Kıvırcık cüce koşin(Gallus gallus)testisindeki bazı glikokonjugatların lektin histokimyasal olarak belirlenmesi
Lectin histochemical determination of some glycoconjugates in the testes of curly dwarf cochin (Gallus gallus)
Yazar: ŞEYDA BÜYÜKYILDIRIM
Danışman: YRD. DOÇ. DR. KENAN ÇINAR
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu tez çalışması Kıvırcık Cüce Koşin (Gallus gallus) horoz testisinin histolojik yapısının ve bu dokudaki bazı glikokonjugatların (α-D-Man, α-D-Glc, N-asetil-D-Galaktosamin, Fucα1-2Gal-R, Galactose b1,3-N-acetylgalactosamine a1-, GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc,Neu5Ac) lektin (Con A, SBA, UEA-I, PNA, WGA) histokimyasal yöntemle belirlenmesi amaçlandı. 
Çalışmada araştırma materyali olarak Süleyman Demirel Üniversitesi Ziraat Fakültesi Çiftçi Eğitim ve Tarımsal Uygulama kümesinden temin edilen sağlıklı, erişkin 6 adet horoza ait testisler materyal olarak kullanıldı. Çalışma, Süleyman Demirel Üniversitesi Hayvan Deneyleri Etik Kurulu (HADYEK) onayı (karar tarihi: 07.01.2014/ karar no: 3957-yl1-14) kapsamında gerçekleştirildi. Alınan testis dokuları, Bouin solusyonunda 16 saat süreyle tespit edildi. Tespit işleminden sonra rutin histolojik doku takibinden geçirilen örnekler parafinde bloklandı. Parafin bloklardan 5-6 µm kalınlığında alınan kesitlere  genel histolojik yapının belirlenmesi için Masson'un üçlü boyama metodu uygulandı. Glikokonjugat içeriğinin belirlenmesi amacıyla alınan doku kesitleri horseradish peroxidase  (HRP) bağlı Canavalia ensiformis aglutinin (Con A), Glycine max aglutinin (SBA), Ulex europaeus aglutinin (UEA-I), Arachis hypogaea aglutinin (PNA) ve Triticum vulgaris aglutinin (WGA) lektinleri ile inkübe edildi.

Uygulanan lektin histokimyasal yöntemler sonucunda spermatagonyum ve Leydig hücrelerinde çok güçlü Con A reaksiyonu gözlenirken, lamina proprianın peritübüler hücrelerinde reaksiyona rastlanmadı. Primer spermatositlerde orta yoğunlukta PNA, çok güçlü WGA reaksiyonu gözlendi. Buna karşılık bazal laminada SBA'ya karşı reaksiyon gözlenmezken, UEA-I'e karşı çok güçlü reaksiyon saptandı. Sertoli hücrelerinde Con A, SBA ve UEA I lektinlerinde orta yoğunlukta, PNA ve WGA' da ise zayıf reaksiyon tespit edildi. 

Sonuç olarak, farklı gelişim aşamasında olan spermatojenik hücrelerin tüm glikokonjugatları içerdikleri belirlendi. Sekonder spermatosit ve erken dönem spermatid aşamasındaki hücrelerdeki  α-D-Man, α-D-Glc (Con A) ve Fucα1-2Gal-R (UEA-I) içeriğinin diğer aşamalara göre az olduğu, tüm hücrelerin yoğun miktarda GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc,Neu5Ac (sialik asit) (WGA) içerdiği saptandı. Leydig hücrelerinin çok yoğun miktarda tüm glikokonjugatlara sahip olduğu belirlendi. Böylece kanatlı türlerinde testislerde meydana gelen spermatogezisin hangi aşamasında ne tür özellikte şeker birimlerinin etkili olduğu ortaya çıkarıldı ve kanatlı üreme biyoloji çalışmalarında spermatogenezisin düzenlenmesinde şekerlerin ne şekilde etkili olacağı tarzındaki çalışmalara katkı sağlayacağı düşünülmektedir.

Abstract:
This thesis study was aimed to determine the histological structure of Curly Dwarf Cochin (Gallus gallus) cock's testicle, and the distribution of some glycoconjugates (α-D-Man, α-D-Glc, N-acetyl-D-Galactosamine, Fucα1-2Gal-R, Galactose ß1,3-N-acetylgalactosamine, GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc, Neu5Ac) in this tissue by using some lectins (Con A, SBA, UEA-I, PNA, and WGA) through  lectin histochemical method. 
Testicles of 6 healthy, adult cocks provided from Farmers' Training and Agricultural Practices Center (Süleyman Demirel University, Faculty of Agriculture) were used as study material. The study protocol was approved by Animal Experiments Local Ethics Committee (HAYDEK) of Süleyman Demirel University (Approval date: 07.01.2014, Decision No: 3957-yl1-14) in accordance with the guidelines of the International Association for the Study of Pain. The testicle specimens were immediately immersed in Bouin's fluid, and fixed for 16h at room temperature. After fixation, the samples subjected to routine histological tissue processing were embedded in paraffin. Serial 5-6 µm thick sections were cut and collected on albumin-coated slides. Masson trichrome staining was carried out to demonstrate the general histological structure. The sections were incubated with the horseradish peroxidase (HRP)-conjugated Canavalia ensiformis agglutinin (Con A), Glycine max agglutinin (SBA), Ulex europaeus agglutinin (UEA-I), Arachis hypogaea agglutinin (PNA) and Triticum vulgaris agglutinin (WGA) lectins in order to determine the glycoconjugate content and distribution.
Lectin histochemistry results indicate that spermatagonium and Leydig cells reacted very strongly with Con A lectin, but the peritubular cells of the lamina propria did not react with this lectin. A moderate reaction to PNA and very strong reaction to WGA were observed in primary spermatocytes. It was noticed that it reacted very strongly with UEA-I lectin while SBA lectin did not bind to the basal lamina. A moderate reaction to Con A, SBA and UEA-I, and weak reaction to PNA and WGA were detected in Sertoli cells.
In conclusion, it has been determined that spermatogenic cells at different stages of development contain all glycoconjugates. It has been detected that secondary spermatocytes and early spermatids contain less α-D-Man, α-D-Glc (Con A) and Fucα1-2Gal-R (UEA-I) than the other stages, and that all cells produce a large amount of GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc, Neu5Ac (sialic acid) (WGA). Leydig cells were found to contain plenty of all glycoconjugates. The results reveal, therefore, that what kind of sugar units are effective in which stages of spermatogenesis that occurs in the poultry testicles. In addition, it has been expected that our present study will contribute to the studies such as what kind of roles these sugars will play in the regulation of spermatogenesis in the researches into reproductive biology of poultry.