Endometrium kanseri ve endometrial hiperplazi dokularında 2D-DIGE yöntemiyle proteomik analizi
Proteomic analysis of endometrial hyperplasia and endometrial cancer by 2D-dige technique
Yazar: YASİN CEYLAN
Danışman: PROF. DR. İZZET YÜCESOY ; DOÇ. DR. MURAT KASAP
Kocaeli Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Elektroforez-agar jel = Electrophoresis-agar gel ; Endometrial hiperplazi = Endometrial hyperplasia ; Endometrial neoplazmlar = Endometrial neoplasms ; Endometriyum = Endometrium ; Gen ifadesi = Gene expression ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Amaç:
Kompleks atipili endometrial hiperplazi ve endometrial karsinom dokularının protein ekspresyonunu, sağlıklı endometrium dokusunun protein ekspresyonuyla karşılaştırmak, bu sayede diagnoz, prognoz ve moleküler terapötik hedef amacıyla kullanılabilecek proteinleri tanımlamak.
Materyal Metod:
Çalışmaya dilatasyon ve küretaj materyalinin histopatolojik incelemesinde "benign endometrial değişiklikler", "kompleks atipili endometrial hiperplazi" ve "endometrioid tip adenokarsinom" rapor edilmiş ve bu tanılar ile opere edilen 30 olgu alındı. Hastaların nihai patoloji raporlarına göre 6 grupta değerlendirildiler (a. Benign endometrial değişiklikler (n=7), b. Kompleks atipili endometrial hiperplazi (n=5), c. Evre IA (n=5), d. Evre IB (n=5), e. Evre II (n=3), f. Evre III (n=5)).
Çalışma gruplarının protein profilleri 2D-DIGE tekniği kullanılarak tespit edildi ve kontrol grubuyla karşılaştırıldı. Farklı ekspresyon gösteren protein spotları MALDI TOF/TOF-MS yöntemi ile tanımlandı. Her deney grubu için tanımlanan proteinlerin PANTHER ve STRING analiziyle hücredeki görevleri ve birbiriyle ilişkileri belirlendi.
Bulgular:
Çalışmamızda endometrium kanseri olgularının protein ekspresyonlarının sağlıklı ve kompleks atipili endometrial hiperplazi olgularının protein ekspresyonlarıyla karşılaştırılması sonucunda K2C8, UAP56, ENOA, ACTB, GRP78, GSTP1, PSME1, CALR, PPIA, PDIA3, IDHc proteinlerinin ekspresyon düzeylerinde anlamlı yükselmeler izlendi. SOD1'in ekspresyon düzeyi kanserin evresi arttıkça azalma eğilimindeydi. CALR aktivitesinin indüklenmesiyle kanser hücrelerinde apoptozu ilerleten bir faktör olabileceğini böylece postoperatif yeni kemoterapi tedavi yöntemlerine umut olabileceğini tespit ettik. Bununla beraber CAH1 ve PPIB proteinlerinin ekspresyonları kompleks atipili endometrial hiperplazi ile karsinom evreleri arasında karşılaştırıldıklarında, CAH1 ve PPIB düzeyinin ileri evrelerde arttığı gözlendi. Bu belirteçler arasında ileri evre kanser ile en yakından ilişkili proteinler K2C8, UAP56 ve GRP78 olarak bulundu.
Sonuç:
Çalışmamızda ön plana çıkan K2C8, UAP56, GRP78 ve CALR proteinlerinin endometrium kanserinde diagnoz, prognoz tahmini ve terapötik hedef belirlemek için ileride yapılacak araştırmalar ve daha geniş serilerde tekrar değerlendirilmesinin yararlı olacağını düşünüyoruz.

Abstract:
Aim :
To compare the protein expression of complex atypical endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma tissues with the protein expression of healthy endometrial tissue, and by this way, to identify proteins that can be used for diagnosis, prognosis and molecular therapeutic targets.
Material Method:
After local ethical committee approval, we made dilatation and curettage (D & C) to the patients who had an abnormal uterine bleeding and postmenopausal bleeding symptoms. Histopathological examination of the D & C material had reported "benign endometrial changes", "complex atypical endometrial hyperplasia" and "endometrioid adenocarcinoma" and 30 patients ,who underwent surgery with these diagnosis, were studied.
Six study groups were determined according to the patients final pathology report: a. Benign endometrial changes (group 1, n = 7, the control group) b. Complex atypical endometrial hyperplasia (group 2, n = 5), c. Stage IA endometrioid adenocarcinoma (group 3, n = 5), d. Stage IB endometrioid adenocarcinoma (group 4, n = 5), e. Stage II endometrioid adenocarcinoma (group 5, n = 3), f. Stage III endometrioid adenocarcinoma (group 6, n = 5).
Protein profiles of the study groups were detected using 2D-DIGE technique and compared to the control group. Protein spots which showing different expression, were defined by MALDI TOF / TOF-MS method. For each test groups, the functions and the relations of the defined proteins in the cell were determined by PANTHER and STRING analysis, respectively.
Results:
In our study, comprasion of the results of protein expression of endometrial cancer cases with protein expression of healthy and complex atypical hyperplasia cases revealed significant elevations in the expression levels of K2C8, UAP56, ENOA, ACTB, GRP78, GSTP1, PSME1, CALR, PPIA, PDIA3 and IDHc proteins. The expression of SOD1 levels had a tendency to decline with the increase of the stage of the cancer. We identified a factor that may promote apoptosis in cancer cells by inducing the activity of CALR so that it might be a hope for the new postoperative chemotherapy treatments. However, when the expression of the CAH1 and PPIB proteins were compared between complex atypical endometrial hyperplasia and carsinoma stages, it has been observed that CAH1 and PPIB levels were increased in advanced stages. Among these markers, the most closely related proteins with advanced stage cancer were found to be as K2C8, UAP56 and GRP78 proteins.

Conclusion:
We think that it would be useful to make researches in the future to determine the diagnosis, prediction of prognosis and identifying therapeutic targets of the highlighted proteins of our study that are K2C8, UAP56, GRP78 and CALR in endometrial cancer and also recurrent investigations in larger study series would be useful.