Serviks dokularında HPV pozitifliği ve osteopontin düzeyi arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between HPV positivity and osteopontin level in cervical tissues
Yazar: ESRA TUBA DEMİR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE AYDIN
Erzincan Binali Yıldırım Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Osteopontin = Osteopontin ; Papillom = Papilloma ; Papillomavirüsler = Papillomaviridae ; Uterin servikal neoplazmlar = Uterine cervical neoplasms

Özet:
Giriş ve Amaç: Serviks kanseri kadınlarda meme kanserinden sonra en sık görülen ikinci kanserdir. HPV, papillomaviridae ailesine ait ikozahedral simetrili, çift sarmallı DNAvirüsüdür. HPV, servikal kanserin major etiyolojik ajanıdır. Ekstrasellüler matriks molekülü olan OPN, sitokin benzeri, sialik asitten zengin bir fosfoglikoproteindir. Çeşitli malignitelerde OPN'nin yüksek oranda salındığı bildirilmektedir. Çalışmamızda, HPV pozitif ve HPV negatif serviks dokularında OPN düzeyinin araştırılması, prognostik bir biyobelirteç olarak tanıda klinik öneminin değerlendirilmesi amaçlandı.
Materyal ve Metot: Haziran 2015-Nisan 2017 tarihleri arasında Erzincan Üniversitesi, Kadın Hastalıkları ve Doğum polikliniğine başvuran ve serviks kanseri taramasına katılan 82 kişi çalışmaya alındı. Servikovajinal swablar, standart işlem prosedürüne göre toplandı. Geleneksel Pap sitolojisi için bir slayt hazırlanarak, standart protokollere göre boyandı ve sonuçlar 2004 Bethesda Sınıflandırma sistemine göre derecelendirildi. Digene konik fırça örnekleyicisi ile serviksten örnek alındı. Tüm servikal örnekler, 13 yüksek riskli HPV genotipinin  (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 ve 68) varlığı veya yokluğu açısından digene® HC2 High-Risk HPV DNA Testi (Qiagen, Gaithersburg, MD, ABD)  ile üretici firma önerileri doğrultusunda analiz edildi. HPV pozitif olan kadınlara kolposkopi, endoservikal kürtaj ve servikal biyopsi yapıldı. HPV pozitif 41 hasta ile benign jinekolojik nedenlerle ameliyat edilen HPV negatif 41 hastaya (kontrol grubu) ait doku örneği histopatolojik olarak incelendi ve doku OPN düzeyleri ELISA kiti (Hangzhou Eastbiopharm Co., Ltd, Çin) ile üretici firma önerileri doğrultusunda araştırıldı. Verilerin değerlendirilmesinde SPSS 19 programı kullanıldı.

Bulgular: Çalışmamıza 41 hasta ve 41 sağlıklı kontrol olmak üzere 82 kişinin yaş ortalamaları 46.76 ± 10.1 bulunurken, hasta grubunda 43.88±9.2, kontrol grubunda ise 49.63±10.3 yıl olarak bulundu. OPN değerleri hasta ve kontrol grubunda sırasıyla; 31.55±7.11 ve 28.81±5.44 olarak saptandı. HPV pozitif servikal dokularda OPN düzeyleri, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında daha yüksek ve istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p=0,048). OPN düzeyi ile yaş, doğum şekli, hastalık öyküsü, operasyon yöntemi, HPV tipi, preoperatif ve postoperatif patoloji, gravida ve parite arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmadı (p>0.05). Çalışan kişiler, ev hanımlarıyla kıyaslandığında hasta ve kontrol gruplarında OPN değeri istatistiksel olarak farklı bulundu (p=0.029).Üç ve üzeri doğumla sonlanan gebeliğe sahip hasta grubunda OPN değerleri, kontrol grubuna göre daha yüksek ve istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p=0,025). HPV pozitif 41 hastanın 5'inde (%12.2) CIN saptandı.

Sonuç: Çalışmamızda HPV pozitif 41 hastadan sadece 5'inde CIN saptanması çalışmamızın kısıtlayıcı yanını oluşturmaktadır. Osteopontin düzeyi, HPV pozitif hastalarda yüksek bulunmasına rağmen, daha geniş sayıda CIN olguları üzerinde yapılacak olan çalışmalara ihtiyaç olduğunu düşünmekteyiz. 

Anahtar Kelimeler: ELISA, İnsan Papilloma Virüsü (HPV), Osteopontin, Serviks Kanseri

Abstract:
Introduction and  Aim: Cervical cancer is the second most common cancer in women after breast cancer. HPV is a double-stranded DNA virus of icosahedral symmetry belonging to the papillomaviridae family. HPV is the major etiologic agent of cervical cancer. OPN, an extracellular matrix molecule, is a cytokine-like phosphoglycoprotein rich in sialic acid. It has been reported that OPN is released at high rates in various malignancies. This study aimed to investigate the OPN levels in HPV-positive and HPV-negative cervical tissues and evaluate its clinical significance as a prognostic biomarker.
Material and Method: A total of 82 individuals that referred to the Polyclinic of Obstetrics and Gynecology of Erzincan University, Turkey and underwent cervical cancer screening between June 2015 and April 2017 were included in the study. Cervicovaginal swabs were collected according to the standard procedure. A slide for traditional Pap cytology was prepared and stained according to standard protocols, and the results were categorized according to the 2004 Bethesda classification system. All cervical samples were analyzed in terms of the presence or absence of 13 high-risk HPV genotypes (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68) using the digene® HC2 high-risk HPV DNA test (Qiagen, Gaithersburg, MD, USA) according to the manufacturer's recommendation. Colposcopy, endocervical abortion, and cervical biopsy were performed on women that were HPV-positive. The tissue samples of 41 HPV-positive patients and 41 HPV-negative control patients that underwent surgery for benign gynecologic reasons were histopathologically examined, and the OPN levels in these samples were investigated by an ELISA kit (Hangzhou Eastbiopharm Co., Ltd, China) according to the manufacturer's recommendation. SPSS software v. 20 was used for the statistical analysis of data.
Results: The mean age of the study population (41 patients and 41 healthy controls) was 46.76 ± 10.1 years; 43.88 ± 9.2 years in the patient group and 49.63 ± 10.3 years in the control group. The OPN values were found to be 31.55 ± 7.11 and 28.81 ± 5.44 in the patient and control groups, respectively. The OPN levels in HPV-positive cervical tissues were statistically significantly higher compared to the control group (p = 0.048). There was no statistically significant difference between the OPN level and age, delivery method, history of disease, surgical method, HPV type, preoperative and postoperative pathology, gravida and parity (p > 0.05). In both patient and control groups, the OPN values statistically significantly differed between working women and homemakers (p = 0.029). Furthermore, the OPN levels were statistically significantly higher (p = 0.025) among the patients with a history of three and more full-term pregnancies compared to the control group. CIN was detected in five (12.2%) of 41 HPV-positive patients.
Conclusion: The detection of CIN in only five of 41-HPV positive patients constitutes a limitation of this study. Although the level of OPN was high in HPV-positive patients, we consider that there is a need for further studies on a larger number of CIN cases.
Keywords: Cervical Cancer, ELISA, Human Papilloma Virus (HPV), Osteopontin