Katalaz enzimi aktivitesi üzerine peroksinitrit etkisinin incelenmesi
Determination of peroxynitrite effect on catalase enzyme activity
Yazar: AYBİKE SİVRİKAYA
Danışman: DOÇ. DR. SEVGİ KOLAYLI
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry
Dizin: Karaciğer = Liver ; Katalaz = Catalase ; Peroksinitrit = Peroxynitrite

Özet:
Canlı organizmalarda oksidanlar ile antioksidanlar arasında bir denge mevcuttur.Katalaz enzimi tüm canlı dokularında mevcut bir antioksidan enzim olup turnover sayısı enyüksek enzimdir. Oksijenin eksik indirgenme ürünlerinden olan H2O2'nindönütürülmesinde görev alan bu enzim özellikle karacier mikrozomlarında yüksekkonsantrasyonda bulunmaktadır.Çalımada kullanılan peroksinitrit, asidik çözeltideki hidrojen peroksidin sodyumnitrit ile muamele edilmesiyle oluan kararsız peroksinitröz asidin sodyum hidroksitkullanılarak kararlı peroksinitrit anyonuna dönütürülmesi sonucu elde edildi. Sentezlenenperoksinitritin kararlılıı sıcaklık ve pH'ya balıdır. Anyon bazik ortamda ve -70 0 C'deuzun zaman muhafaza edilebilmektedir. Sentezlenen peroksinitritin konsantrasyonu molarabsorptivite katsayısından (e: 1670 M-1.cm-1; 302 nm'de) ölçülebilmekte ve NaOH ileistenen konsantrasyonda çözeltisi elde edilebilmektedirPalamut karacier dokusundan (40.000 g, 10 dakika) elde edilen mikrozomal katalazekstraktının aktivitesi klasik yöntem olan 240 nm'de H2O2'nin absorbansındaki azalmanınölçülmesi ile yani kinetik yolla tespit edildi. Ortama ilave edilen 5 faklı konsantrasyondaki(10, 20, 40, 50 ve 100 ?M) PN'in çözeltisi ile katalaz aktivitesi tayin edildi. Ayrıca nötralya da asidik ortamda oluan bozundurulmu peroksinitrit (BPN) in 5 farklı konsantrasyonuile de muamele edilen katalaz enziminin aktivitesi ölçüldü.Sonuç olarak PN ve BPN ürünlerinin katalaz enziminin inaktivasyonuna nedenolduu ve bu inaktivasyonun konsantrasyona baımlı olduu tespit edildi.Anahtar Kelimeler: Katalaz, Peroksinitrit, Bozundurulmu Peroksinitrit, Karacier,Palamut

Abstract:
In living organisms there is a balance between oxidants and antioxidants. Catalase,an antioxidant enzyme, which occurs in all living tissues, has the highest turnover number.This enzyme especially occurs in large concentrations in liver microsomes and plays a rolein the convertion of H2O2, one of the short reduction products of O2.Peroxynitrite used in the study, obtained by convertion of instable peroxynitrose,formed by treating acidic hydrogen peroxide solution with sodium nitrite, using sodiumhydroxide to stable peroxynitrite anion. The stability of the synthesized peroxynitrite isdepend on temperature and pH. Anion can be keeped in basic media and at -70 0 C for along time. The concentration of synthesized peroxynitrite can be measured by molarabsorbtivity coefficient (e: 1670 M-1.cm-1; at 302 nm) and with NaOH wantedconcentrations can be obtained.The activity of microsomal catalase extract obtained from bonito?s liver tissue(40.000 g, 10 minutes), is confirmed with the clasical method, measuring the decrease inthe absorbance of H2O2 at 240 nm. Catalase activity is determined by adding 5 differentconcentrations of peroxynitrite solution (10, 20, 40, 50 and 100 ?M) into the media. Alsoenzyme activity is measured with 5 different concentrations of vicious peroxynitritesolution formed in neutral or acidic media.In conclusion, it?s confirmed that, the products of PN and BPN caused inactivation ofcatalase enzyme and this inactivation is due to concentration.Key Words: Catalase, Peroxynitrite, Vicious Peroxynitrite, Liver, Bonito