Echinococcus granulosus antigenlerinin izolasyonu tanıdaki değerlerinin araştırılması
Isolation of echinococcus ganulosus antigens and validating diagnostic values
Yazar: TUNCAY ÇELİK
Danışman: PROF.DR. ÇİĞDEM GÜNGÖR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Parazitoloji = Parasitology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
52ÖZETEchinococcus granulosus antijenlerinin izolosyonu vetanıdaki değerlerinin araştırılmasıEchinococcus granulosus'un metasestod formunun yol açtığı kistik ekinokokoz (KE),ülkemizde hem halk sağlığı hem de sosyoekonomik açıdan önemli bir zoonozdur.Yapılan çalışmalar, KE tanısında görüntüleme yöntemlerinin, serolojik yöntemlerledoğrulanması gerekliliğini ortaya koymuştur, bununla birlikte serolojik testlerinduyarlılığı ve özgüllüğünde büyük oranda antijen standardizasyon eksikliğine bağlıolarak farklılıklar ortaya çıkmaktadır. Bu nedenle kolay standardize edilebilir,duyarlı ve özgül bir serolojik yöntem, KE'un doğru tanısı için gereklidir.Tanısal açıdan önemli antijenleri elde etmek ve bu kozmopolitan zoonozun tanısınıkoyabilmek için bugüne kadar kist sıvısı ve çeşitli kist elemanları (protoskoleksler,kist duvar yapıları gibi) kullanılmıştır. Bu antijen kaynakları içinde en zengin vedeğerli olanın kist sıvısı olduğu bildirilmiştir. Kist sıvısının içeriği çok karmaşıktır vehem konak hem de parazit kaynaklı pek çok antijen içermektedir. Tanıda daha özgültestlerin oluşturulması açısından bu antijenlerin saflaştırılması ve özgül antijenlerinelde edilmesi önemlidir. Antijenik süspansiyonun karakterizasyonu için, Gradient jelelektroforez uygulanmıştır. Gradient jel elektroforez ile protein bantları ortayakonmuş, immunoblotting ile de bu bantların KE'lu hasta serumuyla karşılaştırılmasısonucu reaktifliği saptanmıştır.Ameliyattan sonraki ilk ay içerisinde veya PAIR (Puncture, Aspiration, Injection,Reaspiration) uygulanarak kisti inaktif hale getirilmiş 50 hasta serumu WByöntemiyle test edilmiştir. Ayrıca, KE hastalığı bulunmayan 20 sağlıklı insandan veçapraz reaksiyonları saptayabilmek için de başka paraziter hastalıkları olduğubelirlenmiş beş hastanın serumları, koyun karaciğerinden alınan saf kist sıvısıkullanılarak Western Blot (WB) yöntemiyle çalışılmıştır.53KE'li hastaların tedaviden veya ameliyattan hemen sonra alınan (1. ay-16. yıl)serumlar, WB ile test edildiğinde 215, 205, 120, 116, 66, 50, 45, 29, 20, 14.2, 8 ve6.5 kDa molekül ağırlığına sahip 12 adet özgül antijen saptanmıştır. Ayrıca, başkaparaziter hastalıkları olduğu belirlenmiş beş hastanın (Hymenolepis nana, Enterobiusvermicularis, Ascaris lumbricoides Taenia saginata Trichuris trichura) serumlarıçalışıldığında sırasıyla 8, 29, 62, 66, 116 kDa molekül ağırlıklarına sahip bantlargörülmüştür.Sonuçlarımıza göre, tedavi olmuş hastaların takibinde 8, 20, 45 ve 116 kDaağırlığındaki antijenler oldukça özgül bulunmuştur. KE'in takibinde WB yöntemininuygulanması gerektiği, özellikle kist sıvısından saflaştırılarak elde edilen 45 kDa'lukantijene, tedaviden sonraki dönemlerde bakılmasının hastaların takibinde önemliolduğu sonucuna varılmıştır.Anahtar sözcükler: Echinococcus granulosus, western blot, antijen, tanı

Abstract:
54SUMMARYIsolation of Echinococus granulosus antigens andvalidating diagnostic valuesCystic Echinococcosis (CE) caused by the metacestode stage of Echinococcusgranulosus is one of the most important zoonosis causing socioeconomic and publichealth problems in Turkey. Several studies show that radiological imaging methodsshould be confirmed by immunodiagnostic tests for the diagnosis of CE; however,there are differences between the sensitivity and specificity of the serologic tests,probably due to the lack of standardization of antigenic preparations. Thus, a specificand sensitive test that could be easily standardized is needed for the diagnosis of thisdisease.Hydatid cyst fluid and various cyst elements (protoscoleses, cyst wall elements) havebeen employed in order to obtain diagnostically important antigens for theimmunodiagnosis of this cosmopolitan zoonosis. Cyst fluid is reported to be the mostvaluable antigen source among these. Cyst fluid has a complex structure and involvesseveral parasitic antigens as well as host proteins. Purification of these antigens toobtain the specific parasitic antigens is important to apply a more specific test inserodiagnosis. This antigenic suspicious was then characterized by using Gradientgel electrophoresis and immunoblotting. Protein bands were seen with Gradient gelelectrophoresis and the reactivity of these antigens were tested with immunoblottingusing the serum of CE patients.50 serum specimens surgically proven cases of CE or was cyst inactivated usingPAIR (Puncture, Aspiration, Injection, Reaspiration) was tested by Western Blot(WB). 20 healthy control serum specimens and five patient in sera infected withparasitic infections other than CE, was studied by WB using purified cyst fluids fromsheep.55In our study, sera obtained from 50 CE patients was tested after treatment or surgery(1th month-16th year) WB and 215, 205, 120, 116, 66, 50, 45, 29, 20, 14.2, 8 and 6.5kDa spesific 12 antigen were found. Morever, five patients infected with parasiticinfections other than CE (Hymenolepis nana, Enterobius vermicularis, Ascarislumbricoides Taenia saginata Trichuris trichura) was showed to have 8, 29, 62, 66,116 kDa antigens respectively.According to our results, 8, 20, 45 and 116kDa antigens was found quite spesific.Follow up of CE patients are needed by using WB, especially with 45kDa antigenpurified from hydatid cyst fluid will give important clues following chemotherapy orpostsurgical.Key Words: Echinococcus granulosus, western blot, antigen, diagnosis56