Soya fasulyesinden (Glycine max) lektin izolasyonu, saflaştırılması ve elektroforetik karakterizasyonu
Isolation, purification and electrophoretic characterization of lectin from soybean (Glycine max)
Yazar: IŞIK PERÇİN
Danışman: PROF. DR. EROL AKSÖZ
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoloji = Biology

Özet:
Karbonhidratlara geri dönüşümlü olarak bağlanabilen bir protein sınıfı olan lektinlerdoğada virüslerden bakterilere ve bitkilerden hayvanlara kadar pek çok kaynaktabulunmaktadır. Son yıllarda lektinlerin bitkilerden özellikle baklagillerdenizolasyonu ve saflaştırılması ile ilgili çalışmalar artmıştır. Lektinler daha çok afinitekromatografisi ile, son yıllarda da rekombinant DNA teknikleri ile saf halde eldeedilebilirler. Saflaştırılmış lektin, analitik, diyagnostik ve klinik kullanımları içerenbiyomedikal uygulamalarda kullanımından ötürü çok değerlidir.Bu çalışmada Glycine max L.Merrill'e ait SA88 çeşidinin tohumlarından afinitekromatografisi ile soya fasulyesi lektini (soybean lectin=SBL) saflaştırılmıştır.Çalışmada matriks olarak poli(HPMA-GMA) (hidroksipropilmetakrilat-glisidilmetakrilat), ligand olarak ise N-asetil-D-galaktozamin kullanılmıştır.Tohumlardan elde edilen özütteki SBL molekülleri için maksimum adsorpsiyonkapasitesi kuru adsorbent birim gram ağırlığı başına 26.01 mg olarak bulunmuştur.SBL'nin mikrokürelerden elusyonu 0.5 M galaktoz ile gerçekleştirilmiştir. Afinitekromatografisi sonucu elde edilen lektinin moleküler ağırlığı ve saflığı standart SBL(Sigma) ile karşılaştırılarak SDS-PAGE (Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jelelektroforezi) ile belirlenmiştir. Ayrıca N-asetil-D-galaktozamin takılı poli(HPMA-GMA) mikrokürelerine PBS içinde çözülmüş SBL çözeltilerinden SBL adsorbeedilmiş ve maksimum adsorpsiyon kapasitesi kuru adsorbent birim gram ağırlığıbaşına 5.01 mg olarak bulunmuştur. SBL'nin adsorpsiyon kapasitesinde önemli birazalma olmadan N-asetil-D-galaktozamin takılı poli(HPMA-GMA) mikrokürelerinetekrar tekrar adsorbe ve desorbe edilebileceği gösterilmiştir.Anahtar Sözcükler: Lektin, soya fasulyesi lektini, SBL, Glycine max, afinitekromatografisi, poli(HPMA-GMA)Danışman: Prof. Dr. Erol AKSÖZ, Hacettepe Üniversitesi, Biyoloji Bölümü,Moleküler Biyoloji Anabilim Dalıi

Abstract:
Lectins which bind to carbohydrates reversibly are ubiquitous in nature frombacterium to plants and animals. In recent years, number of the studies aboutlectin purification from legumes has increased. Lectins can be obtained purely byaffinity chromatography and in recent years by recombinant DNA methods.Purified lectin is highly valued for its use in a variety of biomedical applicationsincluding analytical, diagnostic and clinical uses.In this study, soybean lectin (SBL) was purified from seeds of Glycine maxL.Merrill SA88. In the study, poly(HPMA-GMA) (hydroxypropyl methacrylate-glycidyl methacrylate) microspheres were used as matrix and N-acetyl-D-galactosamine molecule was used as ligand. Maximum adsorbent capacity ofSBL molecules obtained from the extract was determined to be 26.01 mg per drygram of adsorbent polymer. Elution of SBL from microspheres was accomplishedby 0.5 M galactose. Molecular weight and purity of SBL purified by affinitychromatography was determined by SDS-PAGE comparing with pure SBL(Sigma). Also, SBL adsorbed with N-acetyl-D-galactosamine binded poly(HPMA-GMA) microspheres from SBL solution dissolved in PBS and maximum adsorbentcapacity per dry gram of adsorbent was found to be 5.01 mg. It was observed thatSBL could be repeatedly adsorbed and desorbed with N-acetyl-D-galactosaminebinded poly(HPMA-GMA) microspheres.Keywords: Lectin, soybean lectin, SBL, Glycine max, affinity chromatography,poly(HPMA-GMA)Advisor: Prof. Dr. Erol AKSÖZ, Hacettepe University, Department of Biolgy,Molecular Biology Sectionii