Çeşitli klinik örneklerden izole edilen Staphylococcus aureus suşlarında antibiyotik direnç genleri ve panton-valentine lökosidin varlığının araştırılması
Investigation of antibiotic resistance genes and the presence of pantone valentine leukocidin in Staphylococcus aureus strains isolated from various clinical specimens
Yazar: ESMA KARATAŞ
Danışman: DOÇ. DR. FAHRİYE EKŞİ
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Genler = Genes ; Lökositler = Leukocytes ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; İlaç alerjisi = Drug hypersensitivity ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Staphylococcus aureus en sık görülen enfeksiyon etkenlerinden birisidir. Bu çalışmada yara, kan ve solunum yolu örneklerinden izole edilen S. aureus suşlarında,   çeşitli antibiyotiklere olan direnç durumlarının fenotipik ve genotipik yöntemlerle saptanıp karşılaştırılması ve bu suşlarda dirence sebep olabilecek direnç genlerinin ve Panton-Valentine Lökosidin (PVL) varlığının moleküler yöntemlerle tespit edilmesi amaçlanmıştır. Gaziantep Üniversitesi Şahinbey Araştırma ve Uygulama Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarına, Aralık 2012 ve Eylül 2014 tarihleri arasında poliklinik ve yatan hastalardan gönderilen yara, kan ve solunum yolu örneklerinden izole edilen toplam 96 S. aureus suşu çalışmaya dahil edildi. S. aureus suşlarının identifikasyonu yapılarak, metisilin direnci, sefoksitin (30μg) ve oksasilin (1μg) diskleri ile disk difüzyon testi,otomatize sistem ve oksasilin tuz-agar tarama testi ve kromojenik agar kullanılarak yapıldı. Çeşitli antibiyotiklerin duyarlılık paternleri klasik disk difüzyon testi ile araştırıldı. Makrolid direnci (ermA, ermC), beta laktamaz direnci (mecA), tetrasiklin direnci (tetK, tetM), kinolon direnci (gyrA, parC), aminoglikozid direnci (aacA) vankomisin direnci (vanA) ve PVL varlığı multiplex Polimeraz Zincir Reaksiyonu'nu (PZR) takiben hibridizasyon yöntemi ile araştırıldı. Çalışma kapsamına alınan suşların 61'i (%63.5) metisiline duyarlı Staphylococcus aureus (MSSA), 35'i (%36.5) metisiline dirençli S. aureus (MRSA) olarak tanımlandı. Tanımlanan suşlardaki en yüksek direnç oranları penisilin 93 (%96.9), ampisilin 91 (%94.8) ve amoksisilin klavulonik asit 62 (%64.6) olarak belirlendi. MSSA suşlarının 11'inde (%31.4), MRSA suşlarının 24'ünde (%68.6) mecA geni saptandı. Toplam 96 S. aureus suşu arasında %35'inde mecA, %17.7'sinde ermA, %12.5'inde ermC, %12.5'inde tetK, %19.8'inde tetM, %15.6'sında parC ve %30'unda aacA ve 5'inde (%5,4) PVL varlığı saptandı. Hiçbir suşda vanA geni saptanmadı. Sonuç olarak, metisilin direncini saptamada en güvenilir sonucun sefoksitin disk difüzyon yöntemi ile alındığı tespit edildi. 

Anahtar Kelimeler: S. aureus, antibiyotik direnci, mecA, MRSA, PVL

Abstract:
Staphylococcus aureus is one of the most common infectious agents. In this study, wound, blood and respiratory samples isolated from S. aureus strains, is intended to be determined by the resistance status to various antibiotics phenotypic and genotypic methods identified and compared and is also aimed to detect the presence of Panton-Valentine Leukocidin (PVL) with molecular methods and resistant genes caused by resistance on this strains. Between December 2012 and September 2014, Laboratory of Microbiology in Gaziantep University Medical Faculty Hospital, 96 S. aureus strains isolated from wound, blood and respiratory samples which were sent from clinics and inpatients, are included in the study. The identification of S. aureus strains were made and methicillin resistance, cefoxitine (30μg) and oxacillin (1μg) disc diffusion test and oxacillin salt-agar screening test and chormogenic agar were used for methicillin resistance. Various antibiotics sensitivity patterns were researched with disc diffusion test. Macrolide (ermA, ermC), beta lactamase (mecA), tetracycline (tetK, tetM), kinolone (gyrA, parC), aminoglycoside (aacA) and vancomycine resistances (vanA) and PVL presence were researched by Polimerase Chain Reaction (PCR) following hyridization method. Out of the 96 S. aureus isolates, 61 were methicillin sensitive Staphylococcus aureus (MSSA, 63.5%) and 35 were methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA, 36.5%).  The highest resistance rates observed as; 93 (96.9%) penicillin, 91 (94.8%) ampicillin and 62 (64.6%) amoxicillin clavulanic acid. 11 (31.4%) of the MSSA isolates and 24 (68.6%) of the MRSA isolates showed the presence of the mecA gene. Out of 96 S. aureus isolates, positivity of the genes were mecA 35%, ermA 17.7%, ermC 12.5%, tetK 12.5%, tetM 19.8%, parC %15.6, aacA 30% and PVL presence was 5.4%. vanA gene positivity did not observed. In conclusion, cefoxitine (30 µg) disk diffusion test was found as the most reliable test for the detection of MRSA.

Key words: S. aureus, antibiotic resistance, mecA, MRSA, PVL