Glial tümörlerde kan ve tümör mikroçevresindeki innate lenfoid hücrelerin (ılc) karakterize edilmesi
Characterization of innate lymphoid cells (ilc) in the blood and tumor microenvironment in glial tumors
Yazar: ŞERİFE ERDEM
Danışman: DOÇ. DR. AHMET EKEN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
GLİAL TÜMÖRLERDE KAN VE TÜMÖR MİKROÇEVRESİNDEKİ İNNATE LENFOİD HÜCRELERİN (ILC) KARAKTERİZE EDİLMESİ
Şerife ERDEM
Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı
Doktora Tezi, Ekim 2021
Doç.Dr. Ahmet EKEN
KISA ÖZET
Gliomalar, merkezi sinir sisteminin glia adı verilen destek hücrelerinden kaynaklanan en yaygın birincil beyin tümörleridir. IDH1 R132H mutasyonu, çeşitli hastalık evrelerindeki hastalarda önemli bir tanısal belirteç olan gliomadaki en yaygın mutasyonlardan biridir ve daha iyi prognoza işaret eder. ILC'ler yardımcı T hücrelerine benzer işlevlere ve fenotiplere sahiptir ve üç ayrı alt sınıfa ayrılır: ILC1, ILC2 ve ILC3. 
Çalışmamızda donörlerden glial tümör ve tonsil biyopsileri (kontrol dokusu) (IDH1WT=9, IDH1MT=3, Tonsil=14) ve periferik kan (IDH1WT=12, IDH1MT=10, SK=20) alındı. Glial tümörü dokuları ve periferik kandaki ILC fenotipi karakterize edildi. ILC'ler insan tonsillerinden FACSAriaIII aracılığı ile izole edildi ve sitokinlerin varlığında ve yokluğunda WT/IDH1R132H mutant U-87MG hücre hatları veya süpernatantları ile birlikte kültürlenip ILC yüzey CTLA-4, KLRG-1, PD-1 ekspresyon seviyeleri, sitokin üretme kapasiteleri, hücre proliferasyonu analiz edildi. 
IDH1MT insan glial tümör dokularındaki ILC1 düşük aynı zamanda kanlarında ve tümördeki ILC3 frekansının yüksek olduğu bulundu. İnsan IDH1WT ILC2 ve IDH1 MT ILC3'te yüksek PD-1 ifadesi varken IDH1WT ILC3'te artmış KLRG1 ifadesi ayrıca IDH1MT glial tümörü olan hastaların kan ILC1'lerinde azalmış CTLA-4 ifadesi vardı. IDH1 WT GBM hücreleri ile kültürlenen ILClerin yüzey PD-1, KLRG1 ve CTLA-4'ü IDH1 MT ile kültürlenenden önemli ölçüde daha yüksekti. ILC'ler, IDH1MT ile birlikte kültürlerde IDH1WT hücre hattından daha iyi prolifere olduğu bulundu. Son olarak IDH1WT veya IDH1MT GBM hücre hattı süpernatanlarına maruz kalan ILC'ler tarafından IFNγ, IL-2, IL-17, TNFα üretiminin ko-kültür yapılmayan ILC'lere kıyasla arttığı gösterildi. 
Bu çalışmada verilerimiz, hem birincil tümörlerde hem de kültür koşullarında IDH1 MT glial tümör mikro ortamının IDH1WT tümör mikro ortamına göre daha az bağışıklık baskılayıcı olduğunu göstermiştir ve IDH1 mutant GBM hastalarının daha iyi prognozunu açıklamaya yardımcı olabilir.
Anahtar Kelimeler: Glial tümör;  innate lenfoid hücre; U87MG/IDH1 MT GBM hücre hattı

Abstract:
CHARACTERIZATION OF INNATE LYMPHOID CELLS (ILC) IN THE BLOOD AND TUMOR MICROENVIRONMENT IN GLIAL TUMORS

Şerife ERDEM
Erciyes University, Graduate School of Health Sciences
Department of Medical Biology
Doctoral Thesis, October 2021
Supervisor Associate Professor Ahmet EKEN
ABSTRACT
Gliomas are the most common primary brain tumors that arise from supporting cells of the central nervous system called glia. The IDH1 R132H mutation is one of the most common mutations in glioma, an important diagnostic marker in patients at various disease stages, and indicates a better prognosis. ILCs have functions and phenotypes similar to helper T cells and are divided into three distinct subclasses: ILC1, ILC2, and ILC3.
In our study, glial tumor and tonsillar biopsies (control tissue) (IDH1WT=9, IDH1MT= 3, Tonsil=14) and peripheral blood (IDH1WT=12, IDH1MT= 10, HC=20) were obtained from donors. The ILC phenotype was characterized in glial tumor tissues and peripheral blood. ILCs were isolated human tonsils by FACSAriaIII and cultured together with WT/IDH1R132H mutant U-87MG cell lines or their supernatants in the presence and absence of cytokines to express ILC surface CTLA-4, KLRG-1, PD-1. levels, cytokine production capacity, cell proliferation were analyzed. 
IDH1 MT human glial tumor tissues were found to have less ILC1 but also high frequency of ILC3 in their blood and tumor. There was increased PD-1 expression in human IDH1WT ILC2 and IDH1MT ILC3, while increased KLRG1 expression in IDH1WT ILC3 and decreased CTLA-4 expression in blood ILC1 of patients with IDH1 MT glial tumor. Surface PD-1, KLRG1 and CTLA-4 of ILCs cultured with IDH1WT GBM cells were significantly higher than those cultured with IDH1MT. ILCs proliferated better than the IDH1WT cell line in co-cultures with IDH1 MT. Finally the production of IFNγ, IL-2, IL-17, TNFα by ILCs exposed to IDH1WT or IDH1MT GBM cell line supernatants was increased compared to non-co-cultured ILCs.
In this study, our data showed that the IDH1MT glial tumor microenvironment was less immunosuppressive than the IDH1WT tumor microenvironment in both primary tumors and culture conditions, and may help explain the better prognosis of IDH1 mutant GBM patients.
Keywords: Glial tumor;  innate lymphoid cell; U87MG/IDH1 MT GBM cell line