Koyun karaciğer mikrozomlarından PON1 enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı radyonüklid ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification of PON1 from sheep liver microsomes, caracterization and investigation effects of some radionuclides drugs on the enzyme
Yazar: BÜŞRA KONCUK
Danışman: DOÇ. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Enzim saflaştırması = Enzyme purification ; Enzim-inhibisyon yöntemi = Enzyme-inhibition method

Özet:
HDL ile ilişkili olan Paraoksonaz 1 (PON1) enzimi öncelikli olarak LDL'yi oksidasyondan koruma gibi fizyolojik role sahip organofosfat parçalayıcı bir enzimdir. Serum PON1 hakkında çok fazla bilgi olmasına rağmen karaciğer mikrozomal PON1 için bilgi çok azdır. Bu tez kapsamında koyun karaciğer mikrozomal PON1 enziminin saflaştırılması, karakterizasyon gerçekleştirildi ve bazı radyonüklid ilaçların bu enzim üzerine etkileri incelendi. Mikrozomal PON1, DEAE-Sephadex A-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-150 jel filtrasyon kromatografisi teknikleri kullanılarak %9 verim, 1687,03 EU/mg spesifik aktivite ile 392,33 kat saflaştırılmıştır. Enzimin alt birim molekül kütlesi SDS-PAGE ile 65,09 kDa olarak belirlendi. Koyun karaciğer dokusundaki mikrozomal PON1 enziminin doğal halinin molekül kütlesi ise Sephadex G-150 jel filtrasyon kolonu kullanılarak 66 kDa olarak belirlendi. Koyun karaciğer mikrozomal PON1 enzim aktivitesi üzerine bazı radyonüklid ilaçların etkileri araştırıldı. İnhibisyon etkisi gösteren ilaçlardan SnCl2.2H2O, 99mTc-MIBI, 99mTc-SnCl2.2H2O, MIBI, Pirofosfat, Exametazime, Dietilentriamin penta asetik asit 99mTc-Pirofosfat ve Metilen difosfonik asit için %Aktivite-[I] ilaç grafikleri çizilerek IC50 değerleri belirlendi. SnCl2.2H2O, MIBI, Pirofosfat, Exametazime, Dietilentriamin penta asetik asit ve Metilen difosfonik asit radyonüklid ilaçlarının inhibisyon tipini belirlemek ve Ki sabitlerini hesaplamak için Lineweaver-Burk grafikleri çizildi.

Abstract:
Paraoxonase 1 (PON1) is a high-density lipoprotein (HDL)-associated enzyme which can hydrolyze organophosphates and protect LDL againist oxidation. Serum PON1, although too much information about the liver microsomal PON1 is very small for the information. In this thesis sheep liver microsomal PON1 enzyme purification, characterization and some radionuclide study was performed to investigate the effects of drugs on this enzyme. Microsomal PON1 enzyme was purified 392,33 fold and 1687,03 EU/mg specific activity with a yield of 9% using ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-50 anion exchange and Sephadex G-200 gel filtration chromatographies. In addition, effects of some radionuclide drugs on sheep liver microsomal PON1 enzyme activity were investigated. IC50 values were determined by drawing %Activity-[I] graphs of radionüclide drugs SnCl2.2H2O, 99mTc-MIBI, 99mTc-SnCl2.2H2O, MIBI, Pyrophosphate, Exametazime, Dietilentriamin penta-acetic acid, 99mTc- Pyrophosphate and Methylene diphosphonic acid, those showed inhibition effect. Lineweaver-Burk graphs were drawn to determine inhibition type and calculate Ki values of radionuclide drugs as SnCl2.2H2O, MIBI, Pyrophosphate, Exametazime, Dietilentriamin penta-acetic acid and Methylene diphosphonic acid.