Sinapik asitin d17 köpek osteosarkom hücre hattında apoptotik etkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of apoptotic effect of sinapic acid on canine d17 osteosarcoma cell line
Yazar: HAVVA KOFTAR
Danışman: PROF. DR. ZAFER BULUT
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre döngüsü = Cell cycle ; Kemik neoplazmları = Bone neoplasms ; Köpekler = Dogs ; Osteosarkom = Osteosarcoma ; Sinapik asit = Sinapic acid

Özet:
Köpeklerde kemik kanserinin oluşumu hakkında ve olası sinyal yolakları ile ilgili çeşitli çalışmalar gün geçtikçe artmakta ve yeni tedavi yöntemleri aranmaktadır. Bu çalışmada, D17 kemik kanseri hücre hattında çeşitli besinlerde fenolik bir bileşik olarak bulunan sinapik asitin (SA) hücre döngüsü, sinyal iletimi ve apoptoz yolaklarında gen ekspresyonları üzerine etkilerinin araştırılması hedeflenmiştir. 
Ekspresyon düzeyinin araştırılmasından önce uygun SA dozunu bulmak için XTT yöntemi ile SA'in hücre canlılığına etkisi belirlenmiştir. IC50 dozu D17 hücre hattında 72. saatte 750 μM olarak saptanmıştır. Ardından, tamamlayıcı DNA'nın (cDNA) sentezi için Transkriptor First Strand cDNA Sentez Kiti (Roche Diagnostics) kullanılarak çalışmalar yürütülmüştür.
Sinapik asitin, D17 hücre hattında apoptoz yolaklarındaki gen ekspresyonu üzerine etkileri gerçek zamanlı kantitatif PZR (qPZR) ile analiz edilmiştir. Analiz sonucunda nörogenez biyobelirteçleri olan BAX, BCL2, CASP3, CASP7, CASP8, CASP9, CYCS, FAS ve P53 genlerinin ekspresyonları çalışılmıştır. Ayrıca internal kontrol ve referans gen olarak RPL32 ve YWHAZ genleri kullanılmıştır. 
BAX, CASP3, CASP7, CASP8, CASP9, FAS ve P53 genlerindeki ekspresyon artışlarının istatistiksel olarak anlamlı (p<0,05) olduğu belirlenmiştir. BCL2 ekspresyon düzeyindeki artış ve CYCS ekspresyon düzeyindeki azalmanın istatistiksel olarak anlamlı olmadığı anlaşılmıştır. Bulgulara göre, SA'in D17 osteosarkom hücre hattında hücreleri ektrinsik yolak üzerinden apoptoza götürebileceği anlaşılmıştır.

Abstract:
Number of various studies on the formation of bone cancer in dogs and possible signal pathways are increasing day by day and new treatment methods are being investigated. In this study, it was aimed to investigate the effects of sinapic acid (SA), a phenolic compound in various nutrients, , on cell cycle signal transduction and gene expression in apoptosis pathways in the bone marrow cell line D17. Before investigating the expression level, the effect of SA on cell viability was determined by the XTT method to find the appropriate SA dose. IC50 was determined to be 750 μM at 72 h in D17 cell line. Subsequently, studies were performed using the Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit (Roche Diagnostics) for the synthesis of complementary DNA (cDNA). 
The effects of sinapic acid on cell cycle in D17 cell line and expression in apoptosis pathways were analyzed by real time PZR. Expression of the BAX, BCL2, CASP3, CASP7, CASP8, CASP9, CYCS, FAS and P53 genes were studied. In addition, RPL32 and YWHAZ genes were used as the intenal control and reference genes. 
While there was a slight increase in BCL2 expression level, there was a decrease in CYCS level but not both. Increase was seen in BAX, CASP3, CASP7, CASP8, CASP9, FAS, and p53. It was statistically significant (p <0.05). According to findings, SA was found to be able to stop cell cycle in cell line D17.