Stromal vasküler fraksı̇yonun tendon- tendon ı̇yı̇leşmesı̇ üzerı̇ne etkı̇sı̇nı̇n araştırılması
Researching the effect of stromal vascular fraction on tendon-tendon healing
Yazar: MİKAİL TELEK
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DURAN TOPAK
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology
Dizin: Aşil tendonu = Achilles tendon ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Metalloproteinazlar = Metalloproteinases ; Stromal vasküler fraksiyon = Stromal vascular fraction ; Sıçanlar = Rats ; Tendon yaralanmaları = Tendon injuries ; Tendonlar = Tendons ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
Amaç: Stromal vasküler fraksiyon (SVF), yağ dokunun enzimatik veya mekanik olarak parçalanmasıyla elde edilir. İçerisinde yağ doku kökenli kök hücre (YDKKH), preadipositler, endotelyal hücreler, perisitler, hematopoetik hücre öncülleri ve fibroblastlar gibi hücreler bulunur. Stromal vasküler fraksiyondaki hücrelerin birçok büyüme faktörü salgıladığı, yeni damar oluşumunu arttırdığı, anti-apopitotik ve antioksidan etkilerinin olduğu, yara iyileşmesini olumlu yönde etkilediği, antiinflamatuar etkilerinin olduğu, fibroblastlarda kollajen sentezini arttırdığı ve kök hücre kaynağı olduğu gösterilmiştir. Tendon yaralanmaları, özellikle el, el-bilek seviyesinde kesici delici alet yaralanması ve spontan aşil tendon rüptürü gibi nedenlerle meydana gelir ve sosyal hayatı olumsuz etkilediği gibi ciddi iş gücü kaybına neden olur. Bu çalışmayla literatürde ilk defa tendon-tendon iyileşmesinde otolog olarak elde edilen ve lokal uygulanan Stromal Vasküler Fraksiyon'nun erken iyileşme evresinde ve geç iyileşme evresinde etkilerini histopatolojik, immunohistokimyasal, biyokimyasal ve biyomekanik olarak değerlendirmeyi amaçladık.
Yöntem: 12 haftalıktan büyük ve ortalama ağırlıkları 400 gr kadar olan 50 adet Wistar- Albino cinsi erkek sıçan seçildi. 5 adet sıçan reserv grup olarak ayrıldı, 9 adet sıçan  SVF elde edilmesi için ayrıldı. Geriye kalan 36 adet sıçan randomize olarak her grupta 18 adet sıçan bulunacak şekilde, SVF verilen grup ile serum fizyolojik (SF) verilen gruba ayrıldı ve her grupta kendi içerisinde 9 adet olacak şekilde 1. hafta (erken evre) ve
5. hafta (geç evre) sakrifiye edilmek üzere 2 alt gruba ayrıldı. 9 adet sıçanın inguinal bölgelerinden elde edilen yağ dokusundan SVF elde edildi. Gruplardaki tüm sıçanların aşil tendonları aynı cerrah tarafından standart olarak kesilerek sonrasında primer onarıldı. SF grubunda bulunan sıçanlara 1 cc kadar serum fizyolojik peritendinöz olarak
 
uygulandı ve SVF grubunda bulunan sıçanlarada 1 cc SVF peritendinöz olarak uygulandı. SF ve SVF alt gruplarında bulunan sıçanlardan 1. haftada sakrifiye edilenlerin aşil tendon ve kanları alınarak biyokimyasal, histopatolojik ve immünhistokimyasal verileri incelendi. 5. hafta sakrifiye edilenlerin aşil tendon ve kanları alınarak biyokimyasal, biyomekanik, histopatolojik ve immünhistokimyasal verileri incelendi.
Bulgular: Yapmış olduğumuz çalışmada tendon iyileşmesinin erken ve geç evresinde ölçülen biyokimyasal parametrelerde anlamlı bir farklılık elde edilemedi. Histopatolojik olarak tendon iyileşmesinin erken evre ve geç evresinde SVF uygulanan grup lehine anlamlı sonuçlar elde edilmiştir. İmmünhistokimyasal olarak tendon iyileşmesinin erken evre ve geç evresinde MAC387 (inflamasyon) boyama sonuçlarına göre SVF uygulanan grup lehine anlamlı sonuçlar elde edilmiştir. İmmünhistokimyasal olarak bakılan STRO-1 (kök hücre) boyama sonuçlarına baktığımızda ise erken evrede SVF uygulanan grup lehine anlamlı sonuçlar elde edilirken tendon iyileşmesinin geç evresinde SVF uygulanan grupta daha yoğun kök hücre bulunmasına rağmen anlamlı bir sonuç elde edilememiştir. Biyomekanik olarak tendon iyileşmesinin geç evresinde young modülü, maksimum kuvvet ve gerilme dayanıklılığı incelenmiş olup SVF lehine anlamlı sonuçlar elde edilmiştir.
Sonuç: Yapmış olduğumuz çalışmada SVF'nin tendon iyileşmesi üzerine biyokimyasal olarak anlamlı bir etkisi gösterilememiştir. Örneklem çoğaltılarak 2. hafta sakrifikasyonu için ayrı grup oluşturularak ve ek biyokimyasal parametler de çalışılarak anlamlı sonuçlar elde edilebilir. İmmünhistokimyasal değerlendirmede MAC387 sonuçları tendon iyileşmesinin erken evresi ve geç evresinde SVF lehine anlamlı sonuçlanmıştır. STRO-1 sonuçları ise erken evrede SVF lehine anlamlı sonuçlanmış olup tendon iyileşmesinin geç evresinde SVF uygulanan grupta daha yoğun kök hücre tespit edilmesine rağmen istatistik olarak anlamlı bulunamamıştır. Biyomekanik ve histopatolojik olarak SVF lehine olacak şekilde anlamlı sonuçlar elde edilmiştir. Histopatolojik değerlendirme ve biyomekanik değerlendirme sonuçlarına baktığımızda sonuçların paralellik göstermesi yapmış olduğumuz çalışmadaki bulguların tutarlı olduğunu göstermekte ve SVF'nin tendon iyileşmesine olumlu etkili olduğunu ve iyileşmeyi hızlandırdığı sonucunu çıkarabiliriz.

Abstract:
Objective: Stromal vascular fraction (SVF) is obtained by enzymatic or mechanical breakdown of adipose tissue. It contains cells such as adipose tissue-derived stem cells (ADCSC), preadipocytes, endothelial cells, pericytes, hematopoietic cell precursors and fibroblasts. It has been shown that cells in the stromal vascular fraction secrete many growth factors, increase new vessel formation, have anti-apoptotic and antioxidant effects, positively affect wound healing, have anti-inflammatory effects, increase collagen synthesis in fibroblasts and stem cell source of Tendon injuries occur due to reasons such as stab wounds and spontaneous Achilles tendon rupture, especially at the hand, wrist-wrist level, and negatively affect social life and cause serious loss of workforce. In this study, we aimed to evaluate the histopathological, immunohistochemical, biochemical and biomechanical effects of the autologously obtained and locally applied Stromal Vascular Fraction in the early healing phase and late healing phase in tendon-tendon healing for the first time in the literature.
Methods: Fifty male Wistar-Albino rats over 12 weeks of age with an average weight of 400 g were selected. 5 rats were separated as reserve group, 9 rats were separated to obtain SVF. The remaining 36 rats were randomly divided into the group given SVF and the group given saline (SF), 18 in each group, and 9 in each group in the 1st week (early stage) and the 5th week (late stage). divided into 2 subgroups to be sacrificed. SVF was obtained from adipose tissue obtained from the inguinal regions of 9 rats. Achilles tendons of all rats in the groups were cut by the same surgeon as standard and then primary repaired. The rats in the SF group were administered 1 cc of saline peritendinous, and the rats in the SVF group were administered 1 cc of SVF peritendinous. The Achilles tendon and blood of the rats in the SF and SVF subgroups,
 
which were sacrificed in the first week, were taken and their biochemical, histopathological and immunohistochemical data were examined. Achilles tendon and blood of those who were sacrificed at the 5th week were taken and their biochemical, biomechanical, histopathological and immunohistochemical data were examined.
Results: In our study, no significant difference was found in the biochemical  parameters measured in the early and late stages of tendon healing. Histopathologically, significant results were obtained in favor of the SVF group in the early and late stages of tendon healing. According to the MAC387 (inflamation) staining results in the early and late stages of tendon healing immunohistochemically, significant results were obtained in favor of the SVF applied group. When we look at the immunohistochemical STRO-1 (stem cell) staining results, significant results were obtained in favor of the group in which SVF was applied in the early stage, but there was no significant result in the late stage of tendon healing, although more stem cells were found in the group that was administered SVF. Young's modulus, maximum strength and tensile strength were investigated in the late stage of tendon healing biomechanically, and significant results were obtained in favor of SVF.
Conclusion: In our study, a biochemically significant effect of SVF on tendon healing was not demonstrated. Significant results can be obtained by multiplying the sample, creating a separate group for the 2nd week sacrification and working on additional biochemical parameters. In immunohistochemical evaluation, MAC387 results showed significant results in favor of SVF in the early and late stages of tendon healing. STRO- 1 results were significant in favor of SVF in the early stage and although more dense stem cells were detected in the group that underwent SVF in the late stage of tendon healing, it was not statistically significant. Biomechanically and histopathologically, significant results were obtained in favor of SVF. When we look at the results of histopathological evaluation and biomechanical evaluation, the parallelism of the results shows that the findings in our study are consistent and we can conclude that SVF has a positive effect on tendon healing and accelerates healing.