Salmonella enterica serotip Typhimurium'da stj fimbriyal operonunun regülasyonunun ve patojenitede oynadığı rolün tanımlanması
Identification of the regulation and the role in the pathogenesis of the stj fimbrial operon in Salmonella enterica serotype Typhimurium
Yazar: BANU ÖZDEN
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA AKÇELİK
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics
Dizin: Patojenite = Pathogenicity ; Regülator = Regulator ; Salmonella typhimurium = Salmonella typhimurium

Özet:
Stj fimbriyasının patojenitede oynadığı rolün tanımlanması amacıyla, stj operonu kanamisin gen kaseti ile bozulmuş mutant suş ve doğal S. Typhimurium AJB715 suşu arasında yarışma denemeleri yapılmıştır. İlk olarak stj fimbriyal operonunun 5 geninden biri olan stjA geninin kanamisin gen kaseti ile bozulması sonucu MA44 mutant suşu oluşturulmuştur. Ardından 6-8 haftalık dişi fareler oral yoldan MA44 mutant ve doğal tip AJB715 suşu ile enfekte edilmiştir. Fekal ve organ örneklerinde bakteri sayımları yapılmış ve istatistiki olarak MA44 mutant suşun doğal tip AJB715 suşuna kıyasla önemli (p < 0.05) ölçüde azaldığı tespit edilmiştir. stj operonunun regülatörünün tanımlanması amacıyla, stjE::lacZYA füzyonunu içeren S. Typhimurium MA2 suşuna transpozon mutasyonu gerçekleştirilmiştir. Seçilen transdüktantlar arasında Mudj mutantlarının T-POP mutantlarından daha yüksek ß-galaktozidaz aktivitesine sahip olduğu belirlenmiştir. Sonrasında invörs PCR yöntemi ile 6 transdüktantta transpozon insersiyon bölgeleri çoğaltılmıştır. PCR ürünlerinin dizi analizine tabi tutulması ile mudj transpozonunun histidin operonunun ilk iki geni olan hisD ve hisG arasına girdiği tespit edilmiştir. Elde edilen tüm veriler ışığında stj fimbriyal operonunun ppGpp global regülatörünün de dahil olduğu ikili regülasyon sistemi ile düzenlendiği kanısına varılmıştır.

Abstract:
In order to describe the role of stj fimbria in the patogenesis, the competition tests were done between wild type S. Typhimurim AJB715 and mutant strain MA44 which were degenerated with kanamycin gene casette. Initially, MA44 mutant strain was generated in consequence of disturbing the one of the genes in stj operon, stjA, with the kanamycin gene casette. Next, 6-8 week female mice enfected orally with MA44 mutant strain and wild type strain AJB715. Bacteria numbers from faeces and organ samples were counted and it was observed that there was a statistically significant (p < 0.05) reduction in the number of the MA44 mutant strain in comparison with the wild type strain AJB715. In order to describe the regulator of the stj operon, transposon mutations were carried out to S. Typhimurium MA2 including stjE::lacZYA fusion. Among the selected transductants, it was determined that mudj mutants have a higher ß-galactosidase activity than T-POP mutants. Afterwards in 6 transductants, transposon insertion regions were amplified by the method of inverse PCR. By subjected PCR products to sequence analysis it was determined that mudj transposon was inserted between primal two genes in the histidine operon, hisD and hisG genes. On the basis of the all data obtained, it was estimated that stj fimbrial operon was regulated by a two-component regulatory system included the global regulator ppGpp.