Biyoelektrokimyasal ölçüm sistemlerinde kullanılmak üzere enzimlerle modifiye edilmiş yüzeylerin hazırlanması ve karakterizasyonu
Preparation and characterization of enzymes-modified surfaces for their use in bioelectrochemical measurement systems
Yazar: MOHOMODOU MAIGA
Danışman: DOÇ. DR. DİLEK ODACI DEMİRKOL
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmada enzim immobilizasyonu için setiltrimetilamonyum bromür modifiye Dellit (CTAB-Del) dayalı yeni bir materyal başarıyla sentezlenip piranoz oksidaz biyosensörleri (CTAB-Del/PyOx) hazırlanmasında kullanılmıştır. Del kilin içine CTAB interkalasyonu FT-IR, XRD ve TGA teknikleri ile teyit edilmiştir. Daha sonra PyOx enzimi CTAB-Del'in immobilizasyon materyali olarak kullanımıyla canımsı karbon elektrot üzerine glutaraldehit ile çapraz bağlayarak immobilize edilmiştir. Killerin gözenekli yapıları immobilize edilmiş tabakadan glukoz ve ko-substrat olarak oksijenin difüzyonunu kolaylaştırır. CTAB-Del/PyOx biyosensörlerinin analitik performansını test etmek için, kronoamperometrik ölçümler üçlü elektrod sistemi kullanarak -0,7V sabit bir potansiyelde olçümler alınmıştır. CTAB-Del/PyOx biyosensörü ile glukoz için tayin aralığı 0,01-0,5mM olarak bulunmuştur, kalibrasyon grafiği için doğru denklemi  y =4,42x+0,004    (R2=0,998). Ayrıca tayin limiti (LOD) 0,081µM (S/N=3) olarak hesaplanmıştır. CTAB-Del/PyOx biyosensörünün pratik kullanımıNI doğrulamak için, çeşitli içeceklerin glukoz analizine uygulanmıştır.
Buna ek olarak, Del ve CTAB-Del antimikrobiyal aktiviteleri üç farklı Gram-pozitif, beş farklı Gram-negatif bakteri ve bir maya suşuna karşı disk difüzyon duyarlılık testi ile in vitro koşullarda taranmıştır. Sonuç olarak CTAB-Del Gram-pozitif bakterilere karşı orta düzeyde antibakteriyel etki göstermiştir.

Abstract:
A novel immobilization material for enzyme immobilization based on cetyltrimethylammonium bromide modified dellit (CTAB-Del) was successfully synthesized and utilized in the preparation of pyranose oxidase (PyOx) biosensors (CTAB-Del/PyOx).The intercalation of CTAB into Del was confirmed by FT-IR, XRD and TGA techniques. PyOx was immobilized onto the glassy carbon electrode using CTAB-Del as a support via glutaraldehyde crosslinking.  Porous structures of clays are important for the diffusion of glucose and oxygen as a co-substrate through the immobilized layer. To test the analytical performance of CTAB-Del/PyOx biosensors, chronoamperometric measurements were carried out using three electrode configurations at a constant potential of -0.7V in working buffer. The linear response for CTAB-Del/PyOx biosensor ranged from 0.01 to 0.50 mM with an equation of y=4.42x+0.004  (R2=0.998), and the limit of detection for glucose was calculated to be 0.081 μM (S/N=3).In order to confirm its practical use the CTAB-Del/PyOx biosensor was also applied for glucose analysis in various beverages.
 In addition, the antimicrobial activities of Del and CTAB-Del were screened in vitro by means of the disc diffusion susceptibility test, selecting a yeast, three different Gram-positive, andfive different Gram-negative bacteria. The obtained results showed a moderate antibacterial activity of CTAB-Del against Gram-positive bacteria.