Bakterilerde dışa-atım pompası yolu ile antimikrobiyal direnç gelişimini saptamada mikrodilüsyon yöntemi ve bis-benzimide kullanımı
Determination of antimicrobial resistance via efflux pump in bacteria by using microdilution method and bis-benzimide
Yazar: CANAN ÖZER
Danışman: PROF. DR. ŞAFAK ERMERTCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Bakteriler = Bacteria ; Tiyoridazin = Thioridazine ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial ; İndikatör dilüsyon teknikleri = Indicator dilution techniques

Özet:
Bakterilerde uzun yıllardır bilinen direnç mekanizmalarına son zamanlarda dışa-atım (efluks) pompa sistemleri eklenmiştir. Bakterilerdeki dışa-atım pompa sistemleri transport proteinlerinden oluşur. Bu transport proteinleri antimikrobiyal ilaçları aktif olarak hücre dışına atarak ilacın hedefine ulaşmasını engellemektedir. Bu çalışmada, gram negatif bakterilerde bulunan dışa-atım pompalarına, PAßN, CCCP ve tiyoridazinin etkilerinin mikrodilüsyona dayalı pratik bir yöntem ve Bis-benzimid (Bb) maddesi kullanılarak araştırılması amaçlanmıştır.Manisa Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji A.D. Bakteriyoloji Laboratuvarında izole edilmiş olan 24 adet gram-negatif bakteri kökeni (6 Escherichia coli, 6 Klebsiella pneumoniae, 6 Pseudomonas aeruginosa, 6 Acinetobacter baumannii) çalışmaya alındı. Bakteri kökenleri gerekli işlemlerden sonra çalışmaya uygun süspansiyonlar haline getirildi. Bu süspansiyonlar 96 kuyucuklu siyah mikropleytlere aktarıldı. Daha sonra kuyucuklara PAßN, CCCP ve tiyoridazin ile Bb eklendi. Kuyucuklardaki floresans değerleri mikropleyt okuyucu kullanılarak belirlendi.Bu çalışmada, gram negatif bakterilerde dışa-atım pompaları üzerine en belirgin inhibitör etki PAßN ile elde edildi. Eğri altında kalan alana göre yapılan karşılaştırmada, PAßN'nin en fazla inhibisyonu A. baumannii dışa-atım pompalarına gösterdiği saptandı. PAßN'nin en az etki gösterdiği bakteri ise K. pneumoniae oldu. CCCP'nin dışa-atım pompalarını inhibe etmediği hatta bisbenzimid'in dışa-atımını arttırdığı görüldü. Tiyoridazinin ise dışa-atım pompa aktivitesi üzerine etki göstermediği sonucuna varıldı.Bakterilerde dışa-atım pompalarını inhibe eden maddeler enfeksiyon hastalıklarının tedavisinde yeni bir adım olacaktır. Ancak bu inhibitör maddelerin insanlar üzerine toksik etkilerinin olmaması ve farmakokinetik özelliklerinin uygun olması gerekmektedir. Bu konuda daha çok sayıda araştırmaya ihtiyaç vardır. Bu tez çalışmasında kullanılan yöntemi pratik olması, uygulama kolaylığı ve kısa sürede kantitatif sonuç alınması nedeniyle diğer araştırmacılar tarafından kullanılabileceğini düşünüyoruz.

Abstract:
Efflux pump systems have been to added the resistance mechanisms known in bacteria for long years. Efflux pump system in bacteria is made up of transport proteins. These transport proteins prevent medicine to reaching its target by ejecting antimicrobial medicines actively outside of the cell. In this study it is aimed to analyze the effects of PAßN, CCCP and thioridazine to the active efflux pumps in gram negative bacteria (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii) by the use of microdilution, a practical method, and bisbenzimide.Twenty four gram negative bacteria (6E. coli, 6 K. pneumoniae, 6 P. aeruginosa, 6 A. baumannii) isolated in Manisa Celal Bayar University, Faculty of Medicine, Department of Medical Microbiology, Laboratory of Bacteriology were included in this study. Bacterial suspensions were prepared from bacterial cultures after performing necessary procedures. These suspensions were transferred to 96-well black microplates. And then PAßN, CCCP, thioridazine and Bb were added into the wells. Fluorescence values in the wells were determined by the use of microplate reader.In this study, the highest inhibitory effect on efflux pumps of gram-negative bacteria was observed with PAßN. In the comparison according to the field under the curve, the highest inhibitor effect of PAßN was observed against efflux pumps of A. baumannii. Klebsiella pneumoniae was the least effected bacteria by PAßN. It was observed that CCCP didnt inhibit efflux pumps, even thought Bb increased efflux. Thioridazine did not have any effect on the activity of efflux pumps.It will be a new insight in the treatment of infections diseases that the subjects inhibits the efflux pumps. But these inhibitors should not be toxic for humanbeings and should have appropriate pharmacokinetic properties. It is needed more studies in this subject. We suggest to use this method in the other studies since the method used in this study is practical, easy to use and results quantitatively in a short time period.