Melanositik tümörlerde dna kopya sayısı ve kromozomal değişikliklerin floresan ın situ hibridizasyon yöntemi ile değerlendirilmesi, ayırıcı tanı ve prognostik öneminin araştırılması
Evaluation of dna copy number changes and chromosomal aberrations in melanocytic tumors by fluorescence ın-situ hybridization method, ınvestigation of ıts differential diagnosis and prognostic value
Yazar: DENİZ SOLGUN ANLAR
Danışman: PROF. DR. MELEK ERGİN
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: FISH = FISH ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Melanositler = Melanocytes ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prognoz = Prognosis

Özet:
Giriş-Amaç: Melanositik tümörler melanositlerin neoplastik proliferasyonu ile karakterize morfolojik ve genetik yönden oldukça geniş ve heterojen spektruma sahip tümörlerdir. Melanom, öldürücü deri tümörlerinin hemen hemen %60'ından sorumludur. Bu nedenle melanositik tümörlerin erken tanısı ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilebilmesi amacıyla, etiyopatogeneze yönelik moleküler çalışmalar giderek ivme kazanmaktadır. Çalışmamızda özellikle tanısal güçlüğe neden olan melanositik lezyonların tanısında 6p25, 6q23, 11q13 ve sentromer 6 genlerini hedefleyen dört renkli FISH yönteminin tanısal değerini araştırmayı ve bu paneli kullanarak melanositik nevüs, displastik nevüs, non-metastatik melanom ve metastatik malign melanomdaki kromozomal anomalilerin farklılıklarını, konvansiyonel morfolojik prognostik kriterlerle karşılaştırarak, malign melanomun biyolojik davranışındaki yerini araştırmayı amaçladık.Gereç-Yöntem: Çalışmaya Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı'nda tanı almış 74 melanositik lezyon alındı. Olguların 17'si (%23) benign (melanositik nevüs), 28'i (%37) borderline, 29'u (%39,2) malign özellikteydi. Borderline ve malign lezyonlar klinik takipleri olan hastaların arasından seçildi. Bu olgulara ait formalinle fikse parafin bloklardan alınan 3 µm kalınlıktaki kesitlere FISH prosedürü uygulandı. Sonuçlar floresan mikroskopta değerlendirilerek genlerin kopya sayısına karşılık gelen dört farklı rengin sayısal değerleri kaydedildi.Bulgular: FISH testi 17 melanositik nevüsün tamamında negatif; Borderline lezyonlardan tanısal güçlük oluşturan 19 lezyonun 6'sında pozitif, diğerlerinde negatif; 11 non-metastatik melanomun 10'unda pozitif; 18 metastatik melanomun tamamında pozitif sonuçlandı. Test sonuçlarının değerlendirilmesinde, mutlak benign ve mutlak malign lezyonların histopatolojik tanıları esas alındı. Borderline grup lezyonların değerlendirilmesinde klinik davranışa göre belirlenen lezyon karakteri esas alındı. Testin sensitivitesi %98,5; spesivitesi %100 olarak belirlendi. Sinyal parametrelerinin kantitatif değerleri benign, borderline, nonmetastatik ve metastatik gruplar arasında ikili olarak karşılaştırıldı. 6q23 kaybı dışındaki tüm parametrelerde benzer şekilde, benign ve borderline gruplar; borderline ve non-metastatik gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı fark izlenirken; non-metastatik ve metastatik melanom arasındaki fark istatistiksel olarak anlamsız idi. 6p25 ve 6q23 kaybı ile prognoz arasında kuvvetli ilişki; 11q13 ve 6q23 amplifikasyonu ile prognoz arasında zayıf ilişki saptandı. 6p25 (kazanım ve kayıp) pozitifliği akral bölge (%83,3) ve alt ekstremite (%75) yerleşiminde sık izlendi (p=0,042). 6p25 anormalliği ve 11q13 amplifikasyonu ile tümör çapı arasında anlamlı ilişkili bulundu (sırasıyla p=0,001; p=0,046). 6q23 amplifikasyonu pozitifliği ile mitoz arasında anlamlı ilişki saptandı (p=0,046).Tartışma-Sonuç: Çalışmamızda 6p25 anormalliği ve amplifikasyonu, 11q13 amplifikasyonu ve 6q23 amplifikasyonunun karsinogenezin erken aşamasında rol aldıklarını ve tümörün metastatik potansiyelini yansıtmadıklarını saptadık. 6p25'in tümör çapı ile ilişkili ve kuvvetli; 6q23 kaybının ise Breslow, tümör çapı ve mitozdan bağımsız bir prognostik parametre olduğu sonucuna vardık.11q13 amplifikasyonunun tümör çapı ile ilişkili, 11q23 amplifikasyonunun ise mitozla ilişkili ve zayıf prognostik parametreler olduğunu tespit ettik. Sonuç olarak FISH testinin, tanısal güçlük oluşturan melanositik lezyonların tanısında sensitif ve spesifik bir yöntem olmasının yanında prognostik yönden de hastaların takibinde ve tedavi seçiminde yol gösterici olduğunu düşünmekteyiz.

Abstract:
Introduction-aim: Melanocytic tumors characterized by neoplastic proliferation of melanocytes and have highly wide and heterogeneous spectrum morphologically and genetically. Melanoma responsible for almost 60% of fatal skin tumors. Therefore, molecular studies for etiopathogenesis increasingly gain importance. In our study, we aimed to research the diagnostic value of four-colored fluorescent in situ hybridization method targeted of 6p25, 6q23, 11q13 and centromeric region of chromosome sixth at particularly melanocytic tumors which have diagnostic challenge. We aimed to determine differences of chromosomal aberrations in melanocytic nevus, displastic nevus, non-metastatic melanoma and metastatic melanoma and its place at biological behavior of malignant melanoma, comparing conventional morphological and prognostic criteria.Material and Method: In this study, we involved 74 melanocytic lesions, which diagnosed at Cukurova University School of Medicine Pathology Department. 17 cases (23%) had benign feature, 28 cases (38%) had borderline feature, 29 cases (39%) had malign feature. Borderline and malign lesions were selected from among the patients who have clinical follow-up. Fluorescence in situ hybridization procedure was performed on 3µm thickness sections of formaline fixed-paraffin embedded tissues taken from these cases. The results were examined by fluorescence microscope and numeric value of different four colors corresponding to copy numbers of genes were recorded.Results: Fluorescence in situ hybridization was negative in all of 17 melanocytic nevi cases; positive in 6 of 19 cases of borderline lesions which have diagnostically challenging; positive in 10 of 11 non-metastatic melanoma and positive in all of 18 metastatic melanoma cases. The evaluation of test results were based on histopathological diagnosis as clearly benign and malignant lesions and were based on the characteristics of lesions that determined according to clinical behavior for borderline melanocytic lesion. Test sensitivity was 98,5% and specifity was 100%. Quantitative values of signal parameters compared as pairs in benign, borderline, non-metastatic and metastatic groups. All parameters, except of 6q23 loss had statistically significant difference when compared benign and borderline groups, borderline and non-metastatic groups, but there was no statistically significant difference between non-metastatic and metastatic melanom. Abnormal 6p25 and loss of 6q23 had strong correlations to prognosis, and 11q13 and 6q23 amplifications had weakly correlations to prognosis. 6p25 positivity was observed frequently at acral region (83,3%) and lower extremity (75%). Significant correlation were determined between 6p25 abnormality and 11q13 amplification with tumor diameter (p=0,001, p=0,046 respectively). There was significant correlation between 6p13 amplification and mitosis was observed (p=0,046).Conclusion: In our study, we showed that abnormality and amplification of 6p25, and amplification of 6q23 and 11q13 play an active role in earlier stages of carcinogenesis, but those were not related to metastatic potential of tumor. We thought that 6q25 is a strong prognostic parameter which is correlated to tumor diameter, however loss of 6q23 is the prognostic parameter that is independent from Breslow length, tumor diameter, ulceration and mitosis. 11q13 and 6p23 amplification were in the opinion of the vaguely prognostic parameters that correlated only to tumor diameter and mitosis respectively. Fluorescence in-situ hybridization is highly sensitive and specific method especially for diagnostic evaluation of challenging melanocytic lesions and can also be useful in patient clinical follow-up for prognosis.