RHO kinaz yolağının coronavirüs enfeksiyonundaki rolünün araştırılması
The role of RHO kinase pathway in coronavirus infection
Yazar: İBRAHİM BOZGEYİK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SERDAR ÖZTUZCU
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Korona virüs enfeksiyonları = Coronavirus enfections ; Korona virüsler = Coronaviridae ; Rhokinaz = Rhokinase ; Solunum sıkıntı sendromu = Respiratory distress syndrome

Özet:
Coronavirüsler (CoV) insanlar başta olmak üzere birçok memelilerde ve kuşlarda solunum sistemi, gastrointestinal ve sistemik hastalıklara sebep olmaktadırlar. Coronavirüsler insanlarda genellikle solunum sistemi hastalıkları ile ilişkilendirilmişlerdir. Coronavirüsler, 2002-2003 yılları arasında patlak veren ve yüzlerce insanın ölümüne sebep olan şiddetli akut solunum yolu yetersizliği sendromu (SARS) salgını ile insan sağlığı için tehdit oluşturmaktadırlar. Öte yandan SARS-CoV salgınından sonra yeni insan coronavirüsleri tanımlanmıştır ve bu virüsler insan sağlığı için büyük tehdit unsurudur. Rho kinaz uyarı iletim yolağı başta hücre iskeletinin şekillenmesi ve düzenlenmesi olmak üzere kesecik trafiğinin düzenlenmesi, hücre şekillenmesi, hücre döngüsünün düzenlenmesi, hücre bölünmesi, hücre göçü, adezyonu ve farklılaşması gibi birçok hücresel olayın gerçekleşmesinde etkin rol almaktadır. Yapılan çalışmalarda Rho kinaz uyarı iletim yolağı herpes virüsler başta olmak üzere birçok virüs enfeksiyonu ile ilişkilendirilmiştir. Virüsler, Rho kinaz yolağı bileşenlerine etki ederek hücre iskeletinin düzenlenmesine etki etmekte ve enfeksiyonlarını kolaylaştırmaktadırlar. Bu çalışmada Rho kinaz uyarı iletim yolağının Coronavirüs enfeksiyonundaki rolünün araştırılması amaçlanmıştır. Bu çalışmada ifade plazmid pMHVR ile transfekte edilmiş HeLa-CEACAM hücre hattı ve moleküler tabanlı Coronavirüs çalışmalarında model olarak kullanılan MHV-A59 fare Coronavirüsü kullanılmıştır. Rho kinaz uyarı iletim yolağı ile ilişkili olduğu bilinen 32 genin mRNA seviyelerine Nano teknoloji temelli yüksek kapasiteli Real-Time PCR olan Fluidigm BioMark? HD Sistem ile bakılmıştır. Yapılan bu çalışmada, ilginç şekilde CoV enfeksiyonu sonucu taranan genlerin çoğunun ifade seviyelerinde anlamlı bir farklılık saptanamamıştır. Ancak, 6 saat coronavirus enfeksiyonuna maruz bırakılmış hücrelerde kontrol grubuna kıyasla Rho GDP ayrışma inhibitörü gama (RhoGDI?) genin ifade seviyesinde dört kat azalma gözlenmiştir.

Abstract:
Coronaviruses are known to cause respiratory tract infections, gastrointestinal tract infections, and systemic disease in humans, other mammals, and birds. Furthermore, they are responsible for common colds of humans. Coronaviruses became important for human health during the severe acute respiratory syndrome (SARS) outbreaks of 2002-2003 and caused hundreds of deaths. Moreover, novel coronaviruses also identified after SARS epidemic and they are still risk factor for human health. Rho signaling pathway plays essential role in regulating various cellular process such as cytoskeletal dynamics, vesicular traffic, morphogenesis, cell cycle progress, cell division, migration, adhesion and differentiation. Several studies have showed that Rho kinase pathway plays crucial role in viral infections, well documented with herpes viruses. Viruses modulate the Rho signaling pathway and as a result cause deregulation of cytoskeletal dynamics. The present study was aimed to examine the role of Rho signaling pathway in Coronavirus infection. In this study, HeLa-CEACAM cell lines transfected with expression plasmid pMHVR and MHV-A59 mouse hepatitis coronavirus were used as a model for coronaviral infection. mRNA expression levels of 32 genes that are known to have a role in Rho kinase pathway were examined by high-throughput, nanotechnology-based Fluidigm BioMark HD system Real-Time PCR. In this study we examined mRNA expression levels of Rho kinase pathway members. In this study surprisingly, expression levels of the most of the pathway members was not altered. However, the downregulation of RhoGDI? (4-fold) was found to be highly significant in six-hours infected cells compared to control group.