Arı sütü ve buzağı serumunun sığır oositlerinin vitrifikasyonu ve olgunlaşması üzerine etkilerinin araştırılması
Effects of royal jelly and fetal bovine serum on the maturation and vitrification of bovine oocytes
Yazar: ZELİHA NECLA AKSU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ALİ GALİP ÖNAL
Mustafa Kemal Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Ziraat = Agriculture
Dizin: Arı sütü = Royal jelly ; Serum = Serum

Özet:
Bu çalışmayla amaçlanan; seruma alternatif olarak düşünülen arı sütünün oosit olgunlaştırmada kullanılarak, olgunlaştırılan oositlerin OPS vitrifikasyon yöntemiyle dondurulduktan sonra canlı kalma oranlarını ve fertilizasyon yeteneklerinin araştırılmasıdır.Çalışmanın materyalini Antakya Belediyesi'ne ve özel bir kişiye ait iki farklı mezbahaneye kesim için getirilen Siyah-Beyaz Alaca sığırlara ait ovaryumlardan elde edilen oositler oluşturmaktadır. Oositler morfolojik olarak sınıflandırılmışlar ve kaliteli olanlar in vitro olgunlaştırma ortamına (TCM-199 + % 10 (v/v) FBS + % 0,625 (w/v) arı sütü (AS5) + % 1,25 (w/v) arı sütü (AS4) + FSH (5 µg/ml) + LH (5 µg/ml) + 50 IU/mL penisilin / 50 µg/mL streptomisin) aktarılarak, 38°C sıcaklıkta %5 CO2 li atmosferde 22-24 saat inkübe edilmişlerdir. Oositler ters mikroskop (Olympus, CKX41) altında X40 oranında büyütülerek nükleer olgunlaşmaları incelenmiş ve ters mikroskoba (Olympus, CKX41) bağlı floresan ışık kaynağı ve UV filtre kullanılarak olgunlaşmalar tespit edilmiştir. Olgunlaştırma ortamlarına ilave edilen arı sütünün kontrol grubunda kullanılan seruma alternatif olabilecek ölçüde oositlerin olgunlaşması (K: % 77,8, AS4: % 64,5 ve AS5: % 74,5) üzerine etkili olduğu görülmüştür (P>0,05). Ortama ilave edilen arı sütü dondurulmuş olgunlaşmayan oositlerin olgunlaşma oranlarını olumlu yönde etkilemiş (HYC+K: % 71,4 HYC+V: % 54,3 AS5+K: % 61,2 AS5+V: % 60,8) fakat tespit edilen bu etki istatistiki olarak önemli bulunmamıştır. Ayrıca arı sütü vitrifikasyon sonrası fertilizasyonu (AS5+K: % 54,7 ve AS5+V: % 62,5) olumlu şekilde etkilemektedir.Sonuç olarak, arı sütü sığır oositlerinin olgunlaştırılması ve fertilizasyonunda seruma alternatif olma potansiyeline sahiptir. Ancak, arı sütünün oosit vitrifikasyonu açısından daha detaylı araştırılmasına ihtiyaç vardır.

Abstract:
Aim of this study was to explore the fertilization abilities and survival rates of oocytes maturated using royal jelly and cryopreserved using OPS vitrification.Oocytes, collected from the ovaries of Black-White cattles slaughtered in two different slaughterhouses in Antioch. COC?s were assessed morphologically prior to maturation and only oocytes with compact, non-atretic cumulus investment and evenly granulated cytoplasm were selected for maturation. Selected oocytes were matured in bicarbonate-buffered Medium 199 with Earle?s salts supplemented with 10% (v/v) fetal bovine serum or 0,625 % (w/v) honeybee royal jelly (RJ5) and 1,25% (w/v) honeybee royal jelly (RJ4) in the presence of FSH (5µg/ml), LH (5µg/ml) and antibiotics (50 IU/mL penicillin and 50 µg/mL streptomycin sulphate) under a humidified atmosphere of 5% CO2 at 38 °C for 22-24 h.Nuclear maturations of oocytes evaluated under inverted microscope at X40 zoom (Olympus, CKX41). Also, maturation rates evaluated using flourescent beam source and UV filters. Findings indicated that royal jelly inclusion to maturation medium has been shown to be an alternative in terms of maturation rate (C: 77,8%, RJ4: 64,5% and RJ5: 74,5%). Royal jelly inclusion to maturation medium did not significantly effect vitrified immature oocytes maturation rates (HYC+C: 71,4% HYC+Vitrification: 54,3% RJ5+C: 61,2%, RJ5+V: 60,8%), but tended to improve oocyte maturation after vitrification. Also, fertilization rates following vitrification-thawing were improved RJ5+C: 54,7% and RJ5+V: 62,5%) when royal jelly included maturation medium.In conclusion, royal jelly has the potential of being an alternative to the serum for maturation and fertilization on cattle oocytes. However, its required to make detailed researches on effect of royal jelly on oocyte vitrification.