Ankilozan spondilit hastalarında mevalonat kinaz gen polimorfizmlerinin araştırılması
Studying mevalonate kinase gene polymorphisms in patients with ankylosing spondylitis
Yazar: FATİH YILDIZ
Danışman: PROF. DR. EREN ERKEN
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2013
Konu: Romatoloji = Rheumatology
Dizin: Ailesel akdeniz ateşi = Familial mediterranean fever ; Ankiloz = Ankylosis ; Ateş = Fever ; Hastalık = Disease ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Spondilit = Spondylitis ; Spondilit-ankilozan = Spondylitis-ankylosing ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins

Özet:
Amaç: Ankilozan spondilit (AS), sıklıkla aksiyel iskelet sistemini tutan, kronik, progresif bir inflamatuar hastalıktır. Etyolojisi tam bilinmemekle birlikte genetik faktörler, AS gelişiminde önemli rol oynamaktadır. Mevalonat kinaz (MVK) enzimi, kolesterol biyosentez yolağında yer alan bir enzimdir. MVK geni mutasyonları, Hiperimmünglobulinemi D ve periyodik ateş sendromu patogenezinden sorumlu tutulmaktadır. AS?de MVK gen polimorfizmleri daha önce araştırılmamıştır. Biz bu çalışmada, AS hastalarında MVK gen polimorfizmleri araştırarak, patogeneze katkısını ve klinik bulgulara etkisini bildirmeyi amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Bu kesitsel çalışmaya 18 yaş üstü, 1984 Modifiye New York kriterlerini karşılayan ardışık, 32 erkek ve 19 kadın olmak üzere toplam 51AS hastası alındı. Kontrol olarak, SpA bulguları, sistemik otoimmün ve otoinflamatuar hastalık öyküsü olmayan, yaş ve cinsiyet uyumlu 31 erkek ve 21 kadın toplam 52 sağlıklı gönüllü birey alındı. Periyodik ateş semptomları sorgulandı. AS hastalarının spinal mobilite ölçümleri ve fizik muayenesi yapıldı. Hastaların eş zamanlı bakılan ESR ve CRP düzeyleri kaydedildi. Hastalar, BASDAI ve BASFI formunu doldurdu. AS hastalarının IgD düzeyi radial immünodifüzyon yöntemi ile çalışıldı. MVK gen analizi, periferik kan örneklerinden DNA?ları elde edilip PCR/sekans yöntemi ile çalışıldı. Kontrol ile AS hastaları arasında bu polimorfizmler açısından farklılıklar araştırıldı. Bulunan MVK geni polimorfizmlerinin, AS?in klinik bulguları ve tutulum şekillerine etkisi incelendi.
Bulgular: 51 AS?li hastanın yaş ortalaması 37,31±10,297 yıl idi. 32?si (% 62,7) erkek ve 19?u (% 37,3) kadındı. Kontrol grubunun yaş ortalaması 33,81±12,367 yıldı. Birinci grup semptomatik olarak adlandırılan tek nükleotid polimorfizmlerinden, c.769-38 C>T heterozigot, c.769-7 T>G heterozigot, c.769-38 C>T homozigot, hasta ve kontrol grubunda sıklığı benzer bulundu (p=0,646). İkinci grup semptomatik olmayan tek nükleotid polimorfizmleri, AS hastalarında kontrole göre daha fazla bulundu (83/58), ancak bu sonuç istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0,05). Yeni bulunan tek nükleotid polimorfizmleri, AS hastalarından dördünde, I56V A>G heterozigot, E281D G>D heterozigot, V80I G>A heterozigot, C173Y G>A heterozigot olarak tespit edildi. Bu polimorfizmlere literatür taraması ve Infevers web sitesinde rastlanmadı. Tüm MVK gen polimorfizmleri değerlendirildiğinde, 36 (% 70,6) AS hastasında ve 33 (% 63,4) kontrol grubunda tek nükleotid polimorfizmleri vardı. Her iki grup arasında sıklık farkı anlamlı değildi (p>0,05). AS hastalarında MVK geni polimorfizmleri taşıyanlarla taşımayanlar arasında klinik bulgularda fark bulunmadı.
Sonuç: AS hastalarında toplam MVK gen polimorfizm sıklığı sağlıklı kontrollerden daha fazla bulundu. Ancak, klinik bulgulara etkisi saptanmadı. Sağlıklı bireylerde de bulunan bu polimorfizmlerin, AS?de daha sık görülmelerin nedenini araştırmak ve klinik bulgulara etkisini incelemek için daha geniş çaplı hasta gruplarında ve farklı popülasyonlarda benzer çalışmalar tekrar edilmelidir. Bu çalışmada daha önce bildirilmeyen dört adet yeni tek nükleotid polimorfizmi bulunmuştur.

Abstract:
Objective: Ankylosing spondylitis (AS) is a chronic, progressive, inflammatory 
disorder, which generally affects the axial skeletal system. Despite the fact that its etiology 
is largely unknown, genetic factors have a substantial role in the development of AS. 
Mevalonate kinase (MVK) is an enzyme involved in cholesterol biosynthesis pathway. The 
MVK gene mutations are known to be responsible for the pathogenesis of 
hyperimmunoglobulinemia D and periodic fever syndrome. There is no study investigating 
the MVK gene polymorphisms in AS patients. In this study, we aimed to examine the MVK 
gene polymorphisms in AS patients to report its contribution to the pathogenesis, and its 
effect on the clinical symptoms.
Material and Method: A total of 51 AS patients, consisting of 32 male (62.7 %)
and 19 female (37.3 %), who are older than 18 years of age and meet the 1984 Modified 
New York criteria are included in the study. Control group was consisted of age and sexmatched 52 healthy volunteers (31 male and 21 female) who had neither sign of SpA nor 
the history of systemic autoimmune or autoinflammatory disease. All persons were 
questioned about symptoms of periodic fever syndrome. Measurements of spinal mobility 
and physical examination were performed for AS patients. ESR and CRP levels were 
simultaneously analyzed and recorded. AS patients were asked to fill BASDAI and BASFI 
forms. IgD levels of patients with AS were carried out by using the radial immunodiffusion 
assay. After DNA extraction from the peripheral blood samples, PCR/sequence-based 
typing technique was performed to identify polymorphic sites within the MVK gene. 
Differences in terms of these polymorphisms were investigated between AS patients and the 
control group. MVK gene polymorphisms detected in the patient group were further studied 
with respect to their effects on the clinical symptoms of AS and the type of involvement.
Results: The mean age of the patient and control groups was 37,31±10,297 and 
33,81±12,367 years respectively. Single nucleotide polymorphisms, named as the first 
group symptomatic, c.769-38 C>T heterozygote, c.769-7 T>G heterozygote, c.769-38 C>T 
homozygote were found to have similar frequencies in patient and control groups 
(p=0,646). The second group, called asymptomatic single nucleotide polymorphisms, were 
detected in higher number in the AS group compared to the control group (83/58), however 
the difference was not statistically significant (p>0.05). The newly found single nucleotide 
polymorphisms, including I56V A>G heterozygote, E281D G>D heterozygote, V80I G>A 
heterozygote, and C173Y G>A heterozygote were identified in four of AS patients. These 
polymorphisms could not be found neither during literature search nor in the Infevers 
website. When all polymorphisms in the MVK gene were evaluated, 36 patients (70.6%) 
with AS and 33 subjects (%63.4) from control group were found to have single nucleotide 
polymorphisms. Differences in frequencies were not statistically significant between the 
groups (p>0.05). There was no difference in the clinical symptoms in AS patients with and 
without single nucleotide polymorphisms in the MVK gene.
Conclusion: The frequency of total MVK gene polymorphisms was found to be 
higher in AS patients compared to the control group. However, no effect on the clinical 
symptoms was detected. Further studies with larger number of patients and on different 
populations should be conducted in order to investigate the reason why the same 
polymorphisms were found in both groups but in higher proportion in the patient group as 
well as the impact of these polymorphisms on the clinical signs and symptoms. Four 
previously unknown single nucleotide polymorphisms were described in this study.

Keywords: Ankylosing spondylitis, IgD, Mevalonate kinase gene, Periodic fever,