Down sendromu riski yüksekliği nedeniyle amniyosentez yapılan fetüslerin amniyosit kültürlerinde ve gebelerin plazma örneklerinde 21. kromozom kökenli MİR-99A ekspresyonunun karşılaştırılması
Comparison of chromosome 21-derived MİR-99A expression in amniocyte culture samples of fetuses and plasma samples of pregnants undergoing amniocentesis DUE to increased risk of DOWN syndrome
Yazar: İBRAHİM KAPLAN
Danışman: PROF. DR. HATİCE ILGIN RUHİ
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Down sendromu = Down syndrome ; Doğum öncesi = Prenatal ; Mikro RNA = Micro RNA

Özet:
Amaç: Down sendromu, entelektüel yetersizliğin bilinen en sık sebebidir. Entelektüel yetersizliğin yanında konjenital kalp defektleri gibi iç organ gelişim defektleri ve fenotipik bulgular Down sendromu fenotipinde yer almaktadır. Down sendromu fenotipinin oluşumu, genetik ve epigenetik düzenlenmeleri içeren kompleks bir durumdur. Epigenetik mekanizmalar arasında microRNA (miRNA)'lar yer almaktadır.  miRNA'lar hücresel birçok süreçte görev almaktadırlar. miRNA genlerinin çeşitli dokulardaki (plasental dokular, koryon villus örnekleri, amniyositler, fetal mononükleer hücreler, maternal kan örneği gibi) ekspresyonlarının değişik genetik yöntemlerle incelendiği birçok çalışma literatürde bulunmaktadır.  Bu çalışmada, Down sendromu riski olan olguların amniyosit kültürlerinde ve amniyon sıvısı örneğiyle eş zamanlı alınan gebe plazma örneklerinde 21. kromozom kökenli miR-99a ekspresyonunun karşılaştırılmasını amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmaya, Down sendromu riski nedeniyle amniyosentez yapılan 92 vaka dahil edilmiştir. miR-99a ekspresyon düzeyi her iki örnekte real-time PCR yöntemiyle incelenmiştir. miRNA ekspresyon düzeyi rölatif kantitasyon metodu ile incelenmiştir. Elde edilen ekspresyon düzeyi karyotip sonucu, amniyosentez endikasyonu ve ultrasonografik bulgulara göre oluşturulan gruplarda incelenmiştir. 
Bulgular: miR-99a ekspresyonunun Down sendromlu fetüslerin amniyosit kültürlerinde normal kromozom kuruluşundaki fetüslerin amniyosit kültürlerine göre; maternal yaş ve tarama testi riski nedeniyle amniyosentez yapılan fetüslerin kültürlerine göre; patolojik ultrasonografik bulgusu olan fetüslerin kültürlerine göre; kardiyovasküler gelişim defekti olan fetüslerin kültürlerine göre artmış olarak saptanmıştır. Bu bulgular, istatistiksel olarak anlamlı olarak saptanmamıştır. Amniyosit kültürleri ile maternal plazmadaki miR-99a ekspresyonları arasında anlamlı korelasyon gözlenmemiştir.
Sonuç: Araştırmamızda Down sendromlu fetüslerin amniyosit kültürlerinde normal karyotip kuruluşundaki fetüslerin kültürlerine göre miR-99a ekspresyonu artmış olarak saptanmıştır ancak bu değişiklik istatisitksel olarak anlamlı bulunmamıştır. Amniyosit kültürlerinde ve maternal plazmadaki miR-99a ekspresyonun değerlendirilebilmesi için daha geniş örneklemde araştırma yapılmasına ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Aim: Down syndrome is the most common known cause of the intellectual disability. Beside intellectual disability, visceral organ developmental anomalies such as congenital heart diseases and phenotypic changes are included in Down syndrome phenotype. Down syndrome phenotype is a complex entity that includes genetic and epigenetic changes. In between epigenetic mechanisms, microRNA (shortly miRNA)s are thought to be take part. miRNAs are involved in many cellular processes. Therefore, in literature, there are many studies in which miRNA expression of various tissues (placental tissues, chorionic villus samples, amniocytes, fetal mononuclear cells, maternal blood/plasma samples, etc) is examined by using various genetic techniques. In this study, it is aimed that the comparison of the expression of chromosome 21-derived miR-99a in amniocytes and simultaneously obtained plasmas of pregnant women who carry increased risk of Down syndrome.
Materials and Methods: 92 cases undergoing amniocentesis due to increased risk of Down syndrome are included in this study. miR-99a expression in both tissues are examined via real-time PCR. miRNA expression levels are examined by using relative quantification method.  The expression level results are analyzed in between groups formed according to the fetal karyotype, amniocentesis indication and ultrasonografic findings
esults: miR-99a expression was observed as increased in amniocyte cultures of fetuses with Down syndrome compared to amniocyte cultures of fetuses with normal chromosomal structure; fetuses undergoing amniocentesis due to screening test risk or maternal age risk; fetuses undergoing amniocentesis due to pathological ultrasonografic examination findings; fetuses undergoing amniocentesis due to cardiovascular developmental defects. These findings were not statistically significant. In between miR-99a expression levels of amniocyte cultures and maternal plasma, no significant correlation was observed. 

Conclusions: In our study, miR-99a expression level was found to be increased in amniocyte cultures of Down syndrome fetuses compared to the amniocyte cultures of the fetuses with normal chromosomal structure. However, this change was not statistically significant. In order to observe exact results of miR-99a expression in amniocyte cultures and maternal plasma samples, further studies with larger sample size are needed.