Anadolu mandasinin in vitro embriyo gelişim ve üretim parametrelerinin belirlenmesi
Determination of in vitro embryo development and production parameters of Anatolian water buffaloes
Yazar: MEHMET ALİ YILMAZ
Danışman: PROF. DR. YAŞAR ERGÜN ; PROF. DR. MUSTAFA KAYMAZ
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum,Jinekoloji ve Suni Tohumlama (Veterinerlik) Anabilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Embriyo = Embryo ; Embriyo gelişimi = Embryonic development ; Embriyo kültür teknikleri = Embryo culture techniques ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Mandalar = Buffaloes ; Oositler = Oocytes

Özet:
Bu çalışmada,  Anadolu mandası oositlerinden in vitro koşullarda embriyo gelişimi ve üretim parametrelerinin belirlenmesi amaçlandı. Bu amaçla ovaryum başına elde edilen oosit miktarı, oositlerin kalite sınıflandırılma oranları, oositlerin maturasyon oranı, oositlerin fertilizasyon oranı, kültür ortamında bölünme oranları, blastosiste erişme oranları hatched blastosist erişme oranları ve embriyo kalite oranları belirlendi. Bu amaçla, materyal olarak Uluslararası Hayvancılık Araştırma ve Eğitim Merkezi Müdürlüğüne yakın il mezbahalarında (Afyonkarahisar, Çorum) kesilen Anadolu mandalarına ait ovaryumlar kullanıldı. Çalışmanın bütün prosedürleri yaygın kabul görmüş standart in vitro fertilizasyon (IVF) protokollerinden oluştu. Ovaryumlardan oositler aspirasyon yöntemiyle elde edildi. Bu oositlerin maturasyonunda TCM-199 + %10 FCS, fertilizasyonunda BO (Bracket & Oliphant) medyumu ile direk yıkama metodu, kültüründe CR1aa (Charles Rosencrans 1 Aminoasit) medyumu kullanıldı. Çalışma 2019 ve 2020 yıllarında 6 replikasyon halinde gerçekleştirilen çalışmada 92 baş Anadolu mandasına ait 184 adet ovaryum kullanıldı. Ovaryumlardan toplam 395 adet oosit aspire edildi. Oositlerin 334 tanesi A-B kalite olarak değerlendirildi. Maturasyona alınan A-B kalite 334 adet oositten 329 adedinin mature olduğu kabul edildi. Maturasyonu yapılan 329 adet oositten 308 adedinin fertilizasyonu gerçekleştirdi ve tamamı CR1aa kültüre alındı.  Embriyo kültüründe 24. saatte bölünme sayısı 93/308 oranı %30,19 oldu. Anadolu mandası embriyolarının CR1aa kültüründe 96. saatte, morula sayıları 53/308, oranı ise %17,21 olarak gerçekleşti. Anadolu mandası embriyoları CR1aa kültürde 7. günde blastosist sayısı 29/308 ve oranı  %9,42 oldu. Anadolu mandası embriyoları CR1aa kültüründe 8.-9. günlerde hacking ve hatcked blastosist sayısı 12/308 ve oranı ise  %3,89 oldu. Anadolu mandası embriyoları CR1aa kültürüne alınışından itibaren 7. günde stereo mikroskopla yapılan kontrolde 29 adet blastosistten transfer edilebilir kalitede (1. ve 2. Kalite) embriyo sayısı 16 adet oranı %55,17, vasat ve zayıf kalitede 13 adet embriyo, bunların oranı ise %44,74 oldu. Bu çalışma ile Anadolu mandası üzerine yapılacak in vitro fertilizasyon ve embriyo üretim çalışmalarına öncülük edilmeye çalışıldı. Çalışma ile Anadolu mandasında ilk defa in vitro embriyo gelişim ve kalite parametreleri hakkında bilgiler verildi. Anadolu mandasının in vitro embriyo üretim potansiyelini ortaya konularak, gelecekte yapılacak çalışmalara bir alt yapı oluşturuldu.

Abstract:
In this study, it was aimed to determine embryo development and production parameters from Anatolian buffalo oocytes under in vitro conditions. For this purpose, the amount of oocytes obtained per ovary, the quality classification rates of oocytes, the maturation rate of oocytes, the fertilization rate of oocytes, the cleavage rates in culture medium, the blastocyst accession rates, hatched blastocyst rates and embryo quality rates were determined. For this purpose, ovaries belonging to Anatolian water buffaloes slaughtered in the provincial slaughterhouses (Afyonkarahisar, Çorum) close to International Center For Livestock Research and Training Directorate were used as material. All procedures of the study were created from widely accepted standard in vitro fertilization (IVF) protocols. Oocytes were obtained from the ovaries by aspiration method. TCM-199 + 10% FCS was used for maturation of these oocytes, direct washing method with BO (Bracket & Oliphant) medium for fertilization, CR1aa (Charles Rosencrans 1 Amino Acid) medium was used for culture. The study was carried out in 6 replications in 2019 and 2020. In the study, 184 ovaries belonging to 92 Anatolian water buffaloes were used. A total of 395 oocytes were aspirated from the ovaries. 334 of the oocytes were evaluated as A-B quality. Of the 334 A-B quality oocytes taken for maturation, 329 were considered to be mature. Fertilization was performed in 308 of 329 matured oocytes and all of them were cultured as CR1aa. The number of cleavage at 24 hours in embryo culture was 93/308, and the cleavage rate was 30.19%. In the CR1aa culture of Anatolian Water Buffalo embryos, the morula count was 53/308 and the rate was 17.21% at the 96th hour. The blastocyst count was 29/308 and the rate was 9.42% on the 7th day in Anatolian Water Buffalo embryos CR1aa culture. The number of Hacking and Hacked Blastocysts in the CR1aa culture of Anatolian Water Buffalo embryos was 12/308 and the rate was 3.89% on the 8th-9th days. In the CR1aa culture of Anatolian water buffaloes embryos, the rate of transferable quality (1st and 2nd quality) embryos from 29 blastocysts was 16 (55.17%), 13 of poor and weak quality embryos, and their ratio was 44.74%, in the control performed with a stereo microscope on the 7th day. With this study, it was tried to precursor in vitro fertilization and embryo production studies on Anatolian Water Buffaloes. With this study, information about in vitro embryo development and quality parameters in Anatolian Water Buffaloes was given for the first time. By revealing the in vitro embryo production potential of the Anatolian Water Buffaloes, an infrastructure was created for future studies.