Ankilozan spondilitli hastaların nötrofillerinde tümör nekrozis faktör-alfa inhibitörü infliximabın kalsiyum sinyali, oksidatif stres ve apopitozis üzerine etkisi
Effects of infliximab, a TNF-a inhibitor, on intracellular calcium signaling, oxidative stress parameters and apoptosis levels in neutrophils of patients with ankylosing spondylitis
Yazar: YUNUS UGAN
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET ŞAHİN
Süleyman Demirel Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Romatoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Romatoloji = Rheumatology
Dizin: Kalsiyum = Calcium ; Nötrofiller = Neutrophils ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Romatoloji = Rheumatology ; Spondilit-ankilozan = Spondylitis-ankylosing ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors ; İnfliksimab = Infliximab

Özet:
Ankilozan spondilit, vertebranın progresif ve asendan kemik füzyonuna yol açabilen, spinal eklemlerin inflamasyonu ile karakterize, periferik eklemlerin daha az sıklıkla etkilendiği, etyolojisi tam olarak aydınlatılamamış kronik inflamatuar bir hastalıktır. Hastalığın günümüzde halen kesin bir tedavisi olmayıp kullanılan mevcut ilaçlar hastalığın gidişatını yavaşlatmak için kullanılmaktadır.Ankilozan spondilitte nötrofil fonksiyonlarının arttığı bildirilmiştir. Nötrofil fonksiyonlarını etkileyen en önemli faktörlerden biri hücre içi serbest Ca+2'un düzeyidir. Kalsiyum iyonu nötrofillerde kemotaksis, adezyon, araşidonik asit ürünlerinin yapımı ve serbest oksijen radikalleri üretimini etkilediği için nötrofillerde meydana gelen hücre içi Ca+2 düzey değişiklikleri nötrofil fonksiyonlarını doğrudan etkilemektedir.Biz bu çalışmada anti-TNF ilaçlardan olan infliximabın ankilozan spondilitli hastaların polimorf nükleer lökositleri (PMNL) üzerine olan etkisini kalsiyum sinyalleri üzerinden bakmayı ve hem oksidatif stres hem de apopitozis üzerine olan etkilerini in vitro ortamda araştırmayı amaçladık.Bu amaçla AS'li hastaların in vitro ortamda nötrofilleri ayrıştırılarak infliximab ile inkübe edildi. Sonrasında hem inkubasyon öncesinde hem de inkubasyondan sonra nötrofillerin sitozole Ca+2 iyon salınışı hesaplanarak infliximabın bu kanallara olan etkisi araştırıldı. Nötrofillerde infliximabla ortaya çıkabilecek oksidatif stres durumunu incelemek için Glutatyon (GSH), Glutatyon peroksidaz (GSH-Px), Lipid peroksidaz (LPO) düzeyleri; apopitoz için ise kaspas-3 ve kaspaz-9 düzeyleri ölçüldü. Hasta grubunda sitozole Ca+2 salınışının arttığı ve infliximabın hücre içi Ca+2 düzeylerini azalttığı saptandı. Ayrıca infliximabın nötrofillerdeki apopitozu inhibe ettiği gözlemlendi.Bu çalışmanın sonuçları AS hastalığında nötrofillerde intrasitoplazmik Ca+2 akışının ve apopitozun önemini göstermektedir.

Abstract:
Ankylosing spondylitis (AS) is a chronic inflammatory disease which is characterized with inflammation of the spinal joints. The etiology of AS is not very well known. There is no definitive treatment of AS till today, the aim of the most common used drugs is to slow down the course of the disease.Increased neutrophilic activation has been reported in AS patients. Ca2+ is a universal cation which plays an important role for many types of cell function. One of the most important factor which affects neutrophil functions is the level (concentration) of intracellular free calcium ions ([Ca2+]I). Ca2+ may affect chemotaxis, adhesion, formation of arachidonic acid pathways products and free oxygen radicals. The changes in [Ca2+]I levels affect on neutrophil functions directly.The main objective of the current study is to investigate the possible protective effects of Infliximab, one of the antiTNF-drug, on neutrophils of patients with Ankylosing spondylitis via [Ca2+]I signaling, oxidative stress parameters and apoptosis levels, in vitro.Neutrophils were freshly isolated from the AS patients and incubated with 100 µM Infliximab during one hour. [Ca2+]I release were measured both with before and after incubation of neutrophils with Infliximab. Glutathione (GSH),Glutathione peroxidase (GSH-Px) and Lipid Peroxidation (LPO) levels were also evaluated to determine the oxidative stress status and Caspase-3 and -9 levels were evaluated for apoptosis levels.We found that [Ca2+]I release increased in patient group and Infliximab caused a dramatic decrease on [Ca2+]I release. We also observed that Infliximab inhibited apoptosis.The results indicate the impact of the [Ca2+]I signaling and apoptosis in neutrophils of patients with AS.