Yüksek molekül ağırlıklı hyaluronik asitin insan pulpa hücreleri üzerine sitotoksik etkisinin ve alkalen fosfataz aktivitesinin incelenmesi
Evaluation of the cytotoxicity and alkaline phosphatase activity of  high molecular hyaluronic acid  on human dental pulp cells
Yazar: ÖZGE ATİKLER
Danışman: DOÇ. DR. ELİF BAHAR TUNA İNCE
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pedodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Bu çalışmada yüksek molekül ağırlıklı hyaluronik asitin insan pulpa hücreleri üzerine sitotoksik etkisinin ve alkalen fosfataz aktivitesinin karşılaştırmalı olarak incelenmesi amaçlanmıştır. 19-25 yaş arası bireylerin gömük üçüncü büyük azı dişlerine ait pulpa dokusundan elde edilen insan pulpa hücreleri yeterli yoğunluğa ulaştığında pasajlama işlemi yapılmış ve çalışmada kullanılmak üzere 3. pasaj hücreler seçilmiştir. Oluşturulan hücre kültürlerine hyaluronik asit (H-9390, Sigma Aldrich), Gengigel Prof®, ProRoot® MTA, Biodentine™ ve Dycal® materyallerine ait salınım sıvıları uygulanmıştır. 1. ve 7. günler sonunda hücrelere anneksin V ve ethidyum homodimer III boyaması yapılarak akım sitometri analizi yapılmıştır. Hücre oranları canlı, erken apoptotik, geç apoptotik ve nekrotik hücre olacak şekilde belirlenmiştir. 7. ve 14. günler sonunda ELISA ile alkalen fosfataz aktivitesi değerlendirilmesi yapılmıştır. Bulgular IBM SPSS Statistics 22 programı ile analiz edilmiştir. Verilerin değerlendirilmesi sonucunda hyaluronik asit ve Gengigel Prof grupları 1. ve 7. günlerde kontrol grubu ile benzer hücre canlılığı göstermiş ve apoptoz ve nekrozu uyarmamıştır (p>0.05). ProRoot MTA ve Biodentine grupları kontrol grubu ile karşılaştırıldığında biyouyumlu bulunmuştur (p>0.05). Dycal grubunda her iki günde de hücre canlılığı diğer tüm gruplara göre anlamlı derecede düşük bulunmuştur (p<0.05). Mineralizasyonun erken belirteçlerinden olan alkalen fosfataz (ALP) aktivitesi tüm gruplarda kontrol grubundan yüksek bulunmuştur. ALP aktivitesinin 7. ve 14. gün sonuçları karşılaştırıldığıda 14. günde artış olduğu belirlenmiş ancak bu fark istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır (p>0.05). Sonuç olarak yüksek molekül ağırlıklı hyaluronik asit, insan pulpa hücreleri üzerinde sitotoksik etki oluşturmamış ve biyouyumluluk göstermiştir.

Abstract:
The aim of this study was to investigate the cytotoxicity and alkaline phosphatase activity of high molecular hyaluronic acid  on human dental pulp cells.  Human dental pulp cells were derived from pulp tissue obtained from impacted third molars. After cultures reached confluence, cell passages were performed and the cells at 3rd passages were used in experiments. Cultures were treated with hyaluronic acid (H-9390, Sigma Aldrich), Gengigel Prof®, ProRoot® MTA, Biodentine™ and Dycal® extracts. On the 1st and 7th days of culture, after cell staining with annexin V and ethidium homodimer III, flow cytometry analysis was performed and vital, early apoptotic, late apoptotic and necrotic cells were determined. On the 7th and 14th days of culture, alkaline phosphatase activity of the cells was performed with ELISA. The data were analyzed using IBM SPSS Statistics 22. Hyaluronic acid and Gengigel Prof showed similar cell viability with control group on 1st and 7th days and did not induce apoptosis and necrosis of cells (p>0.05). Proroot MTA and Biodentine was found biocompatible when compared by control group however Dycal decreased cell viability on both days significantly more than all the other groups (p<0.05). In all groups the induction of alkaline phosphatase activity which is an early marker of mineralization increased depending on time however statistically significant difference was not found with control groups (p>0.05). In conclusion, high molecular hyaluronic acid  has shown any cytotoxicty effects on human dental pulp cells and exhibited good biocompatibility.