Pseudomonas ve acinetobacter klinik izolatlarında metallo-beta-laktamaz üretiminin araştırılması
Investigation of metallo-beta-lactamase production in pseudomonas and acinetobacter clinical isolates
Yazar: LİNDA AŞIK
Danışman: PROF.DR. MÜZEYYEN MAMAL TORUN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
VIIÖZETAşık L. Pseudomonas ve Acinetobacter Klinik. İzolatlarında Mettallo-beta-laktamazÜretiminin Araştırılması. İstanbul Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Mikrobiyoloji veKlinik Mikrobiyoloji ABD. Yüksek Lisans Tezi. İstanbul. 2006.Çalışmamız Ocak 2004-Ocak 2006 tarihleri arasında Anabilim Dalı'mizagönderilen çeşitli klinik örneklerden izole edilen 45 Pseudomonas ve 45 Acinetobacterolmak üzere toplam 90 bakteri kökeni ile yapılmıştır. Bakterilerin tanımlanması standartklinik mikrobiyolojik yöntemler ile yapılmış (diagnostic microbiology), bu yöntemlerletanımlamanın yapılamadığı durumlarda API 20E (Bio Merieux SA/ABD) ve Sceptor(Becton Dickensen, Sparks MD/ABD) sistemleri kullanılmıştır.Bakterilerin invitro koşullarda antibiyotiklere direnç durumları Clinical andLaboratory Standards Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda disk difüzyon yöntemi ilebelirlenmiş, MBL üretimi kombine disk metodu, çift disk sinerji, modifıye Hodge testi veE test yöntemleri ile araştırılmıştır.Acinetobacter izolatlarında karbapenem direnci %62,2, Pseudomonas izolatlarında%77,8 olarak belirlenmiştir. Karbapenem dirençli Acinetobacterler'de seftazidim direnci%100, settriakson %100, sefepim %64,3, siprotloksasin %92,8, amikasin %75,piperasilin/tazobaktam %96,4; Pseudomonaslar'da seftazidim direnci %68,6, seftriakson%100, sefepim %68,6, siprotloksasin %85,7, amikasin %77,1, piperasilin/tazobaktam%74,3 olarak saptanmıştır.İmipenem dirençli Acinetobacter kökenlerinde metallo-beta-laktamaz (MBL)üretimi kombine disk metodu ile %28,8, IMP-EDTA çift disk sinerji testi ile %20, CAZ-EDTA çift disk sinerji testi ile %15,5, modifıye Hodge testi ile %26,7, E test ile %44,4;imipeneme dirençli Pseudomonas kökenlerinde kombine disk metodu ile %31,1, IMP-EDTA çift disk sinerji testi ile %28,9, CAZ-EDTA çift disk sinerji testi ile %15,5, E testile %17,7 oranında bulunmuştur. Modifıye Hodge testi ile Pseudomonaslar'da MBLüretimi tespit edilmemiştir.E testi standart yöntem olarak kabul edildiğinde Acinetobacter kökenlerinde CAZ-EDTA çift disk sinerji testinde %2,2, modifıye Hodge testinde %2,2 oranında yalancıpozitiflik; Pseudomonas kökenlerinde ise IMP-EDTA çift disk sinerji testi ile %4,4, CAZ-EDTA çift disk sinerji testi ile %2,2 oranında yalancı pozitiflik bulunmuştur.MBL üreten bakterilerin aztreonam dışında tüm beta laktamlara dirençli olmaları veklinik uygulamada uygun bir MBL inhibitörünün bulunmaması, ayrıca MBL ileaminoglikozid direnç genlerinin genetik olarak birarada bulunması epidemiyolojik açıdanMBL varlığının tespit edilmesini çok önemli kılmaktadır. MBL araştırılmasında hızlı,basit, duyarlılık ve özgüllüğü yüksek olan iyi bir fenotipik tarama yöntemine gerek vardır.Şimdilik var olan tarama metodlarının hiçbiri yeterli değildir. Bu sebeple taramasonuçlarının moleküler yöntemlerle doğrulanması gereklidir.Yaptığımız çalışma bir ön çalışma niteliğinde olup hastanemizde MBL üretensuşların belirlenmesi ve kontrolü ile ilgili olarak daha ileri araştırmaların yapılmasıgerekmektedir.Anahtar kelimeler: MBL üretimi, Pseudomonas, Acinetobacter, fenotipik yöntemlerBu çalışma İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından T-808/27122005 no'lu proje olarak desteklenmiştir.

Abstract:
VIIIABSTRACTAsjk L. Investigation of metallo-beta-lactamase production in Pseudomonas andAcinetobacter clinical isolates. Istanbul University, Institute of Health Science, DepartmentOf Microbiology And Clinical Microbiology. MSc. Thesis. Istanbul 2006.A total of 90 strains (45 Pseudomonas, 45 Acinetobacter), isolated from clinicalspecimens sent to our Microbiology and Clinical Microbiology laboratory between thedates of January 2004-2006, were studied. The bacteria were identified by standart clinicalmicrobiological tests, API 20E (Bio Merieux SA/ABD) and Sceptor ID (BectonDickensen, Sparks MD/ABD) panels were also used for the identification of some strainswhich were not been identified.The invitro antimicrobial resistance of bacteria was determined by the diskdiffusion method according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)guideline. The MBL production was found using combined disk method, double disksynergy test, modified Hodge test and E test.The carbapenem resistance was found as 62,2% in Acinetobacter strains, as 77,8%in Pseudomonas strains. In carbapenem resistant Acinetobacter strains the cettazidimresistance was evaluated as 100%, the ceftriaxone 100%, cefepime 64,3%, ciprotloxacin92,8%, amikacin 75%, piperacilin/tazobactam 96,4%. Ceftazidime resistance was found as68,6%, ceftiaxone 100%, cefepime 68,6%, ciprotloxacin 85,7%, amikacin 77,1%,piperacilin/tazobactam 74,3% in carbapenem resistant Pseudomonas strains.In imipenem resistant Acinetobacter strains, the MBL production determined bycombined disc method was found as 28,8%. The MBL production was found as 20% byIPM-EDTA double disk synergy test, as 15,5% by CAZ-EDTA double disk synergy test,as 26,7% by modified Hodge test and as 44,4% by E test. In imipenem resistantPseudomonas strains, the MBL production was found as 31,1% by combined disc method,as 28,9 by IPM-EDTA double disk synergy test, as 15,5% by CAZ-EDTA double disksynergy test and as 17,7% by E test. It was not determined a MBL production by modifiedHodge test in Pseudomonas spp.If the E test was accepted as a standard procedure it was observed that inAcinetobacter strains CAZ-EDTA double disk synergy test and modified Hodge testshowed a false positive results in a rate of 2,2%. In the Pseudomonas strains a falsepositive results was observed in IPM-EDTA double disk synergy test in a rate of 4,4%, anda false positive result in CAZ-EDTA double disk synergy test, in a rate of 2,2%.The determine the presence of MBL is very important in point of epidemiologicview because MBL producing bacteria are resistant to all beta lactams except aztreonamand also because the MBL and aminoglycosid resistance gene were present togethergenetically. Additionally there is not a MBL inhibitor for clinical treatment. There is aneed of quick, easy fenotipic screening test with high specifity and sensitivity. Todayneither of the present screening methods are sufficient. For this reason there is a need toconfirm the screening results by molecular techniques.This study is like a preliminary study and there is a need to advance studies for thedetermination and control of MBL producing strains.Key words: MBL production, Pseudomonas, Acinetobacter, fenotipic methodsThis study was supported by The Research Support Unit of Istanbul University as theproject no T-808/27122005.