Alfa-linolenik asitin kolon kanseri üzerindeki etkisinin moleküler mekanizmasının araştırılması
Investigation of the molekuler mechanism of the effect of alpha-linolenic acid on colon cancer
Yazar: ARZU EMEKSİZ
Danışman: PROF. DR. ERGİN ŞİNGİRİK
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Gastroenteroloji = Gastroenterology ; Onkoloji = Oncology ; İç Hastalıkları = Internal diseases
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Genler = Genes ; Genler-Bax = Genes-Bax ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Kaspazlar = Caspases ; Kolon hastalıkları = Colonic diseases ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Linolenik asitler = Linolenic acids ; Moleküler yapı = Molecular structure ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Alfa-linolenik Asitin Kolon kanseri Üzerindeki Etkisinin Moleküler Mekanizmasının Araştırılması
Amaç: Alfa-linolenik asit bitkisel omega-3 yağ asiti olarak bilinmektedir. Bu yağ asitinin antioksidan ve antiinflamatuar özellikleri vardır. Yapılan çalışmalarda programlı hücre ölümü olarak bilinen apoptozisi etkilediği gösterilmiştir. Apoptotik yolaklar kanserlerde, kemoterapötiklere gösterilen dirençte ve kanser gelişiminde önemlidir. Bu çalışmanın amacı insan kolon kanseri hücrelerinde alfa-linolenik asitin proapoptotik etkilerini araştırmaktır.
Gereç ve Yöntemler: Amerikan Tip Kültür Koleksiyonu Organizasyonundan (ATCC) temin edilen insan kolorektal adenokarsinom hücre hattı (HT29) kullanıldı. İnsan kolon kanseri hücre kültürü yapıldı. Hazırlanan hücre kültürü besiyeri uygun koşullar altında (37 ºC ve %5'lik CO2'li etüvde) inkübe edilerek, hücrelerin çoğalması sağlandı. Hücreler tek tabaka halinde 1ml'de 1x106 canlı hücre olacak şekilde 75cm2'lik standart hücre kültürü plaklarında yetiştirildi. Daha sonra bu hücreler 100 μmol/L alfa-linolenik asit ile 48 saat boyunca muamele edilip ELISA yöntemiyle protein analizleri için homojenize edildi. Apoptotik yolak belirteçleri olan BAX, BCL-2, KASPAZ-3, WEE1 (G2-M kontrol noktası protein kinazı), Growth arrest and DNA damage 153(GADD 153), apoptoz indükleyici faktör (AIF), 78kDa glukoz regülasyonlu protein (GRP78) protein düzeyleri ve aktiviteleri ELİSA yöntemiyle analiz edildi.
Bulgular: ELİSA test sonuçlarına göre alfa-linolenik asit ile muamele edilen kanser hücrelerinde proapoptotik proteinler olan KASPAZ-3 aktivitesi artarken; BAX, WEE1, GADD153, AIF, GRP78 ekspresyonlarında artış görüldü. Antiapoptotik protein olan BCL-2 ekspresyonunda ise azalma gözlemlendi.
Sonuç: Çalışmamız alfa-linolenik asitin kolon kanser hücrelerinin çoğalmasını engellediğini, proapoptotik proteinlerin ekspresyonunu arttırdığını ve antiapoptotik proteinlerin ekspresyonunu azalttığını ortaya koydu. Sonuç olarak çalışmamız alfa-linolenik asitin insan kolon kanseri üzerinde apoptotik etkileri olduğunu gösterdi.
Anahtar sözcükler: Apoptozis, kolon kanseri, alfa-linolenik asit, kaspaz-3, bax, bcl-2, wee1, gadd153, AIF, grp78

Abstract:
Investigation of the Molecular Mechanism of the Effect of Alpha-linolenic Acid on Colon cancer
Objectives: Alpha-linolenic acid is known as a vegetable omega-3 fatty acid. This fatty acid has antioxidant and anti-inflammatory properties.In studies, it has been shown to affect apoptosis, known as programmed cell death. Apoptotic pathways are important in cancers, resistance to chemotherapeutics, and cancer development.The aim of this study was to investigate the proapoptotic effects of alpha-linolenic acid in human colon cancer cells.
Materials and Methods: The human colorectal adenocarcinoma cell line (HT29) obtained from the American Type Culture Collection Organization (ATCC) was used.Human colon cancer cell culture was performed.The cell culture medium prepared was incubated under appropriate conditions (37 ºC and 5% CO2 in an incubator) and the cells were proliferated. Cells were grown in a monolayer at 1x106 viable cells in 1ml in standard 75cm2 cell culture plates.Then, these cells were treated with 100 μmol/L alpha-linolenic acid for 48 hours and homogenized for protein analysis by ELISA method.Apoptotic pathway markers BAX, BCL-2, KASPAZ-3, WEE1(Cell cycle G2/M checkpoint kinase protein), Growth arrest and DNA damage 153 (GADD 153), apoptosis inducing factor (AIF), 78kDa glucose regulated protein (GRP78) protein levels and activities were analyzed by ELISA method.
Results: According to the ELISA test results, the proapoptotic proteins KASPAZ-3 activity increased in cancer cells treated with alpha-linolenic acid; BAX, BCL-2, KASPAZ-3, WEE1, GADD 153, AIF, GRP78 expressions were increased.A decrease in the expression of BCL-2, an antiapoptotic protein, was observed.
Conclusion: Our study showed that alpha-linolenic acid inhibits the proliferation of colon cancer cells, increases the expression of proapoptotic proteins and reduces the expression of antiapoptotic proteins.As a result, our study has shown that alpha-linolenic acid has apoptotic effects on human colon cancer.
Key words: Apoptosis, colon cancer, alpha-linolenic acid, caspase-3, bax, bcl-2, wee1, gadd153, AIF, grp78