Hidrokarbonla Kirlenmiş Alanlardan İzole Edilen Bakterilerin Proteaz Üretim Yeteneklerinin Araştırılması
Investigation of protease production ability of bacteria isolated from hydrocarbon polluted area
Yazar: BURÇİN ÖZÇELİK
Danışman: DOÇ. DR. AHMET ÇABUK
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu çalışmada hidrokarbon ile kirlenmiş 5 farklı istasyondan aseptik şartlarda alınan toprak örneklerinden 69 farklı bakteri türü izole edilmiştir. Proteolitik aktiviteleri bakımından taranan izolatlar oluşturdukları hidrolitik zon çaplarına göre değerlendirilmiş ve en geniş zon çapına sahip 3 izolat arasında kantitatif tayin sonucunda en yüksek aktiviteyi gösteren D3 izolatı gram özelliği bakımından incelenmiş ve bazı biyokimyasal testleri yapılmıştır.D3 izolatının proteaz üretim yeteneği üzerine çeşitli faktörlerin etkisi incelenmiş ve üretim ortamının optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla en uygun başlangıç pH değeri, karbon ve azot kaynakları ve bu kaynakların miktarları, inokulüm miktarı, inkübasyon sıcaklık ve süre değerleri belirlenmiştir. D3 izolatı için en yüksek proteaz aktivitesi karbon kaynağı olarak %2 laktoz, azot kaynağı olarak %0,5 maya özütü kullanıldığında ve %1' lik inokulasyon oranında, 35°C' de 48 saatlik inkübasyon sonucunda gözlenmiştir.D3 izolatının ürettiği proteaz enziminin karakterizasyonu amacıyla yapılan çalışmalarda enzimin optimum reaksiyon sıcaklığı 55°C ve optimum reaksiyon pH değeri 11 olarak bulunmuştur. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleri ile kısmi olarak saflaştırılmış ve 1.61 kez saflaştırma sağlanmıştır. Enzim aktivitesi üzerine ağır metallerin inhibisyon etkisi olduğu gözlenmiştir. SDS-PAGE yöntemi ile moleküler ağırlığı 45-55 kDa, 29-36 kDa ve 24-29 kDa arasında olmak üzere üç bant gözlenmiştir.

Abstract:
In this study, 69 bacteria were isolated from soil samples taken from five different stations contaminated with hydrocarbon. Isolates scanned for proteolytic activities were evaluated according to hydrolytic zone diameter they formed and the isolate D3 showed the highest activity as a result of quantitative determination of three isolates had widest zone diameters was examined for gram reaction and some biochemical tests were performed.The effect of various factors on protease production ability of D3 isolate were examined and optimisation of production medium was performed. For this purpose, optimal initial pH value, carbon and nitrogen sources and amount of these sources, inoculum size, values of incubation temperature and time were determined. The highest protease activity for D3 isolate was observed when %2 lactose was used as a carbon source and %0,5 yeast extract as a nitrogen source and in %1 inoculation ratio, after 48 h incubation at 35°C.In the studies for characterization of protease enzyme produced by D3 isolate, the optimum reaction temperature and pH value were determined as 55°C and pH 11. Enzyme was purified partially by amonnium sulphate precipitation and dialysis and 1,61 fold purification was provided. Inhibition effect of heavy metals was observed on protease activity. Three bands with moleculer mass between 45-55 kDa, 29-36 kDa and 24-29 kDa were observed by SDS-PAGE.