Süksinilaseton için kapiler elektroforetik miktar tayini yöntemi geliştirilmesi ve elektrokimyasal davranışının incelenmesi
Developing of capillary electrophoretic quantification method for succinylacetone and investigation of electrochemical behaviour
Yazar: SAADET MERAL KARACAN
Danışman: PROF. DR. A. NUR ONAR
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Süksinilaseton (SA, 4,6 diokzoheptanoik asit) genetik bir metabolizma bozukluğu olan tirosinemia tip I hastalığının etken maddesidir. Süksinilaseton normal vücut sıvıları içinde bulunmaz ancak kan ve idrar içindeki süksinilaseton varlığı tirosinemia belirtisidir. Bu çalışmada süksinilasetonun amniyon sıvılarında tayini için voltametrik ve kapiler elektroforetik miktar tayini yöntemleri geliştirilmesi amaçlanmıştır. Voltametri ve kapiler elektroforez deneyler için en uygun koşullar kemometri kullanılarak belirlenmiştir.Süksinilaseton için literatürde bildirilmiş voltametrik bir yöntem olmadığından elektrokimyasal davranışı incelenmiştir. Süksinilasetonun, KCl destek elektrolit ortamında cıva elektrotta -1,68V(Ag/AgCl'ye karşı) potansiyelde, difüzyon kontrollü akım ile ve bir elektron aktarılarak indirgendiği saptanmıştır. Kare dalga voltametrisi için 1,23x10-4 ? 4,41x10-4M doğrusal derişim aralığında hesaplanan LOD ve LOQ değerleri sırasıyla 2,92x10-5 ve 9,76x10-5M olarak bulunmuştur. Bu yöntem özütleme yapılmadan amniyon sıvılarına uygulandığında süksinilaseton, biyolojik sıvıdan gelen pikler nedeniyle belirlenemediğinden özütlemeye başvurulmuştur. Özütleme işleminin süksinilasetonun, metil esterini oluşturduğu saptanmıştır. Süksinilaseton metil esteri, süksinilasetondan farklı bir yapıya sahip olduğu için yeniden elektrokimyasal davranışı incelenmiştir. Süksinilaseton metil esterinin KCl destek elektrolit ortamında cıva elektrotta gerçekleşen indirgenme tepkimesi sonucu bir adet indirgenme piki gözlenmiş, aktarılan elektron sayısı, akım örnekleme polarografi ile ölçülmüş, iki olarak bulunmuştur. Süksinilaseton metil esteri için 3,25x10-6 ? 5,83x10-5M doğrusal derişim aralığında çizilen kalibrasyon eğrisinden hesaplanan LOD ve LOQ değerleri sırasıyla 2,72x10-7 ve 9,08x10-7M olarak bulunmuştur. Amniyon sıvısında süksinilaseton metil esteri tayininde, standart ekleme yöntemi kullanılarak hesaplanan ortalama geri alınabilirlik değeri %88,1 olarak bulunmuştur.Bu çalışma UV belirlemeli kapiler elektroforetik sıkıştırma yöntemi ile belirlemeyi anlatmaktadır. Ayırma ters faz polaritede -10kV potansiyelde gerçekleştirilmiştir. Enjeksiyonlar 150s, 5x10-3MPa basınç uygulayaral gerçekleştirilmiştir. Bu uygun koşullar altında 2,85x10-11 M derişim alt tayin sınırına inilebilmiştir. Geliştirilen sıkıştırma yöntemi altı adet amniyon sıvısına uygulandığında hesaplanan geri alınabilirlik değeri ortalama %91,69 olarak bulunmuştur.Anahtar kelimeler: Süksinilaseton, süksinilaseton metil esteri, voltametri, kapiler elektroforez, örnek sıkıştırması

Abstract:
Succinylacetone (SA, 4,6 diketoheptanoic acid) is primary diagnostic metabolite for inherited disorder hepatorenal tyrosinemia type I. This work describes the voltammetric and capillary electrophoresis determination of succinylacetone. Optimum conditions for voltammetry and capillary electrophoretic were determined by chemometry.A voltammetric method for succinylacetone has not been reported in the literature that examined the electrochemical behavior. Potassium chloride (0.1mol L-1) was selected as supporting electrolyte. Succinylacetone gave an irreversible reduction peak at -1.68V versus Ag/AgCl reference electrode. Cylic voltammetric measurements showed that current was controlled by diffusion. Linearity range was between 1.23x10-4 ? 4.41x10-4 mol L-1. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were calculated as 2.92x10-5 mol L-1 and 9.76x10-5 mol L-1 respectively. The method was applied to succinylacetone spiked amniotic fluid. For extraction of succinylacetone from amniotic fluid, methyl alcohol was used in acidic medium. After extraction procedure, it is determined that ester of succinylacetone was formed in acidic medium with methyl alcohol. The polographic investigation showed that succinylacetone methyl ester was reduced with two electron transfer. Linearity range was between 3.25x10-6 ? 5.83x10-5 mol L-1. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were calculated as 2.72x10-7mol L-1 and 9.08x10-7mol L-1 respectively. In amniotic fluid succinylacetone methyl ester was analyzed using square wave voltammetry. Recovery was calculated as %88.1This work describes sample stacking method by capillary electrophoresis with UV detection has been developed for the determination of succinylacetone. The separation was performed with reversed polarity mode at -10kV voltage. Injections were made at 5.10-3MPa for 150s pressure. Under the optimum conditions, the detection limit (LOD) for succinylacetone was calculated at level 2.85x10-11 mol L-1. The mean overall coefficient of succinylacetone recovery (%) from amniotic fluid spiked succinylacetone using dilution and recalculated with standard curve established with same procedure was %91.96.Key words: Succinylacetone, succinylacetone methyl ester, voltammetry, capillary electrophoresis, sample stacking