Cypermethrin verilmiş ratların testislerinde Curcumin'in koruyucu etkisinin immunohistokimyasal ve stereolojik metodlarla araştırılması
Immunohistochemical and stereological investigation of the protective effects of curcumin on the cypermethrin treated rat testes
Yazar: MEHMET AYDIN AKALAN
Danışman: PROF. DR. AYSUN ÇEVİK DEMİRKAN ; DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET FATİH BOZKURT
Afyon Kocatepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Anatomi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Anatomi = Anatomy ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kurkumin = Curcumin ; Stereoloji = Stereology ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Cypermethrin tip II sentetik piretroit grubundan bir pestisit olup, diğer sentetik piretroitler gibi memelilerde daha az toksik olduğu düşünüldüğünden oldukça yaygın bir kullanım alanı bulmuştur. Ancak cypermethrin'in erkek üreme sistemi de dahil birçok sistem üzerine toksik etkilerinin incelendiği araştırmalar gün geçtikçe artmaktadır. Curcumin zerdeçal (curcuma longa) bitkisinden elde edilen, son dönemde fiziksel, kimyasal birçok zararlı etkene karşı koruyucu etkisi olduğu tespit edilen bir antioksidandır. Bu çalışma cypermethrin'in rat testis'leri üzerine olumsuz etkilerinin ve curcumin'in bu olumsuz etkilerine karşı olası koruyucu etkilerinin araştırması amacıyla yapılmıştır. 
Üç aylık erkek ratlar, her grupta 8 hayvan olacak şekilde 6 gruba ayrıldı ve 30 gün boyunca gastrik gavaj yoluyla kimyasallar uygulandı. İlk grup çözücü olarak kullanılan mısırözü yağı verdiğimiz kontrol grubu olup, 2. grup cypermethrin, 3. grup curcumin, 4. grup ilk 15 gün cypermethrin sonraki 15 gün curcumin, 5. grup ilk 15 gün curcumin sonraki 15 gün cypermethrin, 6. grup ise cypermethrin ve curcumin'in birlikte uygulandığı gruplardı. 30 günlük uygulamanın ardından ötenazisi yapılan ratların sağ testis'leri stereolojik inceleme, sol testis'leri ise histolojik inceleme, ölçüm ve immunohistokimyasal inceleme amacıyla alındı. Stereolojik inceleme amaçlı 2 mm'lik eşit aralıklarla dilimlenen sağ testis'lerden Cavalieri metodu ile hacim hesaplandı. Sol testis'ler küçültme işlemi ve histolojik doku takibi ardından parafin bloklara gömüldü. Bloklardan 5 µm kalınlığında kesitler alındı. Kesitlerden bir kısmı histolojik inceleme ve ölçüm amacıyla Hematoksilen-Eosin yöntemiyle boyandı. Diğer kesitler ise immunohistokimyasal olarak boyandı.
	İncelemeler sonucunda canlı ağırlık, testis ağırlıkları, tubuli seminiferi çapı bakımından kontrol grubu ve deney grupları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark tespit edilmedi. Cypermethrin verilen grupta histolojik olarak testis yapısında olumsuzluklar tespit edilirken, cypermethrin ve curcumin'in birlikte verildiği grup ve ilk 15 gün cypermethrin ardından 15 gün curcumin verilen grupta bu olumsuzluklara rastlanmadı. İlk 15 gün curcumin ardından 15 gün cypermethrin verilen grupta ise histolojik bulgular cypermethrin verilen gruba benzerdi. Leydig hücre sayısı ve tubuli seminiferi epitel yüksekliğinin cypermethrin verilen grupta anlamlı olarak düştüğü tespit edilirken, cypermethrin ve curcumin'in birlikte verildiği grup ve ilk 15 gün cypermethrin ardından 15 gün curcumin verilen grupta bu ölçüm değerleri kontrol grubuna benzer olarak tespit edildi. İlk 15 gün curcumin ardından 15 gün cypermethrin verilen grupta ise bu ölçüm değerleri cypermethrin verilen gruba benzerdi. İmmunohistokimyasal incelemelerde ise cypermethrin verilen grupta leydig, sertoli ve peritubuler myoid hücrelerinde AR immunboyama yoğunluğu kontrol grubuna göre düşerken, cypermethrin ve curcumin'in birlikte verildiği grup ve ilk 15 gün cypermethrin ardından 15 gün curcumin verilen grupta yoğunluğun kontrol grubuna benzer olduğu saptandı. İlk 15 gün curcumin ardından 15 gün cypermethrin verilen grupta ise AR immunboyama yoğunluğu cypermethrin verilen grup ile benzerlik göstermekte idi.
Sonuç olarak çalışmada cypermethrin'in rat testis'lerinde incelediğimiz parametreler bakımından olumsuz etkileri ve curcumin'in cypermethrin'e karşı koruyucu etkileri tespit edildi.

Abstract:
Cypermethrin is a pesticide of type II synthetic pyrethroid group and has been found to be of widespread use as it is thought to be less toxic in mammals such as other synthetic pyrethroids. However, the studies on the toxic effects of cypermethrin on many systems, including the male reproductive system, are increasing recently. Curcumin is an antioxidant obtained from turmeric (Curcuma longa) plant, which has a protective effect against many physical and chemical harmful substances. This study was carried out to investigate the negative effects of cypermethrin on rat testicles and the possible protective properties of curcumin on these negative effects.
Three-month-old male rats were divided into 6 groups of 8 animals in each group, and 30 days of gastric gavage of chemicals were applied. The first group was the "control" group, the second group was "cypermethrin", the third group was "curcumin", the fourth group was "15 days cypermethrin + 15 days curcumin", the fifth group was "15 days curcumin + 15 days cypermethrin", and the sixth group was "cypermethrin + curcumin" group. After 30 days of application, the right testicles of euthanized rats were taken for stereological examination and left testicles were taken for measurement, histological and immunohistochemical examinations. The volume was calculated by the Cavalieri method from the right testicles, which were cut at 2 mm equal intervals for stereological examination. Left testicles were embedded in paraffin blocks followed by reduction and histological tissue procedures. 5 µm thick sections were taken from the blocks and stained with Hematoxylin-Eosin method for histological examination and measurement. Other sections were stained immunohistochemically.
As a result of the investigations, no statistically significant difference was found between the control group and the experimental groups in terms of live weight, testicle weight, seminiferous tubule diameter. In the group of Cypermethrin histological disorders were detected in the testis structure but in "cypermethrin + curcumin" and "15 days cypermethrin + 15 days curcumin" groups these disorders were not found. Histological findings were similar to the cypermethrin group in the "15 days curcumin + 15 days cypermethrin" group. Leydig cell number and seminiferous tubule epithelial height were significantly decreased in the "cypermethrin" group. However, in the group of "cypermethrin + curcumin" and "15 days cypermethrin + 15 days curcumin"  these values were similar to the control group. These values were similar to the cypermethrin group in the "15 days cypermethrin + 15 days curcumin" group. In the immunohistochemical examination, the intensity of AR immunostaining in Leydig, Sertoli and peritubular myoid cells in cypermethrin group were decreased compared to the control group, cypermethrin and curcumin group were given together and the first 15 days of cypermethrin followed by cypermethrin in 15 days curcumin group was similar to the control group. The first 15 days of curcumin followed by cypermethrin for 15 days in the group of AR immunostaining density cypermethrin showed similarity with the group.
As a result, the negative effects of cypermethrin in rat testes and the protective effects of curcumin against cypermethrin were determined.