Mastitisli sığırlardan izole edilen shiga toksini üreten escherichia coli suşlarının virulans faktörlerinin saptanması
Determining virulence factors of shiga toxin-producing escherichia coli in cattle with mastitis
Yazar: MESUDE BİÇER
Danışman: DOÇ. DR. ŞÜKRÜ KIRKAN
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Escherichia coli = Escherichia coli ; Escherichia coli enfeksiyonları = Escherichia coli infections ; Mastit = Mastitis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Stereotip = Stereotyping ; Sığırlar = Cattles ; Toksinler = Toxins ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Shiga toksini üreten Escherichia coli (STEC) kanlı ishal, hemorajik kolitis ve hemolitik üremik sendromu gibi ciddi insan hastalıklarına neden olan önemli bir patojendir. STEC, gelişmiş ülkelerin oldukça önemli bir sorunudur. STEC suşlarının genel habitatı, özellikle sığır ve koyun gibi ruminantların intestinal sistemleridir. Sığır ve koyun gibi ruminantların dışkıları ile kontamine gıdalar, insanlarda enfeksiyonların temel kaynağını oluşturmaktadır.Bu çalışmada, Aydın ilindeki sığırlarda mastitisli sütlerden izole edilen shiga toksini üreten Escherichia coli (STEC) suşlarında intimin (eaeA), stx1 ve stx2 genlerinin varlığının Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) ile belirlenmesi, bu izolatların serogruplandırılması amaçlanmıştır. Çalışmamızda klinik mastitisli olarak belirlenen 160 sığırdan 160 süt örneği materyal olarak kullanıldı. Fenotipik identifikasyon ile E. coli olarak belirlenen 31 izolatın, genotipik olarak intimin (eaeA) ve shiga toksin (stx1 ve stx2) genlerinin incelenmesi ile 6 izolatın STEC olduğu saptandı. İzolatlarda intimin (eaeA) ve shiga toksin (stx1 ve stx2) genlerinin varlığı, PCR ile spesifik primerler kullanılarak gerçekleştirildi. E. coli izolatları; O26, O55, O86, O111, O114, O119, O125, O126, O127, O128, O142 ve O158 serogruplarına karşı polivalan (II, III ve IV) sera kullanarak lam aglütinasyon testi ile tespit edildi. Polivalan II, Polivalan III ve Polivalan IVseraları ile bu izolatlaralam aglutinasyon testi uygulandı. Yapılan lam aglütinasyon testi sonucunda Escherichia coli suşunun serogrupları belirlendi. Bu değerlendirmeye göre 31 izolatın 8' i polivalan antiserum II, 14'ü polivalan antiserum III ve 9'u ise polivalan antiserum IV pozitif olarak saptandı. Sığırlarda, intimin (eaeA) pozitif STEC suşlarının neden oldukları infeksiyonların durumunu açıklığa kavuşturulabilmesi için, bu konuda daha geniş kapsamlı epidemiyolojik çalışmaların yapılmasına ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Shiga toxin producing Escherichia coli (STEC) is a major pathogen causing severe diseases in humans, like diarrhoea, haemorrhagic colitis and haemolytic-uraemic syndrome. The usual habitat of STEC is the intestinal tract of ruminants, especially cattle. STEC is an important problem in development countries. Foods that become contaminated with faeces from these animals serve as the primary source of human infection.The aim of this study is to determine the presence of shiga toxin (stx1 and stx2) and intimin (eaeA) genes in shiga toxin producing Escherichia coli (STEC) strains that isolated from bovine milk in Aydın with Polimerase Chain Reaction (PCR) and serotyping of these isolates. The material of our study were consisted to 160 milk samples taken from 160 clinic mastitic dairy cows. By phenotypical identification, 31 isolates that were determined as Escherichia coli were also performed genetically identification. The presence of shiga toxin (stx1 and stx2) and intimin (eaeA) genes in this isolates was revealed with multiplex PCR using spesific primers. E. coli isolates were identified to determine O26, O55, O86, O111, O114, O119, O125, O126, O127, O128, O142 and O158 serotypes by slide agglutination method with polyvalent (II, III and IV) sera. These isolates was carried out using the slide agglutination method with polyvalent II, polyvalent III and polyvalent IV sera. E. coli serotypes were determined using the slide agglutination method. According to this assessment, a total of 8 of 31 isolates were identified as polyvalent II, 14 of 31 isolates were identified as polyvalent III and 9 of 31 isolates were identified as polyvalent IV. For investigation of the precise status of the infections caused by eaeA positive STEC strains in dairy cows further epidemiologic studies should be designed