Gastrointestinal sistem tümörlerinde LYVE-1, VEGFR-3, CD44 ekspresyon düzeyleri ve lenfatik metastaz arasındaki ilişki
The relationship between LYVE-1, VEGFR-3, CD44 gene expresions and lymphatic metastasis in gastrointestinal tumors
Yazar: FÜSUN ÖZMEN
Danışman: PROF. DR. EMİN KANSU
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Gastrointestinal sistem tümörlerinde lenf nodu metastazı önemli prognostik göstergelerdendir. Tümör lenfatik damar yoğunluluğunun kantitatif olarak ölçülmesi, lenfanjiyogenez, lenfatik metastaz ve klinikopatolojik durumlar hakkında bilgi verebilir. Bu amaçla mide, kolon, pankreas kanserlerinde lenfatik endotel hücre belirteci olan LYVE-1, VEGFR-3 ile adezyon molekülü CD44'ün mRNA düzeyleri, normal ve tümörlü dokularda real-time PCR ile kantitatif olarak ölçüldü. Elde edilen değerler ile lenf nodu tutulumu, tümörün histolojik tipi, diferansiasyonu, T evresi, stage durumu ve nöral, perinöral, vasküler invazyon arasındaki ilişki araştırıldı. Her üç molekülün dokudaki dağılımına immünohistokimyasal yöntemle bakıldı ve Western blot tekniği ile bu gen mRNA'larının proteine dönüşümü gösterildi. Mide, kolon, pankreas kanserlerinde LYVE-1, CD44 ve VEGFR-3 gen ekspresyonlarının normal dokudaki düzeylerine oranla anlamlı ölçüde arttığı saptandı. Histolojik tip, diferansiasyon ve evre gibi klinikopatolojik kriterler ile gen ekspresyon düzeyleri arasında anlamlı bir ilişki bulunamazken, özellikle mide kanserli hastalarda Pozitif Lenf Nodu sayısının/Total Lenf Nodu sayısına oranı ve perinöral invazyon ile bu artışların ilişkili olduğu görüldü. Mide kanserinde LYVE1 ve CD44 over-ekspresyonları ile perinöral invazyon ve lenfatik tutulum arasında; pankreas kanserlerinde ise CD44 ve VEGFR-3 ile vasküler invazyon arasında anlamlı bir ilişki saptandı. LYVE-1 antikoru ile boyanan lenfatik damarların dokudaki dağılımları değerlendirildiğinde, hastaların %13 ünde tümöral, buna karşın %27'sinde peritümöral boyanma olduğu saptandı. Tümöral ve peritümöral boyanmaların her ikisinde de LYVE-1 ile boyanma saptanan hastaların tamamında lenf nodu metastazı pozitifti. Bu bulgular, her üç genin de gastrointestinal sistem tümörlerde lenfanjiyogenez, invazyon ve lenf nodu metastazı oluşumunda önemli rol oynadıklarını düşündürmektedir. LYVE-1 güvenilir bir lenfatik damar belirtecidir ve immunohistokimyasal olarak kullanıldığında tümöral ve peritümöral lenfatik damar yoğunluğu saptamakta yararlanılabilir. Bu bulguların biyolojik önemini, hastaların prognozlarını belirlemede ve tedavilerinde kullanılabilirliğini saptamaya yönelik yeni çalışmalara gereksinim vardır.Anahtar Kelimeler: LYVE-1, VEGFR-3, CD44, kanser, lenfanjiyogenezDestekleyen kurum : TÜBİTAK-SBAG, Proje No: 104S581

Abstract:
Lymph node metastasis is a very important prognostic factor in gastrointestinal tumors. Quantification of lymphatic vessel density in the tumor might give some information on the relationship between lymphangiogenesis, lymphatic metastasis and clinicopathologic parameters. With this purpose mRNA levels of lymphatic endotelial cell marker LYVE-1, vascular endothelial grofth factor receptor VEGFR-3, and adhesion molecule CD44 in normal and tumor tissues of patients with gastric, pancreatic and colonic cancers were quantitatively measured by using real-time PCR and the results were correlated with lymph node metastasis, histologic type and the diferentiation of the tumor, T stage, final stage according to TNM and the presence of neural, perineural and vascular invasions. The distribution of these molecules in the tissue was evaluated by using immunohistochemistry and the conversion of their mRNAs into the proteins was shown by Western-Blot. LYVE-1, CD44 and VEGFR-3 gene expression levels in gastric pancreatic and colonic cancers were significantly higher than the normal tissue. While there was no correlation between gene expressions and clinicopathologic features such as histologic type, diferentiation and stage, the levels of gene expressions were found to be increased with the ratio of the positive lymph node/total lymph node and the presence of perineural invasion especially in gastric cancers. The significant correlation were also found between LYVE-1 and CD44 over-expressions and perineural invasion and lymph node positivity in gastric cancers; CD44 and VEGFR-3 overexpresions and vascular invasion in pancreatic cancers. When the LYVE-1 antibody stained lymphatic vessels distribution in tissue were evaluated, lymphatic vessels were located intra-tumorally in 13% and peri-tumorally in 27% of the patients. Moreever, lymph node metastasis were also positive in all LYVE-1 stained patients. It is concluded that LYVE-1, VEGFR-3 and CD44 all play an important role in the development of lymphangiogenesis, invasion and lymph node metastasis in gastrointestinal cancers. LYVE-1 is an excellent lymphatic vessel marker tumoral and peritumoral lymphatic vessel density might be evaluated by using immunohistochemical techniques. Future studies are needed to evaluate their biological relevance in prognosis and therapeutics.Keywords: LYVE-1, VEGFR-3, CD44, Cancer, LymphangiogenesisSupported by : TÜBİTAK-SBAG with Project number: 104S581