Resveratrol'ün kolon kanser hücre hattında apoptoz üzerine etkisinin incelenmesi
The apoptotic effect of resveratrol in colon cancer cell line
Yazar: CEYDA ÇÖREK
Danışman: PROF. DR. YAVUZ TAGA
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Apoptozis = Apoptosis ; Genler = Genes ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Hücre dizisi = Cell line ; Kaspazlar = Caspases ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Kolorektal neoplazmlar = Colorectal neoplasms ; Resveratrol = Resveratrol

Özet:
Kolon kanseri tüm dünyada en yüksek üçüncü mortaliteye ve insidansa sahip bir kanser türüdür. Birçok faktörün yanı sıra kolon kanseri ve beslenme alışkanlıkları arasında önemli bir ilişki olduğu düşünülmektedir. Bu araştırmada kolon kanseri hücre hattında kırmızı üzüm, soya fasulyesi, yer fıstığı gibi besinlerde bulunan bir flavanoid olan Resveratrol'ün apoptoz üzerine etkisinin araştırılması planlandı. İlk olarak çalışmada HCT-116 kolon kanseri hücre hattına uygulanacak Resveratrol'ün IC50 değerini tespit edebilmek amacıyla WST-1 hücre canlılık tayini yapıldı. Resveratrol'ün belirlenen IC50 değerinin hücre hattına 24 saat inkübasyonu sonrasında akış sitometrisi cihazı ile hücrelerin apoptoza gitme oranları belirlendi. Akış sitometrisi grafikleri sonuçlarına göre Resveratrol uygulanan hücrelerin apoptoza gittikleri kantitatif olarak gösterildi.Hücrelere uygulanan Resveratrol'ün akış sitometresi cihazı kullanılarak apoptoz/nekroz oranı belirlendi. Ayrıca bu ajanın hücre yaşam döngüsüne etkisini belirlemek için de hücre yaşam döngüsü analizi yapıldı. Hücre yaşam döngüsünün de G0/G1 fazında duraksamaya neden olduğu histogram istatistikleri ile sayısal olarak gösterildi.Kolon kanseri hücreleri üzerinde Resveratrol'ün apoptotik etkisini göstermek için immünblotlama tekniğinden yararlanıldı. Resveratrol uygulanmış hücre lerde üzerinde kaspaz-3 için substrat olarak tanımlanan PARP proteinin ekspresyonları incelendi. Bu çalışma sonucunda kesilmemiş PARP proteinin hem kontrol grubunda hem de indüklenmiş hücre hatlarında eksprese olduğu, ancak PARP proteininin kesiminin arttığı sadece Resveratrol ile apoptozu indüklenmiş hücrelerde eksprese olduğu gösterilmiştir.

Abstract:
Colon cancer has the third highest incidence among cancers and also is third leading cause of mortality from cancer deads worldwide. Besides various factors, a high correlation has been suggested between the colon cancer and nutrition habits. In this study, the effect of resveratrol (a flavonoid present in red grapes, soy bean and peanut) on apoptosis has been tested in a colon cancer cell line. First, WST-1 as a viability assay has been performed for detection of IC50 level of resveratrol. Afterwards, apoptosis ratio has been determined by flow cytometry following the incubation of cells with this IC50 concentration of resveratrol. Flow cytometric analysis confirmed that resveratrol treatment induces apoptosis in the HCT-116 cells, in a quantitive manner.Apoptosis/necrosis ratio has been assessed following the treatment of resveratrol. Additionally, cell cycle analysis has been performed to detect the effect of this agent on cell cycle. Quantitave results have shown that resveratrol causes G0/G1 cell cycle arrest.On the other hand, immunoblotting has been performed to prove the apoptotic role of resveratrol in colon cancer cells. The protein levels of PARP which is a substrate of caspase-3 has been determined in the resveratrol treated cells. Results showed that pro-PARP has been expressed in the same levels in both control and resveratrol-treated groups. PARP cleavage increased only in resveratrol treated group confirming the induction of apoptosis.