Sağlıklı köpek dışkılarından lactobacillus acidophilus ve enterococcus faecium izolasyonu ve probiyotik özelliklerinin araştırılması
The isolation of lactobacillus acidophilus and enterococcus faecium from faeces of HEALTHY dogs  and determination of probiotic properties
Yazar: GİZEM SÖZÜÖZ
Danışman: PROF. DR. ALPER ÇİFTCİ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Enterococcus faecium = Enterococcus faecium ; Köpekler = Dogs ; Lactobacillus acidophilus = Lactobacillus acidophilus ; Probiyotik bakteriler = Probiotic bacteria ; Probiyotikler = Probiotics ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Probiyotik tedavisi pet hayvan sağlığında biyogüvenlik uygulamaları kapsamında son yıllarda güvenle uygulanan yöntemlerin başında yer almaktadır. Bu tez çalışması, potansiyel probiyotik bakterilerden olan Lactobacillus acidophilus ve Enterococcus faecium'un sağlıklı köpeklerden izolasyonu ve izole edilen bakterilerin probiyotik olarak kullanılma potansiyellerini araştırmak amacıyla gerçekleştirilmiştir. 
Çalışmada L. acidophilus ve E. faecium selektif izolasyonu için yapılan ekimler sonucunda 10 L. acidophilus ve 14 E. faecium belirlendi. Bu izolatlar probiyotik özelliklerinin araştırılması için yapılacak olan testlerde kullanılmak üzere seçildi. İzole edilen E. faecium izolatlarının çoklu antibiyotik dirençliliklerine göre değerlendirilmesi sonucunda 2 izolat 3 antibiyotiğe, 4 izolat 4 antibiyotiğe, 4 izolat 5 antibiyotiğe, 2 izolat 6 antibiyotiğe ve 2 izolat da 8 antibiyotiğe karşı dirençli olarak bulundu. L. acidophilus izolatlarının 1 tanesi 2 antibiyotiğe, 2 tanesi 3 antibiyotiğe, 4 tanesi 4 antibiyotiğe, 2 tanesi 5 antibiyotiğe ve 1 tanesi 7 antibiyotiğe dirençli olarak değerlendirildi. Çalışmada E. faecium izolatlarının %0,5 safra konsantrasyonunda %70-95 ve %1,0'lık safra konsantrasyonunda %35-42,5 oranında canlılıklarını korudukları saptandı. L. acidophilus izolatlarının da %0,5 safra konsantrasyonunda %87,5-100 ve %1,0'lık safra konsantrasyonunda %75-95 oranında canlılıklarını korudukları belirlendi. Bu çalışmada izolatların pH toleransı pH 3 ve pH 5'te test edildi. E. faecium izolatlarının pH 3'te %50-92,5 ve pH 5'te %62,5-100 oranında canlılıklarını korudukları saptandı. L. acidophilus izolatlarının da pH 3'te %50-90 ve pH 5'te %75-100 oranında canlılıklarını korudukları belirlendi. E. faecium ve L.acidophilus izolatlarının tamamının hidrofobik oldukları belirlendi. Çalışmada ishalli bir köpekten izole edilmiş olan ve kültür koleksiyonumuzda bulunan patojen E.coli izolatına karşı izole edilen bakterilerin antagonistik etkileri Disk Difüzyon Agar yöntemi ile araştırıldı. L. acidophilus izolatlarından hiçbirisi E.coli'ye karşı in vitro antagonistik etki göstermezken, E. faecium izolatlarından 9 tanesi E.coli'ye karşı in vitro antagonistik etki göstermiştir.
Sonuç olarak, probiyotik olarak kullanımları açısından tüm sonuçlar karşılaştırmalı olarak değerlendirildiği zaman antibiyotik direnç durumlarına göre 2 E. faecium ve 1 L. acidophilus izolatının probiyotik olarak kullanılabilir özellikte olduğu düşünüldü. Literatür bilgilerinde bildirildiği üzere probiyotik bakteriler in vitro olarak etkili bulunmasa bile in vivo koşullarda koruyucu bir etki gösterebilmektedirler. Dolayısı ile izolatların in vivo olarak da etkisinin araştırılması gerekliliği kanısına varıldı.

Abstract:
Probiotic treatment is one of the methods that have been safely applied in recent years within the scope of biosafety practices in pet health. This thesis study was carried out to isolate potential probiotic bacteria, Lactobacillus acidophilus and Enterococcus faecium, from healthy dogs and to investigate the potential of the isolated bacteria to be used as probiotics.
In the study, 10 L. acidophilus and 14 E. faecium isolates were determined. These isolates were selected to be used in tests to investigate their probiotic properties. As a result of the evaluation of the isolated E. faecium isolates according to their resistance to multiple antibiotics, 2 isolates were found to be resistant to 3 antibiotics, 4 isolates to 4 antibiotics, 4 isolates to 5 antibiotics, 2 isolates to 6 antibiotics, and 2 isolates to 8 antibiotics. 1 of the L. acidophilus isolates were evaluated as resistant to 2 antibiotics, 2 to 3 antibiotics, 4 to 4 antibiotics, 2 to 5 antibiotics, and 1 to 7 antibiotics. In the study, it was determined that E. faecium isolates maintained their viability at a rate of 70-95% at 0.5% bile concentration and 35-42.5% at 1.0% bile concentration. It was determined that L. acidophilus isolates maintained their viability at a rate of 87.5-100% at 0.5% bile concentration and 75-95% at 1.0% bile concentration. In this study, determination of pH tolerance of isolates was tested at pH 3 and pH 5. It was determined that E. faecium isolates maintained their viability at a rate of 50-92.5% at pH 3 and 62.5-100% at pH 5. It was determined that L. acidophilus isolates maintained their viability at a rate of 50-90% at pH 3 and 75-100% at pH 5. It was determined that all E. faecium and L. acidophilus isolates were hydrophobic. In the study, the antagonistic effects of bacteria isolated from a diarrheal dog and against the pathogen E. coli isolate in our culture collection were investigated by Disk Diffusion Agar method. It was determined that none of the L. acidophilus isolates showed an in vitro antagonistic effect against E. coli. 9 of the E. faecium isolates showed an in vitro antagonistic effect against E. coli.
As a result, when all results were evaluated comparatively in terms of their use as probiotics, it was thought that 2 E. faecium and 1 L. acidophilus isolates could be used as probiotics according to their antibiotic resistance status. As reported in the literature, even if probiotic bacteria are not found to be effective in vitro, they can show a protective effect in vivo. Therefore, it was concluded that it is necessary to investigate the effect of isolates in vivo.