İnsan normal ve kanserli akciğer dokusunda kazein kinaz 2 (CK 2) enziminin Myc onkoproteinini substrat olarak kullanarak kinetik karektizasyonu ve L-Myc onkogeninin restriction fragment length polymorphism (RFLP) analizi
The Kinetic charecterization of casein kinase 2 (CK 2) by using Myc oncoprotein as substrate in normal and lung cancer tissues and restriction fragment length polymorphism analysis of the L-Myc gene
Yazar: İLHAN YAYLIM
Danışman: PROF.DR. TURGAY İSBİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2000
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
6. ÖZET Çalışmamızda akciğer tümörlü ve tümör içermeyen akciğer dokusunda, CK II aktivitesi, hem RRRDDDSDDD dizili peptid hem de c-myc (401-419 a.a. ) peptidi kullanarak tayin edilmiştir. Tümör içeren dokuda CK II aktivitesi, RRRDDDSDDD peptidi kullanıldığında normal dokuya oranla yaklaşık 2.5 kat daha yüksek tespit edilmiş olup, aynı zamanda kullanılan c-myc peptide karşı CK II affinitesinin de oldukça iyi (yüksek) olduğu bulunmuştur. Sonuçlarımızın CK II enziminin hücre proliferasyonunda rolünü ve aktivasyon mekanizmalarım açıklamaya yardımcı olabileceği kanısına varılmıştır. Ayrıca, L-myc gen polimorfizmi saptamak için Polimeraz Zincirleme Reaksiyonu (PCR), Restriksiyon Fragmam Gen Polimorfizmi (RFLP) ve agaroz jel elektroforezi teknikleri kullanılmıştır. 37 sağlıklı, 64 akciğer kanseri tanısı konmuş hastada L-myc gen polmorifızmi saptanmış ve L-myc gen polimorfizminin klinik ve cerrahi teşhis sırasında göz önüne alman parametrelerle olan ilişkisi incelenmiştir. L- myc gen polimorfizmi saptamak için Polimeraz Zincirleme Reaksiyonu (PCR), Restriksiyon Fragmam Gen Polimorfizmi (RFLP) ve agaroz jel elektroforezi teknikleri kullanılmıştır. Çalışma sonunda L-myc gen polimorfizminin (LL, LS ve SS) tümör safhası veya nod metastazına etkisi olduğuna dair bir bulgu saptanmamıştır. Ancak L-myc geninin S allelinin bulunması ilemetastaz durumu arasındaki ilgi, hasta takibi için gerekli süree kısa olduğundan yeterince incelenememiştir. Bu sonuçlara göre L-myc genotipinin akciğer kanser riski ve hastalığın evrelenmesindeki parametreler üzerine bir etkisi olmadığı kanısına varılmıştır. 62

Abstract:
7.SUMMARY THE KINETIC CHARECTERIZATION OF CASEIN KINASE H (CK II) BY USING MYC ONCOPROTEIN AS SUBSTRATE IN NORMAL AND LUNG CANCER TISSUES AND RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM ANALYSIS OF THE L-MYC GENE In our study, casein kinase (CK) II activity was assayed in lung cancer and normal tissue using RRRDDDSDDD sequenced peptide and c-myc (40 1 -4 19th aminoacid sequnce). In the lung cancer tissue RRRDDDSDDD peptide was phosphorylated by CK II 2.5 fold higher comparing the activity of the enzyme in normal lung tissue. Also, the c-myc phosphorylating activity of CKII was found to be considerably high. Our results may help to explain the role of CK II in cellular proliferation and its mechanisms of activation. Additionally, L-myc gene polymorphism was studied using restriction fragment length polymorphism (RFLP) and agarose gel electropheresis was performed in order to assess the gene fragments. L-myc gene polymorphism and its clinical, surgical prognostic importance in 64 lung cancer patients, comparing the data from 37 healthy individuals were investigated. There was no statistically significant correlation between L-myc gene polymorphism (LL, LS and SS) and T stage or nodal status in lung cancer patients. However, no connection was found between presence of S allele of L-myc and metastatic status of the patients possibly due to relatively short follow-up period of the cases. As a result, L-myc genotype has no effect on clinical or surgical staging factors of patients with lung cancer. 63