Akım sitometrik B hücreli lenfoblastik lösemi MRD panel antikorlarının hematogon-blast ayrımına yönelik rölatif floresan ekspresyon seviyeleri ve MRD pozitifliği sınır değerlerinin belirlenmesi
Determination of relative fluorescent expression levels for hematogon-blast discrimination and MRD cut-off values of antibodies in flow cytometric B-cells lymphoblastic leukemia MRD panel
Yazar: UĞURCAN EKER
Danışman: PROF. DR. FATMA MERİÇ YILMAZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Antikorlar = Antibodies ; Lösemi-lenfositik-kronik-B hücreli = Leukemia-lymphocytic-chronic-B-Cell ; Minimal rezidüel hastalık = Minimal residual disease

Özet:
Amaç: Akım sitometri analizi, B-ALL tanı ve takibinin yanı sıra ayırıcı tanıların desteklenmesi için hızlı ve güvenilir bir yöntemdir. Morfolojik ve immünfenotipik benzerlikleri nedeniyle neoplastik lenfoblastların, sağlıklı hücre karşılığı olan hematogon (HG) popülasyonundan ayrımı önem teşkil eder. Bu çalışmada akım sitometrik B-ALL MRD panelinde yer alan CD10, CD38, CD45, CD20, CD19, CD34 antikorlarının rölatif floresan ekspresyon seviyelerini HG ve lenfoblastik B hücrelerinde hesaplayarak; bu değerler sayesinde oluşturulacak pozitiflik sınır değerleri ile HG-blast ayrımına yönelik objektif bir yaklaşım getirmek amaçlanmıştır.

Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada Eylül 2019-Aralık 2020 tarihleri arasında Dr. Sami Ulus Kadın Doğum, Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Eğitim ve Araştırma Hastanesi'nde B-ALL ayırıcı tanısı veya B-ALL tanılı hastalarda immünfenotiplendirme ve MRD analizi için Ankara Şehir Hastanesi Akım Sitometri Laboratuvarı'nda kemik iliği numunelerinden B-ALL panel antikorları çalışılan 0-18 yaş arası hastalara ait veriler incelendi. Çalışmada oluşturulan HG, blast ve rezidüel blast hücre gruplarının antijen ekspresyon düzeyleri değerlendirildi. İncelenmesi hedeflenen blast, HG ve rezidüel blast hücre gruplarını sağlıklı hücre grubu olarak değerlendirdiğimiz granülosit, monosit, B lenfosit ve T lenfosit gruplarına oranlayarak rölatif ortanca floresan yoğunluk seviyesi (RMFI) değerleri elde edildi. RMFI değerleri ile hücre gruplarının antijen ekspresyon dereceleri karşılaştırıldı ve ROC analizi ile HG/blast ayrımına yönelik pozitiflik sınır değerleri oluşturuldu.

Bulgular: Çalışmamızda oluşturduğumuz RMFI parametreleri açısından neoplastik lenfoblastlar, Tip 1 HG popülasyonuna göre CD19, CD20 anlamlı derecede yüksek, CD38'i düşük ekspresyon gösterirken CD10 ve CD34 ekspresyonu açısından anlamlı fark bulamadık. Blast/HG ayrımına yönelik ise en güvenilir 2 parametreyi CD19 RMFITle ve CD38 RMFIMo olarak bulduk. Bu iki parametreye ait pozitiflik sınır değerlerini CD19 RMFITle için 4,07; CD38 RMFIMo için 1,51 olarak belirledik. 

Sonuç: Belirlediğimiz pozitiflik sınır değerleri ile HG/Lösemi ilişkili blast ayrımının kantitatif değerlendirme ile objektif olarak yapılabilmesi için bir algoritma geliştirdik. Elde edilen verilerin, B-ALL ayırıcı tanısında faydalı olmasının yanı sıra güvenilir ve standardize B ALL MRD analizi için de önemli bir adım olacağını düşünüyoruz.

Abstract:
Objective: Flow cytometry analysis is a fast and reliable method for the diagnosis and follow-up of B-ALL, as well as to support differential diagnosis. Because of their morphological and immunophenotypic similarities, it is important to distinguish neoplastic lymphoblasts from their healthy cell counterpart, the hematogone population. In this study, by calculating the relative fluorescent expression levels of CD10, CD38, CD45, CD20, CD19, CD34 antigens in the flow cytometric B-ALL MRD panel in HG and lymphoblastic B cells; it is aimed to bring an objective approach to the differentiation of HG-blast with the positivity limit values to be created by these values.

Material and Method: In this study, the data of patients with the age between 0-18 whose B-ALL panel antibodies were studied from bone marrow samples in Ankara City Hospital Flow Cytometry Laboratory for differential diagnosis of B-ALL or immunophenotyping and MRD analysis in patients with B-ALL between September 2019 and December 2020 at the Dr. Sami Ulus Gynecology, Child Health and Diseases Training and Research Hospital were examined. Antigen expression levels of HG, blast and residual blast cell groups formed in the study were evaluated. Relative median fluorescence intensity level (RMFI) values were obtained by proportioning the blast, HG and residual blast cell groups, which were aimed to be analyzed, to the granulocyte, monocyte, B lymphocyte and T lymphocyte groups, which we considered as healthy cell groups. RMFI values and antigen expression levels of cell groups were compared and cut-off values for HG/blast differentiation were established by ROC analysis.

Results: While neoplastic lymphoblasts showed significantly higher expression of CD19, CD20 and lower expression of CD38 compared to Type 1 HG population in terms of RMFI parameters we created in our study, we could not find any significant difference in terms of CD10 and CD34 expression. We found the two most reliable parameters for blast/HG discrimination as CD19 RMFITle and CD38 RMFIMo. The cut-off values were determined 4.07 for CD19 RMFITle and 1.51 for RMFIMo.

Conclusion: We have developed an algorithm to objectively distinguish HG/Leukemia-associated blasts with the cut-off values we have determined, by the quantitative evaluation. We think that the obtained data will be an important step for reliable and standardized B ALL MRD analysis as well as being useful in the differential diagnosis of B-ALL.