Cinsiyet hormonlarının oküler yüzey epitel hücrelerinde inflamatuar yolaklar üzerine etkisi
Effect of sex hormones on inflammatory pathways in ocular surface epithelial cells
Yazar: AFSUN ŞAHİN
Danışman: PROF. DR. DİDEM TURGUT COŞAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Androjenler = Androgens ; Cinsiyet = Gender ; Cinsiyet hormonları = Sex hormones ; Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Göz = Eye ; Konjonktiva = Conjunctiva ; Östrojenler = Estrogens ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Amaç: Androjenler dokuya spesifik anti-inflamatuar etki göstermektedirler. Lakrimal bezdeki lenfositik infiltrasyonu ve oküler yüzeydeki IL-6, IL-1β, TNF-α gibi pro-inflamatuar mediyatörlerin ekspresyonunu baskılamakta, anti-inflamatuar sitokin olan TGF-β sentezini arttırmaktadırlar. Ancak androjenlerin oküler yüzey üzerindeki inflamasyon yolakları üzerine etkileri henüz tam olarak aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada androjenlerin oküler yüzeydeki inflamatuar yolaklar ile ilişkisi araştırılmıştır. 
Gereç-Yöntem: Çalışmamızın ilk aşamasında pBABE-puro-hTERT retrovirüsü ile primer kornea epitel hücreleri enfekte edilmiştir. Projemizin ikinci aşamasında bu hücreler hiperozmolarite ile uyarıldıktan sonra pro-inflamatuar sitokin gen ifadesi (IFN-gamma, IL-1 beta, IL-6, IL-8) ölçülmüştür. Daha sonra androjenlerin ve östrojenlerin bu genler üzerindeki etkileri incelenmiştir. 
Bulgular: Hiperozmolarite ile pro-inflamatuar gen ifadesinin anlamlı miktarda arttığı ve bu artışın androjenler ve östrojenler tarafından düzenlendiği bulunmuştur. Fosforilasyona özgü antikorlar kullanılarak yapılan Western blot analizinde, fosforile edilmiş p38, ERK ve JNK'nin, DHT tedavisi olmayan hOsM grubu ile karşılaştırıldığında, 500 mOsM hiperosmolar ortama maruz kaldıktan sonraki 15 dakika içinde kornea epitel hücrelerinde androjen ile ön işleme tabi tutularak inhibe edildiğini ortaya çıkardı, ancak ifadeleri 500 mOsM hiperosmolar ortama maruz kaldıktan sonraki 30 dakika içinde arttı. Fosforillenmiş p38, ERK ve JNK, hiperosmolar ortam maruziyetinin 15 ve 30 dakika içinde 17-b-estradiol ile ön tedavi ile inhibe edildi.
Sonuç: Bu bulgular androjenlerin ve östrojenlerin oküler yüzeyde inflamatuar yolaklar üzerine etki gösterdiklerini ve kuru göz hastalığında cinsiyet farklılıklarından sorumlu olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Purpose: Androgens have tissue-specific anti-inflammatory effects. They suppress lymphocytic infiltration in the lacrimal gland and the expression of pro-inflammatory mediators such as IL-6, IL-1β, TNF-α on the ocular surface, and increase the synthesis of the anti-inflammatory cytokine TGF-β. However, the effects of androgens on the inflammation pathways on the ocular surface have not yet been fully elucidated. In this study, the relationship of androgens with inflammatory pathways on the ocular surface was investigated. 
Materials-Methods: In the first stage of our study, primary corneal epithelial cells were infected with the pBABE-puro-hTERT retrovirus. In the second stage of our project, after these cells were stimulated with hyperosmolarity, pro-inflammatory cytokine gene expression (IFN-gamma, IL-1 beta, IL-6, IL-8) was measured. Then, the effects of androgens and estrogens on these genes were examined. It was found that pro-inflammatory gene expression increased significantly with hyperosmolarity and this increase was regulated by androgens and estrogens. Western blot analysis using phosphorylation-specific antibodies revealed that phosphorylated p38, ERK, and JNK were inhibited by androgen pretreatment in corneal epithelial cells within 15 minutes of exposure to 500 mOsM hyperosmolar medium, compared with the hOsM group without DHT treatment. However, their expression increased within 30 min after exposure to 500 mOsM hyperosmolar environment. Phosphorylated p38, ERK and JNK were inhibited by pretreatment with 17-b-estradiol within 15 and 30 min of hyperosmolar medium exposure.
Conclusion: These findings suggest that androgens and estrogens act on inflammatory pathways on the ocular surface and are responsible for gender differences in dry eye disease.