Miyeloproliferatif neoplazi kökenli hücre dışı genomik materyallerin endotel hücrelere etkisinin incelenmesi
An analysis of the effect of myeloproliferative neoplasm-derived extracellular genomic materials on endothelial cells
Yazar: CEMAL ÇAĞIL KOÇANA
Danışman: DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology
Dizin: Endotelyal hücreler = Endothelial cells ; Genom = Genome ; JAK 2 = JAK 2 ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nükleik asit = Nucleic acids ; Transfeksiyon = Transfection

Özet:
Miyeloproliferatif Neoplaziler (MPN) kan hücre oluşumunu etkileyen hematopoetik kök hücrelerin (HKH) sebep olduğu bir hastalık grubudur. Bu hastalık farklı HKH hatlarını etkileyebilir ve farklı alt gruplarda incelenebilir. MPN için en kritik mutasyonlar BCR-ABL1 ve JAK2V617F'dir. Bu mutasyon MPN hasta endotel hücreler (EH)'de tespit edilmiş ve hastalıkta sıklıkla görülen trombo-embolik olaylarda rolü olduğu düşünülmüştür. Ancak henüz oluş mekanizması tam bilinmemektedir. Genometastaz, bir onkogenin kanser hücresinden salınarak dolaşım yoluyla farklı bir bölgeye taşınması ve bu bölgede bulunan bir hücreye girmesiyle metastaza sebep olmasını temel almaktadır. Bu çalışma, EH'de tespit edilmiş mutasyonun genometastaz yoluyla oluştuğunu ve genometastaz sonrasında EH'de bir takım değişikliklere sebep olduğunu göstermeyi amaçlamaktadır. Bunun için ilk olarak biallelik JAK2V617F
taşıyan insan eritrolösemi(HEL) ve BCR-ABL1 taşıyan K562 hücre hatlarından toplanan serumlardan DNA izolasyonu yapıldı ve hücrelere ait mutasyonlar tespit edildi. Ardından, insan umblikal ven EH(HUVEC) hattı, toplanan serumlar ile ayrı ayrı 48 saat süresince kültür edildi. Kültür sonucunda transfekte HUVEC hücreleri toplanarak DNA izolasyonu yapıldı ve EH'lerde JAK2V617F ve BCR-ABL1 mutasyonları tespit edildi. Mutant HUVEC'ler; apoptoz, proliferasyon ve trombotik olaylarda rolü olan EH yüzey proteinleri (CD106, CD141, CD146, CD309, CD54, CD31 ve CD142) açısından akım ölçerde incelendi. Mutant EH'lerde kontrole göre CD141 (Trombomodulin)'de azalma ve CD142 (Doku faktörü)'de artma istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0.05). Mutant HUVEC'ler çoğaltıldı ve pasajlanarak her iki mutasyonun hücre genomuna entegrasyonu tespit edildi. Sonuç olarak, literatürde ilk defa serumda bulunan JAK2V617F, EH genomuna entegre oldu ve EH'lerde fonksiyonel değişikliklere neden
oldu. Bu çalışma ile genometastasın kanserogenezdeki önemine ışık tutulmuştur.

Abstract:
Myeloproliferative Neoplasm(MPN) is basically a group of hematopoietic stem cell(HSC) caused disease affecting blood cell formation. This disease can affect different HSC lines and can be examined in different subgroups. JAK2V617F and BCR- ABL1 mutations are critical mutations for MPNs. These mutations were detected in MPN patient endothelial cells(EH) and were thought to play a role in thrombo-embolic events frequently seen in the disease. However, the exact mechanism of its occurrence is not yet known. Genometastasis is based on release of an oncogene from a cancer cell to circulation for transportation, transfection of a susceptible cell, and becoming malignant of the cell. This study aims to show that the detected mutation in EH occurs through genometastasis and causes some changes in EH after genometastasis. Firtsly, DNA from sera collected from biallelic JAK2V617F mutation carrier Human Erytroleukemia(HEL) cells and BCR-ABL1 carrier K562 cell line was isolated; mutation was detected in HUVECs. Mutant HUVECs were examined for apoptosis, proliferation,
and surface proteins(CD106, CD141, CD146, CD309, CD54, CD31 ve CD142). Although there were no significant changes for apoptosis, proliferation and some surface proteins, the decrease and increase in CD141 and CD142 proteins compared to control, respectively, were statistically significant. Mutant HUVEC was cultivated and both mutations were detected again despite sub-culturing. As a result, extracellular genomic materials in the circulation can integrate into the genome of the endothelial cells and cause changes in the protein level of the cells. This study sheds light on the importance of genometastasis in carcinogenesis.