Kronik obstruktif akciğer hastalığı olan ve sigara kullanan bireylerde Mannoz Binding Lektin Polimorfizmi, Serum Mannoz Binding Lektin Konsantrasyonu,CD4, CD8 oranları ve Toll Like Reseptör-2 ekspresyonunun incelenmesi
Assesments of toll like receptor 2 expression, Mannose Binding Lectin Gene Polymorphisms, Serum Mannose Binding Lectin Concentrations, CD4, CD8 ratio in chronic obstructive pulmonary disease patients and cigarete smokers
Yazar: GÜROL ŞAHİN ULUTAŞ
Danışman: DOÇ. DR. FATMA TANELİ
Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Amaç: Çalışmamızda KOAH hastalarında ve sigara kullanan bireylerde olası biyomarkırları incelemek amacıyla MBL polimorfizmi, serum MBL konsantrasyonu, CD4+ ve CD8+ ile CD4/CD8 oranı ve monositer TLR2 ekspresyonlarının klinikte uygulanan solunum fonksiyon testleriyle kıyaslanarak değerlendirilmesi amaçlanmıştır.Gereç yöntem: Çalışmaya, Grup 1'e KOAH tanısı almış 20, Grup 2'ye KOAH tanısı almış ve sigara içen 20; Grup 3'e sigara içen ve solunum fonksiyon testi normal olan 20 ve Grup 4'e kontrol grubu olarak 20 birey dâhil edilmiştir. Serum MBL konsantrasyonları ELISA yöntemi ile MBL polimorfizmi RT-PCR tekniği kullanılarak saptandı. CD4 ve CD8 T hücre oranları ile monositer TLR2 ekspresyonu flow sitometri tekniği ile bakıldı. Kontrol grubu hariç diğer olgulara spirometrik solunum fonksiyon testi uygulanmıştır.Bulgular: Tüm denekler incelendiğinde MBL A/B alleli %82,5 (66/80), homozigot D alleli %15 (12/80) ve homozigot B alleli %2,5 (2/80) sıklıkla tespit edilmiştir; gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fak bulunmamıştır. Serum MBL konsantrasyonu, Grup 1'de 2103±1311 ng/ml, Grup 2'de 2324±1001 ng/ml, Grup 3'de 1746±1142 ng/ml ve Grup 4'de 2040±879 ng/ml saptanmış ve gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır. CD14+ hücrelerde yapılan TLR2 ekspresyon analizinde, Grup 1'de %56,41±24,49, Grup 2'de %64,47±22,93, Grup 3'de %64,18±23,47 ve Grup4'de %51,82±24,79 olarak saptanmış ve gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır. Çalışma gruplarımızda hem CD4+, CD8+ ve CD4/CD8 oranı için gruplar arasında anlamlı bir fark tespit edilmemiştir. Ancak buna rağmen CD4+ T hücre oranları ile FEV1 ve FEV1/FVC arasında pozitif korelasyon, CD4/CD8 oranı ile FEV1/FVC arasında pozitif korelasyon saptadık. MBL düzeyleri ile CD4/CD8 oranları arasında negatif bir korelasyon tespit ettik. Serum MBL konsantrasyonu KOAH `ta en önemli risk faktörü olan sigara içimi ile pozitif, solunum fonksiyon testleri ile (FEV1 ve FEV1/FVC) ile negatif korelasyon göstermektedir.Sonuç: Bulgularımız CD4/CD8 oranı ve serum MBL değerinin KOAH'ta klinik bir belirteç olarak kullanılabileceğini düşündürmektedir. Bu konu daha çok KOAH hastası içeren ileri klinik araştırmalarla desteklenmeye ihtiyacı vardır. Literatürde Türk toplumunda MBL polimorfizmi analizini içeren bir yayın saptanmamıştır. Çalışmamız bu konuda bir ilk olma özelliği taşımaktadırAnahtar kelimeler: KOAH, sigara, TLR-2, CD4, CD8, MBL, MBL varyant, FEV1/FVC.

Abstract:
Aim: The aim of the present study is to assess monocyte (CD14+) Toll-like receptor 2 expression (TLR-2), mannose-binding lectin (MBL) gene polymorphisms, serum MBL concentrations, CD4+, CD8+ and CD4/CD8 ratio as possible biomarkers in chronic obstructive pulmonary disease (COPD) patients and in cigarette smokers and to search for possible correlations between the clinical pulmonary function tests.Materials and methods: In this prospective study, 20 COPD patients were enrolled as Group 1, 20 COPD patients who were cigarette smokers were enrolled as Group 2, 20 cigarette smokers with normal pulmonary function tests were enrolled as Group 3 and 20 healthy volunteers were enrolled as the control group for Group 4. Circulating MBL concentrations were assessed by ELISA method and MBL gene polymorphisms were assessed by real time RT-PCR method. Flow cytometry method with monoclonal antibodies was used for the evaluation of lymphocyte subsets: CD4+ and CD8+ T lymphocytes and TLR-2 expression on CD14+ monocytes. Pulmonary function tests were performed to all cases except group 4 controls.Results: In all cases MBL gene frequencies were found A/B allele 82,5% (66/80), homozigot D allele 15 % (12/80) and homozygote B allele 2,5% (2/80) and we found no statistical differences between the study groups.Circulating MBL concentrations were found as 2103±1311 ng/ml, 2324±1001 ng/ml, 1746±1142 ng/ml and 2040±879 ng/ml respectively in Groups 1, 2, 3 and 4. No statistical difference was found between the study groups. TLR-2 expression on CD14+ monocytes 56.41±24.49%, 64.47±22.93%, 64.18±23.47% and 51.82±24.79% respectively in groups 1, 2 , 3 and 4. No statistical difference was found between the study groups for TLR-2, CD4+, CD8+ and CD4/CD8 ratio. We found significant positive correlations between CD4+ T subsets and FEV1 and FEV1/FVC ratio, and between CD4/CD8 ratio and FEV1/FVC. We found negative correlations between serum MBL concentrations and CD4/CD8 ratio. Serum MBL concentration correlated positively with cigarette smoking and negatively with pulmonary function tests (FEV1 and FEV1/FVC).Conclusion: Our results revealed that CD4/CD8 ratio and serum MBL concentration could correlate well with pulmonary function tests and could be used as one of the clinical biomarkers of COPD. However we believe these results still needs further investigation which includes larger series of COPD patients. Previously no study was performed in Turkish population about the MBL gene polymorphism and our study is the first article presenting this data.Key Words: COPD, cigarette smoking, TLR-2, CD4, CD8, MBL, MBL variant, FEV1/FVC.