Kök yüzeyi modifikatörü olarak sıvı trombositten zengin fibrin (S-TZF) uygulamasının gingival fibroblast ataşmanı üzerine etkisinin in vitro olarak incelenmesi
In vitro investigation of the effect of injectable platelet rich fibrin (I-PRF) application on gingival fibroblast attachment as A root surface modifier
Yazar: CEMRE ALTAY
Danışman: PROF. DR. MAZLUM BÜLENT KURTİŞ
Gazi Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Periodontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2022
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Diş kökü = Tooth root ; Dişler = Teeth ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Gingiva = Gingiva ; Periodontal hastalıklar = Periodontal diseases ; Rejenerasyon = Regeneration ; Trombositten zengin fibrin = Platelet rich fibrin ; İn vitro = In vitro

Özet:
Periodontal hastalık sonucu, doku hasarı meydana gelen bölgelerde yumuşak ve sert doku kaybının yanında açığa çıkan kök yüzeyinde de çeşitli değişiklikler meydana gelmektedir. Bu değişimler bölgedeki iyileşmeyi olumsuz yönde etkilemekte ve bu nedenle kök yüzeyi üzerinde çeşitli modifikasyon işlemleriyle bu olumsuzlukların giderilmesine çalışılmaktadır. Yalnızca mekanik olarak kök yüzeyi düzeltmesi sonrasında kök yüzeyinde smear tabakası kalır ve ataşmanı negatif yönde etkiler. Smear tabakasını uzaklaştırmak amacıyla kök yüzeylerine asitli bileşenler uygulanmakta ve iyileşmeyi artırmak için kök yüzeyi modifikatörleri kullanılmaktadır. Bu çalışma, kullanılan modifikatörlere ek olabilecek otojen kaynaklı kan ürününün (sıvı trombositten zengin fibrin, s-TZF) etkinliğini değerlendirildi. İlk olarak çekilmiş dişler üzerinde trefen frezler yardımıyla 4 mm çapında dentin diskler elde edildi. Ardından kök yüzeyi düzeltmesi işlemi yapıldı ve hasarlı sement ortadan kaldırıldı. Örnekler her biri 2 alt grup içeren 5 ana gruba ayrıldı. Birinci alt gruptaki dişler floresan ve elektron mikroskopi (SEM) analizi için, ikinci alt gruptaki dişler ise gen ekspresyonu analizi için kullanıldı. Bu gruplara ek olarak, her gruptan 8'er örnek olacak şekilde XTT (Terazolium Salt) analizi için dişler çalışmaya dahil edildi. Gingival Fibroblast Hücreleri (GF) dentin disklerinde büyütüldü. Büyütülen hücrelerin yüzeydeki bağlanma, çoğalma ve farklılaşma faaliyetleri takip edildi. Transforme Edici Büyüme Faktörü-beta (TGF-β), Tip 1 Kolajen α1 ve alkalen fosfataz (ALP) için gen ekspresyon analizi yapıldı. Numuneler üzerinde s-TZF'lerin uygulanma sürelerinin bu parametrelere etkileri karşılaştırıldı. XTT analizinde, etilen diamin tetra asetik asit (EDTA) uygulanan grup ile diğer gruplar arasında anlamlı fark bulundu. s-TZF 1 dk., s-TZF 3 dk., s-TZF 5 dk. ve EMD grubu arasında anlamlı fark gözlemlenmedi. Floresan mikroskopi analizinde hücrelerin sitoiskelet organizasyonları değerlendirildi. En iyi organizasyon s-TZF 5 dk ve EMD gruplarında gözlendi. EDTA ve s-TZF 1dk gruplarında aktin filamentlerin oldukça az organize olduğu, s-TZF 3dk grubunda ise filamentlerin organize olmaya başladığı fakat EMD ve s-TZF 5dk grupları kadar belirgin olmadığı gözlendi. SEM analizinde hücrelerin morfolojileri değerlendirildi. EDTA grubunda GF'ların küresel morfolojide ve yüzeye tam ataşman göstermedikleri gözlemlendi. s-TZF 1dk grubunda hücrelerin yassılaşmaya başladığı; s-TZF 3dk, s-TZF 5dk ve EMD gruplarında hücrelerin fenotipik iğ morfolojilerini kazandığı görüntülendi. TGF-β için yapılan değerlendirmede en yüksek ekspresyon s-TZF 5 dk grubundan elde edildi. EMD grubu ikinci en yüksek ekspresyonu gösterdi. Tip 1 Kolajen α1 gen ekspresyonu değerlendirmesinde, en yüksek ekspresyonu EMD grubu gösterdi. EMD grubunu s-TZF 5 dk grubu takip etti. GF'ların ALP aktivitelerinin ölçümü hücre içi ve hücre dışı olarak tayin edildi. Hücre içi ALP konsantrasyonu hücre dışından daha az miktarda bulundu. s-TZF'nin kök yüzeyindeki etkinliğinin değerlendirildiği ilave çalışmalara ihtiyaç bulunmaktadır.
Anahtar Kelimeler   	:	Rejenerasyon, s-TZF, in vitro, kök modifikasyonu

Abstract:
In areas where tissue damage has occurred because of periodontal disease, various changes occur in the exposed root surface as well as soft and hard tissue loss. These changes negatively affect healing of the area; these negative effects are planning to be eliminated by modification procedures on the root surface. Smear layer remains on root surface when only mechanical root planning is applied and negatively affects cell attachment. To remove smear layer, acidic components are applied on root surfaces and root surface modifiers are commonly used to improve healing. This study evaluates effectiveness of autogenous blood product (injectable platelet-rich fibrin i-PRF), which may be in addition to this root surface modifiers. First, 4 mm diameter dentin discs are obtained from extracted teeth using trephen burs. Then, root surface planning procedure applied to the samples and damaged cement removed completely. The samples are divided into 5 main groups, each containing 2 subgroups. One subgroup is used for fluorescent and electron microscope (SEM) analysis while the other subgroup is used for gene expression for each main group. In addition to these two subgroups, another subgroup is included in the study to implement XTT (Terazolium Salt) analysis by taking 8 samples from each main group. Gingival Fibroblast Cells (GF) are grown on dentin discs. Attachment, proliferation and differentiation activities on grown cell's surfaces are monitored. Gene expression analysis implemented for Transforming Growth Factor-beta (TGF-β), Type 1 Collagen α1 and alkaline phosphatase. The effects of s-TZF application duration to samples on these parameters are compared. Material difference detected between ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) applied group and other groups on XTT analysis. No significant difference observed between s-TZF 1min., s-TZF 3min, s-TZF 5min and EMD groups. Cytoskeleton organizations are evaluated on fluorescent microscopy analysis. The most successful organizations are observed on s-TZF 5min. and EMD groups. Actin filaments are observed poorly organized in EDTA and s-TZF 1min. groups, starting to organize in s-TZF 3min. groups while still not as evident compared to EMD and s-TZF 5min. groups. Cell morphologies are evaluated on SEM analysis. GF's are observed having spherical morphology and not fully attached to the surface in EDTA group. The cells are observed starting to flatten in s-TZF 1min group; while cells in s-TZF 3min., s-TZF 5min., and EMD groups are observed as phenotypic spindle morphology. Highest expression obtained from s-TZF 5min. group on TGF-β while EMD demonstrated second highest expression. EMD demonstrated highest expression on Type 1 Collagen α1 evaluation. EMD is followed by s-TZF 5min group. Measurement of GF's ALP activities are obtained both intracellular and extracellular. Intracellular ALP concentration is obtained less than extracellular. Additional studies that evaluate effectiveness of s-TZF on root surface are required.
Key Words              	:	Regeneration, i-PRF, in vitro, root modification