Α-sinüklein aşırı eksprese edilmiş parkinson hastalık modeli oluşturulmuş hek293 hücre soyunda TP53, MYC, ATF2 transkripsiyon faktörlerinin mRNA seviyelerinin araştırılması
Investigation of the mRNA expression levels of TP53, ATF2, MYC transcription factors in the α-synuclein overexpressed hek293 cells
Yazar: BUSE ÜNLÜ
Danışman: PROF. DR. ERDİNÇ DURSUN ; DOÇ. DR. BEDİA SAMANCI ; DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE ALAYLIOĞLU
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Nörolojik Bilimler Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology ; Nöroloji = Neurology

Özet:
α-sinüklein (α-syn), Parkinson hastalığında görülen Lewy cisimciklerinin yapısındaki majör proteindir ve hücrelerde gen ekspresyon kontrolünde rol oynadığı ileri sürülmektedir . α-syn, hücredeki bu görevini direkt olarak veya diğer transkripsiyon faktörlerini etkileyerek gerçekleştirebilme potansiyeline sahiptir. Buradan yola çıkarak, α-syn ile ilişkisini saptadığımız üç transkripsiyon faktörünün (Tp53, MYC, ATF2) mRNA seviyeleri Parkinson hastalık modeli oluşturulmuş HEK293 hücre soyunda araştırılmıştır. HEK293 hücrelerine 48 saat süreli SNCA transfeksiyonu yapılarak α-syn ekspresyonu arttırılmıştır ve RNA izolasyonu yapılarak, α-syn'nin hedef transkripsiyon faktörlerin mRNA ekspresyonu üzerindeki etkisi gösterilmiştir. Gerçek zamanlı PZR sonuçları özellikle Tp53 transkripsiyon faktörü α-syn aşırı eksprese edilen SNCA grubunda çalışmadaki Kontrol grubuna ve Mock grubuna oranla mRNA ekspresyon seviyesinde istatistiksel olarak anlamlı azalma bulunmuştur. ATF2 transkripsiyon faktörünün ise α-syn aşırı eksprese edilen SNCA grubunda ve boş plazmid uygulaması yapılmış Mock grubunda çalışmadaki Kontrol grubuna oranla mRNA ekspresyon seviyesinde istatistiksel olarak anlamlı artış bulunmuştur. Bu durum hücre içi plazmid varlığının ATF2 mRNA ekspresyonu üzerinde etkiye sahip olabileceğini göstermiştir. MYC mRNA ekspresyonunda çalışmadaki gruplar arasında istatiksel olarak anlamlı fark bulunamamıştır. Çalışmadan elde edilen veriler göz önüne alındığında Parkinson patogenezinde rol oynayan olası gen ekspresyon değişimleri incelenerek hastalık patolojisinde rol oynayan potansiyel transkripsiyon faktörlerin belirlenebileceği ve erken tanı için biyobelirteç geliştirme çalışmalarına ışık tutabileceği düşünülmektedir. Çalışmadan elde edilen veriler, Tp53'ün hastalık patogenezinde rol oynama potansiyeline sahip olduğunu göstermektedir. Farklı hücre soylarında farklı transfeksiyon saatlerinde uygulama yapılarak ve insan numunelerinde veya hayvan modellerinde çalışılarak bu transkripsiyon faktörlerin hastalık patolojisindeki potansiyel rollerinin belirlenmesi ve doğrulanması gerekmektedir.

Abstract:
α-synuclein (α-syn) is the major protein in the structure of Lewy bodies seen in Parkinson's disease and is known to play a role in gene expression control in cells. α-syn has the potential to perform this role in the cell directly or by interacting with other transcription factors. From this point of view, the mRNA levels of 3 transcription factors (Tp53, MYC, ATF2), whose relationship with α-syn was determined, were investigated in HEK293 cell line, in which the Parkinson's disease model was created. α-syn expression was increased by transfection of SNCA into HEK293 cells and the effect of α-syn on mRNA expression of the target transcription factors was demonstrated by RNA isolation. It was found that there was a statistically significant decrease in the mRNA expression levels of Tp53 transcription factor in α-syn overexpressed SNCA group as compared to other groups (Control and Mock) in the study. On the other hand, a statistically significant increase was found in the mRNA expression level of the ATF2 transcription factor in the α-syn overexpressed SNCA group and in the Mock group with empty plasmid application compared to the Control group in the study. It is proposed that the presence of intracellular plasmid may have an significant effect on mRNA expression of ATF2. In contrast, it was revealed that the mRNA expression level of MYC was not statistically significant among the groups. It is thought that the data obtained from the study may contribute to the determination of potential transcription factors that play a role in the pathogenesis of the disease and biomarker development studies for early diagnosis by examining possible gene expression changes that play a role in the pathogenesis of Parkinson's disease. It seems that Tp53 might be involved in the disease's pathogenesis. The role of these transcription factors in the disease pathology needs to be determined and confirmed by applying different cell lines at different transfection periods and studying human samples or animal models.