Tetraploid trifolium pratense l.(çayır üçgülü) kalluslarında bazı izoflavonların(fitoöstrojen)analizi
Analysis of some isoflavones (phytoestrogen) in Tetraploid trifolium pratense l. calluses
Yazar: TUĞBA ERÇETİN
Danışman: PROF.DR. MEHMET CİHAT TOKER
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
ÖZETYüksek Lisans TeziTETRAPLOİD Trifolium pratense L. (ÇAYIR ÜÇGÜLÜ) KALLUSLARINDA BAZIİZOFLAVONLARIN (FİTOÖSTROJEN) ANALİZİTuğba ERÇETİNAnkara ÜniversitesiFen Bilimleri EnstitüsüBiyoloji Anabilim DalıDanışman: Prof. Dr. M. Cihat TOKERFitoöstrojenler östrojen hormonuna benzer etki gösteren bitki sekonder metabolitleridir.Fitoöstrojenler; menopoz ve osteoporoz şikayetlerinin giderilmesinde ve atardamarların elastikiyetininartırılması yoluyla kalp damar hastalıklarının ve hipertansiyonun engellenmesinde etkili olmalarınınyanında göğüs, prostat, rahim, kolon kanserlerine karşı da koruyucu özellik gösteren besindestekleridir. En çok çalışılan fitoöstrojenler, izoflavonlar ve lignanlardır. Trifolium pratense L.(Çayırüçgülü)'de izoflavonlardan formononetin, biokanin A, genistein ve daidzein tespit edilmiştir.Çalışmada doğal tetraploid Trifolium pratense L. tohumlarının çimlendirilmesiyle elde edilenfidelerden alınan eksplantlardan kallus oluşturuldu. En iyi kallus oluşumunu sağlayabilmek amacıylafarklı bitki büyüme düzenleyicileri içeren PCL-2 ve B5 ortamları kullanıldı. Oluşan kallusların ikincive üçüncü alt kültürleri ile diploid ve tetraploid bitkinin çiçek kısımları, asit hidrolizi içerenekstraksiyona tabi tutulduktan sonra ince tabaka kromatografisine (İTK) tatbik edildi. Ardından diyot-array dedektör (DAD) kullanılarak, ters fazlı kolonda (Lichrospher 100 RP-18), yüksek basınçlı sıvıkromatografisinde (HPLC), lineer gradient yöntemle, formononetin, biokanin A, genistein, daidzeiniçerikleri tespit edildi. HPLC'de Trifolium pratense L.'nin diploid çiçeğinde miktar tayininiyaptığımız izoflavonlara ait hiç bir pike rastlanmazken, tetraploid çiçekte en çokformononetin olmak üzere genistein ve biokanin A tespit edildi. Kalluslarda en yüksekizoflavon içeriği (% 0.115= 1.15mg/g formononetin) B5 ortamının (11 mg /L NAA 10 mg /L2,4-D 10 mg /L KIN) ikinci altkültür kalluslarında belirlendi Geri kalan ortamların kalluslarındaise en çok formononetin olmak üzere çeşitli miktarlarda diğer izoflavonları tespit edildi.2007 , 66 sayfaAnahtar Kelimeler: Tetraploid Trifolium pratense L., Çayır üçgülü, İzoflavon, Fitoöstrojen, Kallus,HPLC

Abstract:
ABSTRACTMaster ThesisANALYSIS OF SOME ISOFLAVONES (PHYTOESTROGENS) IN TETRAPLOIDTrifolium pratense L. CALLUSESTuğba ERÇETİNAnkara UniversityGraduate School of Natural and Applied SciencesDepartment of BiologySupervisor : Prof. Dr. M. Cihat TOKERPlant derived estrogens, which are called phytoestrogens, are plant secondary metaboliteswhich influence similar to the estrogen hormones. Phytoestrogens are nutrient support toshow protective attribute for remove menopause and osteoporosis complaints. Besidesphytoestrogens effective to prevent cardiovascular disease via increase elasticity of arteryvessel and hyper blood pressure. The two most studied groups of phytoestrogens are theisoflavones and lignans. It was determined isoflavones such as formononetin, biochanin A,genistein, daidzein in Trifolium pratense L. (Red clover). In this study, calli were formedfrom explants which were obtained from in vitro germinated natural tetraploid T. pratense L.seedlings. Different plant growth regulators used in PCL-2 and B5 media for provide bestcallus formation. Calli of second and third subcultures and diploid and tetraploid plantflowers, following an extraction procedure employ in acid hydrolysis were applied to thinlayer chromatography (TLC). Than extracts were revealed for contents of formononetin,biochanin A, genistein, daidzein with using a reversed-phase C column (Lichrospher 100 RP-18) with linear gradient elution on a high performance liquid chromatography (HPLC)coupled with photodiode array detector (DAD). Natural tetraploid T. pratense L. flower havebiochanin A, genistein beside maximum formononetin, while none of our isoflavones peakwere observed on HPLC chromatograms of diploid flower extracts. In calli, the highestisoflavones contents (% 0.115= 1.15mg/g formononetin) are confirmed in second subculturecallus of B5 medium (11 mg /L NAA 10 mg /L 2,4-D 10 mg /L KIN). In the calli of remainedmedia were determined main isoflavone formononetin but they have different amount of otherisoflavones.2007 , 66 pagesKey Words: Tetraploid Trifolium pratense L., Red clover, Isoflavones, Phytoestrogen, ,Callus, HPLC