Vitrifikasyon ve ototransplantasyon sonrasında fare ovaryum dokusunun morfoloji ve üreme potansiyeli açısından değerlendirilmesi
Evaluation of morphology and reproductive potential of mouse ovary tissue after vitrification and autotransplantation
Yazar: ERKAN GÜMÜŞ
Danışman: PROF. DR. CELAL KALOĞLU
Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Ephrin B1 = Ephrin B1 ; Fareler = Mice ; Over = Ovary ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Trombosit kaynaklı büyüme faktörü = Platelet-derived growth factor ; Vitrifikasyon yöntemi = Vitrification method ; Üreme = Reproduction ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
İnfertiliteye neden olan çok sayıda faktör mevcuttur. Bunlardan birisi de kanser tedavisidir. Bu hastalarda fertiliteyi korumak icin oosit, embriyo ve ovaryum dokusu dondurulması yöntemleri kullanılabilir. Ovaryum dokusunun kriyoprezervasyonu, pre-pubertal kız, genç kadınlar ve partneri olmayan kadınlar için günümüzde uygulanabilir tek yöntemdir.  Ovaryum dokusu, yavaş dondurma (slow freezing) ve hızlı dondurma (vitrifikasyon) yöntemleriyle dondurulmaktadır. 
Bu çalışmada, vitrifikasyon yöntemiyle dondurulan fare ovaryum dokularının bir kısmı, çözüldükten sonra aynı hayvanların böbrek kapsülü altına transplante edildi. Kontrol, dondurulup-çözülmüş ve dondurulup çözüldükten sonra transplante edilen çalışma gruplarında; folliküllerin morfolojileri ve follikülogenezde, proliferasyonda ve anjiyogenezde etkin olan Ephrin B1, PDGF-α, GDF-9, Ve-kaderin ve Pecam-1 genlerinin ve gen ürünlerinin ekspresyonları RT-PCR ve immünohistokimyasal yöntemlerle belirlendi.
Kontrol ve çalışma gruplarında folliküller ışık mikroskobu kullanılarak sayıldı ve istatistiksel olarak değerlendirildi. Vitrifiye edilen ovaryum dokularında primordiyal ve primer folliküllerin korunduğu ve kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, anlamlı bir farkın olmadığını tespit ettik (p>0,05). Dondurulup-çözüldükten sonra transplante edilen ovaryum dokuları, sham grupla karşılaştırıldığında primordiyal ve sekonder folliküllerin daha iyi korunduğu ve anlamlı bir farkın olmadığını tespit ettik (p>0,05). Tüm folliküller açısından değerlendirildiğinde, folliküllerin dondurulup-çözüldükten sonra transplante edilen ovaryum dokularında sham grubundan yaklaşık %9 daha az olduğunu tespit ettik. Kontrol ve çalışma grupları arasında ekspresyonları incelenen genlerin, gen ifade düzeylerinde istatistiksel olarak anlamlı olmayan değişiklikler tespit ettik. Bu genlerin ürünlerinin hem kontrol hem de çalışma gruplarında eksprese olduklarını gösterdik. 
Sonuç olarak, gerek morfolojik değerlendirmelerle, gerekse PDGF-α, GDF-9, Ephrin B1, Ve-Cadherin ve Pecam-1 genlerinin değerlendirilmesiyle ovaryum dokusunun başarılı şekilde vitrifiye edildiği ve seçilen genler açısından korunduğu tespit edildi.

Abstract:
There are many factors that cause infertility. One of them is the cancer treatment. Oocyte, embryo and ovary tissues cryopreservation techniques can be used for fertility preservation.  Cryopreservation of ovarian tissue is the most essential technique for prepubertal girls, young women and women without a partner. Ovarian tissue have been cryopreserved by using slow freezing and vitrification techniques. 
In this study, some of the vitrified-warmed mouse ovarian tissues were transplanted under the kidney capsule of the same recipients. The morphology of the follicles and the expression of the gens (Ephrin B1, PDGF-α, GDF-9, Ve-kaderin and Pecam-1) that play key roles in folliculogenesis, proliferation and angiogenesis, were determined by RT-PCR and immunohistochemistry in control, vitrified-warmed and vitrified-warmed grafted tissues groups.
The tissue sections were analyezed by using light microscopy and was considered statistically in control and experiment groups. We determined that primordial and primary follicles have been preserved in vitrified ovarian tissues and was no significant difference between vitrified-warmed and control groups (p>0,05). We detected that primordial and secondary follicles have been preserved better in vitrified-warmed ovarian grafts. There was no significant difference between transplanted of fresh (non-vitrified) and vitrified-warmed ovarian tissue grafts (p>0,05). In vitrified–warmed ovarian grafts, the follicular content was approximately 9% lower than that of fresh (non-vitrified) grafted ovaries.
The expression levels of examined genes were dectected difference between control and experiment groups but there was no significant differences between groups (p>0,05). The expression of genes products were showed both control and experiment groups as well. 
In conclusion, evaluation of morphologic and genes expression showed that mouse ovarian tissues were successfully vitrified and it was found that the selected genes were protected.