İnsan göbek kordonundan türetilen mezenkimal/stromal kök hücrelerin tip 1 diyabet hastalarından alınan periferik kan T lenfositleri üzerindeki immünmodülatör etkisi
Immunomodulator effect of human umbilical cord-derived mesenchymal/stromal stem cells on peripheral blood T lymphocytes from type 1 diabetes patients
Yazar: SELİN URSAVAŞ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ HALİME TUBA CANBAZ ; PROF. DR. ERDAL KARAÖZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı, insan göbek kordonu kaynaklı mezenkimal kök hücrelerinin (WJ-MKH'lar) sağlıklı bireylerin ve tip 1 diyabetli (T1DM) hastaların kanından izole edilen T düzenleyici hücreler (Treg) üzerindeki immünomodülatör etkisini değerlendirmektir.
Gereç ve Yöntem: Sağlıklı ve T1DM bireylerden alınan kandan Treg'ler izole edilmiştir. Treg'ler kontrol kuyusunda tek başına, WJ-MKH ile direkt ve indirekt kokültür koşullarında 7 gün boyunca kültürlenmiştir. Treg proliferasyon analizi için hücreler Karboksifloresin Diasetat Süksinimidil Ester (CFSE) ile işaretlenmiş ve flow sitometri ile analiz edilmiştir. FOXP3, IL-10, IL-4 ve TGF-β gen ekspresyonları RT-PCR yöntemiyle analiz edilmiştir. CD4, IL-2, TNF-α ve BCL-2 belirteçleri immünfloresan boyama ile gösterilmiştir.
Bulgular: MKH'ların hem T1DM hem de sağlıklı gruplarda Treg hücre proliferasyonu üzerinde önemli bir etkisi gözlenmedi. T1DM grubunda, TGF-β ve FOXP3 ekspresyonları özellikle direkt kültürde artmıştır. Sağlıklı grupta IL-4 ve TGF-β sentezi artmıştır. T1DM grubunun indirekt kuyusunda IL-10 seviyeleri daha yüksekken, direkt kuyusunda TNF-α seviyeleri daha yüksektir. CD4 sentezi gruplar arasında anlamlı bir fark göstermezken, sağlıklı grupta IL-2 sentezinin yüksek olduğu görülmüştür. 
Sonuç: Bulgular, MKH'ların Treg proliferasyonunu indüklemede doğrudan uyarıcı bir etkiye sahip olmadığını göstermektedir. MKH'ların bağışıklık sisteminin düzenlenmesi ve Treg hücrelerinin işlevleri üzerinde potansiyel etkileri olduğu gösterilmiştir. Ancak, bu etkilerin bağışıklık mikroçevresine ve kullanılan kültür koşullarına bağlı olarak değiştiği anlaşılmaktadır.

Abstract:
Aim: The aim of this study to evaluate the immunomodulatory effect of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (WJ-MSCs) on T regulatory cells (Treg) isolated from the blood of healthy individuals and patients with type 1 diabetes (T1DM). 
Materials and Methods: Treg cells were isolated from the blood of healthy and T1DM individuals and cultured alone as a control and together with WJ-MSCs in direct and indirect co-culture conditions for 7 days. For Treg proliferation analysis, cells were labeled and analyzed in a flow cytometer. FOXP3, IL-10, IL-4, and TGF-β gene expressions were analyzed by RT-PCR. CD4, IL-2, TNF-α, and BCL-2 markers were demonstrated by immunofluorescence staining.
Results: No significant effect of MSCs on Treg cell proliferation was observed in both T1DM and healthy groups. In the T1DM group, TGF-β and FOXP3 expressions were increased, especially in direct culture. IL-4 and TGF-β synthesis was increased in the healthy group. IL-10 levels were higher in the indirect well of the T1DM group, while TNF-α levels were higher in the indirect well. While CD4 synthesis did not show a significant difference between the groups, IL-2 synthesis was observed to be high in the healthy group.
Conclusion: The findings show that MSCs do not have a direct stimulatory effect in inducing Treg proliferation. MSCs have been shown to have potential effects on the regulation of the immune system and the functions of Treg cells. However, it is understood that these effects vary depending on the immune microenvironment and the culture conditions used.