İnsan umblikal ven endotel hücre kültürlerinde endotoksin aracılı endotel disfonksiyonda NO-ADMA-Homosistein arasındaki ilişki, arginin ve taurinin etkisi
The relationship between NO-ADMA-Homocysteine in endotoxin mediated endothelial dysfunction of human umblical vein endothelial cell cultures, the effect of arginine and taurine
Yazar: ÖZGE TUĞÇE PAŞAOĞLU
Danışman: PROF. DR. NURTEN TÜRKÖZKAN
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Homosistein = Homocysteine ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Taurin = Taurine

Özet:
Çalışmamızın amacı endotoksinle uyarılmış insan umblikal ven hücresi (HUVEC) primer kültürlerinde NO, ADMA, Homosistein arasındaki ilişkiyi ve bu ilişkiye arginin ve taurinin etkisini araştırmaktı.Bu amaçla altı adet grup oluşturuldu. Kontrol grubuna hiçbir madde uygulaması yapılmazken, LPS grubuna 10?g/mL endotoksin (E.coli 0111:B4 suşu), Arginin grubuna 10-4 mol/L arginin, Taurin grubuna 5 ?g /mL taurin, LPS+Arginin grubuna aynı dozlarda endotoksin ile beraber arginin ve LPS+Taurin grubuna aynı dozlarda endotoksin ile beraber taurin uygulaması yapıldı.NO parametresi ölçümü için son ürünler olan nitrit (NO2-) ve nitrat (NO3-)'ın Griess yöntemiyle spektrofotometrik ölçümünden yararlanıldı. ADMA ve Homosistein parametreleri HPLC cihazında floresan dedektörle ölçüldü.Çalışmamızın sonucunda endotoksemide NO, ADMA ve Homosistein parametreleri arasında her üçünün de artışı şeklinde bir ilişki saptandı. (p<0,05) LPS ile beraber arginin uygulamasının NO ve ADMA'yı düşürücü (p<0,05); ancak Homosistein açısından çelişkili etkileri olduğu saptandı. Taurinin intakt endotelde NO'nun anlamlı artışını (p<0,01), LPS ile uyarılmış endotelde ise NO ve ADMA'nın LPS gurubuna göre anlamlı düşüşünü (p<0,05) sağladığı bulundu. LPS ile beraber taurin verilmesi Taurin grubuna göre anlamlı homosistein artışına neden olurken (p<0,05) LPS grubuna göre homosisteinde anlamlı bir değişime neden olmamıştır.Çalışmamızda, LPS uyarısıyla hem Arginin-ADMA hem de Arginin-NO yolunun aktive olduğu bulunmuştur. LPS uyarısı nedeniyle inkübasyon sonunda artış gösteren ADMA'nın iNOS'u inhibe edecek düzeyde olmadığını düşünüyoruz. Sonuçlarımızdan yola çıkarak, argininin endotoksemi durumunda NO ve ADMA parametreleri üzerinde düşürücü bir etkisi olduğu söylenebilir. Verilerimiz, taurinin intakt endotelde prooksidan, LPS ile uyarılmış endotelde antioksidan olarak davrandığını göstermektedir. Sonuçlarımıza göre taurinin Homosisteini düşürücü bir etkisinin saptanmaması nedeniyle fazla alımı konusunda şüpheyle yaklaşılması gerektiğini düşünüyoruz.

Abstract:
The aim of our study was to investigate the relationship between NO, ADMA, Homocysteine and the influence of arginine and taurine on this relationship in endotoxin-induced human umblical vein endothelial cell (HUVEC) cultures.For this reason six groups are formed. Control group consists of HUVEC cultures without any treatment. LPS, Arginine, Taurine, LPS+Arginine and LPS+Taurine groups are treated with 10?g/mL endotoxin (E.coli 0111:B4), 10-4 mol/L arginine, 5 ?g /mL taurine, endotoxin plus arginine (same doses) and endotoxin plus taurine (same doses) respectively.The measurement of NO levels is implemented by the spectrophotometric measurement of nitrite (NO2-) and nitrate(NO3-), which are end-products of NO, by Griess method. ADMA and Homocysteine levels are measured using HPLC with fluorescence detection.The results of our study showed that there was a significant increase of NO, ADMA and Hcy in endotoxemia. (p<0,05) LPS plus arginine treatment lowered NO and ADMA levels (p<0,05) while this treatment showed conflicting results for Hcy. Taurine treatment elevated NO levels significantly (p<0,01) while LPS+taurine treatment diminished NO and ADMA, compared to LPS group (p<0,05). As a result of simultaneous treatment of LPS and taurine, Hcy levels increased significantly compared to Taurine group (p<0,05) and did not change compared to LPS group.In our study, LPS stimulation activated both Arginine-ADMA and Arginine-NO pathways. In our opinion, ADMA, which is formed after the incubation with LPS, was not elevated enough to inhibit iNOS. According to our results, arginine has a decreasing effect on NO and ADMA levels in endotoxemia. Our data showed that taurine acts as a prooxidant on intact endothelium and as an antioxidant on LPS-stimulated endothelium. Furthermore, as taurine did not show any diminishing effect on Hcy, we speculate that there should be a suspicious act towards excess intake.