Acacia nilotica (L.)  metanolik yaprak ekstraktının anti-kanser potansiyelinin A549 ve H1299 hücre hatlarında araştırılması
Investigation of anti-cancer potential of acacia nilotica (L.) methanolic leaf extract in A549 and H1299 cell lines
Yazar: ABDELAZIZ ASSOUYOUTI
Danışman: DOÇ. DR. ÖZGÜR VATAN
Bursa Uludağ Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Akasya = Acacia ; Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Antikanser = Anticancer ; Comet tekniği = Comet assay ; Mikrobiyolojik yöntem = Microbiological method

Özet:
Kanser, dünyanın birçok ülkesinde önde gelen ölüm nedenlerinden biri olmakla birlikte yaşam süresinin artmasının önünde önemli bir engel olarak yer almaktadır. Günümüzde, kanser gibi hastalıklara karşı yeni ilaçlar geliştirmek için çeşitli bitkisel ürünlerin araştırılması artarak devam etmektedir. Son yıllarda, çeşitli bitkisel ürünlerin farklı kanserlere karşı umut verici anti-kanser etkinliği gösterilmiştir. Bu bağlamda tez çalışmasında, özellikle subtropik coğrafyada halk arasında tıbbi amaçlar için kullanımı yaygın olan, Acacia nilotica (L) bitkisinin yapraklarından elde edilen metanolik ekstraktlarının anti-kanser potansiyellerinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaca yönelik olarak, Akciğer kanseri hücre hatları olan A549 ve H1299 hücrelerinde sitotoksisitenin belirlenebilmesi için XTT ve Klononjenik testler, hücre ölüm modunun belirlenebilmesi için Annexin-V, DNA hasarlarının belirlenebilmesi için Komet yöntemi ve DNA hasar etmenlerinin belirlenebilmesi için hücre içi ROS testleri uygulanmıştır.  

XTT testi sonucunda A. nilotica yaprak metanolik ekstraktlarının A549 ve H1299 hücreler hatlarındaki IC50 değerleri sırasıyla 616,66 ± 11,71 µg/ml ve 198,05 ± 14,48 µg/ml olarak hesaplanmıştır. Klonojenik testte ise bu değerler A549 ve H1299 hücreleri için sırasıyla 212,66 µg/ml ve 56,06 µg/ml olarak belirlenmiştir. Komet testinde ise XTT testinden elde edilen IC12,5, IC25, IC50 ve IC75 değerlerinde maruz bırakılan A549 ve H1299 hücre hatlarında kuyruk uzunluğu, kuyruk % DNA ve olive kuyruk momenti hesaplanmış ve elde edilen sonuçlarda DNA iplik kırıklarında kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı artışlar olduğu belirlenmiştir. ROS testi sonuçları ise A. nilotica yaprak metanolik ekstraktının IC12,5, IC25, IC50 ve IC75 konsantrasyonlarına maruz bırakılan A549 ve H1299 hücrelerinde ekstraktların, hücre içi ROS düzeylerinde kontrol gruplarına göre istatistikî olarak anlamlı artışlara yol açtığı belirlenmiştir. Annexın-V testin sonuçları ise A. nilotica ekstraktın IC12,5, IC25, IC50 ve IC75 değerlerine 24 saat maruz bırakılan A549 ve H1299 hücrelerinde A. nilotica ekstraktının hücreleri apoptoza götürmediğini ve doğrudan nekroza sebep olduğunu belirlenmiştir.

Abstract:
Cancer is a leading cause of death and a significant obstacle to increasing life expectancy in every country in the world. Today, research into various plant-based products is ongoing to develop new drugs for diseases such as cancer.
In recent years, various herbal products have shown promising anticancer activity against different cancers. In this context, the thesis study is aimed to investigate the anticancer potential of methanolic extracts obtained from the leaves of the Acacia nilotica (L) plant, which is widely used for medicinal purposes, especially in subtropical geography For this purpose, XTT and Clonogenic assay were used to assess cytotoxicity in lung cancer cell lines A549 and H1299 cells, Annexin-V to determine the cell death mode, Comet assay to determine DNA damages, and intracellular ROS assay to determine DNA damage factors. 

As a result of the XTT assay, IC50 values in A549 and H1299 cell lines obtained from A. nilotica leaf methanolic extract are calculated as 616.66 ± 11.71 µg/ml and 198.05 ± 14.48 µg/ml, respectively. The clonogenic test determined these values as 212.66 µg/ml and 56.06 µg/ml for A549 and H1299 cell lines, respectively. In the comet assay, tail length, tail % DNA, and olive tail moment are calculated in A549 and H1299 cell lines after exposure to IC12.5, IC25, IC50, and IC75 values obtained from the XTT test. The results indicated a statistically significant increase in DNA strand breaks compared to the control group. The results of the ROS assay showed that methanolic extract of A. nilotica leaves induced statistically significant increases in intracellular ROS levels in A549 and H1299 cell lines exposed to IC12.5, IC25, IC50 and IC75 concentrations compared to the control groups. The results of the Annexin-V assay showed that A. nilotica extract did not induce apoptosis and directly induced necrosis in A549 and H1299 cell lines exposed to IC12.5, IC25, IC50, and IC75 concentrations for 24 hours.