Duchenne/Becker Kas Distrofisi hastalarında multipleks polimeraz zincir reaksiyonu ile delesyon analizi
Deletion analysis of Duchenne/Becker Muscular Dystrophy patients by multiplex polymerase chain reaction
Yazar: PERVİN DİNÇER
Danışman: PROF.DR. ŞÜKRÜYE AYTER
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1994
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Gen tedavisi = Gene therapy ; Genetik hastalıklar-doğuştan = Genetic diseases-inborn ; Kas distrofileri = Muscular dystrophies ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Bu çalışmada klinik olarak DMD tanısı alan 56 hasta, BMD tanısı alan 7 hasta ve intermediyer kas distrofısi tanısı alan bir hasta, distrofin genindeki delesyonlar yönünden incelenmiştir. Multipleks polimeraz zincir reaksiyonu tekniği kullanılarak akrabalık ilişkisi olmayan 33 DMD, 3 BMD ve bir intermediyer kas distrofısi hastasında hastalığın delesyondan kaynaklandığı saptanmıştır. Genel delesyon oranı %58 olarak bulunmuştur. 37 hastanın 25'inde delesyonlar genin merkezinde (43-52. ekzonlar), 12'sinde genin 5' ucuna yakın bölgede (4-19. ekzonlar) toplanmıştır. Delesyon görülen ekzonlar içerisinde 48. ekzonun en çok delesyona uğrayan, 44. ekzonun ise en az delesyona uğrayan ekzon olduğu tespit edilmiştir. Hastalarda delesyon görülen ekzon sayısı incelendiğinde, toplumumuzda tek ekzon delesyonlarının sık görüldüğü (%43) saptanmıştır. Genin merkezinde bulunan 42, 46, 49 ve 53. ekzonlara ait primerlerin kullanılmasıyla 21 hastada delesyonların başlama ve sonlanma noktalarının lokalizasyonu saptanmıştır. Toplam 25 adet 5' kırılma noktasının ve 22 adet 3' kırılma noktasının lokalize olduğu intronlar incelendiğinde, genin merkezindeki delesyon bölgelerinde, 5' kırılma noktalarının %32'si 44. intronda, 3' kırılma noktalarının %37'si 50 ve 52. intronlarda toplanmıştır. 19 DMD hastasında mRNA'nın translasyonal okuma çerçevesini değiştiren "out of frame" delesyonlar, 2 BMD hastasında ise mRNA'nın okuma çerçevesini değiştirmeyen "in-frame" delesyonlar oluşmuştur. 2 1 hastada delesyonun tipi ile klinik fenotip arasında gösterilen korelasyon, "reading frame" teorisi ile uyumlu bulunmuştur.

Abstract:
A total of 56 Duchenne muscular dystrophy (DMD) patients, 7 Becker muscular dystrophy (BMD) patients and 1 Intermediate muscular dystrophy patient were analyzed by multiplex amplification of selected exons for intragenic deletions of the dystrophin gene. Deletions were observed in 58% (37 cases) of the patients. The majority of these deletions (25/37) were found to be localized within the central region of the gene (Exons 43-52). The remaining deletions (12/37) were mapped to proximal hot spot (Exons 4-19). It was found that, exon 48 was most frequently affected, while exon 44 was least frequently affected. The number of deleted exons is variable, but single exon deletions are more frequent (43%) than larger deletions in our population. Using the primers specific to 42, 46, 49 and 53. exons which are located in the central region of the gene, starting and ending breakpoint regions of deletions were detected in 2 1 patients. When 25 starting breakpoint regions and 22 ending breakpoint regions were analyzed, intron 44 was involved mostly as a starting breakpoint region whereas intron 50 and intron 52 appeared to be involved as the ending breakpoint region. All of the deletions described for BMD patients were in-frame deletions, and all DMD patients had deletions leading to a frameshift of the dystrophin transcript. Therefore, the conservation of the dystrophin and the severity of the clinical phenotype were concordant in 100% of the DMD/BMD deletions documented in this work.