Nöroblastoma hücre kültüründe glutamat aracılı oluşturulan nörotoksisiteye oksitosinin etkileri
Effects of oxytocin on glutamate mediated neurotoxicity in neuroblastoma cell culture
Yazar: BÖRTE GÜRBÜZ ÖZGÜR
Danışman: PROF. DR. KAMİL VURAL ; PROF. DR. MEHMET İBRAHİM TUĞLU
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Glutamat = Glutamates ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Oksitosin = Oxytocin ; Toksisite = Toxicity

Özet:
Amaç: Bu çalışmada insan nöroblastoma SH-SY5Y hücre kültüründe glutamat ile oluşturulan nörotoksisitede, oksitosinin nörit büyümesi, hücre canlılığı, hücre proliferasyonu ve apoptozise olan etkileri araştırılması ve olası nöroprotektif etkinliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Oksitosin ve glutamatın toksik etkileri Nörotoksisite Tarama Testi (NTT), apopitotik etkileri TUNEL yöntemi ve hücre canlılık testi MTT yöntemi ile incelendi. NTT testinde; hücre kültürüne glutamat 32 µM konsantrasyonunda eklenerek nörotoksisite oluşturuldu. Oksitosin 1, 3, 10, 30 ve 100 µM konsantrasyonlarında eklenerek nörit inhibisyonuna etkisi incelendi. SH-SY5Y hücre hattında glutamat uygulamasının apoptozise neden olduğu TUNEL yöntemi ile gösterildi. glutamat ile birlikte oksitosinin farklı dozlarda verildiğinde ortaya çıkan antiapoptotik etki apoptotik indeks ile değerlendirildi.
Bulgular: Glutamatın SH-SY5Y hücre kültüründe doz bağımlı nörotoksik etki gösterdiği ve 32 μM konsantrasyonda nörit uzamasını %50 oranında azalttığı saptandı. SH-SY5Y hücrelerinde glutamat ile oluşan nörit uzaması inhibisyonunun oksitosin uygulanarak doza bağımlı olarak azaldığı gösterildi. Özellikle oksitosinin 10 µM konsantrasyonlarından itibaren anlamlı olarak nörit inhibisyonunu azalttığı ve nöroprotektif etki gösterdiği tespit edildi. MTT sonucuna göre glutamatın hücre proliferasyonunu %50 azalttığı konsantrasyon 54 µM olarak belirlendi. Ardından oksitosin uygulaması ile glutamatın hücre proliferasyonuna olan olumsuz etkisini doza bağımlı olarak anlamlı olarak azalttığı görüldü. 
Sonuçlar: Glutamatın farklı konsantrasyonlarda hücre çoğalması ve canlılığı üzerinde anlamlı toksik etkiye sahip olduğu; oksitosinin ise glutamat ile oluşan nörit inhibisyonunu azalttığı, nöroprotektif etkisi olduğu ve antiapoptotik etkilerinin olduğu gösterildi. Ayrıca önceden oksitosin uygulanan SH-SY5Y hücrelerinde glutamatın nörotoksik etkisini oksitosinin engellediği ve hücre canlılığını arttırdığı saptandı.

Abstract:
Aim: We aimed to investigate the effects of oxytocin on neurite growth, cell viability, cell proliferation and apoptosis to demonstrate its neuroprotective effect on glutamate induced neurotoxicity in human neuroblastoma SH-SY5Y cell culture.
Materials and Methods: Toxic effects of oxytocin and glutamate were examined by Neurotoxicity Screening Test (NTT), apoptotic effects by TUNEL method and cell viability test by MTT method. In the NTT test; Neurotoxicity was induced by adding glutamate at a concentration of 32 µM to the cell culture. Oxytocin was added at 1, 3, 10, 30 and 100 µM concentrations and its effect on neurite elongation was investigated. It was demonstrated by TUNEL method that application of glutamate caused apoptosis in the SH-SY5Y cell line. Afterwards when glutamate and different doses of oxytocin were given, antiapoptotic effect was evaluated with the apoptotic index.
Findings: Glutamate was found to have a dose-dependent neurotoxic effect in SH-SY5Y cell culture and reduced neurite elongation by 50% at a concentration of 32 μM. It was shown that the inhibition of neurite elongation caused by glutamate in SH-SY5Y cells decreased in a dose-dependent manner by applying oxytocin. Especially oxytocin was found to significantly reduce neurite inhibition and show a neuroprotective effect starting from 10 µM concentrations. The concentration at which glutamate reduces cell proliferation by 50% was determined as 54 µM in MTT. Subsequently, it was observed that the adverse effect of glutamate on cell proliferation significantly decreased with oxytocin administration, depending on the dose.
Results: It was found that different concentrations of glutamate have a significant toxic effect on cell proliferation and viability, glutamate inhibits neurite elongation in a dose-dependent manner; oxytocin reduces neurite inhibition caused by glutamate, has a neuroprotective and has antiapoptotic effects. In addition, it was detected that oxytocin inhibits the neurotoxic effect of glutamate in SH-SY5Y cells previously administered oxytocin and increases cell viability.