Crohn hastalığının TLR4 reseptörü ile ilişkisi
The relationship of Crohn disease with TLR4 receptor
Yazar: DERYA ALTUNKANAT
Danışman: PROF. DR. SEVGİ KALKANLI TAŞ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Genetik = Genetics ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Amaç: Bu çalışmadaki amaç NF-κB ve TLR4 ekspresyonları araştırılarak 
inflamasyondaki rolünü belirlemek ayrıca TLR4'ün aktivitesinin Crohn hastalığında 
prognostik biyobelirteç ve terapötik hedef olarak kullanılıp kullanılamayacağının 
belirlenmesidir. 
Gereç ve Yöntem: 20 aktif dönem Crohn hastasından ve 20 sağlıklı 
gönüllülerden alınan periferik kandan periferik kan mononüklear hücreler izole edildi. 
Ardından hücreler LPS ile 1 gün uyarıldı. TLR4 ve NF-κB'nin mRNA ifadeleri qPCR 
yapılmıştır. TLR4 protein düzeyi Western blot yöntemiyle incelenmiştir. Pro
inflamatuar sitokin olan IL-1B ve IL-18 düzeyleri ELISA yöntemi çalışılmıştır. 
Bulgular: Çalışmamızda LPS ile uyarım öncesi ve sonrası TLR4 (önce 13,69 
kat, sonra 6,38 kat) (sırasıyla p=0,0013, p=0,015) ve NF-κB'nin (önce 11,21 kat, sonra 
2,22 kat) (sırasıyla p=0,022, p=0,027) mRNA ifadelerinin düştüğü gözlemlenmiştir. IL
1B ve IL-18 düzeyleri uyarım öncesi (sırasıyla p=0,022, p=0,0125) ve sonrası (sırasıyla 
p=<0,0001, p=0,0357) kontrol grubuyla karşılaştırıldığında düşük çıkmıştır. Western 
Blot'ta sonuç alınamamıştır. 
Sonuç: TLR4 ve NF-κB, bağırsak epitelyumun farklı bölgelerinde tercihen 
lokalize olurken, periferik kan mononüklear hücrelerde mRNA ekspresyonu gözlendi. 
Fakat uyarım sonrası ekspresyonda düşüş gözlendi. TLR4'ün koruyucu etkisi, 
hücresel yerleşimi ve ligand yanıtı veya miRNA gibi aracılar tarafından olabileceğini 
düşündürmektedir. IL-1β ve IL-18 seviyelerinin hastalarda düşük olduğu 
gözlemlenmiştir. IL-1β'nin aktivasyonu, kaspaz-1 bağımlı ve bağımsız 
mekanizmalarla gerçekleşirken, IL-18, IL-1β'nin proteazlar tarafından kesilmesiyle 
aktif hale gelir. Crohn hastalığında IL-1β ve IL-18 sentezinin inhibe edilmesinde 
farklı mekanizmalar rol oynayabilir. 
Anahtar Kelimeler: Crohn Hastalığı, İnflamasyon, NF-kB, TLR4

Abstract:
Aim: The aim of this study was to investigate the expressions of NF-κB and 
TLR4 to determine their role in inflammation, as well as to determine whether the 
activity of TLR4 can be used as a prognostic biomarker and therapeutic target in 
Crohn's disease.  
Materials and Methods: PBMC were isolated from 20 active Crohn's 
disease patients and 20 healthy volunteers. Subsequently, the cells were stimulated 
with LPS for 1 day. The mRNA expressions of TLR4 and NF-κB were analyzed 
using qPCR. The TLR4 protein level was examined using the Western Blot. The 
levels of IL-1B and IL-18 were studied using the ELISA method. 
Results: In our study, it was observed that the mRNA expressions of TLR4 
(before 13.69-fold, after 6.38-fold) (p=0.0013, p=0.015, respectively) and NF-κB 
(before 11.21-fold, after 2.22-fold) (p=0.022, p=0.027, respectively) decreased after 
stimulation with LPS. The levels of IL-1B and IL-18 were found to be lower 
compared to the control group both before (p=0.022, p=0.0125, respectively) and 
after (p=<0.0001, p=0.0357, respectively) stimulation. Western Blot yielded no 
results.  
Conclusion: TLR4 and NF-κB are preferably localized in different regions of 
the intestinal epithelium, while mRNA expression was observed in peripheral blood 
mononuclear cells. However, a decrease in expression was observed after 
stimulation. It suggests that the protective effect of TLR4 may be mediated through 
mechanisms such as its cellular localization and ligand response, or through 
intermediaries like miRNA. It was observed that IL-1β and IL-18 levels were low in 
patients. While the activation of IL-1β occurs through both caspase-1 dependent and 
independent mechanisms, IL-18 becomes active through the proteolytic cleavage of 
IL-1β. Different mechanisms may play a role in inhibiting the synthesis of IL-1β and 
IL-18 in Crohn's disease. 
Key Words: Crohn Disease, Inflammation, NF-kB, TLR4