Kültür balıklarından izole edilen Aeromonas hydrophila suşlarında fenolik bileşenlerin çevreyi algılama sistemi üzerine inhibisyon etkisi ve suşlar arasındaki klonal ilişkinin pulsed fıeld jel elektroforez yöntemiyle belirlenmesi
Inhibition effect of phenolic compounds on quorum sensing system and determination of clonal relationship between strains by pulsed field gel electrophoresis in Aeromonas hydrophila isolated from culture fishes
Yazar: NURDAN FİLİK
Danışman: PROF. DR. AYŞEGÜL KUBİLAY ; DR. ÖĞR. ÜYESİ EBRU ÖNEM
Isparta Uygulamalı Bilimler Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Araştırmada balıklarda ölümcül Motile Aeromonas Septisemisi etkeni virülans faktörlerini çevreyi algılama sistemiyle yöneten toksikolojik açıdan oldukça güçlü Aeromonas hydrophila suşları çalışılmıştır.
Hasta balıklardan izole edilen 20 A. hydrophila suşu ile A hydrophila ATCC 7966 referans suşunun antibiyotik direnç profilleri incelenmiş, virülanslardan sorumlu ahyI ve ahyR genleri Polymerase Chain Reaction (PCR) ile araştırılmıştır. Ayrıca bazı fenolik bileşenlerin A. hydrophila suşlarında çevreyi algılama sisteminin yönetimindeki biyofilm, β-hemolitik aktivite, elastolitik aktivite üzerine inhibisyon etkisi araştırılmış ve suşlar arasındaki ilişki Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) yöntemiyle incelenmiştir. 
A. hydrophila suşları 28 antibiyotiğe karşı taranmış 12 antibiyotiğe dirençli, 14 antibiyotiğe duyarlı, 2 antibiyotiğe orta derecede duyarlı olduğu belirlenmiştir. Antibiyogramda en dikkat çeken suşların tedavide etkili olduğu bilinen oksitetrasikline dirençli oluşudur. 
PCR analiziyle çevreyi algılama sisteminin yönetimindeki virülans oluşumundan sorumlu ahyI ve ahyR genlerinin ikisi de tüm A. hydrophila suşlarında saptanmıştır. 
A. hydrophila suşlarında çevreyi algılama sisteminin yönetimindeki virülans faktörleri biyofilm, β-hemolitik aktivite, elastolitik aktivite üzerine inhibisyon etkisi araştırılmak üzere fenolik bileşenlerden gallik asit, rosmarinik asit, vanilik asit kullanılmıştır ve virülans inhibisyon testlerinde taranan fenolik bileşenlerin önemli inhibisyon etkisinin olduğu belirlenmiştir. Özellikle rosmarinik asidin biyofilm üzerine, vanilik asitin β-hemolitik aktivite ve elastolitik aktivite üzerine inhibisyon etkisinin güçlü olduğu bulunmuştur. Sonuçların istatistiksel olarak anlamlı olduğu (P≤0.05) görülmüştür. 
PFGE yöntemiyle suşlar arasındaki moleküler epidemiyolojik ilişkinin araştırılmasında 21 A. hydrophila suşunun 17 farklı genotip (pulsotip) oluşturduğu saptanmıştır. 
Sonuçta A. hydrophila'nın virülansından çevreyi algılama sistemi sorumludur ve bu sayede hastalık sürecini yönetir. Hastalık oluşumunda kritik önemde olan çevreyi algılama sisteminin fenolik bileşenlerle inhibisyonunun sağlanarak aralarındaki iletişimin bloke edilmesiyle hastalıkların kontrol altında tutulması bakterilerle mücadelede önemli bir stratejidir.

Abstract:
Research deadly Motile Aeromonas Septicemia agent in fish virulence factors manage with quorum sensing system toxicologically very strong Aeromonas hydrophila strains were studied.
Antibiotic resistance profiles 20 A. hydrophila strains isolated from sick fish and A. hydrophila ATCC 7966 reference strain were examined, ahyI and ahyR genes responsible for virulence investigated by Polymerase Chain Reaction (PCR). Additionally some phenolic compounds investigated inhibition effect on biofilm, β-hemolytic activity, elastolytic activity management quorum sensing system A. hydrophila strains and relationship between strains examined by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) method.
A. hydrophila strains were screened against 28 antibiotics, 12 antibiotic resistant, 14 antibiotic sensitive, and 2 antibiotics moderately sensitive. The most striking strains antibiogram resistant oxytetracycline which known to be effective treatment.
Both ahyI and ahyR genes responsible for virulence formation management quorum sensing system by PCR detected all A. hydrophila strains.
A. hydrophila strains, phenolic components gallic acid, rosmarinic acid, vanilic acid were used to investigated virulence factors biofilm, β-hemolytic activity, elastolytic activity management quorum sensing system and determined phenolic components screened virulence inhibition tests significant inhibition effect. Especially rosmarinic acid found strong inhibitory effect on biofilm and vanilic acid on β-hemolytic activity and elastolytic activity. Results observe statistically significant (P≤0.05).
Investigation molecular epidemiological relationship between strains by PFGE method found 21 A. hydrophila strains formed 17 different genotypes (pulsotypes).
Ultimately quorum sensing system responsible for virulence of A. hydrophila and manages disease process. Keeping diseases under control by blocking communication between them by disease formation ensuring critical quorum sensing system inhibition with phenolic components important strategy struggle against bacteria.