Kan kanseri tedavisinde sıklıkla kullanılan insan hematopoetik büyüme faktörlerinden G-CSF ve GM-CSF'ün rekombinant olarak üretilmesi saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of recombinant human hematopoietic growth factors such as G-CSF and GM-CSF which are frequently used in leukemia treatment
Yazar: YASEMİN BOZKURT
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL ERDEN TAYHAN
Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Hematopoetik büyüme faktörleri, temelde böbrek ve kemik iliğinde yer alan, progenitör hücrelerden köken alan çeşitli kan hücrelerinin çoğalmasını, olgunlaşmasını ve farklılaşmasını sağlayan terapötik proteinlerdir. Büyüme faktörlerinden olan koloni stimüle edici faktörler (CSF), kemik iliği öncü hücrelerinden belirli hücre kolonilerinin oluşumuna yol açtıkları için bu isimle adlandırılmaktadırlar. Bu faktörlerden olan granulosit koloni stimüle edici faktör (G-CSF) ve granulosit makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) anemi, lösemi, talasemi, trompositopeni gibi hastalıkların tedavisinde sıklıkla kullanılmaktadır.
 Bu tez çalışmasında, insan GM-CSF (rhGM-CSF) ve insan G-CSF (rhG-CSF) proteinlerini kodlayan gen dizileri Escherichia coli için kodon optimizasyonu yapılarak pTOLT ve pET22b vektör sistemlerine klonlanmıştır. Ayrıca ilgilenilen gen dizileri ile üretilen proteinin kolay bir şekilde saflaştırılması için vektör sistemlerine histidin-etiketi eklenmesi sağlanarak klonlama işlemi gerçekleşmiştir. Söz konusu etiket, nikel ana maddeli afinite kromatografisi teknikleri ile saflaştırma yönteminin kullanılabilmesi için kullanılmıştır. Sonuç olarak, rekombinant olarak elde edilen vektörler, ekspresyon vektörüne transforme edilmiş ve G-CSF protein ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Ek olarak, ilgili protein saf olarak elde edilmiştir ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Projedeki hedef proteinlerden bir diğeri olan GM-CSF'in rekombinant üretimi ise gerçekleştirilememiştir.

Abstract:
Hematopoietic growth factors are therapeutic proteins that allow the proliferation, maturation and differentiation of a variety of blood cells, mainly originating from progenitor cells located in kidney and bone marrow. Colony-stimulating factors (CSF), one of the growth factors, are called by this name because they lead to the formation of certain cell colonies from bone marrow precursor cells. These factors such as granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) are frequently used in the treatment of anemia, leukemia, thalassemia and thrombocytopenia. 
In this thesis, the gene sequences encoding human GM-CSF (rhGM-CSF) and human G-CSF (rhG-CSF) proteins were optimized for Escherichia coli and cloned into pTOLT and pET22b vector systems. In addition, cloning was accomplished by the addition of histidine-tag (his-tag) to vector systems for easy purification of the proteins which were expressed by the gene sequences of interest. As a result, the recombinantly obtained vectors were transformed into expression vector and G-CSF protein expression was performed. Additionally, this protein was obtained in pure form and characterized. Recombinant production of GM-CSF, another of the target proteins in the project, has not been achieved.