Acinetobacter baumannii complex klinik izolatlarında karbapenem direncinin moleküler mekanizmalarının araştırılması
Investigation of molecular mechanisms of carbapenem resistance in acinetobacter baumannii complex from clinical isolates
Yazar: GÜLŞEN ULUÇAM
Danışman: YRD. DOÇ. DR. GÜLÇİN BAYRAMOĞLU
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Acinetobacter baumannii = Acinetobacter baumannii ; Antibiyotikler = Antibiotics ; Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Karbapenemler = Carbapenems ; Moleküler biyoloji = Molecular biology

Özet:
Karbapenemler, çoğul dirençli A. baumannii complex (ABC) izolatlarının neden olduğu ciddi enfeksiyonlarda genellikle son çare antimikrobiyal ajanlardır. Fakat karbapenemleri hidrolize eden beta laktamazlar, karbapenem kullanımına paralel olarak artan oranlarda bildirilmektedir. Metallo beta laktamazlar (MBL) ve karbapenemleri hidrolize eden oksasilinaz türleri (OXA), karbapenemlere dirence neden olan beta laktamazlardır ve aynı zamanda horizontal yayılım açısından önem arz etmektedir.MBL ve OXA karbapenemaz grubu enzimleri üreten ABC ile enfekte hastaların tedavilerinde uygun antibiyotiklerin seçilebilmesi ve direncin bakteriler arasında mobil elemanlarla (plazmid ve transpozon gibi) yayılımının önlenmesi için bu enzimlerin varlığının belirlenmesi son derece önemlidir.Bu çalışmanın amacı, karbapenem dirençli izolatlarda MBL ve OXA enzimlerinin fenotipik ve moleküler yöntemlerle araştırılmasıdır. Bu amaçla; Ocak 2007-Aralık 2009 tarihleri arasında 74 hastanın kan örneğinden izole edilen imipenem ya da meropeneme orta duyarlı ve dirençli ABC izolatları çalışmaya dahil edilmiştir. Fenotipik testlerden kombine disk testi ve modifiye Hodge testi (MHT) uygulanmıştır. Fenotipik test sonuçları PCR ve DNA dizi analizi yöntemleriyle karşılaştırılmıştır.ABC izolatlarının kombine disk testi ile 4' ünün (%5.4), MHT ile sadece birinin (%1.35) MBL ürettiği saptanmıştır. PCR yöntemi ile blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM ve blaSPM genleri araştırılmış ancak izolatların hiçbirinde bu genler tesbit edilmemiştir.Oksasilinaz genlerinden PCR ile; 26 izolatta blaOXA-23 geni, 32 izolatta blaOXA-58 geni ve tüm izolatlarda blaOXA-51 geni bulunmuştur. İzolatların hiçbirinde blaOXA-24 geni saptanmamıştır. Üç izolatta blaOXA-23, blaOXA-58 ve blaOXA-51 genlerinin birlikte bulunduğu tespit edilmiştir. Bu izolatların bir tanesinde blaOXA-23 blaOXA-58 ve blaOXA-51 genlerinin varlığı DNA dizi analizi yöntemiyle doğrulanmıştır.Çalışmamızın sonuçları hastanemizde dirençli suşların yayılımının önlenmesi ve uygun ampirik tedavinin belirlenmesinde yardımcı olacaktır.

Abstract:
Carbapenems are usually last resort antimicrobial agents used in serious infections caused by multi-resistant A. baumannii complex (ABC) strains. However, beta lactamases, which hydrolyze carbapenems, have been increasingly reported in parallel with the use of carbapenem. Metallo beta lactamase (MBL) and oxacillinase types (OXA), are beta lactamases, which hydrolyze carbapenems, therefore, cause resistance to carbapenems and also important in terms of horizontal propagation.To determine the presence of these enzymes in the treatment of patients infected with ABC that produce MBL and OXA group of carbapenemase enzymes is extremely important for the prevention of the spread of the resistance between bacteria by mobile elements (such as plasmid and transposon) and selection of appropriate antibiotics.The purpose of this study is to investigate MBL and OXA enzymes in carbapenem resistant isolates using phenotypic and molecular methods. For this purpose, 74 imipenem or meropenem resistant and moderately susceptible ABC strains isolated from blood samples of patients admitted to hospital between January 2007 and December 2009 were included. Of the phenotypic tests, combined disk test and the modified Hodge test (MHT) were applied. Phenotypic test results were compared with PCR and DNA sequencing methods.Four ABC isolates (5.4%) with combined disc test and only one isolate (1.35%) with MHT identified producing MBL. Using PCR method blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM and blaSPM genes are searched, but none of them were found in the isolates.Of the oxacillinase genes, blaOXA-23 gene in 26 isolates, blaOXA-58 gene in 32 isolates, and blaOXA-51 gene in all isolates were determined by PCR. blaOXA-24 gene was not found in none of the isolates. In three of the isolates blaOXA-23, blaOXA-58 and blaOXA-51 genes were found together. In one of these isolates, the presence of blaOXA-23, blaOXA-51 and blaOXA-58 was confirmed by using DNA sequencing method.The results of this study will help to prevent the spread of resistant strains in our hospital and to determine the appropriate empiric therapy.