Trombositten zengin plazmanın etkinliğinde donörün, trombosit sayısının ve konsantrasyonun öneminin fibroblast hücre kültürü üzerinde incelenmesi
Evoluotion of the importance of the donor, platelet count and concentration on PRP efficacy on fibroblast cell culture
Yazar: İSTEMİHAN ÖZTÜRK
Danışman: PROF. DR. METİN GÖRGÜ
Abant İzzet Baysal Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Doz-cevap ilişkisi-ilaç = Dose-response relationship-drug ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Trombosit sayısı = Platelet count ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma

Özet:
Trombositten Zengin Plazma (TZP) günümüzde Kardiyovasküler Cerrahi, Ortopedi, Üroloji, Maksillofasyal Cerrahi, Diş Hekimliği, Spor Hekimliği, Estetik ve Plastik Cerrahi gibi pek çok alanda kullanılmaktadır. Bu kadar geniş kullanım alanı olan TZP uygulamaları ile ilgili etkinlik, standardizasyon, hazırlama şekilleri adına pek çok çalışma devam etmektedir. Çalışmada amacımız; TZP'nin iki farklı donörden hazırlanıp aynı konsantrasyonlarda uygulandığında fibroblast hücre kültürüne etkilerinin ne olacağını incelemek oldu. Bu amaçla iki farklı donörden alınan tam kanlar ile çift aşama santrifüj yaparak TZP'ler elde ettik. TZP'leri iki donörde de 4 farklı gruba bölerek, farklı dilüsyon oranlarında toplamda 8 grup fibroblast hücre kültürüne uyguladık (J1, J2, J3, J-PPP, E1, E2, E3, E-PPP). Ayrıca iki donör için fibroblast hücresi içermeyen TZP grupları oluşturuldu (J1ext, J2ext, J3ext, E1ext, E2ext, E3,ext). Çalışmada süreyi 24 saat olarak uyguladık.
Bulguları yorumlarken; fibroblast hücre kültürleri'nde mitotik aktivite artışını ve kültürlerde "Fibroblast Growth Faktör (FGF)", "Insulin Like Growth Faktör (IGF)", "Vasküler Endotelyal Growth Faktör (VEGF)", "Transforme Growth Faktör (TGF)", "Platelet Derived Growth Faktör (PDGF-AB)" düzeylerinin ölçümlerini ve bu düzeylerin TZP konsantrasyonları ile korelasyonunun olup olmadığını değerlendirdik.
Çalışma sonunda; J-ppp ve E-ppp grupları hariç diğer tüm gruplarda fibroblast hücre kültürlerinde mitotik aktivitenin, diğer bir deyişle prolifrasyonun kontrol grubuna göre istatistiksel anlamlı olarak arttığını belirledik. J-ppp ve E-ppp grupları trombosit konsantrasyonu açısından fakir gruplar olduğundan proliferasyon artışı kontrol grubuna göre anlamlı olmadı. Büyüme faktör düzeyleri incelendiğinde; TZP konsantrasyon artışı ile korelasyonu olan büyüme faktörünün PDGF-AB olduğunu gördük. Diğer büyüme faktör düzeylerininkonsantrasyon artışı ile korelasyonu saptanmamıştır.
TZP; kolay elde edilebilen, yan etki profili düşük, otolog bir kan ürünüdür. Plastik Cerrahi alanında özellikle yara iyileşmesi üzerine olumlu etkilerinden dolayı kullanılmaktadır. Yara iyileşmesinin kilit hücrelerinden olan trombositleri ve büyüme faktörlerini yüksek konsantrasyonda içermektedir. Çalışmamızda TZP'nin fibroblast hücrelerinde proliferasyonu arttırdığını ve bu artışın istatistiksel olarak anlamlı olduğunu tespit ettik. PDGF-AB düzeylerinin TZP'de konsantrasyon artışı ile korelasyonunun olduğunu gördük. İki farklı donörden hazırladığımız TZP'lerin aynı konsantrasyonlarda birbirine benzer etkiler gösterdiğini gördük. Bu bize TZP etkinliğini değerlendirmede; konsantrasyon oranının trombosit sayısından daha belirleyici olduğunu düşündürdü. Ancak yinede çalışmamızın, kendi TZP'sini hazırlayanlara referans olabilmesi, etkinliğin daha da iyi açıklanabilmesi için detaylandırılması ve ileriye götürülmesi gereklidir.

Anahtar Kelimeler :Trombositten Zengin Plazma, Fibroblast Hücre Kültürü, TZP Standardizasyon, TZP Artan Dozlar

Abstract:
Platelet rich plasma (PRP) is used at widely varied branches such as cardiovascular surgery, orthopedics, urology, maxillofascial surgery, dentistry, sports medicine, plastic surgery right now. Due to having such a broad spectrum of usage, researches for efficiency, standardization and preparation of PRP are still going on for the moment. In this study, our aim was to prepare PRPs from two different donors and apply it to fibroblast cell cultures at the same concentrations to see its effects. For this purpose we took whole blood samples from two different donors and prepared the PRPs with a two staged centrifuge. By dividing each sample to four different groups with different concentrated PRPs, we were able apply PRPs to eight different cell cultures (J1, J2, J3, J-PPP, E1, E2, E3, E-PPP). Furthermore for both donors cell cultures without PRPs were established (J1ext, J2ext, J3ext, E1ext, E2ext, E3ext). We applied the time as 24 hours for our study. While interpreting the results, we have considered the increase in mitotic activity, measurement of the levels of "Fibroblast Growth Factor (FGF)", "Insulin Like Growth Factor (IGF)", "Vasculer Endothelial Growth Factor (VEGF)", "Transforming Growth Factor (TGF)", "Platelet Derived Growth Factor (PDGF-AB)" and whether these levels were corelated with PRP concentrations or not.
At the end of the study compared to the control group, we have determined statistically significant increase in mitotic activity, in other words proliferation at each and every group expect j-ppp and e-ppp. Due to fact that both j-ppp and e-ppp were poor in terms of platelet concentration, increase in proliferation was not meaningful when compared to the control group. When growth factors were examined, PDGF-AB was the factor corelated with the increase of mitotic activity. Increase in other factors were not corelated with proliferation.
PRP; is an autologous blood product which is easily obtainable, with a low side effect profile. At the field of plastic surgery it is used especially for its positive effects at wound healing. It contains the key elements of wound healing such as platelets and growth factors at a high concentration. In our study we have concluded that PRP causes a statiscally significant increase in proliferation at fibroblast cell cultures. We have seen
corelation between increased levels of PGDF-AB with proliferation. By preparing equally concentrated PRPs from two different donors we have seen similar effects on proliferation. This made us think that while evaluating the efficieny; concentration is more definitive than platelet count. On the other hand, in order to make our study a reference point for those who are preparing their own PRPs, and in order to understand efficieny of PRP further detailing and research must be done.

Keywords: Platelet Rich Plasma, Fibroblast Cell Culture, PRP standartization, PRP increasing doses