Boraks'ın kolorektal kanser hücre hattı (DLD-1) üzerine etkisinin belirlenmesi ve 5-fluorouracil ile sinerjistik etkilerinin araştırılması
Determining the effect of borax on colored cancer cell line (DLD-1) and investigation of synergistic effects with 5-fluorouracil
Yazar: ÖMER FARUK KIRLANGIÇ
Danışman: PROF. DR. TANER ÖZGÜRTAŞ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Gülhane Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Biyokimya = Biochemistry ; Bor = Boron ; Boraks = Borax ; Boraks = Borax ; Flüorourasil = Fluorouracil ; Hücre dizisi = Cell line ; Kolorektal neoplazmlar = Colorectal neoplasms ; Kolorektal neoplazmlar = Colorectal neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Amaç: Kolorektal kanser, Avrupa'da morbidite ve mortalitenin önde gelen ikinci nedenidir.Kolorektal kanser tedavisinde, mevcut tedavi yöntemleri ile başarı oranları oldukça düşüktür. Kolon kanserinde rutin tedavide kullanılan 5-Fluorouracil'in (5-FU) ancak %30 civarında başarı şansı nedeniyle, alternatif tedavi yöntemlerine ihtiyaç duyulmaktadır. Son yıllarda doğal bileşiklerin kanser tedavisi üzerinde etkileri yanında konvansiyonel tedavilerle kombine edilmesi ile ilgili araştırmalar artmaktadır. Doğal bileşikler günümüzde kanser tedavisi için oldukça önemli potansiyel kaynaklardır. Bunlar arasında en önemli adaylardan biri de bor ve bileşikleridir. Bu çalışmada amacımız, rutin tedavide kullanılan 5-FU ile bor bileşiği olan boraks'ın (borik asit sodyum tuzu) kolon kanseri üzerine kombine tedavisinin proliferasyon, sitotoksisite ve apoptoz etkisini vitro yöntemlerle araştırmaktır. 
Gereç ve Yöntem: Bu tez çalışmasında, insan kolon kanseri hücre hattı olan DLD-1 hücrelerine, boraks ve 5-florourasil'in sitotoksik ve hücre canlılığı üzerine etkileri 3-(4.5-dimethylthiazol-2y])-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) yöntemi ile, Boraks ve 5-florourasil'in apoptoz üzerine etkileri Annexin V/Propidium İyodür ile flow sitometrik yöntemi ile araştırılmıştır. Nekroz ve apoptoz sırasında hücrelerin çekirdeklerinde meydana gelen kromatin yoğunlaşmasını, nükleer parçalanmayı, hücre hacminde azalmayı, yüzey veziküllerinin veya membran kabarcıklarının oluşumunu tespit edebilmek için immünofloresans DAPI boyama yöntemi uygulanmıştır. 
Bulgular: Boraks'ın DLD-1 kolon kanseri hücrelerinin yaklaşık % 50'sini öldüren dozu 500 μM iken 5-FU'nun hücrelerin yaklaşık % 50'sini öldüren dozu 50 μM olduğu saptanmıştır. Kontrol gruplarına oranla Boraks ile muamele edilmiş hücrelerin ilk 24 saat ve 48 sonucunda hücre proliferasyonu azalmış, çekirdek yapılarının küçüldüğü, sitoplâzmalarında azalma olduğu ve apoptotik oranının arttığı saptanmıştır. Boraks ve 5-FU grupları karşılaştırıldığında, her ikisinin sinerjik etkisinin daha etkin olduğu görülmüştür.
Sonuç: Çalışmalarımızda Boraks'ın DLD-1 hücre hattı üzerinde, hücre canlılığı ve çoğalmasında kontrol grubuna kıyasla belirgin bir azalma gözlendiği, doz ve zamana bağlı olarak apoptotik etkisinin anlamlı derecede arttığını bulduk (p˂0,05). 

Anahtar Kelimeler: Bor, Boraks, 5-Fluorouracil, Kolorektal Kanser, Apoptoz

Abstract:
Objective:Colorectal cancer is the second leading cause of morbidity and mortality in Europe. In the treatment of colorectal cancer, success rates are quite low with current treatment methods. Alternative treatment methods are needed because of the 30% chance of 5-Fluorouracil (5-FU) used in routine treatment in colon cancer. In recent years, there has been increasing research on the combination of natural compounds with conventional therapies as well as their effects on cancer treatment. Natural compounds are very important potential sources for cancer treatment today. One of the most important candidates among these is boron and its compounds. This study aims to investigate the proliferation, cytotoxicity, and apoptosis effects of the combined treatment of 5-FU and borax (boric acid sodium salt) used in routine treatment on colon cancer by in vitro methods.
Materials and Methods:In this thesis study, the effects of borax and 5-fluorouracil on cytotoxic and cell viability on human colon cancer cell line DLD-1 cells by 3- (4.5-dimethylthiazol-2y]) - 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method The effects of borax and 5-fluorouracil on apoptosis were investigated by flow cytometric process with Annexin V / Propidium Iodide. Immunofluorescence DAPI staining method was applied to detect chromatin condensation, nuclear disintegration, decrease in cell volume, the formation of surface vesicles or membrane bubbles that occur in the nuclei of cells during necrosis and apoptosis. 
Results:While the dose of borax that kills about 50% of DLD-1 colon cancer cells is 500μM, the dose of 5-FU that kills about 50% of cells is 50μM. In the first 24 hours and 48 of the cells treated with borax compared to the control groups, the cell proliferation decreased, the nucleus structures shrank, the cytoplasm decreased, and the apoptotic rate increased. When the borax and 5-FU groups compared, the synergistic effect of both was more effective.
Conclusion:In our studies, we found that there was a significant decrease in the viability and proliferation of Borax on the DLD-1 cell line compared to the control group, and its apoptotic effect increased significantly depending on the dose and time (p˂0.05).

Keywords:Bor, Borax, 5-Fluorouracıl, Colorectal Cancer, Apoptosis