Tuberoskleroz tanılı hastalarda mikro RNA düzeyi değerlendirilmesi
Assessment of micro RNA level of patients diagnosed with tuberous sclerosis
Yazar: MİNE YÜKSEL
Danışman: PROF. DR. AKIN İŞCAN
Bezm-i Alem Vakıf Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases

Özet:
Tuberoskleroz otozomal dominant geçişli, multipl organ sistemlerinde hamartomlarla
karakterize genetik bir hastalıktır. MikroRNA'lar; küçük, kodlanmayan, 20-24 nükleotidden
oluşan, gen ekspresyonunda post-transkripsiyonel seviyede regülatör görevi alan RNA
molekülleridir.
Oksidatif stres ıse, başta kanser olmak üzere birçok hastalığın patogenezinden
sorumludur. Genetik geçişli hastalıkların patogenezinde oksidatif stresin ve buna bağlı DNA
hasarının olduğu düşünülmektedir. Bu yüzden tuberosklerozun patogenezinde oksidatif stresin
ve buna bağlı DNA hasarı ve miRNA'ların önemli yer aldığı bilinmektedir.
Çalışmamızda tuberoskleroz tanılı hastaların total oksidan-antioksidan seviye,
oksidatif stres indeksi, DNA hasarı ve ve mikroRNA düzeylerinin değerlendirilmesi
amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmaya Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi
Çocuk Nöroloji polikliniği'ne başvuran 0-16 yaş arası, 30 tuberoskleroz hastası ve kontrol
grubu olarak da aynı yaş grubunda 29 sağlıklı çocuk dahil edildi-:- Alınan kan örnekleri
santrifüj edilip serumlarına ayrıldı. Tıbbi Biyokimya Anabilim Dalı'nda, serum örneklerinde
Total Antioksidan Seviye (TAS ) ve Total Oksidan Seviye (TOS ) plak okuyucuda ( Thermo
Scientifıc Multiskan FC, 2011-06, USA ) sırasıyla 240 nm ve 520 nm dalga boylarında
ölçüldü. Ölçülen TAS ve TOS değerleri Oksidatif Stres İndeksi (OSİ) hesaplamasında
kullanıldı. Örneklerden ayrıca Comet Assay Yöntemi ile DNA hasar tayini yapıldı. Kalan
serum örneklerinde RNA izolasyon kiti Qiagen TM kullanılarak total RNA 'nın saflaştırılması
ile RNA'lar cDNA'ya çevrildi ve bunlar Real-Time PCR yöntemi ile incelendi. Elde edilen
veriler SPSS programında analiz edildi.
Bulgular:
1. Tuberoskleroz kompleksi (TSK) tanılı hastalar ve kontrol grubu arasında TAS, TOS
ve OSİ değerleri bakıldı. Hasta grubu vakaların TAS ölçümleri istatistiksel olarak anlamlı
olarak düzeyde düşük (p=0,001; p<0,0 1 ), TOS ölçümleri istatistiksel olarak anlamlı düzeyde
yüksek (p=0,001; p<0,0 1) ve OSI ölçümleri istatistiksel olarak anlamlı düzeyde yüksek
bulundu (p=0,001; p<0,01).
2. TSK tanılı hastalar ve kontrol grubu arasında DNA hasarı ( Comet Assay )
ölçümleri bakıldı. Hasta grubu vakaların Comet Assay ölçümleri istatistiksel olarak anlamlı
düzeyde yüksek bulundu (p=0,001; p

Abstract:
Purpose: Tuberous sclerosis is a genetic disease characterized by hamartomas in
multiple organ systems, with autosomal dominant passage. MicroRNAs are RNA molecules
which are small, uncodable, consisting of 20-24 nucleotides, assuming regulator level at posttranscriptional level in gene expression.
Oxidative stress is responsible for pathogenesis of many diseased, in particular,
cancer. It is considered that oxidative stress and related DNA damage occurs in pathogenesis
of genetically inherited diseases. Therefore, it is known that oxidative stress and related DNA
damage and miRNAs play an important role in pathogenesis tuberous sclerosis.
Our study aims to assess total oxidant-antioxidant level, oxidative stress index, DNA
damage and microRNA levels of patients diagnosed with tuberous sclerosis.
Material and Method: The study includes 30 tuberous sclerosis patients of ages in
the range of 0-16 years consulting to Bezmialem Foundation University Medical Faculty,
Pediatric Neurology polyclinic and as control group, 29 healthy children from the same age
group. Blood samples that are taken are subjected to centrifuge to separate the serum. Total
Antioxidant Level ( TAL ) and Total Oxidant Level ( TOL ) were measured from serum
samples at wavelengths of 240 nm and 520 nm, respectively in plate the reader ( Thermo
Scientifıc Multiscan FC, 2011-06, USA ) at Medical Biochemisty Department. Measured
TAL and TOS values were used in Oxidative Stress lndex (OSI) calculation. Also, DNA
damage determination was carried out from the samples by using Comet Assay Method. in
the remaining serum samples, RNAs were converted to cDNA through purifıcation of total
RNA by using RNA isolation kit Qiagen 1M and these were analyzed by using Real-Time PCR
method. Obtained data was analyzed in SPSS software.
Results:
1. TAL, TOL, and OSI values of patients with Tuberous Sclerosis Complex (TSC)
diagnosis and the control group were compared. TAL measurements of patient group cases
were found to be low at statistically signifıcant level (p=0.001; p<0.0 1 ), TOL measurements
thereof were found to be high at statistically signifıcant level (p=0.001; p<0.0 1) and OSI
measurements thereof were found to be high at statistically signifıcant level (p=0.001;
p<0.01).