Karaciğerde tümör oluşmasına neden olan dietilnitrozamin ve 2-asetilaminofloran uygulanmış sıçanlara demetoksiviridin ve 1-alfa-hidroksi demetoksiviridin'in etkileri
The effects of demethoxyviridine and 1-alpha-hidroxyl demethoxyviridine on diethylnitrosamine and 2-acetylaminoflourine induced rats
Yazar: MEHMET CENGİZ ÜSTÜNER
Danışman: PROF.DR. İRFAN DEĞİRMENCİ
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
ÖZETBu çalışmada, dietilnitrozamin (DEN) ve 2-asetilaminofloran (2-AAF)'nın 2aylık 86 adet Spraque dawley türü sıçan karaciğerinde tümör oluşturma etkileri iledemethoxviridin (DMV) ve ondan türetilmiş 1- a -hidroksi- demethoxviridin (1- a -hidroksi-DMV)'in bu tümör oluşumunu ne derece önleyebildikleri araştırıldı. Buamaçla deney hayvanları 10 gruba ayrıldı. Gruplar, 1.grup (kontrol), 2.grup (0,1 ml yağgavajla), 3.grup (0.1 ml DMSO i.p), 4.grup (0.1 ml DMSO'da çözündürülerek 1.5mg/kg DMV oranında i.p), 5.grup (0.1 ml DMSO'da çözündürülerek 1.5 mg/kg 1- a -hidroksi-DMV oranında i.p), 6.grup (0.1 ml DMSO'da çözündürülerek 175 mg/kg DENoranında i.p), 7.grup (0.1 ml DMSO'da çözündürülerek 20 mg/kg 2-AAF oranında 0.1ml yağ ile birlikte gavajla), 8.grup (DEN uygulamasından bir hafta sonra 20 mg/kg 2-AAF oranında 0.1 ml yağ ile birlikte gavajla), 9.grup (DEN + 2-AAF ile birlikte 16., 23.ve 30. günde 1,5 mg/kg dozunda DMV, 0.1 ml DMSO'da çözündürülerek i.p) ve10.grup (DEN + 2-AAF ile birlikte 16., 23. ve 30. günde 1,5 mg/kg dozunda 1- a -hidroksi-DMV oranında 0.1 ml DMSO'da çözündürülerek i.p) olarak düzenlendi.Deneyin 5. haftasında, eter anestezisi altında sıçanların karaciğeri alındı. Karaciğerhomojenatları hazırlanarak, SOD, Gpx ve katalaz enzim aktiviteleri ve MDA düzeylerispektrofotometrik olarak belirlendi. Ayrıca, karaciğer mikrosomları hazırlanarak,Western blot yöntemiyle CYP1A2 enzimlerinin ekspresyonu incelendi. Karaciğer dokupreperatları H&E boyama yöntemi ile histopatolojik olarak ve immunohistokimyasalyöntem ile de Ha-Ras, GST-p ve Cx32 proteinleri yönünden değerlendirildi.Elde edilen bulgular, kontrole göre SOD aktivite % inhibisyonunun 6., 7. ve8. gruplarda çok önemli düzeyde, 10.grupta önemli düzeyde azaldığı ve 9.grupta isekontrol düzeyine yaklaştırdığı ortaya koymuştur. Gpx bakımından, kontrole göre, 2.,3., 4., 5., 7. ve 9. gruplarda fark bulunmazken 6., ve 8. gruplarda çok önemli düzeyde,10. grupta ise önemli düzeyde fark bulundu. MDA düzeyi 2., 3., 4. ve 5. gruplardakontrole yakın değerlerde fakat 6., 7., 8., 9. ve 10. gruplarda çok önemli düzeydeyüksek bulundu. Katalaz aktivitesi, 2., 3., 4., 5. ve 9. gruplarda kontrole benzerdüzeyde iken, 6., 7., 8., ve 10. gruplarda çok önemli düzeyde azalma gösterdi. CYP1A2ekspresyonu, kontrol grubuna göre 2. ve 3. gruplarda farklı bulunmadı, 4. grupta en az,5. ve 10. gruplarda önemli, 6., 7., 8. ve 9. gruplarla ise çok önemli düzeyde farklıbulundu.Histolojik olarak; 1., 2., 3., 4. ve 5. gruplarda dejeneratif bulgular vepatolojik bozukluklara rastlanmazken, 6., 7. ve 8.gruplarda, 8. grupta daha fazla olmaküzere, hepatosit karyomegali, hepatosit sitomegali ve iltihabi hücre infiltrasyonuoluşumu gibi patolojik bozukluklar gözlendi. İmmunohistokimyasal olarak; Ha-Ras veGST-p'nin 8.grupta arttığı, 9. ve 10. gruplarda düştüğü, Cx32'nin ise tüm gruplardadeğişmeden kaldığı belirlendi.Sonuç olarak, her iki mantar metabolitlerin de preneoplastik dönemde etkiliolduğu ortaya kondu. Fakat bu sonucun daha da kesinleşebilmesi ve preneoplastikdönemi takip eden evrelerde ne gibi etkilerinin olabileceğini ortaya koyabilmek için,henüz çok yeni olan bu konuda, daha çok çalışmaya ihtiyaç vardır.Anahtar Sözcükler : 2-AAF, Antioksidant enzymes, Cx32, CYP1A2,DEN, , DMV, GST-p, Ha-Ras, 1-hidroksi-DMV

Abstract:
SUMMARYIn this study, we determined the effects of diethylnitrosamine (DEN) and 2-acetylaminofluorene (2-AAF) in the liver of 2 months old, totally 86 Spraque dawleyrats, and we determined the effects on protection of tumorogenesis of demethoxyviridin(DMV) and its metabolite 1-Î±-hidroksi-demethoxyviridin (1- Î±-hidroksi-DMV).We grouped the study animals in 10 groups. The first one was the control,the second group (olive oil), 3. group (DMSO), 4. group (DMV), 5. group (1-Î±-hidroksi-DMV), 6. group (DEN), 7. group (2-AAF), 8. group (DEN + 2-AAF), 9. group(DEN + 2-AAF + DMV) and 10. group (DEN + 2-AAF + 1- Î±-hidroksi DMV). DEN(175 mg/kg DEN dissolved in 0.1 ml DMSO) was injected intraperitonally to itsadministrated groups on first day. 2-AAF (20 mg/kg 2-AAF dissolved in 0.1 ml DMSOand combined with 0.1 ml olive oil) was given to its administrated groups with gavagetechnique on 7., 8. and 9. days. DMV and 1-Î±-hidroksi DMV (1.5 mg/kg separately,DMV/1-Î±-hidroksi dissolved in 0,1ml DMSO) were injected intraperitonally to theirsadministrated groups on the 16., 23. and 30. days.In the 5. week of the study, the rat liver tissues were removed under etheranaesthesia. Liver homogenates prepared and SOD, Gpx and Catalase enzyme activitiesand MDA levels determined spectrophotometrically. On the other hand livermicrosomes prepared and the expression of CYP1A2 enzymes determined with Westernblot technique. Liver tissue slides evaluated as histopathologically with H&E stainingand immunohistochemically about Ha-Ras, GST-p and Cx32 proteins.The results showed too significant differences of SOD % activity inhibitionin 6, 7 and 8. groups. According to control group, in the 10. group the decreasing wassignificantly and in the 9. group it was near to the control group. No statisticaldifferences were found in 2. 3. 4. 5. 7 and 9 groups about Gpx, but it is too significantdifference in 6th and 8th groups, and it was significantly difference in 10. group. MDAlevels were nearly to the control in 2, 3, 4 and 5. groups, but it was too significantlyincrease in the 6. 7. 8. 9 and 10. groups. Catalase activity was likely to the control in 2,3, 4, 5 and 9. groups, but in 6. 7. 8 and 10. groups it showed too significantly decrease.CYP1A2 expression didn?t show a difference to the control in 2. and 3. groups. It wasthe least in 4. group, it was significantly in 5 and 10. groups and too significantdecreasing in 6. 7. 8. 9. groups.Any pathology and degeneration found histologically in 1. 2. 3. 4 and 5.groups, but hepatocyte caryomegaly, hepatocyte cytomegaly and inflammatory cellinfiltration found pathologically in 6. 7. and 8. groups and more in 9. group.Immunohistochemically, Ha-Ras and GST-P increased in 8. group, decreased in 9. and10. groups and Cx32 didn?t change in any groups.Finally, it was found that both of the fungi metabolites were effectible inpreneoplastic period. But there is need to new studies in order to make definite and findthe affects on following stages after preneoplastic period.Key Words : 2-AAF, Antioxidant enzymes, Cx32, CYP1A2, DEN, DMV, GST-p, Ha-Ras,1- Î± -hidroksi- DMV