Bazı kumarinlerin salgı fosfolipaz A2 (sPLA2) ve siklooksigenaz-2 (COX-2) enzimleri üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of some coumarins on secretory phospholipase A2 (sPLA2) and cyclooxigenase-2 (COX-2) enzymes
Yazar: OĞUZ KURT
Danışman: PROF. DR. KERİMAN GÜNAYDIN ; PROF. DR. SABRİYE PERÇİN ÖZKORUCUKLU
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Enflamasyon çeşitli sebeplerle oluşabilen fizyolojik bir süreçtir. Genel anlamda fosfolipitlerin fosfolipazlar ile araşidonik aside, araşidonik asidin de siklooksigenaz (COX) enzimleri ile pro-enflamatuar mediatörlere enzimatik olarak metabolize edilmesiyle oluşur. 
Fosfolipaz A2 (PLA2)'ler gliserofosfolipitlerin sn-2 pozisyonundaki ester bağının hidrolizini katalizler. Bu reaksiyonun sonucunda araşidonik asit meydana gelir. PLA2 ailesi iki enzim sınıfını kapsamaktadır: hücre içi (sitozolik) PLA2'ler ve salgılanan PLA2 (sPLA2)'ler. 
COX araşidonik asidin prostaglandinlere olan metabolik dönüşümünde hız sınırlayıcı bir enzimdir. Prostaglandin sentezinin biyosentetik yolağında anahtar rol oynar. COX-1 ve COX-2 olmak üzere iki çeşidi vardır.
Bu çalışmada fosfolipazlardan sPLA2 ve siklooksigenazlardan COX-2, enflamasyon yolağında anahtar rol oynadıkları için, Umbelliferae familyasından bazı kumarin sınıfı bileşikleri içeren bitki ekstrelerinin, sPLA2 ve COX-2 enzimleri üzerindeki etkilerinin araştırılması amacı güdülmüştür. 
Çalışmada sPLA2 ve COX-2 enzim aktivitesi ve inhibitör taraması için uygun olan kitler esas alınarak spektrofotometrik analizler yapılmıştır. ELISA Reader'da substratın enzim ile reaksiyonu sonucunda absorpsiyondaki değişimler dikkate alınarak çeşitli kumarin sınıfı bileşikler ile etkileştirilen enzimlerin aktiviteleri değerlendirilmiştir.
Elde edilen sonuçlardan, Ammi majus bitki ekstresinin sPLA2 enzimi üzerinde istatistiksel olarak anlamlı (p<0.05) inhibisyon etkisinin olduğu görülmüş (% 84.7717), diğer ekstrelerin inhibisyon etkisine sahip olmadığı belirlenmiştir. Aynı şekilde çalışmada kullanılan tüm bitki ekstrelerinin COX-2 enzimi üzerinde inhibisyon etkisi göstermediği belirlenmiştir.	
Çalışmanın özgün yanı, literatürde kumarin sınıfı bileşiklerin sPLA2 ve COX-2 enzimlerinin her ikisinin de üzerindeki etkileri dolayısıyla bir bütün olarak anti enflamatuar etkinliğinin saptanmış olmamasıdır. Ayrıca Ammi majus bitki ekstresi genelde sıçanlarda pençe ödemi metoduyla gözlemsel olarak incelenmiştir, enzimatik olarak değerlendirilmemiştir. Bu çalışmada ise Ammi majus'un sPLA2 ve COX-2 üzerindeki inhibisyon etkinliği enzimatik olarak araştırılmıştır.

Abstract:
Inflammation is a physiological process that may occur for various reasons. Generally, phospholipids are formed by phospholipases and arachidonic acid, and enzymatic metabolism of arachidonic acid with cyclooxygenase (COX) enzymes and pro-inflammatory mediators.
Phospholipase A2 (PLA2) catalyzes the hydrolysis of the ester linkage at the sn-2 position of the glycerophospholipids. As a result of this reaction arachidonic acid occurs. The PLA2 family comprises two classes of enzymes. These are intracellular (cytosolic) PLA2s and secreted PLA2 (sPLA2)s. 
COX is a speed-limiting enzyme in the metabolic conversion of arachidonic acid to prostaglandins. It plays a key role in the biosynthetic pathway of prostaglandin synthesis. There are two types of COX-1 and COX-2. 
In this study, it was aimed to investigate the effects of some coumarin class compounds in the family Umbelliferae on sPLA2 and COX-2 enzymes because sPLA2 and COX-2 enzymes play a key role in the inflammation pathway.
In this project, spectrophotometric analysis were performed using kits suitable for sPLA2 and COX-2 enzyme activity and inhibitor screening. In ELISA Reader, the activity of enzymes activated by various coumarin class compounds was evaluated by considering the changes in absorption as a result of reaction of substrate with enzyme.
According to the results, it was observed that Ammi majus plant extract had statistically significant (p<0.05) inhibition effect (% 84.7717) on sPLA2 enzyme. The inhibition effect of other extracts could not be evaluated. Similarly, the inhibition effect of all plant extracts which used in the study on COX-2 enzyme could not be evaluated.
The original side of the work is that in the literature, anti-inflammatory activity of coumarin class compounds as a whole has not been determined due to their effects on both sPLA2 and COX-2 enzymes. In addition, Ammi majus plant extract is generally observed observationally by claw edema method in rats, it has not been evaluated enzymatically. In this study, the inhibitory activity of Ammi majus on sPLA2 and COX-2 was investigated enzymatically.