Tavuklarda mycoplasma gallisepticum infeksiyonunun tanısında bakteriyolojik ve serolojik yöntemlerin polymerase chain reaction (PCR) ile karşılaştırılması
Comparison of polymerase chain reaction (PCR) with bacteriological and serological methods in the diagnosis of mycoplasma gallisepticum infections in chickens
Yazar: ARZU FUNDA BAĞCIGİL
Danışman: PROF.DR. ATİLLA ILGAZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2002
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
6. ÖZET Bu çalışmada, Marmara Bölgesi' nde yer alan farklı işletmelerden ve kesimhanelerden tesadüfi örnekleme ile seçilen toplam 96 tavuğun trachea örnekleri Mycoplasma gallisepticum izolasyonu için bakteriyolojik olarak ve spesifik DNA' nın saptanması amacıyla Polymerase Chain Reaction (PCR) ile incelendi. Aynı hayvanların kesimden önce alınan kan serumu örnekleri ile M. gallisepticum antikorları yönünden lam aglutinasyon testi uygulandı. PCR tekniği ile spesifik DNA' nın saptanması amacıyla, Mycoplasma gallisepticum DNA based Probe Test Kit kullanıldı. 96 tavuğa ait trachea örneğinden 47 (% 49)' sinde spesifik DNA saptandı. Kesime gönderilen 54 tavuktan 26 (% 48)' sının ve işletmelerde örnek alınan 42 tavuktan 21 (% 50)' inin trachea örneklerinin PCR ile pozitif olduğOu belirlendi. İzolasyon çalışmaları sonucunda, 96 trachea örneğinin 3 (%3.1)' ünden M. gallisepticum izole edildi. Bu 3 örnekde PCR ile de spesifik DNA saptandığı belirlendi. PCR ile spesifik DNA saptanan diğer 44 trachea örneğinden ve PCR bulguları negatif olan 49 trachea örneğinden M. gallisepticum izole edilmedi. Trachea örneği alınan 96 tavuğun lam aglutinasyon testi sonucunda, serumların 10 (% 10.4)' unda spesifik antikorlar saptanırken, 10 (%10.4) serum örneği şüpheli olarak değerlendirildi. 76 (%79.2) serumda ise aglutinasyon gözlenmedi. PCR ile spesifik M. gallisepticum DNA' sı saptanan 47 tavuğa ait trachea örneklerinden, sadece 3 (% 6.4) 'ünden izolasyon gerçekleştirildi. PCR sonuçları pozitif olan 47 tavuğun 4 (%85.1)' ü sero-pozitif; 40 (%8.5)' ı sero-negatif,3 (%6.4)' ü şüpheli olarak değerlendirildi. Bu araştırmanın sonuçları, genellikle saha taramalarında uygulanan lam aglutinasyon testinin tek başına yetersiz kaldığını, PCR tekniğinin kısa sürede ve daha güvenilir sonuç verdiğini, izolasyonun uzun sürmesi ve bazı güçlüklerle karşılaşılması nedeniyle PCR' in kültüre tercih edilmesi gerektiğini ve rutin tanı amacıyla kullanılabileceğini ortaya çıkarmıştır. 64

Abstract:
7. SUMMARY In this study, 96 tracheal swab samples of randomly selected chickens from different abattoirs and commercial flocks in the Marmara Region were investigated for bacteriological isolation of M. gallisepticum and for detection of specific DNA by PCR. Slide-agglutination test was applied to detect antibodies to M. gallisepticum in the matches blood sera. Mycoplasma gallisepticum DNA based Probe Test Kit was used to detect specific DNA. The specific DNA was detected from 47 (49%) of tracheal swabs, taken from 96 chickens. 26 (48%) of 54 tracheal samples obtained from slaughtered chickens and 21 (50%) of 42 from commercial flocks were found to be positive by PCR. M. gallisepticum were isolated from 3 (3.1%) of 96 trachea samples. The specific DNA was also detected from the tracheal swabs of the culture positive chickens. The remaining 93 chickens -44 PCR positive and 49 PCR negative- were culture negative. As a result of slide agglutination test, 10 (10.4%) sera were evaluated sero-positive and 10 (10.4%) were suspicious. No agglutinations were seen in the remaining 76 sera. There were only 3 (6.4%) isolations from the 47 chickens from which specific M. gallisepticum DNA were detected. In total of 47 PCR positive chickens, 4(8.5%) were found to be sero positive, while 40 (85.1%) were sero-negative and 3 (6.4%) were suspicious. Our results indicated that, using slide agglutination test which is commonly used as a screening test in field conditions was not sufficient alone. PCR technique because of its advantages such as rapidity and reliability should be preferred in routine diagnosis instead of difficult and time-consuming culture techniques. 65