İshikawa endometrium epiteli hücre kültürlerinde propolisin karboplatin sitotoksisitesi üzerine etkisi
Effect of propolis on carboplatin cytotoxicity in ishikawa endometrial epithelium cell cultures
Yazar: NURSEL İŞCİ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF KERVANCIOĞLU DEMİRCİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Endometrial neoplazmlar = Endometrial neoplasms ; Endometriyum = Endometrium ; Hücre kültürü = Cell culture ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Propolis = Propolis ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Endometriyum kanseri, dünyada en sık görülen jinekolojik kanser türlerinden biridir.  Çalışmamızda antitümoral, antibakteriyel, antiviral, antioksidan özelliği ile bilinen propolisin ve endometriyal adenokanserde sıklıkla kullanılan kemoterapötik ajanlardan olan karboplatinin etkileri, endometriyal adenokarsinom hücre hattı İshikawa (Isc) ve fibroblast hücre hattı 3T3 kullanılarak araştırıldı. 
Kontrol Isc, Isc+propolis, Isc+karboplatin, Isc+propolis+karboplatin, kontrol 3T3, 3T3+propolis, 3T3+karboplatin, 3T3+propolis+karboplatin grupları çalışıldı. 24, 48 ve 72. saatlerde örneklerdeki etkiler için testler uygulandı. Deneyler üçer kez tekrar edildi. Hücre sayısı, canlılığı ve migrasyonu sitolojik yöntemlerle araştırıldı. Sitokrom-c ve p27 immünositokimyasal olarak çalışıldı. Apoptoz ve hücre döngüsü akım sitometri kullanılarak değerlendirildi. Geçirimli elektron mikroskobu (TEM) 24. ve 72. saatlerdeki ince yapısal değişiklikleri gösterdi. Karboplatin ve propolis tek veya kombine uygulandıklarında kontrol grubuna göre tümör hücreleri üzerinde sitotoksik etki gözlendi. Canlı hücre sayısında ve migrasyonda azalmaya yol açtılar. Bu etkilerin kombine uygulandıklarında daha çok olduğu görüldü. Apoptozu artırdıkları ve bunu intrinsik yolak üzerinden yaptıklarını sonucunu elde ettik. Hücre döngüsünde p27 boyamalarında ajanlar tek verildiklerinde etki görülmezken, kombine verildiklerinde G1 fazında istatistiksel olarak anlamlı bir durmaya yol açtıkları görüldü ancak bu veriler akım sitometri ile doğrulanamadı. TEM incelemelerinde hem propolis hem de karboplatin apoptoza giden hücrelerin özelliklerini gösterdiler ve kombine olarak verildiklerinde daha şiddetli olarak hücre tomurcuklanmalarının, apoptotik cisimlerin ve vakuolizasyonun varlığı dikkati çekti. 3T3 hücrelerinin immunositokimya, akım sitometri ve TEM sonuçları incelendiğinde, her iki ajanın etkilerinin minimal olduğu gözlendi.  Sonuç olarak, bir gıda takviyesi propolis, sinerjik etkisi ile endometrial adenokarsinom tedavisine karboplatine katkıda bulunabilir. Bu çalışma, daha detaylı hayvan ve insan çalışmaları için veriler ortaya koymuştur.  
Anahtar Kelimeler :  Propolis, İshikawa, Karboplatin, Endometriyum, Hücre kültürü

Abstract:
Endometrial cancer is one of the most common types of gynecological cancer worldwide. The effects of propolis, known for its antitumoral, antibacterial, antiviral, and antioxidant properties, and carboplatin, one of the chemotherapeutic agents frequently used in endometrial adenocancer, were investigated in our study using endometrial adenocarcinoma cell line Ishikawa (Isc) and fibroblast cell line 3T3. The study groups were as follows: Control Isc, Isc+propolis, Isc+carboplatin, Isc+propolis+carboplatin, control 3T3, 3T3+propolis, 3T3+carboplatin, 3T3+propolis+carboplatin. Tests were performed for the effects on the samples at 24th, 48th, and 72th hours. Experiments were repeated three times. Cell number, viability, and migration were investigated by using cytological methods. Cytochrome-c and p27 were studied immunocytochemically. Apoptosis, and cell cycle were examined by using flow cytometry. Transmission electron microscopy showed changes in the ultrastructure at 24th and 72th hours. Cytotoxic effects were observed on tumor cells when compared with the control group as carboplatin and propolis were administered single or combined. They caused a decrease in migration and viable cell count. These effects were more severe in combined group. They exert their apoptotic effects through the intrinsic pathway of apoptosis. When p27 was examined in the cell cycle, no significant effect was seen with single agent. Yet, combined administration led to a significant arrest in the G1 phase. On the other hand, these data could not be confirmed by flow cytometry. The single administrations of propolis or carboplatin showed in TEM examinations both the properties of cells going to apoptosis. When given combined, the presence of cell budding, apoptotic bodies, and vacuolization was noted more severely. The immunocytochemistry, flow cytometry, and TEM examinations of 3T3 cells showed minimal effects for both agents. 
In conclusion, a food supplement propolis can contribute to the treatment of endometrial adenocarcinoma with its synergestic effect to carboplatin. This study provided data for further detailed animal and human studies. 
Key Words: Propolis, Ishikawa, Carboplatin, Endometrium, Cell cultures