Polikistik over sendromlu (PKOS) hastalarda telomer uzunluğunun ölçülmesi
Measurement of telomere length in patients with polycystic ovary syndrome (PCOS)
Yazar: SEZİN GÜRKAN
Danışman: DOÇ. DR. AHMET İLTER GÜNEY
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Genital hastalıklar-kadın = Genital diseases-female ; Kadınlar = Women ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Telomer = Telomere ; Ürogenital hastalıklar = Urogenital diseases

Özet:
Amaç:  Bu çalışma, Polikistik Over Sendromu ve telomer uzunluğu arasındaki istatistiksel olarak anlamlı olan bir ilişkinin varlığını saptamak ve DNA örneklerini farklı tekniklerle inceleyerek telomer uzunluklarını belirlemek amacı ile yapıldı.
Gereç ve Yöntem: Çalışmaya 20-35 yaş arası PKOS tanısı almış 52 hasta ve aynı yaş aralığında olan 28 sağlıklı gönüllü dahil edildi. Tüm hastaların periferik kanından DNA izolasyonu yapıldı. Elde edilen DNA örnekleri, telomer uzunluklarını belirlemek amacıyla hem Gerçek Zamanlı PZR Yöntemi hem de Southern Blot Yöntemi kullanılarak incelendi. Yapılan validasyon çalışması sonrasında en etkin çalışan 36B4F-R housekeeping gen ve TeloF-R telomeraz primerleri amplifikasyonda kullanıldı. Örneklere ait telomer verileri normalize edilerek dCt değerleri hesaplandı. Southern Blotlama analizi için izole edilen DNA örneklerine enzim kesimi yapıldı ve jelde yürütüldü. DNA parçalarının naylon membrana transferi sağlandı ve telomer dizilerine spesifik oligonükleotid diziler kullanılarak işaretlendikten sonra kemilüminisans boyama yapıldı ve görüntülenmesi sağlandı. 
Bulgular: PKOS hasta ve kontrol grubuna ait gerçek zamanlı PZR sonuçları (p=0,256) ve Southern Blot verileri (p=0,210) karşılaştırıldığında, iki grup arasında telomer boyları açısından istatistiksel olarak anlamlı fark bulunamadı. Bununla birlikte Gerçek Zamanlı PZR ve Southern Blot ile telomer ölçüm sonuçların karşılaştırılması yapıldığında telomer boylarının değerlendirilmesinde sonuçların birbirileri ile pozitif ilişki (p<0,01) bulundu.   
Sonuçlar: Telomer uzunluğu ölçümü için hassas, aynı zamanda laboratuvarda uygulama kolaylığı ve hızlı sonuç vermesi nedeni ile Gerçek Zamanlı PZR protokollerinin bu gibi çalışmalarda kullanılabileceği gösterildi.

Abstract:
Aim: The objective of this study was to investigate the presence of a statistically significant relationship between Polycystic Ovarian Syndrome and telomer length and to determine telomeric lengths by examining DNA samples with different techniques.
Material and Methods: This study includes 52 patients with PCOS diagnosis aged between 20-35 and 28 healthy volunteers with the same age range. Peripheral blood of the patients was utilized for DNA isolation. In order to determine telomer length, the DNA samples obtained were analyzed using Real-Time PCR and southern blotting methods. After validation, the most effective housekeeping gene, 36B4F-R, and TeloF-R telomerase primers were used for amplification. Then, the telomeres of the samples were normalized and the dCt values were calculated. DNA fragments isolated for southern blotting analysis were digested with enzyme and separated by running on the gel. Separated DNA fragments were transferred to nylon membrane. Finally, after labeling the telomeric sequences using specific oligonucleotides, they were incubated with chemiluminescence dye and visualized.
Results: Comparing real-time PCR results (p=0.256) and southern blotting data (p=0.210) obtained from PCOS patients and control group, there was no statistically significant difference in telomer length between two groups. However, there was a positive correlation (p <0.01) between the results of evaluating the telomeres length using Real-Time PCR and southern blotting analyses.
Conclusions: As Real-time PCR method is a sensitive, easy to apply, and fast technique, so it can be utilized for such laboratory tasks.