Genistein'in bıldırcın (Coturnix coturnix) testisi üzerine kısa süreli etkileri
Short-term effects of genistein on the testis of quail (Coturnix coturnix)
Yazar: SERAP EKİNCİ
Danışman: DOÇ. DR. MELİKE ERKAN
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Zooloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Fitoöstrojenlerin özellikle de genisteinin testis üzerindeki etkisi ile ilgili bir çok çalışma olmasına rağmen kuşların testis dokusu üzerindeki etkisini gösteren bir çalışma bulunmamaktadır. Buna dayanarak, çalışmamızda histolojik ve immunohistokimyasal yöntemler kullanılarak bıldırcınların testis dokusu üzerine genisteinin göstermiş olduğu etkinin açığa çıkarılması amaçlanmıştır.Çalışmada 64 adet erkek bıldırcın (Coturnix coturnix) kullanılmıştır. Hayvanlar her biri sekiz bireyden oluşan sekiz gruba ayrılmıştır. Bu gruplardan ikisini kontrol, diğer altı grubu ise deney grupları oluşturmaktadır. Kontrol grubu I'e 15 gün mısırözü yağı, kontrol grubu II'ye 30 gün mısırözü yağı verildi. Deney grubu I 15 gün 0.5 mg/kg, deney grubu II 15 gün 25 mg/kg, deney grubu III 15 gün 50 mg/kg, deney grubu IV 30 gün 0.5 mg/kg, deney grubu V 30 gün 25 mg/kg, deney grubu VI 30 gün 50 mg/kg genistein uygulanan gruplardır. Parafin bloklardan alınan kesitler, testiste meydana gelen histolojik değişikliklerin saptanması amacıyla Hematoksilen + Eosin (H + E) boyası ile boyandı. Ayrıca in situ DNA uç işaretlemesi (TUNEL) yöntemi apoptotik hücrelerin saptanması amacıyla parafin kesitlere uygulandı.Elde edilen bulgulara göre testis ağırlığı, seminifer tübül çapları, germinal epitel yükseklikleri değerlendirildi. Ayrıca histolojik ve immünohistokimyasal değerlendirmeler de yapıldı. Bu değerlendirmeler sonucunda, 15 gün 50 mg/kg genistein uygulanan deney grubundaki bireylerin testislerinde seminifer tübül çapında anlamlı bir düşüş gözlenirken, diğer tüm deney gruplarında bir değişiklik gözlenmemiştir. Ayrıca, 15 gün 50 mg/kg genistein ve 30 gün 50 mg/kg genistein verilen gruplar kendi aralarında değerlendirildiğinde seminifer tübül çapı bakımından anlamlı bir artış gözlenmiştir. 15 gün ve 30 gün genistein uygulanan deney gruplarında genistein miktarının artmasına bağlı olarak testis dokusunun histolojisinde hasar meydana gelmiştir. En belirgin olarak 30 gün 50 mg/kg genistein uygulanan grupta görülen bu hasarlar germinal epitel hücreleri arasında boşluklar meydana gelmesi ve sperm yoğunluğunun azalmasıdır. İmmünohistokimyasal değerlendirmeler sonucunda 15 ve 30 günlük deney gruplarında genistein miktarına bağlı olarak apoptotik indeksin de arttığı saptanmıştır.Yapılan histometrik, histolojik ve immünohistokimyasal değerlendirmelerin sonucuna göre genisteinin düşük dozlarda bıldırcın testisi üzerinde bir etki göstermediği fakat yüksek dozlarda ve özellikle 30 günlük uygulamalarda sperm sayısı ve testisin histolojik yapısı bakımından olumsuz etkiler gösterdiği ortaya çıkarılmıştır. Ayrıca, genisteinin düşük ve yüksek dozlarda apoptozu da teşvik ettiği belirlenmiştir.

Abstract:
Although there are a lot of studies about the effect of phytoestrogens, especially of genistein on testis, no study has been undertaken to demonstrate the effect on the testis tissue of birds. Therefore, the purpose of this study is to reveal the effects of the genistein on the testis tissue of quails using histological and immunohistochemical methods.64 male quails (Coturnix coturnix) were employed in the study. The animals were divided into eight groups containing eight individuals. Of these groups two were control groups, and the other six were experimental groups. Control group I was administered with corn oil for 15 days, and control group II for 30 days. Experimental group I was exposed to 0.5 mg/kg genistein for 15 days, experimental group II to 25 mg/kg genistein for 15 days, experimental group III to 50 mg/kg genistein for 15 days, experimental group IV to 0.5 mg/kg genistein for 30 days, experimental group V to 25mg/kg genistein for 30 days, and experimental group VI to 50 mg/kg genistein for 30 days. The sections taken from paraffin blocks were stained with Haematoxilene +Eosine (H + E) in an attempt to determine the changes occuring in the testis. Besides, in situ terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelling (TUNEL) method was applied to paraffin sections in order to determine the apoptotic cells.The weight of the testes, the diameter of the seminiferous tubules and the height of the germinal epithelium were assessed in accordance with the results obtained. Moreover, histological and immunohistochemical assessments were also performed. According to the result of these assessments, while a significant decrease was observed in the diameter of the seminiferous tubule in the testes of individuals in the experimental group that was exposed to 50 mg/kg genistein for 15 days, no change was observed in all other experimental groups. In addition, the groups which were exposed to 50 mg/kg genistein for 15 days and 30 days were assessed against each other and a significant increase was observed in the diameter of the seminiferous tubules. In the experimental groups that were exposed to genistein for 15 days and 30 days, some damages occurred in the histology of the testis tissue due to the increase in the amount of genistein. The damages which were observed most apparently in the experimental group exposed to 50 mg/kg genistein for 30 days were the occurrence of spaces between germinal epithelium cells and the decrease in the density of the spermatozoa. It was revealed in immunohistochemical assessments that in experimental groups exposed to genistein for 15 days and 30 days apoptotic index increased depending on the amount of genistein.The results of histometrical, histological and immunohistochemical evaluations indicate that exposure to genistein in lower doses has no effect on quail testis, but exposure in higher doses and especially for 30 days has negative effects on sperm count and histology of the testis. Moreover, lower and higher doses of genistein induce apoptosis.