Klinik semptomlu köpeklerin kan, idrar, rektal sürüntü, nasal ve oküler akıntı örneklerinde canine distemper virus enfeksiyonun real time RT-PCR ile tespit edilmesi
Investigation of canine distemper virus by real time RT-PCR technique in blood, urine, rectal swab, nasal and ocular discharge samples of dogs with clinical signs
Yazar: HASBİ SAİT SALTIK
Danışman: PROF. DR. MEHMET KALE
Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Distemper virüsü-köpek = Distemper virus-canine ; Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Köpekler = Dogs ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Batı Akdeniz illeri (Burdur, Isparta ve Antalya)'nde CDV'ye özgü klinik semptom gösteren, aşılanmamış, 1 yaş altı, 50 adet köpekten örnekleme yapıldı. Bu amaçla hayvanlardan kan, idrar, rektal sürüntü, nasal ve oküler akıntı örnekleri toplandı. Örnekler serolojik, moleküler ve virolojik yöntemlerle incelendi. Çalışmada en fazla pozitiflik tüm testlerde 0-3 aylık hayvanlarda belirlendi. ELISA (IgM-IgG) ve virus izolasyonunda dişilerde , viral genom tespitine yönelik yapılan testte erkeklerde daha fazla pozitiflik belirlendi. Kan serum örneklerinde CDV'ye özgü IgM ve IgG antikor varlığına yönelik yapılan analizlerin virus izolasyon sonuçlarıyla kıyaslanması sonucu hem erken konvalesan dönemde hem de geç konvalesan dönemde etken izolasyonunun yapılabileceği ortaya kondu. Ayrıca CDV'ye özgü IgM ve IgG antikorlarının her ikisinin birden pozitif olup viral nükleik asidin tespit edilmediği durumlarda, virus izolasyonunun yapılabileceği saptandı. Toplamda 250 örnekte viral genom RNA varlığı One Step Real Time RT-PCR tekniğiyle araştırıldı. Bu metot ile en fazla pozitiflik (% 93.75) rektal sürüntü örneklerinde tespit edildi. Pozitif rektal sürüntü örneklerinin temin edildiği hayvanlarda öncelikle sindirim ve merkezi sinir sistemi semptomları gözlendi. Virus izolasyonu için tüm örnekler MDCK hücre kültürlerine ekildi. Bu metot ile de en fazla pozitiflik (% 93.75) rektal sürüntü örneklerinde tespit edildi. Pozitif rektal sürüntü örneklerinin temin edildiği hayvanlarda öncelikle solunum, sindirim ve merkezi sinir sistemi semptomları gözlendi. Tüm örneklerin meydana getirdiği CPE'ler üç derecede incelenerek; ileri(+++) seviye CPE meydana getiren örneklerin rektal sürüntü ve idrar örnekleri olduğu, düşük(+) seviye CPE meydana getiren örneklerin lökosit örnekleri olduğu belirlendi. Bu çalışmada, CDV enfeksiyon teşhisinde kullanılan testler arası korelasyonlar istatistiki açıdan önemli bulundu. Batı Akdeniz Bölgesi'nde aşılanmamış ve CDV enfeksiyonuna ait klinik semptom gösteren köpeklerden alınan farklı örneklerden 105 (%42) adet CDV genomu tespit edildi. Ayrıca çalışmada 39 (%78) köpekten alınan muhtelif örneklerden virus izolasyonu yapıldı.

Abstract:
In Western Mediterranean provinces (Burdur, Isparta and Antalya) the samples of 50 unvaccinated dogs under 1 year age which show CDV-spesific clinical symptoms were taken. For this purpose, blood, urine, rectal swab, nasal and ocular discharge specimens obtained from these dogs were collected. Specimens were examined by serological, molecular and virological methods. In this sudy, the highest positivity in all tests was detected in one-three month animals. More positivity was detected In ELISA (IgM-IgG) and virus isolation for females, and viral genom detection test for male dogs. By analysis presence of CDV spesific IgM and IgG in blood serum samples with isolation results showed that virus isolation can be done in both early and late convalescence period. In a total of 250 samples, the presence of viral genomic RNA was investigated by One Step Real Time RT-PCR method. With this method, the highest positivity (93.75%) was detected in rectal swab specimens. In animals where positive rectal swab specimens were obtained primarliy symptoms of digestion and central nervous system were observed. All samples for virus isolation were seeded into MDCK cell cultures. With this method, the highest positivity (93.75%) was also detected in rectal swab specimens. In animals where obtained primarily respiratory, digestive and central nervous system symptoms were observed. The CPEs of all samples used in the study were examined at three rates after the seeding of the MDCK cell cultures. It was determined that the samples which showed high level(+++) CPE were rectal swabs and urine specimens while the leukocyte samples which showed low level(+) CPE. By this method, the highest positivity (%62) was detected in RS samples.Mixed symptoms were also observed in animals with the most positive RS samples, as well as primarily digestive system symptoms. In this study correlations between tests which are used in diagnosis of CDV infection were significant in terms of statistic. 105 (42%) CDV genomes were detected in different samples from unvaccinated and symptomatic dogs of the CDV infection in the Western Mediterranean Region. In addition, virus was isolated from 39 (78%) dogs.