Ratlarda oluşturulan deneysel endometriozis modelinde anti-vegf bevacizumab'ın profilaktik ve tedavi edicietkisinin histopatolojik ve immünohistokimyasal olarak gösterilmesi
The histopatological and immunohistochemical presentation of  prophylactic and treatment effect of anti-vegf bevacizumab in experimental endometriosis rat model
Yazar: HATİCE IŞIK
Danışman: PROF. DR. ALİ SERTAÇ BATIOĞLU
Sağlık Bakanlığı / Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Giriş ve Amaç  
Bevacizumab, insan vasküler endotelyal büyüme faktörüne (VEGF) spesifik olarak bağlanan ve biyolojik aktivitesini nötralize eden bir rekombinant hümanize monoklonal antikordur. Bu çalışmanın amacı ratlarda eksperimental olarak endometriozis oluşturmak ve oluşturulan endometriozis implantı üzerine bevacizumabın (VEGF inhibitörü) profilaktik ve tedavi edici  etkisini histopatolojik ve immün histokimyasal olarak araştırmaktır.
Gereç ve Yöntem
Bu randomize, plasebo kontrollü, rat eksperimental araştırma Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi Deney Hayvanları Labartuarında gerçekleştirilmiştir. Araştırma için 36 adet Wistar Albino türü dişi rat kullanılmıştır. Otolog endometrium dokunun sağ pelvik yan duvara implante edilmesiyle ratlarda endometriosis oluşturuldu. Ratlar random olarak üç gruba ayrıldı. A grubuna ilk operasyon sırasında 0.05ml(1.25 mg) bevasizumab (Altuzan®) intraperitoneal verildi.4 hafta iyileşme periodundan sonra endometriozis odakları ikinci laparatomiyle değerlendirildi.2 rat A grubundan 5 rat kontrol grubundan kayıp oldu. Bütün gruplarda endometriozis odaklarının hacimleri ölçüldü. A ve kontrol grubu endometriotik odaklar çevre dokuyla birlikte histolojik ve immünohistokimyasal inceleme için çıkarılarak patolojiye gönderildi. B grubu ratlara da yine 0.05 ml(1.25mg) bevasizumab intraperitoneal verilerek 4 hafta sonra değerlendirildi.B grubunda oluşan endometriozis odakların hacimleri  ölçüldü,odaklar çıkarılarak patolojiye gönderildi. Histopatolojik skor epitelyal tabakanın korunması esasına göre değerlendirildi. Ayrıca endometriozis odakları çevresindeki fibrozis dokusu Masson's trikrom boyama ile değerlendirildi. Fibrozis derecesine göre skorlama yapıldı. Her üç grupta ektopik endometrial dokuda VEGFR(Vasküler Endothelial Growth Faktör) için ve Kİ-67 için immünhistokimyasal inceleme yapıldı. Ektopik dokuda reseptör için immün boyanmanın derecesine göre skorlama yapıldı.
Bulgular	
Mann Whitney U testi ve Kruskal-Wallis testiyle veriler değerlendirildi. Profilaktik amaçlı tedavi alan grup ile kontrol grubu lezyon hacimleri karşılaştırıldığında kontrol grubuna göre lezyon hacimlerinin profilaktik tedavi alan grupta anlamlı olarak düşük olduğu saptandı(p<0.05). Ayrıca endometriotik odak oluştuktan sonra tedavi alan B grubu lezyon hacimleri de tedavi öncesine göre belirgin azaldı(p<0.05).Bevacizumab endometrial lezyonların gerilemesine ve atrofisine neden oldu.Histolojik, trikrom ve immünohistokimyasal skorlarda gruplar arasında  istatistiksel anlamlı fark mevcuttu(p<0.05).Tedavi sonrası profilaktik tedavi alan A grubunda  kontrol grubuna göre; sonradan tedavi alan B grubunda da tedavi öncesine  ve kontrol grubuna göre skorlar  belirgin olarak azalmıştı(p<0.05).
Sonuç
 Bevacizumab, endometriotik odakların hacmini küçültüyor, histopatolojik özellikleri geriletiyor. Endometriotik odakların gerileyip atrofiye uğramasına neden oluyor.Bu da endometriozis patogenezinde VEGF'in önemli rolünü ve anti-VEGF olan bevacizumab'ın endometriozis profilaksi ve tedavisinde yararlı olduğunu gösteriyor.
Anahtar kelimeler: Endometriozis, anti-VEGF, bevacizumab, rat model

Abstract:
Objective
   Bevacizumab is a recombinant humanized monoclonal antibody which binds specifically to vascular endothelial growth factor (VEGF) and neutralizes its biological activity. The aim of this study is to investigate the efficacy of anti-VEGF therapy(bevacizumab, Altuzan®) on profilactic and terapeutic treatmnet of endometriotic foci in the rat endometriosis model by using histopatologic and immunohistochemical assays.
Study Design
This randomized, placebo- controlled, rat experimental study was executed in the Expremental Surgery Labaratory at Ankara Education and Researc Hospital. The study was performed on 36 Wistar female rats. Experimental endometriosis was constituted with implantation of  otologus endometrial tissue to the right side of the pelvic wall. Rats were divided randomly into 3 groups. 0.05ml(1.25 mg)bevacizumab(Altuzan®) by intraperitoneal route was given to Group A in the first operation. After four weeks, the implants were examined by second laparatomy, two rats from Group A and five rats from Group C were died. The volumes and properties of the implants of each group were evaluated. Rats in Group A and Group C were killed and the endometriotic foci with surrounding normal tissue were extracted for the histopatologic and immunohistochemical evaluation and sent pathology.0.05ml(1.25 mg)bevacizumab(Altuzan®) by intraperitoneal route was given also to Group B and after 4 weeks third laparatomy was done to Group B.Again rats were killed and implants were examined, volumes are evaluated and endometriotic foci were extracted for histopatologic and immunohistochemical evaluation. A scoring system was used to evaluate preservation of epithelia. Also the fibrosis around the endometric foci was evaluated by Masson's Trichrome paint.A scoring system was used to evaluate the degree of fibrosis.In adition, endometrial explants were evaluated immunohistochemically for VEGFR and Ki-67. A scoring system was used to evaluate expression grade of  VEGRFR  and Ki-67 in endometriotic lesions.
Results
Mann Whitney U testi ve Kruskal-Wallis tests were used for statistical evaluation of results. verile. The volumes of lesions were smaller in profilactic treated group than the ones in the control group and this was statistically significant (p<0.05). Also the volumes of endometriotic foci in Group B, in which rats were treated after the endometirotic foci exists, were smaller than the ones in the control group and this was statistically significant also(p<0.05).Bevacizumab causes regression and atrophy of the endometriotic lesions. There were significiant differences among the groups in histopathological, trichrome and immunohistochemical parameters (p< 0.05). After treatment, the scores in profilactic treated Group A were less than the ones in control and also the scores in Group B were less than the ones in the same group before treatment and also the ones in control. 
Conclusion
 Bevacizumab treatment was seen to have effect on the volumes and histopathological structure of endometriotic implants. Bevacizumab causes regression and atrophy of the endometriotic lesions. This also shows that vascular endothelial growth factor has an important role in the pathogenesis of endometriosis and anti-VEGF bevacizumab is beneficial in the profilaxy and treatment of endometriosis.  
Key Words: Endometriosis, anti-VEGF, bevacizumab, rat model.