Doğumdan puberte dönemine kadar 4-cpa' ya maruz kalan sıçanlarda karaciğer oksidan ve antioksidan sistemlerinin incelemesi
Investigation of liver?s antioxidant and oxidant systems at the rats, were exposed to 4-cpa from birth until the puberty periods
Yazar: AYŞE TAŞTAN
Danışman: PROF. DR. AYDAN BABÜL
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: 4-klorofenoksiasetik asit = 4-chlorophenoxyacetic acid ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Bitki büyüme düzenleyicileri = Plant growth regulators ; Doğum = Delivery ; Ergenlik = Puberty ; Karaciğer = Liver ; Oksidanlar = Oxidants ; Oksinler = Auxins ; Pestisitler = Pesticides ; Sıçanlar = Rats

Özet:
4-CPA, indol astik asit (IAA) gibi davranan, yapay, fenoksi asetik asit türevi oksinlerdendir. Özellikle domates üretiminde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca bitkilerde bıraktıkları kalıntılar nedeniyle istenmeyen etkilere neden olmaktadırlar.Literatürde 4-CPA ile ilgili çeşitli toksisite çalışmaları bulunmaktadır. Bunların çoğunluğu üreme ve endokrin sistem üzerine yoğunlaşmıştır. 4-CPA' nın uygun doz ve uygun zamanda kullanılmaması durumunda hepatoselüler nekroza neden olduğu ifade edilmektedir. Aynı zamanda puberte öncesi dönemde uygulanan 4-CPA' nın karaciğer dokusunda cinsiyete bağlı olmaksızın lipid peroksidasyonunu ve inflamatuar reaksiyonları arttırdığını gösteren bir çalışma da mevcuttur.Bu bilgiler ışığı altında çalışmamızda doğumdan puberte dönemine kadar 4-CPA' ya maruz kalan sıçanlarda karaciğer oksidan ve antioksidan olayları incelemeyi amaçladık.Araştırmamızda, yeni doğmuş, Wistar Albino cinsi 12 erkek, 12 dişi sıçan kullanıldı. Bunlar 4 gruba ayrıldılar.E20 (n=6): Doğumdan sonraki süt emme döneminde ( 20 gün) annelerine 25 mg/kg/gün 4-CPA verilen erkek sıçanlarE50 (n=6): Doğumdan puberte dönemine kadar ( 50 gün) 25 mg/kg/gün 4-CPA'ya maruz kalan erkek sıçanlarD20 (n=6): Doğumdan sonraki süt emme döneminde ( 20 gün) annelerine 25 mg/kg/gün 4-CPA verilen dişi sıçanlarD50 (n=6): Doğumdan puberte dönemine kadar ( 50 gün) 25 mg/kg/gün 4-CPA'ya maruz kalan dişi sıçanlarD20 ve E20 grubundaki dişi ve erkek yavrular, laktasyon dönemindeki annelerinden, anne sütü aracılığı ile 20 gün boyunca bu oksini almış oldular. D50 ve E50 gruplarındaki deneklere ise süt emme döneminden itibaren sonra da 30 günlük puberte döneminde oral olarak 25 mg/kg/gün 4-CPA verilemye devam edildi. Son uygulamadan 24 saat sonra intramuskuler (IM)Rompun+Ketamin (50+60-100mg/kg) anestezisi ile denekler feda edildi. Dokudaki lipid peroksidasyonunun göstergesi olarak kabul edilen MDA düzeyi, TBARS madde oluşum yöntemi ile, antioksidan kapasitenin göstergesi olan GSH ve protein tiyol düzeyi spektrofotmetrik yöntemle, nitrit nitrat toplamı olan NOx düzeyi ise Griess yöntemi ile ölçüldü. Sonuçlar Anova ve Mann- Whitney U testleri ile değerlendirildi. P< 0.05 değerleri anlamlı kabul edildi.Araştırmamızda 4-CPA' ya maruz kalan erkek deneklerin hem 20 günlük süt emme döneminde hem de 50 günlük ergenlik döneminde lipid peroksidasyon değerlerinin dişilerden daha yüksek olduğu saptandı.Karaciğer dokusu tiyol düzeylerinin ise dişilerde daha yüksek bulunması, bu deneklerdeki düşük MDA düzeyleri ile uyumlu bir bulgu olarak yorumlandı. Her iki cinsiyette de 20 günlük süt emme dönemindeki deneklerin karaciğer dokusu tiyol düzeylerinin 50 gün uygulama yapılanlara kıyasla önemli derecede yüksek olduğu görüldü.20 gün ve 50 gün 4-CPA' ya maruz kalan deneklerin NOx düzeylerinde ise fark saptanmadı. Ancak değerlerin normal seviyenin yaklaşık yarısı düzeyinde olması dikkat çekmiştir.Bu bulgular laktasyon döneminde 4-CPA verilen bir annenin sütü ile beslenen yavrularında karaciğer oksidan ve antioksidan sistemlerinin, ergenlik döneminden itibaren maruz kalanlara kıyasla daha ileri derecede etkilendiğini düşündürmektedir.

Abstract:
4-CPA is one of the artificial auxines derived from phenoxy acetic acid behaving like indole acetic acid (IAA). It is especially commonly used in the production of tomato. Furthermore are leading to undesired effects due to residues left on the plants.There are various toxicity studies related to 4-CPA in the literature. Most of these have been focused on reproduction and endocrine system. In case 4-CPA is not used in convenient doses and at properly times, was expressed that leads to hepatocellular necrosis. Meanwhile there is a study showing that 4-CPA applied in the pre-puberty period is icreasing the peroxidation of lipids and inflammatory reactions in the tissue of liver without being depending to gender.In the light of these information in our study we aimed to analyze the oxidant and antioxidant events of liver at the rats exposed to 4-CPA from birth and until the puberty period.In our study 12 male, 12 female new born Wistar Albino race rats have been used. They have been separated in 4 groups.E20 (n=6): Male rats to which mothers 25mg/kg/day 4-CPA has been applied within the period of lactation (20 days) following the birthE50 (n=6): Male rats exposed to 25mg/kg/day 4-CPA from the birth until puberty period (50 days)D20 (n=6): Female rats to which mothers 25mg/kg/day 4-CPA has been applied within the period of lactation (20 days) following the birthD50 (n=6): Female rats exposed to 25mg/kg/day 4-CPA from the birth until puberty period (50 days)The female and male babies from D20 and E20 group have been taken this auxine during 20 days by means of milk of mother from their mothers within the lactation period. The subjects from D50 and E50 groups have been continued to be given with 25 mg/kg/day 4-CPA orally within the 30 days puberty period following the lactation period. 24 hours later following the last administration the subjects have been sacrificed with intramuscular (IM) (Rompun + Ketamine (50+60-100mg/kg) anesthesia. MDA level accepted as the indicator of lipid peroxidation from the tissue, has been measured with TBARS substance creation method, GSH which is the indicator of antioxidant capacity and thyol level spectophotometric method, and the NOx level which is the total of nitrite nitrate has been measured with Giress method. The results have been evaluated with Anova and Mann-Whitney U tests. P<0.05 values have been accepted as significant.In our study it has been determined that lipid peroxidation values both within the 20 days lactation period and 50 days puberty period of the male subjects exposed to 4-CPA are higher that female subjects.The higher values of thyol level in the lever tissue of female subjects have been commented as a finding consistent with lower MDA levels from these subjects. It has been seen that at the both genders the thyol levels from liver of the subjects within 20 days lactation period are significantly higher that the subjects exposed to 50 days administration.Difference has not been determined in the NOx levels of the subjects exposed for 20 and respectively 50 days to 4-CPA. However attention has been drawn by the values which were about the half level at the normal level.These findings give rise to thought that oxidant and antioxidant systems of lever of the babies nourished with mother milk to which 4-CPA has been administrated within the lactation period, are affected on highest degree when compared to those exposed as of puberty period.