Hepatoselüler karsinom sürecinde  erken büyüme yanıtı 1 aracılıklı sinyal iletiminin rolü
The role of  early growth response 1 mediated signaling pathways in hepatocarcinogenesis
Yazar: EVİN İŞCAN
Danışman: PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Genetik Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Büyüme maddeleri = Growth substances ; Heparin = Heparin ; Hepatositler = Hepatocytes ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Matriks metalloproteinaz 2 = Matrix metalloproteinase 2 ; Matriks metalloproteinaz 9 = Matrix metalloproteinase 9 ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sinyal nakli = Signal transduction

Özet:
Hepatoselüler Karsinom (HCC) dünyada en sık görülen pirmer karaciğer kanseridir ve kanser ile ilişkili ölümlerde 3. sırada yer almaktadır. Hepatit B, Hepatit C viral enfeksiyonları HCC'nin %75'inden sorumludur. Toksinler ve alkol ise HCC ile ilişkili diğer etiyolojik faktörleri oluşturmaktadır. HCC'de erken dönemde teşhis konulması durumunda, transplantason veya cerrahi yolla tümör bölgesinin alınması gibi yöntemlerle hastaların sağkalımı artırılabilmektedir. Ancak geç evre HCC'ler için herhangi bir tedavi yöntemi bulunmamaktadır. 
Hepatosit Büyüme Faktörü (HGF) HGF/c-Met sinyal yolağı HCC'de hücre invazyonu, anjiogenez, metastaz süreçlerini düzenlemektedir. Ancak bu süreçlerde rol oynayan moleküller çok iyi tanımlanmamıştır. Bu mekanizmanın tanımlanması, yeni tedavi hedeflerinin belirlenmesi açısından son derece önem taşımaktadır. EGR1 bir transkripsyon faktörü olup, birçok sinyal ileti yolağı tarafından ekspresyonu düzenlenmektedir.  EGR1'in apoptozu, hücre proliferasyonunu, hücre invazyonunu, hücre migrasyonunu ve anjiyogenez süreçlerini düzenlediği birçok kanser tipinde gösterilmiştir.  Ancak HCC'nin gelişiminde EGR1'in rolü tanımlanmamıştır.
Çalışmamızda, HCC hücrelerinde EGR1 ekspresyonu western blot (WB) yöntemi ile, primer karaciğer dokularında (normal karaciğer, sirotik karaciğer ve HCC) EGR1 ekspresyonu immünhistokimya (IHC) yöntemi ile incelendi. EGR1'in  sessizleştirildiği ve overeksprese edildiği HCC hücrelerinde, EGR1'in HCC hücrelerinin invazyonuna, migrasyonuna ve proliferasyonuna olan etkisi Boyden Chamber ve Roche xCELLigence sistemleri ile incelendi. HCC hücrelerinde EGR1 ekspresyonunun düzenlenmesinde HGF/cMet yolağının rolünün belirlenmesinde ve EGR1 aracılıklı biyolojik yanıtların hangi mekanizmalar ile gerçekleştirdiklerinin belirlenmesi için WB ve jelatin-zimografi yöntemleri kullanıldı.
Çalışmalarımız,  incelemeye alınan HCC hücre dizilerinin tamamında EGR1 ekspresyonunun pozitif olduğunu,  normal karaciğer dokularında EGR1 ekspresyonu olmadığını,  sirotik dokuların %28'inde ve HCC dokularının ise %43'ünde EGR1 ekspresyonunun yüksek olduğunu göstermiştir.   Bu çalışma kapsamında ayrıca HCC hücre dizilerinde EGR1 ekspresyonunun HGF/c-Met sinyal yolağı üzerinden düzenlendiği, ve  EGR1 ekspresyonundaki artışın HCC hücrelerinin daha invazif karakter kazanmasını MMP2 ve 9 aktivasyonunu ve HPA-1 ekspresyonunu artırarak  sağladığını literatürde ilk kez tanımlanmıştır. 
Bu sonuçlar EGR1 overekspresyonunun HCC gelişim ve ilerlemesine katıldığını ve HCC tedavisinde bir tedavi hedefi olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common form of primary liver cancer and the third leading cause of cancer-related deaths worldwide. Hepatitis B and Hepatitis C virus infection accounts for 75% of all HCCs. Toxins and alcohols are the other etiologic factors that are associated with HCC. Although liver transplantation and surgical resection improves overall survival, there is still no effective treatment for patients with advanced HCC.
Hepatocyte Growth Factor (HGF) /c-Met signaling pathway regulates cell invasion, cell migration, angiogenesis and metastasis in HCC. However, the key players of these pathways have not been well defined. The determination of these molecules are important for the development of new therapeutic targets in HCC. Early Growth Response 1 (EGR1) is a transcription factor that is regulated through several signaling pathways. It has been shown that EGR1 regulates apoptosis, cell proliferation, invasion and cell migration as well as angiogenesis in several types of cancers. However the role of EGR1 in the development of HCC has not been determined.
In this study, we determined EGR1 expression in HCC cell lines by Western Blotting (WB), and by Immunhistochemistry (IHC) techniques in primary liver tissues (normal liver, cirrhotic liver and HCC). We examined the effects of  EGR1 in invasion, migration and proliferation of HCC cell lines in EGR1 silenced and overexpressed clones by using Boyden Chamber and Roche xCELLigence System. The role of the HGF/c-Met signaling pathway in the regulation of EGR1 expression and the mechanisms that regulate EGR1 mediated biological responses were investigated by WB and gelatin zymography in HCC cells. 
Our study showed that EGR1 expression was positive in all tested HCC cell lines. We also determined that there was no EGR1 expression in normal liver tissues, whereas 28% of cirrhotic liver tissues and 43% of HCC tissues were positive for EGR1 expression. In addition, the regulatory roles of HGF/c-Met signaling in the invasive behaviours of HCC cells via EGR1 induced MMP-2, MMP-9 activation and HPA-1 expression have been determined for the first time.
Our results support the involvement of EGR-1 overexpression in the development and progression of HCC and could be a potential target for HCC treatment.