Kültür balıklarındaki vibrio anguillarum?un immunohistokimyasal yöntemlerle teşhisi
Diagnosis of vibrio anguillarum by using immunohistochemical methods in cultured fish
Yazar: BUKET AYDIN
Danışman: DOÇ. DR. TÜLAY AKAYLI
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Su Ürünleri = Aquatic Products
Dizin: Bakteri izolasyonu = Bacterial isolation ; Bakteriler = Bacteria ; Balıklar = Fishes ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Bu tez çalışmasında; yurdumuzda kültürü yapılan gökkuşağı alabalığı, levrek ve çipura balıklarında görülen Vibrio anguillarum kaynaklı enfeksiyonların bakteriyolojik, histopatolojik ve immunohistokimyasal yöntemler kullanılarak teşhisinin yapılması amaçlanmıştır. 
2011 ve 2012 yıllarında toplam 8 farklı işletmeden 2 kez örnekleme yapılmıştır. Hastalık belirtisi gösteren ağırlıkları 150-200gr arasında değişen toplam 15 adet gökkuşağı alabalığı,  ağırlıkları 150-220gr arasında değişen toplam 10 adet levrek balığı ve ağırlıkları 150-200gr arasında değişen toplam 8 adet çipura balığı örneği bakteriyolojik ve histopatolojik yöntemler kullanılarak incelenmiştir. Etkenin dokulardaki varlığı ve lokalizasyonu ise immunohistokimyasal yöntem kullanılarak tespit edilmiştir. 
Hasta balıklarda klinik bulgu olarak iştahsızlık, yavaş yüzme hareketi, renkte koyulaşma, solungaçlarda solgunluk, yüzgeç diplerinde kanamalar, iç organlar üzerinde peteşi ve hemoraji, karaciğerde solgunluk yanısıra hiperemi ve hemoraji, dalakta büyüme ve bağırsakta sarı renkli sıvı birikimi gözlenmiştir. Hasta balık örneklerinin karaciğer, dalak ve böbrek gibi iç organlarından %1,5 NaCl içeren TSA besiyerine yapılan bakteriyolojik ekimler sonucunda besiyeri üzerinde 3-4 mm çapında yuvarlak kenarlı, parlak, krem renkli koloniler gözlenmiş ve bu bakterilerin Gram-negatif karakterli, hafif kıvrık basil şekilli, aktif hareketli, fermantatif, sitokrom oksidaz ve katalaz testlerinde pozitif, TCBS ve VAM besiyerinde sarı renkli koloniler oluşturduğu, O/129 vibriostat ajanına karşı hassas olması ve diğer fizyolojik ve biyokimyasal özellikleri nedeniyle Vibrio anguillarum olarak izole ve identifiye edilmiştir. 
Bu tez çalışmasında materyal olarak kullanılan hasta gökkuşağı alabalığı, levrek ve çipura balığına ait dokuların histopatolojik incelenmesi sonucunda solungaç filament ve lamellalarının yapısal düzeninde bozulma, karaciğerde küçük hemorajik odaklar, dalakta doku kaybı, böbrek tübüllerinde ve kalp kasının fibrilleri arasındaki bağ dokuda  bozulma gibi genel patolojik değişiklikler gözlenmiştir. Ayrıca dokuların immunohistokimyasal boyama yöntemi ile incelenmesi sonucunda da hastalığın gelişim evresine bağlı olarak etkenin karaciğer, dalak, böbrek ve kalp yanı sıra solungaçlarda, özellikle kan damarlarına yakın bölgelerde yoğunlaştığı tespit edilmiştir.
Sonuç olarak bu tez çalışması ile Muğla ilinde bulunan ve kültürü yapılan gökkuşağı alabalığı, levrek ve çipura balıklarından vibriosisin klinik belirtilerini gösteren hasta balık örneklerinden yapılan bakteriyolojik, histolojik ve immunohistokimyasal incelemeler sonucu Vibrio anguillarum?un teşhisi ve dokulardaki varlığı tespiti yapılmıştır. Ayrıca bu tez çalışmasında bu bakterinin enfekte balık dokularındaki varlığının tespiti amacıyla kullanılan ve indirekt immunoenzimatik yöntemlerden olan streptavidin-biotin boyama yöntemi adı geçen bakterinin teşhisinde ilk kez kullanılmış ve başarılı sonuçlar elde edilmiştir.

Abstract:
In this thesis study, diagnosis of infections caused by Vibrio anguillarum in cultured rainbow trout, European sea bass and gilt-head sea bream in Turkey by using bacteriological, histopathological and immunohistochemical methods was aimed.  
2 sampling studies were made in a total of 8 different fish farms in 2011 and 2012 years. In total, 15 rainbow trout samples weighing between 150-200 g, 10 European sea bass samples weighing between 150-220 g and 8 gilt-head sea bream samples weighing between 150-200 g showing disease signs were investigated by using bacteriological and histopatological methods. The presence and the location of the agent in the tissues were detected by using immunohistochemical method.
Lethargy, slow swimming behavior, darkening of the skin, sloughing of the gills, hemorrhages at the fin bases, petechia and hemorrhages over the internal organs, sloughing, hyperemia and hemorrhage on the liver, splenomegaly and accumulation of a yellow colored fluid in the intestine were observed as clinical findings in the diseased fish. After the inoculations from the internal organs of the diseased fish samples such as liver, spleen and kidney onto the TSA containing 1,5 % NaCl, shiny creamy round colonies with a diameter of 3-4 mm were observed. These slightly curved bacilli that are Gram-negative, motile, fermentative, cytochrome oxidase and catalase positive, forming yellow colonies on TCBS and VAM media and sensitive to O/129 vibriostatic agent were identified as Vibrio anguillarum depending on these and other physiologic and biochemical properties.
As a result of the histopathologic examination of the tissues of diseased rainbow trout, European sea bass and gilt-head sea bream which were used as fish material in this study, general pathologic changes such as structural deformations in gill filaments and lamellae, small hemorrhagic centers in liver, tissue loss in spleen, deformations in the kidney tubules and in the connective tissue between the heart muscle fibrils were observed. It was also detected in the immunohistochemical examination that the causative agent densifies in the liver, spleen, kidney, heart and also in the gills especially in the areas near around the blood vessels depending on the development stage of the disease.
As a result, with this thesis study, after the bacteriological inoculations, histological and immunohistochemical investigations, the diagnosis of V. anguillarum was made and the presence of this organism was detected in the tissues of rainbow trout, European sea bass and gilt-head sea bream samples showing clinical symptoms of vibriosis cultured in Muğla province. Also an immunoenzimatic method, streptavidin-biotin staining method was used for the first time in this thesis study for the detection of the presence of this bacterium in the infected fish tissues and successful results were achieved.