Ratlarda deneysel intestinal iskemi reperfüzyon hasarında monoklonal anti tnf antikoru uygulamasının etkisi
The effect of monoclonal anti tnf antibody administration in rats in injury of experimental intestinal ischemia reperfusion
Yazar: EYÜP MURAT YILMAZ
Danışman: PROF. DR. PARS TUNÇYÜREK
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors ; İnfliksimab = Infliximab ; İntestinal hastalıklar = Intestinal diseases ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Ratlarda deneysel intestinal iskemi reperfüzyon hasarında monoklonal Anti TNF antikoru olan infliximab uygulamasının etkisini araştırmakMateryal ve Metot: Ağırlığı 170- 270 gr arasında değişen, 48 adet erkek Wistar-Albino tipi sıçan kullanıldı. Ratlar, kontrol grubu , laparotomi + infliximab (II. grup, n=8) , 30 dk. iskemi + 30 dk. reperfüzyon (III. grup, n=8), infliximab+ 30 dk. iskemi + 30 dk. reperfüzyon (IV. grup, n=8), 60 dk. iskemi + 30 dk. reperfüzyon (V. grup, n=8), İnfliximab+ 60 dk. iskemi + 30 dk. reperfüzyon (VI. grup, n=8) olmak üzere altı eşit gruba ayrıldı. Tedavi gruplarına laparotomi ve planlanan sürelerde iskemi reperfüzyon yapılarak intraperitoneal olarak infliximab (10 mg/kg) enjekte edildi. Kontrol gruplarına ise 3 cc % 0.9 NaCl intraperitoneal olarak enjekte edildi. İşlem sonunda ratlar sakrifiye edildi ve kan ile doku örnekleri alındı. Alınan kan ve doku örneklerinden tümor nekroz faktor alfa, glutatyon, glutatyon peroksidaz glutatyon redüktaz, katalaz, süperoksid dismutaz, myeloperoksidaz , malondialdehit , nitrik oksit gibi parametreler bakıldı. Ayrıca doku örnekleri %4'lük formalin fiksasyonu sonrası rutin doku takip kesitler alınarak ışık mikroskobunda incelendi.Bulgular: Belirlenen I/R süreleri sonunda alınan kanların incelenmesinde GR, GSH ve MDA sonuçlarında gruplar arasında anlamlı fark yoktu (p=0,0952). III.grubun (30 dk. iskemi + 30 dk. reperfüzyon) TNF-? değerleri yalnızca kontrol grubundan yüksekti (p=0,0079). Eritrosit GSH-Px değerlerinde kontrol grubu ve II. grubun (laparotomi + infliximab) değerleri diğer gruplardan yüksekti. III.grubun değerleri ise VI.gruptan (60 dk iskemi + 30 dk. reperfüzyon + infliximab) yüksekti (p=0,0006). Eritrosit SOD değerlerinde III. grubun değerleri ve IV.grubun (30 dk iskemi + 30 dk. reperfüzyon + infliximab) değerleri diğer gruplara gore düşüktü (p<0,0001). Eritrosit CAT değerlerine bakıldığında ise II. grubun değerleri III.grup, IV. grup, V.grup (60 dk iskemi + 30 dk. reperfüzyon) ve VI. grubun değerlerinden yüksekti. III. grubun değerleri ise kontrol grubundan düşüktü (p<0,0001). Serum NO değerlerinde IV.grubun değerleri kontrol grubu, II. grup, V. grup ve VI. grubun değerlerine göre yüksekti ancak III. grup ile arasında anlamlı fark saptanmadı. Yine III. grubun değerleri ise II. gruba gore yüksek bulundu (p<0,0001). Doku TNF-? değerlerinde gruplar arasında anlamlı fark saptanmadı (p=0,064). Doku GR değerlerinde IV grubun değerleri I, II ve V. gruptan yüksekti (p=0,0015). Doku SOD değerlerinde ise III. grubun değerleri kontrol grubuna göre düşüktü (p=0,0183). Doku GSH-Px değerlerinde IV. grubun değerleri I, II, III ve VI. gruptan yüksek iken V. grupla aralarında fark yoktu (p=0,021). Doku GSH değerlerinde III. grubun değerleri II. gruba göre düşüktü (p=0,0329). Doku CAT değerlerinde IV. grubun değerleri I, II, V ve VI gruba göre yüksek iken III grup ile aralarında fark yoktu (p=0,0003). Doku NO değerlerinde IV. grubun değerleri I, II ve III. gruptan daha yüksekti (p=0,0073). Doku MDA gruplarına bakıldığında II grubun değerleri IV ve VI. gruptan daha yüksek bulunurken (p=0,0064) , doku MPO değerlerinde III grubun değerleri V gruptan daha yüksekti (p=0,0065).Sonuç: Çalışmamızdan elde edilen veriler doğrultusunda infliximabın intestinal I/R hasarında erken dönemde antiinflamatuar ve antioksidan olumlu etkisi olduğunu görmekteyiz. Ancak infliximabın olası yeni klinik rolünün bulunması ve sistemik geç dönem etkilerinin anlaşılması için daha uzun iskemi ve reperfüzyon süreleri ile ayrıntılı araştırmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Aim: To study the effects of infliximab application, which is a monoclonal anti TNF anticor, in experimental intestinal ischemia reperfusion injury in rats.Material and Method: In this study, 48 male Wistar-Albino type rats whose weights ranged between 170 and 270 gr were used. The rats were equally divided into 6 groups, as the control group (Group I, n=8), laparotomy+infliximab (Group II, n=8), 30 minutes ischemia+30 minutes reperfusion (Group III, n=8), infliximab+ 30 minutes ischemia+ 30 minutes reperfusion (Group IV,n=8), 60 minutes ischemia+30 minutes reperfusion (Group V, n=8), and infliximab+ 60 minutes ischemia+30 minutes reperfusion (Group VI, n=8). Treatment groups were done ischemia reperfusion for planned periods of times and laparotomy, and were injected infliximab (10 mg/kg) intraperitoneally. The control group was given 3 cc %0.9 NaCl intraperitoneally. After the operation, the rats were sacrificed and blood and tissue samples were taken. The blood and tissue samples were examined by parameters such as tumor necrosis factor alfa, glutathione, glutathione peroksidas, glutathione reductose, katalas, superoxide dismutase, myeloperoksidaz, malondialdehit, and nitric oxide. In addition to these, the tissue samples were examined by light microscope being taken routine tissue follow up sections after %4 formalin fixation.Results: Following the defined I/R periods, it was understood that there were no significant differences among groups for GR, GSH, and MDA results (p=0.0952). Group III ( 30 minutes ischemia+ 30 minutes reperfusion) TNF-? values were only higher than the control group (p=0.0079). For eritrosid GSH-Px values, the values of the control group and Group II (laparotomy + infliximab) were higher than the other groups?. Similarly, the values of Group III were higher than Group VI (60 minutes ischemia+30 minutes reperfusion + infliximab) values (p=0.0006). For Eritroside SOD, the values of Group III and Group IV (30 minutes ischemia+ 30 minutes reperfusion +infliximab) were lower when compared to the values of other groups. When it came to Eritrosid CAT values, the readings of Group II were higher than Group III, Group IV, Group V (60 minutes ischemia+30 minutes reperfusion) and Group VI values. The values of Group III were lower than the control group (p<0.0001). For serum NO, Group IV values were higher than the control group, Group II, Group V, and Group VI; however, there was not a significant difference with Group III. Even so, Group III values were found high in comparison with Group II values (p<0.0001). There were not significant differences among groups for tissue TNF-? values (p=0.064). In tissue GR values, Group IV was higher than Group I, II, and V (p=0.0015). For tissue SOD values, Group III was lower than the Control group (p=0.0813). As for tissue GSH-Px values, while Group IV was higher than Groups I, II, III, and VI, there was no difference with Group V( p=0.021). Group III tissue GSH values were lower according to Group II (p=0.0329). While Group IV tissue CAT values were higher than groups I, II,V and VI, they were similar to Group III (p=0.0003). In tissue NO values, Group IV was higher than Groups I, II, and III (p=0.0073). When tissue MDA groups were examined, it was seen that Group II values were higher than Groups IV and VI (p=0.0064), and for MPO, Group III values were higher than Group V (p=0.0065).Result: We can see that infliximab has a positive anti inflammatory and antioxidant effect in the early period on intestinal I/R injury. However, more detailed research with longer ischemia and reperfusion period is needed for the determination of the possible new clinical role of infliximab and for the understanding of the later period systematic effects of it.