İmmatür sıçan testis dokusunun, fertilitenin korunması amacıyla yavaş dondurma ve vitrifikasyon yöntemleriyle dondurup çözme sonrası ışık ve elektron mikroskobik olarak incelenmesi ve karşılaştırılması
The comparison of vitrification and slow freezing metods after freezing and thawing, in the İmmature testis: Light and electron microscopy
Yazar: GÜLNAZ KERVANCIOĞLU
Danışman: PROF. DR. ŞULE ÇETİNEL
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Doku saklanması = Tissue preservation ; Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Fertilizasyon = Fertilization ; Mikroskopi-elektron = Microscopy-electron ; Mikroskopi-ışık = Microscopy-polarization ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; Vitrifikasyon yöntemi = Vitrification method

Özet:
İnsanda prepubertal dönem kanser tedavilerinden sonra gelişebilecek infertilitenin tedavisi yoktur. İleriye yönelik olarak fertilitenin korunması için prepubertal testis dokusunun dondurulup saklanması umut vadeden yöntem olarak görülmektedir. Ancak prepubertal testis için henüz standart bir dondurarak saklama yöntemi bulunmamaktadır.
           Çalışmamızda immatür (prepubertal) sıçan testis dokuları, vitrifikasyon yöntemi ve programlı yavaş dondurma yöntemiyle dondurulmuştur. Vitrifikasyon yönteminde, taşıyıcı (ilk kez fırça ve yüksek güvenlikli straw) ve süre (dengeleme ve vitrifikasyon süresi) değişken olarak kullanılıp 8 alt grup oluşturuldu. Programlı yavaş dondurma yönteminde ise seeding uygulanan ve uygulanmayan olmak üzere 2 alt grup oluşturuldu.
            İmmatür testis dokularında kullanılan dondurma çözme yöntemlerinin etkileri ışık ve elektron mikroskopunda histolojik olarak karşılaştırmalı incelendi. Sertoli hücreleri ve SKH nukleuslarının birbirinden ayırt edilebilmesi, nukleuslarda piknoz, bazal membran ayrışması, tübüler hücrelerde sitoplazmik vakuolüzasyon, dejenerasyon ve canlı hücre oranı değerlendirme kriteri olarak kullanıldı.
Vitrifikasyon yönteminin programlı yavaş dondurma yöntemine oranla dokuyu daha iyi koruduğu, tüm gruplar içinde ise dokuyu  en iyi koruyan yöntemin 10 dk dengeleme ve 5 dk vitrifikasyonun uygulandığı, fırçanın taşıyıcı olduğu vitrifikasyon yöntemi olduğu saptandı. Ayrıca ilk kez kullanılan fırçanın vitrifikasyon yönteminde, strawa üstün bir taşıyıcı olarak kullanılabileceği gösterildi.

Abstract:
Infertility caused by cancer treatment of prepubertal age group has no cure in humans. Freezing and storage of prepubertal testicular tissue is apromising method for the future studies. Yet there isn?t any available standart cryopreservation of prepubertal testicular tissue method. 
           In our study we aimed to assess the prepubertal testicular rat tissue freezing  by both programmed slow-freezing method and rapid cooling vitrification methods to compare the two methods according to the  damage in the testicular tubuli structure.
           In vitrification method variable carriers (high-secure straw and the brush we modified) and variable durations (of equlibration and vitrification) were used to maintain 8 groups.
           In programmed slow-freezing method 2 subgroups were settled as seeding applied (+) and non-applied (-) groups.
           The morphological effects of both freezing methods and carriers were evaluated and compared with light and transmission electron microscopy. The parameters of morphological assesments were to distinguish the nuclei of Sertoli and spermatogonial stem cells, picnosis of nuclei, disruption of basal membrane, cytoplasmic vacuolization and degeneration and the ratio of vitality among the cells in the tubules. 
           As a result of both morphologic and  quantitative assesments, the most appropriate method is shown:  by using the  brush carrier, equlibration for 10 minutes and vitrification for 5 minutes. 
           Vitrification method using the brush we modified was shown to be superior to straw as a carrier.