Akut myeloid lösemi hücre hatlarında MİR-145-5P ekspresyonu ile MiR-145-5p olası hedef genlerinin ilişkisinin araştırılması
Investigation of the association of MİR-145-5P expression with MiR-145-5P possible target genes in acute myeloid leukemia cell lines
Yazar: RUKİYE ASLAN
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ ÖZTÜRK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Amaç: Akut myeloid lösemi (AML), prognozu heterojen olan ve hastalık oluşum mekanizmaları tamamen aydınlatılamamış bir lösemi türüdür. AML heterojenitesi ile mikroRNA'lar sıklıkla ilişkilendirilmektedir. Bu çalışma ile birçok kanserde tümör supresör olarak görev yaptığı bilinen miR-145-5p'nin, AML hücrelerinin biyolojik süreçlerine olan etkisi ve olası hedef genlerindeki ifade değişiminin araştırılması amaçlanmıştır. 
Yöntem: NB4 ve HL-60 hücre hatlarına miR-145-5p'nin, Lipofectamine™ 2000 method ile mimik transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir. miR-145-5p artışının hücrelerin canlılığına etkisi WST-8 yöntemiyle, apoptoza etkisi ise Kaspaz-3 aktive tayini aracılığıyla araştırılmıştır. miR-145-5p'nin AML hücrelerindeki aday hedef genleri CDK4, CDK6, KLF4, EIF4E, IRS1 ve NRAS, in silico olarak belirlenmiştir. Aday hedef genlerdeki ifade değişimi qRT-PZR ile değerlendirilmiştir. Sonuçlar kontrol grupları ile karşılaştırılarak istatistiksel olarak analiz edilmiştir. 
Bulgular: miR-145-5p transfekte edilen AML hücrelerinde kontrol gruplarına göre hücre canlılığında anlamlı bir azalma ve NB4 hücrelerinde apoptozda artış saptanmıştır (p<0,05). CDK4 ve KLF4 gen ifadelerinin, kontrol gruplarına oranla anlamlı olarak azalmış olduğu bulunmuştur (p<0,05). 
Sonuç: Sonuç olarak, AML hücrelerinde miR-145-5p'nin, proliferasyonu engelleyebileceği ve apoptozu tetikleyebileceği aynı zamanda CDK4 ve KLF4 gen ifadelerini de kontrol edebileceği bulunmuştur. Elde edilen sonuçların ileri çalışmalarla doğrulanması ile miR-145-5p/hedef gen etkileşiminin AML patogenezindeki rolü daha iyi anlaşılabilecektir. Bu durum AML için yeni tedavi yöntemlerinin geliştirilmesinde ve erken tanıda miR-145-5p'nin, biyobelirteç olarak kullanılabilme potansiyelini arttırması açısından önem taşımaktadır.

Abstract:
Aim: Acute myeloid leukemia (AML) has a heterogeneous prognosis. MicroRNAs are frequently associated with AML heterogeneity. The purpose of this study was to investigate the effect of miR-145-5p, which acts as a tumor suppressor in many cancers, on the biological processes of AML cells and the expression changes in potential target genes.
Method: Transfection of miR-145-5p mimics was performed on NB4 and HL-60 cell lines using the Lipofectamine™ 2000 method. The effect of increased miR-145-5p on cell viability was studied using the WST-8 method, and the effect on apoptosis was studied using the Caspase-3 activation assay. In AML cells, potential target genes of miR-145-5p (CDK4, CDK6, KLF4, EIF4E, IRS1, and NRAS) have been identified in silico.  The expression change in these genes was evaluated by qRT-PCR in comparison with the control groups, and statistical analysis was performed.
Results: There was found a significant decrease in cell viability in miR-145-5p transfected AML cells compared to control groups and an increase in apoptosis in NB4 cells (p<0.05). CDK4 and KLF4 gene expressions were discovered to be significantly reduced compared to the control groups (p<0.05). 
Conclusion: miR-145-5p has been found to inhibit proliferation and induce apoptosis in AML cells while also controlling CDK4 and KLF4 gene expression. If these findings are supported by further research, the role of miR-145-5p in the pathogenesis of AML will be better understood. This increases the potential of miR-145-5p for use as a biomarker in the development of new methods for the diagnosis and treatment of AML.