Ratlarda kuersetinin siyatik sinir hasarında terapötik etkisi
Therapeutic effect of quercetin on sciatic nerve injury in rats
Yazar: HALİL ALAKUŞ
Danışman: PROF. DR. MUHAMMED ENES ALTUĞ ; PROF. DR. ALİ SAİD DURMUŞ
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Cerrahi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Fonksiyonel iyileşme = Recovery of function ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kaspazlar = Caspases ; Kuersetin = Quercetin ; Periferik sinir hasarları = Peripheral nerve injuries ; Siyatik sinir = Sciatic nerve ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmada, siyatik sinirde ezilme yaralanması sonrası ortaya çıkacak hasara karşı kuersetinin nöroprotektif ve terapötik etkinliğinin ortaya konması amaçlandı.
Çalışmamızda 250-300 gr canlı ağırlığa sahip, 70 adet erişkin Wistar Albino erkek rat kullanıldı. Çalışma grupları; kontrol, sham, DMSO (araç) ve kuersetin grubu olmak üzere 4 ana gruptan oluşturuldu. Kontrol grubu hariç diğer gruplar 1. gün, 21. gün ve 42. gün olmak üzere 3 alt gruba ayrıldı. Toplamda 10 grup ve her grupta 7 adet rat kullanıldı (n=7). Ratlarda siyatik sinir hasarı anevrizma klipsi (FE-752K aneurysm clip, Aesculap AG & Co., Tutlingen, Germany) ile 60 saniye boyunca sıkıştırılarak oluşturuldu. Kontrol grubuna herhangi bir işlem uygulanmadı ve 42 gün takip edilerek sakrifiye edildi. Sham gruplarına siyatik sinir hasarı oluşturuldu ve 1, 21 ve 42. günlerde sakrifiye edildi. DMSO gruplarında siyatik sinir hasarı oluşturulup 1 ml %0.5 DMSO, 1 günlük gruba 1 gün, 21 günlük gruba 21 gün, 42 günlük gruba ise 42 gün boyunca içirildi ve DMSO grupları 1, 21 ve 42. günlerde sakrifiye edildi. Kuersetin gruplarında siyatik sinir hasarı oluşturulup 200 mg/kg/gün dozunda kuersetin, 1 günlük gruba 1 gün, 21 günlük gruba 21 gün, 42 günlük gruba ise 42 gün boyunca içirildi ve kuersetin grupları 1, 21 ve 42. günlerde sakrifiye edildi. Ratlardan kan ve doku örnekleri alınarak histomorfometrik, biyokimyasal ve immunohistokimyasal olarak kuersetinin etkinliği değerlendirildi. Fonksiyonel değerlendirme için yürüyüş yolu analizi yapılarak siyatik fonksiyon indeksleri hesaplandı.
Kuersetinin, yürüyüş yolu analizlerinde 7. günden itibaren fonksiyonel dönüşe katkı sağladığı belirlendi. Kuersetin, biyokimyasal olarak kuersetin 21. gün grubunda serum MDA düzeyinde düşme sağlarken aynı zamanda serum GSH ve GPx düzeyinde artmaya neden oldu. Histomorfometrik ölçümler kuersetin 21. gün grubunda G oranı ve miyelinli akson sayısında artış sağladı. İmmunohistokimyasal olarak kuersetin 21. gün grubunda kaspaz-3 ile boyalı apoptotik hücre sayısını azalttı. Sonuç olarak; kuersetinin siyatik sinir hasarı sonrası 21. günde antioksidan ve antiinflamatuar etkisi ortaya konularak nöroprotektif ve terapötik etkinliğinin olduğu sonucuna varıldı.

Abstract:
In this study, it was aimed to reveal the neuroprotective and therapeutic efficacy of quercetin against damage to the sciatic nerve after crush injury.
In the study, 70 adult Wistar Albino male rats weighing 250-300 g were used. Working groups; It were formed from 4 main groups as control group, sham group, DMSO group (vehicle group) and quercetin group. Except for the control group, the other groups were divided into 3 subgroups as day 1, day 21 and day 42. A total of 10 groups and 7 rats in each group were used (n=7). Sciatic nerve injury was induced in rats by clamping the aneurysm clip (FE-752K aneurysm clip, Aesculap AG & Co., Tutlingen, Germany) for 60 seconds. No procedure was applied to the control group and they were sacrificed after 42 days. Sciatic nerve injury was induced in the sham groups and sacrificed on days 1, 21, and 42. Sciatic nerve injury was created in the DMSO groups, and 1 ml of 0.5% DMSO was given to the 1-day group for 1 day, the 21-day group for 21 days, the 42-day group for 42 days, and the DMSO groups were sacrificed on the 1st, 21st and 42nd days. Sciatic nerve injury was created in the quercetin groups and quercetin at a dose of 200 mg/kg/day was given to the 1-day group for 1 day, the 21-day group for 21 days, the 42-day group for 42 days, and the quercetin groups were sacrificed on the 1st, 21st and 42nd days. The efficacy of quercetin was evaluated histomorphometrically, biochemically and immunohistochemically by taking blood and tissue samples from the rats. For functional evaluation, sciatic function index were calculated by performing walking tracking analysis.
It was determined that quercetin contributed to functional return from the 7th day in walking tracking analysis. Quercetin, biochemically, caused a decrease in serum MDA levels in the quercetin day 21 group, while at the same time it caused an increase in serum GSH and GPx levels. Histomorphometric measurements increased the G ratio and the number of myelinated axons in the quercetin Day 21 group. Immunohistochemically, quercetin reduced the number of apoptotic cells stained with caspase-3 in the Day 21 group. As a result; Antioxidant and anti-inflammatory effects of quercetin were demonstrated on the 21st day after sciatic nerve injury, and it was concluded that it had neuroprotective and therapeutic effects.