Rose-bengal testi (+), serum tüp aglütinasyon testi (-) ve coombs testi (-) olan ve klinik olarak bruselloz şüpheli hastaların serumunda brucella DNA'nın real time PCR yöntemiyle aranması
Detection of brucella DNA by realtime PCR assay in brucellosis suspected patients' serum specimens with rose-bengal (+),serum tube agglutination test (-)and coombs test (-)
Yazar: HAKAN TEMİZ
Danışman: PROF.DR. KADRİ GÜL
Dicle Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2006
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
ÖZETBrucella cinsi bakterilerin etkeni olduğu bruselloz; dünyada önemli halk sağlığıproblemi oluşturmaktadır. Hastalığın ciddiyeti ve insanlar için uygun aşının yokluğundandolayı biyoterörizm ajanı olarak kullanılabilmektedir.Brusellozda genel infeksiyon belirtilerinin yanında özgül klinik belirtilerininolmamasından dolayı laboratuvar tanı yöntemleri ön plana çıkmıştır. Bruselloz tanısında;mikroorganizmanın izolasyonundaki güçlüklerden dolayı serolojik yöntemlerden daha fazlayararlanılmaktadır. Serolojik testlerde endemik bölgelerde yaşayan sağlıklı kişilerde depozitiflik görülebilmekte ve ayrıca 1/20 ve 1/160 arasındaki titreleri yorumlamak güçolmaktadır. Ancak son yıllarda moleküler yöntemler hastalığın tanısında yaygın olarakkullanılmaya başlanmıştır.Bu çalışmada; Dicle üniversitesi Tıp Fakültesi klinik ve polikliniklerden brusellozön tanısı ile Merkez Laboratuvarına gönderilen hasta serum örneklerinden, Rose Bengal testipozitif, Standart Tüp Aglütinasyon testi titresi 1/160'tan düşük ve Coombs testi negatifolanlarda, Brucella DNA'nın real time PCR yöntemiyle aranması amaçlandı.Çalışmaya alınan RBT pozitif olan toplam 90 serum örneğinin 21 tanesi (%23.3)1/20 titrede, 41 tanesi (%45.5) 1/40 titrede ve 28 tanesi de (%31.1) 1/80 titrede pozitifbulunmuştur. real time PCR ile 90 serum örneğinde yapılan çalışmada ise 3 hastada (%3.3)Brucella DNA pozitif bulundu. Çalışmamızda saptadığımız pozitif PCR sonuçlarının;bölgemizde sık rastladığımız kronik veya tam tedavi görmemiş hastalara ait serumlarolduğunu düşünmekteyiz.40PCR testinin; duyarlılığının yüksek olması, hızlı olması, herhangi bir vücutdokusunda uygulanabilmesi, bulaştan 10 gün sonra bile pozitif sonuç vermesi, laboratuvardapersonele bulaş riskinin diğer yöntemlere göre az olmasından dolayı, yöntemin çalışmasındatam bir standardizasyon sağlandıktan sonra rutin laboratuvar tanısında kullanılması önemli birgelişme olarak kabul edilmektedir.41

Abstract:
SUMMARYBrucellosis is a zoonosis caused by bacteria of the genus Brucella and an importantpublic health problem in many parts of the world. There is still no effective vaccine forhumans and these bacteria can be used as bioterrorism agent.Brucellosis has a great variety of clinical manifestations, making it difficult todiagnose clinically. Therefore; isolation or detection of specific antibodies is essential forconfirmation of the diagnosis. Serologic tests play a major role in cases when the diseasecannot be detected by culture. However; the interpretation of these tests is often difficult;particularly in patients with chronic brucellosis and in areas of endemicity, where a highportion of the population have antibodies against brucellosis. In last decades; PCR-basedassays have been applied for diagnosis of brucellosis.In this study, a total of 90 serum samples were obtained from patients with brucellosissuspicion at Dicle University Medical Faculty Hospital Central Laboratory. The serumsamples were Rose Bengal test positive, Standart Tube Agglutination titer below 1/160 andCoombs test were negative. We aimed to detect Brucella DNA in these sera.The STA titer is 1/20 in 21 (%23.3) patients, 1/40 in 41 (%45.5) and 1/80 in 28(%31.1) patients. We detected Brucella DNA in 3 (%3.3) serum samples of patients. Weconcluded that these positive results belongs to chronic or incomplete treated patients.In conclusion; the PCR-based assay has several advantages including speed, safety,high sensitivity and specifity; therefore it can be considered a routine diagnostic method forthe diagnosis of brucellosis after standardization.42KAYNAKLAR1. Capasso L. Bacteria in two-millennia-old cheese, and related epizoonoses in Romanpopulations. 2002. J Infect. 45; 122-127.2. Sözen TH. Bruselloz. İnfeksiyon Hastalıkları ve Mikrobiyolojisi. Ed: Topçu AW,Söyletir G, Doğanay M. Cilt 1, Sistemlere göre infeksiyonlar,2002. s: 636-642. Nobeltıp kitapevleri.3. Young EJ. Brucella species. Mandell GL, Bennett JE, Dolin R(eds). Principles andPractice of Infectious Diseases. 2000. 5th. Edition. vol 2, p: 2386-2391. Churchill,Livingstone, Philadelphia.4. Chu MC, Weyant RS: Francisella and Brucella. Eds: Murray Patrick R. Manual ofclinical microbiology. 2003. 8th edition. p: 789-808. ASM pres.Washington DC.5. Mamıkoğlu L. Bruselloz, Önemli ve sorunlu gram-negatif bakteri infeksiyonları.2005.Ed: Ulusoy S, Leblebicioğlu H, Arman D. sf :327-342 Bilimsel Tıp Yayınevi Ankara.6. Sümerkan B. Brucella Türleri. İnfeksiyon Hastalıkları ve Mikrobiyolojisi. Ed: TopçuAW, Söyletir G, Doğanay M. Cilt 2, Etkenlere göre infeksiyonlar, 2002. s: 1647-1652.Nobel tıp kitapevleri.7. Erdenliğ S. Türkiye?de Brucella kökenleri. 2003. 11. Türk Klinik Mikrobiyoloji veİnfeksiyon Hastalıkları Kongresi Kongre Kitabı. s: 214-216.8. Al Dahouk S, Tamaso H, Nöckler K, Neubauer H, Frangoulidis D. Laboratory-baseddiagnosis of brucellosis-A Review of literature .Part 1: Techniques for direct detectionand identification of Brucella spp. 2003. Clin Lab. 49: 487-505.9. Altoparlak Ü. Brusellozun etiyolojisi. 2003. Ankem Derg 17 (3): 330-332.43