Otolog serum göz damlasında bulunan epitelyotrofik faktörlerin stabilitesi ve otolog serum göz damlasının mikrobiyal kontaminasyona karşı dayanıklılığı
Stability of epitheliotropic factors in autologous serum eye drops and  resistance of autologous serum eye drops to microbial contamination
Yazar: ZERRİN ALKAN
Danışman: PROF. DR. SAİT EĞRİLMEZ
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Göz = Eye ; Göz hastalıkları = Eye diseases ; Gözyaşları = Tears ; Gözyaşı fonksiyon testleri = Lacrymal function tests ; Kararlılık = Stability ; Serum = Serum

Özet:
Amaç: Otolog serum göz damlasında bulunan epitelyotrofik faktörlerin değişik saklama koşullarında stabilitesinin ve otolog serum göz damlasının mikrobiyal kontaminasyona karşı dayanıklılığının değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Sağlıklı 13 gönüllüden alınan kan örnekleri ile prezervan madde içeren yapay gözyaşı ve dengeli tuz solüsyonu (BSS) kullanılarak % 20 konsantrasyonda olmak üzere iki farklı şekilde otolog serum göz damlası hazırlandı.  Yapay gözyaşı ile hazırlanan otolog serum göz damlasında bulunan epitelyotrofik faktörlerin (Epidermal büyüme faktörü, EGF; transforme edici büyüme faktörü β1, TGF-β1; transforme edici büyüme faktörü β2, TGF-β2 ve fibronektin) konsantrasyonları 1. günde ELISA yöntemi ile ölçüldükten sonra örnekler hem  4°C'de saklanarak 15. günde ve 1. ayda, hem de -20°C'de saklanarak 1. ve 3. ayda ayrı ayrı epitelyotrofik faktör ölçümü için kullanıldı. Yapay gözyaşı ve BSS ile hazırlanan ve 4°C'de saklanan damlalardan sırasıyla 1., 4., 7., 14., 20. ve 30. günlerde;  -20°C'de saklananlardan ise 1., 3. ve 6. aylarda  kültür örneği alındı. Bunun yanında gerçek hayattaki durumu değerlendirmek amacıyla oküler yüzey hastalığı nedeniyle otolog serum damla ile tedavi edilen 43 hastanın poliklinik kontrolüne geldiği andaki kullanmakta olduğu damlalardan alınan örnekler mikrobiyal kontaminasyon açısından değerlendirildi.
Bulgular: Sağlıklı gönüllülerden hazırlanan otolog serum göz damlalarındaki epitelyotrofik faktörlerin 4°C'de 1 ay ve -20°C'de 3 ay boyunca stabil kaldığı saptandı. Ayrıca 4 °C'de saklanan otolog serum göz damlalarında 1 ay ve -20°C'de saklananlarda ise 6 ay boyunca mikrobiyal üreme olmadığı gözlendi. Bunun yanısıra 43 hastanın kullanmakta olduğu otolog serum damlalarından alınan örneklerin birinde (%2.32) küf mantarı (Alternaria türleri) ve Klebsiella oxytoca üredi.
Sonuç: Saklama koşullarına uyulduğu sürece otolog serum göz damlası 3 ay boyunca stabil kalabilmektedir. Otolog serum göz damlası kullanan hiçbir hastada oküler enfeksiyon bulgusu izlenmemiştir. Ancak hastalarda damlaların kontaminasyonuna bağlı gelişebilecek oküler enfeksiyon riski akılda tutulmalıdır.

Anahtar kelimeler: Otolog serum, Epitelyotropik faktör, Stabilite, Kontaminasyon

Abstract:
Aim: Aim of this study was to investigate the stability of epitheliotropic factors in autologous serum eye drops in different storage conditions and to evaluate  resistance of autologous serum eye drops to microbial contamination.
Method: After obtaining  blood from 13 healthy volunteers, supernatant serum was diluted with artificial tear drop and balanced salt solution (BSS) to 20%, creating to two different autologous serum eye drops. The concentrations of epitheliotropic factors (Epidermal growth factor, EGF; transforming growth factor-beta1, TGF-β1; transforming growth factor-beta2, TGF-β2 and fibronectin) in those autologous serum eye drops  preparations were determined ELISA at baseline and after different storage conditions: at 4°C for 15 days and 1 month; and at −20°C for 1 and 3 months. Samples were collected for culture at the day of preparation and  then on the  4, 7, 14, 20, and 30 th day from eye drops stored  at 4° C  and   1, 3 and 6 months stored at -20° C.  Also, to evaluate real life conditions, samples were collected for culture from eye drops of 43 patients being treated for ocular disease  with autologous serum eye drops during rutin clinical follow-up. 
Results: Epitheliotropic factors in autologous serum eye drops were stable at 4° C up to 1 month and at -20° C up to 3 months. None of autologous serum eye drops which were obtained from 13 healthy volunteers showed any microbial contamination. Only one (2.23%) sample from 43 patients autologous serum eye drops had positive culture for mold (Alternaria species) and Clebsiella oxytoca. 
Conclusion: Autologous serum eye drops can be sufficiently stable for up to 3 months, when stored properly. No ocular enfection was detected in patients using autologous serum eye drops, but the risk caused by microbial contamination of the eye drops must be kept in mind.

Key Words: Autologous serum, Epitheliotropic factor, Stability, Contamination