Meme kanseri hücre hattı MCF-7 üzerinde taksan sınıfı bileşiklerin ultra seyreltilmiş konsantrasyonlarının sitotoksik etkilerinin değerlendirilmesi
Evaluation of cytotoxic effects of ultra diluted concentration of taxane class compounds on the breast cancer line MCF-7
Yazar: SİNEM ŞEKER
Danışman: PROF. DR. İLHAN ONARAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Dosetaksel = Docetaxel ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Paklitaksel = Paclitaxel ; Sitotoksinler = Cytotoxins ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Tıp-geleneksel = Medicine-traditional

Özet:
Günümüzde kullanılan klasik ilaç tedavilerinde hasta üzerinde görülen yan etkiler ve standart tedavilerin kısıtlı kaldığı durumlar görülmektedir. Ultra seyreltik dozlarla yan etkisiz bir tedavi şekli olan homeopatik tedavi çok uzun yıllardan beri çok çeşitli hastalıklarının tedavisinde uygulamalarda yer bulmaktadır. Son yıllarda bu tedavinin mekanizmalarını çözmeye yönelik çalışmalar hız kazanmıştır. Ancak gen ekspresyon çalışmalarının da dahil edildiği moleküler çalışmalarda çoğunlukla bitki ekstraktlarının ultra seyreltik dozlarının etkileri incelenmiştir. Geleneksel ilaçların bu yöndeki etkilerini araştıran çalışmaların yetersiz olması göz önünde bulundurularak, bu çalışmada meme kanseri tedavisinde kullanılan taksan sınıfı bileşiklerin 1x10-6-1x10-30 kat ultra seyreltilmiş konsantrasyonlarının gen ekspresyonu üzerindeki etkilerinin ortaya çıkartılması amaçlandı. MCF-7 ve 3T3 hücreleri ile yapılan çalışmada gen ekpresyonunun yanı sıra çalışılan konsantrasyonların sitotoksisite ve hücre iskeleti yapısı üzerindeki etkileri de incelendi. Taksan sınıfı bileşiklerden olan paklitaksel ve dosetakselin ultra seyreltilmiş dozları, MCF-7 ve 3T3 hücre soylarında uygulanması sonucu hücre canlılığında ve hücre proliferasyonunda kısmen azalmalar görüldü. Moleküler düzeyde gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi (RT-PZR) ile her iki hücre grubunda incelenen 5 adet genin (p53, p21, COX-2, TUBB2A, TUBB3) ifadesinde ilaca ve seyreltme oranlarına bağlı olarak değişimler tespit edildi. Hücre iskeleti yapısını immunfloresan yöntemi ile incelediğimizde, her iki hücre grubunda ve her iki ilaç uygulamasında  aktin yapısında değişme olmadığı, ancak tübülin yapısı incelendiğinde mikrotübül ağında ilaca ve doza bağlı bozulmalar görüldü. Bu çalışmadan avagadro sınırını aşan ultra seyreltik dozlardaki paklitaksel ve dosetakselin meme kanseri hücrelerinde, seçilmiş bazı genlerin ekspresyonunu ve tübülin organizasyonunu etkileyebileceği sonucu çıkartılabilir.

Abstract:
Currently, the side effects of conventional drug treatments on the patients as well as insufficient standart treatments has occured. Homeopathic treatment has been used in treating many diseases for many years with ultra diluted concentrations and without side effects. Recently, studies have been accelerated to resolve the mechanism of this treatment. Generally, ultra diluted dosage effects of plant extracts have been examined on molecular studies by incorporating gene expression practices. However, there is an insufficiency of information on molecular effects of the ultra diluted concentrations as related to conventional drugs. In this study, our aim was to investigate the impact of the ultra dilute concentrations (1x10-6-1x10-10) of the taxane class compounds that are being used for breast cancer treatment on cytotoxicity, gene expression and cell skeleton structure in MCF-7 and 3T3 cell line. Results revealed that administration of the paclitaxel and docetaxel had little cytotoxic effect in MCF-7 and 3T3 cell lines. Further more, it was observed by applying RT-PCR method that there are the differences in expression levels of the selected of 5 genes (p53, p21, COX-2, TUBB2A and TUBB3) as both depending upon the drug and dosage. Upon examining the cytoskeletal structure by using immunofluorescence method, we determined no change in both cell line and no effect in their actin structure after administrating both drugs. However, the microtubule network was disorganized in this cells associated to the used drug and dosage. The results of our study may suggest that there are some effects on the expression several selected genes and tubulin organization at ultra diluted dosages that exceeds the Avagadro's limit of paclitaxel and docetaxel in the breast cancer cells.