Yenidoğan ve erken süt çocukluğu döneminde steroid hormon profilinin likit kromatografi tandem mass spektrometri yöntemi (LC-MS/MS) ile değerlendirilmesi ve referans aralıklarının belirlenmesi
Simultaneous profiling of steroid hormones using liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) in newborn and early infancy
Yazar: ECE ÖGE
Danışman: PROF. DR. TÜLAY GÜRAN
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Eğitimi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Bebek-yenidoğmuş = Infant-newborn ; Bebekler = Infant ; Hormonlar = Hormones ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Kütle spektroskopisi = Mass spectroscopy ; Referans değerler = Reference values ; Steroidler = Steroids

Özet:
GİRİŞ: Steroid hormon metabolizmasını etkileyen bozuklukların çoğu yenidoğan veya erken süt çocukluğu döneminde tuz kaybı veya belirsiz genitalya ile bulgu verir. Bu tabloya neden olan hastalıkların tanı ve ayırıcı tanısında endojen steroid hormonların ve prekürsörlerinin ölçümü önemlidir. Fetal adrenal zon involusyonundaki farklılıklar, düşük analit konsantrasyonları, plasental ve endojen steroid hormonların interferansı bu hormonların ölçümünde ana sorunlardır. Serum steroid hormon düzeylerinin likit kromatografi kütle spektrometri (LC-MS) yöntemi ile ölçümü aynı anda birçok steroid hormonun yüksek özgünlük ve duyarlılıkta ölçümüne hızlıca imkan sağlar.

YÖNTEM VE METOD: 325 tamamen sağlıklı (152 kız,173 erkek) yenidoğan ve infanttan alınan 0.4 mL plazmada 19 steroid hormon eş zamanlı çalışıldı ve bebekler 5 farklı gruba ayrıldı (3-7, 8-14, 15-28, 29-90, 91-180. gün). Yaş gruplarına göre 2.5, 50 ve 97.5 persantil değerleri nonparametrik istatistiksel yaklaşımlar ile belirlendi. 17 Hidroksiprogesteron+21-Deoksikortizol/Kortizol, 11-Deoksikortizol/Kortizol, 17-Hidroksipregnenolon/Kortizol, Kortizol/Kortizon ve erkeklerde Testosteron/Dihidrotestosteron oranları 21-alfa Hidroksilaz, 11-beta Hidroksilaz, 3-beta Hidroksilaz, 11 -Beta hidroksisteroid dehidrojenaz-2 ve 5-alfa reduktaz eksikliğinin biomarkerları olarak hesaplandı. 

DEĞERLENDİRME: LC-MS yöntemi ile eş zamanlı ölçülen 19 steroid hormonun referans değerleri sunulacaktır. 17-hidroksile C21 glukokortikodler (17 hidroksipregnenalon,17-hidroksiprogesteron ve kortizol), Non17- Hidroksile C21-mineralokortikoid öncülleri (pregnenalone ve progesteron) ve C19 androjenler (dihidroepiandrostenedion ve dihidroepiandrostenedion sülfat, androstenedion) yaşa bağlı olarak 3 ve 180 gün aralığında çok büyük değişiklikler göstermiştir. Ancak C21-mineralokortikoidler (aldosteron, kortikosteron, 11-deoksikortikosteron) hayatın ilk 6 ayında belirgin değişiklik göstermemiştir. 

SONUÇ: LC-MS bazlı steroid hormon paneli ölçümü, eş zamanlı olarak birçok steroid hormon ölçümüne olanak sağladığından steroidogenez bozukluklarının tanısında en modern tanısal veriyi sağlayacaktır. Ayrıca, çalışmamızda yenidoğan ve erken süt çocukluğu dönemine ait yaşa ve cinse bağlı olarak belirlenen referans değerleri hızlıca doğru tanı konması ve ayırıcı tanı yapılması açısından büyük fayda sağlayacak, genetik danışma ve prognoz hakkında bilgi verecek ve bozulmuş steroidogenezin hayati tehdit eden sonuçlarına karşı koruyucu olacaktır.

Abstract:
BACKGROUND: Many of the steroidogenic disorders present in newborn or early infancy with ambiguous genitalia and/or salt- wasting. Quantification of endogenous hormonal steroids and their precursors is essential for the diagnosis and differential diagnosis of these disorders.  Rapid changes in steroid hormone concentrations due to fetal adrenal zone involution, low-concentration analytes and assay interference by endogenous or placental steroids are main diagnostic challenges of this critical life period. Analysis of serum steroids by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) can provide rapid, highly specific, and sensitive simultaneous analysis of multiple steroid analytes. However, reference data from healthy newborns and infants of precise age groups are a prerequisite for correct interpretation of the results.
 
OBJECTİVE AND METHOD: We employed LC-MS/MS to measure a panel of 19 steroids in 0.4 mL plasma from the samples of 325 healthy full-term newborns and babies (173 males, 152 females) grouped in five age groups (3-7th, 8-14th, 15-28th, 29-90th, 91-180th days). Nonparametric statistical approaches were used to generate the mean, 2.5th-97.5th percentile distributions for age groups. 17OH-Progesterone+21-deoxycortisol)/cortisol, 11-deoxycortisol/cortisol, 17OH-pregnenolone/cortisol, cortisol/cortisone and testosterone/dihydrotestosterone (only in boys) ratios were calculated as biomarkers of 21-α-hydroxylase, 11-β-hydroxylase, 3-β-hydroxylase, 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase-2 and 5-α-reductase activities, respectively.
 
RESULTS: Reference intervals of 19 steroids measured simultaneously by LC-MS/MS were established.17-hydroxylated C21-glucocorticoids (17OH-pregnenolone, 17OH-progesterone and cortisol), non-17-hydroxylated C21-mineralocorticoid precursors (pregnenolone and progesterone) and C19-androgens (dehydroepiandrosterone, dehydroepiandrosterone-sulphate, Δ4-androstenedione) showed most significant age-related changes over 5 (age groups) from 3 to 180 days of life.However C21-mineralocorticoids (aldosterone, corticosterone, 11-deoxycorticosterone) remained constant during the first 6 months of life.Biomarkers of 21-α-hydroxylase, 11-β-hydroxylase, 3-β-hydroxylase activities were in favor of cortisol increase.
 
CONCLUSION: Implementation of LC-MS/MS based steroid panel will provide a state-of-art diagnostic tool to be targeted for a variety of diseases with disordered steroidogenesis. Therefore, the establishment of age-related reference intervals for newborn babies and early infancy in this study will allow rapid, noninvasive, accurate diagnosis and differential diagnosis, guide sex assignment, genetic counseling, predicting prognoses and prevent the potential life-threatening outcomes of impaired steroidogenesis.