Kolsişin ve kurkumin'in A549 akciğer kanseri hücreleri üzerindekiantiproliferatif etkinliği
Antiproliferative effectiveness of colchine and curkumin on A549 lung cancer cells
Yazar: LAMAN GADIRLI
Danışman: DOÇ. DR. NURDAN SARAÇ
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Curcuma longa L. = Curcuma longa L. ; Kolşisin = Colchicine ; Kurkumin = Curcumin

Özet:
Kansere bağlı ölümlerde ilk sıralarda yer alan akciğer kanseri vakaları Dünya'da ve ülkemizde giderek artmaktadır. Yaygın görülen bu kanser türünün tedavisi için mevcut kemoterapötiklere alternatif olabilecek yeni ajan arayışları arasında doğal ürünler ve özellikle de bitkiler büyük bir öneme sahiptir. Curcuma longa L.'nın köklerinden (rizomlarından) elde edilen kurkumin ve Colchicum autumnale L. bitkisinin bir alkaloidi olan kolşisinin çeşitli kanser türleri üzerindeki antiproliferatif aktiviteleri araştırılmaktadır. 
Bu tez çalışmasında, antikanser ajan olarak potansiyel etkinliği bilinen kolşisin ve kurkuminin kombinasyonlarının A549 akciğer kanseri hücre hattı üzerindeki sinerjik aktiviteleri araştırılmıştır. Antiproliferatif aktivite MTT (3-(4,5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide) ve Nötral Red boyama yöntemleri ile tespit edilmiştir. İlk olarak kolşisin ve kurkuminin A549 hücre hattı üzerindeki IC50 değerleri belirlenmiş, ardından IC50 ve altındaki dozlarda kombine edilen bu iki bileşiğin aynı hücre hattı üzerindeki sinerjik antiproliferatif aktivitesi belirlenmiştir. 
Kolşisinin A549 Akciğer kanseri hücre hattı üzerindeki en yüksek inhibisyon etkisi 25 µg/ml konsantrasyonda belirlenmiştir. Bu konsantrasyonda MTT testi ile belirlenen inhibisyon değeri % 64.37, nötral red ile belirlenen inhibisyon ise %55.45'tir.   Kolşisinin IC50 değeri MTT ve Nötral Red testi için sırasıyla 20 nM ve 29 nM olarak hesaplanmıştır. 
Kurkuminin A549 Akciğer kanseri hücre hattı üzerindeki en yüksek inhibisyon etkisi 125 µg/ml konsantrasyonda belirlenmiştir. Bu konsantrasyonda MTT testi ile belirlenen inhibisyon % 71.86 ve Nötral Red testi ile  % 59.94'lük inhibisyon elde edilmiştir. IC50 değeri MTT ve Nötral Red testi için sırasıyla 48.69 µM ve 50.53 µM olarak hesaplanmıştır. 
Kolşisin ve kurkuminin IC50 (25 nM + 50 µM) dozlarındaki kombinasyonlarının MTT ve Nötral red ile belirlenen sinerjik aktiviteleri sırasıyla % 48.05 ve % 44.36  olarak belirlenmiştir. IC50/2 (12.5 µM + 25 µM) konsantrasyonundaki inhibisyonlar MTT ve Nötral red testi ile % 49.21 ve % 41.6; IC50/4 (6.25 nM + 12.5 µM) konsantrasyonunda ise % 40.51 ve % 40.33 olarak ölçülmüştür.
Elde edilen sonuçlar bu iki bileşiğin IC50/2 ve IC50/4 dozlarındaki kombinasyonlarında önemli bir sinerjik etkinin ortaya çıktığını göstermektedir. Bu sonuçlar bu iki bileşiğin birlikte kullanımlarında tek başına kullanıldıkları dozun daha alt dozlarında benzer etkiyi gösterebileceklerini ortaya koymaktadır. 

Anahtar Kelimeler: Kurkumin, kolşisin, Curcuma longa, Colchicum autumnale, sinerjik aktivite, MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)), Nötral red, A549

Abstract:
Lung cancer cases, which are in the first place in cancer-related deaths, are increasing in the world and in our country. Natural products, especially plants, have a great importance among the search for new agents that can be an alternative to existing chemotherapeutics for the treatment of this common type of cancer. The antiproliferative activities of curcumin obtained from the roots (rhizomes) of Curcuma longa L. and colchicine, an alkaloid of Colchicum autumnale L., on various cancer types are being investigated.
In this thesis, the synergistic activities of colchicine and curcumin combinations, which are known to have potential efficacy as anticancer agents, on A549 lung cancer cell line were investigated. Antiproliferative activity was determined by MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and Neutral Red staining methods. First, the IC50 values of colchicine and curcumin on the A549 cell line were determined, then the synergistic antiproliferative activity of these two compounds combined on the same cell line at IC50  and below doses was determined.
The highest inhibition effect of colchicine on A549 Lung cancer cell line was determined at a concentration of 25 µg/ml. At this concentration, the inhibition value determined by the MTT test is 64.37%, and the inhibition determined by Neutral Red test is 55.45%. The IC50 value of colchicine was calculated as 20 nM and 29 nM for the MTT and Neutral Red test, respectively.
The highest inhibition effect of curcumin on A549 Lung cancer cell line was determined at a concentration of 125 µg/ml. At this concentration, 71.86% inhibition was determined by MTT test and 59.94% inhibition was obtained with Neutral Red test. The IC50 value was calculated as 48.69 µM and 50.53 µM for the MTT and Neutral Red test, respectively.
The synergistic activities of colchicine and curcumin combinations at IC50 (25 nM + 50 µM) doses, determined by MTT and Neutral Red, were determined as 48.05% and 44.36%, respectively. Inhibitions at IC50/2 (12.5 µM + 25 µM) concentration were 49.21% and 41.6% by MTT and Neutral Red test; It was measured as 40.51% and 40.33% at IC50 /4 (6.25 nM + 12.5 µM) concentration.
The results show that a significant synergistic effect occurs in combinations of these two compounds at IC50/2 and IC50/4 doses. These results reveal that when these two compounds are used together, they can show similar effects at lower doses than when they are used alone.

Keywords: Curcumin, colchicine, Curcuma longa, Colchicum autumnale, synergistic activity, MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)), Neutral red, A549