Serebral iskemi modelinde oluşan nöroinflamasyon üzerine 12/15 lipooksijenaz inhibitörlerinin etkisi
The effect of 12/15 lipoxygenase inhibitors on neuroinflammation induced by cerebral ischemia models
Yazar: CANAN ÇAKIR AKTAŞ
Danışman: DOÇ. DR. EBRU BODUR ; DOÇ. DR. HÜLYA KARATAŞ KURŞUN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Lipid peroksidasyonu = Lipid peroxidation ; Lipoksijenaz = Lipoxygenase ; Matriks metalloproteinaz 9 = Matrix metalloproteinase 9 ; Metalloproteinazlar = Metalloproteinases ; Serebrovasküler bozukluklar = Cerebrovascular disorders ; Sitokinler = Cytokines ; İnflamasyon = Inflammation ; İnflamazom = Inflammasome ; İnme = Stroke ; İskemi = Ischemia

Özet:
Bu tez çalışmasında, 12/15 LOX inhibisyonunun iskemi sonrası gelişen nöroinflamasyon sürecine etkisi incelenmiştir. Bunun için farede kalıcı iskemi ve iskemi/rekanalizasyon (İ/R) olmak üzere iki farklı serebral iskemi modeli oluşturulmuştur. Serebral iskemi ile indüklenen inflamasyon süreci ve 12/15 LOX inhibitörünün bu süreç üzerindeki etkisi 3 farklı zaman noktasında (6, 24 ve 72 saat) incelenmiştir. Bu amaçla kan beyin bariyeri geçirgenliği (MMP-9 ve TIMP-1), mikroglia aktivasyonu, NLRP1 ve NLRP3 inflamazom protein kompleksleri, pro-inflamatuvar (IL-1beta, IL-6 ve TNF-alfa) ve anti-inflamatuvar sitokinler (TGF-beta ve IL-10) immünohistokimyasal yöntemle incelenmiştir. Ayrıca ELISA ile beyin dokusunda pro-inflamatuvar ve anti-inflamatuvar sitokin miktarları ölçülmüştür. İskemi sonrası oluşan oksidatif hasarı belirlemek için dokuda malondialdehit miktarları ölçülmüştür. Buna göre inflamasyon süreci iki model arasında zamansal olarak farklılıklar göstermiştir. 12/15 LOX inhibisyonu ile peri-enfarkt alanda inflamatuvar yanıt baskılanmıştır. Serebral iskemi sonrası oksidatif hasar ve inflamatuvar süreçlerin incelenmesinde İ/R modelinin en uygun model olduğu, proinflamatuvar belirteçlerden IL-6, anti-inflamatuvar belirteçlerden TGF-beta'nın belirgin olarak değişiklik gösterdiği saptanmıştır. Sonuç olarak, elde edilen tüm bu bulgular 12/15 LOX inhibisyonunun inflamatuvar süreç ile yakından ilişkili olup, inme gibi inflamasyonun tetiklendiği hastalıkların tedavisinde etkin bir hedef olabileceğini göstermektedir.

Abstract:
In this study, our aim was to investigate the effect of 12/15 LOX inhibition on neuroinflammation process. For this purpose, two different cerebral ischemia models in mouse, permanent ischemia and ischemia/recanalization (I/R), have been performed. Cerebral ischemia with two different models-induced inflammation and the effects of 12/15 LOX inhibitor on this process were examined at 3 different time points (6, 24 and 72 hours). Blood brain barrier integrity (MMP-9 ve TIMP-1), microglia activation, NLRP1 and NLRP3 inflammasome protein complexes, pro-inflammatory (IL-1beta, IL-6 and TNF-alpha) and anti-inflammatory (TGF-beta and IL-10) cytokines, were observed by immunohistochemistry technique. Moreover, amount of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in the brain tissues were investigated by ELISA. Tissue levels of malondialdehyde were assessed to analyze oxidative stress following ischemia. In our results, inflammation process induced by ischemia has different properties according to models and time points of the insult and 12/15 LOX inhibition suppressed inflammatory response in the perienfart region. I/R model was the most suitable model to examine oxidative damage and inflammatory processes after cerebral ischemia and among proinflammatory markers, IL-6 and among anti-inflammatory markers TGF-beta were significantly different in this model. In conclusion, all these findings show that 12/15 LOX inhibition is closely related to the inflammatory process, indicating that it may be an effective target in the treatment of inflammation-induced diseases such as stroke.