Radyasyonun neden olduğu testis hasarında apocynin'in etkilerinin histolojik olarak incelenmesi
Histological investigation of effects of apocynin on testicular damage caused by radiation
Yazar: MERVE TATLI
Danışman: DOÇ. DR. SEDA ÖZBAL
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Radyoloji ve Nükleer Tıp = Radiology and Nuclear Medicine
Dizin: Apokinin = Apocynin ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Histoloji = Histology ; Radyasyon = Radiation ; Radyasyon etkileri = Radiation effects ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Amaç : 
Çalışmamızda radyasyon uygulanan sıçanlarda, testis dokusunda meydana gelen hasara karşı kuvvetli bir antioksidan olan Apocynin'in koruyucu etkilerini histokimyasal, immünohistokimyasal, elektron mikroskobik ve biyokimyasal düzeyde incelemeyi amaçladık.  

Yöntem : 
Çalışmamızda 35 adet Wistar albino erkek sıçan (n=7) 5 gruba ayrıldı: 1-Kontrol grubu: normal adlibitum beslenen grup, 2-Sham grubu: 5 gün günde tek doz ip. salin verilen grup, 3-Apocynin grubu: 5 gün 20 mg/kg/gün apocynin salinde ip. verilen grup, 4-Radyasyon grubu: Tek doz 10 Gy skrotal radyasyon uygulanan grup, 5-Apocynin+Radyasyon grubu: Radyasyon öncesi 5 gün ip. 20 mg/kg/gün apocynin salinde verilen ve son dozdan 24 saat sonra tek doz 10 Gy skrotal radyasyon uygulanan grup. Radyasyon uygulamasından 24 saat sonra tüm gruplar sakrifiye edildi. 
Işık mikroskobik incelemeler için Hematoksilen & Eozin (H&E), Periyodik Asit Sciff (PAS) ve Masson Trikrom boyaması ile boyandı. Kesitlerde Johnsen's skorlaması yapılıp, seminifer tübül çapı, seminifer tübül epitel yüksekliği ve bazal membran kalınlığı ölçüldü. İmmunohistokimyasal olarak apopitozu değerlendiemek için TUNEL, aktive kaspaz-3 immunohistokimya, hücreler arası sıkı bağlantı kompleksleri için ZO-1 ve Occludin immunohistokimyasal boyama yapıldı. Testis dokusu ultrastrüktürel olarak değerlendirildi. Biyokimyasal incelemeler için doku homojenatlarında Glutatyon Peroksidaz (GPx), Süperoksit Dismutaz (SOD), ve Malondialdehit (MDA) düzeyleri ölçüldü.

Bulgular :
Yapılan ışık mikroskobik ve elektron mikroskobik incelemelerde kontrol, sham ve apocynin gruplarında normal yapıda seminifer tübüller, düzgün sıralanmış spermatogenik seri hücreleri, normal kalınlıktaki seminifer tübül çapları, seminifer epitel yükseklikleri ve bazal membran yapısı gözlendi.
Radyasyon grubunda germ hücre kaybı, intertisyel alanda bağ doku artışı saptandı. Johnsen's skorlamasında, seminifer tübül çaplarında ve seminifer tübül epitel yüksekliğinde azalma ve bazal membran kalınlığında artış gözlendi. Apocynin+radyasyon grubunda ise normale yakın morfolojide testis yapısı gözlendi.. 
Yapılan immunohistokimyasal incelemeler sonucunda radyasyon grubunda kontrol grubuna oranla seminifer tübüllerde TUNEL pozitif boyanan hücre sayısının ve aktive kaspaz-3 immun pozitif boyanan hücre sayısının arttığı, ZO-1 immun pozitif ve occludin immun pozitif hücre sayısının azaldığı saptandı. Apocynin+radyasyon grubunda ise TUNEL pozitif ve aktive kaspaz-3 immun pozitif hücre sayısının azaldığı, ZO-1 immun pozitif ve occludin immun pozitif hücre sayısının ise kontrole yakın bir şekilde arttığı tespit edildi. Biyokimyasal olarak ise Apocynin uygulamasının hasar grubu ile karşılaştırıldığında GPx ve SOD düzeyini arttırdığı, MDA düzeyini ise azalttığı görüldü.
Sonuç :
Radyasyonun oluşturduğu testis hasarında, Apocynin'in oluşan doku hasarını, apopitozu ve oksidatif stresi azaltarak olumlu koruyucu etkileri olduğu sonucuna varıldı.

Abstract:
Objective:
The aim of this study is to investigate the effect of apocynin on rat testis damage which is caused by exposure to radiation by histochemically, immunohistochemically, electron microscopically and biochemically.

Method: 
In our study, 35 Wistar albino male rats (n=7) were divided into 5 groups; 1-Control group: normal adlibitum fed group, 2-Sham group: 5 days ip. saline given group, 3-Apocynin group: 5 days ip. 20 mg / kg / day apocynin dissolved in saline given group, 4-Radiation group: single dose of 10 Gy scrotal radiation group, 5-Apocynin + Radiation group: 5 days before irradiation the group receive ip. 20 mg / kg / day apocynin saline and after a single dose of 10 Gy scrotal radiation applied 24 hours after the last dose of ip. 20 mg / kg / day apocynin. All groups were sacrificed 24 hours after irradiation.
Hematoxylin & Eosin (H&E), Periodic Acid Sciff (PAS) and Masson Tricrom stainings were made for light microscopic examinations. Johnson's scoring was performed on testis sections besides seminiferous tubule diameter and height, seminiferous tubule basal membrane thickness' were measured. TUNEL, active caspase-3 immunohistochemistry was used to evaluate apoptosis; ZO-1 and Occludin immunohistochemical staining were made for intracellular tight junction complexes. Testicular tissue was evaluated ultrastructurally. Glutathione peroxidase (GPx), superoxide dismutase (SOD), and malondialdehyde (MDA) levels were measured in tissue homogenates for biochemical assays.

Results : 
Seminiferous tubules, regularly sorted spermatogenic serial cells, seminiferous tubule diameters in normal thickness, seminiferous tubule epithelial height and basal membrane structures were observed normal in control, sham and apocynin groups in light microscopic and electron microscopic examinations.
Germ cell loss, interstitial inland connective tissue growth was detected in the radiation group. Johnsen's score, seminiferous tubule diameter and seminiferous tubule epithelium height were decreased and thickening in the seminiferous tubule basal membrane was found. In the apocynin+radiation group, ameleration in the histomorphology of the testis was observed.
As a result of the immunohistochemical studies, it was found that increase in number of TUNEL positive stained cells and active caspase-3 immunopositive cells in seminiferous tubules, number of ZO-1 immunpositive and occludin immunoreactive cells decreased in the radiation group compared to the control group. In the apocynin + radiation group, it was found that the number of TUNEL positive and active caspase-3 immunpositive cells decreased and number of  ZO-1 and occludin immunoreactive cells were increased similar to the control group sections. Biochemically, it was observed that apocynin administration increased GPx and SOD levels and decreased MDA levels when compared to the injury group.

Conclusion: 
It has been concluded that apocynin has positive protective (amendatory) effects by reducing tissue damage, apoptosis and oxidative stress in the testis damage caused by radiation.