Endotelyal nitrik oksit sentaz açilasyonunun nitrik oksit sentezi ve vasküler reaktivite üzerine etkisi
The effects of endothelial nitric oxide synthase acylation on nitric oxide synthesis and vascular reactivity
Yazar: FATOŞ İLKAY ALP
Danışman: PROF.DR. OSMAN ÖZDEMİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Nitrik oksit = Nitric oxide

Özet:
Alp FI. `'Endotelyal Nitrik Oksit Sentaz Açilasyonunun Nitrik Oksit Sentezi Ve VaskülerReaktivite Üzerine Etkisi'' stanbul Üniversitesi Saglık Bilimleri Enstitüsü, FarmakolojiABD. Doktora Tezi. stanbul, 2007.Proteinlerin miristolasyonu ve palmitolasyonu, fonksiyonel olarak bulunmaları gerekenplazma membranlarındaki lokalizasyonları açısından önemlidir. Endotel hücrelerde Nitrikoksit (NO) sentezinini katalizleyen enzim olan endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS), Glisin-2rezidüsünden N-miristolasyona, sistein-15 ve -26 rezidülerinden S-palmitolasyona ugramaktave bu modifikasyon eNOS'un Golgi kompleksinde ve plazma membranlarının kaveola velipid raftler gibi kolesterolden zengin mikrodomainlerinde lokalize olmasına aracılıketmektedir. Açilasyon defektif mutant eNOS formlarının bu domainlere hedeflenemediklerive buna baglı olarak bazal ve agonistle stimüle edilen NO salınımının bozuldugugözlenmistir. eNOS'un yanı sıra kaveolanın majör proteini olan kaveolin-1 ve Src kinazlargibi endotel hücrelerde eksprese edilen diger proteinlerin de palmitollendigi bilinmektedir.Vasküler biyoloji açısından global palmitolasyonun önemini analiz etmek için, normal vegenetik modifikasyonlu farelerden izole edilen damar preparatlarında ve endotel hücrekültürlerlerinde, protein yag açilasyonu inhibitörü 2-bromopalmitat ve uzun zincirli yag asidiaçil KoA sentaz inhibitörü Triacsin C'nin etkileri çalısılmıstır. Triacsin C'nin endotelhücrelerden NO salınımını arttırdıgı, eNOS-kaveolin-1 etkilesmesini anlamlı düzeyde azalttıgıve Golgi'nin fragmentasyonuna sebep oldugu gözlenmistir. 2-bromopalmitat'ın ise böyle biretkisi gözlenmemistir. Ayrıca Triacsin C'nin hücre proliferasyonunu inhibe ettigi ve in vitroolarak anjiogenik cevaplılıgı anlamlı düzeyde arttırdıgı belirlenmistir. Triacsin C ve 2-bromopalmitat'ın wild tip, eNOS knockout ve kaveolin-1 knockout farelerden izole edilenaortik halkalarında fenilefrin ile indüklenen kontraksiyonları inhibe ettigi ve bu inhibitöretkinin wild tip ve kaveolin-1 knockout farelerde eNOS inhibitörü L-NAME varlıgındakısmen geriye döndügü gözlenmistir. Bu çalısma yag açilasyonu inhibitörlerinin endotel hücrebiyolojisi ve vasküler reaktivite üzerindeki etkisini ortaya koymaktadır.

Abstract:
Alp FI. `?The Effects of Endothelial Nitric Oxide Synthase Acylation on Nitric OxideSynthesis and Vascular Reactivity?? stanbul University, Institute of Health Science,Department of Pharmacology Doktora Tezi. stanbul. 2007.Myristoylation and palmitoylation of proteins enhance the localization to the plasmamembrane, where they must be present to function properly. Endothelial nitric oxide synthase(eNOS), the enzyme that catalyze the nitric oxide (NO) synthesis in endothelial cells, is Nmyristoylatedat Glycine-2 and subsequently S-palmitoylated at Cysteine-15 and -26residues. N-myristoylation and S-palmitoylation mediate the localization of eNOS in Golgicomplex and cholesterol rich microdomains of the plasma membranes, including caveolaeand lipid rafts. Acylation defective mutants of eNOS, which can not target either domain,impairs basal and agonist-stimulated NO release. In addition to eNOS, other importantproteins like caveolin-1 (major coat protein of caveolae) and Src expressed in endothelial celltypes are also palmitoylated.In order to analyse, the importance of global palmitoylation in vascular biology, we studiedthe effect of protein fatty acylation inhibitor 2-bromopalmitate and long-chain acyl-CoAsynthase inhibitor Triacsin C on wild type and genetically modified mice as well asendothelial cell cultures. Our results showed that, Triacsin C but not 2-bromopalmitateincreases NO release in endothelial cells, abolishes the interaction between eNOS andcaveolin-1 and causes the Golgi apparatus fragmentation. Triacsin C partially inhibits the cellproliferation, but significantly enhance the angiogenic response ?in vitro?. 2-bromopalmitateand Triacsin C inhibited phenylephrine-induced contraction on isolated aortic rings from wildtype, eNOS knockout and caveolin-1 knockout mice. This effect was partially restored withNOS inhibitor L-NAME in wild type and kaveolin-1 knockout mice, showing the role of NOon the inhibitory effects of these acylation inhibitors. This study provides evidences for theimportance of fatty acylation inhibitors on endothelial cell biology and vascular reactivity.