Meme kanserinde DZNep ve stauprimid kombinasyonunun MYC gen ekspresyonu üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of DZNep and stauprimid combination on MYC gene expression in breast cancer
Yazar: ÇAĞLAR ÇELEBİ
Danışman: PROF. DR. CUMHUR GÜNDÜZ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: 3-Deazaneplanocin-A = 3-Deazaneplanocin-A ; Gen ifadesi = Gene expression ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Stauprimid = Stauprimide

Özet:
Dünyada kadınlar arasında görülme sıklığı birinci olan meme kanseri, heterojen ve karmaşık bir hastalıktır ve bu heterojenite giderek artmaktadır. Meme kanserinin pek çok alt tipleri bulunmaktadır. Meme kanserinin erken tanısı ve tedavisi hastalığın prognozunda önemli bir yer almaktadır. 
Hücre büyümesi, farklılaşması, apoptoz ve proliferasyonunda anahtar düzenleyici olan MYC geni, meme kanserinin gelişimi ve progresyonuyla da ilişkilidir. Yapılan çalışmalarda MYC geni aşırı ekspresyonunun baskılanmasının meme kanseri hücreleri üzerinde antiproliferatif etki oluşturduğu gösterilmiştir.
Terapötik hedef olarak stauprimid embriyonik kök hücrelerde NME /NM23 nükleosit difosfat kinaz 2 (NME2) nükleer lokalizasyonunu inhibe ederek MYC geninin aşırı ekspresyonunu baskılar. DZNep (3-Deazaneplanocin-A) ise EZH2 (Enhancer of zeste homolog 2) yolağında H3K27me3 metillenmesini inhibe etmektedir. 
Tez kapsamında yapılan çalışmalarda, DZNep ve Stauprimid'in ayrı ayrı ve kombinasyon şeklinde insan meme kanseri hücre hatlarına muamelesi ile sitotoksisitesi, yara iyileşme, klonojenik analiz ve gen ekspresyon deneyleri gerçekleştirilmiştir. 
Stauprimid'in 72. saatte MDA-MB-231 hücre hattı için IC50 dozu 2,74 μM, DZNep'in 182,75 μM, 1:1 oranındaki kombinasyonunun ED50 0,33 μM ve CI (kombinasyon indeksi) 0,134 güçlü sinerjizm, MCF-7 hücre hattı için 72. saatte Stauprimid IC50 2,07 μM, DZNep IC50 115,0 μM, 1:1 oranındaki kombinasyonunun ED50 1,37 μM ve CI 0,671 sinerjizm, MCF-10A hücre hattı için 72. saatte Stauprimid IC50 19,90 μM, DZNep 108,6 μM, 1:1 oranındaki kombinasyonunun ED50 7,90 μM ve CI 0,47 sinerjizm göstermiştir. Yara iyileşme deneyinde, maddelerin kombinasyon uygulamasında ayrı ayrı ajan muamelesi ve kontrol grubuna göre daha az kapanma eğilimi göstermiştir.
DZNep ve Stauprimid ajanlarının kombine tedavi şeklinde kullanılmasının meme kanseri hücreleri üzerinde tek bir anti-tümör özellikte kullanılmasına göre daha anti-prolifaretif etkisinin olduğu gösterilmiş ve bu bağlamda MYC geninin regülasyonu sağlanmıştır. 
Sonuç olarak, her iki etken maddenin MYC geni üzerine etkisinin olması ve apoptozu indüklemesi bu iki ajan arasındaki sinerjistik etki olduğunu göstermektedir. In vivo ve faz çalışmalarının ardından kullanılacak olan kombine terapötik tedavilerde fayda sağlanacağı ön görülmektedir.
Anahtar Kelimeler; Meme Kanseri, EZH2 yolağı, NME2 yolağı, DZNep, Staurpimde, Polikomb Grubu (PcG) Proteinleri

Abstract:
Breast cancer, which is the most prevalent among women in the world, is a heterogeneous and complex disease and this heterogeneity is increasing. There are many subtypes of breast cancer. Early diagnosis and treatment of breast cancer has an important role in the prognosis of the disease. 
The MYC gene, a key regulator of cell growth, differentiation, apoptosis and proliferation, is also associated with the development and progression of breast cancer. Studies have shown that suppression of MYC gene overexpression has an antiproliferative effect on breast cancer cells.
As a therapeutic target, stauprimidine inhibits overexpression of the MYC gene by inhibiting NME / NM23 nucleoside diphosphate kinase 2 (NME2) nuclear localization in embryonic stem cells. DZNep (3-Deazaneplanocin-A) inhibits H3K27me3 methylation in the EZH2 (Enhancer of vine homologous 2) pathway.
According to the data we were obtained, doses effects was detected at 72 h for MDA-MB-231 cell line the IC50 doses of Stauprimide 2.74 µM, DZNep 182.75 µM, the combination of agents 1:1 ratio ED50 0,33 µM and CI (combination index) 0.134 strong synergism, for MCF-7 cell line the IC50 doses of Stauprimide 2.07 µM, DZNep 115.0 µM, the combination of agents 1:1 raito ED50 1.37 µM and CI 0.671 synergism, for MCF-10A cell line the IC50 doses of Stauprimide 19.9 µM, DZNep 108.6 µM, the combination of agents 1:1 ratio ED50 7.9 µM and CI 0.470 synergism. In the wound healing experiment, less closing formation were observed in the combination application of the substances compared to the control group and separate agent treatment. 
The use of DZNep and Stauprimide agents as a combined treatment has been analyzed in flow cytometry, which has a more anti-prolifaretive effect than the use of a single anti-tumor treatment on breast cancer cells. In this context, regulation of MYC gene was achieved.
In the context of all these results, the effect of both agents on MYC gene and induction of apoptosis shows that there is synergistic effect between these two agents. Combined therapeutic therapies to be used after in vivo and phase studies are predicted to be beneficial.
Keywords; Breast Cancer, EZH2 pathway, NME2 pathway, DZNep, Staurpimde, Polycomb Group (PcG) Proteins