Bazı flavonoidlerin antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi ve insan eritrositlerinden saflaştırılan glutatyon s-transferaz enzim aktivitesi üzerine inhibisyon etkilerinin incelenmesi
Determination of antioxidant capaci̇ty of some flavonoid, purification of glutathione s-transferase from human erythrocyte and investigation of inhibition effect on enzyme activity
Yazar: MİNE AKSOY
Danışman: PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Enzim-inhibisyon yöntemi = Enzyme-inhibition method

Özet:
Bu tez kapsamında baicalin, baicalein ve phloridzin flavonoidlerinin antioksidan kapasiteleri incelendi. Çalışmada kullanılan flavonoidlerin antioksidan kapasitesini ölçmek için demir indirgeme aktivitesi, kuprik iyonları (Cu+2) indirgeme aktivitesi, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe+3) indirgeme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikalini (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikalini (ABTS∙+) giderme aktivitesi yöntemlerinden yararlanıldı. Sonuçların mukayese edilmesinde bütillenmiş hidroksianisol (BHA), bütillenmiş hidroksitoluen (BHT), α-tokoferol ve troloks standart antioksidanları kullanıldı. Ayrıca baicalin, baicalein ve phloridzin flavonoidlerinin bir detoksifikasyon enzimi olan ve metabolik öneme sahip glutatyon S-transferaz (GST) enzim aktivitesi üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Çalışmada kullanılan GST enzimi için kaynak olarak insan eritrositleri kullanıldı. İnsan eritrositlerin GST enzimi glutatyon-agaroz afinite kolonu yardımıyla 3,309 EÜ/mg protein spesifik aktiviteyle 1140 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı sodyumdodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile kontrol edildi. Saflaştırılan enzim üzerine baicalin, baicalein ve phloridzin flavonoidlerinin inhibisyon etkilerini incelemek amacıyla önce beş farklı inhibitör konsantrasyonunda enzim aktivitesi ölçüldü ve % Aktivite-[İnhibitör] grafiği çizildi. Enzim aktivitesini yarıya düşüren inhibitör konsantrasyonu olan IC50 değerleri çizilen bu grafik yardımıyla sırasıyla 0,028; 0,056; 0,769 mM olarak hesaplandı. Enzim inhibitör ayrışma sabiti olan Ki değerleri ise sırasıyla 0,0145; 0,024; 0,762 mM olarak bulundu.

Abstract:
In this thesis, antioxidant capacity of baicalin, baicalein and phloridzin flavonoids were examined. To measure the antioxidant capacity of flavonoids used in the study, iron reduction activity, cupric ions (Cu2+) reduction activity, ferric ion according to the FRAP method (Fe3+) reduction activity, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl free radical (DPPH ·) removal activity, 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiyoazol-6-sulfonic acid) radical (ABTS ∙ +) removal activity methods were used. Butylated hydroxy anisole (BHA), butylated hydroxy toluene (BHT), α-tocopherol and trolox standards antioxidants were used for a comparison of the results. In addition in vitro inhibitory effect of baicalin, baicalein and phloridzin flavonoids were investigated on the glutathione S-transferase (GST) enzyme activity. Human erythrocytes as a source of GST enzymes in the study was used. GST enzymes of erythrocyte with the help of glutathione-agarose affinity column was purified with 3.309 EU/mg protein specific activity and 1140-fold. The purity of the enzyme were checked with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). IC50 values baicalin, baicalein and phloridzin flavonoids, respectively, as 0.028, 0.056, 0.769 mM was calculated with % Activity-[Inhibitory] graphs. Values inhibitor dissociation constant of the enzyme, Ki, were found as 0.0145, 0.024, 0.762 mM, respectively