İmplantasyon sırasında uterusun JAK STAT profili /
Yazar: CAN KÖSE
Danışman: PROF.DR. KEMAL ÖZBİLGİN
Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2007
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
7 ÖZETHücre dışından gelen çok sayıda sinyal bir transmembran reseptörü olanJAK'lar tarafından alınarak, hücre içindeki STAT'lar (signal transducers andactivators of transcription) aracılığı ile DNA'ya iletilir ve hedef gen üzerindetranskripsiyonu başlatır. Çok sayıda farklı molekül tarafından kullanılan bir yolak farklıfonksiyonların gerçekleşmesinde önemli rol oynamaktadır. Daha önce yapılançalışmalarda implantasyon döneminde bazı JAK ve STATların eksprese edildiğitespit edilerek fonksiyonları tanımlanmıştır. Ancak bu konuda yapılan çalışmalaroldukça sınırlıdır. Bu çalışmada sıçanlarda oluşturulan implantasyon modelinde ,JAK1, JAK2, JAK3, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5 ve STAT6 ekspresyonuincelenerek uterusta implantasyon dönemindeki JAK/STAT profilinin çıkarılması vemuhtemel fonksiyonlarının araştırılması amaçlanmıştır.MATERYAL METODDişi sıçanlar 3 gruba ayrıldı. Sıçanlara saat 15:00 civarında vajinal smearyapıldı. Smear hematoksilen eozin boyası ile boyandı. Östroz durumları belirlendi.Östroz da olan dişi sıçanlar bir gece uygun şartlarda kafeste çiftleşmeye bırakıldılar.Ertesi gün servikal sürüntüde sperm tespit yöntemi ile gebe olarak kabul edilenhayvanlar ayrı kafeslere alındı. Ayrı kafeslere alındıkları gün embriyonik gün E:0. günolarak kabul edildi. Embriyonik 4., 5., 6. günlerde sıçanlar sakrifiye edildiler.4. günsakrifiye edilen sıçanlar 4. gün olarak, 5.gün sakrifiye edilen sıçanlar 5. gün olarak ve6. gün sakrifiye edilen sıçanlar 6. gün olarak tanımlandı. Ve implantasyon bölgelerimakroskobik olarak belirlendikten sonra uterus piyesleri %10 formol solusyonunakonarak 24-48 saat bekletildiler. Dokular rutin doku takip protokolüne uygun olarakparafin blok haline getirildi. Bloklardan 5 mikronluk seri kesitler alındı. Bu kesitlerhematoksilen-eozin ve immunohistokimya tekniklerine göre JAK ve STATmonoklonal antikorları ile boyandı. Boyanan preparatlar ışık mikroskobu iledeğerlendirildi.BULGULARH-E ile boyanan preparatlar, gebelik günleriyle uyumlu doku değişikliklerigösterdikleri gözlemlendi. İmmünohistokimyasal boyamalar da JAK1'in 4. gündeimmunkompetant hücrelerde, 5. günde stromal ve immunkompetant hücrelerde 6.günde ise desidual alanda boyandığı gözlendi. JAK2'nin tüm gruplarda kuvvetli65boyandığı, 5. günün bir önceki güne göre daha fazla boyandığı tespit edildi. JAK3'ünise JAK1 ile benzer boyanma özelliğinde olduğu, 5. ve 6. gün boyanmalarının 4.güne kıyasla artmış olduğu bulundu. STAT2 tüm gruplarda kuvvetliboyanmıştı,boyanma özellikle 4. gün boyaması 5 ve 6. günlere oranla daha çoktu.STAT3'le boyanan kesitler değerlendirildiğinde 4. 5 güne ait kesitlerde,antimezometriyal bölgede supepitelyal alanda, hafif bir boyanma izlenirken 6. gündeboyanmanın daha az olması dikkat çekici bulundu. STAT4 antikoru ile boyanandokuların zayıf bir immunreaktivite gösterdiği bulundu. STAT5 ile boyanan kesitlerde4. ve 5. günlerde yüzey epitel, stromal hücreler ve bezlerle birlikte immunkompetenthücrelerde güçlü immunreaktivite gözlendi, 6. günde ise desidual hücrelerde güçlüimmunreaktivite tespit edildi. STAT6 ile boyanan kesitler incelendiğinde 5. gündezayıf bir boyanma gözlendi.SONUÇJAK ve STAT'ların implantasyon dönemindeki profillerinin incelendiği buçalışmada, JAK ve STAT'ların uterustaki miktarları ve dağılımları günlere görefarklılıklar göstermektedir. Özellikle JAK2, STAT2, ve STAT5'in fazla salgılanması bufaktörlerin implantasyon döneminde aktif fonksiyon gösterdiklerinin bir belirtisi olarakdeğerlendirildi. Buna karşılık diğer faktörlerin az boyanması da bir takım supresiffonksiyonların belirtisi olarak değerlendirildi. Sonuç olarak gebeliğin başlangıçdöneminde JAK ve STAT'ların bazıları indukleyici bazıları ise baskılayıcı fonksiyongöstererek uterusun implantasyonu kolaylaştırma reaksiyonlarında önemli roloynamaktadır.66

Abstract:
ABSTRACTJanus tyrosine kinases (JAKs) and signal transducers and activators oftranscription (Stats) regulate many different processes following cytokinesbinding to specific cell surface receptors. Some of the JAK and STATexpression were determinated during implantation period in previous studies.However, which JAK and STAT is important for receptivity in humanendometrium are not known completely. In this study we aimed to establishThe JAK/STAT profile and to investigate potential functions of these.MATERİAL METHODThirty adult Female rats were separated into three groups. Vaginal smear wascarried out at 03.00 p.m and the sstrus?s period was determined. Female rats inestrus period were left in their cage with male rats to copulate. The next day,rats which had sperm in cervical smear was accepted as pregnant was takeninto separate cages. This day was accepted as embryonic day (ED):0.5. Therats were sacrificed in ED: 4.5 (Group 1, 4Th day), 5.5 (Group 2, 5Th day) and 6.5(Group 3, 6Th day). The implantation sides were observed by macroscopicallyand fixed in 10% formalin solution for 24-48 h. Tissues were placed intoparaffin blocks according to routine paraffin procedure. Five Âµm serial sectionswere taken from the blocks. The sections were stained with H.E. and immuno-histochemical techniques using JAK1, JAK2 and JAK3; STAT2, STAT3, STAT4,STAT5 and STAT6 monoclonal antibodies. Stained sections were evaluatedunder a light microscope.RESULTSIn immunohistochemical staining; JAK1 was positive in immune competentcells on the 4Th day, in stromal and immune competent cells on the 5Th day andin decidual area on the 6Th day. It was observed That, JAK2 was stained strongin all groups, on the 5Th day it was stained more severe according to previousday. JAK3?s staining profile was similar to JAK1?s, and it was found that theirstaining were increased on The 5 Th and 6 Th days compare to 4 Th day. STAT2was stained as strong in all groups. Staining was increased especially on the4Th day compare to 5Th and 6Th days. In the examining of sections stained wiThSTAT3, it was observed mild staining on the antimezometrial region in thesubepiThelial area on The 4Th and 5Th days and minimal staining was observed67on The 6Th day. STAT4 immunoreactivity was observed as minimal. STAT5immunoreactivity was strong on yüzey epiThelium, stromal cells and glandsTh Thand immune competant cells on The 4 and 5 days. On The 6Th daydecidual cells were observed strong immunoreactivity. STAT6Thimmunoreactivity was minimal on The 6 day.CONCLUSIONIn This study, profiles of JAK and STAT were research in the implantationperiod and it was observed that amounts and distributions of JAK and STAThad differences according to days in implantation. Especially, increasedsecretion of JAK2, STAT2, and STAT5 had active function in implantationperiod. But decreased staining of the oTher factors may have a suppressivefunction. Finally, JAK and STAT?s may play an important immunregulatoryfunction during implantation.68