İshalli hastalarda cryptosporıdıum spp.'in modifiye ehrlıch-zıehl-neelsen boyama yöntemi, ELISA ve immunokromatografik yöntem ile araştırılması
Investigation of cryptosporidium spp. in diarrheic patients by modified ehrlich-ziehl-neelsen staining, ELISA and immunochromatographic methods
Yazar: ARSEL ZAIN ALABDEEN
Danışman: DOÇ. DR. FAHRİYE EKŞİ
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Diyare = Diarrhea ; Dışkı = Feces ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kromatografi = Chromatography ; Protozoa = Protozoa

Özet:
Cryptosporidium spp. intrasellüler ekstrasitoplazmik bir protozoon olup gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde ishale yol açan önemli parazitler arasında yer almaktadır. Özellikle immunsupresif kişilerde ölümle neticelenen ishallere yol açabilmektedir. 

Gaziantep Üniversitesi Şahinbey Araştırma ve Uygulama Hastanesi erişkin ve pediatrik Onkoloji ve Hematoloji kliniklerinden ishali olan hastalardan gaita incelemesi amacıyla gönderilen gaita örneklerinde Cryptosporidium spp.'in araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada elde edilen sonuçlar karşılaştırılarak ELISA ile dışkıda spesifik antijen arama yönteminin etkensel tanıya katkı sağlayıp sağlamadığı ve diğer yöntemler ile uyumu araştırılmıştır.

Çalışmaya yaşları 0-85 (ortalama = 34.117 ± 21.208) arasında değişen, 39'u kadın (%41.5), 55'i erkek (%58.5) olmak üzere toplam 94 hasta alınmıştır. Hastalardan elde edilen gaita örneklerinde Cryptosporidium spp. araştırmak amacıyla modifiye Ehrlich-Ziehl-Neelsen (Modifiye EZN) boyama yöntemi, antijen aramaya yönelik hazırlanmış ELISA yöntemi ve İmmunokromatografik yöntem kullanılmıştır. 

Modifiye EZN boyama yöntemiyle hastaların %6.4'ünde, immunokromatografik yöntem ile hastaların %4.3'ünde ve ELISA yöntemiyle de hastaların %7.4'ünde pozitiflik saptanmıştır. Modifiye EZN boyama yöntemi ile pozitif olarak saptanan 6 hastanın 5'i (%83,3) ELISA yöntemiyle de pozitif olarak saptanmakla birlikte 1'i (%16.7) ise ELISA yöntemiyle negatif olarak tespit edilmiştir. Modifiye EZN boyama yöntemi ile negatif olarak tespit edilen 88 hastadan 2'si (%2.3) ELISA yöntemiyle pozitif olarak saptanmıştır. İmmünokromatografik yöntem ile pozitif olarak tespit edilen 4 hastanın tamamı (%100) ELISA yöntemiyle de pozitif olarak tespit edilmişken negatif olarak tespit edilen 90 hastadan 3'ü (%3.3) ELISA yöntemiyle pozitif olarak tespit edilmiştir. Modifiye EZN boyama yöntemi baz alınarak yapılan karşılaştırma neticesinde ELİSA yöntemiyle negatif olarak tespit edilen 87 hastadan 1'i (%1.1) modifiye EZN ile pozitif, ELİSA yöntemiyle pozitif olarak tespit edilen 7 hastadan 6'sı (%75) modifiye EZN yöntemiyle de pozitif bulunmuştur. 

Sonuç olarak dışkıda özgül antijen arayan ELISA'nın yüksek maliyetli bir yöntem olmasına karşın etkensel tanı yöntemlerinde yaşanan zorlukların çözümünde etkili olduğu görülmektedir.

Abstract:
Cryptosporidium spp. are important intracellular, extracytoplasmic protozoans that cause diarrhea both in the developed and developing countries. Especially they can cause diarrhea resulting in death in immunosuppressive people. 

At this study it is aimed to investigate Cryptosporidium spp. in stool samples from diarrheic patients obtained from adult and pediatric oncology and hematology in Gaziantep University, Medicine Faculty, Sahinbey Education and Research Hospital. Comparing the results obtained from the study it has been investigated that whether ELISA provide contribution to the diagnosis in specific antigen in stool and also the compliance with other methods has been investigated. 
 
A total of 94 patients were included in the study. The age of the participants vary between 0-85 years (mean = 34.117 ± 21.208); 39 of the participants were female and 55 were men. In order to investigate Cryptosporidium spp. Modified EZN staining method, ELISA and Immunochromatographic method were used. 

While 6.4% of the patients determined Cryptosporidium positive with Modified EZN staining method, 4.3% of the patients determined as positive with immunochromatographic method and 7.4% of the patients determined as positive with ELISA. 5 of the 6 patients (83.3%) that determined positive by modified EZN staining method determined as positive with ELISA. In addition 2 of the 88 patients that found as negative by modified EZN staining method, found as positive with ELISA. All of the positive results determined by immunochromatographic method also found as positive with ELISA. In addition 3 of the 90 patients that determined as negative by immunochromatographic method, found as positive with ELISA. As a result of the comparison of modified EZN and ELISA, 1 of 87 negative patients (1.1) found with ELISA determined as positive with modified EZN, and also 6 of 7 patients (75%) that found as positive with ELISA also found as positive with modified EZN.

In conclusion, although ELISA which investigates specific antigen in stool samples is a costly method, it has been seen that it is an effective method for problems in diagnosis.