Alerjik konjonktivitli hastalarda gözyaşındaki IFN-gamma, IL-4, IL-10, eozinofilik katyonik protein düzeylerinin değerlendirilmesi
Evaluation of İFN-gamma, IL-4, IL-10, eosinophilic cationic protein levels in tear in patients with allergic conjunctivitis
Yazar: BURAK TAHA KEŞKEKOĞLU
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA ATİLLA NURSOY
Bezm-i Alem Vakıf Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Eozinofil katyonik protein = Eosinophilic cationic protein ; Göz = Eye ; Gözyaşları = Tears ; Konjonktival hastalıklar = Conjunctival diseases ; Konjonktivit = Conjunctivitis ; Konjonktivit-alerjik = Conjunctivitis-allergic ; İnterferon-gamma = Interferon-gamma ; İnterlökin 10 = Interleukin 10 ; İnterlökin 4 = Interleukin 4

Özet:
Giriş: Alerjik konjonktivit (AK) pediyatrik yaş grubunda en sık görülen alerjilerden biridir ve sıklığı dünya genelinde artmaktadır. Kızarıklık, kaşıntı, kemozis, akıntı gibi semptomlara neden olarak hastaların yaşam kalitelerini önemli ölçüde etkiler. Gözyaşı, göz yüzeyini kaplayıp, gözü korumaya yardımcı olan, içeriğinde birçok hücre, protein ve molekül içeren bir sıvıdır. Göz hastalıkları ile ilgili çalışmalarda gözyaşı örnekleri erişimi ve toplaması kolay ve daha az invaziv bir yöntemle toplanması nedeniyle sık kullanılmaktadır. Yapılan çalışmalarda AK patogenezinde farklı sitokinlerin ve sitokin gruplarının önemli rol oynadığı gösterilmiştir. Gözyaşı sitokin çalışmaları son yıllarda giderek artmasına rağmen hala bir sürü yeni çalışmaya ihtiyaç vardır. Biz de çalışmamızı gözyaşı sitokinleri üzerinden planlayıp burada alerjik mekanizmalara farklı etkileri olan sitokinleri tercih ettik. Başlıca Th2 kaynaklı sitokin olarak IL-4, Th1 kaynaklı sitokin olarak IFN-Gamma, anti-inflamatuar olarak IL-10 ve eozinofil kaynaklı protein olarak ECP üzerinden alerjik inflamasyonu farklı yönlerden incelemeyi ve aynı zamanda bu sitokinlerin poliklinik takiplerinde önceden bakılmış olan serum parametreleri ile korelasyonunu değerlendirmeyi amaçladık. 
Materyal ve Metot: Çalışmamıza Nisan 2022 ve Ekim 2022 tarihleri arasında 
Bezmiâlem Çocuk Alerji Hastalıkları Polikliniklerimizde AK tanısı alan toplam 27 hasta ve kontrol grubu olarak Göz Hastalıkları Polikliniklerine gelen herhangi bir kronik hastalığı ve ek hastalığı olmayan 27 sağlıklı çocuk çalışmaya dahil edildi. 
Gözyaşı numuneleri schirmer fitre kağıtları ile schirmer 1 test protokolüne göre toplanıp -40 derecede muhafaza edildi. Hastanemiz biyokimya laboratuvarında oda sıcaklığına getirilip protein ölçümleri yapılan numunelerden yeterli protein miktarına sahip olan numuneler seçilip çalışmaya dahil edildi. Seçilen numuneler ELISA kit protokolüne uygun bir şekilde çalışıldı. Standart grafiği çizilerek her bir örneğin değeri protein miktarları ile hesaplandı. İstatistiksel analizleri yapıldı. 
Bulgular: Çalışmaya katılan vaka ve kontrol grupları arasında cinsiyet ve yaş ortalaması olarak anlamlı fark yoktu. Vaka grubunda tedavi öncesi ve tedavi sonrası sonuçları arasında sadece IFN-Gamma'da anlamlı yükseklik vardı. Diğer sitokinler arasında anlamlı bir fark yoktu. Tedavi öncesi ile kontrol grubu sonuçları arasında IL-4 ve ECP düzeylerinde anlamlı yükseklik vardı. Tedavi sonrası ile kontrol grubu sonuçları arasında IL-4, ECP, IFN-Gamma'da anlamlı fark vardı. IL-10 sonuçlarında, hiçbir grupta anlamlı fark gözlenmemiştir. IL-4, ECP, IFN-Gamma ve IL-10 düzeyleri ile Total IgE ve eozinofil yüzdesi arasında korelasyon yoktu.  
Sonuç: IL-4 ve ECP hasta grupta sağlıklı gruptan daha yüksek olması alerjik inflamasyonda Th2 kaynaklı IgE aracılı tip 1 reaksiyonu ve eozinofilik infiltrasyona bağlı gelişen inflamasyonu desteklemektedir. Tedaviye yanıtı değerlendirmede etkin parametreler olmadıklarını gözlemledik. Tedavi sonrası klinik düzelme olmasına rağmen IL-4 ve ECP düzeylerinin sağlıklı gruptan yüksek olması konjonktivada hala devam eden bir subklinik inflamasyonun olabileceğini düşündürmektedir. IFNGamma'nın alerjiyi kanıtlamada etkin bir parametre olmadığını, terapötik yanıtı değerlendirmede anlamlı bir test olduğunu gözlemledik. Çalışmada IL-10 için anlamlı bir sonuç gösterilememiştir. Sitokin düzeyleri ile serum parametreleri arasında anlamlı bir korelasyon gösterilememiştir. 
Anahtar Kelimeler: Alerjik Konjonktivit, Gözyaşı, IFN-Gamma, IL-4, IL-10, Eozinofilik Katyonik Protein

Abstract:
Introduction: Allergic conjunctivitis (AC) is one of the most common allergies in the pediatric age group and its frequency is increasing worldwide. It significantly affects the quality of life of patients by causing symptoms such as redness, itching, chemosis, and discharge. Tear is a liquid that covers the surface of the eye and helps to protect the eye, containing many cells, proteins and molecules. In studies on eye diseases, tear samples are frequently used due to their easy access and collection, and collection with a less invasive method. Studies have shown that different cytokines and cytokine groups play an important role in the pathogenesis of AC. Although tear cytokine studies have increased in recent years, many new studies are still needed. In our study, we planned on tear cytokines and preferred cytokines that have different effects on allergic mechanisms. We aimed to examine allergic inflammation from different aspects via IL-4 as a Th2-derived cytokine, IFN-Gamma as a Th1-derived cytokine, IL-10 as an anti-inflammatory and ECP as an eosinophil-derived protein, and we also aimed to evaluated the correlation between this cytokines and serum parameters to correlate these cytokines with serum parameters that were previously checked in outpatient follow-ups. 
Material and Methods: A total of 27 patients diagnosed with AC in our Bezmiâlem Pediatric Allergy Diseases Outpatient Clinic between April 2022 and October 2022, and 27 healthy children without any chronic disease or additional disease who came to the Ophthalmology Outpatient Clinic as a control group were included in the study. Tear samples were collected with Schirmer filter papers according to the Schirmer 1 test protocol and stored at -40 degrees. The samples were brought to room temperature in our hospital's biochemistry laboratory and were selected the samples with sufficient protein amount and included in the study. Selected samples were studied in accordance with the ELISA kit protocol. Calculations were made with the protein amounts of each sample by drawing the standard graph. 
Results: There was no significant difference between the case and control groups participating in the study in terms of gender and mean age. There was only a significant increase in IFN-Gamma among the pre-treatment and post-treatment results in the case group. There was no significant difference between other cytokines. There was a significant increase in IL-4 and ECP levels between the pretreatment and control group results. There was a significant difference in IL-4, ECP, IFN-Gamma between the post-treatment, and control group results. In IL-10 results, no significant difference was observed in any group. There was no correlation between IL-4, ECP, IFN-Gamma and IL-10 levels and Total IgE and percentage of eosinophils. 
Conclusion: The fact that IL-4 and ECP were higher in the patient group than in the healthy group supports Th2-mediated IgE-mediated type 1 reaction and inflammation due to eosinophilic infiltration in allergic inflammation. We observed that they were not effective parameters in evaluating response to treatment. Despite clinical improvement after treatment, the fact that IL-4 and ECP levels were higher than the healthy group suggests that there may still be ongoing subclinical inflammation in the conjunctiva. We observed that IFN-Gamma is not an effective parameter in proving allergy, but is a meaningful test in evaluating the therapeutic response. No significant results were shown for IL-10 in the study. There was no significant correlation between cytokine levels and serum parameters. 
Keywords: Allergic Conjunctivitis, Tear, IFN-Gamma, IL-4, IL-10, Eosinophilic Cationic Protein