Termofil bacillus Sp. bakterisinden lichenaz (ß-1,3 ve 1,4 glucanase) enzimi üretimi, karakterizasyonu ve biyoteknolojik kullanılabirliği
Isolation of Thermopilic bacillus Sp., production, characterization and determination of biotechnological application of lichenase (ß-1,3 and 1,4 glucanase)
Yazar: FATMA GÖZÜKARA
Danışman: PROF. DR. BURHAN ARIKAN
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Bölümü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Bacillus = Bacillus ; Glukanaz = Glucanase

Özet:
Bu çalışmada, değişik ortamlardan izole edilen termofil Bacillus sp. suşlarından likenaz enzimi izolasyonu ve karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla bakterilerin farklı sıcaklık ve pH değerlerinde katı besiyerinde üreme ve enzim üretme yetenekleri araştırılmıştır. İzole edilen enzimin karakterizasyonu gerçekleştirilmiştir.Bacillus sp. L-12 suşundan üretilen likenazın nativ-PAGE analizinde 100.74 ve 54.4 kDa moleküler ağırlıklarına sahip iki band elde edilmiştir. Enzimin optimum aktivite gösterdiği sıcaklık 100ºC bulunmuştur. Enzim 30-110 ºC aralığında ortalama %66.5 aktivitesini korumuştur. Enzim, optimum aktivitesini pH 6.0'da gösterirken, 24 saat süreyle 55 ºC de pH 3.0-6.0 aralığında ortalama %88 stabilite göstermiştir. L-12 enzimi %7.5 NaCl konsantrasyonunda %67'lik optimum aktivite göstermiştir. Enzim aktivitesi 5 mM EDTA (%97), 5 mM CaCl2 (%95), 3 mM PMSF (%56), %1 v/v triton X-100 (%101), %1 w/v SDS (%38) ve 5mM ZnCl2 ile (%36) korunmuştur.Bu sonuçlara göre L-12 likenaz enzimi, hipertermofil, termostabil, asidik ve asidostabil, halotolerant, surfaktanlardan etkilenmeyen ve kükürtlü amino asitlerce zengin enzim özelliği göstermektedir.Enzim optimum aktivitesini asidik pH da gösteren termostabil ve asidik pH stabil özellikte olduğu için, özellikle tavuk yemi hazırlama alanında öncelikle kullanılabilecek özelliktedir.Anahtar Kelimeler: Bacillus, likenaz, termofil, asidostabil, halotolerant

Abstract:
In this study, the lichenase enzymes from Bacillus sp. strains isolated from different environments were produced and characterized. For this purpose, different temperatures and pH values of bacteria in solid plate and enzymes to produce reproductive capabilities were investigated. Characterization of the enzyme has been isolated.Molecular weight of the lichenase from Bacillus sp. LB-12 was estimated as 100.74 and 54.4 kDa on native-PAGE. The temperature of the enzyme shows optimum activity was found 100 ºC. The enzyme was retained it`s activity around %66.5 at the end of 24 hours between 30-110 ºC. The optimum activity was obtained at pH 6.0 the enzyme also presented the enzyme was 88% stable at 55 ºC between pH 3.0-6.0 for 24 hours. The optimum activity of L-12 lichenase has shown 67'lik% in the 7.5% NaCl concentration. The activity of enzyme was protected by 5 mM EDTA (%97), 5 mM CaCl2 (%95), 3 mM PMSF (%56), %1 v/v triton X-100 (%101), %1 w/v SDS (%38) and 5mM ZnCl2 ile (%36).According to these result, L-12 lichenase is hiperthermophile, thermostable, acidic and asidostable, halotolerant, sulfur-rich amino acids and not affected by surfactants.For the optimum activity of enzyme is indicating that acidic pH stable and acidic pH thermostable are stable properties, preparation of chicken feed, especially in the first available properties.Key Words: Bacillus, lichenase, thermostable, acidostable, halotolerant