PFAPA hastalarında behçet hastaları ile karşılaştırmalı olarak netozis, düşük dansiteli nötrofiller ve doğal lenfoid hücrelerin değerlendirilmesi
Evaluation of netosis, low-density neutrophils, and innate lymphoid cells in PFAPA patients compared to behçet's disease patients
Yazar: ÜMRAN ABA
Danışman: DOÇ. DR. BARAN ERMAN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pediatrik Temel Bilimler Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
PFAPA (Periyodik ateş, Aftöz stomatit, Farenjit ve Servikal adenit) Sendromu, immün patogenezi tam olarak bilinmeyen ve çocukluk döneminde görülen, tekrarlayan ateş, aftöz stomatit, farenjit ve servikal lenfadenit ile karakterize bir otoenflamatuvar hastalıktır. İnflamatuvar ve otoimmün hastalıklarda nötrofil aktivitesinin fazla olduğu, nötrofil ekstraselüler tuzakların (NET) patogenezde rolünün olduğu ve düşük dansiteli nötrofiller (LDN) ve doğal lenfoid hücrelerin (ILC) bağışıklık yanıtında rol oynadığı bilinmektedir. PFAPA hastalığında belirtilen parametrelerin değerlendirilmesi planlanmıştır. Bu çalışmada Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk İmmünoloji-Romatoloji Polikliniği'nde PFAPA tanısı alan 20 hastada NET üretimi ölçülerek inflamasyona katkısı araştırılacak ve kandaki LDN ve ILC yüzdeleri belirlenecektir. Elde edilen bulgular Behçet hastaları ve sağlıklı kontroller ile karşılaştırılacaktır. Çalışmaya dahil edilen hastalardan ve yaş uyumlu kontrollerden hastalığın aktif olduğu dönemde kan alınarak yoğunluk gradiyent santrifüj yöntemi ile periferik kan mononüklear hücre (PBMC), manyetik negatif seperasyon yöntemi ile nötrofil izolasyonu yapıldı. Akış sitometri ile ILC alt gruplarının ve LDN'lerin yüzdeleri belirlenirken uyarılan nötrofillerin ürettiği ve bir NETozis bulgusu olan nötrofil elastaz (NE) düzeyi ölçüldü. Elde edilen sonuçların analizleri SPSS ve Graphpad programları aracılığı ile yapıldı. Hastaların (n=20) yaşları 4 ve 13 yıl arasında değişmekte olup %55'i erkek ve %45'i kadındı. PFAPA hastalarında Behçet hastalarına (p<0.01) ve sağlıklı kontrol grubuna (p<0.0001) kıyasla daha fazla NETozis bulgusu saptandı.  LDN yüzdesinin her iki hastalık grubunda da sağlıklı kontrole göre anlamlı şekilde yüksek olduğu görülürken (p < 0.0001) ILC1 seviyesi PFAPA hastalarında Behçet hastalarından daha yüksekti (sırasıyla p < 0.001 ve p < 0.05). Bu çalışmada, PFAPA hastalığındaki inflamasyonda NET üretiminin, LDN ve ILC1'in inflamasyonda katkısı olduğu bulunmuştur. Bu sonuçlar, PFAPA ve Behçet hastalıklarının patogenezinde NETozis, LDN ve ILC1 hücrelerinin önemli rol oynadığını ve bu hücresel mekanizmaların anlaşılmasının, yeni tedavi stratejileri geliştirilmesinde kilit bir öneme sahip olduğunu göstermektedir.

Abstract:
PFAPA (Periodic Fever, Aphthous Stomatitis, Pharyngitis, and Cervical Adenitis) Syndrome is an autoinflammatory disease characterized by recurrent fever, aphthous stomatitis, pharyngitis, and cervical lymphadenitis, primarily occurring in childhood, with an unclear immune pathogenesis. It is known that excessive neutrophil activity, the involvement of neutrophil extracellular traps (NETs) in pathogenesis, and the role of low-density neutrophils (LDNs) and innate lymphoid cells (ILCs) in immune responses are present in inflammatory and autoimmune diseases. The evaluation of these parameters in PFAPA disease is planned. In this study, the contribution of NET production to inflammation will be investigated by measuring NET production in 20 patients diagnosed with PFAPA at the Uludağ University Faculty of Medicine Pediatric Immunology-Rheumatology Clinic, and the percentages of LDN and ILC in the blood will be determined. The findings will be compared with those of Behçet's disease patients and healthy controls. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated using density gradient centrifugation, and neutrophils were isolated using the magnetic negative separation method from blood collected during the active phase of the disease from the patients and age-matched controls included in the study. The percentages of ILC subsets and LDNs were determined by flow cytometry, and the level of neutrophil elastase (NE), a marker of NETosis produced by stimulated neutrophils, was measured. The obtained results were analyzed using SPSS and Graphpad software. The ages of the patients (n=20) ranged from 4 to 13 years, with 55% being male and 45% female. In PFAPA patients, more evidence of NETosis was found compared to Behçet's disease patients (p<0.01) and healthy control groups (p<0.0001). While the percentage of LDNs was significantly higher in both disease groups compared to healthy controls (p < 0.0001), the ILC1 level was higher in PFAPA patients than in Behçet's disease patients (p < 0.001 and p < 0.05, respectively). In this study, it was found that NET production, LDN, and ILC1 contribute to inflammation in PFAPA disease. These results suggest that NETosis, LDNs, and ILC1 cells play an important role in the pathogenesis of PFAPA and Behçet's diseases, and understanding these cellular mechanisms is crucial for developing new therapeutic strategies.