Inula viscosa yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin malign melanom hücre hatları üzerine sitotoksik ve antiproliferatif etkilerinin araştırılması
Investigating of cytotoxic and antiproliferative effects of methanol and water extracts obtained from inula viscosa on malignant melanoma cell lines
Yazar: DİLARA KAMER ÇOLAK
Danışman: PROF. DR. ÜNAL EGELİ
Uludağ Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Bitki özütü = Plant extract ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Melanom = Melanoma ; Metanol = Methanol ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Yapraklar = Leafs ; İnula viscosa = Inula viscosa

Özet:
Malign melanom (MM) tedavisinde mevcut terapötik yaklaşımların çoğu,
meydana gelen mutasyonlar sonucu etkinliğin devamlılığı nedeniyle tümör
hücrelerinin aşırı proliferatif özellik sergilemesini sağlayan MAPK yolağındaki etkin
kinazların inhibisyonunu hedefler ancak ne yazık ki hastalarda tedavi sonrası ilaçlara
karşı direnç oluşmaktadır. Bu nedenle adjuvan olarak geliştirilebilecek yeni bitkisel
çözümler araştırmacıların dikkatini çekmektedir. Mevcut tez kapsamında Inula
viscosa (IV) yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin MM hücre
hatlarında (A2058 ve MeWo) ve normal fibroblast hücreleri üzerindeki olası
sitotoksik ve antiproliferatif etkilerinin in- vitro değerlendirilmesi hedeflenmiştir.
Mevcut tez kapsamında öncelikle IV'nin taksonomik ve kromatografik analizi
yapılmış, antioksidan aktivitesi değerlendirilmiştir. Bu analizleri takiben belirlenen
süre ve dozlarda IV yapraklarından elde edilen metanol ve su özütlerinin A2058,
MeWo ve normal fibroblast hücreleri üzerindeki antiproliferatif etkileri WST-1
analizi ile belirlenmiştir. WST-1 bulgularına göre bir sonraki aşamalara Inula
viscosa'nın metanol özütü (IVM) ile devam edilme kararı alınmıştır. IVM'nin
apoptotik etkilerinin ve hücre siklusu üzerindeki etkilerinin belirlenmesi için
Annexin-V ve hücre siklusu analizleri gerçekleştirilmiştir. Hücrelerde meydana gelen
morfolojik değişimler akridin oranj-etidyum bromür (AO/EB) floresan boyaması ile
görüntülenmiştir. Son olarak IV'nin metanol özütünün (IVM) hücre hatlarının
metastatik yeteneklerini nasıl etkilediğini gözlemlemek için yara iyleşmesi testi
uygulanmıştır.
Elde edilen bulgulara göre IV'nin metanol özütünün canlılığı sırasıyla en fazla
MeWo, A2058 ve normal fibroblast hücre hattında inhibe ettiği tespit edilmiştir.
Buna ilaveten IVM'nin MM ve normal fibroblast hücre hatlarında apoptotik ölümü
indüklediği belirlenmiştir. Hücrelerin genomik profillerindeki farklılıktan dolayı
IVM'nin uygulanan dozun miktarına bağlı hücrelerde oluşturulan DNA hasarının
hücre döngüsünün farklı kontrol noktalarında tespit edilebildiği öngörülmüştür. Son
olarak IVM'nin içerisinde çözündüğü varsayılan bileşenlerin literatürdeki
bulgularına göre hücrelerin metastatik özelliğini çeşitli genleri regüle etmek
vasıtasıyla inhibe edebileceği kanısına varılmıştır.

Abstract:
Most of the therapeutic approaches that are available in the treatment of
malignant melanoma (MM) target the inhibition of active kinases in the MAPK
pathway, which allows the tumor cells to exhibit excessive proliferative properties
due to the continuity of the activity resulting from mutations, but unfortunately
patients develop resistance to drugs after treatment. Therefore, new herbal solutions
that can be developed as adjuvants attract the attention of researchers. Within the
scope of the present thesis, it was aimed in vitro evaluation of possible cytotoxic and
antiproliferative effects of methanol and water extracts from Inula viscosa (IV)
leaves on MM cell lines (A2058 and MeWo) and normal fibroblast cells.
Firstly, taxonomic and chromatographic analysis of water and methanol extract
from IV leaves was performed and antioxidant activity was evaluated. Following
these analyzes, the antiproliferative effects of methanol and water extracts obtained
from IV leaves on A2058, MeWo and normal fibroblast cells were determined by
WST-1, According to WST-1 findings, it was decided to continue the next steps with
IVM. Annexin-V and cell cycle analyzes were performed for determination of
apoptotic effects and at which check point of cell cycle they are arrested.
Morphological changes in cells were visualized by inverted microscopy by
fluorescent staining of acridine orange-ethidium bromide. Finally, a wound healing
test was performed to observe how the methanol extract of IV affects the metastatic
ability of these cell lines.
According to the findings, it was found that methanol extract of IV(IVM)
inhibits viability of in MeWo more then A2058 and least normal fibroblast cell lines,
respectively. In addition, the methanol extract of IV was found to induce apoptotic
death in MM and normal fibroblast cell lines. Due to the differences in the genomic
profiles of these cell lines, it is predicted that the DNA damage generated in the cells
due to the amount of dose of IV administered can be arrested at different check
points of the cell cycle. Finally, according to the literature findings it was concluded
that the components assumed to be dissolved in IVM may inhibit the metastatic
property of these cell lines by regulating various genes according to the literature
findings.