Rutinhidrat'ın antioksidan kapasitesinin belirlenmesi ve insan karbonik anhidraz, asetilkolinesteraz, bütirilkolinesteraz enzimleri üzerine etkisinin incelenmesi
Determination of antioxidant capacity of rutinhydrate and investigation of effect on human carbonic anhydrase, acetylcholinesterase, butirlycholinesterase
Yazar: FATMA KOÇ
Danışman: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışma kapsamında, Rutinhidrat'ın, insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimleri (hCA I ve II), asetilkolinesteraz (AChE), ve bütirilkolinesteraz (BChE) enzimleri üzerine in vitro olarak inhibisyon etkisi araştırıldı. İlk olarak hCA I, II izoenzimleri Sepharose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği ile sırasıyla %68.37, %16.77 verim ve 462.60, 783.83 kat saflaştırıldı. CA izoenzimlerinin saflığını belirlemek için, sodyumdodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve her bir izoenzim için tek bant gözlendi. Daha sonra Rutinhidrat'ın hCA I ve II, AChE, ve BChE enzimlerine karşı IC50 ve Ki değerleri belirlendi. Bu inhibisyon etkileri standart enzim inhibitörleri ile kıyaslandı. Çalışmanın devamında Rutinhidrat'ın, kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme kapasitesi, demir (Fe3+ -Fe2+) indirgeme kapasitesi, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe3+) indirgeme kapasitesi, , 1,1-difenil -2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH.) giderme, 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS.+) giderme, süperoksit anyon radikali (O2.-) giderme, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikal (DMPD.+) giderme, aktiviteleri ve bipiridil reaktifiyle metal şelatlama aktivite çalışmaları antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için yapıldı. Sonuçları mukayese etmek için, troloks,α-tokoferol, BHT ve BHA standart antioksidanları kullanıldı.

Abstract:
In this study, the in vitro inhibitory effect of Rutinhydrate, on erythrocyte carbonic anhydrase I, and II isoenzymes, acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE) were investigated. Firstly, hCA I, and II were purified by Sepharose-4B-L-Tyrosine affinity column chromatography with a yield of 68.37%; 16.77% and 462.6; 783.8-fold purification of each isoenzyme, respectively. For determination of both CA isoenzymes purity, sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was applied and single band was observed for each isoenzyme. Then, of IC50 and Kİ values of Rutinhydrate were determined against the metabolic enzymes including hCA I, hCA II, AChE and BChE.These inhibition effects were compared to standard enzyme inhibitors. Continuation of this study, for evaluating antioxidant and radical scavenging capacity Rutinhydrate, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, Fe3+-Fe2+ reducing capacity, reducing capacity by FRAP method, DPPH free radical clarifing (DPPH·), ABTS radical clarifing (ABTS•+), DMPD radical clarifing (DMPD•+) activities, superoxide anion radical clarifing (O2•-) and bipyridyl chelating reagents were performed separately and during study, trolox, α-tocopherol BHT and BHA were used as the reference antioxidant compound. Comparisons were applied with the four standard substances.