Hepatoselular karsinoma'da EpCAM sinyalizasyonunun rolü
The role of  EpCAM signalling in hepatocellular carcinoma
Yazar: EREN ŞAHİN
Danışman: DOÇ. DR. ŞERİFE ESRA ERDAL
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Hücre adezyon molekülleri = Cell adhesion molecules ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sinyal nakli = Signal transduction

Özet:
Hepatoselular Karsinoma (HCC) karaciğerin primer malign tümörü olup, her yıl ortalama 750.000 yeni HCC olgusu görülmektedir. HCC için bilinen risk faktörleri arasında viral enfeksiyonlar (HBV, HCV), alkol kullanımı, aflatoksin yer almaktadır. Epitelyal Hücre Adhezyon Molekülü olan EpCAM'ın son yıllarda HCC'lerde bir hepatik kanser kök hücre belirteci olduğu ve EpCAM pozitif hücrelerin ksenograf hayvan modellerinde tümör başlatıcı rolleri olduğu gösterilmiştir. Ancak, EpCAM sinyal iletiminin HCC sürecindeki rolü bilinmemektedir. Çalışmamızda ilk olarak insan hasta doku materyallerinde immünohistokimyasal olarak, EpCAM sinyal yolağı aktivasyonunun temsil eden EpCAM hücre içi parçanın (EpICD), çekirdek ve sitoplazmik lokalizasyonu ve bunların klinikopatolojik verilerle korelasyonları analiz edildi. 52 HCC, 10 LGDN (düşük dereceli displastik nodül), 10 HGDN (yüksek dereceli displastik nodül) ve 22 siroz dokusunda yapılan analizlerde, EpCAM'in kötü diferansiye HCC'lerde ekspresyonunun anlamlı artış gösterdiği, tümör boyutu ile EpCAM ekspresyonunun HCC'ler için korele olduğu bulundu. İlginç olarak, HGDN içeren dokularda, EpICD'nın, çekirdekte birikimi anlamlı düzeyde artmıştır. EpCAM pozitif olan HCC hücre hatlarında (HuH7, PLC/PRF5, Hep3B ve HepG2), EpICD antikoru kullanılarak yapılan immunofloresan boyamalarda ve/veya western blotlama analizlerinde, EpICD'nin bu hücrelerde çekirdekte değil, hücre membranında lokalize olduğu bulunmuştur. Yine HuH7 hücrelerinden manyetik seperasyonla ayrımlanan EpCAM+/CD133+ hepatik kanser kök hücrelerde yapılan analizlerde de benzer sonuçların bulunması bize, bazal koşullarda bu hücrelerde EpCAM sinyal iletiminin aktif olmadığını göstermiştir.
Sonuç olarak ilk defa bu çalışmada tanımlanan, malin sürecin başı kabul edilen displastik nodüllerde, EpCAM sinyal sinyal iletiminin aktivasyonu, bu sinyal yolağının, HCC'ye karşı geliştirilecek yeni tedavi stratejilerinin belirlenmesinde önemli olacağını göstermiştir.



Anahtar Sözcükler: HCC, EpCAM, EpCAM Sinyalizasyonu

Abstract:
Hepatocellular Carcinoma (HCC) is the primary malignant tumor and about 750.000 new cases of HCC are diagnosed each year. Viral infections (HBV, HCV), alcohol consumption, aflatoxin are among the common risk factors for HCC. Within the last years, the Epithelial Cell Adhesion Molecule, EpCAM, is defined as a hepatic cancer stem cell marker and tumor initiating roles of EpCam positive cells in xenograft models are identified. However, the role of EpCAM signaling in HCC progression has not been revealed. In our study, firstly EpCAM intracellular domain (EpICD) which represents the activation of EpCAM signalling, was identified immunohistochemically in human patient tissue sections, later nuclear-cytoplasmic localizations were studied and the correlation of this data with clinocopathologic data were analyzed. After an analysis of 52 HCC, 10 LGDN (low graded displastic nodule), 10 HGDN (high graded displastic nodule) and 22 cirrhosis tissues, EpCAM expression was found to have a significant increase in poorly differentiated HCC and also a correlation between tumor size and EpCAM expression is found in HCC. Interestingly, nuclear accumulation of EpICD was significantly increased in HGDN tissues. EpICD was shown to be localized in cellular membrane, not in nucleus, in EpCAM positive cell lines (HuH7, PLC/PRF5, Hep3B ve HepG2), using EpICD antibody for immunofluorescence staning and/or western blot analysis. Results from EpCAM+/CD133+ hepatic cancer stem cells, which were derived from magnetic seperation of HuH7 cells, have shown similarity. This indicates that EpCAM signalling is not activated in basal conditions in these cells.
In conclusion; activation of EpCAM signaling in displastic nodules, which are accepted as initiators of malignancy, was identified first time in this study and this shows that EpCAM signaling might have a significant role in developing new treatment strategies against HCC.



Key Words: HCC, EpCAM, EpCAM Signaling