Wnt/ß-katenin sinyal yolu aktivitesinin sitolojik ve immünositokimyasal yöntemlerle saptanması
Determination of activity of Wnt/ß-catenin signaling pathway by cytological and immunocytochemical methods
Yazar: HANİFE GÜLER TANIR
Danışman: PROF. DR. ŞAYESTE DEMİREZEN
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoloji = Biology ; Patoloji = Pathology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Çalışmamızda Wnt/ß-katenin sinyal yolu aktivitesini saptamak amacıyla 200 hastaya ait servikovajinal örnekler sitolojik ve immünositokimyasal olarak incelenmiştir. Sitololojik inceleme sonucunda 200 hastanın 73'ünde (%36,5) çeşitli enfeksiyon etkenleri ve atipik hücresel değişiklikler saptanmış ve bu hastalar çalışma grubu olarak değerlendirilmiştir. Enfeksiyonu olmayan ve atipik hücresel değişikliklerin bulunmadığı 127 (%63,5) hasta ise kontrol grubu olarak kabul edilmiştir.Sitolojik inceleme için alınan servikovajinal örnekler Papanicolaou yöntemine göre boyanıp, sitolojik bulgular açısından değerlendirilmiş ve enfeksiyon etkenleri ile atipik hücresel değişikliklerin varlığı saptanmıştır. İmmünositokimya için ise alınan servikovajinal örnekler %95'lik etanol ile fikse edilmiş ve monoklonal fare anti-ß-katenin antikoru kullanılarak, hücre zarı, sitoplazma ve çekirdekteki ß-katenin pozitifliği açısından incelemiştir. Bu incelemeler yapılırken, hücre zarındaki zayıf (+), orta (++) ve kuvvetli (+++) pozitiflik ile sitoplazmadaki zayıf (+) pozitiflik sinyal yolu aktivitesi açısından inaktif olarak değerlendirilmiş, sitoplazmadaki orta (++) ve kuvvetli (+++) pozitiflik durumunda ise sinyal yolu aktif olarak nitelendirilmiştir.Çalışma ve kontrol grupları Wnt/ß-katenin sinyal yolu aktivitesi açısından incelendiğinde kontrol grubundaki 127 hastanın 16'sında (%12,6), çalışma grubundaki 73 hastanın ise çeşitli enfeksiyon tanısı almış olan 5'inde (%6,8) sinyal yolu aktivitesi pozitif bulunmuştur. Yapılan istatistiksel analizler sonucunda enfeksiyon varlığı ile sinyal yolu aktivitesi arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki bulunamamıştır (p>0,05). Kontrol grubunda postpartum ve proliferasyon döneminde bulunan hastalarda sinyal yolu aktif olup, sinyal yolu ile bu iki parametre arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki olduğu belirlenmiştir (p<0,05).Ayrıca çalışmamızda çok katlı yassı epitel ve endoservikal hücre zarları ß-katenin proteininin pozitifliği açısında incelenmiş, hem kontrol hem de çalışma grubunda hücre zarlarında reaksiyon olduğu gözlenmiştir. Çalışmamızda önemli bir bulgu olarak endoservikal ve metaplazik hücrelerdeki sinyal yolu aktivitesi de değerlendirilmiş ve bu sinyal aktivitesi Klamidyal enfeksiyonlarla istatistiksel açıdan anlamlı bulunmuştur (p<0,05).

Abstract:
Cervicovaginal smears of 200 patients were examined to detect the activity of Wnt/ß-catenin signaling pathway by both cytological and immunocytochemical methods in this study. As a result of cytologic examination, various infectious agents and atypical cellular changes were detected in 73 (36.5%) of 200 patients and these patients were evaluated as a study group. One hundred and twenty seven (63.5%) patients without any infection and atypical cellular changes were considered as a control group.Cervicovaginal smears taken for cytological examination were stained by Papanicolaou method and infectious agents and atypical cellular changes were observed. Cervicovaginal smears taken for immunocytochemical methods were fixed with 95% ethanol, and ß-catenin positivity on the cell membrane, in the cytoplasm and nucleus were examined by using monoclonal anti-ß-catenin antibody. During these observations, weak (+), moderate (++) and strong (+++) positivity of the cell membrane and weak (+) positivity of cytoplasm were considered as inactive in view of signaling pathway, whereas moderate (++) and strong (+++) positivity of cytoplasm is defined as active.In the evaluation of study and control groups in terms of Wnt/ß-catenin signaling, 16 (12,6%) of 127 patients in control group and 5 (6.8%) of 73 patients with various infections in study group had positive signaling activity. As a result of statistical analysis, it was found that there was no significant association between infections and signaling activity (p>0,05). In control group, patients in post partum and proliferation period Wnt/ß-catenin signaling is active and it was found that there was a statistically significant correlation between these parameters (p<0,05).In addition, stratified squamous epithelial and endocervical cells were investigated in view of ß-catenin positivity on the cell membrane, and it was detected that there was a reaction on cell membrane in both control and study groups. As an important finding, the signaling activity in endocervical and metaplastic cells was also evaluated, and a statistically significant association was found between this signaling activity and Chlamydial infections (p<0,05).