Tirozin kinaz inhibitörlerinin farklı subtipteki köpek meme tümörlerinde in vitro etkinliği
In vitro efficiancy of tyrosine kinase inhibitors in different subtypes of canine mammary tumors
Yazar: ASLIHAN BAYKAL
Danışman: PROF. DR. ÖZGE TURNA
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Veteriner Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı / Veterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Pek çok insan kanserinde ve köpeklerde bazı kanser türlerinde PI3K / Akt / mTOR yolağının aşırı aktivasyonu ve bazı PI3K inhibitörlerinin bu yolağın inhibisyonunda etkisi ortaya konulmuş olmasına rağmen, bu sinyal yolağının farklı histolojik ve moleküler subtiplerdeki köpek meme tümörlerinde aktivitesinin belirlenmesine yönelik henüz bir çalışma bulunmamaktadır.  Sunulan tez çalışması kapsamında ilk kez köpek meme tümörlerinin farklı histolojik ve moleküler subtiplerindeki PI3K / Akt / mTOR yolağının aktivitesinin belirlenmesi ve sonrasında farklı alt tiplere özgü primer hücre kültürünün PI3K inhibitörü olarak Buparlisib'e farklı doz ve sürelerde yanıtının değerlendirilmesi amaçlanmaktadır.
Tez çalışması iki aşamadan oluşmaktadır. İlk aşamanın materyalini 7 karsinom, 6 sarkom ve 6 karsinosarkom oluşturmaktadır. Histopatolojik ve moleküler subtiplemenin ardından Akt-mTOR proteinlerinin immunohistokimyasal analizleri yapılmıştır. İkinci aşamada ise 3 adet karsinom, 3 adet sarkom ve 2 adet karsinosarkomdan oluşan tümör dokularından primer hücre kültürü elde edilerek farklı doz ve sürelerde Buparlisib uygulaması ardından WST-1 analizi ile etkin dozlar ve süre 1 ve 5 µM, 48 saat olarak belirlenmiştir. WST-1 analizine göre etkin olduğu belirlenen 48 saat boyunca 1 ve 5 µM Buparlisib uygulanan hücrelerde Annexin V ile apoptotik etki, Akridin Oranj/Propidyum İyodur Boyama ile hücrelerdeki morfolojik değişimler gözlenmiştir. WST-1 analizine göre belirlenen etkin doz ve sürenin sonucunda RT-PCR ile Akt ve mTOR genlerinin ekspresyon seviyeleri belirlenmiştir. Bu bağlamda karsinom grubu içerisinde anlamlı bir down-regülasyon tespit edilememiştir. Ancak sarkom grubundaki liposarkom hücrelerinde ve karsinosarkom grubundaki hücrelerde Buparlisib'in sitotoksik ve apoptotik etkisinin yanında gen düzeyindeki analizlerdeki down-regülasyon ile ilacın etkinliği belirlenmiştir.

Abstract:
Activation of the PI3K/Akt/mTOR pathway had been determined in numerous human cancers and certain types of cancer in dogs. Previous studies have been demonstrated that the effect of PI3K inhibitors on the inhibition of this pathway. However, there is no study yet to determine the activity of this signalling pathway in canine mammary tumors of the different histological and molecular subtypes. This study has been intended to be the first study to determine the activity of the PI3K/Akt/mTOR pathway in different histological and molecular subtypes of canine mammary tumors, and to evaluate the response of primary cell cultures associated with different subtypes to Buparlisib, as a PI3K inhibitor at varying doses and durations.
The study consist of two stages. First stage consists of 7 carcinomas, 6 sarcomas and 6 carcinosarcomas. Following the histopathological and molecular subtyping, immunohistochemical analyzes of Akt-mTOR were performed. In the second stage, primary cell culture were obtained from tumor tissues consisting of 3 carcinomas, 3 sarcomas and 2 carcinosarcomas. These cultures have been treated with Buparlisib at varying doses and durations. The effective doses and durations were determined as 1 and 5 µM, 48 hours by WST-1 analysis, respectively. According to the results of WST-1 analysis, apoptotic effect was observed with Annexin V, also morphological changes in the cell line were observed with Acridine Orange/Propidium Iodide staining. The expression levels of the Akt and mTOR genes were determined by RT-PCR, as a result of the effective dose and duration were determined according to WST-1 analysis. Consequently, there is no significant down-regulation in the carcinomas. However, in addition to the cytotoxic and apoptotic effects of the Buparlisib, in liposarcoma cell line and both carcinosarcoma cell lines the effectiveness of the drug was determined by down-regulation in gene level analysis.