Okadaik asit ile oluşturulan Tau hiperfosforilasyonunun kortikal nöronlardaki Pin1 ekspresyonu üzerine etkisinin araştırılması.
The effect of okadaic acid induced Tau hyperphosphorylation on Pin1 expression in primary cortical neurons
Yazar: DERYA METİN
Danışman: PROF. DR. MELEK ÖZTÜRK SEZGİN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Fosforilasyon = Phosphorylation ; Gen ifadesi = Gene expression ; Mikro RNA = Micro RNA ; Nöronlar = Neurons ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Tau proteinleri = Tau proteins

Özet:
Alzheimer Hastalığı?nın patolojisinde, hücre dışında nöritik plaklar ve hücre
içerisinde nörofibril yumaklar önemli rol oynar. Nörodejeneratif hastalıkların büyük bir
çoğunluğunda anormal hiperfosforile Tau nörofibriller yumakların içerisinde
bulunmaktadır. Tau hiperfosforilasyonu, protein fosfataz 2A (PP2A)?nın inhibisyonu ile
gerçekleşir. Peptidil prolil cis trans izomeraz (Pin1), PP2A tarafından defosforilasyonun
inhibe olduğu Tau?daki Ser/Thr bölgelerindeki fosforilasyonu düzenler. Pin1 Alzheimer
hastalarının beyinlerinde fosforile Tau ile birlikte yerleşim gösterir. Bu çalışmada,
Tau?nun aşırı fosforilasyonunu teşvik eden, okadaik asit (OKA) kullanılarak bir Taupati
modeli uygulandı. Primer kortikal nöronlarda (PKN), OKA?nın Pin1 ekspresyonu
üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı. PKN?lar 16 günlük (E16) Sprague
Dawley embriyolarından elde edildi. Kültür hücrelerine 7. günde 25nM OKA
uygulandı, PP2A inhibisyonu Western blot analizi ile kontrol edildi. Fosforile ve
fosforile olmayan Tau, anti-Tau antikorları: Thr231, Ser262 ve Tau-1 ile tespit edildi. 4,
8 ve 24. saatlerdeki Pin1 ekspresyonu qRT-PCR yöntemi ile belirlendi. 8 saat OKA
uygulaması sonrasında, Tau fosforilasyonu kontrol ve etanol grupları ile
kıyaslandığında, OKA uygulanan gruplarda, Thr231, Ser262 bölgelerinde artış,
defosforile Tau-1?da ise azalma gözlendi. 4. ve 8. saatlerdeki Pin1 ekspresyonunun
kontrol ve etanol gruplarına göre 25nM OKA uygulanan gruplarda azaldığı, 24. saatte
ise OKA uygulanan grup ile kontrol ve etanol grupları arasında anlamlı fark olmadığı
bulundu. OKA ile teşvik edilmiş hiperfosforilasyonun 8.saatte en yüksek seviyeye
ulaştığı fakat 24. saatte etkisinin tamamen kaybolduğu tespit edildi. Sonuç olarak bu
çalışmada OKA?nın Tau hiperfosforilasyonundaki etkisinin Pin1 ekspresyonu ile ilişkili
olabileceği gösterildi.

Abstract:
In the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD), extracellular neuritic plaques
and neurofibrillary tangles play an important role. Aberrant hyperphosphorylated Tau is
found in neurofibrillary lesions in a range of neurodegenerative disorders. Tau
hyperphosphorylation attributes to downregulation of protein phosphatase2A (PP2A).
Peptidyl-prolyl cis/trans isomerase (Pin1) modulates the phosphorylation of the Ser/Thr
residues within Tau by inhibiting the dephosphorylation by PP2A. Pin1 is colocalized
with phosphorylated Tau in AD brain. An experimental Taupathy model is created Tau
phosphorylation by using okadaic acid (OKA). In this study, we aimed to generate a
neurodegenerative model using OKA and to investigate the expression of Pin1 in
primary cortical neuronal cells. Primary cortical neurons obtained from Sprague Dawley
rat embryos (E16). Tau phosphorylation was induced in primary cortical cultured
neurons by OKA. 25nM OKA was applied culture cells in 7 th day. PP2A inhibition was
checked by Western blot analysis. Phosphorylated and non phosphorylated Tau were
detected by the phospho-dependent anti-tau antibodies; T231, S262 and Tau-1. Pin1
mRNA expressions were determined by qRT-PCR in 4, 8 and 24 hours of treatments.
After 8 hours 25nM OKA treatment, it was observed an increase in Tau
phosphorylation at T231, S262 sites, and a decrease in non phosphorylated Tau-1 levels
compared to control and ethanol groups. Pin1 mRNA expression significantly decreased
25nM OKA treatment at 4h and 8h compared to the control and ethanol groups whereas
Pin1 expression were similar to the control and vehicle groups at 24h.
OKA induced hyperphosphorylation is especially at the highest level in 8 hours,
although this effect is completely eliminated in 24 hours. The effect of OKA in
hyperphosphorylation may dependent on Pin1 expression.