IL-12 reseptör beta 1 ekspresyonunun hücre yüzeyinde flow sitometrik olarak değerlendirme yöntemi ile homozigot ve heterozigot eksikliklerin taranması
Screening of homozygous and heterozygous IL-12 beta 1 deficiencies by demostration of IL -12 beta 1 expression on the surface of lmphocytes using flow cytometer
Yazar: ÇAĞMAN SUN
Danışman: PROF. DR. Ş. ÖZDEN SANAL
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2003
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology

Özet:
V ÖZET Sun,Ç.,IL-12 reseptör (31 ekspresyonunun hücre yüzeyinde flow sitometrik olarak değerlendirme yöntemi ile homozigot ve heterozigot eksikliklerin taranması.Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Çocuk İmmünoloji Programı Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 2003. Bazı primer immün yetmezliklerin yaygın BCG ve non-tüberküloz mikobakteri enfeksiyonlarına yol açabildiği bilinmektedir. Ancak iyi tanımlanmış primer immün yetmezliklerden birisi bulunmayan kişilerde de bu ajanlarla yaygın enfeksiyonlar bildirilmiştir. Bu hastalıklar, ailevi geçiş göstermeleri nedeniyle Mikobakteriyel Hastalıklara Mendelian Eğilim (MSMD) olarak isimlendirilmiştir. MSMD çoğunlukla otozomal ressesif geçiş gösteren ancak X'e bağlı ve otozomal dominant formlarının da bulunduğu heterojen bir hastalık grubudur. Bugüne kadar BCG ve non-tüberküloz mikobakterilere hassasiyete yol açan lenfosit-makrofaj aktivasyon yolağında rol alan 5 ayrı genetik defekt gösterilmiştir. Bu defektler; Il_-12p40, IL-12R|31, IFNyRI, IFNyR2, STAT1 eksikliğidir. Bu çalışmada in vitro olarak PHA ile uyarılmış lenfosit yüzeyinde IL-12R|31 ekspresyonu flow sitometri ile değerlendirildi. Hacettepe Üniversitesi Çocuk Hastalıkları İmmünoloji Ünitesine başvuran dissemine BCG enfeksiyonu veya non-tüberküloz mikobakteri enfeksiyonu olan 9 hasta ve aile fertlerinde (toplam 54 kişi) ve sağlıklı 20 kontrolde lenfosit yüzeyinde IL-12R01 ekspresyonu çalışıldı. Sonuçlar bu reseptörü eksprese eden hücre yüzdesi olarak ifade edildi. IL- 12RP1 eksprese eden hücre yüzdesi kontrollerde ortalama ve değişim sınırları olarak %85 (değişim sınırları %98-%71), 4 hastada IL12Rp1 ekspresyonu normal iken, daha önce IL12RP1 eksikliği gösterilmiş olan 5 vakanın hepsinde ekspresyon değerleri %1'in altında taşıyıcı olduğu bilinen kişilerde (ebeveynlerde) %47 (değişim sınırları %18-%75) bulundu, iki hastanın aile fertlerinden birer kardeşte ekspresyon %20'nin (%14 ve %17) altında tespit edildi. Bu çocuklardan birisinde anti-mikobakteriyel tedaviye cevap veren submandibuler drene lenf nodu mevcutken, diğer çocuk sağlıklıidi. Bu çocukların moleküler çalışma sonuçları IL12RP1 eksikliği yönünden heterozigot olduğunu gösterdi. IL12RP1 defekti olduğu bilinen bir hastanın kardeşinde yenidoğan döneminde yapılan çalışmada IL-12RP1 ekspresyonu kontrol düzeylerinde bulundu. Sonuç olarak, bu yöntemin, taşıyıcıların küçük bir bölümünde IL-12RP1 eksprese eden hücre oranları kontrol değerleri ile örtüşmekle birlikte, IL- 12RP1 eksikliği ve taşıyıcı olan bireylerin belirlenebilmesinde kullanılabilecek güvenilir ve ekonomik bir yol olduğu ve tarama çalışmalarında kullanılabileceği belirlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Interlökin 12R(reseptör) eksikliği, IL-12R|31 ekspresyonu, heterozigot IL-12Rp1 eksikliği, Flow sitometrik yöntem Destekleyen kurumlar : Hacettepe Üniversitesi Araştırma Fonu

Abstract:
VI ABSTRACT Sun Ç., Screening of homozygous and heterozygous IL-12 receptor (31 deficiency by demostration of IL-12R(31 expression on the surface of lymphocytes using flow cytometer, Hacettepe University Health Sciencis Institute Ms Thesis in Pediatric Immunology, Ankara, 2003. It is known that patients with disseminated BCG and non-tuberculous mycobacterial infections may develop in some primary immunodeficiency diseases. However, disseminated infections with these agents have also been described in patients without any well defined primary immunodeficiencies. These diseases are named as Mendelian Susceptibilty to Mycobacterial Diseases (MSMD) as familial forms are frequent. MSMDare rather heterogenous and most of them are transmitted as autosomal reccessive forms but occasional X-linked and autosomal dominant forms have been reported. Up to date, 5 different genetic defects leading to susceptibility to BCG and non-tuberculous mycobacterial infections are known. These defects are; IL-12p40, IL-12Rp1, IFNyFM, IFNyR2 and STAT1 deficiencies. In this study, the detection of IL-12R|31 expression on surface of lymphocytes after in vitro stimulation with PHA by flow cytometer was established and studied in 9 patients with disseminated BCG or non- tuberculous mycobacterial infections who are being followed-up at Hacettepe University Children's Hospital Immunology Division and their family members (a total of 54 person) and 20 healthy controls. The results were expressed as the percentage of cells expressing this receptor. The mean percentages of lymphocytes expressing IL-12RJ31 were found to be 85% and 47% with a range of 98%-71% and 18%-75% for the controls and carriers (parents) for IL-12RfJ1 deficiency, respectively. IL-12R|31 expression was normal in 4 patients whereas in 5 patients whose molecular studies showed homozygous IL-12RJ31 deficiency, this value was lower than 1%. In two children from the latter families values were lower than 20% (14% and 17%). Although one ofthese siblings experienced draining submandibular lymph node which responded to antimycobacterial therapy well, the other was healthy. Molecular studies revealed a heterozygous mutation in these siblings. IL- 12RP1 expression value in a newborn sibling of another patient with IL- 12R01 deficiency was similar to the control values. In conclusion, although in a small group of carriers percentages of cells expressing IL-12RP1 overlap with control values, this method seems reliable and cost-effective that can be used both in detecting the patients with IL-12RJ31 deficiency and carrier state and for screening purposes. Keywords: Interleukin 12R (receptor) deficiency, IL-12R|31 expression, heterozygous IL-12R|31 deficiency, Flow cytometry method. Supported by Hacettepe University Research Found.