Meyve sularındaki acılığı gidermek için rekombinant olarak naringinaz enziminin üretilmesi
Expression of recombinant narenginase enzyme for debittering of juices
Yazar: RİZVAN İMAMOĞLU
Danışman: PROF. DR. İSA GÖKÇE
Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyomühendislik = Bioengineering ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Biyoteknolojik prosesler = Biotechnological process ; DNA-rekombinant = DNA-recombinant ; Enzim üretimi = Enzyme production ; Enzimler = Enzymes ; Moleküler biyoloji = Molecular biology

Özet:
Narenciye meyvelerinin özellikle kabuklarında acılığa neden olan moleküller bulunmaktadır. Bu moleküller flavonoidler ve limonoidler olarak iki ana grupta toplanmaktadır. Bunlardan naringin molekülü flavonoidler sınıfında yer alan ve acılık veren en önemli moleküllerden biridir. Bu meyve suyu üretimi esnasında birçok soruna yol açmaktadır. Narenciye sularının işlenmesi sırasında veya sonrasında oluşan acı tat, tüketici beğenisini azaltarak önemli ekonomik pazar problemlere yol açmaktadır. Bu çalışmada naringinaz enzimi pET22b vektörü kullanılarak E.coli ekspresyon sisteminde rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak üretilmesi hedeflenmiştir. Projede ilk olarak naringinaz enzimini kodlayan gen biyoinformatik çalışmalar ve literatür çalışmaları sonucundan tespit edilerek sentezlettirilmiştir. Bir vektör içerisinde gelen gen restriksiyon enzimleriyle kesilerek jelden izolasyonu yapılmıştır ve aynı restriksiyon enzimleri ile kesimi yapılan pET22b vektörü ile ligasyon işlemi gerçekleştirilip E.coli DH5α hücrelerine transformasyonu yapılmıştır. Rekombine plazmitlerin doğruluğu tespit edildikten sonra naringinaz enziminin üretilmesi için E.coli BL21 pLysE hücrelerine transformasyonu yapılmıştır ve üretilen naringinaz enzimi afinite kolon kromatografisi yöntemiyle saflaştırılarak aktivite testi yapılmıştır. Sonuç olarak rekombinant olarak üretilen naringinaz enziminin naringin molekülünden kaynaklanan acılığı giderdiği tespit edilmiştir.

Abstract:
There are molecules particularly in the skin of citrus fruit that cause bitterness. These molecules are divided into two main groups as flavonoids and limonoids. The naringine molecule is one of the most important molecule in this class of flavonoids and leads to many problems during fruit juice production. The bitter taste that occurs during or after the processing of citrus fruits leads to significant economic marketing problems by decreasing consumer enjoyment. In this study, we were targeted to produce naringinase enzyme using E. coli expression system with pET22b vector and recombinant DNA technology. In this project, the gene encoding the naringinase enzyme was determined after bioinformatics and literature studies and synthesized. Gene fragment of naringinase  enzyme was isolated by cutting the synthesised plasmid vector using two restriction enzymes. The ligation reaction was performed with the pET22b vector that digested also with the same restriction enzymes then transformed using E. coli DH5α cells. Integrity and accuracy of the recombinant plasmids were determined and transformed using E. coli BL21 pLysE cells for the expression of the naringinase enzyme. Then naringinase enzyme was purified by affinity column chromatography and assayed for its activity. As a result, it has been determined that produced recombinant naringinase enzyme decreases the bitterness caused by the naringine molecule.