Tendon kılıfı fibroblastlarının hücre kültüründe tenositlere farklılaşması ve tenositlerin sentezlediği kollajen tiplerinin belirlenmesi
The differentiation of tendon sheat fibroblasts to tenocytes in cell culture and characterization of the collagens synthesized by tenocytes
Yazar: CANSIN YAYLALI
Danışman: PROF.DR. DÜRDANE KOLANKAYA ; Y.DOÇ.DR. SİNAN YÜRÜKER
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada sıçan (Rattus norvecigus) Aşil (Achilles) tendonuna aittenositlerde, filtreli kuyu ekleri (FKE) kullanılarak yapılan yüksek yoğunluktahücre kültüründe tendonun temel yapısını oluşturmak üzere sentezlenenkollajen tip I, tip III ve tip V moleküllerinin hücre içindeki dağılımı vekarakterizasyonu yapılmıştır.Yüksek yoğunlukta tenosit kültürü yaparken kullanılan FKE'nin yanı sıra, hücreproliferasyonunu arttırabilmek amacı ile çeşitli kaynaklarda kullanılandan farklıolarak serum miktarı %5 oranında arttırılarak modifiye edilmiş besiyerikullanılmıştır. Çalışmada FKE üzerine alınarak yüksek yoğunlukta kültürükurulan tenositler 1 haftalık ve 3 haftalık olmak üzere 2 ayrı grubabölünmüştür. Belirlenen süre sonunda, FKE yüzeyinde tutulan tenositlerdeimmünofloresan boyama ile AMCA, FITC ve Texas Red florokromlarıkullanılarak sırasıyla tip I, tip III ve tip V kollajen moleküllerininkarakterizasyonu yapılmıştır.FKE yüzeyinde üretilen hem 1 haftalık hem de 3 haftalık plaklara aittenositlerde her 3 kollajen molekülünün de sentezlenmiş olduğu saptanmıştır.FKE yüzeyinde 3 hafta üretilen tenositlere ait plaklar içerisinde 1-2mmboyutunda dokuların oluştuğu gözlemlenmiş; oluşan doku içerisindekitenositlerde kollajen fibrillerin olgunlaştığı hücresel ceplerin de meydanageldiği saptanmıştır. Diğer yandan doku oluşumuna paralel olarak, 3 haftalıkplaklarda üreyen hücrelerde boyanma miktarı çok daha yoğun ve büyükveziküller şeklinde tesbit edilmiştir.Sonuç olarak, serum miktarı %5 oranında arttırılmış besiyeri ve FKEkullanılarak yapılan yüksek yoğunlukta hücre kültürünün, tenositlerin in vitrokoşullarda tip I, tip III ve tip V kollajen moleküllerinin sentezini gösterenözelleşmiş karakterlerini uzun süre koruyarak üretilmesi için oldukça uygun biryöntem olduğu düşüncesindeyiz.Anahtar Kelimeler: Aşil tendonu, tenosit, kollajen tip I, kollajen tip III, kollajentip V, immünofloresan boyama.

Abstract:
In this study, we observed the characterization and intracellular dispersal ofcollagen molecules which are synthesized for the constitution of tendonstructure such as type I, type III and type V collagen in rat (Rattus norvecigus)Achilles tendon tenocytes cultured in high densities by the usage of filter wellinsters (FWI).Other than FWI which was used for high density tenocyte culture, a modifiedmedium with 5% increased amount of serum is used different from the ones inliterature in order to increase cell proliferation. In the study, tenocytes whichwere cultured in high densities by transferring on FWI were divided into 2different groups as 1 and 3 weeks. At the end of the determined period,immunofluorescence staining for the characterization of type I, type III andtype V collagen molecules by using AMCA, FITC and Texas Red fluorochromswas performed on the tenocytes which were produced on FWI.It was determined that all 3 collagen molecules were synthetized by thetenocytes produced on the surface of FWI for both 1 and 3 week plates.Tissues that are 1-2mm in size were observed in the plates which belong tothe tenocytes produced for 3 weeks on the surface of FWI; in these tenocytesthat belong to the tissue, cellular pockets in which collagen fibrils becomemature were also determined. In the cells that were produced in the plates for3 weeks, the amount of stainings were established as more dense and largevesicules.As a result, we consider that high density culture in which both medium with5% increased amount of serum and FWI are used is an appropriate methodfor the production of tenocytes showing specialized characters such aselongated synthesis of type I, type III and type V collagen molecules under invitro conditions.Keywords: Achilles tendon, tenocyte, type I collagen, type III collagen, type Vcollagen, immunoflurorescence staining.