olup olmadığını ortaya koymak amacıyla yapılmıştır. Araştırmada 10 deneme 10 kontrol olmak üzere 20 kuzu (4-5 aylık) kullanıldı. Kistli karaciğerden elde edilen 15.000 canlı protoskoleks ağız yoluyla köpeğe verildi ve iki ay sonunda gelişen E. granulosus'lar bağırsak lümeninden toplandı. Elde edilen yumurtalardan deneme grubundaki her bir koyuna yaklaşık 2000 adet oral yolla verildi. Koyunlar 12 ay boyunca takip edildi. Bu süreçte koyunlar parazite spesifik antikorlar yönünden her iki test ile muayene edildi. Kısmi purifiye kist sıvısı antijeninin kullanıldığı ELISA testi nekropsi bulguları ile kıyaslandığında %57 duyarlılık ve %67 özgüllük gösterdi. 12 ay boyunca koyunlarda gelişen antikor yanıtın farklı zamanlarda pik yaptığı gözlendi. En erken antikor cevap inokülasyondan iki hafta sonra tespit edildi. Kalsifikasyon şekillenen kistlerde antikor yanıt oluşmadığı gözlendi. Bu çalışmada protoskoleks antijeninin kullanıldığı IFA testi ile spesifik bir reaksiyon elde edilemedi.Sonuç olarak deneysel enfekte koyunlarda hidatidoz enfeksiyonlarının erken teşhisinde IFA testine göre ELISA'dan daha güvenilir sonuçlar elde edildi. Serolojik testlerin duyarlılık ve özgüllüğünün belirlenebilmesinde nekropsi sonuçlarının referans test olarak kullanılabileceği kanaatine varıldı. 12 aylık deneme süresi sonunda şekillenen kistlerin küçük çapta olması nedeniyle deneme süresinin uzatılabileceği ve IFA testinde testin duyarlılığı ve özgüllüğünü artırmak amacıyla antijenik özelliği güçlü olan parazite ait yapıların incelenmesi gerektiği düşünülmektedir.

Abstract:
Cystic hydatidosis, a zoonotic infection, is caused by metacestod formation of the Echinococcus granulosus, and it causes major economical loses and health disorders. Clinical diagnosis of cystic hydatidosis is very difficult since clinical signs is not quite. Therefore serologic methods which determine responses to specific antibodies are in use for diagnosis.This study was carried out to determine the sensitivities of ELISA and an IFA test in order to serologic diagnosis of cystic hydatidosis in experimentally infected sheep. The serology was used to determine if an early diagnosis is possible. A total of 20 sheep (4-5 months) were subjected in this study as 10 for control and another 10 for experimental group. A total of 15.000 live protoscolex collected from liver with hydatic cyst were administered into a dog via oral route, and at the end of two months, maturated E. granulosus was collected from intestinal lumen. Approximately 2000 eggs were administered into each sheep in the experiment group. Sheep had been observed for 12 months. During this period, all the sheep were checked by using both tests for parasite specific antibodies. ELISA test used with partially purified cyst fluid antigen had shown 57% sensitivity and 67% specifity when compared to necropsy. Antibody responses in sheep during 12 months were shown different peaks in different times. The foremost antibody response was determined in two weeks after inoculation. No antibody response was determined in calcified cysts. In this study, no specific responses in IFA test in which protoscolex antigen was used.In conclusion, more reliable results were observed in ELISA test in sheep with experimental infection for the diagnosis of cystic hydatidosis compared to IFA test. Necropsy findings can be used as reference for determination of sensitivity and specifity of serology. The study period could be extended due to the small cysts that have been observed at the end of 12 months and in order to increasing of sensitivity and specifity of IFA it should be examined the high antigenic structures belongs to the parasite.