Cevizden (Juglans regia L.) paraoksonaz enziminin saflaştırılması, karakterize edilmesi ve bazı pestisitlerin enzim aktivitesi üzerine etkisinin araştırılması
Purification and characterization of paraoxonase enzyme from the walnut (Juglans regia L.), research the effects of some pesticides on enzyme activity
Yazar: BİNNAZ ÖKSÜZ
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmada cevizden (Juglans regia L.) paraoksonaz (PON) enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Paraoksonaz enziminin saflaştırılmasında afinite kromatografisinden faydalanıldı. Cevizden (Juglans regia L.) saflaştırılan paraoksonaz enziminin saflığını kontrol etmek ve alt birim sayısını belirlemek için SDS-PAGE elektorofezi uygulandı.Enzimin substrat spesifikliğinin belirlenmesi amacıyla, paraokson ve fenilasetat substratları denenmiş ve aktivetesi daha yüksek olan paraokson aktivite ölçümlerinde ağırlıklı olarak kullanılmıştır.Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri tespit edilerek paraokson ve fenilasetat substratları için KM ve Vmax değerleri belirlendi. Paraokson için Vmax ve KM değerleri sırasıyla: 0,062 ? g/L.dak ve 0,038 mM, fenilasetat için Vmax ve KM değerleri sırasıyla: 0,038 ? g/L.dak ve 0,018 mM olarak bulundu.Enzim aktivitesi üzerine 10 mM, 1 mM ve 0,1 mM konsantrasyonlarında, Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn+2, Fe+3 katyonlarının ve EDTA, Askorbik Asit, ß ß-Merkaptoethanol ve SDS bileşiklerinin etkisi denendi. Ca2+, Fe+3'ün paraoksonaz enzim aktivitesini arttırdığı bulundu. Mn2+, Zn+2'nin yüksek konsantrasyonlarda enzim aktivitesini kısmen inhibe ettiği belirlendi. ß-Merkaptoethanol, EDTA, Askorbik Asit ve SDS'nin yüksek konsantrasyonlarda enzimi inhibe ettiği belirlendi.PON enzim aktivitesi üzerine 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm klorprifos etil, metil paratiyon, dimetoat, diklorvos, diazinon, metamidopos, etil paratiyon ve fention pestisitlerinin etkisi araştırıldı. Bu pestisitlerin paraoksonaz enzim aktivitesini arttırdığı bulundu.

Abstract:
In this study; the paraoxonase enzyme was purified and characterized from the walnut (Juglans regia L.). Affinity chromatography was used for purification of the paraoxonase. SDS-polyacrilamide gel electrophoresis was applied for control of the paraoxonase enzyme purified from the walnut (Juglans regia L.).KM and Vmax values for paraoxon and phenyl acetate substrates were determined after setting optimal pH and temperature conditions of paraoxonase enzyme. Vmax and KM values for paraoxon were determined as 0,062 ? g/L.min ve 0,037 mM. Vmax and KM values for phenyl acetate were determined as 0,038 ? g/L.min ve 0,018 mM.Effects of 10 mM, 1 mM ve 0,1 mM Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn+2, Fe+3 cations and 10 mM, 1 mM ve 0,1 mM EDTA, Ascorbic Asid, ß-Merkaptoethanol, SDS compounds on enzyme activity were researched. It was found that Ca2+ and Fe+3 activated the enzyme. It was determined that high concentrations of Mn2+, Zn+2 partially inhibited the enzyme. It was determined that high concentrations of ß-Merkaptoethanol, EDTA, Ascorbic Acid and SDS inhibited the enzyme.Effects of 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm chloropyriphos-ethyl, methyl-parathion, dichlorvos, dimethoate, diazinon, methamidophos, ethyl-parathion and fenthion pesticides on enzyme activity were researched. This pesticides activated the enzyme.