İn vivo yara modellemesine alternatif in vitro yara modellemesi
Alternative to experimental animal studies in vitro wound modelling
Yazar: ESİLA ECE AKKAYA
Danışman: PROF. DR. OĞUZ KUL
Kırıkkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veterinerlik Patolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Hücre kültürü = Cell culture ; Modelleme = Modelling ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries ; İn vitro = In vitro ; İn vivo = In vivo

Özet:
Bu tez çalışmasında canlı hayatı sona ermediği sürece her zaman gündemde ve güncel olacak yara ve yara iyileşmesinin in vivo modellemeye gerek kalmadan hücreler kullanılarak modellenmesi amaçlanmıştır. İn vivo modellemelerde yara iyileşme fizyolojisinin farklı olmasının ortaya çıkardığı dezavantajları kaldırmak ve canlıdaki organoid yapıyı hücre kültüründe oluşturmak için 3B kültür çalışması yapıldı. Fibroblast ve HaCaT hücre hattı kullanıldı. PRP – fibroblast, matrigel fibroblast ve fibroblast- PRP -HaCaT şeklinde iç grup yapıldı. Sferoid oluşturularak matrigel ve PRP jel hücre iskelesi tabanına oluşturulan sferoidlerden ekim yapılarak klinikte yara iyileşmesinde kullanılan aktivatör ve inhibitör maddeler etkisinde gelişimleri ve çoğalmaları incelendi. 0,24,48 ve 72. Saatlerdeki gelişimleri fotoğraflanarak 'Image J ' programı ile alan ve çevre bakımından değerlendirildi.
Sonuç olarak: Kontrol grupları ve aktivatör gruplarında sferoid oluşumunun arttığı ve oluşan sferoid yapıların büyüdüğü görüldü. İnhibitör madde etkisinde olan gruplarda sferoid oluşumunun belirgin bir şekilde azaldığı oluşan sferoid yapıların ise bozulduğu belirlendi. Oluşan sferoid yapıların büyüklüğü ve çokluğu hücre hücre etkileşimlerin ve hücre matriks etkileşimlerinin artması ve iyi bir göstergesi olarak kabul edildi aktivatör maddenin eklendiği gruplardaki gelişme yara iyileşmesinde fibroblast etkinliği ile doğru orantılı olarak değerlendirildi. Yara hattına uygulanacak aktivatör maddenin o bölgede hücre etkinliğini artırarak bölgedeki hüce hücre etkileşimlerine destek olacağı inhibitör maddenin ise bu etkileşimleri azaltarak ya da bozarak yara iyileşmesini geciktireceği sonucu elde edildi. Böylelikle in vivo yara çalışmasına alternatif ve farklı hücre hatları ile ya da farklı hücre iskeleleri kullanılarak yapılacak olan 3B kültürlerin insan organoid yapısını daha iyi yansıtacağı ve hücre hücre etkileşimlerinin daha iyi gösterilebileceği in vitro modellemelerin yapılabileceği ve modellemelerin geliştirilebileceği kanısına varıldı.

Anahtar sözcükler: İn vivo, in vitro, 3B, hücre kültürü, yara, yara iyileşmesi

Abstract:
In this thesis study, it is aimed to model wound and wound healing, which will always be on the agenda and up-to-date, using cells without the need for in vivo modeling, as long as the living life does not end. In vivo modeling, a 3D cultural study was carried out to remove the disadvantages of different wound healing physiology and to create the organoid structure in the living in cell culture. Fibroblast and HaCaT cell line were used. PrP – fibroblast, matrix fibroblast and fibroblast- PRP -HaCaT were made in the form of internal group. Spheroids were created and sedimented from spheroids created at the base of matrigel and PRP gel cell scaffolding and their development and proliferation were examined under the influence of activators and inhibitors used in wound healing in the clinic. Their development in the hours 0,24,48 and 72 hours was photographed and evaluated in terms of area and environment with the 'Image J' program.
As a result: It was seen that spheroid formation increased and spheroid structures grew in control groups and activator groups. It was determined that the formation of spheroids decreased significantly in the groups under the influence of inhibitors and the spheroid structures were disturbed. The size and multiplicity of spheroid structures formed were considered to be a good indicator of the increase in cell cell interactions and cell matrix interactions, and the development in the groups in which the activator substance was added was evaluated in direct proportion to fibroblast efficacy in wound healing. It was concluded that the activator substance to be applied to the wound line will increase cell activity in that region and support cell interactions in the region, while the inhibitory substance will delay wound healing by reducing or disrupting these interactions. Thus, it was concluded that 3D cultures, which will be done with alternative and different cell lines or using different cell scaffolds, will better reflect human organoid structure and in vitro modeling can be done and modeling can be improved, where cell cell interactions can be shown better.

Keywords: In vivo, in vitro, 3D, cell culture, wound, wound healing