(-)- Gossipolün (AT-101) AtT-20/D16v-F2 pitüiter kortikotrop adenom hücreleri üzerindeki sitotoksik, apopitotik ve hormon salgısı üzerine etkilerinin araştırılması
Effects of (-)- Gossypol (AT-101) on cytotoxicity, apoptosis and hormone release in AtT-20/D16v-F2 pituitary corticotroph adenoma cells
Yazar: BANU PINAR ŞARER YÜREKLİ
Danışman: PROF. DR. FÜSUN SAYGILI
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Endokrinoloji ve Metabolizma Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases
Dizin: Adrenokortikotropik hormon = Adrenocorticotropic hormone ; Apoptozis = Apoptosis ; Cushing sendromu = Cushing syndrome ; Gossypol = Gossypol ; Hipofiz bezi = Pituitary gland ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Cushing hastalığı pitüiter kortikotrop adenom hücrelerinden aşırı adrenokortikotropik hormon (ACTH) salınımı ile oluşur. Standart tedavi şekli olan cerrahi ve radyoterapi her zaman başarılı olmamakta ve nüks görülebilmektedir. Pamuk bitkisinden (Gossypium türleri) elde edilen polifenolik yapıdaki (-)- gossipol (AT-101), birçok tümör hücresinde proliferasyonu engellemektedir. Pitüiter tümör hücresi üzerindeki etkisi bilinmemektedir. Bu çalışmadaki amacımız gossipolün pitüiter adenom hücrelerinde hücre proliferasyonu ve hormon salınımı üzerine etkisinin olup olmadığının araştırılmasıdır. Fare AtT-20/D16v-F2 kortikotrop adenom hücreleri, AT-101'in (-/- gossypol, 0.5-30 µM) artan konsantrasyonları ile 24-48-72 saat süreyle muamele edildi. Hücre canlılığı, ?XTT Cell Proliferation Assay? ile değerlendirildi. Apopitoz, ?Cell Death Detection Elisa Plus Kit? ile değerlendirildi ve ?Caspase-Glo 3/7 Assay? ile doğrulama yoluna gidildi. Apopitotik hücreler akridin oranj testi kullanılarak floresan mikroskopta gözlendi. AT-101'in, AtT-20 kortikotrop hücrelerde zamana ve doza bağımlı bir şeklide hücre proliferasyonunu engellediği görüldü. AT-101'in IC50 değeri, 72. saatte 5.4 µM idi. Histon-DNA fragmentasyon değeri, 6 µM AT-101 ile %55.1, 9 µM AT-101 ile %72.7 olarak ölçüldü (p<0.01). Kaspaz 3/7 enzim aktivitesi, 6 µM AT-101 ile %46.1, 9 µM AT-101 ile %64.8 olarak ölçüldü (p<0.01). 0.5 µM AT-101 ile tedavi edilmiş AtT-20 hücrelerinde ACTH 42.3 ng/ml iken, tedavi edilmemiş hücrelerde ACTH 161.1 ng/ml olarak ölçüldü (p<0.05). Bu çalışmayla gossipolün pitüiter hücre proliferasyonunu inhibe ettiğini, apopitozu indüklediğini ve ACTH salınımını inhibe ettiğini gösterdik. Gossipolün, Cushing hastalığının tedavisinde yeni bir töropatik ajan olarak ileri çalışmalarla değerlendirilebileceğini öne sürüyoruz.

Abstract:
Cushing disease results from excess adrenocorticotrophic hormone (ACTH) secreted by pituitary corticotroph tumors. Standard treatment including surgery and radiotherapy is not successful every time and recurrence is frequent. (-)- Gossypol (AT-101), which is a polyphenolic compound extracted from cotton plant (Gossypium species), inhibits the proliferation of several tumor cell lines; however, its effect on pituitary tumor cell proliferation has not been determined. Our objective was to determine whether gossypol has inhibitory effect on cell proliferation and hormone release. Mouse corticotroph AtT20/D16v-F2 cells was treated with increasing concentrations of AT-101 (-/- gossypol, 0.5-30 µM) for 24-48-72 hours. Cell viability was determined by XTT Cell Proliferation Assay. Apoptosis was detected by Cell Death Detection Elisa Plus Kit and confirmed by Caspase-Glo 3/7 Assay. Apoptotic cells are shown by fluorescence microscop with acridin orange test. AT-101 inhibited cell proliferation of AtT-20 corticotroph cells in a time and dose dependent manner. IC50 value of AT-101 at 72 hour was 5.4 µM. Histone-DNA fragmentation was measured as 55.1% with dose of 6 µM AT-101, 72.7% with dose of 9 µM AT-101 (p<0.01). Caspase 3/7 enzyme activity was 46.1% with 6 µM AT-101, 64.8% with 9 µM At-101 (p<0.01). ACTH was measured after treatment of AtT-20 cells with AT-101. ACTH was measured as 161.1 ng/ml in untreated cells and as 42.3 ng/ml in treated cells with 0.5 µM AT-101 (p<0.05). We demonastrate that gossypol inhibits pituitary tumor cell proliferation and induces apoptosis. We propose that gossypol should be further evaluated as a novel therapeutic agent in management of Cushing disease.