Diffüz büyük B hücreli lenfoma ve foliküler lenfomalarda GCET1, HGAL (GCET2) ve LMO2'nin immünhistokimyasal yöntem ile değerlendirilmesi
GCET1, HGAL (GCET2) and LMO2 immunoreactivity in diffuse large B cell lymphomas and follicular lymphomas
Yazar: NESLİHAN BERKER
Danışman: PROF. DR. İBRAHİM ÖNER DOĞAN
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Biyobelirteçler-tümör = Biomarkers-tumor ; Folikül = Follicles ; Gen ifadesi = Gene expression ; Lenfoma = Lymphoma ; Lenfoma-B hücreli = Lymphoma-B cell ; Lenfoma-büyük hücreli = Lymphoma-large cell ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Amaç: Diffüz büyük B hücreli lenfoma, tedavi ile hastaların yarısından azında kür sağlanabilen biyolojik olarak heterojen bir lenfoma grubudur. cDNA microarray yöntemi ile yapılan gen ekspresyon profili çalışmalarında diffüz büyük B hücreli lenfomalar germinal merkez B hücre benzeri, aktive B hücre benzeri ve Tip 3 (sınıflanamayan) olmak üzere 3 farklı moleküler alt gruba ayrılmıştır. Germinal merkez B hücre benzeri fenotip taşıyan vakaların, diğer vakalara göre daha iyi sağkalım gösterdiği saptanmıştır. Ayrıca son zamanlarda aktive B hücre benzeri fenotip taşıyan vakalarda hedefe yönelik yeni tedavi rejimlerinin etkili olduğu bildirilmektedir. Moleküler sınıflama için kullanılan gen ekspresyon profili yöntemleri pahalı olduğundan rutin klinik pratikte kullanılmaya uygun değildir. Bu nedenle her laboratuvarda uygulanabilecek hedef moleküllere yönelik, gen ekspresyon profili ile uyumlu immünhistokimyasal algoritmalar geliştirilmiştir. Bu algoritmaların rutin pratikte en sık kullanılanı Hans algoritmasıdır. 
Çalışmamızın amaçları, immünhistokimyasal yöntem kullanarak germinal merkez B hücre belirteçleri olan GCET1, HGAL ve LMO2'nin foliküler lenfoma vaka grubunda folikül merkez hücre fenotipini ne derecede yansıttığını araştırmak; diffüz büyük B hücreli lenfoma vaka grubunda bu antijenlerin dağılım özelliklerini ortaya koymak ve germinal merkez hücre fenotipini belirlemedeki rolünü ve katkısını Hans algoritması çerçevesinde tartışmaktır.
Gereç ve Yöntem: İ.Ü. İstanbul Tıp Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı'nda 2010-2016 yılları arasında incelenmiş, 40 adet (20 adet grad 1-2, 20 adet grad 3) foliküler lenfoma vakası ve 65 adet başka şekilde sınıflandırılamamış diffüz büyük B hücreli lenfoma vakası çalışma kapsamına alındı. Bu vakalara ait arşivimizde saklanan Hematoksilen&Eozin ile boyalı preperatlar tekrar incelenerek patolojik tanılar yeniden düzenlendi. Sonrasında uygun bloklar seçilerek bu bloklara ait kesitlere GCET1, HGAL ve LMO2 antikorları kullanılarak immünhistokimyasal çalışma uygulandı.
Bulgular:Foliküler lenfoma vaka grubunda GCET1, HGAL ve LMO2 sırasıyla %85, %77,5 ve %100 oranında pozitif saptandı. CD10 negatif olan 4 vakanın biri hariç diğerleri bu antijenlerden bir veya birden fazlası ile pozitifti. Benzer şekilde BCL2 negatif olan 6 vakanın tümünde GCET1, HGAL ve LMO2 pozitif bulundu.
65 adet diffüz büyük B hücreli lenfoma vakasında GCET1, HGAL ve LMO2, sırasıyla %35,4, %53,8 ve %63,1 oranında pozitif bulundu. GCET1, HGAL ve LMO2, Hans sınıflamasına göre germinal merkez B fenotipli vakaların sırasıyla %88, %84 ve %100'ünde; non-germinal merkez B fenotipli vakaların ise %2,5, %35 ve %40'ında pozitif bulundu. Her üç antijenin de bu vaka grupları arasındaki ekspresyon farkı, istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0,001). CD10 pozitif ve sadece MUM1 pozitif vaka gruplarında germinal merkez B hücre fenotipini belirlemede GCET1'in özgüllüğü ve pozitif yorum gücü %100 bulundu. HGAL ve LMO2'nin ise yanlış pozitiflik oranları sırasıyla %10,5, %9,1 olarak hesaplandı. Bu bulgulardan yola çıkılarak diğer vaka grupları, bu antijenlerin ekspresyonlarına göre değerlendirildi. Buna göre, Hans algoritması kullanıldığında non-germinal merkez B grubuna giren 20 adet CD10 negatif, BCL6 pozitif, MUM1 pozitif vakanın 9'unun, 5 adet CD10, BCL6 ve MUM1 negatif vakanın 4'ünün germinal merkez B grubuna girebileceği düşünüldü.
Sonuç: GCET1, HGAL ve LMO2 folikül merkez hücre fenotipini belirlemede oldukça duyarlı belirteçlerdir. Foliküler lenfoma tanısında, özellikle CD10 negatif vakalarda söz konusu belirteçlerin immünhistokimyasal panele eklenmesi yararlı olacaktır. Diffüz büyük B hücreli lenfomalarda, CD10 pozitif veya sadece MUM1 pozitif vaka grupları dışında immünprofil sergileyen vakaların doğru sınıflanabilmesi için söz konusu bu üç belirtecin immün panele eklenmesi veya bu belirteçleri içeren ve gen ekspresyon profili ile daha yüksek uyum gösterdiği bildirilen diğer immünhistokimyasal algoritmaların kullanılması önerilir.

Abstract:
Aim: Diffuse large B-cell lymphoma is a biologically heterogeneous disease that can be cured in less than half of patients. In the gene expression profiling studies performed by cDNA microarray method, diffuse large B-cell lymphomas were divided into three different subgroups: germinal center B cell-like, active B cell-like and Type 3 (unclassified).Among these subgroups, patients with germinal center B cell-like phenotype had more favorable clinical course. New targeted treatment regimens that have been recently reported are effective in cases of active B cell-like phenotype. Due to financial and technical limitations, the use of gene expression profiling technology for routine clinical purposes is challenging. In an attempt to translate gene expression profiling classification into a manageable set of measurable proteins, several algorithms suggesting various immunohistochemical stainshave been proposed in recent years.Among these, the Hans algorithm is the most commonly usedin the daily practice.
The aim of our study was to investigate the extend to which the germinal center B-cell immunohistochemical markers GCET1, HGAL and LMO2 reflected the follicular center cell phenotype in the follicular lymphoma case group. We also aim to demonstrate the distribution of these antigens in the diffuse large B-cell lymphoma case group and to discuss their role in determining the germinal center cell phenotype and their contribution in the context of the Hans algorithm.
Materials and methods: We retrieved 40 follicular lymphoma cases consisting of 20 high-grade, 20 low-gradeand 65 diffuse large B cell lymphoma, not otherwise spesified cases fromour archive. We reviewed all the archive glass slides, revised the diagnosis of the cases and selected a proper paraffin block for immunohistochemical analysis for each case. Immunohistochemical studies were performed using GCET1, HGAL and LMO2 antibodies.
Results: In the follicular lymphoma case group, GCET1, HGAL and LMO2 were positive in 85%, 77.5% and 100% of the cases, respectively. Three of the 4CD10 negative cases were positive with one or more of these three antigens. Similarly  the cases negative for BCL2 (n=6) were all positive for GCET1, HGAL and LMO2. 
In the diffuse large B-cell lymphoma case group, GCET1, HGAL and LMO2 were positive in 35.4%, 53.8% and 63.1% of the cases, respectively. In the cases with germinal center B-cell phenotype according the Hans classification, GCET1, HGAL and LMO2 were found to be 88%, 84% and 100% positive, respectively. In the cases with non-germinal center B-cell phenotype according the Hans classification, GCET1, HGAL and LMO2 were positive in 2.5%, 35% and 40% of the cases, respectively. The expression difference of all three antigens between these subgroups was statistically significant (p<0.001). In the CD10 positive and MUM1 positive cases only, the spesificity and positive predictive power of GCET1 in determining germinal center B-cell phenotype were 100%. HGAL and LMO2 immunoexpression had false positivity of 10.5% and 9.1%, respectively. From these findings, other groups of cases were evaluated according to the expression of these antigens. Nine of the 20 CD10 negative, BCL6 positive, MUM1 positive cases and 4 of the 5 CD10, BCL6 and MUM1 negative cases, formerly classified in non-germinal center B-cell group according the Hans algorithm could join the germinal center B-cell group.
Conclusion: GCET1, HGAL and LMO2 are highly sensitive markers for determining follicular center cell phenotype. It would be helpful to add these three markers to the immunohistochemical panel in the diagnosis of follicular lymphoma especially in CD10 negative cases. In order to properly classifydiffuse large B-cell lymphomas, the use of these three markers or other immunohistochemical algorithms containing these can be recommended, especially for cases exhibiting CD10 negative, BCL6 positive, MUM1 positive and triple negative immun profile.