Geleneksel yoğurtlardan izole edilen streptococcus thermophilus suşlarının hyaluronik asit üretim potansiyelinin ve ilgili genlerin tespit edilmesi
Determination of hyaluronic acid production potential and related genes of streptococcus thermophilus strains isolated from traditional yoghurts
Yazar: BİLUN MERVE KUT
Danışman: PROF. DR. DUYGU KIŞLA ; DOÇ. DR. BURCU KAPLAN TÜRKÖZ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı / Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu çalışma kapsamında, Türkiye'nin farklı bölgelerinde geleneksel yöntemlerle üretilen yoğurtlardan izole edilen laktik asit bakterileri (LAB) ve referans olarak kullanılan Streptococcus thermophilus RSKK 04082 suşunun hyaluronik asit (HA) üretim kapasiteleri araştırılmıştır. İzolatlar arasından referans suşa benzeyen bir LAB tespit edilmiş ve LAB'nin genotipik tanımlaması yapılmış ve Enterococcus faecium (D4-16) olduğu tespit edilmiştir. S. thermophilus RSKK 04082 ve E. faecium (D4-16)'un 38 saatlik periyotta canlı hücre sayımları yapılmış ve sırasıyla 10,11 log kob/mL ve 9,75 log kob/mL olarak 18. saatte en yüksek canlı hücre sayısına ulaştığı tespit edilmiştir. Primer metabolit olduğu bilinen HA'nın konsantrasyonunu belirlemek için karbazol metodu kullanılmış ve glukuronik asit standardı kullanılarak çizilen standart eğri dikkate alınarak HA miktarları belirlenmiştir. S. thermophilus RSKK 04082 ve E. faecium (D4-16)'un en yüksek HA konsantrasyona 16. saatte ulaştığı ve sırasıyla 66,92 mg/L ve 64,50 mg/L olduğu belirlenmiştir. Fourier dönüşümlü kızılötesi spektrofotometresine (FTIR) göre her iki mikroorganizma tarafından üretilen ekzopolisakkaritlerin HA olduğu belirlenmiştir. Ayrıca HA üretiminden sorumlu genlerin belirlenmesi amacıyla primerler tasarlanmış ve hem S. thermophilus hemde E. faecium (D4-16) genomik DNA ile PCR yapılmıştır. Yapılan PCR sonunda her iki suş ile hasA gen bölgesi olduğu düşünülen bir bölge çoğaltılmıştır.

Abstract:
In this study, lactic acid bacteria (LAB) isolated from yoghurts produced by traditional methods in different regions of Turkey and hyaluronic acid (HA) production capacities of Streptococcus thermophilus RSKK 04082 strain used as a reference were investigated. Among the isolates, a LAB similar to the reference strain was selected and identified as Enterococcus faecium (D4-16). By genotypic identification. Viable cell counts were made over a 38-hour period and it was determined that S. thermophilus RSKK 04082 and E. faecium (D4-16) cells reached 10.11 log cfu/mL and 9.75 log cfu/mL, respectively, with the highest number of viable cells at 18th hour. The carbazole method was used to determine the concentration of HA, which is known to be the primary metabolite, and the amounts of HA were determined by considering the standard curve drawn using the glucuronic acid standard. It was determined that S. thermophilus RSKK 04082 and E. faecium (D4-16) reached the highest HA concentration at the 16th hour and was 66.92 mg/L and 64.50 mg/L, respectively. According to Fourier transform infrared spectrophotometer (FTIR), the exopolysaccharides produced by both microorganisms were determined to be HA. In addition, primers were designed to identify genes responsible for HA production and PCR was performed with genomic DNA of both S. thermophilus and E. faecium (D4-16), and a region thought to be the hasA gene region was amplified from both strains.