Melatoninin MCF-7 hücre kültüründeki apoptoz aktivasyonunun ve sitotoksisitesinin polimeraz zincir reaksiyonu (pcr), mtt hücre canlılık testi ve immunsitokimya yöntemleriyle araştırılması
The investigastion of apoptosis activation and cyotoxicity of melatonin in MCF-7 cell culture through polimerase chain reaction (pcr), mtt cell viability assay and immunocytochemical methods
Yazar: SEMİN GEDİKLİ
Danışman: PROF. DR. ELVAN ÖZBEK
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Apoptozis = Apoptosis ; Hücre kültürü = Cell culture ; Melatonin = Melatonin ; Meme kanseri =   ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Protein-P53 = Protein-P53

Özet:
Amaç: Meme kanseri Türkiye'de ve dünyada en sık görülen kanser türlerinden biridir ve kanser nedeniyle gelişen ölüm oranları arasında en üst sıralarda yer almaktadır. Kanser sadece bir sağlık sorunu değil aynı zamanda sosyal ve ekonomik açıdan bir toplum sorunu haline gelmiştir. Bu kadar önemli bir sağlık sorununa çözüm bulunması ise birçok araştırıcının birinci hedefleri arasındadır. Bu nedenle tedaviye yönelik farklı çalışmalar yapılmakta ve farklı maddelerin bu hastalık üzerindeki etkileri yoğun bir şekilde araştırılmaktadır. Bu çalışmada modern tıpta çok yönlü etkileriyle bilinen bir molekül olan melatoninin kanser ile ilişkisini ve kanser hastalığına çözüm açısından sağlayabileceği katkıyı irdelemeyi amaçlamaktayız.
Materyal ve Metot: Çalışmada kullanılan insan meme kanseri MCF-7 hücre hattına, melatoninin sitotoksik dozunu ve IC50 değerini belirlemek için, 10 nM - 100 000 nM konsantrasyon aralığında melatonin uygulandı. Bu uygulamanın ardından hücre hatlarında MTT analizi (hücre canlılık testi) yapıldı. Etkin dozlar belirlendikten sonra, melatonin uygulanmayan kontrol grubu ve 10, 100, 1000, 10 000, 100 000 nM konsantrasyonlarda 24 saat süreyle melatonin uygulanan 5 çalışma grubu olmak üzere 6 deney grubu oluşturuldu. Bütün deney gruplarındaki total antioksidan (TAS) ve total oksidan seviyesi (TOS), apoptotik aktivite (Bax ve p53 immunpozitifliği) ve p53 gen ekspresyon düzeyleri araştırıldı.  
Bulgular: MCF-7 hücrelerine uygulanan melatoninin, hücre çoğalmasını engellediği, yani sitotoksik etki yaptığı ve 24 saatlik inkübasyon süresi sonunda p53 gen ekspresyonunda ve Bax proteininde artışa neden olduğu gözlemlenmiştir. Bu durum immunositokimyasal boyamada da tespit edilmiştir. Ayrıca melatonin uygulaması sonucunda total antioksidan seviyesinde artış olurken, total oksidan miktarında ise azalmanın olduğunu tespit ettik. 
Sonuç: Çalışma sonuçları, melatonin uygulaması ile oluşan p53 genindeki ve Bax proteinindeki artışın apoptotik aktiviteyi arttıracağını göstermektedir. Melatoninin bu etkileri göz önüne alındığında kanser tedavisinde kullanılabilecek bir ajan olabileceği sonucuna varılabilir.
Anahtar Kelimeler: Apoptoz, Bax, Melatonin, Meme kanseri, p53.

Abstract:
Aim: Breast cancer is one of the most common types of cancer in the world and Turkey, and is located at the top among death rates developing due to cancer. Cancer is not only health problem but also is a social and economic problem of society. Finding a solution to such an important health problem is among the primary goals of many researchers. That's why, new researches have been done to treatment of brest cancer and the effects of different subtances on this desease have been investigated extensively. In this study, we aimed to study the melatonin, known as powerful antioxidant with versatile effects in the modern medicine, association with cancer and its contribution to solution of cancer desease.
Material and Method: In the study, human breast cancer MCF-7 was used.  To determine the cytotoxic doses and IC50 value of melatonin, interval of 10 nM ? 100 000 nM concentrations of melatonin were applied in the parenteral MCF-7 cell line. After treatment with various concentration of melatonin, cell viability were analyzed by MTT assay. Then effective doses were determined, MCF-7 cell line was treated with 6 concentration of melatonin doses. These groups consisted of untreated control, 10, 100, 1000, 10 000, and 100 000 nM concentration of melatonin treated groups. All cells were incubated for 24h. In all groups, there examined the melatonin cytotoxicity, TAS, TOS, apoptotic activity  (Bax and p53 immunopositivity)  and expression levels of p53 gene.  
Results: Melatonin which was applied MCF-7 cells inhibited cell proliferation, so it did cytotoxic effect, increased the p53 gen expression and Bax protein synthesis at the end of 24 hours incubation. Increased Bax and p53 immunpositivity were determined in immunocytochemical staining. Furthermore, melatonin treatment was increased TAS and decreased TOS.
Conclusion: The results of the study, melatonin treatment may induced the activation of apoptosis due to increase in p53 gene expression and Bax protein. These effects revealed that melatonin may be a candidate agent in the treatment of cancer.
Key Words: Apoptosis, Bax, Breast cancer, Melatonin, p53.