Erzincan tulum peynirinden izole edilen staphylococcus aureus izolatlarında antibiyotik direncinin ve biyofilm oluşturma özelliğinin fenotipik ve genotipik olarak belirlenmesi
The determination of antibiotic resistance and biofilm creating properties of staphylococcus aureus isolates from erzincan tulum cheese as phenotypic and genotypic
Yazar: NECATİ ÖZPINAR
Danışman: DOÇ. DR. K. SEMİH GÜMÜŞSOY
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Biyofilmler = Biofilms ; Erzincan = Erzincan ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; Tulum peyniri = Tulum cheese ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Bu çalışmada Erzincan'da tüketime sunulan Erzincan tulum peynirinden izole edilen Staphylococcus aureus'ların biyofilm oluşturabilme yetenekleri ve antibiyotik dirençlilikleri fenotipik ve genotipik yöntemlerle araştırıldı.Araştırmada 100 adet Erzincan tulum peyniri numunesi toplandı. Aseptik koşullarda alınan peynir örneklerinden Staphylococcus aureus izolasyonu için Baird-Parker Agar'a ekim yapıldı. Buradan ayrılan izolatlar gram boyama, hemoliz ve koagülaz testleriyle Staphylococcus aureus olarak identifiye edildi. İzolatlar Polimeraz Zincir Reaksiyonu kullanılarak nuc, mecA, vanA ve vanB geni yönünden incelendi. Staphylococcus aureus izolatlarının biyofilm oluşturma yeteneği için Kongo Red Agar ve antibiyotik dirençlilikleri içinde oksasilin (1µg), sefoksitin (30µg), vankomisin (30µg), amoksisilin-klavulonik asit (20µg) ve penisilin(10 unit) antibiyotik diskleri kullanıldı.Test edilen örneklerin 72 (% 72)'si Staphylococcus spp. pozitif bulundu. Bunlardan 61 (% 84,7) örnek fenotipik ve genotipik olarak Staphylococcus aureus olarak identifiye edildi. İzolatların 37 (% 60,6)'sinin biyofilm oluşturduğu saptandı. Disk difüzyon yönteminde 61 izolattan 9 (% 14,7)'unda oksasilin (metisilin), 8 (% 13,1)'inde sefoksitin, 4 (% 6,5)'ünde amoksisilin-klavulonik asit, 28 (% 45,9)'inde ise penisilin dirençliliği tespit edilirken vankomisin dirençli izolata rastlanmadı. Polimeraz Zincir Reaksiyonu sonucunda 61 örnekten 10 (% 16,3)'unda mecA geni saptanırken vanA ve vanB genine rastlanmadı.Sonuç olarak Erzincan tulum peynirinde Staphylococcus aureus'un yüksek bir oranda bulunduğu görülmüştür. Bu durumun özellikle peynirin imalat safhasında yeterli hijyen kurallarına riayet edilmemesi ve olgunlaşma süresinin kısaltılarak satışa sunulmasından kaynaklandığı düşünülmektedir. Bu sonuçların ışığı altında bölge ile özdeşleşmiş olan Erzincan tulum peynirinin Staphylococcus aureus ile kontaminasyon oranının yüksek olması ve izolatların antibiyotik dirençliliği göz önünde bulundurulduğunda halk sağlığı açısından risk oluşturabileceği kanaatine varılmıştır.Anahtar kelimeler: Antibiyotik direnci, biyofilm, Staphylococcus aureus, Polimeraz Zincir Reaksiyonu, tulum peyniri

Abstract:
In this study, biofilm forming capabilities, and antibiotic resistance of Staphylococcus aureus strains which were isolated from 100 different Erzincan tulum cheese consumed in Erzincan province, were investigated as phenotypic and genotypic.In this study 100 samples of Erzincan tulum cheese were gained from Erzincan Province. Samples of cheese which were gained from aseptic conditions were inoculated into the Baird-Parker Agar for the isolation of Staphylococcus aureus. Isolates from agar separated that agar were identified as Staphylococcus aureus with gram staining, hemolysis and coagulase tests. Isolates were examined using the Polymerase Chain Reaction in terms of NUC, mecA, vanA and vanB genes. Congo Red Agar was used to determine biofilm formation capability of isolates of Staphylococcus aureus and oxacillin (1?g), cefoxitin (30?g), vancomycin (30?g), amoxicillin-clavulanic acid (20?g), and penicillin (10 units) antibiotic discs were used to remark antibiotic resistance analyzes.72 (72%) of tested samples were found as positive for Staphylococcus spp. Among these 72 (72 %) samples, 61 (84.7 %) were identified as Staphylococcus aureus both phenotypic and genotypic. It was also determined that 37 (60.6 %) of isolates had formed biofilm. In the study with disc diffusion method, it was found that from 61 isolates 9 (14.7 %) were oxacillin (methicillin), 8 (13.1 %) were cefoxitin, 4 (6.5 %) were amoxicillin-clavulanic acid and 28 (45.9 %) were resistance to penicillin. On the other hand, vancomycin-resistant strain was not detected. In the examination performed by polymerase chain reaction in all of 61 strains of Staphylococcus aureus, nuc gene and 10 (16.3 %) mecA genes were detected. vanA and vanB genes were not detected.As a result, high percentages of Staphylococcus aureus were determined in Erzincan tulum cheese. This is due to poor hygiene rules especially phase of cheese manufacturing and shortened ripening period for sale. In the light of these results it was concluded that Erzincan tulum cheese now identified with the region has a high rate of contamination with Staphylococcus aureus and considering its isolates have antibiotic resistance has risk to public health.Key words: Antibiotic resistance, biofilm, Staphylococcus aureus, Polymerase Chain Reaction, Tulum cheese