Palaemonetes turcorun (Holthuis, 1961) (Decapoda)' da o-aminolevulinik asit dehidrataz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu
Biochemical characterization of o-aminolevulinic acid dehydratase in palaemonetes turcorun (Holthuis, 1961) (Decapoda)
Yazar: İBRAHİM HAKKI CİĞERCİ
Danışman: DOÇ.DR. MEHTAP KUTLU
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2005
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
ÖZETDoktora TeziPalaemonetes turcorum (Holthuis,1961) (Decapoda)'da Î´-AM NOLEVUL N K AS TDEH DRATAZ ENZ M N N B YOK MYASAL KARAKTER ZASYONUbrahim Hakkı C ĞERCAnadolu ÜniversitesiFen Bilimleri EnstitüsüBiyoloji Anabilim DalıDanışman: Doç. Dr. H. Mehtap KUTLU2005, 61 sayfaBu tezde yurdumuz için endemik olan Palaemonetes turcorum'da Î´-AminoLevulinik Asit Dehidrataz (ALAD; Porfobilinojen sentaz; E.C.4.2.1.24) enzimininkurşun ile etkileşimi ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Palaemonetes turcorum'da, kurşun asetat için LD50 değeri 0.135 mM olarakbulunmuştur. Bu değer Palaemonetes turcorum'lara uygulanarak, kurşun asetatın invivoda ALAD üzerine olan inhibe edici etkisi saptanmış ve zamana göre değişimiincelenmiştir. Zamana bağlı olarak enzim inhibisyonunun ve karaciğerdeki kurşunmiktarının arttığı saptanmıştır.Palaemonetes turcorum ALAD'ının optimum pH'sı 7 civarında ve enzimin ısıyadayanıklı olduğu (55ºC) bulunmuştur. Kinetik analizler sonucu Vmax değeri 22.83nmol/PBG/saat/mg protein ve Km değeri 0.06 mmol/reaksiyon karışımı olarakbulunmuştur. Mg+2 ve Mn+2 enzim aktivitesini artırırken Zn+2'nin aktiviteyietkilemediği, EDTA'nın ise aktiviteyi azalttığı saptanmıştır.Amonyum sülfat ve Sephadex G-200 jel ortamı ile yapılan işlemlerden sonraenzim 51 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAJE ile yapılan çalışma sonucunda saflaştırılanPalaemonetes turcorum ALAD'ının moleküler ağırlığı 237.6 kDa ve bir alt ünitesininmoleküler ağırlığı 35.6 kDa olarak bulunmuştur.Anahtar Kelimeler: Enzim, Palaemonetes turcorum, ALAD, kurşun asetat, SDS-PAJE

Abstract:
ABSTRACTPhD ThesisBIOCHEMICAL CHARACTERIZATION of Î´-AMINOLEVULINIC ACIDDEHYDRATASE in Palaemonetes turcorum (Holthuis, 1961) (Decapoda)brahim Hakkı C ĞERCAnadolu UniversityGraduate School of SciencesBiology DepartmentSupervisor: Assoc. Prof. Dr. H. Mehtap KUTLU2005, 61 pagesIn this thesis, it has been aimed to determine the inhibition of Î´-Aminolevulinicacid dehydratase enzyme (ALAD; Porphobilinogen synthase; E.C.4.2.1.24) inPalaemonetes turcorum, endemic for Turkey, with lead and the enzyme?s biochemicalfeatures.LD50 value for lead acetate was found 0.135 mM at Palaemonetes turcorum. Theinhibition effect of lead acetate on ALAD was determined in vivo by the application ofthe value to Palaemonetes turcorum and the change of the effect was examined accordingto time. It was also observed that the inhibition of the enzyme and the amount of thelead in liver increased.It was found out that the optimum pH of Palaemonetes turcorum ALAD wasabout 7 and the enzyme was resistant to heat (550C). As a result of kinetic analyses, theVmax value and Km value were found out to be 22.83 nmol/h/mg protein and 0.06mmol/reaction mixture, respectively. It was determined that while Mg+2 and Mn+2increased the enzyme activation, Zn+2 did not affect the activity, but EDTA decreasedthe activity.The enzyme was purified 51 fold with amonium sulphate and Sephadex G-200 gelmedium. As a result of the study held with SDS-PAGE, the molecular weight of thepurified Palaemonetes turcorum ALAD and its subunit molecular weight were found tobe 237.6 kDa, 35.6 kDa, respectively.Keywords: Enzyme, Palaemonetes turcorum, ALAD, lead acetate, SDS-PAGE