Assaf ırkı koyunlarda süperovulasyon öncesi  eksojen melatonin uygulamasının embriyo verimi üzerine etkisi
The effect of exogenous melatonin application before superovulation on embryo yield in assaf ewes
Yazar: ÖMER FARUK YEŞİLKAYA
Danışman: PROF. DR. HÜSEYİN ERDEM
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veteriner Doğum ve Jinekoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Sunulan çalışmanın amacı, Assaf ırkı koyunlarda süperovulasyon öncesi eksojen melatoninin toplam antioksidan durumu (TAS), toplam oksidan durumu (TOS), oksidatif stres indeksi (OSI), glutatyon peroksidaz (GSH-Px) ve süperoksit dismutaz (SOD) seviyelerine etkisinin tespit edilmesi ve bu faktörlerin transfer edilebilir embriyo oranına etkisinin belirlenmesidir.
Çalışmanın hayvan materyalini 2-4 yaş aralığında, 60-70 kg ağırlığında, daha önce en az bir kez doğum yapmış, önceki gebelik ve doğumunda dölverimi sorunu yaşamamış, sağlıklı ve fertil 18 baş Assaf ırkı koyun oluşturdu. Çalışmaya dahil edilen koyunlar rastgele olarak 2 eşit gruba ayrıldı. Melatonin grubundaki (n=9) hayvanlara melatonin implantı (18 mg melatonin, Regulin®, Ceva, Türkiye) progesteron içeren preparat takılmadan 7 gün önce kulak derisi altına yerleştirildi. Kontrol grubundaki (n=9) hayvanlara ise aynı gün kulak derisi altına serum fizyolojik uygulandı. Her iki çalışma grubuna da aynı senkronizasyon ve süperovulasyon protokolü uygulandı. Ayrıca çalışmada TAS, TOS, GSH-Px ve SOD konsantrasyonlarının belirlenmesi amacıyla -7. gün (melatonin implantının yerleştirildiği gün), 0. gün (vaginal süngerin yerleştirildiği gün), 11. gün (vaginal süngerin uzaklaştırıldığı gün), 12. gün (doğal aşımın olduğu gün) ve 19. gün (uterus yıkamasının yapıldığı gün) olmak üzere 5 farklı günde kan örnekleri toplandı. Aşım sonrası 6,5. günde embriyolar cerrahi yöntemle toplandı. Uterus yıkantıları stereomikroskop altında taranarak bulunan embriyoların kaliteleri ve gelişim aşamaları kayıt altına alındı. Çalışmada süperovulasyona yanıt, fertilizasyon oranı, transfer edilebilir embriyo sayısı, dejenere embriyo sayısı ve fertilize olmamış oosit sayısı açısından her iki grup arasında istatistiki fark tespit edilmedi. Çalışmada donör başına düşen korpus luteum sayısı ise melatonin grubunda 5,00±1,93, iken kontrol grubunda 8,55±4,92 olarak elde edildi. Ayrıca donör başına düşen toplam hücre sayısı melatonin grubunda 3,11±2,38 iken, kontrol grubunda ise toplam hücre sayısı ise 7,00±3,93 olarak elde edildi. Çalışmada toplam korpus luteum ve toplam hücre sayısının kontrol grubunda, melatonin grubundan daha yüksek olduğu belirlendi (P<0,05). Süperovulasyon öncesi eksojen melatonin uygulamasının TAS, TOS, GSH-Px ve SOD konsantrasyonlarını etkilemediği belirlendi.
Sonuç olarak, aşım sezonunda süperovulasyon öncesi eksojen melatonin uygulamasının embriyo verimi ve kalitesini üzerine olumsuz olarak etkilediği düşünülmektedir. Bu nedenle MOET çalışmalarında aşım sezonu içerisinde melatonin implantı uygulanması önerilmemektedir.

Abstract:
The aim of the present study was to determine the effect of exogenous melatonin on total antioxidant status (TAS), total oxidant status (TOS), oxidative stress index (OSI), glutathione peroxidase (GSH-Px), and superoxide dismutase (SOD) levels and to determine the effect of these factors on transferable embryo rate in Assaf ewes before superovulation.
The animal material of the study consisted of 18 healthy and fertile Assaf ewes between 2-4 years of age, weighing 60-70 kg, having given birth at least once before, and having no fertility problems in previous pregnancies and parturiency. The ewes included in the study were randomly divided into 2 equal groups. In the melatonin group (n=9), a melatonin implant (18 mg melatonin, Regulin®, Ceva, Turkey) was placed under the skin of the ear 7 days before the progesterone-containing device. In the control group (n=9), saline was applied under the ear skin on the same day. The same synchronization and superovulation protocol was applied to both study groups. In addition, blood samples were collected on five different days to determine TAS, TOS, GSH-Px, and SOD concentrations. Blood samples were collected on day -7 (melatonin implantation), day 0 (vaginal sponge placement), day 11 (vaginal sponge removal), day 12 (natural mating), and day 19 (uterine flushing). Embryos were collected surgically on day 6.5 after insemination. Uterine flushing was scanned under a stereomicroscope and the quality and developmental stages of the embryos were recorded. There was no statistical difference between the two groups in terms of superovulation response, fertilization rate, number of transferable embryos, number of degenerated embryos, and number of unfertilized oocytes. The number of corpus luteum per donor was 5,00±1.93 in the melatonin group and 8.55±4.92 in the control group. In addition, the total number of cells per donor was 3.11±2.38 in the melatonin group and 7.00±3.93 in the control group. The total number of corpus luteum and total cell counts were higher in the control group than in the melatonin group (P<0.05). Exogenous melatonin administration before superovulation did not affect TAS, TOS, GSH-Px, and SOD concentrations.
In conclusion, it is thought that exogenous melatonin administration before superovulation in the breeding season negatively affects embryo yield and quality. For this reason, exogenous melatonin administration is not recommended in MOET studies during the breeding season.