D-galaktoz ile indüklenmiş yaşlanma modelinde gelişen karaciğer fibrozisinde SIRT2 inhibisyonunun etkisi
Effect of SIRT2 inhibition on hepatic fibrosis that develops in the d-galactose-induced aging model
Yazar: ASLI NUR BAHAR
Danışman: PROF. DR. KAZİME GONCA AKBULUT
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Fizyoloji = Physiology

Özet:
Çalışmamızda, D-galaktozun neden olduğu yaşlanma modelinde, AGK-2 ile yapılan SIRT2 inhibisyonunun karaciğer fonksiyonlarına etkisi, fibrozis ve inlamasyon gibi patolojik süreçlerdeki rolünün belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada toplam 32 adet 3 aylık sprague dawley sıçan kullanıldı. Sıçanlar; kontrol, %4DMSO+PBS+D-GAL, D-GAL, D-GAL+AGK2 şeklinde 4 gruba ayrıldı. Deney ve kontrol gruplarına 10 hafta D-galaktoz (150 mg / kg / gün), spesifik SIRT2 inhibitörü olarak AGK-2 (10µM/bw), %4DMSO+PBS ve serum fizyolojik uygulaması yapıldı. Alınan karaciğer dokularında; biyokimyasal parametreler (ALT, AST, trombosit miktarı, LDH, HDL, VLDL, total kolestrol, trigliserit) çalışıldı. AST-ALT Oranı, AST-Trombosit Oranı İndeksi (APRI), karaciğer indeksi (karaciğer ağırlığı/vücut ağırlığı) hesaplandı. Yaşlanma modelinde karaciğer SIRT2 düzeyleri western blot ve immünohistokimyasal analiz ile belirlendi. Paraoksonaz plazma ve doku düzeyleri, NFĸB, IL 1β ve IL 6 düzeyi ELISA ile çalışıldı. TGF β, β katenin, PDGFBB genlerinin ifade düzeyi gerçek zamanlı-polimeraz zincir reaksiyonu ile belirlendi. Histolojik fibrotik değişiklikler (Kolajen 1,3 ve α-SMA, Fibronektin, β katenin) immünohistokimyasal analiz ile belirlendi. Kolajen lif yoğunluğu değerlendirmesi ve histopatolojik skorlama yapıldı. Bu parametrelerin SIRT2 ile ilişkisi kuruldu. İstatiksel değerlendirme için One-Way ANOVA testi kullanıldı (p<0,05). Bulgularımız D-Galaktoz uygulaması ile AST, AST-ALT Oranı, APRI, SIRT2 protein ekspresyonu, IL1β, TGF β, β katenin, Tip I kolajen, Tip III kolajen ve α-SMA, kolajen lif yoğunluğu ve histopatolojik skorun arttığı, ALT ve lipid panelerinin değişmediği, paraoksonaz plazma ve NFĸB düzeyinin azaldığı görüldü. AGK-2 uygulamasının ise; karaciğerde yaşlanmaya bağlı görülen fibrotik değişiklikleri tersine çevirmede ve yaşlanmaya bağlı fonksiyon kayıplarını iyileştirmede etkili olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
In this study, it was aimed to determine the role of SIRT2 inhibition with AGK-2 in pathological processes such as fibrosis and inflammation in the aging model caused by D-galactose. A total of 32, 3-month-old Sprague Dawley rats were used. Rats; were divided into 4 groups as control, %4DMSO+ PBS, D-GAL, D-GAL+AGK2. D-galactose (150 mg / kg / day), AGK-2 (10µM/bw), %4DMSO+ PBS and saline as a specific SIRT2 inhibitor were applied to the experimental and control groups for 10 weeks. In the liver tissues; biochemical parameters (ALT, AST, platelet, LDH, HDL, VLDL, total cholesterol, triglyceride) were studied. AST-ALT Ratio, AST-Platelet Ratio Index (APRI), liver index (liver weight/body weight) were calculated. Liver SIRT2 levels in an aging model were determined by western blot and immunohistochemical analysis. Paraoxonase plasma and tissue levels, NFĸB, IL 1β and IL 6 levels were studied by ELISA. Expression level of TGF β, β catenin, PDGFBB genes determined by real-time-polymerase chain reaction. Histological fibrotic changes (Collagen1,3and α-SMA, Fibronectin, β-catenin) were determined by immunohistochemical analysis. Collagen fiber density assessment and histopathological scoring were performed. These parameters were associated with SIRT2. One-Way ANOVA test was used for statistical evaluation (p<0.05). Our findings showed that AST, AST-ALT Ratio, APRI, SIRT2 protein expression, IL1β, TGF β, β catenin, Type I collagen, Type III collagen and α-SMA, collagen fiber density and histopathological score increased with D-Galactose application. It was observed that ALT and lipid panels did not change, and paraoxonase plasma and NFĸB levels decreased. As for the AGK-2 application; We think that it may be effective in reversing aging-related fibrotic changes in the liver and improving aging-related loss of function.