Rabdomiyosarkom hücre hattında yüksek doz statinlerin neden olduğu myopati üzerine CAPE'in etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of CAPE on myopathy caused by HİGH dose statins in rhabdomyosarcoma cell line
Yazar: SERKAN ŞEN
Danışman: PROF. DR. CANAN YILMAZ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Atorvastatin = Atorvastatin ; Fenetil ester = Phenethyl ester ; Hücre dizisi = Cell line ; Kafeik asit = Caffeic acid ; Miyopati = Myopathy ; Rabdomiyosarkom = Rhabdomyosarcoma ; Rosuvastatin = Rosuvastatin ; Sarkom = Sarcoma ; Sistatinler = Cystatins

Özet:
Bu çalışmada atorvastatin ve rosuvastatinin ER stresi, mitokondriyal hasar, apoptoz indüksiyonu yaparak RD hücre hatlarında miyopatiye neden olduğunu gösterdik, ayrıca bu yolaklarda CAPE (kafeik asit fenetil ester) kombinasyonunun olası koruyucu etki mekanizmalarını araştırdık. Altı hücre grubu oluşturduk. Kontrol, atorvastatin, rosuvastatin, CAPE, atorvastatin+CAPE ve rosuvastatin+CAPE. Apoptoz için OSI analizleri, western blot ve RT-PCR ile ATF4 ve CHOP protein analizi; AnnexinV ölçümü ve otofaji testi yapıldı. Atorvastatin oksidatif strese neden olmuş, Atorvastatin+CAPE kombinasyonu oksidatif hasar oluşturmamıştır. Atorvastatin ve rosuvastatin grubunda, kontrol grubuna nazaran apoptotik ve nekrotik hücre sayısını artmıştır. Atorvastatin+CAPE uygulanan grupta, bu sayılar kontrol grubu seviyesine düşmüştür. Rosuvastin, ATF4 ve CHOP proteinlerini artırmış, fakat atorvastatin uygulanan grupta bu proteinlerin düzeyleri kontrol grubuyla benzerdi. CAPE kombinasyonu ile, rosuvastatinin neden olduğu ER stresi kontrol grubu seviyesine inmiştir. Rosuvastatin ve atorvastatin gruplarında otofaji düzeyleri kontrol grubu ile benzerdi. CAPE uygulanan tüm gruplarda otofaji artmıştır.  Sonuç olarak; atorvastatinin oksidatif stres ve ER stresi oluşturduğu, Rosuvastatinin ER stresini, apoptozu ve nekrozu arttırdığı gözlemlenmiştir. CAPE kombinasyonu atorvastatinin ve rosuvastatinin neden olduğu myopatiden hücreleri korumuştur. Çalışma kapsamında elde edilen veriler GraphPad Prism version 8.0.1 (GraphPad Software, Inc., CA, USA) programı kullanılarak analiz edildi. Verilerin Kolmogorov-Smirnov testi ile normal dağılım gösterip göstermedikleri analiz edildi. Veriler normal dağılım gösterdiği için üç ya da daha fazla grubun kıyası maksadıyla parametrik testlerden One Way ANOVA testi kullanıldı. Değişkenler arasındaki ilişkilerin incelenmesi için Dunnett's korelasyon analizleri yapıldı. P<0,05 istatistiksel anlamlılık düzeyi olarak kabul edildi.

Abstract:
In this study, we demonstrated that atorvastatin and rosuvastatin cause myopathy in RD cell lines by causing ER stress, mitochondrial damage, induction of apoptosis, in addition, investigating possible protective effect mechanisms of CAPE (caffeic acid phenethyl ester) combination in these pathways. We formed six cell group. Control, atorvastatin, rosuvastatin, CAPE, atorvastatin+CAPE and rosuvastatin+CAPE. OSI analyses, ATF4 and CHOP protein analysis by western blot and RT-PCR, for apoptosis; AnnexinV measurement and autophagy assay were performed. Atorvastatin caused oxidative stress, Atorvastatin+CAPE combination did not cause oxidative damage. The number of apoptotic and necrotic cells increased in the atorvastatin and rosuvastatin group compared to the control group. In the atorvastatin+CAPE applied group, these numbers decreased to the control group level. Rosuvastin increased ATF4 and CHOP proteins, but the levels of these proteins in the atorvastatin group were similar to the control group. With the CAPE combination, the ER stress caused by rosuvastatin was reduced to the level of the control group. Autophagy levels in the rosuvastatin and atorvastatin groups were similar to the control group. Autophagy was increased in all CAPE-treated groups. As a result; It was observed that atorvastatin caused oxidative stress and ER stress, and Rosuvastatin increased ER stress, apoptosis and necrosis. The CAPE combination protected cells from myopathy caused by atorvastatin and rosuvastatin.