Polar body biyopsi tekniği ile elde edilen 1.kutup hücrelerinin fish tekniği ve morfolojik yöntemlerle incelenmesi
FISH tecnique and morpholoical methods for investigation of 1.polar body which is obtained by polar body biopsy tecnique
Yazar: BENGİ ACAR
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA TAŞYÜREKLİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2004
Konu: Morfoloji = Morphology

Özet:
7. ÖZET Çalışmamızdaki oositlerde; oosit morfolojisi ve çaplan, perivitellin aralık granülasyonu, zona pellusidalı oosit alanı, 1. kutup hücresi morfolojisi ve çaplan, 0 ve 1. gün oosit sitoplazma kalitesi gibi morfolojik ve morfometrik parametreleri inceledik. Ayrıca, kutup hücresi biyopsisinden sonra bir tur FISH ile 1. kutup hücresindeki 13, 16, 18, 21 ve 22. kromozomlardaki anöploidi ve öploidiyi inceledik. Deney grubu olarak, ICSI sonrası PGD tedavisi görecek 20 hastanın 176 oositini kullandık. Kontrol gruplarımız ise, 10 hasta ve 20 döllenmemiş oositi ile 1. kontrol grubu ve ICSI tedavisi gören 20 hasta ile 148 oositi ile 2.kontrol grubu şeklindeydi. Morfolojik mcelemelerimizde; oosit için düzenlilik veya düzensizlik, 1. kutup hücresi için 1-3 arası fragmantasyon veya düzenlilik, perivitellin aralık için 1-5 arası granülasyonu araştırdık ve sitoplazma kalitesine 1 ile 4 arası değerler verdik. Lazer sistemine sahip ve Octax Eyeware programı içeren hava-gaz sistemli mikromanipülatör yardımıyla, oositlerden resimler elde ettik ve biyopsi uyguladık. Genetik sonuçlan flörosan mikroskobu ile analiz ettik. Çaplan iki boyutlu olarak ölçtük ve istatistiksel analiz için alanları hesapladık. Morfolojik, morfometrik ve genetik sonuçların genel ve her hasta başına dağılımını inceledik. 2.kontrol grubu ile deney grubunun döllenme sonuçlarını, 1. kontrol grubu ile deney grubunun FISH testine cevaplarım karşılaştırdık. Ayrıca morfolojik ve morfometrik sonuçlar ile genetik sonuçlan karşılaştırdık. Deney grubumuzdaki oositlerin genel dağılımında, zona pellusidalı oositlerin genelde düzenli bir yapıda olduğunu (%93.2) ve alan değerlerinin çoğunlukla 22935,34 - 19406,66 um2 (%74) arasında değiştiğini gözlemledik. 1. kutup hücresinin de genelde düzenli bir yapı gösterdiğini ve alan değerlerinin çoğunlukla 339,16 - 189,04 um2 (%76) arasında değiştiğini gözlemledik. Oosit alan dağılımım ise çoğunlukla 10579,73 - 8365,27 um2 (%79.4) arasında gözlemledik. Perivitellin aralıktaki granülasyon parametremizin çoğunlukla 2 ile 3 değerleri arasında (%49.7 - %41.1) değiştiğini gördük. Elde ettiğimiz genetik sonuçlar ile; 43 opioid oosit tespit ettik, 69 anöploid oositin transferini engelledik. En çok anormal sinyalleri 22.kromozomdan aldık ve 58gözlemlediğimiz anöploidi sonuçlan genelde, Lmayozda meydana gelen kardeş kromatidlerdeki dengesiz bölünmeden kaynaklandığını saptadık. Sonuç olarak; hasta yaşının, morfolojik ve morfometrik parametrelerin genetik sonuçlar ile arasında istatistiksel olarak anlamlı bir korelasyon bulamadık. Morfometrik parametrelerimizin her hastanın her oositine özgün değerler taşıdığım gözlemledik. Ayrıca sitoplazma kalitesinin O.günden l.güne çok değişmediğini ve 1. kutup hücrelerinin uzun süre kültüre edilmesinin FISH sonuçlarım kötü yönden etkilediğini gördük. Anahtar kelimeler: Yardımcı üreme teknikleri, Preimplantasyon genetik tam (PGD), FISH, Anöploidi, Lazer sistemiyle kutup hücresi biyopsisi, Morfoloji, 1. kutup hücresi. 59

Abstract:
8. SUMMARY FISH technique and morphological methods for investigation of l.polar body which is obtained by polar body biopsy technique. In our study we analyzed the morphological and morfometrical parameters of oocytes such as; oocyte morphology and diameters, perivitellin space granulation, oocyte diameters with zona pellucida, l.polar body morphology and diameters, oocyte cytoplasma quality in day 0 and dayl. We also' performed genetic evulation of l.polar body after polar body biopsy by FISH technique for aneuploidy and euploidy on chromosomes 13, 16, 18, 21 and 22. We organize as an experimental group, 20 patients with 176 oocytes who underwent PGD treatment after ICSI. Our control groups were; 1. control group, 10 patients with 20 unfertilized oocytes and 2.control group, 20 patients with 148 oocytes who underwent ICSI treatment The morphological parameters we examined; regularity or irregularity for oocyte and regularity or fragmentation from 1-3 for polar body, granulation from 1- 5 in perivitellin space and in cytoplasma quality we graded from 1-4. Images of oocytes were taken and biopsy was performed by an air-oil system micromanupulator with laser system and Octax Eyeware software. Genetic results were analyzed in flouresense microscope. Diameters were taken in two dimensional and areas were calculated for istatistical analyzes. Morfological, morfometrical and genetic results examined in general distrubution and per patient. We compared fertilization results of experimental and 2.control group, response rates to the FISH test of 1. control and experimental group's. We also analyzed correlation of morfological and morfometrical datas with genetic results. In general distribution of our experimental group oocytes, oocytes with zona pellucida were generally regular in shape (%93.2) and area values were between 22935,34 - 19406,66 um2 (%74) and also polar bodies were generally regular in shape (%40.5) and area values were between 339,16 - 189,04 \ım2 (%76). Oosit area distrubution was between 10579,73 - 8365,27 um2 (%79.4). We analyzed that granulation in perivitellin space was generally between 2 and 3 (%49.7 - %41.1). 60In genetic results; we found out 43 euploid oocytes and prevented transfer of 69 oocyte which were aneuploid. We identified aneuploidy results mostly in chromosome 22 and generally we got aneuploidy results because of unbalanced predivision of sister chromatids at meiosis I. As a result, there is no istatisticaUy significant correlation between morfological and morfometrical parameters with genetic results. Distribution of morfometrical parameters has big variences when examined per patient. Cytoplasmic quality doesn t change a lot from day 0 to dayl. Also there is no istatisticaUy significant correlation between age of patient with morfological, morfometrical and genetic parameters. Culturing polar bodies for a longer time inversely influences FISH results. Key words: Assisted reproductive techniques, Preimplantation genetic diagnosis (PGD), FISH, aneuploidy, Polar body biopsy with laser, Morfology, 1. polar body. 61