Tiroid papiller mikrokarsinomlarında metastaz potansiyelini öngörmede CD73, CD147 ve osteopontin ı̇mmünhistokimyasal ı̇ncelemelerinin yeri
Can we predict the metastatic potential of papillary microcarcinoma by immunohistochemical evaluation of CD73, CD147 and osteopontin?
Yazar: IRMAK URLA GÜNDÜZ
Danışman: DOÇ. DR. GÜLÇİN YEGEN
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-papiller = Carcinoma-papillary ; Lenf nodları = Lymph nodes ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Osteopontin = Osteopontin ; Tiroid hastalıkları = Thyroid diseases ; Tiroid neoplazmları = Thyroid neoplasms ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Amaç: Papiller tiroid mikrokarsinomları, iyi prgnoza sahip olmalarına rağmen, değişken oranlarda lenf nodu metastazı yapabilmektedir. Lenf nodu metastazı, rekürrensi öngörmede en iyi göstergelerden biridir. CD73, CD147 ve Osteopontin (OPN) antikorlarının, malign tümörlerde, lenf nodu metastazı, ileri evre, düşük sağkalım süreleri gibi kötü prognostik durumlarda artmış ekspresyon sergiledikleri bilinmektedir. Çalışmamızda, tiroid papiller mikrokarsinomlarında immünhistokimyasal olarak, CD73, CD147 ve OPN ekspresyon durumunun lenf nodu ve uzak metastaz ile ilişkisini ortaya koymak amaçlanmaktadır. Ayrıca yaş, cinsiyet, tümör çapı, tümör sınır özellikleri, lenfatik, vasküler ve perinöral invazyon gibi bazı histomorfolojik ve demografik bulguların metastaz ile ilişkisi değerlendirilecektir. 
Gereç ve yöntem: 2006-2019 yılları arasında, İstanbul Tıp Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı'nda tanı almış, 18 yaşından büyük, unisentrik, 5 mm'den büyük 248 adet papiller mikrokarsinom vakasına ait preparatlardan uygun tümör alanları seçildi ve parafin bloklardan doku microarray (DMA) yöntemi kullanılarak yeni parafin bloklar oluşturuldu. DMA bloklarından alınan kesitlerde C73, CD147 ve OPN antikorları ile immünhistokimyasal incelemeler gerçekleştirildi ve daha sonra bu antikorlara ait ekspresyonlar boyanma yaygınlığı ve şiddetine göre skorlandı. Ayrıca CD73 ve OPN için, boyanma yaygınlığı ve şiddetine ait skorların çarpımı ile elde edilen H-skoru belirlendi. Genel Cerrahi, Endokrinoloji ve Nükleer Tıp kliniklerinden 248 hasta için son dönem takip bilgileri elde edildi ve lenf nodu ve/veya uzak metastazı olan ve olmayan vakalar belirlendi. Ayrıca patoloji arşiv sistemindeki patoloji raporlarından, 248 vakaya ait histomorfolojik bulgular kaydedildi. 
Bulgular: Çalışma grubundaki 248 vakadan 20'sinde (%8,1) lenf nodu metastazı, 2'sinde (%0,08) uzak metastaz (mediastinal lenf nodu) mecvcuttu. Lenf nodu metastazı bulunan vakaların 18'i klasik tip, 1'i Warthin benzeri varyant, 1'i diffüz sklerozan varyanttı. Uzak metastaz olan 2 olgu klasik tipti. Lenf nodu metastazı, klasik tipte, erkeklerde, 50 yaşından küçüklerde, tümör çapı 7 mm'den büyük olanlarda, lenfatik invazyon bulunanlarda ve infiltratif sınırlı tümörlerde anlamlı şekilde daha fazla görülmekteydi. Kapsüllü tümörlerde invazyon varlığı ve perinöral invazyon bulunması, lenf nodu metastazı ile ilişkili bulunmadı. NİFT-P kriterlerini karşılayan tümörlerin hiç birinde lenf nodu metastazı yoktu. İmmünhistokimyasal değerlendirmelerde, CD73 ile apikal ve nadiren membranöz boyanma gözlendi. Tümör hücrelerinde %80'den yaygın boyanma gösterenlerde, skor 3 şiddetinde boyananlarda veya H-skoru 190'dan fazla olanlarda, lenf nodu metastazının anlamlı olarak daha fazla görüldüğü tespit edildi. Ayrıca skor 3 şiddetinde boyanan bazı vakalarda, tiroidde daha önce literatürde değinilmemiş olan membranöz boyanma paterni gözlendi. Membranöz boyanma izlenen vakalarda lenf nodu metastazı oranının anlamlı şekilde daha yüksek olduğu gözlendi. CD147 immünhistokimyasal incelemesi ile sitoplazmik ve membranöz boyanma izlendi. Lenf nodu metastazı ile anlamlı bir ilişkisinin olmadığı tespit edildi. OPN immünhistokimyasal incelemesi ile sitoplazmik boyanma gözlendi. Tümör hücrelerinde %50'den yaygın boyanma gösterenlerde, skor 2 ve 3 şiddetinde boyananlarda veya H-skoru 100'den fazla olanlarda, lenf nodu metastazının anlamlı düzeyde yüksek olduğu tespit edildi. 
Sonuç: Klasik tip tanılı, 50 yaşından genç ve erkek hastalarda, tümör çapı 7 mm'den fazla olanlarda, lenfatik invazyon bulunan ve infiltratif sınırlı vakalarda lenf nodu metastazı oranının daha yüksek olduğu gözlendi. CD73 ve OPN immünhistokimyasal incelemelerinin, yaygın ve şiddetli ekspresyon izlendiği durumlarda, daha yüksek olasılıkla lenf nodu metastazı olabileceği tespit edildi. CD73'te apikal boyanmaya eşlik eden membranöz boyanmanın, artmış lenf nodu metastazı ile ilişkili olduğu gösterildi. CD147'nin lenf nodu metastazını öngörmede yeri olmadığı gözlendi.

Abstract:
Aim: Papillary thyroid microcarcinomas, which generally has favourable disease outcome, can metastasise to lymph nodes occasionally. Lymph node metastasis is one of the best indicators for disease recurrance. Increased expression of CD73, CD147 and Osteopontin (OPN) antibodies have been shown to be related with the adverse prognostic factors in malignant tumors, such as lymph node metastasis, advanced tumor stage and decreased survival. Our purpose is to define the association between the immunhistochemical expression of CD73, CD147 and OPN antibodies and presence of lymph node and/or distant metastasis in papillary thyroid microcarcinomas. Further we examine the relevance of lymph node metastasis with age, sex, tumor diameter, tumor border features, lymphatic, vascular and perineural invasion. 
Materials and methods: Two hundered forty eight papillary thyroid microcarcinoma cases, which were older than 18 years old, had unicentric and larger than 5 mm tumors and diagnosed between 2006-2019 at Istanbul University, Istanbul Faculty of Medicine, Department of Pathology, were selected. The proper fields of each tumor were signed on the slides and new paraffin blocks were created from the original blocks through using tissue microarray (TMA) process. Immunohistochemistry assays for CD73, CD147 and OPN anitbodies performed on new slides, which were prepared from TMA blocks. Further we evaluated and scored immunohistochemical expressions according to the extensity and intensity of expressions and defined H-score which was calculated by multiplying the extensity and intensity scores. Prognosis data for each case was achieved from General Surgery, Endocrinology and Nuclear Medicine departments, thereby the cases with or without lymph node and/or distant metastasis were defined. Additionally, histomorphological parameters of the cases were noted from the pathology reports. 
Results: There were 20 (8,1%) lymph node metastasis and 2 (0,08%) distant metastasis (mediastinal lymph node) among 248 cases. Eighteen of cases, which had lymph node metastasis, were classical type, 1 case was Warthin-like variant and 1 case was diffuse sclerosing variant. Two cases with distant metastasis were classical type. Lymph node metastasis were significantly more frequent in classical type, males, older than 50 years, tumors that is larger than 7 mm, tumors with lymphatic invasion and infiltrative borders. Capsule invasion or perineural invasion were not relevant with lymph node metastasis. Tumors that fulfilled the criteria of NIFT-P, hadn't got any lymph node metastasis. In immunohistochemistry evaluation, CD73 showed apical and rarely membraneous expression. The expression in ≥80% of tumor cells or intensity score 3 or H-score ≥190, were found relevant with lymph node metastasis. Some of the cases with intensity score 3 revealed membraneous staining pattern, which was not mentioned before, for thyroid tumors. Furthermore, lymph node metastasis is significantly more frequent in cases with membraneous staining. CD147 showed cytoplasmic and membraneous staining. Intensity and/or extensity score of CD147 expression was not correlated with metastasis. OPN showed cytoplasmic staining. The expression in ≥50% of tumor cells or intensity score 2 and 3 or H-score ≥100 were found relevant with lymph node metastasis. 
Conclusion: Lymph node metastasis was significantly more frequent in patients older than 50 years, males, tumors that are larger than 7 mm or tumors that have lymphatic invasion and infiltrative borders. When the expression of CD73 and OPN immunohistochemistry were extensive and severe, lymph node metastasis was observed significantly more frequently. Besides, membraneous expression of CD73 was significantly relevant with lymph node metastasis. Expression of CD147 was not correlated with metastasis. It has showed that CD147 expression hasn't got any significance with lymph node metastasis.