Sülfanilik asit kullanılarak gallik asit ve kuersetinin eşzamanlı spektrofotometrik tayini için metod geliştirme /
Yazar: DERYA CEMEK SARI
Danışman: PROF. DR. HABİBE ÖZMEN
Fırat Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Analitik Kimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada Sülfanilik Asit kullanılarak Gallik Asit ve Kuersetinin eş zamanlı spektrometrik tayini için metod geliştirildi. Çalışmanın ilk aşamasında Sülfanilik Asit kullanılarak diazonyum tuzu oluşturuldu. Oluşturulan diazonyum tuzunun analitik saflıktaki Kuersetin ve Gallik Asit ile ayrı ayrı kenetlenme reaksiyonu yapıldı ve ürün saflaştırıldı. Elde edilen azo boyar madde UV/VIS ve FT-IR kullanılarak karakterize edildi ve maksimum dalga boyları belirlendi. Maksimum dalga boyu Kuersetin için 420nm Gallik Asit için 354nm, belirlenen bu dalga boylarında metodun optimal şartları için deneysel işlemler sonucunda ortama ilave edilen reaktif miktarları belirlendi. 10 dakika içerisinde reaksiyonun oluştuğu ve 60 dakikaya kadar önemli bir absorbans artışı olmadığı görüldü. Hem Kuersetin hem de Gallik Asit kenetleme reaksiyonları pH 10 da gerçekleştirildi. 
Kuersetin tayini için uygulanan metodun analitik parametreleri ve metodun validasyonu için bulunan veriler, Molar absorbsiyon katsayısı (Ɛ); 45574±3217, Ortalama geri kazanım  ± SD (%); 98±8, LOD (mol/L); 3,75x10-6, LOQ (mol/L); 1,14x10-5, Konsantrasyon aralığı  (mol/L); 3,31x10-6 – 2,65x10-5, BSS % 5,134 ± 2,966, Güven aralığı; 0,062±0,066 (%95) değerleri elde edilmiştir.
Gallik Asit tayini için uygulanan metodun analitik parametreleri ve metodun validasyonu için bulunan veriler, Molar absorbsiyon katsayısı (l.mol‾ˡ.cm‾ˡ ); 10508±794, Ortalama geri kazanım  ± SD (%);98±10, LOD (mol/L ); 5,96x10-6, LOQ (mol/L); 1,81x10-5, Konsantrasyon aralığı (mol/L); 5,88x10-6 – 4,71x10-5, BSS % 3,914 ± 3,844, Güven aralığı; 0,013±0,016 (%95) değerleri elde edilmiştir. 354 nm de Kuersetin için elde edilen kalibrasyon eğrisine göre Lambert Beer yasasına ile elde edilen Molar absorbsiyon katsayısı (l.mol‾ˡ.cm‾ˡ ) 8301±345, 420 nm de Gallik Asit için ise Molar absorbsiyon katsayısı (l.mol‾ˡ.cm‾ˡ) 4720±1166 değeri elde edilmiştir. Bu değerler maksimum absorbsiyon yaptığı dalga boyları ile kıyaslandığında oldukça küçük değerler olduğu görülür. Kuersetin ve Gallik Asitin birarada olduğu iki bileşenli örneklerin analizi için, her bir bileşenin absorbansı, bunların absorbanslarının toplamına eşit olduğu için iki bilinmeyenli iki denklem oluşturuldu ve ayrı ayrı miktarları belirlendi. 
Örneklerdeki Kuersetin ve Gallik Asit miktarlarını tayin edebilmek için eş zamanlı tayin metodu uygulandı. Optimal şartları, validasyon ve analitik parametreleri belirlenen bu metod örneklere başarılı bir şekilde uygulanmış, Kuersetin ve Gallik Asit miktarları mg/kg olarak belirlenmiştir.

Anahtar Kelimeler: Kuersetin, Gallik Asit, UV/VIS, Sülfanilik Asit, Diazo

Abstract:
In this study, a method was developed for the simultaneous spectrometric determination of Gallic Acid and Quercetin using Sulfanilic Acid. In the first stage of the study, diazonium salt was formed by using Sulfanilic Acid. Coupling reaction of the formed diazonium salt with analytical grade Quercetin and Gallic Acid was done separately and the product was purified. The azo dyestuff obtained was characterized using UV / VIS and FT-IR and its maximum wavelengths were determined. Maximum wavelength of 420nm for Quercetin and 354nm for Gallic Acid, the amount of reagent added to the medium at the end of experimental procedures for the optimal conditions of the method at these wavelengths were determined. It was observed that the reaction occurred within 10 minutes and there was no significant increase in absorbance up to 60 minutes. Both Quercetin and Gallic Acid coupling reactions were performed at pH 10.
Analytical parameters of the method applied for the determination of quercetin and the data obtained for the validation of the method, Molar absorption coefficient (); 45574 ± 3217, Mean recovery ± SD (%); 98 ± 8, LOD (mol / L); 3.75x10-6, LOQ (mol / L); 1.14x10-5, Concentration range (mol / L); 3.31x10-6 - 2.65x10-5, BSS% 5.134 ± 2.966, Confidence interval; Values of 0.062 ± 0.066 (95%) were obtained.  
Analytical parameters of the method applied for the determination of Gallic Acid and the data obtained for the validation of the method, Molar absorption coefficient (l.mol‾ˡ .cm‾ˡ); 10508 ± 794, Mean recovery ± SD (%); 98 ± 10, LOD (mol / L); 5.96x10-6, LOQ (mol / L); 1.81x10-5, Concentration range (mol / L); 5.88x10-6 - 4.71x10-5, BSS% 3.914 ± 3.844, Confidence interval; Values of 0.013 ± 0.016 (95%) were obtained.  
According to the calibration curve obtained for Quercetin at 354 nm, the Molar absorption coefficient obtained by Lambert Beer's law (l.mol‾ˡ .cm‾ˡ) is 8301 ± 345, and for Gallic Acid at 420 nm, the Molar absorption coefficient (l.mol‾ˡ) .cm‾ˡ) 4720 ± 1166 value was obtained. When these values are compared with the wavelengths it absorbs, it is seen that they are very small values.  
For the analysis of two-component samples in which quercetin and gallic acid are together, since the absorbance of each component is equal to the sum of their absorbances, two equations with two unknowns were created and their respective quantities were determined.  
Simultaneous determination method was used to determine the quercetin and gallic acid amounts in the samples. This method, whose optimal conditions, validation and analytical parameters were determined, was successfully applied to the samples, and the quercetin and gallic acid amounts were determined as mg / kg. 

Keywords: Quercetin, Gallic Acid, UV/VIS, FT-IR Sulfanilic Acid, Diazo, Drug, Food