Protein A baskılanmış süpermakrogözenekli poli (hidroksietil-metakrilat) kriyojeller
Protein a imprinted supermacroporous poly(hydroxyethyl-metacrylate) based cryogels
Yazar: SEVGİ ASLIYÜCE ÇOBAN
Danışman: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Protein A bazı immunglobulinlerin (IgG1, IgG2, IgG4) Fc reseptörleri ile birleşebilmekte, böylelikle antifagositer ve antikomplementer etkinlik gösterebilmektedir. Ayrıca bu protein S. aureus'un nonspesifik taşıyıcı olarak kullanıldığı koaglutinasyon testlerinin esasını oluşturmaktadır. Protein A IgG'ye spesifik olarak bağlanması nedeniyle IgG saflaştırılmasında kullanılan en önemli liganttır. Bu nedenle protein A ticari olarak büyük bir öneme sahiptir.   
Moleküler baskılama, moleküler tanıma temelinde çok çeşitli maddelerin seçici olarak bağlanması temeline dayanan bir yöntemdir. Moleküler baskılanmış polimerler hazırlanması kolay, dayanıklı, ucuz ve moleküler tanıma yeteneği olan malzemelerdir. Moleküler baskılanmış polimerler afinite ayırma araçları olarak düşünülebilir. 
Kriyojeller,  kısmen donmuş ortamda radikalik polimerizasyon ile hazırlanmaktadır. Kriyojellerin ozmotik, kimyasal ve mekanik kararlılık ile eşsiz yapıları birleştiğinde biyolojik nanopartiküller (plazmidler, virüsler, hücre organelleri) ve hatta tüm hücreler için cazip kromatografi matrisleri yapar.
Bu çalışmada Protein A saflaştırılması için Protein A baskılanmış süpermakrogözenekli poli(2-hidroksietil metakrilat) kriyojeller hazırlanmıştır. Hazırlanan kriyojellerin karakterizasyonunun ardından, Protein A adsorpsiyonunun optimum koşulları kesikli sistemde belirlenmiştir. Maksimum Protein A adsorpsiyonu sulu çözeltiden 18.1 mg/g olarak bulunmuştur. Baskılanmış kriyojelin Protein A bağıl seçicilik katsayıları Fc ve Protein G için sırasıyla 5.44 ve 12.56 kat daha büyük olarak bulunmuştur. Ardından bakteri hücre duvarından Protein A, FPLC (Hızlı Performans Sıvı Kromatografisi) kullanılarak ayrılmıştır. Son aşamada kriyojelin tekrar kullanılabilirliği incelenmiştir.

Abstract:
Protein A can be combined with Fc receptors of certain immunoglobulin (IgG1, IgG2, IgG4), and thus can be antifagositer and anticomplementer activity. In addition, this protein was used as a nonspecific carrier with S. aureus coaglutination constitutes the basis of tests. Protein A is the most important ligand of IgG purification, due to the connection of specific IgG. Therefore Protein A is great importance commercially.
Molecular imprinting is a technology to create recognition sites in a macromolecular matrix using a template molecule. Molecularly imprinted polymers (MIP) are easy to prepare, stable, inexpensive and capable of molecular recognition. MIPs can be considered as affinity separation media.
Cryogels are gel matrices that are formed in moderately frozen solutions with radicalic polymerization. The unique structure of cryogels, in combination with their osmotic, chemical and mechanical stability, makes them attractive matrices for chromatography of biological nanoparticles (plasmids, viruses, cell organelles) and even whole cells.
In this study, Protein A imprinted supermacroporous poly(2-hydroxietil metacrilat) cryogel was prepared to Protein A purification.  The optimum conditions of protein A adsorption determined with batch system after characterization of the prepared cryogels. The maximum Protein A adsorption capacity was 18.1 mg/g from aquatic solution. The relative selectivity coefficients of imprinted particles for Protein A were 7.6 and 3.3 times greater than Fc and Protein G respectively. Then Protein A was separated from bacterial cell wall to using FPLC (Fast Performance Liquid Chromatography). The Protein A imprinted cryogels could be used many times without decreasing their adsorption capacities significantly.