Bleomisin ile oluşturulmuş deneysel skleroderma modelinde parikalsitol tedavisinin etkinliği
The effectiveness of paricalcitol in bleomycin induced experimental scleroderma
Yazar: FİKRET DURAN
Danışman: PROF. DR. SÜLEYMAN SERDAR KOCA
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Romatoloji = Rheumatology
Dizin: Bleomisin = Bleomycin ; Katenin = Catenin ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Skleroderma-sistemik = Scleroderma-systemic ; Tedavi = Treatment ; Vitamin D = Vitamin D

Özet:
Sklerodermada, aktive olan Wingless-type MMTV integration site (Wnt)/β-katenin sinyal yolağının fibrotik sürece fibroblastların miyofibroblastlara dönüşümü ve hatta non-fibroblastik hücrelerin fibroblastik hücrelere dönüşümü aşamasında katkı sağladığı düşünülmektedir. Parikalsitol, vitamin D reseptörü (VDR) aracılığı ile transkripsiyon faktörlerinden T-cell factor-4 (TCF-4)'ün β-katenine bağlanmasını yarışmalı olarak inhibe eder ve böylece, Wnt/β-katenin sinyal yolağı aktivitelerini engeller. Çalışmamızın amacı, bleomisin (BLM) ile oluşturulmuş deneysel skleroderma modelinde Wnt/β-katenin sinyal yolağının sentetik D vitamin analogu olan parikalsitol ile inhibisyonunun profilaktik ve teröpatik etkinliklerinin belirlenmesidir.
Bu çalışmaya 60 adet Balb/c dişi fare alındı. Erken evre grupları (Grup I [kontrol grubu], II [plasebogrubu] ve III [parikalsitol grubu]) ve geç evre grupları (Grup IV [kontrol grubu], V[plasebo grubu], VI [parikalsitol grubu]) olarak 6 grup oluşturuldu. BLM uygulanmayacak olan kontrol grubu farelere   (Grup I) ve (Grup IV), tıraş edilmiş bölgeden, hergün sc fosfat ile tamponlanmış salin (FTS) uygulandı. 1mg BLM, 1mL FTS içerisinde çözündürülerek II. Ve III. Gruplarda ki farelere 3hafta, V. ve VI gruplardaki farelere 6hafta boyunca 100L (100g) dozunda her gün sc uygulandı.  BLM'e ek olarak, III. Gruptaki farelere ilk 3hafta, VI. gruptaki farelere ise 21.günden başlayarak çalışma sonuna kadar hergün sc yol ile Parikalsitol (0.3g/kg) enjekte edildi.
İlk üç grup üçüncü haftanın sonunda; kalan gruplar ise altıncı haftanın sonunda, son tedavilerden 24 saat sonra, dekapitasyon ile sakrifiye edildi. Doku örnekleri histopatolojik inceleme ve Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) analizler için toplandı. Doku TGF-β1,axin-1ve wnt-2 mRNA ekspresyonları RT-PCR yöntemi ile belirlendi.
Tekrarlanan subkutan BLM uygulamaları sonucunda; erken ve geç evrede, dermal inflamatuar hücre infiltrasyonu, dermal fibroz ve dermal kalınlıkta artış meydana geldi. Benzer şekilde; TGF-β1, axin-1 ve wnt-2 ekspresyonları belirgin artı. Parikalsitolün hem profilaktik hemde teröpatik uygulamalarında TGF-β1, axin-1 ve wnt-2 mRNA ekspresyonları belirgin azaldı. Ek olarak, histopatolojik olarak dermal nekro inflamasyon ve dermal fibrozda gerileme tespit edildi.
Sonuç olarak, BLM ile uyarılmış dermal fibroz modelinde axin-1 ve wnt-2 ekspresyonlarının artmış olması Wnt/β‐katenin sinyal yolağının dermal fibrozda aktif olduğunu desteklemektedir. Ekolarak, parikalsitol antifibrotik potansiyele sahiptir ve bu etkisi Wnt/β‐katenin sinyal yolağı üzerine etkisi ile ilişkili olabilir.
Anahtar Kelimeler: Deneysel skleroderma, Wnt/β‐katenin sinyal yolağı, parikalsitol

Abstract:
For Scleroderma, it is thought that Signaling pathway of activated wingless-type MMTV integration site (Wnt)/β-catenin contributes to fibrotic process in the stage of transformation of fibroblasts into myofibroblasts and even transformation of non-fibroblastic cells to fibroblastic cells. Paricalcitol inhibits connection of T-cell factor (TCF-4) from transcription factors to the β-catenin as competitively through vitamin D receptor (VDR) and thus inhibits the activity of the Wnt/β-catenin signaling pathway. The aim of our study, in experimental scleroderma models created with BLM, is to determine prophylactic and therapeutic efficacy of inhibition of Wnt/β-catenin signaling pathway with paricalcitol which is synthetic vitamin D analog.
60 Balb/c female mice were taken to this study. 6 groups were formed as early stage groups (groups [Control group], II [placebo group] and III [paricalcitol group]) and late-stage groups (group IV [Control group], V [placebo group] VI [paricalcitol group]). Salin (PBS) which was buffered with phosphate everyday was applied from shaved region to the control group of mice (Group I) and (group IV) which BLM will not be applied to. 1mg BLM by dissolving it in 1 ml FTS as 100L (100g) dose was applied sc daily to mice in group of II and III along 3 weeks, in the group of V and VI along 6 weeks. In addition to BLM, Paricalcitol (0.3g / kg)  was injected daily with sc route to third group mice first three week and to sixth group mice group from 21th day until the end of the working day.
The first three groups at the end of the third week; the remaining groups at the end of six weeks, 24 hours after the last treatment, were sacrificed by decapitation. Tissue samples was collected for the histopathological and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis. Tissue TGF-β1, axin-1 and Wnt-2 mRNA expression was determined by RT-PCR.
As a result of repeated BLM subcutaneous implementation; in the early and late stage, an increase took place in the dermal inflammatory cell infiltration, dermal thickness dermal fibrosis. Similarly; TGF-β1, axin-1 and wnt-2 expression was significantly increased.  In the Prophylactic and therapeutic applications of paricalcitol, TGF-β1, axin-1 and Wnt-2 mRNA expression decreased significantly. In addition, it was determined regression in dermal necro inflammation and dermal fibrosis as histopathological.
In conclusion, in the BLM-induced dermal fibrosis model, increased AX-1 wnt-2 mRNA expressions supports that Wnt / β-catenin signaling pathway is active in dermal fibrosis. Moreover, paricalcitol has antifibrotic potential and this effect may be associated on Wnt / β-catenin signaling pathway.
Key Words: Experimental scleroderma, Wnt/β-catenin signaling pathway, Paricalcitol