Tümör nekrozis faktör alfa'ya (TNF-Alfa) karşı poliklonal antikor üretilmesi
Generation of polyclonal antibody against tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha)
Yazar: EZGİ KOÇ
Danışman: PROF. DR. ERKAN YILMAZ
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Poliklonal antikor = Polyclonal antibody

Özet:
Tümör Nekrozis Faktör Alfa (TNF-alfa), doğal bağışıklığın başlıca mekanizmalarından olan inflamasyonda etkin rol oynayan, multifonksiyonel bir sitokindir. Özellikle Romatoid artrit (RA) ya da Crohn hastalığı (CD) gibi otoimmün ve inflamatuar hastalıklarda TNF-alfa konsantrasyonunun vücutta artması bu sitokini terapötik olarak önemli bir hedef haline getirmektedir. Bu hastalıklarda TNF-alfa'yı tanıyan ve nötralize edebilen anti-TNF-alfa antikoru tabanlı ilaçlar kullanılabilmektedir. Infliximab (Remicade); FDA-onaylı kimerik bir anti-TNF-alfa antikorudur ve dünyanın en çok satan antikor tabanlı ilaçlarından biri olmuştur. Infliximab patent süresi 2018 yılı itibariyle dolmuştur. Biyobenzer antikorlar, orijinal antikorlar ile aynı sekansa sahip olmasının yanında faklı klonlama ya da üretim prosesi ile üretilirler. Bu nedenle, glikolizasyon profillerinde, üretilen ürünün kalitesinde ve işlevselliğinde değişimler olabilmektedir. Bu yüzden anti-TNF-alfa antikorları ve biyobenzerleri oluşturulmaya devam etmektedir. 
Bu tez çalışmasında TNF-alfaya karşı poliklonal antikor üretilmiştir. Bu amaca ulaşmak için; TNF-alfa rekombinant protein ekspresyonu yapılmış ve Balb/C dişi fareye immünizasyonu sonrasında ascite sıvısı toplanarak antikorun TNF-alfa'ya karşı spesifitesi ölçülmüştür. Üretilmiş olan poliklonal antikor geliştirilip saflaştırılarak ELISA ve Western Blot gibi teknikler için kullanılmaya açık olacaktır. Aynı zamanda ülkemizde TNF-alfa'ya karşı biyoteknolojik bir ilaç geliştirilmesi için önemli bir basamak olabilecektir.

Abstract:
Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-alpha), is a multifunctional cytokine which is one of the most important mechanisms of the immune system. Increasing concentration of TNF-alpha, especially in the autoimmune and inflammatory disorders makes this cytokine an important therapeutic target. In diseases with high TNF-alpha concentration, anti-TNF antibody-based drugs can recognize and neutralize TNF-alpha. Nowadays, there are many FDA-approved anti-TNF-alpha antibodies in the market. Infliximab (Remicade), an FDA-approved chimeric TNF-alpha antibody has been one of the top 10 selling antibody-based drugs in the world. Infliximab patent expired as of 2018. Biosimilar antibodies could be produced by different cloning or production processes. For this reason, there may be changes in the glycosylation profiles, the quality of the produced product or its functionality. Therefore, anti-TNF-alpha antibodies and biosimilars continue to be produced. 
In this study, anti-TNF-alpha polyclonal antibody is generated. To achieve this; recombinant protein is produced with the TNF-alpha protein expression vector and the Balb/C female mice are immunized. Ascites fluid is collected and the specificity of the antibody is measured. Generated polyclonal antibody will be developed in later stages for techniques such as ELISA and Western Blotting. This antibody could be a step for the biotechnological drug production against TNF-alpha.