Derinin melanositik lezyonlarının ayırıcı tanısında moleküle yöntemlerin katkısı
The contribution of moleculer techniques in the differential diagnosis of melanocytic lesions
Yazar: HASAN AKTUĞ ŞİMŞEK
Danışman: DOÇ. DR. APTULLAH HAHOLU
GATA / Haydarpaşa Eğitim Hastanesi  / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Patoloji = Pathology

Özet:
Mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) yolağı fizyolojik durumlardasinyalleri hücre yüzeyinden nükleusa ileterek hücre büyümesini, yaşamasınıve göçünü düzenler. MAPK yolağının bozukluğu, melanoma gibi birçokkanserde saptanmıştır. MAPK yolağının önemli genlerinden biri BRAF'dır.BRAF geninin aktive edici mutasyonları melanomalarda en sık görülengenetik değişikliktir. Bu mutasyonlardan en sık görüleni de V600E noktamutasyonudur (> %90).Bu çalışmada GATA HEH Patoloji Servisinden tanı almış 50 primer kutanözmelanoma, 10 displastik nevüs, 30 benign melanositik nevüs (kompound,junktional, intradermal); Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Patoloji Ana BilimDalından tanı almış 23 melanoma; İstanbul Üniversitesi İstanbul Tıp FakültesiPatoloji Ana Bilim Dalından tanı almış 14 melanoma olgusuna ait olmaküzere toplam 87 melanoma, 10 displastik nevüs ve 30 benign melanositiknevüse ait parafin bloklar retrospektif olarak incelenmiştir. Parafin bloklarınher birinden 10 ?m'lik 3 kesit alınarak DNA ekstraksiyonu yapılmıştır.Mutasyon varlığını göstermeye yönelik olarak seçilen primerler (F1: 5'-TGCTTGCTCTGATAGGA 3', F2 5'-TGGTCTTAGCTACAGA 3' R: 5'CTAGTAACTCAGCAGCA 3') kullanılarak sekans spesifik PCR tekniğikurgulanmıştır. Pozitif ve negatif analitik kontrollerle birlikte, biri mutasyonalanını içeren 15.ekzonu (F1R: 241bç), diğeri BRAF mutasyonu varlığındadaha kısa bir segmenti gösteren ( F2R: 141bç) amplikonlar için elektroforezplak görüntüleri değerlendirilmiştir. F2R kombinasyonunda 141 bç'lik bantınvarlığı BRAF V600E mutasyonu için yeterli görülmüştür.Çalışmamızda primer kutanöz melanomaların % 97'sinde (80/83), displastiknevüslerin % 90'ında (9/10) ve benign melanositik nevüslerin % 96'sında(29/30) BRAF V600E mutasyonunun varlığı gösterilmiştir.Melanositik lezyon spektrumunda yer alan lezyonlarda morfolojiden bağımsızolarak, yüksek oranlarda BRAF V600E mutasyonunun saptanması, BRAF'ınmelanositik proliferasyonların patogenezinde erken dönemde oluşan birmutasyon olduğunu göstermektedir. Morfolojik farklılıklar da dikkatealındığında, bu mutasyonun tek başına melanoma gelişimi için yeterliolmadığı ve melanomaların moleküler patogenezinde BRAF dışında başkadeğişikliklerin de olması gerektiği anlaşılmaktadır.Anahtar Kelimeler : Melanoma, Melanositik lezyon, BRAF, noktamutasyonu

Abstract:
Mitogen Activated Protein Kinase (MAPK) pathway, under physiologicconditions regulates cell growth, survival, and differentiation. Constitutiveactivation of this signaling pathway is observed in a variety of cancers, one ofwhich is melanoma. BRAF is one important gene of MAPK pathway. Themutations that activate BRAF gene is the most common genetic alteration inmelanomas. V600E accounts for more than 90% of B-RAF mutations inmelanoma.İn this study, retrospectively the parafine embedded blocks of 87 primercutaneous melanomas, 10 displastic nevi and 30 benign melanocytic nevi (50primer cutaneous melanomas, 10 dysplastic nevi, 30 benign melanocytic nevi(compound, junctional, intradermal) diagnosed by Gülhane HaydarpaşaTraining Hospital Pathology Service; 23 melanomas diagnosed by AkdenizUniversity Department of Patology; 14 melanomas diagnosed by IstanbulUniversity İstanbul Medical Faculty Department of Pathology ) is examined.Three sections of 10 micrometer thickness is taken and DNA extraction isapplied to each sample. Sequence spesific PCR tecnique is performed bymaking use of primers (F1: 5?-TGCTTGCTCTGATAGGA 3?, F2 5?-TGGTCTTAGCTACAGA 3? R: 5? CTAGTAACTCAGCAGCA 3?) which areselected to show mutation presence. Electrophoresis visuals of amplicons of15. exon (F1R: 241 base pair ) including mutation area and the shortersegment in BRAF mutation presence (F2R:141 base pair ) are assessedalong with pozitif and negative analytic controls. In F2R combination,presence of the band 141 basepair is accepted as sufficient for mutation.In our study, BRAF V600E mutation is detected in %97 (84/87) of primercutaneous melanomas, %90 (9/10) of dysplastic nevi and % 96 (29/30) ofbenign melanocytic nevi.Detection of excessive BRAF V600E mutations in melanocytic lesions withno dependency with morphology demonstrated that BRAF mutation inmelanocytic proliferations pathogenesis in early stage. Taking intoconsideration of morphologic differences, this mutation is insufficent todevelop melanoma and moreover melanomas need to differ apart from BRAFin moleculer patogenesis.Keywords : Melanocytic nevi, frequency of melanocytic nevi, sunexposure