Civanperçemi'nin (Achillea millfolium) ehrlich solid tümörün oluştuğu farelerde total protein ve oksidatif stres paneli üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of yarrow (Archilia millefolium) on total protein and oxidative stress panel in mice with ehrlich solid tumor
Yazar: SELİN GÖKÇE EVEREKLIOĞLU
Danışman: PROF. DR. AYSUN ÇETİN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Achillea millfolium = Achillea millfolium ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Civanperçemi = Nosebleed (achillea) ; Enzimler = Enzymes ; Fareler = Mice ; Karaciğer = Liver ; Karsinoma-ehrlich tümörü = Carcinoma-ehrlich tumor ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Bu çalışmada, civanperçemi (CP) bitkisinin antioksidan, antikanser, antiinflamatuar gibi biyolojik aktiviteleri göz önünde bulundurularak Ehrilch Solid Tümörü (EAT) ile kanser oluşturulan farelerin karaciğer dokularındaki etkisinin, çeşitli proteinlerin (enzim vb.) dokuda gösterdiği aktiviteyle incelenmesi amaçlandı. Civanperçeminin, karaciğer gibi detoksifikasyon yeteneği yüksek bir dokuda gösterdiği etkiler enzim aktivitesi ve protein ifade profili yönüyle tespit edilmeye çalışıldı.
Balb/C türü erkek fare karaciğer doku örnekleri; negatif kontrol grubu (i.p. distile su), pozitif kontrol grubu (subkutan EAT hücre bulunan asit sıvısı, i.p. distile su) , 200 mg/kg civanperçemi uygulanan grup (subkutan EAT hücre bulunan asit sıvısı, i.p. 200 mg/kg CP) ve 400 mg/kg civanperçemi uygulanan grup (subkutan EAT hücre bulunan asit sıvısı, i.p. 400 mg/kg CP) olmak üzere dört grubu ayrıldı. Protein konsantrasyonları ölçülerek SDS-PAGE analizi ile protein ifade farklılığına bakıldı. Oksidatif stres belirteci olarak Malondialdehit (MDA), antioksidan sistem enzimleri olarak glutatyon peroksidaz (GSH-Px), süperoksit dismutaz (SOD) ve katalaz (CAT) enzimleri ELISA yöntemi kullanılarak incelendi.
Örneklerde; 12, 24, 35, 46, 53, 72, 97 kDa molekül ağırlığındaki proteinlerin ifadesinde farklılıklarına görüldü. 12 kDa molekül ağırlığındaki proteinin, 200 mg/kg CP uygulanan gruptaki dokularda bantların hacimsel yoğunluğu diğer gruplara göre anlamlı olarak yüksek bulundu (p=0.024). Aynı şekilde 35 kDa molekül ağırlığındaki proteinin, 400 mg/kg CP uygulanan gruptaki bantların hacimsel yoğunluğu diğer gruplara göre anlamlı olarak yüksek bulundu (p<0.001). 72 kDa molekül ağırlığındaki proteinin, 400 mg/kg CP uygulanan gruptaki bantların hacimsel yoğunluğu diğer gruplara göre anlamlı olarak düşük bulundu (p=0.001). 97 kDa molekül ağırlığındaki proteinin, 400 mg/kg CP uygulanan gruptaki bantların hacimsel yoğunluğu diğer gruplara göre anlamlı olarak yüksek bulundu (p<0.001).
400 mg/kg CP uygulanan grubun MDA düzeyi, pozitif kontrol grubu ile 200 mg/kg CP uygulanan gruba göre yüksek bulunmuş olup fark anlamlı değildir (p>0.05). CAT aktivitesi için gruplar arası yapılan istatistiksel analizde anlamlı fark bulundu (p=0.045). Bu farkın sebebi 400 mg/kg CP uygulanan grubun, negatif kontrol grubu ile pozitif kontrol grubu ilişkisinden kaynaklanmaktadır. Civanperçemi uygulanan gruplarda, kontrol gruplarına göre GSH-Px aktivitesi daha yüksek bulunmasına rağmen bu fark istatistiksel olarak anlamlı değildir. Gruplar arası karşılaştırmalara bakıldığında 400 mg/kg CP uygulanan grubun SOD aktivitesi, 200 mg/kg CP uygulanan gruba göre yüksek bulunmuş olup fark istatistiksel olarak anlamlıdır (p=0.02). 400 mg/kg CP uygulanan grubun SOD aktivitesi negatif ve pozitif kontrol grubuna göre yüksek bulunmuş olmasına rağmen fark istatistiksel olarak anlamlı değildir (GSH-Px p=0.446, SOD p=0,218).
Sonuç olarak; civanperçeminin çalışmamızda kullanılan karaciğer dokuları üzerinde beklenilen antioksidan etkiye sahip olmadığı görüldü. SDS-PAGE jel elektroforezinde incelenen protein ifadelerinde gözlenen farklılıklar, çalışmamızdaki diğer bulguları desteklemiş olup civanperçeminin doz aşımındaki yan etkileri, etki mekanizmalarının araştırılması, kullanım amacı ve dozun uygunluğuna karar verilmesine ışık tutabileceği düşünüldü.

Anahtar Kelimeler: Antioksidan; Civanperçemi; Enzim; Karaciğer; Oksidatif Stres

Abstract:
In this research, considering the biological activities of yarrow (CP) plant such as antioxidant, anticancer, anti-inflammatory, it was aimed to investigate the effect of cancer in the liver tissues of mice with Ehrilch Solid Tumor (EAT) through searching the activity of various proteins (enzymes, etc.) in the tissue. The effects of yarrow in a tissue with high detoxification ability, such as the liver, were tried to be determined in terms of enzyme activity and protein expression profile.
Balb/C type male mouse liver tissue samples; negative control group (i.p. distilled water), positive control group (acid fluid with subcutaneous EAT cells, i.p. distilled water), 200 mg/kg yarrow administered group (subcutaneous ascidic fluid with EAT cells, i.p. 200 mg/kg CP) and 400 mg /kg yarrow (ascidic fluid with subcutaneous EAT cells, i.p. 200 mg/kg CP) were divided into four groups. Protein quantitaion in tissue samples were determined and the differences in protein expression were examined by SDS-PAGE analysis. Malondialdehyde (MDA) as an oxidative stress marker and glutathione peroxidase (GSH-Px), superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) enzymes as antioxidant system enzymes were analyzed using ELISA method.
In the samples; differences in expression profiles of 12, 24, 35, 46, 53, 72, 97 kDa protein bands were examined. The volumetric density of the band with 12 kDa molecular weight in the group treated with 200 mg/kg CP was found to be significantly higher compared with other groups (p=0.024). Similarly, the volumetric density of the 35 kDa protein in the 400 mg/kg CP group was found to be significantly higher compared with other groups (p<0.001). The volumetric density of the 72 kDa protein in the 400 mg/kg CP group was found to be significantly lower than the other groups (p=0.001). The volumetric density of the 97 kDa molecular weight protein in the 400 mg/kg CP group was found to be significantly higher compared with other groups (p<0.001).
The MDA level of the 400 mg/kg CP group was found to be higher than the positive control group and the 200 mg/kg CP group, but the difference was not significant (p>0.05). The difference between the groups for CAT activity was found to be significant (p=0.045). The reason for this difference is due to the relationship between the negative control group and the positive control group administered 400 mg/kg CP. Although the GSH-Px activity was found to be higher in yarrow applied groups compared to control groups, the difference was not significant. When comparing the groups, the SOD activity in 400 mg/kg CP administred group was found to be higher than the group administered 200 mg/kg CP, and the difference was significant (p=0.02). The SOD activity in the group with 400 mg/kg CP was found to be higher than the negative and positive control groups, but the difference was not significant (GSH-Px p=0.446, SOD p=0.218).
In conclusion; in present study, it was observed that yarrow did not have the expected antioxidant effect on the liver tissues. The differences observed in protein expression profiles in SDS-PAGE gel electrophoresis supported the results of other methods in our study, and it was thought that it could shed light on the side effects, mechanism of action of yarrow, the purpose of use and the appropriateness of the dose.
Keywords: Antioxidant; Yarrow; Enzyme; Liver; Oxidative Stress