İnsan eritrosit 6-fosfoglukonat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine in vitro ve tavşanlarda in vivo etkisinin incelenmesi
Purification of human erythrocytes 6-phosphogluconate dehydrogenase enzyme, research the effects of some medical drugs on enzyme activity in human in vitro and rabbit erythrocytes in vivo
Yazar: FATMA ÖZABACIGİL
Danışman: PROF.DR. NURİ BAKAN
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2005
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
VIÖZETİNSAN ERİTROSİT 6-FOSFOGLUKONAT DEHİDROGENAZENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI, BAZI İLAÇLARIN ENZİM AKTİVİTESİÜZERİNE İN VİTRO VE TAVŞANLARDA İN VİVO ETKİSİNİN İNCELENMESİBu çalışmada, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (E.C.1.1.1.44; 6PGD) enzimi insaneritrositlerinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi hemolizatın hazırlanması, amonyumsülfat çöktürmesi ve 2',5'- ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi yöntemi ilegerçekleştirildi. Enzimin saflık derecesi SDS-PAGE elektroforez yöntemi ile belirlendi.Enzim üzerine bazı ilaçların in vitro ve in vivo etkileri araştırıldı.Tüm saflaştırma işlemleri sonunda insan eritrosit 6PGD enzimi 742 katsaflaştırıldı. Eritrosit 6PGD enzimi % 50 verimle, spesifik aktivite ise 0.46 U/mg olarakelde edildi. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nm'de Beutler metoduna göreölçüldü. Çalışmada kullanılan fluorourasil, sisplatin, menadion sodyum bisülfit,piroksikam, tenoksikam, ketoprofen, metilergobazin maleat ve tiyokolşikosid ilaçları invitro şartlarda enzim aktivitesini inhibe ederken; adrenalin, midazolam, fentanil,deksametazon sodyum fosfat ve pentoksifilin ilaçlarının in vitro şartlarda enzim aktivitesiüzerine herhangi bir etkisi gözlenmedi. İn vitro inhibe eden ilaçların I50 değerleribulundu. Düşük I50 değerine sahip olan ilaçlardan fluorourasil, sisplatin, menadionsodyum bisülfit, piroksikam, ketoprofenin enzim aktivitesi üzerine inhibisyon etkilerinibelirlemek amacıyla Yeni Zelanda albino türü tavşanlar ile in vivo çalışmalar yapıdı.İlaçların 6PGD enzim aktivitesi üzerine in vivo etkileri incelendiğinde; 1. saattefluorourasil (p<0.01), ketoprofen (p<0.01) ve piroksikam (p<0.01), 3. saatte fluorouracil(p<0.01), ketoprofen (p<0.01), piroksikam (p<0.01), menadion sodyum bisülfit (p<0.05),sisplatin (p<0.01) ve 5. saatte fluorouracil (p<0.01), sisplatin (p<0.01) ilaçlarının enzimaktivitesini istatistiksel olarak önemli derecede inhibe ettiği görüldü.Anahtar Kelimeler: 6-fosfoglukonat dehidrogenaz, eritrosit, inhibisyon, ilaçlar,

Abstract:
VIISUMMARYPURIFICATION OF HUMAN ERYTHROCYTES 6-PHOSPHOGLUCONATEDEHYDROGENASE ENZYME, RESEARCH THE EFFECTS OF SOMEMEDICAL DRUGS ON ENZYME ACTIVITY IN HUMAN IN VITRO ANDRABBIT ERYTHROCYTES IN VIVOIn this study, 6-phosphogluconate dehydrogenase (E.C.1.1.1.44; 6PGD) waspurified in human erythrocytes. This process was carried out by the preparation ofhemolysate, precipitation by (NH4)2SO4 and 2',5'-ADP Sepharose 4B affinitychromatography . The degree of purity of the enzyme was determined with SDS-PAGEelectrophoresis. The effects of some drugs on the enzyme were investigated in vivo andin vitro.Human erythrocyte 6PGD was purified in 742-fold in the end of allpurification process. The recovery of 6PGD was 50%, and its specific activity was 0.46U/mg in erythrocytes. Enzyme activity was spectrofotometrically measured using theBeutler method at 340 nm. Fluorouracil, cisplatin, menadione sodium bisulfide,piroxicam, tenoxicam, ketoprofen and metilergobazin maleat inhibited the enzymeactivity in in vitro conditions, while adrenalin, midazolam, phentanyl, dexametasonesodium fosfat and pentoxifyllin did not have any effect on enzyme activity. I50 values ofthe drugs inhibiting in vitro were determined. For the drugs having low I50 values (drugconcentrations which produce 50% inhibition) (fluorouracil, cisplatin, menadionesodium bisulfide, piroxicam and ketoprofen), in vivo studies were performed in NewZeland- albino rabbits.In the evaluation of the in vivo effects of the drugs on 6PGD activity; it wasobserved that at the first hour fluorouracil (p<0.01), ketoprofen (p<0.01) and piroxicam(p<0.01); at the third hour fluorouracil (p<0.01), ketoprofen (p<0.01), piroxicamVIII(p<0.01) menadione sodium bisulfide (p<0.05) and cisplatin (p<0.01); and at the fifthhour fluorouracil (p<0.01) and cisplatin (p<0.01) significantly inhibited 6PGD activity.Key words: 6-phosphogluconate dehydrogenase, erythrocyte, inhibition, drugs.