Kayısı çekirdeği yağının insan adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücrelerden farklılaşan adipositler üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation the effect of apricot kernel oil on adipocytes differentiated from human adipose-derived mesenchymal stem cells
Yazar: BÜKE DEMİR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ YAVUZ EMRE ARSLAN ; DOÇ. DR. FADİME KIRAN
Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyomühendislik = Bioengineering

Özet:
Tıbbi bitkiler eski zamanlardan beri tedavi amaçlı kullanılmaktadır. Günümüzde, yapılan yeni çalışmalarla birlikte, sentetik ilaçların yerini tıbbi ve aromatik bitkiler almaya başlamıştır. Bu tez çalışmasının amacı, kayısı (Prunus armeniaca L.) çekirdeği yağının insan adipoz türevi mezenkimal kök hücrelerden (iAMKH'ler) farklılaşmış olgun adipositler üzerindeki etkisini araştırmaktır. Araştırma kapsamında, Çanakkale bölgesinden (Kepez) toplanan kayısı çekirdeklerinin yağı vakumlu döner buharlaştırıcı kullanılarak elde edilmiştir. Çözücü olarak hekzan kullanılmıştır. Ekstrakte edilen yağın verimi %31,09 ± 0,94 olarak tespit edilmiştir. Kayısı çekirdeği yağının asitlik değerleri; mg KOH/g cinsinden 1,041, %oleik asit cinsinden ise 0,524 olarak belirlenmiştir. Gerçekleştirilen GC-FID analizleri neticesinde kayısı çekirdeği yağının %45,9 oleik asit, %19,8 linoleik asit ve %19,3 lineoleaidik asit içerdiği belirlenmiştir. Ardından; hücre kültürü çalışmalarında kullanılacak olan dimetil sülfoksitin (DMSO) etkisi 3T3-L1 hücreleri üzerinde incelenmiş ve IC50 değeri 2,19 olarak tespit edilmiştir. iAMKH'ler uygun hücre kültürü temelli protokoller izlenerek hazırlanmış ve kayısı çekirdeği yağının farklı konsantrasyonlarının iAMKH'lerden farklılaşmış olgun adiposit hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisi XTT analizi ile belirlenmiştir. Hematoksin ve Eozin (H&E) ve Oil red O boyamaları neticesinde histolojik incelemeler gerçekleştirilmiştir. İlaveten, Oil red O boyama sonuçları kolorimetrik ölçümlerle onaylanmıştır. Gerçekleştirilen immünohistokimyasal analizler ile adipojenezden sorumlu olan; aP2, C/EBPα, C/EBPβ ve PPARγ analizleri gerçekleştirilmiştir. C/EBPα, C/EBPβ ve aP2 gen ifadeleri RT-PCR ile de değerlendirilmiştir. Elde edilen sonuçlar neticesinde; kayısı çekirdeği yağının iAMKH'lerden farklılaşan adipositler üzerinde sitotoksik etki sergilemediği belirlenmiştir. Ayrıca 100 µg/kuyucuk kayısı çekirdeği yağı içeren hücrelerde, hücresel büyümenin ve adipositler içerisindeki lipit miktarının arttığı belirlenmiştir.

Abstract:
Medicinal plants have been used for therapeutic purposes since ancient times. Nowadays, along with the novel researches, medicinal and aromatic plants have begun to replace synthetic drugs. The aim of this study is to investigate the effect of apricot (Prunus armeniaca L.) kernel oil on differentiated mature adipocytes from human adipose-derived mesenchymal stem cells (hAMSCs). Apricot kernel oil extraction was performed using Rotary evaporator, and hexane was used as solvent. The yield of the extracted oil was determined as 31.09 ± 0.94%. As result of GC-FID analysis, it has been determined that apricot kernel oil contains 45.9% oleic acid, 19.8% linoleic acid and 19.3% lineoleaidic acid. The effect of dimethyl sulfoxide (DMSO) used in cell culture studies was investigated on 3T3-L1 cells, and the IC50 value was calculated as 2.19. hAMSCs were cultured following appropriate cell culture protocols and the cytotoxic effect of different concentrations of apricot kernel oil on mature adipocyte cells differentiated from hAMSCs was determined by XTT analysis. Histological examinations were performed with Hematoxylin and Eosin (H&E) and Oil red O staining. In addition, Oil red O staining results were confirmed by colorimetric means. aP2, C/EBPα, C/EBPβ and PPARγ gene expressions, which are responsible for adipogenesis, immunohistochemical analyzes with investigated. C/EBPα, C/EBPβ and aP2 gene expression levels were also evaluated by RT-PCR. According to the results, it has been determined that apricot kernel oil does not show a cytotoxic effect on adipocytes differentiated from hAMSCs. Besides, it was found that cellular growth and lipid content increased in adipocytes which containing 100 µg of apricot kernel oil.