Resveratrol'ün Drosophila melanogaster'de antigenotoksik etkilerinin araştırılması
Investigation of antigenotoxic effects of Resveratrol in Drosophila melanogaster
Yazar: FATMA TURNA
Danışman: PROF. DR. BÜLENT KAYA
Akdeniz Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, Drosophila melanogaster'de somatik mutasyon ve rekombinasyon testi (SMART) kullanılarak farklı mekanizmalar ile hasara neden olan üç mutajene karşı (EMS, 4-NQO ve K2Cr2O7) Resveratrol'ün antigenotoksik etkileri araştırılmıştır. SMART genetik değişimleri geniş bir spektrumda hızlı ve ucuz şekilde belirlemeye yarayan güvenilir bir yöntemdir. Bu çalışmada larvalar ön ve eş zamanlı uygulamalara maruz bırakıldılar. Ön uygulama çalışmasında; ikinci evre transheterozigot larvalar Resveratrol (1, 5 ve 10 mM) dozları ile beslendikten 24 saat sonra mutajen kimyasallara maruz bırakılmıştır. Eş zamanlı uygulamalar için ise, üçüncü evre transheterozigot larvalar eş zamanlı olarak hem Resveratrol hem de mutajenlere maruz bırakılmıştır. Bu mutajenlerin genotoksik etkileri, larvaların kanat imajinal disk hücrelerinde meydana gelen genetik değişimlerin (nokta mutasyon, parça kopması, ayrılmama ve rekombinasyon) sonucunda oluşan mutant trikomlara göre değerlendirildi. Değerlendirme, Graf vd tarafından belirtilen sınıflandırma (küçük tek tip, büyük tek tip, ikiz, toplam mwh ve toplam klonlar) esas alınarak yapıldı. Resveratrol'ün 1, 5 ve 10 mM dozları Drosophila'da eş zamanlı denemelerde K2Cr2O7'a karşı güçlü bir antigenotoksik aktivite oluşturmuştur. Yine eş zamanlı denemelerde Resveratrol'ün 5 ve 10 mM dozları EMS'ye karşı antigenotoksik etki gösterirken, Resveratrol'ün 1 mM dozu genotoksik aktiviteyi çok az miktarda arttırmıştır. Diğer taraftan Resveratrol'ün 1 ve 5 mM dozları 4-NQO'ın oluşturduğu toplam klon sayılarını azaltırken, 10 mM dozu ise toplam klon sayılarını arttırmıştır. Ön uygulamalı denemelerde Resveratrol'ün 1, 5 ve 10 mM dozlarının K2Cr2O7'a ve EMS'ye karşı güçlü antigenotoksik aktiviteye sahip olduğu gözlenmiştir. Ayrıca Resveratrol'ün 1 ve 10 mM dozlarının 4-NQO'in indüklediği genotoksik hasarı arttırdığı, 5 mM dozunun ise bu hasarı azalttığı gözlenmiştir. Bu çalışma, Resveratrol'ün ön uygulamalı denemelerinde EMS ve K2Cr2O7`ın neden olduğu genotoksik hasara karşı Resveratrol'ün koruyucu potansiyelinin eş zamanlı uygulamalara göre daha yüksek olduğunu göstermiştir. Sonuç olarak Resveratrol, D. melanogaster' de EMS ve K2Cr2O7 karşı antigenotoksik etki göstermiş ancak 4 NQO'in genotoksisitesine karşı çelişkili sonuçlar görülmektedir.

Abstract:
In this study, the antigenotoxic effects of Resveratrol was tested using the somatic mutation and recombination test (SMART) in Drosophila melanogaster against three mutagens (EMS, 4-NQO and K2Cr2O7) which causes genotoxicity with different mechanisms. SMART is a reliable assay to detect a broad range of genetic alterations in a rapid and inexpensive way. In this study, the larvae were treated both pre and simultaneous exposure. For the pre-treatment study; second instar trans-heterozygous larvae were exposed to Resveratrol doses (1, 5 and 10 mM), after 24 hours later they were exposed three different mutagenic chemical (EMS, 4-NQO and K2Cr2O7). For simultaneous treatments 3-day old larvae were exposed Resveratrol concentrations and mutagenic chemicals simultaneously. The effects of these mutagens were evaluated according to genetic changes (point mutation, deletion, non-disjunction, and recombination) in wing imaginal disc cells that lead to the formation of mutant trichomes. Evaluation was done according to the classification (small single spot, large single spot, twin spot, total mwh and total spot) developed by Graf et al. Simultaneously given 1, 5 and 10 mM doses of Resveratrol produced a strong antigenotoxic activity against K2Cr2O7. Similarly simultaneous treatments 5 and 10 mM doses of Resveratrol showed antigenoticity against EMS, while 1 mM dose induced small amount o genotoxic actions in a very small amount. On the one hand, 1 and 5 mM doses of Resveratrol reduced the total spot numbers produced by 4-NQO, 10 mM dose of Resveratrol increased the total spot numbers. In pre-treatments, while 1, 5 and 10 mM doses of Resveratrol produced a strong antigenotoxic activity against K2Cr2O7 and EMS. 1 and 10 mM doses of Resveratrol increased the damage induced by 4-NQO however 5 mM dose of Resveratrol reduced that damage. Our results indicate that protective effect of Resveratrol against genotoxic damage caused by EMS and K2Cr2O7 is higher in pre-treatment compared to simultaneously treated larvaes. Consequently, Resveratrol exerts antigenotoxic activity against to EMS and K2Cr2O7 in D. melanogaster however it produces conflicting results against 4-NQO genotoxicity.