Klinik örneklerden izole edilen corynebacterium türlerinde biyofilm oluşumunun, anti-quorum sensing aktivitesinin ve antimikrobiyal direnç durumunun araştırılması /
Yazar: BANU HÜMEYRA KESKİN
Danışman: PROF. DR. İDRİS ŞAHİN
Düzce Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Biyofilmler = Biofilms ; Corynebacterium = Corynebacterium ; Quorum sensing = Quorum sensing ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Korinebakteriler için son on yılda artan sayıda çeşitli klinik enfeksiyonlar bildirilmiştir. Çalışmamızda izolatlar kültürdeki üreme şekline göre gruplara ayrılarak saf olarak üremeyen korinebakterilerin patojenik potansiyeli hakkında fikir sahibi olunabileceği düşünülmüştür.
           Düzce Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi ve İstanbul Başakşehir Çam ve Sakura Şehir Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarına Haziran 2021 ile Haziran 2022 tarihleri arasında gönderilen çeşitli klinik örneklerden izole edilen 240 adet Corynebacterium spp. izolatı kültürdeki üreme şekillerine göre saf, başka bir etken ile birlikte ve polimikrobiyal olarak üç grupta sınıflandırıldı. Antibiyotik duyarlılıkları disk difüzyon ve vankomisin için sıvı mikrodilüsyon yöntemleri ile belirlendi. İzolatların biyofilm oluşumları kantitatif olarak belirlendi. Güçlü biyofilm yapan 17 izolatın biyoaktif bileşen ekstraksiyonu yapılıp agar difüzyon yöntemi ile anti-quorum sensing aktivitesine bakılmış sonrasında viyolasin pigment üretimi kantitatif olarak ölçüldü.
         Çalışmaya alınan 240 adet Corynebacterium spp. izolatının; 138'i (%58) saf, 52'si (%22) etken ile birlikte ve 50'si (%20) polimikrobiyal grupta yer almıştır. İzolatların 140'ı C. striatum, 34'ü C. amycolatum, 24'ü C. afermentans olarak tanımlanmıştır.
         Corynebacterium izolatlarının antibiyotik direnç oranları gruplara göre incelendiğinde rifampisin ve tetrasiklin antibiyotiklerine karşı direnç oranı polimikrobiyal grupta diğer gruplara göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde düşük olarak saptanmıştır. İzolatlarda penisilin, klindamisin, siprofloksasin, moksifloksasin, rifampisin, tetrasiklin ve linezolide karşı sırasıyla; %96,7, %88,3, %86,3, %73,8, %62,5, %59,2 ve %0,8 oranında direnç görülmüştür. Tüm izolatlar vankomisine karşı duyarlı iken iki adet C. afermentans izolatında linezolid direnci görülmüştür.
       Biyofilm oluşturma kapasiteleri incelendiğinde 87 (%36,3) izolat biyofilm oluşturmuştur. Polimikrobiyal gruptaki izolatların biyofilm oluşturma oranı diğer iki gruptan daha düşük oranda bulunmuştur. Biyofilm oluşturma kapasitelerine göre güçlü biyofilm oluşturan 17 adet izolatın anti-quorum sensing aktivitesine bakılmış, hiç bir Corynebacterium ekstraktının anti-quorum sensing aktivitesi bulunmamışken beş adet izolat ekstraktının antimikrobiyal etkisi görülmüştür. Antimikrobiyal etki gözlenen bakteri ekstraktlarının dört tanesi C. amycolatum bir tanesi ise C. afermentans'a ait olduğu belirlenmiştir.  
        Sonuç olarak hem antibiyotik direnç oranlarına hem de biyofilm oluşturma oranlarına bakıldığında kültürde etken ile birlikte üreyen korinebakterilerin saf kültür olarak üreyen korinebakteriler ile benzer özellikler gösterdiği, ayrıca korinebakterilerin antimikrobiyal etkilerinin olması nedeniyle bu etkinin flora bakterilerini baskılayarak virulansını artırmada mı yoksa patojen bakterileri baskılayarak enfeksiyon oluşumunu önlemede mi rolünün olduğunun belirlenmesi için ileri çalışmalar yapılması gerekmektedir.

Abstract:
An increasing number of various clinical infections for Corynebacterium have been reported in the last decade. In our study, it was thought that by dividing the isolates into groups according to the reproduction type in culture, it was thought that an idea about the pathogenic potential of Corynebacterium that did not grow purely could be obtained.
          240 Corynebacterium spp. isolates isolated from various clinical specimens sent to Düzce University Faculty of Medicine Hospital and İstanbul Başakşehir Çam and Sakura City Hospital Medical Microbiology Laboratory between June 2021 and June 2022 were classified into three groups as pure, combined with another agent and polymicrobial according to their growth patterns in culture. Antibiotic susceptibility was determined by disc diffusion and liquid microdilution methods for vancomycin. The biofilm formation of the isolates was determined quantitatively. Bioactive component extraction of 17 strong biofilm-forming isolates was performed and anti-quorum sensing activity was checked by agar diffusion method, and then violacin pigment production was measured quantitatively.
           Of the 240 Corynebacterium spp. isolates included in the study; 58% were pure, 22% were in combination with another agent and 20% were in the polymicrobial group. Of the isolates, 140 were identified as C. striatum, 34 as C. amycolatum, and 24 as C. afermentans.
          When the antibiotic resistance rates of Corynebacterium isolates were examined according to the groups, the resistance rate against rifampicin and tetracycline antibiotics was found to be statistically significantly lower in the polymicrobial group compared to the other groups. In isolates, against penicillin, clindamycin, ciprofloxacin, moxifloxacin, rifampicin, tetracycline and linezolid, respectively; resistance rates were %96.7, 88.3%, 86.3%, 73.8%, 62.5%, 59.2% and 0.8%. While all isolates were susceptible to vancomycin, linezolid resistance was observed in two C. afermentans isolates.
           When their biofilm forming capacities were examined, 87 (36.3%) isolates formed biofilm. The biofilm formation rate of the isolates in the polymicrobial group was found to be lower than the other two groups. According to their biofilm forming capacities, the anti-quorum sensing activity of 17 isolates that formed strong biofilms was examined, while none of the Corynebacterium extracts had anti-quorum sensing activity, the antimicrobial effect of five isolate extracts was observed. It was determined that four of the bacterial extracts with antimicrobial effect belonged to C. amycolatum and one of them belonged to C. afermentans.
           As a result, when both antibiotic resistance rates and biofilm formation rates are considered, Corynebacterium grown together with the agent in culture show similar characteristics to Corynebacterium grown as pure cultures, ın addition, due to the antimicrobial effects of cornebacteria, further studies are required to determine whether this effect has a role in increasing the virulence by suppressing the flora bacteria or in preventing the formation of infection by suppressing the pathogenic bacteria.