Lipopolisakkarit kaynağı (E. Coli Type 0111:B4) uygulanan tavşanlarda plazma nitrik oksit (NO) ve tümör nekrozis faktör-? (TNF-?) düzeylerinin araştırılması
Research of plasma nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor-? (TNF-?) levels in rabbits to which lypopolysaccharide source (E. Coli type 0111:b4) is applied
Yazar: CELALETTİN YUSUF TÜRKMEN
Danışman: DOÇ. DR. EMİNE ATAKİŞİ
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Endotoksinler = Endotoxins ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Sepsis = Sepsis ; Sitokinler = Cytokines ; Tavşanlar = Rabbits ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors

Özet:
Lipopolisakkarit, gram-negatif bakterilerinin dış membranının yapısal bütünlüğüne katkıda bulunur. Gram negatif sepsis sırasında immun sistemde meydana gelen cevapla ilgili olarak TNF-? ve iNOS'a bağlı olarak NO üretimine sebep olur.Materyal olarak ortalama 3-3,5 kg ağırlığında ve 20-24 aylık 15 adet Yeni Zelanda ırkı tavşan kullanıldı. Başlangıçta hiçbir uygulama yapılmadan önce kulak venalarından kan numuneleri alındı ve 0.dakika (Kontrol grubu) olarak kabul edildi. Daha sonra tavşanlar 2 gruba ayrıldı. Grup I (n=7)'e 150µg/kg Grup II (n=8)'e 300µg/kg LPS intravenöz olmak üzere kulak venalarından enjekte edildi. Enjeksiyondan sonra 1., 2. ve 3. saatlerde kanlar kulak venalarından heparinli godelere alınarak plazmaları ayrıldı. TNF-? düzeyi ELISA yöntemi ile NO düzeyi Griess reaksiyonu ile kolorimetrik olarak ölçüldü.Grup I ve Grup II'deki tavşanlarda LPS enjeksiyonundan sonra TNF-? düzeylerinde artış (p<0.001) gözlendi. Plazma TNF-? değerleri zamana bağlı incelendiğinde (0,1,2,3. Saatler) istatistiksel olarak fark tespit edildi. (p<0.001).LPS enjeksiyonundan sonra plazma NO düzeyinde hem Grup I'de (p<0.05) hem de Grup II'de (p<0.01) artış gözlendi. Gruplar arası karşılaştırmalar (Grup I ve Grup II) yapıldığında, 3.saatte gruplar arasında fark tespit edildi (p< 0.05).Tavşanlara damar içi yolla LPS verildiğinde 1. ve 2.saatlerde hem TNF-? hem de NO düzeylerinde bir artış görüldü. Fakat 3.saatte plazma TNF-? düzeyi bazal seviyeye düşerken, NO salınımı hala devam etmektedir. Dolayısıyla LPS verilen tavşanlarda TNF-?'nın salınımının daha kısa, NO salınımının ise daha uzun süreli olduğu, sepsis sırasında ve endotoksik şok gelişiminde NO'in daha etkin rol oynayabileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Lipopolysaccharide contributes the structural integrity of gram-negative bacteria to the external membrane. It causes production of NO subject to TNF-? and iNOS with regard to the reaction in the immune system during gram negative sepsis.The material used was 15 New Zealand breed rabbits of average weight 3-3,5 kg and age 20-24 months. Blood samples were taken from their ear veins at the beginning prior to starting any process and was recorded as the 0th minute (Control Group). Then the rabbits were divided into 2 groups. Group I (n=7) was injected with 150µg/kg and Group II (n=8) was injected with 300µg/kg LPS intravenously from their ear veins. Following injection, bloods were taken from ear veins to heparin containing godets during 1st, 2nd and 3rd hours and their plasmas were separated. TNF-? level was measured with the ELISA method and the NO level was measured in colorimetric manner with Griess reaction.Following injection of LPS, an increase was observed in the TNF-? levels of rabbits in Group I and Group II (p<0.001). When Plasma TNF-? values were analyzed in different times, (0th,1st,2nd,3rd hours) statistical differences were observed.Following LPS injection, increases were observed in the NO level both in Group I (p<0.05) and Group II (p<0.01). When comparisons were made between the groups, (Group I and Group II) differences were determined between the groups during the 3rd hour (p< 0.05).When the rabbits were treated with LPS intravenously an increase was observed both in TNF-? and NO levels during the 1st and 2nd hours. However while the plasma TNF-? level fell to the basal level in the 3rd hour, NO release still continued. Hence, it has been concluded that duration of TNF-? release had been shorter in rabbits and that NO release had been effective for a longer term, hence it has been concluded that NO could play a more effective role during sepsis and development of endotoxic shock.