Dişi farelerde cinsel siklusun farklı evrelerinde kisspeptinin bazı beyin bölgelerinde immünofloresan yöntemle görüntülenmesi
Immunohistochemical imaging of kisspeptin in some brain regions in different stages of sexual cycles of female mice
Yazar: MERYEM SEDEF DOĞRU
Danışman: PROF. DR. SİNAN CANPOLAT
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Beyin = Brain ; Fareler = Mice ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Hipotalamus = Hypothalamus ; Kisspeptin = Kisspeptin ; Menstrüal siklus = Menstrual cycle

Özet:
Bu tez çalışmasıyla, dişi farelerin cinsel dönemlerinin östrus, diöstrus ve proöstrus fazlarında hipotalamusun arkuat nükleus (ARC),  paraventriküler nükleus (PVN), dorsomedial nükleus (DMN) ve ventromedial nükleus (VMN) bölgelerinde kisspeptin ekspresyonunun immünofloresan yöntemi ile belirlenmesi amaçlanmıştır. Aynı zamanda bu çalışmayla, dişi farelerin belirlenen cinsel dönemlerde,  ilgili hipotalamik bölgelerde immünofloresan yöntemle belirlenen kisspeptin salınımlarının etkilediği fizyolojik mekanizmaların belirlenmesi ve bu bölgelerin immünofloresan görüntülenmesinin literatüre kazandırılması hedeflenmiştir. Belirlenen amaç doğrultusunda yapılan çalışmayla, beyin dokusunda farklı östrus fazlarındaki kisspeptin ekspresyonunun varlığı immünofloresan yöntemi ile tespit edilmiş ve kisspeptin salgılayan beyin bölgelerinin etkilediği fizyolojik mekanizmaların kisspeptin ekspresyonuyla bağlantısı açığa çıkarılmaya çalışılmıştır.
Çalışmada, 40 adet ortalama ağırlığı 35-40 gram olan 5-6 aylık Balb/c ırkı dişi fare kullanılmıştır. Tüm dişi farelere, ortalama 3 östrus döngüsü olacak şekilde her gün saat 10.00-12.00 arasında 15 gün süreyle vajinal smear ile siklus takibi yapılmıştır. Ardından düzenli siklus gösteren toplam 21 adet hayvan seçilmiş ve östrus fazlarına göre 3 gruba ayrılmıştır (diöstrus proöstrus, östrus ve grupları olmak üzere, n=7). Östrus, proöstrus ve diöstrus fazında olan hayvanlar, herhangi bir anestezik madde uygulamadan dekapite edilmiştir ve ardından beyin dokuları kuru buzda dondurulmuştur. Beyin dokusundan kesitler alınıp, floresan boyama basamakları uygulanmıştır. Çalışmanın sonunda, hipotalamusun ARC, PVN, DMN ve VMN çekirdeklerinde kisspeptin yoğunluğu hesaplanmıştır.    
ARC'de de östrus grubunun diöstrus grubuna göre kisspeptin yoğunluğunun istatistiksel olarak anlamlı derecede arttığı bulunmuştur. PVN'de kisspeptin yoğunluğu, istatistiksel olarak değerlendirildiğinde gruplara göre anlamlı bir farklılık bulunmamıştır. DMN ve VMN bölgelerinde, östrus ve proöstrus grupları diöstrus grubuna göre kıyaslandığında kisspeptin yoğunluğunun istatistiksel olarak anlamlı derecede arttığı bulunmuştur.
Sonuç olarak, bu çalışmayla dişi farelerin östrus, diöstrus ve proöstrus dönemlerinde hipotalamik ARC, PVN, DMN ve VMN ve bölgelerinde kisspeptin yoğunluğunun farklı olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
The aim of the study was to determine kisspeptin intensity by immunofluorescence method in hypothalamus arcuate nucleus (ARC), paraventricular nucleus (PVN), dorsomedial nucleus (DMN) and ventromedial nucleus (VMN) in the diestrus, proestrus and estrus phases of the sexual stages of female mice. The other purpose of this study was to determine the physiological mechanisms of the kisspeptin secretions determined by the immunofluorescence method in these hypothalamic regions of the female mice during the sexual periods and to introduce the immunofluorescence imaging of these regions into the literature. With the study conducted in accordance with the specified purpose, the presence of kisspeptin expression in different oestrus phases in brain tissue was determined by immunofluorescence method and the relationship between kisspeptin expression and physiological mechanisms affected by kisspeptin secreting brain regions was investigated. 
In this study, totally 40 Balb/c female mice with 5-6 months age and average weight of 35-40 grams were used. Vaginal smears were taken between 10.00-12.00 hours during 15 days in all female mice. A total of 21 animals with regular cycles were then selected and divided into 3 groups according to the oestrus phases (diestrus, proestrus and oestrus groups, n = 7). The animals in the diestrus, proestrus and oestrus phases were decapitated without administration of any anesthetic, and then brain tissues were frozen on dry ice. Sections were taken from brain tissue and fluorescence staining steps were applied. 
At the end of the study, the intensity of kisspeptin in ARC, PVN, DMN and VMN nuclei of hypothalamus was calculated.
 It was found that the intensity of kisspeptin increased significantly in the oestrus group compared to the diestrus group in ARC. When the intensity of kisspeptin in the PVN was statistically evaluated, no significant difference was found among the groups. In the DMN and VMN regions, when the estrus and proestrus groups were compared to the diestrus group, the intensity of kisspeptin increased significantly. 
As a result, it was determined that kisspeptin intensity was different in hypothalamic ARC, DMN, VMN and PVN regions at estrous, diestrus and proestrus stages of female mice.