Medikament içerikli gutta perka koniler ve bazı kanal içi medikamentlerin antimikrobiyal etkinlikleri, sitotoksisiteleri ve iyon salımlarının in vitro olarak değerlendirilmesi
In vitro antimicrobial effects, cytotoxicity and ion release of medicated gutta percha points and root canal medicaments
Yazar: BURCU ATİLA PEKTAŞ
Danışman: PROF. DR. ÖMER GÖRDUYSUS
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Endodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Biyoaktif camlar = Bioactive glass ; Dental materyaller = Dental materials ; Dentin = Dentin ; Kalsiyum hidroksit = Calcium hydroxide ; Klorheksidin = Chlorhexidine ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Mikroorganizmalar = Microorganisms ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; İyon = Ion

Özet:
Pektaş Atila, B. Medikament içerikli gutta perka koniler ve bazı kanal içi medikamentlerin antimikrobiyal etkinlikleri, sitotoksisiteleri ve iyon salımlarının in vitro olarak değerlendirilmesi. Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Endodonti Programı Doktora Tezi, Ankara, 2012. Bu çalışma Activ Point (AP) (Roeko, Langenau, Almanya), Calcium Hydroxide Plus Point (CHPP), (Roeko, Langenau, Almanya), kalsiyum hidroksit (Ca(OH)2), %1 klorheksidin (CHX) jel ve biyoaktif camın (S53P4) antimikrobiyal etkinliklerini, sitotoksisitelerini ve iyon salımlarını değerlendirmeyi amaçlamıştır. Medikamentlerin antimikrobiyal etkinliklerini değerlendirmek için tek köklü insan dişleri Enterecoccus faecalis (ATCC 29212) ve Streptococcus mutans (RSHM 676) ile enfekte edildi. Medikamentlerle tedavi sonrasında kök kanalından örnekler steril kağıt koniler yardımıyla alındı. Üreme miktarı koloni oluşturan ünite (CFU) olarak hesaplandı. İnsan gingival fibroblast hücreleri ex vivo olarak kültüre edildi. Medikamentlerden elde edilen özütler gingival fibroblastlara uygulanarak 24 saat boyunca inkübe edildi. Medikamentlerin hücre canlılığına etkisi suda çözülebilir tetrazolium tuzunu (WST-1) içeren test yöntemiyle değerlendirildi. Medikamentlerin oluşturduğu apoptoz terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP ile DNA kırıklarının işaretlenmesi (TUNEL) testi ile değerlendirildi ve apoptoz miktarı enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) yöntemi ile belirlendi. Farklı taşıyıcı sistemleri içeren Ca(OH)2 ve klorheksidin içerikli medikamentlerin belirli sürelerle iyon salımları ultraviyole görünür bölge spektrofotometrisi ile karşılaştırıldı. Verilerin istatistiksel analizinde; Kruskal Wallis testi, Conover'in parametrik olmayan çoklu karşılaştırma testi ve Mann Whitney U testi kullanıldı. CHX jel (p<0,001 and p<0,001), AP (p=0,003 and p=0,002) ve Ca(OH)2 (p=0,010 and p=0,005) sırasıyla CHPP ve biyoaktif cam ile karşılaştırıldığında E. faecalis` e karşı daha etkili bulundu. Diğer taraftan Ca(OH)2 ile karşılaştırıldığında CHX jel (p<0,001), AP (p<0,001) ve biyoaktif cam (p=0,014) S. mutans`a karşı belirgin şekilde daha az koloni ürettiler. CHPP pozitif kontrolle benzer sonuçlar vererek her iki mikroorganizmaya karşı etkisiz bulundu. Sitotoksisiteleri karşılaştırıldığında biyoaktif cam (p=0,171) ve CHPP (p=0,031) kontrol grubuyla benzer sonuç verirken, CHX jel en yüksek toksisiteyi gösterdi. TUNEL testinde tüm tedavi gruplarında apoptotik hücreler tespit edilirken ELISA testi sonucunda pozitif kontrol ile karşılaştırıldığında medikamentlerin apoptozu arttırmadığı belirlendi CHPP kalsiyum hidroksite; CHX jel AP`e göre yüzdece daha fazla salım miktarı gösterdi. Sonuç olarak alkalin pH etkili medikamentlerle karşılaştırıldığında klorheksidin içerikli medikamentlerin antimikrobiyal etkinliği daha yüksek bulundu. Antimikrobiyal etkinliği yüksek medikamentler aynı zamanda yüksek sitotoksik özellik gösterdi.Anahtar kelimeler: Antimikrobiyal etkinlik, enfekte dentin, biyouyumluluk, fibroblast kültürleri, iyon salımı, kanal içi medikamentler.

Abstract:
Pektaş Atila, B. In vitro antimicrobial effects, cytotoxicity and ion release of medicated gutta percha points and root canal medicaments. Hacettepe University Institute of Health Sciences, Ph.D. Thesis in Endodontics, Ankara, 2012. This study aims to compare the antimicrobial activities, cytotoxicity, and ion release of Activ Point (AP) (Roeko, Langenau, Germany), Calcium Hydroxide Plus Point (CHPP) (Roeko, Langenau, Germany), calcium hydroxide(Ca(OH)2), 1%chlorhexidine (CHX) gel and bioactive glass (S53P4). In order to evaluate antimicrobial activity single rooted human teeth were infected with Enterecoccus faecalis (ATCC 29212) and Streptococcus mutans (RSHM 676). Sterile paper points were utilized to take samples from root canals after treatment and microbial growth was interpreted as colony forming units (CFU). Human gingival fibroblasts were cultured ex vivo. The fibroblasts which were exposed to extracts of medicaments were incubated for 24 hours. The effect of medicaments on cell viability was estimated by a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) assay. Apoptosis, which was formed by medicaments, was assessed by terminal deoxynucleotidyl transferase nick-end labeling (TUNEL) assay, and quantified by cell death enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Ion release of medicaments with substances of calcium hydroxide and chlorhexidine which include different vehicle systems were compared at different time intervals by using ultraviolet-visible spectrophotometry. Results were tested statistically by using Kruskal Wallis, Conover?s nonparametric multiple comparison tests and Mann Whitney U tests. CHX gel (p<0,001 and p<0,001), AP (p=0,003 and p=0,002) and Ca(OH)2 (p=0,010 and p=0,005) were significantly more effective against E. faecalis than that of CHPP and bioactive glass, respectively. On the other hand compared to Ca(OH)2, CHX gel (p<0,001), AP (p<0,001) and bioactive glass (p=0,014) produced significantly lower colony counts of S. mutans. When compared to positive control, treatment with CHPP (p=0.085 and p=0.066) produced no significantly lower colony counts of E. faecalis and S. mutans, respectively. Compared to the cytotoxic effects of medicaments, while bioactive glass (p=0,171) and CHPP (p=0,031) did not reduce cell viability as positive control, CHX gel showed highest cytotoxicity. Although apoptosis was identified in all treatment groups by TUNEL assay, medicaments did not increase apoptosis when compared with positive control as a result of ELISA assay. CHPP and CHX gel showed more ion release than calcium hydroxide and AP in percentage respectively. As a result compared with the medicaments having an antimicrobial effect because of their alkaline pH, the medicaments containing chlorhexidine were more effective against both E. faecalis and S. mutans. The medicaments which had high antimicrobial effect also showed high cytototoxic effect.Keywords: Antimicrobial effect, infected dentin, biocompatibility, fibroblasts cell culture, ion release, intracanal medicament