Küçük hücreli dışı akciğer karsinomlarının EGFR mutasyon analizinde real-time PCR yöntemi ile mutasyona spesifik immunohistokimyanın karşılaştırılması
Comparetion of real-time PCR and mutation specific immunohistochemistry for detecting EGFR mutation status in non small  cell  lung  cancer
Yazar: MAKBULE ÇİSEL AYDIN
Danışman: DOÇ. DR. SEVGEN ÇELİK ÖNDER
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; ErbB reseptörleri = ErbB receptors ; Karsinoma-küçük hücreli olmayan-akciğer = Carcinoma-non small cell-lung ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Tirozin = Tyrosine ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
İleri evre akciğer adenokarsinomlu
hastalarda epidermal büyüme faktör reseptör (EGFR) geninde izlenen aktive edici
mutasyonların varlığı EGFR tirozin kinaz inhibitörlerine (TKİ) duyarlılık ile
ilişkilidir. Mutasyon spesifik monoklonal antikorlar ile yapılan
immünohistokimyasal çalışma EGFR mutasyon statüsünü belirlemek için
kullanılabilecek yöntemlerden biridir. Biz de küçük hücreli dışı akciğer
karsinomlarında (KHDK) EGFR statüsünü belirlemede Real-Time PCR (RT-PCR)
ile immünohistokimyasal yöntemi karşılaştırıp; İHK'nın duyarlılık, özgüllük,
negatif ve pozitif öngörü değerlerini analiz ettik. Bölümümüzde RT-PCR ile
EGFR mutasyon analizleri yapılmış olan 788 olgu retrospektif olarak taranmıştır.
Olgular içerisinden moleküler yöntemlerle EGFR mutasyonu olan 126 vaka
saptanmıştır. Bu olgular içerisinden 47 pozitif olgunun histolojik materyal ve
sitolojik örneklerine ait hücre bloklarından elde edilen kesitler mutasyon spesifik
antikorlar kullanılarak ekzon 19 (15bp E746-A750 delesyonu) ve ekzon 21
(L858R) mutasyonlarına yönelik immünohistokimyasal çalışma yapılmıştır.
İmmunhistokimyasal çalışma yaptığımız 47 olgunun 32 tanesi (%68) ekzon 19
delesyonu, 14 tanesi (%30) ekzon 21 nokta mutasyonu ve 1 tanesi (%2) ekzon 18
mutasyonu göstermektedir. Ekzon 19 mutasyon spesifik antikorda (15bp E746-
A750 delesyonu) duyarlılık %100, özgüllük %40, negatif öngörü değeri %100 ve
pozitif öngörü değeri %78 olarak hesaplanmıştır. Ekzon 21 mutasyon spesifik
antikorda (L858R nokta mutasyonu) duyarlılık %93, özgüllük %91, negatif öngörü
değeri %97 ve pozitif öngörü değeri %82 olarak hesaplanmıştır. Mutasyon spesifik
EGFR immünohistokimyası özellikle ekzon 21 için yüksek duyarlılık ve özgüllük
göstermektedir. Ekzon 19 (15bp E746-A750 delesyonu) ise yüksek duyarlılık
göstermekte olup, düşük özgüllüğe sahiptir. Mutasyon spesifik
immünohistokimyasal çalışmalar ile pozitif saptanan olgular, moleküler çalışmalar
yapılmaksızın mutant kabul edilmelidir. Testin negatifliği durumunda ise
moleküler yöntemler kullanılarak EGFR mutasyon analizi tekrarlanmalıdır.

Abstract:
Determination of activating mutations in epidermal growth factor receptor (EGFR)
gene in non small cell lung cancer patients is correlated with EGFR-tyrosine
kinase inhibitors (TKI) treatment responses. Immunohistochemistry with mutation
specific antibodies may detect certain mutant EGFR proteins. We compared Real-
Time PCR and immunohistochemistry for detecting EGFR mutation status in non
small cell lung cancer patients and analysed sensitivity, specificity, positive and
negative predictive values of imunohistochemistry. We evaluated 788 non small
cell lung cancer sample which were analysed for EGFR mutation status by RTPCR.
We detected 126 EGFR mutated cases among these patients. We evaluated
mutation specific EGFR immunohistochemistry directed towards the exon 19
deletions (15 bp E746-A750) and exon 21 point mutation (L858R) to the 47 EGFR
mutated patients histologic material and cell blocks of cytologic specimens. 32 of
the 47 cases (68%) had exon 19 deletion, 14 of them (30%) had point mutation in
exon 21 and one of them (2%) showed exon 18 mutation. EGFR exon 19 (15 bp
E746-A750 deletion) antibody showed a sensitivity of 100%, specifity of 40%,
negative predictive value of 100% and positive predictive value of 78%. Sensivity
of exon 21 (L858R point mutation) antibody was 93%, specificity was 91%,
negative predictive value was 97% and positive predictive value was 82%. In our
study mutation spesific EGFR immunohistochemistry showed high sensitivity and
specificity for exon 21. On the other hand exon 19 (15 bp E746-A750 deletion)
antibody has high sensitivity but low specificity. Positivity with
immunohistochemical staining can be accepted to be a sign of EGFR mutation and
patient could be a candidate for TKI treatment without a molecular test. But in the
negativity of immunohistochemical studies, molecular tests should be performed.