Sıçan retinal ven oklüzyonu modelinde resveratrolün  nöroprotektif etkisi
The neuroprotective effect of resveratrol in the rat retinal vein occlusion model
Yazar: EBRU NEVİN ÇETİN
Danışman: PROF. DR. ESAT ADIGÜZEL
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinirbilimler Ana Bilim Dalı / Sinirbilim Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Oksiresveratrol = Oxyresveratrol

Özet:
Amaç: Retinal ven oklüzyonu ile ilişkili retina hasarında nörodejenerasyonun rol oynadığı gösterilmiştir. Resveratrol nöroprotektif etkileri dokümente edilmiş olan bir polifenoldur. Bu çalışmada sıçan retinal ven oklüzyonu modelinde resveratrolün nöroprotektif etkisinin araştırılması planlanmıştır.
Metod: Çalışmada Wistar albino sıçanların gözleri kullanıldı. Sıçanların sağ gözlerinde lazer (532nm yeşil lazer, Iridex IQ532, Iridex corp., Mountain View, CA, USA) ile retinal ven oklüzyonu oluşturuldu. Lazerden önce 20mg/kg fotosensitizan Rose-Bengal boyası intraperitoneal uygulandı.  Sol gözlere lazer yapılmadı ve lazer uygulanan sağ gözlerin kontrol grubu olarak kullanıldı. Sıçanların yarısına nöroprotektif ajan olarak 14 gün boyunca %3 etanol içinde çözündürülerek 40mg/kg resveratrol gavaj ile verildi.  Sıçanların gözleri 4 gruba ayrılarak değerlendirildi: Resveratrol verilen grupta  sağ gözler lazer+resveratrol grubunu, lazer uygulanmamış sol gözleri resveratrol grubunu oluşturdu. Resveratrol verilmeyen grupta sağ gözler lazer grubunu, sol gözler kontrol grubunu meydana getirdi. On dört gün sonunda sıçanlar sakrifiye edilerek retina izolasyonu yapıldı. Retina örneklerinde gangliyon hücre sağkalımının değerlendirilmesi için Brn3a mRNA seviyesi gerçek-zamanlı PCR ile ölçüldü. Brn3a ekspresyonunun protein düzeyinde gösterilmesi için Western-Blot analizi yapıldı. 
Bulgular: Kontrol, resveratrol, lazer ve lazer+resveratrol gruplarına ait retina doku örneklerinde Brn3a ekspresyon düzeyleri sırasıyla 1.062968647±0.355429593, 0.683676202±0.238218336, 1.098342833±0.322410268 ve 0.954085±0.431687 saptandı. Kontrol ile lazer, kontrol ile lazer+resveratrol ve lazer ile lazer+resveratrol gruplarında p değerleri sırası ile p=0.46, p=0.26 ve p=0.37 olarak bulundu. Western-Blot analizlerinde internal kontrol olarak kullanılan - aktin proteinine ait bant gözlendi ancak Brn3a proteinine ait bant izlenmedi. 
Sonuç: Çalışmada gruplar arasında Brn3a mRNA ekspresyon düzeyinde anlamlı farklılık görülmedi. Resveratrol verilen grupta lazer yapılmayan gözlerde Brn3a mRNA ekspresyon düzeyinde kontrol grubuna göre anlamlı olmayan bir düşüş izlendi. Retina örneklerinde Western-Blot analizi ile Brn3a ekspresyonu saptanamadı.

Abstract:
Objective: Neurodegeneration has been shown to play a role in retinal damage associated with retinal vein occlusion. Resveratrol is a polyphenol with documented neuroprotective effects. In this study, it was planned to investigate the neuroprotective effect of resveratrol in the rat retinal vein occlusion model.
Method: The eyes of Wistar albino rats were used in the study. Retinal vein occlusion was created in the right eyes of rats with laser (532nm green laser, Iridex IQ532, Iridex corp., Mountain View, CA, USA). Before the laser, 20mg/kg photosensitizing Rose-Bengal dye was applied intraperitoneally. The left eyes were not lasered, and the lasered right eyes were used as the control group. Half of the rats were given 40mg/kg resveratrol by gavage, dissolved in 3% ethanol for 14 days as a neuroprotective agent. The eyes of the rats were divided into 4 groups: In the resveratrol group, the right eyes formed the laser + resveratrol group, and the left eyes that did not receive the laser formed the resveratrol group. In the group without resveratrol, the right eyes formed the laser group, and the left eyes formed the control group.
At the end of fourteen days, the rats were sacrificed and retinal isolation was performed. To assess ganglion cell survival in retinal samples, the level of Brn3a mRNA was measured by real-time PCR. Western-Blot analysis was performed to show the expression of Brn3a at the protein level.
Results: Brn3a expression levels in retinal tissue samples of control, resveratrol, laser and laser+resveratrol groups were 1.062968647±0.355429593, 0.683676202±0.238218336, 1.098342833±0.322410268 and 0.954085±0.431687, respectively. P values were found as p=0.46, p=0.26 and p=0.37 in control and laser, control and laser+ resveratrol, and laser and laser+resveratrol groups, respectively. In Western-blot analyses, a band of -actin protein used as internal control was observed, but no band of Brn3a protein was observed.
Conclusion: There was no significant difference in Brn3a mRNA expression level between the groups in the study. A non-significant decrease was observed in the expression level of Brn3a mRNA in the resveratrol-treated group in the eyes that did not undergo laser treatment compared to the control group. Brn3a expression could not be detected in retinal samples by Western-Blot analysis.