Glisin reseptör antikoru pozitif kriptojenik fokal epilepside periferik kan hücrelerinin immünfenotiplendirilmesi ve antijenik yanıtlarının araştırılması
Immunophenotyping and investigation of antigenic responses of peripheral blood cells in glycine receptor antibody positive cryptogenic focal epilepsy
Yazar: ELİF ŞANLI
Danışman: PROF. DR. ERDEM TÜZÜN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı / Sinirbilim Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Antijenler = Antigens ; Antikorlar = Antibodies ; B lenfositleri = B lymphocytes ; Epilepsi = Epilepsy ; Glisin = Glycine ; T lenfositleri = T lymphocytes ; İmmünofenotip tayini = Immunophenotyping

Özet:
Epilepsi, beyindeki spontan, ani elektrik boşalımları sonucu oluşan nöbetlerle karakterize yaygın bir hastalıktır. Nöbetlerin eşlik ettiği bazı otoimmün hastalıklarda hastaların serum ve serebrospinal sıvılarında saptanan otoantikorların etiyolojisi bilinmeyen kriptojenik epilepsilerde T hücre aracılı immün yanıta bağlı olarak epileptiform aktiviteyi tetiklediği düşünülmektedir. Son yıllarda rijidite ve miyoklonusla birlikte progresif ensefalomyelit (PERM) hastalarında saptanan glisin reseptör (GlyR) antikorlarına kriptojenik fokal epilepsilerde de rastlanması GlyR antikorlarının nöbet patogenezinde rol oynayabileceğine işaret etmektedir. 
GlyR antikoru pozitif epilepsi olgularının antijen spesifik immün hücre gruplarında ortaya çıkabilecek immünolojik değişikliklerinin belirlenmesi amacıyla çalışmamıza 7 GlyR antikoru pozitif ve 15 antikor bulundurmayan olgu olmak üzere toplamda 22 Kriptojenik Fokal Epilepsi hastası ile yaş ve cinsiyet uyumlu 25 sağlıklı gönüllü dahil edildi. Hastaların kanlarından periferik kan mononükleer hücreleri (PKMH) izole edilerek immün sistem hücreleri (NK hücresi, T hücresi ve alt grupları ile B hücre ve alt grupları) florokrom antikorlarla işaretlendi ve akım sitometrisi yöntemi ile immünfenotipleme yapıldı.
Çalışma sonucunda B, T, NK ve NKT hücreleri genel popülasyonunda gruplar arasında anlamlı bir fark görülmemiştir. GlyR antikoru negatif olguların naif B hücrelerinde (CD19+IgD+CD27-) sağlıklı kontrollere göre artış görülürken (p=0,0233), GlyR antikoru pozitif olgularda anlamlı bir fark bulunmamıştır. GlyR antikoru pozitif ve negatif olguların (CD19+IgD-CD27-) immatür B hücrelerinin  azaldığı görülmüş ve bunlardan antikor negatif olgularda anlamlılık bulunmuştur (p=0,0458). Hastaların (CD19+CD38+CD138+) plazma ve (CD19+CD38++CD138-) plazmablast hücrelerinde görülen azalma anlamlı bulunmamıştır. T hücre ve alt tipleri değerlendirildiğinde CD4+ yardımcı T hücreler ve CD8+ sitotoksik T hücrelerinde kontrollere göre anlamlı bir fark bulunmamıştır. GlyR antikoru pozitif hastaların CD3+CD4+CD25+ T hücrelerinde (p=0,0178) ve CD3+CD4+CD25high regülatör T hücrelerinde (p=0,0101) sağlıklı gönüllere göre artış görülmüştür. 
Bulgular, GlyR antikorlarının otoimmünite gelişiminde anahtar mekanizma olan T hücre aracılı aktif inflamasyona katkıda bulunarak epilepsi patogenezinde rol oynayabileceği görüşünü desteklemektedir.

Abstract:
Epilepsy is a common disease characterized by seizures caused by spontaneous, sudden electrical discharges in the brain. In some autoimmune diseases accompanied by seizures, it is thought that autoantibodies detected in serum and cerebrospinal fluids trigger epileptiform activity due to T cell mediated immune response in unknown etiology. Recently, the presence of glycine receptor (GlyR) antibodies, which are detected in patients with progressive encephalomyelitis with rigidity and myoclonus (PERM) also in cryptogenic focal epilepsy suggests that GlyR antibodies may play a role in the pathogenesis of seizures.
To determine potential alterations in antigen-specific immune cell subpopulations of GlyR antibody positive epilepsy patients, a total of 22 Cryptogenic Focal Epilepsy patients with 7 GlyR antibody positive, and 15 antibody negative patients and 25 age and sex matched healthy individuals were included in this study. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from the patients' blood, and immune system cells (NK cells, T cells with subgroups and B cells with subgroups) were labeled with fluorochrome antibodies and immunophenotyping was performed by flow cytometry.
As a result of the study, there was no significant difference between the groups in the general population of B, T, NK and NKT cells. While naive B cells (CD19+IgD+CD27-) of GlyR antibody negative cases increased compared to healthy controls (p=0.0233), no significant difference was found in GlyR antibody positive cases. Both GlyR antibody positive and negative cases (CD19+IgD-CD27-) showed a decrease in immature B cells and significant difference was found in antibody negative cases (p=0.0458). The decrease in plasma (CD19+CD38+CD138+) and (CD19+CD38 ++CD138-) plasmablast cells of patients was not significant. No significant difference was found in CD4+ helper T cells and CD8+ cytotoxic T cells compared to controls. CD3+CD4+CD25+ T cells (p=0.0178) and CD3+CD4+CD25high regulator T cells (p=0.0101) increased in GlyR antibody positive patients compared to healthy volunteers.
The findings support the view that GlyR antibodies may play a role in the pathogenesis of epilepsy by contributing to T cell-mediated active inflammation, a key mechanism in the development of autoimmunity.