Deneysel karaciğer intoksikasyonunda DNA hasarının belirlenmesi ve N asetil sisteinin rolü
Determination of DNA damage in experimental liver intoxication and role of N acetyl cysteine
Yazar: HASAN AKŞİT
Danışman: PROF. DR. AYŞEGÜL BİLDİK
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Apoptozis = Apoptosis ; Asetilsistein = Acetylcysteine ; DNA hasarı = DNA damage ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karbon tetraklorür = Carbon tetrachloride ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; Oksidatif hasar = Oxidative damage ; Serbest radikaller = Free radicals ; Toksisite = Toxicity

Özet:
Çalışmamızda HAT ve HDAC enzim aktiviteleri tayin edilerek, bu enzimlerin aktiviteleri üzerine (dolaylı olarak tanskripsiyon üzerine) oksidatif stresin olası etkisini, gen transkripsiyonu ile kontrol edilen apoptosis ile histon asetilasyonu arasında bir ilişkinin olup olmadığını, N Asetil Sisteinin deneysel karaciğer intoksikasyonunda DNA hasarı üzerine koruyucu rolünün olup olmadığını araştırmayı amaçladık.Çalışmaya 6 grupta toplam 60 adet rat alındı. Karaciğer toksisitesi oluşturmak amacıyla CCl4, periton içi 2 ml/kg 1/1 oranında zeytinyağındaki çözeltisi şeklinde tek doz enjekte edildi. NAS uygulamasına (periton içi 50 mg/kg/gün) CCl4 enjeksiyonundan 3 gün önce başlandı ve deney süresince devam edildi. Kontrol gruplarına zeytinyağı ve N Asetil Sistein uygulaması yapıldı. CCl4 enjeksiyonundan 6 ve 72 saat sonra eter anestezisi altında kan ve karaciğer dokusu alındı. Karaciğer dokusundan nükleer ekstrakt hazırlandı.Serum AST, ALT, MDA düzeylerinin, CCl4 verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarına göre arttığı, 72. saatte artışın olduğu fakat altıncı saate göre azaldığı belirlenmiştir. CCl4+NAS verilen grupta ise 6. ve 72. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında artışın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin azaldığı belirlenmiştir. CCl4 uygulamasının deneysel karaciğer intoksikasyonu ve lipit peroksidasyonuna neden olduğu, NAS uygulamasına ve zamana bağlı olarak düzeyinin azaldığı tespit edilmiştir.Serum TAK analizinde, CCl4 verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarına göre düzeyinin azaldığı, 72. saatte de azalmanın olduğu fakat altıncı saate göre arttığı görülmüştür. CCl4+NAS verilen grupta ise 6. ve 72. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında azalmanın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin arttığı belirlenmiştirdi. TOK analizinde, CCl4 verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarına göre düzeyinin arttığı, 72. saatte ise gruplar arasında fark olmadığı; CCl4+NAS verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında artışın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin azaldığı, 72. saatte ise fark olmadığı belirlenmiştir.Nükleer ekstraklarda yapılan 8-hidroksi 2-deoksiguanozin ve Histon Asetil Transferaz analizinde, CCl4 verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarına göre düzeyinin arttığı, 72. saatte de artışın olduğu fakat altıncı saate göre düzeyinin azaldığı belirlenmiştir. CCl4+NAS verilen grupta ise 6. ve 72. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında artışın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin azaldığı saptanmıştır. Histon deasetilaz düzeyinin, CCl4 verilen grupta 6. saatte kontrol gruplarına göre azaldığı, 72. saatte de azalmanın olduğu fakat altıncı saate göre arttığı görülmüştür. CCl4+NAS verilen grupta ise 6. ve 72. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında azalmanın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin arttığı belirlenmiştir.Apoptotik DNA fragmentasyonu analizinde ise, 6. saatte CCl4 grubunda kontrol grubuna göre düzeyinin arttığı, 72 saatte de artışın olduğu fakat altıncı saate göre düzeyinin azaldığı tespit edildi. CCl4+NAS verilen grupta ise 6. ve 72. saatte kontrol gruplarıyla karşılaştırıldığında artışın olduğu fakat CCl4 gruplarına göre düzeyinin azaldığı tespit edilmiştir. Apoptozis ayrıca karaciğer dokusunda TUNEL yöntemi ile değerlendirilmiş ve 6. saatte, CCl4 verilen grupta kontrol gruplarına göre apoptotik hücrelerin arttığı, NAS ilave edilen grupta CCl4 grubuna göre azaldığı, 72 saatte kontrol grubuna göre bir artışın olduğu fakat 6. saate göre düzeyinin azaldığı görülmüştür.Karaciğerde serbest radikal oluşturmak için CCl4 toksisite modeli uygulanmıştır. Oksidatif stres oluştuğu ve buna bağlı olarak DNA'da hasar ve DNA kırılmalarının şekillenip, histon asetilasyonunun arttığı, deasetilasyonunun ise azaldığı ve hücrelerin apoptozise yöneldiği belirlenmiştir. Aynı zamanda, N Asetil Sisteinin DNA'daki hasar üzerine koruyucu rolünün olduğu, oksidatif stres ve apoptozisi azalttığı tespit edilmiştir.Anahtar Kelimeler; Karbon tetraklorür, N asetil sistein, oksidatif DNA hasarı, histon asetilasyonu, serbest radikaller, apoptozis

Abstract:
We were assigned to HAT and HDAC enzymes, We aimed to investigate whether on the activities of these enzymes (on tanskripsiyon indirectly) the possible effect of oxidative stress, apoptosis and gene transcription is controlled by whether or not a relationship between histone acetylation, N acetyl cysteine on the protective role of DNA damage in experimental liver intoxication.In this study, totaly 60 rats were used in 6 groups. Liver toxicity of CCl4 in order to create, intraperitoneally 2 ml / kg, 1 / 1 ratio as a single dose of olive oil solution was injected. N Acetyl Cysteine application (intraperitoneal 50 mg / kg / day) was started 3 days before CCl4 injection and was continued during the experimental period. Control groups were performed in olive oil and N Acetyl Cysteine. 6. and 72. hours after CCl4 injection, blood and liver tissue were taken under ether anesthesia. Nuclear extracts were prepared from liver.Serum AST and ALT levels increased in the group CCl4 6. hour than the control groups, 72. hour there was an increased but were decreased compared to 6. hour. In the group with CCl4+NAC 6. and 72. hours there were an increased level compared with control groups but levels were reduced compared to the CCl4 group. MDA analysis, CCl4 in the group 6. hour increase than the control groups, 72. hour there was an increased but were decreased compared to 6. hour. In the group with CCl4+NAC 6. and 72. hour there was an increased level compared with control groups, but levels were decreased compared to the CCl4 groups. CCl4 intoxication and lipid peroxidation in the liver caused by experimental application, the level, depending on the NAS application and time were reduced.Serum analysis of TAS, the levels decreased in the group CCl4 6. hour compared to the control groups, 72. hour there was an decreased but were increased compared to 6. hour. In the group with CCl4+NAC 6. and 72. hours there were an decreased level compared with control groups but levels were increased compared to the CCl4 group. Analysis of the TOS, the levels increased CCl4 in the group 6. hour compared to control groups, 72. hour difference between the groups was not identified. CCl4+NAC treated group compared with the control group 6 hours, there was an increased, but the level decreased compared to CCl4 group, the difference was not identified in 72. hour.The 8-hydroxy-2-deoxyguanosine and Histone Acetyl Transferase analysis in nuclear extract, the CCl4 treated group, the level was increased compared to control groups the in 6 hours, 72. hour, but also there was an increased level compared to 6. hour were reduced. CCl4+NAC treated group, the level was increased compared with control groups in the 6. and 72. hours, but decreased levels were determined according to CCl4 group. The level of histone deacetylase, CCl4 treated group 6. hour level was decreased than the control groups, 72. hour there was an decreased but were increased compared to 6. hour. CCl4+NAC treated group was decreased compared with control groups in the 6. and 72. hours, but increased levels were determined according to CCl4 group.In the analysis of apoptotic DNA fragmentation, the levels increased in the group CCl4 6. hour than the control groups, 72. hour there was an increased but were decreased compared to 6. hour. In the group with CCl4+NAC 6. and 72. hour there was an increased level compared with control groups, but levels were decreased compared to the CCl4 groups. Apoptosis also was evaluated by TUNEL assay in liver tissue, and 6. hour, apoptotic cells increased in CCl4 treated group than the control groups, the NAS was added to the group decreased compared to the CCl4 group, 72. hour is an increase compared with the control groups but decreased levels were determined compared with 6. hour.Toxicity model of CCl4 in the liver was performed to generate free radicals. Oxidative stress, DNA damage and DNA breakage occurred and formed and consequently, increased histone acetylation, decreased histone deacetylation and increased apoptosis were determined. At the same time, that the protective role of N acetyl cysteine on DNA damage and reduced oxidative stress and apoptosis were determined.Key Words; Carbon tetrachloride, N acetyl cysteine, oxidative DNA damage, histone acetylation, free radicals, apoptosis