Toxoplasma gondii canlı takizoit üretiminde fare kullanımına alternatif: Sürekli hücre kültürü
An alternative to production of viable Toxoplasma gondii tachyzoites in mouse: Continuous cell culture
Yazar: AYSU DEĞİRMENCİ
Danışman: PROF. DR. AHMET ÜNER
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Hücre kültürü = Cell culture ; Seroloji = Serology ; Serolojik yöntemler = Serological methods ; Toksoplazma = Toxoplasma

Özet:
Toxoplasma gondii medikal ve veteriner önemi yanında hücre biyolojisi ve moleküler çalışmalara model olması sebebiyle üzerinde en çok çalışma yapılmış parazitlerden biri olarak kabul edilmektedir. Dünyada serolojik testlerde antijen olarak genelde fare veya ratlarda üretilen takizoitler kullanılmaktadır. Hayvanlarda T. gondii takizoitlerinin üretilmesi sırasında yaşanan maliyet ve etik sorunlar hücre kültürünün kullanılmasıyla en aza inmektedir.Hücre kültüründe T. gondii üretilirken takizoit miktarının ve canlılığının yüksek seviyede olması ve konak hücre kontaminasyonunun serolojik testlerin sonucunu etkilememesi amaçlanmaktadır. Bununla birlikte hücre kültüründe sürekli üretim sırasında gerçekleşen gen ekspresyon değişiklikleri T. gondii suşlarına en uygun kültür ortamının bulunmasını gerektirmektedir.Bu çalışmada canlılık oranı yüksek ve bol miktarda T. gondii RH Ankara suşu takizoiti elde ederken, konak hücre kontaminasyonunun en aza indirgeyecek kültür ortamı, HeLa/takizoit oranı 1/8 olan ve iki gün aralıklarla gerçekleştirilen pasajlamalarda oluşturulmuştur. Elde edilen antijenlerin ELISA, IFAT ve Western blot testlerinde kullanılması sonucunda fare kaynaklı antijene duyarlılık ve özgüllüğü yanında kalitatif açıdan en uyumlu antijenin birinci pasajdan elde edildiği belirlenmiştir. Sonuç olarak serolojik testler için HeLa hücre kültüründe üretilen antijenler ile hazırlanan testlerin hastalığı tanımada etkin olarak kullanılabileceği ve T. gondii RH Ankara uygun kriyopreservasyonu ile hayvan kullanımının azaltılabileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Toxoplasma gondii is important in medical and veterinary fields. T. gondii is considered as the most researched parasite since it is a good model for cellular biology and molecular studies. Worldwide, tachyzoites harvested from mouse or rat peritoneum are used as an antigen source in serological assays. The ethical and economic problems encountered during the production of T. gondii tachyzoites in animals can be resolved using cell culture systems.The main aim in producing T. gondii tachyzoites in cell culture is to achieve high levels of tachyzoite viability and abundant number of tachyzoites as well as least host cell contamination to not alter the results of serological assays. In addition, gene expression changes take place throughout the continuous production of T. gondii strains in cell culture enforces scientists to discover the most suitable culture milieu.In the present study, large amount of viable T. gondii RH Ankara strain tachyzoites and least host cell contamination were achieved by a cell culture environment containing HeLa/tachyzoite ratio as 1/8 and passaging at two days intervals. According to the results of ELISA, IFAT and Western blot, the antigen with consistent sensitivity and specificity qualitatively similar to mouse derived antigen was obtained from the first passage of continuous production. As a result, antigen for serological assays can be obtained from cell culture and additionally animal usage can be decreased by successful cryopreservation.