Farklı adeziv rezin simanların sitotoksisitelerinin in vitro olarak değerlendirilmesi
In vitro evaluation of cytotoxicity of different adhesive cements
Yazar: ASLI KAYMAZ
Danışman: PROF. DR. ASUDE DİLEK NALBANT
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Protetik Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Dental bonding = Dental bonding ; Dental materyaller = Dental materials ; Dental restorasyon = Dental restoration ; Dental çimentolar = Dental cements ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Toksisite = Toxicity ; İn vitro = In vitro

Özet:
Sabit protetik restorasyonların kullanımı, dental simanlara olan ilgiyi artırmaktadır. Adeziv rezin
simanlar, adezyon özellikleri iyi olduğu için dişlerde daha konservatif preparasyon şekillerine 
müsaade ederler. Simanların biyouyumlu olmaları istenmektedir. Rezin esaslı materyaller farklı 
konsantrasyonlarda çeşitli monomerler içermektedir. Monomerlerin yapısı ve özellikleri, sitotoksik 
etkileri üzerinde etkilidir. Bu çalışmanın amacı, polimerizasyon şekilleri farklı 3 adeziv rezin 
simanın biyouyumluluklarının in vitro olarak değerlendirilmesidir, ayrıca hücrelerde meydana 
gelen morfolojik değişimlerin SEM ile görüntülenmesidir. Sitotoksisite tespiti yapmak için MTT 
testi, odontoblastik aktivite ölçümü için ALP, tükürük protein düzeyindeki değişimi saptamak için 
TP ölçümü yapıldı. Örnekler steril koşullarda paslanmaz çelik kalıplarda disk şeklinde hazırlandı. 
Ekstrakt metodu için, UV ışık altında steril edilen diskler 24 ve 48 saat boyunca HGF (insan 
gingival fibroblastı) hücre kültürü besiyerinde 37°C, %5 CO₂, %95 nem içeren inkübatörde 
bekletilerek hazırlandı. Hücre hatları laboratuvarda hücre kültürü modülünde 25 cm² ve 75 cm²'lik 
flasklarda, %5 CO₂, %95 nem içeren karbondioksitli inkübatör ortamında tutularak çoğaltıldı. 
Çoğalan hücreler 1x10⁵ hücre/cm² olacak şekilde 96 kuyucuklu plakaya yerleştirildi. Ardından 96 
kuyucuklu plakaya ekstrakt metodu için %100, %50, %25 konsantrasyonda ekstraktlar ve hücreler 
yerleştirildi. Ekilen hücreler 24 ve 48 saat inkübatörde bekledikten sonra MTT testi ile hücre 
canlılığı değerlendirildi. Total protein üretimini değerlendirmek amacıyla Bradford yöntemi ve 
alkalen fosfataz (ALP) etkinlikleri etkinlikleri ise ELİSA testi kullanılarak spektrofotometrik olarak 
ölçüldü ve ölçümler kantitif olarak hesaplandı. Ekstrakt metodu uygulanan HGF hücreleri için 
simanlar arasında en sitotoksik olan Multilink N kimyasal polimerize olan rezin yapıştırma simanı 
bulundu. Yine ekstrakt metodu uygulanarak TP miktarı ölçülen simanlar arasında protein oranını 
en çok düşüren grup Multilink N kimyasal polimerize olan rezin yapıştırma simanı olarak tespit 
edildi. ELİSA testi sonucunda ise en yüksek alkalen fosfataz aktivitesi Variolink Esthetic DC dual 
cure polimerize olan rezin yapıştırma simanında ölçüldü. SEM görüntülerinde de Variolink 
Esthetic DC dual cure polimerize olan rezin yapıştırma simanında hücre tutulumu gözlendi. Tüm 
parametreler değerlendirildiğinde rezin simanların sitotoksisite, TP, ALP sonuçları arasında 
tutarlılık görüldü. Sonuç olarak Variolink Esthetic DC dual cure polimerize olan rezin yapıştırma 
simanının sitotoksik etkisi diğer gruplara göre daha düşük bulunduğu için kullanımının güvenli 
olduğu kanaatine varıldı.

Abstract:
The use of fixed prosthetic restorations is increasing the interest in dental cements. Adhesive resin 
cements allow a more conservative preparation of teeth because of their good adhesion properties. 
Cements are required to be biocompatible. Resin-based materials contain various monomers at 
different concentrations. The structure and properties of monomers influence their cytotoxic 
effects. The aim of this in vitro study is to evaluate the biocompatibility of 3 adhesive resin 
cements with different polymerization forms, also the morphological changes occurred in the cells 
are imaged by SEM. MTT test was used to detect cytotoxicity, ALP was used to measure 
odontoblastic activity, and TP was measured to see destruction at the cellular level. Samples were 
prepared as discs in stainless steel molds under sterile conditions. For the extraction method, the 
discs were sterilized under UV light and kept in HGF (human gingival fibrobaslt) cell culture 
medium for 24 and 48 hours in an incubator containing 37°C, 5% CO₂, 95% humidity. Cell lines 
were propagated in the cell culture module in 25 cm² and 75 cm² flasks, in a carbon dioxide 
incubator with 5% CO₂ and 95% humidity. The proliferating cells were separated and placed in a 
96 well cellular culture plate at 1x10⁵ cells/cm². Then, the extracts were placed in the 96 well 
cellular culture plate at a concentration of 100%, 50%, 25% for the extract method, and cells were 
placed. Plant cells were evaluated in terms of cell viability by MTT test after waiting in the 
incubator for 24 and 48 hours. Total protein production by Bradford method and alkaline 
phosphatase (ALP) activities by ELISA test were measured spectrophotometrically and the 
measurements were calculated quantitatively. Multilink N chemically polymerized resin luting 
cement was found to be the most cytotoxic among the cements for the HGF cells in which the 
extract method was applied. Multilink N chemically polymerized resin luting cement was found to 
be the group that reduced the protein ratio the most among the cements whose TP amount was 
measured by applying the extract method. As a result of ELISA test, the highest alkaline 
phosphatase activity was measured in Variolink Esthetic DC dual cure polymerized resin luting 
cement. Cell involvement was observed in the Variolink Esthetic DC dual cure polymerized resin 
luting cement in SEM images. All parameters are evaluated and consistency was found between 
cytotoxicity, TP, ALP levels of resin cements. In conclusion, since the cytotoxic effect of Variolink 
Esthetic DC dual cure polymerized resin luting cement was found to be lower than the other 
groups, it was concluded that it is more safe to use.