Karaciğer siroz modeli oluşturulmuş sıçanlarda TGF-β tip 1 reseptör kinaz inhibitörü, LY-364947' nin apoptozis ve angiogenez üzerine etkisi
Effect of TGF- β type 1 receptor kinase inhibitor, LY- 364947 on apoptosis and angiogenesis in liver cirrhosis model in rats
Yazar: ÖZGE ÇAĞLAR
Danışman: DOÇ. DR. NECMİYE CANACANKATAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Angiostatin = Angiostatin ; Fosfotransferazlar = Phosphotransferases ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer sirozu = Liver cirrhosis ; Kaspazlar = Caspases ; Reseptörler = Receptors ; Sıçanlar = Rats ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Karaciğer sirozu, fibrozis, yara dokusu ve rejeneratif nodüller ile karakterize edilen yaygın ve kronik karaciğer hastalığının sonucudur. Transforme edici büyüme faktörü (TGF) β1 karaciğer sirozu gelişiminde yer alan önemli pro-fibrojenik mediatörlerden biridir. Hücre çoğalması ve apoptozis arasındaki denge, karaciğer sirozunun oluşmasında çok önemlidir. Anjiyogenez, mevcut vaskülatürden yeni kan damarlarının oluşumudur ve sirozun ilerlemesiyle bağlantılıdır. Bu çalışmada, N-nitrozodietilamin (DEN) ile karaciğer sirozu modeli oluşturulan sıçanlarda, TGF-β1 reseptör kinaz inhibitör LY-364947' nin apoptozis ve anjiogenez üzerine etkisi amaçlandı. Kontrol, Siroz, Siroz+DMSO, Siroz+LY-364947(I)(100μg/kg/hafta), Siroz+LY-364947(II)(300μg/kg/hafta) ve Siroz sonrası+LY-364947(I)(100μg/kg/hafta) olmak üzere 6 grup oluşturuldu.    Siroz grubundan rastgele seçilen sıçanlarda; histopatolojik olarak siroz tespit edildikten sonra Kontrol, Siroz, Siroz+DMSO, Siroz+LY-364947(I)(100μg/kg/hafta) ve Siroz+LY-364947(II)(300μg/kg/hafta) grupları sakrifiye edildi. Siroz sonrası+LY-364947(I)(100μg/kg/hafta) grubuna siroz oluştuktan sonra 4 hafta süreyle LY-364947)(100μg/kg/hafta) uygulandı. Apoptozis, kaspaz -3, -8 ve -9 düzeyleri ölçülerek değerlendirildi. Anjiyogenez ise vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), TGF-β1 ve anjiyostatin düzeyleri değerlendirildi. Ayrıca antioksidan kapasite ve lipit peroksidasyonu sırasıyla indirgenmiş glutatyon (GSH) ve malondialdehit (MDA) düzeyleri ölçülerek değerlendirildi. Değerlendirmeler kolorimetrik yöntemlerle gerçekleştirildi. Ayrıca histopatolojik bulgular da değerlendirildi. Kaspaz -3, -8 ve -9 enzim aktiviteleri ve artmış lipit peroksidasyonu LY-364947(300μg/kg/hafta) ile anlamlı ölçüde baskılandı. LY-364947(300μg/kg/hafta) uygulaması ile TGF-β1 düzeylerinde azalma gözlenirken, anjiyostatin düzeyleri ise anlamlı şekilde arttı. LY-364947(100μg/kg/hafta) uygulaması ile de TGF-β1 düzeyleri azaldı. LY-364947 (300μg/kg/hafta), VEGF düzeylerini baskılamış olsa da bu azalma istatistiksel olarak anlamlı değildi. Histopatolojik bulgularda, siroz gelişiminin LY-364947(300μg/kg/hafta) uygulaması ile azaltıldığı gözlenirken, siroz sonrasında LY-364947(100μg/kg/hafta) uygulaması aynı etkiyi göstermedi. Tüm gruplarda kontrol grubuna göre GSH düzeylerinde azalma gözlendi.  Sonuç olarak TGF-β tip 1 reseptör kinaz inhibitörü, LY-364947 apoptozis ve anjiogenezi baskılaması ile karaciğer sirozunda umut verici bir antifibrotik ve antianjiyojenik ajan olarak kabul edilebilir.

Anahtar Kelimeler: karaciğer sirozu, LY-364947, TGF-β1, kaspaz, VEGF, Anjiostatin

Abstract:
Effect of TGF- β Type 1 Receptor Kinase Inhibitor, LY- 364947 On Apoptosis And Angiogenesis In Liver Cirrhosis Model in Rats

Cirrhosis is a common and consequence of chronic liver disease that characterized by the diffuse fibrosis, scar tissue and regenerative nodules. Transforming growth factor (TGF) β1 is one of the major pro-fibrogenic mediators which takes part in the development of liver cirrhosis. The balance between cell proliferation and apoptosis is very important in the formation of liver cirrhosis. Angiogenesis, the formation of new blood vessels from the existing vasculature has been linked to progression to cirrhosis. In this study, experimental liver cirrhosis had been developed by N-nitrozodietilamin (DEN) and we aimed to determine the effect of the TGF-β1 receptor kinase inhibitor, LY-364947 on apoptosis and angiogenesis in liver cirrhosis model in rats. 6 groups were included as Control, Cirrhosis, Cirrhosis+DMSO, Cirrhosis+LY-364947(I)(100μg/kg/week), Cirrhosis+LY-364947(II)(300μg/kg/week) and After Cirrhosis+LY-364947(I)(100μg/kg/week). Control, Cirrhosis, Cirrhosis+DMSO, Cirrhosis+LY364947(I)(100μg/kg/week), and Cirrhosis+LY-364947(II)(300μg/kg/week) groups were killed when cirrhosis was established by evaluation of histopathological investigations in rats which were chosen randomly from the Cirrhosis group. After cirrhosis was established LY-364947 was administered for 4 weeks to rats After Cirrhosis+LY-364947(I)(100μg/kg/week) group. Apoptosis was evaluated by measurement of caspase-3, -8 and -9. Angiogenesis was evaluated by measurement of vascular endothelial growth factor (VEGF), TGF-β1 and angiostatin levels. Besides antioxidant capacity and lipid peroxidation were evaluated by measuring the levels of reduced glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA), respectively. The evaluations were carried out by colorimetric methods according to the assay instructions. Histopathological investigations were also carried out. Caspase-3, -8 and -9 enzyme activities and also increased lipid peroxidation were significantly suppressed by LY-364947(300μg/kg/week) treatment. TGF-β1 levels were decreased and angiostatin levels were increased significantly by LY-364947(300μg/kg/week) treatment. TGF-β1 levels were also decreased by LY-364947(100μg/kg/week). Although LY-364947(300μg/kg/week) suppressed VEGF levels, it was not significant. Histopathological findings indicated that cirrhosis development was reduced by LY-364947 (300μg/kg/week) whereas administration of LY-364947(100μg/kg/week) after cirrhosis was failed to point out the same affect. GSH depletion was observed in all groups compared with control. As a result, LY-364947 may be considered as a promising anti-fibrotic and anti-angiogenic agent in liver cirrhosis by reducing apoptosis and angiogenesis.

KeyWords: liver cirrhosis, LY- 364947, TGF-β1, caspase, VEGF, Angiostatin
Mersin – 2017