Polikistik over sendromu (pco) ve poor responder (düşük over rezervi) olan hastaların embriyolarının morfokinetik olarak normal yanıtlı hasta embriyoları ile karşılaştırılması
Comparison of embryo morphokinetic parameters polycystic ovary syndrome patients and poor ovarian reserve patients with normal ovarian reserve patients
Yazar: HAYRİYE ÇELENK
Danışman: PROF. DR. MELİKE ERKAN
Yeni Yüzyıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Genital hastalıklar-kadın = Genital diseases-female ; Kısırlık = Infertility ; Morfoloji = Morphology ; Over = Ovary ; Over hastalıkları = Ovarian diseases ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome ; Üreme = Reproduction ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Kapalı görüntüleme sistemi, ile over rezervinin erken embriyo morfokinetik parametrelerine olan etkisinin değerlendirilmesi ve over rezervlerine göre ayrılmış üç grup hastadan alınan embriyoların time lapse monitör sistemi ile restrospektif karşılaştırılması amaçlanmıştır.
Yardımlı üreme teknikleriyle alınan sonucun başarısını etkileyen en önemli faktörlerden birisi de embriyo seçim metodudur. Zamanla gelişen laboratuar koşullarına rağmen, geleneksel embriyo morfoloji değerlendirme metodlarının kısıtlı başarısı, embriyo hücre bölünmelerinin dinamik olarak değerlendirildiği time lapse moniterizasyon sistemi gibi alternatif teknolojilere yöneltmiştir. 
Dolayısıyla yapılan son araştırmalar optimal embriyo morfokinetik parametrellerini kullanarak implantasyon potansiyeli en yüksek olan en iyi embriyoyu seçmeye odaklanmıştır. Time lapse sisteminin avantajları, embriyoların sürekli görüntülenmesi ki bu da objektif ve kesin bilgi sağlamaktadır. Gelişmiş kültür koşulları ve embriyonun dış ortamla temas etmeden değerlendirmesini yapmak ki bu da gözlemci varyasyonunu azaltır.
Bilgimiz dahilinde, literatürde düşük over rezervi (POR), polikistik over sendromu (PCO) ve normal over rezervi olan hastalar arasında embriyo morfokinetik parametrelerinin karşılaştırıldığı bir araştırma bulunmamaktadır. Aynı zamanda maternal yaşın embriyonun kinetik değişimiyle ilişkisini gösteren sınırlı sayıda bilgi bulunmaktadır. Sonuç olarak over rezervi ve embriyo morfokinetik parametreler arasındaki ilişkiyi değerlendirmek hedeflendi. Ayrıca 35 yaş altı ve 35 yaş üstü hastaları içeren iki grubu değerlendirerek yaşın etkisini araştırıldı. 
Bu çalışma Aralık 2015 ve Aralık 2016 arasında İzmir Üniversitesine başvuran hastaların erken morfokinetik parametrelerinin retrospektif veri analizidir. Bu çalışma Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Çalışmaya 200 hasta dahil edilmiş, bu hastalardan 41'i Düşük over rezervli (POR), 62'si normal over rezervine sahip, 97'si Poliksitk over sendromlu (PCO)  hastalardır.

72 saatlik kültür boyunca her embriyonun resmi 20 dakika da bir, 7 farklı planda çekilir. Embriyo görünteleme yazılımı (Embryo Viewer software (Unisense Fertilitech Aarhus)) kullanılarak embriyonik resimler incelenir. Bu yazılım embriyonik gelişim süreçlerini mikroenjeksiyon sonrasındaki saatlik aralıklarla incelemektedir. Bu zaman dilimleri fertilizasyonu takip eden süreçleri analiz eder. Döllenmeden itibaren tPNf, t2, t3, t4, t5, t2-t5, t3-t5, cc2(t2-t3), s2(t3-t4) parametreleri  analiz edilip kayıt altına alınmıştır. Parametreler arasında iki ardışık bölünmenin arasında geçen süre de hesaplanmıştır. Bu parametreler ile optimal embriyo parametreleri belirlenerek ideal embriyo seçilip gelişiminin 3. gününde transfer edildi.
Embriyolar Meseguer  et. all  tarafından belirlenen time lapse analiz parametrelerine göre seçilmiştir. Luteal destek için bütün hastalara günlük 90 mg progesterone gel (Crinone gel 8%, Merck ,Türkiye) ve 200 mg vajinal mikronize progesterone (Progestan caps 200 mg, Koçak Farma, Türkiye) verilmiştir. BhCG kan testi embriyo transferinden 12 gün sonra yapılmıştır. Klinik olarak hamilelik pozitif BhCG kan testinden 2 hafta sonra bir veya birden fazla intrauterin gestasyonel kese saptanmasıyla tanımlanır. 
0,05'den az olan bir p-değeri istatiksel olarak önemli sayılır. Toplamda 1144 embriyo değerlendirildi. Morfokinetik parametreler tPNf, t2, t3, t4, t5, cc2, s2, cc3, t2-t5 gruplar arasında istatiksel olarak farklılık saptanmadı (p>0.05). 
35 yaş altı ve üstündeki hastalar yaş gruplarına göre değerlendirildi. Farklı yaş grubundaki hastalar arasında morfokinetik parametreler istatiksel olarak farklılık içermemektedir(p>0.05). Optimal embriyo morfokinetik parametre oranları t5, s2 ve cc2, gruplar arasında farklılık göstermemektedir (p>0.05).
Over rezervi bu bulgulara göre embriyo morfokinetik parametrelerini etkilemiyor gözükmektedir.
Anahtar kelimeler: Kapalı görünteleme sistemi, over rezervi, Polikistik over sendromu,, embriyo morfokinetiği,

Abstract:
To evaluate the impact of ovarian reserve on early embryo morphokinetic parameters in a time lapse monitoring system and retrospective study comparing time lapse monitoring analysis of embryos from three groups of patients according to the ovarian reserve. 
One of the most important factor for the success of treatment outcomes  in assisted reproduction cycles is the embryo selection method. Although the laboratory conditions have been evolving by the time, limited success rates with conventional embryo morphological evaluation methods led to alternative technologies including time lapse monitoring system which provides the dynamic evaluation of embryonic cell division parameters. Thus recent researches have focused on optimal embryo morphokinetic parameters to select the best embryo which has the most implantation potential. The  advantages of time lapse system are the continuous monitoring of the embryos which provides objective and accurate information, improved culture conditions and embryo evaluation without removal and also decreasing the interobserver variability. 
Although this evolving technologies have been shown to improve the reproductive outcomes, there is still limited success in contrast to expected. Thus the most important factor for the IVF success rate is the maternal age. Pregnancy rates for women over the age of 35 are significantly lower with assisted reproduction, compared to those in women under the age of 35. The other important factor is the retrieved oocyte number after ovarian stimulation in IVF cycles. 
To our knowledge there is not any study in the literature that compared the embryo morphokinetic parameters of patients with poor ovarian reserve (POR), normal ovarian reserve and polycystic ovaries. There is also limited data on the effect of maternal age on embryo developmental kinetics. Therefore we aimed to evaluate the relationship between ovarian reserve and embryo morphokinetic parameters. We also investigated the role of age by evaluating the results in two groups including under 35 and over 35 years of patients.
The study is a retrospective data analysis of early morphokinetic  parameters of patients who were admitted to Izmir University between December 2015 and December 2016. The study was approved by the Instutional review board. 200 patients were included in the study. 41 of them was patients with poor ovarian reserve, 62 of them were patients with normal ovarian reserve, 97  of them were patients with polycystic ovaries. 
Images of each embryo were taken every 20 min in seven different focal planes, during 72 h of culture. The embryonic images were analyzed using Embryo Viewer software (Unisense Fertilitech Aarhus), which annotates embryonic developmental events with the corresponding time in hours after microinjection. The times from fertilization to the following events were analyzed: tPNf,  t2,  t3,  t4,  t5,  t2-t5,  t3-t5,  cc2(t2-t3),  s2(t3-t4). The intervals between two consecutive cleavages were also calculated.Embryo transfer was performed on Day 3 of development. 
The embryos were selected according to time lapse analysis parameters described by Meseguer  et. all. For luteal support all patients received 90 mg progesterone gel (Crinone gel 8%, Merck , Turkey) and 200 mg of vaginal micronized progesterone (Progestan caps 200 mg, Kocak Farma, Turkey) daily.  BhCG blood test was performed 12 days after embryo transfer. The clinical pregnancy was defined by the presence of one or more intrauterine gestational sacs 2 weeks after a positive beta hCG blood test. 
A total of 1144 embryos were evaluated. The morphokinetic parameters including time to tPNf, t2, t3, t4, t5, cc2, s2, cc3, t2-t5 were not statistically different between groups (p>0.05). Data was analyzed according to different age groups including patients under and over 35 years. The morphokinetic parameters were not statistically different in patients. with different age groups (p>0.05). The percentage of optimal embryos according to t5 , s2 and cc2 were not statistically different between groups (p>0.05) .  
The ovarian reserve does not seem to affect the embryo morphokinetic paramaters. 

Key words: time lapse; ovarian reserve,  PCOS, embryo morphokinetics, in vitro fertilization