Prostat kanseri kök hücre kültürü ile kök hücre içermeyen prostat kanseri hücre kültüründe mtor ve mlst8 moleküllerinin immunoflorans yöntemi ile karşılaştırılması ve mtor yolağının prostat kanserindeki yeri
Comparison of mtor and mlst8 moleculars with immunoflorence method in prostate cancer ctem cell culture with prostate cancer  cell culture without stem cell and role of mtor pathway  in prostate cancer
Yazar: ZAFER BİNAL
Danışman: PROF. DR. AHMET BARIŞ ALTAY
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Üroloji = Urology

Özet:
Giriş ve Amaç: Prostat kanseri erkeklerde kansere bağlı ölümlerde ikinci sırada yer almaktadır. Kanser kök hücrelerinin özelliklerinin araştırılması ve kanserin gelişiminde yer alan yolakların tespiti, hedefe yönelik tedavi yöntemlerinin geliştirilmesinde önemlidir. mTOR yolağı prostat kanserinde aktif olarak yer almaktadır. mTOR ve mLST8 molekülleri hem mTOR1 hem de mTOR2 kompleksinde yer alır. Bu çalışmanın amacı kök hücre içeren prostat kanseri hücre kültürü (Du-145 KKH) ile kök hücre içermeyen (Du-145 non-KKH) prostat kanseri hücre hattı kültüründe mTOR ve mLST8 moleküllerinin yoğunluğunu immünofloresans yöntemi ile karşılaştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: Prostat kanseri hücre hattı (Du-145) hücre kültürü flasklarında %5 CO2'li ortamda, 37 oC'de inkübatörde kültüre edildi. Floresanla-aktifleşmiş hücre ayırma (FACS) yöntemi ile akım sitometri analizi kullanılarak Du-145 prostat kanseri hücre hattında CD133+/CD44+/low yüzey belirteçlerini bulunduran kanser kök hücreleri (sorting) ve bunların dışında kalan hücreler (non-sorting) içlerinde 2'şer ml RPMI 1640 medium bulunan 5 ml'lik polistiren falkon tüplere ayrıldı. Du-145 KKH ve Du-145 non-KKH leri, immünfloresans boyama yöntemi kullanılarak hem hücre canlılık (DAPI yöntemi) hem de mTOR ve MLST8 proteinlerindeki floresan miktarının yoğunluğu görsel olarak analiz edildi. İstatistiksel yöntem olarak t-testi kullanıldı ve p<0,05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Bulgular: Du-145 KKH ve Du-145 non-KKH lerinde mTOR ve MLST8 proteinlerde meydana gelen değişimler, immunfloresan boyama yöntemi ile incelendi. DU-145 non-KKH ile kıyaslandığında, DU-145 KKH de mTOR ve MLST8 proteinlerinin floresan miktarında artış görülmüştür. Bir görüntü analizi programı olan İmageJ programı ile mTOR ve mLST8'e ait immünofloresans görüntülerdeki yoğunluk (intensity) değerleri hesaplandı. Du-145 KKH ve Du-145 non-KKH lerindeki mTOR ve mLST8 proteinine ait immünofloresans görüntülerindeki yoğunluk değerleri karşılaştırıldı. Prostat kanseri kök hücresinde mTOR ve MLST8 proteinlerine ait yoğunluk değerleri istatistiksel olarak anlamlı bulundu.
Sonuç: Prostat kanseri kök hücresindeki mTOR ve MLST8 proteinlerindeki bu anlamlı artış tedavi ve prognoz tayininde önemli bir yer teşkil edebilir. mTOR yolağı ile ilgili çalışmalar yapılarak hedefe yönelik tedaviler geliştirebilinir.
Anahtar Kelimeler: Prostat Kanseri hücre hattı (Du-145); Kanser Kök Hücresi; mTOR; MLST8

Abstract:
Background and Aim: Prostate cancer is the second most common cancer-related death in men. Investigation of the characteristics of cancer stem cells and the identification of the pathways involved in the development of cancer are important in the development of targeted treatment modalities. The mTOR pathway is actively involved in prostate cancer. The mTOR and mLST8 molecules are found in both the mTOR1 and mTOR2 complexes. The aim of this study is to compare the intensity of mTOR and mLST8 molecules in stem cell-free (Du-145 non-CSC) prostate cancer cell line culture with stem cell-containing prostate cancer cell culture (Du-145 CSC) by immunofluorescence.
Materials And Methods: Prostate cancer cell line (Du-145) was cultured in an incubator at 37°C in 5% CO2 environment in cell culture flasks. Using flow cytometry analysis with fluorescence activated cell sorting (FACS), the cancer stem cells containing CD133+/ CD44+/low surface markers (sorting) in the Du-145 prostate cancer cell line and the remaining cells (non-sorting) were separated into 5 ml polystyrene tubes which includes 2 ml RPMI 1640 medium. Du-145 CSC and Du-145 non-CSCs were visually analyzed for both cell viability (DAPI method) and the intensity of fluorescence in mTOR and MLST8 proteins using the immunofluorescence staining method. The t-test was used as a statistical method and p<0.05 was considered statistically significant.
Results: Changes in mTOR and MLST8 proteins in Du-145 CSC and Du-145 non-CSCs were examined by immunofluorescence staining. When compared to DU-145 non-CSC, there was an increase in fluorescence of mTOR and MLST8 proteins in DU-145 CSC. Intensity values in the immunofluorescence images of mTOR and mLST8 were calculated using the ImageJ program, an image analysis program. The density values of immunofluorescence images of mTOR protein in Du-145 CSC and Du-145 non-CSCs were compared. The density values of mTOR and MLST8 proteins in the prostate cancer stem cell were statistically significant.
Conclusions: This significant increase in the mTOR and MLST8 proteins in the prostate cancer root cell may be an important part of the treatment and prognosis determination. It is possible to develop targeted therapies by conducting studies on mTOR pathway.
Keywords: Prostate Cancer cell line (Du-145);Cancer Stem Cell; mTOR;MLST8