Yara yaşı tayininde apoptotik yolaktaki ilgili genlerin ifadelenmesi
Expression of related genes at apoptotic pathway in wound age estimation
Yazar: TANER AKAR
Danışman: PROF. DR. ADNAN MENEVŞE
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Kaspazlar = Caspases ; Mikro RNA = Micro RNA ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries ; Ölüm = Death

Özet:
Adli Tıpta yara yaşının saptanması ölüm nedeni ve yaralar arasındaki ilgiyi açıklamak için her zaman gereklidir. Birden fazla travmanın bulunduğu ölüm olgularında, ilk önce isabet eden travmanın belirlenmesi, ölüm öncesi ve sonrası travmatik değişikliklerin ayırt edilebilmesi çok önemlidir. Bu tez çalışmasında, değişik iyileşme evrelerinde ve farklı mekanizmalarla oluşturulan yara dokularında, apoptozun, apoptozda rol oynayan kaspaz 3, 8, 9, Bcl-2, Bcl-xL ve Bax mRNA ve protein düzeylerinin saptanması ve yara yaşı tayininde kullanılabilirliğinin ortaya konulması amaçlanmıştır. 
Çalışmamızda 36 adet Wistar albino dişi ratın sırtında üç ayrı bölgede, bistüri, punch ve koter ile yara oluşturulduktan sonraki 24. saat, 3, 5, 7, 17 ve 21. günlerde yara bölgesinden alınan örneklerde, apoptotik hücre sayıları TUNEL yöntemi ile; Bax, Bcl-2, Bcl-xL, Casp 3, Casp 8 ve Casp 9 genlerinin mRNA ifadelenme düzeyleri Real-time PCR yöntemi ile, protein düzeyleri ise immünhistokimyasal yöntemler ile saptanmıştır.
Çalışmamızın sonuçları, apoptozun yüksek olarak izlendiği, bistüri ile yara oluşumunu takip eden 3. günde, Bax, kaspaz 3 ve kaspaz 9 mRNA ifadelenme düzeylerinin anlamlı derecede yüksek olarak bulunduğunu, Bcl-2 mRNA ifadelenme düzeylerinde ise anlamlı bir artış bulunmadığını, yine apoptozun yüksek olarak izlendiği, koter ile yara oluşumunu takip eden 7. günde, Bax ve kaspaz 9 mRNA ifadelenme düzeylerinin anlamlı derecede yüksek olarak bulunduğunu, Bcl-2 mRNA ifadelenme düzeylerinde ise düşüş saptandığını, koter ile yara oluşumunu takip eden 7. günde, yara bölgesinde saptanan toplam PMNL ve IMC?lerin, proapoptotik özellikteki kaspaz 9 ve Bax antikorları ile immün histokimyasal olarak boyanan yüzdeleri arasında da anlamlı fark saptandığını göstermiştir.
Sonuçlarımız, hekimlerin otopsi sırasında yara bölgelerinden aldıkları örnekleri, apoptotik yolaktaki ilgili genlerin ifadelenme sonuçları açısından değerlendirdikleri takdirde, yara yaşı tayinlerini ve yaranın antemortem-postmortem ayrımlarını doğru olarak yapabileceklerini göstermektedir.

Abstract:
Wound age estimation becomes necessary for the explanation of relationship between the wounds and the cause of death. In the death cases with multipl trauma, determination of the first strike and differentiation of pre and postmortem traumatic changes are very important.  The aim of this thesis is to determine the levels of apoptosis, caspase 3, 8, 9, Bax, Bcl-2 and Bcl-xL mRNA and protein and to show the availability of this results for the wound age estimation in the wound tissues that have different mechanisms and at different healing stages.   
The results of this study indicate that, at the third day in the wound formed by scalpel, Bax, caspase 3 and 9 mRNA expression levels were found to be significantly high, but Bcl-2 mRNA expression levels were not. At the seventh day in the wound formed by kautery, Bax and caspase 9 mRNA expression levels were found to be significantly high, but Bcl-2 levels decreased. At the same day, Bax and caspase 9 protein levels were significantly high. Our results indicate that, the physicians would take samples from wounds in autopsy for the analysis of genes at the apoptotic pathway. As a consequence of this process, physicians could make a correct decision for wound age estimation and pre and postmortem differentiation of traumatic changes.