Non-obstruktif azospermili hastalarda ejekülatta ve TESE materyalinde bakılan PCNA ve LİM-15 gen ekspresyon düzeylerinin tese'de sperm bulma konusunda prediktif değeri
Predictive value of PCNA and LİM-15 gene expression levels in ejeculate and TESE materials for non-obstructive azospermia patients
Yazar: MUHAMMED ARİF İBİŞ
Danışman: PROF. DR. KAAN AYDOS
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Azospermi = Azoospermia ; Ejakülasyon = Ejaculation ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Sperm = Spermatozoa ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Kliniğimizde NOA tanısı konularak TESE işlemi uygulanan hastalarda, ejekülatta ve testis dokusunda bakılan PCNA ve LİM-15 gen ekspresyon düzeylerinin TESE başarısını öngörme olasılığını incelemek
Yöntem ve Gereç: Çalışmaya Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi üroloji polikliniğine 01 Şubat 2018 ve 31 Temmuz 2019 tarihleri arasında başvuran, NOA tanısı ile mTESE cerrahi endikasyonu konulan hastalar dahil edilmiştir. mTESE yapılmış olan tüm hastalardan cerrahi öncesi 7 gün içinde Lim 15 ve PCNA gen ekspresyon düzeyleri ölçülmek üzere semen örneği alınmıştır. TESE işlemi sırasında, sperm hücresi araştırmak, Lim 15 ve PCNA gen ekspresyon düzeyleri ölçmek ve testis histolojisini değerlendirmek için ayrı ayrı doku örnekleri alınmıştır. Alınan semen örneği ve testis dokusu bir dizi işlemden geçtikten sonra dokularda revers transkriptaz enzimi ile cDNA'lar sentezlenmiştir. Daha sonrasında ise RT-PCR ile ekspresyon düzeyleri ölçülmüştür. Sonuçlar TESE'de sperm bulunan ve bulunmayan iki grup arasında karşılaştırılmıştır.
Bulgular: Çalışmaya 22-45 yaş aralığında dahil edilen 143 hastanın ortalama yaşı 34,3 (± 4,2) olarak saptanmıştır. Hastaların 73'ünde TESE'de sperm saptanırken (%51), kalan 70'inde (%49) sperm gözlenmemiştir. Hastaların total testosteron değerinin 116-821 ng/dl arasında değiştiği ve ortalama total testosteron değerinin 431,02 (±161,2) ng/dl olduğu görülmüştür. Hastaların FSH düzeyleri ise 1,1-28 arasında değişmekte olup, ortalama FSH değeri 6,19 (±5,8) mIU/ml olarak bulunmuştur. Bu sonuçlara göre yaşın, serum total testosteron ve FSH düzeylerinin, TESE'de sperm elde etme oranları üzerine anlamlı bir etkisinin olmadığı anlaşılmıştır (Yaş; p=0,982, Total testosteron; p=0,120, FSH; p=0,362). Hastaların ultrasonografik olarak ölçülen sağ ve sol testis volüm ortalamaları sırasıyla 15,45 (±6,5) ml ve 15,55 (±6,2) ml idi. Hastalar testis volümlerine göre 5 ml ve altı, 5-15 ml ve 15 ml üstü olarak 3 gruba ayrılmıştır. Üç grup, sperm bulma açısından birbirleri ile karşılaştırıldığında testis volmü 15 ml'den yüksek olan grupta istatistiksel olarak daha fazla sperm bulunduğu sonucuna ulaşılmıştır (p=0,008). Aynı şekilde testis volmü 6-15 ml olan hastalarda sperm bulma şansının, testis volmü 5 ml'den küçük olgularınkinden istatistiksel olarak daha fazla olduğu görülmüştür (p<0,05). Yapılan TESE işleminde testis patolojisi MA ve HS gelen hasta gruplarında, patolojisi SCO gelen hasta grubuna göre sperm elde etme şansının istatistiksel olarak daha fazla olduğu gösterilmiştir (p<0,05). Aynı şekilde patolojisi HS gelen grupta, patolojisi MA olan gruba göre sperm elde etme şansının istatistiksel olarak daha fazla olduğu gösterilmiştir (p<0,05). TESE dokusunda ölçülen PCNA ve LİM-15 ve semende ölçülen LİM-15 gen ekspresyon miktarı açısından sperm bulunan ve bulunmayan iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı fark olduğu saptanmıştır (TESE-PCNA; p=0,038, TESE-LİM-15; p=0,022 Semen-LİM-15; p=0,004). Semende ölçülen PCNA ekspresyon miktarı açısından sperm bulunan ve bulunmayan iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır.
Sonuç: NOA'lı hastalarda, TESE işleminde alınan dokularda ölçülen PCNA ve LİM-15 gen ekspresyon düzeylerinin ve semen örneklerinde ölçülen LİM-15 gen ekspresyon düzeyinin TESE'de sperm saptanması ile korele olduğu gösterilmiştir. Hasta sayısının arttırılması halinde semende ölçülen PCNA gen ekspresyon düzeyinin de istatistiksel olarak anlamlı çıkacağı düşünülmektedir. PCNA ve LİM-15 gen ekspresyon düzeyleri, kendi biyolojik çocuklarına sahip olma umuduyla YÜT için hazırlık yapan infertil hastalara daha kaliteli danışmanlık hizmeti verilmesinin yolunu açacak ve gereksiz maliyetlerin engellenmesi sağlanacaktır.

Anahtar Sözcükler: azospermi, prediktif faktör, testiküler sperm ekstraksiyonu, infertilite

Abstract:
Objective: To investigate the likelihood of the expression of PCNA and LIM-15 gene expression levels in ejaculate and testicular tissue in patients undergoing TESE with the diagnosis of NOA in our clinic.
Materials and Methods: Patients who were admitted to Ankara University Medical Faculty urology outpatient clinic between February 2018 and July 2019 were diagnosed as non-obstructive azospermia (NOA) and indicated for mTESE surgery included in this study. Semen samples were taken from all patients who underwent mTESE to measure Lim 15 and PCNA gene expression levels within 7 days before surgery. During the TESE procedure, individual tissue samples were taken to investigate sperm cell, measure Lim 15 and PCNA gene expression levels and evaluate testicular histology. After the semen sample and testicular tissue underwent a series of procedures, complementary DNAs were synthesized by reverse transcriptase enzyme. Afterwards, expression levels were measured by RT-PCR. Results were compared between two groups according to successful sperm retrieval in TESE procedure.
Results: 143 patients were included in the study. The range of age was 22-45 years and the mean age was 34.3 (± 4.2) years. While 73 of the patients (51%) were found to have sperm in TESE, sperm was not observed in 70 patients (49%). Total testosterone value ranged from 116-821 ng / dl and the mean total testosterone value was 431.02 (± 161.2) ng / dl. FSH levels of the patients ranged from 1.1 to 28 and the mean FSH value was 6.19 (± 5.8) mIU / ml. According to these results, it was found that age, serum total testosterone and FSH levels did not have a significant effect on sperm retrieval rates (Age; p = 0.982, Total testosterone; p = 0.120, FSH; p = 0.362). The mean volume of the right and left testes was 15.45 (± 6.5) ml and 15.55 (± 6.2) ml, respectively. Patients were divided into 3 groups according to their testicular volumes: <5 ml, 5-15 ml and >15 ml.. When these three groups were compared with each other in terms of sperm retrieval, it was concluded that much more sperm retrieval was obtained in the testis volume of more than 15 ml (p = 0.008). Similarly, the rate of successful sperm retrieval was statistically higher in patients with testicular volume of 6-15 ml than those of testicular volume less than 5 ml (p <0.05). In the TESE procedure, it was shown that the rate of sperm retrieval was statistically higher in the patients with maturation arrest and hypospermatogenesis as a result of testicular pathology than the patients with Sertoly cell only (p <0.05). Likewise, it was shown that the rate of sperm retrieval was statistically higher in the group with pathology HS than the group with pathology MA (p <0.05). There was a statistically significant difference between two groups with and without sperm in terms of PCNA and LIM-15 expression in TESE tissue and LIM-15 gene expression measured in semen (TESE-PCNA; p = 0.038, TESE-LIM-15; p = 0.022 Semen -LIM-15; p = 0.004). There was no statistically significant difference between two groups with and without sperm in terms of PCNA expression measured in semen.
Conclusion: It was shown that PCNA and LIM-15 gene expression levels measured in tissues taken during TESE procedure and LIM-15 gene expression levels measured in semen samples were correlated with sperm detection in TESE in patients with NOA. PCNA gene expression level measured in semen is considered to be statistically significant if the studies are performed with a wider patient population. PCNA and LIM-15 gene expression levels will lead to better quality counseling for infertile patients preparing for ART in the hope of having their own biological children. In addition, unnecessary costs will be prevented for these patients.

Keywords: azospermia, predictive factor, testicular sperm extraction, infertility