Sıçanlarda infrarenal abdominal aorta iskemi-reperfüzyonu ile oluşturulan akut akciğer hasarına karşı αlfa-kristalin'in koruyucu etkisi
Investigation of protective effects of alpha crystallin against ischemia-reperfusion induced acute lung injury
Yazar: SEDA KOÇAK
Danışman: PROF. DR. İBRAHİM GÜNER
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Aort-abdominal = Aorta-abdominal ; Apoptozis = Apoptosis ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia

Özet:
Bu çalışmada, iskemi-reperfüzyonun neden olduğu akut akciğer hasarına karşı alfa- kristalinin koruyucu etkisini oksidatif stres, inflamasyon ve apoptoz parametreleri üzerinden değerlendirmeyi amaçladık. Çalışmamızda ağırlıkları ortalama 319,58±3,11g olan 24 adet Sprague-Dawley, erkek sıçan kullandık. Sıçanlar kontrol (sham), iskemi reperfüzyon (IR) ve alfa-kristalin+IR olmak üzere üç gruba ayrıldı. Sıçanlar anestezi edildikten sonra, kontrol grubundaki hayvanlara infrarenal abdominal aorta (IAA) diseksiyonu uygulanarak insizyon yeri kapatıldı ve iskemi-reperfüzyon uygulanmadı. IR grubu hayvanlar IAA klemplenerek 90 dk. iskemiye ve klemp uzaklaştırılarak 180 dk. reperfüzyona maruz bırakıldı. Alfa kristalin+IR grubundaki hayvanlara IR'den bir saat önce alfa-kristalin (50 µg/100 g vücut ağırlığına) verildi ve IR protokolü uygulandı. IR süresinin bitiminde bronkoalveolar lavaj sıvısı (BALS) ve kan örnekleri alındıktan hemen sonra ötenazi uygulandı. Akciğerler histolojik ve biyokimyasal incelemeler için alındı. Alınan bütün örneklerde reaktif oksijen ürünleri (ROS), malondialdehit (MDA), süperoksit dismutaz (SOD), total oksidan durumu (TOS), total antioksidan durum (TAS), tümör nekrözis faktör (TNF-α), interlökin (IL)-1β, interlökin (IL)-10 ve nükleer faktör kappa-β (NF-κβ), kaspaz-9 seviyelerini ölçtük ve DNA hasarı için 8-OHdG seviyeleri ELISA yöntemiyle ölçüldü. IR grubunda oksidatif parametrelerden ROS, TOS, MDA değerleri kontrol grubuna göre artarken, SOD ve TAS seviyeleri azaldı. Proinflamatuar sitokin (TNF-α, IL-1β) seviyeleri IR grubunda artarken, alfa-kristalin verilen grupta azaldı. Antiinflamatuvar sitokin IL-10, alfa-kristalin grubunda anlamlı olarak artarken, IR grubunda azalma gösterdi. NF-κβ ise alfa-kristalin grubunda IR grubuna göre anlamlı olarak azaldı. Apoptotik faktör kaspaz-9 IR grubunda artarken alfa-kristalin grubunda azaldı. DNA hasar göstergesi 8-OHdG IR grubunda artarken, alfa-kristalin grubunda azaldı. Sonuç olarak bulgularımız alfa-kristalin'in IR'ye bağlı olarak gelişen akut akciğer hasarını önleyebileceğini göstermektedir

Abstract:
In this study, we aim to investigate protective effect of α-crystallin against acute lung injury via oxidative stress, inflammation and apoptosis parameters. We used 24 Sprague-Dawley male rats weight avarage 319.58 ± 3.11, divided into control (sham), IR and α-crystallin+IR groups. Rats anesthetized incision area was covered but IR was not carried out after laporotomy and IAA dissection in sham control group. 90 minutes occlusion and 180 minutes reperfusion applied in IR group. α-crystallin (50 μg/100 g of body weight) was applied intraperitoneally one hour before IR and 90 minutes occlusion and 180 minutes reperfusion was applied following laporotomy and IAA dissection in α-crystallin+IR group. Immediately after reperfusion, blood and bronchoalveolar lavage (BALF) fluid samples taken and rats euthanized immediately followed lung tissue samples removed. To determine the level of oxidative stres in blood, tissue and BALF samples; reactive oxygen species (ROS), malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), total oxidant status (TOS), total antioxidant status (TAS) tests carried out. To determine levels of cytokines; Tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-10, nuclear factor kappa-B (NF-κB) levels, caspase (CASP)-9 levels were measured and 8-OhdG was determined to see possible DNA damage. When we compared control (sham) group to IR group via oxidative stress parameters; ROS, TOS, MDA increased and SOD and TAS decreased. TNF-α, NF-κβ and IL-1β increased and IL-10 decreased.Caspase-9 level increased according to control group. DNA damage biomarker 8-OHdG level increased in IR group. In conclusion, our results show that α-crystallin can prevent IAA-IR induced acute lung injury.