İn vitro hepatik oksidatif hasarda carvacrol'ün etkinliğinin araştırılması
Investigation of the efficacy of carvacrol in in vitro hepatic oxidative damage
Yazar: MERYEM NUR ATABAY
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET MUSTAFA İŞGÖR
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Aldose redüktaz = Aldose reductase ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer yağlanması = Fatty liver ; Karvakrol = Carvacrol ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Palmitatlar = Palmitates

Özet:
İn Vitro Hepatik Oksidatif  Hasarda  Carvacrol'ün  Etkinliğinin Araştırılması
Non-alkolik steatohepatit (NASH);  karaciğerde, özellikle trigliserit olmak üzere yağ birikimi ile karakterize, yaygın görülen bir hastalıktır. NASH insülin direnciyle yakından ilişkilidir ve metabolik sendromun hepatik belirtisi olarak kabul edilmektedir. Hastalığın tedavisinde araştırmalar doğal kaynaklardan elde edilen antioksidan moleküllere yoğunlaşmıştır. Bu bağlamda araştırmamızda üniversitemizin de bulunduğu bölge bitki florasında bulunan kekiğin etken maddesi carvacrol hastalığın tedavisi amacıyla in vitro denemelerle ortaya konulmaya çalışılmıştır.  
Çalışmada materyal olarak insan hepatosit hücre hattı ( HepG-2, ATCCHB-8065 ) kullanıldı. Hücreler "Dulbecco's Modified Eagle Medium" (DMEM) besiyeri ortamında üretildi. Deneme grupları kontrol (kont.), palmitat eklenen grup (P), carvacrol eklenen grup (C) ve palmitat ile birlikte carvacrol eklenen grup (+C) olarak tasarlandı. Farklı konsantrasyonlarda palmitat (150, 300 ve 450 µM/ml) ve carvacrol (1, 5 10 ve 10 µM/ml)   24 saat sürelerle hücrelere uygulanarak etkin konsantrasyon tespitleri MTT viyabilite testi ile ortaya konuldu. Hücrelerden elde edilen homojenatlardan hücre içi glutatyon (GSH) ve nitrit düzeyi (NO) spektrofotometrik olarak analiz edildi. Yine bu örneklerdeki aldozredüktaz düzeyleri (AR) ELİSA metoduyla araştırıldı. Çalışmadan elde edilen viyabilite verilerine göre palmitatın 300 µM konsantrasyonu kontrole göre % 45 oranında hücre kayıplarına neden olduğu, carvacro'lün ise 5µM/ml konsantrasyonunun hücrelere uygulanımıyla bu kayıpların % 41oranında önlendiği tespit edildi. Çalışmada palmitat ve carvacro'lün GSH düzeyinde önemli bir değişiklik oluşturmadığı ancak NO düzeylerini anlamlı düzeyde azalttığı bulundu. Yine hücre içi AR protein düzeyini palmitat arttırırken, carvacrol bu artışı % 1.7 oranında önlediği tespit edildi. 
Tüm bu verilen doğrultusunda carvacro'lün non-alkolik steatozis gibi yağlanmaya bağlı karaciğer hastalıklarında potansiyel bir etken madde olarak düşünülebileceği kanısına varılmıştır. Bu savın tam olarak söylenebilmesi için ise in vivo ve daha ileri moleküler araştırmalara ihtiyaç bulunmaktadır. 
Anahtar kelimeler:Non-alkolik steatozis, palmitat, carvacrol, oksidatif stres, aldozredüktaz.

Abstract:
Investigation of the Efficacy of Carvacrol in In Vitro Hepatic Oxidative Damage
Non-alcoholic steatohepatitis (NASH); is a common disease characterized by accumulation of fat in the liver, especially triglycerides. NASH is closely associated with insulin resistance and is considered as a hepatic symptom of metabolic syndrome. Research in the treatment of the disease has focused on antioxidant molecules derived from natural sources. In this context, carvacrol, the active ingredient of thyme in plant flora of the region where our university is located, has been tried to be demonstrated by in vitro experiments for the treatment of the disease.
Human hepatocyte cell line (HepG-2, ATCCHB-8065) was used in the study. Cells were grown on Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) medium. Experimental groups were designed as control (control), palmitate added group (P), carvacrol added group (C) and palmitate and carvacrol added group (+ C).At different concentrations of palmitate (150, 300 and 450 µM / ml) and carvacrol (1, 5 and 10 µM / ml) were applied to the cells for 24 hours and effective concentration determinations were determined by MTT viability test. Intracellular glutathione (GSH) and nitrite levels (NO) were analyzed spectrophotometrically from homogenates obtained from cells. Besides, aldose reductase levels (AR) in these samples were investigated by ELISA method. According to the viability data obtained from the study, it was found that 300 µM concentration of palmitate caused 45% cell losses compared to the control, and 5 µM / ml concentration of carvacrol prevented 41% of these cell losses. In this study, palmitate and carvacrol did not produce a significant change in GSH levels but it significantly reduced NO levels. In addition, palmitate increased intracellular AR protein level, while carvacrol inhibited this increase by1.7%.
According to all these data, it was concluded that carvacrol can be considered as a potential active agent in fatty liver diseases such as non-alcoholic steatosis. In order to make this claim fully available, in vivo and furthe rmolecular research is needed.
Keywords: Non-alcoholic steatosis, palmitate, carvacrol, oxidative stress, aldose reductase