Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki ve Bt SY49.1 suşlarının farklı yetiştirme koşullarındaki spor kristal konsantrasyonlarının ve protein profillerinin araştırılması
Investigation of spore crystal concentration and protein profiles of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and Bt SY49.1 strains in different growth conditions
Yazar: ENFAL ÇÖMLEKÇİ
Danışman: PROF. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ ; DOÇ. DR. SEMİH YILMAZ
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Bacillus thuringiensis = Bacillus thuringiensis ; Lowry yöntemi = Lowry method ; Spor = Sports ; Sıcaklık = Temperature

Özet:
Bu çalışmada Bacillus thuringiensis kurstaki (Btk) ve Bt SY49.1 suşlarının farklı yetiştirme koşullarında ürettikleri spor kristal konsantrasyonları ve gösterdikleri protein profilleri araştırılmıştır. Her iki suşun melas broth içeren besiyerinde, optimizasyon çalışmaları yapılan diğer besiyerlerine göre daha yüksek düzeyde hücre ürettiği ve sporlandığı gözlenmiştir. T3 besiyerinde 12 saat sonra sporlanma başlamışken melas broth ve B14 besiyerlerinde gelişen bakteriler 36'ncı saatten sonra sporlanmıştır. Hem Btk ve hem de Bt SY49.1 melas broth besiyerinde en yüksek oranda sporlanmayı ve protein üretimini pH 8 ve 9 değerlerinde göstermişken, T3 besiyerinde pH 7 ve 8 değerlerinde göstermişlerdir. Spor üretimindeki bu temayül protein üretiminde de görülmüştür. Farklı sıcaklık derecelerinde gerçekleştirilen inkübasyon sonucu en yüksek protein üretimi melas broth besiyerinde 40°C'de gerçekleşirken, T3 besiyerinde 20°C'de gerçekleşmiştir. Ayrıca bu suşların farklı sıcaklık ve pH derecelerinde sergiledikleri protein profilleri SDS-PAGE analizi ile görüntülenmiştir. Her iki suşun da düşük sıcaklıklarda (20 ve 30°C) daha çok bant verdikleri gözlenmiştir. Tüm sıcaklık dereceleri için her iki suşun düşük pH'larda daha az sporlandıkları ve daha az protein ürettikleri gözlenmiştir. Her iki suşun da düşük pH değerlerinde daha az protein ürettikleri SDS-PAGE analizi ile de doğrulanmıştır. Bt SY49.1, Btk ile kıyaslandığında 50°C'de pH 7, 8 ve 9 değerlerinde bant oluşturmuşken Btk'nin bu sıcaklık ve pH değerlerinde bant vermediği gözlemlenmiştir. Buradan Bt SY49.1'in yüksek sıcaklığa daha dayanıklı olduğu anlaşılmış ve bu durumun daha ileri protein analiz teknikleriyle de araştırılması gerektiği vurgulanmıştır.

Abstract:
In this study we have investigated spore crystal concentrations and protein profiles of Bacillus thuringiensis kurstaki (Btk) and Bt SY49.1 strains in different growth conditions. Both strains produced a higher level of cell and spore in the medium containing molasses broth when compared to other mediums. While sporulation begun after 12 h. in T3 sporulation medium, in molasses broth and B14 medium this spore formation was later than the 36th h. While both Btk and Bt SY 49.1 showed the highest rate of protein production and sporulation in molasses broth media at pH 8 and 9, similar results were observed at pH 7 and 8 in T3 medium. This trend were also observed in the protein production and sporulation. The highest rate of protein production in molasses broth media was realized after incubated at 40°C, the similar results were obtained at 20 °C for T3 medium. The exhibited protein profiles of these strains at different temperature and pH values were also visualized by SDS-PAGE analysis. Both strains exhibited much higher protein bands at lower temperatures (20 and 30 °C). The lowest sporulation level and protein production were observed at the low pH values (5 and 6) for all temperatures. Low protein production at a low pH values was also confirmed by SDS-PAGE analysis. Although Bt SY49.1 strain exhibited protein bands at 7, 8 and 9 pH values for 50 °C, Btk strain did not produce protein band at these pH values in this temperature. According to these results it was showen that Bt SY49.1 was more resistant to high temperatures and further protein analysis has been proposed to clarify this situation.