Toprak solucanlarından elde edilen sölom sıvılarının çeşitli hücreler üzerine etkisi
The effect of coelomic fluid of earthworms against various cells
Yazar: SERKAN AYDİLEK
Danışman: DOÇ.DR. GÜLRUH ULAKOĞLU
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2005
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
ÖZET?TOPRAK SOLUCANLARINDAN ELDE EDİLEN SÖLOM SIVILARININÇEŞİTLİ HÜCRELER ÜZERİNE ETKİSİ?Biyolojik yönden aktif moleküller, devam etmekte olan evrim sürecinin ilkzamanlarından beri mevcutturlar. Aslında omurgasızlar, omurgalılar ve bitkilermilyonlarca yıldan beri benzer bağışıklık savunucusu moleküllerdenyararlanmaktadırlar. Omurgasız hayvanların hayatta kalma başarısı ve her ekolojik niştekoloni meydana getirme yeteneği, enfeksiyonlara karşı etkili bir immün sisteme sahipoluşlarından dolayıdır. Omurgasızların bağışıklık sistemi ile ilgili çalışmalarincelendiğinde, kendinden olmayan yabancı organizmalara karşı, omurgasızların vücutsıvıları ve hücreleri ile savunma yaptığı görülür.Toprak solucanı sölom sıvısı bakteriyostatik, proteolitik, sitolitik, mitojenik vehemaglütinik aktiviteler içeren farklı biyolojik fonksiyonlar göstermektedir. Topraksolucanları ayrıca yüksek rejenerasyon kabiliyetlerini de savunma sistemlerinin önemlibir unsuru olarak kullanmaktadırlar. Bazı karsinojenlere karşı bağışıktırlar ve vücuttan,enjekte edilmiş karsinojenleri temizleyebilirler.İnsanlık için kanser, bir numaralı öldürücü hastalıktır. Kanser hücreleri kesin sınırlarlaayrılmaksızın kendi aralarında sınıflandırılabilir, bu sınıfların sahip olduklarıbiyokimyasal özellikler birbirlerinden farklılık gösterir. Kansere karşı uygulananişlemler için birçok farklı yol olmasına rağmen, uygulamanın yararlı olması durumuender rastlanan bir durumdur. Bu doğrultuda, toprak solucanlarından elde edilen sölomsıvılarının normal ve anormal karakterli hücreler üzerindeki etkilerinin araştırılmasıyeni ufukların açılmasını sağlayabilir.Çalışmamızda toprak solucanlarından elde edilen sölom sıvısının çeşitli dozlarınınmemeli standart tümör hücreleri (Ehrlich ascites tümör ve HeLa) ve embriyonik farefibroblast hücreleri üzerine antitümöral ve sitotoksik etkisinin araştırılmasıamaçlanmıştır. Ayrıca böyle bir etkinin tespit edilmesi halinde normal karakterlihücrelere toksik etki göstermeyip, anormal karakterli hücrelere toksik etki gösterendozun da tespit edilmesi hedeflenmiştir.Çalışmamızda in vivo koşullar altında sölom sıvısının Ehrlich ascites tümör (EAT)hücreleri üzerine etkisi araştırılmıştır. Farelerin intraperitonal bölgesine 3Ã106 EAThücresi aşılanmış ve tümör oluşumu sağlanmıştır. Tümör oluşumunu takiben sölomsıvısının HBSS (Hanks' Balanced Salt Solution) ile seyreltilmiş 1/10, 1/100, 1/1000,1/5000 ve 1/10000 dozları farelere enjekte edilmiştir. Fareden çekilen tümör hücreleriTripan mavisi ile canlılık testine tabi tutularak sayılmış ve sölom sıvısının tümörgelişimine etkisi gözlenmiştir. In vitro olarak da embriyonik fare fibroblastı (EMF),EAT ve HeLa hücre kültürleri hazırlanmış ve kültür ortamına medyumla (%90 Medium199+%10 Fetal Bovine Serum) 1/100, 1/1000 ve 1/5000 oranlarında seyreltilmiş sölomsıvısı dozları konulmuştur. Belirli saatlerde Tripan mavisiyle canlılık testi uygulanaraksayımlar yapılmış ve sölom sıvısının bu hücreler üzerine etkisi kaydedilmiştir.Sonuç olarak, toprak solucanlarından elde edilen sölom sıvılarının hem in vivo hem dein vitro olarak sitotoksik etkisi gözlenmiş olup, bu etkinin normal karakterli hücreler vevanormal karakterli hücreler arasında farklılık gösterdiği saptanmıştır. Sölom sıvısıtümör hücreleri üzerine fibroblast hücrelerine olduğundan daha fazla öldürücü etkigöstermektedir.vi

Abstract:
SUMMARY?THE EFFECT OF COELOMIC FLUID OF EARTHWORMS AGAINSTVARIOUS CELLS?Biologically active molecules are present since early phases of evolution onwards. Infact, invertebrates, vertebrates and plants utilize analogous immunodefense moleculesfor millions of years. The success of surviving of invertebrates and their colony formingability in every ecologic niche due to their effective immun system against infections.The studies on invertebrates immune system show that, invertebrates protect themselveswith their body fluid and cells, against foreign organisms.The coelomic fluid of earthworms exhibits different biological functions, includingbacteriostatic, proteolytic, cytolytic, mitogenic and hemagglutinic activities.Earthworms use their ability of regeneration as an important part of their immunesystem. They have immunity for some carcinogens and they can clean carcinogensinjected by the body.Cancer is one of the major `killer? diseases in mankind. In term of growth characters,cancer cells can divide indefinitely, is anchorage independent, and have distinguishedbiochemical characters. Although there are many ways to treat cancer, the treatmentefficacy is only marginal. In this respect, investigations about the effect of coelomicfluid, which is obtained from earthworms, against normal and abnormal cells canprovide to open new scopes.In our study, it was aimed to investigate the antitumoral and cytotoxic effect of differentdosages of coelomic fluid obtained from earthworms against mammalian standardtumor cells (Ehrlich Ascites Tumor and HeLa) and embryonic Mouse fibroblast cells. Ifsuch effect exists, then it is also aimed to find out the dose which is not have toxiceffect against normal cells but shows toxic effect against abnormal cells.In our study, it was examined the effect of coelomic fluid against EAT cells in vivo.3Ã106 EAT cells were inoculated into intraperitoneal area of mice and it was providedthe formation of tumor. After that formation, and the 1/10, 1/100, 1/1000, 1/5000 and1/10000 dosages of coelomic fluid that was diluted with HBSS (Hanks? Balanced SaltSolution) were injected to mice. Tumor cells which were pulled out from mice wereeliminated after vitality test with Trypan blue and it was observed the effect ofcoelomic fluid to growth of tumor. Embryonic Mouse fibroblast, EAT and HeLa cellscultures were prepared in vitro and 1/100, 1/1000, 1/5000 dosages of coelomic fluid(which was diluted with medium [%90 Medium 199+%10 Fetal Bovine Serum (v/v)])were added to tissue culture flasks. At certain hours, after vitality test with Trypan bluecells were counted and the effect of coelomic fluid against these cells was recorded.As a result, the cytotoxic effect of coelomic fluid of earthworms both in vivo and invitro was observed and it was determined that this effect shows differences for normalcells and abnormal cells. Coelomic fluid showed stronger fatal activity against tumorcells than fibroblast cells.vii