Akut lösemili hastalardan tanı sırasında alınan blast hücrelerinin canlılıkları üzerine B12 vitamini ve D vitamininin etkileri
The effects of vitamin B12 and vitamin D on the viability of blast cells obtained from acute leukemia patients during diagnosis
Yazar: MİRAÇ BERFU TOKUÇ ÜLGEN
Danışman: PROF. DR. AHMET KOÇ
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Çocuk Hematolojisi Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Hematoloji = Hematology ; Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Hematoloji = Hematology ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Multivitamin = Multivitamin ; Çocuk sağlığı = Child health ; Çocuk-hastaneye yatırılmış = Child-hospitalized

Özet:
Amaç: Akut lösemiler (AL) çocukluk çağının en sık görülen kanserleridir. Ülkemizde B12 vitamini ve D vitamini eksikliklerinin yaygın olarak görülmesi nedeniyle AL tanısı alan hastalarda da bu vitamin eksiklikleri saptanmakta ve replasman tedavisi gerekmektedir. B12 Vitamini, DNA sentezinde ve protein sentezinde iki noktada kofaktör olarak kullanılmaktadır. D vitamini eksikliğinin kanser gelişim riskinde artış ile ilişkili olduğu ve D vitamininin insan miyeloid lösemi hücrelerinin in vitro büyümesini baskıladığı bildirilmiştir. Bu çalışmada in vitro olarak inkübe edilen blast hücreleri üzerine B12 vitamini ve D vitamininin etkilerinin gösterilmesi amaçlanmaktadır.

Yöntem: Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematolojisi ve Onkolojisi Bilim Dalı'na başvuran 34 akut lösemi tanılı hasta çalışmaya dahil edilmiştir. Çalışmada kemik iliği aspirasyonundan elde edilen blast hücreleri beş farklı besiyeri ile proliferasyon ve canlılık analizleri için kültür edilmiştir. Birinci grup besiyerine hiçbir şey eklenmemiş (Kontrol grubu- B12 vitamini ve D vitamini eklenmeyen), ikinci gruba 200 ng/L B12 vitamini konsantrasyonu, üçüncü gruba 400ng/L B12 vitamini konsantrasyonu sağlanacak şekilde B12 vitamini, dördüncü gruba 20 μg/L D vitamini konsantrasyonu ve beşinci gruba 40 μg/L D vitamini konsantrasyonu sağlanacak şekilde D vitamini eklenmiştir. Bahsedilen besiyerleri ile kültür edilen blast hücreleri beş gün (120 saat) 37°C derecede inkübe edilmiştir. İnkübasyon sürecinin ardından akım sitometri cihazı ile proliferasyon ve canlılık analizi yapılmıştır.

Bulgular: Özellikle 400 ng/L konsantrasyonunda olacak şekilde B12 vitamini eklenen besiyerlerindeki canlı hücre sayıları istatiksel olarak anlamlı düzeyde artış göstermiştir (p=0,029). Erken apopitoz fazında B12 vitaminin her iki düzeyinde de apopitozda benzer oranda ve istatiksel olarak anlamlı düzeyde azalma görülmüştür (p: 0,001). D vitamini eklenmeyen ve eklenen gruplarda, gruplar arasında proliferasyon ve canlılık akım sitometri ile değerlendirilmiş fakat istatiksel olarak anlamlı fark bulunamamıştır (ikisi için de p>0.05).

Sonuç: Besiyerlerine B12 vitamini eklenen gruplarda in vitro ortamda B12 vitaminin blast hücrelerinin canlılığını artırdığı ve apoptozunu azalttığı, D vitaminin ise in vitro olarak blast hücrelerine önemli bir etkisinin olmadığı gösterilmiştir. Çalışma sonuçlarımız akut lösemi hastalarının tanı aldıktan sonra eksikliği saptanması durumunda B12 vitamini tedavisi verilmesini desteklememekte, D vitamini tedavisi verilmesini ise desteklemektedir. Daha fazla hasta sayısıyla in vitro ortamda benzer prospektif çalışmalar yapılması bulgularımızı destekleyecektir.

Anahtar Kelimeler: Akut Lösemi, B12 vitamini, D vitamini, Blast, Akım sitometri, Proliferasyon, Canlılık, Apopitozis, in vitro, çocuk.

Abstract:
Objective: Acute leukemias (AL) are the most commonly seen type of cancer in childhood. Due to the widespread occurrence of vitamin B12 and vitamin D deficiencies in our country, vitamin deficiencies are commonly detected in patients diagnosed with AL, necessitating replacement therapy. Vitamin B12 is used as a cofactor at two points in DNA synthesis and protein synthesis. Vitamin D deficiency has been reported to be associated with an increased risk of cancer development and to suppress the in vitro growth of human myeloid leukemia cells. This study aims to demonstrate the effects of vitamin B12 and vitamin D on blast cells incubated in vitro.

Methods: A total of 34 patients diagnosed with acute leukemia who applied to the Department of Pediatrics, Hematology, Faculty of Medicine, Marmara University, were included in the study. Blast cells obtained from bone marrow aspiration were cultured with five different culture media for proliferation and viability analyses. No additions were made to the first group culture medium (Control group - no addition of vitamin B12 and D vitamin). Vitamin B12 was added to provide vitamin B12 at a concentration of 200 ng/L to the second group and 400 ng/L to the third group. Vitamin D was added to provide vitamin D at a concentration of 20 μg/L to the fourth group and at a concentration of 40 μg/L to the fifth group. Blast cells cultured with the mentioned culture media were incubated for five days (120 hours) at 37°C. Proliferation and viability analysis were performed using flow cytometry after the incubation process.

Results: The number of live cells in culture media supplemented with vitamin B12, especially at a concentration of 400 ng/L, showed a statistically significant increase (p=0.029). In the early apoptosis phase, there was a similar and statistically significant decrease in apoptosis at both levels of vitamin B12 (p: 0.001). In groups with and without added vitamin D, proliferation and viability were evaluated by flow cytometry, but no statistically significant difference was found between the groups (p>0.05 for both).

Conclusion: In groups which vitamin B12 was added to culture media, it was shown that vitamin B12 increased the viability of blast cells and reduced apoptosis in vitro, while vitamin D did not have a significant effect on blast cells in vitro. Our study results do not support the administration of vitamin B12 therapy to acute leukemia patients if deficiency is detected after diagnosis, but suggests the administration of vitamin D therapy. Further prospective studies with a larger number of patients in an in vitro environment will support our findings.

Keywords: Acute Leukemia, Vitamin B12, Vitamin D, Blast, Flow cytometry, Proliferation, Viability, Apoptosis, in vitro, child.