Kayseri yöresinde süt sığırlarında Escherichia coli O157:H7'nin konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle araştırılması
Investigation with conventional and molecular method of Escherichia coli O157: H7 in dairy cattle in Kayseri region
Yazar: AYŞEGÜL YONTAR
Danışman: PROF. DR. FUAT AYDIN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmada, Kayseri ili ve ilçelerindeki kamu ve özel sektöre ait süt işletmelerindeki çeşitli yaş gruplarındaki sağlıklı hayvanların dışkı ve sütlerinde E. coli O157:H7'nin varlığının saptanması ve hayvansal risk faktörlerinin ortaya konulması amaçlanmıştır.Bu amaçla çeşitli ilçelerden toplanan 500 adet dışkı ve 500 adet süt örnekleri çalışmada materyal olarak kullanıldı. Immuno Magnetik Seperasyon ve ardından Chorom agar ve Sorbitol MacConkey (SMAC) agara ekim yapıldı.Bu besiyerlerinde üreyen şüpheli koloniler seçildi ve bunlar serolojik yönden H ve O agglütinasyon testi ile incelendi. Moleküler yönden ise şüpheli izolatlar multipleks PCR (mPCR)ve unipleksPCR (uPCR) teknikleri ile incelendi. Bu işlemleri sonucunda 500 süt örneğinden 1 (% 2)'inde ve 500 dışkı örneğinden 6(% 4,6)'sında O157:NM suşu tespit edilmiş olup örneklerin hiçbirinde flagella H antijenine rastlanmadı. Dışkıdan izole edilen O157:NM suşlarına yapılan mPCR'da bir örnekte Enterohemolsin genine (Ehly A) rastlanırken, 1 örnekte yalnızca Sitotoksin 2 (stx2) geni tespit edildi. Diğer dışkı örneklerinde virülens genlerinden hiçbirisine rastlanmadı. Sütten izole edilen bir adet O157:NM suşunda ise virülens genlerinden hiçbirisine rastlanmadı.Sonuç olarak, Kayseri ili ve ilçelerindeki işletmelerdeki süt sığırlarının dışkısında ve sütlerinde E. coli O157 belirlenmiştir. Belirlenen kontaminasyon oranının düşük düzeylerde olduğunu, bununla birlikte Kayseri ilinde hijyen kurallarına dikkat edilmesi gerektiği sonucuna varıldı.Anahtar Kelimeler : Sığır dışkısı, çiğ süt, E. coli O157: H7, IMS, PCR

Abstract:
The objective of this study was to investigate the animal risk factors related to the presence of E. coli O157:H7 in feces and milk samples from healthy cattle with various ages collected from private and government dairy farms in Kayseri and vicinity.Five hundred fecal samples and 500 raw milk samples were collected from different locations of Kayseri, processed through immune Magnetic Separation and inoculated Chorom medium and Sorbitol MacConkey medium. Suspicious colonies were selected from this medium and they were examined serological aspect with H and O agglutination test. The molecular direction suspicious isolates were examined multiplex with PCR (mPCR) and unipleksPCR (uPCR) techniques. The examination showed that only 1 (2 %) out of 500 raw milk samples and only 6 (4.6%) out of 500 fecal samples contained O157:NM strain, and none of the samples contained flagella H antigen. Through using mPCR, only one sample from O157:NM of isolated fecal samples contained Ehly A, whereas only one sample contained stx2 genes. None of the other fecal samples contained any virulence genes. Only one raw milk sample isolated from O157:NM strain did not have any virulence genes.In conclusion, the raw milk and fecal samples collected from dairy farms in Kayseri region and its vicinity contain E. coli O157. Low levels of contamination rate was determined in the samples. However it was concluded that attention should be hygiene rules in Kayseri.Key Words: Cattle feces, raw milk, E. coli O157:H7, IMS, PCR