Probiyotik özellikteki lactobacillus ve bifidobacterium kökenleri ile patojen bakteriler arasındaki etkileşimin araştırılması
Investigation of the interaction between probiotic lactobacillus and bifidobacterium strains and pathogenic bacteria
Yazar: BERNA GÜVENÇ
Danışman: PROF. DR. ŞAFAK ERMERTCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Bakteriler = Bacteria ; Bifidobacterium = Bifidobacterium ; Gastrointestinal mikrobiyom = Gastrointestinal microbiome ; Gastrointestinal sistem = Gastrointestinal system ; Lactobacillus = Lactobacillus ; Probiyotik bakteriler = Probiotic bacteria ; Probiyotikler = Probiotics ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Yüzyıllardır insanların diyetlerinde yer alan probiyotiklere ilgi son yıllarda daha çok artmış, probiyotiklerin bağırsak faaliyetlerinin iyileştirmesi, diyare, laktoz intoleransı, alerji, bağışıklığın güçlenmesi ve hatta kanser hücrelerinin yok edilmesi gibi önemli etkileri üzerinde durulmaya başlanmıştır.
Bu çalışmada Escherichia coli, Klebsiella pneumoniea ve Staphylococcus aureus klinik izolatları ile probiyotik özellikteki Lactobacillus acidophilus ve Bifidobacterium animalis subs. lactis arasındaki etkileşimin araştırılması amaçlanmıştır. Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Bakteriyoloji laboratuvarında izole edilen her türden beş adet E. coli, K. pneumoniea ve S. aureus kökeni çalışmaya dahil edildi. Klinik izolatlar ile probiyotik bakteriler arasındaki etkileşimin araştırılması amacıyla, bir klinik izolat ile bir probiyotik bakteri sıvı besiyerinde birlikte kültür edildikten sonra katı besiyerine pasaj yapılarak, inkübasyondan sonra koloni sayılarındaki değişim incelendi. Probiyotik bakterilerin süpernatanlarının inhibisyon etkisini incelemek amacıyla agar difüzyon yöntemi ve optik yoğunluk ölçümüne dayalı yöntem uygulandı. Agar difüzyon yönteminde klinik kökenler katı besiyerine ekildikten sonra besiyerlerinde kuyular açılarak probiyotik bakterilerin kültürlerinden elde edilen süpernatanlar bu kuyulara konuldu. İnkübasyondan sonra kuyular etrafında oluşan inhibisyon zon çapları değerlendirildi. Optik yoğunluk ölçümüne dayalı yöntemde ise, 0.5McFarland bulanıklığındaki klinik kökenler mikroplakalara konulup üzerlerine probiyotik süpernatanları eklenerek inkübasyona bırakıldı ve inkübasyon sonunda optik yoğunlukları ölçüldü. Elde edilen veriler SPSS 22.0 ile yorumlandı.
Klinik izolatlar ile probiyotiklerin birlikte inkübasyonu sonrasında bazı klinik kökenlerin koloni sayılarında anlamlı düzeyde olmasa da azalma gözlenirken, probiyotik bakterilerin son pasajlarında üreme görülmedi. Bu yöntemde yapılan tekrarlarda farklı sonuçlar elde edildi. Bu nedenle yöntemin tekrarlanabilirliği ve güvenilirliğinin arttırılması için modifiye edilmesi gerektiği düşünüldü. Agar difüzyon yönteminde, probiyotik bakteriler klinik kökenlerinin tümünün üzerine inhibitör etki gösterdi. Optik yoğunluk ölçümleri sonucunda, B. animalis subs. lactis'te L. acidophilus'a göre daha yüksek olmak üzere, probiyotik bakterilerin klinik kökenler üzerine %39 ile %86 arasında değişen oranlarda inhibisyon gösterdiği saptandı.
Probiyotiklerin olumlu etkilerinin daha geniş kapsamlı araştırılması ve insan sağlığı üzerindeki etkilerinin netleştirilmesi önemlidir. Bu amaç doğrultusunda bu çalışmanın bundan sonra gerçekleştirilecek araştırmalara bir temel oluşturacağını düşünmekteyiz. Kullanılan yöntemler modifiye edilerek, tekrarlanabilir ve güvenilir yöntemler geliştirilmelidir. Probiyotiklerin insan sağlığı üzerindeki etkilerini daha iyi gözlemlemek ve netleştirmek için in vivo çalışmaların gerçekleştirilmesi de önemli ve gereklidir.

Abstract:
Interest in probiotics, which have taken place in people's diets for centuries, has increased more in recent years, and the important effects of probiotics such as recovery of intestinal activities, diarrhea, lactose intolerance, allergies, strengthening of immunity and even destroying cancer cells have been emphasized.
The aim of this study was to investigate the interaction between the clinical isolates of E. coli, K. pneumoniea and S. aureus and probiotic Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium animalis subs lactis. Five E. coli, K. pneumoniea and S. aureus strains of all species isolated in the bacteriology laboratory of Ege University Faculty of Medicine, Department of Medical Microbiology were included in the study. In order to investigate the interaction between clinical isolates and probiotic bacteria, a clinical isolate and a probiotic bacterium were cultured together in a liquid medium and then passaged to a solid medium to examine the change in colony counts after incubation. Agar diffusion method and optical density measurements were applied to investigate the effect of inhibition of supernatants of probiotic bacteria. In the agar diffusion method, after the clinical origins were planted on solid media, wells were drilled and the supernatants obtained from the cultures of probiotic bacteria were put into these wells. After incubation, inhibition around wells was evaluated according to zone diameters. In the optical density measurement method, clinical strains with 0.5McFarland turbidity were placed in microplates and probiotic supernatants were added and incubated, then optical densities were measured at the end of incubation. The data obtained were interpreted with SPSS 22.0.
After the co-incubation of clinical isolates and probiotics, the number of colonies of some clinical isolates decreased but it was not found significant, in addition to that, no growth was observed in the last passages of probiotic bacteria. Different results were obtained in this method. Therefore, it was thought that the method should be modified in order to increase its reproducibility and reliability. In agar diffusion method, probiotic bacteria showed inhibitory effect on all of their clinical origins. As a result of optical density measurements, B. animalis subs. lactis was higher than L. acidophilus, probiotic bacteria showed inhibition on clinical strains ranging from 39% to 86%.
It is important to further investigate the positive effects of probiotics and clarify their impact on human health. For this purpose, we believe that this study will provide a basis for further research. Reproducible and reliable methods should be developed by modifying the methods used. It is also important and necessary to carry out in vivo studies to better observe and clarify the effects of probiotics on human health.