Hayvanlar ve çevrelerinden Stenotrophomonas Maltophilia izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of Stenotrophomonas Maltophilia from animals and their environment
Yazar: İNCİ ÜLKÜ ÇELİKEL
Danışman: PROF. DR. K. SERDAR DİKER
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Atlar = Horses ; Bakteri grup belirleme teknikleri = Bacterial typing techniques ; Burun = Nose ; Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Hayvanlar = Animals ; Koyunlar = Sheep ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Stenotrophomonas maltophilia = Stenotrophomonas maltophilia ; Sığırlar = Cattles

Özet:
Bu çalışmada, Stenotrophomonas maltophilia'nın sığır, koyun ve atların burunlarında ve çevrelerindeki sıklığı incelendi. Bu amaçla İç Anadolu Bölgesindeki 5 merkezden 60 at burun örneği, 182 sığır ve 120 koyunun burun ve tırnak arası örnekleri eşit sayıda toplandı. S.maltophilia izolasyonu için örneklerden selektif besiyeri olan VIA Agar'a ekimler yapıldı. Örnekler ayrıca direkt teşhis için PCR ile incelendi. Suşların antibiyotik duyarlılıkları Muller Hinton Agar'da disk difüzyon yöntemi ile incelendi.İncelenen toplam 362 örneğin 87 (%24)'sinden S.maltophilia izole edildi. Sığırlardan alınan 91'er burun ve tırnak arası örneğinden sırasıyla 22 (%24.1) ve 23 (%25.2); koyunlardan alınan 60'ar burun ve tırnak arası örneğinden sırasıyla 13 (%21.6) ve 10 (%16.6); atlardan alınan 60 burun örneğinden 19 (%31.6) S.maltophilia izole edildi. Örneklere direkt olarak uygulanan PCR yönteminde 362 örneğin 159 (%43.9)'unda pozitiflik saptandı. S.maltophilia'nın tüm izolatları; virülens faktörleri yönünden proteaz, Tween 80 hidrolizi ve hemoliz testlerinde pozitif iken fosfolipaz C testinde % 94.2 oranında pozitif bulundu. Sitotoksitesi incelenen 80 izolatın 28 (%35)'inde düşük, 19 (%23.7)'unda orta derece ve 11 (%13.7)'inde yüksek sitotoksik etki görüldü. İzolatların antibiyotik duyarlılıkları agar disk difüzyon yöntemi ile incelendi. Tüm sığır, koyun ve at suşları, siprofloksasin, enrofloksasin, sulfametoksazol/trimetoprim, ofloksasin ve azitromisin'e duyarlı; linkomisin/spektinomisin, tilosin, seftifur ve imipenem'e karşı dirençli bulundu. Tüm sığır suşları amoksasilin/klavulanik asit'e dirençli iken koyun ve at suşları sırasıyla %78.2 ve %89.4 dirençli bulundu. Tüm koyun suşları gentamisin'e duyarlı iken sığır ve at suşları sırasıyla %33.3 ve %10.5 dirençli bulundu. Tüm sığır ve koyun suşları tilmikosin'e duyarlı iken at suşları %5.2 dirençli olduğu saptandı. Benzer olarak tüm koyun ve at suşları kloramfenikol'e duyarlı iken sığır suşları %4.4 dirençli bulundu. Sığır, koyun ve at suşlarının, tetrasiklin, oksitetrasiklin ve seftazidime direnç yüzdeleri sırasıyla %60, %43.4, %47.3; %53.3, %47.8, %36.8; %62.2, %39.1, %26.3 olarak belirlendi.Bu sonuçlar, S.maltophilia'nın hayvanların burunlarında ve çevrelerinde yaygın olarak bulunduğunu gösterdi. Suşların antibiyotik dirençliliklerinin literatürlerde bildirilen insan suşlarına göre daha az olduğu belirlendi. S.maltophilia teşhisinde PCR yönteminin kültüre göre daha hassas olduğu saptandı.Anahtar Kelimeler: At, burun, koyun, sığır, Stenotrophomonas maltophilia.

Abstract:
The prevalence of Stenotrophomonas maltophilia in the nose and the environment of cattle, sheep and horses was investigated in this study. For this purpose, equal number of nose and interhoof samples from 182 cattle and 120 sheep and 60 nose samples from horses were collected in Central Anatolian region. The samples were cultured on selective VIA agar for the isolation of S.maltophilia. Samples were also examined by PCR for direct detection of organism. Antibiotic susceptibility of isolates were examined by disc diffusion method in Muller Hinton agar.S.maltophilia was isolated from 87 (24%) of 362 samples examined. Each 91 samples taken from cattle nose and interhoof, S.maltophilia was isolated from 22 (24.1%) and 23 (25.2%) samples, respectively. Similarly, each 60 samples taken from sheep nose and interhoof, S.maltophilia was isolated from 13 (21.6%) and 10 (16,6%) samples, respectively. S.maltophilia was isolated from 19 (31.6%) of 60 equine nose samples. Of 362 samples examined by PCR for direct detection of organism, 159 (43.9%) were positive. All isolates of S.maltophilia were positive in protease, Tween 80 hydrolysis, and hemolysis tests, while 94.2% was positive in phospholipase C test. Cytotoxic activity of 80 isolates was examined in MDBK cell culture, and the cytotoxic effect was found in 28 (35%) isolates as low, in 19 (23.7%) isolates as medium and in 11 (13.7%) isolates as high. Antibiotic susceptibilities of isolates were examined by agar disk diffusion method. All cattle, sheep and horse isolates were sensitive to ciprofloxacin, enrofloxacin, sulfametoxazole/trimetoprime, ofloxacin and azithromycin; and resistant to lincomycin/spectinomycin, tylocin, ceftiofur and imipenem. While all cattle strains were resistant to amoxacylin/clavulanic acid, 78.2% and 89.4% of sheep and horse isolates were found to be resistant, respectively. None of sheep strains, but 33.3% and 10.5% of cattle and horse strains were resistant to gentamicin, respectively. In all isolates, tilmicocin resistance was found only in 5.2% of horse isolates and chloramphenicole resistance was found only in 4.4% of cattle isolates. Resistance to tetracycline, oxytetracycline and ceftazidime were determined respectively in 60%, 43.4%, 47.3% in cattle isolates; 53.3%, 47.8%, 36.8% in sheep isolates; 62.2%, 39.1%, 26.3% in horse isolates.These results suggested that S.maltophilia is a common inhabitant of animal nose and their environment. It was also suggested that the animal strains were less resistant to antibiotics when compared to the proclaimed resistance of humanbeings in literature. It was also observed that the PCR was more sensitive when compared with culture in direct detection S.maltophilia.Key Words: Cattle, horse, nose, sheep, Stenotrophomonas maltophilia.