İndirgeyici mısırda farklı irilikteki polenlerin karakterizasyonu ve polen iriliğinin haploid tohum oluşumuna etkisi
Characterization of pollens with different size in inducer maize and effect of polen size on the haploid seed formation
Yazar: GÜLİZAR PINAR
Danışman: DOÇ. DR. FATİH KAHRIMAN
Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Ziraat = Agriculture

Özet:
Bu çalışmada bir indirgeyici mısır hattından toplanan ve farklı boyutlara ayrılan polen örnekleri morfolojik, moleküler ve spektrofotometrik ölçümlerle incelenmiştir. Ayrıca farklı irilikteki polenler kullanılarak yapılan tozlamadan elde edilen örneklerin haploid indirgeme oranları (HIR) belirlenmiş ve haploid/diploid tohumların protein bantlarındaki farklar karşılaştırılmıştır. Araştırma 2021 yılında sera şartlarında yürütülmüş ve 3 donör (Hya, B73, Hya×B73) ile bir indirgeyici hat (CIM2GTAIL-P2) materyal olarak kullanılmıştır. İndirgeyici hattan toplanan polen örneklerinin 50 ve 100 mikronluk filtreler kullanılarak vakum yardımıyla ayrıştırılmıştır. Morfolojik ölçüm olarak polen çapı, canlılık durumu ışık mikroskobu yardımıyla tespit edilmiştir. Polen örneklerinde spektral ölçümler kızıl ötesi (NIR) ve Raman spektroskopisi ile gerçekleştirilmiştir. Polen ve tohum örneklerindeki protein bant farklılıkları SDS-PAGE analizleri ile incelenmiştir.  Araştırma sonuçları farklı irilikteki polen örneklerinde spektral ve moleküler farklılıklar olduğunu göstermiştir. Polenlerde bulunan protein bantları 36 kDa-99 kDa arasında değişim göstermiş ve küçük çaptaki örneklerde bant sayısı ve yoğunluğu diğer gruptan düşük bulunmuştur. Donörlerde HIR değerleri %7,40 ile %18,9 arasında bulunmuştur. Bu değerler kullanılan polen iriliğine ve genotiplere göre değişim göstermiştir. Sonuçlar, indirgeyici hattan toplanmış küçük irilikteki polenlerin indüksiyon melezlemesinde kullanılmasının HIR değerini artırdığını göstermiştir.

Abstract:
In this study, pollen samples collected from an inducer maize line and separated into different sizes were examined by morphological, molecular and spectrophotometric measurements. In addition, haploid induction ratios (HIR) of the samples obtained from pollination using pollen of different sizes were determined and the differences in protein bands of haploid/diploid seeds were compared. The study was carried out in greenhouse conditions in 2021 and 3 donors (Hya, B73, Hya×B73) and an inducer line (CIM2GTAIL-P2) were used as material. Pollen samples collected from the inducer line were separated by vacuum using 50- and 100-micron filters. As a morphological measurement, pollen diameter and viability were determined with the help of a light microscope. Spectral measurements of pollen samples were made by infrared (NIR) and Raman spectroscopy. Protein band differences in pollen and seed samples were investigated by SDS-PAGE analyses. Research results showed that there are spectral and molecular differences in pollen samples of different sizes. The protein bands in the pollen ranged from 36 kDa to 99 kDa and the number and density of bands in small samples were lower than the other group. HIR values were between 7.40% and 18.9% in donors. These values varied according to the pollen size and genotypes used. The results showed that the use of small size pollen collected from the inducer line in induction crossing increases the HIR value.