Sistemik mikoz tanısında kültür ve kültür dışı yöntemlerin karşılaştırılması ve kitin antijeninin saptanması için ELISA yöntemi geliştirlmesi
Comporison of the culture and non-culture methods and development of an ELISA technique for the determination of chitin antigen in the diagnosis of systemic mycoses
Yazar: BURÇE YALÇIN
Danışman: PROF. DR. SEMRA KUŞTİMUR
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Sistemik mantar infeksiyonlarının tanısı hala zor ve sorunludur.Konvansiyonel yöntemlerin temelini oluşturan kültür kesin tanı için altın standartolmakla beraber bazen zor ve zaman alıcı olmaktadır.Bu çalışmada sistemik mantar infeksiyonu tanısında kullanılan kültür vekültür dışı yöntemlerden galaktomannan, ß-glukan ve PZR' nin karşılaştırılmasıve aralarındaki korelasyonun araştırılması amaçlanmıştır. Ayrıca sistemik mikozşüpheli olguların serumlarında kitin antijeninin ELISA yöntemiyle aranarakmantar infeksiyonlarının erken tanısında kullanılabilirliğinin araştırılması vegeliştirilmesi planlanmıştır.Bu çalışmaya sistemik mikoz şüpheli 46 hasta ve 46 sağlıklı gönüllü dahiledilmiştir.Sistemik mantar infeksiyonu şüpheli 46 hastadan alınan kan örneklerinden7' sinde (% 15,2) kültürde üreme olmuştur. Platelia Aspergillus testi ilegalaktomannan antijeni örneklerin 8' inde pozitif bulunmuştur (% 17.4).FungitellTM kiti ile -glukan aktivitesi ölçülmüş, örneklerin beşinde pozitif sonuçelde edilmiştir (% 10.9). Gerçek zamanlı PZR ile örneklerin altısında CandidaDNA' sı (%13), bir tanesinde Aspergillus DNA' sı (% 2,2) pozitif bulunmuştur.Kitin antijen testi 46 serum örneğinde 1/1, 1/5 ve 1/10 dilüsyonlarında çalışılmışve tüm örneklerde (% 100) sonuç pozitif çıkmıştır (ortalama: 2.874).110Kontrol grubunun kan örneklerinden yapılan kültürlerde mantar üremesiolmamıştır. PZR testinde Aspergillus veya Candida DNA' sı saptanmamış,galaktomannan ve -glukan düzeyleri negatif olarak bulunmuştur. Kitin ELISA'sında hafif bir aktivite tesbit edilmiştir (ortalama: 2.478).Kültür sonuçları ile Candida PZR sonuçları arasında istatistiksel olarakanlamlı korelasyon bulunmuştur (p=0.01). Aspergillus PZR ile galaktomannanELISA sonuçları arasında kısıtlı ancak anlamlı bir uyum gözlenmiştir (p=0.028).Ancak ß-glukan ve Candida PZR sonuçları arasında anlamlı korelasyonsaptanmamıştır (p=0.060).Sonuçta kültür dışı testlerin performanslarını arttırmak içinkombinasyonlarının kullanılması gerektiği düşünülmüştür.Mantar infeksiyonlarının erken tanısına katkı sağlayabileceğini düşünerekELISA yöntemi ile serumda kitin antijeninin varlığı test edilmiştir. Ancak diğertanı yöntemleri ile karşılaştırıldığında anlamlı bir korelasyon saptanmamıştır. Şuanda rutin kullanım amacından uzak olmakla beraber ELISA ile kitin taramasıyönteminin ek protokoller ve uygun optimizasyon çalışmaları sonrasındageliştirilerek tanısal değer kazanabileceği kanısına varılmıştır.Anahtar kelimeler: PZR, Galaktomannan, ß-glukan, kitin ELISA

Abstract:
The diagnosis of systemic fungal infection is still be difficult andproblematic. Although the culture is the gold standard among the conventionaldiagnostic methods, it can be sometimes difficult and time-consuming.In this study, we aimed to compare the use of conventional culture with thenon culture methdos such as galactamannan assay, ß-glucan assay, andpolymerase chain reaction in the diagnosis of systemic fungal infections. On theother hand, we aimed to investigate and develop the possible usage of the chitinmeasurement by ELISA in the sera of the patients with suspected mycosis for theearly diagnosis of fungal infections.Fourty six patients with suspected fungal infections and 46 volunteerswere included in this study.Blood cultures were found positive in the seven (15.2%) of the 46 patientswith systemic fungal infections. Galactomannan antigen was found positive in 8(17.4%) samples by the Platelia Aspergillus test. ß-glucan activity wasmeasured by the FungitellTM kit and five (10.9%) samples yielded positive results.Candida DNA was found positive in six (13%) samples by real-time PCR, andAspergillus DNA in one (2.2%) sample. Chitin antigen was measured in 46 serumsamples in 1/1, 1/5, and 1/10 dilutions and was found positive in all of them.No growth was observed in the cultures of the blood samples of the controlgroup. Aspergillus and Candida DNA were also not detected, and galactomannan112and ß-glucan levels were found negative in the control group. A slight activity,however, was detected in the chitin ELISA.A statistically important correlation was found between the culture andCandida PCR results (p=0.01). We found also an important correlation betweenthe Aspergillus PCR and galactomannan ELISA results (p=0.028). A correlationwas not found between ß-glucan and Candida PCR results (p=0.060).In conclusion, we think that the use of these test in combination would beuseful in order to improve the performance of the non culture tests. Investigationof the presence the chitin antigen by ELISA would be useful for the earlydiagnosis of the funfal infections and therefore we tested the chitin level in theserum samples. However, we did not found any correlation when compared withother diagnostic methods. We think that, although the chitin assay has not beenroutinely used now, measurement of the chitin level may be useful in the futureafter appropriate optimization.Key words: PCR, Galactomannan, ß-glukan, chitin ELISA