C-4 I serviks kanseri hücrelerinde Melphalan' ın antiproliferatif etkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of the antiproliferative effect of Melphalan on C-4 I cervical cancer cells
Yazar: MERVE MALKOÇ
Danışman: PROF. DR. FATMA GÜL ÖZCAN
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Serviks kanseri, genetik mutasyonlar ve çeşitli dış etkenlerle ilişkilendirilen, kadınlarda sık görülen bir kanser türüdür. Kontrolsüz hücre bölünmesine neden olan bu hastalığın tedavisinde cerrahi müdahale ve kemoterapi önemli rol oynamaktadır. Kemoterapötik ajanların kanser hücrelerinde apoptozu tetikleyen dozunun belirlenmesi, etkili tedavi stratejilerinin oluşturulmasında kritik bir adımdır.

Bu tez çalışması, serviks kanseri kökenli C-4 I hücre hattı üzerinde Melphalan adlı azot hardalı türeviden türetilen bir kemoterapötik ajanın antiproliferatif etkisini araştırmayı amaçlamaktadır. Melphalan'ın bu hücre hattındaki sitotoksik etkisi, farklı doz ve zaman aralıklarında değerlendirilerek, tedavi potansiyeli incelenmiştir.
Melphalan'ın antiproliferatif etkisini belirlemek adına, 24 ve 48 saatlik uygulamalarda altı farklı doz (D1 = 50 µM, D2 = 100 µM, D3 = 200 µM, D4 = 400 µM, D5 = 600 µM, D6 = 800 µM) kullanılmıştır. Melphalan'ın 24 saatlik uygulamasında, D1 dışındaki tüm doz gruplarında belirgin bir sitotoksik etki gözlemlenmiştir (p<0,05). 48 saatlik uygulama sonrasında ise, tüm doz grupları kontrol grubuyla karşılaştırıldığında anlamlı bir sitotoksik etki tespit edilmiştir (p<0,05). IC50 dozu, 48 saatlik uygulama sonrasında D5 dozu (600 µM) olarak belirlenmiştir.

Melphalan'ın neden olduğu sitotoksik etki sonucu oluşan apoptoz, Giemsa boyama ve DAPI uygulaması ile morfolojik olarak tespit edilmiştir. Ayrıca, Apoptotik İndeks (AI) parametresi kullanılarak apoptotik hücre yüzdesinin kontrol grubuna göre anlamlı olarak arttığı belirlenmiştir (p<0,05). Melphalan uygulamasının apoptozu tetiklediğini göstermek adına ADP/ATP oranı biyoluminesans testi ile değerlendirilmiş ve bu yönde anlamlı sonuçlar elde edilmiştir.

Sonuç olarak, Melphalan'ın C-4 I hücre hattında artan süre ve doza bağlı olarak sitotoksisite oluşturduğu tespit edilmiştir. Özellikle, 48 saatlik uygulamada IC50 dozu (D5, 600 µM) apoptotik etkiyi belirgin bir şekilde artırmıştır. Bu çalışmanın bulguları, Melphalan'ın serviks kanseri tedavisinde potansiyel bir etken olabileceğini göstermekte olup, gelecekte yapılacak çalışmalara temel oluşturacak niteliktedir.

Abstract:
Cervical cancer is a common type of cancer in women that is associated with genetic mutations and various external factors. Surgery and chemotherapy play an important role in the treatment of this disease that causes uncontrolled cell division. Determining the dose of chemotherapeutic agents that trigger apoptosis in cancer cells is a critical step in establishing effective treatment strategies.
This thesis aims to investigate the antiproliferative effect of Melphalan, a chemotherapeutic agent derived from nitrogen mustard derivative, on C-4 I cell line of cervical cancer origin. The cytotoxic effect of Melphalan on this cell line was evaluated at different doses and time intervals and its therapeutic potential was examined.
In order to determine the antiproliferative effect of Melphalan, six different doses (D1 = 50 µM, D2 = 100 µM, D3 = 200 µM, D4 = 400 µM, D5 = 600 µM, D6 = 800 µM) were used at 24 and 48 hours. At 24 hours of melphalan treatment, a significant cytotoxic effect was observed in all dose groups except D1 (p<0.05). After 48 hours, all dose groups showed a significant cytotoxic effect compared to the control group (p<0.05). The IC50 dose was determined as D5 dose (600 µM) after 48 hours of administration.
Apoptosis caused by the cytotoxic effect of melphalan was detected morphologically by Giemsa staining and DAPI application. In addition, using the Apoptotic Index (AI) parameter, it was determined that the percentage of apoptotic cells increased significantly compared to the control group (p<0.05). In order to show that Melphalan administration triggered apoptosis, ADP/ATP ratio was evaluated by bioluminescence test and significant results were obtained in this direction.

As a result, it was determined that Melphalan induced cytotoxicity in the C-4 I cell line depending on increasing time and dose. In particular, the IC50 dose (D5, 600 µM) significantly increased the apoptotic effect at 48 hours. The findings of this study indicate that Melphalan may be a potential agent in the treatment of cervical cancer and will form the basis for future studies.