Trombositten zengin fibrin membran'ın konjonktiva yara iyileşmesi üzerine etkisi
The effect of thrombocyte rich fibrin membrane on conjunctival wound healing
Yazar: MEHMET EROL CAN
Danışman: DOÇ. DR. HASAN BASRİ ÇAKMAK
Sağlık Bakanlığı / Ankara Atatürk Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Cerrahi-göz = Surgery-eye ; Konjonktiva = Conjunctiva ; Ön göz segmenti = Anterior eye segment

Özet:
Bu çalışma ile konjonktiva doku hasarı sonrasında uygulanan trombositten zengin fibrin membranın (TZFM) yara iyileşmesi üzerine etkilerinin histopatolojik ve immunhistokimyasal olarak incelenmesi amaçlanmıştır.
Bu amaçla çalışma 24 adet yeni Zelanda tavşanı üzerinde yapılmıştır. Tüm tavşanların sadece sağ gözlerinde konjonktival hasar oluşturulmuştur. Oniki adet tavşanın sağ gözlerinde hasarlı bölgeye TZFM sütüre edilirken, diğer 12 adet tavşan kontrol grubunu meydana getirmiştir. Trombositten zengin fibrin membran için tavşanların femoral venlerinden alınan 5 cc periferik kan 10 cc antikoagülansız laboratuvar tüpünde biriktirilmiştir. Alınan kan örnekleri Hettich EBA-20  santrifuj cihazında yaklaşık 2700 rpm (yaklaşık 400 g) 12 dakika santrifuj edilmiştir. Santrifuj sonrasında tüpün üstünde kalan hücresiz plazma kısmı ile tüpün dibindeki kırmızı kan hücrelerinden oluşan tabakanın arasındaki fibrin materyal penset yardımıyla TZFM kutusunda  preslenerek TZFM elde edilmiştir. Elde edilen TZFM konjoktiva hasarı olan bölgeye 7,0 vicryl ile sütüre edilmiştir. İşlem sonrasında her iki gruptan 3'er adet tavşanın sağ gözleri sırasıyla 1.,3.,7. ve 28. günde histopatolojik ve immunhistokimyasal inceleme gerçekleştirmek üzere  ötanazi sonrasında enüklee edilmiştir.
Tavşanların ortalama yaşı 22 hafta (12-30 hafta) ve cinsiyetleri dişi idi. Operasyon sonrası dönemde iki grupta da her hangi bir komplikasyon gelişmedi. Makroskopik olarak incelendiğinde TZFM uygulanan grupta yara iyileşmesinin primer konjonktiva dokusu şeklinde gerçekleştiği gözlendi. Kontrol grubunda ise makroskopik iyileşme yoktu. Örnekler yirmi sekizinci günde hemotoksilen-eozin ve immunhistokimyasal olarak boyandı. PRFM uygulanan grupta yirmi sekizinci gün sonunda dokunun primer konjonktiva dokusu gibi iyileştiği ve hiç skar dokusunun oluşmadığı gözlendi. Ancak kontrol grubunda yirmi sekizinci gün sonrasında fibrozis ile beraber yara iyileşmesinin devam ettiği gözlendi.
Sonuç olarak TZFM konjonktiva doku hasarında güvenli ve yan etkisi olmayan, yara iyileşmesi üzerine destekleyici bir biyomateryaldir. Konjonktival yara iyileşmesindeki etkinliği  histopatolojik ve immunhistokimyasal olarak primer konjonktiva iyileşmesine göre üstündür. PRFM konjonktiva doku rejenerasyonu için bir iskele malzemesi sağlar.Trombositten zengin fibrin membran kolay elde edilen otogreft bir yöntemdir ve birçok doku iyileşme defektlerinde güvenle kullanılması beklenmektedir.

Abstract:
In this study it is aimed that to investigate the histopathologic and immunohistochemical effects on wound healing of platelet rich fibrin membrane (PRFM) in conjunctival tissue damage.
The study was made on 24 New Zealand rabbits. All rabbits were created only in the right eye conjunctival damage. Twelve eyes of 12 rabbits was sutured PRFM between the two ends of damage and the other 12 eyes of 12 rabbits served as the control. To prepare PRFM, 5 mL of fresh blood from the femoral vein of a rabbit was collected into 10 mL glass-coated tubes without anticoagulants. Samples were immediately centrifuged at 2700 rpm (approximately 400 g) for 12 minutes using a Hettich EBA-20 centrifuge. After centrifuge the PRFM clots were mechanically separated, using forceps, from red blood cell corpuscles at the bottom of the centrifuge tubes, and acellular plasma called platelet-poor plasma (PPP) at the top of the tubes and  PRFM clots were and gently compressed using PRFM box to drain the remaining fluid. The resulting TZFM was sutured with 7.0 vicryl to the region of conjunctival damage.The rabbits were euthanized, and the three eyes in each group were enucleated 1, 3, 7 and 28 days after surgery to perform histopathological and immunohistochemical examination.
The average age of rabbits was 22 weeks (12-30 weeks) and sex was female. There were not developed any complications in both groups postoperatively. When examined macroscopically in the group TZFM, primary conjunctival tissues occurs in the form of wound healing was observed. In the control group there was no macroscopic healing.After enucleation all specimens were taken from covering the wound area.These specimens were stained with hematoxylin eosin and immunohistochemical in the twenty-eighth day. In PRFM applied group tissue was regenerated primary conjunctival tissue and there was no scar formation observed at the end of day 28. However in control group wound healing and fibrosis was observed to continue after 28 day.
Consequently TZFM is a safe and without side effects biomaterial in the conjunctival tissue demage in wound healing. In conjunctival wound healing activity it is superior to the primary wound healing by histopathologic and immunohistochemically. PRFM provides a scaffold material for conjunctival tissue regeneration. PRFM is a autograft method that is easy to obtain and is expected to use in many tissue healing defects safely.