Staphylococcus aureus suşlarında çeşitli virulans faktörlerinin araştırılması
The investigation of several virulence factors in Staphylococcus aureus strains
Yazar: İREM YARLI
Danışman: DOÇ.DR. ÖZDEN BÜYÜKBABA BORAL
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2005
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
ÖZET Bu çalışmada çeşitli klinik örneklerden izole edilen 60 MRSA ve 60 MSSA olmak üzere toplam 120 S.aureus susu ile çalışılmıştır. Bu suşların tüpte koagülaz, TNaz ve DNaz özellikleri araştırılmış, tüm suşlarda tüpte koagülaz, TNaz aktivitesi belirlenirken, 120 susun 97'sinde DNaz aktivitesi saptanmıştır. DNaz testinin duyarlılığının %80, özgüllüğünün ise %100 olduğu belirlenmiştir. Protein A belirlenmesi için "Staphytect Plus Oxoid" kiti kullanılmış, 60 MRSA susunun 55'inin, 60 MSSA susunun ise 53'ünün Protein A ürettiği saptanmış ve bu iki grup arasında anlamlı bir fark olmadığı belirlenmiştir (p=0.76). B/S üretiminin belirlenmesi için KKA ve SMPY'leri kullanılmıştır. KKA'da MRSA suşlarının 36 (%60)'sında, 60 MSSA susunun ise 37 (%62)'sinde B/S üretimi saptanmıştır. SMPY'inde ise 60 MRSA susunun 52 (%87)'sinde, MSSA suşlarının ise 49 (%82)'unda B/S üretimi saptanmıştır. Tüm S.aureus suşları için 2 yöntem karşılaştırıldığında, KKA'da 73 (%61) suş için B/S üretimi saptanırken, SMPY'de 120 S.aureus susunun 101 (%84)'inde B/S üretimi belirlenmiştir. S.aureus suşlarının pigmentasyon özellikleri Baird-Parker ağarda incelenmiştir. MRSA suşlarının 45 (%75)'inde, MSSA suşlarının 46 (%77)'sında bu pigment gözlenmiştir, a toksin ve p toksin saptanması için insan ve koyun kanlı besiyerleri kullanılmıştır. 60 MRSA susunun 55 (%92)'i a toksin üretirken, 60 MSSA susunun 22 (%37)'si bu toksini üretmiştir. Aradaki farkın MRSA suşları açısından ileri derecede anlamlı olduğu belirlenmiştir (p<0.001). MRSA suşlarının ise sadece 5 (%8)'inde p toksin üretimi saptanırken, MSSA'ların 35 (%58)'inde bu toksin belirlenmiş ve aradaki farkın istatistiksel olarak MSSA için anlamlı olduğu saptanmıştır (p<0.001). KVR'u 1/100.000'lik kristal viyole ilaveli 44nutrient ağarda incelenmiştir. MRSA suşlarının 49 (%81)'unda, MSSA suşlarının ise 28 (%47)'inde KVR özelliği pozitif olarak saptanmış ve bu sonuçların da MRSA için anlamlı olduğu belirlenmiştir (p<0.001). iki virulans faktörünün birarada taşıma bakımından yapılan incelemelerde; a toksin ve B/S üretimi yapan 48 (%80) MRSA susu ve 19 (%32) MSSA susu saptanmış ve aradaki farkın MRSA için anlamlı olduğu belirlenmiştir (p<0.001). |3 toksin ve B/S üretimi, MRSA suşlarının %7'sinde, MSSA suşlarının ise %47'sinde saptanmış ve aradaki fark MSSA suşları için anlamlı bulunmuştur (p<0.001). B/S üretimi ile KVR özelliğinin pozitif olduğu 42 (%70) MRSA susu ile, 23 (%38) MSSA susu belirlenmiştir. Aradaki farkın istatistiksel olarak anlamlı olduğu gözlenmiştir (p<0.001). a toksin üretimi ile KVR'u pozitif 48 (%80) MRSA susu saptanırken, MSSA suşlarında bu oran %18 olarak belirlenmiştir. Aradaki farkın anlamlı olduğu saptanmıştır (p<0.001). B/S üretimi+a toksin üretimi+KVR pozitifliği, MRSA suşlarının 42 (%70)'sinde, MSSA suşlarının ise 10 (%17)'unda belirlenmiş, aradaki farkın anlamlı olduğu gözlenmiştir (p<0.001). Sonuç olarak; MRSA ve MSSA suşları arasında incelenen altı ayrı virulans faktörünü taşıma açısından belirgin bir fark bulunmamış, ancak bu virulans faktörlerini ikili veya üçlü olarak birarada taşıma yönünden bakıldığında, MRSA suşlarının KVR + B/S, a toksin + B/S, a toksin + KVR ve a toksin + KVR + B/S taşıma yönünden MSSA suşlarına göre istatistiksel olarak ileri derecede anlamlı olduğu gözlenmiştir. 45

Abstract:
SUMMARY The Investigation of several virulance factors in Staphylococcus aureus strains In this study 60 MRSA and 60 MSSA in total 120 S.aureus strains from several clinical materials were studied. TNase, DNase and tube coagulase activities of these strains were studied. In all S.aureus strains, TNase and tube coagulase activities were detected, but in 97 of 120 strains the DNase activity was not detected. The sensitivity and the spesificity of DNase are 80% and 100% respectively. To determine Protein A, an Oxoid kit called "Staphytect Plus" is used. The Protein A production of 55 of 60 MRSA strains and 53 of 60 MSSA strains were detected and there were no any differences between these two groups (p=0.76). To determine the B/S production, CRA and SMP methods were used. In CRA, 36 (60%) of MRSA strains and in 37 (62%) of MSSA strains were detected as B/S producers. In SMP assay, 52 (87%) of MRSA and 49 (82%) of MSSA strains were B/S producers. When these 2 methods were compared to each other in 120 S.aureus strains, with CRA and SMP methods 73 (61%) and 101 (84%) S.aureus strains were detected respectively as B/S producers. The pigmentation characteristics of S.aureus strains were observed on Baird-Parker agar. This pigment was observed in 45 (75%) MRSA and 46 (77%) MSSA strains. To detect a and B toxin two media that were prepared with 5%human and sheep blood, were used. 55 (92%) of 60 MRSA strains, 22 (37%) of 60 MSSA produced a toxin. The difference between two groups, was significant for MRSA strains (p<0.001). In 5 (8%) MRSA strains and 35 (58%) of MSSA strains produced B toxin and this difference was significant for MSSA (p<0.001). CVR was observed on nutrient agar which include 1/100.000 crystal violet stain. In 49 (81%) 46MRSA and in 28 (47%) MSSA strains, CVR were detected as positive and this results were also significant for MRSA strains (p<0.001). When two virulence factors studied together; a toxin and B/S production were found together in 48 (80%) MRSA and 19 (32%) MSSA strains and the difference between them was significant for MRSA (p<0.001). In 7%of MRSA and 47%of MSSA, B toxin and B/S production were detected together so this difference was significant for MSSA (p<0.001). B/S production and CVR positivity were detected together in 42 (70%) of MRSA strains and 23 (38%) of MSSA strains. The difference was significant in statistical analyses (p<0.001). 48 (80%) of MRSA and 18%of MSSA strains have produced a toxin and CVR positivity. The difference was significant (p<0.001). When B/S production, a toxin production and CVR positivity were studied together, 42 (70%) of MRSA and 10 (17%) of MSSA strains were detected and also the difference was significant (p<0.001). In conclusion, there was no important difference between MRSA and MSSA strains for these six virulence factors, but when these six vinulence factors studied in double or triple groups, the production of CVR + B/S, a toxin + B/S, a toxin + CVR and a toxin + CVR + B/S in MRSA strains were more significant than MSSA in statistical analyses. 47