Aspergillus wentii İnülinazı'nın gen ekspresyon seviyelerine üretim şartlarının etkisi
Effects of production conditions on gene expression levels of İnulinase of A.wentii
Yazar: AYTEN SARI
Danışman: YRD. DOÇ. DR. FİLİZ SANAL
Trakya Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, Aspergillus wentii'den inülinaz enziminin üretilmesi, optimum üretim şartlarının belirlenmesi ve bu şartların enzim üretimini nasıl etkilediğinin tespiti ayrıca elde edilen biyokimyasal sonuçların moleküler çalışmalardan elde edilen verilerle karşılaştırılması amaçlanmıştır.
A.wentii'den inülinaz enziminin optimumüretim şartlarının inülinaz aktivitesi üzerine etkileri incelendiğinde, inülinaz aktivitesinin maximum olduğu şartlar, üretim süresi 3 gün, üretim sıcaklığı 30 oC, üretim ortamı başlangıç pH'sı 6.0 ve yer elması konsantrasyonu %3 olarak belirlenmiştir.
Üretim ortamına eklenen C ve N kaynaklarının inülinaz aktivitesine etkisi araştırıldığında, en yüksek aktivite %1 Maltoz içeren ortamda görülmüştür. %1 (NH4)2HPO4 içeren ortamın ise, çalışılan diğer azot kaynaklarına göre daha iyi bir üretim ortamı olduğu tespit edilmiştir. Enzimin pH ve termal kararlılıkları incelendiğinde ise enzimin pH 5-6 aralığında kararlı olduğu ve aktivitesini 50 oC'de  30 dk.süre ile koruduğu gözlenmiştir.
A.wentii'nin  üretim şartlarının, inulinaz enzimi gen ekspresyon seviyelerine etkileri aktine rölatif gen ekspresyonu üzerinden incelendiğinde   üretimin 1.gün'de, 35 oC'de, pH 6.0'da, %2 yer elması konsantrasyonunda, karbon kaynağı olarak %1 selüloz ve azot kaynağı olarak %1 NH4H2PO4 kullanıldığında gen ekspresyon seviyeleri en yüksek seviyelerde tespit edilmiştir.A.wentii inulinaz'ının hidroliz ürünlerinin incelemesi ince tabaka kromotografi (TLC) yöntemi ile gerçekleştirilmiş ve A.wenti inulinaz'ının ekzoinulinaz olduğu belirlenmiştir.

Abstract:
In this study, the production of inulinase enzyme from Aspergillus wentii, the determination of the best production conditions of it, and to find out how these conditions affect enzyme production are aimed. Moreover, the biochemical results are aimed to be  compared to the data obtained from molecular studies.
When the effects of the  production conditions of inulinase from A.wentii on enzyme inulinase activity are analyzed, the most lucrative production conditions are determined as 3 days  production time, 30 0C  temperature, and  initial pH 6.0  and jerusalem artichoke concentration of 3%. When the effect of C and N sources added to the production environment upon Inulinase activity was examined, the highest activity was observed in the environment containing 1% maltose. On the other hand, the environment containing 1% (NH4)2HPO4 nitrogen was identified as a better production environment than other nitrogen sources. When Thermal and pH stability of the enzyme were analyzed, it was observed that  the activity of the enzyme was stable at the range of 5-6 pH at 50 0C for 30 minutes. 
A.wentii's production conditions, inulinase enzyme gene expression levels effects actin relative via gene expression examined production day 1 at 35 oC, at pH 6.0, 2% jerusalem artichoke concentration, carbon source, 1% cellulose and nitrogen source, 1% NH4H2PO4 when used gene expression levels highest levels detected. The inulinase of A.wenti the hydrolysis products views thin layer chromatography (TLC) using the following and A.wentii the inulinase of the ekzoinulinaz was determined. A.wentii review of the hydrolysis products of inulinase was accomplished by thin layer chromatography and Inulinase of A.wentii was determined be ekzo-inulinase.