Propolis için uygun taşıyıcı sentezi ve ağız sindirim sistemindeki bazı biyolojik aktivitelerin tayini
Synthesis of appropriate carrier for propolis and determination of some biological activities in the oral dental system
Yazar: HATİCE KARAKUŞ
Danışman: DOÇ. DR. ÖZGÜR CEYLAN
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu tez çalışmasında, Muğla ili Köyceğiz (KZ), Bodrum (BM), Marmaris (MS), Kavaklıdere (KE), Fethiye (FE) ve Milas (MİS) ilçelerinden toplanan propolis örneklerinin etanol ekstraktları elde edilmiş ve bu ekstraktlar sodyum aljinat/jelatin/kitosan içerikli pH'a duyarlı uygun taşıyıcılar içerisinde tutuklanmıştır. Bu taşıyıcılarla farklı pH değerleri taşıyan sindirim sistemi ortamlarında propolis salınım kinetikleri incelenmiştir. Elde edilen propolis ekstraktları ile ağız ve sindirim sistemine uyarlanan farklı pH ortamlarında salınan propolisin antimikrobiyal aktiviteleri Candida albicans ATCC 10239, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Salmonella typhimurium ATCC 14028 ve Enterococcus faecalis ATCC 19433 suşlarına karşı broth dilüsyon yöntemi ile tespit edilmiştir. Aynı test suşlarına karşı ekstraktların antibiyofilm etkileri kristal viyole yöntemi ile tespit edilmiştir. Elde edilen ekstraktların anti-adezyon etkileri Candida albicans ATCC 10239, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 ve Enterococcus faecalis ATCC 19433 suşlarına karşı belirlenmiştir. 
Çalışmaya alınan tüm propolis ekstraktlarının Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK) değerlerine göre en duyarlı suşun Bacillus subtilis ATCC 6633 olduğu belirlenmiştir. Aynı zamanda tüm propolis ekstraktlarının Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853'e karşı MİK değerleri 50 mg/mL ve üstü olarak tespit edilmiştir. 
Propolis ekstraktlarının MİK değerinde Candida albicans ATCC 10239 üzerinde biyofilm oluşumunu yüksek oranda inhibe ettikleri ortaya çıkarılmıştır. Candida albicans ATCC 10239 suşuna karşı MİK değerinde BM, MS, KE, FE ve MİS bölgesi propolis ekstraktları %100 oranında biyofilm oluşumu inhibisyonu gösterirken, bu oran KZ ekstraktı için % 77.06 olarak tespit edilmiştir. Propolis ekstraktlarının Gram pozitif bakterilerin biyofilm oluşumuna karşı daha etkili olduğu görülmüştür. MİK değerlerinde Bacillus subtilis ATCC 6633 suşuna karşı KE ekstraktı ile Staphylococcus aureus ATCC 25923 suşuna karşı KZ ve MİS ekstraktlarının % 100 oranında antibiyofilm etki gösterdikleri belirlenmiştir. 
Anti-adezyon testi sonuçlarına göre en yüksek adezyon inhibisyonu sırasıyla MİS ve KE bölgesi ekstraktları MİK ve MİK altı konsantrasyonlarında Escherichia coli ATCC 25922 ve Enterococcus faecalis ATCC 19433 suşlarına karşı  belirlenmiştir. Propolis ekstraktlarının Candida albicans ATCC 10239 suşu üzerinde anti-adezyon aktivitesinin olmadığı tespit edilmiştir. 
Propolis yüklü taşıyıcıların pH 1.3, pH 5.0, pH 6.0 tampon çözeltilerinde ve saliva (pH 6.8), yapay mide sıvısı (SGF, pH 1.3) ve yapay barsak sıvısı (SIF, pH 6.8) ortamında kararlılıklarını uzun süre korudukları ancak pH 6.8 tampon çözelti ortamında taşıyıcıların çok daha hızlı parçalandıkları ortaya çıkarılmıştır. En yüksek antimikrobiyal aktivite değerleri, KZ propolis ekstraktı içeren kitosansız taşıyıcı (KZ-5), BM propolis eksraktı içeren kitosanlı taşıyıcı (BM-1) ve KE propolis ekstraktı içeren kitosansız taşıyıcı (KE-2) ile elde edilmiştir.  Propolis içermeyen taşıyıcıların (KL-1, KL-2), propolis ekstraktlarının ve propolis yüklü taşıyıcıların antimikrobiyal aktivite sonuçları karşılaştırıldığında propolis yüklü taşıyıcıların daha yüksek etkiye sahip olduğu belirlenmiştir.
Antibiyofilm etki açısından tüm test suşlarına karşı MİS propolis ekstraktı içeren kitosansız taşıyıcının (MİS-2) en yüksek etkiye sahip olduğu tespit edilmiştir. Propolis taşıyıcılarının Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 suşu hariç diğer suşlarda farklı oranlarda olmak üzere biyofilm oluşumunu inhibe ettiği ortaya çıkarılmıştır.
Üretilen taşıyıcılar kolon kanseri gibi sindirim sistemi hastalıkları tedavisinde kullanılabilme potansiyeli olan kontrollü propolis salım taşıyıcıları olarak önerilmektedir.

Abstract:
In this thesis study, ethanol extracts of propolis samples collected from the provinces of Köyceğiz (KZ), Bodrum (BM), Marmaris (MS), Kavaklıdere (KE), Fethiye (FE) and Milas (MIS) in Muğla province were obtained and these extracts were used to produce the appropriate alginate / gelatin / chitosan loaded pH sensitive carrier. The release kinetics of the propolis extracts added to this carrier construct were determined in the digestive system media carrying different pH values. The antimicrobial activities of propolis quantities released in the different pH environments adapted to the mouth and digestive system by the obtained propolis extracts were compared with the antimicrobial activities of Candida albicans ATCC 10239, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Salmonella typhimurium ATCC 14028 and Enterococcus faecalis ATCC 19433 strains were detected by broth dilution method. The anti-biofilm effects of the extracts were determined by the crystal violet method against the same test strains. The anti-adhesion effects of extracts are described against Candida albicans ATCC 10239, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028 and Enterococcus faecalis ATCC 19433.
The results of antimicrobial activity of all of the propolis extracts revealed that the most susceptible strain was Bacillus subtilis ATCC 6633. At the same time, the Minimum Inhibition Concentration (MIC) values of all propolis extracts against Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 were determined to be 50 mg / mL and ≥50 mg / mL. 
Propolis extracts showed high inhibition of the formation of Candida albicans ATCC 10239 biofilm at the MIC value. Propolis extracts of BM, MS, KE, FE, and MIS in MIC values against Candida albicans ATCC 10239 strain showed 100% inhibition of biofilm formation, which was found to be 77.06% for KZ extract. In the MIC values, KE extract against Bacillus subtilis ATCC 6633 strain, KZ and MIS extract against Staphylococcus aureus ATCC 25923 strain were found to have 100% anti-biofilm effect.
The highest inhibition of adhesion was determined against Escherichia coli ATCC 25922 and Enterococcus faecalis ATCC 19433 at MIC and sub-MIC concentrations in MİS and KE region extracts, respectively. The anti-adhesion activity of Propolis extracts on Candida albicans ATCC 10239 strain was not detected. 
As a result, spherical shaped carriers containing propolis samples collected from different regions were produced and found to be stable in pH 1.3, pH 5.0, pH 6.0, saliva, artificial gastric fluid (SIF) and artificial intestinal fluid (SIF) medium. It was found that carriers only disintegrated in pH 6.8 buffer solution conditions and could not demonstrate this stability in this pH environment. The highest antimicrobial activity values were obtained with chitosan-free carrier (KZ-5) containing KP propolis extract, chitosan-containing carrier (BM-1) containing BM propolis extract and chitosan-free carrier (KE-2) containing KP propolis extract. When the results of antimicrobial activity of propolis extracts and propolis-loaded carriers (KL-1, KL-2) without propolis-free carriers were compared, it was determined that propolis-loaded carriers had a higher effect.
It was determined that the chitosan-free carrier (MIS-2) containing MIS-coded propolis extract had the highest effect on all test strains in terms of anti-biofilm effect. Propolis carriers have been shown to inhibit biofilm formation at different rates in other strains except Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
Produced carriers are proposed as controlled propolis release carriers with potential to be used in the treatment of digestive system diseases such as colon cancer.