Postmortem interval tayininde hücre dışı serbest DNA ve HMGB-1 'in rolü
Putative role of cell free dna and HMGB-1 in postmortem interval
Yazar: EMRAH EMİRAL
Danışman: PROF. DR. İSMAİL HAMİT HANCI ; PROF. DR. NACİYE LALE TUFAN
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Adli Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: DNA = DNA ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; HMGB 1 = HMGB 1 ; Postmortem değişmeler = Postmortem changes ; Ölüm = Death

Özet:
Postmortem interval (PMI) tayini,  adli ölümlerde ceza ve hukuk davalarında oldukça önemlidir. Hukuk davalarında ölüm zamanının tespiti özellikle mirasın bölüştürülmesinde gereklidir. Günümüzde pratik uygulamalarda kullanılan birçok yöntem subjektiftir. Kesin sonuç veren bir yöntem bulunmamaktadır. Moleküler çalışmaların adli bilimlerde kullanımının artmasıyla özellikle Adli Genetik alanında önemli çalışmalar yapılmıştır. Çalışmada, amacımız özellikle hücre nekrozuyla serumda artış gösteren hücre dışı serbest DNA ve serum HMGB-1 protein konsantrasyonlarının postmortem erken dönem değişikliklerinden yararlanarak PMI tayini yapabilmektir.  Çalışma, ağırlıkları 230- 260 gr arasında değişen 96 adet wistar ratlar üzerinde gerçekleştirilmiştir. Ratlar, anestezi ve servikal dislokasyon sonrası +4°C ve +24°C olmak üzere iki farklı sıcaklıkta beklemeye bırakıldı. 0., 3., 6., 9., 12., 24., 48. ve 72. saatlerde otopsi ile kan örnekleri toplandı. 5000 rpm'de 5 dakika santrifüj edilerek serum ayrıldı. Serum örneklerinden HMGB-1 ELİSA kiti kullanılarak HMGB-1 konsantrasyon ölçümü ve SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain nükleik asit boyama protokolü sonrası hücre dışı serbest DNA miktarı için luminometre ile optik yoğunluk ölçüldü. Çalışmada elde edilen sonuçlar standart örneklerden elde edilen denklemler ile konsantrasyona çevrildi. +4°C'de serum hücre dışı serbest DNA miktarının postmortem süre uzadıkça arttığı saptandı (r =0.751 p<0.001). Serum HMGB-1 konsantrasyonunun postmortem zaman arttıkça yükseldiği bulundu (r =0.698 p<0.001).  +24°C'de ise postmortem geçen sürenin, serum hücre dışı DNA miktarıyla negatif yönde ilişkili olduğu (r = -0.213 p=0.15), serum HMGB-1 konsantrasyonuyla ise  pozitif yönde zayıf bir ilişkisi olduğu saptandı (r=0.313 p=0.030). Sonuç olarak; +4°C'de serum hücre dışı serbest DNA konsantrasyonu ve serum HMGB-1 konsantrasyonunun PMI tayininde kullanılabileği bulundu.

Abstract:
Postmortem interval (PMI) determination is essential in forensic deaths in criminal and judicial cases. In judicial cases, determination of the time of death is required especially for the allocation of heritage. The various methods have been used in present practice subjectively. There is no way that given the certain results. With the increasing use of molecular studies in forensic science, significant efforts were mentioned particularly in the field of Forensic Genetics. In this study, our objective was determining the PMI using the postmortem early concentration changes of extracellular DNA and serum HMGB-1 protein that raising especially after the cell necrosis. The study was conducted on 96 Wistar rats whose weights ranging between 230- 260 g. The rats were allowed to stand at 4°C and +24°C temperature after anesthesia and cervical dislocation. Post-mortem blood samples were collected at the hours of 0, 3, 6, 9, 12, 24, 48 and 72. Five minutes-centrifugation separated the serum at 5000 rpm. HMGB-1 concentration was measured using HMGB1-ELISA kit and the amount of extracellular free DNA measured with the luminometer optical density after the nucleic acid staining protocol of SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain. The results obtained in this study were converted to concentration with equations that obtained from standard samples.  The amount of extracellular free DNA increased with the postmortem period at +4°C (r =0.751 p<0.001).  The serum concentration of HMGB-1 increased with the postmortem period (r =0.698 p<0.001).  The negative correlation was found between postmortem period and the amount of extracellular free DNA at +24°C (r = -0.213 p=0.15), and the weak positive correlation was observed between the serum concentration of HMGB-1 and postmortem period at the same temperature (r=0.313 p=0.030). In conclusion, it was found that the amount of extracellular free DNA and the concentration of serum HMGB-1 can be used for determination of PMI at +4°C.