Sıçanlarda tek taraflı obstrüksiyon modelinde apelin ve apelin reseptör antagonisti ala-apelinin renal fibrozis üzerine etkileri
Effect of apelin and apelin receptor antagonist ala-apelin on renal fibrosis in unilateral ureter obstruction model in rats
Yazar: GÜRDAL BİRDAL
Danışman: PROF. DR. MEHMET KOÇ
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Dahiliye Ana Bilim Dalı / Nefroloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2014
Konu: Nefroloji = Nephrology
Dizin: Apelin = Apelin ; Böbrek hastalıkları = Kidney diseases ; Böbrek yetmezliği-kronik = Kidney failure-chronic ; Fibroz = Fibrosis ; Renal dolaşım = Renal circulation ; Sıçanlar = Rats ; Üreter tıkanmaları = Ureteral obstruction

Özet:
AMAÇ: Tek taraflı üreter obstrüksiyonu (UUO) iyi bilinen bir renal fibrozis modeli olup
obstrükte böbrekte tübüler hasar ve interstisyel inflamasyonla karakterizedir.Apelin, APJ reseptörünün endojen ligandı olarak tanımlanmış bir peptid olup kardiyovasküler sistemde anti-fibrotik etkilerinin olduğu, buna karşın APJ reseptör blokajının ise hepatik fibrozisi azalttığı ve anjiyogenesisi baskıladığı gösterilmiştir.Bununla birlikte apelin sisteminin UUO modelindeki direk etkileri henüz çalışılmamıştır. Bu çalışmada, apelinin ve/veya APJ reseptör antagonisti ala-apelinin,UUO modelinde inflamasyon ve fibrozis gelişimini baskılayıp baskılamadığını incelemeyi amaçladık.
GEREÇ ve YÖNTEM: Erkek Wistar albino sıçanlara ketamin anestezisi (100 mg/kg; intraperitoneal, ip) altında sol üreterleri bağlanarak UUO yapıldı. Bir grup sıçana ise sol üreterlerine bağlama yapılmaksızın abdominal inzsizyon yapıldı (kontrol grubu). Sıçanlara günlük ip sderum fizyolojik (SF, grubu, n=8) veya apelin (50μg/kg/gün, apelin grubu, n=8) veya apelin reseptör antagonisti ala-apelin (75μg/kg/gün, ala-apelin grubu, n=8) 7 gün süreyle uygulandı. Kontrol grubuna ise 7 gün boyunca ip serum fizyolojik enjekte edildi. Yedinci günün bitiminde UUO uygulanan böbrek çıkartılarak flow sitometrik analiz için lökositler izole edildi ve böbrek dokusu histopatolojik değerlendirmeler için ayrıldı.
BULGULAR: Obstrükte böbreği infiltre eden CD3+ T-lenfositler, CD4+ T-lenfositler,CD8+ T-lenfositlerin yüzdesi ve CD3+/CD8+ oranı SF, apelin ve ala-apelin ile tedavi edilen gruplarda kontrol grubuna kıyasla anlamlı olarak arttı. CD4+ T-lenfositlerin yüzdesi apelin grubunda, CD3+/CD8+ oranı ise hem apelin hem de ala-apelin grubunda SF grubuna kıyasla anlamlı olarak azaldı. α-SMA ekspresyonu SF grubunda kontrol grubuna kıyasla anlamlı olarak arttı. Buna karşın,α-SMA ekspresyonu apelin ve ala-apelin gruplarında SF grubuna kıyasla anlamlı olarak baskılandı. Masson-trikrom boyası ile belirlenen fibrozis skoru SF grubunda kontrol grubuna kıyasla anlamlı olarak artmakla birlikte apelin ve ala-apelin gruplarında
fibrozis skorunda baskılanma izlenmedi.
SONUÇ: Bulgularımız α-SMA ekspresyonunun apelin ve ala-apelin gruplarında baskılandığını göstermektedir. Apelin uygulanması yada APJ reseptörünün ala-apelin ile blokajı UUO modelinde fibrozis gelişimini önlemedi. Buna karşın, apelin uygulaması ile CD4+ T-lenfosit infiltrasyonunda izlenen baskılanma obstrüksiyona bağlı tübüler hasarı önlemede potansiyel rol oynayabilir.

Abstract:
BACKGROUND: Unilateral ureteral obstruction (UUO) is a well-characterized fibrosis model exhibiting tubular injury and interstitial inflammation in the obstructed kidney.Apelin, a peptide identified as the endogenous ligand of the human orphan G-proteincoupled receptor (APJ), is reported to have anti-fibrotic and anti-inflammatory actions in the cardiovascular system, while the blockade of APJ receptor was shown to be effective in reducing hepatic fibrosis and angiogenesis. However, the role of Apelin in the development of UUO model has not yet been elucidated. In this study, we aimed to determine the possible beneficial effects of of apelin or ala-apelin in renal fibrosis by using UUO model.
METHODS: In male Wistar albino rats under ketamine anesthesia (100 mg/kg;intraperitoneally, ip) UUO was performed by ligating left ureters. The rats were injected ip with either saline (SF group, n=8) or apelin (50 μg/kg/day, apelin group,n=8) or the apelin receptor blocker ala-apelin (75 μg/kg/day, ala-apelin group, n=8)for 7 days. A sham operetaed but saline injected group served as control. On the 7th day, obstructed and non-obstructed kidneys were removed for the isolation of leukocytes by flow cytometry and for the assessment of histopathological and immunohistochemical changes.
RESULTS: The percentages of CD3+ T-lymphocytes, CD4+ T-lymphocytes, CD8+ Tlymphocytes and the ratio of CD3+/CD8+ T-lymphocytes infiltrating obstructed kidneys were increased in the SF, apelin and ala-apelin groups as compared to sham group. The percentages of CD4+ T-lymphocytes decreased in apelin group as compared to SF group. The ratio of CD3+/CD8+ lymphocytes infiltrating obstructed kidneys were decreased by both apelin and ala-apelin treatment. The scores of α-SMA expression was increased in SF group compared to sham-conntrol group.However, the scores of α-SMA expression decreased in both apelin and ala-apelin treatment groups as compared to SF group. Interstitial fibrosis score determined by
Masson-trichrome staining was increased in saline treated group compared to shamcontrol
group. However, the fibrosis scores in the apelin and ala-apelin treated groups were higher than SF group.
CONCLUSION: The present data demonstrate that α-SMA expression was decreased in both apelin and ala-apelin goups. However, neither apelin nor blockade of APJ receptor with ala-apelin prevented fibrosis in UUO. However, apelin by decreaseing the infiltration of CD4+ T-lymphocytes may have a regulatory role in protecting against obstruction-induced tubular injury.