Trichoderma atroviride'den elde edilen kitinazın kısmi saflaştırılması
Partial purification of chitinase from Trichoderma atroviride
Yazar: ZEYNEP ÇAĞLAR
Danışman: DOÇ. DR. İNCİ ARISAN ATAÇ
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2005
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
ÖZETKitinazlar [E.C.3.2.1.14], Î²-1,4-bağlı N-asetil-D-glukozaminin doğrusal bir homopolimeriolan kitini hidroliz eden enzimlerdir. Kitin birçok alg ve mantarın hücre duvarlarınınböceklerin ve eklembacaklıların dış iskeletlerinin, deniz omurgasızlarının kabuklarının, temelbileşenidir.Kitin ve kitinolitik enzimler biyoteknolojik uygulamalar için büyük bir öneme sahiptir.Özellikle, kitinazlar bitki patojenlerini kontrol amaçlı tarımda kullanılırlar. Kitinazlar vekitinin enzimatik hidrolizi ile oluşan kitooligomerler aynı zamanda insan sağlığınınkorunmasında kullanılabilirler. Farklı açılardan kitinazların kullanımındaki başarı makulmaliyette yüksek aktiviteli preparasyonların elde edilmesine bağlıdır. Bu nedenle, kitinolitikenzimlerin genetik ve biyokimyasının, filogenetik akrabalıklarının ve değerlendirmemetotlarının anlaşılması, bu enzimleri yakın gelecekte çeşitli proseslerde kullanılabilirkılacaktır.Kitinin yıkımı ve kitinazlar, biyolojik ve biyoteknolojik proseslerin geniş bir kısmında önemlibir yere sahiptir. Kitin artıklarının çevresel temizliğinden, insan hastalıklarının tedavisine,bitki savunma sistemlerine ve biyolojik kontrole kadar uzanan birçok alanda önemesahiptirler. Bu nedenlerle bitki biyokontrolünde sıkça kullanılan bir küf mantarı olanTrichoderma atroviride'nin ürettiği kitinaz enzimi incelendi. Patates-dekstroz agar üzerindeyetiştirilen T. atroviride'den kitinaz indüksiyonu, Dana ve arkadaşlarının önerdiği sıvıbesiyerinde sağlandı. T. atroviride'nin yer değiştirme yöntemi kullanılarak, %0.1 kolloidalkitin içeren sıvı besiyerinde, 30 ºC'de 48 saat boyunca çalkalamalı inkübasyonu sonucumaksimum kitinaz aktivitesi elde edildi. Kitinaz enzimine amonyum sülfat tuzu, etanol,aseton ve trikloroasetik asit gibi farklı çöktürme yöntemlerinin etkisi incelendi.Anahtar kelimeler: Kitinaz, Trichoderma atroviride, enzim aktivitesi, saflaştırma..i

Abstract:
ABSTRACTChitinases [E.C.3.2.1.14] are enzymes which hydrolyze chitin, a linear homopolymer of Î²-1,4-linked N-asetylglucosamine. Chitin is a major component of most fungal and algae cellwalls, insects and arthropods exoskeletons, and shells of marine invertebrates.Chitin and chitinolytic enzymes are gaining importance for their biotechnologicalapplications. Particularly, chitinases are used in agriculture to control plant pathogens.Chitinases and chitooligomers produced by enzymatic hydrolysis of highly activepreparations at reasonable cost. Therefore, the understanding of biochemistry and genetics ofchitinolytic enzymes, their phylogenetic relationships and methods of estimation will makethem more useful in a variety of processes in near furute.Chitin degradation and chitinases are important in a wide variety of biological andbiotechnological processes, ranging from the exploitation and environmental clean-up ofchitinous wastes, to human therapy, plant defense systems and biological control. For thisreason, being a mold, frequently used in plant biocontrol Trichoderma atroviride producingchitinase was examined. T. atroviride culture was maintained on potato-dextrose agar.Chitinase induction was carried out on liquid medium which had been proposed by Dana et al.It was determined that the maximum chitinase activity obtained with T. atroviride when theliquid medium which was contained 0.1% colloidal chitin, the method of replacement wasapplied, and the cultivation was carried out at 30 ºC for 48 hours with rotary shaker. Then,amonium sulfate, ethanol, acetone and trichloroacetic acid were examined upon the chitinaseactivity.Keywords: Chitinase, Trichoderma atroviride, enzyme activity, purification.2