Kırım-Kongo Kanamalı Ateşi hastalarında kemokin reseptör 5(CCR5) geni delta32 mutasyonunun analizi
Chemokine receptor 5 gene analysis of delta32 mutation in patients with Crimean-Congo Haemorrhagic Fever
Yazar: DUYGU EKİNCİ
Danışman: DOÇ. DR. AYDIN RÜSTEMOĞLU
Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Genler = Genes ; Hemorajik ateş-Kırım = Hemorrhagic fever-Crimean ; Kemokinler = Chemokines ; Mutasyon = Mutation ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Reseptörler = Receptors

Özet:
Kırım-Kongo Kanamalı Ateşi Virüsü, Bunyaviridae ailesinden Nairovirus grubunun alt gruplarında yer alan, ateş, ekimoz, kanama, trombositopeni ve karaciğer fonksiyon bozukluğu gibi bulgular ile seyreden akut zoonotik viral enfeksiyona yol açan bir virüsdür. Kırım-Kongo Kanamalı Ateşi (KKKA) bir akut viral kanamalı ateştir. KKKA infeksiyonunun klinik seyri ve sonucu insanlar arasında farklılık göstermektedir. Kesin tedavisi olmayan bu hastalığın neden bazı insanlarda mortalite, bazı insanlarda ise iyileşme ile sonuçlandığına dair kesin bilgiler mevcut değildir.
Kemokin reseptör 5 (CCR5) geni 3. kromozomda 3p. 21. 3 bölgesinde çeşitli kemokin reseptörü kodlayan bir grup genin arasındadır (3p21-3p24). CCR5 delta32(CCR5 ∆32),CCR5 kemokin reseptörünün delesyon mutasyonudur. Bu mutasyon sonucunda dokuda ve periferik hücrelerde CCR5'in ekspresyonunda önemli azalma görülmektedir. CCR5 Δ32gen delesyonunun HIV, HBV vb. bazı viralenfeksiyonlarda hastalığa karşı koruyucu etkisinin olduğu daha önceki çalışmalarda gösterilmiştir.
Çalışmamızda,CCR5 Δ32 mutasyonunun KKKA hastalığının ortaya çıkışı, seyri ve şiddeti ile ilişkili olup olmadığını araştırmayı amaçladık.
Bu çalışmada,Real-Time Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PZR) yöntemi ile KKKAV RNA'sı pozitif bulunan 133 hastanın kan örneklerinden elde edilen DNA'lar kullanılarak PZR yöntemi ile CCR5 ∆32 gen mutasyonları incelenmiştir.CCR5 ∆32gen mutasyonu çalışmasının sonuçlarının yanı sıra, hastaların yattıkları sırada kaydedilmiş çeşitli verileri ve laboratuvar değerleri istatistiksel analizde kullanılmıştır.
Ki-Kare (X2) testi kullanılarak yapılan istatistiksel analiz sonucunda, CCR5 ∆32 gen mutasyonunun hastalığın kliniği ağır seyreden ve hafif seyreden olgular arasında anlamlı bir farklılık göstermediği bulunmuştur (p>0.05). Kliniği ağır seyreden hastalarda CCR5/CCR5 normal homozigot bireyler için sıklık %100, kliniği hafif seyreden hastalarda CCR5/CCR5Δ32 heterozigot bireyler için %2.08 bir sıklık saptandı. Bununla birlikte çalışılan bireylerde hiçbir CCR5 Δ32 homozigot birey saptanmamıştır. CCR5 ∆32 gen mutasyonuna göre, kliniği ağır ve hafif seyreden olgular arasında bazı klinik ve demografik özellikler ile KKKA arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki göstermediği bulunmuştur.
Ağır ve hafif hasta sayısının az olması bu çalışmayı kısıtlamaktadır. Her ne kadar CCR5 ∆32 mutasyonu ile KKKA hastalık seyri ve semptomları arasında istatistiksel ilişki görülememiş olsa da, CCR5 ∆32 mutasyonunun ağır hastalarda tespit edilememesi, hastalarda tespit edilen mutasyon sıklığının literatürde belirtilen normal Türk populasyonu sıklığından daha düşük çıkması (%1.12 hasta ve %6.20 sağlıklı populasyon) bu mutasyonun ve dolayısıyla CCR5'in KKKA hastalığının patogenezinde veklinik seyrinde rol oynayabileceğini düşündürmektedir. Elde edilen bulgular daha fazla hasta içeren örneklemler ile yeni çalışmaların yapılması ihtiyacı doğurmuştur. Yapılacak çalışmalardan elde dilecek veriler KKKA hastalığının patogenezinde ve prognozunda CCR5 ∆32 mutasyonunun rolünü ortaya çıkararak hastalığın tedavisine yardımcı olabilir.

Abstract:
Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus (CCHFV) is one of the subgroups of Nairovirus group's which involved to Bunyaviridae family, leads to acute zoonotic viral infection associated with findings as fever, ecchymosis, bleeding, thrombocytopenia and liver dysfunction. Crimean-Congo hemorrhagic fever is an acute viral hemorrhagic fever. The clinical course and outcome of the Crimean-Congo hemorrhagic fever infection are different in humans. The precise information about why this disease causes death at some people, and why results by healing at some patients is unknown yet.
Chemokine receptor 5 (CCR5) gene is localized on 3p21.3,in the region among a group of genes encoding various chemokine receptors (3p.21-3p.24). CCR5 delta32 (CCR5 ∆32) is a deletion mutation of chemokine receptor CCR5, that decreased expression level of CCR5 in expressed cells. The protective effect ofCCR5 ∆32 in HIV, HBV, and certain viral infections has been shown in previous studies.
In this study, we aimed to investigate association between CCR5 ∆32 mutation, and CCHV infection outbreak, severity, and mortality.
We were investigated CCR5 ∆32 mutation frequency by PCR method using DNA samples of 133 CCHF patients isolated from blood samples of patients, which were diagnosed by detection of RNA positivity with virus specific RT-PCR. In this study we also used, various data which recorded when patient hospitalized and some laboratory values.	
Result of statistical analysis using by Chi-square test, showed that distribution of CCR5 gene ∆32 mutation frequencybetween severe clinic cases and mild clinic cases were not significantly different(p>0.05).All patients withsevere clinic were detectedCCR5/CCR5 homozygous genotype, whereas in the patients with severe clinic frequency of CCR5/CCR5Δ32 heterozygous individuals were found 2.08%.However, no homozygous CCR5Δ32/CCR5Δ32 individual was defected among the all individuals which examined. Other than, no statistical significance between some clinical and demographic characteristics for CCR5 ∆32 mutation frequency were found.
The limitation of this study was, relatively small size of severe and mild patients. Although to lack of association between CCR5 ∆32 mutation, and progression and symptoms of CCHF, the allele frequency of CCR5 ∆32 mutation in CCHF patients were detected lower than the normal Turkish population frequency which emphasized in the literature (1.12% vs %6.20). The lower CCR5 Δ32 mutation frequency in CCHF patients than normal population, and lack of mutation in severe patients, suggest that the CCR5 Δ32 mutation might have been a role in the pathogenesis of CCHF disease. These findings have led to the need to carry out work with samples containing more patients. The future studies may be help to treat of disease, and uncovering the role of CCR5 Δ32 mutation in the pathogenesis and prognosis of CCHF.