Wıstar albino sıçanlarda D-galaktozamin ile oluşturulmuş akut hepatit'in tedavisinde pentoxifylline ve caffeic acid phenethyl ester'in etkilerinin incelenmesi
The investigation of effects of pentoxifylline and caffeic acid phenethyl ester in treatment D-galactosamine induced acute hepatitis in wistar albino rats
Yazar: ELİF TAŞLIDERE
Danışman: PROF. DR. NİGAR VARDI
İnönü Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Galaktozaminler = Galactosamines ; Hepatit-kronik = Hepatitis-chronic ; Kafeik asit = Caffeic acid ; Pentoksifilin = Pentoxifylline

Özet:
Bu çalışmada, Galaktozamin (GAL) ile hepatit oluşturulan sıçanlarda, karaciğer dokusunda meydana gelen histolojik değişiklikler ve bu değişiklikler üzerine Pentoxifylline (PTX) ve Caffeic acid phenethyl ester (CAPE)'in etkilerinin histolojik ve biyokimyasal yöntemlerle incelenmesi amaçlanmıştır.Çalışmada İnönü Üniversitesi Deney Hayvanları Araştırma Laboratuvarından temin edilen toplam 49 adet Wistar Albino cinsi erkek sıçan kullanıldı. Denekler 1. Grup: Kontrol grubu 2. Grup: GAL (24) grubu 3. Grup: GAL(dev) grubu 4. Grup: GAL+PTX grubu 5. Grup: GAL+CAPE grubu 6. Grup: PTX grubu 7. Grup: CAPE grubu olarak 7 gruba ayrıldı. 21. Gün sonunda 2. grubun dışında bütün sıçanlar ketamin/ksilazin anestezisi altında sakrifiye edildi ve karaciğerleri çıkarıldı. Karaciğerin sağ lobu biyokimyasal analizlerde, sol lobu histolojik analizlerde kullanıldı. Alınan dokular, rutin doku takip işlemlerinden geçirilerek parafine gömüldü. Parafin bloklardan alınan kesitlere histokimyasal (Mayer's Hemotoksilen-Eozin, PAS, Masson Trikrom, Toluidin mavisi) ve immunohistokimyasal (Ki-67 ve kaspaz-3) boyama yöntemleri uygulandı. Boyanan kesitler ve Leica DFC-280 ışık mikroskobunda incelendi.Histolojik analizlerde; Galaktozamin uygulanan grupların karaciğer parankimi içerisinde normal histolojik yapıdan farklı olarak izlenen, sınırları düzensiz alanlar izlendi. Bu lokal alanlar inflamatuvar, nekrotik ve apoptotik hücreler içermekteydi. Lobülün periferinde yer alan hepatositlerde glikojen kaybı gözlendi. Menekşe renginde boyanan granülleri ile mast hücreleri sadece portal alanlarda izlendi. Portal alanlardaki bağ dokusu içerisinde izlenen mast hücre sayısının GAL gruplarında diğer gruplara göre istatiksel olarak anlamlı derecede arttığı tespit edildi (p=0.0001). Ayrıca Ki-67 ve kaspaz-3 boyama metodu uygulanan kesitlerde Ki-67 ve kaspaz-3 (+) boyanan hücre sayılarının kontrol grubuna göre, GAL gruplarında anlamlı derecede arttığı tespit edildi (p=0.0001).Biyokimyasal analizlerde; Galaktozamin uygulanan gruplarda, kontrol grubuna göre MDA ve MPO seviyelerinde artış gözlenirken, GSH ve GPx aktivitelerinde azalma izlendi. Diğer yandan GAL uygulanan sıçanlara PTX ve CAPE verilmesiyle karaciğerde izlenen histolojik ve biyokimyasal hasarın düzeldiği izlendi. Bu gruplarda karaciğer parankimasında GAL'in neden olduğu inflamatuvar, apoptotik ve nekrotik hücreleri içeren lokal alanların sınırları önemli derecede küçüldü. Ayrıca mast ve kaspaz-3 (+) hücre sayılarının azaldığı, Ki-67 (+) hücre sayısının ise anlamlı derecede arttığı tespit edildi. Biyokimyasal analizlerde ise, GAL grubuna göre MDA, MPO seviyesi azalırken, GSH ve GPx seviyesi anlamlı derecede arttı.Bu çalışma GAL'in neden olduğu karaciğer hasarı üzerine PTX ve CAPE'nin iyileştirici etkileri olduğunu göstermektedir. Sonuç olarak karaciğer hastalıklarının tedavisinde PTX ve CAPE gibi antioksidan ve antiinflamatuvar özelliği olan ajanların kullanılmasının, olumlu etkileri olabileceğini düşünmekteyiz.Anahtar Kelimeler: Hepatit, Galaktozamin, Pentoxifylline, CAPE

Abstract:
The aim of this study was to investigate histological changes occurred in hepatic tissue and effects of pentoxifylline (PTX) and caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on these changes by using histological and biochemical methods in rats, in which hepatitis was established by galactosamine (GAL).In this study, forty-nine Wistar Albino male rats which were provided from Inonu University Laboratory Animals Research Center were used. Rats were divided into 7 groups as follows: Group 1, control group; Group 2, Gal (24) group; Group 3, GAL (continue) group; Group 4, GAL+ PTX group; Group 5, GAL+ CAPE group; Group 6, PTX group; and Group 7, CAPE group. Rats, other than those in Group 2, were sacrified under ketamine/xylazine anesthesia and liver of the rats were removed after 21 days. Right lobe of liver was used for biochemical analysis, whereas left one for histological analysis. Removed tissue samples were appied to routine tissue processes and embedded in paraffin. Histological (Mayer?s Hematoxylin-eosine, PAS, Masson?s trichrome, Toluidine blue) and immunohistochemical (Ki-67 and kaspaz-3) staining methods were applied to sections obtained from paraffin blocks and preparations were examined by using Leica DFC-280 light microscope.In histological evaluations, irregular areas with discrete appearance than normal histological structure were seen in the liver parenchyma of groups treated to galactosamine. These focal areas were comprised of inflammatory, necrotic and apoptotic cells. Glycogen loss was observed in the hepatocytes localized at the periphery of lobule. Mast cells stained to violet were solely observed in portal areas. It was found that number of mast cells in the connective tissue of portal areas were significantly higher in GAL groups compared to other groups (p=0.0001). In addition, number of cells with positive staining by Ki-67 and caspase-3 was significantly increased in GAL groups compared to control group (p=0.0001).In biochemical analyzes, there was an increase in MDA and MPO levels, while a decrease was observed in GSH and GPx activity in groups treated to GAL compared to control group. On the other hand, it was seen that, in the groups treated to GAL, histological and biochemical injuries in the liver were recovered by administration of PTX and CAPE. In these groups, borders of GAL-induced focal areas involving inflammatory, apoptotic and necrotic cells were regressed. Moreover, it was found that numbers of mast cells and caspase-3 positive cells were decreased, while number of Ki-67 positive cells was significantly increases. In the biochemical analysis, MDA and MPO levels were decreased compared to GAL group, while GSH and GPx levels were significantly increased.In this study showed that ameliorative effects of PTX and CAPE on GAL-induced liver injury. In conclusion, we think that the treatment of liver diseases the use of agents with antioxidant and anti-inflammatory properties such as PTX and CAPE have beneficial effects.Key Words: Hepatitis, Galactosamine, Pentoxifylline, CAPE