Pediococcus acidilactici PBF suşunda bakteriyosin üretiminden sorumlu genin aktarımı
Transfer of gene responsible for bacteriocin production in Pediococcus acidilactici PBF
Yazar: PELİN DOĞAN
Danışman: DOÇ. DR. ÖZLEM OSMANAĞAOĞLU
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Laktik asit bakterileri gıda endüstrisinde starter kültür olarak kullanılmaları, pilazmit tarafından kodlanan bakteriyosin üretim özelliklerinden dolayı gıdalarda raf ömrünü uzatmak için potansiyel biyolojik koruyucu rolüne sahip olmaları, probiyotik ürünlerin içeriğinde bulunmaları ile birlikte bazı LAB'lerinin gıdalarda bozulmaya sebep olmaları bu bakteri grubunu hem endüstriyel açıdan hem de bilimsel arenada üzerinde yoğun çalışmaların yapıldığı oldukça önemli bir grup haline getirmiştir.Çalışmamızda, gıda-kaynaklı Pediococcus acidilactici PBF suşunun birçoğu gıda bozulması ve gıda kaynaklı hastalıklar ile yakından ilişkili olan Pediococcus, Leuconostoc, Lactobacillus, Lactococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Clostridium ve başta Listeria monocytogenes olmak üzere Listeria'nın birçok türüne karşı antimikrobiyal bir madde ürettiği gösterilmiştir. Proteolitik enzimlere duyarlı, ısıya ve organik çözücülere karşı dirençli ve geniş bir pH aralığında aktif olan bu antimikrobiyal madde çalışmanın ilerleyen aşamalarında ?anti-listerial bakteriyosin? olarak adlandırılmıştır. Agaroz jel elektroforezi ve pilazmit giderim (?curing?) çalışmaları Pediococcus acidilactici PBF suşunda bakteriyosin üretiminin 9.42kbp moleküler ağırlığına sahip bir pilazmit DNA (pPF1.0) tarafından kodlandığını göstermiştir. Bakteriyosine karşı konukçu bağışıklığının pPF1.0 pilazmiti ile ilişkili olduğu bulunmuştur. Pediococcus acidilactici PBF suşunda bakteriyosin üretiminden sorumlu pilazmit DNA (pPF1.0) kit kullanımı ile jel üzerinden elde edilerek saflaştırılmış ve bakteriyosin üretmeyen Pediococcus pentosaceus LAB (Bac-) suşuna elektroporasyon ile transforme edilmiştir. Elektrotransformasyon neticesinde artık bakteriyosin üretmeye/eksprese etmeye başlayan suş Pediococcus pentosaceus PG olarak isimlendirilmiştir.

Abstract:
Lactic acid bacteria are widely used as starter cultures in the food industry. Because of their plasmid-coded bacteriocin production speciality, they make expire date of the food longer and thought to be potential biopreservativies. This group of bacteria become very important both industrially and scientificaly in terms of their usage in probiotic products and some of them causes food spoilage.A food-grade Pediococcus acidilactici PBF was shown to produce an antimicrobial agent active against several species of Pediococcus, Leuconostoc, Lactobacillus, Lactococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Clostridium and Listeria; many of which are associated with food spoilage and health hazards of food origin. This antimicrobial agent is named as anti-listerial bacteriocin as it was found to be sensitive to proteolytic enzymes, effective against food-borne pathogen Listeria monocytogenes, resistant to heat and organic solvents and active over a wide range of pH. Agarose gel electrophoresis of plasmid DNA and plasmid curing experiments suggested that bacteriocin production in Pediococcus acidilactici PBF was encoded on a plasmid with a molecular weight of 9.42 kbp. Host immunity to bacteriocin was also found to be linked to this plasmid, pPF1.0. Sensitive bacteriocin nonproducer Pediococcus pentosaceus LAB strain was transformed by electroporation with gel purified pPF1.0, a plasmid DNA responsible for bacteriocin production in Pediococcus acidilactici PBF and the strain which was then started to produce /express bacteriocin was named Pediococcus pentosaceous PG