Aterosiklerozis'e proteomik yaklaşımlar
Proteomics approches to atherosclerosis
Yazar: ÇAĞRI GÜMÜŞTEKİN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. FATMA DUYGU ÖZEL DEMİRALP
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Aterosklerosis koroner arteri hastalıklarıyla, yüksek tansiyonla, diyabet ve vaskülit patojeniyle bağlantılı önemli hastalıklardan biridir. Aterosklerotik vaskuler yapıda lipit parçacıklarının birikimiyle birlikte ilerleyen enflamatuvar tepki şeklinde kendini gösterir, bu da endotelin aktivasyonunun, adhezyon moleküllerinin, sitokinlerin ve kemokinlerin artmasına neden olur. Aynı zamanda in vitro ortamda yapılan çalışmalar dolaşım sistemindeki monositler ve doku makrofajların da bu oluşum da rol aldığını göstermiştir. Damar duvarındaki endotel hücrelerle vasküler hücre yapısına uygulanan herhangi bir stres sonucu etkin hale geçen ve bağışıklık sisteminin önemli elemanları olan monosit ve makrofajların etkileşimi oldukça önemlidir. Atherosclerosis yaş, genetik ve çevre gibi faktörlerle etkileşimde olan çok fonksiyonlu bir hastalıktır. Çok faktörlü bir hastalık olan Atherosclerosis, henüz gen değişimi ve epigenetik faktörlerle açıklanmamıştır. Bu gün proteomic teknolojileri, proteinlerin global profili ve protein modifikasyonları, bireysel değişiklikleri anlamamıza ve anlatmamıza yardımcı olur.Bu çalışmada atherosiklerozda önemli olabilecek yeni biyo-belirteçlerin tanımlanması ve yeni tedavilerin belirlenmesinde, kullanılabilir yeni yaklaşımların geliştirilmesini amaçlanmıştır. İnflamatuar süreçte yer alabilecek yeni moleküller ve mekanizmaların tanımlanması amacıyla kontrol ve lipopolisakkarit (LPS) ile uyarılarak inflamasyon modellenen entotel (HUVEC) ve THP-1 hücrelerinde öncelikle MTT ile hücre proliferasyonu ve caspase3 ile toksisite testleri yapılmıştır. Yapılan tekli ve ikili ko-kültür örnekleri ile iki boyutlu jel elektroforezinde protein profilleri değerlendirilmiştir. Bu yöntemle tespit edilen protein profil farklılıkları bioinformatik analiz programı ile değerlendirilmiştir. Değerlendirme sonucunda protein profillerinde; 24 saat süre ile LPS uygulanan endotel (HUVEC) ve THP-1 hücrelerinden oluşturulan ikili hücre ko-kültürü uygulamalarında tekli hücre kültürü uygulamalarına göre daha çok artış görülmüştür.

Abstract:
Atherosclerosis is one of the most important diseases that is related with coronary artery diseases, high blood pressure, diabetes and most vaskulite patogenesis. Atheriosclerotic action can be defined as an progressive enflamatuar period that is characterized by the accumulation of lipid particles in the vascular structure , causing the activation of endotel and increasing the wobulation of the leukocyte adhesion molecules, cytokinins and kemokinins .Also monocytes and tissue macrofage in the ciculatory system taken to the medium are involved in the process. The interaction of endothelial cells in the vessel wall and monocyte/macrofages in vascular circulation , an important component of immune response and which are activated in the case of any stress with the vascular cell structure is very important. Atherosclerosis is a multifactor disease that occurs with the interaction between such factors as age, genetics and environment. Atherosclerosis a multifactor disease, has not been explained through gene changes and the epigenetic factors yet. Today advanced proteomic technologies, global profiles of proteins and protein modifications help us to understand and explain individual differences.In this study, it is aimed to find out new bio-markers and development of new diagnosis and treatment methods which may play a role in atherosiklerosis. In order to identify new molecules and mechanisms that can be involved in inflammatory process, cell proliferation and toxic test are carried out on Endothel and THP-1 cells which are stimulated by LPS and control and determined with MTT and appoptosis determined with caspase3 levels .The protein profiles have been analyzed by the help of 2D electrophoresis and one and two layered co-culture samples. Protein profiles differences determined by this method are evaluated through the bio informatics analysis program. These analysis show that there is much increase in protein profiles of the two layered co-culture specimen consisting of endotel (HUVEC) and THP-1 cells which are exposed to LPS for 24 hours when compared to one layered co-culture samples.