Fisetin'in Drosophila melanogaster'de yaşlanmayla ilişkili bazı genlerin ifadeleri üzerine etkisi
The effect of fisetin on the expression of some genes associated with aging in Drosophila melanogaster
Yazar: KÜBRA DANIŞ ORUÇ
Danışman: PROF. DR. AYŞE GÜL MUTLU GÜLMEMİŞ
Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Yaşlanma canlılar için doğal ve fizyolojik bir olaydır. Hücresel yaşlanma olan senesens metabolik olarak hücre aktivitesinin devam ettiği ancak hücrelerin bölünmediği bir süreci oluşturmaktadır. Metabolik aktiflikleri devam eden senesent hücreler senesensle ilişkili salgı fenotipleri (SASP) salgılar. Bu salgı bileşenleri organizmaların kronik hastalıklar başta olmak üzere çeşitli hastalıklara yakalanma riskinin artmasına neden olur. Senolitikler senesense uğramış olan hücreleri çeşitli özelliklerine göre hedef alarak onları spesifik bir şekilde ortadan kaldıran bileşiklerdir. Bu tez çalışması kapsamında Bcl-2 ailesi hedefli bir senolitik madde olan fisetin ile çalışılmıştır. Fisetin, moleküler biyolojide model organizmalardan biri olan Drosophila melanogater olarak bilinen meyve sineğine uygulanmıştır. Uygulama 2 farklı dozda (0,002 M ve 0,005M) ve 4 farklı gün grubunda (7, 14,21 ve 28 gün) yapılmıştır. Farklı sürelerde ve fisetin dozlarında yaşlanmayla ilişkilendirilen memeli sirtüin 1 homoloğu dsir2, dFOXO ve dRPD3 genlerinin ifadeleri RT-qPCR yöntemiyle analiz edilmiştir. Elde edilen tüm verilerin istatistiksel analizi SPSS yazılımı 20.0 (IBM, Armonk, NY, ABD) kullanılarak %95 güven aralığında Duncan testi (p < 0,05) ile analiz edilmiştir. Gen ifadeleri incelenen genlerin ayrıca Cytoscape yazılımı kullanılarak protein protein etkileşimleri ve TBtools programı ile farklı dokularda dijital ifade profilleri çıkarılmıştır. Yapılan ifade analizleri sonucunda dsir2 geni ifadesi en yüksek 7. Günde 0,005M fisetin uygulaması yapılan grupta, 14. günde 0,002 M fisetin uygulaması yapılan grupta, 21. günde 0,005M fisetin uygulaması yapılan grupta ve 28. günde fisetin uygulanmamış kontrol grubunda olduğu görülmüştür. dFOXO geni için en yüksek gen ifadesinin 7. günde 0,002 M fisetin uygulaması yapılan grupta, 14. günde fisetin uygulanmamış kontrol grubunda, 21. günde 0,005M fisetin uygulaması yapılan grupta ve 28. günde fisetin uygulanmamış kontrol grubunda olduğu ve dRPD3 geni için en yüksek gen ifadesinin 7. Günde 0,005M fisetin uygulaması yapılan grupta, 14. günde 0,002 M fisetin uygulaması yapılan grupta, 21. günde 0,005M fisetin uygulaması yapılan grupta ve 28. günde fisetin uygulanmamış kontrol grubunda olduğu görülmüştür.

Abstract:
Aging is a natural and physiological process for living organisms. Senescence, which is cellular aging, constitutes a process in which metabolic cell activity continues but the cells do not divide. Senescent cells that continue to be metabolically active secrete senescence-associated secretory phenotypes (SASP). These secretion components cause the organisms to increase the risk of contracting various diseases, especially chronic diseases. Senolytics are compounds that specifically eliminate cells that have undergone senescence by targeting them according to their various properties. In this thesis study, fisetin, a senolytic compound targeting the Bcl-2 family, was investigated using the model organism Drosophila melanogaster, commonly known as the fruit fly. Fisetin was applied to Drosophila at two different concentrations (0,002 M and 0,005M) across four time groups (7, 14, 21, and 28 days). The expressions of the mammalian sirtuin 1 homolog dsir2, dFOXO and dRPD3 genes, which are associated with aging, were analyzed by RT-qPCR method at different times and doses of fisetin. Statistical analysis of all data obtained was analyzed with the Duncan test (p < 0.05) with a 95% confidence interval using SPSS software 20.0 (IBM, Armonk, NY, USA). Protein protein interactions of the genes whose gene expressions were examined were also obtained using the Cytoscape software and digital expression profiles were obtained in different tissues with the TBtools program. As a result of the expression analyses, it was observed that the expression of the dsir2 gene was highest on the 7th day in the group treated with 0,005M fisetin, on the 14th day in the group treated with 0,002 M fisetin, on the 21st day in the group treated with 0,005M fisetin, and in the untreated control group on the 28th day. The highest gene expression for the dFOXO gene was found in the group applied 0,002 M fisetin on the 7th day, in the control group without fisetin application on the 14th day, in the group applied 0,005M fisetin on the 21st day, and in the control group without fisetin application on the 28th day and the highest gene expression for the dRPD3 gene was observed in the group applied 0,005M fisetin on the 7th day, in the group applied 0,002 M fisetin on the 14th day, in the group applied 0,005M fisetin on the 21st day, and in the control group without fisetin application on the 28th day.