CD19 eksikliğinde Foxp3 ekspresyonunun akan ölçerde değerlendirilmesi
Foxp3 expression in CD19 deficiency evaluation of flowing meter
Yazar: HATİCE İREM KOŞ
Danışman: PROF. DR. İSMAİL REİSLİ
Necmettin Erbakan Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: B lenfositleri = B lymphocytes ; Gen ifadesi = Gene expression ; Mutasyon = Mutation ; Otoimmünite = Autoimmunity ; T lenfositleri = T lymphocytes ; T lenfositleri-düzenleyici = T lymphocytes-regulatory

Özet:
CD19 eksikliği, B lenfosit defekti olarak tanımlanmıştır ve CD19'un mutasyonu olan hastalarda otoimmüniteye (sistemik lupus eritematozus, IgA nefropatisi) sebep olduğu gösterilmiştir. Fakat otoimmünite ilişkili transkripsiyon faktörü Foxp3 ekspresyonu hastalarda analiz edilmemiştir. Bu çalışma ile; CD19 eksikliğinde gelişen otoimmünite durumu ile Regülatör T hücre (Treg) leri arasında bir ilişki olup olmadığının araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmaya, akan hücre ölçer ve genetik analizle CD19 eksikliği tanısı almış olan 3 hasta, bu hastalarla akrabalık ilişkisi bulunan ve genetik olarak doğrulanmış 11 taşıyıcı ve bu hastalarla akrabalığı olmayan 10 sağlıklı kontrol alınmıştır. Hasta, taşıyıcı ve kontrollerden alınan tam kan örneklerinden periferik kan mononükleer hücreler (PBMC) izole edilmiştir. İzole edilen PBMC'lerden CD3, CD4, CD25 ve CD127 ekspresyonlarını değerlendirmek amacıyla yüzey boyama işlemi, Foxp3 ekspresyonunun değerlendirilmesi için hücre içi boyama yöntemi gerçekleştirilmiştir. Boyama sonrası FACSCanto II akan hücre ölçerde yardımcı T lenfositlerin ve Treg hücrelerin yüzey belirteçlerinin ekspresyon yüzdeleri ve ortalama floresan yoğunlukları (MFI) ile ve intrasitoplazmik Foxp3'ün yüzde ve MFI değerleri belirlenmiştir.
Hasta, taşıyıcı ve kontrol grubunun CD4+ T lenfosit ve Treg hücre belirteçlerinin ekspresyon yüzdeleri ve mean floresan yoğunluğu (MFI) değerleri karşılaştırıldı. CD4+ T lenfosit yüzdeleri ve Treg hücrelerin belirteçlerinin yüzde değerleri yönünden gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır (p>0.05). Hasta grubu, taşıyıcı grubu ve kontrol grubunun CD4+ T lenfosit MFI değeri ve Treg hücrelerin belirteçlerinin (CD4+ CD25+ CD127- , CD4+ FOXP3 ve CD4+ CD25+) MFI değerleri yönünden istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmuştur (p=0,001). Kontrol grubunun CD4+ T lenfosit MFI değeri, taşıyıcı grup (p=0,003) ve hasta grubundan (p=0,033) istatistiksel olarak anlamlı derecede daha yüksektir. Benzer şekilde kontrol grubunun Treg hücre belirteçlerinin (CD4+CD25+CD127-, CD4+ FOXP3, CD4+CD25+) MFI değerleri de taşıyıcı ve hasta gruplarından istatistiksel olarak anlamlı derecede yüksektir.
Bu çalışma ile CD19 eksikliği olan hastalarda ve taşıyıcılarda yardımcı T lenfosit ve Treg lenfositlerin belirteçlerinin MFI değerlerinin kontrole kıyasla düşük olduğu gösterilmiştir. Bu bulgumuz, CD19 eksikliği olan veya taşıyıcı olan bireylerde yardımcı T lenfositlerin etkilenmiş olabileceğini ve bozulmuş baskılayıcı fonksiyon sebebiyle T hücre aracılı otoimmünitenin gelişimi ile ilişkili olabileceğini düşündürmüştür.

Abstract:
CD19 deficiency has been described as a B lymphocyte defect. It has been shown to cause 
autoimmunity (systemic lupus erythematosus, IgA nephropathy) in patients with CD19 mutation. 
With this study, it was aimed to investigate whether there is a relationship between the status of 
autoimmunity developed in CD19 deficiency and regulator T cells.
The study included 3 patients who were diagnosed with CD19 deficiency by flow cell meter 
and genetic analysis, 11 carriers with a kinship relationship with these patients and genetically 
confirmed and 10 healthy controls who were not related to these patients. Peripheral blood 
mononuclear cells (PBMC) were isolated from whole blood samples from patients, carriers and
controls. Surface staining was performed to evaluate the expressions of CD3, CD4, CD25 and CD127 
from isolated PBMCs, and intracellular staining method was used to evaluate Foxp3 expression. After 
staining, expression percentages and mean fluorescence intensity (MFI) of helper T lymphocytes and 
Treg cells on the FACSCanto II flow cytometer and the percentage and MFI values of 
intracytoplasmic Foxp3 were determined.
Expression percentages and mean fluorescence intensity (MFI) values of CD4+ lymphocyte 
and Treg cell markers of the patient, carrier and control groups were compared. There was not 
statistically significant difference between the groups in terms of CD4+ T lymphocyte percentages 
and percentage values of Treg cells (p>0.05). A statistically significant difference was found between 
the patient group, carrier group and control group in terms of CD4 + T lymphocyte MFI value and 
MFI values of the markers of Treg cells (CD4+ CD25+ CD127-, CD4+ FOXP3 and CD4+ CD25+) 
(p=0,001). The CD4+ T lymphocyte MFI value of the control group was statistically significantly 
higher than the carrier group (p=0,003) and the patient group (p= 0,033). Similarly, MFI values of 
Treg cell markers (CD4+ CD25+ CD127-, CD4+ FOXP3, CD4+ CD25+) of the control group were 
statistically significantly higher than the carrier and patient groups.
In this study, it was shown that the MFI values of T helper T lymphocyte and Treg 
lymphocyte markers were lower in patients with CD19 deficiency and carriers compared to the 
control. This finding suggests that the function of helper T lymphocytes may be affected in 
individuals with CD19 deficiency or carriers, and may be associated with the development of T cell 
mediated autoimmunity due to impaired suppress or function