Porphyromonas gingivalis lipopolisakkaritinin insan gingival fibroblastları üzerine etkisi
The effect of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide on the human gingival fibroblasts
Yazar: ŞERİFE BUKET BOZKURT
Danışman: DOÇ. DR. SEMA S. HAKKI ; PROF. DR. YUSUF DURAK
Selçuk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry ; Genetik = Genetics ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides

Özet:
Bu çalışmada; Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis)'in önemli virülans faktörlerinden Lipopolisakkarit (LPS)'sinin gingival fibroblast (GF)'lerin, proliferasyonu, hücre canlılığı ayrıca immün modülasyon ve bağ dokusu organizasyonunda önemli rolü olan sitokinlerin, enzimlerin mRNA ekspresyonları üzerine etkisi incelendi.Farklı konsantrasyonlarda P. gingivalis LPS'siyle muamele edilen GF'lerin hücre canlılığı 24. ve 96. saatlerde 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) analiziyle; hücre proliferasyonu ise 3, 5, 8 ve 12. günlerde yapılan hücre sayımlarıyla gerçekleştirildi. Porphyromonas gingivalis LPS'siyle muamele edilen GF'ler üzerinde proenflamatuvar sitokinlerin yanı sıra ekstrasellüler matriks (EM) yıkımından sorumlu olan matriks metalloproteinaz (MMP)'ler ve bu enzimlerin doku inhibitörleri olan (Tissue inhibitors of metalloproteinase; TIMP)'ların mRNA ekspresyonlarına olan etkisi quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR) ile incelendi. Bu amaçla farklı konsantrasyonlarda LPS muamelesi sonrası 3. ve 8. günlerde RNA izole edilerek cDNA sentezi gerçekleştirildi.Hücre canlılığının değerlendirildiği MTT sonuçlarına göre hem 24 hem de 96. saatte P. gingivalis LPS'sinin farklı konsantrasyonlarda kontrol grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık tespit edilmedi (p>0.05). Proliferasyon deneylerinde ise 3, 5 ve 12. günlerde tüm konsantrasyonlarda kontrol grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bir azalma olduğu tespit edildi (p<0.05).Bu sonuçlar kısa dönemde olmamakla birlikte, uzun dönemde P. gingivalis LPS'sinin hücrelerin proliferasyonunu baskıladığını gösterdi. Yapılan Q-PCR sonuçlarına göre de doza bağımlı bir şekilde P. gingivalis LPS'sinin interlökin (IL)-6, IL-8 mRNA ekspresyonunu artırdığı, MMP-1, 2, 3, TIMP-1 ve TIMP-2'de ise doza bağımlı olarak değişik günlerde farklı mRNA ekspresyonları olduğu tespit edildi.Elde edilen sonuçlar P. gingivalis LPS'sinin GF'lerde proenflamatuvar sitokinlerin mRNA ekspresyonlarını regüle ettiğini, yıkım ve yıkımın inhibisyonundan sorumlu enzimlerin ekspresyonlarını da etkilediğini göstermiştirAnahtar Kelimeler: Porphyromonas gingivalis, Lipopolisakkarit, Gingival Fibroblast , Quantitative PCR.

Abstract:
In this study, the effects of Lipopolysaccharide (LPS), one of the important virulence factors of Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis), on the gingival fibroblast (GF) proliferation, cell survival as well as mRNA expressions of enzymes and cytokines that have significant roles in immune modulation and connective tissue organization, were investigated.Cell survival rate of GFs that were treated with different P. gingivalis LPS concentrations were evaluated with 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) at 24 th and 96 th hours. Cell proliferation was determined by counting cells on days 3, 5, 8 and 12. The effects of Porphyromonas gingivalis LPS on GF were determined with quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR) analysis of mRNA expressions of matrix metalloproteinases (MTTs) that are responsible from extracellular matrix (EM) destruction and the tissue inhibitors of metalloproteinase enzymes (TIMPs) in addition to the determination of their effects on proinflammatory cytokines. Thus, total RNAs from GFs with different concentrations of LPS treatments were isolated on days 3 th and 8 th and cDNAs were synthesized on these RNAs.According to the results of MTT assay where cell survivals were evaluated, no statistically significant difference from the control group was detected on either 24 th or 96 th hours after treatments with different concentratios of P. gingivalis LPS (p>0.05). On the other hand, proliferation assays conducted on days 3, 5 and 12 revealed statistically significant (p<0.05) decrease in all treatment concentrations as compared with the control group.These results have shown that while P. gingivalis LPS has no short term negative effects, on long term it suppresses cell proliferation. According to Q-PCR results, P. gingivalis LPS has increased mRNA expression of interleukin (IL)-6 and IL-8 while has resulted in varying MMP-1, 2, 3, TIMP-1 and TIMP-2 mRNA expression levels in different treatment days, in a dosage-dependent manner.In conclusion, P. gingivalis LPS treatments of GFs have regulatory effects on mRNA expressions of proinflammatory cytokines while it also influences the expressions of the enzymes responsible from destruction as well as the inhibitors of destruction.Key Words: Porphyromonas gingivalis, Lipopolysaccharide, Gingival Fibroblast, Quantitative PCR.