Nadph oksidazın bazı fonksiyonel analiz testleri ve x'e bağlı kronik granulomatoz hastalık tanısında moleküler testler ile uygulaması
Some functional analysis tests of nadph oxidase and application with molecular tests in the diagnosis of x-li̇nked chronic granulomatous disease
Yazar: ESMA BENTLİ
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA YAVUZ KÖKER
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; DNA analizi = DNA analysis ; Fagositler = Phagocytes ; Granülomatöz hastalık-kronik = Granulamatous disease-chronic ; Nötrofiller = Neutrophils ; Sitokromlar = Cytochroms ; Teşhis = Diagnosis ; Teşhis teknikleri ve prosedürleri = Diagnostic techniques and procedures ; İmmün yetmezlik = Immun deficiency

Özet:
Kronik Granülomatoz Hastalık (KGH) fagositik hücrelerin bazı bakteri ve mantarları fagosite ettikten sonra öldürememesi ile karakterize kalıtsal bir primer immün yetmezlik hastalığıdır. KGH da fagosit nikotinamid adenin dinükleotid fosfat (NADPH) oksidaz enzim yapısını oluşturan oksidaz proteinlerinden (gp91, p22, p47, p67) birinin eksikliği nedeni ile oksijen radikallerinin öncüsü olan süperoksit üretilemez.
Bu çalışmada Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi İmmünoloji Anabilim Dalı İmmün Yetmezlik Araştırma Laboratuvar'ına gelen25 aileden XKGH tanısı alan 30 hasta, 29 anne, 1 büyükanne, 1 teyze ve 5 kız kardeş ten oluşan 36 X KGH taşıyıcı hasta yakınından ve 40 sağlıklı bireyin olduğu kontrol grubundan alınan periferik kan örnekleri kullanıldı. Hasta, taşıyıcı ve kontrol örneklerinden nötrofil fonksiyon analzi DHR 123 testi ile gerçekleştirildi. Ayrıca taşıyıcı bireylerden gp91/p22phox spesifik antikorla cytocrom b558 ekspresyonu ölçümü akım sitometrede çalışıldı.
Çalışmaya alınan 30 hasta örneğinde KGH ile uyumlu DHR123 test sonucu elde edildi. Ortalama SI: 1,15 olarak bulundu. Kontrol örneklerinde DHR 123 testi sonucu ortalama SI: 80 olarak bulundu. 36 taşıyıcının tamamında DHR 123 testi ile iki farklı nötrofil populasyonu elde edildi. Benzer şekilde ancak stimulasyon olmadan yapılan p22/gp91phox intrasellüler antikor boyaması sonucu da bütün taşıyıcı örneklerinden iki farklı nötrofil populayonu elde edildi. Ayrıca CD11b M1/70 APC-Cy7 ve CD14 MOP9-APC-Cy7 spesifik antikorları DHR 123 testinde dihidrorodamin'e alternatif olarak kullanıldı ve benzer sonuçlar elde edildi.
Sonuç: X-KGH tanısında DHR 123 yönteminin tanı ve taşıyıcılık takibinde tam doğru sonuçlar verdiği gözlendi. Taşıyıcılık takibinde ve tanıda p22/gp91 testinin de destekleyici bir test olduğu belirlendi.
Anahtar Kelimeler:	NADPH Oksidaz, X'e Bağlı Kronik Granülomatoz Hastalık, Nötrofil Fonksiyonu, CYBB, CD11b

Abstract:
Chronic Granulomatosis Disease (GHD) is a hereditary primary immunodeficiency disease characterized by phagocytic cells that can not kill certain bacteria and fungi after phagocytosis. it is not possible to produce superoxide which is the precursor of oxygen radicals due to the lack of one of the oxidase proteins (gp91, p22, p47, p67) that constitute the phagocytic nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase enzyme structure in this disease. In this study, 30 patients who were diagnosed with X CGD from 25 families, 36 X CGD carrier patients consisting of 29 mothers, 1 grandmother, 1 aunt and 5 sisters and 40 healthy subjects peripheral blood samples who came to Erciyes University Faculty of Medicine, Department of Immunology and Immunodeficiency Research Laboratory peripheral blood samples taken were used. Neutrophil function analysis from patient, carrier and control samples was performed by DHR 123 test. In addition, measurement of cytocrom b558 expression with gp91 / p22phox specific antibody from carrier individuals was performed on a flow cytometer. In 30 patients, DHR 123 test result was found to be compatible with CGD. The mean SI was found to be 1.15. In the control samples, result of DHR 123 test SI value found in 80. Two different neutrophil populations were obtained by DHR 123 test in all 36 carriers. Similarly, two different neutrophil populations were obtained from all carrier samples in a p22 / gp91phox intracellular antibody staining result without stimulation. Furthermore, specific antibodies to CD11b M1 / 70 APC-Cy7 and CD14 MOP9-APC-Cy7 were used as an alternative to dihydrorodamine in the DHR 123 test and similar results were obtained. Conclusion: It was observed that DHR 123 method in the diagnosis of X-CGD and in follow-up of diagnosis and carriage gives exact results. p22 / gp91 test was also follow-up and identification in the carriage  a supportive test.
Key Words:	NADPH Oxidase, X-linked Chronic Granulomatous Disease, Neutrophil Function, CYBB, CD11b