Piyodermalı köpeklerde idrarda 8-hidroksi-2'-deoksiguanozin düzeyleri
Urine 8-hydroxy-2?-deoxyguanosine (8-ohdg) levels of dogs in pyoderma
Yazar: NAZLI ERCAN
Danışman: PROF. DR. ULVİ REHA FİDANCI
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: 8-hidroksi deoksiguanozin = 8-hydroxy deoxyguanosine ; Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Köpekler = Dogs ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Piyoderma = Pyoderma ; İdrar tahlili = Urinalysis

Özet:
Endojen ve eksojen kaynaklar tarafından üretilen serbest oksijen radikalleri organizmada hücrelerde ve genetik materyal olan DNA'da hasarlar oluşturmaktadır. Bu hasarlar organizmanın antioksidan sistem olarak adlandırılan savunma mekanizması sayesinde temizlenebildiği gibi kalıcı olarak da çeşitli hastalıklara genetik materyalde mutajenitelere neden olmaktadır.Bu hasar ve antioksidan savunma sistemi arasındaki dengenin deri hastalıklarından olan piyodermada ki rolünün araştırılması amaçlanmıştır.Piyodermalı köpeklerden alınan kan ve idrar örnekleri sağlıklı köpeklerdeki materyaller ile karşılaştırılmış olup 8-OHdG seviyelerinin hastalıklı ve sağlıklı gruplar arası anlamlı fark taşıyıp taşımadığına bakılmıştır. 8-OHdG seviyelerinin piyodermadan etkilenip etkilenmediği ve etkileniyorsa ne düzeyde etkilendiğini açıklamak amacıyla gerçekleştirilen bu tez çalışmasında LC-MS-MS ölçüm yöntemiyle idrar düzeylerinde olan etkileri araştırılmıştır.Çalışmanın hayvan materyalini, Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi İç Hastalıkları Anabilim Dalı'na gelen hastalar, Haymana'daki özel kangal yetiştirme çiftliklerindeki sağlıklı ve hasta köpekler, Terapi Veteriner Kliniği gibi özel veteriner kliniklerine gelen toplam piyodermalı 16 dişi, piyodermalı 12 erkek, sağlıklı olarak kontrol grubunu şekillendiren 13 dişi ve 14 erkek köpekten oluşmaktadır.Kan örnekleri plazma malondialdehit ölçümü için heparinli, tam kan sayımı için EDTA'lı vakumlu kan alma tüpleri kullanılarak toplanmıştır. İdrar örnekleri 15 cc'lik idrar toplama kaplarına alınmıştır. Deri lezyonları taşıyan köpeklerden piyoderma etken analizi için steril swap örnekleri alınıp Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı'na iletilmiştir. Bu çalışma Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Biyokimya Anabilim Dalı'nda yapılmıştır.Toplanan örnekler analiz gününe kadar -80 C'de saklanmıştır. İdrar örneklerindeki 8-OHdG düzeylerine LC-MS-MS'te bakılmıştır. Plazma malondialdehit TBARS (tiyobarbitürik asit reaktif substans) yöntemiyle çalışılmıştır.8-OHdG seviyeleri açısından kontrol ve hasta gruplar arası yapılan genel değerlendirmeye göre; 8-OHdG ölçümü piyodermalı grup sağlıklı gruba göre istatistiki olarak daha yüksek anlamlı bulunmuştur (p ? 0.05).MDA ölçüm düzeyleri ise piyodermalı köpeklerdeki seviyeleri sağlıklı gruptan anlamlı olarak daha yüksek bulunmuştur (p ? 0.05).Cinsiyetlerine göre sağlıklı ve hasta gruplar arasındaki değerlendirmede; kontrol grubunda 8-OHdG/kreatinin ve MDA seviyeleri erkeklerde dişilere göre istatiksel olarak anlamlı (p ? 0.05) sonuç vermiştir. 8-OHdG düzeyi ise erkeklerde dişilere göre daha yüksek olmasıyla beraber istatiksel olarak çok daha anlamlı (p ? 0.01) olarak bulunmuştur. MDA seviyesi ise erkekler ve dişiler arasında aynı düzeyde görülmesiyle beraber istatistiki fark bulunamamıştır.Aynı cinsiyetlerdeki kontrol ve piyodermalı gruplar arasındaki değerlendirmede; dişilerdeki 8-OHdG seviyesi piyodermalı grup kontrol grubuna göre yüksek olmasına rağmen istatiksel fark bulunamamıştır. MDA ölçüm seviyeleri karşılaştırıldığında dişilerde piyodermalı grup kontrol grubuna göre daha anlamlı (p ? 0.01) bulunmuştur ve bu piyodermanın MDA seviyelerinde artışa neden olduğunu göstermektedir.Erkeklerdeki 8-OHdG seviyesi piyodermalı grup kontrol grubuna göre yüksek bulunmasıyla beraber istastiki olarak daha anlamlı (p ? 0.01) olarak bulunmuştur. Buda piyodermanın 8-OHdG seviyesine etki ettiğini erkeklerde daha belirgin olarak göstermiştir. MDA seviyeleri piyodermalı gruptaki değerler kontrol grubuna göre yüksek bulunmasına rağmen istatiksel fark bulunmamıştır.Sonuç olarak oksidatif hasar ürünlerinden 8-OHdG seviyelerinin tespiti çeşitli hastalıkların mekanizmalarındaki rolünü ortaya koymaktadır. Bu hasar ürününün veteriner hastalıklarından piyoderma da incelenmesi, oksidatif hasarla ilişkisinin konması 8-OHdG üzerinden gösterilmiştir.Anahtar Sözcükler: 8-OHdG, Köpek, LC/MS/MS, Oksidatif stres, Piyoderma

Abstract:
Free oxygen radicals produced by endogen and exogen resources cause damages at the cells of the organism and at the genetic material DNA. As well as these damages can be cleaned by the defence mechanism which is called the antioxidant system of the organism they can also cause permanent variable diseases and mutagenities at genetic material.The role of the balance between this damage and antioxidant defence system at the pyoderma caused by skin diseases was aimed to be searched.The blood and urine samples taken from dogs with pyoderma were compared with the materials of healthy dogs and it was examined that whether the 8-OHdG levels carried a significant difference between the diseased groups. This thesis study aims to explain whether the 8-OHdG levels are effected by pyoderma and if they are what the level is. By the help of LC-MS-MS evaluation method, the effects of 8-OHdG levels at urine have been researched.The animal material of the study is composed of patients that came to the Major Chief of Branch of Internal Medicine of Veterinary Faculty of Ankara University, healthy and unhealthy dogs at private kangal dog raising ranches at Haymana, Terapi Veterinary Clinic and at total 16 female dogs that have pyoderma,12 male dogs that have pyoderma,13 female healthy dogs and 14 healthy male dogs that came to private veterinary clinics.Blood samples were gathered by using heparined tubes for plasma malondialdehyde evaluation and vaccum tubes with EDTA for full blood count. Urine samples were put into 15cc urine collecting containers. For pyoderma factor analysis steril swap samples are taken from dogs that carry skin lesions and these samples are sent to major chief of branch of Microbiology of Veterinary Faculty of Ankara University. This study is done at major chief of branch of Biochemistry of Veterinary Faculty of Ankara University.Samples collected have been kept at -80degree until the analyze day. The 8-OHdG levels at urin e samples are examined at LC-MS-MS. The method of plasma malondialdehyde TBARS (thiobarbituric acid reactive substances) has been used.In terms of 8-OHdG levels, according to the general assesment made between control and patient groups; evaluation of 8-OHdG at the group that has pyoderma is statistically more significant than the healthy group (p ? 0.05).MDA levels are found to be more statistically significant at the group of dogs with pyoderma than the healthy group (p ? 0.05).According to the assesment of their sexes done between healthy and unhealthy groups, 8-OHdG, keratinin and MDA levels at male dogs of control group resulted to be statistically more significant than the females. (p ? 0.05) Besides the level of 8-OHdG is higher at the males than at the females, it is also found statistically much more significant (p ?0.01). Although the level of MDA seem at the same level between males and females no statistical difference has been found.At the assesment between the control and dogs with pyoderma of same sex, although the level of 8-OHdG at females with pyoderma are higher regarding to the control group, no statistical difference could be found. When the evaluation levels of MDA were compared, at females with pyoderma it has been found more significant than the control group. This shows that the pyoderma causes rise in MDA levels.Levels of 8-OHdG at males being found higher regarding to group with pyoderma than the control group, it is found statistically more significant.(p ? 0.01) This shows more clearly that pyoderma effects 8-OHdG level at males. Even though MDA levels found higher at the group with pyoderma no statistical difference has been found.In conclusion, the determination of 8-OHdG level which is an oxidative damage product clarifies its role in variable diseases mechanisms. The examination of this damage product according to pyoderma of veterinary diseases, its relation with oxidative damage that is put forth is demonstrated over 8-OHdG.Key Words: 8-OHdG, Dog, LC/MS/MS, Oxidative stress, Pyoderma.