TNF-alfa aracılı ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 genlerinin regülasyonu
Tnf-alpha mediated ADAMTS-2 and ADAMTS-3 genes regulations
Yazar: EHED MUHAMMED AYMAZ
Danışman: PROF. DR. FERAY KÖÇKAR ; DR. ÖĞR. ÜYESİ MELTEM ALPER
Balıkesir Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Proinflamatuar bir sitokin olan TNF-α, artritte kıkırdak yıkımında kritik bir role sahiptir. TNF-α, MMP'lerin ve ADAMTS'lerin kıkırdak spesifik ekspresyonunu indükler. Bu metalloproteinazların aşırı ekspresyonu, osteoartritin ilerlemesini destekleyen, kıkırdak matrisinin degredasyonuna neden olur. ADAMTS ailesi üyeleri arasında prokollajen N proteinazlar kıkırdak yeniden modellemesine katılırlar. Bazı ADAMTS ailesi üyelerinin proinflamatuar sitokin uyarımı altında ekspresyon seviyeleri, bazı kondrosit dokularında veya hücre hatlarında araştırılmıştır, ancak fibriller prokollajenlerin ve ekstraselüler matriksin biyosentetik prosesindeki önemine rağmen, ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 gen ekspresyonunun TNF-α stimülasyonu altında nasıl değiştiği hala osteosarkom hücrelerinde açıklığa kavuşturulmuş değildir.
Bu tez çalışmasında TNF-α'nın İnsan ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 gen promotorunun Saos-2 hücrelerindeki transkripsiyonel aktivitesine olan etkileri araştırıldı. Elde edilen veriler doğrultusunda TNF-α'nın ADAMTS-2 ve ADAMTS-3'ün transkripsiyonel aktivitesini indüklediği ve bu indüklemeyi ADAMTS-2 için PI3K ve NFκB yollarını kullanarak, ADAMTS-3 içinse MEK, PI3K, JNK ve NFκB yollarını kullanarak yaptığı belirlendi. TNF-α'nın ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 mRNA ve proteininin ekspresyon seviyelerini, farklı zaman aralıkları için indüklediği qRT-PCR ve western blotlama ile belirlendi. Bu bu indüklemeyi ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 için MEK, PI3K, JNK ve NFκB yollarını kullanarak yaptığı tespit edildi. EMSA deneyleri kullanılarak ADAMTS-2 ve ADAMTS-3 promotorlarına STAT3 ve NFκB transkripsiyon faktörlerinin işlevsel olarak bağlanma analizi ilk kez bu çalışmayla gerçekleştirilerek ortaya konmuştur.

Abstract:
TNF-α, a proinflammatory cytokine, has a critical role in cartilage destruction in arthritis. TNF-α induces cartilage-specific expression of MMPs and ADAMTS. Overexpression of these metalloproteinases causes degradation of the cartilage matrix, which promotes the progression of osteoarthritis. Among the ADAMTS family members, procollagen N proteinases participate in cartilage remodeling. The expression levels of some ADAMTS family members under proinflammatory cytokine stimulation have been investigated in some chondrocyte tissues or cell lines, but despite the importance of the fibrils procollagen and the extracellular matrix in the biosynthetic process, how ADAMTS-2 and ADAMTS-3 gene expression changes under TNF-α stimulation is still evident in osteosarcoma cells is not crossed.
In this study, we investigated the effects of TNF-α on transcriptional activity of human ADAMTS2 and ADAMTS3 gene promoter in Saos-2 cells. Based on the data obtained, it was determined that TNF-α induced the transcriptional activity of ADAMTS-2 and ADAMTS-3 using PI3K and NFükB pathways for ADAMTS-2 and MEK, PI3K, JNK and NFκB pathways for ADAMTS-3. Expression levels of ADAMTS-2 and ADAMTS-3 mRNA and protein of TNF-α were determined by qRT-PCR and western blotting induced for different time intervals. It was determined that this induction was performed using the MEK, PI3K, JNK and NFκB pathways for ADAMTS-2 and ADAMTS-3. The functional binding analysis of STAT3 and NFκB transcription factors for ADAMTS-2 and ADAMTS-3 promoters using EMSA assays was first demonstrated by this study.