Hypericum calycinum L. bitkisinin in vitro antienflamatuvar etkilerinin araştırılması
Investigation of in vitro anti-inflammatory effects of hypericum calycinum L.
Yazar: SÜMEYYE ÇAPA
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ İREM ATAY BALKAN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakognozi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Antiinflamatuar ajanlar = Anti inflammatory agents ; Farmakognozi = Pharmacognosy ; Hypericaceae = Hypericaceae ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Amaç: Hypericum türleri geleneksel olarak romatizmal hastalıklarda kullanılmaktadır. Buna rağmen, literatürde H. calycinum üzerinde az sayıda çalışmaya rastlanmıştır. Bu nedenle bitkinin bazı enflamatuvar parametreler üzerindeki etkilerinin in vitro yöntemlerle araştırılması ve fitokimyasal içeriğinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: H. calycinum bitkisinin toprak üstü kısımlarından metanol ekstresi ve bu ekstreden sıvı-sıvı ekstraksiyonu yöntemiyle altekstreler (n-hekzan, diklorometan, etil asetat, n-butanol, kalan su) hazırlanmıştır. Altekstrelerin toksik olmayan konsantrasyonları WST-1 yöntemi ile belirlendikten sonra; lipopolisakkarit ile uyarılmış Raw 264.7 hücrelerinin nitrik oksit (NO) seviyeleri üzerindeki etkileri Griess, sitokinler (TNF-α/IL-6) ve PGE2 seviyeleri üzerindeki etkileri ELISA yöntemiyle belirlenmiştir. Ayrıca, 15-LOX enzim inhibitörü etkiler ile toplam fenolik/flavanoit madde miktarları değerlendirilmiştir. Fenolik bileşikler ve yağ asidi bileşenleri sırasıyla yüksek basınçlı sıvı kromatografisi ve gaz kromatografisi kütle spektrometresi ile belirlenmiştir.
Bulgular: Bitkinin n-hekzan altekstresi (100µg/mL) NO, TNF-α, IL-6 seviyelerini sırasıyla %95,11, %63,50, %93,90 oranında azaltmıştır. Bitkinin diklorometan altekstresi (50µg/mL), NO (%48,23), IL-6 seviyelerini (%74,44) azaltmıştır. İki altekstre de PGE2 üretimini %40'ın üzerinde azaltmıştır. Bitkinin n-BuOH altekstresi 15-LOX enzimini (100µg/mL,%28,87) inhibe etmiştir. Bitkinin EtOAc ve n-BuOH altekstreleri (100µg/mL) NO seviyelerini %31,66 ve %37,34 azaltmıştır. En yüksek toplam fenolik (333,49±4,78 mg GAE/g ekstre) ve flavanoit (101,30±7,94 mg KE/g ekstre) miktarı EtOAc altekstresinde belirlenmiştir. Altekstrelerde (EtOAc, n-BuOH) klorojenik asit tespit edilmiştir. Bitkinin n-hekzan altekstresinde majör miktarda α-linolenik asit tespit edilmiştir.
Sonuç: H. calycinum bitkisinin in vitro anti-enflamatuvar etkileri ve kimyasal bileşenleri ortaya konmuştur. Özellikle, n-hekzan ve diklorometan altekstreleri ileride gerçekleştirilecek çalışmalar için aday olabilir.

Abstract:
Aim: Hypericum species are traditionally used against rheumatismal diseases. However, there are only few studies on H. calycinum in literature. Hence, it is aimed to investigate the effects of this plant on some inflammatory parameters by in vitro methods and to evaluate its phytochemical content.
Materials and Methods: Methanol extract was prepared from aerial parts of H. calycinum. Subextracts (n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, remaining-water) were prepared by liquid-liquid extraction. After non-toxic concentrations of subextracts were determined by WST-1; effects on nitric oxide (NO) levels of lipopolysaccharide stimulated Raw 264.7 cells were determined by Griess, effects on cytokines (TNF-α/IL-6) and PGE2 levels were determined by ELISA. 15-LOX enzyme inhibitory effects, total phenolic/flavonoid contents were also evaluated. The phenolic compounds and fatty acid components were determined by high pressure liquid chromatography and gas chromatography mass spectrometry respectively.
Results: The n-hexane subextract (100µg/mL) decreased NO, TNF-α, IL-6 levels by 95.11%, 63.50%, 93.90%. The dichloromethane subextract (50µg/mL) decreased NO (48.23%) IL-6 (74.44%) levels. Both subextracts reduced PGE2 levels more than 40%. The n-BuOH subextract inhibited 15-LOX enzyme (100µg/mL,28.87%). The EtOAc and n-BuOH subextracts (100µg/mL) reduced NO levels by 31.66% and 37.34%. Highest total phenolic (333.49±4.78 mg GAE/g extract) and flavonoid (101.30±7.94 mg QE/g extract) contents were found in EtOAc subextract. Chlorogenic acid was determined in subextracts (EtOAc, n-BuOH). The major component of n-hexane subextract was α-linolenic acid.
Conclusion: The in vitro anti-inflammatory effects of H. calycinum, and its phytochemical components were revealed. Particularly, n-hexane and dichloromethane subextracts might be candidates for future studies.