Trombosit süspansiyonlarında, bakteriyel kontaminasyonun otomatize kan kültürü ve flow sitometri yöntemi ile araştırılması
Investigation of bacterial contamination by automatized blood culture and flow cytometry method in platelet suspensions
Yazar: MEHTAP BOLAT
Danışman: PROF. DR. MEHMET KÖROĞLU
Sakarya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı / Kan Bankacılığı ve Transfüzyon Tıbbı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Bakteriler = Bacteria ; Kan bileşenleri transfüzyonu = Blood component transfusion ; Kan kültürü = Blood culture ; Kan transfüzyonu = Blood transfusion ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Mikrobiyal kirlilik = Microbial contamination ; Transfüzyon reaksiyonu = Transfusion reaction ; Trombosit sayısı = Platelet count

Özet:
Giriş ve amaç: Bu çalışmada, aferez trombosit süspansiyonlarındaki bakteriyel kontaminasyon otomatize sisteme uyumlu özel trombosit kültür şişeleri ve flow sitometri yöntemi ile araştırılması amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Sakarya Üniversitesi Eğitim ve Araştırma Hastanesi Transfüzyon Merkezinde hazırlanan rutinde alınan 50 adet aferez trombosit süspansiyonu ile standart suşlar ve klinik izolatların kullanıldığı 33 aferez trombosit süspansiyonu bakteriyel kontaminasyon yönünden incelenmiştir. Beş farklı standart suş ve 6 farklı klinik izolat ile spike örnekler (100, 101, 102 CFU/ml) hazırlandıktan sonra (1 ml bakteri süspansiyonu+1 ml trombosit süspansiyonu) BacT/ALERT® BPA şişelerine ekildi. Eşzamanlı olarak oda ısısında ve 35±2°C'de 16-18 saat inkübe edilen örnekler, flow sitometri cihazı ile analiz edildi. İnkübasyon sonrası sonra 3 kez dondurup çözme ile trombositler parçalandı ve 500rpm/3dk santrifüj işlemini takiben pelletten flow sitometrik analiz yapıldı. Rutinde alınan 50 adet aferez trombosit süspansiyonu alındığı gün özel trombosit kültür şişelerine ekilerek otomatize kan kültür sistemine konuldu ve aynı örnekler oda ısısında ve 35±2°C'de tutularak flow sitometrik yöntemle 1, 3 ve 5. günlerde) analiz edildi. 
Bulgular: Standart suşlar ve klinik izolatlarla hazırlanan spike örneklerin tümünde BacT/ALERT® BPA ile 12-18 saatte pozitiflik saptandı. Oda ısısında inkübe edilen örneklerden S.aureus (klinik ve standart suş), E.fecalis (standart suş) ve P. aeruginosa klinik izolatı kullanılan 12 örnekte (%36); etüvde inkübe edilen örneklerden 22'sinde (%66) flow sitometrik analizde bakteriyel kontaminasyon saptandı. Spike örneklerin 9'unda (%13) saptanmadı (E.coli, S.epidermidis ve E.fecalis). BacT/ALERT® BPA ile 50 aferez trombosit örneğinin 1'inde pozitiflik (Bacillus simplex) saptandı. Bu örneklerde flow sitometri ile pozitiflik saptanmadı.
Sonuç: Trombosit süspansiyonlarında bakteriyel kontaminasyonun belirlenmesi amacıyla kullanılan özel kan kültürü şişeleri ve flow sitometri yöntemi arasında yüksek oranda uyum gözlenmiştir. Ancak flow sitometri yönteminin bu alanda kullanımı çok yeni olduğundan daha geniş ve kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Introductıon and aim: In this study, it is aimed to investigate bacterial contamination in apheresis platelet suspensions by automated system compatible blood culture bottles and flow cytometry method.
Material and Method: 50 apheresis platelet suspension and 33 apheresis platelet suspension using standard strains and clinical isolates were examined for bacterial contamination in the routine prepared at the Transfusion Center of Sakarya University Training and Research Hospital. Spike samples (100, 101, 102 CFU / ml) were prepared with 5 different standard strains and 6 different clinical isolates (1 ml of bacterial suspension + 1 ml of platelet suspension) and planted in BacT / ALERT® BPA bottles. Samples incubated simultaneously at room temperature and 35 ± 2 ° C for 16-18 hours were analyzed by flow cytometry device. After incubation, platelets were broken down by freezing and thawing 3 times and flow cytometric analysis was performed from the pellet following 500rpm / 3min centrifugation. On the day of taking 50 apheresis platelet suspension taken in routine, they were placed in special platelet culture bottles and placed in the automated blood culture system, and the same samples were kept at room temperature and 35 ± 2 ° C and analyzed by flow cytometric methods on days 1, 3 and 5).

Findings: All of the spike samples prepared with standard strains and clinical isolates were positive with BacT / ALERT® BPA in 12-18 hours. Of the samples incubated at room temperature, S. aureus (clinical and standard strain), E.fecalis (standard strain) and P. aeruginosa clinical isolate was used in 12 samples (36%); Bacterial contamination was detected in flow cytometric analysis in 22 (66%) of the incubated samples in the oven. It was not detected in nine of spike samples (13%) (E.coli, S.epidermidis and E.fecalis). Of the routine 50 apheresis platelets, BacT / ALERT® BPA showed only one positivity (Bacillus simplex). No positivity was detected in these samples by flow cytometry.

Conclusion: A high degree of compliance was observed between the special blood culture bottles and flow cytometry method used to determine bacterial contamination in platelet suspensions. However, since the flow cytometry method is very new to use in this field, larger and more comprehensive studies are needed.