MİR-122-5P ve onun hedeflediği adam10 gen ifadelerinin insan meme kanseri ile ilişkisi
The association of the expressions of MIR-122-5P and its target adam10 gene with human breast cancer
Yazar: SERCAN ERGÜN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SERDAR ÖZTUZCU
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Günümüzde, genetik temelli bir hastalık olduğu bilinen meme kanserinde tedavilerin yetersiz kalmasının sebeplerini hastalığın karmaşık etiyolojisi, moleküler yolakların aydınlatılamamış olması, ilaç direnci oluşturmaktadır. Bu yolakların düzenlenmesinde çok önemli rol oynayan miRNA'lar protein kodlayan genlerin negatif düzenleyicileridir. ADAM10 geninin translasyonel etkinliğini ya da mRNA kararlılığını düzenleyen onkojenik bir miRNA olan miR-122-5p'nin meme kanseri hücrelerinde ADAM10'u susturarak, yani HER2/neu kesilimini engelleyerek, trastuzumab aktivitesini arttırmada rol oynadığını düşünmekteyiz. Belki miR-122-5p onkojenik özelliklerini pek çok yolak üzerinden gösterebilir. Biz de kendisinin ve hedeflediği bir gen olan ADAM10'un ifade profilini çıkararak meme kanseri patofizyolojisine bir ışık yakmayı amaçladık. Bu düşünceyle Anabilim Dalı laboratuvarlarımızda meme kanseri hücre hatlarında (MCF7, HCC1500, ZR-75-1, MDA-MB-231, SK-BR-3) ve kontrol olarak CRL-4010 meme epitel hücre hattında ve aynı zamanda meme kanseri hastalarının tümörlü ve kontrol olarak aynı hastaların tümörsüz meme dokularında miR-122 ve ADAM10'un gen ifade düzeyini belirlemek için Real-Time PCR kullandık. Trastuzumab'ın etkili olduğu HER2+ tek hücre hattımız olan SKBR3'deki ifade sonuçlarına göre miR-122-5p ve ADAM10 ifade seviyeleri kontrol hücre hattındakine göre anlamlı bir şekilde yüksek bulunmuştur. miR-122-5p ifade düzeyi diğer 4 hücre hattında kontrol hücre hattına göre düşükken, aynı hücre hatlarında ADAM10 ifade düzeyi kontrol hücre hattına göre yüksek bulunmuştur. Hastalardaki miR-122-5p ve ADAM10 ifade profiline göre bu ikili arasında meme kanseri patojenezi açısından bir ilişki olduğu ve bu ilişkinin hastalığın histopatolojisine göre şekillendiği görülmektedir. Sonuç olarak, miR-122-5p'nin gerek ADAM10'u gerekse hedefleyerek gerekse başka mekanizmalar üzerinden meme kanseri hücrelerinin histopatolojilerine veya diğer özelliklerine göre değişecek şekilde tümör baskılayıcı etkisi olduğunu ve bu etkisinin trastuzumab direnci hakkında özellikle HER2+ meme kanseri hücrelerinde ADAM10 ifade seviyesi üzerinden yorum yapılabileceği söylenebilir.

Anahtar Kelimeler: miR-122-5p, ADAM10, meme kanseri, trastuzumab, qRT-PCR

Abstract:
Nowadays, the causes of treatment failure in breast cancer known to be a genetically based disease comprises of the complex etiology of the disease, the fact that the molecular pathways have not yet been clarified and drug resistance. miRNAs having very important roles in the regulation of these pathways are negative regulators of genes encoding proteins. We believe that miR-122-5p, which is an oncogenic miRNA regulating translational efficiency or mRNA stability of ADAM10 gene, takes role in increasing of trastuzumab activity by suppressing ADAM10, that is, by preventing HER2/neu shedding, in breast cancer cells. Maybe, miR-122-5p may show its oncogenic features along many different pathways. We aimed to shed light on the pathophysiology of breast cancer by obtaining expression profile of miR-122-5p and its target, ADAM10 gene. By this way, we used Real-Time PCR to obtain expression profile of ADAM10 and miR-122-5p in breast cancer cell lines (MCF7, HCC1500, ZR-75-1, MDA-MB-231, SK-BR-3) and in mammary epithelial cell line (CRL-4010) as control and in tumor and non-tumor breast tissues, as control, of the breast cancer patients at the same time in the laboratory of our Department. According to expression results in SKBR3 which is our only HER2+ cell line responsive to trastuzumab, expression levels of ADAM10 and miR-122-5p were found significantly higher than in the control cell line. While the expression levels of miR-122-5p in other four cell lines were lower than in the control cell line, the ADAM10 expression levels in the same cell lines were found higher than in the control cell line. According to the expression profiles of ADAM10 and miR-122-5p, it is observed that there is a close relationship between these two with respect to the pathogenesis of breast cancer and this association is changing by the histopathology of the disease. Consequently, it could be said that miR-122-5p has a tumor suppressor role changing with the histopathologies or other characteristics of the breast cancer cells by targetting ADAM10 or upon other mechanisms and a comment about trastuzumab resistance could be made upon ADAM10 expression level in especially HER2+ breast cancer cells with the help of this effect of miR-122-5p.


Key Words: miR-122-5p, ADAM10, breast cancer, trastuzumab, qRT-PCR