NF-KB transkripsiyon faktörleri üzerinde flavonoid etkisinin endometrium hücre soyları kullanılarak araştırılması
The effect of flavonoids on NF-ΚB transcription factors in endometrial cancer cell lines
Yazar: ZEYNEP BİRSU ÇİNÇİN
Danışman: PROF. DR. BEDİA ÇAKMAKOĞLU
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Genetik = Genetics ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Endometriyum = Endometrium ; Flavonoid glikozidler = Flavonoid glycosides ; Neoplazm hücreleri = Neoplastic cells

Özet:
Endometrium kanseri, dünya çapında bayanlar arasında en sık görülen jinekolojik kanser türü olup, yüksek östrojen seviyesi, endometrial karsinoma oluşumunda en büyük risk faktörü olarak bilinmektedir. Östrojen reseptörleri, nükleer reseptör süperailesi üyesi olup, hücre içinde hedef genlerde bulunan promotor bölgelerin yanıt elementlerine bağlanarak, NF-κB  gibi önemli hedef genlerin transkripsiyonuna neden olmaktadır. Tümöral hücrelerde, NF-κB sürekli aktif halde bulunmakta olup bu durum NF-κB kontrolü altındaki genlerin ekspresyon seviyelerinde değişime yol açmaktadır.
Flavonoidler, doğal bitki bileşikleri olup,  antiproliferatif ve antikarsinogenik etkilere sahip olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmada, flavonoidlerin endometrium kanserinde yeni bir tedavi yaklaşımı olasılığını araştırmak için, kersitrin ve hesperidin flavonoidleri ile indüklenmiş ECC-1 endometrial kanser hücre soyları kullanılmıştır. Bu bileşiklerin hücre proliferasyon ve canlılığı üzerinde doza bağımlı etkisi WST-1 ve LDH sitotoksisite deneyi, bu etkinin apoptoz ile olası ilişkisi ELISA, kaspaz-3,JC-1 ve AnnexinV-FITC yöntemleri kullanılarak incelenmiştir. Son aşamada, NF-κB  yolağında bulunan hedef genlerin flavonoid etkisi altındaki gen ekspresyonları,tüm genom mikrodizin yöntemi ile profillenmiştir.
Bu çalışma sonucunda, ECC-1 hücre soyu üzerinde, hesperidin ve kersitrin bileşiklerinin etkisinin, doz ve zamana bağlı olarak kaspaz-3 aktivitesinde, mitokondriyal membran potansiyelinde ve apoptotik hücre popülasyonunda artışa neden olduğu tespit edilmiştir. Biyoinformatik  analizleri sonucunda, NF-κB  etkisinin IκB ailesi etkisi ile baskılandığı ve bu durumun PI3K/AKT ve Ras-Raf- MAPK sinyal iletim yolları ile ilişkili olduğu tespit edilmiştir.
Literatürde ilk kez, değişik endometrium hücre soyunda kersitrin ve hesperidin etkisi ayrıntılı olarak incelendiği için çalışmamız orijinal bir değer taşımaktadır. Elde ettiğimiz veriler, özellikle kanser tedavisi için yeni çalışma alanları doğuracak ve çalışmamız yeni tedavi seçeneklerinin arasında yer alarak bilime katkıda bulunacaktır.

Abstract:
Endometrial carcinoma is the most common gynecological malignancy among women in worldwide. Studies demonstrated that hyperestrinism is the most important risk factor on the development of endometrial cancer. Estrogen receptors are members of the nuclear receptor superfamily that binds to estrogen response elements in the promoter regions of target genes such as NF-κB in a cell. During this process, NF-κB  becomes constitutively activated that cause dysregulation expression of down-stream signaling pathway.
Recent studies showed that flavonoids have antiproliferation and anticarcinogenic effects. In this study, we used hesperidin and quercitrin stimulated ECC-1 endometrial cancer cell lines to investigate whether flavonoids are new therapeutic approach on endometrial cancer. Dose-dependent effects of these compounds were studied by WST-1 and LDH assays for cell proliferation and viability. The relation between apoptosis and cytotoxicity analyzed subsequently by ELISA,caspase-3,JC-1 and Annexin-V FITC methods. The expression profiling of NF-κB  signaling pathway under flavonoid effect analysed by whole genome expression microarray. 
There were significant increases in caspase-3 activity, loss of MMP, and increases in apoptotic cell population in response to hesperidin in ECC-1 endometrial cancer cells in a time- and dose-dependent manner. After bioinformatics analysis, we demonstrated that NF-κB  members were inhibited with IκB proteins by affecting PI3K/AKT and Ras-Raf- MAPK signalling pathways.
Results of our study will be encouraging for the new project areas and obtained data make possible to find out some new approaches in the treatment of cancer