Uzun siRNA içeren kitozan nanopartikülleri ile meme kanseri hücrelerinde vasküler endotelyal büyüme faktörü geninin susturulması
Silencing of vascular endothelial growth factor gene in breast cancer cells with chitosan nanoparticles containing long siRNA
Yazar: BİRNUR CÖMEZ
Danışman: PROF. DR. FATMA JULİDE AKBUĞA
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Anjiyogenez inhibitörleri = Angiogenesis inhibitors ; Farmasötik teknoloji = Technology-pharmaceutical ; Genler = Genes ; Kitosan = Chitosan ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Nanopartiküller = Nanoparticles ; Neoplazmlar = Neoplasms ; RNA = RNA ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Amaç: VEGF, meme kanserinin gelişiminde ve metastazında etkili olan önemli bir anjiyogenik faktördür. RNAi mekanizmasını başlatan siRNA, hedeflenen genin transkripsiyon sonrası diziye özgü bir şekilde inhibe edilmesini sağlayarak kanser gibi hastalıkların hedeflenmesi için gen tedavisinde önemli bir araç haline gelmiştir. Bu çalışmada, farklı meme kanseri hücre hatlarında uzun (35 bp) siRNA içeren kitozan nanopartikülleri ile VEGF ekspresyonunun baskılanması ve kısa (21 bp) siRNA'nın gen inhibisyonu etkisiyle karşılaştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve yöntem: 21 bp ve 35 bp siRNA içeren kitozan nanopartiküller TPP kullanılarak iyonik jelasyon yöntemiyle hazırlandı. Elde edilen nanopartiküllerin partikül boyutu, zeta potansiyeli, stabilite ve morfolojik özellikleri incelendi. Hazırlanan nanopartiküllerin MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-435 ve SKBR-3 hücre hatlarında gen inhibisyonu üzerine etkileri incelendi. siRNA içeren kitozan nanopartiküllerin transfeksiyon sonrası in vitro interferon cevabı ve apoptoz üzerine etkileri araştırıldı.
Bulgular: Uzun siRNA ile 324.3 ± 17.9 nm  boyutunda ve 10.0 ± 3.0 mV yüzey yüküne sahip kitozan nanopartiküller elde edildi ve dört farklı meme kanseri hücre hattında VEGF gen inhibisyonu (% 45.4- 51.5) sağlandı. Meme kanseri hücre hatlarında siRNA içeren kitozan nanopartiküllerin in vitro IFN-γ ekspresyonuna neden olduğu ve apoptozu indüklediği gösterildi. 
Sonuç: Uzun ve kısa siRNA'nın kitozan nanopartiküller ile hücrelere alınarak etkin bir şekilde VEGF ekspresyonunu azalttığı ve her ikisi için de yakın sonuçlar elde edildiği gösterilmiştir.
Anahtar Sözcükler: Uzun siRNA, VEGF, Meme kanseri, Kitozan, Nanopartikül

Abstract:
Aim: VEGF is an important angiogenic factor in development and metastasis of breast cancer. siRNA triggering the RNAi mechanism, has become an important tool in gene therapy for the targeting of diseases such as cancer, allowing to post-transcriptional inhibition of the target gene in a sequence specific manner. In this study, it was aimed to supress of VEGF expression with chitosan nanoparticles containing long (35 bp) siRNA in different breast cancer cell lines and to compare gene inhibition activity of short (21 bp) siRNA.
Material and Method: Chitosan nanoparticles containing 21 bp and 35 bp siRNA were prepared by ionic gelation method using TPP. The particle size, zeta potential, stability and morphological properties of the obtained nanoparticles were investigated. The gene inhibition activities of the prepared nanoparticles were examined on MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-435 and SKBR-3 cell lines . After transfection with siRNA-containing chitosan nanoparticles, their effects on in vitro interferon response and apoptosis were investigated.
Results: Chitosan nanoparticles with 324.3 ± 17.9 nm size and 10.0 ± 3.0 mV surface charge were obtained with long siRNA and VEGF gene inhibition (45.4-51.5%) was achieved in four different breast cancer cell lines. siRNA-containing chitosan nanoparticles were shown to induce in vitro IFN-γ expression and apoptosis in the breast cancer cell lines.
Conclusion: It has been shown that long and short siRNAs reduce VEGF expression effectively by delivering them into the cells with chitosan nanoparticles and close results were obtained for the both of them.
Key Words: Long siRNA, VEGF, Breast cancer, Chitosan, Nanoparticle