Korneal neovaskülarizasyonda interferon alfa 2b'nin etkisi
Effects of interferon alpha 2B on corneal neovascularization
Yazar: MÜJDAT KARABULUT
Danışman: YRD. DOÇ. DR. HARUN ÇAKMAK
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Göz hastalıkları = Eye diseases ; Kornea = Cornea ; Korneal hastalıklar = Corneal diseases ; Korneal neovaskülarizasyon = Corneal neovascularization ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
Amaç: Bu çalışmadaki amacımız, korneal neovaskülarizasyonda (KNV) interferon-alfa 2b'nin anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü (anti-VEGF) etkisinin olup olmadığını, eş zamanlı polimeraz zincir reksiyonu (PCR) ve immünohistokimyasal boyama yöntemleriyle araştırmaktır.Yöntem: Otuz adet Wistar-Albino cinsi erkek sıçan randomize olarak onarlı üç gruba ayrılmış ve her bir sıçanın iki korneası da kullanılmıştır. Bütün gruplarda KNV gümüş nitrat çubuklar ile oluşturulmuştur. Her iki göze gümüş nitrat uygulanımı sonrası iki hafta süreyle günde iki damla olacak şekilde birinci gruba 1 milyon İÜ/ mL ve ikinci gruba 3 milyon İÜ/ mL dozunda interferon-alfa 2b; kontrol grubuna ise izotonik salin topikal olarak uygulanmıştır. Çalışma sonunda sıçanlar eterli anestezi altında servikal dislokasyonla sakrifiye edilerek her iki göz korneaları çıkarılmıştır. Sağ kornealar immmünohistokimya boyamada, sol kornealar ise eş zamanlı PCR çalışmasında kullanılmıştır.Bulgular: Mitojen aktive edici protein kinaz-1 gen ekspresyon düzeyi, 1 milyon İÜ/ml ve 3 milyon İÜ/ml gruplarında kontrol grubuna göre istatiksel olarak anlamlı şekilde daha yüksek saptanmıştır (p=0.014, p=0.008, sırasıyla).  Vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörü 2 gen ekspresyonu düzeyi 3 milyon İÜ/ml grubunda kontrol grubuna göre istatiksel olarak anlamlı şekilde daha yüksek saptanmıştır (p=0.028). Kontrol grubu ile 1 milyon İÜ/ml grubu ve 1 milyon İÜ/ml ile 3 milyon İÜ/ml grubu arasında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır. Vasküler endotelyal büyüme faktörü A gen ekspresyonu da 3 milyon İÜ/ml grubunda kontrol grubuna göre istatiksel olarak anlamlı şekilde daha yüksek saptanmıştır (p≤0.05). Kontrol grubu ile 1 milyon İU/ml grubu ve 1 milyon İU/ml ile 3 milyon İÜ/ml grupları arasında yine istatiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır. Ekstrasellüler sinyal düzenleyici kinaz gen ekspresyon düzeyinde ise gruplar arasında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır (p=0.545). İmmunhistokimyasal boyamada grupları karşılaştıracak düzeyde yeterli boyanma elde edilememiştir.
Sonuç: Çalışma sonunda, normalde anti-VEGF aktivitesi bilinen interferon-alfa 2b'nin KNV'de gen ekspresyonu düzeyinde anti-VEGF etkisinin olmadığı görülmüştür. Farklı denekler ve tedavi süresi ile farklı sonuçlar elde edilebilir.	
          
Anahtar kelimeler: Korneal neovaskülarizasyon, vasküler endotelyal büyüme faktörü, interferon-alfa 2b, eş zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu, immünohistokimya.

Abstract:
Objective: To investigate whether or not interferon-alpha 2b has an anti-vascular endothelial growth factor (anti-VEGF) effect on corneal neovascularization (CNV) detected by real time polymerase chain reaction (PCR) and immunohistochemical staining.
Method: Thirty Wistar-Albino male rats were divided into three groups of ten rats each, and two corneas were obtained rom each rat. CNV was induced by application of silver nitrate to the corneas for all groups. In the first group 1 million IU/ml and in the second group 3 million IU/ml interferon-alfa 2b and in the control group isotonic saline was dropped to both eyes two times a day for two weeks after application of silver nitrate to the corneas. At the end of the study, rats were sacrificed by cervical dislocation under ether anesthesia and both of the corneas were removed. The right corneas were used for immunohistochemistry staining and the left ones were used for real time polymerase chain reaction.
Results: Mitogen activated protein kinase-1 gene expression levels were detected significantly higher in both 1 million IU/ml and 3 million IU/ml groups compared to the control group (p = 0.014 and p = 0.008, respectively). Vascular endothelial growth factor receptor-2 gene expression levels were found to be significantly higher in 3 million IU/ml than the control group (p = 0.028). There was no difference between the control and 1 million IU/ml and between 1 million IU/ml and 3 million IU/ml groups for the vascular endothelial growth factor receptor-2 gene expression. Vascular endothelial growth factor-A gene expression levels were also detected significantly higher in 3 million IU/ml group than the control group and there was no difference between the control and 1 million IU/ml and between 1 million IU/ml and 3 million IU/ml groups at the vascular endothelial growth factor-A expression level (p≤0.05). At the extracellular signal regulated kinase gene expression levels, there was no difference between all groups (p = 0.545). Immunohistochemical staining was insufficient to compare all groups.
Conclusion: At the end of the study, it has been shown that interferon-alfa 2b does not have anti-VEGF effects in the level of gene expression on CNV despite its known anti-VEGF activities. Varied results can be obtained by using different subject and different study periods.
Key words: Corneal neovascularization, vascular endothelial growth factor, interferon-alfa 2b, real time polymerase chain reaction, immunohistochemistry.