Farelerde yapılan osteomiyelit modelinde rank-L serum seviyesi ile diğer enfeksiyon belirteçlerinin ve kültür sonuçlarının korelasyonu çalışması
The correlation study performed between rank-L serum level  and other infection indicators and culture results covering  osteomyelitis model implemented on mice
Yazar: HÜSAMETTİN ŞEN
Danışman: PROF. FEHMİ VOLKAN ÖZTUNA
Mersin Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology
Dizin: Enfeksiyon = Infection ; Fareler = Mice ; Kemik hastalıkları = Bone diseases ; Kemik ve kemikler = Bone and bones ; Laboratuvarlar-hastane = Laboratories-hospital ; Osteomiyelit = Osteomyelitis

Özet:
Osteomiyelit kemikte inflamatuar süreçlerin önemli rol oynadığı ve kemik doku hasarı ile seyreden bir enfeksiyondur. Teşhisinde kullanılan standart mikrobiyolojik yöntem, doku kültürü yaparak mikroorganizmanın tanımlanması şeklindedir. Serumda ise enfeksiyon belirteçleri olarak lökosit sayısı, CRP, sedimantasyon ve prokalsitonin gibi değerler ölçülür. Bu yöntemler enfeksiyonun şiddetini göstermekle birlikte kemikte oluşan hasarı göstermemektedir. Çalışmadaki amacımız kemikte yıkım durumunu gösterdiği bilinen RANK-L serum seviyesinin enfeksiyon şiddeti ile korele olup olmadığını incelemektir. 
60 adet Balb/c cinsi dişi fare 15 (enfekte olmayan) ve 45 (enfekte) adetlik 2 gruba ayrıldı. Anestezi altında 15 adetlik kontrol grubunun tibiaları 21 gaujluk iğne ile delinerek intrameduller alana ulaşıdı ve 50 mikrolitre sklerozan madde (Lauromacrogol 200, Aethoxysklerol®) uygulandı. 45 adetlik gruba ise diğer gruba yapılan işlemlere ek olarak intrameduller alana 2x108/ml S.aureus suşu içeren solüsyondan 0.1 ml inokule edildi. 3 hafta boyunca her hafta, her iki gruptan 5'er adet fare sakrifiye edilerek kanları ve tibiaları alındı. Geride kalan 30 adet enfekte fare 15 'erli 2 gruba ayrıldı. Bir gruba teikoplanin 20mg/kg (targocid®) tedavisi verildi ve diğer gruba ise tedavi verilmedi. Dört haftalık tedavi süresinin 2. haftasında her iki gruptan da 8'er adet fare, dördüncü haftanın sonunda da kalan 14 adet fare sakrifiye edildi. Sakrifiye edilen tüm farelerin kanları ve tibiaları alındı. Tibialara kantitatif doku kültürü yapıldı ve kan örneklerinde beyaz küre, C reaktif protein, prokalsitonin ve RANK-L çalışıldı. İstatistik çalışmasında normal dağılıma uygunluk durumlarına göre 2'den çok grup karşılaştırmalarında ANOVA, Kruskal Wallis ve tek değişkenli genel doğrusal modeller kullanıldı. Farklılık çıkan gruplarda ikili karşılaştırmalar için post hoc Bonferroni testi kullanıldı.
İlk 3 haftalık osteomiyelit oluşum döneminde kontrol grubunda RANK-L seviyesi enfekte gruba göre daha yüksek saptandı. Çalışmanın 2. bölümünde  tedavi almayan ve alan gruplarda  RANK-L seviyesi ile mikroorganizma sayısı arasında istatistiksel olarak anlamlı bir korelasyon saptanmadı. Tedavi almayan grupta RANK-L ve prokalsitonin arasında istatistiksel olarak anlamlı bir korelasyon vardır. Çalışmanın tümü değerlendirildiğinde RANK-L seviyesinin mikroorganizma sayısı ve serumdaki diğer belirteçler ile korele olmadığı ve tedaviye verilen yanıtın izlenmesinde güvenilir bir belirteç olmadığı izlenmiştir. 

Anahtar Sözcükler: Osteomiyelit, Labaratuar belirteci, RANK-L

Abstract:
ABSTRACT
THE CORRELATION STUDY PERFORMED BETWEEN RANK-L SERUM LEVEL  AND OTHER INFECTION INDICATORS AND CULTURE RESULTS COVERING  OSTEOMYELITIS MODEL IMPLEMENTED ON MICE
Osteomyelitis is an infection,due to which inflammatory processes play important role  at bone resulting in bone tissue damage.Our purpose by this study is to examine that whether or not RANK-L serum level,which is known as reflecting the demolition level of bone, is correlated with  severity of the infection.
60 pcs  female mice from Balb/c family  were classified into two groups as 15 pcs ( non-infected) and  45 pcs(infected).Through drilling of  tibias of 15 pcs control group with a needle under anesthesia, intramedullar region  was reached and  and 50 mikrolitre Sclerosing substances (Lauromacrogol 200, Aethoxysklerol®) were applied. 0.1 ml solution containing s.aureus with 2x108/ml was inoculated to intramedullar region  of the group of 45 pcs in addition to the processes   performed to the other group.Every week during the period of three weeks,five mice from both groups were sacrificed and their tibias  and blood  were retrieved. The remaining 30 pcs infected mice were divided into two groups with 15 pcs. The treatment of teikoplanin  with 20 mg/kg (targocid®) was applied to one  group  and it wasn't applied to another group.At the second week of  four-week duration of treatment, eight mice from both group were sacrificed, and remaining 14 mice were sacrificed at the end of the fourth week.Blood and tibias of all mice sacrificed were retrieved. Quantitative tissue culture were applied to tibias.WBC, C reactive protein,and procalcitonin and RANK-L were used  to examine blood samples. In the statistical study, ANOVA, Kruskal Wallis, and general linear models with single variable  were used for groups comparasion of  more than two groups  in accordance with their suitability  for normal distribution. Post hoc bonferroni test was used for binary comparisons  of groups where differences occured.
RANK-L level of  control group  was determined higher than the infected group during the first 3 weeks  osteomyelitis formation period. In the second part of the study,any statistically and significant correlation wasn't  determined between RANK-L level  and number of micro-organisms covering  treatment applied and treatment non applied groups. When all of the study evaluated,it was observed that level of RANK-L wasn't correlated with number of microorganisms and other indicators  in serum and wasn't a reliable indicator in monitoring the response for treatment. 

Key words : Osteomyelitis, Laboratory  İndicator, RANK-L