Rat iskemik yara modelinde topikal glutatyon tedavisinin yara iyileşmesi üzerine etkilerinin değerlendirilmesi /
Yazar: CAN KOPAL
GATA / Tıp Fakültesi / Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2000
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery

Özet:
ÖZET İskemiye bağlı olarak gelişen oksidatif stres, dokuda iyileşmeyi olumsuz etkileyen, doku metalloproteinaz (MMP) artışı, ekstrasellüler matriks yıkımımn artışı ve re- epitelizasyonda yetersizlik gibi çeşitli fizyopatolojik değişikliklere neden olmaktadır. Bu deneysel çalışmada, iyi bilinen bir antioksidan olan esterifiye glutatyonun (GSH) topikal uygulanmasımn, intrasellüler GSH düzeyini arttırmak yoluyla oksidatif stresin etkilerini en aza indirgemesi, artmış MMP seviyesini azaltması ve keratinositlerde apoptozisi engellemesi nedeniyle, iskemik yarada iyileşmeyi hızlandırdığı ileri sürülmüş ve rat iskemik yara modelinde etkinliği incelenmiştir. Denekler, tedavi, kontrol ve sağlıklı olmak üzere 3 gruba ayrıldı. Bu çalışmada, her grupta 12 rat olmak üzere toplam 36 adet, 100-180 gram ağırlığında Sprague-Dawley rat kullanıldı. Ratlarda bipediküllü flep üzerinde iskeminin en belirgin olduğu birinci gün sonunda 6 mm.lik punch ile yaralar oluşturuldu. Yara alanları monitörize edilerek 12 gün boyunca takip edildi. 0, 5, 8, 10 ve 12. günlerde, alınan örneklerin histopatolojik ve immunohistokimyasal incelenmesi ve MMP-1 (kollajenaz 1) ile TIMP-1 ( doku metallopreteinaz inhibitörü) seviyelerinin tayini biyokimyasal (ELISA) yöntem ile yapıldı. Histopatolojik incelemede, 5. günden başlayarak ekstrasellüler matriks oluşumu ve re-epitelizasyonun tedavi ve sağlıklı grupta, kontrol gubuna göre daha fazla ve düzenli olduğu gözlenmiştir. İmmunohistokimyasal incelemede kontrol grubunda bazal keratinositlerde artmış apoptozis saptandı. 5 ve 8. günlerde alman örneklerde MMP-1 seviyesinin tedavi ve konrol grubunda yüksek, ancak tedavi grubunda MMP- lin artışına karşılık, TIMP-1 de gözlenen artışın daha fazla olduğu ortaya konuldu. MMP-1 /TIMP-1 oram tedavi grubunda anlamlı derecede düşüktü. Elde ettiğimiz sonuçlar, topikal GSH tedavisi ile oksidatif stresin azaltılabileceği, dolayısıyla yara ortamında MMP/TIMP dengesinin yeniden sağlanarak, yeterli ve düzenli ekstrasellüler matriks sentezi ve re- epitelizasyon ile yara iyileşmesinin hızlandırılabileceğini göstermektedir. Deneysel olarak etkinliğini gösterdiğimiz topikal esterifiye GSH tedavisinin klinikte bası yarası ve venöz ülserler gibi iskemik yaraların iyileşmesine yardımcı olabileceği sonucuna varılmıştır. Anahtar sözcükler: Yara iyileşmesi, Glutatyon, Gecikmiş yara iyileşmesi, îskemi 48

Abstract:
SUMMARY Oxidative stress secondary to ischemia can cause physiopathologic changes that adversely affects wound healing, such as increased tissue MMP, increased extracellular matrix degradation, and inadequate reepithelization.We hypothesized that; topical usage of esterified glutathione (GSH), a well known antioxidant, can minimize the effects of oxidative stress by an increase in intracellular GSH, and accelerate wound healing by reducing elevated level of MMP, and preventing keratinocytes from apoptosis. We used a rat ischemic wound model in this study. 36 Sprague-Dawley rats were divided into three groups 12 of each as treatment, control and healthy. Bipedicled flaps were elevated on the dorsum of the rats. Wounds were created with a 6 mm puncher at 24 hours when the ischemia was maximum. Wounds were monitorized and followed up till 12th day. Samples were collected at 0, 5, 8, 10 and 12 th days for histopathologic and immunohistochemical investigations. MMP-1 and TIMP-1 levels were measured by biochemical (ELISA) method. Histopathologic evaluation revealed more and better extracellular matrix production and reepithelization at the 5th day in treatment and healthy groups when compared with control group. Immunohistochemical evaluation revealed increased apoptosis in basal keratinocytes in control group. The evaluation of the samples collected at 5 and 8th day revealed increased MMP-1 levels in treatment and control groups, but the increase in TIMP-1 levels was more significant than MMP-1 levels in treatment group. MMP-1 / TIMP-1 ratio was significantly low in treatment group. Our results showed that topical GSH treatment can reduce oxidative stress and the reestablishment of the MMP-1 / TIMP-1 ratio gives way to adequate and regular extracellular matrix production and reepithelization and all accelerates wound healing. It is concluded that esterified GSH which is experimentally showed to be effective in ischaemic wound healing may be used clinically in ischaemic wounds such as pressure sores and venous ulcers. 49