Hacettepe Üniversitesi Hastanelerinde ayrıstırılan Pseudomonas aeruginosa izolatlarında metallo-beta-laktamaz enziminin fenotipik ve genotipik yöntemlerle araştırılması
Identification of metallo-beta-lactamases in Pseudomonas aeruginosa strains isolated in Hacettepe University Hospitals by phenotypic and genotypic methods
Yazar: ASLI ÇAKAR
Danışman: PROF. DR. BURÇİN ŞENER
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2005
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
iiiÖZETÇAKAR, A., Hacettepe Üniversitesi Hastaneleri'nde ayrıştırılanizolatlarında metallo-beta-laktamazPseudomonas aeruginosaenziminin fenotipik ve genotipik yöntemlerle araştırılması, HacettepeÜniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Mikrobiyoloji ProgramıDoktora Tezi, Ankara, 2005. Pseudomonas aeruginosa hastaneenfeksiyonlarının en başta gelen nedenlerinden biridir. P.aeruginosa'nınpek çok antibiyotiğe dirençli olması tedavide ciddi bir sorunyaratmaktadır. Metallo-beta-laktamaz enzimleri karbapenemlerin deiçinde bulunduğu monobaktamlar hariç tüm beta-laktam antibiyotikleredirenç gelişiminden sorumlu enzimlerdir. Metallo-beta-laktamaz enziminikodlayan genler sınıf 1 integronlar içindeki gen kasetlerindebulunmaktadır. Gen kasetleri bölgeye özgü rekombinasyon sistemiylefarklı integronlara taşınabilmekte, böylece direnç genlerinin bakterilerarası yayılımına neden olmaktadır. Bu çalışmanın amacı, çeşitli klinikörneklerden ayrıştırılan P.aeruginosa izolatlarında metallo-beta-laktamazenzimini fenotipik ve genotipik yöntemlerle araştırmaktır. Bu amaçla,seftazidim ve/veya imipenem dirençli 110 P.aeruginosa izolatı çalışmayaalınmıştır. Çalışmaya alınan izolatların 66'sında (%60) çoklu ilaç direncigözlenmiştir. Metallo-beta-laktamazın fenotipik tayininde beş fenotipiktest uygulanmış, ayrıca imipenem hidrolizi deneyi gerçekleştirilmiştir.Fenotipik test sonuçlarını doğrulamak amacıyla iki primer setikullanılarak PCR analizi yapılmıştır. PCR analiz sonuçlarına göre,çalışmaya alınan 110 izolatın 11'inde metallo-beta-laktamaz genisaptanmış, metallo-beta-laktamaz sıklığı %1.5 olarak belirlenmiştir.Fenotipik testlerin metallo-beta-laktamaz tayininde yeterli olmadığıgörülmekle birlikte, PCR sonucu ile en uyumlu testin kombine disk sinerjitesti olduğu gözlenmiştir.Anahtar Kelimeler: P.aeruginosa, metallo-beta-laktamaz, integron, genkasetDestekleyen Kurumlar: H.Ü.B.A.B. 03.D02.101.012

Abstract:
iiiABSTRACTÇAKAR, A., Identification of metallo-beta-lactamases inPseudomonas aeruginosa strains isolated in Hacettepe UniversityHospitals by phenotypic and genotypic methods, HacettepeUniversity Health Sciences Institute PhD Thesis in Microbiology,Ankara, 2005. Pseudomonas aeruginosa is a leading cause ofnosocomial infections and is resistant to many antibiotics posing seriousproblems for therapeutic regimens. Metallo-beta-lactamases are theenzymes which cause resistance to all beta-lactam agents exceptmonobactams. Metallo-beta-lactamase genes are carried in gene casetteslocated in class1 integrons.Identification of metallo-beta-lactamase inclinical microbiology laboratories is very important. The aim of this studyis to identify metallo-beta-lactamase enzyme in clinical P.aeruginosaisolates by phenotypic and genotypic methods. For this purpose, 110P.aeruginosa isolates resistant to ceftazidime and/or imipenem wereincluded in this study. Antibiotic susceptibility of the isolates andpresence of metallo-beta-lactamase production were investigated byphenotypic and genotypic tests. From a total of 110 P.aeruginosa isolates,66 (60%) were found multiple drug resistant. For identification ofmetallo-beta-lactamase, five phenotypic tests were performed. Also crudeextract of isolates were tested for the presence of EDTA-inhibitablecarbapenemase activity revealed the presence of imipenemase activity. Inorder to confirm the results of phenotypic tests, PCR analysis wereperformed. According to the PCR analysis 11 isolates were foundmetallo-beta-lactamase positive, and the prevelence of metallo-beta-lactamase was determined as 1.5%. Although phenotypic tests are notsufficient to detect metallo-beta-lactamase phenotypically, according tothe PCR analysis, the most suitable test which can be used is combineddisk diffusion test. The results of this study reveal that metallo-beta-lactamase are prevalent among P.aeruginosa isolates.Keywords : P.aeruginosa, metallo-beta-lactamase, integron, gene cassetteSupported by : H.Ü.B.A.B. 03.D02.101.012