Rekombinant ROR1 tirozin kinaz antijeninin üretilmesi
Production of recombinant ROR1 tyrosine kinase antigen
Yazar: MERVE SAMUR
Danışman: DOÇ. DR. ARZU ATALAY
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Antijenler = Antigens ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hücre dışı sıvı = Extracellular fluid ; Reseptörler = Receptors

Özet:
Reseptör tirozin kinaz benzeri orphan reseptör 1 (ROR1), tirozin kinaz reseptör ailesinin bir üyesi, onkoembriyonik transmembran proteindir. Emriyogenez sırasında normal ifade edilmekte, sağlıklı yetişkin dokularda ifadesi baskılanırken birçok hematolojik ve solid malignitede kanser hücre yüzeyinde aşırı ifade edilmektedir. ROR1 ligand bağlanma alanına Wnt5a endojen ligandın bağlanması ile ROR1 aktive edilir ve aktivasyon artan hücre içi sinyalleşme, tümör büyümesi, hayatta kalması, terapi direnci gibi tümör gelişimi ve ilerlemesine katkı sağlayan hücresel süreçler ile sonuçlanır. ROR1'in kanser gelişimi ve ilerlemesine sağladığı fonksiyonel katkının anlaşılması ROR1'i, yeni immünoterapiler için potansiyel bir hedef haline getirmiştir. Klinik öncesi ve klinik çalışmalarda ROR1'i hedefleyen antikor bazlı immünoterapiler geliştirilmiş ve yenileri geliştirilmeye devam etmektedir.  
Bu tez çalışmasında ROR1 hücre dışı alanının tamamını kapsayan ve ROR1 hücre dışı alanında bulunan fzd+kringle alanlarını kapsayan iki bölgeye karşı Histidin taq konjuge rekombinant protein üretilmiştir. Bu amaçla ilgili diziler klonlanmış, bakteriyel pET30 ekspresyon sistemi ile ifade ettirilmiş ve Ni-NTA rezin kullanılarak saflaştırılmıştır. Üretilmiş bu iki rekombinant protein, ileride hibridoma teknolojisi ile anti-ROR1 nötralizan monoklonal antikor geliştirilmesi için antijen olarak kullanılacaktır.

Abstract:
Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) is a member of the tyrosine kinase receptor family that is an oncoembryonic transmembrane protein. ROR1 is normally expressed during embryogenesis, generally repressed in normal healthy adult tissues and overexpressed on the cancer cell surface in various solid and hematological malignancies. Binding of the Wnt5a endogenous ligand to the ROR1 ligand binding site activates ROR1, enhanced intracellular signaling and results in cellular processes that drive tumor development and progression, such as increased intracellular signaling, tumor growth, survival, and therapy resistance. Understanding the functional contribution of ROR1 to cancer development and progression has made ROR1 a potential target for new immunotherapies. Antibody-based immunotherapies targeting ROR1 have been developed in preclinical and clinical studies and new ones are under development.
In this thesis, Histidine taq conjugated recombinant protein was produced against two regions covering the entire ROR1 extracellular domain and fzd+kringle domains in the ROR1 extracellular domain. For this, the related sequences were cloned, expressed by the bacterial pET30 expression system and purified using Ni-NTA resin. These two recombinant proteins have been produced ,will be used as antigens for the development of anti-ROR1 neutralizing monoclonal antibodies by hybridoma technology in the future.