Çeşitli substratlardan proteolitik Bacillus cinsi üyelerinin izolasyonu, karakterizasyonu ve alkali proteaz aktivitelerinin belirlenmesi
Isolation, characterization and determination of alkaline protease activity of Bacillus genus from the various proteolytic substrates
Yazar: UMUT KOVANCILAR
Danışman: PROF. DR. ABDURRAHMAN ÜSAME TAMER
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Alkalofilik bacillus = Alkalophilic bacillus ; Bakteri izolasyonu = Bacterial isolation ; Serin alkali proteaz = Serine alkaline protease

Özet:
Bu çalışmada alkali proteaz üreten bakterilerin izolasyonu gerçekleştirilmiş ve bu enzimce en aktif (ekonomik açıdan değerli) suşlarının elde edilmesi amaçlanmıştır. İzmir, Manisa ve Aydın illerindeki (14 farklı istasyondan) toprak örnekleri alınmıştır. İzolasyonda dilüsyon ve petri plaka yöntemleri kullanılmıştır. Kazein hidroliz zonlarına göre seçilen izolatlara biyokimyasal testler ve bazılarına APİ testleri uygulanmıştır. 

Bacillus cinsine ait olduğu öngörülen 2 izolat (S9-UKM ve S11-UKM) seçilmiş ve enzim aktivitesinin belirlenmesinde spektrofotometrik yöntem uygulanmıştır.  Bu uygulama esnasında inkübasyon süresi, ortam sıcaklığı ve ortam pH'ı değiştirilmiş, farklı karbon ve farklı azot kaynakları denenmiştir.

S9-UKM İzolatı için en yüksek proteaz aktivitesi 3'ncü günün sonunda 300C'de, pH 8.0'de, karbon kaynağı fruktoz ve azot kaynağı olarak ise skim milk kullanıldığında elde edilmiştir.  S11-UKM izolatı ise en yüksek proteaz aktivitesini 3'ncü günün sonunda, 330C'de pH 7.2'de, karbon kaynağı olarak maltoz, azot kaynağı olarak ise maya ekstresi kullanıldığında elde edilmiştir.

Proteazların kullanım alanları geçmişten günümüze oldukça gelişme göstermiştir. Hemen hemen her alanda sıklıkla kullanılmakta olup ve gelecekte de önemleri daha da artacaktır. 

Elde edilen bulgular sonucunda aynı cinse ait bakterilerde üretilen alkali proteaz üretim parametrelerinde farklılıkların bulunabileceğini gösterilmiştir. Bu tip çalışmalarla en uygun üretici organizmanın tespit edilmesinin önemi ortaya konmuştur.

Abstract:
In this study, we were performed isolation of the alkaline protease producer bacteria and the most active enzyme producer strains (economically valuable) was intended to obtain. The soil samples were collected from 14 different stations which is inside the Izmir, Manisa and Aydın provinces border. We used dilution and petri plate method was for bacteria isolation. Biochemical tests and API test kits were applied to the izolates, which was selected according to the hydrolyzed casein zones. 

2 isolates (S9-UKM and S11-UKM) were selected, which was predicted to be involved in Bacillus genus,  and spectrophotometric method was used to identification of the enzyme activity. During the study, different incubation time, medium temperature, medium pH, carbon and nitrogen sources was tried.

Maximum protease activity for S9-UKM isolate was reached at the end of the third day and in the conditions of 300C, pH 8.0, fructose as carbone source and skim milk as nitrogen source. Also, maximum protease acitivity for S11-UKM isolate was reached at the end of the third day and in the conditions of 330C, pH 7.2, maltose as carbone source and yeast extract as nitrogen source.

Usage of proteases area have increased quite progressively. Proteases are used almost in every area and importance of these enzymes will increased in the future.

The results obtained from the study, it is shown that there may be differences in the parameters of alkaline protease production among the same bacterias, which is in the same genus. With this type of studies, importance of detection of the most suitable organism putted forward.