Kronik miyeloid lösemili hastalarda birinci ve ikinci nesil tirozin kinaz inhibitör tedavisine yanıtta miRNA'ların incelenmesi
Identification of miRNAs in response to first- and second-line tyrosine kinase inhibitor therapy in patients with chronic myeloid leukemia
Yazar: AYSUN DADASHLI
Danışman: DOÇ. DR. ONUR BAYKARA
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics
Dizin: Dasatinib = Dasatinib ; İmatinib mesilat = Imatinib mesilat

Özet:
Kan, oksijen ve besin maddelerini canlı hücrelere taşıyan, atık ürünleri uzaklaştıran, eritrositler, lökositler, trombositler ve taze plazmadan oluşan, vücudun en büyük dokusudur. Kanın bileşenleri kemik iliğinde üretilmektedir. Kemik iliğinde lenfoid ve miyeloid olarak adlandırılan öncül hücrelerin aşırı ve kontrolsüz çoğalarak birikmesi sonucunda kan kanseri olarak da bilinen lösemi oluşmaktadır. Lösemi, akut (hızlı gelişen) ve kronik (yavaş gelişen) olmak üzere 4 grupta sınıflandırılır; 1. Akut Miyeloid Lösemi (AML) 2. Akut Lenfositik Lösemi (ALL) 3. Kronik Miyeloid Lösemi (KML) 4. Kronik Lenfositik Lösemi (KLL). 
	Kronik Miyeloid Lösemi kemik iliğinde miyeloid hücrelerin aşırı ve kontrolsüz bir şekilde çoğalarak kanda birikmesi sonucu ortaya çıkar. Hastalarda 9. kromozomda ABL geninin 22. kromozomdaki BCR genine translokasyonu sonucu BCR-ABL füzyon geni ve Philadelphia (Ph) kromozomu oluşmaktadır. Yapılan çalışmalarda epigenetik mekanizmaların, özellikle miRNA'ların KML gelişiminde rol oynadığı gösterilmiştir. Çalışmamızda miR-373-5p nin KML etyopatogenezindeki rolünü ve tedavide 1. nesil tirozin kinaz inhibitöründen 2. nesil tirozin kinaz inhibitörüne geçişte etkisini araştırmayı hedefledik. 
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa, Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Hastanesinde Hematoloji Polikliniği'ne başvuran ve KML tanısı konan 40 hastanın kan örnekleri ve kontrol grubu olarak yaş ve cinsiyet uyumlu 10 sağlıklı bireyin kan örnekleri kullanıldı. Periferik kandan plazma izolasyonunu takiben miRNA izolasyonu yapıldı, elde edilen örnekler cDNA'ya dönüştürüldükten sonra miRNA-373-5p'nin ifadesi gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (GZ-PZR) yöntemi ile analiz edildi. Elde edilen tüm veriler IBM SPSS Statistics 21 programı kullanılarak incelendi. 
mir-373-5p'nin ifade analiz sonuçlarına göre 40 örneğin 31'inde (%77,5) ifadede artış, 9'unda (%22,5) ise ifadede azalma  görüldü. MiR-373-5p ifadesinin kontrol grubuna oranla belirgin derecede arttığı bulundu (p=0,007). Hastaların gen ifade sonuçları Mann-Whitney U ve Non-parametrik Spearman korelasyon testleri kullanılarak klinik parametrelerle karşılaştırıldı. Sonuç olarak, sırasıyla her iki testte de hastaların miR-373-5p ifade sonuçları ile trombosit değerleri arasında  belirgin ilişki saptandı (p=0,009; p=0,006). Aynı zamanda gen ifadesinin yaş ve hemoglobin değerleri ile belirgin şekilde ilişkili olduğu da görüldü (p=0,045). Ancak klinik parametrelerle karşılaştırma sonucunda anlamlı ilişki bulunamadı.
	Sonuç olarak miR-373-5p'nin KML de etkin rol oynadığını ancak 1. nesil tirozin kinaz inhibitöründen 2. nesil tirozin kinaz inhibitörüne geçişte herhangi bir rolünün olmadığını gösterdik.

Abstract:
Blood is the body's largest tissue, which carries oxygen and nutrients to living cells, removes waste products, and consists of erythrocytes, leukocytes, platelets and fresh plasma. The components of the blood are produced in the bone marrow. Leukemia, which is also known as blood cancer, occurs as a result of excessive and uncontrolled proliferation of precursor cells called lymphoid and myeloid in the bone marrow. Leukemia is classified into four groups as acute (fast developing) and chronic (slow developing); 1. Acute Myeloid Leukemia (AML) 2. Acute Lymphocytic Leukemia (ALL) 3. Chronic Myeloid Leukemia (CML) 4. Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL).
Chronic Myeloid Leukemia occurs as a result of excessive and uncontrolled proliferation of myeloid cells in the bone marrow and accumulation in the blood. BCR-ABL fusion gene and Philadelphia (Ph) chromosome are formed as a result of translocation of ABL gene on chromosome 9 to BCR gene on chromosome 22. Studies have shown that epigenetic mechanisms, especially miRNAs, play a role in the development of CML. In our study, we aimed to investigate the role of miR-373-5p in the etiopathogenesis of CML and its effect on the transition from a 1st generation tyrosine kinase inhibitor to a 2nd generation tyrosine kinase inhibitor in treatment.
Blood samples from 40 patients who applied to the Hematology Clinic at Istanbul University-Cerrahpaşa, Cerrahpaşa Medical Faculty Hospital and were diagnosed with CML, and blood samples from ten age- and gender-matched healthy individuals as controls were used in this study. Following the extraction of plasma from peripheral blood, miRNA isolation was extracted, the expression of miRNA-373-5p was analyzed by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method after the samples were converted to cDNA. All obtained data were analyzed using IBM SPSS Statistics 21 program.
The results of mir-373-5p expression analysis showed an increase in 31 (77.5%) and a decrease in 9 (22.5%) of 40 samples. MiR-373-5p expression was found to be significantly increased compared to the control group (p=0.007). Gene expression results of the patients were compared with clinical parameters using Mann-Whitney U and Non-parametric Spearman correlation tests. Both tests revelaed a significant correlation between miR-373-5p expression and platelet levels, respectively (p=0.009; p=0.006). In addition, gene expression was significantly correlated with age and hemoglobin levels (p=0.045). However, there was no significant correlation between the expression levels and other clinical parameters.
To conclude, we showed that miR-373-5p plays an active role in CML, but does not have any role in the transition from a 1st generation tyrosine kinase inhibitor to a 2nd generation tyrosine kinase inhibitor.