Kültür çipura (Sparus aurata, L. 1758) balıklarından izole edilen bazı patojen bakterilerin protein profillerinin tespiti
Determination of the protein profiles of some pathogenic bacteria isolated from cultured gilt-head sea bream (Sparus aurata, L. 1758)
Yazar: ÖZGÜR ÇANAK
Danışman: DOÇ. DR. TÜLAY AKAYLI
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Balık hastalıkları = Fish disease ; Elektroforez-poliakrilamid jel = Electrophoresis-polyacrylamide gel ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Vibrio = Vibrio ; Çipura balığı = Seabream

Özet:
Bu çalışma Nisan 2009 ? Temmuz 2010 tarihleri arasında Ege bölgesindeki deniz balığı işletmelerindeki çipura balıklarında hastalıklara neden olan bakteriyolojik etkenlerin teşhisi ve immunokimyasal teknikler kullanarak bu etkenlerin serotiplerinin ve protein profillerinin belirlenmesi amacıyla gerçekleştirilmiştir.Çalışma boyunca Muğla ve İzmir illerinde bulunan beş adet deniz balığı işletmesinde gerçekleştirilen üç örnekleme çalışmasında temin edilen, ağırlıkları 3 ile 130 g arasında değişen toplam 27 adet çeşitli hastalık belirtileri gösteren kültür çipura balığı örneği bakteriyolojik açıdan incelenmiştir. Genel olarak dış bakıda yüzeye yakın ve yavaş yüzme hareketi, balık renginde solgunluk, deride pul kaybı, vücut yüzeyinde ülser ve lezyonlar, yüzgeç diplerinde hemorajiler, solungaçlarda anemi ve iç bakıda karaciğer renginde solgunluk, periton boşluğunda sıvı birikimi ve iç organlarda erime ve küçülme gibi klinik bulgular gözlenen hasta balık örneklerinin karaciğer, böbrek, dalak, kan ve lezyonlarından TCBS, MA ve %1,5 NaCl içeren TSA besiyerlerine bakteriyolojik ekimler yapılmış ve petriler 21 °C'de üç gün süreyle inkübe edilmiştir. Çalışma sonucunda saf kültür halinde elde edilen 15 adet bakteri izolatı konvansiyonel metotlar ve API 20E tanı kitleri kullanılarak identifiye edilmiştir. Çalışmada incelenen balık örneklerinden en baskın olarak Vibrio anguillarum, izole edilmiştir. Bunun yanı sıra balık örneklerinden Vibrio genusuna ait türlerden V. scophthalmi, V. logei ve V. harveyi izole ve identifiye edilmiştir. Çalışmada, Vibrio genusu üyelerinin dışında Gram-negatif bakterilerden Pseudomonas stutzeri, P. anguilliseptica ile Gram-pozitif bakterilerden Staphylococcus sp., ve Micrococcus luteus türleri de izole ve identifiye edilmiştir.V. anguillarum olarak identifiye edilen 6 adet izolattan dört tanesinin serotipinin belirlenmesi amacıyla lam aglütinasyon testi gerçekleştirilmiş ve üç tanesinin V. anguillarum serotip O1 olduğu tespit edilmiştir. Bir adet V. anguillarum izolatı ise türün O1, O2 ve O3 serotiplerine karşı geliştirilen antikorlarla çökelme oluşturmadığından lam aglütinasyon tekniği ile serotipleri belirlenememiştir.Bakteri izolatlarının protein profillerinin ve antijenik yapılarının tespiti amacıyla gerçekleştirilen SDS-PAGE analizleri sonucunda, aynı türe ait izolatların temel dış membran proteini bakımından benzerlik gösterirken aralarında küçük farklılıklar bulunduğu tespit edilmiştir.Sonuç olarak bu çalışmada Vibrio genusu üyelerinin çipuraların temel patojenleri olduğu, diğer bazı Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterilerin de bu türlerle birlikte karma enfeksiyonlara neden olduğu tespit edilmiştir. Bu izolatların tespit edilen protein profillerinin bu türlerin neden olduğu hastalıkların tedavi ve önlenmelerine yönelik çalışmalarda yardımcı olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
This study was performed between April 2009 and July 2010 to identify the bacterial agents which cause diseases in gilthead sea bream cultured in the marine fish farms located in the Aegean region of Turkey and to determine the serotypes and protein profiles of these agent using immunochemical techniques.A total of 27 cultured gilthead seabream specimens showing some clinical signals of diseases and weighing between 3-130 g which were supplied from five fish farms located in Muğla and İzmir were examined bacteriologically. Bacteriological samples were streaked on TCBS, MA and TSA containing 1,5% NaCl from the liver, kidney, spleen, blood and lesions of the fish samples which have main external clinical symptoms such as slowly swimming behavior near the sea surface, pale skin color, loss of scales, ulcers and lesions on the skin, hemorrhages at the base of the fins, anemia in the gills and main internal symptoms such as pale liver color, accumulation of fluid in the peritoneal cavity and swollen internal organs that are smaller in size. Petri dishes were incubated at 21 °C for three days. 15 bacterial isolates which were recovered in pure cultures were identified depending on the conventional bacteriological tests and API 20E kits. V. anguillarum was recovered from the fish samples abundantly. Besides, V. scophthalmi, V. logei and V. harveyi belonging to the genus Vibrio were isolated and identified from the fish samples. Except the members of the genus Vibrio, Gram-negative Pseudomonas stutzeri, P. anguilliseptica isolates and Gram-positive Staphylococcus sp. and Micrococcus luteus isolates were also isolated and identified in this study.Slide agglutination tests were performed to determine the serotype of 4 out of the 6 V. anguillarum isolates and 3 of them were identified as V. anguillarum serotype O1. One V. anguillarum isolate did not made any reactions with antibodies raised against serotypes O1, O2 and O3 of this species and hence its serotypes could not be determined using slide agglutination technique.Depending on the results of SDS-PAGE analysis carried out to determine the protein profiles and antigenic structures of the bacterial isolates, it was observed that isolates of the same species show similarities on the major outer membrane proteins besides little differences.In conclusion, it was determined that Vibrio species are the main pathogens of gilthead seabream and some other Gram-negative and Gram-positive bacteria cause mixed infections in this species. It is thought that protein profiles of these bacterial species determined in this study could be used as useful tools in control and preventation studies of diseases caused by these organisms.