Korneal epitel bütünlüğü bozulmadan riboflavin stromaya geçebilir mi? Tavşanlarda ultra performans sıvı kromatografisi ile iyontoforez çalışması
Can riboflavin penetrate stroma without disrupting integrity of corneal epithelium? Ionthophoresis with ultra-performance liquid chromatography in rabbit eyes
Yazar: SHAHİN NOVRUZLU
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA KAMİL BİLGİHAN
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Aköz sıvı = Aqueous-humor ; Kornea = Cornea ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Riboflavin = Riboflavin ; Stroma = Stroma ; Tavşanlar = Rabbits ; İyontoforez = Iontophoresis

Özet:
Amaç: Tavşanlarda Korneal Kollajen Cross-linking öncesinde,  standart, transepitelyal ve korneal epitel bütünlüğünü bozmadan iyontoforez yardımı ile riboflavin uygulaması sonrasında kornea ve humör aközde riboflavin konsantrasyonlarının incelenmesi.
Metod: Çalışmada 12 erişkin Yeni Zelanda tavşanının 24 gözü kullanılmıştır. Her grupta 6 göz olacak şekilde 4 grup oluşturulmuştur. Standart yöntemde epitel debridmanı sonrası %0.1 riboflavin , transepitelyal yöntemde 1.5 dakika arayla 3 kez BAC, EDTA, Tris, HPMC, % 0.25 riboflavin ardından 4 kez % 0.25 riboflavin, iyontoforez yardımı ile korneal epitel bütünlüğünü bozan maddeler kullanılmadan 10 dk boyunca 1mA elektrik akımı kullanılarak %0.1 ve %0.25 riboflavin uygulanmıştır. İşlem sonrası alınan humör aköz ve korneadaki riboflavin konsantrasyonları Ultra Performans Sıvı Kromatografisi (UPLC-ESI-MS/MS) kullanılarak ölçülmüştür.
Sonuç:  Standart yöntemde korneal ve humör aközdeki riboflavin konsantrasyonları diğer gruplardan yüksek saptandı. İyontoforez yardımı ile %0.25 riboflavin uygulanan gözlerdeki korneal riboflavin konsantrasyonu hem  transepitelyal yöntemden (p=0.009), hem de iyontoforez yardımı ile %0.1 riboflavin uygulanan gözlerden (p=0.026) anlamlı düzeyde yüksek ölçüldü. Transepitelyal ve iyontoforez yardımı ile %0.1 riboflavin uygulanan gözlerde korneal riboflavin konsantrasyonu açısından fark saptanmadı (p=0.937)
Yorum: Korneal epitel bütünlüğünü bozmadan iyontoforez yardımı ile %0.25  riboflavin uygulaması  sonrasında, standart uygulamadan  daha düşük, transepitelyal uygulamadan daha yüksek düzeylerde  intrastromal ve aköz riboflavin konsantrasyonları ölçülmüştür. 
Riboflavin konsantrasyonunu çok hassas bir şekilde ölçümlediğimiz bu çalışmada, iontoforez yönteminin epitel bütünlüğünü bozan maddeler kullanılmadan da riboflavin molekülünün korneaya geçişini arttırdığı izlenmiştir.

Abstract:
Purpose: To examine riboflavin concentrations in corneas and aqueous humor with standard and transepithelial methods and iontophoresis without disrupting integrity of corneal epithelium in rabbits before corneal collagen cross-linking.
Methods: Twenty-four eyes of 12 adult New Zealand rabbits were used. They were assigned into four groups, each including six eyes. Group 1 was exposed to the standard method and given riboflavin 0.1% following epithelial debridement. Group 2 was exposed to the transepithelial method and given BAC, EDTA, TRIS, HPMC and riboflavin 0.25% three times at 1.5-minute intervals followed by riboflavin 0.25%. Group 3 was given riboflavin 0.1% by using 1mA electric current for ten minutes with the help of iontophoresis without using substances disrupting integrity of corneal epithelium. Group 4 received the same treatment as Group 3 except that it was given riboflavin 0.25%. Following these treatments, riboflavin concentrations in aqueous humor and corneas were measured with ultra-performance liquid chromatography (UPLC-ESI-MS/MS).
Results: Riboflavin concentrations in the cornea and aqueous humor were higher in Group 1 than in the other groups. They were significantly higher in Group 4 than in Group 2 (p=0.009), and Group 3 (p=0.026). There was not a significant difference in corneal riboflavin concentrations between Group 2 and Group 3 (p=0.937)
Conclusion: Intrastromal and aqueous riboflavin concentrations after administration of riboflavin 0.25% through iontophoresis without disrupting integrity of the corneal epithelium were lower than those after the standard method, but higher than those after the transepithelial method. 
In the present study, in which riboflavin concentrations were measured with a very sensitive method, iontophoresis was observed to increase transmission of riboflavin molecules into the cornea without using substances disrupting the epithelial integrity.