Ratlarda otolog intraperitoneal over transplantasyonunda benfotiamin ve n-asetilsistein kullanımı
The effect of benfotiamine and n-acetylcysteine in autologous intraperiyoneal transplantation of the ovary in rats
Yazar: SEVİM TUNCER CAN
Danışman: DOÇ. DR. REMZİ ATILGAN
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Benfotiamin = Bbenfothiamine ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; Over = Ovary ; Over hastalıkları = Ovarian diseases ; Sıçanlar = Rats ; Transplantasyon-otolog = Transplantation-autologous ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Over transplantasyonunda çözülmemiş en önemli konulardan birisi iskemi re-perfüzyon hasarının önlenmesidir.Bu nedenle, serbest radikal üretimini azaltmak üzere antioksidanlar uygulanması over naklinden sonra iskemi ve reperfüzyon hasarının sonuçlarına karşı önemli bir ilaç hedefi olarak kabul edilebilir.Bu çalışmada over transplantasyonunda N-asetilsistein ve benfotiamin kullanılarak transplantasyon sonrası oluşacak hasara karşı benfotiamin ve N-asetilsistein etkileri araştırıldı.
N-asetil sistein doğal bir aminoasit olan L- Sisteinin N-asetillenmiş türüdür. Asetil sistein mukolitik bir ajan ve sistein proglutatyan yapısında olan serbest radikal tutucu endojen bir antioksidandır. Oksidatif streste glutatyon havuzunu bir glutatyan prekürsörü olarak besler, glutatyon redoks siklusu, endoteli korumada iyi bir defans sistemi sağlar. Benfotiamin Vitamin B1'in yağda çözünen halidir. Benfotiaminin reaktif oksijen türleri üzerinde baskılayıcı olduğu bazı çalışmalarda gösterilmiştir.
 Çalışmada, 28 adet 12-14 haftalık Wistar albino cinsi dişi sıçanlar kullanıldı. Deney hayvanları 4 gruba ayrıldı. . Grup I: Kontrol grubu olarak kullanıldı Grup II: Transplantasyon grubu olarak kullanıldı Grup III: Transplantasyon grubuna transplantasyonda 1 gün once ve sonrasında 3 hafta boyunca 75 mg/kg/gün benfotiamin oral gavaj yoluyla uygulandı Grup IV: Transplantasyon grubuna transplantasyondan 1 gün once ve sonrasında 7 gün boyunca 150 mg/kg/gün N-asetilsistein intraperitoneal uygulandı.
Deney süresi sonunda tüm gruplardaki sıçanlar anestezi altında dekapite edildi. Dekapitasyonun ardından sıçanların over dokuları hızla çıkarılıp uygun fiksatiflerle tespit edilip ardından histolojik takip serilerinden geçirilip parafin bloklara gömüldü. Parafin bloklardan alınan doku kesitlerine Masson-Trikrom boyası yapılarak gruplar arası histopatolojik farklılıklar incelendi. Ayrıca bu kesitlere TUNEL tekniği uygulanarak apoptotik hücreler tespit edildi. Ayrıca dokularda Toplam Antioksidan Durum (TAS)-Toplam Oksidan Durum (TOS) aktivitesine bakılacağından dokular çalışma gününe kadar -80 °C'de saklandı. 
Over dokusunda kontrol grubu ile kıyaslandığında transplantasyon yapılan grupta apopitotik hücreler, fibrozis, oksidatif hasar, inflamatuar hücre düzeyinde belirgin artış izlendi, transplantasyon yapılan grupla kıyaslandığında ise benfotiamin ve NAC verilen gruplarda bu değişikliklerde anlamlı bir azalma izlendi. Over rezervi açısından kontrol grubu ile kıyaslandığında tüm gruplarda primordial folikül sayısı azalmıştı tedavi grupları arasında anlamlı fark yoktu, sekonder, primer folikül, corpus luteum açısından gruplar arasında fark yoktu. Sonuç olarak; Transplantasyon, over dokusunda iskemi-reperfüzyona bağlı oksidatif hasar sonucu apopitozis, nekroz, fibrozisde artışa neden oldu. Benfotiamin ve NAC bu hasarı azaltmada eşit derecede ve etkili bulundu.
Anahtar kelimeler: Over transplantasyonu, N-asetilsistein, Benfotiamin

Abstract:
One of the most important unresolved issues in the ovary transplantation is prevention of ischemia reperfusion injury. Therefore, application of antioxidants to reduce free radical generation after ovarian transplant can be regarded as an important drug target against the consequences of ischemia and reperfusion injury. In this study, using N-acetylcysteine and benfotiamine over tranplantation effect of N-acetylcysteine and benfotiamine were investigated against injury induced by transplantation.
N-acetylcysteine, is a N-acetylated species of natural amino acid L-cysteine. Acetylcysteine is a mucolytic agent and endogenous antioxidants, free radical scavengers the structure of sisteinproglutaty. As a glutathione precursor feeds glutathione pool during oxidative stress, glutathione redox cycle, provides a good defense system in the endothelium protection. Benfotiamine is a fat-soluble form of Vitamin B1. Benfotiamine as inhibitor on reactive oxygen species it has been shown in some studies.
In the study, total number of 28 Wistar Albino 12-14 week old female rats used and were divided into 4 groups. Group I was used as the control group. Group II was used as the transplant group. Group III 1 day before and after the transplantation for 3 weeks was administered by oral gavage 75 mg / kg / day benfotiamine. Grup IV 1 day before and after the transplantation for 7 days 150 mg/kg/day N-acetylcysteine was administered intraperitoneally.
The all group rats were decapitated under anesthesia at the end of the experimental period. After decapitation ovarian tissues of the rats removed quickly, then detected by appropriate fixative passed through the histologic follow-up series and embedded in parafin wax. The tissue sections from paraffin blocks Masson trichrome stain by applying analyzed histopathological differences between the groups. In addion to apoptotic cells were detected by applying the TUNEL technique in this section. Also with the aim look at the total antioxidant status (TAS) -Total oxidant status (TOS) activities in tissues, tissues were stored at -80 ° C until the working day. 
 When compared with the control group in the transplant group was observed apoptotic cells in ovarian tissue, fibrosis, oxidative damage, a significant increase in levels of inflammatory cells. When benfotiamine and NAC-treated group compared with transplantation group, observed by a significant decrease at these changings. In terms of ovarian reserve in all groups compared with the control group, the number of primordial follicles was reduced but no significant difference between treatment groups. There was no difference between groups in terms secondary and primary follicles, corpus luteum.
As a result; the ovarian transplantation caused increased apoptosis, necrosis, fibrosis as a result of oxidative damage caused by ischemia-reperfusion. Benfotiamine and NAC applications were found equally and effectively reduce this damage.
 
Keywords: N-acetylcysteine, Benfothiamin, Ovarian transplantation