Folliküler dalgaları senkronize edilmiş holstein ırkı düvelerde ovum pick up (OPU) öncesinde uygulanan farklı FSH yöntemlerinin kumulus oosit kompleksi sayısı ve kalitesi üzerine etkisi
Effect on the number and quality of cumulus oocyte complexes of different FSH application methods before ovum pick up (OPU) in holstein heifers with synchronized follicular waves
Yazar: MUHAMMED FURKAN ÇİFTÇİ
Danışman: PROF. DR. DURSUN ALİ DİNÇ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veteriner Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Sunulan çalışmanın amacı, farklı FSH uygulama yöntemleri ile zaman, maliyet ve iş gücünden tasarruf etmek, hatalı ve çoklu uygulamalar sonucu hayvanlarda oluşacak stresi en aza indirmek, süperstimülasyon yanıtını ve oosit verimini artırmaktır. 
Çalışmanın hayvan materyalini; 14-16 ay yaşlarında, rektal palpasyon/ultrasonografik muayenede genital sisteminde herhangi bir sorun tespit edilmeyen 10 adet Holstein ırkı düve oluşturdu. Çalışmada süperstimülasyon öncesi östrus siklusunun rastgele bir gününde ilk olarak GnRH kas içi uygulandı ve aynı anda CIDR vaginaya yerleştirildi. Bu uygulamalardan 5 gün sonra PGF2α kas içi yapıldı, CIDR vaginadan uzaklaştırıldı ve 48 saat sonra ikinci GnRH uygulaması yapıldı. Bundan 6 gün sonra dominant folikül ablasyonu gerçekleştirildi. Birinci grupta (OVS, n=10) dominant folikül ablasyonundan 4 gün sonra herhangi bir FSH uygulaması gerçekleştirilmeden transvajinal ultrason yardımı ile oositler toplandı. İkinci grupta (OVS+1FSH, n=10) dominant folikül ablasyonundan 2 gün sonra 250 µg FSH 100 µg kas içi, 150 µg deri altı olmak üzere uygulandı ve 2 gün sonra transvajinal ultrason yardımı ile oositler toplandı. Üçüncü grupta (OVS+4FSH, n=10) dominant folikül ablasyonundan sonraki 1. ve 2. günlerde 12 saat arayla sabah/akşam olmak üzere 250 µg FSH 4 eşit dozda kas içi uygulandı ve 2 gün sonra transvajinal ultrason yardımı ile oositler toplandı. Dördüncü grupta (OVS+A1FSH, n=10) dominant folikül ablasyonundan 2 gün sonra Montanide İSA 206 adjuvantı içerisinde çözdürülmüş 250 µg FSH kas içi uygulandı ve 2 gün sonra transvajinal ultrason yardımı ile oositler toplandı. Beşinci grupta (Kontrol, n=10) herhangi bir hormonal uyarım yapılmadan östrus siklusunun rastgele bir gününde transvajinal ultrason yardımı ile oositler (ovum-pick up) toplandı. Oosit toplama işlemi sonrasında aspire edilen foliküler sıvılar mikroskop altında incelendi elde edilen kumulus oosit kompleksi sayıları ve kaliteleri tespit edildi. OPU sırasındaki ultrasonografik muayenede hayvanların ovaryumunda bulunan toplam antral folikül sayısı açısından gruplar arasında istatistiksel bir fark olmadığı tespit edildi. Orta çaplı antral folikül (3-8 mm) sayısının OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH ve OVS gruplarında kontrol grubuna göre daha fazla olduğu tespit edildi (p<0,05). Senkronizasyon + süperstimülasyon uygulanan (OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH) gruplarda A kalite oosit sayısı kontrol grubundan ve OVS grubundan daha yüksek bulundu (p<0,05). Senkronizasyon + süperstimülasyon uygulanan gruplarda (OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH) toplam A+B oosit sayısının kontrol grubuna göre daha fazla olduğu tespit edildi (p<0,05). Oosit elde etme oranı açısından gruplar arasında istatistiksel bir fark tespit edilmedi. 
Sonuç olarak; iş gücü tasarrufu sağlanması, donör hayvanlardan daha sık aralıklarla oosit toplanabilmesi, kolay uygulanabilir olması nedeniyle farklı şekillerde tek doz FSH uygulamalarının oosit verimini artırarak IVEP başarı oranını yükseltebileceği düşünülmektedir.

Abstract:
The presented study aims to save time, cost and labor with different FSH application methods for superstimulation, minimize the stress that will occur in animals due to faulty and multiple applications, and increase the superstimulation response and oocyte yield.
The material of the study was 10 Holstein heifers, who were 14-16 months old and had no genital tract problems in rectal palpation/ultrasound examination. In the study, before superstimulation, on a random day of the estrous cycle, first GnRH was administered intramuscularly and CIDR was inserted into the vagina simultaneously. After these applications, PGF2α was administered intramuscularly on the 5th day, CIDR was removed from the vagina, and the second GnRH application was performed 48 hours later. Dominant follicle ablation was performed 6 days after the second GnRH administration. In the first group (OVS, n=10), 4 days after the dominant follicle ablation, oocytes were collected with the help of transvajinal ultrasound without any FSH application. In the second group (OVS+1FSH, n=10), 2 days after the dominant follicle ablation, 250 µg FSH was administered as 100 µg intramuscularly and 150 µg subcutaneously, and 2 days later, oocytes were collected with the help of transvajinal ultrasound. In the third group (OVS+4FSH, n=10), 4 equal doses of 250 µg FSH were administered intramuscularly on the 1st and 2nd days after the dominant follicle ablation, and 2 days later, oocytes were collected with the help of transvajinal ultrasound. In the fourth group (OVS+A1FSH, n=10), 2 days after the dominant follicle ablation, 250 µg FSH dissolved in Montanide ISA 206 adjuvant was administered intramuscularly, and 2 days later, oocytes were collected with the help of transvajinal ultrasound. In the fifth group (Control, n=10), oocytes were collected with the help of transvajinal ultrasound (ovum-pick up) on a random day of the estrous cycle without any hormonal stimulation. After the oocyte collection, the aspirated follicular fluids were examined under the microscope, and the number and quality of the cumulus oocyte complex were determined. In the ultrasonographic examination during OPU, it was determined that there was no statistical difference between the groups in terms of the total number of antral follicles in the ovaries of the animals. The number of medium-sized antral follicles (3-8 mm) was found to be higher in the OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH and OVS groups compared to the control group (p<0.05). A-quality oocyte count was found to be higher in the groups that applied synchronization + superstimulation (OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH) than the control group and OVS group (p<0.05). The total number of A+B oocytes was found to be higher in the synchronization + superstimulation groups (OVS+4FSH, OVS+A1FSH, OVS+1FSH) compared to the control group (p<0.05). There was no statistical difference between the groups in terms of oocyte recovery rates.
As a result, it is thought that single-dose FSH applications in different ways can increase the IVEP success rate by increasing oocyte yield, due to labor savings, more frequent oocyte collection from donor animals, and easy application.