Tropomyosin reseptör kinaz b'ye (TRKB) karşi nötralizan monoklonal antikor üretilmesi
Generation of neutralizing monoclonal antibodies against tropomyosin receptor kinase b (TRKB)
Yazar: GAMZE EDA YILDIRIM
Danışman: PROF. DR. ERKAN YILMAZ
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Monoklonal antikorlar =

Özet:
Tropomiyozin Reseptör Kinaz B (TrkB), merkezi sinir sisteminde nöroprotektif ve nörotrofik etkileriyle bilinen bir reseptör tirozin kinazdır. Son yıllarda yapılan araştırmalar, bu reseptörün birçok kanser türünde aşırı ifade edildiğini ve onkojenik bir rol üstlenebileceğini göstermektedir. Bu tez çalışmasının amacı, rekombinant DNA ve hibridoma teknolojileri kullanılarak, insan TrkB reseptörünün ekstraselüler bölgesindeki Ig-benzeri domainleri hedefleyen TrkB-IgL antagonistik monoklonal antikorlarının (mAb) geliştirilmesidir.
Çalışmada, rekombinant TrkB-IgL peptidi E. coli sisteminde üretilmiş ve saflaştırılmıştır. Bu peptid ile immünize edilen farelerden, anti-TrkB-IgL antikorları üreten hibridoma klonları elde edilmiştir. Antijene yüksek afiniteye sahip dört farklı anti-TrkB-IgL klonun anti-proliferatif etkileri ve TrkB aracılı hücre içi sinyal yolakları üzerindeki etkinlikleri araştırılmış ve ardından saflaştırılmıştır. Saflaştırılan antikorların, insan meme ve kolon kanseri hücreleri üzerinde eş zamanlı hücre canlılık testleri ve TrkB aracılı hücre içi sinyal yolakları üzerindeki etkileri incelenmiştir.
Sonuç olarak, anti-proliferatif aktivite sergileyen TrkB-IgL monoklonal antikorlarının, immünofloresan boyama ile yüksek TrkB ekspresyonuna sahip SH-SY5Y nöroblastoma hücreleri üzerindeki membrandaki lokalizasyonu gösterilmiştir. Saflaştırılan antikorlar arasında TrkB-IgL 5.11 mAb, hedef kanser hücrelerinde hücre içi sinyal yolaklarını önemli ölçüde baskılamış ve kolon kanseri hücrelerinde kaspaz aktivitesini artırarak apoptozu indüklemiştir. Bu bulgular, TrkB-IgL 5.11 antikorunu, TrkB'yi etkin bir şekilde nötralize eden ve kanser hücrelerinde apoptozu tetikleyen umut verici bir terapötik ajan olarak öne çıkarmaktadır. Ayrıca, elde edilen bulgular, TrkB'nin Ig-benzeri tip 1 ve tip 2 domainlerinin terapötik potansiyelini daha derinlemesine incelemeye olanak tanırken, TrkB ligandı BDNF ile rekabetçi inhibisyon testlerinin geliştirilmesine yönelik hem bilimsel hem de klinik uygulamalar için değerli bir ürün sunmaktadır.

Abstract:
Tropomyosin Receptor Kinase B (TrkB) is a receptor tyrosine kinase known for its neuroprotective and neurotrophic effects in the central nervous system. Recent studies have shown that this receptor is overexpressed in many types of cancer and may play an oncogenic role. The aim of this thesis is to develop TrkB-IgL antagonistic monoclonal antibodies (mAbs) targeting the Ig-like domains on the extracellular region of the human TrkB receptor by recombinant DNA and hybridoma technologies.
In this study, the recombinant TrkB-IgL peptide was produced using the E. coli system and purified. The mice were immunized with this peptide, and hybridoma clones that produce anti-TrkB-IgL antibodies were obtained. The anti-proliferative effects and the impact on TrkB-mediated intracellular signaling pathways of four different anti-TrkB-IgL clones, which have high antigen affinity, were investigated, and the clones were subsequently purified. The effects of the purified antibodies were investigated in real time cell analysis and on TrkB-mediated intracellular signaling pathways in human breast and colon cancer cells.
In conclusion, the membrane localization of TrkB-IgL monoclonal antibodies, which exhibit anti-proliferative activity, was demonstrated on SH-SY5Y neuroblastoma cells, known for their high TrkB expression, using immunofluorescence staining. These findings highlight the TrkB-IgL 5.11 antibody as a promising therapeutic agent that has exhibited a neutralizing effect on TrkB and induces apoptosis in cancer cells. Furthermore, the results obtained facilitate in-depth investigation into the therapeutic potential of TrkB Ig-like type 1 and type 2 domains, while also providing a valuable product for scientific and clinical applications, particularly in the development of competitive inhibition tests using the TrkB ligand BDNF.