Resveratrol'ün B-CPAP insan papiller tiroid karsinomu hücreleri üzerinde BRAF, ERK VE NIS MRNA ekspresyonu üzerine etkileri
Effects of resveratrol on BRAF, ERK VE NIS MRNA expressions in B-CPAP human papillary thyroid carcinoma cell line
Yazar: GÖKÇEN ÜNAL KOCABAŞ
Danışman: PROF. AHMET GÖKHAN ÖZGEN
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Endokrinoloji ve Metabolizma Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases
Dizin: Hücresel yolaklar = Cellular pathways ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-papiller = Carcinoma-papillary ; Neoplazmlar = Neoplasms ; RNA-haberci = RNA-messenger ; Resveratrol = Resveratrol ; Tiroid neoplazmları = Thyroid neoplasms

Özet:
Tiroid kanserleri en sık görülen endokrin neoplazilerdir. İnsidansı her iki cinste de hızla artmaktadır. Genellikle iyi prognozlu olmasına rağmen küçük bir grup hastada hızlı seyir, invazyon ve radyoaktif iyot tedavisine direnç görülebilmektedir. BRAF papiller tiroid kanseri oluşumunda ve malignitenin sürdürülmesinde önemli olan, tüm papiller tiroid karsinomlarında ortalama %40 sıklıkla görülen bir mutasyondur. BRAF pozitifliği erken invazyon, metastaz ve iyot yakalama kapasitesinde azalma ile ilişkilidir. Resveratrol bitkisel kökenli bir fitoalexindir. Çeşitli tümör hücrelerinde büyüme inhibisyonu, apoptoz indüklenmesi, invazyonun engellenmesi gibi etkileri gösterilmiştir. Tiroid kanser hücreleri üzerinde de apoptozu indüklediği gösterilmiştir. Bu çalışmadaki amacımız resveratrol'ün tiroid papiller kanser hücrelerinde BRAF, ERK ve NIS mRNA ekspresyonları üzerine etkisinin belirlenmesidir. İnsan B-CPAP papiller tiroid karsinom hücreleri resveratrol'ün 10-100 ?M konsantrasyonlarında 24-48-72 saat süreyle muamele edildi. Hücre canlılığı XTT Cell Proliferation Assay? ile değerlendirildi. BRAF, ERK ve NIS mRNA ekspresyonları rt-PCR metoduyla değerlendirildi. Resveratrolün B-CPAP hücrelerinde zaman ve doza bağımlı bir şekilde hücre proliferasyonunu engellediği görüldü. Resveratrol'ün IC50 değeri 48 saatte 18,7 ?M, 72 saatte 56,8?M olarak ölçüldü. 48 saatte 20 ?M resveratrol ile BRAF mRNA ekspresyonunda 1,5 kat; 72 saatte 50 ?M ile 0,5 kat azalma gözlendi. ERK mRNA düzeyinde 48 saatte 20 ?M ile 5,5 kat azalma;72 saatte 50 ?M ile 5 kat azalma meydana geldi. NIS mRNA ekspresyonunda ise 48 saatte 20 ?M ile 3 kat azalma meydana gelirken 72 saatte 50 ?M ile 1,5 kat artış meydana geldi. Bu çalışmayla resveratrolün tiroid papiller karsinom hücre proliferasyonunu inhibe ettiği ve kötü prognostik BRAF ve ERK mRNA ekspresyonlarını azalttığı gösterilmiştir. Çalışmamız Resveratrolün dirençli papiller tiroid kanseri hastalığında yeni bir tedavi edici ajan olarak ileri çalışmalarla değerlendirilebileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
Thyroid carcinomas represent the most prevalent endocrine neoplasias. Its incidence is rising in both sexes. Although the prognosis is generally good, there is agressive clinical course, invasion and resistance to radioactive iodine treatment in a small subset of patients. BRAF mutation has a significant role in tumorigenesis and maintenance of malignant state, and its prevalance is about 40% in papillary thyroid cancer. BRAF mutation is associated with invasion, metastasis and reduced iodine uptake. Resveratrol is a plant derived phytoalexin. It is shown to inhibit growth, induce apoptosis and prevent invasion in several cancer cells. It is also shown to induce apoptosis in thyroid cancer cells. Our aim in this study is to determine effects of resveratrol on BRAF, ERK and NIS mRNA expressions in thyroid cancer cells. Human B-CPAP papillary thyroid carcinoma cells were treated with resveratrol at 10-100 ?M concentrations. Cell viability was determined by XTT Cell Proliferation Assay. BRAF,ERK and NIS mRNA expressions were determined by rt-PCR. Resveratrol inhibited cell proliferation in B-CPAP cells in a time and dose dependent manner. IC50 value of resveratrol at 48 hours was 18,7 ?M and 56,8 ?M at 72 hours. BRAF mRNA expression decreased 1,5 fold with 20 ?M,at 48 hours and decreased 0,5 fold with 50 ?M at 72 hours. ERK mRNA expression decreased 5,5 fold with 20 ?M,at 48 hours and decreased 5 fold with 50 ?M at 72 hours. NIS mRNA expression decreased 3 fold with 20 ?M,at 48 hours and increased1, 5 fold with 50 ?M at 72 hours. In this study we demonstrate that resveratrol inhibits cell proliferation, and decreases worse prognostic BRAF and ERK mRNA expressions and increases NIS mRNA expression in a dose and time dependent manner.We propose that resveratrol can be further studied as a novel therapeutic agent management of resistant papillary thyroid carcinomas.