Vitiligo hastalarında melanogenez ile ilişkili bazı miRNA ekspresyon düzeylerinin araştırılması
Investigation of some miRNA expression levels associated with melanogenesis in vitiligo patients
Yazar: GURBET DOĞRU
Danışman: DOÇ. DR. ÖZLEM İZCİ AY
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Lenfoma-B hücreli = Lymphoma-B cell ; Melaninler = Melanins ; Mikro RNA = Micro RNA ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Tirozin = Tyrosine ; Vitiligo = Vitiligo

Özet:
Vitiligo, epidermisten melanositlerin kaybı ile karakterize edinilmiş, kronik, depigmente bir hastalıktır. Genel populasyonun yaklaşık %0,5-1'inde görülmektedir. Kadınlar ve erkekler 	hastalıktan eşit olarak etkilenmekte ve hastalık her yaşta gelişebilmektedir. Hastalığın etiyolojisi tam olarak bilinmemektedir. Fakat hastalığın temel patogenezi olan melanositlerin kaybını açıklamak üzere ortaya farklı hipotezler sürülmüştür. Otoimmün teori, vitiligonun patogenezini açıklayan en güçlü teoridir. miRNA'lar, hedef mRNA'ların translasyonel inhibisyonunu ve transkripsiyonel degredasyonunu sağlayan kodlamayan RNA'ların  bir sınıfıdır. Birçok araştırma, miRNA'ların deri hastalıkları dahil olmak üzere çeşitli insan hastalıklarının patogenezinde ayrıca doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık sisteminin düzenlenmesi dahil olmak üzere birçok fizyolojik ve patolojik hücresel süreçte önemli rol oynadığı gösterilmiştir. Bu nedenle deri hastalıklarının patogenezine katılan miRNA moleküllerinin klinik olarak hem tanı ve tedavide hem de töropotik ajanlar ve biyobelirteç olabilmeleri bakımından ilgi çekicidir. Çalışmaya Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Dermatoloji Anabilim Dalı'nda vitiligo tanısı alan 56 hasta dahil edildi. Lezyonların Wood ışığı incelemesi ile vitiligo tanısı kesinleştirildi. Çalışmaya kontrol grubu olarak 56 birey dahil edildi. Bu çalışmada melanogenez yolağında görevli genleri hedefleyen 8 miRNA molekülünün (hsa-miR-3163, hsa-miR-6783-3p, hsa-miR-1343-3, hsa-miR-4696, hsa-miR-5197-3p, hsa-miR-3680-3p) ekspresyon düzeyleri hasta ve kontrol bireylerin kan örneklerinden belirlendi. Seçilen miRNA'lar, Real-time PCR'da karşılaştırmalı ΔΔCT yöntemi kullanılarak analiz edildi. Moleküler analizden elde edilen veriler Mann-Whitney U ve Kruskal-Wallis testleri kullanılarak istatistiksel olarak değerlendirildi. Değerlendirme sonucunda hasta ve kontrol bireyler arasında hsa-miR-4495 ve hsa-miR-6824 genlerinin ekspresyon düzeyleri bakımından istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki bulundu. Bu veriler, BCL2 genini hedefleyen hsa-miR-4495'i ve TYR genini hedefleyen hsa-miR-6824'ün vitiligo patogenezinde rol oynayabileceğini göstermektedir.

Anahtar kelimeler: Vitiligo, Real-time PCR, miRNA ekspresyonu, melanogenez, TYR, BCL2

Abstract:
Vitiligo is an acquired chronic, depigmenting disorder characterized by the loss of melanocytes from the epidermis. It affects about 0,5-1% of the general population. Males and females are equally affected and it can develop at any age. The etiology of the disease is stil not clear. Different hypotheses are concerning to explain this melanocyte activity loss. Autoimmune theory is the strongest theory in explaining the pathogenesis of the vitiligo. miRNAs are a class of noncoding small RNAs that provide translational inhibition and posttranscriptional degradation of target mRNAs. A lot of researches have paid attention to the possibility that miRNAs play a role in the pathogenesis of various human disorders including skin diseases and have a major impact on several physiological and pathological cellular processes including modulation of the innate and the adaptive immune system. Accordingly, there is emerging evidence for the clinical potential of miRNAs as both biomarkers and possible therapeutic targets in skin diseases. In this study 56 patients diagnosed as vitiligo in the Department of Dermatology, Mersin University Faculty of Medicine  were included in the study. After a detailed history and a careful physical examination of each patient involved in the study, the diagnose was confirmed by a Wood lamp examination. 56 individuals were included in the study as a control group. In this study, the expression levels of 8 candidate miRNAs (hsa-miR-3163, hsa-miR-6783-3p, hsa-miR-1343-3, hsa-miR-4696, hsa-miR-5197-3p, hsa-miR-3680-3p) targeted genes playing role melanogenesis pathway in blood samples of vitiligo patients were determined. Selected miRNAs were analyzed by using comparative ΔΔCT method in Real-Time PCR. Data obtained from molecular analyze were statistically evaluated by using Mann-Whitney U test and Kruskal-Wallis test. As a result of the evaluation, there was a statistically significant relationship between the expression levels of hsa-miR-4495 and hsa-miR-6824 genes between vitiligo patients and controls(p<0.05). These data show that hsa-miR-6824 targeting the TYR gene and hsa-miR-4495 targeting BCL2 gene may play a role in the pathogenesis of vitiligo. 

Key Words: Vitiligo, melanogenesis, miRNA evpression, Real-Time PCR, TYR, BCL2