Küçük hücreli dışı akciğer kanserli olgularda mediastinal lenf nodu diseksiyonu ve sitotoksik T lenfosit inhibitör reseptör ilişkisi
The effect of mediastinal lymph node dissection on inhibitory receptor expression of cytotoxic T lymphocyte in  non-small cell lung cancer patients
Yazar: AYŞE ENGİN
Danışman: PROF. DR. ESİN ÇETİN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Antijenler = Antigens ; Apoptozis = Apoptosis ; Hücre ölümü = Cell death ; Karsinoma-küçük hücreli olmayan-akciğer = Carcinoma-non small cell-lung ; Lenf nod eksizyonu = Lymph nodes-excision ; Lenf nodları = Lymph nodes ; Neoplazmlar = Neoplasms ; T lenfositleri = T lymphocytes

Özet:
Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) kansere bağlı ölüm nedenleri arasında ilk sıradadır. Evreleme amacı ile uygulanan video yardımlı mediastinoskopik lenfadenektominin (VAMLA) sağkalımı arttırdığı gösterilmiştir. Çalışmamızda VAMLA uygulanan KHDAK hastalarında sitotoksik T (Tc) lenfositlerinin fonksiyon ve fenotipleri incelenmiştir.
       Çalışmaya VAMLA uygulanan 17 T1-4N0-2M0 KHDAK hastasıyla, 20 sağıklı birey dahil edilmiştir. Hastalarda; preoperatif periferik kan (PK), lenf nodu (LN), postop 2. hafta periferik kan örnekleri, sağlıklılarda ise PK örneği alınmıştır. Tc lenfositlerinde PD-1, CTLA-4 ve CD28 ekspresyonları, TNF- & IFN- salınımları ve sitotoksik aktiviteleri akan hücre ölçerle değerlendirilmiştir. sPD-1, sPDL-1 ve sCTLA-4 düzeyleri ELISA'yla ölçülmüştür.
	LN Tc hücrelerinde; CTLA-4, PD-1 eskpresyonunun arttığı, CD8+CD28- inhibitör hücre oranının kana kıyasla yüksek ve CD8+CD28+ aktivatör hücre oranlarında düşük izlenmiştir. KHDAK hastalarında, sağlıklılara kıyasla PK CD3+CD8+CD28+ hücre oranları daha düşük ve CD3+CD8+CD28- hücre oranları ise daha yüksekti. VAMLA sonrasına PK Tc hücrelerinde PD-1 ve CTLA-4 ekspresyonu azalmış, ancak CD28 ekspresyonu ve sitokin salınımı değişmemiştir. LN Tc lenfositlerinin TNF- ve IFN-+TNF-+ ekspresyonları PK'ya kıyasla anlamlı olarak düşüktü. Tüm gruplardaki CTLA-4 eksprese eden Tc lenfositlerinde, hem IFN- hem de TNF- salınımı baskılamıştır. PK Tc lenfositlerinde granzim A salınımı KHDAK hastalarında sağlıklı bireylere kıyasla azalmış, ancak VAMLA sonrası PK'da granzim A salınımı artmıştır. Ayrıca plazma sCTLA-4 düzeyi KHDAK'li olgularda, sağlıklı bireylere göre yüksek saptanmıştır.
	Tümörü drene eden LN'larında CD8+ Tc hücrelerinin efektör fonksiyonları azalmış, baskılayıcı fenotip ise artmıştır. VAMLA sonrasında immün kontrol noktası reseptörlerinden PD-1 ve CTLA-4'teki azalmaya paralel olarak Tc hücrelerindeki fonksiyon kaybı düzelmiştir. Tc hücrelerindeki bu etki sağkalım artışında rol oynamış olabilir. 


Anahtar kelimeler: Sitotoksik T hücre, KHDAK, VAMLA, PD-1, CTLA-4.

Abstract:
Non-small cell lung cancer (NSCLC) is leading cause of cancer-related death. Video-assisted mediastinoscopic lymphadenectomy (VAMLA) increases survival. We evaluated the phenotype and function of ctytotoxic T cells (Tc) in NSCLC patients, who underwent VAMLA.
	We included 17 T1-4N0-2M0 NSCLC patients and 20 healthy subjects. Preoperative peripheral blood, lymph node (LN), postoperative 2nd-week blood samples were taken in patients. Healthy subjects donated one blood sample. PD1, CTLA-4 and CD28 expression, TNF- & IFN- secretion, and cytotoxic activity of Tc lymphocytes were evaluated by flow-cytometry. sPD-1, sPDL-1 and sCTLA-4 was measured with ELISA.
	In LN Tc cells; CTLA-4, PD-1 expression was increased; the ratio of CD8+CD28- inhibitor cells was lower and CD8+CD28+ activator cells was higher compared to blood. In NSCLC, the ratio of CD3+CD8+CD28+ cells was lower and CD3+CD8+CD28- cells was higher in blood. After VAMLA, expression of PD-1 and CTLA-4 was reduced in blood Tc, but CD28 expression and cytokine secretion remained unchanged. The ratio of TNF- and IFN-+TNF-+ expressing Tc cells was significantly-lower in LN compared to blood. CTLA-4 expressing Tc cells secreted less IFN- and TNF- Granzyme A secretion was lower in blood Tc cells in NSCLC, but granzyme A expression increased after VAMLA. Plasma sCTLA-4 levels were higher in NSCLC.
	The effector functions of CD8+ Tc cells are reduced and suppressive phenotype is increased in tumor-draining lymph nodes. After VAMLA, the functional loss in Tc cells improved along with a decrease of PD-1 and CTLA-4 expression. This effect of VAMLA on Tc cells might contribute to its effect on survival rates. 


Key Words: Cytotoxic T cells, NSCLC, VAMLA, lymph node, PD-1, CTLA-4.