Valproik asit, Ara-C ve ATRA'nın pediyatrik AML hücre hattı proliferasyonuna ve viabilitesine etkileri
The Effects of Valproic acid, Ara-C and ATRA on AML cell line proliferation and viability
Yazar: AYÇA GÜL KANBAY
Danışman: PROF. DR. SENİYE SEMA ANAK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pediatrik Temel Bilimler Ana Bilim Dalı / Hematolojik Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Lösemi-miyeloid-akut = Leukemia-myeloid-acute ; Retinoidler = Retinoids ; Valproik asit = Valproic acid

Özet:
Kanbay, A.G. (2013). Valproik asit, Ara-C ve ATRA'nın pediyatrik AML hücre hattı proliferasyonuna ve viabilitesine etkileri. İstanbul Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Temel Pediatrik ABD. Yüksek Lisans Tezi. İstanbul. 
HDAC inhibitörü özelliği yanında valproik asitin (VPA), antikonvülzan ajan ve klinikte manik depresyon tedavilerinde duygudurum düzenleyici özellikleri olduğu da bilinmektedir. HDAC inhibisyonu aktivitesinden ve yıllardır güvenli şekilde ilaç olarak kullanılmasından dolayı VPA?nın, kanser tedavileri için de iyi bir aday olabileceği düşünülmektedir. VPA?nın, lösemi hücrelerinde apoptozu uyarırken, normal hücrelerde bu etkiyi göstermediği bilinmektedir. Çocuklarda genellikle iyi tolere edilen VPA?nın, yapılan klinik çalışmalarda pediyatrik AML tedavilerinde etkili bir ajan olduğu belirtilmiştir.
Tez çalışmamızda,  HDAC inhibitörü VPA'nın ve AML tedavisinde kullanılan ilaçlardan Ara-C ve ATRA ile kombinasyonlarının AML hücreleri üzerindeki in vitro etkisi araştırıldı. Denenecek ilacın etki mekanizmasını test eden yöntemlerden biri olan hücre kültürü yoluyla, kanser hücrelerinin en önemli belirteçleri arasında yer alan hücre proliferasyonu ve viabilitesi üzerinde, VPA?nın ATRA ve Ara-C kombinasyonlarının ne kadar etkili olduğunu belirlemeyi amaçladık.  Bu amaçla, VPA, Ara-C ve ATRA varlığının, pediyatrik AML hücre hattı olan 
THP-1 hücrelerinin proliferasyonu ve viabilitesi üzerinde etkisi kültür ortamında incelendi. Ayrıca,  hücre bölünmesinde ve çoğalmasında düzenleyici rolü olduğu bilinen ve DNA hasarı sonrası büyümenin durmasını sağlayan p21 geninin ekspresyonu RT-PCR yöntemi  ile  ölçüldü.
       Tez çalışmamızda, VPA nın tek başına kullanımında hücre viabilitesini etkilemeden, hücre bölünmesinde düzenleyici rolü olan p21 gen ekspresyonunu arttırdığı belirlendi. Hücre canlılık oranın yüksek olması sonucu p21 gen ekspresyon sonucunun doğruluk oranı da yüksek bulundu. Özellikle VPA ile Ara-C kombinasyonunda p21 gen ekspresyonun daha fazla arttığı belirlendi. P21 gen ekspresyonun yüksek olması sonucu, hücre siklusunun durduğu bilinmektedir.
 Tez çalışmamız,  VPA ile  ATRA ve Ara-C kombinasyonlarının AML hücrelerinde ne kadar etkili olduğunun anlaşılmasında, ileride yapılacak olan deney hayvanı çalışmaları ve klinik denemeler için dikkate değer bir veri olacaktır. Bu veriler üzerinden yürütülecek klinik çalışmaların sonuçlarıyla birlikte, yeni bir kemoterapik protokol geliştirilmesine katkı sağlayabilir. Çalışmamızın sonucunda elde edilen bulgular, yeni klinik çalışmaları yönlendirmede yararlı olma potansiyeli taşımaktadır. 
Anahtar Kelimeler :  Valproik asit, Ara-C, ATRA, AML hücre hattı, p21
Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 20282

Abstract:
Kanbay A.G. (2013). The Effects of Valproic acid, Ara-C and ATRA on AML cell line proliferation and viability. İstanbul University, Institute of Health Science, Pediatric Basic Science. Master of Science. İstanbul.  

In addition to its HDAC inhibitory property, Valproic acid is also known as anticonvulsant agent and mood stabilizer in the treatment of bipolar disorders. Due to its HDAC inhibitory activity and its safety in long-term usage, VPA is presumed to be a good candidate for cancer treatment. It is known that VPA induces apoptosis in leukemic cells, while not in normal cells. VPA is reported as an effective agent in treatment of pediatric AML in clinical studies and  is also well tolerated in children.
In this study, the in vitro effect of the combination of HDAC inhibitor VPA with Ara-C and ATRA which are used in AML therapy, is investigated on AML cells. For this purpose, the effect of VPA, Ara-C and ATRA on proliferation of AML cell line THP-1 is tested in cell culture condition. To assess the effect on cell proliferation, p21 expression was measured by RT-PCR method. The use of VPA alone, did not affect the cell viability, while increasing the expression of the p21 gene. VPA in combination with Ara-C, increased the expression of p21 gene more than the other combinations. Thus it is determined that the p21 gene expression is higher as a result of known cell cycle stops.
In this study, the understanding of how effective is VPA together with ATRA and/or Ara-C on AML cells, might be a good start for animal studies and clinical trials as a remarkable data for the development of new chemotherapeutic protocols. 

Key Words: Valproic Acid, Ara- C, ATRA, AML cell line, p21
This study was supported by the Istanbul University Scientific Research Projects Unit.
Projects Number: 20282