Meme kanserinde sisplatin hücresel yanıtının DDB2 ve DNA polimeraz ETA üzerinden incelenmesi
Investigation of cisplatin cellular response in breast cancer via DDB2 and DNA polymerase ETA
Yazar: ONUR AKTAN
Danışman: DOÇ. DR. GÜLNİHAL KULAKSIZ ERKMEN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sisplatin = Cisplatin ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-neoplazm = Drug resistance-neoplasm

Özet:
Bu çalışmada, MCF-7 meme kanser hücrelerine sisplatin ile birlikte PNR-7-02 verilmesinin hücre canlılıkları ve DNA hasar yanıtlarında görev alan DDB2 ve DNA polimeraz η proteinlerini kodlayan genlerin ekspresyonları üzerine etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. Sisplatin, platin grubu içeren antineoplastik bir ilaçtır. Etkisini DNA'ya bağlanıp replikasyonu engelleyerek ve hücreyi apoptoza götürerek gerçekleştirir. PNR-7-02 ise DNA hasar toleransında görevli insan DNA polimerazı η'nın inhibitörü olarak geliştirilmiş, indol tiyobarbitürik asitten türevlendirilmiş bir kimyasal moleküldür. MCF-7 hücrelerine sisplatin, PNR-7-02 ve kombinasyonları 24 ve 48 saat süre ile uygulanmış, hücre canlılıklarına etkisi MTT deneyi ile belirlenmiştir. Kombine uygulamanın hücre canlılıkları üzerine etkileri Chou-Talalay yöntemiyle değerlendirilmiştir. DDB2 ve DNA polimeraz η gen ekspresyon analizleri kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ile gerçekleştirilmiştir. IC50 değerlerinde verilen ilaç kombinasyonlarının hücre canlılığını anlamlı bir şekilde azalttığı (24 saat için p≤0,01, 48 saat için p≤0,005) gözlenmiştir.  Chou-Talalay yöntemi ile düşük sisplatin dozlarında (24 saat için <36µM, 48 saat için <16 µM) kombine ilaç uygulamasının sinerjistik bir etkisinin (CI <1) olduğu hesaplanmıştır. 24 ve 48 saatlik inkübasyon süresi için IC50'ye uygun dozlarda ilaç uygulandığında, DDB2 ve Pol η gen ekspresyonlarının kontrol gruplarına göre sisplatin, PNR-7-02 ve kombine ilaç verilmiş hücrelerde arttığı bulunmuştur.

Abstract:
In this study, it was aimed to investigate the effect of administration of PNR-7-02 together with cisplatin to MCF-7 breast cancer cells on the expression of genes encoding DDB2 and DNA polymerase η proteins, which are involved in DNA damage responses and cell viability, respectively. Cisplatin is an antineoplastic drug containing a platinum group. It exerts its effect by binding to DNA, inhibiting replication and leading the cell to apoptosis. PNR-7-02 is a chemical molecule derived from indole thiobarbituric acid and developed as an inhibitor of human DNA polymerase η, which is involved in DNA damage tolerance. In this study, cisplatin, PNR-7-02 and their combinations were applied to MCF-7 cells for 24 and 48 hours and their effect on cell viability was determined by MTT assay. The effects of the combined application on cell viability were evaluated by the Chou-Talalay method. DDB2 and DNA polymerase η gene expression analyzes were performed by quantitative real-time polymerase chain reaction. It was observed that given drug combinations at IC50 values were significantly reduced cell viability (p<0.01 for 24 hours, p≤0.005 for 48 hours). Through calculation by the Chou-Talalay method a synergistic effect (CI<1) at low doses of cisplatin when combined with PNR-7-02 was found. When the drugs are administered in doses appropriate to the IC50 for the 24 and 48 hour incubation period, it was found that DDB2 and Pol η gene expressions were increased in single/combined drug-treated cells as compared to the control groups.