İnsan akciğer kanseri hücrelerinde (A549) bleomisin ve hesperidin kombinasyonunun apoptoz ve otofaji üzerine etkisinin araştırılması
The investigation of the effect of bleomycin and hesperid combination on apoptosis and autophagy in human lung cancer cells (A549)
Yazar: GÜLESER ÖZER
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET KADİR ERDOĞAN
Bingöl Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Bu çalışmada; kanser tedavisinde geniş ölçekli kullanılan bir kemoterapi ajanı olan Bleomisin (BL)'in bitkisel bir flavonoid olan Hesperidin (Hesp) ile kombinasyonunun insan küçük hücreli olmayan akciğer kanseri A549 hücre hattı üzerindeki antiproliferatif, apoptotik, anti-anjiyogenik ve otofajik etkileri araştırılmıştır.
A549 hücreleri uygun şartlarda kültüre edilerek çoğaltılmış ve analizler gerçekleştirilmiştir. WST-1 hücre canlılığı analizi ile BL, Hesp ve BL+Hesp kombinasyonunun A549 hücrelerinin canlılığına olan etkisi analiz edilmiş ve IC50 değerleri belirlenmiştir. BL ve Hesp arasındaki sinerjizm kombinasyon indeksi (KI) değeri hesaplanarak değerlendirilmiştir. Koloni oluşumu ve yara iyileşmesi analizleri ile, uygulanan tedavilerin koloni oluşumu ve hücre göçü üzerindeki etkisi belirlenmiştir. Anjiyogenez üzerindeki etkinin belirlenmesinde İnsan VEGF ELISA yöntemi kullanılmıştır. Otofajik ve apoptotik etkinlik ise Beclin-1, p53, p21 ve Bax protein ifade düzeylerinin Western blot yöntemi ile ölçülmesi ile belirlenmiştir. Apoptoz ve otofajinin değerlendirilmesi için aynı zamanda Kaspaz-3 ELISA ve nötral kırmızı boyama yöntemleri de kullanılmıştır.
BL + Hesp kombinasyonunun A549 akciğer kanseri hücreleri üzerinde etkili bir antiproliferatif etkiye sahip olduğu görülmüştür. Bu kombinasyonun aynı zamanda sinerjistik etki gösterdiği belirlenmiştir. BL + Hesp tedavisinin A549 hücrelerinin koloni oluşturması ve göçü üzerindeki baskılayıcı etkinliğinin, kontrol gruplarına göre çok anlamlı olduğu gözlenmiştir. Ayrıca kombine tedavi uygulanan hücrelerde VEGF miktarı önemli oranda azalmıştır. BL + Hesp tedavisinin, hem kontrol grubuna hem de sadece BL ile tedavi edilen hücrelere göre, apoptoz ve otofaji üzerinde daha etkili olduğu görülmüştür. Tüm bu bulgular ileri dönem çalışmalarıyla desteklenirse, Hesp ile BL kombinasyonunun akciğer kanseri tedavisinde yeni klinik yaklaşımların geliştirilmesine katkı sunabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
In this study; the antiproliferative, apoptotic, anti-angiogenic and autophagic effects of the combination of bleomycin (BL), a widely used chemotherapy agent in cancer treatment, and Hesperidin (Hesp), a herbal flavonoid, on the human non-small cell lung cancer A549 cell line were investigated.
A549 cells were cultivated under suitable conditions, and the analysis were carried out. The effect of BL, Hesp and BL + Hesp combination on the viability of A549 cells was analyzed by WST-1 cell viability analysis and IC50 values were determined. The synergism between BL and Hesp was evaluated by calculating the value of the combination index (CI). The effects of the treatments on colony formation and cell migration were determined by colony formation and wound healing analyzes. Human VEGF ELISA method was used to determine the effect on angiogenesis. Autophagic and apoptotic activity was determined by measuring Beclin-1, p53, p21 and Bax protein expression levels by Western blot method. Caspase-3 ELISA and neutral red staining methods were also performed to evaluate apoptosis and autophagy.
It has been observed that the BL + Hesp combination has an effective antiproliferative effect on A549 lung cancer cells. This combination has also been found to have a synergistic effect. It was observed that the inhibitory effect of BL + Hesp treatment on colony formation and migration of A549 cells was more significant than control groups. In addition, the amount of VEGF was significantly reduced in cells treated with combined therapy. BL + Hesp treatment was found to be more effective on apoptosis and autophagy than both the control group and cells treated with BL alone. If all these findings are supported by further studies, it is thought that the combination of Hesp and BL may contribute to the development of new clinical approaches in lung cancer treatment.