Kemik iliği kökenli osteoblastik liyofilizatın kemik hasarlarında kullanılması
The useage of bone marrow derived osteoblastic lyophilizate in bone defects
Yazar: ÖMÜR BUL
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ÖZER AYLİN GURPINAR
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Bu tez çalışmasında, kemik iliğinden izole edilen osteoblastik hücreler liyofilize edilerek kullanılmıştır. Elde edilen liyofilizatın in vitro ortamda hücre canlılığı üzerindeki etkisine bakıldıktan sonra kemik hasarları üzerindeki etkisi incelenmiştir.İlk aşamada, kemik iliği mezenşimal hücreleri, sıçan kemik iliğinden primer kültür yöntemiyle izole edilmiştir. Ardından bu hücreler uygun farklılaştırma faktörlerini içeren besiortamı kullanılarak osteoblast hücrelerine farklılaştırılmıştır. Osteoblast hücreleri, kemik oluşumu ve yenilenmesinde esas görev alan hücrelerdir. Salgılamış oldukları proteinler ve biyomoleküllerle kemik hücrelerinin farlılaşmasında, hücre göçünü, proliferasyonunu ve aktivasyonunu düzenler. Bu tez çalışmasında, bu proteinler ve biyomoleküller osteoblastların liyofilizasyonu ile elde edilmiştir. Hazırlanan liyofilizatın in vitro ortamda L929 fibroblast hücreleri, osteoblast hücreleri ve mezenşimal hücreleri ile olan etkileşimlerine bakılmıştır. Bunun için MTT yöntemi ile hücre canlılığı, Giemsa boyaması ile hücre morfolojisi incelenmiştir. Çalışmanın bundan sonraki aşamasında in vivoda oluşturulan hasar üzerindeki etkisi incelenmiştir. Çalışma için kullanılan Wistar albino türü sıçanların tibialarında oluşturulan kritik boyutlu hasarlar, hazırlanan liyofilizat ile doldurulmuştur. Operasyonu takip eden 2., 4. ve 6. haftalarda hasarlı kemiklerden histolojik inceleme yapılmıştır.Sonuçlar, liyofilizatın in vitroda osteoblastlar üzerinde proliferasyonu arttırıcı bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. L929 hücreleri ve mezenşimal hücreleri üzerinde ise canlılığı arttıcı bir etki kaydedilmemiştir. Histolojik sonuçlarda, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, liyofilizatlı gruplarda endokondral kemikleşmenin ikinci haftadan itibaren şekillendiği görülmüştür.Bu çalışma, hücre liyofilizatının canlı hücrelerle olan etkileşimini ve hasarlı bölgedeki biyouyumluluğunu inceleyen temel bir çalışmadır. Kemik hasarları ile ilgili yapılan araştırma ve çalışmalara ışık tutacağına inanılmaktadır.

Abstract:
In this study, after bone marrow mesenchymal cell differentiated into osteoblasts, they were lyophilized and dried. Then, the cell interactions and effects in bone defect of the lyophilizate were investigated.First of all, bone marrow mesenchymal cells were isolated from rat bone marrow by primer culture method. Mesenchymal stem cells were differentiated into osteoblasts by using appropriate containing differentiation factors. Osteoblasts are the main cells in bone formation and remodeling, biomolecules and proteins lay out bone cells diferentiation, migration, proliferation and activation released by osteoblasts. In this study, these proteins and biomolecules were obtained by lyophilization. Interaction of this homogenate with L929 fibroblast cells, osteoblast cells and mesenchymal cells were examined with in vitro studies. For this, cell viability was examined by MTT assay, cell morphology was examined by giemsa staining. The next step of the study, the curing effect of cell lyophilizate on bone defects was evaluated. Critical-sized defects on tibias of Wistar albino rats were filled with lyophilisate. In following 2nd, 4th and 6th weeks of operation histologic analysis were done for defected bone.The result showed that that lyophilizate had the positive effect on viability of osteoblasts. Also in the test groups used lyophilisate, endochondral ossification was more than the control groups.The content of lyophilisate and the molecular effect on the cells can be explained in detail by using advance studies. It is believe that this basic study will shed light to studies on treatment of bone defects.