Genisteinin kronik myeloblastik hücre dizisinde sinyal yolaklarına olan etkisinin değerlendirilmesi
Signal pathway evaluation of the effect of genistein chronic myeloblastic cell lines
Yazar: NUR ERDEN ARMUTCUOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. ERKAN YURTCU
Başkent Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Genistein = Genistein ; Genler = Genes ; Genler-ABL = Genes-ABL ; Hücre dizisi = Cell line ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Sinyal nakli = Signal transduction ; İmatinib mesilat = Imatinib mesilat

Özet:
Kronik myeloid lösemi (KML) malign klonal hematopoetik kök hücre hastalığıdır. Moleküler patogenezinde Philadelphia (Ph) kromozomu üzerindeki BCR-ABL1 füzyon geni rol oynar. Oluşan füzyon proteini tirozin kinaz kodlar ve bu tirozin kinaz AKT, ERK, STAT yolakları üzerinde etkili olup modülatörleri GAB2 ve GRB2'dir. KML tedavi protokolünde yer alan STI571 (imatinib mesilat, Gleevec™), tirozin kinaz özelliği olan bu enzimin ATP-bağlayıcı bölgesine yarışmalı inhibisyonla bağlanır. Genistein; östrojenik özeliğinin yanı sıra tirozin kinaz inhibitör aktivitesine sahip olan bitkisel bir flavonoiddir.
Bu çalışmada, insan KML hücre dizisi K562 hücrelerine STI571 uygulaması ile birlikte genistein uygulamasının hücre içi sinyal yolakları üzerine etkisinin protein seviyesinde belirlenmesi hedeflenmiştir. 
K562 hücre dizisi %5'lik CO2, %95 nem içeren 37oC'lik inkübatörde çoğaltıldı. STI571 ve genisteinin sitotoksik dozu MTT testi ile belirlendi. STI571 ve genisteinin etkileri 24 ve 48 saat periyotlarla değerlendirildi. Hücrelere STI571, genistein, STI571 ve genistein kombinasyonları birlikte uygulandı. Kontrol grubu olarak kullanılan hücre grubuna bir uygulama yapılmadı. 
Tüm gruplarda protein düzeyleri ELISA metoduyla belirlendi. Sonuçlar uygun istatiksel yöntemlerle değerlendirildi. Verilerimiz toplu halde değerlendirildiğinde STI571 ve genisteinin tek başına ya da birlikte uygulanması ile protein düzeylerinde anlamlı bir değişikliğe neden olmadığı belirlendi. 
Bu çalışmada ilk kez genisteinin STI571 ile birlikte etkileri bir protein paneli üzerinde değerlendirilmiştir. STI571'in ve genisteinin tirozin kinaz inhibitörü özellikleri bilinmektedir.  Ancak her iki ajanın protein düzeyleri üzerine etkilerini inceleyen çalışmalarda tartışmalı sonuçlar mevcuttur. Biz de STI571 ve genisteinin tek başına ve birlikte kullanımıyla bu tartışmalı konuya açıklık getirmeyi hedefledik. Sonuçlarımıza göre her iki ajanın birlikte kullanılmasının protein düzeyleri açısından anlamlı bir fark oluşturmadığını gösterdik.

Abstract:
Chronic myeloid leukemia (CML) is a malign clonal hematopoietic stem cell disease. BCR-ABL1 is a fusion gene which is located on Philadelphia (Ph) chromosome, plays a role on molecular pathogenesis of the disease. 
Induced fusion protein encodes the tyrosine kinase which has effect on AKT, ERK, STAT pathways and GAB2 and GRB2 are its modulators. STI571 (imatinib mesilat) which is used for CML treatment protocol, has tyrosine kinase inhibitor property and binds to the ATP-binding region of this enzyme with competitive inhibition. Genistein is a herbal flavonoid which has estrogenic effects besides tyrosine kinase inhibitor.
In this study, we aimed to determine the effect of STI571 and genistein application for intercellular signal transduction pathways at protein level on the human CML cell line K562 cells. K562 cells were cultured at 5% CO2, 95% humidity and 37 oC. The cytotoxic dosages of STI571 and genistein were determined with MTT test. The effects of STI571 and genistein were evaluated at 24 and 48 hours period.  The cells were treated to STI571, genistein alone and STI571 and genistein combination. Untreated cells were used as control group. 
The protein levels of all groups were determined by ELISA method. The data were evaluated statistically. There was no statistically significant alteration about the amount of protein levels with STI571 and genistein alone and in combination.
This is the first report about the effects of STI571 and genistein on a protein panel. STI571 and genistein are well known agents about their tyrosine kinase inhibitory effects. However previous reports about these chemicals on the protein levels have controversial results. We aimed to contribute with our results about STI571and genistein when used alone or in combination. As a conclusion STI571and genistein have no statistically significant effect on the protein levels.