Endotoksin ile indüklenmiş koryoamniyonit gebe sıçan modelinde magnezyum ve fingolimodun fetal inflamatuvar belirteçlere etkisi
Effects of magnesium and fingolimod on fetal inflammatory markers in endotoxin-induced chorioamnionitis pregnant rat model
Yazar: SERENAT YALÇIN
Danışman: PROF. DR. MEKİN SEZİK
Süleyman Demirel Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2018
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Endotoksinler = Endotoxins ; Fingolimod = Fingolimod ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Magnezyum = Magnesium ; Nöroproteksiyon = Neuroprotection ; Profilaksi = Prophylaxis ; Sıçanlar = Rats ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Amaç: Fingolimod, nörokoruyucu ve enflamasyon önleyici etkileri nedeni ile
hastalık modifiye edici ilaç olarak multipl skleroz tedavisinde kullanılmaktadır.
Sıçan modelindeki önceki deneysel araştırmalarımızda antenatal fingolimod
tedavisinin fetal nörokoruyucu etkiler göstermesinden yola çıkarak mevcut tez
çalışmasında antenatal fingolimod uygulamasını standart nörokoruyucu tedavi olan
magnezyum sülfat ile karşılaştırmayı amaçladık. Fingolimod ve magnezyum sülfatın
(mg-sülfat) kombine kullanımının fetal beyin hasarını önlemede tek ilaçlı
profilaksiden daha etkin olduğu hipotezini kurduk.
Yöntem: Toplam 28 gebe rat 0.80 gebelik süresinde 7 deneysel gruba
bölündü: (1) Tedavisiz periton içine (IP) serum fizyolojik (SF), (2) Tedavisiz IP
endotoksin (1 mg/kg), (3) IP endotoksin + subkütan (sc) mg-sülfat (270 mg/kg
yükleme dozunu takiben doğuma kadar her 20 dakikada bir 27 mg/kg idame), (4) IP
endotoksin + IP tek doz fingolimod (4 mg/kg), (5) IP endotoksin + mg-sülfat +
fingolimod, (6) SF + fingolimod ve (7) SF + mg-sülfat + fingolimod. Endotoksin
uygulaması sonrası 4. saatte histerotomi ile preterm doğum gerçekleştirildi ve fetal
beyin örnekleri elde edilerek interlökin-6 (IL-6), interlökin-10 (IL-10) ve S100 beta
boyamaları immünohistokimya ile değerlendirildi. Karşılaştırmalarda Mann-Whitney
U testi kullanıldı.
Bulgular: Endotoksine maruz bırakılan hayvanlarda kontrollere göre IL-6,
IL-10 ve S100 beta boyanmasındaki artış ile deneysel modelin geçerliliği doğrulandı.
Mg-sülfat ve fingolimodun, endotoksine maruz kalan hayvanlarda IL-6, IL-10 ve
S100 beta boyanmasını azalttığı (tüm karşılaştırmalar için p<0.001) saptandı.
Fingolimod IL-6 ekspresyonunu azaltmada mg-sülfattan daha etkindi (p=0.002).
Kombine tedavi, tek başına mg-sülfata göre IL-6 ve IL-10 boyanmasında daha fazla
azalmaya yol açmıştı (p=0.001ve p=0.002). Endotoksine maruz kalmayan fetüslerin
beyin dokularında fingolimod veya fingolimod + mg-sülfat kombine tedavisinin
zararlı etkisi saptanmadı (tüm karşılaştırmalar için p> 0.05).
Sonuç: Fingolimod, inflamasyon ile indüklenen preterm beyin hasarına karşı
cazip bir yeni ilaç adayıdır ve mg-sülfat ile kombine edildiğinde ilave etki söz
konusu olabilir.

Anahtar Kelimeler: Fingolimod, İnflamasyon, Magnezyum, Nöroprotektif

Abstract:
Objective: Fingolimod is a disease-modifying agent used in multiple
sclerosis treatment with neuroprotective and anti-inflammatory effects. Our recent
research showed fetal neuroprotective effects of antenatal fingolimod treatment in
the rat model. Here, we aim to expand our knowledge on antenatal fingolimod
therapy in comparison to standard neuroprotection with magnesium sulphate (mgsulphate). We also hypothesized that combined treatment (fingolimod plus mgsulphate) is more effective than single-agent prophylaxis against fetal brain injury.
Methods: Twenty-eight pregnant rats were evaluated in 7 experimental
groups at 0. 80 gestation: (1) intraperitoneal (IP) saline only, (2) IP endotoxin (1
mg/kg) only, (3) IP endotoxin + subcutaneous mg-sulphate (270 mg/kg loading dose
followed by 27 mg/kg maintenance every 20 minutes until preterm delivery), (4) IP
endotoxin + IP single dose fingolimod (4 mg/kg), (5) IP endotoxin + mg-sul sphate +
fingolimod, (6) saline + fingolimod, and (7) saline + mg-sulphate + fingolimod.
Preterm delivery was induced by hysterotomy 4 h after endotoxin administration, and
fetal brain samples were evaluated for interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10),
and S100 beta by immunohistochemistry. Mann-Whitney U-test was used for
comparisons.
Results: The validation of the experimental model was confirmed by
increased IL-6, reflex increase in IL-10, and increased S100 beta staining in
endotoxin-exposed animals compared to vehicle controls. Both magnesium and
fingolimod decreased IL-6, IL-10, and S100 beta staining in endotoxin-exposed
animals (p<0.01 for all comparisons). Fingolimod was more effective in mitigating
IL-6 expression compared to mg-sulphate (p=0.002). Combined treatment was
associated with decreased IL-10 (p=0. 002) and IL-6 (p=0. 001) staining compared to
mg-sulphate alone. Fingolimod or combined fingolimod + mg-sulphate did not have
any detrimental effects in non-endotoxin-exposed pups' brain tissues (p>0.05 for all
comparisons).
Conclusion: Fingolimod is an attractive novel candidate drug against
inflammation-induced preterm brain injury and seems to have an additive effect
when combined with mg-sulphate.

Keywords: Fingolimod, Inflammation, Magnesium, Neuroprotective