İn vitro LPS uyarımlı akut böbrek yangı modelinde 3-(4-hidroksifenil) propiyonik asidin antiiflamatuar etkinliğinin araştırılması"
Investigation of the anti-inflammatory effectiveness of 3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid in a model of in vitro LPS induced acute renal inflammation
Yazar: ELİF ÖZTÜRK NİTA
Danışman: DOÇ. DR. ALTUĞ KÜÇÜKGÜL
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: 4-HPPA = 4-HPPA ; Akut böbrek hasarı = Acute kidney injury ; Böbrek = Kidney ; Hidroksifenil = Hydroxyphenyl ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Mikrobiyota = Microbiota ; Propiyonik asit = Propionic acid ; Sepsis = Sepsis ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
İn vitro LPS uyarımlı akut böbrek yangı modelinde 3-(4-hidroksifenil) propiyonik asidin antiiflamatuar etkinliğinin araştırılması
Sepsis, akut böbrek hasarının (AKI) en yaygın nedenidir (~%40-50) ve hayatta kalanlarda kronik böbrek hastalığı görülme riski yüksektir. Bitkiler naringin ve prosiyaninler gibi birçok biyoaktif bileşenleri yapılarında bulundururlar. Bununla birlikte insan mikrobiyotası, bu gibi etken maddeleri enzimatik transformasyona uğratıp, 4-HPPA [3-(4′-hidroksifenil) propanoik asit] gibi moleküllerin açığa çıkmasını sağlayarak insan sağlığına önemli katkılar sağlamaktadır. 4-HPPA'nın birçok araştırmada antiinflamatuar ve antioksidan gibi biyolojik etkileri rapor edilmiştir. Araştırmanın amacını, in vitro LPS (lipopolisakkarit) uyarımlı böbrek yangı modelinde, naringin ve prosiyanidinlerin mikrobiyota ürününlerinden 4-HPPA'nın antiinflamatuar etkinliğinin ortaya konulması oluşturmaktadır.
Araştırmada insan orijinli HEK 293 böbrek hücreleri kullanıldı. Denemede kontrol grubu, LPS grubu, 4-HPPA grubu ve 4-HPPA+LPS grubu olmak üzere 4 gruptan oluşturuldu. LPS ve 4-HPPA farklı konsantrasyonlarda 24 saat süreyle hücrelere uygulandı. LPS ve 4-HPPA'nın etkin konsantrasyonları MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) viyabilite testiyle araştırıldı. Yine tespit edilen konsantrasyonların hücrelere uygulanmasıyla deneme gruplarından elde edilen RNA'lardan cDNA dönüşümleri gerçekleştirildi. Sonunda inflamatuar yanıtlardan sorumlu IL-1β (interlökin 1 beta), TNF-α (Tümör nekroz faktör alfa) ve NFkβ (nükleer faktör kapa B) gen ekspesyon analizleri qRT-PCR yöntemiyle araştırıldı. 24 saat inkübasyonlardan sonra LPS'in 2,5ng/ml ve 4-HPPA'nın 6,25 μg/ml konsantrasyonda deneme için etkin konsantrasyonlar olduğu tespit edildi. Yine 4-HPPA'nın LPS'in uyardığı IL1β, TNFα ve NFkβ gen ekspresyonlarını baskıladığı görüldü.
Araştırma elde edilen verilere göre, in vitro LPS uyarımlı böbrek inflamasyon modelinde 4-HPPA'nın etkin bir şekilde antiiflamatuar özellik gösterdiği ortaya konuldu. Bununla birlikte konunun tam aydınlatılabilmesi için in vivo ve daha ileri moleküler yöntemlere ihtiyaç bulunduğu kanısına varıldı.

Abstract:
Investıgatıon of The Antı-Inflammatory Effectıveness of 3-(4-hydroxyphenyl) propıonıc acıd ın a Model of In Vıtro Lps Induced Acute Renal Inflammatıon
Sepsis is the most common cause (~%40-50) of acute kidney injury (AKI) and survivors are at high risk of developing chronic kidney disease. Plants contain many bioactive components such as naringin and procyanins. Moreover, the human microbiota provides important contributions to human health by enzymatically transforming such active substances and releasing molecules such as 4-HPPA [3-(4′-hydroxyphenyl) propanoic acid]. Biological effects of 4-HPPA such as anti-inflammatory and antioxidant have been reported in many studies. The aim of the study is to reveal the anti-inflammatory activity of 4-HPPA, one of the microbiota products of naringin and procyanidins, in an in vitro LPS (lipopolysaccharide) induced kidney inflammation model.
Human HEK 293 kidney cells were used in the study. Experiment consisted of 4 groups as control group, LPS group, 4-HPPA group and 4-HPPA+LPS group. LPS and 4-HPPA were applied to the cells at different concentrations for 24 hours. Effective concentrations of LPS and 4-HPPA were investigated by MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) viability test. Again, by applying the determined concentrations to the cells, cDNA conversions were performed from the RNAs obtained from the experimental groups. Afterwards, gene expression analyzes of IL-1β (interleukin 1 beta), TNF-α (Tumor necrosis factor alpha) and NFkβ (nuclear factor kappa B) responsible for inflammatory responses were investigated by qRT-PCR method. After 24 hours of incubations, 2.5 ng/ml of LPS and 6.25 μg/ml of 4-HPPA were found to be effective concentrations for the experiment. It was also observed that 4-HPPA suppressed LPS-induced IL1β, TNFα and NFkβ gene expressions.
According to the data obtained in the study, it was revealed that 4-HPPA effectively showed anti-inflammatory properties in the in vitro LPS-stimulated kidney inflammation model. However, it was concluded that in vivo and further molecular methods are needed to fully elucidate the subject.