Gastrointestinal sistem şikayetleri ile çocuk acil servisine başvuran pediatrik hastalarda intestinal parazitlerin araştırılması
Intestinal parasites in pediatric patients who apply to the child emergency department with gastrointestinal system complaints
Yazar: MERVE ÖZKAN
Danışman: DOÇ. DR. BEDİA DİNÇ ; UZMAN FİLİZ KAYA
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Acil servis-hastane = Emergency service-hospital ; Gastrointestinal hastalıklar = Gastrointestinal diseases ; Gastrointestinal sistem = Gastrointestinal system ; Paraziter hastalıklar = Parasitic diseases ; Çocuk acil servisi = Pediatric emergency medicine ; Çocuk hastalıkları = Child diseases ; İntestinal hastalıklar-parazitik = Intestinal diseases-parasitic

Özet:
Amaç: Bu çalışmada Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi Çocuk Acil Servisi'ne gastrointestinal şikayetlerle başvuran 18 yaş altındaki hastaların dışkı örneklerinin direkt bakı (nativ-lugol yöntemi), dışkı konsantrasyon yöntemi, modifiye Kinyoun aside dirençli boyama, Wheatley trikrom boyama ve immunokromatografik kart test yöntemleri kullanılarak incelenmesi ile çocukluk çağındaki hastalarda GI parazit görülme sıklıklarının belirlenmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Aralık 2019-Mart 2020 tarihleri arasında TC. Sağlık Bakanlığı Sağlık Bilimleri Üniversitesi Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi Çocuk Acil Polikliniğine bulantı-kusma, karın ağrısı, diyare, kabızlık, gaz gibi gastrointestinal şikayetlerle başvuran ve şikayetlerine yönelik herhangi bir tedavi başlanmayan, ebeveynleri tarafından çalışmaya katılma onayı verilen 0-18 yaş arası 100 hasta çocuk ve herhangi bir gastrointestinal sistem yakınması bulunmayan, bilinen herhangi bir hastalığı olmayan, 0-18 yaş arası, genel kontrol, aşı vb. nedenlerle hastanemize başvuran toplam 50 çocuk çalışmaya dahil edildi. Her çocuktan alınan dışkı örnekleri direkt bakı (nativ-lugol yöntemi), dışkı konsantrasyon yöntemi, modifiye Kinyoun aside dirençli boyama, Wheatley trikrom boyama ve immunokromatografik parazit kart test yöntemleri kullanılarak incelendi. Ayrıca immunokromatografik virüs kart test çalışıldı ve dışkı kültürü yapıldı. Elde edilen tüm veriler istatistiksel yöntemlerle karşılaştırıldı.
Bulgular: Dışkı örneklerinin makroskobik incelemesinde hasta grubunun %2'sinde dışkıda kan, %29'unda mukus saptandı.  Bu örneklerin %67'si sulu-şekilsiz, %33'ü ise yumuşak kıvamlı olarak bulundu. Direkt mikroskobik inceleme ile hasta örneklerinin %4'ünde yoğun lökosit, %3'ünde nadir lökosit, %1'inde eritrosit görüldü. Kontrol grubunda ise dışkı örneklerinin tamamı yumuşak kıvamlı olup makroskobik olarak kan ve mukus görülmedi, direkt mikroskobik incelemede ise lökosit ve eritrosit saptanmadı. Hasta çocuk grubunda dışkıda mukus ve mikroskobide lökosit kontrol grubuna göre daha fazla tespit edildi ve aradaki fark anlamlıydı (p<0.001). Herhangi bir yöntemle parazit saptanan hasta grubundaki çocukların %25'i (7/28) beş yaşın altında olup, bunların üçü 0-24 ay, biri 24-36 ay, üçü ise 36-60 ay yaş aralığındaydı. Dışkı konsantrasyon işlemi sonrası yapılan direkt mikroskobik incelemede hasta grubunda yer alan çocukların %8'inde Blastocystis spp., %4'ünde Crytosporidium spp., %2'sinde G.intestinalis, %1'inde H.nana, kontrol grubunda yer alan çocukların ise %2'sinde Blastocystis spp. saptandı. İntestinal parazitlerin incelenmesinde taze dışkıdan direkt mikroskobik inceleme ile konsantrasyon yöntemi sonrası mikroskobik inceleme parazit saptama açısından karşılaştırıldığında aradaki fark istatistiksel olarak anlamlı bulundu(p<0.05). Yapılan trikrom boyama sonrası hasta örneklerinin sadece ikisinde G.intestinalis saptanırken kontrol grubunda parazit saptanmadı. Yapılan modifiye aside dirençli boyama sonrası hasta örneklerinin sadece birinde Crytosporidium spp. saptanırken kontrol grubunda parazit saptanmadı. Hasta grubunda immunokromatografik hızlı tanı testi (Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi testi (RIDA QUICK, R-Biopharm, Almanya)  ile dışkıların %7'sinde E.histoytica, %17'sinde G.intestinalis, %2'sinde Cryptosporidium spp. antijenleri pozitif olarak saptandı. Hasta ve kontrol grubuna eş zamanlı olarak immunokromatografik rotavirüs-adenovirüs hızlı tanı testi (Rotavirus and Adenovirus Combo Rapid Test Cassette (Feces) (ExacTest, General Diagnostica, ABD)  çalışıldı ve dışkı kültürleri yapıldı. Hasta grubundan üç çocukta rotavirüs, iki çocukta adenovirüs, bir çocukta ise hem rotavirüs hem de adenovirüs beraber pozitifti. Çocuk hasta grubunda sadece 1 hastanın dışkı kültüründe Salmonella spp. üremesi oldu. Kontrol grubunda patojen mikroorganizma üremedi. Hasta grubunda 22 çocuk sadece tek bir şikayetle acil servise başvurdu. Diğer çocukların birden fazla semptomu vardı. Dışkıda parazit saptanma durumuna göre semptomlar karşılaştırıldığında gruplar arası bulantı ve kusma görülme durumu istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0.001).
Sonuç: Gastrointestinal semptomlar çocuklar için acile başvuruda önde gelen sebeplerdendir. İntestinal paraziter enfeksiyonlar çocuklarda sık görülür. Blastocytis spp, G.intestinalis, Crytpsporidium spp, E.histolytica/dispar en sık görülen paraziter etkenlerdir. Paraziter enfeksiyonlarda doğru teşhis ve tedavi, doğru tanı ile mümkündür. Direkt, konsantrasyon sonrası ve boyama ile yapılan mikroskobik incelemelerin yanı sıra antijen, antikor testleri, moleküler testler tanıda kullanılabilir. Dışkının makroskobik incelenmesi patojen mikroorganizma varlığı hakkında fikir verebilir. Çalışmamızda hasta çocuk grubunda dışkıda mukus ve mikroskobide lökosit kontrol grubuna göre daha fazla tespit edildi ve aradaki fark anlamlıydı (p<0.001). Çalışmamızda konvansiyonel yöntemlerle Blastocystis spp, G.intestinalis ve Cryptosporidium spp., H.nana sıklığı sırasıyla %8, %2, %4 ve %1 olarak bulundu. Kontrol grubunda ise  %2 oranında Blastocystis spp. saptandı. İntestinal parazitlerin incelenmesinde taze dışkıdan direkt mikroskobik inceleme ile konsantrasyon yöntemi sonrası mikroskobik inceleme parazit saptama açısından karşılaştırıldığında aradaki fark istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0.05). Hasta grubunda immunokromatografik hızlı tanı testi (Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi testi (RIDA QUICK, R-Biopharm, Almanya)  ile dışkıların %7'sinde E.histoytica, %17'sinde G.intestinalis, %2'sinde Cryptosporidium spp. antijenleri pozitif olarak saptandı. Konvansiyonel yöntemler ve immunokromatografik testle değerlendirilen dışkı örneklerinde uyumlu sonucu olan dışkı sayısı ikiydi. Çalışmamızda saptanan parazitlerin görülme sıklıkları benzer çalışmalara göre düşük bulundu. Her hastanın tek dışkı örneği incelendi. Bir hasta için birden fazla örnek incelenmemesi, az sayıda hastanın değerlendirilmesi, görülme sıklıklarının düşük olmasının nedeni olarak düşünüldü.
Anahtar Kelimeler: E. Histolytica, Blastocystis, Cryptosporidium, G.intestinalis, parazit, gastrointestinal enfeksiyon, immunokromatografik kart test

Abstract:
Aim: In this study, stool samples of patients under the age of 18 who applied to the Ankara Training and Research Hospital Pediatric Emergency Service with gastrointestinal complaints were examined using direct examination (native-lugol method), stool concentration method, modified Kinioun acid-resistant staining, Wheatley trichrome staining and immunochromatographic card test methods. It was aimed to determine the prevalence of GI parasites in childhood patients.
Materials and Methods: Between December 2019-March 2020, TC. 100 patients aged 0-18 who applied to the Pediatric Emergency Outpatient Clinic of the Ministry of Health Health Sciences University Ankara Training and Research Hospital with gastrointestinal complaints such as nausea-vomiting, abdominal pain, diarrhea, constipation and gas, who were not given any treatment for their complaints and were approved by their parents to participate in the study children with no gastrointestinal system complaints, no known disease, 0-18 years old, general control, vaccination, etc. A total of 50 children who applied to our hospital for reasons were included in the study. Stool samples taken from each child were examined using direct examination (native-lugol method), stool concentration method, modified Kinyoun acid-resistant staining, Wheatley trichrome staining and immunochromatographic parasite card test methods. In addition, immunochromatographic virus card test was performed and stool culture was performed. All data obtained were compared with statistical methods.
Results: In macroscopic examination of the stool samples, 2% of the patient group had blood in the stool and 29% had mucus. 67% of these samples were found to be watery-amorphous and 33% soft consistency. With direct microscopic examination, in 4% of the patient samples, dense leukocytes, 3% rare leukocytes and 1% erythrocytes were seen. In the control group, all of the stool samples were soft and no blood and mucus were seen macroscopically, and no leukocytes or erythrocytes were detected in direct microscopic examination. In the sick children group, mucus in stool and leukocyte were detected more in microscopy than in the control group, and the difference was significant (p <0.001). 25% (7/28) of the children in the patient group in which parasites were detected by any method were under the age of five, three of them were in the age range of 0-24 months, one was 24-36 months, and three were between 36-60 months. In the direct microscopic examination performed after the stool concentration process, 8% of the children in the patient group had Blastocystis spp., 4% had Crytosporidium spp., 2% had G.intestinalis, 1% had H.nana, and the children in the control group were 2% of Blastocystis spp. was detected. In the examination of intestinal parasites, when direct microscopic examination from fresh stools and microscopic examination after concentration method were compared in terms of parasite detection, the difference was statistically significant (p <0.05). After trichrome staining, G.intestinalis was detected in only two of the patient samples, while no parasites were detected in the control group. After the modified acid-fast staining, Crytosporidium spp. No parasites were detected in the control group. In the patient group, immunochromatographic rapid diagnostic test (Cryptosporidium / Giardia / Entamoeba Combi test (RIDA QUICK, R-Biopharm, Germany) for 7% E.histoytica, 17% G.intestinalis, 2% Cryptosporidium spp. Immunochromatographic rotavirus-adenovirus rapid diagnosis test (Rotavirus and Adenovirus Combo Rapid Test Cassette (Feces) (ExacTest, General Diagnostica, USA) was performed simultaneously in the patient and control groups and stool cultures were performed in three children in the patient group. Adenovirus was positive in the child, and both rotavirus and adenovirus were positive together in one child. In the pediatric patient group, Salmonella spp. was grown in the stool culture of only 1 patient. No pathogenic microorganism was grown in the control group. 22 children in the patient group were admitted to the emergency service with only one complaint. When the symptoms were compared according to the presence of parasites in stool, it was observed that there was nausea and vomiting between the groups, it was statistically significant (p <0.001).
Conclusion: Gastrointestinal symptoms are one of the leading reasons for emergency admission for children. Intestinal parasitic infections are common in children. Blastocytis spp., G.intestinalis, Crytpsporidium spp, E.histolytica / dispar are the most common parasitic agents. Correct diagnosis and treatment in parasitic infections is possible with correct diagnosis. In addition to direct, post-concentration and staining microscopic examinations, antigen, antibody tests, molecular tests can be used in diagnosis. Macroscopic examination of feces can give an idea about the presence of pathogenic microorganisms. In our study, more mucus in the stool and leukocytes in microscopy were detected in the sick children group compared to the control group, and the difference was significant (p <0.001). In our study, the frequencies of Blastocystis spp, G.intestinalis and Cryptosporidium spp., H.nana were found to be 8%, 2%, 4% and 1%, respectively, using conventional methods. In the control group, Blastocystis spp. was detected. In the examination of intestinal parasites, when direct microscopic examination from fresh stools and microscopic examination after concentration method were compared in terms of parasite detection, the difference was statistically significant (p <0.05). In the patient group, immunochromatographic rapid diagnostic test (Cryptosporidium / Giardia / Entamoeba Combi test (RIDA QUICK, R-Biopharm, Germany) for 7% E.histoytica, 17% G.intestinalis, 2% Cryptosporidium spp. Stool count with concordant results was two in stool samples evaluated by conventional methods and immunochromatographic test. The frequency of parasites detected in our study was found to be lower than similar studies. One stool sample of each patient was examined. Not more than one sample was examined for one patient, a small number of patients were evaluated, It was considered as the reason for their low prevalence.
Keywords: E. Histolytica, Blastocystis, Cryptosporidium, G.intestinalis, parasite, gastrointestinal infection, immunochromatographic cassette test