Tavşanlarda total parenteral nütrisyon uygulamasının gonadlardaki hücre yaşlanması üzerine etkisinin deneysel olarak araştırılması
Experimental study on the effects of total parenteral nutrition in rabbits on cell aging in gonds
Yazar: ERCAN BAYRAKÇI
Danışman: PROF. DR. MEHMET DEMİRCAN
İnönü Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery
Dizin: Gonadlar = Gonads ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Hücre yaşlanması = Cellular senescence ; Over = Ovary ; Parenteral beslenme = Parenteral nutrition ; Tavşanlar = Rabbits ; Telomer = Telomere ; Telomeraz = Telomerase ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Total parenteralnütrisyon (TPN) gastrointestinal sistemin kullanılamadığı durumlarda hayati fonksiyonların devamı için gerekli olan substratların periferik veya santral venözkompartmana verildiği bir tekniktir. TPN'un kullanımı ile cerrahi işlemler sonucunda mortalite önemli ölçüde azalmıştır. TPN uygulaması sırasında gelişen komplikasyonlar önemli bir mortalite nedeni olarak ortaya çıkmıştır. Hepatobilier disfonksiyon ve sepsis, üzerinde en fazla durulan ve pek çok araştırma yapılan en önemli komplikasyonlardır.
Telomerler birçok biyolojik fonksiyonun parçasıdır. DNA tahribinin tanınması, uc uca füzyonu ve rekombinasyonundan kromozomları korur. Kromozomların tam çoğalması için bir araç olarak işlev görür. Çekirdek içindeki kromozomların fonksiyonel organizasyonuna katkıda bulunur. Genifadesinin düzenlenmesinde rol oynar, hücrelerin çoğalma kapasitesini kontrol eder ve yaşlanmaya girmeleriyle ilgili bir moleküler saat olarak hizmet görür. Yaptığımız deneysel çalışma; TPN uygulaması yapılan tavşanların gonad dokularındaki yaşlanmaya olan etkisini araştırmaktı.
Materyal ve Metod: Çalışmada aynı yaşta ve eşit sayıda erkek ve dişiden oluşan, her biri ortalama 2600 ± 500 gr ağırlığında toplam 42 adet yeni Zellanda tavşanı kullanıldı. Tavşanlar, İnönü Üniversitesi Deneysel Araştırma Merkezinden temin edildi. Çalışma için İnönü Üniversitesitesi Tıp Fakültesi Deney Hayvanları Etik Kurulu'ndan onay alındı. 12 saat gündüz ve 12 saat gece olacak şekilde 23˚C de deney ortamı hazırlandı. Tavşanlar deneyden önce ve sonra tartıldılar.
Toplam 42 adet tavşan 3 gruba ayrıldı. Her grupta 14 tavşan vardı. Birinci ve ikinci gruptaki tavşanlara santral venözkateter yerleştirildi. Birinci gruba 10 gün TPN verilirken ikinci grupda ki tavşanlara10 gün 50 cc/kg/gün serum fizyolojik verildi. Kontrol gruptaki 14 adet tavşana herhangi bir işlem uygulanmadı. Çalışma süresince gruplarda yer alan tavşanların hepsinin oral beslenmesine ve su içmelerine izin verildi. Deney peryodu sonunda testislerinden ve overlerinden örnekler alındı ve tavşanlar sakrifiye edildi. Hemotoksilin&eosin boyası ile boyandı ve Telomeraz reverse transcriptaz ekspresyonu için immunohistokimyasal boyama yapıldı.
İstatiksel analiz SPSS Version 12 kullanılarak yapıldı. Quantitative data Standard deviasyon (SD)+/- aracılığı ile sunuldu. Qualitative data yüzde ve sayı olarak sunuldu.
Bulgular: TERT aktivitesi açısından TPN, Serum Saline ve kontrol grupları arasında anlamlı bir fark vardı (p<0.05). Çoklu karşılaştırmalarda ise Gonad doku kesitlerinde TPN verilen gruptaki TERT aktivitesi Serum Saline ve kontrol grubuyla karşılaştırıldığında önemli bir artış gösterdiği tespit edildi.
Sonuç: TERT aktivitesi kontrol grubunda ve serum saline grubunda mevcut ve TPN grubundan daha düşük olarak bulundu. Mevcut bulgularla TERT aktivitesindeki bu artışla TPN nun hücre yaşlanmasını gonad doku hücrelerinde deneysel olarak azalttığını tespit ettik. Daha önce yapılmış olan çalışmalarda TPN'un apopitozisi mitokondrilerdeki membran permeabilitesini artırarark indüklediği tespit edilmiş olsa da, biz TPN 'un gonad hücre çekirdeğinde telomer kinetikleri üzerine olumlu etkiye sahip olduğu saptadık.
Anahtar kelimeler: Total parenteral nutrisyon, telomeraz reveres transkriptaz, over, testis.

Abstract:
Aim: Total parenteral nutrition (TPN) is a technique where the substrates required for the maintenance of vital functions are released into the peripheral or central venous compartment in cases where the gastrointestinal system can not be used. By th euse of TPN, mortality rates were significantly reduced in surgical procedures. 
Complications that arise during TPN administration have emerged as a significant cause of mortality. Hepatobiliary dysfunction and sepsis are among the most important complications that were predominantly investigated and several studies have been conducted on these complications.
Telomerase is a component of several biological functions. It preserves the chromosomes from the identification of DNA damage, end–to-end fusion and recombination. It acts as a mediator in the full proliferation of chromosomes. It contributes to the functional organization of the chromosomes in the nucleus. It plays a role in the regulation of gene expression, controls the cellular proliferative capacity and serves as a molecular clock related to senescence.
The aim of the present empirical study was to investigate the impact of TPN administration on ageing in rabbit gonad tissues.
Material and Method: 42 New Zealand rabbits that were at the same age and included equal number of males and females, each weighing 2600 ± 500 gr, were used in the study. The rabbits were obtained Inonu University Experimental Research Center. The study was approved by the of Inonu University Faculty of Medicine, Experimental Animals Ethics Committee. The experiment environment was designed at 23 santigrad degrees, with 12 hours day light and 12 hours darkness. Rabbits were weighed before and after the experiment.
Forty-two rabbits were divided into 3 groups. 14 rabbits in each group. Central venous catheters were applied to the rabbits in the first and second groups. TPN was administered to the first group for 10 days, the second rabbits were administered to 50 cc/kg/day saline for 10 days. No treatment was administered to 14 rabbits in the control groups. During the study, oral feeding and water were provided for all the rabbits in the groups. At the end of experiment, gonad and ovary tissue sample were obtained and the rabbits were sacrificed. The samples were stained with Hemotoxylin & eosin and the immunohistochemicl staining was conducted for telomerase reverse transcriptase (TERT) ekspression.
Statistical analysis was conducted SPSS Version 12. Quantative data were presented via Standard deviation (SD)+/-. Qualitative data was presented as percentages and counts.
Findings: A significant difference was determined in TERT ativity between TPN, Serum Saline and control groups (p<0.05). In multıple comparisons, it was observed that TERTactivity in the gonad tissue sections in the TPN group significantly increased when compared to Serum Salin and the control group.
Results: It was determined that TERTactivity was lower in the control group and in the serum saline group when compared to the TPN group. The study findings demonstrated that TPN decreased cell senescence in gonad tissue cells experimentally based on the increase in TERT activity. Although it was observed in previous studies that TPN caused the same impact by increasing the apoptosis and membrane permeability in mitochondria, we identified that TPN had a positive effect on telomeres kinetics in gonad cell nuclei.
Key Words: Total parenteral nutrition, telomerase reverse transcriptase, over, testis.