Triple negatif meme kanserinde WNT/B-katenin sinyal yolağının inhibisyonunun terapötik etkisi
Therapeutic effect of inhibition of WNT/β-catenin signal pathway in triple negative breast cancer
Yazar: AHMET TARIK HARMANTEPE
Danışman: DOÇ. DR. ENİS DİKİCİER
Sakarya Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Beta katenin = Beta catenin ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sinyal nakli = Signal transduction ; İnhibisyon = Inhibition

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Wnt/β-katenin sinyal yolağının aktivatör kinazı olan TNIK' ın NCB-0846 ile inhibisyonunun triple negatif meme kanseri üzerindeki  terapötik etkisinin moleküler düzeyde araştırılması amaçlanmıştır.
YÖNTEM: Triple negatif meme kanseri hücre hattı olarak MDA-MB-231, kontrol hücre hattı olarak ise MCF-10A hücreleri kullanılmıştır. WST-1 analizi ile NCB-0846'nın sitotoksik etkisi, Annexin V analizi ile apoptotik etkisi, hücre döngüsü analizi ile hücre döngüsüne etkisi ise , Akridin Oranj boyama ile hücre morfolojisine olan etkisi gösterilmiştir. Ayrıca CTNNB1 (β-katenin) gen ekspresyonu üzerindeki etkisi RT-PCR analizi gösterilmiştir. Tüm analizlerde hücrelere 1, 2 ve 3 μM dozlarda NCB-0846 uygulanmış ve NCB-0846 uygulanmayan hücre hatları negatif kontrol grubu olarak değerlendirilmiştir ve deneyler üçer kez tekrar edilmiştir. 
BULGULAR: NCB-0846, MDA-MB-231 hücrelerindeki canlılık oranları zaman ve doz bağımlı olarak anlamlı bir şekilde azalmıştır (p<0,01). MDA-MB-231 hücreleri için en düşük canlılık oranları 72 saat inkübasyon sonrasında 3 μM dozda %42,20 olarak belirlenmiştir. MCF-10A hücrelerinde 72 saat inkübasyon sonrasında 3 μM dozda canlılık oranı %53,92 olarak belirlenmiştir (p<0.01). Apoptotik hücre oranları, MDA-MB-231 ve MCF-10A  hücrelerinde 3 μM NCB-0846 inkübasyon için  sırasıyla %60,5 ve % 39,33 olarak tespit edilmiştir. MDA-MB-231 hücrelerinde NCB-0846'nın artan konsantrasyonuna bağlı olarak G2/M evresinde hücre tutulmasına neden olduğu belirlendi (p<0.01). Ayrıca morfolojik olarak, MDA-MB-231 hücrelerinde DNA fragmentasyonu, kromatin yoğunlaşması ve hücre büzülmesi gözlemlendi. RT-PCR analizinde ise MDA-MB-231 hücrelerinde CTNNB1 ekspresyon seviyesi azalırken, MCF-10A hücrelerinde anlamlı bir şekilde arttığı tespit edilmiştir. 
SONUÇ: NCB-0846'nın, MDA-MB-231 hücrelerinde hücre canlılığını inhibe ederken, apoptozu indüklediği gösterildi. Sonuçlarımız, NCB-0846'nın kanser tedavisi için uygun bir aday olabileceğini, ancak moleküler düzeyde etki mekanizmalarını daha iyi anlamak için daha ileri in vitro ve in vivo çalışmaların gerekli olduğunu göstermektedir.

Anahtar Kelimeler: Triple negatif meme kanseri, Wnt/β-katenin, TNIK, NCB-0846

Abstract:
AIM: It was aimed to investigate the therapeutic effect of NCB-0846 inhibition of TNIK, which is the activator kinase of Wnt/β-catenin signaling pathway, on triple negative breast cancer at the molecular level.
MATERIAL AND METHOD: MDA-MB-231 cells were used as triple negative breast cancer cell line and MCF-10A cells were used as control cell line. WST-1 analysis showed the cytotoxic effect of NCB-0846, Annexin V analysis showed its apoptotic effect, cell cycle analysis showed its effect on cell cycle, and Acridine Orange staining showed its effect on cell morphology. In addition, the effect of NCB-0846 on CTNNB1 (β-catenin) gene expression was demonstrated by RT-PCR analysis. 
RESULTS: The viability rates in NCB-0846, MDA-MB-231 cells decreased significantly in a time and dose dependent manner (p<0.01). The lowest viability rates for MDA-MB-231 cells were determined as 42,20% at the 3 μM dose after 72 hours of incubation. After 72 hours of incubation in MCF-10A cells, the viability rate was determined as 53,92% at 3 μM dose (p<0.01). Apoptotic cell rates were determined as 60,5% and 39,33% for 3 μM NCB-0846 incubation in MDA-MB-231 and MCF-10A cells, respectively. It was determined that NCB-0846 caused cell uptake in the G2/M phase due to the increasing concentration in MDA-MB-231 cells (p<0.01). In the RT-PCR analysis, while the expression level of CTNNB1 was decreased in MDA-MB-231 cells, it was determined that it increased significantly in MCF-10A cells.
CONCLUSION: NCB-0846 was shown to induce apoptosis while inhibiting viability in MDA-MB-231 cells. Our results suggest that NCB-0846 may be a suitable candidate for cancer therapy, but further in vitro and in vivo studies are required to better understand its mechanisms of action at the molecular level.

Keywords: Triple negative breast cancer, Wnt/β-catenin, TNIK, NCB-0846