Koç spermasının farklı oranlarda sükroz içeren sulandırıcılar ile gliserollü ve gliserolsüz dondurulması
Freezing of ram semen with glycerol containing or lacking diluents containing different proportion of sucrose
Yazar: İLKER YAVAŞ
Danışman: PROF. NECMETTİN TEKİN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2008
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmanın amacı, koç spermasının dondurulmasında gliserollü ve gliserolsüz sulandırıcılara katılan farklı oranlarda sükrozun, çözüm sonu parametreler üzerine etkisinin araştırılmasıdırÇalışmada 4 baş koç kullanılmıştır. Çiftleşme sezonu içerisinde düzenli olarak koçlardan haftada iki kez suni vagenle sperma alınmış ve makroskobik olarak normal ve motilitesi % 80'in üzerinde olan spermalar birleştirilmiştir (miks ejekülat). Miks ejekülatlar split sample yöntemiyle değerlendirilmiştirSpermaların sulandırılmasında Tris-sitrik asit-fruktoz-yumurta sarısı sulandırıcısı ana sulandırıcı olarak kullanılmıştır. Sperma sulandırıcısına 100 mM sukroz ve % 4 gliserol ilave edilerek 1., 100 mM sukroz ilave edelerek 2., 250 mM sukroz ve % 4 gliserol ilave edilerek 3., 250 mM sukroz ilave edilerek 4., 500 mM sukroz ve % 4 gliserol ilave edilerek 5., 500 mM sukroz ilave edilerek 6. ve sadece % 4 gliserol ilave edilerek 7. (kontrol) grup olmak üzere toplam 7 farklı sulandırıcı grubu elde edilmiştir. Karıştırılmış ejakülatlar hazırlanan 7 farklı sperma sulandırıcısı ile uygun tohumlama dozunun elde edilebilmesi için 1:7 oranında sulandırılmıştırSperma payetleri buzdolabında +4oC de 2,5 saat bekletilerek gerçekleştirilen equilibrasyon işlemi sonrası otomatik dondurma makinesinde -15°C /dakika hızla 8 dakikada dondurulmuştur. Sıvı azotta tutulan dondurulmuş spermalar su banyosunda 37°C de ve 15 saniye içinde çözdürülmüş ve çözüm sonu spermatolojik parametreler (motilite, ölü-canlı, anormal, host) değerlendirilmiştirÇalışmada, çözüm sonrası spermatozoa motilitesinde 250 mM sükroz ilavesi içeren 3. ve 4. sulandırıcı gruplarında (% 59,14 ve % 54,0 ) kontrol grubuna (% 46,71) göre istatistiki olarak önemli derecede iyileşme sağlandığı gözlenmiştir (P< 0,01). 100 ve 500 mM sükroz içeren 1., 2., 5., 6. sulandırıcı gruplarında (% 43,14, %29.0, %36,0, %26,28) ise kontrol grubuna (% 46,71) göre daha düşük çözüm sonrası spermatozoa motilite değerleri elde edilmiştir. Yukarıda ki sonuçlara benzer şekilde çözüm sonu ölü spermatozoa ve host değerleri 250 mM sükroz ilavesi içeren 3. ve 4. sulandırıcı gruplarında kontrol grubuna göre daha iyi değerlere ulaşmış, fakat istatistiki bir fark elde edilememiştir. Çözüm sonu anormal spermatozoa değerlerinde ise tüm gruplarda kontrol grubuna göre iyileşme sağlanmıştırAraştırmadan alınan sonuçlara göre sperma sulandırıcılarına ilave edilen sükrozun özellikle 250 mM oranında katıldığında önemli iyileşmeler sağladığı ancak daha düşük (100 mM) ve daha yüksek (500 mM) oranlarda ilave edilmesinin kötüleşmeye yola açtığı gözlenmiştir.

Abstract:
The aim of this study was to investigate the effect of different proportions of sucrose added into the diluents containing or lacking glycerol on the parameters obtained following thawing of ram semenA number of four rams were used in the study. Sperm was collected by the aid of an artificial vagina twice a week regularly in breeding season from the rams, and sperms determined to be normal macroscopically and having a motility ratio above 80% were mixed together (mixed ejaculate). Mixed ejaculates were evaluated according to split sample methodTris-citric acid-fructose-egg yolk was used as the main diluent in the dilution of the sperms. Seven different diluent groups (6 test one control) were established for the investigation. Test groups, group 1-6, were formed by adding 100 mM of sucrose and 4% glycerol group 1, 100 mM of sucrose group 2, 250 mM of sucrose and 4% glycerol group 3, 250 mM of sucrose group 4, 500 mM of sucrose and 4% glycerol group 5, and 500 mM sucrose group 5, respectively into the sperm diluents. Group 7 where only 4% of glycerol was added into the sperm diluents constituted the control group. Mixed ejaculates were diluted with the proportion of 1/7 with these 7 groups of sperm diluents in order to obtain appropriate insemination doseAfter equilibration process performed with incubation at +4ºC for 2.5 hours, sperm straws were frozen in an automatic freezing machine in 8 minutes at a cooling rate of -15ºC / minutes. Straws stored frozen in liquid nitrogen were thawed in 37ºC water bath in 15 seconds, and spermatological parameters (motility, nonviable/viable spermatozoa, abnormal spermatozoa, host) were evaluatedIn the study, statistically significant (P<0,01) improvement was achieved in sperm motility (59,14% and 54,0%) in groups 3 and 4, respectively, containing 250 mM of sucrose as an ingredient of diluent when compared to the control group (46,71%). Lower post-thaw sperm motilities (43,14%, 29,0%, 36,0%, and 26,28%) were respectively observed in groups 1, 2, 5, and 6 containing 100mM and 500 mM sucrose compared to the control group (46,71%). Similarly, as mentioned before, better post-thaw nonviable/viable spermatozoa and host rates were achieved in groups 3 and 4 than control group, however, no statistically significant difference was found between these groups. In addition, post-thaw abnormal spermatozoa rates were found to be better in all groups than the control groupAs a conclusion, important improvements in spermatological characteristics were obtained when a concentration of 250 mM of sucrose was added into the semen diluents, nevertheless, when lower (100mM) and/or higher (500mM) sucrose concentrations were used detrimental effects were encountered in the parameters.Key Words: Cryopreservation, Glycerol, Ram, Semen, Sucrose.