Elajik asit ( EA )'in insan periferal lenfositlerinde ın vıtro genotoksik ve antigenotoksik etkileri
In vitro genotoxic and antigenotoxic effects of elagic acid( EA ) on human peripheral lymphocytes
Yazar: TUBA DÖRDÜ
Danışman: PROF. DR. RÜŞTÜ HATİPOĞLU
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Bu çalışma, doğal fenolik bir bileşik olan elajik asit (EA)'in insan periferal lenfositlerinde in vitro genotoksik ve antigenotoksik etkilerini kardeş kromatid değişimi (KKD), kromozom anormalliği (KA), mikronukleus (MN) ve tek hücre jel elektroforezi (KOMET) testleri ile belirlemek amacıyla gerçekleştirilmiştir. İnsan periferal lenfositleri 24 ve 48 saat, komet testinde ise 1 saat boyunca  60, 80, ve 100 µg/ml konsantrasyonlardaki EA ile muamele edilmiştir. Ayrıca EMS ve H2O2'nin etkisine karşı EA'nın antigenotoksik etkisinin olup olmadığı araştırmak amacıyla hücreler EA ve bilinen klastojen ve mutajen olan EMS veya H2O2 karışımı ile muamele edilmiştir. 
Bu çalışmada, EA incelenen konsantrasyon ve muamele sürelerinde KKD, KA/Hücre, anormal hücre yüzdesini ve mikronükleus oluşumunu kontrole ve çözücü kontrole oranla istatistiksel olarak uyarmamıştır. Komet testinden elde ettiğimiz sonuçlara göre de EA, nükleusta DNA hasarına sebep olmamıştır. Bu nedenle nükleustan göç eden DNA kırıklarının oluşturduğu nükleusa bağlı kuyruğun uzunluğu, kuyruktaki DNA yoğunluğu ve kuyruk momentinde önemli değişiklik olmamıştır. EA, test edilen muamele süreleri ve konstrasyonlarda  proliferasyon indeksini (PI), mitotik indeksi (MI) ve nukleus bölünme indeksini (NBI) kontrole ve eritici kontrole nazaran önemli derecede etkilememiştir. Yani EA'nın genotoksik ve de sitotoksik etkisi yoktur. 
EA+EMS uygulamasında incelenen muamele sürelerinde ve konsantrasyonlarda EA, kontrol ve çözücü kontrole oranla EMS kaynaklı artan KKD sayısını, KA/Hücre, anormal hücre yüzdesini ve MN oluşumunu önemli oranda azaltmıştır. EA+EMS uygulamasında EA, EMS kaynaklı azalan MI'yı pozitif kontrole göre 24 ve 48 saatlik muamele sürelerinde 100 µg/ml konsantrasyonda  istatistiksel olarak önemli derecede artırmıştır. Yine EA, EMS kaynaklı azalan PI'yı pozitif kontrole oranla arttırmıştır. EA, EMS kaynaklı azalan NBI'yı test edilen muamele sürelerinde ve konsantrasyonlarda  pozitif kontrole oranla istatistiksel açıdan önemli derecede arttırmıştır.  EA+H2O2 uygulamasında EA, H2O2 kaynaklı artan kuyruk uzunluğunu ve kuyruk momentini pozitif kontrole oranla 80 ve 100 µg/ml konsantrasyonlarda, kuyruktaki DNA yoğunluğunu ise 100 µg/ml konsantrasyonda pozitif kontrole oranla istatistiksel açıdan önemli oranda düşürmüştür.

Abstract:
The aim of this study was to investigate the genotoxic and antigenotoxic effects of Ellagic Acid (EA) (a natural phenolic compound found in plants) on human peripheral lymphocytes using sister chromatid exchange (SCE), chromosomal aberration (CA), micronucleus (MN) and single cell gel electrophoresis (SCGE) tests. Cells were treated with 60, 80 and 100 µg/ml EA for 24 and 48 hrs for chromosome aberration, micronucleus and sister chromatid exchange tests, and 1 hr for the comet assay. Furthermore, EA and EMS , H2O2 (a known clastogen and mutagen) were co-administered into the cell culture to investigate the antigenotoxic potential of EA.
In this study, EA did not induce a statistically significant increase in the SCEs, the aberrations per cell (CA/Cell) and the percentage of abnormal cells (AC%) either in 24- or 48-hr treatment periods and at all concentrations when compared to controls (negative and solvent control). According to the results obtained from the COMET assay, EA did not induce DNA damage. Therefore, EA did not significantly increase the lenght of the DNA tail caused by the DNA breaks migrating from the nucleus, the density of the DNA in the tail and the tail moment.  
EA, when compared to control and solvent control, did not significantly affect PI, MI and NDI values at any concentration or treatment periods. EA, when applied to human lymphocyte cell culture alone, did not show genotoxic or cytotoxic effects.With the co-administration of EA and EMS (EA+EMS), EA significantly decreased the frequency of SCEs, the aberrations per cell (CA/Cell), the percentage of abnormal cells (AC%) and MN formation at all concentrations and all treatment periods. In the combination (EA+EMS), EA induced a concentration-dependent increase in the MI, but that increase was statistically significant only at the highest concentration for 24- and 48-hr treatment periods (100 µg/ml) when compared to positive control. EA increased the EMS-reduced PI when compared to positive control at 24 and 48-hr treatment times and at all concentrations. EA statistically significantly increased the EMS-reduced nucleus division index (NDI) at all concentrations and all treatment periods when compared to positive control. In EA+H2O2 application, EAdecreased the hydrogen peroxide-increased tail length, DNA intensity in tail and tail moment compared to the positive control, but this decrease was statistically significant only at the highest two concentrations (80 and 100 μg/ml) for tail lenght and tail moment, and at the highest concentrations (100 µg/ml) for the DNA intensity in tail.