Aferezis ile elde edilen periferik kök hücrelerde fonksiyonel alt grupların sınıflandırılması ve in vitro koşullarda farklılaşma özellikleri /
Yazar: GÜLDEREN YANIKKAYA DEMİREL
Danışman: PROF. DR. MAHMUT BAYIK
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1998
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Hücreler = Cells ; Kan bileşenlerini ayırma = Blood component removal ; Kök hücreler = Stem cells

Özet:
II. ÖZET Periferik kana mobilize edilmiş kök hücrelerden yapılan nakiller son yıllarda kemik iliğinden yapılan nakillerin sayısmı aşmış bulunmaktadır. Aferezis işlemi yapılarak toplanan kök hücrelerin verimliliğini ve yamanma potansiyelini ölçmek için CD34 absolut sayımlan kullanılmakta, 12-14 gün sonra sonuçların elde edilebilmesi nedeni ile CFU (Colony Forming Unit) kültürleri doğrudan ön belirleyici olarak kullanılamamaktadır. 1980'li yıllardan beri yapılan araştırmalarda katyonik bir florokrom olan Rhodaminel23'ün erken dönem kök hücrelerde soluk boyanmasının "quiescent" kök hücre popülasyonu için bir belirteç olduğu saptanmıştır. Ancak yapılan araştırmaların çoğu kemirici kemik iliği ya da periferik kök hücrelerinde yapılmış olan çalışmalardır. Bu çalışmada, aferezis işleminin hemen sonrasında CD34+ hücrelerin Rhodaminel23 içerikleri flow sitometri ile ölçülüp soluk Rhodaminel23 boyanan hücrelerle koloni oluşturma yetisi arasında anlamlı bir ilişki olup olmadığı araştırılmıştır. CD34 pozitif seleksiyon yapılarak saf bir popülasyon halinde elde edilen hücreler iki haftalık bir CFU kültür sistemi olan HPP-Q (High Proliferative Potential-Quiescent) kültür ortamına ekilerek oluşan koloni sayısı ile Rhodaminel23soluk popülasyon arasında pozitif bir korelasyon olup olmadığı araştırılmış ve pozitif bir ilişki olduğu saptanamamıştır. Bu ilk bilgiler ve deneyimlerin ışığında daha çok sayıda örnek çalışılarak, CD34 absolutsayımları ve Rhodamine 123 floresans yoğunlukları ile aferezisin hemen sonrasında engrafman potansiyeli hakkında ön bilgi sahibi olunması, hem çok sayıda aferezis yapılmasını önleyecek hem de engrafman hakkında klinisyene bilgi sağlayıcı bir yöntem olacaktır. CFU kültür sistemlerinin de uygulanması ile elde edilen veriler Rhodamine 123 ve CD34 absolut sayım oranları ile elde edilen bilgilerin doğrulamasının yapılmasını sağlamış olacaktır. tCTUiamflCiunMiqWJu, wtoMGmsrm mucnt

Abstract:
III. SUMMARY The number of PBSC (Peripheral Blood Stem Cell) transplantations have began to be more than the number of bone marrow transplantations. The CD34 absolute counts are used to measure the yield and engraftment potential of the peripheral blood stem cells collected by apheresis. Due to obtaining results after 12-14 days CFU assay (Colony Forming Unit) can not be used as a predictor of transplantation outcome. According to research findings being done since 1980's, Rhodaminel23, a cationic fluorochrome which is known to stain the stem cells "dull" can be used as a marker for quiescent stem cell. Most of the published research work has been done on murine bone marrow and peripheral blood stem cells. In our experiments, we have measured the Rhodaminel23 expression of human CD34+ cells with flow cytometry after apheresis procedure and looked for a positive correlation between Rhodaminel23du11 cells and colony forming capacity of these cells. CD34+ cells, which were selected as purer population were cultured in a two weeks CFU assay, HPP-Q (High Proliferative Potential-Quiescent) and possibility of a positive correlation between colony numbers and Rhodaminel23du11 population is seeked. In spite of these introductory information and experience, to be informed by the engraftment potential of the graft right after apheresis, more samples should be processed. Measuring the CD34 absolute counts and Rhodaminel23 fluorescence intensities will both prevent the excess number of apheresis and will provideinformation about the engraftment to clinicians. Data obtained with CFU assays will support the data from immunopenotyping of Rhodaminel23 and CD34 absolute counts.