Trombositçe zengin plazma (TZP) kitinin metodolojik değişikliğinin in vitro etkisinin araştırılması
Investigation of in vitro effect of methodological change of platelet ri̇ch plasma (PRP kit
Yazar: MELİKE ATAMAN
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA TÜRK
Kırıkkale Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering
Dizin: Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma

Özet:
Bu çalışmada, Albino wistar sağlıklı erkek rattan elde edilen kanın santrifüjlenmesiyle elde edilen trombositten zengin plazmayı (TZP) sonikatöre maruz bırakarak kitosan, hyalüronik asit ve aljinat gibi doğal polimerlerle kullanarak TZP'nin in vitro etkinliğini arttırmayı amaçladık. Doğal polimerlerin her biri TZP ile birlikte bir kombinasyon oluşurarak fibroblast hücre proliferasyonu, migrasyonu ve ölüm yolu (apoptotik/nekrotik) üzerindeki etkisi ve kerotinosit proliferasyonunundaki etkisi araştırıldı, ayrıca trombositlerin barındırdıkları antimikrobiyal moleküler içeriğinden dolayı minimum inhibisyon konsantrasyonu (MIC) ve bakteriyel yapışma testi yapıldı. 
Kombinasyonların hücre canlılığını, proliferasyonunu ve migrasyonunu incelemek için sırasıyla MTT sitotoksisite testi, xCELLigence-Gerçek Zamanlı Hücre Analiz Sistemi ve Scratch Analizi gerçekleştirildi. Bu analizlerin sonuçlarına göre % 5, 2,5 TZP konsantrasyona sahip hyalüronik asit+TZP kombinasyonlarının kontrol grubuna göre pozitif sonuçları elde edilmiştir. Fakat TZP konsantrasyonlarının artması ile birlikte % canlılık değerlerinde azalma gerçekleşmektedir. 
Hoechst (33342) ve Propidium iodide fluoresan boyaları kullanılarak fibroblast hücrelerindeki apoptotik ve nekrotik hücre oranları incelenmiştir. Yüksek TZP konsatrasyonları hariç önemli apoptotik ve nekrotik etki görülmemiştir. Antimikrobiyal etkinin incelenmesi için MIC analizi gerçekleştirilmiştir. Elde edilen sonuçlara göre vankomisine dirençli enterococcus faecalis (VRE) hariç Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans,Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA), Escherichia coli, Candida albicans mikroorganizmalarına karşı antimikrobiyal etki gözlemlenmiştir. Ayrıca, TZP kombinasyonlarının ve TZP'nin bakteriyel yapışmayı engellediğini gözlemlemek için için kristal viyole yöntemi kullanılmıştır. Pozitif kontrole kıyasla E.coli, S.aureus ve S.mutans'ın yapışmasının engellendiği görülmüştür. Elde edilen sonuçlar,  hücre canlılığının, migrasyonunun artması ve enfeksiyonların ortamdan yok edilmesi için TZP kombinasyonlarının ve TZP'nin etkin bir şekilde kullanılabileceğini göstermiştir. Aynı zamanda bu kombinasyonların daha ayrıntılı bir şekilde incelenmesi gerekmektedir.

Abstract:
In this study, we aimed to increase the in vitro efficacy of platelet rich plasma (PRP) by treating PRP obtained by centrifuging from the blood from rat with natural polymers such as chitosan, hyaluronic acid and alginate. Each of the natural polymers was combined with PRP and its effect on fibroblast cell proliferation, migration and death path (apoptotic / necrotic) was investigated, as well as minimum inhibition concentration (MIC) and bacterial adhesion test due to the antimicrobial molecular content of platelets. 
MTT and scratch analysis were performed, respectively, to examine cell proliferation and migration of combinations. According to the results of these analysis, positive results of hyaluronic acid + PRP and chitosan + PRP combinations with 5% PRP concentration were obtained compared to the control group. However, with increasing PRP concentrations,% viability values decrease. 
MTT, xCELLigence-Real Time Cell Analysis System and scratch analysis were performed to examine cell viability, proliferation and migration of combinations, respectively.  According to the results of these analysis, positive results of hyaluronic acid + PRP combinations with 5, 2,5 % PRP concentration were obtained compared to the control group. However, with increasing TZP concentrations,% viability values decrease. Apoptotic and necrotic cell ratios in fibroblast cells were examined using Hoechst (33342) and Propidium iodide fluorescent dyes. No significant apoptotic and necrotic effects were observed except for high PRP concentrations. MIC analysis was performed to examine the antimicrobial effect. According to the results obtained, antimicrobial effect was observed against E.coli, S.aureus, S.mutans, MRSA and C.albicans microorganisms except VRE. In addition, crystal violet method was used to observe that combinations of PRP and PRP prevent bacterial adhesion. It was observed that E.coli, S.aureus and S.mutans were prevented from adhesive compared to positive control. The results obtained showed that combinations of TZP and TZP can be used effectively to increase cell viability, migration and eliminate infections from the environment. At the same time, these combinations need to be examined in more detail.