Diyabetik farelerin ovaryan follikül morfolojisinde ve zona pellusida proteinleri dağılımında görülen değişikliklerin immünohistokimyasal ve ince yapı düzeyinde incelenmesi
Immunohistochemical and ultrastructural examination of the alterations in the morphology of the ovarian follicle and distribution of the zona pellucida proteins of the diabetic mice.
Yazar: GÖKÇE DENİZ KÜLEKÇİ
Danışman: DOÇ. DR. Ş. NECAT YILMAZ
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Diabetes mellitus-tip 1 = Diabetes mellitus-type 1 ; Fareler = Mice ; Kısırlık = Infertility ; Mikroskopi-elektron = Microscopy-electron ; Zona pellucida = Zona pellucida ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Zona pellusida memeli oositinin etrafını saran glikoprotein yapıda yarı saydam bir matrikstir. İnsan ve farelerde ZP1, ZP2 ve ZP3 olmak üzere üç majör glikoproteinden meydana gelir. Bu glikoproteinlerin her biri, spermin zona pellusidaya bağlanmasında, fertilizasyondan sonra oositin birden fazla spermle döllenmesinin engellenmesinde ve implantasyondan önceki embriyonun korunmasında önemli roller oynar.İnfertilite, ortalama olarak çiftlerin %20'sinde ortaya çıkan erkek veya kadın faktörüne bağlı olabildiği gibi bazen de açıklanamayan nedenlerle ortaya çıkan bir durumdur. Diyabet uzun dönemde çeşitli organlarda yetmezliğe ve fonksiyon bozukluğuna sebep olur. Bu çalışmada diyabetin erişkin dişi farelerde zona pellusida üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlandı.Çalışmada erişkin 12 adet Balb/C dişi fare kullanıldı. Fareler diyabet (n=6) ve kontrol (n=6) grubu olmak üzere ikiye ayrıldı. Diyabet grubuna streptozotosin (200 mg/kg) uygulandı. Hayvanlar 4 hafta sonra ovulasyon indüksiyonunu takiben, sakrifiye edildi. Kontrol grubuna ise sadece ovulasyon indüksiyonu yapılarak hayvanlar sakrifiye edildi. Elde edilen over dokuları elektron mikroskobik ve immünfloresan işaretleme için takip edilerek incelendi.Elektron mikroskobik incelemelerde diyabetik grupta, granüloza hücrelerinde apoptozisin arttığı, zona pellusidanın morfolojisinde ve oosit sitoplazmasında anormallikler olduğu gözlendi. İmmünfloresan işaretlemede diyabet grubuyla kontrol grubu arasında ZP2 antikorunun ekspresyonlarında herhangi bir farklılığa rastlanmadı. Ancak, diyabet grubundaki zona pellusidalarda fragmantasyonlar olduğu görüldü.Sonuç olarak ZP2 glikoprotein ekspresyonları açısından gruplar arasında fark olmamasına rağmen diyabet grubunda zona pellusidanın yapısının bozulması diyabetin ZP2 dışındaki glikoproteinleri etkilemiş olabileceğini düşündürdü.

Abstract:
Zona pellusida, a semi-transparent matrix in a glicoprotein structure, surrounds the mammalian oocyte. Zona pellusida consists of three major glicoproteins called as ZP1, ZP2 and ZP3. Each of these proteins has crucial roles on sperm binding to zona pellucida, preventing polyspermy after fertilization and protection of the preimplant embryo .Infertility occurs in the 20% of the couples in the population due to male or female disfunction or sometimes unidentified causes. Diabetes has long term effects on organs as failure and disfunction. The main purpose of this study was to observe the effects of diabetes on the zona pellucida of adult female mice.Twelve adult Balb/C mice were used for the study. Study design has two groups as diabetes (n=6) and control (n=6). In the diabetes group, 200 mg/kg dose of streptozotosin were administered to each adult female mice and after four weeks, following the ovulation induction, both diabetes and control group animals were sacrificed. Postmortem tissues were than processed for the ultrastructural examination and immunofluorescence staining.Ultrastructural examination of the diabetes group tissues showed increased apoptosis in the granulosa cells and abnormalities in the morphology of zona pellucida and oocyte cytoplasm. Immunofluorescence staining of ZP2 protein did not show any significant difference between the control and diabetes groups. However, fragmentation in the diabetes group zona pellucida is observed.Despite there is no difference on the ZP2 glicoprotein expression between the groups, our observation of the ultrastructurally impaired zona pellucida made us to suggest that diabetes might have caused an alternation on the expression of the other glicoproteins.