Azotlu gübre uygulanan Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773)'nın dokularında oksidatif doku hasarının immunohistokimyasal ve antioksidan seviyelerinin biyokimyasal yöntemlerle belirlenmesi
Determination of oxidative tissue damage and antioxidant levels in the tissues of Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773) by immunohistochemical and biochemical methods
Yazar: SEDA VURAL AYDIN
Danışman: DOÇ. DR. MUHİTDİN YILMAZ ; PROF. DR. HASAN ÖZEN
Kafkas Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Capoeta capoeta = Capoeta capoeta ; Kimyasal gübreler = Chemical fertilizers ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Bu çalışmada, azotlu gübre uygulaması sonucu Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773) dokularında oksidatif doku hasarının ve antioksidan seviyelerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Bu amaçla çalışmada, 36 adet Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773) kullanıldı. Hayvanlar 10 günlük adaptasyon süreci sonunda 2 deney (15 mg/L ve 30 mg/L azotlu gübre) ve 1 kontrol olmak üzere, her grupta 12 balık bulunan 3 gruba ayrıldı. Gruplar deney süresi boyunca 300'er litrelik su tanklarında bekletildi. Deney gruplarına uygulanan gübre su ortamına verildi. Kontrol grubuna herhangi bir uygulama yapılmadı. Deney gruplarından 15 günlük azotlu gübre uygulamasının sonunda immunohistokimyasal ve biyokimyasal çalışmalar için kan ve doku örnekleri alındı. Elde edilen plazma örnekleri total oksidan (TOS) ve total antioksidan seviyelerinin (TAS) ölçülmesine kadar -20oC'de saklandı. Histolojik inceleme için alınan karaciğer, solungaç ve bağırsak doku örnekleri ise fosfat tamponu solüsyonu ile hazırlanmış %10'luk formaldehit solusyonunda tespit edildi.
Balıklardan alınan doku örnekleri üzerinde yapılan histopatolojik incelemelere göre kontrol grubuna kıyasla gübre uygulanan gruplarda; karaciğerin en fazla etkilenen organ olduğu, hepatositlerde hidropik dejenerasyon, nekroz ve hepatik kordon dejenerasyonları; solungaç dokusu incelendiğinde sekonder lamellada kütleşme, lamella epitelinde vakuolleşme; bağırsak dokusunda ise villuslarda kütleşme, supranüklear boşlukta azalma ve lamina propriada hücre infiltrasyonu gözlenmiştir.
Katalaz immunoreaktivitesi incelemesine göre kontrol grubuna kıyasla gübre uygulanan gruplarda karaciğer dokusunda dejenerasyonun fazla olduğu bölgelerde ve piknotik çekirdekli hücrelerde immunboyama olduğu, solungaçların sekonder lamel epitel hücrelerinde ve sekonder lamella tabanında katalaz immunoreaktivitesi olduğu, bağırsak dokularında katalaz immunoreaktivitesi olmadığı saptanmıştır.
SOD1 immunoreaktivitesi incelemesine göre kontrol grubuna kıyasla gübre uygulanan gruplarda, karaciğer dokusunda çekirdek üzerinde SOD1 immunoreaktivitesi olduğu, solungaç dokularında bazı sekonder lamella hücrelerinde SOD1 immunoreaktivitesi olduğu, bağırsak dokusu incelendiğinde enterosit kolumnar hücrelerinde hafif şiddette SOD1 immunoreaktivitesi olduğu gözlenmiştir.
TAS ve TOS ölçüm sonuçlarına göre, TAS düzeyinde 15 mg/L ve 30 mg/L gübre uygulanan gruplarda istatistiksel olarak artış olduğu saptandı (p< 0,05). TOS düzeylerinde artış olduğu görüldü ancak istatistiksel olarak önemli bir fark belirlenmedi.

Abstract:
In this study, it was aimed to determine oxidative tissue damage and antioxidant levels in tissues of Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773) which is the result of application of nitrogen fertilizer.
For this purpose, 36 Capoeta capoeta (Guldenstaedt 1773) was used. Animals were divided into 3 groups of 12 fish (15 mg/L and 30 mg/L nitrogenous fertilizer) and 1 control in each group at the end of the 10-day adaptation period. The groups were kept in 300 liter water tanks throughout the experiment. The fertilizer applied to the experimental groups was given to the water. No treatment was given to the control group. Blood and tissue samples were taken for immunohistochemical and biochemical studies at the end of 15 day nitrogen fertilizer application from experimental groups. Obtained plasma samples were stored at -20 °C until total oxidant (TOS) and total antioxidant levels (TAS) were measured. Liver, gill and intestinal tissue samples collected for histological analyses were fixed in 10% phosphate buffered formaldehyde solution.
According to the histopathological studies on the tissue samples taken from the fishes, in comparison with the control group, liver is the most affected organ, hydropic degeneration, necrosis and hepatic cord degeneration in hepatocytes, when the gill texture is examined, secondary to laminae laminae, vacuolization of lamella epithelium, masses in the villi around the intestine, decrease in the supranuclear space and cell infiltration of the lamina propria were observed.
Catalase immunoreactivity was examined in comparison with control group in fertilizer applied groups, regions where there is excessive degeneration in the liver, and immunoblots in picnic nucleated cells, catalase immunoreactivity in the glandular lamellar epithelial cells of the gills and on the bottom of the laminae of the secondary, Catalase immunoreactivity was not found in intestinal tissues. SOD1 immunoreactivity was examined in comparison with control group in fertilizer applied groups SOD1 immunoreactivity is on the nucleus in liver tissue, there is SOD1 immunoreactivity in some gonadal lamella cells in the gill tissues, When intestinal tissue was examined, it was observed that mild severe SOD1 immunoreactivity was found in enterocyte columnar cells.
According to TAS and TOS measurement results, it was found that there was a statistically significant increase in the TAS level in 15 mg/L and 30 mg/L fertilizer application groups (p <0,05). There was an increase in TOS levels but no statistically significant difference was found.