Bazı flavonoid ve fenolik bileşiklerin antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi ve insan eritrositlerinden saflaştırılan karbonik anhidraz ı ve ıı izoenzimleri üzerine in vitro, rat eritrositleri karbonik anhidraz enzimi üzerine in vivo etkilerinin araştırılması
Determination of antioxidant capacities of some flavonoids and phenolic compounds and investigation of effect in vitro on human erythrocytes carbonic anhydrase i and ii isoenzymes, their in vivo on rat erythrocytes carbonic anhydrase enzyme
Yazar: ZÜBEYİR HUYUT
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmanın ilk bölümünde ticari olarak satın alınan bazı flavonoid ve fenolik yapıdaki bileşiklerden Malvin, Callistephin, Oenin, Pelargonin, Araşidonoil dopamin, ID-8, Silikristin, 3,4-Dihidroksi-5-metoksibenzoik asit ve 2,4,6-Trihidroksibenzaldehit maddelerinin antioksidan kapasitelerini belirlemek amacıyla Fe3+-TPTZ metodu ile Fe3+-Fe2+ indirgeme, kuprik iyonlarını (Cu2+) indirgeme, N-N'-Dimetil-fenilendiamin (DMPD) radikali giderme, 1,1-Difenil 2-pikril hidrazil (DPPH) serbest radikali giderme, 2-2'-Azino-bis(3-etilbenztiyazolin-6-sülfonik asit) (ABTS) radikali giderme, O2.- radikali giderme, ferrozin ve bipiridil reaktifi ile ferröz iyonlarını (Fe2+) şelatlama aktiviteleri ile birlikte ferrik tiyosiyanat metoduna göre total antioksidan aktivitesi çalışıldı. Metal şelatlama, indirgeme ve radikal giderme aktivitelerinin tamamında pozitif kontrol olarak standart antioksidanlar olarak bilinen BHA, BHT, α-Tokoferol ve Troloks kullanıldı. Çalışmanın ikinci bölümünde çalışılan maddelerin insan eritrositlerinden izole edilen hCA I ve II izoenzimleri üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Bu amaçla önce Sepharose-4B-L-Trozin afinite kolon kromatografisi ile insan eritrositlerinden hCA I ve II izoenzimleri saflaştırıldı. Enzim saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE yapıldı ve tek bant gözlendi. Çalışma kapsamındaki bütün maddelerin hCA I ve II izoenzimleri CO2-hidrataz ve esteraz aktiviteleri üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. Elde edilen Aktivite (%)-Konsantrasyon grafiklerinden her bir maddenin ayrı ayrı IC50 değerleri ile birlikte esteraz aktivitesi Ki değerleri hesaplandı. Son olarak fenolik bileşikler olan Araşidonoil dopamin, 3,4-Dihidroksi-5-metoksibenzoik asit ve 2,4,6-Trihidroksibenzaldehit maddelerinin rat eritrositleri total CA enzimi CO2-hidrataz aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi araştırıldı ve elde edilen grafiklerden faydalanılarak yarılanma ömürleri (t50)  hesaplandı. Bu çalışmada kullanılan bileşikler hCA I ve II izoenzimlerini in vitro olarak 2,23.10-3 ile 1055,00 µM aralığında IC50 değerleri ile inhibe etmiştir. Ayrıca çalıştığımız maddelerin birçoğu pozitif kontrol olarak kullandığımız BHA, BHT, α-Tokoferol ve Troloks'dan daha iyi antioksidan aktivite göstermiştir.

Abstract:
In first part of study, the antioxidant activities of agents of Malvine, Callistephin, Oenin, Pelargonin, Arachidonoyl Dopamine, ID-8, Silychristine, 3,4-Dihydroxy-5-methoxybenzoic acid and  2,4,6-Trihydroxybenzaldehyde from compounds flavonoid and phenolic structure were using by antioxidant assays including  ferrous ions (Fe3+) reducing capacity with Fe3+-TPTZ, Fe3+-Fe2+ reducing capacity, cupric ions (Cu2+) reduction capacity, N-N'-Dimethyl-phenylenediamine (DMPD) radical scavenging, 1,1-diphenyl 2-picryl hydrazyl (DPPH·) radical scavenging, 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) radical scavenging, O2•- radical scavenging, ferrous ions (Fe2+) chelating activities using by ferrozine and bipyridyl reagents and lastly total antioxidant activity by ferric thiocyanate method. İn all studies of metal chelating, reduction and radical scavenging activities as a positive control was used BHA, BHT, α-Tocopherol and Trolox that are known as standard antioxidants. The obtained results were compared with standard antioxidants. In second part of this study, studied substances were investigated in vitro inhibitory effects on hCA I and II isozymes isolated from human erythrocytes. For that purpose, the first was purified hCA I and II isoenzymes from human erythrocytes by using L-tyrosine-Sepharose-4B affinity column chromatography. To check the purity of the enzyme was performed SDS-PAGE and only one band was observed. The effects on CO2-hydratase and esterase activities of hCA I and II isozymes were investigated we tried in all the materials. Separately of each agent were calculated values of IC50 with levels of esterase activity Ki by using the obtained Activity (%) - Concentration graphics. Finally we use in this study and from sunbstances observing the in vitro inhibitory effect on hCA I and II isoenzymes activities were investigated of inhibitory effects on CO2-hydratase activity of rat erythrocytes total CA enzyme of Arachidonoyl Dopamine, 3,4-Dihydroxy-5-Methoxybenzoic Acid and 2,4,6-Trihydroxybenzaldehyde and benefiting from obtained graphics were calculated  their in vivo half-lives (t50). The phenolic compounds, which used in this study inhibited hCA I and CA II isoenzymes at the range of 2,23.10-3-1055,00 µM as in vitro. Also, most of these compounds demostrated antioxidant activity more than that used positive controls such as BHA, BHT, α-Tokoferol and Trolox.