Hiperglisemik koşullarda insan umbilikal kord venöz endotel hücrelerinde otofaji mekanizmasının araştırılması
Investigation of autophagy in human umbilical cord venous endothelial cells under hyperglycemic conditions
Yazar: KEREM YANAR
Danışman: PROF. DR. EMİN TÜRKAY KORGUN
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Amaç: Hiperglisemi, kanda aşırı miktarda glukoz bulunmasıyla karakterize bir durumdur.
Damarların yapı taşı olan endotel hücreleri, hiperglisemiye karşı oldukça duyarlıdır.
Otofaji, açlık ve stres koşullarında hücrenin hayatta kalma ve enerji metabolizmasını
düzenleyen bir mekanizmadır. Bu çalışmada hiperglisemik koşullarda insan umbilikal
kord venöz endotel hücrelerindeki (HUVEC) otofaji mekanizmasının incelenmesi
amaçlanmıştır.
Yöntem: İnsan umbilikal kord venöz endotel hücreleri, göbek kordonun venlerinden izole
edildi ve farklı glukoz konsantrasyonlarına (5, 17, 25 mM Glukoz) sahip hücre
besiyerlerinde 24, 48 ve 72 saat inkübe edildi. İnkübasyon işleminin sonunda hücreler
Western Blot ve Real Time PCR analizleri için hazırlandı ve otofaji belirteçleri olan LC3,
p62 ve Beklin-1, gen ve protein seviyeleri gruplar arasında karşılaştırıldı.
Bulgular: 24 saat hiperglisemik gruplardaki LC3 miktarı, kontrole kıyasla anlamlı
derecede azaldı. 48 saat hiperglisemik gruplarda LC3 miktarı, kontrole göre istatistiksel
olarak anlamlı derecede arttı. 72 saat hiperglisemik gruplardaki Beklin-1 ve LC3
miktarları, kontrole kıyasla anlamlı olarak arttığı tespit edildi. p62 protein miktarının ise
72 saat hiperglisemik gruplarda, kontrole kıyasla anlamlı derecede azaldığı belirlendi.
Sonuç: İlk 24 saatte hiperglisemiye bağlı olarak hücrelerde otofajinin azalması, glukoz
aracılığıyla otofajinin inhibe olduğunu göstermektedir. Ancak 48 ve 72. saatlerde
otofajide artış tespit edilmiştir. Otofaji artışının nedeni hiperglisemik ortama maruz kalma
süresinin uzamasıdır. Sonuç olarak HUVEC hücrelerinde otofaji mekanizması zamana ve
maruz kaldığı glukoz miktarına göre değişim göstermektedir.
Anahtar Kelimeler: hiperglisemi, insan umbilical kord venöz endotel hücreleri, otofaji

Abstract:
Objective: Hyperglycemia is a condition characterized by the presence of excessive
amounts of glucose in the blood. Endothelial cells, which are the building blocks of
vascular structures, are highly sensitive to hyperglycemia. Autophagy is a mechanism that
regulates cell survival and energy metabolism under starvation and stress conditions. This
study aims to investigate the autophagy mechanism in human umbilical cord venous
endothelial cells (HUVEC) under hyperglycemic conditions.
Method: Human umbilical cord venous endothelial cells were isolated from the veins of
the umbilical cord and incubated for 24 hours, 48 hours or 72 hours in special media with
different glucose concentrations. At the end of these periods, the cells were prepared for
Western Blot and PCR analysis and the autophagy markers LC3, p62 and Beclin-1 were
compared between the groups.
Results: The amount of LC3 in the 24-hour hyperglycemic groups was significantly
reduced compared to the control. The amount of LC3 increased significantly in the 48-
hour hyperglycemic groups compared to the control. The amounts of Beclin-1 and LC3 in
the 72 hour hyperglycemic groups increased significantly compared to the control. On the
other hand, the amount of p62 decreased significantly in the 72-hour hyperglycemic
groups compared to the control.
Conclusion: The decrease in autophagy in cells due to hyperglycemia in the first 24 hours
indicates that autophagy is inhibited by glucose. However, an increase in autophagy was
detected at 48 and 72 hours. The increase in autophagy is due to the prolonged exposure
to the hyperglycemic environment. As a result, autophagy mechanism in HUVEC cells
varies according to time and amount of glucose to which it is exposed.
Key words: hyperglycemia, human umbilical cord venous endothelial cells, autophagy