Hidroksiklorokin sülfatın sıçan femuru kırık modelinde kemik iyileşmesine olan etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of hydroxychlorokine sulfate on bone healing in the rat femoral fracture model
Yazar: YİĞİT ÖNALOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. OZAN BEYTEMÜR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Bağcılar Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology
Dizin: Femoral kırıklar = Femoral fractures ; Femur = Femur ; Hidroksiklorokin = Hydroxychloroquine ; Hidroksiklorokin sülfat = Hydroxychloroquine sulfate ; Kırık iyileşmesi = Fracture healing ; Sıçanlar = Rats ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Amaç: Hidroksiklorokin (HCQ) hücre içinde lizozomlarda birikerek işlevlerini bozar. Osteoklast lizozomlarına da etki ederek kemik yıkımını azaltabileceğini düşündük. Radyolojik, biyomekanik, histopatolojik ve histomorfometrik olarak değerlendirmeyi amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda 24 adet 8 haftalık wistar cinsi erkek sıçan kullanıldı. Her biri 12 sıçandan oluşan biri kontrol diğeri deney olmak üzere 2 grup oluşturuldu. Tüm sıçanların sağ femuruna mikro kesici motor yardımıyla yapılan orta-şaft osteotomisinin ardından Kirschner teli ile intramedullar tespit sağlandı. Cerrahi sonrası deney süresi boyunca oral gavaj iğnesi kontrol grubuna günde 1 cc distile su, deney grubuna günde 1 cc suda çözünmüş hidroksiklorokin sülfat (160 mg/kg) verildi. Gruplar 28. günde sakrifiye edilerek opere sağ femurları çıkarıldı. Çıkarılan tüm femurların röntgenogram incelemesi yapıldı. Ardından her iki gruptan randomize seçilen 6'şar örnek biyomekanik incelemeye kalan örnekler de histopatolojik ve histomorfometrik incelemeye gönderildi. Histopatolojik incelemede H+E ve Masson trikrom boyamalarına ilaveten immünhistokimyasal yöntemlerle ALP, OC, OPN, Cat-K ve TRAP5b düzeyleri ve lokalizasyonları belirlendi. 
Bulgular: Grupların radyografi skorları ve eğme dayanımı skorları arasında istatiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır (p=0,7855 ve p=0,5476, sırasıyla). Histomorfometrik incelemelerde kıkırdak kallus alanının total kallus alanına oranı ve total kallus çapının femoral kemik çapına oranı, kontrol grubuna kıyasla deney grubunda istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azalmıştır (p=0,0411 ve p=0,018, sırasıyla). Histolojik kırık iyileşmesi ve inflamasyon skorları açısından iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır (p=0,267 ve p=0,270, sırasıyla). İmmünhistokimyasal analizlerin sonucunda kontrol grubuna kıyasla deney grubundaki ALP düzeyleri istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azalırken, OC ve OPN düzeyleri açısından iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır (p=0,0039, p=0,821 ve p=0,497, sırasıyla). Kontrol grubuna kıyasla deney grubundaki Cat-K ve TRAP5b düzeyleri de istatistiksel olarak anlamlı düzeyde artmıştır (p=0,0144 ve p=0,0073, sırasıyla).
Sonuç: Histomorfometrik incelemelerde kıkırdak kallus dokusunda, immünhistokimyasal incelemelerde osteoklast fonksiyonlarında ve kondrositler üzerinde olumsuz etkiler gözlemledik.
Anahtar kelimeler: Hidroksiklorokin sülfat, sıçan, femur, kırık iyileşmesi, immünhistokimyasal boyama.

Abstract:
Aim: Hydroxychloroquine (HCQ) while accumulating in lysosomes, impairs functions. It would reduce bone destruction by also acting lysosomes of osteoclast. We aimed to show radiologically, biomechanically, histopathologically and histomorphometrically.
Material and Methods: In our study, 8-week-old 24 male wistar rats were used. Two groups, each consisting of 12 rats, one control and the other experimental, were formed. After mid-shaft osteotomy have done to the right femur of all rats intramedullary fixation was achieved with a Kirschner wire. 1 cc distilled water was given to the control group and 1 cc (160 mg/kg) hydroxychloroquine sulfate to the experimental group, with oral gavage needle per day. The groups were sacrificed on the 28th day. After roentgenogram evaluated of the all operated femurs six randomly selected samples from both groups evaluated biomechanically and the remaining samples evaluated histomorphometrically, histopathologically and  immunohistochemically.
Results: No difference was found between the two groups of the radiological scores and flexural strength scores (p=0,7855 and p=0,5476, respectively). In histomorphometric examinations, the ratio of cartilage callus area to total callus area and the ratio of total callus diameter to femoral bone diameter were decreased in the experimental group compared to the control group (p=0,0411 and p=0,018, respectively). No difference was found between two groups in terms of histological fracture healing and inflammation scores (p=0,267 and p=0,270, respectively). As a result of immunohistochemical analysis, ALP levels in the experimental group were decreased compared to the control group, but no difference was found between two groups in terms of OC and OPN levels (p=0,0039, p=0,821 and p=0,497, respectively). Cat-K and TRAP5b levels were also increased in the experimental group compared to the control group (p=0,0144 and p=0,0073, respectively).
Conclusion: We observed adverse effects on cartilage callus tissue in histomorphometric examinations, on osteoclast functions and on chondrocytes in immunohistochemical examinations.
Key words: Hydroxychloroquine sulfate, rat, femur, fracture healing, immunohistochemical staining.