Farelerde kronik ensefalitik Toxoplasma gondii enfeksiyonunda, konak-parazit ilişkisi ve konak immun yanıtının fonksiyonel nöropatoloji ile araştırılması
Functional neuropathology of host-parasite interaction and host immune response in chronic encephalitic toxoplasma gondii infection in mice
Yazar: TUĞÇE SÜMER
Danışman: PROF. OĞUZ KUL
Kırıkkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Patoloji = Pathology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Fareler = Mice ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Parazit hastalıkları-hayvan = Parasitic diseases-animal ; Parazitler = Parasites ; Sitokinler = Cytokines ; Toksoplazmoz = Toxoplasmosis ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; İmmünperoksidaz boyama tekniği = Immunoperoxidase staining procedure

Özet:
Bu tez çalışmasında, kronik ensefalitik toksoplazmozun farklı dönemlerinde "T. gondii- etkilenen hücre tipi- sitokinsel yanıt" ın aynı anda değerlendirilmesi ve konak immun yanıtının nöropatolojik olarak araştırılması amaçlandı. Ensefalitik toksoplazmoz modeli oluşturmak için, 30 adet C57BL/ 6 fare ME49 takizoitleriyle intraperitoneal olarak enfekte edildi, 10 adet fare ise kontrol grubunu oluşturdu.  Fareler sırasıyla; enfeksiyonun 30, 60 ve 180. günlerinde sakrifiye edildi ve beyin dokuları toplandı. Histopatolojik, immunohistokimyasal ve moleküler testlerle; beynin farklı bölgelerindeki T. gondii varlığı, konağın yangısal yanıtı (CD4+, CD8+, FOXP3+, CD11b+, CD11c+, CD19+, GFAP+ hücre populasyonları ile IL-12, TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-5, IL-6, IL- 18, IL-4 ve IL-10 ekspresyonları) değerlendirildi.
Sonuç olarak; tüm gruplarda serebral korteks, amigdala, striatum ve ventral tegmental alanda T. gondii takizoitlerine, hem etkenin kendisinden hem de neden olduğu yangısal yanıttan etkilenen nöronlara, glial hücrelere ve astositlere rastlandı.  Grup I' in daha çok akut aşama bulgularını yansıttığı ve asıl kronik enfeksiyonun 60'ıncı günden sonra şekillendiği görüldü. Pro-enflamatuar sitokinlerin enfeksiyonun erken döneminde özellikle CD4+ hücrelerden, anti-enflamatuar sitokinlerin ise enfeksiyonun geç döneminde özellikle CD8+ hücrelerden salındığı ve yine bunların T. gondii varlığının daha fazla olduğu beyin bölgeleri olduğu saptandı. İlginç olarak, enfeksiyonun kronik döneminde fazla eksprese edilmesi beklenen ve T. gondii enfeksiyonunu bu yönüyle psikiyatrik bozukluklarla ilişkilendiren IL-1β ve IL-6, Grup III' te diğer gruplara oranla daha düşük olduğu tespit edildi. Böylece bu çalışmayla; ensefalitik toksoplazmozda 30' uncu, 60'ıncı ve 180' inci günlerde etkilenen bölgelerin haritası çıkarıldı ve buralarda eksprese olan sitokinler ile onları salgılayan ve onlardan etkilenen hücreler bir arada gösterilerek genel bir immunopatogenez tablosu oluşturulmuş oldu.
Anahtar Sözcükler: Ensefalitik toksoplazmoz, immunofloresan, immunoperoksiaz, sitokin,  Toxoplasma gondii

Abstract:
In this thesis, it is aimed to investigate "T. gondii- infected cell type- cytokine responses"  interactions in the different stages of chronic encephalitic toxoplasmosis and host immun responses by functional neuropathology. To establish the encephalitic toxoplasmosis 30 C57BL/ 6 mice were infected intraperitonally with ME49 tachyzoites and 10 mice splited up as controls. Groups of 10 mice were euthanized on days 30, 60, and 180 post-infection respectively and brain tissue samples were collected. Toxoplasma gondii in different areas on the brain and host inflammatory response (CD4+, CD8+, FOXP3+, CD11b+, CD11c+, CD19+, GFAP+ cell population and IL-12, TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-5, IL-6, IL- 18, IL-4 ve IL-10 expression) were evaluated by histopathologic, immunohistochemical and molecular tests.
As a result, T. gondii tachyzoites and neurons, glial cells and astrocytes affected by T. gondii itself and inflammatoy responses caused by T. gondii in cerebral cortex, amygdala, striatum and ventral tegmental area in all groups. There was obseved that Group I have showed that acute stage of infection more than chronic stage and chronic stage of encephalitic toxoplasmosis developed on day 60 post-infection. There were also found that pro-inflammatoy cytokines were released from CD4+ cells in early stage of infection and anti-inflammatuar cytokines released from CD8+ cells in the late chonic stage of infection. Interestingly, it was found that IL-1β and IL-6, which are expected to overexpress in the chronic stage of infection and releated to psychiatric disease, were lower in Group III than in other two T. gondii infected groups. Thus with presented study, maps of the affected areas with inflammatory cells an cytokines were constructed on days 30, 60 and 180 post-infection.

Key Words: Encephalitic toxoplasmosis, cytokine, immunofluorescence, immunoperoxidase, Toxoplasma gondi