Farklı doz likopen uygulamasının periodontal hücreler üzerine etkisinin hücre kültürü ortamında yara modeli üzerinde değerlendirilmesi
Evaluation of the effect of different dose lycopene application on periodontal cells in vitro wound model
Yazar: VAHDİ UMUT BENGİ
Danışman: PROF. DR. NURİYE IŞIL SAYGUN
GATA / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Periodontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Kemik rejenerasyonu = Bone regeneration ; İn vitro = In vitro

Özet:
Periodontal hastalıklardaki doku yıkımı reaktif oksijen türlerinin aktivitesi ve antioksidan mekanizmalar arasındaki dengenin oksidasyon lehine artması sonucu meydana gelmektedir. Antioksidanların enflamasyon sonucu ortaya çıkan oksidatif dengesizliği düzenlediği ve enflamasyonun yıkıcı etkilerinden dokuları koruyabildiği bildirilmiştir. Periodontolojide son yıllarda antioksidanlar ile ilgili tedavi yaklaşımları önem kazanmaya başlamıştır. Likopen, güçlü antioksidatif özelliklerinin yanısıra, farklı hücreler üzerinde antienflamatuar, antiproliferatif ve proliferatif etkiler göstermektedir. Bu çalışmada likopenin periodonsiyumu oluşturan gingival fibroblastlar, periodontal ligament fibroblastlar, osteoblastlar ve mezankimal kök hücreler üzerindeki olası proliferatif etkisi ve yara iyileşmesi ve rejeneratif olaylarda rol oynayan biyolojik markerların salımı üzerine etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Çalışmada kullanılan gingival fibroblastlar, periodontal ligament fibroblastlar, osteoblastlar ve mezankimal kök hücreleri primer hücre kültürlerinden elde edildi. Öncelikle, MTT testi ve gerçek zamanlı hücre analizi (RTCA) değerlendirmeleri yapıldı. Bu sonuçlara göre en etkin üç doz belirlenerek (10-1 μmol, 10-3 μmol ve 10-5 μmol) bu konsantrasyonlarda oluşturulan yara modelinde 0., 12., 24. ve 48. saatlerde alınan mikroskop görüntülerinden yara yüzeyinin alanı bir bilgisayar programı ile hesaplandı. Hücre kültür ortamında elde edilen süpernatantlarda RT-PCR yöntemi ile büyüme faktörleri (Bazik Fibroblast Büyüme Faktörü, İnsulin Benzeri Büyüme Faktörü-1, Büyüme Diferansiyasyon Faktör-5) , Tip 1 Kollajen, Osteokalsin ve Alkalen Fosfataz, ayrıca, ELISA yöntemi ile Bazik Fibroblast Büyüme Faktörü ve Tip 1 Kollajen seviyelerine bakıldı. Elde edilen veriler istatistiksel olarak değerlendirildi. Sonuç olarak, likopenin, doza bağlı olarak, periodontal yara iyileşmesinde rol oynayan hücrelerin proliferasyonunu ve migrasyonunu arttırarak ve yara iyileşmesinde rol oynayan proteinlerin ve büyüme faktörlerinin salınımını situmule ederek, periodontal yara iyileşmesi ve periodontal doku rejenerasyonuna katkı sağlayacağı düşünülmektedir.

Abstract:
The tissue damage in periodontal diseases occurs due to the increase of the balance between the activity of the reactive oxygen species and the antioxidant mechanisms in favor of oxidation. It is reported that antioxidants regulate the oxidative disorders resulting from inflammation and can protect tissues from the destructive effects of inflammation. Recently, treatment approaches related to antioxidants has gained importance in periodontology.Lycopene, which is a strong antioxidant, has antiinflammatory, antiproliferative and proliferative effects on different cell types. The aim of this study was to evaulate the possible proliferative effects of lycopene on periodontal cells including gingival fibroblasts, periodontal ligament fibroblasts, osteoblasts and mesenchyal stem cells; and stimulative effects on the biological markers involved in wound healing and regeneration. Gingival fibroblasts, periodontal ligament fibroblasts, osteoblasts and mesenchymal stem cells used in the study were harvested from primary cell cultures. Firstly, the MTT analysis and the real time cell analysis assessments were performed, Three most effective doses (10-1 μmol, 10-3 μmol ve 10-5 μmol) were determined according to these results. In the wound model created in these concentrations, the wound surface areas from the microscope images taken at 0th.,12 th., 24 th. and 48 th hours were calculated by using a computer program. In the supernatans obtained from cell culture, growth factors (basic Fibroblast Growth Factor, Insulin-like Growth Factor-1, Growth Differantiation Factor-5), type 1 collagen, osteocalsin and alkalen phosphatase levels were evaluated with the RT-PCR technique and basic Fibroblast Growth Factor and type 1 collagen levels were elavulated with the ELISA method. The obtained data were evaluated statistically.In conclusion, lycopene was found to contribute to the periodontal wound healing and periodontal tissue regeneration dose-depently, by increasing the proliferation and migration of the cells involved in periodontal wound healing and by stimulating the release of proteins and growth factors that play a role in wound healing.