Pamuk tohumundan (Gossypium hirsutum L.)  lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of lipase enzyme from cotton seed (Gossypium hirsutum L.)
Yazar: NİLAY AKBULUT
Danışman: PROF. DR. METİN BÜLBÜL
Dumlupınar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Lipazlar, gliserol ile yağ asitlerinden oluşan esterlerin hidrolizini sağlayan ya da lipitlerin ester bağlarının oluşumunu katalizleyen enzimler olarak bilinirler. Lipazların, biyolojik proselerdeki kullanım alanları, yeri ve önemi günden güne artmaktadır. Bu çalışmada pamuk tohumundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu amaçlanmıştır. Bu çalışma ile sanayide kullanılan lipaz enzimlerine alternatif lipaz eldesi hedeflenmiştir ve ilk defa pamuk tohumundan lipaz enzimi elde edilmiştir.
Pamuk tohumundan ilk defa lipaz enzimi saflaşrmak için; pamuk tohumlarının proteinlerinin yağsızlaştırılmasından sonra amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, jel filtrasyon kromatografisi gibi metodlar kullanılarak pamuk tohumu lipazı saflaştırılmıştır. Her saflaştırma basamağında Bradford metoduna göre protein tayini ve titrimerik metod kullanılarak lipaz aktivitesi tayini yapılmış ve spesifik aktivite hesaplanmıştır. İşlemler sonucunda pamuk tohumu lipazının 35,2 kat saflaştırıldığı bulunmuştur.
Pamuk tohumu lipazının SDS-PAGE ile karakterizasyonu ve molekül ağırlığı tayini yapılmıştır. Enzimin molekül ağırlığı 21kDa olarak hesaplanmıştır.
Saflaştırılan enzim en yüksek aktiviteyi pH 10,4 ve 50°C sıcaklıkta göstermektedir. Ayrıca stabil pH 10,0 ve stabil sıcaklık 60°C olarak belirlenmiştir.
Pamuk tohumundan elde edilen lipazın depo kararlılığını belirlemek için, iki hafta süreyle aktivite ölçümleri yapılmıştır. Enzim aktivitesinin iki haftanın sonunda 4°C'de korunduğu gözlenmiştir.
Substrat olarak triolein kullanılan pamuk tohumu lipazının Km ve Vmax değerleri hesaplanmıştır. Km = 17,5178 mM ve Vmax= 9,5192 U/dk. mg enzim olarak hesaplanmıştır.
Anahtar Kelimeler: Karakterizasyon, lipaz, pamuk tohumu, saflaştırma.

Abstract:
Lipases are known as enzymes that the provide hydrolysis of esters, which ocur glycerol and fatty acids. The importance, role and the uses in the biological processes of lipases are increasing day by day.
In this study it was aimed that purification and characterization of lipases from cotton seed. Thus an alternative to lipase enzyme used in the industry were obtained. For this reason the methods mentioned below were applied respectively. Defatting of seeds, ammonium sulfate precipitation, dialysis, gel filtration chromatography etc. 
In all purification steps protein quantity was measured according to Bradford method and lipase activity was measured by titrimetric method. Specific activity was calculated and it was determined that lipase was purified 35.2 fold.
To determine molecular weight of cotton seed lipase SDS-PAGE was performed and the molecular weight was identified as 21 kDa.
Maximum acitivity of cotton seed lipase was observed at pH 10.4 and 50 ˚C. It was found that stabil pH and stabil temperature  10.0 and 60 ˚C, respectively. 
To determine storage stability of purified lipase, activities were measured for two weeks. After two weeks lipases in 4 ˚C were protect their catalytic activity. 
To calculate Km and Vmax of cotton seed lipase, triolein was used substrate and Km and Vmax values were found that 17.5178 mM and 9.5192 U/min.mg enzyme, respectively.
Key Words: Cotton seed, lipase, purification, characterization.