Prostat kanser kök hücrelerinde zoledronik asitin Rab23 GTPaz ve sonic- hedgehog yolak aktivasyonu üzerinde etkisi
Effect of zoledronic acid on the Rab23 GTPase and sonic hedgehog pathway activation in prostate cancer stem cell
Yazar: GUNEL MUKHTAROVA
Danışman: PROF. DR. GÜLPERİ ÖKTEM
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Kök hücreler = Stem cells ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat = Prostate ; Prostat hastalıkları = Prostatic diseases ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Zoledronik asit = Zoledronic acid

Özet:
Prostat kanseri erkelerde akciğer kanserinden sonra ölümlü ilişkili ikinci kanser tipidir. Kanser Kök Hücresi (KKH) tümör yapısı içinde çok az sayıda hücreden oluşan, kök hücre gibi sonsuz sayıda bölünebilen ve sessiz kalabilen hücre gurubudur. KKH'i tümörün çoğalmasından, geleneksel tedavilere dirençten, invazyondan ve hatta metastazdan sorumlu tutulmaktadırlar. KKH'de SHH, Wnt, Notch ve BMP yolakları gibi çok yönlü sinyal yolaklarının düzenlenmesindeki bozukluklar kanser oluşumu ve yayılması ile ilişkili bulunmaktadır. SHH sinyali bazal/kök hücrelerin KKH'e transformasyonunda yer almakta ve KKH devamlılığı, sağ kalımını düzenlemektedir. Sağlıklı dokularda Rab23 GTPaz, SuFu-bağımlı şekilde SHH yolak aktivasyonunu negative şekilde düzenler. Çalışmamızın amacı zoledronik asit uygulanan insan prostat KKH'de Rab GTPaz ve SHH yolak bileşenleri genlerinin ekspresyon seviyesini araştırmaktır. Insan prostat kanser hücreleri FACSAria flow sitometri kullanılarak sort edilmiş, prostat kanser kök hücreleri CD 133high/ CD44high olacak şekilde ayrıştırılmıştır. Zoledronik asit uygulanarak deney gruplarında IC50 değerleri bulunmuştur. Zoledronik asit uygulanan deney gruplarında Rab23 GTP' az ve SHH yolak bileşenlerinin ekspresyon profilinin incelenmesi için RNeasy Plus Mini Kit ( Qiagen) kullanılarak total mRNA izole edilmiş, cDNA sentezi gerçekleştirilmiştir. Rab GTP'azların ekspresyonu LightCycler® 480 real-time PCR kullanılarak analiz edilmiştir. Saptanan sonuçlar zoledronik uygulanan insan prostat KKH ve control grupları arasında karşılaştırılmalı şekilde incelenmiştir. Bu çalışma, Zoledronik asit etkisinin Rab23 GTPaz ve SHH yolak bileşenleri ve dolayısı ile de KKH özellikleri üzerinde etkisinin saptanması yönünde ilk olabilme özelliğine sahip çalışmadır.

Abstract:
Prostate cancer (PCa) is the second most common cancers among cancer-related death after lung cancer in men. The cancer stem cell is a group of cells that they exist slightly in neoplastic tissue and ability proliferation endless by itself and keeping silent such as stem cell. It is thinking that these cells are responsible for cancer proliferation, resistance to the conventional treatments, invasion ve also metastasis. The deregulation of the multiple signalling pathways in the stem cells including the Hh, Wnt, Notch and BMP pathways have been related to the formation and expansion of cancer. SHH signalling plays a role in the transformation of prostate basal/stem cells into prostate cancer stem cells (PCSCs) and regulates maintenance and survival of cancer stem cells. Rab23 GTPase negatively regulated SHH signal pathway in a Sufu- dependent–manner in the healthy tissues. The human prostate cancer cells (Du145 and PC3) were sorted using a FACSAria flow cytometer. Prostate cancer stem cells were sorted to be CD 133high/ CD44high population. IC50 values were found in experimental groups by applying zoledronic acid. To investigate the expression profile of Rab23 GTP and SHH pathway components in the experimental groups treated with zoledronic acid total RNA was extracted using RNeasy Plus Mini Kit ( Qiagen) and this was followed by cDNA synthesis and expression were analyses by LightCycler® 480 real-time PCR. On the results, the expression profile of The results was compared between zoledronic administered human prostate CSCs and control groups. This study has been the first to characterize the effect of Zoledronic acid on the ability of Rab23 GTPase and SHH pathway components and consequently on CSCs properties.