P-aminobenzoik asit türevi bileşikten afinite jeli sentezi ve farklı bitkisel kaynaklardan polifenol oksidaz saflaştırılması
Affinity gel synthesis from p-aminobenzoic acid derivative compound and purification of polyphenol oxidase from different herbal sources
Yazar: CANSU ÖZTÜRK
Danışman: PROF. DR. ÖMER İRFAN KÜFREVİOĞLU
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasında, gıda endüstrisinde kararmaya sebep olan PFO enziminin yüksek verimle saflaştırılması için yeni bir afinite jeli olan Sepharose-4B-L-tirozin-4-amino-2-metilbenzoik asit sentezlenmesi amaçlanmıştır. Araştırmamızda enzim kaynağı olarak patates, kültür mantarı ve patlıcan bitkilerinden saflaştırılan PFO enzim aktivitesi üzerine fenolik bileşiklerin inhibisyon etkileri incelendi ve literatürde bulunan inhibitörlerden daha etkili bir inhibitör bulunması amaçlandı.
Yöntem: Çalışmamızda kullanılan afinite jelleri üç farklı reaksiyon basamağında sentezlendi. Matriks olan Sepharose 4B, CNBr ile aktifleştirildi ve uzantı kolu olan L-tirozin kovalent olarak bağlandıktan sonra, diazolanmış ligand uzantı koluna kenetlendirildi. p-aminobenzoik asit enzimin spesifik inhibitörü olduğundan dolayı bilinen afinite jelinde ligand olarak kullanıldı. Sentezlenen yeni afinite jelinde ise 4-amino-2-metilbenzoik asit kullanıldı. İnhibisyon çalışmalarında ticari olarak satın aldığımız naringin, morin hidrat, eskülin hidrat, homovanilik asit, vanilik asit, floridzin dihidrat ve p-kumarik asit fenolik bileşikleri kullanıldı.
Bulgular: Ligand olarak 4-amino-2-metilbenzoik asitin kullanıldığı afinite jelinden patates 41,17 kat, kültür mantarı 64,47 kat, patlıcan ise 56,78 kat saflaştırıldı. p-aminobenzoik asitin ligand olarak kullanıldığı afinite jelinden ise patates 9,02 kat, kültür mantarı 16,57 kat, patlıcan 28,13 kat saflaştırıldı.  Bu çalışmada yeni sentezlenen afinite jeli saflaştırılan enzimler için doğal ve SDS-PAGE uygulanarak her bir enzim için tek bir bant gözlendi. Her bir enzimin molekül ağırlığı yaklaşık olarak 50 kDa olarak belirlendi.
Sonuçlar: Tez kapsamında Sepharose-4B-L-tirozin-4-amino-2-metilbenzoik asit afinite jelinin, bilinen afinite jeline oranla PFO enzimini daha yüksek verimle saflaştırdığı bulundu. Morin hidratın PFO enzimi için potansiyel inhibitör olduğu tespit edildi.

Abstract:
Purpose: In this study, it was aimed to synthesize Sepharose 4B-L-tyrosine-4-amino-2-methylbenzoic acid, which is a new affinity gel for the purification with high efficiency of the PPO enzyme, which causes darkening in the food industry. In our study, the inhibition effects of phenolic on the PPO enzyme activity purified from potato, culture mushroom, eggplant plants as enzyme source were examined and it was aimed to find a more effective inhibitor than the inhibitors found in the literature.
Method: The affinity gels used in our study were synthesized in three different reaction steps. Sepharose 4B, the matrix, was activated with CNBr and after L-tyrosine being the extension arm was attached as covalent, the diazolated ligand was clenched to the extension arm. It was used as a ligand in the affinity gel known due to being a specific inhibitor of the p-aminobenzoic acid. In the newly synthesized affinity gel, 4-amino-2-methylbenzoic acid was used. In the inhibition studies; naringin, morin hydrate, esculin hydrate, homovanillic acid, vanillic acid, phloridzin dihydrate and p-coumaric acid phenolic compounds that we commercially purchased, were used. 
Findings: Potato 41,17 times, culture mushroom 64.47 times, and eggplant 56,78 times from affinity gel using 4-amino-2-methylbenzoic acid as ligand were purified. From the affinity gel that was used as a ligand of p-aminobenzic acid, potato 9.02 times, cultur mushrooms 16,57 times, eggplant 28,13 times was purified. In this study, a single band was observed for each enzyme by applying natural and SDS-PAGE for newly synthesized affinity gel purified enzymes. The molecular weight of each enzyme was determined to be approximately 50 kDa.
Results: In the thesis scope, it was found that the Sepharose-4B-L-tyrosine-4-amino-2-methylbenzoic acid affinity gel purified the PPO enzyme with higher efficiency compared to the known affinity gel. Morin hydrate, a phenolic compound, was found to be a potential inhibitor for the PPO enzyme.