Testis torsiyonunda karşı taraf testiste apoptoz ve bcl-2 araştırılması
Investigation of apoptosis and bcl-2 on the other side test in testis torsion
Yazar: MURAT KABAKLIOĞLU
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA KÜÇÜKAYDIN
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2001
Konu: Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery
Dizin: Spermatik kord torsiyonu = Spermatic cord torsion

Özet:
ÖZET

Amaç:  Tek taraflı testis torsiyonunda karşı testiste apoptoz ve bcl-2'nin araştırılması
Materyal ve metod:  Çalışma herbirinde 10 adet prepubertal Spraque-Dawley erkek rat bulunan 6 grupta yapıldı.  Cerrahi işlem tek doz intraperitoneal Ketamin (50 mg/kg)  anestezisi altında yapıldı.  Midskrotal vertikal insizyonla sol testise torsiyon-detorsiyon-orşiektomi ve sham operasyonları yapıldı.  Torsiyon, sol testis saat yönünde 720 derece döndürülmesi ile oluşturuldu ve testis ipek sütür ile dartos fasyasına tesbit edilerek torsiyonun devamı sağlandı.  Sham operasyonunda, testis insizyon yerinden çıkarıldı ve manipüle edildikten sonra tekrar skrotuma yerleştirildi.  Cerrahi işlem sonrası insizyon kapatıldı.
Gruplar: Kontrol, 3 saatlik torsiyon + orşiektomi, 6 saatlik torsiyon + orşiektomi, 3 saatlik torsiyon + detorsiyon, 6 saatlik torsiyon + detorsiyon ve sham grubu olarak ayrıldı.  Detorsiyon ve sham gruplarına 30 gün sonra orşiektomi yapıldı.  Apoptotik indeks ve bcl-2 için Bouin solüsyonunda tespit edilen ve parafinde bloklanan dokulardan alınan kesitler kullanıldı.  Torsiyone testise iskemi için H&E, karşı taraf testise apoptoz değerlendirilmesi için H&E, bcl-2 için ise İHK yapıldı.
Bulgular:  apoptotik indeks (ortalama ± standart sapma), Grup I'de 2.1±1.5, Grup II'de 18.2±9.6, Grup III'de 29.3±10.1, Grup IV'de 10.9±7.4, Grup V'de 14.6±14.9, Grup VI'da 6.9±7.4 olarak bulundu. İstatistiksel olarak kontrol grubu 2 ve 3. gruplardan; 2. grup 1,4,5 ve 6. gruplardan; 3. grup 6. gruptan farklı bulundu (P<0.05).  Apoptoz daha çok spermatositlerde görüldü, ayrıca seyrek olarak da spermatitler ve Sertoli hücrelerinde de izlendi.
Bcl-2 indeksi (ortalama ± standart sapma), Grup I'de 18.9±6.0, Grup II'de 12.0±10.4, Grup III'de 1.3±1.8, Grup IV'de 5.8±1.8, Grup V'de 13.0±9.1, Grup VI'de 9.0±3.8 olarak bulundu.   Boyanma gruplara göre farklı olmakla birlikte Sertoli, spermatosit ve Leydig hücrelerinin sitoplazmalarında belirgin idi.  İstatistiksel olarak kontrol grubu 3 ve 4. gruplardan; 2. grup  3. gruptan; 3. grup 1,2 ve 6. gruplardan farklı bulundu (P<0.05).
Sonuçlar:  Testis torsiyonu sebebi ile karşı testiste kan-testis bariyerinin bozulması sonucu karşı testisin germinal epitelinde apoptotik indeks artmakta ve bcl-2 boyaması azalmaktadır.  Torsiyon  süresi arttıkça apoptoz da artmaktadır.  Bcl-2, testiste apoptoz regülasyonunda inhibitör olarak görev almaktadır.

Abstract:
SUMMARY

Purpose:  The aim of this study was to determine the contralateral apoptosis and the role of bcl-2 protein in the unilateral testicular torsion.
Material and methods:  Sixty prepubertal male Spraque-Dawley rats were divided into six groups each containing ten rats.  Surgery was conducted under intraperitoneal one-shot ketamine (50 mg/kg)  anesthesia. Torsion, detorsion and sham operations were performed on the left testes through midscrotal vertikal incision.  The torsion was created by rotating the left testes 720 degrees clockwise and maintained by fixing the testes to the scrotum with a silk suture. During the sham operations the testes were brought through the incision and manipulated then replaced into scrotum.  After each surgical intervention the incisions were closed.
The groups were as follows: control, torsion for three hours + orchiectomy, torsion for six hours + orchiectomy, torsion for three hours + detorsion, torsion for six hours + detorsion, and the sham group.  In the detorsion and sham groups orchiectomy were performed after 30 days.  In situ detection of apoptotic index and bcl-2 were performed on Bouin's fixed paraffin-embedded sections.  For ischemia and apoptotic index in all testes detected by H&E and also bcl-2 immunohistochemistry was performed only the contralateral testes.
Results:  Apoptotic index (expressed as mean ± standart deviation) were 2.1±1.5 for Grup I, 18.2±9.6 for Grup II, 29.3±10.1 for Grup III, 10.9±7.4 for Grup IV, 14.6±14.9 for Grup V, 6.9±7.4 for Grup VI.  The control group was different from the groups II and III; the second group was different from the groups I, IV, V and VI; the third group was different from the group VI (P<0.05).  Apoptosis was particularly occurred in spermatocytes; spermatids and  Sertoli cells were less affected.
Bcl-2 index (expressed as mean ± standart deviation) were 18.9±6.0 for Group I, 12.0±10.4 for Group II, 1.3±1.8  for Group III, 5.8±1.8 for Group IV, 13.0±9.1 for Group V and 9.0±3.8 for Group VI.  The control group was different from groups III and IV; the second group was different from the group-III; the third group was different from the groups I, II and VI (P<0.05).  Bcl-2 staining was present in the cytoplasm of spermatocytes, Sertoli and Leydig cells. 
Conclusions:  Trauma to the blood-testes barrier caused by testicular torsion induces extensive apoptosis in the germinal epithelium of the contralateral testes.  In addition, the cells with increased apoptotic index show low levels of bcl-2 staining.  The longer the time of torsion is the more incidence of apoptotic bodies.  In the testes, bcl-2 plays a role in the regulation of apoptosis as an inhibitor agent.