CFPAC-1 (ZEB1+) ve MIAPaCa-2, (ZEB1-) pankreatik kanser hücre hatlarında viteksin'in anti-metastatik ve apoptotik etkilerinin araştırılması
Investigation of the anti-metastatic and apoptotic effects of vitexin on CFPAC-1 (ZEB1+) and MIAPaCa-2, (ZEB1-) pancreatic cancer cell lines
Yazar: KEVSER YAŞAR
Danışman: PROF. DR. AHMET ATA ÖZÇİMEN
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Antikanser = Anticancer ; Moleküler biyoloji = Molecular biology

Özet:
Gastrointestinal sistemin ölümcül kanserlerinden biri olan pankreatik duktal adenokarsinom hızlı yayılım, geç teşhis ve sınırlı tedavi olanaklarından dolayı önemli bir kanser türüdür. Tedavi stratejilerine yönelik çalışmalar artmıştır. Bir doğal flavonoid olan ve bitkilerin yeşil kısımlarında bulunan viteksin maddesinin anti-tümöral özellikleri in-vitro kanser çalışmalarında yerini almıştır. Bu çalışmada, viteksin uygulanan CFPAC-1 ve MIAPaCa-2 hücre hatlarında sitotoksik, apoptotik, migratif ve metastatik etkiler üzerine çalışmalar gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmada, proliferatif etkiyi gözlemleme açısından yapılan MTT deneyinde CFPAC-1 için IC50; 312 μM, IC50/2; 156 μM, MIAPaCa-2 için IC50; 500 μM, IC50/2; 250 μM bulunmuştur. Apoptotik etkiyi gözlemlemek açısından yapılan DNA fragmantasyon deneyinde belirgin bir genomik DNA hasarı her iki hücre hattında da gözlenmemiştir. Anti-migratif/metastatik ve apoptotik etki incelenmesi açısından metastatik Zeb-1, apoptotik Kaspaz-3, -8, -9 gen ifadelerinin analizi Real Time PCR metoduyla B-Actin (ACTB) internal geni primeri kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Viteksin IC50 uygulanan CFPAC-1 hücrelerinde kaspaz-3'te 0,4 kat artış gözlenirken, MIAPaCa-2 hücrelerinde kaspaz-3'te 16 kat artış (P<0.05), kaspaz-9 da 4 kat artış gözlenmiştir. Zeb-1 açısından incelendiğinde, CFPAC-1 hücre hattında 0,5 kat azalma (P<0.01), MIAPaCa-2 hücre hattında da 11 kat artış gözlemlenmiştir. Viteksin IC50/2 uygulanan CFPAC-1 hücrelerinde kaspaz-3'te 0,8 kat azalış (P<0.05) gözlenirken, MIAPaCa-2 hücrelerinde kaspaz-3'te 3 kat artış (P<0.01), kaspaz-9 da 1 kat artış gözlenmiştir. Zeb-1 açısından incelendiğinde, CFPAC-1 hücre hattında 0,9 kat azalma, MIAPaCa-2 hücre hattında da 32 kat artış gözlenmiştir. Kaspaz-8 ifadesi her iki hücre hattında da azalmıştır. MIAPaCa-2 hücre hattında apoptozun iç yolaktan gerçekleşebileceği düşünülmektedir. Anti-migratif/metastatik etkiyi gözlemleme açısından yapılan Wound-healing deneyinde CFPAC-1 hücre hattında yara kapanma oranının %16, MIAPaCa-2 hücre hattında yara kapanma oranının yüzde %100 olduğu gözlenmiştir. Sonuçlar değerlendirildiğinde, viteksinin MIAPaCa-2'de apoptotik, CFPAC-1 hücre hattında anti-migratif ve anti-metastatik etkinliğinin olabileceği görülmektedir.
Anahtar kelimeler; CFPAC-1, MIAPaCa-2, Viteksin, Metastaz, Apoptoz
Danışman: Prof.Dr. Ahmet Ata ÖZÇİMEN, Mersin Üniversitesi, Biyoloji Anabilim Dalı, Mersin.

Abstract:
Pancreatic ductal adenocarcinoma, one of the deadly cancers of the gastrointestinal tract and is an important cancer type due to its rapid spread, late diagnosis and limited treatment options. Studies on treatment strategies have increased. The anti-tumoral properties of vitexin, a natural flavonoid found in the green parts of plants, have taken place in in-vitro cancer studies. In this study, cytotoxic, apoptotic, migratory and metastatic effects were studied in vitexin treated CFPAC-1 and MIAPaCa-2 cell lines. In this study, to observe the proliferative effect the MTT assay was performed onto two cell lines. The result of cytotoxicity were IC50; 312 μM, IC50/2; 156 μM for CFPAC-1 and IC50; 500 μM, IC50/2; 250 μM for MIAPaCa-2. To demonstrate the apoptotic fragmentation effect, DNA fragmentation assay was performed and no significant fragmented DNA bands was observed in both cell lines. In terms of anti-migratory/metastatic and apoptotic effects, analysis of metastatic Zeb-1 and apoptotic Caspase-3, -8, -9 gene expressions was performed by Real Time PCR method using B-Actin (ACTB) internal gene primer. While a 0.4 fold increase in caspase-3 was observed in CFPAC-1 cells treated with vitexin IC50, a 16 fold increase in caspase-3 (P<0.05) and a 4 fold increase in caspase-9 was observed in MIAPaCa-2 cells. In terms of Zeb-1, a 0.5 fold decrease in CFPAC-1 cell line (P<0.01) and a 11 fold increase in MIAPaCa-2 cell line were observed. While a 0.8 fold decrease in caspase-3 (P<0.05) was observed in CFPAC-1 cells treated with vitexin IC50/2, a 3 fold increase in caspase-3 (P<0.01) and a 1 fold increase in caspase-9 was observed in MIAPaCa-2 cells. In terms of Zeb-1, a 0.9 fold decrease was observed in CFPAC-1 cell line and a 32 fold increase was observed in MIAPaCa-2 cell line. Caspase-8 expression was decreased in both cell lines. It is thought that apoptosis in MIAPaCa-2 cell line may occur through the internal pathway. In the Wound-healing experiment conducted to observe the anti-migratory/metastatic effect, it was observed that the wound closure rate was 16% in the CFPAC-1 cell line and 100% in the MIAPaCa-2 cell line. As conclusion of the result, vitexin might have been an apoptotic activity in MIAPaCa-2 and anti-migratory/metastatic activity in CFPAC-1 cell line.
Keywords; CFPAC-1, MIAPaCa-2, Vitexin, Metastasis, Apoptosis
Advisor: Prof.Dr. Ahmet Ata ÖZÇİMEN, Department of Bıology, Mersin University, Mersin.