Zingeronun H2452 mezotelyoma hücre hattı üzerine etkisinin ve bu etkide TRPV1 reseptörünün rolünün incelenmesi
Investigation of the effect of zingeron on cell line of H2452mesothelioma and the role of TRPV1 receptor in this effect
Yazar: ABDULMECİT GÜL
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ SABAHATTİN CÖMERTPAY
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Moleküler biyoloji = Molecular biology ; RNA = RNA

Özet:
Mezotelyoma; akciğer, kalp ve karın zarında gelişen ve teşhisten sonra yaşam süresi yaklaşık bir yıl olarak verilen, nadir ancak oldukça öldürücü bir kanser türüdür. Zingeron maddesi, zencefil (Zingiber officinale) bitkisinde bulunan ve anti-tömoral etkileri olduğu bilinen bir biyoaktif fenolik bileşiktir. TRPV1 ("Transient receptor potential vanilloid -1" Geçici Reseptör Potansiyel Vanillolid 1) seçici olmayan bir iyon kanal proteinidir ve içinde vanilil parçası bulunan zingeron tarafından da aktive edilebildiği düşünülmektedir.  Ayrıca, bu kanal kapsazepin maddesi aracılığıyla inaktive olmaktadır. Bu tez çalışmasında; ticari olarak elde edinilen mezotelyoma hücrelerinin (H2452) in vitro koşullar içerisinde zingeron ile muamele edilmesi sonucu gerçekleşen etkiler gözlenmiş ve bu etkilerin TRPV1 iyon kanalı ile olan ilişkisi araştırılmıştır. Bu amaç doğrultusunda, ilk olarak H2452 hücrelerinde 24 saatte zingeron için IC50 değeri, MTS ("Methylthiazole Tetrazolium Assay" Metilazol Tetrazolyum Yöntemi) ile 9.7±3.1 mM olarak belirlenmiştir. Daha sonra hücrelere, IC50 değerinde etken madde ile 24 saat muamele yapılmış ve hücrelerden izole edilen proteinler ve mRNA'lar sırasıyla Western Blotlama ve qRT-PCR için kullanılmıştır. Sonuçta, zingeron uygulamasına bağlı olarak TRPV1 protein miktarının belirgin bir şekilde azaldığı (p<0.05), buna karşın mRNA bağıl seviyesinin anlamlı bir şekilde değişmediği bulunmuştur (p>0.05). Ayrıca, TRPV1 antagonisti olan kapsazepin uygulanmasının ardından zingeron muamelesi yapıldığında, zingeronun 24 saatteki IC50 değerinde anlamlı bir değişme gözlenmemiştir (p>0.05). Son olarak hücrelere TRPV1 protein ifadesini baskılayacak shRNA uygulanmış ve IC50 değerleri ölçülmüştür.  TRPV1 shRNA muamelesi ile reseptörün protein seviyesi gözle görülür bir biçimde azalmış, ancak bu azalma hücrelerin zingeron IC50 değerlerinde fark edilebilir bir değişime neden olmamıştır (p>0.05). Buna göre, zingeronun H2452 mezotelyoma hücre hattı üzerine etkisinin TRPV1 reseptöründen bağımsız bir mekanizma üzerinden gerçekleşiyor olabileceği sonucuna ulaşılmıştır.

Abstract:
Mesothelioma is a rare but highly lethal cancer developing from lungs, heart and abdomen and its avarage life expectancy after diganosis is given as one year. Zingeron is a bioactive phenolic compound found in ginger (Zingiber officinale) and is know to have anti-tumoral properties. TRPV1 (Transient Receptor Potential Vanilloid Receptor-1) is a non-selective ion channel and is proposed to be activated by vanillyl containing capsaicin, which is structurally very similar to zingerone. In addition, this channel is inactivated with capsazepine. In this study, we investigated how commercially available mesothelioma cells (H2452) were affected by zingerone treatment and whether the impact was related to the presence of TRPV1. For this purpose, the IC50 value for zingeron on H2452 in 24 hours was determined as 9.7 ± 3.1 mM via MTS Assay. The cells were then exposed to zingerone at IC50 concentration and their proteins and mRNAs were isolated for Western Blotting and qRT-PCR, respectively. As a result, it was found that the amount of TRPV1 protein was significantly reduced (p <0.05), whereby its mRNA levels did not change significantly (p> 0.05). In addition, there was no change in the IC50 value of zingerone in 24 hours when  the cells were pre-treated with TRPV1 antagonist, capsezepine (p> 0.05). Finally, the cells were subjected to shRNA to suppress TRPV1 protein expression. TRPV1 shRNA treatment significantly reduced the protein level of the receptor, but did not cause a noticeable change in zingerone IC50 values  (p> 0.05). Accordingly, we conclude that the effect of zingerone on H2452 might occur through a TRPV1 independent mechanism.