B hücreli kronik lenfositik lösemi lenfositlerinde atorvastatin ve rosiglitazonun CD38, ZAP 70, anneksin V ve bcl-2 düzeyine in vitro etkisi
In b-cell chronic lymphocytic leukemia lymphocytes, in vitro effect of atorvastatin and rosiglitazon on cd38, zap 70, annexin v and bcl-2
Yazar: İRFAN YAVAŞOĞLU
Danışman: PROF. DR. A. ZAHİT BOLAMAN
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Hematoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2010
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Anneksin V = Annexin V ; Atorvastatin = Atorvastatin ; Genler = Genes ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Hipoglisemik ajanlar = Hypoglycemic agents ; Lenfositler = Lymphocytes ; Lösemi-lenfositik-kronik-B hücreli = Leukemia-lymphocytic-chronic-B-Cell ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İn vitro = In vitro

Özet:
GİRİŞ: Kronik Lenfositik Lösemi (KLL)'de CD 38 ve ZAP 70 ekspresyonu prognozda önem taşımaktadır. Kronik Lenfositik Lösemi patogenezinde apopitozun rolü bilinmekte ve tedaviyi yönlendirmektedir. Atorvastatin ve rosiglitazonunun lenfosit apopitozu ve immun sistem üzerindeki etkilerini araştıran çalışmalar giderek artmaktadır. Bu deneysel çalışmada iki ilacın KLL'li hastaların lenfositlerindeki CD38, ZAP 70, anneksin V ve Bcl 2 düzeylerine etkisini belirlemeyi amaçladık.MATERYAL VE METOD: Yaş ortalaması 56±8 (4'ü erkek) olan 7 KLL hastası çalışmaya alındı. Dört hasta evre Binet A, 2'si Binet C, diğeri de Binet B'de idi. Hastaların hemoglobin düzeyleri 12 ± 1,8 gr/dl, hematokrit düzeyleri %35±6, trombosit sayıları 156±68x103/mm3, lökosit sayısı 50±38.7x103/mm3 ve lenfosit sayıları 45,7±38.1x103/mm3 idi. Çalışmaya hiperkolestorelemili, diabetes mellituslu ve bunlarla ilgili ilaç kullanımı olan hastalar alınmadı. Hastaların periferik yol ile alınan kanlarından fikol separasyon yöntemiyle mononükleer hücreleri ayrıldı. 24 kuyucuklu kültür plağında (1000000 hücre/ml) 2ml RPMI 1640 ile süspanse edildi. RPMI'ya %20 human albumin, 2mM L- glutamin, 100U/L penisilin, 100 mikrogram/ml streptomisin ilave edildi. %5 CO2'li 37 derece etüvde 24 saat enkübe edildi. Bu hücrelerde akım sitometrisi yöntemi ve EPICS XL-MCL cihazı ile CD5, CD 38, ZAP 70, anneksin V ekspresyonları, ELİSA ile bcl 2 düzeyleri değerlendirildi. Flow sonuçları iki kişi tarafından çift kör olarak değerlendirildi ve ortalaması alındı. Kronik Lenfositik Lösemi lenfositlerinin in vitro ölümü bilindiğinden 1 ng/ml IL-4 ilave edildi. 3 guruba ayrıldı. 1. guruba 5 mikromolar oranında süspanse edilmiş atorvastatin kalsiyum, 2. guruba 2 mikromolar rosiglitazon maleat 3. gurup kontrol olarak alındı. 24 saat sonra CD 5, CD 38, ZAP 70 ve anneksin V değerleri tekrar değerlendirildi. İstatiksel yöntem olarak two-paired student-t testi kullanıldı ve p<0.05 değerleri anlamlı kabul edildi. Bu çalışma için Adnan Menderes Üniversitesi Etik Kurul onayı alındı.BULGULAR: Atorvastatin ve rosiglitazon CD38 ekspresyonlarını ve Bcl-2 düzeylerini etkilememekte iken, anneksin V ekspresyonlarını kontrol gurubuna göre belirgin arttırmaktadır (p<0.001). CD5 ekspresyonu ise kontrol gurubuna göre belirgin azalmaktadır (p=0.03). ZAP 70 ekspresyonu ise her iki ilaçla da azalmaktadır (Her ikisi için p<0.05).SONUÇ: Daha geniş çaplı in vivo değerlendirmeler ile atorvastatin ve rosiglitazon KLL tedavisinde yer alabilir.Anahtar kelimeler: Kronik Lenfositik Lösemi, apopitoz, atorvastatin, rosiglitazon

Abstract:
OBJEKTIVE:CD38 and ZAP 70 expression have an important prognostic role in Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL). Also the role of apopitozis is well known in the pathogenesis of CLL and it may direct the treatment. The studies on the effects of atorvastatin and rosiglitazon on lymphocytic apopitozis and immune system are increased. We aimed to determine the effects of these drugs on CD38, ZAP 70, annexin V, and Bcl-2 levels of CLL lymphocytes.MATERIALS AND METHODS: Seven (4 males) patients with CLL with average age 56±8 years were enrolled to the study. Of them 4 were in Binet A, 2 in Binet C, and 1 in Binet B. Hemoglobin levels of the patients were 12+-1.8 g/dL, hematocrit levels 35+-6%, platelet counts 156±68 x103/mm3, leukocyte counts 50.5±38.7 x103/mm3, and lymphocyte counts 45.7±38.1 x103/mm3. Patients with hypercholesterolemia, DM, and using drugs for these disorders were excluded. Mononuclear cells of blood samples from peripheral veins were separated by ficol method. On culture plate with 24 wells (1000000 cells/ml), it was suspended with 2 mlRPMI 1640. (20% human albumin, 2mM l-glutamin,100U/L penicillin, 100 ?g/ml streptomycin were added to RPMI). It was incubated for 24 hours in a 37 C and 5% CO2 'etüv. In these cells, the expressions of CD5, CD38,ZAP 70, and annexin V were evaluated with flow cytometry using EPICS XL-MCL instrument. These results were evaluated by two researcher as double-blind and means were calculated. Because CLL lymphocytes can die in vitro, 1 ng/ml IL-4 was added. 3 groups were formed. 5 micromolar atorvastatin suspension in first group and 2 micromolar rosiglitazon maleat in second group were added. The third group was used as control group. After 24 hours, the expressions of CD5, CD38, ZAP 70, and annexin V, the levels of Bcl-2 were reevaluated. Two-paired student t test was used for statistical analysis and p<0.05 was accepted as significance level. Adnan Menderes University ethic board approved the study.RESULTS: Atorvastatin and rosiglitazon did not affect CD38 expressions and Bcl-2 levels but Annexin V levels increase significantly when compared with control group (p<0.001). CD5 expression significantly decreases when compared with control group (p=0.03). ZAP 70 expression decreases with both drugs (p<0.05 for both).CONCLUSIONS: To determine the role of atorvastatin and rosiglitazon in CLL, extensive in vivo studies are needed.Key words: Chronic Lymphocytic Leukemia, apopitozis, atorvastatin, rosiglitazon