Granuloza hücre DNA hasar düzeyinin yardımcı üreme teknik başarısındaki  öngörü değeri
Predictive value of granulosa cell DNA damage in the success of assisted reproductive technique
Yazar: ERMAN ÇİFTÇİ
Danışman: DOÇ. DR. İLHAN ŞANVERDİ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / ​Zeynep Kamil Kadın ve Çocuk Hastalıkları Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Amaç: Çalışmamızda, açıklanamayan infertilite ve düşük over rezervi hasta gruplarında tanımlayıcı, biyokimyasal ve embriyoloji takibi değerlendirilmerine ek olarak iki gruptan alınan foliküler sıvıda, DNA çift zincir kırığı belirteci olarak p- H2AX MFI, H2AX MFI, p- H2AX / H2AX MFI, p- H2AX %, H2AX % ve p- H2AX / H2AX % parametrelerini inceleyerek gebelik sonuçlarına olan etkisini araştırmayı planladık. 
 Gereç ve Yöntem: Bu prospektif çalışma Zeynep Kamil Kadın ve Çocuk Hastalıkları Eğitim ve Araştırma Hastanesi İVF kliniğine 20.06.2022- 20.06.2023 tarihleri arasında başvuran ve gerekli kriterleri karşılayan 42 açıklanamayan infertil, 49 düşük over rezervi hasta olmak üzere toplam 91 hasta ile yapılmıştır. Her iki gruptaki hastalara İCSİ uygulanmıştır. OPU işlemi esnasında oosit ve granüloza hücreleri toplanarak uygun medyuma transfer edildikten sonra foliküler sıvı 15 ml'lik konik tüplerde toplandı. Toplanan foliküler sıvı, proje ortağı olan Yeditepe Üniversitesi Doku Tipleme Laboratuvarına teslim edildi. Laboratuvarda, sıvının santrifüj ve süspansiyonunu takiben fiksasyon ve permeabilizasyon sonrası hücrelere CD45- hücre popülasyonu üzerinden kapılama yapıldı ve Histon H2A.X ile fosforile formu Gamma H2A.X protein seviyeleri belirlendi. 
 Bulgular: Çalışmamızda, açıklanamayan infertilite ve düşük over rezervi hasta grupları arasında, foliküler sıvıda, p- H2AX MFI, H2AX MFI, p- H2AX / H2AX MFI, p- H2AX %, H2AX % ve p- H2AX / H2AX % parametreleri açısından anlamlı bir farklılık bulunmamıştır. Bu bilgiye ek olarak düşük over rezervi hasta grubunda p- H2AX/H2AX % değeri arttıkça 5. Gün kaliteli embriyo oranı azaldığı görülmüştür fakat gebelik sonuçlarıyla anlamlı olarak farklılaşmadığı tespit edilmiştir. Açıklanamayan infertilite hasta grubu açısından H2AX/H2AX MFI değeri arttıkça 3. Gün kaliteli embriyo oranı azaldığı görülmüş fakat p- H2AX/H2AX MFI ve p- H2AX/H2AX % değerlerinin gebelik sonuçlarıyla anlamlı olarak ilişkisi tespit edilememiştir. 

Sonuç: Çalışmamızda, açıklanamayan infertilite ve düşük over rezervi hasta gruplarında foliküler sıvıda bakılan DNA hasar belirteç oranları ve embriyoloyi takipleri arasında anlamlı farklar olsa da gebelik sonuçlarıyla kıyaslandığında anlamlı sonuç bulunamamıştır. Çalışmamız bu iki infertil hasta alt grubu arasında DNA hasarını IVF başarısı açısından kıyaslayan literatürdeki tek çalışma özelliğini taşımaktadır. Gelecekte foliküler sıvıda yapılacak olan çalışmaların açıklanamayan infertilite ve düşük over rezervi etiyolojisini belirleyebileceğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Objective: In our study, beyond the comprehensive assessment of descriptive, biochemical and embryological parameters in patients with unexplained infertility and diminished ovarian reserve, we aimed to investigate the impact on pregnancy outcomes by analyzing parameters such as p- H2AX Mean Flourescence Intensity (MFI), H2AX MFI, p- H2AX / H2AX MFI, p- H2AX %, H2AX % ve p- H2AX / H2AX % in the follicular fluid samples collected from both groups, which serve as indicators of DNA double-strand breaks. 
 Materials and Methods: This prospective study was conducted at the IVF Clinic of Zeynep Kamil Maternity and Children's Training and Research Hospital between June 2022 and June 2023. It involved a total of 91 participants, including 42 patients diagnosed with unexplained infertility and 49 with diminished ovarian reserve, all of whom met the established inclusion criteria. Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) was performed in both groups. The follicular fluid was then collected in 15 ml conical tubes. The gathered follicular fluid was subsequently delivered to the Yeditepe University Tissue Typing Laboratory, a collaborative partner in the Project. In the laboratory, following the centrifugation and suspension of the fluid, cells underwent fixation and permeabilization. Subsequently, capture was performed on the CD45- cell population, and the levels of Histon H2A.X and its phosphorylated form, Gamma H2A.X protein were determined. 
 Results: In our study, no significant statistical difference was found between the groups of patients with unexplained infertility and diminished ovarian reserve in terms of the parameters p- H2AX MFI, H2AX MFI, p- H2AX / H2AX MFI, p- H2AX %, H2AX % and p- H2AX / H2AX % in the follicular fluid. Furthermore, within the cohort exhibiting diminished ovarian reserve, it has been observed that an increase in the p- H2AX / H2AX % value corresponded to a decline in the proportion of the 5th day high-quality embryos. However, it was determined that this did not significantly statistically differ in relation to pregnancy outcomes. For the group diagnosed with unexplained infertility, it was observed as the p- H2AX 
 
/ H2AX MFI value increased, there was a decline in the proportion of the 3rd day high-quality embryos. However, no statisticaly significant correlation was identified between p- H2AX/H2AX MFI ve p- H2AX/H2AX % values and subsequent pregnancy outcomes. 
 
Conclusion: In the context of our study, despite evident differences observed in thequantification of DNA damage markers within the follicular fluid and the associated embryological assessments among cohorts presenting with unexplained infertility and diminished ovarian reserve, these differences did not Show statistically significant outcomes when compared with pregnancy results. To the best of our knowledge, this study is the only research in the literatüre that compares DNA damage double-strand break between these two subgroups of infertile patients regarding IVF success. We believe that studies on follicular fluid may determine the etiology of unexplained infertility and diminished ovarian reserve in the future.