Mycobacterıum abscessus izolatlarının sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile antibiyotik duyarlılık paterninin belirlenmesi
Determination of antibiotic susceptibility patterns of mycobacterium abscessus isolates using the broth microdilution method
Yazar: HANDE ÖZCAN
Danışman: DOÇ. DR. MUSTAFA GÜNEY
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Giriş-Amaç:
Hızlı üreyen mikobakteriler içerisinde yer alan Mycobacterium abscessus; immün yetmezliği olan ve kistik fibrozis gibi altta yatan kronik hastalığı olan kişilerde akciğer ve akciğer dışı enfeksiyonlara neden olabilen bir mikroorganizmadır. Ayrıca M. abscessus, anti tüberküloz ilaçlar dahil olmak üzere çoklu ilaca direnç gösterme eğilimindedir. Dolayısıyla M. abscessus'un enfeksiyonlarındaki direnç durumunun sık sık takibi ve elde edilen verilerin analizi akılcı antibiyotik kullanımı için yol gösterici olması açısından önemlidir. Çalışmamızda laboratuvarımızın kültür koleksiyonunda bulunan M. abscessus suşlarına; klaritromisin, siprofloksasin, amikasin, doksisiklin, linezolid ve meropenem için in vitro antimikrobiyal duyarlılık testleri (ADT) yapılarak direnç durumunun belirlenmesi amaçlanmıştır. 
Gereç-Yöntem:
Çalışmaya 2017-2022 yılları arasında laboratuvarımızda izole edilen 43 izolat alındı. Löwenstein Jensen (LJ) besiyerinde canlandırılarak subkültürleri yapıldı. Üreme saptanan 34 izolatın tanımlama doğruluğunu tespit etmek için; Matrix assisted lazer desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) cihazında analiz edildi. Kontamine olduğu gözlemlenen 12 izolat N-Asetil L-sistein /sodyum hidroksit-sitrat yöntemiyle homojenize ve dekontamine edildi. Antimikrobiyal duyarlılık testi ise Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI) M24 rehberinin önerilerine göre; sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle amikasin, klaritromisin, doksisiklin, meropenem, siprofloksasin ve linezolid için yapıldı. Bu amaçla katyon ayarlı Mueller Hinton Broth ile 96 kuyucuklu U tabanlı plaklar kullanıldı. Antibiyotikler için son konsantrasyon 512 µg/ml olarak ayarlandı. Kontrol kuyucuğundaki üreme 72 saat sonra yeterli olduğu için (CLSI en az +2 bulanıklık olması / küme şeklinde üreme görülmesi) plaklar değerlendirildi. Klaritromisin içeren mikrodilüsyon plakları ise indüklenebilir klaritromisin direncini saptamak için 3. günden itibaren gün aşırı değerlendirilerek 14. günde son değerlendirilmeleri yapıldı. Staphylococcus aureus ve M. peregrinum standart suş olarak kullanıldı.
Bulgular:
Elde edilen sonuçlar CLSI M62 rehberinde yer alan MİK değerleri ile karşılaştırılıp değerlendirildi.  İzolatlar, amikasine karşı %100 ve linezolide karşı %44,12 duyarlı olarak tespit edildi. Meropenem, doksisiklin ve siprofloksasin için ise izolatların direnç oranları sırasıyla %97,06, %100 ve %88,24 olarak tespit edildi. İzolatların klaritromisine karşı olan indüklenebilir direnci için 3. gün sonuçlarına ve 14. gün sonuçlarına bakıldı. Sırayla sonuçlar %2,94 ve %70,59 olarak tespit edildi. Dolayısıyla %67,65'inde indüklenebilir klaritromisin direnci görüldü. 
Sonuç:
Sonuç olarak amikasin dışındaki ilaçlara karşı belirgin bir direnç tespit edilmiştir. Bu nedenle M. abscessus enfeksiyonlarının tedavi seçeneklerinin belirlenmesinde bu tür epidemiyolojik çalışmaların sık sık ve düzenli olarak yapılmasının gerekli olduğu değerlendirilmiştir.
Anahtar Kelimeler: Antimikrobiyal direnç, Klaritromisin, Mycobacterium abscessus, Sıvı mikrodilüsyon yöntemi

Abstract:
Determination of Antibiotic Susceptibility Patterns of Mycobacterium abscessus Isolates Using the Broth Microdilution Method
Back ground:
Mycobacterium abscessus, a member of the fast-growing mycobacteria group, is a microorganism capable of causing lung and extrapulmonary infections in individuals with immunodeficiency and underlying chronic diseases such as cystic fibrosis. Additionally, M. abscessus tends to exhibit multidrug resistance, including to antituberculosis drugs. Therefore, it is crucial to frequently monitor the resistance status of M. abscessus infections and to analyze the obtained data, to guide the rational use of antibiotics effectively. Our study aimed to determine the resistance status of M. abscessus strains from our laboratory's culture collection by performing in vitro antimicrobial susceptibility tests (ASTs) for clarithromycin, ciprofloxacin, amikacin, doxycycline, linezolid, and meropenem.
Materials and Methods:
The study included 43 isolates identified in our laboratory between 2017 and 2022. They were revived and subcultured on Löwenstein-Jensen (LJ) medium. For the accurate identification of 34 isolates with observed growth, analysis was performed using Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS). Twelve contaminated isolates were homogenized and decontaminated using the N-acetyl L-cysteine/sodium hydroxide-citrate method. AST were conducted following the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) M24 guideline using the broth microdilution method for amikacin, clarithromycin, doxycycline, meropenem, ciprofloxacin and linezolid.  This involved the use of 96-well U-bottom plates with cation-adjusted Mueller Hinton Broth. The final antibiotic concentration was set at 512 µg/ml. After observing sufficient growth in the control well after 72 hours (as per CLSI guidelines, at least +2 turbidity/cluster growth), the plates were evaluated. Clarithromycin-containing microdilution plates were assessed every other day starting from the 3rd day to detect inducible clarithromycin resistance, with the final evaluation on the 14th day. Staphylococcus aureus and M. peregrinum were used as standard strains.
Results:
The obtained results were compared and evaluated against the MIC values in the CLSI M62 guide. The isolates demonstrated 100% sensitivity to amikacin and 44.12% sensitivity to linezolid. The resistance rates for meropenem, doxycycline, and ciprofloxacin were 97.06%, 100%, and 88.24%, respectively. The 3rd and 14th-day results were analyzed for inducible clarithromycin resistance in the isolates, showing 2.94% and 70.59% resistance, respectively. Thus, a 67.65% rate of inducible clarithromycin resistance was observed.
Conclusion:
The study revealed significant resistance to most drugs except amikacin. Therefore, conducting regular epidemiological studies is essential for determining effective treatment options for M. abscessus infections.
Keywords: Antimicrobial resistance, Broth microdilution method, Clarithromycin, Mycobacterium abscessus