Alfa-amanitine bağlı karaciğer toksisitesinin önlenmesinde silibinin ile resveratrolün etkililiğinin karşılaştırılması
A comparison of the effectiveness of silibinin and resveratrol in preventing alpha-amanitin-induced hepatotoxicity
Yazar: AYNUR ŞAHİN
Danışman: DOÇ. DR. MUALLA AYLİN ARICI
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Toksikoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Amanita = Amanita ; Amanitinler = Amanitins ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Mantarlar = Fungi ; Resveratrol = Resveratrol ; Silibin = Silybin ; Toksisite = Toxicity ; Toksisite testleri = Toxicity tests

Özet:
Amaç: Alfa amanitin (α-AMA) içeren Amanita phalloides türü mantarlar, ölümcül mantar zehirlenmelerinin çoğundan sorumludur ve karaciğer toksisitesi ve akut karaciğer yetmezliği ile sonlanan ciddi zehirlenmelere neden olur. Silibinin ve penisilin G gibi mevcut antidotlar, α-AMA ile oluşturulan karaciğer toksisitesinin önlenmesi ve/veya tedavisinde yeterince etkili değildir. Çalışmamızın amacı, resveratrolün α-AMA'e bağlı karaciğer toksisitesi üzerindeki etkilerini in vivo deneysel toksisite modelinde araştırmak ve tedavide antidot olarak kullanılan silibinin ile karşılaştırmaktı.
Yöntem: Balb/c farelerde, AST ve ALT değerlerinde anlamlı oranda yüksekliğe neden olan ve histomorfolojik olarak da karaciğerde hasara neden olan 1.4 mg/kg α-AMA  ile in vivo toksisite modeli oluşturuldu. Kontrol grubunda -AMA+%0.9. sodyum klorür (NaCl), Dimetil sülfoksit (DMSO) grubunda,  α-AMA+ DMSO, resveratrol gruplarında, 30 mg/kg resveratrol, α-AMA ile eş zamanlı (α-AMA +ER), 12 saat (α-AMA +12R) ve 24 (α-AMA +24R) saat sonra olmak üzere 3 farklı tedavi protokolünde uygulandı. 5 mg/kg silibinin ise  (α-AMA +Sil) α-AMA ile eş zamanlı olarak 6 saat arayla uygulandı. Kırk sekiz saatlik deney  protokolünün sonunda fareler sakrifiye edildi. Alınan serum örneklerinden AST, ALT, Total bilirubin, Direk bilirubin düzeyleri, karaciğer dokularından antioksidan enzimler ve  histomorfolojik incelemeler yapıldı. TUNNEL ve aktif kaspaz-3 incelemeleri ile apoptozis değerlendirildi.
Bulgular: AST ve ALT değerleri,  α-AMA+ER ve α-AMA+12R gruplarında, histomorfolojik hasar skorları ise α-AMA+ER, α-AMA+12R, α-AMA+24R ve gruplarında α-AMA+SF grubuna göre anlamlı düşüş gösterdi. Resveratrol, karaciğerde mononükleer hücre infiltrasyonunu, nekrozu ve aktif kaspaz-3 immünopozitifliğini azalttı.
 Sonuç: İn vivo deneysel toksisite modelimizde, resveratrol,  α-AMA'e bağlı gelişen karaciğer toksisitesini önlemede  etkili bulundu. Sonuç olarak; resveratrol, Amanita phalloides türü mantarlarla zehirlenmelerde kullanılabilme potansiyeli olan yeni bir tedavi alternatifidir.

Abstract:
Objective: Amanita phalloides species mushrooms containing alpha amanitin (α-AMA) are responsible for the majority of fatal mushroom intoxications and can lead to severe poisonings resulting in liver toxicity and acute hepatic failure. Existing antidotes, such as silibinin and penicillin G, are not sufficiently effective in the prevention and/or resolution of α-AMA induced liver toxicity. We investigated the effects of resveratrol on α-AMA induced liver toxicity and compared with silibinin, a known antidote in the  in vivo toxicity model.
Method: The in vivo toxicity model was established with 1.4 mg/kg α-AMA, which results in significant elevation in AST and ALT values in Balb/c mice and also causes histomorphological damage in the liver. α-AMA+0.9% sodium chloride (NaCl) was administered in the control group, and -AMA+dimethyl sulfoxide (DMSO) in the DMSO group, while 30 mg/kg resveratrol was administered in the resveratrol groups, in three different treatment protocols, simultaneously with α-AMA (α-AMA +ER), after 12 h (α-AMA +12R) and after 24 h (α-AMA +24R). Silibinin at 5 mg/kg (α-AMA +Sil) was administered at 6-h intervals simultaneously with α-AMA. Mice were sacrificed at the end of the 48-h experimental protocol. AST, ALT, total bilirubin, and direct bilirubin levels were investigated from serum specimens collected, while antioxidant enzymes and histomorphological examinations were performed from liver tissue. TUNEL and active caspase-3 were examined and apoptosis was evaluated.
Results: The liver transaminase levels in α-AMA+SR and α-AMA+12R groups and histomorphologic injury score in the α-AMA+SR, α-AMA+12R, α-AMA+24R and α-AMA+Sil groups were significantly lower than that of the α-AMA+NS group. Resveratrol, decreased mononuclear cell infiltration, necrosis and active caspase-3 immunopsitivity in liver. 
Conclusion: Resveratrol was found to be effective in α-AMA induced liver toxicity with its anti-inflamatory properties. It is a promising antidote with the potential for use in the treatment of liver toxicity associated with Amanita phalloides type mushroom poisonings.