Prepubertal sıçanlarda busulfan ile oluşturulan testis hasarına alfa lipoik asitin etkisi
The effect of alpha lipoic acid on testical damage caused by busulfan on prepubertal rats
Yazar: MERVE AKSOY
Danışman: PROF. DR. ÇETİN PEKÇETİN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Busulfan = Busulfan ; Ergenlik = Puberty ; Histokimya = Histochemistry ; Lipoik asit = Lipoic acid ; Prepubertal dönem = Prepubertal period ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Yöntem: Çalışmamızda Wistar suşu erkek sıçanlar 4 gruba (n=7) ayrıldı. I. grup;
Kontrol: 5 hafta, oral gavaj ile serum fizyolojik uygulandı. II. grup; Busulfan grubu;; 10
mg/kg Busulfan 21 gün ara ile iki doz olacak şekilde intraperitoneal yöntemle verildi.
III. grup; Alfa Lipoik Asit: 5 hafta, oral gavaj ile 35 mg/kg Alfa Lipoik Asit uygulandı.
IV. grup; Alfa Lipoik Asit + Busulfan: ilk doz 10 mg/kg Busulfan uygulandıktan bir gün
sonra 35 mg/kg Alfa Lipoik Asit verilmeye başlandı ve 5 hafta deney süresince her
gün uygulandı. Deneyin 21. günü ikinci doz 10 mg/kg Busulfan uygulandı. Deney
sonunda tüm denekler sakrifiye edildi. Deneklerin sol testisleri, Hematoksilen & eozin
(H&E), periyodik asit schiff (PAS), TUNEL ve aktif kaspaz-­3 boyamaları için ayrıldı.
Sağ testisleri ise Glutatyon (GSH), glutatyon peroksidaz (GPx) ve malondialdehit
(MDA) düzeyleri için ayrıldı.
Bulgular: Testiste yapılan histolojik ve morfometrik değerlendirmeye göre, Busulfan
grubunun kontrol ve Alfa Lipoik Asit grubuna göre hasarlı olduğu ancak ALA+BUS
grubunda Alfa Lipoik Asit'in bu hasarı önleyemediği gözlendi.
İmmunohistokimyasal olarak Tunel ve Aktif Kaspaz-­3 boyaması ile pozitif hücreler
sayıldı. Kontrol grubuna göre Busulfan ve ALA+BUS gruplarında apoptotik hücre
sayısı anlamlı derecede arttığı gözlendi. Kontrol grubu ve Alfa Lipoik Asit grubunda
anlamlı bir değişiklik olmadığı gözlendi. Busulfan ve ALA+BUS grupları arasında da
apoptotik hücre sayısı açısından anlamlı bir fark olmadığı gözlendi.
Biyokimyasal olarak MDA, GPx ve GSH krtlerr kullanılarak ölçüm yapıldı. MDA
değerleri, kontrol ve Alfa Lipoik Asit gruplarına göre Busulfan grubunda anlamlı
derecede yüksek bulundu. Kontrol grubu ve Alfa Lipoik Asit grubu arasında anlamlı
bir fark olmadığı gözlendi. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda MDA değeri
anlamlı olarak yüksek bulundu.
GSH değerleri, kontrol grubuna göre Busulfan grubunda anlamlı derecede düşük
bulundu. Kontrol grubuna göre Alfa Lipoik Asit grubunda anlamlı derecede yüksek
bulundu. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda GSH değeri anlamlı derecede
yüksek bulundu.
GPx değerleri, kontrol grubuna göre Busulfan grubunda anlamlı derecede düşük
bulundu. Kontrol grubu ile Alfa Lipoik Asit ve ALA+BUS grupları arasında anlamlı bir
fark olmadığı gözlendi. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda GPx değeri
anlamlı derecede yüksek bulundu.
Sonuç: Elde ettiğimiz bulgular doğrultusunda Busulfan'ın testis de doku hasarı
oluşturduğunu ve apoptozu arttırdığını gözlemledik. Ancak koruyucu ajan olarak
kullanılan Alfa Lipoik Asit'in Busulfanla birlikte kullanımında kotuyucu/tedavi edici
etkisini gözlemleyemedik.

Anahtar Kelimler: Busulfan, Alfa Lipoik Asit, Testis

Abstract:
Objective: In this study we aimed to investigate protective effects of Alpha Lipoic Acid, a strong
antioxidant, against possible negative effects of busulfan, on testes of male rats
histolochemically, imunohistochemically and biochemically.
Method: 21 Wistar albino rats were divided into 4 groups (n=7). I.control goup: rates were
givin normal saline orally for 35 days. II.Busulfan group : rates were given busulfan
twice daily for 21 days in a dose of 10mg/kg , intraperitoneally. III.alpha lipoic acid
group: rates in this group were given alpha lipoic acid orally in a dose of 35mg/kg for
5 weeks. IV.alpha lipoic acid + busulfan group: in this group rates were given the fisrt
dose of busulfan in a dose of 10mg/kg on the first day . on the seconde day alpha
lipoic acid started to be given in adaily dose of 35mg/kg for 5 weeks. the seconde
dose of busulfan was given in a dose of 10mg/kg on 21.day of the experiment.
At the end of the experiment, all subjects were sacrificed. the left testests of the rates
were prepared for hematoxylene & eosine (H&E), periodic acid schiff (PAS), TUNEL
and active caspase-­3 painting. The right testeses of the rates were evaluated
biochemically by Glutathion (GSH), glutathion peroxidase (GPx) and
malondialdehyde (MDA).
Result: According to histologic and morphometric evaluation on testicles, it is
observed that Busulfan group is damaged when compared to control and Alpha
Lipoic Acid group, however in ALA+BUS group Alpha Lipoic Acid is not able to
prevent the damage. The positive cells are counted immunohistochemically with
Tunel and Active Caspas-­3 coloring. It is observed that the apoptotic cell amount
has risen significantly in Busulfan and ALA+BUS groups when compared to the
control group. It is also observed that there is no significant difference between
Busulfan and ALA+BUS groups in terms of apoptotic cell amount. The
measurements have been conducted biochemically by MDA GPx and GSH kits.
MDA values are found significantly higher in busulfan group than in control group
and Alpha Lipoic Acid group. No significant difference is observed between
control and Alpha Lipoic Acid groups. Compared to Busulfan group, the MDA
value is found significantly high in ALA+BUS group.
GSH values are found significantly low in Busulfan group when compared to
control group. And when compared to control group, GSH values are found
significantly high in Alpha Lipoic Acid. GSH values are found significantly high in
alabus group when compared to Busulfan group.
GPx values are found significantly low in Busulfan group when compared to
control group. It has been also observed that there is no significant difference
between control group alpha lipoic acid group and ALA+BUS group. When
compared to Busulfan group, GPx value is found significantly high in ALA+BUS
group.
Conclusion: According to our results, it has been been observed that Busulfan
rises apoptose and causes testicle damage while Alpha Lipoic Acid has no
protective/curing effect on testicle damage when used with Busulfan.
Key Word: Busulfan, Alpha Lipoic Acid, Testis