Dietilnitrözamin ile oluşturulmuş hepatoselüler karsinom modelinde chrysin ve apigenin'in potansiyel terapötik etkileri
Potential therapeutic effects of chrysin and apigenin in hepatocellular carcinoma model induced with diethylnitrosamine
Yazar: FATMA TEDİK
Danışman: PROF. DR. NEVİN İLHAN
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apigenin = Apigenin ; Dietilnitrozamin = Diethylnitrosamine ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Krisin = Chrysin

Özet:
Hepatoselüler karsinom (HCC) kötü prognozlu, hızlı ilerleyen, yüksek ölüm oranlarına sahip bir kanserdir. HCC ile ilişkili mortalite artışı alternatif tedavilere ihtiyaç duyulmasına yol açmaktadır. Doğal ürünlerin ve bunların yapısal analoglarının, tedavi için yeni yollar sağlamaları beklenmektedir. Deneysel HCC modeli oluşturulan bu çalışmada doğal flavonoidlerden apigenin ve chrysin'in tek tek ve kombine uygulanmasının potansiyel terapötik etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. 
            Çalışmada sıçanlar 5 gruba ayrıldı (Kontrol, DEN, DEN+Apigenin, DEN+Chrysin, DEN+Kombin grupları). Kontrol grubuna ilk 2 hafta haftada tek doz 0,5 mL PBS, 2 haftalık aranın ardından DMSO oral gavaj yoluyla 4 hafta boyunca haftada 4 kez, sonraki 8 hafta süresince de haftada 3 kez 0,5 mL uygulandı. Kanser modeli oluşturulan gruplara ise ilk 2 hafta, haftada tek doz DEN 150 mg/kg (PBS içinde) intraperitoneal uygulandı. İki haftalık recovery dönemden sonra 2-AAF 4 hafta boyunca haftada 4 kez oral yolla 20 mg/kg dozunda verildi. Çalışmanın devamında 8 hafta boyunca haftada 3 kez oral gavaj yoluyla; DEN grubuna 0,5 ml DMSO, DEN+Apigenin grubuna 50 mg/kg (DMSO'da çözülerek) apigenin, DEN+Chrysin grubuna 50 mg/kg (DMSO'da çözülerek) chrysin, DEN+Kombin grubuna ise aynı dozlarda apigenin ve chrysin birlikte verildi. Uygulamalar sonunda sıçanlar dekapite edilerek alınan kan ve karaciğer doku örneklerinde, histopatolojik ve biyokimyasal değerlendirmeler yapıldı.
            Kontrollerle karşılaştırıldığında, DEN uygulanan kanser gruplarında; STAT-3, NF-κB, CIP2A, survivin, annexin-5, smoothened, sonic hedgehog, jagged1 ve notch1 düzeylerinde artış, tedavi gruplarında ise DEN grubuyla karşılaştırıldığında bu parametrelerin tamamında düşüş saptandı. Kaspaz-3 düzeyinde ise; kontrol grubuna kıyasla kanser gruplarında azalma, tedavi gruplarında ise DEN grubuna kıyasla artma tespit edildi. Bu etkiler DEN+Apigenin grubunda en anlamlıydı. Histopatolojik değerlendirmelerde karaciğer dokularında kontrol grubunda normal histolojik yapı gözlendi. DEN grubundaki sıçanlarda %62,5 oranında orta-şiddetli fibrozis olmak üzere değişen derecelerde fibrozis, yangısal lezyonlar, rejeneratif nodül oluşumu ve %87,5 oranında orta-şiddetli inflamasyon izlendi. Tedavi gruplarında ise bu lezyonlarda ve inflamasyonda belirgin azalma gözlendi. DEN+Apigenin ve DEN+Kombin gruplarında bu azalma en belirgindi.
          Sonuç olarak; apigenin, chrysin ve kombine tedavilerinin HCC'de kemoterapötik etkiye sahip oldukları, bu etkiye en fazla apigenin tedavisi ile ulaşıldığı, histopatolojik ve biyokimyasal değerlendirme sonuçları ile teyit edilmiştir.

Anahtar Kelimeler: Hepatoselüler karsinom, DEN, 2-AAF, apigenin, chrysin

Abstract:
ABSTRACT
POTENTIAL THERAPEUTIC EFFECTS OF CHRYSIN AND APIGENIN IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA MODEL INDUCED WITH DIETHYLNITROSAMINE
            Hepatocellular carcinoma (HCC) is a rapidly progressive cancer with a poor prognosis and high mortality rates. The increased mortality associated with HCC leads to the need for alternative treatments. Natural products and their structural analogs are expected to provide new avenues for therapy. In this study, in which an experimental HCC model was created, it was aimed to examine the potential therapeutic effects of the individual and combined application of natural flavonoids apigenin and chrysin.
In the study, rats were divided into 5 groups (Control, DEN, DEN+Apigenin, DEN+Chrysin, DEN+Combin groups). The control group was administered 0.5 mL PBS once a week for the first 2 weeks, after a 2-week break, DMSO was administered via oral gavage 4 times a week for 4 weeks, and 0.5 mL 3 times a week for the next 8 weeks. For the cancer model groups, DEN 150 mg/kg (in PBS) intraperitoneal once a week for the first 2 weeks. Done. After a two-week recovery period, 2-AAF was administered orally at a dose of 20 mg/kg 4 times a week for 4 weeks. In the continuation of the study, by oral gavage 3 times a week for 8 weeks; 0.5 ml DMSO to the DEN group, 50 mg/kg apigenin (dissolved in DMSO) to the DEN+Apigenin group, 50 mg/kg chrysin (dissolved in DMSO) to the DEN+Chrysin group, and apigenin and chrysin to the DEN+Combin group at the same doses  given together. At the end of the applications, rats were decapitated and histopathological and biochemical evaluations were made in blood and liver tissue samples.
             Compared with the controls, in the cancer groups treated with DEN; There was an increase in STAT-3, NF-κB, CIP2A, survivin, annexin-5, smoothened, sonic hedgehog, jagged1, and notch1 levels, and a decrease in all of these parameters in the treatment groups compared to the DEN group. At the caspase-3 level; There was a decrease in the cancer groups compared to the control group, and an increase in the treatment groups compared to the DEN group. These effects were most significant in the DEN+Apigenin group. In the histopathological evaluations, the normal histological structure was observed in the liver tissues of the control group. Rats in the DEN group had 62.5% moderate-to-severe fibrosis, varying degrees of fibrosis, inflammatory lesions, regenerative nodule formation, and 87.5% moderate-to-severe inflammation. Significant reductions in these lesions and inflammation were observed in the treatment groups. This reduction was most pronounced in the DEN+Apigenin and DEN+Combin groups.
           As a result; It has been confirmed by the results of a histopathological and biochemical evaluation that apigenin, chrysin, and their combined treatments have chemotherapeutic effects in HCC; and that this effect is mostly achieved with apigenin treatment.

Keywords: Hepatocellular carcinoma, DEN, 2-AAF, apigenin, chrysin