Fisetin'in hücre çoğalması ve apoptoz üzerindeki etkisinin insan glioblastoma multiforme (T98G) hücre dizisinde araştırılması
Investigation of the fisetin effects on glioma cells proliferation and apoptosis
Yazar: FULYA PAK
Danışman: DOÇ. DR. AYŞE PINAR ÖZTOPCU VATAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Primer beyin tümörlerinin büyük bir kısmı glial kaynaklıdır ve bunların en tehlikeli türü glioblastoma multiforme (GBM)'dir.  Kemoterapide kullanılan ilaçların az sayıda olması ve kullanılan ilaçlara karşı kanserli hücrelerin direnç geliştirmesi tedaviyi oldukça zorlaştırmaktadır.  Fisetin, bitkilerde yaygın olarak bulunan doğal bir flavonoid çeşitidir.  Yapılan araştırmalarda çeşitli kanser hücrelerinin çoğalmasını baskıladığı ve farklı mekanizmalarla apoptotik hücre ölümüne neden olduğu belirlenmiştir.

Çalışmada ilk olarak 1, 50, 100, 200, 300, 400 ve 500 µM fisetin dozlarının T98G hücre morfolojisi üzerindeki etkileri ters ışık mikroskobu ile belirlenirken, hücre çoğalması üzerindeki etkileri MTT yöntemi ile incelenmiştir.  24 ve 48 saatteki IC50 değerleri sırasıyla, 93 ve 75 μM olarak hesaplanmıştır.  Fisetinin normal hücreler üzerindeki morfolojik ve sitotoksik etkilerini belirlemek ve T98G hücreleri ile karşılaştırmak için BEAS-2B hücreleri kullanılmıştır.  24 ve 48 saatteki IC50 değerleri sırasıyla 270 ve 90 μM olarak hesaplanmıştır.  Seçilen fisetin dozlarının her iki hücrede de, apoptotik fragmentasyonu nekrotik orana kıyasla daha fazla arttırdığı belirlenmiştir.  T98G hücrelerinde 25 ve 50 μM fisetin dozlarının apoptozla ilgili KASPAZ 3, 9, 8 ve BAX genlerinin ifadesini artırırken, BCL-2 ve SURVIVIN genlerinin ifadesini azalttığı gözlenmiştir.  BEAS-2B hücrelerinde ise KASPAZ 3, 9, 8, BAX, BCL-2 ve SURVIVIN genlerinin ifadesini 50 μM dozunda arttırırken, 100 ve 200 μM dozlarında azalttığı tespit edilmiştir.  Ayrıca fisetinin T98G hücrelerinde yarattığı morfolojik değişiklikler TEM mikroskobuyla incelenmiştir. 

Çalışmada, fisetinin glioma hücrelerinde doza ve zamana sitotoksik ve apoptotik bir etkiye sahip olduğu ilk kez belirlenmiştir.  Ayrıca normal hücreler ile karşılaştırıldığında fisetinin sitotoksik ve apoptotik etkilerinin glioma hücrelerinde daha güçlü olduğu tespit edilmiştir.  Çalışma sonuçlarının fisetinin ileride glioma tedavisinde kullanılabilir bir ilaç olarak geliştirilmesinde yapılacak olan in vivo ve in vitro çalışmalara öncülük edeceğini düşünmekteyiz.

Abstract:
A large number of primary brain tumors are glial tumors and glioblastoma multiforme (GBM) is the most dangerous group of them.  Cancer cells which develop resistance to chemotherapy drugs and a small number of used drugs cause difficulties on cancer therapy.  Fisetin is a natural flavonoid.  Previous studies have been reported that fisetin inhibit proliferation and induce apoptosis in several cancer types.

In our research, first we investigated the antiproliferative and morphology effects of 1, 50, 100, 200, 300, 400 and 500 µM doses of fisetin by inverted light microscope and MTT assay.  The IC50 values of fisetin for 24 and 48 h are; 93 and 75 μM on T98G cells respectively.  After BEAS-2B cells used to compare with morphological and T98G cells to the cytotoxic effects on normal cells of the fisetin.  The IC50 values of fisetin for 24 and 48 h are; 270 and 90 μM on T98G cells respectively.  Selected fisetin doses have increased DNA fragmentation on both cell lines, apoptotic was greater than necrotic fragmentation.  We observed that the expression of apoptotic process related genes; CASPASE 3, 9, 8, BAX were increased while BCL-2 and survivin was reduced by selected doses of 25 and 50 μM fisetin in T98G cell lines.  We observed that the expression of genes; CASPASE 3, 9, 8, BAX, BCL-2 and SURVIVIN were increase the dose of 50 μM, it was found to decrease from 100 and 200 μM doses of fisetin in BEAS-2B cell line.  Finally, it is observed that alterations of T98G cell morphology treated with fisetin by transmission electron microscopy (TEM).

Consequently, depending on dose and time of fisetin in T98G cells were determined first to be stronger cytotoxic and apoptotic effects than normal cells.  The results in the treatment of glioma cancer, we believe that it will lead to in vivo and in vitro studies, which will be held in the future.