Curcumın'in ehrlich assit ve solid tümör oluşturulan farelerde antitümöral etkisinin araştırılması
The research of the anti-tumoral effects on mice formed of curcumin's ehrlich ascites and solid tumor
Yazar: SEHER YİLMAZ
Danışman: PROF. DR. HARUN ÜLGER
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Anatomi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Anatomi = Anatomy
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Apoptozis = Apoptosis ; Faktör VIII = Factor VIII ; Fareler = Mice ; Karsinoma-ehrlich tümörü = Carcinoma-ehrlich tumor ; Kurkumin = Curcumin

Özet:
Curcumin, halk arasında yaygın olarak baharat, yiyecek renklendirici ve koruyucu olarak kullanılan sarı renkli bir bitkisel üründür. Curcumin anti-inflamatuar, anti-kanserojen ve anti-oksidan özelliklerinden dolayı yaygın bir kullanıma sahiptir. Bu çalışmada fare meme adenokarsinomundan kökenlenen ve Balb/C farelerde geliştirilen Ehrlich Assit Tümör modelinde farklı dozlarda curcumin uygulamasının assit ve solid tümör üzerine etkileri araştırıldı. Çalışmamızda 6 tanesi stok hayvan diğerleri assit ve solid tümör gruplarında olmak üzere toplam 86 adet Balb/C fare kullanıldı. Farelerin tamamına stok hayvandan alınan Ehrlich assit tümör (EAT) hücreleri (1x106 EAT hücresi) intraperitoneal ve subkutan yolla enjekte edildi. Assit tümör oluşturulan hayvanların tedavi gruplarına 10 gün buyunca, solid tümör oluşturulan grupların tedavi gruplarına ise 15 gün boyunca intraperitoneal olarak 25mg/kg ve 50mg/kg curcumin uygulandı. Deney süresince tüm grupların kilo değişimleri kaydedildi. 10. günde assit tümör oluşturulan hayvanların periton boşluğu içerisindeki EAT hücrelerinin bulunduğu assit sıvısı alınarak canlı ve ölü hücre sayımı yapılarak in vivo sitotoksisitesi değerlendirildi. Deney sonunda hayvanlar dekapite edilip assit tümör oluşturulan gruplara ait hayvanların karaciğer, mide, dalak, böbrek, incebağırsak ve kalınbağırsak dokuları, solid tümör oluşturulan hayvanların ise tümör dokuları histopatolojik değerlendirme için alınarak tespit edildi. Solid tümör oluşturulan hayvanların tümör dokularının hacimleri ölçüldükten sonra kesitlerde immünohistokimyasal olarak Faktör VIII ekspresyonu ile angiogenesis, Tunel yöntemi ile de hücre Apoptozu belirlenerek gruplar arasındaki fark değerlendirildi. Ayrıca curcumin'in EAT hücreleri üzerindeki in vitro sitotoksik etkisinin belirlenebilmesi için curcumin ekstraktlarının 10, 20 ve 30µg mL-1 farklı konsantrasyonları uygulanarak canlı ve ölü hücre oranları farklı iki kişi tarafından sayılarak gruplar karşılaştırıldı. Assit tümör oluşturulan gruplardaki farelerin ağırlık artışına bakıldığında en fazla kilo artışının tümör kontrol grubundan sonra 25mg/kg curcumin verdiğimiz grupta ve daha sonra 50mg/kg curcumin uygulanan grupta olduğu gözlendi. Assit tümör oluşturulan hayvanların dokular histopatotojik sonuçları 50mg/kg curcumin uygulanan grupta tümör kontrol grubuna oranla alınan dokuların etrafında EAT hücrelerinin daha az olduğu gözlendi. Solid tümör oluşturulan hayvanlarda tümör hacim artışı kontrol grubuna (4603.99 mm3) oranla en az 25mg/kg curcumin uygulanan grupta gözlenmiştir (1179.56 mm3) (p<0.05). Deney sonunda 50mg/kg curcumin uygulanan tedavi grubunda damar yoğunluğunun önemli derecede azaldığı (1.866) ve apoptotik hücre sayısının artmış olduğu gözlendi (7.775) (p<0.05). In vitro deney grubunda ise 10µg/ml curcumin uygulanan grupta 3 ve 24 saatlik inkübasyon sonrasında apoptoza uğramış hücre sayısı daha fazla olarak gözlemlendi. Sonuç olarak EAT hücreleri ile oluşturulan gerek assit tümör gelşimi gerekse solid tümör gelişimi üzerinde curcumin'in antitümöral etki gösterdiği birkez de bizim çalışmamızda gösterilmiştir.
 
Anahtar kelimeler: Ehrlich Assit Tümör. Curcumin, Apoptoz, Faktör 8

Abstract:
Curcumin is an herbal product with yellow color used for seasoning, protection and coloring of foods in the public. It is widely used due to its anti-inflammatory, anti-tumor and anti-oxidant features. In this study, effects of curcumin administration at different doses on ascites and solid tumors were investigated in Ehrlich Ascites Tumor model in Balb/C mice originating from rat breast adenocarcinoma. Overall, 86 Balb-c mice (6 as stock animal) were used in this study. Ehrlich ascites tumor (EAT) cells (1x106 EAT cells) harvested from stock animals were injected to all rats via intraperitoneal and subcutaneous route. Doses of 25 mg/kg (i.p.) and 50 mg/kg were given over 10 days to the animals in the treatment groups in which ascites tumor was induced whereas over 15 days to the animals in the treatment groups in which solid tumor was induced. Throughout experiments, weight changes were recorded in all groups. On the day 10, in vivo cytotoxicity was assessed by counting alive and death cells  in ascites fluid including EAT cells obtained from peritoneal space of animals in which ascites tumors were induced. All animals were decapitated at the end of experiment. The liver, stomach, spleen, kidney, small intestine and large intestine tissues from animals with ascites tumor and tumor tissues from animals with solid tumor were removed for histopathological examination. In animals with solid tumor, volume of tumor tissues was measured and angiogenesis and apoptosis were assessed by Factor VIII expression and Tunnel method using immunohistochemical staining in tumor tissues respectively. The differences in angiogenesis and apoptosis were assessed among all groups. In addition, in order to determine in vitro cytotoxic effects of curcumin on EAT cells, alive and death cell ratios were counted by 2 different observers after giving curcumin concentrations of 10, 20 and 30µg mL-1. When rats in the groups with ascites tumor were assessed, maximum weight gain was observed in tumor control group; followed by the group received 25 mg/kg curcumin and the group received 50mg/kg curcumin. Histopathological examination in ascites tumor groups revealed that number of EAT cells at surrounding tissues was smaller in the group received 50 mg/curcumin when compared to tumor control group. The lowest increase in tumor volume was observed in the group received 25mg/kg curcumin (1179.56 mm3) when compared to tumor control group (4603.99 mm3) (p<0.05). At the end of experiment, it was observed that vessel intensity (1.886) was significant decreased while number of apoptotic cells (7.775) was significantly increased in the group received 50mg/kg curcumin (p<0.05). In the in vitro experiment group, greater number of apoptotic cells was observed in the group received 10 µg/ml curcumin after 3 and 24 hours incubation. In conclusion, anti-tumor activity of curcumin in both ascites and solid tumor development induced by EAT cells was reproduced in this study. 

Key words: Ehrlich Ascites Tumor, Curcumin, Apoptosis, Factor 8