In Vitro Parkinson hastalığı modelinde madecassic asidin etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of madecasic acid in an In Vitro model of Parkinson's disease
Yazar: RUKEN GÜÇLÜ
Danışman: DOÇ. DR. IRMAK FERAH OKKAY
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Amaç: Bu tezde SHSY-5Y hücrelerinde 6-OHDA ile indüklenen in vitro parkinson hastalığı modelinde madekasik asitin etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Çalışmada, nöroblastoma hücre dizisi SH-SY5Y (insan) (ATCC Cat. CRL-2266) ve in vitro parkinson hastalığı modeli oluşturmak için 6-OHDA kullanılmıştır. Hücre canlılığını tespit etmek için MTT ve LDH testleri uygulanmıştır. Oksidatif stres belirteçleri olan MDA, SOD, CAT, GSH, aktiviteleri ELISA kitleri ile ölçülmüştür. İnflamasyon seviyelerinin tespiti için iNOS, ELISA analizi ile belirlenmiştir. TNF-𝛼, IL-1β, α-syn, kaspaz-3 ve TH'yi değerlendirmek için ise immünofloresan yöntemi kullanılmıştır. 
Bulgular: MTT analizi sonuçlarına göre, madekasik asit ön tedavisi, SH-SY5Y hücrelerinde hücre canlılığını belirgin bir şekilde artırmıştır. LDH analizi sonuçlarına göre ise, madekasik asit ön tedavisi, hücrelerin dış ortama saldığı LDH aktivitesinde belirgin bir azalmaya neden olmuştur. Bu gözlemler, madekasik asit'in hücre canlılığını artırıcı ve hücre zarının bütünlüğünü koruyucu etkilerini desteklemektedir. SH-SY5Y hücrelerine uygulanan 200 μM 6-OHDA, MDA birikimini önemli ölçüde artırmış ve SOD, CAT ve GSH aktivitelerinde belirgin bir düşüşe yol açmıştır. Ancak, madekasik asit tedavisi, 6-OHDA'nın neden olduğu bu oksidatif stres etkilerini önemli ölçüde tersine çevirmiştir. Madekasik asit, MDA birikimini azaltarak ve SOD, CAT ve GSH aktivitelerini artırarak, hücrelerin oksidatif stresle mücadelesine katkıda bulunmuştur. Nöroinflamasyon modelinde madekasik asitin etkileri immünofloresans yöntemiyle belirlenmiştir. 6-OHDA ile indüklenen nöroinflamasyon, iNOS, TNF-𝛼, IL-1β, α-syn, kaspaz-3 ve TH düzeylerinde artışa neden olmuştur. Ancak, madekasik asit tedavisi, bu nöroinflamatuar belirteçlerin ekspresyonlarını belirgin bir şekilde düşürmüştür. 
Sonuç: Sonuç olarak, madekasik asitin SH-SY5Y hücrelerindeki hücre canlılığını artırıcı ve antioksidan etkilerini gösteren bu çalışma, madekasik asitin potansiyel nöroprotektif özelliklerini vurgulamaktadır. 6-OHDA ile indüklenen oksidatif stres ve nöroinflamasyon modellerinde, madekasik asitin MDA birikimini azaltma, antioksidan enzim aktivitelerini artırma ve nöroinflamatuar belirteçleri düşürme yetenekleri göz önüne alındığında, madekasik asitin Parkinson hastalığına karşı potansiyel bir terapötik ajan olarak değerlendirilmesi gerekebilir. 
Anahtar Kelimeler: 6-OHDA, α-syn, CAT, GSH, madekasik asit, parkinson, SH-SY5Y, SOD

Abstract:
Aim:  In this thesis, it was aimed to investigate the effects of madecasic acid in an in vitro model of Parkinson's disease induced by 6-OHDA in SHSY-5Y cells.
Material and Method: In the study, the neuroblastoma cell line SH-SY5Y (human) (ATCC Cat. CRL-2266) and 6-OHDA were used to create an in vitro Parkinson's disease model. MTT and LDH assays were applied to detect cell viability. Oxidative stress markers MDA, SOD, CAT, GSH activities were measured with ELISA kits. For the detection of inflammation levels, iNOS was determined by ELISA analysis. Immunofluorescence method was used to evaluate TNF-𝛼, IL-1β, α-syn, caspase-3 and TH.
Results: According to MTT assay results, madecacic acid pretreatment significantly increased cell viability in SH-SY5Y cells. According to the results of LDH assay, madecacic acid pretreatment caused a significant decrease in the LDH activity released by the cells into the external environment. These observations support the effects of madecacic acid in increasing cell viability and protecting the integrity of the cell membrane. Treatment of SH-SY5Y cells with 200 μM 6-OHDA significantly increased MDA accumulation and caused a significant decrease in SOD, CAT and GSH activities. However, madecacetic acid treatment significantly reversed these oxidative stress effects induced by 6-OHDA. By decreasing MDA accumulation and increasing SOD, CAT and GSH activities, madecasic acid contributed to the cells' fight against oxidative stress. The effects of madecasic acid in neuroinflammation model were determined by immunofluorescence method. 6-OHDA-induced neuroinflammation caused an increase in iNOS, TNF-𝛼, IL-1β, α-syn, caspase-3 and TH levels. However, madecasic acid treatment markedly decreased the expression of these neuroinflammatory markers.
Conclusion: In conclusion, this study demonstrating the cell viability-enhancing and antioxidant effects of madecasic acid in SH-SY5Y cells emphasizes the potential neuroprotective properties of madecasic acid. Given the ability of madecacetic acid to reduce MDA accumulation, increase antioxidant enzyme activities and lower neuroinflammatory markers in 6-OHDA-induced oxidative stress and neuroinflammation models, madecacetic acid may need to be evaluated as a potential therapeutic agent against Parkinson's disease.
Key Words: 6-OHDA, α-syn, CAT, GSH, madecassic acid, parkinson's, SH-SY5Y, SOD