Travmatik kalça çıkığı modeli oluşturulan sıçanlarda trombositden zengin plazmanın kondrosit iyileşmesi üzerine etkisi
The effect of platelet-rich plasma on chondrocyte healing traumatic dislocation of the hip in the rat model
Yazar: TOKTAMIŞ SAVAŞ
Danışman: PROF. DR. ORHAN BÜYÜKBEBECİ
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kalça eklemi = Hip joint ; Kalça çıkıkları = Hip dislocation ; Kondrositler = Chondrocytes ; Sıçanlar = Rats ; Tedavi = Treatment ; Trombositten zengin plazma = Platelet rich plasma ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries

Özet:
Amaç: Bu çalışmada kıkırdak dahil pluripotent hücrelerin diferansiyasyon ve olgunlaşmasını sağlayan büyüme faktörlerince zengin otolog yollarla sıçan kanından elde edilen TZP (Trombositden Zengin Plazma)'nin izolasyonu yapılacak olup, bu TZP'nin deneysel travmatik kalça çıkığı (TKÇ) modeli oluşturulan sıçanların femoroasetabular kıkırdaklarında iyileşmeye olan etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bu inceleme kıkırdak dokunun histopatolojik değerlendirilmesi şeklinde olup; apopotozise giden kondrositler TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling) yöntemi ile tespit edilecektir.
Materyal ve Metod: Bu çalışma in vivo ve in vitro deneysel çalışmaları içermektedir. Bu deneysel çalışmada 24 adet ağırlıkları 324 gram (gr) ile 617 gr arasında değişen 20-24 haftalık erişkin Sprague-Dawley (SD) cinsi erkek sıçanlar kullanılmış olup, deney hayvanları 3 ana gruba ayrıldı. Her grupta 8 adet örneklem bulunmaktaydı. Bu örneklemlerde aynı hayvanın sağ kalçası belirli bir süre çıkık olarak bekletildikten sonra yerine oturtularak TZP uygulandı; sol kalçası ise sağ kalça süresi kadar çıkık olarak bekletilip daha sonra yerine oturtuldu. Gerçek bir kontrol grubu olabilmesi için TZP içine fosfat tamponlu salin (PBS) solüsyonu eklendi (20 µl kadar). Sol kalçaya, sağ kalçaya enjekte edilen hacim kadar (50 µl) sadece PBS solüsyonu enjekte edildi. Sıçanların kalçaları disloke edilirken, kıkırdakta oluşabilecek mekanik hasarı engellemek için kullanılan güç minimalize edildi. 7 gün sonra hayvanların kalçalarından alınan dokular histopatolojik incelemeye tabi tutuldu. Her sıçanın sağ ve sol femur başı kondrositlerinin apoptotik indeksleri (Aİ) hesaplandı.
Bulgular: Tüm grupların başlangıç ve 7. gün ağırlıklarının anlamlı şekilde azaldığı bulunmuştur. Deneklerin başlangıç ağırlıkları, 7. gün ağırlıkları, ağırlık değişimleri, denek yaşı, operasyon süresi ile Aİ arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki saptanmamıştır. Aİ değerleri; Grup 1a'nın 0,01±0,01 (ortalama±standart sapma), grup 1b'nin 0,03±0,01, grup 2a'nın 0,02±0,01, grup 2b'nin 0,08±0,02, grup 3a'nın 0,05±0,01, grup 3b'nin 0,1±0,02 arasında saptanmıştır. Aİ açısından deney ve kontrol grubu arasında anlamlı bir ilişki bulunmuştur (p<0,05). Her ana grup kendi deney ve kontrol grupları içinde karşılaştırıldığında grup 1a ile grup 1b haricindeki diğer grupların kendi aralarındaki Aİ azalışları istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Tüm deney grupları ve kontrol grupları kendi içinde karşılaştırıldığında grup 1a ile grup 2a nın haricindeki diğer tüm grupların arasında anlamlı farklılık saptanmıştır.
Sonuç: TKÇ tedavisinde TZP umut vaat eden, tekrarlanabilir alternatif bir tedavi yöntemi olup kondrosit apoptozisini azaltmada dikkate değer sonuçlar elde edilmiştir. TKÇ hastalarında erken redüksiyonla birlikte uzun dönem komplikasyonların önlenmesinde TZP'nin yararlı olduğunu düşünmekteyiz.
Anahtar Kelimeler: Travmatik, Kalça, Çıkık, Trombosit, Apoptozis, TZP

Abstract:
Purpose: The aim of the present study was to isolate Platelet Rich Plasma (PRP) which is rich in growth factors providing differantion and maturation of pluripotent cells including the cartilage from rat blood through autologous methods, and to investigate the effect of PRP on healing in femoroacetabular cartilages of the rats on which experimental traumatic hip dislocation (THD) was created. The present study was designed on histopathological analysis of the cartilaginous tissue; and the chondrocytes undergoing apoptosis would be detected through Terminal Deoxynucleotidly Transferase Mediated dUTP Nick End Labeling (TUNEL) method.
Material and method: The present study includes in vivo and in vitro experimental trials. Twenty four 20 to 24-week old mature male Sprague-Dawley rats with body weights between 324 and 617 grams (g) enrolled into the study were divided into 3 groups. Eight subjects were included into each group. The right hips of the subjects were kept as dislocated for a certain period, and then placed, and PRP was administrated; left hip was also kept dislocated as long as the right hip and then placed onto the site. Phosphate buffered saline (PBS) solution (approx. 20 µl) was added into PRP to create an actual control group.  PBS solution was injected onto the left hip with a similar quantity (50 µl) injected into the right hip. The force applied was minimized during hip dislocation of the rats to prevent mechanical injury on the cartilage. The tissues obtained from the hips of the subjects were examined after 7 days. Apoptotic index (AI) of right and left femur head chondrocytes of each rat was calculated.
Findings: It was found that initial body weights as well as body weight at day 7 were significantly lower. There was not any association between AI and body weight at day 7, weight changes, subject age, operation period. AI values were detected as follows; 0.01±0.01 (mean±standard deviation) in group 1a; 0.03±0.01 in group 1b; 0.02±0.01 in group 2a; 0.08±0.02 in group 2b; 0.05±0.01 in group 3a; 0.1±0.02 in group 3b. A significant association in AI was found between experimental and control groups (p<0.05).  Comparison of each main groups with their experimental and control subgroups revealed that decrease of AI between the subgroups themselves were statistically significant except subgroups 1a and 1b. A significant difference was detected between all groups except subgroups 1a and 2a when all experimental and control subgroups were compared among themselves.
Conclusion: PRP is a promising, repeatable and alternative treatment method for THD treatment; and considerable results were obtained to reduce apoptosis of the chondrocytes. We believe that PRP would be useful to prevent long term complications along with early reduction for the patients with THD.
Key Words: Traumatic, Hip, Dislocation, Platelet, Apoptosis, PRP