Soya fasülyesinden (Glycine max L. Merrill) tekniği kullanılarak peroksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of peroxidase enzyme from soybean (Glycine max L. Merrill) affinity technique and investigation of some kinetic properties
Yazar: ZAHRA RASULZADE
Danışman: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Afinite kromatografisi = Affinity chromatography ; Amino benzohidrazid türevleri = Amino benzohydrazide derivatives ; Peroksidaz = Peroxidase ; Soya fasulyesi = Soybean

Özet:
Peroksidaz (POD) enzimleri üzerine çeşitli saflaştırma prosedürleri bulunmaktadır. Önceki çalışmalarda 4-aminobenzohidrazid türevleri peroksidaz enzimlerinin etkili inhibitörlerinin olarak tanımlanmış ve 4-aminobenzohidrazid türevi moleküller tabanlı afinite kromatografisi tekniği kullanılarak POD enziminin saflaştırılması yapılmıştır. Bu tez kapsamında, Soya fasülyesi peroksidaz (SBP) enzimi üzerine 4-amino-3-bromo-5-florobenzohidrazid,4-amino-3-bromo-5-klorobenzohidrazid, 5-amino-izoftalohidrazid, 4-amino-3-bromo-2-metilbenzohidrazid moleküllerinin inhibisyon etkileri araştırılacak ve inhibisyon etkisi gösteren türevlerden afinite jelleri hazırlanarak SBP enzimini tek kademede saflaştırılacaktır. Afinite kromotografi tekniğiyle SBP enziminin  tek basamakta saflaştırılması, bu saflaştırmanın daha az zamanda, uygun maliyyetde ve yüksek verimde  gerçekleştirilmesi, ticari kullanımada ışık tutacaktır. Bu tez çalışmasında  ilk olarak 4-amino-3-bromo-5-florobenzohidrazid,4-amino-3-bromo-5-klorobenzohidrazid, 5-amino-izoftalohidrazid, 4-amino-3-bromo-2-metilbenzohidrazid moleküllerinin Ki ,IC50  değerleri belirlenecek ve Sepharose-4B matriksi kullanılarak inhibisyon gösteren maddeler için Afinite jeli hazırlanacaktır. Hazırlanan afinite jellerinden SBP enzimi tek kademede saflaştırılacaktır. Saflaştırmada kullanılma potansiyeli olan en iyi afinite kolonlarına SBP enziminin bağlanma kapasitesi üzerine sıcaklığın, pH'nın ve iyonik şiddetin etkisi belirlenecektir.

Abstract:
There are various purification procedures on peroxidase (POD) enzymes. In previous studies, 4-aminobenzohydrazide derivatives were identified as effective inhibitors of peroxidase enzymes and the purification of POD enzyme was performed using affinity chromatography technique based on 4-aminobenzohydrazide derivative molecules. Within the scope of this thesis, 4-amino-3-bromo-5-fluorobenzohydrazide,4-amino-3-bromo-5-chlorobenzohydrazide, 5-amino-isophthalohydrazide, 4-amino-3-bromo- Inhibition effects of 2-methylbenzohydrazide molecules will be investigated and affinity gels will be prepared from derivatives showing inhibition effects, and the SBP enzyme will be purified in a single step. Purification of the SBP enzyme in a single step with the affinity chromatography technique, and the realization of this purification in less time, at an appropriate cost and with high yield, will shed light on commercial use. In this thesis, firstly, the Ki ,IC50 of 4-amino-3-bromo-5-fluorobenzohydrazide, 4-amino-3-bromo-5-chlorobenzohydrazide, 5-amino-isophthalohydrazide, 4-amino-3-bromo-2-methylbenzohydrazide molecules values ​​will be determined and Affinity gel will be prepared for substances showing inhibition using Sepharose-4B matrix. SBP enzyme will be purified in one step from prepared affinity gels. The effects of temperature, pH and ionic strength on the binding capacity of the SBP enzyme to the best affinity columns that have the potential to be used in purification will be determined.