G-CSF uyarımının donör granülositlerine etkilerinin hücre yüzey belirteçleri ile gösterilmesi
Demonstrati̇ng the effects of sti̇mulati̇on wi̇th G-CVSF on donor granulocytes usi̇ng cell surface markers
Yazar: RABİYA NAYİR
Danışman: PROF. DR. ALİ ÜNAL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Granülosit = Granulocyte ; Granülosit koloni stimülan faktör = Granulocyte colony stimulating factor ; Nötropeni = Neutropenia ; Reseptör-granülosit koloni stimülan faktör = Receptor-granulocyte colony stimulating factor ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Kemik iliği baskılanmış, uzun süreli nötropenisi olan hastalar veya nötrofil fonksiyon bozukluğu olan hastaların ciddi bakteri ve mantar enfeksiyonlarına yakalanma riski yüksektir. İyileşebilmeleri için dolaşımda yeterli sayıda nötrofil bulunması gerekir. Bu bağlamda standart tedaviye direnç geliştiren hastalarda granülosit transfüzyonunun kullanımı önemli bir klinik uygulamadır. Aferez cihazlarının gelişmesi ve koloni uyarıcı faktörlerin (CSF) kullanımıyla terapötik olarak etkili ve yeterli miktarda granülosit toplamak mümkün olmaktadır.
G-CSF'ler kemik iliğinde granülosit üretimini uyarırken aynı zamanda olgun olmayan granülositlerin kana geçiş süresini de kısaltan sitokinlerdir. G-CSF ile mobilize edilen vericilerden, transfüzyon için iyi bir terapötik granülosit dozu sağlanır.
Bu çalışmada granulosit vericilerine G-CSF uygulamasının vericide ve elde edilen granülositler üzerinde ne gibi etkilerinin olduğunun araştırılması amacıyla 11 vericide nötrofil yüzey belirteçlerinde ekpresyon ölçümü yapıldı. Özellikle değişim olma ihtimali olan (CD10, CD13, CD15, CD16 ve CD116) hücre yüzey reseptörleri seçilerek etkileşim donör perifer hücreleri ve toplanan granülosit üründe araştırıldı.
Yaptığımız ölçüm sonucunda G-CSF uygulaması öncesi ve sonrasında yüzey belirteçlerinde istatistiksel olarak anlamlı bir değişim izlendi. G-CSF uygulaması CD13 ekpresyonu 17 kat (GM SI:17), CD116 yı ise 3,5 kat artırırken, CD15 ekspresyonu 10 kat CD16 yı ise 5 kat azalttığı izlendi. CD13 ve CD116 ekspresyonundaki artış G-CSF'nin bir etkisi olarak granülositlerin kemik iliğinden periferik kana geçişi ile açıklanmaktadır. Miyeloblast aşamasından olgun nötrofillere kadar olan aşamalarda granülositler değişik düzeylerde CD13 ifade edeler. CD116 GM-CSF resptörü olarak artış kaydeder. CD16 ve CD15 ekspresyonundaki azalış uygulama sonrası kemik iliğindeki turn-over artışına bağlı olarak henüz olgunlaşmamış nötrofillerin de hızla dolaşıma çıktığını göstermektedir.
Sonuç olarak çalışmamızda G-CSF'nin vericide farklı olgunluktaki granülositlerin dolaşıma katılmalarını sağladığını, granülositler üzerindeki reseptörlerin ekspresyon düzeylerinde değişime sebep olduğunu gösterdik. Bu durum farklı olgunluktaki granülositlerin işlevsel olarak da farklı olabileceğini gösterir. Bu nedenle hastalara transfer edilecek olan granülositlerin etkinliği ile matürasyon düzeyi arasındaki ilişkinin klinik araştırmalarla ortak çalışılması G-CSF dozu/düzeyinin bu süreçteki etkisini daha iyi ortaya koyacaktır.
Anahtar Kelimeler: G-CSF, Nötropeni, Granülosit Transfüzyonu, Sitokin, Flow Sitometri

Abstract:
Patients with bone marrow suppressed, long-term neutropenia or patients with neutrophil dysfunction are at increased risk of developing serious bacterial and fungal infections. There must be sufficient neutrophils in the circulation for recovery. In this context, the use of granulocyte transfusion in patients developing resistance to standard therapy is an important clinical practice. With the development of apheresis devices and the use of colony stimulating factors (CSF), it is possible to collect therapeutically effective and sufficient amounts of granulocytes.
G-CSFs are cytokines that stimulate the production of granulocytes in the bone marrow while also shortening the passage of immature granulocytes into the blood. From donors mobilized with G-CSF, a good dose of therapeutic granulocyte for transfusion is provided.
In this study, neutrophil surface marker expression was measured in 11 donors in order to investigate the effects of G-CSF application on granulocyte donors on donor and obtained granulocytes. In particular, cell surface receptors that were likely to change were selected (CD10, CD13, CD15, CD16 ve CD116)  and the interaction was investigated in donor peripheral cells and collected granulocyte product.
As a result of the measurement, a statistically significant change was observed in surface markers before and after G-CSF application. It was observed that G-CSF application increased CD13 expression 17 fold (GM SI: 17), CD116 3.5 fold, while CD15 expression decreased 10 fold CD16 5 fold. Increased expression of CD13 and CD116 is explained by the passage of granulocytes from bone marrow to peripheral blood as an effect of G-CSF. In the stages from the myeloblast stage to the mature neutrophils, the granulocytes express different levels of CD13. CD116 records increase as GM-CSF receptor. Decrease in expression of CD16 and CD15 shows that immature neutrophils are rapidly circulating due to turn-over increase in bone marrow after application.
In conclusion, we have shown that G-CSF allows different maturation granulocytes to circulate in the donor and causes changes in the expression levels of receptors on granulocytes. This indicates that granulocytes of different maturity may also be functionally different. Therefore, the association between the efficacy of the granulocytes to be transferred to the patients and the level of maturation in clinical studies will better demonstrate the effect of G-CSF dose / level in this process.
Keywords: G-CSF, Neutropenıa, Granulocyte Transfusıon,  Cytokıne, Flow Cytometry