Resveratrolün meme kanseri hücre kültüründeki p53 aracılı apoptoz aktivasyonunun ve sitotoksisitesinin polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), immunsitokimya ve MTT yöntemleriyle araştırılması
The investigastion of resveratrol treatment in breast cancer cell line for p53 mediated apoptotic activation and cytotoxitity via polymerase chain reaction (PCR), immunocytochemistry and MTT methods
Yazar: ADEM KARA
Danışman: PROF. DR. ELVAN ÖZBEK ; DOÇ. DR. NEJDET ŞİMŞEK
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Genler-P53 = Genes-P53 ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Resveratrol = Resveratrol

Özet:
Meme kanseri tüm dünyada en sık görülen kanser tiplerinden birisidir. Fakat meme kanseri tedavi etkinliğinin azalmasında ilaç direncinin önemli bir rol oynadığı bilinmektedir. Bu durumun giderilmesi için yeni ilaçların kanser tedavisindeki etkinliğinin arttırılması hedeflenmektedir. Son yıllarda kemoteropatik ajanlarla beraber resveratrol gibi birçok antioksidan maddenin etkilerinin araştırılmaktadır. Bu çalışmada farklı dozlarda ve sürelerde uygulanacak resveratrolün kanser hücrelerindeki olası apoptotik ve sitotoksik etkilerinin araştırılması amaçlandı. Çalışmada insan meme kanseri MCF-7 hücre hattı kullanıldı. Resveratrolün sitotoksik dozlarını belirlemek için, 10-140 µM konsantrasyon aralığında resveratrol uygulanan hücre hatlarında MTT analizi (hücre canlılık testi) yapıldı. Etkin dozlar belirlendikten sonra resveratrol uygulanmayan 24 ve 48 saatlik inkübasyonda bekletilen 2 kontrol grubu, resveratrolün 20 ve 40 µM konsantrasyonlarda uygulandığı 24 ve 48 saat süreli inkübasyonda bekletilen 4 çalışma grubu olmak üzere 6 deney grubu oluşturuldu. Bütün deney gruplarındaki total antioksidan seviyesi (TAS), total oksidan seviyesi (TOS), apoptotik aktivite (Bax ve p53 immunpozitifliği) ve p53 gen ekspresyonu düzeyleri araştırıldı. Çalışmamızda, MCF-7 hücrelerine uygulanan resveratrolün hücre çoğalmasını engellediği ya da başka deyişle sitotoksik etki yaptığı ve p53 protein sentezini 24 saatlik inkübasyon grubunda düşürdüğü, 48 saatlik inkübasyonun yüksek doz grubunda ise p53 gen ekspresyonunu arttırdığı belirlendi. İmmunfloresan boyamada, Bax immunpozitifliğinde artış, immunperoksidaz uygulaması sunucunda ise p53 immunpozitifliğinde artış saptandı. Ayrıca resveratrolün uygulaması ile total oksidan miktarı değişmezken ve total antioksidan düzeyleri değişmiştir. Çalışma sonuçları, resveratrol uygulaması ile oluşan p53 genindeki artışın apoptotik aktiviteyi arttıracağını göstermektedir. Resveratrolün bu etkileri göz önüne alındığında kanser tedavisinde kullanılabilecek bir ajan olabileceği sonucuna varılabilir.

Abstract:
Breast cancer is the most common type of cancer in the world. However, acquired resistance remains a major challenge were known. Recently there are many antioxidants such as resveratrol were studied in the treatment of cancer therapy. In the present study, resveratrol treated MCF-7 cells at various dose and incubation periods of time were investigated for expression of p53 mediated apoptotic activation.For this reason, in this study, human breast cancer MCF-7 was used. The cytotoxic doses of resveratrol, interval of 10-140 µM concentration resveratrol administrated cell line were analyzed via MTT analysis (cell viability assay). In all groups, there examined the resveratrol cytotoxicity, total antioxidant status (TAS), total oxidant capacity (TOC), apoptotic activity (Bax and p53 immuno-positivity) and expression levels of p53 gene. In the present study, MCF-7 cell proliferation was inhibited by the treatment or cytotoxic effect of resveratrol and decreased the p53 protein synthesis in 24 hours group, increased the p53 gene expression in 48 hours incubation period. Increased Bax immune-positivity in the immunofluorescent and increased p53 immune-positivity was determined in immunoperoxidase staining. Furthermore, breast cancer cells were affected by the total antioxidant depending on treatment of resveratrol, but oxidant status was not changed. It can be concluded from the results that increase in the expression levels of p53 genes may contribute to apoptotic activation by resveratrol treatment. Above a certain effects of resveratrol, new therapatic treatment strategies may contribute to develop higher efficiently treatment of breast cencer.