Ana safra kanalı bağlanmış sıçanlarda miRNA-30 aktarılmış mezenkimal kök hücre uygulamasının karaciğer hasarı üzerine etkisi
The effect of miRNA-30 transferred mesenchymal stem cell application on liver damage in rats with ligated common bile duct
Yazar: YASİN EKİCİ
Danışman: PROF. DR. MEHMET KILIÇ
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery

Özet:
İntrahepatik ve ekstrahepatik safra yollarındaki hasar inflamasyon ve staza bağlı fibrozis neden olur. Fibrozisteki tedavinin amacı ilerlemeyi azaltmak, durdurmak veya geri döndürmektir. Fibrozis tedavisinde kök hücre kullanımı pre-klinik ve klinik çalışmalarda olumlu sonuçlar vermiş olup güncel çalışmalar kök hücrenin etkisini arttırmaya yöneliktir. miRNA-30D-5p' nin birçok çalışmada karaciğer hariç farklı dokularda fibrozisi azaltıcı etkileri gösterilmiştir. Bu nedenle çalışmamızda karaciğer fibrozisinde, insan wharton jeli kaynaklı kök hücrenin (İWJ-MKH) etkisini arttırmak için miRNA-30D-5p tercih edildi. Deney modelinde Wistar Albino cinsi 32 adet erkek sıçan 4 gruba ayrıldı. Grup I sıçanların (sham)laparotomi sonrası batını kapatıldı. Grup II (SKL) sıçanların laparotomi sonrası ana safra kanalı bağlandı. Grup III (SKL+İWJ-MKH) sıçanların ana safra kanalı bağlandıktan iki hafta sonra kuyruk veninden kök hücre verildi. Grup IV (SKL+ İWJ-MKH+miRNA-30D-5p) sıçanların ana safra kanalı bağlandıktan iki hafta sonra kuyruk veninden miRNA-30D-5p transfekte kök hücre verildi. Tüm gruplar laparotomiden 4 hafta sonra sakrifiye edilerek karaciğer ve kan örnekleri alındı. Kan örneğinden AST, ALT, ALP, TB ve DB çalışıldı. Karaciğer dokusu histopatolojik olarak ışık mikroskopunda incelendi. Ayrıca karaciğer doku HGF, MDA ve albümin düzeyleri ELISA yöntemi ile ölçüldü. Çalışma sonuçlarında; miRNA-30D-5p'nin kök hücrenin etkisini arttırdığını destekleyen ve istatiksel olarak anlamlı bulunan parametreler AST, ALT, DB, albümin, HGF ve MDA seviyeleri oldu. Histopatolojik olarak anlamlı bulunan parametreler ise hasar belirteçleri olan nekrotik hücre, fokal hepatoselüler hasar ve karyolizisde yaşanan iyileşme oldu. Çalışma sonuçlarımızın geneli kök hücre etkisini arttımak için miRNA-30D-5p kullanımının iyi bir seçenek olacağını düşündürmektedir. Doğruluğunun desteklenmesi için pre-klinik ve klinikileri düzeyli çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Damage to the intrahepatic and extrahepatic bile ducts causes inflammation and fibrosis due to stasis. The aim of treatment in fibrosis is to reduce, stop or reverse progression. The use of stem cells in the treatment of fibrosis has given positive results in pre-clinical and clinical studies and current studies are aimed at increasing the effect of stem cells. miRNA-30D-5p has been shown to reduce fibrosis in different tissues except liver in many studies. Therefore, miRNA-30D-5p was preferred in our study to enhance the effect of human wharton gel-derived stem cells (IWJ-MKCs) in liver fibrosis. In the experimental model, 32 male Wistar Albino rats were divided into 4 groups. The abdomen of group I rats (sham) was closed after laparotomy. In group II (SCL) rats, the common bile duct was ligated after laparotomy. Group III (SKL+HWJ-MKH) rats received stem cells from the tail vein two weeks after the common bile duct was ligated. Group IV (SKL+ HWJ-MKH+miRNA-30D-5p) rats received miRNA-30D-5p transfected stem cells from the tail vein two weeks after ligation of the common bile duct. All groups were sacrificed 4 weeks after laparotomy and liver and blood samples were taken. AST, ALT, ALP and DB were determined from the blood sample. Liver tissue was examined histopathologically under light microscope. In addition, liver tissue HGF, MDA and albumin levels were measured by ELISA method. In the results of the study; AST, ALT, DB, albumin, HGF and MDA levels were the statistically significant parameters that supported that miRNA-30D-5p increased the effect of stem cells.Histopathologically significant parameters were necrotic cells, focal hepatocellular damage and improvement in karyolysis. The overall results of our study suggest that the use of miRNA-30D-5p would be a good option to increase stem cell effect. Further pre-clinical and clinical studies are needed to support its accuracy.