Folikül uyarıcı hormon ve testosteronun sıçan aort düz kas hücreleri üzerine in vitro etkileri ve epigenetik analizi
In vitro effects of follicile stimulating hormone and testosterone on rat aortic smooth muscle cells and its epigenetic analysis
Yazar: AYLA BATU
Danışman: PROF. DR. ŞAKİR NECAT YILMAZ
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Aort = Aorta ; Epigenez-genetik = Epigenesis-genetic ; Folikül uyarıcı hormon = Follicle stimulating hormone ; Kas-düz-vasküler = Muscle-smooth-vascular ; Sıçanlar = Rats ; Testosteron = Testosterone ; İn vitro = In vitro

Özet:
Kardiyovasküler hastalıklarda sıklıkla gözlenen ateroskleroz tüm toplumda görülebilir ve komplikasyonları nedeniyle yaşam kalitesini ve süresini etkiler. Bu hastalığın menopoz öncesi kadınlarda görülme sıklığının erkeklere göre daha az olduğu bilinmektedir. Ancak bu durumun nedenleri çok iyi anlaşılamamıştır. Ateroskleroz sonucu endotel hücreleri ve damar duvarındaki düz kas kitlesinin proliferasyonu uyarılır. Prolifere olan hücrelerin hasar bölgesinde birikmesi sonucu damar lümeninde plak oluşumu gözlenir ve bu da damar lümeninin daralmasına neden olur.
Çalışmamızda, aortik düz kas hücre proliferasyonunun FSH ve testosteron hormonlarından nasıl etkilendiğini ve bu etkinin epigenetik sonuçlarını göstermeye çalıştık. Çalışmada kullanılan hücrelere üç farklı dozda testosteron (1 ng/ml, 10 ng/ml, 100 ng/ml) ve folikül uyarıcı hormon (1 ng/ml , 10 ng/ml, 100 ng/ml) uygulandı ve hücrelerin proliferasyon özellikleri, epigenetik değişimleri ve kaveolin-1 ekspresyonları zamana bağlı olarak incelendi. Sonuç olarak, 10 ng/ml FSH uygulanan grupta hormon uygulanmasına bağlı olarak erken saatlerde (44. saatte) proliferasyonda azalan bir etki olduğu ve ilerleyen saatlerde (98. ve 111. saatlerde) ise 100 ng/ml FSH uygulanan grupta proliferasyonda artan bir etki olduğu gözlenirken, testosteronun 100 ng/ml olan konsantrasyonları hücre indekslerinde anlamlı azalmaya yol açtı. Yine sunulan çalışmada immünofloresan işaretleme yöntemi ile Cav-1, DNMT1 ve DNMT3a protein ekspresyonlarına bakıldı ve boyanma yoğunlukları arasında anlamlı bir fark gözlenmedi.
Bu veriler, düz kas hücre metabolizmasının birçok faktörden etkilenebileceğini ve bu durumun ateroskleroz gelişiminde katkı sağlayabileceğini düşündürmüştür. Çalışmanın fark çıkmayan parametreleri için de in vivo çalışmaların planlanması ve farklı faktörlerin de varlığında yeni deneylerin yapılması gerekliliği ortaya çıkmıştır.
Tüm bulgular bir arada değerlendirildiğinde FSH ve testosteronun ateroskleroz patogenezinde düz kaslar üzerinden etkili olabileceği sonucuna ulaşıldı.

Anahtar kelimeler: Aortik düz kas hücreleri, Ateroskleroz, Epigenetik, FSH, Testosteron.

Abstract:
Atherosclerosis that has a high prevalance among cardivascular disease which can be observed by all societes. It affects length and duration of life due to the complications. It is known that the incidence of atherosclerosis in men is higher than in women before menopause. However, the reasons for this situation are not well understood. As a result of atherosclerosis, the proliferation of endothelial cells and smooth muscle mass in the vessel wall are stimulated. The accumulation of cells that proliferate at the injury site causes plaque formation in the vascular lumen which leads to stenosis of the vessels.
In our study, we aimed to show that aortic smooth muscle cell proliferation is affected from FSH or testosterone, and the epigenetic consequences of this effects. Cells were tested with three different doses of testosterone (1 ng/ml, 10 ng/ml, 100 ng/ml) and follicle stimulating hormone (1 ng/ml, 10 ng/ml, 100 ng/ml) to the cells and time dependent variations of cell proliferation, epigenetic changes and caveolin-1 expression were examined. Whereas depending on the applying hormone, the 10 ng / ml FSH hormone treated groups showed deceasing of proliferation, later (98 and 111 hours) the 100 ng / ml FSH hormone treated groups had increasing of proliferation. Moreover, we observed all 100 ng/ml testosterone hormone treated groups had increasing effets of cell index and these findings are significant for statistical analysis. 10 ng/ml FSH treatment group hormones in the early hours, depending on the applied (44 hours) a decreasing influence where and later (98 and 111 Hours) and 100 ng/ml FSH is a growing influence in the treated group testosterone was observed with 100 ng/ml concentration has led to a significant decrease in cell index. In this study, we examined Cav-1, DNMT1 and DNMT3a protein expressions by using immunofluorescence labeling method and none of the antibodies showed significant differences among staining intensities between the groups.
Our results suggest that smooth muscle cell metabolism can be affected by many factors and this can contribute to the development of atherosclerosis. Our results suggest that, in vivo studies must be planned for the insignificant results of this study and these new experiments must perform in the presence of different factors.
When all results are evaluated together, we suggest that FSH and testosterone can be effective on the smooth muscle in the pathogenesis of atherosclerosis. 

Key Words: Aortic smooth muscle cells, Atherosclerosis, Epigenetic, FSH, Testosterone.