Ouabain ile indüklenen senesens ve RHO kinaz arasındaki olası ilişkinin incelenmesi
Investigation of possible link between RHO kinase and ouabain-induced senescence
Yazar: YAPRAK DİLBER ŞİMAY
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA ARK
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Hela hücreleri = Hela cells ; Ouabain = Ouabain ; Rhokinaz = Rhokinase ; Senesens = Senescence

Özet:
Son yıllarda kanser tedavisinde yeni bir yaklaşım olarak ilaçla indüklenen senesens önem kazanmıştır. Yapılan çalışmalar kardiyak glikozitlerin senesense yol açtığını göstermiştir. Diğer taraftan aktif Rho-GTPazların senesent hücre morfolojisinin gelişiminde rol aldıkları bulunmuştur. Ayrıca Rho nun down stream efektörü olan Rho kinazın endotel hücrelerindeki inhibisyonunun Notch ile indüklenen hücresel senesensi geri çevirdiği bildirilmiştir. Bu çalışmada HeLa hücrelerinde bir kardiyak glikozit olan ouabain ile oluşturulmuş senesenste Rho kinazın olası rolü araştırılmıştır. Ouabainle indüklenmiş senesensi belirlemek için, xCELLigence gerçek zamanlı hücre analiz sistemi, senesens ilişkili-ß-galaktozidaz boyaması, hücre siklus analizi ve hücre alanı ölçümleri kullanılmıştır. HeLa hücrelerinde ouabainin doz bağımlı etkisi incelendi. Hücre ölümü ile sonuçlanan yüksek konsantrasyondaki ouabain tedavisinin aksine; düşük konsantrasyonlardaki ouabain tedavisinin senesensi indüklediği gözlemlenmiştir. Spesifik Rock inhibitörü Y-27632 preinkübasyonu (10?M, 30dk) hücrelerde ouabainle (30nM, 48sa) indüklenen-senesensi inhibe etmemesine rağmen; hücre alanını azaltmıştır. Ayrıca Y-27632 preinkübasyonu ouabainle indüklenmiş senesent hücrelerin ölümünü hızlandırmıştır. 30nM ouabain uygulanmasının HeLa hücrelerinde siklusu G2/M fazında durdurduğunu ve Y-27632 preinkübasyonunun değişikliğe neden olmadığını gözlemlendi. Sonuçlarımız; 10?M Y-27632 ile 30nM ouabain kombinasyonunun, senesens oluşumunu engellemezken hücre ölümünü hızlandırdığını göstermektedir. Bu sonuçlar, kanser tedavisinde Rho kinazın, ouabainle indüklenen senesens için önemli bir terapötik hedef olduğunu göstermektedir. 

Film 1 ve film 2 adlı video dosyaları ektedir.

Abstract:
Recently drug-induced senescence has gained an importance as a new approach in cancer therapy. It has been demonstrated that cardiac glycosides induce senescence in several cancer cell lines. Moreover, activation of small G protein Rho is required for the formation of morphological features of the senescent cells. Also, it has been shown that inhibition of Rock, one of the downstream effectors of Rho, prevents the Notch-induced senescence in endothelial cells. In the current work, we evaluated the possible role of Rock in ouabain-induced senescence in HeLa cells. The xCELLigence real time cell analyzer system, senescence associated ß-galactosidase staining and cell size were used to determine senescence. Concentration dependent effect of ouabain on cell viability and morphology was evalulated. In contrast to the treatment of ouabain in high concentrations which resulted in cell death, low nanomolar concentrations of ouabain induced senescence in HeLa cells. Although preincubation of specific Rock inhibitor Y-27632 (10?M, 30min) did not inhibit the occurrence of ouabain-induced (30nM, 48h) senescence in cells, it reduced the cell size. Furthermore preincubation of Y-27632 enhanced the cell death in senescence induced by ouabain. Although incubation of ouabain-induced G2/M phase cell cycle arrest, preincubation of Y-27632 had no effect on that induction. Our results indicate that inhibition of Rock with Y-27632 didn`t inhibit the senesence induced by ouabain. However it induced the cell death in senescent cells. These results suggest that Rock may be an important theurapeutic target in ouabain-induced senescence in cancer therapy.

Film 1 and film 2 are enclosed herewith.