Ovulatuar faktörlü infertil hastaların granüloza hücrelerinde liquiritigenin'in etkilerinin immünohistokimyasal ve elektron mikroskobik incelenmesi
Immunohistochemical and electron microscopic investigation of the effects of liquritigenin on granulosa cells of infertile patients with ovulatory factor
Yazar: EMEL USTA
Danışman: PROF. DR. SİBEL KÖKTÜRK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kısırlık = Infertility ; Liquiritigenin = Liquiritigenin ; Sirtuin = Sirtuin

Özet:
İnfertilite dünya genelinde her geçen gün artan küresel bir sağlık sorunudur. Granüloza hücrelerinin (GH) oosit beslenmesi ve olgunlaşmasının yanı sıra oosit sperm etkileşimi üzerinde de önemli bir role sahip olması, infertilite tanı ve tedavisinde GH'lerinin bir seçenek olarak ön plana çıkmasını sağlamaktadır.  
Liquiritigenin (LQ) Glycyrrhiza radix'ten elde edilen anti-oksidan, anti-inflamatuar, anti-proliferatif ve östrojenik birçok etkiye sahip olan bir flavonoiddir. Çalışmamızda ovulatuvar faktör (OF, infertil) ve erkek faktörü (EF, sağlıklı bireyler) nedeniyle in vitro fertilizasyon (İVF) ünitesine başvuran hastaların oosit-kümülüs komplekslerinden elde edilen GH'lerinde LQ'nun etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. 
OF ve EF nedeniyle İstanbul Üniversitesi Tıp Fakültesi İVF ünitesine başvuran hastalar çalışmaya dahil edilmiştir. 20 OF ve 15 EF hastasından elde edilen GH'ler kültür ortamında EF, EF-Dimetil sülfoksit (DMSO), EF-LQ, OF, OF-DMSO ve OF-LQ gruplarına ayrıldı. Hücre kültüründe GH'lere 24 saat, LQ (40 μM) ve DMSO (5 μL) uygulandı. İmmünohistokimyasal boyama ile SIRT2 antikoru boyanma şiddeti ve hücre morfolojisi değerlendirildi. Transmisyon elektron mikroskobu ile granüloza hücrelerinin ultrastrüktürü incelendi. Tüm grupların GH'lerinde hücre morfolojisi, nükleusları, sitoplazmik organelleri ve apopitotoz gibi ultrastrüktürel değişiklikler karşılaştırıldı.
OF ve OF-DMSO gruplarının GH'lerinde SIRT2 immünositokimyasal boyanma şiddeti, EF  ve EF-DMSO gruplarına göre anlamlı derecede azalmıştır. EF-LQ ve OF-LQ gruplarının GH'lerinde SIRT2 boyanma şiddetinin diğer gruplarla karşılaştırıldığında anlamlı olarak arttığı izlenmiştir. OF ve OF-DMSO gruplarının GH'lerinde apopitotik hücre morfolojisini yansıtan bulgular gözlenirken, OF-LQ grubunda ise daha az olarak gözlenmiştir.
Bu sonuçlar, kültür medyumuna eklenen LQ'nun GH ultrastrüktürü üzerinde olumlu etkileri olduğunu göstermektedir. Bu bize LQ'nun İVF ünitelerinde alternatif bir medyum ajanı olarak kullanılabileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, LQ'nun alternatif bir medyum ajanı olarak kullanımıyla ilgili deneysel ve klinik daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Infertility is a global health problem that has been increasing day by day. The fact that granulosa cells (GCs) have an important role in the oocyte nutrition and maturation as well as the oocyte-sperm interaction makes them appear as an option in the diagnosis and treatment of infertility.
Liquiritigenin (LQ) is a flavonoid compound derived from Glycyrrhiza radix. This experimental study aimed to examine the effects of LQ on GCs obtained from patients treated in an in vitro fertilization (IVF) unit due to the ovulatory factor (OF, infertile) and male factor (MF, healthy individuals).
GCs obtained from patients were divided into groups as MF, MF Dimethyl sulfoxide (DMSO), MF-LQ, OF, OF-DMSO and OF-LQ. LQ (40 μM) and DMSO (5 μL) were applied to culture mediums of determined groups for 24 hours. SIRT2 staining intensity and cell morphology were evaluated by immunocytochemical staining. Ultrastructural morphologies of GCs were examined by transmission electron microscopy.
The intensity of SIRT2 immunoreactivity in GCs of OF and OF-DMSO groups was significantly decreased compared to those of MF and MF-DMSO groups. SIRT2 immunoreactivity increased significantly in EF-LQ and OF-LQ groups when compared to other groups. In OF and OF-DMSO groups, ultrastructural findings reflected apoptotic cell morphology but MF-LQ and OF-LQ groups showed less apoptotic cell morphology
These results demonstrate that LQ has positive in vitro effects on morphology and SIRT expression in GCs, suggesting that LQ can be used as an alternative medium agent in IVF procedures. However, further detailed studies are needed.