Bazı bitki eksrtaktlarının aldoz redüktaz enzim aktivitesi üzerine inhibisyon etkisinin incelenmesi
Investigation of the inhibition effect of some plant extracts on aldose reductase activity
Yazar: BİLAL AKYÜZ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ BÜLENT ŞENGÜL
Bayburt Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Ökseotu = Mistletoe

Özet:
Diabetik komplikasyonların gelişiminde ve önlenmesinde, önemli bir rolü olan poliyol yolağı enzimlerinden Aldoz redüktaz (AR) (Alditol: NADP+ 1- oksidoredüktaz, E.C. 1.1.1.21) koyun böbreğinden kısmi olarak saflaştrıldı, Etanol, metanol ve su çözgenleri kullanılarak hazırlanan Viscum Album L. (ökse otu)'nun meyve, yaprak ve gövde kısımlarından hazırlanan ekstraktların enzim aktivitesi üzerine etkileri incelendi. AR enziminin kısmi saflaştırması homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz basamakları ile gerçekleştirildi. 0,486 EÜ/mg protein spesifik aktivitesine sahip olan AR enzimi %44,43 verimle, yaklaşık 1,09 kat saflaştırıldı. Viscum Album L. bitki ekstraktlarının aldoz redüktaz (AR) enzimi üzerine in vitro ve in siliko inhibisyon etkileri araştırıldı. In vitro inhibisyon etkileri spektrofotometrik yöntemle belirlendikten sonra, moleküler docking yöntemi ile bağlanma enerjisi ve bağlanma modları belirlendi. Viscum Album L. bitkisinin gövde kısmının methanol çözgeni kullanılarak hazırlanan ekstraktın AR enzimine karşı, 0.156 µM IC50 değeri ile en güçlü inhibisyon etki gösteren ekstarkt olduğu belirlenmiştir. Viscum Album L bitkisinin meyve kısımlarının etanol, methanol ve su çözgenleri kullanılarak hazırlanan ekstraktların IC50 değerleri sırasıyla 1.174 μM, 0.860 μM,1.560 μM, bitkinin yaprak kısımlarının etanol, methanol ve su çözgenleri kullanılarak hazırlanan ekstraktların IC50 değerleri sırasıyla 1.090 μM, 0.190 μM, 9.260 μM ve bitkinin gövde kısımlarının etanol, methanol ve su çözgenleri kullanılarak hazırlanan ekstraktların IC50 değerleri sırasıyla 0.700 μM, 0.153 μM, ve 0.906 μM olarak belirlenmiştir. Bu çalışmanın sonuçları, Viscum Album L bitki ekstraktlarının etkili birer AR inhibitor olabileceğini göstermiştir. AR enzimine karşı in vitro inhibisyon etkisi gösteren ekstraktlarda yapılan moleküler docking sonuçları da edinilen verileri desteklemektedir.

Abstract:
Aldose reductase (AR) (Alditol: NADP+ 1-oxidoreductase, E.C. 1.1.1.21), one of the polyol pathway enzymes that has an important role in the development and prevention of diabetic complications, was partially purified from sheep kidney. Viscum Album L. (The effects of extracts prepared from fruit, leaf and stem parts of mistletoe) on enzyme activity were investigated. Partial purification of AR enzyme was performed by preparation of homogenate, ammonium sulfate precipitation and dialysis steps. The AR enzyme, which has a protein specific activity of 0.486 EU/mg, was purified approximately 1.09-fold, with a yield of 44.43%. In vitro and in silico inhibition effects of  Viscum Album L. plant extracts on aldose reductase (AR) enzyme were investigated. After the in vitro inhibition effects were determined by spectrophotometric method, the binding energy and binding modes were determined by molecular docking method. It was determined that the extract prepared by using the methanol solvent of the stem part of the Viscum Album L plant has the strongest inhibitory effect against the AR enzyme with an IC50 value of 0.156 µM. The IC50 values of the extracts prepared using ethanol, methanol and water solvents of the fruit parts of the Viscum Album L plant are 1.174 μM, 0.860 μM, 1.560 μM, respectively, and the IC50 values of the extracts prepared using the ethanol, methanol and water solvents of the leaf parts of the plant are 1.090 μM, 0.190 μM, 9.260 μM, respectively. and the IC50 values of the extracts prepared using ethanol, methanol and water solvents of the stem parts of the plant were determined as 0.700 μM, 0.153 μM, and 0.906 μM, respectively. The results of this study showed that Viscum Album L plant extracts can be effective AR inhibitors. The results of molecular docking of the extracts showing an in vitro inhibition effect against the AR enzyme also support the data obtained.