Sentetik kannabinoid ,jwh'018'in toksikolojik özelliklerinin in vitro araştırılması
In vitro assessment of the cytotoxic, genotoxic and oxidative stress effects of a synthetic cannabinoid jwh-018 in human sh-sy5y neuronal cells
Yazar: YİĞİT SEZER
Danışman: PROF. DR. BÜKET ALPERTUNGA
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Hücre dizisi = Cell line ; Kanabinoidler = Cannabinoids ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sentetik kanabinoidler = Synthetic cannabinoids

Özet:
Son yıllarda THC gibi beyin ve periferik dokularda kannabimimetik etki gösteren yeni nesil sentetik kannabinoidlerin kullanımı giderek yaygınlaşmakta ve sentetik kannabinoidlere bağlı çok ciddi hatta ölümcül yan etkiler rapor edilmektedir. İlk jenerasyon sentetik kannabinoidlerin temsilcisi olan JWH-018 esrarın öforik ve psikoaktif etkilerinden sorumlu olan CB1 reseptörü üzerinde THC'den 4-5 kat daha yüksek afinite göstermektedir.
Günümüzde sentetik kannabinoidlerin sitotoksisite mekanizmalarını araştıran çok az sayıda çalışma bulunmaktadır. Bu çalışmada JWH-018'in insan nöroblastom SH-SY5Y hücre dizisinde sitotoksik, apoptotik, genotoksik etkileri ve oksidatif stres parametreleri üzerine etkileri araştırılmıştır. Sitotoksisitenin ve IC50 değerinin belirlenmesi amacıyla MTT, NRU ve LDH testleri yapılmıştır. MTT, NRU ve LDH testlerinde hücre canlılığında istatistiksel olarak anlamlı bir değişim gözlenmemiştir. 
Oksidatif stres parametrelerini değerlendirilmek üzere maruziyet sonrası glutatyon (GSH), tiyobarbitürik asit reaktif maddeler (TBARS) ve protein karbonil seviyeleri; glutatyon peroksidaz (GSH-Px), glutatyon redüktaz (GR), süperoksid dismutaz (SOD) ve katalaz (CAT) aktiviteleri ölçülmüştür. Genotoksisite tayini için Comet analizi, apoptoz/nekroz oranının belirlenmesi için Annexin V/PI boyaması yapılmıştır. Oksidatif stres parametrelerinden GSH seviyesinde anlamlı düşüş, protein karbonilizasyon seviyesinde anlamlı artış, GR ve CAT aktivitelerinde anlamlı düşüşler görülmüştür. Apoptoz/nekroz oranında ve genotoksisite değerlendirilmesinde JWH-018 maruziyetine bağlı olarak anlamlı değişim gözlenmemiştir .


Anahtar Kelimeler: Sentetik kannabinoid, JWH-018, Nöroblastoma SH-SY5Y, İn
vitro sitotoksisite, oksidatif stres

Abstract:
Abuse of new generation synthetic cannabinoids has been increasing due to THC like cannabimimetic effects on Central Nervous System and serious side effects even fatalities due to synthetic cannabinoids abuse have been reported. JWH-018, one of the first generation of new syntethic cannabinoids, shows 4-5 times higher binding affinity to CB1 receptor which is responsible for euphoria and psychoactive effects of marijuhana. 
There are very few studies investigating the cytotoxicity mechanisms of synthetic cannabinoids. In this study, JWH-018's cytotoxic, apoptotic, genotoxic effects and effects on oxidative stress parameters on neuroblastoma SH-SY5Y cell line were investigated. Firstly, MTT, NRU and LDH assays were performed to determine cytotoxicity and IC50 value. According to MTT, NRU and LDH test results, there were no statistically significant change in cell viability observed.
Evaluating the oxidative stress parameters, glutathione (GSH), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), protein carbonyl levels and glutathione peroxidase (GPx), glutathione reductase (GR), superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) acitivities were measured. For genotoxicity evaluation, Comet assay was performed. For apoptosiz/necrosis ratio determination, Annexin V/PI assay was performed. There was a statistically significant decrease in GSH levels, decrease in glutathione reductase and catalase enzyme activities and increase in protein carbonylation levels. There was no statistically significant change in apoptosis/necrosis ratio and comet assay observed due to JWH-018 exposure.


Key Words: Synthetic cannabinoid, JWH-018, Neuroblastoma SH-SY5Y, In vitro
cytotoxicity, Oxidative stress