PEG-laktat blok kopolimerlerinden oluşan misellere albumin yüklenmesi ve salımı
Albumin loading and release micelles formed from PEG-lactide block copolymers
Yazar: EMEL HÜRTÜRK
Danışman: PROF. DR. ERHAN BİŞKİN
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering

Özet:
Bu çalışma ile doku mühendisliğinde doku iskeleleri ile birlikte kullanılmak üzere polimerik misellerin hazırlanması, protein hapsetme ve salım yeteneklerinin gözlenmesi amaçlanmıştır.Farklı oranlarda ve molekül ağırlıklarında PEG kullanılarak sentezlenen PLA-PEG kopolimerleri ile misel oluşturma kapasiteleri incelenmek üzere ön çalışma yapılmış ve en uygun bulunan ile çalışmaya devam edilmiştir. Kopolimerin ısıl, fiziksel ve kimyasal özelliklerinin FTIR, DSC ve NMR kullanılarak karakterizasyonu yapılmıştır.Miseller su içinde yağ metodu ile hazırlanmıştır. Misel çapı ve büyüklük dağılımı Zetasizer kullanılarak tayin edilmiştir. Kritik misel konsantrasyonu piren metodu ile tayin edilmiştir.Salım çalışmaları için FITC işaretli BSA kullanılmıştır. BSA, protein işaretleme prosedürü takip edilerek işaretlenmiş ve liyofilize edilerek kullanılmıştır. Seçilen polimer kullanılarak miseller hazırlanmış ve FITC-BSA yüklenmiştir. Miseller, verimliliği daha yüksek olduğu için lipozom hazırlama metodu da olan ince film metodu kullanılarak hazırlanarak protein yüklemeleri yapılmıştır. BSA'nın molekül ağırlığının yüksek olması göz önüne alınarak özel bir diyaliz membranı kullanılmıştır (MWCO:100kDa). Değişik miktarda FITC-BSA yüklenmiş miseller diyaliz membranı içine doldurulmuş ve salım işlemi PBS ortamında, 37oC, 60 rpm'de karartılmış karıştırmalı su banyosunda gerçekleştirilmiştir. Protein tayini Bradford protein tayin metodu ve mikroplaka okuyucu yardımıyla yapılmış ve salım çalışmaları 1 ay sonunda tamamlanmıştır.

Abstract:
In this study, it was aimed to prepare polymeric micelles, to examine protein encapsulation efficiency and release kinetics of the micellar particles in order to use in tissue engineering applications incorporated to scaffolds.PLA-PEG copolymers were synthesized at different PEG ratios (MW and molar ratio) and pre-studies were examined to investigate micelle formation of those copolymers and to choose the best for release studies. Thermal, physical and chemical characterizations of the copolymer were measured by FTIR, DSC and NMR.Micelles were formed by oil in water emulsion method. Diameter and size distribution was examined by Zetasizer. Critical micelle concentration was evaluated by pyrene method.Release studies were examined with FITC labeled BSA. Protein labeling procedure was followed to label BSA. Labeled protein was lyophilized to store. Chosen polymer was used to form micelles and encapsulate FITC-BSA. Thin film method which is also used to form lipozomes, is more efficient to encapsulate protein therefore, this method was used for encapsulation. A special dialysis tubing membrane (MWCO: 100kDa) was used for release studies because of high molecular weight of BSA. FITC-BSA encapsulated micelles which contain BSA at different concentrations were. Encapsulated micelle loaded dialysis tubing was placed in PBS medium at 37oC, 60 rpm in a darkened shaker water bath. Bradford protein assay and microplate reader were used to examine protein amount in the release medium during 1 month.