Palmitat ile yağlanma oluşturulan insan kaynaklı hepatoma hücrelerinde vanilik asidin oksidatif strese ve HSP70 protein düzeylerine etkisi
Effect of vanillic acid on oxidative stress and HSP 70 protein levels in palmitate induced steatosis in human derived hepatoma cell
Yazar: REGAİP EKİCİLER
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLBEN SAYILAN ÖZGÜN
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Hücreler = Cells ; Karaciğer yağlanması = Fatty liver ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Oksitlenme = Oxidation ; Oksitlenme ürünleri = Oxidation products ; Palmitatlar = Palmitates ; Sıcaklık şoku proteinleri = Heat shock proteins ; Vanilik asit = Vanillic acid

Özet:
Bu çalışmanın amacı palmitat ile non-alkolik yağlı karaciğer modeli oluşturulan HepG2 hücrelerinde vanilik asidin hücre canlılığına, yağlanmaya, oksidatif strese ve ısı şok proteini 70 düzeylerine etkisini araştırmaktır.
Non-alkolik yağlı karaciğer modeli oluşturmak için HepG2 hücreleri 1 mM palmitat ile 24 saat inkübe edildi. Hücre canlılığı 3-(4,5-Dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazolium bromür testi ile ölçüldü. Yağlanma; trigliserit düzeyleri ticari kitler ile ölçülerek ve oil red O boyama ile mikroskopik olarak gösterildi. İleri oksidasyon protein ürünleri, ve katalaz aktivitesi spektrofotometrik olarak ölçüldü. Isı şok proteini 70 düzeyleri western blot yöntemi ile ölçüldü.
1500 ve 2000 µM vanilik asit HepG2 hücrelerinde canlılığı anlamlı olarak azalttı (p<0.05) ve bu sebeple 0-1000 µM arası vanilik asidin non-alkolik yağlı karaciğer modelinde etkisi araştırıldı. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında 1 mM palmitat hücre canlılığını ve katalaz aktivitesini anlamlı olarak azalttı ve trigliserit, ileri oksidasyon protein ürünleri ve ısı şok proteini 70 düzeylerini anlamlı olarak arttırdı (tümü için p<0.05). 1 mM palmitat uygulanan hücreler ile karşılaştırıldığında 1 mM palmitat ile birlikte uygulanan 500 µM vanilik asit; hücre canlılığını ve katalaz aktivitesini anlamlı olarak arttırırken trigliserit, ileri oksidasyon protein ürünleri ve ısı şok proteini 70 düzeylerini anlamlı olarak azalttı (tümü için p<0.05). 1 mM palmitat uygulan hücreler ile karşılaştırıldığında 1 mM palmitat ile birlikte uygulanan 200 µM vanilik asit ısı şok proteini 70 düzeylerini anlamlı olarak azalttı (p<0.05).
Sonuç olarak çalışmamız; palmitat ile non-alkolik yağlı karaciğer modeli oluşturulan HepG2 hücrelerinde vanilik asidin, özellikle 500 µM konsantrasyonda, hücre canlılığını arttırdığını ve yağlanmayı, oksidatif stresi ve ısı şok proteini 70 düzeylerini ise azalttığını gösterdi.


Anahtar Kelimeler: Vanilik asit (VA), Non-alkolik yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD), Isı şok
proteini 70 (HSP70), İleri Oksidasyon Protein Ürünleri (AOPP), Katalaz (CAT).

Abstract:
The aim of this study is to investigate the effect of vanillic acid on cell viability, steatosis, oxidative stress and heat shock protein 70 levels in palmitate-induced non-alcoholic fatty liver disease model in HepG2 cells.
To induce non-alcoholic fatty liver disease model, HepG2 cells were incubated with 1 mM palmitate for 24 hours. Cell viability was measured by 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay. Steatosis was shown by measuring triglyceride levels with commercial kits and by microscopically with oil red O staining. Advanced oxidation protein products and catalase activity were measured spectrophotometrically. Heat shock protein 70 levels were measured by western blot.
1500 ve 2000 µM vanillic acid significantly decreased the viability of HepG2 cells and therefore effect of vanillic acid on non-alcoholic fatty liver disease were investigated at the vanilic acid concentrations between 0-1000 µM. When compared with control group, 1 mM palmitate significantly decreased cell viability and catalase activity and significantly increased triglyceride, advanced oxidation protein products and heat shock protein 70 levels (p<0.05 for all). When compared with 1 mM palmitate incubated cells, 500 µM vanillic acid incubated with 1 mM palmitate significantly increased cell viability and catalase activity and significantly decreased triglyceride, advanced oxidation protein products and heat shock protein 70 levels (p<0.05 for all). When compared with 1 mM palmitate incubated cells, 200 µM vanillic acid incubated with 1 mM palmitate significantly decreased heat shock protein 70 levels (p<0.05).
As a result, our study showed that vanillic acid, especially at 500 µM concentration, increases cell viability and decreases steatosis, oxidative stress and heat shock protein 70 levels in palmitate-induced non-alcoholic fatty liver disease model in HepG2 cells.


Key Words: Vanillic acid (VA), Non-alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD), Heat Shock
Protein 70 (HSP70), Advanced oxidation protein products (AOPP), Catalase (CAT)