Hücre göçü sürecinde pyrin-pstpip1 ilişkisinin incelenmesi
Analyzing the pyrin-pstpip1 relation during cell migration
Yazar: ZÜLFİYE YELİZ AKKAYA
Danışman: PROF. DR. ENGİN YILMAZ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics
Dizin: Ailesel akdeniz ateşi = Familial mediterranean fever ; Aktinler = Actins ; Hücre hareketleri = Cell movement ; Pirin = Pyrin ; Polimerler = Polymers

Özet:
Akkaya Z.Y. Hücre Göçü Sürecinde Pyrin-PSTPIP1 İlişkisinin İncelenmesi. Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 2011. MEFV (MEditerranien FeVer) genindeki mutasyonlar Ailevi Akdeniz Ateşi (AAA) hastalığına neden olmaktadır. Bu genden kodlanan Pyrin proteininin, inflamasyonun düzenlenmesinde bir işlevi olduğu düşünülmektedir. Nötrofillerde ifade olan Pyrin proteininin, PSTPIP1 ve aktin proteinleri ile etkileşime girdiği bilinmektedir. PSTPIP1 proteininin ayrıca hücre göçünde önemli olan proteinlerle birlikte bulunduğu daha önceki çalışmalarda gösterilmiştir. Bu bilgiler birlikte değerlendirildiğinde hücre göçü sürecinde, hücrenin polarize olduğu durumda bu iki proteinin hücresel yerleşiminin araştırılması kaçınılmaz olmuştur. Tez kapsamında bu araştırmayı yapmak üzere, HL-60 hücreleri kullanılarak bir göç modeli oluşturulmuştur. Öncelikle HL-60 hücreleri %1.28 DMSO (Dimetil sülfoksit) ile nötrofil hücrelerine farklılaştırıldı. Hücrelerin nötrofile farklılaşıp farklılaşmadığı nötrofillerin yüzey reseptörlerinden biri olan FPR1 (Formil Peptid Reseptör 1) geninin ifade değişimine bakılarak test edildi. %1,28 DMSO derişiminde, FPR1 gen ifadesinde, kontrole göre 165,89 kat artışı saptandı (p<0,0021). Nötrofil hücresine farklılaştırılan HL-60 hücrelerinin bir nötrofil kemoatraktanı olarak bilinen fMLP (N-formil-Met-Leu-Phe) ile uyarılıp göç etmeleri sağlandı. 150 nM fMLP ile 2 saat inkübasyondan sonra hücrelerin %90'ında aktin polimerizasyonu görüldü. Son aşamada, normal, farklılaştırılmış ve göç için uyarılmış hücrelerde Pyrin-Aktin, PSTPIP1-Aktin ve Pyrin-PSTPIP1 proteinlerinin hücrenin polarize olan bölgesinde birlikte yerleşip yerleşmedikleri immunfloresan boyama sonrasında konfokal mikroskopda incelendi. Preparatların değerlendirilmesi için profil ve korelasyon eğrileri çizildi. Elde edilen bulgulara göre, uyarılmış hücrelerde hücrenin polarize olan ön kısmında Pyrin proteininin polimerize aktin, PSTPIP1 proteinin de polimerize aktin ile birlikte yerleşim gösterdiği belirlendi. Ayrıca tezin hipotezini destekleyecek şekilde, Pyrin ve PSTPIP1 proteinlerinin göç sırasında hücrenin ön kısmında birlikte yerleşim gösterdikleri saptandı. HL-60 hücrelerinde bu iki proteinin hücre göçü sürecindeki olası işlevlerini daha iyi anlayabilmek için, bu iki geni sırayla kapatarak hücre göçünün etkilenip etkilenmediğinin test edilmesi gerekmektedir. Bu çalışmalardan elde edilecek sonuçlar, Pyrin-PSTPIP1 ilişkisinin hücre göçü üzerinde olabilecek etkisinin aydınlatılmasına önemli bir katkı sağlayabilecektir.

Abstract:
Akkaya Z.Y. Analyzing the Pyrin-PSTPIP1 Relation During Cell Migration. Hacettepe University Insitute of Health Sciences, Msc Thesis in Medical Biology, Ankara, 2011. MEFV (MEditerranien FeVer) gene mutations cause Familial Mediterranean Fever (FMF). This gene encodes a protein termed as Pyrin which appears to play an important role in the inflammatory pathways. It is far characterized that Pyrin, which is expressed in neutrophils, interacts with PSTPIP1 and actin proteins. In previous studies PSTPIP1 has been shown to interact with cell migration proteins. Thus, it seems necesssary to investigate these two proteins in leading edge of the migrating cell where actin polymerisation occurs. As a part of the thesis, a cell migration assay is set with HL-60 cells. Firstly, HL-60 cells were differentiated to neutrophils by using 1,28% DMSO (Dimethyl sulfoxide). To test the efficiency of differentiation, neutrophil cell surface receptor FPR1 (Formyl Peptide Reseptor 1) gene expression levels are measured. In 1,28% DMSO concentration, 165,89 fold change increase is detected (p<0,0021). Then HL-60 cells were differentiated to neutrophil, and fMLP (N-formyl-Met-Leu-Phe), a well-known chemoattractant, is used to stimulate cells to migrate. Cells showed 90% actin polymerization following 2 hours incubation with 150 nM fMLP. At the last step, normal, differentiated and differentiated-stimulated cells are immunostained for Pyrin-Actin, PSTPIP1-Actin and Pyrin-PSTPIP1 to test if the proteins localize together. Slides are analyzed by drawing profile and correlation curves with the help of confocal microscopy. According to obtained data, in stimulated cells Pyrin-Polymerizated actin, PSTPIP1-Polymerizated actin and Pyrin-PSTPIP1 are found to be co-localized. In further studies, it should be tested whether cell migration effects by silencing one or both of the proteins in stimulated HL-60 cells. These results may contribute to understand the exact mechanism of cell migration through Pyrin-PSTPIP1 interaction.