Myasthenia gravis fare modelinde rank yolağında yer alan LGR4 ve CTSH genlerinin anlatım seviyelerinin araştırılması.
Investigation of expression levels of LGR4 and CTSH genes in the RANK pathway in the Myasthenia Gravis Mouse Model.
Yazar: KÜBRA SAMUNCUOĞLU
Danışman: PROF. DR. BURÇAK VURAL ; DOÇ. DR. VUSLAT YILMAZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı / Sinirbilim Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Myasthenia gravis = Myasthenia gravis ; Nöromusküler hastalıklar = Neuromuscular diseases ; Sinyal nakli = Signal transduction

Özet:
Myasthenia Gravis (MG), otoimmünite temelli bir zayıflamış kas ileti hastalığıdır. Otoantikorlar, geliştikleri antijenik yapılara bağlanarak postsinaptik membranda morfolojik ve fonksiyonel değişikliklere neden olur, sonrasında nöromüsküler iletim bozukluğu ve kas güçsüzlüğü meydana gelir. RANK yolağı, kemiklerin ana hücreleri olan osteoblastların, osteoklastlara farklılaşması gibi işlevlerini içeren bir yolaktır. RANK'ın ligandı olan RANKL'ye bağlanması ile dendritik hücre canlılığı, apoptoz ve immün sistemi uyarma kapasitesi etkilenmektedir. RANK yolağında yer alan bazı genlerin otoimmün hastalıklar ile bağlantısının olduğunu gösteren çalışmalar bulunmaktadır. 
Bu çalışmada, deneysel otoimmün MG (DOMG) fare modelinde, RANK yolağı temelli olduğu bilinen ve birçok otoimmün hastalıkta rol alan LGR4 ve CTSH genlerinin ifade düzeylerinin incelenmesi amaçlandı. Değerlendirilen fare lenf gangliyonu hücreleri önceki projede (Proje No: TYL-2017-27428) kullanılan farelerin sıvı azotta saklanılan örnekleridir. Deney grubu olarak MG hastalığına özgü antikor olan torpedo Asetilkolin reseptörü ile immünize edilmiş dişi farelerden (n=4) alınan total lenf ganglionu hücreleri ve kontrol grubu olarak Complete Freud's Ajduvantı (CFA) enjekte edilmiş dişi farelerden (n=4) alınan total lenf ganglionu hücreleri kullanıldı.  Gerçek zamanlı PZR ile gen anlatım düzeyleri belirlenerek gruplar arasında istatistiksel olarak karşılaştırıldı. DOMG modellenmiş farelerde, kontrol grubuna kıyasla; LGR4 ekspresyon düzeylerinin azalma eğilimi (p=0,8846), CTSH ekspresyon düzeylerinin ise artma eğilimi gösterdiği (p=0,6857) gözlendi. DOMG grubundaki LGR4 ekspresyon düzeyindeki azalma ve CTSH ekspresyon düzeyindeki artma istatiksel olarak anlamlı değildi. Bu çalışma, LGR4 ile CTSH'ın hastalık patogenezindeki rolünü belirlemek için ilk defa DOMG fareler üzerinde yapılmış bir araştırma olup, daha detaylı analizlere ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Myasthenia Gravis (MG) is a weakened muscle disease with autoimmune based. Autoantibodies bind to the antigenic structures in which they develop, causing morphological and functional changes in the postsynaptic membrane, and then neuromuscular conduction disorder and muscle weakness occur. The RANK pathway is a pathway that includes functions such as the differentiation of osteoblasts, the main cells of bones, into osteoclasts. Binding of RANK to its ligand, RANKL, affects dendritic cell viability, apoptosis, and the capacity to stimulate the immune system. There are studies showing that some genes in the RANK pathway are associated with autoimmune diseases.
In this study, it was aimed to examine the expression levels of LGR4 and CTSH  genes, which are known to be based on the RANK pathway and play a role in many autoimmune diseases, in an experimental autoimmune MG (DOMG) mouse model. Evaluated mouse lymph ganglia cells are samples of mice used in the previous project (Project No: TYL-2017-27428), stored in liquid nitrogen. Total lymph ganglion cells from female mice (n=4) immunized with torpedo AChR, an antibody specific for MG disease, were used as the experimental group, and total lymph ganglion cells from female mice (n=4) injected with Complete Freud's Adjuvant's (CFA) were used as the control group. Gene expression levels were determined by RT-PCR and compared between groups. In DOMG modeled mice, compared to the control group; It was observed that LGR4 expression levels tended to decrease (p=0.8846), while CTSH expression levels showed a tendency to increase (p=0.6857). The decrease in LGR4 expression level and the increase in CTSH expression level in the DOMG group were not statistically significant. This is the first study conducted on DOMG mice to determine the role of LGR4 and CTSH in the pathogenesis of the disease, and more detailed analyzes are needed.