Kanserli ve ölümsüzleştirilmiş mezotelyum hücrelerinden seçilen klonlar üzerine kapsaisin etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of capsaisin on the clones selected from immortalized and cancerous cells of mesothelium
Yazar: GİZEM CEYLAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ SABAHATTİN CÖMERTPAY
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Malignant mezoteliyoma, nadir görülen ve agresif bir kanser türüdür. Bu kanser türü için henüz etkin bir tedavi yöntemi bulunamamıştır. Bunun en önemli sebeplerinden birinin tümör heterojenitesi olduğu düşünülmektedir; nitekim mezoteliyoma tümörlerinin poliklonal olduğu gösterilmiştir. Kapsaisin, Capsicum spp. cinsi bitkilerde (biber) özgün olarak üretilen ikincil bir metabolittir ve farklı türden kanser hücreleri üzerinde öldürücü etkisi olduğu in vitro ve in vivo olarak gösterilmiştir. Bu çalışmada; kanserli ve ölümsüzleştirilmiş mezotelyum hücrelerinden klonlar seçilmiş ve bu hücreler üzerinde kapsaisin sitotoksisitesi tespit edilmiştir. Buna göre; kanserli hücrelerden seçilen 9 klon için IC50 değerleri 273,5 µM, 256,9 µM, 282,1 µM, 246,8 µM, 254,9 µM, 249 µM, 256,7 µM, 259,7 µM, 217,8 µM iken ölümsüzleştirilmiş hücrelerden alınan 5 klon için bu değerler 344 µM, 373,4 µM, 326,1 µM, 420,3 µM, 564,3 µM olarak hesaplanmıştır. Daha sonra, klonlar üzerine belirlenen ortalama IC50 derişiminde (255 µM, 334 µM sırasıyla kanserli ve ölümsüzleştirilmiş hücreler için) kapsaisin uygulanarak hücrenin apoptotik yolaklarındaki kaspaz-3 değişimi mRNA ve protein düzeyinde gözlemlenmiştir.  qRT-PCR metoduyla edinilen sonuçlara göre; kanserli klon hücelerinde mRNA düzeyinde, kapsaisin mualemesi görmüş olan grup (KAP), yalnızca etanol uygulanmış (EtOH) ve hiçbir uygulama almamış (kontrol) gruplardan istatiksel olarak bazı durumlarda anlamlı düşüşler ve bazı durumlarda anlamlı yükselişler göstermiştir. Bu farklar seçilen klona bağlı olarak p≤0.05 (*), p≤0.01 (**), p≤0.001 (***) ve p≤0.0001 (****) şeklinde değişkenlik göstermiştir. Western blot metodu ile edinilen sonuçlara göre ise; protein düzeyinde aktif kaspaz-3 seviyesi bazı klonlarda artış gösterip apoptozisin indüklendiğini düşündürürken, bazı klonlarda ise aktif kaspaz-3 hiç görülmemiş ve apoptozun baskılandığı düşünülmüştür. Ayrıca, seçilen klonlar ile büyüme eğrileri oluşturulduğunda, bazı klonlar için KAP grubu 48 saat içerisinde EtOH ve Kontrol'e göre belirgin bir yavaşlık göstermişken bazı klonlar için bu fark ancak 72 saatte belirgin hale gelmiştir (p<0.05).

Abstract:
Mesothelioma is a rare and agressive form of cancer. Thus far, no effective treatment for this cancer has been found. It is thought that one of the reasons for its highly-resistant behaviour could be related to tumor heterogenity since mesothelioma tumors have been experimentally shown to be polyclonal in nature. Capsaicin is a secondary metabolite from a special class of alkoloids, which are uniqulely produced in the plants of Capsicum genus, and it has been demonstrated to have a fatal effect on a variety of cancer cells in vitro and in vivo. In this study, clones of cancerous and immortalized cells of mesothelium were selected and capsaicin cytotoxicity was determined for each. Consequently,IC50 values for the 9 clones selected from cancer cells were determined as 273,5 µM, 256,9 µM, 282,1 µM, 246,8 µM, 254,9 µM, 249 µM, 256,7 µM, 259,7 9 µM, 217,8 µM. For the 5 clones of immortalized cells, these values were calculated as 344 µM, 373,4 µM, 326,1 µM, 420,3 µM, 564,3 µM. Then, capsaisin at the mean IC50 concentration (255 µM, 334 µM, respectively, for cancer and immortalized cells) was applied to these clones and the caspase-3 change in apoptotic pathways of the cell was observed at the level of mRNA and protein. According to the results obtained by qRT-PCR method; group CAP of cancerous cells, which had the capsaicin treatment, showed statistically in some cases significant decreases and in some cases significant increases at mRNA level , compared to only ethanol treated (EtOH) and no treatment (control) groups. These differences were varied as p≤0.05 (*), p≤0.01 (**), p≤0.001 (***) and p≤0.0001 (****) depending on the clone studied. While, at protein level, active caspase-3 levels increased in some clones and this was considered as an indicator of apoptosis indution,  there was no active caspase-3 in others and this was understood asthe suppression of apoptosis. Furthermore, when growth curves were generated with the selected clones, the CAP group for some clones showed a significant slowness over EtOH and Control within 48 hours, whereas for some clones this difference became apparent only after 72 hours (p <0.05).