Mesane kanserinde Toll-benzeri reseptörlerin ekspresyon profillerinin belirlenmesi
Determination of expression profiles of Toll-like receptors in bladder carcinoma
Yazar: SEDA SABAH ÖZCAN
Danışman: DOÇ. DR. VİLDAN CANER
Pamukkale Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Karsinoma = Carcinoma ; Mesane neoplazmları = Urinary bladder neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Reseptörler-toll like = Receptors-toll like ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Mesanede ortaya çıkan malign tümörlerin %94'inden fazlasını ürotelyal karsinoma (UK)'lar oluşturmaktadır ve bu karsinomalar morfolojik ve genetik açıdan heterojen tümörlerdir.  UK'lar dünyada en sık görülen 5. kanser tipi olup, Türkiye'de erkeklerde akciğer ve prostat kanserinden sonra 3. sırada yer almaktadir.  Birçok çevresel faktörün UK gelişiminde rol oynadığının bilinmesine karşın, hastalığın nedenleri ve karsinogenez mekanizması net olarak tanımlanmamıştır. Toll-benzeri reseptör (TLR)'ler patojenlere ve hasarlı veya ölü hücrelerden kaynaklanan endojen tehlike sinyallerine yanıtta doğal ve adaptif immunitenin aktivasyonunda önemli rol oynarlar. Bu reseptörler immun sistem hücrelerinde ve bazı epitel hücrelerinde eksprese olurlar. Son yıllardaki çalışmalar bu reseptörlerin malign epitel hücrelerde de eksprese olduğunu göstermiştir. 
Bu çalışmada, TLR ekspresyonlarının UK karsinogenezindeki rollerini belirlemek amacı ile 24 UK ve 46 non-tumoral mesane doku örneklerinde TLR1-10'un mRNA ekspresyonları gerçek-zamanlı PCR ile değerlendirildi. TLR ekspresyonlarının proinflamatuvar sitokinlerin üretimlerini arttırıp arttırmadıklarını belirlemek için, ELISA yöntemi ile idrar örneklerinde pro-inflamatuvar sitokinlerin (IL-1, IL-6 ve IL8) konsantrasyonları belirlendi.
 Normal doku örnekleri ile karşılaştırıldığında, TLR2-7 ve TLR10 ekspresyonlarının anlamlı derecede yüksek olduğu belirlendi. Bu ekspresyon profilleri aynı zamanda doku örnekleri alınan bireylerin idrar örnekleri ile de karsılaştırıldı ve bu profillerin identikal olmadıkları gözlendi. Aynı zamanda TLR1 ve TLR7 ekspresyon artışlarının tümör büyüklüğü ile ilişkili olduğu belirlendi (sırasıyla p=0.001 ve p=0.043). Kanserli olmayan kontrol grubu olgularının idrar örnekleri ile karşılaştırıldığında, UK'lı bireylerin idrar örneklerinde IL-1β, IL6 ve IL8 düzeylerinin anlamlı derecede arttığı belirlendi (sırasıyla p= 0.033, p= 0.001 ve p=0.008). İstatistiksel olarak anlamlı olmamakla birlikte, yüksek dereceli UK'da TLR9 eksprersyonu düşük dercelilere göre daha yüksekti (p=0,057).
Bu çalışmadan elde edilen veriler, normal epitel ve tümör dokularında TLR'lerin farklı ekspresyon profiline sahip olduklarını ve bu ekspresyonların en azından inflamatuvar yolakları uyaran ve henüz bilinmeyen bir mekanizma ile UK oluşumu ve progresyonunda rol oynayabildiklerini göstermektedir.

Abstract:
More than 95% of all bladder cancers are urothelial carcinomas (UCs) and they are morphologically and genetically heterogeneous tumors. UCs are the fifth most common cancers in the world and it is the third most common cancer after lung and prostate cancer in man in Turkey. The causes of the disease and the process of carcinogenesis have not been fully identified although it is well known that many environmental factors contribute to the development of UC. Toll-like receptors (TLRs) have an important role in the activation of both innate and adaptive immunity in response to pathogens and endogenous danger signals from damaged or dying cells. These receptors are expressed in immune cells and in some epithelia. Several reports have described the expression of TLRs in malignant epithelial cells.
In this study, it was evaluated the mRNA expression of TLRs 1-10 in 24 of UC and 46 of non-tumoral bladder tissue samples by real-time PCR whether they play a role in the carcinogenesis. Whether the expressions of TLRs activates the production of proinflammatory cytokines, it was also determined the levels of the pro-inflammatory cytokines ( IL-1, IL-6, and IL8) in the urine samples by ELISA.
TLR2-7 and TLR10 expressions were significantly higher in the UC tissue samples compared to the normal tissues. The profiles of TLR expression were also used to compare the profiles of urine samples taken from the same patient and the TLR expression profiles from the tissue and urine samples of the same patient were not identical. It was also determined that the high expressions of TLR1 and TLR7 were associated with advanced tumor size (p=0.001 and p=0.043, respectively). Compare to the urine samples taken from the patients with non-malignant disease, the levels of IL-1β, IL6 and IL8 were significantly higher in the patients with UC (p= 0.033, p= 0.001 and p=0.008). The expression of TLR9 was higher in the high-grade UCs than in low-grade UCs although there was no statistically significance (p=0.057). 
All results obtained from this study shows that TLR genes were differentially expressed in normal epithelial versus tumor tissues and might at least play a role in the tumor formation and the progression of UC with the unknown mechanisms that induce the inflammatory pathways.