Saproterin dihidroklorür'ün proses ve bozunma safsızlıklarının belirlenmesi için stabilite göstergeli bir HPLC yönteminin geliştirilmesi ve metot validasyonu
Development of stability indicating an HPLC method for saproteri̇n dihydrochride for the determi̇nation and validation of process-related and degradation impurities
Yazar: NURİYE ARSLAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BURCU DİDEM ÇORBACIOĞLU
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı / Kimya Mühendisliği Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Mühendislik Bilimleri = Engineering Sciences

Özet:
Bu çalışmada, Sapropterin Dihidroklorür etken maddesi proses ve bozunma safsızlıklarının bir arada analizi için stabilite göstergeli HPLC yöntemi geliştirildi. Bu yöntemde YMC-Pack ODS-AQ, 150 mm x 4,6 mm, 3,0 µm kolon kullanılmıştır. Potasyum dihidrojen fosfat tamponu, metanol ve asetonitril (90:10, h/h) karışımı hareketli fazı, gradient elüsyon ile 0,6 mL/dk akış hızında ayarlanarak maddelerin ayrılması gerçekleştirilmiş ve deteksiyon dalga boyu 220 nm'ye ayarlanmıştır. Çözücü olarak asetonitril ve askorbik asit karışımı karışımı kullanılmıştır. Yöntemin analitik yöntem validasyonu yapıldı. Seçicilik, doğrusallık, kesinlik, doğruluk, sağlamlık, çözelti stabilitesi, tanıma sınırı ve tayin sınırı parametreleri incelendi. Sapropterin Dihidroklorür etken maddesi ve bozunma safsızlıkları için yapılan doğrusallık çalışmasında 0,997'den büyük korelasyon katsayısı elde edildi. Yöntem kesinliği için aynı gün içinde yapılan analizlerde 0,91 ile 1,52, farklı günlerde yapılan analizlerde 0,72 ile 2,22 arasında değişen %RSD değerleri elde edildi. Yöntem doğruluğu için Sapropterin Dihidroklorür için ortalama 101.10 ve bozunma safsızlıkları için ise 96,38 ile 100,89 arasında değişen %geri kazanım elde edildi. Tespit limit sınırı 2,1 – 3,0 ng/mL arasında; hesaplanabilirlik limiti 7,0 – 10,0 ng/mL arasında bulundu. Standart çözeltisi 15 °C 'de 48 saat stabil olduğu görüldü. Fakat test çözeltisi taze hazırlanmalıdır. Yöntemin sağlamlığı için bazı çalışmalar yapıldı ve kromatografik koşullardaki değişikliklerin yöntem performansını etkilemediği görüldü. İlaç kapsülü için zorla bozundurma çalışmaları (asidik, bazik, oksidatif, ışık ve ısı) yapıldı. Kütle denklikleri yapılarak %95,00 -%105,00 arasında değişen verim elde edildi.

Abstract:
In this study, the HPLC method with stability indicator was developed for the combined analysis of Saproterin Dihydrochloride active ingredient, process and degradation impurities. In this method, YMC-Pack ODS-AQ, 150 mm x 4.6 mm, 3.0 µm column was used. The separation of substances was achieved by adjusting the potassium dihydrogen phosphate buffer, mixture of (90:10, v/v) methanol and acetonitrile mobile phase at a flow rate of 0.6 ml/min by gradient elution, and the detection wavelength was adjusted to 220 nm. mixture of phosphate buffer and ascorbic acid was used as the solvent. Analytical method validation of the method was performed. Selectivity, linearity, precision, accuracy, robustness, solution stability, limit of dedection and limit quantitation parameters were examined. A correlation coefficient greater than 0.997 was obtained in the linearity study for the active ingredient Saproterin Dihydrochloride and its degradation impurities. For the precision of the method, % RSD values ranging from 0.91 to 1.52 were obtained in the analyzes performed on the same day, and from 0.72 to 2.22 in the analyzes performed on different days. An average recovery rate of 101.10% was obtained for saproterin dihydrochloride for method accuracy and between 96.38% and 100.89% for degradation impurities. The limit of dedection was found between 2.1 – 3.0 ng/mL; the limit of quantitation was found between 7.0 – 10.0 ng/mL. The standard solution was found to be stable for 48 hours at 15 °C. However, the test solution must be prepared freshly. Some studies were carried out for the robustness of the method and it was seen that changes in chromatographic conditions did not affect the method performance. Forced degradation studies (acidic, basic, oxidative, light and heat) were performed for the drug tablet. By making mass equivalences, efficiency ranging between 95.0% -105.0% was obtained.