Semen antioksidan kapasitesi, sperm DNA hasarı ve sperm mitokondrial dna mutasyon analiz yöntemleri optimizasyonu
Optimization of semen antioxidant capacity, sperm DNA damage and sperm mitochondrial mutation analysis methods
Yazar: ELNAZ MOSHFEGHI
Danışman: DOÇ. DR. TÜLİN ARASOĞLU
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ) tarafından bir yıllık korunmasız cinsel ilişkiden sonra gebe kalınmaması durumu olarak tanımlanan infertilite, gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde çiftlerin% 10-15'ini etkilemektedir. Ancak rutin infertilite tanısında kullanılan semen analizi çok düşük oranda tanı konulmasını sağladığından infertilite olgularının tanılanmasında başka ilave tekniklere, yeni yaklaşımlara ve daha kapsamlı kombine test uygulamalarına ihtiyaç duyulmaktadır. Sunulan çalışma da varikosel olmayan infertil erkeklerde tanı amaçlı kullanılmak üzere; semen analizi, semen-antioksidan kapasite, nDNA paketleme ve fragmantasyon, mtDNA hasarını içeren sperm biyobelirteçler paneli oluşturulmuştur. Panelde test edilecek parametrelerin analiz metodları optimize edilerek 5 normal ve 2 infertil erkek hastada değerlendirilmiştir. Panelde yer alan parametreler; semen analizi DSÖ kriterleri esas alınarak, semen-antioksidan kapasite sORP analizi ile, nDNA paketleme ve fragmantasyon TUNEL ve Anilin mavi testleri kullanılarak, mtDNA hasarı PZR yöntemiyle "common delesyon" gen bölgesi ve bu bölgenin içerisinde yer alan ATPase6, ND3, primer shift gen bölgelerinin amplifikasyonu ile değerlendirilmiştir. Çalışma sonuçları; sadece 6 nolu infertil hastada sperm sayısının düşük olduğunu ve sORP değerinin yüksek olduğunu göstermiştir.
Sunulan tez çalışmasında erkek infertilitesinin tanılanması amacıyla kombine test yaklaşımıyla dört parametreden oluşan bir panel çalışması için kullanılacak analiz metodlarının optimize edilmesi sağlanmıştır. Uygulanılacak tekniklere yönelik optimizasyon çalışmalarının tamamlanmış olması ileride eldesi planlanan infertil erkek hastaların değerlendirilmesinin önünü açmış ve kolaylaştırmıştır. Ayrıca bu parametrelerin bir bütün olarak değerlendirilmesi, başarısız hamilelik süreci ve yardımcı üreme teknik uygulamalarının yaşanmamasını da sağlayacaktır.

Anahtar Kelimeler: Erkek infertilite, sperm, mtDNA, delesyon, oksidatif stres, motilite, ROS, sperm DNA

Abstract:
Infertility, defined by the World Health Organization (WHO) as an unprotected sex after one year of unprotected sexual intercourse, affects 10-15% of couples in developed and developing countries. However, since semen analysis used in the diagnosis of routine infertility provides diagnosis at a very low rate, other additional techniques, new approaches and more comprehensive combined testing are needed in diagnosing cases of infertility. The present study also aimed to be used for diagnostic purposes in non- varicocele infertile men; sperm biomarkers panel including semen analysis, semen- antioxidant capacity, nDNA packaging and fragmentation, and mtDNA damage. The analysis methods of the parameters to be tested in the panel were optimized and evaluated in 5 normal and 2 infertile male patients. The parameters in the panel are; semen analysis based on WHO criteria, mRNA damage was assessed using the SORP analysis, nDNA packaging and fragmentation TUNEL and Aniline blue tests using the SORP analysis, mRNA DNA damage was assessed using the PZR "common deletion" gene region and the ATPase6, ND3, amplification. Study results; only 6 infertile patients showed low sperm count and high sORP.
In the presented thesis study, optimization of analysis methods to be used for a panel study consisting of four parameters with the combined test approach has been provided for the diagnosis of male infertility. Completion of the optimization studies for the techniques to be applied has opened and facilitated the evaluation of future planned infertile male patients. In addition, the evaluation of these parameters as a whole will ensure that the failed pregnancy process and assisted reproductive techniques are not experienced.

Keywords: Male infertility, sperm, mtDNA, deletion, oxidative stress, motility, ROS, sperm DNA