Tayların trakeal sıvaplarında rhodococcus equi'nin immunositokimyasal yöntemlerle saptanması ve akciğerdeki histopatolojik değişikliklerin araştırılması
Immunocytochemical detection of rhodococcus equi in the tracheal washes of foals and investigation of histopathologic alterations in the lungs
Yazar: KIVILCIM SÖNMEZ
Danışman: PROF.DR. AYDIN GÜREL
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Patoloji = Pathology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Trakeal yıkamaların (TY) Rhodococcus equi (R. equi) enfeksiyonunun tanısında ve etkeninizolasyonunda önemi çok büyüktür. Bu çalısmanın baslıca amaçı R. equi süpheli ve saglıklıhayvanlardan TY örnekleri toplanarak, etkenin immunositokimyasal (ISK) yöntemlerle tespitinisaglamak ve bu yöntemin tanı için kullanılan diger bir yöntem olan ELISA testi ile karsılastırılıpdegerlendirilmesinin yapılmasıdır. Diger bir amacı ise R. equi enfeksiyonundan süpheli ölühayvanların akcigerlerinde sekillenen lezyonların incelenmesi, immunositokimyasal boyanmalar iledoku içerisinde R. equi etkenlerinin tespit edilmesidir.Bu amaçla Bursa ve stanbul çevresindeki bazıharalarda yasayan, 1-5 aylık 54 adet saglıklı (Kontrol grubu), 56 adet R. equi enfeksiyonu süpheli(Çalısma grubu) taydan nazotrakeal yöntemle toplanan TY sıvıları ve kan örnekleri alındı. TY sıvılarıMAb 10G5 kullanılarak ISK yöntemleri ile isaretlendi ve kan örnekleri ELISA ile incelendi.Histopatolojik ve immunohistokimyasal (IHK) degerlendirmeler için arastırma süresince ölen birhayvandan alınan dokular ve Anabilim Dalımıza gönderilen, formolde tespit edilmis-parafinlebloklanmıs, R. equi enfeksiyonu süpheli taylara (n=8) ait doku örnekleri incelendi. Sonuç olarak canlıtaylardan alınan TY'lardan hazırlanan preparatlarda ilk kez ISK yöntemleriyle R. equi etkenlerigösterildi. ELISA sonuçları Kontrol grubundaki tayların %66,7'sinde (36 tay) pozitif ve %33,3'ünde(18 tay) negatif, Çalısma grubundaki tayların %66,1'inde (37 tay) pozitif ve %33,9'unda (19 tay)negatifti. ISK açıdan kontrol grubundaki tayların %70,4'ü (38 tay) pozitif ve %29,6'sı (16 tay) negatifolarak, Çalısma grubundaki tayların %73,2'si (41 tay) pozitif ve %26,8'i (15 tay) negatif olarakboyandı. TY'den hazırlanan hücre blokları sayesinde bir örnekten çok sayıda IHK boyamayapılabilecegi sonucuna varıldı. Ayrıca akcigerlerde saptanan histopatolojik lezyonlarda IHK ile R.equi etkenin kolaylıkla tespit edilebildigi gösterildi. Yapılan literatür taramalarına göre, akcigerlezyonlarının yanı sıra tayların karaciger, dalak ve timus dokularında ilk kez olarak etken tespit edildi.Anahtar Kelimeler: Tay, trakeal yıkama, immunositokimya, ELISA, hücre blogu.

Abstract:
The role of tracheal washes (TW) in the diagnosis and the isolation of Rhodococcusequi are of major importance. The first objective of this study was to establish a procedure forthe immunocytochemical (ICC) detection of R. equi agents in TW of foals suspected of R.equi infection and evaluate the value of this procedure by comparing its results with ELISA.The second aim was to analyze the lesions observed in the lungs of foals which diedsuspected of R. equi infection and immunohistochemically determine the R. equi agents intissue sections with same antibody used in ICC. With those purposes TW and blood sampleswere collected from 54 healthy (Control Group) and 56 R. equi suspected (Suspected Group)foals, which live in studs around Bursa and Istanbul. Preparations from TW were stained withICC, Diff-quick, Gram Stains and extracted blood sera were analyzed with ELISA. Fordemonstration of Rhodococcus equi Mab10G is used in TW and tissue samples. To ourknowledge for the first time R. equi agents are demonstrated with ICC in TW obtained fromlive foals. ELISA results were 66,7 % (36 foals) positive and 33,3% (18 foals) negative in ControlGroup, 66,1% (37 foals) positive and 33,9% (19 foals) negative in Suspected Group.Immunocytochemically; 70,4% (38 foals) stained positive and 29,6% (16 foals) stained negative inControl Group, 73,2% (41 foals) stained positive and 26,8% (15 foals) stained negative in SuspectedGroup. It was shown that repeated immunohistochemical (IHC) staining can be performed to asample taken from an animal by using cell blocks. Also,besides lung lesions, R. equi agentswere determined in liver, spleen and thymus tissues for the first time with IHC.