Siraz (Capoeta umbla) karaciğerinden karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı metal ve pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of carbonic anhydrase from liver of  siraz (Capoeta umbla ), effects of some metals and pesticidies' on the enzyme activity
Yazar: AYŞEGÜL MİNE ÖZAVCI
Danışman: DOÇ. DR. RAMAZAN DEMİRDAĞ
Ağrı İbrahim Çeçen Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu tez kapsamında,  Siraz ( Capoetaumbla) karaciğer dokusunda Karbonik anhidraz (CA, karbonat hidroliyaz, E.C. 4.2.1.1) enzimi üzerine bazı metallerin ve pestisitlerin in vitro etkileri incelendi. Siraz (C.umbla) balığınınkarbonik anhidraz enzimi karaciğer dokusundan ilk kez tarafımızdan afinitekromatografisi (Sepharose 4B–L–tirozin–sulfanilamid) yöntemi ile saflaştırıldı. Afinitekromatografisi neticesinde enzim 2026,32 EÜ/mg spesifik aktiviteyle ve % 59,97 verimle 212,40  kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek amacıyla Sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel (SDS-PAGE) elektroforezi yapıldı ve tek bant elde edildi. 
Siraz ( C.umbla) karaciğer dokusu CA enzim için yapılan kinetik çalışmalarda; p-nitrofenil asetat substratı kullanılarak Km ve VmaxLineweaver-Burk grafiklerinden hesaplandı.K-fosfat tamponunda optimum pH 7.0, Tris-SO4  tamponunda  optimum pH  8.5, optimum iyonik şiddet 0,080 M K-fosfat, optimum sıcaklık 35ºC olarak,  stabil pH ise K-fosfat tamponunda pH 8.5 olarak bulundu. Saflaştırılan CA enzimi üzerine bazı metal iyonları ile bazı pestisitlerin etkileri incelendi ve inhibisyon gösteren Cu+2, Mn+3, Ba+2, Se-2  metal iyonları ile  aldrın, dıeldrın, endosülfan, hexachlorbenzene, alpha- HCH pestisitleri  için IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplandı .

Abstract:
In this thesis , invitroeffects of some ions and pesticides on carbonicanhydrase (CA, carbonatehydrolyase, E.C. 4.2.1.1) enzym from Siraz (Capoeta umbla)liver tissue were investigated. Carbonicanhydrase  enzyme was firstly purified from Siraz (Capoeta umbla) using by affinity gel chromatography (Sepharose-4B-L tyrosine-sulfanilamide) . As a result of affinity chromatography with a spescific activity of  721,0 EU / mg protein and 27.95 % efficiency, 120,709  fold purified. Sodiumdodecylsulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) electrophoresis was performed to check the purity of the purified enzyme and a single band was obtained.
Sirase (C.umbla) livertissue in the kinetic studies for CA enzyme; Km and Vmax were calculated from Lineweaver-Burk plotsusing p-nitrophenylacetate substrate. Optimum pH in the K-Phosphatewas 7.0, optimum pH in the TRİS- SO4  was 8.5 ,  optimum ionicstrengths was 0.080 M Tris-SO4buffer, optimum temperature was 35° C, for the enzyme and stable pH was found in the K-phosphate buffer at pH 8.5. Theeffects of some metal ions and some pesticides on purified CA enzyme were investigated and  Cu2+, Mn3+, Ba2+, Se2-  ions which showeffect of inhibition and valves of  of IC50 and Ki constantsare calculatedfor aldrın, dıeldrın, endosülfan, hexachlorbenzene, alpha- HCH pesticides.