İmmunomanyetik ayırma yöntemi (IMA) ile gıdalardan Salmonella spp. izolasyonu
Isolation of Salmonella spp. from foods by using immunomagnetic separation (IMS) method
Yazar: BİRCE MERCANOĞLU
Danışman: DOÇ.DR. SAİT AYKUT AYTAÇ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2002
Konu: Gıda Mühendisliği = Food Engineering
Dizin: Atomik kuvvet mikroskobu = Atomic force microscope ; ISO 6579 = ISO 6579 ; Salmonella = Salmonella ; İmmunomanyetik ayırma = Immunomagnetic separation

Özet:
Son yirmi senedir, mikroorganizmaların gıdalardan ayrılması ve yoğunlaştırılmasında, analiz süresini hızlandırmak ve hedef mikroorganizmaların belirlenmesi ve izolasyonunu kolaylaştırmak amacı ile hızlı teknikler rutin olarak uygulanmaktadır. Gıdalardan belirli mikroorganizmaların ayrılması için kullanılan immunomanyetik ayırma (İMA) yöntemi de, bu tekniklerden biridir. Bu çalışmada ilk olarak, anti-Salmonella küreciklerinin özgünlüğü incelenmiş ve ardından Salmonella kontaminasyonu açısından risk taşıdığı düşünülen 50 adet gıda örneği ve yapay olarak kontamine edilen 14 adet gıda örneğinden Salmonella spp. izolasyonu amacı ile, anti-Salmonella küreciklerinin kullanıldığı İMA yöntemi- çekirdek metodu ve geleneksel kültürel bir metot olan ISO 6579 referans metodu karşılaştırmalı olarak araştırılmıştır. Ayrıca Salmonella enteritidis, anti-Salmonella kürecikleri ve S. Enteritidis+anti-Salmonella kompleksleri, atomik kuvvet mikroskobu (AKM) kullanılarak görüntülenmiştir. Sonuç olarak; İMA yöntemi-çekirdek metodu, doğal olarak kontamine olmuş 50 adet gıda örneğinin 14'ünün Salmonella ile kontamine olduğunu belirleyebilmişken, ISO 6579 referans metodu 12 adedini belirleyebilmiştir. Ayrıca 103 kob/mL seviyesinde S. enteritidis inokülasyonu gerçekleştirilen 14 adet gıda örneği arasında İMA yöntemi-çekirdek metodu, ISO 6579 referans metoduna göre 1 adet daha fazla Salmonella pozitif örnek belirlemiştir. Bu verilere istatistiksel analizler uygulandıktan sonra, İMA yöntemi-çekirdek metodu ile geleneksel ISO 6579 referans metodu arasında önemli fark olmadığı belirlenmiştir. Ancak İMA yönteminin, ISO 6579 referans metoduna oranla hızlı ve yüksek duyarlıkta olduğu saptanmıştır. Anahtar Kelimeler: Salmonella, immunomanyetik ayırma (İMA), ISO 6579, gıda, atomik kuvvet mikroskobu Danışman: Doç. Dr. S. Aykut AYTAÇ, Hacettepe Üniversitesi, Mühendislik Fakültesi, Gıda Mühendisliği Bölümü

Abstract:
In the last twenty years, rapid techniques for the separation and concentration of microorganisms from foods are routinely applied in order to increase the speed of analysis and ease of isolation and detection of target microorganisms. One recent example of such technique is the immunomagnetic separation (IMS) method that has been used for the separation of specific microorganisms from foods. In this study, firstly the specificity of Dynabeads® anti-Salmonella has been examined and then IMS-core method that uses Dynabeads® anti-Salmonella has been investigated in order to isolate Salmonella spp. from 50 food samples having the contamination of Salmonella risk and 14 spiked food samples in parallel with the traditional cultural method that is ISO 6579 reference method. Also Salmonella enteritidis, anti-Salmonella beads and the S. enteritidis+Dynabeads® anti- Salmonella complexes have been visualised by atomic force microscopy (AFM). As a result, IMS enabled the detection of 14 Salmonella positive samples from the 50 naturally contaminated food samples examined whereas ISO 6579 reference method enabled 12 Salmonella positive samples. Furthermore, in 14 food samples inoculated with 103 cfu/mL of S. enteritidis, IMS-core method isolated one more Salmonella positive sample than the traditional ISO 6579 reference method. After applying statistical analysis to these datas, this IMS-core method showed no difference in performance with the traditional ISO 6579 reference method. But IMS method was found as a rapid and a highly sensitive method than the ISO 6579 reference method. Keywords: Salmonella, immunomagnetic separation, ISO 6579, food, atomic force microscopy Advisor: Assoc. Prof. S. Aykut AYTAÇ, Hacettepe University, Faculty of Engineering, Food Engineering Department