Deneysel hipoksik iskemik ensepalopati modelinde tiroid hormonu ve eritropoetin tedavisinin apopitoz üzerine etkisi
The effect of thyroid hormone and erythropoietin treatment on apoptosis in experimental hypoxic ischemic encepalopathy model
Yazar: ERDEM GÖNÜLLÜ
Danışman: PROF. DR. AYŞE SEVİM GÖKALP
Kocaeli Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2005
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Eritropoietin = Erythropoietin ; Hipoksi = Hypoxia ; Hipoksi ile indüklenebilen faktör 1 alfa =

Özet:
Giriş:
Hipoksik iskemik ensefalopatinin deneysel modellerinden türetilen hücre hasar mekanizmalarının daha iyi anlaşılması ile tedavi modaliteleri klinik kullanıma uygulanacaktır. Hipoksik iskemik sıçan beyinlerinde tiroksin, eritropoietin ve hem tiroksin hem de eritropoietin tedavisinin nöroprotektif ve antiapoptotik etkilerini inceledik.

Araç ve yöntemler
Doğum sonrası yedi günlük sıçanlar dört gruba alındı (kontrol: 6, epo: 6, t4: 6, epo + t4: 6). Tek taraflı sol karotis arter ligasyonu yapıldıktan hemen sonra% 92 nitrojen ve% 8 Oksijen karışımı ile bir saat hipoksi yapıldı. Bir saatlik hipoksiden sonra EPO grubuna intraperitoneal (i.p.) olarak rHuEpo bir bolus doz (1000 U / kg), t4 grubuna i.p. t4 + EPO grubuna intraperitoneal olarak (i.p.) günlük rHuEpo bir bolus dozu (1000 U / kg) ve L-tiroksin (3,6 mcg / 100g / gün) verildi. Doğum sonrası 14. günde, sıçan beyinleri çıkarıldı ve parafin bloklarına gömüldü. Hematoksilen - Eosin boyası, CFV boyası ve kaspaz-3 ab işaretleyici immünokimya boyası tüm beyin slaytlarında gerçekleştirildi. Nissl miktarları, Nissl lekeli beyin slaytlarından ve kaspaz-3 antikoru immünohistokimyası ile boyanmış slaytlardan yapılan apoptotik hücre sayımlarından gösterilmiştir. Parietal korteks ve hipokampus CA1, CA2, CA3 alanları incelendi. Nekrotik hücreler, Nissl skorları ve apoptotik hücreler, 40X objektifle her bir sıçan için sağ ve sol hemisferlerde 6 çapraz kesitte incelendi. Dört grup Kruskal-Wallis ve Mann Whitney-U testleri ile karşılaştırıldı.
Sonuçlar:
EPO grubunda kontrol grubuna göre beynin tüm bölgelerinde Nissl skorları artmış ve apoptotik hücre sayıları azalmıştır.
T4 tedavisi, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında beynin tüm alanlarında Nissl skorlarını artırdı. T4 tedavisi, kontrol grubuna kıyasla sağ parietal korteks alanı dışında beynin tüm alanlarında apoptotik hücreleri azalttı.
EPO + T4 tedavisi, kontrol grubuna kıyasla beynin tüm alanlarında Nissl puanlarını artırdı, nekrotik hücre ortalama puanlarını ve apoptotik hücre sayılarını azalttı.

Sonuç:
Hem EPO, T4 hem de EPO + T4 tedavisi, hipoksik-iskemik sıçan beyinlerinde apoptotik hücre sayısını azalttı ve  nöral Nissl skorunu artırdı.

Abstract:
ABSTRACT:
Introduction:
	Treatment modalities will be applied to the clinic use with better understanding of cell injury mechanisms derived from experimental models of hypoxic ischemic encephalopathy. We examined the neuroprotective and antiapoptotic effects of thyroxine, erythropoietin and both thyroxine and erythropoietin treatment in hypoxic-ischemic rat brains.

Material and methods
	Postnatal seven-day-old rats are taken to four groups (control:6, epo:6, t4: 6, epo+t4:6).  One hour of hypoxia with 92% nitrogen and 8%Oxygen mixture immediately following unilat-eral left carotid artery ligation was done.  After one hour of hypoxia, rHuEpo one bolus dose (1000 U/kg) was given to EPO group intraperitoneally (i.p.), L-thyroxine (3, 6 mcg/100g/day, daily) given to t4 group i.p. and rHuEpo one bolus dose (1000 U/kg) and L-thyroxine (3,6 mcg/100g/day) daily was given to t4+EPO group intraperitoneally (i.p.). At postnatal day 14, rat brains were taken out and embedded to paraffin blocks. Hematoxylin – Eosin stain, CFV stain and caspase-3 ab marker immunochemistry stain was performed all brain slides. Nissl quantities of neurons are demonstrated from Nissl stained brain slides and apoptotic cell counts made from caspase-3 antibody immunohistochemistry stained slides. Parietal cortex and hippocampus CA1, CA2, CA3 areas were examined. Necrotic cells, Nissl scores and apoptotic cells were examined at 6 crosscuts in right and left hemispheres for each rat with 40X objective. Four groups were compared with Kruskal-Wallis and Mann Whitney-U tests.
Results:
	In EPO group, Nissl scores were increased and apoptotic cell counts were reduced in all areas of the brain, compared with the control group.
	T4 treatment augmented Nissl scores in all areas of the brain, compared with the control group. T4 treatment reduced apoptotic cells in all areas of the brain except right parietal cortex area, compared with the control group.  
	EPO+T4 treatment augmented Nissl scores, reduced necrotic cell average scores and apoptotic cell counts in all areas of the brain, compared with the control group.

Conclusion:
	Both EPO, T4 and EPO+T4 treatment were reduced apoptotic cell count, and augmented neural Nissl score of hypoxic-ischemic rat brains.