Çay (Camellia sinensis L.) bitkisinden obestatin-benzeri immünoreaktif maddelerin izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Isolation, purification and characterize of obestatin-like immunoreactive substances from tea (Camellia sinensis L.)
Yazar: İFTİHAR TEMİZYÜREK
Danışman: DOÇ. DR. MUSTAFA CALAPOĞLU
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Obestatin son yıllarda grelin geni ürünü olarak tanımlanan 23 amino asitten oluşan  yeni bir hormondur. Vücut ağırlığının denetiminde zıt etkili olan obestatin ve grelin  peptid hormonları aynı grelin geninden oluşurlar. Obestatin besin alınımında azalma,  kilo kaybı, gastrik boşalmada azalma, susama ve anksiyeteyi azaltma,  hafızayı  geliştirme, uykuyu düzenleme, pankreas suyu enzimlerinin salgılanmasında artış, G  protein - bağımlı orphan reseptör 39 (GPR39) etkileşimi yoluyla intestinal motilitenin  baskılanmasını sağlamakta ve ayrıca enerji ve glukoz metabolizmasında düzenleyic i  rol oynamaktadır. Obestatin memeliler,  kuşlar ve amfibiler gruplarına ait türlerde de  tanımlanmıştır ve grelin sekansı evolüsyon boyunca iyi korunmuştur.  Bu çalışmada amaç, Çay ( Cameelia sinensis L. ) bitkisinin  taze doku larında grelin benzeri immünoreaktif maddeleri tesbit etmektir. Total protein,  QB tamponu kullanılarak bitki örneklerinden ekstre edildi.  Cameelia sinensis L.  ekstraktında  o bestatin immünoreaktivitesi direk ELISA ile  belirlendi .  Cameelia sinensis  L. ' nin total protein ekstraklar ından  insan obestatin benzeri immünoreaktif maddeler trisin - SDS - PAGE ve immünoblot teknikleri ile karakterize edil di . Sonuç olarak,  insan serumunda ve  Cameelia sinensis L.' nin  total protein ekstraktında  total obestatin immünoreaktivitesi sırasıyla 0,121 ± 0,053  μg/mL  ve 0,087 ± 0,012  μg/mL  olarak bulundu. Ayrıca  trisin - SDS - PAGE ve western blot ile  yapılan  obestatin karakterizasyonda  12 kDa'lık moleküler kütleye sahip tek bir obe statin  immünoreaktivitesi gösteren protein bandı elde edildi. Çalışmadan elde edilen veriler, obestatin h em hayvanlar aleminde ve  hem de bitkiler  a leminde de evrensel  bir peptid olabileceğini göstermektedir . Bitkilerde farklı  düzeylerde bulunan obestatin - benzeri immünoreaktif maddeler insanlarda kilo  denetimine katkı sağlayabilir.

Anahtar Kelimeler: Obestatin,  Camellia sinensis (L.) Heynh.  ghrelin - benzeri  maddeler ,  trisin - SDS - PAGE

Abstract:
Obestatin is a novel 23 – amino acid amidated peptide, recently identified as a product  of the ghrelin gene. Obestatin and ghrelin peptide hormones with opposing action in  weight regulation are derived from the same ghrelin gene. Obestatin has been reported to reduce food intake, body weight gain, gastric emptying, inhibiting thirst  and anxiety, improving memory, regulating sleep, affecting cell proliferation,  increasing the secretion of pancreatic juice enzymes, suppressing intestinal motility  thro ugh an interaction with the G protein - coupled orphan receptor (GPR39), and also  play a role regulation of energy and glucose metabolism .  Obestatin has also been  identified in many other species belonging to the mammals, birds, fish and  amphibians, and its  sequence is well conserved throughout evolution. In this study, the aim is to determine obestatin - like immunoreactive substances in  fresh vegetative tissue of tea ( Camellia sinensis  L. ) Total proteins were extracted  from the plant samples using the QB buff er as a extraction buffer. Obestatin - like  immunoreactive substances in  Camellia sinensis  L. extracts were investigated using a  direct home - made ELISA. Human obestatin - like immunorective substances from  Camellia sinensis  L. were isolated and characterised b y tricine - SDS - PAGE and  immunoblotting techniques.  As a result,  ELISA demonstrated that human obestatin and human obestatin - like  immunorective substances from  Camellia sinensis  L. were present at concentrations  of 0,121 ± 0,053 μg/mL and  0,087 ± 0.012 μg/m L, respectively.  A single obestatin - like protein band appeared about molecular mass of 12 kDa on tricine - SDS - PAGE  and western blotting in fresh vejetatif tissues of  Camellia sinensis  L. Both animal and plant worlds give the idea that obestatin is  universal. Plants  contained different levels obestatin - like substances may be contribute on weight  control in human.

Key words: Obestatin,  Camellia sinensis (L.) Heynh.  obestatin - like substances ,  tricine - SDS - PAGE