HCT116 Hücre hattına ait kolon kanser hücrelerine uygulanan b-AP15 ve VLX1570 ilaçlarının etkisi
Effect of b-AP15 ve VLX1570 drugs on HCT116 colon cancer cells line
Yazar: HAZAL YILMAZ
Danışman: DOÇ. DR. SAVAŞ İZZETOĞLU
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Ubikuitin-proteazom sistemi (UPS) ökaryotik hücrelerde protein yıkımının ana yoludur. Proteazom aktivitesinin birçok kanserde arttığı gösterilmiştir. Proteazom inhibisyonunun, çeşitli kanser modellerinde kanser büyümesini ve anjiyogenezini yavaşlattığı veya bloke ettiği gösterilmiştir. USP14 proteazomla ilişkili proteindir ve deubikuitinaz işlevi vardır. Bu çalışmada uygulaması yapılan ana ilaç hedefidir. Bu tezin amacı, kolon kanseri (HCT116) hücre hatlarında, deubikuitinaz USP14'ü hedef alan ubikuitin proteazom sisteminin yeni bir inhibitörü olan b-AP15'in ve türevi VLX1570 ilaçlarının etkileri ile sialik asit mekanizması arasında bir bağlantının olup olmadığını Western blot ve Analitik yöntemlerle ortaya koymaktır. Western blot sonuçlarına göre, hücre gruplarına (GFP ve K/O) ilaç uygulanmış örnekleri, kontrol gruplarına kıyasla daha koyu poli-ubikuitin bantlarına sahiptir. İlaç uygulaması yapılmış hücrelerde ilacın hedeflediği deubikutinazlar sayesinde proteazom işlevini azaltmış ve hücreleri apoptozise uyarmıştır. Analitik yöntemlerle elde edilen total sialik asit miktarları sonuçları karşılaştırılmıştır. b-AP15 ilacının 1 µl ve VLX1570 ilacının 0.5 µl'lik uygulamalarında en yoğun poliubikutinleşme görülmesi ve total sialik asit miktarlarına bakıldığında en az sialik asit miktarlarının yine b-AP15 ilacının 1 µl ve VLX1570 ilacının 0.5 µl'lik uygulamalarında gözlenmiş olması poliubikutinleşme ve sialik asit miktarı arasında bir uyum olduğunu düşündürür. Bu sebeple apoptozise uyarılan hücrelerde sialik asit mekanizmasının da etkilendiği gösterilmektedir. Bu tez çalışması bu alanda yapılmış ilk çalışmadır ve araştırılmak üzere yeni bir hipotez sunmaktadır

Abstract:
The ubiquitin proteasome system (UPS) is the main pathway of protein degredation in Eucaryotic cells. Proteasome activity has been shown to increase in many cancers. Proteasome inhibition has been shown to slow or block cancer growth and angiogenesis in various cancers. USP14 is a proteasome related protein and has deubiquitinase function that is main target of this study. The aim of this thesis is to investigate the effects of b-AP15 and its derivatives VLX1570, a novel inhibitor of ubiquitin proteasome system targeting deubiquitinase USP14 in colon cancer (HCT116) cell lines and to determine whether there is a connection between the mechanism of sialic acid and inhibition of USP14 using by Western blot and Analytical methods. According to the Western blot results, the drug treated samples of the cell groups (GFP and K / O) had darker poly-ubiquitin bands than their control groups. It reduced proteasome function and stimulated cells to apoptosis owing to the drug-targeted deubiqutinases in drug-treated cells. Total sialic acid levels obtained by analytical methods were compared. The lowest concentrations of sialic acid were observed in 1 µl of b-AP15 and 0.5 µl of VLX1570 and also the highest poli-ubiquitinations are observed in 0.5 µl of b-AP15 and 0.5 µl of VLX1570, this results suggest a coherence between the amount. Therefore, it is shown that the mechanism of sialic acid is also affected in apoptosis-induced cells. This thesis is the first study in this field and presents a new hypothesis to be investigated.