Resveratrolün insan akciğer kanseri hücrelerinde (H1299) antioksidan etkisinin araştırılması
Investigaton of the antioxidant effect of resveratrol on human lung cancer cells (H1299)
Yazar: ÖZNUR YURDAKUL
Danışman: PROF. DR. AYSUN ÖZKAN
Akdeniz Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada polifenolik bir bileşen olan resveratrolün insan akciğer kanseri hücre dizisi (H1299) üzerine antioksidan etkisi araştırılmıştır. Antioksidan etki hücrelerin resveratrol uygulaması sonrasında güçlü bir oksidan olan hidrojen perokside maruz bırakılarak MDA ve GSH düzeyleri ile Se-bağımlı-GPx, Se-bağımsız-GPx, GRx ve GST aktivitelerinin ölçülmesiyle ortaya konmuştur. İnsan embriyonik akciğer fibroblast hücreleri (MRC-5) pozitif kontrol olarak kullanılmıştır.
Resveratrolün ve H2O2'in hücreler üzerine sitotoksik etkisi ve resveratrolün H2O2 sitotoksisitesine karşı koruyucu etkisi Hücre Canlılık Testi (Cell Titer-BlueR Cell viability assay kiti) kullanılarak ölçülmüştür. Resveratrolün membran üzerine etkileri, hücrelerde oluşan MDA miktarının floresan spektrofotometrede ölçülmesiyle gözlenmiştir. Kantitatif protein miktarları Bradford metodu ile ölçülmüştür. Glutatyon düzeyi ve antioksidan enzimlerin aktiviteleri spektrofotometrik ölçümlerle gözlenmiştir.
H1299 hücrelerinin resveratrol ile 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyona bırakılması sonucunda IC50 değerleri sırasıyla 200 µM, 100 µM ve 50 µM olarak hesaplanmıştır. Hücrelerin güçlü bir oksidan olan H2O2 ile 72 saat inkübasyonundan sonra IC50 ve IC70 değerleri sırasıyla 300 µM ve 420 µM bulunmuştur. Resveratrolün IC50'den daha düşük konsantrasyonları hücrelerde H2O2 sitotoksisitesine karşı koruyucu (antioksidan) etki göstermiştir. En etkili koruyucu doz IC30 olarak bulunmuştur. Hücreler IC50 ve IC70 resveratrol konsantrasyonları ile inkübe edildiklerinde MDA miktarı artmıştır. Bu da resveratrolün yüksek konsantrasyonlarda membran hasarına neden olduğunu göstermiştir. IC30 resveratrol ile ön inkübasyona maruz bırakıldıktan sonra H2O2'e maruz bırakılan hücrelerde azalan MDA miktarları resveratrolün H2O2'e karşı membran koruyucu etkisi olduğunu göstermiştir.
72 saat süreyle IC50 ve IC70 konsantrasyonlarında resveratrole maruz bırakılan hücrelerde Se-bağımlı ve Se-bağımsız-GPx aktivitesi, GST aktivitesi ve GRx aktivitesi kontrol grubuna göre istatistiksel açıdan önemli derecede yüksek bulunmuştur. Resveratrol yüksek konsantrasyonlarda prooksidan gibi etki göstermiştir. H2O2 uygulaması öncesinde IC30 resveratrol ile ön uygulamaya maruz bırakılan hücrelerde ise bu değerler azalmıştır. 
Resveratrol hücrelerde oksidan ve antioksidan etkiye sahiptir ve bu etkileri konsantrasyona bağlı olarak göstermiştir.

Abstract:
In this study, the antioxidant effects of resveratrol, which is a polyphenolic content, on human lung cancer cell line (H1299) were investigated. The antioxidant effect were displayed measurement of MDA and GSH level, and Se-GPx,  non-Se-GPx, GST and GRx  activities  of the cells which were exposed to H2O2 which is a strong oxidant, after  preincubated with resveratrol. The human embryonic lung fibroblast cells (MRC-5) were used as control cells. 

The cytotoxic effect of resveratrol and H2O2 on cells and the protective effect of resveratrol (antioxidant) against H2O2 cytotoxicity were measured by using the Cell Viability Test (Cell Titer-BlueR Cell viability test Kit). The effects of resveratrol on membrane were observed by fluorescence spectrophotometric measurement of the amount of MDA formed in the cells. Quantitative protein quantities were measured by the Bradford method. Glutathione level and activities of antioxidant enzymes were observed by spectrophotometric measurements. 

As a result of 24, 48 and 72 hours incubation of the cells with resveratrol, the values of IC50 were respectively calculated as 200 μM, 100 μM and 50 μM. IC50 and IC70 values were respectively found to be 300 μM and 420 μM after 72 hours of incubation of the cells with H2O2 which is a strong oxidant. Concentrations of resveratrol which are lower than IC50 showed protective (antioxidant) effect against H2O2 cytotoxicity in cells. The most effective dose was found as IC30. When the cells were incubated at IC50 and IC70 resveratrol concentrations, the amount of MDA increased. Consequently, this has shown that high concentrations of resveratrol cause membrane damage. The decreasing amount of MDA in the cells, which were exposed to H2O2 after pre-incubation with IC30 resveratrol, has shown that resveratrol has a membrane protective (antioxidant) effect against H2O2.

Se-GPx, non-Se-GPx, GST and GRx activities of the cells exposed to resveratrol at IC50 and IC70 concentrations for 72 hours were found significantly higher than the control cells.  Resveratrol has been shown to act as prooxidant at higher concentrations. These activities were decreased in the cells, which were exposed to H2O2 after pre-incubation with IC30 resveratrol. 

Resveratrol had oxidant and antioxidant effects on the cells and it was showed those effects were depending on concentration.