Deneysel alzheimer modelinde acacetin'in otofaji yolağı ve eksozom salınımı üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of acacetin on autophagy pathway and exosome release in an experimental alzheimer model
Yazar: NİLÜFER ERÇİN
Danışman: PROF. DR. ÜLKAN KILIÇ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Eksozomlar = Exosomes ; Otofaji = Autophagy

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı deneysel Alzeheimer modelinde acacetinin, otofaji yolağı ve eksozom salınımı üzerindeki etkilerini araştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda, moleküler kenetleme analizi ve moleküler dinamik simülasyonu gerçekleştirilerek acacetin ile hedef otofajik proteinlerin etkileşimleri incelendi. Ardından in vitro analizler gerçekleştirildi. Bunun için ilk olarak mezenkimal kök hücre hattı nöron hücrelerine farklılaştırıldı ve karakterize edildi. Ardından hücreler Aβ1-42 toksisitesine maruz bırakılarak deneysel Alzeheimer modeli oluşturuldu. Deneysel model oluşturulan hücrelere acacetin uygulanarak total protein izolasyonu ve eksozomal protein izolasyonu gerçekleştirildi. Transmisyon elektron mikroskobu ile eksozomlar karakterize edildi. Western blot yöntemiyle otofaji yolağında görev alan proteinler analiz edildi ve Amyloid-β miktarındaki değişimler tespit edildi. Otofaji ilişkili eksozom salınım seviyesi araştırıldı. Bununla birlikte immünfloresan yöntemi kullanılarak otofaji proteinleri ve Amyloid-β'nın birlikte hücre içi lokalizasyonları tespit edildi.
Bulgular: Elde ettiğimiz bulgulara göre deneysel Alzheimer modelinde acacetin otofajik protein seviyeleririni düzenleyerek Amyloid-β miktarını ve ekszom salınımını azaltmaktadır. 
Sonuç: Acacetin'in, otofajik proteinlerin düzenlenmesindeki ve otofaji ilişkili eksozom salınımındaki rolü ile Alzheimer patolojisini iyileştirebilme potansiyeli olduğu düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: Acacetin, Alzheimer Hastalığı, Exosome, Moleküler Modelleme, Otofaji

Abstract:
Aim: The aim of this study is to investigate the effects of acacetin on the autophagy pathway and exosome release in an experimental Alzheimer's model.
Materials and Methods: In our study, molecular docking analysis and molecular dynamics simulation were performed to examine the interactions of acacetin and target autophagic proteins. Then, in vitro analyzes were performed. For this, first the mesenchymal stem cell line was differentiated into neuron cells and characterized. Then, an experimental Alzheimer's model was created by exposing neuron cells to Aβ1-42 toxicity. Total protein isolation and exosomal protein isolation were performed by applying acacetin to the cells for which a experimental model was created. Exosomes were characterized by transmission electron microscope. Proteins involved in the autophagy pathway were analyzed by western blot method and changes in the amount of Amyloid-β were detected. Autophagy-related exosome release level was investigated. In addition, intracellular localizations of autophagy proteins and Amyloid-β were detected using the immunofluorescence method.
Results: According to our findings, acacetin reduces the amount of Amyloid-β and exsome release by regulating autophagic protein levels in the experimental Alzheimer's model.
Conclusion: Acacetin is thought to have the potential to improve Alzheimer's pathology with its role in the regulation of autophagic proteins and autophagy-related exosome release.

Key Words: Acacetin, Alzheimer Disease, Autophagy, Exosome, Molecular Modeling