Narenciye alkaloidi olan limonin ve nomilinin preadipositlerde (3T3-L1) proliferasyon ve diferansiyasyon üzerine etkileri
Effects of the limonin and nomilin, citrus alkaloids, on proliferation and differentiation on preadipocytes (3T3-L1)
Yazar: ABDULLAH BARANSEL YALÇIN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ AHMET SENCER YURTSEVER
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre ve (Rejeneratif) Yenileyici Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Bilim ve Teknoloji = Science and Technology
Dizin: Alkaloidler = Alkaloids ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Limonin = Limonin ; Narenciye = Citrus ; Obezite = Obesity

Özet:
Bu çalışmanın amacı narenciye meyvelerinde bulunan limonin ve nomilin alkaloidlerinin adiposit farklılaşması için yaygın olarak kullanılan preadiposit 3T3-L1 hücre hattı üzerinde proliferasyon ve diferansiyasyona etkisinin belirlenmesidir. Limonin ve nomilinin 3T3-L1 preadipositlerinde proliferasyon üzerine etkisinin değerlendirilmesi amacıyla diferansiyasyon protokolünün 0-4'üncü günleri boyunca 5, 10 ve 25 mcg/ml konsantrasyonlarda limonin ve nomilin uygulaması yapıldı (n=4). Alkaloidlerin proliferasyon üzerine etkisi MTT (3-(4, 5-dimetiltiazolil-2)-2,5-difeniltetrazolyum bromid) analizi ile ölçüldü. Limonin ve nomilinin 3T3-L1 preadipositlerinde diferansiyasyon üzerine etkisinin değerlendirilmesi amacıyla diferansiyasyon protokolünün 0-8'inci günleri boyunca 5, 10 ve 25 mcg/ml konsantrasyonlarda limonin ve nomilin uygulaması yapıldı (n=4). Alkaloidlerin diferansiyasyon üzerine etkisi ise Oil Red O boyama yöntemi ile ölçüldü. İlaveten nomilin ve limoninin hücre viabilitesi üzerine etkisi de değerlendirildi. Hücre viabilitesi üzerine etkilerinin değerlendirildiği deney serilerinde  limonin ve nomilinin 5,10 ve 25 mcg/ml  konsantrasyonlarda 48 ve 96 saat süresince hücre kültür ortamına uygulandı (n=4) ve sonuçlar MTT analizi yapılarak değerlendirildi. Test edilen tüm konsantrasyonlarda limonin ve nomilin 3T3-L1 preadipositlerinin canlılığı üzerine bir etki oluşturmadı. Diferansiyasyon protokolünün 0-4'üncü günlerinde 5 mcg/ml ve 25 mcg/ml konsantrasyonda uygulanan limonin, 3T3-L1 hücrelerinin proliferasyonunu anlamlı olarak artırırken 10 mcg/ml konsantrasyonda bir etki yapmadı. Nomilin uygulanan dozlarda 3T3-L1 preadipositlerinin proliferasyonu üzerinde anlamlı bir etki oluşturmadı. Nomilin, uygulanan tüm konsatrasyonlarda 3T3-L1 hücrelerinin terminal diferansiyasyonunu doza bağımlı şekilde anlamlı olarak süprese etti. Limoninin diferansiyasyon üzerine herhangi bir etkisi olmadı. Sonuç olarak, bir narenciye alkaloidi olan nomilinin 3T3-L1 hücrelerinde preadiposit farklılaşmasını süprese edebileceği görülmektedir. Bu nedenle, potansiyel olarak bu alkaloidin anti-obezite etkisi olabilir.

Abstract:
The aim of this study was to determine the effects of limonin and nomilin alkaloids in citrus fruits on proliferation and differentiation on the preadipocyte 3T3-L1 cell line, which is widely used for adipocyte differentiation. In order to evaluate the effects of limonin and nomilin on proliferation in 3T3-L1 preadipocytes, limonin and nomilin were administered at 5, 10 and 25 mcg/ml concentrations during the 0-4 days of the differentiation protocol (n=4). The effect of alkaloids on proliferation was measured by MTT (3-(4, 5-dimetiltiazolil-2)-2,5-difeniltetrazolyum bromid) analysis. In order to evaluate the effects of both alkaloids on differentiation in 3T3-L1 preadipocytes, limonin and nomilin were applied at concentrations of 5, 10 and 25 mcg/ml during the 0-8th days of the differentiation protocol (n=4). The effect of alkaloids on differentiation was measured by Oil Red O staining method. In addition, the effects of nomilin and limonin on cell viability were also evaluated. In the experimental series in which the effects of limonin and nomilin on cell viability were evaluated, limonin and nomilin were applied at concentrations of 5, 10 and 25 mcg/ml to the cell culture medium for 48 and 96 hours, and the results were evaluated by MTT analysis (n=4). Limonin and nomilin at all concentrations tested had no effect on the viability of 3T3-L1 preadipocytes. Limonin applied at 5 mcg/ml and 25 mcg/ml concentrations on days 0-4 of the differentiation protocol significantly increased the proliferation of 3T3-L1 cells, but did not have an effect at 10 mcg/ml concentration. Nomilin had no significant effect on the proliferation of 3T3-L1 preadipocytes at administered doses. Nomilin significantly suppressed the terminal differentiation of 3T3-L1 cells at all applied concentrations in a dose-dependent manner. Limonin had no effect on differentiation. In conclusion, it seems that nomilin, a citrus alkaloid, can suppress preadipocyte differentiation in 3T3-L1 cells. Therefore, potentially this alkaloid may have an anti-obesity effect.