Klopidogrel kullanan hastalarda CYP2C19 geni rs4244285 polimorfizminin klinik kardiyovasküler olaylar ile ilişkisinin araştırılması
Association of CYP2C19 gene rs4244285 polymorphism with clinical cardiovascular events in patients using clopidogrel
Yazar: ÖZGE ÇATMAZ
Danışman: PROF. DR. BELGİN SÜSLEYİCİ DUMAN
Marmara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
ÖZET
KLOPİDOGREL KULLANAN HASTALARDA CYP2C19 GENİ rs4244285 POLİMORFİZMİNİN KLİNİK KARDİYOVASKÜLER OLAYLAR İLE İLİŞKİSİNİN ARAŞTIRILMASI
Clopidogrel, bir tienopiridin türevi ve sitokrom p450 enzim sistemi tarafından aktif metabolitlere dönüştürülen bir ön ilaçtır; ADP ve P2Y12 reseptörlerini bloke ederek trombosit agregasyonunu geri dönüşümsüz olarak inhibe eder. Bir sitokrom P450 genetik varyantı olan Cyp2c19 * 2 polimorfizmi, hem aktif metabolitlerin oluşumunda hem de platelet inhibisyonunda azalmaya neden olduğundan, klopidogrel metabolizması üzerinde olumsuz bir etkiye sahiptir. Trombosit agregasyonunun klopidogrel ile inhibisyonu hastalar arasında farklılık gösterebilir. Genetik faktörler, klopidogrel direncinin gelişmesinden sorumlu önemli mekanizmalardan biridir. Cyp2c19 genindeki rs4244285 gibi polimorfizmler, klopidogrelin antitrombotik aktivitesini etkiler ve bu etki nedeniyle klopidogrele verilen cevap farklılık gösterir. Kardiyovasküler hastalığı olan hastalarda CYP2C19 * 2 allelinin araştırılması, spesifik fenotipe bağlı rs4244285 polimorfizminin metabolik ve klopidogrel cevabı üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçlamaktadır. Hastanın kan örneklerini kullanarak yapılan farmakogenetik test CYP2C19 geninin * 2 polimorfizmini belirleyecektir. Koroner kalp hastalığı tanısı alan ve klopidogrel tedavisine başlanan 32 hastaya farmakogenetik analiz yapıldı. Genomik DNA'lar izole edildi ve -20 ° C'de "Yüksek Saf PCR Şablon Hazırlama Kiti, Roche" protokolü kullanılarak saklandı. CYP2C19 geninin rs4244285 polimorfizmini tanımlamak için polimeraz zincir reaksiyonu –sınırlayıcı enzim parça uzunluk polimorfizm yöntemi kullanılmıştır. Bu amaçla kullanılan ileri ve geri primer sekansları ve kesme enzimi aşağıdaki gibidir: (5'-GTA AAC ACA CAA CTA GTC AATG-3 ') (5'-CAG AGC TTG GCA TAT TGT ATC-3') ve Smal. Amplifiye edilmiş gen ürünleri SmaI enzimi tarafından kesildikten sonra, genotiplerin belirlenmesi için agaroz jel elektroforezinde yürütüldü. Her bir PZR'de bir negatif kontrol vardı. Analiz edilen 32 hasta (18 erkek 14 kadın) arasında 4 hastanın PZR sonuçları elde edilemedi. Genotipler, 28 hastanın gen ürünü üzerinde RFLP ile belirlendi. Belirlenen genotiplere göre; bir hastada heterozigot genotipi görüldü ve 27 hastanın geri kalanında homozigot wild genotipi görüldü. Türk hasta çalışma grubumuzda rs4244285 polimorfizminin klopidogrel metabolizması ve kardiyovasküler hastalıklarla doğrudan bağlantılı olmadığı gözlenmiştir. 
Ağustos,2019                                                                                                 Özge ÇATMAZ

Abstract:
ABSTRACT
ASSOCIATION OF CYP2C19 GENE rs4244285 POLYMORPHISM WITH CLINICAL CARDIOVASCULAR EVENTS IN PATIENTS USING CLOPIDOGREL
Clopidogrel is a thienopyridine derivative and a prodrug that is converted to active metabolites by the cytochrome p450 enzyme system; it inhibits platelet aggregation irreversibly by blocking ADP and P2Y12 receptors. A cytochrome P450 genetic variant, Cyp2c19 * 2 polymorphism has an negative effect on clopidogrel metabolism, as it causes the decrease both on formation of active metabolites and the platelet inhibition. Inhibition of platelet aggregation with clopidogrel may vary among patients. Genetic factors are one of the important mechanisms responsible for the development of resistance to clopidogrel. Polymorphisms such as rs4244285 in the cyp2c19 gene affect clopidogrel's antithrombotic activity and that the response to clopidogrel differs between individuals due to this effect.  It is aimed to investigate CYP2C19 *2 allele in patients with cardiovascular disease to investigate the effects of rs4244285polymorphism on the metabolic and clopidogrel response due to spesific phenotype. The pharmacogenetic test using the blood samples of the patient will determine the * 2 polymorphism of the CYP2C19 gene.  Pharmacogenetic analysis were performed to 32 patients who had been diagnosed with coronary heart disease and who had started clopidogrel treatment. Genomic DNAs were isolated and stored at -20 ° C using the "High Pure PCR Template Preparation Kit, Roche" protocol. The polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism method was used to identify the rs4244285 polymorphism of the CYP2C19 gene. The forward and reverse primer sequences used for this purpose and the cutting enzyme are as follows: (5′-CAG AGC TTG GCA TAT TGT ATC-3′),(5′-GTA AAC ACA CAA CTA GTC AATG-3′) and SmaI. After amplified gene products were cut by SmaI enzyme, genotypes were determined by separating them in agarose gel electrophoresis for determination of genotypes. Each PCR experiment contained a negative control.  
Among the analysed 32 patients (18 male and 14 female), 4 patients PCR results could not be obtained. Genotypes were determined by RFLP on 28 gene products of patients. According to the determined genotypes; heterozygous genotype was seen on 1 patient and homozygous wild genotype was seen on the rest of the 27 patients. It has been observed that rs4244285 polymorphism has no direct relationship with clopidogrel metabolism and cardiovascular diseases in our Turkish study group.
August,2019	                                                                                              Özge ÇATMAZ