Nerium oleander distilatı'nın bovine viral diarrhea virus'unun sitopatojen suşuna karşı antiviral etkinliğinin in vitro belirlenmesi
Determination of in vitro antiviral affect of Nerium Oleander Distillatte to against cytopathogen Bovine Viral Diarrhea Virus
Yazar: ASLI SAKARYA
Danışman: DOÇ. DR. OĞUZHAN AVCI
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Antiviral ajanlar = Antiviral agents ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Nerium oleander = Nerium oleander ; Sığır virüs diyaresi-mukoza hastalığı = Bovine virus diarrhea-mucosal disease ; İn vitro = In vitro

Özet:
Bu çalışma Nerium Oleander (NO)'in sitopatojen Bovine Viral Diarhea Virus (BVDV)  suşuna karşı antiviral etkinliğinin in vitro şartlarda belirlenmesi amacı ile yapıldı. NO ılıman iklim kuşak bitkisi olarak bilinmektedir. Kalifornia, Arizona ve Güney Amerika'da yetişir, ıslak ve nemli yerlerde, deniz kenarlarında rastlanmaktadır. Ülkemizde Ege ve Akdeniz kıyılarında yetiştirilmektedir.  NO'nun zona, sıtma, ekzama, deri hastalıkları, göz hastalıkları, kanser türleri, astım, cüzzam, siğil ve tümör hastalıklarında kullanıldığı bilinmektedir. 
Araştırmada kullanılan BVDV'nin çoğaltılması ve NO'nun sitotoksik dozunun belirlenebilmesi için Selçuk Üniversitesi Veteriner Fakültesi Viroloji Anabilim Dalı'ndan temin edilen MDBK devamlı hücre kültürleri kullanıldı. Virusun Doku Kültürü İnfektif Doz 50 (DKID50)'si mikrotitrasyon yöntemi ile belirlenirken NO'nunsitotoksik dozu ile belirlendi. Bütün mikropleytler sitopatojenik effekt (CPE) oluşumu yönünden doku kültürü mikroskobunda her gün incelendi. 72 saat sonunda hücrelerin canlılığı MTT 3-(4,5-Dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazoliumbromide) ile gerçekleştirildi. Spektrofotometrik Optik Dansite (OD) değerleri ELISA okuyucusu ile 540 nm dalga boyunda okutularak hesaplandı. Bütün aşamalar hücre, virus ve NOD kontrol ile birlikte değerlendirilerek en az 3 bağımsız tekrar yapıldı. OD absorbans değerleri ANOVA ve Duncan testi kullanılarak hesaplandı. 
NO'nun toksisite değeri 5mg/ml olarak belirlendi. Hücre kontrol, virus kontrol NO kontrol değerlendirmeleri yapıldı. Hücre kontrol ve NO kontrol gözlerinde herhangi bir CPE oluşumuna rastlanmadı. Virus kontrol gözlerinin tamamında ise CPE kaydedildi. Elde edilen sonuçlar değerlendirildiğinde NO'nun MDBK devamlı hücre kültürlerinde sitopatojen BVDV'ye karşı in vitro antiviral etkinliğinin olmadığı belirlendi.
Sonuç olarak NOD'un sitopatojen BVDV'ye in vitro şartlar altında antiviral etkinliğinin olmadığı ancak NOD'un antiviral etkinliğinin farklı virus ve farklı hücre suşları ile araştırılmasında fayda olacağı öngörülmektedir.

Abstract:
The aim of this study was to determine the antiviral activity of Nerium Oleander (NO) against cytopathogenic Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) strain in vitro. NO is known as temperate climate belt plant, Grows in California, Arizona and South America, Wet and humid places, seaside, It is grown in the Aegean and Mediterranean coasts of our country. NO is known to be used in shingles, malaria, eczema, skin diseases, eye diseases, cancer types, asthma, leprosy, warts and tumor diseases.
To increase the Bovine Viral Diarrhea Virus used in the study and to determine the cytotoxic dose of NO, MDBK continuous cell cultures obtained from the Virology Department of the Faculty of Veterinary Medicine of Selcuk University were used. Tissue Culture Infective Dose 50 (TCID50) of the virus was determined by micro titration method and cytotoxic dose of NO was determined by. All micro plates were examined daily by tissue culture microscopy for cytopathogenic effect (CPE) formation. After 72 hours, viability of the cells was performed with MTT 3- (4,5-Dimethyl thiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolumbromide). Spectrophotometric Optical Density (OD) values were calculated by ELISA reader at 540 nm wavelength. All stages were evaluated with cell, virus and NOD control and at least 3 independent repetitions were performed. OD absorbance values were calculated using ANOVA and Duncan test.
The toxicity value of NO was 5mg/ml. Cell control, virus control NO control evaluations, No cpe formation was detected in the cell control and NO control eyes. Cpe was recorded in all virus control eyes, When the results were evaluated, it was determined that NO had no in vitro antiviral activity against cytopathology BVDV in MDBK continuous cell cultures.
As a result, NOD does not have antiviral activity in vitro for cytopathogenic BVDV, but it is predicted that it will be useful to investigate the antiviral activity of NOD with different viruses and different cell strains.