Fasulye tohum böceğin (Acanthoscelides obtectus Say)'den bakteri izolasyonu ve tanımlanması
Isolation and determination bacteria from bean weevil (Acanthoscelides obtectus Say)
Yazar: EKREM OKUTAN
Danışman: PROF. DR. KAZIM SEZEN
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada, Acanthoscelides obtectus'a karşı etkili bir mikrobiyal mücadele etmeni geliştirebilmek için zararlıdan bakteri izolasyonu yapıldı, izolatların morfolojik biyokimyasal ve moleküler karakterizasyonları gerçekleştirildi. A. obtectus'un bakteri izolasyonu ve tanımlanmasını belirlemek için yapılan çalışmada, 9 bakteriyel izolat elde edildi ve bunlar Ao1-9 olarak isimlendirildi. Bu izolatların ışık mikroskopisi ile morfolojileri, geleneksel mikrobiyolojik yöntemler ve API kitleri kullanılarak biyokimyasal özellikleri belirlendi. Moleküler tanımlamada 16S rDNA gen dizileri sekanslanarak GenBank verileriyle karşılaştırıldı. Elde edilen sonuçlara göre bu izolatlardan 7 tanesi Gram (+) (Ao1, Ao2, Ao3, Ao4, Ao5, Ao8 ve Ao9), bunlardan 5'i sporlu (Ao3, Ao4, Ao5, Ao8 ve Ao9) bakteridir. İzolatlardan 2 tanesi Gram (–) (Ao6 ve Ao7) olarak belirlendi. Oksidaz enzim aktivitesi incelendiğinde 3 izolatta (Ao6, Ao7 ve Ao8) oksidaz testinin pozitif, diğer izolatlarda negatif olduğu tespit edildi. Katalaz enzim aktivitesi incelendiğinde ise, 6 izolatta (Ao1, Ao2, Ao4, Ao5, Ao8 ve Ao9) pozitif sonuç belirlendi. İzolatlardan 3'ünün de (Ao3, Ao6 Ao7) katalaz negatif olduğu anlaşıldı. 16S rDNA gen sekans analizlerinin sonuçlarına göre Ao5 izolatı Bacillus thuringiensis olarak tanımlandı. Şu ana kadar tamamlanan insektisidal aktivite testlerine göre Ao5 izolatı %80 ölüm oranı ile en etkili izolattır. B. thuringiensis Ao5 izolatının zararlının biyolojik mücadelesinde değerli olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
In this study, to develop an effective microbial control agent against Acanthoscelides obtectus, we isolated bacteria and characterized as morphological, physiological, biochemical and molecular. In the studies to determine the bacteria from A. obtectus, 9 bacterial isolates have been isolated and named as Ao1-9. They are determined as morphological using light microscopy, biochemical features using both conventional microbiological methods and API kits. For molecular characterization, analyzed the sequences of 16S rDNA gene and compared the isolates in GenBank. According to the obtained results, 7 of these isolates are Gram (+) (Ao1, 2, 3, 4, 5, 8 ve 9), 5 of them include spore form, (Ao3, Ao4, Ao5, Ao8 and Ao9), and 2 of isolates are Gram (–) (Ao6 ve Ao7). Oxidase enzyme activity was determined in 3 isolates (Ao6, Ao7 ve Ao8) as positive, other isolates were observed as oxidase negative. According to catalase enzyme activity test, 6 of isolates (Ao1, 2, 4, 5, 8 and 9) were observed as positive. And the rest of 3 isolates (Ao3, Ao6 and Ao7) were also observed as catalase negative. According to the results of 16S rDNA base sequence analysis, Ao5 isolate was identified as Bacillus thuringiensis. According to the insecticidal activity tests results, the most effective isolate was 80% for Ao5 isolate. B. thuringiensis isolate (Ao5) may be valuable as biological control agent against A. obtectus.