TGF-β, hesperitin ve kuersetinin MCF-7 hücresinin uPA aktivitesi üzerine ve PAI-1 ekspresyonuna etkisi
The effect of TGF-β, hesperetin and quercetin on uPA activity and PAI-1 expression of MCF-7 cell line
Yazar: HATİCE MÜGE SAMANCI DURSUN
Danışman: PROF. DR. ALİ ÜNLÜ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Flavonoidler = Flavonoids ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hesperidin = Hesperidin ; Hücre dizisi = Cell line ; Kuersetin = Quercetin ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Plazminojen = Plasminogen ; Plazminojen aktivatörleri = Plasminogen activators ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta

Özet:
ÖZET

T.C.
SELÇUK ÜNİVERSİTESİ
SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ

TGF-β, Hesperitin ve Kuersetinin MCF-7 Hücresinin 
uPA Aktivitesi Üzerine ve PAI-1 Ekspresyonuna Etkisi

Hatice Müge SAMANCI DURSUN

Tıbbi Biyokimya Anabilim Dalı

YÜKSEK LİSANS TEZİ / KONYA-2015

	Sitokin ailesinin başlıca üyesi olan transforme edici büyüme faktörlerinden TGF-β; hücrenin proliferasyonu, diferansiasyonu, motilitesi, adhezyonu ve ölümü gibi hücresel süreçleri düzenleme yeteneğine sahiptir. Epidemiyolojik ve deneysel in vivo ve vitro çalışmalarda kanser üzerine etkinliği gösterilmiştir.
	Bitki kaynaklı flavonoidler, özellikle antiproliferatif ve antioksidan özellikleri taşıması yönüyle son zamanlarda araştırmacıların dikkatini çekmektedir. Hücre kültürü ve deney hayvan çalışmalarıyla, karsinogenezde flavonoidlerin kanser önleyici etkilerinin olduğu ortaya konmuştur. Fakat antikanserojenik olarak değerlendirilen flavonoidlerin halen moleküler etki mekanizmaları anlaşılamamıştır.
	Çalışmamızda TGF-β ve flavonoid türünde olan, kuersetin (3,3',4',5,7-pentahidroksi flavon) ve hesperetin (3',5,7-trihidroksi–4'-metoksiflavon)'in, MCF-7 meme kanseri hücre serisinde, farklı konsantrasyon ve sürelerde hücre proliferasyonu üzerine etkisini, gerçek zamanlı hücre elektronik algılama sistemiyle (xCELLigence,) ortaya koymayı amaçladık. Ayrıca proteazlardan biri olan uPA ve inhibitörü olan PAI-1 üzerine ne gibi etki ettiğini ortaya koyarak birbirleriyle bağlantılarını açıklamaya çalıştık.
Bu amaçla hücre kültürü laboratuvarında TGF-β, hesperetin ve kuersetinin farklı konsantrasyonları ile muamele edilen MCF-7 hücrelerinin doz ve zaman bağımlı olarak proliferasyonunun inhibisyonu gözlemlendi. Hücrelerin proliferasyonundaki değişiklikler, gerçek zamanlı hücre algılama sistemi kullanılarak değerlendirildi. Hücre sayısındaki değişiklikler, mikro elektrot içeren özel hücre kültürü kuyucuklarında, deney süresince  15'er dakika boyunca bir sürekli olarak izlendi. Bu sistemde belirlenen IC50 dozuyla hazırlanmış olan hücre lizatlarından alınan örneklerde, uPA aktivitesi ve PAI-1 düzeyi analizleri gerçekleştirildi.
Sonuç olarak, TGF-β, hesperetin ve kuersetinin meme kanseri hücresi proliferasyonunu doz ve zamana bağımlı olarak inhibe ettiği ve bunu uPA aktivitesini ve PAI-1 düzeyini etkileyerek gösterdiği gözlenmiştir. Bu değerlendirmeyle birlikte, TGF-β, hesperetin ve kuersetinin hücre proliferasyonuna etki mekanizmasıyla ilgili daha ileri çalışmalar bu konuda aydınlatıcı olacaktır.
Anahtar Sözcükler:hesperetin; kuersetin;MCF-7; TGF-β; uPA aktivitesi.

Abstract:
SUMMARY

REPUBLIC of TURKEY
SELÇUK UNIVERSITY
HEALTH SCIENCES INSTITUTE

The Effect of TGF-β, Hesperetin and Quercetin on uPA Activity and PAI-1 Expression of MCF-7 Cell Line.

Hatice Müge SAMANCI DURSUN

Department of Medical Biochemistry


MASTER / KONYA-2015


TGF-β, which is one of the transformer growth factors and the main member of Cytokine family, is able to arrange cellular processes like cell proliferation, differentiation, motility, and adhesion and cell death. Its efficiency on cancer in epidemiological and experimental in vivo and vitro studies is shown. 
Phyto-flavonoids have recently drawn the attention of researchers for anti-proliferative and antioxidant features. With cell culture and experimental animal studies, it was revealed that flavonoids had anti-carcinogenic effects in carcinogenesis. However, molecular effect mechanisms of flavonoids that are considered as anti-carcinogenic still can't be understood. 
	In our study, it is aimed to prove the effect of quercetin(3,3',4',5,7-pentahidroksi flavon) and hesperetin (3',5,7-trihidroksi–4'-metoksiflavon), which are in type of TGF-β and flavonoid, on cell proliferation in different concentration and durations through real-time cell electronic sensing system (xCELLigence,). Besides, the study reveals how it has an effect on uPA, one of the proteases and its inhibitor, PAI-1 and their links with each other. 
	To this end, inhibition of MCF-7 cells' proliferation in a dose and time dependent manner is observed in cell culture laboratory. These MCF-7 cells have been treated with different concentrations of TGF-β, hesperetin and quercetin. Changes in cells' proliferation have been evaluated by using real-time cell sensing system. Changes in cell number have been monitored in every 15 minutes during the experiment in special cell culture boxes containing microeiectrode. In the patterns of cell lysates prepared with IC50dose determined in this system uPA action and PAI-1 level analyses have been conducted.
	Consequently, it is observed that TGF-β, hesperetin and quercetin inhibits proliferation of breast cancer cell in a dose and time dependent manner and also that it indicates this by effecting uPA action and PAI-1 level. With this fact, further studies on TGF-β, hesperetin and quercetine'smechanism of action on cell proliferation will be informative. 
	Key Words: hesperetin; MCF-7; quercetin; TGF-β; uPA.