Replikasyon defektif tip 5 adenoviral vektörlerin tümör hücrelerinde sitokin gen ekspresyonuna etkileri
Effects of cytokine gene expression of replicative defective TYPE 5 adenoviral vectors on tumor cells
Yazar: İREM ZENGİN
Danışman: PROF. DR. HAKAN AKBULUT
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Onkoloji = Oncology ; İç Hastalıkları = Internal diseases
Dizin: Adenovirüsler = Adenoviridae ; COVID 19 = COVID 19 ; Gen ifadesi = Gene expression ; Gen tedavisi = Gene therapy ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitokinler = Cytokines ; Virüs replikasyonu = Virus replication ; İmmünosupresif ajanlar = Immunosuppressive agents ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Gen tedavisi son 30 yıldır başta kanser olmak üzere birçok hastalıkta denenmiş ve son yıllarda birkaç tane ürün rutin kullanıma girmiştir. Gen tedavisinde özellikle viral vektörler sıklıkla kulanılmaktadır. Covid-19 pandemisi sürecinde adenoviral vektör tabanlı aşılar rutin olarak kullanılmaya başlanmıştır. Özellikle aşılarda replikasyon defektif adenoıviral vektörler kullanılmaktadır. Adenoviral vektörlerin enfeksiyon etkenine ait antijenler ya da kanser tedavisinde kullanılan terapötik genlerin etkileri yanı sıra vektörlerin kendilerinden kaynaklanan birtakım etkiler de söz konusu olmaktadır. Özellikle rekombinant vektörlerin immün cevaplar üzerindeki etkisi ve ayrıca inflamasyon üzerindeki etkileri çok iyi bilinmemektedir. Bu çalışma ile hücrelere AdV-5 verildiğinde immün sisteminin baskılanması ve inflamasyon gelişimine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Çalışmada HUVEC (insan göbek kordonu veni endotel hücresi), HeLa (insan serviks kanseri hücre hattı) ve MCF7 (insan meme kanseri hücre hattı) hücre hatlarının replikasyon defektif AdV-5 ile enfeksiyonu sonrası immün sistemi baskılayıcı etkisi ve inflamatuar destekleyici olan IL-1B, IL-6, IL-8, IL- 10, TNF-a ve TGF-B mRNA düzeyinde gen ekspresyonlarına ve protein ifade düzeylerine bakılarak ifade değişimleri değerlendirilmiştir.
Replikasyon defektif tip 5 adenoviral aşı ve tedavi vektörlerine karşı in vitro ortamda oluşan immün yanıtta görüyoruz ki inflamasyon başlatıcı genleri benzer şekilde mRNA ve protein düzeyinde ifade değişimi göstermiştir. İmmünsüpresif olan IL10 ve TGF-Beta'nın baskılanması ise bu vektörlerin aşı olarak kullanılabilirliğini desteklemekte ve adenoviral vektörlerin kanser tedavisinde iyi bir seçim olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
Gene therapy has been tried in many diseases, especially cancer, for the last 30 years, and several products have been routinely used in recent years. In gene therapy, especially viral vectors are often used. During the Covid-19 pandemic process, adenoviral vector-based vaccines have been routinely introduced. In particular, the vaccines use replication defective adenoiviral vectors. In addition to the effects of antigens or therapeutic genes used in cancer treatment of Adenoviral vectors, there are also some effects from the vectors themselves. In particular, the effects of recombinant vectors on immune responses and inflammation are not well known. This study aimed to investigate the effect of the replication-defevtive addenoviral vector administration on the secretion of immunosuppressive and inflammatory cytokines in normal and tumor cells.
We transduced the HUVEC (human umbilical cord and endothotelial cell), HeLa (human cervical cancer cell line), and MCF7 (human breast cancer cell line) cell lines by defective AdV-5 vectors. Then we assayed the mRNA and protein expression of immune suppressive and inflammatory cytokines, including IL-1B, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-alpha, and TGF-beta by qPCR and western blotting. 
In the immune response to replicative defective type 5 viral adenoviral vaccine and treatment vectors, in vitro conditions, we see that pro-inflammation genes have similarly demonstrated a change in expression at mRNA and protein levels. Furthermore, the suppression of immunosuppressive IL-10 and TGF-Beta supports the usability of those vectors as vaccines and suggests that adenoviral vectors may be a good choice in cancer treatment.