İstanbul yöresinde sağlıklı ve klinik belirti gösteren köpeklerde helicobacter pylori varlığının kültür, polimerase chain reaction (pcr) ve restriction fragment length polymorphisim (rflp) ile saptanması
Detection of helicobacter pylori in healthy dogs and dogs with the clinical semptoms by culture, polimerase chain reaction (pcr) and restriction fragment length polymorphism (rflp) in istanbul district
Yazar: NAFİYE SONAY SAĞNAK
Danışman: PROF. N. YAKUT ÖZGÜR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Dışkı = Feces ; Helicobacter = Helicobacter ; Kültür = Culture ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Restriksiyon fragman uzunluğu polimorfizmi = Restriction fragment length polymorphisms

Özet:
Bu çalısmada, gastrik klinik belirti gösteren ve göstermeyen köpeklerin dıskı örneklerinde H.pylori varlıgı moleküler ve bakteriyolojik yöntemler kullanılarak arastırıldı. Bu amaçla,stanbul ilinde bulunan sahipli ve sahipsiz toplam 96 köpekten dıskı örnekleri toplandı. Dıskıörneklerinin Helicobacter cins spesifik primerler kullanılarak PCR ile incelenmesi sonucunda,65 (% 67.7) örnekte 375 bp' lik bantlar gözlendi. Gastrik klinik belirti gösteren 36 köpekten27 (% 75)' sinde, gastrik klinik belirti göstermeyen 60 köpekten 38 (% 63.3)' indeHelicobacter DNA' sı saptandı. 40 sahipli köpekten 15 (% 37.5)' inde, 56 sahipsiz köpekten50 (% 89.3)' sinde 375 bp'lik bantlar görüldü. Elli erkek köpekten 29 (% 58)' unun, 46 disiköpekten 36 (% 78.3)' sının 375 bp'lik bantlar olusturdugu belirlendi. Bir yas ve altındaki 49köpegin 38 (% 77.6)' inde ve 1 yas üstü 47 köpegin 27 (% 57.4)' sinde Helicobacter sppDNA' sı saptandı. PCR teknigi ile incelenen 96 köpege ait dıskı örneklerinden elde edilenbulguların istatistiki analizi sonucunda, disi ve erkek köpekler arasındaki fark incelenen tümköpeklerde istatiksel olarak önemli (p=0.034) bulundu. Aynı sekilde sahipli ve sahipsizköpekler arasındaki fark (p=0.01) ile, 1 yas ve altındaki ve 1 yas üzeri köpekler arasındakifark da (p=0.035) önemli bulundu. PCR teknigi ile Helicobacter oldugu saptanan 65 DNA'nın HinfI enzimi ile kesimi sonucunda ise, 12 (% 18,46) DNA örneginde H. pylori saptandı.Gastrik klinik belirti gösteren 36 köpegin 5 (% 13.9)' inde, gastrik klinik belirti göstermeyen60 köpegin ise 7 (% 11.7)' sinde H. pylori saptandı. 40 sahipli köpekten 3 (% 7.5)' ünde, 56sahipsiz köpekten 9 (% 16.1)' unda H. pylori görüldü. 50 erkek köpekten 6 (% 12)' sının 46disi köpekten 6 (% 13)' sında H. pylori saptandı. 1 yas ve altındaki 49 köpege ait dıskıörneklerinin 6 (% 12.2)' sında, 1 yas üstü 47 köpege ait dıskı örneklerinin 6 (% 12.8)' sındaH. pylori DNA' sı saptandı. RFLP teknigi ile elde edilen bulguların istatistiki analizisonucunda ise; gastrik klinik belirti gösteren ve göstermeyenler arasındaki fark (p=0.750), disive erkek köpekler arasındaki fark (p=0.877), sahipli ve sahipsiz köpekler arasındaki fark(p=0.439) ile 1 yas ve altındaki ve 1 yas üzeri köpekler arasındaki fark (p=0.938) önemsizbulundu. PCR sonrası yapılan RFLP sonucunda H. pylori DNA' sı saptanan 12 köpegin dıskıörneklerinden yapılan bakteriyolojik inceleme sonucunda, örneklerin hiçbirinden H. pyloriizole edilmedi.

Abstract:
The presence of H. pylori in stool specimens of healthy dogs and dogs with gastrointestinalsymptoms was investigated by using molecular and bacteriological techniques. For thispurpose stool specimens were collected from 96 pet and sheltered dogs living in Istanbulprovince. As a result of PCR investigation with Helicobacter genus specific primers, 375 bpbands were obtained from 65 (67.7 %) of the specimens. Out of 36 dogs which hadgastrointestinal symptoms 27 (75 %) and out of 60 healthy dogs 38 (63.3 %) were foundpositive. Fifteen (37.5 %) of 40 pet dogs, and 50 (89.3 %) of 56 sheltered dogs were found tobe Helicobacter positive. From 29 (58 %) of 50 male dogs and 36 (78.3 %) of 46 femaleswere found positive. When the dogs were classified by their ages, 38 (77.6 %) of 49 dogs oneand less than one year old age and 27 (57.4 %) of 47 older dogs had Helicobacter spp. DNA.In all the examined groups, the rate of Helicobacter spp. in female dogs were higher than maledogs and the difference was found statistically significant (p=0,034). The positive resultsbetween sheltered dogs and pet dogs were statistically significant (p=0.01).The percentage ofpositive samples were also found to be significantly higher in the dogs that aged one and lesscompared with the elders (p=0,035). Although no statistical significance was found betweendogs with gastrointestinal symptoms and healthy dogs, more positive results were obtainedfrom healthy dogs. As a result of restriction of 65 Helicobacter spp. DNA by HinfI, H. pylorispecific bands (196 bp, 119 bp, 60 bp) were observed from 12 (18.46 %) of DNA samples.Out of 36, 5 (13.9 %) positive results were obtained from specimens of dogs withgastrointestinal semptoms and out of 60, 7 (11.7 %) positive were obtained from healthy dogs.Out of 40 pet dogs 3 (7.5 %) were found H. pylori positive while out of 56 sheltered dogs, 9(16.1 %) found positive. From 6 (12 %) of 50 male dogs and from 6 (13 %) of 46 femaleswere found to be positive. When the dogs were classified by their ages, 6 (12.2 %) of 49 oneand less than one year of age and 6 (12.8 %) of 47 older aged dogs were detected positive.Those rates had no statistically importance in any of classified groups. The H. pylori positive12 stool specimens were also examined bacteriologically and no positive result was obtained.