İvermektin ve Sulfadiazinin Toxoplasma Gondii'ye etkinliklerinin in vitro ortamda karşılaştırılması
The comparision of in vitro effects of Ivermectin and Sulfadiazine on Toxoplasma gondii
Yazar: MELEK BİLGİN
Danışman: PROF. DR. MURAT HÖKELEK
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Sulfadiazine = Sulfadiazine ; Toksoplazma = Toxoplasma ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii ; İn vitro = In vitro ; İvermectin = Ivermectin

Özet:
Toksoplazmoz, tüm dünyada yaygın olarak görülen, zorunlu hücre içi paraziti Toxoplasma gondii'nin etken olduğu bir enfeksiyon hastalığıdır. İmmün sistemi sağlıklı olan kişilerde akut enfeksiyon asemptomatik veya hafif bulgularla seyrederken, özellikle immün yetmezliği veya immün sistemi baskılanmış hastalarda çok ağır seyretmekte ve ölümle sonuçlanabilmektedir.Bugün için konjenital ve kazanılmış toksoplazmozisde kullanılan en etkili ilaç primetamin-sulfadiazin kombinasyonudur. Ancak, bu tedavi ile hem immün yetmezlik sendromu (AIDS) olan hastalarda çok ciddi yan etkiler oluşmakta hem de parazitin kist formları yok edilememektedir. Bu yüzden, hastaların tedavisi için daha etkili ve daha az toksik yeni tedavi yaklaşımlarının araştırılmasına devam edilmektedir.Bu çalışmanın amacı, antiparaziter olarak kullanılan ivermektin ile halen standart tedavide en etkili ilaçlardan biri olarak kullanılan sulfadiazinin, in vitro T. gondii RH suşu takizoitleri ile enfekte Hep-2 (human larynx epidermoid karsinom) hücrelerinde anti-Toxoplasma aktivitelerinin araştırılmasıdır.Antimikrobiyal ajanların anti-Toxoplasma aktivitelerinin değerlendirilmesinde genellikle hücre kültürleri ve enfekte fare modelleri kullanılmaktadır. Bu çalışmada, 96 kuyucuklu hücre kültür pleytlerinde hazırlanan monolayer Hep-2 hücreleri, farelerden izole edilen T. gondii RH suşu takizoitleri ile enfekte edildi. İlaçlar eklendikten sonra inkübasyonun 24, 48 ve 72. saatlerinde etkinlikleri hem mikroskobik olarak hemde 48. satte ELISA yöntemi ile değerlendirildi. Ayrıca test edilen ilaçların ve takizoitlerin Hep-2 hücrelerine toksisiteleri, Neutral Red Dye Uptake değerlendirme testi ile saptandı.İvermektin, inkübasyonun 48. Saatinde, 5 ve 2,5 ? g/ml (P ? 0.01) konsantrasyonlarda, sulfadiazin ise inkübasyonun 48. saatinde, düşük konsantrasyonlar olan 1,5 ve 0.75 ? g/ml (P ? 0.05) hariç bütün konsantrasyonlarda takizoit replikasyonunu anlamlı olarak inhibe ettiği saptandı. İvermektin ve sulfadiazinin inkübasyonun 48. saatinde, %50 inhibitör konsantrasyon (IC50) değerleri sırasıyla 0.27 ? g/ml ve 7.3 ? g/ml olarak hesaplandı. Ayrıca her iki ilacın test edilen konsantrasyonlarının Hep-2 hücrelerine toksik olmadığı saptandı.Sonuç olarak; ivermektinin in vitro T. gondii RH suşu takizoit replikasyonunu anlamlı olarak inhibe etmesi, ileriki çalışmalarla in vivo hayvan modellerinde ve diğer ilaçlarla kombinasyon aktivitelerinin gösterilmesi halinde toksoplazmoz tedavisinde yararlı olabilir.

Abstract:
Toxoplasmosis is an infection disease caused by the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii occur worldwide. In most individuals, acute infection with T. gondii is asymptomatic or causes mild symptoms. However, toxoplasmosis can cause severe diseases in fetuses if a seronegatif pregnant woman is infected and also it can become fatal in immunodeficiency or immunocompromised individuals.Currently, the most effective treatment for both congenital and acquired toxoplasmosis is the combination of pyrimethamine?sulfadiazine. But this regimen is associated with severe adverse reactions, especially in patients with acquired immunodefiency syndrome and fails to eliminate the encysted form of the parasite. Therefore the more effective and less-toxic drugs as well as search for new therapy regimens have been sought..The aim of this study was to investigate in-vitro the anti-Toxoplasma activities of antiparasitic ivermectin and sulphadiazine, currently one of the most effective available therapeutic regimen, using tachyzoites of T. gondii RH strain infected Hep-2 epithelial cells.Generally, cell culture and infected mice models have been used in determining anti-Toxoplasma activities of antimicrobial agents. In this study, Hep-2 cells in tissue culture plates were infected with the tachyzoites isolated from peritoneal fluid of mice infected with T. gondii. Subsequently, drugs were added and their inhibitory activities were assessed after 24, 48 or 72 incubations using invert microscopy and ELISA at 48.hour. The toxicities of drugs and tachyzoites for Hep-2 cells were also determined with NRUD assay.İvermectin was found to have significant inhibitory activity against tachyzoites after 48 h of incubation at a concentration of 5 and 2,5 ? g/ml (P ? 0.01) and higher concentrations. On the other hand sulphadiazine in all concentration, except at a concentration of 1,5 and 0,75 ? g/ml (P ? 0.05) showed significantly higher activity at 48 h incubations. The 50 % inhibitory concentrations (IC50) of ivermectin and sulphadiazine were estimated to be 0.27 ? g/ml and 7.3 ? g/ml after 48 h of exposure, respectively. None of the concentrations tested for each drugs demonstrated toxicity to Hep-2 cells after 72 h of incubation.Our results indicated that ivermectin significantly inhibited replication of the tachyzoites of T. gondii RH strain, suggesting that further studies in combination with other drugs and animal models may be useful for better treatment model for toxoplasmosis in humans.