Tolfenamik asitin insan LNCAP prostat kanser hücre dizisi üzerindeki olası antiproliferatif etkisinin araştırılması
Investigation of possible antiproliferative effect on tolfenamic acid human lncap prostatic cancer cell lines
Yazar: RIFAT ERTEKİN
Danışman: PROF. DR. SELDA KABADERE
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat = Prostate ; Prostat hastalıkları = Prostatic diseases ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Tolfenamik asit = Tolfenamic acid

Özet:
Prostat kanseri Türkiye'de en sık görülen kanser tiplerindedir. Günümüzdeki tedavi yöntemleri, prostat kanserinin tedavisi için yeni ve etkin olabilecek yöntem ve kimyasalların arayış çabalarını zorunlu kılmaktadır. Tolfenamik asit (TA) non-steroid antiinflamatuar bir ilaçtır ve son yıllarda yapılan çalışmalarda pankreas, özefagus, akciğer gibi kanser hücrelerinde apoptozu uyardığı gösterilmiştir. Bu araştırmanın amacı, androjen duyarlı insan prostat kanser hücre dizisinde (LNCaP) ve glioma hücrelerinde (T-98G) TA'nın, hücre canlılığı ve apoptoz üzerindeki etkisini belirlemektir. Çalışmamızda T-98G ve LNCaP hücre dizileri üzerine TA'nın 1, 5, 10, 25, 50 ve 100 µM'lık dozları 24 ve 48 saat süreyle uygulandı ve ardından MTT testi ile hücre canlılığı belirlendi. Etkili bulunan dozlar akım sitometri ve real time PCR teknikleri ile değerlendirildi. T-98G hücrelerinde TA'nın söz konusu dozlarının 24 ve 48 saatte herhangi bir etkisi saptanamadı. Bu nedenle T-98G hücreleri akım sitometri ve RT-PCR ile incelenmedi. LNCaP hücrelerine 24 saat süreyle 1, 5, 10, 25, 50 ve 100 μM TA dozları uygulandığında yaşayan hücre oranları sırasıyla %91, %83, %82, %76, %61 ve %49 olarak hesaplandı. 48 saatte ise aynı TA dozlarında elde edilen yaşam oranları sırasıyla %90, %83, %82, %78, %52 ve %47 oldu. LNCaP hücrelerinde 24 saatte 25, 50 ve 100 μM TA uygulaması sonucu elde edilen erken apoptotik değerler (kontrol %0.60), %2, %4 ve %17 iken 48 saatte (kontrol %0.48) %10, %10 ve %64 olarak bulundu. TA doz ve zamana bağlı olarak LNCaP hücrelerinde apoptozu uyarmaktadır. PCR sonuçlarına göre TA, kaspaz-9 düzeyinde, gruplar arasında istatistiksel olarak bir fark oluşturmadı. Bununla birlikte 50 μM TA grubunda kaspaz-9 aktivitesinin kontrol grubuna göre katlı olarak arttığı tespit edilmiştir. Bu sonuç artan TA konsantrasyonuna bağlı olarak apoptozun arttığını göstermektedir. Çalışmamızda 25, 50 ve 100 μM TA uygulanan gruplarda siklooksijenaz-2 (COX-2) kontrol grubuna göre katlı olarak azalmıştır. Kanser oluşumunda ya da yayılmasında COX-2 yolaklarının aşırı uyarılması göz önüne alındığında, çalışmamızda TA'nın ilk kez kanserli LNCaP hücrelerinde doz ve zamana bağlı olarak hücre çoğalmasını baskılayıcı ve apoptozu uyarıcı etkilerinin tespit edilmesi önemlidir.

Anahtar Kelimeler: Tolfenamik asit, prostat kanseri, LNCap, apoptoz,
MTT.

Abstract:
Prostate cancer is among the most frequently observed type of cancers in Turkey. Contemporary treatment modalities require that new and effective methods or chemicals should be developed. Tolfenamic acid (TA) is a nonsteroidal anti-inflammatory medicine that recently reported to stimulate apoptosis in cancer cells, such as pancreas, oesophagus and lungs. The present study aims to determine the role of TA on cell viability and apoptosis in glioma cells (T-98G) and androgen-sensitive human prostate cancer cell line (LNCaP). In our study, 1, 5, 10, 25, 50, and 100 µM doses of TA were applied to T-98G and LNCaP cell lines for periods of 24 and 48 hours. Subsequent cell vitality was tested with MTT test. The effective doses were then analysed by flow cytometry and real-time PCR techniques. Upon MTT spectrophotometric tests aforementioned doses exhibited no significant effect on the survival rate of T-98G cells in 24 and 48 hours. Therefore, T-98G cells did not need to be analysed by flow cytometry and RT-PCR. When LNCaP cells were exposed to 1, 5, 10, 25, 50 and 100 µM doses of TA for 24 hours, the rates of living cells were determined as 91%, 83%, 82%, 76%, 61%, and 49%, respectively. When, the same doses were applied for 48 hours, the living cell rates were 90%, 83%, 82%, 78%, 52%, and 47%, respectively. Following applications of 25, 50 and 100 μM TA to LNCaP cells for 24 hours, the apoptopic values (0.60% for the control group) were found to be 2%, 4%, and 17%, whereas the values for 48 hours were 10%, 10% and 64% (0.48% for the control group), respectively. TA induced apoptosis of LNCaP cells depending on the dose and duration of exposure.        
According to PCR results, TA showed no statistical significance among the groups at caspase-9 level, but caspase-9 activity increased incrementally in groups given 50 μM of TA. The increase in the apoptosis of LNCaP cells can be attributed to the rising amount of TA concentration. In our study, in 25, 50, and 100 μM TA groups, cyclooxygenase-2 (COX-2) decreased incrementally when compared to the control group. Considering the overstimulation of COX-2 paths in the emergence of cancer or in metastasis, the present study indicates that TA has an antiproliferative effect and a stimulating effect on apoptosis of LNCaP cells depending on the dose and duration of exposure.

Key words: Tolfenamic acid, prostate cancer, LNCaP, apoptosis, MTT.