Sıçanlarda prenatal dönemde uygulanan imatinibin testis gelişimi üzerine etkisi
The effect of imatinib administered in the prenatal period on testis development in rats
Yazar: ZEHRA TOPAL SUZAN
Danışman: PROF. DR. LEVENT TÜMKAYA
Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: RNA = RNA ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; Testosteron = Testosterone ; İmatinib mesilat = Imatinib mesilat

Özet:
Sıçanlarda prenatal dönemde imatinibe maruziyetin testis gelişimi üzerindeki etkilerinin incelenmesi amaçlandı. Çalışmamızda kullanılan 15 adet Sprague Dawley cinsi gebe sıçanlar 5 gruba ayrıldı; kontrol grubu, prenatal 1-8. Günlerde imatinib uygulanan İmatinib-20 (20 mg/kg), İmatinib-40 (40 mg/kg), İmatinib-60 (60 mg/kg) ve İmatinib-80 (80 mg/kg) grupları olarak belirlendi. Tüm çalışma gruplarına doğum öncesi 1-8. günlerde intraperitoneal imatinib verildiğinde gebelik devam etmesine rağmen, İmatinib-80 grubunda gebeliğin devam etmediği görüldü. Postnatal 60. günde yavru erkek sıçanlar sakrifiye edildi. Histopatolojik ve immünohistokimyasal analizler için testis dokusu alınarak tespit solüsyonlarında takip edildi, ince kesitler alınarak boyamalar yapıldı ve uygun alanlar fotoğraflanarak değerlendirildi. Epididimal sıvıda sperm sayımı yapıldı. Biyokimyasal analizlerde kullanılan serum ve testis örnekleri uygun koşullarda muhafaza edildi ve moleküler analizlerde doku örneklerinden mRNA izole edildi. Tüm istatistiksel veriler değerlendirildi. İmmünohistokimyasal analizler TUNEL, anti-8-OHdG, anti-c-kit ve anti-PDGF boyaması pozitiflik skorlaması açısından gruplar arasında fark olmadığını gösterdi. İmatinib-20 grubunda kontrol grubuna göre toplam sperm sayısında anlamlı azalma tespit edilirken (p= 0,001), İmatinib-60 grubunda sperm sayısı İmatinib-20 grubuna göre daha yüksekti (p= 0,01). TBARS seviyesinin ölçümlerinde ilaç İmatinib-20 grubunda testis (p= 0.014) ve serumda (p= 0.003) oksidatif stresi artırırken, İmatinib-60 grubunda dokuda azalmaya neden oldu (p= 0.027). Tiyol ölçümleri İmatinib-60 grubunda testis (p= 0,080) ve serumda (p= 0.000) azalma olduğunu gösterirken, İmatinib-40 grubunda serum ölçümlerinde artış gözlendi (p= 0.005). Testosteron seviyesi ölçümlerinde kontrol grubuna kıyasla İmatinib-20 grubu (p= 0,039) ve İmatinib-60 gruplarında (p= 0,007) anlamlı bir artış görülürken, İmatinib-40 grubundaki azalma anlamlı değildi. Moleküler düzeydeki analizler, testis dokusunda protamin ve histon ekspresyon düzeyleri açısından gruplar arasında istatistiksel olarak fark olmadığını ortaya koydu. Sonuç olarak, imatinibe prenatal dönemde maruziyetin testis dokusunda histopatolojik ve biyokimyasal değişikliklere yol açabileceğini, ancak spermiogenez sırasında germ hücrelerinin nükleer olgunlaşmasında olumsuz bir etki olmadığını göstermiştir.

Anahtar Kelimeler: İmatinib, C-kit, PDGF, testis, TUNEL, sıçan

Abstract:
It was aimed to investigate the effects of imatinib exposure on testicular development during prenatal period in rats. Fifteen pregnant Sprague Dawley rats used in our study were divided into 5 groups; control group, prenatal 1-8. Imatinib-20 (20 mg/kg), Imatinib-40 (40 mg/kg), Imatinib-60 (60 mg/kg) and Imatinib-80 (80 mg/kg) groups were defined as imatinib on days. Prenatal 1-8. Although pregnancy continued when imatinib was given intraperitoneally on days, it was observed that the pregnancy did not continue in the imatinib-80 group. On the postnatal 60th day, young male rats were sacrificed. For histopathological and immunohistochemical analysis, testicular tissue was taken and followed in fixation solutions, staining was done by taking thin sections, and appropriate areas were photographed and evaluated. Sperm count was made in epididymal fluid. Serum and testis samples used in biochemical analysis were kept under suitable conditions and mRNA was isolated from tissue samples in molecular analyzes. All statistical data were evaluated. Immunohistochemical analysis, TUNEL, c-kit and PDGF staining revealed no difference between the groups in terms of positivity scoring. A significant decrease was detected in total sperm counts in the Imatinib-20 group compared to the control group (p= 0,001), but the sperm count was higher in the Imatinib-60 group than in the Imatinib-20 group (p= 0,01). In the measurement of TBARS level, the drug in the Imatinib-20 group increased oxidative stress in the testis (p = 0.014) and serum (p = 0.003), while in the Imatinib-60 group it caused a decrease in tissue (p = 0.027). Thiol measurements revealed a decrease in the testis (p= 0,080) and serum (p= 0.000) in the Imatinib-60 group, while an increase in serum measurements was observed in the Imatinib-40 group (p= 0.005). Testosterone level measurements were significantly increased in Imatinib-20 group (p = 0.039) and Imatinib-60 groups (p = 0.007) compared to the control group, while the decrease in Imatinib-40 group was not significant. Molecular-level analyzes revealed that there was no statistically significant difference between the groups in terms of protamine and histone expression levels in testicular tissue. In conclusion, it has been shown that exposure to imatinib during prenatal period may cause histopathological and biochemical changes in testicular tissue, but there is no negative effect on nuclear maturation of germ cells during spermiogenesis.

Keywords: Imatinib, C-kit, PDGF, testis, TUNEL, rat