Ege Bölgesi'nde üzümlerde Botrytis cinerea izolatlarının bazı fungisitlere dayanıklılık durumlarının belirlenmesi ve moleküler karakterizasyonu
The determination of resistance levels of the Botrytis cinerea isolates to some fungicides and their molecular characterization on grapes in Aegean region
Yazar: AHMET KAAN SELVİ
Danışman: PROF. DR. PERVİN KINAY TEKSÜR
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Bitki Koruma Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Ziraat = Agriculture
Dizin: Bitki hastalıkları = Plant diseases ; Botrytis cinerea = Botrytis cinerea ; Fungusitler = Fungicides ; Üzüm = Grape

Özet:
Botrytis cinerea bağın en önemli hastalık etmenlerinden biridir. Hastalığın mücadelesinde çok yoğun fungisit kullanımı patojenin dayanıklılık kazanma riskini ortaya çıkarmaktadır. Çalışmada Ege Bölgesi'nde bağ alanlarından toplanan B. cinerea izolatlarının en fazla kullanılan fungisitlere (pyrimethanil, iprodione, fenhexamid, cyprodinil+fludioxonil, boscalid) karşı in vitro ve in vivo koşullarda duyarlılık düzeyleri test edilmiştir. Bu izolatların moleküler yöntemlerle aralarındaki genetik farklılık ortaya konmuştur. ED50 değerlerine göre pyrimethanil ve iprodione miselyal gelişimi engellemede düşük derecede etkili bulunurken, fenhexamid ve cyprodinil+fludioxonil yüksek derecede etkili fungisitler olarak saptanmıştır. Fungisitlerin farklı dozlarında B.cinerea izolatlarının spor çimlenmesine bakıldığı çalışmada cyprodinil+fludioxonil'in 3 μg/ml dozunda, tüm izolatlarının spor çimlenmesini engellediği görülmüştür. In vivo koşullarda, pyrimethanil'in 5-10 μg/ml doz aralığında, B.cinerea izolatlarının % 50'sinin, iprodione'nun ise aynı doz aralığında izolatların %70'nin miselyal gelişimini engelleyemediği görülmüştür. Hem in vitro hemde in vivo da cyprodinil+fludioxonil karışımı miselyal gelişimi en fazla engelleyen etkili madde olarak bulunmuştur. B.cinerea izolatlarının tümünde mutasyon bölgesi (G143A) allel spesifik primerlerle (BcAR-F; 5'-GGC AAA TGT CAC TGT GAG C-3', BcAR-R; 5'-ACC ATC TCC ATC CAC CAT ACC T-3') tespit edilmiştir. Ayrıca izolatlar arasındaki genetik farklılığı belirlemek için primerler (Boty_442, Boty_1006, F300, F1500) aracılığıyla moleküler testler yapılmış ve 7 izolatın elektroferez jel görüntüsünde 604 bp uzunluğunda bant elde edilmiştir.

Abstract:
Botrytis cinerea is the most destructive pathogen on grapes. The usage of very intensive fungicides to control the disease causes the risk of acquiring the pathogen resistance. In this study, Botrytis cinerea isolates were collected from the vineyards in the Aegean Region. Isolates were tested for their sensitivity to fungicides (pyrimethanil, iprodione, fenhexamid, cyprodinil+fludioxonil, boscalid) in vitro and in vivo conditions. Genetic differences between these isolates by molecular methods were also determined with specific primers. According to ED50 value of fungicides pyrimethanil and iprodione were found to low effective while fenhexamid and cyprodinil+fludioxonil were highly effective against mycelial growth of isolates. The efficacy on spore germination of B.cinerea isolates was determined at different doses of the fungicides. Cyprodinil+fludioxonil at the dose of 3 μg/ml inhibited spore germination of all B.cinerea isolates. It was observed that pyrimethanil did not inhibit mycelia growth of 50% of B.cinerea isolates and iprodione 70% in the dose range of 5-10 μg/ml. Both in vitro and in vivo conditions it was determined that cyprodinil+fludioxonil mixture was the most effective active ingredients to inhibit mycelial growth of isolates. All isolates had a point mutation (G143A). Therefore it was detected with allel-specific primers (BcAR-F; 5'-GGC AAA TGT CAC TGT GAG C-3', BcAR-R; 5'-ACC ATC TCC ATC CAC CAT ACC T-3'). Furthermore, to determine the genetic differences among B.cinerea isolates  molecular analysis was carried out. In seven isolates of B.cinerea were obtained band 604 bp in gel electrophoresis of PCR products.