Astrositlerde amiloid beta uyarımlı enflamasyon modelinde fasudil uygulamasının etkileri
The role of fasudil treatment on amyloid beta induced inflammation model in astrocytes
Yazar: BURÇİN NİLAY YENER
Danışman: DOÇ. DR. HÜLYA ÇİÇEK
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Amiloid = Amyloid ; Amiloid beta protein = Amyloid beta protein ; Astrositler = Astrocytes ; Fasudil = Fasudil ; Kaspazlar = Caspases ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Alzheimer hastalığı bugüne kadar görülen en yaygın nörodejeneratif bozukluktur. Nöropatolojik özellikleri amiloid plak ve nörofibriller yumaklardır. Ancak enflamatuvar süreç Alzheimer hastalığının patogenezinde temel bir role sahiptir. Sitokinler, Alzheimer hastalığında enflamatuvar ve anti-enflamatuvar süreçlerde kilit rol oynamaktadır.
Son zamanlarda, çok sayıda apoptoz düzenleyici faktör ve çoklu yollar belirlenmiş ve apoptotik hücre ölümü, Alzheimer hastalığında nöronal kayıp ile ilişkilendirilmiştir. Glial hücreler nöronlara kıyasla oksidatif strese karşı daha dirençli olsalar da, geniş oksidatif stresin glial hücrelerde de apoptotik hücre ölümüne neden olduğu görülmektedir.
Rho/kinaz birçok santral sinir sistemi (SSS) hastalığında aşırı aktive olur ve inhibe edilmesinin enflamatuvar ve demiyelinizan hastalıklarda potansiyel tedavi edici ajan olabileceği düşünülmektedir. Fasudil bir rho/kinaz inhibitörüdür ve nöroprotektif etkilere sahiptir. Çalışmada astrosit hücre hattında amiloid beta uyarımlı enflamasyonda fasudil uygulamasının Alzheimer hastalığında farmakolojik bir yaklaşım olup olmayacağı hakkında mevcut literatüre katkı sağlanması amaçlandı. Hücreler kontrol ve amiloid beta olmak üzere iki gruba ayrıldı ve 24 saat süresince 5 μM amiloid beta ile inkübe edildi. Başka bir gruba tedavi amacıyla Rho-kinaz inhibitörü 2.5 μM fasudil eklendi. Hücrelerden izole edilen RNA örneklerinden cDNA sentezi yapıldı. Gerçek zamanlı PCR metodu ile gen ekspresyon analizleri yapıldı. Elde edilen sonuçlara göre amiloid beta uygulanan hücre kültürü örneklerinde TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12, Cas-3, Cas-8, Bax, Bcl-2 mRNA ekspresyon düzeylerinde kontrol grubuna göre 2-27 kat artış gözlendi. Fasudil tedavisi ise amiloid beta uyarımlı enflamatuvar ve bazı apoptotik genlerdeki artışı önemli derecede azalttı (p<0.001). Mikroskop incelemeleride fasudilin koruyucu etkisini gösterdi. Sonuç olarak, fasudil ile rho-kinaz inhibisyonu amiloid beta aracılı enflamasyonun baskılanmasında koruyucu etkinliği olan ve tedavide kullanılabilecek bir ajan olabileceği gösterildi. Ancak, ileriki çalışmalara ihtiyaç duyulduğu sonucuna varıldı.
Anahtar Sözcükler: Alzheimer hastalığı, Amiloid beta, Fasudil, TNF-α, Cas-3, Cas-8

Abstract:
Alzheimer's disease is the most common neurodegenerative disorder to date. Neuropathological features is amyloid plaque and neurofibrillary tangles. However, the inflammatory process has a fundamental role in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Cytokines play a key role in inflammatory and anti-inflammatory processes in Alzheimer's disease. Recently, a large number of apoptotic regulatory factors and multiple pathways have been identified, and apoptotic cell death has been associated with neuronal loss in Alzheimer's disease.
Rho-kinase is overactivated in many CNS disorders and inhibition of rho is thought to be a potential therapeutic agent in inflammatory and demyelinating diseases. Fasudil is a rho-kinase inhibitor and has neuroprotective effects. The main purpose of this thesis is to investigate whether fasudil is beneficial for beta amyloid induced neuronal toxicity. In this study, it was aimed to contribute to current literature about whether pharmacological approach to Alzheimer's disease of amyloid beta induced inflammation in the astrocyte cell line would be fasudil. Cells were incubated with 5 μM amyloid beta for 24 hours. Another group of rho kinase inhibitors for treatment was added to 2,5 μM fasudil. cDNA synthesis was performed from RNA samples isolated from the cells. Gene expression analysis was performed by real-time PCR method. According the results obtained, amyloid beta TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12, Cas-3, Cas-8, Bax, Bcl-2 mRNA expression levels were 2 to 27 higher than control group. Fasudil therapy significantly reduced the increase in amyloid beta-stimulated inflammation and some apoptotic genes. (p<0.001). Microscopic examinations also showed of fasudil cell protective effect. As a result, the inhibition of rho kinase by fasudil may be an agent that can be used in therapy with a protective effect on the suppression of amyloid beta mediated inflammation. However, further work is needed to arrive at a definite conclusion.
Key Words: Alzheimer's disease, Amyloid beta, Fasudil, TNF-α, Cas-3, Cas-8