Nonylphenol'ün kemik gelişimi üzerine toksik etkisine karşı curcumin'in koruyucu rolü
The protective role of curcumin against toxic effect of nonylphenol on bone development
Yazar: PINAR SUNA
Danışman: DOÇ. DR. ARZU HANIM YAY ; DOÇ. DR. TOLGA ERTEKİN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Alkalen fosfataz = Alkaline phosphatase ; Kemik gelişimi = Bone development ; Kemik ve kemikler = Bone and bones ; Kurkumin = Curcumin ; Nonilfenol = Nonylphenol ; Toksisite = Toxicity ; Toksisite testleri = Toxicity tests

Özet:
NONYLPHENOL'ÜN KEMİK GELİŞİMİ ÜZERİNE TOKSİK ETKİSİNE KARŞI CURCUMİN'İN KORUYUCU ROLÜ
Pınar SUNA
Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Histoloji- Embriyoloji Anabilim Dalı Yüksek Lisans Tezi Mart 2018
Danışmanlar: Doç. Dr. Arzu YAY ve Doç. Dr. Tolga ERTEKİN
ÖZET
Son yıllarda yapılan çalışmalarda, doğal yaşamdaki canlıların ve insanların endokrin sistemi üzerinde tahrip edici etkisi bulunan 'endokrin bozucu' kimyasalların tehlikeli boyutlarda yayılım gösterdiği belirlenmiştir. Endokrin bozucu kimyasallardan en önemlilerinden olan nonylphenolün kemik gelişimi üzerine toksik etkileri ile ilgili yeterli çalışma bulunmamaktadır. Toksik faktörlere karşı curcumin'in koruyucu rolünün anlaşılması ile birlikte çalışmamızda, güçlü bir antioksidan olan curcuminin, nonylphenol'ün kemik gelişimi üzerine toksik etkisine karşı olası koruyucu etkilerinin araştırılması amaçlandı. 
Çalışmada, ağırlıkları 250-300 gr arasında değişen, 3-4 aylık Wistar albino cinsi 30 adet gebe dişi sıçan kullanıldı. Deney grupları her birinde 6 gebe sıçan  olacak şekilde, kontrol grubu, curcumin grubu (100 mg/kg/gün), mısır yağı grubu (150 µl/kg/gün), curcumin+nonylphenol grubu (100 mg/kg/gün+50 µl/kg/gün) ve nonylphenol grubu (50 µl/kg/gün) olmak üzere 5 gruba ayrıldı. Belirtilen dozlar sıçanlara gebeliklerinin 5. gününden 20. gününe kadar gavaj yoluyla verildi. Deney sonunda, fetuslar anne ratların gebeliklerinin 20. gününde sezeryan ile alındı. Kemik gelişimini belirlemek amacıyla, her gruba ait fetüslerin yarısı ikili iskelet boyama metodu için kullanılırken, diğerleri morfolojik ve immünohistokimyasal (tartara dirençli asit fosfataz (TRAP) ve alkalin fosfataz (AP) ekspresyon düzeyleri) analizler için kullanıldı. Ön ekstremite (clavicula, scapula, humerus, radius, ulna) ve arka ekstremite kemiklerinde (femur, tibia, fibula) kemik-kıkırdak oranı ImageJ programı ile belirlendi ve veriler SPSS istatistiksel yazılım programı kullanılarak analiz edildi.
Çalışmada, deney gruplarına ait fetusların ağırlıkları ve plasenta ağırlıkları, baş-kıç, bipariatel uzunluk ve occipito-frontal uzunlukları gruplar arasında karşılaştırıldığında, Nonylphenol grubu diğer gruplarla kıyasla azaldığı, Curcumin+Nonylphenol grubunda ise hemen hemen kontrol grubuna yakın olduğu gözlendi. Ön ekstremite kemiklerinden clavicula, scapula, humerus, radius ve ulna kemiklerinde yapılan tüm ölçüm sonuçlarında en düşük kemik uzunluğu yüzdesi ve kemikleşme alanının yüzdesi değerleri Nonylphenol grubuna aitti. Curcumin+Nonylphenol grubunda ön ekstremite kemiklerindeki değerler neredeyse kontrol grubuna yakındı. Benzer sonuçlar, ikili iskelet boyama metodu uyguladığımız arka ekstremite kemikleri olan femur, tibia ve fibula kemiklerinde de gözlendi. Bununla birlikte immünohistokimyasal boyama sonuçlarımızda, femurlara ait TRAP ve AP ekspresyon değerleri bakımından Nonylphenol grubu ile kontrol grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı derecede farklı olduğu tespit edildi. 
 Bu çalışmada, Nonylphenol'ün kemik metabolizmasını olumsuz yönde etkilediği ve kemik yapımı-yıkım aşamalarını geciktirdiği, Curcumin'in ise bu toksik etkiyi düzelttiği sonucuna varıldı. 
Anahtar Kelimeler: Nonylphenol, Curcumin, ikili boyama, AP, TRAP, kemik gelişimi

Abstract:
THE PROTECTIVE ROLE OF CURCUMIN AGAINST TOXIC EFFECT OF NONYLPHENOL ON BONE DEVELOPMENT
Pınar SUNA
Erciyes University, Institute Of Medical Sciences Department Of Histology- Embriyology MSc Thesis     
 March 2018
Supervisor:  Doç. Dr. Arzu YAY and Doç. Dr. Tolga ERTEKİN
ABSTRACT
Recent studies have shown that chemicals called 'endocrine disrupters' which have disruptive effects on the endocrine systems of organisms and people living in nature are spreading in dangerous dimensions. There are not enough studies related to the toxic effects of nonylphenol (NF), one of the most important endocrine disrupting chemicals, on bone development. When we understanding of the protective role of curcumin against toxic factors, in our study it was aimed to investigate possible protective effects of curcumin, a potent antioxidant, against the toxic effect of nonylphenol on bone development.
In the study, 30 pregnant female rats weighing between 250-300 g, 3-4 months old Wistar albino were used. Experimental rats were equally distrubuted amongst five groups provided that each has 6 of them; the control group, curcumin group (100 mg/kg/day), corn oil group (150 µl/kg/day), curcumin+nonylphenol group (100 mg/kg/day+ 50 µl/kg/day) and nonylphenol group (50 µl/kg/day). The doses given were given by gavage from the 5th day to the 20th day of the gestation. The fetus was removed out on the 20th day of pregnancy by cesarean at the end of study. Half of the fetuses belonging to each group were used for the double skeletal staining method, while others were used for morphologic and immunohistochemical staining (tartaric acid phosphatase (TRAP) and alkaline phosphatase (AP) expression levels) analyses in order to determine bone development. The rate of bone-cartilage in forelimb (clavicula, scapula, humerus, ulna, raidus) and hindlimb bones (femur, tibia, fibula) were determined with ImageJ program and data was analyzed using SPSS statistical software.
In the study, when weights of fetuses and placenta weights, head-ass, bipariatel length and occipito-frontal length of the experimental groups compared between the groups, the decrease in nonylphenol group compared to the other groups, curcumin + nonylphenol group was almost observed to be close to the control group. The nonylphenol group has the lowest bone length percentage and percentage of the ossification area in all measurements of clavicula, scapula, humerus, radius and ulna, anterior limb bones. The values in the anterior limb bones were almost close to the control group in the curcumin+nonylphenol group. Similar results were observed in the bones of the femur, tibia, and fibula from posterior limbs bones which we applied the double skeletal staining method. Moreover, it was detected that TRAP and AP expressions of femur were determined statistically significant differences between the control and nonylphenol groups by using immunohistochemical staining.
In this study is result while the effect of nonylphenol on bone metabolism in the negative direction and delayed the bone-destruction stages, curcumin corrects this toxic effect is achieved.
  Keywords: Nonylphenol, Curcumin, double staining, AP, TRAP, bone development