Prostat karsinoma hücrelerinde lizofosfatidik asidin otofajiye  etkisi
The effects of lysophosphatidic acid on autophagy in prostate carcinoma cells
Yazar: GİZEM ESRA GENÇ
Danışman: PROF. DR. SAADET GÜMÜŞLÜ
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Karsinoma = Carcinoma ; Lisofosfatidik asit = Lysophosphatidic acid ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Otofaji = Autophagy ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms

Özet:
Amaç: Lizofosfatidik asit hücre sağkalımı, apoptozis, tümör progresyonu ve metastazın düzenlenmesinde rolü olan bir fosfolipiddir. Lizofosfatidik asit, G proteinine bağlı reseptörlerine bağlandıktan sonra PI3K–Akt veya Ras-Raf-MEK-ERK sinyal yolaklarını aktive ederek hücre içinde etkilerini gösterir. Otofaji besin, oksijen, büyüme faktörü eksikliği veya hücresel hasar koşulları altında katabolik bir süreçtir. Literatür taraması sırasında, prostat karsinoma hücrelerinde lizofosfatidik asidin otofajiye etkisini gösteren herhangi bir çalışmaya rastlanamamıştır. Bu araştırmanın amacı, prostat kanseri PC3, LNCaP ve Du145 hücrelerinde lizofosfatidik asidin ERK aktivasyonu yoluyla mTOR'u aktive edip etmediğini belirlemek ve böylece otofajinin engellenip engellenmediğini açıklığa kavuşturmaktır.
Yöntemler: PC3, LNCaP ve Du145 hücreleri medyum, lizofosfatidik asit, serumsuz medyum ve serumsuz medyum+LPA ile  inkübe edildiler. Bu hücre gruplarında fosfo ERK1/2, total ERK1/2, fosfo mTOR ve total mTOR düzeyleri ölçüldü. Floresan mikroskobu kullanılarak tüm hücre gruplarında  otofajinin oluşup oluşmadığı belirlendi. 
Bulgular: PC3, LNCaP ve Du145 hücrelerinin lizofosfatidik asit, serumsuz medyum ve serumsuz medium+LPA grupları için en etkili inkübasyon süresi 2 saat olarak belirlendi. Lizofosfatidik asit ile inkübe edilen PC3, LNCaP ve Du145 hücrelerindeki fosfo ERK1/2/total ERK1/2 ve fosfo mTOR/total mTOR oranlarının yüzdesi, kontrol, serumsuz medyum ve serumsuz medyum+LPA gruplarından daha yüksek bulundu. Lizofosfatidik asit ile inkübe edilen PC3, LNCaP ve Du145 hücrelerindeki otofagozom oluşumu kontrol, serumsuz medyum ve serumsuz medyum+LPA gruplarını oluşturan hücrelerdeki otofagozom oluşumuna göre daha düşük bulundu.
Sonuçlar: Prostat kanseri PC3, LNCaP ve Du145 hücrelerinin lizofosfatidik asit ile inkübe edilmesi sonucunda, ERK1/2'nin aktivasyonu yoluyla mTOR aktivitesinin arttığı bulundu. Ayrıca, bu hücrelerde ERK1/2 ve mTOR aktivasyonlarının artması sonucunda otofaji oluşumunun engellendiği görüldü.

Abstract:
Objective: Lysophosphatidic acid  is a phospholipid that plays a role in the regulation of cell survival, apoptosis, tumor progression and metastasis. Lysophosphatidic acid affects intracellularly by activating PI3K-Akt or Ras-Raf-MEK-ERK signaling pathways after binding to G protein coupled receptors. Autophagy is a catabolic process under nutrient, oxygen, growth factor deficiency or cellular damage conditions. During the literature review, no studies showing the effect of LPA on autophagy in prostate carcinoma cells were found. The aim of this study was to determine whether LPA activates mTOR through ERK activation and thus clarifying whether autophagy is inhibited in prostate cancer PC3, LNCaP, and Du145 cells.
Methods: PC3, LNCaP and Du145 cells were incubated with medium, lysophosphatidic acid, serum free medium and serum free medium+LPA. Phospho ERK1/2, total ERK1/2, phospho mTOR and total mTOR levels were measured in these cell groups. It was determined whether or not autophagy occurred in all cell groups using fluorescence microscopy.
Results: The most effective incubation time for PC3, LNCaP and Du145 cells for lysophosphatidic acid, serum-free medium and serum-free medium + LPA groups was determined to be 2 hours. Percentage of phospho ERK1/2 / total ERK1/2 and phospho-mTOR/total mTOR ratios in PC3, LNCaP and Du145 cells incubated with lysophosphatidic acid were higher than control, serum-free and serum-free media + LPA groups. The formation of autophagosomes in PC3, LNCaP and Du145 cells incubated with lysophosphatidic acid was found to be lower than that of control, serum free medium and serum free medium + LPA groups.
Conclusion: As a result of incubating the prostate cancer PC3, LNCaP and Du145 cells with lysophosphatidic acid, it was found that the activity of mTOR increased through the activation of ERK1/2. Furthermore, it was observed that autophagy formation was inhibited as a result of increased activation of ERK1 / 2 and mTOR in these cells.