Kronik hepatitis b virüsü (HBV) enfeksiyonu olan ve HBV'ye karşı doğal bağışık bireylerde stimulator of ınterferon genes (STING) ekspresyon düzeylerinin araştırılması
Investigation of stimulator of interferon genes (STING) expression levels among individuals with chronic hepatitis b infection and who have naturally acquired immunity against hbv
Yazar: BÜNYAMİN KASAP
Danışman: PROF. DR. NEŞE KAKLIKKAYA
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Hepatit B = Hepatitis B ; Hepatit B virüsü = Hepatitis B virus ; İmmünite-doğal = Immunity-natural ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
Tüm dünyada yaklaşık 350-400 milyon kişinin kronik olarak enfekte olduğu ve her yıl yaklaşık bir milyon kişinin de HBV ile ilişkili hastalıklardan dolayı hayatını kaybettiği tahmin edilmektedir. Enfeksiyonun kronikleşmesinde virüse ve konağa ait faktörlerin özellikle de konağın bağışıklık sisteminin rol oynadığı ileri sürülmektedir. Stimulator of Interferon Genes (STING) hücre içindeki DNA varlığını algılayan, bir dizi ikinci haberci kullanıp özgül transkripsiyon faktörlerini aktifleştiren, buna bağlı olarak interferon (IFN) alfa, IFN beta, tümör nekroz faktörü (TNF) alfa ve interlökin (IL)-6 gibi sitokinlerin sentezini arttıran bir ''patern tanıma reseptörü (PRR)'' üyesi olup, HBV'ye karşı bağışıklık sisteminin önemli bir elemanı olabileceği düşünülmektedir.
Bu çalışma HBV'ye karşı doğal bağışık bireylerde, kronik hepatit B hastalarında ve HBV virüsü ile karşılaşmamış normal popülasyondaki bireylerde STING gen ekspresyon düzeyinin araştırılması amacı ile yapılmıştır.
Çalışmaya 18-65 yaş aralığında HBV'ye karşı doğal bağışık 30 kişiden oluşan birinci grup, kronik hepatit B hastası 30 kişiden oluşan ikinci grup, ve HBV virüsü ile karşılaşmamış normal popülasyondaki 30 kişiden oluşan üçüncü grup olacak şekilde üç gruptan toplam 90 kişi dahil edilmiştir. Her bir katılımcıdan tam kan örneği alınıp periferik kan mononükleer hücrelerinin (PKMNH) izolasyonu gerçekleştirildi. Elde edilen PKMNH'den total RNA izolasyonu gerçekleştirildi. İzole edilen total RNA'dan cDNA sentezi gerçekleştirildikten sonra STING gen ekspresyon düzeyi Real Time Polymerase Chain Reaction (RT PCR) yöntemiyle belirlenmiştir. RT PCR işleminden sonra 2^(-∆∆CT) formülü uygulanarak normalizasyon işlemi gerçekleştirilmiştir.
Çalışmaya katılan HBV'ye karşı doğal bağışıklardan oluşan grubun STING ekspresyon düzeyi ortalama 0,084±0,026, HBV ile karşılaşmamış gönüllü grubunun STING ekspresyon düzeyi ortalama 0,082±0,032, kronik hepatit B hastalarından oluşan grubun STING ekspresyon düzeyi ise ortalama 0,075±0,022 şeklindedir.
Çalışmamız HBV enfeksiyonunun kronikleşmesinde STING ekspresyon düzeyinin araştırıldığı bildiğimiz ilk çalışmadır. Doğal bağışıkların ortalama STING ekspresyon düzeyi kronik hepatit B hastalarından yaklaşık %10 daha fazla bulunmasına rağmen istatistiksel olarak anlamlı fark bulunamamıştır.

Abstract:
It has been estimated that currently 350-400 million people have been chronically infected with the Hepatitis B virus (HBV) worldwide, and approximately one million people die each year due to HBV related diseases. It has been suggested that the viral and host factors, especially the host immune system, may play a role in the chronicity of the HBV infection. Stimulator of Interferon Genes (STING) is one of the members of the pattern recognition receptor (PRR) that detects the presence of DNA in a human cell, using a number of second messengers to activate specific transcription factors for synthesis of cytokines such as interferon (IFN) alpha, IFN beta, tumor necrosis factor (TNF) alpha and interleukin (IL)-6 and is thought to be an important member of the immune system against HBV.
The main purpose of this study is to investigate STING gene expression levels in individuals naturally immunized against HBV, in chronic hepatitis B infected patients, and in normal individuals who have not been exposed to HBV.
A total of 90 volunteers have been included in the study from the age of 18 to 65, in which the first group consists of 30 individuals naturally immunized against HBV, the second group consists of 30 chronically hepatitis B infected patients while the third group consists of 30 healthy population members who have not been exposed to HBV. Whole blood samples were taken from each participant and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was isolated afterwards. Total RNA was isolated from PBMC. After cDNA synthesis of the total RNA, STING gene expression levels were determined by real-time polymerase chain reaction (RT PCR) method. After RT PCR, normalization was performed by applying the 2^(-∆∆CT) formula.
STING expression level of the naturally immunized group was calculated as 0,084±0,026 on average, average STING expression level of healthy population group was 0,082±0,032, and STING expression level of chronically infected patients group was 0,075±0,022 on average. 
To our knowledge, this is the first study investigating the role of STING expression in chronicity of HBV. Although the average expression level of naturally immunized individuals was calculated as approximately 10% higher than that of hepatitis B infected patients, no significance was found, statistically.