Deneysel subaraknoı̇d kanama modelı̇nde quercetı̇nı̇n beyı̇n hasarı ve vazospazm üzerı̇ne etkı̇lerı̇nı̇n araştırılması
Investigation of the effects of quercetin on brain damage and vasospasm in experimental subarachnoid bleeding model
Yazar: ENGİN KAYIKÇI
Danışman: DOÇ. DR. HAKAN YILMAZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İzmir Bozyaka Eğt. ve Arş. Hast. / Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı / Cerrahi Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Beyin = Brain ; Hemorajiler = Hemorrhage ; Kuersetin = Quercetin ; Malondialdehit = Malondialdehyde ; Oksidatif hasar = Oxidative damage ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Peroksidaz = Peroxidase ; Subaraknoid kanama = Subarachnoid hemorrhage ; Vazospazm-intrakraniyal = Vasospasm-intracranial

Özet:
Amaç: Bu çalışmamızda quercetinin deneysel subaraknoid kanama (SAK) sonrası oluşan beyin hasarı vevazospazmda tedavi etkinliğini araştırdık. 
 Gereç ve yöntemler: Çalışmamızda 40 adet Wistar Albino türü rat kullanıldı. Ratlar randomizasyon ile 5 gruba ayrıldı. A grubunda deneklere SAK yapılmadı. B grubunda SAK uygulandı fakat tedavi verilmedi. C grubunda SAK yapıldıktan sonra intraperitoneal DMSO uygulandı. D grubunda SAK yapıldıktan sonra intraperitoneal10 mg quercetin uygulandı. E grubunda SAK yapıldıktan sonra intraperitoneal50 mg quercetin uygulandı. Müdahale gruplarının hepsinden anestezi altında intrakardiak kan alındı. Sonrasında oksipitoservikal bileşkeye insizyonla oksipital kasların altında atlantooksipital membranları bulundu. 26G branül ile sisterna mangaya ulaşıldı. Yeterli miktarda BOS alındıktan sonra 0,1ml otolog kan sisterna magnaya enjekte edildi. İşlem sonrası her rata grubuna uygun olarak 30. dakikada 12.saatte ve 24. saatte olmak üzere DMSO, 10 mg/kg quercetin, 50 mg/kg quercetinden biri intraperitoneal olarak verildi.48. saatte deneyden çıkarılmayan her rattan dekapitasyon öncesi 4 cc kan alındı, uygun şartlarda saklandı. Daha sonra usulüne uygun dekapitasyon uygulandı, beyin tamamen rezeke edildi ve histolojik inceleme için %10 nötr tamponlu formalin solüsyonuna transfer edildi (%10 formaldehit, 4 g NaH2P04 ve litre başına solüsyonda 6 g Na2HP04). Basiler arterde mikroskobik ölçüm ile damar lümen çapı ve duvar kalınlığı, dejenere nöron sayıları, immunhistokimyasal olarak GSH peroksidaz ve caspase 3 boyanan hücre sayıları değerlendirildi. Biyokimyasal yöntemler ile total oksidan ve antioksidan kapasiteye bakılarak oksidatif stres oranı ölçüldü. Serum caspase 3, GSH peroksidaz ve MDA seviyeleri ölçüldü. Tüm bu parametrelerin beyin hasarı ve vazospazm ile olan ilişkisi incelendi. 
  Bulgular: SAK sonrası gelişen beyin hasarı ve vazospazm serum GSH peroksidaz seviyesini azaltıp caspase 3 ve MDA seviyelerini arttırmış.OSI değerlerini arttırmıştır. Vazospazma bağlı basiler arter duvar kalınlığında artış ve arter lümen çapında ise daralma gelişmiştir. Quercetin ile tedavi edilen gruplarda GSH peroksidaz artmış, caspase3 ve MDA seviyeleri azalmıştır. Yine tedavi ile basiler arter duvar kalınlığı azalmış, arter lümen çapı artmıştır. İmmunhistokimyasal boyama ile incelemede caspase 3 boyanan hücre oranı azalmış GSH peroksidaz ile boyanan hücre oranı artmıştır. OSI değerleri quercetin ile tedavi edilen grupta azalmıştır.  
 Sonuç:Quercetin apoptoz, oksidatif hasar, damar duvar kalınlaşması ve vazokonstrüksiyonu azaltarak serebral vazospazm ve beyin hasarı tedavisinde yeni etkin bir tedavi seçeneği olabilir. Bunun için daha fazla preklinik ve klinik çalışmalara ihtiyaç vardır. 
 Anahtar kelimeler: SAK, quercetin,erken beyin hasarı, serebral vazospazm, apoptoz, oksidatif hasar, caspase 3, GSH peroksidaz, MDA, OSI

Abstract:
Objective: In this study, we investigated the efficacy of quercetin in thetreatment of brain damage and vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage (SAH). 
 Materials and methods: Forty Wistar Albino rats were used in our study. Rats were divided into 5 groups by randomization. SAH was not performed on the subjects in group A. In group B, SAH was applied but notreatment was given. In group C, intraperitoneal DMSO was administered after SAH was performed. In group D, 10 mg of quercetin was administered intraperitoneally after SAH was performed. In group E, 50 mg of quercetin was administered intraperitoneally after SAH was performed. Intracardiac blood was collected under anesthesia from all intervention groups. Afterwards, atlantooccipital membranes were found under the occipital muscles by incision at the occipitocervical junction. The cisterna magna was reached with a 26G branule. After obtaining sufficient amount of CSF, 0.1 ml of autologous blood was injected into the cisterna magna. After the procedure, DMSO, 10 mg/kg quercetin, 50 mg/kg quercetin were administered intraperitoneally at 30 minutes, 12 hours and 24 hours, in accordance with each rat group. Before decapitation, 4 cc of blood was taken from each rat that was not removed from the experiment at 48 hours and stored under appropriate conditions. It was then duly decapitated, the brain was completely resected and transferred to 10% neutral buffered formalin solution for histological examination (10% formaldehyde, 4 g NaH2PO4 and 6 g Na2HP04 per liter solution). By microscopic measurement in the basilar artery, vessel lumen diameter and wall thickness, degenerated neuron counts, immunohistochemically GSH peroxidase and caspase 3 stained cell counts were evaluated. Oxidative stress rate was measured by looking at the total oxidant and antioxidant capacity with biochemical methods. Serum caspase 3, GSH peroxidase and MDA levels were measured. The relationship of all these parameters with brain damage and vasospasm was examined. 
 Conclusion: Quercetin may be a new effective treatment option in the treatment of cerebral vasospasm and brain injury by reducing apoptosis, oxidative damage, vessel wall thickening and vasoconstriction. Fort his, more preclinical and clinical studies are needed. 
  Keywords: SAH, quercetin, early brain injury, cerebral vasospasm, apoptosis, oxidative damage, caspase 3, GSH peroxidase, MDA, OSI