Asprosin hormonunun yara iyileşmesi üzerine etkisinin in vitro olarak araştırılması
In vitro investigation of the effect of asprosin hormone on wound healing
Yazar: MERVE DURMUŞ KAYGISIZ
Danışman: DOÇ. DR. TUBA DEMİRCİ
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Dermatoloji = Dermatology ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Adiponektin = Adiponectin ; Asprosin = Asprosin ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Yara enfeksiyonu = Wound infection ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Yaralanma skalası-kısaltılmış = Abbreviated injury scale ; Yaralar-delici olmayan = Wounds-nonpenetrating ; İn vitro = In vitro ; İştah = Appetite

Özet:
Asprosin Hormonunun Yara İyileşmesi Üzerine Etkisinin İn Vitro Olarak Araştırılması
Amaç: Önemli bir sağlık sorunu olan kutanöz yaraların tedavisi amacıyla, çeşitli maddeler yüzyıllardır araştırılmış olup yenileri de her geçen gün eklenmekte ve elde edilen bilgiler bilim ışığında güncellenmektedir. Bu çalışmada, yeni keşfedilen ve pek çok sistemi birden etkileyebilen bir adipokin olan asprosin hormonunun yara iyileşmesi üzerindeki olası etkilerinin in vitro olarak araştırılması amaçlandı.
Gereç ve Yöntemler: Asprosin dozları 50 ng/ml, 100 ng/ml, 150 ng/ml ve 200 ng/ml olarak belirlendikten sonra HDF hücre hattından elde edilen fibroblast hücreleri platelere ekilerek konfluenti sağlandı. Daha sonra plateler kontrol, 24 ve 48 saatlik gruplar şeklinde ayrıldı. Platelerde, 'Yara Çizik Deneyi' ile yara modeli oluşturuldu ve belirlenen dozlarda asprosin hormonu uygulandı. Bütün gruplarda hücre canlılıkları MTT yöntemi ile hücrelerdeki IL-1, IL-10, fibronektin ve kollajenin immünreaktiviteleri immünositokimyasal yöntemle ve bu proteinlere ait gen ekpresyonları Real Time-PCR yöntemi ile analiz edildi.
Bulgular: Yara çizik deneyi sonrası asprosin verilen bütün gruplarda yara alanları kontrol grubundan önce kapandı, ancak en erken kapanma asprosin hormonunun 200 ng/ml dozunda gözlendi. Hücre canlılığı; bütün gruplarda kontrole göre ileri seviyede ve 200 ng/ml dozunda en yüksek seviyede tespit edildi. Hem immünositokimyasal hem de moleküler analizlerde, IL-1'in gen ekpresyonu kontrol ve diğer gruplar arasında farklılık göstermedi. IL-10 ekpresyonununda, asprosin hormonunun 150 ng/ml ve 200 ng/ml dozlarında 48 saatlik gruplarda anlamlı artış tespit edildi. Asprosinin 200 ng/ml dozunda uygulandığı 48 saatlik gruplarda daha belirgin olmakla birlikte, 24. ve 48. saatlerde 100 ng/ml, 150 ng/ml ve 200 ng/ml dozlarında fibronektinin yüksek ekpresyon sergilediği tespit edildi. Kollajen ekspresyonunun ise 48 saatlik gruplarda 100 ng/ml, 150 ng/ml ve 200 ng/ml dozlarında kontrol grubuna göre yüksek olduğu belirlendi. 
Sonuç: Çalışmamızda, asprosin hormonunun; hücre proliferasyonunu artırdığı, anti-inflamatuar etki gösterdiği, fibronektin ile kollajen oluşumunu artırarak yara iyileşmesinde olumlu etkileri olduğu varıldı. Böylelikle asprosin hormonunun gelecekte yaraların tedavisinde kullanılabilecek bir ajan olabileceği düşünüldü.
Anahtar Kelimeler: HDF hücre hattı, Yara İyileşmesi, Asprosin, İmmünositokimya, Real Time-PCR

Abstract:
In Vitro Investigation of the Effect of Asprosin Hormone on Wound Healing
Objective: Various substances have been studied for centuries for the treatment of cutaneous wounds, which are an important health problem, and new ones are being added every day, and the information obtained is being updated in the light of science.  In this study, it was aimed to investigate the possible effects of the asprosin hormone, an adipokine that is newly discovered and affects many systems, on wound healing in vitro.
Material and Methods: After the asprosin doses were determined as 50 ng/ml, 100 ng/ml, 150 ng/ml, and 200 ng/ml, the fibroblast cells obtained from the HDF cell line were seeded in the plates, and their confluence were provided. Then, the plates were divided into control, 24-and 48-hour groups. A wound model was ensured with the "Wound Scratch Assay," and the asprosin hormone was administered at the determined doses in the plates. Cell viabilities were analyzed by the MTT method, the immunoreactivities of IL-1, IL-10, fibronectin, and collagen by the immunocytochemical method, and the gene expressions of these proteins with the Real Time-PCR method, in all groups.
Results: After the wound scratch assay, wound areas were closed in all groups given the asprosin hormone before the control group, but the earliest closure was observed at a 200 ng/ml dose. Cell viability was observed at higher levels in all groups compared to the control, and it was the highest at the dose of 200 ng/ml In both immunocytochemical and molecular assays, gene expression of IL-1 did not differ between control and other groups. A significant increase was detected in IL-10 expression at 150 ng/ml and 200 ng/ml doses of asprosin hormone in the 48-hour groups. Although it was more pronounced in 48-hour groups administered asprosin at a dose of 200 ng/ml, it was determined that fibronectin exhibited high expression at 100 ng/ml, 150 ng/ml, and 200 ng/ml doses at 24th and 48th hours. It was detected that collagen expression was higher in the 48-hour groups at 100 ng/ml, 150 ng/ml, and 200 ng/ml doses compared to the control group.
Conclusion: Our study concluded that the asprosin hormone increases cell proliferation, exhibits an anti-inflammatory effect, and has positive effects on wound healing by increasing collagen and fibronectin formation. Therefore, it was thought that asprosine hormone could be an agent that can be used for treatment of wounds in the future.
Keywords: HDF Cell Line, Wound Healing, Asprosin, Immunocytochemistry, Real Time-PCR