Azadırachtın'in Galleria mellonella larvalarının bağışıklık sistemine etkisi
Effect of azadirachtin on immune system of Galleria mellonella larvae
Yazar: EDA CANSU
Danışman: PROF. DR. ZAHİDE ULYA NURULLAHOĞLU
Marmara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology ; Fizyoloji = Physiology ; Zooloji = Zoology
Dizin: Azadirachtin = Azadirachtin ; Büyük balmumu güvesi = Greater wax moth ; Galleria mellonella = Galleria mellonella ; Hemosit = Hemocyte

Özet:
Neem ağacı tohumlarından elde edilen Azadirachtin (AZA)'nin böceklerde toksik etkileri olduğu bilinmektedir. AZA'nın kimyasal insektisitlere oranla çevresel ve ekonomik zararları daha azdır. Ayrıca memeliler üzerinde toksik etkilerinin olmaması AZA için bir kullanım tercihi oluşturmaktadır.
Çalışmamızda AZA'nın böcek hemositleri üzerindeki etkisi incelenmiştir. Çalışmada kullanılan büyük bal mumu güvesi Galleria mellonella, bilimsel araştırmalar için iyi bir model organizma olması ve laboratuvar koşullarında kolay ve hızlı yetiştirilmesi sebebiyle tercih edilmiştir. Deneylerde son evre larvalar (0.16-0.17 g) kullanıldı. Dört farklı dozda AZA (0.5, 1.0, 1.5, 2.0 μg/larva) böceklere force-feeding yöntemi ile uygulandı. Larvalar force-feeding öncesi 3 saat aç bırakıldı.  Force-feeding uygulamasından 48 saat sonra böcekler incelemeye alındı. Bir grup larvaya enkapsülasyon tepkimesi için Sephadex A-25 cam boncuk enjekte edildi ve bu işlemden sonraki 4 ve 24 saatte gösterdikleri enkapsülasyon ve melanizasyon tepkimeleri gözlendi. Diğer bir grup larvanın hemolenfleri alındı. Boyama işleminden sonra hemositlerin gösterdiği apoptoz ve nekroz tepkimeleri, mitotik indeks ve mikronukleus oluşumları incelendi.
AZA'ya bağlı olarak tüm dozlarda canlı hücre sayısında azalma tespit edildi. AZA dozlarına bağlı olarak geç apoptoz ve nekroz verilerinde artış gözlendi. Nekrotik hücre sayısında 0.5 ve 1.0 μg/larva AZA uygulanan gruplarda önemli bir artış belirlendi. 0.5 μg/larva dozu 0.5 μg/larva AZA dozunun mitotik hücre sayısında önemli bir artışa sebep olduğu tespit edildi. Mikronukleus oluşumunun 1.5 ve 2.0 μg/larva AZA dozlarında arttığı belirlendi. 0.5, 1.0 ve 1.5 μg/larva AZA dozlarında 4 saatlik enkapsülasyon yanıtında artış bulunurken 24 saatlik enkapsülasyon yanıtında fark tespit edilmedi. 4 saatlik melanizasyon yanıtında tüm AZA dozlarında ve etanol uygulanan grupta artış gözlendi. AZA uygulamasına bağlı olarak 24 saatlik melanizasyon yanıtında azalma gözlendi. 
Sonuç olarak AZA, G. mellonella larvalarının bağışıklık sistemini etkilemiş ve genotoksik hasara sebep olmuştur.

Abstract:
Azadirachtin (AZA) obtained from Neem tree seeds is known to have toxic effects on insects. Environmental and economic harms of AZA are less than chemical insecticides. In addition, it is preferred because it has no toxic effect on mammals.
In our study, the effects of AZA on insect hemocytes were investigated. The Greater Wax Moth, Galleria mellonella used in the study was preferred because of being an excellent model organism for scientific research and easy and fast growing in laboratory conditions. Last instar larvae (0.16-0.17 g) were used for the experiments. Four different doses of AZA (0.5, 1.0, 1.5, 2.0 µg/larva) were applied to larvae via force-feeding method. Larvae were starved for 3 h before feeding. Larvae were investigated 48 hours after force-fed. Sephadex A-25 glass beads were injected into a group of larvae for encapsulation reactions, and encapsulation and melanization reactions were determined at 4 and 24 hours after this procedure. The hemolymph was taken from another group of larvae. The apoptosis and necrosis reactions, micronucleus and mitotic index of the hemocytes were investigated in preparations prepared with hemolymph after dyeing. 
The number of viable cells decreased in all doses due to AZA. There was an increase in late apotosis and necrosis data depending on the doses of AZA. There has been a significant increase in the number of necrotic cells in 0.5 and 1.0 µg/larvae of AZA applied groups. 0.5 µg/larvae AZA caused a significant increase in the number of mitotic cells. The significant increase of micronucleus formation was found in the groups applied to 1.5 and 2.0 µg/larvae doses. 0.5, 1.0 and 1.5 µg/larva doses caused an increase in 4 hours encapsulation response, but did not have effect at 24 hours encapsulation response. There was increase at 4 hours melanization response in all AZA doses and groups of ethanol. Depending on AZA application, a decrease was observed at 24 hours melanization response.
As a result of this study, AZA affected the immune system of G. mellonella larvae and caused genotoxic damages.