Kronik astım modelioluşturulan farelerde sinomenin'in akciğerhistopatolojisi ve sitokin düzeyleri üzerine etkinliğinin değerlendirilmesi
The effect of sinomenine on lung histopathology and cytoki̇ne levels in a murine model of chronic asthma
Yazar: SAKİNE IŞIK
Danışman: PROF. DR. NEVİN UZUNER
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Çocuk Allerjisi Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2014
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology

Özet:
Giriş:Sinomenin, yüzyıllardır çeşitli hastalıkların tedavisinde başarılı bir şekilde kullanılan, Sinomenium acutum'dan izole edilen, aktif bir bileşendir. Daha önce yapılan bir çalışmada sinomenin'in farelerde kemik iliği kökenli mast hücrelerinden prostoglandin D2 ve lökotrien C4 salınımını inhibe ederek antialerjik etki sağladığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, kronik astım modeli oluşturulmuşfarelerde sinomenin'in akciğer histolojisi ve sitokin düzeyleri üzerine etkisi araştırılmıştır. 

Gereç ve Yöntem:Yirmi dört adet fare; grup I (Kontrol), II (plasebo), III ve IV olmak üzere dört gruba ayrıldı. Kontrol grubu dışındaki tüm fareler intraperitoneal ovalbumin ve adjuvan olarak alüminyum hidroksit ile duyarlılaştırıldıve daha sonra çalışmanın 24. gününden başlayarak 8 hafta boyunca haftada 3 gün aerosolize ovaalbumin ile verilererek model oluşturuldu. Akciğer histopatolojisi 100mg/kg sinomenin, deksametazon ve plasebo verildikten sonra değerlendirildi. İnterlökin-4, IL-5, IL-13 ve NO düzeyleri akciğer homojenatlarından, OVA spesifik IgE düzeyi serumdan ELISA yöntemi ile çalışıldı. Sinomeninin angiogenesis ve apoptosis üzerine etkilerini değerlendirmek amacıyla matriks metalloproteinaz-9 (MMP-9), vasküler endotelyal growth faktör (VEGF), transforming growth faktör-β (TGF-β), Caspas-3, TUNNEL ile immunohistokimyasal boyama yapıldı.

Bulgular:Işık mikroskobik değerlendirmede sinomenin tedavisi verilen grupta subepithelial düz kas kalınlığı ve mast hücre sayısında plasebo grubu ile karşılaştırıldığında anlamlı azalma saptandı. Sinomenin verilen grupta BAL da eozinofil sayımında plasebo ile karşılaştırıldığında anlamlı azalma saptandı. IL-5 dışındaki sitokin düzeylerinde sinomenin tedavisi verilen grupta plasebo ile karşılaştırıldığında anlamlı azalma saptandı. İmmunohistokimyasal analizde MMP-9, VEGF, TGF-β, Caspas-3, TUNEL ile boyanma plasebo ile karşılaştırıldığında sinomenin tedavisi alan grupta belirgin olarak azalmış bulundu. 


Sonuç:Çalışmamızda 100mg/kg sinomenin tedavisinin Th-2 sitokin düzeylerini ve bazı kronik astıma ait histolojik değişiklikleri düzelttiği gösterilmiştir.

Abstract:
Background
Sinomenine is an active compound isolated from Sinomenium acutum, which has been successfully used for centuries in the treatment of various disease. In a study,  anti-allergic effect of sinomenine by inhibition of prostaglandine D2 and leukotriene C4 in mouse bone marrow-derived mast cells was shown, previously. Using a murine model of chronic asthma, we investigated the effects of sinomenine on airway histology and cytokine level of asthmatic lung tissue. 

Materials and Methods
Twenty-four mice were divided into four groups;  group I (control), II (plasebo), III, IV.  Mice except control were sensitized by an intraperitoneal injection of ovalbumin with alum adjuvant and then challenged with an aerosol of ovaalbumin on 3 days of the week for 8 weeks beginning from the 21st day of the study. Lung histology was eveluated after treatment with peroral 100 mg/kg sinomenine, dexamethazone and  plasebo. Interleukin-4, IL-5,IL-13, NO levels were studied in lung homogenates and OVA spIgE level was studied in serum with ELISA. Immunohistochemical staining was done with matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), vascular endothelial growth factor (VEGF), transforming growth factor beta (TGF-b), Caspas-3, TUNNEL, for evaluation of effect's of  sinomenine on angiogenesis and apoptosis. 



Results
In light microscopic evaluation sinomenine group's subepithelial smooth muscle thickness and number of mast cells were reduced compared with placebo group. The number of eosinophils in BAL decreased significantly in group receiving sinomenine. There were significantly decreases of IL-4, IL-13, NO, OVA sp IgE levels in sinomenine group compared with placebo group except for IL-5. Immunohistochemical analyses, staining of MMP-9, VEGF, TGF-b were significantly decreases in sinomenine group compared with placebo. 

Conclusion

In our study we demonstrated that 100mg/kg sinomenine treatment decreases Th-2 sitokin levels and alleviated some of the histologic changes in chronic asthma.