İnsan meme kanseri (MCF 7) ve fare fibroblast (L-929) hücre kültürlerinde poliakrilik asidin toksisitesinin incelenmesi
Examine of the polyacrylic acid toxicity on human mammary cancer cell line MCF-7 and mouse fibroblast cell line L-929
Yazar: MELİKE ERSÖZ
Danışman: PROF. DR. ADİL ALLAHVERDİYEV ; YRD. DOÇ. DR. ZEYNEP AKDESTE
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering

Özet:
Son yıllarda biyopolimerler tıbbın çeşitli alanlarında; ortopedide, kemoterapide, immünojide,dişçilikte olmak üzere geniş şekilde kullanılmaktadır. Herhangi bir polimerin praktikteuygulanabilmesi için biyouyumluluğunun incelenmesi gerekmektedir. Bir polielektrolit olanpoliakrilik asidin (PAA) immünolojide adjuvant etkisi, tıbbi deneylerde antitrombojenik etkisive ilaç salınım sistemlerinde taşıyıcı olarak kullanıldığı bilinmektedir. Literatürde PAA'nınçeşitli konjugatlarıyla ilgili çalışmalar olmasına rağmen, tek başına toksisitesine ait çalışmalarbulunmamaktadır. Biyopolimer çalışmalarında toksisitenin belirlenmesi son derece önemlidir.Bu amaçla çeşitli hücrelerin kültürleri kullanılmaktadır. Ancak PAA'nın ve konjugatlarınıntoksisitesinin tayin edilmesinde kullanılan hücre kültürlerinden hangisinin daha duyarlıolduğu konusunda bilgiler bulunmamaktadır.Tezin amacı; insan meme kanseri (MCF 7) ve fare fibroblast (L-929) hücrelerininkültürlerinin yapılması ve bu hücre kültürlerinde PAA'nın toksisitesinin çeşitli yöntemlerleincelenmesidir. Çalışmada hücre kültürü, kriyoprezervasyon, 3-(4,5-dimetiltriazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid (MTT), tripan mavisi ve 4,6-diamidino 2 phenylindole (DAPI)yöntemleri kullanılmıştır. Birinci aşamada ilk kez olarak Y.T.Ü Biyomühendislik BölümüHücre Kültürü Laboratuvarında MCF 7 ve L-929 hücrelerinin adaptasyonluğu sağlanmış vedevamlı kültürü elde edilmiştir. Bu hücrelerin kriyoprezervasyonunun sağlanmasında optimalşartlar belirlenmiş ve laboratuvarda hücrelerin yeterli miktardaki kriyobankı oluşturulmuştur.Çalışmamızda ilk kez MCF 7 hücre kültürünün PAA'nın toksisitesinin incelenmesinde uygunbir model olduğu ortaya konmuştur. Yapılan kültür çalışmalarının sonraki aşamalarındaPAA'nın pH'a ve konsantrasyona bağlı olarak toksik etkisinin incelenmesi sonucunda farklıhücrelerde farklı olduğu belirlenmiştir. PAA'nın EC50 değeri MCF 7 hücrelerinde 6.6 iken L-929 hücrelerinde 1,8 olduğu tespit edilmiştir. Elde edilen bu sonuçlar polimerlerin hücrekültüründe toksisitesinin belirlenmesinde uygun hücre kültürü seçilmesinin dikkate alınmasınıgöstermektedir.Anahtar kelimeler: Hücre Kültürü, MCF 7, L-929, Poliakrilik Asit, Toksisite, MTT, DAPI

Abstract:
In recent years, biopolymers are widely used in various fields of medicine; namely,orthopedics, chemotherapy, immunology and dentistry. It is very important to testcompatibility to determine the practical applicability of any polymer. Many effects ofpolyacrylic acid (PAA), which is a polyelectrolyte, is known by researchers. Its adjuvanteffect in immunology, antitromogenic effect in medical experiments and its use as transporterin drug release systems is among its applications. Despite there are various studies of PAAwith several different conjugates, there is no study on its individual toxicity. It is severelyimportant to determine the toxicity in biopolymer studies and several cell lines are used forthis kind of studies. But there is no information on the sensitive cell lines for PAA and itsconjugates.The aim of this thesis is to make the culture of human mammary cancer cell line MCF-7 andmouse fibroblast cell line L-929 and examine the PAA toxicity on these cells by using variousmethods. The methods used in this study are; cryopreservation, 3-(4,5-dimethyltriazol-2-il)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), trypan blue and 4,6-diamidino 2 phenylindole(DAPI). Initially, the adaptation of MCF 7 and L-929 cell lines is provided in the tissueculture laboratory of Yıldız Technical University, Department of Bioengineering for the firsttime and their stable cultures were established. Optimization of cryopreservation conditionswas achieved and satisfactory cryobanks of these cells were generated in the laboratory. Inthis study, it is established for the first time that, MCF 7 cell line is a suitable cell line fortoxicity studies of PAA. In the latter steps of culture studies which include toxicity analysis ofPAA in varying pH and concentration; differential toxicity in different cell lines was detected.IC50 value of PAA is shown to be 6,6 in MCF 7 cells whereas 1,8 in L-929 cell lines. Theseresults indicate the importance of the choice of cell lines used in toxicity analysis.Keywords: Cell culture, MCF 7, L-929, Polyacrylic Acid, Toxicity, MTT, DAPI