Albino ırkı sıçanlardan süperovülasyon ile pronükleer safhadaki embriyoların eldesi, vitrifikasyonu ve vitrifikasyon sonrası embriyo kültür koşullarının araştırılması
Embryo isolation and embryo culture conditions after vitrification of pronuclear stage embryos with superovulation in albina rats
Yazar: TOLGA AKKOÇ
Danışman: DOÇ.DR. HAYDAR BAĞIŞ ; PROF.DR. İHSAN SOYSAL
Trakya Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Ziraat = Agriculture ; Zooloji = Zoology

Özet:
1. ÖZETÇekirdek öncesi (Pronükleer safhada (PN) embriyoları soğuk etkilerden korunması(kriyoprezervasyonu); hayvan üretiminde, transgenik teknolojide, insan embriyolojisinde vegen bankacılığında önemli bir destekleyici teknoloji olmaktadır.Bu çalışmada 15 IU Gebe Kısrak Serum Hormonu (PMSG)-30 IU nsan KorionikGonadotropin (hCG) ve 30 IU PMSG - 15 IU hCG hormon kompozisyonlarının çekirdeköncesi safhadaki embriyoların sayılarının üzerine etikleri karşılaştırılmıştır. Aynı zamanda ,m-R1ECM-BSA, mR1ECM-PVA, KSOM, G1, HECM-1 kültür ortamları hem düşük (%5CO2, %5 O2 ve %90 N2), hem de yüksek (%5 CO2 ve %95 Hava) Oksijen miktarları ve farklıdeneylerde PN safhadaki embriyoların bölünme oranları analiz edilmiştir. Bu çalışmadaayrıca PN safhadaki embriyoların SSV yöntemi ile camsı ortam dondurma (vitrifikasyon) veçözündürme sonundaki en iyi olan kültür ortamlarında embriyo bölünmeleri araştırılmıştır.Elde edilen sonuçlar, 30 IU PMSG - 15 IU hCG hormon karışımının süperovulasyonprotokolünde anlamlı olarak daha iyi olduğunu göstermektedir. Aynı zamanda M16-mR1ECM-BSA ortamının yüksek oksijen konsantrasyonunda kullanılmasıyla en iyi kültürortamının sağlandığı kararlaştırılmıştır. KSOM ve mR1ECM-BSA kültür ortamlarınınkarşılaştırılmasında, KSOM camsı ortam donndurmada 2 ve 4 hücreli safhalı embriyoya dahafazla oranda elde edilmiştir (68% ve 26% sırasıyla) ve sadece mR1ECM-BSA ortamı ileyapılan kültürlerde embriyolar, 8 hücreli safhaya gelmiştir.Sonuç olarak bu çalışmada süperovulasyon protokolü için en iyi hormonkompozisyonu olarak 30 IU PMSG - 15 IU hCG kullanılmıştır. Yüksek konsantrasyondakioksijen ile M16-mR1ECM-BSA ortamları PN safhasındaki embriyoların kültürlerindeönerilebilir bir kültür ortamı olduğu kararlaştırılmıştır. Bununla beraber camsı ortamdondurma sonrasında embriyo kültüründe kullanılan mR1ECM-BSA ortamının KSOMortamından daha umut verici olmaktadır.Anahtar Kelimeler: Pronükleer safha, embriyo, vitrifikasyon

Abstract:
2. SUMMARYEMBRYO ISOLATION, VITRIFICATION AND EMBRYO CULTURE CONDITIONSAFTER VITRIFICATION OF PRONUCLEAR STAGE EMBRYOS WITHSUPEROVULATION IN ALBINO RATSThe cryopreservation of pronuclear-stage (PN) embryos is one of the importantsupporting technologies for advanced animal husbandry, transgenic technology, humanembryology and gene banking.In this study, we aimed to compare the 15 IU PMSG- 30 IU hCG and 30 IU PMSG-15IU hCG hormone compositions on number of Pronuclear stage (PN) embryos. We alsocompare M16, m-R1ECM-BSA, mR1ECM-PVA, KSOM, G1, HECM-1 culture mediums inboth Low (%5 CO2, %5 O2 and %90 N2) and High (%5 CO2 and %95 Air) Oxygen conditionsand in separate experiment we analyzed division rate of PN embryos. In this studyfurthermore we analyze the optimal culture medium after SSV Vitrification and warming ofPN embryos for outcome of embryo cleavage.Our results revealed that, 30 IU PMSG-15 IU hCG hormone composition found to besignificantly better condition on superovulation protocol. Also we determined that M16-mR1ECM-BSA medium is the best culture conditions in high oxygen area. In comparation ofKSOM and mR1ECM-BSA culture mediums 2 and 4 cell stage found higher in percentage inKSOM-vitrification (68% and 26% respectively) and only culture medium with mR1ECM-BSA reached 8 cell stage.In conlusion in this study ve optimised best hormon composition with 30 IU PMSG-15IU hCG for superovulation protocols. According to our results higher oxygen consantrationwith M16 - mR1ECM-BSA medium is determined preferable condition for PN embryoculture. Finaly mR1ECM-BSA Vitrification is more promising method than KSOM-Vitrification in embryo culture.Key words: Pronuclear stage, embryo, vitrification.