Mikroenjeksiyon ve piezo elektrik uygulanmış insan oositlerinde DNA hasarının belirlenmesi ve östrojen reseptör gen polimorfizmlerinin fertilizasyona etkisinin incelenmesi
Diagnosis of DNA damage on oocytes which are subject to microinjection and piezo electric as well as determining the impact of estrogen receptor gene polymorphisms on fertilization
Yazar: ÖZGE ÜNER AYVAZ
Danışman: PROF. DR. ABDULLAH EKMEKÇİ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: DNA = DNA ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic

Özet:
Bu çalışmada tüp bebek tedavisi gören 104 kadından toplanan metafaz-II aşamasındaki dört grup oosite komet tekniği uygulandı. Grup 1 oositler, spermle birleştirilmeden doğrudan çalışmaya dahil edildi. Mikroenjeksiyon sonrası döllenmeyen oositler ikinci grubu oluşturdu. Grup 3 oositlere piezo elektrik uygulandı. Dördüncü grup ise hidrojen peroksitte bekletilen oositlerden oluşmaktaydı. Bu gruplarda mikroenjeksiyon ve piezo elektrik gibi tekniklerin oosit DNA'sı üzerine etkilerinin ortaya konması beklendi. Çalışmanın sonunda 1. ve 2. grup oositlerde, 3. ve 4. gruptakilere göre DNA fragmentasyonunun düşük olduğu belirlendi.Çalışmanın diğer amacı da östrojen reseptör gen polimorfizmlerinin PCR-RFLP ile fragment analizi teknikleri kullanılarak belirlenmesi ve oosit olgunlaşma ve fertilizasyon oranları ile ilişkilendirilmesidir. Bu doğrultuda 104 infertil, 107 fertil kadın çalışmaya katıldı. İnfertil ve fertil kadınlar arasında polimorfizmlerin dağılımı karşılaştırıldı ve in vitro fertilizasyon (IVF) parametreleri üzerinde polimorfizmlerin etkileri incelendi.c.454-397 T>C, c.454-351 A>G ve TA polimorfizmlerinin infertil ve fertil kadınlar arasındaki dağılımının farklı olduğu ve olgunlaşma oranları, embriyo sayısı ve fertilizasyon oranlarının pp ve xx genotipli kadınlarda düşük olduğu belirlendi. Uzun TA tekrarının düşük embriyo sayısı ve fertilizasyon oranı ile ilişkisi gözlendi.Çalışmamızda elde ettiğimiz bulgular, komet yönteminin IVF tedavilerinde uygulanan tekniklerin oosit DNA'sı üzerine etkilerinin belirlenmesi ve uygulanan tekniklerin geliştirilmesi için önemli olduğunu göstermektedir. Çalışmamızın bulguları, komet tekniğinin bir biyoassay yöntemi olarak kullanılabileceği ve bu sayede DNA'da hasar oluşumu en aza indirilerek IVF başarısının arttırılabileceği görüşünü desteklemektedir. Östrojen reseptör gen polimorfizmleri ile infertilite ve IVF parametreleri arasında elde ettiğimiz ilişkiler ise bireylerin genotiplerine uygun tedavi yöntemleri geliştirmek ve uygulamak, dolayısıyla tüp bebek tedavilerinde başarı şansını arttırmak doğrultusunda önem taşımaktadır.

Abstract:
In this study, comet assay was applied on four groups of metaphase-II oocytes collected from 104 women undergoing in vitro fertilization (IVF) treatment. Group1 oocytes were not microinjected. Group2 oocytes were the unfertilized ones. Group3 oocytes were exposed to piezo electric stimulation. Group4 was the positive control in which the oocytes were incubated in hydrogen peroxide. It was expected to reveal the impact of microinjection and piezo electric stimulation on oocyte DNA. Group1 and 2 oocytes were found to have lower DNA fragmentation than Group3 and 4.Another point was to detect estrogen receptor gene polymorphisms via PCR-RFLP and fragment analysis and correlate with oocyte maturation and fertilization rates. 104 infertile and 107 fertile women were investigated. First the severity of polymorphisms between infertile and fertile women then the effect of the polymorphisms on IVF parameters was analyzed.Significant statistical relationship was observed between infertile and fertile women in terms of c.454-397T>C, c.454-351A>G and TA polymorphisms. Maturation rates, embryo number and fertilization rates were significantly smaller in women having pp and xx genotypes. Long TA repeat was found to be associated with low embryo number and fertilization rate.The outcome of our study implies the importance of comet technique upon determing the impact of techniques applied in IVF treatment on oocyte DNA and developing the applied techniques. The relationship we found between the polymorphisms and infertility&IVF parameters carry weight in developing and applying treatment methods suitable to individuals genotypes, in this way in increasing the success rates in IVF treatments.