İzole ve kombine şekilde uygulanan kuersetin veksenogreftin rat tibial kemik defektlerininiyileşmesi üzerine etkilerinin histolojik olarakincelenmesi
The histological analysis of the effects of quercetin and xenograft applied in both isolated and combined way on recovery of rat tibial bone defects
Yazar: BEKİR DURMAZ
Danışman: DR. NEDİM GÜNEŞ
Dicle Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Ağız, Diş, Çene Hastalıkları ve Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2020
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Çalışmamızda kuersetin ve ksenogreftin, kritik boyut kemik defektlerinde yeni kemik oluşumu (YKO) ve kemik iliği oluşumu (KİO) üzerine olan etkilerini ve kemik iyileşmesinde görev aldıkları bilinen osteopontin (OPN) ve osteonektinin (SPARC) immün lokalizasyonu ve ekspresyonu üzerine olan etkilerini, histolojik ve moleküler düzeyde ortaya koymak amaçlanmıştır.
Dicle Üniversitesi Sağlık Bilimleri Uygulama ve Araştırma Merkezi'nde her grupta 7 adet olmak üzere toplam 56 adet Sprague-Dawley cinsi ortalama 350 gr ağırlığında yetişkin erkek rat üzerinde yapılmıştır. Çalışmamız; kontrol grubu (k), kuersetinin gavaj yoluyla ratlara uygulandığı kuersetin grubu (q), kuersetinin gavaj yoluyla ve ksenogreftin lokalize kemik defektine drekt olarak uygulanıp iki ajanın kombine bir şekilde kullanıldığı kuersetin ve ksenogreft grubu (q+x), ile ksenogreftin lokalize bir şekilde kemik defektine tek başına ve drekt olarak uygulandığı ksenogreft grubu (x) olmak üzere toplam 4 gruptan oluşmuştur. Her gruptan 7 rat 4. hafta sonunda, gruptaki diğer 7 rat ise 8. hafta sonunda sakrifiye edilerek çıkarılan dokular fiksatif solüsyon içinde histolojik ve immünohistokimyasal olarak incelemeye tabi tutulmuştur. Bu çalışmada elde edilen yeni kemik oluşumu ve kemik iliği oluşumu üzerine veriler %95 güven düzeyinde olup Sosyal Bilimler İçin İstatistik Programı 22 (SPSS) ile analiz edilmiştir.
Değişkenlerin normal dağılımdan gelme durumları araştırılırken birim sayılarına göre Kolmogrov Smirnov veya Shapiro Wilk's' den yararlanılarak normallik testi sonuçları incelenmiştir. Sonuçlar yorumlanırken anlamlılık düzeyi olarak 0,05 kullanılmış olup; p<0,05 olması durumunda değişkenlerin normal dağılımdan gelmediği belirtilmiştir.
Gruplar arasındaki farklılıklar incelenirken değişkenlerin normal dağılımdan gelmemesi durumunda Kruskal Wallis H Testinden yararlanılmıştır. Anlamlı farklılık görülmesi durumunda Post-hoc testleri yardımıyla anlamlı farklılık görülen gruplar tespit edilmiştir.
İki bağımlı değişken arasındaki farklılık incelenirken değişkenlerin normal dağılımdan gelmemesi nedeniyle Wilcoxon Testi kullanılmıştır.
Çalışmadaki grupların 4 ve 8. hafta OPN ile SPARC değerleri arasındaki ilişki için Wilcoxon Signed Rank Testi yapılmıştır.

Sonuçlar yorumlanırken anlamlılık düzeyi olarak 0,05 kullanılmış olup; p<0,05 olması durumunda anlamlı bir farklılığın olduğu, p>0,05 olması durumunda ise anlamlı bir farklılığın olmadığı belirtilmiştir.
Çalışmada yapılan analizler sonucunda kontrol grubunun YKO 56. ölçüm değeri Kuersetin grubuna ve Kuersetin+Ksenogreft grubuna göre anlamlı derecede düşüktür. Kontrol grubunun KİO 28. ölçüm değeri Kuersetin grubuna göre anlamlı derecede düşüktür. Kuersetin grubunda YKO değerleri bakımından 28. gün ve 56. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır. Kuersetin grubunda YKO 28. gün değeri YKO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. Kuersetin+Ksenogreft grubunda YKO değerleri bakımından 28. gün ve 56. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır. Kuersetin+Ksenogreft grubunda YKO 28. gün değeri YKO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. Ksenogreft grubunda YKO değerleri bakımından 28. gün ve 56. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır. Ksenogreft grubunda YKO 28. gün değeri YKO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. Grup gözetmeksizin YKO 28. gün değeri YKO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. Kuersetin+Ksenogreft grubunda KİO değerleri bakımından 28. gün ve 56. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır. Kuersetin+Ksenogreft grubunda KİO 28. gün değeri KİO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. Grup gözetmeksizin KİO değerleri bakımından 28. gün ve 56. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmaktadır. Grup gözetmeksizin KİO 28. gün değeri KİO 56. gün değerine göre anlamlı derecede düşüktür. 4. haftada kontrol grubunun OPN ortalaması 0.57 ve SPARC ortalaması 1,00 olarak bulundu. Kontrol grubunun 4. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 8. haftada kontrol grubunun OPN ortalaması 1.14 ve SPARC ortalaması 1,00 olarak bulundu. Kontrol grubunun 8. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 4. haftada Kuersetin grubunun OPN ortalaması 1,43 ve SPARC ortalaması yine 1,43 olarak bulundu. Kuersetin grubunun 4. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 8. haftada Kuersetin grubunun OPN ortalaması 2.28 ve SPARC ortalaması 2,14 olarak bulundu. Kuersetin grubunun 8. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "orta" düzeydeydi.

4. haftada Kuersetin + Ksenogreft grubunun OPN ortalaması 1,28 ve SPARC ortalaması yine 1,28 olarak bulundu. Kuersetin + Ksenogreft grubunun 4. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 8. haftada Kuersetin + Ksenogreft grubunun OPN ortalaması 1,43 ve SPARC ortalaması 1,18 olarak bulundu. Kuersetin + Ksenogreft grubunun 8. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 4. haftada Ksenogreft grubunun OPN ortalaması 1,14 ve SPARC ortalaması yine 1,14 olarak bulundu. Ksenogreft grubunun 4. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi. 8. haftada Ksenogreft grubunun OPN ortalaması 1.28 ve SPARC ortalaması 1,14 olarak bulundu. Ksenogreft grubunun 8. hafta OPN ve SPARC değerlerinin ikisi de "düşük" düzeydeydi.
8. hafta SPARC değeri en fazla kuersetin grubunda (2,14) olup, fark analizi sonuçları 8. hafta SPARC ortalamalarının kuersetin grubu ile diğer tüm gruplar arasındaki farkın istatiksel olarak anlamlı olduğunu gösterdi. 8. hafta OPN düzeyi en yüksek kuersetin grubunda (2,28) olup, fark analizi sonuçlarına göre 8. hafta OPN düzeylerinde tüm gruplar ile kuersetin grubu arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlıydı.
Çalışmamızdan elde ettiğimiz sonuçlara göre kuersetinin kemik iyileşmesini ve ksenogreftin iyileşmesini olumlu etkilediği görüldü. Ancak bu özelliklerinin daha iyi anlaşılabilmesi için daha ileri düzeyde araştırmalara ihtiyaç vardır.

Anahtar Sözcükler: Kemik Defekti, Kuersetin, Ksenogreft

Abstract:
In our study, the effects of quercetin and xenograft on new bone formation (NBF) and bone marrow formation (BMF) in critical size bone defects, and the effects on osteopontin (OPN) and osteonectin (SPARC) immune localization and expression, which are known to be involved in bone healing, histological and It is aimed to reveal at the molecular level. At Dicle University Health Sciences Application and Research Center, a total of 56 Sprague-Dawley breeds, 7 in each group, were made on an adult male rat weighing an average of 350 g. In our study, there are 4 groups in total. These are the control group (k), the quercetin group where quercetin is applied to the rats by gavage (q), the quercetin and xenograft group (q + x) in which quercetin is applied in combination with the gavage and xenograft to the localized bone defect. The xenograft group (x) in which xenograft is applied locally to the bone defect alone and as a drect. 7 rats in each group were sacrificed at the end of the 4th week and 7 rats in the group at the end of the 8th week, and the tissues removed were subjected to histological and immunohistochemical examination in fixative solution. The data on the new bone formation and bone marrow formation obtained in this study were 95% confidence level and analyzed by the Social Sciences Statistics Program 22 (SPSS). While investigating the normal distribution of variables, the results of normality tests were examined by using Kolmogrov Smirnov or Shapiro Wilk's according to the number of units. When interpreting the results, 0.05 was used as the level of significance; If p <0.05, it is stated that variables do not come from normal distribution. When examining the differences between the groups, Kruskal Wallis H Test was used if the variables did not come from the normal distribution. In case of a significant difference, groups with significant differences were identified with the help of Post-hoc tests. When examining the differences between the groups, Kruskal Wallis H Test was used if the variables did not come from the normal distribution. In case of a significant difference, groups with significant differences were identified with the help of Post-hoc tests. While examining the difference between two dependent variables, Wilcoxon Test was used because the variables did not come from the normal distribution. Wilcoxon Signed Rank Test was performed for the relationship between OPN and SPARC values in the 4th and 8th weeks of the groups in the study. When interpreting the results, 0.05 was used as the level of significance; It was stated that there was a significant difference if p <0.05, and there was no significant difference if p> 0.05. As a result of the analyzes made in the study, the NBF 56th measurement value of the control group was significantly lower than the kuersetin group and the kuersetin + xenograft group. The 28th measurement value of the BMF of the control group is significantly lower than that of the quercetin group. In the quercetin group, there is a statistically significant difference between the 28th and 56th days in terms of NBF values. In the quercetin group, NBF 28th day value is significantly lower than NBF 56th day value. In the quercetin + xenograft group, there is a statistically significant difference between the 28th and 56th days in terms of NBF values. In the quercetin + xenograft group, the NBF 28th day value is significantly lower than the NBF 56th day value. Regardless of the group, NBF 28th day value is significantly lower than NBF 56th day value. In the quercetin + xenograft group, there is a statistically significant difference between 28th and 56th days in terms of BMF values. In the quercetin + xenograft group, the 28th day value of BMF is significantly lower than the value of the 56th day of BMF. Regardless of the group, there is a statistically significant difference between 28th and 56th days in terms of BMF values. Regardless of the group, the value of the 28th day BMF is significantly lower than that of the 56th day BMF. In the 4th week, the control group's OPN mean was 0.57 and SPARC mean was 1.00. The control group's OPN and SPARC values were both "low" at week 4. At the 8th week, the control group's OPN mean was 1.14 and the SPARC mean was 1.00. The 8th week OPN and SPARC values of the control group were at "low" level. In the 4th week, the OPN mean of the quercetin group was 1.43 and the SPARC mean was 1.43. Both the OPN and SPARC values of the quercetin group at the 4th week were "low". In the 8th week, the mean OPN of the quercetin group was 2.28 and the average of SPARC was 2.14. Both of the 8th week OPN and SPARC values of the quercetin group were at the "intermediate" level. In the 4th week, the OPN mean of the quercetin + xenograft group was 1.28 and the average of SPARC was 1.28. In the 4th week of the quercetin + xenograft group, both OPN and SPARC values were at the "low" level. In the 8th week, the OPN mean of the quercetin + xenograft group was 1.43 and the average of SPARC was 1.18. The 8th week OPN and SPARC values of the quercetin + xenograft group were at the "low" level. In the 4th week, the OPN average of the xenograft group was 1.14 and the average of SPARC was 1.14. Both the OPN and SPARC values of the xenograft group at the 4th week were at the "low" level. In the 8th week, the OPN average of the xenograft group was 1.28 and the average of SPARC was 1.14. The 8th week OPN and SPARC values of the xenograft group were at the "low" level. The 8th week SPARC value was highest in the quercetin group (2.14), and the results of the difference analysis showed that the 8th week SPARC averages were statistically significant between the quercetin group and all other groups. The 8th week OPN level was highest in the quercetin group (2.28). According to the results of the difference analysis, the difference between all groups and the quercetin group at the 8th week OPN levels was statistically significant. According to the results obtained from our study, quercetin positively affected bone healing and xenograft healing. However, further research is needed to better understand these features.