Enterobacterales üyesi bakterilerde genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz doğrulamasında düşük içerikli eucast sefalosporin disklerinin çift disk sinerji testinde kullanılabilirliğinin değerlendirilmesi
Evaluation of using eucast low-content cephalosporin disks in double disk synergy test for confirmation of extended spectrum beta-lactamase
Yazar: EYŞAN ÖZGÜR YARKICI
Danışman: PROF. DR. ÖZGEN ALPAY ÖZBEK
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Gram negatif bakteriler = Gram negative bacteria ; İlaçlara direnç-bakteriyel = Drug resistance-bacterial

Özet:
AMAÇ: Klinik örneklerde Genişlemiş Spektrumlu Beta-Laktamaz (GSBL) üretiminin tespiti, enfeksiyon kontrolü ve halk sağlığı açısından kritik öneme sahiptir. EUCAST rehberi, GSBL doğrulaması için seftazidim 30 μg (CAZ30), sefotaksim 30 μg (CTX30) diskleri ile amoksisilin/klavulanik asit 30 μg (AMC) diski arasında 20 mm mesafe ile çalışılan çift disk sinerji (ÇDS) testini önermektedir. Bu çalışmanın amacı, Enterobacterales türlerinde GSBL doğrulaması için, EUCAST antibiyotik duyarlılık testlerinde kullanılan düşük içerikli sefalosporin disklerinin [seftazidim 10 μg (CAZ10) ve sefotaksim 5 μg (CTX5)] ÇDS testinde kullanılabilirliğini araştırmaktadır.
GEREÇ VE YÖNTEM: İki basamaklı bir çalışma planlandı. Çalışmanın optimizasyon basamağında; 33 adet GSBL üreticisi izolat (bazılarında GSBL ile birlikte AmpC, karbapenemazlar gibi GSBL varlığını maskeleyebilen direnç mekanizmaları mevcut), 3 kalite kontrol suşu (Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603) ve 4 adet fenotipik ve genotipik olarak GSBL negatif izolat kullanıldı. Bu izolatlarla çalışılan rehber önerisi ÇDS testi ve düşük içerikli CAZ10, CTX5 diskleri ile AMC diskinin farklı mesafelerde (15-20-25-30 mm) yerleştirilmesi ile çalışılan ÇDS testi sonuçları karşılaştırıldı. Rehber ÇDS testi sonuçları ile en uyumlu bulunan düşük içerikli ÇDS mesafesi saptandı. Çalışmanın klinik uygulama basamağında; 185 adet klinik izolat ile, hem en uygun bulunan mesafe ile düşük içerikli ÇDS testi hem de rehber önerisi ÇDS testi çalışıldı. Sonuçların uyumu karşılaştırıldı.
BULGULAR: Dört farklı mesafede çalışılan düşük içerikli ÇDS testlerinin rehber ÇDS test sonuçları hem disk özelinde hem de CAZ-CTX ikili değerlendirmesindeki uyumuna bakıldığında; diğer mesafelere göre en uyumlu sonucun düşük içerikli sefalosporinler ile AMC arasında 20 mm mesafe ile çalışılan ÇDS testinde elde edildiği gözlendi. Klinik izolatlar ile yapılan çalışmada da rehber önerisi ÇDS ile 20 mm mesafede çalışılan düşük içerikli ÇDS testi Kappa değeri 0.955 olarak saptanmış olup 'neredeyse mükemmel uyum' olarak yorumlandı.
SONUÇ: Çalışma, düşük içerikli EUCAST sefalosporin diskleri kullanılarak çalışılan ÇDS testinde 20 mm mesafenin onaylı sonuçlarla en uyumlu sonucu sağladığını göstermektedir. Bu çalışmanın verilerine dayanarak; GSBL doğrulanmasında kullanılan ÇDS testi uygulamasında, rehberde önerilen 30 mikrogramlık CAZ ve CTX diskleri yerine EUCAST sefalosporin disklerinin, AMC ile arasında önerilen mesafe olan 20 mm mesafenin değiştirilmeden kullanılabileceği söylenebilir. Bu sonuçlar, GSBL'nin fenotipik doğrulaması için rutin disklerin kullanılmasıyla daha uygun maliyetli ve daha az emek gerektiren bir GSBL raporlamasına katkıda bulunmaktadır.

Abstract:
AIM: Detection of Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL) production in clinical samples is critical for infection control and public health. The EUCAST guideline recommends the double disk synergy (DDS) test for ESBL confirmation with a distance of 20 mm between ceftazidime 30 μg (CAZ30), cefotaxime 30 μg (CTX30) disks and amoxicillin/clavulanic acid 30 μg (AMC) disk. This study aimed to investigate the feasibility of using low-content cephalosporin disks [ceftazidime 10 μg (CAZ10) and cefotaxime 5 μg (CTX5)] used in EUCAST antibiotic susceptibility testing for ESBL confirmation in Enterobacterales species.
METHODS: A two-step study was planned. In the optimisation step of the study; 33 ESBL producer isolates (some of them have resistance mechanisms that can mask the presence of ESBL such as AmpC, carbapenemases together with ESBL), 3 quality control strains (Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603) and 4 phenotypically and genotypically ESBL negative isolates were used. The results of the guideline recommendation DDS test and the results of the DDS test with low-content CAZ10, CTX5 disks and AMC disk placed at different distances (15-20-25-30 mm) were compared. Low-content DDS distance was found to be the most consistent with the results of the guideline DDS test. In the clinical application step of the study, the most appropriate distance the low-content DDS test and the guideline recommendation DDS test was performed with 185 clinical isolates. The concordance of the results was compared.
RESULTS: When the agreement of the low-content DDS tests performed at four different distances with the guideline recommendation DDS test results both in disk-specific and CAZ-CTX binary evaluation was examined; it was observed that the most compatible result was obtained in the DDS test performed at a distance of 20 mm between low-content cephalosporins and AMC compared to other distances. In the study conducted with clinical isolates, the Kappa value between the guideline recommendation DDS and the low-content DDS test performed at a distance of 20 mm was 0.955. It was interpreted as 'near perfect agreement'.
CONCLUSION: The study shows that a distance of 20 mm provides the most consistent result with the approved results in the DDS test using low-content EUCAST cephalosporin disks. Based on the data of this study, it can be concluded that EUCAST cephalosporin disks can be used instead of the 30 micrograms CAZ and CTX disks recommended in the guideline, without changing the recommended distance of 20 mm from the AMC. These results contribute to a more cost-effective and less labour-intensive ESBL reporting by using routine disks for phenotypic confirmation of ESBL.