Farklı kanser türlerinde B ve T lenfositlerinin izolasyonu ve CD38 enzim etkinliklerinin karşılaştırılması.
Contrast of B and T lymphocyte isolation and CD38 enzyme activity at several cancer types.
Yazar: AYCAN BAŞ
Danışman: DOÇ. DR. IŞIL ALBENİZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyofizik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyofizik = Biophysics
Dizin: Anemi = Anemia ; Antijenler = Antigens ; Antijenler-CD4 = Antigens-CD4 ; Antijenler-CD8 = Antigens-CD8 ; Antijenler-yüzey = Antigens-surface ; Antikorlar = Antibodies ; B lenfositleri = B lymphocytes ; Enzimler = Enzymes ; Fareler = Mice ; Neoplazmlar = Neoplasms ; T lenfositleri = T lymphocytes ; İmmün sistem = Immune system

Özet:
CD38 hem reseptör hem de enzim özelliği gösterebilen pleiotropik (bir genin birden çok gen üzerinde etkisini göstermesi) bir moleküldür. CD38 anlatımı B ve T lenfositlerinde farklılaşmanın fenotip belirleyicisi olarak kullanılmaktadır. Kanserli hasta eritrositlerinde CD38 etkinliğinin kontrollere oranlara yüksek olduğu bilinmektedir. Bu bilgilerden yola çıkarak, CD38 aktivitesi İ.Ü. İstanbul Tıp Fakültesi kliniklerinden alınan farklı kanser gruplarına ait hasta kanlarından RosetteSep kitleri ile izole edilen B ve T lenfositlerinde incelendi. Ayrıca Ehrlich asit tümör hücrelerinin aktarılmasıyla tümör oluşturulan BALB/c farelerinin kanlarından da EasySep kitleri ile B ve T lenfositleri izole edildi. Elde edilen tüm B/T lenfositlerinde NAD glikohidrolaz enzim etkinliği, akım sitometri analizi ve Western emdirim teknikleri kullanılarak CD38 düzeyleri saptandı.İnsan deney gruplarının B ve T lenfositlerinin NAD glikohidrolaz etkinliği kontrol gruplarına göre yüksek bulunmuştur (p<0,001). Fare deney grubu sonuçlarının kontrol gruplarına göre CD38 değeri ise bu tekniklerle bakıldığında; T lenfositlerinde anlamlı bir artış saptanmıştır (p<0,05).İnsan ve fare B/T lenfositlerinde; SDS-PAGE ve "Western Emdirim" yöntemi aracılığı ile 45 kDa molekül ağırlığına karşılık gelen protein bandı CD38'e özgü antikor kullanılarak deney ve kontrol gruplarında, diğer bulguları da destekleyecek şekilde, bir sinyal görüntülenmiştir.İmmün sistemin hücrelerinden olan B ve T lenfositlerinin fizyolojik işlevlerinden biri tümörlerin yok edilmesi ve büyümelerinin engellenmesidir. Kanserli olgularda ve hayvan tümör modelinde B ve T lenfositlerinde CD38 düzeyi ve etkinliği karşılaştırılmıştır. Yaptığımız çalışmalar sonucunda CD38 aktivitesinin arttığı gözlenmiştir. Üç farklı teknik kullanılarak elde edilen sonuçlar bu artışı doğrulamış ve CD38'in prognostik bir belirteç olarak kullanılabileceği yolunda ki düşüncemizi desteklemiştir.Anahtar Kelimeler : B lenfosit, T lenfosit, CD38, CD19, CD3

Abstract:
CD38 is a pleiotropic molecule which behaves at the same time both as an enzyme and as a receptor. CD38 expression is used as phenotype determinant of differentiation at B and T lymphocytes. It has been known that CD38 activity on the cancer patients is higher when compared to the control group. Based on this knowledge, CD38 activity has been studied at B and T lymphocytes isolated with RosetteSep kits from patient bloods belonging to several cancer groups taken from I.U. Istanbul Medicine Faculty clinics. B and T lymphocytes isolated with EasySep kits from tumor formed BALB/c mouse bloods by transferring Ehrlich acid tumor cells. CD38 levels were determined by NAD glychohydrolase enzyme activity, flow cytometry analyze and Western blot techniques at all resulting B/T lymphocytes.Human test groups B and T lymphocytes NAD glychohydrolase activity has been found higher comparing to control groups (p<0,001). When CD38 levels of mouse test group results compared to control groups has analyzed with these techniques a significant increase at T lymphocytes has been determined (p<0,05).Using an antibody specific for CD38 at control and test groups at a protein band corresponding to 45 kDa molecule weight at human and mouse B/T lymphocytes through SDS-PAGE and Western Blot techniques a signal has been detected in the manner of supporting other findings.One of the the physiological functions of B and T lymphocytes in immune system cells is eliminating tumors and inhibiting their growth. CD38 level and activities which obtained from cancer patients and animal tumor at B and T lymphocytes have been compared. As a result of increased activity of CD38 was? observed in our studies. Results obtained by using three different techniques has confirmed this increase and supported our thoughts about using CD38 as a prognostic marker.Key words: B lymphocyte, T lymphocyte, CD38, CD19, CD3