Arı sütünün (royal jelly) Yenidoğan rat büyüme plağına histomorfometrik ve immünohistokimyasal etkileri
Histomorphometric and immunohistochemical effects of royal jelly on newborn rats' growth plate
Yazar: MURAT SEVER
Danışman: DOÇ. DR. MUSTAFA ÖZGÜR PİRGON
Süleyman Demirel Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Arı sütü = Royal jelly ; Arılar = Bees ; Büyüme plağı = Growth plate ; Büyüme plağı = Growth plate ; Sıçanlar = Rats ; Östrojenler = Estrogens ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Amaç: Aileler özellikle çocuklarının büyüme ve gelişmesinde, daha sağlıklı bireyler olarak yetişmelerinde son dönemlerde alternatif tedavi yöntemlerini sıkça kullanmaktadırlar. Ailelerin sıkça kullandığı alternatif tedavi yöntemlerinden bir tanesi de apiterapidir.  Apiterapi ürünlerinden de en sık kullanılan arı sütüdür (royal jelly). Yapılan çalışmalarda arı sütünün östrojenik etkisi olduğuna dair önemli kanıtlar elde edilmiştir. Bu çalışmanın amacı, arı sütünün sahip olduğu östrojenik (13-15) etki sebebi ile büyüme plağının erken kapanmasına yol açarak boy kısalığına neden olup olmadığını araştırmak ve özellikle ileri yaş kadınların önemli bir sağlık problemi olan osteoporoz-kemik sağlığı hastalıklarına yönelik yapılacak araştırmalara katkı sağlamaktır.
Metot: Çalışmaya Sprague-Dawley tipi 30 adet 21 günlük rat alındı. Bütün ratların aynı ortamda kalması sağlandı (sıcaklık: 22±2 °C, nem: %55±5, aydınlık süresi: 12 saat, karanlık süresi:12 saat). Benzer tipte ve miktarda standart laboratuvar besinleri verildi. Ratların su alımı serbest bırakıldı. Ratlar randomize olarak iki gruba ayrıldı. Çalışma grubu olarak belirlenen gruba 15 gün boyunca 50 mg/kg'dan arı sütü, kontrol grubu olarak belirlenen gruba ise 15 gün boyunca bir mL distile su gavaj yöntemi ile günde tek doz olarak ve aynı saatte verildi. Çalışma sonunda ratlar sakrifiye edilerek büyüme plakları ve kan örnekleri alındı. Büyüme plakları üzerinde histomorfometrik ölçümler ve immünohistokimyasal incelemeler yapıldı. Ayrıca alınan kan örneklerinden biyokimyasal olarak hormonal inceleme amaçlı östrojen, IGF-I ve BH çalışıldı.
Bulgular: Çalışma sonrası yapılan değerlendirmede, antropometrik ölçümlerden, arı sütü alan grubun ağırlık artışı, kontrol grubuna göre anlamlı olarak yüksekti (ağırlık değişimi, çalışma grubu 41.4±7.1 g ve kontrol grubu 31.5±4.8 g, p<0.001). Bir diğer değerlendirdiğimiz parametre olan kuyruk uzunluğu ölçümü de kontrol grubuna göre çalışma grubunda anlamlı olarak yüksekti (kuyruk uzunluk değişimi, çalışma grubu 3.7±0.6 cm ve kontrol grubu 3.6±0.3 cm, p=0.04).
Biyokimyasal açıdan yaptığımız hormonal değerlendirmede baktığımız östrojen düzeyleri çalışma grubunda 708±353 pg/mL, kontrol grubunda ise 582±85 pg/mL olarak sonuçlandı ve bu sonuç istatistiksel olarak anlamlı bir fark oluşturmuştu (p=0.03). Diğer bir parametremiz BH düzeyleri ise, çalışma grubunda 2.8±5.7 ng/dL, kontrol grubunda ise 1.05±0.6 ng/dL olarak bulundu ve bu sonuç istatistiksel olarak anlamlıydı (p=0.04). Hormonal açıdan son değerlendirdiğimiz parametre olan çalışma grubu IGF-I düzeyi 2.07±2.7 ng/dL, kontrol grubu ise 4.04±4 ng/dL olarak bulundu ve bu sonuç istatistiksel olarak anlamsızdı (p=0.175).
Histomorfometrik açıdan yapılan değerlendirmede, çalışma grubu ratların total büyüme plağı uzunluğu 5.2±0.1 mm iken kontrol grubunun total büyüme plağı uzunluğu ise 2.7±0.8 mm idi ve aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptandı (p<0.001).
İmmünohistokimyasal açıdan yaptığımız değerlendirmede, çalışma grubu ratların östrojen reseptör ekspresyonu, hipertrofik zon açısından bakıldığında  %38±20 iken kontrol grubunun yüzdesi ise %0 olarak saptandı ve bu istatistiksel olarak anlamlıydı (p<0.001). Proliferatif zon açısından yapılan değerlendirmede ise çalışma grubu %81.3±17.6 iken kontrol grubu %14.3±16.3 olarak bulundu, aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptandı (p<0.001). Ki-67 proliferasyon boyamasında ise, çalışma grubu hipertrofik zon %27.3±7.9 iken kontrol grubu ise %8±11.6 olarak saptandı ve bu istatistiksel olarak anlamlıydı (p<0.001). Proliferatif zon açısından yapılan değerlendirmede ise çalışma grubu %59±14.9 iken kontrol grubu %22.3±17.8 olarak bulundu, aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptandı (p<0.001). İmmünohistokimyasal olarak son değerlendirdiğimiz parametre olan IGF-I reseptör ekspresyon boyamasında, çalışma grubu %31±14.7 iken kontrol grubu %3±5 idi ve aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptandı (p<0.001)
Sonuç: Bu çalışma sonunda, arı sütünün östrojenik etkisi olduğunu gösteren önemli kanıtlar elde edilmiştir ve bu alanda ileride yapılacak çalışmalar için önemli verilere ulaşılmıştır

Abstract:
The Aim: In recent years families, especially in the children's growth and development, often use alternative treatments as growing more healthy individuals. One of the alternative treatment method, often used by families, is apitherapy. Royal jelly is the most commonly used product of apitherapy. In studies, considerable evidence supporting the estrogenic effect of royal jelly was obtained. The purpose of this study is to investigate whether of the growth plate with estrogenic effects that cause premature closure of the owner of the royal jelly lead to the cause of short stature and especially for women, the elderly will be a major health problem of osteoporosis and bone health to illness is to contribute to research.
Method: The study enrolled 30 numbers of 21-day rat, type of Sprague-Dawley. All rats were allowed to stand in the same environment (temperature: 22±2 °C, humidity: 55±5%, lightperiod: 12 hours, dark period: 12 hours). Similar types and amounts of Standard laboratory food were given. Water intake of rats was released. The rats were randomly divided into two groups. The group identified as the working group was given for 15 days 50 mg/kg of royal jelly, while the group  specified as the control group was given as a single dose by gavage with one mL of distilled water method for 15 days and two groups were given at the same time. At the end of the study, the rats were sacrificed, blood samples and the growth plate were taken. Histomorphometric measurements and immunohistochemical examinations were performed on the growth plate. On the received blood samples, estrogen, IGF-I and GH were studied biochemically with the purpose of hormonal evaluation.
Results: By the evaluation made after study, in anthropometric measurements weight gain of the group taking royal jelly was significantly higher than the control group (weight change: working group 41.4±7.1 g and control group 31.5±4.8 g, p<0.001). Another evaluated parameters that we measure, tail length measurement was significantly higher in the working group compared to the control group (tail length change: working group 3.7±0.6 cm and contol group 3.6±0.3 cm, p=0.04 ).
In the hormonal evaluation made biochemically, estrogen levels that we analized were reported as 708±353 pg/mL in working group and as 582±85 pg/mL in control group. As a result, there was a statistically significant difference (p=0.03). Another parameter, the BH levels were found 2.8±5.7 ng/dL in working group and 1.05±0.6 ng/dL in control group, this was statistically significant (p=0.04). The last parameter that we evaluate hormonaly, IGF-I level was found 2.07±2.7 ng/dL in working group and 4.04±4 ng/dL in control group. This result was not statistically significant (p=0.175 ).
  By the histomorphometric evaluation, while the total length of growth plate of rats in the working group was measured as 5.2±0.1 mm, the total length of growth plate of rats in control group was measured as 2.7±0.8. A statistically significant difference was stated between them (p<0.001).
   By the evaluation made in terms of immunohistochemical, while estrogen receptor expression of rats in working groups was stated 38±20% in terms of the hypertrophic zone, percentage of the control group was stated 0% and this was statistically significant (p<0.001). By the evaluation made in terms of the proliferative zone, while the working group was stated 81.3±17.6%, the control group was stated 14.3±16.3%, a statistically significant difference was stated between them (p<0.001). Then, by Ki-67 proliferation staining, while the working group hypertrophic zone was stated 27.3±7.9% percentage of the control group was stated 8±11.6%, this was statistically significant (p<0.001). In the evaluation in terms of the proliferative zone, the working group was found 59±14.9% and the control group was found 22.3±17.8%, a statistically significant difference was stated between them (p<0.001). Finally, in the parameter that we evaluate immunohistochemical, IGF-I receptor expression staining, while the working group was resulted in 31±14.7%, the control group was resulted in 3±5%, a statistically significant difference was stated between them (p<0.001).
   Conclusion: In the end of this study significant evidences showing the estrogenic effects of royal jelly were obtained and for future studies in this field have been achieved important data.