Deneysel olarak oluşturulan polikistik over sendromunda kisspeptin uygulamasının mtor mekanizmasına etkisi
The effect of kisspeptin administration on mtor (the mammalian target of rapamycin) mechanism in experimentally induced polycycstic over syndrome (PCOS)
Yazar: CANSU BEKDEMİR
Danışman: PROF. DR. IŞIL TEKMEN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Genitalia-dişi = Genitalia-female ; Kisspeptin = Kisspeptin ; Over = Ovary ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome ; Rapamisin = Rapamycine

Özet:
Amaç:Çalışmamızda deneysel olarak oluşturulan polikistik over sendromunda, folikül gelişiminde görev alan mTOR sinyal yolağına Kisspeptin-10 uygulamasının ovaryum dokusu üzerine etkisini histokimyasal, immünohistokimyasal ve biyokimyasal olarak incelemeyi amaçladık.
Yöntem:Çalışmamızda 27 adet 23 günlük Wistar suşu dişi sıçanlar (50-80g) kullanıldı ve denekler 4 gruba ayrıldı: GRUP 1 (Kontrol Grubu, n=6): Hiçbir uygulamanın yapılmadığı gruptur. GRUP 2 (Çözgen Grubu, n=7): 20 gün boyunca subkutan olarak 0.2 ml susam yağı verilen ve 20 gün boyunca intraperitoneal olarak serum fizyolojik sıvı (0.2 ml) verilen gruptur. GRUP 3 (PKOS Grubu, n=7): 20 gün boyunca PKOS modeli oluşturmak amacıyla subkutan olarak 0.2 ml susam yağında çözülen 6mg/100g DHEA (Dehidroepiandrostenedion) verilen ve 20 gün boyunca intraperitoneal olarak serum fizyolojik sıvı (0.2 ml) verilen gruptur. GRUP 4 (PKOS + Kisspeptin-10, n=7): 20 gün boyunca PKOS modeli oluşturulmak amacıyla subkutan olarak 0.2 ml susam yağında çözülen 6mg/100g DHEA verilen ve 20 gün boyunca 100 nmol intraperitoneal olarak Kisspeptin-10 verilen gruptur. Deneklerin deney başlangıcında, 20. günde ve deney sonunda kan örnekleri alınmıştır. Histokimyasal incelemeler için kesitler Hematoksilen-Eozin, MassonTrikrom, Periyodik Asit Schiff (PAS) ile boyandı. İmmünohistokimyasal olarak mTOR ve p-mTOR antikorları ile boyama yapıldı. Morfometrik incelemeler için; folikül sayıları, primer ve sekonder foliküllerin çapları ve granüloza tabakası kalınlığına bakıldı. Biyokimyasal incelemeler için kan plazma östradiol ve progesteron düzeyleri ELISA yöntemi ile incelendi. Gruplar arası farklılıklar istatistiksel olarak Kruskal Wallis ve Mann Whitney-U testleri ile değerlendirildi.
Bulgular:Yapılan histokimyasal incelemelerde PKOS grubunda kontrol grubuna göre kistik ve atretik foliküllerin sayısında artış olduğu ve medulla bölgesindeki damar yapılarının genişlediği gözlendi. Kollajen miktarının ise tüm gruplarda benzer olduğu gözlendi. PKOS+Kisspeptin grubunda ise PKOS grubuna göre kistik ve atretik folikül sayısında azalma olduğu izlendi. Primer folikül çapı bakımından PKOS grubunda kontrol grubuna göre azalma olduğu izlendi, sekonder folikül çapı bakımından ise PKOS grubunda kontrol grubuna göre artış olduğu izlendi. Ancak PKOS ve PKOS+Kisspeptin grubu karşılaştırıldığında primer folikül çapında değişim olmadığı, sekonder folikül çapının ise PKOS grubunda arttığı gözlendi. Primer folikülün granüloza tabakası kalınlığı bakımından incelediğimizde, PKOS ve PKOS+Kisspeptin grubunda kontrol grubuna göre azalma olduğu gözlendi. Sekonder folikülün granüloza hücre tabakasında PKOS grubunda kontrol grubuna göre azalma olduğu; PKOS+Kisspeptin grubunun ise PKOS grubuna göre granüloza hücre tabakasının azaldığı izlendi. Yapılan immünohistokimyasal incelemeler sonucunda, PKOS grubu ile kontrol grubu kıyaslandığında granüloza hücrelerinde mTOR immünopozitivitesinin azaldığı izlendi. PKOS+Kisspeptin grubunda ise PKOS grubuna göre mTOR pozitif hücrelerinin sayısında azalma olduğu gözlendi. p-mTOR immünopozitivitesinin ise PKOS grubunda kontrol grubuna göre artma olduğu, PKOS+Kisspeptin grubunda ise PKOS grubuna göre azalma olduğu izlendi. Biyokimyasal olarak incelendiğinde östradiol ve progesteron düzeylerinde kontrol grubuna göre PKOS grubunda artma olduğu, PKOS+Kisspeptin grubunda ise PKOS grubuna göre azalma olduğu gözlendi.
Sonuç: Çalışmamızın sonucunda elde ettiğimiz bulgulara dayanarak deneysel PKOS modelinde Kisspeptin-10'un kistik folikül sayısına, hücre proliferasyonunda etkili olan mTOR sinyal yolağının etkinliğinin azalmasına ve plazma östradiol ve progesteron düzeylerinin azalmasına yol açtığını gözlemledik. Bu bulgular ışığında kompleks bir hastalık olan PKOS'da Kisspeptin-10'un uygulamasının literatürde yeni çalışmalar için yol gösterici olacağı kanısındayız.

Abstract:
Objective: In this study, we aimed to investigate in the experimental policystic over syndrome, the effect of Kisspeptin-10 administration on the ovarian tissue of the mTOR signaling pathway involved in follicle development histochemistry, immunohistochemistry and biochemistry.
Method: In our study; Twenty-seven 23-day-old Wistar strain female rats (50-80 g) were used and the subjects were divided into 4 groups: GROUP 1 (Control Group, n = 6): No application was performed to this animals. GROUP 2 (Solvent Group, n = 7): 0.2 ml of sesame oil administered subcutaneously for 20 days and intraperitoneally administered saline solution (0.2 ml) for 20 days. GROUP 3 (PCOS Group, n = 7): In order to establish PKOS model for 20 days; subcutaneously administered with 6 mg / 100 g of DHEA (Dehydroepiandrostenedion) dissolved in 0.2 ml of sesame oil and administered intraperitoneally with saline solution (0.2 ml) for 20 days. GROUP 4 (PCOS+Kisspeptin-10, n = 7): Kisspeptin-10 administered intraperitoneally to 100 nmol for 20 days with subcutaneous 6mg / 100g DHEA dissolved in 0.2 ml of sesame oil to form a PCOS model for 20 days. Blood samples were taken at the beginning of the experiment, on day 20 and at the end of the experiment. Sections for histochemical studies were stained with Hematoxylin-Eosin, Masson Tricrom, Periodic Acid Schiff (PAS). Immunohistochemically stained with mTOR and p-mTOR antibodies. For morphometric examinations; follicle counts, diameters of primary and secondary follicles, and granulosa layer thickness. Blood plasma estradiol and progesterone levels for biochemical studies were examined by ELISA. Differences between the groups were evaluated statistically by Kruskal Wallis and Mann Whitney-U tests.
Results: It was observed that the number of cystic and atretic follicles in the PCOS group increased and the vascular structures in the medulla region expanded in histochemical examinations. The amount of collagen was observed to be similar in all groups. In the PCOS+Kisspeptin group, there was a decrease in the number of cystic and atretic follicles according to the PCOS group. In terms of primary follicle diameter, it was observed that there was a decrease in the PCOS group compared to the control group, and as to the secondary follicle diameter, there was an increase in the PCOS group compared to the control group. However, when the PCOS and PCOS+Kisspeptin groups are compared, there was no change in the diameter of the primary follicle, and the diameter of the secondary follicle was increased in the PCOS group. When we examine the thickness of the granulosa layer of the primary follicle; PCOS and PCOS+Kisspeptin group were observed to be decreased according to the control group. There is a decrease in the PCOS group of the saccharide follicle compared to the control group in the granulosa cell layer; It was observed that the granulosa cell layer of PCOS + Kisspeptin group decreased according to the PCOS group. As a result of the immunohistochemical studies made; when the control group was compared with the PCOS group, it was observed that the mTOR immunopositivity decreased in the granulosa cells. In the PCOS + Kisspeptin group, there was a decrease in the number of mTOR positive cells compared to the PCOS group. p-mTOR immunopositivity in the PCOS group; Compared to the control group, it was observed that there was a decrease in PCOS+Kisspeptin group compared to the PCOS group. When biochemically analyzed, it was observed that the levels of estradiol and progesterone were increased in the PCOS group compared to the control group, and that in the PCOS+Kisspeptin group was decreased compared to the PCOS group.
Conclusion: Based on the findings of our study; we observed that in the experimental PKOS model, the number of cystic follicles of the Kisspeptin-10 decreased, the efficiency of the mTOR signaling pathway, which is effective in energy metabolism and proliferation in the cell, decreased and the levels of plasma estradiol and progesterone hormones were decreased at high levels. We believe that the application of Kisspeptin-10 in PKOS, a complex disease in these findings, will provide guidance for new studies.