Enfekte kök kanal dentininde farklı irrigasyon ve aktivasyon tekniklerinin antimikrobiyal etkinliklerinin değerlendirilmesi /
Yazar: MUSTAFA SAK
Danışman: DOÇ. DR. NESLİHAN BÜŞRA KESKİN
Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Endodonti Ana Bilim Dalı / Endodonti Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2024
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Bu in vitro çalışmanın amacı farklı irrigasyon solüsyonlarının farklı irrigasyon aktivasyon yöntemleri ile aktive edilerek E.faecalis üzerine antibakteriyel etkinliklerini karşılaştırmalı olarak incelemektir. 
Yüz adet çürüksüz, tek köklü tek kanallı diş 40.06 apikal genişlik elde edilinceye kadar ProTaper Next NiTi döner alet sisteminin X4 döner eğelerine kadar prepare edildi.  Her bir diş 15 dk 121°C'de otoklavda steril edildi. 21 gün boyunca E. faecalis ile kontaminasyon sağlandı.21 günlük inokülasyon periyodunun ardından dişler,  farklı irrigasyon solüsyonlarına göre 3 ana gruba (NaOCl, Dual Rinse HEDP, Kitosan, n=30) ve her grup aktivasyon yöntemine göre kendi içerisinde 3 farklı (Geleneksel iğne irrigasyonu, Pasif ultrasonik aktivasyon ve Sonik aktivasyon, n=10) alt gruba ayrıldı. Oluşturulan gruplara göre irrigasyon ve aktivasyon prosedürleri tamamlandı. İrrigasyon protokollerinin uygulanmasının ardından diş örneklerinden bakteriler PBS tamponu ile toplanarak süspansiyon halinde 1.5mL'lik tüplere alındı. Bu süspansiyonlardan, Nucleogene Total RNA Extration Kit (Nucleogene, Türkiye) kullanılarak RNA saflaştırma işlemi yapıldı. Elde edilen RNA örneklerinden 16 µL alınarak Nucleogene cDNA synthesis kit kullanılarak cDNA sentezi yapıldı. Sentezlenen cDNA örnekleri kalıp olarak kullanılarak qPCR çalışmaları yapıldı. PCR sonucunda Ct değerleri elde edildi. Veriller SPSS 26.0 programı kullanılarak Two-Way Anova ve gruplar arasındaki ilişkilerin değerlendirilmeleri için post hoc Bonferroni testleri kullanılarak istatistiksel olarak analiz edildi (p<0.05).
Test edilen tüm gruplarda kontrol grubuna göre anlamlı bir şekilde daha yüksek Ct değerleri görüldü (p<0.05). Ct değerlerinin yüksek olması bu gruplarda bakteri popülasyonunun daha düşük olduğunu göstermektedir. NaOCl'nin, Kitosan ve DualRinse-HEDP'ye göre anlamlı derecede kök kanallarından daha fazla E.Feacalis'i uzaklaştırdığı görülürken (p=0,009 ), Kitosan ve DualRinse-HEDP arasında anlamlı bir farklılık görülmedi. NaOCl için geleneksel iğne irrigasyonu ve ultrasonik aktivasyon, Kitosan solüsyonu için sonik aktivasyon yöntemi ile kök kanallarından daha fazla E. feacalis'in uzaklaştırıldığı görüldü. DualRinse-HEDP için ise aktivasyon yöntemleri anlamlı bir farklılık oluşturmadı (p=0,445). Bu çalışmanın sonuçlarına göre; NaOCl ve Kitosan solüsyonlarının uygun irrigasyon aktivasyon sistemleri ile aktive edilmeleri solüsyonların antibakteriyel etkinliklerini artırdığı sonucuna varılmıştır.

Anahtar Kelimeler: E. Faecalis, İrrigasyon Aktivasyonu, Sodyum Hipoklorit, Dual Rinse HEDP, Kitosan

Abstract:
Evaluation of Antimicrobial Efficacy of Different Irrigation and Activation Techniques on Infected Root Canal Dentin
The aim of this in vitro study was to comparatively investigate the antibacterial activities of different irrigation solutions on E. faecalis by activating them with different irrigation activation methods.
One hundred caries-free, single-rooted, single-canal teeth were prepared for X4 rotary files of ProTaper Next NiTi rotary instrument system until 40.06 apical widths were obtained. Each tooth was sterilized in an autoclave at 121°C for 15 min. Contamination with E. faecalis was provided for 21 days. After 21 days of inoculation period, the teeth were divided into 3 main groups according to different irrigation solutions (NaOCl, Dual Rinse HEDP, Chitosan, n=30) and each group was divided into 3 different subgroups according to the activation method (Standard, needle irrigation, Passive ultrasonic activation and Sonic activation, n=10). Irrigation and activation procedures were completed according to the groups formed. After the application of irrigation protocols, bacteria from tooth samples were collected with PBS buffer and suspended in 1.5 mL tubes. RNA purification was performed from these suspensions using the Nucleogene Total RNA Extraction Kit (Nucleogene, Turkey). 16 µL of the obtained RNA samples were taken and cDNA synthesis was performed using the Nucleogene cDNA synthesis kit. qPCR studies were performed using the synthesized cDNA samples as templates. Ct values were obtained as a result of PCR. Data were statistically analyzed using the SPSS 26.0 program using Two-Way Anova and post hoc Bonferroni tests for the evaluation of the relationships between the groups (p<0.05).
All tested groups showed significantly higher Ct values compared to the control group (p<0.05). High Ct values indicated that the bacterial population were lower in these groups. While NaOCl was observed to remove significantly more E. Feacalis from the root canals than Chitosan and DualRinse-HEDP (p=0.009), no significant difference was observed between Chitosan and DualRinse-HEDP. It was observed that more E. Feacalis was removed from the root canals with standard needle irrigation and ultrasonic activation for NaOCl and with sonic activation method for Chitosan solution. For DualRinse-HEDP, the activation methods did not create a significant difference (p=0.445). According to the results of this study, it was concluded that activating NaOCl and Chitosan solutions with appropriate irrigation activation systems increased the antibacterial activities of the solutions.
Keywords: E. faecalis, Irrigation Activation, Sodium Hypochlorite, Dual Rinse HEDP, Chitosan