Ubikuitini aktive edici enzim E1`in kan ve plasentadan saflaştırılması, antikor üretilmesi ve doku dağılımının incelenmesi
The Purification of E1 (Ubiquitin activating enzyme) from blood and placenta, antibody production and the tissue distribution of E1
Yazar: AHMET KIZILTUNÇ
Danışman: PROF.DR. YAŞAR NURİ ŞAHİN
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1996
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antikor yapıcı hücreler = Antibody producing cells ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Enzimler = Enzymes ; Proteinler = Proteins ; Ubikuitinler = Ubiquitins

Özet:
II ÖZET Ubikuitin 76 amino asitlik, sadece ökaryot hücrelerin zarında, sitoplazmasında ve çekirdeklerinde bulunan bir proteindir. Bu proteinin bir çok fonksiyonu yanında en iyi bilineni hücre içerisinde anormal, kısa ömürlü ve düzenleyici proteinlerin yıkımında görev almasıdır. Bu amaçla Ub, ATP'nin varlığında multienzim yolunun ilk enzimi olan Ub aktive edici enzimle (E1) aktive edilip fonksiyon kazanarak, Ub taşıyıcı enzim (E2) ve Ub-ligaz (E3) enzimleri üzerinden hedef proteine bağlanmaktadır. E1 enziminin plasenta dokusunda ki varlığını araştırmak gayesi ile kan ve plasentadan sataştırıldı ve doku dağılımı incelendi. Enzim DEAE-selüloz ve afinite kromatoğrafisi teknikleri ile materyallerden saflaştırıldı. Saflaştırılan E1 enziminin saflığı SDS-PAGE de test edildi. ELISA ve Immünohistokimyasal çalışmalarda kullanılmak üzere E1 enzim proteinine karşı tavşanlarda antikor üretildi. Üretilen antikorun spesifikliği ELISA yöntemi ile test edildi. Plasenta doku kesitlerinde E1 enziminin varlığını araştırmak için üretilen antikor ile doku kesitleri immünohistokimyasal olarak boyandı. Boyama sonucu plasenta desidual hücrelerinin bazılarının sitoplazmalarının boyandığı tesbit edilerek plasenta dokusunda E1 enziminin var olduğuna karar verildi.

Abstract:
SUMMARY THE PURIFICATION OF E1 (UBIQUITIN ACTIVATING ENZYME) FROM BLOOD AND PLACENTA, ANTIBODY PRODUCTION AND THE TISSUE DISTRIBUTION OF E1 Ubiquitin with 76 amino acid residues is only found in cytoplasmic membranes, cytoplasms and nuclei of eukaryotic cells. In addition to its many functions, the most known one is that it plays a role in degradation of abnormal, short-lived and regulatory proteins. For this purpose, Ub in the presence of ATP, is activated by E1, which is the first enzyme of multienzyme pathway, and binds to target proteins via E2 (Ub carrying enzyme) and E3 (Ub-ligase). Ub was purified from both placenta and blood, and its tissue distribution was investigated. The enzyme was purified by DEAE-cellulose and affinity chromatography from the materials inquestion. The purify of the purified E1 enzyme was tested by SDS- PAGE. An antibody against E1 enzyme was produced for the use in ELISA and immunohistochemical studies. The spesificity of the antibody produced was tested with ELISA. Tissue sections were stained immunohistochemically with the antibody produced for the investigation of the presence of E1 enzyme in placental sections. It was concluded that E1 enzyme is present in placental tissue, since some of the placental decidual ceil cytoplasms showed staining.