Çiğ süt ve peynir örneklerinden izole edilen Listeria türlerinde biyofilm oluşumunun incelenmesi
Investigation of biofilm formation by Listeria spp. isolated from raw milk and cheese samples
Yazar: HAVVA YILDIRIM
Danışman: PROF. DR. NİHAL YÜCEL
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Çiğ süt = Raw milk

Özet:
Bu çalışmada, Ankara?da tüketime sunulan 80 çiğ süt ve 80 peynir örneğinde Listeria türlerinin varlığı araştırılmıştır. Bu amaçla steril koşullar altında alınan örnekler kısa sürede laboratuvara getirilmiş ve aynı gün işleme alınmıştır. Örneklerden Listeria türlerinin izolasyonu ISO 11290-1/A1-2004?de önerilen yönteme göre yapılmıştır. Araştırmada incelenen 80 çiğ süt ve 80 peynir örneğinden 15 izolat elde edilmiştir. Bu izolatların 11?i Listeria innocua, 3?ü Listeria grayi ve 1?i Listeria welshimeri olarak tanımlanmıştır. Biyofilm çalışma yöntemi olarak sıklıkla kullanılan stardart mikroplate (96 kuyucuklu plastik mikroplate) metodu ile çalışılmıştır. Bu yöntemle yapılan çalışmada Listeria spp. inoküle edilmiş triptic soy broth (TSB), TSB+%1 NaCl ve TSB+%1 glikoz besiyerleri 30°C?de 24, 48 ve 72 saat inkübasyona bırakılmıştır. Çiğ süt ve peynir örneklerinden izole edilen 15 Listeria izolatının TSB?de 24 saatlik inkübasyon sonrasında 9?unun, 48 saat sonra 5?inin, 72 saat sonra ise 1?nin iyi olarak tutunduğu tespit edilmiştir. Aynı izolatlar 30°C?de TSB+%1 NaCl?de 24 saat sonra 5 izolatın, 48 saat sonra 4 izolatın ve 72 saat sonra ise 2 izolatın iyi tutunduğu bulunmuştur. TSB+%1 glikoz?lu ortamda ise 30°C?de 24 v saat sonra 3 izolatın, 48 saat sonra 6 izolatın ve 72 saat sonra ise 1 izolatın iyi tutunduğu tespit edilmiştir. 30°C?de TSB?de inkübasyon sonrası çiğ süt örneklerinden izole edilen 5 no?lu L. innocua?da 24 saat sonra tutunma 1,016 bulunurken; peynir örneklerinden izole edilen 15 no?lu L. grayi?de ise 1,101 ile en yüksek tutunma tespit edilmiştir. 30°C?de TSB+%1 NaCl?de inkübasyon sonrası çiğ süt örneklerinden izole edilen 7 no?lu L. innocua?da 24 saat sonra tutunma 0,459 bulunurken; peynir örneklerinden izole edilen 15 no?lu L. grayi?de ise 0,617 ile en yüksek tutunma tespit edilmiştir. 30°C?de TSB+%1 glikoz?da inkübasyon sonrası çiğ süt örneklerinden izole edilen 7 no?lu L. innocua?da 24 saat sonra tutunma 0,253 bulunurken; peynir örneklerinden izole edilen 11 no?lu L. grayi?de ise 0,420 ile en yüksek tutunma tespit edilmiştir. Çiğ süt ve peynir örneklerinden izole edilen 15 Listeria izolatının 48 saatlik inkübasyon sonrasında kuvvetli derecede biyofilm oluşturduğu gözlenmiştir. 48 saatlik inkübasyon sonrası tutunmada TSB+%1 glikoz en iyi besi ortamı olarak tespit edilmiştir. Bunun nedeninin biyofilm oluşumunda bakteri hücreleri tarafından polisakkarit bazlı ekzopolisakkarit matriks üretiminin olduğu düşünülmüştür.

Abstract:
In this study, existence of Listeria species was investigated in 80 raw milk and 80 cheese samples which were presented to consumption in Ankara. For this purpose, samples were collected at sterile conditions, brought to the laborotary immediately and analysed at same day. Listeria species were isolated from the samples according to ISO 11290-1/A1-2004 method. 15 Listeria isolates obtained from collected 80 raw milk and 80 cheese samples. 11 of these isolates were identified as Listeria innocua, 3 of them were identified as Listeria grayi and 1 of them was identified as Listeria welshimeri. At biofilm study, widely used standard microplate (96-welled plastic microplate) technique was used. In this study; tyriptic soya broth (TSB), TSB+1% NaCl, TSB+1% glucose media were inoculated with Listeria spp. and incubated at 30°C for 24, 48 and 72 hours. Out of 15 Listeria isolates 9 isolates from raw milk and cheese samples were determined to show tight attachment after 24 hours 5 isolates after 48 hours, 1 isolate after 72 hours at 30°C. 5 isolates were determined to show tight attachment after 24 hours, 4 isolates after 48 hours, 2 isolates after 72 hours at 30°C in TSB+1% NaCl medium. 3 isolates were determined to show tight vii attachment after 24 hours, 6 isolates after 48 hours and 1 isolate after 72 hours at 30°C in TSB+1% glucose medium. In TSB medium, isolate number 5 L. innocua?s attachment isolated from raw milk samples were evaluated 1.016 while isolate number 15 L. grayi?s attachment isolated from cheese samples were evaluated at maximum value of 1.101 at 30°C after 24 hours. In TSB+1% NaCl medium, isolate number 7 L. innocua?s attachment isolated from raw milk samples were evaluated 0.459 while isolate number 15 L. grayi?s attachment isolated from cheese samples were evaluated at maximum value of 0.617 at 30°C after 24 hours. In TSB+1% glucose medium, isolate number 7 L. innocua?s attachment isolated from raw milk samples were evaluated 0.253 while isolate number 11 L. grayi?s attachment isolated from cheese samples were evaluated at maximum value of 0.420 at 30°C after 24 hours. After 48 hours of incubation, the 15 Listeria isolates which were isolated from raw milk aand cheese showed a strong attachment to microtiter. After 48 hours of incubation the TSB+1% glucose medium was the best medium for attachment. This is because of the exopolysaccharide which is produced by bacteria during biofilm formation.