Farklı gruplardaki immün-süprese bireylerde Cryptosporidium'un ELISA ve Modifiye asit-fast boyama yöntemi ile araştırılması
To ınvestıgate the Cryptosporıdıum ın ımmune suppressed subjects of dıfferent group by usıng Modıfıed acıd-fast paıntıng and ELISA methods
Yazar: CANAN EREN
Danışman: PROF. DR. ÖMER METE
Dicle Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Boyama ve işaretleme = Stains and staining ; Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Paraziter hastalıklar = Parasitic diseases ; Parazitler = Parasites ; Protozoa = Protozoa ; Protozoa enfeksiyonları = Protozoa infections ; İlaç alerjisi = Drug hypersensitivity ; İmmün yetmezlik = Immun deficiency

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Gastroenterit etkenlerinden birisi de, özellikle çocuklarda ve immunitesi yetersiz hastalarda etkili olan Cryptosporidium cinsi protozoonlardır. Klora dirençli olması, içme suyu süzgeçlerinden geçebilmesi dolayısıyla parazitin kaynak sularındaki prevalansının yüksek olması ve çok az sayıda parazitin bile enfeksiyona neden olabilmesi su kaynaklı epidemilerin nedenleri olarak gösterilmektedir.Bu çalışmada, Diyarbakır, Dicle Üniversitesi Tıp Fakültesi Araştırma Hastanesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarı'na; risk grubundaki immunsuprese hastalardan (Onkoloji ve diyaliz hastaları, malnütrisyonlu çocuklar) ve ishal şikâyeti nedeniyle, farklı yaş grubundaki non immunsuprese hastalardan gönderilen dışkılarda, Cryptosporidium sp. antijenleri ELISA yöntemiyle araştırılmış ve modifiye asit-fast boyama yöntemiyle Cryptosporidium ookistleri aranmıştır.MATERYAL VE METOD: Çalışmada; onkoloji (n=156), diyaliz (n=98) ve malnütrüsyonlu çocuklardan (n=21) oluşan toplam 275 immunsüprese hasta ve non-immunsuprese ancak gastroenterit şikayeti ile laboratuarımıza gönderilen gastroenteroloji hastaları (n=22) ve pediatri hastaları (n=178) olmak üzere 200 hastadan alınan dışkı örnekleri çalışıldı. Ayrıca farklı kliniklerden gönderilen, ishal şikayeti olmayan non-immunsuprese 55 hasta dışkı örneği kontrol grubu olarak çalışmaya dahil edildi. Dört farklı yaş grubundan oluşan toplam 530 hastadan alınan dışkı örnekleri çalışıldı. Çalışmada, 1. grup 0-5 yaş , 2. grup 6-15 yaş ,3. grup 16-40 yaş, 4. grup 40 yaş üstü kişilerden oluşturuldu. Makroskobik olarakta incelenen her dışkı örneğine lam-lamel arası preparasyon, modifiye asit-fast boyası ile boyama yapılarak Cryptosporodium ve diğer barsak parazitleri açısından incelendi. Ayrıca dışkı örneklerinde Prospect Cryptosporidium ELISA kiti (OXOID) ile Cryptosporidium sp. antijenleri arandı.BULGULAR VE SONUÇ: Çalışmada, toplam 530 dışkı örneğinin 17'sinde %(3. 2) modifiye asit-fast boyama yöntemi ile Cryptosporidium ookistleri saptandı. Cryptosporidium ookistleri en fazla immün süprese bireylerde tespit edildi (%70. 5). 530 dışkı örneğinin ELISA yöntemi ile yapılan çalışmasında toplam 31(%5. 8) hastanın dışkısında Cryptosporidium sp. antijeni tespit edildi. ELISA yöntemi ile, 40 yaş üstü immün süprese hastalar, asit-fast boyama yönteminde olduğu gibi Cryptosporidium ' un en fazla pozitif olduğu hastalardı. Modifiye asit-fast boyama yönteminin duyarlılığı %54. 83, Özgüllüğü %100; ELISA yönteminin duyarlılığı %100, Özgüllüğü de %100 olarak bulundu. Nativ- lugol preparasyon yöntemiyle örneklerin 61'inde (% 11,5) çeşitli protozoon kistleri ve 3'ünde de (%0. 5) Hymenolepis nana yumurtaları görüldü. En fazla parazit saptanan grup pediatri grubu idi. Sonuç olarak hem immun süprese hastalarda hem de gastroenterit şikayeti ile gelen normal hastalarda Cryptosporidiumun da araştırılması ve boyama yönteminin negatif olduğu durumlarda ELISA gibi ikinci bir yöntemin rutinde kullanılmasının uygun olacağı kanaatine varıldı.

Abstract:
INTRODUCTION AND OBJECTIVE: One factor of gastroenteritis is Cryptosporidium protozoa genus which are effective in patients with inadequate immunity and particularly in children. It is shown as the causes of water-borne epidemics, because it is resistant to chlorine, can pass interference from drinking water filters, have a high prevalence of parasite in source waters and very small number of parasite can cause infection.In this study, Cryptosporidium sp. antigens were investigated by ELISA method and modified acid-fast staining of Cryptosporidium oocysts were sought in the feaches send to the Medical Microbiology Laboratory of Dicle University Medical Faculty Hospital Diyarbakir from immunocompromised patients at risk group (oncology and dialysis patients, malnourished children) and non-immunocompromised patients in the different age groups have diarrhea. The aim of the study is to make a determination about the situation of cryptosporidiosis, furthermore to compare the methods of ELISA and acid-fast staining and to evaluate the applicability of them.MATERIAL AND METHODS: In this study, fecal samples of oncology (n = 156), dialysis (n=98) and children with malnutrition (n = 21) of the total of 275 patients, immunocompromised and non-immunocompromised patients sent to our laboratory with complaints of gastroenteritis gastroenterology patients (n = 22) and pediatric patients (n = 178) of the total of 200 patients were studied. Stool samples of non-immunocompromised 55 patients have not suffering from diarrhea were send from different clinics was enrolled as a control group in the study. Stool samples of 530 patients of four different age groups were studied. In the study, 1. group 0-5 age, 2. group 6-15 years, 3. group 16-40 age, 4. group people over the age of 40 was created. Stool samples from each studied as macroscopic solid-lamella preparation, modified acid-fast stain and were examined for intestinal parasites and other Cryptosporodium dyeing. In addition, Prospect Cryptosporidium stool samples by ELISA kit (OXOID) and Cryptosporidium sp. antigens were searched.RESULTS AND CONCLUSION: In this study, 17% (3. 2) with modified acid-fast staining of Cryptosporidium sp. oocysts in a total of 530 stool samples were detected. Cryptosporidium sp. Oocysts were found at most immune suppressed individuals (70. 5%). In the stool of 31 (5. 8%) patients was detected Cryptosporidium sp. antigen in a total of 530 stool samples by using ELISA method. Most of the positive patients as acid-fast staining method of Cryptosporidium sp. detected by ELISA were immune-suppressed patients over 40 years. The sensitivity of modified acid-fast staining method was 54. 83%, specificity was 100%; both sensitivity and specificity of the ELISA method was found 100%. 61 (11. 5%) of samples include variety of protozoan cysts and in 3 (0. 5%) were seen Hymenolepis nana eggs by using Native-Lugol preparation method. Most parasites group was detected in pediatric group. As a result, ELISA method would be suitable for routine use to investigate Cryptosporidiumun in immune suppressed patients and also in normal patients suffering from gastroenteritis and in the cases of staining methods have been found negative.