Tam kanda siklosporin A düzeyi ölçümünde sıvı kromatografi sıralı kütle spektrometre yönteminin, antikor bağlı manyetik immunassay yöntemle karşılaştırılması
Comparison of liquid chromatography-tandem mass spectrometry method with a antibody-bound magnetic immünoassay method for the determination of whole-blood cyclosporine-A level
Yazar: MURAT AR
Danışman: PROF. DR. LEVENT ERDİNÇ
Dicle Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Doz-cevap ilişkisi-ilaç = Dose-response relationship-drug ; Kromatografi = Chromatography ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Siklosporinler = Cyclosporins ; Siklosporinler = Cyclosporins ; İlaçlar = Drugs ; İmmünoassay = Immunoassay

Özet:
Siklosporin A (CsA) 11 amino asit içeren halkasal yapıda bir polipeptittir ve güçlü bir immünsüpresif  ilaçtır. Organ ve kemik iliği transplantasyonu sonrası red reaksiyonunun önlenmesinde kullanılır. Ayrıca otoimmün hastalıklar ile graft-versus-host hastalığı tedavisinde de kullanılır. Siklosporin A etkinlik ve toksisite arasında dar bir terapötik aralık sergiler. Siklosporin A renal, hepatik ve immünolojik komplikasyonlara neden olabilir ve bunlardan bazıları ciddi yan etkilerdir. Böbrek yetmezliği ve lenfoma gibi artmış malignite riski önemli yan etkilerdendir. Ek olarak, CsA'nın bireyler ve etnik gruplar arasındaki farmakodinamik ve farmakokinetik çeşitliliği geniştir.  Siklosporin A kan düzeyi izlenimi bu yüzden zorunlu bir gerekliliktir.
Biyolojik numunelerde CsA ilaç düzeyi izlemi için immünassay, yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile kombine edilmiş ultraviyole dedektör (HPLC-UV) ve HPLC ile kombine edilmiş kütle dedektör (LC/MS/MS) gibi analitik teknikler mevcuttur.
Bu çalışmanın amacı kan CsA ilaç düzeyinin belirlenmesinde kullanılan bir immünassay yöntem olan antibody conjugate magnetic immünassay (ACMIA) yöntemini immünsüpresif ilaç izlenimi için daha sensitif ve daha selektif bir metot olan sıvı kromatografi-tandem mass spektrometre (LC/MS/MS) ile karşılaştırmaktır. Çeşitli hastalıklardan dolayı CsA ilacı kullanan 50 hasta çalışmaya dahil edildi. Her hastadan 2 tam kan tüpü alındı ve ACMIA ile LC/MS/MS yöntemi ile analiz edildi. Çalışmada iki yöntem arasında korelasyon katsayısı 0.857 olarak bulundu. Regresyon analizinde ise iki yöntem arasındaki denklemde [LC/MS/MS metodu (x) ve ACMIA (y) ekseni] eğim 1.437 kesim noktası 25.66 ve R2 0.735 olarak bulundu. İki yöntem arasında sistematik bir hata bulundu ve genel olarak LC/MS/MS yönteminin ACMIA yöntemine göre %42 oranında  daha düşük okuma yaptığı gözlendi. Tandem mass spektrometre yöntemi çeşitli immünsüpresif ilaçları birlikte analiz edebilmektedir ve bu durum ilaç izlemi için gereken maliyeti düşürmektedir. Tandem mass spektrometre yöntemi daha önce kullanılan immunassay yönteme göre immünsüpresif ilaçlar için daha sensitif, daha selektif ve daha geniş bir lineer aralığa sahiptir. Sonuç olarak bu yöntem tam kanda immünsüpresif ilaç düzeyi izlemi için immünassay yöntemlere alternatif olarak kullanılabilir.

Anahtar Sözcükler: Siklosporin A, sıvı kromatografi-tandem mass spektrometre, antikor bağlı manyetik immunassay, terapötik ilaç düzeyi izlemi

Abstract:
Cyclosporine A (CsA) is a cyclic endecapeptide and a potent immunosuppressive drug. It is used as an immunosuppressant to prevent rejection of transplant organs and bone marrow. Cyclosporine A is also used for the treatment of autoimmune diseases and graft-versus-host disease. Cyclosporine A exhibits a narrow therapeutic range between efficacy and toxicity. Cyclosporine A may cause numerous side effects including renal, hepatic and immunological complications and some of them are serious. Renal dysfunction and increased risk of developing malignant diseases such as lymphoma are some of the serious side effects. In addition, the inter-individual and intra-individual pharmacodynamics and pharmacokinetic variability of CsA is large. Therefore constant monitoring of the CsA concentration is mandatory.
Several analytical methods are available for the determination of CsA in biological specimen for therapeutic drug monitoring purpose, such as immunoassays, liquid chromatography coupled with ultraviolet detection (HPLC-UV) and liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC/MS/MS). 
The aim of this study is to compare an immunoassay method, antibody conjugate magnetic immunoassay (ACMIA), with a more sensitive and selective method, liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) for CsA determination. 50 volunteers using CsA drug due to various diseases included in this study. Two whole blood samples were drawn from each subject included in this study and analyzed with ACMIA and LC/MS/MS methods. In this comparative study, a correlation (r=0.857) was found between two methods. Regression analysis [LC/MS/MS method (x) and ACMIA (y)] yielded a slope of 1.437, an intercept of 25.66, and R2 0.735. There was a systematic deviation between LC/MS/MS and ACMIA (42% lower than ACMIA). It is possible to detect several immunosuppressants simultaneously, thus significantly lowering the cost of analysis. LC/MS/MS method is more sensitive, more selective and have a larger linear range for immunosuppressant drugs than the previously used immunoassay method. In conclusion, this method may be preferred to immunoassays for the routine clinical measurement of immunosuppressive drug concentrations in whole blood.

Key Words: Cyclosporine A, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, antibody conjugate magnetic immunoassay, therapeutic drug monitoring