İstanbul ilindeki kedilerden toplanan pirelerde bazı ektoparaziter ilaçlara karşı direncin belirlenmesi
Detection of resistance to some ectoparasitic products in fleas collected from cats in İstanbul
Yazar: TUĞBA KÜNTÜZ
Danışman: PROF. DR. OYA ÜSTÜNER
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Farmakoloji ve Toksikoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Farmakoloji ve Toksikoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Kedi piresi (Ctenocephalides felis), hayvan sağlığı için küresel bir tehdit oluşturmakta ve hem hayvanlara hem de insanlara bulaşarak önemli sağlık sorunlarına yol açabilmektedir. Ayrıca bakteriyel, viral veya parazitik patojenler için vektör görevi görerek insan ve hayvan sağlığı için önemli riskler oluşturmaktadır. Yıllar boyunca karbamatlar, neonikotinoidler, fenilpirazoller ve sentetik piretroidler gibi ektoparaziter ilaçlar pire enfestastonlarını kontrol etmek ve tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu ektoparaziterlerin yaygın kullanımı, potansiyel olarak tedavileri etkisiz hale getiren direnç gelişmesine neden olmuştur. Ektoparaziter direncin izlenmesi ve altında yatan mekanizmaların anlaşılması, direnç yönetimi ve pire kontrolü için stratejiler geliştirilmesinde kritik öneme sahiptir. Bu çalışma, pire mücadelesi için veteriner hekimlikte en sık kullanılan farmasötiklerin etkin maddeleri olan fipronil, imidakloprid, flumetrin ve propoksura karşı pirelerdeki direncin mevcut durumunun incelenmesi amaçlamaktadır. İstanbul ilindeki iki barınakta bulunan kedilerden toplanan pirelerde öncelikle biyolojik analiz yapılmış ve bu etkin maddelere karşı direnç durumları belirlenmiştir. Pirelerin 1 saat, 8 saat ve 24 saat sonraki ortalama mortalite oranları sırasıyla fipronil için %42.5, %95, %100, imidakloprid için %72.5, %100, %100, flumetrin için %35, %72.5, %87.5, propoksur için %47.5, %100 ve %100 olarak bulunmuştur. Flumetrin ile yapılan biyolojik analizde 24 saatte ölmeyen 5 pirede ve fipronil ile yapılan analizde 8 saatte ölmeyen 2 pirede DNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. Flumetrin direncinin araştırılacağı örneklerde L1014F ve T929V mutasyonu tanımlamak için para genini hedefleyen bir PCR uygulanmıştır. Pirelerdeki T929V ve L1014F mutasyonlarının sıklığı sırasıyla %20 (5/1) ve %100 (5/5) olarak bulunmuştur. Fipronildeki direnci gösteren A302S mutasyonunun varlığı moleküler düzeyde araştırılmış ve 8 saat sonunda ölmeyen 2 pirede de direnç ile ilişkili A302S mutasyonu bulunamamıştır. Biyolojik analizler sonucu elde edilen veriler sahada pirelere karşı mücadele için kullanılan imidakloprid ve uzun yıllar kullanılmış ancak kullanımı yasaklanmış olan propoksur için bir direnç görülmediğini ortaya koymuştur. Fipronile karşı direnç oluşmadığı ancak knockdown'daki hafif düşmenin moleküler düzeyde olmadığı sonucuna varılmıştır. Flumetrine ise direncinin bulunduğu moleküler düzeyde de para gendeki mutasyonların varlığı ile gösterilmiştir.
Anahtar kelimeler: Pire, Direnç, Ektoparaziter, Biyolojik Analiz, Mutasyon

Abstract:
Cat flea (Ctenocephalides felis) poses a global threat to animal health and can cause significant health problems by infecting both animals and humans. In addition, it also poses significant risks to human and animal health by acting as a vector for bacterial, viral or parasitic pathogens. Over the years, ectoparasitic substances such as carbamates, neonicotinoids, phenylpyrazoles and synthetic pyrethroids have been widely used to control and treat flea infestations. However, the widespread use of these ectoparasitics has led to the development of resistance, potentially rendering treatments ineffective. Monitoring ectoparasitic resistance and understanding the underlying mechanisms is critical in developing strategies for resistance management and flea control. The aim of this study was to investigate the current status of resistance in fleas to fipronil, imidacloprid, flumetrin and propoxur, the active ingredients of the most commonly used pharmaceuticals in veterinary medicine for flea control. Fleas collected from cats in two shelters in Istanbul were first biologically analyzed and their resistance to these active ingredients was determined. The average mortality rates of fleas after 1 hour, 8 hours and 24 hours were 42.5%, 95%, 100% fo fipronil, 72.5%, 100%, 100% for imidacloprid, 35%, 72.5%, 87.5% for flumetrin, 47.5%, 100% and 100% for propoxur. DNA was isolated from 5 fleas that did not die in 24 hours in the biological analysis with flumethrin and 2 fleas that did not die in 8 hours in the analysis with fipronil. A PCR targeting the para gene was applied to identify the L1014F and T929V mutation in the samples to be investigated for flumethrin resistance. The frequency of T929V and L1014F mutations in fleas was 20% (5/1) and 100% (5/5), respectively. The presence of the A302S mutation indicating fipronil resistance was investigated at the molecular level and no A302S mutation was found in the 2 fleas that did not die after 8 hours. The data obtained as a result of biological analyses revealed that there was no resistance to imidacloprid, which is used in the field against fleas, and propoxur, which has been used for many years but has been banned for use. It was concluded that there was no resistance to fipronil, but the slight decrease in knockdown was not at the molecular level. Resistance to flumetrin was also demonstrated at the molecular level by the presence of mutations in the para gene.
Keywords:  Flea, Resistance, Ectoparasiticide, Bioassay, Mutation