PC-3 ve LNCaP prostat kanseri hücre hatlarında ferulik asitin etkisinin araştırılması
The investigation of the effect of ferulic acid on the PC-3 and LNCaP prostate cancer cell lines
Yazar: CANAN EROĞLU
Danışman: DOÇ. DR. YAVUZ DODURGA
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms

Özet:
Prostat kanserinin altında yatan genetik değişimler ve olası sinyal yolakları ile ilgili çeşitli çalışmalar gün geçtikçe artmakta ve yeni tedavi yöntemleri aranmaktadır. Bu çalışmada, PC-3 ve LNCaP prostat kanseri hücre hatlarında çeşitli besinlerde bulunan, fenolik bir bileşik olan ferulik asitin (FA) hücre döngüsü sinyal iletimi ve apoptoz yolaklarında gen ekspresyonları üzerine etkilerinin araştırılması hedeflenmiştir. Ferulik asitin hücre canlılığına etkisi XTT yöntemi ile belirlenmiş, IC50 dozu PC-3 hücre hattında 48. saatte 300µM, LNCaP hücre hattında ise 48. saatte 500µM olarak saptanmıştır. 
Ferulik asitin PC-3 ve LNCaP hücre hatlarında hücre döngüsü ve apoptoz yolaklarındaki gen ekspresyonu üzerine etkileri gerçek zamanlı PZR ile analiz edilmiştir. Ferulik asitin PC-3 hücre hattında ATR, ATM, CDKN1A, CDKN1B, E2F4, RB1, TP53, BIK, BAX, CASP1, CASP2, CYCS gen ekspresyonlarında anlamlı artışa, CCND1, CCND2, CCND3, CDK2, CDK4, CDK6, BCL2 gen ekspresyonlarında ise anlamlı azalışa neden olduğu görülmüştür. LNCaP hücre hattında ise CDKN1B, CDKN2B, CASP1, CASP2, CASP8, CYCS, FAS, FASLG, TRADD gen ekspresyonlarında anlamlı artış, CCNF, CCNT1, CDK6, CDK4, BCL2, XIAP gen ekspresyonlarında anlamlı azalış bulunmuştur. Çalışmada bu hücre hatlarında anlamlı değişim görülen bazı genlerin protein değişimleri western blot yöntemi ile  değerlendirilmiştir. FA'nın apoptotik etkileri TUNEL yöntemi ile değerlendirilmiş, PC-3 ve LNCaP hücre hatlarında sırasıyla 2.5±0.47 ve 4.7±2 kat apoptozu indüklediği gözlenmiştir. PC-3 ve LNCaP hücre hatlarında sırasıyla FA'nın invazyonu %33.6±0.5 ve %23±1.9, koloni oluşumunu ise %38±0.82 ve %40±1.7 oranında baskıladığı görülmüştür. Sonuç olarak, bulgulara göre PC-3 hücre hattında FA'nın hücre döngüsünü durdurabileceği, LNCaP hücre hattında ise apoptoza neden olabileceği saptanmıştır.

Abstract:
Studies on genetic changes underlying prostate cancer and the possible signaling pathways are getting increased day by day and new treatment methods are being searched for. The present study aims to investigate the effect of ferulic acid, a phenolic compound, found in various aliments, in the PC-3 and LNCaP prostate cancer cell lines, on cell cycle signal transmission and gene expression in apoptosis pathways. The effect of ferulic acid on cell viability was determined via XTT method and the IC50 dose of ferulic acid in PC-3 cell line was found to be 300µM in the 48th hour and in LNCaP cell line it was found to be 500µM in the 48th hour.
The effect ferulic acid in PC-3 and LNCaP cell lines on cell cycle and gene expression in the apoptosis pathways were analised with Real-Time PCR. It was observed that ferulic acid in PC-3 cell line caused a significant increase in the gene expressions of ATR, ATM, CDKN1A, CDKN1B, E2F4, RB1, TP53, BIK, BAX, CASP1, CASP2 and CYCS,  and a significant decrease in the gene expressions of CCND1, CCND2, CCND3, CDK2, CDK4, CDK6 and BCL2. On the other hand, in LNCaP cell line, a significant increase was seen in the gene expressions of CDKN1B, CDKN2B, CASP1, CASP2, CASP8, CYCS, FAS, FASLG, TRADD and a decrease in the gene expressions of  CCNF, CCNT1, CDK6, CDK4, BCL2 and XIAP. In our study, in these cell lines, protein changes of some genes on which a significant change was observed were evaluated with western blot method. The apoptotic effects of FA were evaluated with TUNEL method and it was observed that FA in PC-3 and LNCaP cell lines induced 2.5±0.47 and 4.7±2 fold apoptosis respectively. Also, it was found that FA in PC-3 and LNCaP cell lines suppressed the invasion in the ratios of %33.6±0.5 and %23±1.9 respectively while it surpressed the colony formation in the ratios of %38±0.82 and %40±1.7 respectively. In conclusion, it is considered that FA in PC-3 cell line may lead to cell cycle arrest while it may cause apoptosis in LNCaP cell line.