İki farklı genin (Güçlendirilmiş yeşil floresan protein geni, insan gamma interferon geni) ayrı ayrı veya birlikte mikroenjeksiyonunun transgenik fare eldesi üzerine etkilerinin araştırılması
Effects of seperate or simultaneous injection of two different genes (Enhanced green-fluorescence protein gene, human gamma interferon gene) on transgenic mice recovery
Yazar: KORHAN ARSLAN
Danışman: DOÇ. DR. HAYDAR BAĞIŞ ; PROF. DR. MUNİS DÜNDAR
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Sunulan çalışmada hIFN-? ve EGFP gen konstraktlarının farklı konsantrasyonları birlikte ve ayrı ayrı pronüklear safhadaki fare embriyolarına mikroenjekte edilmiştir. Mikroenjeksiyon deneyleri aktarılan gen konstraktlarının yalnız ve/veya birlikte aktarımlarına göre üç farklı deney grubu olarak sınıflandırılmıştır. I.Deney Grubunda hIFN-? ve EGFP genleri birlikte mikroenjekte edilmiş, toplam 759 mikroenjekte embriyo taşıyıcı annelere aktarılmıştır. Aktarımlar sonucunda toplam 39 yavru doğmuştur. Yapılan moleküler analizlerde toplam 3 yavrunun transgenik olduğu belirlenmiştir. Üç transgenik yavrudan 2'si EGFP transgenik, 1 tanesi ise hIFN-? transgenik dir. II.Deney Grubunda yalnız hIFN-? geni mikroenjekte edilmiş, toplam 518 mikroenjekte embriyo taşıyıcı annelere aktarılmıştır. Aktarımlar sonucunda toplam 21 yavru doğmuştur. Yapılan moleküler analizlerde toplam 2 yavrunun hIFN-? transgenik olduğu belirlenmiştir. III.Deney Grubunda yalnız EGFP geni mikroenjekte edilmiş, toplam 431 mikroenjekte embriyo taşıyıcı annelere aktarılmıştır. Aktarımlar sonucunda toplam 5 yavru doğmuştur. Bu yavrulardan elde edilen DNA'lar ile yapılan moleküler analizlerde transgenik yavruya rastlanmamıştır. Yapılan istatistiki değerlendirmede transgenlerin bir arada ya da ayrı ayrı mikroenjeksiyonlarının transgenik yavru eldesi üzerine anlamlı bir etkisinin olmadığı ortaya konmuştur ( p>0.05).Sunulan çalışmada elde edilen sonuçlar ile iki farklı genin birlikte mikroenjeksiyonu sonunda doğan yavruların transgenik yüzdelerinin yüksek olduğu ortaya konmuştur. Sunulan çalışmada geliştirilen protokolün transgenik fare üretim çalışmalarında uygulanması durumunda iki farklı geni ayrı ayrı veya birlikte taşıyan transgenik fare hatları elde edilebilecek, böylece ekonomi ve zaman açısından tasarruf sağlanabilecektir.Anahtar kelimeler: Transgen, mikroenjeksiyon, EGFP, hIFN-?, Ko-enjeksiyon

Abstract:
In this study, different concentrations of hIFN-? ve EGFP gene constructs were separately or simultaneously injected to mouse embryos at pronuclear phase. Micro-injection trials were classified in three different experiment groups according to alone or simultaneous transfer of gen constructs. In first trial group co-injection of hIFN-?+EGFP trans-genes were performed, total of 759 micro-injected embryos were transferred to carrier mothers. As a result of transfers, totally 39 neonates were born. In molecular analysis performed on DNAs obtained from those neonates, 2 were EGFP transgenic and 1 was hIFN-? transgenic. In second trial group micro-injection of hIFN-? trans-gene was performed, total of 518 micro-injected embryos were transferred to carrier mothers. As a result of transfers, totally 21 neonates were born. In molecular analysis performed on DNAs obtained from those neonates, totally 2 neonates were hIFN-? transgenic. In third trial group micro-injection of EGFP trans-gene was performed, total of 431 micro-injected embryos were transferred to carrier mothers. As a result of transfers, totally 5 neonates were born. In molecular analysis performed on DNAs obtained from those neonates, it was found that there were no transgenic neonates. When rate of recovered transgenic neonates was statistically examined, it was revealed that separate or simultaneous micro-injection of trans-genes has no statistically significant effect on transgenic mice recovery ( p>0.05).Results presented in present study found that transgenicity percentage of neonates born as a result of simultaneous micro-injection of two different genes was high. If the protocol presented in this study is applied to transgenic mice recovery studies, it is possible to recover transgenic mice carrying two different genes separate. Thus, it will be possible to save money and time.Key words: Trans-gene, Micro-injection, EGFP, hIFN-?, Co-injection