Rat testis dokusunda poliklorobifenil toksikasyonuna alfa lipoik asit kullanımının etkisi
The effect of alpha lipoic acid useage on polychlorinated biphenyl toxicity in testicular tissue of rat
Yazar: ÖZAY GÜLEŞ
Danışman: PROF. DR. ÜLKER EREN
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Araştırmada, testislerde oluşan poliklobifenil (PCB) toksikasyonuna karşı alfa lipoik asit (ALA)'in antioksidan rolünün olup olmadığının, histolojik ve biyokimyasal farklılık oluşturup oluşturmadığının araştırılması amaçlanmıştır. 
Bu amaçla 40 adet yetişkin erkek Wistar Albino rat (180-200 g/ 90 günlük) kullanıldı. Materyal, her biri sekizer rat içerecek şekilde beş gruba ayrıldı. Kontrol grubundaki (1. Grup) ratlara deneme süresince hiçbir uygulama yapılmadı. Sham kontrol grubuna (2. Grup) 2 ml/kg/gün mısır yağı verildi. PCB grubuna (3. Grup) Aroclor 1254 5 mg/kg/gün dozda, 2 ml/kg olacak şekilde mısır yağı ile karıştırılarak ağızdan uygulandı. ALA grubuna (4. Grup) 25 mg/kg/gün dozda ALA mısır yağı ile karıştırılarak 2 ml/kg olacak şekilde verildi. ALA-PCB grubuna (5. Grup) ise, 25 mg/kg/gün dozda ALA uygulandıktan bir saat sonra 5 mg/kg/gün dozda Aroclor 1254 aynı şekilde mısır yağı ile karıştırılarak 2 ml/kg olacak şekilde verildi. Deneme süresi 30 gün olarak belirlendi ve uygulamalar besleme kanülü ile ağızdan gerçekleştirildi.
Deney süresi sonunda 120 günlük olan ratların vücut ağırlıkları ve testis ağırlıkları belirlendi. Serum örneklerinde total oksidan seviyesi ve total antioksidan seviyesi  ile serum testosteron seviyesi belirlendi. Alınan sağ testis dokusunda TOS ve TAS ile, HO-1 band yoğunluğu belirlendi. Epididimislerden elde edilen sperma örnekleri ile hazırlanan frotilere eosin-nigrosin boyama tekniği uygulanarak anormal spermatozoon sayısı belirlendi. 
Parafin bloklardan alınan seri kesitlere Crossman'ın üçlü boyama metodu, TUNEL metodu ve sABC boyama yöntemi uygulandı. Işık mikroskobu ile doku kesitlerinde histolojik görünüm, histolojik değişimler, XIV. dönem tubulus yoğunluk değeri, apoptozis, HO-1 yoğunluğu ve anormal spermatozoon sayısı belirlendi. Mikroskoba bağlı görüntü analiz sistemi (Leica Q Win Standart) yardımı ile VII-VIII. dönem ve XII-XIV. dönem seminifer tubulus çapı ve epitel yüksekliği tespit edildi.
Ratlarda PCB uygulamasının, histolojik değişimler açısından subbazal vakuolizasyon, epiteliyal dökülme, tubuler lumene germ hücre dökülmesi ve kapilar kanlanmayı artırdığı belirlendi. Ayrıca VII-VIII ve XII-XIV. dönem tubulus çaplarında azalmaya, apoptozisin artmasına, HO-1 enzimi yoğunluğu, serum ve testis dokusu total oksidan seviyesi ile anormal spermatozoon sayısında artışa sebep olduğu tespit edildi. ALA-PCB uygulaması ile sadece PCB uygulanan grupta gözlenen bu olumsuzluklardan subbazal vakuolizasyon, epiteliyal dökülme, tubuler lumene germ hücre dökülmesi ve kapilar hiperemi ile apoptozis oranında önemli derecede azalmaya neden olduğu belirlendi. Dolayısıyla sunulan çalışma ile, PCB'nin erkek reprodüktif sistem üzerinde oluşturacağı toksik etkilere karşı ALA'nın koruyucu etkisinin varlığı ortaya kondu. 
Literatürden farklı olarak sunulan çalışmada, PCB'nin testosteron üzerinde etkili olmamasının sebebinin, PCB'nin ratlara sindirim sistemi yoluyla verilmesi olabileceği ileri sürülebilir. Sunulan çalışma, testiste PCB toksikasyonuna karşı ALA'nın antioksidan etkisini araştıran ilk çalışmadır. ALA'nın kullanım oranı ve vücuda veriliş yolunun değiştirilerek yapılacak çalışmaların, erkek reproduktif sistemde ALA'nın antioksidan ve anti apoptotik etkisinin ayrıntısının belirlenmesine katkı vereceği düşünülmektedir. 

 Anahtar kelimeler; Aroclor 1254, alfa lipoik asit (ALA), histometri, TUNEL, HO-1, testosteron, total oksidan seviyesi, total antioksidan seviyesi, anormal spermatozoon, rat.

Abstract:
The aim of the present study was to investigate the antioxidant, histologic and biochemical effects of alpha lipoic acid (ALA) in polychlorobipheniyl (PCB)-induced testicular toxicity.
Fourty adult male albino Wistar rats   (180-200 g/ 90 days) were used. The animals were randomly divided into 5 groups consisting of 8 animals each. Group I rats (control group) did not receive any chemicals for during experimental period. Group II (control sham) received 2 ml/kg body weight (BW) corn oil by oral gavage. Group III rats received Aroclor 1254 (5 mg/kg BW) dissolved in corn oil (2 ml/kg BW) by oral gavage. Groups IV rats received ALA (25 mg/kg BW) dissolved in corn oil. Groups V rats received ALA (25 mg/kg BW) by oral gavage  24 hours prior to the administration of Aroclor 1254 (5 mg/kg BW). Applications were practiced by oral gavage with feeding needle for a period of 30 days.
At the end of experimental period, all animals (120 days old) were weighted and their testis weights were determined. Total oxidant status (commercial kit/TOS Assay Kit, Rel Assay Diagnostics, RL0024) and total antioxidant status (commercial kit/Total Antioxidant Status-TAS Assay Kit, Rel Assay Diagnostics, RL0017) and, serum testosteron levels (Testosterone EIA Kit, Cayman Chemical 582701) were analysed in serum samples. Right testes were taken, for analysis of TOS and TAS levels and HO-1 band intensity, Sperm samples were taken from epididymal ducts and the slides were prepared. The slides were stained with eosin-nigrosin, in order to determine the number of abnormal spermatozoa.
Crossman's triple staining methods, TUNEL method and strept avidin-biotine complex (sABC) were applied to the serial paraffin sections. Histological apparence, histological alterations, incidences of stage XIV tubules, apoptotic cells, HO-1 density were defined in tissue sections and the count of abnormal spermatozoa were determined with light microscope examination. Seminiferous tubule diameter and seminiferous epithelium height were measured at stage VII-VIII and stage XII-XIV tubules with image analyze system which was linked to a microscope (Leica Q Win Standart).
        An increase in sub-basal vacuolization, epithelial desquamation, the presence of germ cells across to tubular lumen and capillary congestion was determined in PCB group. Seminiferous tubule diameter were decreased at stage VII-VIII and stage XII-XIV tubules. Apoptosis, HO-1 density, total oxidant status in serum and testis and the count of abnormal spermatozoa were significantly increasedin PCB group. In ALA-PCB groups, sub-basal vacuolization, desquamation of germinal cells in the epithelium, germ cells across to tubular lumen, capillary congestion and apoptosis were decreased. At the end of the study, we determined the protective effect of alpha lipoic acid (ALA) in PCB-induced testicular toxicity.
        In this study, in contrast to published data, serum testosterone levels were not effected in PCB groups. The reason for this discrepancy could be due to the fact that PCB was given via oral route. This study is the first research investigating the antioxidant effect of alpha lipoic acid (ALA) against PCB toxicity in the testes. Future work in the field by changing the utilization rate and the administration method of ALA, will contribute to determine the antioxidant and antiapoptotic effects of ALA in the male reproductive system.
        Key words; Aroclor 1254, alpha lipoic acid (ALA), histometry, TUNEL, HO-1, testosterone, total oxidant status, total antioxidant status, abnormal spermatozoa, rat.