Akciğer kanseri hücre hattında cetuximab, cisplatin ve melatonin uygulamalarının p53 geni ve apoptoz aktivasyonu üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of cetuximab, cisplatin and melatonin administration on p53 gene and apoptosis activations in lung cancer cell lines
Yazar: CİHAN GÜR
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SEÇKİN ÖZKANLAR
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Apoptozis = Apoptosis ; Genler-P53 = Genes-P53 ; Hücre dizisi = Cell line ; Melatonin = Melatonin ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Setuksimab = Cetuximab ; Sisplatin = Cisplatin

Özet:
Amaç: Akciğer kanserinde kemoterapötiklere karşı gelişen dirençten dolayı, akciğer kanseri nedenli ölüm oranları her geçen yıl biraz daha yükselmektedir. Kemoterapötiklerden kaynaklanan toksik etkiyi elimine edebilmek için son yıllarda antioksidan maddelerin kullanımı yaygınlaşmıştır. Bu çalışmada anti-büyüme faktörü ajanı olan cetuximabın ve kanser tedavisinde sıklıkla başvurulan cisplatinin, melatonin ile kombine kullanımlarında kanser hücreleri üzerinde oluşturdukları apoptotik ve sitotoksik etkilerinin araştırılması amaçlandı.
Materyal ve Metot: Bu çalışmada, akciğer kanseri hücre hattına (A549) kontrol grubu ile anti-kanserojenik maddelerin kombinasyon gruplarına (melatonin, cisplatin, cetuximab, cisplatin-ceuximab, melatonin-cisplatin-cetuximab, melatonin-cisplatin, melatonin-cetuximab) etken dozların uygulanmasının ardından MTT analizi yapıldı. Daha sonra sırasıyla, ICC boyama metodu ile pro-apoptotik Bax immün pozitifliği ve RT-PCR metodu ile de P53 ve MDM2 gen ekspresyon seviyeleri belirlendi.
Bulgular: Çalışma bulguları sonucunda melatoninin hücrede önemli bir sitotoksik etkiye sahip olmadığı belirlenirken, özellikle cisplatin ve cetuximab uygulanan gruplarda sitotoksik etkinin olduğu görüldü. RT-PCR analizi sonuçlarında, melatonin, cisplatin ve melatonin-cisplatin uygulanan gruplarda yüksek bir P53 gen ekpresyonu belirlendi. Benzer olarak cisplatin, melatonin-cetuximab ve melatonin-cisplatin-cetuximab uygulamaları yapılan gruplarda MDM2 ekspresyon düşüşü olduğu belirlendi. Pro-apoptotik Bax immün boyamasında ise cisplatin, cetuximab, melatonin-cetuximab ve melatonin-cisplatin uygulamalarının apoptotik aktivitede artışa sebep olduğu belirlendi.
Sonuç: Çalışma sonuçları; melatonin, cisplatin ve cetuximab ile bunların kombine uygulamalarının P53 ve MDM2 gen ekspresyonlarındaki apoptotik aktiviteyi arttıracağını göstermektedir. Melatonin, cisplatin ve cetuximab gruplarının etkileri göz önüne alındığında melatoninin kanser tedavisinde kullanılabilecek bir ajan olabileceği sonucuna varılabilir.

Abstract:
Aim: Because of the development of resistance against chemotherapeutics in lung cancer, the mortality rate caused by lung cancer is increasing in every year. Use of antioxidant compounds has been become widespread to prevent the toxic effect due to chemotherapeutics. In this study, the apoptotic and cytotoxic effects of cetuximab, as an anti-growth factor, has been aimed to investigate along with the combination of cisplatin and melatonin on the cancer cells.
Material and method: In this study, MTT analysis was performed to the lung cancer lines (A549) in control group and combination groups of anti-cancerogenic compounds (melatonin, cisplatin, cetuximab, cisplatin-ceuximab, melatonin-cisplatin-cetuximab, melatonin-cisplatin, melatonin-cetuximab) after the administration. Afterwards, pro-apoptotic Bax immune positivity by ICC and levels of P53 and MDM2 gene expression were determined in an order. 
Results: It was observed that melatonin had no significant cytotoxic effect on the cell while cisplatin and cetuximab groups had cytotoxic effects based on the results of study. A high P53 gene expression was detected in melatonin, cisplatin and melatonin-cisplatin administration groups by the results of RT-PCR analysis. Similarly, MDM2 expression level was found to be low in cisplatin, melatonin-cetuximab and melatonin-cisplatin-cetuximab administrated groups. Cisplatin, cetuximab, melatonin-cetuximab and melatonin-cisplatin administrations had the effect of increasing apoptotic activity in proapoptotic Bax immune staining. 
Conclusion: As a result, administrations of melatonin, cisplatin and cetuximab and the combination of these compounds may increase the apoptotic activity of P53 and MDM2 gene expressions. When the effects of melatonin, cisplatin and cetuximab groups have been evaluated, it can be concluded that the melatonin compound be used in the treatment of cancer.
Key Words: