Asetilsalisilik asitin pankreatik stellat hücre aracılı pankreas kanseri agresifliğine etkisi
Investigation of effects of acetylsalicylic acid on pancreatic stellate cells-mediated pancreatic cancer aggressiveness.
Yazar: SILA SIĞIRLI
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DİDEM KARAKAŞ ZEYBEK
İstinye Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Kanser Biyolojisi ve Farmakolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Aspirin = Aspirin ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Pankreas = Pancreas ; Pankreas hastalıkları = Pancreatic diseases ; Pankreas neoplazmları = Pancreatic neoplasms ; Tümör mikroçevresi = Tumor microenvironment

Özet:
Pankreas kanseri (PaCa) günümüzde tedavisi en zor olan ve en ölümcül kanser türlerinden biridir. PaCa'nın tümörijenez sürecine katkı sağlayan özel bir mikroçevreye (TME) sahip olduğu bilinmektedir. Pankreatik stellat hücreleri (PSC'ler) pankreatik TME'de en bol bulunan hücre tiplerinden biridir. Çalışmalar, PSC'lerin kanserin agresif karakterini desteklediğini, hatta intraepitelyal neoplastik lezyonlarda (kanserin başlangıç aşamalarında) bile bu hücrelerin aktif durumda olduğunu göstermiştir. Bu durum PSC hücrelerinin tümör oluşumuna ve gelişimine destek veren özelliklerine işaret etmektedir. PSC hücrelerini hedeflemek için birçok yol bulunmaktadır. Bunlardan biri de aspirinin etken maddesi olan asetilsalisilik asittir (ASA). Çalışmalar ASA'nın pankreas kanseri de dahil olmak üzere çeşitli kanser tiplerinde proliferasyonu inhibe ettiğini ve apoptozu indüklediğini belirtmiştir. Benzer şekilde bazı çalışmalar düzenli ASA kullanımının kanser insidansını düşürdüğünü göstermiştir. Literatürde ASA'nın kanser hücreleri üzerindeki etkilerini inceleyen çalışmalar olmasına rağmen, ASA'nın PSC aracılı pankreas kanseri agresifliği üzerine etkilerini inceleyen bir çalışma bulunmamaktadır. Bu sebeple bu çalışmada PSC hücrelerinin sekretomunun ASA ile değiştirilmesi hedeflenerek kanserin agresif karakterine olan etkisi incelenecektir. Bu amaçla, ilk olarak PSC hücrelerinin aktif/pasif durumları Oil Red O ve alfa-düz kas aktin boyamaları ile belirlendi. Daha sonra PSC hücrelerine çeşitli dozlarda ASA uygulandı ve hücreleri öldürmeyen 1.25 ve 2.5 mM dozları ileri analizler için seçildi. Tedavi uygulanmamış ve 24 saat ASA ön tedavisi uygulanmış PSC hücrelerinden toplanan besiyeri (conditioned media; CM) PANC-1 ve BxPC-3 pankreas kanseri hücre soylarına farklı konsantrasyonlarda uygulandı. Hücre canlılığı sülforhodamin B (SRB) testi ile, hücrelerin migrasyon yetenekleri yara kapanma testi ile ve hücrelerin koloni oluşturma yetenekleri koloni oluşturma testi ile incelendi. Daha sonra ASA uygulanmış ve uygulanmamış CM gruplarının pankreas kanseri hücreleri üzerine etkisi birbiri ile kıyaslandı. Böylece ön tedavi görmemiş ve ASA ön tedavisi görmüş PSC hücrelerinden toplanan besiyerindeki farklılıkların pankreas kanseri hücrelerini ve onların agresif karakterini nasıl etkilediği incelendi. Beklendiği şekilde, ASA ön tedavisi görmüş PSC hücrelerinden toplanan CM kanser hücrelerinin canlılığını, migrasyon yeteneklerini arttırırken; ASA ön tedavisi görmüş PSC'lerden toplanan CM bu agresif karakter yapılarını azaltmıştır. Öte yandan koloni oluşturma yeteneğinde ön tedavi görmemiş PSC'lerden toplanan conditioned besiyeri belirgin bir farklılık yaratmamıştır. Bu çalışmadan elde edilen bilgiler ile ileri aşamada anti-inflamatuar bir ilaç olan ASA'nın pankreas kanseri tedavisinde kullanılabilecek önemli bir strateji olup olmayacağına ilişkin yapılacak kapsamlı araştırmalara öncülük edebilecek temel bilgiler üretilmiştir.

Abstract:
Pancreatic cancer (PaCa) is one of the deadliest and incurable cancer types. It has been known that PaCa has a unique tumor microenvironment (TME) which contribute to tumorigenesis. Pancreatic stellate cells are the most abundant cells in pancreatic TME. They contribute to the aggressiveness of cancer and they are active even in intraepithelial neoplastic lesions. This indicates that these cells could have tumor-initiating abilities. One of the approaches to targeting PSCs is acetylsalicylic acid (ASA), the active ingredient of aspirin. Previous studies showed that ASA inhibited the proliferation and induced apoptosis in various cancer types including PaCa. Some studies have shown that regular use of aspirin reduces the incidence of cancer. Although there are studies indicating the role of ASA on cancer cells in the literature, there is no study showing its effect on PSC-mediated cancer aggressiveness. In this study we aimed to examine the effects of ASA on aggressive cancer behaviours by changing PSC secretome. First of all, the active and passive states of PSC cells were evaluated via α-smooth muscle and Oil Red O stainings, respectively. Next, PSC cells were treated with various doses of aspirin, and doses of 2.5 and 1.25 mM that were not toxic to cells were selected for further experiments. Conditioned media were collected from untreated-PSC cells and 24 h ASA pre-treated PSC cells and then were applied to PANC-1 and BxPC-3 PaCa cell lines. The viability of cancer cells was evaluated with the sulforhodamine B (SRB) test, their migration abilities were analyzed with a wound healing assay and their colony formation abilities were analyzed with colony formation assay. Then the two groups were compared with each other. In this way, it was examined how the differences in the medium between ASA-treated and un-treated PSC cells affected the aggressive character of cancer cells. As expected, media collected from untreated PSC cells increased the viability and migration of cancer cells, while media collected from ASA-treated PSC cells decreased these abilities According to the information obtained from the studies so far, targeting PSC- pancreatic tumor cells interaction using the prevalent anti-inflammatory drug ASA might be a promising strategy for PaCa treatment.