Transmissible veneral tümörlü dişi köpeklerde kaspaz-3 ve apoptoz indükleyici faktör(aIF) ekspresyonu
Expression of caspase-3 and apoptosis inducing factors (AİF) in female DOGS WİTH transmissible venereal tumors
Yazar: SEMA KÖSE
Danışman: PROF. DR. CİHAN KAÇAR
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kaspazlar = Caspases ; Köpekler = Dogs ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Bu çalışmada transmissible veneral tümörlü (TVT) dişi köpeklerde kaspaz-3 ve apoptozis inducing faktörlerinin (AIF) ekspresyonlarının belirlenmesi ve bu markırların dişi köpeklerde venereal tümör oluşumundaki etkilerinin ortaya konulması amaçlanmıştır. Çalışmada 20 adet dişi köpek kullanılmıştır. Çalışma iki grup üzerinde yürütülmüştür. Birinci grupta transmissible veneral tümör tanısı konulmuş 10 dişi köpekten alınan tümöral doku örnekleri, histopatolojik değişikliklerin tespit edilmesi amacıyla Hematoksilen-Eozin boyası ile boyanmıştır. İkinci grupta ise nekropsi amacıyla getirilen ex olmuş dişi köpeklerden vagina dokusu alınmış ve daha sonraki işlemler birinci grupaki gibi yapılmıştır. Çalışmamızda immunohistokimyasal yöntem olarak Avidin-Biotin Peroksidaz metodu kullanılmıştır. Kaspaz-3 ve AIF immunohistokimyasal boyama sonuçlarının analizi; İmmünopozitiflik, 3 temsili alanda biyomarkerlar için spesifik boyanma sergileyen hücrelerin sayısı baz alınarak semikantitatif bir derecelendirme sistemi kullanılarak değerlendirilmiştir: hücrelerde boyama yoksa (Yok, -, 0), hücrelerin %1-10'unun boyanması (Zayıf, +, 1); hücrelerin %11-59'unun boyanması (Orta, ++, 2) ve hücrelerin >%60'ının boyanmasını (Şiddetli, +++, 3)  ifade etmektedir. Vagina bölgesinden alınan dokuların normal histolojik yapısını sergilediği ve kontrol amacıyla alınan bu dokularda herhangi bir patolojik lezyon olmadığı kaydedilmiştir. İmmunopozitive skor kaspaz-3 ve AIF ekspresyonu yönünden negatif sonuç vermiştir. TVT teşhisi konulan vakaların histopatolojik muayenesinde ise tümör hücrelerinin çoğunlukla ince bir stroma ile çevrili olduğu tespit edilmiştir. Tümör hücrelerinin çekirdeklerinin oldukça hiperkromatik ve eksantrik yerleşimli olduğu gözlemlenmiştir. Tümörlerin gelişim evreleri incelendiğinde çoğunluğunun progresyon aşamasında olduğu saptanmıştır. TVT vakaları ise kontrol grubuna nazaran kaspaz-3 ve AIF immunoreaktivitesi yönünden dikkate değer oranda artış göstermiştir. Kaspaz-3 ve AIFekspresyonları çoğunlukla tümoral hücrelerin sitoplazmasında yoğunlaşmıştır. Bunun yanı sıra lenfositer tipteki hücrelerde de tek tük pozitif reaksiyonlara rastlanmıştır. TVT gruplarında kaspaz-3 ekspresyonlarına nazaran AIF immunoreaktivitesinin daha şiddetli olduğu saptanmıştır.Sonuç olarak TVT'de kaspaz bağımsız yolak vasıtasıyla apoptozun tetiklendiği çalışma verileriyle ortaya konulmuştur. Sonuç olarak TVT'de kaspaz bağımsız yolak apoptozun tetiklendiği çalışma verileriyle ortaya konulmuştur.

Abstract:
In this study, it was aimed to determine the expressions of caspase-3 and apoptosis inducing factors (AIF) in female dogs with transmissible venereal tumors (TVT) and to reveal the effects of these markers on venereal tumor formation in female dogs. 20 female dogs were used in the study. The study was carried out on two groups. Tumor tissue samples taken from 10 female dogs diagnosed with transmissible venereal tumor in the first group were stained with Hematoxylin-Eosin dye to detect histopathological changes. In the second group, vagina tissue was taken from the dead female dogs brought for necropsy and further procedures were performed as in the first group. In our study, the Avidin-Biotin Peroxidase method was used as an immunohistochemical method. Analysis of Caspase-3 and AIF immunohistochemical staining results; Immunopositivity was assessed using a semiquantitative grading system based on the number of cells that showed specific staining for biomarkers in 3 representative areas: cells lacking staining (None, -, 0), staining 1-10% of cells (Weak, +, 1); indicates the staining of 11-59% of the cells (Moderate, ++, 2) and the staining of >60% of the cells (Severe, +++, 3). It was noted that the tissues taken from the vagina region exhibited their normal histological structure and there were no pathological lesions in these tissues taken for control. The immunopositive score was negative for caspase-3 and AIF expression. In the histopathological examination of the cases diagnosed with TVT, it was determined that the tumor cells were mostly surrounded by a thin stroma. It was observed that the nuclei of the tumor cells were highly hyperchromatic and eccentrically located. When the developmental stages of the tumors were examined, it was determined that most of them were in the progression stage. TVT cases showed a remarkable increase in caspase-3 and AIF immunoreactivity compared to the control group. Caspase-3 and AIF expressions are mostly concentrated in the cytoplasm of tumoral cells. In addition, sporadic positive reactions were also observed in lymphocytic cells. AIF immunoreactivity was found to be more severe than caspase-3 expressions in TVT groups. As a result, study data revealed that apoptosis was triggered by caspase-independent pathway in TVT. As a result, it has been demonstrated by the study data that caspase-independent pathway apoptosis is triggered in TVT.