Staphylococcus aureus ve Pseudomonas aeruginosa Biyofilm Tabakası Üzerine Çeşitli Dezenfektanların Etkinliğinin Karşılaştırılması
The Comparison of Various Disinfectants' Efficiency on Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa Biofilm Layer
Yazar: HATİCE KÖSE
Danışman: PROF. DR. NUR YAPAR
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Biyofilmler = Biofilms ; Dezenfektanlar = Disinfectants ; Hidrojen peroksit = Hydrogen peroxide ; Pseudomonas = Pseudomonas ; Pseudomonas aeruginosa = Pseudomonas aeruginosa ; Sodyum hipoklorit = Sodium hypochlorite ; Staphylococcus = Staphylococcus ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus

Özet:
Biyofilmler antibiyotik ve dezenfektanlara dirençli olması nedeniyle sıklıkla  tedavisi zor, mortalite ve morbiditesi yüksek,  kronik persistan enfeksiyonlara sebep olurlar. Tüm enfeksiyon hastalıklarının en az %65'i biyofilm ile ilişkilidir. Bu nedenle çalışmamızda Staphylococcus aureus ve Pseudomonas aeruginosa  biyofilm tabakası  canlı mikrobiyal hücre ve ekstrasellüler polimerik madde üzerine ortofitalaldehit, parasetik asit, hidrojen peroksit ve sodyum hipokloritin etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır.
Doksan altı kuyucuklu plate kullanılarak biyofilm oluşturuldu. Dezenfektanların belirlenen sürelerde teması sonrası kristal viyole yöntemi ile matriks ve canlı/ölü mikrobiyal hücre saptandı. Resazurin yöntemiyle ise biyofilm tabakasındaki canlı mikrobiyal hücre saptandı. Ayrıca elektron mikroskobu ile biyofilm tabakası gösterildi.
Sodyum hipokloritin P. aeruginosa biyofilm matriks ve canlı/ölü mikrobiyal hücrede 30. dakikada %83.6 azalma ile (p=0.000) ve biyofilm tabakasındaki canlı mikrobiyal hücrede 60. dakikada % 99.789 azalma ile (p=0.003) en etkin dezenfektan olduğu saptandı. S. aureus biyofilm matriks ve canlı/ölü mikrobiyal hücreye en etkin dezenfektanların 60. dakikada % 80.3 azalma ile (p=0.001) hidrojen peroksit ve 30. dakikada %76.1 azalma ile (p=0.000) sodyum hipoklorit olduğu, biyofilm tabakasındaki canlı mikrobiyal hücreye ise 1. dakikada %99.854 azalma ile (p= 0.000) sodyum hipoklorit olduğu saptandı.
Çalıştığımız dezenfektanlar içinde hem matriks tabakasına, hem de biyofilm tabakasındaki canlı mikrobiyal hücreye en etkili dezenfektanın sodyum hipoklorit olması nedeniyle yüzeylerde ve medikal araçlarda yüksek düzey dezenfektan olarak kullanılmasının biyofilm ile ilişkili enfeksiyonların önlenmesinde faydalı olacağını düşünmekteyiz. Fakat biyofilm matriks tabakası tamamen ortadan kaldırılmadığından biyofilm oluşumunun önlenmesi için çalışmalara ve deneysel biyofilm modeli için yöntem standardizasyonuna ihtiyaç vardır.

Abstract:
Because biofilms are  resistant to antibiotics and biocides, they usually cause chronic persistent infections which are arduous to cure, have high mortality and morbidity. At least 65% of all infectious diseases are related to biofilm. Thus, our study aimed to investigate the efficiency between orthophthalaldehyde, peracetic acid, hydrogen peroxide and sodium hypoclorid on Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus biofilm layer microbial cell and extracellular polymeric substances.
Biofilm was created by using 96 well plates. Matrix and alive/dead microbial cell was determined with crystal violet assay after disinfectants' contact at certain times. Alive  microbial cell that was on the biofilm layer was determied with using resazurin assay. Furthermore, biofilm layer was shown with electron microscope.
Sodium hypoclorid was identified the most influential disinfection because it diminished %83,6  (p=0,000) of P. aeruginosa biofilm matrix and alive/dead microbial cell in the thirtieth minute, and it decreased %99,789 (p=0,003) of alive microbial cell on the biofilm layer in the sixtieth minute. Hydrogen peroxide was determined the most efficient disinfectant  in the sixtieth minute % 80,3 (p=0,001) reduction and sodium hypoclorid was determined the most effective disinfectant in the thirtieth minute  %76,1 (p=0,000) decrease to S. aureus biofilm matrix and alive/dead micorobial cell. Sodium hypoclorid was also determined the most efficient disinfectant in the first minute with 99,854% (p=0,000) reduction to alive microbial cell in the biofilm layer.
Sodium hypoclorid is the most influential disinfectant both on matrix layer and alive microbial cell. We think that if we use sodium hypoclorid as a high level disinfectant for  both surface and medical equipments, it will be beneficial to prevent illnesses which are related to biofilm. We need more studies to prevent biofilm occurence and method standardization for empirical biofilm method because biofilm matrix layer was not removed completely.