Helicobacter pylori ve candida albicans'ın gastrit etyopatogenezindeki rolü ve antimikrobiyal olmayan tedavi yaklaşımları
The Role of helicobacter pylori and candida albicans in the etio-pathogenesis of gastritis and non-antibiotic treatment approaches
Yazar: SERDAR ALTINEL
Danışman: PROF. DR. HALUK ATAOĞLU
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2001
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Helicobacter pylori ve Candida albicans* m Gastrit Etyopatogenezindeki Rolü ve Antimikrobiyal Olmayan Tedavi Yaklaşımları Bu çalışmanın amacı: i) C. albicans ve H.pylorfmn gastrit etyopatogenezindeki rolünü deneysel fare gastrit modelinde incelemek; ii) bu iki organizma arasındaki etkileşimi in vivo olarak incelemek; iii) son olarak, antioksidan astaxanthin ve H+- pompa inhibitörü omeprazol'ün mukozal inflamasyon ve bakteriyel/fungal yüke olan etkilerini incelemektir. İnbred C57BL/6 fareleri, daha önceden en az 2 ay süre ile gastrointestinal cadidiasis ve Helicobacter infeksiyonu geliştirdiği gösterilmiş C. albicans CCUG 34446 ve/veya H.pylori CCUG 17874 ve H.pylori 119/95 klinik izolatı ile oral yoldan inoküle ve ko-inoküle edildi. İki haftalık inkübasyon dönemim takiben farelere 1 hafta süreyle antioksidan astaxanthin veya H+-pompa inhibitörü omeprazol verildi veya tedavi edilmeden uygulama sonrası 4. haftaya kadar izlendi. İnkübasyonu takiben her zaman aralığında (0, 1. hafta, 2 ve 4. hafta) 3-5 infekte fakat tedavi edilmemiş fare öldürüldü. Tedavi gruplarındaki farelerin yansı hemen tedavi bitiminde diğer yansı da 1 hafta sonra öldürüldü. Serum antikor yanıtlan immunoblot (IB) ile incelendi. Mide açılarak steril tuzlu içinde homojenize edildikten sonra H.pylori için GAB-camp agar plağına ekildi ve diğer parça ve dışkı homojenatı Sabouraud-Dextrose agar plağına ekildi. Alt özefagus (1/3) uzunlamasına iki parçaya aynldı ve yukanda tarif edildiği gibi Candida için kültüre edildi. Dokulann geri kalanlan % 4 formalin içerisinde histopatoloji için ve - 20°C'da dondurularak saklandı. H.pylori izolatları randomize amplifiye adilmiş polimorfik DNA-PZR (RAPD-PZR) ile tiplendirildi. Candida ile beslenmiş grupta böbrek, karaciğer, dalak ve kalp alınarak kültüre edildi. Bütün doku örnekleri Warthin-Starry ve/veya light-green PAS ile boyandı. İnflamasyon kör olarak bir patoloji uzmanı tarafından skorlandı (0-3). Mann-Whitney U test ve Kruskal-Wallis testleri inflamasyon ve bakteriyel yük dağılımım karşılaştırmada kullanıldı. Anlamlılık düzeyi p< 0.05 seçildi. Bütün kültürü pozitif farelerin midesinde RAPD-PZR ile H.pylori 1 19/95 klinik zolatı saptandı. C.albicans bütün farelerin gastrointestinal (Gİ) yoluna 65başarıyla kolonize oldu. Candida ile beslenen grupta mide ve barsaktaki fungal yük uygulamadan 2 hafta sonra azalırken, H.pylori inoküle grupta midedeki bakteriyel yük uygulamadan 2 hafta sonra yükseldi. Fakat ko-infeksiyon gruplarındaki inflamasyon skorları Helicobacter grup skorlarından daha yüksek bulundu (/?< 0.05). Bununla birlikte C. albicans doku invazyonu göstermedi. Ko-infeksiyon grubunda, astaxanthin ile tedaviyi takiben inflamasyon skoru omeprazol tedavi grubuna oranla düşük bulundu (p< 0.05). Bir haftalık omeprazol tedavisini takiben dışkıdaki fungal yük kontrol hayvanlarına oranla azaldı (p< 0.05). Fakat Candida tedavi gruplarındaki inflamasyon skorları kontrol hayvanlarından anlamlı derecede farklı değildi. Bir haftalık omeprazol tedavisinden sonra midenin H.pylori tarafından kolonizasyonu kontrol hayvanlarına kıyasla 14 kat fazlaydı (p< 0.05). Bu gruptaki inflamasyon skoru da yüksekti (p< 0.05). H.pylori infekte gruptaki astaxanthin tedavisi inflamasyon skoru üzerine belirgin bir etki göstermedi. H.pylori ve C.albicans'a karşı özgün bir antikor yanıtı oluştuğu IB ile saptandı ve uygulamadan iki hafta sonra antikor yanıtı arttı. Bu çalışmada, C.albicans'm H.pylori infeksiyonunun ilerleyişine katkıda bulunabileceğini gösterdik. Omeprazol tedavisi antibiyotik ile kombine edilmeden H.pylori tedavisinde kullanılmamalıdır. Antioksidan astaxanthin' nin etkilerim anlamak için daha ileri çalışmalara gerek vardır. C.albicans ve H.pylori'nin gastritteki etkileşimini açıkça ortaya koymak için yeni kronik ko-infeksiyon modellerinin geliştirilmesi gereklidir. Anahtar kelimeler: Helicobacter pylori, Candida albicans, hayvan modeli, gastrit, tedavi. 66

Abstract:
The Role of Helicobacter pylori and Candida albicans in the Etio-pathogenesis of Gastritis and Non-antibiotic treatment approaches The aims of this study to evaluate: i) the role of H.pylori and C. albicans in an experimental mouse model of gastritis; ii) the interaction between these two organisms in vivo; iii) the effects of anti-oxidant astaxanthin and H+ pump inhibitor omeprazol on inflammation and bacterial load of the stomach and esophagus. Inbred C57BL/6 mice were inoculated and co-inoculated with C.albicans CCUG 34446 and the mixture of H.pylori CCUG 17874 and a mouse-passaged strain of H.pylori 119/95 by the oral-intragastric route as adults have previously been shown to develop gastrointestinal cadidiasis and gastric Helicobacter infection for at least 2 months post-challenge without the use of compromising procedures. After two weeks of incubation period, animals were treated either an anti-oxidant astaxanthin or a H^pump inhibitor omeprazol for one week or not treated and followed up to four week post-challenge. Three to five infected but not-treated animals were sacrificed right after incubation and the following first, second and fourth week post-challenge. Half of the animals in each treatment group were sacrificed right after and one week after the treatment. Serum antibody responses were evaluated by immunoblot (IB). Stomach was opened and homogenized in sterile saline, then inoculated onto GAB-camp agar for H.pylori and, the other piece of stomach and a pellet of feces inoculated onto Sabouraud-Dextrose agar. One third of lower esophagus was cut into two pieces logitudely and one cultured for Candida as described above. The rest of tissues were stored in 4% formalin for histopathology and frozen at minus 20°C. H.pylori isolates were typed by RAPD-PZR. All tissue samples were stained with Warthin-Starry and/or light-green PAS. Inflammation and bacterial load of the each tissue taken was blindly scored (0-3) by the pathologist. The Mann-Whitney U test and Kruskal-Wallis were used to compare inflammation and bacterial load distributions. The level of significance selected was/?< 0.05. Clinical isolate of H.pylori 119/95 colonized stomach in all culture positive animals determined by RAPD-PZR. C.albicans managed to colonize GI tract in all animals. While in Candida-fed group, fungal load in stomach and intestine decreased 67after two weeks post-challange, in H.pylori inoculated group, bacterial load in stomach increased after two weeks post-challange. Inflammation scores in co- infection groups were found significantly higher than Helicobacter group scores (p< 0.05). Although C.albicans showed no evidence of tissue invasion. One week after treatment with astaxanthin in co-infection group, inflammation score was lower than omeprazol treatment group {p< 0.05). Colony forming units (CFUs) of C.albicans in stool cultures were lower than control animals after one week omeprazol treatment (p< 0.05). But inflammation scores in Candida treatment groups was not significantly different than control animals. Colonization of stomach by H.pylori after one week omeprazol treatment was 14 fold higher than control animals (p< 0.05). Inflammation score in this group was also higher after omeprazol treatment (p< 0.05). Astaxanthin treatment in H.pylori infected group did not show significant effect on inflammation scores. A specific immun response to H.pylori and C.albicans, analysed by immunoblot, was detected after two weeks of post-challenge and the antibody levels increased in the number and intensity of stained proteins in time. In the present study, we have shown that C.albicans may contribute to the progress of H.pylori infection. Omeprazol treatment should not be given without combination with antibiotics in H.pylori infections. Further studies are needed to understand effects of anti-oxidant astaxanthin. Developing new chronic co-infection models is necessary to demonstrate clearly interaction between C.albicans and H.pylori in gastritis. Key Words: Helicobacter pylori, Candida albicans, animal model, gastritis, treatment. 68