Silibinin molekülünün hidrojen peroksit (h2o2) uyarılı u-2 os hücreleri üzerine antioksidan etkisinin araştırılması
Investigation of antioxidant effect of silibinin molecule on u-2 os cells induced by hydrogen peroxide (h2o2)
Yazar: KÜBRA GÜNDÜZ
Danışman: DOÇ. DR. MERAL URHAN KÜÇÜK
Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Hidrojen peroksit = Hydrogen peroxide ; Hücre dizisi = Cell line ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Silibin = Silybin

Özet:
Silibinin, Silybum marianum L. (devedikeni) bitkisinin tohumlarında bulunan bileşenlerden biridir. Silibininin anti-oksidan, anti-inflamatuar, anti-apoptotik ve anti-karsinojenik etkilerini gösteren birçok çalışma bulunmaktadır. Son yıllarda yapılan birçok çalışmada, bu maddenin çeşitli kanser türlerine karşı etkileri gösterilmiştir. Ancak silibininin, kemik kanseri üzerine anti-oksidan etkileri araştırılmamıştır.
Çalışmamızda silibinin maddesinin, U-2 OS hücre proliferasyonu ve oksidatif stres parametrelerinden katalaz ve MDA üzerine etkilerini araştırmayı amaçladık. Bu doğrultuda, U-2 OS hücreleri farklı dozlarda ve sürelerde H2O2 (24 ve 48 saat süreyle 0-800 μM dozlarda) ve silibinin maddesine (24 saat süreyle 0-100 μM dozlarda) maruz bırakıldı. Oksidatif stresli model için, H2O2'nin uygun maruziyet dozu ve süresi (24 saat süreyle 500 ve 650 μM dozlarda), MTT yöntemi ile belirlendi. U-2 OS hücreleri, 0-100 μM dozlarda 24 saat süresince silibinin maddesine maruz bırakıldıktan sonra hücre canlılığı MTT yöntemi ile değerlendirildi. Ayrıca, U-2 OS hücreleri 24 saat boyunca H2O2 (500 ve 650 μM), silibinin (5 ve 10 μM) ve H2O2+silibinin (500 μM H2O2+ 5μM silibinin, 500 μM H2O2+10 μM silibinin, 650 μM H2O2+5 μM silibinin ve 650 μM H2O2+10 μM silibinin)'e maruz bırakılarak katalaz enzim aktivitesi ve MDA düzeyi spektrofotometrik yöntem ile belirlendi.
Kontrol grubu (0 μM H2O2), 500 ve 650 μM H2O2 maruziyet grupları ile karşılaştırıldığında, katalaz enzim aktivitesinin maruziyet yapılan gruplarda anlamlı olarak daha yüksek olduğu gözlendi (sırasıyla p=0.034, p=0.021).  Bununla birlikte, katalaz enzim aktivitesinin 500 μM H2O2+10 μM silibinin grubunda, 500 μM H2O2 grubuyla kıyaslandığında anlamlı olarak daha düşük olduğu gözlendi (p=0.05). Kontrol grubu (0 μM H2O2), 500 ve 650 μM H2O2 maruziyet grupları ile karşılaştırıldığında, MDA düzeyinin maruziyet yapılan gruplarda anlamlı olarak daha yüksek olduğu gözlendi (p=0.05). Bununla birlikte, katalaz enzim aktivitesinin 650 μM H2O2+10 μM silibinin grubunda, 650 μM H2O2 grubuyla kıyaslandığında anlamlı olarak daha düşük olduğu gözlendi (p=0.05). 
Sonuç olarak çalışmamızda, silibinin molekülünün U-2 OS hücrelerinde anti-proliferatif etkisinin olduğu ve doza bağımlı olarak katalaz enzim aktivitesi ve MDA düzeylerini azalttığı gözlemlendi.

Abstract:
Silibinin is one of the compounds found in Silybum marianum L. (thistle) seed. There are many studies indicating the anti-oxidant, anti-inflammatory, anti-apoptotic and anti-carcinogenic effects of silibinin. In recent years, many studies have shown the effect of this substance against various types of cancer. However, anti-oxidant effects of silibinin on bone cancer have not been investigated.
In our study, we aimed to investigate the effects of silibinin on cell proliferation and oxidative stress parameters catalase and MDA in U-2 OS cells. For this purpose, the U-2 OS cells were exposed to H2O2 (0-800 μM for 24 and 48 hour time periods)  and silibinin (0-100 μM for 24 hours) at different doses and time periods. The suitable time period and treatment dose of H2O2 for oxidative stressed model was determined by MTT method. After exposing U-2 OS cells with silibinin at 0-100 μM doses for 24 hours, cell viability was evaluated with MTT assay. U-2 OS cells exposed to H2O2 (500 and 650 μM), silibinin (5 and 10 μM) and H2O2+silibinin (500 μM H2O2+5 μM silibinin, 500 μM H2O2+10 μM silibinin, 650 μM H2O2+5 μM silibinin and 650 μM H2O2+10 μM silibinin) together at different doses for 24 hours. MDA level and catalase enzyme activity were determined by spectrophotometric method.
When control group (0 μM H2O2) compared with 500 and 650 μM H2O2 treatment groups, catalase enzyme activity was found to be significantly higher in treatment groups (p=0.034 and p=0.021, respectively). However, catalase enzyme activity was significantly lower in 500 μM H2O2+10 μM silibinin group compared to 500 μM H2O2 (p=0.05). When control group (0 μM H2O2) compared with 500 and 650 μM H2O2 treatment groups, MDA level was significantly higher in treatment groups (p=0.05). However, MDA level was significantly lower in 650 μM H2O2+10 μM silibinin group when compared with 650 μM H2O2 treatment group (p=0.05).
In conclusion, silibinin molecule was observed to have anti-proliferative effect and decrease the catalase enzyme activity and MDA levels in dose-dependent manner in U-2 OS cells.