Acinetobacter baumannii izolatlarında çeşitli antibiyotiklere karşı direncin saptanmasında time-kill ve mikrodilusyon yöntemlerinin karşılaştırılması
Comparison of time kill and microdilution methods for the detection of resistance against various antibiotics in acinetobacter baumannii isolates
Yazar: SELMA KELEŞ ULUDAĞ
Danışman: PROF. DR. ASUMAN BİRİNCİ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Acinetobacter = Acinetobacter ; Acinetobacter baumannii = Acinetobacter baumannii ; Antibiyotikler = Antibiotics ; Doripenem = Doripenem ; Kolistin = Colistin ; Polimiksin B = Polymyxin B ; İndikatör dilüsyon teknikleri = Indicator dilution techniques

Özet:
Giriş: Acinetobacter baumannii son yıllarda hastane enfeksiyonlarında en sık izole edilen etkenler arasındadır. A. baumannii' de artan ilaç direnci nedeniyle, yeni tedavi seçeneklerine ve bu yeni ajanların etkinliklerinin araştırılmasına ihtiyaç duyulmaktadır.Çalışmamızda, hastanemizin çeşitli servislerinde yatan hastalardan gönderilen alt solunum yolu örneklerinden izole edilen A. baumannii izolatlarına karşı doripenem, tigesiklin ve polimiksin grubu ilaçlardan polimiksin B ve polimiksin E' nin (kolistin) in vitro etkinliklerinin sıvı mikrodilüsyon ve time-kill testleriyle araştırılması amaçlanmıştır.Materyal ve Metot: Ondokuz Mayıs Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Laboratuvarına çeşitli kliniklerden, Ocak-Haziran 2010 tarihleri arasında gönderilen ve alt solunum yolu örneklerinden (trakeal aspirat ve balgam) izole edilen 50 A. baumannii ve standart suş olarak E. coli ATCC 25922, A. baumannii ATCC 19606 çalışmaya dahil edildi. Suşlar konvansiyonel yöntemler ve BD Phoneix otomatize sistemi (BD Phoenix-Becton-Dickinson, U.S.A) kullanılarak tanımlandı. Doripenem, tigesiklin, kolistin ve polimiksin B için minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri, CLSI önerileri doğrultusunda sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile belirlendi. Doripenem MİK değerleri yüksek olan 7 suşun, bakteriyostatik ya da bakterisidal aktiviteleri, time-kill testiyle araştırıldı. Time kill testi, doripenem, tigesiklin ve kolistin'in 1xMİK, 2xMİK, 4xMİK konsantrasyonlarında ve 0, 4, 8 ve 24. saatlerde uygulandı.Bulgular: Sıvı mikrodilüsyon yöntemiyle doripenem, tigesiklin, kolistin, polimiksin B' nin MİK aralıkları sırasıyla 0,5-128 µg/ml, 0,06-2 µg/ml, 0,06-1 µg/ml, 0,06-0,5 µg/ml olarak saptanmıştır. Bu aralıklarda doripenem, tigesiklin, kolistin ve polimiksin B duyarlılık oranları sırasıyla, % 12, % 82, % 100 ve % 100 olarak bulunmuştur. Tüm izolatlar için, doripeneme en yüksek bakterisidal aktivite 4xMİK konsantrasyonunda 24. saatte ve kolistine ise 4xMİK konsantrasyonda 8. saatte tespit edilmiştir. Bu iki ilaçta, bakılan her konsantrasyonda ve saatte değişik düzeylerde sidal etkinlik saptanmıştır. Tüm izolatlar için, tigesikline 4xMİK konsantrasyonunda 4. saatte bakteriyostatik etkinlik saptanmasına karşın, 4xMİK konsantrasyonunda 8 ve 24. saatlerde iki suş için bakterisidal etki tespit edilmiştir.Sonuç: Çalışılan suşlarda karbapenemlere gittikçe artan direnç dikkat çekici olarak değerlendirilmiştir. Mikrodilüsyon yöntemi ile yalnız inhibisyon verileri elde edildiği halde time-kill yöntemi ile denenen ilaçların hem bakterisidal hem de bakteriyostatik aktivitesi ölçülebilmiştir. Bu nedenle bakterisidal amaçlı tedavi takipleri için daha anlamlı bir yöntem olduğu düşünülmüştür.Anahtar Kelimeler: A. baumannii, sıvı mikrodilüsyon, time-kill, doripenem, tigesiklin, kolistin, polimiksin B

Abstract:
Introduction: Acinetobacter baumannii is one the most common microorganisms that have been isolated in nosocomial infections in recent years. Increasing drug resistance in A. baumannii requires new therapeutic options and investigation of these novel drugs.In our study, it was aimed to investigate in vitro activity of doripenem, tigecycline and polymyxin B and E (colistin) against A. baumannii strains that had been isolated from lower respiratory tract samples from inpatients in various clinics in our hospital by broth microdilution and time-kill methods.Material and Methods: Fifty A. baumannii strains isolated from lower respiratory tract samples sent by various clinics to Ondokuz Mayıs University Faculty of Medicine Microbiology Laboratory between January and June 2010 and E. coli ATCC 25922 and A. baumannii ATCC 19606 standart strains were included in the study. Identification of the strains was performed by conventional methods and BD Phoenix automated system (BD Phoenix-Becton-Dickinson, U.S.A). Minimum inhibitory concentration (MIC) values for doripenem, tigecycline, colistin and polymyxin B were determined according to the recommendations of CLSI. Bacteriostatic and bactericidal activites of the seven strains which have high doripenem MICs were investigated by time-kill test. Time-kill test was performed at 1xMIC, 2xMIC and 4xMIC concentrations of doripenem, tigecycline and colistin at 0, 4, 8 and 24 hours after inoculation.Results: MICs of doripenem, tigecycline, colistin and polymyxin B were ranged between 0,5-128 µg/ml, 0,06-2 µg/ml, 0,06-1 µg/ml and 0,06-0,5 µg/ml, respectively. In these ranges, susceptibility to doripenem, tigecycline, colistin and polymyxin B were 12 %, 82 %, 100 % and 100 %, respectively. For all isolates tested, highest bactericidal activity to doripenem was detected at 4xMIC concentration at 24 h, and to colistin was detected at 4xMIC concentration at 8 h. For both drugs, bactericidal activity at different levels was detected at all tested concentrations and hours. For all isolates tested, bacteriostatic activity to tigecycline was detected 4xMIC concentration at 4 h, whereas for only 2 isolates bactericidal activity was detected at 4xMIC concentration at 4 h.Conclusion: Increasing carbapenem resistance in strains tested was considered remarkable. Although only inhibition data could be obtained with microdilution methods, both bactericidal and bacteriostatic activities of the drugs could be tested by time-kill test. Therefore, time-kill was thought to be a more effective method in the therapeutic regimens targeting bactericidal activity.Key words: A. baumannii, broth microdilution, time-kill, doripenem, tigecycline, colistin, polymyxin B