Kemoterapi alan malign solid tümörlü hastalarda cryptosporidium spp'nin mikroskobik ve serolojik yöntemlerle araştırılması
Investigation of cryptosporidium spp. by microscopic and serological methods in malignant solid tumor patients receiving chemotherapy
Yazar: MEHMET KARABEY
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYŞEGÜL AKSOY GÖKMEN
İzmir Katip Çelebi Üniversitesi / İzmir Atatürk Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Diyare = Diarrhea ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Mikroskopi = Microscopy ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Seroloji = Serology ; İlaç tedavisi = Drug therapy

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: : Cryptosporidium spp. gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde gastroenterite sebep olan parazitler arasında çok önemli bir yere sahiptir. Klora dirençli olması, içme suyu arıtma süzgeçlerinden geçebilmesi ve çok az sayıdaki parazitin enfeksiyona sebep olabilmesi özellikle immun sistemi baskılanmış kişilerde hayatı tehdit eden ishallere sebep olabilmekte ve su kaynaklı salgınların önemli sebebi olabilmektedir. Bu çalışmada, İKÇÜ Tıp Fakültesi Atatürk Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na; kemoterapi alan malign solid tümörlü ve ishal şikâyeti nedeniyle gönderilen dışkılarda, Cryptosporidium ookistleri kinyoun asit-fast boyama yöntemiyle aranmış ve Cryptosporidium spp.'nin. antijenleri ELISA yöntemiyle araştırılmıştır.
MATERYAL VE METOD: Bu çalışma, İKÇÜ Tıp Fakültesi Atatürk Eğitim ve Araştırma Hastanesinde takip ve tedavileri yapılan 94 hastanın dışkı örnekleri ile gerçekleştirilmiştir. Dışkı örneklerinin bir kısmı eppendorflara alınarak -40 °C'de ELISA testleri için saklanmış, diğer kısmı ise bekletilmeden makroskobik ve mikroskobik incelemeleri yapılmıştır. Formol-etil asetat çöktürme yöntemi kullanılarak çoklaştırılan ve AFB Kinyoun Kit (Cold Method) ile boyanan örneklerde x100 objektifte ookistler aranmıştır. –80 °C'de saklanan dışkı örneklerinde Cryptosporidium (RIDASCREENR, C 1201 r-biopharm) ELISA kiti kullanılarak C.parvum ve C.hominis antijenleri aranmıştır.
BULGULAR VE SONUÇ: Çalışmamızda, yaşları 19 ile 85 arasında 94 (60'ı erkek, 34'ü kadın) hastanın dışkıları incelenmiştir. Yaş ortalamaları 64,11 ± 1,58 olarak saptanmıştır. 94 fekal örneğin 2'sinde kinyoun asit-fast boyama yöntemi ile pozitiflik saptanmıştır. Serolojik yöntemlerden ELISA yöntemi ile 94 örneğinin 5'inde (%5.3) pozitiflik saptanmıştır. Kinyoun asit-fast boyama ile Cryptosporidium spp. pozitif tespit edilen 2 hastada (% 2.1) ELISA yöntemi ile de pozitif sonuç alınmıştır. Kinyoun asit -fast boyama yönteminin duyarlılığı %40, özgüllüğü de %100; ELISA yönteminin duyarlılığı %100 özgüllüğü de %96,7 olarak tespit edilmiştir. ELISA testlerinin maliyetinin yüksek olmasına rağmen tanımlamadaki zorluklara yardımcı olacağı ve cryptosporidiosis tanısında duyarlılığı arttıracağı kanaatine varılmıştır.

Anahtar Kelimeler: Crptosporodium, solid organ tümörü, ishal, kinyoun asit-fast boyama, ELISA

Abstract:
Introduction and Aim: Cryptosporidium spp. has a very important place among parasites that cause gastroenteritis in developed and developing countries. Cryptosporidium spp. can be a major cause of water-borne outbreaks and life-threatening diarrhea (especially in immunocompromised people) with its chlorine-resistant, the ability to pass through drinking water treatment filters and causing infections even with a small amount of parasites. In this study, stool specimens from patients with malignant solid tumors and diarrhea who received chemotherapy that sends to IKCU Faculty of Medical Atatürk Education And Research Hospital Medical Microbiology Laboratory; were investigated for Cryptosporidium oocysts by kinyoun acid-fast staining method and Cryptosporidium spp. antigens by ELISA methods.
Material and Methods: This study was carried out with stool samples of 94 patients who were monitoring and treated in Izmir Katip Çelebi University, Faculty of Medicine Atatürk Training and Research Hospital. Some of the stool samples were taken to eppendorf and stored at -40 ° C for further analysis, while the other part was macroscopically and microscopically examined. Oocysts were searched on x100 lens in samples which were multiplied using formol-ethyl acetate precipitation method and stained with AFB Kinyoun Kit (Cold Method). C.parvum and C.hominis antigens were searched for stool samples that stored at –80 ° C using Cryptosporidium (RIDASCREENR, C 1201 r-biopharm) ELISA kit.
Results and Conclusion: In this study, feces of 94 patients (60 male, 34 female) aged 19 to 85 years were examined. The mean age was calculated as 64.11 ± 1.58. Two of 94 (2.1 %) fecal samples were detected as positive by Kinyoun acid-fast staining method. According to staining results; 33 (97.1 %) of 34 female patients were detected as negative, 1 (2.9%) was positive and 59 (98.3 %) of 60 male patients were detected as negative and 1 (1.7 %) was positive. Serological examinations revealed positivity in 5 out of 94 samples (5.3 %) by ELISA method. The sensitivity and specificity of the kinyoun acid fast staining method were 40 % and 100 %, respectively. On the other hand, the sensitivity of ELISA method was 100% and the specificity was 96.7   %. Although the cost of ELISA tests is high, it is believed that it will help to identify difficulties and increase sensitivity in the diagnosis of cryptosporidiosis. Since Cryptosporidium spp. is associated with life-threatening diarrhea, hygiene of food and drinking waters of risk groups for cryptosporidiosis should be considered. In addition, cryptosporidiosis should not be ignored when the risk groups present to the clinic with long-term diarrhea.

Keywords: Cryptosporidium, solid tumor patients,  diarrhea, kinyoun acid-fast staining, ELISA