Veteriner hekimliğinde Brucella abortus hastalığına karşı immunojen olarak kullanılabilen sentetik peptid-polimer konjugatlarının sentezlenmesi ve yapılarının incelenmesi
Synthesis and structure analysis of synthetic peptide polymer conjugates that can be used as immunogen in veterinary medicine against Brucella abortus disease
Yazar: TAYFUN ACAR
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ZEYNEP AKDESTE ; YRD. DOÇ. DR. MESUT KARAHAN
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering

Özet:
Polimer-biyomolekül kompleks ve konjugatlarıyla ilgili yapılan çalışmalar, hem canlı organizmadaki davranışlarının anlaşılmasına, hem de biyokonjugasyon teknolojisinin geliştirilmesine olanak sağlamaktadır. İmmunojen özellikteki polimer-peptid konjugatları, var olan aşılara alternatif nitelikte, etkin ve virüs içermeyen sentetik aşıların, teşhis ürünlerinin ve biyoteknolojik ürünlerin gelişimi açısından önem taşımaktadır. Bu konjugatların yeni tip sentetik polimerik aşı sistemlerinin geliştirilmesine katkı sağlayacağı düşünülmektedir.
Bu tez çalışmasında, bakteriyel hastalıklardan Brucella hastalığı üzerinde çalışılmıştır. Tezde, Brucella hastalığının literatürde bulunan antijenik peptid dizisinin [Trp-Leu-Ala-Glu-Ile-Lys-Gln-Arg-Ser-Leu-Met-Val-His-Gly (WLAEIKQRSLMVHG)] tarafımızca mikrodalga uygulamalı katı faz yöntemiyle kimyasal olarak sentezi, saflaştırılması ve karakterizasyonu yapılmıştır. Bu peptidin PAA (poliakrilik asit) polimeri ve tarafımızca sentezlenen ve yapısı aydınlatılan VP-AA (Poli(N-Vinil-2-pirolidon-ko-akrilik asit)) kopolimeri ile çapraz bağlayıcı EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorid) varlığında farklı konjugasyon oranlarında kovalent konjugatları elde edilmiştir. PAA polimeri ile konjugasyon peptid sabit-polimer artan ve polimer sabit- peptid artan olmak üzere iki ayrı şekilde yapılmıştır. VP-AA kopolimeri ile konjugasyonda ise iki ayrı yöntem uygulanmıştır. Suda çözünebilir özellikteki bu biyokonjugatlar HPLC, GPC, FT-IR ve Zetasizer cihazlarında incelenmiş, en iyi konjugasyon oranları belirlenmiştir. VP-AA ile sentezlenen konjugatların sitotoksisite analizleri yapılmıştır. 
Ayrıca sentezi yapılan peptid ile peptid yüklü PLGA nanopartikülleri oluşturulmuştur ve yapıları AFM, SEM, Zetasizer ve fluoresans mikroskobu ile aydınlatılmıştır. Sitotoksik özellikleri incelenmiştir.

Abstract:
The studies about polymer-biomolecule complexes and conjugates, provide opportunity for both understanding their behaviour in living organism and advancing bioconjugation technology. Immunogenic polymer-peptide conjugates, which can be alternatives to existing vaccines, are very important for developing effective synthetic vaccines that contain no virus and also for diagnostic and biotechnological products. It's a common thought that these conjugates will make contribution to developing new type of synthetic polymeric vaccine systems.
In this thesis, Brucella, one of the bacterial diseases, was studied. In the thesis, antigenic peptide sequence of Brucella disease that is found in literature [Trp-Leu-Ala-Glu-Ile-Lys-Gln-Arg-Ser-Leu-Met-Val-His-Gly (WLAEIKQRSLMVHG)] was chemically synthesized by microwave assisted solid phase technique, purified and characterized. Covalent conjugates of this peptide were obtained in the presence of cross-linker EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochlorid) with different conjugation rates with PAA (polyacrylic acid) polymer and VP-AA (Poly (N-vinyl-2-pyrrolidone-co-acrylic acid)) copolymer which is synthesized and characterized by our group. Conjugation with PAA polymer was carried out with two different ways which are constant peptide-increasing polymer and constant polymer-increasing peptide. For conjugation with VP-AA copolymer, two different methods were performed. These water soluble bioconjugates were studied using by HPLC, GPC, FT-IR and Zetasizer instruments, the best conjugation rates were determined. Cytotoxicity analyses were made for the conjugates synthesized with VP-AA. 
Also with this synthesized peptide, peptide loaded PLGA nanoparticles were formed and their structures were investigated with AFM, SEM, Zetasizer and fluorescence microscopy. Cytotoxic features were assessed.