Adrenal kanser hücre hatlarında HSP (ısı şok proteinleri) inhibitörlerinin etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of HSP (heat shock proteins) inhibitors on adrenocortical cancer cell lines
Yazar: ADNAN BATMAN
Danışman: PROF. DR. YUSUF TUTAR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı / Moleküler Tıp Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Amaç: Adrenokortikal kanser mortalite ve morbiditesi yüksek olup moleküler mekanizmaları tam olarak aydınlatılamamıştır. Moleküler mekanizmaları aydınlatılmaya çalışılsa da son 20 yıldır kliniğe yeni bir moleküler tedavi ajanı eklenememiştir. Adrenokortikal hücre serilerinde HSP mRNA ekspresyonlarından özellikle HSP90'ın arttığı gösterilmiştir. Çalışmamızda sentezlediğimiz HSP inhibitörünün adrenokortikal kanser hücre hattındaki toksik etkilerinin moleküler düzeyde araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: NCI-H295R [H295R] hücre hattında mitotan ve HSP inhibitörünün 48. saatteki sitotoksik etkileri MTT hücre canlılık testi ile belirlenmiştir. Etken maddelerin hücre üzerinde moleküler düzeydeki etkilerinin belirlenmesi için sinyal yolaklarındaki gen ekspresyonu değişimleri qPCR analizleriyle belirlenmiştir. Ayrıca etken maddelerin hücre ölümü ve hücre döngüsündeki etkileri akış sitometri analizleriyle tespit edilmiştir.
Bulgular: Çalışmamızda HSP inhibitörümüzün 48. saatte IC50 değeri 3.215±0.034 μM (p<0.001) mitotanın ise 48. saatteki IC50 değeri 6.967±0.036 (p<0.001) μM olarak belirlenmiştir. HSP inhibitörü uygulanan hücredeki gen ekspresyonları, mitotan uygulanan hücre ile kıyaslandığında MAP2K1, MAP2K3, TBX2, IGFBP5, ANGPT1, CDC20, FOXC2, SNAI1, GPD2 genleri aşırı ifadelenmesi olmuştur. HSP inhibitörünün ön planda Fosfotidilinositol-3-fosfat (PI3K)-Akt yolağı ve mitojenle aktive edilen protein kinaz (MAPK) yolağı üzerinden etki ettiği, mitotanın ise MAPK ve tümör nekroz faktörü (TNF) yolağı üzerinden ön planda etki ettiği gözlenmiştir.
Sonuç: Sonuç olarak çalışmamızda; inhibitörümüzün adrenokortikal kanser hücre hattı üzerindeki toksik etkileri göz önüne alındığında hedefe yönelik kanser ilacı geliştirme çalışmalarında iyi bir aday ilaç maddesi olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Aim: Adrenocortical cancer has high mortality and morbidity and its molecular mechanisms have not been fully elucidated. Although efforts have been made to elucidate the molecular mechanisms, no new molecular treatment agent has been introduced to the clinic in the last 20 years. It has been shown that HSP mRNA expression, especially HSP90, increases in adrenocortical cell lines. In our study, it was aimed to investigate the toxic effects of the HSP inhibitor we synthesized on the adrenocortical cancer cell line at the molecular level.
Materials and Methods: The cytotoxic effects of mitotane and HSP inhibitor at the 48th hour on the NCI-H295R [H295R] cell line were determined by the MTT cell viability test. To determine the effects of active substances on the cell at the molecular level, gene expression changes in signalling pathways were determined by qPCR analyses. In addition, the effects of active substances on cell death and cell cycle were determined by flow cytometry analysis.
Results: In our study, the IC50 value of our HSP inhibitor at the 48th hour was determined as 3.215±0.034 μM (p<0.001) and the IC50 value of mitotan at the 48th hour was determined as 6.967±0.036 (p<0.001) μM. When the gene expressions in the HSP inhibitor-treated cell were compared with the mitotane-treated cell, MAP2K1, MAP2K3, TBX2, IGFBP5, ANGPT1, CDC20, FOXC2, SNAI1, GPD2 genes were overexpressed. It has been observed that the HSP inhibitor primarily acts on the Phosphotidylinositol-3-phosphate (PI3K)-Akt pathway and the mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway, while mitotan acts primarily on the MAPK and tumor necrosis factor (TNF) pathway.
Conclusion: As a result, in our study; Considering the toxic effects of our inhibitor on the adrenocortical cancer cell line, it shows that it is a good candidate drug in targeted cancer drug development studies.