Değişik kaynaklı MKH'lerin detaylı karakterizasyonu, lenfohematopoezi destekleyici özellikleri ve izolasyonunda cd271 antijeninin önemi
Detailed characterization of mscs from different sources, their ability to support lymphohematopoiesis and the importance of cd271 antigen for their isolation
Yazar: GÖZDE AYDIN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ FATİMA SUSANNA FAUSTİNA AERTS KAYA
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology
Dizin: Antijenler-CD = Antigens-CD ; Fetüs = Fetus ; Hematopoetik kök hücreler = Hematopoietic stem cells ; Hematopoetik kök hücreler = Hematopoietic stem cells ; Kemik iliği = Bone marrow ; Kemik iliği = Bone marrow ; Kök hücreler = Stem cells

Özet:
Mezenkimal Kök Hücreler (MKH), kendini yenileyebilen multipotent hücrelerdir ve rejeneratif tedavilerin temelini oluşturmaktadır. CD271 antijeni, kemik iliğinden (Kİ) saf MKH izolasyonu için kullanılan en etkin belirteçtir. Bu tez kapsamında; CD271 antijeni kullanılarak insan Kİ'nden MKH izolasyonu ve karakterizasyonu yapılmıştır; plastiğe aderan Kİ-MKH ve CD271+ kök hücrelerin (KH), koloni oluşturma kapasitesi, immün profili, proliferatif ve farklılaşma kapasiteleri kıyaslanmıştır. Ayrıca CD271 antijeninin, fetal dokulardan saf MKH izolasyonu için kullanılıp kullanılamayacağı araştırılmıştır; Kİ-kaynaklı MKH ve CD271+ KH'lerin fonksiyonu ve lenfohematopoetik desteği karşılaştırılmıştır; lenfohematopoetik farklılaşmasına desteğini anlamak için NOTCH reseptör ve ligandların ifadelerine bakılmıştır. CD271 antijeni düşük oranlarda Kİ'nde ifade edilse de, CD271+ KH'ler; Kİ'nin tüm koloni oluşturma kapasitesine sahip ve aderan Kİ-MKH'ler ile benzer bir immünofenotip, farklılaşma profili, sitokin salınımı ve NOTCH reseptör ve ligand ifadeleri göstermekte olup, benzer şekilde hematopoetik hücre desteğini sağlamaktadır. Ancak, CD271 antijeni Kİ'nden saf MKH'lerin izolasyonunda kullanılabilirken, fetal dokulardan saf MKH izolasyonu için kullanılamamaktadır. Bu sebeple; plasenta koryon (PK), plasenta amniyon (PA) ve göbek kordonundan (GK) MKH saflaştırılması için farklı izolasyon ve/veya kültür koşullarının optimizasyonu gerekmektedir. Medyuma salınan sitokin profiline ve NOTCH reseptör ile ligand ifadelerine bakıldığında, CD271+ KH'ler ve Kİ-MKH'ler birbirine yakındır. Ancak, fetal dokulardan izole edilen MKH'lerin profilleri birbirine yakın iken, Kİ'nden izole edilen MKH'lerden belirgin farklar göstermektedir. Bu farklar; ex vivo Hematopoetik kök hücre'lerin (HKH) çoğaltılması ve lenfohematopoetik farklılaşmaya olan desteği bakımından büyük önem taşıdığı için, klinik açıdan tartışılmıştır.

Abstract:
Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are multipotent cells with self-renewal ability and form the basis for regenerative treatments. CD271 antigen is an effective marker for isolation of pure populations of MSCs from bone marrow (BM). Within this thesis, the efficacy of CD271 in the isolation of MSCs from BM was assessed, cells were characterized with respect to their colony forming capacity, immunophenotype, proliferative and differentiation capacities and compared to plastic adherent BM-MSCs. In addition, the use of CD271 for isolation of MSCs from fetal tissues was assessed. Functional and lymphohematopoietic support of BM-derived MSCs and CD271 + stem cells and expression of NOTCH receptors and ligands was examined to understand their role in in vitro lymphohematopoietic differentiation. Although the CD271 was expressed at very low levels, CD271 + stem cells contained all colony forming capacity of the BM. These cells showed similar immunophenotypes and differentiation profiles, cytokine release, NOTCH receptor and ligand expression, as well as support of ex vivo hematopoietic cell expansion in comparison to BM-MSCs. However, the CD271 antigen could not be used for isolation of pure MSC populations from fetal tissues. Therefore; different isolation and/or culture conditions must be optimized for the purification of MSCs from placenta chorion (PC), placental amnion (PA) and umbilical cord (UC). CD271 + stem cells and BM-MSCs showed similar cytokine secretion and NOTCH receptor and ligand expression. However, while the profile of MSCs isolated from fetal tissues displayed high similarities, they were clearly distinct from BM-MSCs and BM-CD271+ stem cells. The importance and implications of these differences, which may have great importance for their clinical use, as well as effects on the ex vivo expansion of hematopoietic stem cells (HSCs) and lymphohematopoietic differentiation are discussed in this thesis.