Şanlıurfa yöresinde immunsuprese hastalarda cryptosporidium spp sıklığının kinyoun asit-fast boyama ve ELISA yöntemleri ile araştırılması
Investigating the frequency of cryptosporidium spp among immunosuppressed patients in şanliurfa province using the kinyoun acid-fast stain and ELISA methods
Yazar: ADEM DAĞ
Danışman: PROF. DR. SAMİ TAŞÇI
Harran Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Cryptosporidium = Cryptosporidium ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kriptosporidiyozis = Cryptosporidiosis ; Teşhis = Diagnosis ; Teşhis-ayırıcı = Diagnosis-differential ; İmmünosüpresyon = Immunosuppression ; Şanlıurfa = Şanlıurfa

Özet:
Cryptosporidium spp. özellikle bağışıklığı baskılanmış hastalarda uzun süren ağır ishallere neden olmaktadır.Bu çalışmada Cryptosporidium spp'nin Şanlıurfa yöresinde görülme sıklığını araştırmayı, cryptosporidiosisin gastrointestinal şikayetleri olan immunsuprese ve immunkompetan hastalarda oluşturduğu klinik semptomlar arasındaki farklılığı belirlemeyi ve bu parazite yönelik her iki gruptaki hastalara ait dışkı numunelerine uygulanan Kinyoun asit-fast boyama yöntemi ile ELISA yöntemi sonuçlarını karşılaştırmayı amaçladık.Çalışmada Şanlıurfa yöresinde gastrointestinal şikayetleri bulunan 100 immunsuprese ve 80 immunkompetan hastaya ait dışkı numunelerinin bir miktarına Kinyoun asit-fast boyama yöntemi uygulandı. Dışkı numunelerinin bir miktarına da daha sonra bu örneklerde ELISA yöntemi ile Cryptosporidium parvum koproantijenleri araştırılmak amacıyla ependorf tüplerine alınarak hiçbir koruyucu madde eklenmeden ? 20 °C'de saklandı. Her iki yöntemden en az biri ile pozitif sonuç alınan dışkı örnekleri DFA yöntemi ile de çalışılmak amacıyla %10 formolde oda ısısında saklandı.İmmunsuprese grupta bulunan 100 hastanın 4'ü (%4) ELISA ile, 3'ü (%3) Kinyoun asit-fast boyama ile cryptosporidiosis tanısı aldı. Kontrol grubunda ise her iki yöntemle de Cryptosporidium saptanamadı. Kinyoun asit-fast boyama ile Cryptosporidium ookistleri saptanan 3 dışkı numunesi ELISA yöntemi ile de pozitif sonuç verdi. ELISA ile pozitif saptanan dışkı numuneleri, DFA yöntemiyle de doğrulandı. Cryptosporidiosisli 4 hastanın ikisi öldü, diğer ikisinde klinik ve parazitolojik düzelme sağlandı.Bu çalışmada konak faktörlerinin ve immunitenin Cryptosporidium enfeksiyonunun prognozunu belirlediği görülmüştür. Sırasıyla %100 ve %99 sensitivite ve spesifiteye sahip kolay, güvenilir ve daha az subjektif olan ELISA yöntemi, rutin tanıda ve kısa sürede çok sayıda örneğin taranmasında özellikle büyük ölçekli epidemiyolojik surveyansda çok faydalı olabilir. Bununla birlikte immunsuprese hastalarda ishale neden olan Isospora ve Cyclospora gibi diğer patojenlerin olup olmadığının da saptanmasına imkan verdiği için asit-fast boyama yönteminin de faydasının küçümsenmemesi gerektiği kanaatindeyiz. Gastrointestinal şikayeti olan her immunsuprese hastanın ve sulu ishali olan her hastanın cryptosporidiosis açısından asit-fast boyama yöntemiyle incelenmesinin ve boyama yöntemiyle ookist saptanamayan dışkı numunelerinde ELISA yöntemiyle Cryptosporidium antijeni aranmasının cryptosporidiosis tanısında duyarlılığı arttıracağı sonucuna varılmıştır.Anahtar Kelimeler: Şanlıurfa, Cryptosporidium spp, immunsuprese hasta, Kinyoun asit-fast boyama, ELISA

Abstract:
Cryptosporidium spp. causes long-lasting severe diarrhea especially in immunosuppressed patients.In this study, we aimed to investigate the frequency of Cryptosporidium spp. in Şanlıurfa province, to determine the difference of clinical symptoms of immunosuppressed and immunocompetents patients with gastrointestinal complaints that caused by cryptosporidiosis and also to compare the results of stool samples of both groups which studied by Kinyoun acid-fast stain and ELISA methods.In this study, the Kinyoun acid-fast staining method was applied to a number of the fecal samples taken from 100 immunosuppressed and 80 immunocompetent patients with gastrointestinal complaints in Şanlıurfa province. A number of the fecal samples were stored at ?20 °C after being transferred to eppendorf tubes without the addition of any preservatives towards the aim of probing for Cryptosporidium parvum coproantigens in these samples using the ELISA method. The fecal samples for which positive results had been obtained with at least one of the two methods were stored at room temperature at 10% formaldehyde so that they could be examined using the DFA method.Four (4%) out of of 100 patients in the immunosuppressed group were diagnosed with cryptosporidiosis as a result of ELISA method and 3 (3%) received this diagnosis as a result of Kinyoun acid-fast stain method. In the control group, Cryptosporidium spp. could not be detected with either method. Three fecal samples in which Cryptosporidium oocysts were detected using Kinyoun acid-fast stain provided positive results as a result of the ELISAmethod, as well. The fecal samples detected to be positive using the ELISA method were also confirmed to be positive using DFA method. Two out of 4 patients with cryptosporidiosis passed away; clinical and parasitological improvements were achieved in the other two patients..This study suggested that the host factors and immunity determined the prognosis of Cryptosporidium infection. The ELISA method, which has 100% sensitivity and 99% specificity and which is easy, reliable and less subjective, can be very beneficial in routine diagnosis and in screening several samples in a short period of time, especially in large scale epidemiological surveillance. On the other hand, we hold the opinion that the benefit of acid-fast stain method should not be underestimated, either; because it enables us to determine whether other pathogens causing diarrhea in immunosuppressed patients such as Isospora and Cyclospora are available. It has been concluded that examining every immunosuppressed patients with gastrointestinal complaints and every patients with watery diarrhea for cryptosporidiosis using acid-fast stain method and using the ELISA method to search for Cryptosporidium in the fecal samples in which no oocysts were detected with stain method will raise sensitivity in cryptosporidiosis diagnosis.Keywords: Şanlıurfa, Cryptosporidium spp, immunosuppressed patient, Kinyoun acid-fast stain, ELISA