Testisteki savaşın kazananı kim? siklofosfamid mi, pterostilben mi?
Who is the winner of the battle in the testis? cyclophosphamide OR pterostilbene?
Yazar: TUĞBA ARICI
Danışman: DOÇ. DR. GÖKÇEN KERİMOĞLU
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Pterostilben = Pterostilbene ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide ; Sperm = Spermatozoa ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis

Özet:
Testisteki Savaşın Kazananı Kim? Siklofosfamid mi, Pterostilben mi?

Amaç: Bu çalışmada sitotoksik etkileri olan Siklofosfamid (CP)'in neden olduğu erişkin sıçan testis hasarının engellenmesi ve/veya iyileştirilmesine kuvvetli bir antioksidan olan Pterostilben (Ptr)'in etkisi araştırılmıştır. Bu amaç için ağırlık ölçümleri, sperm analizi, histopatoloji ve biyokimyasal yöntemler kullanılmıştır.
Metotlar: Araştırmada kullanılmak üzere 21 adet Sprague Dawley ırkı erişkin erkek sıçan rastgele 3 eşit gruba (kontrol (K), CP ve CP+Ptr) ayrıldı. Tüm denekler deneyin 1. günü, CP'nin uygulandığı 9. gün ve deneklerin sakrifiye edildikleri 15. gün olmak üzere 3 kez tartıldı. Kontrol grubuna 1 ml/kg ayçiçeği yağı (14 gün, oral) ve intraperitoneal (ip.) 10 ml/kg serum fizyolojik (SF) (9. gün) verildi. Siklofosfamid grubuna 1 ml/kg ayçiçeği yağı (14 gün, oral) ve 200 mg/kg tek doz CP (10 ml SF içinde çözülmüş, 9. gün, ip.) ve CP+Ptr grubuna 40 mg/kg Ptr (1 ml ayçiçeği yağı içinde çözülmüş, 14 gün, oral) ve 200 mg/kg tek doz CP (10 ml SF içinde çözülmüş, 9. gün, ip.) uygulandı. Deneyin 15. günü sıçanlar sakrifiye edildi ve sol testis ile epididim dokuları diseke edildi. Kauda epididimden elde edilen sperm örneklerinde sperm sayısı, motilitesi, canlılığı ve morfolojisi analiz edildi. Kaput epididimiste Hematoksilen & eozin (H&E) ve testis dokusunun bir yarısında H&E, Masson Trichrome ve Periyodik Asit Schiff (PAS) boyama yöntemleriyle histopatolojik incelemeler yapıldı. Testis dokusunun diğer yarısında ise biyokimyasal olarak malondialdehit (MDA), süperoksit dismutaz (SOD), katalaz (CAT), total antioksidan durum (TAS), total oksidan durum (TOS) ve oksidatif stres indeksi (OSI), kaspaz-3 ve testis doku testosteron düzeylerine bakıldı.
Bulgular: Vücut ağırlığı ölçümlerinde CP+Ptr grubunda K grubuna göre anlamlı azalma vardı. Histolojik olarak CP grubuna ait testislerde; seminifer tübüllerde atrofi, bazal membranda düzensizlik ve ayrılma, interstisyumda ödem ve germinal epitelde ayrılma görüldü. Bu bulgular, CP+Ptr grubunda oldukça azalmıştı. Hem CP hem de CP+Ptr grubunda belirgin immatür germinal hücre dökülmesi (GHD) vardı ve Modifiye Johsen Skoru (MJS) kontrole göre düşüktü. Spermlerde sayı, motilite, canlılık ve normal morfolojinin CP grubunda bozulduğu; CP+Ptr grubunda ise morfolojinin düzeldiği görüldü. Biyokimyasal olarak CP grubunda CAT ve doku testosteronunda azalma, TOS'ta artış mevcuttu. Siklofosfamid+Ptr grubunda ise CP'ye göre TOS azalırken; CAT arttı. Grup CP'ye ait epididim dokularında K ve CP+Ptr gruplarından farklı olarak berrak hücrelerde azalma, halo hücrelerinde artış ve bazı hücrelerde sitoplazmik vakuoller izlendi. 
Sonuçlar: Elde edilen bulgular sonucunda CP'nin erişkin sıçan testisini olumsuz etkilediği, Ptr uygulamasının CP'nin bazı olumsuz etkilerini önlediği söylenebilir.
Anahtar Kelimeler: Sıçan, testis, sperm analizi, pterostilben, siklofosfamid.

Abstract:
Who is the Winner of the Battle in the Testis? Cyclophosphamide or Pterostilbene?

Background: In this study, the effects of Pterostilben (Ptr), a powerful antioxidant, on the prevention and/or healing of adult rat testicular injury caused by Cyclophosphamide (CP), which has cytotoxic effects, was investigated. For this purpose, weight measurements, sperm analysis, histopathology and biochemical methods were used.
Methods: Twenty-one Sprague Dawley adult male rats were randomly divided into 3 equal groups as control (K), CP and CP+Ptr in this study. All subjects were weighed three times: on the first day of the experiment, on the 9th day on which CP was applied, and on the 15th day on which the subjects were sacrificed. Group K was administered oral 1 ml/kg sunflower oil for 14 days and intraperitoneally (ip.) 10 ml/kg saline (SF) on the 9th day of the experiment. Group CP was given oral 1 ml/kg sunflower oil for 14 days and 200 mg/kg single dose CP (dissolved in 10 ml/kg SF) ip. on the 9th day of the experiment. Oral 40 mg/kg Ptr (dissolved in 1 ml/kg sunflower oil) and ip. 200 mg/kg single dose CP (dissolved in 10 ml SF) were applied to group CP+Ptr. On the 15th day of the experiment, the rats were sacrificed, and the left testes were dissected together with epididymis. In the sperm samples obtained from cauda epididymis, sperm count, motility, viability and morphology were examined. Histopathological examinations were performed using staining methods Hematoxylin & eosin (H&E) in caput epididymis and H&E, Masson Trichrome and Periodic Acid Shiff (PAS) in one half of testicular tissue. In the other half of the testicular tissue, malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), total antioxidant status (TAS), total oxidant status (TOS) and oxidative stress index (OSI), Caspase-3 and levels of tissue testosterone were examined using biochemical methods.
Results: In body weight measurements, there was a significant decrease in CP+Ptr groups compared to K group. Histologically, in the testes belonging to the CP group; atrophy in the seminiferous tubules, irregularity and separation in the basement membrane, edema in the interstitium, and separation in the germinal epithelium were observed. These findings were significantly lightened in the CP+Ptr group. There was significant immature germinal cell shedding (GHD) in both CP and CP+Ptr groups and the Modified Johsen Score (MJS) was lower than the control. The number, motility, vitality and normal morphology of the spermatozoa were deteriorated in the CP group, however sperm morphology was improved in CP+Ptr group. Biochemically, CP group had a decrease in level of catalase (CAT) and testosterone and increase in total oxidant status (TOS). In CP+Ptr group compared to CP, CAT level increased while TOS level decreased. Unlike K and CP+Ptr groups, epididymal tissues of CP group revealed a decrease in clear cells, despite of the increase in halo cells and vacuoles in cytoplasm of several epithelial cells.
Conclusions: As a result of the findings obtained, it can be said that CP affects adult rat testis and Ptr application can prevent some negative effects of CP.
Key Words: Rat, testis, sperm analysis, pterostilbene, cyclophosfamide.