Vitamin B12'nin sisplatin uygulanmış sıçanların böbrek dokusunda galectin-3, pentraxin-3 ve asprosin düzeylerine etkileri
Effects of vitamin B12 on galectin-3, asprosin and pentraxin-3 levels in the kidney tissue of cisplatin applied rats
Yazar: RÜYA TEK
Danışman: PROF. DR. RAMAZAN ULU
Adıyaman Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: İç Hastalıkları = Internal diseases

Özet:
Giriş ve Amaç: Sisplatin (CP) çok çeşitli kanserlerin tedavisinde etkin olarak kullanılan ve ciddi yan etkilere sahip olan bir antikanser, antimikrobiyal ve antiinflamatuvar ajandır. Yan etkileri içinde en sık rastlanan ve kullanımını sınırlandıran ise nefrotoksisitedir. İlaca bağlı nefrotoksisitelerde koruyucu ajan olarak çeşitli maddeler kullanılmıştır; bunlardan bir tanesi de vitamin B12'dir. Pentraksin-3 (PTX3) CRP'nin de içinde bulunduğu pentraksin ailesinin bir üyesi olup kompleman sistemiyle etkileşim halinde bulunan inflamasyon ile ilişkili bir glikoproteindir ve hem Kronik Böbrek Hastalığı (KBH) hem Akut Böbrek Hastalığı (ABH)'da düzeylerinin arttığı bilinmektedir. Galektin-3 (Gal-3) immünite ile ilişkili karbonhidrat bağlayan lektindir ve böbrek hasarında ekspresyonu artmaktadır. Asprosin esas olarak beyaz adipöz dokudan salgılanan ancak farklı doku ve hücrelerden de salgılanabilen bir hormondur. Asprosinin açlıkta iştah arttırıcı etki gösterdiği, karaciğer (KC)'de glukoneogenezi uyardığı ortaya konmuştur. Yapılan çalışmalar diyabetik böbrek hastalarında asprosin düzeyinin arttığını göstermiştir.
Çalışmamızın amacı sisplatin ile indüklenmiş böbrek hasarında B12 vitaminin koruyuculuğunun ve böbrek dokusunda immunohistokimyasal olarak PTX3, Asprosin ve Gal-3 ekspresyonları üzerine etkisini araştırmaktır.
Gereç ve Yöntem: Deneyde 28 adet 8-10 haftalık erişkin Wistar albino cinsi erkek sıçanlar 4 gruba ayrıldı. 1.gruba hiçbir uygulama yapılmadı (grup I, Kontrol). 2.gruba 5mg/kg tek doz intraperitoneal (i.p) yolla sisplatin deney başlangıcında uygulandı (grup II, Sisplatin). 3.gruba 5mg/kg tek doz sisplatin deney başlangıcında tek doz uygulandı ve ardından 4 mg/kg vitamin-B12 ise 14 gün boyunca i.p yolla uygulandı (grup III, Sisplatin+Vitamin B12). 4.gruba4 mg/kg vitamin-B12, 14 gün boyunca i.p yol ile uygulandı (grup IV, Vitamin B12).
Tüm gruplardaki sıçanlardan böbrek doku örnekleri alındı ve serum fizyolojik ile yıkandıktan sonra %10'luk formaldehit içine konularak histolojik ve immunohistokimyasal çalışmalar için uygun koşullarda saklandı. 10'luk formol çözeltisinin içerisinde bir haftalık post-fiksasyon işleminden sonra ışık mikroskobik analizleri gerçekleştirmek için rutin doku takip işlemleri yapıldı. Otomatik doku takip cihazı ile rutin histolojik takibi yapılarak hazırlanan parafin bloklardan uygun kalınlıkta kesitler alındı. Sonrasında kesitler Hematoksilen-Eozin boyama metodu ile boyanıp ışık mikroskopta değerlendirildi.
Bulgular: Kesitlerin ışık mikroskobu altında incelenmesi sonucu; Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında böbrek dokusu normal histolojik yapısında gözlendi. Kontrol grubuyla kıyaslandığında Sisplatin grubunda glomerüllerde belirgin atrofi ve bowman boşluğunda azalma, proksimal ve distal tübül epitelinde dejenerasyon ve yer yer hiyalin kistleri görüldü. Sisplatin grubu ile karşılaştırıldığında ise Sisplatin+Vitamin B12 grubunda böbrek dokusundaki hasarda histopatolojik olarak belirgin bir azalma olmasına rağmen sisplatinin neden olduğu hasar tam olarak giderilememiştir.
Asprosinin immünreaktivitesi Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında benzerdi (p=0,446). Kontrol ile karşılaştırıldığında Sisplatin grubunda asprosinin immünreaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde artmıştı (p<0,001). Sisplatin grubu ile kıyaslandığında ise Sisplatin+Vitamin B12 grubunda asprosin immünreaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde azalmış görüldü (p<0,001).
PTX3 immünreaktivitesi Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında benzerdi (p=0,816). Kontrol ile karşılaştırıldığında Sisplatin grubunda PTX3 immünreaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde artmıştı (p<0,001). Sisplatin grubu ile kıyaslandığında ise Sisplatin+Vitamin B12 grubunda PTX3 immünreaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde azalmış görüldü (p<0,001).
Gal-3 immünreaktivitesi Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında benzerdi (p=0,861). Kontrol ile karşılaştırıldığında Sisplatin grubunda Gal-3 immünreaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde artmıştı (p<0,001). Sisplatin grubu ile kıyaslandığında ise Sisplatin+Vitamin B12 grubunda Gal-3 immün reaktivitesi istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde azalmış görüldü (p<0,001).
Tüm gruplardaki sıçanlardan anestezi altında intrakardiyak olarak kan alındıktan sonra anestezi altında sakrifiye edildi. Kan örnekleri 4000 rpm'de 8 dakika santrifüj edilerek serumları alındı. Serum örnekleri analiz tarihine kadar -80°C'de saklandı. Tüm gruplara ait serum total oksidan seviyesi (TOS) düzeylerinin değerlendirilmesi için yapılan biyokimyasal çalışmada; TOS düzeyleri, Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında benzerdi (p=0,209). Kontrol grubu ile kıyaslandığında Sisplatin grubunda, TOS düzeyi istatistiksel olarak anlamlı şekilde artmıştı (p<0,001). Sisplatin grubu ile kıyaslandığında, Sisplatin+Vitamin B12 grubunda TOS düzeyleri istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalmıştı (p<0,001). Tüm gruplara ait serum total antioksidan seviyesi (TAS) düzeylerinin değerlendirilmesi için yapılan biyokimyasal çalışmada; TAS düzeyleri, Kontrol ve Vitamin B12 gruplarında benzerdi (p=0,649). Kontrol grubu ile kıyaslandığında Sisplatin grubunda, TAS düzeyi istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalmıştı(p<0,001). Sisplatin grubu ile kıyaslandığında Sisplatin+Vitamin B12 grubunda TAS düzeyleri istatistiksel olarak anlamlı şekilde artmıştı (p<0,001).
Sonuç: Vitamin B12 sisplatine bağlı nefrotoksisitede artan PTX3, Gal-3 ve asprosin immünreaktivitelerinde ve böbrek hasarını gösteren bulgularda azalmaya sebep olmuştur. Vitamin B12 sisplatin ile indüklenen böbrek hasarında büyük oranda koruyucu etkiye sahiptir.
Anahtar kelimeler: Sisplatin, böbrek hasarı, vitamin B12, PTX3, Asprosin,Gal-3

Abstract:
Introduction and Purpose: Cisplatin is an anticancer, antimicrobial and anti- inflammatory agent that is used effectively in the treatment of a wide variety of cancers and has serious side effects. The most common side effect that limits its use is nephrotoxicity. Various substances have been used as protective agents in drug- induced nephrotoxicities; One of these is vitamin B12. Pentraxin-3 (PTX3) is a member of the pentraxin family, which includes CRP, and is an inflammation-related glycoprotein that interacts with the complement system, and its levels are known to increase in both CKD and AKD. Galectin-3 (Gal-3) is an immunity-related carbohydrate-binding lectin and its expression increases in kidney damage. Asprosin is a hormone secreted mainly from white adipose tissue, but can also be secreted from different tissues and cells. It has been demonstrated that asprosin has an appetite-increasing effect during fasting and stimulates gluconeogenesis in the liver. Studies have shown that asprosin levels increase in diabetic kidney patients.
The aim of our study is to investigate the protection of vitamin B12 in cisplatin-induced kidney damage and its effect on PTX3, Asprosin and Gal-3 expressions immunohistochemically in kidney tissue.
Materials and Methods: In the experiment, 28 8-10 weeks old adult Wistar albino male rats were divided into 4 groups. No application was made to group 1 (group I, Control). A single dose of 5mg/kg cisplatin was administered intraperitoneally (i.p.) to group 2 at the beginning of the experiment (group II, Cisplatin). To group 3, a single dose of 5mg/kg cisplatin was administered at the beginning of the experiment, and then 4mg/kg vitamin-B12 was administered i.p. for 14 days (group III, Cisplatin+Vitamin B12). To group 4, 4 mg/kg vitamin-B12 was administered i.p. for 14 days (group IV, Vitamin B12).
Kidney tissue samples were taken from rats in all groups and after washing with physiological saline, they were placed in 10% formaldehyde and stored under appropriate conditions for histological and immunohistochemical studies. After a week of post-fixation in 10% formol solution, routine tissue follow-up procedures were performed to perform light microscopic analyses. Sections of appropriate thickness were taken from the paraffin blocks prepared by routine histological monitoring with an automatic tissue tracking device. Afterwards, the sections were stained with the Hematoxylin-Eosin staining method and evaluated under a light microscope.
Results: As a result of examining the sections under a light microscope; Kidney tissue was observed in its normal histological structure in the control and Vitamin B12 groups. Compared to the control group, significant atrophy of the glomeruli and a decrease in the Bowman space, degeneration of the proximal and distal tubule epithelium, and occasional hyaline cysts were observed in the Cisplatin group. Although there was a histopathologically significant decrease in the damage to the kidney tissue in the Cisplatin+Vitamin B12 group compared to the cisplatin group, the damage caused by cisplatin could not be completely eliminated.
The immunoreactivity of asprosin was similar in the Control and Vitamin B12 groups (p = 0.446). Compared to the control, the immunoreactivity of asprosin increased statistically significantly in the Cisplatin group (p<0.001). Compared to the cisplatin group, asprosin immunoreactivity was observed to decrease statistically significantly in the Cisplatin+Vitamin B12 group (p<0.001).
PTX3 immunoreactivity was similar in Control and Vitamin B12 groups (p=0.816). PTX3 immunoreactivity increased statistically significantly in the Cisplatin group compared to the control (p<0.001). Compared to the Cisplatin group, PTX3 immunoreactivity was observed to decrease statistically significantly in the Cisplatin+Vitamin B12 group (p<0.001).
Gal-3 immunoreactivity was similar in the Control and Vitamin B12 groups (p=0.861). Gal-3 immunoreactivity increased statistically significantly in the Cisplatin group compared to the control (p<0.001). Compared to the Cisplatin group, Gal-3 immune reactivity was observed to decrease statistically significantly in the Cisplatin+Vitamin B12 group (p<0.001).
Rats in all groups were sacrificed under anesthesia after blood was taken intracardiacally under anesthesia. Blood samples were centrifuged at 4000 rpm for 8 minutes and serum was taken. Serum samples were stored at -80°C until the date of analysis. In the biochemical study conducted to evaluate the serum total oxidant level (TOS) levels of all groups; TOS levels were similar in the Control and Vitamin B12 groups (p=0.209). Compared to the control group, TOS level increased statistically significantly in the Cisplatin group (p<0.001). Compared to the Cisplatin group, TOS levels decreased statistically significantly in the Cisplatin+Vitamin B12 group (p<0.001). In the biochemical study conducted to evaluate the serum total antioxidant level (TAS) levels of all groups; TAS levels were similar in the Control and Vitamin B12 groups (p=0.649). Compared to the control group, TAS level decreased statistically significantly in the Cisplatin group (p<0.001). Compared to the Cisplatin group, TAS levels increased statistically significantly in the Cisplatin+Vitamin B12 group (p<0.001).
Conclusion: Vitamin B12 caused a decrease in PTX3, Gal-3 and asprosin immunoreactivities, which increased in cisplatin-induced nephrotoxicity, and findings indicating kidney damage. Vitamin B12 has a significant protective effect against cisplatin-induced kidney damage.
Key words: Cisplatin, kidney damage, vitamin B12, PTX3, Asprosin, Gal-3