Sıçanlarda geçici fokal serebral iskemi sonrası sitikolin ve hipoterminin nöronal apopitozis üzerindeki nöron koruyucu etkileri
Neuroprotective effets of citicoline and hypothermia on neuronal apoptosis following transient focal cerebral ischemia in rats
Yazar: SONER ŞAHİN
Danışman: PROF.DR. ENDER KORFALI
Uludağ Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroşirürji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2006
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Nöroloji = Neurology ; Nöroşirürji = Neurosurgery

Özet:
ÖZETStrok ölümlerin ve uzun dönem ağır nörolojik bozuklukların en önemlinedenlerinden biridir ve apopitozis serebral iskemi patolojisinde kritik roloynar. Çalışmamızın amacı, geçici fokal serebral iskemi reperfüzyon modeliuygulanan sıçanlarda nöronal apoptotik hücre ölümünün engellenmesindesitikolin'in hafif dereceli hipotermi ile kombine edilmesinin nöron koruyucuetkilerinin araştırılmasıdır. Erkek SD (275 Â± 25 g) sıçanlarda orta serebralarterde geçici oklüzyon (OSAo) oluşturuldu. OSAo uygunluğu ipsilateralparietal kortekste Laser Doppler Flowmetre monitörizasyonu ve işlem sonrasınörolojik muayene ile doğrulandı. Tüm deney hayvanları (Grup 1, shamhariç) 2 saat oklüzyon ve takiben 24 saat reperfüzyona alındı. Grup 2'ye(Kontrol) %0,9 NaCl, Grup 3'teki normotermik (37Â±0,5ºC) deney hayvanlarınaSitikolin (400mg/kg ip), Grup 4'teki hipotermik (34Â±1ºC) deney hayvanlarınaSitikolin (400mg/kg ip) uygulandı. 24 saat reperfüzyon sonrası transkardiyakperfüzyon uygulandı. Dekapitasyon sonrası beyinler immunohistokimyasalişlemler için hazırlandı. Kesitler H&E ile boyandı ve OSAo sonrası infarktsınırı lokalize edildi. Komşu alanlarda kesitlerde bcl-2, kaspaz 3, kaspaz 9 vebax immun boyamaları yapıldı. Grup 2 bcl-2 immunohistokimyasalskorlarında (0,71Â±0,75) sırasıyla grup 3 ve grup 4 ile karşılaştırıldığındaazalma saptandı (2,33Â±0,81; p<0,05), (2,20Â±0,83; p<0,05). Kaspaz 3proteinleri, grup 2'de (2,28Â±0,95) grup 4 (1,50Â±0,83; p<0,05) ilekarşılaştırıldığında yüksek ekspresyon gösterdi. Bax proteinleri grup 2'de(1,85Â±1,06) grup 4 (0,40Â±0,54; p<0,05) ile karşılaştırıldığında artmış olarakbulundu. Kaspaz 9 immunohistokimyasal skorlarının ortalama değerleri içinGrup 2 (2,29Â±0,96; p<0,05) ve Grup 4 (0,20Â±0,44; p<0,05); Grup 3(1,00Â±0,70; p<0,05) ve Grup 4 (0,20Â±0,44; p<0,05) karşılaştırılmalarındaistatistiksel anlamlı farklılık tespit edildi. Sonuçlarımız Sitikolin ve hafifdereceli hipoterminin geçici fokal serebral iskemi sonrası serebralhasarlanmayı iyileştirdiğini kanıtlamaktadır. Bu durum nöronal hasarlanmanınilerlemesinin hem apoptotik süreçlerin azalması hem de iskemi-reperfüzyonhasarlanmasının nötralizasyonu ile sınırlandırılabileciğini akla getirmektedir.iiAnahtar kelimeler: Geçici fokal serebral iskemi, apopitozis, sitikolin,hipotermiiii

Abstract:
SUMMARYNEUROPROTECTIVE EFFECTS OF CITICOLINE AND HYPOTHERMIA ONNEURONAL APOPTOSIS FOLLOWING TRANSIENT FOCAL CEREBRALISCHEMIA IN RATSStroke is the leading cause of death and long term morbidity andapoptosis plays a critical role in pathology of cerebral ischemia. The aim ofthis study is to investigate the neuroprotective effects of a combined therapywith citicoline and mild hypothermia in prevention of neuronal apoptotic celldeath following focal cerebral ischemia-reperfusion model in rats. Focalcerebral ischemia was induced in male SD (275 Â± 25 g) rats by transientocclusion of middle cerebral artery (MCA). Adequacy of MCA occlusion wasmonitored with laser-Doppler flowmetry over the ipsilateral parietal cortex andtested with post procedural neurologic examination. All animals underwentischemia (except group 1, sham) for two hours, followed by 24 hours ofreperfusion. Group 2 (control) received 0,9% NaCl; group 3 receivedciticoline (400 mg/kg ip) in normothermic (37Â±0,5ºC) animals; group 4received citicoline in mild hypothermic (34Â±1ºC) animals. After the rats werereperfused for 24h transcardiac perfusion was carried out. Followingdecapitations, brains were prepared for immunohistochemical studies.Sections from each rat were stained with H&E to localize the infarct bordersafter MCA occlusion. Adjacent sections were stained with bcl-2, caspase 3, 9and bax immunostaining. Group 2 bcl-2 immunostaining scores (0,71Â±0,75)were decreased when compared group 3 and group 4, respectively(2,33Â±0,81; p<0,05), (2,20Â±0,83; p<0,05). Caspase 3 proteins were highlyexpressed in group 2 (2,28Â±0,95) when compared with group 4 (1,50Â±0,83;p<0,05). Bax proteins were increased in group 2 (1,85Â±1,06) when comparedgroup 4 (0,40Â±0,54; p<0,05). We determined statistically significantdifferences in group 2 (2,29Â±0,96; p<0,05) vs group 4 (0,20Â±0,44; p<0,05)and group 3 (1,00Â±0,70; p<0,05) vs group 4 (0,20Â±0,44; p<0,05) for meanvalues of cas 9 immunohistochemical scores. Our data proved thatcombination of citicoline with mild hypothermia ameliorated cerebral damageivafter transient focal cerebral ischemia, by reducing apoptotic processes or byneutralizing the ischemia reperfusion injury.Key Words: Transient focal cerebral ischemia, apoptosis, citicoline,hypothermiav