Behçet hastalığında dendritik hücrelerde ve nötrofillerde doğal immün sistem patern tanıma reseptörlerinin incelenmesi
Research of Innate Immunity Pattern Recognition Receptors in Dendritic Cells and Neutrophils in Behcet Disease
Yazar: FİLİZ TÜRE ÖZDEMİR
Danışman: PROF. DR. EMEL EKŞİOĞLU DEMİRALP
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Romatoloji = Rheumatology
Dizin: Behçet sendromu = Behcet syndrome ; Hücreler = Cells ; Nötrofiller = Neutrophils ; Reseptörler = Receptors ; Reseptörler-immünolojik = Receptors-immunologic ; Sitokinler = Cytokines ; İmmünite-doğal = Immunity-natural ; İnflamazom = Inflammasome

Özet:
Amaç: Behçet Hastalığı'nın immünopatogenezinde yer alan birçok parametrenin içinde doğal immün sistem reseptörleri de bulunmaktadır. Bu çalışmamızda, Behçet Hastalarının dendritik hücreleri ve nötrofillerinde, doğal immün sistem patern tanıma reseptörlerinden `RIG-1 like' reseptör (RLR) ve `NOD-like' reseptörleri (NLR) aracılığı ile inflamazomun aktivasyon durumunu incelemeyi, ayrıca Behçet Hastalığı immünopatogenezinde inflamazomun bir katkısı olup olmadığını irdelemeyi amaçladık. Hastalar ve Yöntem: Çalışmaya, mukokutanöz tipte olan ve çalışma sırasında aktif lezyonları olan on altı Behçet hastası ve on yedi sağlıklı gönüllü birey alındı. Tüm bireylerden alınan periferik kanlardan mononükleer hücreler (PKMH) ve nötrofiller izole edildi, PKMH'lerinden de matür DH'ler oluşturuldu. Üretilen DH ve nötrofiller, RLR ve NLR ligand aktivatörleri ile uyarıldı. Hücrelerin kaspaz-1 aktivasyonu `FLICA Caspase 1 Detection Kit' ile incelenerek akım sitometrik olarak test edildi. Ek olarak, kültür süpernatanlarında IL-6, TNF-?, IFN-?, IL-1ß ve IL-18 sitokinleri ELİZA yöntemi ile ve hücre içi p38 ile, RIP2 sinyalleri de akım sitometrik olarak olarak incelendi. Bulgular: Kaspaz-1 aktivasyonları açısından, Behçet hastalarına göre sağlıklı kontrollerin hem nötrofil hem de DH'lerinde daha fazla aktivasyon gözlenirken aralarında istatistiksel olarak anlamlı farklılık saptanmadı. Ancak NOD2 ile uyarılan Behçet hastalarının DH'lerinin süpernatanlarında, sağlıklı kontrollere göre, istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde daha düşük IL-18 seviyeleri (p=0.017) ve daha düşük hücre içi boyamalar (p38 ve RIP2 için sırasıyla p=0,037 ve p=0,018) saptandı. Sonuç: Behçet hastalığında, patern tanıma reseptörlerinden NLR ve RLR'leri aracılığı ile uyarılan dendritik hücre ve nötrofillerinde, kaspaz-1 aktivasyonlarının düştüğünü gözlemledik ve Behçet hastalığında inflamazomun fonksiyonel durumda olduğu ancak hem DH'lerde hem de nötrofillerde defektlerin olduğunu saptadık.

Abstract:
Aim: Innate immune system reseptors located in Behçet?s Disease (BD) immunopathogenesis. Aim of this study is to research the pattern recognition receptors of innate immunity (RLR; RIG-1 like receptors and NLR; NOD-like receptors) and their activation in neutrophils and dendritic cells (DCs) with BD, and to investigate inflammasome throughly in BD immunopathogenesis. Patients and Methods: Sixteen BD patients with mucocutaneous ulceration with active form and seventeen healthy donors were enrolled to the study. Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) and neutrophils of patients and healthy donors were isolated and DCs were generated from PBMC. Both DCs and neutrophils were stimulated with RLR and NLR ligands. Caspase-1 activation of cells was investigated with `FLICA Caspase 1 Detection Kit? by flow cytometer. Additionally, IL-6, TNF-?, IFN-?, IL-1ß and IL-18 cytokines from culture supernatants with ELISA and p38 and RIP2 signals were analyzed in both of the cell types with flow cytometer. Results: Caspase-1 activation of both DCs and neutrophils were decreased in BD patients according to healthy donors but not statistically significant. However, when dendritic cells were stimulated with NOD2 ligand, there was statistically significant differences between BD patients? and healthy donors? IL-18 supernatant levels (p=0.017), p38 (p=0.037) and RIP2 (p=0.018) cell signals were decreased in BD patients. Conclusion: When BD patients? DCs and neutrophils were stimulated with NLR and RLR, we observed that caspase-1 activation was low and the inflammasome was functional, but there were some defects in both cell types.