Embriyonun endometriuma implantasyonunda mikroRNA200-C'nin rolü
The role of microrna200-C in implantation of embryo to endometrium
Yazar: AYŞE AKGÜN
Danışman: PROF. DR. GÜLÇİN METE
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Embriyo nakli = Embryo transfer ; Endometriyum = Endometrium ; Endometriyum = Endometrium ; Kısırlık = Infertility ; Mikro RNA = Micro RNA ; RNA = RNA ; Uterus = Uterus ; İnfertilite =

Özet:
İmplantasyon, reseptif uterus ile blastosist arasındaki etkileşimi içeren oldukça
kompleks bir süreçtir. Kusurlu implantasyon; infertilite, spontan düşük, preeklamsi gibi
olumsuz gebeliklere neden olabilmektedir.
Çalışma kapsamında 30 adet dişi sıçan kullanılmış, altışarlı beş gruba ayrılan
bu sıçanlardan, dört grupta gebelik oluşturulmuştur. Gebeliğin 4. gününde, gebelik
oluşturulan grup2 ve grup3 sıçanların, sağ uterus boynuzlarına miRNA200-c mimiği,
sol uterus boynuzlarına fizyolojik salin uygulanmıştır. Gebeliklerinin 8. gününde grup2
ve 13. gününde grup3 sıçanlara servikal dislokasyon yapılarak uterus dokuları alınmış
ve embriyoları sayılmıştır. Grup4 ve grup5 gebe sıçanlara herhangi bir uygulama
yapılmamıştır. Gebeliklerinin 8. gününde grup4'ün ve 13. gününde grup5'in uterus
dokuları, servikal dislokasyon yapılarak alınmış ve embriyoları sayılmıştır. Gebelik
oluşturulmayan grup1 sıçanların uterus dokuları, östrus siklusunda servikal dislokasyon
yapılarak alınmıştır. Gruplar arasındaki farklılığı belirlemek için embriyo sayıları
istatistiksel olarak analiz edilmiştir. Dokular, ışık mikroskop takip yöntemi uygulandıktan
sonra parafin bloklardan kesitler alınmıştır. Kesitlere α5β3 integrin, VEGF, LIF, CD105,
Oct3/4, SSEA-1, NANOG, IL-6, IL-18 ekspresyonlarının belirlenmesi amacıyla
immunohistokimyasal işlem uygulanmıştır. MiRNA-200c uygulanan gruplardaki embriyo
sayılarında, istatistiksel olarak anlamlı azalma olduğu gözlenmiştir. Yapılan
immunohistokimyasal analizlerde; CD105'in stromal hücrelerdeki ekspresyonunun
miRNA-200c mimiği uygulanan gruplarda azaldığı, α5β3'ün gruplar arasında farklı
olmadığı, IL-6'nın mimik uygulanan grupta bez epitelinde ve stromal hücrelerde
ekspresyon görülmediği, IL-18'in mimikli gruplarda azaldığı, LIF'in erken gebelikte
azaldığı ve gebeliğin 13. gününde tekrar arttığı görülmüş, mimik uygulanan gruplarda
gebeliğin 8. gününde yüksek seviyede ekpresyon gözlemlenmiştir. NANOG
ekpresyonunun mimik uygulanan gruplarda stromal hücrelerde arttığı, mimik
uygulanmayan erken gebelikte azaldığı ve plasentada arttığı, Oct3/4'ün mimik
uygulanan Grup2 ve grup3'te lümen epitelinde ekspresyonun, negatif olduğu
görülmüştür. SSEA'nın mimik uygulanan gruplarda arttığı, VEGF'nin mimik uygulanan
gruplarda stromal hücrelerde iyice azaldığı bulunmuştur. Elde edilen sonuçlar, miRNA-
200c'nin, implantasyon olayında implante olan embriyo sayılarının üzerinde etkili
olduğunu ve implantasyon sürecini etkilediğini göstermektedir.

Abstract:
Implantation is a highly complex process involving the interaction between the
receptive uterus and blastocyst. Defective implantation can cause adverse pregnancies
such as infertility, spontaneous abortion, and preeclampsia.
Thirty female rats were used in this study. The rats were divided into five groups
of six and pregnancy was established in four of these groups. miRNA200-c mimic was
applied to the right uterine horns and physiological saline was applied to the left uterine
horns of the group2 and group3 rats on the 4th day of pregnancy. Uterine tissues were
taken by cervical dislocation on the 8th day of the pregnancy in the group2 rats and
13th day of the pregnancy in the group3 rats, and the embryos were counted. No
application was applied to the group4 and group5 pregnant rats. Uterine tissues were
removed by cervical dislocation on the 8th day of the pregnancy in group4 rats and
13th day of the pregnancy in group5 rats, and the embryos were counted. In nonpregnant
rats, uterine tissues were removed by cervical dislocation during estrous
cycle. Embryo numbers were statistically analyzed to determine the difference between
groups. Sections were taken from the paraffin blocks after the light microscope method
was applied to the tissues. An immunohistochemical procedure was applied to the
sections to determine the expressions of α5β3 integrin, VEGF, LIF, CD105, Oct3/4,
SSEA-1, NANOG, IL-6, IL-18. A statistically significant decrease was observed in the
number of embryos in the miRNA-200c groups. In the immunohistochemical analyzes,
it was reported that; the expression of CD105 in stromal cells decreased in miRNA-
200c mimic groups, α5β3 was not different between groups, IL-6 was not expressed in
gland epithelium and stromal cells in the mimic group, IL-18 decreased in mimic
groups, LIF decreased in early pregnancy and increased again on the 13th day of
pregnancy, and a high level of expression was observed on the 8th day of pregnancy
in the mimic groups. It was observed that; NANOG expression increased in stromal
cells in mimic groups although it decreased in early pregnancy and increased in
placenta in the mimic- free group, and Oct3/4 had negative expression in the lumen
epithelium in group2 and group3 in which mimic was applied. It was observed that;
SSEA increased in mimic groups, VEGF decreased in stromal cells in mimic groups.
These results show that; miRNA-200c has an effect on the number of implanted
embryos during the implantation event, and it affects the implantation process.