Türkiye'de, hepatit c enfeksiyonunun laboratuvar tanısında kullanılan immunoassay metoduna dayalı farklı anti-hcv kitlerinin tanı değerlerinin araştırılması
Investigation of diagnostic values of different antihcv reactives based on immunoassay method used in the laboratory diagnosis of hepatitis c infection in turkey
Yazar: ÖZGÜL ÇETİNKAYA
Danışman: DOÇ. DR. RECEP KEŞLİ
Afyon Kocatepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Hepatit C virüsü = Hepatitis C virus

Özet:
HCV enfeksiyonun %80'inin kronikleşmesi, hepatosellüler karsinom ve karaciğer sirozuna neden olması, karaciğer transplantasyonuna yol açması gibi nedenlerle günümüzde önemli bir sağlık problemidir. HCV enfeksiyonunun tanısında doğru sonuçların elde edilebilmesi için, günümüzde farklı tanı yöntemleri kullanılmaktadır. Bu çalışmada Türkiye'de rutin laboratuvarlarda HCV enfeksiyonunun tanısında kullanılan farklı anti-HCV testlerinin ve HCV core antijen testinin tanı değerlerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmaya Afyon Kocatepe Üniversitesi Tıp Fakültesi ANS Uygulama ve Araştırma Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na 1 Eylül 2014-30 Haziran 2015 tarihleri arasında rutin olarak anti-HCV ve/veya HCV RNA testleri çalışılması için gönderilen 179 serum örneği dahil edildi. Serum örmekleri en az 3 cc olacak şekilde -800C derin dondurucuda çalışma günlerine kadar saklandı. Örnekler Vitros anti-HCV (Ortho-Clinical Diagnostics, High Wycombe, UK), Advia Centaur anti-HCV (Siemens Healthcare Diagnostics, Tarrytown NY, USA), Elecsys anti-HCV II (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), Architect anti-HCV (Wiesbaden, Germany), Liaison anti-HCV (DiaSorin, Saluggia, Italy), Architect HCV Ag (Wiesbaden, Germany), recomLine HCV IgG (Mikrogen Diagnostik, Neuried, Germany), Cobas® AmpliPrep/ Cobas® TaqMan® HCV Kantitatif Test, versiyon 2.0 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) ve sadece uyumsuz sonuçlar için Innotest HCV Ab IV (Fujirebio, Gent, Belgium) testleriyle
çalışıldı.
Beş farklı anti-HCV testleri içinde sonuçlar açısından en yüksek ve en düşük uyum sırasıyla %94.9 ile Elecsys II-Liaison anti-HCV testleri arasında ve %86.5 ile Advia Centaur-Vitros anti-HCV testlerinde saptandı. Diğer anti-HCV testleri ile en düşük uyum gösteren test Advia Centaur olarak belirlendi. Beş farklı anti-HCV testlerinin birbiriyle olan uyumu %83.8 (150/179) olarak bulundu. En
iyi S/Co korelasyon değeri Architect-Liaison (r=0.842) anti-HCV testleri arasında elde edildi. En düşük korelasyon Advia Centaur-Elecsys II (r=0.251) anti-HCV testleri arasında gözlemlendi. Elecsys anti-HCV II ve diğer testler arasında korelasyon saptanmadı. HCV RNA'nın altın standart kabul edilerek yapıldığı hesaplamalarda tüm anti-HCV testlerinin duyarlılık ve NPD'leri %100 olarak belirlendi. Çalışılan anti-HCV testlerinin tamamı analitik performansları açısından değerlendirildi ve Advia Centaur en yüksek olarak bulundu sonra diğer testler Liaison anti-HCV, Architect anti-HCV, Elecsys anti-HCV II ve Vitros anti-HCV sırasıyla derecelendirildi. Vitros anti-HCV, Advia Centaur anti-HCV, Elecsys anti-HCV II, Architect anti-HCV ve Liaison anti-HCV testleri için kritik eşik değerler sırasıyla 6.6 S/Co, 5.28 S/Co, 14.88 COI, 3.6 S/Co ve 4.3 S/Co olarak belirlendi. HCV RNA (IU/mL) ve anti-HCV testleri (S/Co veya COI) değerleri arasında korelasyon belirlenmedi. HCV core antijen ve HCV RNA konsantrasyonları arasında Spearman korelasyon testine göre iyi bir korelasyon belirlendi (r=0.943, p<0.001, n=90). HCV RNA sonucu pozitif, antijen testi negatif bulunan bir örnekte düşük viral yük tespit edildi (2.7x101 IU/mL). HCV RNA negatif olup antijen tekrarlı pozitifliği saptanan beş örneğin HCV core antijen değerleri 3.56-6.43 fmol/L arasında saptandı.
HCV enfeksiyonu tanısında günümüzde tarama amaçlı kullanılan EIA veya CIA yöntemlerine dayalı üçüncü kuşak anti-HCV testlerinin yalancı pozitif sonuçlar verebilmeleri nedeniyle sonuçlarının ek testlerle desteklenmesi gerekmektedir. HCV RNA testi altın standart test olarak kabul edilmektedir, fakat vireminin olmadığı dönemlerde HCV RNA testinin negatif sonuç verebileceği unutulmamalıdır. Enfeksiyon şüphesi durumlarında testin tekrarlanması gerekmektedir. Son dönemlerde kullanıma giren dördüncü kuşak anti-HCV testleri yüksek duyarlılık ve özgüllükleriyle uyumsuz sonuçların aydınlatılması konusunda oldukça iyi sonuçlar vermektedir. HCV core antijen testleri HCV RNA testinin çalışılamadığı durumlarda enfeksiyon varlığını göstermek adına kullanılabilecek alternatif bir testtir. Tanı algoritma yaklaşımlarındaki problemler hala devam etmektedir. Bu sorunlar ancak HCV hücre kültürlerinden elde edilen saf yapısal antijenlerin ilave edildiği yeni jenerasyon anti-HCV kitlerinin geliştirilmesi ile tam olarak çözüme kavuşturulabilir.

Abstract:
HCV infection is an important health problem for reasons such as 80% of infection become chronic, cause to hepatocellular carsinoma and liver cirrhosis and lead to liver transplantation. Nowadays different diagnostic methods used to obtain the correct results, in the diagnosis of HCV infection. In this study, it was aimed to investigate diagnostic values of the five different anti-HCV tests and HCV core antigen test used in the routine laboratories for the diagnosis of HCV infection in Turkey.
One hundred seventy nine sera samples were included into the study sent to Afyon Kocatepe University Faculty of Medicine ANS Practice and Research Hospital Medical Microbiology Laboratory for routine anti-HCV and/or HCV RNA testing between 1 September 2014 and 30 June 2015. Sera samples were aliquoted as to be at least 3 cc and were kept in -800C deep freezer until the study days. Samples were tested by Vitros anti-HCV (Ortho-Clinical Diagnostics, High Wycombe, UK), Advia Centaur anti-HCV (Siemens Healthcare Diagnostics, Tarrytown NY, USA), Elecsys anti-HCV II (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), Architect anti-HCV (Wesbaden, Germany), Liaison anti-HCV (DiaSorin, Saluggia, İtaly), Architect HCV Ag (Wesbaden, Germany), recomLine HCV IgG (Mikrogen Diagnostik, Neuried, Germany), Cobas® AmpliPrep/ Cobas® TaqMan® HCV Quantitative Test, version 2.0 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) and Innotest HCV Ab IV (Fujirebio, Gent, Belgium) only for discrepant results.
In terms of results in the five different anti-HCV tests, the highest and the lowest agreement was detected respectively in Elecsys II- Liaison anti-HCV tests with 94.9% and Advia Centaur-Vitros anti-HCV tests with 86.5%. It was determined that the lowest agreement showed in the Advia Centaur with the other anti-HCV tests. The overall concordance rate of five different anti-HCV tests was found 83.8% (150/179). The best S/Co correlation value was obtained between Architect and Liaison (r=0.842) anti-HCV tests. The lowest correlation was observed between Advia Centaur and Elecsys II (r=0.251) anti-HCV tests. There was no correlation between Elecsys anti-HCV II and the other tests. In the calculations that HCV RNA was accepted as the gold standart, sensitivity and NPV of all anti-HCV tests was determined to be 100%. All the studied anti-HCV tests evaluated for the analytical performances and Advia Centaur was found to be the highest, the other anti-HCV tests: Liaison, Architect, Elecsys and Vitros graded respectively. The critical values for Vitros anti-HCV, Advia Centaur anti-HCV, Elecsys anti-HCV II, Architect anti-HCV and Liaison anti-HCV tests were determined as 6.6 S/Co, 5.28 S/Co, 14.88 COI, 3.6 S/Co and 4.3 S/Co respectively. It was not determined any correlation between anti-HCV tests (S/Co or COI) and HCV RNA (IU/mL) values. It was determined a good correlation between HCV core antigen and HCV RNA concentrations by Spearman correlation test (r=0.943, p<0.001, n=90). It was observed low viral load (2.7x101 IU/mL) in one sample which the antigen test is negative and HCV RNA result is positive. HCV core antigen values was found between 3.56-6.43 fmol/L in five samples which samples HCV RNA negative and antigen repeatedly positive.
The third generation anti-HCV tests based on EIA and CIA methods used for screening of diagnosis of HCV infection nowadays, should be supported by additional tests due to give false positive results. HCV RNA test is considered as the gold standard test, but in the absence of viremia, should be noted that HCV RNA test result could be negative. In cases of suspected infection the test should be repeated. The fourth generation anti-HCV tests with high specifity and sensitivty came into use in recent years, gives very good results in the elucidation of discordant results. HCV core antigen tests can be used as an alternative test in order to show the presence of infection when HCV RNA test can not be studied. Problems in diagnostic algorithm approaches still continues. This problems may be solved properly only by the way that improving new generation anti-HCV reactives that embedded pure structural antigens obtained from HCV cell cultures into the new generation anti-HCV reactives.