Sıçanlarda renal iskemi sonrası biyokimyasal parametreler ve demir metabolizmasından sorumlu hepsidin ve hepsidin bağımlı genlerin (BMP6, GDF-15, HJV) incelenmesi
Investigation of biochemical parameters in rats after renal ischemia and hepcidin linked genes (BMP6, GDF-15, HJV)) which are responsible for the iron metabolism
Yazar: RECEP DOKUYUCU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. TUNCER DEMİR
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Fizyoloji = Physiology ; Genetik = Genetics
Dizin: Böbrek = Kidney ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hepsidin = Hepcidin ; Kemik morfojenik proteinleri = Bone morphogenic proteins ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reseptörler-transferrin = Receptors-transferrin ; Transferrin = Transferrin ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Demir homeostazisinin düzenlemesinde merkezi bir rol üstlenen peptid yapıdaküçük bir hormon olan hepsidinin vücut savunmasında, inflamasyonda aracı olarakgörev aldığı bulunmuştur. Hepsidinin demir homeostazisi ile anemi ve anemiye sebepolan hastalıklarla olan ilişkisini belirlemek amacıyla myokardial ve karaciğeriskemi/reperfüzyon (İ/R) modelleri üzerinde çalışmalar yapılmıştır, ancak renal i/Rmodeli üzerinde bir çalışma yapılmamıştır. Çalışmamızda renal İ/R yapılarak serumbiyokimyasal belirteçlerin [tam kan sayımı, eritropoetin seviyesi, retikülosit sayımı,demir (Fe), transferrin (Tfr), solubl transferrin reseptörü (sTfR), hepsidin ve IL-6]ölçümü değerlendirilecektir. Günümüzde artış gösteren anemi, renal hastalıklar ve diğerinflamasyonla ilişkili hastalıkların tanı ve tedavisine ışık tutması amacı ile yukarıda ismigeçen parametrelerle birlikte hepsidin bağımlı genlerin (GDF-15, BMP-6, HJV/HFE2)ekspresyonları Revers Transkriptaz PCR (RT-PCR) tekniği kullanılarak gösterilmiştir.Ayrıca dokular histopatolojik olarak değerlendirilmiştir.Gereç ve Yöntem: Çalışma için toplam 20 adet Wistar Albino sıçan eşit olarak 2 grubaayrıldı. Grup I=kontrol grubu (n: 10), Grup II= İ/R grubu (60 dakika iskemi+48 saatreperfüzyon) (n: 10). 1. grup kontrol grubu olarak planlandı. 2. grupta deneysel olaraksol böbrekte İ/R oluşturulması planlandı. mRNA çalışmasında İ/R yapılacak olanböbreğin cevaplarının gerçek olabilmesi ve genetik farklılıkların göz ardı edilebilmesiiçin İ/R grubundaki sıçanların referans böbreği olarak iskemi yapılmayan sağ böbreğikullanıldı. Daha sonra 2. gruptaki tüm sıçanların böbreğinden sol renal arterin (İ/Roluşturulan kısım) İ/R alanının çıkarılması planlandı. Aynı şekilde gruplardaki her birsıçanın sağ renal arter kısmından da normal dokunun alınması planlandı.Bulgular-Sonuç: Böbrek fonksiyon bozukluğu ve İ/R sonucu biyokimyasalparametlerde yapılan çalışmaların sonuçlarına göre Hgb (p=0.593), RBC (p=0.842),demir (Fe) (p=0.364), Ret % (p=0.402), Tfr (p=0.849), sTfR (p=0.895), Epo (p=0.283),IL-6 (p=0.111) ve hepsidin (p=0.149) değerlerinde yapılan istatistikî analize göreanlamlılık görülmemiştir. Trombosit (p=0.043) değerinde istatistiki olarak anlamlılıkgörülmüştür (p<0,05). Yapılan gen seviyesi sonuçlarına göre İ/R grubunda GDF-15(p=0,126), BMP-6 (p=0,420) ve Hjv/Hfe2 (p=0,673) genlerinin ekspresyonlarındaistatistiksel olarak anlamlılık görülmedi. Histopatolojik sonuçlarımızda, hematoksileneosin (HE) ile yapılan genel doku değerlendirilmesinde ise kontrol grubu (Grup I) ileİ/R grubunun (Grup II) iskemik ve non-iskemik böbrek skorlaması karşılaştırıldığındaİ/R grubundaki böbrek dokusunda hipoksik ? iskemik belirtiler anlamlı bulundu. Ayrıcaİ/R grubunda iskemi yapılan böbrek ile iskemi yapılmayan böbrek dokusu arasında dahipoksik ? iskemik belirtiler anlamlı bulundu.

Abstract:
Purpose: As well as its central role in regulation of iron homeostasis hepsidin alsoplays significant role in the body?s defense mechanism and inflammation. In order todetermine association of hepsidin with iron homeostasis, anemia and diseases thatcauses anemia was investigated on myocardial and liver ischemia/Reperfusion (I/R)models, but there has not been a study on the renal I/R model. In this study, the level ofserum biochemical markers [complete blood count, erythropoietin levels, reticulocytecount, iron (Fe), transferrin (TfR), solubl transferrin receptor (sTfR), hepcidin and IL-6]was evaluated after renal I/R. Also, in order to shed light on the diagnosis and treatmentof anemia, renal disease, and the other inflammatory disorders the expression levels ofhepsidin linked genes (GDF-15, BMP-6, HJV/HFE2) was investigated by using RTPCRtechnique. In addition, the histopatology of tissues were evaluated.Materials & Methods: A total of 20 Wistar albino rats were equally divided into 2groups. Group I: control group (n = 10), Group II = I/R group (60 minutes ischemia+ 48 hours of reperfusion) (n = 10). First group was control group and noting was doneand second group was experimental group therefore, in the left kidneys of these rats I/Rwas performed. For the expression studies right kidney of the experimental group wasused as a reference. Then, in the second group I/R generated parts of left renal arterieswas removed. Likewise right renal arteries of the all rats were removed. Furthermore,normal tissues of I/R generated kidneys were taken as a control.Findings-Results: As a result of renal dysfunction and I/R no significant associationwas found in terms of biochemical parameters hgb (p=0.593), RBC (p=0.842), iron (Fe)(p=0.364), Ret % (p=0.402), Tfr (p=0.849), sTfR (p=0.895), Epo (p=0.283), IL-6(p=0.111) and hepcidin (p=0.149). However, platelet (p=0.043) values were statisticallysignificant (p<0,05). Furthermore, expression levels of GDF-15 (p=0,126), BMP-6(p=0,420) and HJV/HFE2 (p=0,673) genes were not statistically significant. In addition,the evaluation of the general tissue histopathology was performed by usinghematoxylineosin (HE) and in terms of hypoxic-ischemic signs histopathology resultsshowed significant associations between control group and I/R group of ischemic andnon-ischemic kidney scoring. In addition, hypoxic-ischemic signs were also significantbetween I/R group of kidneys without ischemia and I/R group of kidneys with ischemia.