Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin (ad-scs) kültürasyonunda ve adipositlere farklılaştırılmasında trombositten zengin plazmanın (prp) etkinliği
Effectiveness of platelet-rich plasma (prp) on cultivation and differentiation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ad-scs) into adipocytes
Yazar: ŞÜKRAN NOYAN SAVAŞ
Danışman: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
PRP, tam kanın santrifüj edilmesi ile elde edilir. Büyüme faktörlerini yoğun içermesi nedeniyle son yıllarda birçok tedavi alanında yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. İnsanın otolog olarak kendi kanından alınıp elde edilebildiği için PRP uygulaması alerjik etkilerin oluşmasını da engellemektedir.
Mezenkimal kök hücreler (MKH) multipotent farklılaşma yeteneğine sahip olan kök hücrelerdir. Köken aldığı tabaka mezoderm tabakası olduğundan, in vivo ve in vitro şartlarda MKH  kondroblast, osteoblast ve adiposit gibi mezoderm kökenli hücrelere kolayca dönüşebilme potansiyeline sahiptirler.
Çalışmamızda Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Kliniğine liposakşın işlemi için başvuran gönüllü vericilerden etik komiteden onay alınarak alınan lipoaspirat/lipektomi materyalinden adipoz doku kök hücreleri (AD-SCs) saflaştırılmıştır. Hücreler kültüre edildikten sonra adipositlere farklılaştırılmıştır. Ayrıca, aynı vericilerden alınan periferal kan örneklerinden  PRP de elde edilmiştir. AD-SCs'in kültürasyonu ve adipositlere farklılaştırılması esnasında gereksinim duyduğu büyüme faktörlerinin temininde hayvansal kaynaklı fetal bovine serum (FBS) veya fetal calf serum (FCS) yerine insan vericilerden otolog olarak elde edilen PRP kullanılmıştır. Böylece hayvansal kaynaklı materyalden meydana gelebilecek immün red ya da alerjik reaksiyonun engellenmesi ya da azaltılması hedeflenmiştir. Ayrıca AD-SCs'in adipositlere farklılaştırılması esnasında hayvansal FBS yerine PRP kullanılması farklılaşma sürecini yaklaşık iki kat kısaltmıştır. Aynı zamanda, kültürasyonunda PRP kullanılan ortamdaki hücre miktarının FBS kullanılan ortamdaki hücrelere göre yaklaşık 2 kat fazla olduğu gözlemlenmiştir. Örneğin %20 PRP kullanılan kültürde dt (doubling time, ikilenme süresi, hücrelerin sayısal olarak ikiye katlanma süresi) 20.087 saat iken, %20 FBS kullanılan hücrelerde dt 35.99 saat olarak saptanmıştır.
Sonuç olarak MKH'in kültürasyonunda FBS yerine PRP kullanılmasının daha etkin olduğu belirlenmiştir. Klinik çalışmalarda MKH'in kültürasyonu ya da diferansiyasyonu prosedürlerinde gereksinim duyulduğunda hayvan kaynaklı FBS ya da FCS yerine insan kaynaklı otolog PRP kullanımı immün reddi de önleyebileceğinden ya da azaltabileceğinden rahatlıkla önerilebilir.

Abstract:
PRP is obtained by centrifuging whole blood. Because it contains growth factors intensively, it is used widely in many therapeutic areas in recent years. Since PRP is obtained autologously from individual's own blood, its application also prevents the formation of allergenic effects.
Mesenchymal stem cells (MSCs) are stem cells having multipotent differentiation ability. since they are originated from mesoderm layer, they have the potential of transforming into mesoderm-derived cells such as condroblast, osteoblast and adipocyte easily. 
In our study, after getting ethical committee approval, AD-SCs were purified from lipoaspirate/lipectomy material taken from the voluntary donors who have applied to Ege University Faculty of Medicine, Plastic and Reconstructive Surgery for the liposuction procedure. After cultivation AD-SCs were differentiated into adipocytes. PRP was obtained by centrifuging the peripheral blood samples obtained from the same donors. During cultivation and differentiation of AD-SCs into adipocytes, PRP derived autologously from human donors were used in order to supply the growth factors required instead of using fetal bovine serum (FBS) or fetal calf serum (FCS) of animal origin. Thus, it was aimed to prevent or reduce immün rejection or allergenic reactions that may ocur because of animal-derived material. 
During the differentiation process of AD-SCs into adipocytes, the use of PRP instead of animal serum shortened the differantiation period approximately two-fold. At the same time, it was observed that the amount of cells in the culture medium with PRP was nearly two times greater than the cells in the medium with animal serum. For example, it was determined that dt (doubling time) was 20.087 hours in 20% PRP used culture medium, while dt was 35.99 hours in the 20% FBS used one.
In conclusion,  it was determined that using PRP instead of FBS in culturing of MSCs was more effective. Since immun rejection can be prevented or lessened  by using autolog human material instead of animal derived material, in requirement of FBS or FCS for culturing or differantiation procedures of MSCs in clinical trials the use of autolog PRP can be conveniently recommended.