Sıçan karaciğer hücre hattında (in vitro) prolaktin/prolaktin reseptörünün okratoksin a toksisitesi ile ilişkisinin araştırılması
In vitro investigation into the relationship of prolactin/prolactin receptor with ochratoxin a toxicity in rat liver cell line
Yazar: MESUT CİHAN AYDEMİR
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET AKİF KILIÇ
Akdeniz Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Bilim ve Teknoloji = Science and Technology ; Biyokimya = Biochemistry ; Biyoloji = Biology

Özet:
Okratoksin A (OTA) fungal bir toksin olup birçok besin maddesi OTA tarafından kontamine edilmektedir. OTA başta böbrek ve karaciğer olmak üzere birçok dokuya hasar vermekte olup olası insan karsinojeni olarak sınıflandırılmıştır. OTA'nın hasar verme mekanizmalarından biri hücresel sinyal yolaklarının regülasyonunu bozması olup bu çalışmada prolaktin reseptör formlarının bu mekanizma ile ilişkisinin araştırılması hedeflenmiştir.
WB-F344 sıçan karaciğer hücre hattının canlılık aktivitesini 24 saatte istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde düşüren en düşük OTA dozunun 10 μM olduğu bulunmuştur. Bundan dolayı WB-F344 hücre hattı 24 saate kadar 10 μM OTA'ya maruz bırakılmış ve prolaktin reseptör sinyalizasyonu ilişkili proteinlerin düzeyi Western blot yöntemi ile incelenmiştir. WB-F344 hücrelerinin 24 saat OTA'ya maruz kalması bu hücre hattında kısa form prolaktin reseptör protein seviyesini düşürmüştür. Ayrıca prolaktin reseptör sinyalizasyonunun akış aşağı hedeflerinden olan ERK ve AKT fosforilasyon düzeyinin 10 μM OTA maruziyeti ile zamana bağlı olarak arttığı gözlemlenmiştir. 
Kısa form prolaktin reseptör ifadesinde değişim gözlenmesinin sebebi OTA'ya bağlı olarak ifadesi değişen miRNA'lar olabileceği düşünülmektedir. Literatürde kısa form prolaktin reseptörünün aktivasyonu sonucunda ERK defosforilasyonunu gerçekleştiren bir fosfataz (DUPD1) tanımlanmıştır. Kısa form prolaktin reseptör ifadesinin OTA maruziyetine bağlı azalması, bu fosfatazın aktivitesinin kaybı ile sonuçlanıp ERK fosforilasyonunun devamlılığına katkı sağlayabileceği düşünülmüştür.

Abstract:
Ochratoxin A (OTA) is a fungal toxin and many foods are contaminated by OTA. OTA damages multiple tissues, especially the kidney and liver, and is classified as a possible human carcinogen. One of the damaging mechanisms of OTA is its disruption of the regulation of cellular signaling pathways, and this study aimed to investigate the relationship of prolactin receptor forms with this mechanism.
It was found that the lowest dose of OTA that significantly reduced the viability of the WB-F344 rat liver cell line at 24 hours was 10 μM. Therefore, the WB-F344 cell line was exposed to 10 μM OTA for up to 24 hours and the levels of prolactin receptor signaling-related proteins were examined by Western blot method. Exposure to OTA for 24 hours reduced short form prolactin receptor protein level in WB-F344 cell line. Additionally, it was observed that the phosphorylation level of ERK and AKT, which are also downstream targets of prolactin receptor signaling, increased in a time-dependent manner with 10 μM OTA exposure. 
It is thought that the reason for the change in short form prolactin receptor expression may be miRNAs whose expression changes depending on OTA. A phosphatase (DUPD1) that carries out ERK dephosphorylation as a result of activation of the short form prolactin receptor has been described in the literature. The decrease in short-form prolactin receptor expression due to OTA exposure may result in the loss of activity of this phosphatase and contribute to the sustained phosphorylation of ERK.