Östrojen ve progesteron reseptörü negatif meme kanserlerinde kras, braf ve pık3ca mutasyonlarının değerlendirilmesi /
Yazar: ASLI NALDEMİR
Danışman: PROF. DR. BİNNUR ÖNAL ; DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM KANTARCIOĞLU COŞKUN
Düzce Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Meme kanseri =   ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Moleküler yapı = Molecular structure ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Progesteron = Progesterone ; Sınıflandırma = Classification ; Östrojenler = Estrogens

Özet:
Amaç
Meme kanseri ülkemizde ve dünyada kadınlarda en sık görülen malign tümör olup kadınlarda kanserden ölümlerin ikinci sebebidir. Geniş genetik heterojenitesi nedeniyle moleküler tedavi potansiyeli oldukça yüksektir. Tamoksifen ve türevleri gibi hormonal tedaviden faydalanamayacak, östrojen ve progesteron reseptörü negatif meme tümörlerinde; KRAS, BRAF ve PIK3CA mutasyonlarını araştırmayı amaçladık. Üçlü negatif ve HER2'den zengin moleküler alt tipler arasında, bu mutasyonların görülme sıklığında farklılık olup olmadığını inceledik. Demografik veriler, TNM evresi, histolopatolojik tanı, tümör derecesi, menopoz durumu ve sağkalım ile bu mutasyonlar arasındaki ilişkiyi araştırdık.

Gereç ve Yöntem
DÜTF Patoloji ABD'da 2013-2019'da östrojen ve progesteron reseptörü negatif meme karsinomlu 24 hastanın mastektomi materyallerinin formalin ile fikse parafine gömülü doku bloklarından makrodiseksiyonla tümörlü alanlar seçildi; DNA ekstraksiyonunun ardından KRAS/BRAF/PIK3CA Multiplex Arrays kullanılarak mutasyon tayini gerçekleştirilmiştir. İstatistiksel analizler SPSS v.22 paket programı ile yapılmış kategorik değişkenlerin değerlendirilmesinde Pearson ki-kare testi uygulanmıştır.

Bulgular
Olguların ortalama tanı yaşı 60,29±12,41 olup serimizdeki karsinomlar; invaziv meme karsinomu, NOS (n=18, %75), metaplastik (n=2, %8,6), lobüler (n=1, %4,3), papiller (n=1, %4,3), mikst (lobüler+duktal karsinom) (n=1, %4,3) ve apokrin diferansiasyonlu (n=1, %4,3) karsinomdur. Olguların 12'sinde mutasyon saptanmıştır; beş olguda (%21.7) PIK3CA, dört olguda (%17.3) KRAS, bir olguda (%4.3) BRAF, bir olguda (%4.3) kombine BRAF/KRAS ve bir olguda (%4.3) kombine KRAS/PIK3CA mutasyonları görüldü. Üçlü negatif ve HER2'den zengin gruplar arasında PIK3CA (p=0,640), KRAS (p=0,371) ve BRAF (p=0,949) mutasyon oranları açısından anlamlı bir farklılık saptanmamıştır. Her üç mutasyon için histolojik derece, patolojik evre ve sağkalım ile istatiksel olarak anlamlı farklılık bulunmamış olup PIK3CA mutasyonu ve tümör çapı arasında istatiksel olarak anlamlı bir ilişki tespit edilmiştir (p=0,01). Tümör çapı arttıkça PIK3CA mutasyonu görülme oranı artmakta olup kötü prognostik faktörlerle bu mutasyonun ilişkili olabileceği düşünülmüştür.

Sonuçlar
Literatürde; PIK3CA mutasyonu %20-45, HER2'den zengin grupta %23, üçlü negatif grupta %5-13.2 aralığında saptanmışken; çalışmamızda toplamda %26, HER2'den zengin grupta %18.2, üçlü negatif grupta %33.3 oranında saptanmıştır. PIK3CA mutasyonu (H1047R, E542K, H545K) ve tümör çapı arasında istatiksel anlamlı ilişki gözlenmiştir (p=0,01). Tümör çapı arttıkça PIK3CA mutasyon görülme oranı artmakta olup, kötü prognostik faktörlerle bu mutasyonun ilişkili olabileceği düşünülmüştür.
Diğer çalışmalarda; meme kanserinde KRAS mutasyonu %7-12, HER2'den zengin grupta %17, üçlü negatif grupta %0-8 oranında tespit edilmiştir. Çalışmamızda KRAS mutasyonu (Q61H1, G12S, G12D, G12R, Q61R) toplamda %26, HER2'den zengin grupta %36.4, üçlü negatif grupta ise %16.7 bulunmuştur.
Literatürde BRAF mutasyonu %2-4 saptanmışken çalışmamızda (V600E) toplamda %8.6'dır.
Her üç genin de hedefe yönelik tedavileri halen araştırılmakta olup, mutasyon saptanan hastalarda bu ajanların rutinde kullanılması için geniş serili çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Aim
Breast cancer is the most common malignant tumor in women in Turkey and in the world, and it is the second cause of cancer deaths in women. Due to its wide genetic heterogeneity, its molecular therapy potential is quite high. We investigated KRAS, BRAF and PIK3CA mutations, in estrogen receptor  and progesterone receptor  negative breast tumors, that can't benefit from hormonal treatment such as tamoxifen and its derivatives. We analyzed whether there is a difference in the frequency of these mutations between triple negative and HER2 rich molecular subtypes. We investigated the relationship between these mutations with demographic data, TNM stage, histolopathological diagnosis, tumour grade, menopausal status and survival.

Material and Methods
In Duzce University Medical School Pathology Department, between 2013 and 2019, tumor areas were selected by macrodissection from formalin-fixed paraffin-embedded tissue blocks of mastectomy materials of 24 patients with estrogen and progesterone receptor negative breast carcinoma. After DNA extraction, mutation determination was performed using KRAS/BRAF/PIK3CA Arrays. Statistical analyzes were made with the SPSS v.22 package program, and the Pearson chi-square test was used to evaluate the categorical variables.

Results
The median age of our cases was 60,29±12,41 years. Histopathological diagnoses of our cases were invasive breast carcinoma, NOS (75%), metaplastic (8.6%), lobular (4.3%), papillary (4.3%), mixed (lobular+ductal carcinoma) (4.3%) and apocrine carcinoma (4.3%). Mutations were detected in 12 of the cases; PIK3CA in five cases (21.7%), KRAS in four cases (17.3%), BRAF in one case (4.3%), combined BRAF/KRAS in one case (4.3%) and combined KRAS/PIK3CA in one case (4.3%). No significant difference was found between the triple negative and HER2 rich groups in terms of PIK3CA (p = 0.640), KRAS (p = 0.371) and BRAF (p = 0.949) mutation frequencies. For all three mutations, no statistically significant difference was found with histological grade, pathological stage, and survival but statistically significant relationship was found between the PIK3CA mutation and tumor diameter (p = 0.01). As the tumor size increases, the incidence of PIK3CA mutation increases, and it was thought that this mutation may be associated with poor prognostic factors.
Conclusion
In the literature; While PIK3CA mutation was detected as 20-45% in all breast cancers, it was detected in the range of 23% in HER2-rich subgroup and 5-13.2% in triple negative subgroup. In our study, PIK3CA was detected as 26% in total, 18.2% in HER2-rich subgroup and 33.3% in triple negative subgroup. Statistically significant relationship was observed between the PIK3CA (H1047R, E542K, H545K) mutation and tumor size (p = 0.01). As the tumor size grows, the incidence of PIK3CA mutation increases, and it was thought that this mutation may be associated with poor prognostic factors.
In other studies; KRAS mutation in breast cancer was detected in 7-12%, 17% in HER2-rich subgroup, 0-8% in triple negative subgroup. In our study, KRAS mutation (Q61H1, G12S, G12D, G12R, Q61R) was found 26% in total, 36.4% in the HER2-rich subgroup, and 16.7% in the triple negative subgroup.
While the BRAF mutation was detected as 2-4% in the literature, (V600E) was 8.6% in our study.
Targeted therapies of all three genes are still being investigated, and large series studies are needed for the clinical use of these agents in patients with mutations.