Porsuk barajında bulunan Carassıus gibelio türü balıktan karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve izolasyonu
In the Porsuk dam of fish species Carassius gibelio of the enzyme carbonic anhydrase purification and isolation
Yazar: NAZMİYE ALTINMEŞE
Danışman: DOÇ. DR. METİN BÜLBÜL
Dumlupınar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Karbonik anhidraz (E.C.4.2.1.1 karbonat hidroliyaz, karbonat hidrataz) Zn+2 iyonu ihtiva eden bir metaloenzimdir. Memeli eritrositlerinde karbonik anhidraz, hücrelerde CO2'in hidrasyonu veya HCO3'ın dehidrasyonu reaksiyonlarını katalizler. Karbonik anhidraz böbrek, gastrik mukoza ve göz merceği, tükürük bezleri, beyin, sinir miyelin kılıfı, pankerans, prostat, uterus ve endometrium dokularında da aktivite gösterir. Ayrıca balıkların solungaç ve salgı organlarında, bazı böcek ve bakterilerde, kabuklu hayvanların kabuk yapımında ve yumurta kabuğunun oluşumunda, alglerde ve bitkilerin fotosentetik kloroplastlarında bu enzimin önemli rolleri olduğu bilinen bir gerçektir.Bu çalışmada kullanılan canlı Carassius gibelio sağlıklı ve olgundur. İsrail sazanının boyu 35 cm ve ortalama ağırlığı 3000 g dır. Tatlı suların dipleri çamurlu olan kısımlarında yaşamaktadır. Oksijen miktarı çok düşük olan sularda dahi yaşayabilmektedir. Ortalama su sıcaklığı 10?20 0C arasında olduğu tespit edilmiştir. İsrail sazanı istilacı bir tür olup aynı zamanda ekonomik değeri de bulunmamaktadır.Bu balıktan elde edilen homojenatın optimum pH, stabil pH, optimum sıcaklık ve iyonik şiddeti belirlenmiştir. Carassius gibelio `nun optium sıcaklığı 25 oC; optimum pH' ı 8,7; iyonik şiddeti ise 1 M olarak bulunmuştur. Daha sonra solungaçlarındaki karbonik anhidraz enzimi afinite jeli kullanılarak (Sepharose-4B-L-tirozin-sülfonilamid) saflaştırılmaya çalışılmıştır.Anahtar Kelimeler : Carassius gibelio, Sepharose-4B-L-tirozin-sülfanilamid, optimum pH, iyonik şiddet, stabil pH.

Abstract:
SUMMARYCarbonic anhydrase (E.C.4.2.1.1) is a metalloenzymes contains Zn+2 ion. In human erythrocyte carbonic anhydrase enzyme catalyze the reactions of CO2 hydration in cells or the dehydration reactions of HCO3?s. Carbonic anhydrase shows activity in kidney, gastric mucosa and the lens of the eye, salivary glands, brain, nerve myelin sheath,pansreas, prostate, uterus and endometrial tissues. In addition, it is well known that this enzyme has an important role on endocrine organs and gills of fish, some insects and bacteria, making the shell of crustaceans and the formation of the egg shell, algae and photosynthetic chloroplast of plants.The Carassius gibelio used in this study is healthy and mature. The length of Carassius gibelio is 35 cm and the average weight is 3000 grams. They live in parts of the muddy bottoms of fresh water. They can survive even in water contains very low amount of oxygen. The average water temperature has been established between 10-20 oC. Carassius gibelio is invasive spcies and also they do not have economic value. It has been tried to determine that optimum pH, stable pH, optimum temperature and ionic strength of homogenates which gained from this fish. The optimum temperature, pH and ionic strength of Carassius gibelio has been found as 25 oC, 8,7 and 1 M respectively the of, the optimum pH, ionic strength the. Afterwards, carbonic anhydrase enzyme in gills has been tried to be purified by using affinity chromatography (Sepharose- 4B-tyrosine-sülfonilamid).Key words : Carassius gibelio, Sepharose-4B-L-tyrosine-sülfonilamid, optimum pH, stable pH, ionic strength.