Nar suyu (Punica granatum)  ekstraktının hücre kültürü ortamında genotoksisite ve oksidatif durum üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of Pomegranate Juice extract on cell culture environment upon  genotoxicity and oxidative status
Yazar: MURAT ÜSTÜNEL
Danışman: PROF. DR. NURTEN AKSOY
Harran Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Bitki özütü = Plant extract ; Genotoksisite = Genotoxicity ; Hücre kültürü = Cell culture ; Nar suyu = Pomegranate juice ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Oksidanlar = Oxidants ; Punica granatum = Punica granatum

Özet:
Amaç: Akdeniz havzasında birkaç bin yıldır var olan nar, Afganistan ve Pakistan'dan Himalayalar'a kadar geniş bir alanda yetişir. Nar meyvesini; kabuğu, çekirdeği ve suyu olmak üzere üç bölümde incelemek mümkündür. Nar suyu, içerdiği zengin bileşikler ve minerallerden dolayı çeşitli hastalıkların tedavisinde yüzyıllardır kullanılmaktadır. Bu çalışmada nar suyunun, hücre kültürü ortamında mononükleer lökosit hücrelerinde genotoksisite, oksidatif durum ve H2O2'nin (Hidrojen peroksit) genotoksik etkisine karşı, anti-genotoksik, antioksidatif etkileri araştırılmıştır.
Gereç ve yöntem: İn vitro olarak yapılan deneyde, PBS'de çözdürülen değişik konsantrasyonlardaki nar suyu ekstraktı, hücre kültürü ortamında mononükleer lökosit hücrelerine verilip 30 dk inkübasyona bırakıldıktan sonra, hücreler yıkanıp her gruba 50µmol/ml H2O2 verilmiştir. Her grubun, inkübasyondan ve hidrojen peroksitten sonra, comet assay yöntemiyle genotoksisitesi ve Erel yöntemiyle oksidatif durumu araştırılmıştır.Gruplara SPSS 11.5 programı ile istatistiksel olarak non-parametrik Kruskall Wallis H ve Mann-Whitney U testleri, korelasyon analizleri için de Spearman korelasyon testi uygulanmıştır.
Bulgular: Total oksidan Seviyede, negatif kontrol grubu ile 100µg/ml nar suyu ekstraktı grubu, pozitif kontrol grubu ile 100µg/ml nar suyu ekstraktı + 50µmol H2O2 uygulanan gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmuştur(p?0,05 hepsi için). Total Oksidan Seviye ile DNA hasarı arasında, Sperman korelasyon analizine göre pozitif korelasyon bulunmuştur (p<0,001, rho:849). DNA hasarı, negatif kontrol grubu ile 100, 4 ve 1 µg/ml nar suyu ekstrakt grupları, pozitif kontrol grubu ile 100µg/ml nar suyu ekstraktı + 50µmol H2O2 gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur(p?0.05 hepsi için).
Sonuç: Çalışma Sonuçlarımıza göre, nar suyu, anti-genotoksik ve antioksidatif etkilere sahiptir. Bu özelliklerinden dolayı, oksidatif stresin arttığı kronik hastalıklarda, yaşlanmaya bağlı hastalıklarda ve kanser tedavisinde önleyici ve destekleyici tedaviler arasında kullanılabilir. 

Anahtar Kelimeler: Nar suyu, comet assay, genotoksisite, antioksidan, kanser

Abstract:
Purpose: Pomegranate, that has been in Mediterranian Reservoir for ages, has been grown in a wide region from Afghanistan and Pakistan to Himalayas. It is possible to divide pomegranate into three parts as juice, seeds and peel. Pomegranate juice have been used  for the treatment of several diseases due to its rich minerals and compounds for centuries. In this study, on cell culture environment, genotoxicity and oxidative status of mononuclear leukocyte cells and anti-genotoxic and antioxidative effects of pomegranate juice against genotoxic effects of H2O2 have been researched.
Materials and Methods: In this in vitro experiment, pomegranate juice extract in different concentrations dissolved in PBS was given to mononuclear leukocytes in a cell culture environment and incubated for 30 minutes.Subsequently the cells have been washed and then 50µmol/ml H2O2 was given to each group. After both incubation and hydrogen peroxide application of each group, genotoxicity by using comet assay and oxidative status by using Erel method have been investigated. For statistical analyses SPSS 11.5 for Windows have been used. Non-parametric Kruskall Wallis H and Mann-Whitney U tests to analyse the difference between the groups and Spearman Correlation test for correlation analysis have been used.
Results: There are statistically significant differences between the negative control group and 100 µg/ml Pomegranate Juice Extract group, positive control and 100 µg/ml Pomegranate Juice Extract + 50µmol H2O2 group in respect to total oxidant status (p?0,05 for all). A positive correlation between the total oxidant status and DNA damage have been identified according to Sperman correlation analysis (p<0,001, rho:849). DNA damage has been found as significantly different between the groups negative control group and 100, 4, 1 µg/ml Pomegranate Juice Extract groups, positive control and 100 µg/ml Pomegranate Juice Extract + 50µmol H2O2 group (p?0.05 for all).
Conclusion : According to our findings, pomegranate juice has antigenotoxic and antioxidative effects. Because of these properties, it may be used effectively  in the chronic diseases, aging-related diseases and cancer, in which oxidative stress increased as  preventive and supportive therapy.

Key Words: Pomegranate Juice, Comet Assay, Genotoxicity, Antioxidant, Cancer