Pediatrik hasta grubunda Epstein Barr virüs tanısında kullanılan serolojik ve moleküler yöntemlerin karşılaştırılması ve EBV tanı algoritmasının oluşturulması
Comparison of serological and molecular methods used in the diagnosis of Epstein Barr virus in the pediatric patient group and determination of the EBV diagnostic algorithm
Yazar: FİRDEVS GÜVENÇ
Danışman: DR. ALPARSLAN TOYRAN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Ankara Bilkent Şehir Hastanesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı /  Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Amaç: Epstein-Barr Virüs (EBV) enfeksiyonunun tanısında kullanılan ELISA, IFA, İmmünblot, avidite ELISA ve Real-Time PCR yöntemlerinin pediatrik yaş grubundaki tanısal performansları araştırılmıştır. Referans IFA yöntemine göre testlerin duyarlılık, özgüllük ve kappa değerlerinin hesaplanması ve karşılaştırılması amaçlanmıştır. Ayrıca ELISA yöntemi ile elde edilen atipik serolojik profillerin avidite ELISA yöntemi ile aydınlatılması amaçlanmıştır.
Gereç ve yöntem: Çalışmaya Enfeksiyöz Mononükleoz şüpheli 200 hasta ve EBV enfeksiyonu ile ilişkili herhangi bir belirti taşımayan 40 kontrol hastasının örnekleri dahil edildi. Serum örnekleriyle ELISA, IFA, blot, avidite ELISA (EUROIMMUN, Almanya) ve Real-Time PCR (QIAGEN, Almanya) testleri çalışıldı. ELISA, blot, avidite ELISA testleri ile elde edilen sonuçlar ve enfeksiyon evreleri referans IFA yöntemi ile karşılaştırıldı. Real-Time PCR testi ile farklı enfeksiyon evrelerindeki viremi varlığı araştırıldı.
Bulgular: ELISA/IFA evreleme uyumu için kappa değeri 0,812, ELISA+avidite ELISA/IFA evreleme uyumu için 0,972, İmmünblot/IFA evreleme uyumu için 0,822 olarak belirlenmiştir. ELISA yönteminin parametre bazında duyarlılık ve özgüllükleri, anti-VCA IgM için %86,9 ve %100, anti-VCA IgG için %93,7 ve %100, anti-EBNA IgG için %88,9 ve %100, anti-EA-D IgG için ise %41,1 ve %99,5 olarak belirlenmiştir. İmmünblot yönteminin parametre bazında duyarlılık ve özgüllükleri, anti-VCA IgM için %47,5 ve %99,5, anti-VCA IgG için %94,4 ve %98,9, anti-EBNA IgG için %82,2 ve %100, anti-EA-D IgG için ise %64,7 ve %99,5 olarak belirlenmiştir. Real-Time PCR testinin primer enfeksiyon için duyarlılığı %66,6 olarak belirlenmiştir.
Sonuç: EBV enfeksiyonunun evrelemesinde, ELISA ve blot yöntemleri IFA yöntemi ile mükemmel derecede uyum göstermiştir ve ELISA testi avidite ELISA testi ile birlikte değerlendirildiğinde neredeyse IFA yöntemi kadar doğru evreleme sağlamıştır. ELISA, EBV enfeksiyonunun tanı ve evrelemesinde immün kompetan bireylerde ilk adımda düşünülmesi gereken yöntem olmakla beraber atipik serolojik profillerin aydınlatılmasında avidite ELISA testi ile beraber kullanımı düşünülebilir. Özellikle altı yaşın altındaki çocuklarda, immün yetmezlik durumunda, EBV ilişkili lenfoproliferatif bozukluk/maligniteler için risk taşıyan hastalarda, ELISA yöntemi ile Real Time PCR yönteminin kullanımı düşünülebilir.

Abstract:
Aim/Background: The diagnostic efficacy of ELISA, IFA, Immunoblot, avidity ELISA, and Real-Time PCR methods for Epstein-Barr Virus (EBV) infection in pediatric patients was evaluated. Sensitivity, specificity, and kappa values of these methods were calculated and compared against the gold standard IFA method. Additionally, the avidity ELISA method was used to elucidate atypical serological profiles identified by ELISA.
Materials and Methods: Samples were collected from a diverse cohort, including 200 children with suspected infectious mononucleosis and 40 children without symptoms associated with EBV infection. ELISA, IFA, Immunoblot, avidity ELISA (EUROIMMUN, Germany), and Real-Time PCR (QIAGEN, Germany) tests were performed. Results based on parameters and serological constellations from ELISA, Immunoblot, and avidity ELISA were compared with the reference IFA method. The Real-Time PCR test was used to investigate viremia at different stages of infection.
Results: The kappa value for serological staging agreement between ELISA and IFA was 0.812, between Avidity ELISA+ELISA and IFA was 0.972, and between Immunoblot and IFA was 0.822. On a parameter basis, the sensitivity and specificity of the ELISA method are as follows: for anti-VCA IgM, 86.9% sensitivity and 100% specificity; for anti-VCA IgG, 93.7% sensitivity and 100% specificity; for anti-EBNA IgG, 88.9% sensitivity and 100% specificity; and for anti-EA-D IgG, 41.1% sensitivity and 99.5% specificity. The Immunoblot method's sensitivity and specificity on a parameter basis are: for anti-VCA IgM, 47.5% sensitivity and 99.5% specificity; for anti-VCA IgG, 94.4% sensitivity and 98.9% specificity; for anti-EBNA IgG, 82.2% sensitivity and 100% specificity; and for anti-EA-D IgG, 64.7% sensitivity and 99.5% specificity. The Real-Time PCR test demonstrated a sensitivity of 66.6% for primary infection.
Conclusion: ELISA and Immunoblot methods demonstrated excellent agreement with the reference IFA method in serologically staging EBV infection. The staging of EBV infection was nearly as accurate with the combination of ELISA and avidity ELISA tests as with the IFA method. In the diagnosis and staging of EBV infection in immunocompetent individuals, the ELISA method can be considered a primary option. Additionally, the use of Avidity ELISA in combination with ELISA tests may be considered for explaining atypical serological profiles. Especially in children under 6 years of age, in cases of immunodeficiency, and in patients at risk for EBV-associated lymphoproliferative disorders and malignancies, the combined use of ELISA and Real-Time PCR methods may be considered.