Mastitisli sığır sütlerinden candida türlerinin izolasyonu ve antifungal duyarlılıklarının belirlenmesi
Determination of antifungal susceptibility and isolation of candida SPP. from mastitic cattle milk
Yazar: MUSTAFA SÖNMEZ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. GÖKSEL ERBAŞ
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antifungal ajanlar = Antifungal agents ; Antifungal duyarlılık testleri = Antifungal sensitivity tests ; Kandida = Candida ; Mantar hastalıkları = Mycoses ; Mantarlar = Fungi ; Mastit = Mastitis

Özet:
Araştırmamızda Marmara bölgesi Tekirdağ ili ve ilçelerinde sığırlarda mikotik mastitis hastalığına neden olan Candida spp.'lerin izolasyon, identifikasyon ve antifungallere karşı olan duyarlılıklarının tespiti amaçlanmıştır. Bölgedeki çiftliklerden California Mastitis Testi (CMT) yapılarak mastitisli olduğu tespit edilen 100 adet mastitisli süt örneği kullanılmıştır. Örnekler öncelikle SDA'a ekildi ve 25ºC ile 37ºC de ayrı ayrı inkübe edildiler. SDA'da 2-3 günde üreyen, hamur kıvamında, 0,5-1 mm çapında, beyaz veya krem renkli, düzgün sınırlı ve kendine özgü maya kokusu olan kolonilerden Gram boyamalar yapıldı. Gram boyamada değerlendirmesinde Candida spp. olarak tanımlanan mikroorganizmalar SDA'ya pasajlanarak saf kültürler elde edildi. Saf olarak elde edilen izolatların identifikasyonu API 20C AUX hızlı identifikasyon kiti ile yapıldı.  İdentifiye edilen Candida türlerinin antifungal duyarlılık değerleri Disk difüzyon tekniği kullanılarak gerçekleştirildi. Çalışmada antifungal duyarlılık testlerinde Ketoconazole, Fluconazole, Miconazole, Amphoteracine B, Nystatin ve Flucytosine etken maddelerini içeren antifungal diskleri kullanıldı. Araştırmada Tekirdağ ilindeki büyükbaş çiftliklerinden toplanan 100 adet mastitisli süt örneğinin 25 (%25) adedinde Candida spp. varlığı saptanmıştır. İzole edilen 25 suşun API 20C AUX hızlı tanı test kiti ile yapılan identifikasyon bulgularına göre 8 adet (%32) C. krusei, 5 adet (%20) C. albicans, 3'er adet (% 12) C. boidinii, C. famata ve C. kefyr, 2 adet (%8) C. spherica ve 1 adet de (%4) C. thermophilia tespit edilmiştir. İzole edilen suşlara NCCLS'in M-44 (Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts; Approved Guideline) yönergesine göre yapılan test sonuçları değerlendirildiğinde; Tüm izolatlar Ketoconazol'e %100 duyarlı iken Fluconazole, Miconazole, Amphoteracine B ve Flucytosine %100 dirençli oldukları bulunmuştur. Araştırmamızda 2 adet (%40) C. albicans ve 1 adet (%12,5) C. krusei  izolatı Nystatin etken maddesine tam duyarlı iken, diğer tüm izolatların ise orta düzey duyarlı olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
Isolation, identification and determination of antifungal susceptibility of Candida spp. that cause mycotic mastitis in cattle in Tekirdağ province and its counties in Marmara Region were aimed in this research. 100 mastitic milk samples were used that were collected from farms of the region by performing California Mastitis Test (CMT). Primarily, samples were cultured to SDA and were incubated separately at 25-37 °C. From the colonies that grown in SDA in 2-3 days, in paste stiffness, 0.5-1 mm in diameter, white or cream colored, uniformly bounded and that have distinctive yeast scent were subjected to gram staining. Under gram staining evaluation, microorganisms that were predefined as Candida spp. were conveyed to SDA and pure cultures were obtained. Pure isolates were identified by API 20C AUX rapid identification kit. Antifungal susceptibility rates of identified Candida spp. were determined by using disc diffusion technique. In antifungal susceptibility tests; Ketoconazole, Fluconazole, Miconazole, Amphoteracine B, Nystatin and Flucytosine containing discs were used. Candida spp. were detected in the 25 of the 100 mastitic milk samples. According to results of API 20C AUX rapid identification kit, 8 C. krusei (32%), 5 C. albicans (20%), 3 each C. boidinii, C. famata and C.kefyr (12%), 2 C. spherica (8%) and 1 C. thermophilia (4%) were identified from the 25 isolated strains. In the evaluation of test results of isolated strains that performed as in respect to M-44 directive of NCCLS (Method for Antifungal Disc Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts; Approved Guideline); all strains were found % 100 susceptible to Ketoconazole and 100% resistant to Fluconazole, Miconazole, Amphoteracine B and Flucytosine. Two of the C. albicans (40%) and 1 of the C. krusei (12.5%) isolates were susceptible Nystatin while all the other isolates were moderately resistant to that.