Trombositten zengin fibrin ile kombine edilmiş borik asidin dental pulpa kök hücrelerı̇nin farklılaşması ve canlılığı üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of boric acid combined with platelet rich fibrin on the difference and vitality of dental pulp stem cells
Yazar: GÖZDE KOTAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BETÜL AYCAN UYSAL
Bezm-i Alem Vakıf Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Endodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2022
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Anneksin V = Annexin V ; Borik asit = Boric acid ; Dental pulpa = Dental pulp ; Dental pulpa boşluğu = Dental pulp cavity ; Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Kök hücreler = Stem cells ; Trombositten zengin fibrin = Platelet rich fibrin

Özet:
Bu tez çalışmasının amacı enjekte edilebilir trombositten zengin fibrin ile kombine kullanılan borun insan pulpa hücreleri üzerine sitotoksik etkisinin ve odontojenik farklılaşmaya olan etkisinin karşılaştırmalı olarak in vitro koşullarda incelenmesi ve bu ürünlerin rejeneratif endodonti için potansiyel bir materyal olarak kullanılabilirliğinin değerlendirilmesidir.
Çalışmamızda kullanılan dental pulpa mezenkimal kök hücresi 19-25 yaş aralığında bulunan bireylerin çekim endikasyonu konulmuş gömük üçüncü büyük azı dişlerinden elde edilmiştir. 3. pasaja getirilen getirilen dental pulpa mezenkimal kök
hücrelerine hem canlılık hem de odontojenik farklılaşma değerlendirmesi için yalnız enjekte edilebilir trombositten zengin fibrin (I-PRF), yalnız 1 µM derişimde borik asit ve I-PRF ile borik asitin kombinasyonu hazırlanarak direkt temas yöntemiyle uygulanmıştır. Tüm materyallerin 24., 48. ve 72. saatlerdeki sitotoksik etkileri Anneksin V ve Propidium iyodür (PI) ile hücreler boyanarak canlı hücre, nekrotik hücre, erken ve geç apoptoza uğramış hücreler akım sitometri ile analiz edilmiştir. Elde edilen bulgular Minitab 17 ile istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Odontojenik farklılaşma değerlendirmesi için odontojenik besi ortamında bekletilen hücrelere alizarin red boyama protokolü uygulanarak inceleme yapılmıştır. Akım sitometri değerleri karşılaştırılmasında iki yönlü varyans analizi kullanılmış ve çoklu karşılaştırmalar Tukey HSD Testi ile yapılmıştır.
Veriler değerlendirildiğinde canlı hücre bulguları açısından I-PRF uygulanan grup en yüksek ortalama canlı hücre değerine sahiptir. Erken apoptoz bulguları açısından ise gruplar arasında anlamlı bir farklılık görülmemiştir (p >0,05). Geç apoptoz bulguları açısından gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık vardır ve en düşük geç apoptotik hücre değeri I-PRF grubuna aittir. (p<,001). Nekrotik hücre bulguları açısından ise borik asit en düşük nekrotik hücre değerine sahip olup gruplar arasında anlamlı bir farklılık görülmemiştir (p>0,05). Alizarin red boyama sonrası niteliksel inceleme sonucu en yüksek kalsifiye nodül oluşumu ve dağılımı         I-PRF ile kombine borik asit grubunda gözlemlenmiştir. Bu çalışmada I-PRF ve borik asidin biyouyumluluk ve odontojenik farklılaşma açısından etkinliği gösterilmiş olup, diş doku mühendisliğinde kullanım potansiyelini daha fazla araştırmak için ilave hayvan ve klinik çalışmalar gereklidir.

Abstract:
The aim of this study was to evaluate the biocompatibility and compare the potential in vitro cytotoxic effects of boric acid and injectable platelet-rich fibrin on human dental pulp stem cells (DPSCs) and their effects on odontogenic differentiation of DPSCs for dental tissue engineering.
Human dental pulp tissue were isolated from extracted impacted third molars from healthy adult patients aged from 18 to 25 years. Injectable platelet-rich fibrin (I-PRF), 1 µM concentration of boric acid and a combination of them were prepared and applied to the cells by direct contact method. The viability of the stimulated cells with experimental material and DMEM control group were evaluated on the flow cytometry device with Anneksin-V and Propidium iodide at the end of the 24th, 48th and 72nd hours. To evaluate the odontogenic differentiation capacity of both cells, Alizarin-red (ALR) staining were performed. Two-way analysis of variance was used to compare flow cytometry values, and multiple comparisons were made with the Tukey HSD Test.
When the data were evaluated, I-PRF group had the highest mean live cell value in terms of viable cell viability. In terms of cell viability findings, there is a statistically significant differences were noted between the sampled hours (p> 0.05). There was no significant difference between the groups in terms of early apoptosis findings (p>0.05). There is a statistically significant difference between the groups in terms of late apoptosis findings and the lowest late apoptotic cell value belongs to the I-PRF group. (p<0.05). In terms of necrotic cell findings, boric acid had the lowest necrotic cell value and no significant difference was observed between the groups (p>0.05).The best odontogenic differentiation potential on DPSCs was determined in the group combined with boric acid and I-PRF. 
In this study, I-PRF and boric acid were demonstrated for biocompatibility and odontogenic differentiation, and additional animal and clinical studies are required to further explore their potential for use in dental tissue engineering.