MDA-MB-231 meme kanseri hücre hattında flavopiridolün endoplazmik retikulum stresi bağlantılı apopitoza etkisinin araştırılması
Investigation of the effects of flavopiridol on endoplasmic reticulum stress-connected apopitosis in the breast cancer of MDA-MB-231
Yazar: EMEL ÖZTÜRK
Danışman: PROF. DR. BİRKAN YAKAN ; DOÇ. DR. ZÜHAL HAMURCU
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Anneksin V = Annexin V ; Apoptozis = Apoptosis ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; Hücre dizisi = Cell line ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Kanser ölümlerinin ikinci önemli nedeni olan meme kanseri kadınlar arasında en yaygın görülen kanser tipidir. Son zamanlarda sayısının giderek artıyor olması alternatif tedavide yeni yaklaşımları getirmektedir. Bu yüzden sunulan tez çalışmasında antitümör etkiye sahip bir flavonoid türevi olan flavopiridolün agresif meme kanseri hücre hattı olan MDA-MB-231 hücreler üzerindeki hücre canlılığı ve endoplazmik retikulum stresi (ERS) ile bağlantılı apopitotik yolaklar üzerindeki etkisinin araştırılması amaçlandı. 
Bu çalışmada flavopiridolün MDA-MB-231 hücrelerinin canlılığı üzerindeki etkisi içinhücre canlılık testi (MTS) ve koloni oluşumuna etkisini belirlemek için klonojenik test uygulandı. Migrasyon testi ile hücrelerin göç etme oranları, Anneksin V ve western blot yöntemleri ile flavopiridolün apopitoz, ERS [Glucose regulated protein (GRP78), Aktive edici transkripsiyon factor 4 (ATF4), Fosfo-ökaryotik başlama faktörü 2 α (p-eIF2 α)] ve ERS ile bağlantılı apopitozda rol alan CCAAT/ Enhancer Binding Protein (C/EBP) (CHOP) proteinlerin ekspresyonları belirlendi.
MTS sonuçlarına göreflavopiridolün MDA-MB-231 hücre hattında, 200nM-700nM doz aralığında flavopiridolün hücre canlılığını önemli oranda azalttığı bulundu. Klonojenik test sonuçlarına göre 90nM-300nM doz aralığında flavopiridolün kloni oluşumunu azalttığı bulundu. Migrasyon deney sonuçlarına göre ise flavopiridolün 24 saatlik 400nM ve 500nM konsantrasyonlarda flavopiridolün hücrelerin migrasyonunu baskıladığı bulundu. 48 saat 400nM ve 500nM flavopiridol ile muamele edilen hücrelerin ise tamamen öldüğü bulundu. Western blot bulgularına göre 24 saat 200nM-500nM, 48 saat 200nM ve 300nM doz aralığında flavopiridol ile muamele edilen hücrelerde ERS ve ERS ile bağlantılı proteinlerin ekspresyonlarında artış olduğu tespit edildi. Anneksin V deney sonucunda da 24 saat 200nM-500nM, 48 saat 200nM ve 300nMdoz aralığında flavopiridol ile muamele edilen hücrelerde apopitoz oranın arttığı bulundu. Sonuçlarımız diğer diğer sitotoksik kemoterapötik ajanlarla kombinasyon halinde kullanıldığı takdirde flavopiridolün agresif meme kanserli hastaların tedavisi için umut verici bir potansiyele sahip olacağını, ancak bu konu ile ilgili daha ileri düzeyde çalışmaların yapılması gerektiğini gösterdi.
 Anahtar Kelimeler: Anneksin V, Apopitoz, Flavopiridol, MDA-MB-231, ERS.

Abstract:
Breast cancer, the second leading cause of cancer deaths, is the most common type of cancer among women. The fact that its number has been increasing recently brings new approaches in alternative therapy. Therefore, in the presented thesis, it was aimed to investigate the effect of flavopiridol, a flavonoid derivative with antitumor effect, on cell viability and endoplasmic reticulum stress (ERS) -related apopitotic pathways on aggressive breast cancer cell line MDA-MB-231 cells.
In this study, cell viability test (MTS) was performed for the effect of flavopiridol on the viability of MDA-MB-231 cells, and the clonogenic test was used to determine the effect on colony formation. The migration test showed the migration rates of the cells, the expressions of proteins involved in apoptosis, ERS [Glucose regulated protein (GRP78), Activating transcription factor 4 (ATF4), Phospho-eukaryotic initiation factor 2 α (p-eIF2 α)] and ERS-related apoptosis [CCAAT/ Enhancer Binding Protein (C/EBP) (CHOP)]of flavopiridol by Anneksin V and western blot methods. 
According to MTS results, flavopiridol was found to significantly reduce cell viability in the MDA-MB-231 cell line, in the 200nM-700nM dose range. According to the clonogenic test results, it was found that flavopiridol reduced clone formation in the 90nM-300nM dose range. According to the results of the migration experiment, flavopiridol suppressed the migration of the cells at 24 hours at 400nM and 500nM concentrations. The cells treated with 400nM and 500nM flavopiridol for 48 hours were found to be completely dead. According to Western blot findings, there was an increase in the expression of ERS and ERS related proteins in cells treated with flavopiridol at a dose interval of 24 hours 200nM-500nM, 48 hours 200nM and 300nM. As a result of Annexin V experiment, it was found that the rate of apoptosis increased in the cells treated with flavopiridol in the range of 200nM-500nM, 48 hours 200nM and 300nMdoz for 24 hours. Our results showed that if used in combination with other cytotoxic chemotherapeutic agents, flavopiridol will have promising potential for the treatment of patients with aggressive breast cancer, but further studies on this subject should be done.
Key Words: Annexin V, Apoptosis, Flavopiridol, MDA-MB-231, ERS.