Juglon ve fluorouracil kombinasyonlarının LNCaP ve PC-3 prostat kanser hücreleri üzerindeki in vitro sitotoksik ve genotoksik etkilerinin araştırılması
Investigation of the in vitro cytotoxic and genotoxic effects of juglone and fluorouracil combinations on LNCaP and PC3 prostate cancer cells
Yazar: ZEHRA NUR DÜZEN
Danışman: PROF. DR. TOLGA ÇAVAŞ
Bursa Uludağ Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Flüorourasil = Fluorouracil ; Genotoksisite = Genotoxicity ; Juglon = Juglone ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
1,4-naftokinonlar doğada yaygın olarak bulunan ve antikanser aktivitesi bulunan fenolik bileşiklerdir. Bu çalışmada juglon ve 5-Florourasilin ayrı ayrı ve kombinasyonlarının prostat kanseri üzerindeki in vitro sitotoksik ve genotoksik etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla her iki maddenin ayrı ayrı ve kombinasyonlarının LNCaP (prostat kanseri lenf metastazı) ve PC3 (prostat kanseri kemik metastazı) hücre hatlarında sitotoksik etkileri XTT testi, genotoksik etkileri komet testi ile değerlendirilmiştir. Ayrıca olası hücre içi reaktif oksijen türevlerinin seviyeleri DCF-DA kullanılarak, hücre ölüm şekli ise Annexin V yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. 
İki hücre hattında da XTT testi ile belirlenen 5-FU IC12,5 konsantrasyonu sabit tutularak juglon IC12,5, IC25 ve IC50 konsantrasyonlarının uygulandığı kombinasyon gruplarında canlılık oranlarında artan dozlarda anlamlı bir azalma olduğu belirlenmiştir. Komet testinde juglon ve 5- FU'nun IC12,5, IC25, IC50 ve IC75 konsantrasyonlarına maruz bırakılan LNCaP ve PC3 hücre hatlarında kuyruk uzunluğu, kuyruk % DNA ve olive kuyruk momenti hesaplanmış ve elde edilen sonuçlarda kontrol grubuna göre anlamlı artışlar olduğu saptanmıştır. Hücre hatlarında kombinasyon için 5-FU IC12,5 konsantrasyonu ile juglon IC12,5, IC25 ve IC50 konsantrasyonları kullanılarak yapılan komet testinde de hem kontrol hemde tek başına 5-FU grubu ile yapılan karşılaştırmada anlamlı artışlar gözlenmiştir. ROS testinde hücre hatlarında juglon ve 5-FU'nun ayrı ayrı ve kombinasyonları aynı konsantrasyonlar kullanılarak uygulanmıştır. Bunun sonucundaher iki hücre hattında da anlamlı artışlar olduğu belirlenmiştir. Kullanılan hücre hatlarında juglonun tek başına ve 5-FU ile kombinasyonunun aynı konsantrasyonlar kullanılarak uygulandığı Annexin V testi apoptotik potansiyelin doz artışı ile anlamlı bir şekilde arttığını göstermiştir.

Abstract:
1,4-naphthoquinones are phenolic compounds widely found in nature and have anticancer activity. This study aimed to investigate the in vitro cytotoxic and genotoxic effects of juglone and 5-Fluorouracil separately and in combination on prostate cancer. For this purpose, the cytotoxic and genotoxic effects of both substances separately and in combinations on LNCaP (prostate cancer lymph metastasis) and PC3 (prostate cancer bone metastasis) cell lines were evaluated using XTT and comet test, respectively. In addition, the levels of possible intracellular reactive oxygen derivatives were determined using DCF-DA, and the mode of cell death was determined using the Annexin V method.
The 5-FU IC12,5 concentration determined by the XTT test was kept constant in both cell lines. A significant decrease was observed in the viability rates at increasing doses in the combination groups in which the juglone IC12,5, IC25, and IC50 concentrations were applied. In the comet test, tail length, tail % DNA, and olive tail moment were calculated in LNCaP and PC3 cell lines exposed to juglone and 5-FU (IC12,5, IC25, IC50, and IC75), in which significant increases were observed compared to the control group. By using 5-FU IC12.5 concentration and juglone IC12.5, IC25, and IC50 concentrations for combination in cell lines, significant increases were noticed in comparison with both the control and 5-FU groups alone. In the ROS test, juglone and 5-FU were applied separately and in combinations using the same concentrations in cell lines. As a result, significant increases were determined in both cell lines. In the cell lines used, the Annexin V test in which juglone alone and in combination with 5-FU was applied using the same concentrations showed that the apoptotic potential increased significantly with the increase in dose.