Sıçanlarda doksorubisin ile indüklenen nefrotoksisiteye karşı safranal'ın etkilerinin histolojik ve flow sitometrik değerlendirilmesi
The histological and flowcytometric evaluation of effects of safranal against doxorubicin-induced nephrotoxicity in rats
Yazar: OĞUZHAN KESKİN
Danışman: PROF. DR. YAVUZ TEKELİOĞLU
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Apoptozis = Apoptosis ; Doksorubisin = Doxorubicin ; Histoloji = Histology ; Nefrotoksisite = Nephrotoxicity ; Safranal = Safranal ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmada doksorubisin tedavisi nedeni ile sıçanlarda oluşabilecek nefrotoksisiteye karşı, safranal'ın etkilerinin histolojik ve flowsitometrik yöntemlerle araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmamızda toplam 18 adet Sprague Dawley dişi şıçan kullanıldı ve 3 gruba ayrıldı. Kontrol grubuna 7 gün boyunca hiçbir uygulama yapılmadı. DOKS grubuna deneyin beşinci günü tek doz 40 mg/kg doksorubisin intraperitoneal (i.p.) olarak uygulandı. DOKS+SAF grubuna, 7 gün boyunca 200 mg/kg safranal oral gavaj ile verildi ve deneyin beşinci günü doksorubisin 40 mg/kg intraperitoneal uygulandı. Deney sonunda (8. gün) derin anestezi (ketamin 90 mg/kg) altında sıçanlar eksanguinasyon yöntemi ile sakrifiye edildi ve sol böbrek dokuları alındı. Böbrek dokularının histopatolojik değerlendirmesi için ışık mikroskobu kullanıldı. Böbrek dokusunda apoptozu ve oksidatif stresi değerlendirmek için flowsitometrik inceleme yapıldı.
Yapılan histopatolojik değerlendirmeler sonunda DOKS grubuna ait böbrek kesitlerinde interstisyel alanda yoğun vasküler konjesyon, tübül epitel hücrelerinde dökülme, tübül epitelinde yer yer vakuolizasyon ve yer yer tübüllerde atrofi izlendi. DOKS+SAF grubuna ait böbrek dokusunda, interstisyel alanda vasküler konjesyon, tübül epitel hücrelerinde dökülme, tübül epitelinde yer yer vakuolizasyon ve yer yer tübüler atrofi izlenmekle birlikte DOKS grubu ile kıyaslandığında interstisyel vasküler konjesyonda çok daha belirgin olmak üzere histopatolojik bulgularda düzelme oldu. Morfometrik ölçümler sonucu, gruplar arasındaki tübül çapı değişiklikleri açısından istatistiksel olarak anlamlı bir farklılık saptanmadı. Yapılan flowsitometrik inceleme sonunda DOKS grubunda apoptoz indeksi artarken DOKS+SAF grubunda DOKS grubuna göre apoptoz indeksinin azaldığı tespit edildi. Ayrıca DOKS grubunda kontrol grubuna göre antinox2/gp91phox pozitif hücre sayısında artış tespit edilirken DOKS+SAF grubunda DOKS grubuna göre anlamlı bir azalma tespit edildi.
Elde ettiğimiz bulgular, doksorubisinin dişi sıçanların böbrek histolojisini olumsuz olarak etkilediğini, doksorubisine ek olarak safranal uygulanması ile bu olumsuz değişikliklerin histopatolojik ve flowsitometrik düzeyde düzeldiğini göstermektedir. Bu düzelmelerin safranalın antioksidan etkileri ile gerçekleşmiş olabileceği söylenebilir. 


Anahtar Kelimeler: Doksorubisin, Nefrotoksisite, Safranal, Apoptoz, Flow Sitometri

Abstract:
The aim of this study was to investigate the effects of safranal against nephrotoxicity due to doxorubicin treatment using histologic and flowcytometric methods in rats.
A total of 18 Sprague Dawley female rats were used and divided into three groups. The control group received no treatment for 7 days. 40 mg/kg i.p. doxorubisin as a single dose was administered to the DOX group in the fifth day of the experiment. 200 mg/kg safranal was given to the DOX+SAF group by oral gavage for 7 days and 40 mg/kg doxorubicin was administered intraperitoneally on the fifth day of experiment. At the end of the experiment (day 8), the rats were sacrificed by exsanguination method under deep anesthesia (ketamine 90 mg/kg) and left kidney tissues were removed. Light microscopy was used for histopathological evaluation of renal tissues. Flow cytometric examination was performed to evaluate apoptosis and oxidative stress in renal tissue.
As a result of histopathological evaluations, the renal sections of DOX group revealed intense vascular congestion in the interstitial area, shedding of tubular epithelial cells, vacuolization of tubuler epithelium and tubular atrophy. Vascular congestion in the interstitial area, shedding of tubular epithelial cells, vacuolization of tubuler epithelium and tubular atrophy are observed in renal tissues belonging to DOX+SAF group. Compared witht he DOX group, histopathological findings were improved in DOX+SAF group especially in interstitial vascular congestion. As a result of morphometric measurements, statistically significant difference was not found in terms of tubule diameter between the groups. At the end of flowcytometric examination, apoptosis index increased in DOX group compared to control group and apoptosis index decreased in DOX+SAF group compared to the DOX grup. In addition, in the DOX group the number of antinox2/gp91phox positive cells were increased compared to the control group and a significant decrease was found in DOX+SAF group compared to the DOX group.
Our findings show that doxorubicin administration adversely affects kidney histology of female rats and in addition to doxorubicin, safranal administration improves these changes at histopathological and flowcytometric level. It can be said that these improvements may have been caused by the antioxidant effects of safranal. 


Keywords: Doxorubicin, Nephrotoxicity, Safranal, Apoptosis, Flow Cytometry