Karragenanın insan meme kanseri hücre hatlarında sitotoksik etkisinin incelenmesi
Examination of cytotoxic effect of carrageenan in human breast cancer cell lines
Yazar: MERVE SAYIN
Danışman: DOÇ. DR. ÖZER AYLİN GÜRPINAR
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu tez çalışmasında, karragenanın belirlenen dozlarda MCF-7, MDA-MB-231, SKBR-3 meme kanseri hücre hatları ve sağlıklı meme epitel hücre hattı olan SVCT üzerinde doza ve zamana bağlı olarak sitotoksik etkileri incelenmiştir. 
Karragenan, deniz yosunlarından elde edilen, galaktoz ve anhidrogalaktoz alt birimlerinin glikozidik bağlar ile birleşmesinden oluşan, sülfatlanmış polisakkarit yapısında büyük molekül ağırlıklı bir moleküldür. Karragenanlar gıda endüstrisinde yaygın olarak kullanılmakla beraber, son yıllarda farmasötik ve medikal amaçlı kullanımları da yaygınlaşmaktadır. Yapılan çalışmalar, karragenanın, immünomodülatör, antikoagulant, antitrombotik, antiviral ve anti-tümöral etkilerinin de olduğunu göstermektedir.
Bu tez çalışmasında, karragenanın olası anti- tümoral etkilerinin incelenmesi için in vitro modelde bir sitotoksisite çalışması yapılmıştır. Hücre canlılığı, (3-(4,5- dimethylthiazol- 2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) MTT yöntemi ile test edilmiş; akridin orange/proidium iodide (AO/PI) boyama yöntemi ile ölü ve canlı hücreleri florasan boyama yöntemi ile incelenmiştir. 
Tez çalışmasında L929 fare fibroblast hücreleri 96-kuyucuklu kültür kaplarında altı tekrarlı olacak şekilde inkübe edilerek, belirlenen dozlarda (I. Dilüsyon: 1000 µg/ml, II. Dilüsyon: 250 µg/ml, III. Dilüsyon: 62.5 µg/ml, IV. Dilüsyon: 15.62 µg/ml ve V. Dilüsyon: 3.90 µg/ml) besi ortamı içinde hazırlanan karragenan, MCF-7, MDA-MB-231, SKBR-3 ve sağlıklı meme epitel hücre hattı olan SVCT ile inkübe edilmiştir. Karragenan uygulanmayan grup kontrol olarak belirlenmiş; inkübasyonun 24., 48. ve 72. saatlerinde MTT analizi ve AO/PI boyamaları yapılmıştır.
Elde ettiğimiz sonuçlarda karragenanın yüksek dozlarda sitotoksik etkisinin olduğu gösterilmiştir ve bu hücrelerde apoptotik hücre ölümüne doğru bir etki gösterdiği bulunmuştur. Bu sonuçlar doğrultusunda, karragenanın kanser oluşumu ve ilerlemesinin önlenmesi için terapilerde güvenli, daha az toksik bir madde olduğu sonucuna ulaşılabilmektedir. Ancak bu konuda kuşkusuz in vitro ve in vivo çalışmanın yapılması gerektiği açıktır. Dünyada ve ülkemizde yaygın olarak görülen meme kanseri için kullanılabilirliğinin araştırılmasında in vitro basamak olarak ilk adımı oluşturacağı düşünülmektedir. Klinik açıdan kullanılabilmesi için in vivo ve in vitro çalışmalarla desteklenmesi gerekmektedir.

Abstract:
In this thesis stage, the dose and time dependent cytotoxic effects of carrageenan on 
MCF-7, MDA-MB-231, SKBR-3 breast cancer cell lines and healthy breast epithelial 
cell line SVCT were investigated.
Carregenan is a sulfated polysaccharide molecule of high molecular weight, which is 
formed from the combination of galactose and anhydrogalactose subunits with 
glycosidic bonds obtained from seaweeds. Although carrageenans are widely used in 
the food industry, their use for pharmaceutical and medical purposes has become 
widespread in recent years. Studies have shown that carregenan also has immunomodulatory, anticoagulant, antithrombotic, antiviral and anti-tumoral effects.
Cytotoxicity in cells (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) 
MTT test; dead and viable cells were determined by acridine orange / propidium iodide 
(AO / PI) staining. The concentrations determined for application to the cells in the experiment were added to the wells with 200 µl of prepared stock solution and DMEM F-12 media. The cell lines used were prepared as carrageenan concentrations and control groups. 
Carrageenan was not administered to the control group. Carrageenan MCF-7, MDAMB-231, SKBR-3 breast cancer cell lines and healthy breast epithelial cell line SVCT cells 1000 µg / ml, 250 µg / ml, 62.5µg / ml, 15.62 µg / ml, 3.90 µg / ml and DMEM F- 12 medium were applied to the control group and incubated for 24, 48 and 72 hours. 
In our results, it has been shown that carrageenan has a cytotoxic effect at high doses, and it has been found that it has a direct effect on apoptotic cell death in these cells. However, it is obvious that in vitro and in vivo studies need to be done on this subject. Based on these results, it can be concluded that carrageenan is a safe, less toxic substance in therapies to prevent cancer formation and progression. It is thought to constitute the first step in the investigation of its usability for breast cancer, which is common in the world and in our country, as an in vitro step. In order to be used clinically, it must be supported by in vivo and in vitro studies.