Glioblastomalı olgularda O6-metil guanin DNA-metil transferaz promoter metilasyonunun tedavi cevabına etkisi ve prognostik önemi
The effect on treatment response and prognostic valueofo6-methyl guanin DNA-methyl transferase promoter methylation in glioblastoma cases
Yazar: DİCLE ASLAN
Danışman: DOÇ. DR. OĞUZ GALİP YILDIZ
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Radyasyon Onkolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Radyoterapi = Radiotherapy

Özet:
Amaç: Bu çalışmada; postoperatif radyoterapi (RT) ile eşzamanlı ve ardından adjuvan Temozolamide (TMZ) tedavisi alan ve yalnız RT alan glioblastoma (GBM) olgularında O6-metil guanin DNA-metil transferaz (MGMT) promoter metilasyonunun tedavi cevabına etkisini ve prognostik önemi araştırıldı.Gereç ve Yöntem: 2000-2010 tarihleri arasında Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi Kemal Dedeman Onkoloji Hastanesi' nde GBM tanısı alıp RT+TMZ ve yalnız RT alan 100 olgunun parafinle bloklanmış doku örneğinden genomik DNA izole edilip bisülfit ile muamele edilerek kontrol DNA'larla karşılaştırıldı. Metilasyona spesifik olan/olmayan primerlerle hedef bölgenin amplifikasyonu için PCR yapıldı. Örnekler PCR'dan sonra pyrosequencing dizi analizine yüklendi. Metile-unmetile ayrımı için dizi analizi yapıldı. MGMT promoterdeki CpG 1, 2, 3, 4 adalarının metilasyonu incelendi. Metile ve unmetile olgular gruplandırılıp MGMT promoter metilasyonun prognostik önemi ile genel sağkalım (GS) ve hastalıksız sağkalıma (HS)'a katkısı tek değişkenli ve çok değişkenli istatistiksel analizlerle incelendi.Bulgular: Elli beş olgu (% 55) RT+TMZ, 45 olgu (% 45) yalnız RT aldı. 67 olgu (% 67) 60 yaş altı iken, 33 olgu (% 33) 60 yaş ve üstündeydi. 52 olguda (% 52) MGMT metile (mMGMT) , 48 olguda (% 48) unmetileydi (umMGMT). mMGMT grupta ortanca GS, HS sırasıyla 10,5 ay (2-67) ve 6 ay (2-57) idi.mMGMT grupta RT+TMZ alan 23 (% 44,2), yalnız RT alan 29 (% 55,8) olgu vardı. Kaplan-Meier analizi (Log Rank) ile RT+TMZ ve yalnız RT alan grup arasında GS ve HS karşılaştırıldı. RT+TMZ alan grupta ortanca GS 27±5.14 ay iken yalnız RT alan grupta 9±1.14 ay bulundu ve istatistiksel olarak anlamlılık saptandı (p<0,001). Ortanca HS, RT+TMZ alan grupta 13±4.59 ay iken yalnız RT alan grupta 6±0,41 ay idi ve anlamlı olarak bulundu (p<0,001). Cox regresyon analizi ile yaşın metile grupta etkisi incelenerek 60 yaş üstünde 60 yaş altına göre riskin ölüm 1.985 kat arttığı bulundu (p=0.04).umMGMT grupta ortanca GS, HS sırasıyla 9,5 ay (2-27) ve 5 ay (2-13) idi. Unmetile grupta RT+TMZ alan 32 (% 66,7) ve yalnız RT alan 16 (% 33,3) olgu vardı. RT+TMZ alan grupta ortanca GS 10±1.32 iken yalnız yalnız RT alan grupta 7±3 bulundu ve istatistiksel olarak anlamlı fark saptanmadı (p=0.813). Ortanca HS RT+TMZ alan grupta 6±1.08 iken yalnız RT alan grupta 6±0.72 idi ve anlamlı olarak değerlendirilmedi (p=0.715). Cox regresyon analizinde 60 yaş üstünde 60 yaş altına göre ölüm riskinin 2.232 kat arttığı bulundu (p=0.01).Sonuç: Literatürde MGMT promoter metilasyonu olan GBM'li olgularda RT'ye TMZ ilavesiyle genel sağkalıma katkı sağlanırken, unmetile olgularda bu katkı gösterilemediğinden TMZ kullanılması umMGMT grubunda tartışmalı olarak kalmıştır. Bizim çalışmamıza ait 100 olguluk retrospektif serimizde de MGMT promoter metilasyonu olanlarda RT'ye TMZ eklenmesinin GS ve HS'ı anlamlı şekilde uzattığı ancak MGMT metilasyonu olmayan olgularda TMZ'in GS ve HS'a anlamlı katkı sağlamadığı gösterildi. MGMT promoter metilasyonunun olup olmamasının tedavi cevabını tahmin etmede güçlü prediktif bir faktör olabileceği sonucu çıkarıldı. Bu haliyle umMGMT grubunda RT'ye TMZ eklenmesi tartışılması gereken bir konudur.

Abstract:
Purpose: In this study; the effect of O6-methyl guanine DNA-methyl transferase (MGMT) promoter methylation on treatment response and prognostic value was investigated on glioblastoma (GBM) cases, treated by postoperative radiotherapy (RT) with concomitant and adjuvant temozolomide (TMZ) and RT alone.Materials and Methods: Genomic DNA isolated from paraffin embedded tissue samples of 100 GBM cases, treated by RT+TMZ and RT alone between 2000-2010 years, at Erciyes University Medical Faculty Kemal Dedeman Oncology Hospital. Genomic DNA incubated with bisulfite and compared with control DNA. PCR was applied for amplification of target region with methylation spesific or not spesific primers and samples were loaded from PCR to pyrosequencing chain analysis. Analysis was done for methylated-unmethylated MGMT distinction. CpG 1, 2, 3, 4 islands methylation on MGMT promoter was demonstrated. Methylated and unmethylated cases were grouped and then the prognostic value of MGMT promoter methylation and contribution to overall survival (OS) and progression free survival (PFS) was demonstrated with univariate-multivariate analysis.Results: Fifty-five (%55) cases were applied RT+TMZ and 45 (%45) cases was administered RT alone. Sixty-seven (%67) cases were under 60 years and 33 (%33) cases were 60 years of age and over. The presence of MGMT methylation was demonstrated in 52 (%52) cases and the rest of 48 (%48) cases weren?t.Median OS and PFS for group with methylated MGMT were 10,5 months (2-67) and 6 months (2-57), respectively. In this group, 23 (%44,2) cases were applied RT+TMZ and 29 (%55,8) cases were applied RT alone. OS and PFS were compared between RT+TMZ and RT alone group with Kaplan-Meier (Log Rank) Analysis. Median OS for RT+TMZ and RT group was 27±5.14 months and 9±1.14 months, respectively and a statistically significant difference was demonstrated (p<0.001). Median PFS for RT+TMZ and RT group was 13±4.59 months and 6±0.41 months, respectively and a statistically significant difference was detected, too (p<0.001). Also, the importance of age was demonstrated with Cox regression analysis and the patients who 60 years of age and over had death risk 1,985 times more according to under 60 years (p=0.04).Median OS and PFS for group with unmethylated MGMT were 9,5 months (2-27) and 5 months (2-13), respectively. In this group, 32 (%66,7) cases were administered RT+TMZ and 16 (%33,3) of them was applied RT alone. Median OS for RT+TMZ and RT group was 10±1.32 months and 7±3 months, respectively and a statistically significant difference wasn?t demonstrated (p=0.813). Median PFS for RT+TMZ and RT alone group was 6±1.08 months and 6±0.72 months, respectively and a statistically significant difference wasn?t demonstrated, either (p=0.715). Also, the importance of age was demonstrated and the patients who were 60 years-old and over had death risk 2,232 times more according to under 60 years. group (p=0.01)Conclusion: As the addition of TMZ to RT, for GBM cases with methylated MGMT promoter, provides contribution to OS, the contribution for cases with unmethylated MGMT promoter, is controversial, because of not been shown in literature. In our retrospective trial on 100 cases was indicated that the addition of TMZ to RT improved OS and PFS for cases with methylated MGMT promoter but didn?t improve OS and PFS for cases with unmethylated MGMT promoter. As a result of this trial, MGMT promoter methylation status is thought to be a strong predictive factor to estimate the treatment response. In this state, the addition of TMZ to RT for cases with unmethylated MGMT promoter is controversial.