Nonfermentatif gram negatif bakterilerde metallo-beta-laktamaz varlığının araştırılması
Investigation of metallo-beta-lactamases enzyme in nonfermentative gram-negative bacteria
Yazar: ZEYNEP ERDİL
Danışman: DOÇ. DR. MUHAMMET HAMİDULLAH UYANIK
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Bakteriler = Bacteria ; Beta laktamazlar = Beta lactamases ; Gram negatif bakteriler = Gram negative bacteria ; Karbapenemler = Carbapenems

Özet:
Nonfermentatif Gram negatif bakteriler (NFGNB) son yıllarda hastane infeksiyonlarından sıklıkla izole edilmektedirler. Acinetobacter ve Pseudomonas türlerine ait suşlarda hızla yayılan ve geniş antibakteriyel direnç spektrumuna neden olan metallo enzimler infeksiyonların tedavisi için ciddi bir tehdit oluşturmaktadır. Metallo-beta-laktamaz (MBL) enzim üretimini saptamak için moleküler ve çeşitli fenotipik yöntemler kullanılmaktadır. Bu çalışmada, imipeneme dirençli Acinetobacter baumannii ve Pseudomonas aeruginosa suşlarında MBL enzim üretiminin dört farklı fenotipik yöntem kullanılarak saptanması ve bu testlerin birbirleri arasındaki uyumun araştırılması amaçlanmıştır.
Eylül 2012–Ekim 2013 tarihleri arasında Atatürk Üniversitesi Araştırma Hastanesi'inde çeşitli klinik örneklerden izole edilen farklı hastalara ait 111 A. baumannii, 140 P. aeruginosa suşundan karbapeneme direnç tespit edilen 94 A. baumannii ve 48 P. aeruginosa suşu çalışma kapsamında incelenmiştir. Tür düzeyinde tanımlanma ve bakterilerin antimikrobiyal duyarlılıkları VITEK-2 compact (bioMerieux-France) otomatize sistem ile yapılmıştır. MBL varlığı çift disk sinerji testi, kombine disk testi, E-test yöntemi ve modifiye Hodge testi kullanılarak araştırılmıştır.
A. baumannii suşlarında MBL pozitifliği E-test yöntemi, kombine disk testi, çift disk sinerji testi ve modifiye Hodge testi ile sırasıyla %97.9, %98.9, %98.9, ve %95.7 oranında saptanırken; bu oranlar P. aeruginosa suşlarında ise %100, %93.7, %89.6 ve %41.7 olarak saptanmıştır.
A. baumannii suşlarında E-test ile kombine disk testi, çift disk sinerji testi ve modifiye Hodge testi arasındaki uyum sırasıyla %94.7, %94.7 ve %91.5 oranında saptanmışken; P. aeruginosa suşlarında E-test ile diğer testler arasındaki bu uyum oranları sırasıyla %93.7, %89.6 ve %41.7 olarak bulunmuştur.
Çalışmamızda A. baumannii ve P. aeruginosa suşlarında yüksek oranda karbapenem direnci ve MBL üretimi saptanmıştır. Tedavide kullanılabilecek bir MBL inhibitörünün bulunmaması bu durumu ciddi bir problem haline getirmektedir. MBL enzim varlığının saptanması, hastane infeksiyonlarının önlenmesinde epidemiyolojik verilerin elde edilmesine ve uygun antimikrobiyal ajan seçimine yardımcı olacaktır. Fenotipik testler genel olarak birbiriyle uyumlu gözükse de moleküler yöntemlerle MBL enzim varlığının saptanması testlerin gerçek özgüllük ve duyarlılığını göstermesi açısından gerekli görülmektedir.

Abstract:
In recent years, Nonfermentative Gram Negative bacteria (NFGNB) are frequently isolated from nosocomial infections. Metallo-enzymes that spread quickly and cause a wide spectrum of antibacterial resistance in Acinetobacter and Pseudomonas strains cause serious problem in the treatment of infections. Molecular and various phenotypic methods are used to determine the metallo beta-lactamases (MBLs) enzyme production. In this study, it was aimed to determine the production of MBLs enzyme by using four different phenotypic methods in imipenem-resistant Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa strains and it was also aimed to compare these methods with each other.
This study was performed in Ataturk University, Research Hospital between September 2012 and October 2013. Carbapenem-resistant 94 A.baumannii and 48 P.aeruginosa strains which were obtained from 111 A. baumannii and 140 P. aeruginosa strains isolated from various clinical samples of different patients were used in this study. VITEK-2 Compact (bioMerieux-France) automated systems were used to identify the species and to determine antimicrobial susceptibility of the isolates. The MBL production of carbapenem resistant strains was tested phenotypically by using double-disk synergy test, combined disc test, E- test method and modified Hodge test.
MBL positivity of A. baumannii strains by E-test method, combined disk test, double-disk synergy test, and modified Hodge test were detected 97.9%, 98.9%, 98.9%, and 95.7% respectively; these rates were 100%, 93.7%, 89.6% and 41.7%, respectively for P. aeruginosa strains.
The concordance of E-test between combined disk test, double-disk synergy test, modified Hodge test were determined 94.7%, 94.7% and 91.5% respectively in A. baumannii strains; these concordance rates of E-test between other tests were found 93.7%, 89.6% and 41.7% respectively in P. aeruginosa strains.
In our study, high carbapenem resistance and MBLs production rates were found in A. baumannii and P. aeruginosa strains. Absence of an inhibitor of MBLs for mentioned agent in the treatment causes a serious problem. Detection of MBLs enzyme production helps collection of epidemiological data for the prevention of nosocomial infections and selection of appropriate antimicrobial agents in the treatment. Although phenotypic tests that used to determine MBLs production are generally seem compatible with each other, molecular methods was necessary to determine the real sensitivity and specificity of certain tests.