Balıklardan izole edilen Enterococcus türlerinin bazı virulans, teknolojik özellikleri ve antibiyotik dirençliliklerinin araştırılması
Virulence properties and antibiotic resistance and technological features of Enterococcus isolated from fish investigation
Yazar: LEYLA BİGEÇ
Danışman: PROF. DR. NESLİHAN GÜNDOĞAN BAKIRCI
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyoloji = Biology ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada, Ankara'da tüketime sunulan 100 balık örneği (50 tatlı su, 50 deniz) materyal olarak kullanılmıştır. Çalışılan 100 balık örneğinden Enterococcus izolasyonu gerçekleştirilerek, tür seviyelerindeki tanımlamaları yapılmıştır. Tanımlamaları yapılan Enterococcus türlerinde; 4°C'de 20°C'de ve 37°C'de proteolitik aktivite; 30°C'de lipolitik aktivite, slime, biyofilm, jelatinaz, DNaz, hemoliz gibi bazı virulans özellikleri ve Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi ile antibiyotik dirençlilikleri araştırılmıştır. Balık örneklerinden izole edilen 150 Enterococcus izolatın, %18,7'si Enterococcus spp., %16,7'si E.casseliflavus, %14'ü E.flavescens, %13,3'ü E.gallinarum, %8,7'si  E. raffinosus, %8'si E.solitarius , %7,3' si E.pseudoavium, %4' ü E.avium, 4%'ü E. faecalis, %2'si E.malodoratus, %0,7'si E. durans, %0,7'si E.mundtii, %0,7'si E.hirae, %0,7'si E. dispar, %0,7'si  E. faecium, olarak tanımlanmıştır. Araştırmamızda balık örneklerinden izole edilen 150 Enterococcus izolatının, 102'si (%68) slime (+), 19'u (%12,7) jelatinaz (+),  128'i (%85,3) DNaz (+) ve 3'ü (%2) hemoliz (+)'dir. Enterococcus izolatlarının mikroplate kullanılarak yapılan biyofilm değerlendirmesinde; Triptic Soy Broth (TSB)'da 24 saat inkübasyon sonrası izolatların % 18,7'si kuvvetli pozitif, %52,7'si orta derecede pozitif, %24'ü zayıf pozitif ve %1,3'ü negatif biyofilm oluşumu gösterdiği tespit edilmiştir. Aynı izolatların %2 glikoz içeren TSB'de 24 saat inkübasyon sonrası % 33,3'ünün kuvvetli pozitif, %40'ının orta derecede pozitif, %14,7'sinin zayıf pozitif ve %9,3' ünün ise negatif biyofilm oluşturduğu gözlenmiştir. Tatlı su balık örneklerinden izole edilen Enterococcus izolatları, (%32,9) eritromisin, (%19,2) gentamisin, (%24,6) teikoplanin, (%83,6) ampisilin, (%28,8) kloramfenikol, (%56,2) vankomisin, (%93,2) novobiosin, (%35,6) siprofloxosin, (%54,8) tetrasiklin, (%24,7) nitrofurontoin'e dirençli bulunmuştur. Deniz balığı örneklerinden izole edilen 77 Enterococcus izolatları ise (%64,9) eritromisin (%20,8) gentamisin, (%49,3) siprofloxosin, (%31,2) kloramfenikol, (%44,1) novobiosin, (%92,2) ampisilin, (%3,9) teikoplanin, (%44,1)  vankomisin, (%68,8) tetrasiklin ve (%35,1) nitrofurontoin'e dirençli bulunmuştur. 150 Enterococcus izolatı'nın 4°C'de, 24'ü (%16) kuvvetli pozitif, 73'ü (%48,7) orta derecede pozitif, 26'sı (%17,3) zayıf pozitif proteolitik aktivite,   20 °C'de 31'i(%20,7) kuvvetli pozitif, 13'ü (%8,7) orta derecede pozitif, 4'ü (%2,7) zayıf pozitif proteolitik aktivite, 37 °C'de 42'si(%28) kuvvetli pozitif, 42'si (%28)  orta derecede pozitif, 38'i(%25,3) zayıf pozitif proteolitik aktivite göstermiştir. Tüm Enterococcus izolatlarının 30 °C'de lipolitik enzim aktivite göstermemiştir.

Abstract:
In this study, 100 fish samples (50 freshwater, 50 seawater) which are provided for consumption in Ankara, were used as material. Enterococcus species were isolated from fish samples and identified. Identified Enterococcus species were analysed for proteolytic activity at 4°C, 20°C and 37°C, lipolytic activity at 30°C, somevirulenceproperties as slime, biofilm,gelatinase, DNase,hemolysis andantibiotic resistance withKirby-Bauerdisk diffusion methodwere researched. The distribution rates among 150 Enterococcus  isolated from fishes were %18,7Enterococcus spp., %16,7 E. casseliflavs, %14 E. flavescens., %13 E. gallinarum, %8,7 E. raffinosus, %8 E. solitarius, %7,3 E. pseudoavium, %4 E. avium, %4 E. faecalis %2 E. malodorats, %0,7 E. durans, %0,7 E. mundtii, %0,7 E. hirae, %0,7 E. dispar and %0.7 E. faecium.In our research, 102 (68%) slime (+), 19 (12,7%) gelatinase (+),  128 (85,3%) DNase (+) and 3 (2%) hemolyses (+) are in 150 Enterococcus isolated from the fish samples.  By using microplate method all Enterococcus isolates after 24 hours of incubation on tryptone soy broth %18,7 strong biofilm, %52,7 medium positive, %24 weak positive and %1,3 negative biofilm formation have been identified. On the same isolates 2% glucose containing the TSB after 24 hours of incubation in %33,3 strong biofilm, %40 medium positive, %14,7 weak positive and %9,3 negative biofilm formation have been identified. The distribution of antibiotic resistances of Enterococcus isolates (freshwater fish samples) was (32.9 %)erythromycin,  (35.6%) ciprofloxacin,  (83.6%) ampicillin, (54.8%) tetracycline,  (56.2%) vankomycin,  (24.7%) nitrofurantoin, (93.2%)novobiocin,  (19.2%) gentamicin, (24.6%) teicoplanin, (28.8%) chloramphenicol. The distribution of antibiotic resistances of Enterococcus isolates (seawater fish samples) was (64.9%)erythromycin,  (49.3%) ciprofloxacin,  (92.2%) ampicillin, (68.8%) tetracycline,  (44.1%) vankomycin,  (35.1%) nitrofurantoin, (44.1%)novobiocin,  (20.8%) gentamicin, (3.9%) teicoplanin, (31.2%) chloramphenicol.From 150 Enterococcus isolates, 24 of the isolates (16%) strong positive, 73 of the isolates (48,7%) medium positive, 26 of the isolates (17,3%) weak positive have been identified proteolytic activity at 4°C. 31 of the isolates (20.7 %) strong positive,13 of isolates (8.7%) medium positive, 4 of the isolates (2.7%) weak positive have been identified proteolytic activity at 20°C. 42 of the isolates (28%) strong positive, 42 of isolates (28%) medium positive, 38 of the isolates (25.3%) weak positive have been identified proteolytic activity at 37°C.None of Enterococcus isolate were shown 30 °C lipolytic enzyme activity.