Protez taşıyan bireylerde tükürük ve mukoza örneklerinde Candida albicans taranması ve moleküler yöntemler ile tiplendirilmesi
Scanning of Candida albicans in dental prosthesis wear individuals' samples of saliva and mucosa and typing by molecular methods
Yazar: ÖZLEM ABACI
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ALEV HALİKİ UZTAN
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Candida albicans = Candida albicans

Özet:
Bu çalışmada, 30 tam protez kullanan birey, 30 hareketli bölümlü protez kullanan birey, 30 sabit protez kullanan birey ve 20 doğal dişli bireyden oluşan kontrol bireyleri olmak üzere toplam 110 bireyden tükürük örneği, dil ve damak mukozasından sürüntü örneği alınmıştır. Bireyler Newton sınıflandırmasına göre protez stomatitinin gelişimi açısından değerlendirilmiştir.İzole edilen maya türlerinin tanısı CHROMagar Candida ortamında koloni rengi, germ tüpü ve klamidospor oluşumu ve API 20C AUX kitleri kullanılarak fenotipik olarak yapılmıştır. Ayrıca, fenotipik olarak 45 ºC'de büyüme, TTC indirgenmesi, genotipik olarak Species-Specific PCR, C. albicans olarak tanılanan suşların doğrulanması için yapılmıştır. Ayrıca bazı risk faktörlerinin Candidal taşıyıcılık üzerine etkisi incelenmiştir.Protez stomatitinin gelişimine tam protez kullanan bireylerde sık rastlandığı, hareketli bölümlü protez kullanan bireylerde daha az ve sabit protez kullanan bireylerde ise en az olduğu saptanmıştır. Tükürükte maya sayısı ?400 kob/ ml olduğu zaman protez stomatiti gelişim sıklığı artmıştır. Protez stomatiti gelişiminde C. albicans'ın sıklığının artığı gösterilmiştir. Protez stomatiti gelişen bireylerin tükürük, damak sürüntüsü ve dil sürüntüsü örneklerinde en sık rastlanan türün C. albicans olması protez stomatiti gelişiminin sebebinin C. albicans olduğunu göstermektedir. Protez hijyeni, Candidal gelişim yoğunluğu (p=0,00<0,01) ve protez stomatiti gelişimi (p=0,002<0,01) ile ilişkili bulunmuştur.Çalışmamızda ayrıca, protez kullanan bireylerde şikayet gelişen hastalardan izole edilen C. albicans suşları ile herhangi bir şikayeti olmayan hastalardan izole edilen C. albicans suşlarının genotipik olarak karşılaştırılması yapılmıştır. Burada ise amaç protez ağrısına neden olan suşun diğer suşlardan genotipik olarak farklı olup olmadığını araştırmaktır. Tükürük örneği, dil ve damak sürüntü örneği olmak üzere her bireyden 3 örnek alınmıştır. 19 bireyde her 3 örnekte (3 izolat), 14 bireyde sadece tükürükte (1 izolat), 7 bireyde tükürük ve dil sürüntü örneklerinde (2 izolat) ve 12 bireyde ise tükürük ve damakta (2 izolat) C. albicans saptanmıştır. Bu şekilde 52 tükürük örneğinden, 26 dil sürüntü örneğinden ve 31 damak sürüntü örneğinden olmak üzere toplam 109 C. albicans suşu elde edildi ve CA-21 ve CA-22 primerlerinin kullanıldığı REP-PCR tiplendirildi. 6 referans suş da çalışmaya dahil edildi. Çalışmanın sonuçlarına göre; REP-PCR 109 C.albicans suşu ve 6 referans suşu 44 farklı genotipe ayırabilme yeteneğinde bulunmuştur. C. albicans suşlarının heterojen dağılım gösterdikleri ve protez ağrısı mevcut bireylerden izole edilen C. albicans suşlarının özel bir genotip göstermedikleri saptanmıştır. REP-PCR basit, hızlı, maliyeti az olan bir yöntem olup, çok sayıda örneğin çalışılmasını sağlamıştır.

Abstract:
In this study, saliva samples, smear from palatal mucosa and dorsum of the tongue were taken from total of 110 induvidials to 30 complete denture, 30 removable partial denture, 30 fixed protshesis users, and 20 induvidial with natural teeth. Individuals were evaluated for DRS (Denture-related stomatitis) according to Newton?s classification.Identification of yeast species were made by colony color on CHROMagar Candida medium, germ tube and chlamydospores formation and API 20C AUX as fenotypicaly. Morever, growth at 45 ºC, TTC (2,3,5-triphenyl-terazolium chloride) reduction as fenotypic and Species-specific PCR as genotypic were made for verification of strains identified as C. albicans. And also evaluated impact of some risk factors on candidal carriage.The DRS development is most common in complete prosthesis users and development of DRS is less in the removable partial prosthesis users than in the total prosthesis users and minimum in fixed prosthesis users. When the count of yeast in saliva ?400 cfu/ml, frequency of DRS is increased. In individuals who develop DRS, most frequently encountered species has been identified as C. albicans. Prosthetic hygiene was related with intensity of candidal growth and the development of DRS.In our study also, C. albicans strains isolated from complaining patients who use dental prosthesis and C. albicans strains from the patients who have no complaints were compared genotypically. The target of this is to search whether the strain causing prosthesis stomatitis is genotypicaly different from other strains.Saliva samples, smear from palatal mucosa and dorsum of the tongue to, 3 samples were taken from each individuals. In each 3 samples (3 isolate) for 19 individuals, only in saliva (1 isolate) for 14 individuals, in saliva and tongue smear ( 2 isolate) for 7 individuals, and in saliva and palatal smear (2 isolate) for 12 induvidials, C. albicans was determined. Thus, 52 strain from saliva samples, 26 strain from tongue smear samples, and 31 strains from palatal smear samples to total 110 C. albicans strain were obtained and were typed by REP-PCR using CA-21 and CA-22 primers. 6 reference strains were also included.The study showed that Rep-PCR was shown to be capable of discriminating 109 C. albicans starins and 6 reference strains in to 44 genotypes. And, it was determined that C. albicans strains show heterogeneous distribution and also C. albicans strains were isolated from individuals with DRS didn?t show particular genotype. Rep-PCR is simple, rapid, highly discriminatory, cost effective, and allow analysis of large numbers of samples.