Testiküler iskemi-reperfüzyon hasarı olan ratlarda prp kullanımının sperm fonksiyonlarına etkisinin in vitro fertilizasyon (ıvf) ile değerlendirilmesi
In vitro investigation of the effect of PRP on sperm functions by ischemia-reperfusion injury in rats
Yazar: BURAK UYSAL
Danışman: PROF. DR. OSMAN KÖSE
Sakarya Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Üroloji = Urology

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Testis torsiyonu ani gelişen, tanı aldığında acil müdahale edilmesi gereken ürolojinin gerçek acillerindendir. Zamanında yapılan detorsiyon tedavise rağmen testiste iskemi/reperfüzyon (İ/R) hasarı meydana gelmektedir. Son yıllarda İ/R hasarında plateletten zengin plazma (PRP) ile yapılan çalışmalar umut vadedicidir. Çalışmamızın amacı PRP'nin, testiküler İ/R hasarında sperm fonksiyonlarına etkisini in vitro olarak değerlendirmektir.
YÖNTEM: 12 haftalık 50 adet Wistar Albino erkek sıçan; randomize şekilde kontrol (Sham), Sham+PRP uygulaması (Sham+PRP), iskemi (İ), 4 saatlik iskemi sonrası PRP uygulanması (İ+PRP), torsiyon/detorsiyon (İ/R) ve torsiyon/detorsiyon sonrası PRP uygulanması (İ/R+PRP) gruplarına ayrıldı. PRP hazırlığı için 2 erkek, oosit temini içinse 12 adet dişi sıçan kullanıldı. Torsiyon sağ testise 720º derece uygulandı. 4 saatlik torsiyon süresinden sonra intratestiküler 20 µl PRP enjeksiyonu yapıldı. 28 gün sonra tüm sıçanlar sakrifiye edilerek sperm örnekleri toplandı ve testisler histopatolojik incelemeye alındı. Kontrollü overyan stimülasyon ve östrus senkronizasyonu yapılan dişi ratlardan oosit toplanarak inseminasyonun ardından kültürize edildi. 5 güne kadar kültürize edilen örnekler, fertilize oosit sayısı ve bölünmüş oosit sayıları açısından incelendi. 
BULGULAR: Testis ağırlığında en belirgin azalma İ ve İ/R gruplarındaydı. Johnsen testiküler biyopsi skoru İ/R grubunda en düşük bulundu ve İ/R+PRP grubuyla arasındaki fark anlamlı saptandı. (p<0,05). Sham ve Sham+PRP grupları arasında fark izlenmedi (p<0,05). Semen parametreleri Sham ve Sham+PRP grubu arasında fark göstermezken, İ/R+PRP grubunda İ/R grubuna kıyasla tüm parametrelerde üstündü (p<0,05). Fertilize oosit sayısı Sham ve Sham+PRP grubunda fark göstermedi (p>0,05) ancak İ/R+PRP grubunda İ/R grubundan yüksek bulundu (p<0,05). Bölünen oosit sayılarına bakıldığında, PRP uygulanan gruplarla uygulanmayan kontrolleri arasında anlamlı fark saptanmadı (p>0,05).
SONUÇ: 20 µl'lik PRP uygulamasının testis hasarı meydana getirmeden reperfüzyon hasarına karşı olumlu etkisinin olduğunu, sperm parametrelerine ve histopatolojik olarak reperfüzyon hasarına karşı olumlu etki göstermesine rağmen klinik fertilite sonuçlarına etkisinin sınırlı kaldığını göstermiştir.

Abstract:
INTRODUCTION AND AIM: Testicular torsion is one of the real emergencies of urology, which develops suddenly and requires immediate intervention when diagnosed. Despite the timely detorsion treatment, testicular ischemia/reperfusion (I/R) damage occurs. In recent years, studies with platelet-rich plasma (PRP) in I/R injury are promising. The aim of our study is to evaluate the effect of PRP on sperm functions in testicular I/R damage in vitro.
MATERIALS AND METHODS: 12-week-old fifty Wistar Albino male rats; randomized control(Sham), Sham+PRP administration(Sham+PRP), ischemia(I), PRP administration after 4 hours of ischemia(I+PRP), torsion/detorsion(I/R) and PRP administration after torsion/detorsion(I/R+PRP) groups. 2 male rats were used for PRP preparation and 12 female rats were used for oocyte retrieval. Torsion was applied to the right testis at 720 degrees. After a 4-hour torsion period, intratesticular 20 µl PRP injection was performed. After 28 days, all rats were sacrificed, sperm samples were collected and testicles were taken for histopathological examination. Oocytes were collected from female rats with controlled ovarian stimulation and oestrus synchronization and cultured after insemination. Samples cultured for up to 5 days were examined for the number of fertilized oocytes and the number of divided oocytes.
RESULTS: The most significant reduction in testicular weight was in the I and I/R groups. The Johnsen testicular biopsy score was the lowest in the I/R group and the difference between the I/R+PRP group was significant. (p<0.05). No difference was observed between Sham and Sham+PRP groups (p<0.05). While semen parameters did not differ between Sham and Sham+PRP groups, they were good in all parameters in the I/R+PRP group compared to the I/R group (p<0.05). The number of fertilized oocytes did not differ in the Sham and Sham+PRP groups (p>0.05), but it was higher in the I/R+PRP group than in the I/R group (p<0.05). Considering the number of dividing oocytes, no significant difference was found between the groups that were administered PRP and their controls (p>0.05).
CONCLUSION: 20 µl PRP application may protects the testis against reperfusion injury without causing testicular damage, and although it has a positive effect on sperm parameters and histopathologically against reperfusion damage, its effect on clinical fertility results is limited.