Vitamin E ile kombine selenyum uygulamasının periodontal dokuların rejenerasyonu üzerine etkisinin hücre kültürü ortamında değerlendirilmesi
Evaluation of the effect of selenium treatment combined with vitamin E on regeneration of periodontal tissues in cell culture
Yazar: FERİDUN DİŞÇİOĞLU
Danışman: PROF. DR. N .IŞIL SAYGUN
GATA / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Periodontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Gingiva = Gingiva ; Hücre kültürü = Cell culture ; Selenyum = Selenium ; Vitamin E = Vitamin E ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
E vitamini ve selenyum peroksitleri ve serbest oksijen radikallerini nötralize ederek hücre ve doku hasarını önleyen sinerjistik etkiye sahip olan antioksidanlardır. Bu tez çalışmasında; diş çevresi dokularda bulunan dişeti fibroblastları, periodontal ligament fibroblastları ve mezenkimal kök hücreleri kullanılarak oluşturulan in vitro yara modeli üzerinde selenyumun E vitamini ile birlikte kullanımının hücresel aktivite ve yara iyileşmesi üzerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.Bu çalışmada insan gingival fibroblast, mezenkimal kök hücre ve periodontal ligament fibroblastı primer hücre kültürü kullanıldı. Hücreler pasajlanıp seyreltildikten sonra hücre canlılığı ve proliferasyonu değerlendirmek için 24., 48. ve 72. saatlerde 60 µM E vitamini ile 5x10-8 M, 10-8 M ve 5x10-9 M konsantrasyonlardaki selenyum kombine edilerek XTT testi yapıldı. E vitamini ile kombine selenyumun yara iyileşmesindeki etkisini araştırmak için oluşturulan yara modelinde, XTT testinde kullanılan aynı dozlar kullanılarak 0., 12., 24., 36., 48. ve 72. saatlerde yara şekillerinin görüntüsü mikroskop altında çekildi. Elde edilen fotoğraflardan yara yüzeyinin alanı bir bilgisayar programı ile hesaplandı. Yara modeli deneyinden 24., 48. ve 72. saatlerde elde edilen süpernatantlarda ELISA yöntemi ile yumuşak ve sert doku için öneme sahip olan büyüme faktörleri (Bazik Fibroblast Büyüme Faktörü, İnsulin Benzeri Büyüme Faktörü-1) ve yara iyileşme süreci ile ilgili proteinlere (Tip 1 Kollajen, Osteokalsin, Osteonektin) bakıldı. Elde edilen sayısal veriler T testi ve One-Way Anova Testleri ile istatistiksel olarak değerlendirildi.Elde edilen bulgular değerlendirildiğinde; Alfa-tokoferolün tek başına ve selenyum ile değişen konsantrasyonlarda kombinasyonunun periodontal dokuları oluşturan hücrelerde sitotoksik etki yaratmadan erken dönem ya da geç dönem proliferatif etkileri ve yara iyileşme sürecine olumlu katkıları düşünülecek olursa bu antioksidanların ileride periodontal doku mühendisliği uygulamaları için uygun bir alternatif olma potansiyaline sahip oldukları öngörülebilir.

Abstract:
Vitamin E and selenium are antioxidants which have synergistic effect to prevent cell and tissue damages by neutralizing the peroxides and free oxygen radicals. It was the aim of the present study to evaluate the effect of vitamin E and vitamin E+selenium on cellular activity and wound healing process using an in vitro wound healing model.Human gingival fibroblast, mesenchymal stem cells and primary cell cultures of periodontal ligament fibroblast were used. In order to evaluate the cell activity; 60 µM Vitamin E, and its combination with 5x10-8 M, 10-8 M and 5x10-9 M selenium were tested at 24th, 48th and 72th hours after seeding the cells using an XTT tests. The same concentrations of vitamin E and selenium were used in the wound healing model. In order to evaluate the healing processes in all groups the photographs were taken at 0th, 12th, 24th, 36th, 48th and 72nd hours under a microscope using a digital camera. An image analyses computer software program was used to calculate the wound surface area during that period. The supernatants were obtained from the wound healing model at 24th, 48th and 72nd hours and were used to evaluate the growth factors including Basic Fibroblast Growth Factor and Insulin-like Growth Factor -1 which have essential roles in soft and hard tissue formation. The proteins which are important in wound healing process such as Type 1 Collagen, Osteocalcin, Osteonectin were also evaluated using ELISA method. The obtained data were examined statistically by T test and One-Way Anova Tests.When the obtained data are evaluated, without created a cytotoxic effect on the cells of peiodontal tissues, it is considered that the combination single alpha-tocopherol and its varying concentrations with selenium have positive contributions of early or late term proliferative effects and wound healing process. It is predicted that these antioxidants have an alternative potential for periodontal tissue engineering.