Kantaron (Hypericum perforatum L.) bitkisinde myrosinaz enziminin tanımlanması ve enzim üzerine bazı kozmetik ve ilaç etken maddelerinin etkisinin araştırılması
Defination of myrosinase enzyme from centaury (Hypericum perforatum L.) plant and on enzyme of some cosmetics and drug article effects investigation
Yazar: ÜLKÜ KAPLAN
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Myrosinaz (tiyoglikozid glukohidrolaz, EC 3.2.3.1), glukozinolat moleküllerini hidrolizlemekte ve glukoz, ve aglikon grupları ürün olarak açığa çıkmaktadır. Bu çalışmada Mersin yöresinde doğal olarak yetişen ve şifalı olarak bilinen kantaron (Hypericum perforatum L.) bitkisinden myrosinaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Enzim 3 basamakta saflaştırıldı. İlk basamakta amonyum sülfat çöktürmesi yapıldı, 2. basamakta Sephacryl S-200 anyon değiştirici kromatografisi kolonu kullanıldı ve 3. basamakta ise concavalin A sepharose afinite kromatografisi kullanılarak enzim saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE elektorofezi uygulandı.Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri tespit edilerek sinigrin substratı için KM ve Vmax değerleri belirlendi.Enzim aktivitesi üzerine Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe3+ (10mM, 1mM ve 0,1mM) katyonlarının ve askorbik asit, EDTA ve SDS (10mM, 1mM ve 0,1mM) bileşiklerinin etkileri araştırıldı. Bunlara ek olarak kozmetikte kullanılan pantenol, cephalotin, betamethasone, linoleik asit ve E vitamininin (10mM, 1mM ve 0,1mM) ve cilt kanseri tedavisinde etkili olan TA1, TA2, TA3, TA4, TA5, TA6, TA7, TA8, TA9 ve TA10 (500 ppm) moleküllerinin etkileri araştırıldı.Sonuçlar canlıların bu zararlı UV ışınlarından hem korunması, hem de cilt kanseri oluşumundan sonra tedavi aşamasında, ilaç ve güneşin zararlı ışınlarından koruma amaçlı kozmetiklerin yapımında, myrosinaz enzimi içeren bitki ekstraktlarının veya saf enziminin çok faydalı olabileceğini gösterdi.

Abstract:
Myrosinase (ß-thioglucoside glucohydrolase; EC 3.2.1.147) hydrolyzes glucosinolates to form an aglucone and D-glucose. In this study; the myrosinase enzyme was purified and characterized from centaury (Hypericum perforatum L.), which grows naturally in certain rural regions of Mersin. Three different step were used for purification of enzyme. First step was (NH4)2SO4 precipitation. Secand step was Sephacryl S-200 anion exchange chromatography and finally was used Concavali A affinity chromatography. SDS-polyacrilamide gel electrophoresis was applied for control of enzyme purifiedKM and Vmax values for sinigrin substrate were determined after setting optimal pH and temperature conditions of protease enzyme.Effects of Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe3+ (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) cations and ascorbic acid, EDTA and SDS (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) on enzyme activity were researched. İn addition to, effects pantenol, cephalotine, betamethasone (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) that used in cosmetic and TA1, TA2, TA3, TA4, TA5, TA6, TA7, TA8, TA9 and TA10 (500 ppm) that benefit in treatment skin cancer.The results showed that the myrosinese enzyme can be used for benefited both protected from dangerous UV light and medical treatment of living creatures as medicine and cosmetic.