LC-ESI-MS and On-line HPLC-ABTS yöntemleriyle belirlenen gilaburu, kızılcık, kokulu üzüm ve karayemiş meyvelerinin biyoaktif fenolik bileşimi
Bioactive phenolic composition of snowball, european cornel, fox grape and cherry laurel determined with LC-ESI-MS and On-line HPLC-ABTS methods
Yazar: AYÇA AKTAŞ
Danışman: PROF. DR. MURAT KÜÇÜK
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada Doğu Karadeniz Bölgesinde yetişen gilaburu (Viburnum opulus L.), kızılcık (Cornus mas L.), kokulu üzüm (Vitis vinifera L.) ve karayemiş (Prunus laurocerasus L.) meyvelerinin meyve suyu ve çekirdek ve zar kısımlarının farklı çözücüler (metanol, asetonitril, su) ile hazırlanan ekstraktlarındaki antioksidan aktivitenin belirlenmesi için on-line HPLC-ABTS ve off-line (klasik) antioksidan aktivite belirleme yöntemlerinden ABTS radikali temizleme aktivitesi, demir (III) indirgeme / antioksidan kuvvet (FRAP) ve Folin-Ciocalteu yöntemi ile toplam fenolik madde tayini yöntemleri kullanıldı. Ayrıca gilaburu meyve suyu ve çekirdek kısmının metanollü ekstraktına HPLC-ESI-MS yöntemi uygulanarak mevcut olan fenolik bileşiklerin yapısının aydınlatılması yapıldı. 14 fenolik standart kullanılarak HPLC-UV metodunun optimizasyonunun ardından bütün meyvelerden elde edilen ekstraktlar analiz edildi. Bu ekstraktlarda bulunan 18 fenolik bileşik, standartların ve literatürde rapor edilen bileşiklerin alıkonma zamanı ve kütle spektrumları ile karşılaştırılarak tanımlandı. Bunlar arasında kateşin, epikateşin, klorogenik asit, prosiyanidin B2, prosiyanidin trimer major pikler olarak tespit edildi. Ekstraktların her birinden oldukça farklı antioksidan bileşim profilleri elde edildi. Bütün klasik ve on-line antioksidan aktivite belirleme yöntemlerine göre gilaburu, kızılcık ve kokulu üzüm meyvelerinin çekirdek kısımlarının zar kısımlarına göre daha yüksek aktiviteye sahip olduğu, fakat karayemiş meyvesinin zar kısımlarının daha yüksek aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. On-line ve off-line radikal temizleme aktivite yöntemleri sonuçları arasında doğrusal bir korelasyon olduğu belirlenmiştir. Çalışmada ayrıca bütün meyvelerin meyve suyu ve sulu ekstraktlarının klinik önemi olan karbonik anhidraz enzimini %14-%100 oranında inhibe ettiği bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: Gilaburu, Kızılcık, Kokulu üzüm, Karayemiş, On-line HPLC-ABTS/DPPH, Antioksidan, Fenolik,HPLC-ESI-MS, Karbonik anhidraz inhibisyonu.

Abstract:
In this study, in order to determine antioxidant activity of the juices and seed and skin extracts prepared with three different solvents (methanol, acetonitrile, water) of the fruits snowball (Viburnum opulus L.), European cornel (Cornus mas L.), fox grape (Vitis vinifera L.) and cherry laurel (Prunus laurocerasus L.) grown in Eastern Black Sea Region, an on-line HPLC-ABTS method and off-line (classical) antioxidant activity determination methods, ABTS radical scavenging activity, iron (III) reducing / antioxidant power (FRAP) and total phenolic contents determination with Folin-Ciocalteu reagent were used. In addition, the identification of the structures of the phenolic components of the fruit juice and the seed methanol extract of snowball was made with the use of an HPLC-ESI-MS method. After the optimization of HPLC-UV method by using 14 standard phenolics, all the fruit extracts obtained were analyzed. 18 phenolic compounds in these extracts were identified by comparison of the retention time and mass spectra with those of the standards and with those of the phenolics reported in the literature. Among these, catechin, epicatechin, chlorogenic acid, procyanidin B2, and procyanidin trimer were determined to be the major peaks. Quite different antioxidant composition profiles were obtained from each of the extracts. According to all of the classical and the on-line antioxidant determination methods, the antioxidant activities of the seed extracts of snowball, European cornel and fox grape were higher than those of the skin extracts, while the skin extracts of cherry laurel fruit were determined to have higher activity. A linear correlation was determined between the results of the on-line and the off-line antioxidant/antiradical methods. In addition, the fruit juices and the aqueous extracts of all the fruits were found to inhibit clinically important carbonic anhydrase enzyme in 14-100% range.Key Words: Snowball, European cornel, Fox grape, Cherry laurel, On-line HPLC-ABTS/DPPH, Antioxidant, Phenolic, HPLC-ESI-MS, Carbonic anhydrase inhibition.