Bazı peynir ve yoğurt ürünlerinde bulunan natamisinin miktar tayini ve analitik metod validasyonu
Quantitative determination and analytical method validation of  natamycin i̇n some cheese and yoghurt products
Yazar: ÖZLEM KARALOMLU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. DİLEK BİLĞİÇ ALKAYA
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Natamisin = Natamycin ; Peynirler = Cheeses ; Yoğurt = Yoghurt

Özet:
Natamisin gıda kalitesini korumak için gıda koruyucusu olarak uygulanan bir polien makrolittir. Güney Afrika topraklarında bulunan Streptomyces adlı mikroorganizmadan izole edilmiştir. Bu çalışmanın amacı,  peynir kabuğu, peynir içi ve yoğurtta meydana gelebilecek küf ve mantarı önlemek için kullanılmış olan natamisini tayin etmektir. Önerilen metod ISO+9233-2-2007 metodu referans alınarak valide edilmiştir. Natamisin, peynir ve yoğurt örneklerinde HPLC DAD ve UV dedektör kullanılarak tayin edilmiştir. Mobil faz olarak  metanol /su/asetik asit (12:8:1, h/h/h), kolon olarak C8 (150mmx4.6mmx5µm)  seçilmiştir ve tüm ayırmalardaki akış hızı 1,0 mL/dak 'dır. Analitik kolon ve ön kolon sıcaklığı 25 0C' dir. Dedektörlerin dalga boyları 303 nm' dir. Validasyon parametreleri ve sistem uygunluk testi sonuçları detaylı olarak elde edilmiştir. Konsantrasyon aralığı  0,01-0,80 mg/mL 'dir. DAD dedektör ile elde edilen LOQ değerleri peynir ve yoğurt için 0,388 mg/kg ve 0,403 mg/kg; LOD değerleri peynir ve yoğurt için 0,321 mg/kg ve 0,320 mg/kg olarak bulunmuştur. Miktar tayini için geri kazanım %95 güven düzeyinde  %91±0,05 olarak  saptanmıştır. Sistem uygunluk testleri için natamisinin 0,6mg/mL konsantrasyonda hazırlanan çözeltisinin HPLC cihazına 10 kez enjeksiyonu ile elde edilen yüzde bağıl standart sapma peynir için %3,442 yoğurt için %3,256 olarak bulunmuştur. İki farklı analizci tarafından elde edilen sonuçlar ANOVA F testi ile karşılaştırılmış ve istatistiksel olarak birbirinden farklı olmadığı saptanmıştır. Bu çalışma ile önerilen metod, basit ve hızlı analiz sağlamasından dolayı avantajlıdır.

Abstract:
Natamycin is a polyene macrolid that is applied as food preservatives to protect food quality. It is isolated from Streptomyces that is available in South African soils. The aim of this study is to determinate natamycin which is effectively against yeast and fungi, for cheese, cheese rind, and yoghurt. The proposed method was validated using ISO+9233-2-2007 referance method. Natamycin was analyzed in cheese and yoghurt samples with HPLC diode array and UV detection. Mobil phase was methanol/water/acetic acid (12:8:1, v/v/v); C8 (150mmx4,6mm,5µm) column was selected and all seperations were performed at a flow rate of 1,0 mL/min. Analytical and guard columns were maintained at 25 oC. The wavelength of detectors was 303 nm. Validation parameters and system suitability test result were evaluated in detail. Linearity range was 0,01-0,80 mg/mL. LOQ values of cheese and yoghurt were 0,388 mg/kg and 0,403 mg/kg respectively, LOD values of cheese and yoghurt were 0,321 mg/kg and 0,320 mg/kg respectively by diode array detector. The quantitative method recovery was 91±0,05% with 95% confidence limits. For system suitability, the natamycin solution (c=0,6 mg/mL) was injected into the HPLC instrument at 10 times and percent relative standart deviation (RSD %) of its peak area was 3,442% for cheese and 3,256% for yoghurt. The results which obtained by two different analysts were compared with ANOVA F test and statistically they were not different. The proposed method in this study has advantage due to simple and fast analysis.