Uyarılmış mezenkimal kök hücre eksozomlarının inflamasyon modeli üzerine etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of stimulated mesenchymal stem cell exosomes on inflammation model
Yazar: CANAN ÖZTÜRK
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEHRA SEDA HALBUTOĞULLARI
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı / Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Biyoloji = Biology ; Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji = Infectious Diseases and Clinical Microbiology
Dizin: Eksozomlar = Exosomes ; Kök hücreler = Stem cells ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Makrofajlar = Macrophages ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Amaç: Sunulan tez çalışmasında inflamatuvar sitokinlerle uyarılmış veya uyarılmamış
olarak elde edilen mezenkimal kök hücre (MKH) eksozomlarının inflamasyon üzerine olası
etkilerinin incelenmesi ve bu etkilerin neler olacağının belirlenmesi amaçlanmıştır. Bunun
için insan wharton jeli kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (iWJ-MKH) TNFα, IFNɣ ve ILß proinflamatuar sitokinleri ile uyarılması ve eksozomlarının izolasyonu, U937
makrofajlarının PMA ve LPS ile uyarılarak inflamasyon modelinin oluşturulması,
oluşturulan inflamasyon modeline izole edilen iWJ-MKH eksozomlarının eklenerek
etkilerinin belirlenmesi hedeflenmektedir.
Yöntem: Planlanan tez çalışmasında deney grupları temel olarak inflamatuar sitokinlerle
uyarılmadan elde edilmiş eksozomların (Ekso+) ve inflamatuar sitokinlerle uyarılarak elde
edilmiş eksozomların (uEkso+), makrofaj hücre hattı olan U937 hücrelerine etkisinin
incelenmesi üzerine kurgulanmıştır. Eksozomların inflamasyon durumundaki makrofajlarda
ne gibi değişikliklere yol açtığının anlaşılması için öncelikle PMA ile uyarılıp makrofajlara
çevrilen U937 hücreleri kontrol grubu olarak kullanılmıştır. Hücrelerin makrofajlara
dönüşümü için 250 ng/ml Phorbol-12-myristate 13-acetate (PMA) eklenmiş ve 24 saat
37°C'de ve %5 CO2'li ortamda inkübe edildikten sonra PMA içeren besiyeri uzaklaştırılarak
taze besiyeri eklenmiştir. İlgili kuyucuklara LPS (Escherichia coli, serotip O26:B6) 10
μg/ml konsantrasyonda uygulanmıştır. Hücre kültürüne eklenen eksozom ve uyarılmış
eksozomların U937 makrofajlarına apoptotik ve antiproliferatif etkileri değerlendirilmiştir.
Bulgular: U937 makrofajlarında PMA ve LPS ile inflamasyon modeli oluşturulmuştur.
İnflamatuar sitokinlerle kültür sonrası elde ettiğimiz iWJ-MKH eksozomlarının normal
besiyeri ile kültüre edilenlere göre U937 hücreleri üzerine daha apoptotik etki gösterdiği ve
U937 hücrelerinden kaynaklı inflamatuar sitokin salınımını azalttığı saptanmıştır.
Sonuç: Kültür ortamına PMA ve LPS ekleyerek U937 makrofajlarında inflamasyon modeli
başarılı bir şekilde oluşturulmuştur. Genel olarak iWJ-MKH eksozomlarının U937

Abstract:
Objectıve: The goal of the presented thesis was to investigate and determine the possible
effects of mesenchymal stem cell (MSC) exosomes obtained stimulated or unstimulated with
inflammatory cytokines on inflammation. For this, TNF, IFN, and IL-ß proinflammatory
cytokines were used to stimulate human wharton jelly-derived mesenchymal stem cells
(hWJ-MSC) and isolate their exosomes; an inflammation model was created by stimulating
U937 macrophages with PMA and LPS; and exosomes from the isolated hWJ-MSC were
added to the established inflammation model.
Method: The experimental groups in the planned thesis study were based primarily on
examining the effects of exosomes (Exo+) obtained without stimulation with inflammatory
cytokines and exosomes obtained after stimulation with inflammatory cytokines (sExo+) on
the macrophage cell line U937 cells. To understand what changes exosomes cause in
macrophages during inflammation, U937 cells were first stimulated with PMA and
translated into macrophages as a control group. To transform cells into macrophages, 250
ng/ml Phorbol-12-myristate 13-acetate (PMA) was added and incubated for 24 hours at 37°C
and 5% CO2. After that, the PMA-containing medium was removed and fresh medium was
added. LPS (Escherichia coli, serotype O26:B6) was applied to the respective wells at a
concentration of 10 μg/ml. The apoptotic and antiproliferative effects of exosomes and
stimulated exosomes added to cell culture on U937 macrophages will be evaluated.
Results: Inflammation model was established with PMA and LPS in U937 macrophages. It
was determined that the exosomes of hWJ-MSCs obtained after culture with inflammatory
cytokines showed a more apoptotic effect on U937 cells than those cultured with normal
medium, and decreased the release of inflammatory cytokines originating from U937 cells.
Conclusion: By adding PMA and LPS to the culture medium, a model of inflammation was
successfully established in U937 macrophages. Overall, hWJ-MSC exosomes were found to
reduce inflammatory cytokines secreted from U937 cells. However, after adding TNFα,
vii
IFNɣ and IL-β cytokines to the hWJ-MSC culture medium, it was determined that the
isolated exosomes showed a more apoptotic effect on U937 cells and reduced inflammatory
cytokine release from U937 cells compared to the exosomes collected from hWJ-MSC
cultured with normal medium.