Sirtuin (SIRT) ve apoptoz genlerinin leptin uygulanan farelerin yavrularının granulosa hücrelerindeki ekspresyonu
Expression of sirtuin (SİRT) and apoptosis genes in granulosa cells of offspring of leptin-administered mice
Yazar: MERVE ERKOÇ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÇAĞRI ÖNER
Maltepe Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Disiplinlerarası Klinik Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Klinik Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Genler-P53 = Genes-P53 ; Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Leptin = Leptin ; Sirtuin = Sirtuin

Özet:
Leptin, ağırlıklı olarak adipoz dokudaki adipositler tarafından sentezlenerek kana salınan, dolayısıyla kişinin yağ dokusu ile orantılı olarak serum düzeylerinde yükselen bir hormondur. Plazma leptin konsantrasyonları, yaş ve vücut kitle indeksi ile uyumlu gebe olmayan dişilere kıyasla hamile dişilerde önemli ölçüde yüksektir ve doğumdan sonra keskin bir şekilde düşmektedir. Plasentada leptin metabolizmasının ve/veya leptin fonksiyonunun deregülasyonu, tekrarlayan düşük, gestasyonel diyabet, intrauterin büyüme kısıtlaması ve preeklampsi gibi gebelik sırasındaki çeşitli bozuklukların patogenezinde rol oynayabilmektedir. Yapılan tez çalışmasının amacı, subkutan leptin uygulanan dişi Balb-C farelerin dişi yavrularının yumurtalığından elde edilen granulosa hücrelerinde, yumurta korunumu ve fonksiyonlarıyla alakalı olduğu düşünülen SIRT1, SIRT6 ve SIRT7 gen ekspresyonları ile aynı örneklerde programlı hücre ölümü olan apoptozun yolak molekülleri olan p53, Bcl-2 ve Bax gen ekspresyonlarını belirlemektir.
Bu çalışmada ikinci jenerasyon 14 adet Balb-C tipi dişi fare kullanıldı. Fareler kontrol ve leptin uygulanan deney grubu olmak üzere ikiye ayrıldı. Çalışmamızda deney grubu dişilere gebelikleri boyunca leptin uygulaması subkutan enjeksiyon ile uygulandı. Doğumu takiben 10. Haftada dişi farelerden çıkarılan ovaryumlar, kit prosedürüne göre total RNA izolasyonu yapıldı.  Total RNA izolasyonu işlemini takiben cDNA çevrimi ve RT-PCR ile gen ekspresyonları belirlendi. Elde edilen veriler istatistiksel olarak SPSS 26.0 programı ile değerlendirildi. 
Elde edilen verilere göre kilo açısındanda gruplar arasında fark bulunmadı (p>0.05). Deney grubunda p53 ile Bcl-2 gen ekspresyonlarında istatistiksel olarak anlamlı derecede azalırken (p<0.0001); Bax ekspresyonunda gruplar arasında istatistiksel olarak fark bulunmadı (p>0.05). Deney grubunun SIRT1 gen ekspresyonu kontrol grubuna göre istatistiksel azalma görülürken (p<0.0001); SIRT6 ve SIRT7 gen ekspresyonlarında gruplar arasında istatistiksel fark bulunamadı (p>0.05). 
Bu tez çalışması ile genetik açıdan leptinin ikinci jenarasyonda da etkilerinin olduğunu, hatta bu etkinin dişilerde üreme (yumurta kalitesi gibi) üzerinde olduğu belirlendi. Leptinin ikinci jenarasyon dişilerin yumurtalarını besleyen granulosa hücrelerinde apoptozdan kaçabilme yeteneği azalttığı ve daha çok hayatta kalma yeteneği kazandırabileceği fikrini yaratmaktadır.

Abstract:
Leptin is a hormone that is predominantly synthesized by adipocytes in adipose tissue. Plasma leptin concentrations are significantly higher in pregnant females compared to non-pregnant females consistent with age and body mass index and decline sharply after birth. The aim of the study was to determine the SIRT1, SIRT6 and SIRT7 gene expressions, which are thought to be related to ovary preservation and functions, in granulosa cells obtained from the ovaries of female Balb-C mice with subcutaneous leptin administered, as well as to determine p53, Bcl- 2 and Bax gene expressions.
In this study, 14 second generation Balb-C type female mice were used. Mice were divided into control and leptin-treated experimental groups. In our study, leptin was administered to the experimental group females during their pregnancy by subcutaneous injection. Total RNA was isolated from ovaries extracted from female mice at week 10 following birth, according to the kit procedure. Following the total RNA isolation, gene expressions were determined by RT-PCR. The obtained data were statistically evaluated with the SPSS 26.0 program.
According to the obtained data, there was no difference between the groups in terms of weight (p>0.05). While p53 and Bcl-2 gene expressions were statistically significantly decreased in the experimental group (p<0.0001); there was no statistical difference between the groups in Bax expression (p>0.05). While SIRT1 gene expression of the experimental group was statistically decreased compared to the control group (p<0.0001); There was no statistical difference between the groups in SIRT6 and SIRT7 gene expressions (p>0.05).