Doksisiklinin c6 glioma hücre hattında apoptotik ve anti – proliferatif etkilerinin incelenmesi
Investigation of apoptotic and anti-proliferative effects of doxycycline on c6 glioma cell line
Yazar: FİRUZE ÜNLÜ BEKTAŞ
Danışman: PROF. DR. MUHAMMED HAMZA MÜSLÜMANOĞLU
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Doksisiklin = Doxycycline ; Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) = Reverse transcription polimerase chain reaction ; Glioma = Glioma ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Doksisiklin, tetrasiklin grubuna üye bir antibiyotik çeşididir ve halihazırda çeşitli hastalıkların tedavisinde kullanımı bulunmaktadır. Özellikle penisilin ve streptomisin gibi biyosidal etkili antibiyotiklere direnç kazanmış olup bu antibiyotiklerle tedavi edilemeyen enfeksiyonlarda kullanılmaktadır. Doksisiklinin enfeksiyonlarla mücadele etme özelliği biyostatik etkili bir molekül olmasından gelmektedir. Bu özelliği sayesinde patojenik mikroorganizmaların üremesini ve yayılmasını durdurarak/yavaşlatarak immün sisteme bu organizmaları yok edebilmesi için gerekli zamanı kazandırır. Bu çalışmada, doksisiklinin, Rattus norvegicus türünden elde edilmiş olan C6 glioma hücre hattında meydana getirdiği sitotoksik, anti-proliferatif ve apoptotik etkiler gözlemlendi. Sitotoksik etkilerin anlaşılabilmesi için önce MTT testleri gerçekleştirildi ve IC50 değeri elde edildi. Hesaplanan değerler sonucunda, çalışmanın devamında kullanılacak dozlar belirlenip koloni formasyon testi gerçekleştirildi. Koloni formasyon testlerinin sonuçları da sitotoksisite testi bulgularını destekleyecek nitelikte bulundu. Elde edilen verileri kuvvetlendirmek ve doksisiklinin hücrelerin migrasyon yeteneklerine olan etkisini göstermek için yara iyileşmesi testi gerçekleştirildi. Yara iyileşmesi testi ve koloni formasyon testi sonuçları birbirlerini destekler nitelikte bulundu. DAPI ile doz uygulanan hücreler ve kontrol grubu boyanıp floresan mikroskobunda morfolojik incelemeler yapıldı. Doza bağımlı olarak hücre sayındaki azalma morfolojik gözlemle tespit edildi. RT-qPCR yöntemi ile belirlenen genlerin ifade seviyelerine bakıldı ve kontrol grubuyla belirlenen dozdaki gen ifade seviyeleri karşılaştırıldı. Sonuç olarak, doksisiklinin C6 rat glioma hücre hattında sitotoksik, anti-proliferatif ve apoptotik etkileri bulunmaktadır. Potansiyel tamamlayıcı bir ajan olarak kanser tedavisinde kullanılabilmesi için daha geniş kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Doxycycline is a member of the tetracycline group and is currently used in the treatment of various diseases. It has usage against microorganisms that gained resistance to biocidal antibiotics, especially penicillin and streptomycin, and is used in infections that cannot be treated with these antibiotics. Doxycycline's ability to fight infections comes from being a biostatically effective molecule. Thanks to this feature, it stops/slows the reproduction and spread of pathogenic microorganisms and gives the immune system the necessary time to destroy these organisms. In this study, cytotoxic, anti-proliferative and apoptotic effects of doxycycline on the C6 glioma cell line derived from Rattus norvegicus were observed. In order to understand the cytotoxic effects, MTT test were performed first and the IC50 value was obtained. As a result of the calculated values, the dosages to be used in the continuation of the study were determined and the colony formation test was performed. The results of the colony formation tests were also found to support the findings of the cytotoxicity test. Wound healing test was performed to strengthen the data obtained and to show the effect of doxycycline on the migration abilities of cells. Wound healing test and colony formation test results were found to support each other. Control cells and treated cells were dyed with DAPI and morphological examinations were made under fluorescent microscope. A dose-dependent decrease in cell number was detected by morphological observation. The expression levels of the genes determined by the RT-qPCR method were examined and the gene expression levels at the determined dose were compared with the control group. In conclusion, doxycycline has cytotoxic, anti-proliferative and apoptotic effects in C6 rat glioma cell line, and more comprehensive studies are needed to use it as a potential complementary agent in cancer treatment.