Fungal kaynaklı heteropolisakkaritlerin bazı biyoaktivite özellikleri ile LPS indüklü BV-2 hücrelerinde antiinflamatuar potansiyelinin ölçülmesi
Investigation of some bioactivity properties and antiinflammatory potential LPS-induced in BV-2 cells of fungal heteropolysaccharides
Yazar: BERRAK ALTINSOY
Danışman: PROF. DR. GÖKÇEN YUVALI ÇELİK
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Mantarlar = Fungi ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Polisakkaritler = Polysaccharides ; İnflamasyon = Inflammation ; İnterlökin 6 = Interleukin 6

Özet:
Günümüzde doğal ürünlerin araştırılması, biyoaktif yeni kaynakların keşfedilmesi bakımından büyük önem taşımaktadır. Türkiye, coğrafik konumundan dolayı oldukça zengin bir mantar florasına sahiptir ve son yıllarda, mantarların fitokimyasal ve biyolojik aktivitelerine yönelik çalışmalar her geçen gün artmaktadır. Tez çalışmamızda, Kastamonu, Kütahya ve Muğla bölgelerinden toplanan dört yabani mantar türünden (Leucoagaricus leucothites, Roseolus roseolus, Terfezia claveryi, Tricholoma terreum) izole edilen polisakkaritlerin bazı biyolojik aktiviteleri ve LPS ile indüklenmiş BV-2 (mikroglial hücre hattı) hücrelerinde antiinflamatuar potansiyellerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Belirlenen türlerin ultrasonik banyoda soğuk su ile polisakkarit özütleri hazırlanmıştır. Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) analizlerinde fungal polisakkaritlerin monosakkarit birimleri belirlenmiştir. HPLC'de yapılan monosakkarit analizleri ile çalışılan dört mantar polisakkaritlerinin başlıca D-glukoz ve fruktoz içerdiği belirlenmiştir.
T.claveryi' nin polisakkarit özütünün fenolik bileşikler bakımından diğer üç türe göre daha zengin olduğu ve 2,2'-azinobis-(3-etilbenzotiyazolin-6-sülfonik asit (ABTS⋅) radikal katyon dekolorizasyon metoduna göre dört tür içinde en yüksek antioksidan aktiviteye sahip olduğu gözlenmiştir. 2,2-difenil-2-pikrilhidrazil hidrat (DPPH⋅) radikal süpürme metoduna göre ise polisakkarit özütlerinin hiçbirinin aktivite göstermediği görülmüştür.
Fungal polisakkaritlerin BV-2 hücrelerindeki sitotoksik etkileri MTT (3- (4,5)–dimethylthiazol-2-yl)–2,5-diphenyl tetrazolium bromide) yöntemi ile antiinflamatuar aktiviteleri ise LPS ile indüklenen BV-2 hücrelerinde araştırılmıştır. Bulgulara göre çalışılan fungal polisakkaritlerin BV-2 hücre hattında IL-6, TNF-α, COX-2 ve iNOS salınımını ve p38 ve ERK1/2 proteinlerinin ekspresyonunu azaltarak inflamasyonu baskıladığı gösterilmiştir.
Sonuç olarak, fungal polisakkaritlerin BV-2 hücrelerinde LPS ile oluşturulan inflamasyonun azaltılmasında etkili olduğu bulunmuştur.

Abstract:
Today, natural product researches are of great importance for discovering new bioactive sources. Turkey has a rich mushroom flora due to its geographical position and in recent years, phytochemical and biological activity analysis of mushrooms have been increased day by day. In our thesis study, it was aimed to investigate some biological activities and antiinflammatory potential in LPS-induced BV-2 microglial cells in polysaccharides isolated from four wild mushroom species (L.leucothites, R.roseolus, T.claveryi, T.terreum) collected from Kastamonu, Kütahya and Muğla regions. 
Firstly, the selected species were extracted by ultrasonic bath with cold water. Monosaccharide units of fungal polysaccharides were identified by High Pressure Liquid Chromatography (HPLC). The results of monosaccharide analysis in HPLC showed that polysaccharides of studied four mushrooms composed of mainly glucose and fructose.
The polysaccharide extract of T.claveryi were found as rich in phenolic compounds when compared the other three species and showed the highest antioxidant activity, according to the 2,2'-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS⋅) radical cation decolorisation method. It was seen that according to 2,2-diphenyl- 2-picrylhydrazil hydrate (DPPH⋅) radical scavenging activity method, polysaccharide extracts do not have activity.
Cytotoxic effects of fungal polysachharides were analysed by MTT (3-(4,5)–dimethylthiazol-2-yl) –2,5- diphenyl tetrazolium bromide) in BV-2 (microglial cell line) cells and antiinflammatory activities were determined in LPS-induced BV-2 cells. According to findings, it has been shown that fungal polysaccharides supress inflammation by reducing emissions of IL-6, TNF-α, COX-2, iNOS and expression of p38 and ERK1/2 in BV-2 cell line.
As a result, fungal polysaccharides were found to be efficient in reducing inflammation induced by LPS in BV-2 cells.