Kurkuminin CDK4/6 inhibitörlerinden palbociclib ve ribociclib ile kombinasyonunun meme kanseri hücrelerindeki etkilerinin karşılaştırılmalı analizi
Comparative analysis of curcumin in combination with CDK4/6 inhibitors, palbociclib and ribociclib on breast cancer cells
Yazar: MUSTAFA BURAK DABAK
Danışman: DOÇ. DR. HARİKA ATMACA İLHAN
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Meme kanseri dünyada ve ülkemizde en sık görülen malignitesi ve mortalitesi oldukça yüksek bir kanser türüdür. Mevcut kemoterapötik ajanlarla yaşam süresi uzatılsa da hastaların sadece %5-10'u beş yıldan fazla yaşar ve gelişen ilaç direnci tedavideki en büyük problemdir. Bu nedenle yeni ajanların ve kombinasyonların araştırılmasına ve bu ajanların moleküler mekanizmalarının aydınlatılmasına ihtiyaç vardır. Bu tez çalışmasının birincil amacı Curcuma longa bitkisinden izole edilen kurkuminin (KR) CDK4/6 inhibitörlerinden Palbociclib (PB) ve Ribociclib (RB) ile kombinasyonlarının olası sinerjistik sitotoksik etkilerinin karşılaştırmalı olarak araştırılmasıdır. İkincil amaç ise, saptanacak olası sinerjistik sitotoksik kombinasyonların hangi ölüm tipi/tipleri üzerinden gerçekleştiğini belirlemektir. Hücre canlılığının ölçülmesinde MTT yöntemi kullanıldı. Ajanların IC50 değerlerinin ve kombinasyon indeks değerlerinin belirlenmesinde Calcusyn 2.1 programı kullanıldı. Apoptotik etkilerinin belirlenmesi için DNA fragmentasyonunu ölçen ELISA tabanlı bir kit, otofajik hücre ölümünün tespiti için otofajik vakuolleri spesifik olarak boyayan Autophagy Assay Kit kullanıldı. 
PB ve RB'nin MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinin canlılığını konsantrasyona ve zamana bağlı şekilde azalttığı, apoptozis miktarını ise arttırdığı belirlendi (p<0.05). KR ise meme kanseri hücrelerinin canlılığını konsantrasyona ve zamana bağlı olarak azaltırken, embriyonik böbrek hücre hattı HEK-293'ün canlılığı üzerinde anlamlı herhangi bir değişikliğe neden olmadı (p<0.05). Elde edilen veriler CDK 4/6 inhibitörlerinin KR ile kombine edildiğinde meme kanseri hücre canlılığının sadece PB veya sadece RB uygulanan hücrelere göre daha fazla inhibe olduğunu ve apoptotik etkide önemli bir artış meydana geldiğini gösterdi. Literatürde ilk kez gösterilen bu sinerjistik veriler normal hücrelere sitotoksik etkisi olmayan KR'nin CDK 4/6 inhibitörlerinin sitotoksik etkisi arttırabileceğini ortaya koymuştur.

Abstract:
Breast cancer is the most common malignancy and mortality in the world and in our country. Although life expectancy is extended with existing chemotherapeutic agents, only 5-10% of patients live more than 5 years and developing drug resistance is the biggest problem in treatment. Therefore, it is necessary to investigate new agents and combinations and to elucidate the molecular mechanisms of these agents. The primary aim of this thesis study is to compare the possible synergistic cytotoxic effects of curcumin (KR) isolated from Curcuma longa plant with CDK4 / 6 inhibitors Palbociclib (PB) and Ribociclib (RB). The secondary aim is to determine through which type / types of death possible synergistic cytotoxic combinations to be detected. MTT method was used to measure cell viability. Calcusyn 2.1 program was used to determine the IC50 values and combination index values of the agents. An ELISA-based kit measuring DNA fragmentation was used for determination of apoptotic effects, and Autophagy Assay Kit, which specifically stains autophagic vacuoles for detection of autophagic cell death.
It was determined that PB and RB decreased the viability of MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells depending on concentration and time and increased the amount of apoptosis (p <0.05). While KR decreased the viability of breast cancer cells depending on the concentration and time, it did not cause any significant change on the viability of the embryonic kidney cell line HEK-293 (p<0.05). The data obtained showed that when CDK 4/6 inhibitors were combined with KR, breast cancer cell viability was more inhibited than cells treated with PB or RB alone, and a significant increase in apoptotic effect occurred. These synergistic data shown for the first time in the literature revealed that KR, which does not have a cytotoxic effect on normal cells, can increase the cytotoxic effect of CDK 4/6 inhibitors.