Miyomlu hastalarda ölüm reseptörü 4 (death reseptör-DR4) geni varyant analizi
Death Receptor 4 - DR4 Gene Variant Analysis in Patients with Leiomyomas
Yazar: TOLGA HALICI
Danışman: DOÇ. DR. EREN AKBABA ; PROF. DR. TUBA EDGÜNLÜ
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Amaç: Leiomyomlar üreme çağındaki kadınlarda rastlanan en sık benign tümörlerdir. Apoptozisin tümör patogenezindeki rolü iyi bilinmektedir. Apoptozun tetiklenmesi; ya hücre içi sinyal ileti yollarının (intrinsik yol) ya da ölüm
reseptörlerinin (death receptor) uyarılması gibi hücre dışı etkenlerle (ekstrinsik yol) sağlanmaktadır. İster hücre dışı ister hücre içi etkenler tarafindan tetiklensin, apoptozda temel mekanizma, hücresel proteinleri aspartat rezidülerinden parçalayan proteazlar yani kaspaz|ar ile hücre yıkımının gerçekleştirilmesidir. Ekstrinsik apoptotik yolak da; ölüm reseptörlerinin(DR), TNF-α, cd95, TNF related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) stimülasyonuyla, kaspaz kaskadının aktivasyonu gerçekleşir. Tezimizdeki amacımız leiomyom patogenezinde Death Receptor 4 (DR4) gen polimorfizmlerinin rolünü araştırmaktır
Gereç ve Yöntem: Bu vaka kontrol çalışmamızda 25Aralık 2021 ile 31 Mart 2022 tarihleri arasında Muğla Eğitim ve Araştırma Hastanesi Jinekoloji Kliniğine başvuran 76 miyom tanısı konmuş hasta ile kontrol grubu olarak 81 miyomu olmayan sağlıklı kadın çalışmaya dahil edildi. Katılımcılardan alınan kan örneklerini %2'lik Etilendimetiltetraasetik asit (EDTA) içeren, 5 ml'lik santrifüj tüplerine koyarak DNA izolasyonuna kadar –20oC'de sakladık ve daha sonra Spin Kolon yöntemi ile DNA'ları elde ettik. Gen varyantlarını tespit etmek amacıyla ilk olarak DR4 geni rs6557634 ve rs20576 polimorfik gen bölgeleri PCR yöntemi ile amplifiye edilmiştir. Ardından uygun koşullarda Thermal Cycler'da DR4 geni rs6557634 ve rs20576 polimorfik bölgeleri çoğaltılmıştır. Genotipleri, restriksiyon fragment uzunluk polimorfizmi (PCR-RFLP) ürünleri ile tanımladık. Yapılan analitik analizlerde p<0.05 anlamlılık sınırı kabul edilmiştir. İstatistik analizlerde SPSS 23.0 paket programı kullanılmıştır.
Bulgular: DR4 geni rs20576 ve rs6557634 polimorfizmlerinin genotipik özelliklerine vaka ve kontrol grubu arasında baktık(p<0,05). Rs20576 'nın CC genotipi sıklığı (p:0.014) ve rs6557634'ün GG genotipi sıklığını (p:0,039) leiomyom hastalarında anlamlı derecede yüksek bulduk. Rs20576'nın C allelinin frekans dağılımını (p:0,018, OR:1.304 [1.056-1.609]) ve rs6557634'ün G allelinin frekans dağılımını (p:0.029, OR:1.275 [1.033-1.573]) leiomyom hastalarında anlamlı derecede yüksek bulduk. Bununla birlikte rs25576'nın A allelinin frekansının dağılımını (p:0,018, OR:0.561 [0.347-0.962]) ve rs6557634'ün A allelinin frekansının dağılımını (p:0.029, OR:0.591 [0.367-0.949]) miyom oluşumu riski açısından istatistiksel olarak anlamlı derecede koruyucu olarak bulduk.
Sonuç: Mevcut bulgular ile DR4 geni rs20576 ve rs6557634 polimorfizmlerinin leiomyom patogenezindeki katkısını ilk kez gösterdik ve bu polimorfizmler leiomyom riskini arttırmaktadır. Miyom etiyolojisinin genetik alt yapısını ortaya çıkarmak için daha geniş hasta popülasyonlu ve doku çalışmalarını içeren çalışmalara ihtiyaç vardır.
Anahtar Kelimeler: Leiomyom, uterin fibroid, Ölüm Reseptörü 4, Genetik polimorfizm

Abstract:
Objective: Leiomyomas are the most common benign tumors in women of reproductive age. The role of apoptosis in the tumor pathogenesis is well known .The triggering of apoptosis is provided by intracellular signaling pathways (intrinsic pathway) or extracellular factors that stimulates the death receptors (extrinsic pathway). Whether intrinsic or extrinsic pathways initiate the apoptosis, the main mechanism is the degradation of the cell by the caspases which are proteases that degredates cellular proteins from aspartate residues. In the Extrinsic pathway; stimulation of death receptors (DR) by TNF-α, cd95 and TNF related apoptosis-inducing ligand (TRAIL), results in activation of the caspase cascade. In our thesis, we aimed to investigate the role of death receptor 4 (DR4) in the pathogenesis of leiomyoma.
Materials and Methods: In our case report study, 76 patients diagnosed with leiomyoma and 81 patients without leiomyoma as healthy control, who were admitted to the Gynecology Clinic of Muğla Training and Research Hospital between 25 December 2021 and 31 March 2022, were included. We put the blood samples taken from the participants in 5 ml centrifuge tubes containin 2% Ethylenedimethyltetraacetic acid (EDTA) and stored them at -20°C until DNA isolation,and then we obtained the DNAs by Spin Column method. To detect gene variants, we first amplify the polymorphic regions of rs20576 and rs6557634 polymorphisms of DR4 gene. Then, rs20576 and rs6557634 polymorphic regions of the DR4 gene were amplified in Thermal Cycler under appropriate conditions. We identified genotyopes by products of restriction fragment length polymophism (PCR-RFLP) In the analytical analyzes, p< 0,05 was accepted as the significance limit. SPSS 23.0 package program was used for statistical analysis.
Findings: We observed significant differences in the genotypic distribution of the rs20576 and rs6557634 polymorphism in leiomyoma patients compared with controls (p<0,05); our data suggest that CC genotype of rs20576 (p:0,014) and GG genotype of rs6557634 (p:0,039) significantly different in leiomyoma patients and the distribution of C alelle frequency of rs20576 (p:0,018, OR:1.304 [1.056-1.609]) and the distribution of G allelle frequency of rs6557634 (p:0.029, OR:1.275 [1.033-1.573]) were significantly higher in leiomyoma patients whereas the distribution of the A allele frequency of rs20576 (p:0,018, OR:0.561 [0.347-0.962]) and the distribution of A allele frequency of rs6557634 (p:0.029, OR:0.591 [0.367-0.949]) could be protective against leiomyomas.
Results: The present results indicate the possible contribution of the DR4 gene rs20576 and rs6557634 polymorphisms in pathogenesis of leiomyomas for the first time, which may influence susceptibility to leiomyoma. Therefore, there is need for further researches including tissue investigations with large number of patients to elucidate the genetic backgrounds of the etiology of leiomyomas.
Keywords:Leiomyoma, uterine fibroids, death receptor 4, genetic polymophism