Kozmetik amaçlı kullanım için kır menekşesinde (Viola odorata) bazı biyokimyasal aktivitelerin aranması ve tanımlanması
Investigation and determination of some biochemical activities of sweet vi̇olet (Viola odorata) to use in cosmetic
Yazar: AYŞE DEMİRAY
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry

Özet:
Kozmetik sektörü gelişmeye açık bir alan olup, çok büyük bir tüketici kitlesine hitap etmektedir. Bu tüketici kitlesi gün geçtikçe daha da artmaktadır. Alanın bu kadar hızlı gelişmesi ve tüketici kesimin artması insan sağlığı açısından bazı sorunlara neden olmaktadır. Bu sorunlara karşı önlem almak isteyen tüketicilerin tercihleri hızlı sonuç alınan bitkisel kökenli organik ürünlerin lehine değişmektedir. Bu da üreticileri bu doğrultuda üretilen inovatif ürünlere yöneltmektedir.Bu çalışmada Muğla yöresinde doğal olarak yetişen kır menekşesi (Viola odorata) bitkisinin çiçeklerinden proteaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. (NH4)2SO4 çöktürmesi ve CM-selüloz iyon değişim kromotografisi ile kır menekşesi (Viola odorata)  bitkisinin çiçeklerinden saflaştırılan proteaz enziminin saflığını kontrol etmek amacıyla SDS-PAGE elektorofezi uygulandı.Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri belirlenerek 5 farklı substrat için KM ve Vmax değerleri belirlendi. En yüksek aktivitenin pH:7,0' de ve 40 oC' de olduğu gözlendi. Kazein, hemoglobin ve azokazein için KM ve Vmax değerleri belirlendi. Yine enzim aktivitesi üzerine 10 mM, 1 mM, 0,1 mM SDS, EDTA, ß-merkaptoetanol bileşiklerinin ve 10 mM, 1 mM, 0,1 mM Mg+2, Ca+2, Mn+2, Ni+2, Hg+2, Fe+2, Fe+3 katyonlarının etkisi araştırıldı.
Taze bitkiden alınan ekstrelerde organik bileşen analizi yapıldı. Buna göre % 38 1-octen-3-ol, % 19,3 2-Hexenal ve % 13,3 1-Hexanol içerdiği belirlendi. 1-Hexanol nem tutucu, kıvam artırıcı özelliğe sahip olan ve bitkiye güzel kokusunu veren aromatik bir bileşen olup nemlendirici ürünler için bitkiyi ideal kılmaktadır.
Kır menekşesi (Viola odorata)  bitkisinin çiçeklerinden elde edilen ekstrelerde demir indirgeme gücü belirlendi, DPPH. serbest radikal uzaklaştırma aktivitesi, metal şelat aktivitesi, H2O2 uzaklaştırma aktivitesi ve fenolik bileşiklerin belirlenmesi tayini yapıldı. Elde edilen sonuçlar doğal ve sentetik olarak bulunan standartlarla karşılaştırıldığında yüksek aktivite gösterdiği belirlendi. Ayrıca çiçekten alınan ekstrelerde suda çözünen vitaminler ile A, D, E ve K vitamin analizi yapıldı. Analiz sonuçlarına göre antioksidan aktivite gösteren bazı önemli vitaminler içerdiği bulundu.
Bu sonuçlar menekşeden yeni bitkisel kaynaklı cilt bakım ürünleri geliştirilmesine imkan tanımıştır. Proteaz enziminin varlığı tasarlanan ürüne peeling işlemi özelliği katacaktır. 1-Hexanol bileşiğinin nem tutma ve kıvam artırıcı özelliği tasarlanan nemlendiricinin etkisini arttıracaktır. Antioksidan özellikli olması ve vitamin içermesi yaşlanmayı geciktirici bir etki yaratacaktır.

Anahtar kelimeler: proteaz, kır menekşesi (Viola odorata), karakterizasyon, kozmetik, saflaştırma

Abstract:
The cosmetics industry has a big potential for development, it is related with very large consumer group. The quantity of this consumer group increases day by day. Rapid development of industry and increase in number of consumers result in some problems on human health. Prefers of consumers who want to avoid these problems are changing towards to organic products with plant origin that gives result rapidly. So manufacturers also are directed to these kind of innovative products.In this study, protease enzyme obtained from garden violet flowers (Viola odorata) which has grown spontaneously in Muğla region is purificated and characterised. For determition of purity of protease enzyme which was purificated from garden violet flowers (Viola odorata) by (NH4)2SO4 precipitation and CM-cellulose ion exchange chromatography SDS-PAGE electrophoresis has been applied.Optimum pH and temperature values of enzyme has been found and KM and Vmax values for 5 different substrates has been determined. It is observed that the highest activity is at Ph: 7,0 and 40 °C.  KM and Vmax values for casein, hemoglobin and azocasein has been determined.The effects of 10 mM, 1 mM, 0,1 mM SDS, EDTA, ß-mercaptoethanol compounds and 10 mM, 1 mM, 0,1 mM Mg2+, Ca2+, Mn2+, Ni2+, Hg2+, Fe2+, Fe3+ cations on enzyme activity has been investigated.Organic component analysis was performed in extracts of fresh plant and it was determined that the extract contains 38 % 1-octen-3-ol, 19,3 % 2-hexenal and 13,3 % 1-hexanol. 1-hexanol is an aromatic compound that has scent and some properties such as humectant, stabilizer. So, these properties makes ideal this compound for moisturizer products. Iron reduction potential of the extracts from garden violet flowers (Viola odorata), DPPH. free radical scavenging activity, metal chelate activity, H2O2 scavenging activity and phenolic compound profile has been determined. The results show that these activities are high compared to natural and synthetic standarts. In addition, vitamin analyses of extracts from flowers has been performed and some important vitamins which has antioxidant activity were determined. These results show that it is possible to develop skin care products with plant origin. Presence of protease enzyme provides peeling process property to the product designed. Humectant and stabilizer properties of 1-hexanol increase the effect of moisturizer product. Antioxidant properties and vitamin content of the products also provide anti-aging effect.
Keywords: protease, sweet violet (Viola odorata), characterization, cosmetic, purification