Androctonus crassicauda türü akrep venomunun biyolojik etkinliğinin araştırılması üzerine ön çalışmalar
Studies about researching biological activity venom of the scorpion Androctonus crassicauda species
Yazar: FİGEN ÇALIŞKAN
Danışman: PROF. DR. YALÇIN ŞAHİN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2002
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Akrepler = Scorpions ; Biyolojik etki = Biological effect ; Toksinler = Toxins ; Yalıtım = Insulation ; Zehirlenmeler = Poisonings

Özet:
ÖZET Akrep venomları, çeşitli iyon kanallarına yüksek bir afınite ve özgünlük ile bağlanan nörotoksik peptidlerin kaynağım oluştururlar. Böylece iyon kanallarının protein haritalarının araştırmalarında, kanal geçitleri ve bilinen iletimin karmaşık moleküler mekanizmasının açıklanmasında yararlı araçlar olarak faydalanılırlar. Bu çalışmada, Eski Dünya akrebi Androctonııs crassicanda (Oliver, 1807) 'nın venomunun içerdiği peptid yapılar araştırıldı. Bunun içinde Ters-Faz Yüksek Performans Sıvı Kromatografısi (RP-HPLC), Kütle Spektrometresi (MS), Amino Asit Sequencer (AAS)'dan yararlanıldı. HPLC'deki ayırımlarda ilk olarak C 18 RP analitik kolon, ardından C 18 RP Microbore kolon kullanıldı. A.crassicaııddnm ham venomunun HPLC ile yapılan ilk ayırımında 30'un üzerinde farklı peptid elde edildi. Beş ana bileşenin farelerdeki biyolojik etkileri çalışıldı. Bu çalışmada peptidlerin intraperitonal yolla enjeksiyonu yapılarak toksik olup olmadıkları araştırıldı. Bileşen H'nin letal, IH'ün toksik,I, IV ve V'in ise toksik olmadığı gözlendi. Bileşen H'nin HPLC'de yeniden saflaştırılmasıyla, iki farklı peptid elde edildi, Acra 1 ve Acra 2 olarak adlandırıldı. Acra 1 ve Acra 2 'nin birlikte farelere intraperitonal yolla enjeksiyonu sonucu görülen belirtiler ile ayrı ayrı enjeksiyonu ile görülen belirtilerin farklı olduğu gözlendi. 58 amino asit içeren Acral'in birincil yapısı belirlendi. Acra l'in N-terminal amino asit dizilimi ADVPGNYPLD SSGNKYPCTV LGDNQSCIDV CKKHGVKYGY CYSFKCWCEF LEDKNVSL olarak bulundu. Acra 1 içerdiği 58 amino asit dizilimi nedeni ile uzun zincirli toksinler arasındadır. Ancak uzun zincirli toksinler içerdikleri 8 sistein ile oluşturdukları 4 disülfit köprüsü ile tanımlanırlar. Fakat Acra 1 içerdiği 6 sistein ile oluşturduğu 3 disülfit köprüsü ile bağlı uzun zincirli bir nörotoksin olması nedeni ile bu toksinler arasında yeni bir alternatif yaratmaktadır. Anahtar kelimeler: Androctonus crassicauda, akrep, venom, toksin, izolasyon, birincil yapı. vı

Abstract:
SUMMARY Scorpion venoms are rich sources of neuro-toxic peptides, which bind with high affinity and specificity to various ion channels. Thus widely serve as useful tools in probing the protein mapping of ion channels and clarifying the molecular mechanism involved in the signal transduction and channel gating. In this study peptides from the venom of the Old World scorpion Androctomis crassicaiida (Oliver, 1807) was investigated, by means of Reverse Phase, High- Performance Liquoid Chromatography (RP-HPLC), Mass Spectrometry (MS), Amino Acid Sequencer (AAS). Firstly a C 18 RP analytic column was used, then C 18 RP Microbore column in HPLC. The initial separation of the crude venom from Androctomis crassicauda by means of HPLC resulted in over 30 distinct peptides. Biological activity of five principal components to mice was studied. In this study with intraperitoneal injection of this peptides, investigated toxic or non toxic. We observed component II is lethal, III is toxic, I, IV, and V is nontoxic. When component II repurificationed by the means of HPLC, obtained two different peptides, named Acral and Acra2. We observed two different activity when intraperitoneal injection of this peptides together and one by one each other Acral and Acra2. Determined primary structure with 58 amino acid in Acral. The N-terminal amino acid sequence of Acral was found : ADVPGNYPLD SSGNKYPCTV LGDNQSCTDV CKKHGVKYGY CYSFKCWCEF LEDKNVSL. Acral is long chain toxin due to involved 58 amino acids. However, long chain toxins are known to contain eight cysteine with four disulfide bridges. But Acral due to contain six cysteine with three disulfide bridges, offer a new alternative among these toxins. Keywords: Androctomis crassicauda, scorpion, venom, toxin, isolation, primary structure. VII