Viral hemorajik septisemi virusunun (vhsv) fenotipik karakterinin virulans üzerine etkisinin araştırılması
Research of the viral hemorrhagic septisemia virus      (vhsv) phenotypic characteristics effect on virulence
Yazar: YASEMİN ÇİÇEK
Danışman: PROF. DR. HARUN ALBAYRAK
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Gökkuşağı alabalığı = Rainbow trout ; Hemorajiler = Hemorrhage ; Piscine novirhabdovirus = Piscine novirhabdovirus ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sepsis = Sepsis

Özet:
Amaç: Viral Hemorajik Septisemi Virusu (Piscine novirhabdovirus), deniz ve tatlı su balıklarında enfeksiyonlara neden olan virustur. Bu çalışmada; Türkiye'de tatlı suda (Gökkuşağı alabalığı) ve denizde (Kalkan balığı) yaşayan balıklardan izole edilen Bolu\06 ile TR-WS13G adlı iki VHSV izolatının farklı fenotiplerinin gökkuşağı alabalıklarındaki (Oncorhynchus mykiss)  klinik bulgular, mortalite oranı ve patojenitesi üzerine etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Materyal ve Metot: Bu çalışmada; Bolu/06 ve TR-WS13G VHSV izolatları plak saflaştırma yöntemiyle saflaştırıldı. Test sonunda her iki izolata ait dar ve geniş plak oluşturan 4 farklı saflaştırılmış izolat 60-100 g ağırlığındaki gökkuşağı alabalıklarına intraperitonal olarak verilerek deneysel enfeksiyon oluşturuldu. Deneysel enfeksiyon sırasında ölen veya deneme sonucunda öldürülen balıklarda realtime PCR metodu ile VHSV viral nükleik asit varlığı ve miktarı araştırıldı.
Bulgular:Deneysel enfeksiyon sonucunda mortalite oranı; kontrol grubunda %3,33, Bolu/06 dar plak izolat grubunda % 43,3, Bolu/06 geniş plak izolat grubunda %20, TR-WS13G dar plak izolat grubunda %33,3, TR-WS13G geniş plak izolat grubunda %14,8 olarak tespit edildi. rRT PCR testi sonucunda ölen\öldürülen balık örneklerinde 7,33x104-1,67x102/µl arasında viral kopya sayısı tespit edildi. Balık organ örneklerinde en yoğun CT değeri 28,35 olarak kaydedildi. Hastalığın açık klinik belirtileri enfekte edilme sonucu ölen balıkların tamamında gözlemlendi.
Sonuç: Fenotipik karakter olarak geniş ve dar plak oluşturan hem tatlı su izolatı Bolu/06 hem de deniz izolatı TR-WS13G'nin dar plak çapına sahip izolatlarının geniş plak oluşturan izolatlarından daha yüksek mortaliteye neden olduğu, gökkuşağı alabalıklarından izole edilen tatlı su izolatı Bolu/06'nın kalkan balığından izole edilen deniz izolatı TR-WS13G'den daha patojen olduğu ortaya konulmuştur. Bu sonuçla; fenotipik karakterin virulans üzerinde önemli düzeyde etkili olduğu gösterilmiştir. Anahtar Kelimeler: Plak Test; rRT PCR; Viral Hemorajik Septisemi Virusu;  Gökkuşağı alabalığı

Abstract:
Aim: Viral Hemorrhagic Septicemia Virus (Piscine novirhabdovirus) is a virus that causes infection in various marine and freshwater fish. It was aimed to determine the effect of different phenotypes of two VHSV isolates, Bolu\06 and TR-WS13G, isolated from fish living in freshwater (rainbow trout) and sea (turbot) in Turkey, on clinical findings, mortality rate and pathogenicity in Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).
Material and Method: In this study, Bolu/06 and TR-WS13G VHSV isolates were purified by plaque purification method. At the end of the test, 4 different purified isolates, which form wide-narrow plaques of both isolates, were given intraperitoneally to rainbow trout weighing 60-100 g and experimental infection was performed. VHSV viral nucleic acid presence and quantity were investigated by realtime PCR method in dead or killed fish during experimental infection.
Results: Mortality rate due to experimental infection were detected as; %3.33 for control group; %43.3 for Bolu/06 narrow isolates group, %20 for Bolu/06 wide isolates group, %33.3 for TR-SW-13 narrow isolates group;  and %14.8 for TR-SW-13 wide isolates group.  The number of viral copies in the fish samples (dead/killed) were found to be 7.33x104-1.67x102/μl by rRT-PCR. The most intensive CT value in the fish organ samples was recorded as 28.35. The clinical symptoms of the disease were observed in all of the fish that died as a result of infection.
Conclusion: The phenotypic character of the wide narrow- plaque forming isolates freshwater isolation Bolu / 06 and marine isolation TR-WS13G, have a higher mortality rate than wide plaque-forming isolates of narrow-plate isolates. Freshwater isolation from rainbow trout isolation Bolu/06 more pathogenic than turbot isolated from marine isolate TR-WS13G. This result showed phenotypic character has been shown to be significantly effective on virulence.
Keywords: Plaque Test; rRT PCR; Viral Hemorrhagic Septicemia Virus; Rainbow Trout