Ceviz endokarp zarının fitokimyasal içeriğinin belirlenmesi ve bu bileşiğin böbrek iskemisi yapılmış ratlarda koruyucu etkilerinin histopatolojik ve moleküler olarak araştırılması
Determination of the phytchemical content of walnut endocarp loss and the investigation of the protective effects of this compound in the kidney of the renal ischemia as a histopathologic and molecular
Yazar: ELİFNUR DURSUN
Danışman: PROF. DR. HAKAN AŞKIN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Akut böbrek yetmezliği, glomerüler filtrasyon hızında ani azalma, azotlu artık maddelerin vücutta birikimi ve ekstrasellüler sıvı hacminin, elektrolit ve asit-baz dengesinin alt-üst olmasıyla karakterize bir sendromdur. Akut böbrek yetmezliğinin tedavisinde kullanılan ilaçlar genellikle steroidal olmayan anti-inflamatuar özelliklere sahiptir. Bununla birlikte bu ilaçların sahip oldukları gastro-intestinal ve renal toksik etkileri sebebiyle kullanımları sınırlıdır. Bu toksik etkiler arasında prostaglandin sentezinin inhibisyonu ve artmış oksidatif stres sayılabilir. Bu toksik etkileri iyileştirmek için mevcut tedaviye alternatif veya mevcut tedaviyle kombinasyonlu olarak doğal antioksidantlar kullanılabilir. Bu yüzden mevcut çalışmamızı ceviz endokarp zarının renal hasara uğratılmış Sprague-Dawley ratlarda renoprotektif etkilerinin olup olmayacağı üzerine kurduk. Bu amaçla ilk önce bu maddenin fito-kimyasal içeriği gaz kromotografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS) yöntemi ile belirlendi. Böbrek ve karaciğer fonksiyonlarını değerlendirmek için kontrol gruplarıyla uygulama gruplarının kan plazmasında aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT), laktat dehidrogenaz (LDH), üre ve kreatinin değerleri ölçüldü. Bunlara ilaveten, bu maddenin antioksidatif etkisini belirlemek için endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS), anti-inflamatur etkisini belirlemek için tümor nekrosis faktor-alfa  (TNF-α) ve interlökin-6 (IL-6), apoptotik etkisini araştırmak için ise kaspaz-4 ve kaspaz-9 parametreleri q-RT PCR yöntemi kullanılarak böbrek ve karaciğer doku örneklerinde belirlendi. Ayrıca böbrek ve karaciğer dokusunda histopatolojik analizler de yapıldı. Çalışmanın sonuçlarına göre, ceviz endokarp zarı ekstraktının böbrek iskemisi yapılan ratlarda bozulan kan parametrelerini hasta kontrole göre düzelttiği belirlendi. Histopatolojik analiz sonuçlarında ceviz endokarp zarının böbrek ve karaciğer dokusunda koruyucu etkiye sahip olduğu gözlemlendi. Gen seviyesinde yürütülen çalışmalarda ise ceviz endokarp zarı ekstraktının karaciğer dokusunda eNOS'u aktive ederek anti oksidan etki gösterdiği yine karaciğer dokusunda IL-6'yı inhibe ederek anti-enflamatuar etki gösterdiğini belirledik. Böbrekte ise TNF-α ekspresyonunu azaltarak bu bileşiğin anti-enflamatuar etkisini belirledik. Son olarak bu bileşiğin kaspaz-4 ve kaspaz-9'u modüle ederek kronik enflamasyonu önlediği ve apoptotik/anti-apoptotik yolakları aktive ederek böbrek ve karaciğer dokuları üzerinde bir koruma sağladıklarını belirledik.
Sonuç olarak bu çalışma neticesinde, akut böbrek yetmezliği hastalığına karşı toksik etkisi olmayan yeni bileşiklerin kullanımlarına yönelik literatüre katkıda bulunuldu.

Abstract:
It is a syndrome characterized by acute renal failure, sudden reduction in glomerular filtration rate, accumulation of nitrogenous residues in the body and extracellular fluid volume, electrolyte and acid-base balance upside down. Drugs used in the treatment of acute kidney failure generally have non-steroidal anti-inflammatory properties. However, their use is limited due to their gastro-intestinal and renal toxic effects. These toxic effects include inhibition of prostaglandin synthesis and increased oxidative stress. Natural anti-oxidants can be used as an alternative to current therapy or in combination with existing therapy to improve these toxic effects. Therefore, we have established our current study on whether the walnut endocarpic membrane will have renoprotective effects in renal damaged Sprague-Dawley rats. For this purpose, the phytochemical content of this substance was first determined by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) method. AST, ALT, LDH, urea and creatinine values were measured in the blood plasma of the control groups and the control groups to evaluate kidney and liver functions. In addition, endothelial nitric oxide synthase (eNOS) to determine the anti-oxidative effect of this substance, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) to determine the anti-inflammatory effect, and caspase to investigate the apoptotic effect caspase-4 and caspase-9 parameters were determined in kidney and liver tissue samples using q-RT PCR method. In addition, histopathological analyzes were performed on kidney and liver tissue. According to the results of the study, walnut endocarpic membrane extract corrected the impaired blood parameters in the rats undergoing kidney ischemia according to the patient control. In the results of histopathological analysis, it was observed that walnut endocarpic membrane has protective effect on kidney and liver tissue. In studies conducted at the gene level, we determined that walnut endocarpic membrane extract showed anti-oxidant effect by activating eNOS in liver tissue and by inhibiting IL-6 in liver tissue and showed anti-inflammatory effect. In the kidney, we determined the anti-inflammatory effect of this compound by reducing TNF-α expression. Finally, we determined that this compound modulates caspase-4 and caspase-9, prevents chronic inflammation and provides protection on kidney and liver tissues by activating apoptotic / anti-apoptotic pathways. As a result of this study, we have contributed to the literature for the use of new compounds that have no toxic effects against acute renal failure.