Sıçanlarda 4-Vinylcyclohexene Diepoxide (VCD) ile oluşturulan deneysel Prematür Over Yetmezliği'ne Silymarin'in Etkisi
Effect of silymarine on experimental premature ovarian failure in rats induced by 4-Vinlycyclohexene diepoxide (VCD)
Yazar: MUSTAFA ÇELİK
Danışman: PROF. DR. A.ERGİN AÇIKALIN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Sıçanlarda 4-Vinylcyclohexene Diepoxide (VCD) İle Oluşturulan Deneysel Prematür Over Yetmezliği'ne Silymarin'in EtkisiAraştırmamızda VCD'nin sıçan ovaryumlarında neden olduğu toksisiteye karşı silymarinin koruyucu etkisinin olup olmadığını incelemeyi amaçladık.Dişi bireyler ovaryumda belli sayıda primordiyal folikül ile doğarlar. Primordiyal ve primer foliküllerde oluşacak istenmeyen kayıplar dişilerde prematür over yetmezliği yada erken menapoza neden olur.Endüstriyel bir kimyasal olan 4-Vinylcyclohexene diepoxide (VCD) sıçan ve fare primordiyal folikül sayısını selektif olarak azaltır. VCD ovaryumlarda primordiyal ve primer foliküllerin apoptoz sürecini başlatarak kaybına neden olur. VCD ile ovaryumlarda toksisite oluşması için tekrarlayan dozlar ve zaman önemlidir.Östrojenin folikülogenez, steriodogenez, ovulasyon ve korpus luteum oluşumuna etkisi vardır. Ayrıca oosit etrafındaki granüloza hücrelerinin çoğalmasını sağlar ve apoptozu azaltır. Bir fitoöstrojen olan silymarinin östrojenik ve antiöstrojenik etkileri bulunmaktadır ve apoptozu engeller.Araştırmamızda 28 günlük, 40-60 g ağırlığında, toplam 48 adet immatür dişi Sprague Dawley türü sıçan kullanılarak 4 grup oluşturuldu. Yiyecek ve su gereksinimleri sınırsız olarak sağlandı ve her gün kontrol edildi. Sıçanlara 160 mg/kg VCD ve 25 mg/kg silymarin dimetilsülfoksit (DMSO) içinde çözdürülerek intraperitoneal olarak 15 gün boyunca günlük olarak verildi. Deney sonunda sıçanlar derin anestezi altında servikal dislokasyon ile öldürüldü. Vücut ve organ ağırlıkları ölçüldü. Alınan dokulara uygun takip işlemi yapılarak parafin blokları hazırlandı. 5?m kalınlığındaki seri kesitlere Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated dUTP Nick and Labelling (TUNEL), Kaspaz-3 ve Anti Mülleriyen Hormon (AMH) immünohistokimyasal olarak uygulandı. Genel yapı ve özellikleri Masson'un trikrom, Periyodik Asit Schiff-Hematoksilin (PAS) ve Hematoksilin-Eozin (H-E) boyaları ile belirlendi. Işık mikroskobu ile ovaryumlarda gelişen foliküller, korpus luteum ve folikül kistleri sayıldı.Bulgularımızda vücut ağırlığı yönünden sadece silymarin uygulanan grupta artış varken organ ağırlıklarında gruplar arasında fark gözlenmedi. VCD grubunda özellikle primordiyal ve primer foliküllerde kayıp VSL grubunda ise koruyuculuk belirgindi. Apoptoza giren hücre sayısı genel olarak VCD grubunda artarken AMH seviyesi azaldı.Sonuçlarımıza göre; VCD ovaryumdaki preantral foliküllerde kayıplara neden olurken, VCD'nin yarattığı toksik etki silymarin uygulanması ile azaldı. Önemli bir antioksidan olan silymarinin folikül kayıplarına neden olacak çevresel faktörlere karşı koruyucu olarak kullanılabileceğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Effect of silymarine on experimental premature ovarian failure in rats induced by 4-Vinlycyclohexene diepoxide (VCD)In the present study, we aimed to determine the protective effect of silymarin against the toxic effect of VCD on rat ovaries.Females are born with a limited number of primordial follicles in their ovaries. Non-physiological losses of the primordial and primer follicles in females due to toxic agents cause premature ovarian failure or early menopause.4-Vinlycyclohexene diepoxide (VCD) is an industrial a chemical and is shown to selectively decrease the number of primordial follicles in rats and mice. Moreover, VCD leads to the apoptosis and the loss of primordial and primer follicles in ovary. Repeated doses of VCD and the time intervals between its admissions are critical for VCD-induced ovarian toxicity.Estrogen not only stimulates folliculogenesis, steroidogenesis, ovulation, and corpus luteum formation but also induces the proliferation of the granulose cells surrounding the ovary while decreasing the apoptosis. Silymarin, one of phytoestrogens, is reported to have estrogenic and anti-estrogenic effects and prevent cells from the apoptosis.We used 28 days old female Sprague-Dawley rats, weighting 40-60 g. The rats were randomly divided into four groups. Food and water were supplied ad libitum. The rats received VCD (160mg/kg) and silymarine (25mg/kg, dissolved in DMSO) intraperitoneally during 15 days. At the end of the study, after determining the body weights of the animals, they were anaesthetized and sacrificed with cervical dislocation. Subsequently, their ovaries and uteruses were removed and weighed. The ovaries were taken and blocked in paraffin, and processed for routine histological inspections. In short, 5?m-thick sections were cut and stained immunohistochemically for TUNEL, Caspase-3 and Anti-Müllerian hormone (AMH). The overall structure and general features of the organs were studied using Masson's trichrome, Periodic acid-Schiff stain-hematoxylin (PAS). Developing follicles, corpus luteum, follicular cyst were inspected using a light microscopy.The present results showed that the body weights were only increased in silymarine group. However, there were no differences between the organ weights in groups. The number of preantral follicles markedly increased in 4-Vinlycyclohexene diepoxide+silymarine-treated group (VSL) compared to VCD-treated group. Apoptosis generally increased but AMH level was decreased in VCD group.In the present study, VCD exposure reduced the number of preantral follicles in the ovaries. However, silymarin treatment decreased VCD-induced ovarian toxic effects in the rats. The current findings suggest that the use of antioxidants e.g. silymarin is effective for preventing the loss of the follicles in the ovary, induced by the toxic environmental factors.