Beta talasemi majörlü hastalarda nk (natural killer ) aktivitesini etkileyen faktörlerin araştırılması
Investigation of factors influencing nk (natural killer) activity in beta-thalassemia major patients
Yazar: BELKIS ATASEVER
Danışman: PROF. DR. SERAP ERDEM KURUCA
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Fizyoloji = Physiology

Özet:
Beta-talasemi majör hemoglobinde ? -globin zincirinin üretilmemesiyle karakterize, kalıtsal bir hastalıktır. Çoğu hastada, tedavi için gerekli olan çoklu kan transfüzyonları lenfosit alt gruplarında ve sitokin düzeylerinde immun modifikasyonlara yol açar. NK hücreleri patojenlere ve tümör hücrelerine karşı doğal bağışıklık yanıtında önemli bir lenfosit altgrubudur. NK hücrelerinin aktivitesi, hücre yüzeyinde bulunan aktivatör ve inhibitör reseptörlerin hücre içine ilettiği sinyaller ve immün hücreler tarafından salgılanan sitokinler ile düzenlenir.Çalışmamızda 27 beta-talasemi majör hastasının ve 18 gönüllünün NK aktivitesi ve bu aktiviteyi etkileyen faktörler araştırıldı. İzole ve mononükleer hücreler içindeki NK hücrelerinin K562 hücrelerine karşı sitolitik fonksiyonu deney öncesinde ve sonrasında, flow sitometride CD56sönük, CD56parlak alt gruplarına ayrılarak CD16, NKp30, NKp44, NKG2D reseptörleri ölçülerek incelendi.Beta-talasemi hastalarının izole ve mononükleer hücreler içindeki NK aktivitesi kontrollerden daha düşük bulundu. Kontrollerde mononükleer hücreler içindeki CD56sönük NK hücrelerinde deneyden sonra anlamlı olarak CD16 artarken, beta-talasemi hastalarında CD56parlak altgrubunda arttı. İzole NK hücrelerinde ise değişmedi. Fakat bu değişiklik beta-talasemi hastalarında kontrole göre daha azdı. NKG2D reseptörü her iki gruptada değişmedi. İzole ve mononükleer içinde CD56sönük NK hücrelerinde NKp30 düzeyi deneyden sonra kontrollerde azalırken, beta-talasemi majörlü hastalarda sadece izole NK hücrelerde azaldı ve kontrollere göre bu değişiklik daha düşük bulundu. İzole NK hücrelerinde, CD56parlak alt grubunda NKp44 reseptörü beta-talasemi hastalarında deneyden sonra anlamlı olarak artarken, kontrollerde değişmedi fakat gene hastalara göre anlamlı olarak daha yüksekti. Mononükleer hücreler içindeki NK'ları K562 ile uyarmadan önce ve sonra toplanan süpernatantlardaki sitokin ölçümünde, beta-talasemi hastaları ve kontrollerde IL2, IL12, IFN ? , TNF ? miktarları değişmezken, hastalarda IL10, IL15 ve TGF- ? 1 miktarları kontrollere göre anlamlı olarak daha yüksekti.Bu sonuçlara göre, beta-talasemi hastalarının NK aktivitesindeki azalmanın, NK hücrelerinde ve monositlerde fonksiyonel yetersizliklerin ve sitokin üretiminin düzenlenmesindeki bozuklukların bir sonucu olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
Beta-thalassemia major are hereditary disease that characterized by absence of beta-globin chain production. In most patients, multiple blood transfusions can induce to immunomodifications in lymphocyte subsets and cytokine levels. NK cells are lymphocyte subpopulations that are important effectors of innate immune responses against infectious pathogens and tumor cells. The cytotoxic activity of NK cells is regulated by positive and negative signals from multiple receptors expressed on their cell surface and cytokines that are secreted from immune cells.This study was carried out to investigate details NK cell function of 27 patients with beta-thalassemia and 18 controls. We analyzed their cytolytic function against K562 cells in both pure NK cells and PBMC. Before and after the experiment, CD16, NKp30, NKp44, NKG2D receptors are examined in CD56dim, CD56bright subsets by flow cytometry.We observed that beta-thalassaemia patients had lower activities of pure NK cells and inside PBMC than controls. While CD16 of CD56dim NK subsets in PMNC was significantly increased in controls after experiment on the contrary it was increased in CD56bright subset of beta-thalassemia patients but wasn?t changed in pure NK cells. These differences were lower in beta-thalassemia patients than controls. NKG2D receptor wasn?t changed in both groups. While NKp30 receptor of CD56dim subset in pure NK and inside PBMC was decreased in controls after experiment it was only decreased in pure NK cells of beta-thalassemia patients and this difference was low compare with controls. NKp44 receptor of CD56bright subset in pure NK cells was significantly increased in beta-thalassemia patients after experiment and it wasn?t changed in controls however it was higher than patients as significantly. The supernatants of NK cells inside PBMC were collected before and after induced K562 and were measured cytokine levels by ELISA. IL2, IL12, IFN ? , TNF ? levels weren?t changed but IL10, IL15, TGF- ? 1 levels were significantly high in patients compare to controls.These findings demonstrate that environmental factors such as ineffective cytokine production and defective function of monocytes and NK cells, may cause low NK activity in beta-thalassaemia patients.