Renal iskemi reperfüzyon hasarıyla indüklenen ferroptozun lipit yolağı ile ilişkili miR497, miR3584, miR106b ve miR92a2'nin ekspresyon düzeylerinin farklı iskemi sürelerine bağlı olarak araştırılması
Investigation of expression levels of miR497, miR3584, miR106b, and miR92a2 associated with the lipid pathway of ferroptosis induced by renal ischemia-reperfusion injury due to different duration of ischemia
Yazar: BEYZA KİBAR
Danışman: PROF. DR. AYŞE PINAR ÖZTOPCU VATAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
İskemi, herhangi bir faktöre bağlı olarak, doku ve organlara olan kan akışının kısmen veya tamamen kesilmesi durumu olarak tanımlanmaktadır. Doku ve organlara tekrar kan akışı sağlanması reperfüzyon olarak ifade edilmektedir. İskemi durumunda dokular oksijenden yoksun kaldıklarından dolayı hasar durumu meydana gelmektedir, reperfüzyon sürecinde, iskemide meydana gelen hücresel hasar genişlemektedir. Bu süreçte gelişen hasar iskemi/reperfüzyon (İ/R) hasarı olarak tanımlanmaktadır. İ/R hasarının indüklediği hücre ölüm çeşitlerinden birisi de ferroptozdur. Ferroptotik hücre ölümü sürecinde hücrede gelişen hasarda mikroRNA (miRNA)'ların da rol aldığını gösteren çalışmalar bulunmaktadır. miRNA'lar bağlandıkları geni baskılayarak veya yıkıma uğratarak hücre ölümünü düzenleyebilmektedir. 
Bu amaçla çalışmamızda, 48 adet Sprague Dawley cinsi erkek albino sıçanlar 6 gruba ayrıldı. İ/R gruplarında, sol böbreğe 30, 45, 60 dakika iskemi, 24 saat reperfüzyon; sham gruplarına cerrahi stres prosedürü ve 24 saat iyileşme süresi sağlandı. Bu süre sonunda anestezi altında böbrek dokusu ve kan örnekleri toplanarak analizler gerçekleştirildi. İ/R hasarı sonucu hücrelerde gelişen ROS seviyesi ELISA metodu ile ALOX15, ACSL4 mRNA, miR497, miR3584, miR106b ve miR92a2'nin ekspresyon düzeylerindeki değişiklikler ise kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) yöntemi ile araştırıldı. Dokuda İ/R hasarına ve iskemi süresine bağlı olarak meydana gelen morfolojik değişiklikler TEM ile incelendi. 
ROS düzeyi tayini sonucunda tüm İ/R gruplarında, sham gruplarına göre artış tespit edildi. Böbrek dokusundan TEM görüntülerinde iskemi süresine bağlı olarak değişen şiddette morfolojik değişiklikler gözlendi. ACSL4 ve ALOX15 mRNA ekspresyon düzeyleri tüm İ/R gruplarında anlamlı artış göstermiştir. miR497 ve miR92a2'nin ekspresyon düzeyi tüm zaman aralıklarında İ/R gruplarında anlamlı azalma göstermiştir. miR106b'nin 30 dakika İ/R grubunda sham grubuna göre anlamlı azalma görülmüştür. miR3584'ün ekspresyon seviyelerinde anlamlı bir değişiklik gözlenmemiştir.

Anahtar Kelimeler: Renal iskemi reperfüzyon, Ferroptozis, MikroRNA, Reaktif oksijen türleri

Abstract:
Ischemia is defined as partial or complete cessation of blood flow to tissues and organs, depending on any factor. Restoring blood flow to tissues and organs is expressed as reperfusion. In the case of ischemia, damage occurs because the tissues are deprived of oxygen, during the reperfusion process, the cellular damage that occurs in ischemia expands. The damage that develops in this process is defined as ischemia/reperfusion (I/R) injury. Ferroptosis is one of the types of cell death induced by I/R damage. There are studies showing that microRNAs (miRNAs) also play a role in the damage that develops in the cell during the ferroptotic cell death process. miRNAs can regulate cell death by suppressing or destroying the gene to which they bind.
For this purpose, 48 Sprague Dawley male albino rats were divided into 6 groups in our study. In I/R groups, 30, 45, 60 minutes ischemia, 24 hours reperfusion to the left kidney; The sham groups were provided with a surgical stress procedure and a 24-hour recovery period. At the end of this period, kidney tissue and blood samples were collected and analyzed under anesthesia. The level of ROS in cells as a result of I/R damage was investigated by ELISA method, and changes in expression levels of ALOX15, ACSL4 mRNA, miR497, miR3584, miR106b and miR92a2 were investigated by quantitative real-time PCR (qPCR) method. Morphological changes in the tissue due to I/R damage and ischemia duration were examined by TEM.
As a result of the ROS level determination, an increase was detected in all I/R groups compared to the sham groups. In TEM images of kidney tissue, morphological changes of varying severity were observed depending on the ischemia duration. ACSL4 and ALOX15 mRNA expression levels were significantly increased in all I/R groups. The expression level of miR497 and miR92a2 showed a significant decrease in I/R groups at all time intervals. A significant decrease was observed in the 30-minute I/R group of miR106b compared to the sham group. No significant changes were observed in the expression levels of miR3584.

Keywords: Renal ischemia reperfusion, Ferroptosis, MicroRNA, Reactive oxygen species