Alfa humulenin SH-SY5Y hücre hattı üzerinde oluşturulmuş in vitro ko-kültür modelinde antiproliferatif antiapoptotik ve nöroprotektif etkilerinin araştırılması
Investigation of antiproliferative antiapoptotic and neuroprotective effects of alpha humulene in vitro co-culture model on SH-SY5Y cell line
Yazar: PERİHAN EZGİ TUNCER
Danışman: DOÇ. DR. ZERRİN CANTÜRK
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Alfa humulen = Alpha humulene ; Humulus lupulus L. = Humulus lupulus L. ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre kültürü = Cell culture ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Nöroproteksiyon = Neuroprotection ; Şerbetçiotu = Hops

Özet:
Latince ismi ile Humulus Lupulus'un şetbetçiotu bitkisinin majör etken maddesi olan Alfa Humulen, üç eşlenmemiş C═C çift bağ içeren üç izopren biriminden oluşan monosiklik bir seskiterpendir. Şerbetçiotundan başka kenevir, adaçayı, fesleğen ve ginseng bitkilerinde de yaygın olarak bulunur. Aynı zamanda Alfa humulen, Alfa karyofilen adıyla da bilinmektedir. Alfa humulenin; anti-inflamatuar, antimikrobiyal, antioksidan, antikanserojen ve lokal anestezik gibi birçok etkisi vardır. Bu tezde, kemik iliği kökenli insan nöroblastoma hücre hattı olan SH-SY5Y hücre hattında Alfa humulenin sitotoksik etkilerinin konsantrasyon aralığı belirlenebilmek için MTT testi kullanılmıştır. Buna ek olarak, H2O2 tarafından indüklenen nörotoksisite modelinde Alfa humulenin nöroprotektif etkileri, gerçek zamanlı hücre analiz sistemi (xCELLigence RTCA-DP) ile farklılaşmamış SH-SY5Y üzerinde IC50 değeri 221 μg/mL ve farklılaşmış SH-SY5Y üzerinde IC50 değeri > 400 μg/mL'dir. AO/PI boyama yöntemi ile apoptotik etki seviyeleri belirlenmiştir. SH-SY5Y hücre hattı ve LPS ile stimüle edilmiş THP-1 hücre hattı birlikte inkübe edilerek in vitro ko-kültür modeli oluşturulmuştur. Oluşturulan in vitro ko-kültür modelinde LPS stimülasyonu kullanılarak Alfa humulenin immünolojik etkilerini belirlemek amacı ile Cytation 3 Multi-Mode Reader'de floresans ölçümleri alınmış ve birden çok bağımsız görüntü çekilmiştir. Apoptotik etkide Alfa humulen H2O2'nin neden olduğu hücre hasarını azalttığı tespit edilmiştir.

Abstract:
Alpha humulene, the major active ingredient of the Humulus lupulus hops plant with its Latin name, is a monocyclic sesquiterpene consisting of three isoprene units containing three unpaired C═C double bonds. Apart from hops, cannabis is commonly found in sage, basil and ginseng plants. Alpha humulene is also known as alpha-Caryophyllene. Alpha humulene; it has many effects such as anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant, anticancer and local anesthetic. In this thesis, the MTT test was used to determine the concentration range of the cytotoxic effects of alpha humulene in the SH-SY5Y cell line, a bone marrow derived human neuroblastoma cell line. In addition, the neuroprotective effects of Alpha humulene in the model of neurotoxicity induced by H2O2, the IC50 value of Alpha humulene on undifferentiated and differentiated SH-SH5Y was determined 221 μg / mL and > 400 μg / mL cells using the Real-time cell analysis system (xCELLigence RTCA-DP). Apoptotic effect levels were determined by AO / PI staining method. The SH-SY5Y cell line and the LPS stimulated THP-1 cell line were incubated together to establish an in vitro co-culture model. In the in vitro co-culture model established, fluorescence measurements were taken in Cytation 3 Multi-Mode Reader to determine the immunological effects of Alpha humulene using LPS stimulation and multiple independent images were taken. The apoptotic effect caused by cellular damage caused by H2O2 alpha humulene was reduced.