Ektoin'in saklama ortamı olarak kullanımının, insan periodontal ligament hücrelerinin canlılığı ve farklılaşma potansiyeli üzerine etkisinin in vitro olarak incelenmesi
To investigate the effect of ectoine as a storage media on the viability and differentiation potential of human periodontal ligament cells, in vitro
Yazar: DAMLA TUNCER BUDANUR
Danışman: PROF. DR. ELİF SEPET
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pedodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, ozmotik bir koruyucu olan Ektoin'in saklama ortamı olarak kullanımının, insan periodontal ligament hücrelerinin canlılığı, osteojenik ve fibroblastik farklılaşma potansiyeli üzerine etkisinin incelenmesi amaç olarak belirlenmiştir. Gereç ve yöntem: Gömük üçüncü büyük azı dişlerine ait PDL dokusundan elde edilen hücrelerin karekterizasyonu yapıldı. 2, 6, 12, 24 saat sürelerinde Ektoin, Süt, Ektoin + CDMEM, CDMEM ve Musluk suyuna maruz bırakılan PDLMKH'ler Anneksin-V ile işaretlenerek akım sitometri cihazında hücre canlılığı açısından değerlendirildi. PDLMKH'lerin osteojenik farklılaşmasının saptanmasında Alizarin Red boyası, fibroblastik farklılaşmasının saptanmasında ise Vimentin belirteci kullanıldı ve hücreler morfolojik olarak incendi. Bulgular, IBM SPSS Statistics 22 programı kullanılarak istatistiksel olarak değerlendirildi. Bulgular: PDL dokusundan izole edilen hücrelerin morfolojik ve immünofenotipik olarak mezenkimal kök hücre özellikleri gösterdiği kanıtlandı. Tüm deney gruplarında, zamana bağlı olarak canlı hücre oranlarında anlamlı derecede azalma ve ölü hücre oranlarında anlamlı derecede artış saptandı. Sütün PDLMKH'lerin canlılığını 12 saate kadar koruduğunu, ancak farklılaşma yetenekleri üzerine sınırlı etkisi olduğu gözlendi. Ektoin'in PDLMKH'lerinin canlılığı, osteojenik ve fibroblastik farklılaşması üzerine 2 saate kadar sınırlı bir etkisi olduğu, ancak CDMEM kültür ortamına eklenen Ektoin'in hücre kültürünü incelenen parametreler açısından güçlendirdiği, hücrelerin adezyon ve morfolojik özelliklerini koruduğu saptandı. Tüm deneylerde en olumsuz bulgular Musluk suyu grubunda gözlendi. Sonuç: Çalışmadan elde edilen bulgular ışığında, ozmotik bir koruyucu olan Ektoin'in saklama ortamı olarak kullanımının, PDL hücrelerinin canlılığı ve farklılaşma potansiyeli üzerine etkisinin 2 saate kadar olumlu olduğu görülmüş, 2 saatten uzun sürelerde ideal bir saklama ortamı yaratmadığı sonucuna varılmıştır. CDMEM kültür ortamına eklenen Ektoin'in, PDL hücrelerinin canlılığı ve farklılaşma potansiyelini olumlu yönde etkilediği saptanmıştır.

Abstract:
Aim: This study aimed to investigate the effect of Ectoine as a storage media on the viability and differentiation potential of human periodontal ligament cells.
Material and Methods: The periodontal ligamentderived mesenchymal stem cells (PDLMSCs) were obtained from PDL tissue of the embedded third molar and incubated in different mediums with Ectoine, milk, Ectoine + CDMEM only CDMEM, and tap water during 2, 6, 12 and 24 h. The cell viability was analyzed with a flow cytometer after Annexin V labeling.
The Alizarin red stain was used for detecting osteogenic differentiation of the PDLMSCs. The vimentin marker was used to detect fibroblastic differentiation, and the cells were also examined morphologically. The results were analyzed using IBM SPSS Statistics 22 computer program.
Results: The study demonstrated that the cells isolated from PDL tissue showed mesenchymal stem cell characteristics morphologically and immunophenotypically. In all experimental groups, a significant decrease in cell viability and a significant increase in the number of dead cells were observed over time. The PDLMSCs which incubated in milk remained alive for 12 h; however, the culture media had a limited effect on the differentiation abilities of the cells. Ectoine, which was added to CDMEM media, improved the cell culture environment regarding investigated parameters. It was detected that Ectoine-containing CDMEM media preserved cellular adhesion and morphologic characteristics. The worst results were obtained in the tap watercontaining group.
Conclusions: The results indicated that the usage of an osmotic solute called Ectoine as a storage medium had a positive effect on both cell viability and differentiation potential of PDL cells for 2 h. However, Ectoine did not serve as an ideal storage media after 2 h. It was also observed that Ectoine added into CDMEM media positively affected the cell viability and differentiation potential of PDL cells.