Hepatit B virüsü "e" antijeni gen bölgesinin mayada ekspresyonu
Expression of Hepatitis B virus "e" antigen gene region in yeast
Yazar: BERKSAN ŞİMŞEK
Danışman: DOÇ. DR. KENAN ŞENER
GATA / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Gen klonlama = Gene cloning ; Genetik vektörler = Genetic vectors ; Hepatit B antijenleri = Hepatitis B antigens ; Hepatit B virüsü = Hepatitis B virus ; Hepatit B-e antijenleri = Hepatitis B-e antigens ; Klonlama = Cloning

Özet:
Bu çalışmada, hepatit B virüsü (HBV) enfeksiyonlarının tanı ve izleminde önemli serolojik belirleyicilerden biri olan hepatit B ?e? antijeni (HBeAg)'ne ait gen bölgesinin rekombinant DNA teknolojisi ile ökaryotik maya hücrelerine aktarılması ve bu hücrelerde ekspresyonu amaçlandı. Çalışmada HBV DNA'sı pozitif hasta serumları kullanıldı ve HBeAg'yi kodlayan genin primerleri dizayn edilerek HBeAg gen bölgesi polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile çoğaltıldı. Daha sonra saflaştırılan amplikonlar ekspresyon vektörüne (pYES2.1 plazmidi) klonlandı ve vektör CaCl2 yöntemiyle kompetan bakteriye (TOP 10F' Escherichia coli) transforme edildi. HBeAg gen bölgesi içeren ekspresyon vektörü kompetan bakteri yardımıyla çoğaltıldıktan sonra Saccharomyces cerevisiae'ya transforme edildi. Son aşamada, HBeAg'nin maya tarafından eksprese edilip edilmediği mikropartiküllü kemiluminesens immünoassay yöntemiyle kontrol edildi. Bu çalışmada elde edilen maya hücreleri sonraki çalışmalarda HBeAg proteininin saf olarak izole edilmesinde kullanılabilir. Ülkemizde HBV enfeksiyonunun serolojik tanısında kullanılan kitlerin büyük çoğunluğunun ithal ürünler olduğu ve bu durumun ülke ekonomisine getirdiği yük dikkate alındığında, bu ve benzeri çalışmalarla elde edilen deneyim ve bilgi birikiminin, kendi öz kaynaklarımızla elde edilecek ürünlere dönüşmesine önemli katkılar sağlayacağı düşünülmektedir.

Abstract:
In this study it was aimed to transform the hepatitis B ?e? antigen (HBeAg) gene region, one of the most important serological markers in the diagnosis and follow-up of hepatitis B virus (HBV) infections, into eukaryotic yeast cells by recombinant DNA technology and observe the expression within the cells. For this purpose, HBV DNA positive patient sera were used and by designing the primers of the gene coding HBeAg, HBeAg gene region was amplified by polymerase chain reaction (PCR). After the amplicons were purified and cloned to expression vector (pYES2.1 plasmid) and the vector was transformed to competent bacteria (TOP 10F? Escherichia coli) by CaCl2 method. Expression vector including HBeAg gene region was grown with the support of competent bacteria and then transformed to Saccharomyces cerevisiae. Finally, whether HBeAg was expressed by the yeast was checked through a microparticule chemiluminescence system. Yeast cells obtained from this study may be used to isolate purified HBeAg protein in latter studies. The diagnostic kits used in our country for HBV serology are usually imported products, which have been creating a great economical burden, should this reality be taken into consideration, it is concluded that the experience and knowledge gained with such studies will help to produce our own diagnostic products using our own resources.