Antibiyotiğe rezistanslık gösteren Bradyrhizobium Japonicum suşlarının elde edilmesi ve bunların fizyolojik özellikleri ile nodülasyon ve N2-fiksasyon yeteneklerinin belirlenmesi
Obtaining antibiotic-resistant mutants of A Bradyrhizobium Japonicum strain and determination of their physiological properties, nodulation and N2-fixing ability
Yazar: KAMURAN AYHAN
Danışman: PROF.DR. VELİTTİN GÜRGÜN
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Gıda Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1991
Konu: Gıda Mühendisliği = Food Engineering
Dizin: Bradyrhizobium japonicum = Bradyrhizobium japonicum

Özet:
11 ÖZET DOKTORA TEZİ ANTİBİYOTİĞE REZİSTANSLIK GÖSTEREN.Bradyrhizobium japonicum SUŞLARININ ELDE EDİLMESİ VE BUNLARIN FİZİKSEL ÖZELLİKLERİ İLE NODÜLASYON VE N -FİKSASYON 2 YETENEKLERİNİN BELİRLENMESİ Kamuran AYHAN Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Gıda Bilimi ve Teknolojisi Anabilim Dalı Danışman : Prof.Dr. Ve 1 ittin GÜRGÜN 1991, Sayfa: 101 Jüri : Prof.Dr. Vel ittin GÜRGÜN : Prof.Dr. Mehmet AKTAŞ : Prof.Dr. Deniz GÖKTAN 1- İnokulant üretiminde kullanılan B. japonicum USDA 110 suşundan spontan mutasyon yoluyla 100-2000 mg/1 kon santrasyonlar arasında değişen 10 adet farklı antibi yotiğe dirençlilik gösteren mutant suşlar elde edil miştir. Tek antibiyotiğe dirençlilik gösteren mutant suşlardan STR ve CHL mutantları diğer antibiyotik lerle kombine edilerek aynı yolla çift antibiyotiğe dirençlilik gösteren suşlar izole edilmiştir. 2- Tek ve çift antibiyotiğe dirençlilik gösteren mutant suşların sıvı besiyeri ve inokulant içindeki sayıları ata suş ile kıyaslanmıştır. Sıvı kültür ve inokulant içinde STR r mutant susunun sayısı ata suşunkine çok yakın değerde bulunmuştur (Çizelge 4.1). 3- Elde edilen mutantların ve ata suşun nodülasyon ve azot fiksasyon yeteneklerini belirlemek amacıyla sera denemeleri yapılmıştır. Buna göre, denemede tek anti biyotiğe dirençlilik gösteren suşlardan STR r mutant suşunun istatistiki olarak ata suşdan farklı olmadığı ve mutasyon sonucu herhangi bir efektiflik kaybının söz konusu olmadığı anlaşılmıştır. Diğer mutant suş ların birbirleri arasında farklılık olmamakla beraber ata susa göre belli düzeyde efektiflik kayıplarına uğ radıkları saptanmıştır (Çizelge 4.2 ve Çizelge 4.3). çift antibiyotiğe dirençlilik gösteren mutant suşlarınIll efektiflik bakımından ata suş gibi davrandığı bazıla rının ise efektiflik kayıplarına uğradığı anlaşılmış tır (Çizelge 4.5 ve Çizelge 4.6). 4- Ata suş ve mutantları ile hazırlanan inokulantlar kul lanılarak kurulan tarla denemesi sonuçlarına göre bit ki üstü ağırlığı, nodul ağırlığı, tane verimi, protein ve yağ verimleri bakımından STR r- mutant suşunun üstün lük gösterdiği anlaşılmıştır. o 5- Tarla denemesi sonucunda STR r mutant suşu ile aşılanan parsellerden alınan bitkilerin köklerinde oluşan nodüllerin serolojik olarak kontrolleri jel-immünodif- f üzyon yöntemi ile yapılmış ve bu nodüllerin STR ^- mutant susu tarafından oluşturulduğu doğrulanmıştır (Şekil 3.3). 6- Fermenter ve inokulant içindeki kontaminant bakterile rin sayısının ata suş ile hazırlanan inokulantta, STRr mutant susu ile hazırlanan inokulanttakinden daha yüksek olduğu, mutant susun kullanılmasının bu bakterilerin gelişimini % 50 oranında engellediği an laşılmıştır (Çizelge 4.11). 7- STR r mutant suşunun nodul oluşturma gücünü belirlemek amacıyla ata suşla 1:1 oranında karıştırılmış sıvı kültürü ile yapılan sera denemesi sonucunda oluşan no düllerin % 60'nın ata suş, % 40 nın ise STRr mutant suşu tarafından oluşturulduğu saptanmıştır (çizelge 4.12). 8- Kontaminantlar üzerinde Kristal Violet boyasının (1,25 mg/1) konsanstrasyonunun çok etkili olduğu, buna kar şın Brilliant Green 'in etkisiz olduğu saptanmıştır (çizelge 4.13). ANAHTAR KELİMELER: Bradyrhizobium japonicum USDA 110, tek ve çift antibiyotik rezıstant mutant, efektiflik, spontan ratitasyon, inoku lant, jel-immünodiff üzyon, Kristal Violet.

Abstract:
IV ABSTRACT PhD Thesis OBTAINING ANTIBIOTIC-RESISTANT MUTANTS OF A Bradyrhizobjum japonicum STRAIN AND DETERMINATION OF THEIR PHYSIOLOGICAL PROPERTIES, NODULATION AND N -FIXING ABILITY 2 Kamuran AYHAN Ankara University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Food Science and Technology Supervisor: Prof.Dr.Velittin GÜRGÜN 1991, Page: 101 Jury: Prof.Dr.Velittin GÜRGÜN Prof.Dr. Mehmet AKTAŞ Prof.Dr. Deniz GÖKTAN 1- From the B. japonicum USDA 110 which is used in inoculant production, some antibiotic resistant mutants which resist to 10 different antibiotics in concent ration of 100-2000 mg/1 were obtained thru spontaneous mutation. The single antibiotic resistant mutants of STRR and CHL^ were also used to obtain double anti biotic resistant mutants using same methods. 2- The viable cell count of those mutant strains in liquid culture and peat-based inoculants were deter mined and compared with the viable cell counts^of wild type, in same conditions. The counts of STRK mutant strain in both liquid culture and inoculant were found to be very close to wild-type strain (Table 4.1 and 4.4). 3- To determine the nodulation and N^ - fixation ability of mutants and wild-type strain, a greenhouse experi ment had been established. According to results ofgreenhouse experiment there were found no difference between STR R. and wild-type on their infectivity and effectivity. Though there were no significant diffe rences on effectivity between all other mutant strains, a considerable lost of effectivity was deter mined between mutant strains and wild-type strain (Table 4.2 and 4.3). Most of the double antibiotic resistant mutants were effective as high as wild-type (STR-KANR,STR-BACR, CHL-KAN^and CHL-BAC*) while the others (STR-SPC^, STR-NAlAand CHL-NAl£) showed a very low effectiveness (Table 4.5 and 4.6). 4- According to shoot weight, nodule weight, seed yield, protein and oil content in field trials, STR^ mutant strain overcome to all other treatments. p 5- The nodules of STR mutant strain treated plants were found to be identical with its own antiserum using jel-immunodiffusion method (Figure 3.3). 6- The count of contaminants in fermenter and inoculant prepared with STRR mutant strain were 50 % less than prepared with wild-type strain (Tablo 4.1). 7- The nodule formation ratio of the mixture of STR mutant and wild-type strain (1:1) was 40 and 60 % respectively (Table 4.12). 8- The inhibitory effect of Crystal Violet dye (1,25 mg/1) on contaminants was very high while Brilliant Green dye had no effect. KEY WORDS: Bradyrhizobium japonicum USDA 110, single and double antibiotic resistant mutant, effecivity spontaneous mutation, inoculant, jel-immuno diffusion.