İnsan interlökin 7 geninin (IL7) moleküler klonlaması
Molecular cloning of human interleukin 7 gene (IL7)
Yazar: GAMZE KORKUT
Danışman: DOÇ. DR. SEMRA HASANÇEBİ ; DR. GÜNSELİ KURT GÜR
Trakya Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics
Dizin: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Rekombinant DNA teknolojisi = Recombinant DNA technology ; İnterlökin 7 = Interleukin 7

Özet:
İnsana ait interlökin 7 (IL-7) immünolojide uzun süredir T hücreleri ve B hücreleri üzerindeki etkileri bilinen bir sitokindir. IL-7'nin B ve T hücresi proliferasyonu için gerekli olduğu ve IL-7'nin eksikliğinin immün sistem hücrelerinin gelişimin durmasına neden olduğu bilinmektedir. Ayrıca yapılan çalışmalar, IL-7'nin antijene spesifik T-hücre yanıtlarını uyarma veya arttırma kabiliyeti ve geniş sitotoksik aktiviteleri nedeniyle antitümör ve antiviral tedavi için in vitro kullanılabileceğini ortaya konmuştur. Ek olarak hematopoetik kök hücreleri mobilize etme kabiliyeti sayesinde, radyasyona maruz kalma, kemoterapi ve kemik iliği/kök hücre nakli sonrası T-hücre homeostazisinin rekonstrüksiyonuna önemli bir katkı sağladığı da gösterilmiştir. Bu araştırmalar sonucu IL-7'nin, T hücresi azalmış/tükenmiş hastalarda (kanser, kemik iliği nakli ve AIDS) umut verici bir potansiyele sahip olduğu ve bu hastalarda terapötik bir ajan olarak kullanılabileceğini ortaya koymuştur.Bu tez çalışmasında; IL-7'ye olan talep göz önüne alınarak IL7'nin Escherichia coli (E.coli) bakterisine klonlanması hedeflenmiştir. Bu amaçla; IL7'nin insan mononükleer beyaz kan hücrelerinden izolasyonu yapılmış ve iki farklı klonlama vektörü (pCR-BluntII-TOPO ve pJET 1.2/Blunt) kullanılmıştır. hIL7 DNA'sı yerleştirilmiş rekombinant vektörlerin, E. coli bakterisinin DH5α suşuna transformasyonu gerçekleştirilmiştir. Trasformasyon sonucu elde edilen olası transgenik bakteri kolonileri, moleküler analizlerle doğrulanmaya çalışılmış ve hIL7 taşıyan 3 adet E.coli bakteri kolonisi elde edilmiştir. Tez çalışması ile IL-7'nin bakteriyel sistemler tarafından rekombinant üretimi için gerekli ilk adımı oluşturulmuş ayrıca bilgi ve kaynak yaratılmak istenmiştir.

Abstract:
Human interleukin 7 (IL-7) is a cytokine whose effects on T cells and B cells have long been known in immunology. It is known that IL-7 is necessary for B and T cell proliferation and that the deficiency of IL-7 causes the development of the immune system cells to halt. Furthermore, studies have shown that IL-7 can be used in vitro for antitumor and antiviral therapy because of its ability to stimulate or enhance antigen-specific T-cell responses and its broad cytotoxic activities. In addition, its ability to mobilize hematopoietic stem cells has been shown to make a significant contribution to the reconstruction of T-cell homeostasis after radiation exposure, chemotherapy and bone marrow/stem cell transplantation. These studies have shown that IL-7 has a promising potential in T-cell depleted/depleted patients (cancer, bone marrow transplantation and AIDS) and can be used as a therapeutic agent in these patients. In this thesis; in view of the demand for IL-7, it was aimed to clone the IL7 into Escherichia coli (E.coli). For this purpose; The IL7 was isolated from human mononuclear white blood cells and two different cloning vectors (pCR-BluntII-TOPO and pJET 1.2/Blunt) were used. Recombinant vectors with IL7 DNA insert were transformed into the DH5α strain of E. coli. Possible transgenic bacterial colonies obtained from the transformation were tried to be confirmed by molecular analysis and three E. coli bacterial colonies bearing the IL7 were obtained. In this thesis, the first step of IL-7 for recombinant production by bacterial systems was accomplished and intended for information and resource to create.