Biyolojik materyallerde B12 vitamini bileşenlerinin ve diğer suda çözünür vitaminlerin dağılımının incelenmesi
Investigation of vitamin B12 components and other water soluble vitamins in biological materials
Yazar: RABİYE ÇINAR BUDAK
Danışman: PROF.DR. ARİF USLAN
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
VÖZETBİYOLOJİK MATERYALLERDE B12 VİTAMİNİBİLEŞENLERİNİN VE DİĞER SUDA ÇÖZÜNÜRVİTAMİNLERİN DAĞILIMININ İNCELENMESİBUDAK ÇINAR, RabiyeDoktora Tezi, Biyokimya BölümüTez Yöneticisi: Prof. Dr. Arif H. UslanEylül 2006, 158 sayfaSuda çözünen vitaminler Tiamin (B1), Riboflavin (B2), Niasinamid(B3), Pantotenik asit (B5), Piridoksin (B6), Biotin (B7), Folik asit (B9),CN-Cbl ( B12 ) ve Askorbik asit(C) dir. Biyolojik aktif B12 türleri metilkobalamin (Me-Cbl) ve 5â²-deoksiadenozilkobalamindir (Ado-Cbl). Fakatdokularda varlıkları indirekt olarak gösterilmiş akuakobalamin (OH-Cbl),nitrokobalamin (O2N-Cbl) ve Sülfitokobalamin (O3S-Cbl) bileşenleri debesin değeri olan kobalamin türevleridir. Siyanokobalamin (CN-Cbl)vitamin B12 olarak adlandırılan dayanıklı bir türevidir.Biyolojik materyallerde suda çözünen vitaminler mikrobiyolojik,enzimatik, radyoizotop seyreltme, flow-injeksiyon, likitkromatografi veatomik absorbsiyon, yüksek basınç kapiler elektroforezi(HPCE), yüksekbasınç sıvı kromatografisi (HPLC) ve özel kimyasal yöntemlerle tayinedilir. Bunlar oldukça pahalı ve zaman gerektiren işlemlerdir. Ayrıcamikrobiyolojik yöntemlerle sadece biyolojik aktif B12 türleriölçülebilmekte, izotop seyreltme yöntemlerinde kullanılan bağlayıcıprotein saflığı sonuçları etkilemektedir. Yüksek Basınç SıvıKromatografisi (HPLC) farklı türlerin tayinine olanak sağlayan hızlı birVItayin yöntemidir. Sentetik B12 türlerinin ve vitamin tabletlerininanalizinde başvurulan bir yöntemdir. Fakat biyolojik materyallerdevitamin analizlerinde kullanılmamıştır.Çalışmamızda karaciğer ekstraktında B12 vitamini ve türlerinindağılım oranları ile diğer suda çözünür vitamin miktarlarının saptanmasıamaçlanmış ve en iyi ekstrakt hazırlama şartları araştırılmıştır. Bu amaçlasulu ortamda ekstraksiyona ısı, asit, kadmiyum asetad, amonyumprolidinditiyokarbamat (APDC) etkileri incelenmiş, total B12 tayiniaraştırılmıştır. Cbl ve Cbi standartlarının ve standartların siyanürlemuamelesi sonucu oluşan HPLC pik örneklerinin tek tek toplanması ileelde edilen analiz örneklerinin ESI-Mass ve FTIR spekrumları alınaraksiyanür işlemleri ile oluşan bileşiklerin yapısı hakkında bilgi edinilmeyeçalışılmıştır.Anahtar Sözcükler: Koenzim B12, Vitamin B12, Suda çözünenvitaminler, HPLC

Abstract:
VIIABSTRACTINVESTIGATION OF VITAMIN B12 COMPONENTSAND OTHER WATER SOLUBLE VITAMINS INBIOLOGICAL MATERIALSBUDAK ÇINAR, RabiyePh.D in BiochemistrySupervisor: Prof. Dr. Arif H. USLANSeptember 2006 158 pagesThe water soluble vitamins are Tiamin (B1), Riboflavin (B2),Niasinamid (B3), Pantotenik asit (B5), Piridoksin (B6), Biotin (B7), Folikasit (B9), CN-Cbl ( B12 ) and Askorbik asit(C). Biological aktive B12 aremetil kobalamin (Me-Cbl) and 5â²-deoksiadenozilkobalamin (Ado-Cbl).But aquacobalamin (OH-Cbl), nitrocobalamin (O2N-Cbl) andsülfitocobalamin (O3S-Cbl) components are involution of cobalaminwhich have food value. Shown indirect subsistences at tissues.Water soluble vitamins at biological materials apointed withmicrobiologic, enzimatic, radioisotopic dilution assays, flow injection,liquid chromatograpy and atomic absorbsion, high performance capilaryelectrophores, high pressure liquid chromatography and spesial chemicalmethods. These are very expensive and time spending proceses. Meanwhile only biologic methods. Purity of binding protein, which is used inmethods of izotop dilution, influses results. HPLC which allowsapointment of different species, is a fast apointment method. This methodVIIIuses for analysing synthetic B12 species and vitamin tablets. But it hasn?tused in vitamin analysis of biological materials.In this study we aimed determine B12 vitamin and speciesdispersion ratio in liver extract with the other water soluble vitaminamount. And research the best extract preparation essension.On this purpose we examine effects of heat, acid, cadminiumacetate, APDC to extraction in aquatic ambiant and examine total B12appointment standarts of Cbl and Cbi and HPLC peak examples, whichget the results of standarts dealing with cyanide, individually gettogether. Optaining analysis examplesspectrum get by ESI-Mass andFTIR. We try to get information about composition of compounds, whichbe formed with cyanide proceeding.Keywords: Coenzim B12, Vitamin B12, Water soluble vitamins, HPLC