Pankreas adacıklarında er stres
Er stress in pancreatic islets
Yazar: BURCU BABA
Danışman: DOÇ. DR. AYSUN HACIŞEVKİ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Endoplazmik retikulum (ER) lümeninde yanlış katlanmış proteinlerin biriktiği koşullarda, organel "ER Stres" denilen durumun içine girmektedir. ER stres, katlanmamış protein cevabı (UPR) sinyal yolaklarını tetiklemektedir. Kronik ER stresin; obezite ve leptin direnci ile ilişkili olduğu öne sürülmektedir. Çalışmamızda, obezitede ER stresin ve ER stresi azaltıcı etkiye sahip kimyasal şaperon PBA'nın rolünün ve bunların rezistin, kaspaz 3 düzeyleri ile leptin sinyal yolağı üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmamızda yirmi dört zayıf ve yirmi dört ob/ob fare kullanılmıştır. Hem zayıf hem de ob/ob fareler, PBA uygulaması yapılan ve yapılmayan olmak üzere iki gruba ayrılmıştır. Otuz gün PBA uygulaması yapılmıştır. Pankreas adacıkları izole edilmiş, sonra leptin ile 48 saat inkübe edilmiştir. Adacıklarda UPR sinyal yolaklarının göstergesi P-eIf2α ve eIf2α düzeyleri western-blot, CHOP ve XBP1s ekspresyonları ise RT-PCR yöntemiyle belirlenmiştir. In vitro leptin uygulamasıyla, leptin sinyal yolağı göstergesi P-Stat3 ve Stat3 düzeyleri western-blot, SOCS3 ekspresyonu ise RT-PCR yöntemiyle ölçülmüştür. Plazma insülin, rezistin ve kaspaz 3 düzeyleri ELISA yöntemiyle ölçülmüştür. Bulgularımız; ER stresin obezitede arttığını, kimyasal şaperon PBA'nın ER stresini, rezistin düzeylerini, apoptozu belirgin şekilde azalttığını, hiperglisemiyi normalize ettiğini, hiperinsülinemiyi azalttığını ve leptin sinyalinde artış eğilimine yol açtığını göstermektedir. Araştırmamızdan hareketle ER stresin, obezite ve leptin direnci arasında bağlantı olabileceği düşüncesindeyiz. Sonuç olarak, çalışmamız obezitenin ve obezitenin neden olduğu bozuklukların tedavisine yönelik yeni yöntemlerin ortaya çıkarılmasına katkı sağlayabilecektir.

Abstract:
Accumulation of unfolded/misfolded proteins in the endoplasmc reticulum (ER) lumen creates a condition defined as ER stress. ER stress triggers the unfolded protein response (UPR) signaling pathways. It is suggested that chronic ER stress is associated with obesity and leptin resistance. We aimed to investigate the role of ER stress and effect of chemical chaperone PBA that reduce ER stress in obesity and their effects on the resistin, caspase 3 levels and leptin signaling. This study comprised with twenty-four lean controls and twenty-four leptin-deficient (ob/ob) mice. Both lean and ob/ob mice were divided into two groups, with and without PBA administration. PBA was administered for 30 days. Islets were isolated, then incubated at leptin for 48 hours. In islets, P-eIf2α and eIf2α levels were measured by western-blotting, CHOP and XBP1s expressions were measured by RT-PCR that indicators of UPR signaling. After leptin treatment Stat3 and P-Stat3 levels, were measured by western-blotting and SOCS3 expressions were measured by RT-PCR that indicators of leptin signaling. Plasma insulin, resistin and caspase 3 levels were measured by ELISA. Our results demonstrated that ER stress was increased in obesity and PBA normalized hyperglycemia, decreased hyperinsulinemia, apoptosis and alleviated ER stress seen in obesity and leading to an increased tendency in leptin signaling. We thought to ER stress can be a link between obesity and leptin resistance according to our research. In conclusion, our study may contribute to the discovery of new methods for the treatment of disorders caused by obesity and obesity.