Fare testisinde küçük-vcp ile etkileşen protein (SVIP) ekspresyonu ve fonksiyonunun belirlenmesi
Determination of expression and function of small-VPC-interacting protein (SVIP) in mouse testis
Yazar: GÜLBEN AKCAN
Danışman: PROF. DR. SEVİL ÇAYLI
Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Androjenler = Androgens ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Proteinler = Proteins ; Steroidler = Steroids ; Testiküler hastalıklar = Testicular diseases ; Testis = Testis

Özet:
Küçük VCP ile etkileşen protein (SVIP: Small VCP-InteractingProtein),  Endoplazmik Retikulum ile ilişkili protein yıkımı (ERAD) ailesine ait 76 aminoasitten oluşmuş 9-Kda'luk bir proteindir. Son yapılan çalışmalar da SVIP'in androjene cevap veren bir protein olduğu ve androjenler tarafından SVIP ekspresyonunun düzenlendiği belirlenmiştir. Fakat bugüne kadar, SVIP'in androjen reseptörlerinin fazlaca ekspre edildiği testis dokusunda hücresel lokalizasyonu ve olası fonksiyonu araştırılmamıştır. Bu nedenle bu çalışmada öncelikle SVIP proteinin gelişmekte olan fare testisindeki ekspresyonu belirlenmiş ve bu proteinin olası fonksiyonunu hücre kültürü çalışmaları ile saptamak amaçlanmıştır. Gelişmekte olan fare testislerinde SVIP'in protein ekspresyonunu belirlemek amacıyla fetal (18 ve 19 günlük, n:6), postnatal (1, 5, 15, 35 günlük, n:6) ve ergin fareler (50 günlük, n:6)'den elde edilen testis dokuları İmmünohistokimya ve Western blot çalışmaları için kullanılmıştır. TM3 ve MA-10 fare Leydig hücreleri kültüre edilmiş, bu hücrelerde SVIP ve Steroidogenik akut regulatör protein (STAR)'nin ekspresyonları kolokalizasyon çalışmalarıyla değerlendirilmiş ve SVIP siRNA'leri kullanılarak SVIP ekspresyonu baskılanarak STAR protein ekspresyonundaki değişimler çalışılmıştır. Bu çalışmada ilk defa androjen reseptörü olarak literatürde geçen SVIP proteinin İmmünohistokimya ve Western blot çalışmaları sonucundaekspresyonu gösterilmiştir. Fetal, postnatal ve ergin farelerin testislerinde SVIP'in baskın olarak Leydig hücrelerinde ekspre olduğu ve gelişmekte olan testis dokularında ekspresyonunun artığı belirlenmiştir. TM3 ve MA-10 Leydig hücrelerinde de SVIP proteini ekspresyonlarının gözlenmesi sonucu steroidogenezle ilişkisi kurulmuş ve SVIP proteinin baskılanması sonucu Leydig hücre belirteçi olarak bilinen ve steroidogenezde aktif rol alan steroidogenik akut regulator protein (STAR)'in proteinin ekspresyonununda azaldığı gösterilmiştir ve proteinler arasında korelasyonlar gözlenmiştir.


Anahtar kelimeler: SVIP, STAR, Fare Testisi, Leydig Hücresi.

Abstract:
Small VCP-Interacting Protein (SVIP) is a 9-kDa protein that is composed of 76 amino acids of the family of Endoplasmic Reticulum-Associated Protein Degradation (ERAD). Recent studies have shown that SVIP is a androgen-responsive protein and SVIP expression is regulated by androgens. Until now, however, the cellular localization and possible function of SVIP in tissue, where the androgen receptors is overexpressed, have not been investigated. Therefore we aimed to detect the protein expression of SVIP at the cellular level and the possible function of SVIP in mouse testis by cell culture studies. In developing mouse testes, fetal (18 and 19 days, n: 6), postnatal (1, 5, 15, 35 days, n: 6) and adult mice (50 days, n: 6) were used to determine protein expression of SVIP. The obtained testis tissues were used for Immunohistochemistry and Western blot studies. In addition, TM3 and MA-10 mouse Leydig cells were cultured, and the expression of SVIP and the steroidogenic acute regulator protein (STAR) were evaluated by fluorescence microscopy with colocalization studies. The expressional changes of STAR was studied by using SVIP siRNA's in Leydig cell cultures. In this study, the expression of the SVIP protein, was demonstrated by Immunohistochemistry and Western blot studies. The expression of SVIP protein was increased in developing testicular tissues. In fetal, postnatal and adult mice testes SVIP expression was predominantly observed in Leydig cells. SVIP expression was also detected in TM3 and MA-10 Leydig cells and the correlation between SVIP expression and steroidogenezis was established. Suppression of SVIP resulted in the diminished expression of STAR which is a Leydig cell marker. The expression of two proteins were positively correlated in Leydig cell.

Key words: SVIP, STAR, Mouse Testis, Leydig Cell.