İvf sikluslarında folikül sıvısı ve embriyo hücre kültür vasatında total antioksidan kapasite ve oksidatif stres parametrelerinin fertilizasyon başarısı ve embriyo seçimindeki yeri
The role of the total antioxidant capacity and oxidative stress in the success of fertilization and embryo selection in the follicular fluid and the embryo cell culture medium in ivf cycles
Yazar: SEVTAP SEYFETTİNOĞLU
Danışman: PROF. DR. EGE NAZAN TAVMERGEN GÖKER
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Embriyo = Embryo ; Kısırlık = Infertility

Özet:
İvf Sikluslarında Folikül Sıvısı Ve Embriyo Hücre Kültür Vasatında Total Antioksidan Kapasite Ve Oksidatif Stres Parametrelerinin Fertilizasyon Başarısı Ve Embriyo Seçimindeki YeriAmaç: Bu çalışmada amaç IVF tedavisindeki hastalarda oositlerin foliküler sıvılarında antioksidan parametreler ve lipid peroksidasyonu belirteçleri, paraoksonaz enzim düzeylerini, ayrıca nitrik oksit (NO) kaynaklı hasarın bir göstergesi olan nitrotirozin düzeylerini belirlemektir. Ayrıca oluşan embriyoların hücre kültür vasatlarında total antioksidan kapasite düzeylerine bakarak, embriyo kalitesi ve sonuçta bu parametrelerin fertilizasyon başarısı ve gebelik oranları üzerine etkisinin araştırılmasıdır.Materyal Metod: Bu çalışmaya Haziran 2010- Ağustos 2011 tarihleri arasında Ege Üniversitesi Rektörlüğü Aile Planlaması, Kısırlık Uygulama ve Araştırma Merkezinde IVF/ICSI uygulanan ve çalışmaya katılma kriterlerine uygun olan 51 olgu dahil edildi. IVF tedavi protokolüne uygun gerekli tetkikleri yapıldıktan sonra 22 olguda kontrollü ovaryan stimülasyon için uzun agonist protokol, 29 olguda antagonist protokol uygulandı. Olgulardan elde edilen toplam 454 folikül sıvısından 260 adet folikül sıvısı ve yine her olgudan bir adet olmak üzere 51 adet transfer edilen embriyonun hücre kültür vasatı incelendi. Folikül sıvıları ve embriyo hücre kültür vasatları oosit fertilizasyonuna göre, uygulanan protokole göre, transfer gününe göre, elde edilen embriyoların kalitesine göre ve gebelik elde edilip edilmemesine göre gruplara ayrıldı. Folikül sıvılarında TEAC, FRAP, AOA ile total antioksidan kapasite, TBARS ile ilişkili oksidatif stres, PON1düzeyi ve nitrotirozin düzeyi değerlendirildi. Emrbiyo hücre kültür vasatlarında ise TEAC ve FRAP analizi yapıldı.Bulgular: Çalışmaya dahil edilen 260 adet folikül sıvısı analizinde uygulanan prokole göre oositlerin fertilizasyon oranı benzer olmakla beraber, fertilize olan oositlerin folikül sıvılarında TBARS düzeyi fertilize olmayanlara göre anlamlı olarak daha düşük saptandı (21 vs 29,75 nmol/ml p=0.002). Gruplar kendi içinde değerlendirildiğinde ise hem fertilize olmayan grupta hem de fertilize olan grupta TEAC düzeyi antagonist protokol grubunda agonist protokole göre daha yüksek idi (6.14 vs 4.69 p=0.017, 6.33vs 5.40 ?mol/ml, P=0.001). Embriyo kalitesine göre sınıflandırma yapıldığında incelenen parametreler açısından gruplar arasında herhangi bir fark saptanmadı.51 hastadan 24'ünde gebelik sağlanırken 27'sinde gebelik elde edilemedi. Olguların gebe olan ve olmayan gruplar arasında folikül sıvısı analizinde incelenen parametreler açısından fark saptanmadı. 2.gün transfer edilenler kendi içinde değerlendirildiğinde gebelik elde edilen grupta gebelik elde edilmeyen gruba göre embriyo hücre kültür vasatı TEAC düzeyi daha yüksek idi (4.25 vs 3.52 ?mol/ml p=0.031). Yüksek doz gonadotropin uygulanan grupta folikül sıvısı TEAC düzeyi düşük doz uygulanan gruba göre daha yüksekti. Yapılan analizlerde nitrotirozin düzeyleri açısından gruplar arasında fark saptanmadı.Sonuç: Bu sonuçlar fertilizasyon aşamasında lipid peroksidasyonunun olumsuz etki yarattığını ve antagonist protokol uygulanan olgularda folikül sıvısı TEAC düzeyi düşüklüğünden yola çıkarak bu olgularda antioksidan mekanizmaların daha kötü işlediği konusunda yol gösterici olabilir. Transfer gününe göre yapılan incelemede (2. Gün ve 3.gün) kullanılan indüksiyon protokolleri arasında bazı farklar olduğu tespit edilmiştir. Farklı protokollerin farklı günlerde transfer edilmesinin oksidatif strese karşı gebelik başarısını arttırabileceği düşünülebilir. Tabii ki bu konuda daha geniş kapsamlı yeni çalışmalara ihtiyaç vardır.Anahtar kelimeler: İn vitro fertilizasyon, fertilizasyon, embriyo kalitesi, gebelik, total antioksidan kapasite, TBARS, paraoksonaz, nitrotirozin,

Abstract:
The role of the total antioxidant capacity and oxidative stress in the success of fertilization and embryo selection in the follicular fluid and the embryo cell culture medium in IVF cyclesObjective: The aim of this study was to determine the antioxidant parameters, markers of lipid peroxidation, paraoxonase enzyme levels and the nitrotyrosine levels, which is an indicator of nitric oxide (NO) induced damage in the follicular fluid of the oocytes in patients with IVF treatment. In addition, the total antioxidant capacity of embryos derived in the cell culture medium was investigated to determine the embryo quality and ultimately the effect of these parameters on the success of fertilization and the pregnancy rates.Materials and Methods: In this study, 51 patients were included, who underwent IVF / ICSI at the Family Planning and Infertility Application and Research Center of Ege University, between June 2010 and August 2011, and who met the criteria to participate in the study. After the necessary tests for the IVF treatment protocol, the long-agonist protocol with the controlled ovarian stimulation was applied in 22 patients. Twenty-nine patients were treated with the antagonist protocol. Of the 454 samples of the follicular fluid obtained from the patients, 260 were investigated and one sample form each case, thus a total of 51 embryos transferred to the cell culture medium were examined. The follicular fluids and the embryo cell culture media were grouped according to the oocyte fertilization, the applied protocol, the day of transfer, the quality of the embryos and the achievement of pregnancy. In the follicular fluid, TEAC, FRAP, AOA and total antioxidant capacity, oxidative stress associated with TBARS, PON1 levels and nitrotyrosine levels were determined. TEAC and FRAP analyses were performed in the embryo cell culture media.Results: Although the oocyte fertilization rate, which was determined in the 260 samples of follicular fluid was similar in both groups, the TBARS levels were significantly lower in the fertilized oocytes compared to the unfertilized ones (21 vs. 29.75 nmol / ml, p = 0.002). When the groups were assessed separately, TEAC levels were higher both in the fertilized and unfertilized oocytes in the antagonist protocol group compared to the agonist protocol (6.14 vs 4.69, p = 0.017, 6.33vs 5:40 micromol / ml, P = 0.001). As to the quality of embryos, there were no differences between the groups in terms of the investigated parameters. Of the 51 patients, pregnancy was achieved in 24, and 27 patients did not become pregnant. There were no significant differences between the pregnant and the non-pregnant groups in the analysis of follicular fluid. When the patients were evaluated according to the day of transfer, in cases with transfer on the second day, the TEAC levels were higher in the embryo cell culture media in the group with pregnancy (4.25 vs. 3:52 mmol / ml, p = 0.031). The levels of TEAC in the follicular fluid were higher in the group that was treated with high-dose gonadotropin. There was no difference between the groups in terms of nitrotyrosine levels in the analyzes.Conclusion: These results suggest that the lipid peroxidation has a negative impact on fertilization and the low levels of TEAC in the follicular fluid in patients that undergo antagonist protocol imply that the antioxidant mechanisms has a worsening effect in these cases. In the examinations according to the day of transfer Day 2 and Day 3), differences were found between the used induction protocols. This may suggest that the transfer of some protocols on different days may increase the success of pregnancy by preventing oxidative stress. Obviously more extensive studies are needed in this regard.Key words: in vitro fertilization, fertilization, embryo quality, pregnancy, total antioxidant capacity, TBARS, paraoxonase, nitrotyrosine.