Ratlarda sisplatin ile oluşturulan deneysel Prematür Over Yetmezliği (POF) modelindemelatonin ve resveratrol'ün etkisi
The effect of melatonin and resveratrol in an experimental model of Premature Ovarian Failure (POF) induced by cisplatin in rats
Yazar: KÜBRA ŞEVGİN
Danışman: DOÇ. DR. SALİME PELİN ERGÜVEN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Amaç: Bu çalışmada sisplatin (SİS) kaynaklı prematür over yetmezliği (POY) gelişen overlerde kombinasyon halinde melatonin (MEL) ve resveratrol (RES) tedavisinin; over fonksiyonu, fenotipi, hormon seviyesi ve hücre ölüm/savunma yolaklarını kontrol eden molekülleri hangi seviyede hedef aldığının incelenmesi amaçlandı.
Gereç ve Yöntem: Toplam 42 adet Sprague Dawley dişi rat 7 deney grubuna ayrıldı; Grup 1: KONT, Grup 2: POY, Grup 3: MEL, Grup 4: RES, Grup 5: POY+MEL, Grup 6: POY+RES, Grup 7: POY+MEL+RES. Histolojik inceleme için Hematoksilen&Eozin (H&E), PAS&Masson Trikrom (PAS&MT) boyamaları yapıldı. pH2Ax, SIRT1, FOXO3a ve Bcl2 protein ekspresyonu ve immün lokalizasyonu immünofloresan (İF) yöntemi ile belirlendi. SIRT1, FOXO3a ve Bcl2 mRNA ekspresyonları gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile belirlendi. Serum östrojen (E2) hormonu seviyeleri ELISA yöntemi ile ölçüldü.
Bulgular: Histopatolojik bulgularda ve serum E2 seviyesinde ve primordiyal folikül sayısında POY+MEL+RES grubunda tekli tedavi gruplarına kıyasla farklılık görülmedi. POY+MEL+RES grubunda atretik folikül sayısındaki azalma hem POY+MEL hem de POY+RES grubuna kıyasla anlamlı idi (p<0,002). POY+MEL+RES grubunda protein seviyesinde pH2Ax, SIRT1, FOXO3a, Bcl2 ve mRNA seviyesinde SIRT1 ve Bcl2 ekspresyonu POY grubuna kıyasla anlamlı bulundu (p<0,002).  POY+MEL ve POY+RES grubunda ise pH2Ax, SIRT1, FOXO3a ve Bcl2 protein ve mRNA ekspresyonunda anlamlı farklılık görülmedi. POY+MEL ve POY+RES grupları POY+MEL+RES grubu ile karşılaştırıldığında protein seviyesinde farklılık pH2Ax, SIRT1, FOXO3a ve Bcl2 ekspresyonunda görülürken; mRNA seviyesinde farklılık yalnızca SIRT1 ekspresyonunda görüldü (p<0,002).
Sonuç: POY+MEL+RES grubunda artan SIRT1 ekspresyonu, pH2AX/SIRT1 sinyalleşme yolu ve FOXO3a gibi yolak proteinlerinin SIRT1 aracılığıyla deasetilasyonu yoluyla folikül rezervindeki azalmanın ve hücre apoptozunun (Bcl2) engellenmesinde önemli rol oynayabilir.

Abstract:
Aim: The aim of this study was to investigate the extent to which melatonin (MEL) and resveratrol (RES) treatment in combination targets molecules that control ovarian function, phenotype, hormone levels and cell death/defense pathways in ovaries with cisplatin (CIS)-induced premature ovarian failure (POF).
Materials and Methods: A total of 42 female Sprague Dawley rats were divided into 7 experimental groups; Group 1: Control, Group 2: POY, Group 3: MEL, Group 4: RES, Group 5: POY+MEL, Group 6: POY+RES, Group 7: POY+MEL+RES. Hematoxylin & Eosin (H&E), PAS&Masson Trichrome (PAS&MT) staining were performed for histological examination. pH2Ax, SIRT1, FOXO3a and Bcl2 protein expression and immun-localization were determined by immunofluorescence (IF) method. SIRT1, FOXO3a and Bcl2 mRNA expressions were determined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). Serum estrogen (E2) hormone levels were measured by ELISA.
Results: There was no difference in histopathologic findings, serum E2 level and number of primordial follicles in POY+MEL+RES group compared to single treatment groups. The decrease in the number of atretic follicles in POY+MEL+RES group was significant compared to both POY+MEL and POY+RES groups (p<0.002). The expression of pH2Ax, SIRT1, FOXO3a, FOXO3a, Bcl2 at protein level and SIRT1 and Bcl2 at mRNA level were significant in POY+MEL+RES group compared to POY group (p<0.002).  In POY+MEL and POY+RES groups, no significant difference was observed in pH2Ax, SIRT1, FOXO3a and Bcl2 protein and mRNA expression. When POY+MEL and POY+RES groups were compared with POY+MEL+RES group, the difference in protein level was seen in pH2Ax, SIRT1, FOXO3a and Bcl2 expression, while the difference in mRNA level was seen only in SIRT1 expression (p<0.002).
Conclusion: Increased SIRT1 expression in POY+MEL+RES group may play an important role in preventing the decrease in follicle reserve and cell apoptosis (Bcl2) through SIRT1-mediated deacetylation of pathway proteins such as pH2AX/SIRT1 signaling pathway and FOXO3a.