Meme kanseri hücre hattında farnesil transferaz inhibitörünün gen ekspresyonu üzerine proliferatif ve apoptotik etkisinin araştırılması
Effects of farnesyl transferaz inhibitors on proliferative and apoptotic gene expression on breast cancer cell line
Yazar: EMİNE FİRDEVS YILDIRIM
Danışman: DOÇ. DR. HACER İLKE ÖNEN
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Anakardik asit = Anacardic acid ; Apoptozis = Apoptosis ; Farnesiltransferaz inhibitörleri = Farnesyl transferaz inhibitors ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hücre dizisi = Cell line ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Meme kanseri Dünya'da kadınlar arasında görülen en yaygın kanser türüdür. Etiyolojisinde hem genetik hem de çevresel faktörler rol almaktadır. Konvansiyonel tedavilerde etkinliğin arttırılması ve tedavide yeni ajanlar ile yöntemlerin geliştirilmesi önemli araştırma konuları arasındadır. Bu çalışmada MCF-7 meme kanseri hücre hattında anakardik asit ve LB42708'in farklı konsantrasyonlarda ve sürelerde tek başlarına ve anakardik asit önkoşullaması ile birlikte uygulandıktan sonra hücrelere olan olası etkilerini araştırmayı amaçladık. AA ve LB42708'in MCF-7 hücrelerine etkileri hücre canlılığı, sitotoksisite ve aktif kaspaz-3 düzeylerine göre değerlendirildi. Bununla birlikte, proapoptotik (BAK ve BAX), antiapoptotik (BCL2L1 ve BCL2) ve hücre döngüsünde görevli (CCND1, cMYC ve cFOS) genlerin mRNA ifadeleri nicel gerçek zamanlı PCR (qPCR) ile belirlendi. mRNA düzeylerinin normalizasyonu için GAPDH kullanıldı. Anakardik asit önkoşullaması ve birlikte uygulanmasının LB42708 ile uyarılan hücre canlılığı ve sitotoksisite oranını azalttığı belirlendi. AA önkoşullaması ve birlikte uygulanması LB42708'in tek başına uygulanması ile karşılaştırıldığında MCF-7 hücrelerinde LB42708 ile uyarılan kaspaz bağımlı apoptozun arttığı saptandı. Bununla birlikte, AA ile önkoşullama ve birlikte uygulama sonrası antiapoptotik BCL2L1 ve BCL2 mRNA ifadesi azalırken, proapoptotik BAK ve BAX'ın mRNA seviyeleri arttı. Ancak, CCND1, cMYC ve cFOS genlerinin mRNA ifade seviyelerinin AA uygulamasından sonra anlamlı olarak etkilenmediği belirlendi. Preklinik in vitro çalışmamız, AA ile önkoşullamanın ve birlikte uygulamanın MCF-7 hücrelerinde LB42708'in sitotoksik etkilerini azalttığını ve meme kanseri hücrelerinin ölümünü arttırdığını gösterdi. Bulgularımızı doğrulamak için in vivo modellerin kullanıldığı daha ileri analizlerin yapılması gerekmektedir.

Anahtar Kelimeler : LB42708, anakardik asit, meme kanseri, farnesiltransferaz
 İnhibitörü

Abstract:
Breast cancer is the most common type of cancer in women around the world. Both genetic and environmental factors play a role in the etiology. Increasing efficacy of conventional treatments and development of new agents and methods in treatment are important research topics. We aimed to investigate possible apoptotic effects of AA and LB42708 on MCF-7 breast cancer cells both alone and combination at different concentrations and period of time. The effects of both AA and LB42708 on MCF-7 cells were evaluated in terms of cell viability, cytotoxicity, and cleaved caspase 3 levels. Moreover, the mRNA expression levels of proapoptotic (BAK and BAX), antiapoptotic (BCL2L1 and BCL2), and cell cycle regulator (CCND1, cMYC and cFOS) genes were detected with quantitative real time PCR (qPCR). GAPDH was used to normalize mRNA levels. We observed that pretreatment and co-incubation by AA decreased the percentage of LB42708-induced cell viability and cytotoxicity. Elevation of cleaved caspase-3 levels were also detected after pretreatment and co-incubation by AA. Compared with LB42708 alone treatment, we found that pretreatment and co-incubation by AA increased LB42708-induced caspase-related apoptosis in MCF-7 cells. Moreover, after pretreatment and co-incubation by AA, we detected the mRNA expression levels of antiapoptotic BCL2L1 and BCL2 was decreased, whereas proapoptotic BAK and BAX mRNA levels was elevated. Nevertheless, mRNA expression level of CCND1, cMYC and cFOS genes were not significantly affected by AA exposure. Our preclinical in vitro study suggest that pretreatment and co-incubation by anacardic acid may reduce cytotoxic effect of LB42708 on MCF-7 cells and increase cell death response of breast cancer cells.  Further analyses using in vivo models are needed to confirm these findings.

Key words : LB42708, anacardic acid, breast cancer, farnesyltransferase
 İnhibitör