Bakla (Vicia faba L.) polifenol oksidazının biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi
Investigation of biochemical properties of polyphenol oxidase from broad bean (Vicia faba L.)
Yazar: CANAN UZUN DURGUN
Danışman: DOÇ. DR. NİMET BALTAŞ
Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Bakla = Broad bean ; Biyokimyasal özellikler = Biochemical properties ; Karakterizasyon = Characterization ; Polifenol oksidaz = Polyphenol oxidase

Özet:
ÖZET

BAKLA (Vicia faba L.) POLİFENOL OKSİDAZININ BİYOKİMYASAL ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ

Bu çalışmada, Antalya İlinden toplanan Bakla'dan (Vicia faba L.) kısmen saflaştırılan polifenoloksidazın (PFO) biyokimyasal özellikleri incelendi. Bakla PFO' sunun doğal elektroforezde 2 tane izoenziminin olduğu tespit edildi. Enzimin en çok ilgi duyduğu substrat hidrokafeik asiti takiben 4-metilkatekol ve katekol olarak belirlendi. Hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında enzimin optimum sıcaklık değeri 30 °C olarak bulundu. Bakla PFO' sunun optimum pH değeri hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında, sırasıyla 8,0; 4,0 ve 4,0 olarak tespit edildi. Hidrokafeik asit, 4-metilkatekol ve katekol substratları varlığında Bakla PFO' sunun Km değeri, Lineweaver-Burk eğrisi ile, sırasıyla 0,172 mM; 7,133 mM ve 9,158 mM olarak hesaplandı. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, hidrokafeik asit substratı varlığında 10 günün sonunda, 30 ºC'de 10 gün sonra aktivitesinin % 77' sini koruduğu gözlendi. En yaygın PFO inhibitörleri olan askorbik asit, benzoik asit, sodyum azid ve sodyum metabisülfit için IC50 değeri sırası ile 8,25 µM; 11,00 mM; 60,00 mM ve 116,00 µM olarak belirlendi. Na+, K+, Ba+2, Mg+2, Mn+2, Hg+2, Ni+2, Cu+2, Ca+2 ve Fe+2 iyonlarının 1 mM; 5 mM ve 10 mM' lık son konsantrasyonda Bakla PFO'su üzerine inhibisyon etkisi incelendi.

Abstract:
ABSTRACT

INVESTIGATION OF BIOCHEMICAL PROPERTIES OF POLYPHENOL
OXIDASE FROM BROAD BEAN (Vicia faba L.)

In this study, the biochemical properties of partially purified polyphenoloxidase from broad bean (Vicia faba L.) were investigated, collected from Antalya Province. It was determined that the broad bean PPO had 2 isoenzymes in native electrophoresis. The substrate of greatest interest for the enzyme was determined as hydrocaffeic acid, followed by 4-methylcatechol and catechol. The optimum temperature value of the enzyme was found to be 30 °C, in the presence of hydrocaffeic acid, 4-methylcatechol and catechol substrates. The optimum pH value of broad bean PFO was determined as 8,0; 4,0 and 4,0 in the presence of hydrocaffeic acid, 4-methylcatechol and catechol substrates, respectively. The Km values of the Broad bean PPO, for hidrocaffeic acid, 4-methylcatechol and catechol substrates were determined 0,172 mM; 7,133 mM and 9.158 mM, by Lineweaver-Burk curve, respectively. When the thermal stability profile of the enzyme was examined, at the end of 10 days, it was observed that, for hydrocaffeic acid substrate the enzyme retained over 77% of its original PPO activity at 30 ºC. IC50 values of ascorbic acid, benzoic acid, sodium azide and sodium metabisulfite, the most common PFO inhibitors, were determined as 8,25 µM; 11,00 mM; 60,00 mM and 116,00 µM, respectively. It was examined that the effect of the Na+, K+, Ba+2, Mg+2, Mn+2, Hg+2, Ni+2, Cu+2, Ca+2 and Fe+2, on the PPO activity, at the 1 mM; 5 mM and 10 mM final concentrations.