Kronik hareketsizlik stresine maruz bırakılmış ratlarda resveratrolün testis üzerine koruyucu etkilerinin araştırılması
Protective effects of resveratrol against chronic immobilization stress on testis
Yazar: GÜLŞAH BİTGÜL
Danışman: DOÇ. DR. IŞIL TEKMEN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Resveratrol = Resveratrol ; Stres = Stress ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Çalışmamızda kronik hareketsizlik stresinin erkek sıçanların genital sistemi üzerine olumsuz etkilerine karşı antioksidan olan resveratrolün koruyucu etkilerini histokimyasal, immünohistokimyasal, ultrastrüktürel ve biyokimyasal olarak incelemeyi amaçladık. Yöntem: Çalışmamızda Wistar suşu erkek sıçanlar (200-220 gr) kullanıldı ve denekler 4 gruba (n=7) ayrıldı: I. grup, Kontrol grubu; herhangi bir strese maruz kalmayan grup. II. grup, Stres grubu; kronik hareketsizlik stresine maruz bırakılan grup. III. grup, Resveratrol düşük doz + Stres grubu; kronik hareketsizlik stresine maruz bırakılmadan hemen önce ve her gün intragastrik gavaj yöntemiyle 10 mg/kg/gün resveratrol verilen grup. IV. grup, Resveratrol yüksek doz + Stres grubu; kronik hareketsizlik stresine maruz bırakılmadan hemen önce ve her gün intragastrik gavaj yöntemiyle 20 mg/kg/gün resveratrol verilen grup. Kronik hareketsizlik stresi uygulaması deneklerin, 32 gün ve günde 6 saat (09:00?15:00), 6 cm. çap ve 15 cm. uzunluktaki plastik tüplere konulmasıyla uygulanmıştır. Tüm denekler son stres uygulamasından 18 saat sonra sonra sakrifiye edildi. Histokimyasal incelemeler için kesitler Hematoksilen ve Eozin (HE), Masson Trikrom, Periyodik Asit Schiff (PAS) ile boyandı. İmmünohistokimyasal olarak apoptoz belirlenmesi için TUNEL ve Aktif Kaspaz-3 boyamaları yapıldı. TEM (Transmission Electron Microscope) kullanılarak ultrastrüktürel incelemeler yapıldı. Biyokimyasal incelemeler için alınan dokularda glutatyon (GSH) ve malondialdehit (MDA) düzeyleri, kan örneklerinde ise testosteron hormon seviyeleri incelendi. Sonuçlar istatistiksel olarak gruplar arasında karşılaştırıldı. 2 Bulgular: Yapılan histokimyasal ve ultrastrüktürel incelemelerde kontrol grubunda normal testis yapısı gözlendi. Stres grubu seminifer tübüllerinde vakuolizasyon, germ hücre kaybı ve interstistyel alanda bağ doku artışı gözlendi. Resveratrol düşük ve yüksek doz gruplarında ise normale yakın testis yapısı gözlendi. Yapılan immunohistokimyasal incelemeler sonucu stres grubu seminifer tübüllerinde kontrol grubuna oranla TUNEL (+) hücre sayısının ve Aktif Kaspaz 3 (+) hücre sayısının arttığı, resveratrol düşük ve yüksek doz gruplarında ise sayının azaldığı gözlendi. Biyokimyasal olarak kontrol, resveratrol düşük ve yüksek doz grupları ile stres grubu karşılaştırıldığında MDA, GSH ve testosteron değerlerinde anlamlı bir fark bulunmadı. Sonuç: Çalışmamızın sonucunda elde ettiğimiz bulgulara dayanarak kronik hareketsizlik stresinin, testiste oksidatif stresi ve apoptozu arttırdığı, doku hasarı oluşturduğu; resveratrolün hasar oluşumunu anlamlı miktarda azalttığını gözlemledik. Anahtar Kelimeler: stres, resveratrol, testis, sıçan

Abstract:
Objective: In this study we aimed to investigate protective effects of resveratrol, a strong antioxidant, against possible negative effects of chronic immobilization stress on testes of male rats histochemically, immunohistochemically, ultrastructural and biochemically. Method: In this study, male Wistar rats (200-220 gr) were used. Rats were divided into four groups (n=7). Group I, Control group; not exposed to stress. Group II, Stress group; exposed to chronic immobilization stress. Group III, Low dose Resveratrol + Stress group; rats were given 10mg/kg/day resveratrol by intragastric route just before the chronic immobilization stress application. Group IV, High dose Resveratrol + Stress group; rats were given 20mg/kg/day resveratrol by intragastric route just before the chronic immobilization stress application. For chronic immobilization stress application experimental animals were put in the plastic tubes (6 cm in diameter, 15 cm in length) during 32 days for 6 hours (09:00?15:00). All experimental animals were sacrificed 18 hours after the last chronic immobilization stress application. Testes tissue slides were stained with Hematoxylene and Eosine (HE), Masson Trichrome and Periodic Acid Schiff (PAS) for histochemical observations. Immunohistochemically TUNEL and Caspase 3 stains were performed to determine apoptosis. TEM was used to make ultrastructural observations. Glutathione (GSH), malondialdehyde (MDA) and testosterone levels were evaluated biochemically. Results were statistically compared between groups. Results: Histochemical and ultrastructural investigations showed that on stress group?s seminifer tubules showed vacuolization, germ cell deprivation and increase of connective tissue on interstitial area. No significant changes were seen in low and high dose resveratrol groups. After immunohistochemical investigations apoptotic cell death was increased in stress group compared with control group. In low and high dose resveratrol groups TUNEL (+) cells and Active Caspase 3 (+) cells were decreased compared with stress group. According to 4 biochemically results; MDA, GSH and testosterone levels in stress group showed no significant difference when compared with control, low and high dose resveratrol groups. Conclusion: According to our results; we consider that chronic immobilization stress increases oxidative stress and apoptosis, causes histological tissue damages; resveratrol can minimize the histological damage in testes significantly. Key Words: stress, resveratrol, testes, rat