Pregabalin ve pregabalinin morfin ile birlikte kullanım etkilerinin sıçanlarda değerlendirilmesi
Evaluation of the effects of pregabalin and the concomitant use of pregabalin and morphine in rats
Yazar: NURAN AY
Danışman: PROF. DR. SERAP ANNETTE AKGÜR ; PROF. DR. ALİ NECATİ GÖKMEN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Madde Bağımlılığı Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Uyuşturucu Alışkanlığı ve Alkolizm = Drug Addiction and Alcoholism
Dizin: Morfin =   ; Pregabalin = Pregabaline ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Bu çalışma ile sıçanlar için önerilen yüksek tedavi dozunda pregabalin (PGB) ve morfinin (MOR) tek başına veya birlikte tedavi amaçlı kullanımının davranışsal ve kardiyak etkilerinin toksikolojik analizler ışığında değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Yöntem: Kontrol, PGB, MOR ve PGB + MOR olarak oluşturulan dört gruptan (n=7) kontrol grubuna serum fizyolojik, PGB grubuna 10 mg/kg pregabalin, MOR grubuna 1 mg/kg morfin, PGB + MOR grubuna 10 mg/kg pregabalin ile 1 mg/kg morfin 21 gün boyunca verilmiştir. Bu süreçte Spragu Dawley yetişkin ağırlıkları 300g üstü olan erkek sıçanlardan oluşturduğumuz tüm çalışma gruplarımızda ortaya çıkan etkiler davranış testleri ve biyokimyasal analizler ile davranışsal etkiler, biyokimyasal analizler ve morfolojik ölçümler ile de kadiyak etkiler değerlendirilmiştir.   biyokimyasal analizler ve morfolojik ölçümler ile de kardiyak etkiler, değerlendirilmiştir. Davranışsal testler deney başlangıcından itibaren 0., 7., 14. ve 21. günlerde tekrarlanmıştır.  Davranış testleri açık alan (OFT) ve yükseltilmiş artı labirent testi (EPM) ve biyokimyasal parametreler kortizol ve ACTH olarak belirlenmiştir. Kardiyak değerlendirmeler ise morfolojik ve biyokimyasal düzeyde yapılmıştır. Kardiyak değerlendirmeler ve biyokimyasal incelemeler için yine 0., 7., 14. ve 21. günlerde toplanan idrar, serum ve plazma örnekleri kullanılmıştır. Morfolojik değerlendirmeler 0.,14., ve 21. gün USG ile yapılırken LDH, ACTH, BNP ve CK-MB kardiyak biyokimyasal parametreler olarak incelenmiştir. Pregabalin ve morfinin idrardaki düzeylerinin değerlendirilmesi 0.,7.,14.ve 21.günlerde sıvı kromatografi ardışık kütle-spektrometresi (LC-MS/MS) ile gerçekleştirilmiştir. Elde edilen bulguların istatistiksel değerlendirilmesinde p<0,05 anlamlılık düzeyi esas alınmıştır. 
Bulgular: PGB'nin tek başına ya da MOR ile birlikte kullanılması açık alan testinde hem PGB verilen hem de PGB+ MOR verilen sıçanlarda, tek başına morfin verilen sıçanlara göre katedilen toplam mesafenin özellikle 14. günden sonra artmış olması, orta alanda geçirilen sürenin fazla olması, dolayısıyla thigmo alanda geçirilen sürenin kısalması pregabalinin anksiyeteyi azaltmış olduğunu, öforik etki ortaya çıkardığını düşündürmektedir. Yükseltilmiş artı labirent testinde PBG ve PGB + MOR grubunda özellikle 14. günden sonra anksiyete benzeri davranışlar olmuştur. Davranış testlerindeki değişiklikler doğrudan biyokimyasal analizlere yansımazken ACTH düzeyinden PGB + MOR grubunda 14.-21. gün arasında anlamlı fark bulunmuştur. ACTH düzeyinin değişmesi ve istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar elde ettiğimiz zaman noktası olan PGB + MOR grubunda 14.günde yükselmiş olması davranış değişiklikleriyle de örtüştürülebilir. Kardiyak morfolojik incelemelerde miyokard kalınlığı açısından gruplararası değerlendirmede anlamlı olmasa da PGB+MOR grubunda 14. ve 21. günde periyodik myokard kalınlık artışı, grupiçi değerlendirmede yine PGB+MOR grubunda 14., 21.gün kısa aks ejeksiyon fraksiyonu ölçümlerinde anlamlı azalma gözlenmiştir. PBG grupda 21. gün uzun aks ef değeri 14. gün değerinden anlamlı azalmıştır. MOR grubu grupiçi değerlendirmede 21.gün kısa aks ef azalmıştır. Kardiyak değerlendirmenin biyokimyasal ayağında LDH ve ACTH düzeylerinde 14. gün PGB + MOR ve PGB gruplarında artma gözlenmiştir. Elde edilen bulgular toksikolojik analizlerden elde edilen verilerle desteklenmiştir. PGB ve PGB +MOR gruplarında LDH ve ACTH değerlerinin 14. günde yükselme davranışsal test bulgularımız ve morfolojik kardiyak bulgularımız ile eşzaman diliminde anlamlı fark görülmesi birbirini destekler bulgulardır.
Sonuç: Sonuç olarak, PGB (10 mg/kg PGB) ve MOR'un (1mg/kg) birlikte kullanıldığı deneysel bir hayvan çalışmasında, toksikolojik analiz verileri ışığında USG ve biyokimyasal analizle desteklenerek davranışsal ve kardiyak değişiklik olduğu ilk defa gösterilmiştir.
Anahtar Kelimeler; Pregabalin; Morfin; Kardiyak etki; Davranışsal etki; Sıçan.

Abstract:
Evaluation of the Effects of Pregabalin and the Concomitant use of Pregabalin and Morphine in Rats
Aim: In this study, it was aimed to evaluate the behavioral and cardiac effects of the use of pregabalin (PGB) and morphine (MOR) alone or in combination for therapeutic purposes at the high treatment dose recommended for rats in the light of toxicological analyzes.
Methods: Among the four groups (control, PGB, MOR and PGB + MOR) (n=7), physiological saline to the control group, 10 mg/kg pregabalin to the PGB group, 1 mg/kg morphine to the MOR group, and 10 mg/kg pregabalin to the PGB + MOR group and 1 mg/kg of morphine were given for 21 days. In this process, the effects that emerged in all our study groups, which we formed from male rats with sprague dawley adult weights over 300 g, were evaluated with behavioral tests and biochemical analyzes, and cardiac effects with biochemical analyzes and morphological measurements. Cardiac effects were also evaluated with biochemical analyzes and morphological measurements. Behavioral tests were repeated at 0, 7, 14 and 21 days from the beginning of the experiment. Behavioral tests were determined as open field (OFT) and elevated plus maze test (EPM), and biochemical parameters were determined as cortisol and ACTH. Cardiac evaluations were made at the morphological and biochemical level. Urine, serum and plasma samples collected on days 0, 7, 14 and 21 were used for cardiac evaluations and biochemical studies. Morphological evaluations were made with USG at 0, 14, and 21 days, while LDH, ACTH, BNP and CK-MB were examined as cardiac biochemical parameters. Evaluation of the urinary levels of pregabalin and morphine was performed by liquid chromatography sequential mass-spectrometry (LC-MS/MS) on days 0, 7, 14 and 21. In the statistical evaluation of the obtained findings, the significance level of p<0.05 was taken as a basis.
Results: In the open field test, using PGB alone or in combination with MOR, the total distance traveled increased especially after the 14th day in rats given both PGB and PGB+ MOR compared to rats given morphine alone, the time spent in the middle area was longer, therefore, the shortening of the time spent in the thigmo area suggests that pregabalin reduces anxiety and produces a euphoric effect. In the elevated plus maze test, anxiety-like behaviors occurred in the PBG and PGB + MOR groups, especially after day 14. While the changes in behavioral tests were not directly reflected in the biochemical analyzes, the ACTH level in the PGB + MOR group has significant difference was found between 14.-21 days. The change in ACTH level and its increase on the 14th day in the PGB + MOR group, the time point at which we obtained statistically significant results, can also be correlated with behavioral changes. In cardiac morphological examinations, although it was not significant in terms of myocardial thickness in the intergroup evaluation, periodic thickness increase was observed on the 14th and 21st days in the PGB+MOR group, and a significant decrease was observed in the short axis ejection fraction measurements on the 14th and 21st days in the PGB+MOR group in the intragroup evaluation. In the PBG group, the long axis ef value on the 21st day was significantly decreased from the 14th day value. In the within-group evaluation of the MOR group, the short axis ef was decreased on the 21st day. In the biochemical aspect of the cardiac evaluation, an increase was observed in the LDH and ACTH levels on the 14th day in the PGB + MOR and PGB groups. The findings were supported by the data obtained from toxicological analyzes. The increase in LDH and ACTH values on the 14th day in the PGB and PGB +MOR groups, with our behavioral test findings and morphological cardiac findings, and the significant difference in the synchronous period are findings that support each other.
Results: PGB alone or in combination with MOR increased the total distance traveled in the open field test in both PGB and PGB + MOR rats compared to morphine alone rats, especially after the 14th day, increased the time spent in the middle area and shortened the time spent in the thigmoid area, suggesting that pregabalin decreased anxiety and produced a euphoric effect. In the elevated plus maze test, PBG and PGB + MOR groups showed anxiety-like behaviors especially after the 14th day. While the changes in behavioral tests were not directly reflected in biochemical analyses, a significant difference was found in ACTH levels between the 14th and 21st day in the PGB + MOR group. The fact that the ACTH level changed and increased on the 14th day in the PGB + MOR group, which is the time point at which we obtained statistically significant results, can be overlapped with behavioral changes at some point. In cardiac examinations, morphologically, there was an increase in myocardial thickness on the 14th day in the morphine group, although it was not significant in the intergroup evaluation. In intragroup evaluation, a significant decrease was observed in short axis ejection fraction measurements on the 14th and 21st days in the PGB+MOR group. In the groups given pregabalin, the long axis ef value on the 21st day was significantly lower than the 14th day value. In the biochemical part of the cardiac evaluation, an increase in LDH and ACTH levels was observed in PGB + MOR and PGB groups on day 14th The findings were supported by the data obtained from toxicological analysis. The increase in LDH and ACTH levels in PGB and PGB + MOR groups on the 14th day is consistent with our behavioral test findings and morphological cardiac findings.
Conclusion: In conclusion, in an experimental animal study in which PGB (10 mg/kg PGB) and MOR (1 mg/kg) were used together, behavioral and cardiac changes were shown for the first time in the light of toxicological analysis data supported by USG and biochemical analysis.
Keywords: Pregabalin; Morphine; Cardiac effect; Behavioral effect; Rat