Laktik asit bakterisinden ?-amilaz izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterzation of ?-amylase from lactic acid bacterium
Yazar: İHSAN REZZUKOĞLU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SEMA AGÜLOĞLU FİNCAN
Dicle Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, Diyarbakır'daki peynirciler çarşısından peynir altı suyu örnekleri alınarak laktik asit bakterileri izole edildi. İzole edilen bu bakteriler morfolojik, fizyolojik ve biyokimyasal testler yardımıyla tanımlandı ve PS-2A, PS-3B, PS-3C ve PS-4B olarak adlandırıldı. Daha sonra bu bakterilerin ekstraselüler ?-amilaz üretme yeteneği araştırılarak en iyi aktivite gösteren PS-2A bakterisi seçildi. PS-2A bakterisinin kok (yuvarlak) şekilli, Gram pozitif, katalaz negatif, hareketli olduğu belirlendi. Bu bakterinin üremesi için; optimum inkübasyon süresinin 16. saat, optimum pH'nın 7.0 ve optimum üreme sıcaklığının 35°C olduğu belirlendi.PS-2A'nın ?-amilaz aktivitesini; optimum 20. saatte (1847 U/mg), LB besi yerinde gerçekleştirdiği ve ?-amilaz aktivitesinin optimum pH ve sıcaklık değerlerinin sırasıyla 7.0 ve 35°C olduğu belirlendi.PS-2A'nın üretim ortamına değişik karbon (glukoz, galaktoz, fruktoz, çözünebilir nişasta, maltoz ve sükroz) ve azot kaynakları (pepton, tripton, üre, amonyum sülfat, amonyum klorür ve kazein) eklenerek ?-amilaz üretimi üzerine etkisi araştırıldı.Karbon kaynaklarında; %1'lik çözünebilir nişastanın ?-amilaz üretimini iki kat (4743 U/mg) arttırdığı, glukoz (1392 U/mg), fruktoz (468 U/mg) ve maltoz (1158 U/mg) ilavesiyle de enzim üretiminin azaldığı saptandı.Azot kaynaklarında; %1'lik pepton (2550 U/mg), tripton (3527 U/mg), amonyum sülfat (3463 U/mg) ve amonyum klorür (4166 U/mg) ile ?-amilaz üretiminin arttığı, üre (1241U/mg ) ve kazein (1960 U/mg) ilavesi ile de enzim üretiminin azaldığı tespit edildi.

Abstract:
In this study, whey samples from Diyarbakır cheese market place were collected and lactic acid bacteria were isolated. These bacteria which were isolated were described with the aid of morphological, physiological, and biochemical tests and named as PS-2A, PS-3B, PS-3C and PS-4B. And then, by investigating extracellular ??amylase production capabilities of these bacteria, PS-2A bacterium which showed the best activity was selected. It was found that bacterium PS-2A was round-like, Gram positive,catalase negative, active. For produce the PS-2A; the optimum incubation time as 16th hours, optimum pH as 7.0 and optimum incubation temperature was determined as 35°C.After that extracellular ??amylase enzyme production capabilities of the PS-2A were studied and the optimum conditions of the enzyme were determined. It was found that PS-2A conducted its optimum ??amylase activity at the 20th hour (1847 U/mg) in LB medium performed, and optimum pH and temperature values of ??amylase activity were 7.0 and 35°C, respectively.By adding diverse carbon (glucose, galactose, fructose, soluble starch, maltose and sucrose) and nitrogen (peptone, tryptone, urea, ammonium sulphate, ammonium chlorid ve casein) sources to PS-2A?s medium the effects of these on ??amylase production were investigated.In carbon sources; The %1 soluble starch was increased the ??amylase production 2 fold (4743 U/mg), and it was determined that the enzyme production was decreased by adding glucose (1392 U/mg), fructose (468 U/mg) ve maltose (1158 U/mg).In nitrogen sources; it was determined that with %1 peptone (2550 U/mg), tryptone (3527 U/mg), ammonium sulphate (3463 U/mg) and ammonium chlorid (4166 U/mg) the ??amylase production was increased and by adding urea (1241U/mg ) and casein (1960 U/mg) the enzyme production was decreased.