Metastatik kolorektal kanser hücrelerinde cetuximabın apoptotik ve otofajik genler üzerine etkileri
The effects of cetuximab on apoptotic and autophagic genes in metastatic colorectal cancer cells
Yazar: FATMA BETÜL ÖZGERİŞ
Danışman: PROF. DR. MEVLÜT SAİT KELEŞ
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Apoptozis = Apoptosis ; Kolorektal neoplazmlar = Colorectal neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Otofaji = Autophagy ; Setuksimab = Cetuximab

Özet:
Amaç: Kolorektal kanser (KRK) dünyada en sık görülen kanser tiplerinden birisidir ve tedavisinde kemoterapi önemli bir yere sahiptir. Son zamanlarda kemoterapötik ajanların apoptozda ve otofajide rol olan genler üzerine etkisini araştıran birçok çalışma yapılmaktadır. Mevcut çalışmada kolorektal kanser tedavisinde kullanılan ve epidermal büyüme faktörü (EGF) antagonisti monoklonal bir antikor olan cetuximab'ın (CTX) kanser hücreleri üzerindeki apoptotik, otofajik ve sitotoksik etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Materyal ve Metot: KRK hücre hatlarına farklı dozlarda cetuximab uygulanarak 10 adet deney grubu oluşturuldu ve tüm gruplar 24 ve 48 saat süreyle inkübasyonlara bırakıldı. Sitotoksisiteyi belirlemek amacıyla MTT analizi uygulandı. Histokimyasal olarak apoptozun tespit edilmesinde TUNEL metodu kullanıldı. p21, p27, p57, KRAS, LC3A, BECN1, EGF ve ATG4A gen ekspresyon düzeyleri Real-Time PCR'la ölçüldü.
Bulgular: MTT sitotoksite analizi sonucunda 10 µg/mL cetuximab etkin doz olarak belirlendi. Aynı zamanda p21, p27, p57, LC3A, BECN1 ve ATG4A gen ekspresyonları artış gösterirken KRAS ve EGF gen ekspresyonlarında azalma gözlendi. TUNEL boyamada, artan cetuximab dozuyla apoptozda bir yükselme gözlendi.
Sonuç: CTX'in HT-29 KRK hücrelerini hem p21, p27 ve p57 gen ekspresyonlarını arttırarak apotoza hem de ATG4A, LC3A ve BECN1'in gen ekspresyonlarını arttırarak otofajiye yönlendirdiği kanaatine varıldı. Bunun yanı sıra CTX'in EGF ve KRAS gen ekspresyonunu azaltarak kanser hücrelerinin büyümesini inhibe ettiğide izlendi.

Abstract:
Purpose: The colorectal cancer (CRC) is one of the most common cancer type and chemotherapy has an important effect in the treatment. Recently, a number of studies investigating the effect of chemotherapeutic agents on genes involved in apoptosis and autophagy have been carried out. In this thesis, it was aimed to investigate the apoptotic, autophagic and cytotoxic effects of cetuximab (CTX), used for the treatment of colorectal cancer and is a monoclonal antibody that is epidermal growth factor (EGF) antagonist, on the cancer cells. 
Material and Method: Cetuximab was administered to colorectal cancer cell lines at different doses to form 10 test groups and all groups were left in incubations for 24 and 48 hours. MTT assay was applied for determine the cytotoxicity. TUNEL assay was used to detect the apoptosis by histochemical. p21, p27, p57, KRAS, LC3A, BECN1, EGF and ATG4A gene expression levels were measured by Real-Time PCR.
Findings: MTT cytotoxicity analysis indicated that 10 μg/mL cetuximab was the effective dose. At the same time, there was a decrease in KRAS and EGF gene expression while p21, p27, p57, LC3A, BECN1 and ATG4A gene expressions were increased. In TUNEL staining, an increase in apoptosis was observed with increasing dose of cetuximab.
Result: We can come to the conclusion that CTX mediates HT-29 KRK cells to apoptosis and autophagy by increasing both p21, p27, p57 gene expressions and ATG4A, LC3A and BECNI gene expressions. In addition, it can be said that inhibiting the growth of cancer cells by decreasing EGF and KRAS gene expression.