Tip 2 Diyabetik hastalarda DNA tamir enzimi olan NEIL1 gen mutasyonunun Türk popülasyonunda araştırılması
Investigation of mutation of The NEIL1 gene, the DNA repairing enzyme gene, in patients with type 2 Diabetes Mellitus in Turkish population
Yazar: MUSA SALMANOĞLU
Danışman: PROF. DR. METİN ÖZATA
GATA / Haydarpaşa Eğitim Hastanesi  / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases ; Genetik = Genetics

Özet:
Bu çalışmanın amacı; DNA tamir enzimi olan NEIL1 gen mutasyonu ile tip 2 diyabet arasındaki ilişkiyi değerlendirmektir. 70 tip 2 diyabetik hasta (yaş: 53,07±11.12 yıl, VKİ: 29,57±4,00 kg/m²) ve 50 non-diyabetik kontrol grubu (yaş: 49,54±11.12 yıl, VKİ: 24,14 ± 2,14 kg/m²) çalışmaya alındı. Ayrıca sağlıklı ve gönüllü bir birey ise ?referans birey? olarak kabul edildi ve çalışmaya alındı (yaş: 42 yıl, VKİ: 23,2 kg/m²). Çalışmaya alınan tüm bireylerin periferik venöz kan örneklerinden DNA'ları izole edildi. İzole edilen DNA'lara, NEIL1 geninin her ekzonu için farklı siklusda PCR yapıldı. PCR işleminden sonra referans bireyin DNA'sı ?referans DNA? (kalıp DNA), bunun dışındaki tüm DNA'lar ?hedef DNA? olarak kabul edildi. Hedef DNA'lar referans DNA ile eşleştirilerek, heterodubleks ve homodubleks DNA'lar oluşturuldu. Oluşan bu hibrid DNA'lar restriksiyon enzimi ile kesim işlemine tabi tutuldu. Kesim ürünleri %2'lık agaroz jele yüklenerek elektroforezde yürütüldü ve mutasyon yönünden değerlendirildi. Mutasyon tespit edilen olgulara baz sekanslaması yapıldı. Çalışmamızda hasta grubundan 2 hastada NEIL1 geninin 8. ekzonunda, aynı noktada mutasyon saptandı. Kontrol grubunda ise mutasyon saptanmadı. Baz sekanslaması ile mutasyonun, NEIL1 geninin 8. ekzonunda 1068. pozisyonundaki guanin yerine adenin değişimden (1068G?A) kaynaklandığı gösterildi. Çalışmamızda kontrol grubuna göre hasta grubunda, NEIL1 gen mutasyonu saptanması ve her iki mutasyonun NEIL1 geninin 8. ekzonunda olması istatistiksel olarak anlamlı bulundu. Tespit edilen mutasyonun amino asit yapısını değiştirmediği belirlendi. Bundan dolayı mutasyon ?Silent? (sessiz) mutasyon olarak değerlendirildi. Bu mutasyonun, tip 2 diyabetin oluşmasında genetik yatkınlık yaratması veya tip 2 diyabetin gelişimine neden olabileceğini düşünüyoruz.Anahtar kelimeler: Tip 2 diyabet, DNA tamiri, NEIL1 mutasyonuYazar : Musa SALMANOĞLUDanışman : Metin ÖZATA

Abstract:
Our aim in this study was to investigate the existence of any possible mutation of the NEIL1 gene, a DNA repairing enzyme gene, in type 2 diabetic patients.Seventy type 2 diabetic patients (aged 53,07±11.12 years, BMI; 29,57±4,00 kg/m²) and fifty non-diabetic healthy control (aged 49,54±11.12 years, BMI; 24,14 ± 2,14 kg/m²) and a healthy and volunteering individual was accepted as a reference subject (aged 42 years, BME; 23,2 kg/m²) were enrolled in the study. The DNA?s from the periferic venous blood samples of all the subjects involved in the study were isolated. PCR was applied to gene NEIL1 from the isolated DNA?s. After the process of PCR, the DNA of the reference DNA, forming hetrodublex and homodublex DNA?s. Resulting hybrid DNA?s were subjected to slicing process with restriction enzyme. Sliced products were added on 2% agarose gel, processed on electrophoresis and evaluated for mutation. Base sequences were applied to the formations where mutations were determined.In our study, mutation was determined at the same point of the eighth exon of NEIL1 gene in two subjects of our patient group. In the healthy controls group, no mutation was observed. Our study demonstrated that base sequencing and mutation originated from adenine replacement (1068G?A) instead of guanine at the position of 1068 in the eighth exon of gene NEIL1.Determination of NEIL1 gene mutation in our diabetic patient group compared with the healthy control group and the fact that both mutations were formed at the eighth exon of NEIL1 gene were noted as statistically significant in our study. It was determined that observed mutation did not alter the amino acid structure of NEIL1. Therefore, the mutation was regarded as silent mutation. We consider it is meaningful for this mutation to create a genetic tendency in formation of type 2 diabetes or be a risk factor for type 2 diabetes, according to the data obtained in our study.Key words : type 2 diabetes, DNA repair, Neil1 mutationAuthor : Musa SALMANOĞLUAdvisor : Metin ÖZATA