Sibirya Mersin Balığı Acipenser Baerii (Brandt, 1869)'un karaciğer ve kas dokusundan karbonik anhidraz'ın (EC.4.2.1.1) saflaştırılması ve metal iyonlarının inhibisyon etkilerinin incelenmesi
Purufi̇cation of carboic anhydrase (EC. 4.2.1.1) from the liver and muscle tissue of sturgeon Acipenser Baerii (Brandt, 1869) and investigation of the inhibitoin effects of metal ions
Yazar: HATİCE ŞAHİN AYIK
Danışman: PROF. DR. SALİH GÖRGÜN ; DOÇ. DR. ÜMİT MUHAMMET KOÇYİĞİT
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
SİBİRYA MERSİN BALIĞI ACİPENSER BAERİİ (BRANDT, 1869)'UN KARACİĞER VE KAS DOKUSUNDAN KARBONİK ANHİDRAZ'IN (EC.4.2.1.1) SAFLAŞTIRILMASI VE METAL İYONLARININ İNHİBİSYON ETKİLERİNİN İNCELENMESİ

HATİCE ŞAHİN

Yüksek Lisans Tezi
Biyokimya Anabilim Dalı
Tez Danışmanlar: 
Prof. Dr. Salih GÖRGÜN
Doç. Dr. Ümit Muhammet KOÇYİĞİT
2024, 79+xvi sayfa

Bu çalışmada, çeşitli organizmalarda bulunan ve temel biyokimyasal süreçlerin düzenlenmesinde önemli bir enzim olan karbonik anhidraz (EC.4.2.1.1) (CA), Sibirya Mersin Balığı Acipenser baerii (Brandt,1869) karaciğer ve kas dokularından Sepharose-4B-L-tirozin sülfanilamit afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Saflaştırma parametreleri karaciğer dokusu CA-I izoenzimi için 17.80 kat saflık, % 43.58 verim ve 1.85 EU/mg.protein spesifik aktivite olarak belirlendi. Bu parametreler karaciğer CA-II için 10.6 kat saflık, % 16.1 verim ve 1.107 EU/mg.protein spesifik aktivite olduğu bulunmuştur. En yüksek saflaştırma kas CA-I izozimi için belirlendi (92.03 kat saflık, 52.9 % verim ve 0.543 EU/mg.protein spesifik aktivite). Kas CA-II için saflaştırma parametreleri 22.7 kat saflık, %13.84 verim ve 0.134 EU/mg.protein spesifik aktivite olarak belirlendi. Saflaştırma aşamaları SDS-PAGE ile analiz edilmiştir. Elde edilen enzim preparatları için bazı ağır metal iyonlarının inhibisyon etkileri araştırılmıştır. Karaciğer CA-I için IC50 (mM) değerleri 1.494(Co2+), 1.566(Cd2+), 1.390(Cu2+), 0.587(Pb2+), 0.987(Fe2+) olarak belirlenirken; karaciğer CA-II için bu değerler 1.432(Co2+), 0.608(Cd2+) olduğu bulunmuştur. Kas dokusunda CA-I için IC50 değerleri (mM) 1.364(Co2+), 0.648(Cd2+), 1.342(Cu2+), 0.461(Pb2+), 1.316(Fe2+) olarak belirlendi. Bu değerler CA-II için 0.952(Co2+), 0.543(Cd2+), 0.777(Cu2+) olduğu bulundu. Araştırılan tüm metal iyonlarının inhibisyon tipleri yarışmalı olarak belirlenmiştir.
Anahtar kelimeler: Karbonik Anhidraz (EC. 4.2.1.1), Acipenser baerii (Brandt,1869), Sepharose-4B-L-tirozin sülfanilamit afinite kromatografisi, saflaştırma, inhibisyon.

Abstract:
PURUFİCATION OF CARBOIC ANHYDRASE (EC. 4.2.1.1) FROM THE LIVER AND MUSCLE TISSUE OF STURGEON ACIPENSER BAERII (BRANDT, 1869) AND INVESTIGATION OF THE INHIBITOIN EFFECTS OF METAL IONS 

Hatice ŞAHİN

Master of Science Thesis, Department of Biochemistry

Supervisor 
Prof. Dr. Salih GÖRGÜN
Doç Dr. Ümit Muhammet KOÇYİĞİT
2024, 79+xvi pages

In this study, carbonic anhydrase (EC 4.2.1.1) (CA) enzyme from the liver and muscle tissues of Siberian Sturgeon Acipenser baerii (Brandt,1869)  was purified using Sepharose-4B-L-tyrosine sulfanilamide affinity chromatography. The purification parameters were determined as 17.80 % purity, 43.58% yield, and a specific activity of 1.85 EU/mg protein for liver CA-I. These parameters were found to be 10.6 purity, 16.1% yield, and 1.107 EU/mg protein specific activity for the liver CA-II. The highest purification was determined for the muscle CA-I isozyme (92.03 fold purity, 52.9% yield and 0.543 U/mg protein specific activity). Purification parameters for the muscle CA-II were determined as 22.7 fold purity, a yield of 13.84%, and a specific activity of 0.134 EU/mg protein. Purification steps were analysed by SDS-PAGE. Additionally, the inhibitory effects of heavy metal ions on the obtained enzyme preparations were investigated. While IC50 values (mM) for liver CA-I were determined as 1.494 (Co2+), 1.566 (Cd2+), 1.390 (Cu2+), 0.587 (Pb2+), 0.987 (Fe2+), these values for liver CA-II were found to be 1.432 (Co2+), 0.608 (Cd2+). In the muscle tissue, IC50 values (mM) for CA-I were determined as 1.364 (Co2+), 0.648 (Cd2+), 1.342 (Cu2+), 0.461 (Pb2+), 1.316 (Fe2+). These values for CA-II was found to be 0.952 (Co2+), 0.543 (Cd2+), 0.777 (Cu2+). The inhibition types of all the investigated metal ions were determined to be competitive.
Key words: Carbonic Anhydrase (EC 4.2.1.1), Acipenser baerii (Brandt,1869), Sepharose-4B-L-tyrosine sulfanilamide affinity chromatography, purification, inhibition.