Achillea millefolium'un çeşitli yöntemler kullanarak bazı hücre hatları üzerine apoptotik/mitotik etkisinin araştırılması
The investigation of apoptotic/mythotic effect on some cell lines by using various methods of Achilllea millefolium
Yazar: EBRU KARADAŞ İBİŞ
Danışman: DOÇ. DR. SERVET ÖZCAN
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, halk arasında "civanperçemi" olarak bilinen Achillea millefolium bitkisi uçucu yağının farklı konsantrasyonlarının HeLa (CCL-2) ve Kasumi-1 (CRL-2724) hücre hatlarının fenotipik özellikleri üzerine olan etkisinin belirlenmesi amacıyla apoptoz, hücre döngüsü ve proliferasyon testleri yapılmıştır. Apoptoz belirlenmesi için Muse Annexin V/Dead Cell kiti, hücre döngüsünün aşamalarını belirlemek amacıyla Muse Cell Cycle Kit, Proliferasyon oranını belirlemek için ise Muse Ki-67 Proliferasyon kiti kullanılmıştır. Bu analizler Muse Cell Analyzer cihazında gerçekleştirilmiştir. GC-MS analizi ile civanperçemi uçucu yağında 10 temel bileşen tespit edilmiştir ve uçucu yağda 1,8-Cineole, Camphor, Beta-eudesmol ve Caryophyllene oxide diğer bileşenlere göre daha yüksek oranda bulunmuştur. Tespit edilen dört bileşen (1,8-Cineole, Camphor, Beta-eudesmol ve Camphene) için IPA analizleri yapılmıştır. Uçucu yağ uygulamasının HeLa hücrelerinde apoptozu arttırdığı ve hücrelerin proliferasyon yeteneğini azalttığını göstermiştir. Hücre döngüsü testlerinde ise kontrol grubuna kıyasla anlamlı bir fark tespit edilememiştir. Kasumi-1 hücre hattına ait biyolojik etki testlerinde ise uygulama grupları ile kontrol grupları arasında anlamlı bir fark bulunamamıştır. Bu çalışmadan elde edilen veriler bu uçucu yağın kanser hücre hatlarının geneline etki etmekten daha çok HeLa hücrelerinin üzerinde baskılayıcı etkisi olduğunu göstermiştir. Uçucu yağ bileşeninin hücre döngüsündeki kontrol noktalarının aktive edilmesinden ziyade apoptotik mekanizmaların uyarılması ile HeLa hücrelerinin gelişimini durdurduğu gözlenmiştir. Böylece kanser hücrelerinin proliferasyonundaki azalma populasyondaki hücre sayısının artmasını engellemiştir. Kasumi-1 hücrelerine gözlenebilen bir etkisinin olmaması Achillea millefolium uçucu yağının hematopoetik kökenli kanser hücrelerine etkilerinin sınırlı olabileceğini göstermektedir.

Abstract:
In this study, the Achillea millefolium plant, known as "yarrow" among the people, was tested for the effect of different concentrations of essential oil on HeLa (CCL-2) and Kasumi-1 (CRL-2724) cell line. These cells on which essential oil was applied were subjected to apoptosis, cell cycle and proliferation tests. For the determination of apoptosis, Muse Annexin V/Dead Cell kit, to identify the stages of cell cycle, Muse Cell Cycle Kit, to determine the proliferation rate, the Muse Ki-67 Proliferation kit was used. Analyzes were performed on the Muse Cell Analyzer. In GC-MS analysis, 10 compounds in the structure of yarrow essential oil were detected, and 1,8-Cineole, Camphor, Beta-eudesmol and Caryophyllene oxide were found to be higher in essential oil than the other compounds. IPA analyzes were performed in order to show the biological effect for four identified compounds (1,8-Cineole, Camphor, Beta-eudesmol ve Camphene). It has been shown that the application of essential oil increases apoptosis in HeLa cells and reduces the ability of cells to proliferate. In the cell cycle tests, no significant difference was observed compared to the control group. No significant difference between the experimental groups and the control groups in the biological effect tests of Kasumi-1 cell line was observed. The data obtained from this study showed that this essential oil has a more repressive effect on HeLa cells than on cancer cell lines in general. It has been observed that activating the control points in the cell cycle of the essential oil component has halted the development of HeLa cells by induction of apoptotic mechanisms. Thus, the decrease in the proliferation of cancer cells prevented the increase in the number of cells in the population. The absence of an effect that can be observed in Kasumi-1 cells shows that the essential oil of the Achillea millefolium may not affect the hematopoietic originated cancer cells.