Vajinal sıvının saptanmasında kullanılan lactobacillus türlerinin varlığını etkileyen faktörlerin araştırılması
Investigation of factors affecting the presence of lactobacillus SPP. used in identification of vaginal secretion
Yazar: EREN AKGÜNDÜZ
Danışman: PROF. DR. BEHNAN ALPER
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Adli Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Adli tıp = Forensic medicine ; Cinsel suçlar = Sex offenses ; Lactobacillus = Lactobacillus ; RNA = RNA ; Serolojik testler = Serological tests ; Vajinal akıntı = Vaginal discharge ; Vajinal smirler = Vaginal smears ; Vücut sıvıları = Body fluids

Özet:
Amaç: Vücut sıvılarının tanımlanması adli araştırmalarda olay yerinin yeniden canlandırılması ve olayın nasıl olduğunun belirlenmesinde gereklidir. Vücut sıvılarının ve lekelerinin identifikasyonunda serolojik testlere ek olarak insan RNA analizine dayalı metotlar geliştirilmiştir. Vücut sıvılarının identifikasyonunda bakterilerin kullanımı da araştırılmış ve çalışmalar vajinal spesifik bakterilerin vücut sıvılarının identifikasyonunda kullanılabilecek umut vaat eden bir yol olabileceğini göstermiştir.Bu çalışmada, vajinal enfeksiyonlu kadınlar ile postmenoz dönemdeki kadınlardan alınan vajinal sürüntü örneklerinde Lactobacillus gasseri, Lactobacillus crispatus ve Lactobacillus jensenii'nin dahil edildiği çeşitli Lactobacillus tiplerinin varlığı araştırılmıştır.
Gereç ve Yöntem: Bu çalışma için Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Balcalı Hastanesi Kadın Doğum ve Hastalıkları Polikliniğine 04.04.2016-20.06.2016 tarihleri arasında gelen, yazılı ve sözlü onamı alınan 91 gönüllüden alınan vajinal sürüntü örnekleri dahil edilmiştir. Alınan örnekler 30 kontrol grubu, 31 enfeksiyon grubu, 30 post menopozal yaş grubu olarak sınıflara ayrılmıştır. Aradığımız Lactobacillus türlerine ait 16S-23S rRNA intergenic spacer bölgesinin, sırasıyla RNA izolasyonu, cDNA sentezi ve PCR'ı yapılmıştır. PCR sonrası ürünler kapiller elektroforezde yürütülmüştür.
Bulgular: Kategorik ölçümlerin gruplar arasında karşılaştırılmasında Ki Kare test istatistiği kullanıldı. Kontrol grubunda yer alan 30 olgunun 28'inde Lactobacillusgasseri olduğu, enfeksiyon grubunda yer alan 31 olgunun 21'inde, post menopozal dönemdeki olguların 15'inde Lactobacillusgasseri olduğu görüldü. Yapılan istatistiksel analiz sonucu hem enfeksiyon grubunda hemde post menopozal grupta aradığımız Lactobacillusgasserinin saptanma oranında anlamlı bir azalma olduğu görüldü(p<0,001). Kontrol grubunda yer alan 30 olgunun 29'unda Lactobacilluscrispatus olduğu, enfeksiyon grubunda yer alan 31 olgunun 26'sında, postmenopozal dönemdeki olguların 16'sında Lactobacilluscrispatus olduğu görüldü. Yapılan istatistiksel analiz sonucu kontrol ve enfeksiyon grubuna göre postmenopozal grupta aradığımız bakteri türünün saptanma oranında anlamlı bir azalma olduğu görüldü(p<0,001). Kontrol grubundaki 30 olgudan ancak 15'inde Lactobacillusjenseninin olduğu, enfeksiyon grubunda 31 olgunun 14'ünde, postmenopozal dönemdeki 30 olgudan sadece 2'sinde Lactobacillusjenseni'nin olduğu, istatistiksel analiz sonucu kontrol ve enfeksiyon grubuna göre postmenopozal grupta aradığımız bakteri türünün saptanma oranında anlamlı bir azalma olduğu görüldü(p<0,001).
Sonuç: Enfeksiyon tanısı alan örneklerin %12.9'unda, postmenopozal dönemdeki olguların %46.6'sında hiçbir Lactobacilllus türünün tanımlanmamış olması, vajinal sıvının veya lekenin tanımlanmasında alınan negatif sonuçların vajinal sekresyonun dışlanmasında kullanılamayacağını, ancak pozitif sonuçların özellikle şu ana kadar vajinal sekresyonun tanımlanmasında hiç serolojik yöntem bulunmaması sebebi ile oldukça önemli olabileceği düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: Cinsel saldırı, Lactobacillus,RNA, Vajinal sekresyon, Vücut sıvılarının identifikasyonu

Abstract:
Aim: Detection of human body fluids is necessary in forensic investigation for the reconstruction of crime scene and how the event happened. In addition to serological tests, methods based on human RNA analysis were developed for identification of body fluids and stains. The use of bacteria for the identification of body fluids was also being investigated and studies showed the promising use of vaginal specific bacteria as a way of identifying vaginal secretions. In this study, the presence of the various Lactobacillus spp. including Lactobacillus gasseri, Lactobacillus crispatus andLactobacillus jensenii were investigated in the vaginal swab samples taken from women with vaginal infections and with postmenopausal.
Material and Method: Vaginal swab samples taken from 91 volunteers who came to Çukurova University Medical Faculty Balcalı Hospital Gynecology and Obstetrics Clinic between 04.04.2016 and 06.20.2016 were used. Verbal and written consents were approved from these volunteers in this study. Samples were categorized as control group (30), infection group (31) and postmenopausal (30). RNA isolation, cDNA synthesis and PCR were done respectively to 16S-23S rRNA intergenic spacer regions of the Lactobacillus spp we investigated.  PCR products were run in capillary electrophoresis.
Results: Chi Square test was used for statistical analysis in comparison of categorical evaluation between groups. Lactobacillus gasseri was detected in 28 of 30 cases in control group, 21 of 31 cases in infection group and 15 of 30 in postmenopausal period group. As a result of statistical analysis, a significant reduction in detection rate of Lactobacillus gasseri in both infection group and postmenopausal period group was detected (p<0,001). L. crispatus was detected in 29 of 30 cases in control group, 26 of 31 cases in infection group and 16 of 30 cases in postmenopausal period group. Statistical analysis showed that a significant reduction in detection rate of Lactobacillus spp. we investigated in postmenopausal period group in comparison with control group and infection group (p<0,001).  Lactobacillus jensenii was detected in only 15 of 30 cases in control group, 14 of 31 cases in infection group and only 2 of 30 in postmenopausal period group. Statistically significant reduction was found in detection rate of Lactobacillus spp. we investigated in postmenopausal period group in comparison with control group and infection group (p<0,001).
Conclusion: It is thought that the negative results cannot be used to exclude the presence of vaginal secretion because of undetected any of Lactobacillus spp in 12.9% of infection diagnosed samples and 46.6% of postmenopausal period cases. However, positive results may be valuable especially because of no serological methods have been found in identification of vaginal secretion until now.

Key Words: Sexual assault, Lactobacillus,RNA, Vaginal secretion, Body fluid identification