Kümes hayvanlarında mycoplasma gallisepticum'un tespiti için lam aglütinasyon, ELISA ve PCR testlerinin karşılaştırılması
Comparison of slide agglutination, ELISA and PCR tests for the detection of mycoplasma gallisepticum in poultry
Yazar: MÜMTAZ RECEP TEKKALAN
Danışman: PROF. DR. EMRAH TORLAK
Necmettin Erbakan Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aglütinasyon testleri = Agglutination tests ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kümes hayvanları = Poultry ; Mikoplazma galliseptikum = Mycoplasma gallisepticum ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Moleküler biyoloji = Molecular biology ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Serolojik testler = Serological tests

Özet:
Mycoplasma gallisepticum, kanatlı hayvan yetiştiriciliğinde önemli bir hastalık etkeni olarak tanımlanmaktadır. Tavuklarda kronik solunum yolu hastalığına, hindilerde enfeksiyöz sinüzite sebep olmaktadır. Yüksek mortaliteye sahip olmamasına rağmen diğer hastalıklarla kombine olduğunda büyük maddi hasarlara yol açmaktadır. Bu nedenle, etkenin en kısa zamanda ve en doğru yöntemle tespit edilmesi önemlidir.
Bu çalışmada, 300 adet kanatlıya ait svab-doku örnekleri PCR testi, kan serumları ise serolojik testler için kullanılmıştır. Lam aglütinasyon testi ile 148 örnek pozitif, 152 örnek ise negatif olarak değerlendirilmiştir. ELISA testi ile 128 örnekten pozitif, 172 örnekten ise negatif sonuç elde edilmiştir. Svab-doku örneklerinin 180 adedinden M. gallisepticum spesifik DNA izole edilmiştir. Testlerin karşılaştırılmasında kullanılan Kappa metodunda, test sonuçları arasında iyi düzeyin üzerinde bir uyum saptanmamıştır. PCR pozitif örneklerin önemli bir bölümünü, trakeal svabların oluşturduğu tespit edilmiştir. Bu nedenle, hastalığın ileri döneminde yapılan PCR testleri için trakealardan svab alınmıştır.
Hastalık belirtileri devam eden 100 kanatlıdan 21 gün sonra tekrar trakeal svab ve serum örnekleri alınmıştır. Bu örnekler ile gerçekleştirilen lam aglütinasyon testinde, 55 örnek pozitif, 45 örnek ise negatif olarak değerlendirilmiştir. ELISA testi ile 55 örnekten pozitif, 45 örnekten ise negatif sonuç elde edilmiştir. Svab-doku örneklerinin 75 adedinden M. gallisepticum spesifik DNA izole edilmiştir. Kappa metodu uygulandığında test sonuçları arasında önemli düzeyde uyum tespit edilmemiştir.
Elde edilen sonuçlar M. gallisepticum tespitinde sadece bir metot kullanılmasının yeterli olmadığını ve serolojik test metotları ile elde edilen sonuçların PCR ile doğrulanması gerektiğini ortaya koymuştur. PCR ile elde edilen sonuçlar, PCR testi için trakeal svabların tercih edilmesi gerektiğini göstermiştir.

Abstract:
Mycoplasma gallisepticum is defined as an important disease causative agent in poultry farming. It causes chronic respiratory disease in chickens and infectious sinusitis in turkeys. Although it does not have high mortality, when combined with other diseases, it causes great financial damage. For this reason, it is important to identify the agent in the shortest time and with the most accurate method. 
In this study, swab-tissue and serum samples from 300 poultries were used for the PCR test and serological tests, respectively. According to the slide agglutination test, 100 serum sample was negative and 200 serum samples were evaluated as positive. ELISA test yielded positive results from 128 samples and negative results from 172 samples. M. gallisepticum specific DNA was isolated from 180 of the swab-tissue samples. In the Kappa method used for comparing the tests, there was no good correlation between the test results. It was determined that a significant part of the PCR positive samples consisted of tracheal swabs. Therefore, swabs from the trachea were taken for PCR tests in the progressive stage of the disease.
Tracheal swab and serum samples were collected 21 days later from 100 poultries with disease symptoms. In the slide agglutination test performed with these samples, 55 samples were evaluated as positive and 45 samples as negative. With the ELISA test, positive results were obtained from 55 samples and negative results from 45 samples. M. gallisepticum specific DNA was isolated from 75 of the swab-tissue samples. When the Kappa method is applied, there is no significant agreement between the test results.
The obtained results revealed that the results obtained with a single test method are questionable in the detection of M. gallisepticum and the results obtained with serological test methods should be confirmed by PCR. Results obtained with PCR showed, that tracheal swabs should be preferred for PCR testing.