Everolimus'un over berrak hücreli kanser hattında PTEN/mTOR/ VEGF sinyal yolağındaki etkilerinin apoptotik düzeyde araştırılması
Research of everolimus on ovary clear cell carcinoma cell line on  PTEN/mTOR/VEGF pathway with  apoptosis
Yazar: KAMİL HAKAN MÜFTÜOĞLU
Danışman: PROF. DR. ADNAN MENEVŞE
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Genetik = Genetics ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Everolimus = Everolimus ; Fosforik monoester hidrolazlar = Phosphoric monoester hydrolases ; Hücre dizisi = Cell line ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Over neoplazmları = Ovarian neoplasms ; Paklitaksel = Paclitaxel ; Rapamisin = Rapamycine ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Over berrak hücreli karsinomu tedaviye dirençli düşük differensiasyon gösteren kanserlerdir. mTOR hücrede birçok stimülan yolağın birleşkesinde yer alarak hücre proliferasyonu ve anjiogenezisi stimüle eden önemli bir role sahiptir. Çok sayıda hücre dışı uyaran ve hücre içi uyaran etkilerini mTOR aracılığı ile gerçekleştirir. Bir tümör supressörü olan PTEN hücre siklusunda önemli bir role sahip olup PI3K inhibisyonu yapar. mTOR inhibitörü olan everolimus rapamisin türevi olup antianjiogenik ve antiproliferatif etkilere sahiptir.
Çalışmamızda everolimus ve taxolun ES-2 hücre hattına etkilerini sitotoksik, apoptotik ve genomik düzeyde araştırması yanında PTEN, mTOR, VEGFA yolağındaki etkilerinin değerlendirilmesi amaçlandı.
Taxol?un 500 nM dozda 24 saat uygulanması ile elde edilen %50.3 hücre canlık oranı, çok düşük doz taxol?un (10nM) ve everolimus kombinasyonu ile de yaklaşık olarak benzer oranda elde edilebilmiştir. 48 saat süreli 5nM taxol ve 10nM everolimus kombinasyonu ile de yüksek apoptozis oranı (%27) ve düşük canlılık oranı (%46.7) elde edilebilmiştir (p<0.05). Everolimus ve taxol kombinasyonu ile VEGFAmRNA ve PTENmRNA seviyesinde azalma (p<0.05) ve mTORmRNA seviyesinde değişme olmadığı saptanmıştır.
Sonuç olarak everolimus ve taxol kombinasyonun kullanılmasının hücre canlılığını azaltmada ve apoptozisi arttırmada tek başına taxol kullanılmasına göre daha etkin olduğu ve bu etkiyi taxolun çok daha düşük dozları ile de etkin sonuçlar sağlayarak, taxolun yüksek sitotoksitesinden koruyabileceğini ve PTEN ile VEGFA seviyelerini değiştirebilecek etkiler oluşturduğunu saptadık.

Abstract:
Ovary's clear cell cancers are among the low differential and treatment-resistant cancers. mTOR forms the junction of many stimulant paths in the cell and it stimulates cell proliferation and angiogenesis through VEGF. PTEN, a tumor suppressor and it has the key role in cell cycle. It does the inhibition of PI3K.	
Everolimus, which is mTOR inhibitor, is a derivative of rapamycin which has a effect of antiangiogenic and antiproliferative. 
In our study, it is aimed to show the evaluate the cytotoxic, apoptotic and genomic effects of everolimus on ES-2 cell line, on PTEN/mTOR/VEGFA path and to research the effect of taxol, which is a currently used standard treatment element.
Treatment with taxol only for 24h incubation at 500nm dose resulted in the low viability percentage (50.3%) while a same percentage (48.1%) was observed after treatment with the very low dose (10nM) taxol  and everolimus combination for the same incubation duration. Treatment with 5 nM taxol and 10 nM everolimus combination for the 48h incubation duration resulted low apoptosis percentage (27%) and low viability percentage (46.7%) (p<0.05). After treatment of everolimus and taxol combination VEGFA mRNA and PTEN mRNA level decreased (p<0.05) and mTOR mRNA level unchanged. 
It further shows that use of everolimus and taxol combination leads to a further increase in this effect. In conclusion, our study draws attention to the possible clinical effectiveness of use of Everolimus together with chemotherapeutic agents with high cytotoxicity due to the opportunity to attain suitable apoptotic effect with reduced dose in cancer treatment targeting PTEN/mTOR/VEGFA pathway.