Farklı deneysel prematür over yetmezliği modellerinde kök hücre tedavisinin etkinliği
Efficacy of stem cell threapy in different experimental prematür ovarian insufficiency models
Yazar: BÜŞRA ŞEN HALICIOĞLU
Danışman: PROF. DR. MEHMET İBRAHİM TUĞLU ; DR. ÖĞR. ÜYESİ ABU SHAMEEM MD. SAADAT KHANDAKAR
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Etyoloji = Etiology ; Konneksinler = Connexins ; Kök hücreler = Stem cells ; Over yetmezliği-prematür = Ovarian failure-premature ; Pannexin = Pannexin ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide

Özet:
Amaç: Sıçanlarda siklofosfamid (CYP) ve 4-vinilsiklodiepoksid hekzen (VCD) ile oluşturulmuş Prematür Over Yetmezlik (POY) modelinde, POY etiyolojisinde etkili olduğu düşünülen bazı moleküllere Yağ Doku Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin (YDMKH) ve NİŞ ortamının etkilerinin gösterilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: 8 haftalık Wistar Albino cinsi sıçan 8 gruba bölündü. 21 adet sıçana 120mg/kg CYP 1 hafta arayla 2 doz verilerek, 21 adet sıçana ise 5 gün boyunca 240mg/kg VCD verilerek POY indüklendi. YDMKH gruplarında deneyin 15. gününden itibaren 3 gün art arda 1x106 hücre enjeksiyonu i.p olarak yapıldı. NİŞ grupları içinse POY oluşturulan farelere deneyin 15. gününden itibaren 3 gün art arda 0,1ml NİŞ enjeksiyonu i.p olarak yapıldı. Ovaryumda histopatolojik değerlendirmeler için H&E ve Masson Trikrom boyamaları yapıldı ve tüm ovaryum folilkülleri sayıldı. ELİSA yöntemi ile serum AMH seviyesi ölçüldü. Daha sonra iNOS, Casp3, Cx43, Panx1 protein ve mRNA ekspresyon seviyeleri immunohisyokimya ve qPCR yöntemleri ile analiz edildi.
Bulgular: Her iki POY modelinde ovaryumda farklı miktarlarda hemoroji, vakuolizasyon, fibrozis gibi dejenerasyonlar gözlendi. POY gruplarında iNOS, Casp3, Panx1 ekspresyonları artarken, Cx43 ekpresyonu azaldı. YDMKH ve NİŞ uygulamasında ise bu moleküllerin ekspresyonları kontrole yakın bulundu.
Sonuçlar: Hem VCD hem de CYP deneysel POY modeli oluşturmak için uygun ajanlar olarak belirlendi. VCD daha çok primordiyal ve primer foliküllerde dejenerasyonlara sebep olurken, CYP gelişmekte olan folikülleri etkiledi. Bahsedilen moleküllerin POY oluşumunda önemli moleküller olduğu ve bu moleküllerin hastalığın mekanizmasını aydınlatmada etkili olacağı düşünülmektedir. Her iki grupta da YDMKH ve NİŞ'in iyileştirici etkileri POY'un tedavisine yönelik yeni yöntemlerin gelişmesine katkı sağlayacağını göstermektedir.

Abstract:
Aim: In the Premature Ovarian Insufficiency (POI) induced by cyclophosphamide(CYP) and 4-Vinylcyclodiepoxide hexene(VCD) in rats, it is aimed to show the effects of Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells(ADMSC) and the NISCHE on some molecules that are thought to be effective in POI.
Materials and Methods: Eight weeks old Wistar Albino rats were divided into 8 groups. POI was induced by administering 2 doses of 120mg/kg CYP to 21 rats at 1week interval, and 240mg/kg VCD to 21 rats for 5 days. ADMSC injection was performed as i.p for 3 days consecutively 1x106 cells. As for the NICHE 0,1 injection was performed as i.p for 3 consecutive days. H&E and Masson Trichrome staining were done. Serum AMH level was measured by ELISA. iNOS, Casp3, Cx43, Panx1 levels were analyzed by immunohistochemistry, qPCR methods.
Results: In both POI models, different amounts of degenerations were observed. In POI groups, iNOS, Casp3, Panx1 expressions increased while Cx43 expression decreased. In ADMSC and NISCHE groups, expressions of these molecules were found close to control.
Conclusions: Both VCD and CYP were identified as suitable agents to create an experimental POI model. While VCD mostly caused degenerations in primordial and primary follicles, CYP mostly affected developing follicles. It is thought that the molecules mentioned are important in the formation of POI and these molecules will be effective in illuminating the mechanism of the disease. The healing effects of YDMKH and NİŞ show that it will contribute to the development of new methods for the treatment of POI.