Difenil eter grubu herbisitlerin biyolojik numunelerden tayinine yönelik sıvı kromatografisi yöntemi geliştirilmesi ve pestisit-protein etkileşimlerinin incelenmesi
Development of liquid chromatography method for determination of diphenylether group herbicides from biological samples and investigation of pesticide-protein interactions
Yazar: HİLAL SAPMAZ
Danışman: PROF. DR. BENGİ USLU
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Disiplinlerarası Adli Eczacılık Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Difenileter = Diphenyl ether ; Herbisitler = Herbicides ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Pestisitler = Pesticides

Özet:
Bu tez çalışması kapsamında Aklonifen ve Bifenoks pestisit bileşiklerinin YPSK yöntemi kullanılarak analizi için gerekli parametreler bulunmuş ve bu parametrelere bağlı olarak da eş zamanlı analizleri yapılmıştır. Bu amaçla hareketli faz organik çözücü yüzdesi, tampon çözelti molaritesi, kolon, akış hızı, sıcaklık ve pH kullanılarak analizler için en iyi koşullar belirlenmiştir.
Optimizasyon ve validasyon işlemleri tamamlanarak geliştirilen yöntemimizde literatürdeki birçok analiz yöntemine göre daha iyi ve etkin bir ayrım ve daha iyi geri kazanım, teşhis sınırı ve tayin alt sınırı değerleri elde edilmiştir. Hesaplanan validasyon parametreleri doğrultusunda ise geliştirilen yöntemin doğru, duyarlı, kararlı bir yöntem olduğu söylenebilmektedir.
Sonuç olarak bulunan veriler doğrultusunda, Aklonifen ve Bifenoks pestisit maddelerinin biyolojik numunelerden eş zamanlı analizi için hızlı, duyarlı, kesin, kolay uygulanabilir, doğru, ekonomik ve herhangi bir ön ayırma işlemi gerektirmeyen analiz yöntemi geliştirilmiştir. Geliştirilen analiz yönteminin biyolojik numunelerden bu maddelerin eş zamanlı analizine başarılı bir şekilde uygulanabilir olduğu istatistiksel olarak gösterilmiştir.
Ayrıca kullanılan pestisit bileşiklerinin dolaşım sisteminde ana taşıyıcı protein olarak bulunan insan serum albümini (HSA) ile etkileşimlerinin floresans spektroskopisi ve hesaplamaları teknikleri ile incelenmesi amaçlanmış, floresans ve absorbsiyon spektroskopisinden elde edilen sonuçlar ACF/BİF ve HSA arasındaki kompleksleşmeyi doğrulamıştır.
Artan sıcaklıkla beraber KSV değerlerindeki artış, HSA flüoresansının ACF/BİF kaynaklı sönümlemesinin dinamik sönümleme olduğunu göstermiştir. Oda sıcaklığında, pestisitlerin HSA ile bağlanma afiniteleri ACF–HSA kompleksi için Kf=3,47 × 105 M-1; BİF–HSA kompleksi için Kf =1 × 105 M-1 olarak bulunmuştur. Sıcaklık artışıyla beraber bağlanma sabiti değerlerinde artış gözlenmiştir.
Termodinamik verilerin sayısal olarak değerlendirmesi (ACF-HSA kompleksi için ΔS= +0,864 kJ mol–1K–1, ΔH = 225,43 kJ mol–1 ve BİF-HSA kompleksi için ΔS= + 1,11 kJ mol–1K–1, ΔH = 304,63 kJ mol–1) sonucunda bulunan sonuçlar, ACF-HSA ve BİF-HSA komplekslerinin oluşumunda hidrofobik bağların daha etkili olduğunu göstermiştir.

Abstract:
Within the scope of this thesis, the necessary parameters for the analysis of Aklonifen and Bifenox pesticide compounds using the HPLC method were found and simultaneous analyzes were made depending on these parameters. For this purpose, the best conditions for analyzes were determined by using mobile phase organic solvent percentage, buffer solution molarity, column, flow rate, temperature and pH.
In our method, which was developed by completing the optimization and validation processes, a better and more effective separation and better recovery, diagnostic limit and lower limit of determination values were obtained compared to many analysis methods in the literature. In line with the calculated validation parameters, it can be said that the developed method is an accurate, sensitive and stable method.
As a result, in line with the data obtained, a fast, sensitive, precise, easily applicable, accurate, economical and does not require any pre-separation process has been developed for the simultaneous analysis of Aklonifen and Bifenox pesticides from biological samples. It has been shown statistically that the developed analysis method can be successfully applied to the simultaneous analysis of these substances from biological samples.
In addition, it was aimed to examine the interactions of the pesticide compounds used with human serum albumin (HSA), which is the main carrier protein in the circulatory system, by fluorescence spectroscopy and calculation techniques, and the results obtained from fluorescence and absorption spectroscopy confirmed the complexation between ACF/BIF and HSA.
The increase in KSV values with increasing temperature showed that the ACF/BIF induced quenching of HSA fluorescence is dynamic quenching. At room temperature, the binding affinities of pesticides with HSA were Kf=3.47 × 105 M-1 for the ACF–HSA complex; For the BIF–HSA complex, Kf was found to be =1 × 105 M-1. An increase in the binding constant values was observed with the increase in temperature.
Numerical evaluation of thermodynamic data (ΔS= +0.864 kJ mol–1K-1 for ACF-HSA complex, ΔH = 225.43 kJ mol–1 and ΔS= + 1.11 kJ mol–1K-1 for BIF-HSA complex The results obtained as a result of ΔH = 304.63 kJ mol-1) showed that hydrophobic bonds were more effective in the formation of ACF-HSA and BIF-HSA complexes.