Sığır mastitislerinden streptokok türlerinin izolasyonu ve moleküler tiplendirilmesi
Molecular typing of streptococcus species isolated from cow's mastitis
Yazar: SEYDA CENGİZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET AKAN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Hayvancılık = Animal husbandry ; Mastit = Mastitis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Streptococcus = Streptococcus ; Sığırlar = Cattles

Özet:
Bu çalıĢmanın amacı, mastitisli sütlerden etken izolasyonu ve Streptokokların mastitis
etiyolojisindeki rollerini klasik kültür yöntemi ile belirlemek, ayrıca izole edilen
Streptokok suĢlarının moleküler tekniklerle (polimeraz zincir reaksiyonu; PCR)
tiplendirilmesi ve moleküler epidemiyolojilerinin belirlenmesini sağlamaktır.
Bu çalıĢmada incelenen 1135 süt örneğinin 68 (%6)'sinden Streptococcus spp.
izolasyonu gerçekleĢtirildi. Ġzole edilen suĢların 13 (%19,1)'ü S. agalactiae, 14
(%20,6)'ü S. dysgalactiae ve 41 (%60,3)'i S. uberis olarak identifiye edildi. Ġzole edilen
Streptokokların 9 (%13,2)'unda CAMP pozitiflik belirlendi. Tür düzeyinde
identifikasyonda kullanılan fenotipik özelliklerine göre özellikle S. agalactiae suĢlarında
CAMP pozitifliğinin (%30,8) değiĢken olduğu belirlendi ve Na-hippurat pozitif sonuç
veren suĢlar S. agalactiae olarak değerlendirildi. Ayrıca S. uberis suĢlarında da CAMP
pozitifliği (%12,2) saptandı.
Ġzole edilen etkenlerin hemaglütinasyon özellikleri %7,3 oranında bulunurken, S.
agalactiae'da %15,4, S.dysgalactiae'de %7,1 ve S.uberis'te %4,8 olarak tespit edildi.
Streptokok suĢlarında hemoliz özellikleri incelendiğinde; S. agalactiae'de alfa hemoliz
%23,1, beta hemoliz %61,5, gama hemoliz %15,4, S. dysgalactiae'de alfa hemoliz
%64,3, beta hemoliz %14,3, gama hemoliz % 21,4 ve S. uberis'te alfa hemoliz %75,6,
gama hemoliz %24,4 bulunurken beta hemoliz görülmedi.
Lancefield serogruplandırmasında, identifiye edilen 13 S. agalactiae suĢunun 12
(%92,3)'sinin B grubunda yer aldığı belirlenirken bir suĢ tiplendirilemedi. S.
dysgalactiae suĢlarının tamamının C serogrubunda olduğu belirlendi. Ġncelenen 41 adet
S. uberis suĢunun 16 (%39)'sı C serogrubunda, 7 (%17,1)'si B serogrubunda ve 6
(%14,6)'sı D grubunda yer alırken 12 (% 9,3) S. uberis suĢu serogruplandırılamadı.
Ġzole edilen streptokokların RFLP-PCR analizinde, 68 suĢun 9 (%13,2)'u S.
uberis,13 (%19,1)'ü S. agalactiae, 14 (%20,6)'ü S. dysgalactiae ve 32 (%47,1)'si S.
parauberis olarak identifiye edildi. OPE-04 primeri ile yapılan RAPD-PCR analizinde;
S. agalactiae'da 3, S. dysgalactiae'da 2, S. uberis'te 5 ve S. parauberis'te 9 farklı bant
patterni saptandı.
Sonuç olarak, süt örneklerinden Streptokokların izolasyon ve identifikasyonu
için kullanılan konvansiyonel ve moleküler tekniklerle elde edilen bulgular birlikte
değerlendirildiğinde, tür düzeyinde identifikasyonda farklılıklar belirlendi.
Konvansiyonel yöntemlerle S. uberis olarak identifiye edilen 41 suĢun 9 (%22)'u S.
uberis olarak identifiye edilirken 32 (%78)'sinin S. parauberis olduğu belirlendi. Bu 
53
sonuç, moleküler yöntemlerin Streptokokların tür düzeyinde identifikasyonu için
oldukça yararlı olduğunu ortaya koydu

Abstract:
The aim of study, isolation Streptococcus spp. from milk samples according to
conventional and than evaluate of these samples according to molecular test and
detecting of Streptococcus spp. strains. Additionally detection of molecular
epidemiology in mastitis cases.
In this study, Streptococcus spp. were isolated from 68 of 1135 (6%) milk
samples thirteen (19,1%), 14 (20,6%) and 41 (60,3%) strains were identified as S.
agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis, respectively. CAMP test was positive for 9 of all
Streptococcus spp. (13,2%). The CAMP positive property that used for differentiation of
strains was S. agalactiae variable (30,8%) especially for S. agalactiae strains.
Additionally, the strains were named as S. agalactiae if they had Na-Hippurate positive
results. On the other hand CAMP positive property was found in S. uberis strains
(12,2%).
Haemagglutination properties were detected 7,3%, 15,4%, 7,1% and 4,8% for
isolated strains, S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. uberis, respectively. According to
haemolysis properties, 23,1% alpha, 61,5% beta, 15,4% gamma haemolysis were
observed for S. agalactiae. In S. dysgalactiae strains 64,3% alpha, 14,3% beta, 21,4%
gamma haemolysis were detected. Although, 75,6% alpha and 24,4% gamma
haemolysis were seen, beta haemolysis was not found for S. uberis.
Twelve of 13 strains of were placed into Lancefield serogroup B. One strain of S.
agalactiae could not be classfied. All strains of S. dysgalactiae were placed into group
C. Sixteen (39%) , 7 (17,1%) and 6 (14,6%) of 41 strains of S. uberis were placed into
serogroup C, B and D respectively. But 12 strains (9,3%) couldn't be classified.
Nine (13,2%), 13 (19,1%), 14 (20,6%) and 32 (47,1%) of 68 strains were
identified as S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. parauberis by using RFLPPCR
analysis method respectively.
According to the RAPD-PCR method with OPE-04 primer, different 3, 2, 5 and
9 patterns were identifed for S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis and S. parauberis,
respectively.
Nine of 41 strains were detected as S. uberis and 32 strains were S. parauberis by
molecular methods although all strains were evaluated as S. uberis by the conventional
methods. This result showed that the molecular methods were beneficial for
identification of Streptococcus species.