Deneysel otoimmün miyastenia gravis fare modelinde inflamazom komplekslerinin ekspresyon seviyesi /
Yazar: CEYDA NUR BALTACI
Danışman: PROF. DR. BURÇAK VURAL
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Gen ifadesi profili = Gene expression profiling ; Genler = Genes ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Myasthenia gravis = Myasthenia gravis ; Nöromusküler hastalıklar = Neuromuscular diseases ; Otoimmünite = Autoimmunity ; İnflamazom = Inflammasome

Özet:
Myasthenia gravis (MG) anormal kas zaafı, çabuk yorulma ile seyreden, patolojik olarak timus anormallikleri ve immünolojik olarak nikotinik asetilkolin reseptörlerine karşı anti AchR antikoru gelişimi, kompleman ile reseptör hasarı oluşumu ile karakterize otoimmün nöromüsküler bir hastalıktır [1, 3]. 
AchR'ye karşı gelişen antikorlar, kompleman aracılığı ile postsnaptik membran harabiyeti ve antikorların çapraz bağlanması yolu ile reseptörleri azalttığı bilinmekte, ancak otoimmün yanıtın nasıl başladığı bilinmemektedir. 
MG hastalığının inflamazomlarla ilişkili olabileceğine dair ipuçlarına rağmen literatürde MG hastalığı ve inflamazomlarla ilgili bir araştırma yer almamaktadır. Bu çalışmada, inflamazom kompleksinde yer alan genler ile hastalıktaki inflamatuvar yanıt arasındaki ilişkinin belirlenmesi hedeflenmiştir.
Çalışmamızda, fareler MG hastalığına özgü antikor olan AchR ve adjuvan olarak Freund's Complete Adjuvant(CFA) ile immünize edilerek deneysel otoimmün MG oluşturuldu (DOMG). Farelerin kas zaafı, klinik skorlama, asma ve motor aktivite testleri ile değerlendirildi. Serum anti-AChR Ig seviyeleri ELISA ile belirlendi. Serumda AchR'ye karşı antikor geliştiren fareler hasta grubuna dahil edildi. Farelerden elde edilen total lenf ganglionuna RNA izolasyonu yapıldı ve qPCR ile kaspaz-1, NLRP3, Il-1 beta,  GADPH,  P2X7R ve Akt-1 gen ekspresyonu seviyeleri incelendi. DOMG grubundaki fareler, CFA ile immünize edilen kontrol grubu fareleri ile kıyaslandığında kaspaz-1, NLRP3 ve P2X7R gen ekspresyonlarında artma, Akt-1 de ise azalma gözlenmiştir. Buna karşılık IL-1 beta'da DOMG grubundaki artış anlamlı idi (p= 0,01). Serum antikor düzeyleri ve gen ekspresyon seviyeleri arasında ise korelasyon saptanmıştır.

Abstract:
Myasthenia gravis (MG) is an autoimmune neuromuscular disease characterized by abnormal muscle weakness, rapid fatigue, pathologic thymus abnormalities, and immunologically an anti-AchR antibody development against nicotinic acetylcholine receptors and receptor damage formation by complement system [1,3]. 
 It is known that the antibodies developped against AchR cause postsynaptic membrane destruction via complement system and decrease the number of receptors by cross-linking of these antibodies. However, how the autoimmune response begin is still not known.
Despite the clues that myasthenia gravis (MG) disease may be associated with inflammation, there is no literature study on MG disease and inflammation. In this  study, mice were immunized with MG-specific antibody AchR and adjuvant with Freund's Complete Adjuvant (CFA) to generate experimental autoimmune MG(EAMG). Muscle weakness, clinical scoring, paw-grip test and motor activity tests of mice were evaluated. Serum anti-AChR Ig levels were determined by ELISA. Mice that developed antibodies against AchR in the serum were included in the experimental group(EAMG). RNA was isolated from the total lymph node from mice, and caspase-1, NLRP3, IL-1 beta, GADPH, P2X7R and Akt-1 gene expression levels were examined by qPCR. The mice in the EAMG group showed increasement in the levels of caspase-1, NLRP3 and P2X7R gene expressions, and decreasement in Akt-1 gene expression compared to the control group mice immunized only with CFA. The increasement in the level of IL-1 beta  in EAMG group was significant (p = 0.01). There was no correlation between serum antibody levels and gene expression levels.