Mısır Püskülünden(Stylus maydis) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve karaterizasyonu
purification and characterization of polyphenol oxidase from corn tassel(Stylus maydis)
Yazar: NURTEN ASLAN
Danışman: DOÇ. DR. REYHAN GÜL GÜVEN
Dicle Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Polifenol oksidaz = Polyphenol oxidase ; Substrat = Substrate

Özet:
Bu çalÕúmada, mÕVÕr püskülü (Stylus maydis) polifenol oksidaz (PFO) enziminin
saflaúWÕUÕlmasÕ yapÕlmÕú ve bazÕ kinetik özellikleri incelenmiútir. MÕVÕr püskülünden ekstrakte
edilen polifenol oksidaz, (NHࢩ(ࢧSOࢩ) amonyum sülfat) çöktürmesi, diyaliz, ultrafiltrasyon ve jel
kromatografisi prosodürleri kullanÕlarak saflaúWÕUÕldÕ. SaflaúWÕUÕlan enzim tek bir bant olarak
SDS-PAGE'de elde edilmiútir. MÕVÕr püskülünün PFO enziminin molekül a÷ÕrlÕ÷Õ ise yaklaúÕk
158 kDa civarÕnda gözlemlenmiútir.
Katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ kullanÕlarak, PFO enziminin optimum pH ve
VÕcaklÕk de÷erleri belirlenmiútir. Polifenol oksidaz aktivitesi 4-metilkatekol ve katekol için 420
nm'de spektofotomtrik olarak ölçülmüútür. Optimum sÕcaklÕk katekol için 40°C ve 4-
metilkatekol için 30°C bulunmuútur. Optimum pH katekol için 8 ve 4-metilkatekol için 6 olarak
tespit edilmiútir.
AyrÕca PFO'nÕn substrat spesifikli÷i ve ÕVÕ inaktivasyonu incelenmiútir. PFO enziminin
optimum pH ve sÕcaklÕkta katekol ve 4-metil katekol substratlarÕ için Km ve Vmax de÷erleri
Linewear-Burk yöntemi ile bulunmuútur. Vmax/ Km de÷erlerine göre PFO enzimi için en
uygun substratÕn katekol oldu÷u bulunmuútur. AyrÕca katekol kullanÕldÕ÷Õnda artan inaktivasyon
süresine paralel olarak PFO aktivitesinin bariz bir úekilde azaldÕ÷Õ gözlemlenmiútir.
EDTA, SDS ve sodyum azidin PFO aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi katekol substratÕ
kullanÕlarak etkisi incelendi. Bu çalÕúmada sÕrasÕyla sodyum azidin % 26.6 EDTA'nÕn % 22.2 ve
SDS'nin % 12.2 oranÕnda enzimi inhibe etti÷i tespit edildi. AyrÕca sukroz, fruktoz, riboz ve
glikoz gibi karbonhidratlarÕn PFO aktivitesi üzerine etkisi araúWÕUÕlmÕúWÕr. Fruktoz ve ribozun
enzimi % 17 oranÕnda aktive etti÷i, glikozun % 16, sukrozun ise % 4 oranÕnda aktive etti÷i
tespit edilmiútir.
 Anahtar Kelimeler: Stylus maydis,Polifenol oksidaz ,substrat spesifikli÷i,inhibisyon

Abstract:
In this work, purification of polifenol oxidase enzyme from stylus maydis was done and
some kinetic characteristics were analysed. Polifenol oxidase extracted from stylus maydis was
purified by the procedures of ammonium sulphate (NHࢩ(ࢧSOࢩprecipitation, dialysis,
ultrafiltration and jel chromatography. One band for purified enzyme was obtained by SDSPAGE.
Molecular weight of stylus maydis PPO enzyme was calculated as approximately 158
kDa.
Optimum pH and temperature values of PPO enzyme were determined by using
catechol and methyl catechol substrates. Polifenol oxidase activity was measured for 4-methyl
catechol ve catechol at 420 nm as spectrophotometric. Optimum temperature was founded as
40°Cfor catechol and 30°C for 4-methyl catechol. Optimum pH was determined as 8 for
catechol and 6 for 4-methyl catechol.
Besides, substrat specifity and temperature inactivation of PPO were analysed. PPO
enzyme's Km and Vmax values for catechol and 4-methyl catechol substrates at optimum pH
and temperature were determined by using Linewear-Burk method. According to Vmax and Km
values, the most suitable substrate was found to be catechol. Furthermore, it was observed that
PPO activity decreased clearly in paralel with increasing inactivation time when catechol used.
Inhibition effect of EDTA, SDS and sodium azide on PPO activity was analysed by
using catechol substrate. In this work, sodium azide, EDTA and SDS were found to inhibit the
enzyme activity as 26.6 %, 22.2 % and 12.2 %, respectively. Besides, the effects of
carbohydrates such as sucrose, fructose, ribose and glucose on PPO activity were investigated.
The enzyme was found to be activated 17 % by fructose and ribose, 16 % by glucose and 4 %
by sucrose.
Key words: Stylus maydis, polyphenol oxidase, substrate specifity, inhibition.