Karfilzomibin tek başına ve lenalidomid ile kombinasyonunun myeloma hücre hattı üzerine olan sitotoksik etkilerinin in vitro incelenmesi
In vitro investigation of the cytotoxic effects of carfilzomib that used alone and combined with lenalidomide on myeloma cell line
Yazar: İPEK ESKİOCAK
Danışman: PROF. DR. MEHMET ŞENCAN
Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Kan hastalıkları = Hematologic diseases ; Karfilzomib = Carfilzomib ; Kaspazlar = Caspases ; Lenalidomid = Lenalidomide ; Multipl miyelom = Multiple myeloma ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Multipl myelom (MM), kemik iliğinde malign plazma hücrelerinin klonal proliferasyonu, kan ve/veya idrarda monoklonal protein ve ilişkili organ disfonksiyonu ile karakterize neoplastik plazma hücre hastalığıdır. Erişkinlerdeki tüm malignitelerin %1'ini, hematolojik malignitelerin ise %10-15'ini oluşturur. Bir plazma hücre hastalığı olan MM, yeni ajanlarla yüksek doz kemoterapi ve otolog kök hücre nakli gibi tedavi modalitelerine rağmen ortalama survi 5-6 yılı geçmeyen inkurabl bir malignite olarak karşımızda durmaktadır. Bu nedenle direnci azaltacak ve yüksek kür oranlarına imkân sağlayacak yeni ve alternatif tedavilere ihtiyaç duyulmaktadır.
Bu bilgiler ışığında çalışmamızda; Karfilzomb'in tek başına ve Lenalidomid ile kombine şekilde uygulanmasının antikanser etkisinin myeloma hücre hattı üzerinde araştırılması ve bu etkide apoptotik etkinin rolünün saptanması amaçlanmıştır.
Çalışmada U266 myelom hücre hattı kullanıldı. Karfilzomib ve lenalidomid'in tek başına uygulamalarının ardından, lenalidomid'in 25 nM konsantrasyonu ile karfilzomibin 200, 100, 50, 25 ve 12.5 nM konsantrasyonları kombine edildi ve uygulamaların antikanser etkisi ile apoptotik etkileri değerlendirildi. Canlı hücre sayımı için "Cell Proliferation Kit", XTT testi ve tripan mavisi boya testi kullanıldı. Apoptozis tayini için Kaspaz-3 enzim aktivitesi ölçüldü. Hem karfilzomib hem de lenalidomid tek başına uygulamalarda zamana ve konsantrasyona bağımlı şekilde bir antikanser etkinlik göstermiştir. Kombine uygulamanın ardından istatistiksel olarak anmalı bir sitototoksisite artışı meydana gelmiştir. Kombinasyonun meydana getirdiği antikanser etkinlik her konsantrasyonda tek başına uygulamadan üstün bulunmuştur. Hatta, karfilzomibin etkinlik göstermediği konsantrasyonlarda bile anlamlı bir sitotoksik etkinlik görülmüştür. Karfilzomib uygulaması apoptotik etki meydana getirmesine rağmen bu kısıtlı artış apoptozisin karfilzomibin etki mekanizmasında sınırlı bir rol oynadığını göstermektedir. Lenalidomid ise güçlü bir apoptototik etki meydana getirmiştir. Kombinasyonun meydana getirdiği kaspaz-3 enzim aktivite artışı tek başına uygulamalardan anlamlı şekilde fazladır.
Sonuç olarak, karfilzomib özellikle tedaviye dirençli vakalarda öne çıkan bir ilaçtır ve lenalidomid ile kombinasyonu hem yan etkilerden sakınmak hem de direnç ortaya çıkmasını önlemek için bir seçenek olarak karşımıza çıkmaktadır.

Abstract:
Multiple myeloma is a neoplastic plasma cell disease characterized by clonal proliferation of malignant plasma cells in bone marrow, monoclonal protein in blood or urine, and neoplastic plasma cell disease characterized by associated organ dysfunction. It constitutes 1% of all malignancies or if it is hematologic 0-15% in adults. MM, a plasma cell disease, stands as a recurrent malignancy with an average survival time of 5-6 years despite treatment modalities such as high dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation with new agents. Therefore, new and alternative therapies are needed that may reduce resistance and allow for high cure rates. In the light of these information; It is aimed to investigate the anticancer effect of Carfilzomb alone and in combination with Lenalidomide on Myeloma Cell Line and detection of the role of apoptotic effect in this effect. U266 myeloma cells were used in the study. Concentrations of 200, 100, 50, 25 and 12.5 nM of Carfilzomib were combined with 25 nM concentration of lenalidomide following the administration of the carfilzomib and lenalidomide alone and the anticancer effect of the applications and the apoptotic effects were evaluated. For the cell count, "Cell Proliferation Kit", XTT test and trypan blue dye test were used. Caspase-3 enzyme activity was measured to determine apoptosis. Both Carfilzomib and Lenalidomide exhibited an anticancer activity in a time and concentration dependent manner on their own. There was a statistically significant increase in cytotoxicity following administration. The anticancer efficacy brought by the combination was found to be superior to the individual application at each concentration. Even when Carfilzomib was inactive at concentrations that were not efficacious, a significant cytotoxic activity was observed. Although the administration of carbylzomib induces apoptotic effects, this limited increase shows that apoptosis plays a limited role in the mechanism of action of Carfilzomib. Lenalidomide has a strong apoptotic effect. The increase in caspase-3 enzyme activity brought by the combination that is significantly greater than in the individual applications. In conclusion, carfilzomib is a particularly prominent drug in resistant cases, and its combination with lenalidomide appears to be an option to avoid side effects and to prevent resistance.