JAK2V617F mutasyonunun endotel hücreleri üzerindeki trombotik etkilerinin değerlendirilmesi
Evaluation of thrombotic effects of JAK2V617F mutation on endothelial cells
Yazar: HİLAL HEKİMOĞLU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology
Dizin: Endotelinler = Endothelins ; JAK 2 = JAK 2 ; Lentivirüs enfeksiyonları = Lentivirus infections ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Tromboz = Thrombosis

Özet:
Amaç: Miyeloproliferatif Neoplaziler (MPN) hematopoietik hücre hatlarının klonal çoğalması sonucu olgun kan hücre sayısındaki artış ile karakterize bir grup hastalıktır. Nokta mutasyonu olan JAK2V671F bu hastalık grubunda yaygın olarak görülmektedir. Bu mutasyonun endotel hücrelerinde (EH) saptanması ile EH faktörlerinin hastalıktaki rolü önem kazanmıştır. Bu çalışmada EH'lerde JAK2 mutasyonu varlığında EH reseptörleri, EH'lerden salınan mikropartiküller, hücre çoğalması ve apoptozu normotermi ve hipotermi koşullarında incelenmiştir.
Yöntem: Lentiviral vektörler aracılığı ile JAK2 yabani tip, JAK2 mutant ve GFP genleri normotermik ve hipotermik koşullarda HUVEC hücre hattına aktarıldı. Enfekte olan hücreler akış sitometrisi ile GFP pozitifliklerine göre belirlendi. Bu hücreler üzerinde EH reseptörleri endotel protein C reseptör (EPCR), thrombomodulin (TM) ve doku faktörü (DF) incelendi. Enfeksiyon sonrası kültüre salınan mikropartiküller, EH çoğalması ve apoptozu GFP pozitif hücrelerde akış sitometrisi cihazı ile belirlendi.
Bulgular: JAK2 yabani tip, JAK2 mutant ve GFP ile enfekte olmuş hücreler birbirlerine ve enfekte olmamış kontrol hücrelerine göre EPCR için bir farklılık göstermemiştir. Thrombomodulin seviyesinde her 3 vektör için enfekte olmamış kontrole göre azalma, doku faktörü için artış belirlenmiştir. Hücre çoğalması 3 vektörde farklılık göstermezken, apoptoz seviyesi GFP ile kıyaslandığında MUT için anlamlı artış göstermiştir (p=0.01).
Sonuç: JAK2 mutasyonu varlığında EH'de membran EPCR, TM ve DF normotermik ve hipotermik koşullarda ilk defa incelenmiştir. Bu çalışmada analiz edilen reseptörlerin ve mikropartiküllerin JAK2 mutasyonu ile bağlantılı trombozda rol oynadığı sonucuna varılmamıştır. JAK2 yabani tip ve JAK2 mutasyonu varlığında EH'lerin tromboza yönelimi tespit edilmiştir. Bu faktörlerin EH'ler üzerindeki etkisini daha net bir şekilde görebilmek için yeni çalışmalara gereksinim duyulmaktadır.

Abstract:
Objective: Myeloprolierative Neoplasms (MPNs) are a group of hematopoietic disorders characterized by clonal expansion of myeloid cell lineages resulted in expanded mature blood cells. A point mutation, JAK2V617F has high prevalence among this group of disorders. By detection of this mutation in endothelial cells (EC), the role of EC factors has came into question in MPNs. In this work, EC receptors, microparticles that are released from ECs, EC proliferation and apoptosis is examined under normothermic and hypothermic conditions in ECs carrying JAK2 mutation. 
Method: By using lentiviral vectors JAK2 wild-type, JAK2 mutant and GFP genes are delivered to HUVEC cell line under normothermic and hypothermic conditions. Infected cells are detected by flow cytometry and EC receptors endothelial protein C receptor (EPCR), thrombomodulin and tissue factor are quantified on these cells. In addition, microparticles that are released from ECs, EC proliferation and apoptosis analyses are performed by flow cytometry. 
Findings: JAK2 wild-type, JAK2 mutant and GFP infected ECs indicate no differences for EPCR levels compared to uninfected cells. Thrombomodulin levels demonstrated decrease, tissue factor have elevated levels for 3 vectors compared to uninfected cells. There is no difference detected for cell proliferation between GFP, WT and MUT. Apoptosis levels in MUT have statistically significant increase compared to GFP infected cells (p=0.01). 
Result: Membrane endothelial cell receptor (EPCR), thrombomodulin (TM) and tissue factor (TF) is analysed under normothermic and hypothermic conditions in JAK2 mutation carrying ECs for the first time in literature. There is no relation is found between JAK2 mutation and receptors and microparticles analysed in this study relevant with thrombosis. JAK2 wild-type and mutant showed increased apoptosis levels compared to GFP. We need detailed studies to understand effects of these factors on ECs in the future.