Ratlarda gliserol ile oluşturulan rabdomiyolizin indüklediği akut renal yetmezlikte kefirin etkinliği
Effects of kefir with the glycerol of rhabdomyolysis-induced acute renal failure in rats
Yazar: PINAR KARABACAK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. FİLİZ ALKAYA SOLMAZ
Süleyman Demirel Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation
Dizin: Böbrek yetmezliği-akut = Kidney failure-acute ; Gliserin = Glycerin ; Kefir = Kefir ; Rabdomiyoliz = Rhabdomyolysis ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Akut böbrek yetmezliği (ABY) erken postoperatif dönemde ve yoğun bakımda yatan hastalarda sık karşılaşılan bir sorundur. Dünyada ABY mortalite oranları hala %40-60 gibi yüksek bir oranda olup, postoperatif veya şiddetli travmayı takiben gelişen ABY?de bu oran %50-70?e çıkmaktadır. Kefir, düzenli olarak günde yarım litre tüketiminin metabolizma üzerinde stabilize edici etkisinin yanında karaciğer, safra, böbrek fonksiyonları ve kan dolaşımı üzerine olumlu etkiler gösterdiği tespit edilmiştir (2,3).
Çalışmamızda rabdomyoliz ile ATN oluşturulan ratlarda bir antioksidan olan kefirin böbrek dokusu ve fonksiyonları üzerinde oluşan hasarı azaltıp azaltmadığını ve koruyucu etkisinin olup olmadığını araştırmayı amaçladık.Çalışmaya 32 tane 12 haftalık 250-300 gr Wistar Albino çalışmaya dahil edildi. Ratlar 4 gruba ayrıldı. Kontrol grubu (Grup 1, n: 8): Ratlar standart rat yemi ve su ile beslenirken gavaj ile 2×1 ml SF(4-8 ml/kg/gün) ile 30 gün beslenmeye devam edilecek. 31. günde ratlara 0,4 ml SF subkutan olarak uygulandıktan   yaklaşık 1 saat sonra ratların 2 arka bacak kas dokusuna 1? er ml SF  intramusküler olarak uygulanacak.
Rabdomyoliz grubu (Grup 2, n: 8): ): Ratlar standart rat yemi ve su ile beslenirken gavaj ile 2×1 ml SF (4-8 ml/kg/gün) ile  30 gün beslenmeye devam edilecek. 31. günde ratlara 1,5 mg/kg dozunda morfin(yaklaşık 0,4 cc)   subkutan olarak uygulandıktan 1 saat sonra ratların 2 arka bacak kas dokusuna rabdomyoliz oluşturmak için 9 ml/kg veya 4,5ml/ kg %50?lik hazırlanmış gliserol  intramusküler olarak ( her bacağa 0,5-1ml im) uygulanacak.
Kefir grubu (Grup 3,n:8): Ratlar standart rat yemi ve su ile beslenirken gavaj ile 2×1 ml kefir(4-8 ml/kg/gün)  ile  30 gün beslenmeye devam edilecek  31. gün sonunda 0,4 cc SF subkutan olarak uygulandıktan  1 saat sonra ratların 2 arka bacak kas dokusuna her birine 1 ml SF intramusküler olarak uygulanacak
Kefir +rabdomyoliz grubu (Grup 4,n:8): Ratlar standart rat yemi ve su ile beslenirken gavaj ile 2×1 ml kefir (4-8 ml/kg/gün) ile 30 gün beslenmeye devam edilecek. 31. Günde 1,5 mg/kg morfin( yaklaşık 0,4 cc) subkutan olarak uygulandıktan 1 saat sonra  ratların arka bacak kas dokusuna rabdomyoliz oluşturmak için %50?lik hazırlanmış 9 ml/kg ve ya 4,5ml/ kg gliserol  intramusküler olarak( her bacağa 0,5- 1ml im) uygulanacak.
Tüm gruplar 31. Günde 10 mg/kg xylazine ile 80-100mg/kg ketamin i.p. uygulanacak. Genel anestezi altında batın açılacak,  abdominal aortadan kan alınacak ve  KREATİNİN, ÜRE, BUN, CİSTATİN C, CPK, LDH çalışılacak. Alınan kanlar 5000 devirde 8 dakika santrifüj edildikten sonra CİSTATİN C rat spesifik kitler kullanılarak  ELISA ile çalışılacak. Diğer kanlar ise biyokimya cihazında çalışılmak üzere biyokimya laboratuarına gönderilecek. Alınan böbrek dokusunun biri  fosfat tamponuna koyularak biyokimya laboratuarında homojenizasyon yapılarak TAS, TOS rat spesifik kitlerle çalışılacak. Diğer böbrek dokusu 2 parçaya bölünerek histolojik değerlendirme için  % 10 formalin solüsyonuna konulacak ve Hematoksilen-Eozin ile boyanacak. Boyanan örnekler Olympus BX50    tipi binoküler mikroskopta incelenerek  ve fotoğraflar elde edilerek değerlendirilecek

Abstract:
Acute renal failure (ARF) is a common problem in hospitalized patients in intensive care at early postoperative period. ARF mortality rates in the world is still as high as 40-60%, postoperative or severe trauma,increase the  ARF developing ratio  to 50-70%. Kefir, regular consumption of half a liter a stabilizing effect on the metabolism, has been shown that a positive impact on as liver, bile, kidney function and blood circulation. 

In our study ATN develeped with rhabdomyolysis in rats. An antioxidant kefir decrease damage  on kidney functions to research whether the protective effect. 32 Wistar albino 12 weeks old and 250-300 g were included. Rats were divided into 4 groups. The control group (Group 1, n = 8): Rats will fed standard rat chow and water by gavage with 2 × 1 ml saline (4-8 ml / kg / day) for 30 days. At the end of this period saline 0.4 ml was administered subcutaneously to rats  about 1 hour after administration, 1 ml saline intramuscularly will be applied at rat?s bilateral hind leg muscles.

Rhabdomyolysis group (Group 2, n = 8):): Rats will fed standard rat chow and water by gavage with 2 times  1 ml saline (4-8 ml / kg / day) for 30day. After this periot   to the rats 1,5 mg / kg dose of morphine (about 0.4 cc) 1 hour after subcutaneous  will admineter. To  create a rhabdomyolysis on hind limb muscle tissue of rats, previously prepared 50% glycerol, 9 ml / kg or 4.5 ml / kg will  be applied intramuscularly (0.5-1ml of each leg, im). 
Kefir group (Group 3, n = 8): Rats will gavage fed with standard rat chow and water kefir with 2 times 1 ml (4-8 ml / kg / day) for 30 days. At the end of the day 0.4 cc saline subcutaneously in hind leg muscle tissue of rats and one hour after administration, 1 ml saline will be applied to each leg  intramuscularly
Kefir + rhabdomyolysis (Group 4, n = 8): Rats were gavage fed with standard rat chow and water kefir with 2 times 1 ml (4-8 ml / kg / day) for 30. At the 31. Day 1.5 mg / kg of morphine (about 0.4 cc) will subcutaneously adminester. One hour after administration create rhabdomyolysis, previously prepared i 50% glycerol  9 ml / kg or 4.5 mg / kg intramuscular injection will be applied to hind limb muscle tissue of rats (each leg 0.5 - 1 ml im).
All the groups, at the 31th day, 10 mg/kg xylazine and ketamine 80-100mg/kg will  be  applied intrapeitenally. Under general anesthesia the abdomen will be explored, the blood will be taken from the abdominal aorta, and creatinine, urea, BUN, CİSTATİN C, CPK, LDHwil be studied. The blood samples were centrifuged at 5000 rpm after 8 minutes, CİSTATİN C rats studied by ELISA using specific kits. The residue blood will send to biochemistry laboratory for studying. one of the renal tissue will put in phosphate bufferto  homogenization by the laboratory of biochemistry, TAS, TOS studied rat-specific kits.
Other  renal tissue will be divide into two parts, one part part of these for histological evaluation, placed in 10% formalin solution and  painted with hematoxylin-eosin. Stained samples were obtained from the Olympus BX50-type binocular microscope and photographs will be assessed. The evaluation used a scoring system to determine the damage.