Bazı potansiyel patojen mikroorganizmalara karşı eisenia fetida sölom sıvısının antimikrobiyal aktivitesinin araştırılması
Investigation of antimicrobial activity of eisenia fetida coelomic fluid against some potential pathogenic microorganisms
Yazar: İLKE KARAKAŞ
Danışman: DOÇ. DR. BİNNUR MERİÇLİ YAPICI
Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antibakteriyel aktivite = Antibacterial activity ; Antibiyotikler = Antibiotics ; Antimikrobiyal aktivite = Antimicrobial activity ; Bakteri izolasyonu = Bacterial isolation ; Bakteriler = Bacteria ; Eisenia foetida = Eisenia foetida ; Solucanlar = Earthworms ; Sölomik sıvı = Coelomic fluid ; Toprak solucanları = Eisenia Fetida

Özet:
Bu çalışmada, insanlarda hastalığa neden olan dokuz farklı klinik bakteriye karşı
Eisenia fetida sölom sıvısının antibakteriyel aktivitesi araştırılmıştır. Bakteriyel izolatlar
öncelikle morfolojik ve kültürel özellikleri dikkate alınarak gruplandırılmış ve sonrasında
16S rRNA dizi analizi ile tanılanmıştır. Dizi analizi sonuçlarına göre izolatlar Lactococcus
lactis, Staphylococcus aureus, Bacillus nealsonii, Escherichia fergusonii, Shigella boydii,
Salmonella enterica, Escherichia coli suşları olarak tanılanmıştır. Araştırmada klinik
bakterilere karşı antibakteriyel madde olarak, saf sölom sıvısı ve sölom sıvısının %25, %50
ve %75'lik konsantrasyonlarda etil alkol, serum fizyolojik, dimetil sülfoksit ve kloroform
ile homojenize edilmesiyle elde edilen çözeltiler kullanılmıştır. Antibakteriyel maddelerin
bakteri kültürlerine karşı antibakteriyel aktivitesi disk difüzyon ve mikrodilüsyon
yöntemleri ile belirlenmiştir. Ayrıca saf sölom sıvısının bakteriyel izolatlar üzerindeki
etkinliğini gözlemlemek amacıyla taramalı elektron mikroskobu ve transmisyon elektron
mikroskobu ile inceleme yapılmıştır. Disk difüzyon sonuçlarına göre saf sölom sıvısından
elde edilen en yüksek inhibisyon zon çapı değerleri Escherichia coli (İ-1), Escherichia coli
(B-1) ve Shigella boydii klinik suşları için sırasıyla 35,50 mm, 33,75 mm ve 24,50 mm
olarak tespit edilmiştir. Ayrıca denemelerde kullanılan çözücü miktarındaki artışa bağlı
olarak inhibisyon zon çaplarında azalma meydana geldiği belirlenmiştir. Araştırmanın
Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu (MİK) bulgularına göre saf sölom sıvısının MİK
aralığı %0,03 (v/v) ile %4 (v/v) ve diğer antibakteriyel çözeltilerden elde edilen MİK
aralığı ise %0,03 (v/v) ile %8 (v/v) olarak tespit edilmiştir.
Taramalı alan mikroskobu ile yapılan incelemelerde saf sölom sıvısının S. aureus ve
E. coli suşlarının biyofilm oluşturma kapasitesilerinde bir azalmaya neden olduğu
gözlemlenmiştir. Transmisyon elektron mikroskobu ile yapılan incelemelerde ise saf sölom
sıvısının yine aynı bakteri hücreleri üzerinde hücre duvarı ve membranında hasar
oluşturduğu ve bazı hücrelerin tamamen lizize olduğu tespit edilmiştir.
Çalışmada denenen birçok antibiyotiğe dirençli bulunan bakteri suşlarına karşı gerek
sölom sıvısı ve gerekse ondan elde edilen çözeltilerin antibakteriyel etkinlik sergilemesi
nedeniyle; sölom sıvısı ile ilgili daha ileri araştırmaların yürütülmesi gerektiği kanaatine
varılmıştır.

Abstract:
In this study, against nine different clinical bacteria causing disease in humans was
investigated the antibacterial activity of Eisenia fetida coelomic fluid. Bacterial isolates
were firstly grouped according to their morphological and cultural characteristics and then
identified by 16S rRNA sequence analysis. According to the results of sequence analysis
isolates Lactococcus lactis, Staphylococcus aureus, Bacillus nealsonii, Escherichia
fergusonii, Shigella boydii, Salmonella enterica and Escherichia coli strains were
identified. In the research as an antibacterial agent against clinical bacteria, the solutions
obtained by homogenizing pure coelomic fluid and coelomic fluid with 25%, 50% and
75% concentrations of ethyl alcohol, saline water, dimethyl sulfoxide and chloroform were
used. Antibacterial activity of antibacterial agents against bacterial cultures was
determined by disc diffusion and microdilution methods. Furthermore, in order to observe
the efficacy of pure coelomic fluid on bacterial isolates were examined with scanning
electron microscope and transmission electron microscope. According to disc diffusion
results, the highest inhibition zone diameter values obtained from pure coelomic fluid
were; Escherichia coli (İ-1), Escherichia coli (B-1) and Shigella boydii were 35,50 mm,
33,75 mm and 24,50 mm respectively for clinical strains. In addition, depending on the
increase in the amount of solvent used in the trials inhibition zone diameters decrease was
determined. According to the Minimum Inhibition Concentration (MIC) findings of the
research, the MIC range of pure coelomic fluid was 0.03% (v/v) and 4% (v/v) and the MIC
range obtained from other antibacterial solutions was 0.03% (v/v) and 8% (v/v) was
determined as.
Scanning field microscopy with was research, showed that pure coelomic fluid was
isolated from S. aureus and E. coli strains have been observed to cause a decrease in
biofilm forming capacity. In the examinations made with transmission electron microscope
it was determined that pure coleomic fluid caused damage to the cell wall and membrane
on the same bacterial cells and some cells were completely lysed.
Against the bacterial strains found to be resistant to many antibiotics tested in the
study, because of both coelomic fluid and the solutions obtained therefrom exhibit
antibacterial activity urther studies on coelomic fluid should be conducted.