Trombosit yüzey belirteçlerinin referans aralığının akım sitometrik yöntem ile değerlendirilmesi
Evaluation of the reference range of thrombocyte surface markers by the current cytometric method
Yazar: ZEYNEP POYRAZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET BURAK YAVUZ ÇİMEN
Mersin Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Kan hastalıkları = Hematologic diseases ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Membran proteinleri = Membrane proteins ; P-selektin = P-selectin

Özet:
Trombosit analizlerinde,  akım  sitometri  (AS)  kullanımı  hematolojik 
hastalıklar  açısından  gelişmekte  olan  bir  alandır.  Trombositlerinlerin  yüzey 
reseptörlerinin ekspresyonunun, bağlanan ligandların, diğer trombosit, nötrofil ve 
monositlerle  ilişkisinin  incelenmesine  yardımcı  olmaktadır. Bernard Soulier 
Sendromu  (BSS)  ve  Glanzman  Trombastenisi  (GT)  gibi  kalıtsal  trombosit 
hastalıklarının tanısı AS ile daha kolay ve güvenilir hale gelmiştir.  BSS nadir 
görülen  otozomal  resesif  bir  hastalık  olup,  trombosit  yüzey  antijenlerinden 
GPIb/IX(CD42)  kompleksinin  eksikliğinden  kaynaklanmaktadır.  Bu  kompleks 
subendotelyal  proteinlere  özellikle  Von  Willebrand  Faktöre  trombosit 
adezyonunundan  sorumludur  ve  eksikliğinde  kanamaya  eğilim  görülmektedir. 
CD42'ye spesifik monoklonal antikorlar kullanılarak AS ile hızlı ve güvenilir tanı 
konulabilmektedir.  GT  ise  GPIIb/IIIa(CD41/61)  reseptörlerinin  eksikliği  ya  da 
fonksiyon  bozukluğundan  kaynaklanan  OR  geçişli  trombosit  fonksiyon 
bozukluğudur. Bu reseptörler fibrinojene bağlanarak trombosit agregasyonunu 
sağlar, eksikliğinde BSS'na benzer şekilde kanamaya eğilim görülür. CD41/61'e 
spesifik antikorlar kullanılarak AS analiz ile tanı koyulabilir.  Trombosit yüzeyinde 
gözlenen  α-granül  membran  proteini  P-selektin  (CD62)  ekspresyonu  artışı, 
aktivasyon  göstergesidir. Bu bilgiler ışığında, bu çalışmada, sağlıklı bireylerde 
CD42,  CD41/61,  CD62  reseptörlerine  yönelik  referans  aralığının  belirlenmesi 
amaçlandı.  
Çalışmaya Mersin Üniversitesi Hastanesine başvuran 134 sağlıklı gönüllü 
dahil edildi. Gönüllülerden 5 ml'lik EDTA'lı hemogam tüplerine, sitratlı tüplere ve 
içeriksiz  tüplere  kan  örnekleri  alındı.  Bu  örneklerden  tam  kan  sayımı, 
koagülasyon  parametreleri  (APTT,  PT,  INR,  Fibrinojen)  ve  biyokimyasal 
parametreleri  (glukoz,  kreatinin,  AST,  ALT,  Ca,  total  kolesterol, CRP) çalışıldı. 
Sonuçların normal değer aralığında olduğu tespit edildi. EDTA'lı tüplere alınan 
kan örnekleri aynı gün BD Facs Calibur akım sitometri cihazında CD41a, CD42b, 
CD61, CD62 için uygun boyalar kullanılarak analiz edildi. CD41 için ortalama ve 
standart  sapma  değerleri  87,94±10,01,  CD42  için  86,96±12,71,  CD  61  için 
87,78±10,23, CD 62 için 16,59±14,78 bulundu.  
Elde  ettiğimiz  bulguların  trombosit  fonksiyon  bozukluklarının  tanısına 
yardımcı olacağını düşünmekteyiz.       
Anahtar kelime: Flow sitometri, Trombosit, CD41a, CD42b, CD61, CD62

Abstract:
The use of flow cytometry (AS) in platelet analyzes is a developing field in 
terms of hematological diseases. It helps to examine the expression of platelets' 
surface receptors, the relationship of ligated ligands with other platelets, 
neutrophils  and  monocytes.  Diagnosis  of  hereditary  platelet  diseases  such  as 
Bernard  Soulier  Syndrome  (BSS)  and  Glanzman  Thrombastenia  (GT)  has 
become  easier  and  more  reliable  with  AS.  BSS  is  a  rare  autosomal  recessive 
disease.  It  is  caused  by  the  deficiency  of  the  GPIb  /  IX  (CD42)  complex  from 
platelet  surface  antigens.  This  complex  is  responsible  for  platelet  adhesion  to 
subendothelial  proteins,  especially  Von  Willebrand  Factor,  and  its  deficiency 
tends to bleed. Fast and reliable diagnosis can be made with AS using specific 
monoclonal antibodies to CD42. [2nd] GT is an OR transitive platelet dysfunction 
due to lack of GPIIb / IIIa (CD41 / 61) receptors or dysfunction. These receptors 
bind to fibrinogen, providing platelet aggregation, and in its deficiency, there is a 
tendency to bleed similar to BSS. Diagnosis can be made with AS analysis using 
specific antibodies to CD41 / 61.  α-granule membrane protein P-selectin (CD62) 
observed on platelet surface shows platelet activity. In this study, it was aimed to 
determine  the  reference  range  for  CD42,  CD41/61,  CD62  receptors  in  healthy 
individuals. 
134 individuals who applied to Mersin University Hospital were included in 
the study. Blood samples will be taken from patients to hemogam tubes with 5 ml 
EDTA, tubes with citrate and empty tubes. From these samples, complete blood 
count,  coagulation  parameters  (APTT,  PT,  INR,  Fibrinogen)  and  biochemical 
parameters  (glucose,  creatinine,  AST,  ALT,  Ca,  total  cholesterol,  CRP)  were 
studied.  The  results  were  found  to  be  within  the  normal  range.  Blood  samples 
taken into tubes with EDTA  analyzed on the same day on the BD Facs Calibur 
flow  cytometry  device.  Patient  samples  evaluated  for  platelet  surface  markers 
using  dyes  suitable for  CD41a,  CD42b,  CD61,  CD62. The  mean and  standard 
deviation values for CD41 were 87.94±10.01, for CD42 86.96±12.71, for CD 61 
87.78±10.23, for CD 62 16.59±14.78.  
We think that our findings will help the diagnosis of thrombocyte 
dysfunction. 
 
Keyword: Flow cytometry, Thrombocyte, CD41a, CD42b, CD61, CD62