Myasthenia gravis hastalarının periferik kan hücrelerinde sitokin üretim düzeyleri
Cytokine production level of peripheral blood mononuclear cells in Myasthenia gravis
Yazar: VUSLAT YILMAZ
Danışman: PROF. DR. GÜHER SARUHAN DİRESKENELİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Artrit-romatoid = Arthritis-rheumatoid ; Asetilkolin = Acetylcholine ; Kan hücreleri = Blood cells ; Myasthenia gravis = Myasthenia gravis ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Myasthenia gravis (MG), nöromüsküler bileşkedeki nikotinik asetil kolin reseptörlerine (AChR) karşı gelişen otoantikor ile karakterize otoimmün bir hastalıktır. Hastalarda AChR ye (AP) veya kasa özgü kinaza karşı (MuSK) (MP) antikor bulunabilmesi ya da antikor gösterilememesi seronegatif (SN) hastalık alt gruplarını oluşturmaktadır. Bu çalışma, MG hastalarında B hücre aktivitesini in vitro sitokin üretimi yoluyla araştırmayı ve romatoid artrit (RA) ile karşılaştırmayı amaçlamaktadır.Bu amaçla 72 MG (33 AP, 19 MP ve 20 SN), 20 RA ve 30 sağlıklı kontrolün (SK) periferik kanından manyetik boncuk yöntemi ile seçilen CD19+B hücreleri CD40L ve ek olarak AChR, MuSK, poliklonal immünoglobulin (poli-Ig) veya CpG ile uyarılmıştır. Hücre kültürü üst sıvılarında İL-10, İL-6, İL-12p40, TNF- ? ve TNF- ? düzeyi çoklu ölçüm tekniği ile belirlenmiştir. Ayrıca CD19+B hücrelerinde IL10, IL6 ve IL12A ile CD4+T hücrelerinde IL10, IFNG ve CD40L genlerinin relatif mRNA ekspresyon düzeyleri değerlendirilmiştir. İstatistiksel analiz için parametrik olmayan Mann-Whitney-U testi kullanılmıştır.Spontan İL-10 salgı düzeyi MG (p=0.01) ve alt gruplarından MP (p=0.04) ve SN (p=0.04), ile RA grubunda (p=0.02) SK dan anlamlı olarak düşük bulunmuş, poli-İg ile de B hücrelerinden indüklenen İL-10, MG (p=0,028) ve SN'de (p= 0.02) düşük olmuştur. Spontan salgılanan İL-6 düzeyi de MG (p=0,033) ve RA hastalarında (p=0,008) SK dan düşük saptanmış, poli-İg uyarısı ile İL-6 da MG (p= 0.003), AP (p= 0.025) ve MP (p= 0.001) gruplarında SK'ya göre düşük kalmıştır. B hücrelerinden salgılanan TNF- ? AChR (p=0,01), MuSK (p=0,01) ve poli-İg uyarısıyla (p=0,04), SN grubunda AP'den daha yüksek olmuş, poli-İg ile uyarılan TNF- ? salgısı ise MG'de (p=0.038) SK'dan daha düşük olarak belirlenmiştir. T hücrelerinde CD40L'ın relatif mRNA ekspresyon düzeyi, MG (p=0,001) ve tüm alt gruplarında (AP; p=0,002, MP; p=0,024, SN; p=0,005) SK'dan daha düşüktür.Spontan ve özgül olmayan uyarana yanıt olarak salgılanan İL-10, İL-6 ve TNF- ? nın MG ve RA'da düşük oluşu antikor üretiminde ilişkili olabileceğini düşündürmektedir. MG alt gruplarındaki farklı sitokin aktivitesi hastalığa özgül antikor izotip dönüşümüne işaret edebilir.

Abstract:
Myasthenia gravis (MG) is characterized by autoantibodies (Ab) to nicotinic acetylcholine receptor (AChR) at the neuromuscular junction. Ab production in MG distinguishes patient subgroups with Ab to acetylcholine receptor (AChR) (AP), to muscle-specific kinase (MuSK) (MP) or with no detectable Ab (SN). In this study, B cell cytokine activity is investigated in MG groups in vitro and compared with rheumatoid arthritis (RA).Study group included 72 MG (33 AP, 19 MP and 20 SN), 20 RA patients and 30 healthy controls (HC). Magnetically isolated CD19+B cells from peripheral blood were cultured on CD40L-transfectants and stimulated with AChR, MuSK, polyclonal immunoglobulin (poly-Ig) or CpG. IL-10, IL-6, IL-12p40, TNF- ? and TNF- ? levels were measured in culture supernatants. Relative mRNA expression of IL10, IL6 and IL12A genes in CD19+B cells and IL10, IFNG and CD40L in CD4+T cells were determined using RT-PCR method. Non-parametric Mann-Whitney-U tests were used for statistical analysis.Spontaneous IL-10 production levels were lower in MG (p=0.01), MP (p=0.04), SN (p=0.04), and RA (p=0.02) compared to HCs. With poly-Ig stimulation B cells secreted lower levels of IL-10 in MG (p=0,028) and SN (p= 0.02), as compared to HCs. Spontaneous IL-6 production was also lower in MG (p=0,033) and RA patients (p=0,008) than in HCs. When stimulated with poly-Ig, IL-6 production was lower in MG (p= 0.003), AP (p= 0.025), and MP (p= 0.001) too. TNF- ? was higher with AChR (p=0,01), MuSK (p=0,01) and poly-Ig stimulations (p=0,04) only in SN than AP (p=0,004), whereas TNF- ?? secretion was also lower in MG (p=0.038) than HC when stimulated with poly-Ig. CD40L relative mRNA expression in T cells was lower in MG (p=0,001) and in all subgroups of MG (AP; p=0,002, MP; p=0,024, SN; p=0,005) than HCs.Spontaneous and non-specific secretion of IL-10, IL-6 and TNF- ? were down regulated in MG and RA, which may be related to the regulation of antibody production. Differential cytokine activities of B cells in MG subgroups may have implications in disease-specific antibody isotype changes in MG.