Pyrin ve pyrin ile ilişkili proteinler; PSTPIP1 ve siva'nın inflamasyondaki rolü
The role of pyrin and pyrin interacting proteins; PSTPIP1 and siva in inflammation
Yazar: BANU PEYNİRCİOĞLU
Danışman: PROF.DR. ENGİN YILMAZ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Ailevi Akdeniz ateşi (AAA) hastalığıgeni, MEFV, Pyrin adı verilen, inflamasyonda önemli olduğu düşünülen proteinikodlamaktadır. Bugüne kadar ASC, PSTPIP1, 14.3.3 ve Siva isimli proteinler, `Pyrin ileilişkili protein' olarak saptanmıştır. Bu projede, PSTPIP1 ve Siva ile Pyrin arasındakiilişkinin niteliğinin belirlenmesi ve bu ilişkilerin inflamasyondaki rolünün aydınlatılmasıamaçlandı.Pyrin-PSTPIP1 proteinleri arasındaki ilişki immünfloresan boyama yöntemiyledoğrulandı, bu ilişki açısından önemli olduğu düşünülen Pyrin bölgeleri üzerinde in vitromutagenez ile yaratılan mutasyonların Pyrin-PSTPIP1 ilişkisini etkilemediği gösterildi.Pyrin-PSTPIP1 ilişkisinin inflamasyondaki rolünün belirlenmesi için yapılan işlevselçalışmalarda, bu ilişkinin fagositik aktiviteyi arttırdığı gösterildi.Pyrin-Siva ilişkisinin doğrulanması amacıyla yapılan immünçöktürme deneyleri ile,Pyrin'in hem Siva-1 hem de Siva-2'ye bağlandığı gösterildi. Bu deneyler sonucundaayrıca, MEFV geninde ekzon10, Siva'da ise ekzon1'in bu ilişki için önemli olduğugösterildi. İmmünfloresans mikroskobi ile, Pyrin ve Siva-2'nin transfekte hücrelerdekihücresel yerleşmine bakıldığında, bu proteinlerin sitoplazmada ve hücre zarında birlikteyerleşim gösterdiği görüldü. Bu ilişkinin hücre ölümü üzerine etkisi araştırıldığında;Pyrin, Siva-1 ve Siva-2'yi kodlayan vektör kasetleri ile transfekte edilen hücrelerde,hücre canlılığı açısından anlamlı bir fark bulunmadı. Böylece, Siva'nın, Pyrin'e bağlananbir protein olduğu immünçöktürme ve immünfloresan boyama deneyleri ile doğrulandı.Sonuç olarak, AAA mutasyonları açısından önemli olan ekzon10'nun kodladığı bölgeninPyrin-Siva ilişkisinde önemli olduğunun gösterilmesi, Pyrin-Siva ilişkisinin AAApatogenezi açısından önemli olabileceğine işaret etmektedir.Anahtar Kelimeler: AAA, MEFV geni, Pyrin, PSTPIP1, Siva, inflamasyon, fagositoz,apoptoz.

Abstract:
Familial Mediterranean fever(FMF) gene, MEFV,encodes a protein termed as Pyrin which appears to play an important role in theinflammatory pathways. Pyrin-interacting proteins thus far characterized are ASC,PSTPIP1, 14.3.3 and Siva. The purpose of this study is to identify the interaction betweenPSTPIP1, Siva and Pyrin and to explore the molecular role of this interaction ininflammation.We confirmed Pyrin-PSTPIP1 interaction by immunofluorescence (IF) staining techniqueand showed that the mutations that we generated by using invitro mutagenesis on Pyrindomains those are important on PSTPIP1 interaction, do not affect the interaction. Thenwe examined the effect of Pyrin-PSTPIP1 interaction using a functional assay whichdemonstrated that this interaction have a role in increasing phagocytosis activity. Weconfirmed Pyrin-Siva interaction and assessed the important domains of Pyrin and Sivafor the interaction, by performing immunoprecipitation (IP) experiments. The IP dataconfirmed that Pyrin binds to both Siva-1 and Siva-2. Our data suggest that exon10 ofMEFV and exon1 of Siva is necessary for this interaction. When we examined the cellulardistribution of Pyrin and Siva-2 in transfected cells by IF microscopy, these proteinsshowed a colocalization in cytoplasm and on the cellular membrane. Viabilities of thecells, co-transfected with Pyrin, Siva-1 and Siva-2 were not significantly different.Thus, Siva was confirmed by IP and IF to be a Pyrin-interacting protein. This interactionmay have a particular importance for FMF pathogenesis since many of the major FMFassociatedmutations are localized to the exon10 coding region which has been shown tobe important for the interaction.Keywords: FMF, MEFV gene, Pyrin, PSTPIP1, Siva, inflammation, phagocytosis,apoptosis.