Theileria annulata'nın hücre kültürü pasajlarında atenüasyon düzeylerinin moleküler belirteçler ile incelenmesi
Investigation of attenuation levels of theileria annulata in cell culture passages with molecular markers
Yazar: BERİL KOÇ
Danışman: DOÇ. DR. HÜSEYİN BİLGİN BİLGİÇ ; PROF. DR. TÜLİN KARAGENÇ
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Biyobelirteçler = Biomarkers ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hücre kültürü = Cell culture ; Theileria annulata = Theileria annulata

Özet:
Amaç: Bu araştırma T. annulata ile enfekte hücre kültürünün düşük, orta ve yüksek pasajlı suşlarında T. annulata'ya özgü atenüasyon markerları kullanılarak hedef gen bölgelerindeki ekspresyon seviyelerindeki farklılaşmaları tespit etmek amacı ile yapılmıştır.
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada parazit materyali olarak, T. annulata 'nın Acarlar ve Cincin izolatlarına ait düşük, orta ve yüksek pasajlar, Ankara/Pendik izolatının orta ve yüksek pasajları ile aşı suşu olan TeylovacTM kullanılmıştır. İlk olarak, ilgili her bir izolattan RNA ektrakte edilmiş ve akabinde ekstrakte edilen her bir RNA örneğinden cDNA'lar sentezlenmiştir. Daha sonra atenüasyon markerları kullanılarak RT-PZR yapılarak farklı aşamadaki pasajlarda ilgili makerlerin ekspresyon seviyeleri incelenmiştir.
Bulgular: Yapılan incelemeler sonucunda HDAC, ADAM-19, MMP9 ve TIMP-3 gen bölgelerinin ekspresyon seviyeleri ölçülmüş ve farklı pasajlara sahip izolatlar arasında gen ekspresyon seviyelerinde önemli bir artış veya azalma tespit edilmemiştir.
Sonuç: Bu araştırmada atenüasyon markerı olarak belirlenen gen bölgelerinin kullanılan tüm izolatlarda eksprese edilmediği tespit edilmiştir. Ayrıca T. annulata hücre hatlarının farklı pasajları arasında ilgili genlerin ekspresyon seviyeleri arasında pozitif ve/veya negatif korelasyon belirlenemiştir.
Anahtar Kelimeler: Atenüasyon, aşı, hücre kültürü, marker Theileria annulata

Abstract:
Objective: This study was carried out to detect the differences in expression levels in target genes using T. annulata-specific attenuation markers in low, medium and high passage strains of T. annulata infected cell culture.
Materials and Methods: In this study, low, medium and high passages of Acarlar and Cincin isolates of T. annulata, medium and high passages of Ankara/Pendik isolate of T. annulata and vaccine strain, TeylovacTM, were used as parasite material. Initially, RNA was extracted from each related isolate, and cDNAs were synthesized of each extracted RNA sample. Then, the expression levels of each gene at different stages of passage were investigated by RT-PCR using attenuation markers.
Results: As a result, the expression levels of HDAC, ADAM-19, MMP9 and TIMP-3 gene regions were measured and no significant increase or decrease in gene expression levels were determined among isolates with different passages.
Conclusion: In this study, it was determined that genes used as attenuation markers were not differencially expressed in all isolates. Additionally, no positive and/or negative correlation was found between the expression levels of related genes among different passages of T. annulata cell lines.
Keywords: Atenuation, cell culture, marker, Theileria annulata, vaccine