Sığır karaciğerinden afinite yöntemiyle saflaştırılan glutatyon redüktaz enzimi üzerine Arum elongatum Steven subsp. detruncatum (C.A. Mey. ex Schott) Riedl (yılan yastığı) ekstraktından kolon kromatografisi ile izole edilen etken maddelerin etkisinin araştırılması
Investigation the effect of active compounds isolated from Arum elongatum Steven subsp. detruncatum (C.A. mey. ex Schott) Riedl by column chromatography on glutathione reductase enzyme purified from bovine liver by affinity method
Yazar: MEHMET RIZA KIVANÇ
Danışman: PROF. DR. VEDAT TÜRKOĞLU
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Enzim-inhibisyon yöntemi = Enzyme-inhibition method ; Protein saflaştırma = Protein purification ; Serbest yağ asitleri = Free fatty acids

Özet:
Bir flavoenzim olan Glutatyon redüktaz (GR, E.C. 1.8.1.7) enzimi, okside glutatyonun disülfid döngüsünü sağlar ve böylece sitozol, çekirdek ve mitokondride redükte glutatyonun (GSH) miktarının yüksek seviyelere ulaşmasını sağlar. Glutatyon Redüktaz enzimi, sığır karaciğerinden afinite kolon kromatografisi yöntemi ile saflaştırıldı ve sığır karaciğer glutatyon redüktaz enziminin saflaştırma oranı ve spesifik aktivitesi sırasıyla 1832 kat ve 141 EU/mg.protein olarak hesaplandı. SDS-PAGE yöntemiyle GR enziminin molekül ağırlığı 55 kDa olarak belirlendi. 
Arum elongatum steven subsp. detruncatum (C.A. Mey. Ex Schott) Riedl (yılan yastığı) bitkisinin, doğal yağ asitleri kolon kromatografisi yöntemi ile izole edildi. İzolasyon işlemi (Şekil 3.1) özetlendiği şekilde yapıldı. Çözücü sistemi olarak hex:etoac kullanıldı. TLC plakalarına göre, 7 madde (R1, R2, R3, R4, R5, R6, ve R7) saf olarak elde edilmesine rağmen NMR analizlerinde R7 maddesi dışındakilerde yağ asidi karışımları olduğu saptanmıştır. Yağ asitlerinin analizi GC-MS ile yapıldı. R7 maddesinin, 2D-NMR analiz sonuçlarına göre β-Sitosterol ve Campesterol olduğu anlaşılmıştır. İzolasyonları yapılan maddelerin GR aktiviteleri incelendi. R1 maddesi, GR aktivitesi üzerine artırıcı etki gösterdi. R4, GR aktivitesi üzerine yarışmasız inhibisyon gösterirken, R6, yarışmalı inhibisyon gösterdi. % aktiviteye karşı inhibitör konsantrasyon grafiği çizildi. Bu grafik denkleminden R4 ve R6 maddelerinin I50 değerleri, sırasıyla 0.193 (mg/mL), 3.98 (µg/mL) olarak hesaplandı.

Abstract:
Glutathione reductase (GR, E.C. 1.8.1.7) enzyme, a flavoenzyme, recycles oxidezed glutathione disülfid and thus gets to high levels of reduced glutathione (GSH) in the cytozol, nucleus and mitochondria. In this study, glutathione reductase enzyme was purified from bovine liver by affinity column chromatography and purification rate and specific activity of the enzyme were calculated as 1832 fold and 141 EU/mg.protein respectively. The subunit molecular weight of the enzyme was determined 55 kDa by means of SDS-PAGE. 
Natural fatty acids of Arum elongatum steven subsp. detruncatum (C.A. Mey. ex Schott) Riedl plant were isolated by column chromatography. The isolation protocol was performed as outlined in fig 4.4. Hexane:ethylacetate was used as the solvent system.  According to TLC plate, seven substances (R1, R2, R3, R4, R5, R6, and R7) were isolated. However, according to the NMR results, all substances were understood to be the mixture of fatty acid, but R7. The analysis of isolated fatty acids were determined by GC-MS. According to the 2D-NMR results, R7 is β-Sitosterol and Campesterol. GR activity of the isolated substances was investigated. R6 was shown competitive inhibition when R4 had non-competitie inhibition on GR activity. But, R1 has a role as a activator on GR activity. % Inhibitory activity versus concentration graph was plotted. I50 values of R4 and R6 were calculated as 0.193 (mg/mL), 3.98 (µg/mL) respectively from this graph equation