Folliküler lenfomalarda mikroçevrenin organizasyonunda TGFβ/Smad yolağının rolü ve prognozla ilişkisi
The role of transforming growth factor  ß (TGFß)/ Smad pathway i̇n microenvironment organization of follicular lymphoma and i̇ts relevance to prognosis
Yazar: ŞENAY KÖM
Danışman: PROF. DR. IŞINSU KUZU
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Germinal merkez B hücrelerinden kaynaklanan Folliküler lenfoma (FL) dünyada en sık rastlanan ikinci lenfoma alt tipidir. Genellikle yavaş klinik seyirli lenfomalar arasında sayılmalarına rağmen hastalar farklı klinik seyir gösterebilmektedir. Folliküler lenfoma vakalarının %30-40 kadarı, agresif karakterli diffüz büyük B hücreli lenfomaya (DBBHL)'ye ilerleyebilmektedir. T(14;18)(q32;q21) translokasyonu FL'da % 85-90 oranında en sık görülen genetik değişikliktir. 
Bu zamana kadar, FL'da yaş, evre, grade, tümör yükü, kemik iliği tutulumu, serum laktat dehidrojenaz (LDH), hemoglobin ve beta2 mikroglobulin (B2 mikroglobulin) gibi birçok klinik prognostik faktör tanımlanmıştır. Bu faktörlerin dışında hastalık mikroçevresinin prognozda çok önemli bir etken olduğu çeşitli çalışmalarca gösterilmiştir. FOXP3 ifade eden Treg hücrelerinin (Treg) mikroçevrede artmış olması daha iyi genel sağ kalım ile ilişkilendirilirken, mikroçevrede makrofajların artışı daha kötü klinik gidiş ile ilişkisi bildirilmiştir. Ancak mikroçevre klinik davranış ilişkisini ortaya koyan çalışmalarda elde edilen sonuçlar birbirleriyle çelişmektedir. 
Bu bilgilerden yola çıkılarak, bu tez çalışmasında, tümör mikroçevresi üzerinde etkisi olduğu düşünülen TGFβ/Smad yolağındaki genlerin ifade değişimlerinin, folliküler lenfoma örneklerinde klinik/patolojik prognostik parametreler ile ilişkisinin anlaşılması hedeflenmiştir. 21 FL vakası ve kontrol grubunu oluşturan 5 reaktif folliküler hiperplazi vakasında, regülatör T hücrelerin varlığının tespiti için FOXP3 ve tümör ilişkili makrofajların varlığının tespiti için de CD163 antikorları ile immunohistokimyasal inceleme yapılmıştır. FL örneklerinde lazer mikrodiseksiyon yöntemi ile ayrıştırılan neoplastik folliküllerden ve kontrol grubundan elde edilen RNA'lar ile TGFβ/Smad yolağında yer alan TGFBR1, Smad2, Smad3, Smad4, Smad6, Smad7, SARA ve CDKN2B genlerinin ifade düzeyleri qRT-PCR yöntemi ile incelenmiştir.  Bu analizler sonucunda elde edilen bulgular ile histopatolojik-klinikopatolojik prognostik veriler arasındaki ilişki istatistik analizler ile araştırılmıştır.  Bu istatistiksel araştırmalardan sonra elde edilen veriler arasında anlamlı herhangi bir korelasyon olmadığı saptanmıştır. 
Bu tez çalışması 18H0230001 numaralı proje ile Ankara Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinatörlüğü tarafından desteklenmiştir.

Abstract:
Follicular lymphoma (FL) caused by germinal central B cells is the second most common lymphoma subtype. Although they are considered as indoent lymphomas, patients may have a wide variety of clinical course. 30-40 % of cases of follicular lymphoma are transformed into aggressive characterized diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), which is also of germinal origin.  T(14; 18) (q32; q21) translocation is the most important genetic marker of FL and is observed in 85-90% of FL cases. 
To date, many clinical prognostic factors have been identified including factors such as age, stage, grade, tumor burden, bone marrow involvement, serum lactate dehydrogenase (LDH), hemoglobin and b-microglobulin.  Beside these factors, various studies have shown that the microenvironment of the disease is a very important factor in prognosis. Increased number of of FOXP3-expressing T cells (Treg) in microenvironment was associated with better overall survival, while higher macrophage content was associated with poorer clinical outcome. However, the results obtained from the studies on this subject may contradict each other. 
Based on this information, in this thesis, it is aimed to understand the relationship between the expression changes of genes in the TGFβ / Smad pathway, which are thought to have an effect on tumor microenvironment, with clinical / pathological prognostic parameters in follicular lymphoma samples. In 21 cases of FL and 5 reactive follicular hyperplasia cases that constitute the control group, immunohistochemical examination was performed with the antibodies FOXP3 to detect the presence of regulator T cells and CD163 antibodies for the presence of tumor-associated macrophages. RNA was extracted from the neoplastic follicles in FL samples and reactive follicles in control group which were separated by laser microdissection method. The expression levels of TGFBR1, Smad2, Smad3, Smad4, Smad6, Smad7, SARA and CDKN2B genes in the TGFβ / Smad pathway were examined by the qRT-PCR method. The relationship between the findings obtained as a result of these analyzes and histopathological-clinicopathological prognostic data were investigated by statistical analysis. No significant correlation was found between the data obtained after these statistical studies.
This thesis was supported by Ankara University Scientific Research Projects Coordinator with the project numbered 18H0230001.
Keywords: Follicular lymphoma, prognosis, microenvironment, TGFβ/ Smad pathway