Sıçanlarda deneysel testis torsiyon modelinde iskemi/reperfüzyon hasarı üzerine pirfenidonun koruyucu etkisi
Protective effect of pirfenidone on ichemia/reperfusion damage in experimental testicular torsion rat model
Yazar: SEMİH TÜRK
Danışman: DOÇ. DR. SİNAN LEVENT KİREÇÇİ ; UZMAN ABDULLAH HIZIR YAVUZSAN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Şişli Hamidiye Etfal Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Ekstrasellüler matriks = Extracellular matrix ; Glütatyon peroksidaz = Glutathione peroxidase ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Lipid peroksidasyonu = Lipid peroxidation ; Miyeloperoksidaz = Myeloperoxidase ; Spermatik kord torsiyonu = Spermatic cord torsion ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Testis torsiyonu erken tanı ve tedavi gerektiren acil bir durumdur. 
Torsiyondan kaynaklanan hasarlanma, detorsiyondan sonra da İskemi/Reperfüzyon (I/R) hasarı olarak devam ederek testiste atrofi gelişiminde ve fonksiyon kaybı oluşmasında önemli rol oynar. Çalışmamızda pirfenidonun testiküler I/R hasarında etkisini araştırmayı amaçladık.

Gereç ve Yöntem: 21 adet yetişkin erkek Sprague Dawley sıçan randomize 
edilerek, Kontol (n=5), Sham (n=5), Torsiyon/Detorsiyon (T+D) (n=6) ve 
T/D+Pirfenidon (PFD) (n=5) olmak üzere 4 grupta incelendi. T/D ve PFD 
gruplarına 4 saat iskemi ve ardından 24 saat reperfüzyon uygulandı. PFD grubuna ek olarak reperfüzyondan 30 dakika önce oral 500mg/kg Pirfenidon tedavisi verildi. Biyokimyasal değerlendirme için toplanan doku örneklerinden, MDA, GSH, MPO, IL-1β, TIMP-2 ve CTGF; serum örneklerinden ise TAS, TOS, TNF-α, TGF-β, PAI1 ve MMP-2 çalışıldı. İmmünohistokimyasal boyama yapılarak TGF-β antikorunun ekspresyonu değerlendirildi. Histopatolojik olarak testis dokularının direkt mikroskobik bulguları incelendi. Spermatogenezi değerlendirmek için Johnsen Skoru kullanıldı. 
Bulgular: Biyokimyasal değerlendirmede; IL-1β, TNF-α, TGF-β ve TIMP-2 ve 
PAI-1 değerlerinin T+D grubunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede arttığı görüldü (sırasıyla; p=0.001, p=0.017, p=0.<001, p=0.015, p=<0.001). Ayrıca post hoc analizlerde Pirfenidon tedavisi alan PFD grubunda, T/D grubuna kıyasla IL-1β ve TGF-β değerlerinde anlamlı seviyelerde azalma görüldü (sırasıyla p=0.003,p=<0.001). GSH, MPO, TOS, CTGF ve MMP-2 değerlerinin T/D grubunda kontrol grubuna kıyasla artmış olduğu, TAS değerinin ise azalmış olduğu izlendi. Ayrıca PFD tedavisi alan grupta bu değerlerin azaldığı, TAS açısından ise arttığı gözlendi. Fakat istatistiksel olarak bu parametreler açısından gruplar arası anlamlı sonuçlar elde edilemedi. 
İmmünohistokimyasal değerlendirmede; TGF-β ekspresyonunun, PFD tedavisi 
alan grupta azaldığı görülse de istatistiksel açıdan anlamlı bulunamadı. Johnsen skoru açısından gruplar kıyaslandığında sonuçlar anlamlılığa yakın olsa da istatistiksel olarak farklılık görülmedi. 

Sonuç: Pirfenidon testiste I/R hasarına karşı anti-inflamatuar etkinliği daha baskın olmak üzere hem anti-inflamatuar hem antioksidan etkinlik göstermektedir. Testis  torsiyonu sonrası testiste koruyucu etkisinin olup olmayacağının tam olarak anlaşılması için ise yeterli hasta üzerinde yapılacak olan klinik çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Aim: Testicular torsion is an emergency that requires early diagnosis and treatment. Damage caused by torsion continues as Ischemia/Reperfusion (I/R) damage after detorsion and plays an important role in the development of testicular atrophy and loss of function. In our study, we aimed to investigate the effect of Pirfenidone on testicular I/R injury.

Material and Methods: 21 adult male Sprague Dawley rats were randomized and 
divided into 4 groups: Control (n=5), Sham (n=5), Torsion/Detorsion (T+D) (n=6) and T/D+Pirfenidon (PFD) (n=5). T/D and PFD groups underwent 4 hours of ischemia followed by 24 hours of reperfusion. In addition to the PFD group, 500mg/kg oral Pirfenidone treatment was given 30 minutes before the reperfusion. For biochemical evaluation, MDA, GSH, MPO, IL-1β, TIMP-2 ve CTGF from collected tissue samples and TAS, TOS, TNF-α, TGF-β, PAI-1 and MMP-2 from collected serum samples were studied. Expression of TGF-β antibody was evaluated by immunohistochemical staining. Direct microscopic findings of testicular tissues were examined histopathologically. Johnsen Score was used to evaluate spermatogenesis.

Results: In biochemical evaluation; IL-1β, TNF-α, TGF-β and TIMP-2 and PAI-1 
values were significantly increased in the T+D group compared to the control group (respectively; p=0.001, p=0.017, p=0.<001, p =0.015, p=<0.001). In addition, post hoc analyzes showed a significant decrease in IL-1β and TGF-β values in the PFD group receiving Pirfenidone treatment compared to the T/D group (respectively; p=0.003, p=<0.001). It was observed that GSH, MPO, TOS, CTGF, and MMP-2 values were increased in the T/D group compared to the control group, while the TAS value was decreased. In addition, it was observed that these values decreased in the group receiving PFD treatment, but increased in terms of TAS. However, statistically significant results were not obtained between the groups in terms of these parameters. 
In immunohistochemical evaluation; Although it was observed that TGF-β 
expression decreased in the group receiving PFD treatment, it was not found to be statistically significant. When the groups were compared in terms of Johnsen score, although the results were close to significance, there was no statistical difference.

Conclusions: Pirfenidone shows both anti-inflammatory and antioxidant activity against testicular I/R damage. In our study, it was observed that its antiinflammatory activity was more dominant. Clinical studies on patients are neededto fully understand the protective effect after testicular torsion.