Çukurova bölgesindeki Trichogramma türlerinin (Hymenoptera, Trichogrammatidae) teşhisinde moleküler yöntemlerin kullanımı
Usage of molecular techniques for identification of Trichogramma species (Hymenoptera, Trichogrammatidae) in Çukurova region
Yazar: FAHRİYE SÜMER
Danışman: PROF. DR. AYDIN Ş. TUNÇBİLEK
Erciyes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Çukurova Bölgesindeki farklı lokalitelerinden toplanan Trichogramma örnekleri rDNA'nın ITS2 dizisine göre teşhis edilmiş ve örneklerin T. turkestanica (Meyer, 1940), T. brassicae (Bezdenko, 1968) ve T. euproctidis (Girault, 1911) olmak üzere üç tür içerdiği belirlenmiştir. ITS2 nükleotit dizilerindeki farklılıklar ve genetik uzaklık UPGMA yöntemi ile hesaplanmış ve buna göre örnekler iki ana gruba ayrılmıştır. T. turkestanica türleri arasındaki genetik uzaklık % 0-0,531 arasında değişirken, T. brassicae için % 0-0,750, T. euproctidis için % 0,565 olarak hesaplanmıştır. Türler arası genetik uzaklık ise % 4,388 ile % 6,934 arasında değişmektedir. ITS2 dizi analizi sonucu T. turkestanica ve T. brassicae olduğu belirlenen kültürler arasında çaprazlama denemeleri kurulmuş ve farklı tür olduğu bilinen örnekler arasında yapılan çaprazlama sonucunda F1'de elde edilen bireylerin tamamının erkek olduğu bulunmuştur. Çalışmamızda ITS2 bölgesinden başka rDNA'nın 28SD2 bölgesi ile mitokondriyal COI bölgelerinin dizi analizinin Trichogramma türlerinin ayırt edilmesinde kullanılabilirliği araştırılmıştır. T. turkestanica'ya ait örneklerin D2 bölgesi 522 bç, COI bölgesi 669 bç iken T. brassicae'ye ait olanların D2 bölgesinin 530 bç, COI bölgesinin 672 bç olduğu belirlenmiştir. Bu iki tür arasındaki genetik uzaklık COI dizisine göre % 1,047, D2 dizisine göre % 3,439 iken, ITS2 dizisine göre % 6,012 ile % 6, 934 arasında değişmektedir. Ayrıca tür içi ve türler arası farklılıkları belirlemek için 50 farklı RAPD primeri denenmiş ve bunlardan 6 tanesi ayırt edici bant vermiştir. RAPD primerlerinden elde edilen bantlara göre örneklerin arasındaki genetik uzaklık hesaplanmış ve bu uzaklıkların % 0,05 ile % 79,85 arasında değiştiği belirlenmiştir.Bu çalışmada moleküler belirteçler kullanılarak biyolojik mücadelede oldukça önemli bir doğal düşman olan Trichogramma türlerinin moleküler teşhisi ve karakterizasyonu sağlanmıştır. Kullanılan moleküler belirteçler içerisinde ITS2'nin ayırt edici ve güvenilir sonuçlar sağladığı tespit edilmiştir.

Abstract:
In this study, Trichogramma species were collected from different locations of Çukurova and identified by using the sequence of rDNA-ITS2. It was found that all samples were belonging to T. turkestanica, T. brassicae and T. euproctidis. Nucleotide sequence diversity was calculated by using UPGMA analysis. According to the analysis the samples were separated in two main groups. The genetic distances were calculated as in the range of 0-0,531 % for T. turkestanica, 0-0,750 % for T. brassicae and. 0,565 % for T. euproctidis species. The range of genetic distances were found between 4,388 % and 6,934 % for different species. Only males were obtained, after reciprocal crossing with T. turkestanica and T. brassicae species. We also used 28SD2 region of rDNA and mitochondrial COI region for identification of Trichogramma species. 28SD2 and COI sequences were distinct in size, 522 bp and 669 bp for T. turkestanica and 530 bp and 672 bp for T. brassicae, respectively. While the genetic distances between the species were calculated to be 3,439% and 1,047% for 28SD2 and COI, respectively, these values for ITS2 were between 6,012 % and 6,934 %. Among 50 different RAPD primers used for determining diversities between species, six primers showed distinctive bands. The banding patterns were compared with each other and the genetic distances of samples were found in the range of 0,05% to 79,85%. In conclusion, molecular identification of Trichogramma was provided and ITS2 marker was found to be the best distinguishing and reliable one among the markers that was used in this study.