Diyabetik nefropatili hastalarda miR-184, miR-98, miR-185, miR-196a-3p ve miR-203 ekspresyon düzeyleri ve hastalık şiddeti ile ilişkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of miR-184, miR-98, miR-185, miR-196a-3P and miR-203 expression levels and relationship between disease aktivity in patients with diabetic nephropathy
Yazar: İSMET EROĞLU
Danışman: DOÇ. DR. HAKAN KORKMAZ
Süleyman Demirel Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Endokrinoloji ve Metabolizma Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases
Dizin: Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetik nefropatiler = Diabetic nephropathies ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hastalık şiddeti indeksi = Severity of illness index ; Mikro RNA = Micro RNA ; RNA = RNA ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Amaç: Çalışmamızın amacı diyabetik nefropati (DN)'si olan tip 2 diyabetes mellitus (T2DM) hastalarında miR-98, miR-184, miR-185, miR-203 ve miR-196a-3p ekspresyonlarında değişikliklerin olup olmadığını belirlemek ve bu mikroRNA'larda olası değişimlerinin hastalık şiddeti ile ilişkisini değerlendirmektir.
Gereç ve Yöntem: Çalışmaya kliniğimize başvuran 18-65 yaş arası 35 sağlıklı kişi, normoalbuminürili 40 T2DM hastası, mikroalbuminürili 40 T2DM hastası ve makroalbuminürisi olan 35 T2DM hastası alındı. Grupların metabolik laboratuvar parametreleri ölçüldü. Serum VEGF-A ve TGF-ß'nın seviyeleri enzim-linked immunosorbent assay yöntemi ile kantitatif olarak ölçüldü . miRNA ekspresyon düzeyleri Real-time PCR tekniği ile hesaplandı.
Bulgular: Makroalbuminüri ve mikroalbuminüri grupları normoalbuminüri ve kontrol gruplarına göre anlamlı olarak yüksek TGF-ß düzeylerine sahipti (herbiri için; p<0.001). 
Normoalbuminuri ve makroalbuminüri gruplarında kontrol grubuna göre miR-98 ekspresyonu anlamlı olarak downregüle saptandı (p=0.011). Makroalbuminüri ve mikroalbuminürisi olan DM gruplarında normoalbuminürisi olanlara göre miR-184 ekspresyonu anlamlı olarak downregüleydi (sırasıyla; p=0.003 ve p=0.010). MiR-185 ekspresyon düzeyleri açısından gruplar arasında anlamlı bir fark saptanmadı (herbiri için; p>0.05). MiR-196a-3p ekspresyon düzeyleri normoalbuminürik diyabetik grupta sağlıklı kontrol gruba göre down regüleydi. Makroalbuminüri ve mikroalbuminürisi olan diyabetik gruplarda miR-196a-3p ekspresyon düzeyleri normoalbuminürik diyabetik gruba göre  upregüleydi (sırasıyla; p=0.001 ve p=0.049). Ayrıca makroalbuminüri grubundaki miR-196a-3p upregülasyonu mikroalbuminüri grubuna göre daha belirgindi (p=0.017). MiR-203 ekspresyon düzeyleri makroalbuminüri grubunda mikroalbuminüri, normoalbuminüri ve kontrol grubuna göre anlamlı olarak upregüleydi (sırasıyla; p=0.001, p=0.001 ve p<0.001). Mikroalbuminüri grubundaki miR-203 ekspresyonu normoalbuminüri grubuna göre de upregüle oldugu saptandı (p=0.001). 
Logistik regresyon analizinde; miRNA-98, miRNA-203 ve miRNA-196a-3p'nin VKİ, VEGF ve TGF-ß ekspresyonundaki değişiklikler ile birlikte DN gelişiminde riski artıran bağımsız risk faktörleri olduğu tespit edildi. ROC analizi ile yapılan değerlendirme sonucunda  plazma miRNA-184, miRNA-196a-3p, miRNA-203, VEGF ve TGF-ß'nın  DN'yi öngörmede tanısal değeri olduğu görüldü (her biri için; p<0.05)
Sonuçlar: Serum miR-203, miR-196a-3p ve miR-184 ekspresyon düzeylerindeki değişiklikler DN gelişimi açısından bağımsız risk faktörleridir. Ayrıca bu miRNA'lar DN açısından tanısal bir marker olarak kullanılabilir. Serum miR-203 ve 196a-3p'nin ekspresyonlarının düzeylerinde ki artış DN progresyonu açısından risk oluşturabilir. 
Anahtar Kelimeler: Diyabetik Nefropati, VEGF, TGF-ß, MikroRNA

Abstract:
Aim: The aim of our study was to determine whether there were changes in miR-98, miR-184, miR-185, miR-203 and miR-196a-3p expressions in type 2 diabetes mellitus (T2DM) patients with diabetic nephropathy (DN) and to evaluate the relationship between possible changes in these microRNAs and disease severity.
Matherial and Method: The study included 35 healthy controls, 40 T2DM patients with normoalbuminuria, 40 T2DM patients with microalbuminuria and 35 T2DM patients with macroalbuminuria. Metabolic laboratory parameters of the groups were measured. Levels of VEGF-A and TGF-ß were quantitated by enzyme-linked immunosorbent assay. miRNA expression levels were calculated by Real-time PCR technique.
Results: Macroalbuminuria and microalbuminuria groups had significantly higher TGF-ß levels than normoalbuminuria and control groups (for each; p <0.001). 
In normoalbuminuria and macroalbuminuria groups, miR-98 expression was significantly downregulated compared to the control group (p = 0.011). In DM groups with macroalbuminuria and microalbuminuria, miR-184 expression was significantly downregulated compared to normoalbuminuria (p = 0.003 and p = 0.010, respectively).
There was no significant difference between the groups in terms of MiR-185 expression levels (for each; p> 0.05). MiR-196a-3p expression levels were down-regulated in normoalbuminuric diabetic group compared to healthy control group. In diabetic groups with macroalbuminuria and microalbuminuria, miR-196a-3p expression levels were upregulated compared to normoalbuminuric diabetic group (p = 0.001 and p = 0.049, respectively). Furthermore, miR-196a-3p upregulation in the macroalbuminuria group was more prominent than the microalbuminuria group (p = 0.017). MiR-203 expression levels were significantly upregulated in microalbuminuria group compared to macroalbuminuria, normoalbuminuria and control group (p = 0.001, p = 0.001 and p <0.001, respectively). MiR-203 expression in microalbuminuria group was upregulated compared to normoalbuminuria group (p = 0.001).
In logistic regression analysis; miRNA-98, miRNA-203 and miRNA-196a-3p were found to be independent risk factors that increased risk of DN development with changes in BMI, VEGF and TGF-ß expression. As a result of the evaluation made by ROC analysis; plasma miRNA-184, miRNA-196a-3p, miRNA-203, VEGF and TGF-ß were found to have diagnostic value in predicting DN (p <0.05 for each).
Conclusion: Changes in expression levels of serum miR-203, miR-196a-3p and miR-184 are independent risk factors for DN development. In addition, these miRNAs can be used as a diagnostic marker for DN. Increased levels of serum miR-203 and 196a-3p expression may pose a risk for DN progression.
Key Words: Diabetic Nephropathy, VEGF, TGF-ß, MicroRNA