Sıçanlarda endotoksin ile oluşan hipotansiyona dalak tirozin kinazının katkısının araştırılması
Investigation of the contribution of syk on endotoxin-induced hypotension in endotoxemic rats
Yazar: MELTEM KAÇAN
Danışman: DOÇ. DR. KEMAL BUHARALIOĞLU
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Dalak = Spleen ; Endotoksinler = Endotoxins ; Farmakoloji = Pharmacology ; Hipotansiyon = Hypotension ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Sıçanlar = Rats ; Tirozin = Tyrosine

Özet:
Bu çalışmada, seçici bir Dtk inhibitörü olan BAY 61-3606'nın kontrol ve 
lipopolisakkarit (LPS) ile hipotansiyon oluşturulan endotoksemik sıçanların ortalama 
arteriyel basıncı (OAB) üzerine etkisi renal, kardiyak ve vasküler dokularında 
proenflamatuvar molekül oluşumu ile ilişkilendirilerek bu sürece Dtk'nin katılımı 
araştırıldı. Deneyler, kontrol grubu olarak serum fizyolojik (SF) ve septik şok grubu 
olarak LPS, deney grubu olarak BAY 61-3606 tek başına ve LPS ile birlikte BAY 61-
3606 grubu olarak tasarlandı. BAY 61-3606 sıçanlara SF veya LPS enjeksiyonundan 1 
saat sonra uygulandı. SF veya LPS enjeksiyonundan hemen önce ve enjeksiyondan 1, 2, 
3 ve 4 saat sonra sıçanların kuyruğundan OAB ve kalp hızı (KH) kayıtları alındı.
Deneyler sonunda öldürülen sıçanlardan alınan kanlardan hazırlanan serum 
örneklerinde nitrit; böbrek, kalp, torasik aort ve süperiyor mezenterik arterlerinde dalak 
tirozin kinazı (Dtk), fosforile Dtk, nükleer faktör-κB (NF-κB) p65, fosforile NF-κB p65, 
inhibitör kappa B-α (IκB-α), fosforile IκB-α, indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS)
ve siklooksijenaz (COX)-2 protein ekspresyonları ölçüldü. Aynı dokularda 
miyeloperoksidaz (MPO) etkinliği ve nitrotirozin, 6-keto-prostaglandin F1α (PGF1α) ve 
tümör nekroze edici faktör (TNF)-α düzeylerine bakıldı. Sıçanlara LPS uygulamasından 
4 saat sonra OAB 30 mmHg kadar azaldı, KH 109 atım/dakika kadar arttı. Dtk 
ekspresyonu LPS uygulaması ile değişmezken; IκB-α protein ekspresyonu azaldı. Dtk
fosforilasyonu, NF-κB p65 ekspresyonu ve fosforilasyonu, IκB-α fosforilasyonu, iNOS 
ve COX-2 protein ekspresyonları ise LPS ile arttı. Serum ve/veya dokularda ölçülen 
nitrit, nitrotirozin, 6-keto-PGF1α, TNF-α düzeyleri ve MPO etkinliği ise LPS 
uygulaması ile arttı. LPS'nin neden olduğu tüm bu değişiklikler BAY 61-3606 ile geri 
çevrildi. Bu çalışmanın bulguları, BAY 61-3606'nın LPS'nin neden olduğu
hipotansiyonu IκB-α/NF-κB yolu aracılığıyla oluşan vazodilatör ve proenflamatuvar 
moleküllerin oluşumunu inhibe ederek geri çevirdiğinden septik şok patojenezinde 
Dtk'nin rolü olduğunu göstermektedir. 

Anahtar kelimeler: LPS, NF-κB p65, Dtk, hipotansiyon, BAY 61-3606

Abstract:
In this study, the participation of the Syk on endotoxin-induced hypotension 
was investigated and was associated with changes in proinflammatory mediators in 
renal, cardiac and vascular tissues of the control and endotoxemic rats by using 
BAY 61-3606, a potent inhibitor of Syk. The experiments was designed saline, 
lipopolysaccharide (LPS), and BAY 61-3606 alone or in combination with LPStreated rats were used as control, septic shock, and experimental groups, 
respectively. BAY 61-3606 was administered 1 hour after injection of saline or 
LPS. Mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) were measured from rats 
received either saline or LPS at time points of 0, 1, 2, 3 and 4 hours. At the end of 
the experiments, rats were sacrified and serum and/or kidney, heart, thoracic 
aorta (TA) and superior mesenteric artery (SMA) nitrite, nitrotyrosine, 6-ketoPGF1α and tumor necrosis factor (TNF)-α levels were measured. Protein 
expression and/or phosphorylation of Syk, NF-κB p65, inhibitor of κB α (IκB-α), 
inducible nitric oxide synthase (iNOS) and inducible cyclooxygenase (COX-2) were 
measured on the same tissues. MAP fell by 30 mmHg, HR rose by 109 beats/min at 
4 hours after LPS administration. Tissue protein expression of Syk didn't change, 
however Syk phosphorylation increased after LPS administration. Tissue protein 
expression of IκB-α decreased, whereas IκB-α phosphorylation increased. Tissue 
protein expression and/or phosphorylation of NF-κB p65, iNOS and COX-2 
increased after LPS administration. Serum and/or tissue nitrite, nitrotyrosine, 6-
keto-PGF1α, TNF-α ve myeloperoxidase (MPO) levels increased. All this changes 
induced by LPS were prevented by BAY 61-3606. 
The results of this study demonstrated that BAY 61-3606 inhibited 
IKKβ/IκB-α/NF-κB/proinflammatory mediators pathway to prevent the LPSinduced hypotension. Furthermore, Syk would have an essential role in septic 
shock pathogenesis. 

Key Words: LPS, NF-κB, Syk, hypotension, BAY 61-3606