Elazığ ilindeki sokak köpeklerinde dirofilaria immitis ve dirofilaria repens'in multipleks-pzr ile tespit edilmesi, wolbachia dna'sının pzr ile aranması ve dirofilaria immitis seroprevalansının belirlenmesi
Detection of dirofilaria immitis and dirofilaria repens by multiplex-pcr, investigation of wolbachia dna by pcr and determination of dirofilaria immitis seroprevalance in stray dogs of Elazig province
Yazar: AYŞE TÜRKAN ÇİFTÇİ
Danışman: DOÇ. DR. SAMİ ŞİMŞEK
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Dirofilaria = Dirofilaria ; Dirofilaria immitis = Dirofilaria immitis ; Dirofilaria repens = Dirofilaria repens ; Elazığ = Elazığ ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Köpekler = Dogs ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Wolbachia sp. = Wolbachia sp.

Özet:
Dirofilaria immitis ve Dirofilaria repens köpeklerde parazitlenen en yaygın nematodlardandır. Bu çalışmanın amacı, sokak köpeklerinden elde edilen kan örneklerinde tek bir multipleks-PZR metoduyla her iki paraziti eş zamanlı olarak tespit etmek ve D.immitis'in yayılışını ELISA yöntemiyle belirlemekti. PZR amplifikasyonunda parazitin mitokondrionunun (12S rDNA) small subunit ribozomal RNA gen bölgesi, serolojik tanı amacıyla da ticari ELISA kiti kullanıldı. Çalışmanın diğer bir amacı da dirofilariosisin patogenezisinde önemli bir rol oynayan Wolbachia'nın PZR ile belirlenmesiydi. Bu çalışma için 161 sokak köpeğine ait kan ve serum örneği toplanmış ve kullanılıncaya kadar -20 °C'de saklanmıştır. DNA izolasyonundan sonra bütün örnekler D.immitis ve D.repens için multipleks PZR ile ve Wolbachia için de konvansiyonel PZR ile spesifik primerler kullanılarak çoğaltılmış, serum örnekleri de ticari ELISA kitiyle çalışılmıştır. Bu çalışma ile incelenen toplam 161 köpeğin üçünde (% 1.8) sadece D.immitis, birinde (% 0.6) D.repens ve üçünde (% 1.8) de miks enfeksiyon belirlenmiştir. Öte yandan çalışmaya dahil edilen 161 köpeğin 10'unda (% 6.2) Wolbachia sp. etkenine rastlanmıştır. Bu çalışma ile serum örneği ticari ELISA kiti ile analiz edilen 161 köpeğin altısında (% 3.7) D.immitis bakımından seropozitiflik saptanmıştır. Bu proje ile ülkemizde ilk kez D. immitis ve D. repens'in multipleks-PZR ile eş zamanlı tespiti gerçekleştirilmiş, bunun yanısıra ticari ELISA kiti ile bahsi geçen köpeklerdeki D. immitis seroprevalansı belirlenmiştir. Yine bu örneklerde Wolbachia bakterisinin varlığı bölgemizde ilk kez araştırılmıştır. Dirofilariozisin yörede ciddi bir sorun olmamasına rağmen, sokak köpeklerinin enfeksiyon kaynağı olmaya devam ettiği kanısına varılmıştır.

Abstract:
Dirofilaria immitis and Dirofilaria repens are the most common species of filarial nematodes described in the dogs. In this research we aimed to performe a single-step multiplex PCR to detect and differentiate simultaneously and unequivocally D.immitis and D.repens on DNA extracted from canine peripheral blood and also detect the seroprevalance of D.immitis by ELISA. The amplification was performed using a set of primers designed on a portion of the small subunit ribosomal RNA gene of the mitochondrion (12S rDNA). We also aimed to PCR detection of the Wolbachia which is play an important role in D.immitis biology and contributes to the inflammatory pathology of the heartworm. For this aim, 161 blood and sera samples were collected from stray dogs and stored at -20 °C until used. After the DNA extraction, all samples will be worked with Dirofilaria primers by multiplex-PCR and Wolbachia primers by conventional PCR besides ELISA for serology. In this study, three of examined dogs (1.8 % ) were found to be infected with only D.immitis, one of them (0.6 % ) with D.repens and three of them (1.8 % ) with both parasites. Besides, 10 out of 161 (6.2 % ) were detected as infected with Wolbachia sp. Lastly, the seroprevalence of dirofilariosis in examined dogs were found to be 3.7 % (6/161). The simultaneous detection of both D. immitis and D. repens has been achived for the investigation of Wolbachia bacteria in those samples were made first time in our region. As a result, it was concluded that although dirofilariosis is not a serious problem in the region, stray dogs still continue to be a source of infection.