Yapay ince barsak segmentinin doku kültüründe üretilmesi ve yapısal olarak değerlendirilmesi: Ön çalışma
Artificial creation of the small bowel segment and structural evaluation: Preliminary study
Yazar: AHMET ALPTEKİN
Danışman: PROF. DR. ERGUN ERDOĞAN
İstanbul Üniversitesi / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Çocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery
Dizin: Bağırsak-ince = Intestine-small ; Doku mühendisliği = Tissue engineering ; Organ kültürü = Organ culture

Özet:
Kısa bağırsak sendromu, geniş barsak rezeksiyonu ya da bağırsakların konjenital kısalığı sonrası malabsorbsiyon ve buna bağlı malnütrisyonla karakterize klinik tablodur. Bağırsak uzunluğunu artırıcı cerrahi tekniklerin gelişmesiyle bu hastalar geçmişe göre daha iyi yaşam şansına sahip olmaktadır. Buna rağmen hastalığın erken ve geç dönem problemlerinin devam etmesi ve transplantasyon olanaklarının sınırlı olması, araştırmacıların yeni yöntemler aramasına neden olmaktadır. Son zamanlarda doku mühendisliği tekniklerinin gelişimi ile yapay ince barsak segmentinin oluşturulmasına yönelik çalışmalar dikkati çekmektedir.Çalışmamızda tavşan ince bağırsağı biyopsi materyalinden elde edilen hücrelerin tübüler biyopolimer matriks üzerine ekilerek yapay bağırsak segmentinin elde edilmesini ve bu yeni segmentin yapısal özelliklerinin incelenmesini amaçladık.Biz bu çalışmamızda tavşan ince bağırsağı biyopsi materyalinden elde ettiğimiz hücrelerin tübüler biyopolimer matriks üzerine ekimini yaptık. Biyopsi alınan intestinal segmentin sorunsuz iyileşerek, barsak bütünlüğünün korunduğu ikinci laparotomi sırasında gözlendi. Deney hayvanları, implantlarından eksizyonunlarına kadar sağlıklı şekilde yaşadı. Çalışma grubundan bir hayvan postoperatif 21. gün, kontrol grubunda ise bir hayvan postoperatif 4. günde kaybedildi. Parça alınan intestinal segmentin sorunsuz iyileşerek, bağırsak bütünlüğünün korunduğu ikinci laparotomi sırasında gözlendi.Kültür aşamasında ,flasklar 37°C %5 CO2 koşulları altında hücrelerin çoğalması için etüve alındı. Her bir flask mikroskop altında gözlemlenerek hücre tutunmaları değerlendirildi. DMEM-F12 medyum ile ekim yapılan I.Flaskda birkaç hücre dışında tutunma olmadığı gözlendi. Chang medyum ile ekimi yapılan II-III. Flaskta 14-15 ve IV. Flaskta ise 35-40 arası koloni oluşumu tespit edildi. Bu flasklara birer pasaj yapılarak iki yedek flask daha oluşturuldu. Alınan örneklerin invert mikroskopta boyama yapılmadan canlı incelemesinde küboid yapıda, geniş sitoplazmalı, nükleusu santral yerleşimli epitelyal hücreler başta olmak üzere çeşitli morfolojik özellikte hücreler gözlendi.Süspansiyondan hazırlanan preparatların tripan blue boyama testinde %95 üzerinde canlılık oranı tespit edildi. Tübüler yapıdaki polimerlere hücre süspansiyonun enjeksiyonu ve bir saat 4 0C de bekletilmesinden sonra invert mikroskopta incelemede polimer liflerinin içerisi yoğun hücre bulunduğu görüldü. Tutunma gösteren hücrelerin pediküllü flep şeklinde vasküler yapı ile beslendiği görüldü. Biz bu yeni segmentin yapısal özelliklerini histopatolojik olarak inceleyerek normal barsak dokusunun biyopolimer lifleri üzerine tutunmalarını ve bunların canlılığını genetik laboratuar incelemesinde tesbit ettik.

Abstract:
Short bowel syndrome, large bowel resection or congenital intestinal malabsorption after shortening and associated clinical condition characterized malnütrition. Total parenteral nutrition be widely applied to increase the length of the intestine and the remaining development of surgical techniqus according top ast these patients have a better change of livings. Despite this problem early and late periods of the disease and transplantation will continue to be limited opportunities, has led researchers to search new methods. Recently with the development of tissue engineering techniques to create an artificial bowel segment studies is remarkable. In our study, cells derived from rabbit small intestine biopsy of the tubular matrix of biopolymers can be added on to obtain an artificial bowel segment, and investigate the structural properties of this new segment.In our study we cultered cells obtained from intestines of rabbits on to the biopolimer matrix. At second look we observe that the intestinal segment biopsy taken seems healty and intact. All rabbits were healty through all study. One in study group at postoperative 21st day and one in control group at postoperative 4th day died. At second look we observe that the intestinal segment biopsy taken seems healty and intact.All flasks cultured at 37°C and %5 CO2 conditions. Every flask was observed at microscope. At 1.flask that cultured with DMEM ?F12 and flasks that cultured with chang media colonisation was observed, 14-15 colony at 2-3rd flasks and 35-40 colony at 4th flasks. At microscopic investigation without dye cuboid in shape with large cytoplazm and centrally localised nucleus was observed.With tripan blue dye over 95% vitality was confirmed. After cell enjection to the tubulerised polimers and waiting for an hour at 4C many cells observed between polimerised fibers. Those cells were observed to have pedicules for getting nutrition. We confirmed this new segment?s vitality at genetic investigations.