Melatonin uygulanan insan PANC-1 hücre hattında mirna ekspresyon analizinin yapılması
Mirna expression analysis in human PANC-1 cell line applied with melatonin
Yazar: BÜŞRA AKYOL
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DUYGU SARI AK
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Hepatopankreas = Hepatopancreas ; Melatonin = Melatonin ; Mikro RNA = Micro RNA ; PANC-1 = PANC-1 ; Pankreas kanseri hücre hattı =

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı; pankreas kanseri hücre hattı (PANC-1) kullanılarak, PANC-1 hücrelerinde melatonin hormonunun toksik dozunun belirlenmesi, pankreas kanserinin moleküler mekanizma yolaklarında etkisinin olduğuna dair çalışmalar yapılan miRNA'ların (has-miR-27a, has-miR-203, has-miR-148a, has-miR-196a) melatonin ile kombinasyonu sonucunda PANC-1 hücrelerinde ekspresyon seviyelerinin nasıl değişkenlik göstereceğinin araştırılması sonucunda pankreas kanserine yönelik yeni tedavi yaklaşımlarına katkı sağlamaktır.
Gereç ve Yöntem: Araştırmamızda, ilk olarak pankreas kanseri hücre hattı (PANC-1) hücre kültürü ortamında çoğaltılmıştır. Çoğaltılan hücrelere melatonin eklenerek MTT testi analizi ile melatoninin PANC-1 hücre hattındaki toksik dozu belirlenmiştir. Belirlenen toksik dozlarda melatonin PANC-1 hücrelerine uygulanmıştır ve melatonin uygulanan PANC-1 hücrelerinden ve melatonin uygulanmayan PANC-1 hücrelerinden total RNA izolasyonu yapılmıştır. Sonrasında RNA örnekleri kullanılarak cDNA sentezi yapılmıştır. Araştırılmak istenen miRNA'lar (has-miR-27a, has-miR-203, has-miR-148a, has-miR-196a) melatonin uygulanmış PANC-1 hücreleri ile melatonin uygulanmamış PANC-1 hücreleri ile karşılaştırmalı olarak qRT-PCR/qPCR yöntemi ile analizi yapılmıştır. Sonuçlar istatiksel analiz yapılarak değerlendirilmiştir.
Bulgular: Bu tez çalışmasında, in vitro yapılan deneyler neticesinde PANC-1 hücre hattında melatonin hormonunun inhibe edici dozları bulundu, melatonin uygulanan PANC-1 hücrelerinde miR-27a, miR-148, miR-203 ve miR-196a miRNA'larının ekspresyon analizi sonucunda PANC-1 hücrelerinde melatoninin miRNA'lar üzerinde modülatör etkisi olduğu görüldü.
Sonuç: Melatoninin PANC-1 hücre hattında miR-27a, miR-148, miR-203 ve miR-196a miRNA'ları ile birlikte regülatör etkisi olduğu ve pankreas kanserini etkileyen sinyal yolaklarındaki bozuklukları iyileştirmeye yönelik etkileri olduğu düşünülmektedir. Buna yönelik ileri çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Aim: The aim of this study is to determine the toxic dose of melatonin hormone in PANC-1 cells using pancreatic cancer cell line (PANC-1), and to investigate how the expression levels of miRNAs (has-miR-27a, has-miR-203, has-miR-148a, has-miR-196a), which have been studied to have an effect on the molecular mechanism pathways of pancreatic cancer, will change in PANC-1 cells as a result of the combination with melatonin, thus contributing to new treatment approaches for pancreatic cancer.
Materials and Methods: In our study, firstly, pancreatic cancer cell line (PANC- 1) was propagated in cell culture medium. Melatonin was added to the propagated cells and the toxic dose of melatonin in PANC-1 cell line was determined by MTT test analysis. Melatonin was applied to PANC-1 cells at determined toxic doses and total RNA was isolated from melatonin-applied PANC-1 cells and from PANC-1 cells that were not treated with melatonin. Then, cDNA synthesis was performed using RNA samples. The miRNAs that were intended to be investigated (has-miR-27a, has-miR-203, has-miR-148a, has-miR- 196a) were analyzed comparatively with melatonin-applied PANC-1 cells and PANC-1 cells that were not treated with melatonin using qPCR method. The results were evaluated by statistical analysis.
Results: In this thesis study, as a result of in vitro experiments, inhibitory doses of melatonin hormone were found in the PANC-1 cell line, and as a result of the expression analysis of miR-27a, miR-148, miR-203 and miR-196a miRNAs in melatonin-applied PANC-1 cells, it was seen that melatonin had a modulatory effect on miRNAs in PANC-1 cells.
Conclusion: It is thought that melatonin has a regulatory effect together with miR-27a, miR-148, miR-203 and miR-196a miRNAs in PANC-1 cell line and has effects on improving the disorders in signaling pathways affecting pancreatic cancer. Further studies are needed in this regard.