Hepatosellüler karsinomaya neden olan genlerin gen ekspresyonunun kantitatif ölçümü
Quantitative measurement of gene expression of the genes causing hepatocellular carcinoma
Yazar: GÖNÜL ŞEYDA SEYDEL
Danışman: PROF. DR. KIYMET AKSOY
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Ergokalsiferol = Ergocalciferols ; Hücreler = Cells ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer yağlanması = Fatty liver ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Kistik fibroz = Cystic fibrosis ; Major histokompatibilite kompleksi = Major histocompatibility complex

Özet:
Hepatosellüler karsinoma genel olarak kronik karaciğer hastalığı veya siroz zemininde gelişmekte olan ve dünya genelinde en yaygın ölüm nedeni olan karaciğerin primer bir tümorüdür. Günümüzde bu kanser tipi için etkili tedavi yöntemleri yeterli olmadığından yeni terapatik stratejilere ihtiyaç duyulmaktadır.Bu tez çalışmasında hepatik stellat hücre hatlarında (LX-2, primer insan hepatik stellat hücre) ve hepatosellüler karsinoma hücre hatlarında (HepG2, Huh7), Vitamin D2 ve serbest yağ asidinin(FFA) stres ligand genleri olan MICA ile MICB ve profibrojenik genler olan COL1?, ?-SMA ve TGF-ß'nın gen ekspresyonu üzerine olan etkisi moleküler düzeyde çalışılmıştır. Çalışmada LX-2 hücre hattı, 24 saat boyunca VD2(10-6) ve 0,5mM, 1mM FFA ile, primer hepatik stellat hücre hattı, 24 saat boyunca VD2(10-6) ve 0,25mM FFA ile, HepG2 ve Huh7 hücre hatları ise 24, 48 ve 72 saat boyunca VD2(10-6) ve 0,5mM FFA ile tedavi edilmiştir. Gen ekspresyon düzeyleri qRT-PCR yöntemiyle ölçülmüştür. Çalışma sonucunda kontrol örneklerine kıyasla, 0,5 mM ve 1 mM FFA'lı tedavinin LX-2 hücrelerinde ?-SMA ve TGF-ß'nın gen ekspresyonunu indüklediği,VD2'nin FFA ile indüklenen ?-SMA ve TGF-ß'nın ekspresyonunu önemli düzeyde azalttığı, hemVD2'li hem de FFA'lı tedaviden sonra COL-1?'nın ekspresyonun önemli düzeyde azaldığı gözlenmiştir. LX-2 hücre hattında VD2'nin MICA ve MICB gen ekspresyonunu etkilemediği, Primer stellat hücre hattında ise VD2'nin MICA gen ekspresyonunu etkilediği, fakat FFA'nın MICA ve MICB gen ekspresyonunun etkilemediği gözlenmiştir. HepG2 hepatosellüler karsinoma hücre hattının VD2 tedavisinden sonra MICA ve MICB gen ekspresyonunun etkilendiği, Huh7 hücre hattında ise VD2'nin 72 saatlik tedaviden sonra MICB gen ekspresyonunu etkilediği gözlenmiştir. Bu çalışmanın sonucunda in vitro ortamda VD2'nin hepatik stellat hücrelerin profibrojenik ve inflamatuar aktivitesini etkilediği gözlenmiştir.Anahtar Sözcükler: Hepatosellüler karsinoma, hepatik stellat hücreler, MICA/B, Vitamin D2

Abstract:
Hepatocellular carcinoma (HCC), the major type of primary liver cancer, is one of the most common malignancies worldwide.This malignant tumor develops on a back ground of chronic hepatitis or cirrhosis. Effective therapy to this cancer is currently lacking, creating an urgent need for new therapeutic strategies for HCC.The aim of this study was therefore to investigate the effect of vitamin D2 and free fatty acids (FFA) on stress ligands (MICA and MICB) and pro-fibrotic activity (?-SMA COL1? and TGF-ß) in hepatic stellat cells (LX-2 cells and human primary HSC) and hepatocellular carsinoma cells (HepG2, Huh7). LX-2 cells were treated with VD2 (10-6 M) and 1 mM FFA for 24 hours, primary human HSC were treated with VD2 (10-6 M) and 0,25 mM FFA for 24 hours, HepG2 and Huh7 cells were treated with VD2 (10-6 M) and 0,5 mM FFA for 24,48 and 72 hours and and expression of the genes were assessed by quantitative real time-PCR. In summary this study shows that compared to vehicle controls, treatment of cells with 0.5 mM and 1 mM FFA induced ? -SMA and TGF-ß expression in LX-2 cells. VD2 treatment significantly downregulated the FFA-induced expression of TGF-ß and ?-SMA in LX-2 cells. COL1? expression was reduced after addition of FFA. Moreover, VD2 treatment significantly downregulate expression of MICA in isolated primary HSC and MICA/B expression in primary HSC was not affected by FFA treatment. Also, in HepG2 cells a significant decrease of MICA and MICB mRNA by VD2 was detectable. Following VD2 treatment for 72 hours of Huh 7 cells significantly downregulate expression of MICB. These results indicate that vitamin D2 may reduce inflammatory and profibrogenic activity of stellate cells in vitro.Key Words: Hepatocellular carcinoma, Hepatic stellate cells, MICA/B, Vitamin D2