Vinca türlerinden elde edilen ekstraktların, vincristin ve vinblastin ile karşılaştırmalı olarak multiple miyeloma hücre hatları üzerine sitotoksik ve apoptotik etkilerinin araştırılması
The investigation of comparative cytotoxic and apoptotic effects of the extracts obtained from vinca species, vincristine and vinblastine on multiple myeloma cell lines
Yazar: ELA NUR ŞİMŞEK SEZER
Danışman: PROF. DR. TUNA UYSAL
Selçuk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Multipl miyelom, kemiklerde ve kemik iliğinde kanserojen hücrelerin birikimine neden olan patolojik plazma hücreleri ile karakterize edilen sistemik bir hastalıktır. Yeni ilaçların geliştirilmesi ve bitkisel preparatların tedaviye destek olarak kullanılmalarına rağmen multipl miyelom hala tam tedavi edilemez bir hastalıktır.
Bu tez çalışmasında Vinca türlerinden (Vinca herbacea Waldst. & Kit. ve Vinca soneri Koyuncu) elde edilen ekstraktların multipl miyelom üzerindeki sitotoksik ve apoptotik etkileri, kanser tedavisinde kemoterapide sıklıkla tercih edilen Catharanthus roseus bitkisinden elde edilen vinka alkoloidlerinden vincristin ve vinblastin ile karşılaştırmalı olarak ortaya konulmaya çalışılmıştır. Ekstraktların alkoloid içeriği daha önce belirlenmiş olmasına rağmen fenolik madde içeriği ilk kez bu çalışmada HPLC tekniği ile belirlenmiştir. Çalışmamızda, farklı doz ve zaman aralıklarında uygulanan ekstraktların multipl miyelom hücreleri üzerindeki sitotoksik ve anti-proliferatif etkilerini belirlemek için WST-1 testi, apoptotik etkilerini ortaya koymak için ise DNA fragmantasyonu, Real Time PCR, kaspaz enzim aktivitesi ve flow sitometri teknikleri kullanılmıştır. HPLC analizi ile ekstraktlarda 17 fenolik madde için miktar tayini yapılmıştır. WST-1 testi sonucunda Vinca ekstraktlarının özellikle V.herbacea'den elde edilen ekstraktın multipl miyelom hücreleri üzerinde doza ve zamana bağımlı sitotoksik etki gösterdiği tespit edilmiştir. Bunun yanı sıra DNA'da fragmantasyon, BAX, BIK, p53, kasp3 gibi pro-apoptotik gen ekspresyonlarında ve kaspaz 3 enzim aktivitesinde artış gözlenmesi ekstraktların multipl miyelom hücrelerini apoptoza yönlendirdiğini göstermektedir. Sonuç olarak, Vinca türlerinden elde edilen ekstraktların multipl miyelom hücreleri üzerinde önemli oranlarda sitotoksik ve apoptotik etkileri olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
Multiple myeloma is a systemic disease characterized by pathological plasma cells that cause the accumulation of carcinogenic cells in the bones and bone marrow. Despite the development of new drugs and the use of herbal preparations as treatment support, multiple myeloma remains untreatable.
In this thesis, the cytotoxic and apoptotic effects of extracts from Vinca species (Vinca herbacea Waldst. & Kit. And Vinca soneri Koyuncu) on multiple myeloma have been tried to be compared with vinca alkaloids which extracted from Catharanthus roseus, vincristine and vinblastine which are frequently preferred in chemotherapy. Although, the alkoloid content was determined previous studies, the phenolic content of the extracts was determined by HPLC technique for the first time in this study. In our study, WST-1 test was used to determine the cytotoxic and anti-proliferative effects of extracts applied on myeloma cells at different doses and time intervals, and DNA fragmentation, Real Time PCR, caspase enzym activity and flow cytometry techniques were used to reveal apoptotic effects. Quantitative determination of 17 phenolic substances in the extracts were made by HPLC analysis.  The result of WST-1 test, it was found that Vinca extracts, especially V.herbacea extract, had a dose and time-dependent cytotoxic effect on multiple myeloma cells. In addition, DNA fragmentation, an increase in pro-apoptotic gene expressions such as BAX, BIK, p53, casp3 and an increase in caspase 3 enzyme activity indicate that the extracts direct apoptosis of multiple myeloma cells. As a result, it has been determined that extracts from Vinca species have cytotoxic and apoptotic effects on multiple myeloma cells.