Glioblastoma multiforme hücre hatlarında var olan eritropoetin reseptörlerinin tayini ve eritropoetinin bu hücre hatlarında  proliferasyona, migrasyona, invazyona  ve angiogeneze etkilerinin araştırılması
Confirmation of presence of known erythropoietin receptors in gbm cells and further investigating effect of erythropoietin in proliferation, invasion, migration and angiogenesis
Yazar: ZEYNEP ÖZGE AYYILDIZ
Danışman: PROF. DR. ŞERMİN GENÇ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Onkoloji = Oncology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Anjiyogenez inhibitörleri = Angiogenesis inhibitors ; Eritropoietin = Erythropoietin ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Glioma = Glioma ; Hücre dizisi = Cell line ; Kanser =   ; Migrasyon = Migration ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Reseptörler = Receptors

Özet:
Glioblastoma multiform (GBM), yetişkinlerde görülen malignant beyin tümörleri arasında en yaygın olarak rastlanan beyin tümörü şeklidir. Günümüzde GBM hastalarına uygulanan cerrahi rezeksiyon, temozolamide aracılığı ile alkilleyici ajan bazlı kemotörapatik uygulanması ve iyonize edici radyasyon tedavisi gibi tedavi yöntemlerine karşı GBM hastalarının ortalama yaşam süreleri 15 ay olup, 5 yıllık sağ kalım oranları %10 dan azdır.  Anemi hem hematolojik kökenli hem de solid tümöre sahip kanser hastalarında, hastalığın seyri boyunca herhangi bir evresinde görülen ve hastalığın seyrini etkileyen bağımsız bir prognostik faktördür. Kanser süresince görülen aneminin, kanser hastalarında radyoterapiye, kemoterapiye ve cerrahi müdahaleye yanıtı azalttığını, tedaviyi olumsuz etkilediğini gösteren çalışmalar bulunmaktadır. Rekombinant insan eritropoeitini (rHuEPO) klinik olarak kronik böbrek hastalığı ile antiviral HIV terapisi ilişki anemide kullanıldığı gibi kemoterapinin tetiklediği aneminin (CIA) gözlendiği kanser hastalarında da kullanılmaktadır.
Bu çalışmamızda, U-87 malignant glioma (U-87 MG) hücre hattında öncelikle, hangi eritropoetin (EPO) reseptörlerinin bulunduğunun belirlenmesi ve sonrasında bu EPO reseptörleri aracılığı ile proliferasyon, migrasyon, invazyon ve angiogenesiz gibi hangi biyolojik olayların düzenlendiğinin belirlenmesi amaçlamıştır.
Bu doğrultuda önce bilinen EPO reseptörleri olan EPO reseptörü (EPOR), Efrin B4 reseptör tirozin kinaz (EPHB4) ve Beta ortak reseptörü (CSF2RB)'nün varlığı U-87 malignant glioma hücre hattında gösterilmiş, daha sonra reseptör spesifik siRNA'lar ile gen ifadeleri 24 saatte efektif olarak susturulmuştur. Reseptör gen ifadesi baskılanan hücreler 1 IU/ml Epo ile muamele edilmiş, hedef reseptörlerin rHuEPO'nun proliferasyona, migrasyona ve invazyona etkisi scrambled kontrolleri ile kıyaslanarak yorumlanmıştır.
	rHuEpo'nun U-87 MG hücrelerinin proliferasyonunu ve invazyonunu anlamlı bir şekilde artırdığı bulunmuştur. EPO reseptörlerinin, EPOR, EPHB4 ve CSF2RB; bu hücrelerde proliferasyon ve invazyon metabolik yolaklarının aktive olmasına ayrı ayrı katkı sağladığı anlamlı olarak gösterilmiştir. Her bir reseptörün ayrı ayrı susturulduğu koşullarda, proliferasyon ve invazyon anlamlı olarak azalmıştır. Bununla beraber rHuEPO'nun U-87 MG hücrelerinin migrasyonunu anlamlı olarak artırmadığı gösterilmiştir.

Abstract:
Glioblastoma multiforme (GBM), are one of the most frequent primary malignant brain tumors seen in adults. In contrast to current treatment regimens applied to GBM patients (neurosurgery, alkylating agent based-chemotherapy with temozolomide (TMZ) and ionising radiation), median survival of GBM patients is about 15 months with a 5 year survival rate lesser than 10%. Anemia is an independent prognostic factor that plays role at some point in the course of the disease in cancer patients with both hematological and solid tumors.  Studies demonstrate that anemia seen during cancer may decrease the response to radiotherapy, chemotherapy and surgery in cancer patients. Recombinant human erythropoietin (rHuEPO) has been used clinically for the treatment of anemia associated with chronic kidney disease, antiviral HIV therapy as well as for the chemotherapy induced anemia observed in cancer patients.
In this study, we aim to search first, which known erythropoietin receptors are present and further by which receptor erythropoietin contributes to proliferation, migration, invasion and angiogenesis in U-87 malignant glioma cell line.  
 	Accordingly, first, presence of known eryhtropoietin receptors; EPO receptor (EPOR), EphrinB4 receptor tyrosine kinase (EPHB4) and Beta common receptor (CSF2RB) in U-87 malignant glioma cell line are confirmed. Subsequently, receptor expression knockdown with receptor specific siRNAs are efficiently performed in 24 hours. The cells with interest of specific receptor gene knockdown further treated with 1IU/ml eryhtropoietin and contribution of target receptor to erythropoietin induced proliferation, migration, invasion and angiogenesize is evaluated compared to scramled group. 
The effect of rHuEPO in U-87-MG cells in terms of proliferation, and invasion is significantly demonstrated. The contribution of each EPO receptor; EPOR, EPHB4, and CSF2RB, to proliferation, and invasion in U-87 MG cells was shown significantly. Knock down of each receptor alone reduced proliferation, and invasion of U-87 MG cells in a signifacant manner. However, it has been demonstrated that 1 IU/ml rHuEPO has no significant effect on migration in U-87 MG cells.