Beta glukanın immünomodülatör etkinliğinin hayvan modelinde incelenmesi
Investigations for beta glucan effects of immunomodulatuar in mice
Yazar: KADRİYE USLU
Danışman: PROF. DR. TURGUT İMİR
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bazı mantar, patojenik bakteriler, yulaf ve arpa gibi bitkilerin hücre duvarında bulunan ve önemli bir yapı olan ?? 1,3) glukanın biyolojik aktif immunomodülatör rolü yaklaşık 40 yıldır incelenmektedir. Yapılan birçok çalışmaya rağmen biyolojik etkilerinin bir çok değişkene bağlı olduğu düşünülen glukanların hücresel düzeyde bağlandıkları spesifik reseptörlerin varlığı hakkında bir fikir birliği oluşmamıştır.Çalışmamızda; glukanın immun cevaba olan etkisi, inflamatuvar yanıtın başlamasında ve yönlendirilmesinde etkin rol oynayan TNF- ? , IL- ?? , IL-6, IL-12p40 ve IL-2 sitokinleri üzerinden değerlendirilmiştir. Farklı konsantrasyonlarda hazırlanmış olan glukan ile fare dalak ve periton makrofajları karşılaştırılmıştır. 24 saatlik inkübasyon sonrasında sitokin miktarları ELISA kitleriyle ölçülmüştür. Ayrıca immün yanıt sırasında immün sistem hücrelerinin immun yanıtın siddetini ve yönünü tayin etmek için belirledikleri hücre yüzey reseptörlerinin değişiminde glukanın etkisi akan hücre ölçüm yöntemiyle değerlendirilmiştir. Bunun için anti-CD4, CD8, CD25, CD69, CD62L, CD19, ICAM-I, MHC-class II, F4/80, CD11b- monoklonal antikorları kullanılmıştır. ? -D-glukanların yapısal olarak farklılığının immun cevabı düzenleyici özellikleri üzerine olan etkisi değerlendirilerek; genel immunomodulatör etkinliği hakkında bilgi edinilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaların istatistiksel değerlendirilmesi One-Way ANOVA ve Bağımsız İki Örneklem T testleri ile yapılmıştır.Çalışmalar sonunda; S.cerevisiae'den elde edilmiş glukanın 1 ? g/ml konsantrasyonda en yüksek sitokin değeri verdiğini, yüksek konsantrasyonlarda ise alınan sitokin cevabının düştüğü görülmüştür. Bundan farklı olarak arpa glukanının doza bağlı olarak etkinliğinin arttığı gözlemlenmiştir. Her iki glukan polimerinin özgül olmayan immun yanıtı uyardığı ve sonrasında hücre yüzeyinde aktivasyon ve ko-stimulasyonda görev yapan moleküllerin ifadelenmesini değiştirdiği değerlendirilmiştir.Konuya açıklık getirilmesinde hücresel düzeydeki moleküler mekanizmaların yanında; glukanın fiziksel ve kimyasal yapısının tanımlanmasını sağlayan yeni teknolojilerin bulunması ve varolan teknolojilerin geliştirilmesi de oldukça önemlidir.

Abstract:
ß1,3-glucan, one of the major cell wall components of plants, such as oat, barley,certain fungi and pathogenic bacteria. Glucan?s role as a biologically active immunomodulator has been well documented for over 40 years Despite the progress, it is not clear if there is a separate receptor for glucan. As biological effects of glucans appear to be multifactorial.In our study, the effect of glucan over the immun response is evaluated over the TNF- ? , IL-1 ? , IL-6, IL-12p40 ve IL-2 playing major role in the initiating inflamatuar response and its directing. Spleen cell and periton macrophage prepared with varied glucan consantrations were incubated and after 24 hours ,supernatants were collected from each wells for measured of cytokine production. Also during the immune response the effect of glucan over the determination and alteration of cell surface receptors ,specified by immune cells, directing the degree and the way of immune response was evaluated. For this anti-CD4, CD8, CD25, CD69, CD62L, CD19, ICAM-I, MHC-class II, F4/80, CD11b- monoklonal antibody were used. By evaluating the effect of structural variability of beta glucans over their regulatory characteristic in immune response, acknowledgement of about efficiacy of general immunomodulatory of glucans is aimed. Statitical analysis of studies were made by One-Way ANOVA and Independent samples T test.At the end of the studies we observed the fact that the one obtained from S.cerevesiae gives optimal cytokine level in 1 ? g/ml concentration and this response decreases in high concentration. However, the effaciacy of barley glucan increases related to dose. The fact that both of the glucan polymers induce non-specific immune response and after the expression of molecules responsible for activation and co-stimulation in the cell surface alters, is observed .To sum up; for the elucidation of the topic, the investigation of new thecnologies providing the description of physical and chemical structure of glucans and cellular immune response mechanism, and improvement of existing ones is considerably important.