Osteosarkomda ilaç etkileşim mekanizmalarının incelenmesi
Investigation of drug interaction mechanisms in osteosarcoma
Yazar: MİNE ÖZCAN DEMİRBİLEK
Danışman: PROF. DR. YUSUF TUTAR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı / Moleküler Tıp Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Amaç: Çocuklarda ve genç erişkinlerde en sık görülen primer malign kemik
tümörü olan osteosarkom için hedefe yönelik tedaviler ile ilgili yeterli moleküler
çalışma yoktur. Klasik tedavi protokolleri toksik ve kısa sürede direnç geliştiren
yolaklar olduğundan artık yeni tedavi protokolleri aranmaktadır. Bu protokollerden
hedefe yönelik tedaviler birçok hücreyi ilgilendiren moleküler şaperon ailesine ve
lizozomal otofaji yıkım yolaklarına odaklanmıştır. Çalışmada amacımız antitümoral
etkinliği bilinen moleküler şaperon üyesi olan HSP-90β (ısı şok proteini-90β) selektif
inhibitör KUNB31, lizozomal otofaji ve deubikuitinaz enzim inhibitörü olan IITZ-01'in
osteosarkom hücre hattı Saos-2 üzerindeki moleküler düzeyde etkilerini araştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: Araştırmamızda Saos-2 hücre hattı, lizozomal otofaji
inhibitörü IITZ-01 ve HSP-90β selektif inhibitör KUNB31 kullanılmıştır. Bu
moleküllerin sitotoksik etkisi ve IC50 konsantrasyonları 48 saatlik uygulama sonrasında,
MTT yöntemi aracılığıyla belirlenmiştir. Moleküler düzeydeki etkilerinin belirlenmesi
için RT-qPCR ile cDNA (komplementer deoksiribonükleik asit) sentezlenmiştir ve
apoptozun belirlenmesinde anneksin-V analizlerinin yapıldığı flow sitometri cihazı
kullanılmıştır.
Bulgular: KUNB31 molekülünün 48. saatte 10 μM'de % canlılık değerleri en
düşük %94 olduğu için etkili bulunmamış ve çalışmadan çıkarma kararı alınmıştır.
IITZ-01' in IC50 değeri 48. saatte 3 μM (p<0,05), klinik ilaç Doksorubisin'in 48. saat
IC50 değeri 1,17 μM (p<0,001) bulunmuştur. Ayrıca yapılan kanser pathway analizinde
apoptozun indüklendiği tespit edilmiştir.
Sonuç: Araştırmamıza göre KUNB31'in Saos-2 hücrelerinde etkin değerine
ulaşmak için gerekli konsantrasyonun toksisite düzeylerinin çok yüksek olduğu için
klinik kullanıma uygun olmayacağı ancak IITZ-01'in güvenli dozlarda canlılığı önemli
derecede azalttığı belirlendi.

Abstract:
Aim: There are insufficient molecular studies on targeted therapies for
osteosarcoma, which is the most common primary malignant bone tumor in children and
young adults. Since classical treatment protocols are toxic and cause resistance in a
short time, new treatment protocols are now sought. Targeted therapies from these
protocols have focused on the molecular chaperone family of many cells and lysosomal
autophagy degradation pathways. Our aim in this study is to investigate the molecular
level effects of HSP-90β selective inhibitor KUNB31, a molecular chaperone member
with known antitumoral activity, and IITZ-01, a lysosomal autophagy and
deubiquitinase enzyme inhibitor, on the osteosarcoma cell line Saos-2.
Materials and Methods: In our study, Saos-2 cell line, lysosomal autophagy
inhibitor IITZ-01 and HSP-90β selective inhibitor KUNB31 were used. The cytotoxic
effect and IC50 concentrations of these molecules were determined by the MTT method
after 48 hours of administration. In order to determine the effects at the molecular level,
cDNA was synthesized by RT-qPCR and flow cytometry device, in which annexin-V
analyzes were performed, was used to determine apoptosis.
Results: Since the KUNB31 molecule had a minimum 94% viability at 10 μM at
48 hours, it was not found to be effective and it was decided to exclude it from the
study. The IC50 value of IITZ-01 was 3 μM (p<0.05) at the 48th hour, and the IC50
value of the clinical drug Doxorubicin at the 48th hour was 1.17 μM (p<0.001). In
addition, it was determined that apoptosis was induced.
Conclusion: According to our research, it was determined that the concentration
required to reach the effective value of KUNB31 in Saos-2 cells would not be suitable
for clinical use due to its very high toxicity levels, but IITZ-01 significantly reduced
viability at safe doses.