HIV enfeksiyonlularda ishalsiz ve ishalli dönem dışkılarında cryptosporidium, ısospora, giardia ve blastocystis parazitlerinin araştırılması
Investigation of cryptosporidium, isospora, giardia and blastocystis in stool samples in hiv i̇nfected patients at periods with and without diarrhea
Yazar: HATİCE YAŞAR ARSU
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA SAMASTI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı / Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Blastocystis = Blastocystis ; Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Diyare = Diarrhea ; Dışkı = Feces ; Giardia = Giardia ; HIV = HIV ; HIV enfeksiyonları = HIV infections ; Paraziter hastalıklar = Parasitic diseases ; İsospora = Isospora

Özet:
Bu çalışmada HIV pozitif bireylerde ciddi klinik semptomlara hatta ölümlere neden olabilen fırsatçı protozoon enfeksiyonlarından  Cryptosporidium,   Isospora, Giardia ve Blastocystis parazitlerinin varlığı araştırılmıştır. Araştırma amacı ile HIV pozitif 52 gönüllü hastadan 24'ü ishalli, 69'u ishalsiz 93 örnek çalışılırken, kontrol amacı ile HIV negatif 48 kişiden örnek alınmıştır. İshalli örneklerden bakteriyolojik kültür ve Clostridium difficile için ELISA yöntemi ile  toksin A+B araştırılmış ve tüm örnekler negatif sonuçlanmıştır. Örnekler makroskobik ve mikroskopik (direct mikroskopi, yoğunlaştırma sonrasında Kinyoun aside dirençli boyama ve DFA) olarak incelenmiştir. Hızlı antijen arama testi ile Giardia ve Cryptosporidium araştırılmıştır. Kinyoun aside dirençli boyama, hızlı antijen ve DFA yöntemi ile HIV pozitif ishalli bir hastada Cryptosporidium varlığı saptanmıştır. PCR yöntemi ile aynı örnekte saptanan Cryptosporidium'a dizi analizi yapılarak tür tayini gerçekleştirilmiş ve C. andersoni ile uyumlu bulunmuştur. Mikroskopik yöntemler ile on hastaya ait 13 örnekte farklı yoğunluklarda B. hominis saptanmıştır. Subtip spesifik primerler ile yapılan multipleks PCR testleri sonucunda  sekiz HIV pozitif hastaya  ait 10 örnekte B. hominis saptanmıştır. Subtip tayini yapılan örneklerin yapılan filogenetik incelemesinde filogenetik ağacın oluşturulmasında Neighbor-Joining metodu kullanılmış ve 4 ayrı hastada ST7, 3 hastada ST3 ve 1 hastada ST1 saptanmıştır. Kontrol grubunda mikroskopi ile farklı yoğunluklarda saptanan B. hominis'lerin 3'ü PCR ile tanımlanmış ve bunların ikisi ST7 bir tanesi ise ST7+ST1 olarak tanımlanmıştır. Toplumda yapılan çalışmalarda en sık saptanan ST3 çalışmamızda ikinci sırada yer almıştır. Çalışmaya katılan HIV pozitif hastalardan ve kontrol grubundan alınan örneklerin hiçbirisinde Isospora belli ve Giardia intestinalis saptanmamıştır. Çalışmamızda yurtdışında benzer guruplarda yapılan çalışmaların aksine parazit oranları çok düşük bulunmuştur. Bunun nedeni, sanitasyonun iyi olması,  bulunduğumuz bölgedeki toplumda artan kişisel hijyen bilincine paralel olarak enfeksiyon oranlarının çok düşük olması,  HIV pozitif bireylerin kullandığı HAART ve proflaktik ilaçların kullanımı olabilir.

Abstract:
In this study, the presence of Cryptosporidium, Isospora, Giardia and Blastocystis protozoans which leads opportunistic infections  with severe clinical symptoms even death in HIV-positive individuals was investigated.   In order to achieve this aim a total of 93 samples, 24 of which were diarrhoeal and 69 were non-diarrhoeal, were collected from 52 HIV-positive volunteers. Also 48 samples were collected from 48 HIV-negative individuals for control purposes. Bacteriological cultures and  ELISA for Clostridium difficile toxin A+B were performed in diarrhoeal samples and all were found negative. The samples were examined macroscopicaly and microscopicaly following concentration by wet-mount preparation, Kinyoun. acid fast staining and DFA. Rapid antigen test was used for the detection of Giardia and Cryptosporidium. Cryptosporidium was detected in one HIV-positive patient with diarrhea with Kinyon acid fast staining, rapid antigen test and DFA methods. Species identification of Cryptosporidium was performed by using PCR and sequence analysis and it was determined to be C. andersoni. B. hominis were detected in 13 samples from 10 patients with microscopic method at different concentrations. The results of subtype-specific primers based multiplex PCR revealed that 10 samples from 8 HIV-positive patients had B. hominis. The phylogenetic tree was constructed by using Neighbor-Joining method. ST7 was the most prevalent subtype, found in samples from 4 individual patients, followed by ST3 in 3 patients and ST1 in 1 patient. B. hominis was detected in 3 samples at different concentrations in the control group by microscopy and idefined as ST7 and ST7+ ST1 in 2 and 1 of the samples, respectively.  ST3 which is the most prevalent subtype reported in studies conducted in the community was the second most frequently found subtype in our study.  None of the samples collected from HIV-positive patients and control group were found to harbour Isospora belli and Giardia intestinalis. Unlike previous studies that were conducted in similar groups in other countries, the prevalence of parasites among our study population was very low. This finding could be the result of good personal sanitation, increasing awareness of personal hygiene in our study population,  HAART and prophylactic treatments that were used by HIV-positive patients.