Halofilik mikroorganizmaların izolasyonu, identifikasyonu ve biyoteknolojik öneme sahip ekstraselüler enzimlerinin araştırılması
Isolation, identification of halophilic microorganisms and research of their extracellular enzymes with biotechnological importance
Yazar: ÖZGE KAHRAMAN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. İHSAN YAŞA
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2008
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Enzim üretimi = Enzyme production ; Halofilik archaea = Halophilic archaea ; Moleküler tanı = Molecular identification

Özet:
Bu araştırmada İzmir Çamaltı Tuzlası'ndan alınan örneklerden halofilik mikroorganizma izolasyonu gerçekleştirilerek bu mikroorganizmaların biyoteknolojik öneme sahip bazı enzimlerinin taramaları ve biyokimyasal testlerinin yanı sıra moleküler karakterizasyonları yapılmaya çalışılmıştır.Tuzlanın iki farklı yerinden alınan toprak örneklerinden saflaştırılan 14 izolatın ekstraselüler extremozim taramalarında % 48,2'sinin esteraz, % 28,5'nin proteaz, % 100'ünün DNaz aktivitesine sahip oldukları; lipaz, amilaz jelatinaz ve selülaz aktivitelerine ise sahip olmadıkları görülmüştür. Proteaz aktivite ölçüm sonuçlarında % 99 benzerlik oranıyla Halobacterium salinarum olarak saptanan 2 nolu izolatın, % 0,5 maya özütü içeren SW-25 (pH 7.0) ortamında 4. gün 2 U aktivite, 5. gün ise 2,5 U aktiviteye sahip olduğu görülmüştür. Farklı besin, azot kaynaklarının ve farklı NaCl konsantrasyonlarının proteaz üretimine etkisi incelendiğinde maya özütünde; 2,6 U ve et özütünde; 1,2 U ayrıca 3,5M NaCl içeren ortamda 2,3 U aktivite ve 4M NaCl içeren ortamda 2 U aktivite gösterdiği görülmüştür. İzolatların 16S rDNA moleküler tanıları sonucu 1,4,6,7,10,11,13 nolu izolatlar % 99 oranında Haloferax alexandrinus, 5 nolu izolat % 98 oranında Haloferax alexandrinus, 12 nolu izolat % 96 benzerlik oranıyla Haloferax alexandrinus, 3 nolu izolat % 99 Haloferax sp. HSC4, 8 nolu izolat % 97 Haloferax YT 228, 2 nolu izolat % 99 Halobacterium salinarum R1 strain, 9 nolu izolat % 97 Halobacterium salinarum olarak tanılanmıştır.

Abstract:
In this research we tried to isolate halophilic microorganisms from İzmir Camaltı Saltern and screened their enzymes with biotechnological importance and molecular identification besides biochemical tests.In the extracellular extremozyme screening of 14 isolates isolated from soil samples taken from two different parts of saltern, we observed that % 48.2 has esterase activity, % 28.5 has protease activity, % 100 has DNase activity but any lipase, amylase, gelatinase and cellulase activity have been detected.Compared to protease production capacities of isolates, isolate 2 was the best protease producer and identified as Halobacterium salinarum with % 99 sequence similarity. Isolate 2 reached to 2 U activity in SW-25 (pH:7.0) medium containing % 0.5 yeast extract at 4th days and 2.5 U activity at 5th days.When we investigated effect of different nutrition, nitrogene sources and NaCl concentration on protease production, we observed the best activities in medium containing yeast extract with 2.6 U activity and meat extract with 1.2 U activity; 2.3 U activity in medium containing 3.5M NaCl and 2 U activity in medium containing 4M NaCl.At the result of 16S rDNA molecular identification, isolates identified as Haloferax alexandrinus with % 99 sequence similarity are 1,4,6,7,10,11,13; isolate identified as Haloferax alexandrinus with % 98 sequence similarity is 5; isolate identified as Haloferax alexandrinus with % 96 sequence similarity is 12; isolate identified as Haloferax sp. HSC4 with % 99 sequence similarity is 3; isolate identified as Haloferax sp. YT 228 with % 97 sequence similarity is 8; isolate identified as Halobacterium salinarum R1 strain with % 99 sequence similarity is 2; isolate identified as Halobacterium salinarum with % 97 sequence similarity is 9.