Dendrobine ve Dendrobium nobile Lindl.'in glioblastoma üzerindeki In Vitro etkisi
In vitro effect of Dendrobine and Dendrobium nobile Lindl. on glioblastoma
Yazar: BEYZA NUR ÖZKAN
Danışman: DOÇ. DR. ERAY METİN GÜLER
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Glioblastoma = Glioblastoma ; Kanser =

Özet:
Amaç: Glioblastoma, gliomanın en yüksek dereceli, en yaygın ve agresif tipidir. Dendrobium nobile Lindl., Asya'nın çeşitli yerlerinde farklı geleneksel ilaçlarda kullanıldığı bilinmektedir. Çalışmamızın amacı hem Dendrobium nobile Lindl.'in glioblastoma üzerindeki terapötik etkinliğini araştırmak ve bir standart olarak içeriğindeki dendrobine alkaloidi ile kıyaslamaktır.
Metot ve Dizayn: Dendrobium nobile Lindl. bitkisinin çiçek, yaprak ve gövde olmak üzere üç farklı kısmı yaş ve kuru olarak %80 oranında kloroform, metanol ve etanol ile ekstrakte edilmiştir. Tüm ekstraktların total antioksidan seviye, total fenol ve total flavonoid içerikleri, serbest radikal süpürücü aktiviteleri fotometrik olarak ölçülmüştür. Ekstraktların ve standart dendrobinenin terapötik etkileri in vitro olarak insan glioblastoma (U-87 MG) hücre hattı üzerinde gösterilmiştir. Hücreler farklı konsantrasyonlarda Dendrobium nobile Lindl. ekstraktları ve dendrobine ile 24 saat boyunca inkübe edilip, hücre canlılığı ATP testiyle analiz edilmiştir. Hücre içi reaktif oksijen türlerinin (ROT) seviyeleri florometrik olarak 2',7'-dikhloro-dihidrofluoresin-diasetat (H2DCF-DA) floresan probuyla, mitokondriyal membran potansiyeli (MMP) florometrik 3,3' diheksiloksakarbosiyanin iyodür (DiOC6(3)) boyasıyla, hücre içi kalsiyum seviyeleri Fura-2AM boyasıyla, hücre içi glutatyon düzeyleri luminometrik olarak, apoptotik etkisi ise akridin turuncusu/ etidyum bromür (AT/EB) çift boyası ile gösterilmiştir. Hücrelerdeki DNA hasarı ise alkalen tek hücre jel elektroforezi ile analiz edilmiştir.
Bulgular: Yapılan deneylerle Dendrobium nobile Lindl. ekstraktlarının ve dendrobine alkaloidinin glioblastoma hücrelerinde artan konsantrasyonlarına bağlı olarak sitotoksisiteyi, hücre içi ROT'u ve hücre içi kalsiyum seviyelerini arttırırken MMP ve hücre içi glutatyon düzeylerini azaltmıştır. Buna bağlı olarak apoptoz ve DNA hasarı indüklenmiştir.
Sonuç: Çalışmamızla Dendrobium nobile Lindl.'in glioblastoma tedavisindeki terapötik etkinliği ortaya koyulmuş olup ilaç yapımında kullanılabilmesi için ileriye dönük detaylı çalışmalara ihtiyaç duyulduğu düşünülmektedir.

Abstract:
Aim: Glioblastoma is the highest grade, most common and aggressive type of glioma. Dendrobium nobile Lindl. is known to be used in different traditional medicines in various parts of Asia. The purpose of our study is to investigate the therapeutic efficacy of Dendrobium nobile Lindl. on glioblastoma and to compare it with the dendrobine alkaloid in its content as a standard.
Materials and Methods: Dendrobium nobile Lindl. Three different parts of the plant, namely flower, leaf and stem, were extracted with 80% chloroform, methanol and ethanol as fresh and dry. Total antioxidant level, total phenol and total flavonoid contents, and free radical scavenging activities of all extracts were measured photometrically. The therapeutic effects of the extracts and standard dendrobine have been demonstrated in vitro on the human glioblastoma (U-87 MG) cell line. Cells were treated with different concentrations of Dendrobium nobile Lindl. extracts and dendrobine were incubated for 24 hours, and cell viability was analyzed by ATP test. Then, the experiments were continued with the three extracts and dendrobine, which showed the best cytotoxic effect. Intracellular reactive oxygen species (ROS) levels fluorometrically with 2',7'-dichloro-dihydrofluoresin-diacetate (H2DCF-DA) fluorescent probe, mitochondrial membrane potential (MMP) fluorometric 3,3′-Dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6(3)) dye, intracellular calcium levels Fura-2AM Intracellular glutathione levels were demonstrated luminometrically, and its apoptotic effect was demonstrated with acridine orange/ ethidium bromide (AO/EB) double dye. DNA damage in cells was analyzed by alkaline single-cell gel electrophoresis.
Results: It increased cytotoxicity, intracellular ROS and intracellular calcium levels due to increasing concentrations of Dendrobium nobile Lindl. extracts and dendrobine alkaloid in glioblastoma cells, while decreasing MMP and intracellular glutathione levels. Accordingly, apoptosis and DNA damage were induced.
Conclusion: Our study revealed the therapeutic efficacy of Dendrobium nobile Lindl. in the treatment of glioblastoma, and it is thought that future detailed studies are needed for its use in drug production.