Meme kanseri MDA MB 435 hücre serisinde IGFBP-2 ve IGFBP-5'in IGFBP PTEN regülasyonu üzerine etkisi
The effects of IGFBP-2 and IGFBP-5 on IGFBP regulation in MDA-MB 435 breast cancer cell line
Yazar: SEVGİ KARABULUT
Danışman: ÖĞR. GÖR. MUSTAFA AKKİPRİK
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
İnsülin benzeri büyüme faktörü (IGF) sisteminin hem normal doku gelişiminde hem meme kanserinde etkin bir rol oynadığı bilinmektedir. IGFBP2'nin ekspresyonunun tümör baskılayıcı bir gen olan Fosfataz ve Tensin Homolog Proteini (PTEN) tarafından regüle edildiği çeşitli çalışmalarda rapor edilmiştir. Bu çalışmada IGFBP2 ve IGFBP5 proteinleri arasında nasıl bir etkileşim olduğu ve IGFBP5 gen ekspresyonundaki artışın meme kanseri hücre serisinde neden olduğu baskılayıcı etkisinin serin/treonin kinaz (Akt) sinyal ileti yolağını regüle eden PTEN geni üzerinden olup olmadığı ve diğer bir IGF bağlayıcı protein olan IGFBP2 ekspresyonuna nasıl bir etki oluşturduğunu araştırılmıştır. Bu amaç doğrultusunda IGFBP5 eksprese etmeyen MDA-MB-435 meme kanseri hücre serilerine lipozomal yöntemle IGFBP5 geni transfekte edilmiş ve IGFBP2 ekspresyonundaki değişimler western blot ile incelenmiştir. Gen transfekte edilen hücrelerde ve kontrol hücrelerinde hücre canlılığı tripan blue testi ile ölçülmüştür. Bu çalışmada IGFBP5 gen transfeksiyonun IGFBP2 ekspresyonu üzerine arttırıcı etkisi gözlemlenmiştir. Fakat PTEN, p-Akt, total Akt protein ekspresyonu açısından IGFBP5 gen transfeksiyonu gerçekleştirilen hücreler ile kontrol hücreleri arasında bir fark bulunamamıştır. ß-aktin kontrol amaçlı kullanılmıştır. IGFBP5 gen transfeksiyonu hücre proliferasyonunu baskılamıştır. Sonuç olarak, IGFBP5 artışının MDA-MB-435 meme kanseri hücre serisinde IGFBP2 protein artışını tetiklediği ve bunun tümör baskılayıcı bir özelliğe katkı sağladığı düşünülmektedir. Ayrıca PTEN yolağının bu mekanizmada bir rolü olmadığı tespit edilmiştir.

Abstract:
Breast cancer is the second major lethal type of cancer which is responsible for women death. The researchers have identified lots of genes that are responsible for breast cancer. IGF play a key role on both normal tissue progression and breast cancer. IGFBP can both block and stimulate the mitogenic effect of IGF ligands.A recent study is suggested that IGFBP2 expression is regulated by a tumor suppressor gene called PTEN. In this study, we investigated the correlation between IGFBP2 &IGFBP5 proteins and whether there is an correlation between IGFBP5 and PTEN which has a key role in breast cancer progression and we examined whether the suppressor effect of an increase of IGFBP5 gene expression in breast cancer cell line is on PTEN gene-which regulates Akt signal transduction pathway and whether it has an effect on IGFBP2 expression which also is another IGF binding protein. In this aim, IGFBP5 gene will be transferred to MDA-MB-435 breast cancer cell line-which cannot express IGFBP5 and the changes in IGFBP2 expression will be analyzed by western blotting. Cell proliferation analysis has been done via tyrpan blue exclusion test in the cells which was transfected by IGFBP5 gene and in the control cells. In this study we observed that IGFBP5 gene transfection increase IGFBP2 protein expression. But there has been no difference in amount of PTEN, p-Akt, total Akt between cells which has been transfected by IGFBP5 gene and control cells. ß-actin was used as a control. Its expression was not different between two cell groups. IGFBP5 gene transfection has suppresssed cell proliferation. We conclude that increasing of IGFBP5 stumulates IGFBP2 protein expression in MDA-MB-435 breast cancer cell line and this effect might be contributed its tumor suppression feature and PTEN signalling pathway do not involve in the mechanism.