Tripl negatif meme kanseri hücrelerinde regorafenib uygulamasının sisplatin tedavisine katkısı
The additional effect of regorafenib to cisplatin therapy at triple negatif breast cancer cell lines
Yazar: FATİH GÜRLER
Danışman: DOÇ. DR. SAADETTİN KILIÇKAP
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Hücre kültürü = Cell culture ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Tedavi = Treatment ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Bu hücre kültürü çalışmasında; dünya genelinde kadınlarda en sık görülen meme kanserinin tedavisinde henüz istenilen başarıya ulaşılamayan tripl negatif meme kanseri alt tipinde, bazı kanser türlerinde kullanılmaya başlanan regorafenib tedavisinin sisplatin tedavisine katkısı araştırılmak istenmiştir.
Hacettepe Üniversitesi Onkoloji Enstitüsü Temel Onkoloji Anabilim Dalı laboratuarlarında ticari olarak elde edilen MDA-MB-231 meme kanseri hücre kültüründe; sisplatin ile regorafenib kombine tedavisinin, sisplatinin tek başına uygulandığı duruma göre etkinliğinin nasıl değiştiği incelenmiştir. İlaç uygulanmamış canlı hücrelerin bulunduğu kuyuların en yüksek absorbansa göre ilaç etkisiyle canlılığını yitiren hücrelerin bulunduğu kuyuların absorbanslarının karşılaştırılmasıyla doza bağlı sağkalım eğrisi ortaya çıkarılmıştır. 
Regorafenib çözücüsü olan DMSO ile 24 saatlik regorafenib uygulaması karşılaştırıldığında; 24 saatlik regorafenib uygulamasında hücre ölümünün daha yüksek olduğu gözlendi (p<0,001). 24 saat ve 48 saat verileri birbiriyle karşılaştırıldığında tek başına regorafenib 24 saatte daha güçlü bir etki gösterdi. 48 saatte hücre ölümünün doz azalışı ile paralel olarak azaldığı gözlendi. Sisplatin 48 saat uygulamasının, sisplatin 24 saat uygulamasına göre daha düşük dozda LD50 değerine ulaştığı gözlendi. Hücrelerin 24 saat ilaçsız inkübasyonu sonrası subtoksik dozda sisplatin uygulanması durumunda; hücrelerin canlılık oranlarının %60 seviyelerinde olduğu görüldü ve subtoksik dozda çalışıldığı doğrulandı. Regorafenibin 24 saat inkübasyonu sonrası sisplatinin eklenmesi koşulunun hem hücre hem de tek sisplatin uygulanması koşullarına göre istatistiksel olarak anlamlı düzeyde hücre ölümünü arttırdığı (p<0,001) ve azalan sisplatin dozlarında regorafenibin öldürücü etkisinin devam ettiği gözlendi. Hücrelerin 24 saat ilaçsız inkübasyonu sonrası subtoksik dozda regorafenib ve sisplatinin birlikte uygulanması durumunda; hücre ölümünün hem uygulama yapılmamış hücrelere göre hem de DMEM ile inkübe edilmiş hücrelere göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde arttığı gözlendi (p<0,001). Ardışık koşullar ile birlikte uygulama koşulları karşılaştırıldığında 1,5 μg/mL regorafenibin 24 saat uygulanması sonrası sisplatin eklenmesi koşulu; birlikte eklenmesi koşulundan anlamlı derecede daha etkili bulundu (p<0,001). 781 ng/mL regorafenibin 24 saat uygulanması sonrası sisplatin eklenmesi koşulu; birlikte eklenmesi koşulundan sınırda anlamlı derecede etkili bulundu (p<0,006).
Çalışmamızda, meme kanseri hücre kültüründe regorafenib ve sisplatin uygulamalarının hem ardışık hem de birlikte uygulandığında kontrol gruplarına göre hücre ölümünü anlamlı derecede arttırdığı gözlendi. Çalışmamız, sisplatin ve regorafenib uygulamalarının, tripl negatif meme kanseri hücrelerinde birlikte veya ardışık olarak denendiği ilk çalışmadır. Bu çalışmadaki anlamlı tedavi yanıtının; umutları devam ettirmesi için bir sonraki basamakta, regorafenibin (BAY 73-4506) majör metabolitleri olan M2 (BAY 75-7495) ve M5 (BAY 81-8752) metabolitlerinin incelenmesi, organizmadaki etkisini daha iyi anlamamıza yardımcı olacaktır.

Abstract:
In this cell culture study; we aim to investigate, the additional effect of regorafenib, which is being used in many cancer types, to cisplatin in triple negative subtype of breast cancer, most seen cancer in women.
The study was performed in the laboratories of Hacettepe University, Institute of Oncology, Department of Basic Oncology, investigating the additional effect of both sequential and concurrent use of regorafenib and cisplatin to cisplatin alone with commercially available MDA-MB-231 breast cancer cell line. The comparison of untreated cell culture and treated cell culture was done with the measurement of optic dansities and the dose-dependent survival curves was generated.
As compared with 24 hour regorafenib plus DMSO a resolvent of regorafenib and 24 hour regarofenib, higher cell death was seen in 24 hour regorafenib administration (p<0,001). When results of 24 and 48 hour datas were compared; 24 hour regorafenib produced more powerful effect. Cell death rate decreased in paralel with dose decrease. 48 hour cisplatin raised to LD50 with low dose compared to 24 hour cisplatin. When subtoxic dose cisplatin was administered after incubation of cells without drug for 24 hours; living cells were 60% and studying with subtoxic dose was showed. An increase in cell death was seen with cisplatin additon after 24 hour incubation of regarofenib (p<0,001) and fatal effect of regorafenib was continued with decreasing of cisplatin. In case of subtoxic dose administration of cisplatin with regarofenib after 24 hour incubaiton of cells without drug;  a statistically significant increase in cell death was seen compared to both no drug administrated cells and cells incubated with DMEM. As compared with sequential and concurrent use of regorafenib and cisplatin at breast cancer cell culture; 24 hour incubation of cells with 1,5 μg/mL of regorafenib and than sequential use of cisplatin is superior to concurrent use of drugs (p<0,001). 24 hour incubation of cells with 781 μg/mL of regorafenib and than sequencial use of cisplatin is partially superior to concurrent use of drugs (p<0,006).
Our study shows that; both sequential and concurrent use of regorafenib and cisplatin at breast cancer cell culture cause significant increase in cell death compared to control groups. This is the first study in which regorafenib and cisplatin are used sequentially and concurrently in triple negative breast cancer. A new study design to investigate the effects of M2 (BAY 75-7495) ve M5 (BAY 81-8752) which are the major metabolites of regorafenib, will help us to understanding the effects to the organism.