Deneysel sıçan yara modelinde Lucilia sericata larvalarının kullanımı ile iyileşen yaralarda MRNA profillerinin incelenmesi
MRNA analysis of healed wounds with treatment Lucilia sericata larvae in experimental rat wound model
Yazar: İLAYDA AKSÖZ
Danışman: PROF. DR. İLHAN ONARAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Genler = Genes ; Larva = Larva ; Lucilia sericata = Lucilia sericata ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sıçanlar = Rats ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
İyileşmeyen yaraların tedavisi için uzun yıllardır kullanılan birçok topikal yöntem bulunmakla birlikte günümüzde hala iyileşmeyen/zor iyileşen yaralar önemli bir sağlık problemidir. Larva tedavisi yara iyileşmesi tedavisinde kullanılırlığı araştırılan etkili bir yöntemdir. Her ne kadar Lucilia sericata larvalarının yara iyileşmesini bazı büyüme faktörlerinin seviyesini değiştirerek yaptığına dair bulgular bulunsa da bu bulgular larvaların yara iyileştirme mekanizmasını açıklamak için yeterli değildir. Yara iyileşmesi çok fazla hücre ve faktörün katıldığı bir süreç olması nedeniyle larvanın bu sürece katılan genlerden hangilerini ne yönde değiştirdiğinin ortaya çıkartılması mekanizmasının açıklanmasında önemli bir aşama olabilir. Çalışmamızda larva salgısı tedavisinin yara iyileşmesi sürecine katıldığı bilinen genlerin ifadesi üzerine etkilerinin araştırılması amacıyla Wistar albino sıçanların sırt bölgesine tam kat deri defekti yara modeli oluşturuldu. 4. 7. ve 10. günlerde yaralara larva salgısı tedavisi uygulandı ve biyopsi ile yara alanından doku örnekleri alındı. Alınan doku örneklerinden elde edilen total RNA?lar kullanılarak PCR array metodu ile 84 adet genin ifadesindeki değişiklikler iki tekrarlı olarak incelendi. Elde edilen bulgular larva salgısı tedavisi uygulanmayan sıçanlardan alınan örnekler ile karşılaştırılmıştır. 2-??CT yöntemi ile kat değişimleri hesaplandığında ve eşik -2/2 olarak alındığında toplam 59 adet genin ifadesinde değişimler tespit edilmiştir. Bunlardan 2 tanesi izlenen süreç boyunca artarken 4 tanesinin azaldığı diğerlerinin ise sürecin tamamını kapsamayan, günlere özgü değişiklikler gösterdiği tespit edilmiştir. Bu genler arasında fibrosis ile ilişkili olduğu bildirilen Ccl7 ve cd40lg genlerinin artmış ifadeleri ve epitelizasyon için önemli olduğu bildirilen Hb-egf nin artmış ifadesi göze çarpmaktadır. Çalışmamızın bulguları larva salgısı tedavisinin normal iyileşme sürecinden farklı olarak genlerin ifade seviyelerini değiştirdiğini göstermektedir.

Abstract:
Wound healing aberrations are still a major health problem although there are several topical method used for the treatment non-healing wounds for many years. Maggot therapy is an efficient method which was studied in treatment of wound healing. Several mechanisms have been suggested to reveal the real pathway maggots use to increase the wound healing process. Although there are findings which associate the larvae and wound healing process by the change of growth factors such as EGF, VEGT, FGF and PDGF, those findings are not sufficient to explain the mechanism of wound healing. Wound healing is a multi-factorial process which involves many cell types and factors so it may be an important stage to explain which genes are regulated by larvae to identify maggots? healing mechanism. In this respect, we studied the effects of the larvae secretion on the genes which were known to be involved in the wound healing process. For this purpose, we used male Wistar albino rats and created full thickness wound defect on their dorsum. Larval secretion/extraction is treated to wounds of treatment group on days 0 and 4 post wounding. Wound tissues were collected on days 4, 7 and 10 post wounding. Total RNA was isolated from wound tissues and they were used to analyze the change of 84 genes? expression by using RT2 PCR array, twice. The findings were compared with the samples from the rats with no treatment. Fold changes were calculated by using 2-??CT method and treshold was assumed -2/2, disregulations of 59 genes were established. While 2 of them increased and 4 of them decreased throughout healing, others were disregulated in particular times. Among these genes, Cc17 and Cd401g which were reported to be associated with fibrosis and Hb-egf which is important in epitelization were found to increase in expression. Our findings show that larvae secretion treatment change the expression of the genes compared to the normal healing process.