Miyeloproliferatif neoplazilerde JAK2 ve JAK2V617F MRNA hedefli nanopartikül uygulamasının cgas-sting yolağına etkilerinin araştırılması
Effects of JAK2 and JAK2V617F MRNA targeting nanoparticule application on CGAS-sting pathway in myeloproliferative neoplasms
Yazar: BERKAY TOKCAN
Danışman: DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: JAK 2 = JAK 2 ; Mikro RNA = Micro RNA ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Nanopartiküller = Nanoparticles ; Neoplazmlar = Neoplasms ; mRNA = mRNA ; İlaç hedefleme = Drug targeting

Özet:
Çalışmada miyeloproliferatif neoplaziler ile özdeşleşmiş JAK2V617F mutasyonu varlığında, bir sitozolik DNA tespit sinyal yolağı olan cGAS-STING yolağının etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla JAK2V617F mutasyonu taşıyan HEL ve SET2 hücre hatları ile yabani tip JAK2'ye sahip K562 hücre hattında, cGAS-STING yolağı, mutant ve yabani tip JAK2 mRNA'sıyla eşleşerek çift zincirli yapıların oluşmasını sağlayan Nanoflare partikülleriyle uyarıldı. Nanopartiküllerle farklı sürelerde muamele edilmiş hücrelerde, cGAS-STING ve JAK-STAT yolaklarıyla ilişkili genlerin anlatımları gerçek zamanlı kantitatif PZR uygulamasıyla test edildi. Çalışmada cGAS, STING, TBK1, IRF3, TLR9, JAK2, STAT1 ve STAT2 genlerinin anlatımları her üç hücre hattında incelendi. HEL ve SET2 hücrelerine nanopartiküllerle yapılan uyarım sonucu test edilen genlerin anlatımlarında değişimler gözlendi. K562 hücre hattında ise değişimlerin sınırlı olduğu gözlendi. Gen anlatımlarının kısa süreli inkübasyonlarda, yarım saatlik dilimlerde değişkenlik gösterdiği gözlendi. Genel olarak mutant JAK2 mRNA'sına özgü nanopartiküllerin cGAS-STING yolağındaki genlerin anlatımını yabani tipe göre daha yüksek seviyelere çıkardığı gözlendi. Bu sonuçlar nanopartiküller ile mutant JAK2 mRNA'sının bloklanmasının cGAS-STING yolağının aktivasyonunu pozitif yönde etkilediğini göstermiş oldu. Bu durum MPN'lerde sürekli aktif halde olan JAK2 proteinin cGAS-STING yolağında baskılayıcı etkisinin göstergesi olarak yorumlandı.

Abstract:
In this study, it was aimed to investigate the activity of cGAS-STING cytosolic DNA detection pathway in presence of JAK2V617F mutation which is one of the indicator mutations of myleproliferative neoplams. With this purpose, HEL and SET2 cell lines carrying JAK2V617F and K562 cell line possessing wild type JAK2, were stimulated with Nanoflare particles that form double stranded structures by matching JAK2 and JAK2V617F mRNAs. The expressions of genes related with cGAS-STING and JAK-STAT pathways were analised with real time PCR in cell lines which were incubated with Nanoflares for various time. The expressions of cGAS, STING, TBK1, IRF3, TLR9, JAK2, STAT1 ve STAT2 genes were investigated all three cell lines. Expression changes were observed for tested genes in HEL and SET2 as result of nanoparticle application. Limited expression changed was observed in K562 cell line. In short termed incubations variable expression values were observed with in half hour periods. In general, the expressions of cGAS-STING pathway genes were reached higher values for mutant nanoparticles than wild type ones. This result showed that the blockage of mutant JAK2 mRNA affected cGAS-STING pathway positively. This situation might be the result of suppresive effect of continuously active JAK2 on cGAS-STING pathway.