İnsan kolanjiokarsinoma hücre hattında verteporfin'nin epitelyal mezenkimal geçiş (EMT) üzerine etkisi
The effect of verteporfin on epithelial mesenchymal transition in human cholangiocarcinoma cell line
Yazar: ÇİĞDEM UÇAR
Danışman: PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Hücre dizisi = Cell line ; Kolanjiokarsinoma = Cholangiocarcinoma ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Verteporfin = Verteporfin

Özet:
Kolanjiokarsinoma (KK), kolanjiyosit farklılaşma belirteçlerine sahip olan epitelyal tümörlerdir. KK'nin insidans ve mortalite oranı her geçen gün artmaktadır ve ikinci en sık rastlanan primer hepatobiliyer kanser türüdür. Verteporfin, karbon atomlarına bağlı dört modifiye pirol biriminden oluşan aromatik heterosiklik, siklik moleküller içeren porfirin ailesine ait bir bileşiktir. Verteporfin neovasküler makula dejenerasyonu ve birçok insan tümörünün tedavisinde bir fotosensitizer olarak yaygın kullanıma sahiptir. 2000 yılında da Verteporfin FDA onayı almıştır. İn vitro ve in vivo yöntemlerle yapılan pek çok çalışma ile Verteporfin'nin antikanser etkisi araştırılmıştır. Epitelyal Mezenkimal Geçiş (EMT); epitel hücrelerinin birtakım değişiklikler geçirmesi sonucunda epitel özelliklerini kaybederek mezenkimal özellikler kazandıkları önemli bir değişim sürecidir. EMT sonucunda kanser hastalığının hayati tehlike oluşturan belirteçleri ortaya çıkmaktadır.
Bu çalışmada, in vitro ortamda TFK-1 hücrelerine 2 μM, 5 μM, 10 μM, 12 μM ve 15 μM konsantrasyonlarında Verteporfin uygulandı ve IC50 değeri 13 μM olarak bulundu. Migrasyon deneyi yapılarak kontrol ve 13 μM konsantrasyonunda Verteporfin verilen gruplardaki yara genişlikleri, 24 satte bir ölçüldü. Deney sonucunda, 13 μM Verteporfin verilen grupta kontrole göre migrasyonun inhibe edildiği tespit edildi. Hücre döngüsü deneyinde Verteporfin'nin G0/G1 evresini arttırdığı, S ve G2/M evresini azalttığı görüldü. Ayrıca Verteporfin'nin EMT üzerine etkisi araştırldı. TFK-1 hücreleri 13 μM Verteporfin ile 72 saat inkübe edildi ve Western Blot yöntemiyle E-kaderin, N-kaderin ve Vimentin protein seviyeleri incelendi. Verteporfin'nin 13 μM konsantrasyonuyla muamele edilen TFK-1 hücrelerinde, kontrole göre E-kaderin, N-Kaderin ve Vimentin proteinlerinin seviyesinde azalma  gözlemlendi. Sonuçlar istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0,05).
Sonuç olarak Verteporfin'nin, TFK-1 hücrelerinde  migrasyonunu engellediğini ve hücreleri G0/G1 evresinde tutuğunu gördük . Ancak bunun yanında Verteporfin'nin  EMT üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olduğunu gördük. Bu durum, Verteporfin'nin kullanımı sırasında dikkat edilmesi gerektiğini düşündürmektedir. Ayrıca bu konuda daha ayrıntılı çalışmalar yapılmasının faydalı olacağını öngörmekteyiz.

Anahtar Kelimeler: Kolanjiokarsinoma, EMT, Verteporfin

Abstract:
Cholangiocarcinoma (CC) are epithelial tumors with features of cholangiocyte differentiation. The incidence and mortality rate of CC is increasing day by day and the second most common primer is hepatobiliary cancer. Verteporfin is a compound of the porphyrin family which contains aromatic heterocyclic, cyclic molecules consisting of four modified pyrrole units bound to carbon atoms. Verteporfin has widespread use as a photosensitizers in the treatment of neovascular macular degeneration and many human tumors. Verteporfin was granted FDA approval in 2000. Several in vitro and in vivo studies have been examined the anticancer effect of Verteporfin. Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT); is an important change process in which epithelial cells lose mesenchymal properties by losing epithelial properties as a result of a number of changes. As a result of EMT, life-threatening markers of cancer are seen. 
In this study, TFK-1 cells were treated with 2 μM, 5 μM, 10 μM, 12 μM and 15 μM Verteporfin in vitro and the IC50 value was also found to be 13 μM. Wound widths in the control and Verteporfin groups at 13 μM concentration were measured at specified times by the migration experiment. As a result, migration was inhibited in the 13 μM Verteporfin group compared to the control. In the cell cycle experiment, Verteporfin increased the G0 / G1 phase and decreased the S and G2 / M phases. In addition, the effect of Verteporfin on EMT was investigated. TFK-1 cells were incubated with 13 μM Verteporfin for 72 hours and E-cadherin, N-cadherin and Vimentin protein levels were examined by Western Blot method. In TFK-1 cells, a decrease in the level of E-cadherin, N-cadherin and Vimentin proteins relative to control was observed. The results were statistically significant (p<0.05).

In conclusion, we found that Verteporfin inhibited migration in TFK-1 cells and held cells in G0 / G1 phase. However, we found that Verteporfin had a negative effect on EMT. This suggests that attention should be paid to the use of Verteporfin. We also anticipate that further studies in this regard will be useful.

Key Words: Cholangiocarcinoma, EMT, Verteporfin