Bazı gram-negatif bakteriyel balık patojenlerinde çevreyi algılama sisteminin incelenmesi
Investigation of quorum sensing system in some gram-negative fish pathogenic bacteria
Yazar: NURDAN NURCAN
Danışman: DOÇ. DR. AYŞEGÜL KUBİLAY
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products

Özet:
Araştırmada bakteriyel balık patojenlerinden Vibrio anguillarum (5 suş), Vibrio alginolyticus (3 suş), Pseudomonas fluorescens (3 suş), Aeromonas hydrophila (2 suş) ve Yersinia ruckeri (12 suş) izolatları kullanılmıştır. İzolatlarda öncelikle N-butanoyl-L-homoserin lakton (BHL) ve N-(3-okzododekanoyl)-L-homoserin lakton (OdDHL) sinyal moleküllerinin üretimi, Chromobacterium violaceum CV026 ve Agrobacterium tumafeciens NT1 indikatör suşları kullanılarak test edilmiştir. C. violaceum CV026 suşu kullanılarak yapılan testlerde A. hydrophila ve Y. ruckeri suşlarının BHL sinyal molekülünü ürettiğinin tespit edilirken V. anguillarum, V. alginolyticus ve P. fluorescens suşlarının ise üretmediği tespit edilmiştir. BHL sinyal molekülünü üretmeyen suşlar ve üreten suşların tamamının A. tumefaciens NT1 suşu kullanılarak yapılan testte ise OdDHL sinyal molekülünü üretebildiklerini göstermiştir. Araştırmanın sonucunda çalışılan tüm Gram negatif bakteriyel balık patojenlerinin OdDHL sinyal molekülünü üretebildikleri tespit edilmiştir. Üretmiş oldukları sinyal molekülleri aracılığıyla birbirleri ile iletişim kurmakta ve istedikleri çoğunluğa ulaştıkları anda balık için kritik gen ekspresyonlarını tetiklemektedir. Gram negatif bakteriyel balık patojenleri BHL ve OdDHL sinyal moleküllerinin tespitiyle bu moleküllere bağımlı olan biyofilm, pigment, ramnolipid, elastaz, proteaz, amilaz, hemoliz üretimi gibi çevreyi algılama sistemi tarafından kontrol edilen virülens faktörlerinin varlığı bakımından fenotipik olarak test edilmiştir.Çalışılan Gram negatif balık patojenlerinin birbirleriyle aynı ya da farklı olarak araştırılan virülens faktörlerini üretebildikleri tespit edilmiştir. V. anguillarum, V. alginolyticus, P. fluorescens suşlarının tamamının biyofilm ve pigment ürettikleri belirlenmiştir. Pigment için yapılan ikinci test olan tirozin saydamlaştırmada ise sadece P. fluorescens`in bir suşunda belirlenmiştir. P. fluorescens, A. hydrophila suşlarının ramnolipid ürettikleri belirlenmiştir. PAO1 kontrol suşuna göre daha az elastaz aktivitesine sahip olan suşlar P. fluorescens, A. hydrophila, Y. ruckeri, V. anguillarum suşlarıdır. PAO1 kontrol suşuna göre daha yüksek elastaz aktivitesine sahip olan V. alginolyticus suşlarıdır. V. anguillarum, A. hydrophila suşları ve P. fluorescens suşlarından ikisinin proteaz aktivitesi pozitifken Y. ruckeri ve V. alginolyticus suşlarında negatiftir. V. anguillarum, V. alginolyticus, P. fluorescens, A. hydrophila suşlarının amilaz testi pozitifken Y. ruckeri suşları negatiftir. V. anguillarum, P. fluorescens, A. hydrophila suşlarının hemoliz testi pozitif olarak Y. ruckeri ve V. alginolyticus suşları negatif olarak tespit edilmiştir.Bu klinik Gram negatif bakteriyel balık patojen izolatları çevreyi algılama sistemiyle organize olmakta, aynı anda etki göstermekte ve virülens faktörleriyle balıklarda çeşitli şekillerde enfeksiyonlara sebep olmaktadır.Anahtar Kelimeler: Çevreyi algılama sistemi, biyofilm, pigment, N-acyl homoserin lakton, bakteriyel balık patojenleri

Abstract:
Some Gram Negative fish pathogen bacteria in Vibrio anguillarum (5 strains), Vibrio alginolyticus (3 strains), Pseudomonas fluorescens (3 strains), Aeromonas hydrophila (2 strains) and Yersinia ruckeri (12 strains) isolates were used in this investigation. Before all else these isolates were tested for the production of N-butanoyl-L-homoserine lacton (BHL) and N-(3-okzododekanoyl)- L-homoserine lacton (OdDHL) signal molecules using indicator strains the Choromobacterium violaceum strain CV026 and the Agrobacterium tumefaciens strain NT1. V. anguillarum, V. alginolyticus and P. fluorescens strains had no BHL activity while A. hydrophila and Y. ruckeri strains had BHL activity by using bioassay strain C. violaceum CV026. Strains produce had no BHL activity and strains produce had BHL activity all A. tumefaciens NT1 strain showed using tested the produce of OdDHL signal molecules. All working in Gram Negative fish pathogen bacteria identified the produce of OdDHL signal molecules was investigated. The signal molecules of the produce via communication with each other and majority of desirable access at the same time when triggers critical gene expression for fish. Gram Negative fish pathogen bacteria identified of BHL and OdDHL signal molecules this molecules dependent which the produce of biofilm, pigment, rhamnolipid, elastase, protease, amilase and hemolysis as phenotype tested as virulence factors entity controlled of quorum sensing system.Working in Gram negative fish pathogen bacteria with each other identified alike or different virulence factors can produce has been invested. Biofilm and pigment product determined of all V. anguillarum, V. alginolyticus, P. fluorescens strains. Only one strain of P. fluorescens identified if doing secondary test which make sth transparent of thyrosine tested for pigment. P. fluorescens, A. hydrophila strains identified rhamnolipid product. According P. aeruginosa PAO1 control strain P. fluorescens, A. hydrophila, Y. ruckeri, V. anguillarum strains had less elastase activity. According P. aeruginosa PAO1 control strain V. alginolyticus strains had higher elastase activity. V. anguillarum, A. hydrophila strains and two of P. fluorescens strains are protease activity positive while Y. ruckeri ve V. alginolyticus strains were activity negative. V. anguillarum, V. alginolyticus, P. fluorescens, A. hydrophila strains were amilase activity positive while Y. ruckeri strains were activity negative. V. anguillarum, P. fluorescens, A. hydrophila strains were hemolysis activity positive while Y. ruckeri and V. alginolyticus strains were hemolysis activity negative.This clinic Gram negative fish pathogen bacteria isolate to have one's ducks in a row with quorum sensing system and adduced alike at the same time show effect and with virulence factors at fish induced cause different shape of infections.Key Words: Quorum sensing system, biofilm, pigment, N-acyl homoserine lactones, fish pathogens bacteria