Limon yetiştirme alanlarından insektisidalBacillus thuringiensis izolasyonları ve tanımlanması
Insecticidal Bacillus thuringgiensis isolations from lemon growing areas and identification
Yazar: HALİME BALCI
Danışman: DOÇ. DR. NECİBE CANAN USTA
Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibakteriyel ajanlar = Anti-bacterial agents ; Bitki patojeni bakteriler = Plant pathogenic bacteria ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Genler-bakteriyal = Genes-bacterial ; Gram pozitif bakteriler = Gram positive bacteria ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Mikrobiyolojik aktivite = Microbiological activity ; Mikrobiyolojik teknikler = Microbiological techniques ; Mikrobiyolojik özellikler = Microbiological properties ; İlaçlara direnç-bakteriyel = Drug resistance-bacterial

Özet:
Bu araştırmada, Mersin ili Erdemli ilçesine bağlı olan Kargıpınarı'nda  üç farklı mevkide (Çıkacak, Çarkçılı ve Elvanlı) bulunan limon bahçelerinden (çiçek, yaprak, sürgün, toprak, meyve) alınan örneklerden insektisit özellikte bakteri izole edildi. Çalışmada ilk olarak morfolojik ve biyokimyasal testlere göre  84  adet çubuksu ve sporlu bakteri izole edildi. 84 izolatın 19' unda (H1, H5, H7, H8, H18, H26, H27, H31, H33, H34, H35, H37, H39, H40, H42, H57, H65, H77 ve H80) kristal toksin cry genleri tespit edildi. Kristal toksin genine sahip, potansiyel biyoinsektisit Bacillus thuringiensis olanları saptamak için genetik analizler gerçekleştirildi. Bu amaçla, bu türlerde bulunan insektisit cry genlerin, (Cry1, Cry2, Cry3, Cry4),  ana domainlerine göre primerler kullanılarak, polimeraz zincir reaksiyonları ve agoroz jel elektroforetik analizleri gerçekleştirildi, ve sonuçta ilgili DNA band gözlemleri yapıldı. Bu analizlere göre 19 izolat içerisinde kristal toksin cry genlerin bulunduğu ve aralarından 6 sının 4 ayrı insektisit cry gen bulundurduğu belirlendi, (H42, H5, H7, H77, H53,H35). Tez çalışmasında elde edilen bu sonuçlara göre, elde edilen Bacillus thuringiensis bakteriyel izolatlarının, 4 insektisit geninin taşınması nedeniyle, biyolojik bakteriyel haşere kontrolünde kullanılma potansiyeli vardır ve yüksek olduğu söylenebilir. Elde edilen bakteriyel izolatlar, potansiyel biyolojik kontrol maddesi olarak önemli bir kaynak olabilecektir. Bu nedenle tez çalışması, özellikle bakteriyel haşere kontrolü için, sonraki in vitro ve in vivo biyoassaylar ve diğer ileri araştırmalar için önemli bir veri kaynağı niteliğindedir.

Abstract:
In this study, bacterial isolations were performed from the samples taken from the lemon orchards (flowers, leaves, shoots, soil, fruit) which are located in three different locations (Çıkacak, Çarkçılı and Elvanlı) of Kargıpınar which is connected to the district of Erdemli, Mersin. Firstly, in morphological and biochemical test, 84 rod and sporulated bacteria were dertermined. Crystalline toxin cry genes were detected in 19 of 84 isolates (H1, H5, H7, H8, H18, H26, H27, H31, H33, H34, H35, H37, H39, H40, H42, H57, H65, H77 and H80). Genetic analyzes were conducted to investigate putative bioinsecticide Bacillus thuringiensis bacterial cells with the crystal toxin gene(s). For this purpose, polymerase chain reactions and agorose gel electrophoretic analyzes were performed by using primers according to the main domains of the insecticide cry genes (Cry1, Cry2, Cry3, Cry4) found in these species, and consequently related DNA band observations were performed. Crystal toxin cry genes were observed in the genomes of 19 isolates, and within them, 6 B. thuringiensis isolates carrying the four cry genes were obtained. According to these results obtained in the thesis research, it can be said that the obtained Bacillus thuringiensis bacterial isolates, due to carrying 4 insecticide genes,  have high potential to be used in biological bacterial pest control. The results are important for other biological control studies like in vitro and in vivo bioassay researches and therefore, the bacterial isolates are an important source as a biological control agent, so for other subsequent investigations being conducted. The resulting bacterial isolates may be an important source as the putative biological control agents. Therefore,  it is an important data for, specifically bacterial pest control, researches such as the subsequent in vitro and in vivo bioassays and so for further investigations.