Lyme olgularının borrelia burgdorferi antijeni ile uyarılmış periferik kan mononükleer hücrelerinde IFN-Y, IP-10, I-TAC ve MIG aktivitesinin araştırılması
Investigation of IFN-γ, IP-10, I-TAC and MIG  activity in borrelia burgdorferi antigen stimulated peripheral blood mononuclear cells of lyme cases
Yazar: ŞEYDA KARABÖRK
Danışman: PROF. DR. RESUL KARAKUŞ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Borrelia burgdorferi = Borrelia burgdorferi ; Kemokinler = Chemokines ; Lyme hastalığı = Lyme disease ; İmmünositokinler = Immunocytokines ; İnterferon-gamma = Interferon-gamma ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
Bu çalışmada amacımız Lyme hastalarının periferik kan mononükleer hücrelerini (PBMC) Borrelia burgdorferi'ye spesifik rekombinant dış yüzey proteini (rOspC) ile uyararak, uyarımdan 24, 48 ve 72 saat sonra toplanan süpernatan örneklerinde IFN-γ, MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10 ve I-TAC/CXCL11 düzeylerinin değerlendirilmesi ve erken tanıya destek olabilecek bir belirteç belirleyebilmektir. Çalışmaya 13 Eritema kronikum migrans (ECM), 7 Lyme artrit (LA), 10 Lyme nöroborelyoz (LNB) ve 10 sağlıklı kontrol olmak üzere toplam 40 birey dahil edilmiştir. Olguların ve kontrollerin mononükleer hücreleri ayrıştırılarak kültüre edilmiştir. Kültüre edilen PBMC'ler rOspC ile uyarılarak 24, 48 ve 72 saat sonra toplanan kültür süpernatanlarında IFN-γ MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10, I-TAC/CXCL11 düzeyleri ELİSA ile ölçülmüştür. Olguların ve kontrol grubunun rOspC ile uyarımı sonrası ilk 24 saatte ECM ve LNB olgularında IP-10/CXCL10 düzeyinde istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmuştur (sırasıyla p=0,013, p=0,016). LA olgularında ise kontrol grubu ile karşılaştırma yapıldığında ilk 24 saatte hem MIG/CXCL9 hem de IP-10/CXCL10 düzeylerinde 48 ve 72. saate kıyasla istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmıştır (sırasıyla p=0,008, p=0,007). Kene teması olan veya olmayan Lyme borelyoz şüpheli olgularda özellikle endemik bölgelerde seronegatiflik olsa bile western blot ile doğrulama yapılması önerilmektedir. Lyme hastalarının PBMC'lerinden izolasyon yapılarak IFN-γ ilişkili kemokinler üzerinde yapılan çalışmamız hastalığın hem tanısı için potansiyel yeni belirteçlerin belirlenmesi hem de hastalığın patogenezinin detaylı olarak incelenmesi için belirli veriler elde etmemize olanak sağlamıştır. Çalışmamızın verilerine göre serolojik testlere ek olarak hastalığın her üç klinik tutulum biçiminde de kontrol grubuna göre anlamlı artış gösteren IP-10/CXCL10'un erken dönemde tanıda kullanılabilecek potansiyel bir belirteç olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
In this study, we aimed to determine a marker that can support an early diagnosis by evaluating IFN-γ, MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10, and I-TAC/CXCL11 levels by stimulate peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of Lyme patients and Borrelia burgdorferi-specific recombinant outer surface protein (rOspC) in the supernatant samples collected 24, 48, and 72 hours after stimulation. A total of 40 individuals, including 13 Erythema chronicum migrans (ECM), 7 Lyme arthritis (LA), 10 Lyme neuroborreliosis (LNB), and 10 healthy controls, were included in the study. Mononuclear cells of cases and controls were separated and cultured.  The cultured PBMCs were stimulated with rOspC, and ELISA measured IFN-γ, MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10, I-TAC/CXCL11 levels in the culture supernatants collected after 24, 48, and 72 hours. A statistically significant difference was found in the IP-10/CXCL10 level in ECM and LNB cases in the first 24 hours after stimulation with rOspC in the subjects and control group (p=0.013, p=0.016, respectively). In LA cases, when compared with the control group, a statistically significant difference was found in both MIG/CXCL9 and IP-10/CXCL10 levels in the first 24 hours compared to the 48th and 72nd hours (p=0.008, p=0.007, respectively). It is recommended to confirm with WB in cases with suspected Lyme borreliosis with or without tick contact, especially in endemic areas, even if there is seronegativity. Our study on IFN-γ related chemokines by isolating from PBMCs of Lyme patients has enabled us to obtain specific data for both determining potential new markers for the diagnosis of the disease and for detailed examination of the pathogenesis of the disease. According to the data of our study, in addition to serological tests, IP-10/CXCL10, which shows a significant increase in all three forms of clinical involvement of the disease compared to the control group should considered as a potential marker that can be used in early diagnosis.