Tirosinaz enziminin bazı fungal kaynaklardan üretimi ve aktivitesine etkili parametrelerin araştırılması
Determination of parameters affecting Tyrosinase production and activation from some fungal sources
Yazar: DARYOUSH MAJİDİ
Danışman: PROF. DR. NİLÜFER AKSÖZ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Bölümü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Beyaz çürükçül mantarlar = White rot fungus ; Enzim aktivitesi = Enzyme activity ; Enzim immobilizasyonu = Enzyme immobilization ; Enzim immobilizasyonu = Enzyme immobilization ; Funalia trogii = Funalia trogii ; Tirosinaz = Tyrosinase

Özet:
Bu çalışmada verimli yeni bir alternatif fungal kaynaktan tirosinaz üretimi amaçlandı. İncelenen funguslar arasında Funalia trogii`nin en yüksek tirosinaz üreticisi olduğu saptandı ve yüksek enzim üretimi için bazı kültürel parametreler optimize edildi. Üretim ortamındaki karbon ve azot kaynaklarının tirosinaz aktivitesine etkisi incelendiğinde, glukoz ve NaNO3'ün uygun olduğu saptandı. En yüksek enzim üretimi için kültür ortamının fizyolojik koşulları incelendiğinde (Glukoz-C, NaNO3-N) 5:1 oranında C:N içeren pH değeri 5 olan enzim üretimi ortamında, 30ºC'de, 200 rpm'de 7 gün inkübasyonun uygun olduğu görüldü. Optimize koşullarda elde edilen kaba enzim ekstresi başlangıç koşulları ile kıyaslandığında enzim üretiminde artış gözlendi. Üretilen kaba tirosinaz enzimi ekstresi pH, sıcaklık ve günlere göre dayanıklılığı incelendi. Enzimin 73ºC'ye kadar dayanıklı olduğu saptandı. Ayrıca -20ºC'de saklanmak koşuluyla 100.günde enzimin dayanıklı olduğu sonuçu elde edildi. Tirosinaz enziminin reaksiyon ortamındaki pH değişikliklerine dayanıklılığı incelendiğinde pH:3,5-7 arası değerlerde, enzimin dayanıklı olduğu görüldü. Ürettiğimiz kaba enzim ekstresi bentonite immobilize edildi. Tutuklu tirosinaz enziminin günlere göre ve tekrarlı kullanımındaki dayanıklılığı incelendiğinde 8. tekrarlı kullanıma kadar dayanıklı olduğu ayrıca -20ºC'de saklanmak koşuluyla 16 günlük ölçümlerde dayanıklı olduğu görüldü.

Abstract:
In this study, the objective was to produce tyrosinase enzyme efficiently from an alternative fungal soruce. Among the sources investigated, Funalia trogii was found to be the most potent tyrosinase producer and some cultural parameters were optimized in order to maximaze tyrosinase production. When the effect of the carbon and additional nitrogen sources in the cultural medium on tyrosinase production was investigated, it was observed that glucose and NaNO3 was suitable. Some physiological conditions were optimized for enzyme production and it was concluded that, incubation for 7 days at 30ºC, 200 rpm of tyrosinase production medium containing 5:1 ratio of (Glucose-C, NaNO3-N) C:N with pH 5, was suitable. Temperature, pH and by days stabilities of the crude extract of enzyme were studied and it was concluded that crude extract of tyrosinase was stable at 73ºC and pH 3,5-7 about 100 days. In the next step, crude extract of tyrosinase enzyme was immobilized onto bentonit. In addition, repeated use and daily stability of the immobilized enzyme was studied. Stabilities of immobilized crude extract of tyrosinase activity at 8. Frequently reaction and until 16. day were determined.