Genetik mühendisliği teknikleri ile yem katkısı balık probiyotiklerinin oluşturulması
Construction of feed additive fish probiotics with genetic engineering techniques
Yazar: ÖZGEN ARZU ÇAM
Danışman: DOÇ. DR. MAKBULE BAYLAN
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Temel Bilimleri Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Balıkçılık Teknolojisi = Fisheries Technology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Yapılan bu tez çalışmasında, su ürünlerinde yemden kaliteli bir şekilde yararlanmak, canlı ağırlık kazancını artırmak ve bağışıklık sisteminin güçlenmesini sağlamak için yem katkısı balık probiyotiklerinin oluşturulmasında iyi bir kaynak olan β-Glukan kullanılmıştır. β-Glukan yulaf ve arpa gibi tahılların hücre duvarlarının önemli bir bileşenidir. 1,3-1,4-D-glukan 4-glukanhidrolaz (β-glukanaz; likenaz) (EC 3.2.1.73), β-glukanları hidrolize edebilme yeteneğine sahip bir enzimdir. Bu çalışmada, Streptococcus bovis genomuna ait β (1,3-1,4) glukanaz (likenaz) genini taşıyan rekombinant vektör pNW33N, elektroporasyon yoluyla Bacillus subtilis RSKK246 (CMCase +) suşuna aktarılmıştır. Daha sonra, likenan içeren LB-agar plakaları üzerinde elektrotransformasyon yapılmış ve congo kırmızısı ile boyanarak rekombinant B. subtilis RSKK246 kolonilerinin enzimatik aktivite bölgeleri gözlenmiştir. Ayrıca, rekombinant vektör pNW33N/Likenaz'dan elde edilen DNA hem BamHI hem de HindIII endonükleazları ile kesilerek likenaz geni (1800 bp) agaroz jel üzerinde gözlenmiştir. Diğer taraftan, rekombinant B. subtilis RSKK246 suşunun toplam hücre dışı proteinleri, vahşi tip suşu ile karşılaştırılmıştır. Son olarak, rekombinant enzimin 26 kDa'ya karşılık gelen protein bandı zimogram analizi ile gözlenmiştir. Bu sonuçlar, β (1,3-1,4) glukanaz geninin B. subtilis RSKK246 suşuna başarıyla eksprese edildiğini göstermektedir.

Abstract:
In this thesis, β-Glucan which is a good source of feed additive fish probiotics, was used in order to benefit from feed quality in fishery products, to increase live weight gain and to strengthen the immune system. β-Glukan is an important component of the cell walls of grains such as oats and barley. 1,3-1,4-β-D-glucan 4-glucanhydrolase (β-glucanase, lichenase) (EC 3.2.1.73) is an enzyme with the ability to hydrolyze β-glucans. In this study, recombinant vector pNW33N carrying the β (1,3-1,4) glucanase (lichenase) gene of Streptococcus bovis genome was transferred to Bacillus subtilis RSKK246 (CMCase +) strain by electroporation. Subsequently, electrotransformation waas performed on LB-agar plates containing lichenan and enzymatic activity regions of recombinant B. subtilis RSKK246 colonies were observed by staining with congo red. In addition, the DNA from the recombinant vector pNW33N/Lichenase was cut on both the BamHI and HindIII endonucleases and observed on the ligase gene (1800 bp) agarose gel. On the other hand, the total extracellular proteins of the recombinant protein band corresponding to the recombinant enzyme 26 kDa was observed by zymogram analysis. These results indicate that the β (1,3-1,4) glucanase gene has been successfully expressed to the B. subtilis strain RSKK246.