Fare endometriyumundan geliştirilen organoidde implantasyon potansiyeli
Implantation potential in organoid from mouse endometrium
Yazar: SEMA GENCÜR
Danışman: PROF. DR. HAFİZE SEDA VATANSEVER
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Endometriyum = Endometrium ; Fareler = Mice ; Kısırlık = Infertility ; Organoidler = Organoids

Özet:
Bu çalışmada fareden endometrial organoid oluşturulması, oluşturulan endometrial organoide blastokistlerin implantasyon potansiyelinin incelenmesi ve insan kökenli mezenkimal kök hücrelerin hem organoid oluşumu hemde implantasyon başarısındaki yerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla östrus dönemindeki 6-8 haftalık Balb-c dişi fareler kullanıldı. Eş zamanlı olarak östrus dönemindeki 3 adet dişi farelerden embriyonik 3,5. günde toplanan blastokistler çalışma gruplarına göre eklenerek kültüre edildi. Çalışma grupları; proliferasyon evresindeki endometrial organoid kültürü (grup 1), proliferasyon evresindeki endometrial organoid + iMKH ile 48 saat indirekt ko-kültürü (grup 2), sekresyon evresindeki endometrial organoid kültürü (grup 3a), sekresyon evresindeki endometrial organoid +blaskosit kültürü (grup 3b), sekresyon evresindeki endometrial organoid + iMKH 48 saat indirekt ko-kültürü (grup 4a) ve sekresyon evresindeki endometrial organoid + iMKH 48 saat indirekt ko-kültürü+ blastokist kültürü (grup 4b) şeklinde oluşturuldu. Çalışma sonrasında model histokimyasal analiz için hematoksilen-eozin boyaması ile immunohistokimyasal analiz için LIFR, pan-sitokeratin, müsin 1, MMP9 ve CD146 dağılımları image j analiz yöntemi ile değerlendirildi. Çalışma gruplarına göre Hematoksilen-Eozin ile boyanmasında bez ve epitel yapıları açıkça görüldü. Yapılan indirekt immunohistokimya boyamasında çalışma gruplarına göre incelenen protein immünoreaktivitelerinin normal endometriyum dokusunu yansıtacak düzeyde farklılıkların olduğu görüldü.Çalışmada uygulanan protokol ve kullanılan faktörler ile proliferasyon-sekretuar dönemdeki, iMKH ve blastokist ilave edilen gruplardaki farklılıkların anlamlı olmasıyla in vitro endometrial organoid modelin oluşturulabildiği sonucuna varıldı.

Abstract:
In this study, we were aimed to create an endometrial organoid from mice, to examine the implantation potential of blastocysts in the formed endometrial organoid, and to examine the role of human-derived mesenchymal stem cells in both organoid formation and implantation success.For this purpose, 6-8 weeks old Balb-c female mice in estrus period were used. Simultaneously, on embryonic 3,5. blastocysts collected daily were added according to study groups and cultured.Study groups; endometrial organoid culture in proliferation stage (group 1), 48 hours indirect co-culture with proliferation stage endometrial organoid iMKH (group 2), endometrial organoid culture in secretion stage (group 3a), endometrial organoid blascocyte culture in secretion stage (group 3b), endometrial organoid iMKH was created as 48 hours indirect co-culture (group 4a) and secretory endometrial organoid iMKH 48 hours indirect co-culture blastocyst culture (group 4b). After the study, the distribution of LIFR, pan-cytokeratin, mucin 1, MMP9 and CD146 for immunohistochemical analysis with hematoxylin-eosin staining for model histochemical analysis was evaluated using image j analysis method. According to the study groups, gland and epithelial structures were clearly seen in Hematoxylin-Eosin staining. In indirect immunohistochemistry staining, protein immunoreactivities examined according to study groups were found to be different, reflecting normal endometrial tissue. It was concluded that the in vitro endometrial organoid model could be created due to the significant differences between the protocol and the factors used in the study and the proliferation-secretory period, the groups in which IMKH and blastocyst were added.