İmmün yetmezlik hastalarında carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) yöntemi ile lenfosit proliferasyonunun incelenmesi
Lymphocyte proliferation with the methot of carboxyfluourescein succinimidyl ester (CFSE) in common variable immunodeficiency (CVID) patients
Yazar: AYŞE GÜL İZGİ
Danışman: DOÇ. DR. TUNÇ AKKOÇ
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Allerjik Hastalıklar Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: B lenfositleri = B lymphocytes ; Esterler = Esters ; Lenfositler = Lymphocytes ; T lenfositleri = T lymphocytes ; İmmün yetmezlik = Immun deficiency ; İmmünite = Immunity

Özet:
Sık Değişken İmmün Yetmezlik (SDİY); hipogamagloblunemi ve normal / düşük B hücre ile tanımlanan antikor eksikliği hastalıkları grubundandır ve tekrarlayan bakteriyel infeksiyonlar, otoimmün hastalıklar ve malignite ile karakterize edilmektedir. Bu çalışmada, SDİY hastalarındaki T ve B lenfositlerinin proliferasyonlarının incelenmesi amaçlandı. T ve B hücre alt gruplarında hastalığın immünopatogenezinde önemli rol oynadığı düşünülen CD19+, CD21+, CD27+ B hücreleri ve CD3+, CD8+, CD4+ T hücrelerinin Caboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) ile hücre proliferasyon yanıtlarına bakıldı. Çalışmaya SDİY tanısı almış hastalar (n:13) ve kontrol grubu için SDİY hastalarıyla yaş uyumu olan sağlıklı bireyler (n:5) alındı. Tüm çocuklardan 6 ml venöz kan heparinli tüpe alındıktan sonra, 3'er ml tam kandan negatif seçilim yöntemi Rosette Sep ile T ve B hücre izolasyonu yapıldı. İzolasyon sonunda T ve B hücrelerinin saflığına akım sitometrisi ile bakıldı. Daha sonra izole edilen lenfositler CFSE-FITC ile karanlık ortamda işaretlendi ve T hücre proliferasyonu için hücreler anti-CD2, anti-CD3, anti-CD28 (CDmix) ile uyarılarak 4 günlük kültürleri yapıldı. Kültür sonunda hücreler anti-CD3-PE, anti-CD4-PE, anti-CD8-APC ile boyandıktan sonra CD3+, CD4+, CD8+ T hücrelerinin proliferasyonu akım sitometrisi ile bakıldı. B hücre proliferasyonu için hücreler anti-IgM + IL-4 ile 4 gün kültür edildikten sonra hücreler anti-CD19-APC-Cy7, anti-CD27-PE, anti-CD21-APC ile boyanarak CD19+, CD27+ ve CD21+ B hücrelerinin proliferasyonu akım sitometrisi ile bakıldı. Sonuç olarak T lenfositlerin ve CD19+ B hücrelerinin proliferasyonlarının 1. bölünmesinde, CDmix ile uyarımlı SDİY hücreleri, CDmix ile uyarımlı kontrolden anlamlı olarak daha fazla prolifere olmuştur. CD4+ T hücrelerinin 2. bölünmelerinde CDmix ile uyarımlı SDİY hücreleri, uyarımsız SDİY hücrelerinden anlamlı olarak daha fazla prolifere olmuşlardır. CD27+ ve CD21+ B hücrelerinde ise anlamlı proliferasyon görülmemiştir.Anahtar Sözcükler: SDİY, CFSE, Lenfosit proliferasyonu, T Lenfosit izolasyonu ve B lenfosit izolasyonu

Abstract:
Lymphocyte Proliferation With the Methot of Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester (CFSE) in Common Variable İmmunodeficiency (CVID) Patients.Common variable immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous disease in the group of predominantly antibody deficiencies, which is defined by hypogammaglobulinemia and normal or low number of B cells, and characterized by increased susceptibility to recurrent bacterial infections, autoimmune disorders, and malignancies. The goal of this thesis is to investigate the proliferation of the B and T lymphocytes of the patients with the CVID disorder. In this study we investigated that B cell subset proliferation, which are CD19+, CD21+, CD27+ B cells and T cell subset proliferation, which are CD3+, CD8+, CD4+ T cells. CVID patients and a control group whose members are of the same age with the patients but are healthy and free of CVID have been taken in to the study. Six milliliters of venous blood has been taken from all children and cell isolation on the B and T cells has been implemented on each 3ml of blood using the negative selection procedure called Rosette Sep as well as ficoll. After the isolation, the purity of the B and T cells was checked using flow cytometry. Later on, the lymphocytes, that have been isolated were marked in a dark environment using CFSE. For T cell proliferation, lyphocytes has been stimulated with anti-CD2, CD3, CD28 (CDmix) and have been cultured for four days. After the culture, cells are dyed with anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8 and later on CD3+, CD4+, CD8+ T cells proliferation is analyzed with flow cytometry. To proliferation the isoleted B cell, it is cultured for four days along with the anti-IgM+IL-4. Afterwards, B cells having been dyed with anti-CD19, anti-CD27, anti-CD21, the proliferation of cells CD19, CD27 and CD21+B cells are analyzed using flow cytometry. As a result, first division of at the proliferation of the T lymphocytes and the CD19+ B cells, there is significant difference between the stimulated control and stimulated CVID cells. So stimulated CVID more proliferate than stimulated control. Even more that second division of CD4+ T cell has significant proliferation. Stimulated CVID cells more proliferate than unstimulated CVID cells. CD27+ ve CD21+ B cells haven?t significate division.Key words: CVID, CFSE, Lymphocytes proliferation, B cell and T cell isolation.