Hiperterminin erkek germ hücreleri üzerine olan etkisinin yapısal olarak incelenmesi
Investigation of the effect of hyperthermia on the male germ cells by the structural analysis
Yazar: SEVİNÇ VELİYEVA
Danışman: PROF. DR. M. TAHİR HATİPOĞLU
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hipertermi = Hyperthermia ; Testis özellikleri = Testes traits

Özet:
Hipertermi vücut sıcaklığının 41° C ya da daha yüksek bir değere ulaşmasıyla ortaya çıkan ve sıcak çarpmasına yol açabilen bir durumdur. Memelilerde testiküler sıcaklık vücut sıcaklığından daha düşüktür. Skrotal ısının artması düşük kalitede spermiyum üretimine, germ hücrelerinde apoptozise ve infertiliteye neden olur. Süperoksit dismutaz (SOD) ise serbest oksijen radikallerini ortadan kaldırarak, oksidatif stresi engelleyebilen ve apoptotik süreci geri döndürebileceği düşünülen antioksidan bir maddedir.Tüm bu nedenlerden ötürü çalışmamızda; hipertermi ile oluşturulan ısı stresinin ve stres öncesinde kullanılan süperoksit dismutazın, testis üzerindeki koruyucu ve tedavi edici etkilerinin apoptotik ve oksidatif stres belirteçleri kullanılarak belirlenmesi amaçlanmıştır.Çalışmada kullanılan 18 adet Wistar-albino cinsi erkek sıçan, her grupta 6 denek olacak şekilde 3 gruba ayrılmıştır. Kontrol grubu olarak belirlenen birinci gruptaki deneklerin skrotumları, sıcaklığı 22° C'ye ayarlanmış havuzda 20 dakika süre ile tutulmuş ve 24 saat sonra kesilerek testis dokuları alınmıştır. İkinci ve üçüncü gruptaki denekler ise; skrotal hiperterminin oluşturulması amacıyla, sıcaklığı 42° C' ye ayarlanmış havuzda 20 dakika bekletildikten sonra sırasıyla 30. dakika ve 24. saatte testis dokuları alınmıştır. Hipertermi uygulaması yapılan gruplara, uygulamadan 1 saat önce NaCl+ Katalaz+ SOD enjeksiyonu yapılmıştır. Alınan dokular alışılagelmiş ışık mikroskobik izleme yöntemlerinden geçirilerek parafin bloklar oluşturulmuştur. Hiperterminin neden olduğu apoptozise, sitozolik bir antioksidan olan süperoksit dismutazın (SOD) protektif ve törapatik etkilerinin belirlenmesi amacıyla Kaspaz 3, Kaspaz 8 ile Kaspaz 9 ve HSP protein düzeylerine etkisinin belirlenebilmesi amacıyla HSP 70 primer antikorlarıyla indirekt immünohistokimyasal yöntem uygulanmıştır.Yapılan değerlendirmeler sonucunda; başlatıcı kaspazlardan Kaspaz 8 ve 9 ile ilerletici kaspazlardan Kaspaz 3 proteinlerinin tutulumu incelendiğinde, Kaspaz 9 tutulumunun daha belirgin olduğu saptanmıştır. İmmünoreaktivitenin özellikle spermatogonyum, spermatosit I'lerde ve Leydig hücrelerinde hipertermi uygulaması ile arttığı izlenmiştir. Kaspaz 9 tutulumunun belirginliği, hiperterminin dış yolak üzerinden apoptozisi uyarmış olabileceği kanısını uyandırmıştır. Ancak Kaspaz 3 tutulumunun hipertermi ile çok belirgin artmadığı, dolayısıyla hiperterminin ileri apoptozise neden olmadığı belirlenmiştir. Tüm kaspazlar için SOD uygulamasının süreye koşut tutulumu azalttığı gözlenmiştir.HSP70 tutulumunun testis genelinde intersitisyel doku düzeyinde olduğu, SOD uygulaması ile tutulumun süreye koşut arttığı belirlenmiştir. Bu bulgu, HSP 70'in koruyucu özellik sergilediğinin bir göstergesi olarak kabul edilmiştir.Sonuç olarak hiperterminin özellikle spermatogonyum ile spermatosit I ve Leydig hücrelerinde dış yolaktan apoptozisi başlattığı, Leydig hücrelerinde gözlenen apoptozisin testosteron sentezini azaltarak, seminifer tubüllerde sprermatogenezis ve spermiyogenezisi baskılamış olabileceği ve bu seriyi oluşturan hücrelerde dış yolak apoptozisinden sorumlu olabileceği düşünülmüştür. Ancak SOD uygulamasının süreye koşut apoptozisi baskıladığı, bunun da artan HSP 70'in koruyucu etkisi aracılığıyla gerçekleşmiş olabileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Hyperthermia can be caused a heat shock when the body temperature rise up 41 °C. Testicular heat lower than body heat in mammalian. Scrotal temperature increase can cause lower quality sperm production, germ cells apoptosis and infertility. Superoxide dismutase (SOD) can eliminate free can prevent oxidative stress and turn back apoptotic process by element free oxygen radical.Because of all these reasons in this study our aim to determine protecting and curative effects of heat stress and SOD which used before stress on testis by using apoptotic and oxidative stress marks.In this study used 18 male Wistar albino, I will be divided into the three groups. Each group contains 6 rats. The first group was identified as a control group of subjects scrotum, temperature 22°C for 20 minutes in the pool were adjusted and testicular tissue were taken 24 hours after the cut. The subjects in the second and third group, in order to create a scrotal hyperthermia, being set in the pool which temperature 42°C for 20 minutes after respectively 30. minutes and 24. hours testicular tissues were obtained per hour. The application of hyperthermia groups enjected with NaCl + SOD + Catalase one hour before application. Tissues which were obtained, compose paraffin blocks which were created by passing methods of light microscopy methods.Testis tissue had been stained caspase 3, 8, 9 and HSP 70 antibody, and we expirimented curative effects of SOD on apoptosis which caused by hypertermia by using immunohistochemical method.After assesment of activator caspase 8, 9, effector 3, we detected that caspase 9 is more markedly. Immunoreactivity increasing specially in spermatogonium, spermatocyte I and Leydig cells by hypertermia exposing. The reason of detecting more caspase 9 positive germ cells, that hypertermia can induce apoptosis by caspase 9 pathway. But caspase 3 did not increase prominently, so we can say that hypertermia did not cause high apoptosis. Consequently we detected that SOD decrease caspase positive germ cells.We detect HSP 70 expression in interstitial location and expression increased with SOD application. This finding indicate of HSP 70?s protecting feature.At the end we can say that hypertermia activate apoptosis specially in spermotogonium, spermatocyte I and Leydig cells through external pathway. Apoptosis decrease testosterone levels in Leydig cells and can be pressed spermatogenesis in seminiferous tubules and can be caused apoptosis through pathway in these cells. But SOD application decrease apoptosis by HSP 70 protective effect.