Kainik asit ile oluşturulan eksitotoksitite modelinde endoplazmik retikulum stres markerlarının araştırılması
Investigation of endoplasmic reticulum stress markers in A kainic acid formed excitotoxicity model
Yazar: ALİME SARI
Danışman: DOÇ. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
SARI A. 2019, Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji Programı Yüksek Lisans Tezi, Aydın, 2020

Endoplazmik Retikulum (ER) stresi yanlış katlanmış ya da katlanamamış proteinlerin birikmesi sonucunda ortaya çıkmaktadır. ER stresi, tüm beyin hastalıklarında, kanser ve metabolik hastalıklarda görülen adaptif bir stres cevabıdır. Eksitotoksisite, sinapslarda fazla glutamat birikimiyle meydana gelir. Kainik asit hücresel ve hayvansal modellerde eksitotoksisiteye yol açan bir toksindir.  Kainik asite bağlı eksitotoksisite hücrede strese neden olur. Bu nedenle, bu çalışmada amacımız, kainik asite bağlı eksitotoksisite ve ER stres arasındaki ilişkiyi iki majör Endoplazmik Retikulum stres markırı olan ATF5 ve fosforile eIF2'yı analiz ederek incelemektir.
50, 200, 1000 µM dozlarında kainik asit, N2A hücrelerine verilerek 24 saat sonunda hangi dozlarda hücre ölümü gerçekleştiği  MTT Assay  Testi ile  belirlendi. 24 saat inkübasyon sonucunda kontrol grubu ve kainik asit verilen hücrelerden protein ekstraktları elde edildi. Bradford Assay ile protein miktar tayini gerçekleştirildi. ER stres markırlarından; ATF5 ve  fosforile eIF2 markırlarının protein ekspresyon seviyeleri western blot yöntemi ile incelendi.
Kainik asit ile muamele edilmiş neuroblastoma hücrelerinde ATF5 ve fosforile eIF2 seviyelerinin kontrole göre değişmediği  ilk kez gösterildi.
 Çalışmamız sonucunda 50, 200, 1000 µM ve 24 saat süren kainik asit muamelesi, ATF5 ve  fosforile eIF2 ile gösterilebilecek Endoplazmik Retikulum stresi oluşturmak için yeterli olmayabileceği düşünüldü.  Süre ve konsantrasyon  olarak arttırılmış kainik asit muamelesi ya da farklı markırların denenmesi gerekmektedir.

Abstract:
SARI A. Aydın Adnan Menderes University Institute of Health Sciences Medicine Faculty Clinical Biology Program Master Thesis, Aydın, 2020

        Endoplasmic Reticulum (ER) stress occurs as a result of the accumulation of misfolded or unfolded proteins. ER stress is an adaptive stress response observed in almost all brain diseases, cancer and metabolic diseases. Excitotoxicity occurs when excess glutamate accumulates in synapses. Kainic acid is a toxin that leads to excitotoxicity in cellular and animal models. Kainic acid realated excitotoxicity causes stress in the cell. Therefore, our aim in this study is to investigate the relationship between ER stres and excitotoxicity by investigating two major ER stress markers ATF5 and  phosphoryl eIF2.
          MTT Assay Test was used to determine the cell viability with the administration of 50, 200, 1000 µM doses of kainic acid 24 hours. After 24 hour incubation, protein was extracted both from control and kainic acid treated cells. The protein concenration was determined by Bradford Assay and the expression of ATF5 and phosphorylated eIF2was determined by western blot method.
            It was shown for the first time that ATF5 and phosphorylated eIF2 levels in neublastoma cells did not change after kainic acid treatment.
            As a result of our study, we thought that  50, 200, 1000 µM kainic acid treatment for 24 hours is not enough to induce Endoplasmic Reticulum stress measurable by ATF5 and phosphorylated eIF2. Increased concentration or duration of kanic acid treatment or the use of different markers could be tried in further experiments to induce ER stress.


Key words: ATF5, Phosphoryl eIF2, Excitotoxicity, Endoplasmic Reticulum Stress, Kainic Acid