Streptozotocin ile diyabet oluşturulmuş ratlarda oksidatif stres ve lipit profili üzerine alfa lipoik asit ile C vitamini ilavesinin etkileri
Effect of alpha lipoic acid and vitamin C supplemantation on oxidative stress and lipid profile in diabetic rats induced with streptozotocin
Yazar: HAMİT USLU
Danışman: PROF. DR. EBRU BEYTUT
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Askorbik asit = Ascorbic acid ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetes mellitus-tip 1 = Diabetes mellitus-type 1 ; Lipidler = Lipids ; Lipoik asit = Lipoic acid ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Streptozotosin = Streptozotocin ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmada, deneysel olarak diyabet oluşturulmuş ratlara eksojen olarak verilen Alfa lipoik asit ile C vitamininin diyabete bağlı şekillenen oksidatif stres ve hiperlipidemi üzerine etkilerini araştırmak amaçlandı.
Çalışmada, her grupta 10 adet olmak üzere 5 gruba ayrılan 50 adet 4-5 aylık Spraque Dawley rat kullanıldı. Kontrol grubuna herhangi bir uygulama yapılmazken; deneme grubundaki hayvanlara intraperitoneal olarak 50 mg/kg dozunda Streptozotocin enjeksiyonu yapılarak diyabet oluşturuldu. Diyabet oluşturulan hayvanlar ise diyabetik kontrol grubu, oral olarak 80 mg/kg Alfa lipoik asit, 60 mg/kg C vitamini ve 80 mg/kg Alfa lipoik asit ile 60 mg/kg C vitamini verilen kombine grup olarak belirlendi. Çalışma süresince bütün gruplar ad-libitum olarak beslenildi. Tüm çalışma süresince uygulamayı eşitlemek için diyabetik kontrol grubuna oral olarak serum fizyolojik verildi. 
Çalışma sonunda elde edilen numunelerin Total Kolesterol, Trigliserit, HDL, LDL ve VLDL kolesterol düzeyleri otoanalizörde, Paraoksonaz ve Arilesteraz enzim aktiviteleri ile Total Oksidan ve Total Antioksidan seviyeleri Spektrofotometrede ölçülmek suretiyle belirlendi.
Madde uygulanan grupların açlık kan glukoz seviyeleri diyabet kontrol grubu ile kıyaslandığında istatistiksel olarak önemli bir farklılık olmamasına rağmen (p>0.05), en düşük açlık kan glukoz seviyelerine kombine grupta rastlandı. Diyabetin oluştuğu 3. gün ile çalışmanın son günü olan 24. gün kıyaslandığında; diyabetik kontrol (p<0.01), Alfa lipoik asit (p<0.01), C vitamini (p<0.001) ve kombine gruplarının (p<0.001) vücut ağırlıklarında istatistiksel açıdan önemli azalışlar belirlendi.
Diyabetik kontrol grubunun yüksek olan trigliserit düzeylerinin kombine grupta önemli bir şekilde azaldığı (p<0.05), total kolesterol, LDL ve VLDL kolesterol düzeylerinin değişmediği (p>0.05), bunun yanı sıra diyabetik kontrol grubunda önemli şekilde azalan (p<0.001) HDL kolesterol seviyelerinin, C vitamini (p<0.05), Alfa lipoik asit (p<0.001) ve kombine grupta (p<0.05) önemli bir şekilde arttığı tespit edildi. 
Diyabet kontrol grubunda azalan serum Paraoksonaz enzim aktivitesinin Alfa lipoik asit (p<0.05), C vitamini (P<0.001) ve kombine gruplarında (p<0.001); Arilesteraz enzim aktivitesinin ise tüm deneme gruplarında önemli (p<0.001) şekilde arttığı belirlendi. Diyabetik kontrol grubunun karaciğer dokusundaki Paraoksonaz enzim aktivitesine kıyasla Alfa lipoik asit grubunda artış (p<0.001) gözlendi. Buna ek olarak diyabetik kontrol grubunun karaciğer dokusunun Arilesteraz enzim aktivitesinde kontrollere oranla azalış (p<0.001) belirlenirken; deneme gruplarının Arilesteraz enzim aktivitelerinde diyabetik kontrol grubuna kıyasla herhangi bir değişiklik tespit edilemedi ( p>0.05).
Plazma total oksidan ve total antioksidan düzeylerinde herhangi bir değişiklik (p>0.05) gözlenmedi. Diyabetik kontrol grubunun karaciğer dokusunda artan total oksidan seviyelerinin C vitamini grubunda kontrol grubu seviyelerine kadar indiği (p<0.001); yine aynı grubun total antioksidan seviyelerinin ise önemli derecede azaldığı (p<0.001) saptandı. Bununla birlikte, oksidatif stres indeksinin plazmada değişmediği, C vitamini grubunun karaciğer dokusunda ise diyabetik kontrol grubuna göre önemli şekilde azaldığı (p<0.001) tespit edildi. Bununla birlikte, karaciğer dokusunun histopatolojik bulguları bizim verilerimizi destekler nitelikteydi.
Sonuçta: Deneysel olarak Tip 1 diyabet oluşturulmuş ratlara eksojen olarak verilen Alfa lipoik asit, C vitamini ve bunların kombinasyonlarının diyabetin komplikasyonları olarak da bilinen oksidatif stres ve hiperlipidemiyi düzenleyici yönde rol oynadığı, ancak daha iyi sonuçların alınabilmesi için insülinle birlikte verilmelerinin daha etkili olacağı; aynı zamanda konunun daha iyi aydınlatılabilmesi için başka çalışmaların yapılmasına gerek olduğu kanaatindeyiz. 

Anahtar Kelimeler: Tip I diyabet, Alfa lipoik asit, C vitamini, Oksidatif stres, Lipit profili

Abstract:
In this study, we studied the effects of exogenic application of Alpha lipoic acid and vitamine C on oxidative stres and hyperlipidemia using induced diabetics rats. 
We used a total of 50 4-5 months years old Spraque Dawley rat divided into 5 groups of 10 individuals. The control group was not treated, whereas the experimantal groups were treated with intraperitoneal application of 50 mg/kg dose of Streptozotocin to induced the diabetics. Among the induced diabetics, we designed the four groups as follow: Diabetic control (no application), an oral application of 80 mg/kg Alpha lipoic acid, an oral application of 60 mg/kg vitamine C, and an oral application of combination of 80 mg/kg Alpha lipoic acid and 60 mg/kg vitamine C. During the entire experiment the rats were fed ad-libitum. In order to standardize the applications, diabetic control group was given orally the physiological saline.  
The level of total cholesterol, trigliseride, HDL, LDL, and VLDL were obtained using autoanaliser, and the level enzyme activity of Paraoxonase ve Arilesterase and level of Total Oxidant and Total Antioxidant were gathered using Spectrophotometer.
Despite the insignificant difference between diabetic control group and other diabetic groups (p>0,05) in the fasting blood glucose levels, the lowest value was observed in the combined diabetic group. We were compared the third day (the initial day of diabetics) and 24th day, we found significant decreases at the body mass in the diabetic control (p<0.01), Alpha lipoic acid group (p<0.01), Vitamine C group (p<0.001), and combined group (p<0.001). 
Higher level of triglycerides in the diabetic control group compare to the combined group was observed (p<0.05); however, no significant difference (p>0.05) were observed in total cholesterol, LDL, and VLDL. The HDL cholesterol levels were significantly decreased (p<0.001) in the diabetic control group. Moreover HDL cholesterol levels vitamine C (p<0.05), Alpha lipoic acid (p<0.001), and the combined groups (p<0.05) were increased significantly compared to diabetic control group.
The level of Paraoxonase enyzme activity was observed to be lower in the diabetic control group in comparison to the control group and the activity was found to be higher in three other induced diabetics groups in comparison to the diabetic control group. Arilesterase enzyme activity was found to higher in all experimental groups when compared with the control group.  Paraoxonase enzyme activity of liver of Alpha lipoic acid applied group was found to be higher compare to diabetic control group.  Arilesterase enzyme activity of liver of diabetic control group was found to be lower compare to the control group (p<0.001).  Arilesterase enzyme activity of liver of diabetic control group was found to be no different than any other diabetics groups (p>0.05).  
No difference in total oxidant and antioxidant levels were observed (p>0,05).  Higher levels of total oxidant was observed in diabetic control group compare to the control group; however, no difference was observed in vitamine C applied group compare to control group. Total antioxidant level of vitamine C applied group was found to be lower compare to control group. Oxidative stres index was not found to change in the plasma but there is a significant difference was observed in the liver of vitamine C applied group compare to diabetic control group. In addition, the histopathological data from liver is in agreement with the results presented here.
In conclusion, the exogenic application of the Alpha lipoic acid, vitamine C, and combination of both applied to the induced Type I diabetics rats have positive effects on oxidative stres and hyperlipidemia which are known complications of diabetics. However, beter results would be expected when combined with insulin. We also suggest further research on the subject to obtain definitive results. 

Key Words: Type I diabetes, Alpha lipoic acid, Vitamine C, Oxidative stress, Lipid profile