HT29 kolon kanseri hücrelerinde TRPM2 kalsiyum kanalı aracılı apoptozis ve oksidatif stres oluşumu üzerinde Sisplatin ve erusik asidin etkilerinin incelenmesi
Erucic acid potentiate antitumor, apoptotic, and oxidant actions of cisplatin via the stimulation of TRPM2 channel in colon tumor cells
Yazar: AYŞENUR NAZIROĞLU
Danışman: PROF. DR. AHMET ÇARHAN
Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kanser Biyolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Neoplazm hücreleri = Neoplastic cells

Özet:
Sisplatin (CSP) direnci, kolon kanseri hücrelerinin tedavisinde önemli bir sorundur. Adjuvan tedaviler, aşırı Ca+2 akışı, apoptoz ve oksidatif stresi indükleyerek sorunu engeller. Son araştırmalara göre, omega yağ asidi tedavisi, TRPM2 kanallarını aktive ederek beyin tümör hücrelerini öldürür. Erusik asit (ErA) olarak bilinen bir omega-9 yağ asidinin, kolon kanseri hücreleri dışındaki tümör hücreleri üzerinde antitümör etkilere sahip olduğu gösterilmiştir. 
Bu çalışmada; HT29 tümör hücre hattında TRPM2 katyon kanallarının aktivasyonunun ErA ve CSP'ye maruz kalmanın etkilerini nasıl etkilediği incelenmiştir. İn vitro deneysel çalışma; kontrol, CSP, ErA, ErA+CSP olmak üzere 4 grupta gerçekleştirilmiştir. ErA tedavisi ile hücrelerde TRPM2 aktivasyonunun (H2O2 aracılığıyla) CSP'nin sitotoksik, oksidatif ve apoptotik etkilerini daha da indüklediği keşfedilmiştir. TRPM2 antagonistleri [N-(P-AmylcinnamoylAnthranilik) Asit ve 2-Aminoethoxydiphenyl Borat] ile tedavinin, hücrelerdeki eylemleri azalttığı gösterilmiştir. ErA ve CSP'nin apoptotik etkilerinden kaspaz -3, kaspaz -8 ve kaspaz-9'un aktivasyonu ile propidyum iyodür pozitif HT29 oranının uyarılması sorumlu olduğu gözlenmiştir. Ayrıca, bu tedavilerin oksidatif etkileri, mitokondriyal membran depolarizasyonu, reaktif oksijen türleri (ROS) ve sitosolik ROS'taki artışa neden olmuştur. ErA'nın oksidatif ve apoptotik etkileri, hücrelerde TRPM2 akım yoğunluğunun ve aktivitesinin uyarılması nedeniyle mitokondride sitozolik serbest Ca+2 birikimi ile hızlanmıştır.
Yapılan çalışmalar sonucunda, ErA ve CSP kombinasyonunun, TRPM2'nin uyarılması yoluyla HT29 hücrelerini tedavi etmek için sinerjistik olduğu gözlemlenmiştir. Kolon tümör hücrelerinde TRPM2'nin uyarılması yoluyla, ErA ve CSP kombinasyonu olumlu bir doz azaltımı göstermiştir.

Abstract:
Cisplatin (CSP) resistance is main problem in colon cancer treatment. Adjuvant therapies prevents the resistance problem by inducing excessive Ca+2 influx, apoptosis and oxidative stress. According to recent research, omega fatty acid therapy kill brain tumor cells by activating TRPM2 channels. An omega-9 fatty acid known as erucic acid (ErA) has been shown to have antitumor effects on tumor cells other than colon cancer cells. 
This study examined how activation of TRPM2 action channels in HT29 colon cancer cell line was affected in exposure to ErA and CSP. ın vitro experimental study was carried out in 4 groups as control, CSP, ErA and CSP+ErA. We determined that the activation of TRPM2 (via H2O2) in the cells by ErA treatment further induced the cytotoxic, oxidative, and apoptotic effects of CSP. The treatment with TRPM2 antagonists (N-(P-Amylcinnamoyl) anthranilic acid and 2-Aminoethoxydiphenyl Borate) reduced those activities the targeted cells. The activation of caspase -3, caspase -8, and caspase -9, as well as the stimulation of propidium iodide positive HT29 rate, were responsible for the apoptotic effects of ErA and CSP. Moreover, the oxidative effects of these treatments resulted in an increase in mitochondrial membrane depolarization, reactive oxygen species (ROS) and cytosolic ROS. ErA's oxidative and apoptotic effects were sped up by the accumulation of cytosolic free Ca+2 in mitochondria due to the activation of TRPM2 current density and activity in the cells.
In conclusion, we observed that the combination of ErA and CSP was synergistic for treating HT29 cells via stimulation of TRPM2. Through the stimulation of TRPM2 in the colon tumor cells, the combination of ErA and CSP demonstrated a favorable dose reduction.