Mezenkimal stromal hücre koşullu besiyerinin kondrositler üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi
Evaluation of the effects of mesenchymal stromal cell conditional fi̇ve on chondrocytes
Yazar: ŞEYDA KORKMAZ
Danışman: DOÇ. DR. ZEYNEP BURÇİN GÖNEN ; DR. ÖĞR. ÜYESİ HASAN SALKIN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Besi yerleri = Culture media ; Kondrositler = Chondrocytes ; Kök hücreler = Stem cells ; Kültür ortamı = Culture media ; Osteoartrit = Osteoarthritis ; Sekretom = Secretome ; Stroma = Stroma ; Umbilikal kord = Umbilical cord

Özet:
Bu çalışmanın amacı, umblikal kord ve adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (MKH) sekretomunun, osteoartritli hastalardan elde edilen kondrositlerde kondrojenik onarım ve yenilenme üzerine etkisini incelemektir. Uygulanan sekretomların osreoartritik kondrositler üzerinde canlılık, immünojenik yüzey belirteçleri ve glikozaminoglikan seviyelerinde gerçekleşen değişiklikler değerlendirilmiştir.
Normal kültür koşulları altında akım sitometri aracılığıyla immünofenotipik analizi ve farklılaştırma testleri yapılan umbilikal kord (UK) ve adipoz doku (AD) kaynaklı MKH'lerden koşullu besiyeri elde edilmiştir. Elde edilen koşullu besiyerleri Taramalı Elektron Mikroskop (SEM) ile görüntülenmiştir. Umbilikal kord ve adipoz doku kaynaklı MKH 'lerden elde edilen koşullu besiyerleri, osteoartritik kondrosit (OA) hücreler üzerine uygulanıp 24 saat, 48 saat ve 7 gün sonrasında hücre proliferasyonu, canlılık, Glikozaminoglikan (GAG) ve immünofloresan boyama deneyleri ile değerlendirilmiştir. İstatiksel analizler GraphPad Prism 8.0.2 programı ile yapılmıştır. p<0,05 olan veriler anlamlı kabul edilmiştir.
Sonuçlarımız adipoz doku ve umbilikal kord kaynaklı MKH 'lardan elde edilen koşullu besiyerleri OA kondrositler üzerinde 48. Saat ve 7. Gün de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında UK – MKH koşullu besiyerinin hücre proliferasyonunu azaltmıştır (p<0,003). Kıkırdak dokunun temel ekstraselüler bileşenlerinden birisi olan sGAG, AD – MKH koşullu besiyeri grubunda 6802±564 iken, kontrol grubunda 10812±267 ve UK – MKH koşullu besiyeri grubunda12501±280 olarak belirlendi (p<0,05). İmmün floresan boyama analizlerinde kondrojenik medium ile birlikte uygulanan sekretom UK – KB2 ve AD – KB2 deney gruplarında Sox9, Kollajen tip II ve Agregan ekspresyonunun güçlü olduğu tespit edildi(p<0,05).
Elde edilen sonuçlara göre, hem UK – MKH hem de AD – MKH koşullu besiyerlerinin osteoartritik kondrositler üzerine terapotik etkinliği mevcut olup, ileri araştırmalara gereksinim vardır.
Anahtar Kelimeler: Osteoartritik Kondrosit, Mezenkimal Kök Hücre, Koşullu Besiyeri

Abstract:
The aim of this study was to examine the effect of umbilical cord and adipose tissue-derived mesenchymal stem cell (MSC) secretome on cartilage repair and regeneration on chondrocytes (ready commercial cell line) obtained from patients with osteoarthritis. The changes in viability, immunogenic surface markers and glycosaminoglycan levels on osteoarthritic chondrocytes of the applied secretomes were evaluated.
Conditional medium was obtained from mesenchymal stem cells from umbilical cord and adipose tissue, whose immunophenotypic analysis and differentiation tests were performed by flow cytometry under normal culture conditions. The obtained conditioned media were visualized by Scanning Electron Microscope (SEM). Conditional media obtained from umbilical cord and adipose tissue-derived MSCs are applied on osteoarthritic chondrocyte (OA) cells for their proliferation after 24 hours, 48 hours and 7 days with MTT assay, with relevant kits Viability, Glycosaminoglycan (GAG) and immunofluorescence staining experiments. evaluated. Statistical analyzes were performed with the GraphPad Prism 8.0.2 program and data with p<0.05 were considered significant.
Our results showed that conditional media obtained from MSCs derived from adipose tissue and umbilical cord decreased cell proliferation of UC-MSC conditional media on OA chondrocytes when compared with the control group at 48th hour and 7th day (p<0.003). While sGAG, one of the main extracellular components of cartilage tissue, was 6802±564 in the AD – MSC conditional medium group, it was 10812±267 in the control group and 12501±280 in the UC – MSC conditional medium group (p<0.05). In immunofluorescence staining analysis, it was determined that the expression of Sox9, Collagen type II and Aggregate was strong in secretome UC – CM2 and             AD – CM2 experimental groups, which were applied together with chondrogenic medium (p<0.05).The results obtained can be used as an effective therapeutic cell-free-cellular product in OA pathology of hUC – MSC and hAD – MSC conditional media.
Keywords: Osteoarthritic Chondrocyte, Mesenchymal Stem Cell, Conditional Medium