Sıçan siyatik sinir bloğunda bupivakaine ilave edilen adjuvan ajanların blok süreleri ile sodyum ve kalsiyum kanal gen ekspresyonları üzerine etkileri
The effects of adjuvant agents added to bupivacaine on block duration times, and gene expression of calcium and sodium channels in sciatic nerve block of rat
Yazar: NURGÜL KAPLAN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. LEVENT ŞAHİN
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation
Dizin: Bupivakain = Bupivacaine ; Kalsiyum = Calcium ; Melastatin = Melastatin ; Sinir blokajı = Nerve block ; Siyatik sinir = Sciatic nerve ; Sodyum = Sodium ; Sodyum kanalları = Sodium channels ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu deneysel çalışmada en çok kullanılan lokal anesteziklerden biri olan bupivakain ile buna adjuvan olarak eklenen epinefrin, deksmedetomidin, ve klonidinin blok başlangıç ve etki süreleri ile siyatik sinir hücre membranındaki Na+ ve Ca+2 kanal gen ekspresyonlarına etkilerini incelemeyi amaçladık.    
  	Çalışma, Deney Hayvanları Etik Kurulu onayı alındıktan sonra, Gaziantep Üniversitesi Fizyoloji Anabilim Dalı Deney Hayvanları Araştırma Laboratuvarında gerçekleştirildi. Çalışmada kullanılan toplam 24 adet erişkin sağlıklı 200-250 gram ağırlığında erkek Wistar-Albino sıçan, her birinde 6 denek olacak şekilde 4 gruba ayrıldı. Gruplar; Grup B: Bupivakain (5mg/ml), Grup BD: Bupivakain+Deksmedetomidin (5µg/ml), Grup BK: Bupivakain+Klonidin (7.5µg/ml), Grup BE: Bupivakain+Epinefrin (5µg/ml) olarak düzenlendi. Ketamin anestezisi altında sağ bacakta siyatik sinir bifurkasyon noktasından açılarak epinöryum altına her grup için önceden hazırlanan 0.2mL solüsyon sıçanların uyanmasını takiben enjekte edilip sütürle kapatıldı. Duyusal (proprioseptif ve nosiseptif blok) ve motor blok başlama ve bitiş süreleri kaydedildi. Motor blok; yürüyebilme yetisine göre, proprioseptif blok; taktil yerine koyma cevabına göre, nosiseptif blok; sıçanın çekilme refleksine göre değerlendirildi. İşlem sonrası genetik değerlendirme için siyatik sinir örnekleri alındı.  Bu örneklerden; Na+ kanalı (SCN9A) ve Ca+2 kanalı (TRPM2, TRPM4, TRPM7) gen ekspresyon analizleri için RNA izolasyonu, cDNA sentezi ve Revers-Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyon (RT-PCR) yapıldı

Yaptığımız siyatik blokta; en kısa etki başlangıcı BK grubunda, en uzun duyusal ve motor blok süreleri BD grubundadır. Periferik sinir bloklarına hızlı etki başlangıcı için klonidin, daha uzun etki süresi için ise deksmedetomidin eklenmesi uygundur. BE grubu dışındaki gruplarda, hücre apoptozunun ve oksidatif stresin bir ön göstergesi olan TRPM-2 oranının artışı ve baskılandığında hücreyi oksidatif stres ve anoksik hücre ölümüne karşı koruyan TRPM-7 oranının azalışı gözlenmiştir. BE grubunda SCN9A ve TRPM2-4-7 ekspresyon oranları en az değişiklik gösterdiğinden, hücre bütünlüğü bakımından en güvenilir grup gibi görünmektedir.
Anahtar kelimeler: Siyatik sinir bloğu, bupivakain, adjuvan ilaçlar, SCN9A, TRPM.

Abstract:
In this experimental study, comparing of effects of one of the commonly used local anesthetic, Bupivacaine, and its combination with adjuvant agents such Epinephrine, Dexmedetomidine, and Clonidine on onset time and duration of block, were aimed. Investigation of changes of gene expression in Na+ and Ca++ channels on cell membrane of sciatic nerve also aimed. 
	The study was performed in Research Laboratory of Experimental Animal in Department of Physiology of The University of Gaziantep after approval of The Ethics Committee of Experimental Animals. A total of 24 adult, healthy male Wistar-Albino rats weighs 200-250 g were used. The rats were divided into 4 groups each consisting of 6 with randomly. Groups were organized as: Group B: Bupivacaine (5mg/ml), Group BD: Bupivacaine + Dexmedetomidine (5µg/ml), Group BC: Bupivacaine + Clonidine (7.5µg/ml), Group BE: Bupivacaine + Epinephrine (5µg/ml). Skin of the right leg was incised 1-2 mm. at bifurcation of sciatic nerve under ketamine anesthesia.  For each group, the previously prepared solution was injected under epineurium 0.2mL and skin was sutured. Sensory and motor block onset and end times were recorded following the waking up of rats. Motor block was evaluated according to the ability to walk, proprioceptive block was evaluated according to response of tactile replacement, and nociceptive block was evaluated according to response of withdrawal reflex. The sciatic nerve samples were taken for genetic evaluation after the procedure. RNA isolation, cDNA synthesis, and reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed for gene expression analysis of  Na+ channels (SCN9A) and Ca+2 channel (TRPM2, TRPM4, TRPM7) with those examples.
In the study, it was found that, BC group has the shortest onset time, and BD group has the longest duration of sensory and motor block. We considered that, adding clonidine is appropriate for rapid onset time, and adding dexmedetomidine is appropriate for longer duration for peripheral blocks. Increasing the rate of TRPM-2 which is a preliminary indicator of cell apoptosis and oxidative stress, and decreasing the rate of TRPM-7 which protects the cell from oxidative stress and anoxic cell death were observed in all groups except BE group. By the way the changes of SCN9A and TRPM2-4-7 expression rates are minimum, the group of BE seems to be the most reliable in terms of cell integrity.
Key words: Sciatic nerve block, Bupivacaine, Adjuvant agent, SCN9A, TRPM.