Bitki gelişiminde kullanılan bazı maddelerin mutajenik etkilerinin Salmonella Ames mikrozom testi ile araştırılması
Investigation of the mutagenic effects of some substances used in plant growth with salmonella ames microsome test
Yazar: SEVİLAY YAPICI
Danışman: PROF. DR. GÜVEN URAZ
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Gibberellik asit = Gibberellic acid ; Mutajenite = Mutagenicity ; Salmonella = Salmonella

Özet:
Çalışmamızda, tarım sektöründe sıklıkla kullanılan 4 farklı bitki gelişim düzenleyicisinin (Gibberellic acid, Kinetin, Chlormequat chloride, 2,4,6-trichlorobenzoic acid) mutajenik etkileri araştırılmıştır. Deneyler metabolik aktivasyon enzimleri varlığında (S9+) ve yokluğunda (S9-), Salmonella Ames Mikrozom test yöntemiyle yapılmıştır. Test yönteminde Salmonella typhimurium TA 98 ve TA 100 suşları kullanılmıştır. TA 98 suşu çerçeve kaymasına yol açan mutajenlerin, TA 100 suşu ise baz çifti değişimine yol açan mutajenlerin belirlenmesi için kullanılmıştır. Mutajenite deneylerine başlamadan önce, test maddelerinin sitotoksik dozları belirlenmiştir. Daha sonra her test maddesi için sitotoksik olmayan 5 doz seçilmiştir. Mutajenite tayini için Gibberellic acid maddesinin 50 µg/plak, 100 µg/plak, 500 µg/plak, 1000 µg/plak, 5000 µg/plak dozları çalışılmıştır. Kinetin maddesinin 2,5 µg/plak, 25 µg/plak, 250 µg/plak, 1000 µg/plak, 2500 µg/plak dozları, Chlormequat chloride maddesinin 100 µg/plak, 200 µg/plak, 400 µg/plak, 800 µg/plak, 1600 µg/plak dozları çalışılmıştır. 2,4,6-trichlorobenzoic acid maddesinin ise 5 µg/plak, 50 µg/plak, 500 µg/plak, 1000 µg/plak, 2500 µg/plak dozları çalışılmıştır. Deneme plaklarında elde edilen koloni sayıları spontan kontrol plakları ile karşılaştırılarak değerlendirilmiştir. Test bulgularına göre; Kinetin maddesinin 2500 µg/plak dozu, TA 98 suşu üzerinde S9 enzimi varlığında ve yokluğundamutajen olarak tespit edilmiştir. Yine Kinetin'in 2500 µg/plak dozu, TA 100 suşu üzerinde S9 enzimi varlığında yapılan deneylerde mutajen olarak belirlenmiştir. Kinetin maddesinin diğer dozlarının, TA 98 ve TA 100 üzerinde geri mutasyona neden olmadığı tespit edilmiştir. 2,4,6-trichlorobenzoic acid maddesinin 2500 µg/plak dozu, TA 98 suşu üzerinde S9 enzimi yokluğunda yapılan deneylerde mutajen olarak belirlenmiştir. 2,4,6-trichlorobenzoic acid maddesinin diğer dozlarının, TA 98 ve TA 100 üzerinde geri mutasyona neden olmadığı tespit edilmiştir. Diğer iki madde Gibberellic acid ve Chlormequat chloride'nin denenen tüm dozları non-mutajen olarak belirlenmiştir. Dolayısıyla bu iki madde için çerçeve kayması ve baz çifti değişimi gibi mutasyonlara neden olmadıkları düşünülebilir.

Abstract:
In this study, the mutagenic effects of the four different plant growth regulator (Gibberellic Acid, Kinetin, Chlormequat chloride, 2,4,6-trichlorobenzoic acid) that is commonly used in agricultural sector were investigated. Experiments were done with Salmonella Ames Mikrozom test method in the absence (S9-) and presence (S9+) of metabolic activation enzymes. Salmonella typhimurium TA 98 and TA 100 strains of were used in the test system. TA 98 was used for determination of the mutagens that cause of frameshift mutations and TA 100 was used for the mutagens that cause of base-pair mutations. Before starting to mutagenicity tests, the cytotoxic doses of the test substances were determined. Then, 5 non-cytotoxic dose for each test substances were selected. For the determination of mutagenicity of Gibberellic acid 50 µg/plate, 100 µg/plate, 500 µg/plate, 1000 µg/plate, 5000 µg/plate doses were studied. 2.5 µg/plate, 25 µg/plate, 250 µg/plate, 1000 µg/plate and 2500 µg/plate doses of Kinetin substance, 100 µg/plate, 200 µg/plate, 400 µg/plate, 800 µg/plate, 1600 µg/plate doses of Chlormequat chloride substance were studied. 5 µg/plate, 50 µg/plate, 500 µg/plate, 1000 µg/plate, 2500 µg/plate doses of 2,4,6-trichlorobenzoic acid substance were studied. Colony counts obtained test plates were evaluated by compare with spontaneous control plates. According to findings, 2500 µg/plate dose of Kinetin has been found mutagenic on the strain TA 98 in the presenceand in the absence of S9 enzyme. Again, 2500 mg/plate dose of Kinetin was determined to be mutagenic on TA 100 strain in the presence of S9 enzyme experiments. The other doses of Kinetin substance were not observed back mutation on the TA 98 and TA 100 strains. 2500 µg/plate dose of 2,4,6-trichlorobenzoic acid were determined to be mutagenic on strain TA 98 in the absence of S9 enzyme experiments. The other doses of 2,4,6-trichlorobenzoic acid substance were not observed back mutation on the TA 98 and TA 100 strains. The other two substances all tested doses of Gibberellic acid and Chlormequat chloride identified as non-mutagenic. Therefore, for these two substances should be considered that are not caused by mutations such as frameshift and base pair changes.