Kronik periodontitisli hastalarda anaerob bakteriyel etkenlerin moleküler yöntemler kullanılarak belirlenmesi
Identification of anaerobe bacteria from patients with periodontitis using molecular techniques
Yazar: GÜL ARICA
Danışman: DOÇ. DR. YASEMİN BULUT
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Bakteriler-anaerobik = Bacteria-anaerobic ; Dental plak = Dental plaque ; Gingiva = Gingiva ; Gingival hastalıklar = Gingival diseases ; Periodontitis = Periodontitis

Özet:
Periodontitis, periodontal liflerde ve se¬mentte harabiyete, alveolar kemikte yıkı¬ma neden olan klinik bir enflamasyondur. Kronik periodontitis ise plak birikimi sonucu ortaya çıkan, dişeti enflamasyonu ve cep oluşumu ile sonlanan,  periodontal ataşman ve alveol kemiği kaybıdır. Bu tezde kronik periodontitisli hastalardan alınan subgingival plak örneklerinden, anaerob bakterilerin varlığının moleküler yöntemler ile araştırılması ve bu hastalardaki bakteri sıklığı ile, periodontitisin seyrini belirlemede önemli olan, plak indeksi (Pİ), gingival indeks (Gİ) ve sondalama derinliği (SD) gibi parametreler arasında bir ilişki olup olmadığının belirlenmesi amaçlandı. Bu amaçla, 2013 yılında Elazığ Diş Hastanesi' ne başvuran kronik periodontitisli 37 ve periodontitis yönünden sağlıklı 33 bireyden, periodontal ceplere paper pointler yerleştirilerek krevikular sıvı örnekleri alındı. Daha sonra, bu örneklerden DNA izolasyonu yapıldı. Elde edilen DNA'lar Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR)-Ters hibridizasyon yöntemiyle incelendi. PCR-Ters hibridizasyon sonuçlarına göre;  kronik periodontitisli 37 hastada % 94 Tannerella forsythia (T. forsythia-Tf)  ve Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum-Fn), % 86 Capnocytophaga türleri       (C sp), % 78 Campylobacter rectus (C. rectus-Cr), % 70 Treponema denticola  (T. denticola-Td), % 56 Parvimonas micra (P. micra-Pm) ve Eikenella corrodens (E.corrodens-Ec), % 51 Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis-Pg), % 21 Eubacterium nodatum (E.nodatum-En) ve % 16 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans-Aa)' a rastlanmıştır. Kontrol grubunda ise, % 54 Fn , % 15 C sp, % 3 Tf ve Ec' ye rastlanmıştır. Kronik periodontitisli ve sağlıklı bireylerdeki mikroorganizmaların dağılımı incelendiğinde, iki grup arasındaki farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğu  belirlendi (p< 0,01, p<0,001). Pİ, Gİ ve SD değerleri bakımından her iki grup arasında istatistiksel açıdan anlamlı farklılıklar tespit edildi (p<0,001).  Hastaların cep derinliği ile bakterilerin bulunma sıklıkları incelendiğinde ise, Aa, Pg, Tf, Td, Pm, Cr, Ec varlığı ile sondalama derinliği arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar olduğu tespit edilirken (p<0,05, p<0,01, p<0,001). Pi, Fn, En, C sp varlığı ile cep derinliği arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark belirlenemedi (p> 0,05).
   Sonuç olarak, kronik periodontitisin seyrini belirlemede önemli olan klinik parametreler ile anaerob bakteri varlığı arasında kuvvetli bir ilişkinin olduğu ve bu ilişkiyi belirlemede daha hızlı, spesifik, doğru sonuçlara kısa sürede ulaşılabilecek, PCR-Ters hibridizasyon yönteminin uygulananabileceği kanaatine varıldı.

Abstract:
Periodontitis is an inflammatory disease damaging periodontal fibers and cement, and destructing alveolar bone. Chronic periodontitis on the other hand is the loss of periodontal attachment and alveolar bone resulting from the accumulation of plaque and resulting in  the inflammation of gingiva and a pocket formation.  The objectives of this thesis were molecular detection of anaerobic agents from the subgingival plaque samples and  to determine  whether there is any relationship between the frequency of these agents in the patients and some parameters such as plaque index (PI), gingival index (GI), and  probing depth (SD) that are important in determining the course of the periodontitis. For this purpose, in 2013, crevicular fluid samples were taken from 37 periododntitis patients at the Elazığ Dental Hospital  and 33 otherwise healthy people by placing paper points to the periodontal pockets. Next, DNA was isolated from these samples. The DNA samples were tested by Polymerase chain reaction (PCR)-Reverse hybridization method. According to the results of PCR-reverse hybridization , the agents  detected from the 37 periodontitis patients were % 94  Tannerella forsythia (T. forsythia-Tf)  and Fusobacterium nucleatum                   (F. nucleatum-Fn), % 86  Capnocytophaga türleri (C sp), % 78 Campylobacter rectus (C. rectus-Cr), % 70 Treponema denticola (T. denticola-Td), % 56  Parvimonas micra (P. micra-Pm) and Eikenella corrodens (E.corrodens-Ec), % 51 Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis-Pg), % 21 Eubacterium nodatum (E.nodatum-En)and % 16  Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans-Aa). On the other hand, % 54  Fn , % 15  C sp, % 3 Tf and Ec were found. within the control group. When distribution of the microorganisms were looked into, the difference between the two groups were found significant (p< 0,01, p<0,001).  Significant differences were detetcted in PI, GI, PD values between the groups. (p<0,001).  Analyzing the relation between PD and the frequency of the occurence of bacteria, there were a significant relation between PD and the presence of Aa, Pg, Tf, Td, Pm, Cr, and Ec (p<0,05, p<0,01, p<0,001) while no significant relation was found in Pi, Fn, En, and C sp. (p> 0,05).
    As a result, there is a strong relationship between the clinical parameters of importance and the presence of anaerobic bacteria. PCR-reverse hybridization  can be used to detect this relationship faster, and more specifically and accurately.