İmmun sistemi baskılanmış sıçanlarda Pneumocystis pnömonisinin etkeni Pneumocystis carinii'nin mikroskobik ve moleküler tekniklerle gösterilmesi
Displaying the causative agent of Pneumocystis pneumonia P. carinii in immune suppressed rats using microscopic and molecular techniques
Yazar: HÜSEYİN CAN
Danışman: PROF. DR. SABİRE KARAÇALI
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Pneumocystis türleri dünyada yaygın olarak insan ve çok sayıda hayvanda immun sistemin baskılanmasını takiben Pneumocystis pnömonisine (PCP) neden olmaktadır. Bu çalışmada 12 hafta süreyle ağızdan ve derialtından deksametazon ile immun sistemi baskılanmış sıçanlarda P. carinii'nin mikroskopik ve moleküler tekniklerle gösterilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla deksametazon uygulamasından önce ve sonraki 2., 6. ve 12. haftalarda kan, ağız, burun ve göz sürüntüsü yanında 12. hafta sonunda akciğer, kalp, karaciğer, böbrek, diyafram, beyin, dalak, dil, kas, göz, bağırsak ve dışkıdan oluşan toplam 16 farklı örnek toplanmıştır. Tüm örneklerde P. carinii kist ve trofozoitleri mikroskopik olarak Giemsa ve Gram-Weigert boyaları uygulandıktan sonra ve P. carinii'ye ait MSG geni ise PZR ile araştırılmıştır. Bu çalışmada ilk defa sıçanlarda ağızdan deksametazon uygulanmasının derialtından uygulamaya göre daha fazla kilo kaybına yol açtığı belirlenmiştir (P<0.05). Mikroskopi ile deksametazon uygulaması sonrası sadece akciğer dokuda pozitiflik saptanırken, PZR ile deksametazon uygulaması öncesi akciğer doku yanında ağız sürüntüsünde, deksametazon uygulaması sonrası ise akciğer ve ağız sürüntüsüne ek olarak dalak ve böbrek doku yanında ilk defa burun sürüntüsünde saptanmıştır. P. carinii MSG geni burun sürüntüsünde ağızdan deksametazon uygulamasının 2., derialtından uygulamanın ise 6. haftasında saptanmıştır. Bu sebeplerle sonraki çalışmalarda ağızdan deksametazon uygulamasının derialtına göre daha uygun olacağı düşünülmüştür. Ayrıca bu çalışmada ilk defa alınan burun sürüntüsünde P. carinii saptanması, bu yöntemin Pneumocystis enfeksiyonunun kesin tanısında önemli bir örnek alma tekniği olarak uygulanabileceği düşünülmüştür.

Abstract:
The genus Pneumocystis causes Pneumocystis pneumonia worldwide in human and wide variety of animals after immune suppression. The aim of the present study was to demonstrate P. carinii using microscopy and molecular techniques in rats immune suppressed by oral and subcutaneous administration of dexamethasone. Blood, oral, nasal and eye swabs were collected before and 2, 6, and 12 weeks after administration of dexamethasone. In addition, at the end of 12 weeks, samples were collected from lung, hearth, liver, kidney, diaphragm, brain, spleen, tongue, muscle, eye, intestine, feces. In these samples, P. carinii cysts and trophozites were investigated microscopically in Giemsa and Gram-Weigert stained slides and P. carinii MSG gene was detected by PCR. The results of the present study showed that oral administration of dexamethasone caused significant weight loss compared to subcutaneous administration of dexamethasone in rats (P<0.05). Microscopy was positive only in lungs of rats orally administered with dexamethasone. PCR was positive in lungs and oral swabs of rats before the administration of dexamethasone. After the administration of dexamethasone, P. carinii MSG gene was detected in oral swabs, lungs, spleen, kidney and first time in nasal swabs. PCR was positive in nasal swabs during the second week of orally dexamethasone administered rats and sixth week of subcutaneously dexamethasone administered rats. Thus, it might be useful to administer oral dexamethasone to rats instead of subcutaneous administration, in future research. In addition, detection of P. carinii first time in nasal swabs showed that nasal swab can be used as a collection technique to diagnose Pneumocystis infection.