Çeşitli bitki türlerinde vitamin B12, folik asit ve biotin içeriğinin immuno-enzimatik yöntemle araştırılması
The investigation of vitamin B12, folic acid and biotin content of different plant species by enzyme immuno assay
Yazar: NİLGÜN GÜLER
Danışman: PROF. DR. BİLAL CEM LİMAN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji ve Toksikoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2005
Konu: Beslenme ve Diyetetik = Nutrition and Dietetics ; Biyokimya = Biochemistry ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
IVÇEŞ TL B TK TÜRLER NDE V TAM N B12, FOL K AS T VE B OT N ÇER Ğ N NMMUNO-ENZ MAT K YÖNTEMLE ARAŞTIRILMASIÖZETBu çalışmada, çeşitli bitki türlerinde folik asit, biotin ve vitamin B12 içeriğinin immuno enzimatikyöntemle belirlenmesi amaçlandı. Ispanak, pırasa, marul, maydanoz, kekik, nane, sarımsak, iğdeçiçeği, şalgam tohumu ve kuşburnu örnekleri, Kayseri merkezindeki yerel pazarlardan taze vetemiz olarak temin edildi. Kinetik Hesaplama V16 Bilgisayar programı kullanılarak vitamin B12,folik asit ve biotin ölçümü için ayrı ayrı protokoller hazırlandı. Analiz için bitki örneklerihazırlanırken 10 g bitki öğütüldükten sonra 100 ml distile su ilavesi ile karıştırıldı ve 1 ml alfaamilaz ilavesinden sonra 20 dk inkubasyona tabi tutuldu, 3dk kaynatıldı ve oda sıcaklığınasoğutuldu, Carrez I ve Carrez II çözeltilerinin ilavesinden sonra 4000 dev/ 10dk `da santrifüj edildi.Süzüntü örnek tampon çözeltisi ile 1:10 sulandırıldı , bu çözeltiden ve standart çözeltilerinden50'şer Âµl numaralandırılmış kuyucuklara konuldu. Ellişer Âµl enzim kongujat ilavesinden sonra odasıcaklığında 15 dk bekletildi, kuyucukların içi boşaltıldı ve 2 kez yıkanarak 100'er Âµl substrat vekromojen ilave edildi. Karanlıkta 15 dk bekletildi, 100'er Âµl reaksiyonu sonlandırma çözeltisiilave edildikten sonra ELISA cihazında 450 nm de ölçüm yapıldı sonuçlar ppb olarak elde edildi.Folik asit düzeyleri ppb olarak sırasıyla ıspanakta 0.698, marulda 0.711, maydanozda 3.450,kuşburnunda 2.139, şalgam tohumunda 0.959, iğde çiçeğinde 10.303 bulundu. Vitamin B12düzeyleri ppb olarak sırasıyla ıspanakta 11.070, nanede 90.088, kekikte 168.330, sarımsakta10.744, kuşburnunda 21.240, iğde çiçeğinde 44.127 bulundu. Biotin düzeyleri ppb olarak sırasıylaıspanakta 249.436, pırasada 330.228, marulda 630.676, maydanozda 273.521, nanede 278.973,sarımsakta 942.248, kuşburnunda 589.469 bulundu. Biotinin en fazla sarımsak ve marulda , B12vitamininin en fazla kekikte, folik asidin en fazla iğde çiçeğinde olduğu tesbit edildi.Anahtar Kelimeler: Biotin, Bitki, ELISA, Folik Asit, Vitamin B12

Abstract:
VTHE INVESTIGATION OF VITAM N B12, FOLIC ACID AND BIOTIN CONTENT OFDIFFERENT PLANT SPECIES BY ENZYME IMMUNO ASSAYABSTRACTThe aim of this study was determination of vitamin B12, folic acid, and biotin content of differentplant species by enzyme- immuno assay. Spinach, leek, lettuce, parsley, thyme, mint, garlic,oleaster, turnip seed, rosehip samples were obtained from Kayseri?s regional markets as a fresh andclean was used in the study. Protocols for evaluation of vitamin B12 , folic acid, and biotin wereprepared separately using Cinetic Calculation V16 software. Ten g of homogenized plant samplewas added to 100ml of distilled water in a classbeaker and mixed then 1 ml of alfa amylasesolution was added prior to the incubation at room temperature for 20 min. The sample was boiledfor 3 min and chilled down to room temperature and then centrifuged at 4000 rpm for 10 min afterthe addition of Carrez I and Carrez II solutions the supernatant was diluted 10 fold using samplebuffer. 50 Âµl of each standart solution or prepared sample was added to seperate wells and 50 Âµlenzyme conjugate solution was added to each well, and then incubated for 15 minutes at roomtemperature. After the incubation, liquid phases were poured out of the wells by taping themicrowell holder upside down against to absorbent paper. After twice washing with distilled water100 Âµl substrate and 100 Âµl chromogen were added to each well and incubated for 15 min in dark,at room temperature. 100 Âµl of stop solution was added to each well and absorbance was measuredat 450 nm by ELISA instrument results obtained as ppb.The levels of folic acid as ppb were respectively 0.698 in spinach, 0.771 in lettuce, 3.450 in parsley,2.139 in rosehip, 0.959 in turnip seed, 10.303 in oleaster found. The levels of vitamin B12 as ppbwere respectively 11.070 in spinach, 90.088 in mint, kekikte 168.330, 10.744 in garlic, 21.240 inrosehip, 44.127 in oleaster found. The levels of biotin as ppb were respectively 249.436 in spinach,330.228 in leek, 630.676 in lettuce, 273.521 in parsley, 168.330 in thyme, 278.973 in mint, 942.248in garlic, 589.469 in rosehip found. The highest biotin content was found in garlic and lettuce. Thehighest vitamin B12 content was found in thyme. Oleaster has the highest folic acid content.Key Words: Biotin, ELISA, Folic Acid, Plant, Vitamin B12 .