Ankaferd bloodstopper kanama durdurucu'nun in vitro kolon kanseri hücrelerinin çoğalmaları üzerine olan etkisi
The effect of ankaferd bloodstopper on in vitro proliferation of colon cancer cells
Yazar: BÜŞRA DİLER ZENGİNER
Danışman: PROF. DR. İLKER DIBIRDIK
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Adenokarsinom = Adenocarcinoma ; Ankaferd kanama durdurucu = Ankaferd bloodStopper ; Apoptozis = Apoptosis ; Bitki özütü = Plant extract ; Hücre dizisi = Cell line ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İlaç kombinasyonları = Drug combinations

Özet:
Kolorektal kanserler, dünyada önemli morbidite ve mortalite sebeplerinden biri olup, 3. en sık görülen kanser türüdür. Kolorektal kanserin klinik tedavisinde, 5-Florourasil, Oxaliplatin ve Cetuximab yaygın olarak kullanılmaktadır. Kemoterapi ilaçları anti-tümör etkiye sahiptir. Ancak, sağlıklı dokular üzerinde de ciddi yan etkilere sahiptir. İlaçların bu yan etkilerinden dolayı, bitkilerden ilaç elde etmeye yönelik araştırmalar artış göstermektedir. ABS; Thymus vulgaris, Glycyrrhiza glabra, Vitis vinifera, Alpinia officinarum ve Urtica dioica bitkilerinden elde edilen standardize bir doğal ekstrakt üründür. Bileşenlerinin her birinin, çeşitli deneysel modellerde antineoplastik etkiye sahip olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmada, kolorektal adenokarsinoma hücre hattı üzerinde ABS'nin 5-FU, Oxaliplatin ve Cetuximab ile kombinasyonlarının sinerjistik etkileri araştırıldı. MTT testi ile hücrelere ait % canlılık oranları belirlendi. Uygulanan tedavi gruplarına ait IC50 değerleri hesaplandı. IC50 değerlerine göre ABS tek başına ve ilaçlar ile kombine olarak hücrelere uygulandı. Kombinasyonların etkinlikleri, Chou ve Talalay'ın kombinasyon indeksi metodunu temel alan CompuSyn programı ile yapıldı. Apoptozun indüksiyonu, Tali görüntü tabanlı sitometre ile analiz edildi. Uygulanan tedavilerin, apoptotik yolaklarda önemli rollere sahip olan p53, bax, bcl-2, sitokrom c, apaf-1 ve kaspaz-3 gen ve proteinleri üzerindeki etkileri RT-PCR yöntemi ile analiz edildi. Çalışmanın sonuçları; ABS'nin tek başına veya 5-FU, Oxaliplatin ve Cetuximab ile kombinasyonlarının hücre proliferasyonunu baskıladığı ve ABS'nin bcl-2 gen ifadesinde azalmaya ve bax, p53, sitokrom c ve kaspaz-3 gen ifadesinde artmaya neden olarak, HT-29 hücrelerinde mitokondriyal aracılıklı apoptozu indüklediğini göstermektedir.

Abstract:
Colorectal cancer is a major cause of morbidity and mortality throughout the world and it is the third most common cancer. In the clinical treatment of colorectal cancer 5-FU, Oxaliplatin and Cetuximab are widely used. These drugs have anti-tumor effect. However, they also have severe side effects on normal tissues. Because of this severe side effects research on obtaining medicines from plants has increased. Ankaferd Blood Stopper is a standardized natural extract product prepared from Thymus vulgaris, Glycyrrhiza glabra, Vitis vinifera, Alpinia officinarum and Urtica dioica and known as hemostatic agent. Each constituent of ABS has been proven to have an antineoplastic effect in various experimental models. In this study, synergistic effects of ABS combination with 5-FU, Oxaliplatin and Cetuximab were investigated in HT-29 cell line. Cell survival rates were determined by MTT. IC50 values of the treatment groups were calculated. According to the IC50 value, ABS was applied to cells alone or in combination with drugs. Efficacy of this combination was determined by CompuSyn software based on combination index method of Chou and Talalay. Induction of apoptosis was analyzed by Tali image based cytometer. The effects of the applied treatment on p53, bax, bcl-2, cytochrom-c, apaf-1 and caspase-3 which have an important role in the apoptotic pathway were analyzed by RT-PCR. Results of the study show that ABS alone or in combination with 5-FU, Oxaliplatin and Cetuximab suppressed proliferation and induces mitochondrial-mediated apoptosis in HT-29 cells via decrease levels of bcl-2 and increase of bax, p53, cytochrom-c, apaf-1 and caspase-3.