Proksimal tübül amonyak sekresyonunda nitrik oksidin rolü
The role of nitric oxide on the proximal tubule ammonia secretion in rat
Yazar: SELMA CIRRIK
Danışman: DOÇ. DR. İBRAHİM BİLGEN
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2003
Konu: Fizyoloji = Physiology

Özet:
Böbrek korteks dilimlerinde, amonyak yapımı üzerine nitrik oksidin etkisini incelemek amacıyla düzenlenen bu çalışmada 250-300 g ağırlığında, erkek Wistar sıçanların böbrekleri kullanılmıştır. Böbrek korteks dilimleri iki saat boyunca 37 °C, pH 7.4 olan krebs tamponu içinde, 95% 02 ve 5% C02 ile gazlandırılan ortamda inkübe edilmiştir. Glutaminsiz ve 1mM glutamin eklenen ortamda korteks dilimlerinin amonyak yapım ve sekresyonu ve nitrik oksit ve angiotensin M'nin etkisi çalışılmıştır. İki saat boyunca krebs tamponu içinde inkübe edilen böbrek korteks dilimlerinden ortama salgılanan amonyak miktarı 31.98 ± 1.76 |iM/g protein iken, amonyak öncül maddesi glutaminin inkübasyon ortamına eklenmesi ile amonyak salgısı 64.11 ± 2.6 p,M/g protein değerine yükselmiştir (p<0.001). 10"4 M L-NAME'in inkübasyon ortamına eklenmesi ile de amonyak salgısı önemli düzeyde artmıştır (99.14 ± 16.02|u.M/g protein p<0.01). 10"7M Angiotensin II ortam ve doku amonyağında önemli bir artışa neden olmuştur. Angiotensin II aracılı amonyak yapımındaki artış; L-NAME ve 10"4 M L- Canavanin ile endojen nitrik oksit üretiminin engellenmesinden ya da nitrik oksit donörünün (10"5 M SNAP) ortama eklenmesinden etkilenmemiştir. Kortek dilimlerinin kullandığı glutamin miktarları gruplar arasında önemli değişim göstermemiştir. Ancak glutaminin amonyağa dönüşüm oranı, ortama L-NAME ilavesi ile 0.87 ± 0.08 (mol/mol)'den 1.03 ± 0.04' e, Angiotensin II ilavesi ile de 0.98 ± 0.04'e yükselmiştir. İnkübasyon sonu ortam protein miktarı 1 mM glutamin varlığında anlamlı olarak yükselmiştir. Protein salgısında glutaminin neden olduğu bu artış, L-NAME ve Angiotensin II ile tamamen ortadan kalkmıştır. Angiotensin II ve L-NAME'in yaptığı inhibisyon, SNAP ilavesi ile ortadan kalkmış ve ortam protein miktarı kontrol seviyesine dönmüştür. Sonuç olarak bulgularımız: 1- Angiotensin M'nin sıçan böbrek korteks dilimlerinde hem amonyak yapımını hem de sekresyonunu stimüle ettiğini göstermektedir. 2- Amonyak salgılanmasında inhibitor bir etkiye sahip olan endojen nitrik oksitin angiotensin II aracılı amonyak yapımında rolünün olmadığını göstermektedir. 3- L-NAME ve angiotensin II varlığında amonyak/glutamin oranındaki önemli artış ve ortam protein miktarındaki azalış; bu iki ajanın amonyak metabolizması üzerine etkilerini glutamat dehidrogenaz yolağı üzerinden yaptıklarını göstermektedir.

Abstract:
In order to study the effect of nitric oxide on ammoniagenesis,the renal cortical slices obtained from, 250-300 g male Wistar rats were used in this experiment. The ammonia production and secretion were studied in the cortical slices incubated in krebs buffer with and without 1 mM glutamin for 2 h at 37° C, pH7.4 under 95% 02 and 5% C02. The ammonia secretion into the medium from the cortical slices incubated with krebs buffer for 2 h was 31.98 ± 1.76 nM/g protein and the addition of 1 mM glutamin,an ammonia precursor into incubation medium increased the ammonia secretion to 64.11 ± 2.6 |aM/g protein (p<0.001). Presence of 10"4 M L-NAME in the incubation medium significantly increased the ammonia secretion (99.14 ± 16.02(aM/g protein, p<0.01). 10'7M Angiotensin II also caused a significant increase in the medium and tissue ammonia. Neither prevention of endogenous nitric oxide production with L- NAME and lO^M L-Canavanin nor addition of 10"5 M SNAP, a nitric oxide donor, to the medium influenced the angiotensin II mediated increase in ammoniagenesis. Glutamine utilisation by the cortical slices in all groups were the same however the convertion of glutamine to ammonia increased significantly to 1.03 ± 0.04 and 0.98 ± 0.04 from 0.87 ± 0.08 (mol/mol) in the slices subjected to L-NAME and Angiotensin II respectively. The protein content of the incubation medium significantly increased in the cortical slices subjected to 1 mM glutamine for 2 h. L-NAME and Angiotensin II completely prevented glutamine mediated protein secretion but addion of SNAP overcomed the Angiotensin and L-NAME dependent suppression and the protein content of the medium returned to the control level. As a result our findings demonstrated that: 1- Angiotensin II stimulated both the production and secretion of ammonia in the renal cortical slices of rats. 2- Endogenous nitric oxide which has an inhibitory effect on ammoniagenesis is not involved, angiotensin II merdiated ammoniagenesis. 3- The significant increase in the ratio of ammonia to glutamine and decrease in medium protein contents in the presence of L-NAME and Angiotensin II indicate that these two agents prefer the Glutamate dehydrogenase pathway for their effect on ammoniagenesis.