İleri evre larinks kanserli hastalarda HPV 16, HPV 18, p16 ekspresyonunun değerlendirilmesi ve prognostik önemi
Assessment of HPV 16, HPV 18, p16 expression in advanced stage laryngeal cancer patients and  prognostic significance
Yazar: SELMAN DOĞANTEMUR
Danışman: DOÇ. DR. SÜLEYMAN ÖZDEMİR
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)

Özet:
İleri Evre Larinks Kanserli Hastalarda HPV 16, HPV 18, p16 Ekspresyonunun Değerlendirilmesi ve Prognostik Önemi

Amaç: Larinks karsinomlarının gelişim mekanizması oldukça komplekstir ve çeşitli faktörler tarafından kontrol edilir. Sigara ve alkol kullanımı etyolojideki saptanmış risk faktörleridir. Son yıllarda yapılan çalışmalar HPV enfeksiyonun da larinks karsinomlarında önemli bir rol aldığını göstermektedir. p16 tümör baskılayıcı bir gendir. Mutasyona uğradığında tümör gelişimine katkıda bulunmaktadır. Çalışmamızda ileri evre larinks karsinomunda HPV ve/veya p16 pozitifliğinin, yaş, cinsiyet, sigara alışkanlığı, tümör lokalizasyonu, lenf nodu metastazı, nüks varlığı ve yaşam süresi gibi değişkenlerle olan ilişkisini saptamayı amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmaya, Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi (ÇÜTF) Kulak Burun Boğaz Anabilim Dalında Ocak 2006 - Aralık 2011 tarihleri arasında tanı alan ve daha öncesinde tedavi almamış ileri evre larinks karsinomlu 90 hasta dahil edildi. 10 adet normal larinks mukozası kontrol grubu olarak çalışmaya alındı. Çalışmaya dahil edilen hastaların dosyaları retrospektif olarak değerlendirildi. Doku örnekleri % 10'luk formaldehitte tespit edilerek, parafine gömüldü ve histolojik kesitler hazırlandı. Hematoksilen eozin boyası uygulanarak ışık mikroskobik inceleme yapıldı. Daha sonra, immünohistokimyasal yöntem ile p16, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile poliklonal HPV varlığı araştırıldı. HPV pozitif olgularda PCR ile HPV 16, 18 tiplerinin varlığı değerlendirildi.
Bulgular: 90 olgunun 11'inde (% 12,2) poliklonal HPV pozitifliği saptandı. Bu 11 olgudan 6'sında HPV 16, 4'ünde HPV 18, 1'inde HPV 16 ve 18 pozitif idi. Olguların 18'inde (%20)  p16 pozitif idi. Olguların 6'sında (%6,6) hem HPV hem de p16 pozitifliği mevcuttu. p16'nın tek başına veya HPV ve p16'nın birlikte pozitif olduğu olgularda alkol kullanımı daha az ve tümörün supraglottik alanda yerleşim oranı daha yüksek olarak saptanmıştır. Bu oranlar istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Çalışmamızda HPV pozitifliği ile ortalama yaş, diferansiyasyon, sigara ve alkol kullanımı, tümörün evresi, LN metastazı, tümör lokalizasyonu, nüks, ölüm nedeni ve tedavi yöntemleri arasında istatistiksel olarak anlamlı ilişki saptanmamıştır. Hastalarımızın ortalama takip süresi 6.7 yıldı.
Sonuç: Larinks karsinomu ile HPV ilişkisi ve bunun hastaların prognozu üzerine etkisi şu ana kadar ki yapılan çalışmalara rağmen netlik kazanmamıştır. Çalışmamızda ileri evre larinks karsinomlu hastaların %12,2'sinde HPV, %20'sinde p16 pozitifliği saptandı. HPV ve p16 pozitif olgularda 5 yıl üzeri yaşam süresi rakamsal olarak daha fazla olmasına rağmen istatistiksel olarak anlamlı saptanmadı. Bu konu hakkında, neoplastik proliferasyonun daha iyi ortaya konduğu, elde edilen sonuçların doğruluğunun farklı tekniklerle desteklendiği, daha geniş popülasyonlu kinik çalışmalara ihtiyaç vardır. Elde edilecek veriler, gelecekte larinks kanserlerinden korunmada HPV aşılamasının gerekliliği konusunu karşımıza çıkarabilir.

Anahtar Kelimeler: Larinks, skuamöz hücreli karsinom, HPV, p16.

Abstract:
Assessment of HPV 16, HPV 18, p16 Expression in Advanced Stage Laryngeal Cancer Patients and  Prognostic Significance

Objective: The developmental mechanisms of laryngeal carcinomas are quite complex and controlled by various factors. Smoking and alcohol use are the identified risk factors in the etiology. Recent studies indicate that  HPV infection also plays an important role in larynx carcinomas. p16 is a tumor suppressor gene. When the mutation is on, it contributes to tumor development. We aimed to determine the association of HPV and/or p16 positivity with variables such as age, sex, smoking habits, tumor localization, lymph node metastasis, recurrence and survival in advanced stage laryngeal carcinoma in our study.
Materials and Methods: This study included 90 patients with advanced laryngeal carcinoma who were diagnosed between January 2006 and December 2011 at the Departmant of Otorhinolaryngology of Çukurova University Faculty of Medicine(ÇÜTF). The files of the patients included in the study were evaluated retrospectively. Ten normal larynx mucosa was used as a control group. Tissue specimens were fixed in 10% formaldehyde, embedded in paraffin and histological sections were prepared. Light microscopic examination was performed by applying hematoxylin eosin stain. The presence of HPV was investigated polyclonally by  PCR, and p16 with immunohistochemical method. In HPV positive cases, the presence of HPV types 16, 18 were evaluated by PCR.
Findings: Polyclonal HPV positivity was detected in 11 (12.2%) of 90 cases. Out of these 11 cases, HPV 16 was positive in 6, HPV 18 in 4, and both HPV 16 and 18 were positive in 1. In 18 (20%) of the cases, p16 was positive. Six of the cases (6.6%) had both HPV and p16 positivity. In cases where p16 alone or HPV and p16 were co-positive, alcohol use was less and the tumor was found more likely to be localized in the supraglottic area. These ratios were statistically significant. Although life expectancy over 5 years were numerically higher in HPV and p16 positive cases, this was not found to be statistically significant. There was no statistically significant relationship between HPV positivity and mean age, differentiation, smoking and alcohol use, tumor progression, lymph node metastasis, localization, recurrence, cause of mortality and treatment methods in our study. The mean follow-up period of our patients were 6.7 years.
Conclusion: The relationship between laryngeal carcinoma and HPV, and its effect on the prognosis of the patients has not been clarified despite the work done so far. In our study, 12,2% HPV and 20% p16 positivity were detected in patients with advanced stage laryngeal carcinoma. Although life expectancy over 5 years were numerically higher in HPV and p16 positive cases, this was not found to be statistically significant. There is a need for more populated clinical trials, where neoplastic proliferation is better demonstrated and the accuracy of the results obtained is supported by different techniques. The resulting data may present the need for HPV vaccination in the future to protect against laryngeal cancer. 

Keywords: Larynx, squamous cell carcinoma, HPV, p16.