Raloksifen'in biyolojik materyalden ve farmasötik preparattan analizi için gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi yönteminin geliştirilmesi ve valide edilmesi
Development and validation of gas chromatography-mass spectrometry method for the analysis of raloxifene in biological material and pharmaceutical preparation
Yazar: MÜNEVVER TANDOĞAN
Danışman: PROF. DR. NURAN ÖZALTIN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Bölümü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı / Analitik Kimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry
Dizin: Biyolojik ürünler = Biological products ; Kromatografi-gaz = Chromatography-gas ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Tamoksifen = Tamoxifen

Özet:
Raloksifen, kadınlarda postmenopozal osteoporozun tedavisinde, erkeklerde doping amacıyla kullanılan selektif östrojen reseptör modülatörleri (SERM) grubundan bir ilaçtır. Raloksifenin insan idrarından ve farmasötik preparattan analizi için yeni bir gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) yöntemi geliştirilmiştir. Raloksifen GC-MS analizinden önce silillenmiştir. Tepkime koşulları farklı türev reaktifleri, tepkime sıcaklıkları ve süresi gibi parametreler incelenerek optimize edilmiştir. Raloksifen, MSTFA/ß-merkaptoetanol/NH4I türevlendirme reaktifi kullanılarak 80 °C'de 30 dk'da etkin bir şekilde türevlendirilmiştir. Metiltestosteron iç standart (IS) olarak seçilmiştir. Analiz seçilmiş iyon modunda (SIM) yapılmıştır. Raloksifen için m/z 578, IS için m/z 446 iyonları nicel analiz amacıyla seçilmiştir. Kromatografik yöntemi optimize etmek için kromatografik parametreler (başlangıç ve son fırın sıcaklıkları, gaz akış hızı) incelenmiştir. Raloksifen idrardan karbonat tamponu (pH 9.0) ve metil tersiyer-butil eter kullanılarak ekstre edilmiştir. Geliştirilen yöntemin, sistem uygunluk testleri, özgünlük, duyarlılık, doğrusallık, doğruluk, kesinlik, geri kazanım, kararlılık, sağlamlık ve tutarlılık parametreleri insan idrarından ve farmasötik preparattan raloksifen analizi için ayrı ayrı valide edilmiştir. İdrardan raloksifen tayini için doğrusallık aralığı 10-200 ng mL-1, alt tayin sınırı (LOQ) 10.0 ng mL-1, gözlenebilme sınırı (LOD) 8.0 ng mL-1 olarak bulunmuştur. Raloksifenin farmasötik preparattan analizi için doğrusallık aralığı 10-400 ng, LOQ 10.0 ng ve LOD 5.0 ng bulunmuştur. Validasyon sonuçları, yöntemin duyarlı, kesin, doğru, özgün, sağlam ve tutarlı olduğunu göstermiştir. Geliştirilen ve valide edilen yöntem Raloksifen HCl içeren farmasötik preparatın analizine başarılı bir şekilde uygulanmıştır. Sonuçlar kaynaklardaki bir yöntemle karşılaştırılarak aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır.

Abstract:
Raloxifene is selective estrogen modulator (SERM) drug which is used in the treatment of postmenopausal osteoporosis in women and used for doping in men. A new gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method was developed for the determination of Raloxifene in human urine and pharmaceutical preparation. Raloxifene was silylated prior to GC-MS analysis. Derivatization reaction was optimized to investigate parameters such as different derivatization reagents, reaction temperatures and times. It was efficiently derivatized using MSTFA/ß-mercaptoethanol/NH4I at 80 °C for 30 min. Methyltestosterone was selected as internal Standard (IS). Analysis was performed in selected ion monitoring (SIM) mode. The ions m/z 578 for raloxifene and m/z 446 for IS were selected for quantitation. Chromatographic variables (initial and final oven temperature, flow rate of gas) were investigated to optimize the chromatographic method. Raloxifene was extracted from urine with carbonate buffer (pH 9.0) and methyl ter-butyl ether. The developed method was validated in terms of system suitability tests, specificity, sensitivity, linearity, accuracy, precision, recovery, stability, robustness and ruggedness for analysis of Raloxifene in each urine and pharmaceutical formulation. Linearity was established in the range of 10-200 ng mL-1, limit of quantification (LOQ) was 10.0 ng mL-1 and limit of detection (LOD) was 8.0 ng mL-1 for urine. Linearity was found 10-400 ng, LOQ was 10.0 ng and LOD was 5.0 ng for pharmaceutical analysis. Developed method was sensitive, precise, accurate, specific, sensitive, rugged and robust due to the validation study results. The developed and validated method was successfully applied to analysis of the pharmaceutical preparation containing raloxifene HCl. The results were compared to the method in literature and no significant difference was found between them.