Mezenkimal kök hücrelerin meme kanserine etkilerinin in vitro araştırılması
In vitro investigation of the effects of mesenchimal stem cells on breast cancer
Yazar: İLKAY GÜZEL
Danışman: DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Kök hücreler = Stem cells ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İn vitro = In vitro

Özet:
Kanser organ veya dokulardaki hücrelerin iç ve dış etkenler nedeniyle meydana gelen mutasyonlar sonucu anormal çoğalmasıdır. Meme kanseri, kadınlarda en yaygın görülen kanser türüdür ve dünya genelinde kadınlarda en sık görülen ölüm nedenlerinden biridir. MDA-MB 231 insan meme adenokarsinomundan türetilmiş ve hücre zarında östrojen reseptörü, progesteron reseptörü ve insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 ifadelerinin eksikliği ile üçlü negatif meme kanseri olarak tanımlanan ve meme kanseri vakalarının yaklaşık% 15-20'sini oluşturan bir epitel kanser hücre tipidir. Meme kanseri genellikle cerrahi, radyasyon tedavisi, kemoterapi ve hormon tedavisi kombinasyonları, hedefli terapi ve immunoterapi ile tedavi edilir ancak bu tedavilerin yan etkilerinden dolayı günümüzde pek çok araştırma çalışması meme kanseri tedavisi için alternatif tedavi bulmayı amaçlamaktadır.Mezenkimal kök hücreler kordon kanı, Wharton'un jölesi, plasenta, kemik iliği, dişler ve yağ dokusu gibi çeşitli dokulardan izole edilebilir. Mezenkimal kök hücreler, osteoblastlar, adipositler ve kondrositler dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine farklılaşabilen multipotentstromal hücrelerdir. Mezenkimal kök hücre ve kanser ilişkisi ile ilgili çalışmalar bulunmaktadır ancak bu çalışmalardan elde edilen sonuçlar çelişkilidir. Yaptığımız bu tez çalışmasında insan diş folikülü kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin(DF-MKH) MDA-MB 231 hücresi üzerine proliferasyon ve apoptoz yönünden etkisinin olup olmadığının araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmamızda kullandığımız kök hücreler diş çeperinde bulunan diş folikülü dokusundan izole edildi 3.pasaja getirilen hücrelerin mezenkimal kök hücre karakterizasyonunu yapmak için pozitif ve negatif antikorlar kullanılarak flow sitometride analizleri yapılmıştır. Karakterizasyon analizi sonrası hücrelerin farklılaşma potansiyeli adipojenik, kondrojenik ve osteojenik farklılaşma kitleri uygulanarak mikroskop altında görüntülenmiştir. Her iki analiz sonrasındaki veriler sonucunda izole ettiğimiz kök hücrelerin mezenkimal kök hücre olduğu ispatlanmış ve kanser hücresine koşullandırılmış ortamın uygulama aşamasına geçilmiştir. Proliferasyon testi MTT yöntemi ile, apoptoz analizi ise Annexin V yöntemi ile flow sitometri  cihazında çalışılmıştır. DF-MKH'lardan elde edilen %50 doz koşullandırılmış besiyeri ortamı MDA-MB 231 hücre hattında kontrol grubuna göre canlılığı %66,6 ya düşürerek proliferasyonu  inhibe etmiştir. Apoptoz analizi sonucunda 24.saatte kontrol grubunun total apoptoz miktarı %12,5 %50 doz uygulanan hücrelerin ise % 16,5 bulunmuştur.48. saatte kontrol grubunun total apoptoz miktarı %13,1  %50 doz uygulanan hücrelerin ise % 20,35 bulunmuştur ve koşullandırılmış ortam kontrol hücrelerine göre apoptoza götürmüştür.

Abstract:
Cancer is an abnormal proliferation of cells in the organs or tissues as a result of mutations caused by internal and external factors. Breast cancer is the most common type of cancer in women and is one of the most common causes of death in women worldwide. MDA-MB 231 derived from human breast adenocarcinomas and cell membrane estrogen receptor, progesterone receptor, and human epidermal growth factor receptor 2 expression with triple negative breast cancer is defined as the lack of all breast cancers and approximately 15-20% of epithelial cancer is a type of cell that makes up an. Breast cancer, is usually treated with surgery, radiation therapy, combinations of chemotherapy and hormonal therapy, targeted therapy and immunotherapy, but because of the side effects of these treatments today, many research aims to find alternative treatment for breast cancer. Mesenchymal stem cells can be isolated from various tissues, such as cord blood, Wharton's jelly, placenta, bone marrow, teeth, and adipose tissue. Mesenchymal stem cells are multipotent stromal cells that can differentiate into various cell types, including osteoblasts, adipocytes, and chondrocytes. There are studies on the relationship between mesenchymal stem cells and cancer, but the results from these studies are contradictory. In this thesis, we aimed to investigate whether mesenchymal stem cells(DF-MSC) of human dental follicle origin have an effect on MDA-MB 231 cell in terms of proliferation and apoptosis. In our study, the stem cells we used were isolated from the tooth follicle tissue located on the tooth Wall 3. Flow cytometry analysis was performed using positive and negative antibodies to make mesenchymal stem cell characterization of cells brought into the passage. After characterization analysis, the differentiation potential of cells was displayed under the microscope by applying adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation kits. As a result of the data after both analyses, it was proven that the stem cells that we isolated were mesenchymal stem cells, and the application phase of the environment conditioned on the cancer cell was passed. Proliferation test was studied by MTT method and apoptosis analysis by Annexin V method in flow cytometry device. 50% dose conditioned medium medium obtained from DF-MSCs inhibited proliferation by reducing the viability to 66.6% in MDA-MB 231 cell line compared to the control group. As a result of the apoptosis analysis, the total apoptosis amount of the control group at 24 hours was 12.5% and 16.5% of the cells dosed with 50%. The amount of total apoptosis per hour was 13.1% in the control group and 20.35% in the cells dosed with 50%, and conditioned environment led to apoptosis compared to the control cells.