Hepatosellüler karsinomalarda HBV ve aflatoksin metabolitleri ile aflatoksin maruziyetinin patogeneze  katkısının gen düzeyinde araştırılması
Contribution of HBV and aflatoxin exposureto the pathogenesis of hepatocellular carcinomas in gene level
Yazar: ILLA LAWALI NA AWACHE
Danışman: PROF. DR. FATİH KÖKSAL
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aflatoksinler = Aflatoxins ; Genler = Genes ; Genler-P53 = Genes-P53 ; Hepatit B = Hepatitis B ; Hepatit B virüsü = Hepatitis B virus ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Metabolitler = Metabolites ; Mutasyon = Mutation ; Patojenler = Pathogens

Özet:
Hepatosellüler karsinoma (HSK), dünyada erkeklerde beşinci, kadınlarda ise yedinci sırada görülen yaygın malignitelerden birisi olup primer karaciğer kanser olgularının %70-90'ını oluşturur.  Kronik Hepatit B Virüsü (HBV) enfeksiyon prevalansı ve yüksek aflatoksin maruziyeti, HSK'nın önemli risk faktörlerini oluşturmaktadır.Diğer taraftan özellikle gıda menşeili aflatoksin ve metabolitlerinin karaciğerde neoplastik değişikliklere yol açtığı veya ko-faktör olarak katkı sağladığı uzun süreden beri speküle edilmektedir. Çalışmamızda, özellikle iklim ve beslenme tipi sebebi ile gıda menşeili Aflatoksin maruziyetine açık olan bölgemizde HSK gelişimi üzerinde Aflatoksin B1 (AFB1)'in ve kronik HBV'li hastalarda HBx geninin rolleri değerlendirilecektir. HBV ve Aflatoksinin hepatotoksisitede önemli olduğu düşünülen P53 gen bölgesindeki mutasyonlar üzerinde sinerjistik ilişkisi sorgulanacak ve moleküler mekanizmaları araştırılacaktır. Bu amaçla kronik HBV taşıyıcısı HSK'li hastaların parafine gömülü karaciğer biyopsi örneklerinden deparafinizasyon sonrasında AFB1 seviyesi ve Hbx onkoproteinini kodlayan gen bölgesinin varlığı araştırılacaktır.  HBV ve AFB1'in HSK riski üzerindeki sinerjistik etkisi, tümör supresör p53 geninin kodon 249'da hotspot mutasyon sıklığı DNA dizi analizi veya B planı olarak RFLP yöntemi kullanılarak tespit edilecektir. Çalışmamız sonucunda bölgemizdeki HSK hastalarında Aflatoksine maruziyet durumu ile HSK gelişiminde bir risk faktörü olarak Aflatoksin B1'in önemi belirlenecek ve kronik HBV enfeksiyonlu HSK hastalarının tedavisinde göz önünde bulundurulacak önemli bir veri sağlanacaktır. Çalışmamız sonucunda çalışmaya dahil edilen HSK+HBV'li hasta grubunda yer alan bireylerin ortalama idrar AFM1 konsantrasyon seviyeleri, kontrol grubunda yer alan bireylerin ortalama konsantrasyon seviyeleri ile kıyaslandığında, hasta idrarlarında 0.130absorbans/2600pg/ml, kontrol grubunda ise 0,179 absorbans/1600 pg/mL değerleri ile hasta grubundaki AFM1 konsantrasyonunun daha yüksek olarak bulunmuş, kontrol grubu bireylerden 3 (%14.2)'ünün, hasta grubunda ise 4  (%11.4)'ünün  idrar AFM1 tespit seviyesi altında kalmıştır. R249S mutasyon varlığının belirlendiği DNA örneklerinde HSK'lı hastalara ait örneklerin  6/35 (%17.1)'sında ve 5'inde (%14.3), kontrol grubu bireyleri arasında ise her iki yöntem ile yalnızca 2'sinde (%9.6) tümör supresör geni p53'de  ilgili kodonda AGG>AGT mutasyon varlığı tespit edilmiştir. DNA dizi analizi yöntemi ile p53 geninde R249S mutasyonu tespit edilen 5'i HSK'lı 6 bireyin tamamında da PCR-RFLP ile mutasyon tespit edildiği görüldü.Hasta grubunda AFM1 konsantrasyonu en düşük 1340pg/ml ve en yüksek 5015pg/ml,DNA dizi analizi yöntemi ile mutasyon belirlenen 5bireyin ortalama AFM1 miktarı ise 3139 pg/ml olarak belirlendi.

Abstract:
Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumors in the world, as fifth in males and seventh in females, accounting for 70-90% of primary liver cancer cases. Chronic Hepatitis B Virus (HBV) infection prevalence and high aflatoxin exposure are important risk factors for HCC. On the other hand, it is speculated, especially since the long time that food-derived aflatoxin and its metabolites contribute neoplastic changes in the liver or contribute as a cofactor. Our study will evaluate the roles of Aflatoxin B1 (AFB1) and HBx in patients with chronic HBV, especially on the development of HCC in our region, which is open to food and aflatoxin exposure due to climate and nutritional type. The synergistic relationship between HBV and Aflatoxin which are thought to be important in hepatotoxicity, for mutations in the P53 gene region, will be questioned and molecular mechanisms will be investigated. For this purpose, we will investigate the presence of the gene region encoding Hbx oncoprotein and AFB1 level in the paraffin-embedded liver biopsy specimens of HCC patients with chronic HBV after deparafinization. The synergistic effect of HBV and AFB1 on HCC risk will be determined using the hotspot mutation frequency by DNA sequence analysis of the tumor suppressor p53 gene at codon 249 or by PCR-RFLP method as B plan. As a result of our study, aflatoxin exposure status in the HCC patients in our region and the importance of Aflatoxin B1 as a risk factor in the development of HCC will be determined. Significant data to be considered in the treatment of HCC patients with chronic HBV infection will be provided.The mean urine AFM1 concentration levels of the individuals in the HSK + HBV patient group were 0.130absorbance / 2600pg / ml in the patient urine and 0.1799 absorbance / 1600 pg / mL in the control group compared to the mean concentration levels in the healthy subjects, 3 (14.2%) of the individuals in the control group and 4 (11.4%) in the patient group remained below the AFM1 detection level. DNA samples in which R249S mutation was detected, 6/35 (17.1%) and 5 (14.3%) samples of HCC patients, among the healthy individuals, only two (9.6%) were found to have AGG> AGT mutations at the relevant codon in tumor suppressor gene p53 with both method.PCR-RFLP mutation was detected in all 6 individuals, 5 of whom had HCC, whose DNA sequence analysis method detected R249S mutation in the p53 gene.In the patient group the lowest and highest AFM1 concentration was 1340pg / ml and 5015pg / ml, respectively.