Olay yerinde bulunan bakteriyel kontaminasyona maruz kalan dışkı ve idrar örneklerinde DNA tiplendirmesi
DNA typing from stool and urine samples exposed to bacterial contamination at crime scene
Yazar: YASEMİN BERİL ORHANEL
Danışman: YRD. DOÇ. DR. E. HÜLYA YÜKSELOĞLU
İstanbul Üniversitesi / Adli Tıp Enstitüsü / Fen Bilimleri Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Adli bilimler = Forensic sciences ; Bakteriler = Bacteria ; Bozulma = Degradation ; DNA = DNA ; Delil = Evidence ; Deoksiribonükleaz = Deoxyribonuclease ; Dışkı = Feces ; Olay yeri inceleme = Crime scene experts ; Suç = Crime ; Suç yeri = Crime scene ; İdrar = Urine

Özet:
Olay yerinde bulunan biyolojik materyallerden suçun anlaşılması ve suçlunun bulunması adli bilimlerin görevlerinden biridir. Biyolojik materyallerden kanın, semenin, tükürüğün kullanımı adli vakalarda daha yaygındır. Bunların yanında idrar ve dışkının da kullanımı mevcuttur. Bunlar genellikle cinsel saldırı veya taciz davalarında karşımıza çıkar. Delil olarak dışkıyı en yaygın olarak fiili livata olgularında o veya anal yolla girmiş herhangi bir materyalden alacağımız örnekten elde edebiliriz. Çalışmamda, bu gibi davalarda önem kazanan dışkı ve idrarın, hangi şartlarda nasıl etkilendiğini anlamak, yapılacak test sonuçlarında hangi etmenlerden etkilenip etkilenmediğini anlamak için bir dizi deney yaptım. Projede 30 gönüllü kişiden rıza formu doldurularak temin edilen dışkı ve idrar örnekleri ile çalışıldı. Çalışmanın laboratuvar kısmı İstanbul Üniversitesi Adli Tıp Enstitüsü Moleküler Genetik Öğrenci Laboratuvarında yapıldı. Gönüllülerden alınan materyallerin yanında kontrol grubu için ağız içinden swap alındı. Kontrol DNA örneklerinin DNA ekstraksiyonu Chelex ile yapılıp, çeşitli ticari kitlerle miktar tayini ve amplifikasyonu yapılıp elektroforezle tiplenmesi yapıldı. Çeşitli şartlar altında tutulmuş idrar ve dışkı örneklerinin yüzeyinden DNA toplama işlemi steril nemli koton swap'la yapıldı. Dışkıdan elde edilen DNA'ların ekstraksiyonu ticari kit ile, idrardan ise Chelex yöntemi ile yapıldı. Dışkı ve idrardan elde edilen DNA için miktar tayini ve amplifikasyonu çeşitli ticari kitler ile yapılıp, kapiller elektroforez ile tiplendi. Ayrıca floramızda bulunan bakteri populasyonun uygulayacağımız çevre koşullarından nasıl etkilendiğini ve bu etkilenme sonucunda bizim çalışmamızı nasıl etkileyeceğine bakıldı. Yapılacak bu işlemler sonucunda; gerek ışık, nem, soğukluk, sıcaklık gibi fiziksel etmenler gerekse bakteriler gibi diğer organizmalardan etkilenip etkilenmediğine bakıldı.Projenin sonunda; olay yerinde çeşitli şekillerde karşımıza çıkabillecek bu biyolojik materyallerin, çeşitli çevre şartlarına göstermiş oldukları bozunmayı veya dayanıklılığı hakkında bilgi sahibi olup dışkı ve idrarında diğer biyolojik materyaller gibi kullanışlı olduğunu, gözardı edilmemesi gerektiğini kanıtlamaya çalıştım.

Abstract:
Biological evidence in crime scenes has a great importance in both identifying perpetrators and revealing crimes. Although blood, semen, saliva are the most common biological material, urine and stool can also be rarely found in the crime scene. Urine and/or fecal samples may be either intentionally left behind or neglected as in the example of used toilet papers. This type of evidence is also valuable in sexual assault cases for DNA analysis in forensic identification. In the project, I studied with the stool and urine samples of 30 volunteers who had filled the approval form. Laboratory work of the project was conducted at the Forensic Molecular Genetic Laboratory of Istanbul University Forensic Medicine Institute. As well as the samples taken from the volunteers, swap from mouth will also be obtained from the control group. This study initially aims to demonstrate in which conditions the urine and fecal samples, therefore the results of the analyses can be affected. The second aim of this research is to analyze the bacterial contamination since the urine and stool have specific bacterial flora and furthermore the environmental factors also have an effect on this media. It is also evaluated in this research whether these bacteria affect DNA isolation and amplification or not, a false identification due to microorganisms in urine and stool might be possible or not. An experimental design was used considering a crime scene modelling. Human urine and stool samples of the volunteers were subjected to various environmental conditions. DNA was extracted using Chelex and QIAamp DNA Stool Mini Kit. Amplifications were carried out using AmpFISTR SGM Plus PCR Amplification Kit and the samples were electrophoresed on ABI 310 Genetic Analyzer. Saliva samples of the volunteers were also analyzed as controls. The results reveal that the urine and stool samples are significant and beneficial evidence for forensic identification in particular when there is not any other biological evidence in the crime scene.