JAR ve JEG-3 koryokarsinom insan hücre kültüründe topotekan ve folik asit etkisinin incelenmesi
The examination of the effects of topotecan and folic acid on JAR and JEG-3 choriocarcinoma human cell culture
Yazar: RAŞAN EYÜP
Danışman: DOÇ. DR. AYKUT BARUT
Bülent Ecevit Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Folik asit = Folic acid ; Gestasyonel trofoblastik hastalık = Gestational trophoblastic disease ; Koryokarsinom = Choriocarcinoma

Özet:
Raşan EYÜP, JAR ve JEG-3 Koryokarsinom İnsan Hücre Kültüründe Topotekan ve Folik Asit Etkisinin İncelenmesi, Bülent Ecevit Üniversitesi Tıp Fakültesi, Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı Tezi, Zonguldak 2016.
Amaç: Plasentanın trofoblast hücrelerinden köken alan gestasyonel trofoblastik hastalıklar, trofoblastın anormal proliferasyonu ile karakteristik özellik gösteren bir hastalık grubudur. Bu hastalık grubu, epidemiyolojisi, patolojik özellikleri ve genetik bileşenleri ile geniş spektrum göstermektedir. Koryokarsinoma ise gestasyonel trofoblastik hastalıkların en malign türüdür. Etyolojisinde genetik faktörlerden etnik kökene hatta diyetsel faktörlere kadar birçok sebep bulunmaktadır. 
Doğal bir antioksidan olan ve vücuttaki tek karbon metabolizmasında görev yapan folik asit, pürin sentezi ile fosfolipidler, proteinler, deoksiribonükleik asit ve nörotransmitterleri içeren önemli biyolojik maddelerin metilasyonu için gerekli tek karbon metabolizmasını oluşturmaktadır. Özellikle hücre bölünmesinin hızla arttığı gebeliğin ilk trimesterinde folik asit eksikliğinin görülmesi konjenital anomalilerin açıklanmasına yardım eder. Topotekan ise over ve küçük hücreli akciğer kanserleri tedavisinde kullanılan kemoterapötik bir ilaç olan topoizomerazın inhibitörüdür. Topoizomeraz I, deoksiribonükleik asitte revesible tek sarmal kırılımlarını indükleyerek deoksiribonükleik asitin ekseni etrafındaki gerilimi ortadan kaldırır. 
Bu çalışmanın amacı, koryokarsinom tedavisine yeni bir bakış açısı sunarak daha efektif tedavi yöntemleri geliştirebilmek amacıyla topotekan ve folik asitin, JAR ve JEG-3 hücre kültüründe geliştirilen koryokarsinom modelleri oluşturulmuş hücre kültürleri üzerindeki etkilerini ve tedavi etkinliklerini araştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: İnsan koryokarsinom benzeri JAR ve JEG-3 hücrelerin Roswell Park Memorial Institute -1640 ortamında  % 10 fetal dana serumu, penisilin-steptomisin varlığında 37°C, % 95 hava, % 5 CO2 içeren atmosferde çoğaltıldı. Topotekan ve folik asitin uygulama grupları aşağıdaki gibi belirlendi;
Topotekan,  Dimetil sülfoksit (DMSO) içerisinde çözülerek   1, 5, 10, ve 50 μg/ml'lik dozlar halinde hazırlanmıştır. 
Folik asit, dimetil sülfoksit içerisinde çözülerek 1, 5 ve 10 μg/ml'lik dozlar halinde hazırlanmıştır. Maddeler hücrelere aynı anda verilmiştir. 
Bulgular: Yaptığımız çalışmada topotekanın tek başına artan dozlarda kullanıldığında JAR hücre serileri üzerindeki apopitotik etkilerinin istatistiksel olarak arttığı görülmüştür. Folik asitin tek başına artan dozda apoptozisi azalttığı,  bu iki ilacın kombine edilip artan dozlarda kullanıldıklarında JAR hücre serisi üzerinde apoptotik etkilerinin istatistiksel olarak daha da arttığı görülmüştür.
Sonuç: İnsan Koryokarsinom hücre hattı modellerinden biri olan JAR üzerinde topotekanın folik asit ile  tek ajan ve kombine kullanımları ayrıca immünoenzimatik yöntemle beta human koryonik gonadotropin ve hiperglikolize human koryonik gonadotropin ölçümü, literatürde ilk kez her iki hücre hattında birden yapılmıştır. Elde edilen sinerjistik apoptotik veriler topotekan ve folik asitin Koryokarsinom tedavisinde karşılaşılan çoklu ilaç direnciyle mücadelede kullanılabilecek seçeneklerden biri olabileceğini göstermektedir. Ancak ilaçların etkileri ve kombinasyonlarındaki etkilerin in vivo sistemlerde farklı olabileceğinden, veriler ilk olarak hayvan deneyleri ve sonra klinik araştırmalarla da desteklenmelidir. 

Anahtar Kelimeler: Gestasyonel trofoblastik hastalık, folik asit, topotekan, koryokarsinom.

Abstract:
Aim: Gestational trophoblastic diseases, which are of the trophoblastic origin of placenta, are a group of disease which is characterized by the abnormal proliferation of the trophoblasts. This group of disease has a wide spectrum in terms of their epidemiology, pathologic features and genetic compounds. Choriocarcinoma is the most malignant type of these diseases. The etiology of the disease have many factors including genetic factors, ethnicity, even nutritional habits. Folic acid, which is a natural antioxidant, constitutes the odd-carbon metabolism which required for the methylation of the important biological substances such phospholipids, proteins, deoxyribonucleic acid and neurotransmitters by the way of purine synthesis. Existence of the folic acid deficiency in the first trimester, which is characterized by the increased cytokinesis, aids to explain congenital abnormalities on first trimester.
Topotecan is an inhibitor of the topoisomerase, which is a chemotherapeutic agent used in the treatment of ovarian cancer and small cell carcinoma of the lung. Topoisomerase I induces the reversible breakdown of the single helices of deoxyribonucleic acid and annihilates the tension covering the axis of the deoxyribonucleic acid.
The pupose of this study is to search the effects and treatment efficacies of topotecan and folic acid on the choriocarcinoma cultures generated in JAR and JEG-3 cellular cultures.
Materials and Method: Human choriocarcinoma-like JAR and JEG-3 cells are augmented in the 10% fetal bovis serum and Roswell Park Memorial Institute -1640 media, 95% air at 37°C with the existence of penicillin and streptomycin. Groups to apply topotecan or folic acid are identified as below:
Topotecan dissolved in dimethyl sulphoxide (DMSO) and prepared as separate doses of 1, 5, 10 and 50 μg/ml. Substances are given to cells simultaneously.

Conclusion: In this study, the apoptotic effect of the use of topotecan only, in

residual doses on JAR cell series is statistically significant. The use of folic acid only, in residual doses has found to decrease the apoptosis. In the combination of these two drugs in residual doses, the apoptotic effect of this drug is even more increased, and statistically significant.

Results: This is the first study which use the topotecan and folic acid separately and combined on JAR, a human choriocarcinoma cell line model, and evaluation of beta human chorionic gonadotropin and hyperglycholysis human chorionic gonadotropin by the means of immunoenzymatic method on the both two cell lines. Synergistic and apoptotic data gathered indicates that topotecan and folic acid can be one of the treatment options in order to struggle multi-drug resistance which is an enormous obstacle on treatment. However, the efficacy of drugs and effects of combination therapies might be disparate in vivo; therefore data must be supported by animal experiments and after that by clinical evaluations.

Key words: Gestational trophoblastic disease, folic acid, topotecan, choriocarcinoma.