Yeni izole edilmiş Trametes versicolor'un  lakkaz üretim yeteneğinin araştırılması
Investigation of laccase production ability of newly isolated Trametes versicolor
Yazar: TÜLAY TUTAL
Danışman: PROF. DR. ÖZFER YEŞİLADA
İnönü Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Katı faz özütlemesi = Solid phase extraction ; Lakkaz = Laccase ; Trametes versicolor = Trametes versicolor ; Özütleme = Extraction

Özet:
Bu çalışmada yeni izole edilmiş Trametes versicolor suşunun lakkaz üretim yeteneği üç farklı fermentasyon sürecinde araştırılmıştır. Üç fermentasyon sürecinde de fungus lakkaz enzimini üretebilmiştir. Tüm fermentasyon süreçlerinde, bakırın lakkaz üretimi için önemli bir indükleyici olduğu gözlenmiştir. 
Katı faz fermentasyonu sürecinde bakır içermeyen ortamda 20. günde 10.70 U/mL lakkaz aktivitesi saptanırken, bakır içeren ortamda aynı günde bu değer 13.21 U/mL olarak saptanmıştır. 0.5 mM ABTS içeren ortamda 20. günde 5.60 U/mL lakkaz aktivitesi elde edilirken, 0.5 mM ABTS + 10 mM bakır ortamında 27.30 U/mL lakkaz aktivitesine ulaşılmıştır. 10 mM ksilidin içeren ortamda ise 20. günde 5.53 U/mL lakkaz aktivitesi saptanırken, 10 mM ksilidin + 10 mM bakır içeren ortamda ise 22.59 U/mL enzim aktivitesi belirlenmiştir. Sıvı kesikli fermentasyon sürecinde 1 mM bakır içeren ortamda lakkaz aktivitesi önemli oranda indüklenmiş ve lakkaz aktiviteleri 3, 6 ve 9. günlerde sırasıyla 2.25, 19.83 ve 24.57 U/mL'ye ulaşmıştır.  ABTS ve ksilidin bu suşun lakkaz üretimini bakıra göre çok daha düşük düzeyde indüklemiştir. 0.05 mM ABTS + 1 mM bakır içeren ortamda 6. günde 10.50 U/mL lakkaz aktivitesi saptanırken, 1 mM ksilidin + 1 mM bakır içeren ortamda ise 10.69 U/mL enzim aktivitesi belirlenmiştir. Tekrarlı kesikli süreç de lakkaz üretimini önemli oranda indüklemiştir. Bakır içermeyen ortamda düşük düzeyde enzim aktiviteleri saptanırken; bakır içeren ortamda lakkaz aktiviteleri indüklenmiş ve peletlerin 6. kullanımında aktivite 0.66 U/mL' den 9.87 U/mL'ye ulaşmıştır. 1 mM ksilidin + 1 mM bakır içeren ortamda ise lakkaz üretimi güçlü bir şekilde indüklenmiştir. Doğal poliakrilamid jel elektroforezi sonrası yapılan aktivite boyamaları aktif lakkaz bantlarını göstermiştir. 
Sonuçlar, bu suşun iyi bir lakkaz üreticisi olduğunu ve fermentasyon sürecine, üretim zamanına ve kullanılan indükleyiciye bağlı olarak lakkaz üretim veriminin değiştiğini ortaya koymuştur.

Abstract:
In this study, laccase production ability of the newly isolated Trametes versicolor strain was investigated during three different fermentation process. In all three fermentation processes, the fungus was able to produce the laccase enzyme. It has been observed that copper is an important inducer for laccase production in all fermentation processes. 
During the solid phase fermentation process, 10.70 U/mL laccase activity was detected on the 20th day in the medium without copper, while this value was 13.21 U/mL on the same day in the 10 mM copper-containing medium. In the medium containing 0.5 mM ABTS, 5.60 U/mL laccase activity was obtained on 20th day, while the laccase activity reached to 27.30 U/mL in 0.5 mM ABTS + 10 mM copper medium. On the 20th day, 5.53 U/mL laccase activity was detected in the medium containing 10 mM xylidine, while 22.59 U/mL enzyme activity was determined in the medium containing 10 mM xylidine + 10 mM copper. During the liquid batch fermentation process, in the medium containing 1mM copper, laccase activity was significantly induced and laccase activities reached 2.25, 19.83 and 24.57 U/mL on the 3rd, 6th and 9th days, respectively. ABTS and xylidine induce laccase production of this strain at a much lower level than copper. On the 6th day, 10.50 U/mL laccase activity was detected in the medium containing 0.05 mM ABTS + 1 mM copper, while 10.69 U/mL enzyme activity was determined in the medium containing 1 mM xylidine + 1 mM copper. The repeated batch process also significantly induced laccase production. While low level of enzyme activities in copper-free medium detected, laccase activities were induced in the copper-containing medium and for example, the activity reached from 0.66 U/mL to 9.87 U/mL in the 6th use of pellets. In the medium containing 1 mM xylidine + 1 mM copper, laccase production was strongly induced. Activity staining after natural polyacrylamide gel electrophoresis showed active laccase bands.
The results showed that this strain is a good laccase producer and the laccase production yield varies depending on the fermentation process, production time and inducer used.