Atlarda Equine Arteritis Virus (EAV) İnfeksiyonu'nun Virus İzolasyonu , Serolojik ve Moleküler Yöntemlerle Tanısı ve İnfeksiyonun Marmara Bölgesindeki Sıklığı
Investigations on the frequency and diagnosis of Equine Arteritis Virus (EAV) infection in horses by virus isolation, molecular and serological techniques in the Marmara region
Yazar: HASAN SAGED
Danışman: PROF. DR. NURİ TURAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmanın amacı, atlardan Equine Arteritis Virusu'nun izolasyonu, revers transkriptaz PCR (RT¬PCR) ile saptanması ve virusa karşı oluşan antikor varlığının ELISA ile araştırılmasıdırBu amaçla, Marmara bölgesinde bulunan 7 adet at çiftliğinden 252 kan serumu, 223 burun swabı, 27 bronkoalveolar lavaj, 67 buffy coat (lökosit) ve 12 atık fötus örneği toplandı. Kan serumları EAV'una karşı oluşan antikorları saptamak için ELISA ile test edildi. Burun swabları, bronko-alveolar lavaj, buffy coat ve atık fötuslardan ticari kit kullanılarak RNA ekstraksyonu yapıldıktan sonra EAV RNA'sının tespiti için RT-PCR yöntemi kullanıldı. Ayrıca ilk olarak EAV referans suş kullanılarak RK-13 ve Vero hücre kültürlerinde virus izolasyonu çalışmaları ve RT-PCR standardizasyonu yapıldı..RT-PCR çalışmaları sonucunda örneklerin hiçbirinde EAV RNA'sı saptanmadı ancak referans EAV suşunda 279 bp ürün (EAV RNA) tespit edildi. Virus izolasyonu çalışmalarında sadece referans suşta CPE saptandı. Referens suşun hücre kültürlerinde RT-PCR ve real-time RT-PCR ile EAV RNA saptanırken at örneklerinin hücre kültürlerinde EAV RNA'sı saptanmadı. ELISA ile 19 (%7.5) adet kan serumunda EAV'una karşı antikorlar saptandı.Anahtar Kelimeler: Equine Arteritis Virus, RT-PCR, ELISA, izolasyonu, Marmara.Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: T-875/02062006Virus izolasyon çalışmalarında referans suş hücre kültürlerinde CPE oluşturdu ve RT-PCR ile pozitiflik saptandı. Ancak örneklerin hücre kültürlerinde

Abstract:
The aim of this study was isolation and detection of Equine Arteritis Virus in horses by revers-transcriptase PCR (RT¬PCR). The detection of antibodies to EAV by ELISA was also aimedFor this aim, 7 horse studs located in the Marmara region of Turkey were visited and 252 sera, 223 nasal swabs, 27 bronchoalveolar wash, 67 buffy coat and 12 aborted fetuses were collected. Sera were analysed for the presence of antibodies to EAV by ELISA. RNA was extracted from nasal swabs, bronchoalveolar wash, buffy coat and aborted fetuses by using commercial kit. The RT-PCR was performed to detect RNA of EAV in a standardized PCR reaction. In addition, for the first time, EAV referens strain was isolated using the RK-13 and Vero cells.RNA of EAV was not detected in any of the samples analysed by RT-PCR while a 279 bp PCR product (RNA of EAV) seen on the gel when referens strain tested. Cytopatic effect was observed on the cells inoculated with EAV referens strain only. A 279 bp PCR product (indicative for RNA of EAV) was detected in the cell culture of referens strain by RT-PCR and real-time RT-PCR while no RNA of EAV was detected in the cell culture of horse samples . Antibodies to EAV were detected in 19 (%7.5) horse sera by ELISA.Key Words: Equine Arteritis Virus, RT-PCR, ELISA, isolation, Marmara.This study was funded by the Scientific Research Foundation of the University of Istanbul (Project No: T-875/02062006).