Metastatik luminal A tip meme kanserlerinde cdk4/6 inhibitör tedavi etkinliğine WİP1 fosfataz ve inhibitörlerinin etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of WİP1 phosphatase and inhibitors on CDK4/6 inhibitor treatment activity in metastatic luminal A breast cancers
Yazar: GÖKHAN ÇOLAK
Danışman: DOÇ. DR. ESİN OKTAY
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: İç Hastalıkları = Internal diseases
Dizin: Abemasiklib = Abemaciclib ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Palbosiklib = Palbociclib ; Ribosiklib = Ribociclib ; İlaç tedavisi = Drug therapy

Özet:
Amaç-Hipotez: Hormon reseptörü pozitif meme kanserlerinin tedavisinde son yıllarda önemli gelişmeler olmuştur. Hormon dirençli hastalarda artmış etkinliği gösterilen CDK 4/6 nın; CDK 4/6 inhibitörleri ile baskılanması ile metastatik meme kanserli hastalarda kemoterapiye benzer bir yüksek etkinlik ve daha uzun sağ kalım sağlanmıştır. Bu amaçla günümüzde onaylı olarak Palbociclib, Ribociclib ve Abemaciclib adlı moleküller yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu çalışmamızın amacı; meme kanseri oluşumunda çoklu etki mekanizmalarına sahip ve artmış düzeyleri gösterilen hücre stres yanıt yolaklarının negatif düzenleyicilerinden olan Wip1'in inhibe edilmesinin; CDK4/6 inhibitörlerinin etkinliğini nasıl etkileyeceğini değerlendirmek ve Wip1 inhibitörleri ile CDK4/6 inhibitörleri kombinasyonunun olası pozitif etkinliğinin gösterilmesi durumunda yeni araştırmalara yol göstermektir.
Yöntem: Bu çalışmada MCF-7 Luminal A alt tipine ait ER(+), PR(+), HER2(-) ve wt BRCA-1'e sahip hücre dizisi kullanıldı. Hücre serilerinde kontrol grubu ve GSK2830371 ve CDK4/6 inhibitörünün 48/72 saat muamele edilerek hücre canlılığı üzerine etkileri MTT analizi, apoptotik etkileri için Annexin V/7 AAD analizi, hücre döngüsü analizi, protein izolasyonu yapılarak Western Blot analizi ve hücre göçünün değerlendirilmesi için de invazyon testi yapıldı.
Bulgular: Hücre canlılık oranları en düşük pal250+g2,5 kombinasyonu ile muamele edilen hücre kültüründe olduğu görüldü. Apoptoz oranın en yüksek olduğu hücre kültürü ise pal 250 nM+GSK 2,5 µM ve pal 250 nM+GSK 5 µM ile muamele edilmiş hücre kültürleriydi. Hücre döngüsü üzerine etkilerine bakıldığında kombinasyon kolununda G1 fazında kalan hücre oranın belirgin değişme olmadığı, S fazında belirgin azalmanın ve G2/M geçişinde duraksamaya sekonder G2 fazındaki hücre oranın arttığı gözlendi. Palbosiklib ve GSK'nın beraber uygulanmasında CDK2, Wip 1, p-Rb düzeyinde azalmanın olduğu, cyclin D1, P21 ve P53 düzeylerinde artmanın olduğu gözlendi. Pal 200 nM +GSK 2,5 µM'da Wip1 en düşük düzeydeydi. Hücre dizileri 48 saat boyunca GSK ve Palbosiklib tek tek veya birlikte uygulandığında en fazla Pal 200 nM +GSK 2,5 µM ve Pal 200 nM+GSK 5 µM kombinasyon kollarında hücre göçünün azaldığı gözlendi.
Sonuç: MCF-7 hücrelerinde GSK+Palbosiklib uygulamasının hücre canlılığı, apoptozis, hücre döngüsü, DNA hasar yanıtı ve hücre göçünde uygun doz kombinasyonlarında tek ajan uygulamara göre daha iyi sonuç verdiği görülmüştür. Bu veriler ışığında GSK'nın Wip1 ekspresyonunun fazla olduğu Luminal A tip meme kanserinde CDK 4/6 inhibitörleriyle kombinasyonun tedaviye yanıtı arttırabileceği düşünülmüştür. Bu konuda daha fazla sayıda hücre kültürü çalışmalarına ve klinik çalışmalara ihtiyaç vardır.
Anahtar Kelimeler: CDK 4/6, Meme kanseri, Wip1 fosfataz inhibitörü.

Abstract:
Purpose-Hypothesis: Significant advances have been made in the treatment of hormone receptor-positive breast cancers in recent years. CDK 4/6, which has increased efficacy in hormone resistant patients; Suppression with CDK 4/6 inhibitors has resulted in higher efficacy and longer survival similar to chemotherapy in patients with metastatic breast cancer. For this purpose, molecules named Palbociclib, Ribociclib and Abemaciclib are widely used today. The aim of this study; Wip1, which has multiple mechanisms of action and increased levels in breast cancer; To evaluate what role it plays on the efficacy achieved with CDK4/6 inhibitors and to investigate the inhibitory effect of Wip1 inhibitors on this possible effect.
Method: In this study, a cell line of ER(+), PR(+), HER2(-) and wt BRCA-1 and MCF-7 Luminal A subtype was used. Effects of control group and GSK2830371 and CDK4/6 inhibitor on cell viability with 48/72 h treatment in cell lines MTT analysis, Annexin V/7 AAD analysis for apoptotic effects, cell cycle analysis, Western blot analysis with protein isolation and evaluation of cell migration, invasion test was performed.
Findings: Cell viability rates were the lowest in cell culture treated with the combination of pal250+g2,5. The cell culture with the highest apoptosis rate was the cell cultures treated with pal 250 nM+GSK 2.5 µM and pal 250 nM+GSK 5 µM. Considering the effects on the cell cycle, it was observed that there was no significant change in the ratio of cells remaining in the G1 phase in the combination arm, a significant decrease in the S phase and an increase in the ratio of cells in the G2 phase secondary to the pause in the G2/M transition. It was observed that there was a decrease in CDK2, Wip 1, p-Rb levels, and an increase in cyclin D1, P21 and P53 levels when palbociclib and GSK were administered together. Wip1 was lowest at Pal 200 nM +GSK 2.5 µM. When the cell lines were applied individually or together with GSK and Palbociclib for 48 hours, it was observed that cell migration was reduced the most in the combination arms of Pal 200 nM + GSK 2.5 µM and Pal 200 nM + GSK 5 µM.
Results: As a result of this study; It was found that the effects of different dose combinations on cell viability, apoptosis, cell cycle, DNA damage response and cell migration were different after GSK+Palbociclib administration in MCF-7 cells. In the light of these data, it is thought that the combination of GSK with CDK 4/6 inhibitors may increase the treatment response in Luminal A type breast cancer that overexpresses Wip1.
Key Words: Breast cancer, CDK 4/6, Wip1 phosphatase inhibitor.