Terapötik monoklonal antikor üretiminin optimizasyonu ve veriminin arttırılması
Optimization and increasing efficiency of production of therapeutic monoclonal antibodies
Yazar: BURCU NUR AYDIN
Danışman: PROF. DR. ARİF KAYGUSUZ ; PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı / Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Adherent hücreler = Adherent cells ; Antikor yapıcı hücreler = Antibody producing cells ; Antikorlar = Antibodies ; Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; CRISPR = CRISPR ; Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Hücre dizisi = Cell line ; Setuksimab = Cetuximab

Özet:
Terapötik monoklonal antikorlar (mAb) günümüzde özellikle onkoloji, immünoloji ve organ nakli alanlarında iyi kabul görmüş bir ilaç sınıfıdır. MAbların çeşitli kanserlerin tedavisinde, geleneksel sitotoksik ilaçlardan daha az yan etki taşıdığı kanıtlanmış ve hasta yaşam kalitesinin artmasını sağladığı gösterilmiştir. 
Günümüzde bilinen birçok monoklonal antikorun endüstriyel ölçekte üretilebilmesi için sıklıkla CHO (Chinese Hamster Ovary) hücreleri kullanılmaktadır. CHO hücreleri insan benzeri translasyon sonrası modifikasyonlar ile rekombinant proteinleri ifade edebilme yeteneğine sahiptir.
Bu çalışmanın amacı CHO hücrelerinin K1 suşu kullanılarak Cetuximab üretiminin ve verimliliğinin arttırılması için: 
1.Yapışan hücre kültüründen süspansiyon kültürüne geçiş yapılarak daha büyük hacimlerde kültür yapılarak daha fazla mAb üretilmesi, 
2.Süspansiyon kültürünü desteklemek için RPMI 1640'tan EXCELL Hybridoma'ya geçilmesi,
3.Vasatta bulunan serum miktarı azaltılarak CHO-K1 hücrelerinin serum içermeyen kültüre adapte edilmesi, 
4.CRISPR/Cas9 sistemi kullanılarak programlı hücre ölümüne neden olan pro-apoptotik Bak1 ve Bax genlerinin kalıcı olarak inhibe edilmesi ile zorlu kültür koşullarına dayanıklı yeni bir hücre suşu oluşturulup Cetuximab üretimindeki verimin arttırılması hedeflenmektedir.

Abstract:
Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are currently a well-accepted class of drugs, especially in the fields of oncology, immunology, and organ transplantation. MAbs have been proven to have fewer side effects than conventional cytotoxic drugs in the treatment of various cancers and have been shown to improve patient quality of life.
CHO (Chinese Hamster Ovary) cells are frequently used to produce many known monoclonal antibodies on an industrial scale. CHO hücreleri insan benzeri translasyon sonrası modifikasyonlar ile rekombinant proteinleri ifade edebilme yeteneğine sahiptir. [2] CHO cells are capable of expressing recombinant proteins with human-like post-translational modifications. CHO hücreleri insan benzeri translasyon sonrası modifikasyonlar ile rekombinant proteinleri ifade edebilme yeteneğine sahiptir. 
The aim of this study is to increase the production and efficiency of Cetuximab using K1 strain of CHO cells by: 
1.Producing more mAbs by switching from adherent cell culture to suspension culture and culturing in larger volumes,
2.Switching from RPMI 1640 to EXCELL Hybridoma to support suspension culture,
3.Adaptation of CHO-K1 cells to serum-free culture by reducing the amount of serum in the medium,
4.By using the CRISPR/Cas9 system, it is aimed to permanently inhibit the pro-apoptotic Bak1 and Bax genes that cause programmed cell death, to create a new cell strain resistant to harsh culture conditions and to increase the efficiency in Cetuximab production.