Puromisin aminonükleosit uygulamasıyla oluşturulmuş sıçan böbrek hasarı modelinde stat3 proteini ifadesindeki değişikliklerin incelenmesi
The investigation of stat3 protein expression changes in rat kidney injury model induced by puromycin aminonucleoside application
Yazar: HALİL İBRAHİM SAYGI
Danışman: PROF. DR. İSMAİL SEÇKİN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Böbrek yetmezliği = Kidney failure ; Glomerüler filtrasyon = Glomerular filtration ; Glomerülonefrit = Glomerulonephritis ; Nefroz = Nephrosis ; Proteinüri = Proteinuria ; Puromisin aminonükleosit = Puromycin aminonucleoside ; Sıçanlar = Rats ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Glomerüldeki hasarlar glomerül kaybına ve devamında da börek fonksiyonlarının yitirilmesine sebep olabilmektedir. Son zamanlardaki çalışmalar JAK/STAT yolağının glomerüler hasarlarda rol aldığını ortaya koymuştur. STAT3'ün hem büyüme faktörleri gibi hücre dışı hem de oksidatif stres gibi hücre içi uyarımlardan etkileniyor oluşu STAT3'ü glomerül açısından önemli kılmıştır. Glomerüler hasar modellerinden birisi olan PAN'ın oksidatif strese dayalı olarak geliştiği düşünülmektedir. Bu çalışmada PAN modeli kullanılarak glomerül hasarında STAT3 proteinlerinin etkilenmesi incelenmiştir.
Kontrol grubu ve 5 gün boyunca 1,5 mg/100 gr PA'nın i.p. olarak uygulanmasına takiben farklı günlerde sakrifiye edilen 5., 15. ve 25. Gün grupları oluşturuldu. Deney esnasında farklı günlerde toplanan 24 saatlik idrarlarla proteinüri takibi yapıldı ve deney bitiminde böbrek dokuları pSTAT ve tSTAT antikorlarıyla immünohistokimyasal, PAS-Hemaluan boyasıyla ışık mikroskobik ve elektron mikroskobisiyle ultrastrüktürel olarak incelendi.
Kontrol ve 5. Gün grupları proteinüri göstermezken, 15. Gün grubunda proteinüri seviyesi en yüksek değerlere ulaştı ve 25. Gün grubunda azalarak Kontrol grubuna yakın değerlere yaklaştı. Ultrastrüktürel inceleme ve ölçümlerde 5. ve 15. Gün gruplarında SP sayısının azalması, GBM kalınlığının giderek artması, podositlerin hipertrofik hale gelmesi, PAG granüllerinin oluşması gibi glomerüler hasarlar tespit edildi. Yine 5. ve 15. Gün gruplarında belirgin bir biçimde giderek artan mezangial matriks ve pSTAT immünoreaktivitesi artışı tespit edildi. Bu değerler iyileşme gösteren 25. Gün grubunda azalarak Kontrol grubu değerlerine yakın seviyelere yaklaştı. tSTAT immünoreaktivitesi ise ilk artışını 15. Gün grubunda gösterdi ve daha sonra 25. Gün grubunda pSTAT'la birlikte hafif azalma sergiledi.
Tüm gruplar birlikte değerlendirildiğinde pSTAT ve tSTAT artışlarının hipertrofik podositler, mezangial matriks artışı ve anjiyogenezle ilişkili olduğu düşünülmüştür.

Abstract:
Glomerular damages may lead to glomerular losses which can result in end stage renal diseases. Recent studies showed that JAK/STAT pathway has some roles in glomerular damages. The fact that STAT3 could be activated both by extracellular (e.g. growth factors) and intracellular (e.g. oxidative stress) stimulants make STAT3 very important for the glomerulus. One of the animal models that represent glomerular damages is PAN model which is thought to be due to oxidative stress. In this study, glomerular STAT3 expression changes are aimed to be evaluated in PAN model.
Along with a Control group, three PAN groups which were sacrificed on different days were formed by the i.p. injection of PA for 5 days. Throughout the experiment, 24-hour-urines were collected on specific days and level of urinary proteins was monitored. At the end of the experiments, tissue specimens were stained with pSTAT and tSTAT antibodies. Moreover they also examined ultrastructurally in electron-microscope and stained with PAS-Hemaluan for light-microscope.
The proteinuria levels did not increase in Control and 5th Day groups but showed a dramatic increase in 15th Day group. In 25th Day group, urinary protein levels decreased and become close to Control group. Ultrastructural findings showed glomerular damages such as decrease in SP number, a gradual increase in GBM thickness, podocyte hypertrophy and formation of PAGs in 5th and 15th Day groups.  Increase in mesangial matrix and pSTAT immunoreactivity was detected. These changes come close to Control group levels in 25th Day group which showed a recovery. On the other hand tSTAT immunoreactivity showed its first increase in 15th Day group.
Regarding all the groups, it was thought that the increases in the pSTAT and tSTAT immunoreactivity levels are related to hypertrophy in podocytes, mesangial matrix expansion and angiogenesis.