Radyokontrast madde enjeksiyonu sonrası gelişen nefropatilerde apoptoz ve rac1 ekspresyonunun değerlendirilmesi
Evaluation of apoptosis and rac1 expression in nephropathy after injection of radiocontrast media
Yazar: YAŞAR AYSUN MANİSALIGİL
Danışman: PROF. DR. MUKADDES GÜMÜŞTEKİN GÜNELİ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Böbrek yetmezliği = Kidney failure ; Fareler = Mice ; GTP fosfohidrolazlar = GTP phosphohydrolases ; Kontrast maddeler = Contrast media ; Nefrotoksisite = Nephrotoxicity

Özet:
Amaç: Günümüzde radyolojik görüntüleme yöntemlerinin gelişmesi nedeni ile radyokontrast madde kullanımı oldukça artmıştır. İyot içeren radyokontrast (RK) maddelerin intravasküler uygulamasından sonra gelişen nefropatiler, hemodiyaliz veya renal transplantasyon gereksinimi ve ölüm riskini arttırmaktadır. RK nefropatisi oluşum mekanizması hala tam olarak bilinmemektedir. Bu çalışmada apoptozis, serbest radikalleri arttırıcı, hücre farklılaşması ve endotel fonksiyonu üzerindeki etkileri olması nedeniyle; farelerde radyokontrast madde uygulaması sonrası gelişen nefropatide, küçük GTPaz Rac1 molekülünün rolünün araştırılması amaçlanmıştır. 
Yöntem: İndometazin ve NG-nitro-L-arjinin metil ester uygulandıktan  15-30 dakika sonra iohekzol (3 g iyot/kg, ip) uygulanarak oluşturulan radyokontrasta bağlı nefropati modelinde, fareler 5 gruba ayrıldı. Tedavi gruplarına iohekzol uygulamasından önce 5 gün boyunca Rac1 inhibitörü EHT1864 (10, 40 ve 100mg/kg) intraperitoneal uygulandı. İohekzol uygulamasından önce kontrol gruplarından birine 5 gün boyunca aynı hacimde salin (ip), diğerine ise hiçbir tedavi uygulanmadı. Nefropati, histolojik yöntemler ve biyokimyasal analizlerle (serum kreatinin ve  sistatin C); apoptozis, TUNEL yöntemiyle; serbest radikaller, total antioksidan kapasite analiziyle; Rac1 ve β-PAK ekspresyonları immünhistokimyasal yöntemle değerlendirildi.
Bulgular: İohekzol uygulaması; farelerde nefropati bulgularını, apoptozisi ve Rac1 ekspresyonunu arttırdı. Radyokontrast enjeksiyonu öncesinde EHT1864 ile yapılan Rac1 inhibisyonunun; Rac1 ve onun efektör molekülü β-PAK ekspresyonlarını azalttığı,  histolojik bulguları düzelttiği, düşük ve orta dozlarda apoptozisi inhibe ettiği gözlendi. Biyokimyasal analizler ve total antioksidan kapasite sonuçları açısından gruplar arasında fark bulunmadı. 
Sonuç: Bulgularımız, kontrast nefropatisinin önlenmesinde küçük GTPaz Rac1'i hedef alan tedavilerin umut verici olduğunu ve daha ileri çalışmalara gerek olduğunu düşündürmektedir.

Anahtar Sözcükler: Apoptoz, EHT1864, fare,  kontrast nefropatisi, Rac1

Abstract:
Objective: Nowadays due to the development of radiological imaging methods have increased to use radiocontrast (RC) agents. After intravascular application, they've developed nephropathy, hemodialysis or renal transplantation requirement and increased the risk of death. RC-induced nephropathy mechanism is still not fully known. Small GTPase Rac1 may play role.The aim of this study was to investigate the roles of Rac1 in RC-induced nephropathy, through its effects on endothelial function, apoptosis, increasing free radicals and cell differentiation.
Method: Before applying iohexzol (3 g iodine/kg, ip), indomethacin and NG-nitro-L-arginine methyl ester were injected to induce the RC nephropathy model. Mice were divided into 5 groups and Rac1 inhbitor EHT1864 (10, 40 and 100 mg/kg) was administered intraperitoneally for 5 days before iohexol application. One of the control groups was injected to the same volume of saline for 5 days (ip) and the other had no treatment before iohexol injection. Nephropathy was evaluated by histological and biochemical analysis methods (serum creatinine and cyctatin C), apoptosis was evaluated by the TUNEL method; free radicals were evaluated by total antioxidant capacity analysis and Rac1 and β-PAK expressions were evaluated by immunohistochemical staining.
Results: Iohexol injection increased nephropathy, apoptosis and expressions of Rac1 and its effector molecule the β-PAK expression in mice. Inhibition Rac1with EHT1864 before RC injection reduced Rac1 and β-PAK expressions improved, histologic findings and inhibited apopotosis at low and moderate levels. There were no significant differences  in terms of biochemical and total antioxidant capacity results  among the groups. 
Conclusion: Our findings sugget that therapies targeting small GTPase Rac1is promising and that there is need for further studies. 

Key Words: Apoptosis, EHT1864, mice, contrast nephropathy, Rac1