Ratlarda deneysel olarak oluşturulmuş miringoskleroz modelinde topikal plateletten zengin plazma kullanımının etkisi
Effect of using topical platelet-rich plasma on an experimental created myringosclerosis model in rat
Yazar: NAFİZ TUFAN VAROL
Danışman: PROF. DR. NECMİ ARSLAN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Antalya Sağlık Uygulama ve Araştırma Merkezi / Kulak Burun Boğaz Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)

Özet:
Amaç: Miringoskleroz, timpanik membranın lamina propriasının hyalinizasyonu ve takiben kalsifikasyonu ile karakterize bir durumdur. Miringoskleroz oluşumuna perforasyonla seyredebilen akut süppüratif otitis media, kronik otitis media, orta kulakta sıvı birikimiyle karakterize efüzyonlu otitis media, kulak zarının travma ile yırtılması veya efüzyonlu otitis medianın tedavisinde uygulanan miringotomi, ventilasyon tüpü yerleştirilmesi gibi işlemler sebep olur. Bunlar, kulak burun boğaz pratiğinde oldukça sık karşılaşılan patolojilerdir. Efüzyonlu otitis media tedavisinde kullanılan miringotomi ve ventilasyon tüpü yerleştirilmesi de kolaylıkla ve sık uygulanan bir girişimdir. Bu nedenle miringoskleroz, çoğu zaman asemptomatik seyretse de pratikte sık karşılaşılan ve zaman zaman morbiditeye sebep olabilen bir durumdur. PRP (Plateletten zengin plazma), bireyin kendi kanından belirli bir yöntem ile elde edilen serum preparatıdır. Elde etmesi oldukça kolay olmakla beraber; yapılan
çalışmalarda doku rejenerasyonunu desteklediği, antiinflamatuar ve antioksidan özelliği olduğu gösterilmiştir. Ortopedi, plastik ve rekonstrüktif cerrahi, dermatoloji gibi birçok branşta aktif olarak kullanılan PRP, kulak burun boğaz pratiğinde de özellikle otoloji alanında son zamanlarda gündeme gelmektedir. Ratlarda oluşturulan miringoskleroz modellerinde daha önce antioksidan ve antiinflamatuar özellik gösteren birçok madde denenmiştir. Ancak PRP'nin doku yenileyici, anti-inflamatuar ve antioksidan etkisinden yararlanılarak, serbest radikal artışı ve kronik inflamasyonla ilişkili olan miringoskleroz gelişimine etkisini araştıran herhangi bir çalışma bulunmamaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada ratlarda
oluşurulmuş miringoskleroz modelinde PRP kullanımının etkisi araştırıldı.

Gereç ve Yöntem: Çalışmada Sprague Dawley albino cinsi 26 adet rat kullanıldı. Ratlardan rastgele şekilde iki tanesi PRP hazırlanmak üzere ayrıldıktan sonra kalanlar rastgele şekilde üç gruba dağıtıldı. Çalışmanın birinci gününde; tüm gruplardaki ratların otomikroskopik muayenesi sonrasında, her üç gruptaki ratların bilateral timpanik membranlarına posterosuperior kadrana steril pik yardımıyla perforasyon oluşturuldu. Ardından her üç gruptaki ratların sol kulağına beş gün %0.9'luk serum fizyolojik damlatıldı. Grup 1'teki ratların sağ kulağına herhangi bir tedavi uygulanmadı. Grup 2'deki ratların sağ kulağına beş gün 0,4 mg deksametazon çözeltisi damlatıldı. Grup 3'deki ratların sağ kulağına beş gün taze hazırlanmış prp çözeltisi damlatıldı. Çalışmanın on beşinci gününde tüm gruplardaki ratların otomikroskopik muayenesi yapıldı. Hiçbir hayvanda dış veya orta kulakta enfeksiyon, adhezyon, perforasyon ya da retraksiyona rastlanmadı. Miringosklerotik lezyonlar dört puanlık skala kullanılarak semikantatif olarak değerlendirildi. Ardından ratlar sakrifiye edilerek timpanik membranları histopatolojik değerlendirme için disseke edildi. Preperatlar Hematoksilen-Eozin ve Masson-Trikrom ile boyanarak hazırlandı ve ışık mikroskobisi ile değerlendirme yapıldı.

Bulgular: Sadece miringotomi yapılan kulaklar ile deksametazon tedavisi uygulanan kulaklar arasında histopatoloji skoru (p<0,05), inflamatuar hücre sayısı (p<0,05) ve timpanik membran kalınlığı (p<0,05) açısından istatistiksel olarak anlamlı fark bulundu. Sadece miringotomi yapılan kulaklar ile PRP tedavisi uygulanan kulaklar arasında histopatoloji skoru (p<0,05), inflamatuar hücre sayısı (p<0,05) ve timpanik membran kalınlığı (p<0,05) açısından istatistiksel olarak anlamlı fark bulundu. PRP tedavisi verilen kulaklar ile serum fizyolojik (kontrol) verilen kulaklar arasında arasında otomikroskopi skoru (p<0,05), histopatoloji skoru (p<0,05), inflamatuar hücre sayısı (p<0,05) ve timpanik membran kalınlığı (p<0,05) açısından istatistiksel olarak anlamlı fark bulundu. Deksametazon tedavisi uygulanan kulaklar ile PRP tedavisi uygulanan kulaklar arasında ise değerlendirilen kriterlerden herhangi birinde istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmadı.

Sonuç: Timpanik membran hasarı sonucu oluşan miringosklerozun önlenmesinde plateletten zengin plazmanın ratlarda topikal olarak dış kulak yoluna uygulanması inflamasyonu azaltarak ve skleroz gelişimini önleyerek, daha ince bir zar yapısıyla iyileşme sağlamaktadır.

Anahtar kelimeler: Miringoskleroz, plateletten zengin plazma, doku yenilenmesi, mirinogotomi

Abstract:
Aim: Myringosclerosis is a condition characterized by hyalinization and subsequent calcification of the lamina propria of the tympanic membrane. Myringosclerosis is caused by acute suppurative otitis media with or without perforation, chronic otitis media, otitis media with effusion characterized by fluid accumulation in the middle ear, traumatic rupture of the tympanic membrane, or procedures such as myringotomy and ventilation tube placement performed in the treatment of otitis media with effusion. Those pathologies are frequently encountered in otolaryngology practice. Myringotomy and ventilation tube placement used in the treatment of otitis media with effusion is also an easily and frequently performed procedure. Therefore, although myringosclerosis is often asymptomatic, it is a condition frequently encountered in practice with a probability of causing morbidity. PRP (Platelet Rich Plasma) is a serum preparate obtained using a specific method from an individual's own blood. Although it is quite easy to obtain, studies have shown that it supports tissue regeneration and has anti-inflammatory and antioxidant properties. Actively used in many specialties such as orthopedics, plastic and reconstructive surgery, dermatology, PRP has recently gained importance in otolaryngology practice, especially in the field of otology. Many substances with antioxidant and anti-inflammatory properties have been tested in rat myringosclerosis models. However, there is no study investigating the effect of PRP by utilizing its tissue regenerative, anti-inflammatory and antioxidant effects on the development of myringosclerosis, which is associated with free radical increase and chronic inflammation, Therefore, in this study, the effect of PRP use in a rat myringosclerosis model was investigated.

Materials and Methods: In the study, 26 Sprague Dawley albino rats were used. After randomly separating two of the rats for PRP preparation, the remaining rats were randomly distributed into three groups. On the first day of the study; after otomicroscopic examination of rats in all groups, perforation was created in the posterosuperior quadrant of bilateral tympanic membranes of rats in all three groups with a sterile pick. Then, 0.9% saline solution was applied into the left ear of rats in all three groups for five days. No treatment was applied to the right ear of rats in Group 1. 0.4 mg dexamethasone solution was applied into the right ear of rats in Group 2 for five days. Freshly prepared PRP solution was applied into the right ear of rats in Group 3 for five days. Otomicroscopic examination of rats in all groups was performed on the fifteenth day of the study. No external or middle ear infection, adhesion, perforation or retraction was observed in any animal. Myringosclerotic lesions were assessed semiquantitative using a 4-point scale. The rats were then sacrificed and the tympanic membranes were dissected for histopathological evaluation. Preparations were done by staining with Hematoxylin-Eosin and Masson- Trichrome and evaluated by light microscopy.

Results: A statistically significant difference was found between ears that underwent only myringotomy and ears that received dexamethasone treatment in terms of histopathology score (p<0,05), inflammatory cell count (p<0,05) and tympanic membrane thickness (p<0,05). A statistically significant difference was found between ears that underwent only myringotomy and ears that received PRP treatment in terms of histopathology score (p<0,05), inflammatory cell count (p<0,05) and tympanic membrane thickness (p<0,05). A statistically significant
difference was found between ears that received PRP treatment and ears that received saline solution (control) in terms of otomicroscopy score (p<0,05), histopathology score (p<0,05), inflammatory cell count (p<0,05) and tympanic membrane thickness (p<0,05). No statistically significant difference was found between the ears treated with dexamethasone and those treated with PRP in any of the evaluated criteria.

Conclusion: In preventing myringosclerosis resulting from tympanic membrane damage, topical application of platelet-rich plasma to the external auditory canal in rats reduces inflammation and prevents the development of sclerosis, providing healing with a thinner membrane structure.

Keywords: Myringosclerosis, platelet-rich plasma, tissue regeneration, myringotomy