Pankreas adenokarsinom hücre hattında etken flavonoid bileşenlerin kemopreventif ve gemsitabin'e karşı gelişen direnç üzerindeki etkilerinin araştırılması
Study on chemopreventive and on gemcitabine-based chemoresistance effects of flavonoid containing mixture in pancreatic adenocarcinoma cell lin
Yazar: ÇAĞATAY AYDOĞAN
Danışman: PROF. DR. HÜLYA YILMAZ AYDOĞAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı / Moleküler Tıp Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Adenokarsinom = Adenocarcinoma ; Flavonoidler = Flavonoids ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; PANC-1 = PANC-1 ; Pankreas hormonları = Pancreatic hormones ; Pankreas neoplazmları = Pancreatic neoplasms ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-neoplazm = Drug resistance-neoplasm

Özet:
Pankreas kanserlerinin %85-95'ini oluşturan pankreatik duktal adenokarsinom (PDAC) hastalarının 5-yıllık sağkalım oranı %9'dur. Günümüzde genel sağlık durumu iyi olan hastalarda lokal yayılım gösteren veya metastatik PDAC tümörlerinin tedavisinde birden fazla kemoterapötiği içeren ajanlar kullanılmakla beraber genel performansı düşük olan hastalarda Gemsitabin monoterapisi altın standart olmaya devam etmektedir. Gemsitabin'e artımlı maruz bırakma ile direnç kazandırılan Panc-1/GEM ve Panc-1 hücre hatlarında, bitkilerin çeşitli kısımlarında bulunan flavonoidleri içeren fenolik karışımın tek başına ve Gemsitabin ile birlikte viyabilite üzerindeki etkileri CCK-8 testi ile, migrasyon üzerindeki etkileri yara-iyileştirme testi ile ölçüldü. Ayrıca, bir anti-metastatik gen olan NDRG1'in ve bir ilaç atım pompası geni olan MRP5'in ekspresyonları mRNA düzeyinde gerçek-zamanlı PZR ile ölçüldü. Yaklaşık 1 yıl süren direnç kazandırma işlemi teyit edildikten sonra, fenolik karışımın dirençli ve dirençsiz Panc-1 hücrelerinin viyabiliteleri üzerindeki etkilerinin istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde farklı olmadığı, dirençşi hücrelerde Gemsitabin ile az da olsa sinerjistik bir etkisi olduğu bulundu. Fenolik karışım hem dirençli hem de dirençsiz hücrelerin migrasyonunu, Gemsitabin anlamlı bir etkide bulunmazken, düşük dozlarda yavaşlattığı ve yüksek dozlarda durdurduğu ölçüldü. Dirençli hücrelerde NDRG1 ve MRP5 genlerinin ekspresyonları anlamlı ölçüde düşüktür. Direnç kazandırılmamış hücrelerde hem Gemsitabin hem de fenolik karışım NDRG1 ve MRP5 genlerinin ekspresyonlarını değiştirmezken, fenolik karışım dirençli hücrelerde NDRG1 ve MRP5 genlerinin ekspresyonlarını, 2 kattan daha fazla arttırırken, Gemsitabin sadece NDRG1 genininkini arttırmıştır. Fenolik karışımın Gemsitabin'e karşı direnç kazanmış pankreas kanser hücrelerinde kazanmamışlarla aynı sitotoksisiteyi göstermesi, migrasyonu durdurabilmesi, NDRG1 geninin ekspresyonunu dirençli hücrelerde arttırması bu karışımın özellikle lokal yayılım gösteren Gemsitabin'e karşı dirençli PDAC tümörlerinde migrasyonu engelleme ve proliferasyonu durdurma konularında etkili olabilme potansiyelini göstermektedir.

Abstract:
The 5-year survival rate of patients with pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), which constitutes 85-95% of pancreatic cancers, is 9%. Though agents containing more than one chemotherapeutics are used in the therapy of locally advanced or metastatic tumors of patients who have high performance score, Gemcitabine monotherapy is still golden standart in the therapy of patients who are not eligible for surgical operation and combination chemotherapy. In Panc-1 cells and Gemcitabine-resistant Panc-1 cells (Panc-1/GEM) which were established by gradually increasing concentrations of GEM, the cytotoxicity and anti-migrative effects of a phenolic mixture containing flavonoids and combination of GEM and the mixture were calculated via CCK-8 assay and wound-healing assay, respectively. Additionally, the expressions of NDRG1 and MRP5 genes were evaluated by RT-PCR.  It is found that the cytotoxic effects of the mixture in both cell lines are not significantly different. Furthermore, Gemcitabine and the mixture have moderate synergistics effects in Panc-1/GEM cells. The mixture has anti-migration effects in both cell lines. Importantly, in Panc-1/GEM cells, the levels of mRNAs of NDRG1 and MRP5 genes are lower than the levels of Panc-1 cells. In Panc-1 cells, GEM and the mixture does not change the levels of two genes. Both increase the levels of NDRG1, but only the mixture elevates the levels of MRP5 in resistant-cells. In conclusion, the mixture could prevent migration of pancreas cancer cells and increases NDRG1 levels in only resistant-cells and further researches are needed to elucidate potential anti-cancer, anti-proliferative and anti-migrative effects on locally advanced and GEM-resistant PDAC tumors.