Farklı mezenkimal kök hücrelerden elde edilen eksozomların MDA MB 231 insan meme kanseri ve LNCaP prostat kanseri hücre hatları üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of exosomes obtained from different mesenchymal stem cells on MDA MB 231 human breast cancer and LNCaP prostate cancer cell lines
Yazar: PINAR SUNA
Danışman: PROF. DR. ARZU  YAY
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Kanser günümüzde insanları etkileyen önemli sağlık sorunlarından biri olup, tedavisine yönelik çok sayıda araştırma yapılmaktadır. Mezenkimal kök hücrelerden izole edilen eksozomların sağlıklı ve kanser hücrelerindeki etkilerinin araştırıldığı birçok yayın bulunmaktadır. Bu çalışmada, insan adipoz doku mezenkimal kök hücreleri (hAD-MKH) ve insan umbilikal kord mezenkimal kök hücrelerinden (hUC-MKH) elde edilen farklı iki tip eksozomların meme kanseri ve prostat kanseri hücreleri üzerine etkisinin araştırılması amaçlandı.
Çalışmada, hAD-MKH'ler ve hUC-MKH'lerinden elde edilen farklı iki tip eksozomların MDA MB 231 meme kanseri hücre hattı ve LNCaP prostat kanseri hücre hattına etkilerini belirlemek için, deney grupları şu şekilde oluşturuldu; MDA MB 231 / LNCaP kanser hücre grubu, MDA MB 231+%50 hAD-MKH eksozom / LNCaP+%50 hAD-MKH eksozom grubu ve MDA MB 231+ hAD-MKH eksozom / LNCaP+ hAD-MKH eksozom grubu. Aynı şekilde hUC-MKH eksozomları içinde deney grupları oluşturuldu. İn vitro uygulamalar sonucunda, Annexin V apoptoz testi, Kİ67 proliferasyon testi, hücre döngüsü testi ve migrasyon testi uygulandı. Ayrıca, PCNA, TNF-alfa (), IL1ß, NFkß antikorlarının ekspresyon yoğunlukları immünfloresan boyama ile değerlendirildi ve son olarak TUNEL metodu uygulandı. Deney sonunda elde edilen veriler GraphPad Prism 9 istatistik programı ile analiz edildi.
Çalışmada, hAD-MKH'ler ve hUC-MKH'lerin eksozomları MDA MB 231 ve LNCaP hücreleri üzerinde apoptozu arttırdığı, proliferasyonu ve hücre göçünü azalttığı görüldü. Hücre döngüsünde ise GO/G1 evresinde azalma, S ve G2/M evresinde artış gözlendi. TUNEL ve Annexin V analiz yöntemleri birbirini destekler nitelikte olup eksozom uygulamasının pozitif apoptotik hücre artışına neden olduğunu gösterdi. İmmünfloresan boyama sonuçlarında ise PCNA, TNF-, IL1ß ve NFkß ekspresyonlarında artış görüldü.
Sonuç olarak çalışmadan elde edilen bulgularla, hAD-MKH ve hUC-MKH eksozomlarının meme kanseri ve prostat kanseri hücreleri üzerinde toksik etki yaptığı görülmüştür.
Anahtar Kelimeler: Meme Kanseri; hAD-MKH ve hUC-MKH Eksozomu; Prostat Kanseri

Abstract:
Cancer is one of the important health problems affecting people today, and a lot of research is being done on its treatment. There are many publications investigating the effects of exosomes isolated from mesenchymal stem cells on healthy and cancer cells. In this study, it was aimed to investigate the effects of two different types of exosomes obtained from human adipose tissue mesenchymal stem cells (hAD MSCs) and human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC MSCs) on breast cancer and prostate cancer cells.
In the study, two different types of exosomes obtained from hAD-MSCs and hUC-MSCs were applied to the MDA MB 231 breast cancer cell line and the LNCaP prostate cancer cell line. Experimental groups created; They were divided into three groups: MDA MB 231 / LNCaP cell group, MDA MB 231 + 50% hAD-MKH exosome / LNCaP + 50% hAD-MKH exosome group, and MDA MB 231 + hAD-MKH exosome / LNCaP + hAD-MKH exosome group. The same groups were formed in hUC-MSC exosomes. Annexin V apoptosis test, KI67 proliferation test, cell cycle test and migration scar formation test were performed to determine the effects of exosomes of hAD-MSCs and hUC-MSCs. In the histology section, the expression intensities of PCNA, TNF-alpha (), IL1ß and NFKß antibodies were examined using the immunofluorescence staining and TUNEL method. Data were analyzed with GraphPad Prism 9.
In the study, exosomes of hAD-MSCs and hUC-MSCs were observed to increase apoptosis and reduce proliferation and cell migration on MDA MB 231 and LNCaP cells. In the cell cycle, it decreased in the GO/G1 phase and increased in the S and G2/M phases. TUNEL method supported Annexin V analysis and an increase in + apoptotic cells was observed. Immunofluorescence staining results showed an increase in the expressions of PCNA, TNF-, IL1ß and NFkß.
As a result, the findings obtained from the study showed that hAD-MSC and hUC-MSC exosomes had a toxic effect on breast cancer and prostate cancer cells.

Keywords: Breast Cancer; hAD-MSC and hUC-MSC Exosome; Prostate Cancer.