Geliştirilen uzun süreli ağrı kesicinin in vitro ve in vivo değerlendirilmesi
Evaluation of in vitro and in vivo of the developed long-term pain reliever
Yazar: EMİNE DERİN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ARZU EROL
Zonguldak Bülent Ecevit Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Hidroksibutiratlar = Hydroxybutyrates ; Morfin = Morphine ; İlaçlar = Drugs ; İn vitro = In vitro ; İn vivo = In vivo

Özet:
Opioid bir analjezik olan morfinin, güçlü bir analjezi sağlamasına rağmen metabolizma süresi sınırlıdır. Günümüzde, morfinin salım süresinin sınırlı olmasından dolayı yeni formülasyonlar için çalışmalar yapılmaktadır. Bu doğrultuda, Poli (hidroksi-butirat) (PHB) omurgasına ilaç ekleme konusundaki literatürdeki bilgilere dayalı olarak, uzun süreli analjezi sağlamak üzere morfin salımını kontrol etmek için morfin bazlı bir PHB polimeri (PHB-MRP) sentezlenmiştir. Sentezlenen morfin bazlı PHB'nin fizikokimyasal karakterizasyon çalışmaları, in vitro biyostabilite çalışmaları, in vitro sitotoksisite çalışmaları, analjezik etkinin in vivo değerlendirilmesi üzerine çalışmalar ve in vitro biyo-afinite çalışmaları yapılmıştır. Fizikokimyasal karakterizasyon çalışmaları sonucunda, PHB-MRP'nin karakteristik sinyal dizilerini içerdiği ve herhangi bir kontaminasyon olmadığı gözlemlenmiştir. Sitotoksisite çalışmaları sonucunda ise, ticari olarak temin edilen morfin ile sentezlenmiş olan PHB- MRP'nin in vitro sitotoksisiteleri değerlendirilmiş olup anlamlı bir farklılık gözlemlenmemiştir ve PHB-MRP'nin fibroblast hücreleri için sitotoksik olabileceği doz belirlenmiştir. PHB-MRP'nin analjezik etkisi, in vivo hayvan deneyleri ticari morfin ile karşılaştırılarak, sıçanlar üzerinde test edilmiştir ve çalışmalar sonucunda, serbest morfinin analjezik zaman penceresinin 2 katından fazla, 15 güne kadar sürekli analjezi sağladığı gösterilmiştir. İn vitro ilaç salım çalışmaları ile karşılaştırıldığında, PHB-MRP'nin hidrolizi in vivo olarak daha yavaş görünmüştür. PHB-MRP'nin DNA afinite çalışmaları sonucunda, PHB-MRP'nin DNA ile olan etkileşiminin değerlendirilerek ticari alınan morfin ile karşılaştırılması yapılmıştır, çalışmada kullanılan DNA'lar üzerinde, PHB-MRP'nin herhangi bir denatürasyona yol açmadığı gözlemlenmiştir ve ticari morfin ile aynı sonuçlara ulaşılmıştır.

Abstract:
Although morphine, an opioid analgesic, provides strong analgesia, its metabolism time is limited. Currently, studies are being carried out for new formulations due to the limited release time of morphine. Accordingly, based on the literature on adding drugs to the Poly(hydroxy- butyrate) (PHB) backbone, a morphine-based PHB polymer (PHB-MRP) was synthesized to control morphine release to provide prolonged analgesia. Physicochemical characterization studies, in vitro biostability studies, in vitro cytotoxicity studies, in vivo evaluation of analgesic effect, and in vitro bioaffinity studies of synthesized morphine-based PHB have been performed. As a result of physicochemical characterization studies, it was observed that PHB-MRP contains characteristic signal sequences and there was no contamination. As a result of cytotoxicity studies, the in vitro cytotoxicity of PHB-MRP synthesized with commercially available morphine was evaluated, no significant difference was observed and the dose at which PHB-MRP could be cytotoxic to fibroblast cells was determined. The analgesic effect of PHB-MRP has been tested in rats in vivo by comparing animal experiments with commercial morphine, and studies have shown that free morphine provides continuous analgesia for up to 15 days, more than twice the analgesic time window. Hydrolysis of PHB-MRP appeared slower in vivo compared to in vitro drug release studies. As a result of DNA affinity studies of PHB-MRP, the interaction of PHB-MRP with DNA was evaluated and compared with commercially purchased morphine, results have been achieved.