Klinik örneklerden izole edilen pseudomonas aeruginosa suşlarında beta-laktamaz üretimi ve biyofilm varlığının araştırılması
Investigation of beta-lactamase production and biofilm formation in pseudomonas aeruginosa strains isolated from clinical specimens
Yazar: TUĞÇE SOYLAMIŞ
Danışman: PROF. DR. EMİNE İNCİ TUNCER
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Beta laktamazlar = Beta lactamases ; Biyofilmler = Biofilms ; Pseudomonas aeruginosa = Pseudomonas aeruginosa ; Pseudomonas aeruginosa = Pseudomonas aeruginosa ; Çapraz enfeksiyon = Cross infection ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Fırsatçı patojenlerden biri olan Pseudomonas aeruginosa antimikrobiyal ajanlara karşı direnç göstermesi ve buna bağlı olarak tedavi başarısızlıkları ile sık karşılaşılması nedeniyle özellikle hastane infeksiyonlarında önemli bir sorun olarak karşımıza çıkmaktadır. Bu çalışmada P.aeruginosa suşlarının antibiyotiklere karşı direnç durumları, indüklenebilir beta-laktamaz, metallo-beta-laktamaz üretimi varlığı ve biyofilm oluşumunun araştırılması amaçlanmıştır. 
Selçuk Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarına 2013-2015 tarihleri arasında farklı kliniklerden gelen örneklerden, üreyen toplam 100 P.aeruginosa suşu çalışmaya dahil edildi. Bakterilerin identifikasyonu standart klinik mikrobiyolojik yöntemlerle belirlendi ve tür tayini için VITEK 2 otomatize sistemi (bioMerieux, Fransa) kullanıldı. Bakterilerin antibiyotik duyarlılık testleri European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing standartları doğrultusunda disk difüzyon yöntemi ile yapıldı. İndüklenebilir beta-laktamaz üretimi Mueller Hinton agarda ortaya imipenem diski 20 mm uzağına aztreonam ve seftazidim diskleri yerleştirilerek test edildi. Metallo-beta-laktamaz oluşumu ise Modifiye Hodge ve imipenem/imipenem+EDTA Gradient-test yöntemi ile araştırıldı. Biyofilm varlığı mikroplate yöntemi ile araştırıldı.
P.aeruginosa suşlarında sırası ile aztreonama (%86), piperasilin/tazobaktama (%48), seftazidime (%40), meropeneme (%24), imipeneme (%22), levofloksasine (%20), gentamisine (%10), amikasine ve sefepime (%6), tobramisine (%3) oranında direnç gözlendi. İzolatlarımızda indüklenebilir beta-laktamaz pozitifliği %89, metallo-beta-laktamaz üretimi Modifiye Hodge test yöntemi ile %20, IMP/IMP+EDTA Gradient-test yöntemi ile %17 oranında pozitiflik saptandı. Suşlarımızın 8'inde (%8) biyofilm oluşumu belirlendi.
Beta-laktamaz aktivitesi gösteren ve biyofilm oluşturma yeteneğine sahip P.aeruginosa kökenlerinin saptanması, aynı zamanda antibiyotiklere direncin belirlenmesi, tedavide kullanılacak antibiyotik seçiminde ayrıca tedavinin takibi ve infeksiyon kontrol programlarının geliştirilmesinde yol gösterici olacaktır. Sonuç olarak; Antibiyotiklere direnç tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de ciddi bir sağlık sorunudur. Bu nedenle antibiyotik direnç mekanizmaları bilinmeli ve direnç gelişimi önlenmelidir.

Abstract:
Pseudomonas aeruginosa is one of the opportunistic pathogens. Resistance to antimicrobial agents and consequently treatment failures are frequently encountered as an important problem especially in hospital infections. In this study, it was aimed to investigate inducible beta-lactamase production, metallo-beta-lactamase production, biofilm formation and the antimicrobial resistance status of P.aeruginosa strains.
The study include 100 P.aeruginosa strains from different clinical samples between the years 2013-2015 that determined at Selcuk University Medical Faculty Microbiology Labratory. The description of the bacteria was determined by Standard clinical microbiological methods and the VITEK 2 automated system (bioMerieux, France) was used for identification of species. The antimicrobial susceotibility tests of the bacteria were carried out by disk diffusion method and evaluated according to the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing standards. 
Inducible beta-lactamase production was tested in Mueller Hinton agar by placing, imipenem in the middle at the agar plate and 20 mm away from imipenem aztreonam and ceftazidime dics wereplaned. Production of Metallo-beta-lactamase was investigated by Modified Hodge and imipenem/imipenem+EDTA gradient-test method. Presence of biofilm was investigated by micoplate method.
Antimicrobial resistance rate of P. aeruginosa strains have been found against aztreonam (86%), piperacillin / tazobactam (48%), ceftazidime (40%), meropenem (24%), imipenem (22%), levofloxacin (20%), gentamicin (10%), amikacine and cefepime (6%) and tobramycin (3%). Respectively inducible beta-lactamase positivity have been found %89 and metallo-beta-lactamase production have been found %20 by Modified Hodge Test method and %17 by IMP/IMP+EDTA Gradient- Test method. Biofilm formation have been detected at %8 strains.

Identification of P. aeruginosa strains, exhibiting beta-lactamase activity and biofilm-forming ability and determination of antimicrobial resistance and selection of antibiotics to be used in treatment will guide the development of follow-up care and infection control programs. As a result; antimicrobial resistance is a serious health in our country as well world. Fort his reason, antibiotic resistance mechanisms should be known and development of resistance should be prevented.