Farklı büyüme faktörü kombinasyonlarının sertoli hücrelerinin üç boyutlu tübül oluşturma kapasitelerine etkisinin araştırılması /
Yazar: BEGÜM DURKUT
Danışman: PROF. DR. ÇİLER ÇELİK ÖZENCİ
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Büyüme faktörleri = Growth factors ; Hepatositler = Hepatocytes ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Sertoli hücreleri = Sertoli cells ; Sinir büyüme faktörleri = Nerve growth factors ; İn vitro = In vitro

Özet:
Amaç: Sertoli hücrelerinin in vitro testiküler organizasyon süreci iki aşamadan oluşur: testis kordonu benzeri yapıların ve tübül benzeri yapıların oluşması. Embriyonik dönemde seminifer tübüllerin oluşumunda direkt rol oynayan faktörlerden hepatosit büyüme faktörü (HGF), postnatal dönemde de Sertoli hücrelerinden salgılanır. Gliyal hücre kökenli nörotrofik faktör (GDNF) spermatogonyal kök hücre devamlılığını sağlar. Renal tübülogenez sürecinde; GDNF'nin HGF'nin in vitro tübül oluşturma kapasitesini arttırdığı ortaya konmuştur. Testis tübüllerinin oluşumunda HGF'nin rolü olduğu bilinmesine rağmen, renal tübülogeneze benzer olarak, GDNF'nin de bu süreçte görev alıp almadığı hakkında literatürde henüz bir bilgi yoktur. Bu çalışmada; GDNF'nin, HGF'ye ek olarak, Sertoli hücrelerinin üç boyutlu (3B) tübül oluşturma kapasitelerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.
Yöntem: 15P-1 Sertoli hücre hattı kullanılarak; kontrol, sadece HGF varlığında, sadece GDNF varlığında ve HGF ile GDNF varlığında olacak şekilde 4 grup oluşturulmuştur. Beş gün boyunca Matrigel™' içerisinde 3B kültüre edilen Sertoli hücrelerinin tübül oluşturma kapasiteleri invert mikroskop altında ve parafin kesitlerde hematoksilen-eozin boyaması ile değerlendirilmiştir. Sertoli hücrelerinin kimliğinin değişmediğini göstermek için kit ligand (Sertoli belirteci; pozitif kontrol) ve c-kit (Germ hücre belirteci; negatif kontrol); polarizasyonunu göstermek için ise sıkı bağlantı proteini zonula okludens-1 (ZO-1) protein ifadeleri immünofloresan yöntemi ile değerlendirilmiştir. 
Bulgular: HGF ile birlikte GDNF uygulaması Sertoli hücrelerinin 3B kültürü sırasında in vitro organizasyonunu, lümen benzeri yapıların oluşumunu ve Sertoli hücrelerinin polaritesini anlamlı olarak arttırmıştır.
Sonuç: HGF ile uyarılmış Sertoli hücrelerinin 3B tübül oluşturma kapasitesini GDNF eklenmesi daha da arttırır.
Anahtar Kelimeler: 15P-1 Sertoli hücre hattı, 3B hücre kültürü, HGF, GDNF, in vitro tübülogenez

Abstract:
Objective: The process of testicular organization of Sertoli cells in vitro consists of two stages: the formation of testicular cord-like structures and tubule-like structures. Hepatocyte growth factor (HGF), which is one of the factors that play a direct role in the formation of seminiferous tubules in the embryonic period, is secreted from Sertoli cells in the postnatal period. Glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) provides sustainability of the spermatogonial stem cell. In the process of renal tubulogenesis; GDNF has been shown to increase the tubule forming capacity of HGF in vitro. Although it is known that HGF has a role in the formation of testicular tubules, there is no information in the literature about whether GDNF is also involved in this process, similar to renal tubulogenesis. In this study; it was aimed to investigate the effect of GDNF, in addition to HGF, on the three-dimensional (3D) tubule forming capacity of Sertoli cells.
Method: 15P-1 Sertoli cell line was used, and the following 4 groups were established: control, HGF-administrated only, GDNF-administrated only and HGF-administrated and GDNF-administrated. The tubule forming capacity of Sertoli cells cultured in 3D in Matrigel™ for five days was evaluated under an inverted microscope and by hematoxylin-eosin staining on paraffin sections. To characterize the Sertoli cells during culture, expression of kit ligand (Sertoli marker; positive control) and c-kit (Germ cell marker; negative control); to show the 3D polarization of Sertoli cells, tight junction protein zonula occludens-1 (ZO-1) immunofluorescence staining was performed.
Results: Administration of GDNF together with HGF significantly increased the in vitro organization, formation of luminal-like structures and polarity of Sertoli cells during 3D culture of Sertoli cells.
Conclusion: The addition of GDNF further enhances the 3D tubule forming capacity of HGF-stimulated Sertoli cells.
Key words: 15P-1 Sertoli cell line, 3D cell culture, HGF, GDNF , in vitro tubulogenesis