Ürokinaz saflaştırılması için manyetik nanopartiküllerin hazırlanması ve karakterizasyonu
Preparation and characterization of magnetic nanoparticles for urokinase purification
Yazar: SİNEM EVLİ
Danışman: PROF. DR. DENİZ AKTAŞ UYGUN
Adnan Menderes Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry
Dizin: Enzim saflaştırması = Enzyme purification

Özet:
Bu tezde, manyetik poli(2-hidroksietil metakrilat) [p(HEMA)] nanopartiküller
sürfaktansız emülsiyon polimerizasyonu tekniği ile sentezlenmiĢtir. Manyetik
p(HEMA) nanopartiküllere Cibacron Blue F3GA kovalent olarak bağlanmıĢ ve
boya molekülleri Cu2+ iyonları ile ĢelatlaĢtırılmıĢtır. Ürokinazın Cu2+ ile
ĢelatlaĢtırılmıĢ Cibacron Blue bağlı manyetik poli(HEMA) nanopartiküllere
adsorpsiyonu gerçekleĢtirilmiĢtir. Sentezlenen manyetik nanopartiküllerin 80 nm
boyutunda, küresel yapıda ve manyetik özellikte olduğu gözlenmiĢtir. Manyetik
nanopartiküllere bağlanan Cibacron Blue F3GA miktarı 28.125 µmol/g polimer
olarak bulunmuĢtur. Yapıya katılan Cu2+ miktarı 10.229 µmol/g polimer olarak
hesaplanmıĢtır. Sentezlenen Cu2+ ile ĢelatlaĢtırılmıĢ Cibacron Blue bağlı manyetik
poli(HEMA) nanopartiküllere farklı ortam koĢulları (pH, baĢlangıç ürokinaz
deriĢimi, iyonik Ģiddet ve sıcaklık) altında ürokinaz adsorpsiyonu
gerçekleĢtirildiğinde maksimum adsorpsiyon kapasitesi 630.43 mg/g polimer
olarak bulunmuĢtur. Langmuir adsorpsiyon izoterminin bu adsorpsiyon iĢlemine
uygulanabilir olduğu gözlenmiĢtir. Adsorplanan ürokinazın desorpsiyonu 1.0 M
NaCl ile gerçekleĢtirilmiĢ ve desorpsiyon oranı % 96 olarak bulunmuĢtur. BeĢ kez
tekrar edilen adsorpsiyon-desorpsiyon iĢleminden sonra adsorplanan ürokinaz
miktarında önemli bir azalma gözlenmemiĢtir. Bu çalıĢma, yeni sentezlenen bu
destek materyalinin biyolojik kaynaklardan ürokinaz saflaĢtırılması için
kullanılabileceğini vadetmektedir.

Abstract:
In this thesis, magnetic poly(2-hydroxyethyl methacrylate) [p(HEMA)]
nanoparticles were synthesized by surfactant free emulsion polymerization
technique. Cibacron Blue F3GA was covalently attached to the magnetic
p(HEMA) nanoparticles and Cu2+ ions were then chelated to dye molecules.
Urokinase was adsorbed onto Cu2+
-Cibacron Blue F3GA derived magnetic
p(HEMA) nanoparticles. Synthesized magnetic nanoparticles was about 80 nm in
diameter, spherical and carried magnetic character. Incorporation rate of Cibacron
Blue for magnetic nanoparticles was found to be 28.125 µmol/g polymer. The
Cu2+ ions loaded was calculated to be 10.229 µmol/g polymer. This Cu2+
-Cibacron
Blue F3GA derived magnetic p(HEMA) nanoparticles were used for urokinase
adsorption under different conditions (i.e. pH, enzyme initial concentration, ionic
strength, temperature). Maximum adsorption capacity was found to be 630.43
mg/g polymer for Cu2+-Cibacron Blue F3GA derived magnetic p(HEMA)
nanoparticles. It was observed that Langmuir adsorption isotherm was applicable
in this adsorption process. The urokinase adsorbed Cu2+-Cibacron Blue F3GA
derived magnetic p(HEMA) nanoparticles was desorbed with 1.0 M NaCl and
desorption rate was found to be 96 %. It was also analyzed that adsorption
capacity did not changed significantly after five adsorption/desorption cycles. This
study promised that synthesized support material could be used for urokinase
purification from biological samples.