Tümör küçültücü etkiye sahip myrosinaz enziminin çaşır (Prangos ferulecea L.) ve yaban kerevizi (Smyrnium olusatrum L.) bitkilerinden saflaştırılması ve karakterize edilmesi
Purification and characterization of enzyme myrosinase which have a degrading effect on tumor from (Prangos ferulecea L.) and (Smyrnium olusatrum L.) plants
Yazar: BAHAR AYDİN
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Myrosinaz enzimi (tiyoglikozid glikohidrolaz, E.C 3.2.3.1) hidrolazlar grubu üyesi olup glikozinolatların hidrolizlenmesi reaksiyonu gerçekleştiren bir enzimdir. Bu çalışmada Erzurum ve çevresinde yetişmekte olan çaşır bitkisi (Prangos ferulecea L.) ve Mersin yöresi Tarsus'un dağ köylerinde yetişen yabani kereviz (Smyrnium olusatrum L.) bitkilerinden myrosinaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Myrosinaz enziminin saflaştırılmasında kromatografik yöntemlerden faydalanıldı. Myrosinaz enzimi 3 basamakta saflaştırıldı. İlk basamakta amonyum sülfat çöktürmesi yapıldı, 2. basamakta Sephakril S 200 anyon değiştirici kromatografisi kolonu kullanıldı ve 3. basamakta ise Konkavalin A Sepharoz afinite kromatografisi kullanılarak enzim saflaştırıldı. Çaşır (Prangos ferulecea L.) ve yabani kereviz (Smyrnium olusatrum L.) bitkilerinden saflaştırılan myrosinaz enziminin saflığını kontrol etmek amacı ile SDS-PAGE elektorofezi uygulandı.Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri tespit edilerek sinigrin substratı için KM ve Vmax değerleri belirlendi.Enzim aktivitesi üzerine Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe3+ (10mM, 1mM ve 0,1mM) katyonlarının ve askorbik asit, EDTA ve SDS (10mM, 1mM ve 0,1mM) bileşiklerinin etkileri araştırıldı. Bunlara ek olarak kozmetikte kullanılan pantenol, cephalotin, betamethasone, linoleik asit ve E vitamininin (10mM, 1mM ve 0,1mM) ve cilt kanseri tedavisinde etkili olan TA1, TA2, TA3, TA4, TA5, TA6, TA7, TA8, TA9 ve TA10 (500 ppm) moleküllerinin etkileri araştırıldı.Ayrıca enzim aktivitesi üzerine 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm klorprifos etil, metil paratiyon, dimetoat, diazinon, metamidopos, etil paratiyon ve fention pestisitlerinin etkisi araştırıldı.

Abstract:
The enzyme responsible for the hydrolysis of glucosinolates is known as myrosinase (E.C. number 3.2.3.2, also known as: ß-thioglucosidase, ß-thioglucoside glucohydrolase). In this study; the myrosinase enzyme was purified and characterized from (Prangos ferulecea L.) which grows in Erzurum and (Smyrnium olusatrum L.) plants, which grows naturally in certain rural regions of Mersin. Three different steps were used for purification of the myrosinase from (Prangos ferulecea L.) and (Smyrnium olusatrum L.). First step was (NH4)2SO4 precipitation. Secand step was Sephacryl S200 anion exchange chromatography and finally Concavali A affinity chromatography was used. SDS-polyacrilamide gel electrophoresis was applied for control of the myrosinase enzyme purified from the centaury (Prangos ferulecea L.) and (Smyrnium olusatrum L.) plants.KM and Vmax values for sinigrin substrate were determined after setting optimal pH and temperature conditions of myrosinase enzyme.Effects of Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Fe3+ (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) cations and ascorbic acid, EDTA and SDS (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) on enzyme activity were researched. In addition to, effects pantenol, cephalotine, betamethasone (10 mM, 1 mM ve 0,1 mM) that used in cosmetic and TA1, TA2, TA3, TA4, TA5, TA6, TA7, TA8, TA9 and TA10 (500 ppm) that benefit in skin cancer treatment.Effects of 100 ppm, 10 ppm, 1 ppm chloropyriphos-ethyl, methyl-parathion, dimethoate, diazinon, methamidophos, ethyl-parathion and fenthion pesticides on enzyme activity were researched.