Ratlarda gentamisinle oluşturulan nefrotoksisitede crosinin inflamasyon, oksidatif stres, apoptoz, NF- κB, TLR-4 veNrf-2/HO-1 yolakları üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of crosin on inflammation, oxidative stress, apoptosis, NF- κB, TLR-4 and Nrf-2/HO-1  pathways in gentamicin-induced nephrotoxicity in rats
Yazar: TUBA DOĞAN
Danışman: DOÇ. DR. BETÜL APAYDIN YILDIRIM
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Nefroloji = Nephrology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmada ratlarda gentamisin ile oluşturulan nefrotoksisiteye karşı crosinin inflamasyon, oksidatif stres, apoptoz, NF-B, TLR-4 ve Nrf-2/HO-1 sinyal yolakları üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlandı. Bu amaçla her grupta 6 rat olacak şekilde 36 rat Kontrol, Crosin (Cr) 25mg/kg, Cr 50 mg/kg, Gentamisin (Gm), Gm+ Cr 25 mg/kg ve Gm + Cr 50 mg/kg grupları olmak üzere 6 gruba ayrıldı. Cr gruplarına 25 ve 50 mg/kg crosin, Gm gruplarına 80 mg/kg gentamisin 8 gün boyunca i.p. uygulandı. Deney sonunda anestezi altında ratlardan kan ve böbrek dokuları alınarak böbrekler tartıldı. Tam kanda ürik asit, kreatinin ve üre düzeylerine bakıldı. Plazmada TNF-ɑ, IL-1β, IL-6 ve AOPP; plazma ve böbrek dokusunda MDA, GSH, Nitrit, Nitrat ve TLR-4 düzeyleri, SOD, CAT ve GPx aktiviteleri; böbrek dokusu Bax, Bcl-2, Kaspaz-3, COX-2, HO-1, NF-B, Nrf-2 ve TLR-4 ekspresyon düzeylerine RT-PCR ve western blotlama ile bakıldı. Elde edilen sonuçlara göre Gm uygulaması sonrasında gelişen dejenerasyon, akut tubüler nekroz, inflamasyon ve hemorajinin artışından dolayı böbreklerde ödem gelişimi sonucu böbrek ağırlıklarında artış saptandı; ve böbrek fonksiyon testlerinde,  TNF-α, IL-1β, IL-6, MDA, Nitrit, Nitrat, AOPP ve TLR-4 düzeylerinde artışa sebep olarak SOD, CAT ve  GPx aktivitelerini, Bax, Kaspaz-3, COX-2, NF-B ve TLR-4 ekspresyon düzeylerini artırdığı; Bcl-2, HO-1 ve Nrf-2 ekspresyon düzeylerini azalttığı saptandı. 
Sonuç olarak, crosinin özellikle 50 mg/kg dozunun Gm ile birlikte uygulandığında oksidatif stresi, apoptozu, inflamasyonu inhibe ederek gentamisinin olumsuz etkilerini azalttığı tespit edildi. Gentamisin kaynaklı nefrotoksisitede Crosin 50 mg/kg dozunun böbrek Nrf-2 ve HO-1 protein düzeylerini artırdığı bulgusu literatüre öncü çalışma olarak sunuldu.

Abstract:
In this study, it was aimed to investigate the effects of crosin on inflammation, oxidative stress, apoptosis, NF-B, TLR-4 and Nrf-2/HO-1 signaling pathways against gentamicin-induced nephrotoxicity in rats. A total of 36 rats, 6 rats in each group, were divided into 6 groups, were used for the Control, Crosin (Cr) 25 mg/kg, Cr 50 mg/kg, Gentamicin (Gm), Gm+Cr 25mg/kg, and Gm+Cr 50mg/kg groups. The Cr groups received crosin at 25 and 50 mg/kg, and the Gm groups received gentamicin at 80 mg/kg i.p. for 8 days.  At the end of the experiment, blood and kidney tissues were taken under anesthesia. The collected kidneys were weighed. Uric acid, creatinine and urea levels were measured in whole blood. TNF-ɑ, IL-1β, IL-6 and AOPP levels in plasma; MDA, GSH, Nitrite, Nitrate and TLR-4 levels, SOD, CAT and GPx activities were measured in plasma and kidney tissue. Bax, Bcl-2, Caspase-3, COX-2, HO-1, NF-B, Nrf-2 and TLR-4 expression levels were determined by RT-PCR and western blotting in kidney tissue.
According to the findings, an increase in kidney weights and kidney function tests as a result of edema in the kidneys due to degeneration, acute tubular necrosis, inflammation and increased in hemorrhage after Gm administration; increased in levels of TNF-α, IL-1β and IL-6; decreased in SOD, CAT and GPx activities by causing an increased in MDA, Nitrite, Nitrate, AOPP and TLR-4 levels; and increased in the expression levels of Bax, Caspase-3, COX-2, NF-B and TLR-4; It was determined that Bcl-2, HO-1 and Nrf-2 expression levels decreased in. 
In conclusion; It was found that the application of crosin 50 mg/kg dose against Gm induced kidney damage inhibited oxidative stress, apoptosis, inflammation and reduced the negative effects of gentamicin. The finding that crosin 50 mg/kg treatment dose increased in kidney Nrf-2 and HO-1 protein expression levels when administered with gentamicin was presented as a pioneering study in the literature.