Karaciğer hücrelerinde in vitro olarak test edilmiş etkin antioksidan bitkisel preparatların eldesi
Obtaining herbal preparates with antioxidant potency tested in vitro in liver cells
Yazar: OZAN YEŞİLTEPE
Danışman: DOÇ. DR. DİLEK ODACI DEMİRKOL
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Bağımlılık Toksikolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine ; Uyuşturucu Alışkanlığı ve Alkolizm = Drug Addiction and Alcoholism
Dizin: Etanol = Ethanol ; Nigella sativa =

Özet:
Alkol (etanol) tarihi yazılı kaynaklar ışığında ilk keşfedilen psikofarmakolojik ajandır. Bu nedenledir ki bağımlılık yapıcı maddeler içerisinde en çok kullanılanlardan biridir. Alkol kullanımı birçok hastalığa yol açabilmekle beraber bunların içerisinde en çok karaciğer üzerinde meydana getirdiği toksik etkiler dikkat çekmektedir. Geçmişte ve günümüzde birçok bitkinin kendisi veya tohumlarının farklı hastalıkların tedavisinde kullanıldığı bilinmektedir. Gerçekleştirilen bu tez çalışması kapsamında süperkritik karbondioksit ekstraksiyonu ile elde edilen Nigella sativa (çörek otu) tohum yağları kullanılarak farklı içerikte nanoemülsiyonlar (A1 ve A2 formülasyonları; sırasıyla GSH içeren ve içermeyen) hazırlandı. Nanoemülsiyonların çeşitli içerik ve karakterizasyon testleri yapıldıktan sonra alkol hasarına uğratılmış, normal yetişkin karaciğer epitel hücrelerinin fenotipik karakteristiklerini sergileyen ve tümörijenik olmayan THLE-2 hücre hattı üzerinde söz konusu hasarın önlenmesi ve giderilmesine yönelik bir dizi in vitro hücre kültürü çalışmaları gerçekleştirildi. Bağımlılık alanında, özellikle hepatoprotektif aktivitesi yüksek olan çıktıların elde edilmesi amacıyla gerçekleştirilen bu çalışma sonucunda umut vaadedici sonuçlar elde edildi.
Deneysel aşamada ilk olarak hazırlanan nanoemülsiyonların içerik analizleri ve karakterizasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Ardından in vitro hücre kültürü denemelerinde kullanılacak nanoemülsiyon dozları 0,5 mg/mL olarak belirlendi. Devamında, nanoemülsiyonların in vitro hücre kültürü koşullarında yara kapama, proliferasyon, antioksidan aktivite ve floresans görüntüleme çalışmaları gerçekleştirildi. Çalışmanın ana hedefi olan, nanoemülsiyonların hepatoprotektif aktivitesi araştırılırken, THLE-2 hücreleri farklı süreler ve derişimlerde etanole maruz bırakılarak çalışma boyunca kullanılacak etanol derişimi 400 mM olarak belirlendi. Ardından belirlenen nanoemülsiyon dozlarının koruyucu etkilerini görmek amacıyla 2 saat, 0,5 mg/mL nanoemülsiyon ön uygulamasına tabi tutulan hücrelere 48 ve 72 saat süreyle 400 mM etanol uygulanarak canlılık tayini yapıldı. Elde edilen sonuçlar doğrultusunda hem A1 hem de A2 formülasyonlarının model olarak kullanılan THLE-2 hücre hattı üzerinde hepatoprotektif etkisi gösterilmiş oldu.

Abstract:
The first discovered psychopharmacological agent in the light of historical written sources is alcohol (ethanol). This is why it is one of the most commonly used addictive substances. Alcohol consumption can lead to many illnesses and the most noticeable of these diseases is toxic effects on the liver. It is known that in the past and nowadays many plants and also their seeds have been used in the treatment of different diseases. In this thesis, nanoemulsions (A1 and A2 formulations, with and without GSH, respectively) with different contents were prepared using Nigella sativa seed oils obtained by supercritical carbon dioxide extraction. After the various contents and characterization tests of the nanoemulsions were made, a number of in vitro cell culture experiments were studied to prevent and eliminate the alcohol-damages on THLE-2 cell lines, which is non-tumorigenic and represents phenotypic characteristics of normal adult liver epithelial cells. As a result of this thesis, especially for hepatoprotective activity promising results were obtained in the field of addiction, which was the aim.
In the experimental stage, firstly, content analyzes and characterization studies of prepared nanoemulsions were carried out. Then doses to be used in in vitro cell culture experiments were determined (0.5 mg/mL).After that, wound healing, proliferation, antioxidant activity and fluorescence imaging studies of nanoemulsions were carried out in cell culture in vitro conditions. While investigating the hepatoprotective activity of nanoemulsions, the main goal of the study, THLE-2 cells were exposed to ethanol at different time intervals and concentrations to determine the ethanol concentration to be used throughout the study (400 mM). In order to investigate the protective effects, pre-treated cells with 0,5 mg/mL nanoemulsions for 2 hours were treated with 400mM EtOH for 48 and 72 hours and cell viability test was performed. The hepatoprotective effects of the A1 and A2 formulations on the THLE-2 cell line, which was used as a model, were proved in the light of the results.