İlk trimesterde spontan düşük yapmış ve istemli gebelik sonlandirimasi yapılmış kadınlarda desidua Natural Killer hücre oranlarının akım sitometri analizi ile karşılaştırılması
Comparison of the desidual Natural Killer Cell percentage with flow cytometric analysis in spontan aborts and elective first trimester pregnency terminations
Yazar: SERDAR AYDIN
Danışman: PROF. DR. HALİL SAYGILI
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Abortus-spontan = Abortion-spontaneous ; Katil hücreler-doğal = Killer cells-natural

Özet:
Erken ve sporadik gebelik kayıpları sık karşılaşılan jinekolojik problemlerdir. Gebelikte en sık karşılaşılan komplikasyon olduğu bilinmektedir. Gebelik kayıplarının büyük bir kısmı ilk trimester içinde olur ve bu oran bundan sonra hızla düşer. Günümüz koşullarında erken gebelik kaybına sebep olan nedenleri saptayabilmek her zaman mümkün olmamaktadır. Spontan gebelik kayıplarına neden olan maternal faktörler arasında ise uterin anomaliler, endokrin faktörler, enefeksiyonlar ve immunolojik faktörler sayılabilir. Tekrarlayan gebelik kayıplarının %20-50' sinin immunolojik nedenlere bağlı olduğu düşünülmektedir. Bu durum dikkatleri immun sistem üzerine çekmiştirGebelik kayıplarının nedenlerini bulmak çoğu zaman zordur. Gebelik kaybında oluşan immun cevap şimdiye kadar tam olarak açıklanamamıştır. Doğal öldürücü (NK) hücrelerin implantasyonda ve plasentasyonda önemli rol aldığı rapor edilmiştir (3, 4). Desidual hücrelerin büyük bir kısmı hücre yüzey markerlarindan CD56 bulunduran ancak CD16 ve CD3 bulundurmayan NK (CD56+16-3- ) hücreleridir (5). NK hücrelerinin spontan düşüğe neden olabileceği düşünülebilinir. Üreme fizyolojisinde natural killer hücre fonksiyonunu anlamak hala ilgi çekmektedirAmaç: Erken gebelik kayıplarının nedenlerini araştırmak için spontan düşüklerde ve istemli ilk trimester sonlandırılmalarında desidual lenfositlerdeki doğal öldürücü (NK) hücrelerinin oranını akım sitometri kullanarak değerlendirdikGereç ve Yöntemler: İstanbul Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum kliniğine başvuran normal olarak kabul edilen 5 ile 10 gebelik haftası arasında 15 kadından gebelik desiduası ve 6 ile 11 gebelik haftası arasında gebelik kaybı olan 19 kadından gebelik desiduası toplandı. Normal gebelik grubunda kadınların ortalama yaş 27.53 (21- 37) spontan abort grubunda 28.74 (18- 41)' dı. Antikor işaretleme: Desidual lenfositler FITC (fluorescin isothiocyanate)-konjuge anti-CD16 MoAb, PE-(phycoerythrin) konjuge anti-CD56 antikor ve PerCP-konjuge anti-CD3 antikor ile işaretlendi. Akım sitometri: Antikor işaretli hücreler FACS Caliber akım sitometri ile analiz edildi. Üç renkli akım sitometride 488nm de 15mW argon lazer kullanıldı. İstatiksel analizler Student t test ve Mann Whitney U test kullanılarak yapıldı. p<0.05 anlamlı fark olarak kabul edildi. Veriler SPSS15.0 Windows ile analiz edildi.Bulgular: Abort grubundaki 19 kadının ortalama yaşı 28.7 (18- 41) iken normal gebelik grubundaki 15 kadının ortalama yaşı 27.5 (21-37)' dir. Abort grubunda gebelik haftası ortalaması 8,3 (6-11) ve normal gebelik grubunda 7,7 (5-10) olarak hesaplanmıştır. CD56+ NK hücre yüzdesi normal gebelik grubunda % 51.1 ( 34.5 ? 65.2) olarak bulunmuştur. CD56+ NK hücreleri desidual hücrelerin büyük kısmını oluşturdu. CD56+ NK hücrelerin yüzdesi spontan düşük grubunda ise % 53.3 ( 32.1- 72.2) olarak hesaplanmıştır. Abort grubu ve normal gebelik grubu arasında desidual CD56+ NK hücre yüzdesi bakımından anlamlı fark bulunamadı (p=0.46, p>0.05). CD56+16- NK hücre yüzdeleri spontan düşük ve normal gebelik grubunda incelendiğinde CD56+16- NK hücresi yüzdesi abort grubunda bulunmuşken CD56+16- NK hücresi yüzdesi normal gebelik grubunda % 48.2 (24.2- 68.3) bulunmuştur. P değeri 0.79 olduğundan iki grup arasında anlamlı fark bulunumamıştır (p>0.05).Ayrıca CD56+ NK hücrelerinin CD16 eksprese eden hücrelerde tesbit edildi. Spontan düşük grubunda CD56+16+ NKhücre yüzdesi % 5.1 (2.1- 8.9) normal gebelik grubunda CD56+16+ NK hücre yüzdesi % 5.6 (2.1- 10.3) olarak bulundu. Bu iki grup arasında p=0.502 (p>0.05) olduğu için anlamlı fark bulunamamıştır Son olarak ise CD56+16-3- NK hücre yüzdeleri değerlendirildi. Spontan düşük grubunda CD56+16-3- NK hücre yüzdesi % 43.6 (30.6 -58.2) bulundu. Normal gebelik grubunda CD5616-3- NK hücre yüzdesi % 44.7 (22.2- 64.3) bulundu. İki grup arasında anlamlı fark bulunamadı (p=0.753, p>0.05Sonuç: Spontan düşük ve normal gebelik grupları CD56+, CD56+16-, CD56+16+, CD56+16-3- NK hücre yüzdeleri açısından kıyaslandığında bu iki grup arasında anlamlı fark bulunamadı. Ancak NK hücre aktivitesini ve immun cevabın oluşmasına yardım eden diğer hücrelerle ilişkisi araştırılmalıdır. Bugüne kadar yapılan çalışmalardan NK hücrelerin implantasyonda ve erken gebeliğin desiudasında ana lenfosit tipi olduğu, uterin NK hücrelerinin periferik NK hücrelerinden farklı olduğu çıkarılmalıdır.Düşüğün nedenlerini anlamamız için iyi dizayn edilmiş çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Early pregnancy loss is the common gynecological problem. It is the most common complication of the pregnancy. Insidence of spontaneous abortion is high in first trimester and then slowly decrease. Often, the reasons for abortion is diffucult to determine. The reasons of the pregnancy loss are uterine anomalies, endocrine factors, enfections, immunological factors. The reason of 20-50 % of the recurrent pregnancy loss is immunologic. It attracts attention to immulogical factorsThe reasons for abortion is diffucult to deterimine. The immunologic events in pregnancy loss is not well known. Natural Killer (NK) cells are present in abundance in the uterus at the time of implantation and play role in placentation.(3, 4). A large proportion of decidual lymphocytes are NK cells CD56+16-3-which express the cell surface marker CD56 but do not express CD16 and CD3 (5). NK cells appear to display deleterious effect on fetal development resulting in spontaneous abortions.Undersstanding the functions of natural killer cells remains a challenge in human reproductionObjective: We evaluate the decidual Natural Killer cell percentage with of the elective early pregnancy terminations with spontaneous abortions flow cytometry analysisMaterials and Methods: Desidua were taken from the 19 spontaneous abortions and 15 early pregnancy terminations within 6-11 week of gestation and 5-11 weeks of gestation respectively in the Istanbul University Istanbul Faculty of Medicine Obstetric and gynecology department. Median ages were 28.74 (18-41) in spontaneous abortiion group and 27.53 (21-37) in normal pregnancy groupAntibody labelling: Decidual lymphocytes were labelled with 20 ml of FITC-conjugated anti-CD16 MoAb, PE-conjugated anti-CD56 antibody and PerCP-conjugated anti-CD3 antibodyFlow cytometry: Antibody-labelled cells were analysed by flow cytometry using FACS Caliber. Three-colourflow cytometry utilized an argon laser with 15mW at 488 nm excitation. Statistical analysis Student?s t-test and Mann?Whitney U-test were used to determine the levels of significance of differences. Differences at P < 0?05 were considered statistically significantResults: Median ages were 28.74 (18-41) in spontaneous abortiion group and 27.53 (21-37) in normal pregnancy group. Median gestational ages of the grous are similar. Median gestation ages were 8.3 (6-11) weeks for abortion group and 7.7 (5-10) weeks for normal pregnancy group. The decidual CD56+ NK cell percentage in normal pregnancy group is 51.1% (34.5-65.2). The CD56+ NK cells were the largest proportion of the decidual lymphocytes. The decidual CD56+ NK cell percentage in abortion group is 53.3% (32.1-72.2) (p =0.46, p>0.05). Not significant differance.The decidual CD56+16- NK cell percentage in the abortion group is 47.4 % (32.1- 60.8) and the decidual CD56+16- NK cell percentage in the abortion group is 48.2 % (24.2- 68.3)(p=0.79 p>0.05 not significant). The decidual CD56+16+ NK cell percentage in the abortion group is 5.1 % (2.1- 8.9) and the decidual CD56+16+ NK cell percentage in the abortion group is 5.6 % (2.1- 10.3)(p=0.5, p>0.05 not significant). Finally The decidual CD56+16-3- NK cell percentage in the abortion group is 43.6 % (30.6- 58.2) and the decidual CD56+16-3- NK cell percentage in the abortion group is 44.7 % (22.2- 64.3)(p=0.75, p>0.05 not significantConclusion: There is no significant difference between comaprisions of the decidual CD56+, CD56+16+, CD56+16-, CD56+16-3- NK cell percentages in the spontaneous abortion group and nomal pregnancy group. However the NK cell activity and relations between other regulatory cells must be evaluated. We concluded Natural Killer cells are the main type of lymphocyte in the uterine mucosa at the implantation and during early pregnancy. Uterine NK cells are different from those circulating in peripheral blood.The function of the NK cells in the pregnancy is unknown. There would be well designed studies for the understanding reasons of abortion