İzole sıçan aortunda ROCK ekspresyonu ve aktivasyonunun güniçi ritminin incelenmesi
The investigation of daily rhythm of ROCK expression and activation on the isolated rat aorta
Yazar: EBRU HİÇDURMAZ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MECİT ORHAN ULUDAĞ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Aort = Aorta ; Kan basıncı = Blood pressure ; Kas kontraksiyonu = Muscle contraction ; Rhokinaz = Rhokinase ; Sirkadiyen ritim = Circadian rhythm ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmanın amacı; düz kas kasılması ile ilgili sorumlulardan biri olan Rho-kinaz (ROCK) ekspresyonu ve aktivasyonunun sirkadiyan ritminin olup olmadığı, kan basıncının sirkadiyan ritim paternindeki rolü incelemektir.Çalışmada Wistar, albino erkek sıçanlar kullanılmıştır. Tüm deneyler günün 6 farklı saatinde (09:00, 13:00, 17:00, 21:00, 01:00, 05:00 ve 09:00) tekrarlanmıştır. Deney saatlerinde tail cuff yöntemi ile sıçanların kan basınçları ölçülmüş, daha sonra torasik aortaları çıkarılarak damar halkaları şeklinde izole organ banyosuna asılmıştır. Endoteli sağlam damar halkalarında Y-27632 varlığında ve yokluğunda fenilefrin doz yanıt eğrileri, Y-27632 doz yanıt (gevşeme) eğrileri çıkartılarak Emaks'ları bulunmuştur. Kalan aort parçalarında ise Western blot yöntemi ile ROCK II ekspresyonu ve aktivasyonlarına bakılmıştır.Çalışmalarımız sonunda; sıçanların sistolik kan basınçlarının sirkadiyan ritm profili gösterdiği ve karanlık periyotta sistolik kan basınçlarının daha yüksek olduğu, saat 05:00'de pik yaptığı, saat 09:00'da ise çukur yaptığı bulunmuştur. Sıçanların izole torasik aortalarının fenilefrin konsantrasyon bağımlı yanıtlarında da güniçi ritm olduğu gözlenmiştir. Bu ritm paterni ROCK inhibitörü Y-27632 varlığında değişmemiştir. Ayrıca Y-27632 gevşeme yanıtlarında güniçi anlamlı fark bulunamamıştır. Western blot analizleri sonucunda gerek ROCK II gerekse pMYPT ekspresyonlarında güniçi anlamlı fark bulunmamakla birlikte ROCK II'nin gece, pMYPT'nin ise gündüz daha yüksek olduğu gözlenmiştir.Sonuç olarak; ROCK II ekspresyon ve aktivasyonunun güniçi ritim göstermediği, kan basıncı regülasyonunda rolü olduğu bilinen Rho-kinazların sirkadiyan kan basıncı ritim profiline çok fazla katkısının olmadığı düşünülebilir.

Abstract:
The aim of this study is to examine the expression and activation of the rho-kinaz (ROCK) which is one of factors responsible for smooth muscle contraction, whether there is circadian rhythm, the blood pressure?s role in the circadian rhythm patern.The Wistar albino male rats have been used in this study. All the experiments have been repeated at 6 different hours of day (09:00, 13:00, 17:00, 21:00, 01:00, 05:00, 09:00). The blood pressure of the rats has been measured with the tail cuff technique at the hours of experiment, and then the rat thoracic aortas have been extracted and hanged to isolated organ bath at the form of vascular rings. Emax has been determined by fenilefrin dose response diagrams detected at vascular ring which has safe endothelium with Y-27632 and non Y-27632 and Y-27632 dose response (dilatation) diagrams. ROCK II expression and activations have been examined with Western blot tecnique at residual aort parts.The outcome of the study shows that rat?s systolic blood pressure has a circadian rhythm profile and the systolic blood pressure is higher at dark period, top at 05:00 and deep at 09:00. Rat?s isolated thoracic aorta has also daily rhythm at fenilefrin concentration related response. This rhythm patern does not change with the ROCK inhibitor Y-27632. In addition, there is no significant difference at Y-27632 daily dilation response, either. Wester blot analysis reveals that there is no significant difference at daily expressions of both ROCK II and pMYPT, however ROCK II is higher at night while pMYPT is higher at days.As a result, it can be argued that ROCK II expression and activation has not daily rhythm and the Rho-kinaz which is well known for its role in blood pressure regulation, has not much effect on circadian blood pressure rhythm profile.