Gen tedavisi uygulamalarının ortodontik sutural ekspansiyon sırasında mid-palatal suturdaki kemik rejenerasyonuna etkilerinin değerlendirilmesi
Effect of gene therapy on mid-palatal bone regeneration during sutural expansion
Yazar: ESRA EKİZER
Danışman: DOÇ. DR. SABRİ İLHAN RAMOĞLU
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Ortodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Alveolar kenar artırılması = Alveolar ridge augmentation ; Kemik morfojenik proteini 2 = Bone morphogenic protein 2 ; Maksilla = Maxilla ; Palatal ekspansiyon tekniği = Palatal expansion technique ; Plazmit DNA = Plasmit DNA ; Sıçanlar = Rats ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Bu çalışmanın amacı BMP-2 ve VEGF genlerini kodlayan çıplak plazmitlerin sutur bölgesine enjeksiyonunun sıçanlarda oluşturulan üst çene genişletmesi modelinde genişleyen bölgedeki yeni kemik rejenerasyonuna etkilerini değerlendirmektir. Çalışmada kullanılan plazmit konstraktlarının hazırlanması, bakterilerin transformasyonu, plazmit izolasyonu ve saklanması işlemleri Yeditepe Üniversitesi Genetik ve Biyomühendislik Bölümü Kök Hücre ve Gen tedavi Laboratuarı'nda yürütüldü. Çalışma için 30 adet 80-84 gün arasında, ortalama ağırlıkları 309,06 ± 7,61 gram olan Wistar cinsi erkek sıçanlar kullanıldı. Deneklere genişletme apareyleri yerleştirildikten 24 saat sonra denekler rastgele üç gruba ayrıldı. Grup 1'e (kontrol grubu) GFP,Grup 2'ye BMP-2, Grup 3'e VEGF genlerini kodlayan plazmitler premaksiller bölgeye enjekte edildi. Beş günlük genişletme (T1) ve on günlük retansiyon dönemi (T2) sonrası her gruptan bir denek genlerin floresan mikroskobunda takibi için diğer denekler ise histomorfometrik analizler için dekapite edildi. Kemik yoğunluğunu değerlendirmek için T1 ve T2 döneminde her denekten CBCT alındı. Gruplar arası histomorfometri ve CBCT verilerinin karşılaştırılması için Mann Whitney-U testi uygulandı. Floresan mikroskobu altında genlerin kemik yapıya katıldıkları gözlemlendi. Yapılan istatistiksel analizde yeni kemik oluşum alanı, osteoblastik ve osteoklastik aktivite ve damarlanma miktarı deney gruplarında (Grup 2 ve Grup 3) kontrol grubuna göre artmış bulundu. CBCT değerlendirmesinde gen tedavisi uygulanan gruplarda kontrol grubuna göre kemik yoğunluğunun daha fazla olduğu bulundu. Sıçanlarda mid-palatal suturda genişletme yapılan alana lokal olarak uygulanan BMP-2 ve VEGF genleri kemik yapımına, hücresel aktiviteye ve damarlanma miktarına etki ederek kemik formasyon ve kalitesini artırmaktadır.Anahtar Kelimeler: Üst çene genişletmesi, plazmit, BMP-2,VEGF, sıçan

Abstract:
The aim of this study is to examine the effects of naked plasmids encoding BMP-2 and VEGF genes on the new bone regeneration in the model of maxillary expansion generated in rats. Preparation of plasmids, bacterial transformation, plasmid isolation and storage procedures used in this study carried out in Stem Cell and Gene Therapy Laboratory, Yeditepe University Department of Genetics and Bioengineering. For this study, thirty male Wistar rats (80-84 days old) with an average weight of 309,06 ± 7,61 g were used. 24 hours after placing of expansion appliance, animals were randomly divided into three groups. Plasmids encoding GFP (Group 1-control group), BMP-2 (Group 2) and VEGF (Group 3) genes were locally injected into premaxillary region. After five days of expansion (T1) and ten days of retention period (T2), an animal from each groups was decapitated for following genes under the fluorescent microscope and all other animals were decapitated for histomorphometric analysis. In order to assess bone density, CBCT was taken from each rats at T1 and T2. Mann Whitney-U test was used for the comparison of data (histomorphometry and CBCT) between groups. With fluorescent microscope, genes were observed to join the new bone structure. Statistical analysis showed that new bone regeneration region, osteoblastic and osteoclastic activity and the amount of vascularity parameters were significantly increased in experimental groups (Group 2 and Group 3). Evaluation of CBCT data showed that bone mineral density was greater in the experimental groups than control group. Locally applied BMP-2 and VEGF genes to the expanded mid-palatal suture of rats increase bone formation by affecting bone healing, cellular activity and vascularization.Keywords: Maxillary expansion, plasmid, BMP-2, VEGF, rat