Triple negatif meme kanserlerinde alk durumunun immünhistokimyasal ve FISH yöntemleri ile tayin edilerek bu iki yöntemin karşılaştırılması ve ki67 indeksi ile ilişkisinin saptanması
Detection of alk status by immunohistochemistry and FISH in triple negative breast cancers with comparion of these two methods and identification of its association with ki67 index
Yazar: ÖZLEM KORKMAZ
Danışman: DOÇ. DR. SELVER ÖZEKİNCİ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Okmeydanı Eğitim. ve Araştırma. Hastanesi / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: FISH = FISH ; Gen ifadesi = Gene expression ; Ki-67 = Ki-67 ; Lenfoma = Lymphoma ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Teşhis = Diagnosis ; Teşhis teknikleri ve prosedürleri = Diagnostic techniques and procedures ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
AMAÇ: Tüm meme kanserlerinin yaklaşık olarak %15'ini oluşturan triple negatif meme kanserleri; östrojen reseptörü ve progesterone reseptörü  ekspresyon kaybı olan ve human epidermal growth factor receptor 2  gen amplifikasyonu bulunmayan tümörler olarak tanımlanır ve bu nedenle triple negatif meme kanseri olan kadınlar endokrin tedaviden ve trastuzumab tedavisinden  faydalanamazlar. Güncel olarak uygulanabilen tek sistemik tedavi seçeneği kemoterapidir. Triple negatif meme kanseri tedavisini geliştirme ve sağ kalımı arttırmada, yeni hedefe yönelik tedavilerin tanımlanmasına ihtiyaç vardır.ALK durumunun tayininde immünhistokimya ve FISH yöntemleri kullanılarak uygun ve etkin olan yöntem belirlenecek, ALK durumunun bir proliferasyon antijeni olan Ki67 ile ilişkisi saptanacaktır. Bilinen hormonal ve moleküler hedefe yönelik tedavilerden faydalanamayan, triple negatif meme kanseri olan hastaların, alternatif bir tedavi seçeneği olarak anti-ALK tedavisine (örn:crizotinib) aday olabileceklerini araştırmak ve bu bağlamda literatüre katkı sağlamak amaçlanmıştır. 
GEREÇ (OLGULAR) VE YÖNTEMLER: Sağlık Bilimleri Üniversitesi Okmeydanı Eğitim ve Araştırma Hastanesi-Patoloji Bölümü patoloji rapor arşivi incelenerek, Ocak 2014 ve Aralık 2016 tarihleri arasında,  triple negatif meme kanseri tanısı almış, 70 olgu seçildi. ALK protein ekspresyonu immünhistokimyasal yöntemle ALK-p80 Fare Monoklonal Antikoru (klon 5A4, Novocastra, dilüsyon 1:100) uygulanarak, ALK rearanjmanı FISH yöntemi ile 2p23 ALK DNA break apart FISH Probu kullanılarak tayin edildi. ALK durumu sonuçlarının bir proliferasyon antijeni olan Ki67 ile ilişkisi saptandı. Ayrıca ALK durumu ile hastanın yaşı, tümörün histolojik tipi ve histolojik grade'i gibi klinikopatolojik parametrelerin ilişkisi araştırıldı. 
BULGULAR: Tüm olguların ALK immünhistokimya sonucu negatif bulundu.
ALK FISH sonuçları %0 ile %44 arasında değişmekte olup ortalama %4,63±9,15'tir. Olguların %84,3'ünün (n=59) ALK FISH sonucu negatif, %15,7'sinin (n=11) ise pozitif izlendi. ALK FISH sonucuna göre Ki 67 sunuçları arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık saptanmadı. (p>0,05).ALK FISH sonucu, hastanın yaşı, tümörün histolojik tipi ve histolojik grade'ine göre istatistiksel olarak anlamlı farklılık göstermedi.	
SONUÇ: Çalışmamızın sonuçlarına göre; ALK gen rearanjmanı triple negatif meme kanserlerinde %15 oranında saptanmadı. Bu nedenle ALK gen rearanjmanı taşıyan triple negatif meme kanserli hastaların anti-ALK tedavisine aday olabileceklerini, bu hastalarda ALK tayini yapılarak anti-ALK tedavisine uygun hastaların seçilmesi gerektiğini ve ALK değişimlerini saptamada immünhistokimyasal yöntemde rutin kullanılacak antikorun özelliklerini belirleyebilmek için yeni ve kapsamlı çalışmalara ihtiyaç olduğunu düşündük. 
ANAHTAR KELİMELER: ALK, FISH, immünhistokimya, Ki67,  triple negatif meme kanseri

Abstract:
AIM: Triple negative breast cancer, defined by the lack of estrogen receptor and progesterone receptor expression and the absence of human epidermal growth factor receptor 2 gene amplification, composes of approximately 15% of all breast cancers. Women with triple negative breast cancer do not benefit from endocrine therapy or trastuzumab. Chemotherapy is the only systemic therapy currently available. Identification of new targeted therapy will lead to progress in the therapy of triple negative breast cancer and increase survival rates. With this study, we aim to identify the suitable and effective method in detection of ALK status by immunohistochemistry and FISH and the association of ALK status with Ki67 as a proliferation antigen. This study aims at providing evidence for suggesting anti-ALK (crizotinib) as an alternative therapy for triple negative breast cancer cases which cannot be treated with known hormonal and molecular targeted therapy. The result of this study is expected to be a valuable contribution to the literature.
MATERIALS (CASES) AND METHODS: 70 cases diagnosed with triple negative breast cancer between January 2014 and December 2016 have been selected from the archive of Sağlık Bilimleri University Okmeydanı Education and Research Hospital - Pathology Department. ALK protein expression has been detected by immunohistochemistry using ALK-p80 Mouse Monoclonal Antibody (clone 5A4, Novocastra, dilution 1:100) andALK generearrangementhas been detected by FISH using break apart 2p23 ALK DNA FISH Probe. The association of ALK status with Ki67 as a proliferation antigen has been identified. Besides, the association of ALK status with clinicopathological parameters (such as age,  histologic type and histologic grade) has also been examined. 
RESULTS: In all cases, the result of ALK immunohistochemistry was negative. ALK FISH results ranged from 0% to 44% with a mean of 4.63 ± 9.15%. 84.3% (n = 59) of the cases were negative for ALK FISH and 15.7% (n = 11) were positive. There was no statistically significant difference between Ki 67 outcomes according to ALK FISH results (p> 0,05). ALK FISH did not show a statistically significant difference according to the histologic type and histological grade of the tumor and the age of the patients.
CONCLUSION: According to the results of our study; ALK gene rearrangement was detected in 15% of triple negative breast cancers. Therefore, we think that triple negative breast cancer patients carrying ALK gene rearrangement may be candidates for anti-ALK treatment, that patients should be selected for anti-ALK treatment by conducting ALK test and that new and comprehensive studies are needed to determine the characteristics of routine antibody in detecting ALK changes by immunohistochemistry.
KEY WORDS: ALK, FISH, immunohistochemistry, Ki67,  triple negative breast cancer