Fesleğenin farmakolojik etkileri: kalitatif ve kantitatif çalışmalar
Pharmacological effects of basil: qualitative and quantitative studies
Yazar: BEYZA NUR ARSLAN
Danışman: PROF. DR. NACİYE DÖNDAŞ
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Bitki özütü = Plant extract ; Fesleğen = Basil ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Mesane = Urinary bladder ; Mesane hastalıkları = Urinary bladder diseases ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmada, izole fare (Swiss albino, erkek, 25-30 g) mesane striplerinde mor fesleğen (Ocimum basilicum var. purpurascens) ekstresi (MFE; 40 µl/ml)'nin farmakolojik etkileri araştırıldı. In vitro kalitatif çalışmalarda, MFE'nin elektriksel alan stimülasyonu (EAS; 5,10,20Hz; 1ms, 40V) ile indüklenen izole fare mesane striplerindeki kontraktil cevaplarda MFE'nin etkileri ve bu etkilerde rol oynayan moleküler mekanizmalar (kolinerjik sistem, nitrerjik sistem, potasyum kanalları ve L-tipi kalsiyum kanallarının rolleri) araştırıldı. In vitro kantitatif çalışmalarda ise izole fare mesanesinde MFE'nin antienflamatuvar ve antioksidan etkileri araştırıldı.
       Ketamin/Ksilazin anestezisi altında servikal dislokasyon ile ötenazi edilen farelerin abdomenleri açılarak mesaneleri izole edildikten sonra, in vitro kalitatif deneylerde, mesaneler longitudinal insizyonla iki eşit parçaya bölünerek strip (şerit) haline getirildi ve 37oC'de %5CO2+%95O2 ile gazlandırılan Krebs-Henseleit solüsyonu içeren 10 ml'lik organ banyosuna 0.5 g tonüs uygulanarak asıldı. Cevaplar izometrik transduser ile bilgisayar donanımlı farmakolojik veri analiz sistemi (BIOPAC, MP35 Data Acquisition System)'ne kaydedildi. İn vitro kantitatif deneylerde ise, izole fare mesane dokuları MFE(40 µl/ml) ile inkübe (40dk) edildikten sonra homojenize edildi ve santrifügasyondan sonra elde edilen süpernatantlarda fesleğenin siklooksijenaz (COX) ve süperoksitdismutaz(SOD) üzerindeki etkileri ELISA(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay)  yöntemi ile analiz edildi.
       İn vitro kalitatif deneylerde, EAS ile indüklenen izole fare mesane strip kasılmalarının tamamı MFE tarafından istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde inhibe edildi. Bunun zıttında, kolinerjik muskarinik reseptörlerin nonselektif antagonisti olan atropin, ilgili dokulardaki EAS'ye bağlı kasılmalarda kontrole göre istatistiksel olarak anlamlı bir artışa neden oldu. MFE+Atropin kombinasyonunda ise MFE'nin atropin etkisini istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde inhibe ettiği gözlemlendi. Benzer şekilde, NO sentaz inhibitörü olan L-NOARG, EAS kasılmalarını potansiyelize etti. MFE+L-NOARG kombinasyonunda ise MFE'nin L-NOARG etkisini istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde inhibe ettiği gözlemlendi. Buna ilave olarak potasyum kanallarının nonselektif blokörü olan tetraetilamonyum (TEA) EAS kasılmalarını kontrole göre, anlamlı bir şekilde arttırdı. TEA+MFE kombinasyonunda ise, MFE'nin TEA etkisini istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde inhibe ettiği gözlemlendi. Diğer taraftan L-tipi kalsiyum kanal blokörü olan verapamil, EAS ile indüklenen izole fare mesane striplerindeki kasılma cevaplarında kontrole göre istatistiksel olarak anlamlı bir azalmaya neden oldu. Verapamil+MFE kombinasyonunda ise MFE'nin verapamilin inhibitör etkisini potansiyelize ettiği gözlemlendi. İn vitro kantitatif çalışmalarda, MFE(40 µl/ml)'nin siklooksijenaz (COX) enzim seviyesini kontrol grubuna göre azalttığı, ancak bu azalmanın istatistiksel olarak anlamlı olmadığı gözlemlendi.MFE'nin antioksidan etkisinin araştırıldığı deneylerde ise, MFE'nin süperoksitdismutaz (SOD) enzim seviyelerinde bariz bir artışa neden olmakla birlikte bu artışın istatistiksel olarak anlamlı olmadığı gözlemlendi.
       Sonuç olarak; in vitro kalitatif deneysel bulgular, MFE'nin EAS ile indüklenen kontraktil cevaplar üzerinde inhibitör etki oluşturduğu ve bu inhibitör etkide, kolinerjik yolak, nitrerjik yolak, potasyum kanal aktivasyonu ve kalsiyum kanal inhibisyonunun rol oynadığını göstermektedir. Ayrıca deneysel sonuçlar MFE'nin uygulanan konsantrasyonda antienflamatuvar ve antioksidan etkisinin olmadığını telkin etmektedir.

Abstract:
In this study, the pharmacological effects of purple basilicum (Ocimum basilicum var. purpurascens) extract (MFE; 40 µl/ml) in isolated mouse (Swiss albino, male, 25-30 g) bladder strips were investigated. In in vitro qualitative studies, the effects of MFE on contractile responses in isolated mouse bladder strips induced by electrical field stimulation (EAS; 5,10,20Hz; 1ms, 40V) of MFE and the molecular mechanisms involved in these effects (cholinergic system, nitrergic system, potassium channels and the roles of L-type calcium channels) were investigated. In in vitro quantitative studies, the anti-inflammatory and antioxidant effects of MFE in isolated mouse bladder were investigated.
       After opening the abdomen and isolating the bladders of mice euthanized by cervical dislocation under Ketamine/Xylazine anesthesia, in in vitro qualitative experiments, the bladders were divided into two equal parts through a longitudinal incision and stripped, and Krebs-Henseleit solution gassed with 5%CO2+95%O2 at 37oC 0.5 g of tonus was applied to a 10 ml organ bath containing. The answers were recorded in a computer-equipped pharmacological data analysis system (BIOPAC, MP35 Data Acquisition System) with an isometric transducer. In in vitro quantitative experiments, isolated mouse bladder tissues were homogenized after incubation (40 min) with MFE (40 µl/ml) and the effects of basil on cyclooxygenase (COX) and superoxide dismutase (SOD) in the supernatants obtained after centrifugation ELISA(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay) analyzed by the method.
       In in vitro qualitative experiments, all of the isolated mouse bladder strip contractions induced by EAS were statistically significantly inhibited by MFE. In contrast, atropine, a nonselective antagonist of cholinergic muscarinic receptors, caused a statistically significant increase in EAS-induced contractions in the relevant tissues compared to control. In the combination of MFE + Atropine, it was observed that MFE inhibited the effect of atropine in a statistically significant way. Similarly, L-NOARG, an inhibitor of NO synthase, potentiated EAS contractions. In the combination of MFE+L-NOARG, it was observed that MFE inhibited the effect of L-NOARG in a statistically significant way. In addition, tetraethylammonium (TEA), a nonselective blocker of potassium channels, significantly increased EAS contractions compared to control. In the combination of TEA+MFE, it was observed that MFE inhibited the effect of TEA in a statistically significant way. On the other hand, verapamil, an L-type calcium channel blocker, caused a statistically significant decrease in contractile responses in EAS-induced isolated mouse bladder strips compared to the control. In the combination of verapamil + MFE, it was observed that MFE potentiated the inhibitory effect of verapamil. In in vitro quantitative studies, it was observed that MFE(40 µl/ml) decreased the cyclooxygenase (COX) enzyme level compared to the control group, but this decrease was not statistically significant. In experiments investigating the antioxidant effect of MFE, it was observed that although MFE caused an obvious increase in superoxide dismutase (SOD) enzyme levels, this increase was not statistically significant.
       As a result; in vitro qualitative experimental findings show that MFE has an inhibitory effect on contractile responses induced by EAS, and that cholinergic pathway, nitrergic pathway, potassium channel activation and calcium channel inhibition play a role in this inhibitory effect. In addition, experimental results suggest that MFE has no anti-inflammatory and antioxidant effects at the applied concentration.