Hipogonadotropik hipogonadizmin tanısında KAL1, FGFR1,GPR54, NELF mutasyonlarının multipleks ligasyon bağımlı prob amplifikasyon (MLPA) yöntemiyle analizi
Analysis of KAL1, FGFR1, GPR54 and NELF mutations with the method multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) in diagnosis of hypogonadotropic hypogonadism.
Yazar: HİLMİ UMUT ÜNAL
Danışman: DOÇ. DR. Ş. EROL BOLU
GATA / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases ; Genetik = Genetics
Dizin: Hipogonadizm = Hypogonadism

Özet:
Konjenital GnRH eksikliği; hipotalamik hipofiziotropik nöronlardanGnRH sekresyonunun yokluğu veya onun reseptör düzeyinde kimutasyonlara bağlı etkisizliğinden kaynaklanır ki, bu defekt idiyopatikhipogonadotropik hipogonadizm ile sonuçlanır. Konjenital GnRH eksikliği,primer gonadal yetmezlikten testosteron hormonlarının düşüklüğüne rağmendüşük serum FSH ve LH düzeyleri ile ayrılır. Hipotalamik-hipofizer alanınnormal görüntülenmesinin yanında anterior hipofizin diğer endokrinfonksiyonlarının normal olduğunun gösterilmesi ile izole hipogonadotropikhipogonadizm tanısı konmuş olur. Konjenital GnRH eksikliğinin olduğuhipogonadizm olguları ya Kallmann Sendromu (anosmi/hiposminin eşlik ettiğiIHH) olarak ya da koku duyusunun korunduğu IHH olguları (nIHH) olarakkarşımıza çıkar.Bugüne kadar yapılan araştırmalar GnRH ve gonadotropin sentez yada sekresyonunu bozarak gonadotropin eksikliğine yol açan bir dizi genetikkusuru ortaya çıkarmıştır. Bu genetik kusurlar dört başlık altında özetlenebilir:1) GnRH nöronlarının migrasyonu ve fonksiyonu (KAL1, FGFR1, NELF1,PROK2 ve PROKR2), 2) GnRH sentez ve sekresyonu (GnRH1, KİSS1,GPR54, SF1, DAX1, LEP ve LEPR), 3) GnRH'ya cevap (GNRHR), ve 4)gonadotropin biyosentezi (LHB, FSHB, DAX1, ve SF1).Bu çalışmada 86 HH hastası ile 95 kontrol DNA'sı KAL1, FGFR1,GPR54 ve NELF genlerindeki mutasyon varlığı ve sıklığı yönündenincelenmiştir. Hipogonadotropik hipogonadizm hastalarınındeğerlendirilmesinde dinamik testler ile diğer hipofizer hormonlarda birbozukluk olmadığı gösterilmiştir. Hastaların hipofiz MR'ları da çekilereksekonder tüm nedenler dışlanmıştır. Anosmi/hiposmi varlığı kahve, soğan vb.keskin kokular sorgulanarak değerlendirilmiştir. 86 HH hastanın 76'sı IHHvi10'u Kallmann Sendromu olarak tanı aldı. Hasta ve kontrol grubunun DNA'sıQiagen kullanılarak izole edilmiş ve -80 °C saklanmıştır. Elde edilen DNAörnekleri, MLPA kitleri kullanılarak gen mutasyonları yönünden taranmıştır.NELF ve GPR54 genlerinde mutasyon saptanmazken KAL1 geninde 3hastada ve FGFR1 geninde 1 hastada mutasyon saptanmıştır. KAL1 genindemutasyon saptanan hastalar KS iken FGFR1 geninde mutasyon saptananhasta IHH hastası idi. Sonuç olarak IHH/KS'nun genetik nedenlerini ortayakoymak için daha fazla sayıda olgu ile yapılacak çalışmalara ve yeni genbölgelerinin incelenmesine gerek vardır.

Abstract:
Congenital GnRH deficiency occurs due to the absence of GnRHsecretion from hypothalamic hypophsiotrophic neurons or due to theinefficiency of GnRH caused by mutations at receptor level, which results inidiopathic hypogonadotropic hypogonadism. Congenital GnRH deficiency isdifferentiated from primary gonadal failure by the demonstration of low serumconcentrations of FSH and LH despite low testosterone levels. Isolatedhypogonadotropic hypogonadism is diagnosed in the setting of normalhypothalamic-pituitary imaging in association with normal endocrine functionsof the anterior pituitary. Hypogonadal patients with congenital GnRHdeficiency may present with Kallmann syndrome (anosmic/hyposmic IHH) orwith normal sense of smell (normosmic IHH).To date, several genetic disorders have been found to causegonadotropin deficiency by affecting multiple steps in the GnRH synthesis orsecretion. These genetic defects can be classifed into four categories: 1)Disorders of neuronal migration and function of GnRH (KAL1, FGFR1,NELF1, PROK2 and PROKR2), 2) Disorders of GnRH synthesis andsecretion (GnRH1, KİSS1, GPR54, SF1, DAX1, LEP and LEPR), 3)Disorders of GnRH responsiveness (GNRHR), and 4) Disorders ofgonadotropin biosynthesis (LHB, FSHB, DAX1, and SF1).In this study, 86 patients with hypogonadotropic hypogonadism and 95controls were examined for the presence and frequency of mutations in theKAL-1, FGFR1, GPR54 and NELF genes. Evaluation of the patients withhypogonadotropic hypogonadism showed that the results of dynamic testsand other anterior pituitary hormones were within normal range. Pituitary MRimaging findings were negative in all patients. The presence of anosmia /viiihyposmia was evaluated by sharp-smelling aromas such as coffee, onions,e.g.76 of the 86 hypogonadal patients were diagnosed with idiopathichypogonadotropic hypogonadism, and the remaining 10 with Kallmannsyndrome. DNA was isolated from all participants using Qiagen, stored in -80°C, and scanned for gene mutations using MLPA kits. KAL1 genemutations were detected in 3 patients and a FGFR1 gene mutation wasobserved in 1 patient. However, no mutations were found for the GPR54 andNELF genes. KAL1 gene mutation was detected in patients with Kallmannsyndrome and FGFR1 gene mutation was detected in a patient withnormosmic idiopathic hypogonadotropic hypogonadism. In conclusion, furtherstudies examining new gene regions, with a larger sample size, are requiredto identify the genetic basis of idiopathic hypogonadotropic hypogonadism /Kallmann syndrome.