Mezenkimal kök hücrelerin b-lenfositlerin immünomodülatör fonksiyonları üzerine etkisi
Effect of mesenchymal stem cells on the immunomodulatory functions of b - lymphocytes
Yazar: MERAL SARPER
Danışman: DOÇ. DR. UĞUR MUŞABAK
GATA / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji ve Allerji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: B lenfositleri = B lymphocytes ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kök hücreler = Stem cells ; Lenfositler = Lymphocytes

Özet:
Destek hücresi özelliği taşıyan Mezenkimal Kök Hücre (MKH)'lerin, B lenfositlerin migrasyon, çoğalma ve immünoglobulin sentezini etkileyerek bu hücreler üzerinde düzenleyici rol oynadıkları gösterlimiştir. Bu çalışmanın amacı MKH'lerin B lenfositlerin immünmodülatör fonksiyonları üzerine olan etkilerini araştırmaktır. Bu amaçla insandan alınan kemik iliği örneklerinden gradient dansite yöntemiyle elde edilen MKH'lerle aynı olguların periferik kanlarından manyetik yöntemle elde edilen B lenfositler 24, 48 ve 72 saat süre ile ayrı ayrı ve birlikte kültüre edilmiş, CD5+ ve CD19+ B lenfositlerde akım sitometri ile CD25 ifadesi ve IL-10 sentezi ölçülmüştür. Tek başına ve ko-kültürlerde kullanılan B lenfositler kontrol amacıyla pokeweed mitojen (PWM) ile uyarılmış ve uyarılmamış koşullarda kültüre edilmiştir. Ayrıca tek başına yapılan kültürlerde ve ko-kültürlerde XTT (2,3-bis[2-Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide iner salt) sitotoksisite testi kullanılarak proliferasyon yanıtı ölçülmüş, sonuçlar istatistiksel olarak karşılaştırılmıştır. Ko-kültürlerde interferon gamma (IFN- ? ) ile uyarılmış MKH'ler kullanılmış ve indolamin 2-3 dioksijenazin (IDO) sentezi akım sitometri ile ölçülmüştür. Kontrol amacıyla tek başına kültüre edilen IFN- ? ile uyarılan MKH kültürlerinde IDO sentezi değerlendirilmiştir. MKH kültürlerinde ayrıca CD105, CD90 ve HLA-DR ifadesi de akım sitometri ile ölçülmüş ve bu belirteçlerin yüksek oranlarda ifade edildiği tespit edilmiştir. Ko-kültürlerde hücre fenotipinde meydana gelen değişiklikler MKH ve B lenfositlerin 1M:1B, 1M:2B, 2M:1B, 2M:2B oranlarında ayrı ayrı değerlendirilmiştir. MKH'lerle kültüre edilen uyarılmış ve uyarılmamış CD5+ ve CD19+B lenfositlerdeki CD25 ifadesi ile IL-10 sentezinin tek başına kültüre edilenlere göre daha yüksek olduğu tespit edilmiştir. CD25 ifadesinin ve CD5+B lenfositlerden sentezlenen IL-10 düzeyinin 1M:1B'de, CD19+ B lenfositlerden sentezlenen IL-10 düzeyinin ise 2M:1B'de en yüksek olduğu görülmüştür. XTT proliferasyon testi değerlendirmesine göre MKH ve B lenfositlerin beraber kültüre edildiği oranlardaki proliferasyon yanıtının, bu hücrelerin tek başına yapılan kültürlerindeki proliferasyon yanıtlarına göre daha yüksek olduğu, ko-kültürde MKH oranı arttıkça proliferasyon oranının arttığı, B lenfosit oranı arttıkça da proliferasyonun baskılandığı görülmüştür.Sonuç olarak Mezenkimal Kök Hücrelerin B lenfositlerin immünmodülatör fonksiyonları üzerine etkilerinin olduğu görülmüştür

Abstract:
It was revealed that mesenchymal stem cells show supporting cell features has a regulatory effect on B lymphocytes by influencing migration, proliferation and synthesis of immuglobins (Ig) of B lymphocytes. The purpose of this study was to investigate the effects of MSC on some immunomodulatory functions of B lymphocytes. For this purpose, MSC?s derived from human bone marrow samples by density-gradient density gradient centrifugation method and B lymphocytes obtained from same donors? peripheral bloods by magnetic method were cultured separately and together through 24, 48, 72 hours, and intracellular IL-10 synthesis and surface expression level of CD25 molecule on CD5+CD19+B lymphocytes were measured using flow cytometry. B lymphocytes used in individual or co-cultures were also cultured under induced by pokeweed mitogen (PWM) and non-induced conditions in order to control. In addition, proliferation response was measured in the cultures alone and co-cultures using the XTT(2,3-bis[2-Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide iner salt) cytotoxicity test, and the results were statistically compared with one another. MSCs stimulated by interferon gamma (IFN- ? ) were used in co-cultures and the synthesis of indolamine 2-3 dioxygenase (IDO) was measured by flow cytometry. The synthesis of IDO in alone MSCs cultures stimulated with IFN- ? was also evaluated in order to control. Additionally, the expressions of CD105, CD90 and HLA-DR were also measured in the MSC cultures by flow cytometry and high expression levels of these markers were detected. The changes occurred in the cell phenotype were evaluated separately at the 1M:1B, 1M:2B, 2M:1B, 2M:2B ratios of MSC and B lymphocytes in the co-cultures. It was detected that the surface expression of CD25 and the synthesis of IL10 in stimulated and unstimulated CD5+CD19+ B lymphocytes cultured with MSCs were higher than those of alone. The highest levels of surface expression of CD25 and synthesis of IL10 in CD5+ B lymphocytes were observed at 1M:1B, while the highest levels of synthesis of IL-10 in CD19+B were observed at 2M:1B. According to XTT proliferation test results, proliferation response in the case of together cultivation of MKH and B lymphocytes is overwhelming the proliferation response of either of MKH and B lymphocytes alone.In conclusion, it was shown that mesenchymal stem cells have the effects on some immunomodulatory functions of B lymphocytes.