Viseral leishmaniasis sırasında dalakta gözlemlenen immünopatolojide matriks metalloproteinaz-9 (JELATiNAZ B) enzim etkisinin deneysel hayvan modeli kullanılarak araştırılması.
Investigation of the role of matrix metalloproteinase-9 (Gelatinase B) enzyme in the spleen during the course of experimental visceral leishmaniasis.
Yazar: PINAR YURDAKUL
Danışman: PROF. SİBEL ERGÜVEN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Matriks metalloproteinaz (MMP) enzimleri, ekstraselüler kurşun bağımlı proteinazlar olup, normal fizyolojik rollerinin yanı sıra, immün yanıtta da rol oynamaktadırlar. Birçok MMP'nin, bozuk, artmış ya da azalmış ekspresyonları immünopatolojik durumlarla ilişkilendirilmiştir. Özellikle MMP-9 ve farklı enfeksiyon hastalıklarındaki immünomodülatör rolü uzun zamandır bilinmektedir. Deneysel viseral leishmaniasis enfeksiyonlarında dalak kronik enfeksiyon bölgesi olup, splenomegali ile seyreden ileri düzey yapısal yeniden şekillenme tipiktir. Artmış TNF- ? , bu değişikliklere neden olan temel molekül olarak tanımlanmıştır. Son yıllarda MMP-9'un artmış ya da düzensiz TNF- ? ekspresyon düzeyleri ile seyreden başka immünopatolojilerde de rol oynadığı ispatlanmıştır. Bu çalışmanın amacı, L.donovani enfeksiyonu sırasında bu enzimin hücresel kökenini araştırmak ve MMP-9 ekspresyonunun viseral leishmaniasis enfeksiyonu sırasında da TNF- ? tarafından regüle edilip edilmediğinin ortaya konmasıdır. Enfekte ve sağlıklı C57BL/6 fare dalaklarının immünohistokimyasal analizlerinde, MMP-9 ekspresyonunun kırmızı pulpada yer alan nötrofillerle sınırlı olduğu gözlenmiştir. In situ zimografi analizinde jelatinolitik aktivite nötrofilik infiltrasyonun olduğu bölgede saptanmıştır. Enfekte ve sağlıklı hayvanlardan izole edilen dalak hücrelerinin akım sitometri analizi de GR-1 (+) nötrofillerde MMP-9 enzim ekspresyonu olduğunu doğrulamıştır. Ayrıca GR-1 (+) nötrofillerde MMP-9 enzim ekspresyonu enfekte farelerden elde edilen dalaklarda anti TNF- ? 'ya bağlı biçimde azalma göstermiştir.

Abstract:
Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of extracellular zinc dependent proteases originally described as the enzymes that are able to degrade extracellular matrix components, playing an important role in normal immune response. Aberrant regulation of MMPs have also been well documented in immune-mediated pathologies. In particular, MMP-9 and its immunomodulatory role in infections has long been acknowledged. During the course of experimental visceral leishmaniasis, spleen is the site of chronic infection, displaying splenomegaly and extensive architectural remodelling. Excess TNF- ? alpha has been implicated as the central mechanism mediating many of these changes. As MMP-9 has recently been implicated in other immune pathologies in which excess or misregulated levels of TNF- ? occur, we sought here to determine the cellular sites of MMP-9 expression in the spleen of mice infected with L. donovani and whether TNF- ? played a role in MMP-9 regulation during this infection. Immunohistological analysis revealed MMP-9 expression by neutrophils within the red pulp in both naïve and infected C57BL/6 mice. Gelatinolytic activity, as determined by in situ zymography confirmed that most active enzyme activity was distributed in a manner consistent with expression by neutrophils. Flow cytometric analysis of spleen cells from both naïve and infected mice confirmed expression of MMP-9 by GR-1 (+) neutrophils. Furthermore, MMP-9 expression in GR-1 (+) neutrophils from infected mice was significantly reduced in a TNF- ? dependent manner.