Behçet hastalığında intertlökin-16(Il-16) ve aıre gen mutasyonunun promotör metilasyon durumunun araştırılması
Investigation of promoter methylation status of intertleukin-16 (Il-16) and aire gene mutation in behçet's disease
Yazar: MELİH AKPUNAR
Danışman: DOÇ. DR. DEMET YALÇIN KEHRİBAR
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Dahiliye Ana Bilim Dalı / İç Hastalıkları Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: İç Hastalıkları = Internal diseases

Özet:
Giriş: Behçet Hastalığı ülkemizde sık görülen, özellikle genç erişkinlerde ciddi
morbidite ile seyreden ve etiyopatogenezi hakkında henüz net bir fikir birliği
sağlanamayan bir hastalıktır. Bu çalışmada Behçet Hastalığında interlökin-16 (IL-16)
ve otoimmun regülatör genlerindeki (AIRE) epigenetik değişikliklerin belirlenmesi ve
bu epigenetik değişimlerin hastalık mekanizmasıyla ilişkisininin araştırılması
amaçlanmıştır.
Yöntem: Çalışmamıza Ondokuz Mayıs Üniversitesi Tıp Fakültesi İç Hastalıkları
Anabilim Dalı, Romatoloji Bilim Dalı Polikliniklerine başvuran 18 yaş üstü hastalar
dahil edildi. Çalışma 2014 Uluslararası Behçet Hastalığı Kriterleri referans alınarak
BH teşhisi konan 40 hasta ile 40 sağlıklı gönüllünün periferik kan örnekleri alınarak
yapıldı. Gönüllülerden alınan kan örneklerinden DNA izolasyon kiti kullanılarak elde
edilen genomik DNA'ların DNA konsantrasyonları ve saflıkları nanodrop ile ölçüldü.
Sonrasında, DNA örnekleri, bisülfit modifikasyon kiti kullanılarak modifiye edildi.
Daha sonra metilasyona spesifik PCR yöntemiyle, metilasyona özgül dizayn edilen
primerler kullanılarak IL-16 ve AIRE genlerinin promotör metilasyon profilleri
belirlendi. Çalışmanın sonuçları istatistiksel analiz programı ile değerlendirildi.
Sonuçlar: Çalışmaya alınan Behçet Hastaları ve sağlıklı kontrol grubunun her ikisinde
de IL-16'nın promotör bölgesi metile olarak saptandı ve IL-16 geninin
ekspresyonunun güçlü olmadığı gösterildi. Diğer taraftan AIRE geninin promotör
bölgesi sağlıklı tüm bireylerde metile iken, Behçet Hastalarının tümünde unmetile
olarak saptandı.
Tartışma: Çalışmamız hem AIRE geninin hem de IL-16'nın Behçet Hastalığındaki
rolünü değerlendiren ilk araştırmadır. Çalışmamamızın sonuçlarına bakıldığında self
toleransın gelişiminde ve sürdürülmesinde önemli rolü olduğu gösterilen AIRE
geninin promotör bölgesinin unmetile olması, Behçet Hastalığında otoimmun
regülatör geninin aktif hale geldiğini ve otoreaktif T hücreleri elimine eden otoimmün
regülatuar protein üretimi yaptığını göstermektedir. Bu sonucun Behçet hastalığının
otoimmun doğasına işaret ettiğini düşünmekteyiz. Çalışmamızın diğer bir sonucunda
ise birçok romatizmal hastalığın patogenezinde rol alan IL-16'nın Behçet Hastalığı
patogenezinde önemli bir rolünün olmadığı gösterilmiştir.

Abstract:
Introduction: Behçet's disease is a common disease in our country, especially in
young adults, with serious morbidity, and we have not yet been able to reach a clear
consensus on its etiopathogenesis. This study, it was aimed to determine the epigenetic
changes in Interleukin-16 (IL-16) and Autoimmune Regulator Genes (AIRE) in
Behçet's Disease and to investigate the relationship of these epigenetic changes with
the disease mechanism.
Methods: Patients over the age of 18 who applied to Ondokuz Mayıs University
Faculty of Medicine, Department of Internal Medicine, and Department of
Rheumatology Outpatient Clinics were included in our study. The study was
conducted by taking peripheral blood samples from 40 patients diagnosed with
Behcet's disease according to the 2014 International Behcet's Disease Criteria and 40
healthy volunteers. DNA concentrations and purity of genomic DNAs obtained from
blood samples taken from volunteers using DNA isolation kit were measured with
nanodrop. Afterwards, the DNA samples were modified using the bisulfite
modification kit. Then, promoter methylation profiles of IL-16 and AIRE genes were
determined by methylation-specific PCR method using primers designed specifically
for methylation. The results of the study were evaluated with the statistical analysis
program.
Results: The promoter region of IL-16 was found to be methylated in both Behçet's
Diseases and healthy controls included in the study, and it was shown that the
expression of the IL-16 was not strong. On the other hand, while the promoter region
of the AIRE genes was methylated in all healthy individuals, it was found to be
unmethylated in all Behçet's patients.
Discussion: Our study is the first to evaluate the role of both AIRE genes and IL-16
in Behçet's disease. Considering the results of our study, the unmethylation of the
promoter region of the AIRE genes, which has been shown to have an important role
in the development and maintenance of self-tolerance, shows that the AIRE genes gene
is activated in Behçet's Disease and produces an autoimmune regulatory protein that
eliminates autoreactive T cells. We think that this result indicates the autoimmune
nature of Behçet's disease. Another result of our study shows that IL-16, which has a
xiii
role in the pathogenesis of many rheumatic diseases, does not have an important role
in the pathogenesis of Behçet's disease.