Henoch schönlein purpuralı hastalarda miRNA değişimleri, renal tutulumdaki etkileri ve renal tutulumu erken dönemde belirlemedeki etkisi
The changes of miRNA in patients with henoch schönlein purpura, its effects in renal involvement and its identification in early stages of renal involvement
Yazar: BURCU SEVİCİ
Danışman: PROF. DR. SELÇUK YÜKSEL
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Böbrek hastalıkları = Kidney diseases ; Mikro RNA = Micro RNA ; Purpura = Purpura ; Purpura-Schoenlein-Henoch = Purpura-Schoenlein-Henoch ; RNA = RNA ; Vaskülit = Vasculitis ; İmmünoglobülin A = Immunoglobulin A

Özet:
Henoch-Schönlein purpurası (İmmünglobulin A vasküliti) çocukluk çağında en sık görülen ve histopatolojik olarak küçük damarlarda immünglobulin A içeren immün kompleks birikimi ile karakterize sistemik vaskülittir. IgAV hastalarının %30-50'sinde hastalık başlangıcından 4-6 hafta sonra kendi kendini sınırlayan nefrit görülür. Prognoz büyük oranda renal tutuluma bağlıdır. Hastalığın patogenezini galaktozdan yoksun IgA1 (Gd-IgA1) oluşumu, oluşan Gd-IgA1 moleküllerinin IgG molekülleri ile immünkompleks oluşumu ve bu yeni yapının kandan uzaklaştırılamaması oluşturmaktadır. Bu kompleks yapı renal mezengiumda birikir ve mezengial hücreleri aktive ederler.
MikroRNA (miRNA), genom üzerinde bulunup protein kodlamayan lokalizasyondaki RNA genlerinden ve protein kodlaması yapan ekzon veya intron lokalizasyonlarından transkripsiyonu yapılan, ancak protein translasyonu yapılmayan, işlevsel anlamda gen ekspresyonunun düzenlenmesinde rol alan tek sarmallı ve yaklaşık 22 nükleotitten oluşan fonksiyonel RNA molekülleridir. miRNA'lar, hücresel büyüme, proliferasyon, farklılaşma, yaşlanma, apoptoz, metabolizma ve immün yanıtlar gibi çeşitli işlemleri kontrol ederler. Immunglobülin A Nefropatili (IgAN) hastalarla daha önce yapılan çalışmalarda miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-877-3p, let-7b-3p
XIII
gibi miRNA'ların hastalık patogenezinde yer aldığı gösterilmiştir. Benzer biyolojik ve patolojik anormalliklere sahip IgAV'nde ise serum miRNA düzeyi ve patogenezle ilişkisinin gösterildiği bir çalışma günümüzde yoktur. Çalışmamızda IgAV hastalarında miRNA değişimini ve renal tutuluma etkisini araştırmayı amaçladık.
Çalışmaya Ocak 2019-Aralık 2019 tarihleri arasından IgAV tanısı ile tedavi edilen ve izlenen 34 hasta ile 27 sağlıklı çocuk, toplam 61 çocuk alındı. Hastaların serum örnekleri toplandı ve daha önceden belirlenmiş olan miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-155-5p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-223a-5p, miRNA-233-3p, miRNA-347, miRNA-877-3p, let-7b-3p ekspresyon düzeylerinin ölçümü yapıldı. Çalışma sonunda miRNA ekspresyon düzeyi değişimleri, IgAV tanılı hastalarda ve kontrol grubunda, başlangıçta böbrek tutulumu olmayıp izlemde böbrek tutulumu gelişen ve IgAVN tanısı alanlarla nefrit olmayan IgAV hastalarında, GİS tutulumu olan ve olmayan IgAV tanılı hastalarda ve steroid tedavisi alan IgAV hastaları ile almayanlar arasında ayrı ayrı istatistiksel olarak analiz edildi. Hasta ve kontrol grupları karşılaştırıldığında miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-155-5p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-223a-5p, miRNA-233-3p, miRNA-347, miRNA-877-3p, let-7b-3p'nin hasta grubunda kontrol grubuna göre istatistiksel anlamlı upregüle olduğu görüldü (p<0,05). Ayrıca hastaların klinikopatolojik özellikleri ve miRNA ekspresyon seviyesi değişimleri arasındaki farklılıklara bakıldı. miRNA-16-5p, IgAVN grubunda, nefrit geliştirmeyen IgAV grubuna göre istatistiksel anlamlı daha fazla upregüle olduğu görüldü (p=0,016). IgAV hastaları ve böbrek tutulumu olan IgAV hastaları karşılaştığında miRNA-17-5p ve miRNA-347'nin IgAV grubunda IgAVN grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde daha fazla upregüle olduğu görüldü (p<0,05). IgAN, IgAVN ile aynı patolojik ve biyolojik anormallikleri taşımasına rağmen miR-17-5p'nin IgAN'nde downregülasyonun, IgAVN'nde ise upregülasyonun saptanması dikkat çekici idi.
miRNA-148b-5p GİS tutulumu olan hastalarda olmayanlara göre istatistiksel anlamlı daha fazla upregüle idi (p=0,026). Tedavide steroid tedavisi alan ile sadece
XIV
nonsteroid antiinflamatuvar (NSAİİ) tedavisi alan IgAV hastaları karşılaştırıldığında ise miRNA-17-5p'nin steroid kullanmayanlarda istatistiksel olarak anlamlı şekilde daha fazla upregüle olduğu görüldü (p=0,042).
Sonuç olarak miRNA-16-5p, IgAV hastalarında nefritin erken tanısında yol gösterici olabilir. MikroRNA-17-5p'nin IgAN'nde downregülasyonun, IgAVN'nde ise upregülasyonun saptanması patogenezdeki farklılıkların ortaya çıkmasını sağlayabilir. IgAV ve miRNA'lar ile ileride yapılacak çok merkezli ve daha fazla olgu sayısı içeren çalışmalar ile miRNA'ların IgAV ve IgAVN patagonezindeki yeri daha da iyi anlaşılabilir.

Abstract:
Henoch Schönlein Purpura (Immunoglobulin A Vasculitis) is the most common form of immune complex deposition in childhood and histopathologically it is characterized  by a systemic vasculitis that involves small blood vessels that contain the deposition of immunoglobulin A. In patients with immunoglobulin A vasculitis, 30-50% develop self-limiting nephritis 4-6 weeks after the onset of the disease. The prognosis depends mainly on the degree of renal involvement. The pathogenesis of the disease is related to the formation of IgA (Gd- IgA1) that is devoid of galactose. The formation of Gd-IgA1 molecules form complex with IgG molecules and this new structure is not cleared from the blood circulation. This complex structure deposits in the renal mesengium and activates the mesengial cells.
              The microRNA (miRNA)  are found on the genome, from the locailzation of  RNA genes that do not encode proteins and  exons responsible for encoding protein or from the  localization of introns responsible for transcription, however they are not involved in  protein translation. Functionally, they play a role in gene regulations, they are single stranded, approximately formed from 22 nucleotides that are functional RNA molecules. miRNAs control various processes like cellular growth, proliferation, differentiations, aging, apoptosis, metabolism and immune response. Previous studies have shown that  in patients with immunoglobulin nephropathy, molecules like miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-877-3p, let-7b-3p have a role in the pathogenesis of  miRNA's disease. Ig A vasculitis has similar biologic and pathologic abnormalities, however, at the present time there is no study  that has shown the relationship  between the serum miRNA level Ig A and the pathogenesis of the disease. Our study aims at researching  miRNA changes and its effects on renal involvement in patients with IgA vasculitis.
              In the study conducted between January 2019 and December 2019, the number of patients diagnosed with IgAV and those that are followed clinically were 34 together with 27 healthy children, a total of 61 children were taken into the study. The plasma samples of the patients were collected and previously determined miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-155-5p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-223a-5p, miRNA-233-3p, miRNA-347, miRNA-877-3p, let-7b-3p level of expression were measured. At the end of the study, concerning the changes of the level of  miRNA expression  in patients with IgAV and the control group, in the beginning patients without renal involvement who developed renal involvement upon follow up together with those diagnosed with IgAN with those without nephritis diagnosed with IgAV, patients diagnosed with IgAV with and without gastrointestinal involvement, patients diagnosed with IgAV taking steroid treatment and those who were not taking steroid treatment were statistically analized separately. When the patients were compared with the control group, it was found that miRNA-16-5, miRNA-17-5p, miRNA-21-3p, miRNA-26a-5p, miRNA-100-3p, miRNA-133a-3p ve 133b, miRNA-135a-5p, miRNA-148b-5p, miRNA-150-3p, miRNA-155-5p, miRNA-185-3p, miRNA-192-3p, miRNA-200c-3p, miRNA-223a-5p, miRNA-233-3p, miRNA-347, miRNA-877-3p, let-7b-3p were significantly upregulated in the patients than the control group (p<0,05). Moreover, the differences between the clinicopathologic characteristics of the patients and the level of the experession of miRNA were observed. It was observed that the upregulation of miRNA-16-5p, miRNA-17-5p, miRNA-347 in the group of those with IgA Vasculitis Nephritis was more statistically significant than the group with IgA Vasculitis that did not develop nephritis (p<0,05). 
              miRNA-148b-5p was statistically more significantly upregulated in patients with gastrointestinal system involvement compared to those without gastrointestinal involvement (p=0,026). During the course of the treatment, it was observed that patients with IgA Vasculitis that recieved steroid treatment  with those who recieved Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) alone had statistically more significant upregulated miRNA-17-5p compared to patients who did not receive steroid treatment (p=0,042).

              In conclusion, miRNA-16-5p may be a guide in the early diagnosis of nephritis in IgAV patients. Detection of microRNA-17-5p downregulation in IgAN and upregulation in IgAVN may lead to differences in pathogenesis. The future multicentre studies with IgAV and miRNAs may be better understood in the pathogenesis of miRNAs in IgAV and IgAVN pathogenesis.