Levamizol hidroklorür ve Oksiklozanid'in farmasötik preperatlardan aynı anda analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografi yönteminin geliştirilmesi ve validasyonu
Development and validation of high performance liquid chromatographic method for simultaneous determination of Levamisole Hydrochloride and Oxcylozanide in phramaceutical preparations
Yazar: MUTLU EZGİ DEMİRAL
Danışman: PROF. DR. SACİDE ALTINÖZ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Antihelmintikler = Anthelmintics ; Helmintler = Helminths ; Hidroklorotiyazit = Hydrochlorothiazide ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Levamizol = Levamisole ; Oksiklozanid = Oxyclozanide

Özet:
Bu çalışmada sığır ve koyun akciğer ve mide-bağırsak kıl kurtları, askaritler, göz kurdu, karaciğer kelebekleri ve şeritlere karşı kullanılan Levamizol hidroklorür (LEV) ve Oksiklozanid (OKS)'in farmasötik preparattan birlikte analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Geliştirlen yöntem için iç standart olarak Hidroklorotiazid (HCT) seçilmiştir. HCT ile birlikte LEV ve OKS `un analizi için Eclipse XDB C18 (5µm, 150 x 4,6 mm i.ç.) analitik kolon kullanılmıştır. Hareketli faz olarak fosfat tamponu (10 mM, pH=4.0): Metanol ( 0-4 dk. 30:70, 4- 10 dk. 80:20, h/h) karışımı kullanılmış, 1.2 mL dk.-1 akış hızında elue edilmiştir. UV dedektör 0-4 dk. 225 nm 4-10 dk. 300 nm'ye ayarlanmıştır. HCT, LEV ve OKS'un seçilen kromatografik koşullardaki alıkonma zamanları sırasıyla 1.90, 2.39, 8.58 dk'dır. Geliştirilen yöntemler, ICH analitik yöntem validasyon rehberinde belirtilen kararlılık, doğrusallık, duyarlılık, doğruluk, kesinlik, özgünlük, tutarlılık ve sağlamlık parametrelerine göre valide edilmiştir. Her iki madde için geliştirilen HPLC yönteminde doğrusallık 1-50 µg mL-1'dir. Gözlenebilme sınırları (LOD) LEV için 0.85 µg mL-1 OXC için 0.42 µg mL-1`dir. Alt tayin sınırları (LOQ) ise LEV ve OKS için 1 µg mL-1`dir, geri kazanım LEV için % 100.03-100.17 aralığında, OKS için % 100.01-100.71 aralığındadır. Geliştirilen yöntem, validasyon çalışmaları bulgularına göre doğru, kesin, özgün, duyarlı, tutarlı ve sağlamdır. Bu tezde geliştirilen ve valide edilen yöntem LEV ve OKS'un ikili karışımını içeren tablet preparatlarından analizine uygulanmıştır ve preparatlardaki analizlerinin güvenilirliği gösterilmiştir.

Abstract:
In this study, high performance liquid chromatographic method for simultaneous determination of Levamisole Hydrochloride (LEV) and Oxcylozanide (OXC) in pharmacetucal form which are used againist cattle and sheep lung and stomach pin worms, worms, liver fluke, and tapeworm. Hydrochlorothiazide (HCT) used as an internal standart in developed method. Analysis of LEV and OXC together with HCT was performed using an analyical column of Eclipse XDB C18 (5µm, 150 x 4,6 mm i.d.) Substances were eluted by mobile phase containing phosphate buffer (10 mM, pH 4.0) and methanol (30:70 v/v in 0-4 min. , 80:20 v/v in 4- 10 min.) at a flow rate 1.2 mL dk-1. UV dedector was set to 225 nm for 0-4 min. and to 300 nm for 4-10 min. Under these chromatographic conditions retention times for HCT, LEV and OXC were 1.90, 2.39, 8.58 min., respectively. Developed method was validated for parameters of stability, linearity, sensivity, accurracy, precision, specificity, ruggedness and robutness as given in current ICH Guidline. Linearity for two substances was 1-50 µg mL-1. The lowest limits of detection (LOD) for LEV was 0.85 µg mL-1 and for OXC was 0.42 µg mL-1. The lowest limit of quantification (LOQ) for both LEV and OKS were 1 µg mL-1. Recovery values for LEV were between 100.03- 100.17 % and for OKS were between 100.01- 100.71 %. Developed HPLC method was accurate, precise, specific, sensitive, rugged and robust due to the validation study results. Developed an validated method in this thesis was applied to a binary mixture tablet preparation of LEV and OXC and their reliabilty of analysis in this form was demonstrated.