Toprak altı zararlılarına karşı fungal suşların seçimi ve granül formülasyonun üretilmesi
Selection of fungal strains against subterrenean pests and production of granular formulation
Yazar: EMİNE SÖNMEZ
Danışman: PROF. DR. İSMAİL DEMİR
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Kararlılık = Stability

Özet:
Bu çalışmada tarım alanlarında önemli ekonomik kayıplara neden olan toprak altı zararlılarına karşı granüler formda etkili bir fungal biyopestisit üretmek amacıyla laboratuvar koleksiyonundan seçilen 9 adet Metarhizium anisopliae suşu, biyopestisit üretim çalışmalarına başlamadan önce kararlılık testlerine tabi tutuldu. Fungusların, önemli bir toprak altı zararlısı olan Melolontha melolontha larvaları üzerine patojenite testleri yapılarak, yüksek öldürücü etkiye sahip olan suşları belirlendi. Daha sonra aynı suşların Pr1 gen içerikleri tespit edilerek, tümünün bu geni içerdikleri belirlendi. Tüm izolatlar için var olan genin uygun substrat varlığında enzim aktivitesi ölçümleri yapıldı. Yapılan bu deneyler sonucunda KTU-2, Gg-12, KTU-51 ve KTU-60 daha sonraki çalışmalarda kullanıldı. Belirlenen suşların ardışık 12 kez pasajları yapılarak, pasajlamanın morfolojik (koloni morfolojileri, renk değişimi, fertil olmayan alan oluşumu, spor üretimi ve sporların UV'ye karşı dirençliliği), virulans (Galleria mellonella larvaları üzerine biyotestler), genotipik (RAPD-PCR ve Restriksiyon Endonükleazlar ile Kesim) ve biyokimyasal (Proteolitik aktivitenin ve Esteraz Profillerinin belirlenmesi) etkileri belirlendi. Deney sonuçları analiz edildiğinde en kararlı suşların KTU-2 ve KTU-60 olduğuna karar verildi. Seçilen suşlar katı fazlı fermantasyon yöntemi kullanılarak pirinç üzerinde konidiaların büyütülmesi ile Türkiye'de ilk defa başarılı bir şekilde fungal bir biyopestisit prototip haline getirilmiş oldu.

Abstract:
In this study, 9 Metarhizium anisopliae strains, selected from laboratory collection in order to produce an effective fungal biopesticide with granular form against subterrenean pests causing significant economic losses in agriculture, were subjected to stability tests before biopesticide production studies. By realising pathogenicity tests on Melolontha melolontha larvae which are important subterrenean pests, strains of fungi with high lathel effect were determined. Later, Pr1 gene contents of same strains were determined and it was seen that all these strains were included this gene. Enzyme activity measurements for all isolates, with the presence of appropriate substrate of the existing gene, were realised. After these tests; KTU-2, Gg-12, KTU-51 and KTU-60 were used in later studies. By consecutively realising 12 passaging operations on determined strains, morphological (colony morphologies, change of colour, formation of infertile area, spore production and resistivity of spores to UV), virulence (bioassays on Galleria mellonella larvae), genotypic (degestion with RAPD-PCR ve Restriction Endonucleases), biochemical (determination of proteolytic activity and esterase profiles) effects of passaging were determined. After analysing test results, it was decided that the most stable strains were KTU-2 and KTU-60. That is the first time, successfully, in Turkey that by growing up conidia on rice with solid phase fermentation, selected strains were converted to a fungal biopesticide prototype.