Afliberceptin rat endometriozis modelindeki etkileri
The effects of aflibercept on rat endometriosis model
Yazar: ÇAĞLAYAN ATEŞ
Danışman: PROF. DR. BERNA DİLBAZ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Ankara Etlik Zübeyde Hanım Kadın Hastalıkları Eğitim Ve Araştırma Hastanesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Aflibersept = Aflibercept ; Anjiyogenez = Angiogenesis ; Endometriyoz = Endometriosis ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Sıçanlar = Rats ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Amaç: Endometriozisin patofizyolojisi ve etkin tedavi seçeneği hala tam olarak bilinmemektedir. Anjiyogenez, bu alanlardaki araştırmaların birincil odak noktasıdır. Bu çalışmada anti-anjiyogenik etkili aflibercept ve ikinci basamak tedavi olarak kullanılan leuprolid asetatın ektopik endometrial lezyonlar üzerindeki etkileri karşılaştırılmıştır.
Gereç ve Yöntem: Endometriozis, Wistar albino türü dişi ratların ötopik endometriumlarının peritoneal yüzeye transplante edilmesiyle oluşturuldu. Transplantasyon, eksplorasyon ve lezyon eksizyonu için üç haftalık aralıklarla üç ayrı laparotomi yapıldı. Ratlar, ekplorasyon cerrahisi sonrası verilecek tedavilere göre kontrol (Co, n=5), aflibercept (Af, n=12) ve leuprolid asetat (Le, n=12) olmak üzere rastgele üç gruba ayrıldı. Hemen ardından, Af grubuna intraperitoneal (i.p.) 25 mg/kg aflibercept, Le grubuna subkütan (s.c.) 1 mg/kg leuprolid asetat uygulandı. Kontrol grubuna ise tedavi verilmedi. Ratların ağırlıkları ve Blauer adhezyon skoru'na göre karın içi adhezyon değişimleri tedavi öncesi ve sonrası olmak üzere raporlandı. Sakrifikasyon için uygulanan eksanguinasyon sırasında alınan kandan parametreler (beyaz kan hücresi sayısı, hemoglobin miktarı, trombosit sayısı) elde edildi. Endometriotik lezyonlar, boyut, hacim, histolojik ve immünohistokimyasal olarak değerlendirildi. Eksize edilen dokularda, hematoksilen eozin boyama ile eksplantal epitelyal histolojik skorlama (EHS) yapıldı; ayrıca immünohistokimyasal olarak vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve CD31 ekspresyonları skorlandı. Tüm veriler grup içi ve gruplar arası olmak üzere istatiksel olarak analiz edildi. Anlamlılık düzeyi p< 0.05 olarak kabul edildi.
Bulgular: Ratların tedavi sonrası ağırlıkları, Af ve Co gruplarında Le grubuna göre düşük bulundu (p < .001). Aflibercept adhezyonları, tedavi öncesine göre önemli ölçüde iyileştirdi (p = .006). Endometrial implant hacimleri Af ve Le gruplarında azaldı; ancak bu azalma sadece Af grubunda anlamlı bulundu (p = .002). Eksplantal epitelyal histolojik skoruna (EHS) göre; Af grubunda ratların %75'i 1, Le grubunun %58'i 3, Co grubunun ise % 60'ı 3 skorunu aldı ve bu farklılıklar gruplar arasında anlamlı buludu (p = .007). Af ve Le gruplarında trombosit sayısı ortalaması Co grubuna göre yüksek bulundu. Aflibercept, kontrol grubuna göre VEGF H skorunu ve CD31 ekspresyonunu anlamlı derecede düşürdü (p =.001). Ayrıca CD31 için leuprolid asetata göre de daha başarılı bulundu (p < .001).
Sonuç: Aflibercept, endometriotik lezyonların gerilemesinde ve oluşan adhezyonların tedavisinde, hem kontrol grubuna göre hem de leuprolid asetata göre daha başarılı bulundu.
Anahtar Kelimeler: Aflibercept, anjiyogenez, CD31, endometriozis, VEGF

Abstract:
Aim:  Endometriosis' pathophysiology and adequate treatment options are still unknown. Angiogenesis is the primary focus of research in these areas. The effects of the anti-angiogenic agent aflibercept and the second-line treatment option, leuprolide acetate, on ectopic endometrial lesions were compared in this study.
Materials and Methods: Endometriosis was induced by transplanting eutopic endometrium of Wistar albino female rats to the peritoneal surface. Three times laparotomy were performed at three-week intervals for transplantation, exploration, and excision of lesions. After the exploration surgery, the rats were randomly divided into three groups as control (Co, n=5), aflibercept (Af, n=12) and leuprolide acetate (Le, n=12) according to the treatments to be given. Immediately afterwards, aflibercept 25 mg/kg intraperitoneally (i.p.) was given to the Af group, and leuprolide acetate 1 mg/kg subcutaneously (s.c.) to the Le group. No treatment was given to the control group. Before and after the treatment, the rats' weights and changes in intra-abdominal adhesion were recorded according to Blauer adhesion score. Parameters (hemoglobin, white blood cell, platelet) were obtained from the blood taken during exsanguination applied for sacrification. The size, volume, histology, and immunohistochemistry of endometriotic lesions were all assessed. In excised tissues, histological scoring was done using hematoxylin and eosin staining; in addition, the expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF) and CD31 were scored immunohistochemically. All data were analyzed statistically, within and among groups. Significance level was accepted as p < 0.05.
Results: The post-treatment weights of the rats in the Af and Co groups were significantly lower than those in the Le group (p < .001). Aflibercept significantly improved adhesions compared to pretreatment (p = .006). Endometrial implant volumes decreased in Af and Le groups; however, this decrease was significant only in the Af group (p = .002). According to the explant epithelial histological score (EHS); In the Af group, 75% of the rats got 1, 58% of the Le group got 3, and 60% of the Co group got 3, and these differences were significant among the groups (p =.007). The Af and Le groups had greater mean platelet counts than the Co group. When compared to the control group, aflibercept dramatically lowered VEGF H score and CD31 expression (p =.001). It was also shown to be more effective than leuprolide acetate for CD31 (p < .001).
Conclusion: Aflibercept was more successful than both the control group and leuprolide acetate in the regression of endometriotic lesions and in the treatment of adhesions.
Key Words: Aflibercept, angiogenesis, CD31, endometriosis,  VEGF