Lidokainin indüklediği toksisite üzerine amniomax'ın etkisinin, kolon kanseri ve sağlıklı kolon hücre kültürü düzeyinde araştırılması
Investigation of the effect of amniomax on lidocaine induced toxicity at colon cancer and healthy colon cell culture level
Yazar: SEÇİL AZİME KARAKUŞ
Danışman: PROF. DR. KEMAL TOLGA SARAÇOĞLU
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Kartal Dr. Lütfi Kırdar Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation

Özet:
Amaç: Bu çalışmada in vitro olarak oluşturulan lidokain toksisitesine karşı AmnioMax®'ın etkisinin kolon kanseri ve sağlıklı kolon hücreleri üzerinde araştırılması amaçlanmıştır. 
Yöntem: Çalışmamızda insan kolon kanser hücresi (Lovo CCL-229™) ve sağlıklı kolon hücresi (CCD18-Co CRL-1459™) kullanıldı. Kontrol, lidokain, Amniomax® ve lidokain ile Amniomax® kombinasyonunun olduğu dört grup oluşturuldu. Kullanılan ilaç konsantrasyonları lidokain için %0.06, %0.13, %0.25, %0.5, %1, %2, %3, %4, %5 ve %10, Amniomax® için %0.625, %1.25, %2.5, %5, %10, %20, %40, %60, %80, %100 olarak belirlendi. Sitotoksisiteyi değerlendirmek için luminometrik ATP testi, hücre içi ROS'u belirlemek için florasan sinyal göstergesi H2DCF-DA, glutatyon düzeyini ölçmek için GSH-Glo™ kiti, hücre içi Ca2+ düzeyi için floresans özellikte olan Fura2AM boyası, mitokondriyal membran potansiyeli ölçmek için DiOC6(3), DNA hasarı için Comet Assay metodu, apopitozu belirlemek için AT/EB boyası kullanıldı. 
Bulgular: Artan lidokain konsantrasyonları hem sağlıklı (CCD-18Co) hem de kanser (LoVo) hücresinde canlılığı istatistiksel olarak anlamlı şekilde düşürdü. Artan Amniomax® konsantrasyonları hem sağlıklı hem de kanser hücrelerinde canlılığı istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde artırdı. AmnioMax® ile kombinasyon sadece lidokain verilen kanser ve sağlıklı kolon hücrelerinde canlılığın azalmasını istatistiksel anlamlı olarak önledi. Amniomax®'ın kombine dozda etkisi tek başına lidokaine göre sitotoksisite de koruyucu etki gösterdi. Artan lidokain konsantrasyonları hücre içi ROS ve Ca2+ düzeylerini indüklerken AmnioMax® ile kombinasyon artan ROS ve Ca2+ düzeylerini anlamlı olarak düşürdü. Artan lidokain konsantrasyonları hücre içi GSH ve MMP düzeylerini anlamlı olarak düşürürken, AmnioMax® ile kombinasyon azalan GSH ve MMP düzeylerini anlamlı olarak artırdı.  Artan lidokain konsantrasyonları DNA hasarını ve apoptozu indüklerken, AmnioMax® ile kombinasyon artan DNA hasarını ve apoptozu anlamlı olarak düşürdü.
Sonuç: Lidokain ile indüklenen sitotoksisitede AmnioMax®'ın sitoprotektif ve antiapoptotik etkinlik gösterdiği bulunmuştur. 
Anahtar kelimeler: Lidokain, Amniomax®, Sitotoksisite, Sitoprotektif, Hücre Kültürü, Canlılık, Apoptoz

Abstract:
Objectives: This study aimed to investigate the effect of AmnioMax® on colon cancer and healthy colon cells induced by lidocaine toxicity in vitro.
Methods: Human healthy colon cell hücresi (CCD18-Co CRL-1459™) and cancer colon cell (Lovo CCL-229™) were used in our study. Four groups were created with control, lidocaine, AmnioMax, and the combination of lidocaine and AmnioMax. The drug concentrations used were 0.06%, 0.13%, 0.25%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, and 10% for lidocaine, and 0.625%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, and 100% for AmnioMax. Luminometric ATP assay was used to evaluate cytotoxicity, fluorescent signal indicator H2DCF-DA was used to determine intracellular ROS, GSH-Glo™ kit was used to measure glutathione, fluorescent Fura-2AM stain was used to measure intracellular Ca2+ level, DiOC6(3) was used to measure MMP, comet assay method was used for DNA damage, AT/EB stain was used to determine apoptosis.
Results: Increasing lidocaine concentrations statistically significantly reduced viability in both healthy (CCD-18Co) and cancer (LoVo) cells. Increasing Amniomax® concentrations statistically significantly increased viability in both healthy and cancer cells. The combination with AmnioMax® statistically significantly prevented the decrease in viability in cancer and healthy colon cells treated only with lidocaine. The combined dose effect of Amniomax® showed a protective effect against cytotoxicity compared to lidocaine alone. While increasing lidocaine concentrations induced intracellular ROS and Ca2+ levels, the combination with AmnioMax® significantly reduced the increased ROS and Ca2+ levels. While increasing lidocaine concentrations significantly decreased intracellular GSH and MMP levels, the combination with AmnioMax® significantly increased decreased GSH and MMP levels. While increasing concentrations of lidocaine induced DNA damage and apoptosis, combination with AmnioMax® significantly reduced increased DNA damage and apoptosis.
Conclusion: It was found that AmnioMax® showed cytoprotective and antiapoptotic activity in lidocaine-induced cytotoxicity.
Key words: Lidocaine, Amniomax®, Cytotoxicity, Cytoprotective, Cell Culture, Viability, Apoptosis