Mezenkimal kök hücrede immünomodulatuar etkinin akım sitometrik ve serolojik olarak araştırılması
A research of immunomodulatory effect on mesenchymal stem cells by flow cytometry and serology
Yazar: SAİDE OLGA BAYRAKTAROĞLU
Danışman: DOÇ. DR. H. İLGEN ŞAŞMAZ
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Pediatrik Hematoloji-Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kök hücreler = Stem cells ; İmmünofenotip tayini = Immunophenotyping

Özet:
Amaç: Fibroblast benzeri, yapışma özelliği olan mezenkimal kök hücreler, kemik, kıkırdak ve yağ dokularına farklılaşabilirler. İn vitro ortamda çoğaltıldıklarında, tedavi boyutunda ya da araştırma amaçlı kullanılabilirler. Migrasyon ve bir çok organa yerleşme özellikleri, pek çok hayvan çalışmalarında ve insanlarda organ nakillerinde gösterilmiştir. Bunlara ek olarak, immünomodulatuar özellikleri ve hematopoetik kök hücreleri destekleyici özellikleri de bulunan MKH'lerin otoimmün hastalıklar ve organ nakilleri sonrasında ortaya çıkan doku reddi durumunun tedavisinde kullanımı gündeme gelmiştir. Bu çalışmada, sağlıklı farelere transplante edilen mezenkimal kök hücrelerin lenfosit subgrupları ve bazı sitokinler üzerine olan etkilerinin incelenmesi hedeflenmiştir. Gereç ve Yöntem: Fare kemik iliğinden elde edilen hücreler laboratuar ortamında hücre kültürü yöntemiyle mezenkimal kök hücrelere dönüştürüldü ve sağlıklı farelere transplante edildi. Transplantasyon öncesi ve sonrası, CD3, CD4, CD19, CD34 ve CD45 lenfosit subgrupları düzeylerine akım sitometri ile, IL-2, IL-3, IL-10 ve IL-15 düzeyleri ise ELİSA yöntemiyle çalışıldı. Çalışmada genç ve sağlıklı 20 fare kullanıldı. Bu farelerden transplantasyon öncesi ve sonrasında periferik kan örnekleri toplandı ve analizler yapıldı.Sonuç: MKH transplantasyonu öncesi ve MKH transplantasyonu sonrası yapılan karşılaştırmada, lenfosit altgruplarından CD3 (p?0,0001), CD45 (p?0,001) ve CD19 (p?0,05) değerlerinde transplantasyon öncesi ve sonrası arasında anlamlı farklılık bulunurken, CD4 (p?0,05) ve CD34 (p?0,05) değerlerinde ise herhangi bir farklılığa rastlanmadı. MKH transplantasyonu öncesi ve SF infüzyonu sonrası kontrol grubu arasında yapılan karşılaştırmada, lenfosit altgruplarından CD45 (p?0,0001) ve CD19 değerinde (p?0,05) anlamlı farklılık saptanırken, CD3 (p?0,05), CD4 (p?0,05) ve CD34 (p?0,05) değerlerinde ise herhangi bir anlamlı farklılığa rastlanmadı. MKH transplantasonu sonrası IL-3 ve IL-15 düzeyleri arasında anlamlı bir ilişki (p?0,0001) saptanırken, IL-10 ve IL-15 düzeyleri arasında zayıf bir ilişki (p?0,05) saptandı. SF infüzyonu sonrası kontrol grubu olarak kabul edilen farelerden elde edilen örneklerle, MKH transplantasyonu sonrası elde edilen örneklerin karşılaştırmasında; IL-10 (p?0,05) ve IL-2 (p?0,05) düzeylerinde anlamlı bir fark bulunmazken, IL-15 (p?0,001) ve IL-3 düzeyinde (p?0,05) ise istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulundu. Bu deneysel çalışmada elde edilen sonuçlarla, sağlıklı farelere MKH'ler ile yapılan transplantasyon sonrası, MKH' lerin immünomodulatuar etkilerinin neden olabileceği düşünülen bazı immün farklılıklar gösterilmeye çalışılmıştır.

Abstract:
Aim: Fibroblast-like, adherent mesenchymal stem cells can differentiate to bone, cartilage and adipose tissues. They can be used for research or treatment purposes at the in vitro proliferations. Their properties of migration and establishment to several organs were shown in numerous animal and human organ transports. In addition to those, they have immunomodulatory properties and hematopoetic stem cell supportive activities. They were acquired currency in the treatments of tissue reject after autoimmune diseases and organ transports. The most successful results with mesenchymal stem cells were obtained at GVHD. At this study, the effects of lymphocyte subgroups and some cytokines on healthy mice which are mesenchymal stem cell transplanted were aimed to study.Patients and Methods: Mouse bone marrow stem cells were converted to mesenchymal stem cells by cell culturing method at the laboratory. CD3, CD4, CD19, CD34 and CD45 lymphocyte subgroups were studied with flow cytometry and IL-2, IL-3, IL10 and IL-15 levels were operated by ELISA method before and after the transplantation. 20 young and healthy mice were used at the study. Peripheric blood samples were obtained and analyzed before and after the transplantation.Results: At the comparison between before and after MSC transplantation, there was a significant difference at CD3 (p?0,0001) and CD45 (p?0,001), CD19 (p?0,05) levels, but there was no significant difference at CD4 (p?0,05) and CD34 (p?0,05). At the comparison between before MSC transplantation and normal saline infusion control group, there was a significant difference at CD45 (p?0,0001) and CD19 (p?0,05) levels, but there was no significant difference at CD3 (p?0,05), CD4 (p?0,05) and CD34 (p?0,05) levels. After MSC transplantation, there was a significant relation between IL-3 and IL-15 levels (p?0,0001) and there was a weak relation between IL-10 and IL-15 levels (p?0,05). At the comparision between normal saline infusion control group and after MSC transplantation, there was no significant difference at IL-10 (p?0,05) and IL-2 (p?0,05) levels, a statistically significant difference were found at IL-15 (p?0,001) and IL-3 (p?0,05) levels. By the help of the result obtained in this study, after the MSC transplantation on healthy mice, it has been shown that there might be some immune differences resulted in the immunomodulatory effects of MSCs.