Kütahya yöresinde çeşitli kaynaklardan elde edilen Staphylococcus aureus izolatlarının karakterizasyonu
Characterization of Staphylococcus aureus isolated from varying sources in kutahya province of turkey
Yazar: AYSEL GÜLBANDILAR
Danışman: PROF.DR. KIYMET GÜVEN
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada Kütahya bölgesindeki gıda örneklerinden, gıdaçalışanlarından, gıda alet-ekipmanlarından ve klinik örneklerden 106 adetStaphylococcus aureus bakterisi izole edilerek karakterize edilmiş ve tiplendirmeyöntemleri ile aynı yerdeki gıda elleyicisiyle onların hazırladıkları gıdalardanizole edilen izolatlar arasında akrabalık ilişkisi araştırılmış ve bu kişilerinportörlüğünün belirlenmesi amaçlanmıştır.İdentifikasyonu için geleneksel biyokimyasal testler ve VITEK sistemikullanılmıştır. Fenotiplendirme için antibiyotik duyarlılık testleri, SET-RPLA testkiti ile enterotoksin belirleme testi, SDS-PAGE ile toplam hücre proteinlerininanalizi ve FAME analizleri, genotiplendirme için ise Sma I restriksiyon enzimi ilePFGE ve Eco RI ile otomatik ribotiplendirme yöntemleri kullanılmıştır.Test edilen izolatlardan sadece dört gıda ve iki klinik izolatta metisilindirenci belirlenmiştir. Mupirosin, teikoplanin, vankomisin'e karşı dirençsaptanmamıştır. İzolatların % 91,74'ü penisilin G'ye karşı dirençli bulunmuştur.Test edilen toplam 99 izolat arasında üç izolatın hiçbir enterotoksini üretmediği(%3.03), üç izolatın C ve D enterotoksinlerini birlikte ürettiği (%3.03), geri kalan93 izolatın tümünün ise D enterotoksinini ürettiği (%93.93) belirlenmiştir. SDS-PAGE ile elde edilen protein profillerinde izolatlar ile izole edildikleri kaynakarasında bir ilişki belirlenememiştir. Bu çalışma ile, S. aureus identifikasyonu içinFAME analizine dayalı bir yağ asitleri veri tabanı oluşturulmuş ancak izolatlarınyağ asidi profilleri ile kaynak arasında kesin bir ilişki saptanamamıştır.PFGE ve ribotiplendirme ile genotiplendirme çalışmalarında sırasıyla 9pulsotip ve 7 ribogrup belirlenmiş ve bu yöntemlerin özellikle aynı kaynaklardanizole edilen S. aureus genotiplerinin belirlenmesinde ve enfeksiyon yollarınınizlenmesinde güvenilir bir şekilde kullanılabilecekleri ortaya konmuştur.Anahtar Kelimeler: Staphylococcus aureus, VITEK, yağ asitleri, tiplendirme,PFGE, Ribotiplendirme.

Abstract:
In this study, 106 Staphylococcus aureus strains were isolated fromdifferent food samples, food handlers, food processing equipments and clinicalsamples in Kutahya province. The isolates were characterised and the relationbetween isolates from food handlers and foods from the same source wasinvestigated in order to explain the infection route of the bacterium.Conventional biochemical techniques and VITEK were used foridentification of S. aureus isolates. Phenotyping included antibiotic sensitivitytests, enterotoxin determination test with SET-RPLA, total cell protein analysis bySDS-PAGE and fatty acid methyl esters analysis (FAME), however genotypingwas carried out by using pulsed field jel electrophoresis (PFGE) with Sma Irestriction enzyme, and otomatic ribotyping with Eco RI .Methicilin resistance was observed in four isolates obtained from foodsamples and two clinical isolates. No resistance was determined to antibioticsmupirocin, teicoplanin and vancomycin. 91.74 % of isolates tested were resistantto penicilin G. 99 isolates were tested for enterotoxin production and three isolates(3.03 %) did not produce any entorotoxin, three isolates (3.03 %) producedentorotoxins C and D together, and the remaining 93 isolates producedentorotoxins D only. No relation between isolates and sources of isolates by usingtheir protein profiles determined with SDS-PAGE method was obtained. In thisstudy, a FAME database based on the analyses of fatty acids was established foridentification of S. aureus but, no relation was observed between fatty acidprofiles and source of the isolates.In genotypic studies, nine pulsotypes with PFGE and seven ribotypeswith ribotyping were determined. It is concluded that these methods can be usedreliably to determine S. aureus genotypes among the isolates obtained from thesame sources and monitor infection paths.Keywords: Staphylococcus aureus, VITEK, fatty acids, typing, PFGE,Ribotyping.