PrPC anlatımları susturulmuş H69 ve H69AR hücre hatlarında hücre ölüm belirteçlerinin qRT-PCR yöntemiyle araştırılması
Investigation of cell death markers with qRT-PCR method in PrPC expression supressed H69 and H69AR cell lines
Yazar: HAYRETTİN KADINŞAH
Danışman: PROF. DR. ERDAL BALCAN
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Hücresel Prion proteini (PrPC), embriyogenezin erken safhalarında ifade edilmeye başlanan bir hücre yüzey proteindir. Merkezi sinir sistemi hücreleri ve lenfoid dokularda en çok ifade edilen bu protein birçok rolde görev almasına rağmen birçok işlevi henüz tam olarak aydınlatılamamıştır. Diğer yandan, yapılan çalışmalar PrPC'nin kanser hücrelerinde de yüksek seviyede ifade edildiğini göstermekte, sağ kalım ve çoklu ilaca dirençlilik (MDR) mekanizmalarında rol aldığı öne sürülmektedir. PrPC, kanser hücrelerinde gösterdiği işlevler nedeniyle ilgi odağı olmuş ve programlı hücre ölümü ve çoklu ilaca direnç mekanizmalarındaki rolü nedeniyle yeni tedavi yaklaşımları için potansiyel bir hedef haline gelmiştir. Bu çalışmanın amacı, küçük hücreli akciğer kanseri (KHAK) hücre hatlarında (H69) ve bunun ilaca dirençli formunda (H69AR) PrPC ifadelenmesi ile programlanmış hücre ölümü arasındaki ilişkileri belirlemektir. Bu çalışmada, PrPC'nin programlanmış hücre ölümü ve çoklu ilaca direnç mekanizmaları üzerindeki rollerini belirlemek amacıyla her iki hücre hattından kontrol grubu, PrPC siRNA uygulanmış grup, Doksorubisin uygulanmış grup ve PrPC siRNA+Doksorubisin uygulanmış grup olmak üzere dört grup oluşturulmuş ve Prnp, Bax, Becn1, CD44 genlerinin ekspresyon düzeyleri qRT-PCR (kantitatif Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu) yöntemi ile araştırılmıştır. H69 hücre hattında PrP'nin siRNA ile baskılanması sonucunda CD44 ifadelenme düzeylerinde artış olduğu gözlenmiştir (p<0,05). H69AR hücre hattında ise PrPC baskılanması sonucu Becn1 ve CD44 ifadelenme düzeylerinde gözlenen artışın yanı sıra Doksorubisin uygulanmış grupta Prnp ifadelenmesi de önemli derecede artmıştır (p<0,05). Ancak, PrPC siRNA ve PrPC siRNA+Doksorubisin gruplarının Prnp düzeylerinde anlamlı bir değişim belirlenmemiştir (p>0,05). Elde ettiğimiz bulgular ile, Prnp ifadelenmesinin H69 hücre hattında CD44 ile ilişki halinde olduğunu ve H69AR hücre hattında otofaji ve ilaç dirençliliği ile önemli ölçüde yakından ilişkili olduğu sonucuna vardık. Sonuç olarak, MDR fenotipli küçük hücreli akciğer kanserlerinin tedavisinde, PrPC'nin baskılanması ile eş zamanlı uygulanan kemoterapinin etkin bir tedavi yöntemi olacağı kanısındayız.

Abstract:
Cellular Prion protein (PrPC) is a cell surface protein which is expressed in early stages of embryogenesis. PrPC, is the most expressed protein in the central nervous system cells and lymphoid tissues and it's involved in many roles. However, many of its functions have not yet been fully elucidated. On the other hand, studies have shown that PrPC is expressed at a high level in cancer cells, and suggests, that it plays a role in cell survival and multidrug resistance (MDR) mechanisms. PrPC has become a centre of interest due to its functions in cancer cells and has become a potential target for new therapeutic approaches due to its role in programmed cell death and multi drug resistance mechanisms. The purpose of this study is to determine the interactions between PrPC expression and programmed cell death in small cell lung carcinoma (SCLC) cell line (H69) an its MDR phenotype (H69AR). To determine the roles of PrPC in programmed cell death and multidrug resistance mechanisms, four groups have been designed in both of two cell lines including control, PrPC siRNA treated group, Doxorubicin treated group and PrPC siRNA+Doxorubicin treated group, and the expression levels of Prnp, Bax, Becn1 and CD44 were observed with qRT-PCR (quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction) method. Increased expression of CD44 were observed as a result of the suppression of PrPC with siRNA in the H69 cell line (p<0,05). In the H69AR cell line, the increase in the expression of Becn1 and CD44 were observed in the PrPC siRNA treated group, as well as the expression of Prnp in the Doxorubicin treated group increased significantly (p<0,05). However, no significant change was detected in Prnp levels in the groups PrPC siRNA and PrPC siRNA+Doxorubicin (p>0,05). Our findings suggest that Prnp expression is associated with CD44 in the H69 cell line and it's significantly related to autophagy and drug resistance in the H69AR cell line. In conclusion we propose that, in the small cell lung cancers with the MDR phenotype, concurrent treatment with chemotherapy and Prnp downregulation will be an effective treatment method.