Laktasyondaki akut mastitisli süt ineklerinde meme içi uygulanan 1. kuşak sefalosporin ve proteolitik enzim kombinasyonunun tedavideki etkinliğinin araştırılması
The effectiveness of a 1st generation cephalosporine and a proteolytic enzyme combination applied intramammary for the treatment of acute mastitis occured during lactation in dairy cattle
Yazar: ÖNDER AYTEKİN
Danışman: PROF. DR. İBRAHİM TAŞAL
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Enzimler = Enzymes ; Kimotripsin = Chymotrypsin ; Mastit = Mastitis ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Peptid hidrolazlar = Peptide hydrolases ; Proteolitik aktivite = Proteolytic activity ; Sefalosporinler = Cephalosporins ; Süt inekleri = Dairy cows ; Tripsin = Trypsin ; İnekler = Cows

Özet:
Bu çalışma, laktasyondaki akut mastitisli ineklerde meme içi uygulanan proteolitik enzimlerden tripsin ve kimotripsinin tedavideki etkinliğini belirlemek amacıyla yapıldı. Çalışma, akut mastitisli 79 ineğe ait, 120 meme lobunda yapıldı. Klinik semptomlar ve California Mastitis Testi bulgularına göre akut mastitisli meme lobları tespit edildi. Tedavi öncesi, akut mastitisli meme loblarından mikrobiyolojik muayene amacıyla, taşıma besi yeri ihtiva eden tek kullanımlık steril tüplere süt örnekleri alındı. Ayrıca, aynı meme loblarından normal steril tüplere somatik hücre sayımı için süt örnekleri alındı. Tedavide, üç grup oluşturuldu. Parenteral tedavide tüm gruplarda; sefaleksin sodyum 180 mg/ml (Cefamilk®180) 24 saat arayla üç kez kas içi ve ketoprofen 100 mg/ml (Tobrofin®) 24 saat arayla iki kez kas içi prospektüs dozlarında uygulandı. Meme içi tedavide ise; I. gruba, sefapirin sodyum (200 mg) + tripsin (10 mg) + kimotripsin (10 mg) içeren meme tüpü (Sefapir®sağım), 12 saat arayla üç kez meme içi; II. gruba, sefapirin sodyum (200 mg) içeren meme tüpü, 12 saat arayla üç kez meme içi; III. gruba, sefaleksin (250 mg) + neomisin sülfat (250 mg) içeren meme tüpü (Rilexine®500), 12 saat arayla üç kez meme içi uygulandı. Somatik hücre sayımı amacıyla alınan süt örneklerinde en geç iki saat içinde somatik hücre sayımı PortaCheckSCC® ile gerçekleştirildi. Mikrobiyolojik muayenede, süt örneklerinden kanlı agara ekim yapıldı. İzolasyon besiyeri olarak kanlı agar kullanıldı. Kültürler aerobik koşullarda 37°C'de inkübasyona bırakıldı. Besiyerlerinde üreyen kolonilerin makroskopik ve mikroskopik morfolojileri incelendi. İzole edilen mikroorganizmaların identifikasyonunda nutrient agar ve nutrient brothtan yararlanıldı. Vitek 2 cihazına ait test kartları kullanılarak bakteriler identifiye edildi. İzole edilen bakterilerin antibiyotik dirençlilikleri Mueller-Hinton agarda Kirby-Bauer disk difüzyon yöntemi kullanılarak, Clinical and Laboratory Standards Institute kriterlerine göre belirlendi. Tedavi bitiminden 14 gün sonra, meme loblarındaki klinik iyileşme durumu değerlendirildi ve CMT testi uygulandı; tekrar mikrobiyolojik muayene ve somatik hücre sayımı amacıyla süt örnekleri alındı. Enfekte meme loblarında mikrobiyolojik iyileşmenin tespiti amacıyla yeniden kültür yapıldı. Somatik hücre sayıları ölçülerek, SHS değişimlerine bakıldı. Tedavi gruplarındaki örneklerden 16 tür bakteri ve mayalar identifiye edildi. İdentifiye edilen etkenler içerisinde Staphylococcus aureus ve Escherichia coli'nin başı çekmekte olduğu gözlendi. Kullanılan meme içi antibiyotik antibiyogramlarda; I., II. ve III. gruplar için sırasıyla, duyarlı enfekte lob oranları %78,05, %90,24 ve %92,86 olarak tespit edildi. Tedavi gruplarındaki mikrobiyolojik iyileşme oranları I., II. ve III. gruplar için sırasıyla, %90,24, %80,48 ve %67,86 olarak saptandı. Mikrobiyolojik olarak iyileşmeyen meme lobları oranları ise I., II. ve III. gruplar için sırasıyla, %9,76, %19,52 ve %32,14 olarak belirlendi. Klinik iyileşme oranları, enzim içeren grupta (I. grup) %87,23, enzim içermeyen gruplarda (II. ve III. gruplar) ise sırasıyla %57,77 ve %55,35 olarak tespit edildi. Staphylococcus aureus ve Escherichia coli identifiye edilen meme loblarındaki klinik iyileşme oranları sırasıyla, I. grupta %92,30, %100; II. grupta %63,33, %54,54; III. grupta %70,83, %33,33 olarak bulundu. Tedavi gruplarındaki tüm örneklerde tespit edilen somatik hücre sayılarında tedavi sonrası, I. grupta %70,96, II. grupta %53,93 ve III. grupta %61,42 oranında azalma tespit edildi. Staphylococcus aureus identifiye edilen örneklerde tedavi sonrası somatik hücre sayılarındaki azalma, I. grupta %88,02, II. grupta %63,09 ve III. grupta %74,74 olarak saptandı. Escherichia coli identifiye edilen örneklerde tedavi sonrası somatik hücre sayılarındaki azalma, I.grupta %55,83 , II. grupta %50,26 ve III. grupta %47,93 olarak saptandı. Enzimli (I. grup) ve enzimsiz (II. ve III. gruplar) tedavi gruplarında, tedavi sonrası somatik hücre sayısının 50.000 ve 200.000 hücre/ml'nin altına düştüğü meme lobu sayısı oranı; SHS<50.000 için I. grupta %25,53 iken, II. ve III. gruplarda %10,95 olarak; SHS<200.000 için I. grupta %42,55 iken II. ve III. gruplarda %20,54 olarak tespit edildi. Gruplar arasındaki klinik iyileşme ve SHS oranları istatistiksel olarak önemli bulundu (P<0,05). Sonuç olarak, ineklerde akut mastitis tedavisinde meme içi kullanılan tripsin ve kimotripsin proteolitik enzimlerinin (pankreatik proteazlar) antibiyotiklerle kombine edilmesinin tedavi etkinliğini arttırdığı kanısına varıldı.

Abstract:
This study was performed to evaluate the effectiveness of trypsin and chymotrypsin, which are proteolytic enzymes, inoculated intramammary for the treatment of acute mastitis in dairy cattle during lactation. This study was performed in 120 mammary lobes of 79 cattle having acute mastitis. Diagnosis of acute mastitis in the mammary lobes were made on the basis of clinical findings and California Mastitis Test results. Before treatment, milk samples were taken to single use sterile tubes containing transport medium for microbiological analysis from each mammary lobes. Furthermore, same milk samples were also collected to the normal sterile tubes for somatic cell count. For the treatment, three groups were constituted. All three groups received cephaleksin sodium 180 mg/ml (Cefamilk® 180) three times for 24h intervals intramuscularly and ketoprofen 100 mg/ml (Tobrofin®) two times for 24h intervals im according to dose given in the drugs? prospectuses. In the intramammary treatment; first group received an intramammary tube, containing cephapirin sodium (200 mg) + trypsin (10 mg) + chymotripsin (10 mg) (Sefapir® sagim) three times for 12h intervals intramammary. Second group received mammary tube containing cephapirin sodium (200 mg) three times for 12h intervals intramammary. Third group received mammamary tube (Rilexine® 500) containing cephaleksin (250 mg) + neomycine sulphate (250 mg) three times for 12h intervals intramammary. Somatic cell count were performed within two hours after sampling using PortaCheckSCC®. In the microbiological analysis, milk samples were inoculated onto 5-7% sheep blood agar. Cultures were incubated at 37oC in aerobic condition. Colonies were analysed both macroscopically and microscopically. Nutrient agar and nutrient broth were used for the identification of the isolated microorganisms. Test cards of Vitek 2 equipment were used for the microorganism identification. Antibiotic resistance of the isolated microorganisms were determined on Mueller-Hinton agar by Kirby-Bauer disk diffusion method according to Clinical and Laboratory Standarts Institute criterias. Fourteen days after treatment, clinical improvement in the mammary lobes were evaluated and California Mastitis Test were applied. Milk samples were also taken 14 days after treatment for microbiological analysis and somatic cell count. To determine microbiological improvement in the mammary lobes, again cultures were made. SCC changes were evaluated through somatic cell count. In the treatment group samples; 16 bacteria and yeast species were identified. Most of the identified species were Staphylococcus aureus and Escherichia coli. In the intramammary antibiotic antibiograms; sensitive infected mammary lobe ratios in groups I, II and III were 78,05%, 90,24% and 92,86%, respectively. In the treatment groups, microbiologic improvement ratios for groups I, II, and III were 90,24%, 80,48% and 67,86%, respectively. Clinical recovery ratio in enzyme containing group (group I) were 87,23% and this rate in the groups which enzyme did not contain (groups II and III) were 57,77% and 55,35%, respectively. Clinical recovery rate in the mammary lobes which Staphylococcus aureus and Escherichia coli identified were 92,30%, 100% in the group I, 63,33%, 54,54% in the group II and 70,83%, 33,33% in the group III, respectively. In the number of SCC reduction were determined, 70,96% in the group I, 53,93% in the group II and 61,42% in the group III. In the Staphylococcus aureus identified samples, SCC reduction after treatment were 88,02% in the group I, 63,09% in the group II and 74,74% in the group III. In the Escherichia coli identified samples, SCC reduction after treatment were 55,83% in the group I, 50,26% in the group II and 47,93% in the group III. Mammary lobe numbers ratio which SCC after treatment were for SCC<50.000; 25,53% in the group I (enzyme containing group) and 10,95% in the groups II and III (enzyme did not contain) and for SCC<200.000; 42,55% in the group I and 20,54% in the groups II and III. Clinical recovery and SCC rates between groups were statistically significant (P<0,05). As a result; combining trypsin and chymotrypsin which are proteolytic enzymes (pancreatic proteases) to the antibiotics improve treatment efficacy in the treatment of acute mastitis in dairy cattle.