Rapamisin'in fare nöroblastoma (NB2a) hücre kültürü üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of rapamisin on mouse neuroblastoma (NB2a) cell culture
Yazar: ECE NUR KAYA
Danışman: PROF. DR. KAMİL VURAL
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Farmakoloji ve Klinik Farmakoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Fareler = Mice ; Hücre kültürü = Cell culture ; Klorprifos = Chlorpyrifos ; Mammalian target of rapamycin = Mammalian target of rapamycin ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Nörodejeneratif hastalıklar = Neurodegenerative diseases ; Nöronlar = Neurons ; Nörotoksinler = Neurotoxins ; Rapamisin = Rapamycine ; Teşhis testleri = Diagnostic tests

Özet:
Amaç: Bu projenin amacı bir mTOR inhibitörü olan Rapamisin adlı etken
maddenin fare nöroblastoma hücre dizininde (NB2A) nörotoksik veya nöroprotektif
etkilerinin araştırılmasıdır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda Rapamisin'in olası nörotoksik etkileri fare
nöroblastoma hücre (NB2A) dizininde araştırıldı. Hücreler flask içinde DMEM
eklenerek etüvde çoğaltıldılar. Rapamisin, stok çözelti kullanılmadan önce DMSO
içerisinde çözüldü ve medyum ile seyreltildi. CellTiter-Glo® luminesans hücre
canlılığı ölçüm yöntemi, kullanılarak doz yanıt eğrisi oluşturuldu. 1. gün, tüm
kuyucuklara NB2A hücresi konularak 24 saat inkübasyona bırakıldı. 24 saat sonra ilk
üç kuyucuk hariç kalan tüm kuyucuklardaki medyum çekilerek farklılaşma medyumu
eklendi. Farklılaşma medyumu içeren kuyucukların ilk üçü hariç (+ kontrol),
diğerlerine farklı konsantrasyonlarda Rapamisin konuldu. Hücreler inkübe edildi ve
1 gün bekletildi. Daha sonra çukurlar Coomassie Blue ile boyandı ve image analiz
programı kullanarak ölçümler gerçekleştirildi. Hücre proliferasyonunun
değerlendirilmesi amacıyla MTT ve Rapamisin'nin nöron kültürü üzerindeki
etkilerini araştırmak amacıyla klorprifos 25 µM konsantrasyonlarda eklenerek NTT
testi yapıldı. İstatistiksel analizler gerçekleştirildi ve p<0,05 anlamlılık düzeyi olarak
seçildi.
Bulgular: NTT testinde anlamlı olmayan nörit uzaması, MTT testinde ise
anlamlı hücre proliferasyonu azalması gözlendi. Nörotoksik etkili klorprifos ile de
NB2A hücrelerinde istatiksel olarak doza bağlı bir şekilde azalma gözlemlendi.
Sonuçlar: Rapamisin adlı etken maddemizin nörotoksik olduğu, nöronal
harabiyet ve ölüme sebebiyet verebileceği anlaşılmıştır. Fakat kullandığımız hücre
kültürünün kanser hücrelerinden oluşmasından dolayı antikanserojen etki
gösterebileceği düşünülmüştür.
ix
Anahtar Kelimeler: Rapamisin, fare, nöroblastoma, hücre kültürü, mTOR,
MTT, NTT, Klorprifos, nörotoksisite, nöron, nörodejeneretif hastalıklar
Title: Investigation of the Effects of Rapamisin on Mouse Neuroblastoma
(NB2A) Cell Culturesından dolayı antikanserojen etki
gösterebileceği düşünülmüştür.

Abstract:
Aim: The aim of this study is to investigate the neurotoxic or neuroprotective
effects of an active substance called Rapamycin, which is an mTOR inhibitor, in
mouse neuroblastoma cell line (NB2A).
Material and Methods: In present study, the possible neurotoxic effects of
Rapamycin were investigated in mouse neuroblastoma cell (NB2A) array. Cells were
cultivated in an incubator by adding DMEM in a flask. Rapamycin was dissolved in
DMSO and diluted with medium before using the stock solution. A dose response
curve was generated using the CellTiter-Glo® luminescence cell viability
measurement method. On day 1, NB2A cells were added to all wells and incubated
for 24 hours. After 24 hours, the medium was withdrawn from all the wells and
except the first three wells and the differentiation medium was added. Except for the
first three (+ control) wells containing differentiation medium, the others were
loaded with Rapamycin at different concentrations. Cells were incubated for 1 day.
Then the wells were stained with Coomassie Blue and measurements were made
using an image analysis program. In order to investigate the effects of Rapamycin on
the cell proliferation and neurotoxicity, MTT and NTT tests were performed by
adding chlorpyrifos at 25 µM concentrations. Statistical analyzes were performed
and p<0.05 was chosen as the significance level.
Findings: In the NTT test, neurite prolongation was not significant, and in the
MTT test, significant cell proliferation reduction was observed. A dose-dependent
decrease in NB2A cells was also observed with neurotoxic chlorpyrifos.
Results: It has been shown that our active ingredient, rapamycin, is neurotoxic
and can cause neuronal damage and death. However, since the cell culture we used is
x
composed of cancer cells, it was thought that it might have an anticarcinogenic
effect.
Keywords: Rapamycin, mouse, neuroblastoma, cell culture, mTOR, MTT,
NTT, Chlorpyrifos, neurotoxicity, neuron, neurodegenerative diseases.