Androctonus crassicauda (Olivier, 1807;Scorpiones:Buthidae)'nın genotiplendirilmesi ve gilogenetik konumu
Genotyping and phylogenetic position of Androctonus crassicauda (Olivier, 1807;Scorpiones:Buthidae)
Yazar: ÖZCAN ÖZKAN
Danışman: PROF. DR. K. ZAFER KARAER
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Parazitoloji = Parasitology

Özet:
Akrepler, son 400 milyon yıldır şekillerini çok az değiştirdiğinden yaşayan fosiller olarak tanımlanabilir. Karakteristik şekilleriyle kolayca tanınırlar. Akrepler, Arachnida sınıfında zehirli artropodlar olup örümcekler, keneler ve akarların akrabaları olarak düşünülmektedir.Araknid filogenisinde özellikle, akreplerin filogenetik pozisyonu tartışmalıdır. Mitokondrial DNA, filogenetik ve filocoğrafik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Androctonus soyundan Androctonus crassicauda antivenom üretimi ve skorpionizm için çok önemli akrep türüdür. Bu tür Orta Doğu coğrafyasında yaygın bulunmaktadır. A.crassicauda Güney Doğu Anadolu, özellikle Şanlıurfa ve Mardin'de insan skorpionizm vakaları için diğer türlerden çok daha önemlidir.Bu çalışmada, Orta Doğu akrebi A.crassicauda'nın morfometrik ölçümlerini ve kullanılan 16S mitokondriyal DNA bölgesi ile genetik identifikasyonu belirlemek ve filogenetik analiz uygulanması ve Türkiye akrep faunasında bulunan türlerle filogenetik ilişkisini belirlenmesi amaçlandı.Bu araştırmada, erkek ve dişi akrepler Şanlıurfa ilinden toplandı. Türün identifikasyonu için önemli vücut kısımları hassas dijital kumpas ile ölçüldü ve ayrıca 16S mtDNA bölgesi kullanılarak A. crassicauda'nın genetik identifikasyonu araştırıldı. Örnekler fenotipik olarak kızıl-kahverengi, kızıl-sarı ve siyah olarak üç gruba ayrıldı.Genetik analiz için bütün örnekler % 96 etanol içerisinde muhafaza edildi. DNA bacak kas dokusundan fenol/klorform ekstraksiyon protokolüne göre izole edildi. 16S bölgesi kullanılan üniversal primerlerle PCR ile amplifiye edildi. Elde edilen DNA sekans verileri BLAST 2 programı ile eşleştirildi ve düzenlendi. Bütün yeni DNA sekansları GenBank'da depolandı. Kullanılan ClustalX programı ile filogenetik ağaçlar oluşturuldu. Böylece, Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) ve DNA sekans verileri ile A.crassicauda tanımlandı.Sunulan çalışmanın verileri ile A. crassicauda'nın teşhis anahtarı ve güncel bulgularının kaşlılaştırılmasında gruplar arasında morfolojik farklılık tespit edilmemiştir. Ancak, bu çalışmada, genetik analiz sonuçlarına göre iki genetik grup belirlendik.Bu araştırmanın sonuçlarına göre, GenBank'da kayıt edilen A. crassicauda'nın sekans verisi ile karşılaştırıldığında 16S bölgesinde 5 farklı nükleotidde genetik varyasyon değerlendirildi. Bu nükleotid varyasyonlar ilk bu çalışma ile rapor edildi.

Abstract:
Scorpions can be regarded as living fossils because they have changed so little during the last 400 million years. They have an easily recognisable characteristic shape. Scorpions are venomous arthropods of the Arachnida class and are considered relatives of spiders, ticks and mites. A key order in the arachnid phylogeny, is highly disputed in particular, the phylogenetic position of the Scorpiones.Mitochondrial DNA (mtDNA) is widely used for phylogeographic and phylogenetic studies. Androctonus crassicauda from Androctonus genus is the most important scorpion species in Turkey for scorpionism and antivenom production. This species is found commonly in the Middle Eastern geography. Androctonus crassicauda can be found most commonly in south-eastern Anatolia, especially in Sanlıurfa and Mardin provinces and is more important than other scorpion species for human scorpionism cases.In this study, we aimed to determine the morphometric measurements and the genetic identification using 16S mitochondrial DNA region in the Middle Eastern scorpion Androctonus crassicauda (Olivier, 1807), and performe phylogenetic analysis using 16S mitochondrial DNA, and to explore further phylogenetic relationship with the scorpions in Turkey.In this research, males and females scorpions were collected from Sanlıurfa region with a sensitive digital capillars? body parts those important for the identification of a species. The specimens have been measured and genetically characterized using 16S mitochondrial DNA markers. The specimens were phenotypicaly divided into three group; reddish-brown; brown-yellow and black.To analysis genetically, all the specimens were preserved in 96% ethanol. The DNA was extracted from leg muscle tissues using phenol/chloroform protocol. The 16S region was amplified by PCR using the universal primers. The obtained DNA sequences were edited and aligned using BLAST 2 program. All new DNA sequences were deposited in GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). The phylogenetic trees were created using ClustalX program. Then, Polymerase Chain Reaction (PCR) and DNA sequence data were utilized to identify A. crassicauda.Comparing recent findings on A. crassicauda with the data from the present study, and according to the identification key, no morphological differences were detected between groups. However, this study determined two genetic groups according to the sequence analysis results.This study showed that five different loci at the nucleotide level were determined to have genetic variation in the 16S region when compared with a known A. crassicauda sequence data (Gen Bank Acc. AJ277598). Nucleotide variations found in this research are the first descriptive report for A.crasscicauda.