Farklı hayvan türlerin ısıl işlem uygulanmış et karışımlarında real-tıme PCR tekniği ile tespit edilmesi
Detection of different animal species in heat proccessed meat mixes by real time PCR method
Yazar: AYTEN GÜLLÜCE
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ZÜLAL KESMEN
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Gıda Mühendisliği Bölümü / Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics ; Gıda Mühendisliği = Food Engineering

Özet:
Et ürünlerinde kullanılan farklı hayvan türlerininin tespiti ve bu yolla yapılabilecek hilelerin belirlenmesi amacıyla son yıllarda real time PCR tekniği, yaygın olarak kullanılmaya başlanmıştır.Bu çalışmada çiğ ve ısıl işlem uygulanmış et karışımlarında at, eşek ve domuz türleri Sybr Green ve TaqMan Prob olmak üzere iki farklı real time PCR tekniği ile tespit edilmiştir. Bu amaçla hedef türlere ait etlerin her biri sığır etine farklı seviyelerde (%10, 1, 0.1, 0.01, 0.001 ve 0.0001) karıştırılarak ikili et karışımları hazırlanmış ve bu karışımlara 120ºC ve 200ºC'de 30 dakika ısıl işlem uygulanmıştır.TaqMan prob ve Sybr Green tekniklerinde kullanılan hedef türlere özgü primer ve prob setlerinin spesifite testinde, at, eşek domuz, sığır, koyun, hindi, tavuk olmak üzere toplam 7 tür kullanılmıştır. TaqMan prob tekniği ile gerçekleştirilerin spesifite testlerinin hiçbirinde çapraz reaksiyon tespit edilmemiştir. Sybr Green tekniği ile yapılan spesifite testlerinde ise; yalnızca domuz türüne spesifik primerlerin diğer türlerle hiçbir çapraz reaksiyon vermediği, eşek türüne spesifik primerlerin at (30.76 Ct) ve domuz (28.72 Ct) türleri, at türüne spesifik primerlerin ise eşek (28.02 Ct) ve domuz (33.52 Ct) türleri ile çapraz reaksiyon verdiği tespit edilmiştir.TaqMan Probe ve Sybr Green teknikleri ile hedef türlerin su içerisindeki DNA'ları 0.0001ng seviyesine kadar tespit edilebilmiştir. İkili et karışımlarında ise, hedef türlerin, her iki teknikle, çiğ örneklerde %0.001 seviyesine kadar ısıl işlem görmüş örneklerde ise % 0.01 seviyesine kadar başarıyla tespit edilebileceği gözlenmiştir.Sonuç olarak bu çalışmada kullanılan Sybr Green ve TaqMan prob tekniklerinin taze ve ısıl işlem uygulanmış et ürünlerinde kullanılan hayvan türlerinin tayini için çok hızlı, hassas ve güvenilir teknikler olduğu kanaatine varılmıştır.Anahtar kelimeler: Tür tayini, real-time PCR, TaqMan Probe, Sybr Green, at, eşek, domuz.

Abstract:
Real time PCR method has recently started to be used frequently to determine the different animal species used in meat products and also to determine the various tricks that can be done.In this study horse, donkey and pig species were determined in raw and heat treated meat mixtures by using two different real time PCR methods namely Sybr Green and TaqMan Prob. To this end, meat from each target species were mixed to beef in different amounts (%10, 1, 0.1, 0.01, 0.001 and 0.0001) and double meat mixtures were prepared. Heat treatment was performed on these mixtures at 120ºC and 200ºC for 30 minutes.In the specificity tests of the primer and prob sets special to the species used in TaqMan prob and Sybr Green methods, a total of 7 species were used including horse, donkey, pig, beef cattle, sheep, turkey and chicken. No cross reaction was determined in the specificity tests performed with TaqMan prob method. In the specificity tests performed by Sybr Green method; it was determined that only the primers specific to the pig species did not give cross reaction with the other species whereas the primers specific to the donkey species cross reacted with horse (30.76 Ct) and pig (28.72 Ct) species and that the primers specific to the horse species cross reacted with donkey (28.02 Ct) and pig (33.52 Ct) species.The DNAs of the target species inside water were determined up to 0.0001 ng level by TaqMan Probe and Sybr Green methods. Whereas in the double meat mixtures, it was observed that the target species were successfully detected up to 0.001% level in raw samples and up to 0.01% level in heat treated samples.As a result, it can be stated that the Sybr Green and TaqMan prob methods used in this study are rapid, sensitive and reliable methods for the determination of the animal species used in fresh and heat treated meat products.Key words: species identification, real-time PCR, TaqMan probe,Sybr Green, horse, donkey, pork.