Doping açısından yarış atlarına B12 vitamini uygulamasının kan ve idrar kobalt düzeylerine etkisi
The effect of vitamin B12 administration on blood and urine cobalt levels of race horses in terms of doping
Yazar: ERTUĞRUL GÜNEŞ
Danışman: PROF. DR. MURAT YILDIRIM
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Farmakoloji ve Toksikoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Veteriner Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Arap atları = Arab horses ; Atlar = Horses ; Doping = Drug ; Kobalt = Cobalt ; Sporda doping = Doping in sport ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; Vitamin B 12 = Vitamin B 12 ; Yarış atları = Racehorses

Özet:
Kobalt ve tuzlarının insanlarda ve bazı hayvan türlerinde eritropoetik etkileri gösterilmiştir. Kobalt, geçmişte insanlarda anemi tedavisinde hematopoezin desteklenmesi amacıyla yaygın olarak kullanılmış ancak kardiyomiyopati, kardiyovasküler ve renal yetmezlikler gibi ciddi yan etkilere neden olduğu bildirildiğinden kullanımına son verilmiştir. Kobalt tuzlarının eritropoetik etkileri nedeniyle insan ve hayvan sporlarında kullanımı uluslararası yarış otoriteleri olan; Dünya Antidoping Ajansı (WADA), Uluslararası Binicilik Federasyonu (FEI) ve Uluslararası At Yarışı Otoritesi Federasyonu (IFHA) tarafından yasaklanmıştır. At yarışlarında; ülkemizin de tavsiye niteliğindeki kararlarını uyguladığı IFHA'nın belirlemiş olduğu Uluslararası Yarışçılık, Yetiştiricilik ve Müşterek Bahisler Anlaşmasına (IABRW) göre, yarış atları için kobalt eşik limitleri idrarda 100 ng/mL ve plazmada (proteine bağlı ve serbest) 25 ng/mL olarak belirlenmiştir. B12 vitamini ise yasaklı olmamasına rağmen kimyasal yapısında yaklaşık %5 oranında kobalt içermektedir. 
Bu çalışmanın temel amacı; yaygın kullanıma sahip olan B12 vitamininin atlarda önerilen dozlarda uygulanmasının idrar ve plazmadaki kobalt düzeylerine etkisini ortaya koymak ve bu değerleri doping kuralları kapsamında değerlendirmektir. Bunun yanısıra, parenteral uygulanan tek doz siyanokobalaminin atlardaki farmakokinetiğinin ortaya konulması da hedeflenmiştir. 
Belirtilen amaç kapsamında uygulama öncesinde, çalışma sonuçlarını etkileyebilecek faktörler belirlenmiş ve gerekli çalışmalar yürütülmüştür. Çalışmada yer alacak yarış atlarının genel muayenesi yapıldıktan sonra, kan örnekleri alınarak hemogram, biyokimyasal analizler, kobalt ve siyanokobalamin analizleri yapılmıştır. Hemogram ve biyokimya analizleri ile hayvanların sağlık durumları ile ilgili değerlendirme yapılırken, kobalt ve siyanokobalamin analizleri ile atların çalışma için uygunluğu gösterilmiştir. Ayrıca çalışma öncesinde atların içme suları ve yemlerinde B12 vitamini ve kobalt analizleri yapılarak dışarıdan maruz kalınabilecek kobalt kaynakları ortaya konulmuştur. Analiz sonuçlarının güvenilirliğini sağlamak amacıyla metot validasyonları gerçekleştirilmiştir. Ön hazırlıkların tamamlanmasını takiben yarış atlarına 20 µg/kg dozda deri altı, kas içi ve vena içi yollarla siyanokobalamin uygulanmış, ardından plazma ve idrarda siyanokobalamin ve kobalt analizleri gerçekleştirilmiştir. Siyanokobalaminin atlardaki farmakokinetik verilerinin elde edilmesinin yanı sıra, plazma ve idrarda saptanan kobalt değerleri IFHA'nın belirtmiş olduğu limitlere göre değerlendirilmiştir. Yapılan değerlendirmede parenteral uygulama sonrasında alınan plazma örneklerinde 25 ng/mL eşik limit aşılmaz iken, uygulamadan yaklaşık 5 saat sonra alınan idrar örneklerinde tüm uygulama yollarında 100 ng/mL eşik limitin aşıldığı görülmüştür

Abstract:
The erythropoietic effects of cobalt and its salts have been demonstrated in humans and some animal species. In the past, Cobalt was widely used to support hematopoiesis in the treatment of anemia in humans, but it was discontinued because it has been reported to cause serious side effects such as cardiomyopathy, cardiovascular and renal failures. Due to the erythropoietic effects of the use of cobalt salts in human and animal sports, it is prohibited by the international racing authorities; World Antidoping Agency (WADA), the International Equestrian Federation (FEI) and the International Federation of Horseracing Authority (IFHA). In horse races; According to the International Agreement On Breeding, Racing And Wagering And Appendixes (IABRW) determined by IFHA, which has implemented its advisory decisions in our country, the threshold limits of cobalt for racehorses have been determined as 100 ng/mL in urine and 25 ng/mL in plasma (protein bound and free). 
The main purpose of this study is to; reveal the effect of the widely used vitamin B12 at recommended doses on cobalt levels in urine and plasma and to evaluate these values within the scope of doping rules and regulations. In addition, it is also aimed to reveal the pharmacokinetic data of parenterally administered single dose cyanocobalamin in horses. Within the scope of the stated purpose, the factors that may affect the results of the study were determined before the application and the necessary studies were carried out. After the general examination of the racehorses to be included in the study, blood samples were taken and hemogram, biochemical analyzes, cobalt and cyanocobalamin analyzes were performed. While evaluating the health status of animals with hemogram and biochemistry analyzes, the suitability of horses for the study was demonstrated by cobalt and cyanocobalamin analyzes. In addition, vitamin B12 and cobalt analyzes were made in drinking water and feed before the study, so cobalt sources that could be exposed from outside were identified. Method validations were carried out to ensure the reliability of the analysis results. After the preliminary preparations were completed, cyanocobalamin was administered to the race horses at a dose of 20 µg/kg subcutaneously, intramuscularly and intravenously, and then cyanocobalamin and cobalt analysis were performed in plasma and urine. In addition, obtaining the pharmacokinetic data of cyanocobalamin in horses, the cobalt results, obtained in plasma and urine were evaluated according to the limits specified by IFHA. In the evaluation, 25 ng/mL threshold limit was not exceeded in any administration route in the plasma samples taken, while it was observed that the 100 ng/mL threshold limit was exceeded in the urine samples taken approximately 5 hours later.