Benzoil türevleri kullanılarak biyojen aminlerin yüksek basınç sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemiyle analizi
Analysis of biogenic amines with high pressure liquid chromatography (HPLC) method by using benzoyl chloride derivatives
Yazar: ÖZGÜL ÖZDESTAN
Danışman: PROF. DR. ALİ ÜREN
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2004
Konu: Gıda Mühendisliği = Food Engineering

Özet:
Bu çalışmada gıdalarda oluşan etilamin, tiramin, propilamin, agmatin, kadaverin, spermin, histamin, putresin, metilamin, P- feniletilamin, triptamin gibi biyojen aminlerin belirlenmesi amacıyla yeni bir HPLC yöntemi geliştirilmiştir. Bu yöntemde, biyojen aminlerin benzoil türevleri oluşturulmuş, 254 nm dalga boyunda absorbans dedektör ile yüksek basmç sıvı kromatografisi (HPLC) cihazında analizler gerçekleştirilmiştir. Metanol ve asetat tamponundan oluşan bir dereceli elüsyon programı uygulanmıştır. HPLC cihazındaki belirleme sırasmda, biyojen aminlerin ayrımını etkileyen hareketli faz pH'sı, kolon sıcaklığı, farklı kolon kullanımı gibi değişkenlerin etkileri irdelenmiştir. En iyi ayrımın sağlandığı hareketli faz pH'sı ve kolon çalışma sıcaklığı belirlenmiştir. Türevlendirme reaktifi (benzoil klorür) için optimum türevlendirme sıcaklığı tespit edilmiştir. Ayrıca hem 5 u. hem de 10 p. luk farklı Cıg kolonlarda denemeler yapılmış, hem partikül büyüklüğünün hem de eski ve yeni kolon kullanımının etkileri irdelenmiştir. Denemeler sonucunda; biyojen aminlerin en iyi ayrıldığı hareketli faz pH değerinin 6,0 olduğu, optimum kolon çalışma sıcaklığının 22°C, optimum türevlendirme sıcaklığının 25°C ve türevlendirme sırasındaki optimum çalkalama süresinin 1 dakika olduğu tespit edilmiştir. Anahtar Kelimeler: Biyojen amin, HPLC, histamin

Abstract:
vn ABSTRACT ANALYSIS OF BIOGENIC AMINES WITH HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) METHOD BY USING BENZOYL CHLORIDE DERIVATIVES ÖZDESTAN, Özgül Master Thesis in Food Engineering Department Supervisor: Prof. Dr. Ali ÜREN September 2004, 114 pages In this thesis, a new HPLC method was developed for the determination of some biogenic amines such as ethylamine, tyramine, propilamine, agmatine, cadaverine, spermine, histamine, putrescine, methylamine, p-phenylethylamine, tryptamine which are formed in foods. In this method, biogenic amines were derivatized with benzoyl chloride and determined by using the absorbance detection at 254 nm at HPLC. Chromatographic seperation of biogenic amines was performed by using a gradient elution program composed of methanol and acetate buffer. The effect of variables such as mobile phase pH, column temperature and using of different columns which effect the seperation of amines were investigated. The optimum pH of mobile phase and column temperature were determined to obtain the best seperation of amines. In addition, optimum derivatization temperature and shaking time during derivatization were established. Several experiments were realised by different Cig columns which had 5 and 10 p. particle size to investigate the effect of particle size and the effect of new and old columns. At the end of trials, the best seperation of biogenic amines was obtained at pH 6.0 for mobile phase, at 22°C for column temperature. Optimum derivatization temperature was found as 25°C and optimum shaking time during derivatization was found as 1 minute. Key Words: Biogenic amine, HPLC, histamine