EIS (Electrochemical ımpedance spectroscopy) metodunu kullanarak ICSI (Intra cytoplasmic sperm ınjection) ile oositin spermle uygun fertilizasyon zamanının araştırılması
Applying EIS (Electrochemical impedance spectroscopy) to determine the most appropriate oocyte fertilization time for ICSI (Intra cytoplasmic sperm injection) in rats
Yazar: MOSTAFA ASHRAFİ OSALOU
Danışman: DOÇ. DR. ÜLKER SÖNMEZ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Enjeksiyonlar = Injections ; Fertilizasyon = Fertilization ; Kısırlık = Infertility ; Oositler = Oocytes ; Spektrum analizi = Spectrum analysis ; Sperm = Spermatozoa ; Sperm transportu = Sperm transport ; Vazektomi = Vasectomy ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Tüp bebek merkezlerinde uygun gamet seçimi için çok fazla zaman harcanmasına rağmen, günümüzdeki Yardımcı Üreme Teknikleri (YÜT) ya başarısızdır ya da düşük bir başarı yüzdesine sahiptir. Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS) tekniği, biyofizik ve kimya kökenli bir metodtur. Hücreler, sitoplazma ve organelleri ile biyofizik ve biyokimya kurallarına tamamen uyarlar. Bu birimler yapılarına dayanarak, özel direnç, potansiyel ve elektriksel davranışlara sahiptirler.
Toplam 55 adet, 8-16 haftalık 220-250gr ağırlığında Wistar Albino rat Dokuz Eylül Üniversitesi?nin Deney Hayvanları Anabilim Dalından temin edildi (Grup A1, A2, A3 toplam 15 adet erkek) ve 40 adet dişi (B1, B2, B3). Vasektomi grubundaki (A2) 5 adet erkek rat deneyin 10 gün öncesi ketasol ile anestezi altında vasektomi yapıldı. Sperm aspirasyon grubundan (A1, A3) MESA yöntemi ile ICSI için sperm temin edildi. B1 ve B3 gruplarının östrus evresi smear yaymasıyla tespit edildi, süperovulasyon yapıldı ve oositleri toplandı. EIS yöntemiyle elektriksel potansiyel ölçümü için oosit boyutuna uygun mikroçip hazırlandı. YÜT kriterlerine göre seçilen oositlerin yarısı EIS ile değerlendirilirken diğer yarısına EIS uygulanmadı. Seçilen tüm oositlere ICSI yapıldı. Önceden hazırlanan dişi ratlara anestezi altında 3.gün 4 ile 14 embriyo transfer edildi. Tüm veriler istatistiksel olarak T-Student testi ve SPSS 15 programı ile değerlendirildi.
EIS ile seçilen 58 oositin EIS kullanmadan seçilen 57 oosite göre; fertilizasyon oranı, embriyo transfer oranı daha başarılı olduğu görüldü. Bu çalışmada ratlarda fertilizasyon için uygun oositin `elektriksel EIS fertilizasyon penceresi?nin 118 ile 132 mV arasında olduğu ilk kez gösterildi.

Abstract:
Current use of Assisted Reproductive Techniques in IVF centres are very time-consuming and often amount to a low success-rate or even failure of selecting appropriate gametes often. Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS) technique is a method that originated in biophysics and chemistry. Therefore, the rules of biophysics and biochemistry underlie how cells, the cytoplasm and organelles adapt. These (sub) cellular units have specific resistance and electrical behaviour potential, based on their biological structures. 
A total number of 55 Wistar albino rats (8-16 weeks, 220-250g) were obtained from Dokuz Eylul University department of Experimental Animals (15 males in groups A1, A2 and A3; and 40 female in groups B1, B2, B3). Vasectomy group (A2), comprised of 5 males that were vasectomized under ketasole anaesthesia 10 days before experimental onset. Remaining 10 males in the sperm aspiration groups (A1, A3) were undergoing Microsurgical Epididymis Sperm Aspiration (MESA) to produce sperm for ICSI. Oestrous phase of female rats of groups B1 and B3 was detected by Pap smear, after which these females where induced to super-ovulate. A microchip, suitable for the size of oocytes, was prepared for EIS measurement of electric potential. Half of all collected oocytes were evaluated by EIS, while the other half only benefited assisted reproductive techniques. ICSI was then performed on all selected oocytes. After successful ICSI, 4 to 14 third day staged embryos were transferred into previously prepared, anesthetized pseudo-pregnant rats. All data were evaluated by T-student and SPSS.
58 oocytes selected by the EIS appeared more successful in fertilization and embryo transfer as compared to 57 oocytes selected only by ART.
We found, for the first time, that an EIS fertilization window of 118 to 132 mV defines suitable mature oocytes for fertilization in rats defined.