Pseudomonas aeruginosa izolatlarından elde edilen azurin protein ekstraktının bazı kanser hücre hatları üzerinde sitotoksik etkilerinin belirlenmesi
Determination of cytotoxic effects of azurine protein extract from Pseudomonas aeruginosa isolates on some cancer cell lines
Yazar: NAGHAM ABDULSALAM RASHID RASHID
Danışman: DOÇ. DR. AYŞENUR KAYABAŞ AVŞAR ; PROF. DR. LİQAA MAJEED AZİZ ABDULLAH ALQAISI
Çankırı Karatekin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, Haziran 2022'den Aralık 2022'ye kadar Irak'ın Bağdat kentindeki farklı hastanelere başvuran hastalardan 150 klinik örnek toplanmış ve klasik, bakteriyolojik ve Vitek II yöntemleri kullanılarak çeşitli kaynaklardan P. aeruginosa izole ve teşhis edilmiştir. Örneklerin kesin tanısı yapıldıktan sonra, 130 pozitif kültür örneğinden sadece %32,3'ü (42/130) P. aeruginosa'ya aitken, %67,7'si (88/130) diğer bakteri cinslerine ait olduğu bulunmuştur. Bakteri izolatlarının seçilen 11 antibiyotiğe karşı duyarlılık testi VITEK 2 ile gerçekleştirilmiş olup, P. aeruginosa izolatlarının mevcut çalışma sırasında ilgilenilen antibiyotiklerden 3'üne, özellikle Sefazolin, Seftriakson ve Trimetoprim/Sülfametoksazole karşı tam dirençli 42 (%100) olduğu görülmüştür. Meropenem, P. aeruginosa izolatlarına karşı en etkili antimikrobiyal ajan olmuştur zira P. aeruginosa, 36 (%85,71) yüksek duyarlılık yüzdesi göstermiş, bunu Siprofloksasin 28 (%66,66) ve Piperasilin, Tazobaktam 26 (%61,90) izlemiştir. Daha sonra, Sephadex G-25 ve G-75 üzerinde iyon değişim kromatografisi kullanılarak izole edilen suşlardan azurin saflaştırılmıştır. Azurin amonyum sülfat kullanılarak saflaştırılmış ve daha sonra poliakrilamid jel elektroforezi ile 14 kda'da tanımlanmıştır. Işık mikroskobu kullanılarak, tedavi edilen hücre kanseri hatları incelenmiş ve PCR ile azurin geni tespit edilmiştir. Meme kanseri hücre hattı akciğer kanserinde sitotoksisitenin etkisini incelemek için farklı azurin konsantrasyonları kullanılmıştır. Sonuçlar, göğüs kanseri hücrelerinde en yüksek inhibisyon oranının %61.200 ile 100µg/ml konsantrasyonda olduğunu göstermiştir. Akciğer kanserinde en yüksek inhibisyon oranı 100 µg/ml konsantrasyonda %47.200 olmuştur. Çalışmamızın bulguları, mevcut kanser tedavilerinin sınırlamalarının üstesinden gelmeyi amaçlayan yeni kanser tedavilerinin geliştirilmesi ve kullanımı için olumlu bir bakış açısı sunmakta olup, yan etkileri ve olumsuz etkileri en aza indirirken tümörlerin tamamen ortadan kaldırılmasına da yardımcı olabileceği düşünülmektedir

Abstract:
Based on this research From June 2022 to December 2022, collected 150 clinical samples from patients who were attending  differences hospitals in Baghdad, Iraq, and  isolate and identify P.aeruginosa from various sources by using classical, bacteriological, and Vitek II  methods. After final diagnosis of samples, among 130 positive culture samples, only 32.3%% (42/130) isolates belonged to P. aeruginosa, and 67.7% (88/130) isolates belonged to other genera of bacteria. The susceptibility test of bacterial isolates against 11 selected antibiotics was conducted by VITIK 2which indicates that the P. aeruginosa isolates are fully resistance 42 (100%) to 3 of the antibiotics of interest during the current study, particularly Cefazolin, Ceftriaxone and Trimethoprim /Sulfamethoxazole. Meropenem was the most effective antimicrobial agents against P. aeruginosa isolates because P. aeruginosa, was showed high percentage of sensitivity to it 36 (85.71%), followed by Ciprofloxacin 28(66.66%) and Piperacillin, Tazobactam 26 (61.90%). Then, azurine was purified from the isolated strains using ion-exchange chromatography on Sephadex G-25 and G-75. Azurin was purified using ammonium sulfate, and it was then identified at 14 kda by polyacrylamide gel electrophoresis. Using a light microscope , treated cell cancer lines were examined, and detection azurin gene by PCR. Different concentration of azurin have been used to study the effect of cytotoxicityin the breast cancer cell line lung cancer. The results showed the highest rate of inhibition of brest cancer cells at the concentration of 100µg/ml by 61.200 %. In the lung cancer the highest rate inhibition was 47.200 % at the concentration 100 µg/ml. Our study's findings offer optimism for the development and use of novel cancer therapies that aim to overcome the limitations of current cancer therapies, which may also help to totally eradicate tumors while minimizing side effects and adverse impacts