Deri prik testi ve spesifik ıge ölçümleri ile hem bal hem de yaban arısı pozitifliği olan hastalarda bat ve allerjen komponent testlerinin karşılaştırması
Comparison of skin prick test and specific ige measurements with bat and allergen component tests in pati̇ents with both honey and wasp positive
Yazar: ESRA ÖZSOY
Danışman: PROF. DR. İNSU YILMAZ
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology

Özet:
DERİ PRİK TESTİ VE SPESİFİK IGE ÖLÇÜMLERİ İLE HEM BAL HEM DE YABAN ARISI POZİTİFLİĞİ OLAN HASTALARDA BAT VE ALLERJEN KOMPONENT TESTLERİNİN KARŞILAŞTIRMASI

Esra ÖZSOY

Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
İmmünoloji Anabilim Dalı 
İmmünoloji Programı  
Yüksek Lisans Tezi, Mayıs 2024
Danışman: Prof. Dr. İnsu YILMAZ
ÖZET

Çalışmamızda; özellikle arı venomuna çift duyarlılığı saptanan hastalarda arı venom immünoterapi (VIT) seçiminde bu testlerin ne kadar önemli olabileceğinin ortaya konulması, bazofil aktivasyon testi (BAT) ve allerjen komponent testi (CRD) değerlendirilmelerinin araştırma amaçlı olmaktan çıkmaya başlayıp klinik rutinde kullanımına  yönelik literatüre önemli bir katkıda bulunması ve hangi yöntemin bu çifte pozitiflikte öncelikle tercih edilmesi ile ilgili çalışmaların önünü açması amaçlanmıştır.
Çalışmamız arı ile sistemik reaksiyon öyküsü olan ve arı venom duyarlılığı, deri prik testi (DPT) ve/veya spesifik immünglobülin E (sIgE) ölçümleri ile klavuzlar doğrultusunda VIT kararı verilen arı venom allerjisine çift duyarlılığı olan 10 hasta ile yürütüldü. Hastalardan heparin ile antikoagüle tüpe 3ml'lik kanlar alındı. Hastalardan alınan venöz kan örnekleri pozitif kontrol (PK), negatif kontrol (NK) ve 0.1 mg/ml, 1 mg/ml, 10 mg/ml olmak üzere üç ayrı dilüsyonda hazırlanan venom ekstraktlarından oluşan test tüplerine ayrıldı ve tüplerdeki bazofil aktivasyonu; CD63 yüzde ve CD203c ortalama floresan yoğunluk (mean floresan intensity- MFI) ölçümü yapılarak akım sitometri cihazı ile değerlendirildi. Ek olarak CRD testi ile serum sIgE antikorlarının ölçümü yapıldı.
VIT kararı verilen arı venom allerjisine çift duyarlılığı olan 10 hastanın bazofil aktivasyonlarındaki değişim negatif kontrol (NK), pozitif kontrol (PK) (IgE, FMLP) ve üç ayrı dilüsyondaki venom ekstraktındaki (0.1mg/ml, 1mg/ml, 10mg/ml) CD63 yüzde ve CD203c MFI değerleri kullanılarak ölçüldü. Hem bal hem de yaban arısı allerjen ekstraklarının 0.1 mg/ml, 1 mg/ml, 10 mg/ml konsantrasyonlarında CD63 ekspresyonunda, negatif kontrole oranla ortalama % 70.2 artış gösterildi. CD203c MFI değerlerinde ise her üç konsantrasyonda da negatif kontrole oranla ortalama %50 artış saptandı. CD63 ekspresyonuyla CD203c MFI değerleri kıyaslandığında istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık olduğu saptandı (p<0.01). BAT testi ile hastaların CD63% değerleri göz önünde bulundurulduğunda 5'inin bal arısına 4'ünün ise yaban arısına karşı daha fazla pozitiflik gösterdiği saptandı. 1 hasta da ise iki venom allerjenine karşı eşit oranda pozitiflik saptandı.  CRD testinde ise 3 hasta bal arısına 3 hasta yaban arısına 1 hasta da ikisine karşı da serum IgE antikoru pozitifliği gösterdi. 3 hastada ise hiç pozitiflik saptanmadı.

Bu araştırma BAT ve CRD testlerinin birlikte kullanımının, erken tanıyı ve çift pozitiflik durumunun netleştirilmesini kolaylaştırmada birbirlerini tamamlayacak etkili in-vitro testler olduğu gösterilmiş oldu. Çift pozitiflik saptanan hastalarda CRD ile allerjik reaksiyondan sorumlu gerçek arı türü daha net olarak saptanabilmektedir. Fakat diğer yandan da CRD negatif saptanan hastalarda BAT pozitiflikleri saptanabilmektedir. Bu nedenle çalışmamızda çift pozitiflik saptanan hastalarda VIT kararı verilmeden önce CRD ve/veya BAT testlerinin uygulanması allerjiden sorumlu gerçek arı türünü belirleme ve etkin VIT uygulama açısından oldukça önemli olduğu gösterilmiştir.


Anahtar Kelimeler: Allerjen Komponent Testi; Arı Venomu; Bazofil Aktivasyon Testi; CD63 ve CD203c; Çift Pozitiflik

Abstract:
COMPARISON OF SKIN PRICK TEST AND SPECIFIC IGE MEASUREMENTS WITH BAT AND ALLERGEN COMPONENT TESTS IN PATİENTS WITH BOTH HONEY AND WASP POSITIVE

Esra ÖZSOY
Erciyes University, Graduate School of Healthy Sciences
Department of Immunology 
M.Sc. Thesis, May 2024
Supervisor: Prof. Dr. İnsu YILMAZ
ABSTRACT
In our study; Revealing how important these tests can be in the selection of bee venom immunotherapy (VIT), especially in patients with double sensitivity to bee venom, will make a significant contribution to the literature on the use of basophil activation test (BAT) and allergen component test (CRD) in clinical routine, rather than being used for research purposes. It is aimed to pave the way for studies on finding out and which method should be preferred first in this double positivity.
Our study was conducted with 10 patients with double sensitivity to bee venom allergy, who had a history of systemic reaction to bees and were decided to use VIT in line with the guidelines based on bee venom sensitivity, skin prick test (DPT) and/or specific immunoglobulin E (sIgE) measurements. 3ml of blood was taken from the patients into a tube anticoagulated with heparin. Venous blood samples taken from the patients were divided into test tubes consisting of positive control (PK), negative control (NC) and venom extracts prepared in three separate dilutions: 0.1 mg/ml, 1 mg/ml, 10 mg/ml, and basophil activation in the tubes; CD63 percentage and CD203c mean fluorescence intensity (MFI) were measured by flow cytometry device. Additionally, serum sIgE antibodies were measured with the CRD test.
The change in basophil activation of 10 patients with double sensitivity to bee venom allergy, for whom VIT was decided, was observed in the negative control (NK), positive control (PK) (IgE, FMLP) and venom extract in three separate dilutions (0.1mg/ml, 1mg/ml, 10mg/ml). CD63 percentage and CD203c were measured using MFI values. An average increase of 70.2% in CD63 expression was shown in the concentrations of 0.1 mg/ml, 1 mg/ml, 10 mg/ml of both honey and bumblebee allergen extracts compared to the negative control. An average 50% increase in CD203c MFI values was detected in all three concentrations compared to the negative control. A statistically significant difference was found when CD63 expression and CD203c MFI values were compared (p<0.01). Considering the CD63% values of the patients with the BAT test, it was determined that 5 of them were more positive for honey bees and 4 of them were more positive for bumblebees. In 1 patient, equal positivity was detected for two venom allergens. In the CRD test, 3 patients showed serum IgE antibody positivity against honeybees, 3 patients against bumblebees, and 1 patient against both. No positivity was detected in 3 patients.
This study showed that the combined use of BAT and CRD tests are effective in-vitro tests that complement each other in facilitating early diagnosis and clarification of double positivity. In patients with double positivity, CRD can detect the actual bee species responsible for the allergic reaction more clearly. However, on the other hand, BAT positivity can be detected in patients who are found to be CRD negative. Therefore, in our study, it has been shown that applying CRD and/or BAT tests before deciding on VIT in patients with double positivity is very important in terms of determining the real bee species responsible for allergy and applying effective VIT.

Key Words: Allergen Component Test; Basophil Activation Test; Bee Venom; CD63 and CD203c; Double Positivity.