Kafeik asit fenetil esterin hücre döngüsü kontrol noktasi proteinleri olan BUB 1 ve BUB 3 üzerine etkisinin saccharomyces cerevisiae kullanılarak incelenmesi
Investigating the effect of caffeic acid phenethyl ester on cell CYCLE checkpoint proteins bub 1 and BUB 3 BY using saccharomyces cerevisiae
Yazar: ZEYNEP NARİN AZMAN
Danışman: YRD. DOÇ. HİLAL ARIKOĞLU ; YRD. DOÇ. SULTAN YILMAZ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Bira mayası = Yeast ; Hücreler = Cells ; Kafeik asit = Caffeic acid ; Kafein = Caffeine ; Kromozomlar = Chromosomes ; Saccharomyces cerevisiae = Saccharomyces cerevisiae

Özet:
Propolis ve fenolik bileşenleri bir çok alanda araştırma konusu olmuştur. Sunulan bu çalışmada propolisin en etkili bileşenlerinden CAPE' nin etkileri Saccharomyces cerevisiae kullanılarak değerlendirilmesi amaçlanmış, hücre döngüsü kontrol noktası proteinlerini kodlayan BUB 1 ve BUB 3 genlerinin knock olduğu suşlar üzerine CAPE uygulaması yapılarak meydana gelen değişiklikler izlenerek CAPE' nin etki mekanizmasının saptanması hedeflenmiştir.
Çalışmada knock out suşların CAPE varlığında canlılıkları test edildi. Spot test ile azalan konsantrayonlarda besiyerine ekim yapılarak büyümeleri, kontrol suşu ve knock out suşlar arasındaki büyüme farklılıkları incelendi. Canlılık testi ile koloni oluşturma güçleri analiz edilen suşların daha sonra sıvı kültürlerinde büyüme eğrileri analiz edildi. FACS ölçümleri ile hücre döngülerinde CAPE' ye maruz kalmaktan kaynaklanan bir değişim olup olmadığı analiz edildi. RT PCR ile ekspresyon düzeyleri incelendi. Kromozom transmisyon doğruluğu analiz edilerek suşlar üzerinde kromozom instabilitesi test edildi.
Yapılan spot testlerin sonucunda CAPE' nin knock out suşların büyümesinde azalmaya neden olduğu gözlendi. Canlılık testi ile oluşturabildikleri koloniler sayılarak karşılaştırıldığında CAPE varlığında koloni oluşturma güçlerinin de zayıfladığı bulundu. Büyüme eğrileri analizinde bölünme hız ve sıklıklarında da azalma olduğu tespit edildi. Yapılan hücre döngüsü analiz çalışmalarından ve RT PCR bulgularından anlamlı sonuçlar elde edilemedi.
CAPE' nin birçok kanser türünü inhibe ettiği bilinmektedir. İlişkili olduğu mekanizmalar araştırmacılar tarafından incelenmeye devam etmektedir. Yapılacak ileri çalışmalar etki ettiği mekanizmaları belirleyebilecektir. CAPE' nin etki ettiği moleküler mekanizmaların bilinmesinin, ilaç alternatiflerinin araştırılıp üretilebilmesi için oldukça önemlidir.

Abstract:
Propolis and its phenolic compounds have been subjected to many studies. In this study our aim was to investigate the effect of propolis' most effective compound CAPE on cell cycle checkpoint proteins BUB 1 and BUB 3, and the effect on chromosome instability which is a hallmark of cancer cells by using Saccharomyces cerevisiae as a model organism.
In this study we tested the viability of knock out S. cerevisiae strains on CAPE+ and CAPE- media. We use spotting assay to investigate the growth of the cells in CAPE treatment. The ability of colony formation had been investigated by viability assay and then test the growth curve of strains in liquid media. FACS measurements showed the alterations in cell cycle. Gene expressions investigated by RT PCR. We analyzed chromosome transmission fidelity for test chromosomal instability.
According to our result of spotting assay, CAPE inhibits the growth of knock out strains. When we counted the number of the colonies that knock out strains, we saw that CAPE effects on colony formation. In cell cycle analyzes we find that the rate of cell division and rate reduce with CAPE. Cell cycle analyzes and RT PCR results have no significant results.
It is known that CAPE inhibits many cancer species. The related mechanism not clear so researchers focus on this. Next studies can help understand the molecular mechanism of CAPE effectiveness and medicine technology.