Uzamış öksürüğü olan çocuklarda kültür, gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ve seroloji ile bordetella pertussıs enfeksiyonu araştırılması
Detection of Bordetella pertussis infection by culture, real time polymerase chain reaction and serology in chilren with prolonged cough
Yazar: DERYA GÜRSEL
Danışman: DOÇ. DR. ŞÖHRET AYDEMİR
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Bordetella pertussis = Bordetella pertussis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Seroloji = Serology ; Çocuk hastalıkları = Child diseases ; Öksürük = Cough

Özet:
Giriş ve Amaç: Boğmaca, B. pertussis' in neden olduğu tüm yaş gruplarını etkileyen bulaşıcı bir solunum sistemi enfeksiyonudur. Özellikle yenidoğan ve bebeklerde yüksek morbidite ve mortaliteye sahiptir. Ergen ve erişkinlerde atipik ve ılımlı seyreden hastalığa çoğu zaman tanı konulamamakta; bu hastalar duyarlı bebek ve çocuklara bulaşta önemli bir kaynak oluşturmaktadır. Bu nedenle iki haftadan uzun süren öksürüğü olan çocuk ve ergenlerde B. pertussis enfeksiyonunun laboratuvar incelemeleri ile araştırılması önerilmektedir. Bu çalışma ile uzamış öksürüğü olan 0-18 yaş grubu hastalarda kültür, gerçek zamanlı PZR ve serolojik tanı ile B. pertussis enfeksiyonu araştırılması, bu alanda yeni olan tanı testlerinin Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Bakteriyoloji Laboratuvarı'nın rutin laboratuvar çalışmalarına yerleştirilmesi, boğmaca tanısında Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları kliniğine laboratuvar desteği verilmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Anabilim Dalı Genel Pediatri Polikliniği'ne Aralık 2009-Ağustos 2010 tarihleri arasında başvuran, uzamış (?14 gün) öksürüğü olan 0-18 yaş grubu 51 hastanın nazofarengeyal sürüntü örneklerinde B. pertussis araştırılması için kültür ve IS481 gen bölgesinin hedeflendiği gerçek zamanlı PZR yöntemleri uygulanmıştır. Ayrıca iki-dört hafta arayla elde edilen iki serum örneğinde anti-PT IgG ve anti-FHA IgG düzeylerinin ölçüldüğü ?in-house? ELISA çalışılmış; antikor titresinde dört kat artış veya tek serum örneğinde 100 EU/ml'nin üzerindeki anti-PT IgG titreleri B. pertussis enfeksiyonunun serolojik kanıtı olarak değerlendirilmiştir.Bulgular: Bu çalışmaya alınan 51 hastanın nazofarengeyal sürüntü örneklerinden birinin kültüründe B. pertussis üredi. Altı (%11.8) hastanın nazofarengeyal sürüntü örneğinde IS481 gerçek zamanlı PZR testi pozitifliği saptandı. Serolojik tanı ile dokuz (%17.6) olgu B. pertussis enfeksiyonu olarak değerlendirildi. Toplam 12 (%23.5) hastada en az bir yöntem ile B. pertussis enfeksiyonu saptandı. Bu hastalardan birinde her üç tanı testi ile, ikisinde IS481 gerçek zamanlı PZR ve serolojik tanı ile, üçünde sadece IS481 gerçek zamanlı PZR ile ve altısında sadece serolojik tanı ile pozitiflik saptandı.Sonuç: Çalışmaya alınan uzamış öksürüğü olan çocuk ve ergenlerin %23.5 (12/51)'üB. pertussis enfeksiyonu olarak değerlendirildi. Uzamış öksürüğü olan çocuk ve ergenlerde kültür, PZR ve serolojik tanı testleri ile araştırıldığında etken olarak B. pertussis'in önemli oranda saptandığı, laboratuvar testleri ile araştırılması gerektiği ve bu alanda standardize testlere gereksinim olduğu sonucuna varıldı.Anahtar kelimeler: Uzamış öksürük, Bordetella pertussis (B. pertussis), kültür, gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu, seroloji

Abstract:
Introduction and aim: Pertussis or `whooping cough? is a respiratory infection caused by B. pertussis. It attacks all age groups. It has significantly higher mortality and morbidity among newborns and children. Adolescents and adults with symptomatic but unrecognized pertussis are often the source of the organism for pediatric cases. Therefore, it is suggested to do laboratory diagnostic tests for B. pertussis infection to the children and adolescents with prolonged cough more than two weeks. In this study, it is aimed to detect/identify B. pertussis infection by culture, real time PZR and serologic tests among 0-18 year old children with prolonged cough. It is also aimed to adapt new diagnostic tests in the routine laboratory work of Ege University Medical Faculty Hospital, Bacteriology Laboratory and give laboratory support for the diagnosis of pertussis to the Pediatric Department of Ege University Medical Faculty.Materials and Method: In this study, nasopharyngeal swabs of the 0-18 year old, 51 children who attended to the Outpatient Clinic of General Pediatrics of Ege University Medical Faculty Pediatric Department with prolonged cough (?14 days) during December 2009-August 2010 were examined. Culture and real time PCR target sequence IS481 were done to detect B. pertussis. In addition, in house ELISA were done to detect titer of anti-PT IgG and anti-FHA IgG antibodies in paired sera collected in 2-4 week intervals. Fourfold titer increase of antibodies or anti-PT IgG levels of at least 100 EU/ml in one serum were evaluated as serologic confirmation of B. pertussis infection.Results: In this study, B. pertussis was isolated from one nasopharyngeal swab culture among the 51 patients. IS481 real time PCR assay of six samples (%11.8) detected B. pertussis. Nine patients (%17.6) were diagnosed as B.pertussis infection by serologic tests. Totally 12 (%23.5) patients were evaluated as positive using at least one method. Among them only one had positive results with three different tests and two were positive with IS481 real time PCR assay and serologic tests. Three patients were found positive with only IS481 real time PCR assay and six got only serologic diagnosis.Conclusion: In this study, 23.5% (12/51) of adolescents and children with persistant cough were evaluated as having B. pertussis infection. It was concluded that by culture, PCR and serologic tests, B. pertussis can be detected in high ratio as the etiologic agent of persistant cough in children and adolescents. Therefore, diagnostic tests must be used to evaluate B. pertussis infection. Standardized serologic and PCR assays are needed for diagnosis.Keywords: Prolonged cough, Bordetella pertussis (B. pertussis), culture, real time polymerase chain reaction, serology