Fare mesane düz kasında L-sistein/hidrojen sülfür yolağının RHOA/RHO-kinaz ile olası etkileşiminin hücresel mekanizmalarının araştırılması
Investigation of cellular mechanisms of the possible interaction of L-cysteine/ hydrogen sulfide pathway with RHOA/RHO-kinase in mouse bladder smooth muscle
Yazar: FATMA TUĞÇE DALKIR
Danışman: PROF. DR. NURAN ÖĞÜLENER
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Fareler = Mice ; Hidrojen sülfür = Hydrogen sulfide ; Mesane = Urinary bladder ; Protein kinazlar = Protein kinases ; Rhokinaz = Rhokinase ; Sistein = Cysteine

Özet:
Çalışmamızda izole fare mesane dokusunda L-Sistein/hidrojen sülfür (H2S) yolağının RhoA/Rho-kinaz ile olası etkileşiminin hücresel mekanizmaları araştırıldı. 
Bu amaçla in-vitro organ banyosu ortamında Swiss-albino erkek farelerden izole edilen mesane dokularında kümülatif karbakol (10-8-10-4 M) kasılma yanıtları elde edildi. Elde edilen kasılma yanıtları L-sistein (endojen H2S; 10-2 M) ve sodyum hidrojen sülfür (NaHS) (ekzojen H2S; 10-3 M), Y-27632 (Rho-kinaz inhibitörü; 10-6 M), GF-109203x (protein kinaz C inhibitörü; 10-6 M) ile inhibe edilmiştir. L-sistein ile kasılmalarda oluşan inhibisyon sistatiyon gama liyaz (CSE) inhibitörü DL-proparjil glisin (PAG; 10-2 M), sistatiyon beta sentaz (CBS) enzim inhibitörü aminooksiasetik asid (AOAA; 10-2 M), Y-27632 ve GF-109203x ile geri dönerken, NaHS'ın inhibe edici etkisinde Y-27632 anlamlı bir değişikliğe neden olmadı. Y-27632 ve GF-109203x ile oluşan inhibisyon PAG varlığında geri dönerken, Y-27632 ile oluşan inhibisyonda AOAA'nın anlamlı bir etkisi gözlenmedi. Dokularda yapılan endojen H2S ölçümlerinde bazal H2S salıverilmesi tespit edildi; L-sistein, Y-27632 ve GF-109203x varlığında H2S düzeyi arttı. Bu gruplardaki yüksek H2S düzeyleri PAG ile anlamlı olarak azaldı. Y-27632 ve GF-109203x gruplarında ise L-sistein varlığında H2S düzeyleri azaldı. Ayrıca endojen H2S sentez enzimleri CSE, CBS ve 3-merkaptopürivat sülfürtransferaz (3-MST) ekspresyonları western blot yöntemi ile gösterildi. 
Mevcut çalışmamızda L-sistein/H2S ile RhoA/Rho-kinaz ve PKC yolağı arasındaki etkileşimin CSE/H2S yolağı üzerinden gerçekleşebileceği gösterilmiştir.

Abstract:
In our study, the cellular mechanisms of the possible interaction of the L-cysteine/hydrogen sulfide (H2S) pathway with RhoA/Rho-kinase in isolated mouse bladder tissue were investigated.
For this purpose, cumulative carbachol (10-8-10-4 M) contractile responses were obtained in bladder tissues isolated from Swiss-albino male mice. Contractile responses were inhibited in the presence of L-cysteine (endogenous H2S; 10-2 M), sodium hydrogen sulfide (NaHS) (exogenous H2S; 10-3 M), Y-27632 (Rho-kinase inhibitor; 10-6 M), GF-109203x (protein kinase C inhibitor 10-6 M). Although Y-27632 had no effect on the inhibition of NaHS or GF-109203x, the inhibitory effect of L-cysteine was reversed in the presence of propargylglycine (PAG; cystathionine-gamma-lyase (CSE) inhibitor; 10–2 M), aminooxyacetic acid (AOAA; cystathionine-β-synthase (CBS) inhibitor; 10–2 M), Y-27632 and GF-109203x. The inhibitory effects of Y-27632 and GF-109203x were reversed in the presence of PAG, but AOAA had no effect on the Y-27632 response. Basal H2S release was detected and while L-cysteine, Y-27632 and GF-109203x increased H2S levels, PAG showed a significant decrease in the measurements of endogenous H2S levels. Increased H2S levels of Y-27632 and GF-109203x groups were inhibited in the presence of L-cysteine. In addition, protein expressions of CSE, CBS and 3-mercaptopurivate sülfürtansferase (3-MST) enzymes responsible for endogenous H2S synthesis were demonstrated by western blot method.
In our current study, it has been suggested that the interaction between L-cysteine/H2S and RhoA/Rho-kinase and/or PKC pathway may occur via the CSE/H2S pathway.