Klinik örneklerden izole edilen Candida albicans türlerinde virulans faktörlerinin fenotipik ve genotipik olarak araştırılması
Investigation of virulence factors of Candida albicans species isolated from clinical specimens phenotypically and genotypically
Yazar: DENİZ TURAN
Danışman: PROF. DR. NURİ KİRAZ
İstanbul Üniversitesi / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Biyofilmler = Biofilms ; Candida albicans = Candida albicans ; Enzimler = Enzymes ; Fenotip = Phenotype ; Genotip = Genotype ; Kandida = Candida ; Virülans = Virulence

Özet:
Doğada geniş bir yayılım gösteren, insan ve hayvanların normal vücut florasında kommensal olarak bulunan Candida türleri son yıllarda artan tanı ve tedavi olanaklarına rağmen, altta yatan kolaylaştırıcı faktörlerin varlığında önemli bir morbidite ve mortalite sebebi olabilen fırsatçı patojenler haline gelmişlerdir.
Candida enfeksiyonlarının patogenezini açıklamak ve Candida türlerine  karşı yeni ilaç geliştirmek amacı ile yapılan çalışmalarda, konağa ait savunma sistemlerinin yanı sıra  Candida türlerine ait virülans faktörlerinin de önemi belirtilmektedir. 
Bu çalışmada çeşitli klinik örneklerden izole edilen 100 C. albicans suşunun asit proteinaz, fosfolipaz ve biyofilm oluşturma özellikleri fenotipik, ALS1 ve HWP1 genlerinin varlığı ise genotipik yöntemlerle araştırıldı. Asit proteinaz aktivitesinin saptanması için %1 sığır serum albümini içeren besiyeri, fosfolipaz aktivitesinin saptanması için yumurta sarılı besiyeri, biyofilm oluşumunun saptanması için modifiye tüp adherans yöntemi ve iki farklı modifiye mikroplak yöntemi kullanılırken, ALS1 ve HWP1 genleri multipleks PCR yöntemi ile araştırıldı. 
İzole edilen 100 C. albicans suşunun proteolitik aktivitesi %86, fosfolitik aktivitesi %73 ve biyofilm oluşumu modifiye tüp adherans yöntemi ile %9 olarak saptanırken, her iki modifiye mikroplak yöntemiyle tüm suşlarda biyofilm aktivitesi negatif bulundu. Genotipik olarak araştırılan ALS1 ve  HWP1 genlerinin varlığı  ise sırasıyla %29 ve %91 olarak saptandı. 
Bu çalışmada biyofilm oluşumu sürecinde adezyonda etkili olduğu düşünülen proteinleri kodlayan ALS1 ve HWP1 genlerinin varlığı ile biyofilm oluşumu arasında anlamlı bir ilişkinin saptanamaması, bu süreçte farklı genlerinde birlikte etkili olabileceğini göstermesi açısından anlamlı olabilir.

Abstract:
Candida species that are widespread in nature and are present in human and animal normal body flora as a commensal microorganism have become opportunistic pathogens for mortality and morbidity in the presence of predisposing factors. However, there seen development in the diagnosis and treatment facilities. 
Studies to explain pathogenesis of Candida infections and to develop new drugs against Candida species, expressed the importance of virulence factors of Candida species as well as the immune system of host. 
In this study, 100 C. albicans strains were investigated in terms of acide proteinase, phospholipase and formation of biofilm as phenotypically and of presence of ALS1 and HWP1 genes as genotypically. Egg yolk agar medium to determine the phospholipase activity, the medium containing 1% bovine serum albumin to determine asit proteinase activity, modified tube adherence method and two different modified microplate methods to determine biofilm formation were used. ALS1 and HWP1 genes were investigated by multiplex PCR method.
As a result of this study, phopholipase activity of C. albicans strains was found as 73%, proteinas activity as 86%, and biofilm formation as 9% by modified tube adherence method, and all of the strains were found negative for biofilm formation by the other two methods. Genotypically investigation of presence of ALS1 genes was found as 29% and 91% for HWP1.
When evaluating the interactions between virulence factors, there is no significant relationship between presence of ALS1 and HWP1 genes and biofilm formation, it is considered that different genes may be effective on biofilm formation, and presence of genes do not reflect the phenotype. Highly detection of proteinase and phospholipase and presence of HWP1 may be effective virulence factors in pathogenesis of C. albicans.