İdiyopatik erkek infertilitesinde DNA fragmantasyonu ile MHL1 ve MSH2 genlerinin promotor metilasyonu arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of relationship between promoter methylation of mlh1 and MSH2 with DNA fragmentation in idiopathic male infertility
Yazar: GÜLGEZ NESLİHAN TAŞKURT HEKİM
Danışman: PROF. DR. SEZGİN GÜNEŞ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: DNA = DNA ; Genler = Genes ; Histonlar = Histones ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Metilasyon = Methylation ; Sigara içme = Smoking ; Sperm = Spermatozoa ; Yaş faktörleri = Age factors

Özet:
Amaç: Tez çalışmasında idiyopatik infertil hastalarda MLH1 ve MSH2 genlerinin promotor metilasyonları, sperm DNA fragmantasyonu ve histonca zengin sperm yüzdesinin belirlenmesi ve elde edilen sonuçların semen parametreleri, yaş ve sigara kullanımı verileriyle birlikte analiz edilmesi amaçlanmıştır. 
Materyal ve Metot: Çalışmaya katılan 52 kontrol ve 75 infertil erkekten alınan örneklerde sperm DNA fragmantasyonu TUNEL, histonca zengin sperm yüzdesi anilin mavisi boyama yöntemi, MLH1 ve MSH2'nin promotor metilasyon (sırasıyla n=39 ve 40) yüzdeleri MethyLight yöntemi ile analiz edilmiştir. 
Bulgular: Çalışmada MLH1 ve MSH2 promotor metilasyon değişimlerinin DNA fragmantasyon indeksi (DFI) üzerine etkisi görülmemiştir. MSH2 promotor metilasyonu ve DFI kontrol grubunda oligoastenoteratozoospermi (OAT) grubuna kıyasla daha düşük bulunmuştur. MLH1 promotor metilasyonu ve anilin pozitif sperm yüzdesi arasında pozitif korelasyon (P=0,0188), MSH2 promotor metilasyonu ile sperm konsantrasyonu ve toplam sperm sayısı arasında ise negatif korelasyon bulunmuştur (sırasıyla P=0,0068 ve P=0,009).  Kontrol grubunun anilin pozitif sperm yüzdesi, OAT grubuna göre düşüktür (P<0,0001). Anilin pozitif sperm yüzdesi, yaş (P=0,0015), toplam sperm sayısı (P<0,0001), motilite (P<0,0001) ile negatif korelasyonludur. Sigara içiminin diğer parametreler üzerine etkisi görülmemiştir.
Sonuç: Çalışma sonuçları yanlış eşleşme onarımında kritik görevleri olan MLH1 ve MSH2 genlerindeki epigenetik değişikliklerin semen parametreleri üzerine etkili olabileceğini düşündürmüştür. Ancak, bu genlerin metilasyon değişikliklerinin infertilite, DFI ve protaminasyonla olan ilişkisinin anlaşılması için daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Aim: In this study,  we aimed to investigate the promoter methylation of MLH1 and MSH2 genes, sperm DNA fragmentation and percentage of histone-rich sperm in idiopathic infertile patients and to  evaluate the results with semen parameters, age and smoking data.
Material and Method: The promoter methylation of MLH1 and MSH2 (n=39 and n=40, respectively) were analyzed by MethyLight method, sperm DNA fragmentation by TUNEL and the percentage of histone-rich sperm by aniline blue staining method in 52 control and 75 infertile men.
Results: In the study, no effect of the promoter methylation changes of MLH1 and MSH2 on DNA fragmentation index (DFI) was observed. MSH2 promoter methylation and DFI were lower in the control group compared to the oligoasthenoteratozoospermiac (OAT) group. There was a positive correlation between MLH1 promoter methylation and percentage of aniline positive spermatozoa (P=0.0188) and a negative correlation between MSH2 promoter methylation and sperm concentration and total sperm count (P=0.0068 and P=0.009, respectively). The percentage of aniline positive sperm of the control group was lower compered to the OAT group (P<0.0001). Aniline positive spermatozoa was negatively correlated with age (P=0.0015), total sperm count (P<0.0001) and motility (P<0.0001). No correlation was found between smoking and other parameters.
Conclusion: The results of the study suggest that methylation alterations in MLH1 and MSH2 genes, which have critical roles in mismatch repair, may have an effect on semen parameters. However, further studies are needed to understand the relationship between methylation changes of these genes and infertility, DFI and protamination.