Uvea melanomu hücre dizilerinde AMPK modülasyonunun hücre proliferasyonuna etkisinin incelenmesi
The effect of AMPK modulation on cell proliferation in uveal melanoma cell lines
Yazar: ÖZGE DELİKTAŞ
Danışman: PROF. DR. HAYYAM KIRATLI
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Adenozin monofosfat = Adenosine monophosphate ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Melanom = Melanoma ; Üvea = Uvea ; Üvea hastalıkları = Uveal diseases ; Üveal neoplazmlar = Uveal neoplasms

Özet:
Bu çalışma ile, AMPK (AMP Aktive Edici Protein Kinaz) aktivasyonu ve inhibisyonu sonucunda uvea melanomu hücre dizilerinin hücre proliferasyonu yanıtı incelenerek AMPK hedefine yönelik doğru stratejinin karşılaştırmalı olarak belirlenmesi amaçlanmıştır. Uvea melanomu en sık görülen intraoküler primer malign tümördür. AMPK, sağlıklı hücrenin kanser hücresine dönüşümünde ve tümör gelişiminde metabolik adaptasyonu sağlayarak önemli rol oynamaktadır. AMPK farklı koşullarda tümör supresör veya protümoral etki gösterebilmektedir. Çalışmamızda MEL, OMM2.5, 92.1 ve MP46 uvea melanomu hücre dizileri farklı dozlarda AMPK aktivatör (A-769662) ve inhibitör (Dorsomorfin) ajanları ile ayrı olarak inkübe edilmiştir. MTT hücre proliferasyon deneylerinde hücre dizilerinin 24 saatlik proliferasyon hızları sırasıyla en hızlı prolifere olan 92.1 olmak üzere MP46, OMM2.5, MEL270 şeklinde bulunmuştur. Hücrelerin proliferasyon hızları ve farklı ilaç gruplarına verdikleri proliferasyon yanıtları arasında ilişki gözlenmemiştir. Hücre dizilerinin AMPK düzenleyici ajanlara verdiği yanıt 48 saatlik ilaç inkübasyonu sonrasında XTT hücre proliferasyon deneyi yapılarak saptanmıştır. Tüm hücre dizilerinin (92.1 hücre dizisi, <50 μM AMPK aktivatörü dışında) AMPK aktivatörüne verdiği yanıt aynı hücre dizisinin ilaç eklenmemiş kontrol grubu ile karşılaştırıldığında hücre proliferasyonunda azalma olduğu gözlenmiştir. Aynı hücre dizisinde hücre proliferasyonundaki azalma miktarı ve doz artışı arasında bir ilişki gözlenmemiştir. MP46 hücre dizisinde AMPK aktivatörünün 50 μM üzerindeki uygulamalarında artan ilaç dozlarında hücre proliferasyonunun daha fazla olduğu saptanmıştır. Tüm hücre dizilerinin 5 μM üzerindeki AMPK inhibitörünün artan dozlarda uygulanmasına verdiği yanıt, doz arttıkça proliferasyonun daha da azalması olarak gözlenmiştir.

Abstract:
The aim of this study is to comparatively determine the accurate strategy regarding AMPK targeting by analyzing the cell proliferation response of uveal melanoma cell lines to AMPK activation and/or inhibition. Uveal melanoma is the most common primary intraocular malignant tumor. AMPK plays an important role in the transformation of a healthy cell into a tumor cell and tumor progression by providing metabolic adaptation. AMPK can have a tumor suppressor or a protooncogenic impact under different circumstances. In our study, uveal melanoma cell lines MEL270, OMM2.5, 92.1 and MP46, were incubated separately with varying doses of AMPK activator (A-769662) or inhibitor (Dorsomorphin) agents. MTT cell proliferation assays, the 24-hour rates of proliferation were determined and 92.1 cells showed the highest proliferation rate (92.1, MP46, OMM2.5, MEL270 in the decreasing order). There was no correlation between the cell proliferation rates and the proliferation responses to the different drug groups. The responses of cell lines to these AMPK modulating agents were determined by XTT cell proliferation assays after a 48-hour incubation. There was a decrease in cell proliferation response in all cell lines incubated with AMPK activator, compared to the control group of the corresponding cell lines which were not exposed to any agents. There was no correlation between the amount of decrease in cell proliferation and dosage increment in any of the cell lines. In MP46 cell line, the cell proliferation was found to be higher as a result of the treatment of AMPK activator in increasing doses over 50 μM. The response of all cell lines to the treatment of AMPK inhibitor was observed significantly, as cell proliferations declined further with the increasing doses over 5 μM.