Fenoksazin yapılı bazı boyaların plazma alfa-1-asit glikoprotein'ine bağlanma özelliklerinin incelenmesi
Binding properties of some phenoxazine dyes to plasma alpha-1-acid glycoprotein
Yazar: FIRAT ULUTAŞ
Danışman: PROF.DR. A. NİLGÜN SÜMER
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2005
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry

Özet:
ÖZETUlutaş F., Fenoksazin Yapılı Bazı Boyaların Plazma Alfa-1-AsitGlikoprotein'ine Bağlanma Özelliklerinin ncelenmesi, Hacettepe ÜniversitesiSağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Bilim Uzmanlığı Tezi, Ankara,2005. Bu çalışmada H.Ü. Hastanesi Kan Bankasından sağlanan insan plazmasındanalfa-1- asit glikoprotein (AAG) Cibacron Mavisi F3GA kolonu kullanılarak affinitekromotografisi yöntemi ile saflaştırıldı (SAAG). Saflık, sodyum dodesil sülfatpoliakrilamid jel elektroforezi ile (SDS-PAGE) ile doğrulandı. Fenoksazinboyalardan nil kırmızısı (NK) ve nil mavisinin (NM) ve bir bitkisel flavonoid olanfisetinin, SAAG ve ticari AAG'e bağlanma özellikleri fluorimetrik titrasyon yöntemiile incelendi. AAG'in NK ile fluorimetrik titrasyon çalışmalarında, elde edilenveriler ile sağlıklı bir değerlendirme yapılamadı. Ticari AAG'in NM ile fluorimetriktitrasyonunda Kd (disosiyasyon sabiti) 0,58 Â± 0,04 ÂµM, bağlanma stokiyometrisi, n =0,28 Â± 0,03 bulundu. SAAG ile yapılan çalışmada da benzer sonuçlar elde edildi (Kd= 0,52 Â± 0,04 ÂµM, n = 0,32 Â± 0,02). Ticari AAG'in, diyaliz öncesi ve sonrası, fisetinile titrasyon çalışmalarında bağlanma stokiyometrisi sırasıyla, 0,13 Â± 0,01 ve 0,22 Â±0,02 bulundu. Kd değerlerinde ise belirgin bir farklılık gözlenmedi (Kd = 0,37 Â±0,04). Ticari AAG'in diyaliz öncesi ve sonrası NM ile titrasyon çalışmalarında isebağlanma stokiyometrisi sırasıyla 0,28 Â± 0,03 ve 0,47 Â± 0,05 bulundu. Kd değerininise diyaliz sonrası düştüğü ( 0,25 Â± 0,01) gözlendi.Bu bulgular ışığında AAG'e bağlanma özellikleri incelenen NM ve fisetin ilegözlenen düşük stokiyometri değerlerinin, büyük bir olasılıkla endojen ligantetkisinden ziyade AAG preparatlarının heterojenitesinden kaynaklandığı düşünüldü.Anahtar Kelimeler: Fenoksazin boyalar, Alfa-1-asit glikoprotein, saflaştırma, fisetin,bağlanma stokiyometrisi.Detekleyen Kurumlar: Tübitak S.B.A.G., Tez Destekleme (SBAG-HD-3 105S006).

Abstract:
ABSTRACTUlutaş F., nvestigation of Binding Properties of Some Phenoxazine Dyes toPlasma Alpha-1-Acid Glycoprotein, Hacettepe University Institute of HealthSciences, Master of Science Thesis in Biochemistry, Ankara, 2005. Alpha-1-acidglycoprotein (AAG) was purifed from human plasma obtained from HacettepeUniversity Hospitals Blood Bank by Cibacron blue F3GA affinity chromatogropy(SAAG). Purity was approved by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gelelectorphoresis (SDS-PAGE). Binding properties of nile red (NK) and Nile blue(NB) as phenoxazine dyes and fisetin as herbal flavonoid to SAAG and commercialyavaible AAG were determined by flourometric titration assays. From the datas offluorometric titration assays of NK we couldn?t evaluate exact estimations. In thefluorometric titration assay of commercialy avaible AAG with NB Kd (dissociationconstant) and binding stochiometry (n) were calculated as Kd = 0,58 Â± 0,04 ÂµM andn = 0,28 Â± 0,03 respectively. Similar findings were obtained in the assay of SAAG(Kd = 0,52 Â± 0,04.ÂµM, n = 0,32 Â± 0,02 ). From the titration assays of commercialyavailable AAG with fisetin before and after dialysis binding stochiometries weredetermined as 0,13 Â± 0,01 and 0,22 Â± 0,02 respectively, and, dissociation constantswere not changed (Kd = 0,37 Â± 0,04). From the titration assays of commercialyavailable AAG with NB before and after dialysis binding stochiometries weredetermined as 0,28 Â± 0,03 and 0,47 Â± 0,05 respectively, and, lower value ofdissociation constant (0,25 Â± 0,01) was obtained after dialysis. These findingssuggested that, low stochiometric values which were determined in NB and Fisetinarrays arise from heterogenity of preperation rather than the effect of endogenousligand.Key Words: Phenoxazine dyes, Alpha-1-acid glycoprotein, purification, fisetin,binding stochiometry.Supported by Tübitak S.B.A.G., Thesis Grant (SBAG-HD-3 105S006).