Metastatik ve non metastatik tümörlerde nefronektin ekspresyonu
Expression of nephronectin in metastatic and non metastatic tumors
Yazar: SAYRA DİLMAÇ
Danışman: PROF. DR. NECDET DEMİR
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Ki-67 = Ki-67 ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Meme kanseri kadınlarda sıkça görülen ve tedavi edilmezse ölüme sebebiyet verebilen bir kanser türüdür. Meme kanseri metastaz yapma yeteneği sebebiyle tehlikeli bir hastalıktır. Metastaz; tümörün bulunduğu yerden ayrılıp başka bir organda yeni bir tümör oluşturmasıdır. Metastazın gerçekleşebilmesi için tümör önce bulunduğu dokuda büyüyüp gelişmeli daha sonra da damarlar yardımıyla uzak organlara göç etmelidir. Tümör metastazı sırasında yeni gideceği çevredeki normal yapıyı bozarak kendine bir ortam yaratmalıdır.  Bu yeniden düzenlenmede de hücre dışı matriks proteinleri de görevalmaktadır.
Nefronektin; epiteliyal mezenkimal geçişte rol oynadığı bilinen bir hücre dışı matriks proteinidir. Tümör gelişiminde rol alabileceği düşünülen nefronektinin metastatik tümörler üzerindeki etkisini gösteren bir çalışma henüz yapılmamıştır. Bu nedenle çalışmamızda metastatik ve metastatik olmayan hücre hatlarını kullanarak oluşturulan primer tümörlerde ve metastaz alanlarında nefronektin ekspresyonunu değerlendirmeyi amaçladık. 
Çalışmamızda metastatik olduğu bilinen 4TLM ve 4THM; ve metastatik karakterde olmayan 67NR hücre hatları enjekte edilen farelerden 12. ve 25. günlerde alınan pimer tümör, akciğer ve karaciğer dokuları, ışık mikroskobu ve western blot araştırmaları için hazırlandı. Elde edilen kesitlerde nefronektin ve Ki67 proteinleri için immünohistokimya metodu uygulanarak bu proteinlerin dokulardaki dağılımları belirlendi. Western blot tekniği kullanılarak da nefronektin ve Ki67 ekspresyon miktarları protein düzeyinde araştırıldı. 
Bulgularımıza göre; nefronektin ekspresyonunun primer tümör, akciğer ve karaciğerlerde, metastazın yoğunluğuna bağlı olarak azaldığı gözlendi. Ayrıca metastazın ileri evresi olan 25. günde, metastazın henüz gerçekleşmediği 12. güne göre nefronektin ekspresyonunda bir azalma olduğu görüldü. Proliferasyon belirteci olan Ki67'nin; metastatik hücre hatlarından alınan dokularda yoğun olarak lokalize olduğu; ayrıca metastatik olmayan hücre hattından alınan dokularda da yoğun olmasa da varlığı belirlendi. 
Çalışmamız; metastatik yetenekteki hücre hatlarından elde edilen primer tümör, akciğer ve karaciğer dokularında nefronektin ekspresyon değişimini gösteren literatürdeki ilk çalışmadır. Elde edilen bulgular; hücrelerin dokuya invaze olabilmeleri ve hücre dışı matriks düzenini değiştirerek metastaz yapabilmelerinde nefronektin proteininin bağlantı noktalarında ayrılmaları sebebiyle ekspresyonunun düştüğü ve hücre dışı matriksdeki yerleşiminin bozulduğu ihtimalini düşündürmektedir. Özellikle metastazın yoğun olduğu alanlarda ekspresyonunun düşmesi bu proteinin metastatik süreçte görevli olma ihtimalini akla getirmektedir.

Abstract:
Breast cancer, which can cause of death if its not treated, is commonly occurs in women . One of the reason of breast cancer as a dangerous illness high quality of the its metastatic ability. Metastasis means that; a tumor split from an organ and create a new tumor one another organ.  For existing metastasis firstly tumor grow up in settled tissue and then migrate to a new organ via blood vessels. During the tumor metastasis, tumor create a new environment with disturb to normal tissue structure  a new tissue. So during the reprogramming to extracellular matrix proteins also play a role.
Nephronectin, an extracellular matrix proteins and as a play a role epitelial mesenchymal transition. There is no working about the effect of nephronectins which can take a role in tumor grows on metastatic tumors. So, in this study we aimed to determine the nephronectin expressions by using metastatic and non-metastatic cell lines in primary tumors and metastasis.
In our study, 4TLM and 4THM cell lines, known as metastatic, and 67NR cell lines, known as non-metastatic, is ortotopicaly injected to mice. Primary tumors, lung and liver tissues, taken in 12th and 25th day, is prepared for light microscopy and western blot investigations. Immunohistochemistry methods are implied for nephronectin and Ki67 proteins in tissue sections; and localization of this proteins are determined. The protein expression levels of nephronectin and Ki67 were also investigated by western blot.
According to our results, decreased of nephronectin expressions were observed in primary tumors, lung and liver in 4TLM and 4THM injected mice.  Moreover there is a notablu decrease of nephronectin expressions 25thday ,high level of metastasis, than 12th day, not yet metastasis. Ki67 as a proliferation marker is highly localizated in metastatic cell lines tissues. It is also seemed not highly, in non-metastatic cell line tissues. Ki67 expression levels is clearly observed in tissue taken from 25th day than the tissue taken of 12th day.
In our study we showed for the first time in literature that the expression levels of nephronectin demonstrated in primary tumors, lung and liver tissues which is obtained from metastatic cell lines. Result of our study shows that the possibility of that cancer cells can disturb the localization of nephronectin proteins in extracellular matrix for invasion to tissue and reprogramming extracellular matrix to metastasis. Accordingly nephronectin is considered as a protein which play a role in during metastasis process.