Plateletten zengin plazma hazırlanmasında optimum değerlerin saptanması
Determination of the optimum values on the preparation of platelet rich plasma
Yazar: KADRİ ÖZER
Danışman: DR. YÜKSEL KANKAYA
Sağlık Bakanlığı / Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma

Özet:
Plateletten zengin plazma (PZP), santrifüjlenmiş ayrışma ve toplama prosedürü sonrasında elde edilen plateletlerle zenginleştirilmiş otolog hazırlanan bir plazmadır. PZP, yara iyileşmesinde, anjiyogenezde ve doku yeniden şekillendirilmesinde önemli roller oynayan büyüme faktörleri ve sitokinlerden zengindir. Prosedür, çok sayıdaki klinik uygulamalarda geniş bir aralıkta kullanılmaktadır. Fakat, PZP için optimize edilmiş hazırlama protokolü halen tartışmalıdır ve standardize edilmiş bir protokol mevcut değildir. Bu çalışmanın amacı, santrifüjleme kuvvetinin ve zamanının platelet konsantrasyonları üzerindeki etkisini göstermek ve etkili PZP hazırlama protokolünü optimize etmektir. 5,4 ml hacimli tam kan örnekleri, 0,6 ml asid sitrat dekstroz içeren her bir tüpe alındı. Çalışmanın ilk aşamasında, beş sağlıklı gönüllünün her birinden 4 tüp tam kan alındı. Tüm kan örnekleri 180xg kuvvette 15 dakika boyunca santrifüj edildi. Sonunda, buffy coat ve üst, orta ve alt üçte birlik bölgelerden kan analizleri yapıldı ve böylelikle, ileriki aşamalar için optimum seviyeler belirlendi. Çalışmanın ikinci aşamasında, beş sağlıklı gönüllünün her birinden 24 tüp tam kan alındı. Örnekler, 45xg, 180xg, 400xg, 725xg, 1130xg ve 1630xg kuvvetlerinde 5, 10, 15 ve 20 dakikalar boyunca ayrı olarak santrifüj edildi. Her örnek, analize tabii tutuldu ve üçüncü aşama için optimum değerler belirlendi. Çalışmanın üçüncü aşamasında, beş sağlıklı gönüllünün her birinden 24 tüp tam kan alındı. Örnekler, ilk olarak, ikinci aşamada belirgin farklı olarak bulunan optimum değerdeki zaman ve kuvvette santrifüj edildiler. Sonrasında, ikinci aşamada altı maksimum değere göre ikinci santrifüjleme uygulandı ve kan analizleri uygulandı. Sonuç olarak, platelet sayılarının % 28,78'i ve % 54,56'sı sırasıyla, santrifüjlenen plazmanın alt üçte birinde ve buffy coat seviyesinde toplandı. Bunun yanında, ortalama platelet hacimleri (fL), santrifüjlenen plazmanın üst, orta ve alt üçte birlik bölgelerde ve buffy coat bölgesinde sırasıyla, 5,66, 6,12, 7,14 ve 10,24 idi. Bu iki değer -sayı ve hacim- platelet porsiyonu terimi olarak bir araya getirilirse, platelet kitlelerinin yüzdesi, bu bölgelere göre sırasıyla, % 4,24, % 10,41, % 23,67 ve % 64,36 olarak hesaplanacaktır. İlk santrifüjlemede, 5 dakikalık 1630xg kuvveti en yüksek platelet porsiyonu değerini vermiştir. İkinci santrifüjlemede, 400xg, 725xg, 1130xg ve 1630xg kuvvetleri 5 dakikalık sürede bazal değerlerden anlamlı bir şekilde farklı bulunmuştur. 1630xg kuvveti ve 5 dakika olan grubun platelet konsantrasyonu ve platelet porsiyonu tam kan bazal değerlerinden sırasıyla 4,22 kat ve 4,3 kat olacak şekilde anlamlı derecede farklı bulunmuştur. Sonuçta, santrifüjleme sonrasında, plazmanın alt üçte biri ve buffy coat, tam kandaki tüm platelet sayılarının % 83 kadarını içermektedir ve bu plateletler plazmanın üst ve orta üçte birine göre belirgin derecede daha büyük hacimlere sahiptir. Hacim ve sayıyı aynı anda içeren "platelet porsiyonu" terimi, literatürde PZP etkinliğini karşılaştırmada kullanmak için platelet sayılarından ve konsantrasyonlarının yanı sıra önerilebilir. Son olarak, PZP'nin manüel olarak hazırlanması için plazma alt üçte biri ve buffy coat -her ikisi birden tam kanın % 90 platelet porsiyonunu içermektedir- kullanılması ve bu plazmanın hem birinci hem de ikinci santrifüjlemede 1630xg santrifüjleme kuvvetinde 5 dakika boyunca santrifüjlenmesi önerilmektedir.

Abstract:
Platelet rich plasma (PRP) is an autologous prepared plasma enriched with platelets and obtained after a centrifugal separation and aggregation procedure. PRP is rich in growth factors and cytokines that play important roles in wound healing, angiogenesis and tissue remodeling. The procedure is used in numerous clinical applications in a wide range. However, the optimized preparation protocol for PRP is still controversial and there is no standardized preparation protocols. The aim of this study is to show the effect of time and force of the centrifugation on the concentrations of platelets and to optimize the effective PRP preparation protocol. 5.4 ml of whole blood samples were collected for each tube containing 0.6 ml of acid citrate dextrose. In the first stage of the study, 4 tubes of whole blood were taken from each of five healthy volunteers. All blood samples were centrifuged at the force of 180xg for 15 minutes. At the end, blood analysis was done from upper, middle and lower third of the plasma and buffy coat and so, the optimum levels were detected for the further stages. In the second stage of the study, 24 tubes of whole blood were taken from each of five healthy volunteers. The samples were centrifuged separately at the forces of 45xg, 180xg, 400xg, 725xg, 1130xg and 1630xg for 5, 10, 15 and 20 minutes. Every samples were analysed and the optimum values were detected for the third stage. In the third stage of the study, 24 tubes of whole blood were taken from each of five healthy volunteers. The samples were centrifuged first according to the force and the time of the optimum value that was shown significantly different in the second stage. Then, second centrifugation was performed due to six maximum values of the second stage and blood analysis was performed. As a result, 28.78 % and 54.56 % of platelet counts were collected at the lower third of the centrifuged plasma and at the level of buffy coat, respectively. Besides that, mean platelet volumes (fL) were 5.66, 6.12, 7.14 and 10.24 at the upper, middle and lower third of the centrifuged plasma and at the level of the buffy coat, respectively. If these two values –count and volume- were brought together in terms of platelet portion, the percentage of the platelet mass would be calculated 4.24 %, 10.41 %, 23.67 % and 64.36 %, respectively according to these levels. In the first centrifugation, the 1630xg force and 5 minutes gave the highest value of the platelet portion. In the second centrifugation, the forces of 400xg, 725xg, 1130xg and 1630xg for 5 minutes were significantly different from the basal values. Platelet concentration and platelet portion of group of the 1630xg force and 5 minutes was significantly different as 4.22 times and 4.3 times than basal values of whole blood, respectively. As a conclusion, after the centrifugation, lower third of the plasma and buffy coat includes nearly 83% of all platelet counts of whole blood and these platelets have significantly larger volumes than upper and middle third of the plasma. The term "platelet portion" which includes volume and count at the same time may be suggested for usage to compare the effectiveness of PRP in the literature other than platelet counts and concentrations. Once and for all, for the manual preparation of PRP, it is suggested to use lower third of the plasma and buffy coat -both of them contains 90% of platelet portion of whole blood together- and to centrifuge this plasma at a centrifugation force of 1630xg for 5 minutes for both first and second centrifugations.