Nicotiana tabacum l. cv. sarıbağlar tütününde protoplast rejenerasyonu
Protoplast regeneration in tobacco (Nicotiana tabacum l. cv. sarıbağlar)
Yazar: ÖZGÜN TURAN
Danışman: PROF.DR. AYNUR GÜREL
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyomühendislik = Bioengineering ; Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
VÖZET`Nicotiana tabacum L. cv. Sarıba lar' TÜTÜNÜNDE PROTOPLASTREJENERASYONUTURAN, ÖzgünYüksek Lisans Tezi, Biyomühendislik Anabilim DalıTez yöneticisi: Prof. Dr. Aynur GÜRELEylül 2006, 44 sayfaBu çalı mada, Sarıba lar tütünü mezofil protoplastlarındanrejenerasyon gerçekle tirilmeye çalı ılmı tır. Protoplast izolasyonundakullanılan yapraklar, in vitro sürgün kültürlerinden elde edilmi tir. Yüzeysterilizasyonu uygulanan tütün tohumları agar ile katıla tırılmı Â½ MS(Murashige ve Skoog, 1962) ortamı üzerinde çimlendirilmi , be hafta sonrakökleri uzakla tırılan fidecikler hormonsuz MS ortamı üzerine alınarak sterilsürgün kültürleri kurulmu tur.eritler halinde kesilen yapraklar, % 0.5 (W/V) cellulase ve % 0.4(W/V) pectinase içeren 10 mL enzim solüsyonu içinde karanlıkta, yakla ık 16saat boyunca inkübe edilmi tir. Protoplast izolasyonu için iki farklı yöntem veiki farklı enzim solüsyonu denenmi tir. Hemositometre ile sayılan protoplastlar,7.5x104 protoplast/mL yo unlukta, dört farklı hormon konsantrasyonuna sahipmodifiye sıvı MS ortamları içinde kültüre alınmı tır.Mannitol solüsyonu içinde izolasyon yöntemiyle mL'de 15.47x104protoplast; sukroz üzerinde yüzdürme yöntemiyle ise mL'de 8.28x104 protoplastelde edilmi tir. Denemelerde hücre bölünmeleri ve mikrokoloni olu umlarıgözlenmi ancak sürgün veya bitki rejenerasyonu gerçekle tirilememi tir.Anahtar Sözcükler: Nicotiana tabacum L., tütün, protoplast kültürü,protoplast izolasyonu, mezofil protoplastları.

Abstract:
VIIABSTRACTPROTOPLAST REGENERATION IN TOBACCO(Nicotiana tabacum L. cv. Sarıba lar)TURAN, ÖzgünM. Sc. in Bioengineering DepartmentSupervisor: Prof. Dr. Aynur GÜRELSeptember 2006, 44 pagesIn this study we tried to induce regeneration from mesophyllprotoplasts of Sarıba lar tobacco cultivar. The leaves used to isolateprotoplasts were taken from in vitro shoot cultures. The tobacco seeds weregerminated on agar solidified Â½ MS (Murashige and Skoog, 1962) mediumafter surface sterilization. Five weeks later, seedling roots were removed andseedlings were transferred on to hormone free MS medium to establishaxenic shoot cultures.The leaves were cut into stripes and incubated in 10 mL of enzymesolution containing % 0.5 (W/V) cellulase and % 0.4 (W/V) pectinase, forabout 16 hours in the dark. Two different methods and two different enzymesolutions were used to isolate protoplasts. Protoplasts were counted with ahemocytometer and cultured at a density of 7.5x104 protoplasts/mL inmodified liquid MS media with four different hormone concentrations.We obtained 15.47x104 protoplasts/mL by isolating in mannitolsolution and 8.28x104 protoplasts/mL by floating on sucrose. We couldobserve cell divisions and formation of microcolonies but regeneration ofshoots or plants did not occured.Key Words: Nicotiana tabacum L., tobacco, protoplast culture, protoplastisolation, mesophyll protoplasts.