Suramin'in C6 gliomada telomeraz aktivitesi üzerine etkisi
Effect of suramin on telomerase activity in C6 glioma
Yazar: MİNE ERGÜVEN
Danışman: PROF.DR. NURİYE AKEV
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2004
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
6. ÖZET Suramin'in C6 Glioma'da telomeraz aktivitesi üzerine etkisi Telomeraz, hücre bölünmesinde telomer kaybını engelleyerek genomik stabiliteyi sağlayan RNA'ya bağlı DNA polimerazdır. Telomeraz, hücrelerin replikatif senesens ve kriz safhalarından kaçmasını sağlayarak kansere neden olur. Glioblastoma, kötü prognozla karakterize en malign astrositik beyin tümörüdür. Glioblastomada telomeraz revers transkriptazını fosforile eden protein kinaz C a'nın aktivasyonunda fonksiyonel olan epidermal büyüme faktörü reseptörünün ekspresyonunun arttığı saptanmıştır. Bu artışla uyumlu olarak glioblastomada telomeraz revers transkriptaz ekspresyonunun ve buna bağlı olarak telomeraz aktivitesinin artığı bildirilmiştir. Suramin antiprotozoal, antihelmintik ve antineoplastik etkilere sahip tripan mavisi türevi bir ilaçtır. Suramin HIV revers transkriptazını inhibe ettiğinden AİDS tedavisinde de denenmektedir. Suramin antineoplastik etkisini büyüme faktörlerinin reseptörleri ile etkileşimini ve ATP antagonisti olarak ATP ile purinerjik reseptör etkileşimini inhibe ederek gösterir. Suramin'in revers transkriptaz inhibitörü olması ve bloke ettiği yolların telomeraz aktivasyonunda fonksiyonel olması bize glioblastomada da telomerazı inhibe edebileceğini düşündürmüştür. Suramin'in telomerazı inhibe ettiği kültürdeki insan osteosarkoma ve MCG-101 hücrelerinde saptandığı halde, bu inhibisyon Glioblastomada henüz araştırılmamıştır. Çalışmamızda 42 adet 6 haftalık, in-bred üretim Wistar-albino erkek sıçan kullanıldı. C6 glioma hücreleri, sıçanların boynuna subkutan olarak enjekte edildi. Tümör hacmi 2 cm3'e ulaştığında sıçanlar kontrol (n:22) ve Suramin (n:20) olmak üzere 2 gruba ayrıldı. Sıçanlara haftada 2 defa 40 mg/kg i.p Suramin tedavisi 45 gün süreyle uygulandı. Sakrifikasyondan sonra, Suramin'in tümörlerdeki telomeraz aktivitesi üzerine etkisini araştırmak için Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR)'na dayalı Telomeraz Tekrarı Amplifîkasyon Protokolü (TRAP) uygulandı. Tümör hacmi ve telomeraz aktivitesinin gruplararası karşılaştırılması Bağımsız Student t-test ve aynı grup içinde karşılaştırılması Pearson Korelasyon testi (2-yönlü) kullanılarak yapıldı. Ortalama tümör hacmi Suramin grubunda 5.387±2.211 iken kontrol grubunda 1.711±1.704, ortalama telomeraz aktivitesi Suramin grubunda 6.347±2.683 iken kontrol grubunda 1.836±2.079 olarak saptandı ve aralarındaki fark istatistiksel olarak 0.05 düzeyinde yüksek derecede anlamlı bulundu (pMest:0.000). Suramin grubunda yüksek telomeraz aktivitesi ile artan tümör hacmi arasında, kontrol grubunda düşük telomeraz aktivitesi ile azalan tümör hacmi arasındaki korelasyon 0.01 düzeyinde anlamlı bulundu. Ayrıca Suramin grubundaki yüksek tümör hacminin, Suramin'in sitokinler üzerindeki immunosupresif etkisinden kaynaklandığı tartışılmıştır. Sonuç olarak, Suramin'in subkutan C6 Glioma beyin tümör modelinde telomeraz aktivitesini inhibe etmediği saptandı. 52

Abstract:
7.SUMMARY Effect of Suramin on telomerase activity in C6 glioma Telomerase is a RNA-dependent DNA polymerase that prevents telomere loss during DNA replication and by this way provides genomic stability. Elongation of telomeres by telomerase reinforce cells to escape from replicative senesence and crisis leading to cancer. Glioblastoma multiforme is the most malignant brain tumor model defined with poor prognosis. Reports demonstrate that there is a progressive increase in epidermal growth factor receptor expression which is responsible for the activation of telomerase catalytic subunit phosphorylation enzyme protein kinase C a in glioblastoma multiforme. Compatible with the increase of these factors it was also established that there is a progressive increase in telomerase reverse transcriptase expression and telomerase activity in glioblastoma multiforme. Suramin is trypan blue derived drug that has antiprotozoal, antihelmintic and antineoplastic effects. It also inhibits HIVs reverse transcriptase but it's administration to patients is still in progress. Suramin shows it's antineoplastic action by inhibition of growth factor-receptor interaction and inhibition of purinergic reseptor-ATP interaction as ATP antagonist. Suramin's inhibitory effect on the telomerase activation pathway makes us think that it could inhibit the telomerase activity in glioblastoma. Although inhibition of telomerase on human osteosarcoma cells and MCG-101 cells in vitro has been reported, no reports have been established on this enzyme inhibition in glioblastoma up to date. In our investigation 6 weeks old, in-bred production, 42 male Wistar-albino rats were used. C6 glioma cells were injected subcutaneously into the neck of rats. After tumor volume reached 2 cm3, rats were separated into two groups as control (n:22) and Suramin (n:20). 40 mg/kg Suramin was administered to rats i.p twice a week for 45 days. After sacrification, Polymerase Chain Reaction (PCR) based Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) assay was used to asses the change in telomerase activity caused by Suramin. Independent Student t-test was used for the comparison of tumor volume and telomerase activity between the two groups and Pearson Correlation Test (2-tailed) was used to find out the correlation between these two parameters for the same group. Mean tumor volumes were 5.387±2.211 and 1.71 1±1.704 in the Suramin and control group respectively; mean telomerase activity were 6.347±2.683 and 1.836±2.079 in the Suramin and control group respectively. Difference between two groups for these parameters were significant at the 0.05 level.(pt.test:0.000) Correlation between high telomerase activity and increased tumor volume for the Suramin group and between low telomerase activity and decreased tumor volume for the control group is significant at the 0.01 level. Besides it was discussed that high tumor volume in Suramin give group may be due to Suramin's immunosupressive effect on cytokines. It was concluded that Suramin did not inhibit telomerase activity in subcutaneous C6 glioma brain tumour model. 53