Silibinin'in lipopolisakkarit ile uyarılmış raw 264.7 makrofaj hücrelerindeki etkilerinin araştırılması
Investigating of the effects of silibinin on lypopolysaccharide induced raw 264.7 macrophage cells
Yazar: ŞEBNEM KORKMAZ
Danışman: PROF. DR. KADİRHAN SUNGUROĞLU
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antiinflamatuar ajanlar = Anti inflammatory agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Flavonoidler = Flavonoids ; Makrofajlar = Macrophages ; Silibin = Silybin

Özet:
4000'den fazla çeşidi tespit edilen flavonoidlerin bir kısmı antiinflamatuvar etkinlik gösterir. Bu antiinflamatuvar etkinliği açıklayan mekanizmalardan biride flavonoidlerin antioksidan ve radikal temizleme özellikleridir. silibinin Silybum marianum (L.) Gaertner bitkisinin aktif kompenenti silymarinin temel bileşenidir ve bir flavanolignandır. Silibinin güçlü bir antioksidandır ve serbest radikalleri temizleyerek oksidanla uyarılmış lipid peroksidasyonuna engel olur. Monosit ve makrofajlar, başlıca fagositozis olmak üzere inlamatuvar sitokinlerin ve reaktif oksijen türlerinin (ROT) salınımı, edinsel immün sistemin aktivasyonu yoluyla inflamasyonun başlaması ve iyileşmesinde önemli rol oynarlar.LPS ile uyarılmış makrofajlarda silibinin'in hem nitrik oksit (NO) üretimi üzerine etkisi hakkında hem de antioksidan enzim aktivitesi ve bunun yanında diğer oksidan parametreler üzerine etkisi hakkında literatürde oldukça az bilgi bulunmaktadır. Buna ek olarak silibinin'in makrofajlarda var olan antioksidan ve antiinflamatuvar etki mekanizmalarının aydınlatılmasına ihtiyaç duyulduğu düşünülmektedir.Bu çalışmada RAW 264.7 makrofaj hücreleri bakteri hücre duvarının bir bileşeni olan lipopolisakkarit (LPS) tarafından uyarılarak ve uyarılmadan silibininin bu hücrelerde NO ve malondialdehit (MDA) düzeyleri ile birlikte antioksidan enzimlerden süperoksit dismutaz (SOD), katalaz (KAT), glutatyon peroksidaz (GSHPX) ve oksidan bir enzim olan ksantin oksidaz (XO) aktivitesi üzerindeki etkisi araştırılmıştır. MDA ve NO düzeyi ile KAT, GSHPX ve XO aktivitesi spektrofotometrik olarak ölçülmüştür. Hücre canlılığı ise MTT ile ölçülmüştür. İstatistiksel analiz için Kruskal-Wallis, Mann-Whitney U ve nonparametrik çoklu karşılaştırma testi kullanılmıştır. p<0,05 olan değerler istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.Çalışma sonucunda silibinin'in 24. Saatte NO üretimini LPS ile uyarılmış grupta doz bağımlı olarak azaltmıştır (p=0,006). Ayrıca bu grupta 50 ?M ve 100 ?M silibinin XO aktivitesini anlamlı olarak azaltmıştır (sırasıyla p=0,002, p=0,000). Bununla birlikte 50 ?M dozunda silibinin etkisi ile MDA düzeyinde anlamlı olarak azalma gözlenmiştir (p=0,023). LPS ile uyarılmamış grupta makrofaj hücrelerinde KAT aktivitesini doz bağımlı olarak artırmıştır (p<0,05). Fakat LPS ile uyarılmış grupta bu gözlemlenmemiştir. SOD ve GSHPX aktivitesinde ise her iki gruptada anlamlı etki gözlenmemiştir (p>0,005).Sonuç olarak silibininin aktive ve aktif olmayan makrofajlarda farklı yollarla antioksidan ve antiinflamatuvar etkinlik yaptığı ve bu sebeple inflamasyonun var olduğu veya aşırı NO üretiminin ve serbest radikallerin sebep olduğu hastalıklarda potansiyel terapötik etkinliğinin olabileceği düşünülmektedir. Fakat daha ileri hayvan ve insan çalışmalarına ihtiyaç vardır.Anahtar Sözcükler: Antiinflamatuvar, antioksidan, flavonoid, makrofaj, silibinin.

Abstract:
Flavonoids have more than 4000 types and some of them exhibit anti-inflammatory effect. One of the underlying mechanisms explaining this anti-inflammatory effect is the antioxidant and radical scavenging property of flavonoids. Silibinin is a flavonolignan and it is the main component of silymarin, which is the active component of Silybum marianum (L.) Gaertner. Silibinin is a potent antioxidant and prevents induction of lipid peroxidation via scavenging free radicals. Monocytes and macrophages play an active role mainly in phagocytosis, excretion of inflammatory cytokines and reactive oxygen species (ROS), initiation and recruitment of inflammation by activating acquired immune system.We have almost no information in literature about nitric oxide (NO) production, antioxidant enzyme activity and other oxidant parameters on LPS-stimulated macrophages by silibinin. In addition to this, we should identify antioxidant and anti-inflammatory effects of silibinin on macrophages.This study was designed to investigate the anti-inflammatory and antioxidant effects of silibinin. In this study, non-induced and lypopolysaccharide (LPS), a bacteria cell wall component,-induced RAW 264.7 macrophage cells were investigated for the effects of silibinin on NO and malondialdehyde (MDA) levels, activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSHPx) and an oxidant enzyme, xanthine oxidase (XO). MDA level, NO level and CAT, GSHPx and XO activities were measured by spectrophotometric methods. For statistical analysis, Kruskal-Wallis, Mann-Whitney U and nonparametric multiple comparison test were used. p<0,05 was considered a statistically significant value.The results showed that silibinin significantly inhibited NO production in the LPS-induced group after 24 hours (p=0,006). Besides, 50 ?M and 100 ?M of silibinin reduced XO activity significantly in this group (p=0,002 and p=0,000 respectively). In addition, significant reduction in MDA levels by 50 ?M dose of silibinin was observed (p=0,023). Silibinin also induced CAT activity in the LPS non-induced macrophage group in a dose dependent manner (p<0,05). But this effect was not seen in LPS-induced group. No significant effect was observed in SOD and GSHPX activities in both groups (p>0,05).To sum up, silibinin is thought to have different antioxidant and anti-imflammatory effects in active and inactive macrophages. It can have potential therapeutic value in inflammatory diseases and disorders caused by excessive NO and free radical production. But further animal and clinical human studies are needed.Key Words: Anti-inflammatory, antioxidant, flavonoid, macrophage, silibinin.