Sığır brusellozunun teşhisi için sütte indirekt ELISA'nın kullanımının değerlendirilmesi
Evaluation of using ELISA in milk for diagnosis of brucellosis in cattle
Yazar: İBRAHİM ÇADIRCI
Danışman: DOÇ. DR. SEVİL ERDENLİĞ GÜRBİLEK
Harran Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Brusella = Brucella ; Bruselloz = Brucellosis ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Süt = Milk ; Sığırlar = Cattles

Özet:
Bruselloz insanlarda ve hayvanlarda ciddi enfeksiyonlara neden olan önemli bir zoonozdur. Bu enfeksiyon kamu sağlığı için bir risk ve hayvancılık sektörü için büyük ekonomik kayıplar oluşturur. Serolojik testler, etkenin kültüründen daha çabuk ve daha pratik olduğu için hastalığın tanısında yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Bu çalışmada sütte anti Brucella antikorlarını saptamak için bir indirekt süt ELISA prototipi geliştirilmesi hedeflendi. Daha önce B. abortus biyotip 3 izole edilen enfekte çiftliklerden alınarak rose bengal pleyt testi (RBPT) ve komplement fiksasyon testi (KFT) ile test edilerek pozitif bulunan toplam 36 süt ve serum örneği ilebrucella ari sürülerden alınan 45 adet süt ve serum örnekleri tanısal duyarlılık ve özgüllüğün saptanmasında receiver-operating characteristic (ROC) ile analiz edildiler. Serum örneklerine uygulanan ile aynı duyarlılık ve özgüllük gösteren testi süt örneklerine uygulamak süt sığırları için avantajlı ve pratik bir yöntemdir. Madem ki sütteki IgG konsantrasyonu serumla korelasyon göstermektedir, o halde sütü, hayvanın immünolojik durumunu yansıtacak bir örnek olarak düşünmek mantıklı olacaktır. Çalışmada elde ettiğimiz sonuçlara göre, testin eşik değeri % 29.3 yüzde pozitivite (PP) alınarak, duyarlılık (sensitivite) % 96,15 [%95 (güven eşiğindeki sınırlar(%80.36-99.9)] ve özgüllük (spesifisite) %95.65 [%95 (güven eşiğindeki sınırlar(%85.16-99.47)] olarak saptandı. Sonuçlarımız aynı zamanda aynı hayvandan alınan süt ve serum sonuçları arasında korelasyon göstermiştir. Süt ring testi (SRT) KFT ve RBPT sonuçlarına göre en yüksek oranda yanlış pozitif sonuç vermiştir.
Çalışmanın sonunda elde ettiğimiz bulgular, indirekt süt ELISA prototipinin oldukça duyarlı ve özgül bir test olduğunu ve sütün mevcut olduğu durumlarda hastalığın serolojik tanısı için süt sığırlarında hayvanlarda stress yaratmadan kullanılabileceğini ortaya koymuştur. Dolayısı ile süt sığırcılığı işletmelerinde bruselloz ile ilgili güvenilir ve sağlam veriler, ekonomik ve pratik olarak elde edilebilecektir.

Abstract:
Brusellosis is an important zoonosis that cause serious infections in man and animals. This infection constitutes a risk for public health and big economical losses in animal industry. Serological tests have been intensively used for serologic diagnosis of the disease because of being quicker and more practical than culturing of the causative organism. In this study it was aimed to develop an indirect milk ELISA prototype was developed for the determination of anti Brucella antibodies in milk. A total of 36 serum and milk samples received earlier from infected farms in which B. abortus biotype 3 isolated and identified with Rose Bengal Plate Test (RBPT) and Complement fixation test (CFT) records and 45 milk and serum samples from brucellosis free herds were used for receiver-operating characteristic (ROC) analysis in determining diagnostic sensitivity and diagnostic specificity, respectively. A test from milk samples with similar sensitivity and specificity as those applied to serum samples is economically advantageous and practical for dairy cattle. Since concentration of Ig G in milk correlates well with serum levels, it will be reasonable to think that milk reflects the immunological status of the animal. According to our results, it was determined at 29.3 percent positivity (PP) giving a sensitivity of 96,15% with a 95% confidence interval (CI) [95% (80.36%-99.9%)] and a specificity of 95.65% [95% CI ((%85.16-99.47)]. Our results also showed correlation in antibody level in serum and milk received from the same animal. MRT showed high false positive results related to the CFT and RBPT results.
As conclusion our results indicated that the indirect milk ELISA prototype is a highly sensitive and specific test and could be used without being invasive in dairy cattle for serologic diagnosis of brucellosis whenever milk available for this purpose. Therefore, reliable and robust data about brucellosis in dairy farms would be obtained practically and economically.