Sığır ve koyunlarda akabane infeksiyonununserolojik yöntemler, virus izolasyonu vereal tıme RT- PCR ile araştırılması
The investigation of akabane infection in cattle and sheep by serological,virus isolation and real time RT-PCR
Yazar: ESRA SATIR
Danışman: PROF. DR. NURİ TURAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Akabane virüsü = Akabane virus ; ELISA =   ; Koyunlar = Sheep ; Sığırlar = Cattles

Özet:
ÖZET
Akabane infeksiyonu gebe hayvanlarda ve yeni doğanlarda oluşturduğu bozukluklar
sonucu önemli ekonomik kayıplara neden olmaktadır. Ülkemiz dahil birçok ülkede
bildirilmiştir. Virus, duyarlı konaklar arasında Culicoides spp. türü kan emici sineklerle ve
vertikal yolla bulaşmaktadır.
Bu çalışmada, Marmara bölgesinde bulunan çiftlikler ziyaret edilerek 175 sığır ve 50
koyundan EDTA'lı ve antikoagülansız kan alındı. Tuzla ve Hadımköy mezbahalarından 50 sığır
ve 25 koyundan organ ve kan numuneleri toplandı. Pendik Veteriner Kontrol Enstitüsü'ne ve
İstanbul Üniversitesi Veteriner Fakültesi Viroloji Anabilim Dalı'na gelen klinik olarak Akabane
şüphesi taşıyan 25 sığır ve 25 koyunun abort ve ölü yavrulardan akciğer, karaciğer, dalak,
beyin ve plesanta örnekleri alındı. Kan serumu örnekleri ile yapılan ELISA sonucunda 225 adet
sığır serum örneğinden 17 tanesinde (%7,55) seropozitiflik saptandı. Marmara bölgesinde
bulunan 11 ilden toplanan örneklerde sığırlar için seropozitiflik % 0 ile % 15,68 arasında tespit
edildi. Koyun serum örneklerinde herhangi bir seropozitiflik saptanmadı. Akabane şüpheli 25
sığır ve 25 koyun abort ve ölü yavrulardan alınan akciğer, karaciğer, dalak, beyin, plasenta ile
yapılan real time RT-PCR sonucunda 2 sığır numunesinde akabane virus-RNA'sı saptandı. Bu
örneklerden 3 kez pasajlanarak yapılan BHK-21 ve VERO hücre kültürü çalışmalarında CPE
oluşumu gözlenmedi. Hücre kültürünün real time RT-PCR ve RT-PCR ile incelenmesi
sonucunda pozitiflik saptanmadı. Mezbahalardan alınan 50 sığır ve 25 koyun organ ve doku
örnekleri ile yapılan real time RT-PCR ve RT-PCR sonucunda da pozitiflik saptanmadı.
Sonuç olarak, Akabane infeksiyonu serolojik olarak %7,55 oranında saptanmıştır ve
ülkemiz sığırları açısından risk oluşturmaktadır. Türkiye'de tüm bölgelerde prevalansın ortaya
çıkarılmasında ve vektörlerde dikkate alınarak risk analizleri yapılmasında yarar vardır. Bu
amaçla kolay uygulanabilirliği ve çok sayıda serumun kısa sürede incelenebileceği ELISA
testinin kullanılması ve daha sonra pozitif örneklerin teyit edilmesi için real time RT-PCR ile
incelenmesini önermekteyiz. Ayrıca vektör olan sineklerde (Culicoides) virusun bulunma
sıklığının da araştırılmasında yarar vardır.

Abstract:
ABSTRACT
Akabane disease causes economic losses since it triggers serious disorders in peregnant
ruminants and new borns. It has been reported in many countries including Turkey. The
Akabane virus is transmitted by Culicoides spp. mosquitos between susceptible hosts as weel as
vertical transmission.
In this study, sampling had been performed from farms in Marmara region and 175 cattle
and 50 sheep blood samples both with or without EDTA were collected. Also lung, liver,
spleen, brain, plecanta and blood samples were collected from 50 cattle and 25 sheep after
slaughtering in Tuzla and Hadımköy slaughterhouses. In addition, lung, liver, spleen, brain and
placenta samples were taken from 25 cattle and 25 sheep, abortions or dead newborns which
were brought to Pendik Veterinary Control Institute and Virology Department of Istanbul
University, Faculty of Veterinary Medicine, suspected of Akabane disease. In ELISA
performed with collected serum samples, 17 (7.55 %) of the 225 cattle samples were found to
be seropositive. Seropositivity ratio in cattle samples achieved from 11 provinces in Marmara
region was detected between 0% - 15.68%. On the other hand, no seroposivity to Akabane virus
was detected in sheep sera. Akabane virus–RNA was detected in 2 samples (lung, liver, spleen,
brain and placenta) taken from 25 cattle and 25 sheep abortions or dead newborns. No CPE was
observed in VERO and BHK-21 cells when 2 real time RT-PCR positive samples subjected to
virus culture. Also no amplification was detected in these cells by both real time RT-PCR and
RT-PCR. In addition, no positivity was detected by real time PCR and RT-PCR in lung, liver,
spleen, brain, placenta and blood samples collected from 50 cattle and 25 sheep from Tuzla and
Hadımköy slaughterhouses.
In conclusion, antibodies to Akabane virus were detected in 7.55% cattle and pose a
risk to cattle in Turkey. It will be good to know overall seroprevalence in all regions in Turkey
by considering vectors in order to make risk analyses. For this, ELISA is a good technique to
analyse many samples at a time and seropositives can be analysed by real time RT-PCR for
definitive diagnosis. Also, it will be good to know the frequency of Akabane virus in vectors
such as Culicoides.