Prolaktin hormonunun insan mezenkimal kök hücrelerinin proliferasyon ve differansiyasyon üzerine etkileri
Proliferation and differantion effect on human mesenchymal stem cells by using prolactin hormone
Yazar: GÜLŞAH ÜNVER
Danışman: PROF. DR. SADIK DİNÇER ; PROF. DR. İLKNUR KOZANOĞLU
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Kök hücre uygulamalarında en önemli hususlardan birisi, hasarlı dokuya dokunun tamirine yetecek sayıda ve kalitede saf hücrelerin aktarılmasıdır. Bu nedenle, farklılaşmamış kök hücrelerin olgun hücrelere farklılaşması ve çoğalması için rekombinant veya sentetik sitokinler, büyüme faktörleri gibi biyolojik uyaranlar kilit rol oynamaktadır.
Bu çalışmada, steril koşullarda temin edilmiş plasentadan, laminar kabin içinde Mezenkimal Kök Hücre elde edildi. Bu MKH'ler T75 flaska ekilip CO2 inkübatöründe 37 0C de 14 gün kültür takibi yapıldı. Bu süre sonunda tripsinizasyon işlemi gerçekleştirildi (Pasaj 0). Pasaj 0 (P0) sonrası örnekler tekrar ekildi ve 7. Günde tripsinize edildi (Pasaj 1).  P1 de  elde edilen hücreler ile çalışma gerçekleştirildi.
Prolaktin hormonu doz belirlenmesi için 96'lık kuyuya 102 ng/L' den başlayayarak azalan dozlarda (50, 25 ,10 ,1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5  ng/L)  her doz için kontrollü 8 kuyuya, standart sayıda hücre ile ekim yapıldı .Aynı zamanda bir de negatif kontrol için sadece besi yeri ile (medyum) 8 kuyuya ekim yapıldı.
Hücre kültürü üzerine en etkili olan Prolaktin dozunu belirlemek için yaygın  olarak kullanılan enzimatik bir test olan MTT (tetrazolium tuzu 3-[4,5- dimethythiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)  testi yapıldı. Sonuçlar değerlendirildiğinde, dozlar arasında belirgin bir istatistiksel fark görülmedi. Prolaktin hormonunun MKH osteojenik ve adipojenik dönüşüme etkisinin belirlenmesi için 20 ng/L prolaktin dozu ile kültür çalışması yapıldı.
20 ng/L prolaktin dozu kullanılarak sadece hormon ile , hormon ve adipojenik dönüşüm medyumu ile ve hormon ve osteojenik dönüşüm medyumu ile olmak üzere hücre kültürleri yapıldı. CO2 inkübatöründe kültür takibi yapıldı ve farklılaşma üzerine bu hormonun etkisi test edildi. 
Adipojenik dönüşümü test etmek amacıyla Oil Red-O, Osteojenik dönüşümü test etmek için ise Alizarin Red S boyama protokolleri uygulandı ve sonuç mikroskobik olarak değerlendirildi. Elde edilen sonuca gore, prolaktin hormonu kullanılan kültürlerde, kontrol hücre grubu ile benzer sayıda dönüşen hücre gözlenmiştir.

Abstract:
One of the most important issues in stem cell applications is the transfer of pure cells to the damaged tissue in sufficient number and quality to repair tissue. Therefore, biological stimuli such as recombinant or synthetic cytokines, growth factors, play a key role in the differentiation and proliferation of undifferentiated stem cells into mature cells.
In this study, Mesenchymal Stem Cells were obtained from the placenta provided under sterile conditions in a laminar cabinet. These MSCs were planted in T75 flasks and cultured for 14 days at 37 0C in a CO2 incubator. At the end of this period, trypsinization was performed (Passage 0). After passage 0 (P0), the samples were re-seeded and trypsinized on Day 7 (Passage 1). The study was performed with the cells obtained in P1.
To determine the dose of prolactin hormone, starting from 102 ng / L to 96 wells, decreasing doses (50, 25, 10, 1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 ng / L) were controlled for each dose. wells were seeded with a standard number of cells. At the same time, 8 wells were cultured with medium (medium) for negative control.
MTT (tetrazolium salt 3- [4,5-dimethythiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide), a commonly used enzymatic test, was performed to determine the most effective prolactin dose on cell culture. When the results were evaluated, no significant statistical difference was observed between the doses. In order to determine the effect of prolactin hormone on MSC osteogenic and adipogenic transformation, 20 ng / L prolactin dose was cultured.
Cell cultures were made using only 20 ng / L prolactin dose with hormone, hormone and adipogenic transformation medium and hormone and osteogenic transformation medium. Culture was monitored in the CO2 incubator and the effect of this hormone on differentiation tested.
Oil Red-O staining protocols were used to test adipogenic transformation and Alizarin Red S staining protocols were applied to test osteogenic transformation and the result was evaluated microscopically. According to the results, a similar number of transformed cells were observed in the cultures using prolactin hormone.