Leptinin rat timpanik membran kronik perforasyonundaki etkisi
The effect of leptin on chronic perforation of rat tympanic membrane
Yazar: MEHMET TOFAR
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET YAŞAR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Kayseri Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Kulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Leptin = Leptin ; Sıçanlar = Rats ; Timpanik membran = Tympanic membrane ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
Amaç: Leptinin topikal uygulamadaki yara iyileşmesine olumlu etkisinin, rat timpanik
membran kronik perforasyon modelinde etkili olup olmadığının histolojik ve klinik
olarak araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda Erciyes Üniversitesi Deneysel Araştırma
Merkezi'nde üretilen, ağırlıkları 250-300 gr arasında değişen, 6 aylık, 42 adet sprague
dawley cinsi erişkin dişi rat kullanıldı. Rat timpanik membranlarında termal hasar ile
kronik perforasyon modeli oluşturuldu. 42 rat (84 kulak) daha sonra randomize olarak
beş gruba ayrıldı. A grubuna (10 rat) topikal saline (Serum fizyolojik % 0.9, Eczacıbaşı,
Türkiye), B grubuna (10 rat) topikal leptin (Leptin human 1 mg flakon, SİGMA-Life
Science, Almanya), C grubuna (10 rat) topikal fosfat tampon çözeltisi (Phosphate
Buffered Saline tablet-PBS tablet, SİGMA-Life Science, Almanya), D grubuna (10 rat)
intraperitoneal leptin (Leptin human 1 mg flakon, SİGMA-Life Science, Almanya)
verilmesi planlandı. E grubunda (2 rat) sham grubu olarak belirlendi ve perforasyon
sonrası madde tatbik edilmedi. Çalışmanın anestezi aşamasında A ve B grubundan birer
adet ratta kayıp yaşandı ve çalışma toplam 40 rat (80 kulak) ile tamamlandı. Sonrasında
çalışma bitiminde rat timpanik membranları klinik olarak muayene edildi. Muayene
sonrası ratlar sakrifiye edilerek timpanik membranları, subepitelyal kalınlık, fibroblast
proliferasyonu, lökosit infiltrasyonu, neovaskülarizasyon gibi parametreler yönünden
histopatolojik olarak değerlendirildi.
Bulgular: Çalışmamızda topikal fosfat tampon çözeltisi verilen gruptan bir timpanik
membran ve sham grubundan bir timpanik membran haricindeki tüm timpanik
membran perforasyonlarının klinik olarak kapandığı görüldü.
Çalışma grupları subepitelyal kalınlık derecelerinin oranları açısından
karşılaştırıldığında; gruplar arasında anlamlı bir fark bulunamadı (p>0.05).
Gruplar fibroblast proliferasyon derecelerinin oranları açısından karşılaştırıldığında;
gruplar arasında anlamlı fark bulundu (p<0.05). Sham grubunun fibroblast proliferasyon
derecelerinin oranı, topikal leptin grubuna göre anlamlı oranda artmış olarak izlendi 
ix
(p=0.0186). Topikal fosfat tampon çözeltisi verilen grup ve intraperitoneal leptin grubu
fibroblast proliferasyonu derecelerinin oranları açısından kıyaslandığında C grubunun
ortalama değerleri, D grubuna göre anlamlı oranda artmış olarak izlendi (p=0.0024).
Gruplar arasında en anlamlı ilişki intraperitoneal leptin ve sham grubu arasında
saptandı. Sham grubunun fibroblast proliferasyon derecelerinin oranları intraperitoneal
leptin grubuna göre anlamlı oranda artmış olarak izlendi (p=0.0004).
Gruplar lökosit infiltrasyon oranı açısından kıyaslandığında; gruplar arasında anlamlı
fark bulundu (p<0.05). Topikal fosfat tampon çözeltisi verilen grubun lökosit
infiltrasyon oranı, topikal leptin grubuna göre anlamlı olarak artmış olarak izlendi
(p=0.0002). Sham grubunun lökosit infiltrasyon oranı, topikal leptin grubuna göre
anlamlı olarak artmış olarak izlendi (p=0.0009). Sham grubunun lökosit infiltrasyon
oranı, intraperitoneal leptin grubuna göre anlamlı olarak artmış olarak izlendi
(p=0.0001). Topikal fosfat tampon çözeltisi verilen grubunun lökosit infiltrasyon oranı,
intraperitoneal leptin grubuna göre anlamlı olarak artmış olarak izlendi (p<0.0001).
Gruplar neovaskülarizasyon oranları açısından karşılaştırıldığında; gruplar arasında
anlamlı fark bulundu (p<0.05). Topikal fosfat tampon çözeltisi verilen grubun
neovaskülarizasyon derecelerinin oranı, topikal leptin grubuna göre anlamlı olarak
artmış olarak izlendi (p=0.0069). Sham grubunun neovaskülarizasyon derecelerinin
oranı, topikal leptin grubuna göre anlamlı olarak artmış olarak izlendi (p=0.0050). Sham
grubunun neovaskülarizasyon derecelerinin oranı, intraperitoneal leptin grubuna göre
anlamlı olarak artmış olarak izlendi (p=0.0005). Topikal fosfat tampon çözeltisi verilen
grubun neovaskülarizasyon derecelerinin oranı, intraperitoneal leptin grubuna göre
anlamlı olarak artmış olarak izlendi (p<0.0001).
Çalışma grupları timpanik membran kalınlıkları açısından karşılaştırıldığında; gruplar
arasında anlamlı bir fark bulunamadı (p>0.05).
Sonuç: Leptinin sistemik ve/veya topikal kullanımı rat timpanik membran kronik
perforasyon iyileşmesini olumsuz etkilemektedir.
Anahtar Kelimeler: Hayvan deneyi, Leptin, Rat, Timpanik membran perforasyonu,
Yara iyileşmesi

Abstract:
Objective: The aim of present study was the clinical and histological investigation of
the positive effect of topical leptin application on wound healing of rat tympanic
membrane chronic perforation model.
Materials and Methods: In our study, 42 adult female sprague dawley rats aged 6
months, produced at Erciyes University Experimental Research Center, weighing
between 250-300 g were used. A chronic perforation model was established with
thermal damage in rat tympanic membrane. Forty-two rats (84 ears) were then
randomized into five groups. In group A (10 rats) topical saline (physiological saline
solution 0.9% Eczacibasi, Turkey), in group B (10 rats) topical leptin (Leptin human 1
mg vial of Sigma-Life Science, Germany), in group C (10 rats) topical phosphate buffer
solution (Phosphate Buffered Saline tablet, Sigma-Life Science, Germany), in group D
(10 rats) intraperitoneal leptin (Leptin human 1 mg vial, Sigma-Life Science, Germany)
were planned to be applied. Group E (2 rats) was designated as the Sham group and no
substance was applied after perforation. During the anesthetic phase of the study, one
rat from group A and one rat from group B were lost, and the study was completed with
a total of 40 rats (80 ears). At the end of the study, rat tympanic membranes were
clinically examined. After the examination, the rats were sacrificed and the tympanic
membranes were histopathologically evaluated according to parameters such as
subepithelial thickness, fibroblast proliferation, leukocyte infiltration and
neovascularization.
Results: In our study, it could be seen that all tympanic membranes except one
tympanic membrane perforation in the group which topical phosphate buffer solution
was given, and one tympanic membrane perforation from the Sham group were
clinically closed.
When the study groups were compared in terms of the proportion of subepithelial
thickness grades; no significant difference was found between the groups (p> 0.05).
When the groups were compared in terms of the proportion of fibroblast proliferation
grades; significant difference was found between the groups (p<0.05). The degree of
fibroblast proliferation in the sham group was significantly increased compared to the 
xi
topical leptin group (p = 0.0186). When the ratios of fibroblast proliferation rates of the
topical phosphate buffer solution administered group and the intraperitoneal leptin
group were compared, the mean values of group C were found to be significantly higher
than group D (p = 0.0024). The most significant relationship between the groups was
found between the intraperitoneal leptin and sham group. The proportion of fibroblast
proliferation grades in the sham group was significantly increased compared to the
intraperitoneal leptin group (p = 0.0004).
When the groups were compared in terms of leukocyte infiltration rates; significant
difference was found between the groups (p<0.05). The leukocyte infiltration rate of the
group administered topical phosphate buffer solution was significantly higher than that
of the topical leptin group (p = 0.0002). The leukocyte infiltration rate of the sham
group was significantly higher than that of the topical leptin group (p = 0.0009). The
leukocyte infiltration rate of the sham group was found to be significantly increased
compared to the intraperitoneal leptin group (p = 0.0001). The leukocyte infiltration rate
of the group administered topical phosphate buffer solution was significantly increased
compared to the intraperitoneal leptin group (p <0.0001).
When the groups were compared in terms of neovascularization rates; significant
difference was found between the groups (p<0.05). The neovascularization ratios of the
group administered topical phosphate buffer solution was significantly higher than that
of the topical leptin group (p = 0.0069). The neovascularization ratios of the sham group
were significantly higher than that of the topical leptin group (p = 0.0050). The
neovascularization ratios of the sham group were significantly increased compared to
the intraperitoneal leptin group (p = 0.0005). The neovascularization ratios in the topical
phosphate buffer solution group was significantly increased compared to the
intraperitoneal leptin group (p <0.0001).
When the study groups were compared in terms of tympanic membrane thickness; no
significant difference was found between the groups (p> 0.05).
Conclusion: Systemic and / or topical administration of leptin adversely affects the
recovery of chronic tympanic membrane perforation in rats.
Key words: Animal experimentation, Leptin, Rat, Tympanic membrane perforation,
Wound healing