Koç sperması dondurulmasında resveratrol, siklodekstrin ve kombinasyonlarının eritme sonrası spermatolojik özellikler üzerine etkisi
Effect of resveratrol, cyclodextrin and combinations on post thaw spermatological characteristics for freezing ram semen
Yazar: AHMET ESER
Danışman: PROF. DR. KEMAL AK
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​ / Dölerme ve Suni Tohumlama Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Koçlar = Rams ; Resveratrol = Resveratrol ; Siklodekstrinler = Cyclodextrins ; Sperm = Spermatozoa ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Çalışmada, koç sperması dondurulmasında 10 µg/ml, 20 µg/ml ve 40 µg/ml antioksidan özellikteki resveratrol maddesinin saf ve methl-β-siklodekstrine yüklenmiş formlarının eritme sonrası spermatolojik özelliklere etkisi araştırıldı. Elektro-ejakülatör yardımıyla alınan ejakülatlar pooling sonrası 10 eşit hacime bölündü ve çalışma grupları oluşturuldu (Kontrol, RES10: 10 µg/ml resveratrol, RES20: 20 µg/ml resveratrol, RES40: 40 µg/ml resveratrol, CD10: 178,65 µg/ml siklodekstrin, CD20: 357,30 µg/ml siklodekstrin, CD40: 714,60 µg/ml siklodekstrin, CD-RES10: 10 µg/ml resveratrol + 178,65 µg/ml siklodekstrin, CD-RES20: 20 µg/ml resveratrol + 357,30 µg/ml siklodekstrin, CD-RES40: 40 µg/ml resveratrol + 714,60 µg/ml siklodekstrin). Gruplar, etken maddeleri içeren eşit hacimdeki Tris-sitrik asit-glikoz medyumu ile ön sulandırma işlemine tabi tutuldu. 26°C sıcaklıktaki su banyosu içerisinde 15 dk. inkübasyon sonrası final gliserol oranı %5 olacak şekilde Tris bazlı sulandırıcıyla sulandırma ve dondurma işlemleri gerçekleştirildi. Eritme sonrası, faz kontrast mikroskopta HOST, bilgisayar destekli sperma analiz sisteminde kinetik hareket parametreleri, total ve progresif motilite (0., 1., 2. ve 4. saatlerde), floresan ataçmanlı faz kontrast mikroskopta kapasitasyon ve akış sitometrisinde mitokondriyal aktivite, oksidatif stress, membran ve akrozom bütünlüğü muayeneleri gerçekleştirildi. 
Muayeneler sonucunda, siklodekstrinin eritme sonrası spermatolojik özelliklere zarar verdiği, özellikle erken kapasitasyon ve mitokondriyal aktivite gösteren spermatozoon oranını artırdığı belirlendi. 20 µg/ml resveratrolün erken kapasitasyonu engellediği saptandı. Resveratrol (RES) ve resveratrol yüklenmiş siklodekstrin gruplarının (CD-RES) genel olarak başarılı olduğu ve koç sperması dondurulmasında kullanılabileceği kanısına varıldı.

Abstract:
In this study, the effect of pure and methl-β-cyclodextrin loaded forms of resveratrol (10 µg/ml, 20 µg/ml and 40 µg/ml) was investigated on spermatological properties after thawing. The semen collected with the help of electro-ejaculator were divided into 10 equal volumes after pooling and study groups were formed (Control, RES10: 10 µg/ml resveratrol, RES20: 20 µg/ml resveratrol, RES40: 40 µg/ml resveratrol, CD10: 178.65 µg/ml cyclodextrin, CD20: 357.30 µg/ml cyclodextrin, CD40: 714.60 µg/ml cyclodextrin, CD-RES10: 10 µg/ml resveratrol + 178.65 µg/ml cyclodextrin, CD-RES20: 20 µg/ml resveratrol + 357.30 µg/ml cyclodextrin, CD-RES40: 40 µg/ml resveratrol + 714.60 µg /ml cyclodextrin). Groups were pre-diluted with an equal volume of Tris-citric acid-glucose medium containing the group spesific chemicals. After 15 minutes of incubation in a water bath at 26 °C, dilution (final glycerol ratio of 5%) with Tris-based extender and freezing processes were carried out. After thawing total motility, progressive motility and kinetic motion parameters, (at 0, 1, 2 and 4 hours), HOST, capacitation status, mitochondrial activity, oxidative stress, membrane and acrosome integrity examinations were performed.
As a result of the examinations, it was determined that cyclodextrin damaged the spermatological properties after thawing and especially increased the rate of spermatozoon showing early capacitation and mitochondrial activity. It was found that 20 µg/ml resveratrol prevented early capacitation. Resveratrol (RES) and Resveratrol loaded cyclodextrin groups (CD-RES) were found to be successful in general, and can be used for freezing ram semen.