İmikimod ile uyarılmış fare psöriazis modelinde sistemik ursolik asit kullanımının tedavi edici etkisi
Treatment effect of use of systemic ursolic acid in imiquimod induced mouse psoriasis model
Yazar: FEYZA FERAH
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ RUKİYE YASAK GÜNER
Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Deri ve Zührevi Hast. Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Dermatoloji = Dermatology
Dizin: Fareler = Mice ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Psoriyazis = Psoriasis ; Tedavi = Treatment ; Tretinoin = Tretinoin ; Ursolik asit = Ursolic acid ; İmikimod = İmicimod

Özet:
Psöriazis genetik ve çevresel faktörlerden etkilenen, keratinositlerin aktivasyonu ve hiperproliferasyonu ile karakterize, kronik, immün sistem aracılı enflamatuar bir deri hastalığıdır. Th1 ve Th17 sitokinleri psöriazis patogenezinde ana rol oynar. Psöriazis lezyonlarında proinflamatuar sitokinlerde artış (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-8, IL-12, IL-17, IL-18, IL23) ve antiinflamatuar sitokinlerde azalış (IL-10, IL-4) görülür. Küçük bir molekül olan ursolik asit (UA) insan diyetinde çoğu zaman yer alan bitkilerde bulunan bir karboksilik asittir. UA Th17 maturasyonu ve matür Th17'den IL-17 salınımında görevli RORγ'nın güçlü ve seçici bir inhibitörüdür. RORγ bir nükleer hormon reseptörüdür ve ligand bağlama bölgesi olduğu için ilaç hedefi olabilecek bir moleküldür. Psöriazis patogenezinde ana rol oynayan Th17 ve Th17'den IL-17 salınımını baskılayacak RORγ inhibitörleri bu hastalıkta umut vaat etmektedir. UA hayvanlarda ve insanlarda, topikal ve oral yolla kullanılmış, iyi tolere edilmiş ve güvenlik aralığı geniş bir ajandır. Ayrıca güçlü hepatoprotektif, anti-tümör, anti-inflamatuar etkileri vardır. Bu nedenle digoksin, azol türevi antifungaller ve birçok difenilpronamid bileşiği gibi diğer RORγ inhibitörlerinden üstünlüğü vardır.
Bu bilgiler doğrultusunda çalışmamızda psöriazis fare modeli oluşturulup, UA model oluşum süreci ve model oluştuktan sonra olmak üzere 2 ayrı kategoride, farklı dozlarda kullanılarak, UA'in psöriaziste tedavi edici etkinliğini araştırmak amaçlanmıştır. 
56 adet, dişi, 16-18 haftalık BALB/c tipi fare kullanılmıştır. Fareler rastgele 10 gruba (her grupta 6 fare, negatif ve pozitif kontrol gruplarında 4 tane olacak şekilde) ayrılmıştır. Negatif kontrol grubunda ki 4 fare hariç 52 fareye psöriazis benzeri model oluşturmak için sırt derileri çalışmadan yaklaşık 24 saat önce traşlanmış ve traşlanan alana %5 imikimod krem 8 gün boyunca, günde 1 defa 20mg/cm2 olacak şekilde uygulanmıştır. 4 gruba imikimod uygulama süresince, 4 gruba imikimod ile psöriazis modeli oluşturulduktan sonra sırasıyla 2mg/kg/hafta intraperitoneal (i.p)  metotreksat, 50mg/kg/gün i.p ursolik asit, 100mg/kg/gün i.p ursolik asit, 150mg/kg/gün i.p ursolik asit verilmiştir. Gruplar histopatolojik ve immünhistokimyasal boyamalarla (TNF-α, IL-17) tedavi etkinliği açısından karşılaştırılmıştır.
	Çalışma sonunda farklı dozlarda sistemik UA kullanımı histopatolojik ve immünhistokimyasal bulgularda referans ilaç kadar iyileşme sağlamıştır. IL-17'nin baskılanmasında, yüksek dozlarda referans ilaçtan daha etkin olmuştur.

Anahtar kelimeler: Psöriazis, ROR γ inhibitörleri, ursolik asit

Abstract:
Psoriasis is a chronic immune-mediated inflammatory skin disease that is affected by genetic and environmental factors, characterized by the activation and hyperproliferation of keratinocytes. Th1 and Th17 cytokines play a major role in the pathogenesis of psoriasis. Increase in proinflammatory cytokines in psoriasis lesions (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-8, IL-12, IL-17, IL-18, IL23) and decrease in anti-inflammatory cytokines (IL-10, IL-4) It is seen. Ursolic acid (UA), a small molecule, is a carboxylic acid found in plants most of the time in the human diet.It is a potent and selective inhibitor of UA RORγ. RORγ Th17 is involved in maturation and IL-17 release from mature Th17. ROR- γ is a nuclear hormone receptor and is a drug targeted molecule since it is a ligand binding site. ROR-γ inhibitors that will suppress the release of IL-17 from Th17 and Th17, which play a major role in the pathogenesis of psoriasis, are promising in this disease. UA is a topically and orally well tolerated agent with a wide range of safety in animals and humans. It also has strong hepatoprotective, anti-tumor, anti-inflammatory effects. Therefore, it has superiority over other ROR-γ inhibitors such as digoxin, azole-derived antifungals and many diphenylpronamide compounds.
In line with this information, it was aimed to investigate the therapeutic efficacy of UA in psoriasis by creating a psoriasis mouse model and using it in 2 different categories, in different doses, after UA model formation process and model formation.
56 female, 16-18 week old BALB / c type mice were used. Mice were randomly divided into 10 groups (6 mice in each group, 4 in the negative and positive control groups). Except for 4 mice in the negative control group, 52 mice were shaved about 24 hours before the study to create a psoriasis-like pattern, and 5% imiquimod cream was applied to the shaved area once a day at 20mg/cm2 for 8 days. During imiquimod administration to 4 groups, after creating a psoriasis model with imiquimod to 4 groups 2mg/kg/week intraperitoneal (i.p) methotrexate, 50mg/kgday i.p ursolic acid, 100mg/kg/day i.p ursolic acid, 150mg/kg/day i.p ursolic acid, respectively. Groups were compared with histopathological and immunohistochemical staining (TNF-α, IL-17) for therapeutic efficacy.
At the end of the study, the use of different doses of systemic UA provided improvement in histopathological and immunohistochemical findings as much as the reference drug. It was more effective than the reference drug in high doses in suppressing IL-17.

Key Words: Psoriasis, ROR γ inhibitors, Ursolic acid