Clostridium septicum aşılarında potensin vero hücrelerinde toksin nötralizasyon testi ile belirlenmesi
Determination of potency in clostridium septicum vaccines using toxin neutralization test in vero cells
Yazar: OĞUZHAN AYAR
Danışman: PROF. DR. GÖKSEL ERBAŞ
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Amaç: Clostridial aşıların kontrolünde 4R prensipleri ile örtüşmeyen toksin nötralizasyon testi yerine Vero hücrelerde nötralizasyon analizinin uygulanması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmada Bornova Veteriner Kontrol Enstitüsü, Veteriner Biyolojik Ürünler Kontrol Laboratuvarına rutin "satış izni" için gelen farklı üreticilere ait 20 adet C.septicum alfa toksoid içeren aşı ve 10 adet bu komponentten yoksun (Clostridial ya da clostridial olmayan) aşı kullanılmıştır. Her bir aşı için daha önce hastalık ve aşılama geçmişi olmayan New Zealand White ırkı 10 adet tavşan immunizasyona alınmış ve serumları toplanmıştır. Serumlar eşit şekilde bölünerek Vero hücre hatlarında ve her serum için 15 adet farede TNT uygulaması yapılmıştır. Her iki testin sonuçları karşılaştırılarak yeni yöntemin TNT' ye göre spesifite ve sensivitesi hesaplanmıştır.
Bulgular: TNT' si yapılan 20 adet septicum içerikli aşının 16 tanesi "limit geçer" , 4 tanesi ise "limit altında" bulunmuştur. Septicum içermeyen 10 adet aşının tavşan serumlarında ise septicum toksine karşı antitoksin oluşmadığı için TNT' de tüm fareler ölmüştür. Vero hücre hattı testinde de aynı aşıların TNT ile paralel sonuçları alınmıştır. Buna göre yeni yöntemin TNT' ye göre Sensitivite = 16/ (16+0) x 100 = % 100 ve Spesifite = 14/ (14+0) x 100 =  % 100 olarak aralarındaki kuvvetli ilişki ve validite görülmüştür.
Sonuç: Vero hücre nötralizasyon analizinde TNT ile benzer sonuçlar alınarak daha az zaman, maliyet ve daha stabil sonuçlar alındığı tespit edilmiştir.

Abstract:
Objective: The aim was to implement neutralization analysis on Vero cells instead of the toxin neutralization test not aligned with the 4R principles for the control of Clostridial vaccines.

Materials and Methods: In this study, 20 doses of C.septicum alpha toxoid-containing vaccines from different manufacturers routinely submitted for "marketing authorization" to the Veterinary Biological Products Control Laboratory of the Bornova Veterinary Control Institute and 10 doses lacking this component (Clostridial or non-Clostridial) were used. Ten New Zealand White rabbits with no previous disease or vaccination history were immunized for each vaccine, and their sera were collected. The sera were divided equally, and TNT was administered in Vero cell lines and to 15 mice per serum. The results of both tests were compared, and the specificity and sensitivity of the new method were calculated compared to TNT.

Results: Out of the 20 doses tested with TNT, 16 of the septicum-containing vaccines passed the limit, while 4 were below the limit. In the sera of rabbits vaccinated with the 10 doses lacking septicum, no antitoxin against septicum was formed, resulting in death of all mice in the TNT. Similar results to TNT were obtained in the Vero cell line test for the same vaccines. Accordingly, the new method showed a strong relationship and validity compared to TNT, with Sensitivity = 16/ (16+0) x 100 = % 100 and Specificity = 14/ (14+0) x 100 = % 100.

Conclusion: Comparable results to TNT were obtained with Vero cell neutralization analysis, indicating less time, cost, and more stable outcomes.

Keywords: Septicum toxin, Vaccine, Vero, Potency, TNT.