Metisiline dirençli S.aureus (MRSA) suşlarında vankomisin toleransının dilüsyon  yöntemiyle araştırılması zaman-ölüm eğrisi yöntemiyle doğrulanması
Investigation of vancomycin tolerance on methicillin resistant s.aureus (MRSA) strains by using the dilution method, and verification with the time-kill curve method
Yazar: YASEMİN MELEYİM
Danışman: PROF. DR. ŞENGÜL DERBENTLİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Endokardit, menenjit, osteomyelit, derin doku abseleri gibi ciddi infeksiyonlarda ya da bağışıklık yetmezliği olan nötropenik hastalarda, kullanılan antibiyotiğin bakterisit etkili olması istenir. Etken olan bakteri tedavide kullanılan antimikrobiyal maddeye toleran ise bakterisit etki sağlanamayacak ve tedavi olumsuz etkilenecektir. Bir bakteri suşunun, hücre duvarı sentezini inhibe ederek bakterisit etki gösteren beta-laktam antibiyotikler ve vankomisin gibi antibiyotiklerin etkisi ile üremesinin inhibe olması, fakat çok daha yüksek konsantrasyonlarda ve daha uzun sürede ölmesi, antibiyotik toleransı olarak tanımlanır. Antibiyotik toleransı, bu araştırmanın kapsamına alınan stafilokoklarda diğer bakterilere göre daha sık görülür. Vankomisin toleransı insidansı ise, MRSA suşlarında daha yüksektir. Çalışmada klinik örneklerden izole edilen stafilokok suşları konvansiyonel yöntemlerle tür düzeyinde tanımlanmış ve S. aureus olarak tanımlanan suşlarda disk difüzyon yöntemiyle metisilin direnci aranmıştır. Bu deneyler sonucunda elde edilen 145 MRSA suşu vankomisin toleransı yönünden incelenmiştir. Mikrodilüsyon yöntemi ile vankomisin MİK ve MBK değerleri saptanmıştır. Vankomisin MİK50, MİK90 değerleri ve MİK aralığı sırasıyla 1 µg/ml, 2 µg/ml ve 0,5 µg/ml – 2 µg/ml olarak saptanmıştır. MİK/MBK ≥32 olan suşa rastlanmamıştır. Ancak bu oranın 2,4,8,16 bulunduğu 5 suşun ve ayrıca E. faecalis ATCC 29212 (pozitif kontrol) suşunun sonuçları zaman-ölüm eğrisi yöntemiyle yeniden araştırılmıştır. Yeniden incelenen suşlarda zaman-ölüm eğrisi yöntemi ile de vankomisin toleransı saptanmamıştır. Buna göre her iki yöntemin sonuçları birbiri ile uyumlu bulunmuştur. Bulgularımız tolerans araştırmalarında; literatürde güvenilir bir yöntem olarak bildirilen, ancak emek, zaman ve giderler yönünden daha zahmetli olan zaman-ölüm eğrisi yöntemi yerine, koşulların standardize edilmesi şartıyla kolay bir yöntem olan MBK/MİK oranlamasının önerilebileceğini göstermiştir.

Abstract:
Antibiotics used in the treatment of serious infections such as endocarditis, meningitis, osteomyelitis and deep tissue abscesses, or in neutropenic patients with immune deficiency are expected to have a bactericidal effect. If bacteria are tolerant to the antimicrobial agent, the bactericidal effect cannot occur and treatment will be negatively affected. Antibiotic tolerance can be defined as a bacteria strain's inhibition of a cell membrane synthesis, and the inhibition of reproduction by the effect of beta-lactam antibiotics and antibiotics like vancomycin, but cell death occurs over a much longer period with higher concentrations of antibiotics. Antibiotic tolerance is more common among staphylococci, which were included in this study, compared to other bacteria; however, the incidence of vancomycin tolerance is higher among MRSA strains. In the present study, staphylococcus strains isolated from clinical samples were identified using conventional methods at the species level and methicillin resistance was investigated with the disk diffusion method in the S. aureus strains. One hundred forty-five MRSA strains obtained through the experiments were investigated for vancomycin tolerance. MIC and MBC values of vancomycin were obtained by using the microdilution method. MIC50, MIC90 values of vancomycin and MIC range were determined consecutively as 1µg/ml, 2 µg/ml and 0.5 µg/ml – 2 µg/ml. There was no bacterial strain with MBC/MIC ≥32. The results of the five bacterial strains with MBC/MIC values of 2,4,8,16 and E. faecalis ATCC 29212 (positive control) strain were reexamined using a time-kill curve and again, there was no sign of vancomycin tolerance among the strains that were re examined. The results of both methods were found to be compatible. The findings of the study revealed that simple methods such as MBC/MIC comparisons can be used in tolerance investigations (provided that experiments are standardized) instead of the time-kill curve method, which is documented as a reliable method in the literature, but is more difficult, costly and time consuming.