Laurus nobilis L. uçucu yağının farklı klinik izolatlara karşı In vitro antibakteriyal aktivitesinin belirlenmesi
Determination of In vitro antibacterial activity of Laurus nobilis L. essential oil against different clinical isolates
Yazar: AYŞEN KAYA
Danışman: DOÇ. DR. BİNNUR MERİÇLİ YAPICI
Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Çalışmada 20 farklı klinik bakteri suşuna karşı 5 farklı Laurus nobilis L. ticari uçucu yağının (UY1, UY2, UY3, UY4 ve UY5) antibakteriyal aktivitesi araştırılmıştır. Antibakteriyel aktivite deneylerinde disk difüzyon ve mikrodilüsyon yöntemleri kullanılmıştır. Önemli derecede antibakteriyel aktivite sergileyen uçucu yağların Minimum İnhibitör Konsantrasyonu (MİK) belirlenmiştir. Ayrıca çalışmada denenen uçucu yağların Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometrisi (GC-MS) analizi ile kimyasal kompozisyonu belirlenmiş ve UY3 uçucu yağının biri Gram pozitif diğeri Gram negatif olan iki farklı klinik bakteri üzerinde etkinliği Taramalı Elektron Mikroskobu ve Transmisyon Elektron Mikroskobu ile ortaya konulmuştur. Disk difüzyon bulgularına göre UY1, UY2, UY3, UY4 uçucu yağlarından elde edilen en yüksek inhibisyon zon çapları Klebsiella pneumoniae Staphylococcus caprae Staphylococcus aureus Shigella flexneri klinik suşlarına karşı elde edilmiş sırasıyla 31,00 mm, 13,75 mm, 48,75 mm ve 51,50 mm olarak belirlenmiştir. Ancak UY5 uçucu yağı tüm bakterilere karşı herhangi bir antibakteriyal aktivite sergilememiştir. Klinik suşlara karşı etkili bulunan UY3 ve UY4 uçucu yağlarının MİK değerleri UY3 için %8 (v/v) ile %0,015625 (v/v), UY4 için ise %8 (v/v) le %0,0125 (v/v) olarak belirlenmiştir.
GC-MS analizi ile UY3 ve UY4 uçucu yağlarından elde edilen baskın bileşenler sırasıyla %70,65 1,8 cineol, %4,86 (+) limonen, %4,60 sabinen ve %4,54 α-pinen ve %65,86 1.8 cineol, %8,07 (+) limonen, %5,23 α-pinen ve %5,07 sabinen olarak belirlenmiştir.
Taramalı Alan Mikroskobu ile UY3 ticari uçucu yağının Stapyhlococcus aureus ve Escherichia coli klinik bakteri suşlarının her ikisinde de biyofilm miktarında önemli derecede azalmaya neden olduğu belirlenmiştir. Ayrıca Transmisyon Elektron Mikroskobu ile aynı uçucu yağın yine aynı bakteri hücreleri üzerinde özellikle hücre duvarı ve membranlarında hasara neden olduğu ve bazı hücrelerin tamamen lizize olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
In this study, antibacterial activity of 5 different Laurus nobilis L. commercial essential oil (UY1, UY2, UY3, UY4 and UY5) against 20 different clinical bacterial strain was investigated. Disc diffusion and microdilution methods were used in antibacterial activity experiments. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of essential oils exhibiting significant antibacterial activity was determined. In addition, the chemical composition of the essential oils tested was determined by Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) analysis and the efficacy of the UY3 essential oil on two different clinical bacteria, one of which was Gram positive and the other one with Gram negative was demonstrated by Scanning Electron Microscopy and Transmission Electron Microscopy.
According to disc diffusion findings, the highest inhibition zone diameters obtained from the UY1, UY2, UY3, UY4 essential oils were determinated against the clinical strains of Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus caprae, Staphylococcus aureus, Shigella flexneri and were determined as 31,00 mm, 13,75 mm, 48,75 mm, 51,50 mm, respectively. However, UY5 essential oil did not show any antibacterial activity against all of the bacteria. MIC values of UY3 and UY4 essential oils, which are effective against clinical strains were determined as 8% (v / v) to 0.0015625% for UY3 and 8% (v /v) to 0.0125% (v / v) for UY4.
Predominant components obtained from UY3 and UY4 essential oils by GC-MS were determined as 70.65% 1.8 cineole, 4.86% (+) limonene, 4.60% sabinene, 4.54% α-pinene and %65,86 1.8 cineole, %8,07 (+) limonene, %5,23 α-pinene ve %5,07 sabinene, respectively.
It was determined by Scanning Electron Microscopy that UY3 commercial essential oil caused a significant decrease in the amount of biofilm in both clinical strains of Stapyhlococcus aureus and Escherichia coli. In addition, the same volatile oil with Transmission Electron Microscope has been detected to cause damage on the same bacteria, especially in the cell wall and membranes, and to be completely lysize some cells.