İnsan immünoglobulin G'nin glikasyonu ve antijen bağlanması üzerindeki etkisi
Human immunoglobulin G glication and its effect on antigen binding
Yazar: FERYAL ZELİHA AKAY
Danışman: PROF. DR. GÖKSEL KIZIL ; PROF. DR. BERAN YOKUŞ
Dicle Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Beslenme ve Diyetetik = Nutrition and Dietetics ; Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Beslenme yönteminin yaşam kalitesini etkilediği bilinen bir gerçektir. Beslenmenin yaşlanmada veya yaşlanmaya bağlı hastalıkların tedavisinde olduğu gibi bağışıklık sistemi elemanları için de gözardı edilemeyecek bir unsurdur. Diyabette hiperglisemik durum, çeşitli plazma proteinlerinin glikasyonunu arttırmaktadır. Çalışmada, antioksidan özellikleri olduğu bilinen glutatyon oleuropein ve selenyumdan vücudun günlük ihtiyacı olan doza göre bir karışım (mix) hazırlandı. Bu hazırlanan karışımın serbest radikal söndürme sistemi üzerindeki etkisini incelemek için DPPH ve OH radikali söndürme aktiviteleri tespit edildi. Bağışıklık sistemi elemanlarından biri olan ticari insan İmmunuglobulin G  proteni fruktoz ile hasara uğratıldı. Hasara uğratılan protein, karışım ile 28 günlük inkübasyona bırakıldı. Protein glikasyon çalışmasında; IgG/fruktoz/mix sisteminde, 0, 7, 14, 21. ve 28. günlerde alınan örneklere bağlanmamış şekerleri uzaklaştırmak için diyaliz yöntemiyle kullanıldı. Protein örneklerindeki fruktoz kaynaklı hasarı ve karışımın etkisini karakterize edebilmek  için; α-Dikarbonil Bileşik Tayini, Fruktozamine Testi, Kongo kırmızısı spektral kayma, UV-Visible Spektroskopi, Floresan Spektroskopi, İçsel Floresans ve SDS PAGE yöntemleri kullanıldı.  Yapılan biyokimyasal ve biyofiziksel çalışmaların ışığında; fruktozun IgG proteininin yapısını bozduğu ve karışımın ise IgG glikasyonu üzerindeki koruyucu etkisi tespit edildi. Sonraki aşamada ise (18-35 yaş, sağlıklı) gönüllülerden alınan kann örneklerinden  izole edilen lenfosit hücrelerinde kültür ortamında fruktozun ve karışımın  etkisi incelendi. Fruktozun lenfosit hücre ölümüne neden olduğu gözlendi. Bu dikkat çekici artışın nedeni selenyum oleuropein ve glutatyonun serbest radikalleri parçalaması, antioksidan etkiye sahip olması, bazı enzimleri aktive ederek toksinleri inhibe etmesi ve hücre içinde çeşitli yolları aktive ederek vitamin metabolizmasını desteklemesi olabilir.Bu çalışma, diyet AGE'lerinin lenfosit hücre döngüsü üzerinde önemli bir etkiye sahip olabileceğini düşündürmektedir. Diyet AGE'lerini temel otoimmün/enflamatuvarda incelemek, onun hastalıklardaki rolünü araştırmak ve daha geniş ölçekli çalışmalar yapmak için öncü bir çalışma olmuştur.
Sonuç olarak fruktozun bağışıklık sisteminde önemli bir role sahip olduğu ve hazırlanan karışımın bağışıklık sistemi proteinlerinden IgG'yi koruyucu bir ajan olduğu önerilebileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
It is a known fact that nutrition method affects quality of life. Nutrition is an element that cannot be ignored for immune system elements, as in the treatment of aging/aging-related diseases. One of the main causes of obesity common in the world is fructose/glucose (corn) syrup. The study was structured in two stages. A mixture was prepared from glutathione oleuropein and selenium, which are known to have antioxidant properties, according to the daily requirement of the body. In order to determine the effect of this prepared mix on the free radical quenching system, DPPH and OH radical quenching activities were determined. The commercial human IgG protein, one of the immune system elements, was damaged by fructose. The damaged protein was incubated with the mix for 28 days. In the protein glycation study; It was used by dialysis method to remove unbound sugars from the samples taken on days 0, 7, 14, 21 and 28 in IgG/fructose/mix system. To characterize fructose-induced damage and mixin effect in protein samples; Determination of α-Dicarbonyl Compound, Fructosamine Test, Congo red spectral shift, UV-Visible Spectroscopy, Fluorescent Spectroscopy, Intrinsic Fluorescence and SDS PAGE methods were used. In the light of biochemical and biophysical studies; It was determined that fructose disrupted the structure of IgG protein and the protective effect of the mixture on IgG glycation. In the second stage, the effects of fructose and mixin in culture medium were investigated in lymphocyte cells isolated from blood from volunteers (18-35 years old, healthy). It was observed that fructose caused lymphocyte cell death. Chemical modifications resulting from its glycation, reactive carbonyl formation and amino acid oxidation were detected by cell death. It was observed with the increase in the number of cells that glutathione, selenium and oleuropein, which are soldiers of the free radical defense system, maintain the current healthy state of the cell. The reason for this remarkable increase may be that selenium oleuropein and glutathione break down free radicals, have antioxidant effects, inhibit toxins by activating some enzymes, and support vitamin metabolism by activating various pathways in the cell. This study suggests that dietary AGEs may have a significant effect on the lymphocyte cell cycle. It has been a pioneering study to examine dietary AGEs in the main autoimmune/inflammatory, to investigate its role in diseases and to conduct larger-scale studies. As a result, it was determined that fructose has an important role in the immune system and the prepared mixture is a protective agent for IgG, one of the immune system protein.