3-kloro-6sübstitüepiridazin, 6-sübstitüe- 3(2H)piridazinon ve etil 6-sübstitüe-3(2H)-pridazinon- 2-İL asetat türevlerinin anti-tüberküloz aktivitelerinin araştırılması
Investigation of antituberculosis activity of 3-chloro-6substitue-pyridazine, 6-substitue-3(2H)pyridazinone ve etil 6- substitue-3(2H)-pyridazinone-2-yl acetate derivates
Yazar: EMİNE YAŞA
Danışman: PROF. DR. GÖNÜL ASLAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antitüberküloz ajanlar = Antitubercular agents ; Mycobacterium tuberculosis = Mycobacterium tuberculosis ; Piridazinler = Pyridazines ; Piridazinon = Pyridazinon ; Tüberküloz = Tuberculosis

Özet:
Mycobacterium tuberculosis kompleks (MTC) tüm dünyadaki enfeksiyon
kaynaklı ölümlerin en sık nedenlerinden biridir. Tedavide kullanılan antitüberküloz
ilaçlar; Tüberküloz tedavisinde kullanılan ilaçlar başlıca iki grupta incelenebilir. Primer
ilaçlar; izoniazid (İNH), rifampisin (RİF), pirazinamid (PZA), etambutol (ETM),
streptomisin (SM) ve tiasetazon (T)'dur. Rifabutin, rifapentin, sikloserin, etiyonamid,
amikasin, kanamisin, kapreomisin, paraaminosalisilik asit, levofloksasin ve
moksifloksasin gibi daha toksik ve zor tolere edilebilen ilaçlar ise sekonder ilaçlar
grubunda yer alır. Hidrazit türevleri de yeni seçenek ilaçlar olarak araştırılmaktadır.
3-kloro-6sübstitüepiridazin, 6-sübstitüe-3(2h)piridazinon ve etil 6-sübstitüe-3(2h)-
pridazinon-2-il asetat türevleri çalışma için hazırlandılar. Mersin Üniversitesi Tıp
Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Mikobakteriyoloji Laboratuvarı
stoklarında bulunan birinci seçenek antitüberküloz ilaçların en az ikisine rezistanolduğu
tespit edilen 5 suş ile birinci seçenek antitüberküloz ilaçlara sensitif olduğu bilinen 5 suş
ve bir standart M. tuberculosis suşu (H37Rv) olmak üzere toplam 11 M. tuberculosis
suşu bu çalışmaya dahil edilmiştir.
Klinik örneklerden izole edilen suşların en az iki en çok üç antitüberküloza
rezistanolduğu, suşların yarısının izoniazid'e rezistanolduğu ve tüm suşların da
etambutole sensitif olduğu gözlendi. BACTEC MGIT 960 sistemi ile elde edilen
antitüberküloz ilaçlara karşı sensitiflık için kullanıldı.
Çalışmaya dahil edilen hastaların BACTEC MGIT 960 sistemi ile birinci seçenek
antitüberküloz ilaçlara karşı sensitiflık paterni incelendi.
H37Rv ve çalışmaya dahil edilen hastaların agar proporsiyon yöntemi ve alamar
mavisi yöntemi ile 3-kloro-6sübstitüepiridazin, 6-sübstitüe-3(2h)piridazinon ve etil 6
sübstitüe-3(2h)-pridazinon-2-il asetat türevlerine karşı sensitiflık paternleri
değerlendirilmiştir. Agar proporsiyon yöntemi ile 3-kloro-6-sübstitüepiridazin I'e karşı
10-4 dilüsyonunda 40 μg/ml konsantrasyonunda sensitiflık göstermiştir. Çalışmaya
alınan suşlardan yeni sentezlenen 6-Sübstitüe-3(2H)piridazinon II'ne karşı 10-4
dilüsyonunda 40 μg/ml konsantrasyonunda sadece bir hastanın sensitiflık gösterdiği
görülmektedir. Çalışmada elde edilen olgulara göre; birincil seçenek ilaçlara karşıda
x
sensitif olan iki hasta suşunun, agar proporsiyon yöntemi ile yeni sentezlenen Etil 6-
sübstitüe-3(2H)-pridazinon-2-il asetat III'ne karşı 10-2 ve 10-4 dilüsyonlarınnın 40 μg/ml
konsantrasyonlarında ilaca karşı sensitiflık gösterdiği görülmektedir.
Çalışmada elde edilen olgulara göre; Agar proporsiyon yöntemi ile birincil
seçenek ilaçlara karşı da sensitif olan üç hasta suşunun, yeni sentezlenen 6-sübstitüe-
3(2H)-pridazinon-2-il asetohidrazit IV'e karşı 10-2 ve 10-4 dilüsyonlarınnın 40 μg/ml
konsantrasyonlarında ilaca karşı sensitiflık gösterdiği görülmektedir. Bununla birlikte
çalışma sonuçları incelenmeye devam edildiğinde 6-sübstitüe-3(2H)-pridazinon-2-il
asetohidrazit IV'e karşı 10-4 dilüsyonunda 40 μg/ml konsantrasyonunda üç hasta
suşunun daha yeni sentezlenen ilaca karşı sensitiflık gösterdiği görülmektedir. Yeni
sentezlenen 6-sübstitüe-3(2H)-pridazinon-2-il asetohidrazit IV'e karşı sensitiflık
gösteren hastaların birinci seçenek ilaçlardan RİF ve EMB' e karşı da sensitiflık
gösterdiği bilinmektedir.
Alamar mavisi yöntemiyle 10-2 dilüsyonunda 50 μg/ml konsantrasyonunda yeni
sentezlenen hidrazit türevlerine karşı seçilen suşların direnç ve sensitiflık patentleri
incelenmiştir. Alamar mavisi yöntemiyle yaptığımız çalışma sonucunda 3-kloro-6-
sübstitüepiridazin I'e ve 6-Sübstitüe-3(2H)piridazinon II'e karşı 10-2 dilüsyonunda
çalışmaya dahil edilen 11 M. tuberculosis suşu da direnç göstermiştir.
Çalışmada elde edilen olgulara göre; birincil seçenek ilaçlara karşıda sensitif olan
iki hasta suşunun, yeni sentezlenen Etil 6-sübstitüe-3(2H)-pridazinon-2-il asetat III'e
karşı 10-2 dilüsyonunda 50 μg/ml konsantrasyonlarında ilaca karşı sensitiflık gösterdiği
görülmektedir.
Alamar mavisi yöntemi( 10-2 dilüsyonunda 50 μg/ml konsantrasyonu) ile agar
proporsiyon yönteminin(10-2 dilüsyonunda 40 μg/ml konsantrasyonu) karşılartırılması
yapılmıştır.
Agar proporsiyon yöntemini ve alamar mavisi yöntemi arasında suşlar üzerinde
ilaç sensitiflik MİK hesaplanırken uyumlu bir sonuç elde edilebileceği sonucuna
varılabilir. Buradan da her iki yöntem arasında MİK belirlemede uyum olduğu
görülmektedir.

Abstract:
Mycobacterium tuberculosis compleks (MTC) is one of the most mortality
reason that arise from infectious diseases and drugs used for treatment of tuberculosis
can be determined in two groups. Drugs used for the treatment of tuberculosis can be
determined in two groups. Primary drugs are; isoniazid (INH), rifampicin (RMP),
pyrazinamide (PZA), ethambutol (ETM), streptomycin (SM) ve thiacetazone, (T)'dur.
Rifabutin, rifapentine, cycloserine, ethiyonamide, amikacin, kanamycin, capreomycin,
paraaminosalicylic acid, levofloxacin ve moxifloxacin which are more toxic and hardly
tolarable are placed in the secondary drugs group. Hydrazide derivates are being
investigated as new choice drugs.
3-chloro-6substitue-pyridazine, 6-substitue-3(2h)pyridazinone ve etil 6-
substitue-3(2h)-pyridazinone-2-yl acetate derivates are prepared for our study. 5 strains
that have been determined to be resistant at least two of first choice antituberculosis
drugs present at the Laborautary of Mycobacteriolgy Of Depatment Of Medical
Microbiology Of Medical Faculty, Mersin University reserves and 5 strains which are
known to be sensitive for antituberculosis drugs and one standard M.tuberculosis strain
M.tuberculosis (H37Rv), in total 11 M.tuberculosis strains are included in the study.
The strains which have been obtained from clinical samples are resistant at
least two maximum 3 antituberculosis drugs and half of the strains were resistant to
Isoniazide, all were sensitive to ethambutol. BACTEC has been used as a sensitivity
index against antituberculosis drugs that had been obtained through MGIT 960 System.
The patients included in the study were examined against the first choice
antituberculosis drug susceptibility patterns with MGIT 960 system.
The sensitivity patterns of M. tuberculosis H37Rv and the patients included
in the study against 3-chloro-6substitue-pyridazine, 6-substitue-3(2h)pyridazinone ve
etil 6-substitue-3(2h)-pyridazinone-2-yl acetate derivates has been evaluated via Agar
Proportion method and the Alamar Blue method.
Sensitivity is observed against 3-chloro-6substitue-pyridazine at 40 μg/ml concentration
with 10-4 dilution. The strains obtained from the study; only one of the patient had
sensitivity against 6-substitue-3(2h)pyridazinone at 40 μg/ml with 10-4 dilution.
According to the obtained cases from the study strains of two patient is
sensitive to first choice of drugs, at 10-2 and 10-4 dilution level, 40 μg/ml concentration
sample which is newly synthisized against etil 6-substitue-3(2h)-pyridazinone-2-yl
acetate III via agar proprotion method have been seen to be sensitive to the drugs.
According to obtained cases from the study; 3 patients strains which are
sensitive to first choice drugs via agar proportion method have been observed to be
sensitive to newly synthsized etil 6-substitue-3(2h)-pyridazinone-2-yl acetohidrazid IV
at 40 μg/ml with 10-2 and 10-4 concentration. However, when results of the study
continued to be examine 3 patients strains are sensitive to the newly synthsized 6-
substituted-3 (2H) -pyridazinone-2-yl asetohidrazid IV at 40 μg/ml with 10-4 dilution.
It's known that the patients who have sensitivity against newly synthisized 6-substitute-
3 (2H) -pyridazinone-2-yl asetohidrazid IV are also sensitive to RIF and EMB.
Resistance and sensitivity patterns of the strains selected against hyrazide
derivates that have been newly synthsized at 50 μg/ml concentration with 10-2 dilution
via Alamar Blue method were examined. After the study via Alamar Blue method
against 3-chloro-6substitue-pyridazine, 6-substitue-3(2h)pyridazinone II, all the 11 M.
tuberculosis strains included in the study also showed resistance. According to the cases
obtained from the study; two patient's strains which are sensitive to first choice drugs
are also sensitive to newly synthisized etil 6-substitue-3(2h)-pyridazinone-2-yl acetate
at 50 μg/ml concentraition with 10-2 dilution.
Comparision of Alamar Blue method ( at 50 μg/ml concentration with 10-2
dilution ) and agar proprotion methods (at 40 μg/ml concentraition with 10-2 dilution)
have been performed.
A compliance outcome can be obtained while drug MIC sensitivity being
calculated among the strains through agar proprotionmethod and Alamar Blue method .
In conclusion MIC determination seems to be complient among two methods.
Here it is seen that there isan accordance between the two methods for
determining MIC.