Pleksin C1 ifadesinin hepatoselüler karsinomlu hücre hatlarında ve dokularda incelenmesi
Investigation of Pleksin C1 expression in hepatocellular carsinoma cell lines and tissues
Yazar: SERHAT AKIN
Danışman: PROF. DR. TAMER YAĞCI
Gebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü / Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Pleksinler hücre hareketini yönlendirmede ve hücrenin doğru yerlere konumlanmasında fonksiyon gösteren tek membran geçişli transmebran proteinlerdir. Primer doku bölgesinden kanser hücrelerinin başka dokulara metastaz yapabilmeleri için invazyon yapabilme özelliklerinin aktive edilmesi gerekmektedir. Pleksinler de hücre hareketi ile ilgili olmalarından dolayı kanser invazyonu ile ilişkilendirilmiştir. Hepatoselüler karsinoma (HCC) hücreleri de epitel mezenşim dönüşümü geçirerek invazivleşmektedirler. Bu açıdan pleksinler HCC invazyon ve metastazı ile ilişkili olabilirler. Bundan dolayı bu çalışmada Pleksin ailesinin bir üyesi olarak tanımlanmış olan Pleksin C1'in ifadesi protein ve gen düzeyinde HCC hücre hatlarında ve doku kesitlerinde incelenmiştir. Ayrıca, Pleksin C1 anlatımı farklı tipte kanserli doku kesitleri içeren doku dizinlerinde de araştırılmıştır. 
Pleksin C1 gen ifadesinin HCC hücre hatlarında RT-qPCR yöntemi ile incelenmesi sonucu iyi farklılaşmış HCC hücrelerinde sağlıklı karaciğere göre ifadede artış görülmüştür. Ayrıca, Pleksin C1'in HCC hücre hatlarında protein seviyesinde ifadelendiği Western Blot ve immünfloresan yöntemleri ile gösterilmiştir. İmmünohistokimya çalışmasında HCC'li doku kesitlerinin Pleksin C1 antikoru ile boyandığı fakat tümörsüz karaciğer kesitlerinin boyanmadığı saptanmıştır. Farklı tümör ve normal dokulardan oluşan doku dizinlerinde ise, Pleksin C1 ifadesinin genel olarak tümör dokularında arttığı ortaya konmuştur. Akış sitometrisi, immünfloresan ve immünohistokimya yöntemlerinin uygulandığı çalışmalar Pleksin C1'in membrana lokalize olduğunu göstermiştir. 
Sonuç olarak Pleksin C1 ifadesindeki artış bu proteinin hepatokarsinogenezdeki rolüne işaret etmektedir. Pleksin C1 ifadesi diğer kanserlerde değişkenlik göstermekle birlikte, olguların çoğunda tümördeki anlatım normale göre artmakta ve bu da proteinin tümör oluşumunda önemli bir işleve sahip olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
Plexins are single pass transmembrane proteins that regulate migration, and positional maintenance of cells. To metastasize from their primary localization to distinct organ sites, the invasive capabilities of tumor cells have to be activated. According to their role in cell migration, Plexins have been associated with the invasion of cancer cells. Hepatocellular carcinoma (HCC) cells may acquire invasiveness by undergoing epithelial-to-mesenchymal transition. Thus, Plexins may be involved in HCC invasion and metastasis. In this study, the expression of one Plexin family member, namely Plexin C1 was investigated in HCC cell lines and tissues at transcript and protein levels. Furthermore, the protein expression was explored in multiple tumor tissue arrays. 
In RT-qPCR analyses, Plexin C1 was found to be up-regulated in well-differentiated HCC cell lines compared to normal HCC tissue. Besides, the expression of Plexin C1 protein was shown in HCC-derived cells by western blot and immunofluorecence assay. In immunohistochemistry studies, HCC but not non-tumor tissues showed a reactivity with anti-Plexin C1 monoclonal antibody. Further studies in multiple tumor tissue arrays indicated an increased expression of Plexin C1 in tumors. By using flow cytometry, immunofluorescence and immunohistochemistry, we found membrane-localized Plexin C1 expression. 
In conclusison, overexpression of Plexin C1 in HCC cell lines and tissues might indicate its role in hepatocarcinogenesis. Although variable in other tumor tissues, the fact that the expression of Plexin C1 was upregulated in tumors compared to uninvolved non-tumoral areas in most of the cases suggests an important role for Plexin C1 in tumorigenesis.