Sıçanlarda sisplatinin meydana getirdiği testis hasarı üzerine D vitamini etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of vitamin D on testicular damage caused by cisplatin in rats
Yazar: RÜMEYZA HİLAL CIRIK
Danışman: DOÇ. DR. ELİF KARACA
İnönü Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Üroloji = Urology
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Sisplatin = Cisplatin ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; Testis hasarı = Testicular damage ; Vitamin D = Vitamin D

Özet:
Sıçanlarda Sisplatinin Meydana Getirdiği Testis Hasarı Üzerine D Vitamini Etkisinin Araştırılması
Amaç: Çalışmamızda sisplatinin neden olduğu testis hasarına karşı VD'nin etkilerini histopatolojik, immunohistokimyasal ve biyokimyasal yöntemlerle araştırmayı amaçladık.
Gereç ve Yöntem: 28 adet Wistar albino sıçan kontrol ve VD grubunda 6, sisplatin ve sisplatin+VD grubunda 8 adet olarak dört gruba ayrıldı. Sıçanların deney başında ve sonunda vücut ve testis ağırlıkları ölçüldü. 10 günlük deney sonunda ketamin/ksilazin anestezisi altında sıçanlar sakrifiye edildi. Sağ testisler biyokimyasal analizlerde, sol testisler histolojik analizlerde kullanıldı. Alınan dokular, rutin doku takip işlemlerinden geçirilerek parafine gömüldü. Parafin bloklardan alınan seri kesitlere HE, PAS, kaspaz-3 ve VDR boyama metodları uygulandı. Epididimis kauda kısmından elde edilen semen örneklerinden sperm vitalitesi ve morfolojisi değerlendirildi. Ayrıca sperm sayımı yapıldı. Biyokimyasal olarak TOS, TAS, FSH, LH, testosteron, östrojen, VD, Ca ve P düzeyleri ELISA test kitleri aracılığıyla spektrofotometrik yöntemler kullanılarak ölçüldü.
Bulgular: Histopatolojik analizlerde; sisplatin grubunda seminifer tübül çapı ve germinal epitel kalınlığında azalma, Johnsen skorunda düşme, germinal hücrelerde dejeneratif değişiklikler gözlendi. PAS boyamada bazal membranda ondülasyon ve artmış pozitiflik izlendi. Kaspaz-3 immün pozitiflik artarken, VDR immün boyama azalmış tespit edildi. Biyokimyasal analizlerde; sisplatin grubunda TOS da anlamlı artış görülürken TAS yönünden anlamlı bir fark tespit edilmedi. FSH, LH, Testosteron, VD Ca ve P yönünden kontrol ile kıyaslandığında istatistiksel olarak bir fark izlenmedi. Östrojenin ise kontrole göre anlamlı düzeyde düştüğü görüldü. Sperm sayısı ve sperm vitalitesi kontrol grubuna göre azalmış, sperm anomalisi ise artmış tespit edildi. VD uygulamasının histolojik hasarı azalttığı ve Johnsen skorunda anlamlı yükselmeye neden olduğu görüldü. Bu grupta kaspaz-3 immün boyanma azalırken VDR immün boyanmada artış izlendi. Biyokimyasal olarak TOS düzeyinde anlamlı azalma ve VD seviyesinde anlamlı artış tespit edildi.
Sonuçlar: Sonuç olarak bu çalışma, sisplatin ile testis hasarı oluşturulan sıçanlarda VD uygulamasının testiküler hasarı hafiflettiğini göstermektedir. Bununla birlikte, klinik tedavi protokollerine VD'nin eklenmesi için daha ileri çalışmaların yapılmasına ihtiyaç vardır.
Anahtar Kelimeler: D Vitamini, Sıçan, Sisplatin, Testis

Abstract:
ABSTRACT
Investigation of the Effect of Vitamin D on Testicular Damage Caused by Cisplatin in Rats
Aim: In our study, we aimed to investigate the effects of VD against testicular damage caused by cisplatin by histopathological, immunohistochemical and biochemical methods.
Material and Method: 28 Wistar Albino rats were divided into four groups, 6 in the control and VD groups, and 8 in the cisplatin and cisplatin+ VD groups. Body and testicular weights of the rats were measured at the beginning and end of the experiment. At the end of the 10-day experiment, the rats were sacrificed under ketamine/xylazine anesthesia. Right testicles were used for biochemical analyzes and left testicles were used for histological analyses. Tissues were taken through routine tissue follow-up procedures and embedded in paraffin. HE, PAS, caspase-3 and VDR staining methods were applied to serial sections taken from paraffin blocks. Sperm vitality and morphology were evaluated from semen samples obtained from the cauda part of the epididymis. Number of sperms was also counted. Biochemically, TOS, TAS, FSH, LH, testosterone, estrogen, VD, Ca and P levels were measured by ELISA test kits using spectrophotometric methods.
Results: In histopathological analysis; a decrease in seminiferous tubule diameter and germinal epithelial thickness, decrease in Johnsen score, and degenerative changes in germinal cells were observed in the cisplatin group. In PAS staining, corrugation and increased positivity were observed in the basement membrane. While caspase-3 immune positivity increased, VDR immunostaining decreased. In biochemical analysis; while a significant increase was observed in TOS in the cisplatin group, no significant difference was found in terms of TAS. No statistical difference was observed in terms of FSH, LH, Testosterone, VD, Ca and P when compared with the control. It was observed that estrogen decreased significantly compared to the control. Sperm count and sperm vitality were decreased compared to the control group, and sperm anomaly was increased. It was observed that VD application reduced histological damage and caused a significant increase in Johnsen score. In this group, caspase-3 immunostaining decreased while VDR immunostaining increased. Biochemically, a significant decrease in TOS level and a significant increase in VD level were detected.
Conclusion: In conclusion, this study shows that VD administration alleviates testicular damage in rats with cisplatin-induced testicular damage. However, further studies are needed to add VD to clinical treatment protocols.
Keywords: Vitamin D, Rat, Cisplatin, Testis