Okadaik asitin zebra balığı embriyolarında meydana getirdiği immunflorasans değişiklikler
Immunoflorance changes occurred by okadaic acid in zebra fish embryo
Yazar: HATİCE OĞUŞ
Danışman: DOÇ. DR. AHMET TOPAL
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı / Su Ürünleri Mühendisliği Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Amaç: Bu çalışma okadaik asitin zebra balığı embriyolarında meydana getireceği malformasyon ve immunfloresan değişiklikleri incelemek için yapılmıştır. 
Yöntem: Yapılan çalışmada; her bir grupta 80 tane olacak şekilde zebra balığı yumurtası embriyosu 4 gruba ayrılmıştır. Bu gruplardan ilk grup kontrol grubu olup, ikinci gruba 0,5 µg/ml okadaik asit, üçüncü gruba 1 µg/ml okadaik asit, dördüncü gruba 2,5 µg/ml okadaik asit ilavesi yapılmıştır. Bu işlem 5 gün boyunca tekrarlanmıştır. Embriyolarda meydana gelen hayatta kalma oranı ve değişimler gözlemlenmiştir ve 6. günde anomalik bozukluk görülen embriyolar, metil selüloz damlatılmış olan lamın üzerine alınıp mikroenjeksiyon mikroskobunda beyaz ışık çekimi yapılmıştır. Çekim yapıldıktan sonra embriyolarda meydana gelen malformasyon değerlendirilerek çıkan sonuçlara göre oluşan anomalik bozukluklar tespit edilmiştir. Deney sonunda gruplardan rastgele 10 embriyo seçilerek %4 paraformaldehit fiksatifine bırakılarak embriyolarda meydana gelen immunfloresan değişiklikler kaspaz 3, 8-OHdG, ERK½, NF-Kb, TLR4 ve c-Fos primer antikorları uygulanarak belirlenmiştir.
Bulgular: Okadaik asit, doza bağımlı olarak NF-Kb, TLR-4, kaspaz 3, ERK½, c-Fos ve 8-OHdG nin immunpozitifliğine sebep olmuştur. Okadaik asitin,  zebra balığı embriyo beyin dokularında DNA hasarı, inflamasyon ve apoptotik aktiviteleri etkileyerek nöronal hasara neden olduğu tespit edilmiştir.
Sonuç: Elde ettiğimiz sonuçlar, okadaik asit toksisitesinin patofizyolojisi altında yatan moleküler mekanizmayı daha iyi anlamak için imkan sağlamaktadır. Ayrıca bu çalışma ile okadaik asit biyotoksininin; kabuklu deniz ürünlerinin tüketimi ile insan vücudunda olumsuz etkiler oluşturabileceği gözlemlenmiştir.

Abstract:
Purpose:  This study was carried out to examine the malformation and immunofluorescence changes that okadaic acid will cause in zebrafish embryos.
Method: In the study; zebrafish egg embryos are divided into 4 groups, with 80 in each group. The first group of these groups was the control group, 0.5 µg/ml okadaic acid was added to the second group, 1 µg/ml okadaic acid was added to the third group, and 2.5 µg/ml okadaic acid was added to the fourth group. This procedure was repeated for 5 days. The survival rate and changes occurring in embryos have been observed, and on the 6th day, the embryos with anomalous disorders were taken on the slide where methyl cellulose was dripped and white light was taken under microinjection microscope. After the extraction, the malformation of the embryos was evaluated and the anomalous disorders were determined according to the results. At the end of the experiment, 10 embryos were randomly selected from the groups and left in 4% paraformaldehyde fixative, and immunofluorescent changes in the embryos were determined by applying primary antibodies to caspase 3, 8-OHdG, ERK½, NF-Kb, TLR4 and c-Fos.
Findings: Okadaic acid induced dose-dependent immunopositivity of NF-Kb, TLR-4, caspase 3, ERK1/2, c-Fos and 8-OHdG. It has been determined that okadaic acid causes neuronal damage by affecting DNA damage, inflammation and apoptotic activities in zebrafish embryo brain tissues.
Results: Our results provide an opportunity to better understand the basic load mechanism underlying the pathophysiology of okadaic acid action. In addition, with this study, okadaic acid biotoxin; It has been observed that consumption of shellfish can cause negative effects on the human body.