Trombositten zengin fibrin kökenli mezenkimal kök hücrelerin klinikte uygulanabilir üretim şartlarının araştırılması
investigation of clinically applicable manufacturingconditions of thrombocyte rich fibrine origined mesenchimal  stem cells
Yazar: BUKET BANU ÖZKAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEYNEP BURÇİN GÖNEN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Hücreler = Cells ; Kök hücreler = Stem cells ; Tedavi = Treatment ; Trombositten zengin fibrin = Platelet rich fibrin

Özet:
Bu çalışmanın amacı, MKH' lerin TZF' nin fibrin yapısında bulunabileceği hipotezinden yola çıkılarak, kişide invaziv herhangi bir cerrahi işlem gerektirmeden, kişi konforunu etkilemeden, direkt olarak venöz damardan alınan kan ile TZF elde edilmesi ve bu dokudan da MKH elde edilmesini sağlamaktır. Elde edilecek MKH' lerin klinik olarak uygulanabilir hale (GMP grade) getirilen yeni bir kök hücre kaynağı olması amaçladı. 
Gönüllülerden alınan kan, 2500 rpm'de 12 dk süreyle santrifüj edilerek TZF elde edildi. TZF' lerin kültüre edilmesi ile elde edilen TZF-MKH' ler, adipojenik, osteojenik, kondrojenik farklılaşma testlerine, akım sitometri cihazı ile yüzey belirteçleri analizine, primer kültürden çıkma sürelerine ve koloni oluşturma özelliklerine göre değerlendirildi. TZF-MKH' lerin akım sitometri cihazı ile analizi sonucunda elde edilen tüm yüzey belirteçlerinin ortalamaları istatistiksel olarak değerlendirildi. 
Sonuçta, TZF'den %10 insan serumu içeren D-Lizin kaplı kültür kabında alfa modifiye besiyeri koşullarında MKH elde edilebilir. TZF-MKH'ler CD 44, CD 73, CD 90, CD 105 yüzey belirteçlerini ifade ettiklerini, negatif kokteyl olarak kullanılan CD 11b, CD 19, CD 45, CD 34 ve HLA-DR yüzey belirteçlerini ifade etmedikleri belirlendi. Ayrıca bu hücrelerin adipojenik, osteojenik ve kondrojenik olarak farklılaştığı adipo red, alizarin red ve floresans boyamalar ile gösterildi. Elde edilen TZF-MKH' lerin primer kültüre alındıkları günden 1.pasaj işlemine alındığı güne kadar geçen sürenin ortalama 17,6±3,3 gün olduğu tespit edildi. Sonuç olarak; TZF, klinik olarak kullanılabilir üretim şartları altında MKH üretiminin sağlanabildiği yeni bir mezenkimal kök hücre kaynağıdır.
Anahtar Kelimeler: Mezenkimal Kök Hücre, Trombositten Zengin Fibrin, Kök Hücre Kaynağı, Hücresel Tedavi

Abstract:
The aim of this study, based on the hypothesis that MSCs can be existed among fibrin structures in the PRF, was to obtain PRF with the blood taken directly from the venous vein and to ensure to obtain MSC from also this tissue without requiring any invasive surgical operation and without affecting the comfort of the person. The MSCs to be obtained were intended to be a new source of stem cells, made clinically applicable (GMP grade).
Blood from the volunteers was centrifuged at 2500 rpm for 12 minutes to obtain PRF. The PRF-MSCs obtained from cultivation of PRF, according to adipogenic, osteogenic, and chondrogenic differentiation tests, and surface markers analysis by flow cytometry device, and their duration to come out of primary culture, and colony-forming properties. The mean of all surface indicators obtained by the analysis of 10 PRF-MSCs via the flow cytometry device was evaluated statistically. 
As a result, MSC can be derived from PRF by using D-lysine treated culture flasks and 10% human sera containing alpha modified culture media. According to this evaluation, it was determined that the results showed the surface indicators of CD 44, CD 73, CD 90, and CD 105 as a positive coctail, but did not show the surface indicators of CD 11b, CD 19, CD 45, CD 34, and HLA-DR which were used as negative cocktail. In addition, adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation of these cells was demonstrated by adipo red, alizarin red, and fluorescent stainings. The mean time from the day of the primer culture to the first passage was evaluated statistically and it was found to be 17.6 ± 3.3 days. The fact that the PRF-MSCs were able to form a colony was determined by staining with crystal violet  after the CFU test. As a result; PRF is a new available source of mesenchymal stem cells which is produced under clinically GMP conditions for clinical applications.
Keywords: Mesenchymal Stem Cell, Platelet Rich Fibrin, Stem Cell Origin, Cell Therapy