İmmobilize zeytin βeta-glukozidazının oleuropein hidrolizinde kullanılması
The using immobilized olive beta-glucosidase in the hydrolization of oleuropein
Yazar: MİHRAP YAŞAR KAYA
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ELİF SAVAŞ ; PROF. DR. FERAY KÖÇKAR
Balıkesir Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmada, Zeytin (Olea europea L.) meyvesinden, Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi ile %16,80 verim ile 20,91 kat saflaştırılmış olan β-glukozidaz enziminin süperparamanyetik Fe+2/Fe+3 (demir oksit ) nanoparçacıklara kovalent bağlanma reaksiyonuyla immobilizasyonu gerçekleştirilmiş ve enzim sofralık zeytin üretiminde acılık giderme işlemi amacıyla kullanılmıştır. Zeytin β-glukozidaz enziminin Para-nitrophenyl--d-glukopiranozidaz substratına karşı serbest enzim optimum sıcaklığı 55 oC, immobilize enzimin 37 o C olarak belirlenirken, optimum pH'ları, serbest ve immobilize zeytin β–glukozidazı için 5,5 olarak belirlenmiştir. Zeytin β-glukozidaz enziminin saf ve immobilize formlarının pNPG substratına karşı KM ve Vmax değerleri Linewear-Burk grafiği ile saf enzim için 0,8 mM ve 192 EU/ml olarak immobilize enzim için 1,26 mM ve 333,3 EÜ/ml olarak belirlenmiştir.      β-glukozidaz süperparamanyetik nanoparçacıklara immobilizasyonunda en yüksek aktivite 22,9 µg enzim/25 mg Fe +2 süperparamanyetik nanoparçacık ile elde edilmiştir. Zeytin meyvesinden saflaştırılarak süperparamanyetik nanoparçacıklara immobilize edilen β-glukozidaz enziminin sofralık zeytin üretiminin en önemli basamağı olan acılık giderme aşamasında kullanımıyla ilgili olarak ham ve enzim uygulanmış zeytin örneklerinde oleuropein analizleri HPLC ile gerçekleştirilmiştir. 6 ve 12 saatlik denemelerde immobilize enzimin oleuropeinin başlangıçtaki miktarına göre % 43,56 , 20 saat sonunda %100 oranında düşüşe neden olduğu belirlenmiştir. Denemeler göstermiştir ki, 6 kullanım sonunda aktivitesini koruyan immobilize enzim oleuropein hidrolizinde %65 düzeyinde etkili olmuştur.

Abstract:
This study, β-glucosidase which was purified with hydrophobic interactions chromatography from Olea europea L. of fruit, immobilized with covalent binding reaction to superparamagnetic Fe+2/Fe+3 nanoparticles. In the production of eating olives, β- glucosidase used for debittering process. The optimum temperature of free and immobilized β- glucosidase was determined 55 oC and 37 oC againist pNPG substrate, respectively. The optimum pH for free and immobilized β-glucosidase was determined as 5.5. The KM and Vmax values of free and immobilized β-glucosidase were determined 0,8 mM (192 EU/ml) and 1,26 mM (333,3 EÜ/ml)  by the method of Lineweaver-Burk plots. The highest activity was obtained by 22,9 µg enzyme/25 mg Fe +2 in immobilisation with superparamagnetic nanoparticles. Oleuropein analysis which were related with using β-glucosidase for debittering process, were performed by HPLC in crude and enzyme-treated olive samples. At 6 and 12 hour trials immobilized enzymes caused a decrease of 43.56 % compared to the initial amount of oleuropein, caused a decrease of 100% after 20 hours. Trials have shown that the immobilized enzyme which protects own activity at the end of 6 experiments, is effective 65%  in the hydrolysis of oleuropein.