Larinks kanserli hastalarda ctla-4 düzeyi ve polimorfizmi ile triptofan metabolizmasının araştırılması
Investigation of ctla-4 level and polymorphism and tryptophan metabolism in patients with laryngeal cancer
Yazar: AYÇA SEZEN US
Danışman: PROF. DR. İLHAN YAYLIM ; PROF. DR. ÖZLEM KÜÇÜKHÜSEYİN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı / Moleküler Tıp Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Laringeal hastalıklar = Laryngeal diseases ; Laringeal neoplazmlar = Laryngeal neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Restriksiyon fragman uzunluğu polimorfizmi = Restriction fragment length polymorphisms

Özet:
Larinks kanseri, tüm baş ve boyun kanserlerinin üçte birini oluşturan önemli bir morbidite ve mortalite kaynağıdır. T hücre bağışıklığının düzenleyicilerinden CTLA-4 geni kanser immünoterapisi yaklaşımlarında son yıllarda oldukça ilgi görmüştür ancak larinks kanseri ile ilişkisi hakkında yeterli çalışma bulunmamaktadır. Çalışmamızın amacı, larinks kanserli hastaların immünitesinin düzenlenmesinde rolü olabilecek CTLA-4'ün serum düzeyi ve polimorfizmi ile triptofan (TRP) ve metabolitleri olan kinürenin (KYN) ve kinürenik asit (KYNA) seviyelerinin varlığı ve değişimi ile birlikteliğinin incelenmesidir. Bu çalışma kapsamında hasta ve kontrollerin kanlarından izole edilmiş DNA örnekleri kullanılarak CTLA-4 49 A/G ve CTLA-4 318 C/T polimorfizmlerinin  genotipik özellikleri, serum sCTLA-4 seviyeleri ile plazma TRP, KYN ve KYNA seviyeleri yüksek performanslı sıvı kromotografisi (HPLC) ile tespit edilmiştir. Elde ettiğimiz verilere göre, LK hastaları ve kontrol grubu CTLA-4 49 A/G genotip ve allel dağılımı anlamlıydı (sırasıyla, p=0,016 ve p=0,005). G allel taşıma frekansı (p=0,026) ve GG genotip frekansı hastalarda anlamlı yükselmiştir. Kontrolle karşılaştırıldığında hasta gurubunda CA haplotipi (p=0,0047) anlamlı düşük, CG haplotipinin (p=0,0143) anlamlı yüksekti. LK hastalarının ve kontrollerin taşıdıkları CTLA-4 49 A/G gen polimorfizmine ait genotipler ile sCTLA-4 seviyeleri birlikte değerlendirildiğinde A alleli taşıyan hasta ve kontrol grubu bireylerin sCTLA-4 seviyeleri anlamlı artmıştı (p<0,001). CTLA-4 318 C/T gen polimorfizmine ait genotipler ile sCTLA-4 serum seviyeleri birlikte değerlendirildiğinde C alleli taşıyan hastaların sCTLA-4 seviyelerindeki artış anlamlıydı (p<0,001). CTLA-4 49 A/G gen polimorfizmine ait genotipler ile KYN seviyeleri birlikte değerlendirildiğinde AG genotipine (p=0,048) sahip veya A alleli taşıyan (p=0,006) hastaların KYN seviyeleri anlamlı azalmıştı. CTLA-4 318 C/T gen polimorfizmine ait genotipler ile KYN seviyeleri birlikte değerlendirildiğinde C alleli taşıyan (p=0,005) hastaların KYN seviyeleri anlamlı azalmıştı.  Çalışmamızda, larinks kanserinde önemli immün kontrol noktalarından biri olan CTLA-4 molekülünün serum soluble CTLA-4 düzeyleri ve buna etki edebilecek kritik gen varyantlarının tümör hücre metabolizmasında önemli rol oynayan triptofan metabolitleri ile beraber değerlendirilecektir.

Abstract:
Larynx cancer is an important source of morbidity and mortality, accounting for one-third of all head and neck cancers. The CTLA-4 gene, which is one of the regulators of T cell immunity, has received a lot of attention in cancer immunotherapy approaches in recent years, but there are not enough studies on its relationship with larynx cancer. The aim of our study is to examine the serum level and polymorphism of CTLA-4, which may have a role in regulating the immunity of patients with larynx cancer, and the presence and change of tryptophan (TRP) and its metabolites kynurenine (KYN) and kynurenic acid (KYNA) levels. In this study, genotypic features of CTLA-4 49 A/G and CTLA-4 318 C/T polymorphisms, serum sCTLA-4 levels and plasma TRP, KYN and KYNA levels were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) using DNA samples isolated from the blood of patients and controls. According to the data we obtained, CTLA-4 49 A/G genotype and allele distribution in LK patients and control group were significant (p=0.016 and p=0.005, respectively). G allele carrying frequency (p=0.026) and GG genotype frequency were significantly increased in patients. Compared to the control group, CA haplotype (p=0.0047) was significantly lower and CG haplotype (p=0.0143) was significantly higher in the patient group. The genotypes of CTLA-4 49 A/G gene polymorphism carried by LK patients and controls and sCTLA-4 levels were evaluated together, sCTLA-4 levels of patients and control group individuals carrying A allele were significantly increased (p<0.001). The genotypes of the CTLA-4 318 C/T gene polymorphism and sCTLA-4 serum levels were evaluated together, the increase in sCTLA-4 levels of patients carrying the C allele was significant (p<0.001). The genotypes of the CTLA-4 49 A/G gene polymorphism and KYN levels were evaluated together, the KYN levels of the patients with the AG genotype (p=0.048) or the A allele (p=0.006) were significantly reduced. The genotypes of the CTLA-4 318 C/T gene polymorphism and KYN levels were evaluated together, the KYN levels of the patients carrying the C allele (p=0.005) were significantly reduced. In our study, serum sCTLA-4 levels of CTLA-4 molecule, which is one of the important immune control points in larynx cancer, and critical gene variants that may affect it, will be evaluated together with tryptophan metabolites that play an important role in tumor cell metabolism.