Nikotinin embriyonal kemik gelişimi üzerindeki teratojenik etkisine karşı folik asitin koruyucu rolü
The protective role of folic acid against teratogenic effect on nicotinin embryonal bone development
Yazar: KADİRHAN DOĞAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHTAP NİSARİ
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Anatomi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Anatomi = Anatomy
Dizin: Embriyo = Embryo ; Folik asit = Folic acid ; Kemik gelişimi = Bone development ; Nikotin = Nicotine ; Sıçanlar = Rats ; Teratojenler = Teratogens

Özet:
Bu çalışmada nikotinin gebe sıçanların fetuslarının kemik gelişimine olası teratojenik etkileri ve folik asitin bu etkilere karşı koruyucu etkisi ikili iskelet boyaması yöntemi ile araştırıldı. Çalışmamızda 18 adet dişi ve erişkin Wistar-Albino türü sıçan kullanıldı. 2 dişi ve 1 erkek sıçanın aynı kafeste 14 saat geçirmesinin ardından yapılan vajinal smear testi ile gebe olduğu tespit edilen sıçanlar her gruba 3 tane düşecek şekilde 6 gruba ayrıldı. Gruplar kontrol, düşük doz nikotin (DDN), yüksek doz nikotin (YDN), düşük doz nikotin+folik asit (DDN+FA), yüksek doz nikotin+folik asit (YDN+FA) ve folik asit (FA) olarak oluşturuldu. Gebeliğin 1-20. günleri arasında kontrol grubuna 1 ml/kg serum fizyolojik (SF), DDN grubuna 3 mg/kg nikotin, YDN grubuna 6 mg/kg nikotin, DDN+FA grubuna 3 mg/kg nikotine ek olarak 400 µg FA, YDN+FA grubuna 6 mg/kg nikotine ek olarak 400 µg FA ve FA grubuna 400 µg FA verildi. 
Gebeliğin 20. gününde fetuslar sezaryenle alınarak ağırlıkları, biparietal ve baş-kıç uzunlukları ölçüldü. Daha sonra ikili iskelet boyama yöntemi kullanılarak fetusların kemik yapılarının Alizarin Red-S ile kırmızı, kıkırdak yapılarının da Alcian Blue ile mavi renge boyanması sağlandı. Fetuslara ait ön ve arka ekstremite kemiklerin (scapula, humerus, ulna, radius, femur, tibia, fibula) stereomikroskop altında incelenmesinin ardından fotoğrafları çekildi. Daha sonra Image J programı kullanılarak kemik uzunlukları, kemikleşme sergileyen bölgenin uzunlukları ve kemikleşme yüzde oranı hesaplandı. Elde edilen veriler R 3.2.3 programı ile değerlendirildi.
Kemik boy uzunlukları değerlendirmesinde DDN uygulanan grup verileri ile kontrol grubu verilerinin arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığı (p<0,05); YDN verilen grubun verilerinin anlamlı derecede düşük olduğu (p<0,05); DDN+FA ve YDN+FA gruplarına verilen FA'nın ise DDN ve YDN gruplarına verilen nikotinin etkisini düzelterek kontrol grubu verilerine yaklaştırdığı (p<0,05) tespit edildi. 
Bu veriler ışığında nikotinin teratojenik etkisinin kemikleşmeyi azalttığı; nikotine karşı verilen FA'nın ise bu etkiyi azaltarak kemikleşmeyi arttırdığı sonucuna varıldı.

Anahtar Kelimeler: Sıçan, nikotin, folik asit, kemikleşme, ikili iskelet boyaması

Abstract:
In this study, the possible effects of nicotine on the bone development of fetuses of pregnant rats and the protective effect of folic acid on these effects were investigated by dual skeletal staining. In our study, 18 adult female Wistar-Albino rats were used. Two female and one male rats were exposed to the same cage for 14 hours and the rats were found to be pregnant by vaginal smear test. Two female and one male rats were exposed to the same cage for 14 hours and the rats were found to be pregnant by vaginal smear test. Groups were formed as control, low dose nicotine (LDN), high dose nicotine (HDN), low dose nicotine+folic acid (LDN+FA), high dose nicotine+folic acid (HDN+FA) and folic acid (FA). Between 1-20 days of pregnancy 1 ml/kg of saline given for control group, 3 mg/kg of nicotine for LDN group, 6 mg/kg of nicotine for HDN, in addition 3 mg/kg nicotine 400 μg FA for LDN+FA group, in addition 6 mg/kg nicotine 400 μg FA for HDN+FA group and 400 μg of FA for FA group.
On the 20th day of the pregnancy, the fetuses were caesarean sectioned and their weights, biparietal and head-to-hip lengths were measured. Subsequently dual skeletal staining was used to redirect fetal bones red with Alizarin Red-S and cartilage blue with Alcian Blue. After examination of fetal front and rear bone (scapula, humerus, ulna, radius, femur, tibia, fibula) under the stereomicroscope photos were taken. Then, Image J program used to evaluate, the bone lengths, the lengths of the ossifying region and the percentage of ossification. The obtained data were evaluated with the R 3.2.3 program.
There was no statistically significant difference between groups of LDN applied group and control group (p<0.05); the data of the group given HDN were significantly lower (p<0.05); FA given to LDN+FA and HDN+FA groups improved the effect of nicotne given to the LDN and HDN groups to the control group (p<0.05).
According this study the teratogenic effect of nicotine reduces ossification; whereas FA given against nicotine increased the ossification by reducing this effect.
Keywords: Rat, nicotine, folic acid, ossification, double skeletal staining.