FOXM1 transkripsiyon faktörü inhibisyonunun meme kanserinde metastaz üzerine potansiyel etkilerinin incelenmesi
Investigation of potential effects of FOXM1 transcription factor inhibition on metastasis in breast cancer
Yazar: FUNDA DEMİRTAŞ KORKMAZ
Danışman: PROF. DR. ABDULLAH EKMEKÇİ ; DOÇ. DR. İREM DOĞAN TURAÇLI
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Selumetinib = Selumetinib ; Thiostrepton = Thiostrepton ; Transkripsiyon faktörleri = Transcription factors ; İnhibisyon = Inhibition

Özet:
FoxM1, pek çok kanserde aşırı ifade edilen, hücre göçü, invazyonu, anjiogenez ve metastaz süreçlerinde önemli rolü olan onkogenik bir transkripsiyon faktörüdür. Bu çalışmada metastatik özellikte olan 4T1 hücreleri ve bu hücreler ile oluşturulmuş allograft Balb/C fare modelinde FoxM1 inhibisyonunun tek başına ve FoxM1'in çekirdeğe göçünde etkili olan MEK inhibisyonunun, hücre canlılığı ve metastaz parametreleri üzerine etkisini inceledik. Hücre canlılığı MTT testi kullanılarak, in vitro ve in vivo protein ifadeleri western blot ve immunohistokimya yöntemleriyle, uPA aktivitesi enzimatik yöntemlerle belirlenmiştir. MTT sonuçlarına göre Thiostrepton'un (FoxM1 inhibitörü) 24 saat ve 48 saat IC50 değeri 4 μM olarak belirlenirken, Selumetinib'in (MEK inhibitörü) IC50 değeri 24 saat için 8 μM, 48 saat için 6 μM olarak belirlenmiştir. Her iki inhibitörün de IC50 konsantrasyonları tek başına ve kombine verildiğinde FoxM1, ERK, p-ERK, Twist, E-cadherin, Vimentin ifadeleri üzerinde etkili olduğu belirlenmiştir. In vivo sonuçlarımıza göre Thiostrepton tek başına metastazla ilişkili proteinlerin çoğunda etkili olurken, Selumetinib ile kombine uygulamalarda sadece Twist, MMP-2 ve MMP-9 proteinlerin ifadesini azaltmıştır. İmmunhistokimyasal olarak ise Thiostrepton ve kombine grupta FoxM1 ifadesinin tümörde boyama şiddetini azalttığı görülürken, FoxM1'in daha çok lenfoid hücrelerdeki varlığı belirlenmiş ve sitoplazmik ve membranöz lokasyonda olduğu gözlenmiştir. Sonuçlarımıza göre FoxM1 inhibisyonunun Thiostrepton ile sağlanması üçlü negatif meme kanseri hücrelerinin metastaz potansiyelini azaltabilir ve MEK inhibisyonu veya diğer kemoterapötiklerle bu etkinin artırılabileceği düşünülebilir.

Anahtar Kelimeler : FoxM1, Selumetinib, Thiostrepton, üçlü negatif meme
kanseri, metastaz

Abstract:
FoxM1 is an oncogenic transciption factor that is overexpressed in many cancer types. It plays important roles in cell migration, invasion, angiogenesis and metastasis. In this study, we investigated the effects of FoxM1 inhibition alone and in combination with MEK inhibition which is a FoxM1's nuclear localization regulator on cell viability and metastasis parameters in 4T1 cells and its allograft Balb/C mouse model. Cell viability was determined by MTT assay, in vitro and in vivo protein expressions were analyzed by western blot and immunohistochemical methods, and uPA activity was determined by enzymatic methods. According to MTT results, the IC50 value of Thiostrepton (FoxM1 inhibitor) was determined as 4 μM for 24 h and 48 h, IC50 value of Selumetinib was determined to be 8 μM for 24 hours and 6 μM for 48 hours. Both inhibitors were found to be effective on the expressions of FoxM1, ERK, p-ERK, Twist, E-cadherin and Vimentin when IC50 concentrations of both inhibitors were given alone and in combination. According to our in vivo results, Thiostrepton was effective alone in most of the metastases related proteins. However, Thiostrepton and Selumetinib combination was only effective in Twist, MMP-2 and MMP-9 expressions. Immunohistochemically, FoxM1 expression intensity was decreased with Thiostrepton alone and in combination with Selumetinib in tumors where as FoxM1 was detected more in lymphoid cells and cytoplasmic and membranous loci. Our results suggest that FoxM1 inhibition with Thiostrepton may reduce the potentials for metastasis of triple-negative breast cancer and this effect can be increased by MEK inhibition or other chemotherapeutics.

Keywords : FoxM1, Selumetinib, Thiostrepton, triple negative breast
cancer, metastasis