Ratlarda dietilnitrozamin ile oluşturulan karaciğer kanserinde theranekron ve kemoterapi uygulamalarının; Karsinogenezis, apoptozis ve biyokimyasal profile etkilerinin karşılaştırılmalı değerlendirilmesi
Comparative evaluation of the effects of theranechron and chemotherapy applications on carcinogenesis, apoptosis and biochemical profile in diethylnitrosamine-induced liver cancer in rats
Yazar: SERDAR VANLI
Danışman: PROF. DR. FİRUZE KURTOĞLU
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Dietilnitrozamin = Diethylnitrosamine ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Karaciğer neoplazmları = Liver neoplasms ; Karsinogenez = Carcinogenesis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sıçanlar = Rats ; Theranekron = Theranekron ; İmmünoterapi = Immunotherapy

Özet:
Hepatoselüler karsinoma (HCC), kanser türleri arasında en sık görülen altıncı ve kansere bağlı ölüm açısından üçüncü sırada olan kanser türüdür. HCC'de; etkili, sistemik ve hedefe yönelik tedavilerin yetersiz kalması nedeniyle prognoz kötüdür. Theranekron veteriner hekimlikte yaygın bir şekilde kullanılan antikanser ve antienflamatuvar özelliklere sahip homeopatik bir ilaçtır. Theranekron'un papilloma, kolon kanseri ve meme adenokarsinoması üzerine yapılan çalışmalarında göstermiş olduğu antikanser özelliğini hangi mekanizmalarca gerçekleştirdiği belirsizdir. Bu çalışmada; Dietilnitrozamin ve N-Nitrozomorfolin ile hepatosellüler karsinomada oluşturulmuş ratlarda tek başına Theranekron ve Sorafenib tedavisi ile Theranekron-Sorafenib kombine tedavisinin biyokimyasal parametrelerle araştırılması, etkinliklerinin karşılaştırılması ve kombine uygulamanın immünoterapi benzeri bir etki oluşturup oluşturamayacağı araştırılmıştır.  
Çalışmada Granzim B, kaspaz-3, p21 düzeyleri ile karaciğer fonksiyonu ve metabolizma göstergeleri için ALT, AST, GGT, glikoz, trigliserit ve üre düzeyleri ölçülmüş, karaciğer dokularında histopatolojik incelemeler yapılmıştır. Granzim B,  kaspaz-3 ve p21 düzeylerinde; Theranekron, Sorafenib ve Theranekron+Sorafenib tedavi gruplarında kanser grubuna göre yüksek değerler elde edilmiştir. Kanser grubunda; ALT, AST, GGT, trigliserit ve glikoz düzeylerinin yükseldiği, üre değerleri düştüğü, tedavi gruplarında kanser grubuna göre AST, ALT, GGT, trigliserit ve glikoz düzeyleri düşük, üre seviyeleri ise yüksek bulunmuştur. Theranekron+Sorafenib tedavi grubunda ise tüm değerlerde belirgin olarak normal kan sınırları tespit edilmiştir. Karaciğer dokusunda değişimler daha sınırlı (P<0.05) düzeyde kalmış; sadece granzim B değerleri önemli değişim göstermiştir (P<0.05). Hepatosellüler karsinoma tedavisinde Theranekron'un etkinlik mekanizmasının Doğal Katil Hücreleri ve/veya Sitotoksik CD8+T lenfositlerin aktivasyonu sonucu apoptozu uyarması olduğu tespit edilmiştir. Histopatolojik değerlendirmede; kanser grubunda kanserli alanlar sağlam karaciğer dokusundan ayrılmış ve kanser hücrelerinde; çekirdek sitoplazma oranının arttığı, iyi diferensiye, kolunmar, atipi, nükleer polimorfizme sahip olduğu görülmüştür. Tedavi gruplarındaki vakalarda kanser hücreleri ve oluşturduğu yapılar kanserli gruba benzer fakat görülme sıklığı ve büyüklüklerinde azalma görülmüştür. Sonuç olarak, Theranekron'un gelecekteki ilaç tasarımı için bir anti-HCC ajanı olabileceği ve kemoterapi ilaçları ile kombine kullanılabileceği söylenebilir. Daha da önemlisi, elde edilen sonuçlar Sorafenib'i immünoterapi benzeri etki oluşturan Theranekron ile birleştirmenin bilimsel gerekçesini sağlamakta ve Theranekron'un immünregülasyon etkisi ile Sorafenib'in "hedef dışı" bağışıklık sistemi stimülasyonunun etkisini ortaya çıkarmıştır. Sorafenib ve Theranekron kombine tedavisi, HCC'li hastalarda antitümör bağışıklığını yeniden harekete geçirmek ve antitümör yanıtlarının büyüklüğünü ve dayanıklılığını iyileştirmek için potansiyel olarak sinerji oluşturabilir. 

Anahtar Sözcükler: Granzim B, immünoterapi, HCC, Theranekron, DEN

Abstract:
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the sixth most common cancer type and the third most common cancer type in terms of cancer-related death. in HCC; The prognosis is poor due to the inadequacy of effective, systemic and targeted therapies. Theranekron is a homeopathic medicine with anticancer and anti-inflammatory properties that is widely used in veterinary medicine. It is unclear by which mechanisms Theranekron achieves its anticancer properties, which it has shown in studies on cancer cell lines, papilloma, colon cancer and breast adenocarcinoma. In this study; It was investigated whether the combination of Theranekron and Sorafenib treatment alone and the combination of Theranekron-Sorafenib treatment in rats formed in hepatocellular carcinoma with diethylnitrosamine and N-Nitrosomorpholine was investigated with biochemical parameters, their efficacy was compared, and whether the combined application could create an immunotherapy-like effect.
In the study, Granzyme B, caspase-3, p21 levels, liver function and metabolism indicators, ALT, AST, GGT, glucose, triglyceride and urea levels were measured and histopathological examinations were made in liver tissues. Granzyme B, caspase-3 and p21 levels; Higher values were obtained in Theranekron, Sorafenib and Theranekron+Sorafenib treatment groups compared to the cancer group. In the cancer group; It was found that ALT, AST, GGT, triglyceride and glucose levels increased, urea values decreased, AST, ALT, GGT, triglyceride and glucose levels were lower in the treatment groups compared to the cancer group, and urea levels were higher. In the Theranekron+Sorafenib treatment group, all values were clearly normal in blood limits. Changes in liver tissue remained more limited (P<0.05); only granzyme B values showed significant changes (P<0.05). It has been determined that the mechanism of action of Theranekron in the treatment of hepatocellular carcinoma is to induce apoptosis as a result of the activation of Natural Killer Cells and/or Cytotoxic CD8+T lymphocytes. In histopathological evaluation; In the cancer group, the cancerous areas were separated from the healthy liver tissue and in cancer cells; It was observed that the ratio of nuclei to cytoplasm increased, well differentiated, columnar, atypia, and nuclear polymorphism. In the cases in the treatment groups, the cancer cells and the structures they formed were similar to the cancerous group, but their incidence and size decreased. As a result, it can be said that Theranekron can be an anti-HCC agent for future drug design and can be used in combination with chemotherapy drugs. More importantly, the results provide the scientific rationale for combining Sorafenib with the immunotherapy-like Theranekron, revealing the immunoregulatory effect of Theranekron and the 'off-target' immune system stimulation effect of Sorafenib. Sorafenib and Theranekron combined therapy could potentially synergize to reactivate antitumor immunity in patients with HCC and improve the magnitude and durability of antitumor responses.
Keywords: Granzyme B, immunotheraphy, HCC, Theranekron, DEN