İnsan nöroblastom hücre hattında glikoziltransferazların prognostik rollerinin belirlenmesi
Determination of the prognostic roles of glycosyltransferases in the human neuroblastoma cell line.
Yazar: DİLARA BENİM
Danışman: PROF. DR. ELVAN BAKAR
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Eczacılık Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Endoplazmik retikulum stresi = Endoplasmic reticulum stress ; Glikoliz = Glycolysis ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Prognoz = Prognosis ; Transferazlar = Transferases ; Tunikamisin = Tunicamycin

Özet:
Nöroblastom, çocuk döneminde görülen ekstrakraniyal solid bir tümördür. Çocuklarda görülen tümörler arasında yaygın oranda görülmesi ve agresif prognozu nedeni ile oldukça önemlidir. Hücre yüzeyinde meydana gelen glikosilasyon değişiklikleri pek çok hastalığın ortaya çıkmasında ve ilerlemesinde önemlidir. Tümör hücreleride gözlemlenen bu değişiklikler glikozilasyonda rol oynayan glikosiltransferazların ve glikosidazların ekspresyon seviyelerinde veya aktivitesinde meydana gelen değişikliklere bağlı olarak ortaya çıkmaktadır. Spesifik glikosilasyon inhibitörleri, biyolojik süreçlerde glikosilasyonun rolünü aydınlatmak amacı ile yaygın olarak kullanılmaktadırlar. Çalışmamızda, N-bağlı glikozilasyon inhibitörü olduğu bilinen Tunikamisin'in SH-SY5Y hücre hattı üzerinde 24 ve 48 saatlik süre ile uygulanmıştır. 24 saatlik MTT sonuçlarında tunikamisinin dozu 7.746 µM, 48 saatte ise 91.477 µM bulunmuştur. Tunikamisin uygulanmış deney gruplarında α-2,8-sialiltransferaz 8B, β1,6-N-asetilglukozaminiltransferaz V, N-Asetilgalaktozaminiltransferaz 3, β1,3-N-asetilglukosaminiltransferaz-3 ile K-RAS proto-onkogen, H-RAS proto-onkogen, Raf-1 proto-onkogen Serin/Treonin Kinaz, Mitojen aktifleştiren kinaz ve hücre dışı sinyalin aktiflediği kinazların, gen ekspresyon düzeyleri qRT-PCR yöntemi ile araştırılmıştır. Tunikamisin'in, SH-SY5Y hücre hattı üzerinde 24 ve 48 saatlik uygulama sürelerinde glikolizasyon enzim düzeyleri üzerine farklı etkilere sahip olduğunu görülmüştür. 24 saatlik Tunikamisin grubunda β1,6-N-asetilglukozaminiltransferaz V ve N-Asetilgalaktozaminiltransferaz 3 ekspresyon düzeylerinin kontrol grubu ile karşılaştırıldığında azaldığı görülmüştür. Alfa-2,8-sialiltransferaz 8B ve β1,3-N-asetilglukosaminiltransferaz-3 ekspresyonları her iki deney grubunda da kontrole göre yüksek bulunmuştur. Bu anlamda SH-SY5Y, hücre hattında Tunikamisin'in glikozilasyon mekanizması üzerinde etkili olabileceği belirlenmiştir.

Abstract:
Neuroblastoma, a solid extracranial tumor that commonly affects children, Its high prevalence among pediatric tumors and aggressive prognosis make it extremely significant. The emergence and development of many diseases are largely dependent on changes in glycosylation that take place on the cell surface. These modifications are due to changes in the expression levels or activities of the glycosyltransferases and glycosidases, which are involved in glycosylation, in tumor cells. The use of specific glycosylation inhibitors to define the role of glycosylation in biological processes is too common. In our study, Tunicamycin, known to be an N-linked glycosylation inhibitor, was applied on the SH-SY5Y cell line for 24 and 48 hours. In the 24-hour results, the dose of tunicamycin was 7,746 µM, and 91,477 µM in 48 hours. The levels of expression in the Tunicamycin group of 2,8-sialyltransferase 8B, 1,6-N-acetylglucosaminyltransferase V, N-Acetylgalactosaminyltransferase 3 and 1,3-N-acetylglucosaminyltransferase-3, as well as the proto-oncogenes K-RAS, H-RAS, Raf-1, Mitogen-Activated Kinase and Extracellular Signal-Activated Kinases, were investigated by qRT-PCR. At 24 and 48 hours after administration, Tunicamycin was found to have different effects on the glycosylation enzyme levels in the SH-SY5Y cell line. When compared to the control group, the expression levels of 1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase V and N- acetyl galactosaminyltransferase 3 were lower in the 24-hour Tunicamycin group. 
The expression levelsof 1,3-N-acetylglucosaminyltransferase-3 and α-2,8 sialyltransferase  8B was higher in both experimental groups compared to the control. In this sense, it has been determined that in the SH-SY5Y cell line, Tunicamycin treatment may be effective in the glycosylation mechanism.