Biyoaktivasyon sonrası polikaprolakton/ipek fibroini esaslı nanofiberlerin zebra balığı embriyoları üzerine etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of polycaprolactone/silk fibroin based nanofibers on zebrafish embryos after bioactivation
Yazar: GÜZİN GÖKSUN SİVAS
Danışman: PROF. DR. TUĞBA AKBAY
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Embriyo = Embryo ; Fibroin = Fibroin ; Nanolif = Nanofiber ; Polikaprolakton = Polycaprolactone ; Toksisite = Toxicity ; Zebra balığı = Zebrafish ; İpek fibroini = Silk fibroin

Özet:
Amaç: Çalışmamızın amacı polikaprolakton/ipek fibroini (PCL/İF) esaslı nanofiber hazırlanırken kullanılan çözücülerin ve antikor, enzim immobilizasyonu gibi işlemler sırasında kullanılan kimyasal maddelerin  toksik etkisi olup olmadığını  ve ayrıca oksidatif hasar oluşturma potansiyalinin zebra balığı embriyo modeli kullanılarak tespit etmektir.
Gereç ve yöntem: Elektro dokuma yöntemi ile hazırlanan PCL/İF esaslı nanaofibere laktaz enzimi ve BPA antikoru immobilize edilmiştir. Zebra balığı embriyoları kontrol,  ham  nanofiber,  laktaz enzimi immobilize edilmiş nanofiber, bisfenol a (BPA) antikoru immobilize edilmiş nanofiber olmak üzere dört gruba ayrılmıştır. Nanofiber esaslı maruziyet gruplarında, ilgili nanofiberler ayrı ayrı embriyoların gelişme ortamına bırakılıp belirli süre bu ortamda bekletilmiştir. Daha sonra embriyolar bu ortamların içerisinde gelişmeye bırakılıp 72 saat süre ile gelişmeleri izlenmiştir. 72 saatin sonunda tüm gruplardaki 100 adet embriyo, 1 mL serum fizyolojik ile homojenize edilmiştir. Elde edilen homojenatlara biyokimyasal analizler uygulanmıştır.
Bulgular:  Çalışmamızda Ham  nanofiber ve Laktaz immobilize edilen nanofiberin  mortalite ve kuluçkadan çıkış yüzdeleri 24, 48, 72 hpf 'de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik tespit edilmemiştir. BPA antikoru immobilize edilen nanofiber 10 saat süre ile E3 ortamında bekletildikten sonra ortama bırakılan embriyoların  hepsi 24 hpf sonunda ölürken, 1 saat süre ile E3 ortamında bekletilen BPA antikoru immobilize edilen nanofiber grubunda ise 24, 48 ve 72 hpf'de mortalite ve kuluçkadan çıkış yüzdeleri kontrol grubu ile karşılaştırıldığında istatiksel olarak anlamlı bir değişiklik tespit edilmemiştir.
Sonuç: Hazırladığımız biyomalzemelerin toksikolojik etkisinin olup olmadığı  deney hayvanı kullanımına gerek kalmadan zebra balığı embriyoları kullanılarak tespit edilmiştir. 
Anahtar kelimeler: Nanofiber, zebra balığı, toksisite, polikaprolakton, ipek fibroin.

Abstract:
Objective: The purpose of our study is to determine whether the solvents used in the preparation of PCL/silk fibroin-based nanofibers and the chemicals used during processes such as antibody and enzyme immobilization may have toxic effects, and also to determine the oxidative damage potential by using a zebrafish embryo model.
Material and Methods: Lactase enzyme and BPA antibody were immobilized on PCL / SF based nanofibers prepared by electrospinning. Zebrafish embryos were divided into four groups: control, raw nanofiber, lactase enzyme immobilized nanofiber, and bisphenol a antibody immobilized nanofiber. Nanofiber-based exposure groups contained the relevant nanofibers separately in the embryonic development environment and kept in this environment for a period of time. Subsequently, the embryos were left to these develop environments for 72 hours, they were homogenized with 1 mL of physiological saline and  homogenates were then analyzed using biochemical methods.
Results: In our study, compared to the control group, there were no statistically significant differences in mortality and hatching percentages of raw nanofibers and lactase immobilized nanofibers at 24, 48, and 72 hpf. Nanofiber immobilized with BPA antibody was left in E3 medium for 10 hours, but all of the embryos left in the development environment died at 24 hpf. Compared with control group and the nanofiber immobilized with BPA antibody no statistically significant difference was observed.
Conclusion: Instead of using experimental animals, we used zebrafish embryos to study the toxicological effects of our biomaterials.
Keywords: Nanofiber, zebrafish, toxicology, polycaprolactone, silk fibroine.