Stbm/vangl (strabismus/vangogh like) gen ekspresyonunun hepatosellüler kanser hücre dizilerinde hücre davranışı üzerine olan etkileri
The effects of stbm/vangl (strabismus/van gogh like) gene expression on cell behaviour in hepatocellular cancer cell lines
Yazar: GÖKHAN OZAN ÇETİN
Danışman: PROF.DR. MERAL SAKIZLI ; PROF.DR. UĞUR YILMAZ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
ÖzetSTBM/VANGL (Strabismus/VanGogh Like) Gen Ekspresyonunun HepatosellülerKanser Hücre Dizilerinde Hücre Davranışı Üzerine Olan EtkileriG. Ozan ÇETİNDokuz Eylül Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD, İzmirHepatosellüler kanser (HCC) dünyadaki en yaygın beşinci kanser türüdür vebilinen etkin bir tedavisi bulunmamaktadır.Wnt düzlemsel hücre polaritesi yolunda yer alan ve transmembran bir proteinolan Van Gogh like 1 (Vangl1) proteini gelişimsel süreçte embriyonik hücrelerinplanar hücre polaritesi kazanmalarını sağlar ve konverjant ekstansiyon hareketindensorumludur. Erişkinde, spesifik olarak testis ve ovaryumda, bunların dışında beyindeve prostatta eksprese olur.VANGL1 ekspresyonu, aralarında HCC'in de bulunduğu çeşitli insan kanserhücre dizilerinde gösterilmiştir. Araştırmamızda, VANGL1 geni siRNA yöntemiylebaskılanan HCC hücrelerinde, bu baskılanmanın yol açacağı hücre davranışdeğişikliklerinin incelenmesi hedeflendi.HCC hücre dizilerinde, VANGL1 ekspresyonunun varlığı, RT-PCR ve gerçekzamanlı PCR yöntemleriyle gösterildi. İnternet tabanlı bir yazılım kullanılarakVANGL1 genine spesifik siRNA hedef bölgesi belirlendi. Bu hedefe yönelik saç tokasıyapısındaki siRNA'yı transkribe edecek DNA dizisi tasarlandı. pSilencer 4.1 CMVNeo plazmidine siRNA kalıbı eklenip HepG2 hücreleri plazmidle transfekte edildi.VANGL1 geninin baskılandığı koloniler RT-PCR ile saptandı. Bu kolonilerden eldeedilen protein lizatları western blotlama ile değerlendirilerek gen ekspresyonununbaskılandığı doğrulandı. VANGL1 geni baskılanmış hücrelerin motilite ve invazyonözellikleri Boyden odacık deney sistemi ile proliferasyon analizleri ise akımsitometresi ile değerlendirildi.VANGL1 geni sessizleştirilen HCC hücrelerinin motilite özellikleri,baskılanmayan hücrelere göre belirgin değişiklik göstermezken, invazyonyeteneklerinin üç kat azaldığı gözlendi. Proliferasyon analizinde, VANGL1 genisessizleştirilmiş hücrelerle atasal hücre grubu arasında S fazındaki hücre oranıaçısından belirgin farklılık gözlenmemiştir.Sonuçta Vangl1 hücre motilitesinden çok hücre invazyonunu etkilemektedir.Bu etkinin mekanizmasını ortaya çıkartmak üzere ileri araştırmalar yapılmalıdır.Anahtar Kelimeler: Wnt, VANGL1, hepatosellüler kanser, motilite, invazyon,proliferasyon,

Abstract:
SummaryThe effects of STBM/VANGL (Strabismus/Van Gogh like) gene expression on cellbehaviour in hepatocellular cancer cell linesG. Ozan ÇetinDokuz Eylül University, Faculty of medicine, Department of Medical biology andGenetics, İzmirHepatocellular cancer (HCC) is the fifth most common cancer type and has noeffective treatment so far.Van Gogh like 1( Vangl1) protein, which is a transmembrane protein takingplace on Wnt planar cell polarity pathway, is important for embryonic cells to gainplanar cell polarity during developmental process and is also responsible fromconvergent extension. In adults, it is expressed spesifically in testis and ovarium as wellas in brain and prostat.VANGL1 expression has been reported in several human cancer cell linesincluding HCC. Our aim in this study was to investigate the behavior of HCC cellwhose VANGL1 gene was suppressed by siRNA method.The existence of VANGL1 expression in HCC cell lines was shown by RT-PCRand real time PCR methods. Internet based software program was used to define thetarget siRNA area spesific for VANGL1 gene. DNA line which transcribes the hairpinsiRNA for this target was designed. SiRNA insert was added to pSilencer 4.1 CMV Neoplasmid, later which was used to transfect HepG2 cells. The colonies having suppressedVANGL1 gene were examined by RT-PCR method. Suppression of the gene expressionwas proven by using western-blot method in assessing protein lisates provided by thecolonies. Motility and invasion of the cells having suppressed VANGL1 were assessedby Boyden chamber assay while proliferation analysis was assessed by flow cytometry.There was no difference in the motility of the HCC cells having suppressedVANGL1 where as the invasion capacity was decreased by 3 times.??. In proliferationanalysis, there was no difference in S phase cell ratio between VANGL1 suppressedcells and parental cells.As a conclusion, VANGL1 gene has an effect on cell invasion rather than cellmotility. Further investigations are needed to understand the mechanism of this effect.Key Words: Wnt, VANGL1, hepatocellular cancer, motility, invasion,proliferation