Mutasyonel yaklaşımlarla farklı enzim kokteylleri üreten "Bacillus subtilis" suşlarının oluşturulması
Construction of "Bacillus subtilis" strains producing various enzymes by mutagenesis
Yazar: MERAL BİLGİLİSOY
Danışman: PROF. DR. NUMAN ÖZCAN
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2003
Konu: Ziraat = Agriculture
Dizin: Bacillus subtilis = Bacillus subtilis ; Enzimler = Enzymes ; Etil metan sulfonat = Ethyl methane sulphonate ; Mutasyon = Mutation

Özet:
öz YÜKSEK LİSANS TEZİ MUTASYONEL YAKLAŞIMLARLA FARKLI ENZİM KOKTEYLLERİ ÜRETEN Bacillus suhtilis SUŞLARÎMN OLUŞTURULMASI MERAL BİLGİLİSOY ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ZOOTEKNİ ANABİLİM DALI Danışman: Prof.Dr. Numan ÖZCAN Yıl:2003, Sayfa: 97 Jüri: Prof.Dr. Numan ÖZCAN Prof.Dr. Hasan Rüştü KUTLU Doç.Dr. Sadık DİNÇER Bu çalışmada, iki Bacillus sp.(R$KK244, RSKK246) enzim üretimini değiştirmek amacıyla Ethyl-methansulphonate (EMS) ve Etihidium Bromid (EtBr) ile mutasyona uğratıldı. RSKK244 ve RSKK246'nm EMS ile muamelesi sonunda 244M1, 244M2 (likenaz-, ksilanaz", CMCase" ct-amilaz4) ve 246M3 (likenaz+> ksilanaz+, CMCase" a-amilaz+) kolonileri saptandı. Her iki Bacillus sp. EtBr ile muamele edilmesine rağmen RSKK244'de hiçbir mutant koloni saptanmadı. RSKK246'da ise 246M4, 246M5 (likenaz", ksilanaz", CMCase+, a-amilaz+) ve 246M6, 246M7 (likenaz+, ksilanaz+, CMCase+, a-amilaz") mutant kolonileri oluştu. Orijinal bakterilerin ve mutantların hücre dışı kültür sıvılarında bulunan toplam proteinler bant profilleri bakımından SDS-PAGE'de karşılaştırıldı. Protein konsantrasyonları belirlendikten sonra enzim aktivasyon deneyleri yapıldı. Yalnızca 246M4 mutantının a-amilaz aktivitesi 1/6 oranında azaldı. Enzim genleri köreltilen diğer mutantlarda ise söz konusu genlere ait enzim aktiviteîeri görülmedi. Enzim üretimini arttırmak ve yeni enzim kombinasyonları oluşturmak için ksilanaz ve likenaz enzim genleri pUB110 plazmid vektörüyle 244M1 ve 246M4 mutantlarına transforme edilmeye çalışıldı. Fakat transformasyon gerçekleşmedi. Anahtar Kelimden Mutasyon, enzim, EMS, EtBr

Abstract:
ABSTRACT MSc THESIS CONSTRUCTION OF Bacillus subûlis STRAINS PRODUCING VARIOUS ENZYMES BY MUTAGENESIS MERAL BİLGİLİSOY DEPARTMENT OF ANIMAL SCIENCE INSTITUTE OF NATURAL AND APPLIED SCIENCES UNIVERSITY OF ÇUKUROVA Supervisor: Prof.Dr. Numan ÖZCAN Year: 2003, Page: 97 Jury: Prof. Dr. Numan ÖZCAN Prof. Dr. Hasan Rüştü KUTLU AssocProf. Dr. Sadık DİNÇER In this research, two Bacillus strains (RSKK244 and RSKK246) were mutagenezed by using Ethyl-methanesulphanate (EMS) and Ethidium Bromide (EtBr). Main purpose of this study was to change mutagenezed cells' enzyme production. After the treatment of RSKK244 and RSKK246 with EMS, we obtained 244M1, 244M2 (lichenase",.xylanase", CMCase", a-amylase4), 246M3 (lichenase+, xylanase+, CMCase", a-amylase+) colonies. However, When These two strains (RSKK244 and RSKK246) were treated by EtBr, we could not obtain any mutant colonies from RSKK244 but we obtained 246M4, 246M5 (lichenase", Xylanase", CMCase+, a-amylase*) and 246M6, 246M7 (lichanase+, xylanase+, CMCase+, a- amylase"). Extracellular protein lines of both mutant strains and original strains were compared by using SDS-PAGE. After evuluating protein concentration of mutant colonies, enzyme activation experiments were performed only 246M4 mutant activity was 1/6 times decreased than orginal RSKK246. On the other hand, enzyme activities of the mutants which were got doll were not observed. To increase enzyme production in mutants, xylanase and lichenase genes with pUBHO plasmid vector tried to transformed into 244M1 and 246M4 but transformation was not observed. Key Words; Mutagenesis, enzyme, EMS, EtBr II