Kırım Kongo kanamalı ateşi virüsü nükleoproteini immünreaktif bölgesinin horseradish peroksidaz ile kimerik formda maya ve bakteri ifade sisteminde üretilmesi
Production of Crimean Congo hemorrhagic fever virus nucleoprotein immunoreactive region in chimeric form with horseradish peroxidase in yeast and bacterial expression systems
Yazar: DİLEK MENEMENLİOĞLU
Danışman: PROF. DR. AYKUT ÖZKUL
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: DNA-rekombinant = DNA-recombinant ; Kırım Kongo kanamalı ateşi hastalığı =

Özet:
Kırım Kongo kanamalı ateşi insanları etkileyen en yaygın kene kaynaklı viral enfeksiyondur. Hastalığın henüz özgül tedavi ve aşısı henüz bulunmamaktadır. Yüksek ölüm oranları, coğrafi yayılımı, salgın oluşturma riski nedeniyle halk sağlığı tehditlerinin başında yer almaktadır. Ülkemizde 2002 yılından bu yana endemik olan hastalık bildirimi zorunlu hastalıklar listesindedir. 
Akut hastalığın tanısı, moleküler testler yanı sıra serolojik testler ile IgM pozitifliğinin saptanması, virüse özgül IgG titresinde 4 kat artış ile konulmaktadır. Serosürveyans ise virüsün yaygınlığının takibinde önem taşır. Nükleoprotein enfekte hücrelerde en fazla bulunan protein olması, yüksek düzey immünojenik olması ve filogenetik olarak en korunmuş genom dizisi olması nedenleri ile tanısal testler geliştirilmesi ve aşı çalışmaları için en önemli hedeftir.
Bu tez çalışmasında, tanı testlerinde kullanılmak üzere, virüsün nükleoproteinin, "horseradish" peroksidaz enzimi ile kimerik şekilde bakteri ve maya ifade sistemlerinde rekombinant olarak üretilmesi için tasarım geliştirilmiştir. Kimerik proteinin, E. coli Bl21 (DE3) hücrelerinde üretildiği, maya ifade sistemi Pichia pastoris tarafından besiyeri içerisine çözünür halde salgılandığı tespit edilmiştir. 

Anahtar kelimeler: Kırım Kongo kanamalı ateşi virüs; rekombinant protein; nükleoprotein

Abstract:
Crimean Congo hemorrhagic fever is the most common tick-borne viral infection affecting humans. No specific treatment and vaccine are available. It is one of the leading public health threats due to its high mortality rates, geographical spread and risk of outbreaks. The disease, which has been endemic in our country since 2002, is on the list of notifiable diseases. 
The diagnosis of acute disease depends on molecular tests as well as serologic tests, detection of IgM positivity or a 4-fold increase in virus-specific IgG titer. Serosurveillance is important in monitoring the prevalence of the virus. Since the nucleoprotein is the most abundant protein in infected cells, highly immunogenic and the most phylogenetically conserved sequence, it is the most important target for the development of diagnostic tests and vaccine studies.
In this thesis, a design for bacterial and yeast expression systems was developed to recombinantly produce the nucleoprotein of the virus in chimeric form with horseradish peroxidase enzyme for use in diagnostic tests. The chimeric protein was found to be produced in E. coli Bl21 (DE3) cells and secreted soluble into the medium by the yeast expression system Pichia pastoris. 

Keywords: Crimean Congo hemorrhagic fever virus; recombinant protein; nucleoprotein