Ficus carica bitkisi meyve ekstraktının MG-63 kemik kanseri hücre hattında apoptotik indüksiyona etkisi
The effect of ficus carica plant fruit extract on apoptotic induction of MG-63 bone cancer cell line
Yazar: TUĞBA YALÇINKAYA
Danışman: PROF. DR. AHMET ÇARHAN
Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Tıp Bilimleri Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Apoptozis = Apoptosis ; Bitki özütü = Plant extract ; Ficus carica = Ficus carica ; Hücre dizisi = Cell line ; Kemik neoplazmları = Bone neoplasms ; Meyveler = Fruits ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Osteosarkoma çocukluk ve ergenlik dönemini etkileyen kemik kanseridir. Osteosarkomanın tedavisinde kemoterapiye direnç büyük bir engeldir. Programlı hücre ölümü ya da apoptoz; kanser gelişiminin inaktivasyonu için önemli bir rol oynamaktadır. Ficus carica (incir)'in kanser baskılayıcı etkileri son yıllarda yapılan çalışmalarda araştırılmıştır. Çalışmamızda kemik kanseri hücre hattı MG-63 ve sağlıklı kemik hücre hattı hFOB'a Ficus carica bitkisi meyve ekstraktı uygulanarak apoptotik etkisi gözlemlenmiştir. Ficus carica bitkisi meyve ekstraktının içeriğindeki protokateşuik asit tayini HPLC analizi tespit edilmiştir. MTT yöntemi ile Ficus carica bitkisi meyve ekstraktının sağlıklı hücrede toksik bir etkisi yokken kanserli hücreyi ölüme götürdüğünü tespit edilmiştir. Hücre hatlarına Ficus carica bitkisi meyve ekstraktı uygulandıktan sonra membran değişimi analiz yöntemi olan LDH yönteminde anlamlı bulunurken (p=0.030), Annexin V metodu ile elde edilen değerlerde artış görülmesine rağmen anlamlı bir sonuç elde edilmemiştir (erken apoptoz evresi p=0.081). TUNEL yöntemi uygulamasıyla MG-63'de DNA parçalanması histolojik olarak tespit edilmiştir. Proapoptotik genler ve kaspazların ekspresyonu qRT-PCR ile analiz edilmişir. Proapoptotik gen olan Bak'ın (p=0.007), başlatıcı ve efektör kaspazların ekspresyonundaki değişim anlamlı bulunmuştur (kaspaz-3 p=0.000, kaspaz-8 p=0.028, kaspaz-9 p=0.030) . Analiz sonuçları Ficus carica bitkisi meyve ekstraktının kemik kanseri hücre hattını hem içsel hemde dışsal yolakları aktive ederek apoptoza götürdüğünü göstermişir. Kanser hücresinin apoptoz sırasındaki hücre döngüsünü analiz etmek için akış sitometri yöntemi kullanılmıştır. Analiz sonucunda her iki hücre hattı içinde anlamlı bir değişim gözlenmemiştir (G1 evresi p=0.976, S evresi p=0.131, G2 evresi p=0.554).

Anahtar Kelimler: Apoptoz, ficus carica, kemik kanseri

Abstract:
Osteosarcoma is a bone cancer that affects childhood and adolescence. Resistance to chemotherapy is a major obstacle in the treatment of osteosarcoma. Programmed cell death or apoptosis; play an important role in the inactivation of cancer development. The suppressor effects of Ficus carica (fig) in cancer have been investigated in recent years. In our study, apoptotic effect was observed by applying Ficus carica fruit extract to the bone cancer cell line MG-63 and healthy bone cell line hFOB. Protocol analysis of Ficus carica plant fruit extract was determined by HPLC analysis. It was found that the fruit extract of Ficus carica with MTT method did not have a toxic effect on the healthy cell and it led to the death of the cancer cell. The Ficus carica plant were found to be significant in the LDH method after the fruit extract was applied to the cell lines (p=0.030). DNA fragmentation in MG-63 was determined histologically by TUNEL method. Expression of proapoptotic genes and caspases were analyzed by qRT-PCR. The change in expression of the proapoptotic gene Bak (p=0.007), initiator and effector caspases was significant (caspase-3 p=0.000, caspase-8 p=0.028, caspase-9 p=0.030). Analysis results showed that the fruit extract of Ficus carica plant leads to apoptosis by activating the bone cancer cell line in both internal and external pathways. Flow cytometry was used to analyze the cell cycle of the cancer cell during apoptosis. As a result of the analysis, no significant change was observed in both cell lines (G1 stage p=0.976, S stage p=0.131, G2 stage p=0.554).


Keywords: Apoptosis, bone cancer, ficus carica