Vajenden probiyotik bakterilerin izolasyonu ve bunların antikanserojen etkisinin araştırılması
Isolation of probiotic bacteria from the vagina and invsetigation of their anticarcinogenic effects
Yazar: SEVDA ER
Danışman: PROF. DR. MERİH KIVANÇ
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
İnsan mikrobiyomu, insan vücudunda kolonize olan trilyonlarca mikroorganizmadan oluşmuştur. Farklı mikrobiyal topluluklar vajina, ağız, deri, gastrointestinal bölge, burun, üretra ve vücudun diğer bölgelerinde yerleşim göstermektedir. Sağlıklı kadınlarda vajinal mikrobiyotanın büyük bir kısmı laktik asit bakterileri tarafından oluşturulmakta olup, bu bakteriler vajinal mikrobiyotanın dengesini sağlamaktadır. Son zamanlarda dikkat, laktik asit bakterilerinin, kanser riskini azaltması üzerine çekilmektedir. Laktik asit bakterilerinin antikanser aktiviteleriyle ilgili literatürde çalışmalar yer almaktadır.
Çalışmamızda, sağlıklı kadınların vajinasından izole edilen laktik asit bakterileri, diğer bakteriler ve mayalar, API CHL-50, VITEK II, 16s rRNA dizi analizi ve MALDI-TOF Kütle Spektrometre Tekniği'yle tanımlanmıştır. Tanımlanan laktik asit bakterilerinden yüksek hidrojen peroksit ve laktik asit üretim miktarına sahip 2 izolat seçilmiş; bu izolatlardan ekzopolisakkarit elde edilmiştir. Sonrasında, 2 izolatın (Enterococcus faecalis 3M2 ve Enterococcus faecalis 8M10) ekzopolisakkaritlerinin, HeLa hücreleri (serviks karsinoma hücreleri) ve HUVEC hücreleri (insan göbek kordon ven hücreleri) üzerindeki sitotoksik etkileri MTT testi (tetrazolyum tesi) uygulanarak araştırılmıştır. Bu sitotoksik aktiviteyi belirlerken HeLa ve HUVEC hücreleri üzerine, farklı konsantrasyonlarda (20mg/mL, 15mg/mL, 10mg/mL, 7.5mg/mL, 5mg/mL ve 2.5mg/mL) laktik asit bakteri ekzopolisakkaritleri uygulanmıştır. Yapılan çalışmada uygulanan 2 bakterinin ekzopolisakkaritlerinin doza bağlı olarak, hücre sayısında farklı etki gösterdiği saptanmıştır. İstatistiksel sonuçlardan elde edilen veriler, Enterococcus faecalis 3M2 ekzopolisakkaritinin en yüksek dozunun (20mg/mL), 24 saatte hücre sayısının azaltılmasında en etkili olduğu sonucunu ortaya koymuştur.

Anahtar kelimeler: Ekzopolisakkarit, HeLa hücreleri, laktik asit bakterileri, MTT testi, vajina florası.

Abstract:
In healthy women, the vaginal microbiota is dominated by lactobacilli and these bacteria provide balance of vaginal microbiota. Recently, studies on the anticancer activity of lactic acid bacteria have been focused.
In this study,  examining probiotic properties of lactic acid bacteria isolated from vagina of healthy woman, aims to investigate the anticancer activity of selected lactic acid bacteria.  Microorganisms (326 bacteria and 18 yeast) were isolated from vagina of healthy women (20-40 ages). Lactic acid bacteria, other bacteria and yeast isolated from vagina were identified with API CHL-50, VITEK II, 16s rRNA seguence analysis and MALDI-TOF Mass Spectrometry Techniques. Performing antibiotic susceptibilities, antimicrobial activities, autoaggregation, coaggregation, hydrofobicity assays, acid and bile salt resistivity, hydrogen peroxide, lactic acid and proteolytic quantitations of identified lactic acid bacteria have been determined probiotic properties of these bacteria. Two isolates were choosen from identified bacteria that have high production rate of hydrogen peroxide and lactic acid. Exopolysaccharides were obtained from these bacteria. Afterwards, cytotoxic effects of exopolysaccharides of two lactic acid bacteria (Enterococcus faecalis 3M2 and Enterococcus faecalis 8M10) were studied on HeLa cells (servix carcinoma cells) and HUVEC cells (human umbilical vein endothelial cells) by MTT Assay (tetrazolium assay). To determine this cytotoxic effect, exopolysaccharides of these bacteria were applied on HeLa cells and HUVEC cells at different concentrations (20mg/mL, 15mg/mL, 10mg/mL, 7,5mg/mL, 5mg/mL and 2,5mg/mL). In this study, we determined these exopolysaccharides of two bacteria exerted different effects on cell viability depending on dose. Data from obtained statistical results revealed that maximum dose of exopolysaccharide of Enterococcus faecalis 3M2 (20mg/mL) were the most efficient bacteria on HeLa cell viability at 24h incubation.	

Keywords: Exopolysaccharide, HeLa cells, lactic acid bacteria, MTT assay, vaginal flora.