Streptomyces cinsine ait tür üyelerinden özütlenen ikincil metabolitlerin saflaştırılması ve molekül yapısının belirlenmesi
Purification and determination of the molecular structure of secondary metabolites extracted from species members of the genus Streptomyces
Yazar: ÖZNUR TARHAN
Danışman: PROF. DR. ALİ FAZIL YENİDÜNYA ; DR. ÖĞR. ÜYESİ GÖKNİL PELİN COŞKUN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: FTIR = FTIR ; Manyetik rezonans spektroskopi = Magnetic resonance spectroscopy ; Moleküler yapı = Molecular structure ; Streptomyces = Streptomyces

Özet:
Gram pozitif, filamentli bir öbakteri olan Actinobacteria şubesinde bulunan Streptomyces cinsinin üyeleri çok önemli biyoaktif ürünler üretmektedir. Bu ürünler genellikle antibakteriyel, antifungal ve insektisit özellik taşır. İkincil metabolitler ekstra- ve intraselüler olabildiği için kültür ortamlarında antimikrobiyal ajanlar tek başına bulunmazlar. Streptomyces griseorubens ve Streptomyces griseobrunnes izolatları için ikincil metabolit üretiminde LB besiyeri kullanılırken, Streptomyces viridodiastaticus izolatı için ISP-2 besiyeri kullanıldı. Kültür koşulları 37°C'de ve pH 7'ye sabitlenerek inkübe edildi. Streptomyces griseorubens, Streptomyces griseobrunnes ve Streptomyces viridodiastaticus izolatlarından elde edilen n-bütanol özütlerinden kuyucuk-difüzyon yöntemiyle antibiyogram yapıldığında Gram pozitif bakterilere etkili antimikrobiyal ajan olduğu tespit edildi. Aktif olan ikincil metabolitlerin hangileri olduğunu belirlemek amacıyla TLC ve kolon kromatografisi ile saflaştırma işlemleri gerçekleştirildi.  Maddelerin çözünürlüklerinin polar çözücülerde çok olması nedeni ile hareketli fazları polar çözücü sistemlerinde denendi. TLC'de çözücü sistemi olarak en iyi ayrım metanol:su:asetik asit (5:1:birkaç damla) çözeltisinde gerçekleştiği için kolon kromatografisinde de bu sistem kullanıldı.  Molekül yapısını belirlemek için FT-IR ve proton (1H),  karbon (13C)  ve iki boyutlu NMR kullanıldı.

Abstract:
Members of the genus Streptomyces belonging to the genus Actinobacteria, a Gram (+) and filamentous eubacterium, produce very important bioactive products. These products generally have antibacterial, antifungal and insecticide properties. While LB medium was used for secondary metabolite production for Streptomyces griseorubens and Streptomyces griseobrunnes isolates, ISP-2 medium was used for Streptomyces viridodiastaticus isolate. The culture conditions were incubated at 37°C and fixed at pH 7. When antibiogram was performed for n-butanol extracts obtained from Streptomyces griseorubens, Streptomyces griseobrunnes and Streptomyces viridodiastaticus isolates by the well-diffusion method, it was determined that it was an effective antimicrobial agent against Gram-positive bacteria. TLC was performed as a qualitative analysis. Due to the high solubility of the substances in polar solvents, their mobile phases were tested in polar solvent systems. This system was also used in column chromatography, as the best separation was achieved in methanol: water : acetic acid (5:1:a few drops) solution as the solvent system in TLC. The secondary metabolite extract was fractionated by column chromatography. FT-IR and proton (1H), carbon (13C) and two-dimensional NMR were used to determine their molecular structures. According to the results of the analysis, three different fatty acids were determined as linolenic acid, erucic acid and linoelaidic acid.