Juglonun C6 glioma hücre hattındaki sitotoksik, apoptotik ve anti-proliferatif etkilerinin incelenmesi
Investigation of cytotoxic, apoptotic and anti-proliferative effects of juglone on C6 glioma cell line
Yazar: EKİN BEKTAŞ
Danışman: PROF. DR. MUHAMMED HAMZA MÜSLÜMANOĞLU
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) = Reverse transcription polimerase chain reaction ; Glioma = Glioma ; Juglon = Juglone ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Juglon, Juglandaceae ailesine üye bitkilerde yapraklarda, kökte, kabuklarda ve meyvelerinde doğal olarak bulunan bir organik bileşiktir. Birçok bitki türünde toksik ve büyüme durdurucu özelliğe sahiptir. Gıda ve kozmetik endüstrisinde boya maddesi olarak kullanılmaktadır. Juglon, ceviz türlerinden ekstrakte edilebildiği gibi yapay olarak da sentezi gerçekleştirilebilen bir bileşiktir. Açık havaya maruz kalması, juglonun degredasyona uğramasına sebep olmaktadır, ayrıca bazı bakteri türlerinin juglonu metabolize edebildiği de keşfedilmiştir. Glioma, glial hücrelerin çeşitli sebeplerle kontrolsüz bölünmeye başlamasıyla ortaya çıkan tümörleşme türüdür. Beyin kanseri olarak da adlandırılan bu tümörler, dört farklı kategoride sınıflandırılmaktadır. Dördüncü kategoride yer alan ve en saldırgan sınıf olan bu türe glioblastama denilmektedir. C6 glioma hücre hattı Rattus norvegicus'tan izole edilmiş, beyin glial hücrelerinden köken alan bir tümör hattıdır. Bu çalışmada, C6 glioma hücre hattına juglon uygulaması yapılması ve sitotoksik etkilerin MTT ve WST-1 testleriyle gözlemlenmesi gerçekleştirilmiştir. Elde edilen veriler, iki testin sonuçlarının birbirleriyle yakından ilişkili olduğunu ve juglonun sitotoksik etkilerinin bu hücre hattında mevcut olduğunu göstermiştir. Belirlenen IC50 değeri sonrasında koloni formasyon testiyle hücrelerin juglon dozajı uygulaması sonrası koloni oluşturma ve proliferasyon yetenekleri incelenmiştir. Yara iyileşmesi testiyle bu gözlemler pekiştirilmiş ve hücrelerin migrasyon yeteneği gözlemlenmiştir. DAPI boyama yapılarak hücrelerin floresan mikroskobunda morfolojik incelemeler gerçekleştirilmiştir. Son aşama olarak RT-qPCR yapılarak belirlenen kanser ilişkili genler üzerindeki ifade seviyeleri karşılaştırılmıştır. Yapılan tüm incelemeler sonrası istatiksel analizler gerçekleştirilerek, istatistiksel olarak anlamlı bulunan sonuçlar gösterilmiştir. Ortaya konulan veriler doğrultusunda, juglonun C6 Rat glioma hattında anti-proliferatif ve apoptotik etkileri belirlenmiştir.

Abstract:
Juglone is an organic compound found naturally in the leaves, roots, bark and fruits of plants belonging to the Juglandaceae family. It has toxic and growth inhibiting properties in many plant species. It is used as a dyestuff in the food and cosmetic industry. Juglone is a compound that can be synthesized artificially as well as extracted from walnut species. Exposure to open air causes juglone to degrade, and it has also been discovered that some bacterial species can metabolize juglone. Glioma is a type of tumorigenesis that occurs when glial cells begin to proliferate uncontrollably because of various reasons. These tumors, also called brain cancer, are classified into four different categories. This type, which is in the fourth category and the most aggressive class, is called glioblastoma. C6 glioma cell line is a tumor line derived from brain glial cells derived from Rattus norvegicus. In this study, juglone application to C6 glioma cell line and observation of cytotoxic effects by MTT and WST-1 tests were performed. The data obtained showed that the results of the two tests were closely related and the cytotoxic effects of juglone were present in this cell line. After the determination of IC50 value, colony formation and proliferation abilities of the juglone treated cells were examined with the colony formation test. These observations were reinforced by the wound healing test and the migration ability of the cells was observed. Morphological examinations of the cell groups were performed under fluorescent microscopy by DAPI staining. As a final step, the expression levels on the cancer related genes determined by RT-qPCR were compared. After all the examinations, statistical analyzes were performed and the results that were found to be statistically significant were shown. In line with the data presented, the anti-proliferative and apoptotic effects of juglone were determined in the C6 Rat glioma line.