Mülleryan agenezi olgularında folikül stimule edici hormon reseptör (FSHR)genotiplerinin klinik verilerle ilişkisinin değerlendirilmesi
Evaluating the association between clinical spectrum and follicule stimulating hormone receptor (FSHR) genotypes in mullerian agenesis cases
Yazar: ASLI BİLEKDEMİR
Danışman: PROF. DR. MÜNİRE ERMAN AKAR
Akdeniz Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Folikül uyarıcı hormon = Follicle stimulating hormone ; Genotip = Genotype ; Gonadotropinler = Gonadotropins ; Müller kanalları = Mullarian ducts ; Over = Ovary ; Reseptörler-FSH = Receptors-FSH

Özet:
Amaç: Anatomik durumları gereği, Mülleryan agenezi olguları önemli röprodüktif sorunlar ile karşı karşıyadırlar. Bu hastaların çoğunun ovulasyon indüksiyonu, oosit toplanması ve taşıyıcı anneye transfere olanak sağlayacak en az bir normal overe sahip olduğu düşünülmektedir. Ancak Mülleryan agenezi hastalarının taşıyıcı annelik veya uterus transplantasyonu sonucu kendileriyle benzer genetik özellikte çocuk sahibi olmalarına olanak sağlayan yardımcı üreme teknikleri, ovulasyon indüksiyonu, over rezervleri ile ilgili daha fazla çalışmaya ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada 2009-2011 yıllarında Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesine başvuran Mülleryan Agenezi tanılı olgularda, over rezervlerine yönelik FSHR genotiplerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmamız, 2009-2011 yıllarında Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesine başvuran hastalarda yapılmıştır. Çalışmaya katılan tüm hastalara çalışma hakkında bilgi verildi ve onam formları imzalatıldı. Etik Kurul onayı alındı.
Kontrol grubuna seçilen hastalarda çalışmaya katılma kriteri olarak spontan gebe kalan 23-39 yaş aralığındaki hastalar seçildi. Mülleryan agenezi hasta grubunda ise kliniğimizde Mülleryan agenezi tanısı alan ya da dış merkezden bu tanı ile hastanemize refere edilen 15-39 yaş arasındaki kadınlar seçilmiştir.
Olguların genomik DNA'ları, p.Ala307Thr ve p.Ser680Asn genotiplerini değerlendirmek amacı ile periferal kandan modifiye non-enzimatik metod ile izole edildi. PZR reaksiyonu, Bio-Rad (MyCycler) ve PCR System 9700 (Gene AmpR) marka PZR cihazlarında gerçekleştirildi. Denatüre edilen PZR ürünleri ABI 3130 dizileme cihazına yüklenerek sonuçlar ABI sequence analysis v3.1 yazılım programında değerlendirildi.
Veriler SPSS (version 20.0) (SPSS, Inc., Chicago, USA) kullanılarak analiz edildi. Örnekleri tanımlamak için frekans dağılımı, ortalama, standart sapma gibi tanımlayıcı istatistikler kullanıldı. p.Ala307 ve p.Ser680 değişimleri için ayrı ayrı genotiplemelere ve gruplara göre yaşlarının karşılaştırılmasında Kruskal-Wallis analizi kullanıldı. Analizlerde farklılıkların belirlenmesi içim %95 anlamlılık düzeyi (ya da α=0.05 hata payı) kullanıldı.
Bulgular: Kontrol grubu ve Mülleryan agenezi grubu hastalar moleküler genetik analiz ve yaşları bakımından karşılaştırıldılar. Kontrol grubu hastaların yaş ortalaması 29+4,8, Mülleryan agenezi hasta grubunun yaş ortalaması 25,6+5,9'dur. İki grup arasında yaş açısından istatistiksel fark bulunmamıştır (p=0,000).
p.Ala307Thr normal allel genotipi, A/T şeklinde heterozigot görülmesi, T/T şeklinde homozigot genotip görülmesi kontrol grubu ve çalışmaya katılan tüm hasta bireyler için incelendiğinde, bu üç durumun hasta ve kontrol grubu içerisinde değerlendirilmesinde istatistiksel fark bulunmamıştır (p=0,470).
p.Ser680Asn polimorfizm kontrol grubu karşılaştırmamızda ise homozigot, heterozigot polimorfizm varlığı ve normal allel izlenme durumları istatistiksel olarak incelenmiş ve değer istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (p=0,042). Ancak bu farklılığın polimorfizmlerin kontrol grubunda daha fazla saptanması kaynaklı olduğu düşünülmüştür.
Sonuç: Mülleryan agenezi olgularının over rezervlerinin normal olduğu düşünülse de bu vakaların over rezervlerine yönelik daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Mülleryan agenezi olgularında FSHR genotiplerinin değerlendirilmesinin over rezervleri hakkında yeterli fikir vermediği, bu vakaların over rezervlerinin değerlendirilmesinde farklı yöntemlere ihtiyaç olduğu sonucuna varılmıştır

Anahtar kelimeler: Mülleryan Agenezi, FSHR Genotipleri, Overyan Rezerv.

Abstract:
Background: Due to their genital system anatomy, patients with Mullerian Agenesis face with considerable reproductive problems. Most of these patients have at least one ovary that enable ovulation induction, oocyte collection and transfer of the embrio to a gestational surrogate. More data are still needed on assisted reproduction techniques, ovulation induction and ovarian reserves which guide these patients to bear child having their genetic traits via surrogation or uterin transplantation. In this study, we aim to determine the association between FSHR genotypes and ovarian reserve in patients with Mullerian Agenesis.
Material and Methods: Our study was designed with patients who admitted to Akdeniz University Hospital between 2009 and 2011. All patients have been informed about the details of the study and have signed the consent forms. Institutional Ethical Approval was obtained for the study.
Patients at 23-39 years of age with the history of spontaneous conception were included as the control group. Case group constituted of 15-39 year-old patients with Mullerian agenesis who has been diagnosed either in our hospital or in another facility.
Genomic DNA of patients was extracted from peripheral blood via non-enzymatic method to identify p.Ala307Thr and p.Ser680Asn genotype statuses. PCR reactions have been set up in Bio-Rad (MyCycler) and PCR System 9700 (Gene AmpR) PCR devices. Denaturated PCR products were loaded into ABI 3130 sequence analyzer and analyzed via ABI Sequence Analysis v3.1 software.
Data were analyzed using SPSS version 20.0 (SPSS, Inc., Chicago, USA). Descriptive statistics such as frequency distribution, mean and standart deviation were used to define samples. Kruskal-Wallis analysis were used to compare ages between genotypes and groups for p.Ala307 and p.Ser680 changes. 95% confidence interval (or α=0.05) were used to determine differences.
Results: Case and control groups were compared in terms of molecular genetic analyses and age group. Mean ages of case and control groups were 25,6+5,9 and 29+4,8, respectively. No statistically significant difference for mean ages was found between two groups (p=0,000).
No statistical difference was found between case and control groups for distributions of p.Ala307Thr wild type, A/T heterozygote and T/T homozygote genotypes (p=0,470).
Comparision of p.Ser680Asn polymorphism genotypes revealed statistically significant difference between groups (p=0,042). However, this difference was attributed to preponderance of polymorphisms in control group.
Conclusion: Although the conclusion was made that ovarian reserves of Mullerian Agenesis cases were normal, more studies that focused ovarian reserves of those cases are still needed. We concluded that identifying FSHR genotypes in Mullerian agenesis cases couldn't give reliable information regarding ovarian reserves of these patients and alternative methods are required to assess these patients' ovarian reserves

Key words: Mullerian Agenesis, FSHR Genotypes, Ovarian Reserve