Hepatit b virus ile ilişkili hepatosellüler karsinomada potansiyel biomarker olan mikrorna'ların serum ve dokuda araştırılması
The i̇nvestigation of micrornas as potential biomarkers in serum and tissue for hepatitis b virus related hepatocellular carcinoma
Yazar: MEHMET ÇİMENTEPE
Danışman: PROF. DR. FÜGEN YARKIN
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Biyobelirteçler-tümör = Biomarkers-tumor ; Dokular = Tissues ; Hepatit = Hepatitis ; Hepatit B = Hepatitis B ; Hepatit B virüsü = Hepatitis B virus ; Hepatit virüsleri = Hepatitis viruses ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Mikro RNA = Micro RNA ; Serum = Serum

Özet:
Hepatosellüler karsinoma (Hepatocellular Carcinoma; HCC) primer karaciğer kanserin %90'ını oluşturur ve bütün dünyada en yaygın beşinci kanser ve kanserle ilişkili ölümün ikinci sebebidir. Hepatit B virus (HBV) enfeksiyonu HCC gelişimi için en önemli risk faktörlerinden biridir. mikroRNA'lar (miRNA'lar) tamamlayıcı mRNA'ların hem stabilitesini hem de translasyonunu etkileyerek transkripsiyon sonrası düzeyde gen ekspresyonunu düzenleyen 22 nükleotid uzunluğunda yüksek oranda korunmuş küçük kodlayıcı olmayan RNA'lardır. miRNA'lar düşük pH ve RNAaz'a direnç gibi koşullar altında önemli stabilite gösterdiğinden dolayı HCC'nin erken tespiti için yeni potansiyel biomarker olarak kullanılabileceğini göstermiştir. Bu çalışmanın amacı HBV ile ilişkili hepatosellüler karsinomada potansiyel biomarker olan miRNA'ların serum ve dokuda araştırılmasıdır. Mart 2016-Aralık 2019 tarihleri arasında HBV ile ilişkili 35 HCC hastası, 35 kronik HBV hastası (KHB) ve 30 sağlıklı bireylerden alınan serum ve doku örneklerinde miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-182-5p, miR-221-5p ve miR-223-5p'nin ekspresyon seviyeleri kantitatif real-time PCR testi (miScript SYBR® Green PCR Kit, Qiagen, Germany) ile analiz edilmiştir. Serum miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-182-5p ve miR-221-5p ekspresyon seviyesi HCC'li hastalarda KHB'li hastalar ve kontrol grubuna göre upregüle iken serum miR-223-5p ekspresyon seviyesi HCC'li hastalarda KHB'li hastalar ve kontrol grubuna göre downregüle bulunmuştur. Doku miR-21-5p, miR-182-5p ve miR-221-5p ekspresyon seviyesi HCC'li hastalarda KHB'li hastalar ve kontrol grubuna göre upregüle iken doku miR-122a-5p ve miR-223-5p ekspresyon seviyesi downregüle olarak tespit edilmiştir. İstatiksel olarak anlamlı bulunan serum ekspresyon seviyelerinin HCC'li hastalarda kontrol grubuna göre ROC (Reciever Operator Characteristic Curve; ROC) analizi ile tanısal değerlendirilmesinde miR-21-5p'nin AUC (Area Under Curve; AUC) değeri 0.763, miR-122a-5p AUC değeri 0.819, miR-221-5p'nin AUC değeri 0.721 ve miR-223-5p'nin AUC değeri 0.801 olarak tespit edilmiştir. İstatiksel olarak anlamlı bulunan doku ekspresyon seviyelerinin HCC'li hastalarında kontrol grubuna göre ROC analizi ile tanısal değerlendirilmesinde miR-21-5p'nin AUC değeri 0.801, miR-122a-5p AUC değeri 0.629, miR-221-5p'nin AUC değeri 0.706 ve miR-223-5p'nin AUC değeri 0.560 bulunmuştur. Sonuç olarak, HCC'yi KHB ve sağlıklı bireylerden doğrulukla ayıran miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-221-5p ve miR-223-5p'nin HCC'li hastaların erken tanısı ve prognozunda potansiyel biomarker olarak kullanılabileceği gösterilmiştir. Bu miRNA'ların serum ve doku ekspresyon seviyeleri KHB'nin siroz ve HCC'ye ilerlemesinin bir göstergesi olarak kullanılabilir.

Abstract:
Hepatocellular carcinoma (Hepatocellular Carcinoma; HCC) accounts for 90% of primary liver cancer and is the fifth most common cancer and the second cause of cancer-related death in the worldwide. Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the most important risk factors for HCC development. microRNAs (miRNAs) are highly preserved small non-coding RNAs of 22 nucleotides in length, which modulate gene expression at the post-transcription level, affecting both stability and translation of complementary mRNAs. Since miRNAs show significant stability under conditions such as low pH and resistance to RNAase, it has shown that it can be used as a new potential biomarker for early detection of HCC. The aim of this study is to investigate of microRNAs as potential biomarkers in serum and tissue for hepatitis B virus related hepatocellular carcinoma. Between March 2016-December 2019, the expression levels of miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-182-5p, miR-221-5p and miR-223-5p in serum and tissue samples from 35 HCC patients, 35 chronic HBV patients (CHB), and 30 healthy individuals were analyzed by quantitative real-time PCR test (miScript SYBR® Green PCR Kit, Qiagen, Germany). Serum miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-182-5p and miR-221-5p expression levels were found to be upregulated in patients with HCC compared to the CHB and control group, while serum miR-223-5p expression level were downregulated in patients with HCC compared to the CHB and control group. While tissue miR-21-5p, miR-182-5p and miR-221-5p expression levels were upregulated in patients with HCC compared to the CHB and control group, the tissue miR-122a-5p and miR-223-5p expression levels were downregulated. In the diagnostic evaluation of serum expression levels found statistically significant in patients with HCC compared to the control group by ROC (Reciever Operator Characteristic Curve; ROC) analysis, miR-21-5p AUC (Area Under Curve; AUC) value of 0.763, miR-122a 5p AUC value of 0.819, miR-221-5p AUC value of 0.721 and miR 223-5p AUC value of 0.801 were detected. In the diagnostic evaluation of tissue expression levels found statistically significant in patients with HCC compared to the control group by ROC analysis, miR-21-5p AUC value of 0.801, miR-122a-5p AUC value of 0.629, miR-221-5p AUC value of 0.706 and miR-223-5p AUC value of 0.560 were found. In conclusion, the serum and tissue expression levels of miR-21-5p, miR-122a-5p, miR-221-5p and miR-223-5p, which differentiate HCC from CHB and healthy individuals with accuracy, have been shown to be used as potential biomarkers in the early diagnosis and prognosis of HCC patients. Serum and tissue expression levels of these miRNAs can be used as an indicator of the progression of CHB to cirrhosis and HCC.