Levobupivakain ve bupivakainin kondrotoksik etkileri; apoptotik aktivite çalışması
Condrtoxic effects of levobupivacaine and bupivacaine; the examination of apoptotic activity
Yazar: OSMAN ÇEVİK
Danışman: PROF. DR. KARAMEHMET YILDIZ
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation
Dizin: Anestetikler-lokal = Anesthetics-local ; Anestezi-lokal = Anesthesia-local ; Apoptozis = Apoptosis ; Bupivakain = Bupivacaine ; Kondrom = Chondroma ; Kıkırdak-artiküler = Cartilage-articular ; Levobupivakain = Levobupivacaine ; Toksisite = Toxicity

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, tek doz intraartiküler enjeksiyonla verilen bupivakain ve levobupivakainin tavşan diz eklemi kıkırdak dokusundaki kondrotoksik ve apoptotik etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Materyal ve Metod: Çalışma Yeni Zelanda türü, dişi cins 40 tavşan üzerinde gerçekleştirildi. Deney hayvanları, her biri 20 tavşandan oluşan 2 gruba ayrıldı. Çalışma grubuna uygun olarak %0,5 konsantrasyonda bupivakain, levobupivakain veya %0,9 normal salin intraartiküler enjeksiyon yöntemiyle uygulandı. Her bir grupta yer alan tavşanlardan 10 tanesi enjeksiyondan sonraki 7. günde, kalan 10 tanesi ise enjeksiyondan sonraki 28. günde intraperitonial pentotal sodyum uygulanarak sakrifiye edildi. Sakrifiye edilen tavşanların enjeksiyon yapılan eklemleri diseke edilerek ışık mikroskobu ve immünflorasan mikroskopta incelenmek üzere hazırlandı. Işık mikroskobu için hazırlanan kesitler hemotoksilen-eozin ile boyanarak söz konusu lokal anestezik ajanların kıkırdak dokusunda neden olduğu apopitotik değişiklikler doku düzeyinde incelendi. İmmünfloresan mikroskop incelemesi için hazırlanan kesitler ise TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick and labelling assay) yöntemi ile boyandı, apopitotik hücreler araştırıldı ve apopitotik indeks hesaplandı.
Bulgular: Işık mikroskobu ile yapılan inceleme sonucunda; Bupivakain grubunda sırası ile 7. ve 28. günlerdeki apopitotik indeks değerlerinin, serum fizyolojik ve levobupivakain gruplarındaki apopitotik indeks değerelerinden anlamlı derecede daha yüksek olduğu gözlendi (p < 0,05). Levobupivakain grubunda 7. ve 28.günlerdeki apopitotik indeks değeri serum fizyolojik grubundan anlamlı derecede daha yüksekti (p<0,05). Levobupivakain grubunda 28. günde gözlenen apoptotik indeks değeri 7. güne nazaran anlamlı derecede yüksek bulunurken (p < 0,05), bupivakain grubunda 7. ve 28. günde gözlenen apopitotik indeks değerleri arasında istatistiksel olarak fark gözlenmedi (p > 0,05).
Floresan mikroskop ile yapılan inceleme sonucunda: Bupivakain grubunda sırası ile 7. ve 28. günlerdeki apopitotik indeks değerleri, serum fizyolojik ve levobupivakain gruplarındaki apopitotik indeks değerlerinden anlamlı derecede yüksekti (p< 0,05). Levobupivakain grubunda 28. günde gözlenen apopitotik indeks değeri 7. günde gözlenen apopitotik indeks değerinden yüksekti (p< 0,05). Bupivakain grubunda ise 7. ve 28. günlerde gözlenen apopitotik indeks değerleri arasında istatistiksel olarak bir fark gözlenmedi (p> 0.05).
Sonuç: Bu çalışmada, tavşan kıkırdak dokusu üzerinde, bupivakainin daha fazla apopitotik aktivasyona neden olarak, levobupivakainden daha fazla kondrotoksik etki gösterdiği gözlenmiştir. Ayrıca, bupivakainin gösterdiği apopitotik aktivasyonun 7. günden sonra sabit bir şekilde 28. güne kadar devam ettiği, levobupivakainin göstermiş olduğu apopitotik aktivasyonun ise, 7. günden sonra da artmaya devam ederek 28. güne kadar artış gösterdiği saptanmıştır.

Anahtar Kelimeler: Apoptozis, bupivakain, kondrotoksisite, lokal anestezikler, levobupivakain.

Abstract:
Aim: In this study, we aimed to investigate the condrotoxic and apoptotic effects of levobupivacaine and bupivacaine performed via single dosage intraartcular injection in the rabbit cartilage tissue.
Materials and Methods: This study was conducted on 40 female New Zealand rabbit. Rabbits were allocated to two groups as 20 rabbits in each group. In accordance with the study groups, Bupivacaine 0,5%, levobupivacaine 0,5% or normal saline 0,9% were injected intraarticularly into the right and left back knee joints of rabbits. In 7th and 28th days after the intraarticular injections, 10 rabbits from each group were sacrified under intraperitoneal pentothal sodium anesthesia. The knee joints of the sacrified rabbits were dissected and prepared for examination under light microscope and immunofluorescence microscope. Sections prepared for light microscopy were stained with hematoxylin-eosin and apoptotic changes in the cartilage tissue caused by local anesthetic agents were examined. Sections prepared for immunofluorescence microscopy were stained by the TUNEL method (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick and labeling assay), apoptotic cells were examined, and apoptotic indexes were calculated.
Results: As a result of the examination by light microscope: Apoptotic index values of Bupivacaine Group was significantly higher than the apoptotic index values of Saline, and Levobupivacaine Groups in 7th and 28th days (p <0.05). Apoptotic index values of Levobupivacaine group in 7th and 28th days were significantly higher than the apoptotic index values of saline group (p <0.05). Although the apoptotic index values in the 28th day were significantly higher than the apoptotic index values in the 7th day in the levobupivacaine group, (P <0.05), no statistical significance was observed between the 7th and 28th day values in bupivacaine group (p> 0.05).
As a result of examination with fluorescence microscope: Apoptotic index values of Bupivacaine group was significantly higher than the apoptotic index values of saline, and levobupivacaine groups in 7th and 28th days (p <0.05). The apoptotic index values in the 28th day were significantly higher than the apoptotic index values in the 7th day in the levobupivacaine group, (P <0.05). No statistical significance was observed between the 7th and 28th day apoptotic index values in bupivacaine group (p> 0.05).
Conclusion: In this study, it is observed that, bupivacaine is showing more condrotoxic effect by causing more apoptotic activation than levobupivacaine on the rabbit cartilage tissue. Also, although the apoptotic activation due to bupivacaine observed in the 7th day continues constant until the 28th day, the apoptotic activation due to levobupivacaine observed in the 7th day continues to increase until the 28th day. 

Key Words: Apoptosis, bupivacaine, condrotoxicity, local anaesthetics, levobupivacaine.