İnsan eksfoliasyon zamanı gelmiş süt dişi pulpasından elde edilen mezenkimal kök hücrenin eldesi, hücre yüzey belirteçleriyle (CD90, CD105, CD45) karakterizasyonun sağlanması ile kisspeptin ve nörokinin reseptörlerinin ((KISS1R, TACR3) gen ekspresyonlarının real time PCR (RT-PCR) ile değerlendirilmesi
Obtaining mesenchymal stem cells from human exfoliated deciduous teeth pulp, characterization with cell surface markers (CD90, CD105, CD45), and evaluation of kisspeptin and neurokinin receptor ((KISS1R, TACR3) gene expressions by real-time PCR (RT-PCR)
Yazar: EZGİ DAMLA YILMAZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET BERTAN YILMAZ ; DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE ÇAPKIN YURTSEVER
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı / Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu çalışmada "İnsan Eksfoliasyon Zamanı Gelmiş Süt Dişi Mezenkimal Kök Hücrelerinin CD90+, CD105+ CD45- Hücre Yüzey Belirteçleriyle Akım Sitometrisinde Karakterizasyonun Sağlanması, Kisspeptin ve Nörokinin Reseptörlerinin (KISS1R, TACR3) RT-PCR ile İncelenmesi" adlı yüksek lisans tez projesi olup Çukurova Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinasyon Birimi destekleri ile hazırlanmıştır. Sunulan tez çalışmasının amacı, süt dişi kök hücrelerinin kisspeptin, nörokininleri ve reseptörlerini eksprese etmeleri mevcut genlerin pubertede anahtar rol üstlenmeleri nedeniyle hipogonadizm gibi üreme sistemi hastalıkları için alternatif bir kaynak olarak kullanabileceği düşünülmüştür. 
Eksfoliasyon zamanı gelmiş süt dişi kök hücrelerinin, Çukurova Üniversitesi Etik Kurulu'ndan alınan izinler doğrultusunda 9 yaşındaki erkek hastadan izole edilmesi sağlanmıştır. İzole edilmesi sağlanan süt dişi kök hücrelerinin kültürlenmesine ÇÜ Biyoteknoloji Araştırma ve Uygulama Merkezi de devam edilmiştir. Akım sitometrisi analizi için pozitif (CD90 ve CD105) ve negatif (CD45) belirteçler belirlenmiştir. Süt dişi kök hücrelerinin mezenkimal kök hücre karakteri sağladıkları hücre yüzey belirteçleriyle doğrulanmıştır. Mezenkimal kök hücre karakteri taşıdıkları doğrulanan süt dişi kök hücrelerinin,  pasaj 3, 4 ve 5'e ulaşması sağlanmış öncelikle her pasaj için RNA izolasyonu ardından cDNA' ya dönüşümü sağlanmıştır.
 Süt dişi kök hücrelerindeki genlerin (KISS1, KISS1R, TAC3 ve TACR3) ekspresyonu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile belirlenmiştir. KISS1, KISS1R ve TAC3, TACR3 gen ekspresyonları pasaj 3, 4 ve 5 için RT-PCR'da analiz edilmiş ve gen ekspresyonlarındaki değişim pasaj sayısıyla ilişkilendirilerek incelenmiştir. KISS1 geni tarafından kodlanan kisspeptin-1 ve ligandı olduğu KISS1R'nin ve KISS1-KISS1R (GPR54) sistemine etki eden TAC3-TAC3R genleri üreme sistemiyle ilişkilendirilmiştir. KISS1, KISS1R (GPR54), TAC3 ve TACR3 genlerinin hipotalamus- hipofiz- gonad aksınını etkileyerek (HHG aksı), üreme sistemindeki işleyişi kontrol etmek ve sürdürülebilir sağlanması için önemli rol üstlenmeleri üzerinde odaklanılmıştır. Üreme sistemindeki düzenleyici rolü, puberteyle olan ilişkisi ve GnRH salınımı gibi pek çok metabolik olayda görev aldığı belirlenip araştırılmıştır. KISS1, KISS1R, TAC3 ve TACR3 genlerin de meydana gelen fonksiyon kaybı, mutasyonların hipogonadizme, puberteye neden olabileceği sonucu üzerinde durulmuştur.
Elde edilen bulgular, mezenkimal kök hücre karakteri taşıyan süt dişi kök hücrelerinin pasaj sayısıyla ilişkili olarak kisspeptin, nörokinin ve reseptörlerini ekspresyonlarında artış meydana geldiği belirlenmiştir.  Hem üreme sisteminde görev alan bu genlerin ifadesinin olması hem de kök hücrelerin hasarlı olan dokuya nakledildiklerinde rejenerasyonu sağlamaları nedeniyle üreme sistemi hastalıklarında alternatif bir kaynak olarak kullanabileceği düşünülmüştür.

Abstract:
This study is a master's thesis project named "Characterization of Human Deciduous Mesenchymal Stem Cells with CD90+, CD105+ CD45- Cell Surface Markers and Investigation of Kisspeptin and Neurokinin Receptors (KISS1, KISS1R, TAC3, TACR3) by RT-PCR". It has been prepared with the support of the Research Projects Coordination Unit. The aim of the presented thesis study is that human exfoliated decidous teeth stem cells can be used as an alternative source for reproductive system diseases such as hypogonadism, since they express kisspeptin, neurokinins and their receptors and these avaible genes play a key role in puberty.
 It was ensured that the deciduous teeth stem cells, whose exfoliation time had come, were isolated from a 9-year-old male patient in accordance with the permissions obtained from the Çukurova University Ethics Committee. The culturing of decidous tooth stem cells, which were isolated, continued at Cukurova University Biotechnology Research and Application Center. Positive (CD90 and CD105) and negative (CD45) markers were determined for flow cytometry analysis. The mesenchymal stem cell character of decidous teeth stem cells was confirmed by cell surface markers. Deciduous stem cells, which were confirmed to have mesenchymal stem cell characteristics, were allowed to reach passages 3, 4 and 5, and first of all, RNA isolation for each passage and then conversion to cDNA was ensured. 
Expression of genes (KISS1, KISS1R, TAC3 and TACR3) in decidous teeth stem cells was determined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). KISS1, KISS1R and TAC3, TACR3 gene expressions were analyzed in RT-PCR for passages 3, 4 and 5, and the change in gene expression was correlated with the number of passages. Kisspeptin-1 encoded by the KISS1 gene, and KISS1R as its ligand, and TAC3, TAC3R genes that affect the KISS1-KISS1R (GPR54) system have been associated with the reproductive system. It has been focused on that KISS1, KISS1R (GPR54), TAC3-TACR3 genes play an important role in controlling and sustaining the functioning of the reproductive system by affecting the hypothalamus-pituitary-gonad axis (HHG axis). It has been determined and investigated that it plays a role in many metabolic events such as its regulatory role in the reproductive system, its relationship with puberty and GnRH release. It has been emphasized that loss of function in existing genes, mutations may cause hypogonadism and puberty. 
The findings from the decidous teeth of the stem cells that carry character of, mesenchymal stem cell, associated passage number KISS1, KISS1R, TAC3, TACR3 genes to express stem cells transplanted into damaged tissue in diseases of the reproductive system are suggested as an alternative source to use it for regeneration.