Rho kinaz ve siklooksijenaz inhibitörleri ile siklofosfamid kombinasyonlarının çeşitli tümör hücre serilerine etkileri
The effects of rho kinase and cyclooxygenase inhibitors and their combinations with cyclophosphamide in various tumor cell lines
Yazar: EBRU DERİCİ
Danışman: DOÇ.DR. NURCAN ARAS ATEŞ
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide

Özet:
Apoptoz programlanmıs hücre ölüm mekanizmasıdır. Yapım ve yıkım yaniapoptoz arasında kontrollü bir denge vardır. ste bu dengenin apoptozun lehine veyaaleyhine bozulması birçok önemli hastalıgın patogenezine katkıda bulunur. Apoptozunyavasladıgı durumlarda otoimmün hastalıklar ve kanser ortaya çıkmaktadır. Kanser,hücrelerin proliferasyon ve diferansiyasyon mekanizmalarındaki bozulma ile ortayaçıkmaktadır. Farklı birçok kanser çesidinde siklofosfamid yaygın olarak kullanılan biralkilleyici ajandır.Rho GTPaz'lar hücre büyümesi, gelismesi, apoptoz, tümörigenezis ve metastazgibi çesitli hücresel fonksiyonlarda görevli olan proteinlerin bir ailesidir.Siklooksijenazlar (COX), arasidonik asitten prostaglandinlerin ve diger bazıeikozanoidlerin olusmasını katalize ederler. Rho GTPaz'lar, NF?kB bagımlı mekanizmaile epitel hücrelerde COX?2 ekspresyonunu indükler. COX?2 inhibitörleri, hem in vivohem de in vitro olarak bir antianjiogenik ajan olarak kullanılmakta ve apoptozuindüklemektedir.Bu çalısmada insan nöroblastoma SK?N?MC ve insan kronik miyeloid lösemiK?562 hücre hatlarında Rho kinaz inhibitörü olan Y?27632, spesifik COX?2 inhibitörüolan niflumik asit ve siklofosfamid maddelerinin, apoptoza ve dolayısıyla tümörregresyonuna etkileri arastırılmıstır. Olusturulan deney gruplarında, apoptotik genlerolan kaspaz?3 ve kaspaz?8 için gen ve protein ekspresyonu düzeylerindekidegisiklikler, ayrıca akım sitometrik analizler ile canlılık ve apoptoz oranlarıincelenmistir.K?562 hücre hattında kaspaz?3 geni için negatif kontrole göre N7, C7, C6, Y5,N8Y5 ve C7Y5 gruplarındaki ekspresyon düzeylerinde istatistiksel olarak anlamlı birfarklılık saptanmıstır. 48. saatte negatif kontrole göre sadece erken apoptotik hücregrubunda N8, N7, C6, Y5, N8Y5, N7Y5, C7Y5 ve C6Y5 gruplarında istatistiksel olarakanlamlı bir farklılık saptanmıstır.Sonuç olarak bu çalısmada elde edilen bulgular, Rho kinaz ve COX inhibitörüile siklofosfamid kombinasyonlarının, apoptozu kısmen de olsa indükleyebilecegine vetümör regresyonuna katkıda bulunabilecegine isaret etmektedir.Anahtar Sözcükler: Kanser hücre serileri, apoptoz, Y?27632, niflumik asit,siklofosfamid

Abstract:
Apoptosis is a process of programmed cell death mechanism. Anabolism andcatabolism or apoptosis is balanced. Loss its equilibrium opposed or favor to apoptosisto give help pathogenesis of many disease. Autoimmune disease and cancer appear toregression of apoptosis. Cancer exists of damaged cell proliferation and differentiationmechanism. Cyclophosphamide is an alkylating agent widely used in many cancertypes.Rho GTPases are a multimember family of proteins involved in diverse cellularfunctions that relate to cell growth, development, apoptosis, tumorigenesis, andmetastasis. Cyclooxygenase (COX) catalyses the conversion of arachidonic acid toprostaglandins and certain eicosanoids. Rho GTPases induce cyclooxygenase?2 (COX?2) expression in epithelial cells by a NF?kB?dependent mechanism. COX inhibitors useantiangiogenic agent and induce apoptosis in vivo and in vitro.In this study we investigated the effects of Rho kinase inhibitor Y?27632,specific COX?2 inhibitor niflumic acid and cyclophosphamide on apoptosis and tumorregression in human neuroblastoma SK?N?MC and human chronic myeloid leukemiaK?562 cell lines. In experiment groups analyzed gene and protein expression level ofcaspase?3 and caspase?8 and cell viability and apoptosis by flow cytometrically.We observed the significantly increase in caspase?3 gene expression levelcompared negative control in N7, C7, C6, Y5, N8Y5 and C7Y5 groups and caspase?8gene expression levels increase all experiment group compare negative groups in K?562cell lines. Besides we demonstrated the significantly increase in caspase?3 geneexpression level compared negative control in N8, N8Y5 and N7Y5 groups andcaspase?8 gene expression levels increase in N8 group compare negative groups in SK?N?MC cell lines.We did not find any difference each cell lines between negative controls, N8Y5and N7Y5 groups in expression levels in caspase?3 and caspase?8 proteins (p>0.05).Other all groups could not evaluate because of the absence of the western blottingresult. We demonstrated that significantly increase in N8Y5 and N7Y5 groups to viablecell portion; in N8Y5 group to primer apoptotic portion; in N8, N8Y5 and C6Y5 groupsto secondary apoptotic portion; in N7 group to necrotic portion by flow cytometricanalyses.In conclusion our observation indicates that rho kinase and COX inhibitors andcyclophosphamide combination induce apoptosis partly and conduce to tumorregression.Key Words: Cancer cell lines, apoptosis, Y?27632, niflumic acid,cyclophosphamide