PINK1 Ve SWAP70 genlerinin klonlanmasıyla oluşturulan proteinlerin behçet hastalarında ELISA yöntemi ile taranması
Screening of patients with behçet?s disease by ELISA method with proteins constitute by cloning of PINK1 and SWAP70 genes.
Yazar: ELİF UĞUREL
Danışman: PROF. DR. UĞUR ÖZBEK
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay

Özet:
Behçet hastalığı genel olarak tekrarlayan oral aftlar, genital ülserasyonlar, deri lezyonları ve üveit ile karakterize olan kronik inflamatuar bir hastalıktır. Behçet hastalığının etiyopatogenezi bilinmemektedir. Genetik olarak yatkın bireylerde mikrobiyal patojenlerin tetiklediği immunolojik anormalliklerin, patogenezinde önemli olduğu düşünülmektedir.Behçet hastalığının patogenezinin belirlenmesine yönelik SEREX yöntemi ile yapılan çalışmalardan elde edilen sonuçlar doğrultusunda PINK1 ve SWAP70 antijenlerine karşı otoantikor yanıtının oluştuğu gözlenmiştir. PINK1 antijenine karşı oluşan antikor yanıtının sadece Behçet hastalarında görülmesi PINK1'in Behçet hastalığında yeni bir aday belirteç olabileceğini ortaya koymaktadır. SWAP70 antikor varlığının Behçet hasta alt gruplarından vasküler tutulum ile bağlantılı olduğu belirlenmiştir. Behçet patogenezi açısından anlamlı olabileceği düşünülen PINK1 ve SWAP70 antijenlerinin, daha fazla örnekte ve daha hızlı taranabilmesi için, proteinlerin sentezlenerek ELISA yöntemi ile taranması da çalışmamızın bir sonraki aşaması olarak düşünülmüştür.Bu tez projesinde PINK1 ve SWAP70 genlerinin klonlanarak ekspresyonlarının gerçekleştirilmesi ve elde edilen proteinlere/antijenlere karşı oluşacak otoantikor yanıtının Behçet hasta ve sağlıklı kontrol serum örneklerinde ELISA yöntemi kullanılarak belirlenmesi amaçlanmıştır. SEREX yöntemi ile PINK1 pozitif olduğu belirlenmiş bir grup Behçet hasta ve normal serum örneğinde, PINK1 antijenine karşı oluşan antikor yanıtının değerlendirilmesi için ELISA yöntemi ile denendiğinde düşük değerler gözlenmiştir. SWAP70 antijenine karşı oluşan antikor yanıtı değerlendirildiğinde ise Behçet hasta ve sağlıklı kontrol serum örneklerindeki ELISA değerleri arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır (p= 0,9293). Seropozitifliği belirlemek için +2SD değeri kesim noktası olarak alındığında 7 hasta seropozitif olarak belirlenmiş ve normaller ile karşılaştırıldığında anlamlılık bulunmuştur (p= 0,014). Seropozitif ve seronegatif hastalardaki SWAP70 antikorlarının Behçet hasta alt gruplarındaki dağılımına bakıldığında da anlamlı bir fark bulunamamıştır.Anahtar Kelimeler : Behçet hastalığı, PINK1, SWAP70, ELISA, antikor yanıtı

Abstract:
Behçet?s disease is a chronic inflammatory disorder characterized by recurrent uveitis, skin lesions, oral aphthous and genital ulcers. The etiopathology of BD remains unclear. In individuals who are genetically susceptible, immunological abnormalities which are triggered by microbial pathogens are thought to have an important part in pathogenesis of Behçet?s disease.According to the results of studies by SEREX for research of pathogenesis in Behçet?s disease, autoantibody response to PINK1 and SWAP70 was found. It is thought that PINK1 may be a new candidate marker for BD since antibody response to PINK1 antigen has been identified only in BD patients. It is found that presence of SWAP70 antibodies were associated with vascular involvement among BD clinical sub-groups. It is thought that the next step of our study would be screening with ELISA in order to screen fast in an abundant of samples after synthesizing the proteins of PINK1 and SWAP70 which are considered as significant in BD pathogenesis.In this thesis project it is aimed to have expressions of PINK1 and SWAP70 by cloning and identify antibody responses to these proteins/antigens by ELISA method in the sera of Behçet?s disease patients and healthy controls. In order to evaluate antibody response to PINK1 antigen expressed in this study, low values were obtained by ELISA method in the sera of Behçet?s disease patients that known as PINK1 positive by experiments with SEREX. In order to evaluate antibody response to SWAP70 antigen, it is not found any statistically significance between ELISA values of samples in the groups of Behçet?s disease and healthy controls (p= 0,9293). When the threshold was calculated as +2SD to determine seropositivity, 7 patients were found as seropositive and there was found a significancy when comparing to controls (p= 0,014). SWAP70 antibodies in seropositive and seronegative patients were compared to BD subgroups but no significant difference was found.Key words: Behçet?s disease, PINK1, SWAP70, ELISA, antibody response