Klinik uygulamaya yönelik üretim serisinin farklı basamaklarından elde edilen klinik kalitedeki mezenkimal kök hücre son ürünlerinin karakterizasyon analizi
Characterization analysis of clinical quality mesenchymal stem cell final products obtained from different stages of the production batch for clinical practice
Yazar: İREM YILMAZ BAŞARAN
Danışman: PROF. DR. AYLA EKER SARIBOYACI
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Disiplinlerarası Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasında; çeşitli hastalıkların tedavisinde insan üzerinde kullanılmak üzere İyi İmalat Uygulamaları koşullarında üretilen umblikal kordun Wharton Jeli dokusundan izole edilmiş "Mezenkimal Kök Hücre (WJ-MKH) serilerinin farklı basamaklarından elde edilen kök hücre son ürünlerinin (deney ve kontrol grupları)" kök hücrelere özgü karakteristik özellikleri açısından immunofenotipik, genotipik, fonksiyonel, moleküler yöntemler ile analiz edilmesi ve sonuçların birbiri ile karşılaştırılması amaçlanmıştır.
Yöntem: WJ-MKH'ler izole edilerek pasaj 3'e getirilmiş, dondurularak saklanmıştır. Dondurularak saklanan hücreler çözülerek 4 gruba ayrılmıştır. Son ürünlerde morfolojik analizler, hücre sayısı ve canlılık, immunfenotipleme, tümörojenite, gen ekspresyonu analizi, potensi analizi, apoptoz ölçümü, hücre döngüsü analizi, CFSE ile canlılık ve proliferasyon analizi, büyüme faktörü analizi ve in vitro yara iyileşmesi deneyleri yapılmıştır.
Bulgular: Hücreler başarıyla son ürün haline getirilmiştir. Genotipik, fonksiyonel ve moleküler açıdan farklılıklar görülürken, morfolojik, immunfenotipik, immunosupresif açıdan anlamlı bir fark bulunmamıştır.
Sonuç: Klinik uygulamalarda WJ-MKH'lerin dondurulup çözülmesinin etkileri olabileceği, son ürün haline getirilmeden bir süre önce kültüre edilerek kendine gelme süresinin tanınmasının daha verimli sonuçlar verebileceği belirlenmiştir.
Anahtar Kelimeler: Mezenkimal kök hücre, iyi imalat uygulamaları, GMP, ileri tıbbi tedavi ürünü, hücresel tedavi, klinik kullanım, son ürün

Abstract:
Title: Detailed analysis of mesenchymal stem cell final product profiles ready to use for clinical application
Objective: In this thesis study, it was aimed to analyze in detail the phenotypic, genotypic, functional, molecular, and immunosuppressive characteristics of the final products obtained from different stages of the umbilical cord Wharton's Jelly-derived Mesenchymal Stem Cell (WJ-MSC) series produced under Good Manufacturing Practice (GMP) conditions, and to compare the results with each other.
Methods: WJ-MSCs were isolated and expanded to passage 3, then cryopreserved. The cryopreserved cells were thawed and divided into 4 groups. On the final products, morphological analyses, cell count and viability, immunophenotyping, tumorigenicity, gene expression analysis, potency analysis, apoptosis assay, cell cycle analysis, CFSE viability and proliferation analysis, growth factor analysis, and in vitro wound healing assays were performed.
Findings: The cells were successfully brought to the final product stage. While differences were observed in terms of genotypic, functional, and molecular aspects, no significant difference was found in terms of morphological, immunophenotypic, and immunosuppressive aspects.
Conclusion: It was determined that the cryopreservation and thawing of WJ-MSCs may have effects in clinical applications, and allowing a recovery period by culturing the cells before reaching the final product stage may yield more efficient results.
Keywords: Mesenchymal stem cell, good manufacturing practices, GMP, advanced therapy medicinal product, ATMP, cellular therapy, clinical use, final product