Sağlıklı ve meme kanseri hastası kadınların (tedavi almamış, tedavi alan ve tedavi olmuş) serum proteinleri değişiminin 2-d (iki boyutlu) elektroforez ile tespiti
Detection with two dimensional gel electrophoresis the change of serum proteins in breast cancer patients (the untreated group, the treated group and the cured group) and healthy women
Yazar: CEVAHİR ALTINKAYNAK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. DUYGU ÖZEL DEMİRALP ; YRD. DOÇ. DR. NALAN ÖZDEMİR
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Meme kanseri kadınlar arasında en sık görülen hastalıktır. Mamografi ve ultrasonografi, meme kanseri taraması ve tanısında en sık kullanılan görüntüleme yöntemleridir. Meme kanseri teşhisinde özellikle ilerlemiş safhadaki lezyonların görüntülenmesinde çok geniş çaplı kullanılan mamografi erken teşhis için yetersizdir. Erken safhada teşhis edilen meme kanseri hastalarının yaşama şansları daha geç (daha ilerlemiş safhada) teşhis edilen hastalara göre daha fazladır. Bu nedenle meme kanserinin erken teşhis ve tedavisi için yeni stratejilerin benimsenmesine ve yeni biyolojik belirteçlerin tanımlanmasına ihtiyaç vardır. Meme kanserinin teşhisi amacıyla önerilen moleküller özellikle ilerlemiş durumlar için geçerli olabilecek moleküllerdir. Ancak hastalığın ileri safhalarında dahi doğru ve güvenilir sonuç veren tek bir belirteç yoktur. Bu durumun sebepleri arasında hastalığın çok genli bir hastalık olması ve literatürde verilen çalışmalarda bir standardizasyonunun olmaması sayılabilir. Dolayısıyla meme kanseri tedavisinde var olanların dışında moleküler düzeyde yeni hedeflerin arayışı devam etmektedir.Bu çalışmada; meme kanserinin gelişim özellikleri proteomik yöntemler kullanılarak moleküler düzeyde ve protein profillenmesi ile değerlendirilip hastalıkla ilişkili protein ve protein değişikliklerinin saptanması amaçlanmıştır. Ailesinde meme kanseri olan hastaların meme kanserine yatkınlıkları daha önceki çalışmalarda kanıtlandığı için bu çalışmada özellikle sporadik olarak kanser geliştiren bireyler değerlendirmeye alınmıştır. Çalışmada kontrol, tedavi almamış, tedavi alan ve tedavi olmuş olmak üzere dört grup değerlendirilmeye alınmıştır. Protein düzeyindeki değişiklerin kapsamlı bir şekilde geniş veri tabanları kullanılarak araştırılmasının, yeni proteinlerin ve yeni biyolojik belirteçlerin (işaretlerin) bulunmasına aracılık edeceği düşünülmektedir. Bunun için öncelikle serumda oldukça yüksek konsantrasyonda bulunan bol (abundant) proteinlerin bir kısmı filtrelenmiş ve daha sonra toplam protein miktarı ?g/µL olarak hesaplanmıştır. İki boyutlu elektroforez sonrası Maldi-Tof kütle spektrometresi ile proteinlerin tanımlanması gerçekleştirilmiştir. Bunun yanında abundant proteinler azaltılmadan da araştırma planlanmış farklanmalar tespit edilmiştir.Yapılan subtraktif analizler sonrası tedavi almamış grupta kontrol grubuna göre albümin, haptoglobin, apolipoprotein A-I, Complement C-4 beta, IgG hafif ve ağır zincir abundant proteinlerinin serum ekspresyon düzeyleri fazla bulunmuştur. Yine abundant proteinler incelendiğinde kontrol, tedavi alan ve tedavi olmuş gruplarda ekspresyonlarının birbirlerine yakın olduğu bu çalışmada tespit edilmiştir. Haptoglobin proteini tedavi almamış grupta evre I' de bulunan hasta serumuna göre evre II' de bulunan hasta serumunda ekspresyonu fazla bulunmuştur. Tedavi alan grupta yapılan değerlendirmeler sonucu 15 Da civarında yer alan Haptoglobin serileri de evre I' de bulunan hasta serumuna göre evre IIB' de bulunan hasta serumunda daha yoğun bulunmuştur.Çalışma sonucu belirtilen protein profil farklılıklarının meme kanserinin oluşum süreci ile ilişkili moleküler değişikliklerin anlaşılmasında, hastalığın oluşum sürecine etkili tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesinde, yeni hedef moleküllerin bulunmasına ve çoklu biyobelirteç geliştirilmesinde katkı sağlayacağı düşünülmektedir.

Abstract:
The breast cancer is the most common diseases in women. Mamography and ultrasonography are often used way in scanning and diagnosis of breast cancer. At breast cancer diagnogis, mamography is often used to determine spread lesions but it is not sufficient to recognize earlier stage. Early diagnosed breast cancer patients have a big chance to survive in comparison with patients diagnosed at later stages of the cancer. So there is needed to find new strategies and to introduce biomarker for earlier diagnosis and treatment of breast cancer. The molecules, are suggested the aim of breast cancer diagnosis, are for patients in spreaded stage of the cancer. But there isn?t a right and reliable marker to give a result for spread stage of the illness. The reasons of this situation are may be multiple genes of the illness and no standardization of studies given at literature. At the treatment of breast cancer, the search of new targets, except known methods, is going on at molecular stage.In this study, it was aimed to determination of the development of breast cancer characteristics using proteomics method in molecular level and whether to be assessed by proteomic profile in the changes of protein and disease related protein. The breast cancer patients with family history are more susceptible to this cancer was proved before, and so in this study, the people who become especially cancer as sporadic will be evaluated. In this study; we were performed to investigate differential serum proteins of the control group, the untreated group, the treated group and cured group. It is thought that the determination of protein changes extensively by using large data base will help to proteom profiling of new proteins and to find new (biological signs) biomarkers. Firstly, twenty abundant proteins that are highly expressed in serum will filtered and then total protein quantity will be calculated as ?g/µL. After two dimensions gel electrophoresis, the identification of proteins will be evaluated by MALDI-TOF mass spectrometry. In this study was also planned besides without reduction of abundant proteins and was detected of differences.After the subtractive analyses, it was found the expression levels in serum of abundant proteins albumin, haptoglobulin, apolipoprotein A-I, Complement C-4 betha, light and heavy chain of IgG were high in the did not received treatment group than control group. Abundant proteins were examined again, it was also detected the expression levels as close to each other in the control, received treatment, was treated groups in this study. Haptoglobulin protein was found more according to stage II than stage I in did not received treatment. As a result of the assessments in treated group, the series of haptoglobulin located in vicinity 15 Da were also found more intense in stage IIB than stage I.Study results indicated differences in protein profiles are thought to contribute in understanding the molecular changes in breast cancer associated with the formation process, the development of treatment approaches effective in the formation process of the disease, the availability of new target molecules and the development of multiple biomarker.