Pneumocystis jiroveci tanısında giemsa, toluidine blue o (TBO), direk floresan antikor (DFA) ve gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemlerinin karşılaştırılması
Comparison between giemsa staining, toluidine blue o (TBO) staining, direct immunofluorescent monoclonal antibody (DFA) staining and real-time polymerase chain reaction (PCR) methods for diagnosing Pneumocystis jiroveci
Yazar: ELİF GÖZDE DURGUT
Danışman: PROF. DR. SEMRA KUŞTİMUR
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Boyama ve işaretleme = Stains and staining ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Histokimya = Histochemistry ; Pnömosistis jirovecii = Pneumocystis jirovecii ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Toluidin = Toluidine

Özet:
Pneumcystis jiroveci bağışıklık sistemi baskılanmış hastalarda özellikle akciğer tutulumu ile seyreden fırsatçı bir patojendir. Son yıllarda AIDS hastalarındaki artış ile birlikte sıkça karşılaşılan etkenin in vitro üretilmesi mümkün olmadığı için tanısı zordur. Hastalığın tedavisi uzun ve yan etkileri fazladır. Tanı konulmadan ampirik tedavi uygulamalarında problemler yaşanabilmektedir. Tedavinin gecikmesi ise hasta için ölümcül olabilmektedir. Sonuç olarak PCP tanısında hızlı ve güvenilir yöntemlere ihtiyaç vardır.Çalışmamızda risk grubundaki 57 hastanın 57 klinik örneğinde Giemsa, TBO, DFA ve GZ-PZR ile etken araştırılmıştır. Giemsa ile beş (%8.7), TBO ile dört (%7), DFA ile yedi (%12.3) ve GZ-PZR ile 57 hastadan yedisinde (%12.3) P. jiroveci gösterilmiştir. Örneklerden sadece bir tanesi GZ-PZR ile negatif, DFA ile pozitif olarak bulunmuştur. Bu örnekte DFA boyamasında yoğun olmayan ve içi boş kistler görülmüştür. Klinik bulgularla doğrulandığında gerçek zamanlı PZR ile en fazla pozitif sonuç elde edilmiştir. Giemsa, TBO ve DFA'nın GZ-PZR ile kıyaslandığında duyarlılığı ve özgüllüğü sırasıyla %72 - %100, %57 - %100, %86 - %98 olarak bulunmuştur.Sonuç olarak PCP tanısı ve tedavisi zor olan ölüm ve sakatlık riskinin yüksek olduğu fırsatçı bir pnömoni etkenidir. Hızlı ve doğru tanısında GZ-PZR yönteminin kullanılmasının uygun olacağı düşüncesindeyiz.

Abstract:
Pneumcystis jiroveci is an opportunistic pathogen especially affecting lungs in immune-suppressed patients. According to the increased number of patients with AIDS the agent is frequently faced with in recent years. Because of the impossibility of culturing in vitro conditions it is difficult to be diagnosed. The treatment of the illness takes long time and has lots of side effects. There can be same problems in prophylactic treatment before diagnosis. Early diagnosis is important because of the high mortality. As a result, rapid and reliable methods are needed in PCP.In our study, in a risk group of 57 patients we collected 57 clinical samples and searched the agent with Giemsa, TBO, DFA and RT-PCR. P. jiroveci was indicated by Giemsa with five (8.7%), TBO with four (7%), DFA with seven (12.3%) and RT-PCR with seven (12.3%) of 57 patients. There was one specimen that was positive by DFA staining but negative by real-time PCR. On DFA staining cysts were rare and hollow in this specimen. When it was confirmed with the clinical findings, the positive results were mostly obtained by RT-PCR. The sensitivity and specificity of Giemsa, TBO and DFA compare with RT-PCR were determined respectively as %72 - %100, %57 - %100, %86 - %98.As a result the diagnosis and the treatment of PCP are very difficult and have high risk of mortality and morbidity. We think that real-time PCR is a convenient method that can be used in the rapid and correct diagnosis of this opportunistic pneumonia.