Yüksek glukoz uygulanan pc12 hücre hattında timokinonun kaspaz sistemi üzerine etkileri
The effect of thymoquinone on caspase system on high glucose treated pc12 cell line
Yazar: ALİ FURKAN GÜMÜŞ
Danışman: PROF. DR. SEMİHA DEDE
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Glükoz = Glucose ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre kültürü = Cell culture ; Kaspazlar = Caspases ; Timokinon = Thymoquinone

Özet:
Bu çalışma, çeşitli şekillerde ve nedenlerle yaygın olarak kullanılan timokinonun, yüksek oranda glukoz eklenen PC12 hücre hattında, kaspaz bağımlı apoptozis üzerine çeşitli dozlarda etkilerinin araştırılması amacıyla planlandı.PC12 hücreleri in vitro koşullarda haftada iki-üç kez düzenli pasajları yapılarak (%5 FBS, %10 host serum, %1 L-Glutamin, %1 penisilin/streptomisin/%0.0125 gentamisin- RPMI 1640, %5CO2 ve %95, 37oC inkübasyon) yetiştirildi. MTT hücre canlılık testleri yapılarak timokinon ve glikoz gruplarının IC50 değeri belirlendi. Hücreler PLL ile kaplı pleytlere, 5x105 hücre olacak şeklide hazırlandı. Glukoz; G1 (150 mM), G2 (250 mM) ve G3 (350 mM), timokinon; TQ (20 µM), TQ2 (40 µM) ve TQ3 (80 µM) dozda deneme grupları ve bu gruplar arasında çaprazlama olarak hazırlandı. Altı saatlik inkübasyonu takiben tripsine edilen hücreler, dondur/çöz yöntemiyle parçalanarak analize hazırlandı. Bu örneklerde; Kaspaz 3, Kaspaz 8, Kaspaz 9 enzimleri, 8 OHdG ve M30 düzeyleri ELISA ile belirlendi. 8-OHdG bakımından, TQ1, TQ2 ve G1, G2 grupları hariç tüm gruplardaki seviyeler kontrolden önemli oranda düşük bulundu (p≤0.001). TQ'nun tüm dozlarının uygulandığı G1 ve G2 gruplarında, 8-OHdG düzeyi azaldı (p≤0.001). Kaspaz 3 ve 9 gruplar arasında açısından önemli bir değişim tespit edilmedi. Kaspaz 8 aktiviteleri TQ1, G3, T1G1, T1G2, T2G1, T2G2, T3G1 ve T3G2 gruplarında, kontrolden önemli oranda yüksek bulundu (p≤0.002). TQ'nun tüm dozlarının G2 gruplarında kaspaz 8 aktivitesini attırdığı görüldü. M30 düzeyleri; T1G1, T3G2 gruplarında kontrolden düşük bulundu (p≤0.002). Sonuç olarak, yüksek oranda glukoz ilave edilen PC12 hücre hattında, TQ uygulamasının kaspaz enzimleri ve proteini ile oksidatif DNA hasarı üzerine etkileri olduğu saptandı.

Abstract:
This study was planned to investigate the effects of different doses of thymoquinone (TQ) which widely used various form and reason, on caspase dependent apoptosis and oxidative DNA damage in high glucose added PC12 cell line.PC12 cells were cultured the regular passages (5% FBS, 10% host serum, L-Glutamin 1%, penicillin1%/streptomycin/gentamicin %0.0125-RPMI 1640, 5% CO2 ve 95%, 37oC incubation). MTT cell viability and IC50 value were determined for glucose and TQ. Cells were seed into PLL coated plates. Glucose; G1 (150 mM), G2 (250 mM) and G3 (350 mM), thymoquinone; TQ (20 µM), TQ2 (40 µM) and TQ3 (80 µM) groups and its cross groups were prepared. Cells were used for analysis after 6 hours incubation and cell lysate were obtained by freeze/thaw cycle. In these examples; 8-OHdG, caspase 3, caspase 8, caspase 9 enzymes and M30 were analyzed by ELISA. The 8-OHdG levels decreased in all group compared to control except TQ1, TQ2 and G1, G2 (p≤0.001). In G1 and G2 groups treated with all TQ doses were observed that 8-OHdG levels decreased (p≤0.001). There were no statistically differences between groups for caspase 3 and 9 activities. Caspase 8 activities of TQ1, G3, T1G1, T1G2, T2G1, T2G2, T3G1 and T3G2 groups were higher than control group (p≤0.002). The all doses of TQ caused the increase of caspase 8 activities in G2 group. The low M30 levels were observed in T1G1, T3G2 compared to control group (p≤0.002). As a result, it was observed thatin thehigh dose glucose added PC12 cell line, using TQ have statistically important effect on oxidative DNA damage and caspase enzymes activities and protein.