Kronik lenfositik lösemilerde görülen prognostik kromozomal anomalilerin tanımlanmasında rutin tekniklerle beraber multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) yönteminin kullanılması
Contribution of MLPA to routine testing used to determine the prognostic chromosomal abnormalities in chronic lymphocytic leukemia
Yazar: AKİF AYAZ
Danışman: DOÇ. DR. EMRE TEPELİ
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology
Dizin: FISH = FISH ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Kromozomlar = Chromosomes ; Lösemi-lenfositik-kronik-B hücreli = Leukemia-lymphocytic-chronic-B-Cell ; Prognoz = Prognosis ; İnterlökin 2 = Interleukin 2

Özet:
Kronik Lenfositik Lösemi, prognostik öneme sahip kromozomal anormalliklerin sık görüldüğü, klinik olarak heterojen seyirli bir hastalıktır. KLL'de tanımlanan sitogenetik anomaliler oldukça fazladır. Bu anomaliler prognoz, tedaviye başlama ve tedaviyi yönlendirme açısından  önemlidir. 13q14 delesyonu, trizomi 12, 11q22 delesyonu, 17p13 delesyonu, KLL'de en sık görülen  kromozomal anormalliklerdir. Bu çalışma ile 41 KLL hastasının SALSA Probmiks P037-A2/P038-A2 kiti ile yapılan MLPA sonuçlarını, konvansiyonel sitogenetik ve FISH sonuçları ile karşılaştırıp, MLPA tekniğinin kullanılabilirliliği araştırıldı. Ayrıca KLL hücrelerinin proliferasyon yeteneğinin düşük olmasından dolayı, konvansiyonel sitogenetikte birer mitotik stimülan olan DSP30+IL-2 kombinasyonu kullanıldı. FISH çalışmasında, 11q22.3(ATM), 13q14.3 ve 17p13(p53) lokus spesifik probları ve sentromerik 12 probları kullanıldı. 
Periferik kan ve kemik iliği kültürlerinde %80.4 oranında başarı elde edildi. Konvansiyonel sitogenetik ve FISH ile trizomi 12 saptanan 13 olgudan 5'i MLPA ile normal değerlendirildi. Ayrıca FISH ile 13q14 delesyonu tespit edilen 20 olgudan 6'sı MLPA ile normal değerlendirildi. Konvansiyonel sitogenetik ve FISH ile tespit edilemeyen 17p13 delesyonu ve 9p21 delesyonu MLPA ile tespit edildi. MLPA ile düşük düzey mozaisizmli anomaliler yanlış negatif olarak yorumlandı. Bu çalışmada MLPA tekniğinin mozaiklikleri tespit edebilme aralığı %25-30 olarak belirlendi. Ayrıca FISH ve MLPA ile 13q14 delesyonu tespit edilen 5 olgunun Rb geni bölgesi MLPA ile normal değerlendirildi.
Sonuç olarak MLPA yöntemi kolay uygulanabilir, düşük maliyetli bir yöntemdir. Düşük düzey mozaisizmlerin MLPA ile tespit edilememesi ve MLPA ile tespit edilen bazı anomalilerin FISH ile tespit edilememesi nedeniyle, KLL'de MLPA yönteminin konvansiyonel sitogenetik ve FISH ile birlikte kullanılmasının uygun olduğu görüldü.

Anahtar Kelimeler: Kronik Lenfositik Lösemi, MLPA, DSP30, IL-2

Abstract:
Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a clinically heterogeneous  disease and chromosomal abnormalities with prognostic impactare frequently detected in CLL patients. CLL is chacterized by a variety of chromosomal abnormalities detected by conventional cytogenetics. These abnormalities are important as prognostic indicators and key strategies formaking treatment decisions. Deletions of 13q14, 11q22, and 17p13, and trisomy 12 are the most frequent chromosomal abnormalities in CLL. 
In this study, MLPA results using SALSA MLPA kit P037-A2/P038-A2 were compared with results from conventional cytogenetics and FISH and assesed the suitability of MLPA technology as a method for detecting a variety of known chromosomal abnormalities in 41 CLL patients. It is also used DSP30+IL-2 combinations as mitotic stimulant agents because of the low mitotic index of CLL cells in conventional cytogenetics.  Locus-specific probes for 11q22.3 (ATM), 13q14.3, and 17p13 (p53), and centromeric probe for chromosome 12 were used for FISH analysis.
Informative results were obtained from 80.04% of peripheral blood and bone marrow cultures. Among the 13 positive patients for trisomy 12 by conventional cytogenetics and FISH, 5 patients were normal by MLPA. The 13q14 deletions were detected in 20 patients by FISH and only 6 patients were normal by MLPA. In contrast, the 17p13 and 13q14 deletions were detected by MLPA but not conventional cytogenetics and FISH. We concluded that MLPA will give false negative results in patients of low level mosaicism for any abnormalities. In this study, it was determined that MLPA was not as sensitive at detecting mosaicism below 25-30% of cells as conventional cytogenetics and FISH. 
In conclusion, MLPA is a simple and cost-effective technique. But, we suggested that MLPA technique should used with conventional cytogenetics and FISH in detection of chromosomal abnormalities with potential clinical significance in CLL because MLPA technique was unsuitable for reliable detection  of  low level mosacisim and some abnormalities were detected by MLPA but not FISH.

Key Words : Chronic Lymphocytic Leukemia, MLPA, DSP30, IL-2