Alfa amanitin ile oluşturulmuş karaciğer toksisitesi üzerine Nigella sativa ve Punica granatum yağının koruyucu etkilerinin araştırılması
Investigation of the protective effects of Nigella sativa and Punica granatum oil on liver toxicity generated by alpha amanitin
Yazar: FATİH SEZER
Danışman: PROF. DR. SEVİL ÖZGER İLHAN
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Amanitinler = Amanitins ; Bitkisel yağlar = Plant oils ; Karaciğer = Liver ; Mantar zehirlenmesi = Mushroom poisoning ; Nar çekirdeği = Pomegranate seed ; Nigella sativa L. = Nigella sativa L. ; Punica granatum = Punica granatum ; Toksisite = Toxicity ; Tıbbi bitkiler = Plants-medicinal ; Çörekotu = Nigella

Özet:
Mantar zehirlenmeleri mantar toplamanın yaygın olduğu bölgelerde sıktır. Ölümcül sonuçların büyük kısmından amatoksin içeren mantarlar sorumludur. Amatoksinlerin ana hedefi karaciğer dokusudur. Alfa amanitin amatoksinler arasında karaciğere en toksik olandır. Nigella sativa (çörek otu) yağı ve Punica granatum (nar çekirdeği) yağı antioksidan, antiinflamatuar, hepatoprotektif özelliklere sahiptir. Pek çok ilaç ve madde toksisitesinde karaciğer koruyucu etkileri ortaya konmuştur. Çalışmamızda alfa amanitinle oluşturulan karaciğer toksisitesinde çörek otu yağı ve nar çekirdeği yağının koruyucu etkilerinin araştırılmasını amaçladık. Çalışma 8 haftalık 36 adet Sprague Dawley cinsi erkek sıçan üzerinde gerçekleştirildi. İlk gruba 0,1 ml salin (ip), 2. gruba 2 ml/kg/gün nar çekirdeği yağı (po), 3. gruba 2 ml/kg/gün çörek otu yağı (po), 4. gruba 3 mg/kg alfa amanitin (ip) ve 2 ml/kg/gün çörek otu yağı (po), 5. gruba 3 mg/kg alfa amanitin (ip) ve 2 ml/kg/gün nar çekirdeği yağı (po), 6. gruba 3 mg/kg alfa amanitin (ip) uygulandı. 8. günde hayvanlardan karaciğer dokusu ve serum örnekleri alındı. Serum ALT, AST, IL-6, TNF-α seviyeleri ELISA ile analiz edildi. Serum ALT, AST, ALP, total protein seviyeleri otoanalizörle analiz edildi. Karaciğer dokusu histopatolojik olarak değerlendirildi ve WB ile cleaved caspase 3 seviyeleri incelendi. Grupları değerlendirmek için tek yönlü ANOVA ve post hoc Tukey testi kullanıldı. 2 grubu karşılaştırmak için T testi kullanıldı. P<0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Alfa amanitin verilen gruplarda cleaved caspase 3 seviyeleri anlamlı olarak yüksekti (p<0.05). Alfa amanitin ile oluşturulan karaciğer toksisitesinde çörek otu yağı verilmesiyle cleaved caspase 3 seviyesi değişmedi ancak nar çekirdeği yağı verilmesiyle azaldı (p=0,98 ve p=0,03). Histopatolojik incelemede alfa amanitin ve yağ verilen gruplarda minimal inflamasyon (portal ve lobüler) ve minimal steatoz görüldü. Nar çekirdeği yağı ve içerdiği aktif maddeler alfa amanitin toksisitesinde gelecekte oluşturulabilecek klinik tedavi yaklaşımlarına katkı sağlayabilir.

Abstract:
Mushroom poisonings are common in areas where mushroom picking is common. Amatoxin containing mushrooms are responsible for most of fatal consequences. The main target of amatoxins is liver tissue. Alpha amanitin is the most toxic for the liver among other amatoxins. Nigella sativa (black cumin) oil and Punica granatum (pomegranate seed) oil have antioxidant, antiinflammatory and hepatoprotective properties. Liver protective effects have been demonstrated in many drug and substance toxicities. In our study, we aimed to investigate the protective effects of black cumin oil and pomegranate seed oil in liver toxicity caused by alpha amanitin. The study was carried out on 36 8-week-old male Sprague Dawley rats. 0,1 ml saline (ip) to group 1, 2 ml/kg/day pomegranate seed oil (po) to group 2, 2 ml/kg/day black cumin oil (po) to group 3, 3 mg/kg alpha amanitin (ip) and 2 ml/kg/day black cumin oil (po) to group 4, 3 mg/kg alpha amanitin (ip) and 2 ml/kg/day pomegranate seed oil (po) to group 5, 3 mg/kg alpha amanitin (ip) to group 6 was administired. The liver tissue and serum samples were obtained from animals on 8th day. Serum ALT, AST, IL-6, TNF-α levels were analyzed by ELISA. Serum ALT, AST, ALP, total protein levels were analyzed by autoanalyzer. The liver tissue was histopathologically examined and the levels of cleaved caspase 3 were examined by WB. One-way ANOVA and post hoc Tukey tests were used to evaluate the groups. T test was used to compare 2 groups. P<0.05 was statistically considered significant. Cleaved caspase 3 level was significantly higher in groups given alpha amanitin (p<0.05). Cleaved caspase 3 level did not change with the administration of black cumin oil in liver toxicity induced by alpha amanitin, but it decreased with the administration of pomegranate seed oil (p=0,98 ve p=0,03). In the histopathological examination, minimal inflammation (portal and lobular) and minimal steatosis were observed in alpha amanitin and oil administered groups. Pomegranate seed oil and its active ingredients may contribute to future clinical treatment approaches in alpha amanitin toxicity.