Sperma-servikal mukus penetrasyon testinde farklı ısı ve süreli inkübasyonların etkileri
Effects of different temperatures and durations on the sperm-cervical mucus penetration test
Yazar: MUZAFFER TAŞ
Danışman: PROF.DR. İRFAN KUMARAN İLERİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2003
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
8. ÖZET Sunulan çalışmada 10 baş Siyah Alaca ırkı boğaya ait dondurulmuş spermaların in vitro olarak servikal mukusa penetre olma yetenekleri (SMPT) ile in-vivo fertiliteleri arasındaki ilişkiyi en iyi belirleyecek inkübasyon ısı ve süresinin belirlenmesi amaçlandı. Çalışma için suni tohumlama laboratuvarında bulunan alet ve malzemeden yararlanarak pratik bir yöntem geliştirilmeye çalışıldı. Bu amaçla test için kullanılacak olan servikal mukus, basit bir düzenek vasıtasıyla kapillar tüp yerine 0.25 mi hacmindeki şeffaf mini payetlere çekildi. Ardından non-toksik bir küvet içerisinde bulunan eritilmiş spermayla 37°C'de 15 dk. (1 grup) ve 45 dk. (2. grup), 39°C'de 15 dk. (3. grup) ve 45 dk. (4. grup), 41°C'de 15 dk. (5. grup) ve 45 dakikalık (6. grup) inkübasyona bırakıldı. İnkübasyon sonrasında payetler sıvı azot buharında donduruldu. Bu tespit sonrasında payetlerden belirli bölümler [1.5-1.75 cm (PA1), 3.25-3.5 cm (PA2) ve 5.0-5.25 cm (PA3)] kesildi ve kesilen örneklerde bulunan spermatozoonlar faz kontrast mikroskopta 200 büyütmede sayıldı. Aynı boğaların donmuş spermasıyla 3537 suni tohumlama uygulaması gerçekleştirildi ve %NR sonuçlarına göre 3 fertilite grubu oluşturuldu. Eritme (37°C'de 30 sn.) sonrası motilite ve morfolojik bozukluk bulguları boğalara göre farklılık gösterdi (p< 0.05). En yüksek motilite ve en düşük morfolojik bozukluklar gebelik oranları en yüksek olan 1. fertilite grubunda saptandı (p< 0.05). İncelenen spermatolojik özelliklerden motilite, akrozom bozuklukları, diğer morfolojik bozukluklar, ve toplam morfolojik bozukluklar ile penetrasyon aralıklarındaki migrasyon yoğunluğu arasında önemli derecede bir ilişki bulunamadı (p> 0.05). Penetrasyon aralıklarında saptanan spermatozoon sayıları fertilite gruplarına göre karşılaştırıldığında 1. ve 2. penetrasyon aralığında (PA 1 ve PA 2), düşük (3. grup) ve yüksek fertilite grupları (1. grup) arasındaki farkın önemli olmadığı saptandı. Ancak 3. penetrasyon aralığında (PA 3) 1. fertilite grubunda saptanan bulgular diğer fertilite gruplarına göre önemli oranlarda yüksek bulundu (p< 0.05). 57İnkübasyon ısısı ve süresinin birlikte penetrasyon aralığına etkisi PA2'de (p< 0.05) ve PA3'te (p< 0.01) önemli bulunmuştur. İkinci grupta (37°C, 45 dk.) PA 1 ve PA 3'de saptanan spermatozoon sayıları 1. ve 2. fertilite gruplarında farklı bulundu (p< 0.05). Aynı şekilde 5. grupta (41 °C, 15 dk.) PA 3'de en yüksek spermatozoon sayısı 1. fertilite grubunda saptandı (p< 0.01). Çalışmada yeni bir yöntem olarak geliştirilmeye çalışılan ve belirli aralıklarda bulunan hücrelerin sayımına dayanan SMPT'nin diğer spermatolojik özelliklerin incelenmesinde ek olarak yararlı ve kullanılabilir bir teknik olduğu sonucuna varılmıştır. Payetlerde PA3'te daha anlamlı sonuçlar alındığı, bu aralıkta 37°C 45 dakikalık inkübasyon tekniğinin kullanılabilir özellikte olduğu, 41 °C gibi daha yüksek ve 15 dakika gibi daha kısa inkübasyon tekniklerinin araştırılmasında büyük yararlar olabileceği sonucuna varılmıştır. Anahtar Kelimeler: Boğa, sperma, servikal mukus penetrasyon testi, spermatolojik özelikleri, fertilite. 58

Abstract:
9. YABANCİ DİLDE ÖZET (SUMMARY) Effects of Different Temperatures and Durations on The Sperm- Cervical Mucus Penetration Test The material of this study, was the frozen semen of 10 Holstein bulls. The aim was determination of the best temperature and time to detect the interrelation ship between the in-vitro penetration skill of spermatozoa to the cervical mucus (SMPT) and in-vivo fertility. The artificial insemination laboratory utensils were employed to develop on practical technique. The cervical mucus, was filled into 0.25 ml transparent mini straws. These straws were incubated with thawed semen in a non-toxic dish at 37°C for 15 min (1. group) and 45 min (2. group), at 39°C for 15 min (3. group) and 45 min (4. group), at 41 °C for 15 min (5. group) and 45 min (6. group). The straws were frozen by liquid nitrogen vapour after incubation. Following this, the straws were cut at various levels [1.5-1.75 cm (PA 1), 3.25- 3.5 cm (PA 2) and 5.0-5.25 cm (PA 3)] and at every cutting level, found spermatozoa were counted by a phase contrast microscobe at 200 magnification. Frozen semen of same bulls were used for artificial insemination and 3 fertility groups were established according to the fertility results. Post-thaw (37°C for 30 sec) motility and morphologic defect rates have been various among the bulls (p< 0.05). The highest motility and lowest morphological defect rates were observed in the group with the highest pragnancy rate the 1st fertility group (p< 0.05). There have been no significant interrelationship between the motility, acrosome defects, other morphologic defect rates, total morphologic defect rates and the migration densities in the penetration paths (p> 0.05). At the comperison of the spermatozoa numbers in the penetration paths according to the fertility groups, it was observed that in 1st and 2nd penetration paths (PA 1 and PA 2), the difference between the low (3. group) and high (1. group) fertility groups was not important. However, in the 3rd penetration path (PA 3) the results of the 1st fertility group were significantly higher than the other fertility groups (p< 0.05). 59The simultaneous effect of incubation temperature and time on the penetration path was important in PA 2 (p< 0.05) and PA 3 (p< 0.001). In the second groups (37°C-45 min), the spermatozoa numbers in PA1 and PA3 were found to be differnt in the 1st and 2nd fertility groups (p< 0.05). Similarly, in the 5th group (41°C-15min) İn PA3 the highest spermatozoa number was observed in the 1 st fertility group (p< 001 ). It was concluded at the end of the study that SMPT which is a developing new technique based on counting the cells found at different levels of the straw is an efficient and useful technique, wich is better to used combined together with examination of other spermatological characteristics. Better results in PA 3 path, efficiently use of 37°C for 45 minute incubation technique, are also achieved results of our study. We have also the views that it would be beneficial to investigate higher temperatures and shorter incubation techniques such as 41°Cand 15 minute. Key Words: Bull, sperm, Cervical mucus penetration test, spermatologic characteristics, fertility. 60