Paklitaksel
(-)- Gossypol (AT-101) kombinasyonunun meme kanseri hücre hattında sinerjistik sitotoksik ve apopitotik etkileri / Synergistic cytotoxic and apoptotic effects of Paclitaxel/ (-)- Gossypol (AT-101) combination in breast cancer cell line
Yazar: KANİ MASAROĞULLARI
Danışman: PROF. DR. ULUS ALİ ŞANLI
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Aldehitler = Aldehydes ; Apoptozis = Apoptosis ; Gossypol = Gossypol ; Hücre dizisi = Cell line ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm hücreleri-dolaşan = Neoplastic cells-circulating ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Paklitaksel = Paclitaxel ; Polifenol = Polyphenol ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Meme kanseri kadınlarda en sık tanı konulan kanserdir. Konvansiyonel ajanlara direnç gelişmesi meme kanseri tedavisindeki en büyük zorluklardan biridir. Sitotoksik ajanlara ikinci bir ilaç eklemek, ilaç direnci problemi için bir çözüm olabilir. Gossypol, gossypium türünden bir pamuk bitkisinin ekstresinden elde edilen yağda çüzünür, doğal polifenolik bir bileşiktir. Birçok kanser türünde hücre büyümesi üzerinde güçlü inhibitör etkileri olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmada meme kanseri hücre hatlarında gossypol ile paklitakselin farklı dozlarda kombinasyonlarının olası sinerjistik sitotoksik ve apopitotik etkileri araştırılmıştır. Gossypol'ün en potent formu olan AT101 [(-)- gossypol] kullanılmıştır. Değişik oranlarda kombinasyonların MCF-7 hücre hattında 72 saat muamele edilmesi sonucu saptanan sitotoksisite yüzdeleri, CalcuSyn programına girilerek kombinasyonların CI (Kombinasyon Indeks) değerleri hesaplanmıştır. Araştırılan 7 adet kombinasyondan 6 tanesinde sinerjizm, bunların ikisinde kuvvetli sinerjizim ve 1 tanesinde de additif etki gözlenmiştir. En yüksek sinerjizm gösteren ilk dört kombinasyonun, sinerjistik etkilerinin apopitozise bağlı olarak gerçekleşip gerçekleşmediğini belirlemek üzere Cell Death Detection Kit (Roche) kullanılarak kantitatif ölçüm yapılmıştır. AT-101 ve paklitaksel kombinasyonun sinerjistik dozlarındaki apopitotik etkinliği, tekli kullanıma göre istatistiksel olarak anlamlı derecede artış göstermiştir (p<0.05). Paklitaksel ve AT-101 kombinasyonunun MCF-7 hücre hattındaki apopitotik etkilerinin ikinci kez gösterilmesi için Live/Dead Viability-Cytotoxicity Kit (Molecular Probe Inc., OR) kullanılarak test yapıldı. Çalışmamızda, AT-101 ve paklitaksel kombinasyonun güçlü sitotoksik ve apopitotik etkileri olduğu gösterilmiş olup, bu sonuçlar daha önce yapılan benzer çalışmalarla uyumlu bulunmuştur. Çalışmadan elde edilen veriler ve kullanılan ilaçların apopitozis mekanizmaları göz önüne alındığında, her iki ilacın da MCF-7 hücre hattında, anti-apopitotik Bcl-2 aktivasyonunu baskılayarak apopitozisisi indükledikleri düşünülebilir. Bu iki ajanın düşük dozlarda sinerjistik etki göstermeleri, klinik kullanımda hem etkinliği artırabilecek hem de yan etki profilini azaltabilecektir. Paklitaksel ve AT-101 kombinasyonu özellikle tedaviye refrakter, ilaç direnci gelişmiş olan metastatik meme kanserli olgularda potansiyel bir kombinasyon olabilir.

Abstract:
Breast cancer is the most common cancer diagnosed in women. Resistance to conventional cytotoxic agents is one of the hard events of breast cancer treatment. Adding a second drug to the cytotoxic agents might be a solution for the drug resistance problem. Gossypol is a natural polyphenolic, lipid soluble compound extracted from cotton plant (Gossypium species) which was shown to have potent inhibitor effect on cell growth of many types of cancer. In this study, possible cytotoxic and apoptotic effects of gossypol and paclitaxel with different combination doses in the breast cancer cell lines were researched. The most potent form of gossypol (AT 101[(-)- gossypol]) was used. Cytotoxicity percentages in 72nd hour in the MCF-7 cell lines by using different combinations of paclitaxel and AT-101 was obtained. Then, these values were entered in the CalcuSyn program and calculated Combination Index levels. Out of the 7 researched combination, 6 of them showed synergism: 2 of them showed strong synergism and 1 showed additive effect. Quantitative measures were done by using the Cell Death Detection Kit (Roche) to see if the synergistic effects were seen depending on the apoptosis in the first four combination that showed highest synergy. The apoptotic effectiveness of the synergistic doses of the AT 101 and paclitaxel combinations were statistically increased according to the single usage (p<0.05). Another test was done by using Live/Dead Viability Cytotoxicity Kit (Molecular Probe Inc., OR) in order to see the apopitotic effects second time in the MCF-7 cell lines by using the paklitaxel and AT-101 combinations. In our study, cytotoxic and apoptotic effects of the AT-101 and paclitaxel combinations were shown, the results were found identical with the previous studies. When looked at the data that was received and the drugs? apoptosis mechanisms, it might be thought that two drugs in the MCF-7 cell line induced apopitosis by downregulating the anti-apopitotic Bcl-2 activation. Those two agents or medications that showed synergistic effects at low levels can be used clinically with more effectiveness and can decrease the side effects. Paclitaxel and AT-101 combination especially can be used for the medication resistant, metastatic breast cancer forms.