Korneal neovaskülarizasyonda mikro-RNA'ların rolü ve VGF ile ilişkisi
The Role of Micro RNA  in Corneal Neovascularization and Its Relation to VEGF
Yazar: MİMBAY YAŞAR
Danışman: DOÇ. DR. HARUN ÇAKMAK
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Göz = Eye ; Göz hastalıkları = Eye diseases ; Kornea = Cornea ; Korneal neovaskülarizasyon = Corneal neovascularization ; Mikro RNA = Micro RNA ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Korneal Neovaskülarizasyonda Mikro-RNA'ların Rolü ve VEGF  ile İlişkisi
Amaç: Bu çalışmadaki amacımız, korneal neovaskülarizasyonda(KNV) Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü(VEGF) ilişkili miRNA düzeyindeki değişikliklerin araştırılarak; korneal neovaskülarizasyon oluşum sürecinin aydınlatılması, sonraki yapılacak deneysel, klinik çalışmalara ve ilaç tedavilerine zemin hazırlanmasının sağlanmasıdır.
Yöntem: On iki adet Wistar-Albino cinsi erkek sıçan randomize olarak altışarlı iki gruba ayrılmış ve her bir sıçanın iki korneası da kullanılmıştır. Bütün gruplarda KNV gümüş nitrat çubuklar ile oluşturulmuştur. Çalışma sonunda sıçanlar eterli anestezi altında servikal dislokasyonla sakrifiye edilerek korneaları çıkarılmıştır. Kornealarda VEGF ve miRNA ekspresyon düzeylerine bakmak için qRT-PCR Array ve qRT-PCR metodları kullanılmıştır. Data analiz web bazlı olarak PCR Array data software kullanılarak yapılmıştır (http://www.sabiosciences.com/pcrarraydataanalysis.php).
Bulgular: Korneal neovaskülarizasyon oluşturulan ratların korneaları ile kontrol ratlarının korneal örnekleri karşılaştırıldığında, VEGF düzeylerinde; Fold-regulation değeri >2 olarak istatiksel anlamlı bir fark gözlemlendi (p0.05). miRNA PCR Array bulgularında her iki grupta under ve over ekspresyon verilerine göre; 9 gende Fold-regulation degeri <-2 ve Fold-regulation değeri >2 olarak istatiksel  anlamlı fark saptandı (p0.05). Korneal neovaskülarizasyon oluşturulan rat korneaları ile kontrol grubu ratlarının korneal örnekleri karşılaştırıldığında mo-miR-21_2, mo-miR-126_1 ve mo-miR-150_1 genlerinin istatiksel düzeyde anlamli over ekspresyonu (Fold-regulation değeri >2) saptandı (sırasıyla p= 0.002443, p= 0.030146, p= 0.000348). Aynı karşılaştırmada mo-miR-184_1 geninin Fold-regulation degeri <-2 olarak istatiksel anlamlı under ekspresyonu saptandı (p= 0.006428). Ayrıca iki grubun karşılaştırılmasında mo-miR-31_1 geninin  Fold regülasyon değeri -2`ye yakın olarak istatiksel anlamlı düzeyde under  ekspresyonu saptanmıştır (p= 0.005082).
Sonuç: Çalışma sonunda, deneysel yanık oluşturulan korneal neovaskülarizasyon grubunda VEGF ekspresyonun istatiksel olarak arttığı; mo-miR-21_2, mo-miR-126_1 ve mo-miR-150_1 genlerinin VEGF ekspresyonunu up regüle ettiği ve mo-miR-184_1 geninin VEGF ekspresyonunu down regüle ettiği gözlemlenmiştir. 

Anahtar Kelimeler: Korneal neovaskülarizasyon, vasküler endotelyal büyüme faktörü, micro-RNA, miRNA, eş zamanlı

Abstract:
The Role of MicroRNAs in Corneal Neovascularization and Its Relation to VEGF
Objective: Our aim in this study was to investigate changes in vascular endothelial growth factor(VEGF) associated miRNA levels during corneal neovascularization(CNV); to elucidate the process of corneal neovascularization, to prepare the ground for future experimental, clinical studies and drug treatments.
Method: Twelve Wistar-Albino male rats were randomly divided into two consecutive groups and two corneas of each rat were used. In all groups, CNV was formed with silver nitrate bars. At the end of the study, the rats were sacrificed by cervical dislocation under anesthesia with ether to remove the cornea. qRT-PCR Array and qRT-PCR methods were used to look at VEGF and miRNA expression levels in corneas. Data analysis was done using web array based on PCR Array data software (http://www.sabiosciences.com/pcrarraydataanalysis.php).
Findings: When corneal specimens of control rats were compared between corneal neovascularized rats and VEGF levels quantitatively measured by qRT-PCR, statistically significant difference was observed between Fold-regulation value >2 (p <0.05). In the result of miRNA PCR Array under and over expression in both groups; statistically significant difference was found between nine genes Fold-regulation values <-2 and Fold-Regulation >2 (p <0.05). When corneals items of corneal neovascularized rats and control rats were compared, statistically significant over expression(Fold-regulation value >2) of mo-miR-21_2, mo-miR-126_1 and mo-miR-150_1 genes were detected (Respectively p = 0.002443, p = 0.030146, p = 0.000348). The identical comparison, a statistically significant under expression of Fold-regulation value <-2 mo-miR-184_1 gene was detected (p = 0.006428). In addition, in contast to two groups, the under expression of the mo-miR-31_1 (p = 0.005082) gene was found to be statistically significant close to Fold regulation value -2.
Conclusion: At the end of the study, VEGF expression increased statistically in corneal neovascularization group in experimental burns; It has been observed that the mo-miR-21_2, mo-miR-126_1 and mo-miR-150_1 genes up regulate VEGF expression and the mo-miR-184_1 gene down regulates VEGF expression.

Key words: Corneal neovascularization, vascular endothelial growth factor, microRNA, miRNA, co-polymerase chain reaction.