Azospermi tanılı primer infertil erkeklerde AZF a,b,c bölgelerinin MLPA tekniği ile taranması ve sonuçların konfirmasyonu
Screening by Multiple ligation-dependent probe amplification assay of AZF a, b, c regions in primary infertile men with azoospermia
Yazar: KÖNÜL HAZIYEVA
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ OĞUZ ÇİLİNGİR
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Azospermi = Azoospermia ; Delesyon = Deletion ; Gen amplifikasyonu = Gene amplification ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Mikrodelesyon = Microdeletion ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sperm = Spermatozoa ; Y kromozomu = Y chromosome

Özet:
Y kromozomu mikrodelesyonları, azosperminin en yaygın nedenidir ve
azospermik infertil erkeklerin %5-15'inde görülmektedir. Azospermik erkeklerin bir kısmında, Y kromozomunun uzun kolunda (Yq) delesyonların saptanması üzerine spermatogenezin bu bölgeden regüle edildiği tahmin edilmiştir ve bu bölge azospermi faktör bölgesi (AZF) olarak tanımlanmıştır. Sperm gelişimi ve farklılaşmasından sorumlu olan AZF bölgesi, AZFa, AZFb, AZFc bölgelerini içermektedir Bu bölgeler çok kopyalı gen aileleri içerir. 

	Yöntem karşılaştırması amacıyla planladığımız bu çalışmamızda; Üroloji Anabilim Dalı'na başvurup, detaylı öykü alımı, fizik muayene ve sperm analizleri yapıldıktan sonra herhangi bir ek sağlık problemi olmayan, klinik olarak azospermi tanısı alan hastalar Tıbbi Genetik polikliniğimize yönlendirilmiştir. Sitogenetik analiz sonrasında normal karyotipe sahip olduğu belirlenen ve multipleks PCR (mPCR) ile yapılan moleküler analiz sonucunda normal olarak değerlendirilen 50 azospermik bireyden oluşan hasta grubumuz ve 15 fertil bireyden oluşan kontrol grubumuz MLPA yöntemiyle analiz edilmiştir. Daha önce mPCR (Polymerase Chain Reaction) analiz yöntemiyle delesyon saptanmayan hasta grubumuzun 8 bireyinde %16 oranında MLPA tekniği ile AZFc ve AZFb bölgelerine ait parsiyel delesyonlar saptanmıştır. AZFb bölgesinde yerleşen EIF1AY geninde delesyon 2 hastada, AZBb+c bölgesindeki EIF1AY ve BPY2 genine ait parsiyel delesyonlar ise sadece 1 hastada görülmüştür. Bunun yanısıra yine 5 hastada AZFc bölgesinde yerleşen  BPY2 geninde parsiyel delesyonlar tespit edilmiştir. Fertil bireylerden oluşan kontrol grubumuzda herhangi bir değişiklik saptanmamıştır.
	
	Bu yöntem; daha geniş bölgeleri kapsayan mikrodelesyon/mikroduplikasyon analizinin yapılabilmesine ve bunun yanısıra detaylı genotip/fenotip korelasyonlarının kurulmasına yardımcı olacaktır. AZF bölgelerinin parsiyel ve komplet delesyonların erkek infertilitesine etkilerinin araştırılması açısından mPCR yöntemine kıyasladığımızda MLPA yönteminin  daha elverişli olduğunu düşünmekteyiz. Buna sebep ise, saptanabilecek bazı delesyonların oluştuğu  bölgelerin rutinde kullanılan mPCR yöntemiyle bakılan bölgeler arasında olmaması ile ilişkilendirilebilir. Multipleks PCR yöntemi ile çalışıldığı zaman bu bölgelere özgü primerlerin dizayn edilmesi gerekirken, MLPA yöntemiyle tek prob miksle analiz edilebilmektedir.

Abstract:
Y chromosome microdeletions are the most common cause of azospermia and occur in 5-15% of infertile men with azospermia. In some of the azoospermic males detection of deletions in the long arm (Yq) of the Y chromosome predicted that spermatogenesis was to be regulated from this region, which was defined as the azoospermia factor region (AZF). The AZF region which responsible for sperm development and differentiation contains regions AZFa, AZFb, AZFc. These regions contain multiple copies of gene families. Azospermia is seen as a pre-meiotic spermatogenic arrest or SCOS (Sertoli cell-only syndrome).

	In this study which we planned to compare the methods; patients who applied to the Department of Urology and received clinical history of azoospermia without any additional health problems after detailed history taking, physical examination and sperm measurements were directed to our Medical Genetics clinic. Our patient group consisting of 50 azoospermic patients and 15 fertile individuals, which are normally evaluated as a result of cytogenetic and molecular analyzes, has been analyzed by MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) method. Partial deletions of AZFc and AZFb regions were detected by MLPA technique in  8 (16%) patients which had no deletions were detected by previously analyzed multiplex PCR method. Partial deletions of the EIF1AY and BPY2 genes were seen in 2 patients in the AZFb locus and only in 1 patient in the AZBb+c region. In addition, in 5 patients were detected partial deletions of BPY2 gene which located in AZFc region. İn our control group which consist of fertile individuals were not determine any microdeletion or microduplication.

This method will enable the analysis of microdeletions/ microduplications covering a wider area and will also assist in the establishment of detailed genotype/phenotype correlations. We think that MLPA is more suitable when compared to mPCR in terms of investigating the effects of partial and complete deletions of AZF regions on male infertility. The reason for this may be related to the fact that some of the deletions which can be detected are not among the regions examined by the mPCR method used in the routine. When using the multiplex PCR method, it is necessary to design the primers specific to these regions, it can be analyzed with a single probe mix with MLPA method.