Günümüzde direkt ve/veya indirekt kuafaj tedavisinde kullanılan materyallerin dental pulpa kök hücreleri üzerindeki sitotoksisite ve biyouyumluluğunun incelenmesi
Evaluation of cytotoxicity and biocompatibility of recently in use materials in direct/indirect capping treatment on dental pulp stem cells
Yazar: BANU ÇİÇEK TEZ
Danışman: DOÇ. DR. BAHAR BAŞAK KIZILTAN ELİAÇIK
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Diş Hekimliği Ana Bilim Dalı / Çocuk Diş Hekimliği Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Koruyucu diş hekimliği = Preventive dentistry ; Çocuk diş hekimliği = Pediatric dentistry

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı, dört farklı pulpa kuafaj materyalinin in vitro ortamda dental pulpa kök hücreleri (hDPSCs) üzerindeki osteojenik, odontojenik ve anjiyojenik etkilerini değerlendirmek, bununla birlikte sitotoksisite ve biyouyumluluklarını karşılaştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: Çalışmada, gömülü üçüncü büyük azı dişlerinden izole edilen DPSC'ler kullanılmıştır. DPSC'ler, Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA, TheraCal LC ve Dycal'ın ekstrakt yöntemi ile elde edilen salınım sıvılarına maruz bırakılmıştır. MTS testi ile hücre canlılığı, Annexin V/PI boyası ile flow sitometride apoptoz/nekroz hücre tayini yapılmış ve materyallerin hücre içi oluşturduğu ROS değerlerine bakılmıştır. Osteo/odontojenik belirteçlerden ALP, OCN, Col1A, SPARC(ON) ve anjiyojenik belirteç olan VEGF'nin gen ekspresyonu RT qPCR ile belirlenmiştir. Yüzey yapısındaki morfolojik değişimler SEM ile görüntülenmiştir.
Bulgular: MTS testi 1.3.5. ve 7. gün sonuçları değerlendirildiğinde Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA ve TheraCal LC negatif kontrol grubuna göre hücre canlılığını olumsuz etkilemediği görülmüş, 14.gün sonu MTS sonuçlarına göre, Dycal, Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA ve TheraCal LC arasında anlamlı bir farklılık bulunamamıştır (p> 0.05). Dycal, ROS seviyesini arttıran tek materyal olmuştur (p ≤ 0.0001). Harvard BioCal-Cap, TheraCal LC (p ≤ 0.0001) ve NeoPutty MTA'da (p ≤ 0.01) yüksek seviyede VEGF mRNA gen ekspresyonu gözlenmiştir. NeoPutty MTA ve Dycal; OCN mRNA gen ekspresyonunu, TheraCal LC ise Col1A ve SPARC (ON) mRNA gen ekspresyonunu yukarı yönde regüle emiştir (p≤ 0.0001). ALP mRNA gen ekspresyonunu arttıran tek materyal Dycal olmuştur (p≤ 0.0001). TheraCal LC ve Harvard BioCal-Cap'in SEM'de DPSC'lere karakteristik iğ morfolojisini kazandırdığı görülmüştür.
Sonuç: Rezin esaslı MTA olan Harvard BioCal-Cap ve NeoPutty MTA, uyumlu biyouyumluluk değerleri göstermiş ve özellikle anjiyojenik belirteci desteklediği saptanmıştır.
Anahtar Kelimeler: Biyouyumluluk, Dental pulpa kök hücresi, Kuafaj tedavisi, mRNA gen ekspresyonu, Sitotoksisite

Abstract:
Aim: This study aimed to evaluate the in vitro osteogenic, odontogenic and angiogenic effects of four pulp capping materials on dental pulp stem cells (hDPSCs), as well as to compare cytotoxicity and biocompatibility.
Materials and Methods: Impacted third molars were used to isolate hDPSCs, which were treated with extract release fluids of pulp capping materials (Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA, TheraCal LC, and Dycal). Effects of capping materials on cell viability were assessed using MTS assay and the apoptotic/necrotic cell ratios and ROS levels from a flow cytometry. Marker expressions (ALP, OCN, Col1A, SPARC (ON) and VEGF) were determined by RT-qPCR. Changes in surface morphology of hDPSCs were visualized by SEM.
Results: The MTS assay results at days 1, 3, 5 and 7 indicated that Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA and TheraCal LC did not adversely affect cell viability when compared to the control group. According to the MTS assay results at day 14, no significant difference was found among Dycal, Harvard BioCal-Cap, NeoPutty MTA and TheraCal LC affecting the cell viability. Dycal was the only capping material that increases the ROS level. High levels of VEGF expression were observed in Harvard BioCal-Cap, TheraCal LC, and NeoPutty MTA. NeoPutty MTA and Dycal up-regulated OCN expression, whereas TheraCal LC up-regulated Col1A and SPARC expression. Only Dycal increased ALP expression. The hDPSCs were visualized in characteristic spindle morphology by SEM due to TheraCal LC and Harvard BioCal-Cap.
Conclusion: NeoPutty MTA and Harvard BioCal-Cap MTA showed suitable biocompatibility values, and in particular, these capping materials were observed to support the angiogenic marker.
Key Words: Biocompatibility, Cytotoxicity, Dental pulp stem cells, mRNA
Expression, Pulp capping treatment