Pseudomonas aeruginosa ve acinetobacter baumannii izolatlarında imipenem-edta/meropenem-edta disk yöntemi ve motifiye hodge testi ile metallo beta-laktamaz varlığının araştırılması
Investigation of metallo-beta-lactamase producing pseudomonas aeruginosa and acinetobacter baumannii isolates by imipenem-edta/meropenem-edta disk method and modified hodge test
Yazar: HATİCE ÇINAR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MERİH ŞİMŞEK
Afyonkarahisar Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Metallo beta-laktamaz (MBL)'lar aztreonam dışında karbapenemler de dahil olmak üzere tüm betalaktam grubu antibiyotikleri hidrolize ederler. Antibiyotiklerdeki direncin yayılmasını sınırlamak ve tedaviye yön vermek amacıyla karbapenem direnç tiplerinin tespit edilmesi gerekmektedir. Bu çalışmanın amacı, giderek artan imipenem ve meropenem dirençli Pseudomonas aeruginosa ve Acinetobacter baumannii klinik izolatlarında MBL üretimini iki farklı fenotipik yöntem kullanarak incelenmesidir. Karbapenem dirençli 54 A.baumannii ve 40 P.aeruginosa klinik suşlarına MBL tespiti için Kombine disk difüzyon testi(KDDT) ve Modifiye Hodge testi(MHT) uygulanmıştır. KDDT: 0.5 McFarland bakteri süspansiyonu müller hinton agara ekildi. İki imipenem diski (10μg) aralarında en az 22 mm olacak şekilde besiyeri yüzeyine yerleştirildi, imipenem disklerinden bir tanesinin üzerine 10 μl EDTA eklendi. Aynı yöntem meropenem/EDTA için de uygulandı. İmipenem ve meropenem diskleri zon çapları, EDTA'lı disklerin  zon çaplarından 7 mm'den daha az ise pozitif kabul edildi. MHT: Müller Hinton Agar besiyerine E.coli ATCC 25922 standart suşu yayıldı, meropenem 10 μg diski plağın ortasına yerleştirildi. İzolatlar imipenem diskinden perifere doğru ekildi. Duyarlılık zon çapının yonca yaprağı şeklinde bozulması durumunda test pozitif kabul edildi. Bu çalışmada, 40 P.aeruginosa suşunun 5 (%12.5)'i MHT ile, 21 (%52.5)'i imipenem/EDTA disk testi ile 23 (% 57.5)'ü meropenem/EDTA disk testi ile pozitiflik verdi. 54 A.baumannii suşunun 43 (% 84.3)'ü MHT ile, 35 (% 68.6)'i imipenem/EDTA disk testi ile 46 (% 90.2)'sı meropenem/EDTA disk testi ile pozitiflik olarak tespit edildi. Çalışmamızdaki KDDT ve MHT ile elde edilen MBL oranları ülkemizde ve yurt dışında yapılan çalışmalar ile uyumlu bulunmuştur. Sonuç olarak, antibiyotiklere karşı hızla gelişen direnç probleminin önüne geçebilmek için yöresel olarak antibiyotik duyarlılık profilleri belirlenmeli ve direnç yayılımını önlemek için MBL varlığı birden farklı yöntemle taranmalıdır. A.baumannii ve P.aeruginosa'nın etken olduğu enfeksiyonların tedavisinde antibiyotik duyarlılık test sonuçlarına göre antibiyotik reçete edilmelidir.


Anahtar Kelimeler: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Metallo beta-laktamaz

Abstract:
Metallo-beta-lactamase (MBL) hydrolyzes all betalactam group antibiotics, including carbapenems, except for aztreonam. In order to prevent the spread of antibiotic resistance and to guide the treatment, carbapenem resistance types should be determined. The aim of this study is to investigate MBL production by using two different phenotypic methods in increasing imipenem and meropenem resistant Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii clinical isolates. Combined disk diffusion (CDT) test and Modified Hodge test (MHT) were performed to detect MBL of 51 A.baumannii and 40 P.aeruginosa clinical strains with resistant to carbapenem.The CDT:0.5 McFarland bacteria suspension was plated into the Muller Hinton Agar.The two imipenem disks (10μg) were placed on the medium surface with a minimum of 22 mm between them, 10 μl of EDTA was added onto one of the imipenem disks. The same method was applied for meropenem/EDTA.The results were considered to be positive if zone diameters of imipenem and meropenem disks  were less than 7 mm from the zone diameters of EDTA disks.MHT: E.coli ATCC 25922 standard strain was spread on Müller Hinton Agar medium,10 μg of meropenem was placed in the center of the plate.Isolates were plated from the imipenem disk to the periphery. The deterioration of sensitivity zone clover leaf accepted as positive. In this study, 5 (12.5%) of 40 strains of P.aeruginosa were positive by MHT,and 21 (52.5%) were positive by imipenem/EDTA disk test and 23 (57.5%) by meropenem/EDTA disk test.43(84.3%) of 54 A.baumannii strains were detected by MHT, 35 (68.6%) were by imipenem/EDTA disk test and 46 (90.2%) were positive by meropenem/EDTA disk test. In our study,we found that MBL rates obtained with CDT and MHT were consistent with the studies performed in our country and abroad. In conclusion,antibiotic susceptibility profiles should be determined in order to prevent the rapidly growing resistance problem against antibiotics and MBL should be screened by different methods to prevent resistance spread. Antibiotics should be prescribed  in according to antibiotic susceptibility test results for the treatment of A.baumannii and P.aeruginosa infections.

Key Words: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Metallo beta-lactamase