Ülserli hastaların gastrik epitel hücrelerinde epidermal büyüme faktörünün apoptozis ile ilişkili genlerin ekspresyonu üzerine etkisinin in-vitro araştırılması
In-vitro research of epidermal growth factor on the gene expressions associated with the apoptosis in the gastric epithelial cells of ulcerous patients
Yazar: FATMA SÖYLEMEZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET EMİN ERDAL ; YRD. DOÇ. ÖZLEM İZCİ AY
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Duodenal ülser = Duodenal ulcer ; Epidermal büyüme faktörü = Epidermal growth factor ; Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Mide ülseri = Stomach ulcer ; İn vitro = In vitro

Özet:
Gastroduedonal ülserlerin iyileşme sürecinde ve mukozal hücre proliferasyonunun düzenlenmesinde epidermal büyüme faktörü (EGF) önemli rol oynamaktadır. Apoptozis de ülser oluşumunda yer alan önemli bir süreçtir. Bu çalışmada, gastrik ve duedonal ülserli hastaların biyopsi örnekleri ve mide kanseri hücre hattından çoğaltılan hücrelere in-vitro ortamda 3 farklı dozda (20, 50 ve 100 ng/ ? l) EGF uygulaması yapılmıştır. Bu hücrelerden izole edilen RNA'lar kullanılarak Bax, Fas ve Bcl-2 genlerinin ekspresyon düzeyleri hem semi-kantitatif olarak, hem de Real-Time PCR ile ?Comparative CT Analizi? yapılarak belirlenmiştir.İstatiksel analizler sonucunda, EGF uygulamasının gastroduodenal ülserli hastalarda Bax, Fas ve Bcl-2 genlerinin ekspresyonunu değiştirmediği belirlendi. Real Time PCR ile ?Comparative CT Analizi? yapılarak elde edilen verilerin istatistiksel değerlendirmesinin sonucunda; EGF'den bağımsız olarak, sadece Bax geninin kontrol grubundaki ekspresyon düzeyinin, hasta grubuna göre daha yüksek olduğu saptandı (p=0.001).Primer hücre kültürü ve mide kanseri hücre hattındaki gen ekspresyon düzeyleri Real Time PCR'da değerlendirildiğinde; semi kantitatif yöntemde EGF dozlarının ekspresyon düzeyleri üzerinde etkisi olmadığı belirlenirken, 1 doz EGF (20 ng/ ? l) uygulandığında hücre hattında Bax geninin ekspresyon düzeyinde belirgin bir artış olduğu (p=0.001), 2 doz EGF (50 ng/ ? l) uygulanmasının ise hücre hattında Fas geninin ekspresyonunu azalttığı (p=0.033) görüldü.Sonuç olarak; özellikle ülser iyileşmesinde rol oynayan EGF'nin, apoptozisi aktive edici fonksiyona sahip olan Bax ve Fas genlerinin ekspresyonu üzerinde etkili olduğu ve Bcl-2 gen ekspresyonunun ise EGF uygulamasıyla değişmediği belirlenmiştir. Bu çalışmanın, ülserli hastalarda EGF'nin apoptotik etkisini inceleyen ilk çalışma olması nedeni ile bu konuyla ilgili yapılacak diğer çalışmalara yol gösterici olacağı düşünülmektedir.

Abstract:
Epidermal grow factor (EGF) has a major role on recovery process of gastroduodenal ulcers and organization of mucosal cell proliferation. Apoptosis is also an important period taking role in ulcer formation. In this study, EGF application to the biopsy samples of gastric and duodenal ulcer patients and the cells increased from gastric cancer cell line has been carried out in-vitro environment in three different doses (20, 50 and 100 ng/ ? l). Using the RNAs isolated from these cells, the expression levels of Bax, Fas and Bcl-2 genes have been determined both semi quantitatively and with Real-Time PCR by making ?Comparative CT Analysis?.In consequence of statistical analyses, the EGF application was found not to change expressions of Bax, Fas and Bcl-2 genes in gastroduodenal ulcerous patients. As a result of statistical evaluation of the data got by making ?Comparative CT Analysis with Real-Time PCR, separately from the EGF, only the expression level of Bax gene in the control group was determined to be higher in comparison with the patient group (p=0.001).When the gene expression levels in the primer cell culture and gastric cancer line were evaluated in Real Time PCR, it was found that EGF doses had no effect on the expression levels in semi quantitative method; on the other hand, there was a clear increase I n the expression level of Bax gene in the cell line when one dose EGF (20 ng/ ? l) was applied (p=0.001) and it was also observed that 2 doses EGF (50 ng/ ? l) application decreased the expression of Fas gene in the cell line (p=0.033).Consequently, it was determined that EGF playing a role especially on the ulcer recovery had influence on the expression of Bax and Fas genes which have a function activating apoptosis and the expression of Bcl-2 gene also didn?t change with the EGF application. Because this study is the first examining the apoptotic effect of EGF in ulcerous patients, it is thought that it will be a guide for the other studies about this subject.