Tannik asidin insan multiple miyelom U266 hücrelerinde bortezomibin sitotoksik etkileri üzerine olan etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of tannic acid on the cytotoxic effects of bortezomib in human multiple myeloma U266 cells
Yazar: EMİNE HANDE ÖKSÜZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET ŞENCAN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Bortezomib = Bortezomib ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Multipl miyelom = Multiple myeloma ; Polifenol = Polyphenol ; Proteaz inhibitörleri = Proteases inhibitors ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Tanenler = Tannins

Özet:
Multiple Miyelom (MM), nadir bir hastalık olmasına rağmen lenfomadan sonra en sık görülen hematolojik malignitedir. MM, kemik iliğinde malign plazma hücrelerinin infiltrasyonu ile karakterize, serum ve/veya idrarda aşırı monoklonal plazma hücre birikimine yol açan B hücreli bir malignitedir. Plazma hücreli maligniteler, önemi belirsiz monoklonal gamopatiden (MGUS) smouldering multipl miyelomaya (SMM), semptomatik multipl miyelomaya ve nadiren plazma hücreli lösemiye kadar çeşitli hastalıkları içerir.
Hastalar; kemik ağrısı, bulantı, kusma, halsizlik, tekrarlayan enfeksiyonlar ve kilo kaybı gibi genellikle spesifik olmayan semptomlarla başvurabilirler. Yine birçok hasta, anemi, böbrek hastalığı ve yüksek protein seviyeleri gibi yalnızca laboratuvar anormallikleri ile başvurur.
Revize edilmiş Uluslararası Miyelom Çalışma Grubu (IMWG) kriterlerine göre semptomatik MM'nin tanısı, kemik iliğinde klonal plazma hücreleri ≥%10 veya biyopsi ile doğrulanmış kemik plazmositomu veya ekstramedüller hastalık bulgusu ve miyelom tanımlayan olaylardan biri veya daha fazlasının bulunması ile konur.
Tedaviye yanıt oranları ve genel sağkalım iyileşmeye devam etse de MM hala tedavi edilemez bir hastalıktır. Semptomatik miyelomun tedavisi, kök hücre nakli için uygunluk ve risk değerlendirmesine bağlıdır. MM tedavisi için mevcut olan ilaçlardan iki veya daha fazlasını kullanan çok sayıda rejim vardır. Ana sınıflar, alkilleyici ajanları, kortikosteroidleri, immünomodülatör ilaçları ve proteazom inhibitörlerini (PI) içerir. Bununla birlikte, MM non-kürabl olmaya devam etmektedir. Bu nedenle yeni ve etkili terapötik ilaçların daha fazla geliştirilmesine acilen ihtiyaç duyulmaktadır.
Bu bilgiler ışığında; çalışmamızda tannik asidin insan multipl miyelom U266 hücre hattında bortezomibin sitotoksik etkilerine olan etkisini görmeyi amaçladık.
Çalışmada U266 miyelom hücre hattı kullanıldı. Bortezomib ve tannik asidin tek başına uygulanmasının ardından, tannik asidin sırasıyla 12.5 ve 80 nM konsantrasyonu ile bortezomibin 6.25, 12.5, 25, 50 ve 100 nM konsantrasyonları kombine edildi ve uygulamaların 48. saatte sitotoksik etkileri değerlendirildi. Canlı hücre sayımı için XTT testi ve tripan mavisi boya testi kullanıldı. Hem tannik asit hem de bortezomib tek başına uygulamalarında konsantrasyona bağımlı şekilde sitotoksik etkinlik gösterdi. Uygulamaların sonucunda bortezomibin IC50 değeri 48 nM, tannik asit için ise IC50 değeri 80 nM olarak ölçüldü. Bortezomib ve tannik asidin kombine edildiği durumda normalde tannik asidin tek başına uygulandığında sitotoksik etki göstermediği konsantrasyonda bile, daha güçlü bir sitotohalksik etki meydana getirmektedir. Dolayısıyla, bortezomibin yüksek dozlara çıkılmadan daha düşük dozlarda, etkili bir antikanser etki göstermesi sağlanabilir. Böylelikle iki ilacı kombine ederek yan etki profili azaltılabilir. 
Sonuç olarak, tannik asit hem etkili olduğu konsantrasyonlarda hem de etkisiz olduğu konsantrasyonlarda, bortezomibin yapmış olduğu sitotoksik etkiyi artırmaktadır.

Abstract:
Although Multiple Myeloma is a rare disease, it is the most common hematological malignancy after lymphoma. MM is a B-cell malignancy characterized by the infiltration of malignant plasma cells in the bone marrow, leading to excessive monoclonal plasma cell accumulation in serum and/or urine. Plasma cell malignancies include diseases ranging from monoclonal gammopathy of uncertain significance (MGUS) to smoldering multiple myeloma (SMM), symptomatic multiple myeloma and, rarely, plasma cell leukemia. 
Patients may present with usually nonspecific symptoms such as bone pain, nausea, vomiting, malaise, malaise, recurrent infections, and weight loss. Many patients present with only laboratory abnormalities such as anemia, kidney disease, and high protein levels. 
According to the revised International Myeloma Study Group (IMWG) criteria, the diagnosis of symptomatic multiple myeloma is with bone marrow clonal plasma cells ≥10% or biopsy-confirmed bone plasmacytoma or evidence of extramedullary disease and one or more of myeloma-defining events. 
Although response rates and overall survival continue to improve, MM is still an incurable disease. Treatment of symptomatic myeloma depends on the assessment of suitability and risk for stem cell transplantation. There are numerous regimens that use two or more of the drugs available for the treatment of MM. The main classes include alkylating agents, corticosteroids, immunomodulatory drugs, and proteasome inhibitors.
In the light of this information; in our study, we aimed to see the effect of tannic acid on the cytotoxic effects of bortezomib in human multiple myeloma U266 cell line.
U266 myeloma cell line was used in the study. After the administration of bortezomib and tannic acid alone, the 12.5 and 80 nM concentrations of tannic acid, respectively, and the 6.25, 12.5, 25, 50 and 100 nM concentrations of bortezomib were combined and the cytotoxic effects of the applications were evaluated at 48 hours. XTT test and trypan blue dye test were used for viable cell count. Both tannic acid and bortezomib showed cytotoxic activity in a concentration-dependent manner when administered alone. As a result of the applications, the IC50 value of bortezomib was measured as 48 nM, and the IC50 value for tannic acid was measured as 80 nM. When bortezomib and tannic acid are combined, it produces a stronger cytotoxic effect, even at a concentration where tannic acid normally does not exert a cytotoxic effect when applied alone. Therefore, it can be ensured that bortezomib has an effective anticancer effect at lower doses without increasing the higher doses. Thus, by combining the two drugs, we will reduce the side-effect profile.
As a result, tannic acid increases the cytotoxic effect of bortezomib both at concentrations where it is effective and at concentrations where it is ineffective.