Süt ve karışık diş dizili çocukların subgingival mikroflorsaında Actinobacillus Actinomycetemcomitans, Porphyromonas ve pigmentli Prevotella varlığının araştırılması
Actinobacillus actinomycetemcomitans, porphyromonas and pigmented prevotella isolation from subgingival microflora of children with primary and mixed dentition
Yazar: NURSEN BAKIR TOPCUOĞLU
Danışman: PROF.DR. GÜVEN KÜLEKÇİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2004
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
6. ÖZET Yetişkinlerde periodontal hastalıklarla ilişkilendirilen Actinobacilhıs actinomycetemcomitans, Porphyromonas ve pigmentli Prevotella cinsi bakterilerin çocukluktaki ekolojisi ve epidemiyolojisi hakkındaki bilgiler kesinlik kazanmamıştır. Çalışmamızda süt ve karışık dişlenme dönemindeki çocukların subgingival floralarında bu bakterilerin varlığını araştırmak amacıyla sistemik açıdan sağlıklı 3-11 yaşları arasında olan 50 (22 kız, 28 erkek) süt, 50 (23 kız, 27 erkek) karışık dişlenme dönemindeki 100 çocuk incelenmiştir. Çocukların her bir dişi için dişeti cebi derinlikleri ölçülerek ataşman kaybı araştırılmış; plak indeksi ve sondalamada kanama durumları değerlendirilerek periodontal durumları sağlıklı, gingivitisli veya periodontitisli olarak belirlenmiştir. Çocukların dişeti oluklarından paper pointlerin yardımıyla alman subgingival örnekler taşıma sıvısı olarak VMG II içeren ependorf tüplerine yerleştirilerek laboratuvara ulaştırılmıştır. Anaerop kültür teknikleri ile siyah pigmentli anaerop gram-negatif çomaklar izole edilerek Porphyromonas ve Prevotella cinsi bakteriler ayırt edilmiş; tür tanıları enzimatik ve biyokimyasal özelliklerine göre yapılmıştır. Kültür yöntemine göre P. intermedia grubu (P. intermedia, p.nigrescens, P pollens) olarak tanımlanan bakteriler Ppallens dışında P. intermedia ve P.nigrescens türlerine özel 16 S rRNA primerlerin kullanılarak PCR tekniği ile ayırt edilmiştir. A.actinomycetemcomitans' 'm tanısı ise TSBV (Triptik-soy-serum-basitrasin-vankomisin)agardaki kültüre göre yapılmıştır. Tüm örnekler total kültür edilebilir bakteri, zorunlu anaerop bakteri ve Prevotella cinsi bakteriler yönünden sayısal olarak değerlendirilmiştir. Çalışmamızda sondalamada kanama indeksine göre süt diş dizili çocukların %36'sı, karışık diş dizili çocukların %62'si gingivitisli olarak belirlenmiş ve gingivitis ile yaş arasında pozitif yönde anlamlı bir ilişki bulunmuştur. Çalışmamızda periodontitisli çocuk bulunmamaktadır. Cep derinlikleri ortalama 1 mm olarak bulunan çocukların kanama indeksi ile yaş ve plak indeksi arasında pozitif yönde aniamiı bir ilişki (Spearman, /?<0.001) bulunmuştur. Çocukların subgingival örneklerinin hiçbirisinden Porphyromonas cinsi bakteriler ve A.actinomycetemcomitans izole edilememiştir. Örneklerin 39'undan izole edilen Prevotella cinsi bakteriler süt dişlenme dönemindeki çocukların 66%32'sinde ve karışık dişlenme dönemindeki çocukların %46'smda bulunmuştur. Prevotetta varlığı ile çocukların cinsiyeti, dişlenme dönemi ve periodontal durumları arasında anlamlı bir ilişki bulunamamıştır. Prevotella cinsi bakterilerden en çok izole edilen tür P.nigrescens (%18)'dir. İzole edilen diğer türler sırasıyla P. intermedia (%7), P.loescheii (%4), P. corporis (%3), P.melaninogenica (%2) ve P.denîicola (%2)'dır. PCR ile P. intermedia grubundan sekiz suş tür düzeyinde tanımlanamamıştır. İki çocukta P. intermedia ve P.nigrescens, bir çocukta P. intermedia ve P.denîicola, bir çocukta P.nigrescens ve P.denticola. bir çocukta da P.nigrescens ve P. corporis birlikte bulunmuştur. P.nigrcscens'in bulunma sıklığı yaşla birlikle anlamlı bir artış göstermiştir(Mann Whitney U, p<0.05). P.nigrescens'm karışık dişlenme dönemindeki izolasyon sıklığı, süt dişlenme dönemine göre anlamlı olarak daha fazla bulunmuştur (x2, p<0.05). Süt ve karışık dişlenme dönemindeki çocukların subgingival florasında P. intermedia varlığı ile sondalamada kanama arasında anlamlı bir ilişki bulunmuştur (Mann Whitney U, p<0.05). Sonuç olarak, P.nigrescens, en sık izole edilen bakteri olması ve bulunma sıklığının yaşla birlikte artış göstermesi nedeniyle çocuklarda normal ağız florasının bir üyesi olarak değerlendirilebilir. Gingivitisin klinik bir göstergesi olan kanamanın, Prevotella cinsi bakterilerden P. intermedia ile ilişkisinin saptanması, P '.intermedia 'run sadece yetişkinlerde değil, çocukluk çağında da periodontal hastalıklar açısından indikatör bir bakteri olarak değerlendirilebileceğini düşündürmektedir. 67

Abstract:
SUMMARY Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas and Pigmented Prevoteila isolation from subgingival microflora of children with primary and mixed dentition. As associated with periodontal diseases in adults, little is known about the presence of Actinobacillus aclinomycetemcomitans, Porphyromonas and pigmented Prevoteila species among children. We investigated the subgingival microflora of 100 children aged 3-1 1 years with primary (n=50) and mixed dentition (n=50) for the presence of these bacteria. The periodontal health has been determined with the probing depth, plaque and bleeding on probing indices and classified as healthy, gingivitis or periodontitis. The subgingival samples collected with sterile paper points have been transported with a vial containing VMG II transport medium. The bacterial counts have been calculated and the pigmented anaerobic gram- negative rods have been isolated using anaerobic culture techniques. The definitive identification of Porphyromonas and Prevoteila has been verified by enzyme profiles and biochemical characteristics. The bacteria, identified as P. intermedia group (P. intermedia, P.nigrescens, P.pallens) has been differentiated by PCR technique using species specific 16 S rRNA primers of P. intermedia and P.nigrescens, except P.pallens. The identification of A. aclinomycetemcomitans has gone by examination the culture on TSBV (Tripticase- soy-serum- bacitracin- vancomycin) agar. Gingivitis, determined the incidence as 36% for the children with primary dentition and 62% for the mixed dentition, has been associated with age. Periodontitis has not been detected among the children. A positive correlation has been found between bleeding on probing, age and plaque indices (Spearman, pO.001). A.aclinomycetemcomitans and Porphyromonas species couldn't be isolated from the children. The incidence of Prevoteila species isolated from 39 children was 32% for primary and 46% for mixed dentition. 68No correlation has been found between the sex, dentition period and periodontal health among children. The isolation frequency of the Prevotella species was P.nigrescens (18%), P.intermedia (%7), P.loescheii (%4), P. corporis (%3), P.melaninogenica (%2) and P.denticola (%2), respectively. The 8 strains among P. intermedia group couldn't be differentiated. The frequency of P.nigrescens has been increased with age (Mann Whitney U, p<0.05). The frequency of P.nigrescens at the mixed dentition has been found statistically more then primary dentition (%, p<0.05). The P.intermedia presence was found to be correlated with bleeding on probing (Mann Whitney U, p<0.05). In conclusion, because of P.nigrescens was the most frequently isolated bacteria and the frequency has been increased by age, it can be assessed as a common member of oral microflora for children. The bleeding on probing, associated with gingivitis, correlated only with P.intermedia among the other Prevotella species. So that P.intermedia, which is associated with periodontal diseases, is not only thought to be as an indicator bacterium for adults, but also for children, as well. 69