Proteazom ve histon deasetilaz inhibitörlerinin prostat kanserli hücre hattındaki apoptotik etkileri
Apoptotic effects of proteasome and histon deacetylase inhibitors in prostate cancer cell line
Yazar: İLKER KILIÇCIOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. ECE KONAÇ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Histon deasetilaz = Histone deacetylases ; Hücre kültürü = Cell culture ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Proteozom = Proteasome ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Genitoüriner kanserler içerisinde erkeklerde görülme sıklığı açısından ilk sırada yer alan prostat kanseri, kanser ilişkili ölümler arasında ikinci sırada yer almaktadır. Proteazom ve histon deasetilaz inhibitörlerinin kombinasyonunun çeşitli malignensilerde aday terapötik ajanlar olarak kullanımları son yıllarda araştırma konularındandır. Bu tez çalışmasında proteazom inhibitörü bortezomib ve histon deasetilaz inhibitörü trichostatin A'nın tekli/kombine dozlarının insan prostat kanserli hücre hatları olan LNCaP ve PC3 hücre hatları üzerindeki sitotoksik ve apoptotik etkilerini araştırdık. Prostat kanserli hücre hatlarında bu ilaçların tek başlarına veya kombine dozlarının, hücrelerin canlılığı üzerine olan etkileri WST-1 yöntemi ile belirlendi. Kaspaz 3 ve IKBα genlerinin mRNA ve protein düzeylerinde ifadelenme değişiklikleri belirlendi. Ayrıca PC3 hücre hatlarında Bcl-2, Bcl-xl, Bim ve Bik proteinlerindeki ekspresyon değişiklikleri western blot yöntemi ile belirlendi. IC50 değerleri bize bu ilaçların her iki hücrenin de proliferasyonunu sinerjistik olarak azalttığını gösterdi. Bu nedenle ilaçların hücre canlılığını azaltıcı etkisine kombine dozlarda daha düşük doz ve sürede ulaşıldı. Ayrıca ilaç uygulanmış her iki hücre hattında da kaspaz3 kaskadının aktive olduğunu gözlemledik. Antiapoptotik IKBα proteininin fosforilasyonunu bortezomib uyguladığımız PC3 hücre hatlarında gözlemledik. Bu hücrelerde uyguladığımız dozlarda pro-apoptotik Bim ve Bik proteinlerinin ekspresyon düzeylerinin arttığını gözlemledik. Bu ilaçların kombine dozlarının, uygun hücre canlılığı ve proliferasyonunu azaltıcı etkilerinin  daha düşük doz ve sürede gözlenmesine bağlı olarak, klinik açıdan da yararlı olabilecekleri düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler : Hücre Kültürü, Proteazom inhibitörleri, HDAC inhibitörleri,

Abstract:
Among genitourinary cancers in men, prostate cancer ranks first in terms of prevalence and it is second among cancer related deaths. In recent years, the combination of proteasome and histone deacetylase inhibitors as therapeutic agents in various malignancies the new candidate research topic. In this thesis we have investigated the cytotoxic and apoptotic effects of proteasome inhibitor bortezomib and HDAC inhibitor trichostatin A, used single or combination doses on LNCaP and PC3 cell lines. The doses of these drugs alone or in combination for their effect on viability of cells was determined by WST-1 method in the prostate carcinoma cell lines. Changes in gene expression levels of caspase3 and IKBα genes mRNA levels and protein levels were determined. Changes in expression level of Bcl-2, Bcl-xl, Bim and Bik proteins were determined by western blot method in PC3 cell line. The IC50 values have showed us that these drugs are synergistically reducing the cell proliferation. For this reason, we achieved the antiproliferative effect of drugs at lower doses and times on combined dose. Also, these drugs in both cell lines were shown to activate the caspase 3 cascade. We observed phosphorylation of antiapoptotic IKBα protein in bortezomib treated PC3 cells. We observed that expression levels of pro-apoptotic Bim and Bik proteins increased on these cells. By the application of combined doses of these drugs, cell viability and proliferation inhibition occured lower dose and time. For these reason, these drugs thought to be useful in clinic.

Key Words : Cell Culture, Proteasome inhibitors, HDAC inhibitors, 
Apoptosis