Kornea yarası oluşturulan ratlarda resveratrol'ün  erken dönem iyileşmedeki etkisinin  araştırılması
The evaluation of the early term healing effects of resveratrol on  corneal wounds in rats
Yazar: HATİCE ÇİLEM PERÇİN
Danışman: PROF. DR. ZÜLFÜKAR KADİR SARITAŞ
Afyon Kocatepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Cerrahi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Göz = Eye ; Göz hastalıkları = Eye diseases ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kornea = Cornea ; Matriks metalloproteinaz 9 = Matrix metalloproteinase 9 ; Resveratrol = Resveratrol ; Sıçanlar = Rats ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
Kornea yaraları klinisyenlerin kedi ve köpeklerde sıkça karşılaştığı olgulardandır. Çoğunlukla sonuçları açısından genellikle olumsuz ve şüpheli kabul edilen olgular olarak değerlendirilmektedir. Veteriner hekimlikte insan hekimliğindeki tedavi yöntemlerinden faydalanarak, çoğunlukla modifiye tekniklerle sağaltım yapılmaya çalışılmaktadır. 
      
         Bu çalışmada, Fitoaleksin olarak bilinen bir polifenol olan resveratrol günümüze kadar kullanılan ilaç ve cerrahi yöntemlerin yanıtına ek olarak ve belki de sağaltımda antibiyotik kullanımının yan etkilerini azaltmak ve resveratrol maddesinin antitümor, antioksidan etkinlikten destek alarak iyileşmeyi hızlandırmak ya da sekel oluşumunu azaltarak ya da ortadan kaldırarak her iki hekimlik alanında da önemli bir çığır açacak yeni bir sağaltım yöntemi ortaya koymak amaçlanmıştır.
	
         Bu amaçla değişik yaş ve cinsiyette 6 haftalık yaşta toplam 20 adet Erkek Wistar Albino Rat kullanıldı. Denekler iki gruba ayrıldı. 1. Grup denek; Kontol Grubu olarak, 2. Grup Denek; Resveratrol grubu olarak ayrıldı. Her bir ratın sağ gözüne her iki grup hayvanın korneasına Lup (2,5 X) kullanılarak, sentralde vertikal olarak bisturi ucu ile 2-3 mm uzunluğunda desement membrana kadar kornea yarası oluşturuldu ve yara 10/0 Nylon dikiş materyali ile basit ayrı dikiş yöntemi ile dikildi. Tüm gruplardaki deneklere tarsorafi uygulaması yapılarak 5 gün boyunca 1. Grup yani kontrol grubu deneklerde sadece tobramisin, 2. Gruptaki yani resveratrol grubu ratlara ise gözlere tobramisin uygulanmasına ek olarak yem ve resveratrol (30 mg/kg) içeren su gastrik gavaj ile; 1. Gruptaki ratlar ise sadece su ve yem ile ad libitum 11 gün boyunca beslendiler. Postoperatif 11 günlük gözlem boyunca oftalmoskopik bulgular not edildi. Tüm olguların yapılan klinik muayenelerinde neovaskülerizasyon gelişmediği ve korneal saydamlığın oluştuğu gözlendi. 11 gün sonunda sakrifiye edilen hayvanlardan alınan gözler histopatolojik olarak incelendi.

    Kontrol Grubu histopatolojik muayene bulguları; uygun kesit alınamadığı için 1 adet ratın korneası değerlendirilemedi. Her grupta toplamda histopatolojik olarak 9 adet ratın sağ göz korneası çalışılmıştır. 

     Hayvanlardan sakrifikasyon öncesinde kan örnekleri toplandı ve kontrol ve deneme grubundan alınan kan örneklerinde yapılan biyokimyasal analizlerde MMP-9, NO, MDA ve AOS ölçüldü. BDP açısından skor 3: gruplarda sırayla %11.1 ve %0.0 idi (p<0.05). YHİ; skor 3 sırayla %11.1 ve %0.0 (p<0.05) idi. MDA sonuçları sırasıyla 0. gün ve 11. gün Grup K ve Grup R için 1,61±0,316, 2,854±0,57 ve 2,362±0,513 olarak ölçüldü. Grup K'daki artış istatistiksel olarak anlamlıydı (p<0.001). MMP-9 ise sırasıyla; 1,115±0,197, 2,842±0,368 ve 2,437±0,323 olarak ölçüldü Grup K'daki artış istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0.01). AOS açısından gruplar arasında fark belirlendi (p<0.05). RES grubunda 11. gün ölçüm sonuçları 0. gün ölçüm sonuçlarına çok yakın bulundu.  

     Çalışma sonucunda biyokimyasal ve histopatolojik bulgular yönünden yapılan değerlendirmelere göre resveratrolün kornea yara sağaltımında vaskülerizasyonun engellenerek korneanın saydam görünümünün tekrar kazandırılması ve dolayısı ile iyileşmenin sağlanmasında önemli oranda etkili olduğu ancak daha kapsamlı ve uzun takip gerektiren çalışmalara ihtiyaç olduğu sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Corneal wounds are frequently seen in clinical surveys of cats and dogs. Mainly their prognose are worse or susceptible by because of the outcome of the theraphies. Oftenly, veterinary medicine benefits from the human medicine for the treatment of this disease with modified methods.    
  
         In this study, a polyphenol substance phytoalexin known as resveratrol was used to adjunct medical and surgical treatments, presumably reducing the side effects of antimicrobials and benefiting from the antitumour, antioxidant effects of resveratrol substance to improve the recovery and reduce or eliminate the cicatrization which marks an era in both medical grounds within this new treatment method. 
	
         For this purpose, 6 weeks old 20 male Wistar Albino Rat were used in this study. Rats were divided randomly to two groups which Group 1 was control group, and Group 2 was resveratrol group. On each rat for both groups,  right eyes' cornea were ensized centrally for 2-3 mm long using lup magnification (2,5X) and wounds were sutured using10/0 nylon material in simple fashion. Tarsoraphy were made and tobramycin was used for treatment. In experiment group, (group 2) rats were fed additionally with resveratrol (30mg/kg) through gavage feeding and in group 1 rats were fed with food and water ad-libidum only for 11 days. Cases were examined for ophatlmoscopic findings. Following the sacrifice of cases at the 11th day speciments examined histologically. 

       The histopatological examination results showed that 1 cases corneal specimen was unavailable by because of inconvenient slicing during speciment preparation. In each group, 9 right eye of rats' corneal speciment was studied. 

     Blood samples were collected prior to sacrifice of animals and biochemical tests were applied. MMP-9 (Matrix metalloproteinase-9), NO (Nitric oxide), MDA (Malondialdehite), AOS (Antioxidan Status) were measured. According to CTP (Connective tissue prolifetaion) scoring 3: respectively group values were: %11.1 and %0.0 (p<0.05). According to Infiltration of Inflamatuaric Cell (IC) scoring 3: respectively %11.1 and %0.0 (p<0.05). MDA results were respectively: Day 0th and day 11th K and RES groups were measured as 1,61±0,316, 2,854±0,57 2,362±0,513. The increase in Group K was statistically significant (p<0.001). MMP-9 was measured respectively; 1,115±0,197, 2,842±0,368 and 2,437±0,323. Group K increase was also found statistically significant (p<0.01). According to AOS the inter-group difference was statistically significant (p<0.05). RES group's 11th day measurements were so similar to day 0 measurements.   

         As a result, according to biochemical and histopathological findings, resveratrol inhibited the vascularisation in corneal wound healing and retained the transparency of corneal tissue. Resvetratrol showed considerable role by maintaining the healing therefore effected the outcome of the treatment. However, it is seen that extended studies and longer follow-ups are needed better evaluation of the outcomes of resveratrol on the healing of corneal wounds.