Perindopril, indapamid ve amlodipin' in farmasötik preparatlardan aynı anda analizi için yüksek performanslı sıvı kromatografisi yönteminin geliştirilmesi ve validasyonu
Developing and validation of a high performance liquid chromatography method for the determination of combined perindopril,  indapamide and amlodipine from pharmaceutical preparations
Yazar: SEVİNÇ AYLA ÖZSAR
Danışman: PROF. DR. SACİDE ALTINÖZ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Amlodipine = Amlodipine ; Diüretikler = Diuretics ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; İndapamide = Indapamide

Özet:
Bu çalışmada, hipertansiyon hastalarında kan basıncını kontrol etmek için kullanılan ve birbirini tamamlayıcı mekanizmalara sahip üç antihipertansif bileşenin; Perindopril Arjinin (PRN), İndapamid (İND) ve Amlodipin Besilat (AML)' ın kombinasyonundan oluşan farmasötik preparatın (TRIPLIXAM)® analizinde kullanılacak yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) tekniği geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Geliştirilen HPLC tekniğinde iç standart olarak Naproksen Sodyum (NPS) seçilmiş olup PRN, İND ve AML' nin analizi için ACE 5 C18   (12.5 cm × 4,6 mm i.ç.) analitik kolon kullanılmıştır. Hareketli faz olarak asetonitril ve 50 mM fosfat tamponu (40:60, h/h) karışımı kullanılarak hareketli faz pH' sı 3.0' e ayarlanmıştır. Akış hızı 1.0 ml dk-1 ve enjeksiyon hacmi 20 µl' dir. UV (Ultraviyole) Dedektör ile 215 nm dalga boyunda ölçüm yapılmıştır. PRN, AML ve İND' nin seçilen kromatografik koşullardaki alıkonma zamanları sırasıyla 2.22, 3.48 ve 5.05 dk' dır. Geliştirilen HPLC yöntemi, ICH (The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use) analitik yöntem validasyon rehberi doğrultusunda kararlılık, doğrusallık, duyarlılık, doğruluk, kesinlik, özgünlük, tutarlılık ve sağlamlık parametrelerine göre valide edilmiştir. PRN için 1.0-25.0 µg mL-1, İND için 1.0-8.0 µg mL-1 ve AML için 1.0-40.0 µg mL-1 aralığında doğrusal kalibrasyon eğrileri elde edilmiştir.  PRN, İND ve AML' nin HPLC ile analiz yöntemine ait gözlenebilme sınırları (LOD) sırasıyla 0.25 µg mL-1, 0.10 µg mL-1 ve 0.15 µg mL-1, alt tayin sınırları (LOQ) değerleri ise sırasıyla 0.50 µg mL-1, 0.25 µg mL-1 ve 0.40 µg mL-1' dir. Validasyon çalışması bulguları doğrultusunda, geliştirilen HPLC yöntemi doğru, kesin, özgün, duyarlı, tutarlı ve sağlamdır. Tez kapsamında geliştirilen ve valide edilen HPLC yöntemi; PRN, İND ve AML' nin üçlü karışımını içeren tablet formundaki farmasötik preparatın analizi için uygulanmış ve sonuç olarak bu farmasötik preparattaki analizlerinin güvenilirliği gösterilmiştir.

Abstract:
In this study, a High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method was developed and validated for the analysis of a pharmaceutical preparation (TRIPLIXAM)®  composed of three antihypertensive complementary components; Perindopril Arginine (PRN), İndapamide (İND) and Amlodipine Besylate (AML) which are used for the control of hypertension in patients with high blood pressure. In this developed HPLC method Naproxen Sodium was choosen as a internal standard  and ACE 5 C18 analytical column (12.5 x 4.6 mm ) was used for the analysis of PRN, IND and AML. Acetonitril and 50 mM phosphate buffer mixture (40:60 h/h) was used as mobile phase and pH was adjusted to 3.0.  Flow rate was 1.0 ml/min and injection volume was 20 µl. Measurements were obtained at 215 nm wavelength using UV detector. Retention times of PRN, AML and IND were 2.22, 3.48 and 5.05 min. respectively, at selected chromatographical conditions. The developed HPLC method was validated in terms of stability, accuracy, sensitivity, linearity, precision, specificity, ruggedness and robustness in accordance with ICH analytical method. Linear calibration curves were obtained in the range of 1.0-25.0 µg mL-1; 1.0-8.0 µg mL-1  and  1.0-40.0 µg mL-1 for PRN, IND and AML, respectively. In this HPLC method the limits to be observed ( LOD) for PRN, IND and AML were 0.25 µg mL-1, 0.10 µg mL-1 and 0.15 µg mL-1; lower observable limits ( LOQ ) were 0.50 µg mL-1, 0.25 µg mL-1 and 0.40 µg mL-1, respectively. As a result of the validation, the developed HPLC method was accurete, precise, specific, sensitive, rugged and robust. Within the scope of  the thesis, the developed and validated HPLC method  was applied for  the analysis of  the pharmaceutical preparation  in the tablet form  of combined triple  PRN, IND and AML mixture and the reliability of the analyses was shown.