Sıçanlarda oluşturulan deneysel endometriozis modelinde ankaferd (Bloodstopper) ve oksitosinin olası tedavi edici etkilerinin histolojik ve sitokinerjik parametreler ile değerlendirilmesi
Evaluation of potential  therapeutic  effects of ankaferd (Bloodstopper) and oxytocin  in experimental rat model of endometriosis by using histologic and cytokinergic parameters
Yazar: İSMET HORTU
Danışman: DOÇ. DR. MURAT ULUKUŞ
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Ankaferd kanama durdurucu = Ankaferd bloodStopper ; Endometriyoz = Endometriosis ; Histoloji = Histology ; Oksitosin = Oxytocin ; Sitokinler = Cytokines ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Sıçanlarda Oluşturulan Deneysel Endometriozis Modelinde Ankaferd  (Bloodstopper) ve Oksitosinin Olası Tedavi Edici Etkilerinin Histolojik ve Sitokinerjik Parametreler ile Değerlendirilmesi
	Amaç: 
	Bu çalışmada amaç; Ankaferd BloodStopper'ın hemostatik etkileri ve oksitosinin antiinflamatuar etkilerinden yola çıkarak endometrioziste olası regrese edici etkilerini araştırmak, böylelikle düşük maliyetli ve minimal yan etkili tedavi protokollerine destek sağlamaktır.
	Materyal ve Metod: 
	Araştırmada 42 adet aynı tür dişi Sprague Dawley tipi erişkin sıçanlar kullanıldı.  Sıçanlar 6 şar adetten oluşan 7 gruba ayrıldı. Deneysel endometriozis modeli oluşturulduktan sonra hayvanlar kontrol grubu, oksitosin grubu ve ankaferd grubu olarak 3 gruba ayrıldı. Sonrasında sıçanlara 4 hafta süreyle haftada 2 kez kontrol grubu sıçanlara izotonik NaCl (1ml/kg/gün intramüsküler), diğer gruplara 20 Ü/kg oksitosin, 40 Ü/kg oksitosin, 80 Ü/kg oksitosin, 0.1 ml/kg Ankaferd ampul , 0.4 ml/kg Ankaferd ampul, 1.5 ml/kg Ankaferd ampul uygulandı. Daha sonra tekrar batın eksplore edilip endometrial implantların boyutu ölçüldü (histopatoloji için örnekler alındı),  batın yıkama sıvıları (1ml saline solüsyonla) (sitokin çalışılmak üzere) alındı. Batın yıkama sıvılarında ve plazmada VEGF, MCP 1, TNF-α' nın düzeylerine bakıldı.
	Bulgular:
	Kontrol (plasebo) grubunda ortalama implant hacimleri tedavi (izotonik NaCl) öncesi 28.6 + 9.1 mm3 iken tedavi sonrasında 43.2 + 10.4 mm3 olarak ölçüldü.
	Oksitosin alan grupta ise tedavi öncesi implant hacimleri 29.8 + 7.2 mm3,  tedavi sonrası implant hacimleri 8.1 + 3.3 mm3  olup anlamlı azalma olarak değerlendirildi.
	Ankaferd verilen grupta, tedavi öncesi implant hacimleri 30.7 + 6.9 mm3 , tedavi sonrası 24.6 + 5.8 mm3  olarak ölçülüp istatiksel olarak anlamlı bulunmadı.
 
	Epitel skorları açısından ise;
	Kontrol grubunda endometriotik odakta endometrium epitel ve bez yapıları orta derecede korunmuş, lökosit infiltrasyonları izlenmekte  ve epitel skoru 2.7 + 0.3 olup oksitosin verilen grupta epitel bütünlüğü bozulmuş, seyrekleşmiş epitel skoru 1.1  ± 0.2 anlamlı azalma saptandı. Ankaferd grubunda ise epitel bütünlüğü oksitosin grubuna göre daha iyi korunmuş, daha kompakt olarak izlendi, epitel skoru ise 1.8 ± 0.5  anlamlı azalma saptandı.
	Sitokinerjik ölçümlerde VEGF için;
	Kontrol grubunda plazma ve  periton yıkama sıvısında sırasıyla VEGF düzeyleri 175.2 ± 16.5 pg/ml, 49.6 ± 8.2 pg/ml olup oksitosin grubunda 56.5 ± 6.6 pg/ml , 22.4  ± 5.3 pg/ml olup anlamlı azalma tespit edildi. Ankaferd grubunda ise  plazma ve periton yıkama sıvılarında sırasıyla VEGF düzeyleri 168.4  ± 21.5 pg/ml, 45.2 ± 9.3 pg/ml  saptanmış olup anlamlı değişiklik yok olarak değerlendirildi.
	TNF – α için;
	Kontrol grubunda plazma ve periton yıkama sıvısında sırasıyla TNF-α  düzeyleri 49.6  ± 2.3 pg/ml, 26.5 ± 4.8 pg/ml olup oksitosin alan grupta; 38.1 ± 3.5 pg/ml , 14.3 ± 1.6 pg/ml  anlamlı azalma saptandı. Ankaferd grubunda ise plazma ve periton sıvısı seviyeleri sırasıyla 45.4 ± 1.8 pg/ml, 18.9 ± 6.1 pg/ml  saptanıp anlamlı değişiklik yok olarak yorumlandı.
	MCP 1 için;
	Kontrol grubunda plazma ve periton yıkama sıvısında sırasıyla MCP 1 düzeyleri 105.8 ± 7.4 ng/ml, 17.2 ± 3.1 ng/ml iken bu değerler oksitosin grubunda 45.2 ± 7.5 ng/ml ve 8.6 ± 1.2 ng/ml , anlamlı azalma olarak tespit edildi. Ankaferd grubu plazma ve periton sıvısı MCP 1 düzeyleri ise 97.1 ± 7.5 ng/ml , 16.3 ± 4.4 ng/ml  olarak ölçüldü ve anlamlı değişiklik saptanmadı.
 
	Sonuç: 
	Oksitosin'in deneysel olarak oluşturulan endometriozis modellerinde endometriotik implantları küçülttüğü ve endometriozis etyopatogenezinde saptanan bir takım inflamatuar sitokin seviyelerini azalttığı saptandı. Dolayısıyla oksitosinin, endometriozis başta olmak üzere bazı otoimmün, immünreaktif hastalıkların tedavisinde etkin olarak kullanılabileceği düşünülmektedir. Ankaferd (Bloodstopper)' in ise çalışmada endometriozisi baskılamada elimizdeki verilere göre  etkisiz olduğu kanısına varıldı.

Abstract:
Evaluation of Potential  Therapeutic  Effects of Ankaferd(Bloodstopper) and Oxytocin  in Experimental Rat Model of Endometriosis by using Histologic and Cytokinergic Parameters
Purpose:
Our aim in this study was to research the potential help of hemostatic effects of Ankaferd BloodStopper and anti-inflammatory effects of Oxytocine on regression of endometriosis and in that way to contribute to the low-budget treatment protocols with minimal side effects in endometriosis. 
Materials and Method:
We used 42 adult female rats of the same Sprague Dawley type and divided them into 7 groups with 6 rats in each group.  After we established the experimental endometriosis model, rats were divided into one control group, three oxytocin groups and three ankaferd groups . Then the rats in the control group and the other 6 groups were given isotonic NaCl (1ml/kg/day intramuscular) ,20 U/kg oxytocin, 40 U/kg oxytocin, 80 U/kg oxytocin, 0.1 ml/kg Ankaferd, 0.4ml/kg Ankaferd and 1.5 ml/kg Ankaferd respectively.  After that we explored the abdomens of rats and measured the sizes of endometrial implants, took samples for histopathologic examination and took abdominal wash fluids (1ml saline solution) to study cytokines. In the abdominal wash fluid and plasma VEGF, MCP 1, TNF-a levels were measured. 
Results:
Average implant volumes were measured in the control group as 28.6+- 9.1 mm3 and 43.2 + 10.4 mm3 before and after the treatment(isotonic NaCl) respectively.
In the oxytocin given group, while before the treatment it was measured 29.8 + 7.2 mm3, after the treatment it became 8.1 + 3.3 mm3 which means an important reduction.
And in the ankaferd given group, the implant sizes were measured as 30.7 + 6.9 mm3 and 24.6+5.8 mm3  before and after the treatment respectively. Even there's a small reduction in the size, it wasn't found statistically important. 
Epithelial scores:
It was found that the endometrial epithelial and glandular structures in the endometriotic focus in the control group were preserved with some leukocytic infiltrations with a epithelial score of 2.7 + 0.3, while in the oxytocin given group, the epithelial integrity was damaged with a 1.1 ± 0.2 epithelial score which was a statistically meaningful reduction. And in the ankaferd group, the epithelial integrity was preserved better than the oxytocin group and it was compact. Its epithelial score was 1.8 ± 0.5 which was also a meaningful reduction. 
Cytokinergic measurements for VEGF:
In the control group VEGF levels in the plasma and periton wash fluid were  175.2 ± 16.5 pg/ml and 49.6 ± 8.2 pg/ml respectively and in the oxytocin group it was 56.5 ± 6.6 pg/ml , 22.4 ± 5.3 pg/ml in in the plasma and periton wash fluid respectively. In both groups the reductions were meaningful. But, in the Ankaferd group VEGF levels in the plasma and periton wash fluid were 168.4 ± 21.5 pg/ml and 45.2 ± 9.3 pg/ml  respectively and it wasn't  a meaningful reduction. 
For TNF-a:
In the control group TNF-a levels in the plasma and periton wash fluid were  49.6 ±2.3 pg/ml, 26.5 ± 4.8 pg/ml respectively and in the oxyctocin given group it was  38.1 ± 3.5 pg/ml , 14.3 ± 1.6 pg/ml respectively which were both detected as meaningful reductions.  However, in the Ankaferd group TNF-a levels in the plasma and periton wash fluid were 45.4 ± 1.8 pg/ml, 18.9 ± 6.1 pg/ml respectively and it wasn't  a meaningful reduction.
For MCP-1:
In the control group MCP-1levels in the plasma and periton wash fluid were  105.8 ± 7.4 ng/ml, 17.2 ± 3.1 ng/ml respectively and in the oxyctocin given group it was  45.2 ± 7.5 ng/ml and 8.6 ± 1.2 ng/ml respectively which were detected again as meaningful reductions. Yet, in the Ankaferd group MCP-1 levels in the plasma and periton wash fluid were 97.1 ± 7.5 ng/ml and 16.3 ± 4.4 ng/ml respectively and it wasn't  a meaningful reduction again. 
Conclusion:
We found that the oxytocin reduced both the sizes of endometrial implants and also the levels of some inflammatory cytokines found in the endometriosis patahogenesis. Thus, oxytocin may be a useful agent for the treatment of endometriosis and  some autoimmune and immunereactive diseases. However, according to our results Ankaferd (Bloodstopper) is ineffective in the regression of endometriosis.