Hidatik kist sıvısından özgül antijenlerin saflaştırılması ve lateks aglütinasyon yöntemi kullanılarak ticari antijen ile karşılaştırılması
Purification of specific antigens from hydatid cyst fluid and comparison with a commercial antigen by using lateks agglutination method
Yazar: GÜLAY ARAL AKARSU
Danışman: PROF.DR. KÜRŞAT ALTINTAŞ
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 1999
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aglütinasyon testleri = Agglutination tests ; Antijenler = Antigens ; Echinococcosis = Echinococcosis ; Kromatografi-affinite = Chromatography-affinity

Özet:
49 7. ÖZET Echinococcus granulosus'un metasestod formunun yol açtığı kistik ekinokokoz (KE), ülkemizde hem halk sağlığı hem de sosyoekonomik açıdan önemli bir zoonozdur. Yapılan çalışmalar, KE tanısında görüntüleme yöntemlerinin, serolojik yöntemlerle doğrulanması gerekliliğini ortaya koymuştur, bununla birlikte serolojik testlerin duyarlılığı ve özgüllüğünde büyük oranda antijen standardizasyon eksikliğine bağlı olarak farklılıklar ortaya çıkmaktadır. Bu nedenle kolay standardize edilebilir, duyarlı ve özgül bir serolojik yöntem, KE'un doğru tanısı için gereklidir. Tanısal açıdan önemli antijenleri elde etmek ve bu kozmopoiitan zoonozun tanısını koyabilmek için bugüne kadar kist sıvısı ve çeşitli kist elemanları (protoskoleksler, kist duvar yapıları gibi) kullanılmıştır. Bu antijen kaynaklarından en zengini ve değerlisi kist sıvısı olarak bildirilmiştir. Kist sıvısının içeriği çok karmaşıktır ve hem konak hem de parazit kaynaklı pek çok antijeni içerir. Tanıda daha özgül testlerin oluşturulması açısından bu antijenlerin saflaştırılması ve özgül antijenlerin elde edilmesi önemlidir. Ancak bu özgülleşme sağlanırken, duyarlılık feda edilmemelidir. Bu amaçla literatürde pek çok yöntem bildirilmiştir. Bizim çalışmamızda uyguladığımız yöntem, tek basamaklı, pratik bir yöntem olup afinite kromatografısini kapsamaktadır. Lipoprotein yapısında olduğu bilinen, tanısal önemi olan kist sıvısı antijenlerinin heparine bağlanmasını esas alan bu yöntem, hızlı bir şekilde antijen saflaştırmasını sağlamıştır. Daha sonra, bu antijenik süspansiyonun karakterizasyonu amacıyla sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ve immunoblotting uygulanmıştır. SDS-PAGE ile protein bantları ortaya konmuş, immunoblotting ile de bu bantların KE'lu hasta serumuyla karşılaştırılması sonucu reaktifliği saptanmıştır. Sonuçta tanısal önemi olan antijenlerde duyarlılığı etkileyecek bir kayıp olmadığı anlaşılmıştır. Elde edilen antijenik preparasyon, KE olduğu operasyonla kanıtlanmış 84 hasta serumu, 47 sağlıklı kontrol serumu ve diğer paraziter hastalıkları olan50 20 hasta serumu kullanılarak serolojik yönden lateks aglütinasyon testiyle denenmiş ve ticari lateks aglütinasyon testinin sonuçlarıyla karşılaştırılmıştır. Bizim antijenimizle hazırladığımız lateks aglütinasyon testinin duyarlılığı ve özgüllüğü 1:5 sulandırmada sırasıyla % 87 ve % 93 bulunmuş ve ticari kitle uyumlu çıkmıştır. Sonuç olarak elde edilen antijenik süspansiyon ile hazırlanacak serolojik testler, ülkemizde endemik olan KE tanısı için pratik ve güvenilir bulunmuştur.

Abstract:
51 8. SUMMARY Purification of Specific Antigens from Hydatid Cyst Fluid and Comparison with a Commercial Antigen by Using Latex Agglutination Method Cystic Echinococcosis (CE) caused by the metacestode stage of Echinococcus granulosus is one of the most important socioeconomic and public health problems in Turkey. Several studies show that radiological imaging methods should be confirmed by immunodiagnostic tests for the diagnosis of CE. However, there are differences between the sensitivity and specificity of the serologic tests, probably due to the lack of standardization of antigenic preparations. Thus, a specific and sensitive test that could be easily standardized is needed for the diagnosis of this disease. Hydatid cyst fluid and various cyst elements (protoscoleses, cyst wall elements) have been employed in order to obtain diagnostically important antigens for the immunodiagnosis of this cosmopolitan zoonosis. Cyst fluid is reported to be the most valuable antigen source among these elements. Cyst fluid has a complex structure and involves several parasitic antigens as well as host proteins. Purification of these antigens to obtain the specific parasitic antigens is important to apply a more specific test in serodiagnosis. However, sensitivity should not be sacrificed meanwhile. Several methods are reported for this purpose and among these, our method is a one step affinity chromatography relying on the relationship between the lipoprotein antigens and heparin. This is an easy method to purify lipoprotein antigens. This antigenic preparation was then characterized by using Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting. Antigen bands were seen with SDS-PAGE and the reactivity of these antigens were tested with immunoblotting using the serum of a CE patient. As a result it was understood that there was no antigenic loss that can affect the sensitivity.52 This antigenic preparation was tested serologically by using latex agglutination test with sera of 84 CE patient confirmed surgically, 47 healthy control and 20 patient infected with parasitic infections other than CE; and the results of this test were compared with the results of the commersial kit. Our results were % 87 sensitive and % 93 specific when the sera were 1:5 diluted, and these values were similar to the results of the commersial kit. As a result, serologic tests prepared with the specific antigens we purified, are thought to be practical and reliable tests to diagnose CE which is endemic in our country.