Aktive protein C'nin rat intraabdominal sepsis modelinde epiteliyal apoptozis üzerine etkisi
The effects of activated protein C on epithelial apoptosis in intraabdominal rat sepsis model
Yazar: ESRA DURAN
Danışman: DOÇ. DR. UĞUR KOCA
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Cerrahi Tıp Bilimleri Bölümü / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation

Özet:
Amaç: Son yıllarda apoptozisin sepsis sendromunun sonuçlarında belirleyici rolüne, sepsis ve endotoksemik süreçte en önemli hücre ölüm mekanizması olduğuna dair kanıtlar vardır. Septik süreçte antiapoptotik tedavi denemeleri yaşam sürecini arttırma açısından önem kazanmaktadır. Bu deneysel çalışmada, aktive protein C'nin (APC) epiteliyal apoptozis ve organ hasarı üzerine etkilerinin rat sepsis modelinde incelenmesi amaçlanmıştır.Yöntem: Deney Hayvanları Etik Kurulu onamı alındıktan sonra 21 adet erişkin erkek Wistar Albino tipi rat randomize olarak 3 gruba ayrıldı, Sham grubu (n=7), Sepsis grubu (n=7), Sepsis+APC grubu (n=7); sham grubuna sadece laparatomi yapıldı. Sepsis grubuna asendan kolon stent peritoniti cerrahisi (colon ascendens stent peritonitis: CASP) cerrahisi uygulanarak, intravenöz serum fizyolojik infüzyonu yapıldı. Sepsis+APC grubuna CASP cerrahisi uygulanarak, intravenöz APC infüzyonu yapıldı. Çalışma bitiminde ratlar anestetize edilerek mediyan sternotomi ile sol ventrikülden kan aspirasyonu ile sakrifiye edildi; akciğer ve jejenum örnekleri alındı. Biyokimyasal olarak serumdaki solubl CK18 (sitokeratin 18) neoepitop M30 düzeyi ELISA yöntemiyle saptandı. Histopatolojik olarak alveoler makrofaj sayısı ve intestinal mukozal hasar (Chiu Skorlaması) değerlendirildi. Nominal değerler için üç grubun karşılaştırmasında tek?yönlü varyans analizi (ANOVA), ikili grup karşılaştırılmalarında ise Mann-Whitney U testleri kullanıldı. p < 0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.Bulgular: Sepsis grubundaki serum M3O düzeyi sham grubuna göre anlamlı derecede yüksek saptandı (p:0.02). Sepsis+APC grubundaki serum M30 düzeyinde sham grubuna göre anlamlı yükselme (p:0.23); Sepsis grubuna göre anlamlı düşme saptanmadı ( p:0,09)Sepsis grubunda jejenum Chiu skorlaması sham grubuna göre anlamlı derecede yüksek saptandı (p:0,001). Sepsis+APC grubunda barsak Chiu skorlaması Sepsis grubuna göre anlamlı derecede düşük saptandı (p:0,002);sham grubuna göre anlamlı derecede yüksek saptandı (p: 0,002).Sepsis grubunda sham grubuna göre alveoler makrofaj sayılarında anlamlı derecede artış saptandı (p:0,002). Sepsis+APC grubunda alveoler makrofaj sayılarında Sepsis grubuna göre anlamlı derecede azalma saptandı (p:0,001). Sepsis+APC grubunda alveoler makrofaj sayılarında sham grubuna göre anlamlı derecede artma saptandı (p:0,001).Sonuç: Çalışmamızda serum M30 düzeyinin APC uygulanan grupta sepsis grubundaki kadar yükselmemesi, APC uygulanan grupta Chiu skorunda ve alveoler makrofaj sayılarında sepsis grubuna göre anlamlı azalma saptanması, APC'nin sepsisteki epiteliyal apoptozis üzerine olumlu etkileri olduğunu ve ayrıntılı çalışmalar ile desteklenmesi gerektiği kanaatini oluşturmuştur.

Abstract:
Objective:In recent years, there are evidences that apoptosis is the major determinant on the results of sepsis syndrome and is the most important cell death mechanism in sepsis and endotoxemic processes. Antiapoptotic treatment trials are started to become important in increasing the lifetime expectance. In this study, it is aimed to investigate the effects of activated protein C (APC) on epithelial apoptosis in rat sepsis model.Method:After the approval of ethics committee for Research Animals, 21 adult male Wistar Albino rats were randomly allocated into three groups: group Sham (n=7), group Sepsis (n=7), group Sepsis+APC (n=7); in sham group only laparotomy was performed. CASP surgery was performed in the sepsis group and intravenous serum physiologic infusion was administered. In Sepsis+APC group after CASP surgery, infusion of APC was administered. At the end of the study a median sternotomy was performed under general anesthesia and rats were sacrified by aspirating blood from left ventricles of the rats; lung and jejenum samples were collected. Serum soluble CK18 (cytokeratine 18) neoepitop M30 level was determined biochemically using ELISA method. Alveolar macrophage quantity and intestinal mucosal injury was assessed histopathologically (Chiu score). In comparison of three groups for nominal values one-way variance analysis (ANOVA) was performed and in couple group comparisons Mann-Whitney U test was used and p< 0.05 were regarded as statistically significant.Results:Serum M30 level in Sepsis group was significantly higher than in sham group (p:0.02). On the other hand, serum M30 levels in Sepsis+APC group were not significantly higher than sham group (p:0.23). There was no significant reduction in M30 level in Sepsis+APC group than in Sepsis group(p:0,09).Jejenum Chiu scoring was significantly higher in Sepsis group than in sham group (p:0,001). Chiu scoring was significantly lower in Sepsis+APC group than in Sepsis group. (p:0,002). Jejenum Chiu scoring was significantly higher in Sepsis+APC group than in sham group.(p: 0,002).Alveolar macrophage quantity was significantly higher in Sepsis group than in sham group (p:0,002). The alveolar macrophage quantity in Sepsis + APC group was significantly lower than in Sepsis group (p:0,001).Furthermore, alveolar macrophage quantity in Sepsis +APC group was significantly higher than in sham group (p:0,001).Conclusion:In conclusion, serum M30 levels in APC administered group were not increased as the ones in sepsis group and in APC administered group Chiu scoring and alveolar macrophage quantity were significantly lower than the ones in sepsis group. As a result of this, the effects of APC on epithelial apoptosis in sepsis should be investigated in further studies.