Salvıa argentea L. etanolik ekstraktının kimyasal kompozisyonu, in vitro ve in vivo anti-inflamatuvar aktivitesi ve toksisite potansiyeli
In vitro and in vivo anti-inflammatory activities and toxicity potential of Salvia argentea L. ethanolic extract
Yazar: ALMONTHER ALHAMEDİ
Danışman: PROF. DR. NEFİSE ÜLKÜ KARABAY YAVAŞOĞLU
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Antiinflamatuar ajanlar = Anti inflammatory agents ; Fitokimya = Phytochemical ; Genotoksisite = Genotoxicity ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; İn vitro = In vitro ; İn vivo = In vivo

Özet:
Salvia argentea L. (Lamiaceae), çok eski çağlardan beri birçok hastalığın tedavisinde kullanılan Akdeniz bölgesi orijinli tıbbi bir bitkidir. Bu çalışmada, in vitro ve in vivo modeller kullanılarak S. argentea L. etanol ekstraktının potansiyel toksisitesini ve anti-inflamatuar aktivitesini araştırmak için deneysel bir araştırma yapılmıştır.
S. argentea L. etanol ekstraktının fitokimyasal içeriği HPLC-DAD analizi ile belirlenmiş olup ekstrede klorojenik asit, p-hidroksi benzoik asit,  kafeik asit,  kumarik asit,  rutin,  luteolin-7-glukozit,  apigenin-7-glukozit, rosmarinik asit,  leutolin, naringenin, apigenin, ve salvigenin bulunduğu ortaya konmuştur. 
S. argentea L. ekstraktının potansiyel sitotoksisitesi, sağlıklı ve kanser hücre hatları [insan kolon karsinoma hücre hattı (CaCo-2), normal insan akciğer fibroblastı (CCD-34Lu), insan servikal kanser hücre hattı (HeLa), insan karaciğer kanseri hücre hattı (Hep-G2), insan prostat kanseri hücre hattı (PC-3) ve insan meme adenokarsinom hücre hattı (MDA-MB-231)] üzerinde incelenmiştir. Ekstraktının, HeLa ve PC-3 dışında, CaCo-2, CCD-34Lu, Hep-G2, MDA-MB-231 hücre hatlarının canlılığını etkilemediği belirlenmiştir. Genotoksisite belirlemesi Ames Salmonella/mikrozom test ile ortaya konmuş olup ekstrenin Salmonella typhimurium TA100, TA98, TA1537 ve TA1535 suşlarına karşı mutajenik olmadığı tespit edilmiştir.
In vitro anti-inflamatuvar etki çalışmaları LPS ile aktive edilmiş fare makrofaj hücre hattı RAW 264.7 ve insan lösemi monositik hücre hattı THP-1 üzerine ekstre uygulaması sonrasında nitrik oksit (NO), proinflamatuar sitokinler olan interlökin (IL-1β), interlökin (IL-6), ve tümör nekroz faktörü-α (TNF-α) düzeyleri ölçülerek belirlenmiş olup S. argentea L. ekstresinin hücre canlılığını etkilemeden uyarılmış RAW264.7 ve THP-1 makrofajlarında NO, IL- β, IL-6 ve TNF-α salınımını baskıladığı belirlenmiştir.
 In vivo anti-inflamatuvar etki çalışmasında, sıçanlar üzerinde karagenan indüklü akut inflamasyon modeli oluşturulmuş, S. argentea L. ekstresi (50, 75 ve 100 mg/kg b.w) ve indometazin (10 mg/kg b.w) oral uygulamasını takiben pençe ödemi ölçülmüştür. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında uygulanan dozlarda anti-inflamatuar aktivite tespit edilmiştir. Çalışma sonunda serum reaktif protein (CRP) üretimi ELISA analizi ile değerlendirilmiş olup CRP seviyeleri önemli ölçüde azalmıştır. Ayrıca S. argentea L. ekstresinin 2000 mg/kg vücut ağırlığında bile akut toksik etki göstermediği belirlenmiştir. 
Bu sonuçlar, Salvia argentea L. etanol ekstresinin, toksik etki oluşmaksızın güçlü anti-inflamatuar aktiviteye sahip olduğunu ve potansiyel bir ilaç aday olabileceğini göstermiştir.

Abstract:
Salvia argentea L. (Lamiaceae) is a medicinal plant originating from the Mediterranean region that has been used since ancient times in the treatment of many diseases. In the present study, an experimental investigation was conducted to explore the potential toxicity and anti-inflammatory activity of Salvia argentea L. extract using in vitro and in vivo models.  
An HPLC–DAD analysis revealed that S. argentea L. extract contained chlorogenic acid, p-hydroxy benzoic acid, caffeic acid, coumaric acid, rutin, luteoline-7-glucoside, apigenine-7-glucoside, rosmarinic acid, leutolin, naringenin, apigenin, and salvigenin. 
The potential toxicity of S. argentea L. extract was evaluated on healthy and cancer cell lines [colon adenocarcinoma (CaCo-2), human lung flbroblasts (CCD-34Lu), human cervical cancer (HeLa), human hepatocellular carcinoma (Hep-G2), human prostate cancer (PC-3), and human breast cancer cell line (MDA-MB-231)].  S. argentea L. extract was not affecting the viability of CaCo-2, CCD-34Lu, Hep-G2, MDA-MB-231 cell lines except HeLa and PC-3 cells. The potential genotoxicity of the extract was assayed using Ames Salmonella/microsome tests and the test revealed that S. argentea L. extract was non-mutagenic towards Salmonella typhimurium strain TA100, TA98, TA1537, and TA1535.  
In vitro anti-inflammatory activity of the extract was investigated in LPS-activated murine macrophage RAW 264.7 and human monocytic cell line THP-1 by measuring the level of nitric oxide (NO), pro-inflammatory cytokines interleukin (IL-1β), interleukin (IL-6), and tumor necrosis factor- α (TNF-α).  S. argentea L. extract suppressed the release of NO, IL- β, IL-6, and TNF-α without affecting cell viability. 
A carrageenan-induced rat model of acute inflammation was used in the in vivo experiments. S. argentea L. extract (50, 75 and 100 mg/kg b.w) and indomethacin (10 mg/kg b.w) were given orally prior paw edema induction of rats. The extract showed anti-inflammatory activity compared to the control group. Production of serum reactive protein (CRP) as an inflammatory marker was evaluated by ELISA analysis and the extract significantly reduced the levels of CRP in treated rats. Animals administered the 2000 mg/kg b.w. dose of S. argentea L. extract showed no apparent signs of toxicity. 
As a result, these results demonstrated that Salvia argentea L. ethanol extract has potent anti-inflammatory activity without toxic effects.