Ratlarda meme koruyucu cerrahi sonrası uygulanan radyoterapi ilişkili fibrozis üzerine platelet zengin plazma (PRP) ve tümor nekroz faktör- alfa(TNF-α) inhibitörü'nün etkis
The effect of prp (platelet reach plasma) and TNF-α (tumor necrosis factor α) on radiotherapy-associated fibrosis applied after breast conserving surgery in rats
Yazar: SERHAT BİNİCİ
Danışman: DOÇ. DR. ÜMİT HALUK İLİKLERDEN
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery
Dizin: Fibroz = Fibrosis ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Radyoterapi = Radiotherapy ; Sıçanlar = Rats ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Malign meme hastalıklarında meme koruyucu cerrahi sonrası küratif tedavi 
amacıyla yapılan radyoterapi uygulaması günümüzde standart tedavi haline gelmiştir. 
Radyoterapinin (RT) sağkalımı uzattığı ispat edilmekle beraber uygulanan alanda ciddi 
fibrozis ve yara kontraktürü oluşturmaktadır. Özellikle meme cerrahisi sonrası 
rekonstrüksiyon planlanan hastalarda elastikiyetin zayıflaması nedeniyle rekonstrüksiyon 
zorlaşmaktadır. Bu çalışmamızda ratlarda meme cerrahisi sonrası uygulanan RT ile ilişkli 
fibrozis yoğunluğu üzerine lokal PRP (platelet rich plasma) ve sistemik TNF-α (tümor 
nekroz faktör-alfa) inhibitörü olan infliximab'ın yara iyileşmesine etkisini araştırmayı 
amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda ortalama vücut ağırlıkları 250- 290 gr olan daha önce 
herhangi bir çalışmada kullanılmamış, hiçbir ilaca maruz kalmamış 48 adet dişi, 3 aylık 
Wistar Albino rat kullanıldı. Tüm gruplar; etkin meme dokusu volümü sağlanabilmesi 
amacıyla emzirmeden henüz kesilmiş, kendi içerisinde çiftleştirilmiş ve en az 3 nesil 
yavru elde edilmiş yavru dişi ratlardan oluşturuldu. PRP hazırlamak için yine bu 3. nesle 
akraba ihtiyaç kadar rat sayısı kullanıldı. Ratlar, sham grubu ile birlikte cerrahi ve diğer 
işlemlerden oluşan 6 gruba (n:8) kuyrukları işaretlenerek gruplandırıldı. Gruplandırma; 
Grup: 1: Kontrol, Grup, 2: Sadece Cerrahi, Grup 3: Cerrahi + RT uygulaması, Grup 4: 
Cerrahi+lokal PRP+RT uygulaması, Grup 5: Cerrahi+ sistemik TNF-α inhibitörü +RT 
uygulaması, Grup 6: Cerrahi+lokal PRP+ sistemik TNF-α inhibitörü+RT uygulaması 
şeklinde oluşturuldu. 
Ratlara segmental mastektomi uygulandıktan 7 gün sonra tek doz tüm vücut 6,75 
Gy iyonize radyasyon uygulandı. Radyoterapi uygulaması yapıldıktan sonra ratlar 
sakrifiye edilerek işlem yapılan meme total eksize edilerek histopatolojik inceleme için
patolojiye verildi. Histopatolojik inceleme için hazırlanan preparatlar hematoksilen-eozin 
(HE) ile boyandı ve fibrozisteki kollajen birikimini göstermek amacıyla Masson Trikrom 
(MT) ile histokimyasal boyama yapıldı. Gruplar ödem, hiperemi, fibrozis ve inflamasyon 
parametrelerine göre karşılaştırıldı. Yara iyileşmesi histopatolojik bulgulara göre; 'yok (-
), hafif (+), orta (++) ve yaygın (+++)' olarak skorlanarak istatistiksel çalışmaları yapıldı.
Bulgular: Cerrahi sonrası tüm gruplarda ödem tespit edildi. Segmental 
mastektominin (SM), ödem şiddetini etkilediği görüldü (p<0,001). Grup 5 ve 6'daki 
XIV
prosedürlerin ödem şiddetini azalttığı belirlendi. Grup 4'deki yöntemin ise ödem şiddetini 
artırdığı izlendi. Cerrahi sonrası tüm gruplarda hiperemi tespit edildi. SM'nin, hiperemi 
şiddetini etkilediği görüldü (p = 0,009). Grup 5 ve 6'daki prosedürlerin hiperemi miktarını 
azalttığı belirlendi. Grup 3'deki prosedürün ratların %75'inde orta veya şiddetli 
hiperemiye neden olduğu belirlendi. Cerrahi sonrası tüm gruplarda fibrozis tespit edildi. 
SM'nin, fibrozis şiddetini etkilediği görüldü (p <0,001). Grup 5 ve 6'daki prosedürlerin 
belirgin biçimde fibrozis miktarını azalttığı belirlendi. Grup 2-4'deki prosedürün ratların
%87,5'inde orta veya şiddetli fibrozis'e neden olduğu belirlendi. Cerrahi sonrası tüm 
gruplarda inflamasyon tespit edildi. SM'nin, inflamasyon şiddetini etkilediği görüldü (p 
<0,001). Tüm gruplarda inflamasyon seviyesinin ılımlı olduğu belirlendi.
Sonuç: Çalışmamızda intraoperatif sistemik infliksimab ve lokal PRP 
uygulanmasının PMRT (Postmastectomy radiation therapy) sonrası fibrozisi, 
inflamasyonu, ödemi, hiperemiyi anlamlı olarak azalttığı görülmüş olup geç 
rekonstüriksiyon planlanan hastalarda onkoplastik cerrahinin istenmeyen tüm 
sonuçlarında azalma yaratacağı düşünülmektedir. Sonuç olarak bu hayvan modeli özgün 
olmakla beraber gelecekte yapılacak klinik çalışmalar için bu yönüyle yol gösterici 
olacaktır.

Abstract:
Radiotherapy application for curative treatment after breast-conserving surgery in 
malignant breast diseases has become the standard treatment today. Although 
radiotherapy (RT) has been proven to prolong survival, it causes severe fibrosis and 
wound contracture in the applied area. Especially in patients who are planned for 
reconstruction after breast surgery, reconstruction becomes difficult due to weakening 
of elasticity. In this study, we aimed to investigate the effect of infliximab, a local PRP 
(platelet rich plasma) and systemic TNF-α (tumor necrosis factor-alpha) inhibitor, on 
wound healing on the fibrosis intensity associated with RT applied after breast surgery 
in rats.
Materials and Methods: In our study, 48 female, 3-month-old Wistar Albino rats with 
an average body weight of 250-290 g, who had not been used in any study before and 
were not exposed to any drug, were used. All groups; In order to provide effective 
mammary tissue volume, female rats were created from female rats that were cut from 
lactation, mated within themselves and obtained at least 3 generations of offspring. To 
prepare PRP, the number of rats related to this 3rd generation was used as much as 
needed. Rats were grouped into 6 groups (n:8) consisting of surgery and other 
procedures, together with the sham group, by marking their tails. Grouping; Group: 1: 
Control, Group, 2: Surgery only, Group 3: Surgery + RT application, Group 4: Surgery 
+ local PRP + RT application, Group 5: Surgery + systemic TNF-α inhibitor + RT 
application, Group 6: Surgery + local PRP + systemic TNF-α inhibitor + RT application 
was formed.
A single dose of 6.75 Gy whole body ionizing radiation was applied to the rats 7 days 
after segmental mastectomy. After the application of radiotherapy, the rats were 
sacrificed and the breast was completely excised and given to pathology for 
histopathological examination. Preparations prepared for histopathological examination 
were stained with hematoxylin-eosin (HE) and histochemical staining was performed 
with Masson's Trichrome (MT) to show the collagen deposition in fibrosis. The groups 
were compared according to edema, hyperemia, fibrosis and inflammation parameters. 
Wound healing according to histopathological findings; Statistical studies were 
performed by scoring 'absent (-), mild (+), moderate (++) and common (+++)'.
XVI
Findings: Edema was detected in all groups after surgery. Segmental mastectomy (SM) 
was found to affect the severity of edema (p<0.001). It was determined that the 
procedures in groups 5 and 6 reduced the severity of edema. It was observed that the 
method in Group 4 increased the severity of edema. Postoperative hyperemia was 
detected in all groups. SM was found to affect the severity of hyperemia (p = 0.009). It 
was determined that the procedures in groups 5 and 6 reduced the amount of hyperemia. 
It was determined that the procedure in Group 3 caused moderate or severe hyperemia 
in 75% of the rats. Fibrosis was detected in all groups after surgery. SM was found to 
affect the severity of fibrosis (p <0.001). It was determined that the procedures in 
groups 5 and 6 significantly reduced the amount of fibrosis. It was determined that the 
procedure in Group 2-4 caused moderate or severe fibrosis in 87.5% of the rats. 
Inflammation was detected in all groups after surgery. SM was found to affect the 
severity of inflammation (p <0.001). It was determined that the level of inflammation 
was moderate in all groups.
Results: In our study, it was observed that intraoperative systemic infliximab and local 
PRP application significantly reduced fibrosis, inflammation, edema, and hyperemia after 
PMRT (Postmastectomy radiation therapy), and it is thought that it will reduce all 
undesirable results of oncoplastic surgery in patients who are planned for late 
reconstruction. As a result, although this animal model is unique, it will be a guide for 
future clinical studies.