Chlamydia trachomatis enfeksiyonu tanısında kullanılan hücre kültürü, DFA, ve MultiplexPCR tabanlı Reverse Line Blot Assay (mPCR/RLB) yöntemlerinin karşılaştırılması
The evaluation of Cell Culture, DFA and multiplexPCR based Reverse Line Blot Assay methods for identification of Chlamydia trachomatis infection
Yazar: İLKAY ÖZTOKLU
Danışman: PROF. DR. CUMHUR ÖZKUYUMCU
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Hücre kültürü = Cell culture ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Chlamydia trachomatis cinsel yolla geçen hastalıkların en önemli etkenlerinden biridir. Kadınlarda servisit, üretrit ve PID gibi enfeksiyonlara neden olurken erkeklerde üretrit, epididimit ve prostatit klinik tablosu oluşturmaktadır. Olguların bir çoğunun asemptomatik seyretmesi kronikleşmeye yol açmakta ve ciddi komplikasyonlar ortaya çıkarmaktadır. Chlamydia trachomatis enfeksiyonlarının tanımlanmasında hücre kültürü, EIA ile antijen saptanması, DFA, NAAT başlıca kullanılan testler arasındadır. Literatürde kültür, DFA, NAAT'nin hepsini içine alan geniş bir çalışma yoktur. Bu testleri içine alan çalışmalarda NAAT tüm örneklere uygulanmasına karşılık, hücre kültürü ve DFA testleri bir kısım örneğe uygulanmakta ve hücre kültürlerinde üremenin gösterilme yöntemi olarak, FA yöntemi yerine, daha az spesifik bir yöntem olan iyot ile boyamanın seçilmesi gibi uygulama hatalarını içermektedirler. Bu çalışmanın amacı DFA, hücre kültürü, mPCR/RLB yöntemlerinin tüm örneklere uygulanması ile Chlamydia trachomatis tanısının kolaylıkla konabileceği bir algoritma oluşturulması ve bu çalışma sonrası elde edilecek suşlar ile ileride yapılabilecek çalışmalar için kaynak oluşturulmasıdır. Yaşları 18-44 arası toplam 200 hastadan alınan endoservikal örneklerin tümüne DFA, hücre kültürü, mPCR/RLB yöntemleri uygulanarak Chlamydia trachomatis araştırılmış, iki hastada mPCR/RLB ve in-house PCR testleri ile Chlamydia trachomatis pozitifliği tespit edilmiştir. Bu hastalardan birisi hücre kültürü ile de pozitif olarak saptanmıştır. Daha fazla sayıda hastada ve farklı hasta gruplarında yapılacak çalışmaların Chlamydia trachomatis tanısında izlenecek yolun belirlenmesine katkıda bulunacağı düşünülmektedir.

Abstract:
Chlamydia trachomatis is one of the major causes of sexually transmitted diseases. It is one of the causative agent of cervicitis, urethritis and pelvic inflamatory disease in woman and urethritis, epididimitis and prostatitis in man. Most of the cases are asymptomatic which cause chronic diseases and severe complications. In order to diagnose Chlamydia trachomatis infections, cell culture system, enzyme immunoassay, direct fluorescent antibody test and nucleic acid amplification tests can be performed. Up to now there is no study which cover the culture system, direct fluorescent antibody test and nucleic acid amplification test together for the diagnosis of Chlamydia trachomatis. The studies which include these tests, nucleic acid amplification test was performed to all samples but cell culture system and or direct fluorescent antibody test were performed some of the samples. These tests include aplication mistakes as use of iodine method which is less spesific than fluorescent antibody test, of visualisation in cell culture system. The purpose of this study was performing cell culture system, direct fluorescent antibody test and one of the nucleic acid amplification test to all samples, to produce an algorithm which can easily identify Chlamydia trachomatis. And as another important point, the strains which were obtained in this study will be the new source for the researches in future. In this study, cell culture system, direct fluorescent antibody test and mPCR / RLB methods were performed to all endocervical samples which were taken from the 200 patients who are ages between 18-44. Chlamydia trachomatis detected in two patients with the methods of mPCR / RLB and in house PCR. One of these patients also determined with the cell culture system. It is suggested that the researches will be in the future with the more and different patient groups would contribute to produce an algorithm which can easily identify the diagnosis of Chlamydia trachomatis.