HUH7 hepatokarsinom hücrelerinde hidroksitirozolün apoptotik etkilerinin belirlenmesi
Determination of the apoptotic effects of hydroxytyrosol in HUH7 hepatocarcinoma cells
Yazar: BÜŞRA GÖZ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BANU BAYRAM
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Beslenme ve Diyetetik = Nutrition and Dietetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hidroksitirozol = Hydroxytyrosol ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer neoplazmları = Liver neoplasms ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Zeytinyağı = Olive oil

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, zeytinyağının biyoaktif bileşenlerinden hidroksitirozolün, Huh7 hepatokarsinom hücre hattında apoptoz ve apoptoz mekanizması ile ilişkili mitokondriyal membran potansiyeli üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Huh7 hücresinde etkili inhibitör konsantrasyonu dozunda uygulanan hidroksitirozolün mitokondri membran potansiyeli ile ilişkili genler olan MICU1, MICU2, PPAR-γ, PPARGC1A, UCP1, UCP2 ve UCP3 genlerinin anlatımları üzerine etkisi RT-PCR ile incelenmiştir. Hücre döngüsü analizi, apoptotik etki, apoptoz satın alınan kitlerle incelenmiş olup mitokondriyal membran potansiyeli ise TMRE boya mekanizması ile yapılmıştır. Tüm analizler akış sitometrisi kullanılarak elde edilmiştir. Bulgular: Huh7 hücre hattına kontrol grubu ile karşılaştırıldığında 48 saat sonunda IC50 dozunda hidroksitirozol uygulanmasının mitokondri membran potansiyeli ile ilişkili genler olan MICU1, MICU2, PPAR-γ ve PPARGC1A genlerini önemli ölçüde azalttığı, bunun yanında UCP1, UCP2 ve UCP3 genlerini ise artırdığı görülmüştür. Hidroksitirozolün IC50 değeri ile inkübe edilen Huh7 hücrelerinde ise apoptoz oranının anlamlı bir şekilde arttığı tespit edilmiştir. Bununla bağlantılı olarak hidroksitirozol uygulanan hücrelerde inkübasyondan sonra G0/G1 fazı oranının kontrole göre anlamlı şekilde arttığı (p<0,01), G2 fazının ise önemli ölçüde azaldığı görülmüştür (p<0,001). Sonuç: Hidroksitirozolün Huh7 hepatokarsinom hücre hattı üzerinde apoptotik etkilerinin olduğu bulunmuştur. Hücre döngüsünde hidroksitirozol hücreleri G0/G1 fazında tutmuş, mitokondri membran potansiyelini düşürdüğü ve mitokondri membran potansiyeli ile ilişkili genler üzerine etki ettiği belirlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Apoptoz, Hepatokarsinom, Hidroksitirozol, Zeytinyağı

Abstract:
Aim: In this study, it was aimed to investigate the effects of hydroxytyrosol, one of the bioactive components of olive oil, on apoptosis and mitochondrial membrane potential associated with apoptosis mechanism in Huh7 hepatocarcinoma cell line. Materials and Methods: The effects of hydroxytyrosol at IC50 dose in Huh7 cells on the expression of mitochondrial membrane potential related genes, MICU1, MICU2, PPAR-γ, PPARGC1A, UCP1, UCP2 and UCP3 were investigated by RT-PCR. Cell cycle analysis, apoptotic effect, apoptosis were examined with purchased kits, and mitochondrial membrane potential was performed with TMRE dye mechanism. All analyzes were obtained using flow cytometry. Results: When compared to the control group, Huh7 cell line application of hydroxytyrosol at a dose of IC50 at the end of 48 hours significantly decreased MICU1, MICU2, PPAR-γ and PPARGC1A genes, which are genes associated with mitochondrial membrane potential, while increasing the UCP1, UCP2 and UCP3 genes. It was determined that the rate of apoptosis increased significantly in Huh7 cells incubated with the IC50 value of hydroxytyrosol. In connection with this, it was observed that the G0/G1 phase ratio increased significantly after incubation in the cells treated with hydroxytyrosol (p<0.01), while the G2 phase decreased significantly (p<0.001). Conclusion: Hydroxytyrosol was found to have apoptotic effects on the Huh7 hepatocarcinoma cell line. It was determined that hydroxytyrosol kept the cells in the G0/G1 phase in the cell cycle, decreased the mitochondrial membrane potential and affected the genes associated with the mitochondrial membrane potential. Key Words: Apoptosis, Hepatocarcinoma, Hydroxytyrosol, Olive Oil