Gram pozitif bakteriyel toksinlerin mezenkimal kök hücrelerdeki toll benzeri reseptörlere etkisinin araştırılması.
Investigations for effects of toxins from gram pozitive bacteria on toll-like receptors of mesenchymal stem cells.
Yazar: MELEK YAMAN
Danışman: PROF. DR. TURGUT İMİR
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Gram Pozitif Bakteriyel Toksinlerin Mezenkimal Kök Hücrelerdeki Toll Benzeri Reseptörlere Etkisinin AraştırılmasıToll benzeri reseptörler (TLR), doğal immün sistemde görev alan patojen tanıyan reseptör (PRR) ailesi üyelerindendir. Pek çok hücre yüzeyinde ekspresse olurlar. Patojen ile ilişkili moleküler yapıları (PAMP) tanıyarak doğal immün sistemi aktive ederler. Mezenkimal kök hücrelerde ekspresse olan TLR'in bu hücrelerin çeşitli dokulara farklılaşmasında önemli rolleri olduğu düşünülmektedir.Çalışmamızda difteri toksini ile Stafilokokal Enterotoksin B'nin (S.E.B) insan kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin (MKH) canlılığına ve TLR ekspresyonuna etkisini araştırmak amaçlanmıştır. Farklı konsantrasyonlarda hazırlanmış toksinler ile 24 saat uyarılan MKH'lerin canlılıkları MTT testi ile incelenmiştir. Difteri toksininin 25 µg/ml konsantrasyonu ve S.E.B'nin 30 µg/ml konsantrasyonu hücre canlılığını kontrol grubuna göre anlamlı bir şekilde azaltmıştır.Difteri toksini ve S.E.B ile uyarılan hücrelerde TLR ifadelenmesini araştırmak için özgül antikorlar kullanılmış ve hücreler akış sitometrisi yöntemi ile incelenmiştir. Yapılan analizler sonucu difteri toksininin MKH'lerde TLR ifadelenmesine etkisi görülmemiştir. S.E.B `nin 30 µg/ml konsantrasyonu TLR-1 ifadelenmesini arttırırken, 3 µg/ml ve 30 µg/ml konsantrasyonu TLR-2 ve TLR-3 ifadelenmeisini arttırmıştır. S.E.B'nin diğer TLR'lerin ifadelenmesine etkisi görülmemiştir.Literatürde S.E.B `nin MKH'lerdeki TLR'lere etkisini gösteren bir çalışma bulunmamaktadır. Bu yüzden çalışma sonunda elde edilen veriler S.E.B `nin MKH'lerde TLR'lerin bir ligantı olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
Investigations for effects of toxins from gram pozitive bacteria on toll-like receptors of mesenchymal stem cells.Toll-like receptors (TLRs) are members of pattern recognition receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns (PAMP) as an important component of innate immune responses. TLR expression by various cells of the innate immune system has been well characterized. However, there is some controversial information pertaining TLR expression by bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSCs). The purpose of this study was to investigate the effects of Diphtheria toxin and Staphylococcal enterotoxin B (SEB) on TLR expression by human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (hBMSCs).MTT assay was used to determine viability of hBMSCs that were exposed to different concentrations of toxins for 24 hours.TLR expression was explored using TLR-specific antibodies by flow cytometry.Diphtheria toxin did not affect TLR expression at all. However, SEB changed TLR expression in a dose dependent fashion. For example, while 30 µg/ml SEB increased expression of TLR-1, SEB at the concentrations of both 3 µg/ml and 30 µg/ml increased expression of both TLR-2 and TLR-3. SEB did not affect expression of the other TLRs.First of all, the results of this study have suggested that SEB could be involved in regulation of TLR-1, TLR-2, and TLR-3 expression by hBMSCs. Secondly, these findings indicate a novel discovery since no literature pertaining effects of SEB on TLR expression by hBMSCs. Therefore, further investigations are needed to make a final definitive conclusions about the regulatory roles of SEB on TLR expression particularly by hBMSCs.