Verapamil tedavisinin embriyonik karaciğer dokusu kök hücreleri üzerine etkisinin incelenmesi
Effects of verapamil treatment on liver embryonic stem cells
Yazar: SERAP USLU
Danışman: PROF.DR. MİNE ERTEM YURTSEVEN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Alfa fetoproteinler = Alpha fetoproteins ; Bromodeoksiuridin = Bromodeoxyuridine ; Verapamil = Verapamil

Özet:
Son yayınlarda embriyogenez ve onkogenezin, kök hücre proliferasyonu ve diferansiyasyonuaçısından benzerlikleri gösterilmektedir. Sıçanlarda karaciger, embriyogenik E9,5.günde endodermdebelirir. Parankimal ve hematopoetik hücrelerinin oranları E15. gün ile eriskin hayatı arasındadegisiklikler göstermektedir. Kanserde tümor progresyonu ve kemorezistansında etkili olan kanser kökhücrelerinin embriyogenetik süreçtede var oldugu düsünülmektedir. Bu hücrelerin invitro ortamdaverapamil ile inhibe edildikleri belirlenmistir. Verapamil kalsiyum kanallarını bloke eden anti hipertansifbir ajandır. Kök hücre transmembran belirteci C-kit ve major plazma proteini Alfa-fetoproteinembriyogenez ve karsinogenez sürecinde etkili proteinlerdir. 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU), normalve neoplastik hücrelerin stokinetiginin arastırılmasında önemlidir Çalısmanın amacı; in vitro kanserkök hücrelerini ortadan kaldırdıgı bilinen verapamil'in, sistemik yüksek doz uygulamasınınembriyogenez sürecinde kök hücreler üzerindeki etkilerini arastırmaktır.Grup A [Kontrol grubu, n=10]: laç tedavisi uygulanmayan E15., E18. ve E21. günlükembriyolardan, Grup B [n=10]: Gebeligin 9. gününden (E9) itibaren hergün günde iki kezintrapertoneal (IP) 10 mg/kg/gün verapamil tedavisi alan E15., E18., E21. günlük embriyolardanolusturuldu. Embriyoların karacigerleri disseke edildi. mmunohistokimyasal analizler için c-kit, alfafetoprotein,BrdU, p-glikoprotein, histolojik analizler için Hematoksilen-Eozin, PAS, Retikulumboyamaları yapıldı. Hücrelerdeki ve damarsal yapılardaki degisiklikler için morfometrik analizleryapıldı.Sistemik yüksek doz verapamil tedavisinin karaciger embriyogenezinde kök hücrelerdeazalma meydana getirdigi, bu etkinligini kök hücre proliferasyonunu mtotik aktiviteyi yavaslatarak veP-glikoprotein inhibisyonu yaparak gösterdigi tespit edilmistir. n vivo ortamda kök hücreler üzerindekietkilerinin sinyal iletim sistemleri düzeyinde arastırılması ile verapamil klinikte kanser tedavisinde,kanser kök hücrelerinin öldürülmesi amacıyla kullanılabilir.Anahtar sözcükler: embriyogenezis, side population, verapamil, c-kit, alfafetoprotein,Brdu, p-glikoproteine-mail: suuslu@hotmail.com

Abstract:
Recent publications have shown the similarities of embryogenesis and oncogenesis,with respect to stem cell proliferation and differentiation. In rats, the liver appears on theendoderm in the embryogenic day E9,5. The ratio of parenchymal and hematopoetic cellsvary between day E15 and the adult life. It is suggested that the cancer stem cells affectingtumor progression in cancer are also present in the embryogenetic process. It has beenshown that these cells are inhibited by verapamil in vitro. Verapamil is an anti-hypertensiveagent which blocks calcium channels. The stem cell transmembrane ligand C-kit and themajor plasma protein Alpha-fetoprotein are proteins that have an effect in the embryogenesisand carcinogenesis processes. 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) is important in studies ofcytokinetics of normal and neoplastic cells the objective of this study is to investigate into theeffects of systemic high dose application of verapamil, which is known to destroy cancerstem cells in vitro, on stem cells in the embryogenesis process.Group A [Control group, n=10]: consisted of embryos of E15, E18 and E21 days,with no drug treatment, Group B [n=10]: consisted of embryos of E15, E18 and E21 days,administered intrapertoneally (IP) 10 mg/kg/day verapamil twice a day starting with the 9thday of the gestation. All of the embryos were dissected. For immunohistochemical analysesc-kit, alpha-fetoprotein, BrdU, p-glycoprotein, and for histologic analyses Hematoxylen-Eozin, PAS, Reticulum staining were conducted. Morphometric analyses were conducted forthe changes in the cells and the vascular structures.It has been shown that systemic high dose verapamil treatment attenuates stemcells in liver embryogenesis, and that this effect was mediated by decelerating stem cellproliferation and mtotic activity and by inhibiting P-glycoprotein. Researching effects onstem cells in vivo at the level of signal transduction systems verapamil may be used clinicallyin cancer treatment, to kill cancer stem cells.Key words: embryogenesis, side population, verapamil, c-kit, alphafetoprotein,Brdu, p-glycoprotein