Bazı makrofungus toksinlerinin elektrokimyasal tayini
Electrochemical determination of some macrofungi toxins
Yazar: AYŞE BETÜL KARADUMAN
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA YAMAÇ ; PROF. DR. YÜCEL ŞAHİN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışma, letal etkiye sahip makrofungus toksinleri olan α-amanitin ve falloidinin serum ve idrar örneklerinde belirlenebilmesi için elektrokimyasal bir tayin yöntemi geliştirilmesi amacı ile gerçekleştirilmiştir.
Çalışma kapsamında α-amanitin ve falloidin toksinleri ile biyolojik sıvılarda bulunan bazı elektroaktif bileşenlerin elektrokimyasal davranışları araştırılmıştır. Elektrokimyasal yöntemlerle doğrudan tayin edilebilirliği anlaşılan α-amanitin ve falloidin toksinlerinin serum ve idrardan tayini sırasında girişim etkisi sorunu çeşitli elektrot modifikasyon işlemleri ile aşılmaya çalışılmış ve bu etki tamamen giderilememiştir. Ancak, α-amanitin ve falloidin toksinlerinin serum ve idrar örneklerinden tayin öncesi ekstraksiyonu için başarılı protokoller geliştirilmiştir. Seçilen protokoller ile elde edilen ekstraktların toksin içerikleri diferansiyel puls voltametrisi yanında HPLC yöntemi ile de tayin edilmiştir. Falloidinin serum ve idrar örneklerinden ekstraksiyonunun tam olarak gerçekleştirildiği, fakat α-amanitinin serumdan yüksek, idrardan ise daha düşük bir verimle ekstrakte edilebildiği anlaşılmıştır.  Amanitin ELISA tayin kiti ile gerçekleştirilen çalışmalarda, örneklerde bulunan α-amanitin, üreticinin önerdiği protokol ile seçici olarak belirlenememiştir.
Gerçekleştirilen çalışmalar ile literatürde ilk kez öldürücü etkiye sahip makrofungus toksinleri olan α-amanitin ve falloidin tayinleri için semikantitatif elektrokimyasal bir yöntem geliştirmeye yönelik çalışmalar yapılmıştır. Bu toksinlerin vücut sıvılarında hızlı biçimde tayin edilmesi ile mantar zehirlenmesi durumunda hastanın daha kısa sürede tedavisinin yapılması, yaşamının kurtarılması, pahalı ve uzun tedavi süreçlerinden de kaçınılması mümkün olabilecektir.

Abstract:
The objective of this study was developing an electrochemical assay method in order to determine of α-amanitin and phalloidin, which are lethal macrofungus toxins, from serum and urine samples. 
In the scope of this study, the electrochemical behaviours of α-amanitin, phalloidin and some of the electro-active components found in the biological fluids were investigated. The problem of interference effect, during the determination of α-amanitin and phalloidin which are electro-active toxins, from serum and urine, was tried to be overcome by different electrode modifications. However, the effect has not been eliminated completely. Nevertheless, successful extraction protocols were developed for α-amanitin and phalloidin toxins from serum and urine samples prior to determination process. The toxin content of the extracts which obtained by chosen protocols were determined by differential pulse voltammetry and HPLC. It was concluded that phalloidin can be entirely extracted from both serum and urine samples, whereas α-amanitin can be extracted from serum and urine samples with higher and lower efficiencies, respectively. During the studies with Amanitin ELISA assay kit, the toxin in the samples could not have been distinctively determined with the protocol suggested by the producers of the kit.
This study is the first attempt in the literature to develop a semi-quantitative electrochemical method for the determination of the lethal macrofungus toxins, α-amanitin and phalloidin. In the case of mushroom poisoning, the fast determination of these toxins in the body fluids, will enable saving patients' lives through rapid treatment and also avoiding expensive and prolonged treatment process.