Yıkanmış Ankara Tekesi spermasının boğa ve koç seminal plazması eklenmiş sulandırıcıyla dondurulması
Freezing of angora goat semen with extenders added bull and ram seminal plasma
Yazar: UMUT ÇAĞIN ARI
Danışman: PROF.DR. ALİ DAŞKIN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2006
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
ÖZETYıkanmış Ankara Tekesi Spermasının Boğa ve Koç Seminal Plazması EklenmişSulandırıcıyla DondurulmasıBu çalışmanın amacı Ankara tekesi spermasının dondurma öncesi yıkanarak seminalplazmasından ayrılmasının, yıkamada kullanılan farklı solüsyonların ve seminalplazmasından ayrılmış Ankara tekesi spermasının dondurulmasında kullanılan sulandırıcılarabelirli oranda (%5) boğa veya koç seminal plazmasının eklenmesinin çözüm sonuspermatolojik parametreler üzerine etkisini araştırmaktı.Çalışmada 4 adet Ankara tekesi kullanılmıştır. Sperma 4 Ankara tekesinden herbirinden 10'ar ejakulat olmak üzere haftada iki kez suni vagen kullanılarak alınmıştır. Alınanspermalar birleştirildikten sonra, yaklaşık 1/7'si alınarak Tris Yumurta sarısı (%20) Gliserol(%7) sulandırıcısıyla her payette 50 milyon spermatozoon olacak şekilde sulandırılmış veequilibrasyon işlemini (+4oC'de 2 saat) takiben sıvı azot buharında (-110/-130oC arasında 15dakika) dondurularak; sıvı azot içinde (-196oC) saklanılmıştır. Geriye kalan sperma iki eşitkısma ayrılarak; her bir eşit hacim 1:10 Sperm-TALP ve 1:10 Ringer solüsyonuyla süspanseedilerek her yıkama grubu 3 eşit hacimde olacak şekilde santrifüj tüplerine pay edilmiştir.Santrifüj işlemi 600 g'de 15 dakika süreyle gerçekleştirilmiştir. Santrifüj işleminden sonra 6santrifüj tüpünde bulunan pelet süpernatant birleşiminin süpernatanant kısmı atılarak diptekipelet kısmı sulandırma işleminde kullanılmıştır. Her Sperm-Talp ve Ringer yıkamagrubundaki seminal plazmasından ayrılmış Ankara tekesi sperması %5 Boğa seminalplazması, %5 Koç seminal plazması veya seminal plazma içermeyen Tris Yumurta sarısıGliserol solüsyonuyla her payette yaklaşık 50 milyon spermatozoon olacak şekildesulandırılmıştır. Toplam 6 gruba ait payetler equilibrasyon işleminin ardından, sıvı azotbuharında dondrulmuş ve sıvı azot içinde saklanmıştır. Böylelikle birisi kontrol olmak üzere7 çalışma grubu oluşturulmuştur. Her gruptan payetler 40oC'lik su banyosunda 20 saniyeçözülmüş ve alınan örnekler motilite (%), ölü spermatozoon (%), anormal spermatozoon(%), anormal akrozom (%) ve HOS test(%) yönünden değerlendirilmiştir.Bu araştırmanın sonucunda Grup 3 (T), Grup 6 (R) ve Grup 7 (C)'nin çözüm sonuspermatolojik parametrelerinin karşılaştırılmasıyla, Ankara tekesi spermasının yumurta sarısıkullanılan sulandırıcılarla sulandırılması öncesinde yıkanması gerektiği ve Sperm Talpsolüsyonunun Ringer solüsyonuna üstünlük sağladığı görülmüştür (p<0,05).Ayrıca yıkanmış Ankara Tekesi spermasının dondurulmasında kullanılan TrisYumurta sarısı Gliserol solüsyonuna belirli oranlarda boğa veya koç seminal plazmasınınkatımının çözüm sonu spermatolojik parametreleri olumlu yönde etkilediği belirlenmiştir.Boğa ve koç seminal plazmasının olumlu etkisi Sperm-Talp ile yıkama işlemi yapılmış vekoç seminal plazması katılmış 2. Grupta (TK) daha açık şekilde ortaya çıkarken; Ringer ileyıkama yapılmış grupta boğa ve ya koç seminal plazması katılmış 4. Grupta (RB) ve 5.Grupta (RK) gözlemlenmiştir(p<0,05).Bu çalışmada, Ankara Tekesi spermasının dondurma öncesi yıkanarak seminalplazmasının ayrılması gerektiği; yıkama işleminde Sperm-Talp solüsyonun RingerSolüsyonuna tercih edilmesi gerektiği ve yıkama işlemini takiben spermanındondurulmasında kullanılan Tris Yumurta Sarısı Gliserol sulandırıcısına boğa veya koçseminal plazmasının eklenmesinin çözüm sonu spermatolojik parametreleri olumlu yöndeetkilediği sonucuna ulaşılmıştır.Anahtar Sözcükler: Ankara Keçisi, sperma, seminal plazma, yıkama,spermanın dondurulması

Abstract:
SUMMARYFreezing of Washed Angora Goat Semen with Extenders Added Bull and Ram SeminalPlasmThe aim of this study was to investigate the effect of separation of seminal plasma of Angora bucksemen by means of washing before cryopreservation, using different solutions in sperm washing andadding of bovine or ovine seminal plasma to extender used for cryopreservation on spermatologicparameters after thawing.In this study, 4 Angora goats were used. Sperm was collected using artificial vagina twice aweek so as to maintain 10 ejaculates from each animal. After harvest of collected sperm, 1/7 portion oftotal mixed sperm was extended with Tris Egg yolk (%20) Glycerol (%7) to a final concentration of50 million spermatozoa in each straw. Extended sperma in straws was equilibrated (2 hours at +4oC)and frozen in vapor of liquid nitrogen (LN) (15 minutes at -110/-130oC) and stored in LN. Rest ofmixed buck sperm was divided in two equal volumes. Each of equal volumes was suspended withSperm TALP (1:10) or Ringer (1:10) solutions. Each suspended sperm was allocated into 3 centrifugetubes. Centrifuge was conducted for 15 minute at 600 g. After centrifuge, supernatants were discardedfrom 6 tubes and pellets in the bottom of tubes were used in process of extending. Angora bucksperms that had been separated from seminal plasma by means of Sperm TALP or Ringer washingwere extended with Tris Egg yolk Glycerol extender including 5 % bovine seminal plasma, 5 % ovineseminal plasma or no seminal plasma so as to sustain 50 million spermatozoa per straw. Afterequilibration, straws relating to 6 groups were cryopreserved and stored until examination time. In thisway, 7 study groups, one of which was control, were composed. Straws from 7 groups were thawed at40oC for 20 seconds in a benmarie. Motility (%), died spermatozoa (%), abnormal spermatozoa (%),abnormal acrosome(%), HOS Test (%) were evaluated in sperm samples.In this study, result of comparisons of spermatological parameters of Group 3 (T), Group 6 (R)and Group 7 (C) is that Angora buck semen should be washed before extending with extendercontaining egg yolk, and Sperm TALP is superior to Ringer solution (p<0,05).In addition, it was determined that adding of bovine or ovine seminal plasma to extender usedfor cryopreservation of washed Angora buck semen improved spermatological parameters afterthawing. The positive impact of bovine and ovine seminal plasma was clearly appeared in 2. Group(TK), which was washed with Sperm TALP and extended with extender containing ovine seminalplasma, compared with control and 3. Group(T)(p<0,05). This positive effect was also appeared in 4.Group (RB), which was washed with Ringer and extended with extender containing bovine seminalplasma, and 5. Group (RK), which was washed with Ringer and extended with extender containingovine seminal plasma, compared with control (7. Group-C) and 6 Group(R) (p<0,05).In this study, it is concluded that Angora Goat semen should be washed before cryopreservationespecially using extender containing egg yolk, Sperm TALP should be preferred to Ringer solution inwashing process and adding of bovine or ovine seminal plasma to extenders following washingprocess improves spermatologic parameters in frozen-thawed Angora goat semen.Key Words: Angora goat, semen, seminal plasma, washing, freezing of sperma