Glutatyon (GSH)) düzeyinin plasentada araştırılması
Investigation of glutathione (GSH)) level in placenta
Yazar: YELDA KASAP
Danışman: PROF. DR. BENAY CAN EKE
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Glütatyon = Glutathione ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Plasenta = Placenta ; Sigara içme = Smoking

Özet:
Gebelikte sigara kullanmak ya da sigara dumanına maruz kalmak sadece annenin sağlığına zarar vermekle kalmaz, aynı zamanda gebelik ile ilgili komplikasyonların ortaya çıkmasına ve yenidoğanda ciddi sağlık problemlerine yol açmaktadır. Serbest oksijen radikallerinin en önemli kaynaklarından biri sigaradır. Serbest oksijen radikalleri antioksidanlar aracılığı ile yüksek oranda kontrol altında tutulabilmektedirler. Reaktif oksijen türlerinin uyardığı hasarın engellenmesi için plasentada enzim ve antioksidanları içeren biyokimyasal koruma mekanizmaları mevcuttur. Glutatyon, oksidatif strese karşı koruyucu mekanizmanın temel bir parçasıdır. Oksidatif ve elektrofilik kimyasallara karşı hücresel hedefleri koruyarak koruyuculuk görevini yerine getirmektedir.Yaptığımız bu çalışmada, sigara içen 8 gebe, sigara dumanına maruz kalan 9 gebe ve sigara içmeyen 22 gebede ölçülen plasental glutatyon seviyeleri sonuçları karşılaştırılarak sigara ile oksidatif stres arasındaki ilişkinin incelenmesi amaçlanmıştır.Plasental glutatyon düzeyinin belirlenmesi için spektrofotometrik yöntem, idrar 1-hidroksi piren düzeyi için floresans dedektörlü HPLC yöntemi kullanılmıştır. HPLC analiz yönteminde 1-OHP için 0.2-30 nM konsantrasyon aralığında analitik yöntem validasyonu yapılmıştır. Yöntemin belirtilen kalibrasyon aralığında doğrusal olduğu (r2 = 0,99496) kanıtlanmıştır. Gün arası tekrarlanabilirlik için 0.2, 2, 30 nM olmak üzere 3 farklı düzeyde standart katılan örneklerde yapılan çalı?malarda RSD (%) sırasıyla 8.73, 2.53 ve 1.19; güniçi tekrarlanabilirlik için 0.2, 2, 30 nM olmak üzere 3 farklı düzeyde standart katılan örneklerde yapılan çalışmalarda RSD (%) sırasıyla 3.64, 1.19 ve 0.29; aynı örneklere ait % geri kazanım sonuçları sırasıyla 66.56, 85.01 ve 92.3 olarak bulunmuştur. Yönteme ait tespit limiti (LOD) 0.06 nM, ölçüm alt limiti (LOQ) 0.2 nM olarak belirlenmiştir. 1-OHP analiz sonuçları kreatinin tayini ile düzeltme yapılarak sonuçlar ?mol/mol kreatinin cinsinden hesaplanmıştır.Çalışmadan elde edilen sonuçlarda sigara içmeyen gebelerin içenlere göre ve sigara dumanına maruz kalan gebelerin sigara içen gebelere göre plasental GSH düzeylerinde istatistiksel olarak anlamlı bir artma ve idrar 1-OHP düzeylerinde anlamlı bir azalma olduğu gözlenmiştir (p<0,05). Sigara içen gebelerin plasental GSH düzeyi ile idrar 1-OHP düzeyi arasında anlamlı korelasyon bulunmamıştır (r = -0.27, p>0,05).Sonuç olarak, sigara içen annelerin plasentalarında anlamlı olarak düşük bulunan GSH düzeyinin sigaraya bağlı oksidatif stresin bir sonucu olduğunu söylemek mümkün olacaktır. Bu çalışmanın sonuçlarının, gebelikte görülebilecek gebelik diyabeti, preeklampsia, fetal gelişim geriliği, erken doğum gibi sorunları kapsayan ileriye dönük çalışmalara katkıda bulunacağı düşünülmektedir.

Abstract:
Smoking during pregnancy or exposure to cigarette smoke not only damages health of the mother but also appears the complications related to pregnancy and causes serious health problems in newborns. Cigarette is one of the most important source of oxygen free radicals. Free oxygen radicals can be controlled in high rates by the antioxidants. There is a biochemical protection mechanism that includes enzyme and antioxidants in the plasenta and it prevents injury induced by reactive oxygen species. Glutathione is an essential part of protective mechanisms against oxidative stres and makes its protective role via protects cellular targets against oxidative and electrophilic chemicals.In this study, it is aimed to investigate the relationship between cigarette and oxidative stres to compare results the placental glutathione rates which measures in 8 smoked pregnant women, 9 passive smoked pregnant women and 22 non smoked pregnant women placentas.Spectrophotometric method for determination of placental glutathione levels and fluorescence detector HPLC method for determination of a 1-hydroxy pyrene in urine were used. The HPLC methods validation were made in 0.2-30 nM concentration range for the 1- OHP. It was demonstrated that method was in a linear calibration range (r2 = 0.99496). It was studied with 3 different levels of standard spiked samples (0.2, 2, 30 nM) to prove interday repeatability, intra-day repeatability and recovery. The results of RSD (%) were respectively 8.73, 2.53, 1.19 for inter-day; 3.64, 1.19, 0.29 for intra-day; % 66.56, 85.01,92.3 for recovery. The method detection limit (LOD) and the lower limit (LOQ) were determined respectively 0.06 nM and 0.2 nM. 1-OHP analysis results were adjusted with creatinine levels and the results were calculated in ?mol / mol creatinine.In this study first of all it was compared that non-smoking pregnant women and smoked pregnant women and than smoke exposure of pregnant women and smoked pregnant women. It was meant that non-smoking pregnant women and smoke exposure pregnant women placental GSH levels significantly increased and urinary 1-OHP levels significantly decreased (p <0.05) to smoked women. Between urinary 1-OHP levels and placental GSH levels were not statistically significant correlation in smoked pregnant women (r = -0.27, p> 0.05).As a result, it was shown that oxidative stress were related with cigarette in pregnant women via measured by placental GSH level significantly decreased. It is considered that the results of this research will contribute the studies of the problems during pregnancy, such as pregnancy diabetes, preeclampsia, intrauterine growth restriction and preterm birth.