Mesane tümörünü tedavi edici etkiden sorumlu mikobakteri hücre duvarı bileşenlerinin HPLC ile ayrıştırılması
Separation of mycobacterial cell wall extracts with HPLC responsible for therapy of bladder cancer
Yazar: ZELİHA ERTÜRK
Danışman: PROF. DR. NACİYE LEYLA AÇAN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Hücre zarı = Cell membrane ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Mesane = Urinary bladder ; Mesane neoplazmları = Urinary bladder neoplasms ; Mycobacterium = Mycobacterium ; Mycobacterium brumae = Mycobacterium brumae

Özet:
BCG, Mycobacterium bovis'in tüberküloz aşısı olarak kullanılan bir suşu olup, bunun dışında yüzeyel mesane tümörlerinin tedavisinde de oldukça etkilidir. Ancak tedavide patojen olan BCG canlı bir şekilde mesane içine verildiğinden, bu uygulama birçok yan etkileri beraberinde getirmektedir. Araştırmalar patojen olmayan başka mikobakteri suşlarının çeşitli hücre ekstreleri üzerine yoğunlaşmıştır. Bu çalışmada BCG'nin yerini alabilecek insan için zararsız mikobakteri türleri ve bu etkiden sorumlu hücre duvarı ekstrelerinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu çalışma SBAG-SANTEZ-5-105S361 no.lu projenin bir parçası olup, daha önceki aşamada TNF-alfa ve IL-12 yanıtları M. phlei ile karşılaştırılan 95 mikobakteri suşu içerisinden 12 tanesi aday olarak seçildi. Bunlar içerisinden ön deneylerde sitotoksik aktivite tespit edilemeyen veya çok zayıf aktivite gösteren 6 tanesi elendi. Kalan 6 suşun IC 50 değerleri MTT ile tespit edildi. IC50 değerleri sitokin yanıtları ile birlikte değerlendirilerek M. bovis ve M. phlei ile en çok benzeşen M. brumae ile çalışılmasına karar verildi. M. brumae hücrelerinin sonikasyonu ile elde edilen supernatan C18 ve SCX kolonlar kullanılarak ileri düzeyde ayrıştırıldı. Örneklerin protein ve şeker derişimleri belirlendi ve MALDITOF/MS profilleri çıkarıldı.

Abstract:
BCG is a strain of M. bovis used as tuberculosis vaccine and in addition effective in therapy of superficial bladder cancer. But during therapy pathogen BCG is given into the bladder in lively form and this application leads to a lot of side effects. Researchs have focused on the use of various cell extracts of other non-pathogenic mycobacterial strains. This study aims to investigate mycobacterial strains, which are non-pathogen for human and will be used instead of BCG and their cell wall extracts responsible for this effect. This study is a part of SBAG-SANTEZ-5105S361 project and in the previous stage 12 from 95 mycobacterial strains whose TNF-alfa and IL-12 responses were compared with M. phlei?s was selected as candidate. 6 of them which did not show sufficient cytotoxic activity in preliminary experiments was eliminated. The IC 50 values of remaining 6 strains were determined by MTT. By evaluating IC50 values with cytokine responses together it was decided to study with M. brumae which is very similar to M. bovis and M. phlei. Supernatant obtained by sonication of M. brumae cells was separated by using C18 and SCX columns. Protein and sugar concentration of each fractions were determined and they were analysed by MALDI-TOF/MS.