Fare embriyonik fibroblastlarından elde edilen hücrelere ait kisspeptin ve nörokinin gen ekspresyonlarının pasaj sayısıyla ilişkisi
The relationship of kisspeptin and neurokinin gene expressions of cells obtained from mouse embryonic fibroblasts with the number of passages.
Yazar: SHABNAM MOHARAMJOODI
Danışman: PROF. DR. MEHMET BERTAN YILMAZ
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Fare embriyonik fibroblast (MEF), hücrelerinin kültürü, kolay erişilebilirliği, çoklu büyüme hızları ve çok sayıda deney yapılabiliyor olması nedeni ile gen işlevlerini test etmek için güçlü bir yöntemdir. Fare embriyonik fibroblast hücrelerinin indüklenmiş kök hücrelere dönüşebilme kapasitesinin yüksek olması ve ayrıca embriyonik dokulardan kolay elde edilebilir olmaları bunların tedavi amaçlı kullanımlarının önünü açmıştır. Pek çok hastalığın tedavisinde kullanılmak üzere ilaç keşfi için fayda sağlayacağı düşünülmektedir. Bu hastalıklardan bir tanesi puberte dönemindeki aksaklıklardır. Puberte dönemine geçiş sürecinde kisspeptin ve nörokinin protein ailesi etkin rol oynamaktadır.  Bu çalışmada fare embriyonik dokulardan elde edilen fibroblast hücrelerine ait kisspeptin ve nörokinin gen ekspresyonlarının pasaj sayısıyla ilişkilendirilmesi gerçekleştirilmiştir. Çalışmamız pubertal bozukluğa sahip olan hastalarda pluripotent kök hücrelere indüklenme kapasitesi yüksek embriyonik fibroblast hücrelerini kullanarak ilaçsız ve minimal immün reaksiyona sahip bir tedaviyi amaçlamaktadır. Aynı zamanda ilerleyen dönemlerde bu yöntemin tedavi şekli açısından ülke ekonomisine katkı sağlayabileceğini düşünmekteyiz. Embriyo fibroblast hücrelerinin pubertal bozukluk tedavisinde kullanılmasıyla ilgili çok fazla çalışma bulunmadığından ve yeterli kaynak olmadığından dolayı yaptığımız çalışmanın bu boşluğu doldurmaya katkı sağlayabileceğine inanmaktayız. Bu çalışmada Embriyonik fibroblast hücre kültürü oluşturulmuştur, kültürün devamlılığı sağlanmıştır (pasajlanması) ve farklı pasaj dönemlerinde kisspeptin ve nörokinin gen ekspresyonları belirlenmiştir. Amacımız pluripotent kök hücrelere dönüşebilme kapasitesi yüksek MEF'lerde kisspeptin ve nörokinin ekspresyonlarını belirleyerek bunların özellikle pubertal hastalıkların kök hücre bazlı tedavisi için uygunluğunu araştırmaktır. MEF'lerde Kisspeptin ve Nörokinin ekspresyon tespit edilmedi fakat her ikisine de yönelik reseptörleri KISS1R ve TACR2 reseptör eksprese olduğunu ve bu ekspresyonunda pasaj sayısına bağlı olarak azaldığını tespit ettik.

Abstract:
Mouse embryonic fibroblast (MEF), The culture of cells is a powerful method for testing gene functions because of its easy accessibility, multiple growth rates, and multiple experiments. The high capacity of mouse embryonic fibroblast cells to transform into induced stem cells and their easy availability from embryonic tissues have paved the way for their therapeutic use. It is thought to be beneficial for drug discovery to be used in the treatment of many diseases. One of these diseases is disruptions in puberty. Kisspeptin and neurokinin protein family play an active role in the transition to puberty. In this study, the association of kisspeptin and neurokinin gene expressions of fibroblast cells obtained from mouse embryonic tissues with the number of passages was performed. Our study aims at a drug-free treatment with minimal immunoreaction using embryonic fibroblast cells with high capacity to induce pluripotent stem cells in patients with pubertal disorders. At the same time, we think that this method may contribute to the country's economy in terms of treatment method in the future. Since there are not many studies on the use of embryo fibroblast cells in the treatment of pubertal disorder and there are not enough resources, we believe that our study can contribute to filling this gap. In this study, embryonic fibroblast cell culture was established, the culture was maintained (passage) and Kisspeptin and neurokinin gene expressions were determined at different passage periods. Our aim is to determine kisspeptin and neurokinin expressions in MEFs with high capacity to transform into pluripotent stem cells and to investigate their suitability for stem cell-based treatment of pubertal diseases. Expression of Kisspeptin and Neurokinin could not be detected in MEFs, but we found that both directionality receptors KISS1R and TACR2 receptors were expressed and this expression decreased depending on the number of passages.