Sperm parametreleri bozulmuş erkek farelerde vitamin c ve e kombinasyonu ile kahverengi algin (halopteris scoparia sauvageau) parametrelerdeki iyileşmeye etkisinin incelenmesi
The comparison of brown algae (halopteri̇s scoparia sauvageau) with vitamins c and e combinations on impaired sperm parameters of male mice
Yazar: ÖZLEM GÜNER
Danışman: PROF. DR. OYA KAVLAK
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kadın Sağlığı ve Hastalıkları Hemşireliği Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Hemşirelik = Nursing ; Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Canlılar üzerinde oldukça toksik etki gösteren ağır metallerden biri olan kadmiyum, testis dokularında birikerek bir çok hasar meydana getirip infertiliteye sebep olmaktadır. Bu gibi çevresel faktörlerde oksidatif stres sonucu erkek infertilitesi olgularına rastlamak mümkündür. Bu olgularda tedavi amaçlı olarak yeri açıkça bilinen sentetik antioksidanların yerine alternatif olarak doğal antioksidanların kullanılabileceği düşünülmektedir. Alglerin, antioksidan, antimikrobiyal ve antiinflammatuvar özelliklerinin olduğu bildirilmiştir. Bu çalışmada, kadmiyum maruziyeti sonucunda erkek farelerde oluşan infertilitede infertiliteyi iyileştirici etkileri bilinen antioksidan vitaminlere kıyasla kahverengi alglerin etkilerini belirlemek amaçlanmıştır. 
Araştırmada, 36 adet erkek  Balb-C türü deney fareleri rastgele  altı  gruba ayrılmıştır. Grup I; kontrol, Grup II (CdCI2); 2 mg/kg/gün  kadmiyum, Grup III (Alg); 900 mg/kg/gün alg, Grup IV (Vitamin C ve E); 200mg/kg/gün Vitamin C ve E, Grup V (CdCI2 +Alg); 2 mg/kg/gün  kadmiyum +900 mg/kg/gün alg, Grup VI (CdCI2 +Vitamin C ve E); 2 mg/kg/gün  kadmiyum +200mg/kg/gün Vitamin C ve E uygulanarak oluşturulmuştur. Araştırmada, 21 günlük deney süresi sonunda her hayvanın kalbinden kan örnekleri antikoagülantsız tüplere alınmış ve testosteron, FSH ve LH parametreleri değerlendirilinceye kadar −20°C'de saklanmıştır. Ayrıca hayvanlar histopatolojik denemeler için servikal dislokasyonla öldürülmüş ve cinsiyet organları çıkarılarak tartılmıştır. Bu organlar fizyolojik su (NaCl 0.9%) ile yıkandıktan sonra %4 paraformaldehit içerisinde değerlendirileceği zamana kadar saklanmıştır. Organların 6 μm kalınlığında parafin blokları hazırlanmış ve apoptozis için TUNEL metodu ile indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) immünohistokimyasal boyamanın yanısıra histolojik incelemeler için hemotoksilen&eozin boyaması uygulanmıştır. Ayrıca, kan örneklerinde serum FSH, serum LH ve serum testosteron seviyelerine bakılmıştır. Farelerin sperm sayıları, sperm motilitesi, sperm canlılığı ve sperm morfolojileri değerlendirilmiştir.
Çalışma sonucunda; sperm sayımında Alg ve Vitamin C ve E grubunun kontrole benzer olduğu, ancak CdCI2, CdCI2 +Alg, CdCI2 +Vitamin C ve E gruplarında sperm sayısında istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azalma olduğu görülmüştür. Sperm sayısında CdCI2'nin sebep olduğu azalmalar üzerinde Alg ve Vitamin C ve E'nin iyileştirici etkisi olduğu görülmüştür. Sperm canlılığında ve normal sperm morfolojisinde Vitamin C ve E grubunun kontrole benzer olduğu, alg grubunda istatistiksel olarak anlamlı artış olduğu, CdCI2, CdCI2 +Alg, CdCI2 +Vitamin C ve E gruplarında istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azalma olduğu görülmüştür (p<0.001). CdCI2'un sebep olduğu azalma üzerinde Alg ve Vitamin C ve E'nin iyileştirici etkisi olduğu ancak algin vitamin C ve E göre istatistiksel olarak daha etkin olduğu görülmüştür (p<0.001). CdCI2 grubu, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında serum FSH düzeyinde ileri düzeyde bir artışa ve serum testosteron düzeyinde ileri düzeyde bir azalmaya neden olduğu, bununla birlikte, CdCI2 ek olarak Alg ve Vitamin C ve E uygulanan gruplarda serum FSH ve testosteron düzeyinde CdCI2'un sebep olduğu değişiklik üzerinde iyileştirici etkisi olduğu görülmüştür (p<0.001). Çalışmada kadmiyum uygulanan grupta TUNEL ekspresyonu gösteren apoptotik hücre sayısında ve NOS 2 ekspresyonunda artma olduğu görülmüştür. Kadmiyum grubunun histolojik incelemelerinde ise şiddetli dejenerasyon ve hücresel kayıplar görülmüştür. Koruyucu amaçlı verilen algin ise tüm bu hasarları engellediği gözlenmiştir.
Sonuç olarak;  H.scoparia'nın CdCI2'ün yol açtığı sperm parametreleri ve histolojik değişimlere karşı koruyucu etkiler sergilediği ve ileri deneysel yöntemlerle desteklenerek etkili bir infertilite ajanı olarak kullanılabileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Cadmium that a major industrial and environmental pollutant are highly toxic to living organisms. However, it usually accumulates in testicular tissues and causes many injuries leading to infertility. It is possible to encounter cases of male infertility due to oxidative stres based environmental factors like this. In these cases, natural antioxidants may be used instead of synthetic antioxidants which using for therapeutic purposes. Algae are reported to have antioxidant, antimicrobial and antiinflammatory properties. This study was conducted to determine the protective effects of algae against proven antioxidant vitamins against infertility caused by cadmium exposure in male rats.
 	In the study, 36 male Balb-C type experimental mice were randomly divided into six groups. Group I; Control, Group II; CdCl2 2 mg/kg/day, Group III; Alg 900 mg/kg/day, Group IV; Vitamins C/E 200 mg/kg /day, Group V; CdCl2 (2 mg/kg/day) + Alg (900 mg/kg/day), Group VI; CdCl2 (2 mg/kg/day) + Vitamin C/E (200 mg/kg /day); were applied. Animal weighed and then blood samples were drawn from the heart of each animal into anticoagulant-free test tubes and serum was removed and stored at −20°C until determination of testosterone, FSH and LH hormone. The animal used in histopatological assay were killed by cervical dislocation and the accessory sex organs were weighed and excised. This removed organ  thoroughly washed with physiological saline (NaCl 0.9%), and stored in  4% para-formaldehyde until further processing. The paraffin blocks of organ were prepared. The blocks were sectioned at 6 μm thickness and were stained with hematoxylin and eosin method as well as inducible nitric oxide synthase (iNOS) and TUNEL immunohistochemical staining for determination of apoptosis was performed. Furthermore, serum FSH, serum LH and serum testosterone levels from blood samples were measured. Sperm counts, sperm motility, sperm viability and sperm morphology of mice were evaluated.
This study revealed that Alg and Vitamin C/E groups in the sperm counts were similar to the control but there was a statistically significant decrease in sperm counts in CdCI2, CdCI2 +Alg, CdCI2+Vitamin C/E groups. It has been shown that Alg and Vitamin C/E have healing effects on reductions caused by CdCl2 in sperm count. There was a statistically significant increase in algae group and a statistically significant decrease in CdCI2, Alg+CdCI2, Vitamin C/E+CdCI2 groups in sperm viability and normal sperm morphology. It was found that Alg and Vitamin C/E had a healing effect on the reduction caused by CdCl2 but algae were statistically more effective than vitamin C and E (p<0.001). CdCI2 group caused a further increase in serum FSH level and a further decrease in serum testosterone level compared with the control group. Alg and Vitamin C/E showed that an ameliorated effect at the level of serum FSH and testosterone caused by CdCl2 (p<0.001). However, in cadmium group, there was an increase in NOS2 and TUNEL expression as well as severe degeneration and cellular losses were observed. At the same time, The algae given for protective purposes has been observed to prevent all these damages.
As a result, it is suggested that algae shows protective effect against changes in histological and sperm parameters caused by CdCl2 and can be used as an effective agent in infertility treatment by supporting further experiments.