Staphylococcus aureus suşlarında metisilin direnci tanısında kullanılan bazı fenotipik yöntemlerin karşılaştırılması
A comparison of phenotypic methods in detecting methicillin resistance in staphylococcus aureus
Yazar: FİSUN ÇATAR KIRCA
Danışman: PROF. DR. NEDİM SULTAN
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2008
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Stafilokoklar, nozokomiyal ve toplum kaynaklı infeksiyonlara neden olan en önemliinsan patojenidir.MRSA suşları, ß-laktam antibiyotiklere düşük afinite gösteren, penisilin bağlayanprotein 2a (PBP2a) olarak adlandırılan bir protein üretmektedir. Bu proteinkromozomal bir gen olan mecA geni tarafından kodlanır. mecA geni ve PBP2aproteinine sahip S.aureus suşları, tüm ß-laktam antibiyotiklere direnç gösterirler.mecA genine bağlı olarak gelişen metisilin direnci, homojen veya heterojen dirençolarak ortaya çıkabilir. Heterojen dirençte metisilin direncinin fenotipik ekspresyonuhücrelerin 1/10³ - 106 sında görülmektedir. mecA geni dışında farklı birçok bölgedebulunan genetik belirleyiciler direncin heterojen ekspresyonundan sorumlututulmaktadır .Staphylococcus aureus suşlarında metisilin direncinin fenotipik yöntemlerle doğruolarak belirlenmesi, bu direncin heterojen olması nedeniyle her zaman mümkünolmamaktadır.Bu çalışmada, Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesinde yatarak tedavi olanhastalara ait çeşitli klinik örneklerden soyutlanan 66 MRSA suşu incelenmiştir.İncelenen bakterilerde PZR yöntemiyle mecA geni varlığı referans alınarak;oksasilin-sefoksitin disk difüzyon, oksasilin agar tarama, oksasilin-sefoksitin E testve PBP2a lateks aglutinasyon yöntemlerinin metisilin direncini belirlemedekiduyarlılıkları karşılaştırılmıştır. Kullanılan tüm yöntemlerin MRSA suşlarını tespitetmedeki duyarlılıkları birbirlerine eşit (%98,48) bulunmuştur. Çalışılan 66 suşgenotipik olarak mecA geni taşıdığı halde, bir suşta test edilen tüm yöntemlerlefenotipik olarak metisilin direnci gösterilememiştir.Moleküler tekniklerin uygulanamaması durumunda oksasilin - sefoksitin diskdifüzyon, oksasilin ? sefoksitin E-test, oksasilin agar tarama ve PBP2a lateksaglutinasyon yöntemlerinin aynı duyarlılıkla kullanılabileceği sonucuna varılmıştır.Bu çalışmadan elde edilen veriler ışığında, fenotipik yöntemlerin hiçbirisi %100duyarlılığa sahip değildir. Bununla birlikte eğer mecA genini tespit eden PZRyönteminin uygulanması mümkün değilse; uygulama kolaylığı ve çeşitli çalışmalardareferans yöntem olarak kabul edilen sefoksitin disk difüzyon tekniğinin MRSAtanısında kullanılması uygun olacaktır.

Abstract:
Staphylococci are the major human pathogens that cause hospital and communityacquired infections.MRSA strains produce a penicillin binding protein named PBP2a, which presentslow binding affinity to ß-laktam antibiotics. This protein is encoded by thechromosomal mecA gene. S.aureus strains that involve mecA gene and PBP2a conferresistance to all ß-laktam antibiotics. Methicillin resistance coded by mecA geneemerges as homogeneous or heterogeneous resistance. The phenotypic expression ofmethicillin resistance in heteroresistant strains occurs only in some cells in the givenpopulation. In addition to mecA gene, other genetic determiners in different parts arealso responsible for the heterogeneous expression of the resistance (28).It is not always possible to accurately detect methicillin resistance in Staphylococcusaureus strains with phenotypic methods due to its heteroresistant characteristic.This study analyzed 66 MRSA strains isolated from the samples of the hospitalizedpatients in Gazi University Medical Hospital. In the MRSA starins analyzed, thepresence of mecA gene is first detected with PCR method, and then oxacillincefoxitin disk diffusion, oxacillin agar screen, oxacillin cefoxitin E test and PBP2alatex agglutination methods are compared in terms of their sensitivity in detectingmethicillin resistance. The phenotypic methods used in this study were found to beequally sensitive (98,48%) in detecting MRSA strains. Only one strain does notconfer methicillin resistance phenotypically with these methods although the isolatehas mecA gene.It is concluded in this study that in cases where molecular techniques cannot beapplied, oxacillin cefoxitin disk diffusion, oxacillin agar screen, oxacillin cefoxitin Etest and PBP2a latex agglutination methods can be used with equal sensitivity. Theresults of this study show that none of the phenotypic methods is 100% sensitive.However, if PCR method that detects mecA gene is not available, cefoxitin diskdiffusion is suitable for MRSA detection due to the fact that it is accepted as areference method in various studies and can be applied easily.