Tarantula cubensis zehrinin multipl miyelom üzerindeki anti-proliferatif etkisinin araştırılması
Investigation of the anti-proliferative effect of Tarantula cubensis venom on multiple myeloma
Yazar: İSMAHAN ŞAHİN
Danışman: DOÇ. DR. DİLARA AKÇORA YILDIZ
Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Multipl miyelom (MM), kemik iliğindeki plazma hücrelerinin kontrol dışı artış göstermesiyle oluşan ve hematolojik malignitelerin yaklaşık %18'ini oluşturan bir kanser türüdür. MM'de kemoterapi, kemik iliği nakli, radyoterapi gibi tedaviler MM'li hastaların sağ kalım sürelerini artırmasına rağmen relaps ve mevcut tedavilere karşı oluşan direnç nedeniyle MM, hâlâ öldürücü maligniteler arasındadır. Bu nedenle, MM'da maligniteyi yönlendiren yeni terapötik ajanların araştırılmasına ihtiyaç duyulmaktadır.
Küba Tarantulası olarak da bilinen örümcek Tarantula cubensis alkollü ekstraktından hazırlanan ve ticari olarak temin edilebilen Theranekron (THR) veteriner hekimlikte pododermatit, enfeksiyon, kutanöz papillomatozis gibi bir çok tedavide aktif olarak kullanılmaktadır. Köpeklerde meme tümörlerini sınırlandırdığı bilinen THR'nun yapılan bazı çalışmalarda da çeşitli kanser hücre hatlarında anti kanser etkisi gösterdiği bildirilmiştir. Bu verilerden yola çıkılarak Tarantula cubensis zehrinin MM üzerindeki anti-proliferatif etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.
İnsan MM hücre hatlarında (RPMI 826, H929 ve U266) 48 saatlik THR uygulamasının hücre canlılığı üzerine olan etkinliği MTT yöntemi ile analiz edilmiştir. Elde edilen veriler üç MM hücre hattında ve ilaveten normal meme epitel hücre hattı MCF10A'da THR'un doza bağımlı olarak hücre canlılığını azalttığını göstermiştir. NCI H929 ve RPMI 8226 hücrelerinde 48 saat THR uygulamasının apoptoz yolağında önemli rol oynayan BAX ve BCL-2 genlerinin mRNA ekspresyon düzeyleri üzerine etkisi qPCR ile araştırılmış; BAX mRNA ifade düzeyinde bir farklılık gözlemlenmezken, BCL-2 mRNA ifade düzeyinde azalışa doğru bir trend görülmüştür. THR uygulanan ve uygulanmayan NCI H929 hücrelerinde yapılan Western Blot analizinde ise apoptozda görevli Bax protein seviyesinde bir fark gözlemlenmezken, aktif kaspaz-3 ve proliferasyon belirteci olarak kullanılan PCNA protein seviyelerinde azalışa doğru bir eğilim görülmüştür. Bu tez çalışmasında elde edilen veriler THR'nun MM'da anti-kanser etki gösterebileceğine, ancak normal hücreler üzerine de toksik etkisinden dolayı dikkatli kullanılmasına işaret etmektedir. THR'un MM'da etki mekanizmasının aydınlatılması için daha ileri araştırmalar önerilmektedir.

Abstract:
Multiple myeloma (MM) is a type of cancer that occurs when plasma cells in the bone marrow increase uncontrollably and constitutes approximately 18% of hematological malignancies. Although treatments such as chemotherapy, bone marrow transplantation, and radiotherapy increase the survival of patients with MM, MM is still among the lethal malignancies due to relapse and resistance to current treatments. Therefore, there is a need to investigate new therapeutic agents that direct malignancy in MM.
Theranekron (THR), which is prepared from the alcoholic extract of the spider Tarantula cubensis, also known as the Cuban Tarantula, and is commercially available, is actively used in veterinary medicine in many treatments such as pododermatitis, infection, and cutaneous papillomatosis. THR, which is known to limit mammary tumors in dogs, has also been reported to have anticancer effects on various cancer cell lines in some studies. Based on these data, it was aimed to investigate the anti-proliferative effect of Tarantula cubensis venom on MM.
The effectiveness of a 48-hour THR application on cell viability in human multiple myeloma (MM) cell lines (RPMI 8226, H929, and U266) was assessed using the MTT assay. The results demonstrated that THR reduced cell viability in a dose-dependent manner in all three MM cell lines and in the normal breast epithelial cell line MCF10A. The impact of the 48-hour THR treatment on the mRNA expression levels of BAX and BCL-2, key genes in the apoptosis pathway, was analyzed via qPCR in NCI H929 and RPMI 8226 cells. While BAX mRNA expression remained unchanged, a decreasing trend in BCL-2 mRNA expression was observed. Western blot analysis in NCI H929 cells, with and without THR treatment, revealed no significant change in Bax protein levels, which are associated with apoptosis. However, a decreasing trend in active caspase-3 levels and PCNA protein, a proliferation marker, was noted. These findings suggest that THR may exert anti-cancer effects in MM. However, its potential toxicity to normal cells warrants caution. Further studies are needed to clarify the underlying mechanisms of THR in MM.