Campylobacter jejuni'ye karşı koruyucu immüniteye yol açan antijenlerin tespiti ve potansiyel kullanım alanlarının araştırılması
Detection of antigens leading protective immunity against campylobacter jejuni and investigation of potantional application area
Yazar: MELDA MERAL
Danışman: PROF. DR. FATİH KÖKSAL
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antijenler = Antigens ; Kampilobakter jejuni = Campylobacter jejuni ; Membran proteinleri = Membrane proteins ; İmmün boyama = Immunoblotting ; İmmünite = Immunity ; İmmünoglobülin Y = Immunoglobulin Y

Özet:
Campylobacter jejuni özellikle kanatlılarda gastrointestinal sistemde kolonize olan Gram negatif spiral şekilli ve hareketli bir mikroorganizmadır. Kanatlılardaki enfeksiyonları et tutulumunu azaltarak ciddi ekonomik kayıplara yol açabilmektedir. İnsanlara sıklıkla enfekte kanatlı ürünlerinin tüketilmesi ile bulaşırlar ve non-spesifik basit semptomlardan dizanteriye kadar değişen intestinal semptomlara yol açarlar. Kanatlılarda kolonizasyonun yaş ile ilişkili olarak arttığı, ilk 2-5 hafta kolonizasyonun gerçekleşmediği gösterilmiş ve koruyucu immunitede yumurtadaki maternal IgY 'nin rolü olabileceği düşünülmüştür. Bu bulgu koruyucu immun cevabı indükleyen C. jejuni antijenlerinin kanatlılarda ve insanlarda aşı çalışmaları ile serolojik tanı kitlerinde kullanılabileceğini akla getirmiştir.  
Çalışmamızda; bölgesel suşlardan elde edilen membran antijenleri ile tavuk yumurtalarındaki anti-C. jejuni-IgY reaktivitelerinin tespiti amaçlanmıştır. Endüstriyel tip et tavukçuluğu yapan işletmelerdeki I. III, V haftalık piliçler ile kesimhanede işlem gören tavukların doku örneklerinden izole edilen C. jejuni suşlarının membran proteinleri ekstrakte edilmiş ve SDS-PAGE ile separe edildikten sonra nitroselüloz membranlarda immobilize edilmiştir.  Daha sonra endüstriyel tip ve ev tipi yumurta tavukçuluğu yapan işletmelerden alınan 100 yumurtadan IgY ekstrakte edilmiş ve bunlarla reaktif membran proteinleri immunblot yöntemi ile araştırılmıştır. 
Çalışmada doku örneklerinin %17.5'inde C. jejuni kolonizasyonu görülmüş, bu suşların membranlarında 8-120 kDA arasında değişen çok sayıda protein bulunduğu ve 36 ve 60 kDa büyüklüğündekilerin suşların tamamında major protein bantları olduğu tespit edilmiştir. Yumurta ekstraktlarının %68'inde SDS-PAGE ve ELISA yöntemleri ile ölçülebilir ve kullanılabilir düzeyde IgY tespit edilmiştir. İmmunblotting yöntemi ile 30 (%44.1) yumurta ekstraktında 36 ve 60 kDa'luk proteinlerle (%93.3-100) reaktif olan IgY varlığı tespit edilmiştir. Bölgemizde endüstriyel tip et tavukçuluğunun yapıldığı işletmelerde C. jejuni enfeksiyonlarının insidansı. %17.5 ile beklenenden yüksek oranda görülmüştür. Endüstriyel ve ev tipi yumurta tavukçuluğu yapılan kümeslerdeki yumurtalarda sırasıyla %14 ve %46 oranında anti-C.jejuni IgY olduğu ve bunların 36 ve 60 kDa'luk proteinlerle immün-reaktif olduğu tespit edilmiştir. Bu antijenlerin aşı çalışmaları ve serolojik tanı kiti geliştirilmesinde hedef antijenler olarak kullanılabileceği belirlenmiştir.

Abstract:
Campylobacter jejuni, is a Gram negative, spiral shaped and motile microorganism that colonize especially on the gastrointestinal tract of the poultry. Their infections in poultry lead to serious economic losses by decreasing meat involvement. Transmission to human commonly occurs by the consumption of infected poultry products and they cause gastrointestinal symptoms ranging from simple non-specific symptoms to dysentery. It has been shown that colonization in poultry increase in relation with the age and the non-colonization occurs in the first 2-5 weeks so it is thought that there may be the role of maternal IgY for protective immunity in eggs. This finding has brought to mind that C. jejuni antigens inducing protective immune responses may be used in vaccine studies and serologic diagnostic kits for human and poultry. 
Determining the reactivity of anti-C. jejuni IgY, obtained from local chicken eggs with the membrane antigens isolated from the local strain was aimed in our study. Membrane proteins of C. jejuni strains that isolated from tissue samples of I. III and V weeks old chicks and the chickens treated in the slaughterhouse of regional industrial type enterprises engaged in meat poultry, were extracted and after separating antigens according to their molecular weight by SDS-PAGE, immobilized to nitrocellulose membranes. Then IgY were extracted from 100 eggs taken randomly from domestic and industrial type enterprises engaged in egg poultry in the region and membrane proteins reacting with these antibodies were investigated by immunoblotting method. 
In this study, C. jejuni colonization in 17.5% of tissue samples was observed, numerous proteins ranging from 8 to 120kdA on cell mebrane of these strains were showed and also 36 and 60 kDa sized proteins were determined as the major protein bands in all these strains. Measurable and usable level of IgY in 68% of the egg extracts was determined by SDS-PAGE and ELISA methods. Presence of reactive IgY with 36 and 60 kDa weight proteins (93.3-100%) in 30 (44.1%) of egg extracts were detected by immunblotting method. Infection of C. jejuni with the incidence of 17.5% were found to be higher than expected in enterprises engaged in industrial type of meat poultry in our region. Anti-C. jejuni IgY antibodies were determined in 14% and 46%  respectively in the eggs obtained from the industrial and domestic enterprices engaged in egg poultry and these antibodies identified immune reactive with 36 and 60 kDa proteins. It is determined that these antigens, can be use as target antigens for the vaccine studies and serologic diagnostic kit development.