Ektopik bir enzim olan hücre yüzey antijeni CD38 anlatımının çeşitli hücre modellerinde incelenmesi
Investigation of CD38 expression, a surface antigen and ectopic enzyme, in various cell models.
Yazar: LEYLA TÜRKER ŞENER
Danışman: DOÇ. DR. IŞIL ALBENİZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyofizik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Biyofizik = Biophysics
Dizin: Antijenler-yüzey = Antigens-surface ; Ehrlich asit tümörü =   ; Elektroforez-poliakrilamid jel = Electrophoresis-polyacrylamide gel ; Enzimler = Enzymes ; Fetal kan = Fetal blood ; Hematopoietik sistem = Hematopoietic system ; Kök hücreler = Stem cells

Özet:
Kanser hücresi biyolojisi konusunda son zamanlarda dikkati çeken bir molekül lenfosit yüzey antijeni CD38'dir. CD38 lenfositlerin genç (blast) evrelerinin yüzeyinde gözlenen bir membran proteinidir. Kanser hastalarındaki CD38'i indükleyici etkinin, bazı serum faktörlerinin varlığından kaynaklandığı düşüncesiyle oluşturduğumuz model sistemde CD38 ilişkili enzim etkinliklerinde anlamlı artışlar bulundu. Benzer artışlar, Ehrlich asit tümör hücrelerinin aktarılmasıyla tümör oluşturulan Balb/c farelerinden alınan serum ile kanserli hastalardan elde edilen serumların normal Balb/c'lere enjekte edilmesi sonrasında yapılan NAD Glikohidrolaz ve ADP-ribozil siklaz etkinliklerinde de kontrollere göre anlamlı artışlar gözlendi. Ehrlich hücreleri içeren fare serumu enjeksiyonu yapılmış olan Balb/c'lerin eritrositleriyle yapılan Western emdirim analizlerinde, 45 kDa'luk bölgede CD38 reaktif protein bantı saptandı. Bu farelerin EAT hücresi enjeksiyonlarından 8 gün sonra 45 kDa bandı görünür olup, 12. günün sonunda maksimum yoğunluk kazandı. Aynı grubun lenfosit membran proteinleriyle yapılan çalışma sonucunda benzer bulgular elde edildi. Kontrol grubunda anti-CD38 bandına rastlanmamışken, EAT enjekte edilmiş grupta yine sekizinci günde bant görülüp onikinci günde maksimum yoğunluk kazandı. Bu yoğunluk yirmibirinci günde de korundu.CD38'in eritrosit farklılaşmasının hangi aşamasında etkinlik kazandığı hematopoetik kök hücre sistemi kurularak açıklandı. Eritroid gelişim yolağında CD38 anlatımının izlenmesi amacıyla kordon kanından elde edilen ilkel/öncül insan hematopoetik hücreleri, serumdan yoksun kültür ortamında uygun kök hücre faktörü ve eritropoetin katkıları varlığında eritroid gelişim süreci boyunca izlendi. Eritroid gelişimi sırasında ikinci fazda CD38 etkinliğinin sekizinci günden itibaren belirgin şekilde arttığı hem NAD glikohidrolaz etkinlik testiyle hem de SDS-PAGE elektroforezi sonrası yapılan Western emdirim tekniğiyle tespit edildi. Ayrıca hücre kültür çalışmalarında co-kültür deneyleri, CD38 anlatımı üzerine olan uyarıcı etkinin bazı serum faktörlerinin varlığından kaynaklandığı görüşünü destekledi. Bu bulgular ayrıca CD38 indüksiyonunun çoğalma sürecinde bazı proinflamatör sitokinler üzerinden muhtemelen tetiklenişi çoğalma veya apoptotik süreci birlikte içeren bir olay olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
A molecule recently become apparent on the cancer cell biology is the lymphocyte surface antigen CD38. CD38 is a membrane protein seen on the young (blast) phases surfaces of lymphocytes. In our model system, composed by the idea that the inducting effect of CD38 among the cancer patients has resulted due to some serum factors, meaningful increases have been found in the enzymatic activities related to CD38.The similar increases, meaningful increases have been found compared to controls in the NAD Glycohydrolase and ADP-ribosyl cyclase activities obtained after injecting serums taken from the cancer patients and from Balb/c mice tumor-formed by the transfer of Ehrlich acid tumor cells, into the normal Balb/c. In Western blot analyses performed by Ehrlich cells containing mouse serum injected Balb/c erytrocytes, within 45 kDa region a reactive CD38 protein band has been detected. After 8 days from these mice EAT cell injections, 45 kDa band has become visible, at the end of the 12th day a maximum density has appeared. Similar findings have been obtained as the result of the study conducted by the lymphocyte membrane proteins of the same group. While anti-CD38 band has not been seen on the control group, in the EAT injected group on day eight the band appeared and on day twelfth maximum density has appeared. This density has been maintained on day twenty first.The fact in which phase of the erythrocyte differentiation CD38 became active has been explained by composing hematopoietic stem cell system. With the purpose of following CD38 expression within the erythroid progress network, primitive/ pioneer human hematopoetic cells obtained from cordon blood, has been monitored in cultivation deprived of serum with the participation of the erythropoetin and the appropriate stem cell factor during erythroid development process. During erythroid development within second phase the finding that CD38 activity has increased prominently from day eight has been detected both by NAD glycohydrolase activity test and by Western blot technique performed after SDS-PAGE electrophoresis. Apart from these, co-culture experiments within the studies cell culture studies, have supported the idea that the stimulant effect of the CD38 expression has resulted from some serum factors. These findings also consider that through CD38 induction proliferation process, it is an event containing induction proliferation and apoptotic process together over some proinflammator cytokins.