Fitokimyasal maddelerin nöroblastom ve metastaz potansiyeli üzerine etkileri
Effects of phytochemicals on neuroblastoma and metastatic potential
Yazar: DİLEK İNCE
Danışman: PROF. DR. HATİCE NUR OLGUN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Allisin = Allicin ; Gen ifadesi = Gene expression ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Resveratrol = Resveratrol ; Sisplatin = Cisplatin

Özet:
Amaç: Nöroblastom hücre hatlarında allicin ve resveratrolün antitümöral etkisi ve sisplatinin etkisini değiştirici rolü olup olmadığının; bu fitokimyasalların metastaz ilişkili genlerin ekspresyonları üzerine etkisinin araştırılmasıdır. Yöntem: Kelly ve SH-SY5Y insan nöroblastom hücre hatları kullanıldı. Gruplar: Grup1:Kontrol, Grup2:Sisplatin, Grup3:Allicin, Grup4:Resveratrol, Grup5:Sisplatin+Allicin, Grup6:Sisplatin+Resveratrol. Ajanların sitotoksik etkisi MTT ve LDH yöntemiyle, apoptoz TUNEL yöntemiyle değerlendirildi. 84 tümör metastaz geni ve DDX1 geni ekspresyonları RTPCR ile değerlendirildi. İstatistiksel analizler üretici firmanın internetteki PCR analiz sayfasında yapıldı. Mann Whitney U, Ki kare ve korelasyon analizi kullanıldı. Bulgular: Allicin sitotoksisite, apoptoz yapmadı ve sisplatinin sitotoksik, apoptotik etkilerini de değiştirmedi. Resveratrol apoptoz yapmadı, doza bağımlı sitotoksisite yarattı; sisplatinin sitotoksisitesini değiştirmedi, apoptotik etkisini azalttı. KELLY: Grup 3/4/5/6?da ekspresyonları en fazla artan ortak genler: CCL7, CDH1, CTSL1, ETV4, FXYD5, KISS1R, HTATIP2, IL1B, IL8RB, ITGA7, KISS1, MMP10, MMP13, MMP3, MMP7, MYC, MYCL1, SYK, TIMP4, TRPM1, TNFSF10. Grup 2/3/4/5/6?da RB1 ve DENR ?3kat azaldı. Grup4?de DDX1, nm23-H1 arttı, nm23-H2 azaldı; grup 5?de nm23-H1 arttı. SH-SY5Y: Grup 3/5?de KISS1, TNFSF10, MMP10, TRPM1, IGF1, MMP13, MMP7, ayrıca grup 3?de MMP3, CCL7, TIMP4, ITGA7 >100kat azaldı. Grup 4/6?da MET, KISS1, IGF1, TNSF10, MMP10, CXCL12, MMP13, MMP7, MMP3, CDH6, CCL7, TRPM1, CTSL1, FXYD5, HPSE, HTATIP2, IL1B, IL8RB, KISS1R, TIMP4 >100kat azaldı. Grup 2/3/4/5/6?da PNN, grup4?de DENR ?3kat arttı. Grup 3/4/5/6?da DDX1 arttı, nm23-H1 azaldı, grup 2?de DDX1, nm23-H2 arttı. Sonuç: Bulgularımız allicin ve resveratrolün çok sayıda metastaz geninde çok yönlü etkilenmeye neden olduğunu göstermiştir. Bu bağlamda nöroblastomda bu fitokimyasalların kemoterapiberaberinde veya tekli kullanımının uygun olmadığını, sorgulanması gerektiği düşünülmüştür. Anahtar Sözcükler: Nöroblastom, Metastaz, Sisplatin, Allicin, Resveratrol

Abstract:
Objective: To explore antitumoral effects of allicin, resveratrol, their changing effects on cisplatin; and effect of these phytochemicals on the expression of metastasis related genes in neuroblastoma cell lines. Method: Kelly and SH-SY5Y human neuroblastoma cell lines were used. Groups: Group1:Control, Group2:Cisplatin, Group3:Allicin, Group4:Resveratrol, Group5:Cisplatin+Allicin, Group6:Cisplatin+Resveratrol. Cytotoxic effects of agents were assessed MTT and LDH assays, apoptosis was determined by TUNEL. DDX1 and 84 custom array genes of tumor metastasis were determined by RT-PCR. Expressions were calculated at manufacturer?s online PCR expression analysis page. Mann-Whitney-U, chi-square, correlation analysis were used. Results: Allicin didn?t cause cytotoxicity, apoptosis, also didn?t change cytotoxic, apoptotic effects of cisplatin. Resveratrol didn?t cause apoptosis, however cause cytotoxicity. Cytotoxic effect of cisplatin didn?t change, but apoptotic effect of cisplatin diminished by resveratrol. KELLY: Groups3/4/5/6: CCL7, CDH1, CTSL1, ETV4, FXYD5, KISS1R, HTATIP2, IL1B, IL8RB, ITGA7, KISS1, MMP10, MMP13, MMP3, MMP7, MYC, MYCL1, SYK, TIMP4, TRPM1, TNFSF10 expressions increased. Groups2/3/4/5/6: RB1, DENR expressions decreased. Group4: DDX1, nm23-H1 increased, nm23-H2 decreased. Group5 nm23-H1 increased. SHSY5Y: Groups3/5: KISS1, TNFSF10, MMP10, TRPM1, IGF1, MMP13, MMP7, additionally MMP3, CCL7, TIMP4, ITGA7 expressions decreased in group3. Groups4/6: MET, KISS1, IGF1, TNSF10, MMP10, CXCL12, MMP13, MMP7, MMP3, CDH6, CCL7, TRPM1, CTSL1, FXYD5, HPSE, HTATIP2, IL1B, IL8RB, KISS1R, TIMP4 expressions decreased. Groups2/3/4/5/6: PNN, Group4: DENR expressions increased. Groups3/4/5/6: DDX1 increased, nm23-H1 decreased; in group2 DDX1, nm23-H2 increased.Conclusion: Our findings indicate allicin, resveratrol have versatile impacts on metastatic genes. Administration of these phytochemicals with or without chemoteharpy are not appropriate and should be questioned in neuroblastoma. Key Words: Neuroblastoma, Metastasis, Cisplatin, Allicin, Resveratrol