Küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücre hattında (A549) yeni bir tirozin kinaz inhibitörü olan pazopanibin (GW786034) antianjiyojenik etkilerinin araştırılması
Investıgatıon of A new tyrosıne kınase ınhıbıtor of pazopanıb (gw786034) antı-angıogenıc effects on NON-SMAll cell lung cancer cell lıne (A549)
Yazar: BUKET DEMİRTAŞ
Danışman: DOÇ. DR. MİRİŞ DİKMEN
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Anjiyogenez inhibitörleri = Angiogenesis inhibitors ; Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Karsinoma-küçük hücreli olmayan-akciğer = Carcinoma-non small cell-lung ; Tirozin = Tyrosine ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Akciğer kanseri, yirminci yüzyılın başlarında ender olmasına karşın, günümüzde görülme sıklığı artan, önemli bir sağlık problemidir. Küçük hücreli olmayan akciğer kanseri (KHDAK) akciğer kanserinin agresif bir türüdür. Günümüzde yeni ve daha etkili ajanların kullanılmasıyla, kanser tedavisinde yeni çalışmalar yapılmaktadır. Anjiyojenik ve antianjiyojenik faktörlerin dengesinin bilinmesi gelecekte akciğer kanseri gibi tümörlerde yeni bir tedavi seçeneği gündeme getirecektir. Kanser gelişmesinde; hücre çoğalması, tümör yayılımı, metastazı gibi süreçler aktive olmuş tirozin kinaz reseptörünün tetiklediği sinyal yolakları tarafından yönetilir. Pazopanib (GW786034), VEGFR-1,-2,-3, PDGFR ve c-Kit reseptörlerine karşı aktivite gösteren çok hedefli bir tirozin kinaz inhibitörüdür.  Son zamanlarda ilerlemiş renal hücreli karsinom (RCC) tedavisi için FDA tarafından pazopanibin klinik kulanımı onaylanmıştır.
Bu tez çalışmasında, bir tirozin kinaz inhibitörü olan pazopanibin, antianjiyojenik etkileri insan akciğer kanseri (A549) ve insan umbilikal ven endotel hücre (HUVEC) hattında in vitro yöntemler ile araştırılmıştır. Pazopanib konsantrasyonlarının (2.5, 25, 50, 100, 200 µM) sitotoksik etkileri, mitokondriyal aktivite düzeylerinde MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)  yöntemi ile belirlenmiştir. Antiproliferatif etkiler, Gerçek Zamanlı Hücre Analiz (RTCA DP) Sistemi kullanılarak hücre indeks değerlerindeki değişikliklere göre değerlendirilmiştir. Vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) miktarları ELİZA ve VEGF mRNA ekspresyonlarıda real-time PCR yöntemi ile araştırılmıştır.
Çalışmanın sonucunda, zamana ve konsantrasyona bağlı olarak pazopanib, A549 ve HUVEC hücrelerinde hücre proliferasyonunda, invazyon ve migrasyonu ile VEGF miktarlarında önemli düzeyde azalma yapmıştır. RTCA DP Sisteminde A549 hücreleri üzerinde pazopanibin IC50 değeri 24. saatte 51.6 µM olarak analiz edilmiştir.  
Bu çalışmanın sonucunda, pazopanibin A549 hücreleri üzerinde önemli antiproliferatif ve antianjiyojenik etkilere sahip olduğunu HUVEC hücreleri ile karşılaştırmalı olarak belirledik. Bir tirozin kinaz inhibitörü olan pazopanibin akciğer kanser kemoterapisi için potansiyel bir ajan olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
Lung cancer, although rare in the early twentieth century, today it's a major health problem that is rising in number of incidence. Non-small cell lung cancer (NSCLC) is a particularly aggressive type of cancer. Thanks to new and more efficient agents, new researches have been done nowadays. Balance of angiogenic and anti-angiogenic factors will bring new treatment ways to tumors like lung cancer. Activated tyrosine kinase receptor is responsible of signal transduction in cancer development that is composed of cell proliferation, tumor invasion and metastasis respectively. Pazopanib (GW786034) is inhibitor of tyrosine kinase receptors that are VEGFR-1,-2,-3, PDGFR and c-Kit. Recently, FDA clinically has approved usage of pazopanib against renal cell carcinoma (RCC). 
In this study, anti-angiogenic effects of tyrosine kinase inhibitor pazopanib were evaluated in vitro in human lung cancer cell line (A549) and human umbilical ven endothelial cell line (HUVEC). Cytotoxic effects of different pazopanib concentrations (2.5, 25, 50, 100, 200 µM) were determined by MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide) method. Antiproliferative effects were evaluated by real time cell analysis (RTCA DP) system according to changing in cell index values. ELISA was used to measured vascular endothelial growth factor (VEGF) and real-time PCR method was used to determined VEGF mRNA expression. 
Our results show that pazopanib depending on time and concentration decreases the amount of VEGF and cell proliferation due to invasion and migration in A549 and HUVEC cells. RTCA DP system results show that IC50 values of pazopanib at 24 hours was analyzed as 51.6 µM in A549 cells.
As a result of our studies, pazopanib has important antiproliferative and anti-angiogenic effects on A549 cells according to results of HUVEC cells. It shows that pazopanib as a tyrosine kinase receptor inhibitor might be potential agent for lung cancer chemotherapy.