Dakapo üzümü posası ekstraktının V79 hücreleri üzerine antigenotoksik etkilerinin incelenmesi
Investigation of antigenotoxic effects of dakapo grape pomace extract on V79 cells
Yazar: EZGİ EYLÜL BANKOĞLU
Danışman: PROF. DR. TOMRİS ONOĞUR
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Gıda Mühendisliği = Food Engineering

Özet:
Bu çalışmada Almanya'daki Geisenheim Araştırma Enstitüsünde üretilen antosiyanince zengin Dakapo üzümü posası ekstraktının antigenotoksik etkilerinin incelenmesi planlanmıştır. Bu amaçla Dakapo üzümü posası ekstraktının V79 hücrelerini hidrojen peroksit kullanılarak oluşturulmuş oksidatif strese ve patulin kullanılarak tetiklenmiş kromozomal hasara karşı koruyucu etkileri incelenmiştir. Üzüm posası ekstraktının toplam fenolik madde içeriği ve toplam antosiyanin içeriği Folin-Ciocalteau ve pH diferansiyel yöntemleri kullanılarak saptanmış, antioksidan kapasitesi FRAP testi ile, hücre içinde gösterdiği antioksidan aktivite DCF-DA testi kullanılarak ölçülmüştür. Antigenotoksik etkiyi saptamak amacıyla alkali komet testi ve mikronükleus testlerinden yararlanılmıştır. Ekstraktın hücre içi antioksidan özellik gösteren glutatiyon üzerindeki etkisini araştırmak için flow sitometri kullanılmıştır. Çalışma sonucunda Dakapo üzümü posası ekstraktının toplam fenolik madde (69.94±4.52 gGAE/100g), toplam antosiyanin (33.49±1.05 g/100g) içeriklerinin oldukça yüksek olduğu saptanmıştır. Dakapo üzümü posası ekstraktının önemli bir antioksidan kaynağı olduğu ve in vitro koşullarda ROS oluşumunu azaltarak, hücreleri oksidatif hasara karşı koruduğu gözlenmiştir. 10 ile 50 mg/ml'lik Dakapo üzümü posası ekstraktı uygulamalarının hücreleri DNA hasarına karşı önemli düzeyde (p<0.05) koruyucu etki gösterdiği belirlenmiştir. Dakapo üzümü posası ekstraktının yüksek dozlarda prooksidan etki göstererek oksidatif streste ve DNA hasarında artışa neden olabileceği gözlenmiştir. Patulin kullanılarak kromozomal hasarın tetiklendiği V79 hücrelerinde Dakapo üzümü posası ekstraktının patuline karşı önemli düzeyde (p<0.05) koruyucu etki göstermediği belirlenmiştir. Dakapo üzümü posası ekstraktının V79 hücrelerini oksidatif strese karşı koruyucu özelliğinin glutatiyon miktarı ile ilişkili olmayıp, antioksidan aktivitesinden kaynaklandığı anlaşılmıştır.Anahtar Sözcükler: Dakapo üzümü, Dakapo üzümü posası ekstraktı, antigenotoksisite, Dakapo üzümü posası ekstraktının antigenotoksik etkileri

Abstract:
In this study, it was planned to investigate the antigenotoxic effects of anthocyanin rich Dakapo grape pomace extract that was produced by Geisenheim Research Institute in Germany. For this purpose, the protective effects of Dakapo grape pomace extract on V79 cells against the oxidative stress caused by hydrogen peroxide and the chromosomal aberration induced by patulin was studied. The total phenolics content and total anthocyanin content of grape pomace extract were determined by Folin-Ciocalteau and pH differential methods, the antioxidant capacity was detected by ferric reducing ability assay (FRAP) and the antioxidative activity in cellular systems was measured by DCF-DA test. The alkaline comet assay and micronucleus assay were used to determine anti-genotoxic effects. Flow cytometry was used for investigating effects of extract on intracellular antioxidant molecule glutathione. As a result of the study, total phenolic compounds (69.94 ± 4:52 gGAE/100g) and total anthocyanins (33.49 ± 1.05 g/100g) of Dakapo grape pomace extract were found to be quite high. It was observed that the Dakapo grape pomace extract is an important source of antioxidants and protect cells against oxidative damage by reducing the production of ROS in vitro. Treatment with 10 and 50 mg/ml of Dakapo grape pomace extract protected cells significantly (p<0.05) against DNA damage. It was also detected that Dakapo grape pomace extracts can show pro-oxidant effect at higher doses that may cause an increase in oxidative stress and DNA damage. Dakapo grape pomace extract did not show significant (p<0.05) protective effect against patulin induced chromosomal damage in V79 cells. The protective effects of Dakapo grape pomace extract on V79 cells against oxidative stress was not associated with glutathione level, but resulted from its antioxidant activity.Key words: Dakapo grape, Dakapo grape pomace extract, antigenotoxicity, antigenotoxic effects of Dakapo grape pomace extract