Homosistein metabolizmasında rol oynayabilecek gen değişimlerinin incelenmesi
Genetic polymorphism at homocysteine metabolism related genes
Yazar: LÜTFİYE YASEMİN KOÇ
Danışman: PROF.DR. NEJAT AKAR
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Bu arastırmada homosistein metabolizmasında görevli olan MTHFR enizimdeki 677.nükleotitde gerçeklesen CT degisimi, CBS enzimindeki 844. nükleotitteki 68 bç'likinsersiyon, TYMS enziminin 3'UTR bölgesindeki 6 bç'lik insersiyon/delesyon ve DHFRenzimindeki 19 bç'lik delesyon incelenmis, ayrıca bu mutasyonların homosistein düzeyiüzerine olan etkileri arastırılmıstır. Önceki çalısmalarda MTHFR, CBS ve TYMSenzimlerindeki mutasyonlar konu olmusken DHFR enzimi ile ilgili yapılan bu çalısma Türktoplumunda ilk kez konu olmustur. Ayrıca yapılan çalısmalarda enzimlerdeki mutasyonlar birhastalıkla iliskilendirilmisken bu arastırmada herhangi bir hastalıkla iliskilendirilmemis veönceden homosistein düzeyi belirlenmis 296 birey çalısma grubunu olusturmustur.Çalısmada MTHFR 677 CT degisimi için Real-Time PCR yöntemi uygulanırken; CBS844ins68, DHFR 19 bç'lik delesyon ve TYMS 3'UTR 6 bç'lik insersiyon/delesyonmutasyonları tespiti için PCR yöntemi yapılmıstır. TYMS 3'UTR 6 bç'likinsersiyon/delesyon için PCR ürünü eldesinden sonra restriksiyon enzimi ile kesilmistir. Eldeedilen veriler non-parametrik analiz yöntemleriyle degerlendirilmistir.Yapılan analizlerle tüm enzimler tek tek incelenmis ve enzimler arası korelasyonanalizleri yapılmıstır. Sonuç olarak homosistein düzeyi üzerine MTHFR 677 CT degisimi içinmutant genotip olan TT genotipinin bir risk faktörü oldugu bulunmustur. Diger analizlerdeistatistiksel bir anlam bulunanmamıstır.Anahtar kelimeler: Homosistein (tHcy), Metilentetrahidrofolat redüktaz (MTHFR),Dehidrofolat redüktaz (DHFR), Sistatyon B sentaz (CBS), TimidilatSentaz (TYMS)

Abstract:
In this study, CT replacement in the 677th nucleotide in MTHFR enzyme involved inhomocysteine metabolism, 68 bp insertion in the 844th nucleotide in CBS enzyme, 6bpinsertion/deletion in the region of 3?UTR in TYMS enzyme and 19 bp deletion in DHFRIn this study, CT replacement in the 677th nucleotide in MTHFR enzyme involved inhomocysteine metabolism, 68 bp insertion in the 844th nucleotide in CBS enzyme, 6bpinsertion/deletion in the region of 3?UTR in TYMS enzyme and 19 bp deletion in DHFRenzyme were investigated. The effects of these mutations over homocysteine levels were alsostudied. In previous studies the main subjects were mutations in MTHF, CBS and TYMSenzymes. However, DHFR enzyme of Turkish society was studied first time in this work.Although the mutations have been related with illnesses in the previous works, 296individuals with known homocysteine levels and individuals who?s any mutations not relatedwith any illnesses were used in this study.Real-Time PCR method was used for a MTHFR 677 CT replacement. TheCBS844ins68 and DHFR 19 bp deletion were studied using Polymerase Chain Reactions.TYMS 3?UTR 6bp insertion/deletion mutations were studied using Polymerase ChainReaction based Restriction Fragment Polymorphism (PCR-RFLP). Obtained data wasevaluated with non-parametric analyze methods.All enzymes were studied and correlation analyzes were tested between enzymes. As aresult; it is discovered that TT genotype could be a risk factor for mutant genotype MTHFR677 CT over homocysteine levels. There was no statistical meaning in other analyzes.Key words: Homocysteine (tHcy), Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR),Dehydrofolate reductase (DHFR), Cystatione B syntase (CBS), ThymidylateSynthase (TYMS)