Echinococcus granulosus'a karşı oluşan antikorların IHA, IFA ve ELISA ile tesbiti ve Western Blot ile antikor çeşitliliğinindeğerlendirilmesi
Determination of antibodies against Echinococcus granulosus using IHA, IFA and differentiation of these antibodies by Western Blot
Yazar: SADIK AKGÜN
Danışman: DOÇ. DR. TEKİN KARSLIGİL
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Kistik ekinokokoz, Echinococcus granulosus'un metasestod formunun sebep olduğu bir helminto-zoonozdur. Kistik ekinokokoz'da klinik özelliklere dayanarak tanı koymak zor olmakta; tanı, görüntüleme yöntemleri ve spesifik antikor yanıtının saptanmasını amaçlayan serolojik yöntemlerle desteklenmektedir. Bu çalışmada, Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi Şahinbey Araştırma ve Uygulama Hastanesi Merkez Laboratuvarı'na Mayıs 2007-Temmuz 2008 tarihleri arasında kist hidatik ön tanısıyla gönderilen 163 hasta serolojik yönden değerlendirildi.Hastalara ait serum örneklerinde ticari indirekt hemaglütinasyon (IHA), indirekt floresan antikor (IFA) ve enzim immuno assay kitleri ile E. granulosus'a karşı oluşan Ig G tipi antikorlar araştırıldı. Sonuçlar Western blot yöntemiyle doğrulandı. Buna göre toplam 163 hastanın 83'ünde (%51) IHA testi ile, 80'inde (%53) IFA testi ile, 70'inde (%42.95) ELISA testi ile pozitiflik tespit edildi. Western blot doğrulama testine göre IHA testinin duyarlılığı %88.76, özgüllüğü %94.59, IFA testinin duyarlılığı %89.89, özgüllüğü %93.24, ELISA testinin duyarlılığı %78.65, özgüllüğü %100 olarak saptandı. Western blot yöntemiyle antijenik bantlara karşı oluşan antikorlar saptanarak, bunun kistin lokalizasyonu ve biyokimyasal değerlerle ilişkisi araştırıldı.Western blot yöntemiyle 163 serum örneği araştırıldığında, serolojik yöntemlerle (IHA, IFA, ELISA) negatif saptanan 69 örnekte herhangi bir bant saptanmazken pozitif saptanan 94 serum örneğinde ise olguların 66'sı p7 kDa bandının varlığı nedeniyle pozitif, 23'ü p7 kDa bandı olmayıp, p16/18, p24/26 ve p39 kDa bantların varlığı nedeniyle şüpheli/sınırda ve 5'i de sadece p39 kDa bandının varlığı nedeniyle negatif olarak değerlendirildi. Negatif bulunan 5 örneğin dördü IHA ile beşi ise IFA yöntemi ile pozitifdi. Pozitif olarak değerlendirilen 71 olguda kist hidatik olduğu operasyonla doğrulandı. Ancak operasyonla kist hidatik saptanan 17 karaciğer ve 6 akciğer olgusunda p7 ve p16-18 kDa bantları saptanamazken diğer bantlar bulunmaktaydı. Bu olgular şüpheli pozitif olarak değerlendirildi. Oluşan bantlarla kistin lokalizasyonu ve biyokimyasal değerler arasında belirgin bir ilişki saptanamadı.Sonuç olarak kistik ekinokokozun serolojik tanısında IFA ve IHA yöntemlerinin benzer şekilde duyarlı ve özgül olduğu, ancak ELISA yönteminin bu iki yönteme göre daha yüksek özgüllüğe sahip olduğu (%100) saptandı. Bununla birlikte IHA yönteminin kullanım kolaylığı ve ucuzluğu açısından uygulanabilir olduğu kanısına varıldı.

Abstract:
Cystic echinococcosis is a helmintho-zoonosis caused by metacestode form of Echinococcus granulosus. The diagnosis of cystic echinococcosis is difficult by clinical features; it is supported by imaging techniques combined with serological methods that aim the determination of specific antibody response. In this study, 163 patients who referred with the suspicion of cystic echinococcosis to the Central Laboratory at Gaziantep University Şahinbey Research Hospital between May 2007 and July 2008 were evaluated serologically.Type Ig G antibodies against E. granulosus in serum samples of patients were investigated by a commercial indirect hemagglutination (IHA) test, by an indirect fluorescence antibody (IFA) test, and by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results were comfirmed by Western blot method. Out of 163 patients, 83 (51%) were positive with IHA, 85 (53%) were positive with IFA, and 70 (43%) were positive with ELISA. According to Western blot test, sensitivity and specifity of IHA test were 88.76% and 94.59%, respectively, for IFA sensitivity was 89.89% and specificity was 93.24%, and for ELISA sensitivity was 78.65% and specificity was 100%. Using Western blot technique, presence of antibodies against antigenic bands were determined, and their relationship to cyctic localization and biochemical parameters were investigated.As 94 out of 163 serum samples, which were positive with serological methods (IHA, IFA, ELISA) were studied with Western blot method; 66 of the cases were positive due to the presence of p7 kDa band, 23 were suspicious/intermediate due to the absence of p7 kDa band, but the presence of p16/18, p24/26 and p39 kDa bands, and 5 were negative due to the presence of p39 kDa band only. Four of these five negative cases were positive by IHA, and all of them was positive by IFA technique. Sixtynine cases which were negative with serological methods (IHA, IFA, ELISA), were negative with Western blot also. In 71 positive cases cystic echinococcosis was confirmed with surgery. However, although in 17 hepatic and six pulmonary cases, which were surgically proven, p7 and p16-18 kDa bands were not determined, other bands were found. These cases were evaluated suspiciously positive. No relationship between the bands and cyctic localization and biochemical parameters was found.As result, IFA and IHA methods were found equally sensitive and specific in the serological diagnosis of cystic hydatidosis, but ELISA method was found more spesific (100%) when compared to these two methods. In addition to that, due to its application facility and low cost, IHA method was found suitable to use.