Sisplatin ototoksisitesinde gen değişimi düzeyinde yeni biyobelirteç geliştirme
Development of new biomarker at the level of gene alteration in cisplatin ototoxicity
Yazar: DENİZ KIZMAZOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. YÜKSEL OLGUN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Onkoloji Ana Bilim Dalı / Temel Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Onkoloji = Oncology

Özet:
Giriş: Sisplatin (CDDP), çocukluk çağı kanserlerinin tedavisinde kullanılan ve DNA platinizasyonu yoluyla etkili olan kemoterapötik bir ajandır. Bu alkilleyici ajanın en önemli yan etkileri nefrotoksisite, ototoksisite ve nörotoksisitedir. CDDP ototoksisitesi genellikle sensörinöraldir. Bilateral, geri dönüşü olmayan ve ilerleyici işitme kaybına neden olur. CDDP'ye bağlı işitme kaybı, özellikle küçük dil ediniminde, öğrenmede ve psikolojik gelişimde zorluklara neden olur ve çocukların hayatlarının geri kalanını da etkileyeceği düşünülür. Sosyal işlevsellikte azalmaya yol açması nedeniyle özellikle önemlidir. Bu çalışmanın amacı, çocukluk çağı kanserlerinde sisplatin ototoksisitesini önceden öngörmemizi sağlayabilecek olan biyobelirteçlerin araştırılmasıdır.
Gereç-Yöntem: Öncelikle; ileri derecede işitme kaybı olan hastalar, aday mutasyon araştırması için karşılaştırmalı genomik hibridizasyon ile analiz edildi. İleri derecede işitme kaybı olan 5 hastada ADAM6, SIX3, GNAS, NDUFV1, H19, DEFA4, ZIM2 genlerinin mutant olduğunu tespit ettik. Bu veriler doğrultusunda sisplatin tedavisi alan daha geniş bir çocukluk çağı kanseri hasta popülasyonunda bu 7 genin mutasyon durumunu tespit etmeyi amaçladık. Rutin kontroller için gelen sisplatin tedavisi alan ya da almakta olan 82 hastanın periferik kanından ayrılan mononükleer hücrelerden DNA izole edildi. Daha sonra 7 gen için RT-PCR analizi yapıldı. Hastalar tanıları, kümülatif sisplatin dozlarıyla birlikte Brock ve Muenster skorlamaları ile ototoksisite açısından değerlendirildi.
Bulgular: Çalışmaya dahil edilen 82 hastanın; 44'ü erkek, 38'i kız idi. Hastaların tanısal dağılımı: Nöroblastom %42,7, Santral Sinir Sistemi Tümörü %14,6, Germ Hücreli Tümör %11, Hepatoblastom %11, Nazofaringeal Karsinom %6,1, Osteosarkom %4,9, diğer tümörler %9,7 şeklinde idi. Ortanca kümülatif sisplatin dozu 400 mg/m2 (75-800 mg/m2) olarak hesaplandı. Tüm hastaların %28'inde işitme kaybı vardı. Bu hastaların işitme kaybı oranları ise  %76,8'inde hafif işitme kaybı, %23,2'sinde ise ileri derecede işitme kaybı olarak görüldü. Ototoksisite varlığı ile ZIM2 geninin amplifikasyonu arasında korelasyon bulundu (korelasyon katsayısı 0,461, p=0,003). ZIM2 gen amplifikasyonu özellikle ileri derecede işitme kaybı olan hastalarda körele idi (korelasyon katsayısı 0,38, p=0,017).
Sonuç: Sisplatin ototoksisitesini öngörmek için yeni biyobelirteçlere ihtiyaç vardır. Çalışmamız ZIM2 genini aday biyobelirteç olarak tanımladı.

Anahtar Kelimeler: Nöroblastom, Sisplatin, Ototoksisite, Biyobelirteç

Abstract:
Introduction: Cisplatin (CDDP) is a chemotherapeutic agent used in the treatment of many childhood cancers. It is effective through DNA platinization. The most important side effects of this alkylating agent are nephrotoxicity, ototoxicity and neurotoxicity. CDDP ototoxicity commonly causes sensorineural, bilateral, irreversible and progressive hearing loss. CDDP-induced hearing loss is particularly important in very young children, as it leads to impaired language acquisition, difficulties in learning and psychological development, and reduced social functioning that will affect them for the rest of their lives. The aim of this study is to determine biomarkers that can enable to predict cisplatin ototoxicity in childhood cancers.
Material&Method: Firstly; patients with severe hearing loss were analysed with comparative genomic hybridization for candidate mutation search. We found that the ADAM6, SIX3, GNAS, NDUFV1, H19, DEFA4, ZIM2 genes were mutant in 5 patients with severe hearing loss. In line with these data, we aimed to detect the mutation status of  these 7 genes in a larger patient population of childhood cancer who take CDDP treatment. For routine checks DNAs were isolated from mononuclear cells separated from the peripheral blood of 82 patients who received or were receiving CDDcisplatin treatment. Then, RT-PCR analysis was performed for 7 genes. Patients were evaluated in terms of ototoxicity using Brock and Muenster scores along with their diagnoses, cumulative cisplatin doses.
Results: Of the 82 patients included in the study; 44 were boys and 38 were girls. Diagnostic distribution of patients as follows: Neuroblastoma 42.7%, Central Nervous System  Tumors 14.6%, Germ Cell Tumors 11%, Hepatoblastoma 11%, Nasopharyngeal carcinoma 6.1%, Osteosarcoma 4.9%, and other tumors 9.7%. Median cumulative CDDP dose was 400 mg/m2 (75–800 mg). 28% of all patients had hearing loss. Hearing loss rates of these patients were seen as mild hearing loss in 76.8% and severe hearing loss in 23.2%. A correlation was found between the presence of ototoxicity and amplification of the ZIM2 gene (correlation coefficient 0.461, p=0.003). ZIM2 gene amplification was correlated especially advanced patients with severe hearing loss (correlation coefficient 0.38, p=0.017).
Conclusion: New biomarkers are needed to predict cisplatin ototoxicity. Our study identified ZIM2 gene as a candidate biomarker.

Key words: Neuroblastoma, Cisplatin, Ototoxicity, Biomarker