Nazal polipoziste ORMDL3 (orosomucoid like 3) gen ekspresyon düzeylerinin ve genetik polimorfizmlerin araştırılması /
Yazar: AYÇA AYDIN
Danışman: PROF. DR. YUSUF KIZIL
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Astım = Asthma ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Nazal polipler = Nasal polyps ; Orosomukoid = Orosomucoid ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic

Özet:
Nazal polipozis, nazal kavite ve paranazal sinüs mukozasının kronik inflamasyonu sonucunda gelişen, çoğunlukla lateral nazal duvardan kaynaklanan benign mukozal çıkıntılarla karakterize bir hastalıktır. Toplumdaki nazal polip prevalansı  %1-4 arasında değişmektedir. Nazal polipozis; sık görülen, günümüzde hem medikal hem cerrahi yöntemlerle tedavi edilmeye çalışılan ve tedavisi sırasında güçlüklerle karşılaşılan, sıklıkla nükslerin görüldüğü ve sosyal yaşamı etkileyen bir hastalıktır. Etiyolojisi multifaktöriyeldir, hastalığın ortaya çıkışında çevresel ve genetik faktörler rol oynamaktadır. 
Bu çalışmada; etyopatogenezi net olarak aydınlatılamamış olan nazal polipozisin genetik altyapısı ve astımla olan güçlü ilişkisi göz önünde bulundurularak, astım gelişmesinde rolü kanıtlanmış olan ORMDL3 geni nazal polipoziste incelenmiştir. Bu amaçla; Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Kulak Burun Boğaz Hastalıkları polikliniğine başvuran 25 nazal polipozisli hasta ve 29 sağlıklı kişi kontrol grubu olarak çalışmaya dahil edilmiştir. Alınan nazal polip ve alt konka örneklerinde ORMDL3 genine ait tek gen nükleotid polimorfizmleri, ORMDL3 mRNA ekspresyon düzeyleri incelenmiş ve immünhistokimyasal yöntemle ORMDL3 protein tayini yapılmıştır. RS8076131, RS12603332, RS17608925,  RS3169572 ve RS17608925 DNA sekanslarında genotipleme yapılmış, iki grup karşılaştırıldığında RS8076131, RS12603332, RS17608925 ve RS3169572 bölgelerinde anlamlı sayılabilecek nükleotid değişimi saptanmamıştır. Sadece RS17608925 bölgesinde görülen TT<->CT (T:timin; C:sitozin) değişiminin anlamlı olarak kabul edilebileceği düşünülmüştür. (p=0,05) 
ORMDL3 mRNA ekspresyon seviyeleri açısından, polip örnekleri ile aynı gruptan alınan alt konka örnekleri ve kontrol grubundan alınan alınan konka örnekleri arasında istatistiksel olarak anlamlı fark saptanmıştır. (p<0,05) Polip dokusunda ORMDL3 geninin mRNA düzeyinde hem aynı hastaların alt konkasına göre, hem de sağlıklı kontrol grubuna göre daha fazla ifadelendiği görülmüştür. Konka grupları arasında ise mRNA ekspresyonu açısından fark görülmemiştir. 
ORMDL3 geninin dokularda protein düzeyinde ifadelenmesini incelemek amacıyla immünhistokimyasal çalışma yapılmıştır. Anti-ORMDL3 antikoru ile yapılan bu çalışmada, dokular arası boyanma şiddetini kantitatif olarak belirleyebilmek amacıyla bir büyük mikroskobik büyütme alanında (BBA) (400x) en yoğun boyanan intraepitelyal inflamatuar hücre sayısı, bir BBA' da stromada en yoğun boyanan inflamatuar hücre sayısı ve bütün alandaki inflamatuar hücre sayısının yüzdesi her bir örnek hesaplanmış ve dokular arası karşılaştırma bu parametrelere göre yapılmıştır. Polip örnekleri ile aynı gruptan alınan konka örnekleri ve kontrol grubundan alınan konka örnekleri arasında intraepitelyal inflamatuar hücre sayısı ve stromal inflamatuar hücre sayısı açısından istatistiksel olarak anlamlı fark saptanmıştır. (p<0,05) Konka grupları arasında bu iki IHKsal parametre açısından fark saptanmamıştır. Epitelyal boyanma açısından üç grup arasında anlamlı fark izlenmemiştir. Astım varlığının polip dokuları arasında anti- ORMDL3 ile boyanma açısından fark yaratmadığı görülmüştür. Polip dokularında IHKsal parametreler ile mRNA ekspresyon durumu arasında istatistiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır. Bu veriye dayanarak, polip dokularında ORMDL3 geninin mRNA ve protein olarak ifadelenmesi arasında korelasyon olmadığı yorumu yapılmıştır.
Sonuç olarak; tek gen nükleotid polimorfizmi gösterilememesine rağmen, ORMDL3 geninin nazal polipoziste mRNA ve protein düzeyinde ekspresyonunun arttığı gösterilmiştir. Bilindiği kadarıyla ORMDL3 geni nazal polipoziste ilk defa çalışılmıştır. ORMDL3 geninin astımda olduğu gibi, nazal polipozis etyopatogenezinde etkili olabileği düşünülmektedir, ancak çalışma daha büyük hasta popülasyonlarında tekrarlanmalıdır.

Abstract:
Nasal polyposis is a chronic inflammatory disease of the nasal cavity and the paranasal sinuses, mostly originated from the lateral nasal wall and characterized with benign mucosal protrusions. In the general population the overall prevalence rate of nasal polyposis ranges from 1-4%. It is a chronic disease which is frequently seen in the population, both medical and surgical methods are used for its treatment, recurrence is often seen and it has a socially negative impact on patients. Nasal polyposis is a complex multifactorial disease; associated with several environmental, genetic and inflammatory factors, but the cellular and molecular mechanisms that contribute to the pathogenesis are not fully understood. 
In this study ORMDL3 gene, which is strongly associated with the development of asthma, was investigated for its possible role in nasal polyposis considering its strong relations with asthma and its genetic background. For this purpose, 25 patients with nasal polyposis admitted to Gazi University Ear Nose and Throat Department and 29 healthy controls were included in this study. Nasal polyp tissue samples and turbinate samples from the both groups were assessed for ORMDL3 gene variants, mRNA and protein expression levels. Five selected single nucleotid gene polymorphisms (SNPs) (RS8076131, RS12603332, RS17608925,  RS3169572 and RS17608925) were genotyped and the single locus analysis showed only a borderline association between RS17608925 variant and nasal polyposis. (p=0,05) The difference of mRNA expression levels between the nasal polyp samples and the turbinate samples was statistically significant. (p<0,05) It was observed that the mRNA expression levels of ORMDL3 gene was higher in the nasal polyp tissue samples than both the turbinate samples from the NP group and the control group. There was no statistically significant difference between the turbinate samples in NP and control groups. 
In order to investigate the protein expression levels of ORMDL3 gene, immunohistochemical staining with Anti-ORMDL3 antibody was used. In order to quantitatively determine the intensity of the staining and compare protein expression levels between groups; the number of intraepithelial inflammatory cells intensely stained in one large microscopic area (LMA) (400x), the number of inflammatory cells intensely stained in the stroma in one LMA, the percentage of the stained inflammatory cells in the whole area and the epithelial staining status was determined for each sample. The comparison between the groups was made according to these parameters. There was no significant difference between the three groups in terms of epithelial staining status. There were statistically significant differences between the number of intraepithelial inflammatory cells and the number of stromal inflammatory cells of the nasal polyp and the turbinate samples. (p<0,05) There was no statistically significant difference between the immunhistochemical parameters and mRNA expression status in polyp tissues. Based on this data, it was interpreted that there was no correlation between the mRNA and protein expression levels of ORMDL3 gene nasal polyp tissues.
As far as we know, this is the first study to assess ORMDL3  gene in subjects with NP. Although the relation between ORMDL3 gene variants and NP was not demonstrated, it was observed that mRNA and protein expression levels of ORMDL3 gene were increased in NP. Our results suggest that ORMDL3 gene expression may has a role in the pathogenesis of NP as in asthma. But the study should be repeated and further investigations should be made in larger patient populations in order to explore the relation between ORMDL3 gene and nasal polyposis.