Pichia pastoris organizmasında rekombinant protein üretimi için sekresyon vektörü konstrüksiyonu
Construction of a secretion vector for recombinant protein expression in Pichia pastoris
Yazar: RAHİME OĞUL
Danışman: PROF. DR. İSA GÖKÇE
Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Plazmitler = Plasmids ; Rekombinant protein üretimi = Recombinant protein production ; Salgılama = Secretion

Özet:
Biyoteknoloji ürünleri içerisinde rekombinant proteinler oldukça önem taşır. Proteinler yaşam için gerekli olan önemli yapısal ve düzenleyici moleküllerdir. Bazı proteinler terapötik amaçlı, bazıları ise endüstriyel amaçlı olarak üretilebilirler ancak birçok protein ise sadece bilimsel araştırma (yapı ve fonksiyon araştırmaları için) amaçlı olarak üretilmektedir. Amaca uygun yani istediğimiz proteine uygun bir expresyon sistemi ve vektör temini ve konstrüksiyonu rekombinant protein üretiminin temelini teşkil etmektedir. İşte bu amaca yönelik olarak hem ticari hemde ticari olmayan bir takım vektör ve ekspresyon sistemleri kullanılmaktadır. Genelde Escherichia. coli ve Saccharomyces cereviciae sistemleri bu amaca en çok hizmet veren vektörlerdir ancak bu sistemler bazen ekspresyon için gerekli olan mekanizmaları gerçekleştiremediklerinden farklı bir sistemin denenmesi gerekmektedir. Biz bu çalışma ile hem bu çalışmada hem de ilerde üniversitemizde hatta ülkemizde üretilmesi istenilen bir takım proteinleri üretebilecek bir Pichia pastoris sekresyon vektörü konstrükt etmek istemekteyiz. Bu sistem istenilen proteinleri P. pastoris organizmasının dışarısına salgılayabilecek ve bu sayede organizmaları toplayıp parçalama gereği duymadan bu organizmanın yetiştirildiği basit içerikli besi yerinden toplanacak olan proteinler yine vektörümüzün bize sağlamış olduğu afinite kromatografisi özelliği sayesinde kolaylıkla saflaştırılabilecektirAnahtar Kelimeler; P. Pastoris, Sekresyon, Mating Faktör, Rekombinant protein

Abstract:
Recombinant proteins are an important place in biotechnological products. Proteins are essential molecules for structural and regulation of life. Some proteins are produced for therapeutic and some for industrial reasons but a lot of proteins are produced for only the scientific research (structural and functional research of proteins). Finding an expression system for the expression of wanted protein is the fundamental of the protein production. There are a lot of commercial and non commercial vectors and also expression systems used for this purpose. Escherichia. coli and Saccharomyces cereviciae expression system vectors are usually and mainly used but these two systems are sometimes not successful for necessary mechanisms fort the expression and therefore some other systems should be used. We would like to construct a Pichia pastoris secretion vector plasmid that can be used for the production of some important proteins in our university and our country. This system could secrete the wanted proteins to the outside of the P. pastoris micro organism and therefore we should not necessarily collect and break (lyse) the cells. The proteins could be easily collected from the basic minimal growth medium and will be purified simply by the affinity chromatography that specialty comes from construction of our vector plasmid.Keywords; P. pastoris, Secretion, Mating Factor, Recombinant protein