Saos-2 osteosarkoma hücre hattında baicalein'in Wnt/β-katenin yolağına ve MiR-25 ifadesine etkisi
The effect of baicalein on Wnt/β-catenin pathway and MiR-25 expression in Saos-2 osteosarcoma cell line
Yazar: ESRA ÖRENLİLİ YAYLAGÜL
Danışman: PROF. DR. CELAL ÜLGER
Adnan Menderes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Osteosarkoma, en sık karşılaşılan primer kemik kanseri olup sıklıkla çocuklarda ve ergenlerde yüksek oranda ortaya çıkmaktadır. Bir flavonoid olan baicalein, biyolojik ve farmasötik etkilerini geniş bir yelpazede göstermektedir ve bunların arasında güçlü anti-tümör aktivitesi son yıllarda büyük ilgi görmektedir. MikroRNA'lar, insan kanserlerinin başlatılması ve ilerlemesinde değişiklikler içeren küçük düzenleyici RNA'ların bir sınıfını oluşturmaktadır. Son zamanlarda mikroRNA-25 (miR-25)'in insan kanserlerinde birçok kritik süreçte yer aldığı bulunmuştur. Bu çalışmada osteosarkoma hücre hattı Saos-2'de baicaleinin ve miR-25'in Wnt/β-katenin sinyal yolağı üzerine etkisi araştırılmıştır. Hücre canlılığı ve apoptoz saptanmış, Wnt/β-katenin sinyal yolağı ile ilişkili β-katenin, GSK-3β, Axin2 ve LRP-5 mRNA ve protein ifadeleri belirlenmiştir. Saos-2 hücrelerinde baicalein IC50 ve AP50 değerleri sırasıyla 35 µM ve 50 µM olarak bulunmuştur. Baicaleinin doza bağlı olarak Saos-2 hücrelerinde proliferasyonu inhibe ettiği ve apoptozu tetiklediği aynı zamanda miR-25 ifadesini artırdığı saptanmıştır. Baicalein uygulaması ve miR-25 mimik tranfeksiyonu β-katenin, Axin2 ve LR5 ifadesinde düşüş meydana getiriken GSK-3β ifadesi artmıştır. Anti-miR-25 uygulaması GSK-3β ve LR5 ifadelerini düşürürken β-katenin ve Axin2 ifadelerinde artış meydana getirmiştir. Bu bulgular, baicaleinin Wnt/β-katenin yolağı ile ilgili genleri miR-25 ifadesini düzenliyerek hedef alabileceğini ve osteosarkoma tedavisi için potansiyel bir Wnt/β-katenin yolağı inhibitörü olabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Osteosarcoma is the most common primary bone malignancy which occurs frequently in children and adolescents. The flavonoid baicalein, shows a wide range of biological and pharmaceutical effects, with its potent antitumor activity raising great interest in recent years. MicroRNAs are emerging as a class of small regulatory RNAs whose alterations are implicated in the initiation and progression of human cancers. MicroRNA-25 (miR-25) has recently been found to be involved in many critical processes in human cancers. In this study, the effect of baicalein and miR-25 on Wnt/β-catenin signaling pathway in osteosarcoma cell line Saos-2 was investigated. Cell viability and apoptosis was assessed, mRNA and protein expressions of β-catenin, GSK-3β, Axin2 and LRP-5, which are associated with the Wnt/β-catenin signaling pathway, were determined. In Saos-2 cells, baicalein IC50 and AP50 values were found to be 35 µM ve 50 µM, respectively. It is indicated that baicalein can inhibit the proliferation and induce apoptosis and also increase miR-25 expression of Saos-2 cells in a dose-dependent manner. Baicalein treatment and miR-25 mimic transfection decreased the expression of β-catenin, Axin2 and LRP-5, while increasing the expression of GSK-3β. Anti-miR-25 treatment decreased the expression of GSK-3β and LRP-5, while β-catenin and Axin2 expression increased. These findings demonstrate that baicalein may target genes related to the Wnt/β-catenin pathway by regulating miR-25 expression and may be a potential Wnt/β-catenin pathway inhibitor for osteosarcoma therapy.