Glutamat eksitotoksititesi oluşturulan C6 glioma hücrelerinde Tofacitinib'in etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of Tofacitinib on C6 glioma cells caused by glutamate excitotoxicity
Yazar: KEVSER NASIRLI
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BİLAL ŞAHİN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı / Fizyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Beyin neoplazmları = Brain neoplasms ; Eksitotoksisite = Excitotoxicity ; Glioma = Glioma ; Glutamat = Glutamates ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Tofasitinib = Tofacitinib

Özet:
Glutamat eksitotoksitite modellemesi oluşturulan hücrelerde farklı madde ve ilaçlar eksitotoksititeyi önlemek amacıyla araştırılmaktadır. Ancak romatolojik hastalıklarda kullanılan ve JAK/STAT yolağı üzerinden antiinflamatuar etki gösteren, sinir sistemi üzerine olumlu etkileri çeşitli çalışmalarla kanıtlanan tofacitinibin glutamateksitotoksisitesineolanetkisi henüz aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada C6 glioma hücrelerinde oluşturulan glutamat eksitotoksititesi üzerine tofacitinibin etkisi ve bu etkide oksidatif stres ve antiinflamatuar yolakların incelenmesi amaçlanmıştır.
C6 glioma hücrelerinde tofacitinib'in etkin dozu XTT testi kullanılarak 100 nM olarak bulunmuştur. Hücreler; Kontrol, Glutamat (10 mM), Tofacitinib (100 nM) ve Glutamat+Tofacitinib olmak üzere dört gruba ayrılmıştır. Tümör Nekrozis Faktör –α (Tnf-α),İnterlökin-1β (IL-1β), total antioksidan seviyesi (TAS) ve total oksidan seviyesi (TOS) ölçümü ticari kitler ile yapılmış ve COX-1 COX-2 ölçümü için immunohistokimyasal yöntemler kullanılmıştır.
Bulgular tofacitinib'in 100 nM dozda glutamat eksitotoksisitesine karşı hücre canlılığını arttırdığını göstermiştir (p<0,05). Ek olarak, tofacitinib eklenmesi glutamat grubu hücrelerde artan TNF-α, IL-1β, ve TOS seviyelerini azaltmıştır (p<0,05). İmmünohistokimyasal bulgular glutamat eksitotoksisitesiyle artan COX-1 ve COX-2 ekspresyonununtofacitinib ile azaldığını göstermiştir(p<0,05).
Sonuç olarak tofacitinib glutamat eksitotoksititesine karşı c6 glioma hücrelerinde hüccre canlılığını koruyucu etki göstermiş ve bu etkide antioksidatif ve antiinflamatuar mekanizmaların rol oynadığı ortaya konmuştur.

Abstract:
Different substances and drugs are being investigated to prevent excitotoxicity in cells modeled for glutamate excitotoxicity. However, the effect of tofacitinib, which is used in rheumatological diseases and has an anti-inflammatory effect through the JAK/STAT pathway, and whose positive effects on the nervous system have been proven by various studies, on glutamate excitotoxicity has not yet been elucidated. This study aimed to examine the effect of tofacitinib on glutamate excitotoxicity in C6 glioma cells and the oxidative stress and anti-inflammatory pathways involved in this effect.
The effective dose of tofacitinib in C6 glioma cells was found to be 100 nM using the XTT assay. Cells were divided into four groups: Control, Glutamate (10 mM), Tofacitinib (100 nM) and Glutamate+Tofacitinib. Tumor Necrosis Factor –α (Tnf-α), Interleukin-1β (IL-1β), total antioxidant level (TAS) and total oxidant level (TOS) measurements were made with commercial kits and immunohistochemical methods were used for COX-1 COX-2 measurement. 
Findings showed that tofacitinib increased cell viability against glutamate excitotoxicity at a dose of 100 nM (p<0.05). Additionally, the addition of tofacitinib reduced the increased levels of TNF-α, IL-1β, and TOS in glutamate group cells (p<0.05). Immunohistochemical findings showed that COX-1 and COX-2 expression, which increases with glutamate excitotoxicity, decreased with tofacitinib (p<0.05).
As a result, tofacitinib showed a protective effect on cell viability in c6 glioma cells against glutamate excitotoxicity, and it was revealed that antioxidative and anti-inflammatory mechanisms played a role in this effect.