Triple negatif meme kanserinde wee1 inhibisyonunun terapötik etkisinin araştırılması
Azenosertib: wee1 inhibitor's anti-cancer effect determination on triple negative breast cancer
Yazar: RABİA RANA DERLİOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. GAMZE GÜNEY ESKİLER
Sakarya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Hücre döngüsü kontrol noktaları, DNA'da oluşan hasar varlığında döngünün durdurularak gerekli onarım ve genomik bütünlüğün sağlanabilmesinde temel rol almaktadır. Hücre döngüsü kontrol noktalarında önemli aktiviteye sahip olan Wee1 kinaz, birçok kanser türünde aşırı eksprese edilmektedir. Bu kapsamda, Wee1 inhibisyonunu hedef alan tedavi stratejileri son zamanlarda oldukça öne çıkmaktadır.  Bu çalışmada ilk kez triple negatif meme kanserinde (TNMK) Wee1 inhibitörü olarak Azenosertib' in potansiyel terapötik etkinliğinin moleküler düzeyde belirlenmesi amaçlanmaktadır.
GEREÇ VE YÖNTEM: Azenosertib'in MDA-MB-231 TNMK ve MCF-10A kontrol hücrelerindeki sitotoksik etkisi CCK-8 analizi ile belirlendi. Annexin V analizi, akridin oranj/ propidyum iyodür boyamasıyla ve hücre siklusu analizleri ile apoptotik etkisi ve hücre siklusunda etkinliği belirlendi. Azenosertib'in MDA-MB-231 hücrelerinde anti-oksidatif etkisinin belirlenmesi için mitokondri boyaması ve ROS analizi gerçekleştirildi. Son olarak, western blot analizi ile Wee1 inhibisyonunun hücre döngüsündeki etkisi aydınlatıldı.
BULGULAR: Azenosertib'in MDA-MB-231 hücrelerinde konsantrasyon ve zamana bağlı olarak hücre canlılığını anlamlı bir şekilde azalttığı belirlenmiştir (p<0.01). Hücrelerde apoptotik ölüme neden olmakla birlikte Wee1 protein düzeyinde artışa neden olarak inkübasyon süresine göre hücre siklusunda etkisi belirlenmiştir. Ayrıca, Azenosertib'in TNMK hücrelerinde mitokondriyal hasara ve intraselüler ROS miktarında artışa neden olduğu tespit edilmiştir.  
SONUÇ: TNMK hücrelerinde ilk kez Azenosertib'in potansiyel antikanser etkinliği moleküler düzeyde belirlenmiştir. Elde edilen bulgular, Azenosertib'in TNMK hücrelerinde Wee1'i aktivitesini inhibe ederek apoptoza ve oksidatif hasara neden olduğunu göstermektedir.  TNMK hücrelerinde ilk kez etkisi gösterilen Azenosertib'in apoptozun yanı sıra farklı ölüm tiplerinde ve diğer kanser türlerindeki terapötik etkinliğinin araştırılmasına yönelik yeni çalışmaların gerçekleştirilebilir.

Abstract:
INTRODUCTION AND OBJECTIVE: Cell cycle checkpoints play a fundamental role in ensuring the necessary repair and genomic integrity by stopping the cycle in the presence of DNA damage. Wee1 kinase, which has significant activity at cell cycle checkpoints, is overexpressed in many types of cancer. In this context, treatments startegies targeting Wee1 inhibition have become prominent recently.  This study aims to determine, for the first time, the potential therapeutic efficacy of Azenosertib as a Wee1 inhibitor in triple negative breast cancer (TNBC) at the molecular level.
MATERIALS AND METHODS: The cytotoxic effect of Azenosertib on MDA-MB-231 TNBC and MCF-10A control cells was determined by CCK-8 analysis. Its apoptotic effect and activity in the cell cycle were determined by Annexin V analysis, acridine orange/propidium iodide staining and cell cycle analysis. Mitochondri staining and ROS analysis were conducted to determine the antioxidant effect of Azenosertib on MDA-MB-231 cells. Finally, the effect of Wee1 inhibition on the cell cycle was elucidated by western blot analysis.
RESULTS: Azenosertib significantly reduced MDA-MB-231 cells viability time and concentrations-dependent (p<0.01). Although it caused apoptotic death in cells, its effect on the cell cycle was determined by increasing in Wee1 protein level depending on the incubation time. Additionally, Azenosertib caused mitochondrial damage and an increase in the amount of intracellular ROS in TNBC cells.
CONCLUSION: The potential anticancer activity of Azenosertib in TNBC cells was determined, for the first time, at the molecular level. The findings showed that Azenosertib caused apoptosis and oxidative damage by inhibiting Wee1 activity in TNBC cells.  New studies can be carried out to investigate the therapeutic effectiveness of Azenosertib, which was shown to be effective on TNBC cells for the first time, in other types of cancer and different types of death as well as apoptosis.