Sığır mastitislerinden streptokok türlerinin izolasyonu ve moleküler tiplendirilmesi
Molecular typing of streptococcus species isolated from cow's mastitis
Yazar: SEYDA ÇETİN
Danışman: PROF. DR. MEHMET AKAN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmanın amacı, mastitisli sütlerden etken izolasyonu ve Streptokokların mastitis etiyolojisindeki rollerini klasik kültür yöntemi ile belirlemek, ayrıca izole edilen Streptokok suşlarının moleküler tekniklerle (polimeraz zincir reaksiyonu; PCR) tiplendirilmesi ve moleküler epidemiyolojilerinin belirlenmesini sağlamaktır.Bu çalışmada incelenen 1135 süt örneğinin 68 (%6)'sinden Streptococcus spp. izolasyonu gerçekleştirildi. İzole edilen suşların 13 (%19,1)'ü S. agalactiae, 14 (%20,6)'ü S. dysgalactiae ve 41 (%60,3)'i S. uberis olarak identifiye edildi. İzole edilen Streptokokların 9 (%13,2)'unda CAMP pozitiflik belirlendi. Tür düzeyinde identifikasyonda kullanılan fenotipik özelliklerine göre özellikle S. agalactiae suşlarında CAMP pozitifliğinin (%30,8) değişken olduğu belirlendi ve Na-hippurat pozitif sonuç veren suşlar S. agalactiae olarak değerlendirildi. Ayrıca S. uberis suşlarında da CAMP pozitifliği (%12,2) saptandı.İzole edilen etkenlerin hemaglütinasyon özellikleri %7,3 oranında bulunurken, S. agalactiae'da %15,4, S.dysgalactiae'de %7,1 ve S.uberis'te %4,8 olarak tespit edildi. Streptokok suşlarında hemoliz özellikleri incelendiğinde; S. agalactiae'de alfa hemoliz %23,1, beta hemoliz %61,5, gama hemoliz %15,4, S. dysgalactiae'de alfa hemoliz %64,3, beta hemoliz %14,3, gama hemoliz % 21,4 ve S. uberis'te alfa hemoliz %75,6, gama hemoliz %24,4 bulunurken beta hemoliz görülmedi.Lancefield serogruplandırmasında, identifiye edilen 13 S. agalactiae suşunun 12 (%92,3)'sinin B grubunda yer aldığı belirlenirken bir suş tiplendirilemedi. S. dysgalactiae suşlarının tamamının C serogrubunda olduğu belirlendi. İncelenen 41 adet S. uberis suşunun 16 (%39)'sı C serogrubunda, 7 (%17,1)'si B serogrubunda ve 6 (%14,6)'sı D grubunda yer alırken 12 (% 9,3) S. uberis suşu serogruplandırılamadı.İzole edilen streptokokların RFLP-PCR analizinde, 68 suşun 9 (%13,2)'u S. uberis,13 (%19,1)'ü S. agalactiae, 14 (%20,6)'ü S. dysgalactiae ve 32 (%47,1)'si S. parauberis olarak identifiye edildi. OPE-04 primeri ile yapılan RAPD-PCR analizinde; S. agalactiae'da 3, S. dysgalactiae'da 2, S. uberis'te 5 ve S. parauberis'te 9 farklı bant patterni saptandı.Sonuç olarak, süt örneklerinden Streptokokların izolasyon ve identifikasyonu için kullanılan konvansiyonel ve moleküler tekniklerle elde edilen bulgular birlikte değerlendirildiğinde, tür düzeyinde identifikasyonda farklılıklar belirlendi. Konvansiyonel yöntemlerle S. uberis olarak identifiye edilen 41 suşun 9 (%22)'u S. uberis olarak identifiye edilirken 32 (%78)'sinin S. parauberis olduğu belirlendi. Bu sonuç, moleküler yöntemlerin Streptokokların tür düzeyinde identifikasyonu için oldukça yararlı olduğunu ortaya koydu.Anahtar sözcükler: Mastitis, PCR, Sığır, Streptokok

Abstract:
The aim of study, isolation Streptococcus spp. from milk samples according to conventional and than evaluate of these samples according to molecular test and detecting of Streptococcus spp. strains. Additionally detection of molecular epidemiology in mastitis cases.In this study, Streptococcus spp. were isolated from 68 of 1135 (6%) milk samples thirteen (19,1%), 14 (20,6%) and 41 (60,3%) strains were identified as S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis, respectively. CAMP test was positive for 9 of all Streptococcus spp. (13,2%). The CAMP positive property that used for differentiation of strains was S. agalactiae variable (30,8%) especially for S. agalactiae strains. Additionally, the strains were named as S. agalactiae if they had Na-Hippurate positive results. On the other hand CAMP positive property was found in S. uberis strains (12,2%).Haemagglutination properties were detected 7,3%, 15,4%, 7,1% and 4,8% for isolated strains, S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. uberis, respectively. According to haemolysis properties, 23,1% alpha, 61,5% beta, 15,4% gamma haemolysis were observed for S. agalactiae. In S. dysgalactiae strains 64,3% alpha, 14,3% beta, 21,4% gamma haemolysis were detected. Although, 75,6% alpha and 24,4% gamma haemolysis were seen, beta haemolysis was not found for S. uberis.Twelve of 13 strains of were placed into Lancefield serogroup B. One strain of S. agalactiae could not be classfied. All strains of S. dysgalactiae were placed into group C. Sixteen (39%) , 7 (17,1%) and 6 (14,6%) of 41 strains of S. uberis were placed into serogroup C, B and D respectively. But 12 strains (9,3%) couldn?t be classified.Nine (13,2%), 13 (19,1%), 14 (20,6%) and 32 (47,1%) of 68 strains were identified as S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. parauberis by using RFLP-PCR analysis method respectively.According to the RAPD-PCR method with OPE-04 primer, different 3, 2, 5 and 9 patterns were identifed for S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. uberis and S. parauberis, respectively.Nine of 41 strains were detected as S. uberis and 32 strains were S. parauberis by molecular methods although all strains were evaluated as S. uberis by the conventional methods. This result showed that the molecular methods were beneficial for identification of Streptococcus species.Key Words: Cow, Mastitis, PCR, Streptococcus