Clostridium perfringens toksinlerinin tespitinde ELISA (Enzyme link immunosorbent assay) ve farelerde in vivo toksin nötralizasyon testinin karşılaştırılması
Comparasion of ELISA (Enzyme link immunosorbent assay) and in vivo toxin neutralization tests for detection of clostridium perfringens toxins
Yazar: DEMET YAMAN AYDOĞAN
Danışman: PROF. DR. HASAN HÜSEYİN HADİMLİ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Clostridium = Clostridium ; Clostridium perfringens = Clostridium perfringens ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Toksinler = Toxins ; Toksisite testleri = Toxicity tests ; İn vivo = In vivo

Özet:
Clostridium perfringens, oluşturduğu toksinlerin etkisiyle koyun, keçi ve  sığırlarda genel olarak enterotoksemi olarak adlandırılan hastalığı oluşturur. Bu mikroorganizma, sağlıklı hayvanlarda ve insanlarda bağırsak mikrobiyatasında yaşar, ancak çeşitli sebeplerle değişmiş bağırsak ortamı, C. perfringens'in çoğalmasına ve güçlü toksinler üretmesine neden olur. Hastalık, çoğu zaman klinik belirti göstermeksizin ani ölüme neden olur. 
Enterotokseminin kesin tanısı için, bağırsak içeriğinde C. perfringens major toksinleri saptanmalıdır. Türkiye'de teşhis laboratuvarlarında enterotoksemi teşhisinde genellikle Fare Toksin Nötralizasyon Testi kullanılmaktadır. Bu çalışmada, Toksin Nötralizasyon Testi'nin hayvan refahı problemlerine ve tutarsız test sonuçlarına sebep olması nedeniyle alternatif bir yöntem olarak ELISA'nın kullanılabilirliği araştırıldı.
Çalışmada, 249 örnekte iki test eşzamanlı yapıldı ve sonuçlar değerlendirildi. Toksin Nötralizasyon Testiyle tiplendirmede, uygun serum-şüpheli numune karışımları, her örnek için onbeş fare kullanılarak periton içi enjekte edildi; her örnek için kontrol grubu olarak üç fareye sadece süpernatant uygulanırken, 3'er fareye major toksinlere ait spesifik antitoksinli süpernatantlar farklı kombinasyonlarda enjekte edildi. Farelerin hayatta kalma ve diğer toksikasyon belirtileri 6-48 saat gözlendi. ELISA ile yapılan analizler, üretici firmanın protokolde belirttiği şekilde uygulandı. 
Sığır, koyun, keçi ve 1 karacaya ait 249 örnekten ELISA ile yapılan çalışmada 21 örnekte (%8,4); Fare Toksin Nötralizasyon Testi ile yapılan çalışmada 17 örnekte (%6,8)  C. perfringens toksinlerinin en az biri yönünden pozitiflik belirlendi. Fare Toksin Nötralizasyon Testi C. perfringens toksinlerinin etkinliğini tespit açısından önemli olsa da, teşhis için ELISA' nın alternatif test olabildiği görüldü. 
Çalışma sonuçları istatistiki olarak  değerlendirildiğinde enterotoksemi teşhisi yönünden iki testin ELISA'nın TNT'ye göre sensitivitesi %100, spesifitesi %98,28; TNT'nin ELISA'ya göre sensitivitesi %80,95, spesifitesi %100 bulunmuştur. Bu çalışma, daha fazla sayıda örneğin klinik ve patolojik verileriyle birlikte kullanılacağı diğer çalışmalara yol gösterici olacaktır.
    
Anahtar Sözcükler: Clostridium perfringens; ELISA; Fare Toksin Nötralizasyon Testi

Abstract:
The effect of Clostridium perfringens toxins on sheep, goats and cattle is usually cause the disease called enterotoxemia.  This microorganism lives in intestinal microbiota in healthy animals and humans, but for various reasons the changed intestinal conditions causes C. perfringens to multiply and produce strong toxins. The disease often causes sudden death without clinical symptoms. 
For the differential diagnosis of enterotoxemia, C. perfringens major toxins should be detected in the intestinal contents. Mouse Toxin Neutralization test is generally used in diagnosis laboratory of enterotoxemia in our country. In this study, the use of ELISA was investigated as an alternative method to Toxin Neutralization Test which causes animal welfare problems and inconsistent test results.
In this study, the results of the Mouse 
Toxin Neutralization Test and ELISA were compared. Two tests were performed simultaneously for 249 samples and the results were evaluated. In typing with the Toxin Neutralization Test, appropriate serum-suspected sample mixtures were injected peritoneally using fifteen mice per sample; three mice as the control group for each sample were treated with supernatant only, while three mice were injected with different combinations of the specific antitoxin of the major toxins with supernatants. The survival and other signs of toxicity of the mice were observed for 6-48 hours. ELISA was performed according to the manufacturer's instruction as described.
From 249 samples of cattle, sheep, goats and a deer; 21 samples (8,4%) was performed with ELISA and 17 samples (6,8%) was performed with the Mouse Toxin Neutralization Test were found to be positive for at least one of the C. perfringens toxins. Although Mouse Toxin Neutralization Test is important to detect the efficacy of C. perfringens toxins, ELISA was detected to be an alternative test for diagnosis.
When the results of the study were evaluated statistically, the sensitivity and specificity of ELISA according to TNT were 100% and 98.28%; according to ELISA, the sensitivity and specificity of TNT were found to be 80.95% and 100%, respectively. This study will be a guide for the other studies which uses more samples with clinical and pathological data.
   
Key Words: Clostridium perfringens; ELISA; Mouse Toxin Neutralization Test