Yenidoğan streptozotocin diabetik sıçanlarda kalsiyum kanal blokerinin ve somatostatin analogunun böbrek dokusuna etkileri
The Effect of calcium channel blocker and a somatostatin analogue on renal tissue of neonatal rats
Yazar: MATEM TUNÇDEMİR
Danışman: PROF. DR. MELEK ÖZTÜRK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1998
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Böbrek = Kidney ; Diabetes mellitus-deneysel = Diabetes mellitus-experimental ; Kalsiyum kanal blokerleri = Calcium channel blockers ; Somatostatin = Somatostatin ; Sıçanlar = Rats

Özet:
6.ÖZET Bu çalışmada Tip II diabeti için uygun bir model olan "yenidoğan sıçan STZ (YD-STZ) diabet modeli"ni oluştururarak, nefropati gelişimini kan glukoz ve mikroalbüminüri düzeyleri ile takip etmeyi, somatostatin analoğu (octreotide) ve kalsiyum kanal bloken (isradipine) uygulanması ile renal dokudaki morfolojik değişiklikler ile IGF-1 dağılımı ve serum IGF-1 düzeyleri arasındaki ilişkiyi araştırmayı amaçladık. Çalışmamızda yenidoğan Wistar sıçanlardan oluşan 7 grup kullanıldı. Doğumun 2.günü (yd:2) L, 2.ve S.gruba STZ (100 mg/kg) enjeksiyonu yapıldıktan sonra 12.haftadan itibaren 6 hafta süre ile 2.grupa octreotide (200ug/kg), S.grupa isradipine (5 mg/kg) uygulandı. 4.grupa yd.2'de isradipine (5mg/kg) yd.3'de STZ (100 mg/kg) uygulandı. 12.haftadan itibaren 6 hafta süre ile S.grupa sadece octreotide (200ug/kg), ö.gruba isradipine (5 mg/kg) ve T.gruba (sağlıkh kontrol) serum fizyolojik enjeksiyonu yapıldı. Tüm uygulamalar i.p. olarak yapıldı. Çalışma süresince periyodik olarak tüm grupların haftalık kan glikoz ve vücut ağırlık ölçümleri, aynca mikroalbüminüri düzey ölçümleri yapıldı. Deney bitiminde serum IGF-1 düzeyleri RIA yöntemiyle ölçüldü. Yine deney bitiminde sağ böbrek ağırlıkları ölçüldü. Böbrek dokuları Bouin'de tespit edilip parafine gömüldü. Parafin kesitlere PAS, H+E boyalan aynca poliklonal IGF-1 antikoru (1:500) kullanılarak streptavidin-biotin-peroksidaz immunohistokimyasal boyama uygulandı. STZ uygulanan tüm gruplarda (l,2,3,4.grup) 12.haftaya kadar sağlıklı kontrole göre kan glukozunda belirgin artış gözlenirken, 12.haftadan itibaren octreotide ve isradipine uygulanan diabetik gruplarda kan glukoz düzeylerinde düşme olduğu saptandı. Böbrek ağırlıklan YD-STZ-diabetik grupta, sağlıklı kontrol grubuna kıyasla artmıştı. Octreotide ve isradipine uygulanan YD-STZ-diabetik gruplarda ise diabetik kontrol grupa göre anlamlı bir azalma saptandı. STZ uygulanan tüm diabetik gruplarda serum IGF-1 düzeylerinin octreotide uygulanan diabetik grupta düştüğü saptandı. Glomerül boyutlarının YD-STZ-diabetik gruplarda sağlıklı kontrole kıyasla arttığı, isradipine uygulanan diabetik grupun ve isradipine+STZ uygulanan grupun 2, 5 ve 6. gruplarından daha büyük boyutta glomerül içerdikleri S77saptandı. Diabetik gruplarda bazal membran kalınlaşması İle mezengial matriks ve mezengial hücre artışı belirgin olarak gözlendi. Octreotide uygulanan diabetik grupta yer yer devam eden glomerül hasarları ısradipİne uygulanan diabetik grubta daha fazla idi. Immunohistokimyasal bulgularda ise diabetik grupta glomerüllerde kuvvetli immunpozitiflik görülmesine rağmen sağhklı kontrol grubunda daha çok tubüllerde IGF-1 pozitif immunreaksiyonu gözlendi. Octreotide uygulanan YD-STZ-diabetik grupta, YD-STZ-diabetik ve sağlıklı kontrol gruplarına oranla glomerüllerde ve tubüllerde oldukça zayıf IGF-1 immunpozitifliği, isradipine uygulanan diabetik grupta ise IGF-1 immunreaktivitesinİn sağhklı kontrole yakın olduğu görüldü. Sonuç olarak, çalışmamızda kullandığımız somatostatin analogu octreotide ve kalsiyum kanal bloken isradipine'nin yeni doğan STZ-diabet modelinde kullanılan doz ve süre içerisinde diabetik nefropati üzerinde olumlu etkileri olmasına karşılık, octreotide'nin nefropati ilerlemesini yavaşlattığı ve renal doku hasarını düzelttiğini saptadık.

Abstract:
7. SUMMARY In this study we aimed to follow up the development of nephropathy by blood glucose and microalbuminuria levels and to investigate the relation between the morphological changes and IGF-1 distribution and serum IGF-1 levels following a somatostatin analogue (octreotide) and a calcium channel blocker (isradipine) by forming a newborn rat STZ diabetes model suitable for type II diabetes. In our study we used 7 groups of newborn wistar rats. On the 2nd day of birth STZ injection (100 mg/kg) was performed to l,2and 3 groups followed by octreotide (200 ug/kg) and isradipine (5 mg/kg) administration to 2nd and 3rd groups respectively for 6 weeks from 12 weeks on. To the 4th group isradipine and STZ were administered on the 2nd and 3rd days of birth respectively. To the 5th group only octreotide (200 ug/kg), to the 6* group octreotide (5 mg/kg) and to the 7th group (healty control) physiological salin injections were performed for weeks from 12th week on. For the whole experimental period, weekly blood glucose and body weight measurements and the measurement of level of microalbuminuria were performed periodically. At the and of the experimental of period serum IGF-1 levels were measured by RIA method. Again at the end of the experimental period right kidney weights were measured. Renal tissues were fixed in Bouin and embedded in paraffine. PAS, H+E satinings and immunohistochemical sataining using policlonal IGF-1 antibody (1:500) were performed to the paraffine tissues. In all STZ treated groups (1,2,3,4th group) while a significant increase in the blood glucose compared to healty controls to the 12th week, a decrease in the blood glucose levels of octreotide and isradipine treated diabetic groups from in all STZ treated groups (1,2,3,4* group) while a significant increase in the blood glucose compared to healty controls to the 12th week, a decrease in the blood glucose levels of octreotide and isradipine treated diabetic groups from 12th week on. Kidney weights were increased in STZ diabetic groups compared to healty control groups. A significant increase in octreotide treated diabetic groups was determined. Serum IGF- 1 levels were found to decrease in octreotide treated diabetic group. While glomerule sizes increased in STZ diabetic groups compared to controls, isradipine treated 59diabetic group and isradipine+STZ group were found to contain bigger glomerules than 2,5 and 6th groups. There were basal membrane thickening and significant increase in mesengial matrix and mesengial cells in diabetic rats was dominant in the diabetic groups there was IGF-1 immunreaction mostly in the tubules in healty control group. As a conclusion although somatostatin analogue octreotide and calcium channel blocker isradipine we used in our study had positive effects on diabetic nephropathy in newborn STZ diabetes model we determined that octreotide slowened the proggress of nephropathy and improved the renal tissue damage. 60