HLA-B*5 ekpsrese eden monosit hücre dizisinde bazal ve uyarılmış koşullarda HLA-B*51 ekspresyonu ve endoplazmik retikulum stresi arasındaki ilişkinin araştırılması
The relationship between endoplasmic reticulum stress and HLA-B*51 expression in the HLA-B*5 expressing monocytic cell line Thp-1 in the basal and stimulated conditions
Yazar: FULYA COŞAN
Danışman: DOÇ. DR. DURAN ÜSTEK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics ; Romatoloji = Rheumatology
Dizin: Behçet sendromu = Behcet syndrome ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; HLA B antijenleri = HLA B antigens ; HLA B27 antijeni = HLA B27 antigen ; HLA B51 antijeni = HLA B51 antigen ; Monositler = Monocytes ; Proteinler = Proteins ; RNA = RNA ; Spondilit-ankilozan = Spondylitis-ankylosing ; Stres = Stress ; İnflamasyon = Inflammation ; İnositol = Inositol

Özet:
Amaç. Endoplazmik retikulum (ER) hücrede proteinlerin katlandığı organelidir. Proteinlerin yavaş ya da yanlış katlanmaları sonucu ER stres oluşur. Hücrede katlanmamış protein yanıtı oluşturularak ER stres engellenmeye çalışılır. ER stres ve UPR moleküllerinin çeşitli hastalıkların patogenezinde rol oynadıkları gösterilmiştir. Ankilozan spondilitten sorumlu HLA-B*27'nin UPR'ye yol açarak hastalığa neden olduğu ileri sürülmektedir. Benzer şekilde yavaş katlanma olasılığı olan bir başka molekül HLA-B*51 olup Behçet hastalığında genetik yatkınlığa neden olmaktadır, ancak ne şekilde etki gösterdiği bilinmemektedir. Bu çalışmada HLA-B*51 UPR arasındaki ilişkinin araştırılması hedeflenmiştir.Yöntem. HLA-B*51 eksprese eden Thp-1 hücre dizisinin monositlerinde ve bu hücre dizisinden elde edilen makrofajlarda LPS, ATP, IFN ve Tm uyarıları sonrasında 8. ve 24. saatlerde örneklerden mRNA ve protein izole edilmiş ve bu örneklerde ATF-6, IRE-1, PERK, XBP-1, BİP ekspresyonu tayin edilmiştir.Bulgular. Makrofajlarda değişik uyaranlarla HLA-B*51 ekspresyonu ve diğer moleküllerin ekspresyonu karşılaştırıldığında ilişki saptanmamıştır. Moleküllerin ER'den Golgi'ye sekresyonunu önlemek için kullandığımız Brefeldin-A'nın özellikle monositlerde kuvvetli bir UPR yanıtına neden olduğu gösterilmiştir. Bir uyaranla UPR uyarıldıktan sonra ikinci bir uyaran verildiğinde UPR moleküllerinin tamamıyla inhibe olduğu gösterilmiştir. IRE-1 ve XBP-1 moleküllerinin ekspresyonunun UPR uyaranları ile belirgin artmadığı gözlenmiştir.Sonuç. HLA-B*51 ekspresyonu ile UPR sinyal moleküllerinin ekspresyonu makrofajlarda paralellik göstermemektedir. UPR moleküllerinin ekspresyonu ikinci bir uyaran varlığında inhibe olmaktadır. Monositler ve makrofajlarda farklı uyaranlarla ER stres oluşturulmakta ve farklı UPR sinyal molekülleri eksprese edilmektedir. HLA-B*51-UPR ilişkisinin değerlendirilmesi için ileri araştırmalara gereksinim vardır.

Abstract:
Background. Endoplasmic reticulum (ER) is the cell organelle where proteins are folded. ER stress occurs as a result of proteins fold slowly or incorrectly. The cell tries to prevent the ER stress by creating unfolded protein response. ER stress and UPR molecules have been shown to play a role in the pathogenesis of various diseases. It is suggested that HLA-B*27, which is related with ankylosing spondylitis cause the disease by misfolded proteins and UPR. Similarly, the other slow folding HLA molecule HLA-B*51 is related to the Behçet's disease pathogenesis, but the effect of it is unknown . This study aimed to investigate the relationship between HLA-B * 51 and UPR.Methods. We have used HLA-B * 51 expressing cell line THP-1 monocytes and its is differentiated form macrophages. The cells were stimulated with LPS, ATP, IFN and Tm. Protein and mRNA samples were isolated from these samples at the 8 and 24 hours after the situmulation. ATF-6, IRE-1, PERK, XBP-1 and BIP Western blot and RT-PCR results were analysed.Results. HLA-B*51 expression in macrophages was not correlated with ATF-6, IRE-1, PERK, XBP-1 and BIP molecules. Brefeldin-A threated, which prevents the secretion of proteins from ER to Golgi, monocytes showed a strong UPR response. We have observed a strong inhibition of UPR response after co-threatment of two stimulus. IRE-1 and XBP-1 did not increase with observed stimuli. We did not observed any significantly expression levels of IRE-1 and XBP-1 after stimuli.Conclusion. There was no correlation between HLA-B * 51 expression and the expression of UPR signaling molecules in macrophages. Co-stimulants had a dramatic inhibition effect on the expression of ATF-6, IRE-1, PERK, XBP-1 and BIP molecules. Another interesting result was that Monocytes and macrophages respond to the different stimuli. To evaluate the relation between HLA-B * 51-UPR further studies are needed.