Helicobacter pylorinin birinci basamak tedavisinde kullanılan klaritromisin direncinin melting curve analizi ile saptanması
Determining clarithromycin resistance in helicobacter pylori in the first line therapy using melting curve analysis
Yazar: KEMALETTİN YILMAZ
Danışman: DOÇ. DR. AHMET UYGUN
GATA / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Gastroenteroloji = Gastroenterology

Özet:
Helikobakter pylori (H. pylori) enfeksiyonu dünyada en sık görülen kronik bakteriyel bir enfeksiyondur. H. pyloride tedavi yetersizliğinin en büyük sebebi, kullanılan antibiyotiklere karşı bakteriyel direnç ve ilaç alımına uyumsuzluktur. Klaritromisin direnci 23S rRNA noktasındaki mutasyondan kaynaklanır ve makrolidlerin ribozoma bağlanması engellenir. A2142G, A2143G mutasyonları en sık görülürken A2142C daha az görülür. Birinci basamak tedavide etkinliği kanıtlanmış tedavi protokollerinin kullanılması önemlidir. Eğer birinci basamak tedavisinde başarısızlık gözlenirse 2' ci ve 3' cü basamak tedavilerde başarı oranı daha da düşük olacaktır. Uygun ve etkili olmayan tedavi rejimleri H. pylori'nin direnç kazanmasına yol açarlar. H. pylorinin birinci basamak tedavisinde klaritromisin bazlı tedavi önerilmektedir.Klaritromisin rezistansının yüksek olduğu ülkelerde H. pyloriye karşı yapılacak antibiyotik duyarlılık ve direnç testleri önemlidir.Bu çalışmada; daha önce hiç klaritromisin kullanmamış, dispeptik yakınması olan hastaları incelemeye aldık. Antibiyoterapi öncesi primer klaritromisin direncini ölçmek PCR ile Melting Curve Analiz metodunu analiz etmeyi amaçladık. Çalışmaya 46 hasta alındı. Histopatolojik inceleme ve hızlı üreaz testi ile H. pylori pozitif çıkan hastalara lansoprazol 30 mgr 2x1, amoksisilin 1000 mgr 2x1, klaritromisin 500 mgr 2x1, 14 gün verildi. 8 hafta sonra kontrol endoskopi yapıldı ve biyopsiler alındı. Çalışmaya 14 erkek, 32 kadın olmak üzere 46 hasta alındı. Ortalama yaşları 37,05 ±11,57 idi. Tedavi sonrası 46 hastanın histopatoloji ile 18'inde (%39,1), PCR ile 26'sında (% 56,5) H. pylori pozitif bulundu. PCR ile Melting Curve Analizi yöntemi ile tedavi öncesi 4 biyopsi örneğinin primer direnç taşıdığını ve tedavi sonrası ise 4 biyopsi örneğinin sekonder dirence sahip olduğunu tespit ettik. DNA dizi analizi ile de tedavi öncesi grupta 6 hasta A2142-2143G(T) ve 5 hasta T2182C primer direncine sahipti. İki hasta her iki direnci birlikte taşıyordu. Tedavi sonrası grupta ise 4 hastada A2142-2143G ve 2 hastada T2182C mutasyonlarını saptadık. Her iki metod ile ortak olarak, tek bir hastada mutasyon tespit edildi. Sonuç olarak, tedavi öncesi klaritromisin rezistansını belirleyebilmek için tek başına PCR temelli Melting Curve Analizinin yeterli gelmeyeceğini gösterdik. Bu nedenle şu anda klaritromisin direncinin moleküler yöntemlerle belirlenmesinde; DNA dizi analizi gibi bir yöntemle kombinasyona ihtiyaç vardır

Abstract:
Determining Clarithromycin Resistance in H.pylori in the First-line Therapy Using Melting Curve AnalysisHelicobacter pylori(H. pylori) infection is the most common chronic bacterial infection in the world. Bacterial resistance against antibiotics and incompliance to therapy are major causes of failure of eradication. Resistance of H. pylori to clarithromycin is due to point mutations in 23S rRNA gene and these mutations cause blockage of macrolide-ribosome binding. The predominant mutations are A2142G and A2143G as well as a small number of A2142C mutations. First-line therapy should include the regimens that are proved to be effective. If treatment failure is seen in the first-line therapy, achievement rates fall in the second and third line therapies. Inappropriate and ineffective regimens lead to resistance of H. pylori to antibiotics. Clarithromycin- based therapy is recommended in the first-line therapy. In the countries with high prevalance of clarithromycin resistance, antibiotic susceptibility and resistance tests against H. pylori are important.In this report the patients admitted to gastroenterology policlinic who haven?t treated with clarithromycin are included. We aimed to determine melting curve analysis method with PCR whether useful in measuring primary clarithromycin resistance before antibiotherapy.46 patients were included in the study. H. pylori positive patients with histopathologic examination and rapid urease test are treated with lansoprasol 30mg 2x1, amoxycilline 1g 2x1 and clarithromycin 500mg 2x1 for 14 days. Patients were undergone control endoscopy and removed tissue samples 8 weeks after the initial endoscopy. 14 male and 32 female patients were included. Mean age was 37.05±11.57. 18(%39.1) of 46 patients were H. pylori positive with histopathologic examination and 26(%56.5) were H. pylori positive with PCR after treatment.4 tissue samples were found to have primary resistance before treatment and 4 samples had secondary resistance after treatment with Melting curve analysis with PCR. 6 patients had A2142-2143G(T) and 5 patients had T2182C primary mutations in pre-treatment group with DNA sequense analysis. 2 of these had mutations of both. 4 patients had A2142-2143G and 2 patients had T2182C mutations in post-treatment group. Only one common resistance was determined with two methods.Our results suggest that PCR based melting curve analysis may fail in determining clarithromycin resistance before therapy. Hence, combination with another method like DNA sequence analysis is needed for detecting clarithromycin resistance using molecular methods.