Van gölü balığının (Chalcalburnus tarichii P.1811) beyin ve karaciğerinden asetilkolinesteraz (E.C.3.1.1.7) enziminin afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
The characterization of purification of acethylcholinesterase (E.C.3.1.1.7) enzyme from the brain and liver of lake Van fish
Yazar: ESRİN AKMAN
Danışman: Y.DOÇ. VEDAT TÜRKOĞLU
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalısma; Vangölü balıgının beyin ve karacigerindeki asetilkolinestenaz enzimininsaflastırılması için etkili ve hassas bir saflastırma yöntemini içermektedir. Bununla berabermetabolizma için büyük öneme sahip bu enzimin bazı özellikleri incelenmistir. Saflastırma içinkullanılan balıgın beyin ve karacigeri gerekli islemler yapıldıktan sonra pH'sı 8'e katı sodyumfosfatile ayarlanarak, kolona tatbik edilecek hale getirildi. Saflastırma isleminde kullanılan affinite jeli,CNBr ile aktiflestirilen Sepharose-4B matriksine biyolojik ilgisi olan ligant (1-etil 3-3dimetilaminopropil karbodiimid) baglanarak hazırlanan jel kolona doldurularak tampon A iledengelendi hazırlanan kolona tatbik edildi. Kolon tampon B ile yıkandı. Yıkama islemi absorbansın0,01'den küçük oldugu durumda son verildi. En son tampon C geçirilerek 5'ser ml halindefraksiyonlar toplandı her bir fraksiyonunun 280 nm'deki kalitatif protein tayinleri, 545 nm'dekikantitatif protein miktarları ve aktivite tayinleri yapıldı. Aynı zamanda da; enzimin optimumsıcaklık, optimum pH, iyonik siddet etkisi arastırıldı.Yapılan çalısma sonucu beyinde saflastırmaoranı 344 kat, karacigerde saflastırma oranı 142 kat olarak bulundu. Enzimin optimum pH'sı 8,optimum sıcaklık ise 35oC olarak bulundu. yonik siddet etkisinin arastırıldıgı çalısmada ise enyüksek aktivite ise 0.2 M Na H2 PO4 konsantrasyonunda görülmüstür.Anahtar kelimeler: Affinite Kromotogrofisi, Asetilkolinestenaz enzimi, Chalcalburnustarichi, Saflastırma,

Abstract:
This study contains efective and sensitive methods for purification ofAcethylcholinesterase enzyme from the brain and liver of lake Van fish. In addition, the analyse ofsame features of this enzyme which is extremely important metabolism was exiting. Afternecessary operations, the fish liver and brain which is going to be used for purification was turnedinto homogenate that will be applined to the column. Its pH was prepared for application to columnhaving been adjusted to 8 with solid sodium phosphate. Affinity gell, prepared before having beenpacked to the column was balanced to with tampon A. The prepared homogenate were applited tothe column. Then, it has been washed by tampon B have been gone throug column. The washingprocess was stopped when the absorbance was less then 0.01. Finally, the fractions, everyone 5 ml,were collected by tampon C have been gone. Also, the rations of quantitative protein in 595 nm andquallitative protein in 280 nm for determination of protein amount were appointed. In the sametime, the optimum temperature, optimum pH and ionic strenght reaction of the enzyme weresearched. In the result of the study, proportion of enzyme purification has found 344 and 142 foldrespectively. The optimum pH of the enzyme is 8 and optimum temperature is 35 ºC. The highestactivity was seen in consantration of 0.2 M (NH4)2SO4 in study in which the ionic strenght wassearched.Keywords : Acetylcholinesterase enzyme, Affinity Chromatography, ChalcalburnusTarichii, Purification.