Diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçanlarda resveratrol uygulamasının retinal SIRT-1 aktivasyonu ve oksidan stres üzerine etkileri
The effects of resveratrol supplementation on retinal SIRT-1 and oxidant stress in old female rats with induced diabetes
Yazar: ADEM ATACAK
Danışman: PROF. DR. ABDULKERİM KASIM BALTACI
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Oksidanlar = Oxidants ; Resveratrol = Resveratrol ; Retina = Retina ; Sirtuin-1 = Sirtuin-1 ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Diyabetik retinopati (DR) görmeyi tehdit eden, kronik bir mikrovasküler komplikasyondur.  
Sirtuin 1 (SIRT1), oksidatif stres, glukoz metabolizması, DNA stabilitesi, yaşlanma ve tümöral olaylarda dahil olmak üzere çeşitli temel fizyolojik süreçlerle ilişkili bir hücre içi proteindir. Bir çok rapor SIRT-1'in diyabetik retinopatinin patogeneziyle ilişkili olabileceğini bildirmektedir. Güçlü bir antioksidan olan resveratrolün (RSV) diyabetik retinopatiye karşı koruyucu bir etkiye sahip olduğu ileri sürülmektedir. Bu çalışmanın amacı da diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçan modelinde resveratrol desteğinin retinal SIRT-1 düzeyleri ile retinal doku hasarını nasıl etkilediğini araştırmaktır.

Çalışma Selçuk Üniversitesi Deneysel Tıp Araştırma ve Uygulama Merkezi'nden elde edilen dişi yaşlı sıçanlar (16 aylık) üzerinde aynı merkezde gerçekleştirildi. Çalışma protokolü aynı merkezin etik kurulu tarafından onaylandı. Toplam 24 adet yaşlı dişi sıçan üzerinde gerçekleştirilen çalışmada hayvanlar eşit sayıda  4 gruba ayrıldı Grup 1. Kontrol, Grup 2. Kontrol+resveratrol Grup 3. Diyabet, Grup 4. Diyabet+Resveratrol. Deneysel diyabet oluşturmak için Grup 3 ve 4'ü oluşturan sıçanlara 40 mg/kg olacak şekilde intraperitoneal streptozotosin (STZ) "Sigma, S-0130" enjekte edildi. Enjeksiyonlardan 6 gün sonra hayvanların kuyruk veninden kan glukoz seviyeleri tanısal bir glukoz kiti kullanılarak ölçüldü.  Kan glukozu 300 mg/dlt ve üstünde olan sıçanlar diyabetik (DM) olarak değerlendirildi. 4 hafta süren resveratrol desteğini takiben genel anestezi altında sakrifiye edilen hayvanlardan alınan retinal doku örneklerinde PCR yöntemiyle SIRT-1 protein gen ekspresyonu tayinin yanı sıra ELISA yöntemiyle retinal dokudaki MDA ve GSH düzeyleri tayin edildi.

Çalışmamızda en yüksek retinal SIRT1 ekspresyon  değerleri diyabet+resveratrol (G4) grubunda elde edildi (P<0,05). Diyabet grubunun (G3) retinal SIRT1 ekspresyon  değerleri grup 4'den düşük (P<0,05),  Genel kontrol (G1) ve Kontrol+resveratrol (G2) gruplarından daha yüksekti (P<0,05). Yine çalışmamızda en yüksek retinal MDA değerleri diyabet grubunda (G3) elde edildi (P<0,05). Çalışmamızda en yüksek retinal GSH değerleri ise Diyabet+Resveratrol grubunda (G4) elde edildi (P<0,05). 
Çalışmamızın bulguları diyabet oluşturulmuş yaşlı dişi sıçanlarda retinal oksidatif stresin resveratrol desteğiyle önlenebileceğini göstermektedir. Resveratrol desteğinin bu koruyucu etkisi; diyabetik yaşlı sıçanlarda hem retinal antioksidan aktivitenin, hem de retinal SIRT1 ekspresyonunun artırılmasıyla ortaya çıkmaktadır.
Anahtar Kelimeler: Diyabet, Doku Hasarı, Resveratrol, Retina, SIRT1, Yaşlı Dişi Sıçan.

Abstract:
Diabetic  retinopathy (DR) is a sight-threatening, chronic  microvascular complication.   Sirtuin 1 (SIRT1) is an intracellular protein associated with a variety of basic physiological processes, including oxidative stress, glucose metabolism, DNA stability, cell aging and tumoral events. Many reports have suggested that SIRT1 may be associated with the pathogenesis of diabetic retinopathy. Resveratrol (RSV) is a potent antioxidant, has been suggested to have a protective effect in diabetic retinopathy. The aim of this study was to investigate how RSV supplementation affects the levels of retinal SIRT1 and retinal tissue damage in a diabetic elderly female rats.
The study was performed on elderly female rats (16 months) obtained from Selçuk University Experimental Medicine Research and Application Center. The ethics committee of the same center approved the study. A total of 24 elderly female rats were divided into 4 groups. Group 1. Control, Group 2. Control + resveratrol Group 3. Diabetes, Group 4. Diabetes + Resveratrol. Experimental diabetes was induced to Group 3 and group 4 by a single intraperitoneal injection of Streptozotocin (STZ) "Sigma, S-0130" (40 mg/kg). 6 days after the STZ injection, blood was collected from the tip of the tail vein of the animals and blood glucose were measured by a diagnostic glucose kit.  The rats having hyperglycemia (≥300 mg/ dl) were assigned to be diabetic. After 4-week resveratrol treatment period, SIRT1 protein gene expression and MDA ve GSH levels were determined by PCR and ELISA, respectively, on retinal tissue samples obtained from the  animals  sacrificed  under general anesthesia.
In our study, the highest retinal SIRT1 expression values were obtained in the diabetes + resveratrol group (G4) (P <0.05). Retinal SIRT1 expression values of the diabetic group (G3) were lower than group 4 (P <0.05) and higher than those of the General control (G1) and Control + resveratrol groups (G2) (P0.05). In our study, the highest retinal MDA values were obtained in the diabetes group (G3) (P <0.05). In our study, the highest retinal GSH values were obtained in the Diabetes + Resveratrol group (G4) (P <0.05). 
The results of the present study revealed that retinal oxidative stress can be prevented by resveratrol supplementation in diabetic elderly female rats. This protective effect of resveratrol supplementation occurs, as both retinal antioxidant activity and retinal SIRT1 expression increases, in diabetic elderly female rats.
Key Words: Diabetes, Retina, Retina, SIRT1, Tissue Damage, Resveratrol, Aged Female Rat.