Kan 25 hidroksi vitamin D3'ün klinik karar limitlerinin geçerliliği kanıtlanmış ölçüm yöntemleri ile değerlendirilmesi /
Yazar: ALİ YILDIRIM
Danışman: PROF. DR. GÜL GÜNER AKDOĞAN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Kan = Blood ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Vitamin D = Vitamin D ; Ölçekler = Scales ; İzmir = Izmir

Özet:
D vitamininin iskelet sistemi dışı etkilerinin aydınlatılması sonrasında, serum D vitamininin yeterlilik düzeyi ile ilgili olarak varolan belirsizliğin boyutları artmıştır. Son yıllarda yapılan çalışma ve değerlendirmelerde, 25(OH)D için uygun referans aralıklarının ve klinik karar limitlerinin ne olması gerektiği, D vitamini sonuçlarının yorumlanmasında en önemli tartışma alanlarından biridir. 
Çalışmanın amacı, İzmir ve çevresi koşullarında kan 25(OH)D3 vitamininin klinik laboratuvarlarda sıklıkla kullanılan, performans özellikleri belirlenmiş ve geçerlilikleri kanıtlanmış HPLC yöntemi ile biyolojik ve çevresel değişkenlere göre referans aralıklarını ve klinik karar limitini belirlemektir. Bu araştırmada, D vitamini ile ilgili olarak ele alınan değişik boyutlar aşağıda özetlenmektedir:
1-	Referans aralık analiz, cinsiyet ve mevsimsel değişim incelenmesi
2-	Serum D vitaminin?inin tanısal parametreleri (özgüllük, duyarlılık, pozitif ve negatif prediktif değerler, ROC eğrisi)
3-	D vitamini ölçümünde sıklıkla kullanılan iki yöntemin karşılaştırılması
Mayıs 2012 ? Nisan 2013 tarihleri arasında İzmir yöresinde yaşayan 18-65 yaşları arasında, Dokuz Eylül Üniversitesi Hastanesi?nde başvuran, araştırmaya dahil etme kriterlerine uyan toplam 400 adet gönüllüde yapılmıştır. 400 gönüllüye ait serum örneklerinde D vitamini, HPLC yöntemi (İmmuchrom SHIMADZU DGU-20A3) ile çalışılarak elde edilen veriler ile referans aralıkları ve klinik karar limiti belirlendi. Tanımlayıcı istatistik ölçütleri (aritmetik ortalama, medyan, standart sapma, minimum değer, maksimum değer, 2.5 ve 97.5 yüzdelik değerleri) hesaplandı. Referans değerlerin alt - üst sınırları - % 90 güven aralıkları hesaplandı. Referans aralıklar, seçilmiş referans bireylerin değerleri kullanılarak parametrik olmayan yönteme göre belirlendi. Tanısal parametreler hesaplanarak ROC eğrileri çizildi. Hastaların klinik durumunu saptamak, dahil edilme/dışlama kriterlerine uygunluklarını değerlendirmek amacıyla aşağıda parametreler ölçüldü: PTH: kemilüminesan immünassay yöntemi ile; Ca (serum), Ca (idrar), Pi; GGT; ALP; Kreatinin ise spektrofotometrik olarak otoanalizörde belirlendi. Ayrıca, araştırmada tanımlanan HPLC yöntemini serum D vitamini ölçümünde sıklıkla kullanılan bir başka yöntem olan kemilüminesan immünoassay ile karşılaştırmak amacıyla CLSI'nın 'hasta örnek bazlı yöntem karşılaştırma kılavuzu' önerilerine göre regresyon analizi yapıldı.
Bu çalışmada serum 25(OH)D'ye ait sağlıklı referans aralık değerleri aşağıdaki gibi bulundu: Kış mevsiminde, kadın/erkek: 7,42-44,0 µg/L; Yaz mevsiminde (kadın): 8,2 - 51,5 µg/L; Yaz mevsiminde (erkek): 19,2 - 64,47 µg/L. Serum D vitamin düzeyi ile yaş arasında korelasyon saptanmadı (r=-0.5, p=0.311). Ayrıca, serum 25(OH)D, PTH, Ca, Pi, ALP ve 24 saatlik idrarda Ca atılımına bakılarak, eksiklik için klinik karar limiti olarak 16 µg/L değeri bulundu. D vitamini ölçümünde HPLC ve Immünassay yöntemleri arasında kuvvetli bir korelasyon saptandı (r=0.9463).
Çalışmanın yaygın etkisinin, D vitamini ölçümünün standardizasyon çalışmalarına katkı ve klinik karar açısından destek olacağı öngörülmektedir.

Abstract:
Following the elucidation of the effects of Vitamin D outside the skeletal system, the already existing incertitude regarding  the reference  levels of Vitamin D has increased in dimensions.  Recent  work has shown that  determination of  the reference values and the clinical decision limits of 25(OH)D is subject to considerable debate in the medical literature. 

The aim of this study was to determine the referance levels and the clinical decision limit of blood  25(OH)D3  and its biologic and seasonal variations, as well as the decision limit,  using the HPLC method, which is extensively employed  in the clinical laboratory and which posseses known  and verified performance parameters. 

The different dimensions studied in this investigation are the following:
1-	Analysis of the reference range and the variations with  gender and season
2-	Determination of the clinical diagnosis parameters of serum Vitamin D: (specificity, sensitivity,  pozsitive and negative predictive values, ROC curves)
3-	Comparison of two valid methods used in Vitamin D assays
400 volunteers who presented to Dokuz Eylül University hospital between May 2012 and April 2013, complying to the criteria for inclusion, were admitted to the study. Vitamin D was assayed using Immuchrome SHIMADZU DGU-20A3. The data obtained were used in the determination of reference values and the clinical decision limit. The descriptive statistical parameters (arithmetic means, median, standard deviation, minimum and maximum values, 2.5 and 97.5th percentile) were calculated.
Upper and lower limits of referance intervals were determined with %90 confidence intervals. The intervals between the percentiles were calculated using the non-parametric method. In order to assess the clinical status of the subjects and determine  their suitability for inclusion in the study, the following parameters were assayed:: PTH: (Using the chemiluminesance immunoassy method);  Ca (serum), Ca (urine), Pi; GGT; ALP (spectrophotometrically using the autoanalyzer). In addition, a comparison was made, using the CLSI 'patient sample-based method comparison guidelines' involving the regression analysis.  
The data obtained for the referance intervals for  serum 25(OH)D  are the following:
Winter, women/men: 7,42-44,0 µg/L; Summer (women): 8,2 - 51,5 µg/L; Summer (men): 19,2-64,47 µg/L. No correlation has been found between the serum Vitamin D and age (r=-0.5, p=0.311).  Using the serum 25(OH)D, PTH, Ca, Pi, ALP levels , and Ca exceretion values in 24-hour urine, the clinical desision limit of e16 µg/L  was determined for Vitamin D deficiency. The  regression analysis for the Vitamin D assay methods: HPLC and immunoassay,  showed a strong correlation (r=0.9463).
	
The impact ot this study isexpected to be contribution to the standardization studies for Vitamin D assays as well as  to provide support for clinical decision limits.