II. derece yüzeyel yanık tedavisinde kullanılan adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerin inflamasyon sürecinde yanık bül sıvısı üzerinden oynadığı rolün moleküler mekanizmalarının araştırılması
Investigation of the molecular mechanisms of the role of mesenchymal stem cells of adipose origin used in the treatment of second-degree superficial burns in the inflammation process on burn bullet fluid
Yazar: BETÜL SEYHAN SINIKSARAN
Danışman: PROF. DR. MUNİS DÜNDAR
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Adipoz doku = Adipose tissue ; Kök hücreler = Stem cells ; Proteomikler = Proteomics ; Rejenerasyon = Regeneration ; Tedavi = Treatment ; Yanıklar = Burns ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Mezenkimal stromal hücreler (MKH'ler), mezodermal farklılaşma potansiyeli ve sitoprotektif fonksiyonu nedeniyle giderek artan sayıda terapötik doku rejeneratif uygulamasına dahil edilmiş olan, kolayca erişilebilir ve kendi kendini yenileyebilen hücrelerdir. Bu çalışmada, adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerin inflamasyona verdiği cevabı bulmak amaçıyla yanık bül sıvısı kullanılanırak bu moleküler mekanizmalar aydınlatılması hedeflenmiştir.
Çalışmada Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahisi Yanık Ünitesine gelmiş olan ve gönüllü onam formunu imzalamış olan hastanın yanık sıvısı üzerinde adipoz kökenli meznekimal kök hücrelerin, inflamasyona vermiş olduğu yanıtı anlamak amacıyla yanık bül sıvısı ile kültüre edilmiştir. İnflamasyon mimiğini oluşturmak için IL-6,IL-1β ve TNFα plazmidleri fibroblast hücrelerine transfeksiyon edilmiş sonrasında adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerle birlikte kültüre edilmiştir. Oluşturulan deney hücre gruplarının hem total hücre hemde salgıladıkları moleküller LC-MS/MS yöntemiyle analiz edilip tanımlanmıştır.
Yanık bül sıvısında akut faz yanıtını oluşturan moleküllerin ve omplement sistem moleküllerinin varlığı gösterilmiştir. Yanık sıvısıyla kültüre edilen adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerin inflamasyona yanıt oluşturduğu ve yara iyileşmesinde görev alan molekülleri salgıladığı tespit edilmiştir. IL-6, IL-1β ve TNFα plazmidleri ile transfeksiyon gerçekleştirilerek inflamasyon mimiği oluşturulmuştur. İnflamasyon mimiği oluşan hücrelerin adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerle birlikte kültüre edilmesiyle antiiflamatuar ve doku onarımında görev alan moleküllerin salgılandığı gözlemlenmiştir.
Adipoz kökenli mezenkimal kök hücrelerin yanık bül sıvısı üzerinden inflamasyona verdiği yanıt doğrultusunda görev alan molekülleri tespit edilmiştir. Yanık yaralarının tedavisinde kullanılan MKH'lerin, hücre kültüründe inflamasyonlu ortamda (ön-koşullama;pre-conditioning) kültüre edilerek tedavi için kullanılmasının tedavi sürecine katkı sağlayacağı düşünülmektedir.
Anahtar Kelimeler: İnflamasyon;  Mezenkimal kök hücre;  Proteomiks; Rejenerasyon; Yanık yarası.

Abstract:
Mesenchymal stromal cells (MSCs) are easily accessible and self-renewing cells that have been included in an increasing number of therapeutic tissue regenerative applications because of their mesodermal differentiation potential and cytoprotective function. In this study, it was aimed to elucidate these molecular mechanisms by using burn blister fluid to find out the response of adipose-derived mesenchymal stem cells to inflammation.  In this study, it was aimed to elucidate these molecular mechanisms by using burn blister fluid to find out the response of adipose-derived mesenchymal stem cells to inflammation.
In this study, in order to understand the response of adipose-derived mesenchymal stem cells to inflammation, they were cultured with burnt bulla fluid on the burn fluid of the patient who signed the voluntary consent form and came to the Erciyes University Faculty of Medicine Plastic and Reconstructive Surgery Burn Unit. To generate the inflammation mimic, IL-6, IL-1β and TNFα plasmids were transfected into fibroblast cells and then co-cultured with adipose-derived mesenchymal stem cells. Both the total cell and the secreted molecules of the constituted experimental cell groups were analyzed and identified by LC-MS/MS method.
The presence of molecules that make up the acute phase response and complement system molecules in the burned bullae fluid has been demonstrated. It was determined that adipose-derived mesenchymal stem cells cultured with burn fluid formed a response to inflammation and they secrete molecules that function in wound healing. By transfection with IL-6, IL-1β and TNFα plasmids, an inflammation mimic was created. It has been observed that by culturing the cells that produce inflammation mimics together with adipose-derived mesenchymal stem cells, molecules that function in anti-inflammatory and tissue repair are secreted. 
Molecules that take charge in the response of adipose-derived mesenchymal stem cells to inflammation have been detected through the burned bulla fluid. It is thought that the use of MSCs used in the treatment of burn wounds for treatment by being cultured in an inflamed medium (pre-conditioning) in cell culture will contribute to the treatment process.
Keywords: Burn Wound; Inflammation; Mesenchymal Stem Cell; Proteomics; Regeneration.