İmatinib-dirençli lösemik hücrelerin atimik farelerde in vivo izlenmesi, histopatolojik analizi ve lösemik kök hücre belirteçleri açısından değerlendirilmesi
In- vivo tracking, histopathological analyses and leukemic stem cell markers assessment of imatinib-resistant leukemic cells in atimic mice
Yazar: PELİN YALÇIN
Danışman: DOÇ. DR. ZEYNEP YÜCE
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Biyobelirteçler = Biomarkers ; Biyobelirteçler-tümör = Biomarkers-tumor ; Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Histopatoloji = Histopathology ; Kök hücreler = Stem cells ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; İmatinib mesilat = Imatinib mesilat ; İn vivo = In vivo

Özet:
Kronik Myeloid Lösemi, insanda 9. ve 22. kromozomların uzun kolları arasında gerçekleşen karşılıklı translokasyon sonucu oluşan hematopoetik klonal bir kök hücre hastalığıdır. Bu translokasyon sonucu ortaya çıkan füzyon protein, lösemik kuşakların genişlemesini sağlayan sürekli bir tirozin kinaz aktivitesi gösterir. Hedefe yönelik tirozin kinaz inhibitörlerinden biri olan İmatinib, bu füzyon proteinin enzimatik aktivitesini engeller ancak uzun dönemde hastalar bu moleküle karşı sekonder direnç geliştirir. Projemizin amacı, imatinib-dirençli K562-Ir hücrelerinin, hücre davranışı ve tümör oluşturma kapasitesinin değerlendirilebilmesi için, atimik farelere subkutan yolla atasal ve imatinib-dirençli hücrelerin aşılanarak, canlı sistemdeki davranış farklarının araştırılmasıdır. Atasal ve imatinib-dirençli hücreler lusiferaz geni ve yeşil floresan protein geni içeren bir lentivirüs ile in vitro işaretlenmesi amacıyla stabil transdüksiyon deneyleri yapılmıştır. İşaretlenen bu iki hücre populasyonu, imatinib varlığı yada yokluğunda, Balb-c/ Nude farelere subkutan olarak aşılanmıştır. Deney süresince belirli aralıklarla lusiferaz assay yapılarak, IVIS görüntülemede biyolüminesans ölçümler alınmış ve kıyaslanmıştır.  Sonuç olarak, imatinib dirençli hücrelerimizin lentivirüs ile stabil transfeksiyonunda zamanla puromisine dirençli alt populasyonların ortaya çıktığı, in vivo atimik nude farelerde dokuda lokalize olmak yerine yayılım göstererek atasal hücrelere oranla daha farklı davranış sergilediği sonucuna varılmıştır. Bulgularımızın, KML biyolojisinde ilaç dirençli hücre populasyonlarının biyolojisinin anlaşılmasına katkı sağlayacağını düşünmekteyiz.

Anahtar kelimeler; kronik myeloid lösemi, imatinib, ilaç direnci, lösemik kök hücre, tümörojenez

Abstract:
Chronic Myeloid Leukemia is a hematopoietic clonal stem cell disease that occurs as a result of respirocal translocation between the long arms of chromosomes 9 and 22. The fusion protein resulting from this translocation exhibits a continuous tyrosine kinase activity that allows expansion of the leukemic lines. Imatinib, one of the targeted tyrosine kinase inhibitors, inhibits the enzymatic activity of this fusion protein, but in the long term patients develop secondary resistance to this molecule. The aim of our project is to investigate the behavioral differences between imatinib-resistant K562-Ir cells and ancestral cells that in live system by inoculation the ancestral and imatinib-resistant cells subcutaneously into athymic mice in order to evaluate cell behavior and tumor formation capacity. In vitro stable transduction assays were performed to mark the imatinib-resistant and ancestral cells with a lentivirus that containing the luciferase gene and the green fluorescent protein gene. These two marked populations were inoculated subcutaneously to Balb-c / Nude mice in the presence or absence of imatinib. Bioluminescence measurements were taken and compared in IVIS imaging by using luciferase assay with specific intervals throughout the experiment. As a result, we concluded that in the stable transfection of imatinib-resistant cells with lentivirus, during experimental procedures puromycine resistant subpopulations have emerged, and they exhibit different behaviors compared to ancestral cells in vivo atimic nude mice rather than localized in tissue.

Keywords; chronic myeloid leukemia, imatinib, drug resistance, leukemic stem cell, tumorogenesis