Periferik kan mononükleer hücre kaynaklı dendritik hücre üretiminin optimizasyonu: IL-15 sitokininin maturasyon sürecine etkisinin araştırılması
Production optimization of peripheral blood mononuclear cell-derived dendritic cells: Investigation of the effect of IL-15 on maturation process
Yazar: FATMA EYÜBOĞLU ÜNÜVAR
Danışman: PROF. DR. ERDAL KARAÖZ
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı / Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Dendritik hücreler = Dendritic cells ; Dinoproston = Dinoproston ; Kök hücreler = Stem cells ; Sitokinler = Cytokines ; İnterferonlar = Interferons ; İnterlökin 15 = Interleukin 15 ; İnterlökin 4 = Interleukin 4

Özet:
Dendritik Hücreler (DH) immün sistemin bilinen en güçlü antijen sunan hücreleridir. DH'ler bu özelliklerinden dolayı kanser aşısı uygulamalarında kullanılmaktadır. Fakat temel sorun üretim ve maturasyon için ideal olan standart bir sitokin kokteylinin belirlenmemiş olmasıdır. Bu nedenle daha etkin DH üretimi için arayışlar devam etmektedir.
Yöntem-Gereçler: Çalışmamızda Aferez ile toplanmış periferik mononükleer hücreler iki farklı sitokin grubu ile desteklenmiş serum free "Cell Gro DC" mediumda 5 gün boyunca 37oC'de CO2 inkübatörde inkübe edilerek immatür DH'ler elde edilmiştir. Ardından 48 saatlik, farklı gruplar halinde sitokin desteği ile 7. günde matur DH'ler geliştirilmiştir. Maturasyon sonrası elde edilen hücrelerin akım sitometrik analizleri, lenfosit proliferasyon yetenekleri ( MTT Bazlı ) ve adezyon yetenekleri ölçülmüştür.
Bu çalışmada İmmatür DH (iDH) üretimi için ideal olduğu bilinen IL-4 ve GM-CSF sitokin kokteyli IL-15 ve GM-CSF ile karşılaştırılırken maturasyon için standart olarak kabul edilen IL-1 beta, IL-6, TNFalfa, PGE2'den oluşan sitokin kokteyli ise IL-1 beta, IFN alfa, TNF alfa ve IL-1 beta, TNF alfa, IFN alfa, IFN gama kokteylleri ile karşılaştırılmıştır.
Sonuç: Çalışmamızın sonucunda akım sitometrik olarak DH maturasyon markerları açısından anlamlı, büyük bir farklılık gözlenmemiştir. T hücre sitimulasyon yetenekleri açısından incelendiğinde kokteyllere IFN alfa ve IFN gama eklenmesinin IL-4 ve IL-15 'li grupların her ikisinde de daha etkin olduğu gözlenirken, IL-15 varlığında geliştirilen DH'lerin lenfosit proliferasyonu ve adezyon yetenekleri açısından çok daha etkin olduğu belirlenmiştir. Bu etkinin hücre morfolojisine de yansıdığı, gelişen hücrelerin monosit kökenli DH'lerden çok langerhans tipi dönüşüm gösterdiği gözlemlenmiştir.
Tartışma: Yapılan bu çalışmada elde edilen veriler IL-15 ve GM-CSF ile üretilen DH'lere IFN alfa ve IFN gama ilavesinin en uygun kokteyl olduğunu ortaya koymakta ve bu sonuçların hayvan çalışmaları ile desteklenmesi gerektiğini göstermektedir.

Abstract:
Dendritic cells(DCs) are the strongest antigen-presenting cells of the immune system.Because of this characteristic,DCs are used in cancer vaccine applications.But the basic problem is that a standard cytokine cocktail which is ideal for the production and maturation is not specified.Therefore, researches for more efficient production of DC have been continuing.
Materials-Method: Peripheral mononuclear cells that were collected by aphaeresis were incubated for 5 days at 37°C CO2 incubator in serum free "Cell Gro DC", which were supported by two different cytokine groups, to obtain immature DCs. After this process, incubation continued for 48 hours and mature DCs were developed on the seventh day with the support of different groups of cytokines. Flow cytometric analyses were made and lymphocyte proliferation(MTT-based) and adhesion capabilities of cells that are obtained after maturation were measured.
In this study "IL-4 and GM-CSF" cytokine coctail that is known as ideal for the production of immature DC was compared with "IL-15 and GM-CSF". "IL-1 beta,IL-6,TNF alpha,PGE2" cytokine coctail that is accepted as standart for the production of mature DCs was compared with "IL-1 beta,IFN alpha,TNF alpha" and "IL-1 beta,TNF alpha,IFN alpha,IFN gamma" cytokine coctails.
Results: As a result of our study, performing flow cytometric analysis, it was observed that there wasn't a significant difference in terms of maturation markers of DCs. In terms of T-cell stimulation capabilities, the use of IFN alpha and IFN gamma was observed to be more effective in both groups ("IL-4 and GM-CSF" and "IL-15 and GM-CSF"). It was shown that, the DCs developed in the presence of IL-15 were much more effective in terms of capabilities of lymphocyte proliferation and adhesion.This was also confirmed morphologically. It was also seen that developed cells transformed into Langerhans-type rather than monocyte derived DCs.
Discussion: The data from this study has shown that, IL-15 and GM-CSF that were supplemented with IFN alpha anda IFN gamma are the most appropriate cocktail for DC production and this result should be supported by animal studies.