Hidrojen peroksit ile oksidatif strese uğratılmış beas 2b hücre hattında myrtus communis L. yağının antioksidan etkisinin araştırılması
Investigation of antioxidant effect of myrtus communis L. oil in beas 2b cell line where hydrogen peroxide and oxidative stress-discharged
Yazar: HAYRİYE ZEHRA ULUTAŞ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLAY GÜLBOL DURAN
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Apoptozis = Apoptosis ; Bitkisel yağlar = Plant oils ; Hidrojen peroksit = Hydrogen peroxide ; Hücre dizisi = Cell line ; Myrtus communis L. = Myrtus communis L. ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Bu çalışmada, Myrtus Communis L.(MC)esansiyel yağının,in vitro olarak hidrojen peroksit ile oksidatif strese uğratılmış insan bronşiyal epitel hücre hattında (BEAS-2B) antioksidan etkilerinin olup olmadığı, apoptotik yolakları tetikleyip tetiklemediği, tetikliyorsa hangi apoptotik yolak üzerinden düzenlendiği araştırılmıştır.
BEAS-2B hücreleri,oksidatif stres modeli oluşturmak için uygun dozunbelirlenmesine yönelik24 saat süreyle 0, 30,40, 50, 75, ve 100µM H2O2'ye maruz bırakıldı. MTT yöntemiyle hücre canlılığı analiz edildi. 40µM H2O2 ileMC yağının 1000-500-250-125-62.5-31.25-15.625 g/ml dozları 24 saat süreyle inkübe edilip MTT yöntemi ile 15,625µg/ml'nin sitotoksik olmayan doz olduğu tespit edildi. Bu dozlarda oksidatif stres durumu ve apoptotik yolakta görevli Kaspaz 3, Kaspaz 8, Kaspaz 9 ile p21 gen ekspresyonları analiz edilerek sonuçları değerlendirildi. 
Kontrol grubu olarak H2O2 maruziyeti uygulanmayan sağlıklı hücre grubuyla karşılaştırıldığında, 40µM H2O2 maruziyeti uygulanan grupta MDA düzeyinde anlamlı bir artış gözlenirken (p=0,0005), MC esansiyel yağı ile tedavi edilen gruptaki MDA düzeyi kontrol grubu ile benzer düzeyde (p>0.05) bulunmuştur. MC esansiyel yağı ile tedavi edilen grup, H2O2 maruziyetine uğratılmış ile grup ile karşılaştırıldığında MDA düzeyinde anlamlı bir azalmasaptanmıştır (p=0,2717).
24.saatte 40 µM H2O2maruziyeti uygulanan hücrelerde Kaspaz 3, Kaspaz 8 ve p21 genlerinin ekspresyon seviyelerinin sağlıklı hücre grubuna göre anlamlı bir şekilde arttığı (sırasıyla p=0.001, p=0.017 ve p=0,0003),Kaspaz 9 gen ekspresyon seviyesinin değişmediği (p=0.8) saptanmıştır. MC yağı ile tedavi edilen hücrelerde, oksidatif stres modelinin oluşturulduğu gruba göre p21, Kaspaz 8 ve Kaspaz 9 gen ekspresyon seviyelerinde bir değişiklik gözlenmezken (p>0.05),  Kaspaz 3 gen ekspresyon seviyesinde anlamlı şekilde azaldığı saptanmıştır (p=0.00007). 
Çalışmamızda, MC esansiyel yağının 15,625µg/ml dozda oksidatif stres üzerinde MDA seviyesini  güçlü şekilde azaltıcı etkisi olduğu, ayrıca aynı dozda Kaspaz 3 gen ekspresyonun azaltılması ile apoptozu durdurucu bir etki göstererek, teröpatik ajan olarak potansiyeli olduğu gösterildi.
Sonuç olarak MC yağınıngüçlü bir antioksidan etkiye sahip olduğu, oksidatif stresten kaynaklanan apoptozisin geri çevirilmesinde de etkili olduğu düşünülmektedir.

Abstract:
The study investigated whether the essential oil of Myrtus Communis L. (MC) has antioxidant effects in human bronchial epithelial cell line (BEAS-2B) that was exposed to oxidative stress in vitro by hydrogen peroxide, and whether it triggers apoptotic pathways and which apoptotic pathway is regulated.
BEAS-2B cells were exposed to 0, 30, 40, 50, 75, and 100 μM H2O2 for 24 hours to determine the appropriate dose to form an oxidative stress model. Cell viability was analyzed by MTT method. 40µM H2O2 and 1000 - 500 - 250 - 125-62.5-31.25-15.625 μg/ml doses of MC oil were incubated for 24 hours and 15.625 µg/ml was determined as non-cytotoxic by the MTT method. At these doses, oxidative stress status and caspase 3, caspase 8, caspase 9 and p21 gene expression in apoptotic pathway were analyzed and the results were evaluated.
When the control group was compared with healthy cell group without H2O2, 40µM H2O2 exposure group showed a significant increase in MDA level (p=0.0005), whereas the level of MDA in MC essential oil which were treated group was similar to the control group (p>0.05). The group which was treated with MC essential oil had a significant decrease in MDA levels compared to the group which was exposed to H2O2 (p=0.2717).
Expression levels of Caspase 3, Caspase 8 and p21 genes were significantly increased in cells which were treated with 40 µM H2O2 at 24 h (p=0.001, p=0.017 and p=0.0003, respectively). Caspase 9 gene expression level did not show any change (p=0.8). While there was no change in p21, Caspase 8 and Caspase 9 gene expression levels in MC treated cells with respect to oxidative stress model (p> 0.05),Caspase 3 gene expression level decreased significantly (p=0.00007).
In our study, MC essential oil has a potent reducing effect on MDA level on oxidative stress at dosageof 15,625 µg/ml in addition to a strong potential as a therapeutic agent by inhibiting apoptosis by decreasing Caspase 3 gene expression at the same dose.
As a result, MC oil has a strong antioxidant effect and it is thought to be effective in reversing apoptotic mechanisms that were caused by oxidative stress.