NAC (N-asetilsistein) kullanan ve kullanmayan fare modelinde adipoz doku orijinli mezenkimal kök hücrelerin senesense olan yatkınlıklarının belirlenmesi
Investigation of NAC (N-acetylcysteine) treatment on adipose tissue originated mesenchymal stem cellsenescence in mouse model
Yazar: ZEYNEP GÜNAYDIN
Danışman: PROF. DR. SERVET ÖZCAN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Fareler = Mice ; Kök hücreler = Stem cells ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; Senesens = Senescence

Özet:
Mezenkimal kök hücreler, çeşitli dokulara farklılaşma yeteneğine sahip multipotent hücre popülasyonudur. Adipoz doku kök hücre içeriği bakımından zengindir ve kolay elde edildiğinden MKH kaynağı olarak sıklıkla tercih edilir. Hücreler, oksidatif stres, DNA hasarı ve onkogen aktivasyonu gibi çeşitli uyaranların bir sonucu olarak hücresel yaşlanmaya girebilir. Hücresel yaşlanma, yaşa bağlı birçok hastalık için önemli risk faktörüdür. Yaşlanan hücreler salgıladıkları moleküller aracılığıyla sadece kendilerini değil çevre dokuları da etkilerler. Glutatyon öncüsü olan N-asetilsistein, ROS'u ortadan kaldıran bir antioksidandır. Uzun süreli NAC kullanımının fare yağ dokusundan elde edilen MKH'ler üzerindeki etkilerinin araştırıldığı bu çalışmada. 7 aylık fareler 14 ay boyunca NAC solüsyonu ile beslendikten sonra. sakrifiye edilerek MKH'ler toplandı, kültürlendi ve moleküler analizlerle karakterize edildi. NAC ile beslenen hayvanlardan elde edilen MKH'lerin, daha yüksek Beta-Gal boyamasına ve Ki-67 boyamasına sahip olduğu saptandı.  Hücre döngüsü verileri, kontrol grubundaki hücrelerin G0/G1'de daha fazla olduğunu gösterirken, NAC'ın hücre döngüsü durmasına ve yaşlanmasına neden olduğunu gösteren daha fazla polinükleer hücre içerdiğini göstermektedi. Aynı zamanda NAC grubunda apoptoz daha yüksek bulundu. p53, BCL2, CDK4, CYCLIN B, p21, RB1, BAX ve ATM gen ekspresyonlarının  analizi de hücre döngüsü ve apoptoz verilerini destekledi. Bu çalışmanın sonucunda, NAC uygulamasından bağımsız olarak her iki grupta da yaşlanan hücrelerin stemness özelliklerini kaybetme eğilimi gösterdiği ayrıca NAC'ın uzun süreli kullanımının yaşlı mezenkimal kök hücrelerde senesens ve apoptozu arttırıcı etkiye sahip olduğu gözlenmiştir.
Anahtar Kelimeler: Mezenkimal Kök Hücre; N-asetilsistein; Senesens; Senoteropatikler

Abstract:
Mesenchymal stem cells are multipotent cell population that has the ability to differentiate into various tissues. Adipose tissue is rich in stem cell content and is frequently preferred as a source of MSC since it is easily obtained. Cells can enter cellular senescence as a result of various stimuli such as oxidative stress, DNA damage, and oncogene activation. Cellular aging is an important risk factor for many age-related diseases. Senescent cells affect not only themselves but also the surrounding tissues via secreted molecules. In recent years, many studies have been carried out in order to eliminate or minimize aging or the damage caused by aging. 
N-acetylcysteine, a glutathione precursor, is an antioxidant which eliminates reactive oxygen species. In our study, we investigated the effects of long-term use of NAC on MSC's obtained from mouse adipose tissue. We feeded 7 months-old mice for 14 month with NAC solution. After scarification of animals MSCs were collected, cultured and characterized by molecular assays. The MSCs obtained from NAC fed animals had higher Beta-Gal senescence staining and Ki-67 staining. Our cell cycle analysis data show that the cells in the control group in G0/G1, while NAC group cells contains more polynuclear cells that which indicate that NAC causes cell cycle arrest and senescence.  At the same time apoptosis was higher in the NAC group. The analysis of p53, BCL2, CDK4, CYCLIN B, p21, RB1, BAX and ATM gene expression also supported the cell cycle and apoptosis data. As a result of this study, it was observed that senescent cells in both groups tended to lose their stemness properties, regardless of NAC application, and long-term use of NAC had an increasing effect on senescence and apoptosis in aged mesenchymal stem cells.
Key Words: Mesencaymal Stem Cell; N-asetilsistein; Senescence; Senothropatics