Servikal kanserde hedef tedavi: SRC tirozin kinaz inhibitörleri
Targeted treatment for cervi̇cal cancer: SRC-tyrosi̇n ki̇naz i̇nhi̇bi̇tors
Yazar: ESAT ÇALIK
Danışman: PROF. DR. TEVFİK GÜVENAL
Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Bosutinib = Bosutinib ; Cerrahi-kadın doğum = Surgery-obs.-gyn. ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Tedavi = Treatment ; Tirozin = Tyrosine ; Uterin servikal neoplazmlar = Uterine cervical neoplasms ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
AMAÇ: Serviks kanseri hücre kültürlerinde tirozin kinaz inhibitörü Bosutinib'in etkisinin incelenmesi 
GEREÇ VE YÖNTEM: İnsan serviks kanseri hücre hattı olan CCL-62 HeLa kontaminantı, uygun koşullarda optimize edilmiş ve Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji bölümünde tüm hücre kültürü çalışmaları yapılmıştır. Gerekli üreme koşulları sağlanan bu hücre hatlarına bir Src-tirozin kinaz inhibitörü olan bosutinibin (SKI-606) farklı konsantrasyonları uygulanmıştır. 
 MTT sitotoksisite testleri ile sitotoksik veya anti-proliferatif etkinin gözlendiği optimum konsantrasyon değerlerinin (IC50 değerlerinin) belirlenmiştir. Daha sonra hücreler primer antikor ile işaretlenip, florokrom takılı sekonder antikorlar ile belirlenip floresan mikroskobu ile incelenmiştir. Hücrelere madde uygulamalarıyla gelişen DNA hasarı nükleer odak oluşumları ölçülmüş ve apoptoz miktarı ise annexin-5 ve kaspaz boyamaları ile görüntülenerek incelenmiştir. Kalorimetrik kaspaz-3 analizi yapılarak bosutinibin serviks kanseri hücre hatlarında apopitoz aktivasyonuna yol açıp açmadığına bakılmıştır. Son olarak western-blot yöntemi kullanılarak DNA hasarı ile ilişkili olarak γH2AX, ATM, p53 seviyelerine ve apoptoz ile ilişkili olarak PARP kırpılması, kaspaz 3 ve 7 seviyelerine bakılmıştır. Burada madde uygulamalarına bağlı olarak hücre grupları arasındaki değişiklikleri saptanması amaçlanmıştır. 
Veriler, Microsoft Excel (XP) ve GraphPad yazılımı aracılığıyla grafiksel olarak ve "Image J" analiz programı kullanılarak histogram grafikleri ile değerlendirildi.
BULGULAR: Tirozin kinaz inhibitörü "Bosutinib", CCL-62 serviks kanseri hücre hattında DNA çift zincir kırıklarına yol açarak DNA hasarına yol açtığı ve Kaspaz 3 aktivasyonunu tetikleyerek anti-proliferatif etki gösterdiği görülmüştür.
SONUÇ: Bir trozin kinaz inhibitörü olan Bosutinib'in, serviks kanseri hücrelerinde (CCL-62 He-La kontaminantı), antiproliferatif etki göstererek DNA hasarı oranını arttırdığı ve apoptozu indüklediği görüldü. Bu etkilerle Bosutinibin serviks kanser tedavisinde etkili olabilecek bir ajan olabileceği sonucuna varılmıştır. Bu etkinin ilerde yapılacak hayvan ve insan çalışmaları ile doğrulanması gerekmektedir.

Abstract:
OBJECTIVE: Investigation of the effect of the cell culture level of the tyrosine kinase inhibitors in the treatment of cervical cancer
MATERIAL AND METHODS:  CCL-62 HeLa contaminant, a human cervical cancer cell line, was optimized in appropriate condition in Department of Medical Biology of Celal Bayar University Medical School. A src-kinase inhibitör named as Bosutinib (SKI-606) was administered in different concentration to these cell lines.
Optimal concentration values (IC50 values) for cytotoxic or anti-proliferative effects were determined by MTT cytotoxicity tests. Then, the cells were marked by primary anticores, identified by secondary anticores affixed to fluorochrome and examined by fluorescent microscope. The damaged focuses in DNA by the study agent was assessed and the rate of apoptosis was evaluated by imaging the annexin-5 and caspase activities. Calorimetric caspase-3 analysis was used for analyzing if bosutinibe activated apoptosis in cervical cancer cell lines. Lastly, the levels of γH2AX, ATM, p53 were evaluated  as markers of damage in DNA and sheared PARP, caspase 3 and 7 were evaluated as markers of apopitosis; for the consideration of the effect of the agent on the cell lines.
The data was analyzed graphically by Microsoft Excel (XP) and GraphPad software programs and with histogram graphics by Image Z analyze programme.
RESULTS : A Tyrosine Kinase Inhibitor ''Bosutinib'' was found to be responsible for DNA damage by causing DNA double-chain fragmentation and had antiproliferative effect by activating caspase 3.
CONCLUSION : Bosutinib causes damage and induces the apopitosis in DNA in CCL-62 cell line depending with dosage. Thus, new treatment options for cervical cancer might be planned in the light of this study.