Deneysel diyabette dişi sıçan aortunda TGF-ß1 ekspresyonunun değerlendirilmesi ve aort katmanlarının ölçümlerinin karşılaştırılması
Evaluation of TGF-ß1 expression and compare of measurement of aort layers on the aorta of female rats in experimental diabetes
Yazar: GÖKHAN CÜCE
Danışman: PROF. DR. SERPİL KALKAN
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Aort-abdominal = Aorta-abdominal ; Aort-torasik = Aorta-thoracic ; Diabetes mellitus-deneysel = Diabetes mellitus-experimental ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta

Özet:
Bu çalışmada deneysel diyabetin multifonksiyonel bir sitokin olan TGF ß1'in abdominal ve torasik aorta duvarındaki ekspresyonuna ve aorta duvarında tunika intima ve tunika media kalınlıklarına etkisi incelenmiştir.Çalışmamızda 3'er aylık 250- 300 gr ağırlığında Sprague-Dawley türü dişi sıçan kullanıldı. Her grupta 12'şer sıçandan diyabet ve kontrol olmak üzere iki grup oluşturuldu. Deneysel diyabet grubuna streptozotosin 50 mg/kg intraperitoneal olarak tek enjeksiyonla verilerek oluşturuldu. Kontrol grubuna ise serum fizyolojik 50 mg/kg intraperitoneal olarak verildi. Başka hiçbir uygulama yapılmadan 60. gün sonunda anestezi altında iki grubun da abdominal ve torakal aorta damarları çıkarıldı. Kontrol torasik (TK), diyabetli torasik (TD), kontrol abdominal (AK) ve diyabetli abdominal (AD) olmak üzere 4 adet inceleme grubu oluşturuldu. Dokuların rutin histolojik takibi yapıldı. Elde edilen parafin bloklardan 4 mikron kalınlığında kesitler alındı. Kesitler Hematoksilen Eozin ve Verhoeff Van Gieson elastik lif boyaları ile boyandı. Işık mikroskobunda abdominal ve torasik aort damarlarının intima ve media kalınlıkları ölçüldü. Ölçümler oküler mikrometre ile yapıldı İmmunohistokimya boyaması için Genway Anti-TGF beta (TB21) IgG 20-272-193974 primer antikoru kullanıldı. İntima ve media kalınlık ölçümlerinde AD ve AK grupları, TD ve TK grupları kendi aralarında değerlendirildi ve istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmadı. TGF ß1 ekspresyonunda ise TD grubunda TK grubuna göre anlamlı bir artış gözlendi. AD ve AK grupları arasında anlamlı bir fark bulunmadı.Çalışmamızda 60 günlük diyabet süresinin diyabetin aortun farklı segmentlerinde intima-media tabakalarında kalınlaşmaya sebep olabilecek patolojik değişiklikler için yeterli bir süre olmadığını düşünmekteyiz. Deneysel diyabet gruplarının hiperglisemi etkisinde kalma süresini ve yaşam süresini uzatabilmek için kontrollü insülin tedavisi yapılmasının insanlarda oluşan diyabetik kronik komplikasyonlara benzer yaklaşık veriler ve başarılı sonuçlar elde edilmesine sebep olabileceği düşünülmektedir. TGF ß1'in abdominal aorta duvarında ekpresyonunun negatif olması ve abdominal aortun ateroskleroz gelişimine yatkın olması, zaman içinde (yaşlanma ile) gelişebileceği düşünülerek buna uygun bir zemin hazırlandığı şeklinde yorumlanabilir. Torasik aorta duvarında ise hücre adezyonu ve doku tamiri gibi hücresel olayları düzenlediği şeklinde yorumlanabilir.

Abstract:
In this study, it was aimed to investigate the effects of experimental diabetes on TGFB expression which is a multifunctional cytokin on abdominal and thoracic aortic wall, tunica intima and tunica media thickness in aorta wall. Three months old female Sprague Dawley rats weighing 250 to 300 g were used in this study. The rats were divided into two groups containing seven animals each. They were non-diabetic and streptozotocin (STZ)-induced diabetic group. In the diabetic group, diabetes was induced by a single intraperitoneal injection of 50 mg/kg STZ that was prepared in a 0.1 M citrate buffer solution, pH 4.5. Non-diabetic rats were injected saline only. At the end of the 60. day without any other application 2 of the groups were taken under anesthesia, the abdominal and thoracic arteries were removed. Four study groups toracic control (TC), thoracic diabetic (TD), abdominal control (AC) and abdominal diabetic (AD) were formed. 4 micron paraffin sections belong to aortic tissue were performed after routine histologic process. Hematoxylin Eosin and Verhoeff?s elastic staining were performed. Evaluations were performed under a light microscope. Abdominal and thoracic intima thickness and media thickness of aorta were measured with the oculometer. For immunohistochemistry staining Anti-TGF beta (TB21) IgG 20-272-193974 primary antibody was used. In the evaluation of intima and media thickness measurements there were no significant statistical differences between AD and AC groups and TD and TC groups. TGF ß1 expression showed a significant increase in TD group compared to TC. AD and AC did not differ significantly.In our study we think that 60 day duration of diabetes is not enough time for the pathological changes could lead to thickening in different segments of the aortic intima-media layers. In human studies tunica intima and tunica media thickness of the aorta increased significantly with diabetes compared with the control groups because of many factors such as human life is longer than experimental models as physiologically, with cholesterol-rich diet nutrition, physical inactivity increased with age, disease, smoking and stress. To extend to time of staying under the effects of hiperglisemia and to prolong to life for experimental diabet groups, controlled insulin therapy can be done thus its thought to may cause that approximately similar data and succesful results will be obtained like diabetic cronic complications occur in people. TGF ß1 expression was negative in the wall of the abdominal aorta and abdominal aorta is predisposed to the development of atherosclerosis, it could be developed with overtime (aging), it can be interpreted for preparing an appropriate basis for the development of atherosclerosis. In the toracic aorta wall, it can be interpreted that TGF ß1 coordinates the cellular events such as cell adhesion and tissue repair.