Sirkadiyen ritim genlerinden period 3 ve clock gen'in infertilite ile ilişkisi
The relationship of circadian rhythm genes period 3 and clock gen with infertility
Yazar: RECAİ ACİ
Danışman: PROF. DR. GÜLAY ÇİFTCİ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Veteriner Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Genetik = Genetics
Dizin: Genler = Genes ; Hormonlar = Hormones ; Kısırlık = Infertility ; Melatonin = Melatonin ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Sirkadiyen ritim = Circadian rhythm

Özet:
Bu çalışmada, Per3 (VNTR) ve Clock (3111 T>C) sirkadiyen ritm genlerindeki polimorfizmlere ek olarak, biyokimyasal, hematolojik ve sirkadiyen ritim gösteren hormon parametrelerinin infertilite üzerine etkisinin araştırılması amaçlandı.
Grup 1 (Kontrol grubu), 18-40 yaş aralığında, endokrinolojik hastalığı bulunmayan ve en az bir canlı gebeliği bulunan 35 kadından oluştu. Grup 2 (İnfertil grubu), 18-40 yaş aralığında, en az 1 yıl düzenli cinsel ilişki ve korunmamaya rağmen gebe kalamamış 35 kadından oluştu. Kontrol ve infertil grubun kan örnekleri mıd-luteal fazda (regl dönemlerinin 3. gününde) sabah aç olarak alındı. Periferik kandan elde edilen hasta ve kontrol DNA'ları, PZR ve RFLP metotları uygulanarak incelendi. Serum örneklerinde FSH, LH, E2, Prolaktin, Serbest T3, Serbest T4, TSH, Serbest Testosteron, Kortizol, Progesteron, Prolaktin, Ferritin, B12 ve Folat düzeyleri Elektrokemiluminesans İmmünoassay (ECLIA) yöntemi ile otoanalizörde melatonin, Clock ve period-3 protein düzeyleri ise ELISA test kitleri ile belirlendi.
 Kontrol ve infertil grubun Per3 (VNTR) genotip ve allel sıklıkları karşılaştırıldığında, gruplar arasında DD (Per34/4) genotip sıklığında anlamlı bir fark saptanırken (P<0.05), diğer genotip ve allel sıklıklarında anlamlı bir fark saptanmadı. Clock (3111 T>C) polimorfizmi arasında gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmadı (P>0.05). Grup 2'de Period 3 protein düzeyinin Grup 1'den düşük olduğu (P>0.05), Clock gen protein düzeyinin ise Grup 1'e göre anlamlı düzeyde yüksek olduğu belirlendi (P<0.001). Grup 2'de Sirkadiyen ritim gösteren TSH düzeyinin Grup 1'e göre hafif arttığı, kortizol ve melatonin hormon düzeyinin ise hafif azaldığı ama bu farkın istatiksel olarak önemli olmadığı belirlendi (P>0.05). Kontrol grubunda Period 3 gen protein düzeyi ile analizi yapılan diğer parametreler arasında anlamlı düzeyde bir ilişki saptanmadı (P>0.05). Kontrol grubundaki Clock gen protein düzeyi ile E2 düzeyi arasında pozitif, LH, prolaktin ve FT4 düzeyleri ile arasında ise negatif yönde bir korelasyon saptandı (p<0.05).
Per 3 (VNTR) polimorfizminin infertil kadınlarda bağımsız bir risk faktörü olabileceği ,Sirkadiyen ritim gösteren melatonin gibi antioksidant takviyesinin fertilitenin arttırılmasına katkı sağlayabileceği, çalışmamızın örnek sayısının daha fazla olduğu ileride yapılabilecek çalışmalara bir temel teşkil edeceği düşünülmektedir.



Anahtar  Kelimeler: İnfertilite, Sirkadiyen ritim, Period 3,Clock gen, Melatonin

Abstract:
This study, it was aimed to investigate the effects of biochemical, hematological, and circadian rhythm hormone parameters on infertility, in addition to polymorphisms in Per 3 (VNTR) and Clock (3111 T>C) circadian rhythm genes.
Group 1 (Control group) consisted of 35 women aged 18-40 years without endocrinological disease and at least one live pregnancy. Group 2 (Infertile group) consisted of 35 women between 18-40 who could not get pregnant despite at least one year of regular sexual intercourse and unprotected protection. Blood samples of the control and infertile groups were taken in the mid-luteal phase (on the third day of their menstrual cycle) in the morning, in fasting conditions. Patient and control DNAs obtained from peripheral blood were analyzed using PCR and RFLP methods. In serum samples, FSH, LH, E2, Prolactin, Free T3, Free T4, TSH, Free Testosterone, Cortisol, Progesterone, Prolactin, Ferritin, B12, and Folate levels were determined by Electrochemiluminescence Immunoassay (ECLIA) method in autoanalyzer, melatonin, Clock and period-3 protein levels were determined with ELISA test kits.
When the Per3 (VNTR) genotype and allele frequencies of the control and infertile groups were compared, a significant difference was found in the frequency of DD (Per3 4/4) genotypes between the groups (P<0.05). In contrast, no significant difference was found in the frequencies of other genotypes and alleles. There was no statistically significant difference between the groups in Clock (3111 T>C) polymorphism (P>0.05). It was determined that the Period 3 protein level in Group 2 was lower than Group 1 (P>0.05), and the Clock gene protein level was significantly higher than Group 1 (P<0.001). It was determined that the TSH level, which showed a circadian rhythm, slightly increased in Group 2. In contrast, the cortisol and melatonin hormone levels decreased slightly, but this difference was not statistically significant (P>0.05). In the control group, there was no significant correlation between Period 3 gene protein level and other parameters analyzed (P>0.05). There was a positive correlation between Clock gene protein level and E2 level and a negative correlation between LH, prolactin, and FT4 levels in the control group (p<0.05).
It is thought that the Per 3 (VNTR) polymorphism may be an independent risk factor in infertile women, antioxidant supplementation such as melatonin, which has a circadian rhythm, may contribute to increasing fertility, and our study will provide a basis for future studies with larger sample size.


Keywords: Infertility, Circadian rhythm, Period 3, Clock gene, Melatonin