İnsan normal endometrium ve endometriyal adenokarsinom hücre hatlarında netrin-1 ve netrin-4 ekspresyonunun değerlendirilmesi
Evaluation of netrin-1 and netrin-4 expression in human normal endometrium and endometrial adenocarcinoma cell lines
Yazar: ERTAN KARAMAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÜMİT ÇABUŞ
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Adenokarsinom = Adenocarcinoma ; Endometrial neoplazmlar = Endometrial neoplasms ; Hücre dizisi = Cell line ; Netrin-1 = Netrin-1 ; Netrin-4 = Netrin-4 ; Onkogenler = Oncogenes

Özet:
Netrin ailesi, semaforinler, yarıklar ve efrinler gibi protein aileleri ile birlikte nöronal rehberlik ipuçlarını oluşturan yüksek oranda korunmuş bir protein sınıfıdır. Tüm netrinler, laminin süper ailesinin üyeleridir. Netrinlerin birçok sistemde eksprese edildiği ve doku morfogenezi, anjiyogenez, lenfanjiyogenez, tümör gelişimi, hücre göçü, invazyon ve adhezyon, apoptoz ve inflamasyonun düzenlenmesinde görev aldığı gösterilmiştir. Bu özellikleri nedeniyle netrinler çeşitli maligniteler üzerinde araştırmalara konu olmuş ve netrin protein ailesinin bazı kanserlerin gelişiminde hayati rol oynadığını bulunmuştur. 
Endometrium kanseri en sık görülen jinekolojik malignitedir. Sağ kalım genellikle hastalığın evresi ve histolojisine ile belirlenir. Endometrium kanserlerinde evreleme cerrahi olarak yapılır. Yüksek riskli grubundaki hastalarda ise adjuvan radyoterapi endikedir. İleri evre endometrium kanseri için kemoterapi uygulamaları ilave tedavi seçeneklerinden biridir. Tüm kanser türlerinde olduğu gibi endometrium kanserinde de patofizyolojide etken rol oynayan basamakları araştırmak ve hastalığın önceden tespit edilmesine yönelik çalışmalar günümüzde temel amaç haline gelmiştir.
 Biz de çalışmamızda insan normal endometriumu ile endometrium adenokarsinomunda netrin-1 ve netrin-4 düzeylerinin ve reseptörlerinin ekspresyon farkını değerlendirirerek endometrium kanserinin patofizyolojisine yönelik veriler elde etmeyi amaçladık. 
Bu amaçla reprodüktif dönemdeki kadın hastadan, endometrial biyopsi yöntemiyle alınan ve herhangi patoloji saptanmayan fonksiyonel taze endometrium dokusu kullanılmıştır. Ayrıca iki farklı insan endometriyum kanseri (Hec1B ve Ishikawa) hücre hattı kullanılmıştır. Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu çalışması ile netrin-1, netrin-4 ve UNC5B genlerinin Ishikawa ve Hec1B hücre hatları ile doku örneğindeki ekspresyonları araştırılmıştır. 
Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu sonuçlarına göre; netrin-4 geninin Ishikawa hücre hattına göre Hec1B hücre hattında 5,64 kat fazla (p<0.0001, one-way ANOVA), doku örneğinin ise Ishikawa hücre hattına göre 1,43 kat fazla (p=0.03144, one-way ANOVA) eksprese olduğu tespit edilmiştir. UNC5B geninin Doku örneklerine göre Hec1B hücre hattında 3.64 kat fazla (p<0.05, Unpaired t-test) artış olduğu görülmüş ayrıca netrin-1 geninde ise doku örneklerinde Ishikawa hücre hattına göre 1.54 kat fazla (p<0.05, Unpaired t-test) artış saptanmıştır. 
Sonuç olarak, çalışmamızdan elde edilen bu veriler ışığında netrin-1'in östrojen ve progesteron reseptör bağımlı tip I endometrium kanser gelişiminde önleyici, netrin-4 ve UNC5B reseptörünün ise tip 2 endometrium kanseri gelişiminde proonkogen olarak rol oynadığını söyleyebiliriz.
Anahtar kelimeler: Endometrial adenokarsinom, Netrin-1, Netrin-4, UNC5b, Hec1B, Ishikawa, Onkogen

Abstract:
The netrin family is a highly conserved class of proteins that together with protein families such as semaphorins, slits, and ephrins form neuronal guidance cues. All netrins are members of the laminin superfamily. It has been shown that netrins are expressed in many systems and are involved in the regulation of tissue morphogenesis, angiogenesis, lymphangiogenesis, tumor growth, cell migration, invasion and adhesion, apoptosis and inflammation. Because of these properties, netrins have been the subject of research on various malignancies and it has been found that the netrin protein family plays a vital role in the development of some cancers.
Endometrial cancer is the most common gynecological malignancy. Survival is usually determined by the stage and histology of the disease. Staging of endometrial cancers is done surgically. Adjuvant radiotherapy is indicated for patients in the high-risk group. Chemotherapy for advanced endometrial cancer is one of the additional treatment options. As in all types of cancer, research on the steps that play an active role in the pathophysiology of endometrial cancer and studies to detect the disease beforehand have become the main objective today.
In our study, we aimed to obtain data on the pathophysiology of endometrial cancer by evaluating the difference in expression of netrin-1 and netrin-4 levels and receptors in human normal endometrium and endometrial adenocarcinoma.
For this purpose, fresh endometrium application was used in a female patient with reproductive sense, using the endometrial biopsy method, in which no pathology was detected. In addition, two different human endometrial cancer (Hec1B and Ishikawa) cell lines were used. Expressions of netrin-1, netrin-4 and UNC5B genes in Ishikawa and Hec1B cell lines and tissue samples were investigated by real-time polymerase chain reaction study.
According to real-time PCR results; Netrin-4 gene was found 5.64 times more (p<0.0001, one-way ANOVA) in Hec1B cell line compared to Ishikawa cell line. It was determined that the tissue sample was 1.43 times more expressed (p=0.03144, one-way ANOVA) compared to the Ishikawa cell line. It was observed that the UNC5B gene increased 3.64 times (p<0.05, Unpaired t-test) in Hec1B cell line compared to tissue samples. In addition, an increase of 1.54 times (p<0.05, Unpaired t-test) in netrin-1 gene was detected in tissue samples compared to Ishikawa cell line.
In conclusion, in the light of these data obtained from our study, we can say that netrin-1 is inhibitory in the development of estrogen and progesterone receptor dependent type I endometrial cancer. Also we can say that netrin-4 and UNC5B receptors play a role as prooncogenes in the development of type 2 endometrial cancer.