Askorbik asit, glutatyon ve taurin kompleksinin sperm kriyoprezervasyonuna motilite ve DNA fragmantasyonu açısından etkisi
The effect of ascorbic asid, glutathione and taurine complex on sperm cryopreservation in term of motility and dna fragmentation
Yazar: SEREN ÇELİK
Danışman: PROF. DR. ÜMİT ÖZEKİCİ
Maltepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Klinik Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Askorbik asit = Ascorbic acid ; DNA = DNA ; Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Glütatyon = Glutathione ; Sperm = Spermatozoa ; Taurin = Taurine ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Bu çalışmanın amacı sperm dondurma medyumuna taurin, glutatyon ve askorbattan oluşan antioksidan kompleksi eklenmesinin, dondurma işleminde oluşacak sperm hasarına etkisini incelemektir.
Çalışmada, Özel Adatıp Hastanesi Üremeye Yardımcı Tedavi Merkezine semen analizi için başvuran hastaların ejakülat örnekleri kulanıldı. Semen analizi WHO kriterlerine göre normal çıkan hastalarda halosperm yöntemiyle DNA fragmantasyonu analizi yapıldı; semen örneklerinde direk çalışıldı. Kalan ejakülat dondurma yapmak için gradient yöntemiyle hazırlandı. Hazırlanan 1 ml sperm ikiye bölündü ve 0,5 ml örnek antioksidan kompleksi eklenen medyum ile, 0,5 ml örnek ise antioksidan eklenmeyen medyum kullanılarak donduruldu. Örnekler dondurulduktan 1 ay sonra çözdürme işlemi yapıldı. Çözdürülen spermler ilk olarak makler chamber ile analiz edildi ve motilite tayini yapıldı. Antioksidanlı ve antioksidansız örneklerde ayrı ayrı halosperm yöntemiyle DNA fragmantasyon analizi yapıldı. Tüm veriler kayıt edildi ve SPSS programıyla analiz edildi. 
Verilerin değerlendirilmesi sonucu, dondurma çözdürme sonucu antioksidan eklenen ve eklenmeyen grupların ikisinde de dondurma öncesine oranla motilitede anlamlı bir düşüş görülmüştür (34.8 ±5.32 vs 65.5 ±6.42 , p1<0.05 ; 38.3± 6.22 vs 65.5 ±6.42 , p2<0.05). Kontrol ve deney gruplarının ikisinde de dondurma öncesine oranla DNA fragmantasyonunda anlamlı bir artış görülmüştür (52.3±5.42 vs 26.4±3.12 , p1<0.05 ; 47.5±4.7 vs 26.4±3.12 , p2<0.05). Ancak, deney grubu spermlerinde kontrol grubuna kıyasla kryo hasar az miktarda düşük olmasına karşın, anlamlı fark bulunamamıştır (47.5±4.7 vs 52.3±5.42 , p>0.05). 
Dondurma medyumuna antioksidan eklediğimiz bu çalışmamızda, anlamlı bir fark görülmese de, antioksidan eklemenin sperm dondurma üzerinde pozitif etkisi olabileceği gösterilmiştir. Bu durum hasta sayısı, hastaların demografik özellikleri, toplumun karakteristik bazı özelliklerinden veya oluşturulan antioksidan kompleksinden kaynaklanıyor olabilir. Anlamlı sonuçlar için  ek çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
The aim of this study is to investigate whether the addition of the antioxidant complex including taurine, ascorbate and glutathione into the sperm freezing medium affects the damage to sperm during the freezing process.
In this study, ejaculate samples of patients who applied for semen analysis to the assisted reproduction unit in Private Adatip Hospital were used. DNA fragmentation analysis was performed with halosperm method for the patients whose semen parameters were within normal range according to WHO criteria; and semen samples were used for halosperm method directly. Remaining ejaculates were washed with gradient method in order to be frozen. 1 ml sperm samples that were prepared for each patient were divided into two parts:  0,5 ml of sample was mixed with antioxidant and frozen and the other 0,5 ml was frozen without the addition of antioxidant complex.  One month later, thawing procedure was implemented. First of all, the number of sperm cells were counted on makler chamber just after thawing, and motility was determined for each sample. DNA fragmentation analysis was done on samples frozen with antioxidants and samples without antioxidants separately with halosperm method. All data were analyzed by SPSS program.
After evaluation of the data, it was found that freezing process resulted in a decrease in motility as expected (34.8 ±5.32 vs 65.5 ±6.42 , p1<0.05 ; 38.3± 6.22 vs 65.5 ±6.42 , p2<0.05). Also; it was observed that freezing caused an increase in the ratios of DNA fragmentation in both groups compared to the before freezing (52.3±5.42 vs 26.4±3.12 , p1<0.05 ; 47.5±4.7 vs 26.4±3.12 , p2<0.05). The group which was frozen with antioxidants was presented with lower DNA damage compared to the group which was frozen without the antioxidants; however, the difference between these groups was not found to be statistically significant (47.5±4.7 vs 52.3±5.42 , p>0.05).
 Our results suggest that addition of antioxidant to the freezing medium may have a beneficial effect on the further DNA damage following freezing process. However; studies with larger number of patients seem to be needed to determine whether antioxidants create a significant and positive contribution to the survival and DNA integrity of sperm samples.