Azospermik sıçanlarda mezankimal yağ doku hücre transferi ve d vitamini enjeksiyonu sonrası spermatogenez
Spermatogenesis after adipose mesenchymal cell tissue transfer and vitamin d injection in azoospermic rats
Yazar: UĞUR ÜNAL
Danışman: DOÇ. DR. ESRA BALCIOĞLU
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
AZOSPERMİK SIÇANLARDA MEZANKİMAL YAĞ DOKU HÜCRE TRANSFERİ VE D VİTAMİNİ ENJEKSİYONU SONRASI SPERMATOGENEZ
Uğur ÜNAL 
Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Sağlık bilimleri Anabilim Dalı
Yüksek Lisans Tezi, Temmuz 2023
Danışman:  Doç. Dr. Esra BALCIOĞLU 
ÖZET
Spermatogenik hücrelerin, kemoterapotik ilaçların zararlı etkilerine çok duyarlı olduğu bilinmektedir. Kemoterapotik ajanlardan en gonodotoksik olanları alkilleyiciler, antimetobolitler, vinka alkoloidler olarak bilinir. Bu kemoterapik ajanlar azospermi oluşturma etkisine sahiptir. Azospermi, erkek germ hücrelerindeki spermatogonyal kök hücrelerin spermatogenezde, sekonder spermatide dönüşmemesi olarak tanımlanmaktadır. Son yıllarda yapılan çalışmalar azospermi tedavisinde kök hücre terapisinin önemli bir rol aldığını  göstermektedir. Bu çalışmalar sonucunda kök hücre tedavisinin testiste gerçekleşen spermatogenez aktivitesini düzenlediği, Leydig ve sertoli hücrelerinin tedavisinde önemli ölçüde düzelttiği gözlemlenmiştir. Uzun zamandır D vitamininin, kemik sağlığının düzenlenmesinde yerleşik bir role sahip olan çok yönlü bir sinyal molekülü olduğu bilinmektedir. Ancak yapılan yeni çalışmalar sonucunda D vitamininin infertilite üzerinde de etkisi olduğu da gösterilmiştir. Bu çalışmada da kemoterapik bir ilaç olan busulfan uygulamasıyla testis dokusunda oluşturulan hasar üzerine yağ dokusundan türetilmiş kök hücre ve D vitamini tedavisi etkinliğinin histopatolojik, biyokimyasal ve immünohistokimyasal olarak araştırılması amaçlandı.

62 adet Wistar Albino cinsi sıçan; Kontrol, Busulfan, Bus.+kök hücre, kök hücre, Bus.+D vitamini ve Bus.+D vit.+kök hücre olacak şekilde 6 eşit gruba ayrıldı. 2 adet Wistar Albino cinsi sıçanda kök hücre elde edilmesi için kullanıldı. Son uygulamadan 24 saat sonra sıçanlar dekapite edilerek testis dokuları alındı. Rutin doku takibi basamaklarından sonra Hemotoksilen & Eozin ile boyanan dokularda histopatolojik değerlendirme, seminifer tübül ölçümleri ve Johnsen Testiküler Biyopsi Skorlaması yapıldı. İlaveten TUNEL ve Caspas-3 yöntemiyle apoptotik hücreler tespit edilerek sayıldı.
-80 oC saklanan testis dokularında da ELİSA yöntemi kullanılarak Malondealdehit, Süperoksit Dismutaz ve Katalaz, Testesteron, Folikül Uyarıcı Hormon ve Luteinizan Hormon seviyeleri ölçüldü. 

Sonuç olarak busulfanın testis dokusu hasarına yol açtığı, tedavi edici olarak uygulanan D vitamini ve yağ dokusundan türetilmiş kök hücrenin toksik etkiyi azalttığı gözlendi. Özellikle D vitamini ve kök hücrenin birlikte uygulandığı grupta daha etkili bir sonuç elde edildiği kanısına varıldı.

Anahtar Kelimeler: Azospermi; Busulfan; D Vitamini; Spermatogenez; Kök Hücre.

Abstract:
SPERMATOGENESIS AFTER ADIPOSE MESENCHYMAL CELL
TISSUE TRANSFER AND VITAMIN D INJECTION IN AZOOSPERMIC RATS
Uğur UNAL
Erciyes University, Institute of Health Sciences
Department of Health Sciences
Master Thesis, July 2023
Advisor: Doç. Dr. Esra BALCIOĞLU
ABSTRACT
It is known that spermatogenic cells are very sensitive to the harmful effects of chemotherapeutic drugs. Among the chemotherapeutic agents, the most gonodotoxic ones are known as alkylators, antimetobolites, vinca alkaloids. These chemotherapeutic agents have the effect of producing azoospermia. Azoospermia is defined as the failure of spermatogonial stem cells in male germ cells to develop into secondary spermatogenesis during spermatogenesis. Recent studies show that stem cell therapy plays an important role in the treatment of azoospermia. As a result of these studies, it has been observed that stem cell therapy regulates spermatogenesis activity in the testis and significantly improves it in the treatment of Leydig and Sertoli cells. It has long been known that vitamin D is a versatile signaling molecule that has an established role in regulating bone health. However, as a result of new studies, it has also been shown that vitamin D has an effect on infertility. In this study, it was aimed to investigate histopathologically, biochemically and immunohistochemically the efficacy of adipose tissue-derived stem cell and vitamin D treatment on the damage caused by the application of busulfan, a chemotherapeutic drug.
62 Wistar Albino rats; They were divided into 6 equal groups as Control, Busulfan, Bus.+stem cell, stem cell, Bus.+vitamin D and Bus.+vit.D+stem cell. It was used to obtain stem cells from 2 Wistar Albino rats. Rats were decapitated 24 hours after the last application and testicular tissues were taken. After routine tissue follow-up steps, histopathological evaluation, seminiferous tubule measurements and Johnsen Testicular Biopsy Scoring were performed on tissues stained with Hemotoxylin & Eosin. In addition, apoptotic cells were detected and counted by TUNEL and Caspas-3 methods.
Malondealdehyde, Superoxide Dismutase and Catalase, Testosterone, Follicle Stimulating Hormone and Luteinizing Hormone levels were measured using ELISA method in testicular tissues stored at -80 oC.
As a result, it was observed that busulfan caused testicular tissue damage, therapeutically applied vitamin D and adipose tissue-derived stem cell reduced the toxic effect. It was concluded that a more effective result was obtained, especially in the group in which vitamin D and stem cells were applied together.
Keywords: Azoospermia, ADSC, Busulfan, Caspas3, D vitamin,  Elisa, Spermatogenesis, TUNEL