Dereotundan izole edilen polifenol oksidaz enziminin bazı killerle immobilizasyonu ve seçilmiş özelliklerinin incelenmesi
Immobilization and investigation of selected properties of polyphenol oxidase enzyme isolated from dill on several clays
Yazar: NURAN AKBULUT
Danışman: YRD. DOÇ. DR. HALİS ŞAKİROĞLU
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada dereotundan (Anethum graveolens) PFO enzimi amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleri ile kısmen saflaştırılarak bazı killerle immobilize edilmiş ve seçilmiş özellikleri incelenmiştir. Bu amaçla optimum şartlarda (pH, sıcaklık, ve iyonik şiddet) KM ve Vmax değerleri belirlenmiştir. Katekol, klorogenik asit, 3,4 dihidroksi fenil alanin ve gallik asit substratları için KM değerleri sırası ile 1,57×10-3, 2,91×10-4, 6,10×10-2, 7,10×10-2 M; Vmax değerleri ise 526,31, 416,66, 204,08 ve 70,92 EÜ/ml×dak olarak elde edilmiştir.İmmobilize çalışmaları belirlenen farklı miktarlardaki killer ile 1 ml fosfat tamponu (pH=6,5 0,2 M) karıştırılarak 0,5 ml kısmen saflaştırılmış enzim çözeltisi ilave edilip immobilizasyon işlemi gerçekleştirilmiştir. Buna göre; 0,066 g/ml; 0,040 g/ml; 0,020g/ml; 0,0133 g/ml; 0,0066 g/ml; 0,0033 g/ml konsantrasyonlarında üç farklı kilden numuneler hazırlanmıştır.PFO enzim aktivitesi, substrat olarak katekol kullanılarak 420 nm dalga boyunda spektrofotometrik yöntemle ölçülmüştür. Buradan % A miktarları hesaplanarak I50 değerleri ve Ki sabitleri bulunmuştur. Buna göre immobilize enzimler içinde en etkili olanın kırmızı kil ile gerçekleştirilen enzim immobilizasyonu olduğu gözlemlenmiştir.Bunlara ek olarak dört farklı değişen inhibitör konsantrasyonlarında substrat olarak katekol kullanılmış ve sırasıyla, askorbik asit, L-sistein klorür, sodyum metabisülfit ve tiyoüre ile çalışılarak I50 değerleri ve Ki sabitleri tespit edilmiştir. En etkili inhibitörün askorbik asit olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
In that research PFO enzyme partially purified from dill (Anethum Graveolens) by means of sedimentation of ammonium sulfate and dialyze operation were immobilized on several clays and selected properties of it were experimentally investigated. For this reason, KM and Vmax values determined with optimum conditions (pH, temperature and ionic straugth). For substrate of catechol, chlorogenic acid, 3,4 dihydroxy phenol alanine and gallic acid, KM values of 1,57×10-3, 2,91×10-4, 6,10×10-2, 7,10×10-2 M and Vmax values of 526,31, 416,66, 204,08, 70,92 EU/ml×minute were obtained respectively.In experiments, firstly different quantities clay specimens in 1,0 ml phosphate buffer (pH=6,5 0,2 M) were stirred, then partially purified enzyme solution (0,5 ml) were added in to the buffer , and PFO immobilization works were realized. In according to this, specimens from three different clays were prepared in 0,066 g/ml; 0,040 g/ml; 0,020 g/ml; 0,0133 g/ml; 0,0066 g/ml; 0,0033 g/ml concentrations.PFO enzyme activity, using catechol as a substrate, was measured in 420 nm wave length by spectrophotometer method. By calculating %A values from that, I50 and Ki constants were determined. In according to experimental results, the most effective enzyme immobilization was achieved in immobilization of red clay as compared with each others. In addition to this, catechol as a substrate in four different inhibitor concentrations was used and I50 values and Ki constants were determined by using ascorbic acid, L-Cysteine chloride, sodium metabisulphite and thiourea, respectively. Ascorbic acid was assessed as the most effective inhibition.