Deneysel hayvan modelinde asetil l?karnitinin, sisplatine bağlı miyelosupresif etkiyi değiştirici rolünün araştırılması
The investigation of protective role of acetyl l-carnitine on cisplatin myelosuppression in experimental animal model
Yazar: DENİZ KIZMAZOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. DİLEK İNCE
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Asetilkarnitinin = Acetylcarnitine ; Kemik iliği = Bone marrow ; Kemik iliği hücreleri = Bone marrow cells ; Kemik iliği incelenmesi = Bone marrow examination ; Sisplatin = Cisplatin

Özet:
Gereçler ve yöntem: Wistar Albino türü 28 adet dişi sıçanın oluşturduğu dört grup çalışmaya alındı. Oluşturulan gruplar şu şekildeydi: Grup 1: Kontrol (serum fizyolojik), Grup 2: Asetil L-karnitin (ALCAR), Grup 3: Sisplatin, Grup 4: ALCAR+Sisplatin uygulanan gruplardı. Başlangıçta sıçanlarda herhangi bir kemik iliği baskılanması olup olmadığını görmek üzere tüm sıçanlardan tam kan sayımı ve periferik yayma bakıldı. Tüm sıçanlara 3 gün boyunca (-2, -1 ve 0. günlerde) hidrasyon amaçlı serum fizyolojik (SF) 5 ml/kg/doz/gün intraperitoneal enjeksiyon şeklinde uygulandı. Yine üç gün boyunca (-2, -1 ve 0. günlerde) grup 2 ve grup 4'teki sıçanlara ALCAR 200 mg/kg/doz subkutan; grup 1 ve grup 3'teki sıçanlara eşit hacimde SF subkutan olarak uygulandı. Çalışmanın 3. gününde (0. gün) grup 3 ve grup 4'teki sıçanlara sisplatin 8 mg/kg/doz intraperitoneal bir saatlik infüzyonla verildi; grup 1 ve grup 2'deki sıçanlara eşit hacimde SF intraperitoneal bir saatlik infüzyonla verildi. Sisplatin uygulamasının 10. gününde tüm sıçanlar feda edildi ve femurları disseke edildi. Kemik iliği preparatları Wright boyası ile boyanıp sellülarite ve her üç serinin hücresel elemanları (miyeloid, lenfoid ve eritroid seri) değerlendirildi. Kemoterapiye bağlı akut hücresel değişiklikler Wright boyalı imprint preparatlarda değerlendirildi. Hücrelerde kontür ve boyut düzensizlikleri, sitoplazmik çıkıntılar, nükleer vakuolizasyon, nükleer membranda bozulma; şiddet ve etkilediği hücre sayısına göre değerlendirildi. Parafin bloktan hazırlanan kesitler hematoksilen eozin ile boyanıp ışık mikroskobunda sellülarite, kemik iliği elemanlarının kompozisyonları, matürasyon, fibrosis, nekroz, kanama, adipoz doku oranı yönünden değerlendirildi.Bulgular: Çalışmanın başlangıcında tüm sıçanların tam kan sayımı ve periferik yaymaları normal bulundu. Tüm sıçan gruplarının kemik iliği inceleme sonuçları şu şekildeydi: Grup 1'de (Kontrol) sellülarite ortalama %93.57±3.7 idi; matürasyon duraklaması yoktu. Kemik iliği hücreleri ışık mikroskobu ile değerlendirildiğinde miyeloid seri ortalama %40.85±3.4, lenfositer seri %47.42±3.7, eritroid seri %11.71±1.7 oranında görüldü. Grup 2'de (ALCAR) sellülarite ortalama %95±4 idi; matürasyon duraklaması yoktu. Kemik iliği hücreleri ışık mikroskobu ile değerlendirildiğinde miyeloid seri ortalama %43.14±2.5, lenfositer seri %45.42±2.5, eritroid seri %11.42±1.5 oranında görüldü. Grup 3'te (Sisplatin) sellülarite ortalama %61,66±5.1 idi; matürasyon duraklaması vardı. Kemik iliği hücreleri ışık mikroskobu ile değerlendirildiğinde miyeloid seri ortalama %22.33±1.5, lenfositer seri %26.66±3.2, eritroid seri %50.66±4.1 oranında görüldü. Grup 4'te (ALCAR+Sisplatin) sellülarite ortalama %71,42±4.7 idi; sisplatin grubuna göre daha ılımlı bir matürasyon duraklaması vardı. Kemik iliği hücreleri ışık mikroskobu ile değerlendirildiğinde miyeloid seri ortalama %32.00±1.6, lenfositer seri %36.28±2.6, eritroid seri %31.71±3.3 oranında görüldü. Kontrol ve ALCAR grupları ile karşılaştırıldığında sisplatin grubunda sellülaritede, miyeloid ve lenfositer serilerde hücre düzeyinde düşme, eritroid seride rölatif yükseklik görüldü. ALCAR+Sisplatin grubu, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında bir miktar miyelosupresyon vardı. Sadece sisplatin alan grup ile karşılaştırıldığında sellülarite, miyeloid ve lenfositer serilerdeki hücre düzeyi anlamlı olarak yüksek saptandı.Sonuç: Bu araştırmada sıçanlarda sisplatin verilerek oluşturulan deneysel miyelosupresyon modelinde, asetil L-karnitinin sisplatin ilişkili kemik iliği toksisitesini azalttığı gösterilmiştir.Anahtar kelimeler: Asetil L-karnitin, sisplatin, miyelosupresyon

Abstract:
Materials and methods: Four groups of twenty-eight adult female Wistar albino rats were taken in this study. The groups were like these: Group 1: Control, group 2:Acetyl L-carnitine (ALCAR), group 3: Cisplatin, group 4: ALCAR+Cisplatin administered groups. Baseline complete blood count and peripheral blood smear of all the rats were obtained for confirming if there was any bone marrow suppression at the beginning of the study. All rats were given 5 ml/kg/dose intraperitoneal normal saline injection once a day for hydration over three days. Yet over three days (-2, -1 and 0. days) group 2 and group 4 were injected with acetyl L-carnitine (200 mg/kg) subcutaneously while group 1 and group 3 were injected with same volumes of normal saline. On the third day (0.day) of study, rats in group 3 and group 4 were given cisplatin 8 mg/kg/dose by intraperitoneal infusion in one hour; rats in group 1 and group 2 were given intraperitoneal infusion of normal saline in equal volume. All rats were sacrificed on the tenth day of cisplatin infusion and their femurs were dissected. Bone marrow samples were painted with Wright stain and all three sequences (myeloid, lymphoid and erythroid cells) were evaluated. Acute cellular changes related to chemotherapy evaluated on Wright stained imprints. Contour and size irregularities in cells, stoplasmic bulges, nuclear vacuolization, disruption on nuclear membrane; all of these were evaluated for severity and the number of effected cells. Sections of parafine blocs prepared with hematoxilen eosin stain were evaluated in light microscope for cellularity, bone marrow cell components, maturation, fibrosis, necrosis, hemorrhage, adipose tissue rate.Results: All baseline complete blood count and peripheral blood smear of rats were normal at the beginning of the study. Bone marrow evaluation of all rat groups were like following: In group 1 (Control) mean cellularity was %93.57±3.7, there was no maturation halt. Bone marrow cells assessed on light microscope, myeloid colony %40.85±3.4 , lymphoid colony %47.42±3.7, erythroid colony %11.71±1.7 in this group. In group 2 (ALCAR) mean cellularity was %95±4, there was no maturation halt. Myeloid colony %43.14±2.5, lymphoid colony %45.42±2.5, erythroid colony %11.42±1.5 in this group. In group 3 (Cisplatin) mean cellularity was %61.66±5.1, there was maturation halt in this group. Myeloid colony %22.33±1.5, lymphoid colony %26.66±3.2, erythroid colony %50.66±4.1 in this group. In group 4 (ALCAR+Cisplatin) mean cellularity was %71,42±4.7 and maturation halt was more mild compared to cisplatin administered group. Myeloid colony %32±1.6, lymphoid colony %36.28±2.6, erythroid colony %31.71±3.3 in group 4. As compared to control and ALCAR groups; cellularity, lymphoid and myeloid cell rates were lower in cisplatin administered group. As compared to control group, there was myelosuppression in ALCAR+cisplatin administered group. As compared to only cisplatin administered group cellularity, lymphoid and myeloid colonies were significantly high.Conclusion : In this study, it was featured that the myelosuppressive effect of cisplatin reduced by using acetyl L-carnitine in experimental myelosuppression model created by cisplatin administring.Key words: Acetyl L-carnitine, cisplatin, myelosuppression