Açık kalp ameliyatı olan hastaların perikard sıvısında ve plazmasında üç bilinmeyenli denklem: İnterlökin 33 (ıl33), fetuin a ve sitokeratin 18 ilişkisi
Three unknown equations in pericard liquid and plasma of patients with open heart surgery: The relationship of interleukin 33 (il33), fetuin a and cytokeratin 18
Yazar: REŞAT DİKME
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET SALİH AYDIN
Harran Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Perfüzyon Ana Bilim Dalı / Perfüzyon Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Genetik = Genetics ; Kardiyoloji = Cardiology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Cerrahi-kardiyovasküler = Surgery-cardiovascular ; Fetuin A = Fetuin A ; Kalp hastalıkları = Heart diseases ; Perikardial efüzyon = Pericardial effusion ; Sitokeratinler = Cytokeratins ; İnterlökin 33 = Interleukin 33

Özet:
Koroner arter hastalığında İnterlökin 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18 gibi biyobelirteçler hastalığın tanı ve tedavisinde yeni ve etkin olan faktörler arasındadır. Bu biyobelirteçler insan plazmasında araştırılmasına rağmen, perikardiyal sıvıda araştırılmamıştır. Bu çalışma koroner arter hastalarının perikardiyal sıvısına ve sistemik dolaşımına geçen İnterlökin 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18 düzeylerinin karşılaştırılması, aralarındaki bilinmeyen ilişkinin çözülmesi ve hastalığın patofizyolojisinin anlaşılmasına katkı sağlamak amacıyla yapılmıştır.
Çalışmaya koroner arter bypass ameliyatı olan 40 hasta dâhil edilmiş olup bu hastalardan perikardiyal sıvı ve venöz kan örnekleri elde edilmiştir. Daha sonra perikardiyal sıvı ve plazmada ELISA ve qRT-PCR yöntemleriyle İnterlökin 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18'in protein ve gen ekspresyon seviyeleri tespit edilerek veriler değerlendirilmiştir.
ELISA sonuçlarına göre İnterlökin 33 düzeyi perikardiyal sıvıda 57,09 ng/L, plazmada 50,15 ng/L çıkarken, Fetuin A düzeyi perikardiyal sıvıda 1060,53 mg/L, plazmada 725,85 mg/L çıkmıştır.  Sitokeratin 18 düzeyi ise perikardiyal sıvıda 1046,42 ng/ml çıkarken plazmada 1025,31 ng/ml çıkmıştır. Gen ekspresyonu sonuçlarına göre İnterlökin 33 (ct) değeri; perikardiyal sıvıda 8,30 çıkarken, plazmada 18,25 çıkmış, Fetuin A (ct) değeri ise perikardiyal sıvıda 14,55 çıkarken, plazmada 21,02 çıkmıştır. 
ELISA çalışmasına göre İnterlökin 33 ve Fetuin A değerlerinde anlamlı (p<0,05), Sitokeratin 18 değerinde ise anlamlı olmayan (p>0,05) sonuç çıkmıştır.  Gen ekspresyonu çalışmasına göre ise İnterlökin 33 ve Fetuin A değerlerinde anlamlı (p<0,05) sonuç çıkmıştır. Yapılan korelasyon analizinde plazmada Fetuin A protein seviyesi ile Fetuin A gen ekspresyonu arasında negatif yönde (r=-0,463; p=0,015), Fetuin A protein seviyesi ile İnterlökin 33 gen ifadesi arasında negatif yönde (r=-0,650; p=0,000) istatistiksel olarak anlamlı ilişki tespit edilmiştir.  Bu durum bize plazmada IL 33 ve Fetuin A gen ekspresyonlarının paralel değişmesine rağmen, Fetuin A protein seviyesinin anti paralel değiştiğini göstermektedir. Plazmada Sitokeratin 18'in İnterlökin 33 ile Fetuin A arasında anlamlı bir korelasyonu olmadığı saptanmıştır. Perikardiyal sıvıda IL 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18 arasında korelasyon saptanmamıştır.
Yaptığımız çalışmada gerek ELISA gerekse gen ekspresyonu sonuçlarına göre perikardiyal sıvıdaki İnterlökin 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18 değerleri plazmaya göre daha yüksek çıkmıştır. Bu durum bize perikardiyal sıvının kalpteki fizyolojik ve biyokimyasal değişiklikleri yansıtabildiğini, dolayısıyla tanısal ve tedavi amaçlı olarak perikardiyal sıvının kullanılabileceğini göstermektedir. 
İnterlökin 33 seviyesinin perikardiyal sıvı ve plazmada düşük çıkması koroner arter hastalarında İnterlökin 33 seviyesinin azaldığını göstermektedir. Plazmada orta seviyeli Fetuin A değerleri koroner arter hastalarında Fetuin A'nın azaldığını göstermektedir. Ayrıca perikardiyal sıvı ve plazmada Sitokeratin 18 değerinin yüksek çıkması bize koroner arter hastalarında nekroz ve apoptozun yüksek olduğu hakkında bir ipucu vermektedir.  
Perikardiyal sıvıda İnterlökin 33, Fetuin A ve Sitokeratin 18 gibi koroner arter hastalığı ile ilişkili parametrelerin anlamlı düzeyde tespit edilmesi bu parametrelerin kalp hastalıklarında güçlü bir biyobelirteç olarak kullanılabileceği fikrini desteklemektedir. Ayrıca perikardiyal boşluğun artmış miyokardiyal alım ve azaltılmış sistemik toksisitelere sahip olması nedeniyle gelecekte bu yapının önemli bir ilaç verme rezervuarı olacağını göstermektedir.

Abstract:
Biomarkers such as Interleukin 33, Fetuin A and Cytokeratin 18 in coronary artery disease are among the new and effective factors in the diagnosis and treatment of the disease. Although these biomarkers have been investigated in human plasma, they have not been investigated in pericardial fluid. This study was conducted to compare the levels of Interleukin 33, Fetuin A and Cytokeratin 18, which pass into the pericardial fluid and systemic circulation of coronary artery patients, to resolve the unknown relationship between them and to contribute to the understanding of the pathophysiology of the disease.
Forty patients who had coronary artery bypass surgery were included in the study, and pericardial fluid and venous blood samples were obtained from these patients. Then, the protein and gene expression levels of Interleukin 33, Fetuin A and Cytokeratin 18 were determined in pericardial fluid and plasma by ELISA and qRT-PCR methods and the data were evaluated.
According to ELISA results, Interleukin 33 level was 57.09 ng/L in pericardial fluid and 50.15 ng/L in plasma, while Fetuin A level was 1060.53 mg/L in pericardial fluid and 725.85 mg/L in plasma. Cytokeratin 18 level was 1046.42 ng/ml in pericardial fluid and 1025.31 ng/ml in plasma. Interleukin 33 (ct) value according to gene expression results; While 8.30 in pericardial fluid, 18.25 in plasma, Fetuin A (ct) value was 14.55 in pericardial fluid and 21.02 in plasma.
According to the ELISA study, significant (p<0.05) results were found in Interleukin 33 and Fetuin A values, and insignificant (p>0.05) in Cytokeratin 18 values. According to the gene expression study, significant (p<0.05) results were found in Interleukin 33 and Fetuin A values. In the correlation analysis, a negative correlation was found between Fetuin A protein level and Fetuin A gene expression in plasma (r=-0,463; p=0,015), and a negative significant correlation between Fetuin A protein level and Interleukin 33 gene expression (r=-0,650; p=0,000). This shows us that although Interleukin 33 and Fetuin A gene expressions in plasma change in parallel, Fetuin A protein level changes in antiparallel. It was determined that there was no significant correlation between Cytokeratin 18 in plasma and IL 33 and Fetuin A. No correlation was found between Interleukin 33, Fetuin A and Cytokeratin 18 in pericardial fluid.
In our study, according to both ELISA and gene expression results, IL 33, Fetuin A and Cytokeratin 18 values in pericardial fluid were found to be higher than in plasma. This situation shows us that the pericardial fluid can reflect the physiological and biochemical changes in the heart, therefore it can be used for diagnostic and therapeutic purposes.
The low level of Interleukin 33 in pericardial fluid and plasma indicates that the level of Interleukin 33 is decreased in coronary artery patients. Moderate levels of Fetuin A in plasma show that Fetuin A is decreased in coronary artery patients. In addition, the high level of Cytokeratin 18 in pericardial fluid and plasma gives us a clue that necrosis and apoptosis are high in coronary artery patients.
The significant detection of coronary artery disease-related parameters such as Interleukin 33, Fetuin A and Cytokeratin 18 in the pericardial fluid supports the idea that these parameters can be used as a strong biomarker in heart diseases. It also indicates that this structure will be an important drug delivery reservoir in the future, as the pericardial space has increased myocardial uptake and reduced systemic toxicities.