Vibrio anguillarum suşlarının antimikrobiyal duyarlılığı ve plazmid izolasyonu
Antimicrobial susceptibilities and plasmid isolation of Vibrio anguillarum strains
Yazar: NİHAN GÜNLÜ
Danışman: PROF. DR. AYŞEGÜL KUBİLAY
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Mikrobiyal duyarlılık testleri = Microbial sensitivity tests ; Plazmitler = Plasmids ; Vibrio anguillarum = Vibrio anguillarum ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Vibrio anguillarum, akuakültür ortamlarında çok yaygın bulunan ve çok sayıda salgınlara neden olan patojenik Vibrio türlerinin en önemlilerinden birisidir. Bu çalışmada, ülkemiz balık işletmelerinden izole edilen V. anguillarum suşlarında oluşan antimikrobiyal direncin belirlenmesi amaçlanmıştır. Kültür balıklarından izole edilen 11 suş ve 1 referans suşun tamamının fenotipik özellikleri; geleneksel mikrobiyolojik ve API 20 E testleri kullanılarak belirlenmiştir.V. anguillarum suşlarında antimikrobiyal duyarlılığı belirlemede, Muller-Hinton Agarda disk diffüzyon (22 antibiyotik) ve ATB VET (Biomerieux 14 289, 28 antibiyotik) strip sistemi kullanılmıştır.Disk difüzyon methodu sonuçlarına göre, V. anguillarum suşlarının klindamisin, oksasilin ve linkomisine dirençli olduğu bulunmuştur. Ayrıca, bütün suşlar, gentamisin, kanamisin, enroflaksasin, rifamisin, florfenikol, tobramisin, ciproflaksin ve trimethoprine duyarlı olduğu saptanmıştır.ATB VET sonuçlarına göre eritromisin, penisilin, linkomisin, amoksilin, pristinamisin, amoksoklav, tiylosin, oksasilin, kolitsin, sephalotin, sefaperazon, sulfamethizol, streptomisin ve metronidazola direnç olduğu belirlenmiştir. Kontrimazol, flumekuin ve enroflaksasine tüm suşların duyarlı olduğu görülmüştür.Vibrio anguillarum suşlarının plazmidleri izole edilerek her suşa ait plazmid profili agaroz jel elektroforezi ile belirlenmiştir. İncelenen 12 suşun hepsinde 1-3 arasında değişen sayıda plazmid DNA'sına rastlanılmış ve molekül ağırlıkları 0,4-33 kb arasında hesaplanmıştır. 16 kb molekül ağırlığındaki plazmid DNA'sı çalışılan tüm suşlarda, 33 kb molekül ağırlığındaki plazmid DNA'sı 4 suşta, 3 kb molekül ağırlığındaki plazmid DNA'sı 3 suşta ve 0,4 kb molekül ağırlığındaki plazmid DNA'sı ise 4 suşta tespit edilmiştir. 12 suş ve 1 referans suşta 0,4-16 kb aralığındaki boyutta 1-3 plazmid bulunmuştur.Çalışma sonuçlarımıza göre, tüm suşlarda 16 kb'da gözlenen plazmidin V. aguillarum'da çoklu antibiyotik direnci gelişiminden sorumlu olabileceği düşünülmektedir. Ayrıca, akuakültürde balık hastalıklarının tedavisinde aşırı ve bilinçsiz antibiyotik kullanımı sonucunda bakterilerdeki antimikrobiyal direnc yaygın olarak ortaya çıkmaktadır.Anahtar Kelimeler: Vibrio anguillarum, antibiyotik, , bakteriyel direnç, agaroz jel elektroforez, plazmid

Abstract:
Vibrio anguillarum is one of the most widely recognized pathogenic Vibrio species due to numerous outbreaks and its? wide occurrence in aqucultre environment. Aims of the present study were to determine of the occurrence of resistance to antimicrobials of V. anguillarum strains that has been isolated from cultured fish species in Turkey. A total of 11 V. anguillarum isolated from farmed fish and 1 reference strain were examined in terms of phenotypic characteristic. Conventional microbiological and API 20 E tests were used to determined the phenotypic characteristics of V. anguillarum strains.The to disk diffusion (22 antibiotics) in Muller-Hinton agar and ATB VET (Biomerieux 14 289, 28 antibiotics) strip system were used for determined the antimicrobial susceptibility of V. anguillarum strains.According to disk diffusion method results were resistant to clindamisin, oxacillin and lincomycin of V. anguillarum strains. Also, all strains were susceptible to gentamicin, kanamycin, enrofloxacin, rifampicin, florfenicol, tobramicin, ciprofloxacin and trimethoprim.According to ATB VET results were resistant to erythromycin, penicilin, lincomycin, amoxycillin, pristinamycin, amox-clav.ac, tylosin, oxacillin, colistin, cephalothin, cefoperazon, sulfamethizol, streptomycin and metronidazol. All strains were susceptible to contrimoxazol, flumequin, oxolinic acid and enrofloxacin.Plasmids of V. anguillarum strains were isolated and plasmid profiles of each strain was determined by agarose gel electrophoresis. The isolated strains were screened for plasmid DNA by agarose gel electrophoresis. 11 strains and 1 reference strain have been found to 1 ? 3 plasmids, with sizes ranging from 0,4 ? 33 kb. According to our results, 16 kb plasmid seems in the all strains to be responsible from the development of multiple antibiotic resistance in V. anguillarum. Our study reveals that the antibiotic-resistant bacteria are widespread in the aquaculture due to fish disease treatment used for serious antibiotic.Keywords: Vibrio anguillarum, antibiotics, bacterial resistance, agarose gel electrophoresis, plasmid