MMTV-TGF-α pozitif farelerde farklı kalori kısıtlaması uygulamalarının hayvanların farklı yaşlardaki inflamasyon parametreleri üzerine etkisi
Effects of different types of calorie restriction application on inflammatory parameters in MMTV-TGF-α mice at different ages
Yazar: İLKER ÇOBAN
Danışman: DOÇ. SONER DOĞAN
Yeditepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoistatistik = Biostatistics ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Fizyoloji = Physiology
Dizin: Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kalori kısıtlaması = Caloric restriction ; Kalorimetri = Calorimetry ; Sitokinler = Cytokines ; Transforme edici büyüme faktörü-alfa = Transforming growth factor-alpha ; İnflamasyon = Inflammation ; İnterlökinler = Interleukins

Özet:
Bu çalışma; farklı kalori kısıtlaması yöntemlerinin, sitokin seviyeleri üzerindeki etkilerini anlama ve yaşa bağlı değişimini değerlendirme amacıyla, 115 adet fare kullanılarak yapılmıştır. Fareler, MMTV-TGF-α türü transgenik dişi ve post-menapopzal dönemde spontane olarak meme tümörü geliştiren farelerdir. Çalışmamızda hayvanlara kronik kalori kısıtlaması (KKK) ve aralıklı kalori kısıtlaması (AKK) uygulanarak, hayvanların 10, 17 ve 50 haftalık yaşlardaki serum sitokin seviyeleri değerlendirilmiştir. Kalori kısıtlaması, kontrol gurubu olan ve ad-libitum (AL) gurubu olarak adlandırılan gurubun haftalık tükettiği yem miktarı referans alınarak uygulanmıştır. KKK gurubuna, AL gurubuna göre %15 oranında; AKK gurubuna ise AL gurubuna göre %60 oranında kalori kısıtlaması uygulanmıştır. AKK gurubuna yönelik kalori kısıtlaması, 1 hafta kalori kısıtlaması ve 3 hafta AL besleme şeklinde olmak üzere tekrar eden periyotlar halinde ve çalışmanın sonuna kadar uygulanmıştır. Çalışma sürecinde hayvanlardan retro-orbital yöntemle kan alınmış ve serum örnekleri elde edilmiştir. Serum örneklerinden IL-1α, IL-6, IL-10, IL-13, TNF-α ve MCP-1 seviyeleri Multiplex Elisa yöntemiyle ölçülmüştür. İstatiksel analizler GraphPad Prism 7.0 Windows sürümü kullanılarak yapılmıştır. Çalışmanın sonucunda, yaşlanmanın ilk periyodu olan 10 haftalık yaşlardan 17 haftalık yaşlara geçişte KKK besleme modelinin IL-1α, IL-6, IL-13 gibi proinflamatuar sitokinlerin seviyelerinde azalmaya (p>0,05) ve antiinflamatuar etkili IL-10 seviyelerinde artmaya sebep olduğu (p>0,05) anlaşılmıştır. Yaşlanmanın ikinci periyodu olan 17 haftalık yaşlardan 50 haftalık yaşlara geçişte ise AKK beslenme modelinin benzer bir etkinliğe neden olduğu açığa çıkarılmıştır. (p>0,05). Sonuç olarak kalori kısıtlaması ile inflamatuar yanıtların değiştirildiği anlaşılmış olsa da elde edilen verilerin istatistiksel olarak anlam taşımamaları nedeniyle, ayrıca hangi kalori kısıtlama yönteminin inflamasyon olaylarını baskıladığının daha ayrıntılı tespiti amacıyla daha fazla çalışma yapılması gerektiği anlaşılmıştır.

Anahtar Kelimeler: Kalori Kısıtlaması, İnflamasyon, C57BL

Abstract:
This Article examines the effects of different calorie restriction methods on cytokine levels and the relation between different calorie restriction methods on aging, according to the research on 115 mice. The mice are the MMTV-TGF-α type, female and that spontaneously develop breast tumours during the post-menopausal period. The serum cytokine levels of mice that have been subject to chronic calorie restriction (CCR) and intermittent calorie restriction (ICR), in the ranges of 10, 17 and 50 weeks are assessed. The calorie restriction has been applied with reference to weekly feed consumption of the control group which is named as ad-libitum (AL) group.  The calorie restriction rates have been determined as 15 % for the CCR group and 60 % for ICR group, compared to the AL group. The calorie restriction on the CCR group has been periodically progressed, up to the end of the research, as one-week calorie restriction and three-weeks AL feeding. During the process, the mice have been taken blood by the retro-orbital method, and the serum samples have been produced. The levels of IL-1α, IL-6, IL-10, IL-13, TNF-α and MCP-1 have been tested, from the serum samples, by the Multiplex Elisa method. Statistical analyses have been carried out by the Windows version of GraphPad Prism 7.0. As a result of the research, it is established that the CCR feeding model causes the decrease (p>0,05) in the levels of pro-inflammatory cytokines such as IL-1α, IL-6, IL-13 whereas it increases (p>0,05) the level of the anti-inflammatory IL-10, during the range of 10-17 weeks as the first period of ageing. It is also revealed that the ICR feeding model results in similar consequences (p>0,05) during the range of 17-50 weeks as the second period of ageing. Consequently, although it is established that the calorie restriction can change inflammatory responses, more researches are needed due to the statistical non-significance of data obtained and for the purpose of better understanding of which calorie restriction type represses the inflammatory responses.

Keywords: Calorie Restriction, Inflammation, C57BL