Servikal kanser için docetaxel yüklü eksozomların geliştirilmesi ve terapötik etkilerinin belirlenmesi
Development of docetaxel loaded exosomes for cervical cancer and determination of therapeutic effects
Yazar: MELİKE CENİK
Danışman: PROF. DR. ÖZGE ÇEVİK
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Serviks kanseri, rahim ağzı kanser olarak bilinir. Bu kanser türünün kadınlarda görülme sıklığı yüksek olmakla birlikte, kanserle ölümler arasında yaygın olarak görülmektedir. Serviks kanseri için kemaoterapiler kullanılmakta ve kombine ilaç tedavileri ile ilgili birçok çalışma bulunmaktadır. Farmasötiklerin nanopartiküller içerisine enkapsülasyonu; kontrollü salım sağlanması, ilaç toksisitesini azaltması ve istenilen bölgeye hedeflendirilebilme özellikleri sayesinde kanser tedavisinde yaşanan problemlere çözüm sunmaktadır. Eksozomlar, hücrelerin kendi yapılarından salınan nano boyuttaki veziküllerdir. Eksozomların, çeşitli hücrelere proteinleri, RNA' ları, biyomolekülleri transfer edebileceği gösterilmiştir. Eksozomlar ilaç dağıtımı için seri üretilebilir bir kapasiteye sahip olup, tümör büyümesini baskıladığı konusunda da çalışmalar yer almaktadır. Bu tez çalışmasında bir mikrotübül inhibitörü olan kemoterapide kullanılan docetaxel' in, eksozomlar içerisine yüklenip yeni bir taşıyıcı sistem geliştirilerek, serviks kanseri için terapötik etkileri araştırıldı. Çalışmada serviks kanser hücreleri olan HELA' dan salınan eksozomlar izole edildi ve eksozomlara elektroporasyon yöntemiyle docetaxel yüklendi. Yükleme yapılan eksozomların karakterizasyon çalışmaları (partikül büyüklüğü, zeta potansiyeli ve enkapsülasyon etkinliği) yapıldı. Sitotoksisitenin belirlenmesi için MTT yöntemi kullanıldı. Uygun doz belirlendikten sonra servikal kanser tedavisi için hücrelere uygulandı. Docataxel yüklü eksozomların migrasyon üzerine etkisi strach testi yapıldı. Apoptoz üzerine etkilerini anlamak için Bax, Bcl-2, Pro kaspaz-3 ve Pro kaspaz-9 proteinlerinin hücre içi ifadeleri Western blot yöntemi kullanılarak saptandı. Gen ifadeleri üzerine etkisi ise RT-PCR yöntemi ile saptandı. Yapılan çalışmalar sonucunda docetaxel yüklü eksozomlar, docetaxel çözeltisine göre daha yüksek sitotoksik etkiye yol açmıştır. Çalışmalar, docetaxel yüklü eksozomların kanser tedavisinde yeni bir yol olabileceğini göstermiştir.

Abstract:
Although the incidence of cervical cancer in women is high, it is common among cancer with deaths. Chemotherapies are used for cervical cancer and there are many studies on combined drug therapies. Encapsulation of pharmaceuticals into nanoparticles; It offers a solution to the problems experienced in cancer treatment thanks to its controlled release, reducing drug toxicity and targeting to the desired area. Exosomes are nano-sized vesicles released from the cells' own structures. It has been shown that exosomes can transfer proteins, RNAs, biomolecules to various cells. Exosomes have a mass manufactured capacity for drug delivery. There are also studies that it suppresses tumor growth. In this thesis study, was invastiged the therapeutic effects of docetaxel, a microtubule inhibitor, used in chemotherapy and were loaded into exosomes and a developmend new carrier system, for cervical cancer. In the study, exosomes released from HELA, which are cervical cancer cells, were isolated and docetaxel was loaded into the exosomes by electroporation. Characterization studies (particle size, zeta potential and encapsulation efficiency) of loaded exosomes were done. MTT method was used to determine cytotoxicity. Applied to cells for cervical cancer treatment after appropriate dose was determined. The effect, on the cell migration of docetaxel loaded exosomes scratch test was performed. Intracellular expressions of Bax, Bcl-2, Pro caspase-3 and Pro caspase-9 proteins were determined using Western blot method to understand their effects on apoptosis. The effect on gene expression was determined by RT-PCR method. As a result of the studies, docetaxel loaded exosomes caused a higher cytotoxic effect than docetaxel solution. Studies have shown that docetaxel-loaded exosomes may be a new way of treating cancer.