Deneysel kolon kanser modeli oluşturulan ratlarda dialil disülfit uygulamasının mir34a ve apoptoz mekanizması üzerine etkisi
The effect of diallyl disulfide administration on mir34a and apoptosis mechanism in rats with experimental colon cancer models
Yazar: BEYZA SUVARIKLI ALAN
Danışman: PROF. DR. ZAFER BULUT
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veteriner Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Kanser; anormal hücre oluşumu ve büyümesi ile vücut fonksiyonlarında değişikliğe sebep olan bir hastalıktır. Kansere kontrolsüz hücre çoğalmasının neden olduğu bilinmesine rağmen, hastalığın ana nedeni tam olarak hala anlaşılamamıştır. Kolon kanseri de dünyada oldukça yaygın olarak görülen kanser türleri arasındadır. Bu yüzden azoksimetan ile deneysel olarak ratlarda kolon kanseri oluşturmak insanlarda kolorektal karsinogenezin sürecini ortaya koymada çok önemli katkı sağlamaktadır. Ayrıca miRNA'ların, hastalıkların erken teşhisinde ve tedavisinde yol gösterebileceği düşüncesiyle çok sayıda araştırma yapılmaktadır. Özellikle geç dönemde klinik belirti veren kanserleri erken teşhis edebilmek için miRNA'ların araştırma alanı günümüzde oldukça fazladır. Bu çalışmada ratlarda deneysel kolon kanser modeli oluşturulup ekspresyon farklılıkları incelenmiştir. Ayrıca yaptığımız çalışmada sarımsağın yağda çözünen bileşenlerinden biri olan dialil disülfit'in (DADS) etkinliğide değerlendirilmiştir.
Çalışmada kullanılan 60 adet erkek Winstar albino rat her grupta 12 adet olacak şekilde 5 gruba ayrıldı: Sağlıklı kontrol (K), kanser kontrol (AOM), sağlıklı dialil disülfit (K + DADS), kanser DADS (AOM + DADS), Mısır yağı (K + mısır yağı). Kanser gruplarının tamamına ilk iki hafta azoksimetan (AOM, 15 mg/kg, sc, 1 hafta ara ile 2 defa) uygulandı. DADS gruplarına 15. haftadan itibaren 50 mg/kg DADS (oral) 3 hafta (haftada 5 gün) süresince verildi. Mısır yağı grubuna da 15. haftadan itibaren 50 mg/kg (oral) 3 hafta (haftada 5 gün) süresince mısır yağı verildi. 18 haftanın sonunda tüm ratlar ötanazi edilerek doku örnekleri alındı. Çalışmada Real Time Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PZR) ile Bcl-2 ve Bax, genlerinin düzeyleri ile miR 34a ekspresyonu ayrıca Elisa ile Bax, Bcl proteini ve MDA seviyesi belirlendi. Ayrıca kolon dokusunda histopatolojik olarak anormal kript odakları (ACF) oluşumu belirlendi. 
Yapılan çalışmanın sonucunda gruplar arasında MDA seviyesinde istatistiki olarak fark gözlenmedi (P>0.05). Kontrol grubuyla kıyaslandığında Bcl mRNA ve protein seviyesinde gruplar arasında (P>0.05) herhangi bir fark olmadığı, Bax mRNA seviyesinde kontrol grubuna kıyasla diğer gruplarda yükselme olduğu (P<0.05), Bax protein seviyesinde ise istatistiksel fark olmadığı (P>0.05) gözlemlendi. miR34a ekspresyonunda kontrole göre DADS ve AOM+DADS grubunda anlamlı yükselme (P<0.05) olduğu tespit edilmiştir. Sonuç olarak primer tümörün yerleşimi, tümörün boyutu, hastalığın ilerlemesine bağlı Bcl-2 ve Bax ekspresyon sonuçlarının değişiklik gösterebileceği DADS uygulamasının apoptoza götürebileceği kanısına varıldı.

Abstract:
Cancer; It is a disease that causes changes in body functions with abnormal cell formation and growth. Although it is known that cancer is caused by uncontrolled cell proliferation, the main cause of the disease is still not fully understood. Colon cancer is one of the most common types of cancer in the world. Therefore, experimentally inducing colon cancer in rats with azoxymethane makes a very important contribution to revealing the process of colorectal carcinogenesis in humans. In addition, many studies are conducted with the idea that miRNAs can lead to the early diagnosis and treatment of diseases. The research area of miRNAs is quite high today, especially in order to detect cancers that show clinical signs in the late period. In this study, an experimental colon cancer model was created in rats and expression differences were examined. In addition, the effectiveness of diallyl disulfide (DADS), one of the oil-soluble components of garlic, was also evaluated in our study.
60 male Winstar albino rats used in the study were divided into 5 groups, 12 in each group: healthy control (K), cancer control (AOM), healthy diallyl disulfide (K + DADS), cancer DADS (AOM + DADS), corn oil (K + corn oil). Azoxymethane (AOM, 15 mg/kg, sc, 2 times with 1 week interval) was administered to all cancer groups for the first two weeks. DADS groups were given 50 mg/kg DADS (oral) for 3 weeks (5 days a week) from week 15. Corn oil group was given 50 mg/kg (oral) corn oil for 3 weeks (5 days a week) starting from the 15th week. At the end of 18 weeks, all rats were euthanized and tissue samples were taken. In the study, the levels of Bcl-2 and Bax genes and miR34a expression were determined by Real Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), as well as the level of Bax, Bcl protein and MDA with Elisa. In addition, abnormal crypt foci (ACF) formation was determined histopathologically in the colon tissue.
As a result of the study, no statistical difference was observed in MDA levels between the groups (P>0.05). It was observed that there was no difference in Bcl mRNA and protein levels between the groups (P>0.05) when compared to the control group, there was an increase in Bax mRNA level in other groups compared to the control group (P<0.05), and there was no statistical difference in Bax protein level (P>0.05). MiR 34a expression was found to be significantly increased in the DADS and AOM+DADS groups compared to the control (P<0.05). As a result, it was concluded that the location of the primary tumor, the size of the tumor, the results of Bcl-2 and Bax expression may vary depending on the progression of the disease, and DADS application may lead to apoptosis.