Hematopoietik kök hücre nakli için toplanan aferez ürünlerinde CD34+ hücrelerin mutlak sayımında "single platform" ISHAGE Protokolü ile volümetrik ölçümlerin karşılaştırılması
Detection of CD34+ cell content of apheresis products: Comparison of "single platform" CD34 cell count and volumetric measurment of CD34 positive cells
Yazar: NAZLI KOZAN TOPCU
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ KLARA DALVA
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Disiplinlerarası Kök Hücre ve Yenileyici Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Hematoloji = Hematology
Dizin: Hematopoetik kök hücre transplantasyonu = Hematopoietic stem cell transplantation ; Hematopoetik kök hücreler = Hematopoietic stem cells ; Kan bileşenlerini ayırma = Blood component removal ; Kan sayımı = Blood cell count

Özet:
Kök hücreler kendini yenileyebilme ve birden fazla dokuya farklılaşma özelliği gösteren hücrelerdir. Hematopoietik kök hücreler (HKH) farklılaşabilme yeteneklerine göre multipotent olarak sınıflandırılan ve tüm olgun kan hücrelerine farklılaşabilen kök hücrelerdir. Hematopoietik Kök Hücre Nakli (HKHN), hematopoietik sistemin yeniden yapılanmasını sağlamak için kişinin kendisinden veya doku grubu uyumlu kişilerden kök hücreleri toplandıktan sonra uygun koşullarda alıcıya nakledilmesidir. Bu amaçla uygun koşullarda dolaşımdan toplanan kök hücreler "aferez ürünü" olarak adlandırılmaktadır. HKHN başarılı olabilmesi için aferez ürünlerinin belirli bir kök hücre sayısına sahip olması gerekmektedir ve bu sayı, klinik uygulamaların başarısında önemli bir etkiye sahiptir. HKH sayısının belirlenmesi için çeşitli analiz yöntemleri geliştirilmiştir. Bu amaçla akan hücre ölçer kullanarak hücrelerin yüzey antijenlerinin immünfenotipleme ile ortaya konması en sık kullanılan yöntemdir. Yapılan birçok çalışma sonucu HKH yüzey antijenleri Lin- CD34+ CD38- CD90+ olarak kabul edilmekle birlikte klinik uygulamalarda yamanmayla ilişkisi gösterilmiş olan CD34 hücre yüzey antijeninin saptanması yeterli kabul edilmektedir. Günümüzde CD34+ hücre sayımı için doğru ve hızlı sonuç veren standardize edilmiş yöntemler kullanılmaktadır. Bu yöntemler ile CD34+ hücreler, floresan boncuk kullanarak (single platform) ya da kullanmadan tam kan sayımı (TKS) sonuçları üzerinden (dual platform) sayılmaktadır. Bu çalışmada tavsiye edilen yöntem olan ve boncuklar ile yapılan "single platform" sayımlarda preanalitik hata riskleri bulunması sebebiyle boncuk kullanımı veya TKS gerektirmeyen alternatif bir yöntem olan "volümetrik" sayım arasındaki performansın karşılaştırılması ve volümetrik ölçüm güvenilirliğinin değerlendirilerek doğrulanması hedeflenmiştir. Çalışma sonuçlarına göre her iki yöntem ile elde edilen mutlak CD34+ hücre sayıları arasında uyum olduğu gözlenmiştir.

Abstract:
Stem cells are characterized by self-renewal and differentiation into highly specialized cells. Hematopoietic stem cells (HSCs) classified as multipotent cells according to their potency, and they can differentiate into all mature blood lineages. Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) is the transplantation of the stem cells into the recipient under appropriate conditions after collecting the HSCs to ensure reconstruction of the patient's hematopoietic system. It can be autologous or allogeneic.  The cell products collected from the circulation of the donor which contain the mobilized Hematopoietic Stem Cells are named as apheresis products. The success of the HSCT is correlated with    the number of stem cells on the apheresisi product. Different analytical methods have been developed for the determination of the numbers of HSCs. Immunophenotyping using cell-surface antigens and counting by Flow cytometry (FCM) is one of the most-used analytical technique to determine HSC numbers. According to many studies, HSC surface antigens were accepted as CD34+, Lin-, CD38- and CD90+. However, determination of CD34 cell surface antigen, which is associated with engraftment, is considered sufficient for clinical applications. Now, standardized methods are used to achieve accurate and rapid results for CD34+ cell count. CD34+ cells are determined with using a fluorescent bead (single platform) or determined according to complete blood count results without using the beads (dual platform). It is known that methods which are using beads have some preanalytical error risk. In this study, it is aimed to compare the performance between the volumetric count, which is an alternative method for single platform analysis without using beads or CBC and to verify the reliability of the volumetric measurement. According to our study, similar results were obtained for absolute CD34+ counts by both methods.