Çocukluk çağı glokomunda (Buphthalmos) CYP 1B1 geninde Türk hastalarda mutasyon taraması
Mutation screening in CYP 1B1 gene in Turkish patients for infantile glaucoma (Buphthalmos)
Yazar: ŞEFAYET BAGİYEVA
Danışman: PROF. DR. AY ÖĞÜŞ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2001
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Genler = Genes ; Genler-CYP 1B1 = Genes-CYP 1B1 ; Glokom = Glaucoma ; Mutasyon = Mutation

Özet:
Glokom, optik sinir hasan ile tanımlanan bir göz hastalığıdır. Tedavi edilmezse körlükle sonuçlanır. Hastalığın oluşum mekanizması tam olarak bilinmemektedir. Glokomla ilgili gen bozukluklarının belirlenmesi, erken tanı ve körlüğün önlenmesi açısından önemlidir. Primer konjenital glokom (PCG) ya da Buphthalmos (gen sembolü GLC3) glokomun otozomal çekinik kalıtım gösteren formu olup, gözün ön kamerasında nedeni bilinmeyen gelişimsel bir bozukluk nedeniyle kendini gösterir. Doğuştan ortaya çıkabildiği gibi, yaşamın ilk yıllarında da görülebilir (Dickens, 1996). Buphthalmos 'tan sorumlu gen, CYP1B1, sitokrom P450 I alt ailesinin bilinen tek üyesidir. Bu genin hastalık fenotipinden %85 oranında sorumlu olduğu rapor edilmiştir (Stoilov, 1997). Bu çalışmada kromozom 2p21'de yerleşim gösteren ve glokomla ilgili ilk lokusta bulunan (GLC3A) CYP1B1 genindeki mutasyonlar SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) ve HA (Heteroduplex Analysis) teknikleri kullanılarak taranmıştır. On aileye mensup ve dört tek birey olmak üzere toplam 36 bireyin kanından DNA izolasyonu yapılıp, hasta bireylerin CYP1B1 geninin ikinci ve üçüncü ekzonlan, sekiz farklı primer seti kullanılarak, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile çoğaltılmıştır. Hasta bireylerden PCG 82 ve PCG 83 'ün ekzon 3B, PCG 74'ün ekzon 2B ve PCG 224'ün ekzon 2C bölgelerinin SSCP profillerinde farklılık gözlenmiştir. Ekzon 3B bölgesi RFLP (Restriction Fragment LengthHI Polymorphism) yöntemi ile bilinen mutasyonlar açısından taranıp, MspI ve Fokl enzimlerinin kesim bölgelerinde ekzon 3B'nin mutasyon taşımadığı saptanmıştır. Farklılığın gözlendiği bölgelerden sadece ekzon 3B DNA Sekans Analizi ile incelenmiştir. Her iki hastanın ekzon 3B bölgesinde lObç büyüklüğünde duplikasyon olduğu bulunmuştur.

Abstract:
Glaucomas are a group of neuropathies that, if untreated, can result in total blindness. Its pathogenesis remains poorly understood. The genetic approach to the of this disease and identification of glaucoma-related genetic defects may not only contribute to a better understanding of the pathogenesis of glaucoma but may also be an important step toward earlier diagnosis and vision preservation. Primary Congenital Glaucoma (PCG) or Buphthalmos (gene symbol GLC3) is an autosomal recessive disorder, associated with unknown developmental defect(s) in anterior chamber and manifests itself in early childhood, usually within the first year of life (Dickens, 1996). Responsible gene for PCG phenotype İs CYP1B1, the only known member of cytochrome P450 I subfamily of CYP1B. This gene has been reported to be responsible from 85% of cases in Buphthalmos (Stoilov, 1997). In this study we investigated CYP1B1 gene mutations in the first locus (GLC3A), mapped to chromosome 2p21 by SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) and HA (Heteroduplex Analysis). DNA samples were isolated from total of 36 individuals (10 familial and 4 isolated cases), from whole blood. Eight different primers were used for amplification of the second and third exons of the CYPlBlgene by PCR (Polymerase Chain Reaction). Amplified exons were screened by SSCP and HA.Patients PCG 82 and PCG 83 had band shift in exon 3B. This site of exon was tested for previously known Mspl and Fold restriction enzyme site by RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Exon 3B was found not to be involved in these mutations. Patient PCG 74 also had different SSCP profile in exon 2B and patient PCG 224 had band shift in exon 2C. Nucleotide sequence analysis of patients that revealed abnormal pattern in SSCP in exon 3B was performed by DNA Sequence Analysis. Patient PCG 82 and PCG 83 have lObp duplication in exon