Diyabetik sıçan testis dokusunda  mezenkimal kök hücre uygulamasının kan- testis bariyerindeki sıkı bağlantı proteinlerine etkisi
Effect of mesenchymal stem cell application on tight junction proteins in blood-testis barrier in diabetic rat testis tissue
Yazar: PELİN TOROS
Danışman: PROF. DR. M. İBRAHİM TUĞLU ; DOÇ. DR. ERDOĞAN KOCAMAZ
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Diabet komplikasyonları = Diabetes complications ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Kan-testis bariyeri = Blood-testis barrier ; Kök hücreler = Stem cells ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Diyabetik erkek hastalarda infertilite olguları oldukça sık görülmektedir. Fonksiyonel kan-testis bariyeri, germ hücre sağkalımı ve spermatogenezin normal progresyonu için önemlidir ve hasarının infertilite durumu ile ilişkili olduğu bilinmektedir. Çalışmamızda; diyabetik sıçan testis dokusunda kan-testis bariyerinde bulunan sıkı bağlantı proteinlerine yağ doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin ve nişinin tedavi edici etkisinin gösterilmesi amaçlanmıştır. 
Gereç ve Yöntem: Gereç 8 haftalık 35 adet Wistar Albino cinsi erkek sıçan 5 gruba ayrıldı ve 50 mg/kg tek doz olacak şekilde streptozotosin (STZ) enjekte edilerek diyabet modeli oluşturuldu. 15. günden sonra AKMKH grubuna 3 gün art arda 1x106 hücre enjeksiyonu ve NİŞ grubuna ise 0,1ml niş i.p olarak uygulandı. Histopatolojik değerlendirmeler için H&E ve Masson Trikrom boyamaları yapıldı. TUNEL metodu ile de apoptotik hücre varlığına bakıldı. Klaudin 11, okludin proteinlerinin ekspresyon seviyeleri immunohistokimyasal ve qPCR yöntemleriyle, zonula okludens-1 proteini immunohistokimyasal yöntemle analiz edildi. 
Bulgular: Diyabet grubunda,  intertisyel alanda ödem, konjesyon,  bağ doku artışı,  germ ve sertoli hücrelerinde kayıp ve vakualizasyon, tübül lümeninde residüel cisimcikler ve seminifer tübül çapında azalma öne çıkan bulgulardır. AKMKH ve NİŞ uygulanmasıyla fibrosizin, germ ve sertoli hücrelerinde kayıbın azaldığı görüldü.  Ayrıca, germinal epiteldeki TUNEL pozitif hücre sayısının AKMKH ve NİŞ uygulanan gruplara göre diyabetik grupta daha fazla olduğu görüldü. Diyabet grubunda, klaudin 11, okludin, zonula okludens-1 ekspresyonları azalırken, ADMKH ve NİŞ uygulamasıyla bu proteinlerin ekspresyonları arttı. Özellikle ADMKH uygulanan gruplarda kontrole yaklaştığı görüldü. 
Sonuçlar: Diyabetik grupta sıkı bağlantı proteinlerinin ekspresyonlarının azalması infertiliteye yol açan önemli proteinler olduğunu göstermektedir. Kök hücre ve nişinin iyileştirici etkisi diyabet kaynaklı infertilite tedavisinde kullanılabilirliliğini göstermektedir.

Abstract:
Aim: Infertility cases are quite common in diabetic male patients. The functional blood-testis barrier is important for germ cell survival and normal progression of spermatogenesis, and its damage is known to be associated with infertility. 
Materials and Methods: In our study; ıt was aimed to demonstrate the therapeutic effect of adipose tissue derived mesenchymal stem cells (ADMSC) and NİCHE therapeutic effect on tight junction proteins in the blood-testis barrier in diabetic rat testis tissue. 35 male Wistar Albino rats, 8 weeks old, were divided into 5 groups and the diabetes model was induced by injecting 50 mg/kg single dose of streptozotocin (STZ). After the 15th day, 1x106 cells were injected in 3 consecutive days in the ADMSC group and 0.1 ml niche i.p was applied to the niche group. H&E and Masson Trichrome staining was performed for histopathological evaluations. The presence of apoptotic cells was examined with the TUNEL method. Expression levels of claudin 11 and occludin proteins were analyzed by immunohistochemical and qPCR methods, and zonula occludens-1 protein was analyzed by immunohistochemical method.
Results: In the diabetic group, edema in the interstitial area, congestion, increase in connective tissue, loss of germ and sertoli cells and vacualization, residual bodies in the tubule lumen and a decrease in the diameter of the seminiferous tubule are prominent findings. It was observed that the loss of fibrosis, germ and sertoli cells decreased with the administration of ADMSC and NICHE. In addition, the number of TUNEL positive cells in the germinal epithelium was found higher in the diabetic group compared to the groups treated with ADMSC and NICHE. In the diabetes group, the expressions of claudin 11, occludin, and zonula occludens-1 decreased, while the expression of these proteins increased with the administration of ADMKH and NICHE. In particular, it was observed that the expression approached the control in the ADMKH groups.
Conclusions: Decreased expression of tight junction proteins in the diabetic group indicates that they are important proteins that cause infertility. The healing effect of stem cells and niche shows their usefulness in the treatment of diabetes-induced infertility.