Akut apikal abselerden alınan örneklerde bulunan anaerobik bakterilerin tür tayini ve kantifikasyon
Identification and quantification of anaerobic bacteriel species taken from acute apical abscesses
Yazar: NİGAR TAŞDEMİROĞLU
Danışman: PROF. DR. LEYLA AÇIK
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Periapikal enfeksiyonlarının çoğu, pulpa ve kök kanalı içindeki mikroorganizmaların apikal foramenden periapikal dokulara doğru yayılmasıyla oluşan iltihabi hücrelerdir. Periapikal doku enfeksiyonu ender olarak ise pulpada nekroz oluşturan kimyasal maddelere ve fiziksel nedenlere bağlı olabilir. Yapılan çalışmalarda periapikal doku ve pulpa enfeksiyonuna çoğunlukla anaerobik bakterilerin sebep olduğu gözlenmiştir. Öncelikle bakteriler dentin duvarlarına tutunarak, ağrılı alevlenmelerle şiddetli bağışıklık sistemi cevabı oluşturarak pulpa iltihabına sebep olur. Pulpa iltihabı ilerleyerek apikal dokulara ulaşır. Periapikal dokularda önce akut sonra kronik apikal doku enflamasyonu başlar. Akut apikal inflamasyon; kökün apeksi etrafındaki dokularda yaygın likefaksiyon şeklinde olabilen lezyonlardır. Periapikal iltihabi lezyonların oluşumdaki asıl sebep olan kök kanalında bulunan mikroorganizmaların teşhisi uygulanması gereken tedavi için önemlidir. Bunun için enfekte kök kanalından alınan örneklerin kültüre edilmesi gerekmektedir. Ancak endodontik patojenlerin çoğu özel anaerobik şartlarda ve geç üreyen bakteriler olması nedeniyle kültür yöntemini zorlaştırmaktadır. Bu çalışmada kök kanal enfeksiyonlarında en sık görülen bakterilerin tanımlanmasında hızlı, özgül ve güvenilir bir yöntem olarak kabul edilen ve karışık flora içinde bile hızlı tür tayinine imkan sağlayan polimeraz zincir yöntemi (PZR) uygulanmıştır. Materyal olarak pulpal ve periapikal enfeksiyon hastalıkları olan dişlerin kök kanallarından aseptik şartlarda kültür örnekleri Gazi Üniversitesi Diş Hekimliği Fakültesi'nden alınmıştır. Alınan örneklerin bakteri DNA izolasyonları yapılmış; örneklerde Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia, Peptostreptococcus micros, Prevotella nigrescens, Prevotella intermedia, Actinomyces israelii, Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, Streptococcus anginosus türlerinin 16S rRNA bölgelerine ait primerler tasarlanarak PZR ile çoğaltılmıştır. Sonuç olarak Porphyromonas endodontalis %40, Prevotella intermedia %30, Peptostreptococcus micros %40, Prevotella nigrescens %25, Actinomyces israelii %30, Treponema denticola%37,5, Porphyromonas gingivalis %27,5, Streptococcus anginosus %17,5 oranlarında görülmüştür.Anahtar Kelimeler : Moleküler Biyolojisi , Endodontal Mikroorganizmalar, 16S rRNA, PZR

Abstract:
Microorganisms, located in pulp and root canal, cause acute apical inflammation by progress from apical foramen to pericementum. But the periapical tissue inflammation rarely become due to the nonbacterial irritants. The experimental study demonstrate that pulp infection and pericementum tissue become mostly by anaerobic bacteria are defused to periapical tissue. Firstly, bacteria attack to dentin than enter to pulp with dolorous, long term fever and severe immune system responsive. Unless root canal treatment, inflammation advance from acute phase to chronic in pericementum. Acute apical inflammation which is localised or defused liquefaction lesion around root apex. Anaerobic bacteria has been accepted as the most important etiologic factors at these kind of infections. For this reason bacteria must be identified which exist in the interdentinal or root canal system for achivement of treatment. Thus, classical, conventional microbiological methods such as culture are needed. But this will take time because of the fastitious and/or slowly growing bacteria and also some of them are uncultivable bacteria. Besides for identification of the species within a mix population/flora will be needed more media, chemical agents and identification kits. So this will take long time and cost will be higher. On the other hand, it was impossible to type every isolated strains by in vitro cultures. Polimerase chain reaction (PCR) is accepted as a rapid, specific, sensitive and every isolated strains by in vitro cultures. Polimerase chain reaction (PCR) is accepted as a rapid, specific, sensitive and reliable technique which enables identification of the species even among a mixed flora specifically. This impossible to type every isolated strains by in vitro cultures. Polimerase chain reaction (PCR) is accepted as a rapid, specific, sensitive and reliable technique which enables identification of the species even among a mixed flora specifically. This technique will be used in this study. Interdentinal samples taken from the patients aseptically from the root canal of the patients who has pulpal and periapical infections in Ankara University Faculty of Dentistry, Department of Endodontics. Then the bacterial DNA were isolated from the samples and amplification of the DNA samples with oligonucleotid primers targeted to the type specific region of 16S rRNA of Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia, Peptostreptococcus micros, Prevotella nigrescens, Prevotella intermedia, Actinomyces israelii, Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, Streptococcus anginosus's in the study. Then electrophoresis of the PCR samples in agarose gel and imaging of them were done. The result of study Porphyromonas endodontalis %40, Prevotella intermedia %30, Peptostreptococcus micros %40, Prevotella nigrescens %25, Prevotella intermedia %30, Actinomyces israelii %30, Treponema denticola %37,5, Porphyromonas gingivalis %27,5, Streptococcus anginosus %17,5 proportional odds was identified.Key Words : Molecular Cell Biology, Endodontic Microorganisms, 16S rRNA, PCR