İnsülin kullanan diyabetik ve gestasyonel diyabetli annelerden C/S ile doğan term bebeklerin ve annelerinin kanlarında P-cresol ve indoxyl sülfat ve dışkıda bifidobacterium miktarının karşılaştırılması ve mikrobiyotanın değerlendirilmesi
Comparison of the amount of P-cresol and indoxyl sulfate in the blood of term infants and their mothers born with C/S from mothers with diabetic and gestational diabetes with mothers using insulin and bifidobacteria in feces and evaluation of the microbiota
Yazar: SERAP KURT
Danışman: DOÇ. DR. DEMET TEREK
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Anneler = Mothers ; Bebek-yenidoğmuş = Infant-newborn ; Bebekler = Infant ; Diabet-gebelik sırasında = Diabetes-gestational ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Metabolitler = Metabolites ; Mikrobiyota = Microbiota ; Yenidoğanlar =   ; İnsülin = Insulin

Özet:
Amaç: Yenidoğan bağırsağında mikrobiyal kolonizasyonu ve bebeklik döneminde bağırsak mikrobiyotasını etkileyen çevresel etkenlerin, ilerleyen yaşlarda hastalık geliştirme riskinin artmasına neden olduğu bilinmektedir. Diyabetik anne bebekleri, gastrointestinal sisteminin, normal gestasyonel glukoz regülasyonu olan annelerden doğan yenidoğanlarla karşılaştırıldığında yaşamın ilk haftasında farklı şekilde kolonize olur. Son zamanlarda bağırsak mikrobiyotasını değerlendirmek için mikrobiyota metabolitleri kullanılmaya başlanmıştır. Bu çalışmada; yenidoğan bebeklerde mikrobiyota metabolitleri olan p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerlerinde term ve diyabetik anne bebeği yenidoğanlar arasında fark olup olmadığının görülmesi, bu değerlerin term ve diyabetik anne bebekleri arasında bağırsak mikrobiyotasının karşılaştırılması ve mikrobiyota sağlığının değerlendirilmesi için kullanılıp kullanılamayacağı açısından bilgi edinilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı'nda Şubat 2020 – Eylül 2021 tarihleri arasında C/S ile doğum yapan anneler ve bebekleri arasından seçildi. Hastalar 2 gruba ayrıldı. Grup 1(Sağlıklı) için; sağlıklı ve gebelik öncesi vücut kitle indeksi (VKİ) <30 olan anneler ve bu annelerden 37 hafta ve üzerinde doğan sağlıklı term yenidoğanlar , grup 2 için ise (Diyabet anne grubu); gebelik öncesi VKİ <30 olan anneler ve gebelik öncesi diyabetes mellitus tanılı veya gebelikte gestasyonel diyabet tanısı alan, gebelikte insülin kullanan anneler, bu annelerden C/S ile doğan term sağlıklı (>37 hafta) yenidoğanlar çalışmaya dahil edildi.
Doğum esnasında korddan veya postnatal 1.günde venöz kandan alınan ve yenidoğan 7-10 günlük olduğunda alınan kan örneklerinden hemoglobin, üre ve kreatinin değerleri ölçüldü ve p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat düzeyleri LC-MS/MS yöntemiyle çalışıldı. Çalışmaya dahil edilen annelerin dışkı örnekleri ve yenidoğanlardan postnatal ilk 24 saat içerisinde ve sonrasında 7-10 günlük olduklarında rektal sürüntü yoluyla dışkı örneği alındı. Dışkı örnekleri DNA izolasyonu için spin column yöntemi yöntemi ile çalışıldı.
Bulgular: Doğum ağırlığı grup 1'de ortalama 3322,50±438, minimum=2210 gr, maksimum 4150 gr, grup 2'de ortalama 3723±366,27, minimum=3110 gr, maksimum=4450 'dı. Doğum ağırlıkları karşılaştırıldığında,iki grup arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptandı (p<0,01). Anne yaşı grup 1'de ortalama 30,70±4,94, minimum=23,maksimum=43,grup 2'de ortalama 31,60±5,71, minimum=24, maksimum=41'di. Grup 1'de olguların %65'i (n=13) kız, %35'i (n=7) erkek iken grup 2'de %50 (n=5) kız, %50'si (n=5) erkekti. Gruplar demografik açıdan karşılaştırıldığında cinsiyet açısından anlamlı fark saptanmadı(p=0,46). Gruplar arasında anne yaşı için istatistiksel açıdan anlamlı fark bulunmadı (p=0,65). Grup 1'de anne vücut kitle indeksinin ortalaması 24,44±3,15, minimum=15,30, maksimum=29,10, grup 2'de ortalama 26,49±3,36, minimum=20, maksimum=29,8'di. Gruplar arasında anne vücut kitle indeksi için istatistiksel açıdan anlamlı fark bulunmadı (p=0,11). Grup 1'de mekonyum saati ortalaması 11,90±7,83, minimum=3, maksimum=24, grup 2'de ortalama 17,20±6,32, minimum=6, maksimum=24'tü. Hasta ve kontrol grubu arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark tespit edilmedi (p=0,06). Grup 1'de 7-10. günde ortalama ağırlık 3278±446,93 gram, minimum=2250 gram, maksimum=4140 gramdı. Grup 2'de ise ortalama ağırlık 3708,50±403,58 gram, minimum=2970 gram, maksimum=4280 gramdı. 7-10. gün vücut ağırlığı açısından gruplar arasında anlamlı fark saptandı (p<0,01). İki grup kıyaslandığında istatistiksel açıdan anlamlı fark bulunmadı (p=0,42). Anne HbA1c değeri ortalama 5,5±0,65 g/dL, minimum=4,7, maksimum=6,6 ölçüldü. Grup 1'de 0. gün p-cresol sülfat değeri ortalama 598,98±785,27 ng/mL, minimum=42,77, maksimum=3331,74, 7-10. gün ortalama 181,39±156,24 ng/mL, minimum=54,16, maksimum=113,72, grup 2'de 0. gün ortalama 1401,99±1772,13 ng/mL, minimum=105,57, maksimum=4512,42, 7-10. gün ortalama 181,390±156,24 ng/mL, minimum=54,16, maksimum=692,62 saptandı. Yapılan p-cresol sülfat analizinde grupların zamana göre değişimi benzer olarak bulundu (p=0,68). Grupların kendi içerisinde 0. ve 7.günler arasında zaman içinde gösterdiği azalma istatiksel olarak anlamlı saptandı (p=0.005). Gruplar arasında ise hem 0.günde hem de 7. günde istatiksel olarak anlamlı fark saptanmadı (p=0,12). P İndoxyl sülfat için 1. grupta 0. gün ortalaması 2727,59±2580,15 ng/mL, 7-10. gün ortalaması 5007,36±11959,97 ng/mL, 2. grupta 0. gün ortalaması 1662,16±2182,16ng/mL, 7-10. gün ortalaması 6921,95±13272,72 ng/mL saptandı. Gruplar arasındaki etkileşim istatistiksel açıdan anlamlı bulundu (p=0,05). Birinci grupta 0. gün ve 7-10.gün arası indoxyl sülfat değerleri arasında istatiksel olarak anlamlı farklılık (azalış) saptandı (p=0.005). 2.grupta ise istatiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır (p=0,75) .Gruplar arası farklılık incelendiğinde 0. ve 7. Günde günde ölçülen indoxyl sülfat değerleri açısından, iki grup kıyaslandığında istatiksel açıdan anlamlı farklılık saptanmadı (p=0.08, p=0.50 ). HbA1c değerleri, GDM süresi ve insülin kullanma süresi ile p- cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerleri arasında zayıf korelasyon saptandı. Annelerden alınan dışkı örneklerinde grup 1'de %10 olguda bifidus faktör pozitif saptandı, grup 2'de %10 olguda bifidus faktör pozitif saptandı. Yenidoğanlarda grup 1'de 0.günde olguların %5 inde bifidus faktör pozitif saptandı. Grup 2'de hem 0. hem de 7-10.günde alınan tüm dışkı örneklerinde bifidus faktör negatif saptandı.
Sonuç: Çalışmamız literatürde ilk olması ve p-cresol sülfat ve indoxyl sülfatın yenidoğanlarda ölçülebilir olup olmadığının bilinmemesi nedeniyle kısıtlı vakayla yapılmıştır. P-cresol diyabet grubunda yüksek saptanmasına rağmen istatiksel olarak anlamlı farklılık saptanmadı. HbA1c değerleri, GDM süresi ve insülin kullanma süresi ile p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerleri arasında zayıf korelasyon gösterilmesi örneklem sayısının azlığına ve çalışmada pregestasyonel diyabetli gebe sayısının az olması ile ilişkilendirildi. Yenidoğanlarda bifidus faktörün negatif saptanması nedeniyle yenidoğanlarda postnatal 10 günde bifidobacterium kolonizasyonunun henüz oluşmadığı düşünüldü. Bu yapılmış ilk çalışma olduğundan bu konuda örneklem sayısı daha fazla olan daha geniş çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Objective: It is known that microbial colonization in the newborn intestine and environmental factors affecting the intestinal microbiota during infancy cause an increase in the risk of developing disease in later ages. Infants of diabetic mothers colonize the gastrointestinal tract differently during the first week of life compared to newborns born to mothers with normal gestational glucose regulation. Recently, microbiota metabolites have been used to evaluate the intestinal microbiota. In this study; The aim of this study is to determine whether there is a difference between the values of p-cresol sulfate and indoxyl sulfate, which are microbiota metabolites, in newborn babies, between term and diabetic mother babies, to compare the intestinal microbiota between term and diabetic mother babies and to obtain information whether they can be used to evaluate the microbiota health.
Materials and Methods: Between February 2020 and September 2021, she was selected from among mothers and their babies who gave birth with C/S at Ege University Faculty of Medicine Hospital Department of Obstetrics and Gynecology. The patients were divided into 2 groups. Group 1(Healthy) and healthy pre-pregnancy body mass index (BMI) <30 mothers and mothers with healthy term newborns born at 37 weeks , Group 2 (for mom Diabetes Group); mothers with a BMI <30 before pregnancy and mothers diagnosed with diabetes mellitus before pregnancy or diagnosed with gestational diabetes during pregnancy, using insulin during pregnancy, term (>37 weeks) newborns born with C/S from these mothers were included in the study.
Cord or postnatal 1 during childbirth hemoglobin, urea and creatinine values were measured from blood samples taken from venous blood per day and taken when the newborn was 7-10 days old, and the levels of p-cresol sulfate and indoxyl sulfate were studied using the LC-MS/MS method. Stool samples of the mothers included in the study and a stool sample were taken from newborns via rectal swabs within the first 24 hours postnatal and then at the age of 7-10 days. Stool samples were studied by the spin column method for DNA isolation.
Results: The birth weight was 3322.50±438 on average in group 1, minimum=2210 g, maximum=4150 g, average= 3723±366.27 in group 2, minimum=3110 g, maximum=4450. When the birth weights were compared,a statistically significant difference was found between the two groups (p