Cisplatinin uterusta oluşturduğu gonadotoksik etkiye,acetly l- carnitinin koruyucu etkisi
The protective effect of acetyl l-carnitine to gonadotoxic effect of cisplatin on uterus
Yazar: SERMİN ŞEYHAN
Danışman: PROF. DR. CANDAN ÖZOĞUL
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Asetilkarnitinin = Acetylcarnitine ; Endometriyum = Endometrium ; Sisplatin = Cisplatin ; Toksisite = Toxicity ; Uterus = Uterus

Özet:
Kemoterapi uygulamalarında etkin olarak kullanılan Cisplatin, erişkin çağda görülen bir kaç tümörün ve nöroblastom, Wilms tümörü, hepatoblastom, beyin tümörleri, germ hücreli tümör, osteosarkom gibi pek çok çocukluk çağı tümörlerinin tedavisinde yer alır. Cisplatinin kanıtlanmış gonadotoksik etkisinin yanında, birçok sistem üzerine de yan etkilerinin varlığı çeşitli çalışmalarla gösterilmiştir. Nefrotoksisite, nöropati, ototoksisite ve gonadotoksisite Cisplatinin klinik açıdan önemli doz sınırlayıcı yan etkilerdir.10 Cisplatin, hücre içerisine girişinden sonra birçok sinyal ileti yolağını aktif hale gelir ve hücrede apoptozis, nekrozis, oksidatif stres, fibrogenez, inflamasyon, hipoksi ve mitokondriyal hasara yol açarak sitotoksik etki gösterir.11Bu çalışmada, gonadotoksik etkisi bilinen cisplatin, uygulanması sonucunda uterus dokusunda meydana gelen değişimler belirlenmiş ve bu değişimleri önlemek amacıyla uygulanan Acetyl L-Carnitin'in koruyucu etkisi araştırılmıştır. Bu amaçla, histomorfolojik analizler için hematoksilen-eosin (H&E) boyama, DNA fragmantasyonunu gözlemleyebilmek için TUNEL yöntemi ve apoptotik etkiler belirlemek için immünohistokimyasal olarak anti Caspase 3, 8 ve 9 antikorları,uygulandı.Çalışmada deney öncesi ve deney sonrası ratların ağırlık ortalamaları değerlendirildi. Cisplatin ve pretedavili grupların ikisinde de kilo kaybı gözlenmesine rağmen Cisplatin grubundaki kilo kaybının pretedavili gruba göre daha fazla olduğu görüldü.Histolojik incelemelerde Cisplatin grubunda endometrium epitelinde intraepitelial olarak ve subepitelial bağ dokusunda inflamatuar hücre infiltrasyonunun varlığı görülürken endometrial bezlerin lümeninde hücresel debrisler ve subepitelial bağ dokuda ödem gözlendi. Ayrıca uterus epitelinin morfolojik karakter değiştirerek skuamoz epitele dönüştüğü izlendi. Acetyl L-Carnitin+Cisplatin pretedavili grup Cisplatin grubu ile karşılaştırıldığında intraepitelial lenfositlerin endometriumda seyrek olarak yer aldığı endometrial bez lümenlerinde hücresel debrislerin hemen hiç gözlenmediği, subepitelial ödemin oluşmadığı belirlendi.Uterus epitelinde Cisplatin grubunda çok sayıda hücrede DNA fragmantasyonu görülürken; Acetyl L-Carnitin+Cisplatin pretedavili grupta bu sayının daha az olması, pretedavi uygulamasının DNA fragmantasyonunu önlediği şeklinde yorumlandı.Cisplatin uygulaması sonucu hangi apototik yolağın uyarıldığını tespit etmek amacıyla uygulanan caspase 8 ve 9 immünohistokimya sonuçları apoptozun ekstrensek ve intrensek olmak üzere her iki yolakla da tetiklendiğini göstermekteydi. Ancak caspase 8 ile tetiklenen ekstrensik yolakla apoptoza giden proapoptotik hücre sayılarının intrensik yolakla tetiklenen hücre sayılarından daha fazla olduğu belirlendi.Çalışma sonucunda, Acetyl L- Carnitin'in profilaktik olarak uygulanması ile histomorfolojik ve apoptotik bulgularla ortaya konan cisplatinin uterus üzerindeki toksik etkisinin önlediği belirlendi.

Abstract:
Cisplatin that is used effectively in chemotherapy, takes place in the treatment of several tumors which are seen in adulthood and many childhood tumors such as neuroblastoma, Wilms tumor, hepatoblastoma, brain tumors, germ cell tumors, osteosarcoma. Along with proven gonadotoxic effect of Cisplatin, it has been shown through various studies that it has side effects on several systems. Nephrotoxicity, neuropathy, ototoxicity and gonadotoxicity are important clinically dose-limiting side effects of Cisplatin. After Cisplatin enters the cell, many signal transduction pathways become active and it causes the cell apoptosis, necrosis, oxidative stress, fibrogenesis, inflammation, hypoxia and by leading to mitochondrial damage shows cytotoxic effect.In this study, applications of Cisplatin, whose gonadotoxic effect is known, changes in the uterine tissue has been detected and to prevent these changes Acetyl L-Carnitin's protective effect has been investigated. To this purpose, for histomorphological analysis hematoxylin-eosin (H&E) staining, to observe DNA fragmentation TUNEL assay and to determine apoptotic effects, anti Caspase 3, 8 and 9 antibodies were applied.In the study, pre-experiment and post-experiment average weights of rats were evaluated. Although weight loss has been observed in both the pre-treated and Cisplatin groups, the loss in the latter one proved to be more than the former one.In histological examinations, in Cisplatin group in the endometrial as intraepithelial and in subepithelial connective tissue, existence of inflammatory cell infiltration has been observed and in the lumen of endometrial glands, cellular debris and edema in the subepithelial connective tissue were observed. Also, it has been spotted that by changing morphological character the uterine epithelium has turned into squamous epithelium. When the pre-treated group with Acetyl L-Carnitin+Cisplatin is compared with Cisplatin group, it is determined that, the cellular debris are almost never observed in the lumen of the endometrial glands, subepithelial and intraepithelial lymphocytes are rarely existent in the endometrium and edema are not formed.While in Cisplatin group, in the uterine epithelia there were many DNA fragmentations; in Acetyl L-Carnitin+Cisplatin pre-treated group this number was less. This is interpreted as pre-treatment practice has prevented DNA fragmentation.Immunohistochemical results of Caspase 8 and 9, that were applied in order to spot which apoptotic pathway has been stimulated as a result of Cisplatin use, showed that apoptosis has been stimulated with both pathways as extrinsic and intrinsic. But it is determined that the proapoptotic cell numbers that go into apoptosis with extrinsic pathway stimulated with Caspase 8 are higher than the cell numbers stimulated by intrinsic pathway.In the conclusion of the study, the toxic effect of Cisplatin upon uterus, which is proven by histomorphological and apoptotic findings, is found to be prevented with the prophylactic use of Acetyl L-Carnitin.