Trifluridin ve tipiracil hidroklorürün farmasötik preparatlardan eş zamanlı tayini için UPLC ve LC-MS/MS yöntemlerinin geliştirilmesi ve bozunma ürünlerinin LCMS-IT-TOF ile karakterizasyonu
Development of the UPLC and LC-MS/MS methods for the simultaneous determination of trifluridine and tipiracil hydrochloride from pharmaceutical preparations and characterization of degradation products by LCMS-IT-TOF
Yazar: MURAT KOZANLI
Danışman: PROF. DR. NAFİZ ÖNCÜ CAN
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı / Analitik Kimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Analitik kimya = Analytical chemistry ; Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Bozunma = Decomposition ; Farmasötik teknoloji = Technology-pharmaceutical ; Kromatografi-sıvı = Chromatography-liquid ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Tipiracil = Tipiracil ; Trifluridin = Trifluridine ; Yüksek basınç sıvı kromatografisi =

Özet:
Kanser, tüm dünyada kardiyovasküler hastalıklardan sonra en çok ölümle sonuçlanan hastalıktır. Ve insanlarda görülme sıklığı her geçen gün artmaktadır. Kolon kanseri,  kanser insidansı ve mortalite sıralamasında çok yüksek sıralamaya sahip bir gastrointestinal kanser türüdür. Kolon kanseri tedavisi için 2015 yılında FDA tarafından onaylanan Lonsurf isimli ilaç Trifluridin (TRI) ve Tipiracil HCl (TIP) etken maddelerinin kombinasyonunu içermektedir.
         Söz konusu bu çalışmada TRI/TIP kombinasyonu içeren farmasötik formülasyonlarının analizi için UPLC ve LC-MS/MS metotu geliştirilmiştir. UPLC metotu bozunma ürünleri varlığında optimize edilmiş ve asidik, bazik ve oksidatif gibi zorlu bozma koşullarında her iki etken maddeye ait yeni bozunma ürünleri tespit edilmiştir. Bozunma ürünlerinin kalitatif analizi LCMS-IT-TOF cihazı ile yapılmıştır.
         Geliştirilen her iki metotun kromatografik ayrımı için çekirdek kabuk ve monolitik silika yapıda olmak üzere farklı sabit fazlar denenmiştir. En başarılı ayırım Kinetex® 2.6 µm PS C18 Core-Shell (100×4.6 mm, ID 2.7μm) kolonda gerçekleştirilmiştir. Hareketli faz ise metanol ve tampon karışımı olup, tampon olarak 10 mM amonyum asetat (pH 5.8) ile en iyi şekilde ayırım elde edilmiştir. Akış hızı UPLC için 1 mL/dk ve LC-MS/MS için 0.5 mL/dk olarak belirlenmiştir. Optimum koşulların elde edildiği yöntemin geçerlilik çalışmaları ve TRI/TIP içeren farmasötik preparatta numune analizi yapılmıştır.

Abstract:
Cancer is the disease that causes the most deaths after cardiovascular diseases in the world. And its incidence in humans is increasing day by day. Colon cancer is a type of gastrointestinal cancer that ranks very high in cancer incidence and mortality. The drug named Lonsurf, which was approved by the FDA in 2015 for the treatment of colon cancer, contains the combination of Trifluridine and Tipiracil HCl active ingredients.
In this study, UPLC and LC-MS/MS methods were developed for the analysis of pharmaceutical formulations containing TRI/TIP combination. The UPLC method was optimized in the presence of degradation products and a new degradation products of both active substances were detected under acidic, basic and oxidative harsh degradation conditions. Qualitative analysis of the degradation product was performed with the LCMS-IT-TOF instrument.
For the chromatographic separation of both developed methods, different stationary phases including core shell and monolithic silica structure were tested. The most successful separation was achieved on the Kinetex® 2.6µm PS C18 Core-Shell (100×4.6 mm, ID 2.7 µm) column. The mobile phase is the methanol buffer mixture, and optimum separation was achieved with 10 mM ammonium acetate (pH 5.8) as a buffer. The flow rate was determined as 1 mL/min for UPLC and 0.5 mL/min for LC-MS/MS. Validation studies of the method obtained with optimum conditions and on the pharmaceutical preparation containing TRI/TIP were performed.