İnfertilite ve metilentetrahidrofolat redüktaz genotip ilişkisi
Association of infertility and methylenetetrahydrofolate reductase genotypes
Yazar: HALİL İBRAHİM PAZARBAŞI
Danışman: PROF. DR. HATİCE KORKMAZ GÜVENMEZ ; DOÇ. DR. MEHMET BERTAN YILMAZ
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Genler-MTHFR = Genes-MTHFR ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; İnfertilite =

Özet:
Açıklanamayan infertilite, konvansiyonel tetkiklerle sebebi tespit edilemeyen ve infertil çiftlerin %15'inde görülen bir durumdur. Literatürde, daha önce yayımlanan sınırlı olgu sayılı çalışmalarda, metilentetrahidrofolat redüktaz (MTHFR) C677T ve A1298C polimorfizmleri ile açıklanamayan infertilite arasında bir ilişki olabileceğine dikkat çekilmiştir. Bu çalışmanın amacı, folat metabolizmasında yer alan MTHFR geninde meydana gelen polimorfizmlerin allel frekanslarını belirlemek ve infertilite riski ve genetik çeşitlilik açısından sonuçları değerlendirmektir. MTHFR geninin iki yaygın polimorfizmi (C677T ve A1298C) açıklanamayan infertilite tanısı alan çiftler ve sağlıklı kontrollerde çalışılmıştır (C677T polimorfizmi için n=60; A1298C polimorfizmi için n=62). MTHFR genotipleri, ABI Genetic Analyzer cihazında, multipleks PCR amplifikasyon/ligasyon ürünlerinin SNP (Single Nucleotide Polymorphism=Tek nükleotid polimorfizmi)  analizi ile çalışılmıştır. DNA'lar Invitrogen Genomic DNA Mini Kit (CA, USA) ile lökositlerden izole edilmiştir. Çalışmamızda, açıklanamayan infertilite ve kontrol grubu; kadın ve erkek cinsiyetleri arasında MTHFR C677T polimorfizminin genotip ve allel sıklığı açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır (p>0.05). A1298C polimorfizmi açısından CC genotip oranlarının açıklanamayan infertilite tanısı almış erkeklerde kontrol grubuna göre daha düşük olduğu ve bu farklılığında istatistiki olarak önemli (p<0.05) olduğu bulunmuştur. İnfertil ve kontrol grupları arasında serum folik asit ve homosistein düzeyleri karşılaştırıldığında; MTHFR C677T heterozigot bireylerin folat ve homosistein değerleri arasında; MTHFR C677T normal bireylerin homosistein değerleri arasında; MTHFR A1298C heterozigot, normal ve homozigot  bireylerin homosistein değerleri arasında; kadın infertil ve kontrol gruplarında MTHFR C677T heterozigot ve normal bireylerin folat değerleri arasında; MTHFR C677T normal bireylerin homosistein değerleri arasında; MTHFR A1298C heterozigot ve normal bireylerin folat değerleri arasında istatistiki olarak önemli fark bulunmuştur. Açıklanamayan infertilite etiyopatogenezinde halen netleşmemiş noktalar mevcuttur. Bu çalışmanın sonucunda, MTHFR C677T polimorfizmi ile açıklanamayan infertilite arasında anlamlı bir ilişki çıkmamakla beraber, sadece erkeklerde, A1298C polimorfizmleri ile açıklanamayan infertilite arasında anlamlı bir ilişki mevcuttur. MTHFR geninin her iki polimorfizmi açısından ilişki gösterilen çalışmaların da literatürde mevcut olması nedeniyle bu konuyu netleştirebilmek için, gelecekte yapılacak geniş olgu sayılı araştırmalara ihtiyaç vardır. Çalışmamızın sonuçları, MTHFR A1298C polimorfizmi ve erkek fertilite problemleri arasındaki ilişkiyi desteklemektedir.

Abstract:
Infertility is defined as unexplained when all of the tests of a basic infertility evaluation return within normal limits and present in 15% of infertile couples. Some studies indicate that male or female probands contribute to the association of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR C677T and A1298C) mutations with fertility problems in grown adults. The objective of this study was to analyze the MTHFR s C677T and A1298C genotype distributions in couples with unexplained fertility problems (UFP) and healthy controls. Two common variants C677T and A1298C of the MTHFR gene were screened in infertile couples (n =60 for C677T polymorphism; n=62 for A1298C polymorphism) and  controls from Çukurova region of Turkey. The MTHFR genotypes were studied by automated SNP (Single Nucleotide Polymorphism)  analysis of Multiplex PCR-amplification/ligation products with ABI Genetic Analyzer. DNA from blood leukocytes was obtained using an Invitrogen Genomic DNA Mini Kit (CA, USA), according to the manufacturer's instructions. Statistically no difference found for frequencies of MTHFR genotypes and allels between the couples with UFP and healthy controls and between males and womens (p>0.05). Frequency of MTHFR 1298 CC genotype for UFP males was lower than  control males and this difference was statistically significant (p<0.05). When we compared the folate and homocyctein levels between the couples with UFP and healthy controls and between males and womens, we found statistically significant difference between folate and homocyctein levels of MTHFR 677 heterozygote individuals; homocyctein levels of MTHFR 677 normal individuals; homocyctein levels of MTHFR 1298 heterozygote, normal and homozygote individuals; folate  levels of MTHFR 677 heterozygote and normal womans; homocyctein levels of MTHFR 677 normal individuals; folate levels of MTHFR 1298 heterozygote and normal individuals  (p<0.05). There are subjects that are not clear on etiopathogenesis of unexplained infertility. In this study, we don't find an association between unexplained infertility and MTHFR C677T polymorphism but we found an association only for MTHFR A1298C polymorphism between males with UFP and controls. There are literatures that showing association between unexplained infertility and two polymorphisms of MTHFR gene. So, there is a necessity for more studies with more case number to clarify this subject. The data presented in this study to support the relation between MTHFR A1298C polymorphisms and fertility problems in grown male adults.