Aşılama stratejilerinde bir gen aktarım vektörü olarak bohv-4 movar suşu ile bac-bohv-4 elde edilmesi
Bac-bohv-4 obtaining with bohv-4 movar strain as a viral gene delivery vector for vaccination strategies
Yazar: TOURAJ ALIGHOLIPOUR FARZANI
Danışman: PROF. DR. SEVAL BİLGE DAĞALP
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Gen aktarımı = Gene transfer ; Genler = Genes ; Hastalık vektörleri = Disease vectors ; Herpesvirüsler = Herpesviridae ; Kromozomlar = Chromosomes ; Virüsler = Viruses

Özet:
BoHV-4, herpesviridae ailesinin gammaherpesvirinea alt ailesinde ve rhadinovirus cinsinde yer alan bir etkendir. Virus solunum sistemi enfeksiyonunda, vulvovaginitis, endometritis, mastitis, abort, metritis, dermatitis olgularında tespit edilmiştir. Ayrıca sağlıklı görünümlü hayvanların çeşitli materyallerinden de etken izole edilmiştir.Son yıllarda, BoHV-4 farklı patojenlere ait immundominant antijenlerin aktarımında ve kanser terapisinde yeni bir viral vektör olarak sunulmaktadır. BoHV-4'ün biyolojik ve moleküler özellikleri, onu diğer viral vektörlerden daha avantajlı kılmaktadır.Bu çalışmada, BoHV-4'ün Movar suşu kullanılarak bir viral vektör geliştirilmesi planlanmıştır. Rekombinant virus oluşturmak için, virusun ORF2 ve ORF3 gen bölgelerinin arası BAC-EGFP-Neo kasetin klonlanması için tercih edilmiştir.Hücrede gerçekleştirilen homolog rekombinasyondan sonra, rekombinant viruslar yeşil floresan protein ekspresyonuna bağlı olarak bir antibiyotik olan genetisin direncine göre seçilmiştir.Hirt yöntemi kullanılarak elde edilen rekombinant sirküler viruslar DH10B bakterisine transforme edilmiştir. Son basamakta, bakteriden ekstraksiyonu yapılan BoHV-4-BAC-EGFP, MDBK hücresine transfekte edilmiş ve rekombinant virus hazırlanarak stabilitesi DH10B bakterisinde doğrulanmıştır. 	Elde edilen BoHV-4-BAC viral vektörün, sahip olduğu özelliklere dayanarak, bu bağlamda ileride yapılması planlanan ülkemizde önemli ekonomik kayıpların nedeni ve/veya zoonoz karakterde etkenlere yönelik aşılamalarda ve başta glioma olmak üzere insan ve hayvanlarda birçok kanserin terapisinde kullanımının yararlı olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
BoHV-4 is a member of herpesviridae family, Gammaherpesvirinae subfamily and rhadinovirus genus. The virus has been detected from respiratory infections, vulvovaginitis, endometritis, mastitis, abortion, metritis and dermatitis. In addition, this virus has been isolated from different samples of the healthy animals.During the last years, BoHV-4 has been used as a new viral vector in the immunodominant antigen transfer and cancer therapy. Due to biological and molecular characteristics, BoHV-4 has more advantages in comparison to other viral vectors.In this study, we have planned to create a viral vector based on BoHV-4 Movar strain. To create recombinant virus, ORF2 and ORF3 genes have been selected to insert BAC-EGFP-Neo cassette.After homologous recombination in the cells, recombinant viruses have been selected based on the green fluorescence protein expression and geneticin antibiotic resistance.By performing Hirt method, circular recombinant viruses transformed into DH10B bacteria. In the last step, extraction of BoHV-4-BAC-EGFP from bacteria has been done and transfected into MDBK cells to verify the stability of recombinant virus in the bacteria.By considering the characteristics of this viral vector, we have planned to use BoHV-4-BAC vector in vaccine production against diseases that cause economic loses and/or are zoonotic and to use in some cancer therapy especially glioma in humans and animals.