Silybum marianum bitkisinin in vitro ortamda karaciğer kanseri hücre hatları üzerine etkisi
Effect of silybum marianum plant on liver cancer cell lines: An in vitro study
Yazar: DİLEK BAYRAM
Danışman: DOÇ. DR. MERAL ÖNCÜ
Süleyman Demirel Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hücre kültürü = Cell culture ; Karaciğer neoplazmları = Liver neoplasms ; Karsinoma-hepatoselüler = Carcinoma-hepatocellular ; Silibin = Silybin ; İn vitro = In vitro

Özet:
Hepatosellüler Karsinom (HSK) karaciğerin en sık (%75) rastlanan primer tümörüdür. HSK'nin etkin bir tedavisi yoktur. HSK'da radyoterapi ve kemoterapi tedavisi ile genellikle başarılı sonuçlar alınamamaktadır. Hep3B, hepatit B virüsü pozitif ve p53 geni mutasyona uğramış hepatosellüler karsinoma hücre soyudur.Silybum marianum (Devedikeni), Asteraceae familyasından bazı dikenli bitkilerin ortak adıdır. Meyveleri yaklaşık olarak 2000 yıldır karaciğer hastalıklarına karşı kullanılan bitki ile ilgili ilk araştırmalar 1958'de başlamıştır. Devedikeni bileşiminde karaciğeri koruyucu etken maddeler; flavonolignandan meydana gelen Silymarin (silibin), taxifolin, quercetrin, albümin, miisiliaj, sabit yağ ve acı maddeler şeklindedir. Yapılan çalışmalarda bitkiden elde edilen ekstraktın (silibin) akciğer tümörü büyümesini baskıladığı, meme, kolon, mesane kanseri hücre hatlarında hücre siklusunu durdurduğu ve apopitozisi tetiklediği gösterilmiştir.Çalışmamızda silibinin Hep3B hücre soyu üzerine etkisini hem iki boyutlu hem de üç boyutlu kültür ortamında incelemek amacıyla 100 µM/ml doz silibin in vitro ortamdaki hücrelere uygulandı. Monolayer kültürde hücrelere silibin (100 µM/ml) verildikten sonra 24, 48 ve 72 saat süreler sonunda BrdU işaretleme indeksi ve aktif kaspaz-3 tayinine immünohistokimyasal yöntemle bakıldı. Üç boyutlu kültürde ise sferoid model oluşturulduktan sonra silibin (100 µM/ml) uygulandı ve yine immünohistokimyasal yöntemler kullanılarak değerlendirildi.Sonuç olarak silibinin hem monolayer kültürde hem de sferoid model kültürde BrdU ile işaretlenen hücrelerin sayısını azalttığı, kaspaz-3 ile boyanan hücrelerin sayısını ise arttırdığı görüldü. Buradan da anlaşılacağı üzere silibin Hep3B hepatosellüler karsinoma hücre soyunda hücre proliferasyonunu inhibe edici ve apoptozisi tetikleyici etki göstermiştir. Üç boyutlu sferoid model vücuttaki tümör yapısını daha iyi yansıttığı için elde ettiğimiz sonuçların hepatosellüler karsinoma tedavisine ışık tutacağı kanısındayız.Anahtar Sözcükler: Hep3B hücre soyu, Silybum marianum

Abstract:
Hepatocellular carsinoma (HCC) is the most seen primer tumor in liver ( 75%). There is no exact cure for HCC. No successful results can be obtained with the treatment of chemotherapy and radiotheraphy in liver cancer. Hep3B cell line is hepatit B virus positive and p53 gene-mutated hepatocarcinoma cell line.Silybum marianum is common name of thorny plants from Asteracea family. Fruits have been used for 2000 years for liver diseases. Researchs about this plant was started about 30 years ago in 1958. Active liver-protective compounds are Silymarin derived from flavonolignan, taxifolin, quercetrin, albumin, musillage, constant fat and bitter substances. Previous studies showed extracts of plant suppressed lung tumor growth and interrupted cell cycle and promoted apopitosis on breast, colon and bladder cancer cell lines.In this study the effect of silibinin on Hep3B cell line and two-dimensional and three-dimensional in the culture medium to examine the 100 microM/ml dose was applied silibin cells in vitro environment. silibin two-dimensional culture medium (100 microM/ml) after applying 24, 48 and 72 hour periods of time marking the end of BrdU labelling index and the determination of active caspase-3 were measured by immunohistochemistry. Three-dimensional culture models after the creation of the spheroids silibin (100 microM/ml) was administered and again assessed using immunohistochemical methods.In conclusion, silibinin both monolayer culture and spheroids the model to reduce the number of cells marked with BrdU in culture, increase the number of cells stained with caspase-3 were seen. Silibin Hep3B hepatocellular carcinoma cell soyunda inhibiting cell proliferation and trigger apoptosis in effect. Three-dimensional tumor spheroids in the body structure of the model to better reflect the results we obtained shed light on the treatment of hepatocellular carcinoma think.Key Words: Hep3B cell line, Silybum marianum