Damar endotel hücrelerinin büyümesi, çoğalması ve canlılığını koruyabilmesi için gerekli faktörlerin belirlenmesi ve bu faktörlerin fonksiyonlarının damar oluşumu üzerinden incelenmesi
Determining of the factors necessary for the growth, proliferation and survival of vascular endothelial cells and the functions of these factors
Yazar: EBRU ÖNER USTA
Danışman: DOÇ. DR. FURKAN AYAZ
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı / Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Anjiyogenez, mevcut damarlardan kılcal ve damarsal ağların tomurcuklanması yolu ile yeni 
damarlar oluşturması sürecidir. Oluşan damarsal ağların gelişimi, damarsal yapı etrafındaki hücrelerin 
sağlıklı olarak büyümesi için gerekli olan temel faktörlerin varlığı ile belirlenmektedir. Anjiogenez 
farklı faktörlerin sürece dahil olması ve bu faktörlerin uygun konsantrasyonlarının sağlanabilmesi 
gerekliliği nedeni ile oldukça karmaşık bir mekanizmadır. Anjiogenezin temel bileşenleri farklı 
özellikleri tetikleyen büyüme faktörleri, sitokinler ve sitokin reseptörleri olarak tanımlanmaktadır. 
Endotel hücreler ile birlikte kılcal damar duvarını oluşturan perisitler büyük öneme sahiptir. 
Anjiyogenez sürecinde kullanılan faktörleri içeren karışım doğru oranda olmalıdır ve bunu da üretebilen 
en iyi aday makrofaj hücreleridir. 
Yapılan çalışmada -80 ℃'de muhafaza edilen memeli makrofaj hücrelerinin (J774.2) sıcak su 
banyosu yardımı ile çözünmesi sağlanmıştır. Memeli makrofaj hücrelerine (J774-2) Roswell Park 
Memorial Institute Media (RPMI)+ %10 FBS %1+ %1 antibiotik [100 μg/MI pecillin and 100 μg/Ml 
streptomycin] içeren besi ortamı farklı oranlarda ilave edilerek 100 cm2'lik hücre kültürü plağında %90 
konfluense ulaşana kadar (kültür kabının %90''ık alanını kaplayıncaya kadar) bekletilmiştir. Memeli 
makrofaj hücrelerinin in vitro ortamda salgıladıkları faktörleri ve miktarlarını belirleyebilmek amacı ile 
proteomik analiz yapılarak protein türleri ve miktarları incelenmiştir. Proteomik analiz sonucuna göre 
makrofaj hücrelerine ait taksonomi (J774-2) mus muskulus olarak doğrulanmıştır. Ayrıca HUVEC 
hücrelerine yapılan MTT analizi sırasında 24 saat, 48 saat ve 72 saat aralıklar ile besi yeri ilavesi (20 μl, 
40 μl, 60 μl ,80 μl ve 100 μl ) yapılmıştır. Çalışmada deterjan reaktifi olarak (SDS) kullanılarak 570 nm' 
de absorbansta % hücre büyüme oranları değerlendirilmiştir. Damar oluşumunu arttıran faktörlerin 
etkilerinin takibi çalışma kapsamında florasan mikroskobu ile görüntüleri alınarak gerçekleştirilmiştir. 
HUVEC hücrelerinin damar oluşumuna etkisi liyofilize ve normal koşullar olarak iki aşamada 
yürütülerek raf ömrünün 6 aydan 18 aya kadar uzatılmasına katkısı araştırılmaktadır.

Abstract:
Angiogenesis is the process of forming new vessels through budding of capillary and vascular 
networks from existing vessels. The development of the formed vascular networks is determined by the 
presence of the basic factors necessary for the healthy growth of the cells around the vascular structure. 
Angiogenesis is a very complex mechanism due to the involvement of different factors in the process 
and the need to provide appropriate concentrations of these factors. The basic components of 
angiogenesis are defined as growth factors, cytokines and cytokine receptors that trigger different 
properties. Pericytes, which form the capillary wall together with endothelial cells, are of great 
importance. The mixture containing the factors used in the angiogenesis process should be in the right 
ratio and the best candidate that can produce this is macrophage cells. 
In the study, mammalian macrophage cells (J774.2) stored at -80 ̊C were dissolved with the help 
of a hot water bath. A medium containing Roswell Park Memorial Institute Media (RPMI)+ 10% FBS 
1%+ 1% antibiotic [100 μg/MI pecillin and 100 μg/Ml streptomycin] was added to mammalian 
macrophage cells (J774-2) at different rates, and 100 cm2 It was kept in the cell culture plate until it 
reached 90% confluency (covering 90% of the culture dish). Protein types and amounts were 
investigated by proteomic analysis in order to determine the factors secreted by mammalian macrophage 
cells and their amounts in vitro. According to the results of proteomic analysis, the taxonomy of 
macrophage cells was confirmed as (J774-2) mus musculus. In addition, medium addition (20 μl, 40 μl, 
60 μl, 80 μl and 100 μl) was made at 24-hour, 48-hour and 72-hour intervals during MTT analysis on 
HUVEC cells. In the study, % cell growth rates were evaluated at absorbance at 570 nm using detergent 
reagent (SDS). Follow-up of the effects of factors that increase the formation of vessels was carried out 
by taking images with a fluorescent microscope within the scope of the study. The effect of HUVEC 
cells on vessel formation is carried out in two stages as lyophilized and normal conditions, and its 
contribution to extending the shelf life from 6 months to 18 months is investigated.