Keratitis ve keratokonjunktivitis olgularında herpes simplex virüsünün hücre kültürü izolasyonu ve direkt immünoperaksidaz tekniği ile gösterilmesi
Detection of herpes simplex virus by cell culture and direct immunoperoxidase in cases with keratitis and keratoconjunctivitis
Yazar: DERYA BİRİKEN
Danışman: DOÇ.DR. SULHİYE YILDIZ
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2001
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
57 ÖZET Keratitis ve Keratokonjunktivitis Olgularında Herpes Simplex Virüsünün Hücre Kültürü izolasyonu ve Direkt İmmünoperoksidaz Tekniği ile Gösterilmesi Bu çalışmada çeşitli göz kliniklerinden HSV keratitis veya keratokonjunktivitis ön tanısı ile laboratuvara gönderilen örneklerde, hücre kültürü iriokülasyonu yöntemi ile HSV izolasyonunu takiben immünoperoksidaz (İP) yöntemi ile identifîkasyonu ve tiplendirilmesi, ayrıca hazırlanan direkt frotilerde direkt immünoperoksidaz (DİP) yön temi ile HSV antijen tespiti ve tiplendirilmesi araştırılmıştır. Toplam 33 olguya ait kornea epitel kazıntısı ile ülser, kornea epiteli veya alt konjunktivadan alınan swablar HSV-1 antijeni yönünden enfekte Vero hücre kültüründe incelenmiştir. Buna göre klinik olarak HSV keratit veya keratokonjunktivit ön tanısı ile örneklenen 33 olgunun 4 (%12.1) tanesinde virus izolasyonu (VI) gerçeUeştMlmiştir. Yapılan DIPT sonucunda hücre kültürlerinde epe (sitopatik etki) sergileyen 4 adet olgu ya ait materyallerden sadece 2 tanesinde HSV-1 tanısı yapılırken, epe pozitif diğer 2 örnekte spesifik boyanma tespit edilememiştir. Yayma frotilerde ise DİP yöntemi ile boyanması sonucunda bu materyallerin %6.6'sında antijen saptanmıştır. Keratitis veya keratokonjunktivitis vakalarında %15.1 nispetinde viral etiyoloji tespit edilmiş olup HSV olarak identifiye edilen olgu sayısı 3 (%9.1) olarak bulunmuştur. Bu sonuç ile hasta grubu içinde yapılan virus tespitlerinin %60'ını HSV oluşturmuştur. Ay rıca izolasyon materyali olarak en uygun örneğin lezyonlardan alman kazıntı olduğu saptanmıştır. Ancak virus izolasyon şansım yükseltmek için süratle inokülasyonu zorun ludur. Herpes simplex virüsünün oluşturduğu göz enfeksiyonları, stromal keratiti izleyen korneal yapısal hasar, hastalığın kronik seyri, tedaviye karşı görülen direnç ve bunların sonucu oluşan görme kaybı nedeniyle göz kliniklerinde önemli bir problem olarak ortaya çıkmaktadır. Etkin antiviral tedavinin bulunması virüsün tanısına değer kazandırmakta dır. Ayrıca laboratuvar tanısı konmadan başlanılan antiherpetik tedaviler, başka bir viral etiyoloji söz konusu olan olgularda gereksiz ve masraflı bir uygulama olarak karşımıza çıkmaktadır. Etken sürme preparatlarda DİP ile hızla tespit edilebilir ancak kazınan hüc re miktarının yeterli olması gerekir. Sonuç olarak HSV'nin hızlı ve doğru tespitinde, duyarlı hücre sistemlerine materyalin inokülasyonu ve takiben DIPT ile doğrulamasının daha pratik, güvenilir ve tercih edilebilir olduğu kanısına varılmıştır. Anahtar Sözcükler; Direkt İmmünoperoksidaz Tekniği, Herpes Simplex Virus 1, Hücre Kültürü, Keratitis, Keratokonjunktivitis.

Abstract:
58 SUMMARY Detection of Herpes Simplex Virus by Cell Culture and Direct Immunoperoxidase in cases with Keratitis and Keratoconjunctivitis In this study, specimens obtained from patients suspected of having HSV keratitis or keratoconjunctivitis were examined for identification and typing of HSV by immunoperoxidase (IP) following isolation of virus by inoculation of cell cultures and for detection and typing of HSV antigen by direct immunoperoxidase on direct smears. Specimens obtained from overall 33 patients by scraping of ulcerated corneal epithelium or swabbing from corneal epithelium or lower conjunctiva were examined for HSV-1 antigen in infected Vero cell cultures. Virus isolation was performed in 4 of 33 cases suspected of having HSV keratitis or keratoconjunctivitis (12.1%). DIPT showed that only 2 of 4 cases with cpe positivity on cell culture had HSV infection, but specific staining was not observed in the specimens of the remaining two cases. Following direct IP staining of smears, HSV antigen was detected in 6.6% of these specimens. 15.1% of cases with keratitis or keratoconjunctivitis were found to have a virus infection whereas 9.1% (3 cases) of cases had infection with HSV. As a result, HSV accounted for 60% of virus infections. The most appropriate material for virus isolation was found to be scraping of lesions. In order to increase frequency of virus isolation, specimens should be inoculated as quickly as possible. Ocular infections with HSV are of great importance in opthalmology clinics in that they are chronic, resistant to treatment and cause blindness due to damage to corneal structure. Detection of virus has a great value for effective antiviral therapy. The causative agent can be detected rapidly by DIPT on smears, but the number of epithelial cells obtained by scraping must be adequate. In addition, antiherpetic treatment initiated before detection of virus are ineffective and costly. In conclusion, following inoculation of specimen into sensitive cell cultures, DIPT is a practical and reliable method for rapid and accurate detection of HSV. Key Words: Cell Culture, Direct Immunoperoxidase Tecnique, Herpes Simplex Virus 1 (HSV-1), Keratitis, Keratoconjunctivitis.