Farklı platformların vero hücre hattı proliferasyonu ve ace2 gen ekspresyonu üzerine etkisinin belirlenmesi
Determining the effect of different platforms on vero cell line proliferation and ace2 gene expression
Yazar: BÜŞRA ORÇAN
Danışman: PROF. DR. BİLGE HİLAL ÇADIRCI
Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı / Biyomühendislik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering

Özet:
ACE-2 proteini 805 aminoasitlik, dipeptidil karboksidipeptidazların anjiyotensin dönüştürücü enzim ailesine ait bir tip I integral membran proteinidir ve X kromozomu üzerinde Xp22.2 pozisyonunda bulunan ace2 geni tarafından kodlanır. Proteinin bir hücre dışı domaini, tek bir transmembran domaini ve bir sitoplazmik kuyruğu bulunur. ACE-2 insan vücudundaki birçok dokuda eksprese edildiği gibi fareler, gelincikler ve altın hamsterlarda da bulunmaktadır. ACE-2, SARS-CoV-2'nin hücreye giriş reseptörüdür. Virüs, spike proteininin reseptör bağlanma domaini (RBD) aracılığıyla ACE-2'ye bağlanarak membran fizyonunu başlatır.
Vero hücresi, Afrika yeşil maymununun böbrek epitel hücrelerinden hazırlanan ve sürekli çoğalma yeteneği sahip olan devamlı hücre hattıdır. Esas olarak tip I interferon genlerinde bir delesyon içerirler, dolayısıyla interferon alfa veya beta üretemezler, bu da onları viral enfeksiyona karşı daha duyarlı hale getirir. Bu nedenle bir dizi virüsü incelemek ve insan aşılarının hazırlanmasında da kullanılmışlardır.
Bu tez kapsamında COVİD-19 aşı üretimi için kullanılmakta olan konak hücresi (Vero), stasyoner kültür ve mikrotaşıyıcılı süspanse kültürde üretilmiştir. Üretim sonunda virüs bağlanma reseptörü olan ace2 ifadesi üretim modelleri karşılaştırılmıştır. Bulgular incelendiğinde her iki kültürde üretilen Vero hücrelerinde ACE-2 reseptörü varlığı, yapılan konvensiyonel PCR analizleri ile doğrulanmıştır. RT-PCR sonuçları ΔΔCT ile hesaplandığında benzer sonuçlar elde edilmiştir. Sonuç olarak mikrotaşıyıcılı süspanse kültürlerinin ACE-2 ekspresyonu üzerinde negatif bir etkiye sahip olmadığını ve aşı üretimde kullanılmasını doğrulamıştır.

Abstract:
ACE2- protein is an 805 amino acid, type I integral membrane protein belonging to the angiotensin-converting enzyme family of dipeptidyl carboxydipeptidases and is encoded by the ace2 gene located at position Xp22.2 on the X chromosome. The protein has an extracellular domain, a single transmembrane domain and a cytoplasmic tail. ACE-2 is expressed in many tissues in the human body and is also found in mice, ferrets and golden hamsters. ACE-2 is the cell entry receptor of SARS-CoV-2. The virus initiates membrane fission by binding to ACE-2 through the receptor binding domain (RBD) of the spike protein. The Vero cell is a continuous cell line prepared from renal epithelial cells of the African green monkey and is capable of continuous proliferation. They mainly contain a deletion in their type I interferon gene, so they cannot produce interferon alpha or beta, making them more susceptible to viral infection. For this reason, they have also been used to study a number of viruses and in the preparation of human vaccines. In this thesis, the host cell (Vero) used for COVID-19 vaccine production was grown in stationary culture and microcarrier suspension culture. At the end of production, the production models of ace2 expression, which is the virus binding receptor, were compared. When the findings were examined, the presence of ACE-2 receptor in Vero cells produced in both cultures was confirmed by conventional PCR analyses. Similar results were obtained when RT-
PCR results were calculated with ΔΔCT.