Enalapril maleat,HL-60 akut miyeloid lösemi hücre dizisnde STAT sinyal yolağı üzerinden sitotoksik etki göstermektedir
Enalapril maleate has cytotoxic effect in HL 60 leukemic cells by altering STAT signaling pathway
Yazar: ÖZLEM PURÇLUTEPE
Danışman: DOÇ. DR. GÜRAY SAYDAM
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: AKUT = Search and Rescue Society ; Enalapril = Enalapril ; HL60 = HL60 ; Hücre dizisi = Cell line ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Lösemi-miyeloid-akut = Leukemia-myeloid-acute ; Sitokinler = Cytokines ; Sitotoksinler = Cytotoxins ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Amaç: Akut lösemi tedavisinde birçok kemoterapötik ajan kullanılmakta fakat kesintedavisi henüz sağlanmamaktadır.Bu çalışmada yapılan deneylerle, Tripan mavisicanlılık testi kullanılarak hücre canlılıkları ve sitotoksisite değerlendirmesi, XTTyöntemi ile kolorimetrik olarak % sitotoksisite değerlendirmesi ve potansiyel hedefolan STAT yolağı üzerine enalaprilin etkilerini göstermek amaçlanmıştır.Yöntem: Çalışmada HL 60 Akut miyelid lösemi hücre dizisi enalapril maleat ilemuamele edilmiş. 0.,24.,48.,72. ve 96. saatlerdeki hücre canlılıkları tripan mavisiyöntemi ile kontrol edilmiş, XTT yöntemi ile sitotoksisitelerine bakılmış, Anneksin V ileapopitoziz ve PCR yöntemi ile STAT mRNA ekpresyonlarına bakılmıştır.Sonuçlar: Tripan mavisi ile yapılan bu deneylerde, enalaprilin artan dozlarındayaşayan hücre sayısının orantısal olarak azaldığı görülmüştür. Enalaprilin, doz vezamana bağlı olarak sitotoksik özellik gösterdiği ve IC50 dozunun 7 uM olduğusaptanmıştır. Enalapril ile muamele edilen HL60 lösemi hücrelerinde, zamanabağımlı olarak STAT3 ekspresyonu PCR metodu ile araştırılmış, ve STAT3ekspresyonunun, kontrol grubuna oranla, enalapril ile muamele edilmiş hücrelerdekısmen azaldığı saptanmıştır.Bu azalmadaki farkın istatiksel anlam ifade etmediğigörülmüştür (p>0.05). STAT5A ekspresyonunun, kontrol grubuna oranla, enalapril ilemuamele edilmiş hücrelerde belirgin azaldığı saptanmıştır.Bu azalmadaki farkınistatiksel anlam ifade ettiği görülmüştür (p<0.05). STAT5B ekspresyonunun, kontrolgrubuna oranla, enalapril ile muamele edilmiş hücrelerde anlamlı olarak değişmediğisaptanmıştır.Bu değişimin istatiksel anlam ifade etmediği görülmüştür (p>0.05).Enalaprilin 7 uM dozu ile muamele edilen HL 60 hücreleri 24 saatlik aralarlaAnneksin V ile değerlendirildiği zaman, apoptotik hücre sayılarında ilk 48 saat içindebir artış olduğu, 72. saatten sonra bu farkın kontrole oranla ortadan kalktığıizlenmiştir. Ancak ilk 48 saatte gözlenen apoptotik hücre oranı %20 olarak kalmış vebu fark istatiksel bir anlam kazanmamıştır (p>0.05)Tartışma: Enalapril relatif olarak yüksek dozlarda olsa da, HL60 hücre dizisinesitotoksik etki gösteririr ve bunu STAT ekspresyonlarını etkileyerek yapar. Ancakapoptozisi uyarmamaktadır.

Abstract:
Purpose: Many chemotherapeutic agents have been used in the treatment of acuteleukemia, but not yet provided a definitive treatment. The aims of this study were toevaluate the potential cytotoxic effect of enalapril in leukemia by using theassessment of cell viability and cytotoxicity with Trypan blue viability test,colorimetricly with XTT method and to show the potential effects of enalapril in theSTAT pathway which would be potential target.Method: In this study acute leukemia cell line HL60 was treated with enalaprilmaleate in dose and time dependent manner. Cell viability was assessed at 0, 24th,48th,72 nd and 96 th hour with tripan blue method and its cytotoxcicity was checkedby XTT method, we evaluated apoptosis by using annexin V and STAT3, 5a and 5bmRNA expressions were evaluated by PCR method.Results: According to the results obtained in our experiments, enalapril was found toinduce cytotoxicity in HL 60 cells in dose and time dependent manner. Its IC50 dosewas calculated as 7 uM . In HL60 leukemia cells treated with doses of 7 um enalapril,time-dependent expression of STAT3 was investigated with PCR method and it wasshowed the partially reduced STAT3 expression in enalapril-treated cells when itscompared with control group. This reduction was not statistically significant (p>0.05).STAT 5a expression was significantly decreased in enalapril treated cells and thisdifference was statistically significant (p<0.05). STAT 5b expression was notchanged significantly in enalapril-treated cells when its compared with control group(p>0.05). When we assessed the apopitosis with annexin V method in enalapriltreated hl-60 cells, it was detected that tehre was a slight increase in the number ofapoptotic cells within first 48 hours and the vanishing of this difference after the 72ndhour. However the rate of the apopitotic cells within 48 hours remained as 20% and itwas not statistically significant (p>0.05)Conclusion: Although relatively high doses enalapril was showed cytotoxic effects toHL60 cells by changing STAT5a expression, apopitotic cell death wa snot induced. Itis needed to have further studies to clarify the underlying mechanism of enalaprilinducedcytotoxicity in HL60 leukemic cells.