İstanbul'daki yüzme havuzlarından alınan su ve biyofilm örneklerinin mikrobiyolojik analizi
The microbiological analysis of water and biofilm samples taken from swimming pools in Istanbul
Yazar: AYŞENUR TÜRKMEN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. ZUHAL ZEYBEK
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Amipler = Amoeba ; Bakteriler-aerobik = Bacteria-aerobic ; Biyofilmler = Biofilms ; FISH = FISH ; Halk sağlığı = Public health ; Kültür teknikleri = Culture techniques ; Legionella = Legionella ; Legionella pneumophila = Legionella pneumophila ; Yüzme havuzları = Swimming pools

Özet:
Günümüzde insanlar yüzme havuzlarını spor, eğlence, sağlık amacıyla sıklıkla kullanmakta ve yüzme esnasında havuzlardaki çeşitli mikroorganizmalar tarafından olumsuz yönde etkilenmektedirler. Bu mikroorganizmalardan olan ve suyun kirliliği hakkında bilgi veren toplam aerobik heterotrofik bakterilerin sayısının ?200 kob/ml olması gerektiği, T.C. Sağlık Bakanlığı tarafından bir yönetmelik ile yayınlanmıştır. Bu yönetmelikte yer almayan, Legionella cinsi bakteriler ile özgür yaşayan amipler de yüzme esnasında insan sağlığını tehdit edebilecek diğer mikroorganizmalar arasındadır. Birçok su ortamında sıklıkla rastlanan bu mikroorganizmalar, uygun ortam bulduklarında havuz sularında da serbest halde yaşayabilirler. Ayrıca havuzların çeşitli yüzeylerinde oluşmuş biyofilm tabakasına da tutunarak sayılarını arttırabilir hatta zamanla bu tabakadan koparak tekrar suya geçebilirler.Yüzme havuzlarının sağlık riski bakımından değerlendirilmesi amacıyla çalışmada 25 adet yüzme havuzuna ait hem su (25) hem biyofilm örneklerinde (25) toplam aerobik heterotrofik bakteriler (TAHB), Legionella cinsi bakteriler ve özgür yaşayan amipler (ÖYA) araştırılmıştır. Çalışmada hem kültür hem floresan in situ hibridizasyon (FISH) yöntemi kullanılmıştır. Su ve biyofilm örneklerinin kültür yöntemine göre incelenmesinde toplam aerobik heterotrofik bakteriler için water plate count agar, Legionella cinsi bakteriler için buffered charcoal yeast extract (BCYE) agar, özgür yaşayan amipler için non nutrient agar (NNA) kullanılmıştır. Aynı örneklerin FISH yöntemine göre incelenmesinde, özgür yaşayan amiplerden Acanthamoeba ve Hartmanella cinsleri için spesifik olan sırasıyla ACANTHA ve HART 498 probları ile Legionella cinsi bakteriler için spesifik olan Leg 705 ve Legionella pneumophila serogrup 1 için spesifik olan Leg PNE1 probları kullanılmıştır.İncelenen havuz sularının 20'sinde (%80), toplam aerobik heterotrofik bakteriler ?200 kob/ml olarak saptanmıştır. Legionella cinsi bakterilere kültür yöntemine göre su ve biyofilm örneklerinde sırasıyla %0 ve %4 oranında rastlanırken, FISH yöntemine göre %24 ve %28 oranında rastlanmıştır. Özgür yaşayan amiplere kültür yöntemine gore su örneklerinin %16'sında biyofilm örneklerinin %8'inde rastlanırken FISH yöntemiyle inceleme sonucunda su ve biyofilm örneklerinde sırasıyla %28 ve %20 Acanthamoeba, %0 ve %4 Hartmanella cinsi özgür yaşayan amipler tespit edilmiştir.Çalışmanın sonuçlarından ilimizde bulunan ve kontrolleri yapılan havuzların T.C. Sağlık Bakanlığı'nın yayınlamış olduğu yönetmeliğe göre genellikle temiz olduğu anlaşılmıştır. Mikroorganizmaların tespiti için FISH yönteminin kültür yöntemine göre daha üstün olduğu sonucuna varılmıştır. Bununla beraber mikroorganizmaların elde edilmesi için kültür yönteminin altın standart olduğu bir kez daha anlaşılmıştır. Nitekim çalışma esnasında bu yöntemle izole edilen tüm bakteri ve protozoonların patojen olup olmadıklarının araştırılması için yeni çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Today people use the swimming pools frequently for sport, fun and health. During the swimming activity they meet with various microorganisms. Number of total aerobic heterotrophic bacteria group which is one of the these microorganisms and gives information about the water pollution, should be ? 200 cfu / ml according to the a regulation which is issued by the Ministry of Health. Legionella bacteria and free-living amoeba which are not included in this regulation, are among the other microorganisms that might threat human health during the swimming. These microorganisms are often found in many aquatic environments and when they find a suitable environment, they can live freely in the water of the pools. In addition, they may increase their number with holding the biofilm layer which is formed on the various surfaces of the pools. Even they can pass into the water again with break from this layer in time.We aimed to investigate total aerobic heterotrophic bacteria (TAHB), Legionella bacteria and free living amoebae (FLA) in both water and biofilm samples taken from 25 swimming pools. For this purpose, either culture or fluorescent in situ hybridization (FISH) methods were used. The examination of water and biofilm samples by culture method, were carried out using plate count agar for the total aerobic heterotrophic bacteria, BCYE agar for Legionella bacteria, non-nutrient agar (NNA) for the free-living amoebae. For the FISH method we used ACANTHA and HART 498 probes specific for free-living amoebae, respectively Acanthamoeba and Hartmanella genera, and also Leg 705 and Leg PNE1 probes specific for Legionella type bacteria.The count of total aerobic heterotrophic bacteria were determined as ? 200 cfu/ml in 20 of examined pool water (80%), Legionella bacteria were detected in 0% and 4% of the water and biofilm samples, respectively by culture metod. The results of FISH analyses showed that Legionella bacteria were abundant as a result of FISH analysis, in the samples of water and biofilm, respectively 24% and 28% Legionella bacteria. Free living amoebae were detected 16% and 8% of the water and biofilm samples, respectively by culture method. The results of FISH analyses showed that free living amoebae were abundant as a result of FISH analysis, in the samples of water and biofilm, respectively 28% and 20% Acanthamoeba, 0% and 4% Hartmanella free-living type amoebae have been identified.The results of this study shows that, according to the regulations published by the Ministry of Health, the pools which were controlled and located in the city are generally clean. FISH method for the detection of microorganisms are found to be superior than the method of culture. However, to obtain of microorganisms, it?s again understood that the culture method is the gold standard. Indeed, new studies are needed to investigate all the isolated bacteria and protozoa whether they are pathogenic or not with this method.