Sisplatin ve radyoterapi ototoksisitesine karşı asetil-l-karnitinin house ear ınstıtute-organ corti 1 (heı-oc1) hücre dizisi ve htb-186 medulloblastom hücreleri üzerine etkileri
The effects of acetyl-l-carnitine on house ear institute-organ corti 1 (hei-oc1) and htb-186 medulloblastom a cells against cisplatin and radiotherapy ototoxicity
Yazar: AYÇA PAMUKOĞLU KAYNAR
Danışman: PROF. DR. ZEKİYE SULTAN ALTUN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Asetilkarnitinin = Acetylcarnitine ; Hücre dizisi = Cell line ; Koklea = Cochlea ; Radyasyon = Radiation ; Radyoterapi = Radiotherapy ; Sisplatin = Cisplatin ; Toksisite = Toxicity

Özet:
Radyoterapi ve sisplatin gibi kemoterapötik ajanlar tek başına ya da kombine kanser tedavilerinde toksik etkiler oluşturabilir. Çalışmamızda in vitro koşullarda kohlea ve medulloblastom hücrelerine uygulanan radyoterapi (RT) ve sisplatinin (CDDP) oluşturduğu olası hasara karşı Asetil-L-Karnitinin etkisinin biyokimyasal ve moleküler olarak incelemesi amaçlanmıştır.
HEI-OC1 kohlea ve HTB-186 medulloblastom hücrelerine kemoterapi, radyoterapi ve kemoradyoterapi uygulanarak hücre canlılığı, apoptoz, MDA, kaspaz 3-8-9, mitokondri membran potansiyeli, ROS, GSSG/GSH, Nrf2 ve ilişkili genlerin ekspresyonları incelenmiştir. Bulguların, SPSS22 programında parametrik t-testiyle istatistik analizi yapılmıştır. p<0,05 değeri istatistiksel anlamlı kabul edilmiştir. HEI-OC1 (72saat) ve HTB-186 (24saat) hücrelerinde IC50 dozları; 5 Gy RT, 50 µM CDDP (HEI-OC1), 75 µM CDDP (HTB-186), 50 µM ALC (HEI-OC1) ve 25 µM ALC (HTB-186) olarak belirlendi. HEI-OC1 hücreleri kontrol grubuna göre; ALC+CDDP'de apoptoz, MDA, ROS, Nrf2 aktivasyonu ve Nrf2, GR, NQO1, GST genlerinin ekspresyonlarıyla ALC+RT'de apoptoz, MDA, ROS, HO-1 ve Nrf2 aktivasyonlarıyla NQO1, SOD3 genlerinin ekspresyonları, ayrıca ALC+CDDP+RT apoptoz, MDA, ROS, HO-1 aktivasyonu ve Nrf2, GR, HO-1, NQO1, SOD2, SOD3, GPx, GST, Gclm ve katalaz genlerinin ekspresyonları artmıştır.
HTB-186 hücreleri kontrol grubuna göre; ALC+CDDP+RT apoptoz, MDA, ROS, HO-1 ve Nrf2 aktivasyonları, GR, Gclm, NQO1, katalaz genlerinin ekspresyonlarıyla ayrıca CDDP+RT apoptoz, MDA, kaspaz 3-8-9, ROS, HO-1 aktivasyonu artmış ve GR, NQO1, Glcm, katalaz genlerinin ekspresyon ifadesi azalmıştır.
Çalışmamızda kulak hücrelerinde özellikle kemoradyoterapi+ALC uygulandığında Nrf2, antioksidan ve faz II detoksifiye edici genlerin ekspresyon seviyelerinin indüklendiği görülmüştür. Medulloblastom hücrelerine kemoradyoterapi+ALC uygulandığında Nrf2 oksidatif stres ilişkili genleri indüklerken, antioksidan ve faz II detoksifiye edici genlerin ekspresyon seviyelerini azalttığı saptanmıştır.

Anahtar Kelime: Kohlea, Medulloblastom, Asetil-L-Karnitin, Sisplatin, Radyasyon

Abstract:
Radiotherapy and Chemotherapeutic agents such as cisplatin (CDDP) may produce toxic effects either alone or in combination in cancer treatments. The aim of this study was to investigate in in-vitro models the protective effects of Acetyl-L-Carnitine (ALC) against radiotherapy (RT) and CDDP on the cochlea and medulloblastoma cells. The possible side effects were deciphered in biochemical and molecular levels.
Chemotherapy, radiotherapy and chemoradiotherapy were used on HEI-OC1 cohlea and HTB-186 medulloblastoma cells to investigate cell viability, apoptosis, MDA, caspase3-8-9, mitochondrial membrane potential, ROS, GSSG/GSH as well as Nrf2 and related genes expressions were investigated. In the SPSS22 program for statistical analysis parametric t-test was performed and p<0.05 was considered statistically significant. IC50 doses were in HEI-OC1 (72h) and HTB-186 (24h) cells; 5 Gy RT, 50 μM CDDP (HEI-OC1), 75 μM CDDP (HTB-186), 50 ALC (HEI-OC1) and 25 μM ALC (HTB-186). In HEI-OC1 cells in comparison to control group; by using ALC+CDDP, apoptosis, MDA, ROS, Nrf2 activation and expressions of Nrf2, GR, NQO1, GST genes and in ALC+RT apoptosis, MDA, ROS, HO-1 and in Nrf2 activations NQO1, SOD3 genes expression as well as in  ALC+CDDP+RT apoptosis, MDA, ROS, HO-1 activation and expression of Nrf2, GR, HO-1, NQO1, SOD2, SOD3, GPx, GST, Gclm and catalase genes were increased.
HTB-186 cells in comparison to control group; ALC+CDDP+RT apoptosis, MDA, ROS, HO-1 and Nrf2 activations and GR, Gclm, NQO1, catalase genes expressions also in CDDP+RT apoptosis, MDA, caspase 3-8-9, ROS, HO-1 activation increased and the expression levels of GR, NQO1, Glcm and catalase genes levels were down-regulated.
In our study especially in chemotherapy+ALC group it was observed that the expression levels of Nrf2, antioxidant and phase II detoxifying genes were induced in the ear cells. When chemoradiotherapy+ALC was applied to medulloblastoma cells, induced oxidative stress related genes like as Nrf2 however at the same time antioxidant and phase II detoxifying genes expressions levels were decreased. 

Key Words: Cohlea, Medulloblastoma, Acetyl-L-Carnitine, Cisplatin, Radiation