Sodyum floroseinin glioblastoma hücre kültürleri üzerine etkisi
Effects of sodium fluoroscein on glioblastoma cell cultures
Yazar: SERDAR ONUR AYDIN
Danışman: PROF. DR. İHSAN SOLAROĞLU ; PROF. DR. TUFAN HİÇDÖNMEZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Beyin-Sinir ve Omurilik Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery

Özet:
Amaç
Florosein Sodyum (FL), özellikle oftalmolojik alanlarda kullanılan ve cerrahi sırasında tümör dokusu ile normal dokuyu ayırt etmek için kullanılmıştır. Kan beyin bariyerinin bozulduğu bölgelere geçme özelliği sayesinde nöroşirürji alanında da tümör dokusunu beyin dokusundan ayırt etmek ve total tümör rezeksiyon oranlarını arttırmak için kullanılır olmuştur.
Cerrahi sırasında FL ile boyanan bölgeler tümör kabul edilip çıkarılmaktadır. Primer hücre kültürü oluşturmak için yapılan tümör cerrahilerinde hücre kültürü için alınan örnekler de dolayısıyla FL ile boyanmaktadır. Ancak FL'un glioblastoma hücre kültürlerine etkisinin olup olmadığı bilinmektedir. 
Çalışmamızın amacı FL'nin glioblastoma hücre kültürlerine herhangi bir etkisinin olup olmadığının araştırılması ve ortaya çıkarılmasıdır.

Materyal ve Metod

Çalışmamızda insan glioblastoma LN229, T98G ve A172 hücreleri kullanılacak olup glioblastoma hücre hatları Koç Üniversitesi Tıp Fakültesi, Beyin Kanser Araştırma ve Tedavi Laboratuarı hücre hatları stokundan temin edildi
Standart hücre kültürü işlemleri uygulanarak büyütülen hücrelerde kontrol grupları oluşturarak aynı koşullarda FL'a maruz bırakılan hücreler ile kontrol grupları arasında: hücre sayılarındaki farklar, hücre canlılık analizleri, hücresel yaşlanma – Beta Galatosidaz analizi, çalışmada kullanılan hücrelere ait mikroskop görüntüleri incelendi. 

Bulgular

Glioblastoma hücre serileri kültürlerde büyütülmüş ve FL eklenerek çeşitli deneylere tabi tutulmuşlardır. Öncelikle hücre sayıları hesaplanmış ve hücre sayılarındaki günlük artışı ortaya konmuştur. Yapılan hesaplamalar sonucu kontrol grubuyla karşılaştırıldığında FL eklenen grubun hücre sayılarının daha düşük olduğu görülmüştür. 
FL eklenen T98G glioblastoma hücrelerinde aktin boyama yaparak hücre içi iskelet yapısı değerlendirlmiştir. T98G hücre serilerinde hücre içi aktin yapısı ile ilgili konfokal mikroskopla alınan görüntülere göre herhangi bir değişiklik izlenmemiştir. Hücre içine girmediği için herhangi bir değişiklik izlenmediği düşünülmüştür.
Hücresel yaşlanma – beta galaktosidaz testi ile hücrelerin FL eklendiğinde yaşlanmalarında bir değişiklik olup olmadığı test edilmiş ve FL inkübasyonu sonrası glioblastoma hücrelerinde daha fazla senesens (hücresel yaşlanma) olduğu görülmüştür.

Sonuç
FL ile glioblastoma rezeksiyonu yapılan hastalarda primer hücre kültürü çalışılması durumunda yapılacak olan örneklemenin FL ile boyamanın olmadan yapılması hücrelerin yaşaması için en uygun koşulların oluşturulması açısından faydalı olabilir. Ancak tümör hücrelerinin içine geçmemesi ve hücre canlılığına bir etkisi olmaması sebebiyle de toksik bir etkiye neden olmadığı da gösterilmiştir.

Abstract:
Aim
Fluorosein Sodium (FL) has been used especially in ophthalmological fields to differentiate tumor tissue and normal tissue during surgery. It has also been used in the field of neurosurgery to distinguish tumor tissue from brain tissue and to increase total tumor resection rates.
During surgery, FL-stained areas are accepted as tumors. The specimens taken for cell culture in tumor surgeries made to produce the primer cell culture are therefore also stained with FL. However, it is not known that FL has an effect on glioblastoma cell cultures.
The aim of our study is to investigate and determine whether FL has any effect on glioblastoma cell cultures.

Materials and Methods

In our study, human glioblastoma LN229, T98G and A172 cells will be used and glioblastoma cell lines were obtained from the cell line stock of the Koç University Medical School, Brain Cancer Research and Treatment Laboratory.
Differences in cell numbers, cell viability assays, cellular aging - Beta Galactosidase assays, microscope images of the cells used in the study were examined between cells exposed to FL under the same conditions and control groups.




Results

Glioblastoma cell lines were grown in cultures and subjected to various experiments by adding FL. First, cell numbers were calculated and the daily increase in cell numbers was revealed. Compared with the end result of the control group, the number of the cells in the FL group was found to be lower. The intracellular skeletal structure was assessed by actin staining in T98G glioblastoma cells supplemented with FL. No changes were observed in the T98G cell lines relative to images taken with confocal microscopy of intracellular actin structure. Since it does not enter the cell, it is thought that no changes are observed. Cell aging-beta galactosidase test was used to test for changes in senescence when cells were added FL and it was found that there was more senescence (cellular aging) in glioblastoma cells after FL incubation.

Conclusion

In the case of primary cell culture studies in patients with FL and glioblastoma resection, it may be useful to construct the samples without FL staining in order to establish optimal conditions for cell survival. However, it has also been shown that it does not cause toxic effects because it does not migrate into tumor cells and has no effect on cell viability.