Malıgn epıtelyal over tümörlerının agresıvıtesınde ve ilaç dırençlılığınde rol oynayan genlerın ekspresyon düzeylerının tümör evrelerıne göre prımer ve metastatık dokularda belırlenmesı
Detection of expression levels of the genes affecting aggressivity and drug resistance of malign epithelial ovarian tumors according to tumor stages in primary and metastatic tumor tissues.
Yazar: MUALLA ÖZCAN ÇALIŞKAN
Danışman: DOÇ. DR. İBRAHİM KESER
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology ; Patoloji = Pathology
Dizin: Gerçek zaman = Real time ; Over neoplazmları = Ovarian neoplasms ; RNA = RNA

Özet:
Over kanseri, ölüme sebebiyet veren kanserler arasında 4. sırada yer alan jinekolojik malignansidir. Over kanserlerin büyük çoğunluğunu (%80-90), overin yüzey epitellerinden köken alan karsinomalar oluşturmaktadır. İlerlemiş evrede teşhis edilmiş over kanserlerinin tedavi oranı %20' den azdır ve 5 yıllık yaşam oranı % 30?40 arasındadır.Epitelyal over kanseri, jinekolojik malignansiler arasında en lenfofilik tümörlerdir. Lenf nodu metastazları erken evrede %12-%25 arasında iken, geç evrede ise %46-76 arasındadır. Bu nedenle son yıllarda epitelyal over kanserlerinde lenf nodu metastazları üzerine çok sayıda çalışma yapılmaktadır.Bu çalışmada, tümör progresyonu ve metastazında önemli rol oynayan AMF/GPI, AMFR, CTGF, RAB25 ve RASSF2A genlerinin epitelyal over tümör agresivitesi ve lenf nodu ile diğer uzak organ metastazlarındaki rolünün belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, metastaz ve tümör agresivitesi ile ilişkili olduğu belirlenmiş olan AMF/PGI, AMFR, CTGF, RAB25, RASSF2A genlerinin ekspresyon düzeyleri kantitatif olarak normal doku, primer ve metastatik epitelyal over tümörü odaklarında belirlendi ve epitelyal tip over kanserinin progresyonu ile ilişkili olup olmadığının gösterilmedi, normalde metillenmemiş olan RASSF2A tümör süpressör geninin metilasyon durumu metilasyon spesifik PCR yöntemi ile normal doku, primer ve metastatik epitelyal over tümörü odaklarında karşılaştırıldı, tümörün agresivitesine yol açan genlerin aşırı ekpresyonu ile olguların tedaviye verdikleri yanıt arasındaki ilişkiyi belirlemek için MDR-1 geninin ekspresyon düzeyi kantitatif olarak belirlendi.Bu çalışmada, 35 olguya ait tümör ve normal over veya tuba dokusu araştırıldı. 35 olgu arasından sadece 4 olgu metastatik tümöre sahipti. Kantitatif gerçek zamanlı RT-PCR ile gen ekspresyon düzeyleri belirlendi. AMF/GPI düzeyine bakıldığında, 35 olgunun 18' inde ekspresyonda artış ve 11' inde ekpresyonda azalış belirlendi. AMFR düzeyine bakıldığında, 35 olgunun 27' sinde artış ve 2' sinde azalış belirlendi. 35 olgunun 19' unda ve 4 metastatik tümör örneğinin 3' ünde CTGF gen ekspresyon düzeyinde artış ve 12' sinde ekspresyonda azalış belirlendi. RAB25A düzeyine bakıldığında 35 olgunun 28' inde ve 4 metastatik tümör örneğinin 2' sinde artış ve 6' sında azalış belirlendi. RASSF2A düzeyine bakıldığında 35 olgunun 8' inde artış ve 18' inde ise azalış belirlendi. RASSF2A geninin metilasyon profili metilasyon spesifik PCR tekniği ile araştırıldı. 35 örneğin 6' sında hem metile hem de metile olmayan allele spesifik PCR da amplifikasyon gösterilmedi. Bu olgulardan 3 tanesinde RASSF2A ekspresyonu varken 3 tanesinde ise ekspresyon olmadığı gözlenmiştir. Kantitatif gerçek zamanlı RT-PCR ile MDR1 düzeyine bakıldığında 35 olgunun 17' sinde artış ve 17' sinde ve 4 metastatik tümör örneğinin 3' ünde ise azalış belirlendi.Bu çalışma sonucunda, özellikle AMF/GPI, AMFR, RAB25A ve CTGF gen ekspresyonlarında gözlenen artışın olguların tümör evreleri ile ilişkili olması tümörün agresivitesi ve metastazı ile ilişkili olduğunu göstermektedir. RASSF2A gen ekspresyonunun, incelenen tüm borderline tümörlerde azalış göstermesi, RASSF2A geninin tümör oluşumunun erken evresinde rol alabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Ovarian cancer is the fourth leading cause of cancer death in women. Carcinomas of the surface epithelium of the ovary comprise the large majority (80-90%) of cancers. The cure rate for ovarian cancer diagnosed at an advanced stage is less than 20% and 5-year survival rate is 30-40%.Epithelial ovarian cancers are the most lymphophilic tumors among the gynecologic malignancy. Lymph node metastasis ranges between 46%-76% in advanced stage and 12%-25% in early stage. Therefore, the lymph node metastasis are the most studied subjects in epithelial ovarian cancer in the last decades.In this study, we aimed detection of the roles of the AMF/PGI, AMFR, CTGF, RAB25 and RASSF2A genes in the tumor aggressivity and lymph node, the other distant organs metastasis in normal tissue, primary and metastatic epithelial ovarian cancer. For this purpose, expression levels according to tumor grades, of AMF/PGI, AMFR, CTGF, RAB25 and RASSF2A genes which play important roles in tumor progression and metastasis in primary and metastatic epithelial ovarian cancer lesions, were quantitatively detected and their effects on tumor progression were demonstrated; the role of early methylation of RASSF2A tumor supressor gene in tumor progression was revealed; and, along with detection of gene expressions leading to tumor aggressivity, MDR-1 gene expression was detected to gather data on drug resistance.In the study, tumor and normal ovary or tuba tissue of the 35 patients were invetigated by Real time quantitative RT-PCR. Among these 35 cases, only four cases had metastatic tumor as well as primer tumors and normal tissue. Evaluation of the AMF/GPI gene expression level revealed increase in 18 of the 35 samples and decrease in 11 of the 35 samples. Evaluation of the AMFR gene expression level revealed increase in 27 of the 35 samples and decrease in 2 of the 35 samples. Evaluation of the CTGF gene expression level revealed increase in 19 of the 35 samples and 3 of the 4 metastatic tumor samples and decrease in 4 of the 35 samples. Evaluation of the RAB25 gene expression level revealed increase in 28 of the 35 samples and 2 of the 4 metastatic tumor samples and decrease in 6 of the 35 samples. Evaluation of the RASSF2A gene expression level revealed increase in 8 of the 35 samples and decrease in 18 of the 35 samples. The methylation profiles of the RASSF2A gene were investigated by methylation specific PCR tecnique. In 6 of the 35 samples, the PCR amplification were not observed both unmethylated and methylated allel spesific PCR. Reexamination of the 6 samples by Real time RT-PCR revealed that RASSF2A expression was observed in 3 samples but in 3 samples. Evaluation of the MDR1 gene expression level by quantitative real time RT-PCR revealed increase in 17 of the 35 samples and decrease in 17 of the 35 tumor samples.