Diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçan modelinde resveratrol uygulamasının kemik sırt-1 proteinleri üzerine etkisi
Effect of resveratrol execution on bone sirt-1 proteins in diabetes created elderly female rat model
Yazar: KÜBRA KIYAR
Danışman: PROF. DR. ABDULKERİM KASIM BALTACI
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetes mellitus-deneysel = Diabetes mellitus-experimental ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kemik ve kemikler = Bone and bones ; Resveratrol = Resveratrol ; Sirtuin-1 = Sirtuin-1

Özet:
Resveratrol üzüm tanelerinde bol miktarda bulunan polifenol yapıda doğal bir antioksidan maddedir ve kemik metabolizmasını etkileyebilen Sirtuin-1 (SIRT-1) protein gen aktivasyonunun doğal bir uyarıcısıdır. Bu nedenle de osteoporoz riskini azaltmak için resveratrolün potansiyel bir tedavi aracı olarak kullanımı umut vadetmektedir. Bu çalışmanın amacı da, diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçan modelinde resveratrolle uyarılan SIRT-1 aktivasyonunun kemik metabolizması üzerindeki etkilerini araştırmaktır.
Çalışma Selçuk Üniversitesi Deneysel Tıp Araştırma ve Uygulama Merkezi'nden elde edilen dişi yaşlı sıçanlar (16 aylık) üzerinde aynı merkezde gerçekleştirildi. Çalışma protokolü aynı merkezin etik kurulu tarafından onaylandı. Toplam 24 adet yaşlı dişi sıçan üzerinde gerçekleştirilen çalışmada hayvanlar eşit sayıda  4 gruba ayrıldı Grup 1. Kontrol, Grup 2. Kontrol+resveratrol Grup 3. Diyabet, Grup 4. Diyabet+Resveratrol. Deneysel diyabet oluşturmak için Grup 3 ve 4'ü oluşturan sıçanlara 40 mg/kg olacak şekilde intraperitoneal streptozotosin (STZ) "Sigma, S-0130" enjekte edildi. Enjeksiyonlardan 6 gün sonra hayvanların kuyruk veninden kan glukoz seviyeleri tanısal bir glukoz kiti kullanılarak ölçüldü.  Kan glukozu 300 mg/dlt ve üstünde olan sıçanlar diyabetik (DM) olarak değerlendirildi. 4 hafta süren resveratrol desteğini takiben genel anestezi altında sakrifiye edilen hayvanlardan alınan kemik doku örneklerinde PCR yöntemiyle SIRT-1 protein gen ekspresyonu tayinin yanı sıra ELISA yöntemiyle kemik dokudaki MDA ve GSH düzeyleri tayin edildi.
Gerçekleştirdiğimiz çalışmada, en yüksek kemik SIRT1 ekspresyon  değerleri Diyabet+resveratrol (G4) grubunda, en düşük kemik SIRT1 seviyeleri ise diyabet grubunda (G3)    elde edildi (P<0,05).   Genel kontrol (G1) ve Kontrol+Resveratrol (G2) gruplarının kemik SIRT1 ekspresyon  değerleri  birbirinden farklı değildi.
Yine çalışmamızda en yüksek kemik MDA değeri diyabet grubunda (G3) tespit edildi. (P<0,05). Genel kontrol (G1) ve Kontrol+Resveratrol (G2) gruplarının kemik MDA düzeyleri birbirinden farklı değildi. Diyabet+Resveratrol (G4) grubunun MDA değerleri ise diğer grupların tamamından önemli şekilde düşük bulundu (P<0,05). Çalışmamızda en yüksek kemik GSH değerleri  Diyabet+Resveratrol grubunda (G4), en düşük kemik GSH seviyeleri ise diyabet grubunda (G3)    elde edildi (P<0,05). Genel kontrol (G1) ve Kontrol+Resveratrol (G2) gruplarının kemik GSH düzeyleri birbirinden farklı değildi.
Çalışmamızın bulguları diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçanlarda kemik dokudaki oksidatif stresin resveratrol desteğiyle önlenebileceğini göstermektedir. Resveratrol desteğinin bu koruyucu etkisi; diyabetik yaşlı sıçanlarda hem kemik dokudaki antioksidan aktivitenin, hem de kemik SIRT1 ekspresyonunun artırılmasıyla ortaya çıkmaktadır.

Abstract:
Resveratrol is a natural antioxidant substance of polyphenol which is abundant in grape seeds and is a natural stimulant of Sirtuin-1 (SIRT-1) protein gene activation, which can also affect bone metabolism. Therefore, the use of resveratrol as a potential therapeutic tool to reduce the risk of osteoporosis is promising. The aim of this study was to investigate the effects of resveratrol-induced SIRT-1 activation on bone metabolism in a diabetic elderly female rat model.
The study was performed on female aged rats (16 months old) who were provided by The Experimental Medicine Research and Application Center of Selçuk University. The study protocol was approved by the ethics committee of the latter. A total of 24 elderly female rats were divided into 4 groups: Group 1. Control, Group 2. Control + Resveratrol, Group 3. Diabetes, Group 4. Diabetes + Resveratrol. In order to produce experimental diabetes, rats composed of Group 3 and 4, were injected intraperitoneally streptozotocin (STZ) "Sigma, S-0130" at 40 mg / kg. Blood glucose levels taken from the tail vein of the animals were measured 6 days after injections using a diagnostic glucose kit. Rats with blood glucose of 300 mg / dlt or more were considered as diabetic (DM). After 4 weeks of resveratrol supplementation, S1RT1 protein gene expression was determined by PCR method and bone tissue MDA and GSH levels were determined by ELISA method in bone tissue samples taken from animals sacrificed under general anesthesia.
In our study, the highest bone SIRT 1 expression values were obtained in the Diabetes + resveratrol (G4) group and the lowest bone SIRT 1 levels were found in the diabetes group (G3), (P <0.05). Bone SIRT I expression values of the General Control (Gl) and Control + Resveratrol (G2) groups were not different from each other.
Again, in our study, the highest bone MDA values were found in the Diabetes Group (G3). (P <0.05). Bone MDA levels of General Control (GI) and Control + Resveratrol (G2) groups were not different from each other. MDA values of the Diabetes + Resveratrol (G4) group were significantly lower than all the other groups (P<0.05). In our study, the highest bone GSH values were found in the Diabetes + Resveratrol group (G4) and the lowest bone GSH levels were found in the Diabetes Group (G3) (P<0,05).  Bone GSH levels of the General Control (Gl) and Control + Resveratrol (G2) groups were not different from each other.
The findings of our study show that oxidative stress in bone tissue can be prevented by resveratrol supplementation in diabetic elderly female rats. This protective effect of resveratrol supplementation shows up with the antioxidant activity in bone tissue and the bone SIRT1 expression in diabetic elderly rats.