Varikosel olgularında sperm dondurma-çözme işleminin (Kriyoprezervasyon) zamana bağlı olarak sperm parametreleri, ince yapısı ve hücre ölümü üzerine etkileri
Effect of cryopreservation on sperm parameters and DNA fragmentation in patients with varicocelectomy
Yazar: EREN ŞAHİN
Danışman: DOÇ. DR. ŞULE ÇETİNEL
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Üroloji = Urology
Dizin: Cerrahi-ürogenital = Surgery-urogenital ; Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Sperm = Spermatozoa

Özet:
Literatürde sperm morfolojisi ile ilgili çok sayıda çalışma olduğu halde varikoselektomi olgularında sperm morfolojisi ile ilgili daha az çalışma vardır. Bu nedenle erkek infertilite nedenleri içinde sıklıkla gözlenen varikosel olgularının operasyonu (varikoselektomi) sonucu sperm motilite ve morfolojisinde olumlu gelişmeler gözlenmektedir. Bu olgularda patolojik durumlar söz konusu olduğunda spermlerinin bir süre dondurulup korunması gerekebilir. Bu nedenle çalışmamızda varikoselektomi olgularında sperm dondurma-çözmenin kısa ve uzun dönemdeki etkilerini ışık ve elektron mikroskobik düzeyde araştırmayı amaçladık. Çalışmamızı oluşturan varikoselektomi denek gruplarında sperm dondurma-çözmenin sperm morfolojisi üzerine olan etkisi floresan mikroskobu ve ince yapısal düzey için elektron mikroskobu ile gözlendi. Bu çalışmada sperm dondurma-çözme öncesi ve sonrası karşılaştırmalı histolojik incelemeler ve değerlendirmeler yapıldı. Dondurma-çözme süresi kısa (1 ay) ve uzun (3 ay) olarak çalışıldı ve kriyoprezarvasyon etkileri morfolojik olarak incelendi. Varikoselektomi olgularında kriyoprezarvasyon yönteminin uzun ve kısa dönem sperm yapısı, canlılığı, fertilizasyon yeteneği üzerine etkileri incelendi. Kontrol grubu (n=10), varikoselektomi grubu (n=10) olmak üzere toplam 20 adet denek kullanıldı. Sperm morfolojisini göstermek için önce Diff-Quik boyası ve hücre ölümünü göstermek için TUNEL yöntemiyle apoptotik hücreler floresanla işaretlenerek gösterildi. Tüm veriler istatistiksel olarak değerlendirildi. Sonuç olarak kontrol grubu ile karşılaştırıldığında varikoselektomi grubunda sperm motilite ve morfolojisinde istatistiksel olarak oldukça anlamlı biçimde azalma ve bozulma gözlendi.

Abstract:
Varicocele is among the common causes of male infertility and varicocelectomy has a beneficial effect on male fertility. There is a significant improvement in semen quality and pregnancy outcome after surgery. Cryopreservation of sperm is a widely used technique to protect the fertility in various occasions such as infertility. However it was reported to have deleterious effects on sperm parameters. Although evidence on the effect on sperm parameters is well known, its interference with cryopreservation is not clear in varicocelectomized patients. This study aims to reveal the resistance of human spermatozoa to cryoinjury by using the fast liquid nitrogen vapor method in control and varicocelectomized groups. Semen samples were obtained from 20 normospermic and 10 male volunteers who underwent varicocelectomy. The samples were separated into two aliquots, where the first was kept for initial semen analysis. The second was stored in liquid nitrogen at -196 oC, and analyzed following thawing after one month and three months. Semen samples were evaluated by light microscopy by means of morphology, motility, concentration and TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay to evaluate the apoptotic cell ratio. Statistical analysis was made to compare the data between normospermic and varicocelectomized groups. As a result, sperm cryopreservation in varicocelectomized cases leads deterioration in the morphology and concentration of the sperm.