All-trans retinoik asit (ATRA) ve 1α,25-dihidroksivitamin D3 (vitamin D3) ile uyarılan akut miyeloid lösemi hücrelerinin T hücre yanıtları üzerine etkisi
All trans retinoic acid (ATRA) and 1α,25-dihydroxyvitamin D3 (vitamin D3) stimulated acute myeloid leukemia cells effect on T cell responses
Yazar: DİĞDEM YÖYEN ERMİŞ
Danışman: DOÇ. DR. GÜNEŞ ESENDAĞLI
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı / Tümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology ; Onkoloji = Oncology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Hematopoez = Hematopoiesis ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Tretinoin = Tretinoin ; Vitamin A = Vitamin A ; Vitamin D = Vitamin D

Özet:
Yöyen-Ermiş D. All-trans retinoik asit (ATRA) ve 1α,25-dihidroksivitamin D3 (vitamin D3) ile uyarılan akut miyeloid lösemi hücrelerinin T hücre yanıtları üzerine etkisi. Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Yüksek Lisans Programı, Ankara, 2014. ATRA ve D3, sırasıyla, A ve D vitaminlerinin en aktif metabolitleridir. Bu çalışmada ATRA, D3, LPS ve IFN-γ ajanlarından faydalanılarak HL-60 miyeloid lösemi hücreleri farklı olgunlaşma basamaklarına ilerletildi. Monositik ve/veya granülositik serileri veya fonksiyonel farklarının ayırt edilmesini sağlayan yüzey belirteçleri, hücre morfolojisi, hücresel yoğunluk, çoğalma, reaktif oksijen türleri (ROS) ve nitrik oksit (NO) üretme kapasiteleri değerlendirildi. Farklı olgunlaşma aşamalarında bulunan AML hücrelerinin sahip oldukları ko-stimülatör ve ko-inhibitör moleküllerin düzeyleri ve T hücrelerin proliferasyon yanıtları üzerine etkilerinin belirlenmesi amaçlandı. Promiyelositik/miyeloblastik kontrol HL-60 hücrelerinin ATRA ile uyarımı sonrasında metamiyelositik morfolojinin baskın olduğu görüldü. D3 uyarımı ile bu hücrelerde promonosit-benzeri karakterler gözlendi. ATRA, CD11b ve CD11c; D3 ise bu belirteçlere ek olarak CD14+ hücre oranlarını belirgin düzeyde artırdı. Bu belirteçlerin, özellikle CD11b düzeyi hücresel yoğunluk artışı ile ilişkilendirildi. CD11b ekspresyon düzeyi ile hücre çoğalması ters korelasyon göstermekteydi. Bu hücrelerde LPS'e karşı belirgin bir yanıt görülmezken, IFN-γ uyarımı B7-H1 ve B7-DC ko-inhibitör moleküllerinin ekspresyonunu artırdı, B7-H2 ko-aktivatör molekülünde düşüşe neden oldu. Ayrıca, CD11b+ hücrelerin CD86, B7-H1 ve B7-DC moleküllerini yaygın olarak taşıyan alt-popülasyon olduğu saptandı. IFN-γ, tüm HL-60 farklılaşma gruplarında CD14 ve HLA-DR; ATRA ile uyarılmış hücrelerde ise TLR4 artışına da neden oldu. T hücre ko-kültür deneylerinde ATRA veya D3 inkübasyonu ile miyeloid olgunlaşma/farklılaşma basamaklarına ilerletilen CD11b+ HL-60 hücrelerinin immün uyarıcılığının devam ettiği gösterildi. IFN-γ varlığında geliştirilen CD11b+ hücrelerinin (özellikle D3 ile uyarılan grubun) ise, CD8+ ve CD4+ T hücreleri sınırlı düzeyde uyardığı ve/veya baskılayabildiği belirlendi. 
Anahtar kelimeler: Akut miyeloid lösemi, ATRA, D3, ko-stimülasyon

Abstract:
Yöyen-Ermiş D. All trans retinoic acid (ATRA) and 1α,25-dihydroxyvitamin D3 (vitamin D3) stimulated acute myeloid leukemia cells effect on T cell responses. Hacettepe University Institute of Health Sciences, Tumor Biology and Immunology Master of Science Program, Ankara, 2014. ATRA and D3 are the active metabolites of vitamin A and D, respectively. In this study, HL-60 myeloid leukemia cells were progressed through different maturation stages with ATRA, D3, LPS, and IFN-γ. For the determination of monocytic and/or granulocytic differentiation and theirfunctional differences, cell surface markers, cell morphology, cellular density, proliferation, and capacities of reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) production were assessed. The aim of the study was to determine the expression of co-stimulatory and co-inhibitory molecules expressed by AML cells and their effects on T cell proliferation. Upon treatment with ATRA the promyelocytic/myeloblastic control HL-60 cells gained metamyelocytic morphology whereas promonocyte-like cells were abundant with D3 stimulation. CD11b and CD11c expression was significantly increased with ATRA stimulation; in addition to those markers CD14 was also induced with D3. These markers, especially CD11b, was associated with high cellular density. There was an inverse correlation between CD11b levels and cell proliferation. No prominent response to LPS was observed with these cells however stimulation with IFN-γ increased co-inhibitory B7-H1 and B7-DC, and decreased co-stimulatory B7-H2 molecules' expression. In addition, CD11b+ cells were identified to be the sub-population carrying CD86, B7-H1, and B7-DC molecules. In all differentiation groups, IFN-γ induced the expression of CD14 and HLA-DR, and especially of TLR4 in ATRA-stimulated HL-60 cells. In the co-cultures with T cells, the immune stimulatory capacity of CD11b+ HL-60 cells that were proceeded through different myeloid maturation/differentiation stages with ATRA or D3 was sustained. On the other hand, when CD11b+ cells (especially that of the D3-stimulated group) were developed in the presence of IFN-γ, CD4+ or CD8+ T cell stimulation were limited and/or suppressed.
Key words: Acute myeloid leukemia, ATRA, D3, co-stimulation