Streptozotosin ile diyabet oluşturulmuş sıçanların testislerinde kisspeptin immünreaktivitesinin belirlenmesi
Determination of kisspeptin immunreactivity in testes of rats with streptozotocin-induced diabetes
Yazar: EMİNE SARMAN
Danışman: PROF. DR. NERİMAN ÇOLAKOĞLU
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Kisspeptin = Kisspeptin ; Streptozotosin = Streptozotocin ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Diyabet, genellikle insülin sekresyonundaki veya etkinliğindeki bozukluğa bağlı olarak gelişen hiperglisemi ile karekterize metabolik bir hastalıktır ve üreme sağlığını menfi yönde etkilemektedir. Hipotalamus-hipofiz-gonadal eksen birbiriyle koordineli çalışarak üreme fonksiyonunun düzenlenmesinde rol oynamaktadırlar. Kiss-1 geninin ürünü olan, hipotalamik nöronlar tarafından sentezlenen kisspeptin adı verilen nöropeptidler bu eksen üzerinde etki göstererek puberteye geçişi ve fertiliteyi regüle etmektedir. Biz bu çalışmada, diyabetin, testiküler dokuyu ve bu dokudaki kisspeptin immünreaktivitesini zamana bağlı olarak nasıl etkilediğini belirlemeyi amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Çalışmada 8 haftalık 48 adet Spragua Dawley cinsi erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar, Grup I (Kontrol, n:8), Grup II (Sham, n:8);  Grup III (Diyabet Grubu, n:32) olacak şekilde ayrıldı. Diyabetik sıçanlar ise 3 günlük, 1, 2 ve 4 haftalık diyabetik gruplar olarak düzenlendi. Deney sonunda sıçanlar anestezi altında dekapite edildi. Deneklerden serum/testosteron düzeyi ölçümü için kan örnekleri ve histopatolojik incelemeler için testis dokuları alındı. Rutin doku hazırlama yöntemi ile parafin bloklar hazırlandı. Parafin bloklardan 5µm kalınlığında doku kesitleri alındı. Dokular, histokimyasal ve imünohistokimyasal yöntemlerle boyanıp, incelendi.
Bulgular: Deney sonunda diyabetik gruplarda sürenin uzamasıyla birlikte özellikle 1. haftadan sonra giderek artan anlamlılıkta sıçanlarda kilo ve serum testosteron düzeyinde düşüş gözlendi. Diyabetin oluştuğu 3. günde dokunun etkilenmesi minimal düzeyde idi. Diyabetin ilerlemesi ile birlikte seminifer tübül epitelinde dejenerasyon, interstisyel ödem, bazı tübüllerin lümeninde olgunlaşmamış spermatogenik hücreler ayırt edildi. İki haftalık ve 4 haftalık diyabetik grupta bu bulgulara ilaveten birkaç atrofik tübül gözlendi. İmmünohistokimyasal boyama yapılan doku kesitlerinde ise kontrol, sham ve 3 günlük diyabetik gruplarda Leydig hücrelerinde ve spermatogenik hücrelerde belirgin kisspeptin immünreaktivitesi saptandı. Diyabet süresinin ilerlemesine bağlı olarak spermatogenik hücrelerdeki kisspeptin immünreaktivitesinin şiddetinde belirgin azalma gözlendi.
Sonuç: Diyabete bağlı testislerde oluşan yapısal bozuklukların; kisspeptin immünreaktivitesindeki ve serum testosteron düzeyindeki azalmayla birlikte seyretmesi, sağlıklı koşullarda testiküler fizyolojinin regülasyonunda ve yapısal bütünlüğünün korunmasında kisspetin ve testosteronun birbiriyle korele çalışan moleküller arasında yer aldıklarını düşündürdü. 	

Anahtar kelimeler: Diabetes Mellitus, Kisspeptin, Sıçan, Testis.

Abstract:
Aim: Diabetes Mellitus, is a metabolic disorder which is generally characterized with hyperglycemia that is developed due to corruption in insulin secretion or effectiveness an it affects reproductive health negatively. Hypothalamus-pituitary-gonadal axis work together coordinated and have a role in organizing reproductive function. Neuropeptides called kisspeptin which are synthesized by hypothalamic neurons are which axis and regulate transition to puberty and fertility. In this study we have aimed to find out how diabetes mellitus affects testicular tissue and the kisspeptin immunoreactivity in this tissue according to time. 
Materials and Methods: In this study, 48 8-week-old Spraqua Dawley male rats have been used. Rats have been classified as Group I, Group II, Group III. Diabetic rats have been classified as 3-days-old, 1-week, 2-week, and 4- week-old. At the end of the experiment, rats have been decapitated under anesthetized. Blood samples have been taken from subjects for measuring serum testosterone level and testicular tissues for histopathological examining. Paraffin blocks have been prepared by routine tissue preparation method. The tissue blocks were sectioned at a thickness of 5 µm to perform histochemical and immunohistochemical staining.
Results: At the end of the experiment, in diabetic group, we have observed a decrease in weight and serum testosterone level among the rats meaningfully especially after 1 weeks. Diabetes Mellitus has been existed on 3 days and on this day the affection of tissue has been on a minimal level with the increase of diabetes mellitus, we have observed degeneration in seminiferous tubules epithelium, interstitial edema and immature spermatogenic cells in some tubules lumens. Addition to these findings in 2-weeks-old and 4-weeks-old diabetic group, we have observed some atrophic tubules. In tissue sections which have been immunohistochemical stained, we have found out clear kisspeptin immunoreactivity in Leydig cells and spermatogenic cells in control, sham and 3-days-old diabetic groups. According to progress of diabet time, we have observed a clear reduction in intensity of spermatogenic cells kisspeptin immunreactivity.
Conclusion: It has been tought that structural impairments in testis due to diabetes mellitus, with the reduction in kisspeptin immunoreactivity and serum testosterone level that in healthy conditions, regulation of testicular physiology and protection of structural integrity, kisspeptin and testosterone are molecules that work correlated with each other.

Key words: Diabetes Mellitus, Kisspeptin, Rat, Testis.