Pilokarpin indüklü sıçan epilepsi modelinde valproik asit'in NRF 2 ekspresyonu üzerindeki etkisinin araştırılması
An investigation of the effect of valproic acid on NRF 2 expression in pilocarpine induced rat epilepsy model
Yazar: ESİN KURT
Danışman: PROF. DR. MÜJGAN CENGİZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Epilepsi = Epilepsy ; Gen ifadesi = Gene expression ; Pilokarpin = Pilocarpine ; Sıçanlar = Rats ; Valproik asit = Valproic acid

Özet:
Epilepsi gelişiminde endojen ve eksojen etmenler nedeniyle artan reaktif ürünlerin, antioksidan sistemin yetersiz kaldığı durumlarda birikimiyle ortaya çıkan oksidatif stres oldukça etkilidir. Bu çalışmada amacımız Epilepsi tedavisinde sıklıkla kullanılan Valproik asit'in, antioksidan mekanizmada önemli bir rolü olan Nrf 2 gen ekspresyonuna ve bazı antioksidan parametrelere etkisini sıçanlar üzerinde yapılan Lityum-Epilepsi modeli ile belirlemektir.
Çalışmamızda 24 adet Wistar albino erkek sıçan kullanılmıştır. Her biri 8'er sıçandan oluşan 3 gruba ayrıldı. 1. ve 2. gruba lityum (3 meq/kg) enjeksiyonu yapılırken 3. gruba serum fizyolojik uygulandı. 24 saat sonra 1. ve 2. gruba 30 mg/kg tek doz pilokarpin enjeksiyonu yapıldı. Epilepsi oluşturulduktan sonra 1. gruba valproik asit (90mg/kg), 2. gruba ise serum fizyolojik enjeksiyonu yapıldı, kontrol grubuna da serum fizyolojik yapıldı ve deney 15 gün sonra sonlandırıldı. Deney sonunda anestezi ile dekapitasyon işlemi yapıldı ve total beyin çıkarılarak, önce frontal lob daha sonra temporal lob bölgeleri ayrıldı. Alınan dokular -80°C'de saklandı. Elde edilen dokulardan Nrf 2 gen ekspresyonu RT-qPZR ile katalaz (CAT), protein oksidasyonu, glutatyon (GSH), glutatyon peroksidaz (GPx), glutatyon S-transferaz (GST) düzeyleri spektrofotometrik yöntemle belirlendi. 
Çalışmamızda epilepsi grubu ile kontroller karşılaştırıldığında Nrf 2 ekspresyonu,  protein oksidasyonu ve katalaz düzeylerinde anlamlı bir değişiklik görülmemiştir(p>0,05), Glutatyon, GST ve GPx düzeyinde anlamlı bir azalma gözlenmiştir (p<0,05). Valproik asit tedavisi almayan epileptik grupta glutatyon ve GPx düzeylerinin diğer gruplarla kıyaslandığında düşük düzeyde olduğu gözlenmiştir. Sonuçlarımız epilepside akut valproik asit tedavisinin oksidatif stres seviyesinin azaltılmasında önemli bir rolü olabileceğini göstermiştir.

Abstract:
Reactive products increases due to endogen and exogenous factors, have tendency to overload at times of insufficiency of antioxidant system and it reveals oxidative stress that is highly effective on epilepsy occurrence. In this study our main purpose is to locate Valproic Acid's -used frequently on epilepsy treatment effects on Nrf 2 gene expression that take an important part of antioxidant mechanism and some other antioxidant parameters using Lithium-Epilepsy model on rats.
In this study 24 Wistar albino male rats were used. They were split into three groups which consist of 8 rats each. While 1st and 2nd group had Lithium(3meq/kg) injections, 3rd had saline. After 24 hours; one shot of 30mg/kg pilocarpine injection has been had by epileptic groups. After fully developed epilepsy; 1st group took Valproic acid (90mg/kg), 2nd had saline and controls had saline as well until the experiment ended which was after 15 days. At the end of the experiment, anaesthesia and decapitation process took place and with removal of total brain; frontal lobe and temporal lobe had been separated and protected at -80°C. Within the experiment tissues NRF2 gene expression has been determined with RT-qPCR and Catalase, Protein Oxidation, Glutathione, Glutathione Peroxidase, Glutathione-S-Transferase levels have been distinguished with spectrophotometric method. 
In our study, there was no significant change in Nrf 2 expression, protein oxidation and catalase levels (p>0,05), and a significant decrease in Glutathione, GST and GPx levels was observed when epilepleptic group and control were compared (p<0,05). In epileptic group without valproic acid treatment, Glutathione, GST and GPx levels were observed to be low compared to other groups. Our results have shown that epilepsy may have an important role in reducing level of oxidative stress of acute valproic acid treatment.