Mide kanserli hastalarda periferik kanda Telomeraz mRNA ekspresyonunun real time-PCR kullanılarak belirlenmesi ve klinikopatolojik özelliklerle ilişkisinin saptanması
The determination of telomerase mRNA expression in peripheric blood by real time-PCR and of association with clinicopathological parameters in patients with gastric cancer.
Yazar: HAMDULLAH TURHAN
Danışman: PROF. DR. EBUBEKİR BAKAN
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Mide kanseri en yaygın ve malign seyirli kanserlerden biri olup bölgemizde diğer bölgelerden 3-5 kat daha fazla sıklıkta görülür. Tanısı genellikle ilerlemiş olan geç evrede konur. Mide kanserinin erken tanısı mortalite oranını azaltmada önemlidir. Dokular ve vücut sıvılarındaki gizli kanser hücrelerinin klasik immunohistokimya ve patoloji ile belirlenmesi nispeten zordur. Bu sebeple mide kanserini belirlemek için alternatif bir metod hala arzu edilmektedir. Ne yazık ki mide kanserinin belirlenmesi için çok sınırlı sayıda moleküler belirteç vardırTelomerler kromozomların uçlarında bulunan tekrarlayıcı DNA dizileri olup kromozomları replikasyon sonu problemine ve nükleaz parçalanmasına karşı korurlar. Telomeraz ribonükleoprotein yapısında bir enzim kompleksidir. Polimerizasyon için kendi RNA'sını kalıp olarak kullanarak replikasyon sırasında kaybolan telomer dizilerini yerine koyar. Telomeraz enzim aktivasyonunun hücre ölümsüzlüğü ve karsinogenez sürecinde önemli bir rol oynadığına inanılmaktadır. Telomerazın aktivasyonu sınırsız proliferasyon ve ölümsüzlüğe yol açar ve bu suretle tümör oluşumunda bu enzimin aktivasyonu çok önemli bir basamağı oluşturur. Yapılan çalışmalarla insan telomeraz revers transkriptaz (hTERT) mRNA ekspresyonunun telomeraz aktivasyonu ile korele olduğu ispatlanmış ve prekanseroz lezyon ve insan kanserlerinin çoğunda up regüle olduğu bulunmuşturBu çalışmada biz, mide kanserlerinin tanısında hTERT mRNA ekspresyonunun kantitatif belirlenmesini ve bu parametre ile mide kanserli hastaların klinikopatolojik özellikleri arasındaki ilişkiyi araştırmayı amaçladık. Bu amaçla 2 erken evre, 10 invaziv, 13 metastatik mide kanserli ve 5 kronik atrofik gastritli hasta olmak üzere toplam 30 hasta ve kontrol grubunu oluşturan 16 sağlıklı bireylerden alınan numunelerde, TaqMan floresans tekniğine dayalı Real Time kantitatif ters transkriptaz polimerize zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi ile hTERT mRNA seviyeleri ölçüldü. Sağlıklı ve kronik atrofik gastritli, erken, invaziv ve metastatik mide kanserli hastalarda ortalama hTERT mRNA seviyeleri sırasıyla 7831.16 ± 5558.69 kopya/100 ng total RNA, 13048.36 ± 6631.44 kopya/100 ng total RNA, 62156.85 ± 31568.65 kopya/100 ng total RNA, 44407.70 ± 17493.43 kopya/100 ng total RNA ve 721399.95 ± 583319.10 kopya/100 ng total RNA idiErken, invaziv ve metastatik mide kanserli hastalardaki hTERT mRNA ekspresyon seviyeleri sağlıklı bireylerden anlamlı olarak daha yüksekti (Sırasıyla istatitistiksel olarak p<0.05, p<0.01 and p<0.05 idi). Kronik atrofik gastritli hastalardaki hTERT mRNA ekspresyon seviyeleri sağlıklı gruptaki bireylerden yüksek olmasına rağmen fark istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0.05). Mide kanserli hastalarda, hTERT mRNA ekspresyon seviyeleri ile uzak metastaz, lenf nodu metastazı, cinsiyet, tümör tutulum yeri, diferansiyon derecesi ve evre gibi klinikopatolojik özellikler arasında anlamlı bir ilişki yoktuBizim sonuçlarımız, periferik kanda hTERT mRNA ekspresyonlarının eş zamanlı ölçümlerinin, mide kanserli hastalar ile sağlıklı kişileri ayırabileceğini ve mide kanserinin erken tanısı için muhtemel bir belirteç olabileceğini göstermiştir. Bununla beraber daha fazla sayıda ve uzun dönem takipli hastalarda daha ileri bir çalışma, bu moleküler belirtecin klinik uygulamasını doğrulamak için gereklidir.

Abstract:
Gastric cancer is one of the most common and malign cancers, occuring 3-5 times more frequently in our region than other regions in Turkey. Gastric cancer is usually diagnosed in advanced stage. Early diagnosis of gastric cancer is important to reduce the mortality rate. It is relatively difficult to determine occult cancer cells within tissues and body fluids by classical immunohistochemistry and pathology. An alternative method to detect gastric cancer is still desirable. Unfortunately, there are only limited number of molecular markers available for stomach cancer detectionTelomeres are repetitive DNA sequences at the ends of chromosomes, protecting them against incomplete replication and nuclease degradation. Telomerase is a ribonucleoprotein enzyme complex. It restores telomere sequences lost during replication by using its RNA component as a template for polymerization. It is believed that telomerase enzyme activation play a significant role in the cell immortalization and carcinogenesis. The telomerase activation leads to indefinite proliferation and immortalization, therefore, it is an important step in tumourigenesis. It has been found that the human telomerase revers transcriptase (hTERT) mRNA expression is correlated with telomerase activity and is up-regulated in most pre-cancerous lesions and human cancerIn this study, we aimed to evaluate quantitative determination of hTERT mRNA expression in the diagnostic value of gastric carcinomas and to analyze the correlation between the expression level of hTERT mRNA and clinicopathological parameters in patients with gastric cancer. The level of hTERT mRNA was analyzed in 46 specimens (2 with early gastric carcinoma, 10 with invasive gastric carcinoma, 13 with metastatic gastric carcinoma, 5 with chronic atrophic gastritis, and 16 healthy individuals ) by Real-Time quantative RT-PCR (RQ-PCR) based on TaqMan fluorescence methodology. The mean levels of hTERT mRNA in healthy individuals and patients with chronic atrophic gastritis,early gastric carcinoma, invasive gastric carcinoma, and metastatic gastric carcinoma were 7831.16 ± 5558.69, 13048.36 ± 6631.44, 62156.85 ± 31568.65, 44407.70 ± 17493.43 and 721399.95 ± 583319.10 copies/100 ng total RNA, respectivelyThe levels of hTERT mRNA expression in early gastric carcinoma, invasive gastric carcinoma, and metastatic gastric carcinoma were significantly higher than in healthy individuals (p<0.05, p<0.01 and p<0.05, respectively). Although levels of hTERT mRNA expression in chronic atrophic gastritis were higher than in healthy individuals, there was no statistically significant difference between these two groups (p>0.05). In patients with gastric cancer, there was no significant association between hTERT mRNA expression level and distant metastasis, lymph node metastasis, gender, location, degree of differentiation, and stageOur preliminary results show that real-time measurement of hTERT mRNA in peripheric blood discriminates between healthy subjects and patients with gastric cancer and that hTERT might be a potential biomarker for the early detection of gastric cancer. However, a further study with long-term followup in a larger number of patients is required to confirm the clinical application of this molecular marker.