Sağlıklı anneden C/S ile doğan term ve preterm bebeklerde kanda p-cresol ve indoxyl sülfat düzeylerinin karşılaştırılması ve mikrobiyota ile ilişkisinin değerlendirilmesi
Comparison of blood p-cresol and indoxyl sulfate levels in term and preterm babies born with C/S from healthy mother and evaluation of their relationship with microbiota
Yazar: PELİN ABDAL YILDIRIM
Danışman: DOÇ. DR. DEMET TEREK
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Bebek-prematür = Infant-premature ; Bebek-yenidoğmuş = Infant-newborn ; Bebekler = Infant ; Kresol = Cresol ; Metabolitler = Metabolites ; Mikrobiyota = Microbiota ; Sezaryen operasyonu = Cesarean section ; İndoksil sülfat = Indoxyl sulfate

Özet:
Amaç: Bağırsak mikrobiyotasının insan sağlığı için önemine yönelik gözlem ve çalışmalar giderek artmaktadır. Çeşitli faktörler bağırsak mikrobiyotasının dengesini bozarak disbiyoza neden olabilir. Disbiyoz yenidoğanlarda kısa ve uzun vadede nekrotizan enterokolit, geç neonatal sepsis, bronkopulmoner displazi, otoimmün ve allerjik hastalıklar gibi pek çok olumsuz sonuca yol açmaktadır. Preterm bebeklerde ise matür bebeklere kıyasla mikrobiyota olgunlaşmamıştır ve pretermler çeşitli postnatal faktörler nedeniyle disbiyoz açısından daha risklidirler. Son zamanlarda bağırsak mikrobiyotasını değerlendirmek için mikrobiyota metabolitleri kullanılmaya başlanmıştır. Bu çalışmada; yenidoğan bebeklerde mikrobiyota metabolitleri olan p-cresol sülfat ve indoxyl sülfatın kan düzeyleri için bir normal değer aralığı oluşturulması, p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerlerinde term ve preterm yenidoğanlar arasında fark olup olmadığının görülmesi, bu değerlerin term ve pretermler arasında bağırsak mikrobiyotasının karşılaştırılması ve mikrobiyota sağlığının değerlendirilmesi için kullanılıp kullanılamayacağı açısından bilgi edinilmesi amaçlanmıştır.

Gereç ve Yöntem: Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı'nda Şubat 2020 – Eylül 2021 tarihleri arasında, gebelik öncesinde anne VKİ < 30 olan, gebelik sırasında annede antibiyotik kullanımı veya ek hastalık öyküsü olmayan annelerden C/S ile doğan ve doğum sonrası yenidoğan bebeklerden antenatal belirgin anomalisi olmayan, postnatal 7-10. gün kontrolüne kadar olan dönemde probiyotik veya antibiyotik kullanmayan, formula ile beslenmeyen doğum haftası 38 ve üzerinde olanlardan n=20 bebek term grup, 33-37 hafta arasında olanlardan n=11 bebek preterm grup olarak çalışmaya alındı. Çalışmaya dahil edilen annelerden doğum öncesi rutin bakılan hemoglobin, üre ve kreatinin değerleri olgu rapor formuna kaydedildi. Doğum esnasında korddan alınan kandan ve yenidoğan 7-10 günlük olduğunda alınan kan örneklerinden hemoglobin, üre ve kreatinin değerleri ölçüldü ve p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat düzeyleri LC-MS/MS yöntemiyle çalışıldı.

Bulgular: Grup 1'de olguların %65'i (n=13) kız, %35'i (n=7) erkek iken grup 2'de %72,7 (n=8) kız, %27,3'ü (n=3) erkekti. Gruplar arasında cinsiyet dağılımı açısından istatistiksel anlamlı fark saptanmadı (p=0,71). Grup 1'de olguların %90'ı (n=18) spinal anesteziyle, %5'i (n=1) epidural+spinal anesteziyle, %5'i (n=1) genel anesteziyle, grup 2'de ise %72,7'si (n=8) spinal, %18,2'si (n=2) epidural+spinal, %9,1'i (n=1) genel anesteziyle doğmuştu. Grup 1 ve 2 arasında anestezi şekli açısından istatistiksel anlamlı fark saptanmadı (p=0,46). Doğum ağırlığı grup 1'de ortalama 3322,50±438, minimum=2210 gr, maksimum 4150 gr, grup 2'de ortalama 2672,27±363,76, minimum=2090 gr, maksimum=3270 gramdı. Doğum ağırlığı açısından gruplar arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptandı (p<0,01). Anne yaşı grup 1'de ortalama 30,70±4,94, minimum=23, maksimum=43, grup 2'de ortalama 30,45±6,86, minimum=19, maksimum=39'du. Gruplar arasında anne yaşı için istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,90). Grup 1'de anne vücut kitle indeksinin ortalaması 24,44±3,15, minimum=15,30, maksimum=29,10, grup 2'de ortalama 22,65±3,23, minimum=17,60, maksimum=27'ydi. Gruplar arasında anne vücut kitle indeksi için istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,14). Grup 1'de mekonyum saati ortalaması 11,90±7,83, minimum=3, maksimum=24, grup 2'de ortalama 11,73±7,44, minimum=4, maksimum=24'tü. Gruplar arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,96). Grup 1'de anne serum üre değerinin ortalaması 14,40±3,48 mg/dL, minimum=8, maksimum=21, grup 2'de ortalama 13,18±4,79 mg/dL, minimum=8, maksimum=25'ti. Gruplar arasında anne üre değeri için istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,42). Grup 1'de anne serum kreatinin değerinin ortalaması 0,52±0,08 mg/dL, minimum=0,39, maksimum=0,75, grup 2'de ortalama 0,48±0,10 mg/dL, minimum=0,35, maksimum=0,66 ölçüldü. Gruplar arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,29). Anne hemoglobin değeri için grup 1'de ortalama 11,65±1,31 g/dL, minimum=8,7, maksimum=13,5 iken grup 2'de ortalama 11,56±1,03 g/dL, minimum=10,20, maksimum=13,70 ölçüldü. İstatistiksel açıdan gruplar arasında anlamlı fark saptanmadı (p=0,85). Grup 1'de bebek 0. gün üre ortalaması 17,05±6,51 mg/dL, minimum=7, maksimum=31, 7-10. gün ortalama 15,05±6,62 mg/dL, minimum=4, maksimum=31, grup 2'de 0. gün ortalaması 19,64±4,54 mg/dL, minimum=13, maksimum 27, 7-10. gün ortalaması 12,45±4,34 mg/dL, minimum=8, maksimum=18'di. Gruplar arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,96). Ancak her iki grupta da zaman içinde istatistiksel açıdan anlamlı azalma saptandı (p=0,01). Grup 1'de 0. gün kreatinin değerlerinin ortalaması 0,68±0,24 mg/dL, 7-10. gün kreatinin değerlerinin ortalaması 0,40±0,10 mg/dL, grup 2'de 0. gün değerlerinin ortalaması 0,79±0,17 mg/dL, 7-10. günün ortalaması 0,42±0,08 mg/dL saptandı. Kreatininde de ürede olduğu gibi gruplar arasında anlamlı fark saptanmadı (p=0,18) ancak grupların kendi içerisinde zaman içinde istatistiksel açıdan anlamlı derecede azalma gösterdiği görüldü (p<0,01). Grup 1'de 0. gün p-cresol sülfat değeri ortalama 598,98±785,27 ng/mL, 7-10. gün ortalama 181,39±156,24 ng/mL, grup 2'de 0. gün ortalama 1740,13±2162,74 ng/mL, 7-10. gün ortalama 427,88±561,07 ng/mL saptandı. P-cresol sülfat için gruplar arasında etkileşim saptanmadı (p=0,29), gruplar arasında istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,08) ancak grupların kendi içerisinde zaman içinde gösterdiği azalma istatistiksel açıdan anlamlı bulundu (p<0,001). P-cresol sülfat değerlerinin istatistiksel analizi logaritmik değerler üzerinden yapılmıştır. İndoxyl sülfat için 1. grupta 0. gün ortalaması 2727,59±2580,15 ng/mL, 7-10. gün ortalaması 5007,36±11959,97 ng/mL, 2. grupta 0. gün ortalaması 2623,59±3855,96 ng/mL, 7-10. gün ortalaması 37226,79±40501,98 ng/mL saptandı. İndoxyl sülfat için grupların zaman içindeki değişiminde istatistiksel açıdan anlamlı fark saptanmadı (p=0,74) ancak gruplar arasındaki etkileşim istatistiksel açıdan anlamlı bulundu, grup 1'de indoxyl sülfat değeri azalırken grup 2'de arttığı görüldü (p=0,005). İndoxyl sülfat değerlerinin istatistiksel analizi logaritmik değerler üzerinden yapılmıştır. Olgulardan 7-10. günlerde hala fizyolojik kilo kaybı olanlar ve tartı alımı olanların 7. günde ölçülen p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerleri ile korelasyonu değerlendirildiğinde fizyolojik kilo kaybı olanlarla tartı alımı olanlar arasında grup 1'de istatistiksel açıdan anlamlı bir korelasyon saptanmadı. Grup 2'de ise kilo kaybı ile p-cresol sülfat ve indoxyl sülfat değerleri arasında bir korelasyon olduğu görüldü.

Sonuç: Çalışmamız literatürde ilk olması ve p-cresol sülfat ve indoxyl sülfatın yenidoğanlarda ölçülebilir olup olmadığının bilinmemesi nedeniyle kısıtlı vakayla yapılmıştır. Ölçülebilir değerler bulunması, sonuçta istatistiksel olarak anlamlı düzeyde sonuçlar saptanması nedeniyle p-cresol sülfat ve indoxyl sülfatın mikrobiyotayı yansıtabileceğini, yenidoğan bebeklerde iyi beslenmenin göstergesi olarak kullanılması açısından da değerlendirilebileceğini düşünüyoruz. Bu yapılmış ilk çalışma olduğundan bu konuda örneklem sayısı daha fazla olan daha geniş çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Objective: Observations and studies on the importance of gut microbiota for human health are increasing. Various factors can cause dysbiosis by disrupting the balance of the intestinal microbiota. Dysbiosis causes many negative consequences in newborns in the short and long term, such as necrotizing enterocolitis, late neonatal sepsis, bronchopulmonary dysplasia, autoimmune and allergic diseases. Compared to mature babies, the microbiota is immature in preterm babies and preterm babies are at higher risk for dysbiosis due to various postnatal factors. Recently, microbiota metabolites have been used to evaluate the gut microbiota. In this study; establishing a normal value range for the blood levels of microbiota metabolites p-cresol sulfate and indoxyl sulfate in newborn babies, determining whether there is a difference in p-cresol sulfate and indoxyl sulfate values between term and preterm newborns, comparing these values between term and preterms, intestinal microbiota and microbiota. It is aimed to obtain information in terms of whether it can be used for the evaluation of health.

Materials and Methods: Between February 2020 and September 2021, in Ege University Medical Faculty Hospital, Department of Obstetrics and Gynecology, from mothers with a BMI < 30 before pregnancy, without a history of antibiotic use or additional disease in the mother during pregnancy and those who were born with C/S and postnatal 7-10th newborn babies without antenatal significant anomaly. In the study, n=20 term infants who did not use probiotics or antibiotics and were not fed with formula during the period up to day control were included in the study as the term group, and n=11 infants between 33-37 week of gestation were included in the study. Hemoglobin, urea and creatinine values of the mothers included in the study, which were routinely checked before birth, were recorded in the case report form. Hemoglobin, urea and creatinine values were measured from the blood taken from the cord during delivery and blood samples taken when the newborn was 7-10 days old and p-cresol sulfate and indoxyl sulfate levels were studied by LC-MS/MS method.

Results: While 65% (n=13) of the cases were female and 35% (n=7) were male in group 1, 72.7% (n=8) were female and 27.3% (n=3) were male in group 2. There was no statistically significant difference between the groups in terms of gender distribution (p=0.71). In group 1, 90% (n=18) of the cases were administered with spinal anesthesia, 5% (n=1) with epidural+spinal anesthesia, 5% (n=1) with general anesthesia, and in group 2, 72.7 % (n=8) were born with spinal, 18.2% (n=2) were born with epidural+spinal and 9.1% (n=1) with general anesthesia were born. There was no statistically significant difference between groups 1 and 2 in terms of anesthesia type (p=0.46). Average birth weight was 3322.50±438, minimum=2210 gr, maximum 4150 gr in group 1, and 2672.27±363.76, minimum=2090 gr, maximum=3270 gram in group 2. There was a statistically significant difference between the groups in terms of birth weight (p<0.01). Mean maternal age was 30.70±4.94, minimum=23, maximum=43 in group 1, and 30.45±6.86, minimum=19, maximum=39 in group 2. There was no statistically significant difference between the groups for maternal age (p=0.90). Mean maternal body mass index in group 1 was 24.44±3.15, minimum=15.30, maximum=29.10, in group 2 average was 22.65±3.23, minimum=17.60, maximum=27. There was no statistically significant difference between the groups for maternal body mass index (p=0.14). Meconium hour mean in group 1 was 11.90±7.83, minimum=3, maximum=24, in group 2 it was 11.73±7.44, minimum=4, maximum=24. There was no statistically significant difference between the groups (p=0.96). Mean maternal serum urea value 14.40±3.48 mg/dL, minimum=8, maximum=21 in group 1, 13.18±4.79 mg/dL in group 2, minimum=8, maximum= It was 25. There was no statistically significant difference between the groups for maternal urea value (p=0.42). Mean maternal serum creatinine value 0.52±0.08 mg/dL in group 1, minimum=0.39, maximum=0.75, mean 0.48±0.10 mg/dL in group 2, minimum= 0.35, maximum=0.66 measured. There was no statistically significant difference between the groups (p=0.29). For maternal hemoglobin value, mean 11.65±1.31 g/dL, minimum=8.7, maximum=13.5 in group 1, mean 11.56±1.03 g/dL in group 2, minimum= 10.20, maximum=13.70, measured. There was no statistically significant difference between the groups (p=0.85). In group 1, the mean urea on day 0 of the baby was 17.05±6.51 mg/dL, minimum=7, maximum=31, 7-10. day mean 15.05±6.62 mg/dL, minimum=4, maximum=31, in group 2 mean day 0 19.64±4.54 mg/dL, minimum=13, maximum 27. Seven-ten day mean was 12.45±4.34 mg/dL, minimum=8, maximum=18. There was no statistically significant difference between the groups (p=0.96). However, a statistically significant decrease was detected in both groups over time (p=0.01). The mean creatinine values on day 0 in Group 1 were 0.68±0.24 mg/dL, 7-10. The mean day creatinine values were 0.40±0.10 mg/dL, and the mean day 0 values in group 2 were 0.79±0.17 mg/dL, 7-10. the mean of the day was 0.42±0.08 mg/dL was. As with urea, there was no significant difference between the groups in creatinine (p=0.18), but it was observed that the groups showed a statistically significant decrease over time (p<0.01). In group 1, the mean p-cresol sulfate value on day 0 was 598.98±785.27 ng/mL, 7-10. day mean 181.39±156.24 ng/mL, mean day 0 in group 2 1740.13±2162.74 ng/mL, 7-10. mean day was 427.88±561.07 ng/mL. There was no interaction between the groups for P-cresol sulfate (p=0.29), no statistically significant difference was found between the groups (p=0.08), but the decrease in the groups over time was statistically significant (p<0.001). Statistical analysis of P-cresol sulfate values was performed over logarithmic values. For indoxyl sulfate, mean day 0 in group 1 was 2727.59±2580.15 ng/mL, 7-10. mean day 5007.36±11959.97 ng/mL, mean day 0 in group 2 was 2623.59±3855.96 ng/mL, 7-10. mean day was 37226.79±40501.98 ng/mL. For indoxyl sulfate, there was no statistically significant difference in the change of the groups over time (p=0.74), but the interaction between the groups was statistically significant. Indoxyl sulfate value decreased in group 1 and increased in group 2 (p=0.005). Statistical analysis of indoxyl sulfate values was performed over logarithmic values. When the correlation between p-cresol sulfate and indoxyl sulfate values measured on the 7th day of those who still had physiological weight loss and weight gain on the 7th day was evaluated, no statistically significant correlation was found in group 1 between those with physiological weight loss and weight gain. In group 2, there was a correlation between weight loss and p-cresol sulfate and indoxyl sulfate values.

Conclusion: Our study was conducted with a limited number of cases since it is the first in the literature and it is not known whether p-cresol sulfate and indoxyl sulfate can be measured in newborns. We think that p-cresol sulfate and indoxyl sulfate can reflect the microbiota and can be evaluated in terms of being used as an indicator of good nutrition in newborn babies, since they have measurable values and statistically significant results. Since this is the first study, there is a need for larger studies with a larger sample size on this subject.