Lucilia sericata'nın lucymycin geninin moleküler karakterizasyonu
Molekular characterization of Lucilia sericata lucymycin gene
Yazar: SONGÜL ÇETİN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ZUHAL ÖNDER
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Parazitoloji = Parasitology

Özet:
İyileşmeyen kronik yaralar bütün dünyada önemli bir sağlık sorunudur. Bu yaralara uygulanan en eski tedavi yöntemi olan Maggot Debridman Tedavi (MDT) günümüzde de başarılı uygulama etkinliği ile dikkat çekmektedir. MDT, Lucilia sericata sinek larvalarının steril hale getirilerek iyileşmeyen yaraların tedavisinde kullanılmasına verilen isimdir. Bu çalışma, Lucilia sericata larvalarının lucimycin geninin moleküler karakterizasyonunu belirlemek amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla, Anabilim dalımız insektaryum ünitesinde ergin sineklerden elde ettiğimiz 3. dönem larvalardan RNA izolasyonu yapılmış ve takiben revers transkripsiyon ile cDNA sentezi gerçekleştirilmiştir. Sentezlenen cDNA'lar, L. sericata'nın lucimycin geni için dizayn edilen spesifik primerler ile PCR analizine tabii tutulmuş ve elde edilen amplikonlar pJET1.2/blunt vektörüne klonlanmış ve plazmit pürifikasyonu yapılmıştır. Elde edilen rekombinant plazmitler vektör spesifik primerlerle sekans analizine tabii tutulmuş ve hedef gen bölgesi dizilimleri elde edilmiştir. Nükleotid dizileri saptanan izolatın moleküler karakterizasyonu belirlendikten sonra GenBank'a kaydedilmiş (MF964229) ve Dünya'da yalnızca Almanya'dan bildirilmiş (GenBank Aksesyon no: KJ413251.1) Lucimycin izolatı ile ikili hizalaması yapılmıştır. Nükleotit dizilimlerinin ikili hizalama sonucunda ilgili iki izolatın birbiri ile %99 identik oldukları saptanmış ve elde edilen bu oranın, nükleotid sekans dizilimlerinin 113. nükleotidlerindeki mutasyondan ileri geldiği tespit edilmiştir.
Sonuç olarak bu çalışma ile Türkiye'de ilk kez L. sericata larvalarından elde edilen lucimycin geninin moleküler karakterizasyonu yapılmış ve elde edilen izolat Türkiye'nin biyolojik varlığı olarak GenBank'a kaydı sağlanmıştır. 

Anahtar kelimeler: Lucilia sericata, lucimycin, moleküler karakterizasyon

Abstract:
Non-healing chronic wounds is a significant health problem all over the world. Maggot Debridement Therapy (MDT), which is the oldest treatment method applied to this wounds, attracts attention with its successful application efficiency. MDT, is the name given to the use of Lucilia sericata fly larvae in the treatment of unhealed wounds by sterilization. This study was conducted to determine the molecular characterization of the lucimycin gene of Lucilia sericata larvae. For this purpose, in the insectary unit of our main science department, RNA isolation was made from adult flies in the 3rd period larvae, followed by cDNA synthesis by reverse transcription. The synthesized cDNAs were subjected to PCR analysis with specific primers designed for the lucimycin gene of L. sericata, and the resulting amplicons were cloned into the pJET1.2/blunt vector and plasmid purification was performed. The resulting recombinant plasmids were subjected to sequence analysis with specific primers of the vector and target gene region sequences were obtained. After the molecular characterization of the isolate that identified the nucleotide sequences was determined, it was registered in GenBank (MF964229) and the binary alignment with Lucimycin isolate was reported only in Germany on the World (GenBank Accession No: KJ413251.1). The two alignments of the nucleotide sequences were found to be 99% identical to each other, and it was determined that this ratio was derived from the mutation at nucleotide positions 113 of the nucleotide sequence sequences. As a result, the molecular characterization of the lucimycin gene obtained from the larvae of L. sericata for the first time in Turkey has been made with this study and the obtained isolate has been registered to GenBank as biological entity of Turkey.

Key words: Lucilia sericata, lucimycin, molecular characterization