Bıldırcın yumurtası tüketiminin puberte başlangıcı üzerine etkilerinin kız çocuklarında ve dişi sprague-dawley sıçanlarda değerlendirilmesi
The evaluation of the effects of quail egg consumption on beginning of puberty in girls and female sprague-dawley rats
Yazar: ÖZLEM SÜREKLİ KARAKUŞ
Danışman: PROF. DR. TÜLAY GÜRAN
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases ; Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Bıldırcın = Quail ; Endokrin bezler = Endocrine glands ; Endokrin sistem = Endocrine system ; Ergenlik = Puberty ; Kız çocukları = Young girls ; Sıçanlar = Rats ; Yumurtalar = Eggs

Özet:
Giriş ve Amaç: Son yıllarda endokrin bozucular adı verilen doğal hormon ve hormon benzeri etki gösteren kimyasallara çevresel maruziyetin, endokrin sistem dengesini etkileyebileceği yolunda veriler gelmeye başlamıştır. Klinikte puberte prekoks bulguları ile karşılaştığımız hastalarda, bu endokrin bozuculara maruziyeti sorguladığımızda özellikle bıldırcın yumurtası tüketimi dikkati çekmektedir. Bu nedenle, öncelikle prematür telarş şikayeti ile başvuran hastalardaki bıldırcın yumurtası kullanım durumunu belirlemeyi ve bıldırcın yumurtasının sıçanların pubertal gelişimi üzerinde oluşturacağı değişiklikleri belirlemeyi hedefledik.
Gereç-Yöntem: 
Klinik ön çalışma: Prematür telarş ile başvuran 6- 8 yaş aralığındaki 55 kız hastanın dosyaları retrospektif olarak incelendi ve ailelerine anket yapılarak bıldırcın yumurtası kullanım durumu, kullanılmışsa sıklığı ve miktarı hakkında bilgiler soruldu. Prematür telarş ile başvuran hastaların başvuru yaşları ortalaması 7 yaş 2 ay olarak belirlenmesi üzerine kontrol grubu olarak 6 - 8 yaş aralığında takibimizde bulunan Tip 1 Diyabetes Mellitus tanılı ve diyabet kontrolü iyi olan 54 kız hastanın dosyaları retrospektif olarak incelendi ve ailelerine aynı şekilde anket yapıldı. Bıldırcın yumurtası tüketim durumu, prematür telarş ve kontrol gruplarında karşılaştırıldı.
In vivo rat modeli çalışması: Sprague-Dawley female ratlar, su ile negatif kontrol, yağ ile negatif kontrol, 17β-estradiol (E2) ile pozitif kontrol ve bıldırcın yumurtası (BY) 300 mg/kg, 1000 mg/kg, 3000 mg/kg doz grupları olmak üzere 6 gruba ayrıldı. Postnatal (PN) 14. günden itibaren her gün vücut ağırlığı ve burun-kuyruk uzunluğu ölçülerek; ağırlığına göre, grubuna uygun şekilde belirlenen dozlarla orogastrik yoldan sonda ile beslendi. PN 22. günden itibaren vaginal açıklık bakılmaya başlandı ve PN 30. gün antropometrik ölçümleri alındı, vaginal smear alındı, dekapite edilerek kan alındı ve organ diseksiyonu yapıldı. Uterus, over, karaciğer, böbrek ve beyin organlarının ağırlıkları, vücut ağırlıklarına oranlanarak rölatif organ ağırlıkları bulundu. Vaginal smearlar, over ve uterus dokuları histolojik incelemeye alındı. Serumdan folikül stimüle edici hormon (FSH), luteinize edici hormon (LH), östrojen, insülin benzeri büyüme faktörü (IGF-1), leptin, kolesterol, düşük yoğunluklu lipoprotein (LDL), kreatinin, enzyme linked immunosorbent assay (ELİSA) yöntemi ile çalışıldı. Karaciğer ve böbrek dokularında, lipit peroksidasyon-malondialdehit (MDA) ve glutatyon (GSH) ölçümü yapıldı.

Bulgular: 
Klinik ön çalışma: Prematür telarş grubunun, kontrol grubuna göre vücut ağırlığı, boy uzunluğu ve vücut kitle indeksi (vki) daha fazla idi. Prematür telarş grubunun %60'ının, kontrol grubunun ise %27,8'inin hayatlarının bir döneminde bıldırcın yumurtası kullandığı saptandı. Bıldırcın yumurtası tüketimi, kontrol grubunda az (%20,4) veya orta (%7,4) iken, yoğun tüketim hiç görülmedi. Prematür telarş grubunun ise %18,2'sinin az, %21,8'inin orta, %20'sinde yoğun tüketim bildirildi.
In vivo rat modeli çalışması: Ratların vücut ağırlığı ve burun-kuyruk uzunluğu günden güne artış göstermekle birlikte, gruplar arası anlamlı farklılık görülmedi. Vaginal açıklık, E2 grubunun hepsinde PN 25. günde, BY 300 mg/kg grubunda 2 hayvanda PN 26. günde ve yağ grubunda 2 hayvanda PN 26 ve 30. günlerde görüldü. Diğer hayvanlarda çalışmanın sonlandırıldığı PN 30. günde halen vaginal açıklık yok idi. Vaginal smear incelemelerinde su grubunun anestrus evresi ile prepubertal, diğer grupların ise östrus siklusu ile pubertesinin başlamış olduğu belirlendi. Vaginal smearda östrojenik aktivite belirtisi olan kornifiye hücre oranında  ise en yüksek E2 grubu olmak üzere, BY 300 mg/kg ve 1000 mg/kg doz gruplarında doz bağımlı anlamlı artış görüldü. Rölatif uterus ağırlığının, E2 grubu ve BY 300 mg/kg ve 1000 mg/kg doz gruplarında arttığı, rölatif over ağırlığının E2 grubu ve BY 1000 mg/kg grubunda arttığı görüldü. Over folikül sayıları, E2 grubunda anlamlı olarak fazla iken; diğer gruplarda farklı değildi. Uterus histolojisinde, endometriyal gland sayısı E2, BY 300 mg/kg ve1000 mg/kg gruplarında kontrole göre istatistiki olarak anlamlı yüksek bulundu. Endometriyal stroma kalınlığı ise E2 ve 1000 mg/kg grubunda anlamlı yüksek bulundu. FSH düzeyi, E2, 1000 mg/kg grubunda; östradiyol düzeyi ise E2, 300 mg/kg ve 1000 mg/kg doz gruplarında yüksek bulundu. Diğer biyokimyasal parametreler gruplar arası anlamlı farklılık görülmedi.

Sonuç: Kız çocuklarında prematür telarş ile başvuranlarda, kontrol grubuna göre bıldırcın yumurtası kullanımının daha sık olduğu görülmektedir. Hayvan deneyi çalışmamızda; smear bulgularında proöstrus evresi görülmesi, vajinal epitelin kornifiye olması, rölatif uterus ve over ağırlıklarındaki artış ve FSH ve östradiyol düzeyleri ile bıldırcın yumurtasının puberte üzerine etkisi olduğu ve 17β-estradiol kadar olmasa bile östrojenik etkisi olduğu görülmektedir.

 Anahtar kelimeler:  Bıldırcın yumurtası, puberte prekoks, endokrin bozucular

Abstract:
Background and Aim: Natural hormones and some synthetic chemicals which we are frequently exposed to in our surrounding environment, may disrupt the balance in our endocrine system and cause undesirable effects. In some patients with precocious puberty, we encountered history of quail eggs consumption which raised the question of whether it has an endocrine disrupting effect. Based on this observation, we investigated the effect of quail egg on puberty by two line of studies. First, we determined the exposure to quail egg in girls with premature thelarche. Secondly, we investigated the effect of quaill egg consumption on the pubertal development of female Sprague-Dawley rats.
Method:
Clinical preliminary research: The files of 55 female patients between the ages of 6 and 8 who presented with premature thelarche were examined retrospectively and their families were asked about the use of quaill eggs and their frequency if used. As the mean age at presentation of the patients presenting with premature thelarche was determined as 7 years and 2 months, the files of 54 female patients with Type 1 Diabetes Mellitus and good glycemic control who were followed up as a control group between the ages of 6 and 8 were retrospectively analyzed and their families were surveyed in the same way.
In vivo rat model: Sprague-Dawley female rats divided into 6 groups as negative control with water, negative control with oil, positive control with 17β-estradiol (E2) and quail egg (BY) 300 mg/kg, 1000 mg/kg, 3000 mg/kg dose groups. All rats were gavaged orogastrically with doses determined according to their weight; after body weight and nose-tail lenght were measured every day. Vaginal opening is checked from the postnatal 22nd day. Anthropometric measurements, vaginal smear and blood were taken by decapitation on the postnatal 30th  day and organ dissection was performed. Vaginal smears, ovarian and uterine histology were performed. Serum follicle stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), estrogen, insülin-like growth factor (IGF-1), leptin, cholesterol, low density lipoprotein (LDL), creatinine levels were measured using specific rat enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kits. Lipid peroxidation-malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) were measured in liver and kidney tissues.
Results:
Clinical preliminary research: Premature thelarche group had higher body weight, height and body mass index (BMI) compared to control group. It was found that %60 of the premature thelarche and %28 of the controls used quaill eggs at sometime in their lives. Quail egg comsumption was mild (%20.4) or moderate (%7,4) in the control group, but no heavy consumption was observed. In the premature thelarche group, there was %18,2 mild, %21,8 moderate and %20 heavy consumption in the history.
In vivo rat model: Although the body weight and nose-tail lenght of the rats increased day by day, there was no significant difference between the groups. Vaginal opening was seen on PN 25th day in all E2 group, 2 rats in the BY 300 mg/kg group on the 26th day and 2 rats from the fat group on PN 26 and 30th days. When the study was terminated, there was no vaginal opening in other rats. Vaginal smear findings were compatible with prepuberty in the control group whereas the other groups had evidence of puberty. In the vaginal smear, cornified cells indicating estrogenic activity was observed in the BY 300 mg/kg and 1000 mg/kg dose groups, with E2 group being highest. Relative uterine weight increased in E2 and BY 300 mg/kg and 1000 mg/kg dose groups, while relative ovarian weight increased in E2 and BY 1000 mg/kg groups. While the number of ovarian follicles were significantly higher in E2 group; they were not different in other groups. Uterine histology was significant for higher number of endometrial glands in E2, BY 300 mg/kg and 1000 mg/kg groups compared to the controls. Endometrial stroma thickness was significantly higher in E2 and 1000 mg/kg groups. FSH level was found to be high in E2 and BY 1000 mg/kg group. Estradiol level was determined to be high in E2, BY 300 mg/kg and 1000 mg/kg dose group. Others biochemical parameters did not differ significantly between groups.
Conclusions: It is observed that quail eggs are used more frequently in those presenting  with premature thelarche compared to the control girls. In our animal experiment;  based on vaginal smear findings , cornification of the vaginal epithelium,  increase in  uterus and ovarian weights and FSH and estradiol levels, the consumption of quail eggs appear to have a facilitatory effect on pubertal development.

Keywords:  Quail eggs, precocious puberty, endocrine disruptors