Torsiyon-detorsiyon oluşturulan sıçan testis dokusunda apoptozis ve trpm2 katyon kanallarının ekspresyonu üzerine n-asetilsistein'in etkileri
Effects of acetylcysteine on apoptosis and trpm2 cation channels expression in torsion-detorsion created rat testis tissue
Yazar: ESRA AYDEMİR
Danışman: PROF. DR. İBRAHİM ENVER OZAN
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Asetilsistein = Acetylcysteine ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Katyonlar = Cations ; N-asetilsistein = N-acetylcysteine ; Spermatik kord torsiyonu = Spermatic cord torsion ; Sıçanlar = Rats ; Testiküler hastalıklar = Testicular diseases ; Testis = Testis ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Testis torsiyonu, nadir görülen fakat tedavi edilemediği zaman fertilite açısından geriye dönüşümü olmayan hasarlara yol açan acil müdahale gerektiren ürolojik bir patolojidir.
Bu çalışmada testis torsiyonu detorsiyonu sonrası iskemik hasarı önlemede antioksidan bir madde olan N-Asetilsistein 'in etkinliği araştırıldı.
Çalışmada 35 adet Spraque –Dawley cinsi 8-10 haftalık erkek sıçan kullanılıp, her birinde 7 sıçan bulunan 5 gruba ayrıldı.
Grup I: Kontrol grubu (n:7); Bu grupta bulunan erkek sıçanlara deney boyunca herhangi bir işlem uygulanmadı.
Grup II: Sham grubu (n:7); Cerrahi olarak batın açılarak sol testis dışarı alınıp herhangi bir işlem yapılmadan 60 dakika bekletildikten sonra tekrar batın içerisine alınıp normal konumuna yerleştirilip kapatıldı.
Grup III: NAS grubu (n:7); Bu grupta bulunan erkek sıçanlara tek doz 100 mg/kg NAS intraperitonal (i.p.) olarak uygulandı.
Grup IV: Torsiyon–detorsiyon grubu (n:7); Cerrahi olarak batın açılarak sol testis dışarı alınıp saat yönü tersine 720 0 döndürülüp torsiyon oluşturuldu. 60 dakikalık torsiyon süresi sonunda detorsiyon yapılan testis tekrar batın içerisine alınıp normal konumuna yerleştirilip kapatıldı.
Grup V: Torsiyon–detorsiyon + NAS grubu (n:7); Cerrahi olarak batın açılarak sol testis dışarı alınıp saat yönü tersine 720 0 döndürülüp torsiyon oluşturuldu. 60 dakikalık torsiyon süresi sonunda tek doz 100 mg/kg NAS intraperitonal (i.p.) olarak uygulanıp, detorsiyon yapılan testis tekrar batın içerisine alınarak normal konumuna yerleştirilip kapatıldı.
48 saat sonra tüm gruplardaki sıçanlar anestezi altında dekapite edilerek cerrahi işlem sonlandırıldı.
Testis dokuları alınarak rutin histolojik takip serilerinden geçirildi. Elde edilen preparatlar H&E, PAS ve Masson'un üçlü boyası ile boyandı. Ayrıca TRPM2 immünohistokimyasal boyama ve apoptozis için TUNEL metodu uygulandı. Kan örnekleri alınarak biyokimyasal analiz yapıldı.
Işık mikroskobu altında yapılan histolojik değerlendirmelerde kontrol grubu ile karşılaştırıldığında torsiyon-detorsiyon yapılan gruba ait kesitlerde ; seminifer tübül germinal epitelinde  dejenerasyon, seminifer tübülün bazal membranlarında ayrılmalar, atrofik tübüller, interstisyel alanda ödem ve bazı tübüllerin lümenlerine dökülmüş immatür hücreler tespit edildi.
Torsiyon–detorsiyon + NAS uygulanan grupta ise; testis dokusunda germinal epitel dejenerasyonunda, vasküler konjesyonda, interstisyel ödemde belirgin iyileşme ve seminifer tübül bazal membranlarındaki ayrılmalarda azalma gözlendi.
Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında torsiyon-detorsiyon grubunda TUNEL pozitif hücrelerde anlamlı bir artış gözlendi.
Torsiyon–detorsiyon + NAS grubunda ise, TUNEL pozitif hücre sayısının kontrol grubu ile benzer olduğu belirlendi.
Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında torsiyon-detorsiyon grubunda TRPM2 immünreaktivitesi açısından anlamlı bir artış tespit edildi. Torsiyon–detorsiyon + NAS grubunda ise TRPM2 immünreaktivitesinde azalma tespit edildi.
Kontrol grubuna göre; torsiyon ve detorsiyon  grubunda TOS değerlerinin istatistiksel olarak anlamlı düzeyde arttığı, TAS değerlerinin ise azaldığı; NAS uygulamasının ise  TAS ve TOS değerlerini kontrole yakın bir düzeye getirdiği tespit edildi.
Sonuç olarak yapılan bu deneysel çalışma sonucunda torsiyon-detorsiyona maruz kalmanın erkek üreme sistemini etkileyerek hasar verdiği tespit edildi.
Torsiyon-detorsiyona karşı koruyucu amaçla kullanılan NAS'in; antioksidan özelliği sayesinde, torsiyon-detorsiyonun oluşturduğu olumsuz etkilerinin belirgin biçimde azaldığı belirlendi.
Anahtar Kelimeler: Torsiyon, N-Asetilsistein,  Sıçan, Testis,Tunel,       İmmünohistokimyasal

Abstract:
EFFECTS OF ACETYLCYSTEİNE ON APOPTOSİS AND TRPM2 CATİON CHANNELS EXPRESSİON İN TORSİON-DETORSİON CREATED RAT TESTİS TİSSUE
Testis tortion is a rarely seen urgent urologic pathology, which gives rise to serious irremediable fertility problems if it is not treated on time.
In this work, the investigations made on the effect of a well-known antioxidant N-Acetylcysteine (NAC) compound on prevention of the ischemic destructions, which arises from testis tortion-detortion steps.
İn the study,35 (Spraque-Dawley) male rats were preparation chosen with the same species and ages (8-10 weeks old). Then all the rats divided into 5 groups with the same number.
Group I: Control group (n:7); in the experiments, not any process was performed on those 7 male rats in order to make comparison with the other groups.
Group II: Sham group (n:7); the abdomen was surgically cut, and the left sides of the testis were taken out and then keep them waiting for 60 min. without performing anymore process. After that, the left sides of the testis were replaced into the abdomen and keep them initial positions.
Group III: NAC group (n:7); single dose (100 mg/kg) of NAC was applied as intraperitoneal (i.p.) to the 7 male rats.
Group IV: Tortion-detortion group (n:7); the abdomen was surgically cut, and the left sides of the testis were taken out, then the tortion was performed by rotating it 7200 towards the counter clock wise. The tortion has completed in 60 min., after this time, detortion was performed and the left side of the testis was replaced to the abdomen and keep it initial position.
Group V: Tortion-Detortion + NAC group (n:7); the abdomen was surgically cut, and the left sides of the testis were taken out, then the tortion was performed by rotating it 7200 towards the counter clock wise. The tortion has completed in 60 min., after this time, single dose (100 mg/kg) of NAC was applied as intraperitoneal (i.p.) to the 7 male rats. After that detortion was performed and the left sides of the testis were replaced to the abdomen and keep them initial positions.
After 48 hours, the surgical work has completed and the rats in all the groups were killed (headless method) under the anaesthesia.
Routine histological tissue preparation methods.Tissue sections were stined by using HE,PAS and Massons frichnome techniques. Moreover, tissue sections were stained by using Audun Brotin Peroksidaze technique and TUNEL methods to determine TRPM2 immünereativity and apoptosis respectively. The results of Group II – V (tortion-detortion applied groups) were compared with the control group (Group I) by using an optic microscope. According to the comparison, the following results obtained in tortion-detortion groups,
•	degeneration was determined in seminiferous tubule germinal epithelium,
•	separation was monitored in seminiferous tubule basal membrane,
•	oedema was determined in atrophic tubules and interstitial area,
•	and also, it was observed that immature cells decanted in some lumens of tubules.
As to tortion-detortion + NAC applied group, an apparent recovery was observed in testis tissue, degenerated germinal epithelium, vascular congestion, and interstitial oedema. Also, a decrease was determined in the separation of seminiferous tubule basal membranes. When comparing the tortion-detortion group with the control group, a meaningful increase was determined in TUNEL positive cells.
As to tortion-detortion + NAC groups, it was determined that the number of  TUNEL positive cells was almost similar with the control group. In terms of TRPM2 immunoreactivity, the tortion-detortion group was compared with the control group and the results showed a meaningful increase. However, in trortion-detortion+NAC group, a decrease was observed in terms of TRPM2 immunoreactivity.
According to the control group, the value of TOC was statistically getting increase, but, the value of TAC was getting decrease. So it can be say that the application of NAC put the value of TAC and TOC in a close aproximate with the value of control group.
As a conclusion, it can be said that the application of tortion-detortion has an detrimental effect on the male reproductive system. NAC was chosen for the purpose of preserver against the tortion-detortion due to having antioxidant feature. The results supported our purpose with showing a significant decrease in unfavourable effects of tortion-detortion.
Key words: Tortion, N-Acetylcysteine, Rat, Testis, Tunel, İmmünohistokimyasal