Real Time PCR aracılığı ile anne kanında fetal DNA miktarının saptanması ve preeklampsi gelişimi ile ilişkisinin ortaya koyulması
Assessment of fetal DNA levels in maternal blood using Real Time PCR for evaluation of preeclampsia
Yazar: YOSUN GÖRKEM ZEYBEK
Danışman: PROF. DR. SEMİH KALELİ
İstanbul Üniversitesi / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Anneler = Mothers ; DNA = DNA ; Fetüs = Fetus ; Kan = Blood ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Preeklampsi = Pre-eclampsia

Özet:
Amaç: Türk populasyonunda preeklampside anne kanındaki fetal DNA düzeyinin normal gebeliklere göre daha yüksek olduğunu ve bu alandaki çalışmaların klinik pratikte belirteç olarak kullanılabilirliğini saptamayı amaçladıkYöntem ve Gereç: İstanbul Üniversitesi Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Kadın Doğum Ana Bilim Dalı polikliniklerine başvuran hastalar arasında, 26-40 hafta arasındaki 30 preeklamptik gebe ve 14 sağlıklı gebede plazmada serbest fetal DNA düzeyleri aynı gebelik haftalarına eşleştirilerek Real Time PCR yöntemi kullanılarak karşılaştırıldı.Anne kanından fetüse ait DNA nın kantitatif olarak ölçülmesi için fetüse ait Y kromozomuna özgü gen dizisi (SRY), anneden alınan kan örneğindeki total DNA'nın göstergesi olarak ise hiçbir durumda ifadesi değişmeyen GAPDH enzimini şifreleyen gen dizisi kullanıldı. Tüm hastalar için uygulanan PCR işlemi sonucunda hastalar, preeklamptik ve kontrol grupları olarak ayrıldı ve gebelik haftalarına göre eşleştirildi.Bulgular: 30 preeklamptik gebede, sağlıklı gebelere göre anne kanındaki serbest fetal DNA düzeyi karşılaştırıldığında ortalama 3,06 kat artış saptanmıştır.İkinci trimestırda preeklamptik gebelerde 1,5 kat fazla serbest fetal DNA bulunmuştur. Üçüncü trimestırda ise bu artış 3,5 kat olmuştur. 29-33 hafta arasında preeklamptik hastalarda DNA artışı 4,1 kat, 34-40 hafta arasında 3,4 kat bulunmuştur.Sonuç olarak, bulgularımız, Türk populasyonundaki preeklamptik gebelerde anne kanındaki fetüse ait serbest DNA düzeylerinin diğer ırklardakine benzer oranda arttığını göstermiştir. Real Time PCR teknolojisinin preeklampside belirteç olarak kullanılması için tecrübe kazanılması ve laboratuar şartlarının geliştirilmesi gerekmektedir.

Abstract:
Aim: Our aim was to determine the higher rate of fetal DNA levels in maternal blood in respect to normal pregnancies in preeclampsia and the clinical use Real Time PCR in Turkish population as a marker.Material and Method: Among patients admitted to Istanbul University Cerrahpaşa Medical Faculty Department of Obstetrics and Gynecology maternity ward, the plasma of 30 preeclamptic women from 26 to 40 weeks of pregnancy were matched with 14 healthy pregnants according to their gestational age. Cell free fetal DNA levels in maternal plasma were compared using Real Time PCR technology.For the quantitative measurement of fetal DNA from maternal blood, relative quantification PCR process was applied to all samples, using SRY and GAPDH genes. The patients were grouped as preeclamptic and control and were matched according to weeks of pregnancy.Results: Free fetal DNA levels of 30 preeclamptic patients were compared to healthy pregnant and an average of 3.06 fold increase was observed.During the second trimester, free fetal DNA level was 1.5 times more in preeclamptic patients. This increase was 3.5 fold during the third trimester. The DNA increase of preeclamptics were 4.1 times and 3.4 fold for 29-33 and 34-40 weeks respectively.Our conclusion derived from results, cell free fetal DNA in maternal blood could be used as a marker for preeclampsia, for the increase is similar in Turkish population when compared to other races. The improvement of laboratory standards and experience is required for the use of Real Time PCR technology in preeclampsia.