Glutatyon s -transferaz enziminin kaz (Anser Anser Domesticus) karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı kimyasalların ve metallerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Glutathion s-transferase enzymepurification from the liver of goose (Anser Anser Domesticus),investigation of characterization, effects of somechemicals and metals on enzyme activity
Yazar: YEŞİM SAYIN
Danışman: PROF. DR. RAMAZAN DEMİRDAĞ ; DOÇ. DR. EMRAH YERLİKAYA
Ağrı İbrahim Çeçen Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Karaciğer = Liver ; Kazlar = Geese ; Metaller = Metals ; Saflaştırma = Purification ; İnhibisyon = Inhibition

Özet:
Bu tez kapsamında, Kaz (Anatidae) karaciğer dokusunda Glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkileri incelenmiştir. Kaz karaciğer dokusundan GST enziminin saflaştırılması işlemi için afinite kromatografisi yöntemi kullanılmıştır. Bu yöntemle enzim 0,121 EÜ/mg protein spesifik aktiviteye sahip %70 verim ile 48,4 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılan enzimin saflık derecesi SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapılarak kontrol edilmiş ve tek bant elde edilmiştir. Molekül ağırlığı yaklaşık 23 kDa olarak hesaplanmıştır.
Enzimin optimum pH'sı 7, stabil pH'sı 6.5, optimum iyonik şiddeti 100 mM K-fosfat ve son olarak optimum sıcaklığı 40 °C olarak hesaplanmıştır. Bunun yanı sıra GSH substratı için KM sabiti 1,34 mM ve Vmax değeri 1,14 EÜ/ml, CDNB substratı için KM sabiti 0,68 mM ve Vmax değeri 0,5 EÜ/ml olarak hesaplandı. Son olarak kaz karaciğer dokusundan saflaştırılan GST enzimine Se-2, Hg+2, Ag+, ve Fe+2 gibi metal iyonları ile Oksitetrasiklin, Tilosin Tartarat, Enrofloksasin ve Doksisiklin kimyasallarının inhibisyon etkileri incelendi ve bu kimyasallar ile metal iyonlarının IC50 değerleri hesaplandı.

Abstract:
In this thesis, purification and characterization of Glutathione S-transferase (GST; EC 2.5.1.18) enzyme in goose (Anatidae) liver tissue and the effects of some chemicals on enzyme activity were investigated. Affinity chromatography method was used for the purification of GST enzyme from goose liver tissue. With this method, the enzyme was purified 48.4 times with a yield of 70.51.25% with a protein specific activity of 0.121 EU/mg. The purity of the purified enzyme was checked by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and a single band was obtained. The molecular weight has been calculated as approximately 23 kDa.
The optimum pH of the enzyme is 7, its stable pH is 6.5, its optimum ionic strength is 100 mM K-phosphate and finally its optimum temperature is calculated as 40 °C. In addition, the KM constant for the GSH substrate was 1.34 mM and the Vmax value was 01.14 EU/ml, the KM constant for the CDNB substrate was 0.68 mM and the Vmax value was 0.5 EU/ml. Finally, the inhibition effects of metal ions such as Se-2, Hg+2, Ag+, and Fe+2 and the chemicals Oxytetracycline, Tylosin Tartrate, Enrofloxacin and Doxycycline on the GST enzyme purified from goose liver tissue were examined and the IC50 values of these chemicals and metal ions were calculated.