Leishmania tropica ile enfekte makrofaj hücre hattında Hypericin etken maddesinin apoptotik ve sitotoksik etkilerinin araştırılması
Investigation of apoptotic and cytotoxic effects of Hypericin in Leishmania tropica infected macrophage cell line
Yazar: ŞİRİN SAHRA CEYLAN
Danışman: PROF. DR. NOGAY GİRGİNKARDEŞLER
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı / Parazitoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Parazitoloji = Parasitology

Özet:
Amaç: Araştırmamızda Hypericin [hiperisin] etken maddesinin, kutanöz leishmaniasis etkeni olan Leishmania tropica üzerine in vitro (promastigotları) ve ex vivo (amastigotları) antileishmanial etkinliğinin araştırılması sonrasında L. tropica ile enfekte THP-1 makrofaj hücrelerine apoptoz mekanizmasında aktif gen bölgelerinin ekspresyon seviyeleri üzerine olan etkilerinin qPCR ile araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Hiperisinin CelltTiter-glo ve hemositometri yöntemleri kullanılarak L. tropica promastigotlarına karşı in vitro antileishmanial aktivitesi (IC50promastigot) hesaplanmıştır. Giemsa boyama yöntemiyle ise hiperisinin L. tropica amastigotlarına karşı ex vivo antileishmanial aktivitesi belirlenmiştir (EC50amastigot). Belirlenen IC50promastigot, EC50amastigot, CC50 değerleriyle seçicilik indeks [SI] değerleri hesaplanmıştır. Apoptoz deneyi ile hiperisinin, L. tropica ile enfekte THP-1 hücresine ait apoptoz mekanizmasında yer alan 88 adet genin ekspresyon seviyeleri qPCR ile araştırılarak, gen seviyelerine olan etkileri incelenmiştir.   
Bulgular: Hiperisinin 24. 48. ve 72. saatlerdeki CC50 değerleri sırasıyla 40,37 - 37,69 - 30,03 µmol olarak bulunmuştur. L. tropica promastigotları üzerine in vitro antileishmanial aktivitesi (IC50promastigot) sırasıyla 9,761 - 9,576 - 6,994 µmol, L. tropica amastigotları üzerine ex vivo antileishmanial aktivite (EC50amastigot) sırasıyla 25,23 -23,12 µmol olarak saptanmıştır. Hiperisinin L. tropica parazitinin iki formu üzerine olan SI değeri ≥1'den büyük olarak hesaplanmıştır. qPCR sonrasında gen ekspresyon seviyelerinden aşağı ve yukarı regüle edilen genler saptanmıştır.
Sonuçlar: Sonuç olarak, hiperisinin L. tropica parazitinin promastigotları ve amastigotları üzerine antileishmanial aktivite gösterdiği ve apoptoz deneyi sonrasında ise hiperisinin L. tropica parazitinin konak hücrenin apoptoz mekanizmasından kaçışını engelleyebileceği saptanmıştır. 
Anahtar Kelimeler: Hiperisin, Leishmania, Antileishmanial, Sitotoksitite, Apoptoz

Abstract:
Objective: In our study, after investigating the in-vitro and ex-vivo antileishmanial effects of hypericin on Leishmania tropica, which is the causative agent of cutaneous leishmaniasis, it was aimed to investigate the effects of active gene regions on the expression levels of active gene regions in the apoptosis mechanism of L.tropica infected THP-1 macrophage cells by qPCR.
Materials and Methods: In-vitro, antileishmanial activity (IC50promastigot) of hypericin against L.tropica promastigotes was calculated using CelltTiterglo and hemocytometry methods. The ex-vivo antileishmanial activity of hypericin against L.tropica amastigotes was determined by Giemsa staining method (EC50amastigote). Selectivity index values were calculated with the determined IC50promastigot, EC50amastigote, CC50 values. Expression levels of 88 genes involved in the apoptosis mechanism of THP-1 cells infected with L.tropica were investigated by apoptosis assay, and their effects on gene levels were investigated by qPCR.
Results: The CC50 values of hypericin at 24., 48., 72. hours were found to be 40.37-37.69-30.03 µmol, respectively. The in-vitro antileishmanial activity (IC50promastigote) on L.tropica promastigotes was 9.761-9.576-6.994 µmol, respectively, and the ex-vivo antileishmanial activity (EC50amastigote) on L.tropica amastigotes was 25.23-23.12 µmol, respectively. The SI value of hypericin on the two forms of the L.tropica parasite was calculated to be greater than ≥1. After qPCR, genes that were up- and down-regulated in gene expression levels were determined.
Conclusions: As a result, it was determined that hypericin showed antileishmanial activity on promastigotes and amastigotes of the L.tropica parasite, and after the apoptosis experiment, hypericin could prevent the escape of L.tropica parasite from the apoptosis mechanism of the host cell. 
Keywords: Hypericin, Leishmania, Antileishmanial, Cytotoxicity, Apoptosis.