DHRS2 geninin meme kanserindeki hücre bölünmesi, apoptozu ve migrasyonu üzerine etkisi
Effects of DHRS2 gene on cell division, apoptosis and cell migration in breast cancer
Yazar: BURCU SALMAN
Danışman: DOÇ. DR. NESLİHAN ABACI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı / Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Genler = Genes ; Hücre hareketleri = Cell movement ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; RNA = RNA ; dsRNA = dsRNA

Özet:
Meme kanseri kadınlarda en sık görülen malignitedir ve tüm kanserler arasında ikinci sıradadır. Dünya genelinde her gün eklenen yeni vakalar ile birlikte yılda yaklaşık iki milyon kadın meme kanseri tanısı almaktadır ve bu malignite her yıl 500 bin ölüme sebep olmaktadır. Son yıllarda yapılan çalışmalarla birlikte tedavi başarısında ve hastaların hayat kalitesinde artış görülmesine rağmen bu kanserin moleküler mekanizmaları ve tümör davranışları hakkındaki bilgi sınırlıdır. p53-Mdm2 etkileşimleri kanser araştırmalarında sıklıkla çalışılmaktadır ancak bu iki proteini düzenleyen mekanizmalar tam olarak çözülememiştir. Mdm2 ve p53 birbirini düzenleyen, hücre metabolizmasında etkili iki önemli proteindir. DHRS2'nin Mdm2'ye bağlanarak p53'ün hücre döngüsü üzerine olan negatif etkisini engellediği düşünülmektedir. DHRS2 proteini MDM2'yi baskılayarak p53'ü düzenler. Bu düzenlenmeyi anlayabilmek için MCF7 hücre hattında DHRS2 gen ifadesi RNAi aracılığıyla baskılandı. Kontrol grupları ve DHRS2 siRNA uygulanmış deney grubuna apoptoz için Annexin V ile akan hücre ölçer cihazında bakıldı. Hücre canlılığı ve proliferasyonu MTT assay ve tripan mavisi ile hücrelerin boyanması şeklinde gerçekleştirildi. Son olarak migrasyon deneyleri ise günümüz çalışmalarında da sıklıkla kullanılan yara iyileşme modeli ile yapıldı. 24 ve 48 saat grupları karşılaştırıldı. Apoptotik hücre sayısı DHRS2 geni baskılanmış hücrelerde kontrol grupları ile kıyaslandığında daha düşük bulundu. Yine DHRS2 geni baskılanmış hücrelerde yara kapanmasının yavaşladığı, canlılığın ve proliferasyonunun azaldığı gözlemlendi. Apoptotik hücre miktarının az bulunması Mdm2'nin artmasını ve bu nedenle p53 miktarının azalmasını desteklemektedir. Hücre migrasyonu hakkındaki bulgular bu alandaki çalışmalar için öncü niteliğindedir. Bu tez çalışması, DHRS2 geninin meme kanserinde spesifik olarak ele alındığı ülkemizdeki ilk çalışma özelliği göstermektedir.

Abstract:
Breast cancer is the most common malignancy in women and takes the second place between all cancers.With new cases adding day by day nearly 2 million woman is diagnosed with breast cancer and this disease casues 500 thousand deaths per year.Even though recent research increased life quality of patients and therapy succession,our knowledge on molecular mechanisms and the tumour behaviour on this cancer is limited.Interactions between p53 and Mdm2 molecules are widely researched but the regulatory mechanisms of these proteins are still not fully known.Mdm2 and p53 proteins effect cell metabolism and regulate each other. DHRS2 regulates p53 by supressing MDM2.To better understand this regulation, DHRS2 gene expression on MCF7 cell line is supressed via RNAi.On the control group and DHSR2 siRNA applied experiment group apoptosis was tested on the flow cytometry with Annexin V.Cell proliferation and viability was tested with MTT assay and cell staining with tryphan blue.Last of all migration test were performed using scratch assay method which is very common nowadays.24 and 48 hour groups were compared.Apoptotic cell count was lower on DHRS2 supressed cells according to the control group.Again results on DHRS2 gene supressed cells showed us supressed wound recovery and decreased viability and proliferation .Decreased apoptotic cell count supports increased MDM2 and the decreased p53 because of MDM2.Our findings on the cell migration could use as a lead on this research area.This thesis research shows the speciality of being the first research on our country that specifically investigates DHRS2 gene on breast cancer.