Deneysel karaciğer intoksikasyonunda apoptosis oranlarının tespiti ve galektin-3'ün ekspresyonunun araştırılması
Detection of apoptosis rate in experimental liver intoxication and the inves-tigation of galectin-3 expression
Yazar: ZELİHA GÖÇER
Danışman: PROF. DR. KAMİL SEYREK
Balıkesir Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Galektin-3 = Galectin-3 ; Karaciğer = Liver ; Karbon tetraklorür = Carbon tetrachloride ; Toksisite = Toxicity ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Deneysel Karaciğer İntoksikasyonunda Apoptosis Oranlarının Tespiti ve 
Galektin-3'ün Ekspresyonunun Araştırılması
Bu çalışmanın amacı, karbon tetraklorür (CCl4) ile karaciğerde oluşturulmuş toksitite modelinde, TUNEL ve ELISA yöntemlerini kullanarak apoptosis oranlarının belirlenmesi ve immunohistokimyasal yöntemler ile de galektin-3'ün (gal-3) ekspresyon ve lokalizasyonunun araştırılmasıdır.
Karaciğer toksisitesi oluşturmak amacıyla ratlara CCl4, periton içi (i.p.) yol ile 1ml / kg 1:1 oranında, zeytinyağındaki çözeltisi şeklinde, birer gün ara ile 3 defa enjekte edilmiştir. Son CCl4 enjeksiyonundan 24 saat sonra eter anestezisi altında karaciğer dokuları alınmış ve ELISA yöntemi ile karaciğer dokularındaki apoptozis oranları belirlenmiştir. TUNEL yöntemi kullanılarak da apoptotik hücrelerin görüntülenmesi yapılmıştır. Daha sonra da immunohistokimyasal olarak Gal-3'ün apoptotik hücrelerdeki ekspresyon ve lokalizasyonlarının incelenmiştir.
Karbon tetraklorür verilen gruptaki ortalama DNA fregmantasyonu 1.32 ± 0.15 U/mg protein iken kontrol guruptaki DNA fragmantasyonu 0.85 ± 1.42 U/mg proteindir. Karbon tetraklorüre maruz kalan grupta apoptosis oranları istatistiksel olarak analamlı düzeylerde artmıştır (p<0.001). Deney grubundaki CCL4'den kaynaklanan apoptozis oranlarındaki artış TUNEL boyama tekniği ile de teyit edilmiştir. Deney gurubundaki apoptotik hücreler çoğunlukla safra kanalı çevresinde gözlenmiştir. Kontrol gurubunda ise karaciğer parankimi içinde çok az sayıda apoptotik hücre gözlenmiştir. İmmünhistokimyasal olarak gal-3'ün varlığı CCL4'e maruz kalan hayvanlarda karaciğer parankiminde tespit edilirken, sağlıklı karaciğer dokuların parankiminde gal-3'ün varlığı çok zayıf olarak gözlemlenebilmiştir. 
Sonuç olarak, CCl4 rat karaciğerinde apoptozun uyarmakta, gal-3 ise CCL4 toksikasyonunun neden olduğu apoptozise karşı hücreleri korumaktadır.

Anahtar Kelimeler: Apoptozis, galektin-3, karaciğer, CCl4, ELISA, TUNEL, immunohistokimya.

Abstract:
Detection of Apoptosis Rate in Experimental Liver Intoxication and The Inves-tigation of Galectin-3 Expression
The aim of this study was to investigate the rate of apoptosis in rat liver tissues exposed to carbon tetrachloride (CCl4) toxicity. Rate of apoptosis was determined using TUNEL and ELISA tecniques. Furthermore, alterations in the expression and localisation of galectin-3 (gal-3) was determined by immunohistochemical methods.
To induce liver toxicity CCl4 is given to the rats intra peritonally (i.p.) 3 times every other day at a dose 1 ml/kg solved in olive oil in 1:1 proportion. Twenty four hour later following the last injection liver tissues of rats were remowed under ether anesthesia. Rates of apoptosis in liver tissues were detected using ELISA and TUNEL techniques. Differences in the expression and localisation of gal-3 in liver tissues between healthy and experimantal animals were visualized using immunhistochemical method.
The mean DNA fragmentation in CCl4 administrated group was 1.32 ± 0.15 U/mg protein, while the mean DNA fragmantation in control animals was 0.85 ± 1.42 U/mg protein. There was a statistically significant (p<0.001) increase in the apoptosis rate in cells exposed to CCl4. Data given above showed that CCl4 induce DNA fragmentation in the rat liver. Similarly in the experimental animals a remarkable increase in the number of apoptotic cells was visualised with  TUNEL staining technique. Apoptotic cells in experimental group were localised predominatly around bile ducts, in control group however only very few apoptotic cells were detected in liver paranchyma. Immunhistochemicaly in CCl4 exposed animals antibody raised against gal-3 reacted with cells mainly localised in liver parachyma, while very slight reaction was detected in healthy tissues. 
In conclusion, CCl4 induce apoptosis in rat liver and data given above indicate that gal-3 may protect cells from apoptosis induced by CCl4.

Key Words: Apoptosis, galectin-3, liver, CCl4, ELISA, TUNEL, immunohistochemistry.