Klinik örneklerden izole edilen MRSA suşlarında Panton-Valentine Lökosidin virülans faktörünün moleküler yöntemlerle belirlenmesi
The detection of panton-valentine leukocidine virulans factor in MRSA strains isolated from clinical specimens by molecular methods
Yazar: MÜGE ŞİMŞEK
Danışman: DOÇ. DR. NURAN DELİALİOĞLU
Mersin Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibiyotikler = Antibiotics ; Metisilin = Methicillin ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; Virülans = Virulence ; İlaç alerjisi = Drug hypersensitivity ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Staphylococcus aureus, nozokomiyal ve toplumdan kazanılmış enfeksiyonların en önemli etkenlerindendir. Özellikle metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) suşlarının neden olduğu enfeksiyonların tedavisinde güçlükler yaşanmaktadır. MR, fenotipik yöntemlerle her zaman doğru olarak belirlenememektedir. Bu nedenle Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile mecA geninin tespit edilmesi, stafilokoklarda MR'yi açığa çıkarmak için altın standart olarak kabul edilmektedir. Stafilokokların virülansta rol oynayan çeşitli enzim, hemolizin ve toksinleri bulunmaktadır. Bunlar içerisinde bulunan ve bir nonhemolitik lökosidin olan Panton-Valentine Lökosidin (PVL), virülansta önemli role sahiptir. PVL, ökaryotik hücre membranında porlar oluşturmak suretiyle lökosit ve makrofajları parçalamakta ve fagositozu engellemektedir.Eylül 2008 ile Eylül 2010 tarihleri arasında, Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarı'nda çeşitli klinik örneklerden izole edilen ve Clinical and Laboratory Standarts Institute'nin (CLSI) önerdiği şekilde oksasilin disk difüzyon testi sonucu MR bulunan 190 adet S. aureus suşu çalışmaya alınmıştır. Bu suşlara aynı zamanda sefoksitin disk difüzyon testi, oksasilin agar tarama, oksasilin E test, sefoksitin E test ve MR'den sorumlu mecA geninin saptanması için PZR yöntemi uygulanmıştır. MRSA suşlarında PVL gen bölgesi PZR yöntemiyle araştırılmıştır.MRSA olarak değerlendirilen 190 suşun tümünde mecA geni tespit edilirken, oksasilin agar tarama, oksasilin E test, sefoksitin disk difüzyon testi ve sefoksitin E test ile 188'i MR olarak bulundu. Toplam 190 adet MRSA suşunun 170'i hastane kaynaklı, 20'si toplum kaynaklıydı. Toplam 6 adet (%3,16) MRSA izolatında PVL geni saptandı. Bunların 5'inin (%2,94) hastane kaynaklı ve 1'inin (%5) toplum kaynaklı olduğu görülmüştür. PVL geni taşıyan MRSA'ların çoklu antibiyotik direncine sahip olduğu görülmüştür.Sonuç olarak; PVL pozitif hastane kaynaklı MRSA suşları daha virülan ve çoklu ilaç dirençli olduğu için araştırılmalı ve buna göre önlemler alınmalıdır.

Abstract:
Staphylococcus aureus is the most important factor of nosocomial and infections. Especially the treatment of infections that are due to methicillin resistance (MRSA) strains are becoming harder. MR can not be always determined by phenotypical methods. So, the determination of mecA gene with the polymerase chain reaction (PCR) method is accepted the gold standard for establishing the methicillin resistance of staphylococcus. Staphylococcus have various enzymes, toxins and hemolysin as virülance factors. Panton-Valentine Leukocidin (PVL) as a non-hemolytic leukocydin is one of these factors and have important role at virulance. PVL leads to pore formation on the cell membranes, destroys macrophages and leucocytes and interrupting phagocytosis.A total of 190 S. aureus strains isolated from specimens which were detected to be methicillin-resistant by using the disc diffusion method with oxacillin by using the methods suggested from Clinical and Laboratory Standarts Institute (CLSI) were included in the study. These specimens were collected from Mersin Univercity Faculty of Medicine Microbiology Laboratory from september 2008 to september 2010. Although cefoxitin disc diffusion test, oxacillin agar screen, oxacillin E test, cefoxitin E test and PCR method for determining mecA gene which is responsible for MR are evaluated at these strains. PVL gene region is analysed with PCR method at MRSA strains.MecA gene is detected at all 190 strains determined as MRSA. By using oxacillin agar screen, oxacillin E test, cefoxitin disc diffusion test, cefoxitin E test 188 strains determined as MRSA. The 20 strains were community-acquired and 170 strains were hospital-acquired of the total 190 strains. PVL gene is determined at 6 (%3.16) MRSA isolates. 5 (%2.94) of these were hospital- acquired and one of these (%5) was community-acquired. The MRSA strains that has PVL gene seems to have multiple antibiotic resistance.As a result hospital-acquired PVL positive MRSA strains must be researched and take cautions for them because they have multiple antibiotic resistance and more virulance.