Hücre içi mekanizmalara dayalı intrasellüler kalsiyum artışının apoptoz üzerine etkileri
The effects of intracellular calcium increase on apoptosis based on intracellular mechanisms
Yazar: ELİF APAYDIN
Danışman: PROF. DR. ZERRİN SELLER
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı / Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu tez kapsamında integrinler aktif formda iken ovaryum kanser hücrelerinde (SKOV-3) ER stres oluşturulduğunda intrasellüler kalsiyum artışının apoptotik etkileri incelenmiştir. SKOV-3 hücreleri 50 μg/ml Fibronektin ile bağlandıktan sonra 30 ya da 60 dakika süre ile 24 M TN uygulaması ile ER stresi oluşturulup, intrasellüler kalsiyum artışı ve mobilizasyonu Fluo-3 AM ve Rhod-2 AM boyaları ile işaretlenerek floresan mikroskopta görüntülenmiştir. Fibronektine bağlı SKOV-3 hücrelerinin bağlanma kapasiteleri ER stresi sonrasında Gerçek Zamanlı Hücre Analiz Sisteminde (RTCA) incelenmiş ve bağlamanın TN uygulama dozuna ve zamanına bağımlı olarak azaldığı tespit edilmiştir. İntegrin aktivasyon düzeyi arttırılmış SKOV-3 hücrelerinde, TN uygulaması sonrasında RT-PCR ile Bax, Bcl-2, Bcl-XL, sitokrom c, EndoG, AIF, kalpain 1, kalpain 2, kaspaz 3, kaspaz 8 ve FAK genlerin mRNA ekspresyon düzeyleri incelenmiştir. RT-PCR sonuçlarına göre farklı apoptotik yolakların etkili olduğu belirlenmiştir.
Sonuç olarak; oluşturulan ER stresi modelinde ve metastatik potansiyeli arttırılmış SKOV-3 hücrelerinde ER stresinin apoptozu uyardığı gösterilmiş olup, kısmen apoptotik mekanizması aydınlatılmıştır. Apoptotik yolakların tam olarak belirlenmesi ile elde edilecek sonuçlar, ovaryum kanserinde baskılanmış apoptoz mekanizmasının detaylarını ortaya koymakla beraber mortalite oranı yüksek olan bu kanser türünün tedavisine yönelik ilaç geliştirme açısından fayda sağlayacaktır.

Abstract:
In this thesis, apoptotic effects of intracellular calcium increase were investigated by genetaring endoplasmic reticulum stress in SKOV-3 ovarian cancer cells while integrins were activated. 
During the SKOV-3 cells were adhering to 50 g/ml fibronectin, endoplasmic reticulum stress was formed with adding 24 M tunicamycin and incubated 30 or 60 minutes. Afterwards, intracellular Ca+2 increase and mobility were imaged by marking with Fluo-3 AM and Rhod-2 AM dyes in fluorescent microscope. In addition to, the binding capacity of SKOV-3 cells to fibronectin was investigated by using Real Time Cell Analyser (RTCA) system and the results obtained here were showed that the adhesion of cells decreased dependend on time and dose of tunicamycin. .In SKOV-3 cells whose integrin activation level increased, mRNA expression levels of Bax, BcL-2, Bcl-XL, cytocrome c, EndoG, AIF, calpain 1,calpain 2, caspase 3, caspase 8 and FAK genes were also investigated by RT-PCR. These result indicated that in our system, SKOV-3 cells might be using the various apoptotic pathways rather than one.
In conclusion, forming stress in endoplasmic reticulum induced apoptosis in high metastatic SKOV-3 cells. The results obtained from this study would be useful for drug development intended for therapy of these cancer type whose mortalite rate is high.