Farklı büyüklükteki sığır oositlerinin maturasyon ve fertilizasyonu üzerine insülin benzeri büyüme faktörü-1 (IGF-1) ve epidermal büyüme faktörünün (EGF) etkilerinin araştırılması
Investigation on the effects of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and epidermal growth factor (EGF) on maturation and fertilization of different sized bovine oocytes
Yazar: DUYGU BURCU TOPUZOĞLU
Danışman: PROF. DR. İ. HAKKI İZGÜR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Döllenme = Fertilization ; Epidermal büyüme faktörü = Epidermal growth factor ; Olgunlaşma = Maturation ; Oositler = Oocytes ; Sığırlar = Cattles ; İn vitro = In vitro ; İnsülin benzeri büyüme faktörü I = Insulin like growth factor I

Özet:
Bu çalışmanın amacı farklı büyüklükteki sığır oositlerinin maturasyon ve fertilizasyonu üzerine insülin benzeri büyüme faktörü 1 (IGF-1) ve epidermal büyüme faktörünün (EGF) etkilerinin araştırılmasıdır.Çalışma materyalini mezbahadan toplanan ovaryumlardaki 1760 adet follikülden aspire edilen 720 adet oosit oluşturdu. Oositler, IGF-1(Grup 1), EGF(Grup 2), IGF-1 ve EGF kombinasyonu (Grup 3) ve katkısız TCM-199 (Grup 4) vasatlarında kültüre edildi. Her bir ana grup oosit çaplarına göre 110 µm'den küçük (A), 110-150 µm arası (B) ve 150 µm'den büyük (C) olmak üzere üç alt gruba ayrıldı. Oositler her bir alt grupta 60 adet olacak şekilde eşit olarak çalışmaya dahil edildi. Maturasyon işlemi % 5 CO2 içeren maksimum nemli ortamda, 24 saatte gerçekleştirildi. Maturasyon sonrası oositlerdeki kumulus ekspansiyonu incelendi.Maturasyon oranları Grup1, Grup 2, Grup 3 ve Grup 4'de sırasıyla % 73,3 , % 75,5 , % 84,4 ve % 63,3 olarak belirlendi (p<0,001). Erken dönem bölünme oranları(2-4 hücreli aşama) gruplar arasında sırasıyla % 58,3 , % 75,6 , % 76 ve % 61,5 olarak bulundu. Çapı 150 µm ve üzerinde olan oositlerin maturasyon oranlarının gruplar arası farkının önemli olduğu belirlendi. Gruplar arasında 4-8 hücreli embriyo gelişim oranları sırasıyla % 51,9 , % 57 , % 61,2 ve % 45,3 olarak bulundu(p>0,05). Blastosist gelişim oranları ise gruplarda sırasıyla % 27,5 , % 38,6 , %47 ve % 24,1 olarak tespit edildi (p>0,05).Bu çalışma bulguları ile HEPES tamponlu TCM-199 vasatının tek başına maturasyonda yeterli olmadığı, mutlaka ilave bir büyüme faktörü ile birlikte kullanılması gerektiği kanısına varıldı. Yüksek maturasyon ve kaliteli embriyo bölünmeleri elde etmek amacı ile 10ng/ml IGF-1 ve 50 ng/ml EGF `nin birlikte kullanıldığında maturasyon başarısını arttırdığı belirlendi. Benzer çalışmalarla birlikte, sığırlarda embriyo üretimi için en uygun oosit çapının 150 µm ve üzerinde olması gerektiği görüşüne varıldı. Sonuç olarak en kaliteli blastosist eldesi için farklı büyüme faktörlerinin farklı dozlarının ve kombinasyonlarının kullanılmasını gerektiren çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
The aim of this study is to investigate the effects of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and epidermal growth factor (EGF) on maturation and fertilization of different sized bovine oocytes.The material of the study included 720 oocytes aspirated from 1760 follicles of ovaries taken from the slaughterhouse. Oocytes were cultured according to the IGF-1 (Group1), EGF (Group2), IGF-1+EGF (Group3) culture supplements and unsupplemented TCM-199 (Group4). Each main group was divided into 3 subgroups according to the oocyte diameters as ?110µm (A), 110-150µm (B) and ?150µm (C). 60 oocytes in each subgroup were involved in the study. Maturation was carried out in 5% CO2 containing 390C incubator for 24 hours and oocyte cumulus expansions were examined after maturation.Maturation rates were determined in Group1, Group2, Group3 and Group4 as 73,3%, 75,5%, 84,4% and 63,3% respectively (p<0,001). Among the groups; early period cleavage rates (at 2-4cell stage) were found as 58,3% , 75,6%, 76% and 61,5% respectively. Maturation rates of oocytes with 150 µm and higher diameter were found significant among the groups. 4-8 cell embryo development rates among the groups were determined as 51,9% , 57%, 61,2% and 45,3% (p>0,05) respectively. Blastocysyt formation rates were found as 27,5% , 38,6% , 47% ve 24,1% respectively.Through these findings, it was determined that HEPES buffered TCM-199 was not sufficient for maturation separately and certainly needed to be combined with growth factors. For higher maturation and cleavage rates, combination of 10ng/ml of IGF-1 and 50 ng/ml of EGF application was determined. In company with similar studies, it was determined that oocytes with ?150µm diameter were found appropriate for bovine embryo production. In conclusion, new studies on using different combinations of different doses of growth factors to gain the best quality blastocyst are necessiated.