Koyun keçi çiçek aşısının Mdbk hücre kültüründe üretilmesi ve Lumpy Skin Disease'e karşı sığırlarda bağışıklık çalışması
Propagation of sheep and goat pox vaccine in MDBK cell culture and immunity study in cattle against Lumpy Skin Disease
Yazar: SERDAR UZAR
Danışman: PROF. DR. NURİ TURAN
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Lumpy Skin Disease(LSD) ile mücadelede ülkemizde heterolog koyun keçi çiçek (KKÇ) aşıları kullanılmaktadır. Yapılan bu çalışma ile canlı Bakırköy koyun çiçek aşı virusunun (SP(BK)LK60), sığır orijinli MDBK hücre kültüründe üretimi ve sığırlarda LSD'ye karşı oluşturacağı bağışıklık, sahada kullanılmakta olan koyun keçi çiçek aşısıyla karşılaştırmalı olarak araştırıldı.
MDBK hücre kültürü %10 fötal sığır serumu içeren DMEM vasatı ile monolayer olarak hazırlandı ve SP(BK)LK60 inokule edildi. CPE oluşumlarının ardından seri pasajlara geçildi ve 5.pasajı aşı olarak stoklandı. Aşı, koruyucu vasatla hazırlanarak liyofilize edildi ve kontrolleri yapıldı. Aşının zararsızlık çalışmasında 2 adet sığır MDBK'da üretilen aşıyla 10 doz, bağışıklık çalışmasında 3 adet sığır MDBK hücre kültüründe üretilen KKÇ aşısıyla 5 doz, 3 adet sığır mevcut KKÇ aşısıyla 5 doz olarak aşılandı. 2 adet sığır aşılanmayarak kontrol olarak belirlendi. Aşılama sonrası 31.gün tüm hayvanlara patojen LSD virusu Pendik suşu ile challenge yapıldı ve belirli günlerde kan ve svap örnekleri alındı. Aşılı ile aşısızlar arasında oluşan challenge titresinin logaritmik farkları hesaplandı.
MDBK hücre kültürüne yapılan inokulasyon sonucunda 7. günde CPE oluşumu gözlendi. MDBK hücre kültüründe seri pasajları yapılan virus, koyun çiçek virusu olarak identifiye edildi ve titresi 10-5.75/ml olarak saptandı.  Aşının zararsızlık çalışmasında 10 doz ile aşılanan hayvanlarda klinik olarak herhangi bir durum gözlenmedi. Challenge sonrası MDBK'da üretilen aşıyla aşılanan hayvanlar ile aşısız hayvanlar arasındaki titre farkının log 2,5'dan az olduğu ve aşılı hayvanlarda viremi gerçekleşirken mevcut aşıyla aşılanan hayvanlarda titre farkının log 2,5'dan fazla olduğu ve viremi gerçekleşmediği tespit edildi.
Yapılan çalışmayla Bakırköy koyun keçi çiçek aşı virusu MDBK hücre hattında üretilebilmesine rağmen, sığırlarda LSD'ye karşı tam olarak koruma sağlamasa da virus saçılımına engel olduğu, Penpox-M ticari adlı koyun keçi çiçek aşısının ise sığırlarda LSD'ye karşı koruduğu belirlenmiştir.

Abstract:
Sheep and goat pox (SGP) vaccines are used heterologously against Lumpy Skin Disease (LSD) in Turkey. In this study, it was investigated the propagation of Bakırkoy Sheep Pox(SP) vaccine virus in bovine origin MDBK cells and evaluated the immunity of vaccine against LSD in cattle with comparison to the currently used SGP vaccine in the field.
Monolayer MDBK cells were prepared with DMEM containing 10% fetal bovine serum and SP(BK)LK60 was inoculated. After cytopathogenic effect (CPE) formation, serial passages were in MDBK and 5th passage was stored as vaccine bulk. SP vaccine virus with protective media was lyophilized and quality controls were taken. In safety study, 2 cattle were vaccinated with 10 doses of SGP vaccine produced in MDBK. In efficacy study, 3 cattle were vaccinated with SGP vaccine produced in MDBK, 3 cattle vaccinated with Penpox-M. 2 cattle were not vaccinated as control animal. After vaccination on the day 31, all animals were challenged with virulent PenLSD strain and blood and swap samples  were taken periodically. Logarithmic differences of the challenge titers between vaccinated and non-vaccinated were calculated.
On the 7th day post inoculation CPE formation was observed and the serial passages in MDBK were identified as SP virus with titer 10-5.75/ml. In safety study, clinical sign wasn't observed in animals vaccinated with 10 doses. It was determined that difference between the animals vaccinated with vaccine produced in MDBK cells and unvaccinated was less than log 2.5 and the viremia occurred in vaccinated animals. The titer difference was higher than log 2.5 in animals vaccinated with the Penpox-M, and viremia didn't occur.
In conclusion, this study revealed that Bakirkoy SP vaccine virus was propagated in MDBK cells and it is safe to administered in cattle but it didn't provide fully protection although it halted spread of the disease, Penpox-M provided protection against LSD.