Sisteamin'in teke spermasının dondurulması üzerine etkisi
Effects of cysteamine to freezing of buck semen
Yazar: EZGİ ERTÜRK
Danışman: PROF. DR. KEMAL AK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Dölleme = Insemination ; Keçiler = Goats ; Sisteamin = Cysteamine ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
Sperma dondurulması işleminde antioksidan maddeler gamet hücrelerini reaktif oksijen türevlerine (ROT) karşı koruma amacıyla tercih edilmektedir. Bu çalışmada Saanen teke spermasının sisteaminsiz (Kontrol), farklı molaritede sisteamin (5 mM, 10 mM) ve yumurta sarısı (%17) içeren sulandırıcı ile sulandırılıp dondurulması ve eritme sonrası spermatolojik özelliklerin saptanması amaçlanmıştır. Ejakülatlar 5 adet Saanen tekesinden çiftleşme mevsiminde (Eylül- Ocak) elektroejakülatör yardımıyla alınmıştır. Çalışma 7 defa tekrarlanmıştır (n=7). Spermanın makroskobik ve mikroskobik muayeneleri yapıldıktan sonra ejekülatlar birleştirilmiştir (pooling). Sperma 2 eşit hacime bölünmüş, bir grubun seminal plazması ayrılmamış (A) diğer grubun seminal plazması 2000 g'de 5 dakika santrifüj edilerek ayrılmıştır (B). Çalışmada her bir grup kendi içinde 3 alt gruba bölünmüştür (Grup A0, A5, A10, B0, B5, B10).  Bu amaçla toplamda 6 grup oluşturulmuştur; Grup A0, B0 (Kontrol), A5, B5 (5mM sisteamin), A10, B10 (10 mM sisteamin). Sulandırılan spermalar 5°C'de ekilibrasyona bırakılmıştır. Daha sonra 0,25 ml'lik payetlere çekilerek −110°C'de dondurulmuş ve −196°C'de saklanmıştır. Dondurulan spermalar su banyosunda 37°C'de 30 sn'de çözündürülmüştür. Çözündürme sonrası değerlendirmelere göre antioksidan içeren (A5, A10, B5, B10) ve içermeyen gruplarda (A0, B0) spermatozoon motilitesi sırasıyla %45,00, %42,14, %45,71, %36,43 ve %46,43, %45,00 olarak kaydedilmiştir. Aralarında istatiksel bir fark bulunmamıştır. Fakat seminal plazmanın varlığına ve grupların farklılığına bakılmaksızın, ekilibrasyon sonrası 10 mM sisteamin varlığının spermatozoon motilitesine zarar verdiği (p<0.001) saptanmıştır. Donma sonrası seminal plazma varlığı ve farklı sisteamin yoğunluklarının spermatolojik özellikleri etkilemediği bulunmuştur.

Abstract:
Antioxidative agents are used in sperma cryopreservation process in order to protect gamet cells from reactive oxygene specieses (ROS). In our study, we aimed to Saanen buck spermatozoa dilueted in extenders, control (without cysteamine), different cysteamine molarity (5 mM, 10 mM) and include %17 egg yolk, than freeze and determine spermatological properties after thawing. All ejaculates were taken from 5 different Saanen bucks by electroejaculator in mating season (September- January). Our study were repeated 7 times (n=7). Semen were divided into two equal volumed groups, first group we kept its seminal fluid (group A), the other group seminal fluid was seperated by centrifuged at 2000 g for 5 minutes at room temperature. Every group was divided into 3 subgroups. For that purpose totally 6 groups were constituted; Group A0, B0 (control), A5, B5 (5 mM cysteamine), A10, B10 (10 mM cysteamine). Diluated semen were equilibrated at 5°C for 45 minute. Straws (0.25 ml) were pulled with groups and freezed at −110°C and stored at −196°C. Freezed spermatozoa were thawed in waterbath at 37°C for 30 seconds. Motility of spermatozoa after thawing in antioxidant groups (A5, A10, B5, B10) and control groups (A0, B0) we found as 45.00%, 42.14%, 45.71%, 36.43% and 46.43%, 45.00% in respectively. No statistically difference were found between groups. Ignoring the presence of the seminal fluid and the difference of groups, when we evaluated the groups after equilibration, cysteamine presence we have found statistically meaningfull (p<0.001) motility results to the detriment of 10 mM groups. The presence of seminal plasma and different cysteamine concentrations after freezing did not affect spermatological characteristics.