Protokatekuik asitin hücre proliferasyonu ve apoptoz üzerindeki etkilerinin memeli hücre kültür yöntemiyle in vitro belirlenmesi
Determination of proliferative and apoptotic effects of protocatechuic acid with mammalian cell culture method in vitro
Yazar: EMİNE İNAN
Danışman: DOÇ. DR. AYŞE PINAR ÖZTOPCU VATAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, insan (T98G) ve sıçan glioma (C6) hücreleri üzerindeki protokatekuik asitin farklı dozlarının (0,5; 0,75; 1; 1,5; 2; 2,5; 3 ve 3,5 mM) hücre morfolojisi, çoğalması ve apoptotik-nekrotik etkileri zamana bağlı olarak incelenmiştir. Protokatekuik asitin hücre çoğalması üzerindeki etkileri 3-(4,5-Dimetiltriazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium bromid (MTT) ve nötral kırmızısı (NR) yöntemleriyle değerlendirilmiştir. Protokatekuik asitin, T98G hücrelerinde, hem hücre morfolojisi hem de çoğalması üzerinde herhangi bir etkisinin olmadığı belirlenmiştir (p>0,05). C6 hücrelerinde ise 24 saatte 2 mM, 48 saatte ise 1,5 mM dozundan itibaren hücre morfolojisi üzerinde değişikliklere neden olduğu gözlenmiştir. Hücre çoğalması üzerindeki baskılayıcı etkisi ise 24 saatte 2 mM (p<0,001); 48 saatte ise 1,5 mM (p<0,001) dozundan itibaren görülmeye başlanmıştır. MTT yöntemine göre 24 ve 48 saatteki IC50 değerleri sırasıyla 2,79 ve 1,84 mM, NR yöntemine göre ise 2,67 ve 1,79 mM olarak hesaplanmıştır. Seçilen protokatekuik asit dozlarının C6 hücreleri üzerinde doza ve zamana bağlı olarak anlamlı bir nekrotik etkiye neden olmazken (p>0,05), apoptotik etkiyi artırdığı belirlenmiştir (p<0,001). Elde edilen tüm veriler, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey'in çok yönlü karşılaştırma yöntemi ile istatistiksel olarak değerlendirilmiştir.
Sonuç olarak, protokatekuik asitin doza ve zamana bağlı olarak hücre morfolojisi, çoğalması ve apoptotik ve/veya nekrotik etkileri T98G ve C6 glioma hücreleri üzerinde ilk defa incelenmiştir. Protokatekuik asitin, doza ve zamana bağlı olarak T98G hücrelerinde, hem hücre morfolojisi hem de çoğalması üzerinde herhangi bir etkisinin olmadığı buna rağmen, C6 hücrelerinde hücre morfolojisini etkilediği, hücre çoğalmasını baskıladığı ve apoptotik etkiyi arttırdığı belirlenmiştir.

Anahtar Kelimeler: Protokatekuik asit, glioma, sitotoksisite, apoptoz

Abstract:
In this study, cell morphology, cell proliferation, apoptotic and necrotic effects of different doses of protocatechuic acid (0.5; 0.75; 1; 1.5; 2; 2.5; 3; 3.5 mM) on human (T98G) and rat glioma (C6) cells time dependent manner are investigated. The effects of protocatechuic acid on cell proliferation are evaluated with 3 - (4,5-Dimetiltriazol-2-yl) -2,5 diphenyltetrazolium bromide (MTT) and neutral red (NR) methods. It is determined that protocatechuic acid hasn't any effect on both morphological and proliferation on T98G cell (p>0.05). It is observed that protocatechuic acid cause cell morphological changes in C6 cells as beginning from dosage of 2 mM at 24 hr and 1.5 mM at 48 hr. Its effect on cell viability is observed as beginning from doses 2 mM at 24 hr (p<0.001) and 1.5 mM at 48 hr (p<0.001). While IC50 values are calculated as 2.79 and 1.84 mM for 24 and 48 hr respectively according to MTT method; these values are calculated as 2.67 and 1.79 mM according to NR method. It is observed that chosen doses of protocatechuic acid do not cause significantly any necrotic effect on C6 cells depending on dose and time(p>0.05); on the other hand, increase apoptotic effect (p<0.001). Obtained all data evaluated as statistically, with one way analysis of variance (ANOVA) and then Tukey's multiple comparison tests.
As a result; cell morphology, cell proliferation, apoptotic and necrotic effects of protocatechuic acid by depending on doses and time are researched on T98G and C6 cell lines for the first time. Protocatechuic acid dose and time dependent in T98G cells, has no effect on cell morphology and also on the proliferation of cells any significantly, although on C6 cells, effects cell morphology, inhibits cell proliferation and increases apoptotic effects was determined.

Key Words: Protocatechuic acid, glioma, cytotoxicity, apoptosis