Valproik asit'in prenatal testis dokusundaki toksik etkilerine karşı folik asit ve propolis'in koruyucu etkileri
The protective effects of folic acid and propolis against the toxic effects of valproic acid in prenatal testis tissue
Yazar: GÖKŞEN DERYA REİS KÖSE
Danışman: PROF. DR. ENGİN YENİLMEZ
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Folik asit = Folic acid ; Prenatal teşhis = Prenatal diagnosis ; Propolis = Propolis ; Testis = Testis ; Toksisite = Toxicity ; Valproik asit = Valproic acid

Özet:
Bu çalışmanın amacı prenatal dönemde Valproik Asit (VPA) etkisine maruz kalan yavru sıçanların testis dokularında meydana gelen değişikliklerin, Folik asit (FA) ve Propolis kullanılarak giderilip giderilemediğini histopatolojik ve biyokimyasal olarak göstermekdir.
Çalışmada 8 adet Spraque Dawley tipi gebe sıçan 4 gruba ayrıldı. 1. Gruba (Kontrol Grubu) herhangi bir uygulama yapılmadı. 2. Gruba (VPA Grubu) deney süresi boyunca, 300 mg/kg/gün VPA, 3. Gruba (VPA+FA Grubu) 300 mg/kg/gün VPA + 400 µg/gün FA ve 4. Gruba (VPA+Propolis) 300 mg/kg/gün VPA + 100 mg/kg propolis uygulandı. Tüm uygulamalar gebeliğin 6-21. günlerinde ve her gün aynı saatlerde gerçekleştirildi. Yeni doğan sıçanlara doğumdan sonra herhangi bir uygulama yapılmadı ve çalışmaya yavru erkek sıçanlar ile devam edildi. Daha sonra yavru erkek sıçanlar, her bir grupta 6'şar yavru bulunacak şekilde Yenidoğan 1. Grup (YD-1.G), Yenidoğan 2. Grup (YD-2.G), Yenidoğan 3. Grup (YD-3.G), Yenidoğan 4. Grup (YD-4.G) olmak üzere 4 alt gruba ayrıldı. Deney süresinin bitiminde (postnatal 21. gün) hayvanların tümü sakrifiye edilerek testisleri alındı. Testis doku örnekleri ışık mikroskobunda histopatolojik olarak değerlendirildi. Testisteki apoptozu değerlendirmek için TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphospate nick end labeling assay) tekniği kullanıldı. Biyokimyasal olarak kanda ve dokuda oksidatif stres parametreleri incelendi.
Yapılan histopatolojik değerlendirmelerde VPA Grubuna ait testis kesitlerinde interstisyel alanda yoğun ödem, lümeninde germinal epitel hücreleri içeren tübül sayısında artış, germinal epitelde yer yer vakuolizasyon ve germinal epitel kalınlığında azalma izlendi. VPA+FA Grubuna ait testis dokusunda, interstisyel alanda ödem, lümende germinal epitel hücreleri içeren seminifer tübüller, nadir alanlarda bozulmuş seminifer tübül yapısı ve germinal epitelin bazal membrandan ayrılması gibi bulgular gözlendi. Ancak interstisyel alandaki ödem bir miktar, diğer bulgular daha farkedilir şekilde azaldı. VPA+Propolis Grubunda da interstisyel alanda ödem, lümende germinal epitel hücreleri içeren seminifer tübüller ve germinal epitelin bazal membrandan ayrılması gibi bulgular gözlendi. Ancak VPA Grubu ile kıyaslandığında interstisyel alandaki ödemde çok daha belirgin olmak üzere diğer histopatolojik bulgularda düzelme oldu. Morfometrik ölçümler sonucu, germinal epitel kalınlığı, Kontrol Grubuna göre VPA Grubunda istatistiksel olarak anlamlı oranda azalırken, VPA Grubuna kıyasla, Propolis Grubunda biraz daha belirgin olmak üzere, Propolis ve FA Gruplarında artış gösterdi. Apoptotik indeks (AI) VPA Grubunda Kontrol Grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı oranda artarken, tedavi gruplarında azalma eğilimi gösterdi; ancak bu azalış istatistiksel olarak anlamlı değildi.
Biyokimyasal olarak, doku biyokimyasında VPA Grubuna ait oksidatif stres indeksi (OSI) Kontrol Grubuna göre anlamlı olarak arttı. VPA+FA Grubunda, Katalaz (CAT) değeri Kontrol Grubuna göre anlamlı olarak artarken, Doku Malondialdehid (MDA) hem Kontrol hem de VPA Grubuna göre anlamlı olarak azaldı. Glutatyon (GSH) Kontrol Grubuna göre anlamlı olarak azalış, total oksidan durum (TOS) ve OSI de artış gösterdi. Serum total antioksidan durum  (TAS) artışı, Kontrol ve VPA Grubuna göre istatistiksel olarak anlamlıydı. VPA+Propolis Grubunda ise TOS ve OSI değerleri Kontrol Grubuna göre anlamlı olarak arttı.
Elde ettiğimiz bulgular sonucu, prenatal dönemde uygulanan VPA'nın yavru sıçanların testis gelişimini olumsuz etkilediğini, VPA'ya ek olarak FA ve Propolis verilmesinin histopatolojik ve biyokimyasal olarak düzelme sağlayabileceği söylenebilir.

Abstract:
The purpose of this study was to show, using histopathological and biochemical methods, whether changes occurring in the testis tissue of rat pups exposed to the effect of valproic acid (VPA) in the prenatal period can be eliminated using folic acid (FA) and propolis.
Eight Sprague Dawley pregnant rats were divided into four groups. No procedure was performed on Group 1 (control group). However, 300 mg/kg/day VPA was administered to Group 2 (VPA group),  300 mg/kg/day VPA+400 µg/day folic acid to Group 3 (VPA+FA group) and  300 mg/kg/day VPA + 100 mg/kg propolis to Group 4 (VPA+propolis group) throughout the experiment. All applications were performed on days 6-21 of pregnancy and at the same time every day. No application was performed on newborn rats after birth, and the study continued with male rat pups. The pups were subsequently divided into four sub-groups of six rats each; Newborn Group 1 (NB-G1), Newborn Group 2 (NB-G2), Newborn Group 3 (NB-G3) and Newborn Group 4 (NB-G4). At the end of the experimental period (postnatal day 21), all animals were sacrificed, and their testes were removed. Testis tissue specimens were evaluated histopathologically under a light microscope. The terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate nick end labeling assay (TUNEL) technique was used to evaluate apoptosis in the testis. Oxidative stress parameters in blood and tissue were examined biochemically.
Histopathological examination of VPA group testis sections revealed intense edema in the interstitial area, non-matured germinal epithelial cells in the lumen, occasional vacuolization in germinal cells and a decreased germinal epithelial thickness. Findings such as edema in the interstitial area, non-matured germinal epithelial cells in the lumen and impaired seminiferous tubule structure and separation of the germinal epithelium from the basal membrane in rare areas were observed in VPA+FA group testis tissue. Edema in the interstitial area decreased, but maintained its density. Other findings decreased more markedly. In the VPA+propolis group, findings such as edema in the interstitial area, non-matured germinal epithelial cells in the lumen and separation of the germinal epithelium from the basal membrane were observed. However, these findings decreased compared with the VPA group, the edema in the interstitial area decreasing particularly markedly. Germinal epithelial thickness decreased statistically significantly at morphometric measurement, but increased in the treatment groups, slightly more markedly in the propolis group. The apoptotic index (AI) increased significantly in the VPA group compared to the control group, and although they tended to decrease in the treatment groups, this was not statistically significant.
Biochemically, the oxidative stress index (OSI) increased significantly in VPA group tissue biochemistry compared to the control group. Catalase (CAT) values in the VPA+FA group increased significantly compared to the control group. Tissue malondialdehyde (MDA) decreased significantly compared to both the control and VPA groups. Glutathione (GSH) decreased significantly compared to the control group, while total oxidant status (TOS) and OSI increased. Serum total antioxidant status increased significantly compared to the control and VPA groups. In the VPA+propolis group, TOS and OSI increased significantly compared to the control group.
Our findings suggest that VPA applied in the prenatal period adversely affects rat pup testis development, while the addition of folic acid and propolis can produce an improvement in histopathological and biochemical findings.