Kestane kabuğunda bulunan ellajik asit türevlerinin hidrolizi üzerine çalışmalar
A study on hydrolysis of ellagic acid derivatives in chestnut peel
Yazar: İRFAN BAHŞİ
Danışman: PROF. DR. GÜLER YALÇIN
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Ellajik asit = Ellagic acid ; Fenoller = Phenols ; Hidroliz = Hydrolysis ; Kestane = Chestnut ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Polifenol = Polyphenol

Özet:
Amaç:
Bu çalışmada, kestane meyve kabuğunda bulunan ve bir polifenol olan ellajik asidin (EA) miktarında hidroliz sonucu ortaya çıkan değişimin izlenmesi planlanmıştır. 
Gereç ve Yöntem:
Bu aşamada eşit miktarda öğütülmüş, elenerek aynı büyüklüğe getirilmiş kestane kabuğu ve perikaptan eşit miktarda alınarak hızlandırılmış çözücü ektraksiyon cihazı (ASE 100) ile ekstrakte edildi. Hidroliz Reaksiyonu Yöntemi: Ekstraksiyon işlemi ile elde edilen ekstrakttaki metanolun tamamı uçuruldu, 4 N trifloraasit ile 110 0C de 2.5 saat hidroliz işlemi uygulandı. EA standart çözeltisi ve hidroliz reaksiyonu ile artışın miktarının tespiti için bir HPLC yöntemi geliştirilmiştir. RP-HPLC-DAD Yöntemi: Kolon: ODS V3; mobil faz:  % 82 5 mM pH=2,5 KH2PO4 çözeltisi, % 18 asetonitril, RTEA: 10,52 dak. analiz süresi: 28,0 dak. basınç: 135 bar, sıcaklık: 25,0C.
Bulgular:
Hidroliz öncesi ve sonrası yapılan HPLC analizleri sonucunda EA pik alanında 4.07 kat artış gözlenmiştir. Ayrıca, EA'den daha kısa alıkonma zamanına (RTX1 =2,49 dak RTX2 =3,28 dak) sahip ve ellajitanen olması muhtemel bileşiklerin pik alanlarında azalma gözlenmiştir. 
Sonuçlar:
Yapılan çalışmalar sonucunda, dış standart ekleme yöntemi ile 3 kez oluşturulan  ölçü eğrisinin doğru denklemi: y = 61,448x + 153,57 ve r2=0,9986 olarak bulunmuştur. Geri kazanım değeri: %89,20 olarak bulunmuştur.
Bu çalışmada, en uygun ve verimli hidroliz reaksiyonu şartları belirlemek için, hidroliz koşullarından sıcaklık ve zaman parametreleri değiştirilerek artış miktarı belirlendi ve geliştirilen HPLC metodu valide edildi.
 
Anahtar kelimeler: Ellajik asit, Kestane, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC), Hızlandırılmış Çözücü Ekstraksiyonu (ASE).

Abstract:
Objective:
In this study, it is planned to observe the change in the amount of a polypheonol, ellagic acid (EA) exists in chestnut peel and pericarp after acid hydrolysis. 
Material and Methods:
At this step chestnut peel and pericarp are grinded and seived to have similar granul size. Equal amounts were taken from both samples and extracted by Accelwereted Solvent Extractor (ASE 100). Hydrolysis Reaction Method: All remainig methanol in the extract was evaporarted and the extract was hydrolyzed with 4N trifluoro acetic acid at 120 0C for two hours. An HPLC method is developed to determine the increase in ellagic acid amount after hydrolysis. RP-HPLC-DAD Method: Column: ODS V3, mobile phase: % 82 5 mM pH=2.5 KH2PO4 solution, % 18 acetonitrile, RTEA: 10,52 min, analysis time: 28.0 min, pressure: 135 bar, temperature: 25 0C.
Results:
As a result of HPLC analysis, 4.07 fold increase was observed at EA peak area after hydrolysis. Additionally, a decrase was observed in the peak area of compounds which have shorter retention time than EA (RTX1 =2,49 min TRX2 =3,28 min) and are likely to be ellagitannins.
Conclusion:
 As a result of this study, calibration curve was constructed three times by standard addition method and found to be y = 61,448x + 153,57 and r2=0,9986. Recovery value was determined as 89,20%.
In this study, in order to find optimum hydrolysis conditions; hydoylsis parameters such as temperature and time were varied, the amount of increase was determined and the developed HPLC method was validated.

Keywords: Ellagic acid, chestnut, High Performance Liquit Chromatography (HPLC), Accelerated Solvent Extraction (ASE).