Nöroblastoma tümör hücrelerine karşı adipoz doku kaynaklı insan kök hücrelerinin apoptoz etkinliğinin araştırılması
The apoptotic effect of human adipose tissue derived mesenchymal stem cells  in neuroblastoma tumor cell
Yazar: AHMET CİNGÖZ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. BETÜL ÇATALGÖL
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Apoptozis = Apoptosis ; Kök hücreler = Stem cells ; Neoplazm kök hücreleri = Neoplastic stem cells ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors

Özet:
Nöroblastoma, çocukluk döneminin en sık görülen ekstrakraniyal tümördür. Pediatrik kanser tedavisindeki gelişmelere rağmen (kemoterapi, radyoterapi, kemik iliği transplantasyonu) yaşama oranı %40?ların altında kalmaktadır. Bu nedenle diğer santral sinir sistemi tümörlerinde olduğu gibi nöroblastomada da farklı tedavi yaklaşımları gerekli görülmektedir.Tümör hücrelerinden salgılanan bir takım aracı moleküllerle kök hücrelerin tümör hücrelerine doğru bir yöneliş gösterdiği yapılan çalışmalarda gösterilmiştir. Bu hücresel yönelişte mezenkimal kök hücrelerin içerisine transfer edilecek olan ve tümör hücresini öldürücü etkisini artırmada önemli rol oynayan bir takım genler de tedavide yeni bir yaklaşım olarak ortaya çıkmaktadır. TNF ailesinin bir üyesi olan TRAIL; kanser hücrelerindeki apoptozu indüklemesi ve normal hücreleri etkilememesi yönünden avantaj sağlamaktadır. Fakat birçok kanser türünde TRAIL?a karşı bir direnç gözlenmektedir. Bu dirençte apoptoz inhibitor protein (IAP) ailesi önemli rol oynamaktadır.Bu çalışmada, yağ doku kökenli insan mezenkimal kök hücreleri (MKH) ile SK-NAS nöroblastoma kanser hücreleri kullanıldı ve TRAIL vektörü mezenkimal kök hücrelere, shXIAP vektörü de kanser hücrelerine transfeksiyon solüsyonları ve Amaxa Nuclefactor 4D (Lonza) cihazı ile transfekte edildi. Kontrol grubu olarak fibroblast hücreleri kullanıldı. Genetik olarak modifiye edilmiş MKH?ler ile SK-N-AS hücreleri 24 saat olarak ko-kültüre edildi. İnkübasyonların ardından nöroblastoma hücrelerinin canlılığı flow sitometride Annexin V/PI yöntemiyle test edildi. SK-N-AS hücrelerinde NF-?B, MEK1, JNK 1/3, Akt 1/2/3 sinyal yolağı analizleri AlphaScreen (Perkin Elmer) teknolojisiyle ölçüldü.Çalışmaların sonuçları genetik olarak TRAIL ekspresyonu artırılmış mezenkimal kök hücrelerin nöroblastoma hücreleri üzerinde apoptozu indükleyerek hücre canlılığını etkilediğini ve nöroblastoma hücrelerinin proliferasyonunu inhibe ettiğini göstermektedir. NF-?B ve diğer sinyal yolaklarının da bu süreçte etkin rol oynadığı bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: Nöroblastoma, Mezenkimal Kök Hücre, TRAIL, XIAP

Abstract:
Neuroblastoma (NB) is the most common solid cancer in childhood and recently the usage of stem cells brings a new aspect for the effective therapy. The stem cells are present in almost every tissue and are useful vehicle for cancer therapy since they can be loaded with antitumor agents. In this direction, TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is a potent inducer of apoptosis in cancer cells which can be inhibited by Xlinked inhibitor of apoptosis protein (XIAP). In this study, human mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated from human adipose tissue and characterized. The TRAIL gene vector were transfected to MSCs and shXIAP plasmid were transfected to SK-N-AS cells (which is an aggressive NB cell line) by Lipofectamine 2000 reagent and Amaxa Nuclefactor 4D. A GFP transfected group and fibroblast cells were used as control. These genetically modified MSCs and fibroblasts were co-cultured with SK-N-AS cells for 24 hours. Thereafter cell survival of neuroblastoma cells were determined with flow cytometry analysis. For the evaluation of the NF-?B, MEK1, JNK 1/3 and Akt 1/2/3 signal pathways related to SK-N-AS cells by AlphaScreen Technology (Perkin Elmer). The results showed that genetically modified MSCs secreting TRAIL reduce the cell survival of cancer cells by inducing apoptosis and inhibiting the proliferation. By demonstrated that XIAP inhibition sensitizes neuroblastoma cells for TRAIL-induced apoptosis and the signal pathways as NF-?B and others plays a critical role in this process.Keywords: Neuroblastoma, Mesenchymal Stem Cell, TRAIL, XIAP