Ankilozan spondilitli hastalarda sitom yöntemi kullanılarak genom/DNA hasarının ve hastalık patogenezindeki rolünün araştırılması
Investigation of genom / DNA injury and the role in pathogenesis of disease in patients with ankylosing spondylitis using cytoma method
Yazar: FUNDA KIRANATLIOĞLU FIRAT
Danışman: PROF. DR. HÜSEYİN DEMİR
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon = Physical Medicine and Rehabilitation
Dizin: 8-hidroksi deoksiguanozin = 8-hydroxy deoxyguanosine ; Ankiloz = Ankylosis ; DNA = DNA ; DNA hasarı = DNA damage ; Genom = Genome ; Mikroçekirdek testleri = Micronucleus tests ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Spondilit-ankilozan = Spondylitis-ankylosing

Özet:
Giriş-Amaç: Ankilozan spondilit (AS) inflamasyon ve yeni kemik oluşumu ile karekterize, spondiloartropati (SpA) grubu hastalıkların prototipidir. Son yıllarda, AS patogenezinde rol oynayan genetik ve immün sistem yolakların belirlenmesinde yeni gelişmeler meydana gelmiştir. Diğer kronik inflamatuvar hastalıklarda kromozomal DNA hasarı ve oksidatif DNA hasarı parametrelerinin inflamasyon yolağı üzerindeki etkileri araştırılmış ve artmış DNA ve kromozom hasarının bu hastalıkların patogenezi üzerinde etkili olabileceği düşünülmüştür. Bu nedenle çalışmamızda, AS'li hastalarda sitom yöntemi kullanılarak genom /DNA hasarının ve hastalık patogenezindeki rolünün araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmaya AS tanısı konulan 25 hasta ve yaş-cinsiyet olarak eşleştirilmiş 25 sağlıklı kontrol alındı. Tam kan sayımı (CBC), eritrosit sedimentasyon hızı (ESH) ve C-reaktif protein (CRP) düzeyleri ölçüldü. Hastaların ayrıca Human Lökosit Antijen (HLA)-B27 gen analizine bakıldı. Hastalık aktivitesi için BASDAI (Bath Ankilozan Spondilit Aktivite İndeksi) hesaplandı. Standart bir olgu bildirim ve mikronükleus (MN) bilgi formu dolduruldu. Her bir katılımcı için, 1000 binükleer (BN) hücre sayıldı. DNA hasarını belirlemek üzere MN'li, nükleer tomurcuklu (NBUD) ve nükleoplazmik köprülü (NPB) BN hücre frekansları (%) kaydedildi. Hücre çoğalmasını belirlemek üzere de BN, multi nükleer hücreler skorlandı ve metafaz sayısı (‰), BN'li hücre frekansı (%), nükleer bölünme indeksi (NBİ) değerleri hesaplandı. Hasta ve kontrollerin plazma örneklerinde de ELISA kiti kullanılarak 8-OHdG (ng /mL) ölçümü yapıldı.
Bulgular: AS hastalarında MN frekansı, NPB'li, NBUD'li hücre frekansları ve 8-OHdG seviyeleri kontrollere göre istatistiksel olarak anlamlı yüksek iken, metafaz sayısı, BN hücre frekansı, NBİ değerleri ise kontrollere göre istatistiksel olarak anlamlı düşük bulundu. Hastalar, HLA-B27 pozitifliği ve negatifliği ya da AS açısından aile öyküsü pozitifliği veya negatifliği açısından iki gruba ayrılarak karşılaştırıldığında; DNA ve kromozom hasarı ile ilişkili incelenen parametrelerin hiçbirinde istatistiksel olarak anlamlı farklılık saptanmadı. Ayrıca DNA ve kromozom hasarı ile ilişkili parametreler açısından incelendiğinde; sadece kontrol grubunda yaş ile 8-OHdG seviyeleri arasında negatif korelasyon vardı. 
Sonuç: Bu çalışma, AS hastalarında MN'li, NPB'li ve NBUD'li BN hücre frekanslarının ve 8-OHdG seviyelerinin kontrol grubuna göre anlamlı arttığı buna karşın metafaz sayılarının, BN hücre frekansının ve NBİ oranlarının kontrol grubuna göre anlamlı azaldığını göstermiştir. Bu sonuç, diğer kronik inflamatuvar hastalıklar ile benzer şekilde, AS hastalığının patogenezinde de genotoksisitenin ve oksidatif DNA hasarının etkili olabileceğini düşündürmektedir. Diğer taraftan; karsinogenezin erken dönemlerinde görülebilen MN, NPB ve NBUD'li BN hücre frekanslarındaki anormal değişiklikler, AS hastalarının erken dönem kanser riskini yansıtması açısından anlamlı olabilir. Bildiğimiz kadarıyla, çalışmamız AS'de Sitokinez Bloke MN sitom (CBMN-cyt) parametrelerini ve 8-OHdG seviyelerini araştıran ilk çalışmadır ve sonuçlarının daha kapsamlı çalışmalarla desteklenmesine ihtiyaç vardır.
Anahtar kelimeler: Ankilozan spondilit, mikronukleus, 8-OHdG, DNA hasarı, kanser

Abstract:
İntroduction-Aim: Ankylosing spondylitis (AS) is characterized by inflammation and new bone formation; spondyloarthropathy (SpA) is the prototype of the group of diseases. In recent years, new advances have been made in identifying genetic and immune pathways involved in the pathogenesis of AS. The effects of chromosomal DNA damage and oxidative DNA damage parameters on inflammation pathway in other chronic inflammatory diseases were investigated and it was thought that increased DNA and chromosomal damage might have an effect on the pathogenesis of these diseases. Therefore, the aim of this study was to investigate genome /DNA damage and its role in pathogenesis of cytome method in patients with AS.
Materials and Methods: Twenty-five patients diagnosed with AS and 25 age-sex matched healthy controls were included in this study. Complete blood count (CBC), erythrocyte sedimentation rate (ESR) and C-reactive protein (CRP) levels were measured. Human leukocyte antigen (HLA)-B27 gene analysis was also worked. BASDAI (Bath Ankylosing Spondylitis Activity Index) was calculated for disease activity. A standard case report and micronucleus (MN) information form was completed. For each participant, 1000 binuclear (BN) cells were counted. BN cell frequencies (%) with MN, nuclear bud (NBUD) and nucleoplasmic bridge (NPB) were recorded to determine DNA damage. In order to determine cell proliferation, BN, multi nuclear cells were scored and metaphase number (‰), cell frequency with BN (%), nuclear division index (NBI) values were calculated. Plasma samples of patients and controls were also measured with 8-OHdG (ng/mL) using ELISA kit.
Results: While MN frequency, NPB, NBUD, and 8-OHdG levels were significantly higher in AS patients compared to controls, the number of metaphase, BN cell frequency and NBI values were found to be significantly lower than controls. Patients were divided into two groups according to HLA-B27 positivity and negativity or AS family history positivity or negativity; no statistically significant difference was found in any of the parameters related to DNA and chromosome damage. In addition, when DNA and chromosome damage parameters are examined; there was a negative correlation between age and 8-OHdG levels only in the control group.
 Conclusion: This study demonstrated that BN cell frequencies and 8-OHdG levels with MN, NPB and NBUD were significantly increased in AS patients compared to the control group, whereas metaphase numbers, BN cell frequency and NBI ratios were significantly decreased compared to the control group. This result suggests that genotoxicity and oxidative DNA damage may be effective in the pathogenesis of AS, similar to other chronic inflammatory diseases. On the other hand; abnormal changes in BN cell frequencies with MN, NPB and NBUD, which can be seen in early stages of carcinogenesis, may be significant in terms of reflecting early cancer risk in AS patients. To our knowledge, this is the first study to investigate Cytokinesis Blocked MN cytoma (CBMN-cyt) parameters and 8-OHdG levels in AS, and the results need to be supported by more comprehensive studies.
Key words: Ankylosing spondylitis, micronucleus, 8-OHdG, DNA damage, cancer