İnsan retina epitel hücrelerinde prilokaine bağlı inflamasyonun araştırılması
Research of prilocaine-induced inflammation in human retinal pigment epithelial cells
Yazar: ALEYNA ÖZTÜZÜN
Danışman: PROF. MUTAY AYDIN ASLAN
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Göz = Eye ; Nitrik oksit sentazlar = Nitric oxide synthases ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Prilokain = Prilocaine ; Retina = Retina

Özet:
Amaç: Prilokain (PRL) bölgesel anestezide sık kullanılan lokal anesteziktir. Göz içi cerrahisinde lokal anestezinin başarılı kullanımına rağmen kaza sonucu intravitreal enjeksiyon durumlarında lokal anesteziklerin retina üzerinde toksik etkileri oluşabilmektedir. Bu çalışma, PRL toksisitesi tarafından aktive edilen sinyal iletim yollarını inceledi ve insan retinal pigment epitel (ARPE-19) hücrelerinde nitrik oksit sentaz-2 (NOS2) inhibisyonunun koruyucu rolünü belirledi. 
Gereç ve Yöntemler: Hem PRL'nin toksik dozunu hem de bir NOS2 inhibitörü olan Asperglaucide'in (ASP) koruyucu etkinliğini belirlemek için toksisite analizi (MTT testi) yapıldı. Nükleer faktör kappa B p65 (NF–B p65), fosforile NF-B p65, fosfo AKT, NOS2, nitrotirozin, kesilmiş kaspaz-3 protein seviyeleri, immünofloresan boyama ve/veya western blot analizi ile değerlendirildi. Interlökin-6 (IL-6) ve nitrozile protein seviyeleri ELISA ile ölçülürken, kaspaz -3 aktivitesi ve nitrit/nitrat seviyeleri florometrik bir yöntemle belirlendi. 
Bulgular: NF-B p65, fosforile NF-B p65 ve fosforile AKT'nin PRL toksisitesinde önemli ölçüde arttığı gözlendi. Benzer şekilde, IL-6, NOS2, nitrit/nitrat ve nitrotirozin seviyeleri, kontrollere kıyasla PRL uygulanan hücrelerde önemli ölçüde daha yüksekti. ASP'nin PRL ile muamele edilmiş hücrelere uygulanması, NF-B p65, fosforile edilmiş NF-B p65 ve fosforile edilmiş AKT'yi önemli ölçüde azalttı. IL-6, NOS2, nitrit/nitrat ve nitrotirozin seviyeleri de PRL kaynaklı toksisitede ASP tedavisini takiben önemli ölçüde geriledi. Kaspaz-3'e bağlı apoptotik yolda aktivasyon gözlenmedi. 
Sonuç: Bu çalışma insan retinal epitel hücrelerinde PRL toksisitesine bağlı NF-B p65 aracılı sinyal yolu aktivasyonunu gösterdi ve ASP'nin koruyucu etkinliğini belirledi.

Abstract:
Objectives: Prilocaine (PRL) is a commonly used local anesthetic. Despite the successful use of regional anaesthesia for intraocular surgery, toxic effects of local anesthetics can occur on the retina in cases of accidental intravitreal injection. This study examined signal transduction pathways activated by PRL toxicity and determined the protective role of nitric oxide synthase-2 (NOS2) inhibition in human retinal pigment epithelial (ARPE-19) cells. 
Materials and Methods: Toxicity analysis (MTT test) was performed to determine both the toxic dose of PRL and the protective efficacy of ASP, a NOS2 inhibitor. Nuclear factor kappa B p65 (NF–B p65), phosphorylated NF-B p65, phospho AKT, NOS2, nitrotyrosine, cleaved caspase-3 protein levels were evaluated by immunofluorescence staining and/or western blot analysis. Interleukin-6 (IL-6) and nitrated protein levels were quantified by immunoassay, while caspase -3 activity and nitrite/nitrate levels were measured via a fluorometric method. 
Results: It was observed that NF-B p65, phosphorylated NF-B p65 and phosphorylated AKT were significantly increased in PRL toxicity. Likewise, IL-6, NOS2, nitrite/nitrate and nitrotyrosine levels were significantly higher in PRL-treated cells compared to controls. Application of ASP to PRL treated cells significantly reduced NF-B p65, phosphorylated NF-B p65 and phosphorylated AKT to basal levels. IL-6, NOS2, nitrite/nitrate and nitrotyrosine levels were also considerably decreased following ASP treatment in PRL-induced toxicity. No activation was observed in the caspase-3-dependent apoptotic pathway. 
Conclusions: NF-B p65-mediated signal transduction pathway is activated due to PRL toxicity and can be down regulated by ASP. Supported by a grant from TUBİTAK #121S194 and BAP# TYL-2022-5989.