İnflamatuvar bağırsak hastalığı olan hastalarda Blastocystis spp'nin direkt mikroskopi ve moleküler yöntemle araştırılması
Investigation of Blastocystis spp. in patients with inflammatory bowel disease by direct microscopy and molecular methods
Yazar: FERİDE ŞENTÜRKOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. SALİH MAÇİN
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Blastocystis = Blastocystis ; Blastocystis enfeksiyonları = Blastocystis infections ; Crohn hastalığı = Crohn disease ; Gastrointestinal hastalıklar = Gastrointestinal diseases ; Kolit-ülseratif = Colitis-ulcerative ; Mikroskopi = Microscopy ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; İnflamatuar bağırsak hastalıkları = Inflammatory bowel diseases

Özet:
Bu çalışmanın amacı; İBH tanılı hastalarda Blastocystis spp. varlığını araştırmak ve İBH ile Blastocystis spp. arasında anlamlı bir ilişkinin, var olup olmadığını tespit etmektir. Ayrıca Blastocystis'in laboratuvar tanısında kullanılan direkt mikroskobik inceleme (DM) ve moleküler yöntem (polimeraz zincir reaksiyonu; PZR) sonuçlarının karşılaştırılması amaçlanmıştır. İnflamatuvar Bağırsak Hastalığı (İBH); Crohn Hastalığı (CH) ve Ülseratif Kolit (ÜK) gibi hastalıkları tanımlamaktadır. İBH, GIS'in çeşitli bölge ve katmanları ile birlikte ekstraintestinal organları da etkileyebilir. İnflamatuvar Bağırsak Hastalığının etyolojisi, hala belirsizliğini korumaktadır. Ancak, hastalığın gelişiminde ve ortaya çıkmasında; genetik, çevresel ve immünolojik faktörlerin rol aldığı kabul görmektedir.
Blastocystis spp. insan ve hayvan konakçıların bağırsak sisteminde yaşayan tek hücreli, anaerobik, ökaryotik bir protozoon parazittir. Gelişmekte olan ülkelerdeki insan dışkı örneklerinde sıklıkla saptanmaktadır.
Selçuk Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Gastroenteroloji Polikiniği'ne başvuran 25 Crohn hastası ve 30 ülseratif kolit hastası ile İnflamatuvar Bağırsak Hastalığı bulunmayan 30 sağlıklı birey çalışmaya dahil edildi. Dışkı örneklerinden, nativ-lugol yöntemi kullanılarak direkt mikroskobik inceleme yapıldı ve Blastocystis spp.' nin morfolojik formlarının herhangi birinin görülmesi ile sonuç pozitif olarak kabul edildi. Moleküler tanı için DNA izolasyonu yapıldı, sonra bu izolatlar ile gerçek zamanlı PZR çalışması yapılarak Blastocystis spp. DNA'sının varlığı araştırıldı.
Çalışmamızda CH olan dışkı örneklerinden 1'i, ÜK olan dışkı örneklerinden 5'i, kontrol grubundan ise 1'i mikroskopi yöntemiyle Blastocystis spp. varlığı açısından pozitif saptandı. PZR yöntemiyle yapılan incelemede ise, CH olan dışkı örneklerinden 1, ÜK olan dışkı örneklerinden 7, kontrol grubundan ise 1 örnekte pozitif olgu saptandı.
Elde edilen sonuçlara göre; ülseratif kolitli hastalarda Blastocystis spp. görülme sıklığı (%23.3) olarak belirlenmiş olup, Crohn'lu hastalar (%4) ve sağlıklı kontroller (%3.3) ile karşılaştırıldığında, anlamlı şekilde yüksek olduğu görülmüştür. Blastocystis'in rutin laboratuvar tanısında, direkt mikroskopi yönteminin rutin tanıda yeterli olduğu ancak PZR gibi ikinci bir yöntemin de tanıya katkı sağlayacağı düşünülmektedir.

Abstract:
The aim of this study is to investigate the presence of Blastocystis spp. in patients diagnosed with IBD and to determine whether there is a significant relationship between IBD and Blastocystis spp. In addition, it is aimed to compare the results of direct microscopic examination (DM) and molecular method (polymerase chain reaction; PCR) used in the laboratory diagnosis of Blastocystis. Inflammatory Bowel Disease (IBD); It defines diseases such as Crohn's Disease (CH) and Ulcerative Colitis (UC). IBD can affect various regions and layers of the GIS as well as extraintestinal organs. The etiology of IBD still remains unclear. However, it is accepted that genetic, environmental and immunological factors play a role in the development and emergence of the disease.
Blastocystis spp. is a unicellular, anaerobic, eukaryotic protozoan parasite that lives in the intestinal tract of human and animal hosts. It is frequently detected in human fecal samples in developing countries.
25 patients with Crohn's disease, 30 patients with ulcerative colitis and 30 healthy individuals without IBD who applied to Gastroenterology Polyclinic of Selcuk University Medical Faculty Hospital were included in the study. Direct microscopic examination was performed from the stool samples using the native-lugol method, and the result was considered positive when any of the morphological forms of Blastocystis spp. were detected. DNA isolation was performed for molecular diagnosis, then real-time PCR was performed with these isolates and the presence of Blastocystis spp. DNA was investigated.
In our study, 1 of the stool samples with CD, 5 of the stool samples with UC, and 1 from the control group were found positive for the presence of Blastocystis spp. by microscopy. In the examination performed by PCR method, positive cases were detected in 1 sample from stool samples with CD, 7 samples from stool samples with UC, and 1 sample from the control group.
According to the results obtained; the incidence of Blastocystis spp. was determined as (23.3%) in patients with ulcerative colitis and was significantly higher when compared to patients with Crohn's (4%) and healthy controls (3.3%). In the routine laboratory diagnosis of Blastocystis, it is thought that the direct microscopy method is sufficient for the routine diagnosis, but a second method such as PCR will also contribute to the diagnosis.