N-asetilsistein ilavesinin dişeti rengindeki bazı kompozitlerin çeşitli biyouyumluluk parametreleri üzerine olan etkilerinin in vitro değerlendirilmesi
In vitro evulation of the effects of N-acetylcystei̇n addition on various biocompability parameters of some composites in gingival color
Yazar: GÜLNAZ DEMİREL
Danışman: DOÇ. DR. OSMAN TOLGA HARORLI
Akdeniz Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Restoratif Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2022
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Asetilsistein = Acetylcysteine ; Biyouyumlu materyaller = Biocompatible materials ; Dental materyaller = Dental materials ; Gingiva = Gingiva ; Kompozit malzemeler = Composite materials ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; İn vitro = In vitro

Özet:
N-Asetilsistein İlavesinin Dişeti Rengindeki Bazı Kompozitlerin Çeşitli
Biyouyumluluk Parametreleri Üzerine Olan Etkilerinin İn vitro Değerlendirilmesi
Amaç: Bu çalışmanın amacı diş eti çekilmelerinin ve servikal diş defektlerinin estetik restoratif
tedavisinde kullanılan bazı kompozitlerin sitotoksik ve apptotik etikilerini hücre kültürü
yöntemi ile araştırmak ve bu materyallere ilave edilen N-asetilsisteinin olası biyolojik
etkilerini incelemektir.
Yöntem: Çalışmamızda, iki adet gingival kompozit (PermaFlo Pink Ultradent, South Jordan
Amerika) (Amaris Gingiva,VOCO, Cuxhaven, Almanya) ve bir adet geleneksel akışkan
kompozit (Filtek Ultimate Flowable, 3M ESPE, Seefeld, Almanya ) kullanılmıştır. Her bir
kompozitten 5 mm çapında 2 mm kalınığında altışar örnek hazırlanmış ve bir LED ışık cihazı
ile standart güç modunda (1000mW/cm2
) üretici firma talimatları doğtultusunda polimerize
edilmiştir. N-Asetil-L-sisteinin (NAC) olası etkilerini araştırmak için; ağırlıkça %1 NAC
içeren ilave üç kompozit test grubu hazırlanmıştır. Çalışmamızda fare fibroblast hücre hattı
(L929) kullanılmıştır. Direkt kontakt testi ile 24 saat sonunda hücre sitotoksisiteleri WST-1
testi ile değerlendirilmiş, apoptoptoz markerları kaspaz 3, kaspaz 8 ve anneksin V seviyeleri
ise PCR testi ile RNA izolasyon kiti kullanılarak belirlenmiştir. Tüm analizlerde anlamlılık
düzeyi 0,05 olarak belirlenmiştir.
Bulgular: WST-1 testi sonucunda hiçbir sitotoksik etki gözlenmemiştir. Filtek Ultimate
Flowable, PermaFlo Pink ve PermaFlo Pink+NAC grubunda hücre populasyonunda artış
gözlenmiştir. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında %1 NAC ilaveli 3M Filtek Ultimate grubu
hariç, tüm gruplarda kaspaz 3 seviyelerinde anlamlı düşüş gözlendi (p<0,05). Kaspaz 8
seviyeleri incelendiğinde; tüm gruplarda kontrol grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı
bir azalma tespit edilmiştir (p<0,05). Filtek Ultimate Flowable ve VOCO Amaris Gingiva
grubunda kontrol grubuna kıyasla daha yüksek Annexin V aktiviteleri saptanmıştır (p<0,05).
Sonuç: Test edilen kompozitlerden hiçbiri 24 saatlik direkt kontakt testi sonucunda L929 fare
fibroblast hücreleri üzerinde doğrudan sitotoksik bir etki oluşturmamıştır. Materyaller
apoptotik yolak üzerinde kaspaz 3, kaspaz 8 ve anneksin V seviyeleri üzerinde çeşitli
değişimlere yol açarak apoptotik süreci etkilemiştir. Ağırlıkça %1 oranında NAC ilavesinin
bu etkileri baskılamada yeterli olmadığı sonucuna ulaşılmıştır.
Anahtar Kelimeler: Gingival kompozit, sitotoksisite, NAC, kaspaz 3, kaspaz 8, anneksin V

Abstract:
In-Vitro Evaluation of the Effects of N-Acetylcystein Addition On Various
Biocompatibility Parameters of Some Composites in Gingival Color
Objective: The aim of this study was to investigate the cytotoxic and apoptotic effects of the
composites which are used in esthetic restorative therapies of gingival recessions and servical
tooth defects by cell culture technique and to analyze the potential biological impacts of Nacetylcysteine that is added to these materials.
Method: In our study, two different gingival composites (PermaFlo Pink Ultradent, South
Jordan, USA) (Amaris Gingiva, VOCO, Cuxhaven, Germany) and one traditional flowable
composite (Filtek Ultimate Flowable, 3M ESPE, Seefeld, Germany) were used. Six samples of
5 mm diameter and 2 mm thickness were prepared from each composite and polymerized with
an LED light device in standard power mode (1000mW/cm2) in accordance with the
manufacturer's instructions. To investigate the possible effects of N-Acetyl-L-cysteine (NAC);
additional three composites test groups were prepared which include %1 NAC by weight. Our
study was conducted with mouse fibroblast cell line (L929). Cellular cytotoxicity was
evaluated after 24 hours with WST-1 assay with direct contact test and the levels of apoptotic
markers (caspase 3, caspase 8 and annexin 5) were determined by using RNA extraction kit of
PCR test. Significance level is determined 0.05 in all analysis.
Results: The results of WST-1 assay has shown that there was not any cytotoxic effects.
Increases of cell populations were observed in Filtek Ultimate Flowable, PermaFlo Pink and
PermaFlo Pink+NAC groups. Compared to the control group, a significant decrease was
observed in Caspase 3 levels in all groups except the 3M Filtek Ultimate group with 1% NAC
supplementation (p<0.05). When Caspase 8 levels were analyzed, when compared with the
control group a significant statistical depression was detected (p<0,05). Higher annexin V
activities were detected in the Filtek Ultimate Flowable and VOCO Amaris Gingiva group
compared to the control group (p<0.05).
Conclusions: None of the tested composites produced a direct cytotoxic effect on L929 mouse
fibroblast cells as a result of the 24-hours direct contact test. The materials affected the apoptotic process
by causing various changes on caspase 3, caspase 8 and annexin V levels on the apoptotic pathway. It
was concluded that the addition of 1 % NAC by weight was not sufficient to suppress these effects.
Keywords: Gingival composite, cytotoxicity, NAC, caspase 3, caspase 8, annexın V