İmatinib dirençli K562R hücre hattında kemoterapötik ajanların oluşturduğu reaktif oksijen türlerinin sığla yağı ile ortadan kaldırılması
Elimination of reactive oxygen speies formed by chemotherapeutic agent in imatinib resistant K562R cell line by sweetgum oil
Yazar: MELİKE BÜGÜL KILINÇARSLAN
Danışman: DOÇ. DR. ONUR EROĞLU
Bilecik Şeyh Edebali Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Sweetgum Oil (SO), Liquidambar orientalis'in yaralı gövdesinden elde edilen "Sığla Yağı" adıyla yerel olarak isimlendirilen reçineli bir eksüdattır. SO'nun antibakteriyel, antioksidan, antiseptik ve antienflamatuar özellikleri birçok çalışmada bildirilmiştir. Bu çalışmada dirençli K562R ve duyarlı K562S kronik myeloid lösemi hücre hatlarında ROS oluşumu üzerine farklılıkların belirlenmesi ve ROS'un otofaji üzerindeki etkilerinin gözlenmesi amacıyla sitotoksik dozda Tirozin Kinaz İnhibitörleri (TKİ) ile sığla yağı kombinasyonu hücre hatlarına uygulanmıştır. K562R ve K562S hücre hatlarında sitotoksisite, ROS oluşumu, DNA hasarı, otofaji ve otofaji ile ilişkili proteinlerden otofagozom oluşumunda rol oynayan LC3α/β proteini ile ROS oluşumuna bağlı olarak inaktif hale gelen Atg4A proteininin ekspresyon seviyelerine etkileri incelenmiştir. Sitotoksisite çalışmalarında sığla yağının K562R hücrelerinde IC50 değeri 250 μg/ml, K562S hücrelerinde IC50 değeri 150 μg/ml olarak belirlenmiştir. H2DCFDA boyama ile sığla yağı kullanımında oluşan ROS'un K562R hücrelerinde ponatinibe kıyasla %28,8 oranında, K562S hücrelerinde ise imatinibe göre %23,8 oranında daha az olduğu görülmüştür. Kombine uygulamalarında ise sığla yağının tekli uygulamalarına göre ROS'un K562R hücrelerinde %67,56 oranında, K562S hücrelerinde ise %60,9 oranında azaldığı görülmüştür. K562R hücrelerinde, K562S hücrelerine göre %21,9 daha fazla ROS gözlenmiştir. Oluşan ROS'a bağlı olarak tirozin kinaz inhibitörleri ile tedavi edilen hücrelerde sığla yağı ile tedavi edilen hücrelere göre daha fazla DNA hasarı meydana gelmiştir. K562R hücrelerinde sığla yağının otofaji aktivasyonunda azalmaya neden olduğu K562S hücrelerinde ise otofaji aktivasyonunda artış sağladığı floresan mikroskop ile gözlenmiştir. Western blot deneyinde sığla yağı uygulanmış hücrelerde Atg4A ekspresyonunun daha fazla olduğu ve ROS'un fazla olduğu diğer gruplarda ise Atg4A ekspresyonunun azaldığı görülmüştür. LC3-I ekspresyonu ise sığla yağı uygulandığında K562R hücrelerinde azalmış, K562S hücrelerinde ise artış göstermiştir.

Abstract:
Sweetgum Oil (SO) is a resinous exudate locally named " Sığla Yağı " obtained from the injured body of Liquidambar orientalis. Antibacterial, antioxidant, antiseptic and anti-inflammatory properties of SO have been reported in many studies. In this study, cytotoxic dose Tyrosine Kinase Inhibitors (TKI) and Sweetgum Oil combination was applied to cell lines in order to determine the differences on ROS formation in resistant K562R and sensitive K562S chronic myeloid leukemia cell lines and to observe the effects of ROS on autophagy. In K562R and K562S cell lines, the effects of the LC3α/β protein, which plays a role in the formation of autophagosomes, which are related to cytotoxicity, ROS formation, DNA damage, autophagy and autophagy, and the Atg4A protein, which becomes inactive due to ROS formation, on expression levels were examined. In cytotoxicity studies, the IC50 value of sweetgum oil in K562R cells was determined as 250 μg / ml and in K562S cells as 150 μg / ml. It
was observed that the ROS formed by the use of sweetgum oil with H2DCFDA staining was 28.8% less in K562R cells compared to ponatinib and 23.8% less in K562S cells than imatinib. In combined applications, according to the single applications of sweetgum oil, it was observed that ROS decreased by 67.56% in K562R cells and 60.9% in K562S cells. 21.9% more ROS were observed in K562R cells than in K562S cells. Due to the ROS generated, more DNA damage occurred in cells treated with tyrosine kinase inhibitors than cells treated with sweetgum oil. It was observed by fluorescent microscope that sweetgum oil caused a decrease in autophagy activation in K562R cells and increased autophagy activation in K562S cells. In the Western blot experiment, it was observed that Atg4A expression was higher in cells treated with sweetgum oil, and Atg4A expression was decreased in other groups with high ROS. LC3-I expression decreased in K562R cells and increased in K562S cells when sweetgum oil was applied.