T98G insan glioblastoma multiforme hücre kültüründe sorafenib ve lityum klorür etkilerinin araştırılması
The effects of sorafenib and lithium chloride on T98G human glioblastoma multiforme cell line
Yazar: PULAT AKIN SABANCI
Danışman: PROF. DR. MURAT İMER
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery
Dizin: Lityum klorür = Lithium chloride

Özet:
Glioblastoma Multiforme (GBM) primer beyin tümörleri içerisinde en sık karşılaşılanı ve en ölümcül olanıdır. Bu tümörün tedavi seçeneklerinin günümüzde halen kısıtlı olması ve nüksün çok kısa sürede görülmesi GBM'deki ortalama yaşam süresinin kısa olmasına yol açmaktadır. Cerrahi rezeksiyon, yeni nesil radyoterapi ve destekleyici kemoterapiye karşın GBM'de ortalama hayat süresi halen 12 ay civarındadır. Bu kısa hayat süresini uzatmak için çeşitli deneysel ve klinik çalışmalar yapılmaktadır ve yeni tedavi yöntemlerine ihtiyaç vardır. Bu çalışmada T98G insan Glioblastoma Multiforme hücre kültüründe LiCl ile Sorafenib'in etkilerini araştırmak amaçlanmıştır. Deneylerde LiCl ve Sorafenib ilaçları tek tek ve birlikte, insan kökenli T98G GBM hücrelerinden oluşan iki boyutlu (tek tabakalı) ve üç boyutlu (sferoid) kültürlerde 72 saat boyunca denenmiştir. Tümör hücre sayıları sayım kamarasıyla, apoptoz oranları flow sitometri yöntemiyle değerlendirilmiştir. Üç boyutlu hücre kültürlerinde hücrelerde meydana gelen değişiklikler geçirimli elektron mikroskobu ile araştırılmıştır. İlaçların etkileri hangi yoldan oluşturduklarını ve ilaç direncini saptamak için Western Emdirimi yöntemiyle MRP-1, P170, GSK-3ß ve NF-?B düzeylerine bakılmış, ayrıca ELISA yöntemiyle de GSK-3ß, Midkin, fosfo-STAT3, fosfo-Erk, fosfo-c-Jun, fosfo-AKT seviyeleri tetkik edilmiştir. LiCl ve Sorafenib'in tek tek verilmesi ve kombine şekilde verilmesi durumunda T98G hücre kültüründe kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede hücre sayısını azalttığı ve apoptoz oranını arttırdığı tespit edilmiştir.

Abstract:
Glioblastoma Multiforme(GBM) is the most common and fatal one among primary brain tumors. Because of the limited treatment options and the narrow time interval between operation and relaps, the average survival is still short. The median survival for GBM is still around 12 months despite all surgical resection, new generation radiotherapy and supportive chemotherapy. New treatment modalities are necessary to prolong this limited life time and various experimental and clinical studies are in progress. In this study we aimed to investigate the effects of Lithium Chloride (LiCl) and Sorafenib on T98G human GBM cell line. The two dimentional (single layer) and three dimensional (spheroid) T98G GBM cell cultures are subjected to LiCl and Sorafenib separately and in combination for 72 hours during experiments. Tumor cells are counted under Cell Count Hemocytometer and the apoptose ratios are investigated with flow cytometry method. The changes in the cells in three dimensional cell cultures are evaluated by transmission electron microscopy. To determine the possible drug resistance and the mechanism of action of the drugs, the MRP-1, P170, GSK-3ß and NF-?B levels are analysed with Western Blotting and the phosphorylated GSK-3ß, midkin, phosphorylated STAT3, phosphorylated Erk, phosphorylated c-Jun and phosphorylated AKT levels are investigated with ELISA method. Separetely and in combination, LiCl and Sorafenib decreased the number of cells and increased the apoptotic ratio in T98G GBM cell line in a statistically significant manner when compared with the control group.