Anne sütü ile beslenen bebeklerin dışkısından izole edilen Lactobacillus türlerinin bazı probiyotik özellikleri
Some probiotic characteristics of Lactobacillus species isolated from feces of infants fed with breast milk
Yazar: LEİLA MEHRNİA
Danışman: DOÇ. DR. ZEHRANUR YÜKSEKDAĞ
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Antimikrobiyal aktivite = Antimicrobial activity ; L-laktik asit = L-lactic acid ; Lactobacillus = Lactobacillus ; Trombosit agregasyon inhibitörleri = Platelet aggregation inhibitors ; Yüzey hidrofobisitesi = Surface hydrophobicity

Özet:
Bu çalışmada, Gazi Üniversitesi Fen Fakültesi Biyoteknoloji Laboratuvarı kültür koleksiyonuda bulunan, anne sütü ile beslenen yeni doğan bebeklerin dışkısından izole edilen ve 16S rDNA bölgesine göre moleküler tanımlamaları yapılan laktobasil cinsine ait 15 adet bakterinin laktik asit, hidrojen peroksit, ekzopolisakkarit (EPS) üretimleri, antibiyotik duyarlılıkları, antimikrobiyal aktiviteleri, asit direnci, safra toleransı belirlenmiştir. Ayrıca yüksek EPS üretimine sahip olan Lactobacillus casei LB74 ve L. casei LB61 suşlarının otoagregasyon ve koagregasyon yetenekleri, hidrofobisite, kolesterol giderimleri araştırılmıştır. Suşların yüzde asit ürettiği miktarının belirlenebilmesi için farklı iki besiyeri kullanılmış ve skim milk besiyerinde daha yüksek asit üretiminin (%1,05-%2,79) olduğu belirlenmiştir. Bakterilerin hidrojen peroksit üretim miktarları 0,68?3,83 ?g/mL arasında değişirken, ürettiği EPS miktarları 142,99?425,16 mg/L arasında bulunmuştur. Suşların antibiyotiklere karşı duyarlılıklarının incelenmesinde disk difüzyon metodu kullanılmış ve suşların penisilin G, kloramfenikol ve amoksisiline %100 duyarlı, streptomisin ve vankomisine %100 dirençli olarak belirlenmiştir. Laktobasil suşlarının, bebeklerde hastalığa neden olan patojen bakterilerden Escherichia coli ATCC 11229 üzerinde antimikrobiyal etkisinin %93,3, Staphylococcus aureus ATCC 25923 üzerinde %66,6, Listeria monocytogenes ATCC 7644 üzerinde %86,6, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium MU 80, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 üzerinde ise %100 olduğu belirlenmiştir. Bakterilerin azalan asit ve artan safra konsantarasyonlarında canlılıklarında azalma olduğu ve bu azalmanında istatistiksel olarak anlamlı olduğu tespit edilmiştir. EPS üretimi yüksek olan suşların otoagregasyon ve koagregasyon (E. coli ATCC 11229, Salmonella enteritidis ve Listeria monocytogenes ATCC 7644 suşları ile) yetenekleri incelenmiştir. %otoagregasyon değerleri L. casei LB74 (%28,91) suşunda, %koagregasyon değerleri ise Salmonella enteritidis test bakterisinin kullanımıyla L. casei LB61 (%31,08) suşunda bulunmuştur. Suşlar, kloroform (%67,05-45,33) ve toluen (%7,88-43,83) ile hidrofobisite göstermişler. Farklı safra konsantrasyonlarında kolesterol gideriminde, suşların artan safra konsantrasyonlarında yüzde kolesterol giderimlerinin arttığını göstermiştir.

Abstract:
In this study, 15 lactobacilli from the Gazi University, Faculty of Science Biotechnology Laboratory culture collection were used as material. The bacteria were formerly isolated from faces of breast-fed newborn babies and were identified based on the 16S rDNA region. The aims of the study were to determine their lactic acid, hydrogen peroxide and exopolysaccharide (EPS) production, antibiotic susceptibility, antimicrobial activity, resistance to acid and bile tolerance. The coagregasyon and autoaggregation capabilities, hydrophobicity, and cholesterol removal of the Lactobacillus casei LB74 and L. casei LB61 strains that exhibit a high EPS production were also determined. In order to determine the amount of acid produced by the strains, two different medium were used. Skim milk agar medium provided a higher acid production (1.05%-2.79%). The quantities of hydrogen peroxide production of the bacteria ranged between 0.68-3.83 mg / mL and the quantities of EPS produced rangend between 142.99-425.16 mg/L. Disk diffusion method has been used to determine the sensitivity of the strains to various antibiotics. The strains were 100% sensitive against penicillin G, chloramphenicol, and amoxicillin but 100% resistant against streptomycin and vancomycin. The antimicrobial effect of the lactobacilli strains over the pathogenic bacteria (Escherichia coli ATCC 11229, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Listeria monocytogenes ATCC 7644, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium MU 80, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) that cause disease in infants were %93.3, %66.6, %86.6 and %100, respectively. The bacteria viability decreased at decreasing and increasing bile acid concentrations and the data is statistically significant. Autoaggregation and coagregasyon (E. coli ATCC 11229, ATCC 7644 strains of Salmonella enteritidis and Listeria monocytogenes) abilities of the strains with high EPS production were determined. % Autoaggregation value was determined at L. casei LB74 (%28.91) and % coagregasyon value was determined at L. casei LB61 (%31.08) by using the test bacteria Salmonella enteritidis. Strains exhibites hydrophobicity with chloroform (67.05 to 45.33%) and toluene (7.88 to 43.83%). Cholesterol removal of the strains also increased with higher bile concentrations.