Sıçan grasilis kas fleplerinde iskemi reperfüzyon hasarının önlenmesinde sistemik apokinin uygulamasının etkinliğinin araştırılması
Study of the protective effects of apocynin on ischemia reperfusion injury in rat gracilis muscle flaps
Yazar: EMRAH ASLAN
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA RIZA ÖZBEK
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Apokinin = Apocynin ; Cerrahi flepler = Surgical flaps ; Cerrahi flepler = Surgical flaps ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Apokinin, asetovanilon olarakta bilinen, metoksillenmiş katekol yapısında bitkilerde doğal olarak bulunan bir maddedir. Oluşturduğu nikotinamit adenin dinükleotit fosfat oksidaz inhibisyonu sebebiyle antioksidan, antiinflamatuar ve antiapoptotik özellikleri mevcuttur. Bu çalışmada sıçan grasilis kasında oluşturulan iskemi-reperfüzyon modelinde apokinin'in iskemi-reperfüzyon hasarı üzerine olan etkileri araştırılmıştır.
Yöntem: Sıçanlar her bir grupta 9 hayvan olacak şekilde randomize olarak 3 gruba ayrıldı. Apokinin iskemiden 6 saat önce 5mg/kg ve 10mg/kg dozunda uygulandığı ikinci ve üçüncü gruplarda intraperitoneal yolla verildi. Kontrol grubuna ise benzer stres oluşturmak amacıyla aynı hacimde serum fizyolojik intraperitoneal yolla verildi. Sıçan bacak iç yüzünde planlamayı takiben grasilis kasına ulaşıldı ve müsküler arter pedikülü üzerinden ada flebi şeklinde eleve edildi. Takiben damar pedikülüne mikroklemp konularak 2 saatlik iskemi süresi beklendi. İskemiyi takip eden sürede ise 2 saat boyunca reperfüzyon sağlandı. Her grasilis kasından biyokimyasal ve histopatolojik değerlendirme açısından örnekleme yapıldı. Deney protokolünün sona ermesiyle sıçanlar yüksek doz anestezik madde verilerek sakrifiye edildi. Alınan örneklerde biyokimyasal olarak glutatyon peroksidaz, katalaz, süperoksit dismutaz, nirik oksit, nitrik oksit sentaz ve malondialdehit seviyeleri saptandı. Histolojik açıdan ise alınan örnekler ışık mikroskobu altında hematoksilen-eozin boyası kullanılarak ödem, inflamatuar hücre infiltrasyonu, çekirdek santralizasyonu, kas liflerinde ayrılma ve nekroz açısından incelendi. 
Bulgular: Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında apokinin verilen gruplarda glutatyon peroksidaz düzeyleri anlamlı oranda yüksek bulundu (p=0,009). Katalaz düzeyleri ise yine anlamlı olarak yüksek bulundu (p=0,023). Süperoksit dismutaz, nitrik oksit, nitrik oksit sentaz ve malondialdehit düzeyleri ise anlamlı olmayacak düzeyde artmış olarak saptandı (p>0,05). 
Sonuç:Apokinin'in iskelet kası dokusunda iskemi-reperfüzyon hasarı ve dolayısıyla flep yaşayabilirliği üzerine olumlu etkileri olmakla birlikte, doz aralığı ve çalışma protokolleri hakkında yapılacak daha geniş kapsamlı çalışmalar, apokinin hakkında daha fazla bilgiye ulaşmamıza yardımcı olacaktır.

Anahtar Sözcükler:  İskemi-reperfüzyon, nikotinamit adenin dinükleotit fosfat oksidaz, antioksidan, flep cerrahisi, apokinin

Abstract:
Aim: Apocynin, also known as acetovanillone, is a naturally occuring methoxy-substituted cathechol and founded in plants. Apocynin plays an antioxidant, antiinflammatory and antiapoptotic role in the organism due to its inhibitory effect on nicotinamide dinucleotide phosphate-oxidase. In this study, the effects of apocynin on ischemia-reperfusion injury evaluated in rat gracilis muscle flap.
Methods: Rats were divided into 3 groups with 9 rats in each one wihthin randomized pattern. 5 mg/kg and 10 mg/kg doze apocynin dissolved in saline and adminstrated intraperitoneally to each rat 6 hours before ischemia. In oreder to induce the similar stres on the rats of the control group, same amaount of saline given intraperitoneally again 6 hours before ischemia. After preoperative planning, gracilis muscle explored from the medial side of rat limbs and muscle flap elevated as an island flap based on muscular artery. Afterwards occlusion achieved in muscular artery with microclemp. 2 hours of ischemia period, followed by 2 hours of reperfusion. After then, tissue samples were taken for biochemical and histochemical analysis from each muscle sample. Glutathione peroxidase, catalase, superoxid dismutase, nitric oxide, nitric oxide synthase, malondialdehyde levels determined in tissue samples. Histologically biopsies were examined under light microscopy with hematoxylin-eosin stain and explored for the oedema, inflammatory cell infiltration, breakage between muscle fibers and necrosis.
Results: The statistical analysis of biochemichal levels showed that a significiant increase in glutatyon peroxidase levels (p=0,009). Also catalase levels were higher with a significiant increase (p=0,023). In apocynin induced groups there have been no statistical differences between control group on superoxide dismutase, nitric oxide, nitric oxide synthase and malondialdehyde levels.
Conclusion:Althoughapocynin had beneficial effects on ischemia-reperfusion injury and flap survival in skeletal muscle tissue, further studies based on dose range and metabolism of apocynin will help us to get more information about this substance.

Keywords: Ischemia-reperfusion, nicotinamide adenine dinucleotide phospate oksidaz, antioxidant, flap surgery, apocynin