Tüberküloz plörezide polimeraz zincir reaksiyonunun(pcr) tanı değeri
The diagnostic value of polymerase chain reaction(pcr) in tuberculous pleurisy
Yazar: AYŞE BAHADIR
Danışman: UZMAN EMEL ÇAĞLAR
Sağlık Bakanlığı / Yedikule Göğüs Hastalıkları Ve Göğüs Cerrahisi Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Göğüs Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 1995
Konu: Göğüs Hastalıkları = Chest Diseases

Özet:
Tanı ve tedavideki  gelişmelere ragmen tüberküloz hala dünyada önemli bir sağlık sorun olmaya devam etmektedir. Tüberküloz plörezide   basil sayısı az olduğundan smear ile %10,kültürde ise %20-40 oranında etkeni izole etmek mümkündür. Plevra biyopsisi ile tanı oranı %60'a çıkmaktadır. Plevra biyopsisi kültüre ekildiğinde ise tanı oranı %90 'a ulaşmaktadır. Bu metotların hiçbiri hızlı ve sensitiv olmadıklarından yeni  ve hızlı metotlar geliştirilmiştir. Bu yeni metotlar mikobakterinin nükleik asidinin saptanması esasına dayanmaktadır. Biz de çalışmamızda tüberküloz plörezide basilin izolasyonu  açısından hızlı ve yüksek spesifiteye sahip bir yöntem olan Polimeraz Zincir Reaksiyonunun tanısal değerini araştırdık. Çalışmamıza Ekim 1993-Kasım 1994 tarihleri arasında takip edilen 47'si erkek(%72.3),18'ikadın(%27.7)olmak üzere 65 hasta alındı. Yaş ortalaması 36.52±16.23 idi.Plevra biyopsisi ile 40 hastaya,klinik radyolojik olarak ise 8 hastaya  tüberküloz plörezi tansı konuldu. Non-tüberküloz efüzyonu olan 17 hasta(13 hastada malign efüzyon,4 non-malign ) kontrol grubu olarak alındı. Plevral sıvıdan DNA izolasyonu sağlandı.Hence ve ark.larının tanımladığı gibi 65 kDa lık antijeni kodlayan 383 baz çifti primer olarak kullanıldı ve DNA amplifikasyonu yapıldı.İstatiksel analiz için  ki-kare ve tek yönlü varyans analizi kullanıldı.  Tüberküloz tanısı konulan 48 hastanın 43'ünde (%89.5)PCR pozitif  iken ,Non-tüberküloz grupta ise 17 hastanın 8'inde (%47.5) PCR pozitifliği saptandı
 PCR pozitifliği tüberkülozlu grupta nontüberküloz gruba göre anlamlı olarak yüksek bulundu(p<0.0001). Spesifite %52.9,sensitivite %89.5,pozitif beklenen değer %84.3,negatif beklenen değer %64.2 olarak bulundu. Doğruluk oranı % 80 idi.Pahalı    ve karmaşık bir yöntem olması ölü ve canlı basili ayıramaması,yöntem için gelişmiş elemana ihtiyaç olması  ise yöntemin   dezavantajlarıdır. Sonuç olarak PCR kültürden daha duyarlı  olup  kültür için  gereken 4-6 haftalık zamanı  kazandırmaktadır.Uygun primer  ve problar kullanılarak  en fazla 3-4 gün süren işlemler sonucunda bakteri DNA'sını saptamak mümkün olmaktadır. Özellikle  basil sayısının az olduğu ekstrapulmoner tüberküloz vakalarında daha yararlıdır.

Abstract:
Tuberculosis is still a major health problem worldwide.The number of organisms in pleural effusion specimens obtained from most patients with tuberculous pleuritis is relatively low, with positive culture results in 20-40 % of cases.Even pleural biopsy reveals granulomatous inflammation only in 60% of patients . Although the combination of microscopic examination and culture of pleural biopsy specimens was reported to increase the rate of diagnosis up to 90%, it is time-consuming. The aim of study was to evaluate the diagnostic value of PCR in tuberculous pleural effusion in comparison to conventional methods as direct smear examinations and cultures.Sixtyfive patients(47 men,18 women) were included between october 1993-novomber 1994 years. Mean age was 36.52±16.23.  Fourty patients with biopsy verifications and the rest of them  with strongly suggestive clinical and laboratory  findings ,had tuberculous pleurisy.17 patients (13 malignant and 4 non-malignant) were
 included as control group.DNA extraction was performed from pleural effusions. 383 bp fragment of the gene coding for 65 kDa antigen was used for DNA Amplification as described  by Hence and at all.Statistical analyses were performed using qi square and single tail variance analysis.
The overall sensitivity and specificity of M. tuberculosis PCR testing of pleural effusion were %89.5 and  52.9%, respectively. PCR is significantly positive in tuberculous pleural effusion (p<0.001)
As a result altough it is a rather expensive and sophisticated procedure, it can  not differentiate between  viable and dead bacilli,and qualified personnal is needed for the method,when adequate procedures and probes  are  employed,it has been possible to identify rapidly and precisely  myobacterium tberculosis  which  could not be grown in culture in tuberculosis pleurises