Sıçan meme kanser modelinde nar ekstresi ve tangeretin'in koruyucu etkinliği
Protective effectiveness of pomegranate extract  and tangeretin on rat breast cancer model
Yazar: HÜSEYİN FATİH GÜL
Danışman: PROF. DR. NECİP İLHAN
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Dimetilbenzantrasen = Dimethylbenzanthracene ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Nar = Pomegranate ; Nar suyu = Pomegranate juice ; Neoplazmlar-deneysel = Neoplasms-experimental ; Sıçanlar = Rats ; Tangeretin = Tangeretin

Özet:
Dünyada olduğu gibi Türkiye'de de kadınlarda en yaygın görülen kanser türü olan meme kanseri hala en önemli sağlık problemlerinden biridir. Bu çalışmada, DMBA ile oluşturulan sıçan meme kanser modelinde nar ekstresi ve tangeretin'in tek başlarına ya da birlikte uygulanmalarının koruyucu etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Çalışmamızda 8-10 haftalık, toplam 68 adet dişi sıçan, randomize olarak 8 gruba ayrıldı. İlk 4 grup kanser ve tedavi gruplarının kontrolleri olarak tasarlandı ve sırası ile Kontrol, Pomegranat (P), Tangeretin (T) ve Pomegranat+Tangeretin (P+T) gruplarından oluşturuldu. Diğer 4 grup ise kanser ve tedavi grupları olarak tasarlandı ve sırasıyla DMBA (D) ve DMBA+Pomegranat (D+P), DMBA+Tangeretin (D+T), DMBA+Pomegranat+Tangeretin (D+P+T) gruplarından oluşturuldu. 23 hafta süren uygulamalar sonunda sakrifiye edilen sıçanlardan elde edilen plazma numunelerinden tümör belirteçleri ve anjiyogenez parametreleri çalışıldı. Meme doku numunelerinde ise histopatolojik, immunohistokimyasal ve TUNEL analizleri, oksidan-antioksidan düzey ölçümleri, apopitozise ve hücre siklusuna etki eden spesifik proteinlerin ekspresyonları gerçekleştirildi. 
Histopatolojik olarak DMBA grubunda % 71,42 oranında tümör tutulum insidansı izlenirken tedavi gruplarında bu oranın düştüğü tespit edildi. DMBA grubunda, kontrollere göre plazma CA15-3, CEA, VEGF, MMP-9 ve NF-κB düzeylerinde anlamlı artışlar gözlenirken, tedavi gruplarında ise MMP-9 hariç bu parametrelerde anlamlı azalmalar saptanmıştır. Kontrol grubuna kıyasla DMBA grubunda doku MDA düzeyleri anlamlı artarken, SOD, CAT, GSH-Px aktiviteleri ve GSH düzeyleri anlamlı olarak azalmıştır. DMBA grubu ile tedavi grupları karşılaştırıldığında ise doku MDA düzeyleri sadece D+P+T grubunda anlamlı azalırken, antioksidan parametrelerden de sadece GSH düzeyleri tüm tedavi gruplarında anlamlı olarak artmıştır. Apopitotik belirteçlerden p53 ve Bax ekspresyonları kontrole göre DMBA grubunda anlamlı azalırken Bcl-2, β-katenin ve Siklin D1 ekspresyonlarının ise anlamlı olarak arttığı gözlenmiştir. DMBA grubuna göre p53 ve Bax ekspresyonlarının hem D+P hem de D+P+T gruplarında anlamlı arttığı gözlemlenirken bu bulgular TUNEL ve immunohistokimyasal bulgular ile desteklenmiştir. Siklin D1 ekspresyonlarının ise sadece D+T grubunda anlamlı olarak düştüğü tespit edilmiş, TUNEL ve immunohistokimyasal bulgular ile desteklenmiştir. İmmunohistokimyasal ER-α ve Ki-67 immun reaktiviteleri DMBA grubunda kontrole göre anlamlı olarak artarken, tedavi gruplarının tümünde ise anlamlı azalmalar saptanmıştır.
Çalışma sonuçlarımız, Nar ekstresi ve Tangeretin'in kombine uygulanmasının meme kanseri gelişimini engellemede daha faydalı olabileceğini göstermiştir. 
Anahtar kelimeler: DMBA, Nar Ekstresi, Tangeretin, Meme Kanseri, Kemopreventif

Abstract:
Breast cancer, which is the most common type of cancer in women in Turkey as well as in the world, is still one of the most important health problems. In this study, it was aimed to investigate the protective effects of pomegranate extract and tangeretin, both alone and in combination, on a DMBA-induced rat breast cancer model. 
In this study, a total of 68 female rats aged 8-10 weeks were randomly divided into 8 groups. The first 4 groups were designed as the controls of cancer and treatment groups and were composed of the Control, Pomegranate (P), Tangeretin (T) and Pomegranate+Tangeretin (P+T) groups, respectively. The other 4 groups were designed as cancer and treatment groups and were composed of the DMBA (D) and DMBA+Pomegranate (D+P), DMBA+Tangeretin (D+T), DMBA+Pomegranate+Tangeretin (D+P+T) groups, respectively. Tumor markers and angiogenesis parameters were studied from plasma samples obtained from the rats sacrificed at the end of the 23-week treatment. In breast tissue samples, histopathological, immunohistochemical and Tunnel analyses, oxidant-antioxidant level measurements, and the expressions of specific proteins acting on apoptosis and cell cycle were performed.
Histopathologically, while there was a 71.42 % incidence of tumor involvement in the DMBA group, it was determined that this ratio decreased in the treatment groups. While significant increases were observed in plasma CA15-3, CEA, VEGF, MMP-9 and NF-κB levels in the DMBA group compared to controls, significant decreases were found in these parameters except for MMP-9 in the treatment groups. While tissue MDA levels significantly increased in the DMBA group compared to the control group, SOD, CAT, GSH-Px activities and GSH levels significantly decreased. When the DMBA group and the treatment groups were compared, MDA levels significantly decreased only in the D+P+T while only the GSH levels of antioxidant parameters significantly increased in all treatment groups. While p53 and Bax expressions of apoptotic markers significantly decreased in the DMBA group compared to the control group, it was observed that Bcl-2 β-Catenin and cyclin D1 expressions significantly increased. It was observed that p53 and Bax expressions significantly increased in both D+P and D+P+T groups compared to the DMBA group, and these findings were supported by Tunnel and immunohistochemical findings. Cyclin D1 expressions were determined to significantly decrease only in the D+T group, which was supported by Tunnel and immunohistochemical findings. Immunohistochemical ER-α and Ki-67 immunoreactivities significantly increased in the DMBA group compared to the control group, but significant decreases were determined in all of the treatment groups.
Our study results have shown that the combined administration of Pomegranate extract and Tangeretin may be more beneficial in preventing breast cancer development. 
Keywords: DMBA, Pomegranate Extract, Tangeretin, Breast Cancer, Chemopreventive