TGF-beta1, TGF-beta2 ve FGF2 büyüme faktörlerinin mezenkimal kök hücrelerin kondrogenez sürecine etkisi
The effect of TGF-BETA1, TGF-BETA2, and FGF2 growth factors on the chrondrogenesis of mesenchymal stem cells
Yazar: MELİKE UÇAK
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZLEM ÖZBEY ÜNLÜ
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Kök Hücre Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Fibroblast büyüme faktörü = Fibroblast growth factor ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Kondrogenez = Chondrogenesis ; Kondrositler = Chondrocytes ; Kıkırdak-artiküler = Cartilage-articular ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta

Özet:
Amaç: TGFβ1, TGFβ2 ve FGF2 büyüme faktörleri mezenkimal kök hücrelerin in vitro kondrogenezi sürecinde oldukça etkilidirler. Bu çalışmanın amacı, TGFβ1, TGFβ2 ve FGF2 büyüme faktörlerinin belirli gün ve kombinasyonlarının Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin (AKMKH) kondrogenez sürecine olan etkisinin araştırılmasıdır.
Yöntem: Tek tabaka kültür sisteminde AKMKH'ler; 3 gün boyunca I. grup-ITS, II. grup-ITS, III. grup-FGF2+TGFβ1 ve IV. grup- FGF2+TGFβ1 olacak şekilde kültüre edildiler. Bu 3 günün sonunda medyum değiştirilerek, 3 gün boyunca I. grup-ITS, II. grup-TGFβ2, III. grup-ITS ve IV. grup- TGFβ2 olacak şekilde tek tabaka kültür sistemine devam edildi. 3B pellet kültür sisteminde 3 gün boyunca I. grup-ITS, II. grup-ITS, III. grup-FGF2+TGFβ1, IV. grup- FGF2+TGFβ1, V. grup kondrojenik medyum ve VI. grup DMEM+FBS ile muamele edildi, üç günün sonunda medyum değiştirilerek bu kez I. grup-ITS, II. grup-TGFβ2, III. grup-ITS, IV. grup- TGFβ2, V. grup kondrojenik medyum ve VI. grup DMEM+FBS olacak şekilde uygulandı. 6. günün sonunda 3B pellet kültür gruplarına kondrojenik medyum eklenerek 21 gün boyunca kültüre edildiler. Tek tabaka kültür sistemleri ile oluşturduğumuz gruplarda kültürün 6. gününde alsiyan mavisi boyaması ve Dimethylmethylene Blue (DMMB) analizi gerçekleştirildi. 3B pellet kültür sistemleri  ile oluşturduğumuz gruplarda alsiyan mavisi boyaması, DMMB analizi, ve immünohistokimya yöntemi ile COL2A1-ACAN ekspresyonları belirlendi.
Bulgular: AKMKH kondrogenezi modelleri olan hem tek tabakalı kültür, hemde 3B pellet kültür sistemlerinde, TGFβ1, TGFβ2 ve FGF2'nin birlikte kullanımı kıkırdak matriksinin oluşumunda pozitif bir etki yaratmıştır.
Sonuç: AKMKH kültür sistemlerine; TGFβ1, TGFβ2 ve FGF2'nin belirli süre ve kombinasyonlarının uygulanması in vitro kondrogenez modelini olumlu yönde desteklemektedir. 
Anahtar Kelimeler: AKMKH, TGFβ1, TGFβ2, FGF2, in vitro kondrogenez.

Abstract:
Objective: TGFβ1, TGFβ2, and FGF2 growth factors are highly effective in the in vitro chondrogenesis of mesenchymal stem cells. The aim of this study is to investigate the effects of certain days and combinations of TGFβ1, TGFβ2, and FGF2 growth factors on the chondrogenesis process of Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells (ADSCs).
Method: ADSCs were cultured in monolayer culture system for 3 days as group I-ITS, group II-ITS, group III-FGF2+TGFβ1, and group IV- FGF2+TGFβ1. After 3 days, the medium was changed, and monolayer culture system was continued for 3 days as group I-ITS, group II-TGFβ2, group III-ITS, and group IV- TGFβ2. ADSCs were treated in 3D pellet culture system for 3 days, as group I-ITS, group II-ITS, group III-FGF2+TGFβ1, group IV-FGF2+TGFβ1, group V-Chondrogenic Medium, and group IV-DMEM+%10FBS. After 3 days, the medium was changed and this time groups were formed as group I-ITS, group II-TGFβ2, group III-ITS, group IV- TGFβ2, group V-chondrogenic medium, and group VI-DMEM+FBS. After 6 days, all groups of the 3D pellet culture system were cultured with a chondrogenic medium for 21 days. Alcian blue staining and Dimethylmethylene Blue (DMMB) analysis were established on the 6th day of monolayer culture systems. In 3D pellet culture systems, we performed alcian blue staining and Dimethylmethylene Blue (DMMB) analysis besides were determined COL2A1- ACAN expressions by immunohistochemistry method.
Results: In both monolayer culture and 3D pellet culture systems, which are models of ADSCs chondrogenesis, the combined use of TGFβ1, TGFβ2 and FGF2 had a positive effect on the formation of the cartilage matrix.
Conclusion: The application of TGFβ1, TGFβ2, and FGF2 of certain durations and combinations to ADSCs culture system positively supports the in vitro chondrogenesis model.
Keywords: ADSCs, TGFβ1, TGFβ2, FGF2 in vitro chondrogenesis