Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) vibriosis'e karşı aşı uygulanmasının bağışıklık sistemine etkisi
The effect of vaccination against vibriosis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) immune system
Yazar: SEÇİL EKİCİ
Danışman: PROF. DR. ÖZNUR DİLER
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Aglütinasyon testleri = Agglutination tests ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Gökkuşağı alabalığı = Rainbow trout ; Vibrio anguillarum = Vibrio anguillarum ; Vibriosis = Vibriosis ; İmmünizasyon = Immunization

Özet:
Halofilik Gram negatif bakteri olan Vibrio anguillarum' un neden olduğu vibriosis deniz balıkları ve son yıllarda da gökkuşağı alabalığı yetiştiriciliğinde yüksek oranda ölümlere yol açan en önemli bakteriyel hastalıklardan birisidir.Bu çalışma ile ülkemizde ilk kez gökkuşağı alabalıklarında (Oncorhynchus mykiss) vibriosis'e karşı deneysel aşı hazırlanmıştır. Akdeniz bölgesinde yetiştiriciliği yapılan gökkuşağı alabalıklarında görülen vibriosis salgınlarından izole edilen Vibrio anguillarum M1 suşundan hazırlanan deneysel aşı ile 4 farklı aşılama yönteminin (enjeksiyon, kısa süreli banyo (k.b.), oral, k.b.+oral) etkinliği karşılaştırılmıştır.Aşılamadan sonraki 30, 60, 90 ve 120. günlerde aşılı ve kontrol gruplarına LD70 dozunda (102 kob/ml) V. anguillarum intraperitonal enjeksiyon ile verilerek eprüvasyon yapılmıştır. Ölümler temel alınarak hesaplanan Oransal Yaşama Oranı (RPS)'nın, injeksiyon aşı uygulanan grupta daha iyi olduğu belirlenmiştir. 30. günde yapılan eprüvasyonda oral, kısa süreli banyo ve injeksiyon gruplarından elde edilen RPS değeri sırasıyla % 57,11, % 31,42 ve % 100 olarak tespit edilmiştir.Denemenin 30. gününde kısa süreli banyo grubundaki balıklara oral yöntemle destek aşı uygulanmıştır. Balıklar Polylactide-co-glycolide (PLG) polimerleri kullanılarak mikrokapsüllenmiş aşı ile 10 gün boyunca canlı ağırlıklarının % 2'si oranında beslenmiştir. 60. günde yapılan deneysel enfeksiyonda kısa süreli banyo ve k.b.+oral aşılanan balıklardan elde edilen RPS değeri sırasıyla % 19,44 ve % 30,55 olarak bulunmuştur. 120. günde yapılan eprüvasyonda i.p. enjeksiyon ile aşılanan balıklarda hala % 100 oranında RPS değerinin olduğu ve diğer gruplardan önemli derecede yüksek koruma sağladığı tespit edilmiştir.Böylece enjeksiyon aşı uygulaması ile yüksek oranda koruma sağlanmıştır. Mikrokapsüle edilen oral aşının V.anguillarum karşı immunitenin geliştirilmesinde destek aşı olarak kullanılabileceği gösterilmiştir.Gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykiss)'da V.anguillarum ile immunizasyonu takiben 21, 28, 45, 60, 90 ve 120 günlerde yapılan ELISA ve mikroaglütinasyon testlerinde tüm gruplarda çok düşük miktarda antikor titresi belirlenmiştir.

Abstract:
Vibriosis, caused by the halophilic Gram negative bacterium Vibrio anguillarum,, is one of the most important bacterial diseases causing high mortality losses in marine fish and recently rainbow trout farming.In this study, an experimental vaccine was prepared for rainbow trout againts vibriosis. This is first experimental vaccine study for rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). The M1 strain of Vibrio anguillarum, isolated from an outbreak of rainbow trout farm in Mediterranean region, Turkey in this study was used a trial comparing four immunization methods: injections, immersion, oral, immersion+oral applications and control (phosphate buffered saline,PBS).Each vaccinated and unvaccinated group of fish were challenged by intrapritoneal injection of LD70 doses (102 cfu per ml) of V. anguillarum in 30, 60, 90 and 120 days. Relative percentage of survival values calculated based on mortalities, it has been determined that, injections methods provided more protection compared to other methods: immersions, oral and immersion+oral vaccines.In fish exposed to the bacteria 30 days after injection RPS value was calculated for oral, immersion and injection methods 57.11 %, 31.42 % and 100 % respectively.The immersion groups were boosted for oral methods when 30 days. Oral vaccine was microencapsulated using polylactide?co?glycolide (PLG) and mixed in to the food. The fish have been fed with a diet containing the oral vaccine for 10 days at 2 % of body weight per day.In fish exposed to the bacteria 60 days after injection RPS value was calculated for injection, immersion, oral, im+oral vaccinated and control groups. 19.44 % and 30.55 % RPS were observed in immersion and im+oral vaccinated groups respectively. However oral vaccinated groups were observed protections for 1 mounth. Immunity remained high in injections method, as the RPS value was 100 % in 120 days, significantly higher than in all other groups. Thus, good protection was achieved in vaccination by injection methods and it was also demostrated that microencapsulated oral vaccine will be used boosted methods for increase immun protection againts Vibrio anguillarum.In all groups, low antibody titres were determinated following 21, 28, 45, 60, 90 and 120 days after immunization using ELISA and micro-agglutination tests.