Türkiye çift kabuklu yumşakçalarının diyaretik çift kabuklu toksinlerinin (DSP) yüksek performanslı sıvı kromotografisi florimetrik sistemde (HPLC/FLD) analizi
Analysis of diarrhetic shellfish poisoning (DSP) toxins by high performance liquid cromotography with fluorimetric detection (HPLC/FLD) on shellfish in Turkey
Yazar: BEKİR DOĞAN
Danışman: PROF. DR. AYNUR LÖK
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Deniz ürünleri = Seafoods ; Diyare = Diarrhea ; Midyeler = Mussels ; Toksinler = Toxins

Özet:
Bu çalışmanın amacı, diyaretik çift kabuklu toksinleri konusunda Türkiye'de üretilen çift kabukluların, mevcut biyolojik deney hayvanı yöntemine (MBA) alternatif olarak Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi Fleurosans Dedektör (HPLC/FLD) ile analiz edilmesidir.İzmir İl Kontrol Laboratuvar Müdürlüğü Biyotoksin Analizleri Laboratuvarı Birimi tarafından, biyolojik deney hayvanı yöntemi MBA ile negatif ( - - - ), negatif ( + - - ), pozitif ( + + - ) ve pozitif ( + + + ) sonuçları raporlanan ve önceden kodlanmış toplam 406 çift kabuklu yumuşakça üzerinde, HPLC/FLD metodu ile her bir örnekten 3 paralel çalışma yapılmıştır.Kalibrasyon çalışmasına göre; belirlenen 100 µg OA/kg kalibrasyon standardından, matrix eşleşmesi yapılarak, on tekrarlı çalışma sonucu, Limit of Detection (LOD) değeri 111.14 µg OA/kg ve Limit of Quantification (LOQ) değeri de 137.16 µg OA/kg olarak bulunmuştur. Geri alım çalışması için MBA ( - - - ) sonucunu en yüksek oranda sağlayan akivadeslerden elde edilen hepatopankreas doku örneğine OA standart maddesi eklenmiş ve normal analitik işlem izlenmiştir. Geri alım çalışması sonucu katkılı doku örneklerinden %98.60 ile %101.20 arasında geri kazanım sağlanmıştır. Geri kazanımla elde edilen sonuca göre; ortalama %99.84 oranında geri alım tespiti yapılmış, standart sapma ± % 4.10 olmuş ve yapılacak hesaplamalar buna göre düzeltilmiştir.Eylül 2008 ile Ocak 2009 tarihleri arasında değerlendirmeye alınan, 406 çift kabuklu yumuşakça numunesinde yapılan biyolojik analiz sonuçlarının değerlendirilmesine göre; % 89.90 oranında DSP yönünden biyotoksisite görülmemiştir. Şüpheli örnekler % 1,90 oranında tespit edilmiş olup, doğrulanmasında sadece bir istiridye örneği dışında temiz olduğu, geriye kalan % 8.20 `lik pozitif örnek sonucunun doğrulanmasında ise sadece bir kara midye örneği dışında sonuçların geçerli olduğu tespit edilmiştir. Analize alınan çift kabuklu yumuşakçalarının %92'si ?LOD değerinin altındadır ve >160 µg OA/kg sınır değerinin üzerinde olan numuneye %7 oranında rastlanılmıştır.

Abstract:
The aim of study, it?s DSPs in shellfish produced in Turkey with High Performance Liquid Chromotographi Flourimetric Detector (HPLC/FLD) as an alternative methot for biological methot Mouse Bio Assay (MBA).Three parallels study for each samples with HPLC/FLD has been carried out on totaly 406 pairs of early coded shelfishes whose results are reported as negative (- - -), negative (+ - -), positive (+ + -) and positive (+ + +) with MBA method by İzmir Provincial Control Laboratory Directory Biotoxin Analysis Laboratory Department.According to the calibration study, the Limit of Detection (LOD: 111.14 µg OA/kg) and the Limit of Quantification (LOQ: 137.16 µg OA/kg) is found at the end of 10 repeated study from marked 100 µg OA/kg calibration standart as made matrix match. For recovery study, Okadaic Acid (OA) standart material is added in the hepatopancreatic tissue sample that obtain from cockles with maximum rate of (- - -) MBA results and normaly analitical process is followed. The recovery has been between 98.60% and 101.20%. According to results that obtained from recovery study, average recovery has been setted as 99.84% and standart deviation has been calculated as ± 4.1% and the other calculations have been evaluated according to these correctings.In accordance with the evaluations of the MBA results carried out on 406 shellfish samples taken into examination between September 2008 and January 2009, there has been no biotoxicity of DSP at a rate of 89.90% with HPLC/FLD analysis. There has been determined debatable samples with a rate of 1.9% and in the confirmation, all of those except one oyster sample have been found negative. In addition, another confirmation results of positive samples with a rate of 8.20% are detected as valid except one mussel sample. In conclusion, the analysed shelfish samples are under LOD with a rate of 92% and it?s been found that the samples with over 160 µg OA/kg MRL are at a rate of 7%.