Aprotininli ve aprotininsiz serum ve plazma örneklerinde irisin seviyesinin belirlenmesi
Determination of irisin levels in serum and plasma samples with and without aprotinin
Yazar: ECEM İMAMOĞLU
Danışman: PROF. DR. EŞREF EDİP KEHA
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Aprotinin = Aprotinin ; Miyokin = Myokine ; Peptid hidrolazlar = Peptide hydrolases ; Plazma = Plasma ; Serine = Serine ; Serum = Serum ; İrisin = Irisin

Özet:
İrisin, miktarı PGC1-α tarafından düzenlenen, 112 amino asitten oluşan bir miyokindir. Bir tip I integral membran proteini olan FNDC5'in proteolitik parçalanması sonucu iskelet kası dokusundan kan dolaşımına salınır. İrisin,  glukoz toleransını ve enerji harcanmasını arttırırken, karbohidrat homeostazını iyileştirir. Aprotinin çok değerlikli bir serin proteaz inhibitörüdür. Serum, plazma veya hücre homojenizatı gibi sulu çözelti örneklerine eklenerek, ortamda bulunan serin proteaz enzimlerini inhibe eder. Bu şekilde, ölçümü yapılacak olan proteinlerin parçalanması önlenir. Laboratuarlarda çeşitli biyolojik örneklerde araştırma amacı ile irisin ölçümü ELISA metodu ile yapılmaktadır. Çok defa -80 °C'de uzun süre saklanma ihtiyacı duyulan örneklerde irisin kaybının olup olmayacağı hakkında bir ön bilgi elde etmek amacı ile bu çalışma yapılmıştır. Bu amaçla,  25-40 yaş arasında 10 erkek ve 10 kadın gönüllüden kan örnekleri alınmış ve bunlardan elde edilen plazma ve serum örneklerine aprotinin eklenerek 3 ay  -80 °C'de saklanmıştır. 3 ay sonra, ELISA ile aprotininli ve aprotininsiz örneklerde irisin seviyeleri ölçülmüştür. Sonuçların istatistiksel değerlendirilmesiyle, aprotininli ve aprotininsiz plazma örneklerindeki irisin miktarlarında önemli bir farklılık olmadığı gözlemlenirken (p=0.525), aprotininli ve aprotininsiz serum örneklerindeki irisin miktarlarında anlamlı bir azalma bulunmuştur (p=0.009). Sonuç olarak, ELISA ile irisin tayin edilmek üzere 3 ay civarında -80 °C'de saklanan plazma ve serum numunelerine aprotinin eklenmesinin gerekip gerekmediği konusunda net bir kanaate varılamamıştır.

Abstract:
Irisin is a myokine with 112 amino acids and its level is regulated by PGC1-α. It is released into blood circulation from skeletal muscle tissue after a proteolytic cleavage of extracellular domain of FNDC5, a Type I integral membrain protein. Irisin improve carbohydrate homeostasis by increasing glucose tolerance and energy expenditure. Aprotinin is a polivalent serin protease inhibitor. It is added to the sample solutions such as serum, plasma or tissue extracts in order to inhibit the serine proteases found in the sample medium. So, degradation of the proteins to be measured can be prevented. In laboratories, irisin is measured by ELISA method in the researches made with several biological samples. These study has been made to get a preliminary information in order to see if any irisin loss could be seen in these samples which are frequently needed to be kept at  -80 °C for a long time. For this purpose, blood samples have been taken from 10 men and 10 women volunteers with ages between 25-40 and aprotinin has been added to the plasma and the serum samples which have been obtained from these blood samples and have been kept  at -80 °C for 3 months. At the end of 3 months, irisin levels of these samples with aprotinin and without aprotinin have been determined by ELISA. Statistical analysis of the results has shown an insignificant differance between the plasma samples with or without aprotinin (p=0.525) and a significant decrease between the serum samples with and without aprotinin (p=0.009). In conclusion, with the results of this study, no net decision could have been achieved to add aprotinin to the samples for irisin determination with ELISA in plasma and serum kept at  -80 °C for about 3 months.