Akut ekstremite iskemisine maruz bırakılan sıçanlarda nikardipinin iskemi/reperfüzyon hasarını engellemedeki rolü
The role of nicardipine in preventing ischemia/reperfusion damage in rats exposed to acute extremity ischemia
Yazar: CEMİLE SEDA PAMUK
Danışman: PROF. DR. TÜRKAN TANSEL
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi = Thoracic and Cardiovascular Surgery
Dizin: Alt ekstremite = Lower extremity ; Ekstremiteler = Extremities ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de sık görülen ekstremite iskemisi önemli mortalite ve morbidite sebeplerinden biridir. İskemi ve reperfüzyon sürecinde hasarın büyük bölümünün reperfüzyon sürecinde oluştuğu ve reaktif oksijen radikallerinin dokuların hasarlanmasında büyük rol oynadığı bilinmektedir.
Bu çalışmada bir kalsiyum kanal blokörü olan Nikardipinin vazodilatasyon ve kalsiyum blokaj etkisinin akut ekstremite iskemisine maruz bırakılan sıçanlarda iskemi ve reperfüzyon hasarını engellemedeki rolü araştırılmıştır. 
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada ortalama ağırlıkları 200-400 gr olan 24 adet erkek Wistar Albino cinsi sıçan rastgele 4 gruba ayrıldı. Kontrol grubu(n=6) sıçanlara sadece deri altı kesi yapıldı. İskemi-reperfüzyon (İR) grubu(n=6) sıçanlarda infrarenal abdominal aort 60 dk süreyle klemplenerek iskemi oluşturuldu, sonra klempler kaldırılarak 120 dk reperfüzyon yapıldı. İskemi-reperfüzyon (İR)+düşük doz nikardipin(n=6) (10 mg/ml)  grubu sıçanlara cerrahi işlemden 4 gün önce başlanılarak her gün tek doz intraperitoneal yolla nikardipin uygulandı. İskemi-reperfüzyon (İR)+yüksek doz nikardipin(n=6) (20 mg/ml)  grubu sıçanlara cerrahi işlemden 4 gün önce başlanılarak her gün tek doz intraperitoneal yolla nikardipin uygulandı. Nikardipin tedavisi tamamlandıktan sonra sıçanlarda infrarenal abdominal aort 60 dk süreyle klemplenerek iskemi oluşturuldu, sonra klempler kaldırılarak 120 dk reperfüzyon yapıldı. Reperfüzyon süresi bitince kontrol grubu dâhil olmak üzere tüm sıçanlar sakrifiye edilerek uygun kan örnekleri alındı, kas ve aort dokusu patolojik değerlendirme için çıkarılarak uygun koşullarda saklandı. 
İncelemeler serum ve doku materyalleri üzerinde yapıldı ve özellikle prooksidan-antioksidan sistem ve inflamasyon ile ilgili monoklonal antikorlardaki değişimler araştırıldı. Bu çerçevede HIF-1 alfa antikoru, ICAM-1 Antikoru, VCAM-1 Antikoru, MMP 3 ve MMP9 antikoru,  Rat myeloperoxidase (MPO), Rat signal transducer and activator of Transcription 1 (STAT1), Rat mitogen activated protein kinase (MAPK), Glutathione Peroksidaz (GSH-PX), reaktif oksijen türleri (ROS), malondialdehit (MDA), proteinlerin ileri oksidasyon ürünleri (AOPP) antioksidan aktivite (FRAP), Total-SH, Süperoksıt dismutaz (SOD) ve Katalaz çalışıldı. 
Bulgular: Biyokimyasal incelemelerde iskemi/ reperfuzyon modeli oluşturulan sıçanların serumlarında SODs, GSH-Px ve katalaz enzimlerinde kontrol grubuna bir farklılık göstermediği, MPO aktivite düzeylerinin ise iskemi de anlamlı artıp, tedavi gruplarında anlamlı olarak azaldığı görüldü. MAPK ve STAT1 düzeylerinde ise iskemi uygulamasıyla anlamlı artış, tedavi ile anlamlı azalma tespit edildi. Serum ROS, MDA, Total SH ve AOPP düzeyleri iskemi uygulaması ile anlamlı artış, FRAP düzeylerinde de düşüş görüldü. Tedavi gruplarında ise MDA ve FRAP anlamlı olarak azalırken, ROS, Total SH ve AOPP de değişiklik görülmedi. HIF-1 alfa antikoru, ICAM-1 Antikoru, VCAM-1 Antikoru, MMP-3 ve MMP-9 antikoru iskemik grupta pozitif boyanma gösterirken, tedavi grubunda daha zayıf boyandığı görüldü. 
Sonuç: Sonuç olarak, İR grubunda alt ekstremitede iskemi- reperfüzyon hasarı oluştuğunu ve nikardipin tedavisinin bu hasara karşı koruyucu etkisinin olduğunu söyleyebiliriz.

Abstract:
Objective: Limb ischemia, which is as common in our country as in the whole world, is one of the important causes of mortality and morbidity. It is known that most of the damage during ischemia and reperfusion process occurs during the reperfusion process and reactive oxygen radicals play a major role in tissue damage.
In this study, the role of the vasodilation effect of Nikardipine, a calcium channel blocker, in preventing ischemia and reperfusion injury in rats exposed to acute limb ischemia was investigated.
Materials and Methods: In this study, 24 Wistar Albino rats with an average weight of 200-400 g were randomly divided into 4 groups. Only subcutaneous incisions were made in the control group (n = 6) rats. Ischemia was induced by clamping the infrarenal abdominal aorta for 60 minutes in ischemia-reperfusion (IR) group (n = 6) rats, then reperfusion was performed for 120 minutes by removing the clamps. Ischemia-reperfusion (IR) + low dose nicardipine (n = 6) group rats were initiated 4 days before the surgical procedure and administered a single dose of nicardipine daily intraperitoneally. Ischemia-reperfusion (IR) + high-dose nicardipine (n = 6) group rats were started 4 days before the surgical procedure and administered a single dose of nicardipine daily intraperitoneally. After the nicardipine treatment was completed, ischemia was created by clamping the infrarenal abdominal aorta for 60 minutes in rats, then reperfusion was performed for 120 minutes by removing the clamps. When the reperfusion period was over, all rats, including the control group, were sacrificed and appropriate blood samples were taken, quadriceps muscle tissue was removed for evaluation and stored under appropriate conditions.
Investigations were made in serum, muscle tissue and aorta; changes in monoclonal antibodies related to prooxidant-antioxidant system and inflammation are investigated in particular. In this context, HIF-1 alpha antibody, ICAM-1 Antibody, VCAM-1 Antibody, MMP-3 and MMP-9 antibody, Rat myeloperoxidase (MPO), Rat signal transducer and activator of Transcription 1 (STAT1), Rat mitogen activated protein kinase (MAPK) , Glutathione Peroxidase (GSH-PX), reactive oxygen species (ROS), malondialdehyde (MDA), advanced oxidation products of proteins (AOPP) and antioxidant activity (FRAP), Total-SH, Superoxide dismutase (SOD) and Catalase were studied.
Results: In the biochemical examinations, it was observed that there was no difference in SODs, GSH-Px and catalase enzymes in the sera of rats for which ischemia/reperfusion model was created. While the MPO activity levels increased significantly in ischemia and it also decreased significantly in the treatment groups. A significant increase in MAPK and STAT1 levels with ischemia and a significant decrease with treatment were detected. Serum ROS, MDA, Total SH and AOPP levels increased significantly with ischemia, and FRAP levels decreased. In the treatment groups, while MDA and FRAP decreased significantly, ROS, TotalSH and AOPP did not change.
Conclusion: In conclusion, we were able to create ischemia-reperfusion injury in the lower extremity in the IR group and we can say that nicardipine treatment has a protective effect against this damage.