Histidin-triptofan-ketoglutarat (HTK) çözeltisine eklenen N-asetil-L-karnitin'in donör uterustaki koruyucu etkileri'nin araştırılması
Investigation of the preservative effect of N-acetyl-carnitine added to hystidine-triptophane-ketogluterate (HTK) solution in donor uterus
Yazar: İLKAY BAŞER DEMİRCAN
Danışman: PROF. DR. CANDAN ÖZOĞUL
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Doku saklanması = Tissue preservation ; Histidin = Histidine ; Karnitin = Carnitine ; Ketoglutarate = Ketoglutarate ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; Organ nakli = Organ transplantation ; Triptofan = Tryptophan ; Uterus = Uterus ; Çözeltiler = Solutions

Özet:
ÖZETGünümüzde uterus faktörlü infertil olan kadınlarda uterus transplantasyonu fertilite için alternatif olarak görülmektedir.Organ transplantasyonlarında organın vücuttan çıkartılması, korunması ve nakledilmesi sırasında bazı değişiklikler meydana gelebilir. Donör organın alıcıya nakledilene kadar geçen sürede, canlılığını ve metabolizmasını korumak ve nakilden sonrada iskemi-reperfüzyon hasarını azaltmak için kullanılan bir takım koruma solüsyonları geliştirilmiştir. Transplantasyonda kullanılan çeşitli solüsyonlarla ilgili literatüre geçen çok sayıda araştırma sonuçlarında iskemi reperfüzyon hasarının tam olarak önlenemediği görülmektedir. Bu çalışmada, soğuk depolama solüsyonlarından Histidin Triptofan Ketoglutarat (HTK) içerisine eklenen antioksidan ajan acetyl L-carnitinin uterus dokusundaki potansiyel koruyucu etkisi araştırılmıştır.Bu amaçla histolojik analizler için hematoksilen-eosin (H&E) boyama, DNA fragmantasyonunu belirlemek için TUNEL yöntemi, biyokimyasal analizler için Lipid peroksidasyonu belirlemek amacıyla TBARS, CAT ve NOS değerleri ölçüldü. 24 adet wistar albino rat rastgele 4 gruba ayrıldı. 1.gruptaki ratların uterusları 4 saat 4oC' lik soğuk periyodunda HTK solüsyonunda, 2. gruptaki dokular 4 saat 4oC' de HTK + acetyl L-Carnitin solüsyonunda, 3. gruptaki dokular 24 saat 4oC' de HTK solüsyonunda, 4. gruptaki uteruslar 24 saat 4oC' de HTK + acetyl L-Carnitin solüsyonunda bekletildi.Histolojik incelemelerde 4 ve 24 saatlik soğuk periyodlarında yalın HTK solüsyonunda bekletilen uteruslarda iskemi reperfüzyon hasarı belirlendi. Subepitelial inflamasyon, intraepitelial inflamatuar hücreler, stromal ve intramuskuler fibroblastik granüloza dokusu ve endometrial bezlerde ve stromada apoptotik cisimcikler, yüzeyel ve derin stromada eozinofilik plazma hücreleri, kas bütünlüğünün bozulması zamana koşut olarak artan iskemik bulgulardı. HTK+acetyl L-carnitin solüsyonunda 4 saat bekletilen uteruslarda yüzey epiteli ve subepitelial bölge normal histolojik yapıdaydı. Ancak, endometrial bez hücrelerinde ve bez periferindeki stromada apoptotik görünümlü hücreler bu grupta da gözlendi. HTK+acetyl L-carnitin solüsyonunda 24 saat bekletilen dokularda diğer tüm gruplara göre subepitelial inflamasyonun daha az olduğu, kas bütünlüğünün korunduğu, fibroblastik granülosa alanlarının gelişmediği dikkati çekti, endometrial bez epitel hücrelerinde inflamatuar hücreler ve apoptotik hücreler daha az yaygın olarak izlendi. Ayrıca yüzeyel ve derin stromal bölgede plazma hücrelerinin yoğunluğu da diğer tüm gruplara göre daha azdı.Yalın HTK gruplarında TUNEL pozitif hücrelerin sayısı zamana koşut olarak artarken HTK solüsyonuna Acetyl L- carnitin eklenen deney gruplarında ise uzun dönem uygulamasında TUNEL pozitif hücre sayısının azaldığı belirlendi. Yalın HTK gruplarında ve 4 saatlik HTK solüsyonuna eklenen acetyl L-carnitin uygulamasında lipid peroksidasyonunun yüksek olduğu HTK+acetyl L-carnitinin uzun periyod uygulamasında ise azaldığı belirlendi. Yalın HTK grupları karşılaştırıldığında CAT değerleri arasındaki fark uzun dönemde CAT değerlerinin yükseldiği gözlendi. Ancak acetyl L-carnitin eklenen kısa ve uzun dönemler karşılaştırıldığında CAT değerleri kısa dönemde uzun döneme göre daha yüksek bulundu. NOS değerleri yalın HTK gruplarında zamana koşut olarak artış gösterdi. Acetyl L-carnitin uygulamasının kısa ve uzun periyodları karşılaştırıldığında ise NOS değerlerinin uzun dönemde arttığı gözlendi.Sonuç olarak, organ transplantasyonularında kullanılan yalın HTK solüsyonuna göre HTK solüsyonuna eklenen acetyl L-carnitinin uygulamasının uterusta koruyucu etkisinin daha fazla olduğu ve bu etkinin uzun dönemde daha baskın olduğu belirlendi.?

Abstract:
SUMMARYAt the present day, transplantation of the uterus in women with uterine factor infertility is seen as an alternative to fertility.Some changes may occur during the organ transplantations, removal of the organ from the body, preservation of the organ, and the transportation of the organ. In order to protect the viability and the metabolism of the donor organ and to reduce the ischemia-reperfusion injury after transplant, some protection solutions have been developed during the transferred period of the organ donor to the receiver. The results of a large number of the relevant literature studies about different solutions used in transplantation show that ischemia-reperfusion injury can not be prevented completely. In this study, the potential protective effect of antioxidant agent acetyl L-carnitine which is added into the solutions of cold storage histidine tryptophan ketoglutarate (HTK) on uterine tissue was investigated.For this purpose, hematoxylin-eosin (H&E) staining was made for the histological analysis, TUNEL method was used to determine DNA fragmentation, TBARS, CAT and NOS were measured in order to determine lipid peroxidation for biochemical analyzes. 24 Wistar albino rats were divided into 4 groups randomly. Rat uteruses of first group were stored 4 hours in 4 oC cold period of HTK solution, tissues in second group were stored 4 hours in 4 oC HTK+ acetyl L-Carnitine solution, tissues in third group were stored 24 hours in 4 oC HTK solution, uteruses in fourth group were stored 24 hours in 4 oC HTK+ acetyl L-Carnitine solution.In histological examination, Ischemia reperfusion injury was held in uteruses waited in HTK solution for 4 hour and 24 hour cold periods. Subepithelial inflammation, intraepithelial inflammatory cells, stromal and intramuscular fibroblastic granulosa tissue and apoptotic bodies in endometrial glands and stroma, eosinophilic plasma cells in superficial and deep stroma, impaired muscle integrity were ischemic findings increased in time. In the uteruses held 4 hours in HTK + Acetyl L-carnitine solution, surface epithelium and subepithelial region was in normal histological form. However, in the endometrial glandular cells and stroma of the gland peripheral apoptotic cells were observed in this group. In tissues held in HTK+acetyl L-carnitine solution for 24 hours subepithelial inflammation is less than all other groups, muscle integrity is maintained, the areas of fibroblastic granulosa were not occurred, , inflammatory cells and apoptotic cells in the epithelial cells of endometrial glands were seen as less common. In addition, the density of plasma cells in the superficial and deep stromal area was less than all other groups.In HTK groups, while the number of TUNEL positive cells increased parallel to time, it is determined that in experimental groups in which Acetyl L-carnitine is added to HTK solution the number of positive cells decrease in the long term application. It is determined that in HTK groups and in 4 hours HTK +Acetyl L-Carnitine groups lipid peroxidation was high while in the HTK+Acetyl-L-carnitine long term grup decreased. When HTK groups compared differences in CAT values, in the long term groups increase in CAT values was observed. However, when the short term acetyl L-carnitine added group and long term acetyl L-carnitine added group compared, CAT values were higher in the short term than long term. NOS values of HTK groups showed increase in parallel with time. It is observed that when the short and long period of Acetyl L-Carnitine application compared, NOS values increased in long term.As a result, it is determined that compared with HTK solutions used in organ transplantation, protective effect of Acetyl L-Carnitine added to HTK solutions in uterus is more and this protective effect is more dominant in long term.