Basınç ülseri oluşturulmuş fare modellerinde ıl 1-alfa, ıl 1-beta, ıl 6, ıl 17, adamts 5 düzeylerinin tespiti
Determination of il 1-alpha, il 1-beta, il 6, il 17, adamts 5 levels in mouse models for pressure ulcer
Yazar: MUSTAFA SAĞLAM
Danışman: DOÇ. DR. BETÜL BAKAN
Turgut Özal Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Fiziksel Tıp ve Rehabilitasyon = Physical Medicine and Rehabilitation

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı, basınç ülseri oluşturulmuş fare modellerinde, yara bölgesinde IL 1-alfa, IL 1-beta, IL 6, IL 17 ve ADAMTS 5 mRNA ekspresyon düzeylerini göstermektir.

Materyal-Metod: Çalışmamızda 10 tane BALB/c-fare kullanıldı. Bunlar her grupta 5'er tane olmak üzere deney ve kontrol gruplarına ayrıldı. Deney grubundaki farelerin sırt derilerinde basınç ülseri modeli oluşturmak amacıyla 2 adet seramik manyetik plak ile iskemi/reperfüzyon hasarı oluşturuldu. Sonrasında basınç ülseri oluşan bölgelerden ve kontrol grubundaki farelerin sağlam sırt derilerinden biyopsiler alındı. Alınan biyopsi materyallerine hematoksilen-eozin boyama yapıldı ve ışık mikroskobu altında incelendi. Materyallerden real-time PCR yöntemiyle IL 1-alfa, IL 1-beta, IL 6, IL 17 ve ADAMTS 5 mRNA ekspresyonları tespit edildi ve deney grubu ile kontrol grubu istatistiksel açıdan karşılaştırıldı.

Bulgular: Işık mikroskobu incelemesinde, kontrol grubunda normal histolojide izlenen deri ve derialtı ile altında kalan kas tabakası izlendi. Dermiste  granüler sitoplazmalı mast hücreleri dağınık olarak görüldü. Deney grubuna ait tüm örneklerde dermal  değişikliklere ek olarak epidermal ve kas tabakası değişiklikleri içeren alanlar gözlendi. Epidermiste incelme ve hafif gevşemiş ödemli görünüm; dermiste interstisyel inflamatuar hücre infiltrasyonu, mast hücre sayısında azalma, deri ekleri kıl follikülleri çevresinde hafif iltihabi hücre infiltrasyonu, kapiller dilatasyon, konjesyon; kas tabakasında ise kas liflerinde ödem, gevşeme şeklinde hafif derecede değişiklikler dikkat çekti. Bunun yanında epidermiste gevşemiş ödemli görünüm ve belirgin derecede  incelme ve  epitelin dejenerasyonu; dermiste interstisyel  inflamatuar hücre infiltrasyonunda belirginlik, deri ekleri kıl follikülleri çevresinde belirgin  iltihabi hücre infiltrasyonu, kapiller dilatasyon, konjesyon; kas tabakasında ise kas liflerinde belirgin ödem, gevşeme ve dejenerasyon gösteren kas lifleri şeklinde ağır derecede değişiklikler tespit edildi. Ancak deney grubundaki değişiklikler dominant olarak hafif derecede değişiklikler olarak görüldü. RT-PCR yöntemiyle bakılan IL 1-alfa, IL 6, IL 17 ve ADAMTS 5 RNA ekspresyon sonuçları, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında deney grubunda anlamlı derecede yüksek bulundu (p<0,05). IL 1-beta RNA ekspresyonu ise deney grubunda kontrol grubuna oranla 2,4 kat yüksek olmasına rağmen, sonuç istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı. 

Sonuç: Basınç ülseri oluşturulmuş farelerde IL 1-alfa, IL 6, IL 17 ve ADAMTS 5 mRNA ekspresyonları anlamlı derecede yüksek bulundu. IL 1-beta RNA ekspresyonu ise deney grubunda kontrol grubuna oranla 2,4 kat yüksek olmasına rağmen, sonuç istatistiksel olarak anlamlı bulunmadı. Bu sonuçlar basınç ülseri etyopatogenezinin daha iyi açıklanabilmesi ve gelecekte geliştirilebilecek lokal sitokin ve sitokin antagonisti tedaviler için yol gösterici olacaktır. Basınç ülseri sitokin profilinin çıkarılması ve lokal tedavilerin geliştirilebilmesi için daha geniş çaplı hayvan ve insan deneylerine ihtiyaç duyulmaktadır.  

Anahtar Sözcükler: basınç ülseri; interlökinler; matriks metalloproteinazlar, RNA ekspresyonu

Abstract:
Aim: This study aimed to investigate the extend of IL 1-alpha, IL 1-beta, IL 6, IL 17 and  ADAMTS 5 mRNA expression in the pressure ulcer sites in mouse models.

Material and methods: A total of 10 BALB/c mice were used in the study. Mice were stratified to control and pressure ulcer (PU) groups. Two seramide magnetic plaques were used to induce ischemia/perfusion injury in the skin in the back region of rats in PU group. Biopsies of the PU sites were were stained with hemotoxylene-eosin dyes and were examined under light microscopy. From the biopsy material using real time PCR method, IL 1-alpha, IL 1-beta, IL 6, IL 17 ve ADAMTS 5 mRNA expressions were measured and compared statistically for each group.

Results: Under light microscopy, in control group normal histopathological configuration of skin, subcutaneous tissue and muscle tissue were observed. In the dermis layer, mast cells with granular cytoplasma were observed. In the majority of rats in PU group,  biopsy material showed changes in the dermal, epidermal and muscular layers. There was thinning and mild edematous changes  in the epidermal layer, interstitial inflammatory cell infiltration, decreased number of mast cells, capillary dilatation, congestion and mild inflammatory cell infiltration around hair follicles. In the muscle layer mild changes were observed like edema, loosening and degeneration. As well as there were serious changes like thinning and epithelial degeneration, profound interstitial inflammatory cell infiltration in the dermis and skin appendeges like hair follicles and intense edema, loosening and degeneration in the muscle layer. However; as a whole the histopathology in the PU group was considered as mild changes. Compared with the control group, IL 1-alfa, IL 6, IL 17 and ADAMTS 5 mRNA expressions were significantly upregulated in the experimental group (p<0,05). Although IL 1-beta RNA expression was 2.4 times higher in the experimental group compared to the control group, the results were not statistically significant.

Conclusion: Compared with the control group, IL 1-alfa, IL 6, IL 17 and ADAMTS 5 mRNA expressions were significantly upregulated in the experimental group (p<0,05). Although IL 1-beta RNA expression was 2.4 times higher in the experimental group compared to the control group, the results were not statistically significant. This result may help to better understand the ethiopathogenesis of  PU and will guide new strategies of local cytokine and cytokine antagonist therapies in future. However, larger series of studies both animal and human are necessary for determining the cytokine profile.

Key Words: pressure ulcer, interleukines, matrix metalloproteinases, RNA expression