Etanersept uygulanan farelerde akut bartonella henselae enfeksiyon modeli
Examination of acute bartonella henselae infection model in rats with etanercept
Yazar: LEVENT AKSOY
Danışman: PROF. DR. ÇAĞRI ERGİN
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Bartonella henselae = Bartonella henselae ; Etanersept = Etanercept ; Fareler = Mice ; Granülom = Granuloma ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha ; İmmünosüpresyon = Immunosuppression

Özet:
Çoğunlukla immünitesi bozulmuş hastalarda görülen bartonelloz, anjiyomatöz deri lezyonlarıyla karakterize, sistemik tutulumun da eşlik edebildiği, Bartonella türü bakterilerin etken olduğu zoonotik bir hastalıktır. Risk gruplarının saptanması ve epidemiyolojisi üzerindeki çalışmaların gerçekleşmesi ile son yıllarda önem kazanmıştır. 
Tümör nekroz faktör-alfa (TNF-α) önemli bir proinflamatuar sitokin olup, kronik inflamatuvar yanıtın devam etmesi sonucunda; romatolojik hastalıklar başta olmak üzere, otoimmün, sistemik inflamatuvar hastalıkların patogenezinde yer almaktadır. Son 10 yılda TNF- α blokeri ilaç kullanımı artmıştır. Antiinflamatuvar etkilerinin yanı sıra, anti-TNF- α ilaçlarının kullanımı, enfeksiyon riskinin artması ile de ilişkilidir. TNF-α aktivitesinin engellenmesi, granülomatöz inflamasyonu baskılar. Seroprevalans araştırmaları toplum içinde sessiz seyreden bartonelloz bulunduğunu göstermektedir. Bu projenin amacı immünitesi TNF-α inhibitörü etanersept etkisi altında olan deneklerde Bartonella henselae. enfeksiyonunun seyrinin doku düzeyinde reaksiyonunun araştırılmasıdır.
Araştırma, 3 farklı grupta Pamukkale Üniversitesi Tıp Fakültesi Deneysel Cerrahi Uygulama ve Araştırma Merkezi  Laboratuvarı'nda yürütüldü. Grup 1'e 100µL fosfatla tamponlanmış tuzlu su (PBS) SC, Grup 2'ye deneyin 0. ve 30. günlerinde ~1X106 cfu/ml Bartonella henselae SC ve Grup 3'e ise 0. Ve 30. günlerinde  ~1X106 cfu/ml Bartonella henselae SC ve deneyin 1. Ve 5. gününde  etanersept 0,4 mg/kg SC uygulandı. Enfeksiyon oluşum kontrolü IFAT (immüfloresan antikor tekniği) ile doğrulandı. 60. günde deney sonlandırıldı. Karaciğer, dalak ve lenf nodu dokularından kültür ve histopatolojik incelemeler yapıldı.
Makroskopik incelemede Grup 3'te bir örnekte deride nodüler lezyon, Grup 3'te iki karaciğer örneğinde kistik yapılar gözlendi. Grup 1 ve Grup 2'de birer adenom (Grup 1 için %11,1, Grup 2 için %14,3) saptandı (p>0,05). Karaciğer dokusunda Grup 2'de bir farede (%14,3), Grup 3'te beş farede (%83,3) mikrogranülom yapısı görüldü (p<0,05). Grup 2'de bir (%14,3) ve Grup 3'de bir (%16,7) farede nekrotize granülom vardı. Grup 2'deki bir farede (%14,3) pleomorfik hepatositler, Grup 3'te bir örnekte hemanjiyom mevcut idi.
Doku kültürlerinde gruplar arasında fark saptanmadı (p>0,05).
Histopatolojik incelemede ETN verilen grupta karaciğer dokusunda,granülom, interfaz hepatit parametrelerinde farklılık saptandı (p<0,05). Dalakta ekstramedüller hematopoez, ETN verilen grupta ETN verilmeyen gruba göre daha fazlaydı (p<0,05). Lenf nodunda histopatolojik inceleme kriterleri açısından gruplar arası farklılık bulunmadı (p>0,05). 
Sonuç olarak etanersept etkisi altındaki Bartonella hensela ile enfekte farelerde enfeksiyon modelinin oluştuğu gösterildi. Etanersept verilen deneklerde histopatolojik olarak tespit edilen granülom oluşumunu artırdığı sonucuna ulaşıldı. Etanersept kullanacak hastalarda bartonellozis reaktivasyonunun ve ağır klinik tabloların oluşabileceği dikkate alınmalı ve bu konuda hasta değerlendirmelerinde duyarlı yaklaşılmalıdır.
Anahtar Kelimeler: Bartonella henselae, TNF-α, etanersept, granülom, immünsüpresyon.

Abstract:
Bartonellosis, which is mostly seen in immunocompromised patients, is a zoonotic disease that is caused by Bartonella bacteria, which can be accompanied by characterization and systemic involvement of angiomatous skin lesions. It has gained importance in recent years with the identification of risk groups and the increased work on epidemiology.
Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) is an important proinflammatory cytokine and as a result of chronic inflammatory response, rheumatologic diseases, especially autoimmune, systemic inflammatory diseases are in the pathogenesis. The use of TNF-α blocking drugs has increased in the last 10 years. In addition to antiinflammatory effects, the use of anti-TNF-α drugs is also associated with an increased risk of infection. Inhibition of TNF-α activity suppresses granulomatous inflammation. Seroprevalence studies show that there is silent bartonellosis in the community. The objective of this project is to investigate the tissue-level reaction of the course of Bartonella henselae infection in subjects with an immunosuppressive effect of the TNF-α inhibitor etanercept.
The research was carried out in 3 different groups at Pamukkale University Medical Faculty Experimental Surgery Application and Research Center Laboratory. Group 1 received 100 μL phosphate buffered saline (PBS) SC. In group 2, ~ 1 × 10 6 cfu / ml Bartonella henselae SC was given on days 0 and 30 of the experiment. Group 3 received ~1 × 10 6 cfu / ml Bartonella henselae SC on days 0 and 30 and etanercept 0.4 mg / kg SC on day 1 and 5 of the experiment. Infection control was confirmed by IFAT (immunofluorescent antibody technique). On the 60th day the experiment was terminated. Culture and histopathological examinations were performed on liver, spleen and lymph node tissues. 
Macroscopic examination of the specimens from subjects revealed nodular skin lesions in one specimen in Group 3, and cystic structures in two liver specimens in Group 3. One adenoma  was detected in Group 1 and Group 2 (11,1% for Group 1 and 14,3% for Group 2) (p> 0,05). Microgranuloma structure was observed in one sample of Group 2 (14,3%) and in five samples of Group 3 (83,3%) in liver tissue (p <0,05). There was necrotizing granulomas in one (14.3%) in group 2 and one (16,7%) in group 3. Pleomorphic hepatocytes in one group 2 (14,3%) and hemangiomas in one group 3.
There was no difference between groups in tissue cultures (p> 0,05).
There was a difference in the liver, granulomas, interphase hepatitis parameters in ETN group (p <0,05). Extramedullary hematopoiesis in the spleen was higher in the group receiving Etanercept than in the group without Etanercept (p <0,05). Histopathologic examination criteria in lymph node were not different between the groups (p> 0,05).
As a result, infection with Bartonella hensela under the influence of etanercept was shown to occur in infected mice. The results obtained in the subjects with etanercept increased histopathologically detected granuloma formation. It should be taken into account that bartonellosis reactivation and severe clinical manifestations may occur in patients who will use etanercept and should be approached sensitively in patient evaluations.
Key words: Bartonella henselae, TNF-α, etanercept, granuloma, immunsupressıon.