Farklı insan dokularından elde edilen mezenkimal kök hücrelerin farklılaşma potansiyellerinin immünofenotipik ve gen ekspresyon düzeyinde incelenmesi
Investigation of differentiation potentials of mesenchymal stem cells obtained from different human tissues by i̇mmunophenotypic and gene expression levels
Yazar: GÜLAY ERMAN
Danışman: DOÇ. DR. YUSUFHAN YAZIR
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Bilim ve Teknoloji = Science and Technology
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Dental pulpa = Dental pulp ; Fenotip = Phenotype ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Kemik iliği = Bone marrow ; Kök hücreler = Stem cells ; Kıl folikülü = Hair follicle ; İmmünofenotip tayini = Immunophenotyping

Özet:
Amaç: Mezenkimal kök hücreler(MKH) günümüzde yenileyici tıp veya hücresel tedavilerin önemli biyolojik ajanlarıdır.  Çeşitli dokulardan türetilen MKH'lerin kullanımını içeren klinik öncesi ve klinik çalışmalar halen devam etmektedir. Bununla birlikte, farklı kaynaklardan elde edilen MKH'lerin eşzamanlı olarak farklılaşma potansiyellerini inceleyen bir çalışma bulunmamaktadır. Çalışmamızda farklı dokulardan izole edilen insan-MKH'lerin farklılaşma potansiyellerini gen ifadesi düzeyinde ve immünofenotipik özelliklerini, karşılaştırmalı olarak incelemeyi amaçladık.
Yöntem: İnsan adipoz doku (iAD), kemik iliği (Kİ), göbek bağı Wharton jeli (WJ), süt dişi ve 20 yaş dişi dental pulpası (DP) ve kıl folikülü (KF) kaynaklı MKH'ler uygun yöntemlerle kültüre edilmiş, pasaj 3'e gelen hücreler flow sitometrik ve immünohistokimyasal yöntemlerle karakterize edilmişlerdir. Tüm kaynaklardan elde edilen MKH'ler osteojenik, adipojenik ve kondrojenik farklılaştırma için kimyasal uyarılmışlardır. Farklılaşan hücrelerin gerçek zamanlı-PZR, ELİZA ve immünohistokimyasal analizleri yapılmıştır.
Bulgular: Tüm kaynaklara ait MKH'ler, MKH'ye özgü yüzey belirteçlerini ifade etmektedir. DP ve KF kaynaklı MKH'ler diğerlerinden farklı olarak CD117 ifade etmektedirler. Kondrojenik farklılaşma için WJ, KF ve DP, adipojenik farklılaşma için WJ, KF ve AD ve de osteojenik farklılaşma için WJ, DP ve Kİ kaynaklarından elde edilen MKH'ler diğer gruplara göre daha iyi farklılaşma potansiyeli göstermişlerdir.
Sonuç: MKH gruplarının hepsi immünofenotipik ve morfolojik olarak benzerlik göstermektedir. Bununla beraber kök hücrelerin farklılaşma kapasiteleri elde edilen kaynaklara göre farklılıklar göstermektedir. Bu sonuçlar, klinik ve pre-klinik çalışmalara uygun MKH kaynağı seçimi için önemli bilgiler sağlarmaktadır. Çalışmamızda elde edilen sonuçlar gelecekte yapılacak olan çalışmalara ışık tutacaktır.

Abstract:
Objectives: Recently, Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are important biological agents in regenerative medicine and cellular therapy. Pre-clinical and clinical studies which involve the use of MSCs derived from various tissues are still in progress, consequently. However, there is no study on examining simultaneously differentiation of the potentials of MSCs derived from different sources. We intended to examine comparatively the differences in expression levels of surface markers and the immunophenotypic and genotypic characteristics of differentiation potentials of human-MSCs isolated from different tissues in our study.
Methods: For this purpose, MSCs from human adipose, bone marrow, umbilical cord Wharton's jelly, exfoliated deciduous teeth, wisdom teeth and hair follicle were cultured until third passaged by using suitable methods and characterized by flow cytometry and immunohistochemistry methods. MSC derived from each source were induced to differentiate to the osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. After differentiation, MSC's were analyzed by Real Time-PCR, ELİZA and immunocytochemistry.
Results: Each individual cell population expresses the MSC-specific cell surface markers. On the other hand, unlike the others, dental pulp and hair follicle-MSC's express CD117. Wharton's jelly, hair follicle and dental pulp for chondrogenic differentiation, Wharton's jelly, hair follicle and adipose tissue for adipogenic differentiation, Wharton's jelly, dental pulp and bone marrow for osteogenic differentiation have higher potential than other sources.
Conclusions: Morphological and immunophenotypic characteristics of MSCs are similar. Differentiation capacities of stem cells show differences according to the resources of them. These results provide important information about selecting the suitable source of MSCs for pre-clinical and clinical studies. It is believed that the results of in our study will shed light the future studies on.