Aminoglutethimid'in nöronal hücre hatlarında Steroid Sentezi ve Amiloid βpeptit toksisitesi üzerine etkisi
The effect of Aminogluthetimide on Amyloid beta Toxicicity in neuronal cell lines
Yazar: CUMHUR DOĞAN
Danışman: PROF. DR. PINAR AKAN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı / Temel Sinirbilimler Bilim dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Amiloid = Amyloid ; Aminoglutetimid = Aminoglutethimide ; Hücre canlılığı = Cell survival ; Hücre dizisi = Cell line ; Nöronlar = Neurons ; Peptidler = Peptides ; Steroidler = Steroids ; Toksisite = Toxicity ; Toksisite testleri = Toxicity tests

Özet:
Progresif ilerleme gösteren Alzheimer Hastalığı(AH), hafıza kaybı ile sonuçlanan geri dönüşümü olmayan nörodejeneratif bir hastalıktır. Nörodejenerasyonu başlatan faktörlerden biri nöronal dokularda Amiloid beta (Aβ) proteininin konsantrasyonundaki artıştır. Aβ gibi toksik ajanlarla indüklenen bazı steroidler hücre ölümü üzerinde doza bağlı koruyucu etkiye sahiptirler. Çok çeşitli ve farklı fizyolojik etkilere sahip steroid hormonları, in vivo koşullarda, kolesterolden yan zincir koparılması, hidroksilasyon ve aromatizasyon reaksiyonları ile oluşabilir. Aminoglutetimid (AMG) uygulama dozuna bağlı olarak steroid sentezini yan zincir koparılması veya aromatizasyon basamağında inhibe edebilir. Bu çalışma ile Aβ toksisitesine karşı AMG uygulamasının hücre canlılığına etkisinin doz bağımlı olarak değerlendirilmesi ve estron, estrodiol, DHEA, pregnenolone sülfat ve androstenedion düzeyleri üzerine etkisinin belirlenmesi hedeflenmiştir.
Çalışmamızda feokromasitoma (PC-12) hücre hattı nöroendokrin hücre modeli olarak kullanıldı. Fonksiyonel fragman Aβ25-35 peptit ve AMG uygulamasının hücre steroid düzeylerindeki oluşturduğu değişiklikler ELISA ve LCMS MS yöntemiyle belirlendi.  Hücre canlılıkları MTT redüksiyonu yöntemi ve ışık mikroskopisi ile değerlendirildi. 
72 saat Aβ25-35 (20uM) uygulaması ile hücre canlılığını kontrol grubuna göre ortalama ~%55 azalttı. Aβ25-35 uygulaması hücre estron ve androstenedion düzeyini artırırken, estrodiol ve DHEA düzeyini azalttı. AMG, Aβ toksisitesi üzerinde doza bağlı kısmi koruyucu etki gösterdi. 
PC-12 hücre hattında oluşturulan Aβ toksisitesi oluşturulan çalışmamızda hücre içi steroid hormon değişiklerinin olduğu ve bu değişikliklerin hücre canlılığını etkileyebildiği gösterilmiştir. AMG'nin doza bağlı koruyucu etkisi hücre içi kolesterolün steroid sentezine girişinin bloke edilmesine veya Aβ'nın tetiklediği eksitotoksik yolakların inhibisyonuna bağlı olabilir. AMG'nin Aβ toksisitesindeki rolünü daha net olarak ortaya koymak için, hücre içi reseptör modülasyonunu gösterecek mekanistik çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Alzheimer's disease is an irreversible and progressive neurodegenerative disease, which results in with memory deficit. The increase in amyloid beta (Aβ) concentration is one of initiating factors in the neurodegeneration process. Some steroids have protective effects on cell death induced by toxic agents (such as Aβ peptide) depending on their dose. In-vivo vary steroids may occur by reactions such as cholesterol side cleavage, hydroxylation or aromatization. Aminogluthetimide can inhibit steroid synthesis on the step of side cleavage or aromatization in dose dependent manner. The aim of this study is to determine the effect of aminogluthetimide on Aβ toxicity and also to evaluate the changes of steroid levels including estron, estrodiol, DHEA, DHEA sulfate, androstenedion and pregnenolon sülfat.
	In our study, the rat feochromacytoma cell line (PC-12) was used as an neuroendocrine model. The effects of Aβ 25-35 peptide which is the functional fragment of Aβ protein, and aminogluthedime on steroid levels were determined by ELISA and LCMS MS methods. MTT reduction method and light microscopy were used to assess cell viability.
	Aβ treatment during 72 hours reduced cell viability by 50 % of control cells. Aβ induced estron, and androstenedione levels but also decreased estradiol and DHEA levels. Aminogluthedimide partially protected the cells against to Aβ toxicity in dose dependent manner.
In our study, it has been shown that Aβ can change the level of steroids in PC-12 cells and also the changes of steroid levels can affect the cell viability. The protective effect of aminogluthetimide may be related to block of cholesterol input for steroid synthesis or it may be connected the inhibition of exitotoxicity induced by Aβ peptide. It needs to be further studies to explain the relationship between aminogluthetimide and receptor modulation in cell.