Giardiasis tanılı hastaların dışkı örneklerinde tpı gen lokusu hedeflenerek G.intestinalis genotiplerinin PCR ? RFLP yöntemiyle araştırılması
Investigation of G. intestinalis genotypes by tpi gen locus targeted PCR-RFLP method in stool specimens of patients diagnosed as giardiasis
Yazar: YALÇIN VURUPALMAZ
Danışman: DOÇ. DR. FADİLE YILDIZ ZEYREK
Harran Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Dışkı = Feces ; Genotip = Genotype ; Giardiasis = Giardiasis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic

Özet:
Amaç: Giardia birçok omurgalı konağı enfekte edebilen kamçılı bir bağırsak parazitidir. Giardiasis insan için en yaygın protozoon infeksiyonu olarak bilinmektedir. Gelişmekte olan ülkelerin tümünde ve Amerika'da hem önemli, hem de en sık rastlanan protozoon hastalığı olarak bilinmek¬tedir. İnfeksiyon asemptomatik seyredebileceği gibi vakaların çoğunda olduğu gibi yağlı, yumuşak dışkılama, karında şişkinlik, gaz, kramp şeklinde karın ağrısı, epigastrik bölgede duyarlılık ve malabsorbsiyon sendromu gibi belirtilere neden olabilmektedir. Mutlaka tedavi edilmesi gereken bir infeksiyondur (78, 79).Farklı coğrafik bölgelerde yaşayan insanlardan izole edilen binden fazla dışkı örneğinden PCR ile elde edilen DNA'nın incelenmesi sonucunda G. duodenalis'in A ve B tiplerinin insan infeksiyonları ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. A tipi ile enfekte olmuş hastaların B tipi ile enfekte olmuş hastalara göre iki kat fazla ishal şikayeti olduğu ve B tipinin asemptomatik giardia ile istatistiksel olarak ilişkilendirildiği rapor edilmiştir. Moleküler çalışmalarla insanlarda giardiasis'in farklı klinik tablolar şeklinde görülmesi, G. intestinalis genotip gruplarının farklı patojenitelere sahip olabileceğini düşündürmektedir. Giardia`ların genotiplendirilmesi gerçekleştirilmiş, sonuçların semptomlarla ilişkisi araştırılmış ve saptanan A ve B gruplarından birer örneğin DNA dizisi belirlenmiştir (77).Çalışmamızın amacı giardiasis tanılı hastalarda TPI gen lokusu hedeflenerek PCR ve RFLP yöntemi ile G. intestinalis'in moleküler olarak grup A ve grup B olarak genotiplendirilmesi ve bu genotiplerin hastalığın klinik olarak semptomatik ve asemptomatik tablolarla ilişkisi ve genotiplerin dağılımının araştırılmasıdır.Yöntem ve Gereç: 2008-2011 yılları arasında Harran Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı'nda giardiasis tanısı almış olan 75 hasta dışkı numunesi incelenmiştir.Bulgular: Çalışmamızda 75 hastanın 69'u semptomatik 6 tanesi asemptomatik olgulardan oluşmaktaydı. 69 adet semptomatik olgunun 67 adedi genotip A olarak bulunmuş iken, 2 adedi genotip B olarak bulunmuştur. 6 adet asemptomatik olgunun ise tamamı genotip B olarak gözlemlenmiştir.Sonuç: Semptomatik olgular ile G. intestinalis genotip A arasında anlamlı bir ilişki olduğu (p<0.05) gözlemlenmiştir. Giardiasis tanısı alan olgularda tip A genotipinin sayıca tip B genotipine göre anlamlı olarak (p<0.05) daha fazla olduğunu gözlemlenmiştir.Anahtar Kelimeler: Giardiasis, PCR, RFLP, Genotip A, Genotip B

Abstract:
Aim: Giardia is an intestinal parasit that infects various vertebrates. Giardiasis is known to be the most common protozoa infection in humans. In America and all developing countries, it is accepted as the most common and the most important protosoal disease. Although, the infection can course without symptoms, it can cause symptoms like soft stools, abdominal bloating, abdominal gas, abdominal cramps, epigastric tenderness and malabsorption syndrome as seen in most of the cases. It is an infection which must be treated (78, 79).Results of the investigations on DNA excreations with PCR from more than a thousand of samples of the feces revealed that G. intestinalis, type A and B are related with human infections. It have been reported that the patients infected by Type A had diarrhea symptoms more than two folds according to patients infected by Type B and the statystical relation between Type B infections and asymptomatic giardiasis was significiant. Since molecular studies have shown that giardiasis can be seen in different clinical appearences, it is thought that G. intestinalis genotypes can have different pathogeneties. Genotyping of Giardia?s have been revealed, the relation between results and symptoms have been investigated and an example from each group of defined Type A and B have been determined (77).The aim of this study was genotyping G. intestinalis as group A and B by molecular techniques such as PCR and RFLP with targeting TPI gen locus in patients diagnosed as giardiasis and investigating the relation of these genotype groups with clinical status of the disease as symptomatic or asymptomatic and also examining of the distrubution of these genotypes.Material and methods: The stool specimens of 75 patients diagnosed as giardiasis in Harran University Medical Faculty, Department of Microbiology between 2008 and 2011 were investigated.Results: In our study, 69 of 75 patients were symptomatic and 6 of them were asymptomatic. While 67 of 69 symptomatic cases had genotype A, two of them had genotype B and all of the asymptomatic patients had genotype B.Conclusion: We observed the significiant relation between symptomatic patients and genotype A (p< 0.05). We determined the predominance of genotype A according to genotype B numerically (p< 0.05).Key words: Giardiasis, PCR, RFLP, Genotype A, Genotype B