Mannheimia haemolytica'nın sığır epitel hücreleri üzerindeki apoptotik etkisi
Apoptotic effect of Mannheimia haemolytica on bovine epithelial cells
Yazar: EBRU YAVRUCU
Danışman: PROF. DR. K. SERDAR DİKER
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2008
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada, Mannheimia haemolytica'nın sığır epitel hücreleri üzerindeki apoptotik etkisinin belirlenmesi ve sığır mannheimiozisinin patogenezinde epitel hücre apoptozisinin bir rolü olup olmadığının araştırılması amaçlandı. Bunun için apoptotik DNA fargmentasyonunun belirlenmesi amacıyla TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase nick end labeling) testi, DNA agaroz jel elektroforezi ve Acridine orange-Ethidium Bromide boyama yöntemleri kullanıldıÇalışmada, sığır nazal turbinata epitel hücreleri ve alveolar makrofajlar canlı M. haemolytica kültürü, M. haemolytica'nın lökotoksini (LKT) ve M. haemolytica'nın kaynatılmış tüm hücre sulandırmaları ile 0, 3, 6, ve 18 saat olmak üzere zaman ve doz bağımlı şekilde muamele edilerek incelendi. TUNEL testi tüm zaman ve sulandırmalarda, DNA agaroz jel elektroforezi ve Acridine orange-Ethidium bromide boyama ise 18. saatte tüm sulandırmalarda değerlendirildiDeğerlendirmeye göre TUNEL testinde canlı M. haemolytica kültürü LKT ve kaynatılmış tüm hücre tüm sulandırılmalarda ve tüm zamanlarda turbinata hücrelerinde apoptozisi uyarmadı. DNA agaroz jel elektroforezinde turbinata hücrelerinde DNA merdiveni gözlenmedi ve Acridine orange-Ethidium bromide boyamada da 18. saatte apoptotik hücrelere rastlanmadı. Makrofajlarda ise TUNEL testinde 0. saat dışında tüm zaman ve tüm sulandırmalarda apoptotik değişimlere rastlandı. Bu bulgular, DNA agaroz jel elektroforezi ve Acridine orange-Ethidium bromide boyama ile desteklendiSunulan çalışmada, canlı M. haemolytica kültürü, LKT ve kaynatılmış tüm hücrenin sığır epitel hücrelerinde apoptozisi indükleme potansiyeline sahip olmadığı fakat makrofajlarda apoptozisi indüklediği sonucuna varıldı.

Abstract:
In this study, it is aimed that whether Mannheimia haemolytica has an apoptotic effect or not on bovine epithelial cells and whether epithelial cells apoptosis have a role or not in patogenesis of bovine mannheimiosis. To detect bacteria-induced apoptosis, TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling), DNA gel electrophoresis and acridine orange-ethidium bromide staining methods were usedCultured bovine nasal turbinate cells and alveolar macrophages were treated with serial dilutions of live M. haemolytica, M. haemolytica leukotoxin (LKT) and boiled M. haemolytica in a time-dependent manner between zero and 18th hours. TUNEL method was applied to all dilutions at all time intervals, DNA gel electrophoresis and acridine orange-ethidium bromide staining to all dilutions at 18th hourIn TUNEL method, live M. haemolytica, LKT and boiled whole cells of M. haemolytica were not found to induce apoptosis in bovine turbinate cells. While TUNEL method revealed the apoptosis in conditions indicated above, apoptosis could not be detected with DNA gel electrophoresis and acridine orange-ethidium bromide staining method. Macrophages treated with live M.haemolytica had apoptotic changes at all time intervals except of zero time. This findings were supported by DNA gel electrophoresis and acridine orange-ethidium bromide staining methodIt was suggested that live cells of M. haemolytica, LKT and boiled whole cells of M. haemolytica have not the potential to induce varying degrees of apoptosis in bovine epithelial cells, but they have such an effect on macrophages.