PANC-1 hücre hattında resveratrol'ün NF-KB ve HTERT ekspresyonuna bağlı telomeraz aktivitesine etkisi
Effect of resveratrol on telomerase activity due to NF-KB and htert expression in PANC-1 cell line
Yazar: BUŞRA BARA
Danışman: DOÇ. DR. FATMA ZUHAL EROĞLU
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; PANC-1 = PANC-1 ; Pankreas hastalıkları = Pancreatic diseases ; Pankreas neoplazmları = Pancreatic neoplasms ; Resveratrol = Resveratrol ; Telomeraz = Telomerase

Özet:
Erken teşhisi ve diğer pankreatik hastalıklardan ayrımı oldukça zor olan pankreas kanseri, başta gelişmiş ülkeler olmak üzere dünyadaki en ölümcül malign neoplazmlardan biridir. 
Kanser hücrelerinde meydana gelen sınırsız çoğalma yeteneği ile ortaya çıkan ölümsüzlük, telomeraz enziminin artmış aktivitesiyle ilişkilendirilmektedir. Telomeraz aktivasyonu, insan kanserlerinin yaklaşık % 85'inin gelişiminde kritik bir adımdır ve henüz kanser hücrelerinde telomerazın yeniden nasıl aktive edildiği tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle kanser tedavisinde telomeraz aktivitesinin inhibisyonu önemli tedavi seçeneklerinden biri gibi gözükmektedir.
Bu tez kapsamında pankreas duktal adenokarsinom hücre hattı olan PANC-1' de doğal bir bileşik olan Resveratrol'ün, telomerazla ilşkilendirilmiş genler olan hTERT ve NF-κB gen ifadesi ve dolayısıyla pankreas kanser gelişimi üzerindeki etkileri incelenmiştir. 
PANC-1 hücre hattı uygun ortam ve koşullarda çoğaltılarak WST-1 reaktifi ile proliferasyon ve sitotoksisite analizleri gerçekleştirilmiş ve bunların ışığında Resveratrol için IC50 değeri belirlenmiştir. Belirlenmiş olan IC50 dozu kullanılarak; apoptoz, yara kapanma analizi ve telomeraz ilişkili genler olarak belirlediğimiz hTERT ve NF-κB ekspresyon düzeyleri qPCR analizleriyle değerlendirilmiştir.
Saptadığımız bulgular ışığında Resveratrol'ün PANC-1 hücre hattı üzerinde sitotoksik etkisi olduğu tespit edilmiş olup, IC50 değeri 72. saatte 75,80 µM olarak hesaplanmıştır. Tespit edilen IC50 değeri PANC-1 hücre hattına uygulanarak apoptotik etkisi değerlendirilmiştir. Apoptoz sonuçları Annexin V ile değerlendirilmiş ve sonuçlara göre de % 41,9 oranında apoptotik etki tespit edilmiştir. Resveratol'ün PANC-1 hücre hattında hücre migrasyonu ve invazyonuna olan etkisi yine IC50 değeri uygulanarak bakıldığında, 72. saatlik değeri kontrolle kıyaslandığında % 47 oranında hücre göçünü engelleyerek yara hattının kapanmasında gecikmeye neden olduğu tespit edilmiştir.
Telomeraz ile ilişkili olarak saptadığımız genler olan hTERT ve NF-κB gen ifadeleri, IC50 dozu uygulanan PANC-1 hücre hattından elde edilen RNA'lar cDNA'ya çevrilerek LightCycler 480 cihazında qPCR ile değerlendirilmiştir. Bu değrlendirme sonunda Resveratrol'ün, hTERT geninde 1,37 kat, NF-κB geninde ise 1,55 kat ekspresyon seviyesinde artışa neden olduğu saptanmıştır.
Sonuç olarak Resveratrol PANC-1 hücre hattında sitotoksik etki göstererek apoptoza neden olmuştur. Ayrıca hücre migrasyonunu engelleyerek hücre göçünü engellemiştir. Fakat telomeraz ile ilişkilendirdiğimiz gen ifadelerinde beklenen azalma gözlenmemiştir. Bu nedenle çalışmamız deney kapsamını genişleterek devamlılığını gerektirmektedir.

Abstract:
Pancreatic cancer, which is quite difficult to diagnose and differentiate from other pancreatic diseases, is one of the deadliest malignant neoplasms in the world, especially in developed countries.
Immortality, which is caused by the unlimited ability of proliferation in cancer cells, is associated with increased activity of the telomerase enzyme. Telomerase activation is a critical step in the development of about 85% of human cancers and it is not yet fully understood how telomerase is reactivated in cancer cells. Therefore, inhibition of telomerase activity in cancer treatment seems to be one of the important treatment options.
In this thesis, the effects of Resveratrol, a natural compound in pancreatic ductal adenocarcinoma cell line, PANC-1, on genes associated with telomerase, on hTERT and NF-κB gene expression and thus on pancreatic cancer development.
Proliferation and cytotoxicity analyzes were carried out with the WST-1 reagent by replicating the PANC-1 cell line under the appropriate environment and conditions and IC50 value for Resveratrol was determined in the light of these. By using the determined dose of IC50; The expression levels of hTERT and NF-κB, which we determined as apoptosis, wound closure analysis and telomerase related genes, were evaluated by qPCR analysis.
In the light of the findings we found, Resveratrol has been found to have a cytotoxic effect on the PANC-1 cell line, and its IC50 value was calculated as 75.80 µM at 72 hours. The apoptotic effect was evaluated by applying the determined IC50 value to the PANC-1 cell line. Apoptosis results were evaluated with Annexin V and according to the results, 41.9% apoptotic effect was detected. When the effect of resveratol on cell migration and invasion in the PANC-1 cell line was again applied by applying IC50 value, it was found that it caused a delay in closure of the wound line at the 72nd hour compared to the control, preventing cell migration.

hTERT and NF-κB gene expressions, the genes we detected in relation to telomerase, were converted to cDNA by using IC50 dosed PANC-1 cell line and evaluated by qPCR in LightCycler 480 device. As a result, Resveratrol has been found to cause an increase in the expression level of 1.37 times in the hTERT gene and 1.55 times in the NF-κB gene. 
As a result, Resveratrol showed cytotoxic effect on the PANC-1 cell line, causing apoptosis. It also prevented cell migration by preventing cell migration. However, the gene expression we associate with telomerase did not decrease as we wanted. Therefore, our study requires continuity by expanding the scope of the experiment.