İzolikuiritigenin'in, antioksidan kapasitesinin belirlenmesi ve insan karbonik anhidraz izoenzimleri I ve II, glutatyon S-transferaz, asetilkolinesteraz ve bütirilkolinesteraz enzimleri üzerine inhibisyon etkisinin incelenmesi
Determinaton of antioxidant capacity of isoliquiritigenin and investigation of its inhibition effects on human carbonic anhydrase izoenzymes (hCAI and II), glutathione S-transferase, acetylcholineesterase and butyrylcholinesterase enzymes
Yazar: SONGÜL ÇETİNKAYA
Danışman: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalışmada meyan kökü (Glycyrrhiza glabra L.) bitkisinde bulunan ve fenolik bir madde olan izolikuiritigenin'in, asetilkolinesteraz (AChE), bütirilkolinesteraz (BChE) enzimleri ile insan eritrosit karbonik anhidraz I ve II izoenzimleri ve glutatyon S-transferaz enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Öncelikle hCA I ve II izoenzimleri Sefarose-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği ile sırasıyla 97,4; 533,9 kat ve %35,5; %14,0 verimle saflaştırıldı. GST enzimi Glutatyon Agaroz afinite kromatografisi tekniği ile 138,84 kat ve %26,81 verimle saflaştırıldı. Enzimlerin saflığını belirlemek için ayrı ayrı sodyumdodesil sülfat jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve her bir enzim için tek bant gözlendi. Sonrasında izolikuiritigenin'in hCA I ve II, GST, AChE ve BChE üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. İzolikuiritigenin her bir enzim için %50 inhibisyona sebep olan konsantrasyonu (IC50) sırasıyla 0,390 nM; 0,359 nM; 76,4 nM; 0,178 nM; ve 0,176 nM olarak hesaplandı. İnhibisyon sabiti (Ki) 0,668 nM; 0,291 nM; 38,0 nM; 0,112 nM; 0,060 nM olarak hesaplandı. Çalışmanın son kısmında izolikuiritigenin'in antioksidan ve radikal giderme kapasitesini değerlendirmek için, ferröz iyonları (Fe2+) indirgeme aktivitesi, kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme aktivitesi, FRAP metoduna göre ferrik iyonları (Fe3+) indirgeme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikalini (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikalini (ABTS∙+) giderme, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikalini (DMPD∙+) giderme ve süperoksit anyon radikalini (O2∙-) giderme aktiviteleri, bipiridil ve ferrozin bileşikleri ile metal şelatlama aktivitesive total antioksidan aktivitesi çalışıldı. Mukayese için bütillenmiş hidroksianisol (BHA), bütillenmiş hidroksitoluen (BHT), α-tokoferol ve troloks standart olarak kullanıldı.

Abstract:
In this study,it was studied that thein vitro inhibitory effect of isoliquiritigenin,found in licorice (Glycyrrhiza glabra L.) as a main phenolic compound, against acetylcholinesterase (AChE), butyrylcholinesterase, erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes (hCA I and II) and glutathione S-transferaseenzymes. Firstly, hCA I and II isoenzyms were purified by Sepharose-4B-L-Tirozin affinity chromatography column chromatoghraphywith97.4 and 533.9 purification folds and %35,5 and %14.0 yields,respectively.Also, glutathione S-transferase enzyme waspurified byglutathione agarose affinity chromatography technique with 138.84 purification folds and a yield of 26.81%. For purities of enzymes, sodyumdodesil gel electrophoresis (SDS-PAGE) was done and a single band observed for each enzyme. Then, for determiningIC50and Ki values were calculated hCA I, hCA II, GST, AChE and BChE enzymes. IC50 values were found as 0.390, 0.359, 76.4, 0.178 and 0.176 nM, respectively. At the same manner, Ki values were determined as 0.668, 0.291, 38.0, 0.112 and 0.060 nM, respectively. In the last part of this study, for evaluating antioxidant and radical scavenging capacity onisoliquiritigenin, ferrous nions (Fe2+) reducing capacity, cupric ions (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, FRAP reducing capacity, DPPH free radical scavenging activity, ABTS radical scavenging activity, DMPD radical scavenging activity, superoxide anion radical  (O2•-)scavenging activity,metal chelating reagents using bybipyridyl and ferrozine agents andtotal antioxidantactivity were performed. For comparision, buthylated hydroxyl toluene (BHT), buthylated hydroxyl anisole (BHA), α-tocopherol and trolox were used as the reference antioxidant compounds.