İnsan servikal kanser hücre hattında (HELA) difraktaik, evernik ve vulpinik liken asitlerinin tiyoredoksin redüktaz 1 hedefli antikanser etkisinin araştırılması
Investigation of thioredoxin reductase 1 targeted anticancer effect of diffractaic, evernic, and vulpinic lichen acids in human cervical cancer cell line (HELA)
Yazar: BÜŞRA BUDAK
Danışman: DOÇ. DR. ÖMER ERKAN YAPÇA
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı / Cerrahi Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Hücre dizisi = Cell line ; Liken asidi = Lichen acid ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Terapötik yöntemler = Therapeutics ; Tiyoredoksin = Thioredoxin ; Uterin servikal hastalıklar = Uterine cervical diseases ; Uterin servikal neoplazmlar = Uterine cervical neoplasms

Özet:
Amaç: Vulpinik, evernik ve difraktaik liken asitlerin insan servikal kanser hücre hattı (HeLa) üzerindeki potansiyel anti-proliferatif, anti-migratif ve apoptotik etkilerini araştırmak ve sonrasında potansiyel antikanser etkisinin kanser araştırmalarında belirteç olarak kabul edilen tiyoredoksin redüktaz 1 (TrxR1) hedefli olup olmadığını belirlemektir.
Gereç ve Yöntem: HeLa hücre hattı üzerinde bahsedilen liken asitlerinin sitotoksik etkisi, doz ve zaman bağımlı olarak XTT yöntemi ile incelendi ve her bir liken asidi için IC50 konsantrasyonları belirlendi. Bu liken asitlerinin apoptotik etkisi, hem flow sitometrik analiz ile hem de apoptotik yolak genlerinden Bax ve Bcl-2 ekspresyonlarına Real Time PCR (qPCR) yöntemi ile bakılarak değerlendirildi. Migrasyon üzerine etkileri ise transwell migrasyon analizleri ile incelendi. Liken asitlerinin TrxR1'in gen ve protein ifadeleri üzerindeki kantitatif etkileri qPCR ve western blot yöntemleri ile, TrxR1 enzimatik aktivitesine etkisi ise DTNB yöntemi ile araştırıldı.
Bulgular: Sitotoksisite sonuçları; vulpinik, evernik ve difraktaik liken asitlerin HeLa hücresinin proliferasyonunu zamana ve doza bağlı olarak baskıladığını gösterdi ve IC50 değerleri 66.53, 70.26 μg/ml ve 22.52 μg/mL olarak 48 saat olarak sırasıyla hesaplandı. Evernik ve difraktaik asidin HeLa hücre hattında apoptotik etkiye sahip olduğu ve üç liken asidinin de migrasyonu önemli derecede engellediği görüldü. Vulpinik ve evernik asit ile muamele TrxR1 ekspresyonunu arttırıken, difraktaik asit bir değişiklik göstermedi. Buna karşın üç liken asidinin de TrxR1 enzim aktivitesini önemli derecede inhibe ettiği görüldü.
Sonuç: Vulpinik, evernik ve difraktaik liken asitlerinin HeLa hücre hattı üzerinde TrxR1 hedefli olarak antikanser etki göstermiştir. Bu üç liken asidinin serviks kanseri tedavisi için etkili ve potansiyel doğal terapötik ajan olabileceği sonucuna ulaşılmıştır.

Anahtar Kelimeler: Serviks Kanseri, Liken Asidi, Terapötik Ajan, Tiyoredoksin Redüktaz 1, Ekspresyon

Abstract:
Aim: The aim of this thesis is to investigate the potential anti-proliferative, anti-migratory, and apoptotic effects of vulpinic, evernic, and diffractaic lichen acids on the human cervical cancer cell line (HeLa). And then to determine whether the potential anticancer effect is targeted to thioredoxin reductase 1 (TrxR1), which is accepted as a marker in cancer research.
Materials and methods: The cytotoxic effect of the abovementioned lichen acids on the HeLa cell line was examined as dose and time-dependent by XTT method and IC50 concentrations were determined for each lichen acid. The apoptotic effect of these lichen acids was evaluated by both flow cytometric analysis and Real-Time PCR (qPCR) method by examining the expressions of the apoptotic pathway genes Bax and Bcl-2. The effects on migration were analyzed by transwell migration analysis. The effect of lichen acids on quantitative gene and protein expressions of TrxR1 was evaluated by qPCR and western blot methods, and the effect on TrxR1 enzymatic activity was investigated by the DTNB method.
Results: The cytotoxicity results indicated that vulpinic, evernic, and diffractaic lichen acids suppressed the proliferation of HeLa cells in a time and dose-dependent manner, and the IC50 values were calculated as 66.53 μg/mL, 70.26 μg/mL, and 22.52 μg/mL, respectively. It has been exhibited that evernic and diffractaic acids have apoptotic effects in the HeLa cell line and all three lichen acids significantly inhibit migration. While vulpinic and evernic acids increased TrxR1 expression, diffractaic acid did not show any change. On the other hand, it was observed that all three lichen acids inhibited TrxR1 enzyme activity significantly.
Conclusion: In conlusion, vulpinic evernic, and diffractaic lichen acids exhibited anticancer effects on the HeLa cell line targeted to TrxR1. It has been concluded that these three lichen acids may be effective and potential natural therapeutic agents for the treatment of cervical cancer.

Keywords: Cervical Cancer, Lichen Acid, Therapeutic Agent, Thioredoxin Reductase 1, Expression