Gemsitabin dirençli ve dirençsiz küçük hücreli dışı  akciğer kanseri kökenli kanser kök hücrelerinden türetilen eksozomlarda mirna 221/222 kümesi profilinin incelenmesi
Investigation of mirna 221/222 cluster profile in exosomes derived from gemcitabine-resistant and gemcitabine-sensitive non-small cell lung cancer stem cells
Yazar: AYNAZ GHORBANI
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR UYSAL
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı, Gemsitabin dirençli kanser kök hücreleri (d-AKKH; CD326+ CD133+ CD44+) ve eksozomlarında (d-AKKH-Exo) miRNA 221/222, MDR1, ABCG2 ve Bcl-2 genlerinin ekspresyonunu araştırmak ve dirençsiz kanser kök hücreleri (AKKH; CD326+ CD133+ CD44+) ve eksozomları (AKKH-Exo) ile karşılaştırılarak miRNA 221/222'nin Gemsitabin direncinde etkisini belirlemektir.
Yöntem: A549 hücrelerinde CFU yöntemi ile Gemsitabin direnci geliştirilerek (d-A549), CD326+ CD133+ CD44+ KKH izolasyonu yapıldı ve tümörsferoid tipte çoğaltıldı. Daha sonra flow sitometri, immunofloresan, qRT-PCR, büyüme eğrisi ve MTT yöntemleri ile karakterizasyon işlemleri tamamlanmış AKKH ve d-AKKH tümörsferoidlerinden eksozom izolasyonu ve karakterizasyonu yapıldı. Son aşamada AKKH, AKKH-Exo, d-AKKH ve d-AKKH-Exo'larında miRNA 221/222, MDR1, ABCG2 ve Bcl2 genlerinin ekspresyonu qRT-PCR yöntemi ile incelendi.
Bulgular: d-A549 hücrelerinde CFU analizi ile belirgin ve canlılık oranı yüksek koloni oluşturma yetenekleri gösterildi. A549 ve d-A549 hücrelerinden izole edilen CD326+ CD133+ CD44+ KKH'lerinde yüksek saflık ve canlılık belirlenerek 3D kültür ortamında çoğaltıldı. Karakterizasyon analizlerinde AKKH hücrelerine göre d-AKKH'lerde daha yüksek MDR1 ve ABCG2 aktivasyonu, OCT4 gen ekspresyonu, daha yüksek proliferasyon ve IC50 değerleri belirlendi. Tüm deney gruplarında yapılan qRT-PCR analizinde d-AKKH-Exo'larında yüksek oranda MDR1 ve Bcl-2, miR-221-3p, miR-222-3p ve miR-222-5p ekspresyonu belirlendi. 
Sonuç: Bu tez çalışmasında miR-221/222 ekspresyon düzeyinin akciğer kanserinde Gemsitabin direnci ile yakından ilişkili olabileceği ve miR-222-5p'nin dirençli akciğer kanserinde erken biyobelirteç olabileceği sonucuna ulaşıldı.

Abstract:
Objective: The aim of this thesis study was to investigate the expression of miRNA 221/222, MDR1, ABCG2, and Bcl-2 genes in Gemcitabine-resistant cancer stem cells (r-CSCs; CD326+ CD133+ CD44+) and their exosomes (r-CSC-Exo), and to determine the impact of miRNA 221/222 on Gemcitabine resistance by comparing them with Gemcitabine-sensitive cancer stem cells (CSCs; CD326+ CD133+ CD44+) and their exosomes (CSC-Exo).
Methods: Gemcitabine resistance was developed in A549 cells using the CFU method (r-A549), followed by isolation of CD326+ CD133+ CD44+ CSCs and their propagation in tumor spheroid form. Subsequently, exosome isolation and characterization were performed from CSC and r-CSC tumor spheroids using flow cytometry, immunofluorescence, qRT-PCR, growth curve, and MTT methods. Finally, the expression of miRNA 221/222, MDR1, ABCG2, and Bcl-2 genes was examined in CSC, CSC-Exo, r-CSC, and r-CSC-Exo using qRT-PCR.
Results: Significant and high colony-forming abilities were demonstrated in d-A549 cells through CFU analysis. CD326+ CD133+ CD44+ CSCs isolated from A549 and r-A549 cells exhibited high purity and viability and were expanded in a 3B culture environment. Characterization analysis revealed higher MDR1 and ABCG2 activation, OCT4 gene expression, increased proliferation, and higher IC50 values in d-CSCs compared to CSCs. qRT-PCR analysis of all experimental groups showed significantly higher expression of MDR1 and Bcl-2, as well as miR-221-3p, miR-222-3p, and miR-222-5p in r-CSC-Exo.
Conclusion: This thesis study suggests that the expression level of miR-221/222 may be closely associated with Gemcitabine resistance in lung cancer, and miR-222-5p may serve as an early biomarker in Gemcitabine-resistant lung cancer.