Viniferinin tek başına ve kemoterapötik bir ajan ile birlikte HEPG2 hücreleri üzerine antioksidan etkisinin incelenmesi
The investigation of antioxidant effect of viniferin, alone and with chemotherapeutic agent on HEPG2 cells
Yazar: SEDA TARHAN
Danışman: DOÇ. DR. EMİNE SÜTKEN DEMİRKAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Glütatyon = Glutathione ; Hücre kültürü = Cell culture ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Lipid peroksidasyonu = Lipid peroxidation ; Süperoksit dismutaz = Superoxide dismutase ; Vincristine = Vincristine

Özet:
Bu çalışmada ?-viniferinin tek başına ve vinkristin sülfat kombine uygulamasının HepG2 hücrelerinde lipid peroksidasyonu (LPO), süperoksit dismutaz (SOD) ve redükte glutatyon (GSH) düzeylerine doğrudan ve H2O2 ile dışsal kaynaklı oluşturulmuş oksidatif stres üzerine koruyucu etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmamız birinci aşamada, maddelerin düşük ve yüksek dozlarından oluşturulmuş dVNF, yVNF, dVCR, yVCR, dETO, yETO, d(VCR+VNF), y(VCR+VNF) grupları ile Kontrol grubundan ve ikinci aşamada bu gruplara ek olarak dışsal kaynaklı oksidatif strese karşı maddelerin koruyucu etkilerini gözlemleyebilmek için kullanılan H2O2-Kontrol grubundan oluşturulmuştur. 
Çalışmamızda sıvı azot tankından çıkarılan hücreler besiyerinde çoğaltılmıştır. Hücreler yeterli sayıya ulaştıktan sonra maddelerin düşük ve yüksek dozları ile 3, 6 ve 24 saat inkübe edilmişlerdir. Antioksidan özelliklerini incelediğimiz maddelerin LPO ve SOD ölçümleri deney kitleri ile kolorometrik olarak ölçülmüş sonuçlar absorbansa karşı değerlendirilmiştir. GSH ölçümleri ise flourometrik deney kiti ile ölçülerek sonuçlar floresans ışımasına karşı değerlendirilmiştir.
Sonuç olarak, birinci aşamada vinkristin sülfat zamana ve doza bağımlı olarak LPO SOD ve GSH değerleri üzerinde kontrole göre anlamlı bir etki göstermemiştir. ?-viniferin ile kombine uyguladığımız ise LPO ve GSH düzeylerinde kontrole göre anlamlı bir etki göstermemiş ancak SOD aktivasyonunu kontrole göre anlamlı olarak azaltmıştır (p<0,05). Elde ettiğimiz verilere göre, zamana bağımlı olarak kombine uygulamanın HepG2 hücrelerinde SOD aktivasyonunu azaltarak hücresel oksidatif stresi arttırabileceğini ve hepatoma  hücrelerinde hasar yaratacağını düşünüyoruz.
Uygulanan maddelerin koruyucu etkilerine baktığımızda ise düşük doz kombine uygulamanın tüm parametrelerde artışa yol açarken, yüksek doz kombine uygulamanın H2O2 ile uyarılmış LPO düzeylerini etkilemeden SOD aktivasyonunu ve GSH düzeylerini arttırması kombinenin HepG2 hücreleri üzerinde dışsal oksidatif strese karşı koruyucu etkisi olduğunu göstermektedir.

Abstract:
The aim of this study is to investigate protective effects of ?-viniferin and vincristine as alone and combinated administration on lipid peroxidation (LPO), superoxide dismutase (SOD) activation and reduced gluthatione (GSH) levels in HepG2 cells. 
In the first stage of study, the groups dVNF, yVNF, dVCR, yVCR, dETO, yETO, d(VCR+VNF), y(VCR+VNF) and Control group were formed with low and high doses of substances. Second range of study, in addition to these groups, H2O2-Control group was formed to observe the protective effects of substances against oxidative stress induced exogenous agents.
In our study, cells were extracted from liquid nitrogen tank duplicated in medium. After reaching the appropriate number, the cells were incubated with low and high doses of substances for 3, 6 and 24 hours.  The substances we have investigated antioxidant properties of LPO and SOD levels were measured as colorimetric with experimental kits and the results were evaluated versus absorbence. GSH levels were measured by fuorometric experimental kit and its results evaluated versus fluorescence sparkle. 
As a result, in the first stage, vincristine sulfate as a time and dose-dependent did not show a significant effect on the LPO, SOD and GSH value compared to the control. When it was applied in combination with ?-viniferin, LPO and GSH levels did not show a significant effect compared to the control, but the activation of SOD significantly reduced compared to the control. According to the our data, we have obtained as a time-dependent the combined therapy in HepG2 cells by reducing activation of SOD could increase cellular oxidative stress and will create damage to the hepatoma cells.
İn the second stage, low dose combination group causes an increase in all parametres while, combination group administrated high dose increases SOD activation and GSH levels without the fact that it does not affect H2O2- induced LPO levels show that combinated administration has a protective effect on HepG2 cells against the exogenous oxidative stress condition.