Rekombinant kırım kongo kanamalı ateş virüsü nükleoproteinin in vivo toksisitesinin araştırılması
In vivo toxicity study of recombinant nucleoprotein of crimean congo hemorrhagic fever virus
Yazar: SEVDE NUR CAN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ESEN BAKHAUTDIN
Fatih Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Hemorajik ateş-Kırım = Hemorrhagic fever-Crimean ; Hemorajik ateş-viral = Hemorrhagic fevers-viral ; Kırım Kongo kanamalı ateşi hastalığı =   ; Nükleoproteinler = Nucleoproteins ; Viral aşılar = Viral vaccines

Özet:
Kırım Kongo Kanamalı Ateş (KKKA) hastalığı Afrika, Orta Doğu, Asya ve Balkanları içine alan bölgede rastlanan endemik bir viral hastalıktır. Nairovirüs cinsi içinde yer alan RNA virüsü tarafından gelişen bu hastalık, %3-30 oranında mortalite oranıyla oldukça şiddetli seyreden bir hastalıktır. Hastalığın kesin bir tedavisi olmamakla birlikte aşı çalışmaları bulaşıcı viral hastalıkların önlenmesi için önem taşımaktadır. Çoğunlukla inaktif veya zayıflatılmış virüsler aşı yapımında kullanılırken son yıllarda özellikle rekombinant teknoloji ile yapılan protein-bazlı aşılar tercih edilmektedir.
Grubumuz tarafından önceki çalışmalarda rekombinant yöntemler ile Kırım Kongo Kanamalı Ateş (KKKA) virüsü iç zarf proteini olan Nükleoprotein (NP) elde edilerek in vitro deneyleri tamamlanmış ve bu çalışma kapsamında da in vivo deneyler ile test edilmiştir. 129S6/SvEv türü dişi farelerde gerçekleştirilen deneylerimizde tek doz Nükleoprotein enjeksiyon grubunda bir hafta sonra deney tamamlanırken, çoklu doz Nükleoprotein enjeksiyon grubunda ilk enjeksiyonun ardından 3. ve 7. günlerde tekrar aşılanarak son enjeksiyondan bir hafta sonra tamamlandı. Kontrol gruplarında ise PBS enjeksiyonu yapıldı. Deneyin sonlandırılması ile gerçekleştirilen hemogram ve biyokimyasal kan analizlerinde kontrol grubu ile enjeksiyon grupları arasında önemli bir fark olmadığı görüldü. IgE test ile de yapılan enjeksiyona yönelik belirgin bir alerjik yanıt oluşmadığı saptandı. Alınan karaciğer, dalak ve böbrek H&E boyama ile histopatolojik olarak incelendi ve yine deney grupları arasında önemli farklılıkların olmadığı görüldü. Böylece tamamlanan in vivo çalışmalar sonunda Nükleoproteinin aşı olarak geliştirilmesi için gerekli olan toksikoloji çalışmaları tamamlanmış ve insan için güvenilir bir aşı olduğu gösterilmiş oldu. Sonraki basamaklarda immünolojik çalışmalarla, Nükleoproteinin aşı potansiyeli test edilecektir.

Abstract:
Crimean-Congo Hemorrhagic Fever (CCHF) is a viral disease, endemic in many countries in Africa, the Middle East, Eastern Europe and Asia. This severe disease caused by CCHF virus in Nairovirus genus with a 3-30% mortality rate. There is currently no approved treatment. However, vaccination remains the most important method for protection of viral disease. There have been few attempts to develop a vaccine with inactivated and attenuated vaccines but studies in recent years focused on recombinant protein based vaccines.
In our previous studies, our research team produced Nucleoprotein of CCHF virus by recombinant techniques and analysed in vitro cytotoxisity of this recombinant protein. The present study evaluates the in vivo toxicity of recombinant Nucleoprotein of CCHF virus. In this study, 129S6/SvEv female mice were used. One of the our experimental group was completed after 1 week single dose Nucleoprotein injection. The other experimental group multiple dose was completed 1 week after last injection. Mice were injected 2 times after first injection at 3. And 7. days. Control groups were treated with PBS. At the end of the experiments, the hemogram and biochemical analysis of blood were measured. There were no significant differences between control and experimental groups. IgE results revealed no significant differences in allergen levels. Liver, kidney and spleen were prepared with routine methods and stained with H-E for histological analysis. However, there was no major difference between groups. The finalized in vivo results showed that Nucleoprotein as a vaccine is safe for human use after toxicology studies. Further studies are required to test the immunologic potential of Nucleoprotein-based vaccine.