Hastanede yatan hastaların klinik örneklerinden izole edilen candida parapsilosis kökenlerinin morfotiplendirilmesi, genotiplendirilmesi ve farklı morfotiplerde bazı virulans faktörlerinin araştırılması
Morphotyping, genotyping and investigation of some virulence factors in different morphotypes of candida parapsilosis strains isolated from the clinical samples of hospitalized patients
Yazar: VOLKAN AKYOL
Danışman: DOÇ.DR. NİLGÜN ÇERİKÇİOĞLU
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
HASTANEDE YATAN HASTALARIN KL N K ÖRNEKLER NDEN ZOLEED LEN CAND DA PARAPS LOS S KÖKENLER N N MORFOT PLEND R LMES ,GENOT PLEND R LMES VE FARKLI MORFOT PLERDE BAZI V RULANSFAKTÖRLER N N ARAŞTIRILMASI.ÖZETSon yıllarda tüm dünyada Candida parapsilosis'e bağlı sistemik kandidiyazolgularının sıklığında artış vardır. Ancak bu enfeksiyonların epidemiyolojik irdelemesindehenüz standart bir genotiplendirme yöntemi oturtulamamıştır.Bu çalışmada morfotiplendirmenin enfeksiyonlarınınC. parapsilosisepidemiyolojisinde genotiplendirmenin yerine kullanılabilirliği ve belli morfotiplerdeki olasıvirulans faktörlerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Buna yönelik olarak M. Ü. Hastanesindeyatan hastaların kan (40) ve idrar (13) kültürlerinden izole edilen 53 C. parapsilosiskökeninin Sabouraud-trifeniltetrazolyum agarda (STTZ), yüzey ve renk özellikleri, maltözütlü agarda (MA) ise yüzey özellikleri dikkate alınarak morfotiplendirmeleri yapılmış veA-K arası 10 farklı alt grup elde edilmiştir.Kökenlerin genotiplendirilmesi için RAPD-PCR (Random Amplified PolymorphicDNA-Polymerase Chain Reaction) yöntemi kullanılmış ve % 90,56'sı tip II olmak üzere 3farklı genotip elde edilmiştir.zolatlarımızda varlığını araştırdığımız olası virulans faktörlerinden biri fosfolipazaktivitesidir. Yumurta sarılı (pH: 4.2) besiyerinde hazırlanan deneylerin sonucunda hiçbirkökende fosfolipaz üretimi saptanmamıştır. Tween-80'li agarda incelediğimiz esterazaktivitesi de bir izolat dışında olumsuz olarak bulunmuştur. Salgısal asit proteinaz aktivitesinigözlemek amacıyla sığır serum albumini içeren (pH: 5.0) besiyeri kullanılmıştır ve % 11,3oranında olumsuz olmak üzere, % 75,5 oranında (+) ılımlı, % 13,2 oranında (++) kuvvetliolarak saptanmıştır. Glukoz (% 8) içeren Sabouraud buyyon (SB) kullanılarak sıvışık örtü(slime) üretimi değerlendirildiğinde kökenlerin % 67,9'u negatif iken, % 20,7'sinde zayıf (+),% 7,5'inde orta düzeyde (++) ve % 3,7'sinde kuvvetli (+++) üretim saptanmıştır.1Hekzadekanlı hidrokarbon aderens yöntemi ile izolatların hidrofobik karakterideğerlendirildiğinde bir izolat az, diğerleri orta hidrofobik olarak bulunmuştur.Elde edilen veriler kıyaslandığında morfotiplendirmenin genotiplendirmeye göreüstünlüğü belirlenememiştir. Ek olarak virulans faktörleri açısından da belirli bir morfotiplebağlantı kurulabilecek bir özellik saptanmamıştır.Anahtar kelimeler: Candida parapsilosis, Virulans, Morfotiplendirme, Genotiplendirme.2

Abstract:
MORPHOTYPING, GENOTYPING AND INVESTIGATION OF SOMEVIRULENCE FACTORS IN DIFFERENT MORPHOTYPES OF CANDIDAPARAPSILOSIS STRAINS ISOLATED FROM THE CLINICAL SAMPLES OFHOSPITALIZED PATIENTSSUMMARYIn recent years there is an increase in frequency of systemic candidiasis cases causedby Candida parapsilosis. However there isn?t any standardized genotyping method to be usedin epidemiology of those infections.In this study we aimed to determine utility of morphotyping instead of genotyping inepidemiology of C. parapsilosis infections and putative virulence factors of certainmorphotypes. For this purpose 53 C. parapsilosis strains isolated from blood (40) and urine(13) cultures of inpatients at M. U. Hospital were morphotyped according to their surface andcolor properties on Sabouraud-triphenyltetrazolium agar (STTZ) and surface characteristicson malt extract agar (MA) media and 10 different sub groups were obtained between A-K.In order for genotyping the strains RAPD-PCR (Random Amplified PolymorphicDNA-Polymerase Chain Reaction) method was used and 3 different genotypes were revealedcomprising mostly type II (90,56 %).One of the putative virulence factors investigated in our isolates was phospholipaseactivity. Phospholipase production was not detected in any of the strains. Esterase activity ofthe strains examined on Tween-80 agar was negative except for one. In order to observe acidproteinase activity, bovine serum albumin containing (pH: 5.0) agar was used and in 11,3 %of the strains no production was seen while in 75,5 % moderate (+), in 13,2 % strong (++)activity was detected. Slime production was investigated in 8 % glucose containingSabouraud broth (SB) medium and 67,9 % of the strains were found to be negative; while20,7 % were weakly (+), 7,5 % were moderately (++) and 3,7 % were strongly (+++)positive. Hydrophobicity of the strains was evaluated by using hexadecane hydrocarbonadherence assay and one isolate was weakly hydrophobic while the remaining strains werefound to be moderately hydrophobic.1When the results were compared we could not observe superiority of morphotypingover genotyping. Additionally no property was found to associate with a certain morphotype,in terms of virulence factors.Key words: Candida parapsilosis, Virulence, Morphotyping, Genotyping.2