Diyabetik sıçan böbreğinde resveratrol' ün etkisi
Effect of resveratrol on diabetic rat kidney
Yazar: DUYGU ALTIN
Danışman: PROF. DR. ÇİĞDEM ÖZER
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Böbrek hastalıkları = Kidney diseases ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetik nefropatiler = Diabetic nephropathies ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Resveratrol = Resveratrol ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Resveratrol' ün (RSV) kardiyoprotektif, antikanser, antiinflamatuar ve antioksidatif özelliklerinin olduğu ve Tip 2 diyabet hayvan modellerinde damar koruyucu etki gösterdiği ileri sürülmüştür. Ayrıca insülin benzeri etki göstererek hepatositler, adiposit ve iskelet kasına glukoz alımını teşvik etmektedir. Çalışmanın amacı, Streptozosin (STZ) ile diyabet oluşturulan sıçanlarda gelişen Diyabetik nefropati (DN) üzerinde RSV' ün morfolojik, biyokimyasal ve fonksiyonel etkilerini incelemektir. Çalışmamızda 30 adet Wistar albino erkek sıçan, 4 gruba ayrıldı. 1. Kontrol, 2. RSV, 3. Diyabet, 4. Diyabet + RSV. Diyabet gruplarına tek doz 0.1M (pH: 4,5) sitrat tampon içinde çözünen STZ (65 mg/kg) intraperitoneal olarak enjekte edildi. Kontrol gruplarına ise intraperitoneal tek doz sitrat tamponu uygulandı. RSV uygulaması 10 mg/kg/gün dozda, diyabetin başlamasından 2 hafta sonra, 8 hafta boyunca oral gavaj yoluyla yapıldı. Kontrollere ise 0,1 M etanol uygulandı. Sıçanlar intra muskuler (IM) Rompun+Ketamin (50+60-100mg/kg) anestezisi altında kalplerinden kan alınarak feda edildiler. Çalışma süresince sıçanlarda: Açlık kan şekeri (AKŞ) düzeyleri, diyabetin böbrek fonksiyonları üzerine olan etkileri (idrar miktarı, idrarda kimyasal analizler…) incelendi. Çalışma sonunda, böbrek vasküler yanıtlarına bakıldı. İmmünohistokimyasal olarak; TEM ile morfolojik inceleme yapılarak, proinflamatuar sitokinler TGF-, iNOS, eNOS, Fibronektin düzeylerine bakıldı. Yine böbrek dokusundaki oksidan (Malondialdehit/MDA), antioksidan (Glutatyon/GSH) ve ayrıca Total nitrik oksit (NOx) düzeyleri tespit edildi. Sonuçlar SPSS paket programında Kruskal Wallis ve Mann Whitney testleri kullanılarak karşılaştırıldı, p<0.05 değerleri anlamlı kabul edildi. Diyabetik gruplarda AKŞ, alınan sıvı ve idrar miktarında artış (p<0.05) kanda ALP, ALT, BUN ve kreatinin düzeylerinde yükselme (p<0.05), sodyum düzeyinde ise düşme tespit edildi (p<0.05). RSV bozulan bu parametrelerde düzelme meydana getirmedi. Gerek diyabetik, gerekse tek başına RSV uygulanan grupta Anjiotensin II (Ang II) ve Fenilefrin'nin (Phe)  renal arter perfüzyon basıncını arttırıcı etkilerinin kontrole göre farklı olmadığı, RSV ile tedavi edilen diyabetik grupta ise hem Ang II hem de Phe yanıtlarının azaldığı (p<0.05) yine aynı grupta asetilkolinin (ACh) vazodilatatör yanıtlarının da azaldığı gözlendi (p<0.05). RSV uygulaması ile diyabete bağlı olarak; artan böbrek dokusu MDA düzeylerinde azalma (p<0.01), azalan GSH düzeylerinde ise yükselme (p<0.01) tespit edildi. NOx düzeylerinde herhangi bir değişiklik gözlenmedi. TEM incelemesinde: RSV uygulamasının diyabete bağlı olarak bozulan böbrek dokusunu büyük ölçüde koruduğu gözlendi. Diyabetin neden olduğu böbrek dejenerasyonu ile uyumlu olarak artan TGF-, fibronektin ve iNOS immunreaktivitesinin RSV uygulamasıyla kısmen azaldığı; diyabetle birlikte azalan eNOS seviyesinin arttığı gözlendi.

Abstract:
Resveratrol (RSV) has cardioprotective, anticancer, antiinflammatory, and antioxidative properties and exerts significant vasoprotective effects in animal models of Type 2 diabetes. Also have an effect of insulin-like promotes uptake of glucose to hepatocytes, adipocytes and skeletal muscle. The aim is to investigate the morphologic, biochemical and functional effects of RSV on diabetic nephropathy (DN) on streptozotocin (STZ) diabetic rats. 30 male Wistar albino rats were divided into 4 groups. Group 1. Control, Group 2. RSV, Group 3. Diabetes, Group 4. Diabetes + RSV. Intraperitoneal single dose STZ 65 mg/kg 0,1M (pH: 4,5) were injected with dissolved in citrate buffer to diabetes groups. Intraperitoneal (i.p) single dose citrate buffer were injected to control groups. Application of RSV (10/mg/kg/day dose (dissolved in 0.1M ethanol) has been started 2 weeks after diabetes formation and continued through 8 weeks by using oral gavage. The control groups were performed 0.1 M ethanol. Rats were sacrificed under intramuscular (IM) Rompun+ketamine (50+60-100mg/kg) anesthesia by taking blood from hearts. During the study: Fasting blood glucose levels, the effects of diabetes on renal function (urine output, urine chemical analysis...) were analyzed and renal vascular responses were measured. Immunohistochemically, morphological research performed by TEM, proinflammatory cytokines TGF-β,  iNOS, eNOS, fibronectin levels were measured. However kidney tissue oxidant (Malondialdehit/MDA, and antioxidants (glutathione/GSH)) parameters were studied, total nitric oxide (NOx) levels were also determined. Results in SPSS, Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were compared using, p<0.05 was considered significant. Fasting blood glucose, fluid intake and urine volume were determined to increase in diabetic groups (p<0.05), increasement of ALP, ALT, BUN and creatinine in blood (p<0.05) and diminution in sodium level (p<0.05) are also identified. But, application of RSV does not have any effect on that parameters. In diabetic and RSV applied groups; Angiotension II (Ang II) and Phenilephrine (Phe) on perfussion pressure were not significant when compared with the control. However both Ang II and Phe effects were significantly decreased in diabetic group treated with RSV (p<0.05). In the same group, vasodilator responses of acetylcholine (ACh) were found to significantly decrease (p<0.05). By RSV treatment, diabetes induced increased kidney MDA levels were decreased (p<0,01) and GSH levels were increased (p<0,01) but NOx levels were not effected. Examination of TEM: application of resveratrol, diabetes-related deteriorating renal tissue was significantly preserved. Increment of TGF-, fibronectin and iNOS immunreactivity are partially decreased, however decresed eNOS level is increased with treatment of RSV.