Temporal lob epilepsi patogenezinde enflamasyonla ilgili genlerin ekspresyonlarının araştırılması
Investigating the expression of inflammation related genes in temporal lobe epilepsy pathogenesis
Yazar: ÖZKAN ÖZDEMİR
Danışman: PROF. DR. UĞUR ÖZBEK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Genetik = Genetics ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Epilepsi = Epilepsy ; Epilepsi-temporal lob = Epilepsy-temporal lobe ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hastalık = Disease ; Hipokampus = Hippocampus ; Sitokinler = Cytokines ; Skleroz = Sclerosis ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Temporal lob epilepsisinde, hipokampusta mevcut değişikliklerin kompleksliği olayın patogenezinde birçok gen ve sinyal yolağının rol aldığını düşündürmektedir. Bu patogenezde yer alan enflamasyon süreci, hayvan modelleri ile yapılan çalışmalarda ortaya konmuştur. Enflamasyon, damarlı dokularda lökositlerin ve plazma proteinlerinin enfeksiyon, toksin veya doku yaralanma bölgesine göçü ve aktivasyonunu içeren bir doğal immün sistem reaksiyonudur. Sitokinler ise enflamasyon sırasında hücreler arası haberleşmeyi sağlayan proteinlerdir ve doğal-adaptif immün yanıtın koordinasyonunu sağlama açısından önemlidir. Bu çalışmada, uygun süre ve kombinasyonlarda uygulanan antiepileptik tedaviye dirençli, mezyal temporal lob epilepsi tanısı konmuş, 20-63 yaşları arasındaki toplam 4 kadın ve 5 erkek hastanın tıbbi endikasyon sonucu amigadalohipokampektomi sonrası elde edilen doku materyalleri kullanılmıştır. Dokulardan elde edilen RNA örneklerinden ters transkriptaz PZR yöntemi ile cDNA sentezlendikten sonra enflamasyon sürecinde yer alan genlerin ekspresyonları gerçek-zamanlı PZR yöntemi ile kantitatif olarak incelendi. Kontrol dokusu olarak epilepsi dışı nedenlerle ölümü gerçekleşmiş 9 kadavradan otopsi sırasında alınan hipokampus materyali kullanıldı. Sonuçların normalizasyonunda genorm analizi sonucunda belirlenen abl ve siklofilin genleri kontrol geni olarak seçildi. Rölatif ekspresyon değerleri delta delta CT yöntemi ile hesaplandı. Sonuçlar ?Mann-Whitney U testi? kullanılarak istatistiksel olarak karşılaştırıldı.Yapılan analizde, hasta bireylerin dokularındaki IL12, IL10, IL6 ekspresyon düzeylerinin sağlıklı bireyler ile karşılaştırılmasında anlamlı bir farklılık gözlenmezken (sırasıyla; P=0.73, P= 0.59, P= 0.24) hastalardaki IL1-ß, TNF-?, IFN-? ve TGF-ß ekspresyonunun sağlıklı bireylere göre anlamlı bir artış gösterdiği saptandı (P= 0.001, P= 0.0006, P= 0.007, P= 0.027). Bunun yanında IL1-?, IL2 ve IL17' nin ekspresyonuna hasta ve sağlıklılarda rastlanmamıştır. Bu çalışmada ortaya çıkan sonuçlar hipokampal sklerozlu MTLE hastalarında lokal bir immün atak olduğunu göstermektedir.

Abstract:
In temporal lobe epilepsy it is thought that various genes and signalling pathways take place due to presence of complex changes in hippocampus during the pathogenesis of disease. The inflammation period in this pathogenesis has been exhibited by the studies of animal models. In this study, we used hippocampus materials which are obtained from post amygdalohippocampectomy period after medical indication of 4 women and 5 men patients who are diagnosed with mesial temporal lobe epilepsy and resistant to antiepileptic treatment applied in convenient time and combinations. RNA samples, isolated from these tissues were used for the synthesis of cDNAs by reverse transcriptase PCR method, in order to quantify the inflammation-related gene expressions by real-time PCR. As control tissue, hippocampus material were taken during autopsy from 9 different cadaver of which the reason of death excluding neurological reasons. In the normalization of results, abl and cyclophilin genes were used Relative expression values were calculated with deltaCt method. Results were compared statistically by using "Mann-whitneyU"test.In the analysis of the expression levels of IL12, IL10, IL6, it has been depicted that these genes do not show any significant differences in the materials of epileptic versus autopsy tissues (P=0.73, P=0.59, P=0.24). On the other hand, it is determined that the expression of IL1-beta, TNF-alfa, IFN-gama and TGF-beta in patients indicate significant increase according to healthy controls (P=0.001, P=0.0006, P=0.007, P=0.027). In addition to these, there was no expression of IL1-alfa, IL2 and IL17 detected neither in patients or in healthy individuals.Results in this study show that an increased level of inflammation-related gene expression participates in the pathogenesis of mesial temporal lobe epilepsy.