Kültür Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst'ın genotoksik antigenotoksik etkilerinin tavuk yumurtası mikronükleus testiyle belirlenmesi
Determination of genotoxic-antigenotoxic effects of cultivated Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst with hen's egg test for micronucleus induction
Yazar: DÖNDÜ BALTA
Danışman: DOÇ. DR. HALUK ÖZPARLAK
Selçuk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Ölümsüzlük mantarı" veya "Reishi" olarak da bilinen Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst tüm dünyada ve özellikle de Çin'de alternatif tıp alanında kullanılan bir mantardır. Son yıllarda G. lucidum'un kültür formu Türkiye'de de yetiştirilmektedir ve halk tarafından özellikle çay, kahve ve tablet olarak tüketilmektedir. Genotoksisite testleri içinde çok yaygın kullanılan yöntemlerden biri mikronükleus tekniğidir. Mikronükleus testleri içerisinde daha yeni bir teknik Tavuk Yumurtası Mikronükleus Testi (Hen's Egg Test for Micronucleus Induction, HET-MN)'dir. HET-MN hayvan hakları ve etik açıdan kesinlikle uygun, in vitro ve in vivo deneyler arasına yerleştirebileceğimiz son derece basit, ucuz ve hızlı bir genotoksisite testidir. Bu çalışmanın amacı Türkiye'deki kültür G. lucidum'un farklı dozlardaki sulu ekstraktının olası genotoksik-antigenotoksik etkilerini alternatif bir test yöntemi olan Tavuk Yumurtası Mikronükleus Testiyle ilk kez belirlemektir. Ayrıca bu çalışmayla kültür G. lucidum'un tavuk embriyolarının gelişimi üzerindeki etkilerinin de belirlenmesi amaçlanmıştır. Döllü tavuk yumurtalarına kuluçkanın 8. gününde farklı dozlarda (219 µg/y (yumurta), 875 µg/y ve 1750 µg/y) kültür G. lucidum sulu ekstraktı, antigenotoksik bileşik olarak C vitamini (50 µg/y) ve genotoksik bileşik olarak siklofosfamit (50 µg/y) ayrı ayrı ve birlikte enjekte edilmiştir. Kuluçkanın 11. gününde embriyolardan perifer kan örnekleri alınarak frotiler hazırlanmış ve modifiye May-Grünwald Giemsa yöntemiyle boyanmıştır. Bu preparatlarda eritrositlerdeki mikronukleus ve anormal çekirdek frekansları ışık mikroskobu yardımıyla belirlenmiştir. Elde edilen veriler istatistiksel yöntemlerle analiz edilmiştir. Test edilen tüm dozlarda kültür G. lucidum sulu ekstraktı genotoksik etki göstermezken, antigenotoksik etki göstermiştir. Ayrıca kültür G. lucidum önemli bir embriyotoksik ve teratojenik etki göstermemiştir. Tavuk embriyolarının kemik gelişimini de makroskobik seviyede etkilememiştir. Bu sonuçlar yabani G. lucidum kullanılarak gerçekleştirilen çalışmanın sonuçlarıyla da benzer bulunmuştur.

Abstract:
Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst is a mushroom which used for alternative medicine worldwide particularly in China, also known as "Immortality Mushroom or Reishi". In recent years, cultivated G. lucidum is also produced in Turkey and consumed by people especially as tea, coffee and tablets. One of widely used methods in genotoxicity tests is micronucleus technique. Hen's Egg Test for Micronucleus Induction (HET-MN) is a member of relatively new of micronucleus tests. HET-MN is an inexpensive, rapid, and extremely simple genotoxicity assay which is positioned between pure in vivo and in vitro analysis, strictly in line with animal protection regulations and ethical aspects. The aim of this study was to determine for the first time the possible genotoxic-antigenotoxic effects of the aqueous extract in different doses of cultivated G. lucidum in Turkey in the Hen's Egg Test for Micronucleus Induction as an alternative test method as well as the effects on the development of chicken embryos. G. lucidum aqueous extract at different doses (219 µg/egg, 875 µg/egg and 1750 µg/egg), vitamin C (50 µg/egg) as antigenotoxic compound, and cyclophosphamide (50 µg/egg) as genotoxic compound were injected separately and together into the fertilized chicken eggs at 8th day of incubation. Blood smears were prepared from peripheral blood samples of the embryos and stained with modified May Grünwald–Giemsa method, on the 11th day of incubation. In this smears, frequencies of micronucleus and nuclear abnormality in erythrocytes were determined under light microscope. Data were analyzed with statistical methods. While cultivated G. lucidum aqueous extract at the examined doses did not show genotoxic effect, it exhibited antigenotoxic effect. The extract did not present significant embryotoxic and teratogenic effects. It also did not affect the bone development of chicken embryos at the macroscopic level. These results are consistent with another study used wild-grown G. lucidum.