Bazı fenolik asitlerin ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC) ile tayini ve yöntem validasyonu
Determination of some phenolic acids by ultra high performance liquid chromatography (UHPLC) and method validation
Yazar: NURLAN RASHIDOV
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF MİNE ÖNCÜ KAYA
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Fenolik asit = Phenolic acid

Özet:
Bu çalışmada, bazı önemli fenolik asitlerden olan Protokateşik asit (PCA), p-Hidroksibenzoik asit (p-HBZ), Kafeik asit (CAF), Şirincik asit, (SYR) p-Kumarik asit (p-COU), t-Ferulik asit (t-FER), Rozmarinik asit (ROS) ve t-Sinnamik asit (t-CIN)'in eriklerde ve bazı gıda takviyelerinde tayini için hızlı ve seçici ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC) yöntemi geliştirilerek validasyonu yapılmıştır. Fenolik asitler, Agilent Zorbax Eclipse Plus C8 (3,0 mm×150 mm×1,8 µm) kolonunda ve A (su:metil alkol:formik asit; 88:10:2; h/h/h), B (su:metil alkol:formik asit; 8:90:2; h/h/h) hareketli fazı kullanılarak UV dedektör ile 280 nm dalga boyu değerinde belirlenmiştir. Akış hızı 0,4 ml/dk ve enjeksiyon hacmi 10 µl'dir. Geliştirilen yöntemin kesinlik, doğruluk, gözlenebilme sınırı (LOD), tayin alt sınırı (LOQ) ve kararlılık parametrelerine göre validasyonu yapılmıştır. Çalışılan fenolik asitler için yüksek korelasyon katsayıları (r2= 0,9991-0,9999) ile doğrusal grafikler elde edilmiştir. Gün içi ve günler arası kesinlik deneylerinde %3,82'den küçük %BSS değerleri ile yöntem tekrarlanabilirdir. Deneyler farklı erik türlerinde ve gıda takviye edici olarak kullanılan piknogenol ile supradin tabletlerinde gerçekleştirilmiştir. Erik sularından fenolik asitlerin saflaştırılması için C18-OH kolonu ile katı faz ekstraksiyonu (SPE) yapılmıştır. 

Anahtar kelimeler: UHPLC, Fenolik asitler, Katı faz ekstraksiyonu, Yöntem geliştirme, Validasyon.

Abstract:
In this study, fast and selective ultra high performance liquid chromatography (UHPLC) method has been developed and validated for the determination of certain important phenolic acids including Protocatechuic acid (PCA), p-Hydroxybenzoic acid (p-HBZ), Caffeic acid (CAF), Syringic acid, (SYR) p-Coumaric acid (p-COU), t-Ferulic acid (t-FER), Rosmarinic acid (ROS) and t-Cinnamic acid (t-CIN) in plums and food supplements. Phenolic acids were determined by UV detector at a wavelength of 280 nm on Agilent Zorbax Eclipse Plus C8 (3.0 mm×150 mm×1.8 µm) column and using a mobile phase A (water:methanol:formic acid; 88:10:2; v/v/v), B (water:methanol:formic acid; 8:90:2; v/v/v). The flow rate was 0.4 ml/min and the injection volume was 10 µl. The method was validated according to the precision, accuracy, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ) and stability parameters. High correlation coefficients (r2 = 0.9991-0.9999) were obtained for the phenolic acids. The method was reproducible which were found in intraday and interday precision experiments, with RSD% values less than 3.82%. The experiments were carried out in different plum species and food supplements including pycnogenol and supradyn tablets. Solid phase extraction (SPE) technique with C18-OH column was performed for the purification of phenolic acids from plum juice.

Keywords: UHPLC, Phenolic acid, Solid phase extraction, Method development, Validation.