Patulinin insan kan lenfositlerindeki mikronükleus sıklığı ve mitotik indeks üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of effects of the patulin on micronucleus frequency and mitotic index in the human blood lymphocytes
Yazar: PERİHAN GÖKALP YILDIZ
Danışman: PROF. DR. HAMİYET DÖNMEZ ALTUNTAŞ
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Lenfositler = Lymphocytes ; Metabolitler = Metabolites ; Mikotoksinler = Mycotoxins ; Mikroçekirdek = Micronucleus

Özet:
Mikotoksinler, insanlarda ve hayvanlarda hastalıklara ve ölüme sebep olabilen mikrofunguslar tarafından oluşturulan ikincil metabolitlerdir.Bu çalışmada, insan periferal kan lenfositleri üzerinde mikotoksin patulinin (PAT) genotoksik ve sitotoksik etkileri çalışılmıştır. On sağlıklı sigara içmeyen bireyden (5 erkek ve 5 kadın) periferal kan örnekleri alınmış ve kültüre edilmiştir. Lenfosit kültürleri son 48 saat 0.1 ? M, 0.3 ? M, 0.5 ? M, 1.0 ? M, 2.5 ? M, 5.0 ? M, 7.5 ? M konsantrasyonlarda PAT, 0.5 ? M konsantrasyonda mitomisin c (pozitif kontrol), negatif kontrol ve DMSO (çözücü kontrol) ile muamele edilmiştir. Sitokinezi durdurmak için, kültürlere 44. saatte 3 ?g/ml son konsantrasyonda sitokalazin B (Cyt-B) eklenmiş ve 72. saatte kültürler sonlandırılmıştır.PAT'in, sitokinezi bloke edilmiş lenfositlerde 5.0 ? M, 7.5 ? M konsantrasyonlarda nükleoplazmik köprü (NPB) sayılarını artırdığı (P<0.05), 0.1 ? M, 1.0 ? M, 5.0 ? M, 7.5 ? M konsantrasyonlarda apopitotik hücre frekanslarını artırdığı (P<0.05), ve 0.3 ? M, 2.5 ? M (P<0.05), 5.0 ? M, 7.5 ? M (P<0.01) konsantrasyonlarda nekrotik hücre frekanslarını artırdığı bulunmuştur. 2.5 ? M 5.0 ? M ve 7.5 ? M PAT konsantrasyonları Nükleer Bölünme İndeksi (NDI) oranlarında açık bir azalmaya yol açmıştır (P<0.05).PAT, insan lenfositlerinde NPB sayılarında, nekrotik ve apopitotik hücre frekanslarında doza bağlı olarak önemli bir artışa ve NDI oranlarında doza bağlı olarak önemli bir azalmaya sebep olmuştur.Bu sonuçlar, kültüre edilmiş insan lenfositlerinde yüksek konsantrasyonlardaki PAT'in genotoksik, sitostatik ve sitotoksik olduğuna işaret etmektedir.Anahtar Kelimeler: Patulin; Lenfosit; Mikronukleus; Sitom yöntemi; Nükleer Bölünme İndeksi.

Abstract:
Mycotoxins are secondary metabolites produced by microfungi that are capable of causing disease and death in humans and other animals.In the present study, the mycotoxin patulin (PAT) was evaluated for its genotoxic and cytotoxic effects to human peripheral blood lymphocytes. Peripheral blood samples were obtained and cultured from ten healthy non-smoking individuals (5 females and 5 males). Lymphocyte cultures were treated for the last 48 h with PAT at the following concentrations, 0.1 ? M, 0.3 ? M, 0.5 ? M, 1.0 ? M, 2.5 ? M, 5.0 ? M, 7.5 ? M, and 0.5 ? M mitomycin c (positive control), negative control, DMSO (a vehicle control). To block cytokinesis, at 44 h of incubation, cytochalasin-B (Cyt-B) was added to cultures to give a final concentration of 3 ?g/ml, and harvested cells at 72 h.PAT was found to induce nucleoplasmic bridges (NPBs) at the 5.0 ? M, 7.5 ? M concentrations (P<0.05), apoptotic cells at the 0.1 ? M, 1.0 ? M, 5.0 ? M, 7.5 ? M concentrations (P<0.05) and necrotic cells 0.3 ? M and 2.5 ? M (P<0.05), 5.0 ? M and 7.5 ? M (P<0.01) in cytokinesis-blocked lymphocytes. The 2.5 ? M 5.0 ? M ve 7.5 ? M PAT concentrations also led to a clear decrease in the percentage of nuclear division index (NDI) (P<0.05).PAT caused a significant dose-dependent increase in the number of NPBs, in the frequency of apoptotic cells and in the frequency of necrotic cells, and a significant dose-dependent decrease in the NDI rates in human lymphocytes.These results indicate that PAT at the high concentrations is genotoxic, cytostatic and cytotoxic in cultured human lymphocytes.Key Words: Patulin; Lymphocytes;Micronucleus; Cytome assay; Nuclear division index.