Klasea bornmuelleri (Azn.) bitkisinin biyolojik  aktivitesinin incelenmesi
Investigation of biological activity of klasea bornmuelleri (Azn.)
Yazar: ZÜLFİNAZ BETÜL ÇELİK
Danışman: PROF. DR. LEYLA AÇIK
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada Klasea bornmuelleri (Azn.) bitkisinin metanol, etanol ve su ekstrelerinin antimikrobiyal, antioksidan, sitotoksik aktiviteleri ve DNA  etkileşimlerinin araştırılması amaçlandı.
Bu amaçla ekstrelerin antimikrobiyal etkileri agar kuyucuk ve minimal inhibisyon konsantrasyonu (MİK) ile incelendi. Metanol ve su ekstresinin testedilen bazı bakterilere karşı orta derecede antimikrobiyal aktiviteye sahip olduğu gözlendi. Metanol ekstresinin E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218 ve S. aureus ATCC 25923 bakterilerine karşı etkili olduğu, su ekstresinin K. pneumoniae ATCC 25955 bakterisine karşı etkili olduğu bulundu. Çalışılan diğer on mikroorganizmanın ekstrelere karşı dirençli oldukları tespit edildi. Çalışılan ekstreler arasında en fazla sayıda mikroorganizmaya karşı etki gösteren ve en geniş inhibiyon zonu oluşturan metanol ekstresinin en etkili antimikrobiyal aktiviteye sahip ekstre olduğu tespit edildi.
Ekstrelerin antioksidan etkileri 2,2?-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikali süpürücü aktivite ve Folin-Ciocalteau reaktifli fenolik içerik tayiniyle incelendi. Antioksidan aktivitede etanol ekstresinin (IC50: 50,5±0,5 µg/ml), metanol (IC50: 83,5±0,5 µg/ml) ve su ekstresine (IC50: 91,7±0,5 µg/ml) göre DPPH radikali süpürücü aktivitesi ve fenolik içeriği daha yüksek bulundu.
Ekstreler ile pBR322 DNA arasındaki etkileşim agaroz jel elektroforezi yöntemiyle incelendi. Metanol ve etanol ekstresinin konsantrasyona ve inkübasyon süresine bağlı olarak DNA?yı parçalama ve kesme şeklinde etkiler gösterdikleri bulundu.
Ekstrelerin sitotoksik etkileri HeLa ( Serviks Kanseri) ve MCF-7 (Meme Kanseri) hücre dizilerinde 3-(4,5-dimetilthiazol-2-yl)-2, 5-difeniltetrazolium bromid (MTT) yöntemiyle belirlendi. Sitotoksisite propidium iyodür (PI), 4',6 diamidino-2-fenilindol (DAPI) ve 3?,3?-diheksiloksakarbo siyanin iyodür (DiOC6) floresan boyama yöntemleriyle de araştırıldı. Etanol ve su ekstrelerinin 0,001-100 ?g/ml konsantrasyon aralığında ve 24 saat sürede HeLa (Etanol IC50: 9,84±0,05 ?g/ml, Su IC50: 0,1±0,005 ?g/ml) ve MCF-7 (Etanol IC50: >100 ?g/ml, Su IC50: 11,04±0,05 ?g/ml)?ye karşı sitotoksik etki gösterdiği tespit edildi. Floresan boyama sonuçlarına göre etanol ekstresinin HeLa hücre dizisi üzerinde apoptotik etkisi olduğu belirlendi. Sonuç olarak HeLa hücre dizisinin MCF-7 hücre dizisine göre etanol ekstresine daha duyarlı olduğu tespit edildi.

Abstract:
In this study, it is aimed to investigate the antimicrobial, antioxidant, cytotoxic activities and DNA interactions of Klasea bornmuelleri (Azn.) methanol, ethanol and water extracts.
To this end, the extracts were analysed for antimicrobial activity by agar well diffusion and minimum inhibition concentration (MIC). It was observed that methanol and water extracts had mild antimicrobial activity against some tested bacteria. The methanol extract was observed to be effective against E.coli ATCC 25922, E.coli ATCC 35218 and S.aureus ATCC 25923 bacteria. In addition, it was noted that the water extract was also effective against K. pneumoniae ATCC 25955.  The methanol extract showed activity against the maximum number of microorganisms and created the largest zone of inhibition among the extracts studied was found to have the most effective antimicrobial activity.
The extracts were analysed for antioxidant activity by 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging and phenolic content detection with Folin-Ciocalteu reactive. According to the results, the ethanol extract (IC50: 50,5±0,5 µg/ml) had DPPH radical scavenging activity and phenolic content higher than methanol (IC50: 83,5±0,5 µg/ml) and water (IC50: 91,7±0,5 µg/ml) extracts.
The interaction between the extracts and pBR322 plasmid DNA were analyzed by agarose gel electrophoresis. It was found that the methanol and ethanol extracts, depending on the concentration of compounds and the duration of incubation, showed effects such as DNA destruction and cleavage.
Cytotoxic effects of the extracts on HeLa (Cervix Cancer) and MCF-7 (Breast Cancer) cells were detected by 3-(4,5-dimetilthiazol- 2-yl)-2, 5-difeniltetrazolium bromid (MTT) method and also by propidium iodide (PI), 4',6-diamidino-2- fenylindole (DAPI) and 3,3-dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6) fluorescence dyes. The ethanol and water extracts at 0,001-100 ?g/ml concentration range were effective on HeLa (Ethanol IC50: 9,84±0,05 ?g/ml, Water IC50: 0,1±0,005 ?g/ml) and MCF-7 (Ethanol IC50: >100 ?g/ml, Water IC50: 11,04±0,05 ?g/ml) in 24 hours. In fluorescence dyes results, it was found that ethanol extract had an apoptotic effect on HeLa cell line. As a consequence, it was detected that HeLa was the most sensitive cell line and was more sensitive against ethanol extract than MCF-7.