Yağ dokusu kaynaklı kök hücrelerin ratlarda gerçekleştirilen sutural genişletme uygulamalarında kemik oluşumu üzerine etkilerinin histomorfometrik olarak incelenmesi
Histomorphometricaly evoluation of adipose tissue-derived stem cells on bone regeneration during sutural expansion in rats
Yazar: ABDULLAH EKİZER
Danışman: PROF. DR. TANCAN UYSAL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Ortodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Kemik rejenerasyonu = Bone regeneration ; Kök hücreler = Stem cells ; Maksilla = Maxilla ; Ortodonti = Orthodontics ; Sıçanlar = Rats ; Çene = Jaw

Özet:
Bu çalışmanın amacı, yağ dokusu kaynaklı kök hücrelerin (YKKH), in vitro şartlarda kemik dokuya farklılaşma potansiyellerini ve in vivo olarak ratlarda oluşturulan üst çene genişletmesi modelinde genişleyen bölgedeki yeni kemik rejenerasyonuna etkilerini değerlendirmektir. İki adet erişkin Wistar cinsi erkek ratın inguinal bölgesinden genel anestezi altında 25 cc yağ doku eksize edildi. Bu yağ dokusundan mezenkimal kök hücreler izole edildi ve osteojenik farklılaşmaları sağlandı. Akım sitometri analizi ile karakterize edilem YYKH yeşil floresan protein ile işaretlendi. 19 adet 12 haftalık wistar cinsi erkek rat deney grubunda 10, kontrol grubunda 9 tane olmak üzere iki gruba ayrıldı. Bütün deneklere genişletme apareyleri yerleştirildikten 24 saat sonra deney grubunda her bir deneğe100 µl PBS içerisinde çözülmüş 106 adet YKKH lokal olarak premaksiller bölgeye enjekte edildi. Kontrol grubuna ise aynı şekilde 100 µl serum fizyolojik enjekte edildi. Beş günlük genişletme ve on günlük retansiyon dönemi sonrası deney grubundaki bir denek YKKH'in elektron mikroskobunda takibi için diğer örnekler ise histomorfometrik analizler için dekapite edildi. Histomorfometrik parametreler yeni oluşan kemik alanı, osteoblast sayısı, osteoklast sayısı ve damarlanma miktarı Eşleştirilmiş t-testi kullanılarak deney ve kontrol grupları arasında karşılaştırıldı. Floresan mikroskobu altında YKKH'in kemik yapıya katıldıkları gözlemlendi. Yapılan istatistiksel analizde yeni kemik oluşun alanı, osteoblastik ev osteoklastik aktivite ve damarlanma miktarı deney grubunda artmış bulundu. Ratlarda premaksiller suturda genişletme yapılan alanına lokal olarak uygulanan osteojenik farklılaşmış YKKH kemik yapımına, hücresel aktiviteye ve damarlanma miktarına etki ederek kemik formasyon ve kalitesini artırmaktadır.

Abstract:
The aim of this study is to examine the differentiation potentials of adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) to bony tissues, in vitro and their effects on the new bone regeneration in the model of maxillary expansion generated in rats, in vivo. 25 cc adipose tissue was extracted from inguinal region of two mature male Wistar rats. Mesenchymal stem cells isolated from this adipose tissue and induced to osteogenic differentiation in osteogenic medium. ADSCs characterized by using flow cytometry analysis labeled with Green Fluorescent Cell Linker. Nineteen 12-weeks-old Wistar rats divided into two groups as 10 for Experimental Group and 9 for Control Group. 24 hours after the placing of expansion appliance, 106 ADSCs solved in 100 µl PBS (Phosphate Buffered Saline) was locally injected into premaxillary region of each animal in the experimental group. In the same way, 100 µl serum was injected into the control group. After five days of expansion and ten days of retention period, an experimental subject of the experimental group was decapitated for following ADSCs under the electron microscope and all other samples were decapitated for histomorphometric analysis. The new bone region in histomorphometric parameter, the number of osteoblast and osteoclast, and the amount of vascularity were compared with experimental and control groups by the using of matched t-test. With fluorescent microscope, ADSCs observed to join the new bone structure. Statistical analysis showed new bone regeneration region, osteoblastic and osteoclastic activity and the amount of vascularity parameters were significantly increased in experimental group. Locally applied osteogenic differentiated ADSCs to the expanded premaxillar suture of rats effects bone healing, cellular activity and vascularization and increased bone formation and its quality in rats.