Büyüme faktörleri ve düşük molekül ağırlıklı heparinlerin anjiyogenez üzerine kısa-orta-uzun dönem etkilerinin civciv koryoallantoik membran yöntemi ile araştırılması
An investigation of the short-medium-long term effects of LOW molecular weight heparins and growth factors on angiogenesis BY chick chorioallantoic membrane method
Yazar: TURGAY ARSLAN
Danışman: DOÇ. DR. MUKADDER OKUYAN
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Anjiyogenez = Angiogenesis ; Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Bemiparin sodyum = Bemiparin sodium ; Bevacizumab = Bevacizumab ; Büyüme faktörleri = Growth factors ; Enoksaparin = Enoksaparin ; Epidermal büyüme faktörü = Epidermal growth factor ; Heparin = Heparin ; Tromboplastin = Thromboplastin ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Anjiyogenez, daha önce varolanın dışında yeni kapillerin oluşumudur. Anjiyogenezde vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) endotelyal hücrelerin, epidermal büyüme faktörü (EGF) ise epidermal hücrelerin aktivasyonu, migrasyonu ve proliferasyonuna yol açar. Düşük molekül ağırlıklı heparinler (DMAH) anjiyogenez büyüme faktörlerini (VEGF), bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ve onların inhibitörlerinin sentezini düzenleyerek etki ederler. Civciv koryoallantoik membran (CAM) embriyonik koryon ve allantoinden oluşan, ekstraembriyonik bir membrandır. Yumurta fertilizasyonunun dördüncü gününde oluşmaya başlar anjiyogenez ve antianjiyogenez çalışmalarında kullanılmaktadır. 
Bu çalışmada DMAH'lerden tinzaparin, enoksaparin ve bemiparin'in anjiyogenik ve antianjiyogenik etkilerinin araştırılmasını amaç edinmiştir ve CAM yöntemi kullanılmıştır. Çalışma altı gruptan oluşmakta ve her grupta yedi fertilize yumurta bulunmaktadır. Kontrol grubu agaroz, VEGF inhibitörü bevacizumab ve EGF inhibitörü setuksimab, DMAH ise bemiparin, enoksaparin ve tinzaparinden oluşmaktadır. Grupların değerlendirmesi, topikal uygulama sonrası 0-12-24-36. saatler olmak üzere kısa, orta, uzun dönemlerde damar uzunluk ve kavşaklarının değişimine bakılmıştır. Damar uzunluk ve kavşaklarının hesaplanması Angioquant ve İmageJ programları ile gerçekleştirilmiştir. 
Damar uzunluk değişimi grup karşılaştırmalarında ilaç uygulamasından 12 saat sonra enoksaparin, agaroza p=0.029, bemiparine p=0.035 ve setuksimaba p=0.047 ile anlamlı fark göstermiştir. Agaroz ve ilaç karşılaştırması sonucu 36 saat sonra bevacizumab p=0.015, setuksimab p=0.035 ve enoksaparin p=0.002 ile istatistiki olarak anlamlı farklılık bulunmuştur. Damar kavşak değişim manuel analizi sonucu enoksaparin ilaç uygulamasından 12 saat sonra p=0.025 ve 36 saat sonra p=0.04 ile agaroz grubuna oranla anlamlı farklılık göstermiştir. 
Bu çalışmanın sonucunda DMAH'lerin antianjiyogenik etkinliğinin olabileceği, antianjiyogenik etkinin molekül ağırlığının büyüklüğü ile bir bağlantı kurulamayacağı, ayrıca CAM modelinde antianjiyogenik etki ilaç uygulamasından 36 saat sonra daha sağlıklı sonuçlara ulaşılabileceği sonucuna ulaşılmıştır.

Abstract:
Angiogenesis is process that occurs new capillaries from pre-existings. During angiogenesis vascular endothelial growth factor (VEGF)  and epidermal growth factor (EGF) are responsible of activation, migration and proliferation of endothelial and epidermal cells respectively. Low molecular weight heparins (LMWHs) influence angiogenesis growth factor by regulating basic fibroblaste growth factor and synthesise of its inhibitors. Chick chorioallantoic membrane (CAM) is extraembryonic membrane that consist of embryonic chorion and allantoic. Chorioallantoic membrane occurs during forth day of fertilization. It is a common method in angiogenesis and antiangiogenesis research. This study claims to investigate antiangiogenic or angiogenic effects of LMWHs tinzaparin, enoxaparin and bemiparin by CAM method. 
This study consits of six groups and seven fertilized eggs for each one. We used agarose as control group, bevacizumab as VEGF inhibitor, cetuximab as EGF inhibitor and bemiparin, enoxaparin and tinzaparin as LMWHs. This comparison was made according to vessel lenght and junction changes at immediately after topical application in a time period of (0 hour) short term (12 hours) medium term (24 hours) and long term (36 hours). Calculation of vessel lenght and junctions carried out by automatic measurement with Angioquant software and manual measurement with ImageJ software. 
After 12 hours of drug application, vessel length changes were statistically significant in enoxaparin compare to agarose, bemiparin and cetuximab (p=0.029, p=0.035, p=0.047 respectively).  After 36 hours of drug application, vessel length changes were statistically significant in bevacuzimab, cetuximab and enoxaparin compare to control group  (p=0.015, p=0.035, p=0.002 respectively).  In 12th and 36th hours, vessel junction changes were statistically significant in enoxaparin compare to control (p=0.025,  p=0.04 respectively). 
The results of this study showed that LMWHs may have antiangiogenic effects and we concluded that antiangiogenic effects of LMWHs do not depends on molecular weight. In addition, the most effective time for study of antiangiogenic effect is 36 hours after drug application.