Lupus antikoagülan test panellerinin referans aralıklarının ve eşik değerlerinin belirlenmesi
Determination of reference inervals and cutoff values of lupus anticoagulant test panels
Yazar: HURUYYA IMANLI
Danışman: DOÇ. DR. GÜNEŞ AK
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Amaç: Lupus antikoagülan (LA) test panelleri LA tarama, LA doğrulama ve karışım testlerini içermektedir. Bu testlerde sonuçların referans aralığın ortalaması kullanılarak hesaplanması ve normalleştirilmiş oran şeklinde raporlanması gerekmektedir. Her laboratuvar LA testleri için kendi referans aralıklarını ve eşik değerlerini belirlemelidir. Bu çalışmada Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Klinik Biyokimya laboratuvarında çalışılmakta olan LA test panellerinin referans aralıklarının ve eşik değerlerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem:  Metadolojik olarak tasarlanan çalışmamızda araştırma evrenini araştırmaya dahil olma kriterlerini karşılayan ve kan vermeye gönüllü olan 18-54 yaş aralığındaki sağlıklı gönüllüler oluşturdu. Anket uygulanan 82 kişiden 55'i çalışmaya dahil edilirken, 27 kişi çalışmadan dışlandı. 27'si erkek, 28'i kadın olmak üzere toplam 55 kişiden 3 adet mavi kapaklı tüpe venöz kan örneği (yaklaşık 5.4 mL) alındı. Kadın gönüllülerden birinin venöz kan örnekleri pıhtılı olduğu için sonradan çalışma dışı bırakıldı. Çift santrifüj işleminden sonra ayrılan plazma örneklerinde öncelikle ön inceleme testleri olan PZ, APTZ ve LA-duyarlı APTZ hızlı bir şekilde çalışıldı. Ön inceleme testleri yüksek çıkan bir erkek gönüllü çalışma dışı bırakıldı. Sonuç olarak 26'sı erkek ve 27'si kadın olmak üzere toplam 53 kişide lupus antikoagülan tarama (LA1) ve doğrulama (LA2) testleri çalışıldı. Test sonuçları referans aralık içinde olan örneklerin her birinden 300 L plazma pipetlenerek normal plazma havuzu (NPP) hazırlandı. Hazırlanmış olan NPP'den 200 L, her örnekten de 200 L (1:1) karıştırılarak LA1 ve LA2 karışım testleri çalışıldı. LA tarama ve doğrulama testleri, LA'nın ortak pıhtılaşma yolu üzerindeki etkisini değerlendiren dRVVT (dilüe Russell Viper Venom Time) yöntemi ile ölçüldü.
Bulgular: Tüm referans bireyler için yaş ortalaması 36.6 yıl olarak hesaplandı. Parametrik yönteme göre RA'lar sırasıyla LA1 için 29.8-41.7 sn., LA2 için 28.7-34.5 sn., LA1 MIX 31.9-37.2 sn., LA2 MIX 30.4-33.1 sn. olarak hesaplandı. Dayanıklı yönteme göre RA'lar sırasıyla LA1 29.5-41.5 sn., LA2 28.6-34.4 sn., LA1 MIX 31.8-37.2 sn. ve LA2 MIX 30.4-33.1 sn. olarak hesaplandı. LA testlerinin normalize edilmiş oranlarının parametrik yönteme göre alt ve üst referans sınırları sırasıyla LA1 norm için 0.83-1.17, LA2 norm için 0.91-1.09, LA1 MIX norm için 0.92-1.08, LA2 MIX norm için 0.96-1.04 ve LA1 MIX norm/LA2 MIX norm için 0.93-1.07 olarak hesaplandı. Dayanıklı yönteme göre hesaplanan referans aralık analizinde alt ve üst referans sınırlar sırasıyla LA1 norm için 0.83-1.16, LA2 norm için 0.91-1.09, LA1 MIX norm için 0.92-1.08, LA2 MIX norm için 0.96-1.04 ve LA1 MIX norm/LA2 MIX norm için 0.93-1.07 olarak saptandı.
Sonuç: Lupus antikoagülan testlerinin referans aralık analizinde hem parametrik hem de dayanıklı yöntemle aynı ya da çok yakın sonuçlar elde ettik. Aynı zamanda hem parametrik, hem de dayanıklı yöntemde normalize oranlar aynılık veya benzerlik gösterdi. Test kaynaklı varyasyonları ve interferansları sonuç verirken daha aza indirmek adına laboratuvarlarda LA test sonuçlarının normalize edilmiş oranlar olarak raporlanması uygun bir yaklaşımdır.

Abstract:
Aim:  Lupus anticoagulant (LA) test panels include LA screening, LA confirmation, and mixing tests. In these tests, results should be calculated using the mean of the reference range and reported as normalized ratios. Each laboratory should establish its own reference ranges and cutoff values for LA tests. This study aimed to determine the reference ranges and cutoff values for LA test panels conducted in the Clinical Biochemistry Laboratory of Ege University Faculty of Medicine.
Materials and Methods: In our methodologically designed study, the population under investigation consisted of healthy volunteers aged between 18 and 54 who met the inclusion criteria and were willing to provide blood samples. Out of the 82 individuals surveyed, 55 were included in the study, while 27 individuals were excluded. Among the participants, there were 27 males and 28 females, making a total of 55 individuals from whom venous blood samples (approximately 5.4 mL) were collected using three tubes with blue caps. Venous blood samples from one of the female volunteers were subsequently excluded from the study since they were clotted samples. Following a double centrifugation process, the plasma samples were subjected to preliminary tests including PT, APTT, and LA-sensitive APTT. One male volunteer with high pre-examination tests was excluded from the study. As a result, lupus anticoagulant screening (LA1) and confirmatory (LA2) tests were performed in a total of 53 individuals, comprising 26 males and 27 females. Plasma samples from the individuals whose test results fell within the reference range were pooled to create a normal plasma pool (NPP). From the prepared NPP, 200 µL was pipetted, and from each individual sample, 200 µL (1:1 ratio) was mixed to perform LA1 and LA2 mixing tests. The LA screening and confirmatory tests were measured using the dilute Russell Viper Venom Time (dRVVT) method, which assesses the impact of LA on the common coagulation pathway.
Results: The average age for all reference individuals was calculated to be 36.6 years. According to the parametric method, the reference intervals were determined as follows: LA1 29.8-41.7 seconds, LA2 28.7-34.5 seconds, LA1 MIX 31.9-37.2 seconds, LA2 MIX 30.4-33.1 seconds. When the robust method was applied, the lower and upper limits for the reference intervals were as follows: LA1 29.5-41.5 seconds, LA2 28.6-34.4 seconds, LA1 MIX 31.8-37.2 seconds, LA2 MIX 30.4-33.1 seconds. The normalized ratios for the LA tests, based on the parametric method, had the following lower and upper reference limits: LA1 norm 0.83-1.17, LA2 norm 0.91-1.09, LA1 MIX norm 0.92-1.08, LA2 MIX norm 0.96-1.04, and LA1 MIX norm/LA2 MIX norm 0.93-1.07. The robust method yielded the following lower and upper reference limits in the analysis: LA1 norm 0.83-1.16, LA2 norm 0.91-1.09, LA1 MIX norm 0.92-1.08, LA2 MIX norm 0.96-1.04, and LA1 MIX norm/LA2 MIX norm 0.93-1.07.
Conclusion: We obtained similar or very close results in the reference interval analysis of LA tests using both the parametric and robust methods. Additionally, the normalized ratios showed consistency or similarity in both the parametric and robust methods. Reporting LA test results as normalized ratios in laboratories is an appropriate approach to reduce test-related variations and interferences in the results.