Kas içi analjezik uygulamasının farelerde derin yumuşak doku enfeksiyonu gelişimindeki rolü
The role of intramusculary analgesic administration in the development of deep soft tissue infections in mice
Yazar: ZEYNEP TÜRE
Danışman: DOÇ. DR. HAYATİ DEMİRASLAN
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Analjezi = Analgesia ; Antiinflamatuar ajanlar-nonsteroid = Anti inflammatory agents-nonsteroidal ; Diklofenak = Diclofenac ; Enfeksiyonlar = Infections ; Streptococcus pyogenes = Streptococcus pyogenes ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha ; Yumuşak doku = Soft tissue ; İnterlökin 6 = Interleukin 6

Özet:
Giriş ve Amaç: Uygun şartlarda yapılmayan kas içi enjeksiyonlar esnasında inoküle olan mikroorganizmalardan salınan uyaranlar sonucu enflamatuvar süreç başlamaktadır. Enflamatuvar cevabı geciktiren etkenler derin yumuşak doku enfeksiyonu, apse veya sepsis gibi komplikasyonlara neden olmaktadır. Non steroid anti enflamatuvar (NSAE) ilaç enjeksiyonu sonrası bu tür komplikasyonlar görülebilmektedir. Bu çalışmanın amacı deneysel fare yumuşak doku enfeksiyonu modelinde kas içi NSAE enjeksiyonu ile derin yumuşak doku enfeksiyonu ve sepsis şiddetinde değişiklik olup olmadığını araştırmaktır. 
Gereç ve Yöntem: Çalışmada Balb-C dişi fareler kullanıldı. NSAE olarak diklofenak sodyum (DS) 20 mg/kg dozunda, bakteri olarak grup A streptokok (GAS) M3 suşu 106 kob/0.1 ml inokulum dozunda kullanıldı. İnvitro olarak DS'nin 0,4 ve 40mg/L konsantrasyonda bakteri üzerine etkisi olup olmadığı kill-time ile belirlendi.
Denekler, DS grubu, GAS grubu, DS sonrası GAS grubu (DS+GASM3), GAS sonrası DS grubu (GASM3+DS) ve kontrol grubu olmak üzere beş gruba ayrıldı. Çalışma sonunda gruplar arasında mikrobiyolojik olarak sepsis gelişimi, kas dokusundaki histopatolojik değişiklikler, kas dokularında gram başına bakteri yükü, serum TNF alfa ve interlökin-6 düzeyleri karşılaştırıldı. Çalışma Erciyes Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu tarafından onaylandı (karar no:13/127).
Bulgular: Yüksek konsantrasyonda (40 mg/L) DS, in vitro ortamda ikinci saaten sonra bakteri üremesini inhibe etti. DS ile birlikte GASM3 enjeksiyonu yapılan gruplarda sepsis gelişti. Bacakların histopatolojik incelemesinde en yüksek enflamasyon skoru GASM3+DS grubunda izlendi. DS+GASM3 grubunda da enflamasyon skoru DS, GASM3 ve negatif kontrol grubundan yüksekti. Ama bu farklar istatistiksel olarak anlamlı değildi. Negatif kontrolle yapılan karşılaştırmada bütün gruplar istatistiksel olarak anlamlı olarak yüksek enflamasyon skoruna sahiptiler (p=0,001). 
Mikrobiyolojik incelemede ise DS+GASM3 enjeksiyonu yapılan grupta kas dokusunda gram başına üreyen koloni sayısı GASM3 enjeksiyonu yapılan gruba göre daha az (p=0,001) olduğu saptandı. 
Sitokin düzeylerinin değerlendirilmesinde serum TNF alfa düzeyi en yüksek olan grup negatif kontrol grubuydu. DS+GASM3 enjeksiyonu yapılan grupta serum TNF alfa ortalaması GASM3 enjeksiyonu yapılan gruptan daha yüksekti. Benzer şekilde  DS+GASM3 enjeksiyonu yapılan grupta serum İL-6 ortalaması en yüksekti. Gruplar arasında serum sitokin düzeyleri ortalaması açısından istatistiksel olarak anlamlı fark yoktu.
Sonuç: Kas içi DS enjeksiyonu kas dokusunda daha fazla enflamasyon ve nekroza neden olmaktadır. Bakteri inokülasyonundan önce veya sonra DS verilmesi 96. saatte kas dokusundaki koloni sayısını azaltmakla birlikte bakterinin sistemik yayılımında ve sepsis gelişmesinde artışa neden olmaktadır. Bakteri enjeksiyonu öncesi DS uygulaması serum sitokin düzeyinde artışa neden olmaktadır.

Abstract:
Introduction and Aim: Inflammatory process begins after the stimuli from microorganisms that were inoculated by intramuscular injections carried out unsuitable conditions. The factors which delay the inflammatory response cause complications such as deep soft tissue infections, abscess or sepsis. These kind of complications may be seen after the injection of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs). The aim of this study is investigating whether alteration of the severity of soft tissue infections and sepsis after intramuscular injection of NSAIDs in an experimental mouse model.  
Material and Methods: Balb-C female mice were used in this study. Diclofenac sodium (DS) was used 20 mg/kg as NSAID, Group A streptococcus (GAS) subtype M3 was used as bacteria with the doses of 106 cfu /0.1 ml inoculum. The effect of DS concentration of 0.4 and 40mg/L on GAS was determined by in vitro kill time study. The subjects were divided into five groups which contain DS group, GAS group, GAS after the DS group (DS + GASM3), DS after GAS group (GASM3 + DS) and the control group. 
Developing sepsis, histopathological changes in the muscle tissue, bacterial load per gram in the muscle tissue, the serum levels of TNF-alpha and interleukin-6 were compared between the all groups at the end of the study. The study was approved by the Local Ethics Committee for Animal Experiments of Erciyes University (Aproval No. 13/127). 
Results: High concentration (40 mg / L) DS was inhibited the bacterial growth, two hours after the in vitro study. Sepsis was observed with GAS M3 and DS injected groups. GASM3+DS injected group had the highest inflammation score on histophatological examination. The inflammation score of DS+GASM3 group was higher than the other groups. The inflammation score of DS group was higher than the GASM3 group. All other groups were statistically significant higher inflammation score than negative control (p = 0.001). 
Isolated colonies per gram of muscle tissue were observed with group of DS+ GASM3 were less than the group of GAS M3 in the microbiological examination (p= 0.001). 
Negative control group had the highest level of in the assessment of TNF alpha cytokine levels. The mean level of TNF alpha in the group of DS+GASM3 was higher than those in GASM3.  Likewise TNF alpha, DS+GASM3 group had the highest serum level of interleukin 6. But, there was no statistically significant difference in terms of the mean serum cytokine levels between the all groups.
Conclusion: Intramuscular injection of DS causes the higher level inflammation and necrosis in the muscle tissue. DS injection, before/after the inoculation of bacteria leads to reduce the number of the colonies in the muscle tissues at 96th hours. However, systemic spreading of bacteria and sepsis developing increases in these groups.  Before the inoculation of bacteria, DS injection leads higher level cytokine levels.