İntrasellüler anjiyotensin II'nin diyabetik sıçan vasküler düz kas hücre proliferasyonuna etkisi
Effect of intracellular angiotensin II on diabetic rat vascular smooth muscle cell proliferation
Yazar: ZEHRA ÇİÇEK
Danışman: PROF. DR. AYŞE DOĞAN
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Anjiyotensin II = Angiotensin II ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Kas-düz-vasküler = Muscle-smooth-vascular ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Diyabet ve intrasellüler anjiyotensin II'nin (Ang II) neden olduğu vasküler düz kas hücre proliferasyonunun altında yatan mekanizma tam olarak bilinmemektedir. Ayrıca diyabet ve hipertansiyonda renin anjiyotensin sistemi bileşenlerinin intrasellüler ve sistemik olarak arttığı bilinmektedir. Birçok çalışmada sistemik Ang II,  anjiyotensin II tip 1 reseptörü (ATR1) ve anjiyotensin II tip 2 reseptörünün (ATR2) düz kas hücre proliferasyonundaki rolü gösterilmiştir. Ancak vasküler düz kas hücresi tarafından intrasellüler olarak da sentezlenen anjiyotensin II'nin proliferasyona etkisiyle ilgili yeterli çalışma bulunmamaktadır. Bu nedenle diyabetik sıçan vasküler düz kas hücre proliferasyonuna intrasellüler anjiyotensin II, ATR1 ve ATR2'nin etkisi araştırıldı. 
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda deney hayvanı olarak Wistar albino 180-200 g ağırlığında erkek sıçanlar kullanıldı. Sıçanların bir kısmına streptozotosin 45 mg/kg intravenöz yolla kuyruk veninden verilerek deneysel diyabetik grup oluşturuldu. Tüm deneysel uygulamalar Çukurova Üniversitesi Deneysel Tıp Araştırma ve Uygulama Merkezi Etik Kurul kararlarına uygun olarak yapıldı. Oluşturulan diyabetik ve kontrol grubu sıçanların aorta düz kas dokusundan primer düz kas hücre kültürü yapıldı. Elde edilen hücrelerin bir kısmı Ang II (0,001 µM, 0,01 µM, 0,1 µM, 1 µM, 10 µM, 100µM ve 1000 μM), ATR1 antagonisti Olmesartan (1 µM) ve ATR2 antagonisti PD123,319 (1 µM) ile 24 saat muamele edilerek hücre çoğalması ve canlılığı 3-(4,5-dimethythiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) ile spektrofotometrik olarak değerlendirildi. Ang II düzeyi hücre medyumundan ve hücre lizatından ELİSA kitiyle ölçüldü.
Bulgular: Normal, diyabetik ve yüksek glukoz uygulanan vasküler düz kas hücresinde (VDKH) 0,1 µM ve 0,01 µM Ang II uygulaması hücre proliferasyonunu anlamlı olarak artırdı. Çalışmamızda normal VDKH'de Ang II, Ang II+PD123,319, Olmesartan+PD123,319 ve Ang II+Olmesartan+PD123,319 uygulamaları hücre proliferasyonunda anlamlı artışa neden olurken, Ang II+Olmesartan uygulaması hücre proliferasyonunu anlamlı olarak azalttı. Ancak diyabetik ve yüksek glukoz uygulanan VDKH'de Ang II+Olmesartan uygulamasında azalma görülmedi. Normal, diyabetik ve yüksek glukoz uygulanan VDKH'de ve medyumunda ELİSA'yla intrasellüler Ang II varlığı gösterildi. Çalışmamızda normal, diyabet ve yüksek glukozlu intrasellüler ve hücre medyumda ölçülen Ang II düzeyleri mg/protein olarak hesaplandığında normal grupla diyabetik grup arasında anlamlı bir fark görülmedi.
Sonuç: Çalışmamızda diyabetik VDKH proliferasyonunda artma eğilimi olmasına rağmen hücre içi ve dışı Ang II düzeylerinde kontrol grubuna göre fark olmaması, diyabetteki proliferasyon, Ang II düzeyleri ve ATR arasında ilişkinin olmadığını düşündürmektedir.
 
Anahtar Sözcükler: Anjiyotensin II, diyabet, düz kas hücresi, intrasellüler, proliferasyon.

Abstract:
Background: The mechanism underlying vascular smooth muscle cell proliferation caused by diabetes and intracellular angiotensin II (Ang II) is not fully understood. It is also known that components of the renin angiotensin system in diabetes and hypertension increase intracellularly and systemically. Many studies have shown the role of systemic Ang II, angiotensin II type 1 receptor (ATR1) and angiotensin II type 2 receptor (ATR2) in smooth muscle cell proliferation. However, there has not been enough studies about the effect of angiotensin II, which is synthesized intracellularly by vascular smooth muscle cell on proliferation. Therefore, the effect of intracellular angiotensin II, ATR1 and ATR2 on diabetic rat vascular smooth muscle cell proliferation was investigated.
Materials and Methods: We used Wistar albino male rats weighing 180-200 g as experimental animals. An experimental diabetic group was formed by administering streptozotocin 45 mg/kg intravenously via a tail vein of the rats. All experimental applications were made in accordance with the decisions of the Ethical Committee of the University of Çukurova Experimental Medicine Research and Application Center. Primary smooth muscle cell culture was performed from the aorta smooth muscle tissue of the diabetic and control group of rats. Some of the obtained cells were treated with Ang II (0,001 μM, 0,01 μM, 0,1 μM, 1 μM, 10 μM, 100 μM and 1000 μM), ATR1 antagonist Olmesartan (1 μM) and ATR2 antagonist PD123,319 (1 μM) for 24 hours to evaluation of cell proliferation and viability spectrophotometrically with 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). Ang II level was measured in cell medium and cell lysate by ELISA kit. 
Findings: In normal, diabetic and high glucose treated vascular smooth muscle cell (VDKH), 0,1 μM and 0,01 μM Ang II application significantly increased cell proliferation. In our study, Ang II, Ang II+PD123,319, Olmesartan+PD123,319 and Ang II+Olmesartan+PD123,319 resulted in a significant increase in cell proliferation whereas Ang II+Olmesartan administration significantly decreased cell proliferation in normal VDKH. However, there was no decrease in Ang II+Olmesartan administration in VDKH with diabetic and high glucose. Intracellular Ang II was detected with ELISA in VDKH and medium with normal, diabetic and high glucose. In our study, Ang II levels measured in normal, diabetic and hyperglucose intracellular and cell media were calculated as mg/protein, but no significant difference was found between normal group and diabetic group.
Conclusion: Although there was an increased tendency in diabetic VDKH proliferation in our study, the difference between intracellular and extracellular Ang II levels compared to the control group suggests that there is no relationship between diabetes proliferation, Ang II levels and ATR.


Key Words: Angiotensin II, diabetes, smooth muscle cell, intracellular, proliferation.