Akut ve kronik miyeloid lösemilerde killer cell immunoglobulin-like reseptör genotip analizi
Analysis of killer imminoglobulin-like receptor genotypes in the acute and chronic myeloid leukaemia
Yazar: MERVE ERKOÇ
Danışman: PROF. DR. EMEL GÜRKAN
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Genotip = Genotype ; Katil hücreler-doğal = Killer cells-natural ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Lösemi-miyeloid-akut = Leukemia-myeloid-acute ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İmmün sistem = Immune system ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins

Özet:
ÖZET
Akut ve Kronik Miyeloid Lösemilerde Killer Cell Immunoglobulin-like Reseptör Genotip Analizi

Amaç: Doğal öldürücü (NK, natural killer) hücreler antitümör aktiviteleri olduğu bilinmektedir. NK hücrelerinin bu aktivitesi KIR (killer cell immunoglobulin-like receptor) adı verilen aktive ve inhibe edici özellikleri olan reseptörler tarafından düzenlenmektedir. Aktive edici ve inhibe edici reseptörler arasındaki oran, reseptörlerin ilgili ligandlarla bağlanma kuvveti ve oluşturulan sinyaller arasındaki denge NK hücrelerinin fonksiyonlarını düzenler. KIR genleri popülasyonlar, bireyler, hastalıklar arasında çeşitlilik gösterir. Yapılan çalışmalar bu farklılıkların tedavi yanıtını etkilediğini göstermiştir. Bu çalışmada akut ve kronik miyeloid lösemi hastalarında KIR genotip frekanslarını araştırdık.
Gereç ve Yöntem: Çalışma grubumuza Mayıs 2016-Eylül 2017 tarihleri arasında kliniklerimizde takip edilen 34 akut miyeloid lösemi (AML), 46 kronik miyeloid lösemi (KML) tanılı hasta dahil edildi. Ayrıca 100 yaş ve cinsiyet uygun sağlıklı birey dahil edildi. Tüm katılımcıların bilgilendirilmiş onayı ile çalışma Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Etik Değerlendirme Kurulu tarafından izin verilmiştir. Tüm hastalardan EDTA'lı venöz kan örneklerinden DNA çıkarıldı. KIR genlerinin genotipik analizi multipleks KIR SSO kiti ile yapıldı. Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve SSO yöntemiyle periferik kan örneklerinden KIR genleri tanımlandı. Grup A haplotipine karakteristik gen (KIR2DL1, 2DL3, 2DL4, 2DP1, 3DP1, 3DL1, 3DL2, 3DL3 and 2DS4) içeriğine sahip kişiler AA genotipi kabul edildi. KIR2DL2, 2DL5, 2DS1, 2DS2, 2DS3, 2DS5 ve 3DS1 arasında herhangi bir gen mevcutsa, birey B haplotipi olarak kabul edildi (genotip Bx).
Bulgular: Çalışmamızda AML, KML ve kontrol grubunda yaş ortalaması sırasıyla 52±2.8, 56.5±2,2 ve 53±1,2 yıl idi (P>0.05). KML hastalarında AA genotipi % 34,8, AML ve kontrol grubu için % 38,2 ve % 30 bulundu. Bx genotipi KML, AML ve kontrollerde sırasıyla; % 65,2, % 61,8 ve % 70 olarak saptandı. Tüm lösemili (AML+KML) hastalar kontrol grubuyla karşılaştırıldığında KIR2DL3 anlamlı bulundu (P<0.05). KML hastaları için KIR2DL3 yüksek frekanslarda anlamlı iken KIR2DS2 ve KIR2DL2 düşük frekanslarda anlamlı bulundu (P ≤0.05). 
	Sonuç: Lösemilerde özellikle KML grubu hastalarda NK hücre fonksiyonlarının düzenleyicisi olarak kabul edilen spesifik KIR genotiplerinin bulunduğuna dair güçlü veriler bulunmaktadır. Çalışmamıza ait bulgular NK hücreleri üzerindeki KIR ekspresyonundaki değişikliklerin akut ve kronik miyeloid lösemi gelişimiyle ilişkili olabileceğini desteklemektedir. Bu konuda daha geniş sayıda hastalarla yapılan çalışmalara gereksinim vardır.

Anahtar Kelimeler: Lösemi, KIR, Miyeloid

Abstract:
ABSTRACT
 Analysis of Killer Immınoglobulin-like Receptor Genotypes in the Acute and Chronic Myeloid Leukaemia

	Objective: It is well-known that natural killer (NK, natural killer) cells have anti- tumour activities. This particular type of activity of NK cells is regulated mainly by specific receptors namely Killer Cell Immunoglobulin-like Receptor (KIR) which possess both activatory and inhibitory features. The proportion between the activatory and inhibitory receptors, binding strength of receptors to the given ligands and the balance in between composite signals, regulate NK cell functions. KIR genes variations among the populations, individuals and diseases. Previous studies have shown that these differences affect treatment response. In this study, we have investigated the frequencies of KIR genotypes in patients with acute and chronic myeloid leukemias.
Material and Method: This study group consisted of 34 acute myeloid leukaemia (AML) and 46 chronic myeloid leukaemia (CML) patients who were followed in our haematology and oncology clinics between May 2016 and September 2017. In addition, 100 age and sex matched individuals were included. With the informed consent of all participants, the study was permitted by the Ethics Review Board at Çukurova University Faculty of Medicine. DNA from the venous-EDTA blood sample of all patients was extracted. Genotyping of KIR genes were performed by the multiplex KIRSSO kit.  Polymerase Chain Reaction (PCR) and KIR typing through SSO method were processed out of patients' blood. Individuals having the characteristic gene content of group A haplotype (KIR2DL1, 2DL3, 2DL4, 2DP1, 3DP1, 3DL1, 3DL2, 3DL3 and 2DS4) were considered as AA genotype. If any gene among KIR2DL2, 2DL5, 2DS1, 2DS2, 2DS3, 2DS5, and 3DS1 were present, the individual was considered to be B haplotype (genotype Bx).
Results: In this study, the median age for the AML, CML patients and healthy controls was 52±2,8, 56.5±2,2 and 53±1,2 years, respectively (P>0.05). Among CML patients % 34,8 had AA genotype, which was % 38,2 and % 30 for AML patients and control group respectively. Bx genotype was detected % 65,2, % 61,8 and % 70 in CML, AML patients and controls, respectively. When all the patients were compared to the control group, KIR2DL3 was found to be significant (P<0.05). For CMLpatients, KIR2DL3 was found to be significant at the higher frequencies whilst KIR2DS2 and KIR2DL2 got significant at lower frequencies (P ≤0.05).
Conclusion: Our results suggest that alterations in KIR expression on the NK cells can be related to the development of acute and chronic myeloid leukaemias. However further studies with larger number of patients are required.

Keywords:Leukaemia, KIR, Myeloid