Linarinin 2D ve 3D MDA-MB-231  meme kanseri hücre kültüründe antikanser ve antimetastatik aktivitelerinin immunhistokimyasal ve akış sitometrik yöntemler ile araştırılması
Investigation of the anti-cancer and anti-metastatic activities of linarin in 2D and 3D MDA-MB-231  breast cancer cell culture by immunohistochemical and flow cytometric methods
Yazar: TALAT YASİN ACAR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BİRCAN KOLBAŞI ERKAN
İstanbul Medipol Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Meme kanseri, dünya üzerinde kadın ölümlerinin başlıca sebeplerinden biridir. Meme kanseri alt tiplerinden biri olan üçlü negatif meme kanseri (TNBC) meme kanseri kaynaklı ölümlerin büyük bir çoğunluğunu oluşturmaktadır. TNBC tedavisinde hormonal tedaviler kullanılamadığı gibi kemoterapiye de direnç görülebilmektedir. Geç evre meme kanseri modeli olan MDA-MB-231 hücreleri TNBC hücre tiplerinden biridir. Bu tez çalışmasında glikozillenmiş bir flavonoid olan linarinin MDA-MB-231 hücreleri üzerindeki anti-metastatik ve anti-kanser etkinliğinin incelenmesi amaçlandı. Bu kapsamda, MDA-MB-231 hücreleri hem iki boyutlu hem de üç boyutlu olarak kültürlendi. Linarinin anti-kanser etkinliğinin incelenmesi amacıyla hem iki boyutlu olarak kültürlenmiş MDA-MB-231 hücrelerinde hem de üç boyutlu olarak kültürlenmiş MDA-MB-231 sferoidlerinde MTT hücre canlılığı analizi gerçekleştirildi. Tümör boyutuna olan etkisinin incelenmesi amacıyla sferoid boyut analizi gerçekleştirildi. Linarinin anti-metastatik etkinliği yara kapanma testi gerçekleştirilerek incelendi. Hayatta kalım yolakları ve metastatik yolaklarla ilişkili olan p-p65 (NF-κB), MMP-9 ve Bax proteinlerinin linarin maruziyeti sonrası değişimlerinin incelenmesi için hem iki boyutlu hem de üç boyutlu olarak kültürlenmiş MDA-MB-231 hücrelerinde immünfloresan ve akış sitometrisi analizleri gerçekleştirildi. Elde edilen sonuçlar incelendiğinde linarinin her iki kültür tekniğinde de hücre canlılığını baskıladığı gözlemlendi. Yara kapanma testinde linarinin migrasyonu istatistiksel olarak anlamlı bir biçimde azalttığı gözlemlendi. Tümör boyutunun değişikliğinde linarin grubunda, kontrol grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık gözlemlenmedi. p-p65, MMP-9 ve Bax proteinleri immünfloresan ve akış sitometri teknikleri ile incelendiğinde, p-p65 ve MMP-9 proteini ekspresyon seviyelerinde anlamlı şekilde azalma, Bax proteini ekspresyon seviyesinde ise anlamlı şekilde artış tespit edilmiştir. Sonuç olarak, bu çalışmada linarinin MDA-MB-231 hücrelerinde, anti-metastatik ve pro-apoptotik etkinlik sergilediği görülmüştür. 
Anahtar Kelimeler: Apoptoz, Metastaz, Linarin, Üçlü negatif meme kanseri, Üç boyutlu hücre kültürü

Abstract:
Breast cancer stands as a leading cause of female mortality worldwide. Among its subtypes, triple-negative breast cancer (TNBC) constitutes a significant proportion of breast cancer-related deaths. TNBC demonstrates resistance to hormonal therapies and chemotherapy. MDA-MB-231 cells, representing an advanced stage breast cancer model, are one of the TNBC cell types. This thesis aims to investigate the anti-metastatic and anti-cancer efficacy of linarin, a glycosylated flavonoid, on MDA-MB-231 cells. In this context, MDA-MB-231 cells were cultured both in two-dimensional and three-dimensional formats. MTT cell viability analysis was conducted on both two-dimensional and three-dimensional MDA-MB-231 spheroids to examine the anti-cancer efficacy of linarin. Spheroid size analysis was performed to assess its impact on tumor size. A wound healing assay was conducted to investigate the anti-metastatic efficacy of linarin. Immunofluorescence and flow cytometry analyses were conducted on both two-dimensional and three-dimensional MDA-MB-231 cells to examine alterations in survival pathways and metastatic pathways-associated p-p65 (NF-κB), MMP-9, and Bax proteins following linarin exposure. Results revealed that linarin suppressed cell viability in both culture techniques. Wound healing assay demonstrated a statistically significant reduction in migration upon linarin exposure. No statistically significant difference in tumor size alteration was observed in the linarin group compared to the control group. Immunofluorescence and flow cytometry analyses revealed significant decreases in p-p65 and MMP-9 protein expression levels and a significant increase in Bax protein expression level. In conclusion, linarin exhibited anti-metastatic and pro-apoptotic activity in MDA-MB-231 cells in this study.
Keywords: Apoptosis, Metastasis, Linarin, Triple Negative Breast Cancer, Three Dimensional Cell Culture