Fibroblast hücrelerinden oktadesilamin bazlı katı lipid nanopartikül ile uyarılmış pluripotent kök hücrelerin eldesi
Obtaning induced pluripotent stem cells from fibroblast cells via octadecylamine based solid lipid nanoparticle
Yazar: HANİFE SEVGİ VARLI
Danışman: DOÇ. DR. NELİSA TÜRKOĞLU
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Uyarılmış pluripotent kök hücreler (UPKH), laboratuvar koşullarında yetişkin somatik hücrelerin çeşitli transkripsiyon faktörleri kullanılarak genetik olarak yeniden kodlanması ile elde edilen pluripotent özellik kazandırılmış hücrelerdir. Sahip olduğu pluripotens özelliği sayesinde hemen hemen tüm hücre tiplerine dönüşebilme yeteneğine sahiptirler. Rejeneratif tıpta kullanımı etik sorunları ortadan kaldıran ve embriyonik kök hücreye alternatif bir kaynak olarak birçok hastalığın tedavisinde kullanılabilecek hücre kaynağıdır. 
Bu çalışmada fibroblast hücrelerden pluripotent kök hücreler elde edilmiştir. Hücrelere pluripotent kök hücre özelliği kazandıran Oct4, Sox2, Klf4 ve v-Myc transkripsiyon faktörleri ile birlikte yeşil floresan protein (GFP) geni içeren plasmid E.coli JM109 suşunda çoğaltılıp saflaştırılmıştır. 
Laboratuvarımızda önceki çalışmalarda sentezlediğimiz oktadesilamin bazlı katyonik lipid nanopartikülün (OLN) karakterizasyon çalışmaları yapılmış ve sitotoksisitesi L929 hücre hattı üzerinde yapılan MTT deneyi ile ölçülmüştür. OLN ile etkileştirilen plazmidler L929 hücre hattına aktarılmış, fibroblast hücrelerdeki transfeksiyon süreci invert mikroskopta GFP ışımasının takip edilmesi ile gerçekleştirilmiştir. Hücrelerdeki Oct4, Sox2, Klf4 ve v-Myc genlerinin ekspresyon varlığı RT-qPCR yöntemi ile belirlenmiştir. Elde edilen UPK hücreleri, yara iyileşmesinde kullanılmak üzere, laboratuvarımızda önceki çalışmalarda elde edilen selüloz bazlı hidrojel özellikte yara örtü malzemesi üzerine yüklenmiştir.

Abstract:
Induced pluripotent stem cells (IPSC) are pluripotent cells that obtained from adult somatic cells by genetic reprogramming in vitro via transcription factors. Due to its pluripotency, it has the ability to differentiate into almost many cell types. The use of the IPSc cell source for regenerative purpose removes ethical problems about embryonic stem cells. In this study, pluripotent stem cells were obtained from fibroblast cells via for main transcription factors. The plasmid containing green fluorescent protein (GFP) gene with Oct4, Sox2, Klf4 and v-Myc transcription factors was amplified in E. coli JM109 strain and purified. Fibroblast cells were transfected with plazmid by using a lipid-based nano vehicle. Characterization studies of octadecylamine-based cationic lipid nanoparticle (OLN) synthesized in our laboratory were performed by zeta-sizer. The cytotoxicity of the nanoparticle was determined by MTT assay (ISO 10993-5) OLN- plasmid conjugates were transferred into the L929 cell line, and the transfection process in fibroblast cells was evaluated via screening GFP expression.  Expression of the Oct4, Sox2, Klf4 and v-Myc genes in the cells were determined by the RT-qPCR. Then, the obtained UPS cells were loaded to a cellulose-based hydrogel wound dressing biomaterial which was designed in our previous studies.