IFNγ sinyal yolağının braf inbitörlerine yanıttaki rolünün A375 ve SK-MEL-1 insan melanom hücrelerinde araştırılması
Investigation of the role of İFNγ signaling pathway in response to braf inhibitors in A375 and SK-MEL-1 human melanom cells
Yazar: FERDİ OĞUZ
Danışman: DOÇ. DR. HARİKA ATMACA İLHAN
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Malign melanom, tüm deri kanseri tiplerinin yalnızca %4'ünü oluştursa da deri kanserine bağlı ölümlerin yaklaşık %80'iyle ilişkilidir. Son yıllarda melanom tedavisinde moleküler hasarlarla mücadele etmek için Vemurafenib ve Dabrafenib gibi doğrudan BRAF proteinini inhibe eden hedefe yönelik tedaviler geliştirilmiştir. Geleneksel tedavilerle karşılaştırıldığında, BRAF inhibitörleri daha yüksek yanıt oranlarına sahiptir fakat ilerleyen dönemlerde melanom hastalarında hastalığın nüksü, kısa sağkalım süresi ve tedaviye direnç süresi gibi istenmeyen durumlar hala en önemli klinik sorunlardır. Bunu ele almak için adjuvan terapi gibi diğer küçük moleküllü inhibitör yaklaşımlarının geliştirilmesine ihtiyaç vardır. IFNγ'nın sadece tümör başlangıcını ve progresyonunu kontrol etmekle kalmayıp aynı zamanda immüno-evazif özelliklere sahip tümör hücrelerinin büyümesini desteklediğine dair kanıtlar bu sitokinin ikili bir rolü olabileceğini göstermektedir. Bu tez çalışmasının amacı IFNγ sinyal yolağı bloke edilmiş insan melanom BRAF-mutant A375 ve BRAF-mutant SK-MEL-1 hücre hatlarında BRAF inhibitörlerine yanıtta IFNγ sinyal yolağının rolünü ortaya çıkarmaktır. Hücre canlılığının ölçülmesinde MTT testi kullanıldı. IFNγ siRNA uygulaması ile IFNγ geni melanom hücrelerin bir grubunda bloke edildi. IFNγ siRNA uygulamalarının ardından melanom hücrelerinde IFNγ'nın başarılı bir şekilde baskılanıp baskılanmadığı qRT-PCR ile araştırıldı. VEM ve DAB'ın artan konsantrasyonlarıyla 24,48 ve 72 saat muamele edilen SK-MEL-1 ve A375 melanom hücrelerinde artan zamana ve konsantrasyona bağlı olarak hücre canlılığında azalma meydana geldi (*p<0.05). IFNγ siRNA uygulanarak IFNγ geni bloke edilmiş A375 ve SK-MEL-1 insan melanom hücrelerinde IFNγ geni bloke edilmemiş melanom hücrelerine göre hücre canlılığında bir artış meydana geldi ve BRAF inhibitörlerine karşı direnç tespit edildi. Bu sonuçlar hücrelerde IFNγ inhibisyonunun yapıldığı gibi IFNγ indüksiyonunun da yapılması gerektiğini göstermektedir.

Abstract:
Malignant melanoma is associated with approximately 80% of skin cancer-related deaths, although it accounts for only 4% of all skin cancer types. In recent years, targeted therapies that directly inhibit BRAF protein such as Vemurafenib and Dabrafenib have been developed to combat molecular damage in the treatment of melanoma. Compared to conventional treatments, BRAF inhibitors have higher response rates, but undesirable conditions such as disease recurrence, short survival time and resistance to treatment are still the most important clinical problems in melanoma patients. To address this, there is a need to develop other small molecule inhibitor approaches, such as adjuvant therapy. Evidence that IFNγ not only controls tumor initiation and progression but also promotes the growth of tumor cells with immuno-invasive properties suggests that this cytokine may have a dual role. The aim of the thesis is to reveal the role of IFNγ signaling pathway in the response to BRAF inhibitors in human melanoma BRAF-mutant A375 and BRAF-mutant SK-MEL-1 cell lines with blocked IFNγ signaling pathway. MTT test was used to measure cell viability. IFNγ gene was blocked in a group of melanoma cells by administration of IFNγ siRNA. Whether IFNγ was successfully suppressed in melanoma cells after IFNγ siRNA applications was investigated by qRT-PCR. Cell viability decreased with increasing time and concentration in SK-MEL-1 and A375 melanoma cells treated with increasing concentrations of VEM and DAB for 24, 48, and 72 hours (*p<0.05). An increase in cell viability was observed in A375 and SK-MEL-1 human melanoma cells with IFNγ gene blocked by application of IFNγ siRNA compared to melanoma cells without IFNγ gene blocked, and resistance to BRAF inhibitors was detected. These results show that IFNγ induction should be performed as well as IFNγ inhibition in cells.