Dağ alası (Salmo trutta macrostigma dumeril, 1858) için ß-aktin promotör - rtghI ifade vektörünün hazırlanması
Construction of ß-actin promoter- rtghI expression vector for brown trout (Salmo trutta macrostigma dumeril, 1858)
Yazar: MESUT YILMAZ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MEHMET ÖZBAŞ
Akdeniz Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Anadolu alabalığı = Anatolia trout ; Salmo trutta macrostigma = Salmo trutta macrostigma

Özet:
Genetik iyileştirme, kültür koşullarında hızlı büyüyen ya da genel olarak istenilen karaktere sahip soyların elde edilmesinde sıklıkla kullanılan bir yöntemdir. Yöntem, türün morfolojik özelliklerini tipik olarak taşıyan ve temsil ettiği kuşakta en hızlı büyüyen bireylerin seçilerek kendi aralarında eşleştirilmesi temeline dayanmaktadır. Gen manipülasyonun da ise, istenilen karakterin frekansının daha birinci jenerasyonda arttırılması amacıyla hedef türün genomunda bir takım değişikliklerin yapılmasıdır. Bu tez çalışmasının amacı gökkuşağı alabalığının (Oncorhyncus mykiss) büyüme hormonu genini içeren bir vektör oluşturmaktır. Bu amaca yönelik Salmo trutta macrostigma(Dağ alası) ß- aktin promotörü ve rtghI geni izole edilmiş ve ara rekombinant vektörden sonra pTRE3G-mCherry ökaryotik ekspresyon vektörüne yerleştirilmiştir. Bunun için S. t. macrostigma ß-aktin promotör dizisinin 1607 bç'lik kısmı ile O. mykiss'in 4570 bç'den oluşan ghI gen dizisi izole edilerek kullanılmıştır. Gene ait ihtiyaç duyulan 4526 bç'lik dizi ile promotör bölgeyi kodlayan 1607 bç'lik dizi bilgisayar ortamında birleştirilerek, restriksiyon enzim kesim bölgeleri analiz yoluyla belirlenmiş, alt klonlamalara engel oluşturabilecek kesim bölgeleri uzaklaştırılmış ve istenilen klonlamayı olası kılacak yeni kesim bölgeleri dizayn edilmiştir. Bu çalışmalardan sonra, promotör ve büyüme hormonu bir bütün halinde in vitro ortamda sentezlenmiştir. Sentezlenen promotör-gen dizisi pTRE3G-mCherry ökaryotik ekspresyon vektörüne yerleştirilmiş ve yeni vektöre pMY07 adı verilmiştir. Hazırlanan bu vektör ile dağ alasının büyümesini olumlu yönde etkileyeceği düşünülmektedir.

Abstract:
Artificial selection techniques have been frequently and traditionally used for improving performance of cultured organisms. The principal of the technique is to select phenotypic characters that show sign of good growth abilities. On the other hand, in genetic manipulation, gene frequency of the desired trait increased in the first generation by altering the genetic structure of the genome of the target species. The aim of this study was to construct a vector that contains the rainbow trout growth hormone gene. For this purpose, the growth hormone gene of Oncorhyncus mykiss and ß-actine promoter of Salmo trutta macrostigma was isolated and after subclonings, the promoter+gene construct were cloned and introduced in to pTRE3G-mCherry eukaryotic expression vector. It was found that ß-actin promoter of Salmo trutta macrostigma contains 1607 bp of the DNA were used for the desired construction. The isolated growth hormone gene of Oncorhyncus mykiss was 4570 bp. For construction of the desired gene cassette, the promoter and the gene DNA sequence (used 4526bp of 4570bp) were put head to tail order next to each other using a computer system. The undesired restriction cutting sites were removed and new restriction sites were introduced for cloning of the gene cassette. The desired whole DNA sequence was synthesized in vitro conditions. After in vitro synthesis of the gene cassette, the promoter+ gene structure were cloned in to pTRE3G-mCherry eukaryotic expression vector. The new vector was named as pMY07. It is expected that the designed structure will improve the growth conditions of the fish.