Antifosfolipid sendromunda aktivasyonla uyarılan sitidin deaminaz(AID) geninin transkripsiyon analizi
Activation ınduced-cytidine deaminase (AID) gene transcription analysis of antiphospholipid syndrome
Yazar: TUĞBA VARLIK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. VEYSEL SABRİ HANÇER
İstanbul Bilim Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antifosfolipid sendromu = Antiphospholipid syndrome ; Antikorlar = Antibodies ; Cytidin = Cytidin ; Genler = Genes ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; RNA = RNA

Özet:
Antifosfolipid sendromu (AFS), arteriyel ve venöz tromboz eğilimi, tekrarlayan düşükler ve antifosfolipid antikorlarının varlığı ile karakterize bir hastalıktır. AFS'de tromboz gelişiminde; klinik tablodan negatif yüklü fosfolipidler ve fosfolipid-protein komplekslerine karşı oluşmuş olan antifosfolipid antikorlarının (lupus antikoagülanı, antikardiyolipin antikorları ve anti-ß2 glikoprotein-I antikorları) sorumlu olduğu düşünülmektedir. Immünglobulin (Ig) çesitliliğine sebep olan baslıca üç B lenfosit mekanizması vardır. Bunlar somatik hipermutasyon (SHM), gen dönüşümü (GC) ve sınıf çevrim rekombinasyonudur (CSR). Bu üç önemli mekanizmanın AID (aktivasyonla uyarılan sitidin deaminaz) denilen bir protein ile kontrol edildiği bildirilmiştir. AID'in Ig dışı genlerde de DNA hasarı oluşturduğu ve genom stabilitesini bozduğu gösterilmiştir.Çalışmamızda, immun çeşitliliğe sebep olan AID geninin anlatım düzeyini belirleyerek, AFS'deki otoimmuniteye katkısının varlığını araştırmayı amaçladık. 70 AFS tanısı konan hasta ile 70 sağlıklı erişkin kontrolden oluşan 2 grubun periferik kan örneklerinden total RNA izolasyonu gerçekleştirildi. Total RNA örnekleri cDNA'ya çevirildi. Hedef gen (AID) ve referans gene (HPRT1) ait tasarlanan primer ve problar kullanılarak gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Q PCR) yapıldı. Böylece referans ve hedef gene ait cDNA'lar çoğaltıldı. Genlerin ekspresyon düzeyleri ölçülerek, veriler kaydedildi. Elde edilen istatistiksel analizler sonucunda AID mRNA düzeyinin, AFS hastalarında sağlıklı erişkin gruba oranla 40 kat fazla bulunduğu hesaplandı.AID geninin fazla anlatımı somatik hipermutasyon oranında artış ve otoantikor oluşumunda etkili olabilir. Sonuç olarak, AID proteininin AFS'de otoantikor oluşumunda anahtar rol oynayabileceği gözlenmiştir. Daha fazla ve kontrol bireyi ile yapılacak çalışmalarla bu sonuçların desteklenmeye ihtiyacı vardır.

Abstract:
Antiphospholipid syndrome (APS), a disease characterized by the presence of arterial and venous thrombosis tendency, recurrent abortions and antiphospholipid antibodies. The development of thrombosis in APS; negatively charged phospholipids and phospholipid-protein complexes formed against with antiphospholipid antibodies (lupus anticoagulant, anticardiolipin antibodies and anti-ß2-glycoprotein I antibodies) are thought to be responsible in the clinical features. There are three main B-lymphocyte mechanism which caused Immunoglobulin (Ig) diversity. These are somatic hypermutation (SHM), Ig gene conversion (GC) and class switch recombination (CSR). These three important mechanisms have been shown to be controlled by an enzyme called AID (Activation Induced Cytidine Deaminase), and also it has been shown that AID can cause breaking the stability of the genome and creating DNA damages in non-Ig genes.In this study, by measuring expression levels of AID gene which leads to immune diversity, we aimed to identify its effect of autoimmunity on APS. 70 APS patient and 70 healthy individuals peripheral blood samples are used for total RNA isolation. cDNA has been prepared by using the total RNA isolated from the samples. Q-PCR has been evaluated by using the target gene (AID) and a reference gene (HPRT1) primers and probes and the reference and target cDNA?s have been replicated. The expression levels of the target gene and the references have been measured and the data have been analyzed statisticaly. The results of the statistical analyses have shown that the APS patients have 40 times increased expression levels on AID gene mRNA versus healty individuals.Increased expression levels of AID gene not only causes somatic hypermutation ratio but also has a probability to increas the production of autoantibodies. To sum up it has been seen that AID gene may has a key role on the production of autoantibodies in APS patients.