Hepatosit hücrelerinde kolesterol ile indüklenen endoplazmik retikulum stres aracılı apoptozun mitojenle aktive edilmiş protein kinazlar ile ilişkisi
Association of cholesterol induced endoplasmic reticulum stress mediated apoptosis in hepatocyte cells with mitogen activated protein kinases
Yazar: DYANA SARI
Danışman: PROF. DR. NESRİN KARTAL ÖZER
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Tıp) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; Endoplazmik retikulum stresi = Endoplasmic reticulum stress ; Hepatositler = Hepatocytes ; Kolesterol = Cholesterol ; Mitojenler = Mitogens ; Protein kinazlar = Protein kinases

Özet:
Amaç: AML12 fare hepatosit hücre hattında kolesterol içeren lipozomun indüklediği in vitro kolesterol birikimi sonucu meydana gelen ER stres aracılı apoptoz mekanizmasında CHOP aktivasyonunun mitojenle-aktive edilmiş protein kinazlar ile ilişkisinin incelenmesi.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda lipozom ve kolesterol içeren lipozom kompleksleri hazırlanarak farklı inkübasyon süreleri ile AML12 hücre hattına uygulandı. In vitro kolesterol birikimi Filipin boyama ile belirlenirken, fosfo-IRE1, CHOP, p38 ve JNK protein ekpresyonları immunfloresans yöntemi ile saptandı. Kolesterol aracılı CHOP aktivasyonunun mitojenle-aktive edilmiş protein kinazlar ile ilişkisinin belirlenmesi için JNK ve p38 inhibitör uygulamalarını takiben CHOP protein ekspresyonları immünfloresans yöntemi ile saptandı. 
Bulgular: Kolesterol içeren lipozom uygulanan gruplarda in vitro kolesterol birikiminin sağlandığı gözlendi. Sekiz saat boyunca kolesterol içeren lipozom uygulanan grup kontrol grubu ile kıyaslandığında fosfo-IRE1, CHOP, p38, JNK protein ekpresyonlarında anlamlı artış saptandı. Kolesterol içeren lipozom uygulamasına ilaveten p38 inhibitörü uygulanan grupta ise, kolesterol içeren lipozom uygulanan gruba kıyasla, CHOP protein ekspresyonunda anlamlı düzeyde düşüş belirlendi. 
Sonuçlar: Çalışmamızda kolesterol içeren lipozom verilen AML12 hücre hattında JNK ve p38 protein ekspresyon düzeylerinin fosfo-IRE1 protein düzeyleri ile birlikte arttığı saptandı. CHOP aktivasyon düzeylerinde kolesterol içeren lipozoma ek olarak p38 inhibitörü verilen hücrelerde düşüş gözlenirken JNK inhibitörü verilen hücrelerde düşüş gözlenmedi.
Anahtar Kelimeler: kolesterol, mitojenle-aktive edilmiş kinazlar, apoptoz, endoplazmik retikulum stres

Abstract:
SUMMARY
Aim: Investigation of the relationship between CHOP activation and mitogen-activated protein kinases in the ER stress-mediated apoptosis mechanism induced by cholesterol-containing liposome via cholesterol deposition in AML12 mouse hepatocyte cell line.
Methods: Liposome and cholesterol-containing liposome complexes were prepared and applied to the AML12 cell with different incubation times. In vitro cholesterol accumulation was determined by Philippine staining, while phospho-IRE1, CHOP, p38 and JNK protein expressions were detected by immunofluorescence method. In order to determine the relationship of cholesterol-mediated CHOP activation with mitogen-activated protein kinases, CHOP protein expressions were determined by immunofluorescence method following JNK and p38 inhibitor applications.
Results: Cholesterol accumulation was observed in the groups treated with cholesterol-containing liposomes. A significant increase in phospho-IRE1, CHOP, p38, and JNK protein expressions was detected in the group that was treated with cholesterol-containing liposomes for eight hours compared to the control group. In the group in which p38 inhibitor was applied in addition to the cholesterol-containing liposome application, a significant decrease was determined in CHOP protein expression compared to the cholesterol-containing liposome administered group.
Conclusion: It was determined that JNK and p38 protein expression levels increased together with phospho-IRE1 levels in the AML12 cells given cholesterol-containing liposomes. There was a decrease in CHOP activation levels in cells given p38 inhibitor in addition to cholesterol-containing liposome while any differences was not observed in cells given JNK inhibitor.
Keywords: Cholesterol, mitogen-activated protein kinases, apoptosis, endoplasmic reticulum stress