Kanatlı kesimhanelerinden alınan piliç sekumu ve boyun derilerinden izole edilen Enterobacterıaceae izolatlarında genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz dirençliliğinin karakterizasyonu
Characterization of extended spectrum beta lactamase resistance in Enterobacteria-ceae isolates isolated from chicken secum and neck skin from poultry slaughterhouses
Yazar: SAFFET ALPER ÜNLÜKAL
Danışman: PROF. DR. MUAMMER GÖNCÜOĞLU
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Gıda Hijyeni ve Teknolojisi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Veterinerlik Besin Hijyeni ve Teknolojisi Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu proje çalışmasında kanatlı kesimhanelerinden alınan piliç sekum ve boyun derisi örneklerinden, genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz (GSBL) üreten Enterobacteriaceae'ların izolasyonu, GSBL üretiminin fenotipik olarak tespiti ve izolatların antibiyotiklere karşı minimum inhibisyon konsant-rasyonu (MİK) değerlerinin tespit edilmesi hedeflenmiştir. Bu kapsamda muhtelif kanatlı kesimhane-lerinden 100 adet boyun derisi ve 100 adet sekum örneği olmak üzere toplamda 200 adet örnek kul-lanıldı. Enterobacteriaceae'ların izolasyonu kromojenik GSBL besiyeri kullanılarak klasik kültür tekniği ile yapıldı. Elde edilen izolatlarda fenotipik olarak GSBL üretimi kombine disk difüzyon yön-temi ve E-test gradiyent şeritleri ile tespit edildi. Son olarak fenotipik olarak GSBL ürettiği tespit edilen izolatların MİK değerleri yine E-test gradiyent şeritleri ile tespit edildi. GSBL üretiminin fenotipik ola-rak tespiti amacıyla uygulanan kombine disk yönteminde 100 adet boyun derisinden izole edilmiş izolatların 66 (%66) tanesinde GSBL üretimi tespit edilmiştir. 100 adet sekum izolatının 5 tanesinde ilgili besiyerinde hiçbir üreme gözlenmemiştir. Nihayetinde 95 adet sekum izolatında ise 50 (%52,6) adet izolatta GSBL üretimi tespit edilmiştir. 95 adet sekum izolatının 50 tanesinde kombine disk difüzyon yöntemiyle GSBL üretimi tespit edilmiş ardından GSBL üretiminin doğrulanması amacıyla yapılan E-Test gradiyent şerit uygulamasında izolatların tamamı için GSBL üretimi doğrulanmıştır. Yine GSBL üretiminin doğrulanması amacıyla yapılan E-test gradiyent şerit uygulamasında ise bo-yun derilerinden izole edilen 66 adet izolatın tamamı için GSBL üretimi doğrulanmıştır.  Doğrulanan bu izolatlarda MİK değerlerinin tespiti için EUCAST'in belirlemiş olduğu kılavuz baz alınarak, farklı sefalosporin grubu antibiyotikler ihtiva eden E-Test şeritleri uygulanmıştır. GSBL pozitif izolatların antibiyotik duyarlıkları ise disk difüzyon yöntemindeki zon çapları baz alınarak yapılmıştır. 66 adet piliç boyun derisi izolatının 53 (%80,3) tanesi seftazidime oldukça dirençli, 8 (%12,1) tanesi orta derece dirençli ve 5 (%7,5) tanesinin ise duyarlı olduğu tespit edilmiştir. Yine 66 adet piliç boyun derisi izolatının tamamı (%100) sefotaksime oldukça dirençli olduğu tespit edilmiştir. Son olarak 66 adet piliç boyun derisi izolatının 58 (%87,8) tanesi sefepime oldukça dirençli, 5 (%7,5) tanesi ise orta dere-ce dirençli ve 3 (%4,5) tanesi de duyarlı olduğu tespit edilmiştir. 50 adet piliç sekum izolatının 48 (%96) tanesi seftazidime oldukça dirençli, 2 (%4) tanesinin ise orta derece dirençli olduğu tespit edil-miştir. Yine 50 adet piliç sekum izolatının tamamı (%100) sefotaksime oldukça dirençli olduğu tespit edilmiştir. Son olarak 50 adet sekum izolatının 48 (%96) tanesi sefepime oldukça dirençli, 2 (%4) tanesinin ise orta derece dirençli olduğu tespit edilmiştir. Çalışmada karşımıza çıkan bu sonuçlardan boyun derisi örnekleri dikkate alındığında boyun derilerinin toplandığı kesimhanelerin kesim hijyeni uygulamalarında noksanlıklar olabileceğini göstermektedir. Yine aynı şekilde sekum örnekleri baz alındığında ise çıkan sonuçlar, piliçlerin kesimhaneye geldikleri birincil üretim işletmelerinin GSBL üreten Enterobacteriaceae'lar yönünden gerek piliçlerin yetiştirilmesi gerekse kesimhaneye nakilleri safhalarında ihtiyaç duyulan kriterlere dikkat etmeleri gerektiğini düşündürmektedir. Kesimhane perspektifini yansıtan boyun derilerinin ve kesimhaneye geldikleri işletme perspektifini yansıtan se-kumların GSBL üreten Enterobacteriaceae'lar ile kontaminasyon düzeyleri arasında istatiksel olarak fark olmadığı bulunmuştur. Ancak, aralarındaki farkların daha detaylı olarak ortaya konması için daha fazla sayıda ve kapsamlı çalışmaların yapılmasına ihtiyaç duyulduğu düşünülmektedir. Tek sağlık kapsamında büyük bir problem olarak karşımıza çıkan antibiyotik direncinin daha net anlaşı-labilmesi için daha kapsamlı çalışmaların ve izleme programlarının etkinleştirilmesinin gerekli olduğu düşünülmektedir

Abstract:
The aim of this project was to isolate extended spectrum beta lactamase (ESBL)-producing Entero-bacteriaceaefrom chicken sequum and neck skin samples taken from poultry slaughterhouses, phe-notypically determine ESBL production and determine the minimum inhibition concentration (MIC) values of the isolates against antibiotics. In this context, a total of 200 samples including 100 neck skin and 100 secum samples from various poultry slaughterhouses were used. Enterobacteriaceaewe-re isolated by classical culture technique using chromogenic ESBL medium. Phenotypic ESBL pro-duction in the isolates obtained was determined by combined disc diffusion method and E-test gradi-ent strips. Finally, MIC values of the phenotypically ESBL-producing isolates were determined again by E-test gradient strips. In the combined disc method applied for the phenotypic determination of ESBL production, ESBL production was detected in 66 (66%) of 100 neck skin isolates. In 5 out of the 100 secretum isolates, no growth was observed on the relevant medium. Finally, ESBL production was detected in 50 (52.6%) of 95 secum isolates. ESBL production was detected in 50 of 95 secum isolates by combined disc diffusion method and then ESBL production was confirmed for all of the isolates in the E-Test gradient strip application performed to confirm ESBL production. Again, in the E-test gradient strip application performed to confirm ESBL production, ESBL production was con-firmed for all 66 isolates isolated from neck skins. E-Test strips containing different cephalosporin group antibiotics were applied based on the guideline determined by EUCAST for the determination of MIC values in these confirmed isolates. Antibiotic susceptibilities of ESBL positive isolates were determined based on zone diameters in disc diffusion method. Out of 66 chicken neck skin isolates, 53 (80.3%) were highly resistant to ceftazidime, 8 (12.1%) were moderately resistant and 5 (7.5%) were susceptible. Again, all 66 chicken neck skin isolates (100%) were highly resistant to cefotaxime. Finally, 58 (87.8%) of 66 chicken neck skin isolates were highly resistant to cefepime, 5 (7.5%) were moderately resistant and 3 (4.5%) were susceptible. 48 (96%) of 50 chicken secum isolates were highly resistant to ceftazidime and 2 (4%) were moderately resistant. Again, it was determined that all 50 chicken secum isolates (100%) were highly resistant to cefotaxime. Finally, 48 (96%) of 50 secum isolates were highly resistant to cefepime and 2 (4%) were moderately resistant. When the neck skin samples are taken into consideration from these results, it shows that may be deficiencies in slaughter hygiene practices of the slaughterhouses where the neck skins are collected. In the same way, the results obtained on the basis of the secum samples suggest that the production facilities where the broilers come to the slaughterhouse should pay attention to the criteria required in terms of ESBL-producing Enterobacteriaceaeduring both the rearing of the broilers and their transport to the slaugh-terhouse. It was found that there was no statistical difference between the contamination levels of the neck skins reflecting the perspective of the slaughterhouse and the sequums reflecting the perspective of the slaughterhouse with ESBL-producing Enterobacteriaceae. However, it is thought that more comprehensive studies should be carried out in order to reveal the differences between them in more detail. It is thought that more comprehensive studies and monitoring programmes should be activated in order to better understand antibiotic resistance, which is a major problem within the scope of one health.