Karpuz (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum ve Nakai)'a VAT (Aphis gossypii'ye dayanıklılık) geninin aktarılması ve transformasyon etkinliğinin araştırılması
An efficient transformation and VAT (resistance to Aphis gossypii) gene transformation of watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum and Nakai
Yazar: SELAY ELDOĞAN
Danışman: PROF. DR. NEBAHAT SARI
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Bölümü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2008
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu tezde, karpuz (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum ve Nakai) bitkisinde rejenerasyon için gerekli olan uygun ortam optimizasyonu ve Agrobacterium aracılığıyla gen aktarma tekniği çalışılmıştır. Test edilen rejenerasyon ortamlarından en etkili olan, 5 gün çimlendirme ortamında olan karpuz tohumları 2 mg/l BAP + 0.1 mg/l IAA ile desteklenmiş MS ortamında kültüre alınmasıyla yüksek rejenerasyon frekansı elde edilmiştir. Agrobacterium'un C58C1-pmp90 ve C58C1-pch32 suşlarının VAT bölgesi ve 2.5 kb'lık 5' ve 3'regülatör dizinlerine sahip pBin19 binary vektör kullanılmıştır.Bakteri solüsyonu ile muamele edilen karpuz tohumu eksplantları, 2 mg/l BAP, 0.1 mg/l IAA, 200 mg/l timentin ve 7.5 g agar içeren MS ortamında kültüre alınmıştır. Gen aktarımı olan bitkileri tespit edebilmek için seçici seleksiyon ortamı (2 mg/l BAP + 0.1 mg/l IAA + 750 mg/l sefuroksim sodyum + 200 mg/l kanamycin + 7.5 g agar) kullanılmıştır. Seleksiyon ortamında canlılığını devam ettiren bitkiler MSG (sürgün geliştirme ortamı) ortamında geliştikten sonra DNA izolasyonu, PCR, Jel elektroforezi sonucunda aktarılan bantlara UVP Jel dökümantasyon sisteminde bakılmıştır. Bantlar ilgili bölgelerde tespit edilmemiştir.Anahtar kelimeler: Citrullus lanatus, transformasyon, Agrobacterium tumefaciens, rejenerasyon, Aphis gossypii

Abstract:
In this thesis, optimum media for regeneration and gene transformation technique with Agrobacterium tumefaciens to watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum and Nakai) plant was studied. The best result obtained from MS medium containing 2 mg/l BAP +0.1 mg/l IAA added, for regeneration of the watermelon seeds which are incubated for germination for 5 days. Regeneration protocol has been achively applied to obtain transformed plants, using Agrobacterium tumefaciens strain C58C1-pmp90 and C58C1-pch32 which is harboring a binary vector pBin19 carring Vat coding region, 2,5 kb of 5? and 3? regulatory sequences.Watermelon seed explants which are treated with bacteria solution cultured in MS media containing 2 mg/l BAP + 0.1 mg/l IAA + 200 mg/l timentin + 7.5 g agar added. To determine the transformant plants, selective media containing (2 mg/l BAP + 0.1 mg/l IAA + 750 mg/l sefuroksim sodium + 200 mg/l kanamisin + 7.5 g agar) was used. The plants which are carried on living in selection medium were transferred to the MSG (medium of shoot growth). After completed their growth, the plants were harvested for DNA isolation. Transformed plants were detected by PCR, Gel Electrophoresis and UV decumantation system. Bands are not seen in the intended region.Key words : Citrullus lanatus, transformation, Agrobacterium tumefaciens, rejeneration, Aphis gossypii