Trypanosoma cruzi, Leishmania tropica ve Toxoplasma gondii parazitlerinin ex vivo kültivasyonu ve auranofin antiparaziter ilaç etkinliğinin değerlendirilmesi
Ex Vivo Cultivation of Trypanosoma cruzi, Leishmania tropica and Toxoplasma gondii Parasites and the Evaluation of Antiparasitic Drug Efficacy of Auranofin
Yazar: AHMET YILDIRIM
Danışman: PROF. DR. KOR YERELİ
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Antiparazitik ajanlar = Antiparasitic agents ; Auranofin = Auranofin ; Bitki yetiştirme = Cultivation ; Leishmania tropika = Leishmania tropica ; Paraziter hastalıklar = Parasitic diseases ; Parazitler = Parasites ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii ; Trypanosoma cruzi = Trypanosoma cruzi

Özet:
Amaç: Çalışmamızda; Türkiye'de ilk kez ex vivo kültür yöntemiyle üretilen T.cruzi'nin yanısıra, L.tropica ve T.gondii parazitlerinin J774, Vero ve HeLa hücrelerinde ex vivo kültivasyon yöntemiyle virulans özelliklerini kaybetmeden kısa sürede fazla miktarda çoğaltılması ve bu parazitler üzerine auranofinin antiparaziter ilaç etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Sıvı azotta saklanan J774, Vero ve HeLa hücreleri birlikte T.cruzi, L.tropica ve T.gondii parazitleri kullanılarak yapılan ex vivo kültivasyonda ardışık 3'er pasaj yapılmıştır. Her pasaj sonrasında giemsa boyalı preparatlar hazırlanarak enfeksiyon oranları ışık mikroskobik incelemeyle değerlendirilmiştir. Auranofin in vitro ilaç etkinliği hemositometri ve celltiter-glo yöntemleri ile ve ex vivo ilaç etkinliği ise giemsa boyalı preparatların ışık mikroskobik incelenmesi ile araştırılmıştır. Ayrıca MTT ile Auranofinin sitotoksik aktivitesi incelenmiştir.
Bulgular: Ex vivo kültivasyon sonucunda T.cruzi ve L.tropica suşlarının ürediği en iyi hücre hatları sırasıyla J774, Vero ve HeLa, T.gondii suşunun ise sırasıyla HeLa, J774 ve Vero olduğu görülmüştür. Auranofinin IC50, CC50 ve SI verilerine göre sitotoksik aktivite göstermediği, T.cruzi, L.tropica ve T. gondii üzerine antiparaziter aktivite gösterdiği istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (p<0,05). 
Sonuçlar: Türkiye'de ilk kez ex vivo kültür yöntemiyle üretilen T. cruzi'nin yanısıra, L.tropica ve T.gondii suşları, ex vivo kültür yöntemiyle virulans özelliklerini kaybetmeden kısa sürede fazla miktarda başarılı bir şekilde üretilmiştir. Auranofinin IC50, CC50 ve SI verilerine göre sitotoksik aktivite göstermemesi ve L.tropica üzerine dünyada ilk kez olmasının yanısıra, T.cruzi  ve T.gondii üzerine antiparaziter aktivite göstermesi önemli ve ümit verici bir gelişme olarak değerlendirilmektedir.

Abstract:
Objective: In our study; It was aimed to reproduce L.tropica and T.gondii parasites besides T.cruzi, produced by ex-vivo cultivation for the first time in Turkey, in J774 Vero and HeLa cells by ex-vivo cultivation rapidly without losing their virulence properties and to investigate the antiparasitic drug efficacy of auranofin on these parasites.
Materials and Methods: In ex-vivo cultivation using T.cruzi, L.tropica and T.gondii parasites, together with J774, Vero and HeLa cells, stored in liquid nitrogen, three consecutive passages were performed. Infection rates were evaluated by light microscopic examination of giemsa-stained slides prepared after each passage. In-vitro drug efficacy of auranofin was investigated by hemocytometry and celltiter-glo methods and the ex-vivo drug efficacy by light microscopic examination of giemsa-stained preparations. Also cytotoxic activity of auranofin was examined by MTT.
Results: As a result of ex-vivo cultivation, the best cell lines for T.cruzi and L.tropica strains were found to be J774, Vero and HeLa, respectively, and for T.gondii strains HeLa, J774 and Vero, respectively. According to IC50, CC50 and SI data, auranofin didn't show cytotoxic activity, but showed antiparasitic activity on T.cruzi, L.tropica and T.gondii (p <0.05).
Conclusions: L.tropica and T.gondii parasites besides T.cruzi, produced by ex-vivo cultivation in Turkey first, were reproduced in J774 Vero and HeLa cells by ex-vivo cultivation rapidly without losing virulence properties. It is considered as an important and promising development that auranofin doesn't show cytotoxic activity according to IC50, CC50 and SI data and shows antiparasitic activity on T.cruzi and T.gondii, besides L.tropica, first indicated in the World.