Monosodyum ürat kristalleri ile indüklenen inflamasyon ko-kültür modelinde, endotel hücreleri üzerinde bortezomibin etkilerinin araştırılması
Investigation of the bortezomib effects on endothelial cellsin the inflammatory co-culture model induced by monosodium urate crystals
Yazar: AYŞE ÜNLÜ KÖSE
Danışman: PROF. DR. MİRİŞ DİKMEN
Anadolu Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Gut, monosodyum ürat (MSU) kristallerinin eklem ve çevresindeki yapılar içinde birikmesine yanıt olarak inflamasyon ile karakterize olan metabolik bir hastalıktır. 
	Tez çalışmasında NF-κB inhibitörlerinden bortezomibin MSU kristalleri ile indüklenen inflamatuar yanıt üzerindeki etkisi incelenmiştir. HUVEC ve THP-1 hücreleri kullanılarak in vitro gut ko-kültür modeli oluşturularak bortezomibin endotel hücrelerindeki hücre proliferasyonu ve migrasyonuna etkisi, apoptotik etkisi ve inflamasyondaki etkisi araştırılmıştır. Bortezomib ve MSU'nun, hücre canlılığına etkileri THP-1 ve HUVEC hücrelerinde MTT yöntemi ile gerçek zamanlı analiz sisteminde de ko-kültür ortamında HUVEC hücre proliferasyonuna etkileri araştırılmıştır. Bortezomibin endotel hücrelerindeki migrasyona etkisi gerçek zamanlı analiz sistemi ve çizik deneyi ile belirlenmiştir. Ko-kültür inflamasyon ortamında, bortezomibin HUVEC hücrelerinde apoptotik etkisi, kaspaz-3 aktivitesi ve mitokondriyal membran bütünlüğü ile NLRP3 inflamazomla da ilişkili TNF-α ve IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 sitokin miktarları akış sitometrisinde analiz edilmiştir. 
	Sonuç olarak bortezomibin MSU kaynaklı inflamasyonda konsantrasyona bağlı olarak antiinflamatuar etkileri belirlenmiştir. HUVEC hücre proliferasyonunun bortezomib konsantrasyon artışına bağlı olarak azaldığı görülmüş ve 24. saatteki IC50 değeri 0.127µM olarak hesaplanmıştır. Bortezomib in vitro gut modelinde apoptotik etkiyi ve kaspaz 3 aktivasyonunu artırmıştır. Özellikle bortezomib konsantrasyonuna bağlı olarak TNF-α, IL- 6, IL-8 düzeylerinde azalma ve IL-10'da artış görülmüştür. Elde edilen sonuçlar ışığında gut gibi inflamatuar hastalıkların tedavisinde bortezomibin terapötik bir madde olarak potansiyel kullanımının literatüre ön veriler kazandıracağını ve klinik ilaç tedavisinde alternatif bir bakış açısı sağlayacağını düşünmekteyiz.

Abstract:
Gout is a metabolic disease characterised by inflammation in response to the deposition of monosodium urate (MSU) crystals in joints and surrounding structures. 
	In this thesis, the effect of bortezomib, one of the NF-κB inhibitors, on the inflammatory response induced by MSU crystals was investigated. The effect of bortezomib on cell proliferation and migration, apoptotic effect and effect on inflammation in endothelial cells was investigated by creating an in vitro gout co-culture model using HUVEC and THP-1 cells. The effects of bortezomib and MSU on cell viability were investigated by MTT method in THP-1 and HUVEC cells and the effect in HUVEC cell proliferation in co-culture medium in real-time analysis system. The migration effect of bortezomib on endothelial cells was determined by real-time analysis system and scratch assay. In co-culture inflammation medium, the apoptotic effect of bortezomib on HUVEC cells, caspase-3 activity and mitochondrial membrane integrity, and the amounts of NLRP3 inflammasome-associated TNF-α and IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 cytokines were analyzed by flow cytometry. 
	As a result, concentration-dependent anti-inflammatory effects of bortezomib were determined in MSU-induced inflammation. It was observed that HUVEC cell proliferation decreased depending on the bortezomib concentration increase and IC50 value at 24th hour was calculated as 0.127µM. Bortezomib increased apoptotic effect and caspase-3 activation in vitro gout model. In particular, TNF-α, IL-6, IL-8 levels decreased and IL-10 level increased depending on the concentration of bortezomib. In the light of the results obtained, we think that the potential use of bortezomib as a therapeutic agent in the treatment of inflammatory diseases such as gout will provide preliminary data to the literature and provide an alternative perspective in clinical drug therapy.