Klopidogrelin membran bütünlüğüne olan etkisinin AML12 hepatosit hücre soyunda araştırılması
Investigation of the effects of clopidogrel in AML12 hepatocyte cell line over plasma membrane integrity
Yazar: DİDEM KUTLU
Danışman: PROF. DR. BELGİN SÜSLEYİCİ
Marmara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Biyoloji Eğitimi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Türkiye'de bulaşıcı olmayan hastalıkların yol açtığı ölümlerin %37'si kardiyovasküler hastalıklar sebebi ile gerçekleşmiştir.  
Adenozin difosfat reseptör antagonisti olan Klopidogrel, felç, damar tıkanıklığı, inme, kalp krizi gibi kardiyovasküler hastalıkların önlenmesi ve tedavi edilmesinde görev alan önemli bir antiplatelet ajandır ve kardiyovasküler olay riskini %30-40 oranında azaltmaktadır. İlacın aktif metabolitleri adenozin difosfatın P2Y12 reseptörüne bağlanmasını engelleyerek platelet oluşumunu geri dönüşümsüz olarak engellemektedir. 
Çalışmamızda antiplatelet tedavide kullanılan Klopidogrel'in AML12 hepatositlerinin plazma membranında oluşturduğu etkileri araştırılmıştır. Klopidogrel'in aktif metabolitlerinin oluşabilmesi için karaciğer hücrelerinde metabolize edilmesi gerektiğinden, çalışmamızda AML12 hepatositleri kullanılmıştır. Kültürü yapılan ve olgunluğa erişen hücreler 100, 300, 400 ve 500 µM Klopidogrel ile muamele edilmiş ve hücrelere LDH testiuygulanarak plazma membranı hasarı araştırılmıştır. Laktat dehidrogenaz enzimi, plazma membranında hasar olması durumunda ekstraselüler boşluğa salınarak kültür ortamındaki varlığı ile sitotoksisite tayinindekullanılır. 
Çalışmamızda, 100, 300, 400 ve 500 µM Klopidogrel ile muamele edilen hücrelere LDH testi uygulanarak, test bileşenleriyle hücrelerin oluşturduğu OD340 dalga boyundaki absorbansları spektrofotometrik olarak ölçülmüştür. Sonuçlar değerlendirilerek, IC50 dozları 100 ve 300 µM Klopidogrel dozu olarak tespit edilmiştir. Çalışmamızda AML12 hepatositlerine 100, 300, 400 ve 500 µM olmak üzere uygulanan tüm Klopidogrel dozlarının plazma membranında hasar oluşturarak sitotoksik olduğu belirlenmiştir. 
Literatür taramalarımızda, Klopidogrel'in AML12 hepatositlerinde plazma membran bütünlüğüne olan etkisini araştıran bir çalışmaya rastlanmadığından çalışmamız özgün nitelik taşımaktadır.

Abstract:
37% of deaths caused by non-communicable diseases in Turkey is realized with the causes of cardiovascular diseases. 
Clopidogrel, an ADP receptor antagonist, is an important antiplatelet agent used in the prevention and treatment of cardiovascular diseases such as stroke, vascular occlusion, heart attack and known as having the capability to reduce the risk of cardiovascular events by 30-40%. The active metabolites of the drug prevent the binding of ADP to P2Y12  receptor and prevent formation of platelets irreversibly.  
In our study, we investigated the effects of Clopidogrel over the plasma membrane of AML12 hepatocytes. Clopidogrel needs to be metabolized in order to form the active metabolites in liver cells. Cells that were cultured and reached maturity were treated with 100, 300, 400 and 500 µM Clopidogrel and LDH test was applied in order to assess the plasma membrane damage that drug has caused. The lactate dehydrogenase enzyme in cells are released into the extracellular space in case of damage to the plasma membrane and the presence of the enzyme in the culture medium is determined as a cytotoxicity marker. 
LDH test was performed on the cells treated with 100, 300, 400 and 500 µM Clopidogrel. The results were evaluated and LDH activity graph was plot to determine IC50 doses. As a result of the calculations, IC50 value was determined to be 100 and 300 µM. In our study, all clopidogrel doses which are 100, 300, 400 and 500 µM administered to AML12 hepatocytes were determined to be cytotoxic by causing damage on the plasma membrane. 
Any research is not found in the literature investigating the effects of Clopidogrel in AML12 hepatocytes over plasma membrane integrity. Our study has characteristics of being an original work.