Broyler yenilebilir iç organlarında salmonella varlığının ıso 6579-1:2017 ve salmonella-spesifik real-tıme PCR ile belirlenmesi
Determination of salmonella presence in broiler internal edible organs by iso 6579-1:2017 and salmonella-specific real-time PCR
Yazar: ZEYNEB AKGÜN
Danışman: PROF. DR. PROF. DR. AYŞEGÜL EYİGÖR ; PROF. DR. SERAN TEMELLİ
Bursa Uludağ Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Besin Hijyeni ve Teknolojisi = Food Hygiene and Technology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Çalışmada, bir kanatlı kesimhanesinde kesilen broylerlere ait sevkiyat öncesi paketlenmiş yenilebilir iç organlardan karaciğer, kalp, dalak (KKD) ve taşlık (T) örneklerinden izole edilen salmonellaların varlığı ve serotipinin belirlenmesi amacıyla sırasıyla uluslararası referans metot olan revize ISO 6579:2017-1 ve ISO 6579:2014-3 kullanımı yanı sıra metot etkinliğinin Salmonella-spesifik real-time PCR (Salm-PCR) ve S. Enteritidis ve S. Typhimurium spesifik r-PCR (SE/ST-PCR) ile doğrulanarak değerlendirilmesi amaçlandı. Bunun için, 30 KKD ile 30 T olmak üzere toplamda 60 örnek Salmonella varlığı yönünden ISO 6579:2017-1 ile analiz edildi. Tür ve SE/ST serovar doğrulaması sırasıyla Salm-PCR ve SE/ST-PCR ile, SE/ST-PCR ile konvansiyonel serotiplendirme arasındaki uyum ise ISO 16140-6:2019 değerlendirildi.
Tüm KKD (%100,00-30/30) ve %90,00 T (27/30) örneğinin Salmonella taşıdığı, genel prevalansın %95,00 (57/60) olduğu bulunurken Salm-PCR ile izolatların tümünün (%100) Salmonella olduğu doğrulandı. Konvansiyonel serotiplendirme ile broyler yenilebilir iç organlarında en yüksek düzeyde bulunan serovarın S. Virchow (%80,70-46/57), bunu %19,30 (11/57) ile S. Enteritidis'in izlediği tespit edildi. Konvansiyonel serotiplendirmenin S. Enteritidis olarak saptadığı bir T izolatı, SE/ST-PCR ile tespit edimedi (%17,54-10/57). Yüksek rölatif doğruluk (%98,25), duyarlılık (%100,00) ve özgünlük (%100,00) değerleri ile yöntemler arasındaki yüksek uyum (κ: 0,94), SE/ST-PCR'ın, SE/ST deteksiyonunda konvansiyonel serotiplendirmeye alternatif olarak kullanılabileceğini gösterdi.
Kesimhane kaynaklı broyler yenilebilir iç organlarında tespit edilen yüksek Salmonella prevalansının, bu patojeni ilk kez en yüksek duyarlılık ve özgünlükle tespit edebilen uluslararası referans bakteriyolojik metot ile belirlendiği çalışma verileri, orijinal nitelikte olup halk sağlığı yönünden önem arz etmektedir. Ayrıca, dominant serovar olarak S. Virchow'un bulunması, S. Enteritidis'in nispeten düşük prevalansta olup örneklerin hiçbirinde S. Typhimurium'a rastlanılmaması, kanatlı endüstrisinde sirküle eden güncel serovar bilgisi açısından ulusal/uluslararası literatüre ve mevzuata tarafsız veri oluşturacağı düşünülmektedir.

Abstract:
This study aimed to determine the presence and serotype of salmonellae in packaged pre-shipment edible internal organ samples as liver, heart, spleen (LHS) and gizzard (G) of slaughtered broilers by international reference methods as revised ISO 6579:2017-1 and ISO 6579:2014-3, respectively, and also to evaluate and verify method efficiency of Salmonella-specific real-time PCR (Salm-PCR) and S. Enteritidis and S. Typhimurium specific r-PCR (SE/ST-PCR). For this, a total of 60 samples, comprised of 30 LHS and 30 G, were analyzed by ISO 6579:2017-1 for the presence of Salmonella. Species and serovar verification was performed by Salm-PCR and SE/ST-PCR, respectively, where agreement between SE/ST-PCR and conventional serotyping was evaluated according to ISO 16140-6:2019.
All LHS (100,00%-30/30) and 90,00% (27/30) of G samples harbored Salmonella with an overall prevalence of 95,00% (57/60) in all samples examined, where all isolates were confirmed as Salmonella by Salm-PCR. Conventional serotyping revealed the most prevalent serovar in broiler edible internal organs as S. Virchow (80,70%-46/57), followed by S. Enteritidis 19,30% (11/57). SE/ST-PCR (%17,54-10/57) could not detect one G isolate, which was serotyped as S. Enteritidis by conventional serotyping. High relative accuracy (98,25%), sensitivity (100,00%) and specificity (100,00%) and agreement between methods (κ: 0,94) revealed SE/ST-PCR as an alternative in SE/ST detection to conventional serotyping.
Data on high Salmonella prevalence in broiler edible organs of slaughterhouse origin, and detection of the pathogen by using an internationally recognized reference bacteriological method of high sensitivity and specificity is of significance for public health. Additionally, idenitification of S. Virchow as the dominant serovar, a relatively lower prevalence of S. Enteritidis with no detection of S. Typhimurium from the samples, would be of use as unbiased and up to date circulating serovar information in poultry industry, both for national/international literature and legal regulations.