İstanbul ili köpeklerinde bulunan babesia türlerinin teşhisinde mikroskobik ve pcr-rlb bulgularının karşılaştırılması
Comparison of microscobic and pcr-rlb findings in detection of babesia species of dogs in istanbul
Yazar: NURAN (SELEK) AYSUL
Danışman: DOÇ.DR. TÜLİN KARAGENÇ ; PROF.DR. AYŞEN GARGILI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Parazitoloji = Parasitology

Özet:
xiiÖZETAysul N. İstanbul İli Köpeklerinde Bulunan Babesia Türlerinin TeşhisindeMikroskobik ve PCR-RLB Bulgularının Karşılaştırılması. İstanbul Üniversitesi SağlıkBilimleri Enstitüsü, Parasitoloji ABD. Doktora Tezi. İstanbul. 2006.Bu çalışma, İstanbul İli köpeklerinde bulunan Babesia etkenlerinin tür ve alttürlerinin tespit edilmesi amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla 11 farklı barınaktaki veVeteriner Fakültesi Kliniklerine getirilen toplam 493 köpekten, Aralık 2004-Haziran2005 tarihleri arasında kan örnekleri toplandı. Örnekler mikroskobik bakı ve PCR-RLByöntemleri ile incelendi.Mikroskobik inceleme amacıyla her bir hayvandan sürme preparatlar hazırlandı,Giemsa yöntemi ile boyandı ve x1000 büyütmede incelendi. Mikroskobik incelemesonucu 493 örnekten 2 (% 0,4)' si pozitif bulundu. PCR-RLB yöntemi için kanörneklerinden DNA izolasyonu yapıldı ve Theileria ve Babesia cinslerinde spesifik olanbir bölgeyi çoğaltan primerler ile PCR yapıldı. Bu aşama sonucunda 493 örnekten 11(% 2,2) tanesi pozitif bulundu. RLB aşamasında iki farklı membran kullanıldı. İlkmembran Babesia canis canis, Babesia canis vogeli, Babesia canis rossi ve Babesiagibsoni spesifik oligonükleotidleri kullanılarak Adnan Menderes Üniversitesi VeterinerFakültesi Parazitoloji Anabilim Dalı laboratuarında hazırlandı. Hazırlanan membranla493 örneğin PCR ürünleri hibridize edildi ve 19 adet (% 3,9) pozitif örnek saptandı.İkinci olarak, hazır blotlu olan ve ek olarak B.equi olgonükleotidi olan ticari membranhibridizasyon için kullanıldı ve örnekler tekrar konfirme edildi. Her iki membranla dayapılan RLB sonucunda 19 adet (% 3,9) pozitif örnek saptandı ve etkenlerin B.canisvogeli olduğu saptandı. Ek olarak, PCR sonucuna göre negatif olan 8 örnek de RLB ilepozitif bulundu etkenlerin B. canis vogeli olduğu saptandı.Sonuç olarak, İstanbul'da kan örneği alınan 493 köpekte % 3,9 oranında B. canisbulunduğu, alt türünün B. canis vogeli olduğu bulundu. İstanbul'da ilk kez köpeklerdeBabesia taraması yapıldı. Mikroskobik bakı, PCR ve RLB yöntemleri içinde iseRLB'nin en duyarlı yöntem olduğu saptandı.Anahtar Kelimeler : Babesia, Köpek, İstanbul, PCR, RLBBu çalışma Adnan Menderes Üniversitesi Bilimsel Araştırma ProjeleriBirimi tarafından VTF-05016 no'lu proje olarak desteklenmiştir.

Abstract:
xiiiABSTRACTAysul N. Comparison of microscobic and PCR-RLB findings in detection ofBabesia species of dogs in Istanbul. Istanbul University, Institute of Health Science,Parasitology Department. PhD Thesis. Istanbul. 2006.This study was carried out to detect Babesia species and subspecies in Istanbuldogs. For this aim, a total of 493 blood samples were collected between December2004-June 2005 from 11 dog shelters and Clinics of Veterinary Faculty. Blood sampleswere examined microscopically and with PCR-RLB (Polimerase Chain Reaction,Reverse Line Blot) assays. For microscobic evaluation thin blood slides prepared fromeach dog, stained with Giemsa and examined with x1000 magnification. Two out of the493 (0.4 %) samples were found to be positive in microscobic evaluation. For PCR-RLB assay, DNA was extracted from individual samples and initially PCR performedwith the Theileria/Babesia specific primers. According the results of this step, 11(2.2 %) samples were found to be positive out of 493 samples. For the evaluation of thesamples with RLB, 2 different membranes were used. First membrane was prepared inAdnan Menderes University Veterinary Faculty Department of Parasitology laboratoryand blotted with Babesia canis canis, Babesia canis vogeli, Babesia canis rossi andBabesia gibsoni specific oligonucleotides. As a result of hibridization of this membranewith the PCR products of 493 samples, 19 (3.8 %) of them were found to be positive.Secondly a commercial membrane, which has already been blotted and have additionalB.equi oligonucleotide, was used for the hybridization and the samples were confirmed.According to the results of both RLB, 19 (3.8 %) of them were found to be positive forB.canis vogeli subspecies. Additionally, 8 samples which have been detected asnegative according to the PCR results were found to infected with B.canis vogeli.Consequently, in this study, Babesia species were screened in İstanbul dogs, outof 493 samples collected from dogs 19 (3.8 %) were infected with B.canis vogeli.Among the Microscobic, PCR, RLB techniques RLB was found to be the mostsensitive.Key Words: Babesia, Dog, Istanbul, PCR, RLBThis study was supported by The Research Support Unit of Adnan MenderesUniversity as the project no VTF-05016.