Pitavastatin'in insan safen ven greft endotel kültüründe nükleer faktör-kappa b (NF-kb) ve adezyon molekülleri üzerine etkilerinin araştırılması
The effects of pitavastatin on nuclear factor-kappa b (nf-kb ) and adhesion molecules in human saphenous vein graft endothelial culture
Yazar: BÜLENT DEMİR
Danışman: PROF. DR. AHMET GÖKHAN AKKAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kardiyoloji = Cardiology
Dizin: Adezyon molekülleri = Adhession moleculs ; Antikolesteremik ajanlar = Anticholesteremic agents ; Ateroskleroz = Atherosclerosis ; Endotelinler = Endothelins ; Hücre kültürü = Cell culture ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Safen ven = Saphenous vein ; Transplantlar = Transplants ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Amaç:  Safen ven endotel hücre kültürün de Pitavastatinin pleotropik etkisinin göstergesi olarak adezyon molekülleri ve NF-κB üzerine  etkilerinin araştırılmasıdır
Materyal ve Metod: İnsan safen ven endotel hücre kültürüne ön tedavi olarak düşük doz (0,1 μM/L) ve yüksek doz (1μM/L) Pitavastatin kalsiyum uygulandı. Sonrasında ise TNF-α ile inflamasyon indüklendi.  Sonra endotel hücrelerindeki VCAM-1 ile ICAM-1 ve NF-κB genlerinin mRNA düzeyinde ki değişiklikler qRT-PCR metodu kullanılarak belirlendi. Ayrıca NF-κB ve ICAM-1 moleküllerinin ekspresyonun  gösterilmesi için immünfluoresan boyama metodu kullanıldı. Son olarak sitotoksisitenin belirlenmesi amacı ile hücre kültürü medyumlarıda ki  LDH düzeyi ELİSA yöntemi ile  belirlendi.
Bulgular: Düşük doz Pitavastatin + TNF-α grubunda, ICAM-1 mRNA ekspresyonu düzeyi sadece TNF-α grubuna göre yüksek saptanırken; yüksek doz Pitavastatin + TNF-α grubuna göre daha düşük saptandı (Her ikisi için de; P = 0.001). Düşük  doz Pitavastatin + TNF-α grubunda VCAM-1 mRNA ekspresyonu düzeyi ise; TNF-α ve yüksek doz Pitavastatin + TNF-α  grubuna göre  yüksekti (Hepsi için; P = 0.001). yüksek doz Pitavastatin + TNF-α grubunda  VCAM-1 mRNA ekspresyonu düzeyi; TNF-α grubuna göre daha düşüktü (P = 0.001). Düşük  doz pitavastatin + TNF-α grubunda;  NF-κB mRNA ekspresyonu düzeyi, TNF-α  ve yüksek doz Pitavastatin + TNF-α gruplarıyla karşılaştırıldığında anlamlı farklılık saptanmadı.
Sonuç: Pitavastatin safen ven endotel hücrelerinde ICAM-1 mRNA ekspresyonunu artırmaktadır, VCAM-1 ekspresyonunu ise düşük dozda artırıp,  yüksek dozda azaltmaktadır. Ayrıca Pitavastatinin adezyon molekülleri üzerine olan etkisi NF-κB' den bağımsız gözükmektedir. Bu konuda yapılacak yeni çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Objective: To study pitavastatin's effects on Nuclear Factor-kappa B (NF-κB ) and adhesion molecules in human saphenous vein graft endothelial culture indicating its pleotropic properties. 
Materials and Method: Low-dose (0.1 μM/L) and high-dose (1μM/L) pitavastatin calcium were administered as a frontline therapy in human saphenous endothelial cell culture, followed by induction of inflammation by TNF-α and determination of mRNA level alterations of VCAM-1, ICAM-1, and NF-κB genes of endothelial cells using the qRT-PCR method. Additionally, immunofluorescence method was used to show the expression of NF-κB and ICAM-1. Finally, LDH levels were determined by the ELISA method to quantify cytotoxicity. 
Results: ICAM-1 mRNA expression in the low-dose pitavastatin+TNF-α group was significantly higher than that in the TNF-α group and significantly lower than that in the high-dose pitavastatin+TNF-α group (for all comparisons, P = 0.001). VCAM-1 mRNA expression in the low-dose pitavastatin+TNF-α group was higher than those of the TNF-α and high-dose pitavastatin+TNF-α groups (for all comparisons, P = 0.001). VCAM-1 mRNA expression was significantly lower in the high-dose pitavastatin+TNF-α group than the TNF-α group. The low-dose pitavastatin+TNF-α group had a similar NF-κB mRNA expression with TNF-α and high-dose pitavastatin+TNF-α groups.
Conclusion: Pitavastatin increases ICAM-1 mRNA expression in saphenous vein endothelial cells. However, it increases VCAM-1 in low dose but decreases it in high dose. Furthermore, the effect of pitavastatin on adhesion molecules appears independent of NF-κB. Novel studies are needed in this field.