İnsan kaynaklı dokuya özgü kök hücrelerde nükleosteminin ifade ve dağılımının belirlenmesi
Determining the expression and diffusion of nucleostemin in that are specific to human originated tissue
Yazar: PINAR AKPINAR OKTAR
Danışman: PROF. DR. ALP CAN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Antikorlar = Antibodies ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kök hücreler = Stem cells ; Mikroskopi = Microscopy ; Tübülin = Tubulin

Özet:
Çalışmamızın temel amacı nükleostemin gibi erişkin kök hücrelerin farklılaşmasında rol aldığı düşünülen ve bölünen hücrelerde belirteç olarak kabul edilen bir dizi çekirdek ve sitoplazma proteinlerin, ifadelenme profilleri ve hücresel dağılımlarının belirlenmesidir. Çalışma sırasında nükleosteminin insan kökenli mezenkimal kök hücrelerdeki ifadelenmesine ek olarak farklanma ve diğer hücre iskelet proteinleri ve çekirdek proteinleri ile ilişkisi irdelenmiştir.Çalışmamızda incelediğimiz çekirdek proteinlerinden biri olan nükleosteminin kök hücrelerdeki ifadelenmesinin belirlenmesi ve bu proteinin diğer hücre iskeleti proteinleriyle çekirdek proteinleri arasındaki ilişkisi konfokal mikroskopiyle incelenmiştir. Nükleosteminin farklanmış kök hücrelerdeki ifadelenme ise konfokal ve qRT-PCR yöntemi ile araştırılmıştır. Akım sitometri yöntemiyle de İGBS-MKH'lerde puluripotent kök hücre belirteçlerinin ve bazı mezenkimal kök hücre belirteçlerinin varlığı araştırılmıştır.Elde edilen en önemli bulgulardan biri nükleosteminin hücrelerin interfaz çekirdekleri ile mitozun değişik evrelerinde çok farklı yerleşimler göstermiş olmasıdır. Nükleostemin özellikle mitoz hücre bölünmesinin profaz, metafaz ve anafaz evrelerinde, kromozomların kollarının etrafını dolaşarak, yamalı bir görünüm verecek şekilde sardığı ve kromozom kolları arasındaki boşlukları doldurduğu gözlenmiştir. Nükleosteminin kromozom kolları arasındaki dağılımıyla, fiziksel olarak ayrılan kromozomların korunmasını sağladığı, mutasyon oluşumunu engellediği düşünülmektedir. Bu bulgu daha önce hiç bir çalışmada gösterilmemiştir Ayrıca ?- ve ß-tubülinler ve NuMA ile ilişkisinin belirlenmesi, nükleosteminin bölünme sırasında hücre iskeletinin korunması, mikrotübülüs mekiğinin düzenlenmesi gibi önemli görevleri olabileceği fikrini de akla getirmiştirDeneysel bulgularımızın özellikle nükleosteminin hücre iskeletinde, kromozomların stabilizasyonunda ve hücre farklanmasındaki rolünün açıklanmasına ışık tutacağı ve katkıda bulunacağı inancındayız.Anahtar Sözcükler: Nükleostemin, NuMA, perisentrin, ?-ß tübülin, ?-tübülin

Abstract:
The main purpose of our study is determining the expression profiles and cell diffusion of series of nuclear and cytoplasm proteins which is thought to take a role in the differentiation of adult stem cells like nucleostamin and conceded to be a marker in divided cells. Determining the expression of human driven meshencymal stem cell, differentiation and examination of the relation of cell structure proteins and nuclear proteins.The determination of expression of nucleostemin, which is one of the nuclear proteins that is examined in our study, in stem cell and the relation of this protein and cell structure proteins and nuclear proteins are examined in confocal microscopy. Expression of nucleostemin in differentiated stem cells is investigated with confocal and qRT-PCR method. The existance of pluripotent stem cell markers on HUCS-MSC and the existance of some meshencymal stem cell markers are examined with flow cytometry method.One of the most important findings in this phase is different localization of nucleostamin in nucleuses on interphase phase of cells and different phases of mitosis. Nucleostamin, especially prophase, methapase and anaphase phases of mitosis cell division, circles around chromosome arms and gives out a patchy appearance. It seems to fill the space between chromosome arms. It is thought that nucleostemin helps the protection of physically detached chromosomes and prevents the formation of mutations by distribution among chromosome arms. This experimental result has never been showed before in previous studies. Besides nucleostemin is thought to have some important functions on designating the relation of ?- and ß-tubulins and NuMa, preservation of cell structure during division of cell and ordering microtubulus spindle.We have a confidence that our experimental results make contribution in stabilization of chromosomes on cell structure and representation of the role on cell differentation of nucleostamin especially.Key Words : Nucleostemin, NuMA, pericentrin, ? -ß microtubulin, ?-tubulin