Trakya'da sığırlarda bulunan Theileria ve Babesia türlerinin ve bunların sığırlarda yaygınlığının Reverse Line Blotting (RLB) tekniği ile araştırılması
Detection and Distribution of Babesia and Theileria Species Infecting Cattle In Thrace (Turkey) by Reverse Line Blotting (RLB)
Yazar: ZAHİDE BİLGİN
Danışman: PROF. DR. ERKUT TÜZER
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Parazitoloji = Parasitology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Babesia = Babesia ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sığırlar = Cattles ; Theileria = Theileria ; Türkiye = Turkey

Özet:
Trakya'da sığır Babesia ve Theileria infeksiyonları üzerindeki mevcut literatürler mikroskopik ve serolojik bulgulara dayanmakta ve bu bulgular çelişkili sonuçlar göstermektedir. Bu durum moleküler bir araştırma yapılmasını gerekli kıldı. 2004-2006 yaz aylarında Trakya'yı temsilen 20 ilçede bulunan 77 yerleşim yerinden tesadüfi seçilen meraya çıkmış 230 sığırdan kan örnekleri alındı. Kan örneklerinden DNA izolasyonunu takiben 18S rDNA'da yer alan Babesia ve Theileria cinslerince ortaklanılan bir gen bölgesinin amplifikasyonu amacıyla PCR (Polymerase Chain Reaction) işlemi yapıldı. PCR ürünlerinin türlere özgü oligonükleotidlerin kovalent olarak bağlandığı bir membranla hibridizasyonu sağlanarak RLB (Reverse Line Blotting) işlemi gerçekleştirildi. Gidilen 77 yerleşim yerinden 3'ünde (%3,9) Babesia bovis, 3'ünde (%3,9) Theileria annulata ve 22'sinde (%28,57) T.buffeli/orientalis infeksiyonu bulundu. 230 sığırdan 3'ünde (%1,3) B.bovis'e, 6'sında (%2,61) T.annulata'ya, 42'sinde (%18,26) T.buffeli/orientalis'e rastlandı. Birden fazla türle oluşan karışık (miks) infeksiyon görülmedi. İnfekte 51 sığır arasında B.bovis infeksiyonunun yaygınlığının %5,88, T.annulata infeksiyonunun yaygınlığının %11,76 ve T.buffeli/orientalis infeksiyonunun yaygınlığının %82,35 olduğu bulundu. Theileria annulata saptanan iki hayvanda şiddetli klinik belirti gözlendi. Trakya bölgesinde T.buffeli/orientalis'in varlığı ilk defa gösterildi. Bu çalışmada saptanan T.buffeli/orientalis prevalansı özellikle Türkiye'nin diğer bölgelerinde yapılan çalışmalardan elde edilen bulgularla kıyaslandığında oldukça yüksek bulundu. Trakya'da T.buffeli/orientalis'in vektör potansiyeli tartışmalı bir durum arzetmektedir ve bu çalışma bölgedeki vektör keneler üzerinde daha kapsamlı çalışmalar yapılması gerektiğini gösterdi. PCR ve RLB'nin güvenilir ve ekonomik olduğu ve epidemiyolojik araştırmalarda olduğu kadar rutin uygulamalarda da kullanımının uygun olduğu sonucuna varıldı.

Abstract:
Existing literature on bovine Babesia and Theileria infections in Thrace region (Turkey) is based on microscopical and serological findings with some controversial results, thus making a molecular investigation necessary. The blood samples were collected from 230 cattle exposed to fıeld conditions during summer seasons of 2004-2006. Sampling was done randomly, from 77 locations in 20 towns in the region. Following DNA extraction from blood samples, PCR (Polymerase Chain Reaction) assay was performed to amplify a 18S rDNA region conserved to Babesia and Theileria species. RLB (Reverse Line Blotting) assay relied on hybridisation of PCR products to a membrane with covalently linked species specific oligonucleotides. Out of 77 locations visited; Babesia bovis and Theileria annulata was found in 3 (3,9%) locations and T.buffeli/orientalis was found in 22 (28,57%) locations. Of the 230 cattle; 3 (1,3%) were positive for B.bovis, 6 (2,61%) for T.annulata and 42 (18,26%) for T.buffeli/orientalis and none with mixed infections. Among 51 cattle infected; infection rates for B.bovis, T.annulata and T.buffeli/orientalis were %5,88, %11,76 and %82,35, respectively. Two animals infected with T.annulata showed severe clinical signs. Theileria buffeli/orientalis is shown to exist in Thrace for the first time. This study bears a remarkably high prevalance of T.buffeli/orientalis infection in Thrace especially with respect to results obtained from other regions of Turkey. The vector potential of T.buffeli/orientalis in Thrace poses a questionable status and this study implies necessity for further studies on tick vectors in the region. PCR and RLB are found to be convenient and economical and can be utilised in epidemiological studies as well as routine practices.