Tanenlerin biyopolimerik biyomalzemelerde kullanımının araştırılması
Investigating of using tannins as biopolimeric biomaterials
Yazar: GÖNÜL ÇELEN
Danışman: PROF. DR. FATMA AYHAN
Muğla Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu tez çalışmasında Hypericum perforatum L. bitkisindeki tanenlerin eldesi ve kollajenaz enzim aktivitesini nasıl etkilediğinin tespiti amaçlanmıştır. Bitkinin toprak üstü kısımlarına belirli oranlardaki organik çözücü: distile su (h/h) karışımları ile 45°C (12 saat), 75°C (5 saat), 90°C (1 saat) ve oda sıcaklığında toplam 24 saat olacak şekilde ekstraksiyon işlemi yapılmıştır. Özütlerin toplam fenolik bileşik miktarları Folin Reaktifi ile, toplam tanen miktarları HCl- butanol deneyi ile belirlenmiştir. Toplam fenolik bileşik miktarı en yüksek % 60 aseton:d.su özütünde 5,09 mg gallik asit/g kuru bitki, % 70 aseton:d.su özütünde de en yüksek toplam tanen miktarı 1888 absorbans/g kuru bitki olarak belirlenmiştir. Farklı oranlarda organik çözücü özütlerin her birinde tanen varlığı silika tabaka üzerinde toluen: aseton: formik asit (60:60:10 h:h:h) hareketli fazı kullanılarak ince tabaka kromotografisinde gözlenmiştir.Sefadeks LH-20 dolgu maddesinin kullanıldığı kolon kromotografisi ile özütteki tanen olmayan fenolik bileşikler % 96 etanol çözeltisi ile kromotografik olarak ayrılmıştır. Büyük molekül ağırlıklı fenolik bileşikler olan tanenler ise % 70 aseton çözeltisi ile kolondan geri kazanılmıştır. Bu elde edilen fraksiyonların toplam fenolik bileşik miktarları ve toplam tanen miktarları incelenmiştir. Mobil faz I olan etanollu fraksiyonlarda 70:30 aseton: d.su özütünün fraksiyonlarında 1,979 mg gallik asit/g kuru bitki, mobil faz II olan asetonlu fraksiyonlarda 70:30 aseton: d.su özütünün fraksiyonlarında 0,816 mg gallik asit/ g kuru bitki elde edilmiştir. Mobil faz II ile elde edilen tanenli fraksiyonlarda 1095,984 absorbans/g kuru bitki olarak toplam tanen miktarı bulunmuştur. Elde edilen bu tanenlere genellikle proteinlere bağlanma metodu olarak kullanılan radyal difüzyon testi uygulanmış ve oluşan dairenin çapı ölçülmüştür.Çalışmanın son kısmında ise, elde edilen tanenlerin kollajenaz enziminin inhibisyonundaki rolü incelenmiştir. Enzim çalışmalarında; kollajene etki eden kollajenaz enziminin derişimi 0.25 mg/mL olarak sabit tutulmuş ve substrat olarak kullanılan FALGPA [(N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala )]'nın derişimi 0.021- 0.168 mM aralığında değiştirilmiştir. Tanenli ortamda kollajenaz enziminin aktivitesi ve kinetik parametreleri serbest enzimle karşılaştırılmıştır. Kinetik parametrelerin (Michaelis-Menten sabiti `Km' ve maksimum hız `Vmax') hesaplanmasında Lineweaver-Burk yaklaşımı kullanılmıştır.Deneysel çalışmalar sonucunda elde edilen değerlere göre, serbest enzim için Vmax değeri 0.031 mM.dk-1, Km= 0.1361 mM olarak hesaplanmıştır. Tanenin inhibitör olarak etki gösterdiği kısımdaki çalışmada, enzim ve tanenin beraber bulunduğu ortamdaki Vmax değeri ise 0.021 mM.dk-1, Km= 0.2515 mM olarak bulunmuştur.

Abstract:
In this thesis it is intended how the tannins in the plants of Hypericum perforatum L. affect the activity of collagenase enzymes. Above ground plant parts was extracted by a certain per cent organic solvents: with distilled water (h / h) to 45 oC (12 hours), 75 oC (7 h), 90 oC (1 hour) and a total of 24 hours at room temperature. The total amount of phenolic compounds and the total amount of tannin of these extracts were determined. Total amount of phenolic compounds were determined as the highest of 60% acetone: in d. water extract 5.09 mg gallic acid / g dried plant, 70:30 acetone: in d. water extract the highest concentration amount of tannin 1888 the absorbance/ g dry plant. In each of extracts in the different organic solvent rates, the presence of tannin has been observed by using mobile phase of toluene: acetone: formic acid (60:60:10 h: h: h) on silica layer in chromatography of thin layer.Column chromatography in which the Sephadex LH-20 filling material is used and non-tannin phenolic compounds in extracts was divided with % 96 ethanol solution as chromatographic. The tannins, large-molecular-weight phenolic compounds, were obtained with % 70 acetone solution from the colon. The total amount of phenolic compounds obtained from this fraction and the total amount of tannin were investigated. Mobile phase I of etanol fraction 70:30% acetone: d.water extract of fractions 1.979 mg of gallic acid / g dry plant, mobile phase II of the acetone fraction of 70:30% in acetone: d. water extract of fractions 0.816 mg gallic acid / g dry plants were obtained. in the tannic fraction Obtained with mobile phase II 1095.984 absorbance / g dry plant has been found as the total amount of tannin. The radial diffusion test generally used as a method of protein binding was applied to this obtained tannins and the diameter of a circle which was formed has been measured.In the last part of the study, the role of inhibition of the collagenase enzyme in the obtained tannins has been examined. Enzyme studies; collagen domain of the collagenase enzyme concentration 0.25 mg / mL as a constant and used as substrate FALGPA [(N-(3-[2-Furyl]acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala )]'s concentration 0.021 to 0.168 mm range was changed. Activity of the collagenase enzyme in tannic environment and kinetic parameters were compared with free enzyme. In the calculation of Kinetic parameters (Michaelis-Menten constant 'Km' and maximum speed 'Vmax') the Lineweaver-Burk approach has been used. According to the values obtained as a result of experimental studies, Vmax value has been calculated as 0.031 mM.dk-1, Km= 0.1361 mM for the free enzyme. In the study which the tannins shows inhibitory effect, the Vmax value in which the enzymes and tannins are in the same environment has been found 0.021 mM.dk-1, Km= 0.2515 mM