Multipl skleroz CD3+ t hücrelerinde sinyal yolağı aktivasyonlarının araştırılması
Investigation of signaling pathway activations in Multiple Sclerosis of CD3+ t cells
Yazar: FATMA BETÜL ÖKTELİK
Danışman: DOÇ. DR. SUZAN ÇINAR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Multipl skleroz = Multiple sclerosis ; Protein kinazlar = Protein kinases ; Sinyal nakli = Signal transduction ; T lenfositleri = T lymphocytes

Özet:
Multipl skleroz (MS)'da, oto-reaktif immün hücreler merkezi sinir sistemine (MSS) göç etmektedir. Akt/PKB sinyal yolağı, T hücre gelişimi ve sağ kalımında önemli bir role sahiptir. Akt'nin artmış veya azalmış aktivasyonu, Tip-2 diabetes mellitus ve kanser dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda rol almaktadır. MS'li bireylerde CD4+CD25+CD127-/düşük Regülatör T (Treg) hücre fonksiyonel baskılamanın kaybını gösteren çalışmalar mevcuttur. Bu çalışmada, Treg hücrelerinde Akt molekülünün, özellikle fosforile-Akt (pAkt) molekülünün seviyeleri ile hastalığın ciddiyeti arasındaki ilişki araştırılmıştır. 
Klinik izole sendrom (KİS, n=8), benign (n=10) ve tekrarlayan remisyonlu multipl skleroz (RR-MS, n=7) olan üç farklı hasta grubu ve yaş, cinsiyet uyumlu sağlıklı bireyler (n=20) çalışmaya dahil edildi. Bireylerin periferik kan mononükleer hücreleri (PKMH), fikol konsantrasyon gradyan yöntemi ile izole edildi. Anti-CD3, -CD4, -CD25, -CD127 monoklonal antikorları Treg hücrelerini tanımlamak için kullanıldı. PMA/İonomisin ile 15 dk uyarımdan sonra Treg hücrelerindeki Akt1 (Ser473) ve p-Akt seviyelerini değerlendirmek için hücre içi boyama yapıldı. FACS DiVa yazılımı ve FACSAria II akan hücre ölçer ile veriler toplandı ve analiz edildi. 
Çalışmamızda MS hastalığında sağlıklılara göre periferik kan Treg'lerde p-Akt ve total Akt1 seviyesinin azalması progresyonda rol oynadığına dair kanıt sunmaktadır. Hasta bireylerin yıllık atak sayısı ve progresyon indeksinin, pAkt ve Akt1 ile pozitif yönde korele olduğu bulunmuştur. 
Hastalığın seyri ve sonuçlarının tahmini için Akt molekülünün biyobelirteç (biomarker) veya terapötik hedef molekül adaylığı ile ilgili bulgular elde edilmiştir.

Abstract:
Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disorder prompted by infiltration of auto-reactive immune cells into the central nervous system (CNS). Akt/PKB signaling pathway has an importance in T cell development and survival. Studies revealed the loss of CD4+CD25+CD127-/low Regulatory T (Treg) cell suppression in MS patients. The relationship between the levels of the Akt and phosphorylated-Akt (pAkt) molecule in Treg cells, and the disease severity was investigated. 
Three different patient groups selected. These are clinically isolated syndrome (CIS, n=8), Benign (n=10) and relapsing remitting multiple sclerosis (RR-MS, n=7). Age and sex matched healthy individuals (n=20) were also involved. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were seperated from heparinized blood samples by ficoll concentration gradient centrifugation method. Anti-CD3, -CD4, -CD25, -CD127 monoclonal antibodies were used to identify the Treg cells. After stimulus for 15 min with PMA/Ionomycin intracellular staining was made to detect the Akt1 (Ser473) and p-Akt levels in Treg cells. Data were collected and analyzed with FACS DiVa software and FACSAria II with flow cytometer. 
In the study, the decreases in the level of p-Akt and total Akt1 in MS subjects compared to the healthy groups presents sign that they play a role in progression of disorder. Annual attacks number and progression index of the patients were found to be positively correlated with pAkt and Akt1. 
The relationship between the Akt molecule and the disease progression was established, and findings were indicate that Akt might be a biomarker for prognosis or therapeutic target molecule.