Niklozamid uygulamasının epitelyal ovaryum kanseri hücre hattı ovcar-3 üzerine etkileri
Effects of niclosamide treatment on epithelial ovarian cancer cell line ovcar-3
Yazar: AYŞE ÇAKIR GÜNDOĞDU
Danışman: PROF. DR. GÜLNUR TAKE KAPLANOĞLU
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Flüorourasil = Fluorouracil ; Hücre dizisi = Cell line ; Katenin = Catenin ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Niklozamid = Niclosamide ; Over neoplazmları = Ovarian neoplasms

Özet:
En ölümcül jinekolojik kanser türü ovaryum kanseridir ve mevcut kemoterapötik yöntemler hastaların çoğunda yetersiz kaldığından yeni tedavi seçenekleri üzerine yoğunlaşılmaktadır. Antihelmintik bir ilaç olan niklozmid'in anti-tümör etkilerinin gösterildiği çok sayıda çalışma yapılmıştır. Bu çalışmada, niklozamid'in epitelyal ovaryum kanserine olan etkileri in vitro yöntemlerle araştırıldı. Niklozamid'in OVCAR-3 hücrelerine sitotoksik etkilerini saptamak ereğiyle MTT testi uygulandı. İlacın apoptozis üzerine etkileri TUNEL yöntemiyle tespit edildi. Hücrelerdeki β-katenin düzeyi immunositokimyasal yöntemle analiz edilerek tümör hücrelerinin çoğalmasında işlev gören Wnt/β-katenin sinyal yolağına niklozamid'in etkisi belirlendi. Aynı deneyler rutinde kanser tedavisinde kullanılmakta olan 5-fluorourasil için de yürütüldü. İki ilaç için elde edilen bulgular birbirleri ve kaynak verileri ile karşılaştırılarak değerlendirildi. Niklozamid'in 2 μM dozda OVCAR-3 hücrelerinin çoğalmasını engellediği belirlenirken, 5-fluorourasil'in sitotoksik etkisi 20 μM dozda görüldü. Niklozamid'in apoptozisi belirgin olarak arttırdığı ancak bu etkinin 5-flourourasile'e karşı daha zayıf olduğu tespit edildi. Sitozolik β-katenin tutulumunun niklozamid uygulaması ile anlamlı olarak azaldığı gözlemlendi. Çalışmada elde edilen bulgulara göre, niklozamid'in OVCAR-3 hücreleri üzerine düşük dozlarda etkin olduğu, apoptozisi uyarma ve β-katenin bağımlı Wnt sinyal yolağını baskılayarak hücre çoğalmasını engellediği belirlendi. Bu özellikleri sayesinde niklozamid'in ovaryum kanseri tedavisinde günümüzde kullanılan kematörapötiklere alternatif bir ilaç olabileceği sonucuna varıldı.

Abstract:
Ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy and since the current chemotherapeutic drugs are not effective enough, new methods of treatment are sought for. Niclosamide is an anthelminthic drug and it has been extensively studied for its anti-carcinogenic effects. In the present study, it is aimed to investigate the possible in vitro effects of niclosamide on ovarian cancer. Human ovarian epithelial adenocarcinoma cell line OVCAR-3 was used in the experiments. MTT was applied to investigate the cytotoxic effect of niclosamide and it was found that 1 μM and 2 μM concentrations significantly reduced cell viability. The effects of the drug on apoptosis were tested by TUNEL method. The β-catenin levels in the cells were analyzed immunocytochemically in order to assess the potency of niclosamide on Wnt/β-catenin signaling pathway that function in cell proliferation. All the assays were also performed for 5-fluorouracil used as a therapeutic agent in cancer treatment routinely and it was found that 10 μM and 20 μM concentrations inhibited cell viability significantly. The data for both drugs were assessed in comparison with each other and the references. Niclosamide at 2 μM concentration inhibited OVCAR-3 cell proliferation whereas 5-fluorouracil was cytotoxic at 20 μM concentration. Niclosamide led to an increase in apoptosis while this effect was weaker compared with 5-fluorouracil. Niclosamide treatment inhibited cytosolic β-catenin accumulation significantly. The results indicate that niclosamide is effective on OVCAR-3 cell line at low concentrations, induces apoptosis and suppresses cell proliferation by inhibiting Wnt/ β-catenin signaling pathway. Taken together, these findings support clinical explorations to reposition niclosamide for ovarian cancer treatment as an alternative for current chemotherapeutics.