İnvaziv-noninvaziv mesane tümörlerinin ayrımında bap-1'in değerlendirilmesi, GATA-3 ve CK 5/6 ile oluşturulan subtipleme ile karşılaştırılması
Evaluation of bap-1 in invasive-noninvasive bladdertumors and comparison with molecular subtypesgenerated by GATA-3 and CK 5/6
Yazar: BEGÜM ÇALIM GÜRBÜZ
Danışman: UZMAN CUMHUR SELÇUK TOPAL
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Ümraniye Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: BRCA1 = BRCA1 ; Mesane hastalıkları = Urinary bladder diseases ; Mesane neoplazmları = Urinary bladder neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitokeratinler = Cytokeratins ; Stereotip = Stereotyping

Özet:
Amaç: Mesane tümörlerinde moleküler subtipleme son yıllarda giderek önem
kazanmaktadır. Farklı subtipleme örnekleri olmakla beraber temel olarak "luminal" ve
"bazal" tipe ayrılmaktadır. Luminal tip GATA bağlayıcı protein-3 (GATA-3) ile, bazal
tip sitokeratin 5/6 (CK 5/6) ile immunreaktivite göstermektedir. Literatürde BRCA1
ilişkili protein-1 (BAP-1) ekspresyonunu mesane tümörlerinde moleküler olarak
araştıran çok az sayıda yayın mevcut iken immunohistokimyasal çalışma
bulunmamaktadır. Bu çalışmada amacımız, invaziv ve non-invaziv mesane
tümörlerini CK 5/6 ve GATA-3 ile subtiplere ayırmak ve BAP-1 ekspresyon
paterninin normal ve tümörlü dokular arasındaki farkını moleküler olarak, tümör
derecesine göre farkını ise immunohistokimyasal olarak saptamaktır.
Gereç ve Yöntem: Sağlık Bilimleri Üniversitesi Ümraniye Eğitim ve
Araştırma Hastanesi Tıbbi Patoloji Bölümü arşivinden 150 non-invaziv, 150 invaziv
mesane tümörü içeren toplam 300 transüretral rezeksiyon (TUR) materyali
değerlendirmeye alınmış, tümüne GATA-3, CK 5/6 ve BAP-1 immunohistokimyasal
boyaları uygulanmış ve değerlendirilmiştir. Ayrıca primer mesane tümörü olduğu
bilinen 11 hastanın tümörlü ve normal dokuları operasyon esnasında taze olarak
alınmış ve bu dokular reverse transkripsiyon polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR)
ve Western Blot yöntemi ile incelenmiştir.
Bulgular: Luminal subtipi gösteren GATA-3 ekspresyon şiddeti ve yüzdesi
non-invaziv grupta istatiksel olarak anlamlı derecede yüksektir (p=0,001; p<0,01).
Bazal subtipi gösteren CK 5/6 ekspresyon şiddeti kas invaziv grupta, düşük dereceli
non-invaziv grup ve lamina propria invazyonu gösteren gruba göre istatiksel olarak
yüksektir (p=0,001; p<0,01). Tümörlü dokular ile normal dokular Western Blot
yöntemi ile karşılaştırıldığında 11 vakanın 9'unda tümörlü dokuların BAP-1 protein
ekspresyon düzeylerinde normal dokulara göre anlamlı bir artış saptanmıştır. Aynı
değerlendirme RT-PCR yöntemi ile yapıldığında 11 vakanın 5'inde tümörlü dokuların
BAP-1 mRNA düzeylerinin normal dokulara göre artmış olduğu görülmüştür. Bu iki
moleküler değerlendirme sonucunda mesane tümörlerinde normal dokulara göre BAP-
1 protein düzeylerindeki artışın mRNA düzeylerine göre daha fazla olduğu
saptanmıştır. BAP-1'in immunohistokimyasal değerlendirmesinde papiller
ix
morfolojisini kaybetmiş kas invaziv grupta şiddetli ekspresyon gösterme eğiliminin
istatiksel olarak anlamlı olduğu saptanmıştır (p=0,017; p<0,05).
Sonuç: Bu çalışmada GATA-3 ve CK 5/6 immunohistokimyasal boyaları ile
moleküler subtipleme yapılabileceği ve bu subtipleme ile özellikle invazyon
derecesinin uyumlu olduğu saptanmıştır. Mesanede henüz çok fazla çalışılmayan
BAP-1 protein ekspresyon düzeyi ise moleküler olarak tümörlü dokularda normal
dokulara göre daha yüksek bulunmuştur. İmmunohistokimyasal BAP-1
değerlendirmesinin de tümör derecesi ve papiller morfolojinin varlığına göre
farklılıklar gösterebildiği sonucuna ulaşılmıştır.
Anahtar kelimeler: mesane, neoplazi, GATA-3, CK 5/6, BAP-1

Abstract:
Aim: Molecular subtyping in bladder tumors has become increasingly
important in recent years. Although there are different types of subtypes, they are
mainly divided into "luminal" and "basal "types. Luminal type shows
immunoreactivity with GATA binding protein-3 (GATA-3) and basal type shows
immunoreactivity with cytokeratin 5/6 (CK 5/6). There are very few publications in
the literature that have investigated molecularly BRCA1-associated protein-1 (BAP-
1) expression in bladder tumors, but there are no immunohistochemical studies. In this
study, we aimed to differentiate the subtypes of invasive and non-invasive bladder
tumors with CK 5/6 and GATA-3 and to determine the difference of BAP-1 expression
pattern between normal and tumor tissues molecularly and the difference of BAP-1
expression pattern according to tumor grade immunohistochemically.
Materials and Methods: A total of 300 transurethral resection (TUR)
materials including 150 non-invasive and 150 invasive bladder tumors were evaluated
from the archive of Health Sciences University Umraniye Training and Research
Hospital Pathology Department. In these 300 cases, GATA-3, CK 5/6 and BAP-1
immunohistochemical stains were applied and evaluated. In addition, tumor and
normal tissues of 11 patients with known primary bladder tumors were taken freshly
during the operation and these tissues were examined by reverse transcription
polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western Blot method.
Results: GATA-3 expression severity and percentage showing luminal
subtype is statistically significantly higher in the non-invasive group (p=0,001;
p<0,01). The expression severity of CK 5/6 showing the basal subtype is statistically
higher in the muscle invasive group than the low-grade non-invasive group and the
group showing lamina propria invasion (p = 0.001; p <0.01). When tumor tissues and
normal tissues were compared with Western Blot method, in 9 of 11 cases, BAP-1
protein expression levels of tumor tissues were significantly increased compared to
xi
normal tissues. When the same evaluation was made by RT-PCR method, it was
observed that BAP-1 mRNA levels of tumor tissues increased in 5 of 11 cases
compared to normal tissues. As a result of these two molecular evaluations, the
increase of BAP-1 protein levels in bladder tumors compared to normal tissues was
found higher than mRNA levels. In the immunohistochemical evaluation of BAP-1,
the tendency to show severe expression in the muscle invasive group that lost papillary
morphology was found to be statistically significant (p = 0.017; p <0.05).
Conclusion: In this study, it was determined that GATA-3 and CK 5/6
immunohistochemical stains can be used for molecular subtyping of bladder tumors
and especially the degree of invasion is compatible with this subtypying. BAP-1
protein expression levels, which have not been studied much in the bladder, were
found to be higher in the tumor tissues than in the normal tissues. It was concluded
that immunohistochemical BAP-1 evaluation may also vary according to tumor grade
and papillary morphology.
Keywords: bladder, neoplasia, GATA-3, CK 5/6, BAP-1