Farmasötik ürünlerde gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi ile genotoksik impürite analizi
Genotoxic impurity analysis by gas chromatography-mass spectrometry from pharmaceutical products
Yazar: BERFİN TAŞ
Danışman: PROF. DR. DURİ ŞEHVAR ÜNAL
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
İlaç ürünlerinin üretimi sırasında ya da başlangıç maddeleri, ara ürün veya üretim sonrası oluşan ürünlerde bazı istenmeyen safsızlıklar bulunabilir. Bu safsızlıklar impürite olarak adlandırılır. İmpüriteler genetik yapıyı bozar ve kanserojen etki yaratır. İnsan sağlığını tehlikeye sokan bu safsızlıkların yok edilmesi veya kabul edilebilir minimum düzeye indirilmesi gerekir. Bu çalışmada farmasötik ürünlerde bulunması muhtemel Epiklorohidrin, Benzaldehit ve 2,6-Dimetilanilin  impürite maddeleri, Sitagliptin ve Linagliptin-Metformin etken maddelerini içeren farmasötik ürünlerde Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrofotometresi ile araştırılmıştır. 
Yapılan çalışmada Agilent Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrofotometresi sistemi ve DB-624 kolonu (30m x 0,250 mm x 1,40 µm) kullanıldı. Geliştirilen yöntemdeki enjeksiyon hacmi 2 µL'dir ve 4:1 oranında split modda çalışıldı. Inlet sıcaklığı 225°C'dir. Kolon akış hızı 1 mL/dk'dır. Fırın sıcaklık programı için 60°C'de başlatılıp 15°C/dk'da 120°C ve daha sonra da 50°C/dk'da 225°C'ye artırılarak son sıcaklıkta 2 dk. bekletildi. Kütle Kromatografisi SIM modunda çalışılarak gerçekleştirildi. 3 impürite maddesi için seçilen iyonlar; 2,6-DMA için 121 m/z, Benzaldehit için; 106 m/z, Epiklorohidrin için; 57 m/z'dir. Toplam analiz süresi 8,1 dakikadır.
Kalibrasyon eğrisi için 5 derişim noktası seçildi. LOD değerleri Epiklorohidrin için 8 ng/mL, Benzaldehit için 2,0 ng/mL, 2,6-DMA için 2,0 ng/mL'dir. LOQ değerleri Epiklorohidrin için; 200,0 ng/mL, Benzaldehit için; 20,0 ng/mL, 2,6-DMA için; 20,0 ng/mL' dir. Kalibrasyon eğrilerinin r2 değerleri Epiklorohidrin, Benzaldehit ve 2,6-DMA için sırasıyla; 0,9993; 0,9998 ve 0,9999'dir. 
Kalite kontrol numuneleri için 2,6-DMA ve Benzaldehit için derişim noktaları; 30, 300, 500 ng/mL ve Epiklorohidrin için 300, 500, 1000 ng/mL'dir. Yöntemin kesinliği yüzde standart sapma şeklinde, yöntemin doğruluğu ise yüzde doğruluk şeklinde gösterildi. Sonuçlar, geliştirilen yöntemin iyi bir kesinlik ve doğruluğa sahip olduğunu ve kesinlik ve doğruluk için kabul limiti içerisinde olduğunu gösterir.

Abstract:
Some undesirable impurities may be present during the production of drug products or in starting materials, intermediates or post-production products. Impurities disrupt the genetic structure and create carcinogenic effects. These impurities that endanger human health must be eliminated or reduced to an acceptable minimum level. In this study, the impurity substances Epichlorohydrin, Benzaldehyde and 2,6-Dimethylaniline, which may be found in pharmaceutical products, were investigated by Gas Chromatography-Mass Spectrophotometry in pharmaceutical products containing the active ingredients Sitagliptin and Linagliptin-Metformin.
Agilent Gas Chromatography-Mass Spectrophotometry system and DB-624 column (30m x 0.250 mm x 1.40 µm) were used in the study. In the developed method, the injection volume was 2 µL and it was worked in split mode at a ratio of 4:1. Inlet temperature is 225°C. Column flow rate is 1 mL/min. For the oven temperature program, it was started at 60°C, increased to 120°C at 15°C/min, and then to 225°C at 50°C/min, and held at the final temperature for 2 minutes. Mass Chromatography was performed in SIM mode. Ions selected for 3 impurity substances; 121 m/z for 2,6-DMA, Benzaldehyde; 106 m/z for Epichlorohydrin; It is 57 m/z. Total analysis time is 8.1 minutes.
5 concentration points were selected for the calibration curve. LOD values are 8 ng/mL for Epichlorohydrin, 2.0 ng/mL for Benzaldehyde, and 2.0 ng/mL for 2,6-DMA. LOQ values for Epichlorohydrin; 200.0 ng/mL for Benzaldehyde; 20.0 ng/mL for 2,6-DMA; It is 20.0 ng/mL. r2 values of calibration curves for Epichlorohydrin, Benzaldehyde and 2,6-DMA, respectively; 0.9993; are 0.9998 and 0.9999.
Concentration points for 2,6-DMA and Benzaldehyde for quality control samples; 30, 300, 500 ng/mL and 300, 500, 1000 ng/mL for Epichlorohydrin. The precision of the method was shown as a percentage of relative standard deviation, and the accuracy of the method was shown as a percentage accuracy. The results show that the method has good precision and accuracy and is within the acceptance limit for precision and accuracy.