Α-chaconine ve α-solanine'in antikanserojen etkilerinin RL95-2 hücrelerinde araştırılması
Investigation of anticarcinogenic effects of 
α-chaconine and α-solanine in RL95-2 cells
Yazar: AYŞE KÜBRA KARABOĞA ARSLAN
Danışman: DOÇ. DR. MÜKERREM BETÜL AYCAN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Adenokarsinom = Adenocarcinoma ; Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Endometrial neoplazmlar = Endometrial neoplasms ; Gen ifadesi = Gene expression ; Glikoalkaloid = Glycoalkaloid ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Protein kinazlar = Protein kinases ; Reseptörler-östrojen = Receptors-estrogen ; Solanum tuberosum = Solanum tuberosum

Özet:
Endometriyum kanseri dünyada kadınlar arasında en sık görülen kanser türlerinden olup genellikle adenokarsinomdur. Endometriyum kanserinin gelişim ve ilerlemesindeki moleküler yolaklarının araştırılması, bu hastalık süreci hakkındaki bilginin arttırılmasını sağlayarak hastalar için yeni, etkili tedavi seçeneklerinin keşfedilmesine yol açacaktır. Bundan dolayı bu tez çalışmasında Solanum tuberosum'da (patates) bulunan majör glikoalkaloitlerden α-chaconine ve α-solanine'in RL95-2 östrojen reseptör pozitif endometriyum kanser hücresinde antikanser etki potansiyellerinin ve kanser ilişkili Akt yolağı ve östrojen reseptör alfa (ERα) ile ilişkisinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Çalışmada α-chaconine ve α-solanine'in hücre canlılığına etkili dozları Sülforodamin B (SRB) testi ile belirlendi, farklı dozlarının hücre büyüme eğrisi üzerinde etki profilleri; elde edilen eğri profillerinden etki mekanizması hakkında fikir sahibi olabildiğimiz gerçek zamanlı hücre analizörü (RTCA) sistemi ile değerlendirildi ve IC50 değerleri hesaplandı. Tüm deneylerde maddelerin Akt yolağı ile ilişkisi Akt inhibitörü API-1 ile östrojen reseptör (ER) ile ilişkisi ise ERα
 inhibitörü MPP dihidroklorür ile karşılaştırılarak ortaya konmuştur. Ayrıca Akt ve p-Akt ile ERα ve p-ERα protein ifadeleri western blot yöntemi aracılığıyla Akt ve ERα mRNA ifadeleri qPCR yöntemiyle gerçekleştirilmiştir. Hücrelerin migrasyon yeteneği üzerine etkileri ise migrasyon kiti ile değerlendirilmiştir. 
Sonuç olarak, RL95-2 insan endometriyum kanseri hücrelerinde α-chaconine ve α-solanine'in Akt sinyal yolağını inhibe ettiği ve ERα aktivitesini ve ifadelenmesini azalttığı, dolayısıyla hücre proliferasyonunu baskılayıcı etkisi ilk kez bu çalışma ile gösterilmiştir. Ayrıca, RL95-2 hücrelerinde, RTCA ile büyüme profil eğrilerinin oluşturulması; α-chaconine ve α-solanine'in bu eğriler üzerindeki etkileri; RL95-2 hücrelerinde bu maddeler için IC50 değerlerinin belirlenmesi; hücre migrasyonuna etkilerinin gösterilmesi de yine ilk kez bu tez çalışması ile ortaya konmuştur.

Abstract:
Endometrium cancer which is usually an adenocarcinoma is one of the most common cancer types in women in the World. Investigation of the molecular mechanisms underlying the development and progress, increases the knowledge about the disease and thus will lead to explore effective therapeutic alternatives.  Therefore, in this thesis the potential anticancer effects of two major glycoalkaloids of Solanum tuberosum; α-chaconine and α-solanine in RL95-2 estrogen receptor positive endometrium cancer cell line and the relations to the Akt and estrogen receptor alpha (ERα) have been investigated.
In this thesis the effects of α-chaconine and α-solanine in cell viability is determined via Sulphorhodamine B (SRB) test and the action profiles of different concentrations on cell growth curves have been evaluated via real time cell analyzer (RTCA) system where we can gain an idea about the action of mechanism from this profiles and the IC50 values have been calculated. Through all experiments the relation of the compounds with Akt pathway has been manifested via comparing with Akt inhibitor API-1 and with ERα via comparing with ERα inhibitor MPP dihydrochloride. Furthermore, Akt and p-Akt; ERα and p-ERα protein expressions were shown by using western blotting and Akt, and ERα mRNA expressions by qPCR. The effects of the compounds on cell migration were evaluated by migration kit. 
In conclusion, the inhibitory effects of α-chaconine and α-solanine on Akt signalling pathway and ERα expression and activity and therefore suppressive effects of the compounds on cell proliferation have been investigated by this study for the first time. Furthermore, the cell growth curve profiles of the RL95-2 cell lines and the effects of α-chaconine and α-solanine on these curves; the calculation of IC50 of the compounds on RL95-2 cell lines; the effects of the compounds on the migration of this cells are firstly manifested by this study.