Farklı pulpa kaplama materyallerinin insan dental pulpa kök hücreleri üzerindeki toplam antioksidan - oksidan seviyelerinin ve gen ekspresyon analizlerinin değerlendirilmesi
Evaluation of total antioxidant - oxidant status and gene expression values of various pulp capping materials on human dental pulp stem cells
Yazar: SEÇKİN AKSU
Danışman: PROF. DR. TAŞKIN GÜRBÜZ
Atatürk Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Çocuk Diş Hekimliği Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2017
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Alkalen fosfataz = Alkaline phosphatase ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Dental pulpa = Dental pulp ; Dentin = Dentin ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kök hücreler = Stem cells ; Oksidanlar = Oxidants ; Pedodonti = Pedodontics ; Propolis = Propolis ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta

Özet:
Farklı Pulpa Kaplama Materyallerinin İnsan Dental Pulpa Kök Hücreleri Üzerindeki Toplam Antioksidan - Oksidan Seviyelerinin ve Gen Ekspresyon Analizlerinin Değerlendirilmesi
Amaç: Bu çalışmada, çeşitli pulpa kaplama materyallerinin (ProRoot@ MTA, BiodentineTM, Pulpine Mineral, Endo Repair ve ZnOEu) insan dental pulpa kök hücreleri üzerindeki etkilerinin TAS - TOS analizleri ve TGF-ß1, BMP-2, ALP, Bcl-2 biyobelirteçlerini ifade eden genlerdeki ekspresyon analizleri ile değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Çalışmamızda Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu'ndan dondurulmuş insan dental pulpa kök hücreleri kullanılmıştır. Filtre difüzyon testi, ISO standartlarına uygun şekilde uygulanmıştır. 24. ve 72. saatler sonunda; TAS-TOS biyokimyasal analizleri sonrasında gen ekspresyon değerleri qRT-PCR yöntemi kullanılarak ölçülmüştür (n=3). Ölçümler arasındaki bağımsız grup karşılaştırmalarında Kruskal Wallis Varyans Analizi ve Mann-Whitney U testi kullanılmıştır.
Bulgular: İlk 24 saatte sadece ProRoot® MTA grubunun antioksidatif savunma mekanizması yüksek bulunmuştur. 24. ve 72. saatler arasında oksidatif strese karşı koruyuculuğun tüm gruplarda artmış olduğu ve en yüksek koruyuculuğun BiodentineTM ve Pulpine Mineral gruplarında; en zayıf koruyuculuğun ise ZnOEu grubunda olduğu tespit edilmiştir (p<0.05). Diğer materyallere kıyasla BiodentineTM ve Endo Repair materyallerinde TGF ß1, BMP-2 ve ALP gen ekspresyonlarının daha yüksek olduğu belirlenmiştir (p<0.05). 24. ve 72. saatler arasında tüm grupların Bcl-2 ekspresyon değerlerinde azalma gerçekleştiği tespit edilmiştir. 72 saat sonunda kontrol grubuna kıyasla Endo Repair ve ProRoot® MTA gruplarında yüksek Bcl-2 gen ekspresyonu gözlemlenmiştir (p<0.05).
Sonuç: Elde edilen TAS ve TOS değerlerine göre tüm materyallerin pulpa kök hücreleri üzerinde antioksidan savunma mekanizmasını harekete geçirdiği belirlenmiştir. BiodentineTM ve Endo Repair gruplarının, biyouyumlulukları yanı sıra biyoaktivitelerinin de iyi olduğu tespit edilmiştir.

Anahtar Kelimeler: Alkalen Fosfataz, Biodentin, B Hücreli Lenfoma Geni-2, Çinko Oksit Öjenol, Hücre Kültürü, Kalsiyum Fosfat, Kemik Morfogenetik Faktör 2, Mineral Trioksit Agregat, Oksidatif Stres, Propolis, Transforme Edici Büyüme Faktörü Beta 1, Toplam Antioksidan Seviyesi, Toplam Oksidan Seviyesi.

Abstract:
Evaluation of Total Antioxidant - Oxidant Status and Gene Expression Values of Various Pulp Capping Materials on Human Dental Pulp Stem Cells
Aim: The aim of this study was to evaluate the effects of various pulp capping materials (ProRoot® MTA, Biodentine™, Pulpine Mineral, Endo Repair and ZnOEu) on human dental pulp stem cells with TAS-TOS analyzes and gene expression values remarking TGF-β1, BMP-2, ALP and Bcl-2 biomarkers.
Materials and Methods: In our study, American Type Culture Collection human dental pulp stem cells were used. The filter diffusion test was applied in accordance with ISO standards. At the end of the 24th and 72nd hours; after TAS and TOS biochemical analysis, gene expression levels were measured by qRT-PCR method (n=3). Kruskal Wallis Variance Analysis and Mann-Whitney U test were used for independent group comparisons between the measurements.
Results: During the initial 24 hours, we observed that only the ProRoot® MTA group had a high antioxidative defensive mechanism. We determined that the antioxidative defense level had been increased in all groups with the highest value in BiodentineTM, Pulpine Mineral groups while the lowest antioxidative defense level seen in ZnOEu group in between the 24-72nd hours (p<0.05). TGF β1, BMP-2 and ALP gene expressions were found to be more frequent in Biodentine™ and Endo Repair materials in relative to the other materials. (p<0.05). It was observed that Bcl-2 gene expression levels decreased in all materials at the end of 72nd hours. Endo Repair and ProRoot® MTA groups performed overexpression in comparison to the control group after 72 hours (p<0.05).
Conclusion: According to the TAS and TOS values, it was determined that all materials have an oxidative effect on pulp and act antioxidant defense mechanism. We also found that Biodentine™ and Endo Repair groups had good bioactivity as well as the biocompatibility.

Keywords: Alkaline Phosphatase, B cell lymphoma-2 gene, Biodentine, Bone Morphogenetic Protein-2, Calcium Phosphate, Cell Culture, Mineral Trioxide Aggregate, Oxidative Stress, Propolis, Total Antioxidant Status, Total Oxidant Status, Transforming Growth Factor Beta-1, Zinc Oxide Eugenol.