Spermatozoon yüzey bağlanma proteinlerinden fertilin ve cryitestin'in insan ve koç spermatozoonlarındaki dağılımı
Distribution of the spermatozoa surface binding proteins fertilin and cryitestin on human and ram spermatozoa
Yazar: GÜL İPEK UYSAL GÜNDOĞAN
Danışman: PROF. DR. HASAN HAKAN BOZKURT
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Cryitestin = Cryitestin ; Fertilin beta = Fertilin beta ; Genler = Genes ; Koçlar = Rams ; Sperm = Spermatozoa ; İnsan = Human

Özet:
Fertilin ß, spermatozoon yüzeyinde bulunan ve spermatozoon?oosit membran bağlanmasında yönlendirici bir proteindir. Cryitestin'in ise spermatozoon yüzeyinde bulunan protein türlerinden biri olduğu ve fertilin ile birlikte spermatozoonun oosit membranına bağlanmasına yardımcı olduğu bildirilmiştir. Spermatozoon maturasyonu sırasında, epididimal spermatozoonların yüzeylerinde fertilin ß ve cryitestin proteinlerinin ortaya çıktığı bilinmektedir. Her iki proteinin de spermatozoon üzerindeki yerini tespit etmek ve maturasyon mekanizmalarını anlamak fertilizasyon problemlerinin çözümü için önemlidir.Kryoprezervasyon uygulanmış koç spermaları suni tohumlama çalışmalarında düşük başarı göstermektedir. Koç spermatozoonlarının maturasyon mekanizmalarının anlaşılması suni tohumlama çalışmalarının geliştirilmesine yardımcı olacaktır.Bu çalışma yukarıdaki konuların açıklanmasına yardımcı olmak üzere iki bölüm şeklinde tasarlanmıştır.Birinci bölümde insan spermaları ile 3 grup oluşturulmuştur. Birinci grup normal spermatogenik değer gösteren fertil kişilerden alınan spermatozoonlar kullanılarak, ikinci grup oligospermi tanısı konmuş kişilerden alınan spermatozoonlar kullanılarak ve üçüncü grup ise normal spermatogenik parametreye sahip fakat infertilite problemi gösteren ve uygulama sonrası gebelik oluşmayan spermatozoonlar kullanılarak oluşturulmuştur. Gruplarda spermatozoonların yüzeyindeki fertilin ß, ADAM2 (C-15) primer antikoru ve donkey anti-goat IgG-FITC sekonder antikoru kullanılarak indirekt immunofloresan yöntemi ile işaretlenmiştir. İmmun işaretlenmiş spermatozoonların yüzdeleri saptanmıştır. Spermatozoonlardaki boyanmalar hiç, 1x, 2x ve 3x boyanma derecesi olarak sınıflandırılıp, sonuçlar istatistiki olarak değerlendirilmiştir. Spermatozoon yüzeyindeki fertilin ß proteininin sadece miktarının değil dağılımının da infertilite ile ilişkisi olduğu saptanmıştır.İkinci bölümde ise koç spermatozoonları ile çalışılmıştır. Koç spermatozoonlarında insan spermasında uygulanan fiksasyon yöntemi ile aynı yöntem uygulanarak preparatlar hazırlanmıştır. İnsana özgü fertilin ß antikorunun koç fertilin ß proteininde kros reaksiyon verdiği kanıtlanmıştır.İndirekt immunofloresan yöntemi uygulanarak farelere özgü cryitestin antikorunun ise hem insan spermatozoonunda hem de koç spermatozoonunda kros reaksiyon vermediği tespit edilmiştir.

Abstract:
Fertilin ß is a sperm surface protein and mediates sperm-egg membrane interactions. Cryitestin is also one of the sperm proteins and includes sperm-egg membrane interactions together with fertilin . It is known that during the maturation of spermatozoon, fertilin and cyritestin proteins appear on the surface of epididymal spermatozoa. To identify the location of both protein and understanding their role in maturation mechanisms can help to understand fertilization problems.The cryopreserved ram semen shows low success on artificial insemination. Understanding the ram spermatozoa maturation mechanisms will assist development of artificial insemination with cryopreserved ram semen.This study is designed into two parts for searching the above subjects.In the first part, 3 study groups have been created with human spermatozoa. The first group has been prepared by using semen from fertile people whom sperm?s demonstrate normal spermatogenic value, the second group have been prepared by using semen whom diagnosis are oligospermia and third group have been prepared by whom sperm have normal spermatogenic value but demonstrate infertility problem and conceiv after implementation. Fertilin ß have been labelled by ADAM 2 (C-15) primary antibody and donkey anti-goat IgG-FITC secondary antibody using indirect immunoflourescence method. Percentage of labelled spermatozoon has been determined. On the other slide, stained spermatozoa have been scaled as non, 1x, 2x and 3x. Results have been evaluated statistically. The relation of infertility with fertilin ß protein on the surface of spermatozoa has been determined not only with the quantity but also with its distribution.In the second part, ram spermatozoa have been studied on three groups . The same fixation method has been used for the ram sperm. The cross-reaction of human spesific fertilin ß antibody on ram spermatozoa has been proven.It is identified that by using indirect immunofluorescence method the mice specific cryitestin antibody doesn?t give cross-reaction neither on human spermatozoa nor on ram spermatozoa.