Metotreksat uygulanan sıçanlarda aposinin'in testisler üzerindeki etkilerinin biyokimyasal ve histolojik olarak incelenmesi
Histological and biochemical examination of apocynin on testes of methotrexate-induced rats
Yazar: KÜBRA KAVRAM
Danışman: PROF. DR. MELDA YARDIMOĞLU YILMAZ
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apokinin = Apocynin ; Apoptozis = Apoptosis ; Glütatyon = Glutathione ; Histoloji = Histology ; Malondialdehit = Malondialdehyde ; Metotreksat = Methotrexate ; Miyeloperoksidaz = Myeloperoxidase ; Testis = Testis ; Testosteron = Testosterone

Özet:
Amaç: Kanser ya da birçok hastalığın tedavisinde yaygın olarak kullanılan Metotreksat'ın testis dokusu üzerinde oluşturduğu yan etkileri değerlendirmek ve bu etkilerin azaltılması ya da önlenmesine yönelik koruyucu bir faktör olarak antioksidan özellikte olan Aposinin uygulanmasının erkek fertilitesi üzerine etkilerini incelemektir.
Yöntem: Araştırma için 50 adet, 8 haftalık Wistar albino ırkı erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar her grupta 10 adet olacak şekilde 5 gruba ayrıldı. Kontrol grubuna 1.25 ml %0.9'luk NaCl verildi. DMSO grubuna ise Aposinin çözücüsü olduğu için hergün 0.2 ml DMSO verildi. Metotreksat alan gruplara deneyin 24.günü 20mg/kg tek doz Metotreksat; Aposinin alan gruplara da 20mg/kg ve 50mg/kg  Aposinin hergün verildi. Tüm enjeksiyonlar intraperitoneal olarak yapıldı. 28.gün sonunda tüm sıçanlar anestezi altında sakrifiye edildi. Alınan testisler ve kan örnekleri histolojik ve biyokimyasal olarak değerlendirildi.
Bulgular: Kontrol ve DMSO grubu sıçanların testis yapısı ve biyokimyasal parametreleri normal olarak izlendi. Metotreksat grubuna ait seminifer tübüllerde vakuolizasyona, lümene dökülen immatür germ hücrelerine ve bazal lamina ondülasyonuna; interstisyel alanda ise konjesyona rastlandı. Aynı zamanda apoptotik hücreler diğer gruplarla karşılaştırıldığında daha fazla görüldü. Biyokimyasal olarak doku ve kan örneklerine bakıldığında, MDA ve MPO seviyeleri yüksek, GSH ve testosteron seviyeleri ise düşüktü. Aposinin(20mg/kg)+Metotreksat ve Aposinin(50mg/kg)+Metotreksat gruplarının apoptotik indekslerinin Metotreksat grubuna göre önemli ölçüde azaldığı belirlendi. Tedavi gruplarının testis histolojileri ve biyokimyasında ise Metotreksat'ın oluşturduğu bozukluklarının önemli ölçüde azaldığı gözlendi.
Sonuç: Bulgularımız Metotreksat'ın testiste oksidatif stresle oluşturulan etkilerin testiste yapısal bozukluklar oluşturduğunu; Aposinin'in ise antioksidan etkisiyle Metotreksat'ın testiste oluşturduğu bu oksidatif hasarı düzelttiğini göstermektedir.

Anahtar Sözcükler: Testis, Metotreksat, Aposinin, Apoptoz, MDA, MPO, GSH, Testosteron

Abstract:
Objectives: Methotrexate, widely used drug in cancer or many diseases therapy, has many adverse effects on tissues. Apocynin, NADPH oxidase inhibitor, has many antioxidant properties. We aim to demonstrate the adverse effects of Methotrexate on testicular tissue and evaluate the protective effects of Apocynin on Methotrexate-induced testis injury and male fertility.
Method: A total of 50 male Wistar albino rats (eight weeks old) were divided into five groups: Control (n=10), DMSO (n=10), Methotrexate (n=10), Apocynin(20mg)+ Methotrexate (n=10), and Apocynin(50mg)+ Methotrexate (n=10) groups. Control group received 1.25 ml, %0.9NaCl. DMSO group received 0,2 ml DMSO(Apocynin solvent) everyday. The experimental groups Methotrexate, Apocynin(20mg/kg) and Apocynin(50mg/kg)  received 20 mg/kg Methotrexate as a single dose on day 24, while Apocynin (20mg/kg) and Apocynin (50mg/kg) received Apocynin everyday. All injections were performed intraperitoneally. At the end of day 28, all rats were sacrified under anesthesia. Testes were evaluated histologically and blood samples were analysed biochemically.
Results: Testicular tissue and biochemical parameters of rats were normal in control and DMSO groups. Methotrexate group displayed vacuolization in seminiferous tubules, immature germ cells in lumens, basal lamina ondulation and congestion in interstitial tissue.  Apoptotic cells were significantly higher in Methotrexate group compared with the other groups. Tissue and blood MDA and MPO levels were increased while the GSH and testosterone levels were decreased in Methotrexate group. Apoptotic index were significantly decreased in Apocynin(20 mg/kg) and Apocynin(50 mg/kg) groups compared with the Methotrexate group. Apocynin treatment groups decimated the methotrexate-induced testicular injury and biochemical abnormalities.
Conclusion: Our results suggest that Methotrexate induces structural defects on testis morphology via oxidative stress and Apocynin ameliorates these effects with its antioxidant properties.

Keywords:Testis, Methotrexate, Apocynin, Apoptosis, MDA, MPO, GSH, Testosterone