Dişi sıçanların over dokusunda deneysel olarak oluşturulmuş iskemi ve reperfüzyon modelinde zamana bağlı moleküler mekanizmaların seyrinin ve strüktürel değişikliklerin araştırılması
Investigation of the time-dependent molecular mechanisms progression and structural changes in experimentally created ischemia and reperfusion model in the ovarian tissues of female rats
Yazar: ELİF POLAT
Danışman: YRD. DOÇ. DR. JALE SELLİ
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Moleküler biyoloji = Molecular biology ; Moleküler yapı = Molecular structure ; Ovaryum =   ; Over = Ovary ; Over hastalıkları = Ovarian diseases ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia

Özet:
Bu çalışmanın amacı over torsiyonu oluşturulduktan sonra detorsiyone edilmiş sıçan overlerinde gelişen iskemi/reperfüzyon hasarının şiddetini, zamanla olan değişimini ve inflamatuar sitokinlerle bağlantısını, histopatolojik, elektron mikroskobik, biyokimyasal ve moleküler düzeyde incelemektir.
Materyal ve Metot: Çalışmada 12 haftalık 78 adet Wistar albino cinsi dişi sıçan kullanıldı. Tüm hayvanlar her grupta 6 adet hayvan bulunan 13 gruba ayrıldı. Deney grupları sham, iskemi (I) ve iskemi/reperfüzyon (I/R) grupları olarak ayrıldı. İskemi grupları 30 dk (I/30), 60 dk (I/60), 90 dk (I/90), 120 dk (I/120), 150 dk (I/150) ve 180 dk (I/180) iskemi sürelerinden oluşturuldu. İskemi/reperfüzyon gruplarında ise 180 dk iskemi yapılan tüm hayvanlara sırasıyla 30 dk (IR/30), 60 dk (IR/60), 90 dk (IR/90), 120 dk (IR/120), 150 dk (IR/150) ve 180 dk (IR/180) reperfüzyon uygulandı. Deney sonunda elde edilen ovaryum doku örnekleri ışık mikroskobik, elektron mikroskobik, biyokimyasal ve moleküler yöntemlerle incelendi. 
Bulgular: Ovaryum doku örneklerinin ışık mikroskobik incelenmesinde I/90, I/180, IR/60 ve IR/90 gruplarında yoğun hemoraji ve vasküler konjesyon izlendi. İmmünohistokimyasal değerlendirmede I/180, IR/60 ve IR/90 gruplarında şiddetli immünreaktivite gözlendi. IL-1β, IL-6,TNF-α, NF-κB ve iNOS ekspresyonlarının kontrol grubuna göre I/180, IR/30, IR/60 gruplarında anlamlı derecede arttığı gözlenirken, eNOS ekspresyonlarının I/120, I/150, I/180 gruplarında anlamlı derecede azaldığı görüldü. Ultrastrüktürel incelemelerde ise I/120 ve IR/150 gruplarında bazal membranda kalınlaşmalar, I/150 ve IR/90 gruplarında da endotel hücrelerinde değişimler tespit edildi.   
Sonuç: Çalışmanın sonuçları ovaryum dokusunun iskemi ve reperfüzyon süreçlerinden anlamlı derecede etkilendiğini göstermektedir. Özellikle I/90, I/120, I/150, I/180 gruplarında doku hasarı iskemi süresine bağlı şiddetle artarken, IR/180, IR/150 ve IR/120 gruplarında ise oluşan hasarın diğer gruplarla kıyaslandığında ileri derecede azaldığı görüldü.

Abstract:
The aim of this study is to investigate severity of ischemia and reperfusion injury, it's connection with inflammatory cytokines and time dependent changes of reperfusion in the detorsioned rat ovary created after ovarian torsion by using histopathological, biochemical, electron-microscopic metods at the molecular level.
Material and Method: 12-week-old 78 Wistar-Albino female rats were used in this study. A total of rats were divided into 13 groups which consist of 6 rats. Experimental groups consists of sham, ischemia(I)  and ischemia/reperfusion(I/R) groups. İschemia groups consists of 30-min(I/30), 60-min(I/60), 90-min(I/90), 120-min(I/120), 150-min(I/150), 180-min(I/180) groups due to ischemia periods. In ischemia/reperfusion groups all animals underwent reperfusion respectively for 30-min(IR/30), 60-min(IR/60), 90-min(IR/90), 120-min(IR/120), 150-min(IR/150), 180-min. (IR/180), after 180-minute ischemia.  Obtained ovarian tissues were evaluated by light-microscopy, electron-microscopy, biochemical and molecular methods at the end of the experiment.
Results: Light-microscopic evaluation of I/90, I/180, IR/60 and IR/90 groups revealed an intensive vascular congestion and hemorrhage in ovarian tissues. İmmunohistochemical assessment indicated severe immunreactivity in I/180, IR/60 and IR/90 groups. IL-1b,IL-6,TNF-α,NF-κB and iNOS expression significantly increased compared to the control group in I/180,IR/30,IR/60 groups, while eNOS expression significantly decreased in I/120,I/150,I/180 groups. Various basement membrane changes detected in I/120 and IR/150 groups, also changes of endothelial-cells detected in I/150 ve IR/90 groups by ultrastructural-examination. 
Conclusion: The results of our study revealed that the ovarian tissue significantly affected from the ischemia and reperfusion. Tissue damage strongly increased especially in I/90,I/120,I/150,I/180 groups according to the duration of ischemia, while in IR/180, IR/150 ve IR/120 groups it was severely decreased when compared to other groups.