Hepatosellüler Karsinom Gelişiminde Hepatosit Büyüme Faktörü/c-Met Yolağı İle Musin1 ve Musin20 arasındaki etkileşimin rolü
The role of the interaction Between Hepatocyte Growth Factor/c-Met Pathway and Mucin1 and Mucin20 in the Development of Hepatocellular Carcinoma
Yazar: GİRAY BOZKAYA
Danışman: PROF. DR. NEŞE ATABEY
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Müsinler = Mucins

Özet:
Farklı hücre tipleri tarafından eksprese edilen yüksek molekül ağırlıklı glikoproteinler olan Musin1 ve Musin20 membrana bağlı musinlerden olup bir yandan bulundukları hücre yüzeyinde koruyucu etki gösterirken diğer yandan hücre yüzey reseptörü ve sensörü olarak görev yapar. Membrana bağlı musinlerin hücre diferansiyasyonu, proliferasyonu ve metastaz süreçlerinde rolleri olduğu, sitoplazmik parçalarının sinyal ileti yolaklarında çeşitli proteinlerle etkileşimleri bulunduğundan, hepatosit büyüme faktörü reseptörü olan c-Met ile de ilişkileri olabileceği düşünülmektedir. Bu sebeple hepatosellüler kanser hücre dizilerinde Musin1 ve Musin20 ile c-Met mRNA düzeyleri reverse transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonu, Musin1 ve c-Met protein ekspresyon düzeyleri western blot ile araştırıldı. Ayrıca, normal, sirotik ve hepatosellüler karsinomlu olgulara ait parafin bloklarda immunohistokimyasal inceleme yoluyla Musin1 ve c-Met ekspresyonundaki değişiklikler belirlendi. Epitelyal fenotipli iyi diferansiye Huh-7, Hep3B ve HepG2 hücrelerinde Musin1'in eksprese edilmediği, mezenşimal fenotipli kötü diferansiye Snu-398, Snu-449, Snu-475, Mahlavu ve SK-Hep1 hücrelerinde ise eksprese edildiği tespit edildi. Protein düzeyinde yüksek Musin1 ve c-Met ekspresyonu yüksek olan Mahlavu hücre dizisinde bazal ve hepatosit büyüme faktörü uyarımına bağlı olarak c-Met ile Musin1 ve beta katenin ile Musin1 arasında fiziksel bir etkileşim olduğu ko-immunopresipitasyon ile gösterildi. Musin1-c-Met, Musin1-beta katenin fiziksel etkileşimlerinin ve S552 fosforile beta-katenin miktarının hepatosit büyüme faktörü uyarımı sonrasında zamana bağlı olarak azaldığı belirlendi. İmmunohistokimyasal incelemelerde normal karaciğer dokusunda Musin1 ve c-Met ekspresyonu bulunmadığı belirlendi. Siroz dokularında Musin1 ekspresyon oranının %15, c-Met ekspresyon oranının %89 olduğu saptandı (sırasıyla p=0.089, p=0.001). Hepatosellüler karsinom dokularında Musin1 ekspresyonunun %45'e çıktığı, c-Met ekspresyonunun ise %88 olduğu tespit edildi (sırasıyla p=0.001, p=0.001). İyi diferansiye hepatosellüler karsinomlarda Musin1 ekspresyon oranlarının orta ve kötü diferansiye olanlara göre daha düşük olduğu görüldü. Sitoplazmik c-Met boyaması orta ve kötü diferansiye hepatosellüler karsinom dokularında iyi diferansiye olanlara göre anlamlı derecede yüksek bulundu (p=0.001).Sonuç olarak bu veriler Musin1 ekspresyon artışının sirozdan hepatosellüler karsinoma geçiş için, c-Met ekspresyon artışının ise siroz gelişim sürecinde önemli olduğunu düşündürmektedir.

Abstract:
Mucin1 and 20 are high molecular weight transmembrane glycoproteins that are expressed by different cell types which have protective effects on the cell surface and on the other hand act as cell surface receptors and sensors. Transmembrane mucins are thought to have roles in the regulation of differantiation, proliferation and metastasis of cells. Since the cytoplasmic domains of transmembrane mucins interact with various proteins in signal transduction pathways, it is thought that they might have association with hepatocyte growth factor receptor, c-Met. The mRNA expression levels of transmembrane Mucin1, Mucin20 and c-Met were investigated in hepatocellular carcinoma cell lines with reverse transcriptase polymerase chain reaction and the protein expression levels of Mucin1 and c-Met were investigated with western blot analysis. Besides, Mucin1 and c-Met expression discrepancies were analyzed in paraffin embedded tissue samples of normal, cirrosis and hepatocellular carcinoma by immunohistochemistry. While there was no Mucin1 expression in well differentiated epithelial cell lines Huh-7, Hep3B and HepG2, poorly differentiated mesenchymal cell lines Snu-398, Snu-449, Snu-475, Mahlavu and SK-Hep1 had Mucin1 expression. It was also determined that c-Met-Mucin1 and beta catenin-Mucin1 co-immunoprecipitate under hepatocyte growth factor induction in Mahlavu cell line which has high Mucin1 and c-Met expression in protein level. These physical associations decreased in a time dependent manner under hepatocyte growth factor induction. Besides, phosphorilated S552 beta catenin levels were also affected by hepatocyte growth factor and decreased time dependently. There was no Mucin1 and c-Met expression in normal liver tissues. Mucin1 and c-Met expression rates in cirrhosis were 15% and 89% and p values were 0.089 and 0.001, respectively. In hepatocellular carcinoma tissues while Mucin1 expression increased to 45%, c-Met expression rate was 88% (p=0.001). Mucin1 expression rate in well differentiated hepatocellular carcinomas were lower than moderate and poorly differentiated ones. A statistically significant elevation was obtained in cytoplasmic c-Met in moderate and poorly differentiated hepatocellular carcinomas compared to well differentiated samples (p=0.001).In conclusion, these data suggest that Mucin1 overexpression is important in transitition from cirrhosis to hepatocellular carcinoma while increase in c-Met expression may have importance in the development of cirrhosis.