Antitümörojenik fenolik bileşiklerin pankreas kanser hücre hattında etkinliğinin incelenmesi
Assessment of the efficiency antitumorigenic phenolic compounds in pancreatic cancer cell line
Yazar: BERZAN EKMEN
Danışman: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Fenolik bileşikler = Phenolic compounds ; Hücre dizisi = Cell line ; Kuersetin = Quercetin ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Resveratrol = Resveratrol

Özet:
Pankreas kanseri tedavisinde 5-florourasil, paklitaksel, cisplatin gibi kemoterapötikler sıklıkla kullanılmasına rağmen, pankreas kanseri teşhisi alan hastaların 5 yıllık sağ kalım oranı %3-5 civarındadır. Düşük bir sağ kalım oranı olmasının sebepleri, pankreas kanserinin aşırı agresifliği, erken tanı konulamaması ve tedavide kullanılan kemoterapötiklere karşı gelişen dirençtir. Güncel çalışmalarda quercetin ve resveratrol gibi doğal fenolik bileşikler, yan etkilerin azaltılmasında etkili olmaları ve/veya kemoterapötikleri potansiyalize etmeleri nedeniyle bazı kanserlerde adjuvan terapi olarak önerilmektedir.
 Bu çalışmada fenolik bileşikler olan quercetin ve resveratrolün etkisi, pankreas kanserinde in vitro olarak PANC-1 hücre hattı kullanılarak değerlendirilmiştir. Quercetin ve Resveratrol'ün pankreatik kanser hücrelerinde IC50 değerlerinin belirlenmesinde sitotoksisite testi kullanılmıştır ve 72. saatteki IC50 değeri sırasıyla 7,75 μM ve 48,75 μM olarak bulunmuştur (p ˂ 0,001). Wound-Healing testi ile etkin dozlarda resveratrol (50 μM) ve quercetin (10 μM) uygulanan pankreas kanseri hücrelerinin migrasyon yeteneklerinin azaldığı belirlenmiştir. 
Colony Forming Assay testi ile değişik dozlarda quercetin ve resveratrolün pankreas kanseri hücrelerinin koloni oluşturma özelliğine etkisi incelenmiş ve IC50 dozlarında koloni oluşumunun azaldığı, hatta yüksek dozlarda yok olduğu görülmüştür. Ayrıca, IC50 dozlarında quercetin uygulamasının invazyon, metastazlar ve ilaç direnci ile ilişkili olduğu bilinen ve kanserde arttığı belirlenen Ökaryotik Elongasyon Faktör 2 Kinaz (eEF-2K) ekspresyonunu azalttığı (p ˂ 0,05) belirlenmiştir. Buna karşın, IC50 dozlarında resveratrol uygulamasının ise eEF-2K ekspresyonunu arttırdığı (p ˂ 0,05) saptanmıştır. Bu nedenle gelecekte yapılması planlanan çalışmalarda quercetinin kullanımı daha uygun görülmektedir.
Bundan sonra kanser alanında planlanacak çalışmalarda, özellikle düşük IC50 dozlarında güçlü bir etki gösteren quercetin, tek başına ya da diğer doğal bileşikler ve/veya kemoterapötik ajanlar ile kombine edilerek potansiyel sinerjistik etkisinin olup olmadığı ve kemoterapötiklerin yan etkilerini azaltma potansiyeli araştırılabilir ve mortalite ve morbiditesi en yüksek kanserlerden olan PaCa için yeni tedavi protokolü geliştirilmesine katkıda bulunabilir.

Anahtar Kelimeler: Pankreas Kanseri; Fenolik Bileşikler; Quercetin;
Resveratrol; Antitümörojenik Etki

Abstract:
Although there are chemotheurapeutics, commonly used in treatment of pancreas cancer (PaCa) such as 5- fluorourasil, paclitaxel and cisplatin, the 5-year-survival rate is around 3-5% for patients diagnosed with PaCa. The reasons causing to a low survival rate are the agressiveness of PaCa, inability to diagnose the disease at an early stage and development of resistance against the chemotheurapeutics used in PaCa treatment. The natural phenolic compounds such as quercetin and resveratrol are recommended in some cancers as adjuvant therapies for their effectiveness in reducing side effects and/or increasing potential of chemoterapeutics in current studies. 
In this study, the effect of the phenolic compounds, quercetin and resveratrol were evaluated in PaCa in in vitro conditions using PANC-1 cell line. The IC50 values of Quercetin and Resveratrol in pancreatic cancer cells were determined by cytotoxicity test and IC50 values at 72 hours were found to be 7.75 μM and 48.75 μM, respectively (p ˂ 0,001). In order to evaluate the migration ability of PaCa cells when treated with effective doses of resveratrol (50 μM) and quercetin (10 μM), Wound-Healing Assay was used and the decrease in migration ability of PaCa cells was determined. In order to evaluate the colony forming ability of PaCa cells when treated with resveratrol and quercetin at IC50 doses, Colony formation Assay was used and with the IC50 doses of quercetin and resveratrol a decrease in colony forming ability of PaCa cells was determined, however at high doses of these compounds even the colonies were disappeared. Moreover, quercetin treatment at IC50 doses caused to a decrease in gene expression profile of Eukaryotic Elongation Factor 2 Kinase (eEF-2K) (p ˂ 0,05) which is known to be in association with invasion, metastasis and drug resistance.  Resveratrol treatment at IC50 doses was found to increase eEF-2K expression (p ˂ 0,05). For this reason, the use of quercetin appears to be more appropriate in future studies.
In planning further studies in cancer research, particularly quercetin, which is found to have a stronger effect in low IC50 doses in PaCa treatment in in vitro conditions can be recommended alone or in combination. In order to evaluate the existence of a potential synergistic effect and to determine its ability to decrease side effects of the chemotherapeutics, quercetin can be combined with other natural phenolic compounds and/or chemotherapeutics. Hence, it may be possible to develop appropriate treatment protocols to cure pancreatic cancer which has still having the highest morbidity and mortality rates.

Key Words: Pancreatic Cancer; Phenolic Compounds; Quercetin; Resveratrol;
Antitumorigenic Effect