Sığla yağının hücre kültüründe yara iyileştirici etkilerinin incelenmesi
Wound healing effects of sweetgum oil in cell culture
Yazar: BURCU EKİZ
Danışman: PROF. DR. YUSUF ÖZTÜRK
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Tüm dünya çapında yara tedavisi için yapılan araştırmalar ve uygulamalar göz önüne alındığında, başarılı bir yara tedavisinin ne denli kıymetli olduğu açıktır. Günümüzde yeni ve etkili ajanların keşfi iyileşme sürecini kısaltarak hastaların yaşam konforunu artırmaktadır. 
Bu tez çalışmasında ülkemizde endemik bir tür olan Liquidambar orientalis'in ürünü olan sığla yağının yara iyileştirici etkilerinin hücre kültürü ortamında test edilmesi ve etki mekanizması araştırılmıştır. Çalışmada in vitro deneyler uygun koşullarda kültüre edilen insan kökenli HaCaT keratinosit hücre hatlarına uygulanmıştır. Çalışmada Muğla'dan iki farklı lokal üreticiye ait sığla yağı getirtilmiştir. Sığla yağının etkinlik karşılaştırması için pozitif kontrol olarak yara iyileştirici etkisi kanıtlanmış olan Centella asiatica bitkisinin standardize ekstresi kullanılmıştır. HaCaT keratinosit hücrelerinde sığla yağının etkinliğinin değerlendirilmesi için toksik olmayan konsantrasyon tespitinde MTT; proliferasyon ve hücre migrasyon tespiti için gerçek zamanlı hücre analiz sistemi; ekstrenin yara iyileşmesi üzerine etkilerini belirlemek için scratch deneyi ve sığla yağının COL1A1 (kollajen tip-1 alfa-1) mRNA ekspresyon düzeyine etkilerinin belirlenmesi için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu yöntemleri uygulanmıştır.  
Araştırmada MTT yöntemi sonucunda toksik olmayan konsantrasyonlar 0,1 μg/ml (100 ng/ml), 0,01 μg/ml (10 ng/ml) ve 0,001 μg/ml (1 ng/ml) olarak belirlenmiştir. Gerçek zamanlı hücre analiz sisteminde yapılan 72 saatlik analize göre hücre proliferasyonunda ve migrasyonunda zamana bağımlı olarak 0,001 μg/ml konsantrasyonlarında anlamlı bir artış gözlenmiştir. Scratch analizine göre 48.saat sonunda hücre migrasyonunda zamana bağımlı olarak 0,001 μg/ml konsantrasyonlarında yaranın her iki yakasındaki mesafenin anlamlı bir şekilde kapandığı gözlemlenmiştir. Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu sonucuna göre ise COL1A1 mRNA ekspresyon düzeylerinde hiçbir artış gözlenmemiştir.  Araştırmamızda in vitro ortamda sığla yağının yara iyileşmesinde etkili olduğu sonucuna ulaşılmıştır.

Abstract:
Considering the researches and practices for wound treatment all over the world, it is clear how valuable a successful wound treatment is. Today, the discovery of new effective agents increases the quality of life of patients by shortening the healing process.
The wound healing effects of Sığla oil (Sweetgum oil), which is the product of Liquidambar orientalis grown in our country, were tested in cell culture medium and its mechanism of action was investigated in the study. In vitro experiments were applied to human derived HaCaT keratinocyte cells lines which cultured under appropriate conditions. Sweetgum oil belonging to two different local producers was brought from Muğla. Centella asiatica plant extract, which has proven wound healing effects, was used as a positive control for the comparison of the efficacy of sweetgum oil. Methods which applied to determine the effects of the extract on wound healing is,  firstly MTT for non-toxic concentration determination for evaluation of the efficacy of sweetgum oil in HaCaT keratinocyte cells; real time cell analysis system and scratch test for proliferation and cell migration detection; and real time polymerase chain reaction to check  COL1A1 (collajen type-1 alpha-1) mRNA expression.
In the study, non-toxic concentrations were determined as 0,1 μg/ml (100 ng/ml), 0,01 μg/ml (10 ng/ml) and 0,001 μg/ml (1 ng/ml) as a result of MTT method. According to the real time cell analysis system results, a significant increase in cell proliferation and migration was observed at 0,001 μg/ml concentrations in a time (72 h) dependent manner. According to the scratch analysis, at the end of the 48th hour it was observed that the distance on both sides of the wound was significantly closed at 0,001 μg/ml concentrations in a time-dependent manner. According to the Real-Time PCR result, no increase in COL1A1 (collajen type-1 alpha-1) mRNA expression levels was observed. In the study, it was concluded that sweetgum oil is effective in wound healing in vitro.