Toxoplasma gondıı DNA aşısı için mıc-3 geninin klonlanması
Cloning MIC3 gene for toxoplasma gondii dna vaccine
Yazar: BORA ÖZKAN
Danışman: PROF. DR. SALİH KUK
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; DNA = DNA ; Genler = Genes ; Klonlama = Cloning ; Toksoplazma = Toxoplasma ; Toksoplazmoz = Toxoplasmosis ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii

Özet:
Toxoplasma gondii tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de görülen bir parazittir. Mortaliteye de sebep olabilen bu parazit gebelerden transplasental yolla bebeklere geçişi sebebiyle oldukça önemli bir halk sağlığı sorunu olarak görülmektedir. İnsanlarda bradizoit ve takizoit formu bulunan parazitin oluşturduğu toxoplasmosisin patogenezinde bir çok faktör rol oynamaktadır. Patogenezde parazite ait faktörler parazitin tanısının konulması ve parazitten korunmak için aşı geliştirilmesi çalışmalarında önemlidir. MIC3 proteini hastalığın patogenezinde önemli olan ve parazitin her üç döneminde de salgılanan bir poteindir. Bu çalışmada MIC3 geninin DNA aşısı  için klonlanması amaçlanmıştır. 
Toxoplasma gondii takizoitlerinden Genomik DNA izolasyonu, QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN) prosedürü modifiye edilerek yapılmıştır. Genomik DNA'dan MIC3 genini hedef alan primerler kullanılarak PCR ile MIC3 geni çoğaltılmıştır. Çoğaltılan MIC3geni DNA aşısı amacıyla kullanılabilecek pcDNA3,1 plazmitine klonlanmış ve rekombinant plazmit, kompetan E.coli hücrelerine transforme edilmiştir. Transformasyon sonrası oluşan kolonilerdeki rekombinant plazmit varlığı PCR Screening ile doğrulanmıştır. Saflaştırılan rekombinant plazmitlerdeki MIC3 geninin varlığı ve DNA dizisi, DNA dizi  analizi ile doğrulanmıştır. 
Bu çalışma sonrasında MIC3 geni tanısal amaçla kullanılabileceği gibi parazite karşı aşı geliştirme çalışmalarında tek başına olabilecegi gibi, diger aday moleküllerle birlikte multiantijenik aşı çalışmalarında da kullanılabilecektir.

Abstract:
Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite that is found more prevalant in our country, as well as all over the world. This parasite can cause mortality and also it is an important public health problem because of engaging babies from pregnant women. Many factors play a role in the pathogenesis of Toxoplasmosis that is caused by the tachyzoites and bradyzoites, stage of parasites which are present in human. At pathogenesis, interference factors of the parasite are important to diagnosis and protective vaccine development studies. MIC3 protein released from tachyzoites, bradyzoites, oocystis  which is stage of  T.gondii, is important at pathogenesis of dissease.
Genomic DNA was isolated from tachyzoites of T.gondii using modified QIAmp DNA Mini Kit (QIAGEN) by manifacture's suggestion. MIC3 gene was amplified with primers which is spesific that target sequence using PCR techinque. That amplified MIC3 gene cloned into pcDNA3.1. vector according to kit procedure and recombinant plasmid was transformed into kit competant E.coli cells. After that, the presence of plasmid was confirmed in the cells after cloning E.coli by PCR screening. That recombinant plasmid which cloned into E.coli cells, was purified High Pure Plasmid Isolation Kit. After purification of plasmids the presence of  MIC3 gene on the plasmid was confirmed PCR technique and sequance analisis.
After this study MIC3gene can be used for diagnostic purposes and can also be used in the development of multiantigenik vaccines against the parasite.