Valproik asit ve baicalein kombinasyonunun akciğer kanseri hücre soylarında sitotoksik/apoptotik etkilerinin araştırılması
Investigation of Cytotoxiıc/Apoptotic Effect of Valproic Acid andBaicalein Combination in Lung Cancer Cell Lines
Yazar: VIDA REZAYIFAR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ NAZLIHAN AZTOPAL
İstinye Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kanser Biyolojisi ve Farmakolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Baicalein = Baicalein ; Hücre ölümü = Cell death ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Valproik asit = Valproic acid

Özet:
Dünyadaki en yaygın malignitelerden biri olan akciğer kanseri, kanser ile iliĢkili ölümlerde birinci sırada yer alır. Valproik asit (VPA) bir anti-epileptik olarak klinikte uzun süredir kullanılmaktadır ve bir HDAC inhibitörü olarak hem mono terapi hem de kombinasyon terapide etkinliği birçok ajan varlığında araĢtırılmıĢtır. Ancak, akciğer kanserinde, VPA‟nin mono terapide sitotoksisitesi etkileyici değildir. Baicalein (BAĠ)‟in çeĢitli kanserlerde sitotoksik etkisi tanımlanmıĢtır ve kombinasyon tedavilerde önemli biyoaktif tavır sergileyen doğal bir bileĢiktir. Bu nedenle, çalıĢmamızda, VPA ve BAĠ‟yi birlikte kullanarak sitotoksik aktiviteyi arttırmak ve hücre ölümünü uyarmak amaçlanmıĢtır. Mevcut tez çalıĢmasında, Valproik asit ve Baicalein kombinasyonunun A549 ve BEAS-2B akciğer hücre soylarındaki etkisininin araĢtırılması amaçlanmıĢtır. Bu amaçla, A549 ve BEAS-2B akciğer hücre soylarında, VPA ve BAĠ‟nin hücre canlılığı üzerine etkisi SRB canlılık testi ile değerlendirildi ve büyüme eğrisi oluĢturularak GI50, TGI ile LC50 değerleri hesaplandı. VPA ve BAĠ‟nin eĢlenik dozları ile 24-72 saat kombinasyon çalıĢmaları gerçekleĢtirildi. Bu analizlerin sonucunda kombinasyon indeksi değerleri belirlendi ve IC90‟a en yakın doz (100uM+2mM), A549 hücre hattında sinerjizm ve BEAS-2B hücre hattında antagonist etki sergilediği gözlendi. Bu sebeple, 24-48 saat Anneksin V -FITC ve Kaspaz 3/7 aktivitesi gibi apoptotik analizleri bu doz ile gerçekleĢtirildi. Bu analizler sonrası kombinasyon tedavinin A549 hücre hattında erken ve geç dönem apoptotik hücre yüzdesi zamana bağlı olarak artıĢ göstermiĢtir. Ayrıca, IC50 değerine en yakın kombinasyon dozu (25uM+0.5mM) hücrelerin migrasyon yeteneğini araĢtırmak için seçildi. Kombinasyon tedavi uygulanan hücrelerde, ajanların tek baĢına etkisine kıyasla, yara kapanma hızında belirgin bir değiĢiklik gözlenmedi. Sonuç olarak bu kombinasyon modelinin farklı kanser hücre soylarında denenerek klinik translasyonu için etki alanlarının geniĢletebileceği düĢünülmektedir.

Abstract:
Lung cancer, one of the most common malignancies in the world, ranks first in cancer-related deaths. Valproic acid (VPA) has been used clinically for a long time as an anti-epileptic and its efficacy as an HDAC inhibitor in both monotherapy and combination therapy has been investigated in the presence of many agents. However, its cytotoxicity as monotherapy is not impressive in lung cancer. The cytotoxic effect of baicalein (BAI) has been described in various cancers and is a natural compound that exhibits an important bioactive attitude in combination therapies. Thus, in the present study, we aimed to increase the cytotoxic activity of VPA and BAI by combination therapy and stimulate cell death. For this purpose, the SRB viability test was performed to examine the effect of VPA and BAI on cell viability of A549 and BEAS-2B cells, and GI50, TGI, and LC50 values were calculated to obtain a growth curve. Following 24-72 hours combination studies, combination index values were determined and it was observed that the dose closest to IC90 (100uM+2mM) showed synergism in the A549 cell line and antagonism in the BEAS-2B cell line. Thus, 24-48 hours apoptotic analyzes such as Annexin V -FITC and Caspase 3/7 activity were performed with the relevant dose. As a result, the percentage of early and late apoptotic cells increased by combination therapy with time in the A549 cell line. The combination dose closest to the IC50 value (25uM+0.5mM) obtained in this cell line was chosen to investigate the migration ability of the cells. No significant change in wound healing was observed in cells treated with the combination treatment compared to the effect of agents alone. In conclusion, this combination strategy can be tested in different cancer cell lines and may expand the domains for clinical translation.