Ege bölgesi sıcak su kaynakları ve toprak örneklerinden izole edilen termofilik aktinomisetlerin proteaz üretimlerinin karekterizasyonu
Characterization of protease production of thermophilic actinomyces isolated from hot spring sediments and soil samples in Ege region
Yazar: SÜMEYYE ÇEVİK
Danışman: DOÇ. DR. ATAÇ UZEL
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, Ege Bölgesi sıcak su kaynakları ve toprak örneklerinden izole edilen 163 termofilik aktinomiset suşunun ekstraselüler proteaz üretim kapasiteleri belirlenmiş ve bu suşlardan iyi üretici oldukları belirlenen 9-4 ve 46-2 No'lu izolatların proteaz üretimlerinin karekterizasyonu gerçekleştirilmiştir. İzolatlar sıvı besiyerinde büyütülerek, hücresiz fermantasyon sıvısında enzim aktivite çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Enzim karakterizasyonunda ham enzim solüsyonları kullanılmış ve termostabilite, pH stabilitesi, pH ve sıcaklığın enzim aktivitesi üzerine etkisi belirlenmiştir. Ayrıca ham enzim preparatlarının farklı inhibitor, ağır metal, denatüranlar, detarjan ve oksidantlara karşı kararlılıkları da belirlenmiştir. Farklı karbon ve azot kaynaklarının, pH'nın ve sıcaklığın izolatların enzim üretimlerine olan etkisi belirlenerek enzim üretiminin karekterizasyonu gerçekleştirilmiştir.İzolatların ürettikleri enzimlerin termostabil oldukları bulunmuştur. İzolat 9-4'e ait enzim 60 ? C'de 2 saat boyunca aktivitesini %100 oranında koruyabilirken, 46-2'e ait enzim %86,36 oranında koruyabilmektedir. Aynı zamanda, PMSF'nin proteaz aktivitesinde güçlü bir inhibisyon (%100) meydana getirmesi enzimlerin serin proteaz sınıfında olduklarını gösterir. Ayrıca enzimlerin, Mn2+ ve Ca2+ divalent katyonları varlığında aktive oldukları, üre ve H2O2 varlığında kararlı oldukları bulunmuştur. Yapılan denemeler sonunda seçilen iki izolatın Thermoactinomyces genusuna ait endüstriyel kullanım için umut vaat eden termostabil alkalen proteaz üreticileri oldukları bulunmuştur.

Abstract:
In this study, a total of 163 thermophilic actinomycetes isolated from hot spring sediments and soil samples in Ege region were investigated for their extracellular protease producing capacities and the best producers? proteases among these strains (9-4 and 46-2) were characterized. Isolates were grown in liquid culture and enzyme assays were performed by using the cell free supernatants. The crude enzyme preparations were used for enzyme characterization and thermostability, pH stability, the effects of pH and temperature on enzyme activity were determined. Besides, crude enzyme solutions were tested against several inhibitors, heavy metals, denaturants, detergents and oxidants. The effect of different karbon and nitrogen sources, pH and temperature on enzyme production of the isolates was also investigated.The enzymes produced by the isolates were found thermostable. While the 9-4?s enzyme had protected 100% of its relative activity at 60 ? C for 2 hours, the enzyme of the strain 46-2 had protected its activity 86.36% at the same conditions. However, PMSF strongly inhibited (%100) the protease activity, suggesting that the enzyme is a serine protease. Moreover, it was found that, presence of the Mn2+ and Ca2+ divalent cations cause an activation and the enzymes were also found stable at the presence of urea and H2O2. The selected two isolates belonging to the genus Thermoactinomyces were found promising thermostable alkalen protease producers for industrial use.