Hipoksik iskemik ensefalopati oluşturulan yenidoğan sıçanlarda işitsel fonksiyon kaybı ve eritropoetin etkisinin araştırılması
Investigation of hearing loss and the effect of erytropoietin in the newborn rats with hypoxic-ischemia induced encephalopathy
Yazar: YÜKSEL OLGUN
Danışman: PROF. DR. SEMİH SÜTAY
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Ensefalopati = Encephalopathy ; Eritropoietin = Erythropoietin ; Hipoksi = Hypoxia ; Koklea = Cochlea ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia ; İşitme kaybı-fonksiyonel = Hearing loss-functional

Özet:
Amaç: Yenidoğan sıçanlarda hipoksik iskeminin işitme üzerine etkisi ve rekombinan eritropoetinin koruyucu etkinliğinin araştırılmasıGereç ve Yöntem: Postnatal yedinci günde Wistar albino cinsi 28 adet yavru sıçan dört grup halinde çalışmaya alınmıştır. Birinci grupta (n=8) sadece intraperitoneal serum fizyolojik uygulanmış, ikinci gruptaki deneklere (n=5) hipoksik-iskemi uygulanmadan sadece orta hat boyun insizyonu yapılmış ve intraperitoneal serum fizyolojik verilmiştir. Üçüncü gruptaki (n=8) yavrulara hipoksik iskemi oluşturulup, intraperitoneal serum fizyolojik uygulanmış, dördüncü gruba (n=7) ise hipoksik iskemi sonrasında 1000Ü/kg rekombinan eritropoetin intraperitoneal yolla verilmiştir. Hipoksik iskemik ensefalopati için cerrahi işlem olarak sol kommon karotid arter bağlanarak iskemi oluşturulmuş, daha sonra üçüncü ve dördüncü gruptaki denekler 2,5 saat süre ile %92 saf nitrojen,%8 oksijen içeren bir karışımı solumuşlardır. Çalışmanın yedinci haftasında grupların klik uyaran ve 6 kHz, 8 kHz tone burst uyaran verilerek ABR kayıtları elde edilmiş ve sakrifikasyon yapılmıştır. Beyinsapı, sağ ve sol temporal lob ve koklea yapıları ışık mikroskobu, TUNEL, kaspaz-3 immunohistokimyasal boyama yöntemleri ve elektron mikroskobu ile incelenmiştir.Bulgular: Hipoksik iskemi ensefalopati grubunda ABR kayıtlarında işitmenin tüm hayvanlarda etkilendiği ve etkilenmenin bazı deneklerde iki taraflı olduğu görülmüştür. Hipoksik iskemi ile birlikte rekombinan eritropoetin uygulanan grupta ABR kayıtlarında işitmenin normal değerlerde olduğu ve iki grup arasında istatistiksel fark olduğu saptanmıştır. Histopatolojik değerlendirmelerde; hipoksik iskeminin beyin sapı nöronlarında apopitotik değişikliklere neden olduğu ışık mikrokobu ve immunohistokimyasal yöntemlerle gösterilmiş, Corti organı, spiral ganglion hücreleri ve temporal lob elektron mikroskopik incelemelerinde ise hücrelerde belirgin apopitotik değişiklikler dikkati çekmiştir. Hipoksik iskemi ile eşzamanlı rekombinan eritropoetin uygulamasının apopitotik değişiklikleri önemli ölçüde engellediği saptanmıştır.Sonuç: Hipoksik iskemik ensefalopati işitme sisteminde apopitotik yolakları tetikleyerek işitme kaybına yol açmaktadır. Bu etkilenme rekombinan eritropoetin uygulanması ile önlenebilmiştir.

Abstract:
Objective: To investigate the effect of hypoxic-ischemia on the hearing and otoprotective effect of recombinant erythropoietin.Materials and Methods: Twenty eight seven-day Wistar albino rat pups were divided into four groups: Control group (n=8), sham group (n=5), hypoxic- ischemic encephalopathy group (n=8), recombinant erythropoietin treated group (n=7). Control group were injected intraperitoneal serum physiologic, sham group had only neck incision without carotid ligation and intraperitoneal serum physiologic, Hypoxic ischemic encephalopathy group and recombinant erythropoietin treated group were subjected to left common carotid artery ligation followed by 2.5 hour hypoxic exposure to a mixture of 8%oxygen ,92% pure nitrogen. Hypoxic ischemic encephalopathy group were injected intraperitoneal serum physiologic and recombinant erythropoietin treated group received eryhthropoietin 1000units/kg within the same volum as serum physiologic. At seventh week hearing of the animals were evaluated by click ABR, 6 kHz and 8 kHz tone burst stimuli. Animals sacrified and both temporal lobes, cochleas and brainstems of the animals were collected. Tissue samples were evaluated with light microscopy, immunuhistochemical studies such as TUNEL and caspase-3 stainings and electron microscopy.Results: Hearing was detoriated in hypoxic-ischemic encephalopathy group animals, in some of the rats hearing loss were bilateral. In recombinant erythropoietin treated group ; ABR values were close to controls. Difference between hypoxic ischemic encephalopathy group and ertyhropoietin treated group were statistically significant (p<0.05). Hypoxic ischemic encephalopathy is found to cause apoptotic changes within brainstem shown by light microscopy and immunohistochemical methods. Apoptotic changes also were found within the organ of Corti, spiral ganglion cells and neurons of temporal lobe by electron microscopic investigation. In recombinant erythropoietin treated group most of those apoptotic changes were found to be decreased.Conclusion: Hypoxic-ischemic encephalopathy leads to hearing loss by inducing apoptotic pathways of the hearing system and recombinant erythropoietin is found to prevent those effects.