Doğal öldürücü hücrelerin in-vitro çoğalmasında kordon kanı kaynaklı trombosit lizatların etkinliğinin değerlendirilmesi
Evaluation of the effectiveness of cordon blood-based trombocite lyases in in-vitro reproduction of natural killer cells
Yazar: FULDEN DUYAR
Danışman: PROF. DR. LEVENT ÜNDAR
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Fetal kan = Fetal blood ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Kan trombositleri = Blood platelets ; Katil hücreler-doğal = Killer cells-natural ; İn vitro = In vitro ; İnterlökin 2 = Interleukin 2

Özet:
Hematopoetik kök hücre nakli (HKHN) lösemi hücrelerinin ilaç tedavisi ile yok edildikten sonra kemik iliğinin yeniden yapılandırıldığı standart bir tedavi yöntemidir. HKHN sonrası Doğal öldürücü hücreler (DÖH) kemik iliğinde yeniden yapılanan ilk hücre grubudur. Nakil sonrası enfeksiyon oluşumunu azaltması ve GVHD oluşumunu geriletmesi gibi özellikleri DÖH'lerin klinik açıdan önemli kılmaktadır ayrıca farklı hematolojik hastalıklarda anti-lösemik etkileri tanımlanmıştır. DÖH'lerin in-vitro ortamda çoğaltılmasına yönelik çalışmalar devam etmektedir. Hücrelerin in-vitro ortamda çoğaltılıp kullanılabilmesi için alternatif besi ve destek ortamları oluşturma yaklaşımı kök hücre ve hücresel tedavilerin klinik uygulamalarındaki artışa paralel olarak artmaktadır. Bu amaçla trombosit lizatları hücre çoğaltılmasında etkin bir biçimde kullanılmaktadır. Bu çalışmada Kordon kanından elde edilen trombosit lizatların DÖH'lerin in-vitro ortamda çoğaltılmasında hücre çoğalmasını arttırıcı yönde etkisi değerlendirildi.Gönüllü gebelerden kordon kanı toplandı, MNH izolasyonu ve DÖH seçilimi yapıldı. Trombosit lizat oluşumu için öncelikle trobositten zengin plazma elde edildi daha sonrada lizat hazırlandı. Hücre kültürü ortamında DÖH'ler IL-2 ve  trombosit lizat varlığında uyarıldı. Hücrelerin belirlenmesi, sayımı ve uyarım sonrası gruplar arasındaki farklar flow sitometrik yöntem ve otomatik hücre sayımı ile değerlendirildi.Bu çalışma kordon kanı kaynaklı trombosit lizatların DÖH'ler üzerine etkinliğini ortaya koyan ilk çalışmadır.DÖH'ler genellikle in-vitro olarak  uzun süreli inkübasyonlar sonunda çoğalabilen hücre grubudur. Uyarım aşamasında birden çok sitokin kullanım ihtiyacı doğmaktadır. Ayrıca ek uyaranlara da ihtiyaç duyulur. Bu çalışma ile elde edilmesi kolay ve ucuz bir preparatla birlikte IL-2 uygulamasının kısa sürede doğal öldürücü hücreler üzerinde proliferasyonu indükleyebileceği ilk kez gösterilmiştir. Bununla birlikte inkübasyon süresinin uzatılması ve trombosit lizat konsantrasyonlarının değişkenliklerinin test edildiği çalışmalar ile desteklenmesi gerekmektedir.

Abstract:
Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is a standard treatment for bone marrow reconstruction after leukemia cells are destroyed by drug therapy. Natural killer cells after HSCT are the first group of cells to be engraftment in the bone marrow. NK cells are clinically important because they can reduce the occurrence of post-transplant infection and reduce the formation of GVHD, in addition, anti-leukemic effects have been described in different hematological diseases. Different studies have been designed for the expansion  of NK cells  in vitro applications. There is a need to create alternative nutritional and support medium in cellular therapy applications. For this purpose  platelet lysates are used effectively in cell proliferation. Through the formation of lysate the factors in the platelet granule are released into the medium. Our aim is to evaluation of the effect of cord blood platelet lysates on natural killer cells. Cord blood was collected from volunteer pregnant women then MNH isolation and natural killer cell selection were performed and platelet lysate was prepared. NK cells were stimulated in the presence of IL-2 and platelet lysate  under cell culture conditions. Differences between groups were evaluated by flow cytometric method and automatic cell count. To our knowledge, this is the first study to demonstrate the efficacy of cord blood derived platelet lysates on natural killer cells. NK cells are usually can proliferate after prolonged incubations in vitro. There is a need to use multiple cytokines during the NK stimulation phase. This study demonstrated for the first time that platelet lysates can provide NK proliferation in a short time with IL 2. However, incubation time should be extended and supported by studies in which changes in platelet lysate concentrations are tested.