Non-radyografik aksiyel spondiloartritli hastalarda kan mikro RNA düzeyleri, hastalık aktivitesi, fonksiyonel kapasite ile ilişkisi
The relationship with blood microRNA levels, disease activity and functional capacity in patients with non-radiographic axial spondyloarthritis
Yazar: ŞAHİN KIRATLI
Danışman: PROF. DR. GÜLCAN GÜRER
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon = Physical Medicine and Rehabilitation
Dizin: Hastalık şiddeti indeksi = Severity of illness index ; Mikro RNA = Micro RNA ; RNA = RNA ; Spondilit-ankilozan = Spondylitis-ankylosing ; Spondiloartrit = Spondylarthritis

Özet:
Amaç: Bu çalışmadaki amacımız, nr-axSPA'lı hastalarda, kan miRNA-5196 ve miRNA-29a düzeylerinin belirlenmesi ve bu iki miRNA alt tipinin nr-axSPA'nın erken tanısında ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesinde katkı sağlaması, miRNA-5196 ve miRNA-29a düzeylerinin hastalık aktivitesi ve fonskiyonel kapasite ile ilişkisinin belirlenmesi ve bu iki miRNA alt tipinin hastalık patogenezindeki potansiyel etkilerinin ortaya çıkarılmasının sağlanmasıdır.
Gereç ve yöntem: Çalışmamıza; kliniğinimize bel-kalça ağrısı ile başvuran 18 yaş üstü, 2009 Spondiloartrit Uluslararası Değerlendirme Derneği (ASAS) aksiyel SpA sınıflandırma kriterlerini karşılayan ve non-radyografik aksiyel spondiloartrit tanısı konulan tüm gönüllü hastalar ve hasta grubu ile korele olarak herhangi bir otoimmün veya inflamatuar hastalığı olmayan gönüllüler çalışmaya alındı. Hastaların yazılı onamları alındıktan sonra yaş, cinsiyet, boy, kilo, VKİ, öğrenim durumu, mesleği, medeni durumu, hastalık süresi ve bu nedenle non steroit anti-inflamatuar ilaç kullanımı, sigara kullanımı, alkol tüketimi ve aile öyküleri, eşlik eden diğer hastalıkları ve kullandıkları ilaçlar sorgulandı. Hastaların rutin fizik muayene ve kas-iskelet sistemi muayenesi ile birlikte, hastalar BASDAI, BASFI, BASMI, ASQOL ölçekleri kullanılarak değerlendirildi. Hastalardan ESH, CRP, HLA-B27 ve real-time PCR yöntemiyle miRNA analizinde kullanılmak üzere kan örnekleri alındı.
Bulgular: Hastaların yaş ortalaması 39,7 ± 11,2 iken, kontrol grubunun yaş ortalaması 47,4 ± 15,2 olarak saptandı. Yaş açısından gruplar arasında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmadı (p=0,085). VKİ ortalaması hasta grubunda 25.3±4,7, kontrol grubunda 25,8±2,9 idi. İki grup arasında VKİ açısından istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık yoktu (p=0,699). Hasta grubunda ortalama hastalık süresi 24(4-100) hafta, NSAİİ kullanım süresi 5(0-7) gün/hafta olarak bulundu. Hastaların eğitim düzeyi olarak 6'sı (%31,6) lise ve altı eğitim, 13'ü (%68,4) lise üstü eğitim düzeyine, hastalardan 9'u (%45) lise ve altı, 11'i (%55) lise üstü eğitim düzeyine sahipti. Eğitim düzeyi açısından gruplar arasında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmadı (p=0,514). Hasta grubunda bakılan BASDAI median değeri
4.8, BASFI median değeri 0, BASMI median değeri 5.0, ASQOL median değeri 4.0 olarak hesaplandı. Hasta grubunun serum ESH ortalaması 20,9±15,4 mm/saat, kontrol grubunun ise 23±18,2 mm/saat olarak bulundu. Gruplar arasında ESH düzeyleri arasında anlamlı bir fark saptanmadı (p=0.700). Serum CRP ortalaması hasta grubunda 4,6 (0-45) mg/dl iken, kontrol grubunda 0 (,0-10,00) mg/dl olarak saptandı. Her iki grup arasında hasta grubunda kontrol grubuna göre serum CRP değerleri açısından istatiksel anlamlı fark saptandı (p=0,023). Hasta grubunda HLA B27 pozitifliği oranı %42,1 kontrol gurubunda HLA B 27 pozitifliği oranı %5 idi. HLA B 27 pozitifliği açısından gruplar arasında anlamlı fark gözlendi (p=0,008). Non-radyografik aksiyel spondiloartrit tanısı konulan hasta grubunda serum miR-5196 düzeyi ortalaması 1,7 (2-74,8) ng/ml, kontrol grubunda ise 1,4 (1-15,7) ng/ml olarak saptandı. Gruplar arasında miR-5196 düzeyleri arasında anlamlı bir fark saptanmadı (p=0.431). Non-radyografik aksiyel spondiloartrit tanısı konulan hasta grubunda serum miR-29a düzeyi ortalaması 0,1 (0,1-2) ng/ml, kontrol grubunda ise 0,3 (1-1,4) ng/ml olarak saptandı. Hasta grubunda kontrol grubuna göre miR-29a nın (p=0.000) istatistiksel olarak anlamlı şekilde daha az eksprese olduğu tespit edilmiştir. Non-radyografik aksiyel spondiloartrit tanısı konulan hastalar ve sağlıklı kontrol grubunda, HLA B27 (+) ve (-) olanlar arasında miRNA ekspresyonları istatistiksel olarak farklı değildi. Hastalar ve sağlıklı kontrol gruplarında, cinsiyetle miRNA ekspresyonu arasındaki ilişki değerlendirildiğinde, miR-5196' nın (p=0.048) sadece kontrol grubundaki kadınlarda erkeklere göre istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde daha fazla eksprese olduğu görülmüştür. Hasta grubunda ise cinsiyetle miRNA ekspresyonu arasındaki ilişki değerlendirildiğinde istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki saptanamamıştır. Hastalar arasında, NSAİİ kullanım sıklığı ile miRNA ekspresyonu arasındaki ilişki değerlendirildiğinde istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki saptanamamıştır. Hasta grubunda BASDAI, BASMI, BASFI, ASQOL, BASMI, şikayetlerin süreleri ve ESH, CRP değerleri ile; miRNA 5196 ve miRNA 29a arasındaki ilişki incelendi. Hastalık aktivitesini değerlendirmekte kullanılan klinik ve laboratuar parametreler ile; miRNA 5196 ve miRNA 29a ekspresyonları arasında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmadı.
Sonuç: Çalışmamızın sonuçları incelendiğinde hasta grubunda kontrol grubuna göre, miR-29a'nın periferik kan ekspresyon seviyelerinde istatistiksel olarak anlamlı şekilde (p<0.001) daha az eksprese olduğunu ve kontrol grubu ile kıyaslandığında ekspresyon düzeyinin 3 kat daha az olduğunu tespit ettik. Hasta grubunda kontrol gurubuna kıyasla miRNA-5196 expresyonun daha yüksek olduğunu ancak istatiksel olarak anlamlı fark
72
bulunmadığını tespit ettik (p=0,431). Mevcut veriler ışığında çalışmamızda hasta takibinde kullanılan klinik ve laboratuvar veriler ile kıyaslandığında hastalık takibinde ve tedaviye yanıtın izlenmesinde biyomarker olarak gösterilebilecek herhangi spesifik bir miRNA ekspresyonuna rastlanmamıştır. Ancak miR-29a' nın hasta grubunda istatistiksel olarak anlamlı şekilde daha az eksprese olması, bu miRNA subtipinin SPA nın rutin seyrinde kan seviyelerinin down-regüle olabileceğini düşündürmektedir. Çalışmamızın az sayıda hasta ve kontrol grubu ile yapılmış olması çalışmanın sonuçlarını etkilemiş olabilir. Elde ettiğimiz bulgular doğrultusunda, SPA grubu hastalıklar ile mikro RNA' lar arasındaki ilişkiyi daha açık şekilde ortaya konulması amacıyla daha fazla sayıda olguyu içeren farklı metodlarla beraber ileri randomize kontrollü çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.
Anahtar kelimeler: Non-radyografik spondiloartrit, Ankilozan Spondilit, Hastalık aktivitesi, Mikro RNA, miRNA-29a, miRNA-5196

Abstract:
Background And Aim: Our aim in this study is to determine blood miRNA-5196 and miRNA-29a levels in patients with nr-axSPA and to contribute to the early diagnosis of nr-axSPA and the development of new treatment strategies of these two miRNA subtypes, to determine miRNA-5196 and miRNA-29a levels. The aim is to determine the relationship between disease activity and functional capacity and to reveal the potential effects of these two miRNA subtypes in the pathogenesis of the disease.
Material and method: All volunteer patients over the age of 18 who applied to our clinic with low back and hip pain, met the 2009 Spondyloarthritis International Evaluation Society (ASAS) axial SpA classification criteria and were diagnosed with non-radiographic axial spondyloarthritis, and volunteers without any autoimmune or inflammatory disease in correlation with the patient group were included in the study. After obtaining the written consent of the patients, age, gender, height, weight, body-mass index (BMI), education status, occupation, marital status, duration of current complaints and therefore non-steroidal anti-inflammatory drug use, smoking, alcohol consumption, comorbidities and medications they used were questioned. Along with the routine physical examination and musculoskeletal examination of the patients, the patients were evaluated using the BASDAI, BASFI, BASMI, ASQOL scales. Blood samples were taken from the patients to be used in miRNA analysis by sedimentation (ESH), c-reactive protein (CRP), HLA-B27 and real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) method.
Results: While the mean age of the patients was 39.7 ± 11.2, the mean age of the control group was 47.4 ± 15.2. There was no statistically significant difference between the groups in terms of age (p=0.085). The mean Body Mass Index (BMI) was 25.3±4.7 in the patient group and 25.8±2.9 in the control group. There was no statistically significant difference between the two groups in terms of BMI (p=0.699). The mean duration of complaints in the patient group was 24(4-100) weeks, and the duration of NSAID use was 5(0-7) days/week. In terms of education level, 6 (31.6%) of the patients had high school or
74
lower education, 13 (68.4%) had higher education level, 9 (45%) of the patients were high school and below, 11 (55%) ) had a higher education level. There was no statistically significant difference between the groups in terms of education level (p=0.514). In the patient group, the median BASDAI value was 4.8, BASFI median value was 0, BASMI median value was 5.0, ASQOL median value was 4.0. The mean serum ESR in the patient group was 20.9±15.4 mm/hour, and 23±18.2 mm/hour in the control group. There was no significant difference in ESR levels between the groups (p=0.700). While the mean serum CRP was 4.6 (0-45) mg/dl in the patient group, it was 0 (.0-10.00) mg/dl in the control group. A statistically significant difference was found between the two groups in terms of serum CRP values in the patient group compared to the control group (p=0.023). The rate of HLA B27 positivity in the patient group was 42.1%, and the rate of HLA B 27 positivity in the control group was 5%. There was a significant difference between the groups in terms of HLA B 27 positivity (p=0.008). The mean serum miR-5196 level was found to be 1.7 (2-74.8) ng/ml in the patient group diagnosed with non-radiographic axial spondyloarthritis, and 1.4 (1-15.7) ng/ml in the control group. There was no significant difference in miR-5196 levels between the groups (p=0.431). The mean serum miR-29a level was found to be 0.1 (0.1-2) ng/ml in the patient group diagnosed with non-radiographic axial spondyloarthritis, and 0.3 (1-1.4) ng/ml in the control group. It was determined that miR-29a (p=0.000) was statistically significantly less expressed in the patient group compared to the control group. MiRNA expressions were not statistically different between HLA B27 (+) and (-) patients in patients diagnosed with non-radiographic axial spondyloarthritis and healthy control group. When the relationship between sex and miRNA expression was evaluated in patients and healthy control groups, it was observed that miR-5196 (p=0.048) was statistically significantly more expressed only in women in the control group. In the patient group, when the relationship between gender and miRNA expression was evaluated, no statistically significant relationship was found. When the relationship between the frequency of NSAID use and miRNA expression was evaluated among the patients, no statistically significant relationship was found. In the patient group, BASDAI, BASMI, BASFI, ASQOL, BASMI, duration of complaints and sedimentation, CRP values; The relationship between miRNA 5196 and miRNA 29a was examined. With clinical and laboratory parameters used to evaluate disease activity; There was no statistically significant difference between miRNA 5196 and miRNA 29a expressions.
Conclusion: When the results of our study were examined, we found that miR-29a was statistically significantly (p<0.001) less expressed in peripheral blood mononuclear cells in the patient group compared to the control group, and the expression level was 3 times less when compared to the control group. We found that miRNA-5196 expression was higher in the patient group compared to the control group, but there was no statistically significant difference (p=0.431). In the light of the available data, no specific miRNA expression was found in our study that could be shown as a biomarker in the follow-up of the disease and in the monitoring of the response to treatment, when compared with the clinical and laboratory data used in patient follow-up. However, the fact that miR-29a was statistically significantly less expressed in the patient group suggests that blood levels of this miRNA subtype may be down-regulated in the routine course of SPA or, as another possibility, that nr-axSPA or agents such as NSAIDs used to treat this miRNA may be downregulated. subtype decreased its expression. However, when the relationship between mi-RNA levels and duration of current complaints, duration and frequency of NSAID use was evaluated in the patient group, there was no evidence that the use of pharmacological treatment had an effect on the expression of both miRNA subtypes. In addition, the fact that our study was conducted with a small number of patients and a control group may have affected the results of the study. In line with the findings we have obtained, advanced randomized controlled studies with different methods involving more cases are needed in order to reveal the relationship between SPA group diseases and microRNAs more clearly.
Keywords: Non-radiographic spondyloarthritis, Ankylosing Spondylitis, Disease activity, Micro RNA, miRNA-29a, miRNA-5196