Kanatlı hayvanlarda aşı potansiyeli olan salmonella enteritidis AroA ve CLPP mutantlarının geliştirilmesi
Development of potential salmonella enteritidis AroA and CLPP mutants candidate vaccines in poultry
Yazar: TAJELSER IDRIS BADRI ADAM TAJELSER IDRIS BADRI ADAM
Danışman: PROF. DR. BARIŞ SAREYYÜPOĞLU
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Enterit = Enteritis ; Genler = Genes ; Mutant = Mutant ; Mutasyon = Mutation ; Salmonella = Salmonella ; Salmonella enteritidis = Salmonella enteritidis ; Virülans = Virulence ; Virülans faktörleri = Virulence factors

Özet:
Kanatlı Hayvanlarda Aşı Potansiyeli Olan Salmonella Enteritidis AroA ve
ClpP Mutantlarının Geliştirilmesi
Bu çalışmada, virülans antijenlerini kodlayan aroA ve ClpP genlerinde delezyon
yaparak kanatlı hayvanlarda aday aşı potansiyeli Salmonella Enteritidis mutantlarının
geliştirmesi ve in vitro koşullarda özelliklerini karşılaştırması amaçlandı.
SEI-△ClpP:CmR ve SEI-△aroA:CmR mutant suşları lambda red
rekombinasyonu yöntemi kullanılarak, Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi
Mikrobiyoloji Anabilim Dalında, kanatlı kümeslerinin altlık örneklerinden izole edilen
ve Pulsed Field Jel Elektroforezi ile genotiplendirilmiş olan Salmonella Enteritidis
saha suşundan oluşturuldu. Elde edilen mutant suşlarının özellikleri saha suşyla
karşılaştırıldığında, SEI-△aroA:CmR'nin 37 oC ve 42oC'de 4,5 pH'lı LB besiyerinde
yavaş ürediği ve SEI-△ClpP:CmR mutant suşunun %5 NaCl'lı LB besiyerinde yüksek
duyarlılık gösterdiği saptandı. SEI-△ aroA:CmR mutant suşu, XLD agarda ve
biyokimyasal testlerde H2S negatif bir sonuç verdi. Oda sıcaklığında ve 42oC'de SEI-
△aroA:CmR ve SEI-△ClpP:CmR mutant suşlarının motiliteleri azaldı, ve
antibiyotiklere karşı duyarlılıkları arttı. SEI-△aroA:CmR mutantının yumurta sarısına
ve EDTA'ya duyarlılığı sırasıyla 16 kat ve 4 kat arttı, domuz serumuna karşı çok
yüksek duyarlılık gösterdi, SEI-△ClpP:CmR mutant suşunun yumurta sarısına karşı
duyarlılığı 8 kat arttı. Vero hücre kültüründe mutantların adezyonu ve invazyonu, SEI-
△aroA:CmR mutantının sırasıyle 33 kat ve 18 kat, SEI-△ClpP:CmR mutant suşu ise
sırasıyla 3 kat ve 4 kat azaldı. PFGE genotiplendirmesinde, SEI-△aroA:CmR ve SEI-
△ClpP:CmR mutant suşlarının PFGE paternleri, saha suşunun PFGE paterninden
farklılık gösterdi.
Elde edilen sonuçlara göre, geliştirilen mutant suşlarının in vitro koşullarda net
bir attenüasyon gösterdiklerinden, tavukları Salmonella Enteritidis enfeksiyonundan
korumak için adayı aşı suşlar olarak kullanılmasında faydalı olacağı düşünülmektedir.
Anahtar Sözcükler: Salmonella Enteritidis, aroA, ClpP, Mutant, Aşı.

Abstract:
Development of Potential Salmonella Enteritidis AroA and ClpP Mutants candidate Vaccines in Poultry.
This study was aimed to develop potential Salmonella Enteritidis mutant
candidate vaccine strains in poultry by knocking out aroA and ClpP genes which
encodes virulence antigens, and compare their properties under in vitro conditions.
The mutant strains SEI-△ClpP:CmR and SEI-△aroA:CmR were generated by
using lambda red recombination method from Salmonella Enteritidis wild type strain
which was isolated from litter samples of poultry houses, identified and genotyped by
Pulsed Field Gel Electrophoresis at Ankara University Faculty of Veterinary Medicine
Department of Microbiology. The results of the tested properties of the generated
mutant strains compared with the wild-type strain revealed that the SEI-△aroA:CmR
grew more slowly in LB broth with 4.5 pH at 37oC and 42oC, while the SEI-
△ClpP:CmR showed very high sensitivity to 5% NaCl. The SEI-△ aroA:CmR mutant
strain was H2S negative when cultured in XLD agar and tested by biochemical tests.
The motility of SEI-△aroA:CmR and SEI-△ClpP:CmR mutant strains decreased
especially at room temperature and 42oC, and their sensitivity to antibiotics increased.
The sensitivity of SEI-△aroA:CmR mutant to egg yolk and EDTA increased by16-
fold and 4-fold respectively and showed very high sensitivity to pig serum, while the
sensitivity of SEI-△ClpP:CmR mutant strain was increased against egg yolk only
which was 8-fold. The ability of SEI-△aroA:CmR mutant to adhere and invade Vero
cells decreased by 33-fold and 18-fold, and for SEI-△ClpP:CmR mutant strain
decreased by 3-fold and 4-fold respectively. In genotyping, the PFGE patterns of SEI-
△aroA:CmR and SEI-△ClpP:CmR mutant strains were different from the PFGE
pattern of the field strain.
According to these results, since the generated mutant strains showed a clear
attenuation under in vitro conditions, it is thought that it will be beneficial to be used
as vaccine candidate strains to protect chickens from Salmonella Enteritidis infection.
Keywords: Salmonella Enteritidis, aroA, ClpP, Mutant, Vaccine.