Ceviz iç kabuğunun farklı polaritelerdeki çözücü ekstraktlarının, plazma kolestrol düzeyi ile ilişkili enzim yolağı üzerine etkisinin in vitro olarak araştırılması
In vitro investigation of the effect of different polarity solvent extracts of walnut inner shells on the enzyme pathway associated with plasma cholesterol level
Yazar: NESLİHAN ŞİRİN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ NURİ CENK COŞKUN
Düzce Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğal ve Bitkisel Ürünler / Kozmetik Ürünler Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Biyoloji = Biology ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Bitki özütü = Plant extract ; Ceviz = Walnut ; Ceviz kabuğu = Walnut shell ; Enzimler = Enzymes ; Kolesterol = Cholesterol ; İn vitro = In vitro

Özet:
Kolesterol, canlıların yapı taşı olan hücrelerdeki işlevselliği bakımından kritik öneme sahip bir moleküldür. Fazlalığı ve azlığı hücre membran yapısında bozunmalara ve hasara sebep olmaktadır. Bunları engellemek için diyetle alınan kolesterol miktarı dengeli tutulmakta, gerekirse tıbbi tedavilere başvurulmaktadır. Ek olarak, halk, doğal ve bitkisel ürünlere de başvurmaktadır. Ceviz iç kabuğunun kolesterol üzerinde etkili olduğu varsayımından yola çıkılarak dizayn edilen bu çalışmada, farklı polaritedeki çözücülerde hazırlanan ceviz iç kabuk ekstraktlarının gaz kromatografisi-kütle spektrometresinde (GC-MS) içerik analizi yapılmış ve 3-hidroksi-3-metilglutaril koenzim A (HMG-KoA) redüktaz ve kolesterol esteraz üzerine etkisi in vitro olarak araştırılmıştır. 50 ml'lik distile su, metanol, etanol, aseton, hekzan ve siklohekzan çözücülerinde 5 gr ceviz iç kabuk numuneleri yirmidört saat ayrı ayrı bekletilerek ekstrakte edildi. Ayrıca distile suda bir saat kaynatma ile ayrı bir solüsyon hazırlandı. Numuneler helyum mobil fazında ve kademeli sıcaklık artışında GC-MS'te analiz edildi, entegre kütüphane veri tabanı ile tanımlama yapıldı. Her bir ekstraktın 10 mg/mL stok çözeltilerinden seyreltik konsantrasyonlar hazırlandı, HMG-KoA redüktaz ve kolesterol esteraz üzerine etkisi kolorimetrik olarak çoklu plaka okuyucuda tayin edildi. GC-MS taramasında distile su, etanol metanol ekstraklarında çoklu doymamış yağ asiti, terpen ve fenolik bileşik türevleri, hekzan, siklohekzan ve aseton ekstraktlarında doymuş hidrokarbon (alkan) bileşikleri görüldü. HMG-KoA redüktaz üzerinde %3,2'lik inhibisyon etki asetonlu ekstraktın 2 μg/mL konsantrasyonunda görülürken, kolesterol esteraz üzerindeki %13,6 inhibisyon etki distile suda bir gün bekletilen ekstraktın 67 μg/mL konsantrasyonunda görüldü. Bu tez çalışması ile ceviz iç kabuğu ekstraklarının plazma kolesterol düzeyi ile ilişkili enzim yolaklarında görevli HMG-KoA redüktaz ve kolesterol esteraz üzerine etkisinin olmadığı in vitro olarak saptanmıştır.

Abstract:
Cholesterol is a critically important molecule for the functionality of cells, which are the building stones of organisms. Its excess and scarcity cause disruptions and damage to the cell membrane structure. In order to prevent these, the amount of cholesterol taken in the diet has kept balanced, and medical treatments are applied if necessary. In addition, the public also applies to natural and herbal products. In this study, which was designed based on the assumption that walnut inner shells have an effect on cholesterol, content analysis of walnut inner shell extracts prepared in solvents of different polarity was carried out in gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and the effect of extracts on 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase and cholesterol esterase was investigated in vitro. 5 g walnut inner shell was extracted separately in 50 ml distilled water, methanol, ethanol, acetone, hexane and cyclohexane solvents for twenty-four hours. Furthermore, a separate solution was prepared by boiling in distilled water for one hour. Samples were analyzed in GC-MS in helium mobile phase and gradual temperature increase, identification was made with the integrated library database. Dilute concentrations of each extract were prepared from 10 mg/mL stock solutions, the effect on HMG-CoA reductase and cholesterol esterase was determined colorimetrically in a multi-plate reader. In the GC-MS scanning, polyunsaturated fatty acid, terpene and phenolic compound derivatives were seen in distilled water, ethanol, methanol extracts, and saturated hydrocarbon (alkane) compounds in hexane, cyclohexane and acetone extracts. While % 3.2 inhibition effect on HMG-CoA reductase was seen at 2 μg/mL concentration of acetone extract, % 13.6 inhibition effect on cholesterol esterase was seen at 67 μg/mL concentration of the extract kept in distilled water for one day. In this thesis, it was determined in vitro that walnut inner shells had no effect on HMG-CoA reductase and cholesterol esterase, which are enzyme pathways related to plasma cholesterol levels.