Çevresel kirleticilerin insan lenfositleri üzerine genotoksik etkilerinin mikronukleus, komet, gama h2ax test yöntemleri ile araştırılması
Genotoxicity on human peripheral lymphocytes of environmental pollutants assessed by the micronucleus, comet and gamma h2ax test
Yazar: SERPİL KÖNEN ADIGÜZEL
Danışman: PROF. DR. REMZİYE SERAP ERGENE
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, bir insektisit olan spirotetramat ve nanopartikül olan seryum dioksit'in genotoksik etkileri 8 sağlıklı bireyin periferal kan lenfositlerinde in vitro mikronukleus (MN) testi, komet testi ve gama H2AX testi kullanılarak araştırılmıştır.
İnsan periferal lenfositleri 25, 50, 75 µg/ml'lik spirotetramat dozlarına 48 saat  ve 72 saat süresince, seryum dioksit nanopartikülünün 6, 12 ve 18 µg/ml'lik konsantrasyonuna 3 saat ve 24 saat maruz bırakılmışlardır. Hidrojen peroksit 100µM'lık tek dozda pozitif kontrol olarak kullanılmıştır.
Spirotetramat, insan periferal kan lenfositlerinde 48 ve 72 saatlik muamelede hasarlı hücre yüzdesini arttırmıştır. 48 saatlik maruziyette her üç dozda da artış gözlenmiştir. 75 µg/ml'lik dozda meydana gelen artış (P˂0.001)  25 µg/ml'lik ve 50 µg/ml'lik dozdan (P˂0.05)  daha yüksek oranda olmuştur. Yetmiş iki saatlik uygulama süresi boyunca genetik hasar indeksi ve hasarlı hücre yüzdesindeki artış devam etmiştir. Fakat en yüksek hasarlı hücre yüzdesi ve genetik hasar indeksi pozitif kontrol grubunda olmuştur. İnsan periferal lenfositlerinde elde edilen mikronukleus bulguları doza ve zamana bağlı olarak artış göstermiştir.
Seryum dioksit, insan periferal kan lenfositlerinde genetik hasar indeksini ve hasarlı hücre yüzdesini arttırmıştır. Fakat negatif kontrol ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak  en yüksek doz grubunda hasarlı hücre yüzdesinde anlamlı bir artış söz konusu olmuştur (P˂0.05). Genetik hasar indeksine bakıldığında ise orta ve yüksek dozda negatif kontrol ile karşılaştırıldığında anlamlı artış gözlenmiştir (P˂0.05). Pozitif kontrol grubu negatif kontrol ile karşılaştırıldığında hem hasarlı hücre yüzdesinde hem de genetik hasar indeksinde anlamlı artış gözlenmiştir (P˂0.001). Mikronukleus çalışmasından elde edilen bulgular, seryum oksitin 24 saatlik maruziyeti sonunda insan periferal lenfositlerinde mikronukleus oranını istatistiksel olarak arttırmıştır. Gama H2AX test sonuçları da mikronukleus testine benzer sonuçlar göstermiştir.
Sonuç olarak, hem spirotetramat hem de seryum dioksit'in test edilen dozları insan lenfosit kültüründe genotoksik etki göstermiştir.

Abstract:
In the present study, genotoxic effects of a widely used insecticide, spirotetramat  and nanoparticle cerium oxide were evaluated on peripheral lymphocytes were obtained by venipuncture from eight healthy donors, using the micronucleus test, comet test and gamma H2AX analysis.
Human peripheral lymphocytes were treated with 25, 50, 75 µg/ml doses of Spirotetramat for 48 and 72 hours periods, in addidion cells were exposed to 6, 12 ve 18 µg/ml doses of cerium oxide for 3 and 72 hours periods. Hydrogen peroxide at a single dose of 100 µM was used as positive control.
Treatment with 25, 50 and 75µg/ml doses of spirotetramat for 48 and 72 hours significantly increased of percentage at damaged cell In 48 hours process, growth was observed in all three doses. Occuring increase at  75 µg/ml doses higher than 25 and 50µg/ml doses. Growth at rate on genetic damage index and damage cell, continued during the implementation period. But, positive control group has the highest percentage at genetic damage index and damage cell. Micronucleus on human peripheral lymphocytes have increased depending on dose and time.
Cerium oxide has caused to rise percentage at genetic damage index and damage cell on the human peripheral lymphocytes. However, compered with negative control, damage cell has a significant increases in the highest dose group statistically(P˂0.05). According to genetic damage index, it had meaningfull increase in middle and high doses when compared with negative control group. When the comparision with positive and negative control group, in both genetic damage index and genetic damage cell had a significant increment. Obtaining findings from study of micronucleus have led to increase on human peripheral lymphocytes during the process of 24 hours on cerium oxide statistically. 
Consequently, both spirotetramat and cerium dioxide has genotoxic potential  at tested doses on human peripheral lymphocytes.