L-karnitin'in yapısal ve biyokimyasal düzeyde karaciğer fibrozisine etkisi
The effect of L-carnitine on liver fibrosi̇s at structural and biochemical levels
Yazar: HANDE NESRİN ÇETİN
Danışman: PROF. DR. ALPASLAN GÖKÇİMEN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Karaciğer fibrozisi; kronik doku hasarının normal olmayan yara onarım cevabını uyararak hücre dışı matriks bileşenlerinin aşırı miktarda üretimine ve dokuda birikmesine sebep olmaktadır. Fibrozis patogenezindeki yolakları baskılayarak bu yapısal değişikliklerin oluşmasını engelleyen çeşitli ajanlar bulunmaktadır. Biz de bu çalışmamızda antioksidan özellik gösteren L-Karnitin kullanarak fibroziste etkin oksidatif stresi azaltmayı hedefledik. Balb/c cinsi erkek farelere haftada 2 kez intraperitoneal (i.p.) 100 mg/kg tiyoasetamid uygulayarak deneysel karaciğer fibrozisi oluşturuldu. Tiyoasetamid uygulamasından 24 saat sonra 50 mg/kg  L-Karnitin intraperitoneal olarak enjekte edildi. L-Karnitinin karaciğer fibrozisinin farklı aşamalarındaki yapısal ve biyokimyasal etkisini incelemek için uygulamanın 7 hafta ve 9 hafta boyunca yapıldığı (Kontrol, L-Karnitin, 7H-9H Tiyoasetamid İndüklü Fibrozis, 7H-9H Tiyoasetamid ve L-Karnitin) 6 ayrı deney grubu oluşturuldu. Uygulamanın  7. ve 9. haftasının sonunda farelerin anestezi altında kesimi yapılmıştır. Alınan kan örneklerinde serum ALT ve AST ölçümü yapılmıştır. Karaciğer doku homojenatından TAS ve TOS analizi yapılmıştır. Örnek olarak alınan karaciğer dokuları rutin takip yöntemlerinden sonra parafin içine bloklanmıştır. 5 μm alınan kesitler hematoksilen ve eozin, masson trikom, pikro sirius kırmzısı ve immünohistokimyasal olarak alfa düz kas aktini (α-SMA) antikoru ile değerlendirilmesi yapılmıştır. Fibrozis ile dokudaki yapısal değişimlerin gösterilmesi için (Transmission Electron Microscope) doku örnekleri glutaraldehit ve osmiyum tetraoksitle fikse edilip, rutin takibi yapılan dokular uranil asetat ve kurşun sitratla boyanarak TEM incelemesi yapılmıştır. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında tiyoasetamid uygulaması yapılan tüm deneysel gruplarda fibrotik değişimler gözlenmiştir. 9 hafta süresince tiyoasetamid uygulanan gruplarda gözlenen yapısal değişimler, 7 hafta boyunca uygulama yapılan gruplara kıyasla daha belirgin olarak gözlenmiştir. L-karnitin uygulaması 7H tiyoasetamid ve L-karnitin grubundaki karaciğer hasarını yapısal ve biyokimyasal düzeyde iyileştirici etki göstermiştir. 9H Tiyoasetamid ve L-karnitin grubunda yalnızca biyokimyasal düzeyde iyileşme sağlamıştır. L-karnitin uygulaması karaciğer fibrozisinin ilerlemesini yavaşlatmıştır. Fakat toksik kimyasala uzun süre maruz kalınması durumunda oluşan şiddetli parenkimal ve stromal hasarı engelleyememiştir.

Anahtar kelimeler: Karaciğer Fibrozisi, L-Karnitin, ROS, Tiyoasetamid

Abstract:
Liver fibrosis occurs as a result of chronic tissue damege. Chronic tissue damage induces abnormal wound repair response resulting in excessive production of extracelular matrix components and it is accumulation in tissue. There are various agents the supress the pathways in the pathogenesis of fibrosis, and prevent strucural changes. İn this study, we aimed to reduce effective oxidative stress in fibrosis, using L-Carnitine which has antioxidant propeties.  Experimental liver fibrosis was induced by administering 100 mg/kg thioacetamide intraperitoneally (i.p.) twice a week to male Balb/c male mice. At 24 hours after the administration of thiocetamide, 50 mg / kg L-Carnitine was injected intraperitoneally.  İn order to examine structural and biochemical effects of L-Carnitine at different stages of liver fibrosis, 6 different experimental groups were formed  for 7 weeks and 9 weeks (Control, L-Carnitine, 7W-9W Thioacetamide Induced Fibrosis, 7W-9W Thioacetamide and L-Carnitine). At the end of 7 and 9 weeks of application, the mice were sacrificated under anesthesia. Serum ALT and AST were measured in blood samples. TAS and TOS analysis were performed from  liver tissue homogenate. Liver tissue samples were blocked into paraffin after routine histological process. Liver sections which thick 5 μm  analyzed using hematoxylin and eosin, masson trichoma, picrosirius red and alpha smooth muscle actine antibody.  İn order to demonstrate the structural changes in the tissue caused by fibrosis, tissue samples were fixed  with glutaraldehyde and osmium tetraoxide, tissue slices were stain with uranyl acetate and lead citrate, TEM examination was performed. Compared with the control group, fibrotic changes were observed in all experimental groups treated with thioacetamide. The structural changes observed in thioacetamide treated groups for 9 weeks were more severe than those treated with group for 7 weeks. Administration of L-carnitine showed a structural and biochemical improvement in liver damage in 7W-Thioacetamide and L-Carnitine. 9W-Thioacetamide and L-Carnitine  improved only at the biochemical level. L-carnitine administration slowed the progression of liver fibrosis. However, it could not prevent severe parenchymal and stromal damage caused by prolonged exposure to toxic chemicals.
	
Keywords: L-Carnitine, Liver Fibrosis, ROS, Thioacetamide