Kızılçam (Pinus Brutia) kabuğundan etken madde izolasyonu ve değişik enzim aktiviteleri üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Isolation of active ingredientin the Pi̇nus Bruti̇a and study on the effect of different enzyme activities
Yazar: ONUR AKÇAY
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada kullanılan kızılçam (Pinus Brutia) kabukları, Muğla İl Orman İşletmesi Müdürlüğünden temin edilmiştir. Kızılçam (Pinus Brutia) kabuğunda bulunan etken maddelerin izolasyonu ve bu etken maddelerin bazı enzimlerin aktiviteleri üzerine olan etkileri ve özellikle proteaz enziminin biyokimyasal aktiviteleri üzerine olsn etkileri araştırılmıştır.
Kolon kromotografisi yönteminden faydalanılarak, kızılçam (Pinus Brutia) kabuğundan fenolik bileşik olan gentisik asit ve kateşin hidrat izole edilmiş ve bu iki maddenin proteaz, pektin esteraz ve karbonik anhidraz aktiviteleri üzerindeki etkileri incelenmiştir.
Proteinlerin peptitlere ve amino asitlere hidrolizini katalizleyen proteaz enzimi, hem endüstriyel hem de biyokimyasal uygulamalarda kullanılan en önemli enzimlerden biridir.
Kızılçam (Pinus Brutia) kabuğundan proteaz enzimi saflaştırmak için (NH4)2SO4 çöktürmesi ve CM-Sephadex iyon değişim kromotografisi kullanılmıştır. Saflaştırılan enzim için optimum pH ve optimum sıcaklık, jelatin, kazein, azokazein, azoalbümin, hemoglobin substratları için KM ve Vmax değerleri belirlenmiştir. Enzimin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE kullanılmış ve jel filtrasyon kromotografisi kullanılarak enzimin molekül ağırlığının 28,6 kDa olarak belirlenmiştir.
Enzim aktivitesi üzerine Hg2+, Ca2+, Mn2+, Fe2+, Fe3+, Ni2+, Mg2+ katyonlarının ve EDTA, SDS, β-merkapto etanol kimyasallarının etkisi incelendi.
Kızılçam (Pinus Brutia) kabuğundan elde edilen kateşin hidratın miktarı 25,307 mg/100 g iken gentisik asidin miktarı ise 2,180 mg/100 g olarak belirlenmiştir. Kateşin hidratın proteaz enziminin, pektin esteraz enziminin ve karbonik anhidraz 




enziminin aktivitelerini belirgin bir şekilde arttırdığı, gentisik asidin ise daha az 
miktarda arttırdığı gözlenmiştir. 
Elde edilen sonuçlara göre kızılçam (Pinus Brutia) kabuğunun, proteaz enzimini ve kateşin hidrat ve gentisik asit gibi fenolik bileşikleri yüksek miktarda içermesi nedeniyle ilaç ve özellikle kozmetik sektöründe çok önemli bir bitkisel kaynak olabileceği kanaatine varılmıştır. 
Anahtar Kelimeler: Kızılçam (Pinus Brutia) Kabuğu, Proteaz, Fenolik Bileşikler, Etken Madde İzolasyonu

Abstract:
Pinus Brutia shells used in this study, Mugla Province were obtained from the Directorate of Forest Management. Pinus Brutia active ingredient present in the Shell and on the isolation of some of these agent and their effects on enzyme activities of the protease enzyme is conducted research into the biochemical activity.
Via column chromatography, which phenolic compounds utilizin a Pinus Brutia, gentisic acid and catechin hydrate isolated. Gentisic acid and catechin hydrate is examined their effect on protease, pectin esterase and carbonic anhydrase activity.
Proteases enzymes catalayses hydrolysis of proteins to peptides and amino acids. They are one of the important groups both in industrial and biochemical applications.
(NH4)2SO4 precipitate and CM-Sephadex ion Exchange choromatography were used for purification of the protease from Pinus Brutia. Optimal pH and temperature and KM and Vmax values for gelatin, casein, azocasein, azoalbumin, hemoglobin substrat for purrified enzyme were calculated. Sodium dodecyl sulphate polacrylamide gel electrophpresis was applied for control of  the protease enzyme purrified  from Pinus Brutia and moleculer weight of purrified protease anzyme is determined as 28,6 kDa by using gel filtration choromatography.
The effect of Hg2+, Ca2+, Mn2+, Fe2+, Fe3+, Ni2+, Mg2+ cations and EDTA, SDS, β-mercapto ethanol chemicals on enzyme activity were studied.
Pinus Brutia obtained from the amount of catechin hdyrate 25,307 mg/100 g, the amount of gentisic acid was determined as 2,180 mg/100g. Catechin hydrate was observed to enhance the activity of the protease enzyme, pectin esterase enzyme and carbonic anhydrase, if small amounts of gentisic acid was observed to increase.
The results obtained Pinus Brutia, contain protease enzyme, gentisic acid and catechin hydrate contain a high amount phenolic compounds in pharmaceutial and cosmetic industry may indicate that a vital resource.

Keywords: Pinus Brutia, Protease, Phenolic Compounds, Isolation of active substances