Karvakrol'ün melanoma hücre hatlarında olası antikanserojenik etkilerinin araştırılması
Investigation of possible anticarcinogenic effects of Carvacrol on melanoma cell lines
Yazar: MEHMET LATİF TAYSI
Danışman: PROF. DR. HALİL ÖZKOL
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
TAYSI ML, Karvakrol'ün Melanoma Hücre Hatlarında Olası  Antikanserojenik Etkilerinin Araştırılması, Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi, Van, 2024. Cilt kanseri, dünyada giderek artan vaka sayıları ile dikkat çekmektedir. Kanser tedavisinde antioksidan içerikli doğal bileşiklerin rolünün araştırılması son yıllarda önem kazanmıştır. Daha önce yapılan bazı çalışmalarda karvakrol (KRV)'ün antioksidan, antimikrobiyal ve antikanser gibi etkilere sahip olduğu bildirilmiştir. Bu çalışmamızda KRV'nin A2058 insan ve B16F10 fare melanoma hücrelerinde antikanserojenik etkileri literatüre göre ilk kez araştırıldı. Bu amaçla yukarıda belirtilen melanom hücre hatlarına in vitro olarak farklı dozlarda (1 µM, 10 µM, 20 µM, 40 µM ve 100 µM) KRV uygulandı ve IC50 değeri MTT sitotoksisite testi ile hesaplandı. Hesaplanan IC50 sonucuna göre KRV'nin melanoma kanser hücreleri üzerinde sitotoksik etki gösterdiği tespit edilmiştir. KRV'nin melanoma hücrelerinin göçü (migrasyon) üzerindeki etkisinin analizi için yara iyileştirme deneyi, hücrelerin koloni oluşturabilme potansiyelini tespit etmek için ise koloni oluşturma deneyi gerçekleştirilmiştir. Söz konusu hücrelerin tutunabilme kabiliyetini test etmek için hücre adezyon deneyi yerine getirilmiş olup CD44 ve CD133 kanser kök hücre yüzey markerlarının ekspresyon seviyelerinin belirlenmesi için ise flow sitometri analizi yapılmıştır. Bunlara ilaveten BAX, BCL-2, TGF-β, CD4 ve CD133 genlerinin ekspresyon düzeylerinin belirlenmesi için RT-PCR analiz yöntemine başvurulmuştur. Elde edilen sonuçlar KRV'nin hücre proliferasyonunu, koloni oluşumunu, hücre adezyonunu azalttığını, hücre göçünü ise yavaşlattığını ortaya koymuştur. KRV uygulanmasıyla CD44 ve CD133 kanser kök hücre yüzey belirteçlerinin hem mRNA hem de protein düzeyinde  ekspresyon seviyelerinin düştüğü not edilmiştir.  Apoptotik gen olan BAX'ın ekspresyonunun (mRNA düzeyinde) arttığı, antiapoptotik gen olan BCL-2'nin  azaldığı görülmüş olup bu da apoptozun indüklediğini işaret etmiştir. Sonuç olarak bu çalışmada KRV'nin hem A2058 insan hem de B16F10 fare melanoma kanser hücre hatlarında sitotoksik ve antikarsinojenik etkiye sahip olduğu gösterilmiştir.Anahtar Kelimeler: Cilt Kanseri, Sitotoksisite, Antikanserojen, Karvakrol.

Abstract:
TAYSI ML, Investigation of Possible Anticarcinogenic Effects of Carvacrol on Melanoma Cell Lines, Van Yüzüncü Yıl University, Institute of Health Sciences, Medical Biology, Master's Thesis, Van, 2024. Skin cancer attracts attention with the increasing number of cases in the world. Investigating the role of antioxidant-containing natural compounds in cancer treatment has gained importance in recent years. In some previous studies carvacrol (CRV) has been reported to has antioxidant, antimicrobial and anticancer effects. In our study, the anticancerogenic effects of KRV on A2058 human and B16F10 mouse melanoma cells were investigated for the first time in the literature. For this purpose, different doses (1 µM, 10 µM, 20 µM, 40 µM and 100 µM) of KRV were applied to the aforementioned melanoma cell lines in vitro and the IC50 value was calculated with the MTT cytotoxicity assay. According to the calculated IC50 result, it was determined that CRV had a cytotoxic effect on melanoma cancer cells. A wound healing experiment was performed to analyze the effect of KRV on the migration of melanoma cells, and a colony formation experiment was performed to determine the colony-forming potential of the cells. Cell adhesion experiment was performed to test the adhesion ability of the mentioned cells, and flow cytometry analysis was performed to determine the expression levels of CD44 and CD133 cancer stem cell surface markers. In addition, RT-PCR analysis method was used to determine the expression levels of BAX, BCL-2, TGF-β, CD4 and CD133 genes. It has been noted that the expression levels of CD44 and CD133 cancer stem cell surface markers decrease at both mRNA and protein levels with the application of CRV. It was observed that the expression of the apoptotic gene BAX (at the mRNA level) increased and the anti-apoptotic gene BCL-2 decreased, indicating the induction of apoptosis. In conclusion, this study showed that KRV has cytotoxic and anticarcinogenic effects on both A2058 human and B16F10 mouse melanoma cancer cell lines. Keywords: Skin Cancer, Cytotoxicity, Anticarcinogenic, Carvacrol.