Koç testislerinde Brucella spp. varlığının bakteriyolojik ve moleküler yöntemlerle karşılaştırmalı olarak incelenmesi
Comparative investigation of the presence of Brucella spp. in ram testicles by bacteriological and molecular methods
Yazar: HÜSAMETTİN AVCI
Danışman: PROF. DR. KEMAL METİNER
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Veteriner Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bruselloz, dünya genelinde yaygın olarak görülen bir zoonozdur. Hastalık, bulaştığı sürülerde damızlık değer kayıplarına, infertiliteye, süt kayıplarına ve abortlara neden olurken; hayvanlarla ve hayvansal ürünlerle temas halinde olan insanlara da bulaşıp halk sağlığı problemlerine yol açmaktadır. Zoonotik karekteri olan Brucella etkenlerinin çevre ve halk sağlığı açısından önemi büyüktür.
Bu çalışmanın amacı; İstanbul ilinde bulunan mezbahanelere kesim amacıyla getirilen farklı yaş ve ırkta olan 150 adet erkek toklu ve koç'a ait olan testis örneklerin, Brucella spp. yönünden bakteriyolojik ve moleküler yöntemlerle karşılaştırmalı olarak incelenmesini içermektedir.
Bu amaçla, Marmara Bölgesinde bulunan farklı illerden kesim amacıyla mezbahanelere getirilen koçlardan 150 hayvana ait testis örnekleri steril poşetlere alınarak soğuk zincirde Pendik Veteriner Kontrol Enstitüsü (PVKE) Müdürlüğü Brusella Referans Teşhis Laboratuvarına getirildi ve Brucella spp. yönünden bakteriyolojik ve moleküler yöntemlerle karşılaştırmalı olarak incelendi.
Alınan örneklerden sadece bir hayvana ait testis örneğinden (%0,67) Brucella spp. izole edildi. Bu izolatın fenotipik testler sonucunda B. melitensis biyotip 3 olduğu belirlendi. Real-Time PCR yönteminde, hazır ekstraksiyon kiti kullanılarak yapılan ekstraksiyon sonrası elde edilen DNA örneklerine, B. melitensis, B. ovis, B. melitensis Rev1 ve B. abortus türlerine ait spesifik primer ve problar kullanıldı. Kültürde B. melitensis biyotip 3 olarak identifiye edilen örnek, Real-Time PCR çalışmasında da B. melitensis olarak identifiye edildi. Bu çalışmada, aynı testis örneğinden hem fenotipik hem de genotipik pozitiflik saptandı ve Marmara Bölgesinden seçilen hayvan çalışma grubunda bruselloz pozitifliğinin %0,67 olduğu belirlendi. 
Sonuç olarak, elde edilen veriler incelendiğinde, B. melitensis'in hala küçükbaş hayvanlarda baskın bir tür olduğu ve gelecekte gerçekleştirilecek diğer epidemiyolojik çalışmalarda her iki yöntemin etken tanımlanmasında kullanılabileceği sonucuna varılmıştır. Ancak Real-Time PCR testinde kültür yöntemine göre daha hızlı ve tanısal gücünün yüksek olması ilerde yapılacak kontrol ve eradikasyon çalışmalarında avantaj sağlayabileceği düşünülmektedir. Enfeksiyon yurdumuzda büyük ekonomik kayıplara neden olmasından dolayı, ulusal strateji planlarının devam ettirilmesi gerekliliği görülmektedir. Bu araştırma, ulusal ve uluslararası literatüre katkı sağlayacak ve gelecekte yapılacak geniş kapsamlı çalışmalarda araştırıcılara ışık tutacaktır.

Abstract:
Brucellosis is a widespread zoonotic disease globally. The disease causes significant economic losses in infected herds, leading to decreased breeding value, infertility, milk losses, and abortions. Moreover, it poses a threat to public health as it can be transmitted to humans in contact with infected animals and animal products. The significance of Brucella agents with zoonotic characteristics for both the environment and public health is substantial.
The aim of this study is to conduct a comparative analysis, using bacteriological and molecular methods, of testicular samples from 150 rams of different ages and breeds brought to slaughterhouses in Istanbul.
For this purpose, testicular samples from 150 rams brought to slaughterhouses from various cities in the Marmara Region were collected in sterile bags, maintaining the cold chain. These samples were transported to the Brucella Reference Diagnostic Laboratory at the Pendik Veterinary Control Institute (PVKE) for bacteriological and molecular analysis.
From the collected samples, Brucella spp. was isolated from only one ram's testicular sample (0.67%). Phenotypic tests identified the isolate as B. melitensis biotype 3. In the Real-Time PCR assay, DNA samples obtained after extraction using a commercial extraction kit were tested with specific primers and probes for B. melitensis, B. ovis, B. melitensis Rev1, and B. abortus species. The sample identified as B. melitensis biotype 3 through culture was also confirmed as B. melitensis in Real-Time PCR. This study revealed both phenotypic and genotypic positivity in the same testicular sample. Selected from the Marmara Region, it was determined that the brucellosis positivity rate in the animal study group is 0.67% .
In conclusion, the data suggest that B. melitensis remains a dominant species in small ruminants, and both methods can be used for pathogen identification in future epidemiological studies. However, considering the faster turnaround and higher diagnostic power of Real-Time PCR compared to culture, it is deemed advantageous for future control and eradication efforts. Given the substantial economic losses caused by infection in our country, the continuation of national strategic plans is deemed necessary. This research will contribute to national and international literature and guide researchers in future comprehensive studies.