D-carvone'un palmitat ile oluşturulan hücresel hepatotoksisite üzerine etkisi
Effect of D-carvone on palmitate-induced cellular hepatotoxicity
Yazar: BÜŞRA DİLER ZENGİNER
Danışman: DOÇ. DR. ERAY ÖZGÜN
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Doymuş yağ asitleri = Saturated fatty acids ; Endoplazmik retikulum stresi = Endoplasmic reticulum stress ; Karaciğer yağlanması = Fatty liver ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Bu çalışmanın amacı, palmitat ile hepatotoksisite oluşturulan AML12 hücrelerinde D-Carvone'un hücre canlılığına, yağlanmaya, oksidatif strese, endoplazmik retikulum stresine ve inflamazom aktivasyonu üzerine etkisini araştırmaktır. AML12 hücrelerine 24 saat süreyle tek başına D-Carvone ve palmitat ve 1 mM palmitat ile birlikte D-Carvone uygulandı. Hücre canlılığı 3-(4,5-dimetil-2-tiyazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazolyum bromür testi ile ölçüldü. Hücre içi lipid birikimi trigliserid düzeyi ölçümü ile spektrofotometrik olarak ve Nile red boyama ile akım sitometrede ölçüldü. Protein karbonil, hem oksijenaz 1, aktive edici transkripsiyon faktör 4 ve NOD benzeri reseptör ailesi pirin domain içeren protein 3 düzeyleri western blot yöntemiyle ölçüldü. 1 mM palmitat hücre canlılığında anlamlı bir azalmaya ve trigliserid düzeylerinde anlamlı bir artışa yol açtı. 10 µM, 25 µM ve 50 µM D-Carvone, 1 mM palmitat uygulanan hücrelerde, hücre canlılığını anlamlı olarak arttırken, trigliserid düzeylerini anlamlı olarak azalttı. Bundan sonraki deneylerde, palmitata bağlı hepatotoksisitede en etkili olduğu gösterilen 10 μM ve 25 μM D-Carvone kullanıldı. 1 mM palmitat AML12 hücrelerinde Nile red ile boyanmayı, protein karbonil, hem oksijenaz 1, aktive edici transkripsiyon faktör 4 ve NOD benzeri reseptör ailesi pirin domain içeren protein 3 düzeylerini anlamlı olarak arttırdı. 10 μM ve 25 μM D-Carvone, 1 mM palmitat uygulanan hücrelerde Nile red ile boyanmayı, hem oksijenaz 1, aktive edici transkripsiyon faktör 4 ve NOD benzeri reseptör ailesi pirin domain içeren protein 3 düzeylerini anlamlı olarak azalttı. Aynı zamanda 25 μM D-Carvone, 1 mM palmitat uygulanan hücrelerde protein karbonil düzeylerini de anlamlı olarak azalttı. Sonuç olarak çalışmamız, palmitat ile hepatotoksisite oluşturulan AML12 hücrelerinde D-Carvone'un, hücre canlılığını arttırırken, lipid birikimini, oksidatif stresi, endoplazmik retikulum stresini ve inflamazom aktivasyonunu azalttığını gösterdi.

Abstract:
The aim of this study is to investigate the effect of D-Carvone on cell viability, steatosis, oxidative stress, endoplasmic reticulum stress and inflammasome activation in palmitate-induced hepatotoxicity in AML12 cells. AML12 cells were treated with D-Carvone alone, palmitate alone and in combination D-Carvone with 1 mM palmitate for 24 hours. Cell viability was measured by the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide test. Intracellular lipid accumulation was measured spectrophotometrically with triglyceride levels measurement, and by flow cytometry with Nile red staining. Protein carbonyl, heme oxygenase 1, activating transcription factor 4 and NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3 levels were measured by western blot method.
1 mM palmitate caused a significant decrease in cell viability and a significant increase in triglyceride levels. 10 µM, 25 µM and 50 µM D-Carvone significantly decreased triglyceride levels while increasing cell viability significantly in 1 mM palmitate-treated cells. In subsequent experiments, 10 μM and 25 μM D-Carvone were used, which were shown to be most effective in palmitate-induced hepatotoxicity. 1 mM palmitate significantly increased staining with Nile red, protein carbonyl, heme oxygenase 1, activating transcription factor 4 and NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3 in AML12 cells. 10 μM and 25 μM D-Carvone significantly reduced staining with Nile red, heme oxygenase 1, activating transcription factor 4 and NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3 in 1 mM palmitate-treated cells. At the same time, 25 μM D-Carvone significantly reduced protein carbonyl levels in cells treated with 1 mM palmitate. In conclusion, our study showed that D-Carvone decreased lipid accumulation, oxidative stress, endoplasmic reticulum stress and inflammasome activation while increasing cell viability in palmitate-induced hepatotoxicity in AML12 cells.