Genç erişkin bronşektazi hastalarında serum ve bronko alveoler lavaj sıvısında inflamatuar sitokin düzeyleri ve gen polimorfizmi ile genetik yatkınlık ilişkisinin incelenmesi
Investigation of the relationship between inflammatory cytokine levels and gene polymorphism and genetic predisposition in serum and broncho alveolar lavage fluid in young adult bronchiectasis patients
Yazar: GÜLHAN AYHAN ALBAYRAK
Danışman: DOÇ. DR. OĞUZHAN OKUTAN
GATA / Tıp Fakültesi / Göğüs Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Göğüs Hastalıkları = Chest Diseases

Özet:
Bronşektazinin sıklığı gelişmiş ülkelerde giderek azalmasına rağmen ülkemizin de içinde bulunduğu gelişmekte olan ülkelerde halen önemini koruyan kronik alt solunum yolu hastalığıdır. Bu çalışma kliniğimizde bronşektazi tanısı ile takip edilen 40 hasta ve 20 kontrol olmak üzere 60 bireyden oluşan bir grubu içermektedir. Çalışmanın amacı,  bronşektazili hastalarda proinflamatuvar ve antiinflamatuvar sitokin düzeylerinin tespiti ile hastalarda gözlenebilecek yeni immun parametreler bulmak, bu inflamasyonun sürekliliğini ortaya koymak ve devam eden bu kronik inflamasyonun klinik özellikler, sigara içimi ve demografik özellikler ile kıyaslamasını yapmak ve bu kronik inflamasyondaki sitokinlerin gen polimorfizminin araştırılması ile yatkınlığı olabilecek hastaların tesbitini sağlamaktır.
            Bu çalışmada bronşektazi olgularında ve kontrol grubunda sistemik ve lokal (pulmoner) inflamasyonu göstermek için; tam kan sayımında lökosit sayısı (nötrofil, bazofil, eozinofil, lenfosit, monosit, sedimentasyon değeri, CRP düzeyi, İmmünglobulin (IgM, IgG, IgA, IgE) seviyeleri, kompleman seviyeleri (C3, C4),  serumda ve bronko alveoler lavaj sıvısında sitokinlerin (IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α) düzeyleri ELISA yöntemi ile belirlenmiş olup, kontrol grubu ile karşılaştırıldı. Ayrıca hastaların tam kan örneklerinden elde edilen DNA' larından otomotik dizi analizi yöntemi ile gen polimorfizmleri çalışıldı ve kontrol grubu ile kıyaslandı. Çalışma sonucunda hasta grubunda serum ve BAL' da İL-8 düzeylerinin kontrol grubuna göre daha yüksek olduğu ve istatistiksel olarak anlamlı olduğu, İL-10 düzeylerinin kontrol grubuna göre daha düşük ve istatistiksel olarak anlamlı olduğu saptanırken (p<0,05), diğer sitokinler istatistiksel olarak anlamlı saptanmadı (p>0,05). 
        Bu tez çalısması kapsamında 40 hasta ve 20 kontrol olmak üzere 60 bireyden oluşan bir grupda IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α sitokinlerinin genine ait, promotor bölgesinin de yer aldıgı 5' uç bölgelerinin genetik analizleri gerçeklestirilmistir. Genetik varyantların belirlenebilmesi için; 5' uç ve promotor bölgeleri uygun primerler ile amplifiye edilmistir. Bu tez çalısmasında bronşektazili ve normal bireylerde otomatik DNA dizi (sekans) analizi yöntemiyle 5' uç ve promotor bölgelerinde sekiz adet polimorfizm çalışıldı. Tanımlanan bu sitokin gen polimorfizmlerinden iL-6 -174 G/C ve İL-10 -592 A/C ve İL-10 -819 T/C promotor bölgelerinde hasta grubunda kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı ilişki saptandı (p< 0,05) ancak diğer polimorfizmler ile bronşektazi arasında  anlamlı ilişki bulunamadı (p> 0,05). 
        Bu çalısmada IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α geni 5' uç bölgesinde küçük bir grupta saptanan polimorfizmlerin ve sıklıklarının, bronşektazili ve normal gruplarda anlamlı farklar oluşturup oluşturmadıkları, polimorfizmlerden hangisinin/hangilerinin sitokin geninin özelliklerini etkileme potansiyeline sahip oldukları ve polimorfizmler arasında bağlantı olup olmadığının veya bağlantı varsa hangileri arasında olduğunun belirlenebilmesi için çalışmaların klinik olarak tanımlanmış 1000 kişilik geniş boyutlu hasta ve kontrol gruplarında yapılması gerektiğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Although the frequency of bronchiectasis is gradually decreasing in developed countries, it is a chronic lower respiratory tract disease that still maintains its importance in developing countries, including our country. This study included a group of 60 individuals, 40 patients and 20 controls, who were followed up with the diagnosis of bronchiectasis in our clinic. The aim of the study is to determine the levels of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines in patients with bronchiectasis and to find new immune parameters that can be observed in patients, to reveal the continuity of this inflammation and to compare this ongoing chronic inflammation with clinical features, smoking and demographic characteristics, and to identify patients who may be predisposed by investigating the gene polymorphism of cytokines in this chronic inflammation.
In this study, to show systemic and local (pulmonary inflammation in bronchiectasis cases and control group; leukocyte count (neutrophil, basophil, eosinophil, lymphocyte, monocyte, sedimentation value, CRP level, Immunoglobulin (IgM, IgG, IgA, IgE) levels, complement levels (C3, C4), cytokines (IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α) levels in serum and broncho alveolar lavage fluid were determined by ELISA method and compared with the control group. In addition, gene polymorphisms were studied by automatic sequence analysis method from the DNA obtained from the whole blood samples of the patients and compared with the control group. As a result of the study, it was determined that IL-8 levels in serum and BAL were higher and statistically significant in the patient group compared to the control group, IL-10 levels were lower and statistically significant compared to the control group (p<0.05), while other cytokines were not statistically significant (p>0.05).
Within the scope of this thesis, genetic analysis of 5' end regions, including the promoter region, belonging to the gene of IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α cytokines was performed in a group of 60 individuals, 40 patients and 20 controls. In order to determine genetic variants; The 5′ end and promoter regions are amplified with appropriate primers. In this thesis, eight polymorphisms were studied in the 5' end and promoter regions by automatic DNA sequence analysis method in normal individuals with bronchiectasis. Of these cytokine gene polymorphisms, a statistically significant correlation was found in the iL-6 -174 G/C and IL-10 -592 A/C and IL-10 -819 T/C promoter regions in the patient group compared to the control group (p< 0.05), but no significant relationship was found between other polymorphisms and bronchiectasis (p> 0.05).
In this study, the studies were conducted on a clinically defined large scale of 1000 people in order to determine whether the polymorphisms detected in a small group in the IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α gene 5' end region and their frequencies produced significant differences in the bronchiectasis and normal groups, which of the polymorphisms had the potential to affect the characteristics of the cytokine gene, and whether there was a link between the polymorphisms or if so, which ones. We think that it should be done in patient and control groups.