Williamsia marianensis kaynaklı kolesterol oksidazın E. coli'de heterolog ifadesi
Heterologous expression of williamsia marianensis induced cholesterol oxidase in E. coli
Yazar: ALAA KADHIM SHAREEF
Danışman: PROF. DR. BELGİN ERDEM ; DR. ÖĞR. ÜYESİ AHMED JASİM NEAMAH
Kırşehir Ahi Evran Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mühendislik Bilimleri = Engineering Sciences
Dizin: Dizi analizi = Sequence analysis ; Kolesterol = Cholesterol ; Moleküler klonlama = Molecular cloning

Özet:
En yaygın tedavi protokollerinin sınırlamaları ve sakıncaları vardır. Bu nedenle, etkili tedaviler bulmak birçok araştırmacının amacıdır.Terapötik peptitler, proteinler ve antikorlar dahil olmak üzere geleneksel farmasötiklere göre çok sayıda fayda sunan umut verici bir ilaç sınıfıdır. Williamsia marianensis'ten üretilen Kolesterol oksidaz'ın terapötik faydaları olduğu gösterilmiştir. Yanık ve kulak örnekleri, yara sürüntüleri, balgam ve idrar örnekleri önceden tanımlanmış izolatların geleneksel biyokimyasal tahlillerle tanımlandığını doğrulamak için alındı. Bu çalışmada, bir ekspresyon vektörüne (pET28b) özgü primerler ile PCR kullanarak kolestrol oksidaz genini klonlandı ve IPTG ile tanımladıktan sonra bunu E. coli (BL-21/DE3) Rosetta'da eksprese edildi. Gyncholestrol oksidaz (~500 bp), bir cox dizisi sağlamak üzere dizilendi ve Genscript Corporation, ABD tarafından sentez için gönderildi. Çift kısıtlamalı bir sindirim modeli gösterildi. pET-28a(+) cox-william elde edilen desen iki şeritten oluşmaktadır: bunlardan biri bir taşıyıcı plazmit (4200 bp) idi ve 2800 baz çiftinden oluşan bir iplik, kolesterol oksidaz genini taşıyordu. Sonuç olarak, kolesterol oksidaz geni başarıyla klonlandı ve eksprese edildi. Williamsia marianensis'ten üretilen kolestrol oksidaz, gelecekteki terapötik sonuçlarda kullanılacaktır.

Abstract:
Most common treatment protocols have limitations and drawbacks. Thus, finding effective treatments is the goal of many researchers. Therapeutic peptides are a promising class of drugs that offer numerous benefits over conventional pharmaceuticals including proteins and antibodies. Cholesterol oxidase, produced from Williamson marianensis, has been shown to have therapeutic benefits. Burn and ear samples, wound swabs, sputum and urine were obtained to confirm the identification of previously identified isolates by conventional biochemical assays. In this study, we were able to clone the cholestrol oxidase gene using PCR with primers specific to an expression vector (pET28b) and express it in E. coli (BL-21/DE3) Rosetta after identification with IPTG. Gyncholestrol oxidase (~500 bp) was sequenced to provide a cox sequence and submitted for synthesis by Genscript Corporation, USA. A double restriction digestion pattern was demonstrated pET-28a(+) cox-william. The obtained pattern consisted of two strands: one of them was a carrier plasmid (4200 bp) and a strand of 2800 base pairs carried the cholesterol oxidase gene. As a result, the cholesterol oxidase gene was successfully cloned and expressed. Cholestrol oxidase derived from Williamson marianensis will be used in future therapeutic outcomes.