İleri baba yaşının oksidatif stres, DNA fragmantasyonu, kromatin yapı ve PARP proteininin ekspresyon seviyelerine olan etkisi
The effect of advanced paternal age on oxidative stress, DNA fragmantation, chromatin structure and expression levels of PARP protein
Yazar: AYLİN YAŞAR
Danışman: PROF. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU ; DR. ÖĞR. ÜYESİ SEDA KARABULUT
Gebze Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: DNA fragmantasyonu = DNA fragmentation ; Kromatin = Chromatin ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Dünya Sağlık Örgütü'ne göre kısırlık, en az 12 ay boyunca korunmasız cinsel ilişkiye girmesine rağmen hamile kalamama olarak tanımlanmaktadır. İleri baba yaşı için en yaygın olarak kullanılan sınır, gebe kalma anında 40 yaş ve üstü olarak tanımlanmaktadır. Çalışmalar, yaşlanma ile oksidatif stres, DNA fragmantasyonu ve spermde kromatin bütünlüğünün bozulması arasında bir ilişki olduğunu ortaya koymaktadır.
Bu çalışmada; ileri baba yaşının oksidatif stres, DNA fragmantasyonu, kromatin yapısı ve PARP protein ekspresyon düzeyleri üzerine etkileri incelenerek ileri baba yaşı ile infertilite arasındaki ilişkinin araştırılması amaçlanmaktadır.
İnfertilite nedeniyle tüp bebek merkezine başvuran hastalardan 20 ileri yaşa sahip (>40 yaş) ve 20 genç yaşa sahip (<40 yaş) erkekte Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA) ve Annexin V/Propidyum İyodür (PI) boyama yöntemi ile DNA fragmantasyonu; Total Oksidan Seviyesi (TOS) ve Total Antioksidan Seviyesi (TAS) analizi ile oksidatif durum; Toluidine Mavi boyaması ile kromatin yapı ve İmmünohistokimyasal analiz ile PARP ekspresyon seviyesi analizleri yapılmıştır.
Çalışmamız sonucunda ileri yaştaki erkeklerde (>40) genç erkeklere (<40) göre daha yüksek seviyede sperm kromatin bütünlüğü bozulması ve DNA fragmantasyonu olduğu gözlemlenmiştir. Buradan yola çıkarak ileri baba yaşının sperm DNA ve kromatin yapısını bozabileceği ve dolayısıyla infertiliteye neden olabileceği sonucuna ulaşılabilmektedir. Ancak oksidatif stres ve PARP ekspresyonunda istatiksel istatiksel olarak anlamlı sonuçlar gözlemlenmemiştir. İleri baba yaşının infertilite etkileriyle ilgili yapılacak daha ileri analizlere ihtiyaç duyulmaktadır.





Anahtar Kelimeler: İleri baba yaşı, Oksidatif stres, DNA fragmantasyonu, Kromatin yapı, PARP.

Abstract:
According to the World Health Organization, infertility is defined as the inability to get pregnant despite having frequent unprotected sexual intercourse for at least 12 months. The most commonly used limit for advanced paternal age is defined as 40 years and above at the time of conception. Studies have shown that there is a relationship between aging and oxidative stress, DNA fragmentation and disruption of chromatin integrity in sperm. 
In this study; it is aimed to investigate the relationship between advanced paternal age and infertility by examining the effects of advanced paternal age on oxidative stress, DNA fragmentation, chromatin structure and expression levels of PARP protein.
DNA fragmentation rates were investigated by Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA) and Annexin V/Propidium Iodide (PI) staining method; Total Oxidant Level (TOS) and Total Antioxidant Level (TAS) analysis for oxidative status determination; Toluidine Blue staining for chromatin structure determination and Immunohistochemical analysis for PARP expression level in 20 older (>40 of age) and 20 young (<40 of age) men from patients who applied an IVF center due to infertility.
As a result of our study, it was observed that older men (>40) had a higher sperm chromatin integrity disruption and DNA fragmantation than younger men (<40). It can be concluded that the advanced paternal age may disrupt the sperm DNA and chromatin structure and thus may cause infertility. However, significant difference results were not observed in oxidative stress and PARP expression. Further analyzes are needed to clarify the effects of advanced paternal age on infertility.







Keywords: Advanced paternal age, Oxidative stress, DNA fragmentation, Chromatin structure, PARP.