Kistik ekinokokkozisli hastaların tanı ve takibinin elisa ve WB yöntemleriyle değerlendirilmesi
Evaluation of cystic echinococcosis patients' diagnosis and follow up with elisa and WB assays
Yazar: ELİF GÜNEYSU
Danışman: PROF. DR. DİNÇER AYAZ ; PROF. DR. NAZMİYE ALTINTAŞ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology ; Halk Sağlığı = Public Health

Özet:
Kistik ekinokokkozisin tanısı radyolojik tanı yöntemleri ile konulmaya çalışılmasına rağmen kistin tümör, apse, basit kist gibi diğer yer kaplayan olgularla ayırıcı tanısının yapılabilmesi ve operasyon sonrası nükslerin daha sağlıklı bir şekilde değerlendirilebilmesi için ön tanının serolojik tanı yöntemleriyle desteklenmesi gerekmektedir. 
Çalışmamızın amacı; ameliyat öncesi, ameliyat sonrası, PAIR öncesi ve sonrasını kapsayan dönemde farklı iki antijen (kist sıvısı ve protoskoleks eriyik antijeni) kullanarak hastaların tanı ve takibinde IgG, IgG4 ve IgE spesifik antikorlarının ELISA ve Western Blot (WB) yöntemleri ile araştırılmasıdır. Böylece KE?li hastaların tanı ve takibinde heriki testin ve spesifik antikorların yeri değerlendirilmiştir.
Çalışmaya 2009-2013 yılları arasında kist hidatik olduğu cerrahi operasyon ya da PAIR işlemi ile saptanan 12?si (%54.5) kadın, 10?u (%45.4) erkek 22 hasta dahil edilmiştir.  
Cerrahi operasyon geçirmiş (11 hasta) ya da PAIR işlemi yapılmış (11 hasta) 22 hastadan operasyon öncesi, operasyondan sonraki birkaç gün içerisinde, 6 ay ve 4 hastadan 12 ay sonra, PAIR hastalarından ise PAIR işlemi yapıldığı gün, 6 ay sonrası, ikişer hastadan ise 12 ay ve 18 ay sonrası kan örnekleri alınmıştır. Toplam 62 serum örneğine,  kist sıvısı ve protoskoleks eriyik antijeni kullanılarak ELISA-IgG, ELISA-IgG4 ve ELISA-IgE ile WB yöntemleri uygulanmıştır. 
ELISA-IgG ile 22 hastanın 18?i pozitif (1/160 ile 1/10.000) 4?ü negatif bulunmuştur. Negatif çıkan hastaların ikisi Ce1 (aktif), ikisi Ce4 (inaktif) tiptedir. 
ELISA-IgE kist sıvısı antijeni ile hastaların 9?unda, protoskoleks antijeni ile hastaların 8?inde pozitif bulunmuştur. 
ELISA-IgG4 5 hastada (2?si cerrahi, 3?ü PAIR) pozitif bulunmuştur. 
IgG-WB ile Echinococcus?a özgü 6-8 kDa, 16-18 kDa, 24-26 kDa luk bantlarla 38 kDa ve 203 kDa bantlar da elde edilmiştir. Toplam 62 stripten yalnızca 3?ünde E. granulosus?a özgü 7-8 kDa ağırlığındaki proteinin varlığı görülmemiştir. Çalışmamızda elde ettiğimiz 203 kDa luk proteinin hastalığın tanı ve takibinde önemli olabileceğini düşünmekteyiz. Ancak bunun için daha uzun süreli takip ve çalışma yapılması gerekmektedir.
Sonuç olarak; herhangi bir nüks olayını engellemek ve erken tanı koymak için takiplerin uzun yıllar sürmesi, hastanın klinik bulguları ile birlikte radyolojik ve sensitivitesi, spesifisitesi yüksek birden fazla (ELISA ve WB) serolojik yöntem kullanılarak spesifik IgG ve IgG4 antikorlarının değerlendirilmesi yararlı olacaktır.

Abstract:
Although trying to diagnose of Cystic Echinococcosis with the radiological diagnosis methods, it is necessary to support of pre-diagnosis with serologic diagnosis methods for making its distinctive diagnosis with the other existing cases like tumor, abscess, and simple cyst and for evaluating of the after operation recurrences more healthy way.  
Aim of our study; to research of IgG, IgG4, and IgE specific antibodies with ELISA and Western Blot (WB) methods for diagnose and follow up of the patients by using two different antigens (cysts fluid and protoskolex crude antigen) at the period which covers before operation, after operation, before, and after PAIR. Thus, place of both tests and specific antibodies at diagnose and follow up of CE patients has been evaluated.
22 patients whose 12 of them (54.5%) and 10 (45.4%) have been determined as cyst hydatic with surgery or PAIR operation has been included into the study between 2009-2013. 
Blood samples have been taken from 22 patients who passed surgery (11 patients) or PAIR operation has applied (11 patients) before the operation, a few days and 6 months after the operation, 12 months after the operation from 4 patients.  Blood samples have been taken from the patients who passed PAIR operation at the day of PAIR operation, after 6 months, after 12 and 18 months after the operation from 2 patients. ELISA-IgG, ELISA-IgG4, ELISA-IgE and WB methods have been applied to totally 62 serum samples by using cystic fluid and protoskolex crude antigen. 
18 of the 22 patients (1/160 and 1/10.000) have been found positive and 4 of them has been found negative with ELISA-IgG. Two of the negative patients are Ce1 (active) and other 2 are Ce4 (inactive) types.
Nine of the patients have been found positive with ELISA-IgE cystic fluid antigen and 8 of the patients have been found positive with protoskolex crude antigen.
ELISA-IgG4 has been found positive at 5 patients (2 of them are surgery and 3 of them are PAIR). 
6-8 kDa, 16-18 kDa, 24-26 kDa bands and 38 kDa, 203 kDa bands specific to Echinococcus have been obtained with IgG-WB. Presence of protein which is specific to E. granulosus and with 7-8 kDa weight has been noticed only 3 of the totally 62 stripes. We think that protein with 203 kDa which we obtained at our study might be important for diagnose and follow up of the illness. However it is necessary to make a follow and study for longer period for this.
In conclusion; it might be useful to evaluate of specific IgG and IgG4 antibodies by using of more than one serological method with high specificity, radiological and sensitivity with the clinical findings of the patient, to continue of follow up activities over many years to prevent any recurrence case and to diagnose early.