Soya etken maddeleri Daidzein ve Genistein'in askorbik asit ile etkileşiminin spektrofotometrik ve kromatografik yöntemlerle incelenmesi
The study of interaction of Daidzein and Genistein in soybean foods with ascorbic acid by spectrophotometric and chromatographic methods
Yazar: MERYEM ŞEYDA YAKINÇAM
Danışman: PROF. DR. GÜLER YALÇIN
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Soya etken maddeleri olan daidzein (DZ) ve genistein' in (GS) uygun çözücülerdeki çözeltileri hazırlandı. Askorbik asit ile daidzein ve genistein etkileşimi farklı sıcaklıklar (oda sıcaklığı ve 40 °C), farklı pH'larda kromatografik ve spektrofotometrik yöntemlerle incelendi. Tüm çalışma çözeltilerinde 50/50 (v/v) oranında su/metanol ve tampon çözelti/metanol kullanıldı. Tampon çözeltiler: pH= 3,8 ve pH= 5,6 sodyum asetat, pH= 6,6, pH= 7,4 ve pH= 8,0 fosfat tamponu. Daidzein ve askorbik asit çözeltileri oda sıcaklığında eşit mol sayılarında; genistein ve askorbik asit çözeltileri oda sıcaklığında eşit mol sayılarında karıştırıldı. Kromatografi için çalışma çözeltileri konsantrasyonları, GS= 1,85x10-4 mol/L, DZ= 1,89x10-4 mol/L ,Vit C= 1,90x10-4 mol/L; spektrofotometri için çalışma çözeltileri konsantrasyonları, GS= 2,31x10-5 mol/L DZ=2,36x10-5 mol/L, Vit C= 2,38x10-5 mol/L olarak alındı. Kromatografi sonucunda alıkonma zamanlarında ve pik şekillerinde pH'a göre farklılıklar gösteren önemli değişikler gözlendi. Absorpsiyon spektrumlarında ise maksimum dalga boylarında kaymalar gözlendi. pH= 3,8'de DZ- Vit C ve GS- Vit C'nin eşit mol sayılarındaki karışımlarının ?249'daki absorbanslarının toplamsal olmadığı gözlendi. pH= 7,4'de ise, DZ- Vit C ve GS- Vit C eşit mol sayılarındaki karışımlarının absorbanslarının tüm dalga boylarında toplamsal olduğu gözlendi. Bu bulgular, DZ ve GS'nin bu koşullarda askorbik asit ile hızlı bir reaksiyona girdiğinin göstermektedir. HPLC, Model 1100 serisinden, dörtlü bir pompa, on-line degasser, autosampler, kolon bölümü, photodiode array dedektör (DAD) ve HP ChemStation bölümlerinden oluşmaktadır. Agilent Technologies'den Eclipse XDB-C18 kolon (150x4.6mm ID., 5µm partikül büyüklüğü) kullanıldı. HPLC koşulları: Kolon sıcaklığı 40 ºC; enjeksiyon hacmi 50µl'dir. 255 nm dalga boyunda çalışıldı. Ayrıca pik tanımlanması için 190-400 nm UV spektrumları kaydedildi. Shimatzu UV-1601 Spektrofotometre ve 1 cm yol uzunluğu olan kuvars küvetler kullanıldı.

Abstract:
Daidzein (DZ) and genistein (GS) solutions were prepared in appropriate solutions. The study of interaction of daidzein and genistein with ascorbic acid were investigated at different pH?s and temperatures (room and 40 °C) by spectrophotometric and chromatographic methods. 50/50 (v/v) water/ methanol and buffer/ methanol used in all working solutions. Buffer solutions: pH= 3,8 and pH= 5,6 sodium acetate buffer; pH= 6,6, pH= 7,4 and pH= 8,0 phosphate buffer. Daidzein and ascorbic acid solutions were mixed in equivalent moles at room temperature; genistein and ascorbic acid solutions were mixed in equivalent moles at room temperature. Working solutions? concentrations for chromatography were GS= 1,85x10-4 mol/L, DZ= 1,89x10-4 mol/L ,Vit C= 1,90x10-4 mol/L and working solutions? concentrations for spectrophotometry were GS= 2,31x10-5 mol/L DZ=2,36x10-5 mol/L, Vit C= 2,38x10-5 mol/L. Significant changes observed in retention times and peak shapes of the chromatograms at different pH?s. The absorbances of the DZ- Vit C and GS- Vit C at ?249 were not additive for the mixture of these substances in equivalent concentrations at pH= 3,8. Whereas the absorbances of DZ- Vit C and GS- Vit C at all wavelenght were additive at pH= 7,4. These results showed that daidzein and genistein reacted with ascorbic acid in these conditions. The HPLC system was a Model 1100 series which consisted of a quaternary pump,an on-line degasser, an autosampler, a column compartment, a photodiode array detection (DAD) system, and an HP ChemStation. An Eclipse XDB-C18 column (150x4.6mm ID., 5µm particle size) from Agilent Technologies was used. HPLC conditions were as follows: column temperature, 40 °C; enjection volume is 50µl. UV detection was performed at 255 nm. UV spectra from 190 to 400 nm were also recorded for peak identification. Shimatzu UV-1601 Spectrophotometre and 1 cm pathlength quartz cuvets were used.