Meme kanseri hücre hatlarındaki (MCF-7) non-kanonik sinyal moleküllerinin leptin'e bağlı değişimlerinin incelenmesi
Investigation of non-canonic signal molecules alteration dependent on leptin in MCF-7 breast cancer cell lines
Yazar: BURÇİN İREM ABAS
Danışman: PROF. DR. ÇİĞDEM YENİSEY
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Onkoloji = Oncology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Hücre dizisi = Cell line ; Leptin = Leptin ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Obezite = Obesity ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Vücut kitle indeksi = Body mass index

Özet:
Obezite vücut yağ kütlesi ve adipositlerden türevlenen sitokinlerin (örn: leptin) yüksek seviyeleri ile karakterize edilen küresel bir hastalıktır. Araştırmalar, vücut yağlanması ve leptin düzeyleri ile  obezite ve kanser arasında bir bağlantı olduğunu göstermektedir. 
Bu çalışmada,  meme kanseri hücreleri üzerinde leptinin farklı dozları uygulanarak pro-anjiyogenik etkilerinin araştırılması ve leptinin MAPK yolağındaki kanonik ve non-kanonik sinyal moleküllerinin düzeylerinin saptanması amaçlanmıştır. 
Çalışmamızda MCF-7 hücre hatları üzerine leptinin farklı konsantrasyonları  (0,10, 20, 100 ve 1000 ng/ml) uygulanarak 48 saat inkübasyonu sonucu toplanan ortam mediumlarında MAPK multi ELISA kiti ile p44/42 MAPK, p38 MAPK, MEK1, pMEK1, SAPK/JNK ve Psapk/JNK moleküllerin düzeyleri saptanmıştır. MCF-7 hücre ortam besiyerinde Smart BCA protein assay kit kullanılarak total protein bakılmıştır. Moleküllerin miktarları ng/mg protein olarak hesaplanmış olup, istatistiksel analizleri Kruskal Walls ve Tamheinn testi ile yapılmıştır.
Elde edilen bulgulara göre leptinin düşük dozlarında (10 ng/ml veya 20 ng/ml) leptin verilmeyen kontrol grubuna göre çalışılan sinyal moleküllerinin tümünde artışında istatistiksel açıdan %95 güven aralığında anlamlı bir fark olduğu saptanmıştır (p<0,05). Obezite leptin dozunun(100 ng/ml) p38 MAPK ve pMEK1 dışındaki tüm sinyal moleküllerinde etkili olduğu gözlenirken, farmakolojik leptin dozunda (1000 ng/ml) tüm sinyal moleküllerinde düşüş  gözlemlenmiştir. Çalışmamızda 20 ng/ml leptin dozunun uygulandığı tüm sinyal moleküllerinde, leptinin MAPK sinyal yolağında yer alan moleküllere indükleyici etkisinin maksimum olduğu saptanmıştır. Psapk/JNK sinyal molekülündeki artışın en yüksek olduğu tespit edilmiştir. Bu sonucun leptinin indüklediği moleküller arasında Psapk/JNK molekülünün belirgin bir artış trendi gösterdiği bir ilk olarak çalışmamız ile ortaya çıkarılmıştır.
Leptin ile MAPK yolağının sinyal molekülleri arasındaki ilişkiyi inceleyen herhangi bir literatür çalışmasının bulunmaması bu tez çalışmasının özgün olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Obesity is a global disease characterized by high levels of body fat mass and cytokines (eg leptin) derived from adipocytes. Research shows that body fat and leptin levels are linked to obesity and cancer.
In this study, it was aimed to investigate the pro-angiogenic effects of different doses of leptin on breast cancer cells and to determine the levels of canonical and non-canonical signaling molecules in the MAPK pathway of leptin.
In our study, different concentrations of leptin (0, 10, 20, 100 and 1000 ng/ml) were applied on MCF-7 cell lines and MAPK multi ELISA kit was used for p44 MAPK, p38 MAPK, MEK1, pMEK1, / JNK and Psapk / JNK molecules have been determined. Total protein was determined using the Smart BCA protein assay kit on MCF-7 cell media. The quantities of the molecules were calculated as ng / mg protein and the statistical analyzes were performed with Kruskal Walls and Tamheinn test.
According to the findings obtained, it was found that, at low doses of leptin (10 ng/ml or 20 ng/ml) there was a statistically significant increase difference of all signal molecules studied compared to the control group which was not receiving leptin. In all signal molecules at the pharmacological leptin dose (1000 ng/ml) were likely to decrease, while obesity leptin dose (100 ng/ml) was found to be effective in all signaling molecules except p38 MAPK and pMEK1. In our study, leptin was found to have a maximal inducing effect on the molecules in the MAPK signaling pathway in all signal molecules where 20 ng / ml leptin dose was applied. It has been determined that the increase in the signal molecule of Psapk / JNK is the highest. This was revealed by our study as a first demonstration of a marked increase trend of the Psapk/JNK molecule among leptin-induced molecules.
The fact that there isn't any literature study that studies the relationship between leptin and the signaling pathways of the MAPK pathway suggests that this thesis study is unique.