Bazı flavonoid bileşiklerinin kronik miyeloid lösemi hücrelerinde sitotoksisite ve P-gp aktivitesi üzerine etkileri
Some flavonoids compounds' effects on chronic miyeloid leukemia cells on cytotoxicity and P-gp activity
Yazar: FERDANE DANIŞMAN
Danışman: PROF. DR. HÜSNİYE BİRMAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Apigenin = Apigenin ; Apoptozis = Apoptosis ; Flavonoidler = Flavonoids ; Luteolin = Luteolin ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Flavonoidler insan diyetinde oldukça geniş bir yer tutan ve çeşitli bitkilerde bulunan doğal bileşiklerdir. Epidemiyolojik çalışmalarda, flavonoid içeren besinlerin tüketimi ile bazı kanser tiplerinin görülme oranının azadığı bazı çalışmalarda bildirilmiştir. Bazı flavonoidlerin hücre kültürlerinde çeşitli kanser tiplerinde sitotoksik etkiye sahip olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı lösemi hücre kültürlerinde apijenin, luteolin ve bizim elde ettiğimiz metilli bir flavonoid formu olan 6-hydroxyluteolin 6,7,3',4'-tetramethyl ether (sinensetin) bileşiklerinin lösemi tedavisinde kullanılan bir ilaç olan imatinib mesylate ile combine uygulandığında apoptotik etklierini araştırmaktır.
K562 hücreleri apigenin, luteolin, sinensetin ve antikanser bir ilaç olan imatinib mesilat ile muamele edilmiştir. Flavonoidlerin K562 üzerindeki hücre proliferasyonu üzerindeki etkileri  MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphentyltetrazolium bromide) testi ile değerlendirilmiştir.  Apigenin ve luteolinin, hücrelerin %50sini öldürdüğü konsantrasyon (İK50) hesaplanmıştır . Apoptoz üzerindeki etkileri Anneksin V-FITCH proteini ile akım sitometride değerlendirilmiştir. P-gp aktivitesi flow sitometri ile değerlendirildi.
Apigenin, luteolin ve sinensetin 25- 200 µM arasında, imatinib 5-50 µM arasında 72 saat çalışılmıştır. Sonuçlar aynı inkübasyon periyodunda anlamlı sitotoksik aktivite göstermiştir;  apigenin İK50: 140 µM, luteolin İK50:100 µM, imatinib İK50:5 µM.  Sinensetinin sitotoksik etkisi ise İK50: >200 µM olarak apigenin ve luteolinden düşük olarak tespit edilmiştir. Apigenin, luteolin ve 6-hydroxyluteolin 6,7,3',4'-tetramethyl ether ve imatinibin apoptotik etkileri sırasıyla % 50.21, %48.17,% 58.95, %0,17 olarak bulunmuştur. Flavonoidler tarafından P-gp aktivitesinin yükseltildiği gözlenmiştir. 
Sonuç olarak bu flavonoidlerin imatinib ile kombinasyonu, apoptotik mekanizma ile K562 hücreleri üzerindeki etkiyi arttırabilir. Sonuçlarımız kronik miyeloid lösemiden korunmada bu flavonların kemoterapötik ajan olarak kullanılabileceğinin göz önünde bulundurulabileceğini desteklemektedir. Ancak P-gp'nin artması nedeniyle, daha detaylı çalışmalara ihtiyaç olduğu görülmektedir.

Abstract:
Flavonoids are naturally occuring in plant foods,fruits and vegetables. Previous studies have been reported the association between dietary flavonoid intake and reduced cancer risk. Some flavonoids show great potential as cancer chemopreventive agents in cell culture studies. The present study was designed to evaluate possible chemopreventive effects of apigenin, luteolin and the recently synthesized N-desmethyl sinensetin (6-hydroxyluteolin 6,7,3',4'-tetramethyl ether) and its combination with imatinib on human chronic miyeloid leukemia cells. 
K562 cells were treated with apigenin,luteolin, sinensetin and imatinib mesylate (anticancer drug). Effect of flavonoids on K562 cell proliferation was detected by MTT (3-(4,5 dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphentyltetrazolium bromide) assay. The concentrations of the apigenin and luteolin causing 50% cells growth inhibition (IC50) were calculated. Apoptosis was measured by annexin V-FITCH accompanied by flow cytometry. P-gp activity was measured by flow cytometry.
Concentrations of apigenin,luteolin and sinensetin ranging from 25 to 200 µM and imatinib 5 to 50 µM for 72 h was studied. The results indicated significant cytotoxic activities with apigenin IC50:140 µM, luteolin IC50: 100 µM, imatinib IC50:5 µM for the same incubation period, against K562 leukemia cells. The cytotoxic potency of sinensetin at >200 µM concentration was lower than those of apigenin and luteolin. Apoptotic effect apigenin, luteolin and 6-hydroxyluteolin 6,7,3',4'-tetramethyl ether and imatinib % 50.21, %48.17,% 58.95, %0,17 were found respectively. P-gp activity was increased by flavonoids. 
Consequently, we found that the combination of these flavonoids and imatinib mesylate was able to enhance cytotoxic activity on K562 cells via apoptotic mechanisms. Our results suggest that the flavones could be considered as chemotherapeutic agents which may help to prevent human chronic miyeloid leukemia by apoptotic pathway. Because of increasing P-gp levels is need more detailed studies detailed studies about effects of flavonoids.