Geldanamycin uygulanmış kolon kanseri hücre dizinlerinde apopitozis mekanizmasının araştırılması
Investigate the mechanism of apoptosis on Geldanamycin applied colon cancer cell lines
Yazar: ZEYNEP KASAR
Danışman: DOÇ. DR. FUNDA KOSOVA
Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Bölümü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Kanser; hücrenin çoğalmasını, farklılaşmasını, sağ kalımını denetleyen kritik genlerde meydana gelen değişikliklerden kaynaklanan hastalıktır. Kanser ve apoptosise, hücre popülasyon dinamiğinde karşılıklı olgu olarak sık sık rastlanmaktadır. Kontrolsüz hücre proliferasyonunun yanında azalmış apoptozis kolon kanseri gelişimine katkı sağlamaktadır.
Geldanamisin, anti-kanserojen etki gösteren, benzokinon ansamisin antibiyotiktir. Isı şok proteinleri, ısı stresine yanıt olarak sentezlenen, hücresel homeostaziyi düzenleyen, hücrenin sağ kalımını artıran, moleküler şaperonlardır. HSP?90 hücre koruyucu özelliğinden dolayı programlı hücre ölümünün (apopitozisin) gerçekleşmesini engelleyen ısı şok proteinidir. 
Çalışmamızda, geldanamisin deviresi olan 17?AAG?nin, kolon kanseri hücre dizini Colo?205 kültüründe apopitozis üzerine etkilerini araştırmak için, öncelikle MTT yöntemiyle hücrelerin canlılık ve çoğalma özelliklerini, ardından TUNEL yöntemiyle apopitotik hücre oranı belirlemeyi, daha sonra 17-AAG?nin apopitozis sinyal yolu üzerindeki etkisi için, mitokondriyal yolun anahtar proteinleri olan sitokrom-c, bcl?2, kaspaz?9, APAF?1 ekspresyonlarına RT PCR yöntemiyle incelemeyi amaçladık.   
17-AAG uygulaması sonrasında MTT analizleri ile hücre çoğalmasının durduğu ölümün gerçekleştiği, RT-PCR gen ekspresyonlarına bakıldığında ise Sitokrom c, Apaf?1, kaspaz 9 proteinlerin ekspresyonu istatistiksel olarak belirgin şekilde artarken (p<0,05), Bcl?2 ekspresyonun ise istatistiksel olarak belirgin şekilde azaldığını (p<0,05) gördük. 
Dolayısıyla, 17AAG uygulaması kolon kanseri tedavisinde katkı sağlayabilecek ajan olarak gözükmektedir. Bu konuyla ilgili daha fazla çalışmalarla da bu bulguların desteklenmesi yararlı olacaktır.

Anahtar Kelimeler: Apopitozis, Hücre Kültürü, 17-AAG, Sitokrom c, Kaspaz 9, Bcl 2, Apaf–1

Abstract:
Cancer is a disease caused from the changes in the critical genes that control cell proliferation, differentiation, survival. Cancer and apoptosis are often seen in the cell population dynamics as mutually case. Uncontrolled cell proliferation and decreased apoptosis contribute to the development of colon cancer.
Geldanamycin is a benzoquinone antibiotic ansamisin that showing the anti-cancer effect. HSPs are molecular chaperones that synthesized in response to heat stress, regulate cellular homeostasis and improve overall survival of the cell. HSP90 is heat shock protein that impeding the realization of programmed cell death in cells due to the its protective nature.
In our study we aimed to examine the effects of 17-AAG, on Colo?205 colon cancer cell line index to investigate culture on apoptosis, primarily the method of MTT viability and growth characteristics of the cells, and then the TUNEL method to identify apoptotic cell ratio. Then the effect of 17-AAG on apoptosis on the signal path, the path key mitochondrial proteins, cytochrome c, bcl?2, caspase?9, apaf?1 expression in RT PCR method were evaluated.
After the implementation of 17-AAG, with MTT analysis, cell proliferation stopped and death occurred. When RT-PCR is analyzed, gene expression in cytochrome c, apaf?1, caspase?9 increased in a statistical manner (p <0.05) and Bcl?2 expression significantly decreased in a remarkable way (p <0.05).
Therefore, 17AAG application seems to be an agent that may contribute to the treatment of colon cancer. More studies on this topic would be useful for supporting these findings.

Keywords: Apoptosis, cell culture,17-AAG, cytochrome c,caspase 9,Bcl 2, Apaf–1