Farklı kök kanal patlarının sitotoksisite ve antimikrobiyal etkinlik yönünden karşılaştırılması
Comparision of cytotoxicity and antimicrobial effects of different root canal sealers
Yazar: MEŞKULE ŞAHİN
Danışman: PROF. DR. BERNA ASLAN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Endodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Enterococcus = Enterococcus ; Kök kanal dolgu materyalleri = Root canal filling materials ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Sitotoksisite testleri-immünolojik = Cytotoxicity tests-immunologic ; Testler = Tests

Özet:
ÖZETBu çalışmanın amacı, kök kanal tedavilerinde kullanılan AH Plus, Tubli Seal EWT,EndoREZ, MTA Fillapex, Real Seal kök kanal dolgu patlarının L-929 hücrekültüründe MTT testi ile sitotoksik etkilerinin ve ayrıca Enterococcus faecalisüzerinde direkt temas testi ile antimikrobiyal etkilerinin incelenmesidir.Çalışmanın birinci bölümünde, 6 kuyucuklu plağın her bir kuyucuğuna farklıkök kanal dolgu patı 1 cm alanı kaplayacak şekilde yerleştirilmiştir. Örnekler üzerineDMEM ilave edilerek, 24, 48 ve 72 saat bekletilmiştir. Elde edilen ekstraksiyonsıvıları, L-929 hücre süspansiyonu içeren 96 kuyucuklu plakların her bir gözüne 100?l yerleştirilmiştir. 48 saatlik inkübasyondan sonra plaklardan ekstraksiyon sıvılarıuzaklaştırılmış ve her bir göze 25 ?l MTT solüsyonu ilave edilerek 4 saat süre ilebekletilmiştir. Bu sürenin sonunda spektrofotometrede 570 nm'de absorbanslarıölçülmüştür.Çalışmanın ikinci bölümünde, kök kanal dolgu patları karıştırılarak 96kuyucuklu plakların yan duvarına yerleştirilmiş ve 10 ?l bakteriyel süspansiyoneklenerek, bakteri ve patın direkt temasını sağlamak için 1 saat beklenmiştir. Patınbulunduğu kuyucuklara taze besiyeri eklenmiş ve bu kuyucuklardan 15 ?l besiyerialınarak sadece besiyeri bulunan kuyucuklara ilave edilmiştir. Bakteriyel büyüme, 18saatlik zaman periyodunda ilk 6 saat ve son 6 saat her saatte bir spektrofotometrekullanılarak 620 nm'de ölçülmüştür.Mosmann'ın sınıflamasına göre AH Plus her 3 zaman diliminde desitotoksisite göstermezken, Tubli Seal EWT, EndoREZ, MTA Fillapex ve Real Seal24. ve 48. saatlerde orta, 72. saatte ise hafif derecede sitotoksisite göstermişlerdir.MTT testi sonuçlarına göre ise, 24, 48 ve 72 saatlik değerlendirmede hücre canlılıkoranları bakımından AH Plus ve kontrol grubu arasında istatistiksel olarak anlamlıbir fark gözlenmezken (p>0,05), diğer kök kanal dolgu patları ve kontrol grubuarasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark olduğu tespit edilmiştir (p<0,05). Kontrolgrubuna ait hücre canlılık oranları Tubli Seal EWT, EndoREZ, MTA Fillapex veReal Seal kök kanal dolgu patlarının hücre canlılık oranlarından anlamlı derecededaha yüksektir.Direkt temas testi sonuçlarına göre, Grup A (pat var)'da ilk 6 saatlik süredeReal Seal hariç diğer tüm kök kanal dolgu patları antimikrobiyal etki gösterirken, son6 saatlik sürede EndoREZ, MTA Fillapex ve Real Seal antimikrobiyal etkilerinidevam ettirmişlerdir. Tubli Seal EWT 14. saatte antimikrobiyal etkisini kaybetmeyebaşlamış, Real Seal antimikrobiyal etkinlik göstermemiştir. Grup B (pat yok)'de ilk 6saatlik sürede bütün kök kanal dolgu patları antimikrobiyal etki gösterirken, son 6saat tüm patlar antimikrobiyal etkilerini kaybetmişlerdir.Anahtar Kelimeler: Antimikrobiyal etki, direkt temas testi, Enterococcus faecalis,kök kanal dolgu patları, MTT testi, sitotoksisite

Abstract:
SUMMARYThe aim of this study was evaluate the cytotoxicity of root canal sealers AH Plus,Tubli Seal EWT, EndoREZ, MTA Fillapex and Real Seal on L-929 cells with theMTT assay and the antimicrobial effects on Enterococcus faecalis using the directcontact test.In the first part of this study, sealers were placed in six-well plate. Everysealers placed at the bottom of each well to cover an area of 1 cm diameter. PlacedDMEM on samples for 24, 48 and 72 hours. 100 ?l of eluate was transferred to a 96-well plate containing L-929 cell suspension. After 48 hours incubation the extractswere removed from the wells, 25 ?l MTT solution was added to each well andwaited for 4 hours. Subsequently, the spectrophotometric absorbance was measuredat 570 nm using a spectrophotometer.In the second part of this study, sealers were mixed and placed on the sidewalls of 96-well plate well and 10 ?l bacterial suspensions were allowed to directlycontact with the sealers for 1 hour. Fresh media were added to wells which includingsealers and 15 ?l were transferred from this wells to another wells containing freshmedium. Bacterial growth was then measured using spectrophotometer at 620 nmfirst six and last six hours at one hour periods over 18 hours.According to Mosmann?s scala AH Plus was non-cytotoxic, Tubli Seal EWT,EndoREZ, MTA Fillapex and Real Seal had moderate cytotoxicity at 24 and 48 hourevaluation and slightly cytotoxicity at 72 hour evaluation. According to the MTTassay, in the rates of cell viability there was no statistically significant differencebetween AH Plus and control group at 24, 48 and 72-hour evaluation (p>0.05), butthere was statistically significant difference between the other sealers and controlgroup (p<0.05). The control group had significantly high rates of cell viability thanTubli Seal EWT, EndoREZ, MTA Fillapex and Real Seal.The results of the direct contact test showed that, in Grup A (paste present) atfirst six hours except Real Seal all sealers had antimicrobial effect, at last six hoursAH Plus, EndoREZ and MTA Fillapex continue their antimicrobial effect, Tubli SealEWT started to loose its antimicrobial effect at 14. hour and Real Seal had noantimicrobial effect. In Grup B (paste absense) at first six hours all sealers hadantimicrobial effect, but they lost their antimicrobial effect at last six hours.Key Words: Antimicrobial effect, cytotoxicity, direct contact test, Enterococcusfaecalis, MTT assay, root canal sealers