İnsan trombositlerinden nitrik oksit sentaz enziminin ve insan serumundan Paraoksonaz-1 enziminin saflaştırılması, bazı ilaçların bu enzimlerin aktiviteleri üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification of nitric oxide synthase enzyme from human platelets and Paraoxonase-1 enzyme from human serum, investigation effects of some drugs on the enzymes activity
Yazar: ZUHAL ALIM
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
DE-52 selüloz iyon değişim kromatografisi ve 2',5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi teknikleri kullanılarak insan trombositlerinden NOS enzimi %6,34 verimle 1972,34 kat, amonyum sülfat çöktürmesi, DEAE-Sephadex A-50 anyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-100 jel filtrasyon kromatografisi teknikleri kullanılarak insan serumundan PON1 enzimi %16,84 verimle 217,7 kat saflaştırıldı. Saf insan trombositi NOS enzimi SDS-PAGE'de yaklaşık 81 kDa'da tek bir bant olarak gözlendi. NOS enzimin doğal molekül kütlesi ise jel filtrasyon kromatografisi tekniği ile 153 kDa olarak belirlendi. Saflaştırılan insan trombositi NOS enzimi üzerine inhibisyon etkisi gösteren vankomisin HCl, amikasin sülfat, linkomisin HCl, seftriakson sodyum, gentamisin sülfat, ampisilin sodyum, sefazolin sodyum antibiyotikleri ve rituksimab, trastuzumab, bleomisin sülfat, okzaliplatin, vinorelbin, etoposid, karboplatin, paklitaksel, 5-fluorourasil, siklosfamid, fludarabin fosfat, gemsitabin HCl antineoplastik ilaçları için % Aktivite/[İlaç] grafikleri çizilerek IC50 değerleri belirlendi. İnsan serumundan saflaştırılan PON-1 enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkisi gösteren setuksimab, paklitaksel, etoposid, dosetaksel, ıfosfamid antineoplastik ilaçları için  %Aktivite/[İlaç] grafikleri çizilerek IC50 değerleri hesaplandı. Ayrıca bu ilaçlar için Lineweaver-Burk grafikleri çizilerek Ki değerleri ve inhibisyon tipleri belirlendi.

Anahtar Kelimeler: Nitrik oksit sentaz, Paraoksonaz, ilaç, inhibisyon

Abstract:
NOS enzyme was purified from human platelet with 6.34% yield and 1972.34 purification fold by using DE-52 cellulose ion exchange chromatography, and 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography techniques. PON1 enzyme was purified from human serum with 16.84% yield and 217.7 purification fold by using ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 anion exchange chromatography and Sephadex G-100 gel filtration chromatography techniques. Purified human platelet NOS enzyme appeared as a single band 81 kDa under denaturing condition (SDS-PAGE). The native molecular weight of human platelet NOS enzyme estimated 153 kDa by gel filtration chromatography. In addition, effects of some drugs on human serum PON-1 enzyme activity and human platelet NOS enzyme activity were investigated. IC50 values were determined from Activity %/[drug] graphs for vancomycin HCl, amikacin sulphate, lincomycin HCl, ceftriaxone sodium, gentamicin sulfate, ampicillin sodium, cefazolin sodium antibiotics and rituximab, trastuzumab, bleomycin sulfate, oxaliplatin, vinorelbine, etoposide, carboplatin, paclitaxel, 5-fluorouracil, cyclophosphamide, fludarabine phosphate, gemcitabine HCl antineoplastic drugs which showed in vitro inhibitory effects on purified human platelet NOS enzyme activity. IC50 values were determined from Activity%/[drug] graphs for cetuximab, paclitaxel, etoposide, docetaxel, ifosfamide antineoplastics which showed in vitro inhibitory effects on purified human serum PON enzyme activity were indicated. In addition. We determined Ki values and inhibition types for these drugs from Lineweaver-Burk graphs.

Keywords: Nitric oxide synthase, paraoxonase, drug, inhibition