Dhea ile indüklenen PKOS fare modelinde naringenin'in endometriyal reseptivite üzerine olan koruyucu etkileri
Protective effects of naringenin on endometrial receptivity in dhea-induced PCOS mouse model
Yazar: ÖZLEM DELİBAŞ
Danışman: PROF. DR. SERPİL ÜNVER SARAYDIN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Endometriyum = Endometrium ; Naringenin = Naringenin ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome

Özet:
Çalışmada deneysel olarak oluşturulan PKOS fare modelinde Naringenin'in endometriyal reseptivite üzerine olan etkilerinin histopatolojik, morfometrik ve immünofloresan yöntemlerle incelenmesi amaçlandı.
Çalışmada vücut ağırlığı yaklaşık 15-20 gram arasında değişen 25 günlük Swiss albino cinsi 40 adet dişi fare kullanıldı. Fareler rastgele beş gruba ayrıldı. PKOS modeli oluşturmak için farelere dehidroepiandrosteron (DHEA) (6 mg/100g) 0,2 mL susam yağı içinde çözülerek 30 gün boyunca günde bir kez subkutan (sc.) enjekte edilerek uygulandı. Kontrol grubundaki farelere 30 gün boyunca susam yağı enjekte edildi. PKOS oluşan fareler her grupta sekiz fare olacak şekilde PKOS (model grup), naringenin, metformin ve naringenin+metformin uygulanan tedavi gruplarına ayrıldı. PKOS indüksiyonundan sonra naringenin ve metformin yedi gün boyunca tek başına ve kombinasyon halinde uygulandı. Bu süreçte kontrol ve PKOS grubundaki farelere %1 karboksimetil selüloz (CMC) ve salin çözeltisi oral gavaj aracılığıyla yedi gün boyunca uygulandı. Yedinci günün sonunda tüm deney gruplarına intraperitoneal glukoz tolerans testi (İPGTT) yapıldı. Ardından tüm deney gruplarında endometriyal reseptivite modeli oluşturuldu. Fareler dördüncü günde sakrifiye edildi. Alınan uterus dokuları histopatolojik, morfometrik ve immünofloresan yöntemler kullanılarak değerlendirildi.
PKOS grubunda uterus ağırlığı, luminal epitel yüksekliği, subepitelyal stroma kalınlığı ve endometriyal bez sayısında artış belirlendi. Naringenin tedavisinin epitel yükseliğini, subepitelyal stroma kalınlığını ve uterus ağırlığını azaltmada yeterli olmadığı görüldü. Naringenin+metformin tedavisi histopatolojik hasarı iyileştirmede daha etkili olabilir. Naringenin uterusta kollajen birikimini azaltmada etkilidir, ancak metformin ile kombinasyonunun kollajen birikimini azaltmada daha etkili olduğu görüldü. Musin1 (MUC1) ve Homeobox A10 (HOXA10) iyi bilinen endometriyal reseptivite belirteçleridir. MUC1, integral bir transmembran müsin glikoproteinidir ve endometriyal epitelin apikal yüzeyinde eksprese edilir. Uterus reseptivitesi sırasında ekspresyonun baskılanması embriyo imlantasyonu için önemlidir. İmmünofloresan boyama sonuçları PKOS grubunda MUC1 ekspresyonunun arttığını ve naringenin+metformin tedavisinin MUC1'in ekspresyonunu azaltabileceğini gösterdi. HOXA10 embriyo implantasyonu ile ilişkili çok sayıda genin düzenlenmesinde rol oynayan transkripsiyonel bir faktördür. PKOS grubunda stromada HOXA10'un ekspresyonunun azaldığı görüldü. Ancak naringenin+metformin tedavisinden sonra stromada HOXA10'un ekspresyonu artmıştır. Sirtuin1 (SIRT1) bir histon deasitilazdır ve hedef molekülleri deasetile ederek veya gen transkripsiyonunu baskılayarak birçok hücresel yolu etkiler. Endometriyal reseptivite sırasında SIRT1 stromal hücreler tarafından eksprese edildi. Fakat PKOS grubunda SIRT1 ekspresyonu stromada önemli ölçüde azaldı. Naringenin'in tek başına veya metformin ile birlikte uygulanması stromal SIRT1 ekspresyonunun geri kazanımında etkili olmadı. 
Bu çalışma naringenin'in tek başına veya metformin ile birlikte PKOS kaynaklı endometriyal reseptivite hasarı üzerinde koruyucu bir etkiye sahip olabileceğini göstermiştir. Naringenin'in terapötik etkisinin hangi mekanizma ile gerçekleştiğini açıklamak için daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
The aim of this research is to investigate the effects of naringenin on endometrial receptivity by histopathological, morphometric and immunofluorescence methods in an experimentally induced PCOS mouse model.
In the study, 40 female Swiss albino mice of 25 days of age with a body weight of approximately 15-20 g were used. The mice were randomly assigned to five groups. To establish the PCOS model, dehydroepiandrosterone (DHEA) (6 mg/100g in mice) were dissolved in 0.2 mL sesame oil and injected subcutaneously (sc.) once daily for 30 consecutive days. The mice in the control group were injected only with sesame oil for 30 days. The mice with PCOS were divided into four groups: PCOS, naringenin, metformin and naringenin+metformin. There were eight mice in each group. After the PCOS induction, naringenin and metformin were administered alone and in combination for 7 days. In this process,1% carboxymethyl cellulose (CMC) and saline solution were administered by oral gavage in the control and PCOS groups for 7 days. At the end of the 7th day, intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT) was performed in all experimental groups. Subsequently, the endometrial receptivity model was established in all experimental groups. The mice were sacrificed on day 4. The uterine tissues were evaluated by histopathological, morphometric and immunofluorescence methods.
Uterine weight, height of the luminal epithelium, thickness of the subepithelial stroma and number of endometrial glands were increased in the PCOS group. Naringenin therapy was not sufficient to reduce the epithelial height, the subepithelial stroma thickness and the uterine weight. However, the naringenin+metformin therapy may be more effective in improving the histopathological damage. Naringenin is effective in reducing the accumulation of collagen in the uterus, but the combination with metformin were found to be more effective in reducing collagen accumulation. Musin1 (MUC1) and HomeoboxA10 (HOXA10) are well-known endometrial receptivity markers. MUC1 is an integral transmembrane mucin glycoprotein and is expressed on the apical surface of the endometrial epithelium. The suppression of expression during uterine receptivity is important for embryo implantation. In the immunofluorescence staining results showed that MUC1 expression was increased in PCOS group and naringenin+metformin therapy may be reduce the MUC1 expression. HOXA10 is a transcriptional factor involved in the regulation of numerous genes associated with embryo implantation. In PCOS group, HOXA10 expression was decreased in the stroma. However, the expression of HOXA10 in the stroma was increased after therapy with naringenin+metformin. Sirtuin1 (SIRT1) is a histone deacetylase and affects many cellular pathways by deacetylating target molecules or suppressing gene transcription. SIRT1 was expressed in stromal cells during endometrial receptivity. However, SIRT1 expression in the stroma was significantly reduced in the PCOS group. Therapy of the naringenin alone or in combination with metformin was not effective in the restoration of SIRT1 expression.
This study showed that the naringenin alone or combined with metformin may have a protective effect on PCOS induced endometrial receptivity damage. The more comprehensive studies are needed to explain the mechanism by which the therapeutic effect of naringenin is achieved.