Sülforafanın 769-P insan böbrek kanser hücre dizisinde apoptoz üzerine etkisi ve hücre migrasyonunun inhibisyonu
Effect of sulforaphane on apoptosis in 769-P human kidney cancer cell line and inhibition of cell migration
Yazar: GÜZİN GÖKAY
Danışman: DOÇ. DR. AYDAN DAĞ
Bezm-i Alem Vakıf Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Böbrek neoplazmları = Kidney neoplasms ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre döngüsü = Cell cycle ; Hücre hareketleri = Cell movement ; Migrasyon = Migration ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Sülforafan = Sulforaphane

Özet:
Kanser görülme sıklığı dünyada giderek artmaktadır. Sağlıklı hücrelerde meydana
gelen fenotipik ve genotipik değişiklikler sonucunda kanser meydana gelmektedir.
Kontrolsüz hücre proliferasyonu sebebiyle hücreler anormal şekilde çoğalarak
invazyon ve metastaz özelliği kazanırlar. Böbrekler metabolizma tarafından üretilen
artık maddelerin vücuttan uzaklaştırılmasında ve homeostazın sağlanmasında önemli
fonksiyonlara sahiptir. Böbrek kanseri; ürogenital kanserler içerisinde yer almakta ve
insidansı gittikçe artmaktadır.
Son yıllarda bitkisel kaynaklı besinlere olan ilgi artmaktadır ve geleneksel tedavileri
desteklemek amacıyla sıklıkla tercih edilmektedir. Tarih boyunca da tedavilerde
bitkisel gıdalar kullanılmış olup biyoaktif bileşenlerin aynı zamanda kanserin
önlenmesinde farmakolojik ve fizyolojik etkilerinin olduğu savunulmaktadır. Diyetle
alınan besinlerdeki kemopreventif bileşikler; hücre içi sinyal iletim yolaklarını
düzenleme veya kanser oluşum sürecini uzatarak çeşitli koruyucu etkiler meydana
getirmektedir.
Brokoli, karnabahar, beyaz ve karalahana, Brüksel lahanası gibi Brassicaceae olarak
da bilinen turpgiller ailesindeki sebzeler 'glukosinolat ' adı verilen bileşik içerirler.
Glukosinolatlar, mirosinaz enzimi tarafından katalizlenen reaksiyona girerler.
Parçalanma ürünü ise izotiyosiyanatın karakteristik bir bileşiği sülforafan (SFN)'dır.
SFN kemopreventif etkileri sayesinde son yıllarda büyük ilgi görmektedir.
Çok sayıda epidemiyolojik araştırmalar ile in vivo ve in vitro çalışmalar, SFN'nin
kanseri önleyici ya da riskini azaltıcı potansiyeli olduğunu belirlemiştir. SFN'nin
çeşitli hücre hatları üzerindeki proapoptotik etkileri tanımlanmıştır fakat literatürde
böbrek kanserinde apoptoz üzerine olan etkisi için yeterli çalışma bulunmamaktadır.
Bu çalışmada SFN'nin 769-P insan böbrek kanser hücre hattı üzerindeki etkisi
araştırılmış ve kontrol grubu olarak 293-T insan böbrek epitel hücre hattı
kullanılmıştır. Bu amaçla çeşitli SFN konsantrasyonları hazırlanmış ve hücre hatları
üzerinde etkileri incelenmiştir. Hücre proliferasyonu üzerine etkisinin gözlenmesi için
MTT [3-(4, 5-dimetil tiyazol-2-il)-2, 5 difenil tetrazolyum bromid] testi (24. ,48. ,72.
saat) ve sitotoksik etkinin belirlenebilmesi için LDH (Laktat dehidrogeneaz) testi
uygulanmıştır. Analizler sonucu seçilen konsantrasyonlarda hücre döngüsü
inhibisyonları saptanmıştır. SFN'nin hücrelerde meydana getirdiği apoptotik etkinin
belirlenebilmesi için erken ve geç apoptotik hücreler Anneksin V yöntemi ile analiz
edilmiştir. 769-P insan böbrek kanser hücre hattında ise doza bağımlı şekilde hücre
migrasyonunun inhibisyonu incelenmiştir.

Abstract:
The frequency of cancer falls in the World and it occurs in phenotypic and genotypic
conditions that occur in healthy cells. Because of uncontrolled cell proliferation, cells
gain abnormalities and gain invasion and metastasis. Kidneys have factors related to
metabolism and homeostasis is sufficient. Kidney cancer; urogenital cancers are
involved and the incidence is increasing.
In recent years, interest in plant-derived foods has increased and is often preferred to
support traditional treatments. Throughout history, plant foods have been used in the
treatment and bioactive components are also claimed to have pharmacological and
physiological effects in the prevention of cancer. Chemopreventive compounds in
dietary foods; by modulating the intracellular signal transduction pathways or
prolonging the cancer formation process.
Broccoli, cauliflower, white and black cabbage, Brussels sprouts such as Brassicaceae
vegetables contain in the compound called glucosinolate. Glucosinolates react by
catalyzing the enzyme myosinase. The disintegration product is a characteristic
compound of isothiocyanate, sulforaphane (SFN). Due to its chemopreventive effects,
SFN has received great interest in recent years.
In vivo and in vitro studies with numerous epidemiological investigations have
identified the potential of SFN to prevent or reduce cancer. The proapoptotic effects
of SFN on various cell lines have been described, but there is insufficient study in the
literature on the effect of apoptosis on kidney cancer. In this study, the effect of SFN
on 769-P human kidney cancer cell line was investigated and 293-T human renal
epithelial cell line was used as control group. Various SFN concentrations were
prepared for this purpose and the effects on cell lines were examined.MTT [3- (4,5-
dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] test (24, 48, and 72 hours)
and LDH (Lactate dehydrogenease) for the detection of cytotoxic effect on cell
proliferation test was applied. Cell cycle inhibitions were determined at the selected
concentrations. In order to determine the apoptotic effect of SFN in cells, early and
late apoptotic cells were analyzed by Annexin V method. In the 769-P human kidney
cancer cell line, inhibition of cell migration in a dose-dependent manner was
investigated.