Psoriasisli hastalarda serum mikrorna analizi
Analysis of serum microrna in patient with psoriasis
Yazar: LALE ATEŞ
Danışman: PROF. DR. SERAP ÖZTÜRKCAN
Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Dermatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Dermatoloji = Dermatology
Dizin: Biyobelirteçler = Biomarkers ; Deri = Skin ; Deri hastalıkları = Skin diseases ; Mikro RNA = Micro RNA ; Mikro RNA = Micro RNA ; Psoriyazis = Psoriasis ; Psoriyazis = Psoriasis ; RNA = RNA

Özet:
Giriş: Psoriasis epidermal hiperproliferasyon, anormal keratinosit diferansiasyonu, anjiogenez , epidermis ve dermiste T hücre prolifersyonu ile karakterize, deri ve eklemleri tutan, kronik inflamatuvar bir deri hastalığıdır. Hastalığın patogenezinde genetik faktörler ile çevresel ve immünolojik faktörlerin rol oynadığı düşünülse de etyopatogenez tam olarak aydınlatılamamıştır. İmmunolojik olarak TNF-a ve IL gibi pek çok sitokin psoriatik lezyonların oluşmasına neden olmaktadır. Bu sitokinlere karşı oluşturulmuş monoklonal antikorlar psoriasis tedavisinde kullanılmakta ve dramatik bir iyileşme sağlamaktadır. MiRNA'lar küçük, kodlanmayan RNA molekülleridir ve gen ekspresyonunu posttranskripsiyonel evrede etkilerler. Genellikle hücre içerisinde etki gösterseler de serum ve plazma gibi hücre dışı çevrede de etkileri olduğu gösterilmiştir. MiRNAların immun yanıtta, hücresel gelişme ve farklılaşmada, organogenez, kök hücre farklılaşması, hücresel büyüme kontrolü ve apoptoziste yer aldığı bilinmekle birlikte, pek çok yayında miRNAların kanserler, immunolojik ve metabolik hastalıkların patogenezinde önemli bir role sahip olduğu gösterilmiştir. İnsanlarda yüzlerce miRNA tanımlanmasına rağmen henüz tam olarak tüm fonksiyonları anlaşılamamıştır. Psoriatik lezyonlarda çok sayıda gen ekspresyon değişiklikleri tanımlanmıştır ve özellikle son çalışmalarda miRNA'ların psoriasiste inflamatuvar proteinlerin ekspresyonunu kontrol ettiği, keratinosit farklılaşmasını ve T hücre fonksiyonunu etkilediği düşünülmektedir. MiRNA'ların aynı zamanda hastalığın şiddetini gösteren ve tedavinin erken döneminde anlamlı biyobelirteçler olarak da kullanılabileceği bildirilmiştir. MiRNA'ların ekspresyonlarındaki değişimin psoriasis patogenezinde pek çok basamağı etkilediği bilinmektedir. Örneğin miR-21, 203 ve 125 epidermal farklılaşmayı, miR-21 ve 378 ise anjiogenezi etkileyerek hastalığın oluşmasına katkıda bulunmaktadır. Önceki çalışmalarda psoriasis spesifik miRNA ekspresyonları doku örneklerinde gösterilmiş olsa da serum ekspresyonlarını gösteren çok az sayıda çalışma mevcuttur.
Amaç: Bu çalışmanın gerekçesi; psoriasisli hastalarda ve sağlıklı kontrollerde serum miRNA ekspresyonlarını analiz ederek hastalık ile miRNA seviyeleri arasındaki ilişkiyi saptamak ve psoriasiste miRNA'ların potansiyel kan biyobelirteci olarak kullanılmasının yolunu açmak için gerekli verileri elde etmektir.
Yöntem: Çalışma kontrollü olarak planlanmış olup başka bir inflamatuvar dermatolojik veya sistemik hastalığı olanlar çalışmaya dahil edilmedi. Çalişma Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Dermatoloji polikliniğine başvuran ve psoriasis tanısı konulan, rutin tanı ve tedavi seçeneklerinin belirlenmesi amacıyla kan tetkikleri yapılan hasta grubu ile 2016 yılından itibaren 1 yıl süre ile yürütüldü. Çalışmaya 35±5 hasta alındı. Rutin tanı ve tedavi işlemleri sırasında psoriasise eşlik edebilecek hiperlipidemi, karaciğer fonksiyon bozuklukları gibi komorbiditeleri saptamak amacı ile  rutin olarak kan örneği alınan (hemogram, sedimentasyon, C-reaktif protein, serum lipid seviyeleri, serum üre, kreatinin, AST, ALT, GGT düzeyleri) hastalarda ek olarak bir adet EDTA'lı tüpe alınan  kanda genetik laboratuvarında mikroRNA ekspresyon analizi yapıldı. Celal Bayar Üniversitesi Dermatoloji polikliniğine başvuran psoriasisli hastalara ait klinik bilgiler ve laboratuar çalışmaları sonrası elde edilen bilgiler olgu rapor formlarına her hasta için ayrı ayrı kaydedildi.  Çalışmaya katılan bütün bireylerin yazılı onayları alındı ve onayları alınan 35 hasta ve 35 kontrolün venöz kanları K2EDTA'lı tüplere toplanıp Tibbi Genetik laboratuvarına iletildi. Araştırmanın bağımlı değişkeni; psoriasis; bağımsız değişkenleri sunumu artan ve azalan genler oldu. Hasta izlem ve örnekleme CBÜ Deri ve Zührevi Hastalıkları kliniğinde, genetik analizler CBÜ Tıbbi Genetik laboratuvarında yapıldı. miR-19a, miR-19b, miR29a, miR-29b, miR-4729, miR-23a, miR-23b, miR-23c, miR-211, miR-204, miR-2277, miR-520, mir-524 ve miR 4795 ekspresyon analizi RT-PCR ile yapıldı.
Bulgular: Çalışmamızda, psoriatik hastalarda kontrol grubuna göre serum miR- 19a, miR-19b, miR-23a ve miR-29a eksresyonları anlamlı bir şekilde azalmıştır. Diğer miRNAların seviyelerinde anlamlı bir değişiklik sağtanmamıştır. miRNA ekspresyonlarındaki azalma ile PAŞİ arasında ise korelasyon görülmemiştir.
Sonuç: Çalışmamızda, miR-19a, miR-19b, miR-23a ve miR-29a'nın psoriasis patogenezinde önemli bir yere sahip olabileceği ve  bu miRNAların düzenlenmesi ile yeni tedavi seçeneklerinin oluşabileceği düşünülmüştür.

Abstract:
Introduction: Psoriasis is a chronic inflammatory disease of skin characterized by epidermal hyperproliferation, abnormal keratinocyte differantiation, angiogenesis and T cell proliferation in epidermis and dermis. It is not only a disease affecting skin but it can affect nails and joint as well. The pathogenesis of psoriasis involves genetic, environmental and immunological factors, but it is not fully understood . MiRNAs are an abundant class of highly conserved small nc-RNA molecules that modulate gene expression post-transcriptionally. MiRNAs act primarily within the cell, however; recent evidence has shown the presence of miRNAs in cell-free environment, including serum and plasma. Alterations in the expression of over 1000 genes have been described in psoriatic lesions. Moreover, recent studies have described a key role for small RNAs known as miRNAs in controlling the gene expression of inflammatory proteins in skin affected by psoriasis. MiRNAs have also been implicated in keratinocyte differentiation and T-cell function in psoriasis. Several attempts have been made to identify soluble biomarkers for psoriasis, however; there are still no specific biomarkers that can accurately predict disease progression and therapeutic response. Differentially expressed miRNAs likely influence many processes that are involved in psoriasis pathogenesis, such as epidermal differentiation (miR-125b, miR-21, miR- 203), angiogenesis (miR-21, miR-31, miR-378). Early studies on psoriasis specific miRNA expression were primarily confined to skin tissue samples. A few studies have investigated the miRNA expression in sera from patient with psoriasis.
Aim: We aimed to analyze serum miRNA expression in patient with psoriasis and healthy controls, to determine the relationship between miRNA and disease and also, to explore miRNAs potential as blood biomarkers for psoriasis. 
Method: Study was planned to be a controlled one; other inflammatory skin conditions and systemic diseases were excluded. Study carried out in patients with chronic plaque psoriasis which were followed by Celal Bayar University, Dermatology Department during 1 years beginning from 2016. 35  patients  included in this study. Routine blood tests were done to check for signs of inflammation and psoriasis comorbidities in addition to one EDTA tube which was sent the genetic laboratory to analyze of mikroRNA expression. Written informed consent was obtained from all subjects. The clinical and laboratory findings of patients with chronic plaque psoriasis was recorded one by one for each patient. The dependent variable of the study was chronic plaque psoriasis and independent variables was increasing and decreasing genes. Blood samples was collected into sterile, anticoagulant (EDTA) coated tubes and miRNA gene expression was studied by flow genetic laboratory. miR-19a, miR-19b, miR29a, miR-29b, miR-4729, miR-23a, miR-23b, miR-23c, miR-211, miR-204, miR-2277, miR-520, mir-524 and miR 4795 expression was analyzed by using RT-qPCR.
Result: In this study, miR- 19a, miR-19b, miR-23a and miR-29a expression was found significantly down-regulated in psoriatic patient comparing to healthy control. The expressions of other miRNAs were not altered. There was no correlation between miRNA ekspression level and PASI score.
Conclusion: Our result suggest that miR-19a, miR-19b, miR-23a and miR-29a may have an important role in pathogenesis of psoriasis vulgaris and also our data indicate that regulation of these miRNAs may be a potential therapeutic option in psoriasis.