Aurora Kinaz B inhibitörü tozasertib'in pankreas karsinoma hücrelerinde CPC (Chromosomal passanger Complex) yolağı üzerindeki etkilerinin araştırılması
The investigation of the effect of tozasertib, an aurora Kinase B inhibitor, onto the chromosomal passanger complex pathway in pancreatic carcinoma cells
Yazar: HİKMET ÇELİK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. AHMET ATA ÖZÇİMEN
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyoloji = Biology ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Aurora kinaz = Aurora kinase ; Fluoroimmunoassay = Fluoroimmunoassay ; Hücre ölümü = Cell death ; Karsinoma-duktal = Carcinoma-ductal ; Pankreas hastalıkları = Pancreatic diseases ; Sitotoksik etki = Cytotoxic effect ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Bu çalışmada CFPAC-1 pankreas duktal adenokarsinoma hücreleri kullanılarak Aurora kinaz B inhibitörü Tozasertib'in sitotoksik etkisi araştırılmıştır. xCELLigence DP eş zamanlı hücre analizi cihazında yapılan hücre titrasyon deneyleri sonucunda sitotoksisite deneyleri için uygun hücre sayısının 50.000, Tozasertib uygulama saatinin ise 12. ve 24. saat olduğu belirlendi. Tozasertib (10-8 M, 10-7 M, 10-6 M, 10-5 M,10-4 M) uygulaması sonucu IC50 değeri 6,4x10-8 M olarak bulundu. xCELLigence DP analizöründe yapılan çalışmada Tozasertib'in, CFPAC-1 hücrelerinin migrasyon aktivitesine engelleyici ya da destekleyici herhangi bir etkide bulunmadığı belirlendi. İmmünflöresan yöntemle hücre çekirdeğine göre konumları ve protein anlatımı düzeyleri görsel olarak incelenen AURKB ve Borealin proteinlerinin anlatım düzeylerinin Tozasertib etkisi altında azaldığı gözlemlendi. Önemli bir apoptotik aktivite engelleyici olan Survivin'in, Tozasertibe yanıt olarak önemli düzeyde artışa uğradığı bulgulandı. Annexin V belirteci ile akan hücre ölçerde takip edilen toplam apoptotik aktivitenin, Tozasertib varlığıda 12. saatte %8,45, 24. saatte %9,70 arttığı gösterildi. Akan hücre ölçerde yapılan DNA hücre döngüsü analizi ile Tozasertib'in anöploidiye neden olduğu ve G1 fazında hücre döngüsü tutuklanmasına neden olduğu belirlendi. Bu bulgularla, AURKB inhibitörü olan Tozasertib'in, pankreas duktal adenokarsinoma hücre hattı olan CFPAC-1'de apopototik etki gösterdiği, CPC yolağı ve hücre döngüsü üzerinde etkili olduğu, ancak migrasyon üzerinde herhangi bir etkisinin bulunmadığı gösterilmiştir.

Abstract:
In this study CFPAC-1 pancreatic ductal adenocarcinoma cells is used to research the cytotoxic activity of the Tozasertib, a Aurora Kinase B inhibitor. The cytotoxic effect studies resulted with Real-Time Cell Analyser, xCELLigence DP demonstrated that the appropriate starting cell number is 50,000 and the implementing time is the 12th and 24th hours. The value of IC50 Tozasertib was considered as 6.4x10-4 M concentration among the range of 10-8 M to 10-4 M. Research on the CFPAC-1 cells with xCELLigence DP Analyser revealed that Tozasertib has no positive of negative effect on migration. The diminishing effect of Tozasertib on protein expression of AURKB and Borealin were observed with immunefluorescent assay visually against the location of cell nuclei and protein amount. A prominent apoptic inhibitor, Survivin was found to increase remarkably in response to Tozasertib. The total apoptotic activity in the presence of Tozasertib is shown to increase 8.45% in 12 hours and 9.70% in 24 hours by an Annexin V marker monitored with flow cytometry. The DNA cell cycle analysis performed with flow cytometry was associated with aneuploidy and G1 cell arrest caused by Tozasertib treatment. In conclusion, the AURKB inhibitör Tozasertib shows apoptotic effect on pancreatic ductal adenocarcinoma cell line, CFPAC-1, affection on CPC pathway and cell cycle, however, no influence to migration.