Farklı pulpa kuafaj materyallerinin toksik etkilerinin morfolojik ve moleküler yöntemler kullanılarak zebra balığı (Danio rerio) üzerinde belirlenmesi
Investigation of toxic effects of different pulp capping materials on zebrafish (Danio rerio) using morphological and molecular methods
Yazar: MELTEM KARAHAN
Danışman: DOÇ. DR. BAHAR BAŞAK KIZILTAN ELİAÇIK
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Diş Hekimliği Ana Bilim Dalı / Çocuk Diş Hekimliği Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Biyouyumluluk = Biocompatibility ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Çocuk diş hekimliği = Pediatric dentistry

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı, pulpa kuafaj tedavisinde kullanılan MTA Angelus (Angelus, Brezilya), Biodentine (Septodont, Fransa), Oxford ActiveCal PC (Oxford Scientific, Elmshorn, Almanya) ve Harvard BioCal-CAP (Harvard Dental International GmbH, Almanya) materyallerinin in vivo zebra balığı modeli üzerinde sitotoksik etkilerini ve biyouyumluluklarını incelemektir.
Gereç ve Yöntem: Zebra balığı embriyoları, farklı dozlarda seyreltilmiş kuafaj materyallerine maruz bırakılmıştır. 24, 48, 72, 96 ve 120. saatlerde tüm deney grupları stereomikroskop altında değerlendirilerek sağ kalım ve koryondan çıkış oranları kaydedilmiştir. Apoptoz belirlenmesi için akridin oranj ve Cleaved Caspase-3 yöntemleri kullanılmıştır. Floresan ve konfokal mikroskop görüntülemeleri yapılarak GraphPad Prism 8.0.2. (GraphPad Prism, San Diego, CA) programı ile analiz edilmiştir. Bulgularının karşılaştırılmalı analizi için İki Yönlü Anova analizi kullanılmıştır. 
Bulgular: 120. saatte sağ kalım oranları değerlendirildiğinde MTA Angelus ve Biodentine'in sadece düşük dozlarında sağ kalım oranının yüksek olduğu görülmüştür. Bununla birlikte Oxford ActiveCal PC ve Harvard BioCal-CAP'in yüksek dozlarında sağ kalım oranları kontrol grubu ile benzer bulunmuştur. Koryondan çıkış sonuçları incelendiğinde tüm materyallerin yüksek dozlarında gecikme olduğu belirlenmiş, düşük dozlarda ise kontrol grubu ile benzerlik gösterdiği saptanmıştır. Akridin oranj ile yapılan apoptoz analizinde Oxford ActiveCal PC ve MTA Angelus'un tüm dozlarının apoptozu indüklediği görülmüş Harvard BioCal-CAP ve Biodentine'in ise en düşük dozlarında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunamamıştır. Cleaved Caspase-3 yöntemi ile bu apoptoz sonuçları doğrulanmıştır.

Sonuç: Tüm materyallerin artan dozlarında zebra balığı embriyoları üzerinde toksik etkili olduğu ve embriyoların koryondan çıkışını geciktirdiği gözlenmiştir. Apopitoz sonuçları göz önünde bulundurulduğunda rezin ile modifiye edilmiş kalsiyum silikat esaslı materyaller (Oxford ActiveCal PC ve Harvard BioCal-CAP) geleneksel kalsiyum silikatlara (MTA Angelus ve Biodentine) kıyasla daha biyouyumlu bulunmuştur. 

Anahtar Kelimeler: Biyouyumluluk, İn Vivo, Pulpa Kuafajı, Toksisite, Zebra Balığı.

Abstract:
Aim: This study aimed to investigate the cytotoxic effects and biocompatibility of MTA Angelus (Angelus, Brazil), Biodentine (Septodont, France), Oxford ActiveCal PC (Oxford Scientific, Elmshorn, Germany) and Harvard BioCal-CAP (Harvard Dental International GmbH, Germany) used in pulp capping treatment on the in vivo zebrafish model.
Materials and Methods: The zebrafish embryos were exposed to various dilutions of pulp capping materials. Survival and hatching rates were recorded by evaluating all experimental groups under a stereomicroscope at 24, 48, 72, 96, and 120 hours. Acridine orange and Cleaved Caspase-3 methods were employed to determine apoptosis. Fluorescent and confocal microscopy images were captured and analyzed using GraphPad Prism 8.0.2 software (GraphPad Prism, San Diego, CA). Two-way ANOVA analysis was utilized for comparative analysis of the findings.
Results: At the assessment of survival rates at 120 hours, MTA Angelus and Biodentine exhibited high survival rates only at low doses. Oxford ActiveCal PC and Harvard BioCal-CAP demonstrated survival rates similar to the control group even at high doses. Hatching results revealed a delay at high doses for all materials, while at low doses, a resemblance to the control group was observed. In the analysis of apoptosis using acridine orange, Oxford ActiveCal PC and MTA Angelus induced apoptosis at all doses, while Harvard BioCal-CAP and Biodentine did not show statistically significant differences at their lowest doses. These apoptosis results were confirmed using the Cleaved Caspase-3 method.
Conclusion: Zebrafish embryos are adversely affected by increasing doses of all materials, causing toxicity and delaying the hatching of embryos. In consideration of the apoptosis results, resin-modified calcium silicate materials, Oxford ActiveCal PC and Harvard BioCal-CAP, have been found to be more biocompatible compared to traditional calcium silicates such as MTA Angelus and Biodentine.
Key Words: Biocompatibility, İn Vivo, Pulp Capping, Toxicity, Zebrafish.