Glioblastoma'da trikostatin A timokinon kombinasyonunun kemoterapötik etkisi
Chemotherapeutic effect of trichostatin A- thymoquinone combinations in glioblastoma
Yazar: RECEP ASLAN
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET TAŞPINAR ; PROF. DR. SEMİHA DEDE
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Timokinon = Thymoquinone ; Trikostatin A = Trichostatin A ; Tıbbi onkoloji = Medical oncology ; İlaç tedavisi = Drug therapy ; İlaç tedavisi-kombine = Drug therapy-combination

Özet:
Glioblastoma (GB), en yaygın, kötü huylu ve yıkıcı primer beyin tümörü türüdür. Etkili, standart ve sürdürülebilir bir tedavi biçimi tanımlanmamıştır. Hastalığın kötü prognozunu ve nüksünü engellemek için rasyonel tedavi alternatiflerini oluşturmamız gerekmektedir. Bu açıdan histon deasetilaz inhibitörleri gibi epigenetik ajanlar ile doğal bileşenlerin kombinasyonunun tedavi potansiyelinin araştırılması doğru bir yaklaşımdır. Bu nedenle, bu tez çalışmasında, Trikostatin A (TSA) ve Timokinon (TQ)'nun GB alkilasyon tedavisinde dirence neden olan tamir genlerinin ekspresyonuna olan etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. TSA ve Timokinon'un GB hücreleri LN-405 ve T98G'deki sitotoksisiteleri MTT ile belirlenmiştir. DNA tamir genlerinin (MGMT, MLH, MSH2, MSH6 ve PMS-2) ve apoptoz genlerinin (Bcl-2 ve Kaspaz-3) ekspresyonları RT-PZR ile saptanmıştır. TSA ve TQ'nun DNA'daki genotoksik etkisi COMET ile belirlenmiştir. TSA ve TQ tek başlarına MGMT ekspresyonunu düşürürken, TSA ve TQ kombinasyonu LN-405'te MGMT ekspresyonunu arttırmış ancak T98G'de azaltmıştır. LN-405'te TSA ve TQ kombinasyonu MLH1 ve MSH6'nın ekspresyonunu arttırırken T98G'de TQ MSH2'nin ekspresyonunu arttırmıştır. TQ ve TSA uygulanan diğer gruplarda tamir genlerinin ekspresyonu kontrole göre azalmıştır. TSA ve TQ, LN-405 ve T98G'de hücre spesifik farklı düzeylerde apoptotik ve antiapoptotik etki göstermiştir. Genomik DNA hasarı açısından gruplar arasında anlamlı bir farklılık saptanmamıştır (p>0.05). Bu sonuçlar, TSA ve TQ'nun tek başlarına yüksek MGMT ekspresyonu nedeniyle alkilasyon ajanlarına dirençli hücrelerde kullanılabileceğini ve TSA ve TQ kombinasyonunun yanlış eşleşme tamir genleri üzerinden kemoterapötik direncin üstesinden gelebileceğini göstermektedir. Bu çalışma, GB'de TSA ve TQ'nun tamir genleri üzerindeki rolünün araştırıldığı ve TSA ve TQ'nun GB'de terapötik amaçlı kullanılabileceğini gösteren literatürdeki ilk çalışmadır.

Abstract:
Glioblastoma (GB) is the most common, malignant and devastating type of primary brain tumor. There is no defined treatment that an effective, standard and sustainable form. We have to constitute rational treatment alternatives to prevent the poor prognosis and recurrence of the disease. In this respect, it is a correct approach to investigate the therapeutic potential of the combination of epigenetic agents such as histone deacetylase inhibitors and natural ingredients. Therefore, it was aimed in this thesis study to investigate the effect of Trichostatin A (TSA) and Thymoquinone (TQ) on the expression of repair genes that cause resistance to alkylation treatment in GB. The cytotoxicity of TSA and TQ in GB cells, LN-405 and T98G, were determined by MTT. Expression of DNA repair genes (MGMT, MLH1, MSH2, MSH6 and PMS-2) and apoptosis genes (Bcl-2 and Caspase-3) were detected by RT-PCR. The genotoxic effect of TSA and TQ on DNA was determined by COMET. While TSA and TQ alone decreased MGMT expression, the combination of TSA and TQ increased MGMT expression in LN-405 but decreased it in T98G. While the combination of TSA and TQ in LN-405 cells increased the expression of MLH1 and MSH6, it also increased the expression of TQ MSH2 in T98G cells. The expression of repair genes decreased in the other groups treated with TQ and TSA compared to the control. TSA and TQ showed cell-specific apoptotic and antiapoptotic effects in different levels in LN-405 and T98G cells. There was no significant difference between the groups in terms of genomic DNA damage (p> 0.05). These results show that TSA and TQ alone can be used in cells resistant to alkylation agents due to high MGMT expression, and the combination of TSA and TQ can overcome chemotherapeutic resistance through mismatch repair genes. This is the first study to investigate the role of TSA and TQ on repair genes in GB and show that TSA and TQ can be used for therapeutic purposes in GB in the literature.