Dickkopf1 (DKK1) gen metilasyonu ile meme kanseri arasındaki ilişkinin araştırılması
Evaluation of relationship between dickkopf1 (DKK1) gene methylation status and breast cancer development and progression
Yazar: MURADİYE ACAR
Danışman: PROF. DR. TÜLİN ÇORA
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Genler = Genes ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Metilasyon = Methylation

Özet:
Meme kanseri kadınlarda en sık görülen malignansidir ve genellikle normal epitelden kaynaklanıp invaziv kansere ilerleyen çok aşamalı bir süreçtir. Bu süreçte genetik değişiklikler gibi epigenetik değişiklikler de birikim gösterir ve kanser ilişkili genlerin promotor bölgelerindeki CpG adalarının metilasyonu karsinogenezin erken aşamalarında oluşmaktadır. Bu genlerdeki metilasyonun analizi neoplazmanın tanısının konmasında, tümörlerin sınıflandırılmasında, tedaviye yanıtın ve hastalığın prognozunun tahmin edilmesinde oldukça önemli olduğu gösterilmiştir. Meme bezinin büyüme ve farklılaşmasında çok önemli olan Wnt sinyal yolağı Dickkopf ve sFRP antagonistleri tarafından regüle edilir. Dickkopf1 (DKK1), Dickkopf sınıfının bir üyesidir ve DKK1 gen ürünü Wnt sinyal yolağının güçlü bir inhibitörüdür. DKK1 geni birçok hücresel olayda görev almakla birlikte son yıllarda çeşitli kanserlerde yapılan çalışmalar genin promoter hipermetilasyonu ile sıklıkla susturulduğunu göstermiştir. Bu çalışmada meme kanseri hikayesi olmayan kadınların normal dokularında, meme kanserli hastaların tümör ve tümöre komşu normal dokularında DKK1 metilasyon durumunu ve protein ekspresyonunu araştırdık.DKK1 metilasyonu MSP tekniğiyle değerlendirildi. 83 tümör ve tümöre komşu normal dokular ve meme kanseri hikayesi olmayan 9 kadının normal dokusunda metilasyon değişikliklerini inceledik. DKK1 protein ekspresyonu 70 tümör ve tümöre komşu normal dokularda ve meme kanseri hikayesi olmayan 9 kadının normal dokusunda immunohistokimyasal boyama yöntemiyle araştırıldı. İmmunohistokimyasal sonuç, DKK1 için pozitif ve negatif olarak sınıflandırıldı. Meme kanseri hikayesi olmayan kadınların normal meme dokularının % 33'ünde DKK1 gen metilasyonu saptandı. Tümörlerin % 70'inde ve komşu normal dokuların % 61'inde DKK1 geni hipermetileydi. Meme kanseri hikayesi olmayan kadınların normal meme dokularının % 33'ünde, tümörlerin % 31'inde ve komşu normal dokuların % 17'sinde immunohistokimyasal olarak DKK1 pozitifti. DKK1 promotor metilasyonu ve protein ekspresyonu yaş, tümör büyüklüğü, lenf nodu durumu, histolojik grade ve östrojen reseptör, progesteron reseptör ve HER2 pozitifliği ile ilişkili değildi.Sonuçlarımız tümör ve tümöre komşu normal meme doku arasındaki metilasyon değişikliklerinin birbiriyle uyumlu olduğunu ve alan etkisinin varlığını gösterdi. Bu durum, normal meme dokularını tek başına transforme edemez ancak gelecekte diğer genetik ve epigenetik değişikliklerin birikimi ile kanserleşmeye yardımcı olabilir.

Abstract:
Breast cancer is the most common malignancy in women and generally appears by a multistep process from normal epithelium to invasive cancer. Epigenetic changes as genetic changes accumulate during the multistep carsinogenetic process and methylation in CpG islands of cancer- related genes is an early stage in carcinogenesis. Methylation analysis of these genes is important diagnosis of neoplasm, tumor classification, prediction of response to treatment and patient prognosis. Wnt signal pathway is very important for mammary gland growth and differentiation. And this pathway is regulated by Dickkopf and sFRP antagonists. Dickkopf-1 (DKK1) gene is a member of Dickkopf family and DKK1 gene product is a potent inhibitor of Wnt pathway. In this study, DKK1 methylation status and its protein expression were examined in normal tissues of women without a history of breast cancer, normal and cancer tissues of breast cancer patients.DKK1 promoter methylation was assessed by MSP method. We examined methylation changes in 83 tumors, adjacent normal tissues and 9 normal breast tissues from women without a history of breast cancer. Immunohistochemical staining was used to investigate DKK1 protein expression in 9 normal breast tissues from women without a history of breast cancer, 70 tumors and adjacent normal tissues. Immunohistochemical result was categorized as positive or negative for DKK1. DKK1 gene methylation was detected in normal breast tissue from women without a history of breast cancer (33%). DKK1 gene was highly methylated in tumors (70%) and adjacent normal tissues (61%). Immunohistochemically, 33% normal breast tissue from women without a history of breast cancer, 31% tumors and 17% adjacent normal tissues were DKK1 positive. DKK1 promoter methylation and protein expression were not associated with age, tumor size, lymph node status, histological grade, and oestrogen receptor or progesteron receptor or HER2 positivity.Our results showed that concordance between the methylation status of cancerous and adjacent normal breast tissues and presence of field defect. These changes in the normal breast tissues are not enough to transform them however they might permit the future acquisition and accumulation of other genetic and epigenetic changes