Tiyoasetamid ile indüklenmiş akut karaciğer hasarında hepatosellüler hücre ölümü üzerine melatoninin etkisinin araştırılması
Investigation the effect of melatonin against hepatocellular cell death thioacetamide-induced in acute liver damage
Yazar: MERYEM SAYAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DERYA KARABULUT
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hücre ölümü = Cell death ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Kaspazlar = Caspases ; Melatonin = Melatonin ; Proteinler = Proteins ; Tiyoasetamid = Thioacetamide

Özet:
Karaciğerde alkol, ilaçlar, virüsler, genetik bozukluklar ve toksisite yoluyla akut ya da kronik hasar oluşabilmektedir. Hasar sonucu karaciğerde doku bütünlüğü bozularak hücre ölüm mekanizmaları gerçekleşebilmektedir. Bu çalışmada Tioasetamid (TAA) ile karaciğerde hasar oluşturularak hepatosellüler hücre ölüm mekanizmaları üzerine melatonin(Mel)'in koruyucu ve tedavi edici etkisinin araştırılması planlanmıştır.
Çalışmada 35 adet Wistar albino türü yetişkin erkek sıçan kullanıldı. Grup I: Kontrol grubu (7 adet), Grup II: TAA (7 adet) 24 saat arayla 300 mg/kg 2 doz verildi, Grup III: Mel+TAA grubu (7 adet) TAA uygulamasından 24 saat önce 10 mg/kg i.p olarak tek doz Mel uygulandı, Grup IV: TAA+Mel grubu (7 adet) TAA 300 mg/kg ip olarak 24 saat arayla 2 doz uygulamasından sonra 10 mg/kg tek doz Mel uygulandı, Grup V: Mel grubu (7 adet) tek doz 10 mg/kg deneyin ilk günü uygulaması yapıldı. Deney sonunda karaciğer doku örnekleri H-E, PAS ve MT boyamaları yapıldı. Dokudaki apopitoz kaspaz-3 ile, nekroz reseptör-etkileşimli protein kinaz-3(RIP3) ile, otofaji mikrotübül-ilişkili protein hafif zincir-3 (LC3) proteinlerinin immunohistokimya boyaması ile belirlendi. Ayrıca kan serum örneklerinde AST, ALT ve ALP, karaciğer doku hasarını belirlemek amacıyla TGF-β ve TNF-α miktarlarıda Eliza yöntemiyle belirlendi. 
Deney sonunda kontrol ve Mel grubu karaciğer doku örneklerinde anormal bir durum izlenmezken, TAA'in bulunduğu diğer gruplarda klasik lobül yapısında bozulma ve periferinde geniş bağ dokusu artışı gözlendi. Mel'nin ise dokudaki tedavi edici etkisinin koruyucu etkisinden daha fazla olduğu gözlendi. Kaspaz-3, RIP3 ve LC3 seviyelerinin kontrol grubuna kıyasla diğer gruplarda daha fazla hücrede eksprese olduğu belirlendi. Ayrıca, AST, ALT ve ALP düzeylerinde ise önemli oranda değişiklik gözlenirken, aynı sonuçlar TGF-β ve TNF-α seviyelerin de de izlendi. 
Sonuç olarak, TAA dokuda önemli derecede hasar oluşturmakta ve hücre ölüm mekanizmalarında artışa neden olurken, Mel'nin ise dokudaki tedavi edici etkisi koruyucu etkisinden daha fazla olduğu kanaatine varılmıştır.
Anahtar kelimeler: Tioasetamid, melatonin, karaciğer, kaspaz-3, RIP3, LC3

Abstract:
Acute or chronic damage to the liver through alcohol, drugs, viruses, genetic disorders and toxicity may occur. As a result of the damage, the tissue integrity of the liver can be impaired and cell death mechanisms can occur. In this study, it was planned to investigate the protective and therapeutic effects of melatonin (Mel) on hepatocellular cell death mechanisms by causing damage to the liver by thioacetamide (TAA).
In this study, 35 Wistar albino adult male rats were used. Group I: Control group (7 pieces), Group II: TAA (7 pcs) 300 mg / kg 2 doses 24 hours interval, Group III: Mel + TAA group (7 pcs) 10 mg / kg ip single dose Mel was applied before 24 hours from TAA application, Group IV: TAA + Mel grubu (7 pcs) single dose of 10 mg / kg Mel was administered after TAA (300 mg / kg) 2 doses at 24 hour intervals, Group V:Mel group (7 pcs) single dose the first day of the experiment was 10 mg / kg. Livert issue samples H-E, PAS and MT were stained. Apopitosis, autophagy and necrosis in tissue was determined by immunohistochemistry staining with caspase-3 microtubule-associated protein light chain-3 (LC3) with, with receptor-interacting protein kinase-3 protein(RIP3), respectively. Inaddition, AST, ALT and ALP in blood serum samples, TGF-β and TNF-α were determined by Eliza method to determine liver tissue damage.
At the end of the experiment, an abnormal condition wasn't observed in the control and Mel group liver tissue samples, but in other groups where TAA wa spresent, deterioration in classical lobule structure and large connective tissue in the periphery were observed. It was observed that the therapeutic effect of Mel was higher than the protective effect on tissue. Caspase-3, RIP3 and LC3 levels were expressed in more cells in other groups than in the control group. In addition, significant changes were observed in AST, ALT and ALP levels, while TGF-β and TNF-α levels were also observed.
As a result, TAA caused significant damage to tissue and increased cell death mechanisms, whereas Mel was found to have more therapeutic effect than protective effect on tissue.
Keywords:Thioacetamide, melatonin, liver, caspase-3, RIP3, LC3