0-6 aylık anneden alınan anne sütü örneklerinin mide kanseri hücre hattı üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of breast milk samples taken from 0-6 months on the stomach cancer cell line
Yazar: DEMET BALDIZ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ CEYDA OKUDU
Haliç Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Beslenme ve Diyetetik = Nutrition and Dietetics
Dizin: Anne sütü = Milk-human ; Anneler = Mothers ; Hücre dizisi = Cell line ; Mide neoplazmları = Stomach neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; PPAR = PPAR

Özet:
Yenidoğanın beslenmesi tarihsel olarak incelendiğinde, günümüze kadar en önemli besin anne sütüdür. Anne sütü yenidoğan bebeğin optimum büyüme ve gelişmesi için gerekli olan sıvı, enerji ve besin ögelerinin içeren, biyoyararlılığı yüksek, sindirimi kolay bir besindir. Mide kanseri, tüm dünyada görülme insidansı ve ölüm oranı yüksek bir kanser tipidir. Mide kanseri, diyet faktörleri, yeterli ve sağlıklı beslenme, liften zengin diyetler, erken teşhis, genetik faktörler insidansı azaltırken, tütün ürünleri ve alkol tüketiminin fazla olması mide kanseri insidansını arttırmaktadır. Bu çalışmada 0-6 aylık bebeği olan 10 farklı anneden alınan anne sütlerinden elde edilen whey proteinlerinin metastaz üzerine etkisi araştırılmıştır. Anne sütü whey proteinlerinin metastaz üzerindeki hücre göçü deneyi ve çeşitli kanser türlerinde metastaz ile ilişkilendirilen PPARRγ'nın gen ifadesi yoluyla incelenmiştir. Çalışmamızda mide kanseri hücrelerini 37oC ve %5 CO2 şartlarında, RPMI büyüme besiyerinde çoğaltılmıştır. Çoğalan hücreler 12 kuyucuklu hücre kültür tabaklarına 200.000 hücre/kuyu olacak şekilde ekilmiş ve hücrelerin konfluent olmaları sağlanmıştır. Daha sonra her kuyucuğa 50 uL anne sütlerinde elde edilen whey proteinleri uygulanmış ve ardından pipet ucuyla düz bir çizik atılmıştır. Hücre göçünün tespiti amacaıyla mikroskop altında 0.saat ve 24. saatteki görüntüleri kaydedilmiştir. PPARγ gen ifade analizi için hücrelerden total RNA izolasyonu yapılmış ve anne sütü whey proteinlerinin PPARγ üzerindeki etkisi RT-PCR yöntemi ile analiz edilmiştir. Çalışma sonucunda 2., 3., 5. ve 8. anne sütü whey proteinlerinin metastaz baskıladığı ancak 6.,7., 9. ve 10. anne sütü whey proteinlerinin metastazı baskılamadığı tespit edilmiştir. Bununla birlikte 1. ve 4. anne sütü whey proteinlerinin verildiği mide kanseri hücrelerinde kapanma gözlemlenmemiş aksine atılan çiziğin genişliğinde artış olduğu gözlemlenmiştir. 3., 4., 5., 6. ve 7. anne sütü whey proteinlerinin uygulandığı hücrelerde PPARγ gen ifadesi anlamlı şekilde artarken (p<0.05), diğerlerinde gen ifade değişimi anlamlı bulunmamıştır. Sonuç olarak her anne sütünün whey proteini profili farklı olduğundan, anne sütü whey proteinlerinin mide kanserindeki etkisi PPARγ ve farklı metastazik yolaklar ile incelenmelidir.

Abstract:
When the nutrition of the newborn is examined historically, the most important nutrient is breast milk. Breast milk is an easily digestible food with high bioavailability, containing fluid, energy and nutrients required for optimum growth and development of the newborn baby. Gastric cancer is a cancer type with a high incidence and mortality rate all over the world. While gastric cancer, dietary factors, adequate and healthy nutrition, diets rich in fiber, early diagnosis, and genetic factors decrease the incidence of gastric cancer, excessive consumption of tobacco products and alcohol increases the incidence of gastric cancer. In this study, the effect of whey proteins obtained from breast milk, which taken from 10 different mothers having 0-6 month old babies, on metastasis was investigated. It has been studied through the cell migration assay of breast milk whey proteins on metastasis and gene expression of PPARRγ, which has been associated with metastasis in various types of cancer. In our study, gastric cancer cells were grown in RPMI medium at 37oC and 5% CO2 conditions. Proliferating cells were seeded in 12-well cell culture dishes at 200,000 cells/well and the cells were confluent. Then, 50 µL of whey proteins obtained from breast milk were applied to each well, and then a straight scratch was made with a pipette tip. It were photographed at 0 and 24 hours under the microscope to detect cell migration. Total RNA was isolated from cells for PPARγ gene expression analysis and the effect of breast milk whey proteins on PPARγ was analyzed by RT-PCR. As result of the study, it was determined that 2nd, 3rd, 5th and 8th breast milk whey proteins suppressed metastasis, however 6th, 7th, 9th and 10th breast milk whey proteins didn't suppress metastasis. Conversely, no closed was observed in gastric cancer cells given 1st and 4th breast milk whey proteins, but an increase in the width of the scratch was observed. While PPARγ gene expression increased significantly (p<0.05) in the cells to which 3rd, 4th, 5th, 6th and 7th breast milk whey proteins were applied, the gene expression change was not significant in the others. As a result, since the whey protein profile of each breast milk is different, the effect of breast milk whey proteins on gastric cancer should be investigated with PPARγ and different metastatic pathways.