Ehrlich assit tümörü enjekte edilen farelerde rhamnetin'in etkisinin araştırılması
The effect of the rhamnetin's antitumoral on mice formed of ehrlich ascites and solid tumor
Yazar: ÖZLEM BOZKURT
Danışman: PROF. DR. ERDOĞAN UNUR
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Anatomi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Anatomi = Anatomy
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Apoptozis = Apoptosis ; Faktör VIII = Factor VIII ; Fareler = Mice ; Flavonoidler = Flavonoids ; Karsinoma-ehrlich tümörü = Carcinoma-ehrlich tumor ; Rhamnetin = Rhamnetin

Özet:
Rhamnetin, özellikle karanfilde olmak üzere çay, elma, soğan gibi bazı bitkilerde bulunan bir flavonoiddir. Rhamnetin antitümöral ve antioksidan özelliklerinden dolayı kanser araştırmalarında kullanılmaktadır. 
Bu çalışmada fare meme adenokarsinomundan köken alan ve Balb/c farelerde geliştirilen Ehrlich Assit Tümör modelinde farklı dozlarda rhamnetin uygulamasının assit ve solid tümör üzerine etkileri araştırılmıştır. Çalışmamızda assit ve solid tümör gruplarında toplam 92 adet Balb/C türü fare kullanılmıştır. Bunların 10 tanesi stok fare olarak kullanılmıştır. Farelerin tamamına stok hayvandan alınan 1x106 EAT hücresi intraperitoneal ve subkutan olarak enjekte edilmiştir. Tedavi gruplarına; assit tümörde 10 gün intraperitoneal, solid tümörde 15 gün boyunca subkutan olarak 100µg/kg ve 200µg/kg rhamnetin uygulanmıştır. 
Deney süresince tüm grupların kilo değişimleri kaydedildi. Bütün gruplarda (assit ve solid tümör gruplarında), kilo artışı en fazla kontrol grubunda gözlendi. Tedavi gruplarında ise, ağırlık artışı en az olan grup 200µg/kg rhamnetin uygulanan gruplardı.  Solid tümör oluşturulan hayvanlarda tümör hacim artışı kontrol grubuna (3.67) oranla en az 200µg/kg rhamnetin uygulanan grupta gözlenmiştir (2.84) (p<0.05). 
Deney sonunda sakrifiye edilen hayvanlardan; assit tümör grubundan dalak, böbrek, mide, ince bağırsak, kalın bağırsak ve karaciğer dokuları, solid tümör grubundan ise tümör dokuları histopatolojik inceleme için alınmıştır. Dokular histopatotojik olarak incelenmiş ve 200µg/kg rhamnetin uygulanan grupta, doku kapsülü ya da tunica serosa'ya invaze olan EAT hücrelerinin tümör kontrol grubuna oranla daha az olduğu gözlenmiştir. 
Solid tümör oluşturulan hayvanların tümör dokularında immünohistokimyasal olarak Faktör VIII ekspresyonu ile angiogenesis, TUNEL yöntemi ile de hücre apoptozu belirlenerek gruplar arasındaki fark değerlendirildi. Ayrıca rhamnetinin EAT hücreleri üzerindeki in vitro sitotoksik etkisinin belirlenebilmesi için rhamnetin dilüsyonlarının 1µg, 2.5µg ve 5µg farklı konsantrasyonları uygulanarak canlı ve ölü hücre oranları sayılarak gruplar karşılaştırıldı.
Deney sonunda 200µg/kg rhamnetin uygulanan tedavi grubunda damar yoğunluğunun önemli derecede azaldığı (1.700) ve apoptotik hücre sayısının artmış olduğu gözlendi (10.416) (p<0.05). In vitro deney grubunda ise 1µg/ml rhamnetin uygulanan grupta 3 ve 24 saatlik inkübasyon sonrasında apoptoza uğramış hücre sayısı daha fazla olarak gözlemlendi. Sonuç olarak EAT hücreleri ile oluşturulan gerek assit tümör gelişimi gerekse solid tümör gelişimi üzerinde rhamnetin'in antitümöral etki gösterdiği bizim çalışmamızda da belirlenmiştir.

Anahtar kelimeler: Ehrlich Assit Tümör. Rhamnetin, Apoptoz, Faktör VIII

Abstract:
Rhamnetin is a flavonoid which contained in especially clove, such as apple, tea, onion plant. Rhamnetin has been used in cancer research due to its antitumor and antioxidant properties
In this study, effects of rhamnetin administration at different doses on ascites and solid tumors were investigated in Balb/C mice bearing Ehrlich Ascites Tumor model that originating from rat breast adenocarcinoma. Overall, 92 Balb-c mice (10 as stock animal) were used in this study. Ehrlich ascites tumor (EAT) cells (1x106 EAT cells) that harvested from stock animals were injected to all rats via intraperitoneal and subcutaneous route. Rhamnetin (100µg/kg and 200µg/kg) were given intraperitonealy and subcutaneously during 10 days and 15 days to the animals bearing ascites tumor and solid tumor respectively.
Throughout experiments, weight changes were recorded in all groups. The maximum weight increase was observed in the control group among all groups (ascites and solid tumor groups). In the treatment groups, the least weight increase were determined in 200 μg/kg rhamnetin applied groups. The lowest increase in tumor volume was observed in the group that received 200µg/kg rhamnetin (2.84) when compared to tumor control group (3.67) (p<0.05).
All animals were sacrificed at the end of experiment. The spleen, kidney, stomach, small intestine, large intestine and liver tissues were removed from animals bearing ascites tumor and tumor tissues were removed from animals bearing solid tumor for histopathological examination. 
Histopathological examination in ascites tumor groups revealed that number of EAT cells that invaded into capsule of tissue and serosa layer were lower in the group received 200µg/kg rhamnetin when compared to tumor control group. 
In animals with solid tumor, angiogenesis and apoptosis were assessed immunohistochemically by Factor VIII expression and Tunnel method in tumor tissues respectively and the differences were assessed among all groups. In addition, in order to determine in vitro cytotoxic effects of rhamnetin on EAT cells, alive and death cell ratios were counted after different concentrations rhamnetin application (1µg, 2.5µg and 5µg).
At the end of experiment, it was observed that vessel intensity (1.700) was significant decreased while number of apoptotic cells (10.416) was significantly increased in the group received 200µg/kg rhamnetin (p<0.05). In the in vitro experiment groups, greater number of apoptotic cells were observed in the group received 1µg/ml rhamnetin after 3 and 24 hours incubation. In conclusion, anti-tumor activity of rhamnetin in both ascites and solid tumor development that induced by EAT cells was determined in this study. 

Key words: Ehrlich Ascites Tumor, Rhamnetin, Apoptosis, Factor VIII