Küçük hücreli dışı akciğer karsinomlarında BRAF ve HER2 mutasyonlarının immunhistokimyasal analizi ve klinikopatolojik parametrelerle ilişkisi
Immunhistochemical analysis of braf and HER2 mutations in small cell lung carci̇nomas atheir nd relationship with clinical-pathological parameters
Yazar: ESİN YİĞİTBAŞI
Danışman: YRD. DOÇ. NESİBE KAHRAMAN ÇETİN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Cerrahi-akciğer = Surgery-lung ; Karsinoma-küçük hücreli olmayan-akciğer = Carcinoma-non small cell-lung ; Mutasyon = Mutation ; Patoloji = Pathology ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Akciğer kanseri tüm dünyada erişkinlerde en sık görülen kanser türü olup, gelişmiş ülkelerde tüm kanserlerin %24'ünü, kansere bağlı ölümlerin de %20'sini oluşturmaktadır. Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri (KHDAK) tüm akciğer kanserlerinin yaklaşık %80'ini oluşturur. KHDAK'ları arasında en sık görülen histolojik alt tipler Skuamöz Hücreli Karsinom (SHK) ve Adenokarsinom (ADK)'dur. Bu farklı histolojik grup tümörlerin tedavisinde kemoterapi ve radyoterapiye duyarlılık açısından biyolojik olarak farklı davranışlar gözlenir. Artan moleküleryöntemlerin ışığında, HER2 ve BRAF da dahil olmak üzere akciğer kanserlerinin patogenezine katkıda bulunan birçok onkojenik sürücü mutasyonunun saptanmasında ilerleme kaydedilmiştir. Bu çalışmada , KHDAK'larda HER2 ve BRAF mutasyon profilinin belirlenmesi, aynı zamanda BRAF ve HER2 immunhistokimya (İHK)'sal boyanma sonuçlarının demografik ve histopatolojik veriler ile karşılaştırılması amaçlanmıştır.
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Tıbbi Patoloji Anabilim Dalı'nda KHDAK tanısı alan 121 olguya ait akciğer rezeksiyon materyali çalışmaya alınmış;olguların demografik ve histopatolojik verileri arşiv raporlarından elde edilmiştir. Olguların tamamına İHK'sal olarak HER2 ve BRAF boyaları uygulanmış, bunların 50'sinde eş zamanlı olarak moleküler yöntemle BRAF ve HER2 mutasyonu çalışılarak sonuçlar karşılaştırılmıştır.
Olguların 108'i (%89,3) erkek, 13'ü (%10,7) kadındı. Ortalama yaş 65,5 (%9,48) idi. Olguların 65'i (%53,7) SHK, 52'si (%43) ADK, 4'ü (%3,3) Adenoskuamöz Karsinom tanılıydı. Moleküler yöntemle BRAF çalışılan 50 olgunun 2'sinde (%4) mutasyon tesbit edildi. Bu 2 olgunun 1'i İHK'al olarak +3, diğeri +1 pozitif boyandı. FISH yöntemiyle HER2 çalışılan 50 olgunun 5'i (%10) pozitif, 45'i (%90) negatifti. 5 olgunun İHK'sal HER2 boyanmasında 1'inde +2; 1'inde +1, 3'ünde 0 (sıfır) boyanma bulundu. BRAF ve HER2 mutasyonlarınınİHK'sal yöntemle analizlerinin karşılaştırılmasında anlamlı ilişki bulunmadı(p=0,21), (p=0,109).Moleküler BRAF ve HER2 pozitifliği saptanan olguların tümü histolojik olarak ADK morfolojisindeydi. BRAF ve HER2 mutasyonları arasında anlamlı bir ilişki bulunmamış olup, hiçbir hastada bu iki mutasyonun beraberliği tesbit edilmedi (p=0,63).Ayrıca İHK'sal BRAF ve HER2 pozitifliği ile olgulara ait yaş, cinsiyet, tümör lokalizasyonu, tümör boyutu, tümörün ana bronşa uzaklığı, tümöre karşı oluşan inflamatuar yanıt, nekroz, plevral invazyon, lenfovasküler invazyon, metastatik lenf nodu parametreleri arasında her biri için ayrı ayrı analiz yapıldı, anlamlı bir ilişki bulunmadı. ADK alt tip dağılımına bakıldığında ise BRAF mutasyonu en sık lepidik baskın tipte saptandı. Ayrıca İHK'sal BRAF ile lepidik baskın tip ADK arasındaki ilişki analizinde de sonuç istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p=0,01). 
Akciğer kanseri gelişimi çok basamaklı bir süreç olup, birçok genetik değişiklik tanımlanmıştır. Günümüzde KHDAK'ların insidansı ve moleküler yapısı bakımından toplumlar arasında farklılıklar görülmektedir.  Çalışmamızda en sık tümöral alt tip SHK olup, erkek cinsiyette baskınlık saptanmıştır. Ülkemizde KHDAK'ların mutasyon profiline dair yeterli veri bulunmamakta olup, tedavi protokolleri Avrupa ve ABD verilerine göre düzenlenmektedir. Bu yüzden KHDAK'ların moleküler verilerinin oluşturulması, tanı ve tedavi stratejilerinin belirlenmesi ayrıca tedavi başarısının artırılması bakımından önemlidir. Çalışmamızda BRAF mutasyonu oranı literatür ile uyumlu aralık içerisinde olup, HER2 mutasyonu ise literatürde belirtilen oranların biraz üzerinde saptanmıştır. Bu çalışma KHDAK tanılı Türk hastalarda BRAF mutasyonu ve HER2 gen amplifikasyonunun değerlendirildiği az sayıdaki çalışmalardan biri olma özelliği taşımaktadır.Akciğer kanseri alt tipleri için hedef tedavilerin gerçek yanıt oranını ve en iyi hedeflenmiş terapileri belirlemek için daha geniş vaka serili çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Lung cancer is the most common type of cancer in adults worldwide, accounting for 24% of all cancers in developed countries and 20% of cancer-related deaths. Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) accounts for about 80% of all lung cancers.The most common histological subtypes among NSCLCs are squamous cell carcinoma (SCC) and adenocarcinoma (ADC). In the treatment of these different histological group tumors, biologically different behaviors are observed in terms of susceptibility to chemotherapy and radiotherapy. In light of increased molecular methods, progress has been made in detecting many oncogenic driver mutations that contribute to the pathogenesis of lung cancers, including HER2 and BRAF. In this study , it was aimed to determine the HER2 and BRAF mutation profile in NSCLCs and also to compare the results of BRAF and HER2 immunhistochemical (İHC) staining with demographic and histopathological data.
In the Medical Pathology Department of Aydin Adnan Menderes University, lung resection material of 121 patients diagnosed as NSCLC was taken into the study; demographic and histopathological data of the patients were obtained from archival reports. In all cases, HER2 and BRAF dyes were applied, and in 50 of them, BRAF and HER2 mutations were studied simultaneously by molecular method and the results were compared.
Of the cases, 108 (89.3%) were male and 13 (10.7%) were female. The median age was 65.5 (9.48%). Of the cases, 65 (53.7%) were diagnosed with SCC, 52 (43%) were diagnosed with ADC, and 4 (3.3%) were diagnosed with Adenosquamous Carcinoma. Mutations were detected in 2 (4%) of the 50 patients studied BRAF by molecular method. Of these 2 cases, 1 was +3 positive and the other was +1 positive. Of the 50 cases studied with FISH method HER2, 5 (10%) were positive and 45 (90%) were negative. In the IHC HER2 staining of 5 cases, 1 had +2, 1 had +1, and 3 had 0 (zero) staining. No significant differences were found in the comparison of İHC analysis of BRAF and HER2 mutations (p=0.21), (p=0.109). All of the patients with molecular BRAF and HER2 positivity were histologically in ADC morphology. There was no significant association between BRAF and HER2 mutations and no correlation between these two mutations was found in any patient (p=0,63).The age, sex, tumor localization, tumor size, tumor distance, inflammatory response to tumor, necrosis, pleural invasion, lymphovascular invasion and metastatic lymph node parameters of the patients were analyzed separately and there was no significant relationship between the positivity of IHC BRAF and IHC HER2.The BRAF mutation was most commonly found in the lepidic dominant type when looking at the ADC subtype distribution. In addition, the results were statistically significant in the analysis of the relationship between IHC BRAF and lepidic dominant type ADC (p=0,01).
The development of lung cancer is a multi-step process and many genetic changes have been identified. Today, there are differences between societies in terms of the incidence and molecular structure of NSCLCs.  In our study, the most common tumoral subtype was SCC and male sex dominance was determined. There is not enough data on the mutation profile of NSCLCs in our country and treatment protocols are regulated according to European and US data. Therefore, the creation of molecular data of NSCLCs, identification and treatment strategies are also important in terms of increasing treatment success. In our study, the rate of BRAF mutation was in the range consistent with the literature, while the HER2 mutation was found to be slightly above the rates indicated in the literature. This study is one of the few studies evaluating BRAF mutation and HER2 gene amplification in Turkish patients with NSCLC.More extensive case series studies are needed to determine the true response rate of target treatments for lung cancer subtypes and the best targeted therapies.