Konya ve çevresinde abort problemli koyun sürülerinde border dısease virus enfeksiyonunun araştırılması
Investigation of border disease virus infection in sheep flock with abortion problem in konya and its environment
Yazar: OĞUZHAN AVCI
Danışman: PROF. DR. SİBEL YAVRU
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Abortus-veteriner hekimlik = Abortion-veterinary ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Konya = Konya ; Koyun hastalıkları = Sheep diseases ; Koçlar = Rams ; Kuzular = Lambs ; Kıl = Hair ; Peroksidaz = Peroxidase ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Viroloji = Virology

Özet:
Konya ve çevresinde abort problemi görülen 5 koyun sürüsünden tesadüfi örnekleme yöntemi kullanılarak elde edilen örnekler Border Disease Virus (BDV)'a karşı oluşan antikor varlığı yönünden indirekt Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ile, BDV antijen varlığı yönünden Direkt ELISA ve Direkt İmmunperoksidaz (IP) testi ile, BDV viral genom varlığı yönünden ise One Step Reverse Transkriptase Polimeraz Zincir Reaksiyon (RT-PZR) testi ile incelendi.Araştırmada 1000 adet koyun, 500 adet kuzu, 50 adet koçdan alınan kan serumu, lökosit ve vaginal svap örnekleri, ölen kuzulardan ve abort olan fötuslardan alınan doku örnekleri (karaciğer, akciğer, kalp, dalak, beyin, böbrek, ince bağırsak, beyincik, timus, lenf, tiroid) incelendi.İndirekt ELISA ile incelenen 1000 adet koyun kan serumundan 790 adedi (%79); 500 adet kuzu kan serumundan 217 adedi (%43.4) ve 50 adet koç kan serumundan 3 adedi (%6) BDV'ye karşı oluşan antikor varlığı yönünden pozitif olarak tespit edildi.Direkt ELISA incelenen 1000 adet koyun lökosit örneklerinden (1. örnekleme) 11 adedi (%1.1) BDV antijen varlığı yönünden pozitif olarak tespit edilirken 989 adedi (%98.9) ise negatif bulundu. BDV antijen varlığı yönünden pozitif olduğu belirlenen 11 adet hayvanın 15 gün sonra 2. örneklemeleri gerçekleştirildi. 11 adet örneğin 3 adedi 2. örnekleme sonrasında da pozitif olarak tespit edildi. Persiste enfekte olduğu belirlenen 3 adet (%0.3) koyun kestirildi. 500 adet kuzu lökosit, 50 adet koç lökosit, 50 adet vaginal svap ve 327 adet doku örneğinin hiçbirisinde Direkt ELISA ile BDV antijen varlığı tespit edilmedi.Direkt immunperoksidaz ile incelenen 1011 adet koyun lökosit örneklerinden 14 adedi (%1.38) ve 327 adet doku örneğinin 11 adedi (%3.36) BDV antijen varlığı yönünden pozitif olarak tespit edilirken 500 adet kuzu lökosit, 50 adet koç lökosit ve 50 adet svap örneğinin hiçbirisinde BDV antijen varlığı tespit edilemedi.One Step RT-PZR ile incelenen 63 adet koyun lökosit örneklerinden 14 adedi (%22.2), 327 adet doku örneklerinden 11 adedi (%3.36) BDV viral genom varlığı yönünden pozitif olarak tespit edilirken, 50 adet vaginal svap örneklerinin hiçbirisinde BD viral genom varlığı tespit edilmedi.Araştırmada kullanılan testlerden Direkt ELISA ile IP arasındaki sensitivite ve spesifite değerleri sırasıyla %100 ve %98.8, Direkt ELISA ile One Step RT-PZR arasında %78.57 ve %98.6, One Step RT-PZR ile Direkt IP arasında ise %100 ve %97.5 olarak tespit edildi.Anahtar Sözcükler: Border Disease Virus; Direkt ELISA; İmmunperoksidaz; koyun; One-Step RT-PZR.

Abstract:
Samples obtained via random sampling method from 5 sheep herds with abortion problem in and around Konya were examined for the presence of Border Disease Virus (BDV) using Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), for the presence of BDV antigen using Direct ELISA and Direct İmmunoperoxidase (IP) test and for the presence of BDV Viral genome using One Step Reverse Transcriptase Polimerase Chain Reaction (RT-PCR) test.In the research, blood serum, leukocyte and vaginal swap samples obtained from 1000 sheep, 500 lambs and 50 rams as well as tissue samples collected from dead lambs and aborted fetuses (liver, lung, heart, spleen, brain, kidney, intestine, cerebellum, thymus, lymph and thyroid) were examined.Positive results for the presence of antibody against BDV in the examinations were as follows; 790 of 1000 sheep blood samples (79 %) examined via Indirect ELISA, 217 of 500 lamb blood serum (43.4 %) and 3 of 50 ram blood serum (6 %).While 11 of 1000 sheep leukocyte samples (1.1 %, first sampling) examined using Direct ELISA were found positive for the presence of BDV antigen, 989 samples (98.9 %) were negative. Second sampling studies were performed 15 days following first session in 11 animals found positive for the presence of BDV antigen. Of these 11 samples, 3 were re-found positive as a consequence of second sampling. Three sheep (0.03 %) determined to be PI were sacrificed. BDV antigen could be determined in none of 500 lamb leukocyte, 50 ram leukocyte, 50 vaginal swaps and 327 tissue samples via Direct ELISA.While BDV antigen positivity was found in 14 of 1011 sheep leukocyte samples (1.38 %) examined using direct immunoperoxidase method and in 11 of 327 tissue samples (3.36 %), BDV antigen could be determined in none of 500 lamb leukocyte, 50 ram leukocyte and 50 swap samples.While presence of BDV viral genome was found positive in 14 of 63 sheep leukocyte samples (22.2 %), 11 of 327 tissue samples (%3.36) examined using One Step RT-PCR, BDV viral genome was determined in none of 50 vaginal swap samples.Sensitivity and specifity values between Direct ELISA and Immunoperoxidase, among tests used in the research, were respectively 100 % and 98.9 % and the values were, respectively, 78.57 % and 98.6 % between Direct ELISA and One Step RT-PCR and 100 % and 97.5 % between One Step RT-PCR and Direct Immunoperoxidase.Key words: Border Disease Virus; Direct ELISA; sheep; Immunoperoxidase; One-Step RT-PCR.