Köpeklerde borrelia burgdorferi infeksiyonunun PCR ile araştırılması
Investigation of borrelia burgdorferi infection in dogs by PCR.
Yazar: ESRA SATIR
Danışman: DOÇ.DR. NURİ TURAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Köpeklerde Borrelia burgdorferi nfeksiyonunun PCR ile Araştırılması. stanbulÜniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Mikrobiyoloji ABD. Yüksek Lisans Tezi.stanbul. 2006.Lyme hastalığı ya da Borreliosis Borrelia burgdorferi'nin neden olduğu, dünyadayaygın olarak görülen zoonoz bir infeksiyondur. Ixodes cinsi keneler bulaşmada önemlirol oynarlar. Lyme hastalığında eklemler, deri, kalp, böbrek ve sinir sistemindebozukluklar görülür.Bu çalışmada köpeklerdeki lyme hastalığı etkeni olan Borrelia burgdorferi' ninspesifik groEL ve ospA genlerinin çoğaltılması esasına dayanan PCR yöntemi ilesaptanması amaçlandı. Bunun için, stanbul' daki çeşitli kliniklere getirilen 48 adet vedeğişik hayvan barınaklarında yaşayan 48 adet olmak üzere toplam 96 köpekincelendi. Köpeklerin öncelikle klinik muayeneleri yapıldı ve EDTA'lı tüplere kanörnekleri alındı. Kan örneklerinden ticari kit kullanılarak DNA ekstraksiyonu yapıldı.Öncelikle pozitif kontrol Borrelia burgdorferi DNA'sı kullanılarak PCR çalışmalarıstandardize edildi. Daha sonra ekstrakte edilen örnek DNA'lar ile konvansiyonel PCRve Nested PCR çalışmaları yapıldı. PCR çalışmaları sonucunda konvansiyonelPCR'da yaklaşık 310 bp ve nested PCR'da yaklaşık 391 bp'lik referans kontrol DNAürünleri saptanırken, 96 köpekten alınan örneklerin hiç birinde etken DNA'sıyönünden pozitiflik saptanmadı. Test örneklerindeki negatifliğin nedeni olarak örnektürü, örnek sayısı, örnekleme yöntemi, ixodes cinsi kenelerin coğrafik dağılımı veekolojik farklılıktan kaynaklandığı düşünülebilir. Bu çalışmanın daha kapsamlı olarakklinik bulgu gösteren ve üzerlerinde kene taşıyan köpeklerle yapılması sonucundainfeksiyonun saptanması olasılığı artacaktır. Ayrıca köpeklerin üzerlerindekikenelerden de DNA ekstraksiyonu yapılmasında ve kene türlerinin araştırılmasındayarar vardır.Anahtar Kelimeler : Köpek, lyme hastalığı, PCR, Borrelia burgdorferi, stanbul.Bu çalışma stanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından T-617/17032005 no'lu proje olarak desteklemiştir.

Abstract:
Investigation of Borrelia burgdorferi infection in dogs by PCR. stanbulUniversity, Institute of Health Science, Department of Microbiology, Master Thesis.stanbul. 2006.Lyme disease or Borreliosis is a widespread zoonozis caused by Borrelia burgdorferi.Ixodes ticks plays important role in transmission. Joint, skin, heart, kidney and nervoussystem disorders are seen in Lyme disease.The aim of this study was to detect Borrelia burgdorferi in dogs using PCR byamplifiying the specific genes groEL and ospA of the Lyme disease agent. For this aim,96 dogs were investigated consisting of 48 dogs which were brought to privateveterinary clinics and 48 dogs living in the kennels. The dogs were first clinicallyexamnined and the blood was drained into vacutainer containing EDTA. The DNAextraction from blood samples was made using commercial DNA extraction kit. FirstlyThe PCR was standardised using the reference control DNA of Borrelia burgdorferi.The DNA extracted from test samples were analysed by both conventional and nestedPCR. The DNA of Borrelia burgdorferi was not detected in any of the samples collectedfrom the 96 dogs while 310 bp product by conventional PCR and 391 bp product bynested PCR were amplified from the reference control DNA. The reason of negativeresults from the test samples may be the type of sample, sampling method, sample size,echological differences and the geographical distribution of Ixodes ticks. Therefore,comprehensive studies are needed in dogs showing clinical symptoms and ticks presenton their skin may increase the possibility of the detection of the infection. In addition,investigations in those ticks and DNA extraction from them will be beneficial in futurestudies.Key Words: Dogs, lyme disease, PCR, Borrelia burgdorferi, Istanbul.This study was supported by The Research Support Unit of stanbul University as theproject no T-617/17032005