Spirulina platensis (Cyanophyta)'e gen aktarımı üzerine bir araştırma
An investigation on gene transfer to spirulina platensis (Cyanophyta)
Yazar: MAKBULE BAYLAN
Danışman: PROF.DR. MUSTAFA AKAR ; PROF.DR. NUMAN ÖZCAN
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Yapılan bu çalışma ile Spirulina platensis (cyanophyta)'e ait serin esteraz geni ikifarklı primer dizileri kullanılarak PCR tekniği ile çoğaltılmıştır. Çoğaltılan gen, primerdizilerinden kaynaklanan farklılığa bağlı olarak, Escherichia coli vektörü olan pBR325plazmid DNA'sına iki farklı şekilde takılmış ve böylece S. platensis için entegratif vektörlergeliştirilmiştir. Yeni entegratif vektörler pBR325SE1 ve pBR325SE2 olarakisimlendirilmiştir. pBR325SE1 ve pBR325SE2 kompetent E. coli XL1 Blue MRF'hücrelerine transfer edilirken, pBR325SE1 S. platensis'e de elektroporasyon ile aktarılmıştır.S. platensis/pBR325SE1 kloramfenikol (cml) içeren Spirulina ortamında ürerken, plazmidaktarılmamış olan S. platensis beklenildiği üzere aynı besi ortamında ürememiş, buna karşılıkcml içermeyen Spirulina ortamında üremiştir.Bakteriyofaj T4'e ait lizozim geni pBR325SE2 entegratif vektörüne takılarakpBR325SL vektörü geliştirilmiştir. pBR325SL önce kompetent E. coli XL1 Blue MRF,sonrada S. platensis hücrelerine aktarılmıştır. S. platensis/pBR325SL cml içeren Spirulinaortamında ürerken, plazmid aktarılmamış olan S. platensis beklenildiği gibi aynı besiortamında ürememiş, buna karşılık cml içermeyen Spirulina ortamında üremiştir. pBR325SLvektöründe lizozim geninin varlığı E. coli hücrelerinden izole edilen vektörlerde PCR ilegösterilirken, S. platensis/pBR325SL hücrelerinin DNA izolasyonu yapılacak kadarürememesinden dolayı, lizozimin varlığı gösterilememiştir.Anahtar Kelimeler: Spirulina platensis, Serin esteraz, Entegratif vektör, PCR, Klonlama

Abstract:
In this study, serin esterase gene from Spirulina platensis amplified by PCR using twodifferent primer sequences. The amplified gene cloned into the pBR325 vector in twodifferent way, depending on differences between primers, thus, two entegrative vectors for S.platensis were constructed. The new entegrative vectors were identified as pBR325SE1 andpBR325SE2 respectively. While pBR325SE1 and pBR325SE2 were transferred intocompetent E. coli, besides this, pBR325SE1 was electroporated into S. platensis.Recombinant S. platensis/pBR325SE1 were grown in the Spirulina medium withchloramphenicol (cml) while there wasn?t any non-transformant Spirulina in the samemedium but intensive non-transformant growth was observed in the medium without cml.Bacteriophage T4 lysosyme gene was cloned into pBR325SE2 and the new vectorharbouring lysozyme gene was identified as pBR325SL. pBR325SL was transferred intocompetent E. coli and S. platensis respectively. Recombinant S. platensis/pBR325SLobserved in the Spirulina medium with cml while there was no non-transformant Spirulina inthe same medium but intensive non-transformant growth was observed in the mediumwithout cml. While the presence of lysozyme gene was demonstrated in pBR325SL isolatedfrom E. coli by PCR, but it couldn?t be demonstrated in S. platensis/pBR325SL because ofinsufficient Spirulina in the medium with cml growth for DNA isolation.Key Words: Spirulina platensis, Serin esterase, Integrative vector, PCR, Cloning