Emamektin benzoatın gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) gen ekspresyonu ve bazı kan parametreleri üzerine etkileri
The effects of emamectin benzoate on gene expression and some blood parameters in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
Yazar: SERDAR KİLERCİOĞLU
Danışman: PROF. DR. ÖZCAN AY ; DOÇ. DR. MEHMET BERTAN YILMAZ
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Bu çalışmada antiparazitik bir ajan olan emamektin benzoatın (EB) gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792)'nda bağışıklık ve stres ilişkili bazı genlerin karaciğer ve dalakta ekspresyonlarına ve biyokimyasal parametrelerine etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışma üç adet deney ve bir adet kontrol olmak üzere toplamda 4 adet 520 lt'lik yetiştiricilik tanklarında yürütülmüştür. Her hafta sonunda 3 tanktan da 5'er balık alınmış (n=15) ve böylece deneme grupları 3 tekrarlı çalışılmıştır. EB, ortalama 100 gram ağırlığındaki balıklara 50 µg/kg (canlı ağırlık)/gün doz hesabı ile 7, 14 ve 21 gün yeme karıştırılarak oral yoldan verilmiştir. Balıklar günlük canlı ağırlıklarının %1'i kadar yem ile beslenmiş ve günlük doz iki öğün (sabah ve akşam) olarak verilmiştir. İlacın etkisini gözlemlemek için balıklarda patojen ile hastalık oluşturulmamıştır. Biyokimyasal analizler Gesan chem. 200, gen ekspresyon analzileri ise Applied Biosystem 7500 cihazları ile gerçekleştirilmiştir. ALT, GGT, toplam protein, glukoz ve albumin düzeyleri incelendiğinde deney ve kontrol grupları arasındaki farklar istatistiksel olarak anlamlı çıkmamıştır (p˃0.05). Tek anlamlı farklılık üçüncü hafta AST enzimi sonucunda elde edilmiş olup, deney grubu AST düzeyleri kontrol grubuna kıyasla anlamlı düzeyde yüksek çıkmıştır (p<0.05). mRNA gen ekspresyon analiz sonuçlarına göre IL-1β mRNA gen ekspresyonu karaciğerde tüm haftalarda, dalakta ise ikinci deney haftası sonunda kontrol grubuna göre anlamlı düzeyde düşük çıkmıştır. Tnf-α mRNA gen ekspresyonu karaciğer ve dalakta ilk hafta sonunda artış gösterse de istatistiksel olarak anlamlı çıkmamıştır. Tek anlamlı farklılık karaciğerde ikinci hafta sonunda meydana gelmiş ve düşüş göstermiştir.  Hsp70 mRNA ekspresyon düzeyleri karaciğerde ilk ve ikinci hafta gruplarında kontrol gruplarına göre anlamlı düzeyde (p<0,05) azalmış; dalakta ilk hafta grubunda kontrol grubuna kıyasla anlamlı düzeyde artmış, ikinci hafta sonunda ise istatistiksel olarak anlamlı düzeyde düşüş göstermiştir. IL-8 mRNA ekspresyon düzeyleri hem karaciğer hem de dalakta deney süresince istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık göstermemiştir.

Abstract:
The aim of this study was to discover the effects of emamectin benzoate (EB) which is an anti-parasitic agent, on expression of immun and stress related genes in liver and spleen and biochemical parameters in plasma of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792). The study has carried out with four aquaculture tanks with the volume of 520 liters and one of them was the control group. Five of fish were taken from each aquaculture tank (n=15) at the end of 7, 14 and 21 days and with this way, experiment groups were studied with 3 replicates. The fish with an average weight of 100 g. were orally administered 50 µg/kg EB daily for 7, 14 and 21 days as medicated feed. The feeding rate was 1% body weight per day and the feeding was carried out with two times daily as morning and evening. The fish have not made infected with any pathogen during experiment to observe only effects of EB on immune system and biochemical parameters. Biochemical and expression analyses were carried out with the devices of Gesan chem 200 and Applied Biosystem 7500 respectively. There were no significant differences results of ALT, GGT, total protein, glucose and albumin compared with results of control group (p˃0.05). AST was found significantly higher only at the end of the third week (p<0.05) but there were no significantly differences at the end of the first and second weeks.
According to gene expression results obtain, mRNA levels of IL-1β were significantly decreased in liver in all weeks but were significantly decreased in only second week in spleen. mRNA gene expression of tnf-α showed increasing both in liver and spleen at end of the first week but results were not statistically significant. It was significantly decreased at the end of the second week and was the single result that found statistically significant. mRNA gene expressions of Hsp70 were significantly decreased in liver compared with results of control group at the end of the fisrt and second weeks (p<0.05).  It was increased and then decreased significantly in spleen in the first and second week respectively. There was no any significant differences for mRNA gene expression of IL-8 in both organs during period of experiment.