Deneysel ikinci derece derin yanık modelinde kültüre edilmemiş hücre spreyi kullanımı
The use of non-cultured cell spray in experimental deep second degree burn model
Yazar: SAFA KÜRŞAT NURAL
Danışman: PROF. DR. ALİ KONAN
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery
Dizin: Cerrahi = Surgery ; Hücreler = Cells ; Otogrefler = Autografts ; Tedavi = Treatment ; Yanıklar = Burns

Özet:
Yanık yaralanmalarının çoğu ayaktan tedavi edilebilirken %10'luk bir hasta grubunda yanık ünite veya merkezinde izlem ve tedavi gerekir. Bu tedavi süreci bazen komplike olabilir ve sekel/fonksiyon kaybı ile sonuçlanabilir.
Birinci ve yüzeyel ikinci derece yanık yaraları sadece yara bakımı ile iyileĢebilirken; derin ikinci ve üçüncü derece yanıklar cerrahi tedavi gerektirir. Bu hastalarda otogreft kullanımı ile yanık yaralarının kapatılması standart tedavi yöntemidir. Ancak uzun süreli yara bakımı gerektirmesi, enfeksiyon, donör saha bakımı ve komplikasyonları gibi sorunlar nedeniyle ideal cerrahi tedavi arayıĢı sürmektedir.
Kültüre edilmiĢ epidermal otogreftler bir süredir kullanılmasına rağmen; ideal bir yara tedavi yöntemi olamamıĢtır. Öte yandan erken dönem otolog hücre spreyinin mesh grefte göre re-epitelizasyonu hızlandırdığı düĢünülmektedir. Bunun üzerine iki aĢamalı enzim etkisiyle keratinosit izolasyonuna dayanan, daha hızlı uygulanılabilen kültüre edilmemiĢ hücre spreyi kullanımı gündeme gelmiĢtir.
Bu araĢtırmanın amacı, sıçanlarda oluĢturulan derin ikinci derece yanıklarda kültüre edilmemiĢ hücre spreyi kullanımının deneysel modelini oluĢturmak ve bu yöntemin etkinliğini klasik kısmi kalınlıkta deri grefti ile karĢılaĢtırmaktır.
Deney için 24 adet Wistar Albino cinsi erkek sıçan 4 gruba ayrıldı. Ġlk grup iĢlem sonrası 3., ikinci grup iĢlem sonrası 7., üçüncü grup iĢlem sonrası 14. ve dördüncü grup iĢlem sonrası 21. gün makroskopik ve histolojik olarak değerlendirilecek deneklerden oluĢuyordu. Hepsinin dorsal derisine farklı lokalizasyonda iki adet derin ikinci derece yanık oluĢturuldu. Yanık yarasının 5.gününde iĢleme alındı. Tanjansiyel eksizyon sonrası yanık yarasının birine kısmi kalınlıkta deri grefti uygulandı. Alınan donör greftinin diğer yarısına iki aĢamalı enzim uygulaması yapıldı ve keratinositler açığa çıkarıldı. Bu hücreler diğer tanjansiyel eksizyon yapılan yanık yarasına sprey olarak uygulandı.
ĠĢlem sonrası 3., 7., 14. ve 21.gün denekler sakrifiye edildi ve fotoğrafları çekilerek doğrudan gözlemle makroskopik olarak incelendi, biyopsiler alındı. Spesimenlerde epitelize olmayan alan, inflamatuar yanıt ve neovaskülarizasyon incelendi.
Doğrudan gözlem yöntemi ile yapılan makroskopik incelemede deri grefti grubu ile sprey grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptandı. Ancak histopatolojik incelemede, inflamatuar yanıt ve neovaskülarizasyon açısından deri grefti ve sprey grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu. Ayrıca bakılan korelasyon testlerinde makroskopik inceleme yüzdesi ile epitelize olmayan alan, inflamatuar yanıt ve neovaskülarizasyon arasında istatistiksel olarak ters yönde orta kuvvette anlamlı bir iliĢki saptandı.
Bu çalıĢmanın sonucunda klasik otolog deri grefti ile kültüre edilmemiĢ hücre spreyinin yara iyileĢmesi üzerine etkilerinin benzer olduğu saptandı. Elde edilen sonuçlar kültüre edilmemiĢ hücre spreyi yönteminin yanık tedavisinde kullanılabilecek etkili bir greft yöntemi olabileceğini göstermektedir. Ancak bu yöntemin insanlarda kullanımı ve daha net sonuçlar elde etmek için ileri çalıĢmalara gereksinim vardır. Tanımladığımız bu hayvan modeli gelecekteki çalıĢmalarda kullanılabilir.

Anahtar Kelimeler: Derin ikinci derece yanık, cerrahi tedavi, otolog hücre,
kültüre edilmemiĢ hücre spreyi

Abstract:
Most of the burn injuries can be treated in outpatient clinics. Ten per cent of the burn patients need follow-up and treatment in a burn unit or center. The treatment process can sometimes be complicated and may result in sequelae / function loss.
First and superficial second-degree burn wounds heals by wound care; Deep second and third degree burns require surgical treatment. In these patients, the closure of burn wounds with autograft use is the standard treatment method. However, due to problems such as long-term wound care, infection, donor site maintenance and complications, the search for ideal surgical treatment is in progress.
Cultured epidermal autografts, although used for a while; failed to become an ideal wound treatment method. On the other hand, early autologous cell spray is thought to accelerate re-epithelization according to mesh graft. Thereafter, the use of non-cultured cell spray, which is based on keratinocyte isolation with the action of two-stage enzyme, can be applied more rapidly.
The aim of this study was to establish the experimental model of the use of non-cultured cell spray in deep second-degree burns in rats and to compare the effectiveness of this method with the conventional partial-thickness skin graft.
Twenty-four Wistar Albino rats were divided into 4 groups which were evaluated macroscopically and histologically on day 3,7,14 and 21 consecutively. Two deep second degree burns were created on the dorsal skin of the rats. On the 5 day a partial thickness skin graft was applied to one of the burn wounds after tangential excision. Two-stage enzyme was applied to the other half of the donor graft and keratinocytes were exposed. These cells were applied as a spray to the burn wound following tangential excision.
After the procedure, the subjects were sacrificed on the 3rd, 7th, 14th and 21st days and their photographs were taken and tissue specimen were collected for histopathological examination. Non-epithelized area, inflammatory response and neovascularization were assessed histopathologically.
The macroscopic examination performed by direct observation method, the take on rates were significantly better in the spray group. However, there was no statistically significant difference between the skin graft and the spray group in terms of inflammatory response and neovascularization in histopathological examination. In addition, a significant reverse correlation of medium strength was found between the percentage of macroscopic examination and non-epithelized area, inflammatory response and neovascularization.
As a result of this study, it was found that the effect of cell autologous non-cultured cell spray on wound healing was similar the partial thickness skin grafting. The results show that the non-cultured cell spray method can be an effective graft method for the treatment of burns. However, there is a need for further studies to use this method in humans and to obtain clearer results. The animal model we described can be used for future research.

Keywords: Deep second-degree burn, surgical treatment, autologous cell,
non-cultured cell spray