Üyte kliniği'ne başvuran hastaların serum AMH değerleri ile multinükleus embriyo görülme sıklığı arasındaki ilişki
Does serum AMH level affect the incidence of multinuclear embryos in icsi cycles?
Yazar: SÜMEYYE MERMİ
Danışman: PROF. NAFİYE YILMAZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Ankara Bilkent Şehir Hastanesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Gebelik = Pregnancy ; Yardımcı üreme teknolojileri = Assisted reproduction technologies ; Üreme = Reproduction ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Amaç: Çalışmamızda infertil hastalarda serum AMH düzeyinin multinükleus
embriyo görülmesi ile ilişkisinin gösterilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: Çalışma kapsamında hastanemiz ÜYTE Kliniği'ne 2018-
2020 yılları arasında 19-45 yaş arası male faktör, kötü over rezervi, açıklanamayan
infertilite, birden fazla endikasyon (male faktör + kadın faktör) ve diğer nedenler ile
başvuran hastaların 1153 siklus sonucu retrospektif olarak analiz edildi. AMH değeri
olmayan hastalar çalışmaya dâhil edilmedi. En az bir MLN embriyo olan sikluslar
çalışma grubu (Grup 1)(n=237), MLN olmayan sikluslar kontrol grubu (Grup
2)(n=651) olarak tanımlandı.
Çalışmaya dâhil edilen 888 siklusun AMH değerleri ve MLN embriyo
görülme durumları kategorize edildi. Bununla beraber hastaların yaş, VKİ, infertilite
nedeni, sperm analizi, E2, FSH, LH, AFC, ovulasyon indüksiyon protokolü, toplam
elde edilen oosit sayısı, M2 oosit sayısı, 2PN embriyo sayısı, denüdasyon süresi,
multinükleus embriyo varlığı, Beta hCG değeri sonuçları, klinik gebelik sonuçları
değerlendirildi.
Elektronik dosya sisteminden elde edilen verilerin analizinde SPSS 11.5
programından faydalanılmış olup bağımlı nitel değişkene etki eden risk faktörlerini
belirlemek için ise Tek ve Çok Değişkenli Lojistik Regresyon analizleri kullanıldı.
İstatistiksel anlamlılık düzeyi 0,05 olarak alındı. Nicel değişken bakımından iki
kategoriye sahip nitel değişkenin kategorileri arasında fark olup olmadığına, normal
dağılım varsayımları sağlanmadığı için Mann-Whitney U testi kullanılarak bakıldı.
Bulgular: Çalışmamızda toplam 888 ICSI siklusu incelendi. Kadın yaşı ve
VKI ortalamaları sırasıyla 32,22 ± 5,29 ve 25,05 ± 4,29 olarak tespit edildi.
Çalışmamızda ICSI endikasyonu; açıklanamayan infertilite olan hasta yüzdesi %21,3
(n=189), male faktör olan hasta yüzdesi %35,2 (n=312), DOR olan hasta yüzdesi
%30,2 (n=268), diğer olan hasta yüzdesi %6,1 (n=55) iken, birden fazla endikasyon
olan hasta yüzdesi %7,2 (n=64) olarak tespit edildi.
Hastaların semen değerlendirmesinde a+b motil sperm % ortalaması 23,79 ±
16,96 iken sperm morfolojisi Kruger kriterlerine göre değerlendirildiğinde, sperm
analizi yapılan hastaların %29,4'ünde (n=236) Kruger < %4, %70,6'sında (n=566)
Kruger > %4 olarak tespit edildi.
Çalışmamızda bazal E2, bazal FSH, bazal LH değerleri ortalamaları sırasıyla
44,80 pg /ml ± 25,68, 8,06 IU/L ± 3,33, 6,10 IU/L ± 3,40 olarak tespit edildi.
Çalışmamızda bazal AFC ortalaması ise 8,82 ± 4,05 olarak tespit edildi.
AMH değeri <1 ng /ml olan hasta yüzdesi %31,0 (n=275), 1-3,5 ng /ml
aralığında olan hasta yüzdesi %45,7 (n=406), 3,5-5 ng/ml aralığında olan hasta
yüzdesi %11,3 (n=100) ve >5 ng /ml olan hasta yüzdesi ise %12,0 (n=107) olarak
tespit edildi.
Katılımcıların %7,2'sinin indüksiyon protokolü agonist protokol(n=64) iken,
%86,6'sının antagonist protokol(n=769) , %6,2'sinin ise mikrodoz olarak tespit
edildi (n=55) .
Hastalara ait elde edilen ortalama oosit sayısı 7,39 ± 5,25, matür oosit oranı
ortalaması %76 ± 2,6, denüdasyon süresi ortalaması ise 146,05 dk ± 77,43 olarak
tespit edildi.
Siklusların %73,3'ünde MLN yok iken (n=651) %26,7'sinde en az bir adet
MLN embriyo tespit edildi. (n=237)
Çalışmada AMH nicel değişken olarak alınıp tek başına MLN varlığına olan
etkisine lojistik regresyon ile bakıldığında anlamlı risk faktörü olarak tespit edildi
(p<0,001). AMH'nin bir birim artması MLN varlığı riskini 1,120 kat arttırdığı tespit
edildi.
Yapılan tek değişkenli lojistik regresyon analizi sonuçlarına bakıldığında
AMH, kadın yaşı, a+b motil sperm %, sperm morfolojisi, bazal FSH, bazal AFC,
toplam elde edilen oosit sayısı, matür oosit oranı ve denüdasyon süresi değişkenleri
anlamlı risk faktörleri olarak bulunmuş ve çok değişkenli lojistik regresyon analizine
dâhil edildi.
Yapılan çok değişkenli lojistik regresyon sonuçlarına göre sperm morfolojisi,
toplam elde edilen oosit sayısı, matür oosit oranı ve denüdasyon süresi değişkenleri
birlikte anlamlı bulundu (sırasıyla p=0,041, p<0,001, p=0,034 ve p=0=005).
Sperm morfolojisi Kruger Kriterleri'ne göre değerlendirildiğinde; Kruger <
%4 olması MLN riskini 1,576 kat arttırdığı tespit edildi. Elde edilen oosit sayısının
bir birim artması ise MLN varlığı riskini 1,106 kat arttırdığı tepit edildi. Ayrıca
matür oosit oranının bir birim artması MLN riskini 2,615 kat artırırken, denüdasyon
süresinin 1 dk artması ise MLN riskini 0,996 kat azalttığı tespit edildi. 
hCG pozitifliği ve klinik gebelik açısından MLN embriyo/total embriyo
yüzdesinin ilişkisine bakıldı ve iki değişken için de anlamlı fark bulundu (sırasıyla
p=0,007 ve p=0,010). hCG pozitifliği görülen grupta MLN embriyo/total embriyo
oranı ortalaması %35 ± 2,1 iken hCG pozitifliği izlenmeyen grupta MLN
embriyo/total embiyo oranı ortalaması %47 ± 2,9 olarak tespit edildi. Klinik gebelik
görülen grupta MLN embriyo/total embriyo oranı ortalaması % 34 ± 0,18 iken klinik
gebelik izlenmeyen grupta MLN embriyo/total embriyo oranı ortalaması % 47 ± 0,30
olarak tespit edildi. Çalışmamıza göre, bir siklusta MLN embriyo görülme yüzdesi
arttıkça hCG pozitifliği ve klinik gebelik oluşumunun azaldığı tespit edildi.
Sonuç: Multinükleasyon, birden fazla çekirdek içeren blastomer olarak
tanımlanmaktadır ve embriyoda MLN varlığı, kötü embriyo gelişimi ve istenmeyen
ÜYTE sonuçları ile ilişkili bulunmuştur. MLN embriyo tespitinin yapılması daha
yüksek oranda gebelik ve canlı doğum eldesi için kritiktir, embriyoda MLN varlığı
için birçok mekanizma öne sürülse de henüz tam olarak mekanizması
keşfedilememiştir. MLN embriyo oluşumunu tedavi öncesi öngörebilecek
parametreler yüksek oranda gebelik ve canlı doğum eldesi için oldukça önemlidir.
Bulduğumuz sonuçlar bir uç nokta olarak serum AMH seviyeleri ile MLN
ilişkisini ve bu durumun embriyo kalitesi ve gebelik oranı üzerindeki etkisini
göstermiştir. Verilerimize göre, serum AMH seviyelerinin MLN embriyo için
öngörücü bir belirteç olarak kullanılabileceği tespit edildi. Bu çalışma serum AMH
değeri ile MLN embriyo görülme ilişkisini tanımlayan ilk çalışmadır. Retrospektif
bir araştırma olması çalışmayı kısıtlayan bir yöndür. Çalışmamız ileride yapılacak
olan daha kapsamlı klinik çalışmalara öncü olacaktır.
Anahtar Kelimeler: MLN, AMH, yardımcı üreme teknikleri, klinik gebelik oranı

Abstract:
Objective: In our study, we aimed to show the relationship between serum
AMH levels and the appearance of a multinucleus embryo in infertile patients.
Materials And Methods: Within the scope of the study, the results of 1153
cycles of patients between ages of 19-45 who applied to our hospital's in ART Clinic
between 2018-2020 for male factor, poor ovarian reserve, unexplained infertility,
multiple indications (male factor + female factor) and other reasons were analyzed
retrospectively. Patients with no AMH value were excluded from the study.
Cycles with at least one MLN embryo were defined as the study group
(Group 1) (n = 237), cycles without MLN as the control group (Group 2) (n = 651).
AMH values ​​and MLN embryo occurrences of 888 cycles included in the
study were categorized. However, patients' age, BMI, cause of infertility, sperm
analysis, basal E2, FSH, LH, AFC, ovulation induction protocol, total oocyte count,
M2 oocyte count, 2PN embryo count, denudation time, presence of multinucleus
embryo, Beta hCG value results, clinical pregnancy outcomes were evaluated.
SPSS 11.5 program was used in the analysis of the data obtained from the
electronic file system, and Univariate and Multivariate Logistic Regression analyzes
were used to determine the risk factors affecting the dependent qualitative variable.
Statistical significance level was taken as 0.05. Whether there is a difference between
the categories of the qualitative variable with two categories in terms of the
quantitative variable was examined using the Mann-Whitney U test, since the
assumptions of normal distribution were not provided.
Results: We searched for 888 ICSI cycle totally. Age and BMI avarage were
diagnosed as 32,22 ± 5,29 ve 25,05 ± 4,29 respectivel. ICSI endication was detected
as; unexplained infertilty %21,3 (n=189), male factor %35,2 (n=312), being DOR
%30,2 (n=268), other patient ratio %6,1 (n=55), endicatıon more than one as %7,2
(n=64)
The avarage of a+b motil sperm in the sperm evaluation is 23,79 ± 16,96. If
the evaluation of sperm morphology according to Kruger criteria is done; %29,4
(n=236) Kruger < %4 and %70,6 (n=566) Kruger > %4 was found.
Basal E2, basal FSH, basal LH values avarages are found as 44,80 pg /ml ±
25,68; 8,06 IU /L ± 3,33; 6,10 IU/L ± 3,40 respectively in our study. In our study the
avarage of AFC was found as ise 8,82 ± 4,05
Number of patients according to AMH values are categorized as follows;
AMH value <1 ng/ml are %31,0 (n=275), AMH value between 1-3,5 ng/ml are
%45,7 (n=406), AMH value between 3,5-5 ng/ml are %11,3 (n=100) ve AMH>5
ng/ml are %12,0 (n=107) .
The induction protocols of participants are; %7,2 agonist protokol(n=64) ,
%86,6 antagonist protokol(n=769) and %6,2 microdoses.(n=55). Also the avarage
od oocyte numbers were detected as 7,39 ± 5,25, the avarage of mature oocyte ratio
was %76 ± 2,6, and avarage of denüdation time was 146,05 ± 77,43 minutes.
While %73,3 of the patients did not habe MLN, at least one MLN embryo
was detected im %26,7.
In the study, AMH was taken as a quantitative variable and its effect on the
presence of MLN alone was found to be a significant risk factor by logistic
regression. (p<0,001). One unit increase of AMH increases the risk of MLN
existence by 1,120 times.
Considering the results of univariate logistic regression analysis, the variables
of AMH, female age, a + b motile sperm%, sperm morphology, basal FSH, basal
AFC, total obtained oocyte count, mature oocyte ratio and denudation time were
found to be significant risk factors and included in the logistic regression analysis.
According to multivariate logistic regression results, the variables of sperm
morphology, total number of oocytes obtained, mature oocyte ratio and denudation
time were found to be significant together.
The presence of sperm morphological abnormality increases the risk of MLN
1.576 times. One unit increase in the total number of obtained oocytes increases the
risk of MLN presence by 1.106 times. In addition, one unit increase in the mature
oocyte ratio increases the MLN risk 2,615 times, while 1 minute increase in
denudation time decreases the MLN risk 0.996 times.
In terms of hCG positivity and clinical pregnancy, it was examined whether
there was a difference in terms of MLN embryo / total embryo ratio and a significant
difference was found for both variables. (respectively p=0,007 ve p=0,010). The
mean MLN embryo / total embryo ratio was 35 ± 2,1 in the group with hCG
positivity, while the mean MLN embryo / total embryo percentage was 47 ± 2,9 in
the group without hCG positivity. The mean MLN embryo / total embryo ratio was
34 ± 0,18 in the group with clinical pregnancy, while the mean MLN embryo / total
embryo percentage was 47 ± 0,30 in the group without clinical pregnancy. It has
been determined that as the percentage of MLN embryo increases in a cycle, hCG
positivity and clinical pregnancy formation decrease.
Conclusion: Multinucleation is defined as a blastomer containing more than
one nucleus and the presence of MLN in the embryo has been associated with poor
embryo development and undesirable ART results. Detection of MLN embryos is
critical for a higher rate of pregnancy and live birth. Although many mechanisms
have been proposed for the presence of MLN in the embryo, the exact mechanism
has not been discovered yet. Parameters that can predict MLN embryo formation
before treatment are very important for high pregnancy and live birth.
Our results determine the relationship between AMH levels and MLN as an
extreme point and the effect of this on embryo quality and pregnancy rate. According
to our data, it has been determined that serum AMH levels can be used as a
predictive marker for MLN embryo. Our study is the first study to describe the
relationship between serum AMH value and the appearance of MLN embryos.
However, the fact that it is a retrospective study are a limitation of the study. Our
study will lead to more comprehensive clinical studies in the future.
Key words: MLN, AMH, asisted reproductive techniques, clinical pregnancy rate