Buğday glutenin proteinlerinin izoelektrik odaklama (IEF) metoduyla karşılaştırılması
The comparison with isoelectric focusing (IEF) of wheat glutenin proteins
Yazar: EBRU BEYOĞLU
Danışman: YRD. DOÇ. DR. AYTEN SAĞIROĞLU
Trakya Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1999
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Buğday = Wheat ; Glutenler = Glutens ; Proteinler = Proteins ; İzoelektrik odaklama = Isoelectric focusing

Özet:
Bu çalışmada, İzoelektrik Odaklama (IEF) tekniği kullanılarak buğdaylarda bulunan gluteninproteinlerini izoelektrik noktasına (pl) göre ayırma amaçlandı. Trakya Bölgesi'nde ekimi yapılan beş çeşit ekmeklik buğday (Tr. Vulgare); AtiUa-12, Bezostaya-J, Kale A-J, Pehlivan ve Prostor unlan örnek materyal olarak kullanıldı. İzoelektrik noktaları bilinen standart proteinler olarak Sığır Serum Albumini (BSA), P-Laktoglobulin, Lipaz ve Tripsinojen kullanıldı. Buğday unlarının 10 hacim n-bütanol ile yağı uzaklaştırıldı. Gluten proteinleri, unların bidestile su ile yıkanması sonucu elastik ve yapışkan hamur formunda elde edildi. % 50 1-Propanol ve 6 M üre ile bu hamurdan ekstrakte edilen glütenin proteinleri 2-Merkaptoetanol ile indirgendi. 6 M üre içeren ekstraktlar Sephadex G-200 destek maddesi kullanılarak 1x30 cm ebatındaki kolona uygulandı ve glütenin proteinleri 3 M üre içeren 10 mM Tris.HCl tamponu (pH 8.0) ile elüe edildi. Saflandırılan glütenin proteinleri dializ tüplerinde silikajel yardımıyla konsantre edildi. Örneklerin glütenin proteini miktarları Lowry metoduna göre bulundu. pH aralığı 3-10 olan amfolit kullanılarak poliakrilamid jeller hazırlandı. Örnekler uygulanmadan önce 15 dak. 200 Volt'da ön yürütme yapıldı. Bütün örnekler ve standart proteinler jele uygulanarak IEF SE-600 Dikey Dilim Jel Elektroforez Ünitesi'nde 400 Volt'da gerçekleştirildi. IEF'den sonra jeller Coomassie Brillant Blue R-250 boyası ile boyandı ve protein bandları boya çıkarma çözeltisi ile görünür hale getirildi. Bilgisayar bağlantılı scanning dansitometre kullanılarak protein bandlarının band şiddetleri (pikler) elde edildi. Dansitometre programı ile her bir protein bandının % alan, Rf ve alan değerleri bulundu. Örnek proteinlerin pl değerleri standart proteinlerin Rf değerleri ile pl değerleri arasında çizilen standart protein grafiği yardımıyla hesaplandı.

Abstract:
The purpose of this study was to the determine the glütenin proteins in different wheat species by using the technique called isoelectric focusing. The flour of five bread wheat (Tr. Vulgare) species which are; Atilla- 12, Bezostaya-1, Kate A-l, Pehlivan and Prostor which grown in Thrace region are used as the sample material. Bovine serum albumin (BSA), pMactoglobulin, lipase and trypsinogen were used as standarts, whose Sigma Chem Co. are IEF standarts. Wheat flour was defatted by 10 volume of n-bütanol. Gluten proteins were isolated as the elastic and cohesive dough mass from the wheat flours by washing the bidestilled water. Glütenin proteins extracted from this dough with 50 % v/v 1-propanol and 6 M ürea were reduced with 2-mercaptoethanol (2-ME). The extracts included 6 M ürea were loaded on to a Sephadex G-200 column (1x30 cm) and glütenin proteins were eluted with 10 mM Tris.HCl, pH 8.0, containing 3 M ürea buffer.The purified glütenin proteins were concentrated in the dialysis tubes through silicagel. Protein concentration in this sample was determined by the method of Lowry with bovine serum albumin as standart. Polyacrylamide gels included ampholites, pH 3-10, were prepared. Before the samples were applied on prerun were carried out for 15 min at 200 Volt. All samples and standart proteins on to gels and isoelectric focusing was carried out in SE-600 Vertical Slab Gel Electrophroses at 400 Volt. After IEF, gels were stained with the Coomassie Brillant Blue R-250 dye and protein bands were archieve to the visible state by the destaining solution. The band intensities (peaks) were obtained by using scanning densitometer connected with a computer. For each of protein bands % area, Rf and area values were found with densitometer programme. According to Rf and pi values of standarts a standart graphic were drawn and pi values of the sample proteins were calculated according to the standart protein graphic.