Maternal periferik kanda fetal genomik DNA'nın belirlenmesi
Detection of fetal genomic DNA in maternal peripheral blood
Yazar: UĞUR AKPULAT
Danışman: Y.DOÇ.DR. ÇİĞDEM ERESEN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2006
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Yeni bir keşif olan anne serum ve plazmasında fetüse ait serbest DNA'nın bulunmasıgirişimsel olmayan prenatal tanı yöntemleri için yeni uygulamaların başlamasını sağlamıştır.Koryonik villus örneklemesi (CVS) ve amniyosentez gibi girişimsel prenatal tanı yöntemlerifetüs morbiditesi ve mortalitesiyle ilişkili riskleri taşıyan prosedürleri gerektirmektedir.Bununla beraber girişimsel olmayan prenatal tanı yöntemleri girişimsel tanı yöntemlerininrisklerini ortadan kaldırdığı gibi aynı zamanda girişimsel yöntemlerin uygulanacağı hamilekadınların duydukları endişeleri de ortadan kaldırmaktadır. Girişimsel olmayan prenatal tanıyöntemlerinden biri anne serum veya plazmasından fetüs DNA'sının izolasyonu ve polimerazzincir reaksiyonu (PCR) ile analizi yapılarak fetüs cinsiyetinin belirlenmesidir. Girişimselolmayan yöntemle fetüs cinsiyetinin belirlenmesi, X' e bağlı resesif bir hastalık riski taşıyanfetüslere girişimsel yöntemlerin uygulanıp uygulanmayacağı konusunda ön test olarakkullanılabilir. Eğer fetüsün cinsiyeti dişi ise girişimsel yöntemlerin uygulanması gereksizdir.Bugüne kadar gelişen teknolojiyle birlikte anne plazma ve serumundaki fetüs DNA'sınınanalizi ile farklı duyarlılıklarda fetüsün cinsiyeti belirlenmiştir.Bu çalışmada PCR analizi ile gebe kadınların periferik kanındaki fetüse ait genetikmateryalin varlığı değerlendirilmiştir. Bu yüzden gebe kadınların periferik kanındanayrıştırılan serum örneklerinden izole edilen total DNA içinde fetal DNA'nın varlığı Ykromozomuna özgün dizilerin (DYS14 ve SRY ) konvansiyonel ve gerçek zamanlı PCRanalizi ile gösterilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya dahil edilen 40 olgudan 25'inin kontrolyöntemleri ile sonuçlarına ulaşılmıştır. statistiksel analizler bu 25 olgu üzerinden yapılmıştır.Çalışmamız anne serumunda fetüse ait DNA'nın varlığını DYS14 ve SRY dizilerine özgükonvansiyonel PCR analizleri ile sırasıyla %80 ve %53.3 doğrulukta gösterilmiştir.Anahtar Kelimeler: Prenatal tanı, PCR, fetal DNA, sirküler DNA, maternal serum, fetüscinsiyetinin belirlenmesi.

Abstract:
The recent discovery of the presence of fetal DNA in maternal plasma and serum hasoffered new approaches to non-invasive prenatal diagnoses. Invasive prenatal diagnosismethods such as Chorionic villus sampling (CVS) and amniocentesis, entail procedure-related risks of fetal morbidity and mortality; however, non-invasive prenatal diagnoseswould not only obviate the procedure-related risks of an invasive prenatal diagnosis, butalso remove the anxiety associated with them on the part of pregnant women intending toundergo the procedure. An example of non-invasive prenatal diagnosis is fetal genderdetermination by isolation of fetal DNA from maternal plasma and serum and analysis withpolimerase chain reaction (PCR). Fetal gender determination to non-invasive prenataldiagnosis is as a ?pre-test? to determine whether invasive prenatal diagnosis should beperformed on a fetus having a risk of an X-linked recessive disorder. If gender of fetus isfemale, the application of invasive methods is unnecessary. By now, along with the improvingtechnology the fetal gender has been determined in different sensitivity by analysis of fetalDNA in maternal plasma and serum.In this study, it has been evaluated the presence of fetal genetic material in theperiferal blood of pregnant women by means of PCR analysis. For this reason, it has beenaimed to show the presence of fetal DNA in total DNA isolated from serum samplingdecomposed the periferal blood of pregnant women with the help of conventional and real-time PCR analysis with Y chromosome specific sequences (DYS14 and SRY). We onlyreached 25 cases? results in 40 cases examined. All statistical analysis made with these 25cases. Our study showed the presence of fetal DNA in maternal serum by means ofconventional PCR analysis of DYS14 and SRY sequences in accuracy %80 and %53.3respectively .Key words: Prenatal diagnosis, PCR, fetal DNA, circulating DNA, maternal serum, fetal sexdetermination.