Genç nüfusta kullanımı yaygın olan amfetamin türevlerinin (ekstazi) idrarda GC/MS ile tayini
Determination of amphetamine derivatives (ecstasy) in urine which is commonly used among young population by GC/MS
Yazar: KADER SÖNMEZ
Danışman: DOÇ. DR. SERAP ANNETTE AKGÜR
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Bağımlılık Toksikolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Amfetamin = Amphetamine ; Bağımlılık = Dependency ; Gençler = Youngs ; Kromatografi-gaz = Chromatography-gas ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Narkotik bağımlılığı = Narcotic dependence ; Narkotikler = Narcotics ; İdrar tahlili = Urinalysis

Özet:
Giriş: Sentetik olarak üretilen yeni psikoaktif maddelerin yasadışı kullanımı son yıllarda önemli bir halk sağlığı sorunu ile birlikte artan küresel bir sorun haline gelmiştir. Amfetaminler sentetik psikoaktif ilaçlar grubundadır. Son yıllarda amfetaminlerin tüketimi kolay ulaşılması ve düşük maliyetli olması nedeniyle önemli ölçüde artmıştır. Biyolojik örneklerdeki amfetaminlerin saptanmasında genellikle yöntemlerin çoğunluğu Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometrisi (GC-MS) ' e dayanmaktadır. Bu çalışmanın amacı, idrarda amfetamin miktarının tayini için güvenilir ve hızlı olan GC-MS kullanılarak yöntem geliştirmektir. Basit bir yöntem olan rahatça uygulanabilen, ucuz ve güvenilir sıvı sıvı ekstraksiyon (LLE) kullanılarak örnek temizlenmiştir ve valide edilmiş yöntem gerçek idrar örneklerinde uygulanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışma Bağımlılık Toksikolojisi ve İlaç Bilimleri Enstitü' sünde Bağımlılık Toksikolojisi Laboratuvarında geliştirilmiştir ve temiz idrar örnekleri gönüllü enstitü çalışanlarından elde edilmiştir. Gerçek idrar örnekleri ise adli ve toksikolojik olgularından elde edilmiştir. İdrar örnekleri LLE prosedürüne göre işlenmiştir. Standart çözeltiden alınan bir örnek (100 μg / L), 2.0 mL idrara ilave edilmiştir. 1 mL KOH çözeltisi eklenerek bazik hidroliz yapılmıştır. Idrar örneği bu amaçla özel olarak hazırlanan asitli maddeler içeren kartuşlara (Toxitüp-A) aktarılır ve örnek 5 dakika boyunca çalkalanır. 4100 rpm' de 5 dakika süren santrifüjlemeden sonra, organik faz temiz bir tüpe aktarılır ve 40° C'de azot akımı altında kuruyana kadar buharlaştırılır. Örneklere etil asetat eklenir ve GC / MS analizi öncesinde Pentafloropropionik anhidrit (PFPA) ile türevlendirilir. Bulgular: Yöntemin seçicilik, doğrusallık, LOQ, LOD, kesinlik ve geri kazanım parametreleri valide edilmiştir. Uygulanan kromatografik yöntemde, 5.59 dakikalık bir alıkonma zamanı içinde AMP elüsyonü gerçekleştirilmiştir ve kabul edilebilir simetrik pikler sağlanmıştır. Kantitasyon; döteryumlu analoğun entegre alanda referans ile özel kromatogramlar altında kalan alanın entegre edilmesi ile gerçekleştirilmiştir. Yöntemin seçiciliği; alıkonma zamanı, öncü iyonlar ve ürün iyonları (91, 118, 190) 'in kombinasyonu ile sağlanmıştır. LOD ve LOQ değerleri sırasıyla 5.6 ve 18.8, olarak bulunmuştur. Doğrusallık için R2> 0.9996 iken 1000 μg / L'ye test edilmiştir. Sonuç: LLE sonrası GC-MS ile idrarda amfetamin tayini için hızlı ve hassas bir yöntem valide edilmiştir. Ayrıca yöntem başarılı bir şekilde amfetamin kullanıcılarından alınan gerçek örneklere uygulanmıştır.

Abstract:
Introduction: The illegal use of synthetic substances has become an increasing global problem resulting in significant public health and legal problems in the last decades. Amphetamines (AMPs) are a group of synthetic psychoactive drugs. The consumption of AMPs have increased significantly over the past years due to the easy availability and low cost. The majority of methods for the determination of AMPs in biological samples are based on gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS). The aim of the present study is to develop and fully validate a simple, reliable and fast GC-MS method for quantification of the amphetamines in urine. A simple liquid-liquid extraction (LLE) was used as sample clean up procedure and the validated method was applied to authentic urine samples. Material and Methods: The study was developed in BATI institute and blank urine samples were obtained from drug-free volunteers in institute workers. Authentic urine samples were obtained from forensic and toxicology cases. Urine samples were processed by a LLE procedure as follows. An aliquot (100 μg/L) of the standard solution was added to 2.0 mL of urine. Basic hydrolysis is achieved by adding 1 mL of KOH to the solution. The urine sample is transferred to Toxitube-A (Varian, Inc) and the sample is shaken for 5 minutes. After centrifugation at 4100 rpm for 5 minutes, the organic upper layer is transferred to a clean tube and evaporated to dryness under a stream of nitrogen at 40 ◦C. The samples are reconstituted using ethyl acetate and derivitizated using Pentafluoropropionic Anhydride (PFPA) prior to GC-MS analysis. Results: The method was validated for selectivity, linearity, LOQ, LOD, imprecision and recovery parameters. The applied chromatographic method ensured the elution of AMP within a retention time of 5.59 min and produced peaks of acceptable symmetry. Quantification was performed by integration of the area under the specific chromatograms in reference to the integrated area of the deuterated analogue. Selectivity of the method was achieved by a combination of retention time, precursor and product ions (91, 118, 190). LOD and LOQ were values were found to be 5.6 and 18.8, respectively. The linearity was tested up to 1000 μg/L with an R2 > 0.9996. Conclusion: A rapid and sensitive method was validated for the determination of amphetamine in urine by GC-MS after a LLE. The method was also successfully applied to authentic samples from amphetamines users.