Üçlü negatif fare meme kanseri hücre hatlarında debio-1143'ün anti-tümöral etkisinin araştırılması
The investigation of the anti-tumoral effect of debi̇o-1143 on triple negative mouse breast cancer cell lines
Yazar: MERAL ALP
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BERRİN TUĞRUL
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Hücre dizisi = Cell line ; Hücre ölümü = Cell death ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Mimetik kuram = Mimetic theory ; Neoplazm hücreleri = Neoplastic cells

Özet:
Meme kanseri kadınlarda sık görülen bir kanser türüdür. Alt tiplerden biri olan üçlü negatif meme kanserinde (TNBC) östrojen reseptörü (ER), progesteron reseptörü (PR) ve insan epidermal büyüme faktörü reseptörü (HER2) ekspresyonları yoktur. Bu özelliklerinden dolayı TNBC terapötik hedeflerden yoksundur ve  tedaviye yanıt çok düşüktür. Bu tez çalışmasında üçlü negatif tipte olan 4T1 ve 4T1-HER2 (+) fare meme kanseri hücre hatlarında SMAC mimetiği olan DEBİO 1143'ün sitotoksik etkisi ve bu etkinin hangi hücre ölüm yolağı aracılığıyla gerçekleştiğinin araştırılması amaçlanmıştır.

Hücre canlılığının belirlenmesi için MTT testi, apotozisi belirlemek için flow sitometri analizi yapılmış ve otofajiyi belirlemede kullanılan MDC boyaması sonuçları floresans mikroskobi ile değerlendirilmiştir. MTT testine göre 4T1 hücre hattında 24 ve 48 saatlik DEBİO 1143 IC50 dozu sırasıyla 20,49 µM, 36,2 µM ve 4T1 HER2 (+) hücre hattında sırasıyla 19.56 µM, 22,45 µM olarak belirlenmiştir. Flow sitometri hücre canlılığı bulgularına göre, 4T1 ve 4T1 HER2 (+) 24 saat DEBİO 1143 (sırasıyla %96,7, % %98,1) uygulaması ile grupların kendi kontrol grubu (sırasıyla %99,6, %99,6) arasında önemli bir yüzdelik farkı olmadığı saptanmıştır. Her iki hücre hattında 48 saatlik ilaç uygulaması kontrolleri ile karşılaştırıldığında DEBİO 1143 IC50 dozlarının hücre ölümüne yol açtığı belirlenmiştir. 4T1 hücre hattında DEBİO 1143 %0,8 erken apoptozise, %3,6 geç apoptozise ve %43,7 apoptozis dışı hücre ölümüne sebep olmuştur. 4T1 HER2 (+) hücrelerine uygulanan DEBİO 1143 IC50 doz uygulamaları ile %3,4 erken apoptotik, %4,8 geç apoptotik ve %27,1 apoptozis dışı ölen hücre olduğu belirlenmiştir. Buna karşın kontrol grubunda %99,7 hücre canlılığı belirlenmiştir. MDC boyama sonuçlarına göre her iki hücre hattında da DEBİO 1143 uygulamasının vezikül sayısını anlamlı olarak arttırdığı belirlenmiştir. Elde edilen bulgulara göre DEBİO 1143'ün üçlü negatif fare meme kanseri hücre hatlarında, zamana bağlı olarak gerçekleşen sitotoksik etkinin apoptozis dışı hücre ölüm mekanizmaları aracılığıyla olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Breast cancer is a common type of cancer among women. In triple negative breast cancer (Triple Negative Breast Cancer-TNBC), which is one of the subtypes, the expressions of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor (HER2) are absent. Because of these properties, TNBC is lacking in therapeutic targets and the response to treatment is very low. In this thesis study, it was aimed to investigate the cytotoxic effect of DEBIO 1143, which is a SMAC mimetic, in triple negative type 4T1 and 4T1-HER2 (+) mouse breast cancer cell lines and through which cell death pathway this effect occurs. 

In the study, MTT test was used to determine cell viability, flow cytometry analysis was performed to determine apoptosis, and fluorescence microscopy was used to determine autophagy from MDC staining results. According to MTT test, DEBIO 1143 IC50 dose was found as 20.49 µM and 36.2 µM in 24 and 48 hour 4T1 cell lines, respectively. It was determined as 19.56 µM and 22.45 µM in 24 and 48 hour 4T1 HER2 (+) cell lines, respectively. Cell viability results obtained from flow cytometry analysis were 96.7% and 98.1%, respectively, in 4T1 and 4T1 HER2 (+) cell lines treated with DEBIO 11434 for 24 hours. When the results of the application groups were compared with the control group (99.6% and 99.6%, respectively), it was determined that there was no significant percentage difference between them. When the results obtained from the 48-hour drug administered group in both cell lines were compared with the control groups, it was determined that DEBIO 1143 IC50 doses caused cell death. In the 4T1 cell line, DEBIO 1143 caused 0.8% early apoptosis, 3.6% late apoptosis and 43.7% non-apoptotic cell death. It was determined that DEBIO 1143 IC50 dose applied to 4T1 HER2 (+) breast cancer cells caused 3.4% early apoptotic, 4.8% late apoptotic and 27.1% non-apoptotic cell death. On the other hand, 99.7% cell viability was determined in the control group. According to MDC staining results, it was determined that DEBIO 1143 application significantly increased the number of vesicles in both cell lines. According to the findings, DEBIO 1143 showed a time-dependent cytotoxic effect in triple negative mouse breast cancer cell lines, indicating that this effect is mediated by non-apoptosis cell death mechanisms.