Cytomegalovirus viral yükünün monitorizasyonunda PP65 antijenemi ve PCR ile kantitatif CMV DNA tayininin karşılaştırılması
Comparison of quantitive CMV DNA analyze by PCR and PP65 antigenemia in monitoring of Cytomegalovirus viral load
Yazar: TUBA YILMAZ
Danışman: PROF. DR. ALİ AĞAÇFİDAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antijenler = Antigens ; DNA = DNA ; Hücre nakli = Cell transplantation ; Kemik iliği nakli = Bone marrow transplantation ; Kök hücreler = Stem cells ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sitomegalovirüs = Cytomegalovirus ; Transplantasyon = Transplantation

Özet:
Çalışmamızda, periferik kök hücre ve kemik iliği (KİT) transplantasyonu olan hastalarda CMV antijenemi ve DNA test sonuçları karşılaştırılmıştır. CMV, periferik kök hücre, kemik iliği ve solid organ transplantasyonundan sonra görülen fırsatçı infeksiyonların birinci sıklıkta nedenidir. Yaptığımız çalışmanın amacı; transplantasyon sonrası CMV infeksiyonun hangi döneminde antijen ve DNA testlerinin pozitif olduğunun saptanmasıdır. Pozitif sonuç alındığında, 14 gün boyunca antiviral tedavi uygulanmaktadır. Çalışmamızda, antijenemi testi için tam kan, DNA testi için plazma örnekleri kullanılmıştır. Antijenemi testinin uygulanmasındaki amaç, lökositlerin kandan ayrıştırılıp, sayıları yeterli olduğunda, sitosantrifüj, tespit ve boyama aşamalarından sonra fluoresan mikroskopta pozitif hücreleri saptamaktır. CMV antijenemi testi için eritrosit eritici yöntem ile pp65' e, CMV DNA tayininde ise real-time PCR metodu (LC-PCR) ile viral yük tayinine bakılmıştır. Çalışmamızın sonucunda, antijen ve DNA testinin birlikte pozitif olduğu durumda, uygulanan antiviral tedavi sürecinde, antijenemi testinin, real-time PCR ile saptanan viral yükle karşılaştırıldığında, daha hızlı bir şekilde negatifleştiği belirlenmiştir. Viral DNA titresinin ise, antijenemi testinin negatif saptanmasından yaklaşık 1-2 hafta sonra negatifleştiği görülmüştür. Antijenemi tayininde pp65 antijenemi metodu ve viral yük tayininde ise LC-PCR metodunun duyarlılığı ve özgüllüğü yüksek bulunmuştur.

Abstract:
In our study, CMV antigenemia and DNA assays? results were compared in peripheral blood stem cell and bone marrow transplantation (BMT) patients. CMV is a major cause of opportunistic infections after peripheral blood stem cell, bone marrow and solid organ transplantation. The aim of our study was comparing the times of the positivity for antigenemia and DNA assays which were detected in the course of CMV infection after transplantation. After detection of positive result, the therapy is given usually during 14 days. In our study, we used whole blood for antigenemia test and plasma for DNA assay. Aim of antigenemia assay, leukocytes were seperated from whole blood samples and existence of enough leukocyte number examined for positive cells on fluorescent microscope after cytocentrifuge, fixation and dying steps. pp65 antigenemia and Real-time PCR (LC-PCR) methods were used for detection of antigenemia by erytrocyte lysis method and detection of CMV DNA viral titer by real time PCR (LC-PCR), respectively. We found that, when antigenemia and DNA assays were given positive results together, negativity of the assays during the antiviral theraphy period was earlier in antigenemia assay than DNA detection with real-time PCR method. Viral DNA load became undetectable in 1 or 2 weeks after the negative antigenemia assay. The sensitivity and specifity of pp65 antigenemia and LC-PCR methods were found very high at detection of antigenemia and viral load, respectively.