Mesane ağrı sendromu/intersitisyel sistit hayvan modellerinde p2x3 reseptör düzeyinin değerlendirilmesi ve p2x3 ekspresyonu ile ağrı-davranış ilişkisinin incelenmesi
Evaluation of P2X3 receptor level in animal models of bladder pain syndrome/interstitial cystitis and investigation of the pain-behavior relationship with PX3 expression
Yazar: İBRAHİM ERKUT AVCI
Danışman: PROF. DR. CÜNEYD ÖZKÜRKCÜGİL
Kocaeli Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Ağrı = Pain ; Genler = Genes ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Mesane = Urinary bladder ; Mesane hastalıkları = Urinary bladder diseases ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Sistit = Cystitis

Özet:
Giriş ve Amaç:
 Bu çalışmada, iki farklı deneysel İnterstisyel Sistit / Mesane Ağrı Sendromu (İS/MAS)
modelinde pürinerjik yolağın İS/MAS mekanizmasındaki rolünü ve P2X3 reseptör
antagonisti AF219'un terapötik etkilerini belirlemeyi amaçladık.
 Gereç ve Yöntemler:
 Siklofosfamid (CYP, n=32) ve kronik sudan kaçınma stres protokolü ile (WAS, n=32)
ile indüklenmiş İS/MAS modelleri için toplam 64 adet yetişkin dişi Wistar albino sıçan
kullanıldı. Her iki modelde de denekler 4'er gruba (n=8; her grup için) ayrıldı: (1) Kontrol,
(2) Kontrol+AF219, (3) İS/MAS ve (4) İS/MAS+AF219. CYP 75 mg/kg, 1 ml, 3 günde bir
(1, 4 ve 7. günlerde) toplam üç doz intraperitoneal (i.p.) uygulandı. WAS protokolü için
sıçanlar 10 gün boyunca her gün 1 saat pleksiglas kutuların merkezine yerleştirilmiş
platformun üzerinde bekletildi. İS/MAS'ın nosisepsiyon ve anksiyete üzerindeki etkileri
davranış deneyleri ile değerlendirildi. Mesanedeki inflamasyon şiddeti histopatolojik
inceleme ile skorlandı. Mesane kasılma ve gevşeme yanıtları izole in vitro organ deneyleri
ile değerlendirildi. Western blot deneyleri ile mesane dokusunda P2X3, P2X7, Trk-A,
TRPV1 ve TRPA1 protein düzeyleri analiz edildi.
 Bulgular:
 Her iki deney modelinde İS/MAS gruplarının kontrol gruplarına göre noksiyus uyarılara
yanıt verme süreleri daha kısa ve sergilenen anksiyete benzeri davranışlar daha fazlaydı
(p<0,05). İS/MAS grupları diğer gruplara göre daha yüksek inflamasyon tabanlı histolojik
skor değerlerine sahipti (p<0,05). İS/MAS+AF219 gruplarında ise hem davranış
deneylerine ait sonuçlar hem de histolojik skorlar kontroller ile farklılık göstermedi
(p>0,05). Mesane şeritlerinin in vitro deneylerinde, her iki modelin İS/MAS gruplarında
kontrol gruplarına göre Karbakol'e, ATP'ye ve Elektriksel Alan Uyarısı'na (EAU) karşı
artmış kasılma yanıtları var iken (p<0,05) Karbakol ve ATP'nin kümülatif
konsantrasyonlarında ve EAU'nun artan frekanslarında İS/MAS+AF219 ile kontrol
grupları arasındaki kasılma yanıtlarında farklılık tespit edilmedi (p>0,05). Buna ek olarak
her iki modele ait tüm grupların mesane şeritleri, 10-5 M AF219 ile inkübe edildiğinde
gruplar arasındaki EAU kasılma yanıtlarında istatistiksel olarak farklılık izlenmedi
(p>0,05). Hem CYP hem de WAS ile oluşturulan İS/MAS modellerinde P2X3, P2X7, Trk-

Abstract:
Introduction:
 In this study, we aimed to determine the function of the purinergic pathway in the
development of Interstitial Cystitis / Bladder Pain Syndrome (IC/BPS) and the therapeutic
effect of P2X3 receptor antagonist AF219 in two experimental models of IC/BPS.
 Materials and Methods:
 Sixty-four adult female Wistar albino rats were utilized for IC/BPS models induced by
cyclophosphamide (CYP, n=32) and water avoidance stress (WAS, n=32). In both models
subjects were divided into four groups (n=8; for each group): (1) Control, (2)
Control+AF219, (3) IC/BPS, and (4) IC/BPS+AF219. CYP 75 mg/kg/ml was administered
intraperitoneally (i.p.), qd in three (days 1, 4, and 7) days for a total of three doses. For the
WAS protocol, rats were placed every day on the platform in the center of the plexiglass
boxes for 1 hour for ten days. The effects of IC/BPS on nociception and anxiety were
evaluated with behavioral experiments. The severity of inflammation in the bladder was
scored by histopathological examination. Bladder contraction and relaxation responses
were evaluated in in-vitro isolated organ-bath experiments. Protein levels of P2X3, P2X7,
Trk-A, TRPV1, and TRPA1 in bladder tissue were analyzed by western blot experiments.
 Results:
 In both experimental models, the IC/BPS groups had shorter response times to noxious
stimuli and more anxiety-like behaviors than the control groups (p<0.05). The IC/BPS
groups had higher inflammation-based histological scores than the other groups (p<0.05).
In the IC/BPS+AF219 groups, both behavioral test results and histological scores did not
differ from controls (p>0.05). In the in-vitro experiments of bladder strips, while there was
increased contractile responses to Carbachol, ATP, and Electrical Field Stimulation (EFS)
(p<0.05) in the comparisons between IC/BPS groups of both models and the control
groups, there was no difference (p>0.05) between IC/BPS+AF219 and control groups at
cumulative concentrations of Carbachol and ATP and at increased frequencies of EFS. In
addition, when the bladder strips of all groups of both models were incubated with 10-5 M
AF219, no statistical difference was observed in the EFS contractile responses between the
groups (p>0.05). Levels of P2X3, P2X7, Trk-A, and TRPV1 proteins were significantly
higher in both CYP and WAS IC/BPS groups when compared with their control groups
(p<0.05). TRPA1 protein levels did not differ between groups in both models (p>0.05). In