Poli (akrilamit-ko-akrilik asit) polietilenimin ve poli (metil metakrilat-koglisidil metakrilat) kullanılarak kolesterol oksidaz enziminin immobilizasyonu
Immobilization of cholesterol oxidase poly (acrylamide-co-acrylicacid) polyethleneimine and poly (methyl metacrylate-co-glycidyl methacrylate)
Yazar: BERRİN AKKAYA
Danışman: YRD. DOÇ. DR. HAYRETTİN TÜMTÜRK
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada, kolesterol oksidaz enzimi, poli (akrilamit-ko-akrilikasit)/polietilenimin ve poli(metilmetakrilat-ko-glisidilmetakrilat)destekleri karbodiimid ve epiklorhidrin kullanılarak aktifleştirilipkovalent olarak immobilize edilmiştir. Serbest enzim için Km ve Vmakdeğerleri sırasıyla 0,756mM ve 1,115 mM.dak-1 bulunmuştur. CDIkullanılarak aktifleştirilen immobilize enzim için Km=2,72mM,-1Vmak=0,908 mM.dakika ve epiklorhidrin kullanılarak aktifleştirilenimmobilize enzim için Km= 2,37mM, Vmak=1,495 mM.dakika-1 olarakbulunmuştur. Serbest ve immobilize enzimler için optimum sıcaklık35Â° ve 37Â° olarak tespit edilmiştir. Serbest enzim, ECH ve CDIC Ckullanılarak aktifleştirilen immobilize enzim için optimum pH sırasıyla 7,7 ve 7,5 olarak bulunmuştur. 40ºC ve 45ºC'de inaktivasyon sabitleriki=0,0442dak-1, ki=0,0664dak-1,sırasıyla serbest enzim için ECHki=0,0398dak-1,kullanılarak aktifleştirilen immobilize enzim içinki=0,0,0407dak-1 ve CDI kullanılarak aktifleştirilen immobilize enzim içinki=0,0285dak-1, ki=0,0352dak-1 olarak bulunmuştur. Serbest enzim 20gün sonunda aktifliğini tamamen kaybederken ECH ve CDI kullanılarakaktifleştirilen immobilize enzimler sırasıyla %88, %94 aktifliğinikorumuştur. ECH ve CDI kullanılarak aktifleştirilen immobilizeenzimlerin 60 kez kullanım sonunda aktiflikleri sırasıyla %56, %83olarak bulunmuştur.Bilim Kodu : 201.1.117Anahtar Kelimeler : mmobilizasyon,kolesterol oksidaz, poli(akrilamit-ko-akrilik asit)/polietilenimin, poli(metilmetakrilat-ko-glisidil metakrilat)Sayfa Adedi : 76Tez Yöneticisi : Yrd.Doç.Dr. Hayrettin Tümtürk

Abstract:
In this study, cholesterol oxidase was covalently immobilized onpoly(methylmetacrylate-co-glyciydylmethacrylate) and poly(acrylamide-co-acrylicacid)/polyethyleneimine which were activated by usingepichlorohydrin and carbodiimide. Kinetic parameters were calculatedas 0,756, 2,37 and 2,72mM for Km and 1,115, 1,495 and 0,908mM.min-1for Vmax in the case of free enzyme, p(MMA-co-GMA) and p(AAm-co-AA)/PEI bound enzymes, respectively. The optimum temperatures forfree and immobilized enzymes were observed as 35Â° and 37Â°C C,respectively. For free and covalently immobilized enzymes on p(MMA-co-GMA) and p(AAm-co-AA)/PEI optimum pH were found as, 7-, 7 and7,5, respectively. At 40ºC, inactivation constans of free, activated ECHÂ°and CDI were calculated as 0,0442, 0,0398, 0,0285min-1 they were alsocalculated as 0,0664, 0,0407, 0,0352min-1 respectively at 45ºC. AfterÂ°storage for 20 days the enzyme activities were found to be %88 and%94 of the initial activity values for ECH and CDI activated matricesrespectively. On the other hand the free enzyme lost its activitycompletely in 20 days. In the repeated batch experiments ,60 uses in 2days, retention of %56 and %83 of the original enzymes activities wereobserved for ECH-activated p(MMA-co-GMA) and CDI p(AAm-co-AA)/PEI immobilized enzymes.Science Code : 201.1.117Key Words : Immobilization, cholesterol oxidase, poly (acrylamide-co-acrylicacid)/polyethyleneimine,poly(methylmetacrylate-co-glyciydylmethacrylate)Page Number : 76Adviser : Asst.Prof.Dr. Hayrettin TÜMTÜRK