Psoriasislilerde kanda FOXP3 geninde TSDR metilasyonu ve sitokin düzeylerinin belirlenmesi
Determination of FOXP3 TSDR methylation and cytokine levels in the blood of patients with psoriasis
Yazar: BURCU AÇIKGÖZ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. HARUN MUAYAD SAID
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Dermatoloji = Dermatology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Deri hastalıkları = Skin diseases ; Genler = Genes ; Metilasyon = Methylation ; Psoriyazis = Psoriasis ; Sitokinler = Cytokines ; T lenfositleri = T lymphocytes ; T lenfositleri-düzenleyici = T lymphocytes-regulatory

Özet:
Deride kırmızı ve sedefi renkte kabukların bulunmasıyla karakterize, immün sistem temelli kronik bir hastalık olan psoriasisin kesin tedavisinin bulunmaması nedeniyle hastaların yaşam kalitesi kötü etkilenmektedir. Efektör T hücrelerin etkinliklerini baskılamada görevli regülatör T (Treg) hücreler, yüksek düzeyde FOXP3 ekspresyonuyla karakterizedir. FOXP3 ekspresyonunun kararlılığı, CpG'ce zengin ve korunmuş intronik bölge olan TSDR metilasyonuyla ilişkilendirilmektedir. Treg hücrelerdeki metilasyonun, otoimmün hastalıkların ve psoriasisin patogenezinde rolü olduğu düşünülmektedir. Proinflamatuar özellikteki IL-17 ve IL-36 ile antiinflamatuar özellikteki IL-10 ve IL-35'in psoriasis patogeneziyle ilgili olduğu düşünülse de kesin bir sonuca varılamamıştır.
Bu çalışmada, psoriasislilerde periferik kanda FOXP3 TSDR metilasyon düzeylerinin, FOXP3 mRNA ekspresyon düzeyi ve seçilmiş sitokinlerin düzeylerinin belirlenmesi ve bulguların hastalık şiddeti ve tedavi durumuyla ilişkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Bunun için psoriasisli hasta (n=38) ve sağlıklı kontrol grubundan (n=20) alınan kan örneklerinden HRM-PCR yöntemiyle FOXP3 TSDR metilasyon analizi, real-time PCR yöntemiyle FOXP3 mRNA ekspresyon analizi ve ELISA yöntemiyle plazma interlökin düzeylerinin analizi gerçekleştirilmiştir.
Hasta ve kontrol grubunda FOXP3 TSDR metile durumda olup, iki grubun erime sıcaklık değerleri ve FOXP3 mRNA düzeyleri arasında anlamlı fark bulunmamıştır. Sitokin düzeyleri incelendiğinde IL-10 hastalarda anlamlı olarak düşük bulunmuştur. Hastalarda psoriasis alan şiddet indeksi (PAŞİ) skorlarıyla IL-35 pozitif; hastalık şiddeti düşük olan hastalarda PAŞİ skorlarıyla IL-17A pozitif, FOXP3 ekspresyonuyla IL-35 negatif; hastalık şiddeti orta-şiddetli olan hastalarda PAŞİ skorlarıyla IL-36G ve FOXP3 ekspresyonuyla IL-17A pozitif korelasyon göstermektedir.
Sonuç olarak FOXP3 TSDR metilasyonunun psoriasisteki durumunun daha hassas yöntemlerle araştırılması gerektiği, incelenen sitokinlerin hastalık şiddetine yönelik önemli göstergeler olabileceği, bunun için çalışmanın daha fazla kişi ve hastalığa yönelik çeşitli gruplandırmalarla incelenmesinin faydalı olacağı düşünülmektedir.

Abstract:
Psoriasis is a common, immune-mediated inflammatory disease which is characterized by red colored plaques with well-defined borders and silvery-white dry scales on the skin. Due to psoriasis being a life-long disease and the lack of definitive treatment of the disease, patients are affected by the poor life quality. Regulator T (Treg) cells, which are responsible for suppressing the activity of effector T cells, are characterized by high levels of FOXP3 expression. The stability of FOXP3 expression is associated with the methylation of TSDR, a CpG-rich and conserved intronic region. Methylation level of Treg cells is thought to have an impact on the pathogenesis of autoimmune diseases and psoriasis. Although proinflammatory cytokines (IL-17 and IL-36) and antiinflammatory cytokines (IL-10 and IL-35) are thought to be related to the pathogenesis of psoriasis, no definite result has been obtained.
In this study, it was aimed to determine the levels of FOXP3 TSDR methylation, FOXP3 mRNA expression and selected cytokines in the peripheral blood samples of patients with psoriasis and to investigate their relationship with disease severity and treatment status. To perform this task, blood samples taken from patients with psoriasis (n=38) and healthy control group (n=20). To determine FOXP3 TSDR methylation status, FOXP3 mRNA expression and interleukin levels; HRM-PCR, real-time PCR and ELISA methods were performed respectively.
In the patient and control groups, FOXP3 TSDR was methylated. There was no significant difference between the melting temperature values and FOXP3 mRNA levels of two groups. Among the cytokine results, only IL-10 was found to be significantly lower in patients. There was positive correlation between IL-35 levels and psoriasis area and severity index (PASI) scores in the patient group; IL-17A levels and PASI scores in patients with mild psoriasis; IL-17A and FOXP3 expression levels, IL-36G levels and PASI scores in patients with moderate-to-severe psoriasis. There was negative correlation between IL-35 and FOXP3 expression levels in patients with mild psoriasis.
In conclusion, it is suggested to analyse the FOXP3 TSDR methylation level of patients with psoriasis using more precise methods. The investigated cytokines may be important indicators of disease severity. Therefore, it would be better to use more detailed grouping and larger sample sizes in further studies.