Asma ve yonca yapraklarının in vitro antioksidan özellikleri
İn vitro antioxidant properties of vine and clover leaves
Yazar: SEZER GÜLEN
Danışman: PROF. DR. YEŞİM YEŞİLOĞLU
Trakya Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu yüksek lisans tezinde; çeşitli in vitro sistemlerle yonca (Medicago sativa L.) ve asma (Vitis vinifera L.) yapraklarının su, aseton ve metanol ekstraktlarının antioksidan özellikleri incelenmiştir. Bunun için toplam fenolik bileşik miktarı, toplam flavonoid içeriği, indirgeme kapasitesi, prolin tayini, süperoksit radikali giderme aktivitesi, DPPH? serbest radikali giderme aktivitesi, klorofil içeriği, H2O2 giderme aktivitesi, FTC ve fosfomolibden metodu ile toplam antioksidan aktivitesi, karotenoid miktarı, Fe+2 iyonlarını şelatlama aktivitesi, ABTS?+ radikali giderme aktivitesi tayin edildi. Elde edilen sonuçlar ?-tokoferol, askorbik asit, kateşin, pirogallol, trolox, gallik asit, BHT ve BHA gibi standart maddelerle kıyaslanarak değerlendirilmiştir.			                   Su, aseton ve metanol çözücüleriyle gerçekleştirilen ekstraksiyonlar sonucunda, çalışılan her iki kurutulmuş bitkiden ekstrakte edilebilen madde miktarları 20-227.2 mg/g bulundu. En yüksek ekstraksiyon verimi su ve metanol ekstraktlarında gözlendi.		        Toplam fenolik madde tayini sonucunda, ekstraktların toplam fenolik madde miktarlarının gallik asit eşdeğeri olarak 16.67±1.53?70.67±1.15 mg/g aralığında; pirogallol eşdeğeri olarak 13.67±1.53?67.67±1.15 mg/g aralığında değiştiği belirlendi. En yüksek miktarlar asma yaprağı ekstraktlarında tayin edildi.			                              Toplam flavonoid madde miktarı ise kateşin eşdeğeri olarak 26.02±0.22?72.90±0.40 mg/g aralığında; gallik asit eşdeğeri olarak 342.33±2.89?951.67±5.13 mg/g aralığında bulunmuştur. En yüksek miktarlar asma yaprağı ekstraktlarında tayin edildi.		H2O2 giderme aktivitesi denemesinde, en yüksek H2O2 giderme oranı yonca su ekstraktında belirlendi.								            İndirgeme kapasitesi tayininde; her bir bitki ekstraktının aktivitesi standartlarla kıyaslandığında standartlardan daha düşük aktiviteye sahip olduğu gözlendi. İndirgeme kapasitesi yetenekleri asma>yonca şeklinde sıralama gösterdi.				Metal şelatlama aktivitesi tayininde; Fe2+ çözeltisi kullanıldı ve sonuçlar EDTA çözeltisi ile kıyaslandı. Yonca metanol ekstraktı asma metanol ekstraktından daha yüksek metal şelatlama aktivitesi gösterdi. Ayrıca metanol ekstraktlarının diğer tüm ekstraktlara göre daha yüksek metal şelatlama aktivitesine sahip oldukları tespit edildi. 	       Serbest radikal giderme aktivitesinden elde edilen verilere göre; yonca su ve asma metanol ekstraktlarının standartlarla karşılaştırılabilir düzeyde DPPH?+ giderme aktivitesi gösterdikleri belirlendi. 								Süperoksit radikali giderme aktivitesinde; PMS/NADH/O2 sisteminde O2?¯ radikali oluşturuldu ve ekstraktların bu radikali giderebilme kapasiteleri incelendi. Yonca aseton ve asma aseton ekstraktlarının diğer ekstraktlara göre daha yüksek süperoksit anyon radikali giderme aktivitesi gösterdi. 				                                ABTS?+ radikali giderme aktivitesi tayininden elde edilen sonuçlara göre; asma ekstraktları, yonca ekstraktlarından daha yüksek oranda radikal giderme aktivitesi gösterdi.												Fosfomolibden metoduyla toplam antioksidan aktivitesi denemesinde; ekstraktların 25-125 ?g/mL konsantrasyonlarında aktiviteleri tayin edildi. Yonca ve asma ekstraktlarının hemen hemen bütün konsantrasyonlarından elde edilen antioksidan aktivite sonuçlarının birbirlerine çok yakın değerde oldukları görüldü.			              Prolin içeriği tayininde; yonca su ekstraktının, asma su ekstraktından daha fazla miktarda prolin içerdiği tespit edildi. Karotenoid tayininde; yonca ve asma yapraklarının toplam karotenoid içeriğini belirleyebilmek için kuru örneklerin 405.2 mg?ı ile çalışıldı. Yonca bitkisinin asmaya göre daha fazla karotenoid miktarına sahip olduğu bulundu.		Klorofil içeriğinin belirlenmesi analizinde; her iki bitkinin klorofil miktarları arasında büyük bir fark olmadığı gözlendi. Bitki ekstraktlarının toplam antioksidan aktivitesi; linoleik asit emülsiyonunda değerlendirildi. Elde edilen sonuçlara göre; yonca ve asma ekstraktlarının toplam antioksidan aktivitelerinin su>aseton>metanol ekstraktı sırasında azaldığı tespit edildi.	
Yıl			: 2013
Sayfa Sayısı		:127
Anahtar Kelimeler	:Antioksidan, radikal, yonca, aktivite, asma, karotenoid, giderme

Abstract:
In this master thesis; the antioxidant properties of water, acetone and methanol extracts of clover (Medicago sativa L.) and vine (Vitis vinifera L.) leaves was investigated by using various established in vitro systems. For this, total phenolic compound, total flavonoid content, reducing power, proline content, superoxide anion scavenging activity, DPPH? free radical scavenging activity, chlorophyll content, H2O2 radical scavenging activity, total antioxidant activity by using FTC and phosphomolybdenum method, carotenoid content, Fe+2 ions chelating activity, ABTS?+ radical scavenging activity. The obtained results were compared by using ?-tocopherol, ascorbic acid, catechin, pyrogallol, trolox, gallic acid, BHT and BHA as standard.
The result of the extractions with water, acetone and methanol solvent; the extractable compound of all studied dried plants were found in the range of 20-227.2 mg/g. The best extraction yield was observed in water and methanol extracts. 
In the total phenolic compound assay, total phenolic compound amounts of extracts were determined to be 16.67±1.53?70.67±1.15 mg/g as gallic acid equivalent; 13.67±1.53?67.67±1.15 mg/g as pyrogallol equivalent. The highest amounts were found in vine leaf extracts. 
Total flavonoid content found between 26.02±0.22?72.90±0.40 mg/g as catechin equivalent and 342.33±2.89?951.67±5.13 mg/g as gallic acid equivalent. The highest amounts were found in vine leaf extracts.
In the H2O2 scavenging activity assay, the high H2O2 scavenging effects were observed the water extract of clover. 
When the reductive capabilities of each one plant samples were compared to reference compounds, it was observed they haven?t high activities. The reducing capacity of all extracts followed the order: vine leaf>clover. 				       Metal chelating effect of samples were carried out by using Fe2+ solution, and the results were compared with EDTA. Methanol extract of clover showed the higher chelating activity Fe2+ ions than the methanol extract of vine leaf. In addition, methanol extracts were found to be having higher metal chelating activity than all extracts. 
According to obtained results from the assay of free radical scavenging activity; the water extract of clover and methanol extract of vine leaf showed DPPH?+ scavenging activity, which is comparable with standard compounds. 
For measurement of superoxide anion scavenging activity; O2?¯ radical was generated by PMS/NADH/O2 system, and the abilities of all extracts to scavenge O2?¯ activity were determined. The acetone extracts of clover and vine leaf showed the higher superoxide anion scavenging activity than the other extracts. 		                            According to the results of the determination of ABTS?+ radical scavenging activity; vine leaf extracts showed the higher radical scavenging activity than the clover extracts.  
Total antioxidant capacity by phosphomolybdenum method assay; the activities of extracts determined at concentrations of 25-125 ?g/mL. The results of the antioxidant activity of clover and vine extracts obtained from almost all concentrations were very close to eachother in value. 
The determination of proline content; it is found that water extract of clover contains more a greater amount of proline than water extract of vine leaf.               The determination of carotenoid; To determine the total carotenoid content of clover and vine plants, with 405.2 mg of dried samples were studied. It is found that clover plant has more the amount of carotenoid than vine leaf. 
The analysis of determination of chlorophyll content; it is observed that there wasn?t a big difference between the amounts of chlorophyll in both the plant. Total antioxidant activities of plant extracts; were assayed by using linoleic acid emulsion. According to obtained results; total antioxidant activity of extracts of clover and vine leaf were in descending order of water extract>acetone extract>methanol extract. 
Year			: 2013
Number ok Pages	        : 127
Keywords		: Antioxidant, radical, clover, activity, vine, carotenoid, scavenging