Bisfenol A'nın HepG2 hücrelerine olan etkilerinin incelenmesi
Examination of the effects of bisphenol A on hepG2 cells
Yazar: ESİN ÖZ
Danışman: DOÇ. DR. ZEKİYE TUBA TÜYLÜ KÜÇÜKKILINÇ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Bisfenol A = Bisphenol A ; Cadherinler = Cadherins ; Epitel = Epithelium ; Hücre dizisi = Cell line ; Vimentin = Vimentin

Özet:
Bu çalışmada, Bisfenol A (BPA) ve Fulvestrant (ICI) kimyasalının HepG2 insan hepatoma hücrelerine uygulanarak hücrelerdeki proliferasyon, yara iyileşmesi, E-kaderin, N-kaderin, vimentin proteinleri ve apoptoza (kaspaz 3/7) etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. BPA endüstride sıklıkla kullanılan bir endokrin bozucu maddedir ve östrojen benzeri etkiye sahiptir. Fulvestrant, östrojen reseptör antagonistidir. BPA, ICI, BPA ve ICI kombinasyonu uygulanmış HepG2 hücrelerinde yüzde hücre canlılığı MTT deneyi ile belirlenmiştir. BPA ve ICI kombinasyonun HepG2 hücre canlılığı üzerindeki etkileri Talalay-Chou metoduna göre değerlendirilmiştir. HepG2 hücrelerindeki migrasyon yara iyileşme yöntemiyle belirlenmiştir. Hücrelerdeki E-kaderin, N-kaderin ve vimentin protein düzeyleri Elisa kitiyle ölçülmüştür. HepG2 hücrelerinde apoptoz ApoTox-Glo ™ Tripleks Testiyle ölçülmüştür. HepG2 hücrelerine uygulanan 8 nM BPA'nın hücre canlılığını arttırdığı,160 nM ICI ile BPA ve ICI kombinasyon uygulamasının hücre canlılığını azalttığı gözlenmiştir. Talalay-Chou metoduyla, HepG2 hücre canlılığına karşı BPA ve ICI kombinasyonu sonucu gözlenen etkinin sinerjistik bir etkileşimden kaynaklandığı açıklanmıştır. Ayrıca BPA'nın ICI'nın sitotoksik etkisini arttırdığı belirlenmiştir. Yara oluşturulmuş HepG2 hücrelerinde, BPA ile BPA ve ICI kombinasyon uygulamasında % yara büyüklüğünün azaldığı gözlenmiştir.HepG2 hücrelerinde E-kaderin protein düzeyi BPA ve ICI kombinasyon uygulamasında azalmıştır. N-kaderin protein düzeyi ICI ile BPA ve ICI kombinasyon uygulamasında artmıştır. Vimentin protein düzeyinde değişiklik gözlenmemiştir. Apoptoz lüminesans verileri değerlendirildiğinde BPA ve ICI kombinasyon uygulamasının apoptozu arttığı belirlenmiştir ve BPA uygulamasının nekroptozu etkilediği görülmüştür. Bu tez çalışmanın sonuçları HepG2 hücrelerine 8 nM BPA ve 160 nM ICI uygulanmasının hücrelerdeki proliferasyonu, yara iyileşmesini ve apoptozu etkilediği açıklanmaktadır.
Anahtar kelimeler: Bisfenol A, epitelyal mezenkimal geçiş, HepG2, E-kaderin, vimentin
Bu tez Hacettepe Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinasyon Birimince desteklenmiştir. Proje No: 17804

Abstract:
In this study, it was aimed to determine the effect of application Bisphenol A (BPA) and Fulvestrant (ICI) chemical to HepG2 human hepatoma cells on proliferation, wound healing, E-cadherin, N-cadherin, vimentin proteins and apoptosis (caspase 3/7) in cells. BPA is an endocrine disrupter commonly used in the industry and has an estrogen-like effect. Fulvestrant is an estrogen receptor antagonist. The% cell viability in HepG2 cells treated with BPA, ICI, BPA and ICI combination was determined by MTT assay. The effects of BPA and ICI combination on HepG2 cell viability were evaluated according to the Talalay-Chou method. Migration in HepG2 cells was determined by wound healing method. The protein levels of E-cadherin, N-cadherin and vimentin in cells were measured with the Elisa kits. Apoptosis in HepG2 cells was measured by ApoTox-Glo ™ Triplex Test. It was observed that 8 nM BPA applied to HepG2 cells increased cell viability, while 160 nM ICI and BPA and ICI combination treatment reduced cell viability. The Talalay-Chou method explained that the effect observed as a result of the combination of BPA and ICI against HepG2 cell viability is due to a synergistic interaction. It was also determined that BPA increased the cytotoxic effect of ICI. In wound-formed HepG2 cells, BPA, BPA and ICI combination treatment showed that % wound size is decreased. The protein level of E-cadherin in HepG2 cells decreased in BPA and ICI combination treatment. The protein level of N-cadherin increased with the combination of ICI and BPA; and ICI. No changes in the protein level of vimentin were observed. When apoptosis luminescence data were evaluated, it was determined that BPA and ICI combination application increased apoptosis and BPA application was found to affect necroptosis. The results of this thesis study explain that applying 8 nM BPA and 160 nM ICI to HepG2 cells affects the proliferation, wound healing and apoptosis in the cells.
Keywords: Bisphenol A, epithelial mesenchymal transition, HepG2, E-cadherin, vimentin
This thesis was supported by Hacettepe University Scientific Research Coordination Unit. Project Number: 17804