Doğal izolat bacıllus suşlarından keratinaz enzimi üretimi ve karakterizasyonu
Production and charactrization of keratinase enzyme from natural isolate bacillus strains
Yazar: ABOUBACAR SIDIKI DANSOKO
Danışman: PROF. DR. HATİCE GÜVENMEZ
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bacillus sp., keratinaz adı verilen proteaz enziminini üretebilen mikroorganizma türlerdir. Çözünmeyen keratin substratlarını parçalama kabiliyetine sahip bu enzim ö hücre dışı proteolitik indüklenebilir enzim sınıfına girmektedir. 
	Bu araştırmada, tavuk üretim çiftliği toprağından izole edilen Bacillus suşlarının, SkimMmilk Agar besiyerinde proteolititik aktiviteleri belirlenmiştir. 63 Bacillus suşu proteolitik olarak belirlenmiştir. Bu suşlardan 9 tanesi keratin-azure substratı ile aktivite göstererek keratinolitik olarak belirlenmiştir.
	İzole edilmiş suşlardan 30 nolu suş en iyi keratinaz üreticisi olarak seçilmiştir. Keratinaz üretmek için temel tüylü besiyeri kullanılmıştır. Enzimin optimum üretim koşulları pH=8.0 ve 30ºC olarak belirlenmiştir. Enzimin optimum aktivite gösterdiği pH: 9.0 sıcaklık 50 ºC dir.
           Enzim 50-100 ºC'lerde 30 dk inkübe edildiğinde 50 ºC  lik ön inkübasyondan sonra aktivitesini yüksek oranda (%90) oranda korumuş, 70 derecenin üzerindeki inkübasyonlardan sonra hiç aktivite göstermemişti.
          Enzimin kimyasal ve metal iyonlarının 1-5 mM konsantrasyonları ile 30 dakikalık ön inkübasyonundan sonra tween 20 (%215) ve SDS'nin (%204) önemli oranda aktiviteyi arttırdiğı belirlenirken, EDTA (%76), Üre (%40),  ZnCl2 (%28),  MgCl2 (%51) , NiCl2 (%24), CaCl2 (%56), HgCl2 % (0)  ve CuCl2 (%83)  aktiviteyi azaltmıştır.

Anahtar Kelimeler: Bacillus sp., Keratin, Keratinaz , Enzim Üretimi, Karakterizasyon

Abstract:
Bacillus sp are microorganism's species which can produce keratinase enzyme. The enzyme has ability to degrade keratine substrate and it belongs to extraceluler inducible enzyme group.
In this study, proteolitic activities of Bacillus strains isolated from soil contaminated with poultry farm waste were determined on Skim Mmilk Agar. 63 Bacillus strains were identified as proteolytic. Nine of these strains showed activity with the keratin-azure substrate and were determined to be keratinolytic.
Among the isolated strains, strain no: 30 was selected as the best keratinase producer. The basal feather medium was used to produce keratinase. The optimum production conditions of the enzyme were determined as pH=8.0 and 30ºC. The optimum activity of the enzyme was determined at pH: 9.0 and 50 ºC.  When the enzyme was pre-incubated for 30 minutes at 50-100 ºC, it preserved its activity at a high rate (90%) after pre-incubation at 50 ºC and showed no activity after pre- incubations above 70 degrees.
After 30 minutes of pre-incubation of the enzyme with 1-5 mM concentrations of chemical and metal ions, it was determined that tween 20 (215%) and SDS (204%) significantly increased the activity, and EDTA (76%), Urea (40%), ZnCl2 (28%), MgCl2 (51%), NiCl2 (24%), CaCl2 (56%), HgCl2 (0), CuCl2 (83%) decreased the activity.

Keywords: Bacillus sp., Keratin, Keratinase, Enzyme production, Characterization