Mezenşimal kök hücrelerin over kanseri hücre hattına etkisi ve senesence belirteçleri ile ilişkisi
The effect of Mesenchymal stem cells on ovarian cancer cell line and its relationship with senesence markers
Yazar: LEVENT AKMAN
Danışman: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı / Kök Hücre Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Over kanseri, hem cerrahi hem de onkolojik tedavilerdeki büyük ilerlemelere rağmen kadın genital sisteminin en ölümcül kanseridir. Eksozomlar endotelden, fibroblast ve kanser hücrelerine kadar bilinen tüm hücreler tarafından ekstraselüler ortama salınan, veziküler yapıda keseciklerdir. Kanser kök hücre kökenli eksozomlar tümör oluşumu için mikroçevre düzenlemesi yaparken mezenkimal kök hücrelerden salgılanan eksozomların tedavi edici özellikleri baskındır. Bu araştırmada mezenşimal kök hücrelerin over kanseri hücre hattına etkisinin belirlenmesi ve senesence belirteçleri ile ilişkisinin ortaya konulması amaçlanmıştır.
Bu araştırma prospektif olarak Ege Üniversitesi Kök Hücre Anabilim Dalı'nda 27.11.2020-27-11-2022 tarihleri arasında gerçekleştirilmiştir. Çalışmada hücre hattı olarak over kanser hücre hattı OVCAR3 ve wharton jöle kökenli kök hücrelerden (WJ-MKH) eksozom eldesi kullanıldı. Hücrelerin canlılıklarını ve sayılarını kontrol etmek için, Tripan mavisi boyası uygulandı. Hücreler inverted mikroskopta (Olympus) 10x büyütmede sayıldı. WJ-MKH'ler 37°C ve %5 CO2 içeren nemli bir ortamda inkübe edildi. WJ-MKH'lerden elde edilen eksozomların karakterizasyonu, eksozom belirteçleri olan CD63 ve CD9 (Beckman Coulter) bakılarak akım sitometrik yöntemle incelendi. WJ-MKH'lerden eksozom suspansiyonlarının OVCAR3 hücre hattındaki sitotoksik etkisinin belirlenmesinde Gerçek Zamanlı Hücre Analiz Sistemi -xCELLigence (RTCA-SP) sistemi kullanıldı. X-Gal Boyaması için Abcam beta Galactosidase Detection Kit (ab102534) kullanıldı.
Çalışma sonucunda WJ-MKH'lerle muamele edilen OVCAR hücrelerinin IC50 değerlerinin 24. Saatte sonuç alınamazken, 48. Saatteki IC50 dozunun 37.69 ve 72. Saatte ise IC50 dozu 1429.3 olarak görüldü. Eksozomların kanser hücrelerine sitotoksik etkisinin kök hücrelere kıyasla daha fazla olduğu ve 72. Saatte dahi etkinliğinin sürdüğünü gösterdi. Boyama sonucunda gruplar arasında herhangi bir boyanma farklılığına rastlanmadı. 
Çalışmamız sonucunda Over kanserinin hücre döngüsüne WJ-MKH'den elde edilen eksozomlar birçok avantajlara sahip tedavi edici kapasitesi yüksek olan biyoaktif ajanlar olduğu gözlendi.

Abstract:
Ovarian cancer is the deadliest cancer of the female genital tract despite great advances in both surgical and oncological treatments. Exosomes are vesicular vesicles that are released into the extracellular environment by all known cells, from endothelium to fibroblasts and cancer cells. While cancer stem cell-derived exosomes regulate the microenvironment for tumor formation, the therapeutic properties of exosomes secreted from mesenchymal stem cells are dominant. In this study, it was aimed to determine the effect of mesenchymal stem cells on ovarian cancer cell line and to reveal their relationship with senescence markers. 
This research was conducted prospectively in Ege University Stem Cell Department between 27.11.2020-27-11-2022. In the study, exosomes obtained from ovarian cancer cell line OVCAR3 and wharton jelly-derived stem cells (WJ-MKH) were used as cell lines. Trypan blue dye was applied to check the viability and number of cells. Cells were counted at 10x magnification under an inverted microscope (Olympus). WJ-MSCs were incubated in a humid environment at 37°C and 5% CO2. The characterization of exosomes obtained from WJ-MSCs was examined by flow cytometric method by looking for exosome markers CD63 and CD9 (Beckman Coulter). The Real Time Cell Analysis System -xCELLigence (RTCA-SP) system was used to determine the cytotoxic effect of exosome suspensions from WJ-MSCs in the OVCAR3 cell line. Abcam beta Galactosidase Detection Kit (ab102534) was used for X-Gal Staining.
As a result of the study, the IC50 values of OVCAR cells treated with WJ-MSCs could not be obtained at the 24th hour, while the IC50 dose at the 48th hour was 37.69 and the IC50 dose at the 72nd hour was 1429.3. It has been shown that the cytotoxic effect of exosomes on cancer cells is greater than that of stem cells and its effectiveness continues even at 72 hours. As a result of staining, no staining difference was found between the groups.
As a result of our study, it was observed that exosomes obtained from WJ-MSC are bioactive agents with high therapeutic capacity, which have many advantages for the cell cycle of ovarian cancer.