Hastane Kökenli MDR-MRSA Suşlarında Protein A Geni ( spa ) Dizi Analizinin Kloanal İlişkinin Tespitindeki Rolü
The Role of at Klonal Relation Establishing of Sequence Analysis of the Protein A Gene ( spa ) in Hospital Origined MDR-MRSA İsolates
Yazar: TANER BOZKURT
Danışman: PROF. DR. FATİH KÖKSAL
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Metisiline dirençli S.aureus (MRSA), hastane ve toplum kökenli infeksiyonlardan sorumlu olan en önemli ajanlardan biridir. Çoğu ülkede MRSA'nın yayılımı sürekli artış göstermektedir ve bazı bölgelerde, hastanelerde S.aureus'un neden olduğu infeksiyonlara ait tüm izolatların yarısından çoğu MRSA'dır. MRSA izolatlarında çoklu direnç gün geçtikçe artmaktadır. 30 yıldan daha uzun süre MRSA tedavisinde kullanılan vankomisine de bu günlerde direnç gelişmiştir.MDR-MRSA ve Hastane Enfeksiyonlarını kontrol çabalarının başarısı büyük ölçüde, etkenin tespiti ve klonal özellikleri, muhtemel bulaş kaynağı ve taşıyıcılar ile bulaş yolu gibi lokal epidemiyolojik özelliklerin tespitine bağlıdır.Tiplendirme yöntemlerinden fenotipik tiplendirme yöntemlerinin tekrarlanabilirlik düzeyleri düşük ve ayrım güçleri zayıftır. Ayrıca fenotipik olarak aynı fakat genotipik olarak farklı olan suşları ayırt edememektedir. Bu yüzden son yıllarda tekrarlanabilirliği ve ayrım gücü yüksek olan genotipik yöntemler kullanılmaktadır. Bu yöntemler içerisinde PFGE yöntemi hastane kökenli MRSA suşlarının klonal ilişkilerinin tespitinde altın standart olarak kabul edilmiştir.Bu çalışmada Ç.Ü. Tıp Fakültesi Balcalı Hastanesi kliniklerinde yatan hastalarda görülen hastane infeksiyonlarından izole edilen MDR-MRSA suşlarının klonal ilişkileri PFGE ve spa dizi analizi yöntemi ile tespit edilmeye çalışılmıştır. Çalışmada 2008-2009 yılları arasında MDR-MRSA' nın neden olduğu enfeksiyon hastalıklardan izole edilen 27 örnek kullanıldı. İzolatlara Kirby-Bauer yöntemi ile antibiyotik duyarlılık testi yapıldı ve oluşan profillere göre antibiyotipleme uygulandı. Daha sonra suşlar PFGE ve spa tiplendirme yöntemi ile genotipik olarak incelendi. DNA bant profillerine göre suşlar tiplendirildi.Sonuç olarak çalışılan 27 örnek antibiyotipleme ile 6 ve PFGE ile 10 tipe ayrılmıştır. spa tiplendirme sonuçunda ise çalışılan suşların hemen hepsinde Protein A' nın varlığı tespit edildi. 27 izolattan sadece 5'i spa tip t190 iken diğer 22 izolat tip t030 olarak tiplendirildi. Çalıştığımız suşların tiplendirilmesinde genotipik yöntemlerin daha duyarlı olduğu ve bu yöntemlerden PFGE'in klonal ilişkinin araştırılmasında daha önemli olduğu sonucuna varıldı. Sadece spa tiplendirme yönteminin taşınabilirlik, tekrarlanabilirlik ve sonuçların kolay karşılaştırılabiliyor olmasından dolayı PFGE' ye göre daha iyi olduğu gözlemlendi.

Abstract:
Methicillin-resistant S.aureus is one of the most significant agent of community-acquired and hospital-acquired infections. The prevalence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in many countries increases consistently and, more than half of all S. aureus disease isolates are MRSA in hospitals and in some areas. MRSA strains are becoming increasingly multiresistant, and have recently developed resistance to vancomycin, usedsuccessfully to treat MRSA for more than 30 years.Finding of infections and clonal specialities, source of infections and carrier with transmission ways are important because successfully controling of MDR-MRSA and hospital-acquired infections.Reproducibility and discriminatory of phenotypic identification methods which is a typing method are poor. Also, phenotypic identification methods could not distinguish similar phenotypic strains with different genotypes. Therefore, recently, genotyping methods which have high reproducibility and discriminatory are used for identifications. PFGE which is genotypig methods have consented the ?gold standard? of molecular typing at klonal relations establishing of hospital-acquired MRSAIn this study, it has been tried for identification of at klonal relations establishing of MDR-MRSA that isolated from hospital-acquired infections in clinics of Ç.Ü. Faculty of Medicine Balcalı Hospital with PFGE and spa typing method. In this study, it has been used 27 izolates that izolated from hospital infections determined by MDR-MRSA between 2008-2009. Isolates were characterized by antibiotyping as determined by the disk diffusion method (Kirby-Bauer). Later, isolates were investigated with PFGE and spa typing metod and typed in accordance with their DNA bant profiles.As a result, of 27 MRSA isolates, 6 types were evaluated with antibiotyping and 10 type with PFGE methods. It was substantiated that all of isolates had protein A. 5 of 27 isolates were spa tip t190 and 22 isolate were spa tip t030. In typing of searching isolates, genotyping metods were found more sensitivite and it was deduced that PFGE was more importand at klonal relation establishing. It was observed that spa typing metod was better than other metods because of reproducibility, transportability and comparability of results.