Nonobstrüktif azoospermik olguların testis dokusuna trombositten zengin plazmanın etkisinin  in vitro araştırılması
In vitro investigation of the effect of platelet-RİCH plasma on testicular tissue of nonobstructive azoospermic cases
Yazar: SUNAY ZENGİNER ERDOĞAN
Danışman: DOÇ. DR. OYA SENA AYDOS
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology ; Üroloji = Urology
Dizin: Azospermi = Azoospermia ; Testis = Testis ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; İnfertilite =

Özet:
İnfertilite, günümüzde üreme çağındaki çiftlerin % 10- 15' ini etkilemektedir ve bu
oranın yaklaşık olarak %50'si erkeğe bağlı nedenlerden oluşur. Normal erkek fertilitesinin
korunması morfolojisi normal, yeterli ve hareketli sperm üretimine dayanırken erkek
infertilitesinin başlıca sebeplerinden biri, semende hiç sperm bulunmama durumu olan
azoospermidir.
Trombosit bakımından zengin plazma (TZP), trombosit yoğunluğu ile
zenginleştirilmiş kandan türetilmiş bir üründür. TZP, trombosit kaynaklı büyüme faktörü
(PDGF), dönüştürücü büyüme faktörü (TGF-β), vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF),
epidermal büyüme faktörü (EGF), insülin benzeri büyüme faktörleri (IGF-1) ve fibronektin
gibi zengin büyüme faktörlerine sahiptir. TZP, büyüme faktörleri ve sitokinleri serbest
bırakarak, insan hücre soylarında kök hücre proliferasyonunu ve farklılaşmasını sağlayarak
anjiyogenez ve kök hücre stimülasyonunun etkilerini arttırır.
Sitokinler, hücre fizyolojisi üzerinde pleiotropik etkilere sahip olan ve hemen
hemen tüm çekirdekli hücreler tarafından üretilen otokrin veya parakrin faktör olarak
hareket eden düzenleyici peptidlerdir. Testislerde, Sertoli ve germ hücreleri, TGF süper
ailesinin üyeleri (örn., TGF-β'ler, aktivinler, inhibinler), trombosit kaynaklı büyüme faktörü
(PDGF), interlökinler (örn. 1, IL-6, IL-11), tümör nekroz faktörü (örn. TNF-α, Fas ligandı),
interferonlar (örn. IFN-α, IFN-), FGF, sinir büyüme faktörü ve kök hücre faktörü (SCF,
KIT-ligand veya çelik faktörü) üyeleri dahil olmak üzere çeşitli sitokinler üretir. Bu
sitokinler, epitelyal döngü boyunca Sertoli ve germ hücreleri arasındaki bağlantının
düzenlenmesi, seminifer epiteldeki germ hücre hareketinin düzenlenmesi ve germ hücre
farklılaşması gibi hücresel süreçlere aracılık eder.
Doku rejenerasyonu bağlamında kök hücre proliferasyonunu ve hücre farklılaşmasını
uyaran yüksek seviyelerde çeşitli büyüme faktörleri içeren TZP, yakın zamanda doku
rejenerasyonu için uygulanabilen biyolojik bir materyal olarak tanımlanmıştır. Bu nedenle,
TZP, rejeneratif tıpta hücre terapisi için umut verici yeni bir yaklaşımı temsil etmektedir.
Çalışmamızda, non-obstrüktif azoospermi (NOA) tanısı almış infertil erkeklerden
testiküler sperm ekstraksiyonu (TESE) işlemi ile alınan testiküler dokudan elde edilen hücre
süspansiyonu in vitro kültür ortamında TZP ile kültüre edilerek, TZP'nin germ hücrelerinin
diferansiyasyonu üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı. TESE'de spermatozoa
bulunan 4 olgu ile TESE negatif 10 NOA tanısı almış infertil hastadan alınan doku
örneklerinden elde edilen hücre süspansiyonları vitro koşullarda uygun kültür ortamında TZP
ile kültüre edilerek, spermatogenik hücreler üzerindeki etkileri, diferansiyasyona olan katkıları
pre-mayotik (PLZF,VASA), mayotik (SYCP3, CREM) ve post-mayotik (PRM2, ACR)
belirteçlerlerle incelendi. Sonuç olarak TZP eklemediğimiz grupta kontrollerle
karşılaştırdığımızda VASA ve CREM ifadelerinin düşüşünün istatistiksel olarak anlamlı
olduğu bulundu (p<0,05).
Hasta gruplarında, kontrol grubu ile kıyaslandığında TZP uygulanan grupta, TZP
uygulanmayan gruba göre diferansiyasyona ait gen ifadelerinde istatistiksel olarak anlamlı
olmasa da artış saptandı. TZP'nin, hasta seçim kriterlerine dikkat edilerek non-obstrüktif
azoospermi olgularında, infertilite tedavisine olumlu katkılar sağlayabileceği kanısına varıldı.
Anahtar Sözcükler: Erkek infertilitesi, Testiküler sperm ekstraksiyonu (TESE),
Trombositten zengin plazma (TZP)

Abstract:
Today, infertility affects 10-15% of couples of reproductive age, and approximately
50% of this rate is due to male causes. While the morphology of maintaining normal male
fertility is based on the production of normal, adequate and motile sperm, one of the main
causes of male infertility is azoospermia, the absence of sperm in the semen.
Platelet-rich plasma (PRP) is a blood-derived product enriched with platelet density.
PRP has rich growth factors such as platelet-derived growth factor (PDGF), transforming
growth factor (TGF-β), vascular endothelial growth factor (VEGF), epidermal growth factor
(EGF), insulin-like growth factors (IGF-1) and fibronectin. . PRP enhances the effects of
angiogenesis and stem cell stimulation by releasing growth factors and cytokines, enabling
stem cell proliferation and differentiation in human cell lines.
Cytokines are regulatory peptides that have pleiotropic effects on cell physiology and
act as autocrine or paracrine factors produced by almost all nucleated cells. In testicles, Sertoli
and germ cells, produce various cytokines include members of the TGF superfamily (e.g. TGFβs, activins, inhibins), platelet-derived growth factor (PDGF), interleukins (e.g. 1, IL-6, IL11), tumor necrosis factor (e.g. TNF-α, Fas ligand), interferons (e.g. IFN-α, IFN-), FGF, nerve
growth factor and stem cell factor (SCF, KIT-ligand or steel factor). These cytokines mediate
cellular processes such as the regulation of the junction between Sertoli and germ cells
throughout the epithelial cycle, regulation of germ cell movement in the seminiferous
epithelium, and germ cell differentiation.
In our study, it was aimed to investigate the effects of PRP on the differentiation of
germ cells by culturing the cell suspension obtained from testicular tissue obtained by
testicular sperm extraction (TESE) from infertile men diagnosed with non-obstructive
azoospermia (NOA) in vitro culture medium. Cell suspensions obtained from tissue samples
obtained from 4 cases with spermatozoa in TESE and from 10 infertile patients diagnosed with
TESE negative NOA were cultured in vitro with PRP in an appropriate culture medium, their
effects on spermatogenic cells, their contribution to differentiation, pre-meiotic (PLZF,
VASA), were analyzed with meiotic (SYCP3, CREM) and post-meiotic (PRM2, ACR)
markers. As a result, the decrease in VASA and CREM expressions was found to be
statistically significant when compared with the controls in the group that did not add PRP.
In the patient groups, when compared to the control group, there was a statistically
insignificant increase in the gene expressions of differentiation in the PRP-treated group
compared to the group not treated with PRP. It was concluded that PRP can provide positive
contributions to the treatment of infertility in non-obstructive azoospermia cases by
considering the patient selection criteria.
Keywords: Male infertility, Testicular sperm extraction (TESE), Platelet rich plasma (PRP)