İzumo1 proteininin sperm değerlendirme parametreleriyle ilişkisinin fertilite statüsüne göre incelenmesi
Examination of relationship between izumo1 protein and sperm parameters, according to fertility status
Yazar: SÜHEYLA ESRA ÖZKOÇER
Danışman: PROF. DR. ÇİĞDEM ELMAS
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Akrosom = Acrosome ; Fertilite = Fertility ; Kısırlık = Infertility ; Kısırlık-erkek = Infertility-male ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
Açıklanamayan infertilite, infertilite şikayetiyle başvuran çiftlerin yaklaşık %15'ini oluşturur. İzumo1 proteini, akrozom reaksiyonu sonrasında spermde görülen, spermin oositle birleşmesi için gerekli bir proteindir. Bu çalışmada açıklanamayan infertilitede İzumo1 proteininin görülmesinde azalma olup olmadığı; İzumo1 proteininin, semen analizi sonuçları ve kromatin yoğunlaşmasıyla ilişkisinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Çalışma Gazi Üniversitesi Klinik Araştırmalar Etik Kurulu'nun izniyle yürütüldü. İki yıl korunmasız cinsel ilişkiye karşı gebelik oluşturamamış, açıklanamayan infertilite hastası 30 gönüllü (grup 2) ve bir yıl içinde kendiliğinden gebelik oluşturabilmiş 18 gönüllüden (grup 1) bilgilendirilmiş onam sonrası semen örnekleri alındı. Semen analizi sonrası anilin mavisi ile kromatin yoğunlaşması değerlendirildi. Kesintili dansite gradyanıyla elde edilen spermlerde, 10 M progesteronla bir saat inkübasyon sonrası akrozom reaksiyonunun gerçekleştirilmesi hedeflendi. İzumo1 ve CD46 proteinlerine karşı geliştirilmiş antikorlarla ve DAPİ ile immünfloresans inceleme yapıldı. Veri dağılımının özelliğine göre uygun istatistik testleri kullanıldı.
Gruplar arasında yaş, semen analizi, kromatin yoğunlaşmasını tamamlamış sperm yüzdeleri değerlendirildiğinde istatistiksel olarak anlamlı bir fark görülmedi. Üçlü immunfloresans inceleme sonrası spermler dört gruba ayrıldı: Üç pozitif, İzumo1 negatif, DAPİ pozitif ve DAPİ negatif. DAPİ negatif ve İzumo1 negatif spermler az sayıda örnekte görüldüğü için istatistiksel değerlendirme yapılmadı. Üç pozitif sperm yüzdesi grup birde fazla olmasına karşın istatistiksel olarak anlamlı değildi. Anilin negatif ve üç pozitif sperm yüzdeleri arasındaki ters ilişki istatistiksel olarak anlamlı bulundu. Baş anomalisi ve üç pozitif sperm yüzdeleri arasındaki ters ilişki, grup birde anlamlı değilken grup ikide anlamlıydı.
Bu çalışmayla, açıklanamayan infertilite hastalarında infertilite İzumo1 eksikliğiyle ilişkilendirilemese de İzumo1 proteininin akrozom reaksiyonunu tamamlayan her spermde olmadığı, spermin yapısal (kromatin yoğunlaşması, baş anomalisi) özellikleriyle işlevsel özelliklerinin (akrozom reaksiyonu) ilişkili olduğu gösterilmiştir. Yapısal ve işlevsel ilişkilerin inceleneceği çalışmalarla infertilite tanı ve tedavi yöntemlerinin gelişmesi sağlanabilir.

Abstract:
Unexplained infertility accounts to 15% of infertile couples. Izumo1 protein is necessary for sperm oocyte fusion and seen after acrosome reaction. Aim of this study is examine whether decrease in the appearance of Izumo1 protein in unexplained infertility and evaluate the relationship between İzumo1, semen analysis results and chromatin condensation.
The study was conducted with the permission of Gazi University Clinical Research Ethics Committee. Semen samples obtained after informed consent from male partner of couples belong group 1 and 2. 30 unexplained infertile patients which had no spontaneous pregnancy in two years (group 1) and 18 subjects had spontaneous pregnancy within last one year (group 2). After semen analysis chromatin condensation examined with aniline blue. Sperms selected with density gradient centrifugation. Acrosome reaction is induced with 10 M progesterone in 1 hour. Appropriate statistical analysis were carried out based on data distribution.
Age, semen analysis and chromatin condensation results didn't show significant differences between groups. "Triple positive", "DAPİ positive", "İzumo1 negative" and "DAPİ negative" classification was made based on triple immunofluorescence results. Since limited number of İzumo1 negative and DAPİ negative sperms statistical analyzes haven't conducted. Despite triple positive sperm percent was higher in group 1 than 2, the difference was statistically insignificant. There is significant negative correlation between aniline negative and triple positive sperm percent. The negative correlation between head anomalies and triple positive sperm percent was significant in group 2 but not in group 1.
There wasn't sufficient data that explains infertility by İzumo1 deficiency. However it is reported that İzumo1 protein couldn't be seen in every sperm undergoes acrosome reaction and structural properties of sperm (head anomalies, chromatin condensation) are related with sperm function (acrosome reaction). With studies about sperm's structural and functional relations, infertility diagnosis and treatment modalities can be improved.