Biyolojik yaş tayininde kullanılmak üzere FHL2 bölgesinin metilasyonunun yaş ile bağlantısının belirlenmesi
Determination of the age correlation of the FHL2 methylation site for use in biological age estimation
Yazar: ALİ ZİKİR DUMAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ TUĞBA ÜNSAL SAPAN
Üsküdar Üniversitesi / Bağımlılık ve Adli Bilimler Enstitüsü / Adli Bilimler Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Adli bilimler = Forensic sciences ; Adli genetik = Forensic genetics ; DNA metilasyon = DNA methylation

Özet:
Olay yerlerinde bulunan bulgular farklılık göstermektedir. Kan, semen, tükürük, vajinal sıvı gibi biyolojik bulgular ise adli vakalarda en çok karşılaşılanlardandır. Olay yerlerinde bulunan bu biyolojik materyallerden elde edilen sonuçlarla kişiler kimliklendirilebilir, olay yeri-şüpheli-mağdur üçgeni oluşturulabilir. Şüphelinin olmadığı ama biyolojik materyalin olduğu durumlarda ise epigenetik yöntemler kullanılarak şüpheli çemberi daraltılabilmektedir. Epigenetik çalışmalar yapılarak olay yerinde bulunan bulguların kaynağı olan kişi hakkında bazı yorumlar yapılabilmektedir. Kişinin yaşı, kişinin biyocoğrafik soy tayini, göz rengi, saç rengi gibi sınıflandırmalar ile şüpheli havuzu daraltılabilir. Özellikle, olay yerlerinde bulunan biyolojik materyallerle şüphelilerin yaşının tahmin edilebilmesi faile ulaşılması açısından çok kıymetlidir. Epigenetik yöntemlerle yaş tayini ile ilgili çalışmalar devam etmektedir.
İnsan genomunda spesifik olarak bulunan CpG adalarındaki DNA metilasyon miktarının yaşla önemli ölçüde ilişkili olduğuna son zamanlarda yapılan epigenetik çalışmalar sayesinde ulaşılmıştır. Günümüzde yaş tahmini amacıyla yapılan çalışmalar sonucunda DNA metilasyon belirteçlerinin; diğer biyobelirteç türlerine göre daha üstün olduğu ortaya konulmuştur.
Bu tezde amaç, daha önceden yaş ile ilgili bağlantılı olduğu tespit edilen ITGA2AB, KCNAB3 ve FHL2 Metilasyon bölgelerinin bu amaçla kullanılabilir olup olmadığının tespit edilmesidir. Bu sebeple Marmara bölgesinde yaşayan farklı yaş gruplarında bulunan 50 kişiden kan lekesi oluşturmak üzere örnekler toplanacaktır. Kan örneklerinden DNA izole edilerek, bisülfit converter kit ile DNA'lar metillenmiş hale dönüştürülerek CpG bölgelerine ait primerler ile metilasyon bölgeleri SNaPshot yöntemi ile çoğaltılacak ve optimizasyon yapılacaktır. Örnekleri daha sonra kapiller elektroforez tekniği ile metilasyon seviyeleri belirlenecektir. Metilasyon seviyeleri belirlenen kan örnek numunelerinin yaş ile bağlantıları incelenecektir.

Abstract:
Findings found at crime scenes vary. Biological findings such as blood, semen, saliva, vaginal fluid are among the most common in forensic cases. With the results obtained from these biological materials found at crime scenes, people can be identified and a crime scene-suspect-victim triangle can be formed. In cases where there is no suspect but there is biological material, the suspect circle can be narrowed by using epigenetic methods. By conducting epigenetic studies, some comments can be made about the person who is the source of the findings found at the crime scene. The suspect pool can be narrowed by classifications such as age, biogeographic ancestry, eye color, hair color. In particular, the ability to estimate the age of suspects with biological materials found at crime scenes is very valuable in terms of reaching the perpetrator. Studies on age determination by epigenetic methods are ongoing.
Recent epigenetic studies have shown that the amount of DNA methylation in CpG islands in the human genome is significantly correlated with age. Today, as a result of studies conducted for age estimation, DNA methylation markers have been shown to be superior to other types of biomarkers.
The aim of this thesis is to determine whether ITGA2AB, KCNAB3 and FHL2 methylation sites, which have previously been found to be associated with age, can be used for this purpose. For this reason, samples will be collected from 50 people of different age groups living in the Marmara region to create blood stains. DNA will be isolated from the blood samples, DNA will be converted into methylated form with bisulfite converter kit, primers belonging to CpG regions and methylation sites will be amplified by SNaPshot method and optimization will be performed. Methylation levels of the samples will then be determined by capillary electrophoresis technique. The age correlations of the blood samples with methylation levels will be analyzed.