Endometriyal ortamın spermin kromatin anormallikleri üzerine etkisi
The effect of endometrial environment on sperm chromatin abnormalities
Yazar: DUYGU NECCAR
Danışman: PROF. DR. EMİNE ELİF GÜZEL MEYDANLI
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Endometriyum = Endometrium ; Histonlar = Histones ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Protaminler = Protamines ; Sıcaklık şoku proteinleri = Heat shock proteins

Özet:
Amaç: Endometriyal hücrelerden salınan salgıların, anormal kromatin yapısına sahip spermler üzerindeki etkilerinin incelenmesidir.
Gereç ve yöntem: Endometriyal hücrelerin kültüre edilmesiyle, bu hücrelerin salgılarını içeren şartlandırılmış medyum (EH-ŞM) elde edildi. Elde edilen EH-ŞM'den uterozomlar ultrasantrifüj yöntemiyle izole edildi. İzole edilen uterozomların tanısı TEM ve Western blot yöntemleri ile ortaya konuldu. Ardından, infertil erkeklerden alınan ve anormal kromatin yapısına sahip olduğu belirlenen sperm örnekleri HAM medyumu (Kontrol), uterozom içeren EH-ŞM ve uterozom içermeyen EH-ŞM (ultrasantrifüjle elde edilen süpernatant-SNT) ile muamele edildi ve anormal kromatin yapısına sahip spermlerdeki histon seviyeleri anilin mavisi boyamasıyla karşılaştırılmalı olarak değerlendirildi.
Bulgular: EH'lerden elde edilen EH-ŞM toplandı. Toplanan EH-ŞM'den ultrasantrifüj yöntemiyle uterozomlar izole edildi. İzole edilen uterozomların karakterizasyonu TEM ve Western blot yöntemiyle yapıldı. Ultrasantrifüj sonucu elde edilen süpernatantta uterozom olmadığı da Western blot yöntemiyle gösterildi. Daha sonra çalışmaya dahil edilen semen örneklerinden (n=7) her biri eşit miktarda sperm içerecek şekilde 3 gruba bölündü ve her grup 15 dk, 1 sa ve 4 sa süre ile kontrol, SNT ve EH-ŞM medyumlarıyla inkübe edildi. Yapılan inkübasyonlar sonucu, üç sürede de gruplar arasındaki immatür sperm oranında istatistiksel olarak anlamlılık bulunamadı.
Sonuç: Endometriyal hücre salgılarının, anormal kromatin yapısına sahip spermler üzerinde fazla histon içeren immatür sperm sayılarında azalma yönünde etkisi gösterilememiştir. İlerleyen safhalarda ek analizlerin yapılması ve örnek sayısının arttırılması yoluna gidilecektir. 


Anahtar kelimeler: Endometriyal hücreler, histon-protamin geçişi, HSPA2, şartlandırılmış medyum, uterozom.

Abstract:
Aim: It is the examination of the effects of secretions released from endometrial cells on sperm with abnormal chromatin structure.
Material and Method: By culturing endometrial cells, conditioned medium containing the secretions of these cells (EC-CM) was obtained. Uterosomes were isolated from the obtained (EC-CM) by ultracentrifugation method. The diagnosis of isolated uterosomes was made by TEM and Western blot methods. Then, sperm samples taken from infertile men and determined to have abnormal chromatin structure were treated with HAM medium (Control), EH-SM with uterosome and EH-SM without uterosome (supernatant obtained by ultracentrifugation), and histone levels in sperm with abnormal chromatin structure were evaluated in comparison with aniline blue staining. 
Result: EC-CM obtained from EHs were collected. Uterosomes were isolated from the collected EC-CM by ultracentrifugation method. Characterization of isolated uterosomes was done by TEM and Western blot methods. It was also shown by Western blot method that there was no uterosome in the supernatant obtained as a result of ultracentrifugation. Then, semen samples (n=7) included in the study were divided into 3 groups, each containing equal amount of sperm, and each group was incubated with control, SNT and EC-CM mediums for 15 minutes, 1 hour and 4 hours. As a result of the incubations, no statistical significance was found in the ratio of immature sperm between the groups in all three periods. 
Conclusion: The effect of endometrial cell secretions on sperms with abnormal chromatin structure in decreasing the number of immature sperm with excess histone has not been demonstrated. In the following stages, additional analyzes will be made and the number of samples will be increased.


Keywords: Conditioned medium, endometrial cells, histone-protamine transition, HSPA2, uterosome.