Centaurea urvillei'nin toxoplasma gondii üzerindeki etkisi
Effect of Centaurea urvillei on toxoplasma gondii
Yazar: ELİF POLAT
Danışman: PROF. DR. KOR YERELİ
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Centaurea urvillei = Centaurea urvillei ; Paraziter hastalıklar = Parasitic diseases ; Parazitler = Parasites ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii ; Tıbbi bitkiler = Plants-medicinal

Özet:
Çalışmamızda; Türkiye'de ex vivo kültür yöntemiyle üretilen T.gondii parazitinin, Vero hücrelerinde ex vivo kültivasyon yöntemiyle virulans özelliklerini yitirmeden üremesini sağlamak ve bu parazit üzerine Centaurea urvillei bitkisinin anti paraziter ilaç etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır.
Centaurea urvillei bitkisi Eskişehir ilinden toplandı, kurutuldu ve ekstraksiyon için kullanılabilecek kısımları alınarak metanol, n-hekzan ve kloroform çözeltilerinde çözdürülürek ekstreler hazır hale getirildi. Ardından Vero ve L929 hücreleri pasajlanmak üzere çözdürülmüştür. Tripan mavisiyle boyanarak hücre sayımı gerçekleştirildi. Diğer yandan Toxoplasma gondii bulunduğu sıvı azot tankından çıkarılıp çözdürülmüştür. Tripan mavisiyle boyanıp parazit sayımı yapılmıştır. 
Centaurea urvillei bitkisinin L929 hücreleri üzerinde in-vitro sitotoksik değerlendirmesi yapılmıştır. CC50 değerleri n-hekzan, metanol, kloroform ve primetaminin sırasıyla 110,4 µg/ml, 99,6 µg/ml, 157,7 µg/ml ve 189,8 µg/ml olarak belirlenmiştir. Sonuç olarak Centaurea urvillei bitkisinin sitotoksik aktivite göstermediği belirlenmiştir.
Ardından T.gondii'nin ex-vivo kültivasyonu yapılmıştır. Vero hücresine T.gondii izolatının ekimi yapılmıştır ve 72 saat inkübasyona bırakılmıştır. 72 saat sonunda enfeksiyon gerçeklemiş olup C.urvillei bitkisinin T.gondii üzerindeki etkisine bakmak üzere farklı konsantrasyonlarda değerlendirmesi yapılmıştır. Enfeksiyon gerçekleşmiş olan Vero hücrelerine kontrol ilacının ve ekstrenin eklenmesinden sonra 48 saat inkübe edilmiştir. Sonrasında Giemsa ile boyanmış ve ışık mikroskobuyla her kuyucuk içindeki takizoit sayısı belirlenip, %anti-takizoit(inhibüsyon) aktivitesi hesaplanmıştır. IC50 değeri de belirlendikten sonra anti paraziter etkinliğinin olup olmadığını belirlemek için seçicilik indeksi (SI) bulunmuştur ve Centaurea urvillei bitkisinin T.gondii üzerinde anti paraziter aktivite gösterdiği istatiksel olarak anlamlı bulunmuş olup, T.gondii üzerindeki etkisi ileride yapılacak olan ilaç çalışmalarında bir basamak olarak görülebilir.

Abstract:
In our study; It was aimed to ensure the reproduction of T.gondii parasite, which is produced by ex vivo culture method in Turkey, without losing its virulence properties by ex vivo cultivation method in Vero cells, and to investigate the antiparasitic drug activity of Centaurea urvillei plant on this parasite.
Centaurea urvillei plant was collected from Afyon province, dried and extracts were prepared by taking the parts that can be used for extraction and dissolving them in methanol, n-hexane and chloroform solutions. Vero and L929 cells were then thawed for passage. Cell count was performed by staining with trypan blue. On the other hand, Toxoplasma gondii was removed from the liquid nitrogen tank and thawed. Parasite count was done by staining with trypan blue.
In vitro cytotoxicity evaluation was performed on L929 cells of Centaurea urvillei plant. The CC50 values of n-hexane, methanol, chloroform and pyrimethamine were determined as 110.4 µg/ml, 99.6 µg/ml, 157.7 µg/ml and 189.8 µg/ml, respectively. As a result, it was determined that Centaurea urvillei plant did not show cytotoxic activity.
Then, ex-vivo cultivation of T.gondii was carried out. T.gondii isolate was cultivated in Vero cell and left for 72 incubations. At the end of 72 hours, infection occurred and the evaluation of the C.urvillei plant at different concentrations was made to look at the effect on T.gondii. The infected Vero cells were incubated for 48 hours after the addition of the control drug and the extract. Afterwards, it was stained with Giemsa and the number of tachyzoites in each well was determined with a light microscope, and the % anti-tachyzoite (inhibition) activity was calculated. After determining the IC50 value, the selectivity index (SI) was found to determine whether it has antiparasitic activity and it was found that Centaurea urvillei plant showed antiparasitic activity on T.gondii, and it was found that it was statistically significant, and its effect on T.gondii can be seen as a step in future drug studies.