Preklinik kimyasal sistit modelinde alfa-linolenik asit ve tarantula cubensis ekstrakt'ının etkinliğinin klinik pratikte kullanılan hyaluronik asit ile karşılaştırılması
Comparison of the effectiveness of alpha-linolenic acid and tarantula cubensis extract with hyaluronic acid used in clinical practice in the pre-clinical chemical cystitis model
Yazar: MEHMET YILDIZ
Danışman: DOÇ. DR. ALİ FURKAN BATUR
Selçuk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Patoloji = Pathology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine ; Üroloji = Urology
Dizin: Mesane = Urinary bladder ; Mesane hastalıkları = Urinary bladder diseases ; Pelvik ağrı = Pelvic pain ; Tarantula cubensis = Tarantula cubensis

Özet:
Bu çalışmada; toplumlarda çok sık görülen, hastaların yaşam kalitesini önemli ölçüde bozan, etyopatogenezinde kronik inflamasyonun sorumlu olduğu öne sürülen İnterstisyel Sistit'in rat modelinde Tarantula Cubensis Ekstraktı ve Alfa-linolenik asit'in halihazırda intravezikal tedavide kullanılan Hyalüronik Asit ile kıyaslanarak histopatolojik ve immünolojik sonuçlarının ortaya konulması, böylece bu ajanların mesane inflamasyonu üzerine etkisi ve yeni bir tedavi seçeneği olarak etkinliklerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Çalışmada 40 adet Wistar Albino dişi rat kullanıldı. Ratlar her grupta 8 adet olacak şekilde 5 gruba ayrıldı. Bu gruplar kontrol, kimyasal sistit (KS), KS+alfa linolenik asit (KS+ALA), KS+tarantula cubensis ekstraktı (KS+TCAE) ve KS+hyaluronik asit (KS+HYA) olarak belirlendi. Deneysel kimyasal sistit modeli 3 günde bir defa toplamda 3 doz intraperitoneal siklofosfamid (50 mg/kg, 0.7 mL) instilasyonu ile sağlandı. Kontrol grubundaki sıçanlara sadece %0,9 NaCl instilasyonu yapıldı. Tedavi gruplarından KS+alfalinolenik asit grubuna 200 mg/kg alfalinoleik asit içeren 2 mL 0.9% NaCl solüsyonu, KS+tarantula cubensis ekstraktı grubuna 0,3 mL Theranekron (tarantula cubensis ekstraktı, 1:100 / D2, Richter Pharma, Austria) ve KS+hyaluronik asit grubuna 2 ml hyaluronik asit (%0,5) instile edildi. Tedavi gruplarına verilen bu ajanlar iki hafta boyunca haftada iki kez uyguldı. KS ve kontrol gruplarında da benzer stres oluşturmak için aynı süre boyunca %0,9 NaCl instilasyonu yapıldı. Tedavilerin bitiminden üç gün sonra ratlar genel anestezi altında servikal dislokasyon yapılarak ötenazi işlemi gerçekleştirildi. Abdominal insizyon ile sistektomi yapıldı. Mesane dokusu iki eş parçaya ayrıldı. Mesane dokusunun bir yarısı mast hücresi, fibrozis, inflamasyon derecesi gibi histopatolojik değişiklikler açısından incelendi. Diğer yarısında ise ELISA yöntemiyle Tümör Nekroz Faktör Alfa (TNFα), Interlökin 6(IL6), Malondialdehid(MDA), Süperoksit Dismutaz(SOD) ve Sinir Büyüme Faktörü(NGF) değerlerine bakıldı.
Çalışmada ratların mesanelerinin histopatolojik muayenesi sonucu yapılan skorlamalar ve istatistiksel veriler analiz edilmiştir. İncelemede; kontrol grubunda hafif şiddette epitelyal dejenerasyon, submukozal ödem, hiperemi ve inflamasyon gözlenirken az sayıda mast hücresi görüldü. KS grubunda, kontrol grubuyla kıyaslandığında epitelyal dejenerasyon, submukozal ödem ve inflamasyon derecesinde anlamlı bir artış saptandı. Kontrol grubunda gözlenmeyen fibrozis bulgusuna rastlandı. Hiperemi bulgusunda kontrol grubuyla kıyaslandığında bir farklılık gözlenmedi. KS grubunda kontrol grubuyla kıyaslandığında mast hücre sayısında da anlamlı bir artış görüldü. KS+TCAE ve KS+HYA gruplarında epitelyal dejenerasyon, fibrozis ve submukozal ödem bulgularında anlamlı bir azalma gözlenirken hiperemi ve inflamasyon skorunda anlamlı bir farklılık gözlenmedi. Mast hücre sayısında ise her iki grup KS grubu ile kıyaslandığında önemli bir düşüş belirlendi. KS+ALA grubunda ise hiperemi hariç tüm bulgularda istatistiksel olarak önemli derecede bir iyileşme saptandı. 
İmmunolojik olarak çalışma gruplarına göre doku MDA düzeyi istatistiksel olarak anlamlı farklılık göstermiştir. İkili karşılaştırmalar sonucunda, en düşük doku MDA düzeyinin KS+ALA grubunda olduğu ve bu değerin KS+TCAE ve KS grubuna göre anlamlı şekilde düşük olduğu belirlendi (p = 0,006). Diğer parametreler açısından istatistiksel anlamlı sonuç elde edilmedi.
PMAS gibi kronik, hastaların yaşam konforunu ciddi etkileyen bu hastalıkta intravezikal tedavide bir alternatif olarak ALA değerlendirilmiştir. Preklinik çalışmamızda ALA'nın mesanede inflamasyonu baskıladığı, fibrozisi azalttığı, epitelyal dejenerasyonda azalma sağladığı saptanmıştır. ALA'nın etkinliğinin araştırılmasında ileri çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
In this study, to reveal the histopathological and immunological results of Tarantula Cubensis Extract and Alpha-linolenic acid by comparing them with Hyaluronic Acid, which is currently used in intravesical treatment, in the rat model of Interstitial Cystitis, which is very common in societies, significantly impairs the quality of life of patients, and is claimed to be responsible for chronic inflammation in its etiopathogenesis. Thus, it was aimed to evaluate the effect of these agents on bladder inflammation and their effectiveness as a new treatment option.
40 Wistar Albino female rats were used in the study. The rats were divided into five groups, 8 in each group. These groups were determined as control, chemical cystitis (KS), KS + alpha linolenic acid (KS+ALA), KS + tarantula cubensis extract (KS+TCAE), and KS + hyaluronic acid (KS+HYA). The experimental chemical cystitis model was achieved by intraperitoneal instillation of cyclophosphamide (50 mg/kg, 0.7 mL) for three doses every three days. Rats in the control group received 0.9% NaCl instillation. Among the treatment groups, 2 mL of 0.9% NaCl solution containing 200 mg/kg alpha linolenic acid was instilled in the KS+alfalinoleic acid group, 0.3 mL Theranekron (tarantula cubensis extract, 1:100 / D2, Richter Pharma, Austria) was instilled in the KS+tarantula cubensis extract group, and 2 ml of hyaluronic acid (%0,5) was instilled in the KS+hyaluronic acid group. These agents were administered to the treatment groups twice weekly for two weeks. To create similar stress in the KS and control groups, 0.9% NaCl was instilled for the same period. Three days after the end of the treatments, the rats were euthanized by cervical dislocation under general anesthesia. Cystectomy was performed via abdominal incision. The bladder tissue was divided into two equal pieces. One-half of the bladder tissue was examined for histopathological changes such as mast cells, fibrosis, and degree of inflammation. In the other half, Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFα), Interleukin 6 (IL6), Malondialdehyde (MDA), Superoxide Dismutase (SOD), and Nerve Growth Factor (NGF) values were examined using the ELISA method.
In the study, scoring and statistical data resulting from the histopathological examination of the bladders of rats were analyzed. In the review, mild epithelial degeneration, submucosal edema, hyperemia, and inflammation were observed in the control group, while a small number of mast cells were observed. A significant increase in the degree of epithelial degeneration, submucosal edema, and inflammation was detected in the KS group compared to the control group. A finding of fibrosis was not observed in the control group. No difference was observed in hyperemia findings compared to the control group. There was also a significant increase in the number of mast cells in the KS group compared to the control group. While a significant decrease in epithelial degeneration, fibrosis, and submucosal edema findings was observed in the KS+TCAE and KS+HYA groups, no significant difference was observed in the hyperemia and inflammation score. A significant decrease was detected in the number of mast cells in both groups compared to the KS group. In the KS+ALA group, a statistically significant improvement was detected in all findings except hyperemia.
Immunologically, tissue MDA levels showed statistically significant differences according to the study groups. As a result of pairwise comparisons, it was determined that the lowest tissue MDA level was in the KS+ALA group, and this value was significantly lower than the KS+TCAE and KS groups (p = 0.006). No statistically significant results were obtained for other parameters.
ALA has been evaluated as an alternative in intravesical treatment in this chronic disease, such as PMAS, which seriously affects the life comfort of patients. Our preclinical study found that ALA suppresses inflammation in the bladder, reduces fibrosis, and reduces epithelial degeneration. Further studies are needed to investigate the efficacy of ALA.