Göğüs kanser hücrelerinde (MCF-7) manyetik nanopartiküller ile siRNA tedavisinin in vitro araştırılması
In vitro investigation of siRNA therapy in breast cancer cells (MCF-7) by magnetic nanoparticle
Yazar: FAZRANEH VALIPOUR
Danışman: PROF. DR. EMİNE SİBEL SÜMER ; DOÇ. DR. MUSTAFA TÜRK
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Kadınlarda en önemli ölüm nedenlerinden biri olan meme kanseri, yaygın görülen karmaşık bir
Bcl2 geninin meme kanserinde normal dokulara göre aktivasyonunda artış olduğu belirlenmiştir.
RNA interferansı (RNAi) gen ifadesinin düzenlenleyen bir mekanizmadır. Bu düzenlenme,
siRNAlar aracılığı ile mRNA'nın yıkımının uyarılması ile gerçekleşir. Tümör biyolojisindeki
gelişmelere paralel olarak nanopartiküller, bioyumlu taşıyıcı sistemleri olarak siRNA'yı
taşıyarak kanser tedavisi için umut vaadetmektedir. Sunulan tez çalışmasında Bcl-2
siRNA+nanopartikül kombinasyonları MCF7 meme kanseri hücrelerine uygulanarak Bcl-2
geninin ifadelenmesinin baskılanması hedeflenmiştir. Bunun için siRNA'nın taşınımında
kullanılmak üzere pH ve sıcaklığa duyarlı manyetik ve manyetik olmayan nanopartiküller
P(NIPAM-DMAEMAQ) sentezlenerek karakterize edildi. siRNA'nın nanopartiküller ile
etkileşimleri agaroz jel elektroforezi ile incelendi. Nanopartiküllerin sitotoksik etkileri MTT testi
ile saptandı. Hücre proliferasyonu xCELLing RTCA analizi ile, apoptotik/nekrotik etkiler de ikili
boyama ile belirlendi. RT_PCR ile de Bcl-2 geninin ekspresyon durumu incelendi. Sonuçta,
MCF7 hücrelerine siRNA(25)/MNP(100) kombinasyonu uygulamasının, Bcl-2 geninin
ifadelenmesinin baskıladığı ortaya çıkarılmıştır.

Abstract:
Breast cancer is a common and complex disease which is one of the most important cause of
death among women. In breast cancer treatment, side effects (such as nonspecific drug delivery,
multi drug resistance) of conventional therapeutic methods reduce effectiveness of therapy. In
recent years, nucleic acid-based medicine (e.g. siRNA treatment) has attracted attention for its
therapeutic applications to cancers and infectious, hereditary, and other diseases. In breast
carcinoma, elevated activation of BCL2 gene was determined, compared with normal tissue.
RNA interference (RNAi) is a mechanism that regulates gene expression. This regulation is
mediated by siRNAs which induce degradation of mRNA. In parallel with developments in
tumor biology, nanoparticles as biopolymer delivery systems used to delivery of siRNA, have
seemed promising for successful cancer treatment. The aim of the presented study is silencing of
bcl-2 gene by treatment MCF7 cells with Bcl-2siRNA+ nanoparticle combination. For this
purpose, thermo and pH sensitive magnetic and nonmagnetic carriers P(NIPAM-DMAEMAQ)
were prepared and characterized. In combined administration of Bcl-2 siRNA and nanoparticles
examined with agarose gel electrophoresis. MTT test was carried out to examine cytotoxic
effects of nanoparticles on MCF7 cell. Cell proliferation determined by xCELLing RTCA. The
morphology of dead cells examined with apoptosis/necrosis double staining. The inhibition of
Bcl-2 gene demonstrated by RT-PCR analysis. As a result, it was determined that
siRNA(25)/MNP(100) is the most effective combination reducing expression of bcl-2 gene in
MCF7 cells.