Hepatit B aşısına cevapta bağırsak mikrobiyotasının rolünün araştırılması
Investigation of the role of the gut microbiota in the response to hepatitis B vaccine
Yazar: ELİF ÖZÖZEN ŞAHİN
Danışman: PROF. DR. MEHMET KÖROĞLU
Sakarya Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı /  Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Hepatit = Hepatitis ; Hepatit B = Hepatitis B ; Mikrobiyota = Microbiota

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Bu çalışmada Hepatit B aşısına cevap alınan ve alınmayan sağlıklı bireylerin bağırsak mikrobiyom analizleri yapılarak, Hepatit B aşısına cevapta bağırsak mikrobiyotasının rolünün araştırılması amaçlanmıştır. 
GEREÇ VE YÖNTEM: Çalışmaya aşı takvimine uygun şekilde (O.,1., ve 6.) 3 doz Hepatit B aşısı ve 3 doz rapel yapıldığı halde Anti-HBs <10 IU/ml olan 20 hasta ile aşılamadan sonra antikor yanıtı oluşan (Anti-HBs >100 IU/ml) 20 sağlıklı gönüllü olmak üzere 18-65 yaş arası toplam 40 kişi (Mart 2020 – Şubat 2022) dahil edildi. Alınan gaita örnekleri en geç 2 saat içerisinde laboratuvara ulaştırıldıktan sonra pH ölçümü ve Bristol skorlama yapıldı. Mikrobiyom analizleri yapılana kadar taze dondurularak -80°C'de saklandı. Nükleik asit izolasyonu, 16S rRNA PCR, yeni nesil dizileme işlemi, biyoinformatik ve istatistiksel analizler yapıldı.

BULGULAR: Hasta grubunda gaita pH'sı yüksek iken, Firmucites/Bacteroidetes oranı (hasta grubunda 1.31, kontrol grubunda 3.28 ) daha düşük saptandı (p<0.05). Hasta grubunda filum düzeyinde; Bacteroidetes sınıf düzeyinde; Gammaproteobacteria, Bacteroidia, Negativicutes takım düzeyinde; Selenomonadales, Veilloonellales, Bacteroidales aile düzeyine; Selenomonadaceae, Rikenellaceae, Veilllonellaceae cins düzeyinde; Massiliprevotella, Alistipes daha yüksek oranda bulunmuştur. Kontrol grubunda ise; filum düzeyinde; Firmucutes sınıf düzeyinde; Clostridia takım düzeyinde; Clostridiales aile düzeyinde; Lachnospiraceae, Peptostreptococcaceae, Hungateiclostridiaceae daha yüksek oranda bulunmuştur

SONUÇ: Hasta grubunun gaita pH değerleri düşük, Firmucites/Bacteroidetes oranı ise yüksek bulundu. Hasta grubunda filum düzeyinde; Bacteroidetes sınıf düzeyinde; Gammaproteobacteria, Negativicutes takım düzeyinde; Selenomonadales, Veilloonellales, aile düzeyinde; Selenomonadaceae, Rikenellaceae, Veilllonellaceae cins düzeyinde; Massiliprevotella, Alistipes daha yüksek oranda bulunmuştur. Kontrol grubunda ise; filum düzeyinde; Firmucutes sınıf düzeyinde; Clostridia takım düzeyinde; Clostridiales aile düzeyinde; Lachnospiraceae, Peptostreptococcaceae, Hungateiclostridiaceae daha yüksek oranda bulunmuştur. Bu veriler Hepatit B aşısına cevap alınamayan grupta bağırsak disbiyozisi varlığını göstermektedir. Ancak bağırsak mikrobiyom analizi sonuçlarının coğrafi bölge, iklim koşulları, diyet ve genetik farklılıkları ile değişkenlik gösterebileceği göz ardı edilmemelidir. Bu konuda daha kapsamlı araştırmalara ihtiyaç vardır.
Anahtar Kelimeler: Mikrobiyota, Hepatit B, mikrobiyom ve aşı, bağışıklık sistemi, bağırsak mikrobiyomu.

Abstract:
INTRODUCTION AND AIM: In this study, it is aimed to investigate the role of gut microbiota in the response to hepatitis B vaccine by performing intestinal microbiome analyzes of healthy individuals who respond and do not respond to hepatitis B vaccine.
MATERIALS AND METHODS: A total of 40 people (March 2020 – February 2022) between the ages of 18-65 comprising of 20 healthy volunteers (Anti-HBs >100 IU/ml) who had an antibody response after vaccination and other 20 patients with (Anti-HBs <10 IU/ml) even though they are administered  3 doses of Hepatitis B vaccine and 3 doses of booster in accordance with the vaccination schedule (0., 1st, and 6th) are included. After the stool samples are delivered to the laboratory within 2 hours at the latest, pH measurement and Bristol scoring are performed. They are freshly frozen and store at -80°C until microbiome analysis is performed. Nucleic acid isolation, 16S rRNA PCR, next generation sequencing, bioinformatics and statistical analyzes are executed.
RESULTS: While stool pH is high in the patient group, the Firmucites/Bacteroidetes ratio (1.31 in the patient group, 3.28 in the control group) is found to be lower (p<0.05). At the phylum level in the patient group; Bacteroidetes at grade level; Gammaproteobacteria, Bacteroidia, Negativicutes at the order level; Selenomonadales, Veilloonellales, Bacteroidales to family level; At the genus level of Selenomonadaceae, Rikenellaceae, Veillonellaceae; Massiliprevotella and Alistipes are monitored at a higher rate. In the control group; at the phylum level; Firmucutes at grade level; Clostridia at team level; Clostridiales family level; Lachnospiracea, Peptostreptococcaceae, Hungateiclostridiaceae are found to be higher levels.
CONCLUSION: The stool pH values of the patient group are found to be low, and the Firmucites/Bacteroidetes ratio is high. At the phylum level in the patient group; Bacteroidetes at grade level; Gammaproteobacteria, Negativicutes at the order level; Selenomonadales, Veilloonellales, at family level; At the genus level of Selenomonadaceae, Rikenellaceae, Veillonellaceae; Massiliprevotella and Alistipes are found at a higher rate. In the control group; at the phylum level; Firmucutes at grade level; Clostridia at team level; Clostridiales family level; Lachnospiraceae, Peptostreptococcaceae, Hungateiclostridiaceae are found to be higher. These data show the presence of intestinal dysbiosis in the group that did not respond to the hepatitis B vaccine. However, it should not be ignored that the results of gut microbiome analysis may vary with geographical region, climatic conditions, diet and genetic differences. More extensive research is needed on this subject.
Key words: Hepatitis B, microbiota, microbiome and vaccine, immune system, gut microbiome