Farklı KOH tedavi protokollerinde endometrial semaforinlerin cevabı:İn vitro çalışma
Response of endometrial semaphorins in different COH treatment protocols: In vitro study
Yazar: ULVİYE CANSU ÖZTÜRK
Danışman: DOÇ. DR. YILDIZ UYAR
Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Büyüme hormonu = Growth hormone ; Büyüme maddeleri = Growth substances ; Endometriyum = Endometrium ; Gonadotropinler = Gonadotropins ; Klinik protokoller = Clinical protocols ; Letrozol = Letrozole ; Over hiperstimülasyon sendromu = Ovarian hyperstimulation syndrome ; Semaforin = Semaphorin ; Tedavi = Treatment

Özet:
AMAÇ: Semaforinler aksonal rehberlik molekülü olarak tanımlanmış daha
sonra nöronal olmayan dokularda da bulunmuştur. Semaforin ailesinin
anjiyogenez, adezyon ve invazyondaki rolleri ile epitelyal-stromal iletişim ve
implantasyon sırasında bir rehberlik mekanizmasını içeren birçok potansiyel
fonksiyonları mevcuttur. İmplantasyon sırasında adezyon, invazyon ve
anjiyogenez major fizyolojik değişiklik olup, implantasyon penceresinde
semaforin 3 aile homologlarının azaldığı gösterilmiştir. Endometriyum
hücrelerinde SEMA azalmasının, implantasyona dayalı infertilitede yararlı
olabileceği düşünülmektedir. Bu amaçla çalışmamızda ovulasyon
indüksiyonunda kullanılan letrozol (L), gonadotropin (Gn) ve büyüme hormonu
(BH) ilaçlarının endometriyumda salgılanan sınıf 3 semaforinleri değiştirip
değiştirmediği in vitro koşullarda araştırılmıştır.
GEREÇ VE YÖNTEM: CRL-1671 insan endometrial epitel hücre hattı
kullanılarak in vitro ilaç etkilerine bakılmıştır. Kontrol grubu 1.Grup olmak üzere
toplam 6 grup oluşturulmuştur. 2.Grup BH, 3.Grup Gn, 4.Grup BH+Gn, 5.Grup
L+Gn, 6.Grup L+Gn+BH'dir. İlaç kombinasyonları klinik uygulamalara uygun
protokoller doğrultusunda BH 1., 4. ve 8. günlerde, L ilk 5 gün, Gn 8 gün
boyunca (L ile uygulandığında doz 1/3 azaltılıp 3. günden itibaren)
uygulanmıştır. İlaç uygulama sonrası immunohistokimya ve immunofloresan
boyama yapılmış ve örnekler 200x büyütmede değerlendirilmiştir. Her bir
preparat için rastgele seçilmiş 5 alanda her 100 hücre içinde pozitif boyanan
hücreler boyanma şiddetleri (i); hafif (1)(+), orta (2)(++) ve şiddetli (3)(+++)
olacak şekilde sayılarak HSCORE değerleri belirlenmiştir [HSCORE: ∑Pi (i+1)
(Pi: % pozitif boyanmış hücre sayısı; i: boyanma şiddeti)]. Sonuçlar One-way 
ANOVA istatistiksel testi ile değerlendirilmiş, istatistiksel olarak p değeri
0.05'ten küçük elde edilen karşılaştırmalar istatistiksel olarak anlamlı kabul
edilmiştir (*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001).
BULGULAR: Çalışmamızda CRL-1671 insan endometrial epitel hücre
hattında, hiç ilaç uygulanmayan kontrol grubu ile karşılaştırıldığında BH ve
BH'nin bulunduğu gruplar olan BH+Gn ve BH+Gn+L gruplarında SEMA 3A,
3F ve 3E'deki azalma istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (p<0.001). BH
ile BH+Gn grubu karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı fark
saptanmamıştır (p>0.05). BH+Gn grubu BH+Gn+L grubu ile
karşılaştırıldığında; istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmamıştır (p>0.05).
SONUÇ: Büyüme hormonunun insan endometrial epitel hücre hattındaki
semaforin 3A, 3E ve 3F'yi azalttığı gösterilmiştir. Letrozol ve gonadotropinlerin
bu etkiye katkı sağlamadığı gösterilmiştir. Ayrıca büyüme hormona letrozol
eklemenin bu noktada bir üstünlüğü olmadığı ve gonadotropinlerle letrozol
yerine büyüme hormonu tercih etmenin bu noktada daha üstün olduğu
gösterilmiştir. İmplantasyonda azaldığı gösterilen semaforinlerin BH ile
azalması, BH'nin implantasyonu arttırdığını desteklemektedir. Öte yandan bu
sonuç yeni çalışmalarla desteklendiği takdirde, implantasyona dayalı
infertilitesi olan kadınlarda ovulasyon indüksiyonu amaçlı kullanılan ilaç
kombinasyonu seçiminde tercih üstünlüğü sağlayabilir, ilaç geliştirme ve ilaç
keşfi amaçlı araştırmalara ışık tutabilir.
ANAHTAR KELİMELER: letrozol, büyüme hormonu, gonadotropin,
endometriyum, semaforin.

Abstract:
OBJECTIVE: Semaphorins have been identified as axonal guidance
molecules and later found in non-neuronal tissues. The semaphorin family has
many potential functions including angiogenesis, adhesion and invasive roles,
and a guidance mechanism during epithelial-stromal communication and
implantation. Adhesion, invasion and angiogenesis during implantation are
major physiological changes, and semaphorin 3 family homologs have been
shown to decrease in the implantation window. It is thought that SEMA
reduction in endometrial cells may be beneficial in implantation-based
infertility. For this purpose, we investigated in vitro conditions that letrozole (L),
gonadotropin (Gn) and growth hormone (GH) drugs used in ovulation induction
in our study altered class 3 semaphorins secreted in the endometrium.
MATERIALS AND METHODS: In vitro drug efficacy was determined using the
CRL-1671 human endometrial epithel cell line. A total of 6 groups were formed,
the control group being the first group. Group 2 GH, Group 3 Gn, Group 4 GH
+ Gn, Group 5 L + Gn, Group 6 L + Gn + GH. Drug combinations were applied
to the clinical applications in accordance with appropriate protocols on days 1,
4 and 8 on GH, 5 days on L, 8 days on Gn (reduced by 1/3 when applied with
L and on day 3). Immunohistochemistry and immunofluorescence staining
were performed and the samples were evaluated at 200x magnification.
Staining intensity (i) of positive stained cells in every 100 cells in 5 randomly
selected 5 sites for each preparation; HSCORE values were determined as
being mild (1) (+), moderate (2) (++), and severe (3) (+++), [HSCORE: ∑Pi (i
+ 1) (Pi:% of cells stained positive; i: staining intensity)]. The results were 
evaluated by One-way ANOVA statistical test. Statistically, p values less than
0.05 were considered statistically significant (* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001).
RESULTS: The decrease in SEMA 3A, 3F and 3E in the GH and GH groups
(GH + Gn and GH + Gn + L groups), in the CRL-1671 human endometrial
epithel cell line was statistically significant when compared to the control group
(p <0.001). When the group GH is compared with the group GH + Gn groups,
no statistically significant difference was found (p> 0.05). When the group GH
+ Gn is compared with the group GH + Gn + L; there was no statistically
significant difference (p> 0.05).
CONCLUSION: Growth hormone has been shown to reduce semaphorin 3A,
3E and 3F in the human endometrial epithel cell line. Letrozole and
gonadotropins have been shown to not contribute to this effect. It has also
been shown that the growth hormone letrozole joint has no superiority at this
point and that it is better to choose growth hormone instead of letrozole with
gonadotropins. Reduction of the indicated semaphorins by implantation
supports GH's implantation. On the other hand, if this result is supported by
new studies, women with implantation-based infertility can provide preference
in the selection of drug combinations used for ovulation induction, and can
shed light on research for drug development and drug discovery.
KEYWORDS: letrozole, growth hormone, gonadotropin, endometrium,
semaphorin.