In vitro beyin iskemisi modeli olarak hipoksik SH-SY5Y hücrelerinde MGF'in ekspresyonu, HIF-1 alfa  ile ilişkisi ve nöroprotektif etkilerinin incelenmesi
Examining mgf expression, relation with hif-1 alpha and neuroprotective effect in hypoxic SH-SY5Y cells as in vitro brain ischemia model
Yazar: AYÇA OLCAY
Danışman: YRD. DOÇ. DR. KENAN ATEŞ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı / Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Beyin = Brain ; Beyin iskemisi = Brain ischemia ; Büyüme maddeleri = Growth substances ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; HIF-1a = HIF-1a ; Hipoksi = Hypoxia ; Serebrovasküler bozukluklar = Cerebrovascular disorders ; İnsülin benzeri büyüme faktörü I = Insulin like growth factor I ; İskemi = Ischemia

Özet:
İskemi dünyada en yaygın görülen ölüm nedenleri arasında ikinci sıradadır. Beyin iskemisi olan hastalar hayat kalitelerine zarar veren uzun süreli olan motor, algılama ve bilişsel hasarlar gösterir. Beyin iskemisinden sonra fonksiyonel geri kazanımı sağlayabilecek etkili bir tedavi henüz yoktur. İnsülin benzeri Büyüme Faktörü – 1 (IGF-1) omurgalı ve memelilerde hücre çoğalması, farklılaşması ve hayatta kalmasını teşvik eden önemli bir büyüme faktörüdür. IGF-1 geninin alternatif kırpılması sonucu oluşan varyantlardan biri olan MGF (Mechano Growth Factor)'in doku hasarının olmadığı normal koşullarda eksprese olmadığı beyinde ve kalpte iskemi koşullarında ekspresyonunun olduğu değişik gruplarca gösterildi. MGF'in doku hasarı olduğu durumlarda ve in vivo beyin iskemisi koşullarında eksprese olması, hücre kültüründe yaratılan beyin iskemisi modelinde de ekprese olabileceğini düşündürdü. HIF-1α proteinin de sadece hipoksi koşullarında görülmesi MGF ile ilişkili olma ihtimalini akla getirdi. Bu nedenle bu çalışmada kobalt klorid kullanılarak hipoksiye maruz bırakılmış SH-SY5Y hücrelerinde mRNA düzeyinde MGF ekspresyonu ve hipoksi koşullarında HIF-1 alfa ve MGF'in ilişkisini araştırmak için HIF-1 alfa'nın baskılandığı koşulda MGF ekspresyonu RT-PZR ve nicel PZR yöntemleriyle araştırıldı. Çalışmanın sonucunda hipoksi koşulunda mRNA düzeyinde MGF ekspresyonunun olduğu ve hipoksinin olmadığı koşullarda ise MGF ekspresyonunun olmadığı gösterilmiştir. Hipoksi koşullarında HIF-1 alfa inhibitörü uygulandığında MGF ekspresyonunda bir değişiklik gözlenmemiştir. Nicel PZR sonucunda MGF'e ek olarak 50 bp uzunluğunda bir bölge bulunmuştur ve dizileme yapıldığında bir sonuca ulaşılamamıştır. Elde edilen bulgular MGF'in in vitro beyin iskemisi koşullarında eksprese olduğunu ve HIF-1 alfa'nın MGF'in ekspresyonu üzerine etkili olmadığını desteklemektedir. MGF'in ekspresyonu ile ilgili yeni bilgilerin elde edilmesi MGF'in iskemi için yeni bir tedavi stratejisi olmasını destekleyecektir.

Abstract:
Ischemia is second disease at one of most common death reasons in the world. Patients who have brain ischemia shows detection and cognitive damage that harm them life quality. There isn't any effective treatment that can provide functional recovering. İnsulin-like Growth Factor-1 (IGF-1) which promote cell proliferation, differentiation and survival is a important growth factor. MGF that one of variants from resulting of alternatif splicing of IGF-1 gene don't express in normal conditions that don't have tissue damage  and express in ischemia of brain and heart was demonstrated by various research groups. MGF expression in vivo brain ischemia have thought that MGF can express brain ischemia model in cell culture. HIF-1 alpha whose protein exist in only hypoxic conditions may relate MGF. For this reason MGF expression and relation with HIF-1α in hypoxic condition were investigate by RT-PCR and quantitative RT-PCR techniques in SH-SY5Y cells exposed hypoxia with cobalt clorid in this study. MGF expression in mRNA level on hypoxic condition is available and doesn't exist on normoxia conditions was demonstrated in result of this study. Changes of MGF expression weren't observed when HIF-1 alpha inhibitor was treated on hypoxic condition. In addition MGF a band in 50bp length was found and sequencing result of this band is nonsense. Findings in this study demonstrated that MGF expression is available in vitro brain ischemia conditions and HIF-1 alpha has no effect in MGF expression. Obtaining new informations about MGF expression will support MGF to become a new treatment strategy in ischemia.