İntestinal iskemi-reperfüzyon sonrası oluşan bakteriyel translokasyon ve vasküler permeabilite üzerine karnosol'un koruyucu etkisinin incelenmesi
Protective effects of carnosol on vasculer permeability and bacterial translocation which being after intestinal ischemia-reperfusion rat model
Yazar: ÖZGÜR CEM MÜSRİ
Danışman: DOÇ. DR. SERHAT OĞUZ
Trakya Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery
Dizin: Bakteriyel translokasyon = Bacterial translocation ; Karnosol = Carnosol ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; İntestinal hastalıklar = Intestinal diseases ; İskemi = Ischemia

Özet:
İskemi bir dokuya gelen kan akımının azalması veya kesilmesi olarak tanımlanır.  Reperfüzyon ise kan akımının yeniden başlamasıdır. İskemi sonrasında dokuda hücresel fonksiyon bozukluklarına neden olacak bir dizi kimyasal olay başlar. Yeniden kanlanma ile dokudaki hasar miktarı giderek artar. Çeşitli nedenlerden oluşan iskemi reperfüzyona bağlı gelişen akut iskemi, vasküler permeabilite artışına ve bakteriyel translokasyona sebep olmaktadır. Deneysel iskemi reperfüzyon modeli üzerinde antioksidanların etkileri ile ilgili çalışmalar son yıllarda hız kazanmıştır.
Trakya Üniversitesi Tıp Fakültesi Genel Cerrahi Anabilim Dalı'nda planlanan ve Trakya Üniversitesi Deney Hayvanları Araştırma Laboratuarı'nda gerçekleştirilen çalışmamızda daha önce hiç üzerinde çalışılmayan intestinal iskemi-reperfüzyon sonrası oluşan bakteriyel translokasyon ve vasküler permeabilite üzerine karnosol'un beklenen koruyucu etkisini göstermeyi amaçladık. 
Aynı biyolojik ve fizyolojik özelliklere sahip 30 adet Sprague Dawley tek cins rattan rastgele seçimle üç grup oluşturuldu. 
Grup 1: Kontrol grubu.
Grup 2: Deney (iskemi-reperfüzyon) grubu.
Grup 3: Deney+ilaç (I/R+karnosol) grubu.
Tüm gruplardaki ratlara 7 gün süreyle standart yem ve su verildi. Deney+ilaç grubuna toz halindeki karnosol %10 dimetil sülfoksid (DMSO)  ile çözüldükten sonra, operasyondan  3 gün önce başlayarak intraperitoneal yolla 3 mg/kg/gün dozunda verildi. Bütün ratlara ilk operasyondan 12 saat önce orogastrik yolla 1 ml 1010 CFU/ml E-coli verildi. 7. günün sonunda opere edilen deney ve deney+ilaç grubuna 60 dakika süreyle intestinal iskemi ve  120 dakika süreyle reperfüzyon uygulandı. Karın ön duvarı orta hat insizyonu ile laparatomi yapılarak karın boşluğuna girildi. İnce barsaklar laparotomi kesisinden dışarı çıkarılarak SMA ortaya konuldu. SMA'e atravmatik mikrovasküler bir klemp konulmasıyla dolaşımı engellendi. İntestinal iskemi arter vurumlarının kaybolması ve barsak renginin soluklaşmasıyla doğrulandı. Deney grubuna 0,2 cc DMSO intraperitoneal yolla verildi. İntestinal iskemi sonunda SMA'deki mikrovasküler klemp çıkarılarak intestinal reperfüzyon başlatıldı. Reperfüzyon arter vurumlarının tekrar belirmesi ve ince barsak renginin pembeleşmesi görülerek doğrulandı. Barsaklar tekrar karın içine geri kondu. Laparatomi kesisi atravmatik 4/0 prolen dikişle kapatıldı.
Kontrol grubuna ise orta hat insizyonu ile laparatomi yapılarak karın boşluğuna girildi. 0,2 cc DMSO intraperitoneal yolla verildi. Laparatomi kesisi atravmatik 4/0 prolen dikişle kapatıldı.
72 saat sonra sıçanlara tekrar laparotomi yapılarak mikrobiyolojik, biyokimyasal ve histopatolojik incelemeler için karaciğer, dalak, mezenter lenf nodları ve ileal doku örnekleri ile birlikte deneklerin kan örnekleri sterilizasyon ve dezenfeksiyon şartlarına uyulan laboratuvar ortamında alındı.
2 ml'lik serumda radioimmunoassay kitler yardımıyla ELISA yöntemi kullanılarak TNF-α, IL-1β ve IL-6 ölçümleri yapıldı.  
Sonuç:
a)	 Deney grubunda meydana gelen ileal doku hasarının deney+ilaç grubunda anlamlı düzeyde azaldığı tespit edildi.
b)	Deney+ilaç grubunda, karnosol'un vasküler permeabiliteyi azaltmasına rağmen etkisininin anlamlı olmadığı tespit edildi.
c)	Deney+ilaç grubunda doku kültürlerinde bakteriyel translokasyon düzeylerinin deney grubuna göre anlamlı bir biçimde azaldığı tespit edildi.
İntestinal iskemi reperfüzyon oluşturulan sıçanlarda kullandığımız karnosol'un iskemi reperfüzyon hasarını önlemedeki etkinliğinin, biyokimyasal, mikrobiyolojik ve histopatolojik değerlendirmeler göz önüne alındığında olumlu olabileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Ischemia is defined as "reduction or cessation of the blood flow to a tissue". Reperfusion is the resumption of the blood flow. After ischemia in the tissues, a series of chemical events start which cause to cellular dysfunctions. The tissue damage gradually increases; as the reperfusion occurs.  The ischemia, which caused by several reasons and acute reperfusion ischemia; could cause bacterial translocation and increased vascular permeability. The effects of antioxidants on the experimental model of ischemia-reperfusion researches, gained momentum in recent years. 
We aimed with this study, which was planned in Trakya University Medical Faculty, Department of General Surgery and was performed at Trakya University Experimental Animal Research Laboratory, to show the expected protective effects of carnosol on the vascular permeability and the bacterial translocation, which causes of intestinal ischemia-reperfusion.
30 single-sex Sprague Dawley rats, which have the same biological and physiological features, were randomly divided into 3 groups.
Group 1: The Control group
Group 2: Experimental (Ischemia-reperfusion) group
Group 3: Experimental+drug (I/R+carnosol) group
In all groups, the rats were given the same food and water for 7 days. Powdered carnosol dissoluted with %10 dimethyl sulfoxide (DMSO) and was given intraperitoneally (3mg/kg/day) to carnosol applied group by starting 3 days before the operation. Before the first operation, to all rats was given 1 ml of E-coli 1010 cfu/ml via orogastric way. At the end of 7. Day, experimental and experimental+drug groups were operated and performed intestinal ischemia for 60 minutes and reperfusion for 120 minutes. With anterior abdominal wall midline laparatomy incision was entered into the abdominal cavity. The small intestines  was taken out from the laparotomy bladder and SMA was exposed. Microvascular circulation was blocked by placing an atraumatic clamp to SMA. Intestinal ischemia was verified with absence of arterial pulses and disappearance of color of intestinals. 0.2 cc of DMSO was given to experimental group via intraperitoneal injection. At the end of intestinal ischemia, intestinal microvascular reperfusion was initiated by removing the clamp in SMA. Reperfusion was confirmed with appearance of arterial pulses and pink color of small intestine. Bowels were put back into the abdomen again. Laparotomy incision was closed with atraumatic 4/0 prolene sutures. 
At the control group, midline incision was made and abdominal cavity was reached. 0,2 cc of DMSO was applied through intraperitoneal way. Midline incision closed with       4/0 prolene sutures. 
After 72 hours, second laparotomy was made to the rats. With keeping the sterilization and disinfection rules, blood samples, hepatic, splenic, mesenteric lymph nodes and ileum biopsies were taken for microbiological, biochemical and histopathological examinations.
2 mls of blood serum samples examined with using ELISA method and with the help of radioimmunassay, for TNF-α, IL-1β and IL-6 levels.
Conclusion:
a)	It was found a statistically significant decrease the level of tissue damage in the experimental+drug group when compared with the experimental group.
b)	It was found that; carnasol decreases the vascular permeability level; however this effect was not statistically significant.
c)	At the bacteriological cultures of tissue; bacterial translocation levels decreased statistically significant in the experimental+drug group, compared to the experimental group.
Considering biochemical, microbiological and histopathological results, carnasol may have a favorable effect on protection from ischemia reperfusion injury in rats subjected to ischemia reperfusion.