P. larvae ADP-ribosiltransferaz enziminin rekombinant üretimi
Recombinant production of P. larvae ADP-ribosyltransferase enzyme
Yazar: FULYA YOLDAŞ
Danışman: PROF. DR. ALİ KILINÇ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Rekombinant üretim = Recombinant production

Özet:
Amerikan Yavru Çürüğü (AYÇ), arı kolonilerini tehdit eden tehlikeli ve ölümcül bir hastalıktır. Peanibacillus larvaları tarafından üretilen ADP- riboziltransferaz (ADP-RT) enzimi, ADP-riboz moleküllerinin arı larvalarının hücreleri içindeki belirli proteinlere transferini katalize ederek larvaların proteinlerini işlevsiz hale getirir. Böylece hücre sinyalizasyonu, DNA onarımı ve gen düzenlemesi gibi süreçler etkilenir ve arıların hayati işlevlerini kaybetmelerine neden olur. Özellikle bağışıklık sistemine ait proteinlerin inaktivasyonu, AYÇ'nin ilerlemesinde ve arı larvalarının ölümünde en önemli faktörlerden biridir.
Bu çalışma, ADP-RT aktivitesini ve mekanizmasını daha iyi anlamak için bu enzimin rekombinant üretimini ele almaktadır. Projemiz, kalan NAD seviyelerine dayanarak ifade edilen ART enziminin aktivitesini ölçmek için bir analiz geliştirmek üzere kullanılacak olan enzimini üretimini amaçlamaktadır.
ADP-RT enzimi, sentetik gen kullanılarak klonlanmış ve saflaştırılmıştır. Elde edilen fraksiyonun saflığı SDS-PAGE ile doğrulanmış ve %95 saflık elde edilmiştir. BCA yöntemi kullanılarak protein tayini sonucunda, her mililitre çözeltinin ortalama 0,5 mg enzim içerdiği ortaya çıktı.
Elde edilen bulgular, rekombinant enzimlerin elde edilmesine ve NAD tespitine dayalı bir aktivite testinin geliştirilmesine katkıda bulunacaktır. Bu çalışmanın sonuçları, rekombinant ADP-RT enziminin başarıyla elde edilmesini mümkün kılmış olup gelecekte arı larvalarında antikor seviyelerini test etmek için bir tanı kiti geliştirmenin temelini oluşturmaktadır.

Abstract:
American Foulbrood (AYÇ) is a dangerous and fatal disease that threatens bee colonies. The ADP-ribosyltransferase (ADP-RT) enzyme produced by Peanibacillus larvae catalyzes the transfer of ADP-ribose molecules to specific proteins within the cells of bee larvae, rendering the larvae's proteins dysfunctional. Thus, processes such as cell signaling, DNA repair and gene regulation are affected, causing bees to lose their vital functions. In particular, inactivation of proteins belonging to the immune system is one of the most important factors in the progression of AYÇ and the death of bee larvae.
This study addresses the recombinant production of this enzyme to better understand the activity and mechanism of ADP-RT. Our project aims to produce the enzyme, which will be used to develop an assay to measure the activity of the ART enzyme expressed based on the remaining NAD levels.
The ADP-RT enzyme was cloned and purified using synthetic genes. The purity of the obtained fraction was confirmed by SDS-PAGE and 95% purity was achieved. As a result of protein determination using the BCA method, it was revealed that each milliliter of solution contained an average of 0.5 mg of enzyme. The findings obtained will contribute to the production of recombinant enzymes and the development of an activity test based on NAD determination. The results of this study made it possible to successfully obtain recombinant ADP-RT enzyme and form the basis for the development of a diagnostic kit for testing antibody levels in bee larvae in the future.