Farklı karakterdeki BHK-21 hücrelerinin serumsuz vasattaki büyüme özelliklerinin tek tabaka kültür sisteminde incelenmesi
Investigation of growth properties of BHK-21 cells with different characteristics in a serum-free medium in the monolayer culture system
Yazar: HAYDAR KARADAŞ
Danışman: DOÇ. DR. MUHAMMET KAYA ; DR. ŞÜKRAN YILMAZ
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı / Hayvansal Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Suriye Hamster yavrularının böbreğinden izole edilip polyoma virüs ile transforme edilerek oluşturulan BHK 21 C13 hücre hattı, virüs izolasyonu, aşı üretimi ve rekombinant protein üretiminde yaygın olarak kullanılmaktadır. Farklı büyüme karakteristiğine sahip BHK 21 An30 ve BHK 21 An73 hücre hatları Şap Enstitüsü'nde şap aşısı üretiminde kullanılmaktadır. Üretim amaçlı tohum hücre stokları, monolayer kültür sisteminde %10 FBS'li GMEM besiyerinde çoğaltılmaktadır. Bu çalışmada, her iki hücre hattının serumsuz besiyerine adaptasyonu ve bu besin ortamının hücrelerin büyüme karakteristikleri üzerine etkisi incelenmiştir. Her iki hücre hattına da serumsuz vasatla ardışık seri pasajlar yapılarak, hücreler canlılık ve apoptoz, hücre döngüsü ve koloni oluşturma etkinliği yönünden analiz edilmiştir. Adaptasyon sonrası büyüme eğrileri çıkartılarak, popülasyon ikilenme zamanları belirlenmiştir. Çalışma sonucunda %2 FBS'li CellventoTM BHK-200 besi ortamında elde edilen hücre sayısının %10 FBS'li GMEM besi ortamından elde edilen hücre sayısından daha iyi olduğu görülmüştür. Yapılan apoptoz testi sonucunda her iki hücre hattında ve iki farklı besi ortamında belirgin bir farklılık olmamıştır. Ancak, pasaj sayısı arttıkça serumsuz besi ortamında büyütülen her iki hücre hattında da apoptotik hücre oranlarının azaldığı görülmüştür. Sonuç olarak, serumsuz vasat ile üretilen hücreler kontrol grubu ile karşılaştırıldıklarında, büyüme karakteristikleri yönünden istatiksel olarak anlamlı farklılık olduğu, serumsuz besi ortamına adapte olan hücrelerde canlılık oranlarının arttığı ve monolayer kültür sisteminde ana hücre bankalamasında kullanılabilirliği gösterilmiştir.

Abstract:
The BHK 21 C13 cell line isolated from the kidney of Syrian hamster puppies and transformed with polyoma virus is widely used for virus isolation, vaccine production, and recombinant protein production. BHK 21 An30 and BHK 21 An73 cell lines with different growth characteristics are used in the production of the FMD vaccine at the Foot and Mouth Disease Research Institute. Seed cell stocks are produced in GMEM media with 10% FBS in the monolayer culture system. In this study, the adaptation of both cell lines to a serum-free medium and the effect of the medium on the growth characteristics of the cells were investigated. The cells were analyzed for viability and apoptosis, cell cycle and colony formation efficiency by sequential serial passages of both cell lines with serum-free medium. After the adaptation, the growth curves were formed and the population doubling times were determined. The number of cells obtained in CellventoTM BHK-200 media with 2% FBS was higher than that of GMEM media with 10% FBS. The apoptosis test revealed that there was no difference between the cell lines and the medium. However, apoptotic cell rates decreased in both cell lines grown in serum-free media with increasing number of passages. Consequently, growth characteristics of the cells produced in serum-free medium or %10 FBS were different. It has been shown that the viability rates of cells adapted to serum-free medium increased and therefore, it can be used for the cell banking in the monolayer culture system.