MDA-MB 231 meme kanseri hücrelerinde TWIST 1 baskılanmasının miRNA düzeyinde etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of TWIST 1 suppression on miRNA level in MDA-MB 231 breast cancer cells
Yazar: AKIN KOL
Danışman: DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antisens elementler (genetik) = Antisense elements (genetics) ; Genler = Genes ; Genler-TWIST = Genes-TWIST ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Meme kanseri (MK) kadınlar arasında en çok karşılaşılan kanser türüdür. Yayılım göstermeden erken dönemde tanı konması durumunda 5 yıllık sağ kalım oranı %95'den fazladır.
Yayılım, metastaz ve anjiyogenez ile ilişkilendirilir. Diğer MK hücrelerine göre daha agresif bir yapıya sahip olan MDA-MB 231, metastatik ve anjiyogenik hücrelerdir. Metastaz ve anjiyogenez, Twist1 geni gibi transkripsiyon faktörlerince düzenlenir.
Twist1 spesifik DNA bölgelerine bağlanabilen ve genlerin faaliyetini kontrol eden transkripsiyon faktörü (TF)'dür. Twist1, sağlıklı embriyoların hücre döngüsünde pozitif veya negatif düzenleyici olarak çeşitli farklılaşma süreçlerinde etkilidir. Yapılan çalışmalarda Twist1 geninin embriyonik dönemden sonra yeniden protein sentezlenmesi hastalarda kötü prognoz ile sonuçlandığı gösterilmiştir. Twist1, kanser ile ilişkilendirilen mikro RNA (miRNA)'ların da ekspresyonlarını düzenler.
miRNA'lar DNA'dan transkripsiyonu yapılan ama proteine çevirisi yapılmayan küçük RNA'lardır. Yapılan birçok çalışmada bu küçük moleküllerin metastaz, anjiyogenez ve apoptozis gibi hücresel mekanizmalarda kritik öneme sahip olduğu gösterilmiştir.
Bu çalışmada MDA-MB 231 MK hücresinde aktif olan Twist1 TF'ü geni susturulmasının miRNA'ların ekspresyon düzeylerine etkisi incendi. MDA-MB 231 hücrelerinde düzenleyici işlev gösteren Twist1 geni, anti-sens Twist1 vektörü transfeksiyonu ile susturuldu. Real Time PCR analizi ile miRNA ekspresyon düzeylerindeki farklılıklar incelendi.
Çalışma sonucunda, miR-1-1 ve miR-210-3p ekspresyonlarında yukarı yönlü düzenlenme olduğu, miR-193b-3p, miR-181b-5p, miR-148a-3p ekspresyonlarında aşağı yönlü düzenlenme olduğu tespit edildi.
Çalışmada elde edilen verilere göre, Twist1 gen ifadesinin susturulmasıyla invazyon, metastaz ve apoptozis ile ilişkilendirilen bazı miRNA'ların ekspresyon düzeyleri değişti. Bu verilere göre Twist1 genini susturmakla, meme kanserinde invazyon, metastaz ve apoptozisin etkilenebileceği sonucuna ulaşıldı.

Anahtar Sözcükler: Antisens; MDA-MB 231; miRNA; Twist1. Anahtar Sözcükler: Antisens; MDA-MB 231; miRNA; Twist1.

Abstract:
Breast cancer (MS) is the most common type of cancer among women. In the case of early diagnosis without spreading, the 5-year survival rate is more than 95%.
Propagation is associated with metastasis and angiogenesis. MDA-MB 231, which has a more aggressive structure compared to other MK cells, is metastatic and angiogenic cells. Metastasis and angiogenesis are regulated by transcription factors such as the Twist1 gene.
Twist1 is a transcription factor (TF) that can bind specific DNA regions and control the activity of genes. Twist1 is effective in various differentiation processes of healthy embryos as a positive or negative regulator in the cell cycle. In studies, Twist1 gene has been shown to result in a poor prognosis in patients with protein re-expression after embryonic period. Twist1 also regulates the expression of micro-RNA (miRNA) genes associated with cancer.
miRNAs are small RNAs transcribed from DNA but not translated into protein. Many studies have shown that these small molecules are critical in cellular mechanisms such as metastasis, angiogenesis and apoptozis.
In this study, the effect of silencing of Twist1 TF gene active in MDA-MB 231 MK cell was affected by expression levels of miRNAs. In the MDA-MB 231 cells, the regulatory Twist1 gene was suppressed by the anti-sense Twist1 vector transfection. Differences in miRNA expression levels were analyzed by Real Time PCR analysis.
As a result of the study, it was found that miR-1-1 and miR-210-3p expressions were upregulated and miR-193b-3p, miR-181b-5p and miR-148a-3p expressions were downregulated.
According to the data obtained in the study, the expression levels of some miRNAs associated with invasion, metastasis and apoptozis were changed by silencing Twist1 gene expression. According to these data, it was concluded that silencing the Twist1 gene may effect invasion, metastasis and apoptozis in breast cancer.

Keywords; Antisens; MDA-MB 231; miRNA; Twist1.