Çeşitli kanserlerde "glutatyon sistemi"nin araştırılması
Various cancers "glutathione system" investigation
Yazar: KEMAL GÖKÇE
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ŞEKER DAĞ
Cumhuriyet Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Antioksidan savunmada önemli rolü olan ?glutatyon sistemi?nin yetersizliği organizmadaki antioksidan/oksidan dengesini oksidan tarafa kaydıracaktır. Dolayısıyla oluşan serbest radikaller canlıya zarar vererek çeşitli hastalıklara neden olabilecektir. Kanser de bu hastalıklardan birisidir. 
     Çalışmamızda kolon, mide ve kan kanseri teşhisi konmuş; 18?75 yaş aralığındaki bireylerden kan örnekleri alınarak okside ve redükte glutatyon miktarları ve glutatyon bağımlı enzim aktiviteleri çalışıldı. Hasta ve kontrol grubu bireylerinden alınan 3ml?lik kan örneklerinden zaman kaybedilmeden eritrosit izolasyonu yapıldı ve elde edilen eritrosit hemolizatları bütün analizlerde kullanılmak üzere 1,5 ml?lik eppendorf tüplere bölünerek -20?C?de saklandı.
     Hemoglobin miktarları, methemoglobinin siyanür varlığında siyanomethemoglobine dönüşümünün 540 nm?de izlenerek, çizilen standart grafikten belirlendi. Glutatyon S-transferaz aktivitesi, CDNB kullanılarak dakikada oluşan S-2,4 dinitrofenilglutatyonun 1 µmol?ünü katalizleyen enzim miktarının ölçülmesiyle belirlendi. Glutatyon peroksidaz ve glutatyon redüktaz aktiviteleri NADPH?ın oksidasyonunun 340 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak izlenmesiyle belirlendi. G6PD enziminin aktivitesi NADP+?nin indirgenerek NADPH oluşturması sırasında meydana gelen reaksiyon 340 nm dalga boyunda izlenmesiyle belirlendi. Ayrıca okside ve redükte glutatyon miktarları da meydana gelen sarı renkli 2-nitro-5-tiyobenzoik asit oluşumunun 412 nm dalga boyunda izlenerek, çizilen standart grafikten belirlendi.
     Kanser hastalarının çalıştığımız parametrelerinde sağlıklı bireylere göre önemli değişiklikler olduğu saptandı. Kanser hastalarında GST, GR ve GSSG değerleri kontrol gruplarına göre istatistiksel olarak önemli derecede artış gösterirken, GPx, G6PD, GSH ve GSSG artışına bağlı olarak GSH/GSSG oranı istatistiksel olarak önemli derecede azalış göstermektedir.  
     Okside ve redükte glutatyon miktarları ve glutatyon bağımlı enzimlerin aktivitelerindeki bu değişiklikler kanser hastalarının önemli derecede oksidatif strese maruz kaldığını bizlere göstermektedir. Glutatyon sistemindeki bu değişikliklerin kanser oluşumunda tetikleyici mi yoksa kanserin sonuç mu olduğunu tesbit etmek için bu verilerin, genetik çalışmalar ve daha çok sayıda kanserli bireylerle çalışma yapılarak desteklenmesi daha doğru olacaktır.

Abstract:
Inefficiency of glutathione system that has an important role to defend antioxidant would slide antioxidant/oxidant balance which is in organism to the side of oxidant. Therefore free radicales that has constructed would cause various ilnesses giving harm to organism. Cancer is one of these ilnesses.
     In our study; colon; stomach canser and leukemia has been diagnosed; taking blood examples from individuals whose ages are among 18-75, oxidized and reduced glutathione amounts and enzyme activities that addicted to glutathione has been studied. Erythrocyte isolation has been made without any loss of time from 3 ml blood exapmles that were taken from patient and control group?s individuals and erythrocyte hemolizats that were obtained, were kept at ?20?C, dividing to eppendorf tubes for each 1,5 ml for using in the whole analyses.
     Haemoglobin amounts has been specified from diagram which was drawn watching transformation to siyanomethemoglobine in 540 nm in existence methemoglobin cyanure. Glutathione S-transferase activity has been specified measuring enzyme amount that has catalysed 1 ?mol of S-2,4 dinitrofenilglutathione which has formed in minute using CDNB. Glutathione peroxidase and glutathione reduced activities has been designated watching oxidation of NADPH in 340 nm wavelength as spectrophotometric. G6PD enzyme activity has been designated watching the reaction that has occured in 340 nm wavelength during the constitution NADPH reducing the NADP. Also oxide and reduced amounts has been designated from drawn diagram watching formation of yellow colour 2-nitro-5-tiyobenzoic acid that has occured in 412 nm wavelength.
     In cancer patient?s parameters that we has studied, has been stated significant changes according to healthy individuals. While GST, GR, GSSG values in cancer patients show increase significantly as statistically according to their control groups; depending on the increase of GPx, G6PD, GSH and GSSG, the rate of GSH/GSSG show decrease significantly as statistically.
     These changes in activities of enzymes that are addicted to glutathione and oxidized and reduced glutathione amounts showes us that cancer patients are exposed substantially to oxidative stres. It has been truer to be supported these datas doing more genetic studies and studies with more number cancer patients to establish whether these changes in glutathione system are precipitating for formation of cancer or cancer is a result.