ICSI ve IVF işlemi uygulanmış kardeş oositlerde embriyo gelişiminin dinamik embriyo görüntüleme sistemi ile morfokinetik özellikler yönünden karşılaştırılması
ICSI and IVF embryo development process in applied brother of oocytes morfokinetik comparison features in terms of dynamic embryo monitoring system
Yazar: TURAN AKSOY
Danışman: PROF. DR. ENGİN ORAL
Yeni Yüzyıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Embriyo gelişimi = Embryonic development ; Fertilizasyon = Fertilization ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Oositler = Oocytes ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
İlk uygulanmaya başladığı dönemde özellikle şiddetli erkek infertilitesi vakalarının tedavisi amacıyla gerçekleştirilen intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) tekniği, artık erkek infertilitesi dışında da uygulanabilen standart bir fertilizasyon metodu olarak kabul edilmektedir. Bununla birlikte, uygulamanın invaziv olması ve uygulama esnasında pek çok doğal aşamayı atlatması nedeni ile tedavi ve sonrasındaki sonuçları halen araştırılan ve tartışılan bir yöntemdir. 
Günümüze kadar gerçekleştirilen ve ICSI tekniğinin in vitro fertilizasyon (IVF) tekniğine kıyasla embriyo gelişimi üzerindeki olası farklı etkilerinin incelendiği çalışma sayısı kısıtlıdır. Sonuçları büyük oranda etkileme özelliğine sahip gamet kaynaklı değişkenlerden mümkün olduğu kadar bağımsız olarak ve sadece tekniğin uygulanma şekli ile ilgili olası sonuçlarının ölçülebildiği vakalar ile kurgulanan (Erkek faktörü olmayan ve kardeş oositlerin kullanıldığı) ve gerçekleştirilen az sayıdaki çalışma da olası farklılıkları statik embriyo kültür şartlarında ve farklı sperm özelliklerindeki vakalarda değerlendirmiş olup, olası morfokinetik farklılıkların detaylı olarak incelenebileceği bir deneysel altyapıya sahip değillerdir.
Bu çalışmada, şiddetli erkek faktörü olmayan 30 vakada, IVF ve ICSI yöntemleri ile insemine edilen 723 kardeş oositin fertilizasyon sonrası oluşturduğu 344 zigot (IVF ile fertilize olmuş 165 zigot ve ICSI ile fertilize olmuş 179 zigot) dinamik embriyo kültür sistemleri ile büyütülerek erken ve geç dönem embriyo morfokinetik değişimleri gözlenmiş, karşılaştırılmış ve özellikle kullanılan fertilizasyon yöntemine bağlı olası morfokinetik değişiklikler mümkün olan gelişim dönemleri içerisinde analiz edilmiştir. 
Bulgular, gruplar arasındaki olası morfokinetik farklılıkların karşılaştırılması için zamansal başlangıç noktasının inseminasyon saati olarak alındığı incelemede, her iki grup arasında embriyo takibinin yapıldığı en son aşama olan hatching blastosist aşamasına (tHB) kadar gözlenen farklı parametreler arasında istatistiki olarak anlamlı bir fark olmadığını (p<0,05), buna karşın ayni verilerin zamansal başlangıç noktasının pronükleusların silinmesinin gözlenmeye başladığı saat olarak alındığı şekli ile incelenmesi sonrasında IVF grubundaki zigotların ICSI grubundaki zigotlara kıyasla anlamlı bir oranda (p=0,02) erken saatte ekspanse blastosist aşamasına ulaştıklarını göstermiştir.
Elde edilen bulgular ayrıca erkek faktörü olmayan olgularda ICSI yöntemi ile fertilize olan embriyoların IVF yöntemi ile fertilize olan embriyolara kıyasla son derece benzer bir embriyo morfokinetik gelişim sürecine sahip olduğunu göstermektedir. Morfokinetik karşılaştırmanın tPNf zamansal değişkenine göre yapıldığı ve IVF grubunda anlamlı oranda ekspanse blastosist elde edildiğini gösterir bulguların daha fazla sayıda vaka ve embriyo üzerinde doğrulanmasına ihtiyaç vardır.

Abstract:
Although at the very beginning, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) was especially described for the treatment of severe male infertility in IVF, it is now well recognized as a standard fertilization method which is applied in the absence of a male factor. However, the invasiveness of the procedure itself and because it skips many natural steps of the fertilization process, ICSI outcomes during and after the IVF treatment are still under investigation, and the method is still discussed.
Number of studies investigating the possible effects of the ICSI technique compared to classical IVF regarding embryo development are limited. Analyses planned in order to totally or partially eliminate gametes-related variables (e.g. no male factor, and including sibling oocytes) to obtain results of the sole technique and its application, were realized in static or standard embryo culture conditions and were evaluated in cases with different sperm characteristics, thus were not examined in a detailed morphokinetic experimental environment.
This study included 723 sibling oocytes belonging to 30 couples without severe male infertility and inseminated either with IVF or ICSI. After fertilization, 344 zygotes were obtained (n=165 from IVF and n=179 from ICSI) and were cultured in a dynamic embryo culture system in order to observe and to compare early and late morphokinetic parameters to outline probable differences in developmental stages regarding the fertilization method employed.
When morphokinetic parameters were compared using the insemination time as the starting point, no significant statistical differences were observed for all developmental parameters annotated until the hatching blastocyst stage (tHB) (p<0.05). However, when the pronuclei fading time was taken as t0, zygotes obtained from IVF were found to develop into expanded blastocysts earlier than those derived from ICSI (p=0.02).
The findings also show that in couples without male infertility, embryos fertilized with ICSI had an extremely similar morphokinetic developmental pattern when compared to their siblings fertilized by IVF. In conclusion, results obtained by using the pronuclei fading time (tPNf) as the starting point of the morphokinetic analyses have to be confirmed in a larger set of patients and sibling embryos.