Bazı antimikrobiyal peptidlerin plasmodium falciparum'a karşı etkinliğinin in vitro olarak saptanması
Detection of the in vitro activity of some antimicrobial peptides against plasmodium falciparum
Yazar: EMRAH RUH
Danışman: PROF. DR. SİBEL ERGÜVEN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Sıtma = Malaria ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
Plasmodium türlerine bağlı gelişen sıtma hastalığı günümüzde önemli bir sağlık sorunu olmaya devam etmektedir. Bu hastalığın tedavisinde kullanılan ilaçlara karşı oluşan dirençten ötürü, alternatif bileşiklerin bu parazite olan etkinliği araştırılarak, bu sorunun üstesinden gelinebileceği düşünülmektedir. Son yıllarda antimikrobiyal peptidlerin, özellikle dirençli mikroorganizmaların tedavisinde umut vaat eden alternatif moleküller olabileceği öne sürülmektedir. Bu çalışmada, sentetik yedi adet peptidin P. falciparum'a karşı in vitro etkinliği SYBR Green I ve SYBR Green II yöntemi ile araştırılmıştır. Antimikrobiyal duyarlılık testleri sonunda elde edilen SYBR Green %50 inhibitör konsantrasyon (IC50) değerleri, bu peptidlerin P. falciparum'a karşı potent etki yapabildiğini göstermiştir. Ardından, peptidlerin eritrosit membranına olan litik aktivitelerinin gösterilmesi için hemoliz deneyleri yapılmıştır. Test edilen peptidlerden dördünün hemolitik aktivite sonucu; üçünün ise eritrosit membranını geçerek doğrudan P. falciparum'a karşı etki yaptığı görülmüştür. Peptidlerin etkisinin parazitin yaşam döngüsünün hangi aşamasında gerçekleştiği, zamana bağlı etki deneyleri ile araştırılmış ve bu moleküllerin ilk 12 saat içinde hızlı sidal etki yaptığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, SYBR Green I ve SYBR Green II yöntemlerinin antimalaryal duyarlılık çalışmalarındaki etkinliği de değerlendirilmiştir. Antimikrobiyal duyarlılık testlerinde her iki yöntem ile elde edilen IC50 değerleri genel olarak uyum gösterdiği için, bu yöntemlerin parazitlerin ilaca olan genel cevabının saptanması amacı ile kullanılabileceği sonucuna varılmıştır. Zamana bağlı etki deneylerinde ise, test edilen bileşiklerin parazitin yaşam döngüsündeki özgül bir safhaya olan etkisinin araştırılması için SYBR Green II'nin daha uygun bir yöntem olduğu sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Malaria which is caused by Plasmodium species continues to be a serious health issue. Due to the occuring resistance against the drugs being used in the therapy, research of alternative compounds against those parasites is regarded as a key point for combating this problem. In recent years, antimicrobial peptides have been introduced as alternative molecules particularly in the treatment of resistant microorganisms. In this study, in vitro activities of seven synthetic peptides against P. falciparum was searched using SYBR Green I and SYBR Green II methods. SYBR Green 50% inhibitory concentration (IC50) values obtained from the antimicrobial susceptibility tests indicated potent activites of the peptides against P. falciparum. Afterwards, haemolysis assays were conducted in order to determine the lytic activities of the peptides to the erythrocyte membrane. Four out of seven synthetic peptides tested were decided to act as a result of the lytic activity, while the remaining three had direct effects on P. falciparum after crossing the erythrocyte membrane. In the last part of the study, possible stage specific effects of the peptides were inquired by the time course assays. The results showed rapid sidal effects of these peptides within the first 12 hours of the life cycle. In this research, the efficiency of SYBR Green I and SYBR Green II in the antimalarial susceptibility assays was also evaluated. Since the IC50 values of both methods obtained from the antimicrobial susceptibility assays were consistent with each other, these methods were decided to be convenient for detection of a general response from the whole parasite population. On the other hand, SYBR Green II method was thought to be more promising in terms of evaluating the stage specific effects of compounds in the time course assays.