K562 hücred Fosfin Bileşiklerinin Sitotoksik Etkisinin MTT (3-[4,5-Dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue) ile araştırılması
Cytotoxic Effect Of Phosphine Complexes on K562 Cell Line by Using MTT ((3-[4,5-Dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue)
Yazar: NİLAY OKTAR
Danışman: PROF. DR. A.BÜLENT ANTMEN
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Pediatrik Hematoloji-Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Hematoloji = Hematology ; Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases

Özet:
Bu çalışmada bazı fosfin bileşiklerinin, ([PtCl2(Ph2PCH2)2NCH3 ], [RhCl(Ph2PCH2)2NCH3]2 ve [PdCl2(dppaEtOH)]), myeloid löseminin blastik kriz evresindeki hücrelerden elde edilmiş olan K562 hücrelerine olan sitotoksik etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Yeni sentezlenen bu organofosfin bileşiklerinin K562 hücre dizisindeki sitotoksik etkileri antikanser ilaç araştırmasının ilk basamağını oluşturmaktadır.K562 hücre dizisi, çalışmaya başlamadan önce pasajlandı. 12 kuyucuklu steril plaklara her bir kuyucuğa öncelikle 104 hücre ekilmesinden 24 saat sonra her bir kuyucuğa 5 farklı konsantrasyonda (1ng/mL, 10-1 ng/mL, 10-2ng/mL, 10-3ng/mL ve 10-4ng/mL olacak şekilde) organofosfin bileşikleri ilave edildi. 48 saat 37 C° ta %5 CO2 li ortamda inkübe edildikten sonra hücreler 96 kuyucuklu plaklara aktarıldı. Her bir kuyucuğa 10 µL MTT solusyonu eklendi ve 4 saat süre ile enkübe edildi. Son olarak vortekste karıştırıldıktan sonra kuyucuklara DMSO eklendi ve 10 dakika bekletilen plaklar, plak okuyucusunda 545 nm'de okutuldu. Sonuçlar istatistiksel analizle değerlendirildi.Yeni sentezlenen üç metal fosfin komplekslerinden sadece bir tanesinde MTT testi ile sitotoksik etki olduğu saptandı. Bu çalışma ile, anti kanser etkinliği, deneysel hayvan modellerinde araştırılması en ümit verici olanın [RhCl(Ph2PCH2)2NCH3]2 adlı metal fosfin bileşiği olduğunu MTT testi kullanarak K562 hücre dizisinde gösterdik.

Abstract:
In this study, we investigated the cytotoxic effect of phosphine compounds on K562 cell line that originated by blastic phase of cronic myeloid leukemia. The possible cytotoxic effect of new synthesized organophosphine compounds on the some cancer cells especially K562 cell line could be the first step of anticancer drug investigation.Before starting this study, K562 cell line was passaged. The 104 K562 cells was seed out each well of 12-well-culture plate. Two well determined as a blank and was put medium and DMSO. Organophosphine compounds were added each wells five different concentrations (1ng/mL, 10-1 ng/mL, 10-2ng/mL, 10-3ng/mL and 10-4ng/mL). MTT (3-[4,5-Dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide; Thiazolyl blue was added each wells of 96-well-culture plate and incubated four hours. After mixing by using vortex, finally DMSO was added each wells. Microplate plates were incubated 10 minutes in the CO2 incubator and after the plates were evaluated by microplate reader on the 545 nm and were determined the absorbance values. The results were analysed by statistically methods.The only one of the three new synthesized organophosphine compounds had cytotoxic effect by used MTT test. In this study, we showed that the possible anti cancer effect of the [RhCl(Ph2PCH2)2NCH3]2 might be give inspiration to us with hope in the experimental animal models.