Ratlarda deneysel alt ekstremite iskemi-reperfüzyon modelinde ozon tedavisinin antioksidan etkinliğinin araştırılması
Antioxidant effect of ozone therapy on experimental lower extremity ischemia reperfusion injury in rats
Yazar: ZUHAL TORLAK
Danışman: PROF. DR. UFUK ALPAGUT
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Cerrahi Tıp Bilimleri Bölümü / Kalp ve Damar Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi = Thoracic and Cardiovascular Surgery
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Bacak = Leg ; Ekstremiteler = Extremities ; Ozon = Ozone ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Sıçanlar = Rats ; Tedavi = Treatment ; İskemi = Ischemia

Özet:
RATLARDA DENEYSEL ALT EKSTREMİTE  İSKEMİ -REPERFÜZYON  MODELİNDE OZON TEDAVİSİNİN ANTİOKSİDAN ETKİNLİĞİNİN  ARAŞTIRILMASI
Amaç: Bu çalısmanın amacı, ratlarda deneysel olarak oluşturulan  alt ekstremite iskemi reperfüzyon hasarının  lokal ve sistemik etkileri üzerine ozon tedavisinin antioksidan etkinliğini araştırmaktır.
Materyal ve Metod: Ağırlıkları 200-300 gram arasında değişen, toplam 24 adet Sprague-Dawley cinsi rat, eşit sayıda (n = 8) ve rastgele olarak 3 deney grubuna ayrıldı. Kontrol grubunda sadece anestezi uygulandı. İskemi-reperfüzyon (İR+SF) ve ozon gruplarında  sağ alt ekstremiteye turnike  ile 4  saat iskemi ve 2  saat reperfüzyon uygulandı. Ozon grubunda turnikenin açılmasıyla birlikte reperfüzyon sırasında 0.5mg\ kg ozon\ oksijen karışımı  İP olarak uygulandı. İ/R +SF ve ozon gruplarında reperfüzyon döneminin sonunda, kontrol grubunda ise aynı süre tamamlandıktan sonra, tüm ratlardan  intrakardiak 4-5cc kan, akciğer, sağ gastroknemius kası, karaciğer, kalp, böbrek  doku örnekleri alınarak sakrifiye edildi. Doku gruplarında biyokimyasal yöntemlerle  malondialdehit (MDA), redükte glutatyon (GSH) düzeyleri ve süperoksit Dismutaz (SOD), katalaz (KAT), miyeloperoksidaz (MPO), glutatyon peroksidaz (GSH-Px)  aktivitesi çalışıldı. Serum da ise   MDA, total sülfidril (total –SH) duzeyleri ve  SOD, KAT, GSH- Px aktivitesi ölçüldü. 
Bulgular: İR+SF grubunda plazma ve doku gruplarinda MDA düzeyi kontrol grubundaki  değerlere göre anlamlı artmış olarak bulundu (p<0.05). Ozon grubunda ise MDA düzeyi plazma ve böbrek dokusu hariç diğer dokularda İR+SF grubuna göre anlamlı azaldığı (p<0.05) tespit edildi. Doku grupları SOD aktivitesi  değerlendirilmesinde İR+SF grubuna göre ozon grubunda anlamlı azalma (p<0.05) tespit edildi. Doku grupları KAT enzim aktivitesinde kontrol, İR+SF ve ozon grupları arasında anlamlı fark tespit edilemedi (p>0.05). KC, kalp, böbrek ve gastroknemius  kas dokusunun ozon grubunda glutatyon düzeyi İR+SF grubuna göre anlamlı artmış olduğu  (p<0.05) saptandı. KC ve gastroknemius  kas dokusunun ozon grubunda MPO duzeyi İR+SF grubuna göre anlamlı azaldığı  (p<0.05)  tespit edildi. GSH-Px aktivitesi , KC ve kalp dokularının ozon grubunda İR+SF grubuna göre anlamlı arttığı (p<0.05)  saptandı.
Sonuç: Bu çalışmanın sonuçlarına dayanarak, alt ekstremite iskemi reperfüzyon hasarına bağlı lokal ve sistemik etkilerin azaltılmasında ozon tedavisinin etkili olduğu düşünülmektedir. Ancak Ozon tedavisinin yararlı etkilerinin hangi mekanizmalar ile oluştuğu ve bu tedavinin etkin olması için uygun dozun ayarlanabilmesi için yeni deneysel ve klinik çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
ANTIOXIDANT EFFECT OF OZONE THERAPY  ON EXPERIMENTAL  LOWER EXTREMITY ISCHEMIA REPERFUSION INJURY  IN RATS.
Objective
     The aim of this study was to examine the antioxidant effect of ozone therapy on local and systemic effects in experimental rat model of ischemia-reperfusion  injury  on lower  extremity. 
Material-Method 
 24 Female Sprague-Dawley rats, averaging 200-250 gm, in weight were used in this study. The rats were divided randomly into three equal (n:8) groups. Anesthesia was performed in the control group. Two hours reperfusion was carried out after four hours of right lower extremity ischemia using an established tourniquet model of limb ischemia in ischemia-reperfusion+ serum physiologic solution group  (IR+SF) and ozone group. 0.5 mg\kg ozone\oxygen mixture  was given by intraperitonealy  during reperfusion period in ozone group. At the end of the reperfusion period, all rats were sacrificed after blood and right gastrocnemius muscle, lung and liver, kidney and myokard tissue were harvested for biochemical examinations. Malondialdehit (MDA) and reduced glutathione (GSH) levels, myeloperoxidase (MPO), catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) activities were studied with biochemical methods. The levels of  MDA and total sulfhydryl, activities of GSH-Px, KAT, SOD were studied in serum.

Results
 Plasma and tissue groups MDA levels were increased in IR+SF group as compared with control group  (p<0.05). Liver, miyokard, lung and gastrocnemius muscle MDA levels were decreased  in ozone group as compared with  IR+SF group (p<0.05). Evaluation of  the tissue activities of SOD in ozone group were significantly lower than the activities in IR+SF group (p<0.05). Tissue and plasma activities of CAT enzyme of control, IR+SF and ozone  groups were compared, there was no found statisticaly significant difference (p>0.05). Liver, miyokard, kidney, gastrocnemius muscle glutatyon levels of ozone group  were  increased significantly as compared with IR+SF group ( p>0.05). Liver and gastrocnemius muscle MPO levels were decreased significantly in ozone group as compared with IR+SF group (p<0.05). The GSH-Px activity of liver and miyokard tissue in ozone group were significantly higher than the activities in IR+SF group (p<0.05).
Conclusion
    The results of this study indicate that ozone therapy has protective effects on local and systemic damage of  ischemia/reperfusion injury  of lower extremity. Further experimental and clinical studies related to the mechanisms of action of  ozone therapy are needed.