Kronik myeloid lösemi tedavisinde kullanılan bazı ilaçların lösemi kök hücreleri üzerine etkilerinin genom düzeyinde araştırılması
Investigation of certain drugs effects that used in chronic myeloid leukemia treatment on leukemia stem cells at the genome level
Yazar: ÇAĞLA KAYABAŞI
Danışman: PROF. DR. CUMHUR GÜNDÜZ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Hematoloji = Hematology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Genom = Genome ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Mikro RNA = Micro RNA ; Tedavi = Treatment

Özet:
Kronik myeloid lösemi (KML) olgularının %90'dan fazlasında (9;22) translokasyonu sonucu lösemik fenotipin gelişmesinden sorumlu BCR-ABL füzyon proteini oluşmaktadırBCR-ABL tirozin kinazın inhibitörü olan imatinib mesilat, ikinci jenerasyon nilotinib ve dasatinib çoğu olguda tam hematolojik, tam sitogenetik ve majör moleküler yanıt elde etmek başarılsa da bazı olgularda yanıt alınamamaktadır. Üçüncü jenerasyon tirozin kinaz inhibörü olan ponatinib hem yabanıl tip hem de T315I mutant ABL1 otofosforilasyonunu inhibe etmektedirÇalışmamızda, Ph+, Ph-, kontrol, imatinib dirençli ve lösemi kök hücre hatları imatinib, dasatinib ve ponatinibe maruz bırakılması ile sitotoksik, apoptotik ve otofajik etkileri ile tüm genom miRNA değişimlerinin araştırılması amaçlanmıştır.Imatinib, dasatinib ve ponatinib IC50 değerleri belirlenmiş ve K562 hücre hattında sırasıyla 650 nM, 1,70 nM ve 0,24 nM bulunmuştur. Imatinib dirençli hücre hattı K562/ima3' te Imatinib 1,8 µM, dasatinib 896 nM ve ponatinib 9,87 nM IC50 değerleri belirlenmiştir. Bu üç etken maddenin IC50 dozları apoptozu indüklediği saptanmıştır. Ayrıca aynı dozlar lösemi hücrelerinde otofajiyi de baskılamaktadır baskılamaktadır.TKİ' leri miRNA ekspresyonları üzerine etkileri ve Imatinib direnç gelişiminde miRNA' ların etkisi değerlendirilmiştir. Onkojenik özellikli miRNA ekspresyonlarının baskılandığı saptanmıştır.Sonuç olarak imatinib, dasatinib ve ponatinib lösemi kanser modellerinde ve dirençli kanser modelinde apoptozu indüklerken otofajıyı de baskılamaktadır. Bu bulgu oldukça ilginçtir. Çünkü tedavi amaçlı etken madde uygulanması kanser hücrelerinin yeni şavaşma metodları geliştirmesine neden olmaktadır. Ayrıca üç nesil TKİ' leri onkojenik miRNA ekspresyonlarını baskılamakta, tümör süpresör özellikli miRNA ekspresyonlarını indüklemektedir. Bu bulgular imatinib, dasatinib ve ponatinibin miRNA aracılı tedavi etkinliğini de göstermektedir. KML tedavisi için TKİ' lerinin uygulanmasında moleküler defektleri yenebilecek ve hücreleri tedavinin etkisinden kaçmasını önleyebilecek miRNA' ın uygulaması preklinik çalışmalarla desteklendiğinde oldukça ümit vermektedir.

Abstract:
BCR-ABL fusion protein, responsible for developing of leukemic phenotype as a result of (9;22) translocation, is occured in more than 90% of Chronic Myeloid Leukemia (CML) cases.BCR-ABL tyrosine kinase inhibitor imatinib mesilat, second generation tyrosine kinase inhibitors nilotinib and dasatinib are exact haematologic, exact cytogenetic and major molecular response were achieved succesfully even some of the cases did not response. Third generation tyrosine kinase inhibitör ponatinib inhibits both wild type and T315I mutant ABL1 autophosphorylation.In our study, it is aimed to investigate cytotoxic, apoptotic and autophagic effects and whole genom miRNA alterations in Ph+, Ph-, control, imatinib-resistant and leukemia stem cell lines by imatinib, dasatinib and ponatinib exposure.IC50 values of imatinib, dasatinib ve ponatinib were determined and it is found 650 nM, 1,70 nM and 0,24 nM in K562 cells respectively. Imatinib 1,8 µM, dasatinib 896 nM and ponatinib 9,87 nM IC50 values were determined in Imatinib-resistant cell line K562/ima3. It is determined that IC50 doses of these three compounds induced apoptosis. Also same doses repress autophagy in leucemia cells.TKI 's effects on the expression of miRNA and miRNA in the development of resistance to imatinib' s was evaluated. miRNA expressions with oncogenic property were suppressed.As a result, imatinib, dasatinib, and ponatinib, induce apoptosis ans suppress autophagy in the same time in leukemia cancer and in resistant cancer model. This finding is quite interesting. Because application of the active ingredient for the treatment of cancer cells to cause the development of new methods for fighting. In addition, three-generation TKI 's to suppress the expression of oncogenic miRNA, induces the expression of tumor suppressor miRNA featured. These findings demonstrates the efficacy of imatinib, dasatinib and ponatinib in miRNA-mediated treatment. Co-application of TKI and miRNAs that can overcome molecular defects and prevent the leukemic cells escape from the cure in the treatment of CML become very promising with the support of preclinical studies.