Farelerde liposakkarit ile oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde piropitoz ve nekropitoz inhibitörü nekrosülfonamidin etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of pyroptosis and necropitosis inhibitor necrosulphonamide in the model of liposarcarid-induced inflammatory hyperalgesia in mice
Yazar: BEYZA ÖZGEN
Danışman: PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı / Farmakoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Hiperestezi = Hyperesthesia ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Nekrosülfonamid = Necrosulphonamide ; Piropitoz = Pyroptosis

Özet:
Bu tezde, lipopolisakkarit (LPS) ile farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde gasdermin D (GSDMD) ve karışık kökenli kinaz benzeri psöodokinaz (mixed lineage kinase domain-like pseudokinase; MLKL) inhibitörü nekrosülfonamit (NSA)'nın santral sinir sistemi (SSS)'de piropitoz ve nekropitoz üzerindeki etkisi demiyelinizasyon ve remiyelinizasyon ile ilişkilendirilerek araştırılmıştır. Deneyler 8 gruba ayrılan fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir: (1) Serum fizyolojik (SF), (2) LPS, (3) SF ve dimetil sülfoksit, (4) SF ve NSA (0.01 mg/kg), (5) LPS ve NSA (0.001 mg/kg), (6) LPS ve NSA (0.01 mg/kg), (7) LPS ve NSA (0.1 mg/kg) ile (8) LPS ve NSA (1 mg/kg). NSA (10 ml/kg) SF (10 ml/kg) veya LPS (10 mg/kg; 10 ml/kg) ile aynı anda intraperitoneal yoldan uygulanmıştır. Farelerin termal uyarıya tepki verme süreleri SF veya LPS enjeksiyonundan 6 saat sonra değerlendirilmiştir. Deneyler sonunda öldürülen farelerin beyin ve omurilik dokuları alınmıştır. Dokularda β-tübülin, kaspaz-11 p20, p30-GSDMD, interlökin (interleukin; IL)-1β, high-mobility-group-box (HMGB) 1, reseptör ile etkileşen serin/treonin protein kinaz (receptor-interacting serine/threonine-protein kinase; RIPK) 1, fosforile RIPK1, RIPK3, fosforile RIPK3, MLKL, fosforile MLKL, semaforin (SEMA) 3A ve miyelin proteolipit protein (PLP) ekspresyonu immunoblotting yöntemiyle ölçülmüştür. Farelerin termal uyarıya yanıt verme sürelerinde LPS'nin neden olduğu azalma 0.01, 0.1 ve 1 mg/kg dozlarda NSA ile önlenmiştir. NSA etkili olan en düşük dozunda (0.01 mg/kg) uygulandığında, LPS'nin neden olduğu kaspaz-11 p20, p30-GSDMD, IL-1β, HMGB1 ve SEMA3A ekspresyonu ile RIPK1, RIPK3 ve MLKL etkinliğindeki artmanın yanı sıra, miyelin PLP ekspresyonundaki azalma önlenmiştir. Bu bulgular, NSA'nın, LPS ile oluşan enflamatuvar hiperaljezi üzerindeki etkisine, SSS'de kaspaz11/GSDMD aracılıklı piropitoz, RIPK1/RIPK3/MLKL nekrozomu aracılıklı nekropitoz ve SEMA3A ekspresyonundaki azalmanın yanı sıra, miyelin PLP ekspresyonundaki artmanın katkıda bulunabileceğini düşündürmüştür.

Abstract:
In this thesis, the effect of gasdermin D (GSDMD) and mixed lineage kinase domain-like pseudokinase (MLKL) inhibitor, necrosulfonamide (NSA), on pyroptosis and necroptosis concerning demyelination and remyelination in the central nervous system (CNS) was investigated in lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory hyperalgesia model in mice. Mice were divided into 8 groups: (1) saline, (2) LPS, (3) saline and dimethyl sulfoxide, (4) saline and NSA (0.01 mg/kg), (5) LPS and NSA (0.001 mg/kg), (6) LPS and NSA (0.01 mg/kg), (7) LPS and NSA (0.1 mg/kg), and (8) LPS and NSA (1 mg/kg). NSA (10 ml/kg) administered simultaneously with saline (10 ml/kg) or LPS (10 mg/kg) intraperitoneally. Reaction time to thermal stimuli was evaluated in mice that received either saline or LPS after 6 hours. Mice were killed at the end of the experiments, and brain and spinal cord tissues were collected from all animals. Tissues were used for the measurement of β-tubulin, caspase-11 p20, p30-GSDMD, interleukin (IL)-1β, high-mobility-group-box (HMGB1), receptor-interacting serine/threonineprotein kinase (RIPK) 1, phosphorylated RIPK1, RIPK3, phosphorylated RIPK3, MLKL, phosphorylated MLKL, semaphorin (SEMA), and myelin proteolipid protein (PLP) expression by using the immunoblotting method. It was observed that LPS-induce decrease in the response time of mice to thermal stimulation was prevented with NSA at doses of 0.01, 0.1, and 1 mg/kg. When NSA was injected at the lowest effective dose (0.01 mg/kg), it prevented the increase induced by LPS in expression of caspase-11 p20, p30-GSDMD, IL-1β, HMGB1, and SEMA3A in addition to the activity of RIPK1, RIPK3, and MLKL as well as decreased expression of myelin PLP. These results suggested suppression of the caspase-11/GSDMD-mediated pyroptosis, RIPK1/RIPK3/MLKL necrosome mediated necroptosis, and SEMA3A expression, in addition to increased expression of myelin PLP, in the CNS of mice involves in the beneficial effect of NSA against inflammatory hyperalgesia induced by LPS.