Endometrial dokudaki T hücrelerin ve sitokinlerin açıklanamayan infertilitedeki rolü
Role of endometrial tissue T cells and cytokines in unexplained infertility
Yazar: ENVER ÇIRACI
Danışman: PROF. DR. ŞERMİN TETİK
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Endometriyum = Endometrium ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-kadın = Infertility-female ; Lenfositler = Lymphocytes ; Sitokinler = Cytokines ; T lenfositleri = T lymphocytes ; T lenfositleri-düzenleyici = T lymphocytes-regulatory

Özet:
Amaç: T hücreler ve sitokinler gebelikte immün toleransın sağlanması için gerekli aracı moleküller olabilirler. Bu çalışma ile, endometrial dokudaki yardımcı T hücrelerinin (Th1, Th2, Th17), regülatör hücrelerin (Treg) ve sitokinlerin ekspresyon düzeylerindeki değişikliklerin takip edilmesi ve aralarındaki korelasyonun değerlendirilmesi ile immünolojik infertiliteye yeni bir tanısal yaklaşımın sağlanması amaçlanmıştır.  
Gereç-Yöntem: 34 fertil ve 52 açıklanamayan infertilitil   olguların menstrüal döngülerinin 21.-24. günleri arasında yapılan biyopsi ile endometrial doku örnekleri elde edilmiştir. Doku örneklerinden ilk olarak total RNA izolasyonu klasik yöntemle yapılmış ve izole edilen RNA'ların konsantrasyonları nanodrop (ND1000) ile ölçülmüştür. Bu çalışmada, IL17-A, IL-20, IL-10, IL-12, TGF-β, IL-8, TNF-α, LIF'ün mRNA ekspresyonları gerçek zamanlı kantitatif PCR (Stratagene M*3005P Agilent Technologies Model no: 401513 Seri no:DE94300617) ile belirlenmiştir.
Bulgular: Açıklanamayan infertil grup ile fertil grubun yaş, VKI, FSH, LH, PRL, TSH, ST4 ve progesteron düzeyleri arasında istatiksel olarak anlamlı bir fark tespit edilememiştir (p>0.05). Açıklanamayan İnfertil olguların ve kontrol grubunun   IL-17A, IL-10, IL12A, TGF, IL20, IL8, TNF ve LIF mRNA ekspresyon düzeyleri karşılaştırıldığında, IL-17A, IL12A ve LIF mRNA ekspresyon düzeyleri kontrol grubunda anlamlı düzeyde yüksek çıkmıştır. (p<0.05). IL-10 mRNA ekspresyonları ise açıklanamayan infertil olgularda yüksek bulunmuştur (p<0,05). Açıklanamayan infertil grupta sitokinlerin birbirleriyle olan korelasyonları spearman testi yapılarak incelendi ve sitokinler arasında pozitif korelasyon bulunmuştur (p<0.05).
Sonuç: Çalışmamızın sonuçları ışığında, açıklanamayan infertil hastaların endometriyumunda IL-17A, IL12A, TNF ve LIF ekspresyonlarındaki değişim, bu olgularda infertilitenin potansiyel hücresel ve moleküler mekanizmalarından biri olabileceğini ve immünolojik infertilite için birer belirteç olabileceğini düşündürmektedir. Daha ayrıntılı kompleks mekanizmaların anlaşılması, kadın infertilitesi için yeni terapötik olanaklar sağlayabilir. Standart tanısal testler ile açıklanamayan infertilite tanısı konan hastalarda ve patogenezin belirsizliği nedeniyle infertilitenin sebebine yönelik açığa kavuşmayan mekanizmaların aydınlatılması gerekmektedir. İnsan üremesindeki T hücrelerinin ve sitokinlerin etkilerini daha ayrıntılı olarak incelenmesi ve mekanizmalarının biyokimyasal, genomik ve proteomik verileri kullanan klinik ve temel bilim araştırmalar ile mümkün olacaktır. Yaptığımız bu çalışma sonucunda, açıklanamayan infertilite tanısında, standart testlere ek olarak immümolojik faktörlerin de tanıda etkin rol oynayabileceği düşünülmelidir.
Anahtar Kelimeler: Açıklanamayan infertilite, sitokin, Th1, Th2, Th17, Treg

Abstract:
Aim: T cells and cytokines may be mediators necessary for immunological tolerance in pregnancy. This study aims to provide a new diagnostic approach to immunological infertility by monitoring changes in the mRNA expression levels of the helper T cells (Th1, Th2, Th17), regulatory cells (Treg) and cytokines in the endometrial tissue and evaluating the correlation between them.
Material-Method: Endometrial tissue specimens were obtained by biopsy performed between days of 21- 24 of the menstrual cycles of 34 fertile and 52 unexplained infertile cases.  IL-10, IL-12, TGF- beta, IL-8, TNF, and IL-10 were measured by measuring the concentrations of RNAs isolated using conventional methods and measuring the concentrations of isolated RNAs using the NanoDrop - α, LIF mRNA expressions were determined by real-time quantitative PCR (Stratagene M * 3005P Agilent Technologies Model no: 401513 Serial no: DE94300617).
Results: There was no statistically significant difference between the unexplained infertile group in terms of  age, BMI, FSH, LH, PRL, TSH, ST4 and progesterone levels in the fertile group (p> 0.05). When IL-17A, IL-10, IL-12A, TGF-β, IL20, IL8, TNF-α and LIF mRNA expression levels of unexplained infertility cases and control group were compared, IL-17A, IL12A and LIF mRNA expression levels were significantly higher in the control group. (P <0.05). IL-10 mRNA expressions were higher in unexplained infertile cases (p <0.05). Correlations of cytokines with each other in the unexplained infertile group were examined by spearman test and positive correlation was found between cytokines (p<0.05).
Conclusion: In the lights of results of our study emphasize that changes in IL-17A, IL12A, IL-10 and LIF expressions in the endometrium of unexplained infertile patients may be one of the potential cellular and molecular mechanisms of infertility in these patients. Understanding the more elaborate complex mechanisms may provide new therapeutic possibilities for female infertility. Unexplained infertility requires more patient groups and more cytokines to be able to fully determine the role of cytokines. Infertility diagnosed by standard diagnostic tests and unambiguous mechanisms of infertility due to uncertainty of pathogenesis need to be elucidated. A more detailed examination of the effects of human urea will be possible with clinical and basic scientific research using biochemical, genomic and proteomic data from its mechanisms.

Key Words: Unexplained infertility, cytokin, Th1, Th2, Th17, Th17