Hıyar bitkisinde (Cucumis sativus L.) rejenerasyonun optimizasyonu ve agrobacterium aracılığıyla GFP (yeşil floresan protein) geninin aktarılması
Regeneration optimisation of cucumber (Cucumis sativus L.) and GFP (green fluorescent protein) gene transformation via agrobacterium tumefaciens aler
Yazar: SİNEM SERBEST KOBANER
Danışman: DOÇ. DR. YEŞİM YALÇIN MENDİ
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Ziraat = Agriculture

Özet:
ÖZYÜKSEK LİSANS TEZİHIYAR BİTKİSİNDE (Cucumis sativus L.) REJENERASYONUNOPTİMİZASYONU ve AGROBACTERİUMARACILIĞIYLA GFP (YEŞİL FLORESAN PROTEİN) GENİNİNAKTARILMASISinem SERBEST-KOBANERÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİFEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜBİYOTEKNOLOJİ ANABİLİM DALIDanışman : Doç.Dr. N.Yeşim YALÇIN-MENDİYıl : 2006, Sayfa : 97Jüri : Doç.Dr. N.Yeşim YALÇIN-MENDİProf.Dr. Selim ÇETİNERDoç.Dr. Mukaddes KAYIMBu tezde, hıyar (Cucumis sativus L.) bitkisinde etkili bir rejenerasyon veAgrobacterium aracılığıyla gen transformasyonu yöntemi geliştirilmiştir. Çeşitlirejenerasyon ve transformasyon yöntemleri test edilmiştir. Dört günlük fidelerinkotiledon eksplantlarının 2 mg/l BAP+1 mg/l IAA ile desteklenmiş MS ortamındakültüre alınması ile en yüksek rejenerasyon frekansı (% 82) elde edilmiştir.rejenerasyon protokolü Agrobacterium tumefaciens'in, CaMV 35S promotorükontrolünde npt II (seçici markör geni) ve yeşil floresan proteinini kodlayan mGFP5-ER genlerini taşıyan pBin-mGFP5-ER binari vektör plazmidi içeren, AGL-1 ırkıkullanılarak gen aktarılmış bitkilerin eldesinde başarı ile uygulanmıştır. Bakterisüspansiyonu ile enfekte edilen kotiledon eksplantları, 2 mg/l BAP, 1 mg/l IAA, 200Î¼M asetosiringon, 0.5 g/l MES ve phytagel içeren MS ortamında birlikte kültürealınmıştır. Transform olmuş dokular çok erken bir dönemde el UV'si ile 254/365 nmemisyon aralığında tespit edilmiştir.Anahtar kelimeler: Hıyar, rejenerasyon, mGFP5-ER, transformasyon, AgrobacteriumtumefaciensI

Abstract:
ABSTRACTMSc THESISREGENERATION OPTIMISATION OF CUCUMBER (Cucumissativus L. ) and GFP (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) GENETRANSFORMATION via Agrobacterium tumefaciensSinem SERBEST-KOBANERDEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGYINSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENSESUNIVERSITY OF CUKUROVAFirst Supervisor : Doç.Dr. Neslihan Yeşim YALÇIN-MENDİYear : 2006, Page: 97Jury : Doç.Dr. Neslihan Yeşim YALÇIN-MENDİProf.Dr. Selim ÇETİNERDoç.Dr. Mukaddes KAYIMAn efficient method for shoot regeneration and Agrobacterium mediated genetransformation of Cucumber (Cucumis sativus L.) has been developed in this study.The optimum regeneration and transformation protocol were tested. The use ofcotyledon explants excised from 4 day-old seedlings cultured in Murashige andSkoog?s medium, supplemented with 1mg/l BAP and 1 mg/l IAA, resulted in a highregeneration frequency (% 82). Regeneration protocol has been successfully appliedto obtain transformed plants, using Agrobacterium tumefaciens strain AL-1 which isharboring a binary vector pBin m-GFP5-ER carrying npt II (selectable marker gene)and mGFP5-ER (Haseloff, 1995) (reporter gene), encoding green fluorescent protein,driven by cauliflower mosaic virus 35S promoter. Cotyledon explants, infected byAgrobacterium suspansion, cocultivated in the MS medium supplemented with 2mg/l BAP, 1 mg/l IAA, 200 Î¼M acetosyringon, 0.5 g/l MES and phytagel.Transformed tissues were detected at a very earyl stage at 254/365nm.emmition byhand UV.Keywords: Cucumber, regeneration, mGFP5-ER, transformation, AgrobacteriumtumefaciensII