Baş boyun kanserinde ıcrt-3' ün wnt sinyal yolağındaki etkisi
The effect of icrt-3 on wnt signaling pathway in head and neck cancer
Yazar: FATMA SÖĞÜTLÜ
Danışman: PROF. DR. CUMHUR GÜNDÜZ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Baş boyun kanseri dünya genelinde en yaygın altıncı kanserdir. Hastalığın patogenezi birçok etmene bağlı olarak değişmekle beraber sigara, alkol ve insan papilloma virüsü (HPV) temel nedenleri oluşturmaktadır.
Anormal Wnt sinyal yolağı, birçok kanserin başlaması, sürdürülmesi ve gelişiminde kilit nokta olarak rol oynarken, baş boyun kanserinin Wnt sinyal yolağının yeterince karakterize edilmemiş olmasından dolayı etkisi tam olarak anlaşılamamıştır. 
ICRT-3' ün Wnt sinyal yolağının ko-aktivatörü olan beta katenine bağlanarak sinyalizasyonu engelleyen oksazol bileşiği olarak görev yapması, Wnt' nin anormal sinyalizasyonunun engellenmesi için umut verici bir etken madde olabileceğini göstermiştir. 
Çalışmamızda ICRT-3' ün belirlenen konsantrasyonlarının, baş boyun kanserinin bir türü olan farenks kanserinde sitotoksisite, apoptoz, hücre döngüsü progresyonu, migrasyon ve gen ekspresyonu üzerine etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Fadu hücre hattında ICRT-3' ün 72. saatte 50 μM, 60 μM, 70 μM konsantrasyonlarının, Detroit 562 hücre hattında ise 65 μM, 75 μM, 85 μM konsantrasyonlarının canlılık üzerine etkisi WST-1 testi ile değerlendirilmiştir. Hücre hattı üzerinde doz gruplarının apoptotik etkisi Anneksin V ve JC-1 yöntemiyle, hücre döngüsü üzerine etkisi Cycle Test Plus DNA Reagent Kit ile gen ekspresyonu üzerine etkisi İkili Lusiferaz Raportör Deneyi ile migrasyonu üzerine etkisi Yara İyileşmesi testi ile değerlendirilmiştir.
Çalışmanın sonucunda iki hücre hattı için de verilen doz gruplarının hücre hatları üzerinde sitotoksisiteye sahip olduğu belirlenmiştir. Doz uygulamasından sonra doz artışıyla apoptozun orantılı bir şekilde arttığı fakat meydana gelen apoptozun mitokondri membran potansiyeli aracılı olmadığı gözlemlenmiş. Ayrıca doz uygulamasının hücre döngüsü arrestine neden olduğu ve hücrenin migrasyonu yeteneğinde ve gen ekspresyonunda da kayda değer bir azalma olduğu saptanmıştır.
Baş boyun kanseri türlerinden biri olan farenks kanserinde, Wnt sinyal yolağında ICRT-3' ün etkisi ilk kez gösterilmiştir. İleriki çalışmalarda baş boyun kanserinde Wnt sinyal yolağını hedeflemenin terapötik tedavi yöntemlerine yeni bir yaklaşım getireceğini öngörmekteyiz.

Abstract:
Head and neck cancer is the sixth most common cancer worldwide. Although the pathogenesis of disease varies depending on many factors, the main reasons of head and neck cancer consist of alcohol, smoking, human papilloma virus.
The effect of Wnt signaling pathway could be poorly understood in head and neck cancer because Wnt pathway of head and neck cancer could not be elucidating, while the aberrant Wnt signaling plays key role in initiation, sustaining and development of many cancers.
ICRT-3 functions as an oxazole compound that blocks signaling by binding to the co-activator beta-catenin of the Wnt signaling pathway, has shown that it can be promising agent for inhibiting aberrant signaling
In our study, it has been aimed to evaluate the effect of ICRT-3 on the cytotoxicity, apoptosis, cell cycle progression, migration and gene expressions in pharynx cancer, a type of head and neck cancer
The cytotoxic effect of concentrations of 50 μM, 60 μM, 70 μM of ICRT-3 in Fadu cell line, and 65 μM, 75 μM, 85 μM in Detroit 562 cell line on viability was assessed by using WST-1 method. The apoptotic effect of active compound on cell lines was detected by using Anneksin V and JC-1 method; on cell cycle progression by Cycle Test Plus DNA Reagent Kit; on gene expression by Dual Luciferase Reporter Assay and on migration by Wound Healing Assay.
It was determined that dose concentrations had cytotoxicity effect on both of cell lines. After treatment with ICRT-3, it was observed that apoptosis increased in direct proportion to rising of dose concentration, but occurring apoptosis was discovered to not be mitochondrial membrane potential-mediated. In addition, it was also found that administration of ICRT-3 caused cell cycle arrest and decreased significantly gene expression level and migration of cell
It has been shown for the first time that the using of ICRT-3 on Wnt signaling pathway is effective in pharyngeal cancer, one of the head and neck cancers. We anticipate that targeting Wnt signaling pathway in pharyngeal cancer which is one of the head and neck cancers will bring new approach to therapeutic treatment methods