Yağ doku matriksi desellülerizasyon tekniklerinin araştırılması
Invastigation of adipose tissue matrix decellularization methods
Yazar: RAVZA TOSUNBAYRAKTAR
Danışman: DOÇ. DR. ZEYNEP BURÇİN GÖNEN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Ekstrasellüler matriks = Extracellular matrix ; Hücresiszleştirme = Desellularization ; Kök hücreler = Stem cells

Özet:
Stromal vasküler fraksiyon (SVF), heterojen bir yağ hücre süspansiyonudur. Tez çalışmasının amacı; SVF sonrası geriye kalan dokuyu (SVFSD) hücresizleştirilerek bir biyomateryal haline getirmek ve diş pulpası kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (DPMKH) proliferasyon ve hücre canlılığı üzerine etkisini değerlendirmektir. Bu amaçla, adipoz ve SVFSD'ların  fiziksel, mekanik ve enzimatik yöntem kullanılarak ex vivo deselülerizasyonu gerçekleştirildi. Desellülerizasyonun karakterizasyonu için histolojik analiz, kalıntı DNA ve mekanik test analizi gerçekleştirildi. Elde edilen hücresizleştirilmiş SVF matriks (DSVFM), hücresizleştirilmiş adipoz matriks (DAM) ve kontrol olarak adipoz doku (AD) sonuçları ile istatistiksel olarak karşılaştırıldı. DSVFM'ler üzerine DPMKH kültürü sonrası canlılık ve proliferasyon analizleri gerçekleştirildi. DAM ve DSVFM'lerin histolojik boyamalar ile deselülerizasyonu doğrulandı ve matrikslerin lifli yapısını koruduğu belirlendi. Kalıntı DNA miktarının DAM'da 4,470 ± 0,834 ng/µl, DSVFM'de 1,820 ± 1,157 ng/µl olduğu bulundu. DSVFM ve DAM, AD ile kıyaslandığında istatistiksel olarak düşük DNA içeriğine sahip bulundu (p=0,002; p=0,003). AD'nin hücresizleştirme sonrası %ağırlık kaybı 99,39 iken; SVFSD'de %98,12 idi. Çekme testi sonrası yeni üretilen DSVFM'in esnekliğini koruduğu belirlendi. DSVFM'ye uygulanan maksimum kuvvet 0,16038 N; maksimum gerilme 5,10493 N/mm2 ve maksimum uzama değeri 26,20329 mm olarak hesaplandı. DAM ve DSVFM'e DP-MKH ekimi sonrası hücrelerin canlılık yüzdesi kontrol grubunda %99,89 ± 0,30; DAM grubunda % 99,91 ± 0,19 ve DSVFM grubunda %99,79  ± 0,57 idi. MTT testi sonrası DAM ve DSVFM'in DP-MKH'ler için toksik etki göstermediği belirlendi. Hücresizleştirilmiş SVF matriks biyouyumlu bir biyomateryal olarak ileri preklinik ve klinik çalışmalarda kullanılarak araştırılmalıdır. Gelecekte bu materyal, klinik olarak yumuşak doku mühendisliğinde kullanılmaya adaydır.
Anahtar Kelimeler: Adipoz doku; deselülerizasyon; mezenkimal kök hücre; ekstraselüler matriks

Abstract:
Stromal vascular fraction (SVF), is heterogenous fat cell suspension. The aim of this thesis study is to produce a decellulerized SVF matrix (DSVFM) which can be a biomaterial and to evaluate the effect on dental pulp mesenchymal stem cells (DPMSCs) in terms of cell proliferation and cell viability. Ex vivo decellularization of adipose tissues (AT) and post SVF isolation tissues (pSVF) were performed using physical, mechanical and enzymatical methods. Histological analysis, residual DNA analysis and mechanical test analysis were performed for the characterization of protocols. The obtained decellularized SVF matrix (DSVFM) was statistically compared with the decellularized adipose matrix (DAM) and AT as a control. Cell viability and proliferation analyzes were performed after DPMKH culture on DSVFMs. Histological stainings results were confirmed the decellularization of matrices and they preserved the fibrous structures. The residual DNA amount was found to be 4,470±0,83 ng /µl in DAM and 1,820±1,15 ng/µl in DSVFM. DSVFM and DAM were found to have statistically lower DNA content compared to AD (p=0.00). While AT has lost 99.39% of weigh after decellularization, pSVF has lost 98.12%. After the tensile test, it was determined that DSVFM preserves its flexibility. The maximum force that can be applied to the DSVFM was 0.16 N; the maximum stress was 5,10 N/mm2 and the maximum elongation was calculated as 26,20 mm. Percent viability of cultured DP-MSCs on DAM was 99.89 ± 0.30%, and 99.79 ± 0.57% in the DSVFM group and it was found 99.91± 0.19% in the control group. After MTT test, it was determined that DAM and DSVFM did not show any cytotoxic effects for DP-MSCs. The decellularized SVF matrix should be investigated as a biocompatible biomaterial in advanced preclinical and clinical studies. In the future, the decellularized SVF matrix may be a candidate as a biomaterial in soft tissue engineering.

Keywords: Adipose tissue; desellularization; extracellular matrix; mesenchymal stem cell