Meme kanseri hücre hatlarında polifenolik bileşenlerin ppargama ekspresyonuna    etkilerinin   araştırılması
Investigation of the effects of polyphenolic compounds on ppar-gamma expression in breast cancer cell lines
Yazar: FIDAN MALIKOVA
Danışman: PROF. DR. HÜLYA YILMAZ AYDOĞAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Erken tanı ve tedavideki ilerlemelere rağmen, yaklaşık % 30 ölüm oranına sahip meme kanseri heterojen bir hastalıktır. PPAR gama'nın normal ve malign meme epitel hücrelerinde eksprese edildiği ve tümör tedavisinin başlangıcında PPAR gama ekspresyonunun aşağı düzenlendiği bilinmektedir. Ayrıca sentetik PPAR gama ligandlarının meme kanseri hücrelerinde proliferasyonu inhibe ettiği, apoptozu indüklediği, anjiyogenezi ve invazyonu baskıladığı bildirilmiştir. Bazı polifenolik maddelerin de PPAR gama ekspresyonu üzerindeki etkileri gösterilmiştir. Polifenolik maddeler antioksidan veya apoptotik aktiviteleri ile meme kanserinin önlenmesinde ve tedavisinde etkili oldukları bilinmektedir. Biyolojik olarak aktif olan bu bileşiklerin hücre tipine özgü şekilde moleküler hedeflerinin aydınlatılması potansiyel tedavi etkilerini artırabilir. Bu nedenle çalışmamızda çeşitli flavonoidlerden oluşan kokteylin (PFK5120) ve sentetik PPAR gama agonisti olan Pioglitazon (PİO)'nun MCF-7, MDA-MB231 meme kanseri hücreleri ve MCF-10A kontrol hücresinde PPAR gama gen ekspresyonu, hücre proliferasyonu ve apoptoz üzerindeki etkileri araştırılmıştır.
Hücre canlılığı, WST-1 yöntemi (Roche) ile ve apoptoz analizleri Annexin V-FITC yöntemi (Muse AnnexinV Dead Cell Kit) kullanılarak yapıldı. PPAR gama mRNA ekspresyon analizi, gerçek zamanlı PCR yöntemiyle yapıldı. 
Hormon pozitif MCF-7 meme kanseri hücre hatlarında PİO ve PFK5120 kombinasyonunun, PPAR gama ekspresyonunda artışla ilişkili olarak hem büyüme inhibisyonu hem de apoptoz indüksiyonu üzerinde daha etkili olduğu gösterilmiştir. Agresif üçlü negative MDA-MB-231 hücre hattında ise PFK5120'in tekli kullanımının daha yüksek PPAR gama ekspresyonu ve daha etkin sitotoksisite ile ilişkisi gözlenmiştir. 
Bu veriler, PİO ve PFK5120'nin artan PPAR gama ekspresyonu ile ilişkilendirdiğimiz çoklu hücresel etkileri aracılığıyla meme kanserinde potansiyel terapötik etkilere sahip olduklarını vurgulamaktadır. Meme kanseri tipine göre farklı etkileri nedeniyle bu maddelerin kullanımlarının da mevcut tedavi protokollerinde olduğu gibi meme kanseri tipine özel olması gerekliliği aşikardır.
Anahtar Kelimeler:  Hücre Kültürü, Meme Kanseri, Pioglitozon, Flavonoid, PPAR gama
Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 35035

Abstract:
Despite advances in early diagnosis and treatment, breast cancer remains a heterogeneous disease with an approximately 30% mortality rate. It is known that PPAR gamma is expressed in normal and malignant breast epithelial cells, and PPAR gamma expression is downregulated at the beginning of tumor therapy. It has also been reported that synthetic PPAR gamma ligands inhibit proliferation and induce apoptosis, suppress angiogenesis and invasion in breast cancer cells. Effects of some polyphenolic substances on PPAR gamma expression have also been demonstrated. Polyphenolic substances are known to be effective in the prevention and treatment of breast cancer with their antioxidant or apoptotic activities. The elucidation of cell type-specific molecular targets of these biologically active compounds may enhance their potential therapeutic effects. For this purpose, in the present study, the effects of PFK5120 consisting of polyphenolic substances and synthetic PPAR gamma agonist Pioglitazone (PIO) have been investigated on PPAR gamma gene expression, cell proliferation and apoptosis in MCF-7, MDA-MB-231 breast cancer cells and MCF-10A control cells.
Cell viability was analyzed by the WST-1 method (Roche) and apoptosis was analyzed by the Annexin V-FITC method (Muse AnnexinV Dead Cell Kit). PPAR gamma mRNA expression analysis was performed by real-time PCR method. 
In hormone positive MCF-7 breast cancer cell lines, the combination of PIO and PFK5120 has been shown to be more effective on both growth inhibition and apoptosis induction, associated with increased PPAR gamma expression. In the aggressive triple negative MDA-MB-231 cell line, a single use of PFK5120 was associated with higher PPAR gamma expression and more effective cytotoxicity.
These data highlight that PIO and PFK5120 have potential therapeutic implications for breast cancer through their multiple cellular effects, which we associate with increased PPAR gamma expression. It is obvious that the use of these substances should be specific to the type of breast cancer, as in the current treatment protocols, due to their different effects according to the type of breast cancer.
Key Words: Cell Culture, Breast Cancer, Pioglitazone, Flavonoid, PPAR-gamma
The present work was supported by the Research Fund of Istanbul University. Project No. 35035