Filoretin: Biyolojik aktivitesi ve yapı-aktivite ilişkisi
Phloretin: Biolojic activity and association with structure activity
Yazar: DİLEK TEKE
Danışman: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmada elma, armut, erik gibi meyvelerin kabuğunda bulunan ve fenolik bir madde olan Filoretin'in, asetilkolinesteraz (AChE), bütirilkolinesteraz (BChE) enzimleri ile insan eritrosit karbonik anhidraz I ve II izoenzimleri (hCA I ve II) üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Öncelikle hCA I ve II izoenzimleri sırasıyla Sefarose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği ile 431,44; 843,41 kat ve %54,54; %35,96  verimle saflaştırıldı. Enzim saflığını belirlemek için sodyumdodesil jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve tek bant gözlendi. Sonrasında Filoretin'in hCA I ve II, AChE ve BChE üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. Filoretin için %50 inhibisyona sebeb olan konsantrasyonu (IC50) ve inhibisyon sabiti (Ki) hesaplandı ve sırasıyla 0,289 µM; 0,308 µM; 0,232 µM; 0,665 µM  ve 0,281 µM; 0,394 µM; 0,182 µM; 0,213 µM olarak hesaplandı. Ayrıca Filoretin'in antioksidan ve radikal giderme kapasitesini değerlendirmek için, demir indirgeme aktivitesi, kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme aktivitesi, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe3+) indirgeme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikalini (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikalini (ABTS∙+) giderme, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikalini (DMPD∙+) giderme ve süperoksit anyon radikalini (O2∙-) giderme aktiviteleri, bipiridil reaktifi ile ferröz iyonları (Fe2+) şelatlama aktivitesi çalışıldı. Mukayese için bütillenmiş hidroksianisol (BHA), bütillenmiş hidroksitoluen (BHT), α-tokoferol ve troloks standart olarak kullanıldı.

Abstract:
In study the in vitro inhibitory effects of Phloretin, found in peel of fruits as apple, pear, plum and become a phenolic compound, on erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes (hCA I and II) and acetylcholine esterase, butyrylcholinesterase were investigated. Firstly, hCA-I and hCA-II were purified by Sepharose-4B-L-Tirozin affinity chromatography column purification of each isoenzyme and 431.44, 843.41with floor respectively and 54.54%, 35.96% with efficiency. For determination of the enzyme purity, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was applied and single band was seen. And then, for determination of IC50 values, Phloretin hCA I and II isozymes and acetylcholine esterase, butyrylcholinesterase were investigated by using hidratase assay and 0.289 µM, 0.308 µM, 0.232 µM, 0.665 µM ve 0.281 µM, 0.394 µM, 0.182 µM, 0.213 µM respectively. Also on Phloretin hCA I-II, acetylcholine esterase and butyrylcholinesterase inhibitory of effects was investigated by the method esterase activity and IC50 and Ki values for each substance was calculated. Continuation of this study, for evaluating antioxidant and radical scavenging capacity Phloretin, Fe3+-Fe2+ reducing capacity, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, reducing capacity by FRAP method, ABTS radical clarifing (ABTS•+), DPPH free radical clarifing (DPPH·)  and DMPD radical clarifing (DMPD•+)  activities, superoxide anion radical  clarifing (O2•-)  and bipyridyl chelating reagents were performed separately and during study, BHT, BHA, α-tocopherol and trolox were used as the reference antioxidant compound. Comparisons were applied with the four standard substances.