Akut miyeloid lösemili hastalarda NPM1 ve FLT3 genlerindeki moleküler değişikliklerin araştırılması
Molecular alterations in NPM1 and FLT3 genes in patients with acute myeloid leukemia
Yazar: NAZLI UÇUNOĞLU
Danışman: PROF. DR. NEJAT DALAY
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı / Deneysel ve Moleküler Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Genler = Genes ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Akut miyeloid lösemi, heterojen bir hematopoietik kök hücre hastalığıdır. AML vakalarının %10-%15'inde kromozomal anomaliler görülür. Yetişkin, normal karyotipli AML hastalarının birçoğunda nükleofosmin (NPM1) gen mutasyonları bildirilmiştir. Nükleofosmin, transkripsiyonun düzenlenmesinde rol oynayan ve tümör baskılayıcı birçok genin tümörle etkinliğini düzenleyen, çekirdekle sitoplazma arasında gidip gelen bir taşıyıcı proteindir. Nükleofosmin geninde gerçekleşen (Tip A, B, C) mutasyonlar 4-5 nükleotidlik çerçeve kaymasına neden olarak proteinin sitoplazmada kalmasıyla sonuçlanır.FMS-like tirozin kinaz 3 (FLT3) geni hematopoez açısından önem taşıyan bir reseptör tirozin kinaz kodlar. Bu gende gerçekleşen iç ardışık tekrar (ITD), farklılaşmayı etkilemeyen ama lösemi hücrelerinde miyeloproliferatif sinyalleri uyaran ve sağkalım avantajı sağlayan bir tür `Sınıf I' mutasyondur. Bu değişiklikler sürekli otofosforilasyona neden olur ve apoptozu engelleyerek hücre çoğalmasını uyarır.Çalışması planlanan bu yüksek lisans tez projesinde, çalışılacak hasta sayısının 50 olması planlanmıştır. Çalışmanın ana deneysel aşamalarını; laboratuarımıza rutin tetkik için gelen akut miyeloid lösemili hastaların kanlarının toplanması, bu kanlardan lenfosit izolasyonu ve lenfositlerden RNA izolasyonu, komplementer DNA (cDNA) sentezi, polimeraz zincir reaksiyonu ile istenilen gen bölgesinin çoğaltılması ve incelenmesi oluşturmaktadır.

Abstract:
Acute myeloid leukemia is a heterogeous hematopoietic stem cell disease. Chromosomal abnormalities are seen in 10-15 % of AML cases. Nucleophosmin (NPM1) gene mutations have been reported in the majority of adult AML patients with normal karyotype. Nucleophosmin is a carrier protein functioning between nucleus and cytoplasm and plays a role in the regulation of transcription and regulates activities of several tumor suppressor genes by interacting with them. Mutations (type A, B and C) in the NPM1 gene lead to a 4-5 nucleotide frame shift and trap the protein in the cytoplasm. The FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) gene codes for a tyrosine kinase which is important for hematopoiesis. Internal tandem duplications (ITD) in this gene are `class I? mutations that provide survival advantage and induce myeloproliferative signals in leukemia cells while not affecting differentiation. These changes result in constant autophosphorylation and stimulate proliferation by inhibiting apoptosis.There is no study investigating mutations in the NPM1 or FLT3 genes in AML patients in Turkey. Within the context of this thesis, NPM1 gene mutation and ITDs in the FLT3 gene will investigated in 50 AML patients. Blood samples will so collected from AML patients admitted to our laboratory for routine diagnostics. Isolation of lymphocytes RNA isolation from isolated lymphocytes, cDNA synthesis, amplification of desired gene region by PCR and analysis of the amplified fragments constitute the main experimental parts of the study.