Pnömoni̇li̇ sığır akci̇ğerleri̇nde mycoplasma bovis enfeksi̇yonunun patoloji̇k ve moleküler yöntemlerle araştırılması.
Investigation of mycoplasma bovis infection in pneumonic lungs of cattle with pathological and molecular methods
Yazar: SERDAR ALTUN
Danışman: PROF. DR. YAVUZ SELİM SAĞLAM
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Mikoplazma enfeksiyonları = Mycoplasma infections ; Pnömoni = Pneumonia ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sığırlar = Cattles ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Amaç: Bu çalışmada; Erzurum ilinde yer alan mezbahalarda kesilen sığırların akciğerlerinde Mycoplasma bovis'in varlığı ve yaygınlığının PZR, immunohistokimya ve immunfloresan yöntemlerle saptanması, ayrıca histopatolojik incelemeler ışığında bu enfeksiyonun oluşturduğu yangısal yanıtın karakterize edilmesi amaçlanmıştır. 
Materyal ve Metot: Çalışmada mezbahada kesilen toplam 836 sığırın akciğerleri incelenmiş, bunların 100'ünde (%11.96) makroskobik olarak pnömoni bulguları gözlenerek örnekler alınmıştır. Kesilen hayvanlara ait tür, yaş, cinsiyet ve akciğerde görülen lezyon lokalizasyonu gibi bilgiler, hazırlanan formlara işlenerek veriler toplandı. Toplanan dokuların rutin histopatolojik ve immunohistokimyasal boyamaları Atatürk Üniversitesi Veteriner Fakültesi Patoloji Anabilim dalı ve PZR uygulamaları ise Mikrobiyoloji Anabilim dalı laboratuvarlarında gerçekleştirildi. 
Bulgular: Pnömoniler, eksudatın karakteri ve lezyonların organdaki lokalizasyonu dikkate alınarak 5 grupta sınıflandırılmıştır. Pnömonili akciğerde ve etken pozitif örneklerde lezyonlara en sık kranial loplarda rastlandı. En yaygın tespit edilen pnömoni tipleri sırasıyla intersitisyel pnömoni (42 hayvan), irinli-nekrotik bronkopnömoni (28 hayvan), bronkointersitisyel pnömoni (16 hayvan), fibrinli-nekrotik bronkopnömoni (8 hayvan), granülomatoz pnömoni (6 hayvan) olarak tespit edilmiştir. PZR testi sonuçlarına göre 36 akciğer örneğinde (%36) M. bovis etken pozitif bantlar görüldü. Bunun yanında pozitif vakalar; interstisyel pnömonili (16 adet), irinli - nekrotik pnömonili (9 adet), bronkointersitisyel pnömonili (7 adet) ve fibrinli-nekrotik pnömoni (4 adet) bulguları gösteren olgularda tespit edilmiştir. İmmunohistokimya ve immunfloresan boyamalar sonucunda pozitif olan 30 örnekte PZR pozitifliğide saptandı. Bu olgular içerisinde immun-pozitif reaksiyonlara çoğunlukla yangı hücrelerinin sitoplazmaları başta olmak üzere, bronş ve bronşiyol epitelleri ve yine nekroz alanlarında rastlandı. 
 Sonuç: Elde edilen bu veriler değerlendirildiğinde, sığır pnömonilerinde M. bovis' in oldukça yaygın olduğu görülmüştür. M. bovis' in PZR yöntemi kullanılarak ortaya konulması açısından yapılan ekstraksiyon yöntemlerinde optimizasyon işleminin, sağlıklı sonuçlar elde edilmesi açısından önemli bir yer tuttuğu kanısına varılmıştır.

Abstract:
Aim: The aim of this study was to determine presence and prevelance of Mycoplasma bovis by immunohistochemistry, immunofluorescence stain and PCR methods in cattle lungs with pneumonia slaughtered in Eruzum province. Furthermore to characterize the inflammatory response against the agent by investigation of the lessions in lungs histopathologically. 
Material and Methods: To obtain 100 lung samples showing pneumonic lesions, totaly 836 (11.96 %) cows were watched before and after they had been slaughtered. Information about this animals like genus, age, sex and the location of the lesions in lungs were noted on information forms. All routine histopathology process like formalin- fixing, sectioning paraffin embedded lung tissue samples, immunohistochemical staining and PCR, besides examination of slides were undertaken in Pathology and Microbiology Department of Veterinary Medicine Faculty of Atatürk University. 
Results: All pneumonic lessions were classified in five groups according to property of the exudative character and affected areas. Pneumonia was detected most frequently in the cranial lobe lesions in the lungs and agents of positive samples. During the evaluation type of intersititel pneumonia was the most common and seen in (42) animals, suppurative - necrotic (Caseo necrotic) bronchopneumonia (28) animals, bronchointerstitial pneumonia(16), necrotic - fibrinoprulent bronchopneumonia (8) and granulomatose pneumonia (6). According to the PCR test results in 36 (36%) lung specimen yielded positive factors for M. bovis band. M. bovis positive cases include 16 intersititiel, 9 suppurative- necrotic, broncho-interstitial pneumonia 7 and fibrinonecrotic 4 pneumonic cases. Immunohistochemistry and immunofluorescence staining result also PCR positive reaction was observed in 30 (30%) specimens of lung tissue samples showing pneumonic lessions. For positive reactions of immunohistochemistry and immunofluorescence frequently cytoplasm of inflomattory cells were first target also epitelium and exudate in lumen of bornch and bronchiol was too. 
Conclusion: According to the results obtained, M. bovis pneumonia was found to be quite common in cattle. Optimizing processes in the DNA extraction phase for detectin M. bovis factor by using the PCR method hold an important place for obtaining reliable results.