Meme kanseri hücre hattında tamoksifen ve vitamin d kombinasyonun apoptoz ve hücre döngüsü üzerine etkilerinin incelenmesi
The investigation of the effects of tamoxifen and vitamin d combination on apoptosis and cell cycle in breast cancer cell line
Yazar: DERYA YETKİN
Danışman: PROF. DR. EBRU BALLI
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre döngüsü = Cell cycle ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Tamoksifen = Tamoxifen ; Vitamin D = Vitamin D

Özet:
Meme kanseri, kadınlarda görülen kanser vakalarının ilk sıralarında yer almaktadır. Meme kanseri teşhisinde hücrelerin büyük bir çoğunluğu östrojen reseptör alfa (ER α+) pozitiftir ve bu tümörlerin büyümeleri östrojene bağlı olarak seyreder. Tamoksifen meme kanseri hastalarında destekleyici tedavi yöntemi olarak kullanılmaktadır. Tamoksifen ER'ye bağlanarak reseptör konformasyonunu değiştirir ve ko-aktivatörlerin bağlanmasını önleyerek transkripsiyonu inhibe eder. Vitamin D3, hormon benzeri fonksiyonları olan bir grup steroldür ve hücre proliferasyon ve diferransiyasyon yolağını düzenler. D vitamini Reseptörü (VDR) malin meme, prostat gibi birçok tümör kökenli hücre hatlarında bulunmaktadır ve vitamin D'nin kanser hücrelerinde anti-proliferatif etkisi olduğu düşünülmektedir. Bu çalışma anti-proliferatif etkisi olduğu düşünülen tamoksifen ve vitamin D'nin farklı konsantrasyonlarının uygulanacağı meme kanseri hücre hattındaki olası anti kanserojenik etkiyi incelemeyi amaçlamaktadır. Deneyler xCELLigence cihazı kullanılarak gerçekleştirildi. Bu sistemde, hücre proliferasyonu izlendi ve ilaç-aracılı sitotoksisitenin zamana bağlı ölçümü yapıldı. Tamoksifen ve vitamin D'nin farklı konsantrasyonları 96 saat boyunca değerlendirildi. Elde edilen veriler sonucunda kombinasyon (20 Tam+ 50 nM vit D, 20 Tam+ 100 nM vit D, 10 Tam+ 50 nM vit D, 10 Tam+ 100 nM vit D) uygulaması yapıldı. Daha sonra FACS ARIA III cihazında apoptoz ve hücre döngüsü değerlendirildi. Ayrıca p53, BcL-2 ve Bax proteinlerinin ekspresyonu qRT PCR'da incelendi. Çalışmamızda tamoksifen ve vitamin D'nin düşük konsantrasyonlarının kanser hücrelerinde proliferasyonu artırdığı, ilaç ve kombinasyon tedavisnin hücre proliferasyonunu azaltığı saptandı. Sonuç olarak, bu iki maddenin ayrı ayrı ve kombine olarak kullanıldığında kanser hücrelerinin proliferasyonunu doza ve zamana bağlı olarak etkilerken hücreyi apoptoza sürüklediği görüldü. Ayrıca kanser hücrelerinde hücre döngüsünün G0/G1 fazında hücre arrestini indüklediği ve p53, BcL-2 ve Bax protein ekspresyonunu değiştirdiği saptandı.

Abstract:
Breast cancer is one of the most common cancer cases in women. The majority of cells in the diagnosis of breast cancer are estrogen receptor alpha (ER α +) positive, and the growth of these tumors is due to estrogen. Tamoxifen is used as a supportive treatment in breast cancer patients. Tamoxifen changes receptor conformation by binding to ER and inhibits transcription by inhibiting the binding of co-activators. Vitamin D3 is a group of sterols with hormone-like functions and regulates the pathway of cell proliferation and differentiation. Vitamin D Receptor (VDR) is found in many tumor-derived cell lines, such as malignant breast, prostate, and is thought to have an anti-proliferative effect on cancer cells. This study aims to investigate the possible anti-carcinogenic effect on the breast cancer cell line where different concentrations of Tamoxifen and vitamin D, which are thought to have anti-proliferative effect, will be applied. Experiments were performed using the xCELLigence device. Cell proliferation was monitored in this system and time-dependent measurement of drug-mediated cytotoxicity was performed. Different concentrations of tamoxifen and vitamin D cells were evaluated for 96 hours. As a result of the data obtained, combination (20 Tam + 50 nM vit D, 20 Tam + 100 nM vit D, 10 Tam + 50 nM vit D, 10 Tam + 100 nM vit D) was performed. Apoptosis and cell cycle were then evaluated in FACSARIA III apparatus. Expression of p53, BcL-2 and Bax proteins was also examined by qRT PCR. In our study, low concentrations of tamoxifen and vitamin D increased proliferation in cancer cells and decreased cell proliferation by drug and combination therapy. As a result, when these two substances were used separately and in combination, it was observed that it influenced the proliferation of cancer cells depending on the dose and time, while dragging the cell to apoptosis. In addition, it was found that cell cycle induces cell arrest in G0 / G1 phase and changes p53, BcL-2 and Bax protein expression in cancer cells.