Acı kavun (Ecballium elaterium (L.) A. Rich.) meyve özsuyunun ketende  (Linum usitatissimum L.) sürgün rejenerasyonu ve Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı üzerine etkisi
The effect of squirting cucumber (Ecballium elaterium (L.) A. Rich.) fruit juice on shoot regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer in flax (Linum usitatissimum L.)
Yazar: MURAT AYCAN
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA YILDIZ
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Acı kavun = Squirting cucumber ; Adventif sürgün rejenerasyonu = Adventitious shoot regeneration ; Agrobacterium tumefaciens = Agrobacterium tumefaciens ; Ecballium elaterium = Ecballium elaterium ; Gen aktarımı = Gene transfer ; Gen klonlama = Gene cloning ; Genetik mühendisliği = Genetic engineering ; Linum usitatissimum L. = Linum usitatissimum L.

Özet:
Bu çalışma, acı kavun (Ecballium elaterium (L.) A. Rich.)  meyve  özsuyunun  ketende  (Linum  usitatissimum L.) sürgün rejenerasyonu ve Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı üzerine etkilerini belirlemek amacıyla yürütülmüştür. A.B.D.'nin Kuzey Dakota eyaletinde bulunan "Northern Crop Science Laboratories"den temin edilen 'Madaras' keten (Linum usitatissimum L.) çeşidi kullanılmıştır. Hipokotil eksplantlarının rejenerasyonu üzerinde etkisini araştırmak amacıyla farklı acı kavun meyve özsuyu dozları (0-kontrol, 200, 400, 800 ve 1600 µl/L) otoklavdan sonra bitki büyüme ortamına eklenmiştir. En yüksek sürgün rejenerasyonu, 400 µl/L acı kavun meyve özsuyu uygulamasından alınmıştır. Gen aktarımı çalışmalarında, kanamisine dayanıklılığı belirleyen npt II ve raportör GUS genlerini bulunduran 'pBin 19' plazmidini içeren Agrobacterium tumefaciens'in GV2260 hattı kullanılmıştır. Bakteri büyütme ve inokülasyon ortamlarına farklı dozlarda (0-kontrol, 200, 400, 800 ve 1600 µl/L) acı kavun meyve özsuyu eklenirken, seleksiyon ortamına 400 µl/L meyve özsuyu konulmuştur. Aday transgenik bitkiler üzerinde yapılan moleküler analizler, bakteri büyütme ve inokülasyon ortamına katılan 400 µl/L acı kavun meyve özsuyunun gen aktarım frekansını önemli derecede artırdığını göstermiştir.

Abstract:
The study was conducted to determine the effects of squirting cucumber (Ecballium elaterium (L.) A. Rich.) fruit juice on shoot regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer in flax (Linum usitatissimum L.). 'Madaras' flax (Linum usitatissimum L.) cultivar which was obtained from "Northern Crop Science Laboratories", North Dakota, U.S.A., was used. Different squirting cucumber fruit juice doses (0-control, 200, 400, 800 ve 1600 µl/L) were added to growth medium after autoclaving in order to examine the effect on regeneration of hypocotyl explants. The highest shoot regeneration was obtained from 400 µl/L squirting cucumber fruit juice application. GV2260 line of Agrobacterium tumefaciens having 'pBIN 19' plasmid containing npt II determining kanamycin resistance and GUS reporter genes was used in transformation studies. While different squirting cucumber fruit juice doses (0-control, 200, 400, 800 ve 1600 µl/L) were added to bacteria growth and inoculation medium, 400 µl/L fruit juice was added to selection medium Molecular analysis performed on candidate transgenic plants showed that 400 µl/L squirting cucumber fruit juice added to bacteria growth and inoculation medium increased gene transformation frequency.