Varikoselli hastalarda immünohistokimyasal yöntem kullanarak spermlerdeki apoptozisin saptanması ve apoptozis ile sperm parametreleri, serum ve seminal plazmadaki tas-tos seviyeleri arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between apoptosis, sperm parameters, tas-tos levels in serum and seminal plasma and detection of apoptosis in sperm using immunohistochemical method in patients with varicocele
Yazar: ŞÜKRÜ AKMEŞE
Danışman: DOÇ. DR. METE KÖKSAL
Harran Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Apoptozis = Apoptosis ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Kaspazlar = Caspases ; Oksidanlar = Oxidants ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sperm = Spermatozoa ; Varikosel = Varicocele ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Pampiniform pleksustaki testiküler venlerin anormal genişlemesi olarak tanımlanan varikosel çoğunlukla etkilenen testisin hacminde bir azalma ile ilişkilidir. Bugün varikoselin gerçekte üreme sistemine ne kadar hasar verdiği bunun oluşma mekanizması üzerine çok sayıda tartışma vardır. Varikosel erişkin erkeklerin yaklaşık %15 kadarında bulunur. Bununla birlikte, primer infertiliteli erkeklerin %35'inde ve sekonder infertiliteli erkeklerin %80'inde belirgin varikosel bulunur. Bu iki duruma göre varikosel erkek infertilitesinin önemli nedenlerinden biridir ve fertilitede ilerleyen bir azalmaya sebep olur. En sık düzeltilebilir infertilite sebebi olan varikoselde spermatogenezin hangi mekanizma ile bozulduğu tam olarak bilinmemektedir. Programlı hücre ölümü ya da apoptozis, hücrelerde fizyolojik bir oranda gerçekleşebilir ancak farklı patolojik durumlarda artan veya azalan oranlarda bulunabilir. Bu çalışmada varikoselli hastalarda apoptosiz markırı olan kaspaz-3 seviyesi ile oksidatif stres ve sperm parametreleri arasındaki ilişkinin araştırılması amaçlanmıştır.  Çalışmamıza, varikosel tanısı almış 40 hasta ve 40 sağlıklı birey dahil edildi. Alınan sperm örneklerinde immün boyama yöntemiyle kaspaz-3 varlığı değerlendirildi. Seminal plazma ve kan örneklerinde total antioksidan ve total oksidan seviyeleri spektrofotometrik yöntemle otoanalizörde ölçüldü. Her iki sonuç kullanılarak OSİ değeri hesaplandı. Çalışmamız sonucunda, TAS seviyesi varikoselli grubunda (0,93 ± 0,28) sağlıklı gruba (1,19 ± 0,27) oranla düşük bulundu (p<0,001). TOS seviyesi ise varikoselli grupta (8,32 ± 1,97) sağlıklı gruba (7,25 ± 1,81) kıyasla yüksek bulundu (p=0,013). OSİ seviyesi de sağlıklı gruba (0,63 ± 0,22) kıyasla varikoselli grupta (1,01 ± 0,48) yüksek bulundu (p<0,001).Apoptozis belirteci olan kaspaz-3, varikoselli grupta (14,27 ± 26,63) kontrol grubuna (25,51 ± 30,70)  oranla düşük bulundu (p=0,028). Spermiyogram parametrelerinden ileri hareket (33,00 ± 19,50), toplam hareket (45,50 ± 27,0) ve morfoloji (7 ± 5,0) varikoselli grupta kontrol grubuna oranla düşük bulundu (p<0,001). Hareketsizlik (54,50 ± 27,0) ise varikoselli grupta yüksek bulundu (p<0,001). Bulgularımız ışığında varikoselli hasta grubunda artmış olan oksidatif stresin antioksidanları tüketerek total antioksidan seviyenin düşmesine neden olduğunu ve ayrıca muhtemelen apoptozisinde bu hastalarda düşük bulunmasına katkıda bulunduğunu söyleyebiliriz.

Anahtar Kelimeler: Varikosel, Apoptozis, Oksidatif stres, Spermiyogram, İmmün boyama

Abstract:
Varicocele, defined as an abnormal dilation of the testicular veins in the pampiniform plexus, is often associated with a reduction in the volume of the affected testicle. Today there is much debate about how much the varicocele actually damages the reproductive system and the mechanism through which this occurs. Varicocele is present in around 15% of the adult male population. However, 35% of men with primary infertility and 80% of men with secondary infertility present palpable varicoceles. This leads to two assumptions: varicocele is an important cause of male infertility and it causes a progressive decrease in fertility status. Although varicocele is the most common correctable cause of infertility, it was not completely known by which mechanism the spermatogenesis is impaired in varicocele. Programmed cell death or apoptosis can occur in cells in a physiological rate, but may in an increasing or decreasing rate in different pathological situations.In the present study, we aimed to investigate the relationship between Caspase-3, which is marker of apoptosis, sperm parameters and oxidative stres. In our study, 40 patients with a diagnosis of varicocele and 40 healthy individuals were included. By immunostaining presence of caspase-3 in the  received sperm samples were evaluated. Total oxidant and Total antioxidant levels in seminal plasma and blood samples were measured by the spectrophotometric method in autoanalyzer. Using both results were calculated the OSI value. In our study, the level of the TAS in varicocele group (0,93 ± 0,28) compared to the healthy group (1,19 ± 0,27)  was lower (p<0,001).  The level of the TOS in varicocele group (8,32 ± 1,97) compared to he healthy group (7,25 ± 1,81)  was higher (p=0,013). Level of OSI compared to the healthy group (0,63 ± 0,22)   was higher in the group with varicocele (1,01 ± 0,48) (p<0,001). Caspase-3 of the apoptosis markers compared to the healthy group (25,51 ± 30,70)  was lower in the group with varicocele (14,27 ± 26,63) (p=0,028). Forward movement (33,00 ± 19,50), total movement (45,50 ± 27,0)  and morphology (7 ± 5,0)  of the semen parameters in varicocele group compared to the healthy group was lower (p<0,001). Inactivity (54.50 ± 27.0) was higher in the varicocele group (p <0.001). Our findings have shown that the increased amount of oxidative stres in the patients with varicocele has caused decrease in total antioxidant level by consuming the antioxidants, also it has probably contributed to the low apoptosis level in these patients.

Key words: Varicocele, Apoptosis, Oxidative stress, Spermiogram, Immunostaining