Hiperkolesterolemi ile oluşturulan non-alkolik karaciğer yağlanması karaciğerdeki moleküler mekanizmanın incelenmesi
Investigation of molecular mechanisms of non-alcoholic fatty liver induced BY hypercholesterolemia in liver
Yazar: ESRA ÖZALTIN
Danışman: PROF. DR. NESRİN KARTAL ÖZER
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Hiperkolesterolemi = Hypercholesterolemia ; Karaciğer yağlanması = Fatty liver ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Reseptörler = Receptors ; Reseptörler-sitoplazmik ve nükleer = Receptors-cytoplasmic and nuclear ; Transforme edici büyüme faktörleri = Transforming growth factors ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors

Özet:
Non-alkolik karaciğer yağlanması (NAKY), hepatosit hasarı, enflamasyon ve fibrozise neden olan aynı zamanda siroza, karaciğer hasarına ve hepatoselülerkarsinoma neden olabilecek yaygın karaciğer hastalıklarından biridir. Genetik ve çevresel koşulların dışında kolesterolden zengin diyet ile beslenilmesi non-alkolik karaciğer yağlanmasına neden olan faktörler arasında yer alır. Bu çalışmamızdahiperkolesterolemik tavşanlarda oluşturulan non-alkolik karaciğer yağlanmasının moleküler mekanizmasınınincelenmesi planlanmıştır. Çalışmamızda, 1-2 aylık 24 adet erkek albino tavşan 4 farklı gruba ayrıldı: (i) Vitamin E den fakiryemilebeslendi. (ii) Vitamin E den fakiryemilebeslendivevitamin E i.m. olarak 50 mg/kg/gün uygulandı.(iii) % 2 kolesteroliçerenvitaminE'denfakiryemilebeslendi. (iv)% 2 kolesteroliçeren Vitamin E den fakiryemilebeslendive vitamin E i.m. olarak 50 mg/kg/gün uygulandı. Sekiz hafta sonunda, karaciğer dokularından alınan kesitler ışık mikroskobu ile incelendi ve kolesterol ile beslenen tavşanlarda non-alkolik karaciğer yağlanması gelişirken, vitamin E verilen tavşanlarda lipit birikiminin ve α-SMA, RAM11, col1A1, 4HNE oluşumunun azaldığı gözlendi.
Hiperkolesterolemik diyetin daha ileri etkilerini incelemek amacıyla karaciğer dokusunda CD36, MMP-9, NF-κB, PPARγ, TGF-β1, TNF-α, ve protein ekspresyonları immunblotlama tekniği ile karşılaştırılmalı olarak incelendi ve vitamin E'nin bu değişiklikler üzerine olan etkisi araştırıldı. Bu çalışma sonucunda, karaciğer dokusunda PPAR-γ protein ekspresyonlarının ise kolesterol grubunda kontrollere göre azaldığı, kolesterol+vitamin E grubunda kolesterol grubuna kıyasla arttığı bulundu. CD36, TNF-α, TGF-β1 ve NF-κB protein ekspresyonları ise kolesterol grubunda, kontrol grubuna göre yüksek oranda artış gösterirken, kolesterol+vitamin E verilen grupta bu artışın baskılandığı gözlendi. Kolesterol grubunda MMP-9 protein ekspresyonlarında kontrol grubuna kıyasla önemli bir değişiklik olmazken kolesterol+vitamin E grubunda MMP-9 protein ekspresyon seviyelerinin kontrol grubuna kıyasla düştüğü gözlendi.

Anahtar Kelimeler: CD36, Hiperkolesterolemi, NF-κB, PPAR-γ, TGF-β1

Abstract:
Non-alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) is one of the common liver diseases that leads to hepatocyte injury, inflammation, fibrosis andcan lead tocirrhosis,liver failure, and hepatocellular carcinoma.Besidesseveralgeneticandenvironmentalfactors,cholesterolrichdiet is consideredto be inducingfactors of NAFLD. In the study, we have planned that investigation of molecularmechanisms of non-alcoholicfattyliverdeveloped in hypercholesterolemicrabbits.Thirty-twomale albino rabbitswererandomlyseperatedtofourgroupsandfedwith: (i) vitamin E deficientdiet, (ii) vitamin E deficientdietwithdailyintramuscularinjections of vitamin E (50 mg/kg), (iii) vitamin E deficientdietcontaining 2% cholesterol, (iv) vitamin E deficientdietcontaining 2% cholesterolwithdailyintramuscularinjections of vitamin E (50 mg/kg).Aftereightweeks, livertissuesectionswereexaminedbylightmicroscopy. While NAFLD wasdeveloped in therabbits fed withcholesterol, it wasobservedthatlipidaccumulationanddeveloping of α-SMA, RAM11, col1A1, 4HNE decreased in therabbitsfed withcholesterol + vitamin E. 
Inordertoinvestigatefurthereffects ofhypercholestrolemicdiet, protein expressions of PPAR-γ, CD36, TNF-α, TGF-β1, NF-κBand MMP-9 in theliverwerecomperativelyexaminedbyimmunoblottingandeffects of vitamin E on thesechangeswereinvestigated. At theend of thestudy, it wasfoundthat in cholesterolgroup,PPAR-γ protein expressions of livertissuesdecreasedcomparedtocontrolgroupandincreased in cholesterol+ vitamin E groupcomparedtocontrolgroup.BothCD36, TNF-α, TGF-β1 and NF-κBprotein expression were increased in cholesterol group compared tocontrol group but this increasing decreased incholesterol+vitamin E group.Whereas MMP-9 protein expressiondid not showsignificantchanges in cholesterolgroupcomparedtocontrolgroup, it wasobservedthatprotein expressionslevels of MMP-9decreasedcomparedtocontrolgroupin cholesterol + vitamin E group.

Keywords: CD36, Hypercholesterolemia, NF-κB, PPAR-γ, TGF-β1