Rekombinant insan interferon-?'nın afinite adsorpsiyonu
Affinity adsortion of human interferon-?
Yazar: ALİ DOĞAN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SERPİL ÖZKARA YAVUZ
İnönü Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Hidroksietil metakrilat = Hydroxyethyl methacrylate ; Jeller = Gels ; Monomerler = Monomers ; Polimerler = Polymers ; Rekombinasyon-genetik = Recombination-genetic ; Saflaştırma = Purification ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
İnterferonlar, lökositler, lenfoblastoid ve miyeloblastoid hücre hatları tarafından üretilen biyolojik aktif proteinlerdir. Özellikle böbrek kanseri, malignant melanom, multiple myeloma, karsinoid tümör, lenfoma ve löseminin bazı tiplerini içeren hastalıların tedavisinde kullanılmaktadır. Rekombinant interferon-? aynı zamanda AIDS, kronik hepatit B ve C tedavisinde de kullanılır. Kriyojeller, kısmen donmuş monomer veya polimer çözeltileri kullanılarak hazırlanan jel matrisleridir. Genel olarak kriyojeller birbirine bağlı makrogözeneklere sahiptir. Bu özellikleri kriyojellerin nano-mikro ölçek aralığında herhangi bir difüzyon sorunu olmaksızın kullanımına olanak sağlamaktadır.Sunulan çalışmada, interferon-? saflaştırılması amacı ile boya bağlı monolitik kriyojel formunda biyoafinite kromatografi adsorbentlerinin hazırlanmıştır. İlk aşamasında; poli(2-hidroksietil metakrilat) kriyojeller hazırlanmıştır. Daha sonra, boya ligand Cibacron Blue F3GA immobilizasyonu gerçekleştirilmiştir. Kriyojeller, şişme testi, SEM, elementel analiz, yüzey alanı ölçümleri ve FTIR ile karakterize edilmiştir. Daha sonra, sulu çözeltiden ve doğal interferon kaynağından (insan gingival fibroblast) interferon adsorpsiyonu incelenmiştir. Optimum adsorpsiyon koşullarının belirlenmesi için pH, derişim, etkileşim süresi, iyonik şiddetin etkileri incelenmiştir. Cibacron Blue F3GA takılı poli(HEMA) kriyojellerin maksimum adsorpsiyon kapasitesi 38.2 mg/g (pH 6.0 ve 2 saat) olarak bulunmuştur. Doğal kaynaktan interferon saflaştırılması hızlı protein sıvı kromatografisi sisteminde gerçekleştirilmiştir. Kromatografi parametreleri (kapasite ve ayırma faktörü, ayırım gücü ve teorik plaka sayısı) 7.79, 9.62, 4.23 ve 554 olarak bulunmuştur. Kriyojellerden interferon desorpsiyonu, 1M NaCl kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Tekrarlanan 10 adsorpsiyon-desorpsiyon döngüsü sonucunda kriyojellerin adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir azalma olmadığı belirlenmiştir. Sonuç olarak; Cibacron Blue F3GA takılı poli(HEMA) kriyojellerin interferonun hızlı, ucuz ve spesifik saflaştırılması için uygun kullanım potansiyeline sahiptir.

Abstract:
Interferons are biological active proteins which are synthesized by leukocytes, lenfoblastoid and myeloblastoid cell lines. Especially, they have been used in treatments of kidney cancer, malignant melonoma, multiple myeloma, carsinoid, lymphoma and leukemia. In addition, they are also used in treatment AIDS, chronic hepatitis B and C. Cryogels are gel matrix which are prepared by using partially frozen monomer and polymer solutions. Generally, cryogels have interconnected macropores. Therefore, cryogels can be used in wide scale range from nano to micro without any diffusion problem.In present study, dye attached monolithic cryogels, potential adsorbent for bioaffinity chromatography, were prepared for interferon-? purification, then, optimal purification conditions and interferon purification performance of the adsorbent were investigated. At first, poly(2-hydroxyethyl methacrylate) cryogels were prepared. Then, Cibacron Blue F3GA, dye ligand, was attached onto cryogels. Cryogels were characterized by swelling test, scanning electron microscopy, elemental analysis, surface area measurements and FTIR. After that, interferon adsorption studies were carried out from aqueous solutions and natural interferon source, human gingival fibroblast. In order to determine the optimal adsorption conditions, pH, concentration, interaction time, and ionic strength were investigated. The maximum adsorption capacity of Cibacron Blue F3GA attached poly(HEMA) cryogels was obtained as 38.2 mg/g at pH 6.0 and 2 h incubation. Interferon purification from natural source was carried out by using fast protein liquid chromatography system. The chromatography parameters, capacity and selectiviy factors, resolution and theoritical plate number were found as 7.79, 9.62, 4.23 and 554, respectively. Interferon desorption from Cibacron Blue F3GA attached poly(HEMA) cryogels was done by using 1M NaCl solution. After ten times repeated adsorption-desorption cycles, no significant decrease could not be determined in adsorption capacity of cryogel. In result, Cibacron Blue F3GA attached poly(HEMA) cryogels have an application potential for rapid, cheap and specific purification of interferon.