Kolorektal kanser hücrelerinde BIBR1532 ve resveratrol kombinasyonunun WNT sinyal yolağı üzerindeki etkileri
The  effects of BIBR1532 and resveratrol combination on colorectal cancer types and WNT signal pathways
Yazar: YASEMEN KARAN BAŞARAN
Danışman: DOÇ. DR. ÇIĞIR BİRAY AVCI
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Kolorektal kanser (CRC) insanlarda en sık görülen kanser türleri arasında ikinci sırada yer almaktadır. Bu durum CRC'nın moleküler mekanizmalarının çalışılması ve bu alanda yapılan çalışmaların üzerinde durulması gerektiğinin, ayrıca önemli bir kanser türü olduğununun iyi bir kanıtıdır. WNT sinyal yolağı bir çok kanser türünde önemli görülen bir moleküler yolak olarak görülmektedir. Bu doğrultuda, WNT sinyal yolağının hiperaktivasyonunun CRC için destekleyici bir güç olduğunu söylemek mümkündür. Doğal bir polifenol bileşik olarak iş gören resveratrol;anti-oksidan, anti-kanser etkilere sahiptir. BIRB1532 ise bir telomeraz inhibitörü olarak bilinmektedir. 
Çalışmamızda, BIBR1532 ve resveratrolün kombinasyonun CRC hücresi olan  HT29 hücrelerinde WNT sinyal yolağındaki genlerin ekspresyon seviyelerine katkısının çalışılması amaçlanmıştır. BIBR1532, resveratrol ve iki ajanın kombine dozlarının kolorektal kanser hücresi olan HT29 hücrelerindeki sitotoksik etkilerinin  değerlendirilmesi için sitotoksisite deneyi WST-1 testi ile gerçekleştirilmiştir. IC50 dozları WST-1 testi ile belirlenmiş olup isobologram analizi yardımıyla kombinasyon indeksleri tespit edilmiştir. Sonrasında  BIBR1532, resveratrol ve kombine olmak üzere üç farklı doz belirlenmiştir. Belirlenen dozlar HT29 hücrelerine  uygulanmıştır. Dozlar ve total RNA izolasyonları daha önceki çalışmamızda gerçekleştirilmiştir. Çalışmamızda, BIBR1532, resveratrol ve iki ajanın kombine dozları ve kontrol grubu olamak üzere dört grubun cDNA analizleri gerçekleştirilmiştir. Kantitatif gerçek zamanlı  PCR olarak bilinen PCR ile qRT-PCR analizi yapılmıştır. Akabinde  BIBR1532, resveratrol ve iki ajanın kombine dozu olmak üzere WNT sinyal yolağındaki genlerin HT29 hücrelerinde  kontrole oranla ekspresyon değişimleri 2- ΔΔCT yöntemi kullanılarak değerlendirilmiştir.
Ekspresyon sonuçları doğrultusunda BIBR1532 ve resveratrol kombinasyonunun kolorektal kanserde (HT29 hücrelerinde) WNT sinyal yolağında tümör süpressör olarak işlev gören bir çok genin up-regüle olduğunu ve onkogen yada proto-onkogen olarak işlev gören birçok genin ise down-regüle olduğunu kantitatif değerler ile tespit ettik. 
BIBR1532 ve resveratrol kombinasyonunun kolorektal kanserde (HT29 hücrelerinde) WNT sinyal yolağına etkileri üzerine bir çalışma daha öncesinde yapılmamıştır. BIBR1532, resveratrol ve iki ajanın kombinasyonunun uygulamasının kolorektel kanser ile ilişkili WNT sinyal yolağı genlerinde ortaya çıkardığı ekspresyon değişiklikleri, bu çalışmanın litratüre, ileri deneylere ve kliniğe önemli veriler sağladığını düşündürmetedir.

Abstract:
Colorectal cancer (CRC) is the second most commonly seen cancer type in humans.  This situation proves that it is important and crucial to study the molecular mechanisms of CRC. WNT is also recognised as a distinct molecular pathway on most cancer types. Therefore it can be said that, the hyperactivisation of the WNT signal pathway is a supportive force for CRC. Resveratrol that works as a natural polyphenol compound, has anti-oxidant and anti-cancer effects. BIBR1532, on the other hand is known to be a telomerase inhibitor.

This study aims to research the effects of the combination of BIBR1532 and resveratrol on HT29 cells which are the cells of CRC, WNT signal pathways. Aiming the evaluation of the effects of these two agents on colorectal cancer cells, WST-1 test and IC⁵⁰ doses were determined. The combination indexes were figured by isobologram analysis and the mentioned doses were applied in the cells to actualise the total RNA isolations in our prior studies.  This study also consists of cDNA in qRT-PCR analysis and WNT signal pathways were determined by 2-∆∆CT method.

According to the expression results, BIRB1532 and resveratrol combination were proved to up-regulate many genes functioning as tumor suppressor in WNT signal pathway as well as down-regulating most of the genes that function as oncogene or proto-oncogene by quantitative results. 

There are no previous studies on the effects of BIRB1532 and resveratrol combination in colorectal cancer (HT29 cells) to WNT signal pathway. Therefore, it is believed that, considering the application of these substances and the expressional changes they cause in WNT signal pathway in relation to colorectal cancer, this study ensures solid and important data to literature, clinic and further studies on the subject.