Arum dıoscorıdıs bitki ekstraktının, tozasertıb ile birlikte CFPAC-1 pankreas karsinoma hücre hattı üzerindeki antikanser etkisinin ın-vıtro araştırılması
The in vitro research of anti-cancer effects arum dioscoridis plant extract with tozasertib on CFPAC-1 pancreas carcinoma cell line
Yazar: ERSİN ÖZTÜRK
Danışman: DOÇ. DR. AHMET ATA ÖZÇİMEN
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Pankreas kanserinin sessiz gelişmesi ve ilerlemesi, aynı zamanda tıbbi tedaviye karşı direnç göstermesi bakımından tedavisi zor bir kanser tipidir. Pankreas kanserinin oluşum ve ilerleme mekanizmaları açıklanmaya çalışılmakta, aynı zamanda kanser hücrelerinin çoğalmalarının durdurulması için birçok farklı yöntem aranmaktadır. İnsanlar yıllardır çeşitli hastalıkların tedavisinde bazı yabani bitkileri "geleneksel" ve "doğal ilaç" olarak kullanmaktadırlar. Fenolik bileşikler kanserin başlama, ilerleme, anjiyogenez ve metastaz aşamalarında pek çok yolakta etkili olabilmektedir. Tarsus Keşbükü köyünden toplanılıp teşhis edilmiş olan Arum dioscoridis bitkisi kurutulup ethanol ekstraksiyonu (2:10 w/v) yapılmıştır. HPLC-DAD kullanılarak özütte Viteksin bileşiği yapılan ekstraksiyon içerisinde 4,1 mM olarak tespit edilmiştir. xCELLigence E-Plate 16 sistemi ile Özüt IC50 değeri 48 saat için 540 μg/ml olarak hesaplanmıştır. Birlikte etki için Tozasertib 10 nM ve Özüt 351 μg/ml olarak 48 ve 72 saatler için CFPAC-1 hücrelerine uygulanmış, Annexin V apoptoz testi ve DNA hücre döngüsü analizi yapılmıştır. İlaç ve ekstraksiyon kombinasyonu 72 saat için % 70 üzeri yüksek bir oranda kanser hücrelerini apoptoza yönlendirmiştir. CASP-3 ifadelerinde de 72 saat için kombinasyon grubunda 2 kat artış gözlenmiştir. Ayrıca, kombinasyonun CFPAC-1 hücrelerinde DNA hücre döngüsü analizinde 72 saatte S fazı düzeyinin çok düştüğü gösterilmiştir. Özüte maruz kalan hücrelerin G1 fazında ve Tozasertib'e maruz kalan hücrelerin G2 fazında tutuklandığı bulunmuştur. CPC yolağı gen ifadelerinde de 48 saat için özüt ve kombinasyon gruplarında anlamlı bir azalma görülmektedir. xCELLigence CIM-Plate 16 ve yara açma deneyleri ile Özüt içeren tüm gruplarda migrasyonun durduğu görülmüştür. Anjiyogenezde rol oynayan VEGF ekspresyonu düzeylerinde de Özüt içeren gruplarda %37 oranında azalma olduğu görülmektedir. Sonuç olarak; Arum dioscoridis ethanolik özütünün anti-migratif bir ajan olarak kullanılabileceği ortaya konulmuştur.

Abstract:
Pancreatic cancer is a difficult form of cancer since its silence and progression as well as its resistance to medical treatment. The mechanisms of formation and progression of pancreatic cancer are being tried to be explained and many different methods are being sought to halt the proliferation of cancer cells. For many years, people have used some wild plants as "traditional" and "natural medicine" in the treatment of various diseases. Phenolic compounds are effective in many pathways in cancer initiation, progression, angiogenesis and metastasis. Arum dioscoridis plant, collected and identified in the village of Tarsus Keşbükü, was dried and subjected to ethanol extraction (2:10 w/v). The HPLC-DAD was used to determine the amount of Vitexin in the extract as 4.1 mM in the extraction. Using the xCELLigence E-Plate 16 system, the Viteksin ext IC50 value was calculated as 540 μg/ml for 48 hours. Tozasertib 10 nM and 351 μg/ml were applied CFPAC-1 cells for 48 and 72 hours for synergic effect and Annexin V apoptosis test and DNA cell cycle analysis test were performed. The combination of drug and extraction directed apoptosis of cancer cells at a high rate of over 70% for 72 hours. CASP-3 gene expressions show a 2-fold increase in the 72-hour combination. Furthermore, according to the DNA cell cycle analysis of the combination on the CFPAC-1 cells, it was demonstrated that the S phase level dropped significantly at 72 hours. The extract and tozasertib treated cells were arrested in the G1 and G2 phase respectively. CPC gene expression also showed a significant decrease in extract and combination groups for 48 hours. Migrations stopped in all groups containing extracts with xCELLigence CIM-Plate 16 and wound healing experiments. VEGF gene expression levels that play a role in angiogenesis also appear to %37 decrease in extract-containing groups. As a result; Arum dioscoridis ethanolic extract can be used as an antimigrative agent.