Nöroblastik tümörlerdeki bölgesel DNA kopya sayısı değişikliklerinin ve allelik dengesizliklerin tanımlanması
Analysis of allelic imbalances and local DNA copy number changes in neuroblastic tumors
Yazar: SAİT TÜMER
Danışman: DOÇ. DR. OĞUZ ALTUNGÖZ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Alleller = Alleles ; DNA = DNA ; Gen amplifikasyonu = Gene amplification ; Genler = Genes ; Genler-MYC = Genes-MYC ; Genom = Genome ; Moleküler genetik = Molecular genetic ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nöroblastom = Neuroblastoma ; Periferik sinir sistemi neoplazmları = Peripheral nervous system neoplasms

Özet:
Periferal nöroblastik tümörler, özellikle nöroblastom (NB), en sık gözlenen çocukluk çağı neoplastik oluşumudur. klinik davranış bakımından kendiliğinden spontan gerileyen benign ganglionöromdan agresif ve metastatik malign tipe kadar farklılık gösterebilmektedir. NB karmaşık ve heterojen genetik değişiklikler içermektedir. En sık gözlenen değişiklikler; ploidi sapmaları, MYCN geninin amplifikasyonu, 1p, 3p, 11q delesyonları ve 17q kol kazanımlarıdır. Bu çalışmada, 249 NB tümörü olan olguda genomik skalada gözlenen genetik değişikler (MYCN geninin amplifikasyonu, 1p, 3p, 11q delesyonları ve 17q kol kazanımı) ve klinik özellikler (yaş, tümör evresi ve histolojisi) çok değişkenli lojistik regresyon analiziyle değerlendirildi. Ayrıca 11q delesyonu ve 3p delesyonu gözlenen olgularda dizin CGH çalışmaları yapıldı. Aynı zamanda amplikon gözlenen hücre hatlarında replikasyonunun hücre döngüsünün herhangi bir aşamasında olabileceğinin gösterilmesi amaçlanmıştır. Olguların tamamında; 1, 2, 3, 4, 7, 9, 11, 12, 14 ve 17. kromozom kollarında 100?den fazla prob kullanılarak hibridizasyon gerçekleştirildi. PCR ile çoğaltılan ürünlerin nicel analizi kapiller elektroforez ile gerçekleştirildi. NB tanılı olgularda MYCN amplifikasyonu % 23.3, 1p delesyonu % 31.7, 3p delesyonu % 20.8, 11q delesyonu % 26.2, 17q kazanımı % 77.2 oranında gözlendi. NAG, DDX1 ve ALK gen amplifikasyonu ile MYCN amplifikasyonu arasındaki ilişki istatistiksel olarak anlamlı bulundu. SiMa hücre hattına DM yapılarının kendini eşlemesinin hücre döngüsünden bağımsız olmadığı ve S-fazında olduğu gösterildi. MLPA sonuçlarına göre 4 tümör grubu oluşmuştur. Grup1; MYCN amplifikasyonu ve 1p delesyonundan en az birini taşıyanlar. Grup2; 11q delesyonu ve 3p delesyonundan en az birini taşıyanlar. Grup3; MYCN amplifikasyonu veya 1p ve 11q veya 3p delesyonlarından en az ikisini taşıyanlar. Grup4 ise bu anomalileri taşımayan tümörler. Grup1, 2 ve 3?de olguların çoğunluğu 12 ay üstü yaş, yüksek evre, kötü histoloji grubunda olduğu saptandı. Sonuç olarak, NB?de çoklu genetik değişikliklerin saptanmasında MLPA kullanılması etkin ve duyarlı bir yaklaşım olup, tümörlerin çoklu genetik özellikleri bakımından sınıflandırılmasını ve tedavi protokollerinin etkin bir biçimde uygulanmasına destek sağlayabilecektir.

Abstract:
Neuroblastoma (NB) is a neoplasm of sympathetic nervous system and the most frequent extra cranial solid tumor of early childhood. The tumors have variable clinical presentation, ranging from a benign tumor which is regress spontaneously or mature into ganglioneuroma to an aggressive and metastatic malignant progression. NB has very complex and heterogeneous genetic alterations. The most common alterations are ploidy changes, amplification of the MYCN, deletions of chromosomes arms 1p, 3p and 11q and gains of 17q arm. In this study, we analyzed genomic scale of the genetic alterations and clinical parameters of the primary neuroblastic tumors in 249 cases with MLPA. Also, we investigated a significance of association between clinical (age, tumor stage and histology) and genetic (MYCN amplification, 1p, 3p, 11q deletions and 17q gain) parameters with multivariate logistic regression analyses. In addition, array CGH analyses were observed in tumors with 11q and 3p deletions. At the same time, we thought that amplicons observed in cell lines may be replicated at any stage of the cell cycle. MLPA analyses of multiple loci at chromosomes 1, 2, 3, 4, 7, 9, 12, 14, and 17 were performed using more than one hundred probes. Amplified PCR products were separated with a capillary electrophoresis and fragments were analyzed with it. Major anomalies in NB were MYCN amplification (23.3%), 1p (31.7%), 3p (20.8%), 11q (26.2%) deletions and 17q (77.2%) gain. There was a highly significant amplification of MYCN gene and NAG, DDX1 and ALK amplifications. Replication of double minutes on SiMa cell line was shown dependent on the cell cycle (S phase). Genetic analysis of multiple loci by MLPA revealed four different tumor groups: (Grup1) Tumors with MYCN amplification and 1p deletion or at least one of them, (Grup2) Tumors with 11q and 3p deletions or at least one of them, (Grup3) MYCN amplification and/or 1p deletion and 11q and/or 3p deletions at least one of them, (Grup4) tumor with anomalies other than 1p, 3p, 11q deletions or MYCN amplification. The majority of the patients in the Group1, 2 and 3 were detected over 12 months of age, high stage and poor histology. In conclusion, our results show that MLPA can confidently and effectively be utilized to detect multiple genomic imbalances at a time, and these changes can be classified into genetic subtypes of NB. Also, MLPA applications could be effectively supported by treatment protocols.