Türkiye'de yetiştirilen bazı sığır ırklarında sığır lökosit bağlanma yetmezliğinin (BLAD) restriksiyon parçacık uzunluk polimorfizmi (RFLP) ile belirlenmesi
Detection of bovine leukocyte adhesion deficiancy (BLAD) in some Turkish cattle breeds with restriction fragment length polymorphism (RFLP)
Yazar: BİLAL AKYÜZ
Danışman: PROF.DR. OKAN ERTUĞRUL
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2004
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
64 ÖZET Türkiye'de Yetiştirilen Bazı Sığır Irklarında Sığır Lökosit Bağlanma Yetmezliğinin (BLAD) Restriksiyon Parçacık Uzunluk Polimorflzmi (RFLP) ile Belirlenmesi. Bu çalışmanın amacı Türkiye'de yetiştirilen bazı sığır ırklarında BLAD allelinin araştırılmasıdır. Bunun için kullanılan moleküler genetik testi Türkiye'de yerleştirmek ve Holştayn yetiştiriciliğinde damızlık adayı buzağılarda BLAD taramasının rutin kullammı için bilgi sağlamaktır. Çalışmanın materyalini, Damızlık Sığır Yetiştiriciler Merkez Birliği ile Tarım Bakanlığının birlikte yürüttüğü projeni test kapsamındaki boğalar ve Damızlık Sığır Yetiştiriciler Birliğine üye çiftliklerdeki Holştayn boğa ve boğa adayları oluşturmuştur. Çalışma Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Genetik A.B.D. Moleküler Genetik Laboratıvarmda yapılmıştır. Çalışmada BLAD allelinin varlığı, PCR-RFLP metodu ile başarılı bir şekilde belirlenebileceği gösterilmiştir. Çalışmada toplam 120 baş Holştayn ve 20 baş İsviçre Esmeri, 20 baş Yerli Kara, 20 baş Boz Irk, 20 baş GAK ve 20 baş DAK sığırından alman kanlar kullanılmıştır. Alman kanlardan fenol-kloroform ekstraksiyon yöntemi ile DNA izolasyonu yapılmıştır. Elde edilen DNATar Kriegesmann ve arkadaşlarının önerdiği primer kullanılarak PCR'de çoğaltılmıştır. Mutasyon bölgesini belirlemek için elde edilen PCR ürünleri Taq I endonükleaz enzimi ile kesilmiştir. Kesilen PCR ürünleri % 2 Tik agaroz jel de elektroforez yapılmıştır. İncelenen Holştayn ırkı sığırların bir boğa ve bir inek olmak üzere ikisinin BLAD yönünden taşıyıcı oldukları belirlenmiştir. İncelenen Holştaynlar içinde homozigot BLAD'lı bireye rastlanmamıştır. Çalışmada incelenen diğer ırklarda BLAD alleline rastlanmamıştır. Toplam 120 baş Holştayn sığırda, mutant BLAD allelinin frekansı 0,0084 olarak hesaplanmışta. Yapılan bu çalışma BLAD 'm Türkiye de yetiştirilen Holştaynlarda da bulunduğu bildiren ilk çalışmadır. Anahtar Sözcükler: BLAD, Holştayn, PCR, restriksiyon enzimi, RFLP,

Abstract:
65 SUMMARY Detection of Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency (BLAD) in Some Turkish Cattle Breeds with Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) The purpose of this work was to study BLAD allele is present in some cattle breeds in Turkey. It was also intended to establish the molecular genetic test used for this reason in Turkey and to provide infrastructure for the routine use of BLAD screening in the calves which are breeding candidate stock in Holstein breed. The material of the study consisted of the bulls used in the progeny testing program, carried out by The Cattle Breeders' Association of Turkey and the Ministry of Agriculture. The study was done in Ankara University, Faculty of Veterinary Medicine Department of Genetics, Laboratory of Molecular Genetics. It was also concluded that PCR-RFLP method can be successfully used to screen the young breeding cattle whether they are carrying BLAD allele. The blood samples obtained from 120 Holstein, 20 Brown Swiss, 20 Anatolian Black, 20 Turkish Grey, 20 South Anatolian Red and 20 East Anatolian Red. The DNA isolation was made from the blood samples using the method of phenol-chloroform extraction. The isolated DNA materials were multiplied in PCR using the primer developed by Kriegsemann et all. In order to determine the area of mutation in PCR products, the PCR products were digested by Taq I endonuclease enzyme. The resulting fragments were analysed on 2 % agarose gel for the absence of a Taq I restiriction site. It was found that one male and another female two of the Holstein cattle were heterozygote BLAD carriers. There was no homozygote BLAD animals. BLAD allele was not found in the other breeds used in the study. The mutant BLAD allele frequency in the 120 Holstein cattle calculation was 0.0084. This is the first study reporting the presence of BLAD in Holstein cattle breed in Turkey. Key Words: BLAD, Holstein, PCR, restriction enzyme, RFLP.