Didesil dimetil amonyum klorür ve benzil dimetil amonyum klorür içeren bir antimikrobiyalin deriden izole edilen bakteriler üzerine etkisinin araştırılması
Examination of the effect of an antimicrobial containing didecyl dimethyl ammonium chloride and benzyl dimethyl ammonium chloride on the bacteria isolated from hide
Yazar: CANAN VEYSELOVA
Danışman: PROF. DR. MERAL BİRBİR
Marmara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Tuzlanmış derilerde ve ıslatma sıvılarında bulunan proteolitik ve lipolitik bakteriler derinin kalitesini olumsuz olarak etkilemektedirler. Bu çalışmada, % 12.5 didesil dimetil amonyum klorür ve % 12.5 benzil dimetil amonyum klorür içerikli antimikrobiyalin 0.8 g/L konsantrasyonu ile muamele görmüş, ıslatılmış deriden daha önceki çalışmalarda izole edilmiş bakteriler kullanılmıştır. Tuzlanmış derilerde de bulunan ve zarar oluşturabilen Bacillus pumilus, Bacillus licheniformis, Pseudomonas luteola, Staphylococcus intermedius, Vibrio fluvialis, Enterobacter cloacae ve Enterococcus faecium bakterileri test izolatları olarak kullanılmıştır.Test izolatlarının proteolitik ve lipolitik aktiviteleri araştırıldıktan sonra % 12.5 didesil dimetil amonyum klorür ve % 12.5 benzil dimetil amonyum klorür içerikli maddenin bu bakteriler üzerine antibakteriyel etkinliği hem tuzsuz ve hem de % 26 tuz içeren Mueller Hinton Broth'da 37 oC'de tüp dilüsyon metodu ve 25 oC ve 37oC'de Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi ile araştırılmıştır. Test izolatlarından Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Pseudomonas luteola ve Enterobacter cloacae hem lipolitik hem de proteolitik aktivite gösterirken Enterococcus faecium, Staphylococcus intermedius ve Vibrio fluvialis proteaz pozitif ve lipaz negatif olarak bulunmuştur. Kullandığımız antimikrobiyalin 0.74 g/L ve 1.0 g/L konsantrasyonlarının 8 ve 24 saatlik temas sürelerinde her mikroorganizma üzerine farklı etki gösterdiği ve genellikle bu konsantrasyonların bakterileri inaktive etmede yetersiz olduğu görülmüştür. Antimikrobiyalin 2.97 g/L'lik konsantrasyonunun, Mueller Hinton Broth'da 37 oC hem 8 hem de 24 saatlik temas sürelerinde tüm test izolatlarını ve karışık kültürü inaktive ettiği saptanmıştır. Bu antimikrobiyalin, tuzlu salamura sıvılarında kullanılabileceği ve tuzun antimikrobiyal maddenin etkinliğini biraz azalttığı görülmüştür. Bu nedenle, bakterileri inaktive etmek için antimikrobiyalin daha yüksek konsantrasyonları tuzlu salamura sıvılarında kullanılmalıdır. Bu antimikrobiyalin test izolatları üzerine, 37 oC'ye göre 25 oC'de daha etkili olduğu Kirby-Bauer disk difüzyon metodu ile saptanmıştır. Antimikrobiyal etkinlik testlerine ilaveten çalışmamızda test izolatlarından hazırlanan karışık kültürün canlılığı tuzsuz Mueller Hinton Broth'da ve % 10, % 15 ve % 26 NaCl içeren Mueller Hinton Broth'da 72 gün boyunca incelenmiştir. Karışık kültürdeki bakterilerin tuzsuz Mueller Hinton'da, tuzlu besiyerlerine göre daha hızlıca öldüğü ve sayılarını 72 günde başlangıç bakteri sayısından (107 kob/mL) 103kob/mL'ye düşürdükleri görülmüştür. Bu depolama süresi sonunda % 10, % 15 ve % 26 NaCl içeren besiyerlerindeki bakteri sayısı sırasıyla 104, 105 ve 104 kob/mL'ye düşmüştür.Sonuç olarak % 12.5 didesil dimetil amonyum klorür ve % 12.5 benzil dimetil amonyum klorür içerikli antimikrobiyal maddenin daha yüksek konsantrasyonları kullanılarak derilerde zarar oluşturan bakterilerin ve bunların karışık kültürlerinin hem tuzlu salamura sıvılarında hem de ıslatma sıvılarında inaktive edileceği saptanmıştır. Bu antimikrobiyal maddenin tuzlu salamura sıvısında da kullanılabileceği belirlenmiştir. Buna ilaveten tuzlanmış derilerde bulunan bakterilerin 72 günlük depolama süresinde de canlı kaldıkları saptanmıştır.

Abstract:
The proteolytic and lipolytic bacteria found on the salted hides and soak liquors affect the quality of the hides adversely.The bacteria used in this study were isolated in the previous study from the soaked hides treated with 0.8 g/L of antimicrobial agent containing 12.5 % didecyl dimethyl ammonium chloride and 12.5 % benzyl dimethyl ammonium chloride. Bacillus pumilus, Bacillus licheniformis, Pseudomonas luteola, Staphylococcus intermedius, Vibrio fluvialis, Enterobacter cloacae and Enterococcus faecium, which may be found and damage the salted hides, were used as test isolates.After proteolytic and lipolytic activities of these bacteria were determined, antibacterial effect of the agent containing 12.5 % didecyl dimethyl ammonium chloride and 12.5 % benzyl dimethyl ammonium chloride were examined on the test isolates with tube dilution method in both the salt free Mueller Hinton Broth and the same broth medium containing 26 % NaCl at 37 oC and with Kirby-Bauer disk diffusion technique at 25 oC and 37 oC. While Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Pseudomonas luteola and Enterobacter cloacae showed both lipolytic and proteolytic activities, Enterococcus faecium, Staphylococcus intermedius and Vibrio fluvialis were found as protease positive and lipase negative. The concentrations of 0.74 g/L and 1.0 g/L of this antimicrobial agent showed different antibacterial effects on the each test bacteria after 8 and 24 hours exposure times and usually these concentrations were not enough to inactivate these isolates. It was determined that the concentration of 2.97 g/L of the agent in the Mueller Hinton Broth inactivated the test isolates and mixed culture of these isolates completely after both 8 and 24 hours exposure times at 37 oC. It was seen that the antimicrobial agent may be used in the brine solution and the salt slightly decreased effectiveness of the antimicrobial agent. Therefore, to inactivate the bacteria, higher concentration of the agent should be used in the brine solution. It was determined by Kirby-Bauer disk diffusion method that, compared to 37 oC the antimicrobial agent is more effective on these isolates at 25 oC. In addition to antibacterial efficiency tests, the viability of the mixed culture prepared from the test isolates was examined in the salt free Mueller Hinton Broth and in the same broth medium containing 10 %, 15 % and 26 % NaCl during 72 days. It was seen that the bacteria in the mixed culture of the isolates died faster in salt free Mueller Hinton Broth medium than the broth containing salt and the initial bacterial number of the mixed culture (107 cfu/mL) is reduced to 103 cfu/mL in the salt free medium in 72 days. After this storage period, bacterial number in the 10 %, 15 %, and 26 % NaCl containing media are reduced to 104, 105 and 104 cfu/mL, respectively.As a conclusion, it was determined that the antimicrobial agent containing 12.5% didecyl dimethyl ammonium chloride and 12.5 % benzyl dimethyl ammonium chloride should be used in higher concentrations in both brine solutions and soak liquors to inactivate the bacteria and their mixed culture that cause damage on the hides. It was concluded that the antibacterial agent may also be used in the brine solution. Furthermore, it was found that the viability of bacteria on salted hides was maintained during 72 days storage.