Igf I ve ıgf II düzeylerinin diş sert doku oluşumuna etkisinin hücre kültürü ile incelenmesi
Cell culture investigation of the effects of igf I and igf II levels on formation of dental hard tissue
Yazar: CANAN TURAN IRMAK
Danışman: PROF. DR. FATMA ZEYNEP AYTEPE
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pedodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Dental mine = Dental enamel ; Dental pulpa = Dental pulp ; Dişler = Teeth ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kök hücreler = Stem cells ; İnsülin benzeri büyüme faktörü I = Insulin like growth factor I ; İnsülin benzeri büyüme faktörü II = Insulin like growth factor II

Özet:
Günümüzde, kök hücre araştırmalarına olan ilgi giderek artmaktadır. Kendiliğinden düşmüş süt dişi kök hücreleri (KDSDKH), kolay elde edilmeleri, yüksek çoğalma ve farklılaşma kapasitelerinin olması nedeniyle hücresel tedavi ve doku mühendisliği çalışmalarında sıklıkla tercih edilmektedir. Bu çalışmanın amacı, KDSDKH'lerinin osteo/odontojenik farklılaşma potansiyeline IGF I ve IGF II'nin etkisinin incelenmesidir. 
Bu çalışmada, ortodontik nedenlerle çekim endikasyonu konulmuş, sağlıklı 10 bireyden elde edilen süt dişleri kullanılmıştır. Çıkarılan pulpa dokusundan mezenkimal kök hücreler (MKH) izole edilmiş ve hücre kültürüyle çoğaltılmıştır. Akım sitometri ve immunohistokimyasal yöntemler ile hücrelerin immunfenotipleri tanımlanmıştır. Bu çalışmalar sonucunda elde edilen hücrelerin, CD13, CD105, CD73, CD44 ve CD90 gibi MKH'lere özgü belirteçleri yüksek düzeylerde ifade ettikleri tespit edilmiştir. Çeşitli uyaranlarla in vitro koşullarda yapılan farklılaşma deneylerinde hücrelerin adipojenik ve osteojenik farklılaşma kapasitelerinin bulunduğu gösterilmiştir. 
Odontojenik/osteojenik farklılaşma, 50ng/mL ve 100 ng/mL'lik dozlardaki IGF I ve IGF II büyüme faktörleri ile uyarılmıştır. Farklılaşan hücrelerin Alizarin kırmızısı boyamaları gerçekleştirilmiş ve alkalen fosfataz aktiviteleri istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Elde edilen bulgular neticesinde 14. günün sonunda, 100 ng/mL IGF I ile uyarılan grupta en yüksek düzeyde olmak üzere tüm IGF I ve IGF II ile uyarılmış gruplarda kontrol grubuna kıyasla artmış osteojenik farklılaşma tespit edilmiştir. Sonuç olarak, veriler KDSDKH'lerinin osteo/odontojenik farklılaşmasının in vitro koşullarda IGF I ve IGF II'nin uygun dozlarda uyarılmasıyla yönlendirilebileceğini ve birçok hastalığın hücresel tedavisinde alternatif kök hücre kaynağı olarak KDSDKH'nin kullanılabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Recently, there has been increasing interest in the research of stem cells. As stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) can be obtained easily, have a strong propensity to proliferate and differentiate, they have considerable potential for cell therapies and tissue engineering. The aim of this study is to determine the effects of IGF I and IGF II to the osteo/odontogenic differentiation capacities of SHEDs.
In this study, stem cells were obtained from deciduous teeth of 10 healthy subjects, that are extracted for orthodontic reasons. Mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated from the pulp tissue and cultured. Immunophenotypic assays were performed with flow cytometry and immunohistochemical methods. It has been demonstrated that SHEDs expressed mesenchymal cell markers such as CD13, CD105, CD73, CD44 and CD90 in high levels. Differantiation assays with various stimulants in the culture points out that SHEDs have adipogenic and osteogenic differantiation capacity.
Odontogenic / osteogenic differentiation was induced with 50ng/mL and 100 ng/mL IGF I and IGF II respectively. Alizarin red staining of differentiated cells were performed, and alkaline phosphatase activity were evaluated statistically. At the end of the 14th day, all the IGF I and IGF II stimulated groups, especially 100 ng / mL IGF-I-induced group, showed significantly high levels of osteogenic differentiation compared to the control group. In conclusion, SHEDs can be induced to differentiate towards osteo/odontogenic lineage in vitro by using IGF I and IGF II in appropriate doses and might be an alternative source of stem cells in cellular therapy of many diseases.