İmmün disregülasyonla seyreden primer immün yetmezliklerde immünolojik testlerin tanısal değeri
The diagnostic value of immunological assays in primary immune deficiencies with immune dysregulation
Yazar: BENGÜ AKÇAM
Danışman: PROF. DR. SAFA BARIŞ
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Alerji-İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; Antijenler = Antigens ; T lenfositleri-düzenleyici = T lymphocytes-regulatory ; İmmün sistem = Immune system ; İmmün yetmezlik = Immun deficiency ; İmmünolojik testler = Immunologic tests

Özet:
Amaç: 
Primer immün yetmezlikler içerisinde immün disregülasyonla seyreden lipopolysaccharide-responsive beige-like anchor protein(LRBA), cytotoxic T-lymphocyte antigen-4(CTLA-4) eksiklikleri ve signal transducer and activator of transcription-1(STAT1) fonksiyon kazanımı(GOF) hastalığı tekrarlayan enfeksiyonlar ve otoimmüniteyle ortaya çıkabilmektedir. CTLA-4 ve LRBA eksikliğinde Treg hücrelerde sayısal ve fonksiyonel azalma oluşabilmektedir. STAT1-GOF hastalarda Th17 hücrelerinde azalma görülmektedir. Çalışmadaki amacımız LRBA, CTLA-4 eksikliği ve STAT1-GOF hastalıklarında moleküler tanıyı öngörebilecek immünolojik testlerin tanısal değerinin araştırılmasıdır.

Yöntem:
Çok merkezli yürütülen çalışmada hastaların klinik ve laboratuvar özellikleri değerlendirildi. Lenfosit alt grupları, T foliküler hücre(TFH), LRBA protein ifadesinin yanında uyaransız ve 16 saatlik uyaranlı ortamda Treg hücre oranları, CD25, FOXP3 ve CTLA-4 protein ifadeleri akan hücre ölçerde analiz edildi. ELISA ile sCD25 düzeyi ölçüldü. Hücre içi Th1/Th17 sitokin analizi ve farklı sürelerde IFN-β ile uyarımlı p-STAT1 protein fosforilasyonu değerlendirildi.

Bulgular:
Çalışmaya LRBA(n=29), CTLA-4(n=12) eksikliği ve STAT1-GOF(n=4) olgusu alındı. Tedavi öncesi üç hastalık grubunda TFH oranları sağlıklı kontrollere göre anlamlı olarak yüksekti. SolubleCD25 düzeyi LRBA eksikliğinde anlamlı olarak yüksekti. Abatacept tedavisiyle TFH ve sCD25 düzeylerinin düştüğü görüldü. LRBA protein ekspresyonu sadece LRBA eksikliğinde anlamlı olarak düşüktü. Uyaransız ortamda LRBA eksikliği olgularında CTLA-4 ekspresyonu sağlıklı kontrol ve CTLA-4 eksikliği olgularına göre anlamlı olarak düşükken, T hücre uyarımıyla beraber sağlıklı kontrollere benzer ifade artışı gözlendi. Bu artış CTLA-4 eksikliği olgularından anlamlı olarak daha yüksek bulundu. Her iki eksiklikte sağlıklı kontrollere göre uyarımla Treg hücre oranı, CD25 ve FOXP3 protein ekspresyonunda anlamlı düşüklük gözlendi. STAT1-GOF hastalarında Th17 yüzdesi anlamlı olarak düşük bulundu.

Sonuç:
İmmün disregülasyonla seyreden olgularda akan hücre ölçer bulguları erken tanı ve hedefe yönelik gen dizileme için yol göstericidir. 

Anahtar Sözcükler: Primer immün yetmezlikler, LRBA eksikliği, CTLA-4 eksikliği, STAT1 GOF, Treg

Abstract:
Aim:
LPS responsive beige-like anchor protein(LRBA), cytotoxic T-lymphocyte protein-4(CTLA-4) deficiencies and signal transducer and activator of transcription-1(STAT1) GOF present with susceptibility to infections and autoimmunity. LRBA and CTLA-4 deficiencies demonstrate similar immune phenotypes that characterize by Treg deficiency. STAT1-GOF patients show defective Th17 development. We sought to investigate the role of flow cytometry in predicting the genetic defect in patients with LRBA, CTLA-4 deficiencies and STAT1-GOF.

Method:
The patients were recruited from different immunology centers and evaluated clinically and laboratory for lymphocyte subsets, T follicular helper cells(TFH), LRBA expression, baseline and 16 hours stimulated Tregs, CD25, FOXP3 and CTLA-4 expression. We also measured sCD25 level by ELISA. Intracellular Th1/Th17 cytokines and IFN-β-induced p-STAT1 phosphorylation was determined in STAT1-GOF patients.

Findings:
LRBA(n=29), CTLA-4(n=12) deficiency and STAT1-GOF(n=4) patients were included. Baseline TFH cells was significantly high in all study groups, compared to healthy controls. sCD25 level was found to be significantly higher in LRBA deficiency and LRBA protein expression was only low in the same patients' group. Baseline CTLA-4 expression was significantly diminished in LRBA deficiency, but after short-term T-cell stimulation, significant CTLA-4 induction was observed in LRBA deficiency and controls, while this expansion was lower in CTLA4-deficient patients. After T-cell stimulation, the frequency of Tregs significantly increased in both disease group, but noted as lower than controls. Th17 cells were significantly decreased in STAT1-GOF patients. 

Result:
The utility of this flow cytometric approach is useful in predicting the defective gene and can thus allow targeted genetic sequencing to provide rapid diagnosis of immune dysregulatory disorders.

Keywords: Primary immune deficiencies, LRBA deficiency, CTLA-4 deficiency, STAT1 GOF, Treg