Plateletden zengin plazma (Platelet rıch plazma-PRP) hazırlanmasında kullanılan farklı tüp, farklı çevirme süreleri ve ısının elde edilen trombositler üzerine etkisi /
Yazar: TAMER KISAARSLAN
Danışman: DOÇ. DR. BERRİN BERÇİK İNAL
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Anjiyogenez inhibitörleri = Angiogenesis inhibitors ; Büyüme faktörleri = Growth factors ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
Platelet rich plasma 2 (PRP2) ya da platelet konsantre plazma (PCP); içinde bulunan plateletler sebebiyle büyüme faktörü kokteyli gibi düşünülebilir. PCP/PRP2; ikinci santrifüj işleminden sonra elde edilen platelet açısından konsantre edilmiş PRP'dir. İçerisinde çok çeşitli ve fazla sayıda büyüme faktörü ihtiva eder. En büyük özelliği oldukça küçük hacimlerde çok fazla sayılarda trombosit içermesidir. Bu da uygulama kolaylığı sağlamakta ve tedavi başarısını arttırmaktadır. Bu sebeple klinik olarak oldukça yaygın kullanılmaktadır. Bu kokteyl, yara iyileşmesini, anjiyogenezisi ve doku yenilemesini teşvik eder ve hızlandırır. Bununla birlikte, PCP 'nin terapötik etkileri, kısmen optimize edilmiş ve standardize edilmiş hazırlama protokollerinin olmamasından dolayı tartışmalıdır.
        Sıradan protokollerle hazırlanan PCP örnekleri çoğu zaman beyaz kan hücreleri içerir (W-PCP). Biz ise çalışmamızda uyguladığımız protokollerle içerisinde WBC' nin ve RBC'nin en az oranda olduğu en uygun PCP elde etmeyi hedefledik. En iyi protokole ulaşabilmek içinde başta bir dizi deneme çalışması yaptık. Yaptığımız deneme çalışmalarında ilk önce 8 mL hacimli sodyum sitrat içeren jelli tüp kullandık fakat uyguladığımız g kuvvetinde jelin gerektiği gibi hareket etmemesi üzerine bu tüpten vazgeçildi. Yine 3 mL hacimli sodyum sitrat içeren başka bir tüp kullandığımız zaman da elde edilen plazma hacminin yetersiz olması sebebiyle bu tüpten de vazgeçildi. En son 5 mL hacimli sodyum sitrat içeren tüp kullandık ve elde ettiğimiz verilere göre; çalışmamız için her yönüyle uygun olduğuna karar verdik. Birkaç deneme çalışması sonrası, en uygun protokolü elde ettiğimize karar verdiğimizde asıl çalışmamıza geçtik. PCP hazırlama protokollerini optimize etmek için tam kan (WB) örnekleri üzerinde çalıştık. WB örnekleri için 5 mL hacminde sodyum sitratlı tüpleri, ikinci santrifüj işlemi sırasında ise (PCP elde etme aşaması) 3 mL hacimli kuru tüpleri kullandık.  
            Santrifüj protokolleri iki adımda uygulandı; birinci adımda 230×g 10 dakika (PRP elde edilen kısım) ve ikinci adımda 2000×g 10 dakika (PCP elde edilen kısım). PCP; 2000×g'de PRP'nin santrifüj edilmesiyle plateletlerin çöktürülmesi sonrası üst plazmanın yaklaşık 9/10' luk kısmının uzaklaştırılması sonrası elde edildi. Daha sonra elde edilen PCP kendi plazmasıyla karıştırılarak çözünmesi sağlandı; PCP'deki trombosit sayısı, WB trombosit ölçümlerinden yaklaşık 20 kat daha fazla bulundu.
Bu sonuçlar, maksimum konsantrasyonlarda platelet kaynaklı büyüme faktörlerin hazırlanmasının optimize edilmesi, geliştirilmesi ve standardize edilmesi konusunda bize ışık tutmaktadır.

Abstract:
Platelet rich plasma 2 (PRP2) or platelet concenrated plasma (PCP) can be thought of as a growth factor cocktail due to the platelets present in it. PCP/PRP2 is the PRP concentrated platelets obtained after the second centrifugation step. It contains a wide variety of growth factors. The greatest feature is that platelets are contained in very large numbers in very small volumes. It provides ease of application and increases treatment success. For this reason, it is widely used in clinical practise. This cocktail encourages and accelerates wound healing, angiogenesis and tissue regeneration. However, the therapeutic efficacy of PCP is controversial due to the lack of optimized and standardized preparation protocols. 
        PCP samples prepared using conventional protocols often contain white blood cells (W-PCP). In our study, we aimed to obtain the most suitable PCP in which the WBC is at least in order with the protocols we have used. In order to follow the best protocol, we did a series of trials. In our experiments, we first used a tube containing 8 mL of sodium citrate and gel, but we could not get the gel move enough with respect to the gravity force, as we expected, so this tube was abandoned. When we used another tube containing 3 mL volume of sodium citrate, the plasma volume obtained was inadequate and this tube was also abandoned. We used a tube containing sodium citrate in the final volume of 5 mL, and according to our data retrieved; we decided that it was at all the right tube for us to perform with. After a few trials, we started the original study, as soon as we got the most suitable protocol for our pupose. We studied on whole blood (WB) specimens to optimize PCP preparation protocols. We used 5 mL volume sodium citrate tubes for WB samples, and we used 3 mL volume dry tubes during the second centrifugation process (PCP acquisition phase). 
Centrifugation protocols were performed in two steps; in the first step, 230×g for 10 min (PRP obtained), and in the second step, 2000×g for 10 min (PCP obtained portion). PCP was achieved by centrifugation at 2000×g for precipitating the platelets of WB and removal of approximately 9/10 of the supernatant in PRP. And then, the achieved PCP was resuspended and resolved by its own plasma; platelet counts in PCP were found approximately 20-fold higher than the counts in WB.
         These results shed light on optimizing, developing and standardizing platelet-derived growth factors at maximum concentrations.