Fipronilin nöroblastom SH-SY5Y hücre hattında sitotoksik etkisinin araştırılması
Investigation of the cytotoxic effect of fipronil on neuroblastoma SH-SY5Y cell line
Yazar: ÖZGE NUR KANAT
Danışman: PROF. DR. GÜLDENİZ SELMANOĞLU
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Ülkemizde ağırlıklı olarak tahıl, mısır ve ayçiçeği ilaçlamasında kullanılan bir insektisit olan fipronilin sinir hücrelerinin sayısında ve morfolojisinde değişime neden olduğu bilinmektedir, ancak etki mekanizması aydınlatılmamıştır. Sinir hücrelerinde ortaya çıkan hasar çeşitli fizyolojik bozukluklara neden olabildiği gibi, nörodejeneratif hastalıklarla da ilişkili olabilmektedir. 
Bu çalışmada insan sinir hücresi hattı olan SH-SY5Y nöroblastom hücre hattında fipronile maruziyet sonucunda oluşabilecek nörotoksik etkiler araştırılmıştır. Bu tez çalışmasında SH-SY5Y hücreleri 24 ve 48 saat süresince 125, 250 ve 500 µM dozlarında fipronile maruz bırakılmıştır. Uygulama sonrasında fipronilin nörotoksisitesi MTT (3-(4 5-dimethyl thiazol-2-yl)-2 5 difenil tetrazolium bromid) testi, laktat dehidrogenaz (LDH) testi, tripan mavisi boyama ve nötral kırmızısı alım testleri ile incelenmiştir. Diğer yandan çalışmada insan SH-SY5Y nöroblastom hücre hattının fipronile maruziyeti sonucu meydana gelebilecek nörodejeneratif değişiklikler, nöronal hücre iskeleti yapısına katılan nörofilamentlerin immünofloresan boyamalarıyla gösterilmiştir. Ayrıca akridin oranj – propidiyum iyodit boyama ve DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenilindol) yöntemleri ile hücre ölüm tipi ya da tipleri belirlenmiştir. Aynı zamanda, nörofilament alt birimlerinin fosforilasyon dereceleri immünositokimyasal yöntemle belirlenerek fipronilin akson canlılığına etkisi araştırılmıştır.
Yapılan sitotoksisite testi sonuçlarına göre, fipronil doza ve inkübasyon süresine bağlı olarak SH-SY5Y hücrelerinde sitotoksisitede artışa sebep olmuştur. İmmünfloresan boyama sonuçlarına göre fipronilin artan dozlarına ve inkübasyon süresine bağlı olarak nörofilament miktarında azalma olduğu gösterilmiştir. Hücre ölüm tipini belirlemek için yapılan boyamalara göre ise fipronilin apoptotik hücre ölümüne neden olduğu ortaya konulmuştur.

Abstract:
In our country, fipronil, an insecticide that is used to spraying mainly cereals, maize and sunflower causes changes in the number and morphology of nerve cells, but its mechanism has not been elucidated. As the damage occurred in nerve cells may cause various physiological disorders, it may be associated with neurodegenerative diseases. 
In this study, it was investigated that the cytotoxic effects that may occur as a result of exposure to fipronil in SH-SY5Y neuroblastoma cell line which is the human neural cell line. In this thesis, SH-SY5Y exposed to 125, 250 and 500 µM fipronil doses and incubated 24 and 48 hours. Neurotoxic effect of fipronil was examined by MTT (3-(4 5-dimethyl thiazol-2-yl)-2 5 difenil tetrazolium bromid) test, lactate dehydrogenase (LDH) test, Trypan blue dye exclusion test and Neutral red uptake assay.  Also, in this study, neurodegenerative changes that may occur as a result of human SH-SY5Y neuroblastoma cell line exposure to fipronil was examined by, changes may occur in neurofilament participating in the neuronal cytoskeleton structure will be indicated by immunofluorescence staining method. Acridine orange - propidium iodide and DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) staining methods was determined by the type of cell death. At the same time, was investigated the degree of phosphorylation of neurofilament subunits fipronil determining the effect of the axonal viability.
According to the cytotoxicity test results, revealed that fipronil significantly increase cytotoxicity in a concentration and time dependent manner in SH-SY5Y. Besides, according to the immunofluorescence staining results, revealed that fipronil significantly decrease neurofilament content in a concentration and time dependent manner. According to the staining to determine the type of cell death it has been demonstrated fipronil caused apoptotic cell death.