Akut myokard enfarktüsü sonrası wnt/beta katenin sinyal ileti yolağının moleküler karakterizasyonu
Molecular characterızatıon of wnt/b-catenın sıgnalıng pathway after myocardıal infarctıon
Yazar: EMEL FERMANCI KILCI
Danışman: DOÇ.DR. CENK ERDAL ; PROF.DR. ÜNAL AÇIKEL
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2006
Konu: Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi = Thoracic and Cardiovascular Surgery ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
1. ÖZETAKUT MYOKARD ENFARKTÜSÜ SONRASI WNT/BETA KATENİN SİNYAL İLETİYOLAĞININ MOLEKÜLER KARAKTERİZASYONUDr. Emel Fermancı, Dokuz Eylül Üniversitesi Tıp Fakültesi Kalp ve Damar Cerrahisi AD,İzmir, Türkiye.(emel.fermanci@deu.edu.tr)AMAÇ: Miyokardiyal enfarktüs ventriküler yapıda ventriküler remodeling oluşumu ile globaldeğişikliklere yol açar. Bu oluşumun arkasında yatan moleküler mekanizma net olarakaçıklanamamaktadır. Wnt/Ã-katenin sinyal ileti yolağı hücre poliferasyonu, diferansiyasyonu,apopitozis ve hücre oryantasyonunun kontrolünü içeren çeşitli modeling ve remodelingolaylarında rol oynamaktadır. Biz bu yolaktaki değişikliklerin akut miyokardiyal enfarktüssonrası iskemik ve non-iskemik alanda ani değişikliğin açıklanmasındaki mekanizmalardan biriolabileceğini düşünmekteyiz Çalışmamızın amacı iskemik ve non-iskemik miyokarddokularındaki gen ekspresyonu değişimlerini tanımlamak ve geliştirilecek tedavi stratejileriiçin olası hedef moleküller belirlemektir.YÖNTEM: Miyokardiyal enfarktüs Wistar ratlarının koroner arter ligasyonu ileoluşturuldu. Ratlar iki gruba ayrıldı. Sham operasyonu ligasyon yapılmayan cerrahi prosedürüiçerdi. Operasyon sonrası 30. dakikada tüm hayvanlar sakrifiye edilip, kalpleri çıkarılarakiskemik ve non-iskemik zonlardan miyokardiyal doku örnekleri alındı. Doku örnekleri hemenRNA analizi için flash frozena konuldu. Total RNA çıkarılıp reverse transkripsiyonu yapıldı.cDNA'ların aliquotları semi-kantitatif RT-PCR ile hedef genlere spesifik oligonükleotidprimerleri ile amplifiye edildi. Enfarktlı zondaki iskemi varlığını belirlemek için dokuörnekleri üzerinde histopatolojik analiz yapıldı.BULGULAR: Wnt1, Wnt3a, Wnt5a, Wnt9a, Axin, Ã-catenin, salgılanmış Frizzled RelatedProtein1(sFRP1), Dishellved, Frz2, Frz4 ve Frz6 genlerinden RT-PCR amplifikasyonlarınınoptimizasyonu yapılarak; Wnt sinyalizasyonunda rolü olan genlerin ayırıcı ekspresyonuyapıldı. LAD ligasyonu olan ve/veya olmayan hayvanlardan alınan doku örneklerindekigenlerin ekspresyonu kıyaslandığında Frz2 ve sFRP1 transkripsiyon seviyelerinde ligasyonabağlı iskemi etkisiyle farklılık vardı.SONUÇ: Ã-katenin proteinlerinin sitoplazmik seviyesini regüle eden sFrz1 ve Frz2 Wntsinyalizasyonunun salgılanan aktivatörleri veya inhibitörleri olarak bilinmektedirler, bu yüzdenratlarda MI tarafından oluşturulan iskemide myokardiyal hücreleri korumaya yönelik çabukcevap vermek için bu genlerin ekspresyonunu regüle etmektedirler.Anahtar Kelimeler: Akut MI, Wnt-Ã katenin sinyal ileti yolağı, Frz2 ve sFRP1.

Abstract:
2. SUMMARYMOLECULAR CHARACTERIZATION OF WNT/B-CATENIN SIGNALINGPATHWAY AFTER MYOCARDIAL INFARCTIONDr. Emel Fermanci, Dokuz Eylül University Faculty of Medicine Department ofCardiovascular Surgery, Izmir, Turkey.(efermanci@deu.edu.tr)OBJECTIVES: Myocardial infarction induces global changes in the ventricular architecture, aprocess called ventricular remodeling. Molecular mechanism behind this process still is notclearly identified. Since Wnt/Ã-catenin signaling pathway involves in a variety of modeling andremodeling processes including cell proliferation, differentiation, apoptosis and the control ofcell orientation. We assume that alterations in this pathway may be one of the mechanismexplaining immediate response in infarct and remote zone after acute myocardial infarction.Aim of our study is to show changing in gene expression at ischemic and non-ischemicmyocardial tissues and also finding possible target molecules for treatment strategies.METHODS: Myocardial infarction was produced by coronary artery ligation of Wistar rats.Animals were divided into two groups. Sham operation comprised surgical procedure withoutligature placement. Following thirty minutes after operation, all animals were sacrificed, heartswere dissected and myocardial samples were obtained from remote and infarct zones. Tissuesamples were immediately flash-frozen for RNA analysis. Total RNA was extracted andreverse transcribed. Aliquots of cDNA?s were then amplified with oligonucleotide primersspesific for the target genes by semi-quantitative RT-PCR. Histopathological analysis wasestablished on tissue samples to verify presence of ischemia in infarct zone.FINDINGS: Optimization of the RT-PCR amplifications from Wnt1, Wnt3a, Wnt5a, Wnt9a,axin, Ã-catenin, secreted Frizzled Related Protein (sFRP1), Dishelleved, Frz2, Frz4 and Frz6genes were performed, differential expression of genes which have roles in the Wnt signalingwere presented in. When expression of genes have been compared between both groups oftissues taken from separate animals with and/or without LAD ligation, there were differencefor the levels of Frz2 and sFRP1 transcription under the effect of ischemia caused by ligation.RESULT: SFrz1 and Axin which regulates cytoplasmic level of Ã-catenin proteins are knownas secreted activators or inhibitors of Wnt signaling therefore ischemia occurred by the MI inrats regulate expression of these genes in order to give quick response for protectingmyocardial cells.Key Words: Acute MI, Wnt-Ã catenin signaling pathway, Frz2 and sFRP1.