Erkek infertilitesi tanısı almış bireylerin spermlerinde otofaji belirteçlerinin araştırılması
Investigation of autophagy markers in the sperms of male infertility diagnosed individuals
Yazar: NAZLI KARAGÖZ CAN
Danışman: PROF. DR. KEMAL ERGİN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Otofaji = Autophagy ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
"ERKEK İNFERTİLİTESİ TANISI ALMIŞ BİREYLERİN SPERMLERİNDE OTOFAJİ BELİRTEÇLERİNİN ARAŞTIRILMASI"

CAN K. N. Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Histoloji ve Embriyoloji Programı Doktora Tezi, Aydın, 2018.
İnfertilite sadece fizyolojik olarak değil, psikolojik ve sosyolojik yönleri ile de ele alınması gereken önemli bir sağlık sorunudur. İnfertilite  günümüzde üreme çağındaki çiftlerin % 10- 15' ini etkilemektedir. Erkek faktörüne bağlı infertilite ise bu oranın yaklaşık olarak  %30-40'ını oluşturmaktadır. Normal erkek fertilitesinin korunması morfolojisi normal, yeterli ve hareketli sperm üretimine dayanır. İnsan spermatozoası, otofaji aktivasyonu için gerekli olan moleküler mekanizmaya sahiptir. Bu mekanizma, insan sperm fizyolojisinde canlılığı ve motiliteyi korumada görev almaktadır. Otofaji işlevselliğini yitirmiş olan proteinlerin, sitoplazmik yapıların ve organellerin parçalanmasından sorumlu fizyolojik bir süreçtir. Otofaji mekanizmasında meydana gelebilecek bir bozulma hücre canlılığını olumsuz yönde etkilemektedir. Bu bilgiler ışığı altında biz yapmış olduğumuz bu çalışmada 4 grup oluşturduk. Grup1: Kontrol Grubu: Hiçbir infertilite rahatsızlığı bulunmayan Dünya Sağlık Örgütü (WHO 2010) semen parametrelerine göre normal kabul edilen hastalar, Grup:2 Varikosel Grubu: Varikosel teşhisi almış ve diğer infertilite nedeni olan hastalıkları bulunmayan hastalar ve Grup:3 Enfeksiyon Grubu:  Orşit-Epididimit teşhisi almış ve diğer infertilite nedeni olan hastalıkları bulunmayan hastalar Grup 4: Açıklanamayan İnfertilite Grubu: Açıklanamayan İnfertilite teşhisi almış ve diğer infertilite nedeni olan hastalıkları bulunmayan hastalar. Her bir gruba dahil edilen hastaların sperm parametreleri WHO 2010 kriterlerine göre değerlendirildi. Ayrıca her bir hasta grubundan alınan örneklere yayma preparat ile LC3A/B, Beclin-1, p62, ATG5, ATG12 ve ATG16 antikorları ile immunohistokimyasal olarak  boyama  yapıldı. Her bir hasta grubunadan alınan örneklere LC3A/B ve Beclin-1 antikorları ile western blot analizi yapıldı ve her bir hasta grubu Transmisyon Elektron Mikroskobu (TEM) kullanılarak  ultrasitrüktürel olarak incelendi.
Elde ettiğimiz sonuçlar doğrultusunda normal insan spermatozoasında işlevsel olarak var olduğu bilinen otofaji belirteçlerinin hasta gruplarında  kontrol grubuna göre anlamlı derecede arttığını gözlemledik. Yapmış olduğumuz western blot analizi ve ultrastrüktürel incelemelerde bu elde ettiğimiz verileri destektemekteydi. Bu sonuçlarda bize varikosel, orşit-epididmit gibi rahatsızlıkların otofaji mekanizmasında bozulmaya neden olabileceğini göstermiştir. Bu mekanizmanın açığa çıkarılması yeni tedavi seçenekleri oluşturulmasının kapısını açacaktır. Ayrıca yapılan tüm araştırmalara rağmen açıklanamayan erkek infertilitesi teşhisi konmuş vakalarda da otofaji belirteçlerindeki bu artışın, yeni teşhis ve tedavi alternatiflerinin geliştirilmesi yönünden bilime katkı sağlayacağı kanaatindeyiz.

Anahtar Kelimeler: İnfertilite, sperm, otofaji.

Abstract:
"INVESTIGATION OF AUTOPHAGY MARKERS IN THE SPERMS OF MALE INFERTILITY DIAGNOSED INDIVIDUALS"

CAN K. N. Adnan Menderes University Institute of Health Sciences Histology and Embryology Program PhD Thesis, Aydın, 2018.
Infertility is an important health problem not only physiologically but also psychologically and sociologically. Infertility affects 10-15% of the reproductive couples today. Infertility due to male factor accounts for approximately 30-40% of this ratio. The preservation of normal male fertility is based on the production of morphologically normal, adequate and mobile sperm. Human spermatozoa has the molecular mechanism necessary for autophagy activation. This mechanism is responsible for maintaining vitality and motility in human sperm physiology. Autophagy is a physiological process responsible for the disruption of proteins, cytoplasmic structures and organelles that have lost their functionality. A disruption that may occur in the autophagy mechanism affects the cell viability negatively. In this study we have created 4 groups:
Group 1: Control Group: Patients without any infertility disorders who are considered normal according to the World Health Organization (WHO 2010) semen parameters.
Group 2: Varicocele Group: Patients diagnosed with varicocele but without other infertile diseases.
Group 3: Infection Group: Patients diagnosed with Orchitis- epididymitis but without other infertile diseases.
Group 4: Unexplained Infertility Group: The group in which the patients were diagnosed with an unexplained infertility diagnosis (without other infertile disease).
The sperm parameters of patients included in each groups were assessed according to the WHO 2010 criteria. Immunohistochemical staining was also performed with LC3A/B, Beclin-1, p62, ATG5, ATG12 and ATG16 antibodies in the specimens obtained from each patient group. Samples from each patient groups were subjected to western blot with LC3A/B and Beclin-1 antibodies. In addition, each patient group was examined ultrastructurally using TEM microscopy. We observed that autophagic markers known to be functionally present in normal human spermatozoa increased significantly in patient groups compared to the control group. The western blot and ultrastructural studies that we have done have also supported the data we have obtained. These results have shown us that such disorders as varicocele, orchitis-epididitis may cause deterioration in autophagy mechanism. The discover of this mechanism will open the door to the creation of new treatment options. In addition, we believe that this increase in autophagic markers will shed new light on the development of new diagnostic and therapeutic alternatives for unexplained infertility cases.

Key Words: Infertility, Sperm, Autophagy.