A549 kanser hücre hattında propolisin antikanserojen etkinliğinin araştırılması
Investigation of anticarcinogenic activity of propolis in A549 cancer cell line
Yazar: KÜBRA ERKOÇ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLAY GÜLBOL DURAN
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Propolis = Propolis

Özet:
Propolis antimikrobiyal, antioksidan, antienflamatuar, immünmodülatör, antimikotik, antifungal, antiülser, antikanserojen etki gibi farmokolojik etkilere sahip yapısında 300'den fazla biyoaktif bileşen bulunduran arı ürünüdür. Propolisin kompozisyonu ve içerdiği biyoaktif bileşenlerin oranları bölgeden bölgeye ve elde edildiği kaynağa bağlı olarak degişkenlik göstermektedir. Kanser tedavi yöntem araştırmalarında apoptotik hücre ölümünün moleküler mekanizmasının anlaşılması antikanserojen etkinin belirlenmesinde büyük önem arz etmektedir. Çalışmamızın amacı, propolisin A549 akciğer kanser hücre hattında apoptozu uyarıp uyarmadığı, uyarıyor ise hangi yolak üzerinden hücreleri apoptoza yönlendirdiğini araştırarak Hatay propolisinin antikanserojen etkisini belirlemektir. Bu bağlamda çalışmamızda, A549 hücreleri 24 saat süreyle 125 ve 7.81 μg/ml konsntrasyon aralığındaki Hatay propolis dozları ile muamele edildi. 24 saat sonunda MTT testi yapılarak sitotoksisite ölçüldü ve hücre ölümünün gerçekleştiği ilk konsantrasyon dozu çalışmada kullanılacak doz olarak belirlendi. Sonrasında hücreler 15.625 μg/ml konsantrasyona sahip Hatay propolisi ile muamele edilerek 24 saatin sonunda RNA ve cDNA izolasyonlarının ardından Kaspaz 3, Kaspaz 8, Kaspaz 9, Bcl-2, Bax, Bid ve p21 genlerinin ekspresyon seviyeleri qRT-PCR analiz yöntemiyle belirlendi.	
	Sonuçlarımız Hatay propolisinin A549 kanser hücrelerinin canlılığını kontrol grubu ile kıyaslandığında 15.625 μg/ml ve daha yüksek dozlardaanlamlı olarak baskıladığını gösterdi. Sonuçlarımız Hatay propolisinin A549 kanser hücrelerini 15.625 μg/ml'lik konsantrasyonda 24 saat süreli inkübasyonunda Kaspaz 3, Kaspaz 8, Kaspaz 9, Bcl-2, Bax, Bid ve p21 genlerinin ekspresyon seviyelerini artırarak kanser hücrelerinin apoptoza teşvik ettiği saptandı (p<0.001). Propolisin ekstrinsik ve intrinsik yolağı tetikleyerek A549 kanser hücre hattını apoptoza teşvik ettiği saptandı.
	Sonuç olarak, bu çalışma kapsamında propolisin intrinsik ve ekstrinsik yolak aracılığıyla apoptozu indüklediği gösterilmiş olup propolisin kanser tedavisinde doğal yeni bir kemoterapötik ajan olarak potansiyel teşkil ettiği düşünülmektedir.

Abstract:
Propolis isa bee product containing more than 300 bioactive components in its composition and has many pharmacologic effects such as antimicrobial, antioxidant, antienflammatory, immunomodulatory, antimycotic, antifungal, antiulcer, and anticarcinogenic. The composition of propolis and the proportions of the bioactive components it contains vary depending on the region and the source it is extracted from. Understanding the molecular mechanism of apoptotic cell death in the search of cancer treatment methods is of great importance in determining the anticarcinogenic effect. The aim of this study is to determine the anticancer effect of Hatay propolis by investigating whether propolis stimulates apoptosis in the A549 lung cancer cell line and, if so, by which pathway it leads the cells to apoptosis. In our study, A549 cells were treated with Hatay propolis at concentrations between 125 and 7.81 μg/ml for 24 hours. At the end of 24 hours, cytotoxicity was measured with MTT test and the first concentration at which cell death occurred was determined as the dose to be used in the study. Cells were then treated with Hatay propolis at a concentration of 15.625 μg/ml for 24 hours and after RNA and cDNA isolation, expression levels of caspase 3, caspase 8, caspase 9, Bcl-2, Bax, Bid and p21 genes were determined withqRT-PCR analysis.
	Our results showed that Hatay propolis significantly suppressed the cell viability of A549 cancer cells at concentrations of 31.25 μg/ml and higher compared to the control group. Our results showed that 24-hour incubation of Hatay propolis A549 cancer cells at a concentration of 15.625 μg / ml increased the expression levels of Caspase 3, Caspase 8, Caspase 9, Bcl-2, Bax, Bid and p21 genes (p <0.001). Propolis was found to trigger the extrinsic and intrinsic pathways to induce apoptosis of the A549 cancer cell line.
 	In conclusion, propolis has been shown to induce apoptosis via the intrinsic and extrinsic pathways in the our study and is thought to be a potential new natural chemotherapeutic agent in cancer treatment.