İnsan eritrositlerinden saflaştırılan karbonik anhidraz izoenzimleri (HCA-I ve HCA-II) üzerine bazı kemoterapi ilaçların etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effect of some chemotherapeutic drugs on human carbonic anhydrase izoenzymes (HCA-I AND HCA-II)
Yazar: FEVZİ TOPAL
Danışman: DOÇ. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Kanser, vücut hücrelerinin kontrolsüz bir şekilde üreyerek komşu dokuları işgal etmesi veya kaynağını aldığı organdan daha uzak bir yere kan-lenf yoluyla yayılması (metastaz) ile oluşan bir hastalık sınıfıdır. Bu çalışmada kemoterapide sıklıkla kullanılan bleomisin sülfat, tratuzumab, ifosfamide, bevacizumab, fludarabin, kalsiyum folinat, vinkristin sülfat, sitarabin ve rituksimab kemoterapi ilaçlarının insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (HCA-II ve HCA-II) üzerine inhibisyon etkileri incelendi.Bu amaçla öncelikle HCA-I ve HCA-II izoenzimleri taze insan kanından Sepharose-4B-L-Tirozin sulfanilamide afinite kolon kromatografisi ile saflaştırıldı. HCA-I ve HCA-II izoenzimleri sırasıyla 93,52 ve 661,90 kat saflaştırıldı ve %54,00, %56,46 verimle elde edildi. Enzim saflığını belirlemek için, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve tek bant gözlendi.Daha sonra I50 değerlerini bulmak için, hidrataz aktivitesi kullanılarak bu ilaçların karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (HCA-I ve HCA-II) üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı ve (%) Aktivite -[İlaç] grafikleri çizildi. Bu grafiklerden sırasıyla bleomisin sülfat, tratuzumab, ifosfamide, bevacizumab, fludarabin, kalsiyum folinat, vinkristin sülfat, sitarabin ve rituksimab kemoterapi ilaçlarının HCA I için 0,196, 0,001, 4,034, 0,006, 3,408, 0,759, 0,050, 2,399 ve 0,002 µM I50 ve HCA II için 0,324, 0,002, 2,519, 0,007, 5,034, 0,816, 0,060, 3,467 ve 0,003 µM I50 değerleri bulundu. Ki değerlerinin bulunması için esteraz aktivitesi ile ilaçların inhibisyon etkilerine bakıldı, fakat en yüksek konsantrasyonda bile bu ilaçların esteraz aktivitesinde herhangi bir inhibisyon etkisi gözlenmedi.Anahtar Kelimeler: Karbonik anhidraz, HCA-I, HCA-II, enzim, inhibitor, kemoterapi

Abstract:
Cancer is a class of diseases in which a group of cells display uncontrolled growth, invasion, and sometimes metastasis, spread to other locations in the body via lymph or blood. In this study, the inhibition effect of some drugs frequently used in chemotherapy such as bleomycin sulphate, tratuzumab, ifosfamide, bevacizumab, fludarabin, calcium folinat, vincristin sulphate, cyitarabin and rituximab on human carbonic anhydrase izoenzymes I and II (HCA-II and HCA-II).Fort his purpose, firstly, HCA-II and HCA-II izoenzymes were purified from fresh human blood by using Sepharose-4B-L-Tyrosine sulfanylamide affinity column chroromatography. HCA-II and HCA-II izoenzymes were purified 93,52, 661,90 folds and obtained 54,00, 56,46 % yields. To determine the enzyme purify, sodium dodecyl sulphate-poliaacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was performed and single band observed.Then, to determine I50 values, the inhibition effects of these drugs on HCA-I and HCA-II izoenzymes were investigated using hydratase activity and Activity (%)-[Drugs] graph were drawn. I50 values were calculated from these graphs. I50 values were found to be 0.196, 0.001, 4.034, 0.006, 3.408, 0.759, 0.050, 2.399 and 0.002 µM for HCA I and 0.324, 0.002, 2.519, 0.007, 5.034, 0.816, 0.060, 3.467 and 0.003 µM for HCA II, respectively. For determination of Ki constants the inhibition effect of these drugs were investigated, however, there was no found any inhibition effect of these drugs at the highest concentrations.Keywords: Carbonic anhydrase, HCA-I, HCA-II; enzyme, inhibitor, chemotherapy