Betaninin Saos-2 osteosarkoma hücre hattında Wnt/β-katenin ve PI3K/AKT/mTOR sinyal yolakları üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of betanin on Wnt/β-catenin and PI3K/AKT/mTOR signalling pathways in Saos-2 osteosarcoma cell line
Yazar: FATİME ALKAYA
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ESRA ÖRENLİLİ YAYLAGÜL
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Beslenme ve Diyetetik = Nutrition and Dietetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Betanin = Betanin ; Osteosarkom = Osteosarcoma ; PI3K =   ; mTOR =

Özet:
Amaç: Bu araştırmada kırmızı pancar (Beta vulgaris) bileşeni betaninin Saos-2 insan osteosarkoma hücrelerinde Wnt/β-katenin ve PI3K/AKT/mTOR sinyal yolakları üzerindeki etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. 
Gereç ve Yöntem: Araştırmada osteosarkoma hücre hattı Saos-2 kullanılmıştır. Betaninin hücre canlılığına olan etkisini belirlemek amacıyla 25-400 μM doz aralığında uygulama yapılarak, 24-48. saat sonunda MTT hücre canlılık testi ile etkinliği belirlenmiştir. Süre ve doza bağlı olarak elde edilen proliferasyon grafiğinden apoptoz ve RT-PCR çalışmaları için uygun doz belirlenmiştir. Bu dozlarda uygulama yapılarak Muse hücre analiz cihazında Muse Annexin V kiti ile apoptoz tespit edilmiştir. Gerçek zamanlı PCR yöntemi ile PI3K/AKT/mTOR ve Wnt/β-katenin sinyal yolaklarında bulunan genlerinin ifadeleri mRNA düzeyinde belirlenmiştir. İstatistiksel analizler IBM SPSS (v25) programında bağımsız örneklem t-testi kullanılarak yapılmıştır (p<0,05). 
Bulgular: Saos-2 hücrelerinin %50'sini inhibe eden betanin dozunun 330 μM olduğu hesaplanmıştır. Ayrıca, betanin uygulamasıyla Saos-2 hücrelerinde apoptozun doza bağlı olarak arttığı bulunmuştur. Aynı zamanda betanin uygulamasının PI3K, AKT, mTOR ve β-katenin mRNA ifadelerini azaltırken, GSK-3β mRNA ifadesini anlamlı olarak arttırdığı belirlenmiştir.
Sonuç: Betaninin osteosarkoma hücrelerinde proliferasyonu baskılayıp apoptozu indüklediği, aynı zamanda da Wnt/β-katenin ve PI3K/AKT/mTOR sinyal yolları aracılığı ile in vitro tümör baskılanmasını sağlayabileceğini ortaya koymaktadır.
Anahtar kelimeler: Betanin, Osteosarkom, Apoptoz, RT-PCR, PI3K/AKT/mTOR, Wnt/β-katenin

Abstract:
Objective: This study aimed to determine the effect of red beet (Beta vulgaris) component betanin on Wnt/β-catenin and PI3K/AKT/mTOR signaling pathways in Saos-2 human osteosarcoma cells.
Material and Methods: The osteosarcoma cell line Saos-2 was used in this study. In order to determine the effect of betanin on cell viability, a dose range of 25- 400 μM was applied and the cell viability was evaluated after 24- 48 hours using the MTT assay. The proliferation curve obtained as a function of time and dose was analysed to determine the appropriate dose for apoptosis and RT-PCR studies. Apoptosis was detected at these selected doses using the Muse Cell Analyzer with the Muse Annexin V Kit. Expression of genes in the PI3K/AKT/mTOR and Wnt/β-catenin signalling pathways was measured at the mRNA level using real-time PCR. Statistical analyses were performed using the independent sample t-test (p<0,05) in the IBM SPSS software (v25). 
Results: The dose of betanin that inhibited 50% of Saos-2 cells was 330 μM. Furthermore, betanin treatment was found to increase apoptosis in Saos-2 cells in a dose-dependent manner. In addition, betanin treatment significantly decreased PI3K, AKT, mTOR and β-catenin mRNA expression while significantly increasing GSK-3β mRNA expression.
Conclusion: Betanine suppresses proliferation and induces apoptosis in osteosarcoma cells and may also induce tumour suppression in vitro via the Wnt/β-catenin and PI3K/AKT/mTOR signalling pathways.
Keywords: Betanin, Osteosarcoma, Apoptosis, RT-PCR, PI3K/AKT/mTOR, Wnt/β-catenin.