Bölgemizde izole edilen brucella suşlarının konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle identifikasyonu ve antibiyotik duyarlılığının belirlenmesi
Brucella strains have been isolated in our region, conventional and moleculer methods for identification and antibiotic susceptibility determination
Yazar: MEHMET PARLAK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. HÜSEYİN GÜDÜCÜOĞLU
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Brusella = Brucella ; Testler = Tests ; İlaç alerjisi = Drug hypersensitivity

Özet:
Bruselloz, birçok gelişmiş ülkede çeşitli eradikasyon programları ile prevalansı azalmakta ancak ülkemizde endemik bir hastalık olarak önemini korumaktadır. Çalışmada, bölgemizde izole edilen brusella suşlarının konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle identifikasyonu yanında tedavide kullanılan temel ilaçlara ek olarak alternatif olabilecek tigesiklin ve azitromisin için antibiyotik duyarlılığının belirlenmesi amaçlandı.Ocak 2009-Haziran 2011 tarihleri arasında Yüzüncü Yıl Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji laboratuvarında izole edilen 75 brusella suşu çalışmaya dâhil edildi. Tüm suşların CO2 gereksinimi, H2S üretimi, tiyonin ve bazik fuksinli besiyerlerinde üreme, üreaz aktivitesi, faj duyarlılığının tespiti, Monospesifik A ve M antiserumları ile aglütinasyon özeliklerine göre konvansiyonel yöntemlerle identifikasyon yapıldı. Moleküler tiplendirme için iki aşamalı bir yöntem kullanıldı. İlk olarak Brucella genusundaki altı türün ayırımına yönelik olarak Brucella Multipleks PCR kiti (FC Biotek Code: 0301, Türkiye), B.melitensis olarak tanımlanan örnekler için ise Brucella melitensis biovar tiplendirme PCR kiti (FC-Biotek, Code: 0302, Türkiye) kullanıldı. Tüm suşların antibiyotik duyarlılıkları epsilometre testi (E-test) ile belirlendi.Konvansiyonel biyotiplendirme sonucunda suşların 73'ü B.melitensis biyovar 3, diğer ikisi B.abortus biyovar 3 olarak belirlendi. Moleküler tiplendirme sonuçları, konvansiyonel biyotiplendirme ile uyumlu olarak bulundu. MİK50 ve MİK90 sonuçlarına göre doksisiklin en etkili antibiyotik olarak bulundu. MİK90 sonuçlarına göre doksisiklinden sonra sırasıyla tigesiklin, trimetoprim-sulfametoksazol ve siprofloksasin en etkili olarak bulundu. En yüksek MİK50 ve MİK90 değerine sırasıyla azitromisin, rifampisin ve streptomisinin sahip olduğu görüldü.Sonuç olarak; bölgemizde aşı suşlarının belirlenmesi ve serolojik tanıda antijen hazırlanırken B.melitensis'le birlikte B.abortus'un da gözönünde bulundurulması gerekmektedir. Bruselloz tedavisinde eskiden beri kullanılan doksisiklin, rifampisin, streptomisin, trimetoprim-sulfametoksazol ve siprofloksasin etkin olarak bulunmuştur. Tigesiklin, bruselloz tedavisine alternatif bir ilaç olabileceği, ancak azitromisin yüksek direnç oranı ile tedavide uygun ajan olmadığı bulunmuştur.

Abstract:
The prevalence of brucellosis declines in many developed countries with various eradication programs, however in our country it remains an important endemic disease. In this study, we aimed to identify Brucella strains isolated from our region using conventional and molecular methods along with determination of antibiotic susceptibility of tigecycline and azithromycin, which can be used as an additional alternative therapy to conventional drugs for treatment.Seventy five strains of Brucella isolated from Yuzuncu Yil University, Faculty of Medicine, Microbiology laboratory between January 2009 and June 2011 were included in the study. All strains were identified by conventional methods including the CO2 requirement, H2S production, reproduction in the presence of thionin and basic fuchsine, urease activity, phage sensitivity and agglutination with monospecific A and M antisera. Two-stage methods were used for molecular typing. First Brucella Multiplex PCR kit (Biotech FC, Code: 0301, Turkey) were used for the separation of six species of Brucella genus and Brucella melitensis biovar typing PCR kit (FC-Biotech, Code: 0302, Turkey) were used for examples defined as B.melitensis. Antibiotic susceptibility of all strains was determined by epsilometer test (E-test).As a result of conventional biotyping 73 strains were identified as B.melitensis biovar 3 and the other two as B.abortus biovar 3. Molecular typing results were compatible with conventional biotyping. According to the MIC50 and MIC90 values doxycycline was found to be the most effective antibiotic, followed by tigecycline, trimethoprim-sulfamethoxazole and ciprofloxacin. The highest MIC50 and MIC90 values were observed for azithromycin, rifampicin and streptomycin, respectively.As a result, when identify strains of the vaccine and prepare antigens for serologic diagnosis in our region, B.abortus should be considered together with the B.melitensis. Doxycycline, rifampicin, streptomycin, trimethoprim-sulfamethoxazole and ciprofloxacin that have been previously used in the treatment of Brucellosis were found to be still effective. While tigecycline has been found as alternative agent in treatment of brucellosis, azithromycin was not the appropriate agent for treatment because of its high resistance rate.