L-askorbik asitin insan sağlıklı lenfosit ve kanserli HL-60 hücre kültürü üzerine olan etkilerinin araştırılması
The investigation of the effects of L-ascorbic acid on human healthy lymphocyte and HL-60 cell culture
Yazar: MEHMET TAHİR HÜSUNET
Danışman: PROF. DR. HASAN BASRİ İLA ; PROF. DR. MEHMET BERTAN YILMAZ
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Bu çalışma, C vitamininin (L-Askorbik Asit, LAA) 0.5, 1 veya 2 mg/ml konsantrasyonlarıyla 6 veya 24 saat muamele edilen sağlıklı lenfosit kültürü veya promyelositik lösemi (HL-60) hattında ortaya çıkan genotoksik, sitotoksik, epigenetik ve oksidatif/antioksidatif potansiyelinin belirlenmesi amacıyla gerçekleştirilmiştir. Genotoksik etki için Kuyruklu yıldız testi ve Ames testi, sitotoksik etki için MTT testi ve epigenetik etki için FAS ve Katalaz genlerinin ifade seviyesi araştırılmıştır. Ayrıca genetik ve epigenetik etkilerle ilişkili olan hücre içi / hücre dışı Ca+2 ve Mg+2 düzeyleri, oksidatif stres parametreleri ve in silico moleküler kenetlenme kuvvetleri belirlenmiştir. Kuyruklu yıldız testi bulgulara göre LAA'nın herhangi bir genotoksik etkisinin olmadığı görülmüştür. HL-60 hücre hattında yapılan MTT testinde LAA kontrole göre bariz proliferatif etki göstermiştir. Sağlıklı lenfositlerde yüksek dozda test maddesiyle genlerdeki ifade (transkripsiyon) oranı anlamlı düzeyde düşerken, HL-60 hücrelerinde bir istisna hariç genel anlamda ifade artışı görülmüştür. Ca+2/Mg+2 seviyesinde hücre tipi, doz ve zamana bağlı net bir korelasyon saptanmamıştır. Ayrıca HL-60 hücre hattında 6 saatlik LAA muamelesinin bazı konsantrasyonlarında oksidatif streste (OSI) önemli azalmalar neden olurken, 24 saatlik bazı muamelelerde ise anlamı OSI artışları gözlenmiştir. Aynı zamanda in silico moleküler kenetlenme analizinde serbest bağlanma (Gibbs) enerjisi anlamlı seviyede yüksek bulunmamıştır. Yapılan çalışmaların tamamının sonuçlarına göre LAA'nın belirgin genotoksik ve sitotoksik etkisi yoktur. Ancak hücre tipine, LAA konsantrasyonu ve muamele süresine göre gen ifadesinde ve oksidatif stres parametrelerinde gözlenen farklılıklar dikkat çekmektedir.

Abstract:
This study was carried out to determine the genotoxic, cytotoxic, epigenetic, and oxidative/antioxidative potential of vitamin C (L-Askorbik Asit, LAA) in healthy lymphocyte culture or promyelocytic leukemia (HL-60) lines treated for 6 or 24 hours with concentrations of 0.5, 1, or 2 mg/ml. Comet test and Ames test for genotoxic effect, MTT test for cytotoxic effect, and expression level of FAS and Catalase genes for epigenetic effect were investigated. In addition, intracellular/extracellular Ca+2 and Mg+2 levels, oxidative stress parameters, and in silico molecular clamping forces, which are related to genetic and epigenetic effects, were determined. According to the comet test findings, it was seen that LAA did not have any genotoxic effect. In the MTT test performed on the HL-60 cell line, LAA showed a pronounced proliferative effect compared to the control. In healthy lymphocytes, expression (transcription) of genes decreased significantly with a high dose of the test substance, while expression increase was observed in HL-60 cells, with one exception. There was no clear correlation between cell type, dose, and time in Ca+2/Mg+2 level. In addition, significant decreases in oxidative stress (OSI) were observed at some concentrations of LAA treatment for 6 hours in the HL-60 cell line, while significant OSI increases were observed in some 24-hour treatments. At the same time, free binding (Gibbs) energy was not found to be significantly high in in silico molecular docking analysis. According to the results of all studies, LAA has no significant genotoxic and cytotoxic effects. However, the differences observed in gene expression and oxidative stress parameters according to cell type, LAA concentration, and treatment time are remarkable.