Kütahya'da bulunan doğal ortam sularından Legionella spp. izolasyonu ve bazı özelliklerinin belirlenmesi
The isolation and determination of some properties of Legionella spp. from naturally found environmental waters in Kutahya
Yazar: ÖZLEM SANİYE BAYRAKTAR
Danışman: DOÇ. DR. FERDAĞ ÇOLAK
Dumlupınar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Çalışmada, Kütahya ilinde bulunan doğal ortam sularından toplam 150 adet su örneği (2016 yılı Haziran –Eylül aylarında)  toplanmıştır. Su örnekleri filtrasyon işleminden geçirildikten sonra BYCE besiyerine filtreler yerleştirilerek inkübasyona bırakılmıştır. Ardından şüpheli kolonilere Lateks aglütinasyon test kiti uygulanmıştır. Elde edilen 8 Legionella izolatının 6 tanesinin serogrubu 2-15, 2 tanesinin ise Legionella spp. olarak bulunmuştur. İzolatların, ağır metal dirençlilik testleri, antibiyotik dirençlilikleri ve sekonder metabolit üretme yetenekleri araştırılmıştır. İzole edilen Legionella bakterilerinin sekonder metabolit üretme yetenekleri Gram pozitif (B. cereus, B. licheniformis, S. epidermidis ve S. aureus), Gram negatif (E. aerogenes, P. aeruginosa, E. coli ve A. hydrophila), mayalardan (S. cerevisiae ve S. baulardii) kullanılarak agar blok yöntemi ile belirlenmiştir. İzolatların genel olarak sekonder metabolit üretiminin olmadığı ya da çok zayıf olduğu tespit edilmiştir. E. coli ATCC 25922 suşu ağır metal ve antibiyotik direçlilik testinde  referans suş olarak kullanılmıştır. Yapılan ağır metal toleranslılık (MİK) deneyinde, ağır metallere karşı en yüksek MİK değeri referans suş ile kıyaslandığında; %100 kurşun ve krom, %12.5 nikel, çinko, kobalt ve bakır ağır metaline karşı dirençli olduğu saptanmıştır. İzolatların demir ve kadmiyum ağır metaline karşı herhangi bir dirence sahip olmadığı saptanmıştır. Antibiyotik dirençlilik testleri disk difüzyon ve mikrodilüsyon yöntemi ile belirlenmiştir. Antibiyotik dirençlilik deneyinde 3 farklı sıcaklık (27°C, 37°C ve 40°C) kullanılmıştır. Kullanılan antibiyotikler Ampisilin, İmipenem, Sefotaksim, Amikasin, Kanamisin, Tetrasiklin, Eritromisin, Ofloksasin, Sulbaktam, Gentamisin, Doksisiklin, Siprofloksasin ve Levofloksasin'dir. Deneyler sonucunda disk difüzyon yöntemine göre en yüksek antibiyotik dirençliliğinin sefotaksime antibiyotiğine karşı olduğu belirlenmiştir. Doksisiklin, Siprofloksasin ve Levofloksasin antibiyotikleri kullanılarak mikrodilüsyon yöntemi ile Legionella izolatlarının Minimal İnhibisyon Konsantrasyonları (MİK) belirlenmiştir. İzolatların hepsinin denenen üç antibiyotiğe karşı duyarlı olduğu belirlenmiştir. 

Anahtar kelimeler: Ağır metal, antibiyotik direçliliği, Legionella spp.

Abstract:
In this study, a total of 150 water samples (from June to September 2016) were collected from the naturally exist environmental waters in the province of Kütahya. After the water samples were passed through the filtration process, filters were placed on the BYCE medium and incubation was allowed in the experimental protocol line. Latex agglutination test kit was then applied to the suspected colonies. Six of the 8 Legionella isolates were found to be serogroup 2-15, and 2 of them were Legionella spp.. Isolates have been investigated for their heavy metal resistance tests, antibiotic resistance and secondary metabolite production ability. The ability of the isolated Legionella bacteria to produce the secondary metabolite is determined by usage of Gram positive (B. cereus, B. licheniformis, S. epidermidis and S. aureus), Gram negative (E. aerogenes, E. aeruginosa, E. coli and A. hydrophila) and yeasts (S. cerevisiae and S. baulardii) by executing agar block method. E. coli ATCC 25922 strain were used as reference strains in heavy metal and antibiotic resistance tests. When compared with the highest MIC value reference strain against heavy metals in the heavy metal tolerance (MIC) assay performed, the 100% resistance against lead and chromium, 12.5% against nickel, zinc, cobalt and copper heavy metals were detected. The isolates were found to have no resistance to iron and cadmium heavy metals. Antibiotic resistance tests were performed by disk diffusion and microdilution methods. Three different temperatures (27°C, 37°C and 40°C) were used in the antibiotic resistance experiment. The antibiotics used were Ampicillin, Imipenem, Cefotaxime, Amikacin, Kanamycin, Tetracycline, Erythromycin, Ofloxacin, Sulbactam, Gentamycin, Doxycycline, Ciprofloxacin and Levofloxacin. As a result of the experiments, it was determined that the highest antibiotic resistance by disk diffusion method was against cefotaxime antibiotic. Minimal Inhibition Concentrations (MIC) of Legionella isolates were determined by microdilution method using doxycycline, ciprofloxacin and levofloxacin antibiotics. All of the isolates were determined to be susceptible to three antibiotics tested.

Key words: Heavy metal, antibiotic resistance, Legionella spp.