Hünnap meyvesinin bilateral kavernöz sinir hasarı yapılmış ratlarda oluşturulan veno-okluzif erektil disfonksiyonda kavernöz doku üzerinde antioksidan etkisi ve fibrozis üzerine etkisi
The effect of ziziphus fruit on antioxidant efficacy and fibrosis on cavernous tissue in veno- occlusion erectile dysfuntion concerned with bilateral cavarnosis nerve injury
Yazar: EYÜP KOLUŞ
Danışman: PROF. DR. SEFA RESİM
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Cinsel bozukluklar = Sex disorders ; Cinsellik = Sexuality ; Erektil disfonksiyon = Erectile dysfunction ; Fibroz = Fibrosis ; Hünnap = Jujube ; Kavernöz sinüs = Cavernous sinus

Özet:
Amaç: Erektil disfonksiyonun nedenleri arasında vasküler, nörojenik, anatomik/yapısal, hormonal, psikojenik ve ilaçlar bulunmaktadır. Kavernözal sinir hasarı özellikle radikal pelvik cerrahiler sonrası geri dönüşümsüz bir şekilde erektil disfonksiyona yol açmaktadır. Kavernözal sinir hasarı penis korporal düz kaslarının kaybına ve ekstraselüler matriks proteinlerinin aşırı depolanmasına neden olmaktadır. Sinir hasarı sonrasında, korpus kavernozumlarda progresif fibrotik süreçle oluşmaktadır. Hünnap meyvesinin ise anti kanser, anti-inflamatuar, immünmodülatör, antioksidan, hepatoprotektif, etkilerinin olduğu gösterilmiştir. Hünnap meyvesinin veno-oklüziv erektil disfonksiyonda korpus kavernozum hasarını ve fibrozis gelişimini engelleyerek ve antioksidan özelliği sayesinde serbest radikallerle reaksiyona girerek, endotel hücrelerine zarar vermelerini önlemek suretiyle erektil fonksiyonlar üzerinde koruyucu bir etkisinin olabileceğini deneysel olarak göstermeyi amaçladık.
Materyal ve metod: Toplam 48 adet Wistar Albino türü erişkin erkek rat kullanıldı. Grup 1; sham grubu, Grup 2; sham + düşük doz(200mg/kg) hünnap ekstraktı, Grup 3; sham + yüksek doz(400mg/kg) hünnap ekstraktı, Grup 4; bilateral kavernöz sinir hasarı + distile su, Grup 5; bilateral kavernöz sinir hasarı + düşük doz(200mg/kg) hünnap ekstraktı, Grup 6; bilateral kavernöz sinir hasarı + yüksek doz (400mg/kg) hünnap ekstraktı grubu olmak üzere toplam 6 grup oluşturuldu. Anestezi intraperitoneal yoldan ksilazin hidroklorid 10mg/kg + ketamin hidroklorür 60 mg/kg uygulandı. Daha sonra batın açılarak kavernözal sinirler ve majör pelvik ganglion, prostatın posterolateral tarafında tespit edildi. Majör pelvik gangliona 2-3 mm distalden ince damar klempi (No.7) konuldu. Bilateral kavernözal sinirlere no.7 avasküler klemp konularak 3 dakika beklenerek ''crush injury'' modeli oluşturuldu. Sham grubunda ise bilateral kavernöz sinirler bulundu ve bir işlem yapılmadan tekrar kapatıldı. 2 hafta hünnap ekstraktı cerrahinin yapıdığı günden itibaren belirtilen dozlarda ikinci, üçüncü, beşinci ve altıncı gruplara oral gavaj yolu ile verildi. 2 haftanın sonunda tüm ratlardan intrakardiyak kan alındıktan sonra sature potasyum klorid' in intrakardiyak enjeksiyonu ile sakrifiye edidi ve penis dokusu çıkarıldı. Ratların korpus kavernozum dokusu alınıp patoloji laboratuvarına gönderildi ve fibrozis oranına ve kollajen yoğunluğuna bakıldı. Biyokimyasal inceleme için fibroziste rol oynayan transforming growth factor-beta1(TGF- β1), kollajen tip I, kollajen tip 3, fibronektin, α ve β aktin değişkenleri bakıldı. Aynı zamanda penis dokusundada TGF-β1, kollajen tip I, fibronektin, α ve β aktin değişkenleri bakıldı. Yine alınan kanda süperoksid dismutaz (SOD), katalaz(CAT), Malondialdehit (MDA) ve prolidaz düzeylerine bakıldı. Normal dağılım gösteren grupların karşılaştırılmasında Tek Yönlü varyans analizi (Anova), ikili karşılaştırmalar için çoklu karşılaştırma testlerinden ise Tukey HSD ve Tamhane T2 testi uygulanmıştır. Normal dağılım göstermeyen grupların karşılaştırılmasında Kruskal Wallis H testi uygulanmıştır. İkili karşılaştırmalarda çoklu karşılaştırma testlerinden Nemenyi testi uygulanmıştır.
Bulgular: Dokuların histopatolojik incelemesinde fibrozis oranın en yüksek olduğu grup hünnap ekstraktı verilmeyen bilateral kavernöz sinir hasarı (BCNI) yapılan grup iken en az olan ise 400mg/kg'dan hünnap ekstraktı verilen BCNI grubu olduğu tespit edildi. Serumdaki kollajen 1, kollajen 3, alfa aktin, beta aktin ve fibronektin hepsi gruplar arasındaki farkılıkları istatiksel olarak anlamlı bulunmuştur(p<0,05). Yine korpus kavernosum dokusunda bakılan kollajen 1, alfa aktin, fibronektin ve TGF-β1 hepsi gruplar arasındaki farklılıkları istatiksel olarak anlamlı bulunmuştur(p<0,05). Anti-oksidan olarak bakılan SOD, CAT, MDA, prolidaz hepsinin gruplar arasındaki farklılıkları istatiksel olarak anlamlı bulunmuştur(p<0,05).
Sonuç: Bilateral kavernöz sinir hasarı sonrası penil kavernozal dokularda belirgin kollajen birikimi sonucunda fibrozis artmaktadır. Hünnap meyvesinin yaptığımız çalışmada antioksidan etkisinin ve antifibrotik etkisinin olduğu penil kavernözal dokuda gösterilmiştir. Bu etkisini, fibrozise neden olan kollajen 1, kollajen 3, alfa aktin, beta aktin, fibronektin miktarlarını azaltmak suretiyle göstermiştir. Elde ettiğimiz veriler ışında, penisteki fibrozise yol açan maddelerin bilateral kavernözal sinir hasarı sonrasında erektil fonksiyonlarda azalmaya yol açabileceğini söyleyebilmekteyiz. Hünnap meyvesinin bu etkilerin zıddı yönünde bir aktiviteye sahip olduğu ve penil fibrozis ile sonuçlanan hastalıklarda erektil fonksiyonu koruyucu yönde etki gösterebileceğine inanmaktayız.

Abstract:
Purpose: The causes of erectile dysfunction include vascular, neurogenic, anatomic / structural, hormonal, psychogenic, and medicinal. Cavernous nerve damage leads to irreversible erectile dysfunction, especially after radical pelvic surgery. Cavernous nerve injury causes penile corporal smooth muscle loss and excessive storage of extracellular matrix proteins. After nerve injury, the corpus occurs in the progressive fibrotic process in the cavernosum. Ziziphus fruit has been shown to have anti-cancer, anti-inflammatory, immunomodulator, antioxidant, hepatoprotective effects. We intend to experimentally demonstrate that jujube fruit may have a protective effect on erectile function by inhibiting corpus cavernosum damage and fibrosis development in veno-occlusive erectile dysfunction and by inhibiting endothelial cell damage by entering antioxidant-mediated reaction with free radicals.
 Materials and Methods: A total of 48 adult Wistar Albino male rats were used and total 6 groups divided, Group 1; Sham group, Group 2; Sham + low dose (200mg / kg) jujube extract, Group 3; Sham + high dose (400mg / kg) jujube extract, Group 4; Bilateral cavernous nerve injury + distilled water, Group 5; Bilateral cavernous nerve injury + low dose (200mg / kg) jujube extract, Group 6; Bilateral cavernous nerve injury + high dose (400mg / kg) jujube extract group. Anesthesia was administered intraperitoneally with xylazine hydrochloride 10 mg / kg + ketamine hydrochloride 60 mg / kg. Then, the abdomen was opened and cavernous nerves and major pelvic ganglion were detected on the posterolateral side of the prostate. The major pelvic ganglion was placed 2-3 mm distal to the fine vessel clamp (No. 7). No.7 avascular clamp was placed in the bilateral cavernous sinuses and a "crush injury" model was created by waiting for 3 minutes.In the sham group, bilateral cavernous nerves were found and closed again without any treatment. From the day that the jujunct extract was made by the surgeon for 2 weeks, the doses were given to the second, third, fifth and sixth groups by oral gavage. After intracardiac blood was taken from all rats at the end of 2 weeks, the sature was sacrificed by intracardiac injection of potassium chloride and the penile tissue was removed. The corpus cavernosum tissue of the rats was removed and sent to the pathology laboratory and the fibrosis rate and collagen density were measured. For biochemical examination, transforming growth factor-beta1 (TGF-β1), collagen type I, collagen type 3, fibronectin, α and β actin variants were examined. In addition, TGF-β1, collagen type I, fibronectin, α and β actin variants were examined in the penile tissue. Superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA) and prolidase levels were measured in rats' blood. One way analysis of variance (ANOVA) was used to compare normal distribution groups, and Tukey HSD and Tamhane T2 test was used for multiple comparison tests for binary comparisons. The Kruskal Wallis H test was used to compare groups with no normal distribution. Nemenyi test was applied to multiple comparison tests in binary comparisons. 
Results: Histopathological examination of the tissues revealed that the group with the highest fibrosis was the group with bilateral cavernous nerve injury (BCNI) without jujuba extract and the group with BCNI with jujunate extract had the least amount of 400 mg / kg. Serum collagen 1, collagen 3, alpha actin, beta actin and fibronectin all showed statistically significant differences between the groups (p <0.05). There were statistically significant differences between the groups in terms of collagen 1, alpha actin, fibronectin and TGF-β1 in corpus cavernosum(p <0.05). The differences between the groups of SOD, CAT, MDA and prolidase as antioxidants were statistically significant (p<0.05). 
Conclusions: Fibrosis increases as a result of significant collagen accumulation in penile cavernosal tissues following bilateral cavernous nerve injury. In our study of jujube fruit, the antioxidant effect and the antifibrotic effect were shown in the penile cavernous tissue. This effect has been shown by reducing amounts of fibrosis-causing collagen 1, collagen 3, alpha actin, beta actin, fibronectin. We can say that the substances that lead to fibrosis in the penis may lead to a decrease in erectile function after bilateral cavernous nerve injury. We believe that the jujube fruit has an activity opposite to these effects and that it can act to prevent erectile function in diseases that result in penile fibrosis.