A549 insan akciğer kanseri hücre hattında trastuzumab ve 5-fluorourasil kombine ilaç tedavisinin etkisinin incelenmesi
Investigation of the effects of combination drug treatment with trastuzumab and 5-fluorouracil on A549 human lung cancer cell line
Yazar: ELİF KORKUT
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR EROĞLU
Bilecik Şeyh Edebali Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Akciğer kanseri, dünyadaki en yaygın malignitelerden biridir ve kansere bağlı ölümün önde gelen nedenidir. Bu çalışmada, trastuzumab ve 5-fluorourasil kombinasyonunun HER2-pozitif insan küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücre hattı A549'da etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.  A549, %5 CO2 inkübatörde 37 ° C'de %10 FBS, %1 penisilin/streptomisin içeren RPMI ortamında kültüre edilmiştir.  MTT analizi, çeşitli konsantrasyonlarda trastuzumab, 5-fluorourasil ve kombinasyonun etkilerini değerlendirmek için yapılmıştır.  Kombinasyon tedavisinin sitotoksik etkisini belirlemek için (24-144 saat) sağkalım deneyi yapılmıştır.  Kombine kullanımlarının etkisi, yara iyileşmesi deneyi, koloni oluşumu deneyi ve soft-agar deneyi ile araştırılmıştır.  Ayrıca kaspaz-3 kaspaz-7 ve kaspaz-9 apoptotik proteinleri incelenmiştir.  MTT analizi ile IC50 değerlerinin trastuzumab için 70µM, 5- fluorourail için 75µM ve kombine kullanımları için 30µM-30µM olduğu belirlenmiştir. Sağkalım analizi, trastuzumab 5-fluorourasil ile kombinasyon tedavisinin hücre canlılığınını azalttığını göstermiştir.  Kombinasyon uygulaması, yara iyileşmesi deneyinde kontrole kıyasla çizilen alana göçü inhibe etmiştir. Ayrıca soft agar ve koloni oluşum deneylerinde, kombinasyon uygulamalarının koloni oluşumunu inhibe ettiği görülmektedir.  Kaspaz-3 seviyesi trastuzumab ve 5-fluorourasil uygulanan gruplarda artmışken, trastuzmab ve 5-fluorourasil kombinasyonu uygulanan grupta azalmıştır.  Kaspaz-7 seviyesi ise trastuzumab uygulanan hücrelerde azalmıştır.  Kaspaz-9 seviyesinde önemli bir değişiklik gözlenmemiştir. Literatürde ilk kez trastuzumab - 5-fluorourasil kombinasyonunun A549 hücreleri üzerinde anti-proliferatif etki yarattığı belirlenmiştir. Kombine tedavi uygulamalarının mekanizmalarının net bir şekilde aydınlatılabilmesi için ileri araştırmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Lung cancer is one of the most common malignancies in the world and the leading cause of cancer-related death.  In this study, we aim to investigate the effects of combining trastuzumab and 5-FU on the HER2-positive human non-small cell lung cancer cell line A549.  A549 was cultured in RPMI medium with 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, at 37˚C in 5% CO2 incubator. MTT assay was performed to evaluate the effects of various concentrations of trastuzumab, 5-fluorouracil and combination.  To determine the cytotoxic effect of drugs combination were used in survival assay (24-144h).  The effect of Trastuzumab, 5-fluorouracil and combination were investigated by wound healing experiment, colony formation experiment and soft-agar experiment. Furthermore, caspase-3 caspase-7 and caspase-9 apoptotic proteins have been investigated. We observed that IC50 values for trastuzumab, 5-fluorouracil and combination by MTT assay 70µM, 75µM and 30µM-30µM respectively.  Survival analysis showed that combination therapy significantly reduced cell viability.  Combination theraphy were inhibited migration into the scratched area as compared to untreated cells.  Furthermore, in soft agar and colony formation experiments, observed that combination treatments inhibit colony formation.  While the levels of caspase-3 trastuzumab and 5-fluorouracil were increased, the combination of trastuzmab and 5-fluorouracil was reduced in the treated group.  Caspase-7 level decreased in cells treated with trastuzumab. There was no significant change in the level of caspase-9.  For the first time in the literature, it has been determined that the combination of trastuzumab-5-fluorouracil has an anti-proliferative effect on A549 cells.  Further research is needed to clarify the mechanisms of combined treatment applications clearly.