Wharton jeli kökenli mezenkimal kök kücrelerin (iWJ-MKH'lerin) ımmünomodulatuvar özellikleri
Immunomodulatory properties of wharton jelly-derived mesenchymal stem sells (iWJ-MSCs)
Yazar: FIDAN GAKHIYEVA
Danışman: DOÇ. DR. AYLA EKER SARIBOYACI
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı, hem potensi hem de allojenik kullanımları ile ön plana çıkmış olan iWJ-MKH'lerin immunosupresif etkinliğini artırmak için immünregülasyonda görev alan matür miRNA-181a'yı transfekte etmek ve transfeksiyonun etkisini, in vitro bağışıklık sistemi modeli olan insan pan T hücre modelinde analiz etmektir.
Yöntem: Bu tez çalışmasında miRNA transfekte iWJ-MKH'lerle ko-kültür sonrası T hücre yanıtı; canlılık ve proliferasyon (CCK8), apoptosis (AnnexinV-PI yöntemi) ve hücre siklusu değişimi (flow sitometrik hücre siklusu analizi), anti- ve pro-inflamatuar sitokinler (TGF-beta1, IL-6, TLR-4 ve STAT1), regülatuar T-hücre (Treg) (CD4+CD25+Foxp3+), T-bet ve T hücre belirteç/gen ekspresyonları (CD3,CD4, CD45, CD4+CD8 ve CD69) üzerindeki etkisi analiz edildi.
Bulgular: PHA-M ile aktive edilmiş T lenfositlerinde faz konstrat mikroskopu ile belirgin ve canlılık oranı yüksek koloni oluşturma yetenekleri gösterildi. Hem miRNA transfekte edilmiş hem de edilmemiş iWJ-MKH'lerin 4. günde apoptotik etki göstermediği üstelik apoptozun azaldığı tespit edildi. Hücre siklusu analizinde 4. günde yalnız T hücreleri ile karşılaştırdığımızda MKH'ler ile ko-kültür edilen T hücrelerinde proliferasyon ve apoptozun azaldığı ve miRNA transfekte MKH'ler ile ko-kültür edilenlerde ise proliferasyonun azaldığı ve apoptozun arttığı (*p<0.05) belirlendi. Her iki ko-kültür grubunda da T hücre belirteçlerini eksprese eden T hücre %'sinin azaldığı belirlendi. TGF-beta gen ekspresyonu azalmışken kokültür besiyerindeki hem MKH hem Treg'den sekreyonunun arttığı ve Tbet hücre populasyonunun artmasına rağmen salgısı olan IFN-gama sekreyonunun ise azaldığı belirlendi. MKH'lerde miRNA transfeksiyonunun, T hücre proliferasyon, apoptoz ve Treg ve T-bet populasyonunu arttırdığı gözlemlendi.
Sonuç: miR-181a transfeksiyonunun MKH'lerin immunsupresif etkilerini IL-6, STAT-1 ve DUSP5 genleri ve TGF-beta ve IFN-gama sitokinleri yoluyla düzenlediği sonucuna varıldı. Bu proje TUSEB A2 31858 nolu projesi ile desteklenmiştir.

Abstract:
Objective: The aim of this thesis is to transfect mature miRNA-181a involved in immunoregulation to increase the immunosuppressive efficacy of iWJ-MSCs, which have come to the forefront with both their potency and allogeneic use, and to analyze the effect of transfection in the human pan T cell model, an in vitro immune system model.
Methods: In this thesis, T cell response after co-culture with miRNA transfected iWJ-MKCs; viability and proliferation (CCK8), apoptosis (AnnexinV-PI method) and cell cycle change (flow cytometric cell cycle analysis), anti- and pro-inflammatory cytokines (TGF-beta1, IL-6, TLR-4 and STAT1), regulatory T-cell (Treg) (CD4+CD25+Foxp3+), T-bet and T-cell marker/gene expressions (CD3, CD4, CD45, CD4+CD8 and CD69) were analyzed..
Results: PHA-M activated T lymphocytes were shown to be capable of forming distinct and highly viable colonies by phase-constrate microscopy. Both miRNA-transfected and non-miRNA-transfected iWJ-MSCs did not show apoptotic effect on day 4 and apoptosis was decreased. In cell cycle analysis, proliferation and apoptosis were decreased in T cells co-cultured with CCPs and proliferation was decreased and apoptosis was increased (*p<0.05) in those co-cultured with miRNA transfected CCPs compared to T cells alone on day 4. The percentage of T cells expressing T cell markers decreased in both co-culture groups. While TGF-beta gene expression was decreased, its secretion from both MSCs and Tregs in coculture medium increased and IFN-gamma secretion decreased despite the increase in Tbet cell population. It was observed that miRNA transfection increased T cell proliferation, apoptosis and Treg and T-bet populations in CRCs.
Conclusion: It was concluded that miR-181a transfection regulates the immunosuppressive effects of CCPs through IL-6, STAT-1 and DUSP5 genes and TGF-beta and IFN-gamma cytokines. This study was financially supported by grants (YL A2 31858) Turkish Institutes of Health (TÜSEB