Over foliküler atrezide FSH uygulamasının granüloza hücreleri mitokondrionları üzerinden etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of FSH application on granulosa cells mitochondria in ovarian follicular atresia
Yazar: MELTEM ÜÇÖZ
Danışman: PROF. DR. MAHMUT KEMAL ÖZBİLGİN
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Folikül uyarıcı hormon = Follicle stimulating hormone ; Foliküler atrezi = Follicular atresia ; Gonadotropinler = Gonadotropins ; Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Koryonik gonadotropinler = Chorionic gonadotropins ; Lüteinleştici hormon = Luteinizing hormone ; Over = Ovary ; Sirtuin = Sirtuin

Özet:
Özet: Folikülogenez, primordial germ hücrelerinde başlar ve matür folikül gelişimine kadar devam eder. Sonucunda olgun oosit ortaya çıkmaktadır. Primordial folikül sayısı, erken embriyonik dönemde fazladır fakat puberteye kadar azalır ve her siklusta yaklaşık 1000 folikül kaybı menopozla birlikte sona ermektedir. 
Overdeki foliküllerin %99'unun atreziye uğradığı ve granüloza hücrelerinin foliküler atrezide rol oynadığı bilinmektedir. Granüloza hücrelerinde oluşan  oksidatif stresin atreziyi başlatıcı etkisi olduğu ileri sürülmektedir.  
Folikül gelişimi, hormonal ve çevresel uyarıların kontrolü altında gerçekleşmektedir. Aşırı Folikül Uyarıcı Hormon (FSH) kullanımının foliküler gelişimi bozduğu  ileri sürülmektedir.  FSH'ın, phospho-mTOR (p-mTOR)  yolağı ekspresyonunu aktive ettiği, uygulamadan 1,5 saat sonra mikrotübülle ilişkili protein 1A/1B hafif zincir 3 (LC3-I) akumulasyonunu ve 3 saat sonra  p-mTOR yolağını  inhibe ederek otofajiyi arttırdığı da bilinmektedir. 
Voltaj bağımlı anyon seçici kanal proteini 2 (VDAC2); apoptoz ile ilişkilidir. VDAC2'nin dominant folliküllerde varlığı gösterilmiş, folikülleri apoptozdan koruyarak folikülün devamlılığını sağlamaktadır.
Sirtuin-6 (SIRT6); preantal folikül gelişiminin inbibe edilmesi, foliküllerin gelişimini uzattığı ve ovaryan yaşlanmayı azalttığı bilinmektedir.
Gereç ve Yöntem: Fareler rastgele her grupta 6 fare olacak şekilde 4 gruba ayrıldı. Farelerin ötenazileri yapıldıktan sonra overleri toplandı. Ovaryumlar immunohistokimyasal  ve qPCR  ile incelemek için kullanıldı ve istatistiksel olarak değerlendirildi.
Bulgular: Hematoksilen eozin boyama sonucu ovarum dokusu ve foliküller saptandı. Folikül sayımı ile doz artışına bağlı sağlıklı ve atretik folikül sayısı tespit edildi. Otofajik ve mitokondral ilişkili markerlar ile atretik foliküller PCR ile desteklenerek tespit edildi.
Sonuç: Çalışmada In Vitro Fertilizasyon (IVF) tedavilerinde yaygın olarak yüksek dozda kullanılan gonadotropinlerin over atreziye neden olup olmadığı; otofajik markerlar olan LC3B ve SIRT6, mitokondrial ilişkisi ise VDAC2 ile immunohistokimyasal ve moleküler olarak  incelendi.

Abstract:
Abstract: Folliculogenesis begins in primordial germ cells and continues until mature follicle development. The result is a mature oocyte. The number of primordial follicles is high in the early embryonic period, but decreases until puberty, and the loss of approximately 1000 follicles per cycle ends with menopause.
It is known that 99% of the follicles in the ovary undergo atresia and granulosa cells play a role in follicular atresia. It has been suggested that oxidative stress in granulosa cells has an initiating effect on atresia.
Follicle development takes place under the control of hormonal and environmental stimuli. It is suggested that excessive use of Follicle Stimulating Hormone (FSH) impairs follicular development. FSH activates the expression of the phospho-mTOR (p-mTOR) pathway, inhibits the accumulation of microtubule-associated protein 1A/1B light chain 3 (LC3-I) 1.5 hours after administration and increases autophagy by inhibiting the p-mTOR pathway 3 hours later. is also known.
voltage dependent anion selective channel protein 2 (VDAC2); associated with apoptosis. The presence of VDAC2 in dominant follicles has been shown, and it ensures the continuity of the follicle by protecting the follicles from apoptosis.
Sirtuin-6 (SIRT6); It is known that inhibiting preantal follicle development prolongs the development of follicles and reduces ovarian aging.
Materials and Methods: Mice were randomly divided into 4 groups with 6 mice in each group. After the mice were euthanized, their ovaries were collected. The ovaries were used to examine by immunohistochemistry and qPCR and were evaluated statistically.
Results: Ovarian tissue and follicles were detected as a result of hematoxylin-eosin staining. With the follicle count, the number of healthy and atretic follicles was determined due to dose increase. Autophagic and mitochondral related markers and atretic follicles were detected by PCR support.
Conclusion: In the study, whether high-dose gonadotropins commonly used in In Vitro Fertilization (IVF) treatments cause ovarian atresia; autophagic markers LC3B and SIRT6 and their mitochondrial relationship with VDAC2 were examined immunohistochemically and molecularly.