Trıchloroethylene ile oluşturulmuş karaciğer hasarıüzerine Thymoquınone'un etkileri ve heat shock protein70'in immün reaktivitesi
Effects of thymoquinone (TQ) on liver damage induced trichloroethylene (TCE) and heat shock protein (HSP) 70 immunreactivity
Yazar: ARZU GÜNEŞ
Danışman: PROF. DR. NERİMAN ÇOLAKOĞLU
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Çevrede yaygın bulunan trichloroethylene, endüstride geniş kullanım alanı
olan kimyasal ajandır. Daha önce yapılan çalışmalarda thymoquinone'un çeşitli
toksik ajanların neden olduğu organ hasarlarında koruyucu etkisinin olduğu
bulunmuştur. Heat Shock Protein (HSP) 70, sirotik karaciğer hastalığında,
hepatokarsinogenezisin erken belirteçlerinden birisidir ve stres şartlarında
ekspresyonu artmaktadır. Bu çalışmada, trichloroethylene ile oluşturulmuş
karaciğer hasarına karşı thymoquinone'un olası koruyucu etkilerinin incelenmesi
ve HSP70'in immün reaktivitesindeki değişikliklerinin belirlenmesi amaçlandı.
Bu amaçla, 3 hafta süren deneyde, 25 adet Wistar-Albino cinsi erkek sıçan
kullanıldı. Sıçanlar 5 gruba ayrıldı. GrupI; kontrol grubu. GrupII'deki sıçanlara
1000mg/kg/gün trichloroethylene verildi. GrupIII'teki sıçanlara 1000mg/kg/gün
trichloroethylene ile birlikte 50mg/kg/gün thymoquinone uygulandı. GrupIV'teki
sıçanlara 50mg/kg/gün thymoquinone verildi. GrupV'teki sıçanlara 1ml/gün
dimethyl sulfoxide verildi. Tüm uygulamalar intragastrik gavaj tekniğiyle yapıldı.
3 haftanın sonunda denekler ksilazin ve ketamin ile sağlanan anestezi altında
servikal dekapitasyonla ötenazi edildi. Çıkarılan karaciğer dokuları, %10'luk
formaldehit solüsyonunda tespit edildi, etanol ile dehidrate edildi ve parafine
gömüldü. 5µm kalınlığında kesitler alındı. Kesitlerin bir kısmı
Hematoksilen&Eozin, Masson'un üçlü boyası ve Periodic Acid Schiff teknikleri
kullanılarak boyandı. Kalan kesitler, HSP70 immün reaktivitesi belirlenmek
üzere kullanıldı. Hazırlanan preparatlar fotomikroskopta incelenip fotoğraflandı.
2
Gruplar arası HSP70 immün reaktivitesindeki farklılıklar istatistiksel analizlerle
belirlendi.
Işık mikroskopik incelemelerimizde, trichloroethylene'in karaciğerde;
vasküler konjesyona, nekroza, inflamasyona, sinüzoidal dilatasyona sebep olduğu
ve HSP70 immün reaktivitesinde belirgin bir artış oluşturduğu belirlendi. Gruplar
arası HSP70 immün reaktivitesinin yaygınlığının belirlemek için yaptığımız
istatistiksel analizler de bulgularımızı destekler niteliktedir. Thymoquinone'un ise
trichloroethylene kaynaklı yapısal değişiklikleri nispeten azalttığı görüldü.
Sonuç olarak, bu çalışmada trichloroethylene'in yüksek dozda tekrarlayan
maruziyetinin karaciğer için oldukça toksik olduğu ortaya konulmuştur.
Trichloroethylene'e bağlı HSP70 ekspresyonundaki artış, iddiamızı
desteklemektedir. Bu bağlamda, gerek çevresel kontaminasyon için gerekse ilgili
meslek gruplarının karşı karşıya olduğu potansiyel tehlikeler için koruyucu
tedbirlerin alınmasının gerekliliği ortaya çıktı.
Anahtar Kelimeler: Trichloroethylene, thymoquinone, HSP70, karaciğer,
immünohistokimya

Abstract:
Effects of Thymoquinone (TQ) on Liver Damage Induced Trichloroethylene
(TCE) and Heat Shock Protein (HSP) 70 Immunreactivity
Trichloroethylene is widely used industrial chemical and a common
environmental contaminant. It was found that thymoquinone had protective
effects on organ injuries caused by various toxic agents. HSP70 is one of the early
markers of hepatocarcinogenezis in cirrhotic liver disease and its expression levels
increases in the organism in stress conditions.
The aim of this study was to investigate the possible protective effects of
thymoquinone on the liver damage induced trichloroethylene exposure and
examination on the changes of HSP 70 immunreactivity.
For this purpose, 25 male Wistar-Albino rats were used. The experimental
period was determined as 3 weeks. The rats were divided into 5 groups. Group I:
control group. Rats in Grup II were treated 1000mg/kg/day trichlorethylene. Rats
in Grup III were treated trichlorethylene 1000mg/kg/day with 50mg/kg/day
thymoquinone. Rats in Group IV were treated 50mg/kg/day thymoquinone. Rats
in Group V were treated 1ml/day dimethyl sulfoxide. All treatments were given
by intragastric gavage technique. At the end of 3 weeks treatment, rats were
anesthetized with xylazine and ketamine and sacrificed by cervical decapitation.
Removed liver tissues was fixed in 10% formaldehyde solution, dehydrated in
ethanol series and embedded in paraffin. 5μm thick sections, some of them, were
stained with Hematoxyline and Eosin, Masson's trichrome and Periodic Acid
Schiff techniques. The remaining sections were used to determine the 
4
immunreactivity of HSP70. Tissue sections were examined in photomicroscope
and photographed. Differences of HSP70 immünreactivity between groups were
determined by statistical analysis.
Light microscopic investigation showed that trichloroethylene caused to
vascular congestion, necrosis, inflammation, sinusoidal dilatation in the liver and
significant increases in immunreactivity of HSP70. The statistical analyzes seem
to support our findings including differances between the groups of prevalence of
HSP70 immune reactivity. It was detected that thymoquinone relatively decreases
trichloroethylene induced structural changes.
As a result, in this study, it was found that long-term recurrent exposure to
high doses of trichloroethylene may be highly toxic for liver. This influence of
trichloroethylene exposure was confirmed by increased immunreactivity of
HSP70. In this context, it is emerged for the necessity of taking protective
precautions for both environmental contamination and professional groups faced
by potential hazards of trichloroethylene.
Keywords: Thymoquinone, trichloroethylene, HSP 70, liver,
immunohistochemistry