Koçlarda intratestiküler trombositten zengin plazma uygulamasının testiküler gelişim ve sperma kalitesi üzerine etkisi
Effect of intratesticular platelet-rich plasma application on testicular development and semen quality in rams
Yazar: ASLIHAN ÇAKIR CİHANGİROĞLU
Danışman: PROF. DR. GAFFARİ TÜRK
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2024
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Transforme edici büyüme faktörleri = Transforming growth factors ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Trombositten zengin plazma (PRP) birçok büyüme faktörünü içeren plazma komponenti olup, üremeyle ilgili etkilerinin olduğu da ileri sürülmektedir. Bu çalışma koçlarda intratestiküler PRP uygulamasının testiküler gelişim ve sperma kalitesi üzerine etkilerini incelemek amacıyla yapıldı. Çalışmada 2 aylık 32 baş Akkaraman ırkı erkek kuzu kullanıldı. Kuzuların 16 tanesine serum fizyolojik (kontrol grubu), diğer 16 tanesine de intratestiküler otolog PRP (deney grubu) uygulandı. İntratestiküler uygulamalar Haziran-Mart ayları arasında 10 ay boyunca ayda bir kez yapıldı. Her iki grupta Temmuz ve Nisan ayları arasında 10 ay boyunca aylık testosteron, testislerin morfometrik ölçümleri, spermatik kord doppler ultrasonografi ölçümleri yapıldı. Kontrol ve deney grubundan ayda bir olmak üzere toplamda 20 hayvan kastre edildi. Kastre edilen hayvanların testislerinde; kolesterol, yağ asitleri, oksidatif stres, histolojik, immunohistokimyasal ile moleküler analizler gerçekleştirildi. Sperma vermeye alıştırılmış toplam 14 (her bir grupta 7) hayvandan 6 hafta boyunca (Şubat sonu-Nisan ortası) haftada bir alınan spermalarda ereksiyon süresi, rutin spermatolojik, flow-sitometrik, kolesterol, yağ asitleri, oksidatif stres ile moleküler analizler yapıldı. 
Testiküler analizlerde kontrole kıyasla PRP grubunda; Aralık'taki skrotal kalınlık, Nisan'daki testis uzunluğu, Ekim'deki kan akım hacmi, ortalama GSH, GPx, behenik asit, nervonik asit değerleri, Catsper2, Catsper4, Kcnj11, TRPM3 ve TRPM7 mRNA ekspresyonları, seminifer tubül çapları, germinal hücre tabakası kalınlıkları, Western blot ile ölçülen TGFβ1, VEGFA, FGF10, PDGFB, FSHR, LHR ve LC3II protein ekspresyonları, Eylül ayı ve ortalama VEGF ile Eylül, Kasım ve Nisan aylarındaki TGFβ immunoekspresyonlarında önemli artış, buna karşın spermatik korddaki direnç indeksi, MDA düzeyi ve apoptotik Bax protein ekspresyonunda önemli azalma ile birlikte spermatojenik aktivitenin daha erken dönemde başladığı gözlendi. 
Sperma analizlerinde kontrole kıyasla PRP grubunda; total ve progresif motilite, yoğunluk, HOST, VCL, VSL ve VAP değerleri, GPx aktivitesi, undesilik asit ve palmitik asit oranları, ELISA analizlerinde StAR, HSD3β1, CatSper1, IGF1, TGFβ, VEGF ve PDGFR düzeyleri, qRT-PCR analizlerinde CatSper4 mRNA ekspresyonu ve Western blot analizlerinde VEGFA, PDGFB, TGFβ1, FGF10 ile HSD3β2 protein ekspresyonlarında önemli artış, buna karşın MDA düzeyi, hsa-miR-29a, hsa-miR-148a, hsa-miR-152, oar-miR-200a, hsa-miR-374, hsa-let-7a, oar-miR-10b ve hsa-miR-19b mRNA ekspresyonlarında önemli azalma gözlendi.  
Sonuç olarak, koçlara 2 aylık yaştan itibaren 10 ay boyunca aylık intratestiküler PRP uygulaması, testiküler gelişime, spermatogenezisin başlaması ve devam ettirilmesine, spermanın morfo-fonksiyonel ve moleküler yapısına olumlu etki etmektedir. PRP'nin bu etkisinin içeriğindeki zengin büyüme faktörleri sayesinde olduğu kanaatine varılmıştır.

Abstract:
Platelet-rich plasma (PRP) is a plasma component containing many growth factors and has been suggested to have reproductive effects. This study was conducted to investigate the effects of intratesticular PRP application on testicular development and semen quality in rams. Thirty-two, 2-month-old Akkaraman male lambs were used in the study. Sixteen lambs were treated with saline (control group) and the other 16 lambs were treated with intratesticular autologous PRP (experimental group). Intratesticular applications were conducted on a monthly basis for a period of ten months, spanning from June to March. In both groups, monthly testosterone, testicular morphometric measurements and spermatic cord Doppler ultrasound measurements were performed between July and April for 10 months. A total of 20 animals from the control and experimental groups underwent castration on a monthly basis. Following this procedure, a series of analyses were conducted on the testes of the castrated animals, including cholesterol, fatty acids, oxidative stress, histological, immunohistochemical and molecular analyses. Erection time, routine spermatological, flow cytometric, cholesterol, fatty acids, oxidative stress, cholesterol, fatty acids, oxidative stress and molecular analyses were performed on semen collected weekly for six weeks (end February - mid April) from a total of 14 animals (seven in each group) accustomed to semen collection. 
In testicular analyses; significant increases in scrotal thickness in December, testicular length in April, blood flow volume in October, mean GSH, GPx, behenic acid, nervonic acid, mRNA expressions of Catsper2, Catsper4, Kcnj11, TRPM3 and TRPM7, seminiferous tubule diameter, germinal cell layer thickness, protein expressions of TGFβ1, VEGFA, FGF10, PDGFB, FSHR, LHR and LC3II measured by Western blot, VEGF in September and mean VEGF and TGFβ immunoexpressions in September, November and April, however, significant decreases in spermatic cord resistive index, MDA levels and apoptotic Bax protein expression along with an earlier onset of spermatogenic activity were observed in PRP group when compared to control.
In semen analyses; significant increasess in total and progressive motility, concentration, HOST, VCL, VSL and VAP values, GPx activity, undecylic acid and palmitic acid ratios, and StAR, HSD3β1, CatSper1, IGF1, TGFβ, VEGF and PDGFR levels in ELISA analyses, mRNA expression of CatSper4 in qRT-PCR analyses and protein expressions of VEGFA, PDGFB, TGFβ1, FGF10 and HSD3β2 in Western blot analyses, however, significant decreases in MDA levels, and mRNA expressions of hsa-miR-29a, hsa-miR-148a, hsa-miR-152, oar-miR-200a, hsa-miR-374, hsa-let-7a, oar-miR-10b and hsa-miR-19b were observed in PRP group when compared to the control.
In conclusion, monthly intratesticular application of PRP to rams from 2 months of age for 10 months has a positive effect on testicular development, initiation and maintenance of spermatogenesis, morpho-functional and molecular structure of semen. It is concluded that this effect of PRP is due to the rich growth factors in its content.