İnsan meme kanseri MCF7 hücre dizisinde fumagillinin antikanserojenik etkilerinin araştırılması
Investigation of fumagillin?s anticancerogenic effects on human breast cancer MCF7 cell lines
Yazar: ADNAN YARAMIŞ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MİRİŞ DİKMEN
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genetik = Genetics

Özet:
Meme kanseri, kadınlar arasında kanser nedenli ölümlerin başında yer almaktadır. Meme kanseri, semptomlarını göstermeden metastaz yapabilir. Özellikle, nonsteroidal anti-östrojen tedavide kullanılan tamoksifenin, meme kanser hastalarının yalnızca 1/3'ünde etkili olduğu açıklanmıştır. Bu gözlemler, meme kanserinin tedavisinde ve önlenmesinde yeni alternatif ajanların araştırılmasına ihtiyaç göstermektedir. Son zamanlarda, tüm dikkatler, Aspergillus fumigatustan izole edilmiş fumagillin gibi sekonder metabolitler üzerine yoğunlaşmıştır. Özellikle anjiyojenez başta olmak üzere, fumagillin in vivo tümör büyümesi ve birçok kanser metastazında güçlü inhibitör etkiye sahip olduğu bilinmektedir.Bu tez çalışmasında; fumagillinin (25, 50, 75 ve 100 µM) sitotoksik, apoptotik ve anjiyojenik etkileri, MCF7 insan meme kanseri hücreleri üzerinde araştırılmıştır. Fumagillinin MCF7 hücreleri üzerindeki sitotoksik aktiviteleri 24, 48 ve 72. saatte WST-1 (stabil tetrazolyum tuzu) yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. 24 saatlik inkübasyon sonunda da, apoptotik etkiyi belirlemek için Poli (ADP-Riboz) Polimeraz (PARP) yarıklanma ELİZA kiti ve anjiyojenik etkiyi belirlemek için de vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) ELİZA kiti kullanılmıştır.Çalışmanın sonunda, zamana ve konsantrasyona bağımlı olarak fumagillinin, MCF7 hücreleri üzerinde önemli derecede sitotoksik etkiye sahip olduğu, özellikle yüksek fumagillin konsantrasyonlarında PARP yarıklanma miktarları önemli düzeyde artarken, VEGF miktarlarında ise önemli düzeyde azalma olduğu belirlenmiştir. Sonuç olarak bu çalışmada, fumagillinin konsantrasyon ve inkübasyon süresine bağımlı olarak, MCF7 hücrelerinde önemli düzeyde sitotoksik, apoptotik ve antianjiojenik etki yaptığı belirlenmiştir. Bu nedenle fumagillinin, MCF7 hücrelerinde moleküler antikanserojenik mekanizmaları, tekli ya da kemoterapötik ajanlarla kombine çalışılarak, meme kanseri tedavisi için yeni kemoterapötik ve kemopreventif ajanların gelişimine önemli katkı sağlayacağı kanaatindeyiz.

Abstract:
Breast cancer is the most common cancer among women. Breast cancer can be metastasis without showing any symptoms. It?s shown that especially no steroidal anti-estrogen drugs can affect solely 1/3 of patients. These findings lead us alternative ways to prevent and cure to breast cancer. Recently, fumagillin, one of the secondary metabolites isolated from Aspergillus fumigatus, catches all the attention on it. Angiogenesis inhibitor, fumagillin, has strong inhibitory activities against in vivo tumor growth and metastasis in a wide variety of tumors.In this study, we investigated cytotoxic, apoptotic and antiangiogenic effects of fumagillin (25, 50, 75 and 100 µM) on MCF7 human breast adenocarcinoma cells. Cytotoxic activities of fumagillin on MCF7 cells were measured by Cell Proliferation Reagent WST-1 (stable tetrazolium salt) for 24, 48 and 72h. After 24h incubation, apoptotic and antiangiogenic effects were determined by using the Poly (ADP-Ribose) Polymerase (PARP) cleavage ELISA kit and the levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) Human ELISA Kit, respectively. We found that fumagillin had significant time- and concentration-dependent cytotoxic effects. Especially, while fumagillin concentrations were increased, PARP level was increased, VEGF level was decreased. In conclusion, a significant cytotoxic, apoptotic, and antiangiogenic effects were observed on the MCF7 human breast cancer cell lines. Therefore, the molecular mechanisms of fumagillin should be studied as a single or combination chemotherapeutic agents, we believe these studies will provide an important contribution to the development of new chemotherapeutic and chemopreventive agents for the treatment of breast cancer.