İmmünosüpresan madde içeren oküler katı lipit nanopartikül formülasyonlarının geliştirilmesi in vitro, ex vivo, in vivo değerlendirilmesi
Development of formulation and in vitro, ex vivo, in vivo evaluation of ocular solid lipid nanoparticles containing immunosuppressant agent
Yazar: EVREN HOMAN GÖKÇE
Danışman: PROF. DR. TAMER GÜNERİ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Göz hastalıkları = Eye diseases ; Nanopartiküller = Nanoparticles ; İlaç hedefleme = Drug targeting ; İmmünosupresif ajanlar = Immunosuppressive agents

Özet:
Bu çalışmada, suda çözünürlüğü düşük bir immünosupresan olan, Siklosporin A'nın oküler olarak topik uygulanmasına imkan verecek, katı lipit nanopartiküllerin hazırlanması düşünülmüştür.Compritol 888 ATO, Poloksamer 188 ve Tween 80 yardımcı madde olarak kullanılmıştır. Tween 80'in Siklosporin A'nın sudaki çözünürlüğünü arttırdığı bulunmuştur.Formülasyonlar, yüksek devirli homojenizasyon ve ultrason yöntemi ile hazırlanmıştır. Formülasyon içeriği ile karıştırma süresi, seyreltme suyu sıcaklığı, ultrasonikasyon süresi ve toplam formülasyon hacmi gibi üretim parametreleri denenmiştir. En uygun lipit: yüzey etkin madde: yardımcı yüzey etkin madde oranı; 4:2:1 olarak belirlenmiştir.Formülasyonlar 110ºC ve 121 derecede sterilize edilmiştir. 110 derecede sterilizasyon partikül boyutunu daha az etkilemiştir. Formülasyonlar glukoz, mannoz, sorbitol ve trehaloz ile liyofilize edilmiştir. Trehaloz hariç, diğer tüm maddelerle tekrar homojen bir dağılım elde edilememiştir.Yapılan in vitro salım ve difüzyon çalışmalarında lipaz-kolipaz enzim bileşimi olmadan herhangi bir salıma rastlanmamıştır.Konfokal lazer taramalı mikroskop ile katı lipit nanopartiküllerin kornea dokusunda, yaygın bir şekilde bulunduğu görülmüştür. Bu görüntüleme çalışmaları için formülasyonlara Siklosporin A yerine Rodamin B yüklenmiştir.Hücre kültürü ile yapılan toksisite çalışmalarında, 121 derecede sterilize edilen formülasyonun toksik olduğu belirlenmiştir.Kornea epitel dokusu, hücre kültürü ile oluşturulmuş ve Rodamin B'nin difüze olduğu görülmüştür.Katı lipit nanopartiküller, albino tavşanların gözlerine uygulanmış ve irritasyon olmadan, aköz hümörde gerekli terapötik konsantrasyonda etkin madde saptanmıştır.Sonuç olarak, iç oküler yüzeylere topik uygulama ile ulaşmak için tasarlanan Siklosporin A'nın katı lipit nanopartikülleriyle istenen amaca ulaşılmış ve biyoyararlanımın sağlanabildiği ve salımın enzim kontrollü olduğu belirlenmiştir.

Abstract:
In this study, it was planned to prepare the solid lipid nanoparticles of Cyclosporine A, an immunosuppresant peptide with low solubility in water, which would allow the topical ocular use.Compritol 888 ATO, Poloxamer 188 and Tween 80 were used as excipients. It was found that Tween 80 has increased the solubility in water.Formulations were prepared with high shear homogenization and ultrasound technique. The parameters such as the formulation content, temperature of dilution water, ultrasonication time and total fomulation volume were tested. Optimum lipid:surfactant:co-surfactant ratio was determined as 4:2:1.Formulation was sterilized at 110 and 121 degrees centigrade. The sterilization at 110 degrees centigrade was found less effective on the particle size growth. Formulations were lyophilized with glucose, mannoz, sorbitol and trehalose. All substances, except trehalose has failed to obtain a homogenious dispersion.In vitro studies showed that lipase-colipase enzyme complex was essential for the release.Solid lipid nanoparticles were also detected in corneal tissue by confocal microscopy. Rhodamine B was used instead of Cyclosporine A for imaging studies.In cell culture studies, it was seen that the formulation which was sterilized at 121 degrees centigrade was found toxic.Rhodamine B was difused through cultured corneal epithelial cells.Solid lipid nanoparticles were administered topically to the eyes of rabbits. Amount of active substance detected in aqueous humor was sufficient enough to produce a therapeutic effect without causing any irritation.As a result, it was concluded that Cyclosporine A loaded solid lipid nanoparticles designed to reach the internal ocular tissues, was bioavailable and the drug release was enzyme controlled.