Plasental trofoblast hücre serilerinde PKR kinaz aktivasyonunun oksidatif stres üzerine etkisi
The effect of PKR kinase activation on oxidative stress response in placental trophoblast cell
Yazar: RAMAZAN KARAYEL
Danışman: PROF. DR. ABDULLAH YALÇIN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Oksidatif stres = Oxidative stress ; Plasenta = Placenta ; Protein kinazlar = Protein kinases ; RNA = RNA ; Trofoblastlar = Trophoblasts

Özet:
Amaç: Çalışmada plasenta trofoblast hücrelerine poly(I:C) ve LPS verilerek PKR
aktivasyonunu uyarabilme kapasitelerinin olup olmadığı amaçlanmıştır. Plasenta trofoblast
hücrelerinde gerçekleşen PKR aktivasyonunun oksidatif stres üzerindeki etkilerinin olup
olmadığı ve PKR aktivasyonu ile oksidatif stres arasındaki bağlantının tespitinin yapılması
amaçlanmıştır. PKR aktivasyonundan dolayı meydana gelen ROS değişimlerine uygulanan
antioksidan maddelerin ROS değişimlerini olan etkisinin tespit edilmesi amaçlanmıştır.
Metot: İlk aşamada hücre kültürü yöntemi ile plasental bewo hücre hatları çoğaltıldı.
Çalışmada 6 farklı grupluk petri kabında hücreler oluşturuldu. İlk grup kontrol grubu olarak
ayrıldı. Dördüncü grup, beşinci grup ve altıncı gruba 50 ul/ml poly(I:C) ve 500 ng/ml LPS
verilerek 24 saat inkübasyona bırakıldı. Plasenta trofoblast hücrelerindeki PKR
aktivasyonunun tespiti için western blot tekniği uygulandı. Hücrelerde PKR aktivasyonu
sonucun da gerçekleşen oksidatif stres belirteçleri ELISA yöntemi ile tespit edildi. İkinci
aşamada gruplara antioksidan madde olarak askorbik asit ve glutatyon uygulandı. İkinci
gruba 100 uM askorbik asit verildi. Üçüncü gruba 24 uM glutatyon verildi. Beşinci ve
altıncı gruplara 100 uM askorbik asit ve 24 uM glutatyon verilerek 24 saat inkübasyona
bırakıldı. Antioksidan maddeler verilerek oksidatif stres parametrelerindeki değişimler
ELISA yöntemi ile tespit edildi. Hücrelerdeki ROS' ta meydana değişimler akış sitometresi
ile ölçüldü.
Bulgular: İlk aşamada hücrelere uygulanan poly(I:C) ve LPS'nin PKR aktivasyonunu
gerçekleştiği western blot analizinde tespit edildi. PKR aktivasyonuna bağlı olarak oksidatif
stres belirteçlerinde anlamlı değişimler meydana geldi. Gruplara uyguladığımız antioksidan
maddeler oksidatif stres belirteç değişimlerini etkiledi. PKR aktivasyonu ROS u arttırırken
antioksidan maddeler ROS u azalttı.
Sonuç: PKR aktivasyonu oksidatif stresi arttırdı. Uygulanan antioksidan maddeler oksidatif
stresi azaltırken PKR aktivasyonun etkilerini de azalttı. Çalışmada PKR aktivasyonu ile
oksidatif stresin bağlantılı olduğu ve hücrelerdeki oksidatif stresin PKR aktivasyonuyla ile
gerçekleştiğini gösterdi.
Anahtar Kelimeler: PKR Aktivasyonu, Oksidatif Stres, ROS, Askorbik Asit, Glutatyon

Abstract:
Objective: In this study, it was aimed whether they have the capacity to stimulate PKR
activation by giving poly(I:C) and LPS to placental trophoblast cells. It is aimed to
determine whether PKR activation in placental trophoblast cells has effects on oxidative
stress and to determine the connection between PKR activation and oxidative stress. It is
aimed to determine the effect of antioxidant substances applied on ROS changes due to
PKR activation on ROS changes
Method: In the first stage, placental bewo cell lines were propagated by cell culture
method.In the study, cells were created in petri dishes of 6 different groups. The first group
was assigned as the control group. The fourth group, the fifth group and the sixth group
were given 50 µl/ml poly(I:C) and 500 ng/ml LPS and incubated for 24 hours. Western blot
technique was applied to detect PKR activation in placental trophoblast cells. Oxidative
stress markers that occur as a result of PKR activation in cells were determined by ELISA
method. In the second stage, ascorbic acid and glutathione were applied to the groups as
antioxidant substances. The second group was given 100 µM ascorbic acid. The third group
was given 24 µM glutathione. Fifth and sixth groups were given 100 µM ascorbic acid and
24 µM glutathione and incubated for 24 hours. Changes in oxidative stress parameters were
determined by ELISA method by giving antioxidant substances. Changes in ROS in cells
were measured by flow cytometry.
Results: It was determined in western blot analysis that PKR activation of poly(I:C) and
LPS applied to the cells in the first stage occurred. Significant changes occurred in oxidative
stress markers depending on PKR activation. The antioxidant substances we applied to the
groups affected the oxidative stress marker changes. While PKR activation increased ROS,
antioxidant substances decreased ROS.
Conclusion: PKR activation increased oxidative stress. While the applied antioxidant
substances reduced oxidative stress, they also reduced the effects of PKR activation. The
study showed that oxidative stress is associated with PKR activation and that oxidative
stress in cells occurs with PKR activation.
Keywords: PKR Activation, Oxidative Stress, ROS, Ascorbic Acid, Glutathione