Ratlarda salisilat ile indüklenmiş tinnitusta transkraniyal manyetik stimulasyonun etkisi
Effect of transcranial magnetic stimulation on salicylate-induced tinnitus in rats
Yazar: AYDIN EROĞLU
Danışman: PROF. DR. ÖZGÜR YİĞİT
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Kulak Burun Boğaz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Ototoksisite = Ototoxicity ; Salisilatlar = Salicylates ; Sıçanlar = Rats ; Tinnitus = Tinnitus ; Transkraniyal manyetik uyarı = Transcranial magnetic stimulation

Özet:
AMAÇ
Tinnitus dışarıda var olmayan frekanstaki seslerin duyulması olarak tanımlanır ve milyonlarca insanın ortak sorunudur. Günümüzde tinnitus için bilimsel olarak kanıtlanmış bir tedavi yoktur ancak literatürde  salisilat  ile oluşturulan  tinnitus modeli tedavisinde  bir çok ajan üstünde çalışmalar mevcuttur. Ama hala etkin bir ajan bulunamamıştır. 
Çalışmamızda ratlarda salisilat ile  indüklenmiş tinnitus   modelinde   Transkraniyal manyetik stimülasyonun    işitsel beyin sapı yanıtlarına etkisini  ve immünhistokimyasal boyamalarla histopatolojik olarak etkisini  araştırmayı amaçladık.

GEREÇ VE YÖNTEM
Çalışmaya 24  adet Spraque Dawley türü 8-12 haftalık 450-500 gr ağırlığında erkek cinsiyette   rat dahil  edildi.  Ratlar 21-23   derece sıcaklıkta  12 saatlik gündüz ve gece siklusu olacak şekilde döngüde tutuldu ve randomize olarak dört gruba ayrıldı. 5 gün boyunca , intraperitoneal yolla günde 300 mg/kg  asetil salisilik asit verilen grup  aspirin grubu  , 5 gün boyunca  intraperitoneal yolla  günde 300 mg/kg asetil salisilik asit  verilip ardından   2 saat sonra 15 dakika 1 Hz frekansta tekrarlayıcı  Transkraniyal Manyetik Stimülasyon(rTMS)  uygulanan grup 1 Hz TMS grubu , 5 gün boyunca intraperitoneal yolla  günde 300 mg/kg asetil salisilik asit  verilip ardından 2 saat sonra  15 dakika  20 hz frekansta   rTMS  uygulanan grup   20 Hz TMS grubu olarak ayrıldı.  1.gün  tüm gruplara işlem öncesi   ABR ölçümü yapıldı.  5.gün sakrifikasyon öncesinde ABR ölçümü tekrarlandı. Çalışma süresince  tüm gruplardan 1' er rat     farklı günlerde ex olduğundan çalışma dışı bırakıldı.Çalışma  toplamda 20 rat ile sonlandırıldı. 5.günün sonunda hayvanlar sakrifiye edilerek  koklea ve işitsel korteksteki patolojik değişiklikler   immünhistokimyasal yöntemler kullanılarak ışık mikroskopu altında değerlendirildi.

BULGULAR 
Sham , aspirin, 1 Hz TMS ve  20 Hz TMS grupları arasında  Dalga 1 amplitid ve latansı, Dalga 4 amplitüd ve latansı, Dalga 2-4 interval değerleri  anlamlı farklılık göstermemiştir(p>0.05). Aspirin, 1 Hz TMS grubu. 20 Hz TMS gruplarında  uygulama sonrası Dalga 1 Amplitüd uV değeri uygulama öncesine göre anlamlı düşüş göstermiştir(p<0.05). Aspirin grubu, 1 Hz TMS grubu, 20 Hz TMS  grubunda uygulama sonrası Dalga 4 Amplitüd uV değeri uygulama öncesine göre anlamlı (p<0.05) artış göstermiştir(p<0.05). Aspirin, 1 Hz TMS ve 20 Hz TMS grubunda uygulama sonrası Dalga 2-4 İnterval MSN değeri Sham grubu grubundan anlamlı olarak daha yüksekti(p<0.05). Sham grubu, aspirin grubu, 1 Hz  TMS grubu, 20 Hz TMS grubunda   uygulama sonrası Dalga 2-4 İnterval MSN değeri uygulama öncesine göre anlamlı farklılık göstermemiştir(p>0.05). 
 Histopatolojik değerlendirmede immünhistokimyasal olarak  koklea ve işitsel kortekste Anti-neun boyamada   nöron yoğunluğunda   gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı fark gözlenmedi .Koklea ve işitsel kortekste   Anti-BDNF boyamada BDNF yoğunluğu açısından gruplar arasında anlamlı fark gözlenmedi. 

SONUÇ 
 Çalışmamızda salisilat ile indüklenmiş tinnitusta  1 Hz ve 20 Hz transkraniyal manyetik stimülasyon uygulamasının tinnitusu azaltacağına dair elektrofizyolojık ve histopatolojik olarak  anlamlı sonuç elde edemedik. Transkraniyal manyetik stimülasyon günümüzde tinnitusta önemini korumakta olup tinnitustaki etkisine  dair daha kapsamlı çalışmalarla aydınlatılmasına ihtiyaç duyulmaktadır.

ANAHTAR KELİMELER : Rat,Salisilat, Ototoksisite, Tinnitus, Transkraniyal manyetik stimülasyon.

Abstract:
OBJECTİVE
Tinnitus is described as hearing sounds at frequencies that do not exist outside and it is a common problem for millions of people. Nowadays, there is no scientifically proven treatment for tinnitus, but in the literature, many studies on many agents in the treatment of salicylate-induced tinnitus model. But still, no effective agent has been found.
In our study, we purposed to investigate the effect of transcranial magnetic stimulation on auditory brainstem responses and histopathologically with immunohistochemical staining in a salicylate-induced tinnitus model in rats.

MATERIALS AND METHODS
Twenty-four Spraque Dawley type male rats (8-12 weeks old and weighing 450-500 g) were included in the study. Rats were kept in a cycle with a 12-hour day and night cycle at 21-23 degrees and randomly divided into four groups. The aspirin group was given 300 mg/kg acetylsalicylicic acid daily intraperitoneally for 5 days, 300 mg/kg acetyl salicylic acid was given intraperitoneally for 5 days, followed by repetitive Transcranial Magnetic Stimulation (rTMS) at 1 Hz frequency for 15 minutes 2 hours later. Group 1 Hz TMS group, 300 mg/kg of acetylsalicylic acid per day intraperitoneally for 5 days followed by rTMS at 20 Hz frequency for 15 minutes 2 hours later were divided into 20 Hz TMS group. On the 1st day, ABR measurement was performed in all groups before the procedure. ABR measurement was repeated before sacrification on the 5th day. During the study, 1 rat from all groups was excluded from the study as it died on different days. The study was terminated with a total of 20 rats. At the end of the 5th day, the animals were sacrificed and pathological changes in the cochlea and auditory cortex were evaluated under a light microscope using immunohistochemical methods.

RESULTS
Wave 1 amplitude and latency, Wave 4 amplitude and latency, Wave 2-4 interval values did not differ significantly between Sham, aspirin, 1 Hz TMS and 20 Hz TMS groups (p>0.05). Aspirin did not differ significantly in 1 Hz TMS and 20 Hz TMS groups. After the application, Wave 1 amplitude value decreased significantly compared to the pre-application, Wave 4 amplitude value showed a significant increase (p<0.05).
 In the histopathological evaluation, the number of Anti-Neun staining cells was significantly (p <0.05) lower in the Aspirin, 1 Hz TMS and 20 TMS groups than in the sham group in immunohistochemical examinations. Anti-Neun Staining cell count did not differ significantly (p > 0.05) between the aspirin ,1 Hz TMS and 20 Hz TMS groups. Anti BDNF Staining rate was significantly (p <0.05) higher in the aspirin, 1 Hz TMS and 20 Hz TMS groups than the sham group. Anti BDNF Staining rate did not differ significantly (p > 0.05) between aspirin ,1 Hz TMS and 20 Hz TMS groups.

DISCUSSION
In our study, we could not obtain electrophysiological and histopathologically results that 1 Hz and 20 Hz transcranial magnetic stimulation application would reduce tinnitus in salicylate-induced tinnitus. Transcranial magnetic stimulation maintains its importance in tinnitus today, and its effect on tinnitus needs to be clarified with more comprehensive studies.

KEYWORDS : Rat, Salicylate, Ototoxicity, Tinnitus, Transcranial magnetic stimulation.