Sibirya Mersin Balığı Acipenser Baerii (Brandt,1869)'un solungaç dokusu glukoz 6 fosfat dehidrojenazının (EC.1.1.1.49) saflaştırılması ve kinetik karakterizasyonu
Purification and kinetic characterization of gill tissue glucose 6 phosphate dehydrogenase (EC.1.1.1.49) from siberian sturgeon Acipenser Baerii (Brandt, 1869)
Yazar: BEYZA GÜL KOÇAK
Danışman: PROF. DR. SALİH GÖRGÜN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
SİBİRYA MERSİN BALIĞI ACİPENSER BAERİİ (BRANDT,1869)'UN SOLUNGAÇ DOKUSU GLUKOZ 6 FOSFAT DEHİDROJENAZININ (EC.1.1.1.49) SAFLAŞTIRILMASI VE KİNETİK KARAKTERİZASYONU

Beyza Gül KOÇAK
Yüksek Lisans Tezi
                                          Biyokimya Anabilim Dalı
                                 Danışman: Prof. Dr. Salih GÖRGÜN
                                                2024, 70+xiv sayfa

Bu çalışmada, Sibirya Mersin Balığı Acipenser baerii (Brandt,1869) solungacından glukoz 6-fosfat dehidrogenaz (EC.1.1.1.49) (G6PD), 2′ 5′ ADP Sefaroz 4B afinite kromatografisi ile saflaştırılmıştır. Elde edilen enzim preparatının saflaştırma parametrelerinin 114.4 kat saflık, % 68.51 verim ve 1.144 EU/mg.protein spesifik aktivite olduğu belirlenmiştir. Saflaştırmanın başarısını kontrol etmek için yerine getirilen SDS-PAGE analizlerinin sonucu olarak, yaklaşık olarak 63 kDa ve 55 kDa molekül kütleli iki protein bandının varlığı belirlenmiştir. Elde edilen enzim preparatı için optimum sıcaklık ve pH sırasıyla, 40 °C ve 8.0 olarak belirlenmiştir. Enzimin kinetik davranışı gerek glukoz 6-fosfat (G6P) gerekse NADP+ substratları için değerlendirilmiştir. Km ve Vmax değerleri G6P için 8.13 mM ve 0.12 EU/mL olarak belirlenirken, bu değerler NADP+ için 9.17 mM ve 0.13 EU/mL olarak belirlenmiştir. Bu veriler değerlendirildiğinde, A. baerii solungaç G6PD enziminin gerek G6P gerekse NADP+' ya ilgisinin benzer olduğu görülmektedir.  Cd2+ ve Cu2+ metal iyonlarının araştırılan konsantrasyonları enzim üzerinde inhibisyon etkisi göstermiştir. Cd2+ ve Cu2+ için IC50 değerleri 1,108- 0,249 mM, Kİ değerleri ise sırasıyla   0,214 ± 0,092 mM  ve   0,213 ± 0,121 mM olarak belirlenmiştir. Her iki metal iyonunun A. baerii solungaç G6PD enzimi üzerinde kompetitif (yarışmalı) inhibisyon sergilediği bulunmuştur.
Anahtar kelimeler: Glukoz 6-fosfat dehidrojenaz, Acipenser baerii (Brandt,1869),      2′ 5′ -ADP Sefaroz 4B afinite kromatografisi, kinetik karakterizasyon, saflaştırma

Abstract:
PURIFICATION AND KINETIC CHARACTERIZATION OF GILL TISSUE GLUCOSE 6 PHOSPHATE DEHYDROGENASE (EC.1.1.1.49) FROM SIBERIAN STURGEON ACIPENSER BAERII (BRANDT, 1869)

                                                     Beyza Gül KOÇAK
Master of Science Thesis, Department of Biochemistry
Supervisor : Prof. Dr. Salih GÖRGÜN
                                                2024, 70+xiv pages
In this study, glucose 6 phospahate dehydrogenase (EC. 1.1.1.49) (G6PD) from the gills of Siberian strugeon Acipenser baerii (Brandt, 1869) was purified by 2′ 5′ ADP Sepharose 4B affinity chromatography. Purification parameters of the enzyme preparation obtained was defined to be 114.4 fold purity, % 68.51 yield and 1.444 EU/mg.protein specific activity. As a result of SDS-PAGE analyses carried out for checking the succes of the purification, the presence of two protein bands with approximately 63 kDa and 55 kDa molecular masses  were determined. Optimum temperature and pH values for the enzyme preparation obtained was defined as 40 °C and 8.0, respectively. The kinetic behavior of the enzyme was evaluated for both glucose 6-phosphate (G6P) and NADP+ substrates. While Km and Vmax values were determined as 8.13 mM and 0.12 EU/mL for G6P, this values were determined as 9.17 mM and 0.13 EU/mL for NADP+. When assessed these data, it has seen that G6PD enzyme from the gills of A. baerii has similar affinities both G6P and NADP+. Investigated concentrations of the matal ions of Cd2+ ve Cu2+ showed inhibition effect on the enzyme. IC50 values for Cd2+ ve Cu2+ were determined as 1,108 mM and 0,249 mM while Ki values were determined as 0,214 ± 0,092 mM  and   0,213 ± 0,121 mM, respectively. It was found that both metal ions exhibited competitive inhibition on A. baerii's gill G6PD enzyme.
 Key words: Glucose 6-phosphate dehydrogenase, A. baerii (Brandt,1869), 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography, kinetic characterization, purification