Akut ekstremite iskemisine bırakılan ratlarda (sıçanlarda) ozon tedavisinin ekstremite üzerine etkisi
The effect of ozone treatment on extremity in rats with acute limb ischemia master's thesis in medicine
Yazar: KAAN ALTUNYUVA
Danışman: PROF. DR. EMİN TİRELİ
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi = Thoracic and Cardiovascular Surgery
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Ekstremiteler = Extremities ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Ozon = Ozone ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; Tedavi = Treatment ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Alt ekstremite iskemisi akut veya kronik olarak ülkemizde sık olarak
karşımıza çıkan, multifaktöriyel olarak prezentasyon gösteren, önemli mortalite ve
morbidite sebeplerinden biridir. İskemi sırasında oluşan hipoksi ve revaskülarizasyon
sonrası oluşan reperfüzyon hasarı dokularda reversible ve irreversible hasarlar
oluşturmaktadırlar.
Kontrollü ozon uygulamasının, iskemiye ve reperfüzyon sırasında oluşacak olan
oksidatif strese karşı koruma sağlayacağı, adaptasyonu teşvik edeceği, reaktif oksijen
türlerinin neden olduğu hasarı önlediği ve iskemi-reperfüzyon (I / R) hasarına karşı
koruyucu olabileceği gösterilmiştir. Bu çalışmada, alt ekstremite iskemisine maruz
bırakılan ratlarda ozon tedavisinin ekstremite üzerine olan etkisini araştırmayı planladık.
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada ortalama ağırlıkları 200-400 gr olan 21 adet
Wistar Albino cinsi sıçan rastgele 3 gruba ayrıldı. Kontrol grubu(n=5) sıçanlara sadece
deri altı kesi yapıldı. İskemi-reperfüzyon (İR) grubu(n=8) sıçanlarda infrarenal abdominal
aort 60 dk süreyle klemplenerek iskemi oluşturuldu, sonra klempler kaldırılarak 120 dk
reperfüzyon yapıldı. İskemi-reperfüzyon (İR)+tedavi(n=8) grubu sıçanlara cerrahi
işlemden 4 gün önce başlanılarak her gün tek doz intraperitoneal yolla 20 mcg/ml medikal
ozon uygulandı. Ozon tedavisi tamamlandıktan sonra sıçanlarda infrarenal abdominal
aort 60 dk süreyle klemplenerek iskemi oluşturuldu, sonra klempler kaldırılarak 120 dk
reperfüzyon yapıldı. Reperfüzyon süresi bitince kontrol grubu da dahil olmak üzere tüm
sıçanlar sakrifiye edilerek uygun kan örnekleri alındı, gastroknemius kas dokusu
biyokimyasal değerlendirme için çıkarılarak uygun koşullarda saklandı.
İncelemeler serum ile kas dokusunda yapıldı ve özellikle prooksidan-antioksidan
sistem ve inflamasyon ile ilgili değişimler araştırıldı. Bu çerçevede serum ve dokuda
reaktif oksijen radikalleri (ROS), malondialdehit (MDA), proteinlerin ileri oksidasyon
ürünleri (AOPP), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-α) ve nükleer faktör eritroid 2 ilişkili
faktör 2 (NRF2) düzeyleri; total antioksidan kapasite ile antioksidan enzim aktiviteleri
ölçüldü. Ayrıca dokuda glutatyon (GSH) düzeyleri tayin edildi. 
Bulgular: Biyokimyasal incelemelerde; serum ROS, MDA, AOPP, GSH ve
FRAP, TNFα, NRF2 düzeyleri, antioksidan enzim aktivitelerinde değişim gözlenmedi.
 Kas dokusu oksidan sistem üzerinde yapılan incelemelerde; ROS, MDA, AOPP
düzeylerinde iskemi-reperfüzyon ile artış saptandı. Medikal ozon uygulamasının kas
dokusunda prooksidan durumunu azalttığı saptandı.
 Yine kas dokusunda antioksidan sistem üzerinde yapılan incelemlerde GSH ve
SOD değerlerinde iskemi ile anlamlı düşüş farkedildi. Ozon (O3) tedavi uygulaması ile
bu değerlerde anlamlı artış saptandı. İ/R hasarının bir sonucu olarak kas dokusunda
TNF-a düzeylerinde değişim gözlenmedi, NRF2 'da ise anlamlı artış saptandı.
Sonuç: Sonuç olarak, İR grubunda alt ekstremitede iskemi- reperfüzyon hasarı
oluştuğunu ve ozon tedavisinin bu hasara karşı koruyucu etkisinin olduğunu
söyleyebiliriz.

Anahtar Kelimeler: Antioksidan, İskemi-reperfüzyon, ozon

Abstract:
Objective: Lower extremity ischemia is one of the major causes of mortality and
morbidity presenting as a multifactorial presentation which is frequently seen in our
country as acute or chronic. The reperfusion injury caused by hypoxia and
revascularization during ischemia is reversible and irreversible.
It has been shown that controlled ozone administration will provide protection
against the oxidative stress that will occur during ischemia and reperfusion, or stimulate
adaptation, prevent damage caused by reactive oxygen species and protect against
ischemia-reperfusion (I / R) damage. In this study, we are planning to investigate the
effect of ozone therapy on the extremities in rats with lower extremity ischemia.
Materials and Methods: In this study, 21 Wistar Albino rats with an average
weight of 200-400 g were randomly divided into 3 groups. Only subcutaneous incision
was made to the ratsin the control group (n = 5). Ischemia-reperfusion (IR) group (n = 8)
was applied to theischemia by clamping the infrarenal abdominal aorta for 60 min in rats.
After the clampswere removed, reperfusion was performed for 120 min. Ischemiareperfusion (IR) + treatment (n = 8) rats were started 4 days before the surgical procedure
and 20 mcg / ml medical ozone was administered intraperitoneally daily. After the ozone
treatment was completed, ischemia was induced by clamping the infrarenal abdominal
aorta for 60 min in rats. After the clamps were removed, reperfusion was performed for
120 min. After the reperfusion period was over, all rats, including the control group, were
sacrificed and appropriate blood samples were taken. Gastrocnemius muscle tissue was
removed for biochemical evaluation and stored under appropriate conditions.
The investigations were performed with serum in muscle tissue and especially the
changes related to prooxidant-antioxidant system and inflammation were investigated.
In this context, serum ROS, MDA, AOPP, GSH, FRAP, TNFα, NRF2, SOD and
GSH-Px levels were determined. In addition, lipid peroxide and protein oxidation 
products, antioxidant system elements, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and nuclear
factor erythroid 2 related factor 2 (NRF2) were determined in the tissues.
Result: In biochemical investigations; no change was observed in serum ROS,
MDA, AOPP, GSH and FRAP, TNFα, NRF2 levels, SOD and GSH-Px activities. In the
studies on muscle tissue oxidant system; ROS, MDA and AOPP levels were increased
with ischemia-reperfusion. A significant decrease was observed in these parameters with
medical ozone application.
GSH and SOD levels were significantly decreased in the muscle tissue antioxidant
system. Ozone (O3) treatment showed a significant increase in these values. As a result
of I / R injury, no significant changes were observed in TNF-a levels in muscle tissue and
a significant increase in NRF2 was observed. No changes were observed in the TNF-α
and NRF2 results with the application of ozone.
Conclusion: In conclusion, we can say that in IR group there is ischemiareperfusion injury in lower extremity and ozone treatment is protective against this injury.

Key Words: Antioxidant, Ischemia-reperfusion, ozone