Candida parapsilosis grubu türlerinin virulans özelliklerinin araştırılması
Investigation of virulance properties of C parapsilosis complex isolates
Yazar: ZEYNEP AKYÜZ
Danışman: DOÇ. DR. İLKNUR TOSUN
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Genler = Genes ; Kandida = Candida ; Virülans = Virulence

Özet:
Candida parapsilosis grubu genellikle invaziv işlemler ve prostetik aletlerle ilişkilendirilen enfeksiyonlara neden olan önemli bir maya türü olarak karşımıza çıkmaktadır.Bu çalışmada C. parapsilosis grubu türlerinin dağılımını belirlemek ve bu mayanın patogenezinde rolü olan esteraz üretimi, TPN'de üreme yeteneği, biyofilm üretimi ve SAPP genlerinin varlığının araştırılması amaçlanmıştır.Bu çalışmaya KTÜ Tıp Fakültesi Farabi Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji AbD Hasta Hizmetleri Laboratuvarına gönderilen farklı klinik ve poliklinik hastası örneklerinden elde edilen 42 C. parapsilosis izolatı dahil edilmiştir. İzolatların tür düzeyinde tanımlanması çimlenme borusu oluşturmamaları, cornmeal-Tween 80 agarda mikroskopik inceleme, CHROMagarda gösterdikleri koloni rengi ve API 20C AUXmaya identifikasyon sistemi ile sağlanmıştır. C. parapsilosis grubu izolatlarının ayırımı PCR-RFLP yöntemi ile yapılmıştır. Esteraz üretimi Tween 80 opasite testi ile, TPN solüsyonunda üreme yetenekleri KTÜ Farabi Hastanesi'nden sağlanan TPN solüsyonları kullanılarak değerlendirilmiştir. Biyofilm üretimi, tetrazolium tuzunun indirgenmesi esasına dayanan 96 kuyucuklu mikrotiter pleyt yöntemi ile tespit edilmiştir. Türlerin SAPP gen profilleri SAPP1, SAPP2, SAPP3 primerleri kulanılarak PCR yöntemi ile belirlenmiştir.Çalışmamız sonucunda izolatların 38'i (%90.5) C. parapsilosis sensu stricto, 3'ü (%7.1) C. metapsilosis, 1'i (%2.4) C. orthopsilosis olarak belirlenmiştir. C. parapsilosis sensu stricto izolatlarının %78.9'u, C. metapsilosis ve C. orthopsilosisizolatlarının hepsi pozitif esteraz aktivitesi göstermiştir. C. parapsilosis sensu stricto izolatları TPN solüsyonlarında genellikle üreme artışı gösterirken, C. metapsilosis ve C. orthopsilosis izolatları belirgin bir üreme artışı göstermemiştir. C. parapsilosis sensu stricto izolatlarında %28.9 oranında biyofilm üretimi belirlenmiştir. C. metapsilosis ve C. orthopsilosis izolatlarında biyofilm üretimi negatif olarak tespit edilmiştir. C. parapsilosis sensu stricto ve C. orthopsilosis izolatlarında tüm SAPP genleri tespit edilmiş, C. metapsilosis izolatlarının üçünde ise SAPP3 geni pozitif iken SAPP1 ve SAPP2 genleri belirlenmemiştir.Sonuç olarak, C. parapsilosis grubu türlerinin dağılımının diğer çalışma verileri ile uyumlu olduğu saptanmıştır . Çalışmamızda bulunan yeni türlerin sayıları az olduğundan türlerin virulans özellikleri arasındaki farklılıklar istatistiki düzeyde belirlenmemiştir. Bunun için daha fazla izolatla yapılacak ek çalışmalara gereksinim vardır. Ek olarak C. metapsilosis izolatlarında SAPP1 ve SAPP2'nin belirlenmemesi nedeniyle bu genlerin sekans analizi yapılmalıdır.Anahtar Kelimeler: C. parapsilosis grubu, SADH geni, virulans faktörler.

Abstract:
Candida parapsilosis complex have emerged as an important yeast species causing infections which usually occur in association with invasive procedures or prosthetic devices.The aim of this study was to determine distribution of C. parapsilosis complex isolates and analyse presence of esterase production, the capability of growth in total parenteral nutrition (TPN) solution, biofilm production and SAPP gene exspression that is involved in its pathogenesis.In this study, a total of 42 C. parapsilosis complex isolates were included that isolated from various samples of inpatients and outpatients which were sent to the Laboratory of Clinical Microbiology in Karadeniz Technical University, Faculty of Medicine. Isolates were identifiedto species level by non production of germ tube, microscopic evaluation on cornmeal-Tween 80 agar, determination of colour of colonies on CHROMagar and API 20C AUX identification kits. Seperation of C. parapsilosis complex was performed by PCR-RFLP. Esterase activity of the C. parapsilosis complex strains were determined by using Tween-80 opacity test. The capability of growth in TPN solution was assessed. Biofilm production was determined by using 96 well plate-based method that is based on reduction of a tetrazolium salt. SAPP gene profile of the isolates were determined by using PCR with primers of SAPP1, SAPP2 and SAPP3.Of the total 42 C. parapsilosis complex isolates, 38 (%90.5) were identified as C. parapsilosis sensu stricto, 3 (%7.1) C. metapsilosis and 1 (%2.4) C. orthopsilosis, respectively. %78.9 of C. parapsilosis sensu stricto and all of the C. metapsilosis and C. orthopsilosis isolates (%100) yielded with positive esteraz activity. While C. parapsilosis sensu stricto isolates generally showed increased growth, C. metapsilosis and C. orthopsilosis isolates did not show as markedly growth in TPN solution. Of C. parapsilosis sensu stricto isolates, %28.9 produced biofilm. C. orthopsilosis and C. metapsilosis isolates did not produce biofilm. C. parapsilosis sensu stricto and C .orthopsilosis were positive for all of SAPP genes. Among to the C. metapsilosis isolates, all of them hadSAPP3, but presence of SAPP1 and SAPP2 genes were not determined.In conclusion, it was found that the distribution of C. parapsilosis complex species was in paralel with other studies. Difference among virulance factors of the species can notbe determined at statistically significant level because of small number of the newly described isolates. For this reason, additional study is required which much isolates will be used. Additionally, because of SAPP1 and SAPP2 genes were not determined in 2 C. metapsilosis isolates, sequence analysis of this genes must be performed.Key Words: C. parapsilosis complex, SADH gene, virulance factors.