Streptomyces lienomycini 350-2'nin lipaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve biyodizel üretiminde kullanımı
Streptomyces lienomycini 350-2 of the li̇pase enzyme puri̇fi̇cati̇on, characteri̇zati̇on and use of biodiesel production
Yazar: BURAK ŞEN
Danışman: YRD. DOÇ. NURDAN SARAÇ ; PROF. DR. AYSEL UĞUR
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada; daha önce yapılan çalışmalarda yüksek lipaz aktivitesi gösterdiği belirlenen Streptomyces lienomycini 350-2 suşu tarafından üretilen ekstraselüler lipaz tanımlanmış ve karakterize edilmiştir.Bu suşun lipaz aktivitesi 11.782 U/ml olarak tespit edilmiştir. 
S.lienomycini 350-2'den elde edilen lipaz (LipS350-2), amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon kromatografisi ile kısmi olarak saflaştırılmıştır. Kısmi saflaştırma sonucu LipS350-2'nin spesifik aktivitesi 1466.8 (U/mg), saflaştırma verimi % 1.17 ve saflaştırma katsayısı 1.56 olarak hesaplanmıştır.Saf lipazın moleküler ağırlığı SDS-PAGE ile yaklaşık 52 kDa olarak tespit edilmiştir. 
LipS350-2'nin optimum sıcaklık ve pH'sı sırasıyla 40 °C ve pH 9.0 olarak belirlenmiştir. Lipaz pH 7.0-11.0 ve 4-40 °C aralığındaki sıcaklıklarda iyi bir stabilite göstermiştir. Çeşitli alkol konsantrasyonlarının ve inkübasyon sürelerinin lipaz aktivitesine ve stabilitesine olan etkileri de belirlenmiştir. Enzim atık yağlara ve p- nitrofenil palmitat'a (p-NPP) karşı yüksek spesifite göstermiştir. LipS350-2'nin depolanma stabilitesi incelenmiş ve enzimin 4 C'de 30. güne kadar depolanabildiği belirlenmiştir. 
LipS350-2'nin geniş pH ve sıcaklık aralıklarında yüksek stabilite göstermesi, alkollerin varlığında aktivitesini koruması bu enzimin biyodizel üretiminde kullanılabilir bir biyokatalizör olabileceğini göstermiştir. Lipazın biyodizel reaksiyonu gerçekleştirilmiş ve biyodizel üretimi kalitatif olarak TLC (ince tabaka kromatografisi) ile belirlenmiştir.

Abstract:
In this study, the extracellular lipase produced by Streptomyces lienomycini 350-2, which showed high lipase activity in previous studies was identified and characterized. The lipase activity of this izolate was determined as 11.782 U/ml.
The lipase produced by S.lienomycini 350-2 (LipS350-2) was partially purified by ammonium sulphate precipitation, dialysis and gel filtration chromatography. After the partial purification, thespecific activity of LipS350-2, purification yield and purification factor were calculated as 1466.8 (U/mg), 1.17% and 1.56, respectively.The molecular weight of the purified lipase was determined to be approximately 52 kDa by SDS-PAGE.
The optimal temperature and pH for LipS350-2 determined as 40ºC and pH 9.0, respectively. The lipase exhibited good stability between pH 7.0 and 11.0 and was stable between temperatures 4 and 40ºC. The effects of concentrations and incubation period of various alcohols were also determined. The enzyme have high specifity toward waste oil and para- nitrophenyl palmitate (p-NPP). LipS350-2's storage stability was examined, and the enzyme can be stored at +4°C for 30 days.
Since LipS350-2 displays high stability in a wide pH and temperature ranges, and maintains its activity in the presence of various alcohols, it can be effectively used as a biocatalyst in production of biodiesel. The biodiesel reaction of lipase was created and the biodiesel production was determined qualitative with TLC.