Tuzak böcek yöntemi İle Entomopatojen Fungus izolasyonunun bazı yönleri ile incelenmesi
A study on certain aspects of Entomopathogenic Fungus isolation by using insect bait method
Yazar: SANİYE ÖZCAN
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET KUBİLAY ER
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Ziraat Bölümü / Bitki Koruma Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Ziraat = Agriculture

Özet:
Daha önce yapılan birçok çalışmada çeşitli entomopatojen funguslar tuzak böcek yöntemi ile topraktan izole edilerek zararlıların mikrobiyal mücadelesine yönelik olarak incelenmiş ve/veya entomopatojen fungusların doğadaki durumları hakkında bu yöntem ile bilgiler elde edilmiştir. Tuzak böcek kullanılarak topraktan entomopatojen fungus izolasyonu çalışmalarından elde edilen sonuçların toprakta var olan fungus yoğunluğu ile ilişkilendirilme olasılığını incelemek üzere bu çalışma yürütülmüştür. Çalışma, 18 entomopatojen fungus izolatı arasından seçilen bir Beauveria bassiana ve bir Metarhizium anisopliae izolatı ve tuzak böcek olarak Galleria mellonella larvaları ile kontrollü şartlar altında gerçekleştirilmiştir. Fungus sporları beş farklı yoğunlukta (103,104,105,106,107 spor/ 10gr toprak) toprağa karıştırılmış ve her bir uygulamada bulunan 10 larvadaki ölümler 10 gün boyunca takip edilmiştir. 3 tekkerrürlü olarak 25±2°C sıcaklık, %65±5 nispi nemde karanlık şartlarda yürütülen deneme sonucunda her iki fungusa ait probit ölüm ile fungus spor yoğunluğu ilişkisine dair doğrular istatistiksel olarak aynı bulunmuştur (ortak doğru; Y=-2,31 x 0,50X). Toprakta bulunan spor miktarı ile ölen larva miktarı arasındaki bu ilişki ortaya konulmuş ve her iki fungusta da aynı olduğu görülmüştür. Larvaların 103, 104, 105, 106, 107 spor ml-1 konsantrasyonundaki süspansiyona daldırılmaları ile gerçekleştirilen deneme sonucunda elde edilen probit doğrularının da öncekiler ile istatistiksel olarak farksız olduğu tespit edilmiştir. Sonuçta, daldırma yönteminde kullanılan 1 ml süspansiyondaki spor miktarının 10 gr toprakta bulunması durumunda aynı oranda G. mellonella larva ölümüne neden olmaktadır. İki fungusun bir arada ve eşit miktarda toprakta bulunduğu durumda tüm ölen böceklerin üzerinde M. anisopliae izolatının gelişerek sporulasyon yaptığı gözlenmiştir. Bu durum, karışık fungus popülasyonlarının bulunduğu topraklardaki tüm fungusların tuzak böcek yöntemi ile izole edilememe ihtimalini ortaya koymaktadır. Çalışmada ayrıca, 3 farklı sıcaklığın (20±2°C, 25±2°C, 30±2°C) fungus koloni gelişimi ve fungus spor çimlenmesi üzerine etkileri de belirlenmiştir. Spor çimlenmesinin her iki fungusta da aynı oranlarda gerçekleştiği, ancak koloni gelişimi bakımından tuzak böcek ile yapılan denemelerin yürütüldüğü ortam sıcaklığı olan 25±2°C'de M. anisopliae izolatının Beauveria bassiana izolatından daha büyük koloniler oluşturduğu belirlenmişir. M. anisopliae izolatının ölen böceklerdeki gelişim ve spor üstünlüğünün bir nedeni olarak değerlendirilmiştir. Bu çalışma ile tuzak böcek kullanarak topraktan entomopatojen fungus izolasyonu yöntemini etkileyen faktörler arasından, fungus spor yoğunluğunun, fungus patojenitesinin oldukça önemli olduğu, toprakta birden fazla entomopatojen fungus bulunması durumunda yoğunlukları eşit dahi olsa hepsinin eşit olarak izole edileme ihtimalinin olmadığı ortaya konulmuştur.
Anahtar Kelimeler: Galleria mellonella, Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, koloni gelişimi, spor çimlenmesi

Abstract:
Various entomopathogenic fungi have been isolated from soil using insect bait technique for investigating microbial control of pest insects, and to gather information about natural occurrence of these fungi in numerous previous studies. This study was conducted to establish a possible relationship between entomopathogenic fungus isolation results obtained from bait insect technique and existing fungus density within the same soil sample. The study was carried out using one Beauveria bassiana and one Metarhizium anisopliae isolate selected from 18 entomopathogenic fungal isolates, and Galleria mellonella larvae as bait insects under controlled conditions. Conidia of fungi were mixed into soil in five concentrations (103, 104, 105, 106, 107 spors/10gr soil) and mortality of 10 larvae in each unit was monitored for 10 days. The experiments had 3 replications and were conducted at 25±2°C, 65±5% relative humidity in darkness. The probit lines of both fungi, showing the relation between mortality and conidium density, were found statistically indifferent (common line; Y=-2.31 x 0.50X). This relation between conidium density within soil and larval mortality was established and was realized to be the same for both fungi. Probit lines were also calculated according to the results of the experiment where larvae were dipped into conidial suspensions of various concentrations (103, 104, 105, 106, 107 spors ml-1). These lines were also statistically indifferent from those calculated previously. These results show that same amount of conidia in 1ml spore suspension and in 10 gr of soil results in the same level of G. mellonella larval mortality. During the experiment where same amount of both fungi were mixed together into the soil, it was noticed that only M. anisopliae grew and sporulated on all dead larvae.  This indicates that, by using insect bait method, all species of fungi may not be isolated from soil where mixed fungal populations exist. In this study, effects of 3 ambient temperatures (20±2°C, 25±2°C, 30±2°C) on fungal colony growth and conidia germination were also determined. Conidia germination occured similarly for both fungi, however, colonies of M. anisopliae were larger than those of Beauveria bassiana at 25±2°C, the temperature at which insect baiting experiments were conducted. This was considered as one of the reasons for M. anisopliae being dominant in growth and sporulation on dead insects. In conclusion; amongst the factors affecting isolation of entomopathogenic fungi by using insect bait method, conidial density and pathogenicity of fungi were found to be quite important; and all fungal isolates may not be recovered from soil even though their densities are equal.
Key Words: Galleria mellonella, Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, colony growth, conidial germination