CCl4 ile oluşturulan deneysel akut hepatittemezenkimal kök hücre infüzyonununetkinliğinin ve hepatosite farklılaşmasınındeğerlendirilmesi
The evaluation of mesenchymal stem cellinfusion efficacy and hepatocytedifferentiation in experimentalCCl4 induced acute hepatitis
Yazar: ÖZLEN BEKTAŞ
Danışman: PROF. DR. DOĞAN YUSUF UZUN
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2006
Konu: Gastroenteroloji = Gastroenterology ; Hematoloji = Hematology

Özet:
Giriş: Toksik hepatit, ilaç ve diğer yabancı kimyasal maddelerin karaciğerde hasara yol
açmasıdır. Hafif nonspesifik hasardan, akut karaciğer yetmezliği, kronik hepatit, siroz,
karaciğer tümörleri, koma ve ölüme kadar uzanan bir klinik yelpazeye sahiptir. İlaca bağlı
karaciğer hasarı, sarılık nedeniyle hastaneye yatırılan hastaların %2-5'inde görülmekte ve
vakaların %30'unda akut karaciğer yetmezliği meydana gelmektedir. Bu hastalara
karaciğer transplantasyonu gerekebilmektedir.
Mezenkimal kök hücrelerin ana kaynağı kemik iliği olup; kemik, kas, kıkırdak, tendon,
yağ, sinir ve kemik iliği stromal hücrelerine farklılaşma yeteneğine sahip olan pluripotent
progenitör hücrelerdir. Kemik iliğinden izole edilen ve kültür ortamına ekilen MKH'ler,
hızlı plastik adhezyon yeteneği, yüksek çoğalma ve farklılaşma kapasitelerine sahiptirler.
Doku mühendisliği ve doku rejenerasyonu alanlarında MKH'lerin farklılaşma
potansiyellerinden yararlanılmaktadır. Bu bulgular, karaciğer patolojilerinde MKH
infüzyonunun, hepatosite farklılaşması aracılığı ile bir tedavi seçeneği olabileceği
umudunu doğurmuştur. Kronik ve fulminan karaciğer hastalıklarında karaciğer
transplantasyonu ile karşılaştırıldığında kök hücre transfüzyonu çok daha az invaziv ve
ucuz bir işlemdir
Amaç: Akut toksik hepatit nadiren fulminan seyirli olabilir ve karaciğer
fonksiyonlarının yeniden sağlanması için karaciğer transplantasyonu gerektirebilir. Bu
çalışmanın amacı, farelerde karbontetraklorür (CCl4) aracılı oluşturulan akut toksik
hepatitte, intraperitoneal yolla uygulanan MKH'lerin akut hepatit tedavisinde etkinliğinin
değerlendirilmesidir.
Metod: 15 dişi BALB/C inbred fare 3 gruba ayrıldı. Grup A'ya (n=5) CCl4
intoksikasyonu ve 24 saat sonra 5x105 MKH transplantasyonu, grup B'ye (n=5) sadece
CCl4 intoksikasyonu, grup C'ye (n=5) sadece 5x105 MKH transplantasyonu yapıldı.
MKH'ler inbred erkek farelerden elde edildi. CCl4 infüzyonu öncesi ve 24 saat sonrası
karaciğer fonksiyon testleri ölçüldü. 4 hafta sonra erkek fare MKH'lerinin dişi fare
karaciğerinde yerleşme durumunu değerlendirmek için immunfloresan ile dokularda Y
kromozomu değerlendirildi. MKH'lerin hepatosite farklılaşması immunfloresan
boyanarak, MKH transplantasyonu sonrası inflamatuar durum histolojik olarak
değerlendirildi.
Bulgular: Grup B'de 1 farede 72. saatte ölüm gözlendi, ölüm oranı %20 olarak
kaydedildi ve karaciğer histolojisinde portal-portal, portal-santral ve santral-santral
köprüleşme nekrozu tespit edildi. Grup A ve grup C'de ölüm gözlenmedi. Yaşayan
farelerin 4 hafta sonunda karaciğer histolojisi incelendi. Grupların istatistiksel analizi, vaka
sayısının yetersiz olması nedeniyle anlamlı bulunmamakla birlikte grup B'de
inflamasyonun daha yoğun olduğu görüldü. Grup C'de 1 adet farede yer yer yama tarzında
52
iltihabi hücre infiltrasyonları gözlendi. Grup A'da inflamasyon belirgin olarak daha az
kaydedildi. İmmunfloresanda dişi fare karaciğerinde Y kromozomu tespit edilmesi ile
MKH'lerin hasar halinde alıcı karaciğerine yerleştiği ve ayrıca bu hücrelerin az miktarda
albümin eksprese ettiği gözlendi.
Sonuç: Bu ön çalışmanın bulguları intraperitoneal yolla transplante edilen MKH'lerin
peritondan karaciğere mobilize olabileceğini ve hasar halinde MKH'lerin hepatosite
farklılaşırken inflamatuar reaksiyonu kontrol eden bir karaktere sahip olabileceğini telkin
etmektedir. Bu verilerin ışığında çalışmaya, farklı kontrol gruplarının da varlığında denek
sayılarını artırarak devam edilmesine karar verilmiştir.

Abstract:
Introduction: Toxic hepatitis is induced by drugs and other chemical substances. Its
wide spectrum of outcomes include from mild nonspecific injury to acute liver failure,
chronic hepatitis, may cirrhosis, liver tumors, coma and death. Drug induced liver failure is
responsible from 2-5 % of jaundice hospitalizations and 30 % of these result with acute
liver failure. In these patients liver transplantation may also be required.
The main source of mesenchymal stem cells (MSC) is bone marrow. These cells are
pluripotent progenitor cells that have the ability of differentiation into bone, muscle,
cartilage, tendon, fat, nerve and bone marrow stromal cells. MSC's that are isolated from
bone marrow and cultured have high plastic adhesion ability and high reproduction and
differentiation capacity.
MSC's differentiation potentials are used in tissue engineering and tissue regeneration.
Findings have suggested that due to the hepatocyte differentiation ability of MSC's, MCS
infusion may offer a therapeutic option in liver pathologies.
Aim: Acute toxic hepatitis rarely has a fulminant course and requires a liver
transplantation in order to restore liver functions. The aim of this study is to evaluate the
efficacy of intraperitoneal MSC transplantation in CCl4 induced acute toxic hepatitis mice
model.
Methods: A total of 15 female BALB/C inbred mice were used in 3 groups. Group A
(n=5) received CCl4 intoxication and 5x105 MSC transplantation at the 24th hour. Group B
(n=5) received only CCl4 intoxication and group C (n=5) received only 5x105 MSC
transplantation. MSCs were obtained from male mice. Before CCl4 infusion and at the 24th
hour liver function tests were studied. At the end of the 4th week Y chromosome in tissues
was evaluated by immunofluorescence to detect the presence of male mice MSC in female
mice liver. Hepatic differentiation of MSC's was evaluated by immunofluorescence
staining and inflammation in liver following MSC transplantation was evaluated
histologically.
Findings: In group B a fatality was observed at the 72nd hour. Death rate was 20% and
portal-portal, portal-central and central-central bridging necrosis were detected. There was
no fatality in other groups. At the end of the 4th week mices were sacrificed and liver
histology was evaluated. Due to the small number of the objects in study groups, statistical
tests failed to demonstrate any correlation, however, inflammation was denser in group B.
In group C a mice histology showed patch-like inflammatory infiltrations. In group A
inflammation was clearly less denser. Immunofluorescence detection of Y chromosome in
female mice liver proved establishment of MSC's in donor liver in injury.
Immunofluorescence also showed albumin expression of these MSC's.
54
Results: Early results of this study showed that intraperitonally transplanted MSCs
may mobilize to liver from periton and during an injury hepatocyte differentiation of these
MSC's may also demonstrate the effect of moderation of inflammation in liver tissue. In
the light of these findings a similar study with additional control groups and increased
subjects was planned.