Metotreksat ile sıçan testislerinde oluşturulan hasar üzerine silimarinin koruyucu etkilerinin araştırılması
Investigation of protective effects of silymarin on methotrexate-induced injury in rat testis
Yazar: ZEHRA ATLI
Danışman: PROF. DR. MERAL ERDİNÇ
Dicle Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Metotreksat = Methotrexate ; Silimarin = Silymarin ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Çalışmamızda, kısa süreli MTX (1 ve 7 günlük) ile oluştuşturulan testis hasarına karşı SLM'nin koruyucu etkilerinin histolojik, enzim aktivitesi, hormon, protein ve  moleküler olarak gen ekspresyonu düzeyinde araştırılması amaçlanmıştır.
Kırk 48 erkek sıçan GrupI (kontrol, n=7),  grupII (ilk-gün-MTX,n=8), grupIII (ilk-gün-MTX+7gün-SLM,n=8), grupIV (7gün-SLM,n=7) grupV (altıncı-günde-MTX,n=8) ve grupVI (altıncı-günde-MTX+7gün-SLM, n=8) olarak altı gruba ayrıldı. Tedavi gruplarına SLM (100mg/kg) veya MTX (20mg/kg) intraperitoneal olarak uygulandı. Sıçanlar 8. günde sakrifiye edildi ve AST, ALT ve testosteron konsantrasyonlarıölçüldü. Testisde MDA,CAT,SOD,TAS/TOS/OSI seviyeleri belirlendi.Apoptoz (BCL2, BAX, CAD) anti-oksidan enzimler (Zn-SOD, Mg-SOD, CAT, GPx1) ve steroidogenez yolu (ABP, StAR) içeren genlerin ekspresyonu realtime-PCR ile ölçüldü. Pro-kaspaz-3'ün protein seviyesi de değerlendirildi.Veriler, tek-yönlü-ANOVA kullanılarak analiz edildi ve post-hoc Tukey testi uygulandı. p<0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
GrupII ve III'te MTX'in yedi günlük etkisi hem vücutta hem de testis ağırlığında bir azalmaya neden oldu. Testosteron grupII ve III'te azalmış olsa da, AST ve ALT sadece grupII'de arttı. GrupII'de antioksidan parametreler azalırken, oksidasyon parametreleri arttı. SLM'in (grupIII) bu parametreler üzerinde iyileştirici etkileri oldu. StAR-mRNA ekspresyonu, grupII ve III'de azaldı. CAD ve BAX'ın-mRNA ekspresyonu grupII ve III'de arttı. GPx1 ve BCL2'nin-mRNA ekspresyonu, MTX ve SLM birlikte kullanıldığı gruplarda (III,VI) arttı. Pro-Caspase-3 grupIII'de artarken, sadece MTX kullanımı grupII'de Pro-Caspase-3 'ü azalttı.
Çalışmamızda MTX'in bir günlük etkisi yedi günlük etkisiyle kıyaslandığında ciddi bir hasar oluşturmadığı bununla beraber MTX'in yedi günlük etkisinin sıçan testis dokusu üzerinde ciddi toksisiteye neden olduğu sonucuna varıldı. Ayrıca, SLM'nin sıçanlarda MTX kaynaklı testiküler toksisite üzerinde koruyucu etkiye sahip olduğu görüldü.

Abstract:
The protective effects of silymarine (SLM) on the methotrexate(MTX)-induced testicular toxicity in rats was investigated by using enzyme activity, histopathological, and levels of hormone, protein and gene expression.
Forty-six-male rats were divided into six-groups as following; groupI(control,n=7); groupII(MTX-on-day1,n=8); groupIII(MTX-on-first-day+7days SLM,n=8); groupIV(7days SLM, n=7); groupV(MTX-on-day-7,n=8), and groupVI(7days SLM+MTX-on-day7,n=8). SLM (100mg/kg) or MTX (20mg/kg) was administered intraperitoneally. On-day-8, rats were sacrificed. Plasma AST, ALT and testosterone levels were measured. Levels of MDA, CAT, SOD, TAS/TOS/OSI was measured. Real-time-PCR was used to evaluate genes in apoptosis(BCL2, BAX, CAD), anti-oxidant enzymes (Zn-SOD, Mg-SOD, CAT, GPx1), and steroidogenesis (ABP,StAR). The protein level of pro-caspase-3 was also evaluated. Data were analyzed using one-way-ANOVA and post-hoc Tukey test was applied. p<0.05 were accepted as statistically significant.
 Seven-day effect of MTX caused a decrease in body and testicular weights in groupII and III. Although testosterone levels decreased in groupII and III, AST and ALT increased in groupII. While antioxidant parameters decreased,  oxidation parameters increased in group II. SLM (groupIII) had improving effects on those parameters. StAR-expression was down-regulated in groupII, and III. CAD and BAX expressions increased in groupsII and III. BCL2 and GPx1 increased in those groups where MTX and SLM were used together (III,VI). While Pro-Caspase-3 increased in groupIII, MTX decreased Pro-Caspase-3  in groupII. 
 Compared to seven-day effect of MTX, one-day effect of MTX did not cause serious damage on rat testis. However, seven-day effect of MTX caused serious toxicity on rat testis. Moreover, SLM had protective effects on MTX-induced testicular toxicity in rats.