Farklı kök kanal yıkama solüsyonları ve kanal dolgu patlarının biyouyumluluklarının hücre kültüründe araştırılması
Investigation of the biocompability of different root canal irrigation solutions and root canal sealers in cell culture
Yazar: CANDAN GÜRBÜZ SARIGÖL
Danışman: PROF. ÖZANT ÖNÇAĞ
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pedodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyomühendislik = Bioengineering ; Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Genotoksisite = Genotoxicity ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kök kanal dolgu materyalleri = Root canal filling materials ; Kök kanalı irrigantları = Root canal irrigants ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Endodontik tedavilerde kullanılan kök kanal yıkama solüsyonları ve kanal dolgu patlarıperiapeksteki dokularla temas halindedir. Bu maddeler olası sitotoksik ve genotoksik etkileriile periapeksteki canlı dokulara verebilecekleri zarar açısından incelenmeye degerdir.Bu çalısmanın amacı, endodontik tedavilerde kullanılan çesitli yıkama solüsyonları(NaOCl, EDTA, klorheksidin glukonat (CHX), CHX+setrimid) ve kanal dolgu patlarının(Ca(OH)2+steril distile su, Ca(OH)2+gliserin, MTA, Diaket, AH26, AHPlus, Endometazon)MTT ve NR test yöntemleri ile devamlı hücre hattı olan 3T3 ve primer/diploid hücre hattıolan insan periodontal ligament fibroblast (HPDLF) hücreleri üzerindeki sitotoksik etkilerinidegerlendirmek ve olusacak olası genotoksik etkilerini de akridin oranj/etidyum bromidyöntemi kullanarak HPDLF hücreleri üzerinde belirlemekti.Kanal yıkama solüsyonları hücre besiyeri ile seyreltilerek test edilecekkonsantrasyonlarına getirildi. Kanal dolgu patları ise içi bos politetrafloroetilen polimersilindirlere yerlestirilerek hücre kültürü tasıyıcılarına transfer edildi. Yıkama solüsyonları 1,2, 4 saat, kök kanal dolgu patları ise 1, 24 saat ve 7 gün HPDLF ve 3T3 hücreleri ile temastabırakıldı. Test süreleri sonunda plakalara MTT veya NR test solüsyonları eklendi ve 3 saat37ºC'de etüvde bekletildi. Daha sonra optik yogunluklar mikroplaka okuyuculuspektrofotometrede okutuldu.2Apoptotik etkilerin belirlenebilmesi için, HPDLF hücreleri yıkama solüsyonları ile 2saat, kanal dolgu patları ile de 24 saat muamele edildi. Bu süreler sonunda akridinoranj/etidyum bromid çalısma solüsyonu eklenerek ve apoptotik ve nekrotik hücre sayılarıfloresan mikroskop kullanılarak belirlendi. Elde edilen veriler istatistiksel olarak varyansanalizi ve post Hoc yöntem Tukey HSD ve Dunnett T3 kullanılarak degerlendirildi (pdegeri<0.05).Test edilen tüm yıkama solüsyonlarının artan konsantrasyonları ile birlikte sitotoksiketkilerinin de arttıgı belirlendi (p<0.05). Esit konsantrasyonlarda, CHX ve CHX+setrimid' inNaOCl ve EDTA solüsyonlarından daha sitotoksik oldugu saptandı (p<0.05). Kanal dolgupatlarının ise sitotoksik etkilerinin zamana baglı olarak arttıgı belirlendi (p<0.05). En azsitotoksik etki MTA, en fazla sitotoksik etki Diaket, AH26, AHPlus, Endometazon kanaldolgu patlarında gözlendi (p<0.05).Apoptotik etkiler incelendiginde ise, en fazla apoptotik etki, EDTA'nın %0,001 veCHX'nin %0,01 ve %0,1 konsantrasyonlarında saptandı (p<0.05). Kök kanal dolgu patlarındaise en fazla apoptotik etki AH26 ve AHPlus kanal dolgu patlarında gözlendi (p<0.05). En azapoptotik etki ise Ca(OH)2+steril distile su ve MTA kanal dolgu patlarında belirlendi(p<0.05).Anahtar Kelimeler: nsan periodontal ligament fibroblastı, kök kanal yıkama solüsyonları,kök kanal dolgu patları, sitotoksisite, genotoksisite, apoptozis

Abstract:
Root canal irrigation solutions and root canal sealers using in endodontic treatments arein close contact with periapical tissues. It is worth to examine the probable cytotoxic andgenotoxic effects of these materials to the periapical living tissues.The aim of this study was to evaluate the cytotoxic effects of various root canalirrigation solutions (NaOCl, EDTA, chlorhexidine gluconate (CHX), CHX+cetrimid) androot canal sealers Ca(OH)2+steril distilled water, (Ca(OH)2+glycerin, MTA, Diaket, AH26,AHPlus, Endomethazone) with MTT and NR assays on 3T3 permanent cell line and humanperiodontal ligament fibroblasts (HPDLF) cells and to determine the probable genotoxiceffects on HPDLF cell line using acridine orange/ethidium bromide method.Root canal irrigation solutions were diluated with cell culture medium for the testconcentrations. Root canal sealers were placed to a polytetraphloroethylene polymer cylinderand transfered to the cell culture inserts. Irrigation solutions were in contact for 1, 2, 4 hoursand root canal sealers were in contact for 1, 24 hours and 7 days with HPDLF and 3T3 cells.At the end of the test periods MTT and NR test solutions were added to the plates andincubated for 3 hours at 37ºC. Then optic densities were read by using a microplate readerspectrophotometer.HPDLF cells were in contact with root canal irrigation solutions for 2 hours and rootcanal sealers for 24 hours to determine the apoptotic effects. At the end of these time periodsacridine orange/ethidium bromide working solution was added and number of apoptotic andnecrotic cells were determined using flourecance microscope. The obtained data wereanalyzed statistically by one-way analysis of variance and post hoc tests Tukey HSD andDunnett T3 (p-value<0.05).It was determined that the cytotoxic effects of all tested irrigation solutions increased asthe concentration increased (p<0.05). At the same concentration, CHX and CHX+cetrimidwere more cytotoxic than NaOCl and EDTA solutions (p<0.05). It was also designated thatroot canal sealers? cytotoxicity increase in a time-dependent manner (p<0.05). MTA rootcanal sealer showed least cytotoxicity, Diaket, AH26, AHPlus, Endomethazone root canalsealers showed the highest cytotoxicity (p<0.05).When the apoptotic effects of root canal irrigation solutions examined, the highestapoptotic effects were established in %0.001 concentration of EDTA and %0.01, %0.1concentrations of CHX (p<0.05). Among the root canal sealers, AH26 and AHPlus showedthe highest apoptotic effects and Ca(OH)2+steril distilled water and MTA showed the leastapoptotic effects (p<0.05).Keywords: Human periodontal ligament fibroblasts, root canal irrigation solutions, root canalsealers, cytotoxicity, genotoxicity, apoptosis.