ADP-ribozillenme örneğinde sentez ötesi modifikasyonlar /
Yazar: IŞIL ALBENİZ ÜSTÜNDAĞ
Danışman: PROF. DR. RÜSTEM NURTEN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyofizik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1996
Konu: Biyofizik = Biophysics
Dizin: Adenozin difosfat-riboz = Adenosine diphosphate ribose

Özet:
İnsan serumunun (14C) NAD ile inkübasyonu sonrası ADP-ribozun serum protein(ler)ine zaman ve doza bağımlı olarak bağlandığı saptandı. Bağlanan ADP-ribozun nötral hidroksitamine dirençli ancak NaOH ortamına duyarlı olduğu gösterildi. NAD'nin domuz beyni NAD glikohidrolaz ile işlem görmesinden gözlenmesi, ADP-ribozillenmenin enzimatik olmayan bir yolla ve Schiff baz oluşumunu serumdaki alıcı proteinler üzerinde gerçekleştiğini düşündürdü. NaDodS04/PAGE ve otoradyografi analizleri 97 kD'luk, bir polipeptit ile yüksek molekül ağırlıklı iki polipeptit ve serum albumininde radyoaktif NAD ile inkübasyondan sonra işaretlendiği saptandı. İnsan serum proteinlerinin ADP-ribozillenmesi, değişik hasta gruplarında sağlıklı kontrollarla karşılaştırmalı olarak incelendi. Bu amaçla ADP-ribozillenme değerleri normal kontrol grup serum örnekleri ile (n=104) değişik hastalardan alınan serum örnekleri (n=170) karşılaştırıldı. Neoplastik hasta grubunda ADP- ribozillenme düzeylerinin diğer gruplara göre 5-10 katlık artışlar gösterdiği saptandı. İstatistiksel değerlendirme sonucunda neoplastik hastalıkların yüksek ADP-ribozillenme değerlerinin anlamlı olduğu sonucuna varıldı. Cinsiyet ve sigara içme parametrelerinin bu aktivite üzerinde anlamlı bir etkisinin olmadığı gösterildi. Serum örneklerindeki yüksek ADP-ribozillenme değerlerinin kanserli hasta serumlarındaki NAD glikohidrolaz etkinliği düşük NAD düzeyleri ve ADP- ribozun geri alımındaki artışla bağlantılı olabileceği gösterildi. Serum proteinlerinin ADP-ribozillenmesi ile bazı tümör belirteç ve özellikle (CEA) değerleri arasında saptanan anlamlı ilişki bir tümör belirteci olarak değerlendirilebileceğini düşündürdü.

Abstract:
14 Incubation of human serum samples with (adenine- C)NAD resulted in a time and dose-dependent ADP-ribosylation, i.e. incorporation of adenine moiety into CCİ3COOH-precipitable material. Incorporated radioactivity was relatively resistant to neutral hydroxylamine, but was completely released by treatment with NaOH. An incorporation was observed also after preincubation of NAD with NAD glycohydrolase from pig brain, implicating that the fofmation of Schiff bases between ADP-ribose group and serum proteins may account for ADP- ribosylation of serum samples. In the analyses carried out by NaDodS04/PAGE and autoradiography, it was determined that, together with a 97 kD polypeptide, two more peptides of higher molecular weight and the serum albumin were marked after incubation with radioactive NAD. ADP-ribosylation of human serum proteins was examined in different patient groups. For this purpose, ADP-ribosylation values of the serum samples of normal control groups (n=104) and those of the serum samples of various patients (n=170) were compared. ADP-ribosylation levels in the neoplastic patient group revealed hereby a 5-10 fold increases with respect to other groups.The statistical evaluation indicated a high significance for the elevated values of ADP-ribosylation in the neoplastic patients parameters like sex and smoking have no effect on the observed activity. It has also been shown that the high level of the ADP-ribosylation of the serum samples could generally be possible with an increase in the NAD glycohydrolase activity of the serum. Elevated levels of ADP-ribosylation were discussed in context with increased serum NAD glycohydrolase activities, depressed serum NAD concentrations as well as increased in ADP-ribose up-take in erythrocytes in cancer patients, correlations of moderate to high degree found with various tumor marker and in particular, (CEA) values suggests that ADP-ribosylation of serum proteins may find, as a further marker, use in tumor diagnosis and follow-up in the future. 91