Laktik asit bakterilerinden ekzopolisakkarit izolasyonu ve biyolojik aktivitelerinin belirlenmesi
Isolation of exopolysaccharide from lactic acid bacteriaand determination of their biological activities
Yazar: AYGÜN MUSTAFAZADE
Danışman: PROF. DR. ZERRİN CANTÜRK
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu tez çalışmasında kolostrumdan izole edilen laktik asit bakterilerinden ekzopolisakkarit ekstraksiyonu yapılmıştır. Ekzopolisakkaritler bağışıklık sistemini geliştirici, kolesterolü düşürücü, antiülser ve antitümör gibi bir çok etkiye sahiptirler. İzole edilen laktik asit bakterilerinin laktik asit üretimi, hemolitik aktiviteleri, pH, safra tuzu ve asit dirençleri, klasik ve moleküler yöntemlerle tanımlanması, otoagregasyon, koagregasyon, biyofilm oluşturma yetenekleri, antibiyotik duyarlılıkları ve antimikrobiyal aktivitesi belirlenmiştir. İzole edilen ekzopolisakkaritler liyofilize edilerek HepG-2 hücre hattı üzerinde MTT yöntemi ile sitotoksik, Anneksin V-PI yöntemi ile apoptotik etkileri araştırılmıştır. Hücre içi ve hücre dışı sitokin seviyeleride akış hücremetrede belirlenmiştir. Moleküler tanımlama sonuçlarına göre tüm suşların L. rhamnosus olduğu belirlenmiştir. IC50 değerleri 3.02-6.5 mg/mL arasında bulunmuştur. Akış sitometri sonuçlarına göre; liyofilize EPS örneklerinin erken apoptoza neden olunduğu tespit edilmiştir. Sitokin sonuçlarına göre ise, TNF-α, IL-1β ve IL-6 sitokinlerde kontrola göre liyofilize EPS örneği uygulanmış hücrelerde azalma, IL-10 sitokininde ise artış olduğu belirlenmiştir. Laktobasillerden izole edilen ekzopolisakkaritlerin hem immünite hem de sitotoksik aktivite açısından önemli potansiyelleri bulunmaktadır.

Abstract:
In this thesis study, exopolysaccharide extraction was performed from lactic acid bacteria isolated from colostrum. Exopolysaccharides have many effects such as improving the immune system, lowering cholesterol, antiulcer and antitumor. Lactic acid production, hemolytic activity, pH, bile salt and acid resistance, identification by classical and molecular methods, autoaggregation, coaggregation, biofilm formation abilities, antibiotic susceptibility and antimicrobial activity of the isolated lactic acid bacteria were determined. The isolated exopolysaccharides were lyophilized and their cytotoxic effects were investigated using the MTT method and apoptotic effects were investigated using the Annexin V-PI method on the HepG-2 cell line. Intracellular and extracellular cytokine levels were also determined on a flow cytometer. According to the molecular identification results, all strains were determined to be
L. rhamnosus. IC50 values were found between 3.02 and 6.5 mg/mL. According to flow cytometry results, it was found that lyophilized EPS samples caused early apoptosis. According to the cytokine results, it was determined that there was a decrease in TNF-α, IL-1β and IL-6 cytokines in the cells treated with lyophilized EPS sample compared to the control, and an increase in the IL-10 cytokine. Exopolysaccharides isolated from lactobacilli have important potential in terms of both immunity and cytotoxic activity.