Ratlarda Streptokokus Pyogenez ve stafilokokus aureus ile deneysel olarak oluşturulan deri enfeksiyonları üzerine ozonlanmış yağın etkisi
The effect of ozonated oil on experimentally induced skin infection BY Streptococcus pyogenes and staphylococcus aureus in rats
Yazar: KEMAL VAROL
Danışman: DOÇ. DR. FATİH MEHMET BİRDANE ; PROF. DR. İHSAN KELEŞ
Afyon Kocatepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases ; Patoloji = Pathology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Deri hastalıkları-enfeksiyöz = Skin diseases-infectious ; Ozon = Ozone ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; Streptococcus pyogenes = Streptococcus pyogenes ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmanın amacı; ratlarda S. pyogenes ve S. aureus tarafından deneysel olarak oluşturulan deri enfeksiyonları üzerine ozonlanmış zeytinyağının etkinliğini, aktivitesini ortaya koymaktır. Araştırmada; 6-8 haftalık canlı ağırlıkları 80-130 gram arasında değişen, 93 adet Wistar Albino ırkı dişi rat kullanıldı. Çalışma başlıca; S. pyogenes ile deri enfeksiyonu oluşturulan grup (Grup 1.) ve S. aureus ile deri enfeksiyonu oluşturulan grup (Grup 2.) ve ortak Negatif Kontrol Grubu (Grup 3.) olmak üzere toplam 3 ana grup üzerinde yürütüldü. Grup 1. ve Grup 2.'nin her biri dört alt gruba ayrıldı.
S. pyogenes ile deri enfeksiyonu oluşturulan grupta (Grup 1); Grup 1.1.'de (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine ozonlanmış zeytinyağı (Aktifoks, Işık Kozmetik), Grup 1.2. (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine zeytinyağı, Grup 1.3.'te (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine fusidik asit (Stafine krem, Koçak Farma İlaç) 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde uygulandı. Grup 1.4.'te (n=11) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine herhangi bir uygulama yapılmadı. Tedavi öncesi ve sonrası olmak üzere Grup 1.1., Grup 1.2., Grup 1.3. ve Grup 1.4.'ten.24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde swap ve doku örnekleri alındı ve değerlendirildi.
S. aureus ile deri enfeksiyonu oluşturulan grupta (Grup 2); Grup 2.1.'de (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine ozonlanmış zeytinyağı (Aktifoks, Işık Kozmetik), Grup 2.2. (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine zeytinyağı, Grup 2.3.'te (n=10) enfeksiyon oluşturulan deri bölgesine fusidik asit (Stafine krem, Koçak Farma İlaç) 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde uygulandı. Grup 2.4.'te (n=11) enfekisyon oluşturulan deri bölgesine herhangi bir uygulama yapılmadı. Tedavi öncesi ve sonrası olmak üzere Grup 2.1., Grup 2.2., Grup 2.3. ve Grup 2.4.'ten 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde swap ve doku örnekleri alındı ve değerlendirildi.
Negatif Kontrol Grubu Grup 3.'te (n=11) aşındırılan deri bölgesine serum fizyolojik 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde uygulandı. Yine Grup 3.'ten 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96. saatlerde swap ve doku örnekleri alındı ve değerlendirildi.
Histopatolojik bakıda gram boyama sonucunda; Grup 1.1.'de (ozonlanmış zeytinyağı grubu) bakteri varlığının % 18,2, Grup 1.4.'te (enfekte kontrol grubu) bakteri varlığının % 100 olduğu ve bunların karşılaştırılması sonucunda; ozonlanmış zeytinyağı uygulanan grupta (Grup 1.1.) ozonlanmış zeytinyağının kontrol grubununa (Grup 1.4.) oranla istatistiksel olarak önemli (p<0,001) derecede bakteri azalmasına neden olduğu ortaya konuldu. Grup 2.1.'de (ozonlanmış zeytinyağı grubu) bakteri varlığının % 45,5, Grup 2.4.'te (enfekte kontrol grubu) bakteri varlığının ise % 100 olduğu bunların karşılaştırılması sonucunda; ozonlanmış zeytinyağı uygulanan grupta (Grup 2.1.) ozonlanmış zeytinyağının kontrol grubununa (Grup 2.4.) oranla istatistiksel olarak önemli (p<0,001) derecede bakteri azalmasına neden olduğu ortaya tespit edildi. Yine Histopatolojik bakıda dermal lezyonlarda; Grup 1.1. ile Grup 1.4. yangı hücreleri varlığı bakımından karşılaştırıldığında; Grup 1.4.'te yangı hücrelerinin daha fazla olduğu ve istatistiksel bir fark (p<0,001) olduğu gözlendi. Grup 2.1. ile Grup 2.4. yangı hücreleri varlığı bakımından karşılaştırıldığında; Grup 2.4.'te yangı hücrelerinin daha fazla olduğu ve istatistiksel bir fark (p<0,001) olduğu belirlendi. Ama papiller dermisteki bulgularda; hem Grup 1.'de hem de Grup 2.'de istatistiksel bir farkın olmadığı görüldü.
Kabuklanma ve iyileşme yönünden Grup 1.'de gruplar karşılaştırıldığında; ozon grubu (Grup 1.1.) ile enfekte kontrol grubu (Grup 1.4.) arasında 40. 48. 56. 64. 72. 80. saatlerinde kabuklanma ve iyileşmenin Grup 1. 1.'de daha iyi olduğu (p<0,01) gözlendi. Aynı şekilde kabuklanma ve iyileşme yönünden Grup 2.'de gruplar karşılaştırıldığında ozon grubu (Grup 2.1.) ile enfekte kontrol grubu (Grup 2.4.) arasında 40. 48. 56. 64. 72. 80. saatlerinde kabuklanma ve iyileşmenin Grup 2.1.'de daha iyi olduğu (p<0,01) belirlendi. 
Sonuç olarak; bu araştırmada, ratlarda S. pyogenes ve S. aureus ile deneysel olarak oluşturulan deri enfeksiyonları üzerine ozonlanmış yağın etkisi değerlendirilmiş ve enfeksiyon şekillendikten sonra 0,1 gr ozonlanmış zeytin yağının 8 saat arayla enfeksiyon bölgesine uygulanması sonucunda antimikrobiyal, antienflamatuar etki göstererek 72-80. saatlerde enfeksiyon oluşan deri bölgesini iyileştirdiği gözlenmiştir. Ayrıca derinin stafilokokal ve streptokokal deri enfeksiyonlarında etkinliği kanıtlanmış fusidik asit (stafin krem) ile ozonlanmış zeytinyağı karşılaştırıldığında etkinliğinin benzer olduğu ve deri enfeksiyonlarının tedavisinde kulanılabilcek yan etkisi az, direnç gelişimi olmayan bir ajan olduğu belirlenmiştir.

Abstract:
The aim of the present study was to determine the effect and activity of ozonated olive oil on experimentally induced skin infection by Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus in rats. In this study 93 female Wister Albino rats aged between 6-8 weeks and weighing 80-130 gr were used as animal material. The study was performed on 3 main groups which Group 1. was infected with Streptococcus pyogenes Group 2. was infected with Staphylococcus aureus and Group 3. was negative control group. Infection were made in the skin of the experimental animals used in this study. Furthermore, each of Group 1. and Group 2. were further divided into 4 subgroups. 
Apart from Streptococcus pyogenes infection, animals in Group 1.1. (n=10), received ozonised olive oil (Aktifoks, Işık Kozmetik), animals in Group 1.2 (n=10) received olive oil, Group 1.3. (n=10) received fusidic acid (Stafine cream, Koçak Farma İlaç) to the infection side in their skin at 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours. Animals in Group 1.4. (n=11) did not received any treatment after Streptococcus pyogenes infection. Swab and tissue samples before treatment and 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours after treatment were collected and evaluated from Groups 1.1., 1.2., 1.3. and 1.4..
Apart from Staphylococcus aureus infection, animals in Group 2.1. (n=10), received ozonised olive oil (Aktifoks, Işık Kozmetik), animals in Group 2.2. (n=10) received olive oil, Group 2.3. (n=10) received fusidic acid  (Stafine cream, Koçak Farma ilaç)  to the infection side in their skin at 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours. Animals in Group 2.4. (n=11) did not received any treatment after Streptococcus aureus infection. Swab and tissue samples before treatment and 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours after treatment were collected and evaluated from Groups 2.1., 2.2., 2.3. and 2.4..
Abraded skin regions in Group 3. (n=11) which was negative control group, received only serum physiologic at 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours. Furthermore, swab and tissue samples before treatment and 24, 28, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 hours after serum physiologic application were collected and evaluated from Group 3..
In histopathological examination, as a result of gram staining, in Group 1.1. (ozonized olive oil group) presence of bacteria was 18.2 % and in Group 1.4. (infected control group) the presence of bacteria was 100 % which ozonized oil caused significant (p<0.001) reduction in the presence of bacteria compared to infected control group (Group 1.4). In addition Group 2.1. (ozonized olive oil group) presence of bacteria was 45.5 % and in Group 2.4. (infected control group) the presence of bacteria was 100 % which ozonized oil caused significant (p<0.001) reduction in the presence of bacteria compared to infected control group (Group 2.4.). Furthermore, with concern to dermal lesions, when presence of inflammatory cells compared it was higher (p<0.001) in Group 1.4. compared to Group 1.1.. Additionally, with concern to dermal lesions, when presence of inflammatory cells compared it was higher (p<0.001) in Group 2.4. compared to Group 2.1. But, statistical importance were not observed only in papillary dermis in both Group 1. and Group 2..
When groups were compared with concern to incrustation and recovery; between ozone group (Group 1.1.) and infected control group (Group 1.4.)  at 40, 48, 56, 64, 72, and 80 hours after infection, incrustation and recovery were better (p<0.01) in Group 1.1. compared to Group 1.4. In addition, When groups were compared with concern to incrustation and recovery; between ozone group (Group 2.1.) and infected control group (Group 2.4.) at 40, 48, 56, 64, 72, and 80 hours after infection, incrustation and recovery were also better (p<0.01) in Group 2.1. compared to Group 2.4..
As a result, in the present study, experimental skin infections with Staphylococcus pyogenes and Streptococcus aureus were made and the effects of ozonized olive oil in the treatment of the infection were evaluated and results were compared with other treatment methods. After occurrence of the infection 0.1 gr ozonized olive oil had anti-microbial and anti-inflammatory effect and observed to have healing activity at 72nd and 80th hours after infection. Furthermore, the effects of ozonized olive oil were comparable with the effects of Fusidic acid which is well known and its activity has been proven in the skin infections with Staphylococcus and Streptococcus. Additionally, as far as known microorganisms has no resistance development against ozone and has no important side effects.