Over granüloza hücrelerindeki steroid biyosentezinde görev alan kaplı vezikül sisteminin histolojik olarak incelenmesi
Histological evaluation of coated vesicle system involved in steroid biosynthesis in ovarian granulosa cells
Yazar: AYNUR ABDULOVA
Danışman: DOÇ. DR. GAMZE TANRIVERDİ
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Biyosentez = Biosynthesis ; Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Histolojik teknikler = Histological technics ; Klatrin = Clathrin ; Over = Ovary ; Vezikül = Blister ; İkarugamisin = Ikarugamycin

Özet:
Steroidogenez, kolesterolün steroid hormonlarına dönüştürüldüğü çoklu enzimler ve substratlar arasındaki kompleks bir süreçtir. Bu süreç, kolesterol mobilizasyonu ile sağlanır. Bu biyosentezde görev alan hücreler kullandıkları kolesterolü farklı yolaklar kullanarak içselleştirir ve steroid hormon sentezini gerçekleştirirler.
Ovaryumlar farklı büyüme evrelerindeki over folikülleri içerisinde yerleşik olan oosit ve onu saran granüloza hücrelerine ev sahipliği yapmaktadırlar. Granüloza hücreleri oositin matürasyonunda ve steroid hormon biyosentezinde önemli görevler üstlenirler. Ovaryumlardaki steroid sentezi folikül uyarıcı hormon (FSH) ve lüteinize edici  hormonların (LH) kontrolündedir. Bu hormonlar, granüloza hücrelerinden salınan östrojen ve  progesteron  hormon seviyelerinin düzenlemesinde görev alırlar.
Bir çok çalışma granüloza hücrelerinin steroid biyosentezinde düşük yoğunluklu lipoproteine (LDL) bağlanan kolesterolü kullandığını göstermektedir. LDL plazma membranı üzerinde bulunan spesifik reseptörüne bağlanarak, kaplı vezikül sisteminin oluşmasını uyarır. Bu kaplı veziküller klatrin ve klatrinle ilişkili bir sıra aksesuar molekülleri içermektedirler. 
İkarugamisin (İKA), streptomyces sp'den izole edilen bir antibiyotiktir ve hayvan ve bitkiler üzerinde yapılan bir çok çalışmada klatrin aracılı endositoz inhibitörü olarak kullanılmıştır. 
Bu çalışmada insan granüloza hücrelerindeki steroid biyosentezinde klatrin kaplı veziküllerin rolü araştırıldı. Bu amaçla, COV434 insan granüloza hücre hattı kulanılarak dört adet deney grubu oluşturuldu. İlk grup kontrol grubu olarak ayrıldı. 2. gruba steroid sentezini stimüle etmek için Dil-konjuge LDL verildi. 3. gruba Dil-konjuge LDL ve İKA birlikte olarak uygulandı. 4. gruba sadece İKA verildi. Gruplar arasındaki klatrin aracılı endositoz ile hücre içerisine alınan LDL miktarları ve steroid hormon  üretimi arasındaki ilişkinin karşılaştırılması immünositokimya, ELISA ve TEM yöntemleri kullanılarak yapıldı. Dil-konjuge LDL verilen grupta, klatrin aracılı endositozun belirgin şekilde aktif olduğu ve buna bağlı olarak pregnanalon ve progesteron seviyelerinde de benzer bir artışın varlığı saptandı.

Abstract:
Steroidogenesis is a complex process between multiple enzymes and substrates in which cholesterol is converted to steroid hormones. This process is achieved by cholesterol mobilization. The cells involved in this biosynthesis internalize the cholesterol they use by using different pathways, and perform the synthesis of steroid hormones.
The ovaries are home to the oocyte and the surrounding granulosa cells within the ovarian follicles at different growth stages. Granulosa cells play an important role in oocyte maturation and steroid hormone biosynthesis. Steroid synthesis in the ovaries is under the control of follicle stimulating (FSH) and luteinizing hormones (LH). These hormones are involved in the regulation of estrogen and progesterone hormone levels released from granulosa cells.
Many studies show that granulosa cells use cholesterol bound to low-density lipoprotein (LDL) in steroid biosynthesis. LDL stimulates the formation of the coated vesicle system by binding to its specific receptor on the plasma membrane. These coated vesicles contain clathrin and a series of clathrin-related accessory molecules.
Ikarugamycin (IKA) is an antibiotic isolated from Streptomyces sp and has been used as an inhibitor of Clathrin-mediated endocytosis (CAE) in studies on many animals and plants.
Accordingly, in our study, the role of clathrin-coated vesicles in steroid biosynthesis in human granulosa cells was investigated. For this purpose, the COV434 human granulosa cell line was used in this thesis study. Four experimental groups were formed. The first group was assigned as the control group. Group 2 was given LDL (Dil-conjugated-LDL) to stimulate steroid synthesis. In the third group, LDL (Dil-conjugated) and IKA were applied together. Group 4 was given only IKA. Comparison of the relationship between clathrin-mediated endocytosis and steroid hormone production between the groups was made using immunocytochemistry, ELISA and TEM methods. In the group given Dil-conjugated LDL, clathrin-mediated endocytosis was significantly active and accordingly, there was a similar increase in pregnanalone and progesterone levels.