Kuersetinin merinos ırkı koç spermasının akrozom reaksiyonu üzerindeki etkinliğinin araştırılması
Investigation of quercetin activation on the acrosomal reaction of the merinos ram sperm
Yazar: OĞUZHAN ULUYOL
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ALİ DOĞAN ÖMÜR
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Abortus-veteriner hekimlik = Abortion-veterinary ; Akrosom = Acrosome ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Fertilizasyon = Fertilization ; Koyunlar = Sheep ; Koçlar = Rams ; Kuersetin = Quercetin ; Merinos = Merino ; Sperm = Spermatozoa ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Amaç: Koyunculukta yüksek verim alabilmek için koç spermasının dölleme yeteneği yüksek olmalıdır. Güçlü bir antioksidan olan kuersetinin farklı türlerde sperma üzerine olumlu etkisi olduğu görülmüştür. Bu tezin amacı kuersetin maddesini kullanarak Merinos ırkı koç spermasının döl verimini yükselterek dölleme yeteneğinin arttırılmasıdır.
Materyal ve Metod:Merinos koçlardanalınan ejakülatlardan uygun özellik (sperm yoğunluğu ≥3×109 spermatozoa/ml; motilite ≥% 80) gösterenler spermanın sulandırılması işleminde kullanıldı.Spermaların sulandırılmasında Tris sulandırıcı kullanıldı. Ejakülatlar 32ºC'de 4 eşit hacme bölündü.Farklı dozlarda kuersetin(15, 30, 45 µg/mL) katılarak 3 grup oluşturuldu. 4'üncü grup olan kontrol grubuna antioksidan(kuersetin) katılmadı. Spermalar Tris sulandırıcısıyla ml'de yaklaşık 4×108 spermatozoa olacak şekilde sulandırıldı ve donduruldu. Çözdürüldükten sonra 60µl sperma, 10µl FITC-PNA ve 2.5µl PI ile ana karışım hazırlanarak 20 dakikada 370C'de inkübasyona bırakıldı. Ardından 10µl Hancock solüsyonuyla muamele edildikten sonrareaksiyon sonlandırıldı. Örnekten 2.5µl'lik miktar alınarak floresan mikroskopta 400'lük büyütmede 200 adet sperm sayıldı.Yeşil renk veren spermler hasar görmüş akrozom, yeşil renk vermeyen spermler ise hasar görmemiş akrozom olarak değerlendirildi. Çalışma 6 replikasyondan oluşturuldu.
Bulgular: 15, 30, 45µg/mL dozlarında kuersetin katılan üç grup ile kuersetin katılmayan kontrol grubunda hasar görmeyen akrozom bütünlüğünün yüzdelerine bakıldı. 15µg/mL grubunda %39,16±2,65b, 30µg/mL grubunda %40,83±0,30b, 45µg/mL grubunda %20,83±2,95c, kontrol grubunda %54,83±3,38a bulunmuştur.
Sonuç:Farklı dozlarda (15, 30, 45µg/mL) katılan kuersetin maddesi ile oluşturulan üç grubunda yüzdesi kontrol grubuna göre daha düşük çıktı. Kuersetinin bu dozlarda akrozom bütünlüğü üzerine toksik etki ettiği görüldü.

Anahtar Kelimeler: Akrozom,Koç, Kuersetin,Sperma

Abstract:
Aim:In the sense of achieving high efficiency in sheep, ram sperm must have high fertilization ability. Quercetin, a potent antioxidant, has been shown to have a positive effect on semen in different species. This thesis aims to improve the efficiency of the Merinos racial ram sperm using quercetin.
Material and Method: The ejaculates collected from Merinosrams were used for the dilution of the sperm (sperm density ≥3×109 spermatozoa/ml, motility≥80%). 
Tris diluent was used to dilute the semen. The ejaculates were divided into 4 equal volumes at 32°C. Three groups were formed by adding quercetin (15, 30, 45 μg/mL) at different doses. Antioxidant (quercetin) did not participate in the 4th group(the control group). Spermatozoa were diluted and frozen to approximately 4x108 spermatozoa per ml with Tris diluent. After thawing, the master mix was prepared with 60μl semen, 10μl FITC-PNA and 2.5μl PI and allowed to incubate at 370C for 20 minutes. The reaction was then terminated after treatment with 10μL Hancock solution. An amount of 2.5μl of the sample was taken and 200 sperm were counted at 400 magnification on a fluorescent microscope. Sperm that gave a green color were evaluated as damaged acrosome, and sperm that did not give green color were regarded as undamaged acrosome. The study consisted of 6 replicates.
Results:In terms of the undamaged percentage of acrosomal integrity was assessed in the control group and quercetin groups (15, 30, and 45μg/mL). Findings: 39.16±2.65b in the 15μg/mL group, 40.83±0.30b in the 30μ/mL group, 20.83±2.95c in the 45μg/mL group and 54.83±3.38a in the control group .
Conclusion: The percentage of the three groups formed with the quercetin substance added at different doses (15, 30, 45μg/mL) was lower than the control group. Quercetin has been shown to toxicize acrosome integrity at these doses.

Key Words: Acrosome, Quercetin,Ram, Semen