Sıçanlarda cerrahi olarak oluşturulan testis hasarlarında testis kaynaklı stromal kök hücrelerin testis dokusuna etkisi
The effect of testicular stromal Stem cells on testicular tissue in surgically induced testicular injuries in rats
Yazar: FARUK ALTINBAŞAK
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MURAT SERKANT ÜNAL
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Azospermi = Azoospermia ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kök hücreler = Stem cells ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Sperm = Spermatozoa ; Sıçanlar = Rats ; Testiküler hastalıklar = Testicular diseases ; Testis = Testis ; Testosteron = Testosterone

Özet:
Azospermi, infertil erkeklerin %10-20'sinde bulunan ve ejakülat ile atılan semen içerisinde spermatozoanın olmaması olarak tanımlanır. Azospermi hastalarında, sperm elde edilmesi için yapılan TESE ameliyatlarında testislerde doku kayıpları ve hasar meydana gelmektedir. Testislerde bu hasarın iyileşmesi uzun bir süre gerekmekte ve testosteron seviyelerinin tekrar yükselebilmesi aylarca sürebilmektedir.
Bu çalışmadaki amacımız testisin kendi mikroçevresine ait olan stromal kök hücreleri, cerrahi olarak lezyon oluşturduğumuz testis hasarında transplante ederek etkilerini incelemektir. Stromal kök hücreler, bu lezyonların daha çabuk olarak iyileşmesine neden olabilir.
Çalışmamızda 10 haftalık 21 adet Wistar-Albino cinsi erkek sıçan kullanıldı. Sıçanlar 3 gruba ayrıldı. Kontrol grubu (n:6), Cerrahi Hasar grubu (CH), CH Sağ ve CH Sol şeklinde (n:6) ve Testiküler Stromal Hücre grubu (TSC), TSC Sağ Ve TSC Sol şeklinde ayrıldı. (n:6). CH ve TSC gruplarının, sol testisine hasar verirken sağ testislerine hiçbir uygulama yapılmadı. Cerrahi olarak hasar verdiğimiz sıçanlara, testisten elde ettiğimiz testiküler stromal kök hücreler (TSC) transplante edildi. Daha sonra dokular hematoksilen-eozin (H&E) ile boyandı ve Modifiye Johnsen skorlaması ile fonksiyonel yapılardaki iyileşme oranları değerlendirildi. TSC'lerin testis dokusu üzerindeki etkileri Kaspas 3, BCL-2 ve BAX kullanılarak immünohistokimya tekniği ile gösterildi. Testisteki serum testosteron seviyeleri ise ELISA yöntemi ile incelendi.
15. günün sonunda, CH Sol grubundaki bazı seminifer tübüllerin germ hücrelerinde dejenerasyon olduğu ve interstisyel alanların azaldığı, TSC Sol grubunda ise seminifer tübüllerin normal histolojisine yakın bir görünüme sahip olduğu belirlendi. İmmünohistokimyasal teknikle dokulardaki ekspresyonlar incelendiğinde CH Sol grubunda, Kaspas 3, BAX düzeylerinin arttığı Kontrol ve TSC Sol grubunda ise azaldığı tespit edildi. BCL-2 düzeylerinin hasar grubunda arttığı, Kontrol ve TSC Sol grubunda ise azaldığı izlendi (p<0.004). Serum testosteron seviyelerinde TSC grubunda, Kontrol ve CH gruplarına göre artış olmasına rağmen bu artış istatiksel olarak anlamlı değildi (p>>0.119). Bütün bunlara bağlı olarak TSC'lerin testis dokusunda oluşan cerrahi hasar üzerinde iyileştirici etkiler yaptığı görüldü.

Abstract:
Azoospermia is defined as the absence of spermatozoa in ejaculate semen, which is found in 10-20% of infertile men. In azoospermia patients, tissue loss and damage occur in the testicles in TESE surgeries performed to obtain sperm. This damage to the testicles takes a long time to heal, and it can take months for testosterone levels to rise again.
Our aim in this study is to examine the effects of transplanting stromal stem cells, which belong to the microenvironment of the testis, in the testicular damage that we have surgically created a lesion. Stromal stem cells can cause these lesions to heal more quickly.
In our study, 21 10-week-old male Wistar-Albino rats were used. The rats were divided into 3 groups. The control group (n:6) was divided into the Surgical Damage group (CH), CH Right and CH Left (n:6), and the Testicular Stromal Cell group (TSC), TSC Right and TSC Left. (n:6). While damaging the left testis of the CH and TSC groups, no application was made to the right testis. Testicular stromal stem cells (TSC) obtained from the testis were transplanted into rats that we had surgically damaged. Tissues were then stained with hematoxylin-eosin (H&E) and recovery rates in functional structures were evaluated with Modified Johnsen scoring. The effects of TSCs on testicular tissue were demonstrated by immunohistochemistry technique using Kaspas 3, BCL-2 and BAX. Serum testosterone levels in the testis were analyzed by ELISA method.
At the end of the 15th day, it was determined that there was degeneration in the germ cells of some seminiferous tubules in the CH Left group and the interstitial areas were reduced, while the seminiferous tubules in the TSC Sol group had an appearance close to the normal histology. When the expressions in the tissues were examined by immunohistochemical technique, it was determined that Kaspas 3 and BAX levels increased in the CH Sol group and decreased in the Control and TSC Sol groups. It was observed that BCL-2 levels increased in the damage group and decreased in the Control and TSC Sol groups (p<0.004). Although there was an increase in serum testosterone levels in the TSC group compared to the Control and CH groups, this increase was not statistically significant (p>>0.119). As a result of all these, it was observed that TSCs had curative effects on the surgical damage in the testicular tissue.