Deneysel Siringomiyeli ve Hidrosefali modelinde Aquaporin-4 ekspresyonu
Aquaporin-4 expression in experimental Syringomyelia and Hydrocephalus
Yazar: KAMRAN AĞAYEV
Danışman: PROF. DR. NEJAT AKALAN
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroşirürji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Nöroşirürji = Neurosurgery

Özet:
Fizyolojik kosullarda santral sinir sistem içinde ve kan-beyin bariyeri arasında sugeçislerini sağlayan esas kanal aquaporin-4'tür (aqp-4). Bu molekülün beyinde veomurilikte kan-beyin ve BOS-beyin sınırları boyunca eksprese edilmesi hidrosefalive siringomiyeli gibi hastalıklarda rol oynayacağını düsündürmektedir.Çalısmamızda, aqp-4'ün rolü deneysel hidrosefali ve siringomiyelide incelenmistir.Ağırlıkları 250-300 gr arasında olan 25 adet Wistar-Hannover beyaz sıçanlarırastgele seçilerek iki gruba ayrılmıstır. Deney grubunda, 20 hayvana sisternamagna'ya 5 ?L, SF içinde %25 kaolin süspansiyonu verildi; kontrol grubunda, 5hayvana 5 ?L SF verildi. Deney grubundan iki denek 6. ve 7. haftada exitus oldu.Enjeksiyondan 8 hafta sonra hayvanlar perfüzyon-fiksasyon yöntemi ile sakrifiyeedildiler. Omurilikler ve beyinler tek blok halinde çıkarıldı. Western blot için,servikal ve frontal bölgelerden parçalar alındı ve -80°C'de muhafaza edildi. Gerikalan örnekler fikse edilerek +4°C'de tutuldu. Western blot çalısmasında aqp-4 ve ß-actin bantlarının dansitler ölçüldü ve bölünerek ekspresyon verileri alındı. Beyinlerinventrikül düzeyinden, omuriliklerin servikal ve torakal segmentlerinden kesitleralındı, hemotoksilen-eozin ve aqp-4 boyamaları yapıldı ve mikroskop altındaincelendi. Siringomiyeli değerlendirilmesi için santral kanallardan x40 büyütmedefotoğraflar alındı ve kanalların uzunluk, genislik ve alanları ölçüldü. Hidrosefali veaqp-4 ekspresyonu sübjektif olarak değerlendirildi. Western blot sonuçları ve santralkanal ölçüm değerleri Mann-Whitney U testi ile değerlendirildi. Deney grubundasiringomiyelide aqp-4 ekspresyonunda hem immunohistokimyada hem de Westernblot'ta azalma fark edildi; fakat fark istatistiksel olarak anlamlı olmadı. Hidrosefalidegruplar arasında Western blot veya immunohistokimya olarak fark saptanmadı.

Abstract:
Physiologically the main channel providing water transport into nervous system andacross blood-brain barrier is aquaporin-4 (aqp-4). The characteristic expression ofaqp-4 along blood-brain and CSF-brain borders, suggests its possible role inpathophysiology of hydrocephalus and syringomyelia. This study was aimed todetermine aqp-4 expression in experimental syringomyelia and hydrocephalus.25 male Wistar-Hannover rats, weighing 250-300 gram, were assigned randomly intotwo groups. In experimental group 20 animals received 5 ?L of 25% kaolin innormal saline injections into cisterna magna; in control group 5 animals received 5?L of normal saline injections in the same manner. Two animals in experimentalgroup died at 6 and 7 weeks. All animals were sacrificed by perfusion-fixationmethod 8 weeks after the procedure. Brains and spinal cords were removed in enblock fashion. Samples from cervical spinal cord and frontal areas were taken andfrozen at -80°C for Western blot analysis. Remaining samples were fixed and storedat +4°C. During Western blot analysis expression data were calculated by dividingaqp-4 and ß-actin band densities. Sections from brains at ventricular level as well asfrom cervical and thoracic segments were obtained, hematoxilin?eosin and aqp-4dyes were applied and specimens were analyzed under microscope. Central channelswere visualized under x40 magnification, photographed and measurements of length,width and area were recordet. Hydrocephalus and aqp-4 expressions were evaluatedsubjectively. Western blot data and central channel measurements were analyzed byMann-Whitney U test. Syringomyelia was associated with low levels of aqp-4expression, according to Western blot and immunohistochemistry, however resultsdid not reach statistical significance. There was no difference in aqp-4 expression incontrol and hydrocephalic brains, by both Western blot and immunohistochemistry.