Dapoksetin ve sildenafil'in bir arada tayinine yönelik kromatografik yöntem geliştirilmesi
Development of A chromatographic methodfor the simultaneous determination of sildenafil and dapoxetine
Yazar: YALIM TOSCALI
Danışman: DOÇ. DR. HASAN ERTAŞ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Dapoksetin = Dapoxetine ; Kromatografi = Chromatography ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Sildenafil = Sildenafil ; Tadalafil = Tadalafil

Özet:
Dapoksetin ve Sildenafil etkin maddeleri, erkeklerde erken ejekülasyon ve ereksiyon bozukluğu problemlerinin tedavisinde kullanılmaktadır. Bu iki etken maddenin bir arada kullanıldığı farmasötik preparatlar dünyada ruhsatlandırılmaya başlanmış ve dolayısıyla farmosötik dozajlarda ve plazmada birarada tayinleri önemli hale gelmiştir. Bu çalışma kapsamında bu etken maddeler için sıvı-sıvı ekstraksiyon tekniği ile biyoeşdeğerlik çalışmalarında kullanılabilecek bir yöntem geliştirilmesi hedeflenmiştir.
Sentetik plazma ortamında Dapoksetin ve Sildenafil, örnek hazırlama aşamasında sıvı-sıvı ekstraksiyon tekniği kullanılarak Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometresi (LC-MS/MS) sistemiyle eşzamanlı olarak tayin edilmiştir. Dapoksetin için 305.8 m/z, Sildenafil için 474.8 m/z ve iç standart olarak kullanılan Tadalafil için 389.7 m/z iyonları ana iyon olarak belirlenmiştir. Parçalanma iyonları için ise sırasıyla 100.1, 157 ve 268 m/z iyonları izlenmiştir. Ayırma gücü, seçimlilik ve alıkonma zamanları gibi parametreler dikkate alınarak cihaz koşulları optimize edilmiştir. Sıvı-sıvı ekstraksiyon tekniğinde yöntem validasyonu için geri kazanım, doğrusallık, tekrarlanabilirlik, seçimlilik, matriks etkisi, kararlılık, dilusyon doğruluğu gibi EMA validasyon parametreleri incelenmiştir.
Sıvı-sıvı ekstraksiyon yönteminde saptanan belirtme alt sınırları (LLOQ) Dapoksetin ve Sildenafil için sırasıyla 0.04 ng/mL ve 2.00 ng/mL'dir. Dapoksetin ve Sildenafil için doğrusal kalibrasyon eğrisi aralıkları sırasıyla 0.04-1.00 ve 2.00-40.0 ng/mL'dir. Geri kazanım değerleri LLOQ, düşük, orta, yüksek derişimlerde Dapoksetin için  %87.5 - 112.5, Sildenafil için ise %85 – 113.5 aralığındadır.

Abstract:
Dapoxetine and Sildenafil active ingredients are used in the treatment of early ejaculation and erectile dysfunction problems, respectively. Pharmaceutical preparations where these two active substances are used together have started to be registered in the world. Therefore, simultaneous determination of these two molecules in both pharmaceutical dosages and plasma has become important. The aim of the thesis is to develop a method that can be used in bioequivalence studies with liquid-liquid extraction technique for these active substances.
Dapoxetine and Sildenafil were determined simultaneously with the Liquid Chromatography Mass Spectrometer (LC-MS/MS) system using the liquid-liquid extraction technique in the sample preparation stage. 305.8 m/z for Dapoxetine, 474.8 m/z for Sildenafil and 389.7 m/z for Tadalafil which is used as internal standard, were determined as the main ion. For the fragmentation ions, 100.1, 157 and 268 m/z were observed respectively. The instrument working conditions are optimized by taking into account parameters; such as separation power, selectivity and retention times. In the liquid-liquid extraction technique, EMA validation parameters such as accuracy, linearity, repeatability, selectivity, matrix effect, stability, dilution integrity were examined for the method validation.
In addition, lower limit of quantitation of liquid-liquid extraction method are 0.04 ng/mL, 2.00 ng / mL for Dapoxetine and Sildenafil respectively. The linear calibration curve ranges varied between 0.04 - 1.00 and 2.00 - 40.0 ng/mL for dapoxetine and Sildenafil, respectively. Recovery values are in the range of 87.5 - 112.5% for Dapoxetine and 85 - 113.5% for Sildenafil at low, medium and high concentrations