Kompozit doku allotransplantasyonu yapılan sıçanlarda, yağ doku kaynaklı mezenekimal kök hücrelerin ilk 24 saatte meydana gelen sistemik yanıta etkisi
First 24 hour systemic effect of adipose derived stem cells in rats which made composite tissue allotransplantation
Yazar: AHMET AKATEKİN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. OSMAN AKDAĞ
Selçuk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Böbrek = Kidney ; Doku nakli = Tissue transplantation ; Kök hücreler = Stem cells ; Sıçanlar = Rats ; Transplantlar = Transplants

Özet:
AMAÇ: Kompozit doku nakilleri eş zamanlı birçok farklı doku türünün
rekonstrüksiyonu açısından avantajlıdır. Ancak bu işlemin önündeki en büyük sorun
tüm doku çeşitlerine karşı ayrı ayrı oluşan sistemik ve immün yanıttır. Biz bu
çalışmamızda kompozit doku nakillerine bağlı ilk 24 saatte meydana gelen sistemik
yanıtı ve oluşan sistemik yanıta yağ doku kaynaklı mezenkimal kök hücrenin (MKH)
etkisini gözlemlemeyi amaçladık.
YÖNTEM: Çalışmada 29 adet Wistar Albino (WA) , 29 adet Sprague Dawley (SD)
türü sıçan kullanılmıştır. 24 adet WA sıçan 12'şerli 2 ayrı gruba ayrılmıştır. ( Grup I,
Grup III), 24 adet SD sıçan 12'şerli 2 ayrı gruba ayrılmıştır. ( Grup II, Grup IV) . Kalan
5 adet WA ve 5 adet SD türü sıçan MKH eldesi ve bazal karaciğer apoptoz değerlerinin
ölçülmesinde kullanılmıştır. Bu gruplardan elde edilen MKH süspansiyonları kendi
türlerinden sıçanlara enjekte edilmek üzere -80 ºC de saklanmış ve enjeksiyondan 40
dakika önce uygun koşullarda eritilmiştir. Grup I ile Grup II arasında, Grup III ile
Grup IV arasında çapraz sol arka ekstremite transferi planlanmıştır. Transfer öncesi
tüm sıçanlardan kuyruk kanı alınarak bazal AST, ALT, Üre ve Kreatinin değerleri
ölçülmüştür. Transfer esnasında anastomoz açılıp ekstremite dolaşımı gözlenen Grup
III ve Grup IV sıçanlara kendi t ürlerinden elde edilen adipoz kaynaklı MKH içeren
süspansiyon intraperitoneal olarak enjekte edilmiştir. Grup I ve Grup II sıçanlara aynı
miktar serum fizyolojik intraperitoneal olarak enjekte edilmiştir. Transfer işleminden
24 saat sonra bacak dolaşımı yeterli olan sıçanlar sakrifiye edilerek hem kan hemde
karaciğer doku örneği alınmıştır. Elde edilen veriler hem grup içinde hemde gruplar
arasında istatistiksel olarak analiz edilmiştir.
BULGULAR: İskemi süreleri ile 24 saat sonunda kandan ölçülen AST, ALT, Üre,
Kreatinin değerleri ve karaciğer dokusundan akım sitometrisi ile elde edilen ölü hücre,
canlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları arasında korelasyon olmadığı
görülmüştür. Kompozit doku nakli sonrası tüm gruplarda AST değerlerinde artış
olmasına rağmen bu artış sadece 1 grupta anlamlı bulunmuştur. Kreatinin ve ALT
değerlerinde tüm gruplarda anlamlı oranda azalma gözlenmiştir. Üre değerleri MKH
enjeksiyonu yapılmayan gruplarda azaldığı halde enjeksiyon yapılan gruplarda artmış
olarak gözlendi. Akım sitometrisi incelemesinde MKH enjeksiyonu yapılan gruplarda
canlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları arasında fark gözlenmedi. Sadece 1
grupta MKH enjeksiyonu sonrası ölü hücre oranında azalma olduğu gözlendi. MKH
eldesi için kullanılan sıçanlardan alınan karaciğer örneklerinin akım sitometrik
incelemesi sonuçları, cerrahi işlem yapılıp MKH enjeksiyonu yapılmayan ve 24 saat
sonunda sakrifiye edilerek karaciğer örnekleri alınan sıçanlar ile karşılaştırıldığında
ölü hücre, canlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları açısından anlamlı fark
gözlenmemiştir.
SONUÇ: Kompozit doku nakilleri sonrası ilk 24 saatte meydana gelen sistemik
yanıtın izlenmesinde AST, ALT, Üre ve Kreatinin değerlerinin anlamlı bulgu
vermediği, iskemi süresinin karaciğer ve böbrek fonksiyon testleri ile korelasyon
göstermediği, AST ve ALT değerlerinin karaciğerde mevcut apoptoz ve ölü hücre
miktarı ile korelasyon göstermediği bu nedenle takip açısından yeterli olmadığı,
MKH' lerin kompozit doku nakli yapılan sıçanlarda ilk 24 saatte meydana gelen
sistemik yanıta belirgin olumlu etkisinin olmadığı hatta bazı parametrelerde olumsuz
etki oluşturabileceği sonucuna varılmıştır.
Anahtar kelimler: Yağ doku, kök hücre, kompozit doku nakli, sistemik yanıt

Abstract:
OBJECTIVE: Composit tissue transplantations are advantageous for reconstructions
of many tissue. However the biggest problem of this process is the sistemic and
immune response against all tissue types seperately. In our study we aimed to observe
sistemic response in the first 24 hours due to vascularised composit tissue
allotransplantations (VCA) and the effect of adipose derived mesenchimal stem cell
to the systemic response.
METHOD: 29 Wistar Albino and 29 Sprague Dawley rats were used in the study.
Twentyfour WA rats were seperated to 2 groups with 12 rats.(group 1,3) 24 SD rats
were seperated to 2 groups with 12 rats (group 2,4) Remaining 5 WA and 5 SD rats
were used for obtaining Mesenchimal Stem Cell (MSC) and for measure the basal liver
apoptosis values. These MSC suspensions were preserved in -80 degrees in order to
inject the same species and melted 40 minutes before the injection in favourable
conditions. Between group 1 and 2 and between group 3 and 4 the cross left hind
extremity transfer was planned. Before transfer, all rats' basal AST, ALT, BUN,
Creatinin values were measured by taking the tail blood. The suspension including the
adipose derived MSC which is obtained from the same species, was injected
intraperitoneally to group 3 and 4 rats that had been observed the extremity circulation
by opening the anastomosis during the transfer. Same amount of serum physiologic
was injected intraperitoneally to the group 1 and 2. Twentyfour hours after the
transfer, the rats which had the enough leg circulation were sacrificed and both blood
and liver tissue samples were obtained. The obtained results were statistically analysed
both in the group and between the groups.
RESULTS: We didn't find any correlation between ischemia time and AST, ALT,
BUN and Creatinin values which were measured 24 hours after VCA. Alike any
correlation with flow cytometry results. Despite the increase in AST values after
composite tissue transplantation, this increase was significant in only one group.
Creatinin and ALT values were significantly decreased in all groups. BUN values were
decreased in the groups which wasn't injected MSC, however it is observed as
increased in the groups which was injected MSC. Significant difference wasn't
observed between the dead cell, live cell, early and late apoptotic cell in the groups
that was injected MSC in the flow cytometry. Only in one group, it is observed that
the dead cell quantitiy was decreased after the MSC injection. The flow cytometric
results of liver samples of the rats which was utilized for obtaining the MSC weren't
differs from the rats which were operated but not get the MSC injection and sacrificed
after 24 hours from the point of dead cell, live cell, early and late apoptotic cell.
CONCLUSION: It is concluded that AST, ALT, BUN and Creatinin values aren't
give significant result for monitoring the systemic response in the first 24 hours after
the composite tissue transplantations. Ischemia time doesn't corelate with liver and
kidney function tests; AST and ALT values don't corelate with the amount of liver
apoptosis and dead cell and so not enough for monitoring; MSC has no significantly
positive effect on the systemic response in the first 24 hours of the composite tissue
transplantation, even has negative effects on some parameters.
Key words: Adipose tissue, stem cell, composite tissue allotransplantation, systemic
response