İdiyopatik trombositopenik purpurada kemik iliğinde girelin, HSP70, BCL-2 ve bax gösterimi
The expression of ghrelin, HSP70, BCL-2 and bax proteins in idiopathic thrombocytopenic purpura at bone marrow
Yazar: MEVRA ÇAY
Danışman: PROF. DR. SAADET AKARSU
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Genler-Bax = Genes-Bax ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Ghrelin = Ghrelin ; Kemik iliği = Bone marrow ; Purpura-trombositopenik-idyopatik = Purpura-thrombocytopenic-idiopathic ; Sıcaklık şoku proteinleri = Heat shock proteins

Özet:
İdiyopatik trombositopenik purpura (İTP), trombositopeni (trombosit sayısı <100.000/mm3), plazmada antitrombosit antikorların varlığı, trombosit yaşam süresinin kısalığı ve kemik iliğinde megakaryositlerin artması ile karakterize çocukluk çağının en sık karşılaşılan edinsel trombositopeni nedenidir. Patogenezindeki esas neden trombosit ömrünün kısalmasıdır. Buna neden olabilecek pek çok faktör öne sürülmüştür. Oksidatif etki, antioksidan mekanizma, apoptozis ve antiapoptozisin her birinin ayrı ayrı etkisi olduğu üzerine çalışmalar bulunmaktadır. 
Çalışma grubumuza İTP tanılı 45 hasta alındı. Tanıdan itibaren ilk 3 ay içinde trombositopenisi düzelen 23 olgu Grup I (Yeni Tanı Konmuş İTP), tanıdan itibaren 12 ay veya daha uzun sürede tombositopenisi düzelmeyen 22 olgu Grup II (Kronik İTP) ve bu tüm olguları içerenler Grup III (Toplam İTP) olarak belirlendi. Grup IV (Kontrol Grubu) olarak solid tümör saptanan, bu nedenle kemik iliği aspirasyon ve biyopsisi yapılarak normal olduğu belirlenen 20 olgudan oluşturuldu. Çalışmada retrospektif olarak dosya kayıtları incelenerek hasta ve kontrol grupları belirlendi. Bu olguların patoloji labaratuvarında saklı parafin blok örneklerine ayrı ayrı girelin, Hsp70, Bcl-2 ve Bax uygulandı. Boyanma yaygınlığı, boyanma şiddeti ve boyanma skoru açısından immunohistokimyasal olarak değerlendirildi.
Kronik İTP'li olgularda girelin boyanma yaygınlığı ve boyanma skoru Yeni Tanı Konmuş İTP'li olgulara göre; girelin boyanma şiddeti ise Yeni Tanı Konmuş İTP ve Kontrol Grubu'na göre istatistiksel olarak anlamlı derecede düşüktü (p<0,05). Çalışmaya dahil edilen gruplar arasında Hsp70 ve Bcl-2 boyanma yaygınlığı, boyanma şiddeti ve boyanma skoru açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılık izlenmedi (p>0,05). Tüm İTP'li olgularda Kontrol Grubu'na göre Bax boyanma şiddeti istatistiksel olarak anlamlı derecede düşüktü (p<0,05). Bax boyanma yaygınlığı ve boyanma skoru açısından istatistiksel olarak anlamlı farklılık izlenmedi (p>0,05). Bcl-2/Bax ve Hsp70/Bax boyanma skoru oranları bakımından çalışmaya dahil edilen olgular arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık izlenmedi (p>0,05). Ancak girelin/Bax boyanma skoru oranı Kronik İTP'li olgularda Yeni Tanı Konmuş İTP'li olgulara göre istatistiksel olarak anlamlı derecede düşüktü (p<0,05). 
Bir oksidan olan Bax parametresinin tüm gruplarda düşük olması; antioksidan parametreler olan girelin, Bcl-2 ve Hsp70 parametrelerinden sadece girelin düşüklüğü İTP'deki olayların bir sonucu mu, yoksa nedeni mi olduğu araştırmaya açık bir konudur. Bu bilgilerin ışığında, trombositlerdeki yapısal ve fonksiyonel değişikliklerden ve trombositopeni mekanizmasından yalnızca antijen-antikor reaksiyonunu sorumlu tutmanın yeterli olmadığı düşünülmektedir.
Anahtar Kelimeler: İdiyopatik trombositopenik purpura, girelin, Hsp70, Bcl-2, Bax

Abstract:
Idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP) is a syndrome that is characterized by thrombocytopenia (thrombocyte count<100,000/mm3), the presence of antithrombocyte antibodies in the plasma, a short thrombocyte lifecycle, and increased megakaryocytes in the bone marrow. The main factor in its pathogenesis is the shortening of the thrombocyte lifetime, and many studies have been conducted for this purpose. There are studies that state that each of the factors such as oxidative effect, antioxidant mechanism, apoptosis, and anti-apoptosis have individual effects. 
Forty-five patients diagnosed with ITP were included in the current study. Diagnosis to three-month, 23 cases in which thrombocytopenia improved were included in Group I (Newly Diagnosis ITP) and during the twelve-month follow up period, 22 cases in which thrombocytopenia did not improve were included in Group II (Chronic ITP) and all cases with ITP were included in Group III (Total ITP). Twenty cases in which a solid tumor was detected and who had normal bone marrow aspiration findings and biopsy were included in Group IV (Control Group). The bone marrow biopsy was immunohistochemically evaluated in terms of diffusiveness of staining, severity of staining, and staining score individually, in paraffin block samples by administration of Bax, Bcl-2, Hsp70, and ghrelin.
In the chronic ITP group, the diffusiveness of staining and staining score with ghrelin were significantly lower when compared to the acute ITP group, and the severity of ghrelin staining was significantly lower when compared with acute ITP group and the control group (p<0.05). There was no significant difference between the study groups in terms of diffusiveness of staining, severity of staining, and staining score with Hsp70 (p>0.05). There was no significant difference between the study groups in terms of diffusiveness of staining, severity of staining, and staining score with Bcl-2 (p>0.05). In all cases with ITP, the severity of Bax staining was significantly lower than the control group (p<0.05). No statistically significant difference was observed in terms of Bax diffusiveness of staining and staining score (p>0.05). No significant difference was found between the study groups in terms of ratios of Bcl-2/Bax and Hsp70/Bax staining scores (p>0.05). However, the ghrelin/Bax staining score ratio in cases with chronic ITP was significantly lower than the cases with acute ITP (p<0.05). 
Whether finding a low Bax value, which is an oxidant parameter, in all groups, and finding only a low value of ghrelin among the antioxidant parameters such as ghrelin, Bcl-2, and Hsp70, is a result or the cause of the events in ITP, is a subject of discussion. In the light of this information, we believe that it is insufficient to consider the antigen-antibody reaction to be responsible for the structural and functional changes in thrombocytes and the mechanism of thrombocytopenia.

Key words: Idiopathic thrombocytopenic purpura, ghrelin, Hsp70, Bcl-2, Bax,