Azospermi oluşturulan farelerde testis hasarının serum mikroRNA düzeyi ile belirlenmesi
Determination of testicular injury in mouse with azospermia via serum miRNA level
Yazar: SERDAĞ DEMİRÖREN
Danışman: PROF. DR. MAHMUT KEMAL ÖZBİLGİN
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Azospermi = Azoospermia ; Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Mikro RNA = Micro RNA ; Okludin = Occludin ; RNA = RNA ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide ; Sperm = Spermatozoa ; Testis = Testis ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta

Özet:
AMAÇ: Siklofosfamid (CP) alkilleyici, kemoterapötik ajandır. Kanser tedavilerinde yaygın olarak kullanılmaktadır ve birçok organ üzerinde özellikle gonadlar üzerinde zararlı etkileri bulunmaktadır. Bu çalışmada, farelerde CP uygulaması sonrasında ortaya çıkan testis hasarının, GDNF, Okludin ve TGF-β3 primer antikorları ile immunohistokimyasal teknik kullanılarak belirlenerek, kan ve doku örneklerindeki mir-34b ve mir-34c arasındaki ilişkinin tespit edilmesi amaçlandı. 
GEREÇ VE YÖNTEM: Manisa Celal Bayar Üniversitesi Deney Hayvanları Araştırma ve Uygulama Merkezi Laboratuvarları'ndan alınan sağlıklı 2 aylık erkek fareler (n:18) üç gruba ayrıldı. Kontrol grubuna hiçbir işlem uygulanmadı. Deney grubuna 5 gün boyunca intraperitoneal, günde bir kez 100 mg/ kg CP, sham grubuna ise aynı miktarda serum fizyolojik enjekte edildi. Son enjeksiyondan 24 saat sonra hayvanlar sakrifiye edilerek, testis dokuları ve kan örnekleri alındı. Dokular ve kan örnekleri immunohistokimyasal ve RT-PCR incelemeleri için takip edildi.
BULGULAR: Testis dokularının immunohistokimyasal incelenmesinde, kontrol grubu ve sham grubu ile karşılaştırıldığında, CP verilen grupta spermatogenik germ hücre sayısında, GDNF ve Okludin ekspresyonlarında azalma; TGF-β3'ekspresyonunda artış gözlendi. RT-PCR tekniği ile mir-34b ve mir-34c ekspresyonları incelendiğinde, doku örneklerinde CP verilen grupta belirgin azalma tespit edilirken, plazma örneklerinde yeterli ekspresyon gözlenmedi.
SONUÇLAR: Bu çalışmada, CP'nin neden olduğu testis hasarında GDNF, Okludin ve TGF-β3 ekspresyonlarının önemli rol oynadığı, doku örneklerinde mir-34b ve mir-34c ekspresyonlarında ortaya çıkan azalmanın, testis hasarının belirlenmesinde önemli bir marker olabileceği, ancak plazmada tespit edilebilmesi için daha ileri tetkiklere ihtiyaç olduğu sonucuna varıldı.
ANAHTAR KELİMELER: Siklofosfamid, testis, GDNF, Okludin, TGF-β3, miR34b/c

Abstract:
CAim: Cyclophosphamide (CP) is an alkylating, chemotherapeutic agent commonly used in cancer treatments and has a detrimental effect on many organs, especially gonads. In this study, we aimed to determine the relationship between GDNF, Okludin and TGF-β3 primary antibodies determined by immunohistochemical techniques and mir-34b and mir-34c in blood and tissue samples in testicular injury after CP administration in mice.
Materials and Methods: Eight weeks old male rats (n: 18) from Manisa Celal Bayar University Laboratory of Experimental Animals Research and Application Center were divided into three groups. No treatment was applied to the mice in the control group. Mice in the experimental group were injected 100 mg/kg CP intraperitoneally once daily for 5 days, and in the sham group the same amount of saline was injected. 24 hours after the last injection, the animals were sacrificed, and testicular tissues and blood samples were taken. Tissues and blood samples were analyzed by immunohistochemical and RT-PCR methods.
Results: Immunohistochemical analysis of testicular tissues showed a decrease in both spermatogenic germ cell count and GDNF and Okludin expressions, and an increase in TGF-β3' expression in the CP group compared to the control and sham group. When the expression of mir-34b and mir-34c were examined by RT-PCR technique, significant decrease was observed in tissue samples in the CP-treated group, but sufficient expression was not observed in plasma samples of the all groups.
Conclusion: In this study, it was concluded that the expression of GDNF, Okludin and TGF-β3 plays an important role in testicular injury caused by CP, and the decrease in the expression of mir-34b and mir-34c in tissue samples may be an important marker for the detection of testicular damage, however, further investigations are needed to detect them in plasma.
Keywords: Cyclophosphamide, testes, GDNF, Okludin, TGF-β3, miR34b/c