Hemokültürlerden izole edilen candida albicans'ların in vitro biyofilm oluşturmasının MTT, XTT ve kristal viyole yöntemiyle araştırılması
In vitro biofilm of candida albicans isolated from hemoculturesinvestigation of its formation by MTT, XTT and crystal violet method
Yazar: NURDAN YUMUK
Danışman: PROF. DR. SEVGİ ERGİN
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Kandidiyazis, insanlarda en yaygın fırsatçı mantar enfeksiyonlarından biridir ve immün
sistemi baskılanmış hastalarda önem arz etmektedir. Candida albicans, kandidiyazisde
sıklıkla izole edilen mantardır, enfeksiyonların çoğundan bu tür sorumludur. Biyofilm
oluşumu, bakterilerde olduğu gibi mantarlarda da önemli bir oluşumdur, çünkü antifungal
tedaviye direnç oluşturmaktadır. Biyofilm birçok Candida türünde önemli virülans faktörü
olarak karşımıza çıkmaktadır. Candida biyofilmleri, dokuda olduğu gibi vücutttaki kalıcı tıbbi
cihazların biyomalzemelerinde de oluşabilmektedir. Bunun yanı sıra mukozal yüzeyler veya
cilt ile temas eden diğer biyomedikal cihazlar veya aparatlar biyofilm oluşumuna neden
olabilmektedir. Bu nedenle çalışmamızda kateter ve lenslerin biyomalzemeleri üzerinde
meydana gelebilecek Candida albicans türünün oluşturduğu biyofilm varlığının araştırılması
amaçlanmıştır. Bu amaçla, 2020-2021 yılları arasındaki hastaların kan kültürlerinden elde
edilmiş, VITEK ® MS ile tür düzeyinde tanımlanmış, boncuklu stok besiyerlerinde
stoklanmış Candida albicans izolatlarından 10 adedi incelenmiştir. Bu stok suşların öncelikle
SDA'da altkültürü yapılmıştır. Ticari olarak temin edilen silikon kateter biyomalzemesi ve
silikon hidrojel lens biyomalzemelerinde bu Candida albicans'ların oluşturduğu biyofilmler 2,3- bis-(2- metoksi-4-nitro-5-sülfofenil)-2H-tetrazolyum-5-karboksianilid (XTT) testi,
3-4,5-dimetil-tiyazolil-2,5- difeniltetrazolyum bromür (MTT) testi ve kristal viyole yöntemi
kullanılarak kolorimetrik olarak ölçüldü.
Çalışmamızda kristal viyole yöntemi ile kataterlerde 10 suştan 7'si yoğun düzeyde biyofilm
yaparken, 1'inin orta düzeyde biyofilm ve 2'sinin zayıf düzeyde biyofilm yaptığı
belirlenmiştir. Lenslerde ise kristal viyole yöntemi ile tüm suşların biyofilm oluşturduğu
gösterilmiştir. MTT testi ile kataterlerde biyofilm oluşumu belirlenemezken lenslerde ise 2
yoğun düzeyde biyofilm oluşumu, 1 orta düzeyde biyofilm oluşumu, 3 zayıf düzeyde
biyofilm oluşumu varken 4 suşun ise biyofilm oluşturmadığı belirlenmiştir. XTT yöntemine
gelindiğindeyse yine kataterlerde biyofilm oluşumu belirlenemezken lenslerde 3 orta düzeyde
biyofilm oluşumu ve 7 zayıf düzeyde biyofilm oluşumu belirlenmiştir. Kristal viyole yöntemi,
MTT ve XTT yöntemine göre biyofilm tespit edilmesinde daha duyarlı bir şekilde sonuç
eldesi sağlamıştır.
Çalışma sonucunda kateterlerin gelişmiş teknoloji ile üretilmesinden kaynaklı olarak biyofilm
oluşumunun gerçekleşmediği gözlenmiş ve lenslerde ise biyofilm oluşumunun gerçekleştiği
belirlenmiştir.

Abstract:
Candidiasis is one of the most common opportunistic fungal infections in humans and is of
importance in immunocompromised patients. Candida albicans is the fungus frequently
isolated in candidiasis, and this species is responsible for most infections. Biofilm formation
is an important formation in fungi as well as in bacteria because it creates resistance to
antifungal treatment. Biofilm appears as an important virulence factor in many Candida
species. Candida biofilms can form in tissue as well as in biomaterials of permanent medical
devices in the body. In addition, other biomedical devices or apparatus that come into contact
with mucosal surfaces or skin may cause biofilm formation. For this reason, our study aimed
to investigate the presence of biofilm formed by Candida albicans species on the biomaterials
of catheters and lenses. For this purpose, 10 Candida albicans isolates obtained from blood
cultures of patients between 2020-2021, identified to species level with VITEK ® MS, and
stocked in beaded stock media were examined. These stock strains were first subcultured in
SDA. Biofilms formed by these Candida albicans on commercially available silicone catheter
biomaterial and silicone hydrogel lens biomaterials
2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxyanilide (XTT) test was measured colorimetrically using the 3-4,5-dimethyl-thiazolyl-2,5-diphenyltetrazolium
bromide (MTT) test and the crystal violet method.
In our study, it was determined that 7 out of 10 strains formed dense biofilms on catheters
using the crystal violet method, while 1 made moderate biofilms and 2 produced weak
biofilms. It has been shown that all strains form biofilms on lenses using the crystal violet
method. While biofilm formation could not be determined in catheters with the MTT test, it
was determined that 2 strains had intense biofilm formation, 1 had moderate biofilm
formation, 3 had weak biofilm formation, and 4 strains did not form biofilm on lenses. When
it comes to the XTT method, while no biofilm formation was detected in the catheters, 3
moderate biofilm formations and 7 weak biofilm formations were detected in the lenses. The
crystal violet method provided more sensitive results in detecting biofilm compared to the
MTT and XTT methods.
As a result of the study, it was observed that biofilm formation did not occur due to the
catheters being produced with advanced technology. It was determined that biofilm formation
occurred on the lenses.