Astımlı çocuklarda CD14 C159T polimorfizminin in vitro IgE sentezi üzerine etkileri
The in vitro effects of CD14 C159T polymorphism on IgE synthesis in children with asthma
Yazar: OZGE UYSAL SOYER
Danışman: DOÇ. DR. CANSIN SAÇKESEN
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Çocuk Allerjisi Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Akciğer = Lung ; Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; Astım = Asthma ; Genler = Genes ; Hücre kültürü = Cell culture ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Çocuklar = Children ; İmmünoglobülin E = Immunoglobulin E ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins

Özet:
CD14 promotor C159T polimorfizmleri ve total IgE seviyeleri arasında iyi tanımlanmış bir ilişki bulunmasına rağmen bu ilişkinin hücresel ve moleküler temelleri bilinmemektedir. Daha önce TT genotipine sahip astımlı Türk çocuklarında plazmada daha düşük total IgE düzeylerini göstermiştik. Bu çalışmanın amacı CD14 C159T polimorfizminin farklı genotiplerine sahip astımlı çocukların periferik kan mononükleer hücrelerinin farklı konsantrasyonlarda endotoksine IgE yanıtını incelemektir. CD 14 CC ve TT genotipli çocukların periferal kanlarından mononükleer hücreler izole edildi. Hücreler 12 gün süresince endotoksin olmadan ve 2 ve 200 ng/ml dozlarında endotoksin ile kültüre kondu. Onikinci gün hücre kültürü süpernatanlarından ELISA yöntemi ile IgE düzeyleri ölçüldü. Her iki genotip arasında IgE yanıtları karşılaştırıldı. CC genotipinde 22, TT genotipinde 23 hasta vardı. TT genotipli çocuklarda, lipolisakkarid 200 ng/ml ile uyarı hücre kültürü süpernatanlarında IgE'de artış ile [0.73 (0.1-1.75) ng/mL ve 2.61 (0.7-5.21) ng/mL, p=0.001] sonuçlanırken CC genotipinde değişiklik saptanmadı [0.85 (0.46-2.06) ng/mL ve 0.83 (0.18-1.64) ng/mL]. Endotoksin CD14 C159T TT genotipine sahip astımlı çocuklarda IgE sentezini transkripsiyonel düzeyde etkileyerek artırmaktaydı. TT genotipinde hücrelerin uyarılmamış koşula göre LPS 2 ng/ml ile uyarılması sonucu transkripsiyonel düzeyde 2.31 (0.99-37) kat artış (p=0.003), LPS 200 ng/ml ile uyarılması sonucu 1.99 (0.95-107.4) kat artış saptandı (p=0.008). CD14 C159T polimorfizmi CC ve TT genotipine sahip astımlı çocukların in vitro koşullarda düşük ve yüksek LPS dozuna farklı düzeylerde IgE sentezi ile yanıt verdiğini göstermiştir. Bu bulgular ? endotoksin switch? olarak önerilen bimodel hipotezle uyumludur.

Abstract:
Even though there is a well established association between the CD14 promoter C159T polymorphisms and total IgE level, the cellular and molecular basis of this association is not known. We have previously shown that Turkish children with asthma possessing the TT genotype have lower levels of total IgE in plasma. The aim is to determine whether peripheral blood mononuclear cells from asthmatic children with alternative genotypes at the CD14 C159T locus produce different amounts of IgE upon stimulation with various concentrations of endotoxin. PBMC were isolated from the peripheral blood of asthmatic children with CC and TT genotypes at CD14 C159T locus. Cells were cultured in complete medium for 12 days and IgE was measured in the supernatants using a home made sandwich ELISA. The cells were cultured in the presence and absence of 2 and 200 ng/ml concentration of endotoxin. IgE response in the cell supernatants were compared between the two genotypes. There were 22 and 23 with CC and TT genotypes, respectively. In children with the TT genotype, stimulation with LPS at 200 ng/ml resulted in a significant elevation from 0.73 (0.1-1.75) ng/mL to 2.61 (0.7-5.21) ng/mL, p=0.001 whereas no increase was observed in the CC genotype [0.85 (0.46-2.06) ng/mL to 0.83 (0.18-1.64) ng/mL]. Endotoxin increased IgE synthesis by acting on transcriptional level in asthmatic children with CD14 C159T TT genotype. In TT genotype, epsilon germline transcription increased 2.31 (0.99-37) fold (p=0.003) by LPS 2 ng/ml stimulation and 1.99 (0.95-107.4) fold (p=0.008) by LPS 200 ng/ml stimulation compared to unstimulated condition. Asthmatic children with CD14 C159T polymorphism CC and TT genotypes responded with different concentrations of IgE in response to low and high doses of LPS. These findings are compatible with ?endotoxin switch? , bimodel hypothesis.