Mesane infiltratif ürotelyal karsinomlarında KRAS, BRAF, PIK3CA mutasyon analizi
KRAS, BRAF, PİK3CA mutation analysis in bladder infiltrative urothelial carcinoma
Yazar: ŞEYMA BÜYÜCEK
Danışman: PROF. DR. BİNNUR ÖNAL ; DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM KANTARCIOĞLU COŞKUN
Düzce Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Karsinoma = Carcinoma ; Mesane = Urinary bladder ; Mesane hastalıkları = Urinary bladder diseases ; Mesane neoplazmları = Urinary bladder neoplasms ; Moleküler genetik = Molecular genetic ; Mutasyon = Mutation ; Üreter hastalıkları = Ureteral diseases

Özet:
AMAÇ: Mesane kanseri, genitoüriner sistemde prostattan sonra en sık görülen kanserdir ve dünyadaki kanserler arasında en yaygın 7. kanserdir. Dünyada ve Türkiye'de erkeklerde sıklığı belirgin olarak yüksektir ve Türkiye'de erkeklerde gözlenen en sık 4. kanserdir. Mesane kanserleri invaziv-olmayan ve infiltratif ürotelyal karsinom (İÜK)'lar olarak iki gruba ayrılmaktadır. İÜK'da daha agresif tedavi yöntemleri (sistektomi, kemoterapi) uygulanmakta ve evrede ilerleme, metastaz sık görülmektedir. Bu bağlamda İÜK'da yeni tedavi yöntemleri geliştirmek, moleküler yolakların keşfi önem kazanmaktadır. Moleküler analizler, hedefe yönelik tedavilerin geliştirilmesinde yol gösterici olmuştur. Hücre büyümesinde tirozin-reseptör-kinazın sinyal yolağında; RAS-BRAF-MEK-ERK ve PIK3CA-PTEN-AKT kaskadlarının onkogenlerinin mutasyona uğraması kanser gelişmesine yol açmaktadır. Çalışmamızda İÜK'da PIK3CA, KRAS ve BRAF mutasyonlarının analizini amaçladık.
GEREÇ VE YÖNTEM: DÜTF Patoloji ABD'da tanı alan 24 İÜK çalışmaya dahil edildi. İÜK olguları diferansiasyon (glandüler, sarkomatoid vb) gösteren/göstermeyen olarak ayrıldı. Dokulardan parafinin ayrıştırılması sonrası DNA ekstraksiyonu yapıldı. İzole DNA, RANDOX cihazı biyoçip dizilerine konularak KRAS, PIK3CA ve BRAF mutasyon analizi yapıldı. Mutasyon sıklıkları olguların demografik, histopatolojik, klinik bulguları ile karşılaştırıldı; genel/hastalıksız sağkalım oranları, aldıkları kemoterapi türü/sayısı ve TNM evresine göre değerlendirildi.
BULGULAR: İÜK vakalarının ortalama tanı yaşı 70.1 olup erkek/kadın:11/1'dir. İÜK olgularının %33.3'ünde KRAS, %12.5'inde PIK3CA, %8.3'ünde BRAF mutasyonu saptanmıştır. Çoğunluğu gemsitabin+sisplatin olmak üzere 14 hasta kemoterapi tedavisi görmüştür. Tümörlerin %79,1'i evre 2'de tanı almıştır ve histopatolojik incelemede eşlik eden in-situ karsinom (n:8), nekroz (n: 13), lenfovasküler invazyon (n: 12) ve perinöral invazyon (n: 10) saptanmıştır. Mutasyon glandüler, sarkomatoid ve skuamöz diferansiasyonlu olgularda mevcut iken mikropapiller ve berrak hücre diferansiasyonlu olgularda saptanmamıştır. Histopatolojik özelliklerin mutasyon analizi ile karşılaştırılmasında istatistiksel olarak anlamlı sonuç gözlenmedi. Bu çalışmada yapılan analizlere göre (KRAS, BRAF, PIK3CA) olguların sağkalım oranları arasında fark görülmedi.
TARTIŞMA: Tümörlerin moleküler karakterlerinin belirlenmesi, hedeflenen tedavi algoritmalarının oluşturulmasında ve uygun hastanın seçilmesinde bir kılavuzdur. Reseptör tirozin kinaz yolu, tümörlerde en sık mutasyona uğrayan yollardan biridir.
Sonuç: Mesane kanseri olan hastaların tedavisine yön verebilecek mutasyon profillerini bulmak için daha geniş serili çalışmalara ihtiyaç vardır. Ayrıca, bunların prognoza etkisinin daha geniş serilerde araştırılması gerekir.

Abstract:
AIM: Bladder cancer is the most common cancer of the genitourinary system after prostate and 7th most common cancer among the cancers in the world with obvious male predominance. Urothelial tumors are divided into two major groups according to their molecular pathogenesis: Non-muscle invasive (pT0, pT1) and infiltrating urothelial carcinomas (IUC) (pT2-pT4). Since, IUC tend to progress and metastasize, more aggressive treatment (cystectomy, chemotherapy) is applied. Therefore, the discovery of molecular pathways to develop new treatment methods, especially in invasive bladder cancers is important. Based on the new discoveries at bladder cancers, we aimed to define mutations seen on receptor tyrosine kinase pathway (KRAS, BRAF, PIK3CA).
MATERIAL AND METHOD: A total of 24 cases of IUC from the archive of Düzce University School of Medicine, Department of Pathology&Cytology were included. IUC cases were divided into two categories according to whether there is divergent differentiation or not. Appropriate tumor area was detected on microscopic
examination and macro-dissected from the paraffin-embedded samples for the mutational analysis. Respectively, DNA extraction and PCR amplification was done. PCR products were placed in RANDOX device biochip sequences and KRAS, PIK3CA and BRAF mutation analysis was performed. Results of the analysis were compared with the clinical, demographic and histopathological findings. Survival rates were evaluated according to the mutations and chemotherapy regimens.
RESULTS: The mean age at diagnosis of IUC cases was 70,2 and male / female ratio was 11/1. Fourteen patient had received chemotherapy including mostly gemsitabin+sisplatin regimens. Histopathological examination revealed in-situ component (n:8), necrosis (n:13), lymphovascular invasion (n:12) and perineural invasion (n:10). Most of the cases were diagnosed at stage 2 (79,1%). KRAS, PIK3CA, BRAF mutations were detected in 33,3%, 12,5%, 8,3% of cases, respectively. While several mutations were present in cases with glandular, sarcomatoid and squamous differentiation, there was no mutation in cases with micropapillary and clear cell differentiation. No statistically significant results could be obtained in the comparison of histopathologic properties and mutation analysis. No difference was seen between the survival rates of the cases when compared according to their analysis done in this study (KRAS, BRAF, PIK3CA).
DISCUSSION: The determination of the molecular characters of tumors is a guide in the creation of targeted treatment algorithms and in choosing the appropriate patient. The receptor tyrosine kinase pathway is one of the most frequently mutated pathways in tumors.
Conclusion: Studies with larger series are needed to find out the mutation profiles that may guide the treatment of patients with bladder cancer. Also, their impact to prognosis need to be investigated in larger series.