Deneysel iskemi reperfüzyon hasarı oluşturulmuş sıçan beyin dokusunda otulın ve speksin immunreaktivitesinin incelenmesi
Investigation of otulin and spexin immunereactivity in experimental ichemia-reperfusion damaged rat brain tissue
Yazar: MUHAMMED BURAK ER
Danışman: DOÇ. DR. FERHAT BALGETİR
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Nöroloji = Neurology

Özet:
ÖZET
 İnme vasküler bir nedene bağlı olarak ortaya çıkan fokal serebral fonksiyon kaybı ile sonuçlanan akut klinik tablolara neden olan sendromdur. Klinik tablo oldukça değişkendir belirtiler günler içinde düzelebilecek kadar hafif olabileceği gibi ciddi sekel bırakan veya ölümle sonuçlanan klinik tablolarıda içerebilir. Toplumda en sık ölüm nedenleri arasın da ve sakatlığın ilk sırada gelen nedenidir. İnme patofizyolojisinde nöronların nekroz ve apoptozisi ile sonuçlanan nöroinflmasyon rol oynar. Nöroinflamasyonun mekanizması net anlaşılamamakla beraber OTULIN ve speksin moleküllerinin nöroinflamasyonda da rol aldığı ve seviyelerinin artığı düşünülmektedir. Akut iskemik inmenin erken döneminde aşırı enflamatuar yanıtın engellenmesi nöron hücrelerini koruyabilir ve nörolojik sonuçları iyileştirebilir Bu çalışmada deneysel iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturulan sıçan beyin dokusunda OTULIN ve speksin serum düzeylerinin ve immünreaktivitesinin incelenmesi amaçlanmıştır.
Çalışmada 8-12 haftalık 35 adet Spraque-Dawley cinsi erişkin erkek sıçanlar rastgele 5 gruba ayrılacak şekilde kullanıldı. Kontrol grubu, Sham grubu, İ/R 2 saat grubu, İ/R 12 saat grubu, İ/R 24 saat grubu oluşturuldu. Kontrol grubundaki sıçanlara deney süresince herhangi bir işlem yapılmadı. Sham grubundaki sıçanlar servikal orta hattan insizyonla bilateral karotis kommunis arterler gözlendikten sonra kapatılıp 4. saatte dekapite edildi. İ/R 2 saat grubu, İ/R 12 saat grubu ve İ/R 24 saat grubundaki sıçanlar bilateral karotis kommunis arterler gözlendikten sonra internal karotis arter içinde cerrahi iplik ilerletilip orta serebral arter 120 dakika oklüde edildi. Ardından sırasıyla 2.saat 12.saat ve 24.saat boyunca reperfüzyonu sağlandı. Deney süresi sonunda tüm gruplardaki sıçanlar ketamin ve xylazine uygulanarak anestezi altında dekapite edildi. Dekapitasyonun ardından sıçanların dokuları hızla çıkarılıp uygun fiksatiflerle tespit edilip ardından histolojik takip serilerinden geçirilip parafin bloklara gömüldü. Parafin bloklardan alınan doku kesitlerinde OTULIN ve Speksin için immunohistokimyasal boyama ve apoptoz için TUNEL boyama yapıldı. Bununla birlikte alınan kanlar santrifüj edilerek ayrılan serumların ELİSA yöntemi ile OTULIN, SPEKSİN ve TOS düzeylerine bakıldı
Çalışmamızda da kontrol, Sham, İR-2, İR-12 ve İR-24 gruplarında OTULIN ve speksin serum seviyeleri biyokimyasal olarak incelendiğinde kontrol, sham ve İR-2 grupları benzerdi. İR-12 ve İR-24 grupları kontrol grubuyla karşılaştırıldığında anlamlı şekilde arttığı tespit edildi, bununla birlikte İR-12 ile İR-24 grupları arasında anlamlı fark yoktu. OTULIN ve speksin immunreaktivitesini değerlendirmek için beyin dokusu immünohistokimyasal olarak boyandı. Kontrol, sham ve İR-2 grubunda benzer olarak saptandı. İR-12 ve İR-24 gruplarında, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında OTULIN ve speksin immunreaktivitesi istatiksel olarak anlamlı derecede artmış olarak tespit edildi. İR-12 grubu ile İR-24 grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu. 
Sonuç olarak; deneysel iskemi-reperfüzyon hasarının beyin dokusunda OTULIN ve speksin seviyelerini artırdığı, iskemi-reperfüzyonun beyin dokusunu hasarlanmasının patofizyolojisinde OTULIN ve speksinin önemli bir rol oynayabileceği düşünülmüştür. İskemik inmede OTULIN ve speksinin daha geniş çalışmaların yapılması ile inme patofizyolojisinin aydınlatılmasına ve hatta tedavi seçeneklerinin oluşturulmasına katkı sunulabileceği düşünülmüştür.
Anahtar Kelimeler: Beyin, iskemi reperfüzyon hasarı, OTULIN, speksin

Abstract:
ABSTRACT
INVESTIGATION OF OTULIN AND SPEXIN IMMUNEREACTIVITY IN EXPERIMENTAL ICHEMIA-REPERFUSION DAMAGED RAT BRAIN TISSUE
Stroke is a syndrome characterized by focal cerebral function loss resulting from vascular causes. The clinical presentation can vary greatly, ranging from mild symptoms that can resolve within days to severe cases with significant disabilities or even fatal outcomes. Stroke is among the leading causes of death in the community and the primary cause of disability. The pathophysiology of stroke involves neuronal necrosis, apoptosis, and neuroinflammation. Although the mechanism of neuroinflammation is not fully understood, it is believed that OTULIN and spectrin molecules also play a role in neuroinflammation and their levels are thought to increase. Inhibition of excessive inflammatory response in the early stage of acute ischemic stroke may protect neuronal cells and improve neurological outcomes. This study aims to investigate the serum levels and immunoreactivity of OTULIN and spectrin in rat brain tissue with experimental ischemia-reperfusion injury.
 A total of 35 adult male Sprague-Dawley rats aged 8-12 weeks were randomly divided into five groups: control group, sham group, I/R 2-hour group, I/R 12-hour group, and I/R 24-hour group. The control group received no intervention throughout the experiment. In the sham group, after observing bilateral common carotid arteries through a midline cervical incision, they were closed and the rats were decapitated at the 4th hour. In the I/R 2-hour, I/R 12-hour, and I/R 24-hour groups, after observing bilateral common carotid arteries, a surgical thread was advanced into the internal carotid artery to occlude the middle cerebral artery for 120 minutes. Reperfusion was then achieved at 2 hours, 12 hours, and 24 hours, respectively. At the end of the experiment, all rats in each group were decapitated under anesthesia with ketamine and xylazine. The tissues were rapidly removed, fixed with appropriate fixatives, processed through histological follow-up series, and embedded in paraffin blocks. Immunohistochemical staining for OTULIN and spectrin and TUNEL staining for apoptosis were performed on tissue sections obtained from the paraffin blocks. In addition, blood samples were centrifuged to obtain serum, and the levels of OTULIN, spectrin, and total oxidative status (TOS) were measured using the ELISA method.
In our study, when the serum levels of OTULIN and spectrin were biochemically examined in the control, sham, I/R 2-hour, I/R 12-hour, and I/R 24-hour groups, the control, sham, and I/R 2-hour groups were similar. However, significant increases were observed in the I/R 12-hour and I/R 24-hour groups compared to the control group, while there was no significant difference between the I/R 12-hour and I/R 24-hour groups. Brain tissue was immunohistochemically stained for OTULIN and spectrin to evaluate their immunoreactivity. Similar staining patterns were observed in the control, sham, and I/R 2-hour groups. In the I/R 12-hour and I/R 24-hour groups, immunoreactivity of OTULIN and spectrin was significantly increased compared to the control group. There was no statistically significant difference between the I/R 12-hour and I/R 24-hour groups.
In conclusion, experimental ischemia-reperfusion injury increased the levels of OTULIN and spectrin in brain tissue, suggesting their potential role in the pathophysiology of ischemia-reperfusion-induced brain tissue damage. Further extensive studies on OTULIN and spectrin in ischemic stroke may contribute to understanding the pathophysiology of stroke and even the development of treatment.
      Key words: Brain, ischemia/reperfusion injury, OTULIN, speksin