Gebe farelerde steroid ile indüklenmiş prenatal stres kaynaklı fetal beyin gelişim hasarında centella asiatica'nın etkisinin incelenmesi
Investigation of centella asiatica's effect on fetal brain damage caused by steroid-induced prenatal stress on pregnant mice
Yazar: DAMLA DEMİRKAYA TAŞ
Danışman: PROF. DR. KEMAL ERGİN
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Beyin = Brain ; Centella asiatica = Centella asiatica ; Fareler = Mice ; Gebelik = Pregnancy ; Otofaji = Autophagy ; Prenatal stres = Prenatal stress ; Steroidler = Steroids

Özet:
Gebelik süresince yavrunun maruz kaldığı stres faktörleri, prenatal stres olarak
tariflenmekte ve çocuklukta ve yetişkinlikte karşılaşılan psikososyal problemlerin nedeni olarak
karşımıza çıkmaktadır. Bilişsel davranışsal, fiziksel ve duygusal problemler ve otizmle, prenatal
stresin ilişkisini açıklayan çokça araştırma mevcuttur.
Farklı hayvan türlerinde yapılan in vivo çalışmalarda, deksametazon veya
betametazon formundaki sentetik glukokortikoid tedavisinin maternal uygulanmasının, fetal
nöronal hücre çoğalmasını azalttığını ve yavruların hipokampus dentat girus ve
neokorteksindeki nörojenezi inhibe ettiğini gösterilmiştir.
Geleneksel Asya tıbbında, yüzyıllardır birçok hastalığın tedavisinde kullanılan
Centella Asiatica, Apiaceae ailesinden olan otsu ve çok yıllık bir bitkidir. Modern tıpta da
özellikle cilt hastalıklarında, uzun süredir kullanılmaktadır. Yara ve yanık tedavisinde, sedef,
egzema, keloid, hipertrofik skar gibi cilt hastalıklarında etkili olduğunu öne süren bilimsel
araştırmalar mevcuttur. Son yıllarda yapılan bilimsel çalışmalarda Centella Asiatica'nın, cilt
dışında, özellikle santral sinir sisteminde de önemli etkilerinin olduğunu öne sürmektedir.
Centella Asiatica'nın nöroprotektif, anksiyolitik, antikonvülzan, nörojenik, sinaps artırıcı
etkilerinin olduğu ve bu yolla Alzheimer, Parkinson, Huntington hastalığı, inme gibi durumların
tedavisinde faydalı olabileceğine dair görüşler öne sürülmektedir.
Çalışmamızda, gebe farelerde intraperitoneal kortizon uygulanarak prenatal stres
ortamı taklit edilmiş olup, oluşan fetal beyin gelişim hasarında, oral Centella Asiatica
uygulamasının etkileri incelenmiştir. 
Çalışmamızda, 18 adet dişi ve 9 adet erkek Balb/c cinsi fare kullanılmış ve
gebelik oluşması sağlanmıştır. Fareler kontrol (n=6), deney (n=6) ve tedavi grubu (n=6) olmak
üzere üç gruba ayrılmıştır. Gebeliğin 9-15. günleri arasında toplam 5 gün, kontrol grubuna
intraperoitoneal yolla 1mg/kg/gün Serum Fizyolojik (SF); deney grubuna intraperoitoneal yolla
1mg/kg/gün deksametazon; tedavi grubuna intraperoitoneal yolla 1mg/kg/gün deksametazon
ile birlikte oral gavaj yoluyla 1mL/kg/gün Centella Asiatica verilmiştir. 18,5. günde gebelikler
sonlandırılarak, embriyo beyinleri diseke edilmiş ve formaldehitte tespit edilmiştir. Fetus
boyları (cm) ve fetal beyinlerin en (cm), boy (cm) ve ağırlıkları ölçülmüş, kayıt altına alınmıştır.
İnceleme için, hematoksilen-eozin boyama, krezil viyole boyama ve immünohistokimyasal
boyama (Cas3 ve Lc3ß) yapılmıştır.
Çalışmamızda, gebe farelere uygulanan deksametazonun, fetus beyinlerinin en,
boy ve ağırlık değerlerinde anlamlı azalmaya neden olduğu gözlenmiştir. Bununla birlikte,
deksametazonla birlikte Centella Asiatica uyguladığımız tedavi grubunda, fetus beyin
ölçümlerinin, kontrol grubuna benzer olduğu görülmüştür. Centella Asiatica'nın apopitoza
gidişi engellediğine dair kanıtlar mevcuttur. Bizim çalışmamızda da, Cas3
immunohistokimyasal boyamasıyla yapılan incelemelerde, Centella Asiatica uygulamasının
apopitozu gidişi engellediği ve incelenen dönem içinde (kısa vade) hasar oluşumunu azalttığı
gözlenmiştir. Centella Asiatica'nın otofaji üzerine de baskılayıcı etkileri öne sürülmektedir.
Bizim çalışmamızda da, Lc3ß immunohistokimyasal boyama yöntemi ile, otofajinin, Centella
Asiatica uygulanan tedavi grubunda, deney grubuna göre daha az olduğu gözlenmiştir.

Abstract:
Stress factors that the offspring are exposed to during pregnancy are defined as
prenatal stress and appear as the cause of psychosocial problems in childhood and adulthood.
There is a great deal of research that explains the relationship between prenatal stress and
cognitive behavioral, physical and emotional problems and autism.
In vivo studies in various animal species have shown that maternal
administration of synthetic glucocorticoid therapy such as of dexamethasone or betamethasone
inhibits neurogenesis and reduces fetal neuronal cell proliferation in the neocortex and
hippocampus dentate gyrus of the offspring.
Centella Asiatica, which has been used in traditional Asian medicine for
centuries to treat many diseases, is a herbaceous and perennial plant from the Apiaceae family.
It has been used in modern medicine for a long time, particularly in skin diseases. There are
studies suggesting that it is effective in the treatment of scars and burns; and skin diseases such
as psoriasis, eczema, keloid, and hypertrophic scars. Recent studies suggest that Centella
Asiatica has important effects apart from the skin, notedly in the central nervous system. It has
been suggested that Centella Asiatica has neuroprotective, anxiolytic, anticonvulsant,
neurogenic, synapse-enhancing effects and that it may be useful in the treatment of conditions
such as Alzheimer's, Parkinson's, Huntington's disease and stroke.
In our study, the effects of oral Centella Asiatica administration on fetal brain
damage caused by prenatal stress environment imitated by intraperitoneal administration of
cortisone on pregnant mice were investigated. 
In our study, 18 female and 9 male Balb/c mice were used and pregnancy was
achieved. Mice were divided into three groups as control (n=6), test (n=6) and treatment group
(n=6). Between the 9th and 15th days of pregnancy, for a total of 5 days, 1mg/kg/day normal
saline (N/S) administrated to the control group intraperitoneally; 1mg/kg/day dexamethasone
administrated to the test group intraperitoneally; the treatment group received 1mg/kg/day
dexamethasone by intraperitoneal route and 1mL/kg per day Centella Asiatica by oral gavage.
Pregnancies were terminated on the 18,5th day, embryo brains were dissected and fixed in
formaldehyde. Fetal lengths (cm) and width (cm), height (cm) and weights of the fetal brains
were measured and recorded. For analysis, hematoxylin-eosin staining, cresyl violet staining
and immunohistochemical staining (Cas3 and Lc3ß) were performed.
In our study, it was observed that dexamethasone administration to the pregnant
mice caused a significant decrease in fetal brain width, height and weight values. However, in
the treatment group in which we administrated dexamethasone and Centella Asiatica, fetal brain
measurements were similar to the control group. There is evidence that Centella Asiatica
inhibits the progression to apoptosis. In our study, it was observed that Centella Asiatica
administration prevented the progression to apoptosis and reduced the formation of damage in
the examined period (short term) with the analyses performed using Cas3 immunohistochemical
staining. It has also been suggested that Centella Asiatica has suppressive effects on autophagy.
In our study, with Lc3ß immunohistochemical staining method, autophagy was observed to be
less in the treatment group treated with Centella Asiatica compared to the test group.