Brusellozlu hastalarda eksozom profilinin değerlendirilmesi
Analysis of exosome profile in patients with brucellosis
Yazar: ABDURRAHMAN ŞİMŞEK
Danışman: PROF. DR. FERAH BUDAK
Bursa Uludağ Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Brusella = Brucella ; Bruselloz = Brucellosis ; Eksozomlar = Exosomes ; Fenotip = Phenotype

Özet:
Bruselloz, etkeni Brucella bakterileri olan dünya çapında zoonotik bir
enfeksiyondur. Eksozomlar, birçok hücre tipi tarafından salınan multiveziküler
gövdelerden türetilen küçük lipit veziküllerdir. Eksozomal hücre kargosu,
kökenlendiği hücrenin tipini yansıtır. Bu çalışmada akut, kronik bruselloz ve sağlıklı
kontrollerden alınan serum örneklerinden elde edilen eksozomların Akan Hücre
Ölçer (AHÖ) yardımıyla immünfenotiplemesini yapmak, farklı gruplarda
eksozomların hangi hücre gruplarından köken aldığını belirlemek, brusellozun
kronikleşmesinde, eksozomların etkisini ortaya koymak ve bruselloz
immünpatogenezinde eksozomların potansiyel rollerine dair literatüre katkılar
sunmak amaçlanmıştır.
Çalışmamıza, bruselloz tanısı konmuş 10 akut ve 10 kronik hasta ile 10
sağlıklı kontrol dahil edilmiştir. Serum örneklerinden eksozomlar ticari izolasyon kiti
kullanılarak elde edilmiştir. Önceden tasarlanan panelde, monoklonal antikorlarla
boyandıktan sonra, AHÖ 'de eksozomların immünfenotiplemesi yapılmıştır.
Eksozom varlığının doğrulanması, eksozoma spesifik monoklonal antikorlar
olan CD9, CD63 ve CD81 boyamaları ve elektron mikroskobu (SEM)
değerlendirmeleriyle yapılmıştır. Değerlendirme sonucuna göre granülosit kökenli
eksozom değerleri akut grupta, kronik ve sağlıklı gruba göre anlamlı derecede
yüksek çıkmıştır, bunun yanında kronik ve sağlıklı grup arasında anlamlı bir fark
gözlenmemiştir. G-MDSC (granülositik-myeloid kökenli süpressör hücreler) kökenli
eksozom değerleri, akut grupta kronik ve sağlıklı gruba göre anlamlı derecede
yüksek bulunmuştur, aynı zamanda kronik grup ve sağlıklı kontrol grubu arasında
anlamlı derecede farklılık gözlenmiştir.
Tez çalışması sonucunda, akut dönemde hastalığın patogenezinde granülosit
kökenli eksozomların rol oynadığı ve ortamda bulunan myeloid kökenli supressör
hücrelerden kaynaklanan eksozomlarında granülosit kökenli eksozomlar olduğu
bulunmuştur. Brusellozun farklı evrelerinde, granülosit kökenli ve G-MDSC kökenli
eksozomlar arasındaki anlamlı farklar, hastalığın immünpatolojisine, yeni
çalışmalarla birlikte önemli katkılar sunabilir.

Abstract:
Brucellosis is a worldwide zoonotic infection caused by a type
of bacteria from the genus Brucella. Exosomes are small lipid vesicles derived from
multi-vesicular bodies released by many cell types. The exosomal cell cargo reflects
the type of cell from which it originated. In this study, we aimed to perform
immunophenotyping of exosomes isolated from serum samples from acute, chronic
brucellosis and healthy controls using Flow Cytometry, determine from which cell
groups exosomes originate in different groups, reveal the effect of exosomes in the
chronicity of brucellosis, and contribute to the literature on the potential roles of
exosomes in the immunopathogenesis of brucellosis.
Our study included 10 acute and 10 chronic patients diagnosed with
brucellosis and 10 healthy controls. Exosomes from serum samples were extracted
using a commercial isolation kit. In the pre-designated panel, after staining with
monoclonal antibodies (mAbs), the exosomes were immunophenotyped using Flow
Cytometry.
Confirmation of the presence of exosome was performed by staining of
exosome-specific mAbs CD9, CD63 and CD81 and electron microscopy (SEM)
evaluations. According to the results of the evaluation, granulocyte and G-MDSC
(granulocyte-like myeloid derived suppressor cells) derived exosomes (%) were
significantly higher in the acute group compared to the chronic and healthy groups.
On the other hand, a significant difference was observed between the chronic group
and the healthy control in exosome values (%) originating from G-MDSC.
In this study, we found that granulocyte and G-MDSC-derived exosomes may
play a role in the acute phase responses of brucellosis. The significant differences
between granulocyte and G-MDSC-derived exosomes at different phases of
brucellosis may contribute to the immunopathology of the disease with new studies.