Dietilnitrozamin ile hepatosellüler karsinom oluşturulmuş ratlarda resveratrolün olası koruyucu etkilerinin araştırılması
Hepatocellular carcinoma with dietilnitroza formed in rats investigation of the possible protective effect of resveratrol
Yazar: SEDA ÇETİNKAYA
Danışman: PROF. DR. AYDAN ÖZGÖRGÜLÜ
Necmettin Erbakan Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Kontrolsüz hücre büyümesi ve apopitoz direnci, kanser hücrelerini
karakterize eder. Bu iki ana özellik kanser hücrelerinde, hücre proliferasyonunu ve
apopitozu doğrudan kontrol eden yolları düzenleyen anahtar sinyal moleküllerinde
mutasyonlar yoluyla başlatılır. Resveratrol (RSV), doğal olarak oluşan bir bitki
polifenoldür, farklı hastalıklarla mücadele eden biyolojik etkilere sahip olduğu
gösterilmiştir. Kardiyo-protektif, nöro-protektif, immüno-düzenleyici ve anti-kanser
özellikleri olduğu bildirilmiştir. RSV'nin kanser hücre çoğalmasını inhibe ettiği,
hücre döngüsü tutuklanmasını ve apopitozu indüklediği ve bu anti kanser etkilerinin,
bu süreçlerde yer alan sinyal moleküllerini modüle etme kabiliyetine bağlı olduğu
keşfedilmiştir.
Bu çalışmada resveratrolün, dozlara göre dietilnitrosamin (DEN) ile
indüklenen hepatosellüler karsinoma (HCC) karşı sıçanlarda kemopreventif etkisini
araştırmayı amaçladık.
HCC oluşturmak için, haftada 1 kez olmak üzere 7 hafta boyunca 100 mg/kg
dozunda DEN intraperitonal (i.p.) olarak verildi. 7 hafta sonra DEN ile indüklenmiş
HCC karsinomlu şıçanlara 50, 75 ve 100 mg/kg dozlarında resveratrol, yedi gün
boyunca i.p. olarak verildi. 56. günün sonunda karaciğer hasarının biyokimyasal ve
histopatolojik incelenmesi ve HCC insidansına yönelik olarak serum ve karaciğer
örnekleri alındı. Karaciğer dokularında histokimyasal olarak hematosilen-eosin ile
immünohistokimyasal olarak da Bax/Bcl-2 ve p53 ile histopatolojik değerlendirmeler
yapıldı. Ayrıca uygulamaya başlamadan önce ve uygulama boyunca haftada bir
tartılarak sıçanların ağırlıkları kaydedildi. Antioksidan kapasiteyi araştırmak için
süperoksit dismutaz (SOD) ve glutatyon (GSH), malondialdehit (MDA) düzeyleri
ölçüldü. Karaciğer hasarı göstergesi olarak da serumda gama glutamil transpeptidaz
(GGT), alanin aminotransferaz (ALT), aspartat aminotransferaz (AST) ve alkalen
fosfataz (ALP) seviyeleri ölçüldü.
Çalışmamızda SOD, GSH ve MDA DEN+Res 100 grubunda her ne kadar
istatistiksel olarak anlamlı olmasa da kontrol grubuna en yakın bulunan doz
grubudur. Karaciğer enzim aktiviteleri (ALT, AST, ALP, GGT) ise kontrol grubuna
göre DEN+Res 50, DEN+Res 75 ve DEN+Res 100 gruplarında artarken, DEN
grubuna kıyasla azalmıştır.
Sıçanların karaciğer histopatolojisinde de, DEN verilen gruplarda karaciğer
portal alanlarda lenfosit infiltrasyonu, karaciğeri nodüllere ayıran ya da nodüllere
ayırma eğilimi gösteren fibrozis, parankimde displastik değişiklikler, hücresel atipi
ve tümör odakları gözlendi. Bax/Bcl-2 ve p53 işaretlemelerinde resveratrolün 100
mg/kg dozunda apoptotik hücrelerde istatistiksel olarak anlamlı bir artış gözlendi.
Sonuç olarak; 100 mg/kg resveratrol dozunun hepatik hasarın önlenmesi ve
HCC'un tedavisinde potansiyel etkili bir terapötik ajan adayı olarak
kullanılabileceğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Uncontrolled cell growth and apoptosis resistance characterize cancer cells.
These two main features are initiated in cancer cells by mutations in key signaling
molecules that regulate cell proliferation and pathways that directly control
apoptosis.
Resveratrol (RSV) is a naturally occurring plant polyphenol that has been
shown to have biological effects against various diseases. It has been reported that
RSV have cardioprotective, neuroprotective, immuno-regulatory and anticancer
properties. It has been discovered that RSV inhibits cancer cell proliferation, induces
cell cycle arrest and apoptosis, and these anti-cancer effects are dependent on the
ability to modulate signal molecules involved in these processes.
In this study, we aimed to investigate the chemopreventive effect of
resveratrol against to HCC induced by different doses of diethylnitrosamine (DEN)
on rats.
DEN was administered intraperitoneally at a dose of 100 mg/kg once weekly
for 7 weeks to generate liver damage. Seven weeks later, resveratrol at doses of 50,
75 and 100 mg/kg was given intraperitoneally for seven days to rats with DEN-
induced HCC carcinoma. At the end of 56 days, serum and liver specimens were
collected for biochemical and histopathological investigation of liver damage and
HCC incidence. Hemotoxilen-eosine and immunohistochemical (Bax/Bcl-2, p53)
histopathological evaluations were performed in liver tissues. Rats body weight were
also recorded before we started the application and weekly throughout the
application. Superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH) and malondialdehyde
(MDA) levels were measured to investigate antioxidant capacity. Gamma glutamyl
transpeptidase (GGT), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase
(AST) and alkaline phosphatase (ALP) levels were measured in serum as indicators
of liver damage.
In our study, although SOD, GSH and MDA DEN + Res 100 groups were not
statistically significant, they were the closest group to the control group. Liver
enzyme activities (ALT, AST, ALP, GGT) were increased in the DEN + Res 50,
DEN+Res 75 and DEN+Res 100 groups compared to the control group, but
decreased compared to the DEN group.
When liver tissues of rats were evaluated histopathologically, lymphocyte
infiltration, fibrosis which tends to differentiate into liver nodules, fibrosis which
tends to separate nodules, dysplastic changes in parenchyma, cellular atypia and
tumor foci were observed in the liver portal areas in the DEN-treated
groups. According to the results of Bax/Bcl-2 and p53, in apoptotic cells a
statistically significant increase that was observed at resveratrol 100 mg/kg dose.
As a result, we believe that a dose of 100 mg/kg resveratrol can be used as a
potential effective therapeutic agent candidate in the prevention of hepatic damage
and in the treatment of HCC.