Boronat afinite kromatografisi için monolitik HPLC kolonları
Preparation of monolithic HPLC columns for boronate affinity chromatography
Yazar: YEŞEREN SAYLAN
Danışman: PROF. DR. ADİL DENİZLİ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmanın amacı, boronat afinite kromatografisi ile immunoglobulin G (IgG) ayrılması için monolitik HPLC kolonları hazırlamaktır.İlk aşamada, 4-vinil fenil boronik asit (VPBA) monomeri 2-hidroksietil metakrilat (HEMA) ile polimerleştirilmiştir. Yığın polimerizasyon sonucu elde edilen polimer, bilyalı değirmen kullanılarak öğütülmüş ve fenil boronik asit içeren partiküller elde edilmiştir. Daha sonra bu partiküller, poli(2-hidroksietil metakrilat) (PHEMA) kriyojellerin içine gömülerek monolitik kompozit HPLC kolonları hazırlanmıştır. Ayrıca sadece PHEMA bazlı kriyojel de sentezlenerek polimerler arasındaki farklar ortaya konulmuştur.Hazırlanan kompozit HPLC kolonları yüzey alanı ölçümleri (BET), taramalı elektron mikroskobu (SEM), Fourier Transform İnfrared spektroskopisi (FTIR), elementel analiz, şişme testleri ve akış hızı-geri basınç ilişkisi ile karakterize edilmiştir.Karakterizasyon basamaklarından sonra monolitik kompozit kriyojeller, HPLC sistemine bağlanmış ve IgG ayırma performansları belirlenmiştir. Bu aşamada pH, derişim, sıcaklık, akış hızı ve iyonik şiddet gibi parametreler incelenmiştir.Çalışmanın son aşamasında, belirlenen optimum koşullarda plazmadan protein ayrılması gerçekleştirilmiş ve kolonların immunoglobulin G (IgG)'ye olan seçiciliğini ortaya koymak amacıyla insan serum albumini (HSA) ile seçicilik deneyleri yapılmıştır.ANAHTAR KELİMELER: Boronat Afinite Kromatografi, Monolit Kompozit Kriyojel, HPLC, İmmunoglobulin G

Abstract:
The aim of this study is the preparation of monolithic HPLC columns for ımmunoglobulin G separation by boronate affinity chromatography.In first step, 4-vinyl phenyl boronic acid (VPBA) monomer was polymerized with 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA). The polymer prepared by bulk polymerization was crushed by using ball-milling and by this way, the particles were including phenyl boronic acid groups, obtained. Then, these particles were embedded into poly(2-hydroxyethyl methacrylate) (PHEMA) based cryogels to obtain monolithic composite HPLC column. In addition, the PHEMA-based cryogel was also synthesized to evaluate the differences between cryogels. The prepared monolithic composite HPLC columns were characterized by surface area measurements (BET), scanning electron microscopy (SEM), Fourier Transform Infrared (FTIR), elemental analysis, swelling tests and flow rate-back pressure relation.After the characterization, the monolithic composite columns were connected to the HPLC system. The performance of IgG separation of composite columns were determined. At this stage, the parameters such as pH, concentration, temperature, flow rate and ionic strength were investigated.In final stage of the study, the IgG separation from human plasma was performed at the determined optimum conditions and selectivity experiment was also performed with human serum albumin (HSA) to present the selectivity of columns to immunoglobulin G (IgG) .KEY WORDS: Boronate Affinity Chromatography, Monolith Composite Cryogel, HPLC, Immunoglobulin G.