In house ELISA kitinin düşük düzeyde tetanoz antitoksik antikorlarının saptanması amacıyla iyileştirilmesi
Innovation of an in house ELISA test kit for the determination of low level anti-tetanus antibodies
Yazar: CEMİLE SÖNMEZ
Danışman: DOÇ. DR. NİLAY ÇÖPLÜ
Sağlık Bakanlığı / Ankara Refik Saydam Hıfsısıhha Merkezi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2003
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Amaç: Tetanoz daha çok gelişmekte olan ülkelerde görülen aşı ile önlenebilir bir hastalıktır. Aşılama programlarının etkilerini görmek, toplumun immun durumunu değerlendirmek için anti-tetanoz antikor düzeylerini saptamaya yönelik serolojik testler çalışılmalıdır. ELISA, tetanoz antikor düzeylerini belirlemede basit, hızlı ve ekonomik bir test olmakla birlikte çapraz reaksiyon veren antikorlardan etkilenerek koruyucu olmayan antikor düzeylerini saptamada yetersiz kalabilmektedir. Amacımız in house ELISA (ELISA 1) yöntemimizi, çapraz reaksiyon veren antikorların bloke edilmesi yolu ile koruyucu olmayan antikor düzeylerini saptayabilecek şekilde iyileştirmektir.
Gereç ve Yöntem: Seçilen 322 serum örneği ELISA 1 olarak adlandırılan in house ELISA yöntemi ile test edilmiştir. Serumlar ELISA 1 yöntemi ile saptanan antikor düzeylerine göre 0,1 lU/ml'nin altı, 0,1-1 ILJ/ml arası, 1-10 lU/ml arası ve 10 IU/ml'nin üzerindeki düzeyler olacak şekilde gruplandırılmıştır. 0,1 IU/ml'nin altındaki antikor düzeyine sahip serumların tümü altın standart olan fare nötralizasyon testi (NT) ile çalışılırken, diğer gruplardan randomize seçilen serumlar NT'ne dahil edilmiştir. Toplam 62 serumda tetanoz antikor düzeyleri NT ile çalışılmıştır. Bu 62 serumun tümü ELISA 2 olarak adlandırılan modifiye in house ELISA yöntemi ile tekrar çalışılmıştır. Sonuçlar karşılaştırılarak değerlendirilmiştir.
Bulgular: NT ve ELISA 1 testlerinin 1,0 lU/ml ve üzerinde uyumlu olduğu görülmüştür. Bununla birlikte 1.0 IU/ml'nin altındaki düzeylerde ise ELISA 1 testinin NT'ye göre daha yüksek antikor düzeyi saptadığı gözlenmiştir. NT altın standart olarak kabul edildiğinde, ELISA 2 yönteminin sonuçlarının ELISA 1 testine göre daha uyumlu olduğu görülmüştür. ELISA 2 yönteminin sonuçları NT ile karşılaştırıldığında en düşük güvenilir saptama düzeyinin 0,5 lU/ml'ye düştüğü gözlenmektedir.
Sonuç: ELISA 2 yöntemi ile ölçülebilen en düşük antikor düzeyi 0,5 lU/ml'dir. ELISA 2 yönteminin koruyucu olmayan antikor düzeyi olan 0,01 lU/ml ve altındaki antikor düzeylerini saptayabilmesi için avidin-biotin sisteminin eklenmesi ve ileri çalışmaların yapılarak in-house ELISA yönteminin iyileştirilmesi gerekmektedir.

Abstract:
Objective: Tetanus is a vaccine preventable clisease that is seen mostly in the developing countries. İn order to evaluate the efficacy of vaccination programmes or to evaluate the immune statııs of the population; anti-tetanus antibody levels must be investigated by serological studies. ELISA test is a simple, rapid and economical test for the detection of tetanus antibody levels. I lowever, the results may be affected by cross reactive antibodies or low levels of antibodies may remain undetected. Our aim was to improve an in-house ELISA (EI.ISA 1) method by blocking the cross reacting antibodies and enable the detection of low levels of antibodies.
Materials and Methods: The selected 322 serum samples were tested for the presence of anti-tetanus antibodies by an in-house ELISA method, named as ELISA 1. The sera vvere grouped according to the levels detected by ELISA 1 test as <0.1 lU/ml, 0.1-1 lU/ml, 1-10 lU/ml, >10 lU/ml. Sera with antibody levels below 0.1 lU/ml and the sera randomly selected from the other groııps were tested with the gold Standard mouse Neutralization Test (NT). A total of 62 sera vvere tested for tetanus antibody levels by Neutralization (NT) test. 62 samples tested vvith NT vvere tested by the modified in house ELISA method, named as ELISA 2. The results vvere compared and evaluated.
Results: NT and ELISA 1 test results correlated well for the sera vvith antibody levels >1.0 lU/ml. Hovvever, for antibody levels belovv 1.0 lU/ml, ELISA 1 test results vvere higher than NT results. When NT test vvas considered as the gold Standard, the results of ELISA 2 method was found to be more compatible than ELISA 1 test results. When ELISA 2 results vvere compared to NT results, the lovvest reliable detection limit w as decreased to 0.5 lU/ml.
Conclusion: The lovvest antibody detection limit for ELISA 2 method was 0.5 lU/ml. İn order to detect nonprotective antibody levels, 0.01 lU/ml and belovv, avidin-biotin system must be added and further studies should be performed to improve the in-house ELISA method.