Kuzu ve oğlakların ağız bölgesinde orf virus (Ektima) nedeniyle meydana gelen dudak lezyonlarının moleküler ve virolojik yönden araştırılması ve papilend™ krem ile tedavi sürecinin incelenmesi
Investigation of molecular and virological of lip lesions caused by orf virus (Ecthyma) in mouth side of lamb and goat kids and examination of the papilend™ cream treatment process
Yazar: GÜLER BERAT KAYA
Danışman: PROF. DR. MEHMET KALE
Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Ektima = Ecthyma ; Ektima-bulaşıcı = Ecthyma-contagious ; Kuzular = Lambs ; Merhemler = Ointments ; Mikroskopi-elektron = Microscopy-electron ; Oğlaklar = Kids ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Tedavi = Treatment ; Virüs hastalıkları = Virus diseases

Özet:
Türkiye'de Orf virus küçükbaş hayvanlarda önemli viral hastalıklardan biridir.
Özellikle yavru ölümlerine sebep olması ekonomik kayıplara yol açmaktadır.
Aşılamalar mevcut olsa da alternatif tedavi yöntemleri geliştirilmesi gereklidir.
Burdur-Merkez ve ilçelerinde halk elinde bulunan çeşitli ağıllardan ırk, cinsiyet ve ≤
1 ay-3 ay yaş aralığında olan ektima hastalığına karşı koruyucu amaçlı aşılama
yapılmamış 50 adet kuzu ve 50 adet oğlağın ağzında (dudak, diş eti) Orf virus (ORFV)
sonucu gelişen lezyonlardan kabuk örnekleri alındı. Alınan örneklerde 25 farklı tip
primer kullanarak konvansiyonel PCR yöntemi ile ORFV genom varlığı araştırıldı.
Çalışmada yerli ırk kuzular (Sakız; %40) ve oğlaklarda (Kıl keçisi; %36) yüksek viral
genom pozitiflik belirlendi. ORFV genom varlığı dişi kuzularda (%60) ve oğlaklarda
(%46), erkeklere göre daha fazla pozitiflik tespit edildi. ORFV genom varlığı ≤ 1 aylık
kuzu (%36) ve oğlaklarda (%40), 2 ve 3 aylık yaş grubundakilere daha fazla pozitiflik
tespit edildi. Bu çalışmada PCR uygulamaları sonucunda Burdur bölgesinde ORFV
yönünden ağırlıklı olarak; GIF/IL, PPP1-PPP4, Orf1-Orf2, VIR1-VIR2, vIL-10-3 vIL-
10-4, B2L ve Alfa tubulin primerlerinin varlığı tespit edildi. PPV JGR, ORFV 011-B
ve ORFV 109 primerleri kullanılarak yapılan PCR analizlerinde hiçbir pozitiflik elde
edilemedi. Çalışmamızda dokularda en çok ikili ORFV primeri olan grupları en yüksek
oranda bulunduğunu tespit edildi. Çalışmada 11 günlük embriyolu tavuk yumurtası
(ETY) Chorioallantoik membran (CAM)'a yapılan doku inokulumlarının ekimleri
sonucu membranda kalınlaşma, opaklaşma, renk değişimi ve karakteristik pock
lezyonlarını tespit edildi. 100 adet yumurtanın 94 tanesinde (%94) lezyon varlığı veya
patolojik durum belirlendi. PCR testinde kullanılan her bir primerde pozitiflik
belirlenmiş doku örneklerinde EM incelemesinde hem hücre sitoplazması içerisinde
hem de sitoplazma çevresinde bir zarfla çevrili orta kısmında elektron densi belirgin
muhtemelen ORFV'ye ait yapılar izlendi. Bu çalışmada elde ettiğimiz PCR (primer
ayrımı yapılmaksızın) ve ETY sonuçları karşılaştırıldığında ORFV tespitinin ikisi
içinde %94 pozitiflik gösterdiği tespit edildi. Her tipe yönelik EM ile incelenen
örneklerde ORFV'nin varlığı görüldü. Çalışmada sığırlarda görülen siğil benzeri
oluşumları yumuşatmak ve sertleşerek rahatsız edici etkisini azaltmak amaçlı
geliştirilmiş ticari preparat olan PAPILEND™ krem 100 adet koyun ve oğlakta ağız
bölgesinde görülen ORFV lezyonlarına sabah akşam birer kez olmak üzere 10 gün
boyunca uygulandı. Uygulamalar sonucu ORFV'ye bağlı gelişen lezyonların tamamen
gerilediği ve iyileştiği görüldü. Sonuç olarak farklı ırklardaki kuzu ve oğlakların ağız
bölgesinde meydana gelen lezyonlarda ORFV varlığı moleküler ve virolojik yönden
tespit edildi. Yeni bir alternatif uygulama prosedürü kullanılarak ORFV
enfeksiyonlarında başarılı sonuçlar elde edildi.
Anahtar kelimeler: Elektron mikroskobi, Embriyolu tavuk yumurtası, Kuzu, Oğlak, PCR

Abstract:
Orf virus is one of the important viral diseases in small cattle in Turkey. Especially the
fact that it causes the death of puppies leads to economic losses. Although vaccinations
are available, it is necessary to develop alternative treatment methods. Shell samples
were taken from lesions that developed as a result of ecthyma disease (Orf
virus=ORFV) in the mouth (lips, gums) of 50 lambs and 50 goat kids aged ≤ 1 month-
3 months from variousin the hands of the people in Burdur-Center and districts racing,
gender and age range. The presence of ORFV genome was investigated by
conventional PCR method using 25 different types of primers in the samples taken. In
the study, high viral genome positivity was determined in domestic breed lambs
(Sakiz; 40%) and kids (Hairy goat; 36%). The presence of ORFV genome was detected
more positivity in female lambs (60%) and kids (46%) than in males. The presence of
ORFV genome ≤ 1 month was detected in lambs (36%) and kids (40%), more
positivity was detected in those in the age group of 2 and 3 months. As a result of PCR
applications in this study, the presence of GIF/IL, PPP1-PPP4, Orf1-Orf2, VIR1-
VIR2, vIL-10-3, vIL-10-4, B2L and Alpha tubulin primers were detected
predominantly in the Burdur region in terms of ORFV. No positivity was obtained in
PCR analyses performed using PPV JGR, ORFV 011-B and ORFV 109 primers. In
our study, we found that the groups with the highest number of binary ORFV primers
were found in the tissues at the highest rate. In the study, thickening, opacification,
color change and characteristic pock lesions were detected in the membrane as a result
of planting of tissue inoculums made on chorioallontoic membran (CAM) of
embryonated chicken egg (ECE) for 11 days. The presence of lesion or pathological
condition was determined in 94 out of 100 eggs (94%). In tissue samples in which
positivity was determined in each primer used in the PCR test, structures belonging to
ORFV with a pronounced electron density were observed in the EM examination, both
in the cytoplasm of the cell and in the central part surrounded by an envelope around
the cytoplasm. When the PCR and ETY results obtained in this study were compared,
it was found that ORFV detection showed 94% positivity in both of them. The
presence of ORFV was seen in the samples examined with EM for each type. In the
study, PAPILEND™ cream, a commercial preparation developed to soften the wart-
like formations seen in cattle and reduce the disturbing effect by hardening, was
applied to 100 pieces of lamb and goat kid ORFV lesions seen in the mouth area once
in the morning and evening for 10 days. As a result of the applications, it was seen that
the lesions developed due to ORFV completely regressed and healed. As a result, the
presence of ORFV in lesions in the mouth area of lambs and capricorns of different
breeds was detected from a molecular and virological point of view. Successful results
were obtained in ORFV infections using a new alternative application procedure.
Keywords: Electron microscopy, Embryonated chicken egg, Lamb, Goat kid, PCR.