İsoproterenol-indüklenmiş miyokardiyal infarktüslü sıçanlarda timokinonun etkileri
Effects of thymokinone in rats  with  isoprotenol -induced  myocardial  infarction
Yazar: NECLA DEĞER
Danışman: DOÇ. DR. DERYA KARABULUT ; DR. ÖĞR. ÜYESİ RIFAT ÖZMEN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kalp hastalıkları = Heart diseases ; Miyokard enfarktüsü = Myocardial infarction ; Nekroz = Necrosis ; Sıçanlar = Rats ; Timokinon = Thymoquinone

Özet:
Miyokart İnfarktüsü (MI), dünya genelinde ciddi morbitide ve mortalite nedenleri arasında yer alan kompleks bir hastalıktır. Isoproterenol (ISO), dokuda serbest oksijen türleri oluşturarak oksidatif strese sebep olan deneysel MI oluşturulmasında kullanılan  bir patojendir. Timokinon (THQ), oksidatif stres üzerinde etkili çok yönlü bir  ajandır. Bu çalışmada, ISO ile indüklenmiş sıçanlarda oluşturulan MI'de THQ'nun koruyucu etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmada Wistar Albino cinsi 32 adet yetişkin erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar her grupta 8 hayvan olacak şekilde 4 gruba ayrıldı. Kontrol, THQ; 7 gün boyunca 24 saat aralıklarla 20 mg/kg 500 µl zeytin yağında çözdürülerek intragastrik (ig) olarak, ISO; deneyin 6. ve 7. gün  100 mg/kg olmak üzere 1 ml distile suda çözdürülerek subkutan (sb), THQ+ISO; THQ 7 gün boyunca 24 saat aralıklarla 20 mg/kg 500 µl zeytin yağında çözdürülerek ig, ISO  deneyin 6. ve 7. gün  100 mg/kg olmak üzere 1 ml distile suda çözdürülerek sb olarak verildi. ISO enjeksiyonundan 24 saat sonra denekler anestezik madde ile uyutularak kanları alındı. Kalp dokusu çıkarılarak yarısı formaldehite diğer yarısı western blot analizi için ayrıldı. Histolojik olarak Hematoksilen-eozin (H-E), immunohistokimyasal olarak nitrik oksit sentaz enzimleri (nNOS, iNOS, eNOS) boyandı. Western blot ile  reseptör ilişkili kinaz 1 ve 3 (RIP1 ve RIP3), biyokimyasal olarak laktatdehidrogenaz (LDH), kreatin kinaz-myoglobulin (CK-MB), troponin-I (cTn-I), antinatriüretik peptit (ANP) ve beyin natriüretik peptit (NT-proBNP) incelendi.
Kontrol ve THQ grubuna kıyasla ISO grubunda kardiyomyosit hasarı, geniş nekrotik alanlar gözlendi. nNOS ekspresyonu azalırken, iNOS ve eNOS ekspresyonu arttı. RIP1 ve RIP3 protein seviyeleri arttı. LDH, CK-MB ve cTn-I seviyeleri arttı. ANP ve NT-pro-BNP seviyeleri azaldı. THQ, ISO'nun sebep olduğu nekrotik alanların azalmasına sebep oldu. NOS enzim seviyelerini düzenledi. Artmış ISO kaynaklı RIP1 ve RIP3 enzim seviylerini azalttı. Biyokimyasal parametre seviyelerini düzenledi.
Çalışmada ISO'ün kalp dokusunda ciddi histolojik değişikliklere sebep olarak MI kaynaklı nekrozu tetiklemesinde NOS enzimlerinin aracı olduğu gözlendi. THQ ise hem NOS enzim seviyelerini hem de nekroz markırlarını düzenleyerek MI kaynaklı hasarın ortadan kaldırılmasında önemli bir ajan olabileceğini ortaya koymaktadır.

Anahtar Kelimeler: Miyokart infarktüsü (MI); Nekroz; Timokinon (THQ)

Abstract:
Myocardial Infarction (MI) is a complex disease that is among the causes of serious morbidity and mortality worldwide. Isoproterenol (ISO) is a pathogen used in experimental MI, which causes oxidative stress by generating free oxygen species in the tissue. Thymoquinone (THQ) is a versatile agent effective on oxidative stress. In this study, it was aimed to investigate the protective effects of THQ in ISO-induced MI in rats. 32 male Wistar Albino rats were used in the study. The rats were divided into 4 groups with 8 animals in each group. Control, THQ; Intragastric (ig) by dissolving 20 mg/kg in 500 µl olive oil at 24-hour intervals for 7 days, ISO; experiment 6th and 7th days 100 mg/kg dissolved in 1 ml distilled water subcutaneously (sb), THQ+ISO; THQ was given as ig by dissolving 20 mg/kg in 500 µl olive oil at 24-hour intervals for 7 days, 100 mg/kg on the 6th and 7th days of the ISO experiment was dissolved in 1 ml of distilled water and administered as sb. 24 hours after the ISO injection, the subjects were anesthetized with anesthetic and their blood was taken. The heart tissue was excised, half for formaldehyde and the other half for western blot analysis. Hematoxylin-eosin (H-E) was stained histologically, and nitric oxide synthase enzymes (nNOS, iNOS, eNOS) were stained immunohistochemically. By western blot, receptor-associated kinase 1 and 3 (RIP1 and RIP3), biochemically lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase-myoglobulin (CK-MB), troponin-I (cTn-I), antinatriuretic peptide (ANP) and brain natriuretic peptide (NT-proBNP) was analyzed. Compared to the control and THQ groups, cardiomyocyte damage and large necrotic areas were observed in the ISO group. While nNOS expression decreased, iNOS and eNOS expression increased. RIP1 and RIP3 protein levels were increased. LDH, CK-MB and cTn-I levels were increased. ANP and NT-pro-BNP levels were decreased. THQ caused the reduction of necrotic areas caused by ISO. NOS regulated enzyme levels. Increased ISO-induced RIP1 and RIP3 decreased enzyme levels. Regulated biochemical parameter levels. In the study, it was observed that NOS enzymes were mediated in triggering MI-induced necrosis by causing severe histological changes in the heart tissue. THQ, on the other hand, reveals that it can be an important agent in the elimination of MI-induced damage by regulating both NOS enzyme levels and necrosis markers. 


Keywords: Myocardial infarction (MI);  Necrosis; Thymoquinone (THQ)