Ateroskleroz hastalarında NKILA aracılığıyla LOX-1 gen düzenlenmesinin araştırılması
Investigation of LOX-1 gene regulation through NKILA in atherosclerosis patients
Yazar: ELİF BURCU TÜZEMEN BAYYURT
Danışman: PROF. DR. SERDAL ARSLAN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Ateroskleroz = Atherosclerosis ; Endotelyal hücreler = Endothelial cells ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Kardiyovasküler hastalıklar = Cardiovascular diseases ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Ateroskleroz, dünya genelinde kardiyovasküler hastalık (KVH)'ların en önemli nedeni olup, mortalite oranı çok yüksek olan poligenik bir hastalıktır. Önemli kardiyovasküler risk faktörlerinden biri olan düşük yoğunluklu lipoprotein (LDL), oksitlenmiş LDL (ox-LDL) oluşumuna neden olur. Ox-LDL, aterosklerotik süreçte rol oynayan hücrelerdeki lektin tipi ox-LDL reseptörü-1 (LOX-1)'in ekspresyonuna/ifadesine ve aktivasyonuna yol açar. LOX-1, endotel hücre büyümesi, fonksiyon bozukluğu, aktivasyonu ve monositlerin/makrofajların adhezyonuna aracılık eder. LOX-1 ekspresyonu kodlama yapmayan RNA (ncRNA)'lar aracılığıyla düzenlenebilir. Biz de bu çalışmada ateroskleroz hastalarında nükleer faktör kappa B (NF-κB) ile etkileşen uzun kodlama yapmayan RNA (lncRNA) (NKILA) aracılığıyla LOX-1 gen düzenlenmesini araştırmayı amaçladık. Bu çalışmada koroner arter plak ve internal mammarian arter (İMA) dokularında gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) yöntemiyle NKILA, NF-κB ve LOX-1 gen ekspresyonları incelendi. Buna ek olarak, ox-LDL ile muamele edilen ve NKILA susturucu RNA (siRNA) transfeksiyonu yapılan insan umbilikal ven endotel hücre (HUVEC)'lerinde NKILA, NF-κB ve LOX-1 ekspresyonları qPCR yöntemiyle araştırıldı. İMA ile karşılaştırıldığında aterosklerotik plak dokularında NF-κB ekspresyonu 2,35 kat artmış ve istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur (p=0,02). İMA dokuları ile karşılaştırıldığında aterosklerotik plaklarda LOX-1 ekspresyonu 2,18 kat artarken (p=0.15) NKILA ekspresyonu 1,07 kat azalmıştır (p=0,88). Buna ek olarak, NKILA siRNA uygulanan ve ox-LDL ile muamele edilmiş HUVEC'lerde NKILA ekspresyonu 2,77 kat istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalırken (p<0,01) NF-κB ve LOX-1 ekspresyonları sırasıyla 1,36 (p=0.72) ve 1,25 kat (p=0,04) artmıştır. Çalışma bulgularımız, aterosklerozun patogenezinin anlaşılmasına katkı sağlayacak niteliktedir.

Abstract:
Atherosclerosis is the most important cause of cardiovascular diseases (CVD) worldwide and is a polygenic disease with a very high mortality rate. Low-density lipoprotein (LDL), one of the important cardiovascular risk factors, causes the formation of oxidized LDL (ox-LDL). Ox-LDL leads to expression and activation of the lectin type ox-LDL receptor (LOX-1) in cells involved in the atherosclerotic process. LOX-1 mediates endothelial cell growth, dysfunction, activation and adhesion of monocytes/macrophages. Changes in epigenetic modifications and gene expression play a role in the pathogenesis of atherosclerosis. LOX-1 expression can be regulated by noncoding RNAs (ncRNAs). In this study, we aimed to investigate LOX-1 gene regulation through long noncoding RNA (lncRNA) interacting with nuclear factor kappa B (NF-κB) (NKILA)  in atherosclerosis patients. In this study, NKILA, NF-κB and LOX-1 gene expressions were analyzed by real time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) method in both coronary artery plaque and internal mammarian artery (IMA) tissues. In addition, NKILA, NF-κB and LOX-1 expressions in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) treated with ox-LDL and transfected with NKILA silencing RNA (siRNA) were investigated by qPCR method. As a result of this study, NF-κB expression was upregulated 2,35 fold in atherosclerotic plaque tissues compared to IMA and it was statistically significant (p=0,02). Compared to IMA tissues, LOX-1 expression in atherosclerotic plaques was upregulated 2,18 fold (p=0,15), while NKILA expression was downregulated 1,07 fold (p=0,88). In addition, NKILA expression was statistically significant downregulated 2,77 fold (p<0,01) whereas NF-κB and LOX-1 expression were upregulated 1,36 (p=0,72) and 1,25 (p=0,04) fold, respectively in HUVECs treated with ox-LDL and NKILA siRNA. Our study findings will contribute to the understanding of the pathogenesis of atherosclerosis.