Escherichia coli ve Klebsiella pneumoniae Klinik İzolatlarında Plazmid Aracılı AmpC Beta- Laktamaz Tespiti
Detection of AmpC Beta-Lactamases in Clinical Isolates of Ecsherichia coli and Klebsiella pneumoniae
Yazar: SERPİL COŞKUN
Danışman: PROF. DR. NURTEN ALTANLAR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler-laktam = Antibiotics-lactam ; Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Beta laktamazlar = Beta lactamases ; Escherichia coli = Escherichia coli ; Karbapenemler = Carbapenems ; Klebsiella pneumoniae = Klebsiella pneumoniae ; Plazmitler = Plasmids

Özet:
Plazmid aracılı AmpC beta-laktamazların tespitine yönelik CLSI'nin önerisi bulunmamaktadır. Bu çalışma E. coli ve K. pneumoniae izolatlarında AmpC beta-laktamaz prevalansını araştırmak ve fenotipik yöntemleri karşılaştırmak amacıyla yapılmıştır.Sefoksitin dirençli 96, sefoksitin duyarlı 130 izolat olmak üzere toplam 226 izolat çalışmaya alınmıştır.Tarama testi pozitif olan izolatlara boronik asit-klavulonatla (BA-CA) inhibisyon test, AmpC disk test, spot inokülasyon test, üç boyutlu test, modifiye üç boyutlu test ve disk antagonizm testi ile multipleks PCR uygulandı.BA-CA testi ile sefoksitin dirençli 96 izolatın 53'ünde (%55,2), sefoksitin duyarlı 130 izolatın 17'inde (% 13) AmpC pozitif olarak tespit edildi.Multipleks PCR ile BA-CA testi pozitif, sefoksitin dirençli 53 izolatın 43'ünde (% 81,1) ampC geni saptanmıştır. AmpC enzim üreten izolatların büyük çoğunluğu CIT ailesine ait AmpC beta-laktamazlar olup, hiç birinde FOX, DHA ve ACC ailesine ait AmpC beta-laktamaza rastlanmadı.AmpC disk testi ile modifiye üç boyutlu test, PCR ve BA testi referans test olarak değerlendirildiğinde AmpC disk testinin sensitivitesi % 67,5, modifiye üç boyutlu testin sensitivitesi % 70 iken her ik testin spesifitesi % 60 olarak bulunmuştur.Üç boyutlu test, PCR-AmpC pozitif 4 izolatın ikisinde pozitif (% 50) sonuç vermiştir.Spot inokulasyon testi, PCR-AmpC pozitif bulunan 43 izolatın 1'inde (% 2,3) pozitif sonuç vermiştir.CLSI'nin önerileri doğrultusunda yapılan GSBL testinde 21 izolat pozitif olarak saptandı, ancak BA ilave edildikten sonra AmpC enzimin inhibisyonuna bağlı olarak GSBL sayısı 25'e ulaşmıştır.Sonuç olarak; AmpC beta-laktamaz ve GSBL'nin tespiti için BA-CA inhibisyon testi uygulanması basit ve yorumu kolay bir testtir.

Abstract:
There is no CLSI guideline for AmpC beta-lactamase detection.The aim of this study was to investigate the prevalences of AmpC enzyme and compared to the phenotypic tests in isolates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.A total of 226 isolates (cefoxitin resistant: 96, cefoxitin susceptible:130) were included in this study.Screen positive isolates were selected for boronic acid-clavulonic acid inhibition test, AmpC disk test, modified three dimensional test, spot inoculation test, three dimensional test, disk antagonism test and multiplex PCR were used.BA-CA test yielded positive result in 53 (55,2 %) of 96 cefoxitin resistant isolates and 17 (13 %) of 130 cefoxitin susceptible isolates.Fourty-three (81,1 %) of 53 BA-CA positive isolates harbored ampC genes as demostrated by multiplex PCR. Most of the AmpC beta-lactamases were CIT family of AmpC enzymes and we couldn?t detected FOX, ACC and DHA family.When used BA-CA inhibition test and multiplex PCR as reference test; the sensitivities of AmpC disk test and modified three dimensional test were 67,5 % and 70 % respectively. The specifiticies of both of them were 60 %.Spot inoculation test, yielded positive result in 1 (2,3 %) of 43 AmpC enzyme producers.Three dimensional test yielded positive result in 2 of 4 AmpC enzyme producers.Used combination disk method of CLSI for detection of ESBL yielded positive result in 21 isolates. When BA was added to this test, the number of positive isolates of ESBL increased to 25 due to inhibition of AmpC with BA.İn conclusion, BA-CA inhibition test is simple to perform and easy to interpret for the detection of AmpC beta-lactamases and ESBL.