Klinik örneklerden izole edilen Staphylococcus aureus suşlarının metisilin dirençlilik genlerinin belirlenmesi
Determination of methicillin resistance genes of Staphylococcus aureus strains isolated from clinical specimens
Yazar: ELİF BAYTAROĞLU
Danışman: DOÇ. DR. ZEHRA NUR YÜKSEKDAĞ
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus

Özet:
Metisilin dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) hem toplum hem de hastane kökenli enfeksiyonlardan izole edilen önemli bir patojendir. Antibiyotiklerin uzun süreli kullanımı ile birlikte, bu bakteri, farklı direnç mekanizmaları geliştirmiştir. Tedavisi ise oldukça güç ve maliyetlidir. S. aureus suşlarında metisilin direncinin doğru ve hızlı bir şekilde belirlenmesi, enfeksiyon kontrol önlemlerinde ve hastanede yayılımının önlenmesi açısından anahtar rol oynamaktadır. Çalışmanın amacı, klinik örneklerden izole edilen S. aureus suşlarının metisilin dirençlilik genlerinin belirlenmesidir. Bu çalışmada, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesinde tedavi olan hastalara ait çeşitli klinik örneklerden soyutlanan 48 Staphylococcus aureus suşu incelenmiştir. Suşların tanımlanması standart mikrobiyolojik yöntemler (koloni morfolojisi, Gram boyama, kanlı agarda hemoliz, DNaz, katalaz, koagülaz testleri ve mannitol fermentasyonu) kullanılarak gerçekleştirilmiş; metisilin direnci, ?Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI)? önerileri doğrultusunda Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi ile belirlenmiştir. Bu suşlardan 39 tanesi metisiline duyarlı olmasına rağmen 9 tanesi (EB3, EB4, EB6, EB17, EB18, EB33, EB36, EB46, EB47) metisiline dirençli bulunmuştur. Stafilokoklarda heterojen dirençli suşlar nedeniyle metisilin direncinin fenotipik yöntemlerle gösterilmesi sıklıkla yanlışlıklara neden olduğundan, Staphylococcus aureus izolatlarında metisilin direncinin gösterilmesinde en uygun yöntem polimeraz zincir reaksiyonu ile mecA geninin belirlenmesidir. Bu amaçla, disk difüzyon yöntemi ile metisiline dirençli olduğu belirlenen 9 Staphylococcus aureus suşlarından ve metisiline duyarlı 3 suşdan (EB5, EB9, EB12) kaynatma yöntemiyle DNA ekstraksiyonu yapılmış, polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemiyle mecA geni araştırılmıştır. Disk difüzyon yöntemi ile duyarlı çıkan EB12 suşunun metisilin direnç geni içerdiği tespit edilmiştir. Bu çalışma metisilin direncinin tespitinde disk difüzyon tekniğinin moleküler yöntemlerle desteklenmesi gerektiğini göstermektedir.

Abstract:
Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is an important pathogen which is responsible for community acquired and nosocomial infections. With the long-term use of antibiotics this bacteria developed different resistance mechanisms. Treatment is extremely difficult and expensive. Rapid and accurate detection of methicillin resistance in S. aureus has become a key element on infection control measures and limiting the spread of this organism. The purpose of this study, determination of methicillin resistance genes of S. aureus strains isolated from clinical specimens. This study analyzed 48 Staphylococcus aureus strains isolated from the samples of the patients in Gazi University Medical Hospital. Identification of the strains was based on standart microbiological procedures (colony morphology, Gram stain, hemolysis on blood agar, DNase, catalase, coagulase reactions and mannitol fermentation) and methicillin resistance was determined by Kirby-Bauer disk diffusion method according to the suggestions of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Although 39 of S. aureus strains were sensitive to methicillin (MSSA), 9 of them (EB3, EB4, EB6, EB17, EB18, EB33, EB36, EB46, EB47) were resistant to methicillin (MRSA). Detection of methicillin resistance in staphylococci by phenotypical methods often leads to false results. So, the most appropriate method for detecting the methicillin resistance for Staphylococcus aureus isolates are detection of mecA gene by polymerase chain reaction. To this end, for 9 methicillin resistant Staphylococcus aureus strains determined by disk diffusion method and 3 methicillin sensitive S. aureus strains (EB5, EB9, EB12), DNA extraction was performed by the boiling method and mecA gene was investigated by polimeraze chain reaction (PCR) method. The EB12 sensitive strain by disk diffusion method methicillin resistance gene was found to contain. This study show that, disk diffusion technigue should be supported by moleculer methods for detection of methicillin resistance.