Oleuropeinin SH-SY5Y nöroblastom hücre hattında çeşitli hücresel yolaklardaki etkisinin belirlenmesi
Determination of the effects of oleuropein on various cellular pathways in the SH-SY5Y neuroblastoma cell line
Yazar: MÜCAHİT SEÇME
Danışman: PROF. DR. GÜLSEREN BAĞCI ; DOÇ. DR. YAVUZ DODURGA
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Beyin neoplazmları = Brain neoplasms ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Oleuropein = Oleuropein

Özet:
Nöroblastom beyin dokusu içerisinde hızlı bir şekilde yayılabilen ve çocukluk çağının en sık rastlanılan tümör çeşitlerinden birisidir. Kanser hastalığı her geçen gün gelişen teşhis ve tedavi yöntemlerine rağmen hala ölüm nedeni olarak dünyada ilk sıralardadır. Günümüzde kanser tedavisinde cerrahi müdahale, kemoterapi, immünoterapi, gen terapisi, radyoterapi ve bunlara destek amaçlı çeşitli alternatif tedaviler kullanılmaktadır. Son yıllarda çeşitli kanser türlerinin tedavisinde kullanılabilecek doğal ve biyolojik etkili bileşiklerin keşfedilmesi en popüler araştırma konuları arasında yer almaktadır. Bu bileşiklerden biri olan polifenoller grubuna ait, zeytin yaprağının etken maddesi oleuropeinin antioksidan, anti-mikrobiyal, anti-inflamatuar, anti-hipertansif, anti-kanserojen etkileri olduğu bilinmektedir. Bu çalışmanın amacı oleuropeinin SH-SY5Y nöroblastom hücre hattında hücre proliferasyonuna, invazyonuna ve koloni oluşumu, hücre döngüsü ve apoptoz mekanizmaları üzerine etkisi ve terapötik etkinliğinin in vitro olarak belirlenmesidir. Oleuropeinin hücre canlılığı üzerine etkisi XTT yöntemi ile belirlenmiş ve  IC50 dozu 48. saate 350 µM olarak bulunmuştur. Gerçek Zamanlı PZR sonuçlarına göre oleuropein hücre döngüsü ile ilişkili genlerden SiklinD1, SiklinD2, SiklinD3, CDK4 ve CDK6 down regülasyonuna ve p53 ve p21'in up regülasyonuna sebep olarak hücre döngüsünü durdurduğu ve ayrıca Bcl-2'nin inhibisyonu, Bax, kaspaz-9 ve kaspaz 3'ün aktive edilmesiyle apoptotik yolağı indüklediği tespit edilmiştir. Western blot yöntemi ile Bcl-2 ve SiklinD1'in protein düzeyinde değişimleri gösterilmiştir. TUNEL testi ile doz grubu hücrelerde apoptotik hücre oranının %36.4±3.27'ye çıktığı bulunmuştur. Ayrıca Matrigel-İnvazyon testi ile oleuropeinin SH-SY5Y hücrelerinde invazyonu azalttığı belirlenmiştir. Koloni formasyon testi ile de koloni oluşumunu %53.6±4.71 oranında baskıladığı tespit edilmiştir. Çalışma sonuçları ile oleuropeinin, nöroblastom tedavisinde potansiyel bir anti-kanserojen ajan olabileceği gösterilmiş ve daha detaylı çalışmalar için ilk veriler ortaya koyulmuştur.

Abstract:
Neuroblastoma is one of the most common type of pediatric tumors that can spread quickly in brain tissues. Despite developed diagnosis and treatment methods, cancer is still one of the leading causes of death in the world. Many types of treatments such as surgery, chemotherapy, immunotherapy, gene therapy, radiotherapy are used for cancer therapy and various alternative treatments are also used for supporting these treatments. On the other hand, discovering the naturally and biologically effective compounds in treatments of various cancer types becomes one of the most popular research topics. Oleuropein which is active compound of olive leaves, belongs to polyphenols group and it is one of these compounds that has antioxidant, anti-microbial, anti-inflammatory, anti-hypertensive and anti-carcinogenic effects. The aim of the study is to determine the therapeutic effects of oleuropein on cell proliferation, invasion, colony formation, cell cycle and apoptotic mechanisms in SH-SY5Y neuroblastoma cell line under in vitro conditions. The effect of oleuropein on cell viability was determined by XTT method and dose of IC50 were detected as 350 µM in 48th hours. According to the Real-time PCR results, it is determined that oleuropein causes cell cycle arrest by downregulating of CylinD1, CylinD2, CyclinD3, CDK4, CDK6 and upregulating of p53 and p21 gene expressions. Oleuropein also induces apoptosis by inhibiting of Bcl-2 and activating of Bax, caspase-9 and caspase-3 gene expressions. Protein expression of CylinD1 and Bcl-2 were determined by western blot analysis. According to TUNEL results, apoptotic cell ratio was found %36,4±3,27 in oleuropein dose group. Matrigel-invasion chamber tests showed that oleuropein decreases invasion in SH-SY5Y cells. Colony formation test results demonstrate that colony numbers in dose group were suppressed in a ratio of %53,6±4,71. All these results demonstrated that oleuropein can be a therapeutic agent in the treatment of neuroblastoma and hereby the first data have been put forward for more detailed studies.