Lakkaz enziminin bazı kil mineralleri üzerine immobilizasyonu ve kinetiğinin araştırılması
Investigation of immobilization and kinetic on some clays of laccase enzyme
Yazar: FULYA DEMİRBAŞ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ZEKİ YALÇINKAYA
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada, endüstride geniş uygulama alanı olan lakkazın immobilizasyonu incelenmiştir. Bu amaçla ticari lakkaz enzimi fiziksel adsorpsiyon yöntemi kullanılarak bazı killer üzerine immobilize edilmiştir. Serbest ve immobilize lakkazların aktifliğine pH, sıcaklık, substrat derişimi ve depolama süresi etkileri incelenmiştir.Serbest lakkaz için optimum pH ve sıcaklık sırayla 5.5 ve 40?C olarak ve bütün immobilize enzimler (bentonit, diatomit ve bardakçı kili) için optimum pH ve sıcaklık sırayla 5.5-6.0 ve 40?C olarak elde edildi. İmmobilize lakkazın aktifliği üzerine pH'ın ve sıcaklığın etkileri, immobilize enzimin özeliklerinin, serbest enzimin özelikleri ile aynı olduğunu gösterdi. Elde edilen kinetik sabit değerleri birbirine oldukça yakın çıktı. Ayrıca adsorpsiyonun enzimin kinetik özelliklerini önemli ölçüde etkilemediği ortaya konuldu. İmobilize enzimin aktivitesi iyi bir kararlılık gösterdi. 2 ayda immobilize lakkaz aktivitesinin sadece  %20-%30'u kayboldu.
	Serbest enzim, immoblize enzimler için Km değerleri sırasıyla 0.0700 mM, 0.0724 mM, 0.0831 mM ve 0.0935 mM ve Vmak değerleri 0.0695, 0.0216, 0.0236 ve 0,0233 mMdak-1 olarak bulunmuştur. İmmobilize şeklinin Km değeri serbest şeklininkinden daha büyük Vmax değeri daha küçüktür. İmmobilize lakkaz, serbest enzimden daha düşük belirgin bir aktivite ve daha düşük bir sübstrat afinitesi gösterdi. İmmobilize enzimin sıcaklık değişimi ve depolama süresine karşı direnç artışı, killer üzerine lakkaz immobilizasyonu enzim immobilizasyonu için yararlı olduğunu gösterir.

Abstract:
In this study, the immobilization of laccase, used in multiple areas in industry, was investigated. For this goal, commercial laccase enzyme was immobilized on some clay minerales by the method of physical adsorption. The effect of pH, temperature, substrate concentration and storage time on the activities of free and immobilized laccases were investigated. The optimum temperature and pH were determined as 40°C and 5.5 for free laccase and 5.5-6.0 and 40°C for all immobilized laccases (bentonite, diatomite and Bardakçı clay) respectively.The pH, temperature effects on the activity of the immobilized laccase show that characteristics of the immobilized enzyme are similar to those of the free one. It was found that the obtained Kinetic Coefficient values were quite close to each other.In addition, it was found out that adsorbtion did not effect the kinetic features of enzyme enormously.Activity of the immobilized enzyme showed good stability.İn2 month, Only 20%-30 % of the immobilized laccase activity was lost.
Kinetic parameters were calculated as 0.0700 mM, 0.0724 mM, 0.0831 mM and 0.0935 mM forthe Michael's constant Km and 0.0695, 0.0216, 0.0236 and 0.0233 mM.min-1 for Vmax for free laccase, immoblized laccases respectively.The Km value is larger and Vmax is smaller in the immobilized form than those in the free form. The immobilized laccase displayed a lower specific activity and a lower substrate affinity than the free enzyme.The increased resistance of the immobilized enzyme against the changes of temperature and storage time indicates that immobilizing laccase onto the clays is useful for enzyme immobilization.