Mastitisli sütlerde görülen aspergıllus flavus varlığının PCR ile araştırılması
Investigation of the presence of aspergillus flavus in mastitis milk with PCR
Yazar: UĞUR AYCEN
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ KIRKAN
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aspergillus flavus = Aspergillus flavus ; Aydın = Aydın ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Mastit = Mastitis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Süt = Milk ; Süt inekleri = Dairy cows

Özet:
Bu çalışmada, Mayıs-Eylül 2017 tarihleri arasında Aydın ili ve çevresinde bulunan çeşitli işletmelerdeki klinik mastitisli 90 adet inekten aseptik ve tekniğine uygun olarak 20'şer ml olmak üzere steril kaplara süt numunesi alınmıştır. Alınan numuneler soğuk zincir altında Adnan Menderes Üniversitesi Veteriner Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarına Aspergillus flavus M1 toksininin varlığı yönünden incelenmek üzere getirilmiştir. İki örnek yapısal deformasyonlardan dolayı araştırma dışında bırakılmıştır. Süt örneklerindeki Aspergillus flavus M1 toksininin varlığının araştırılması ELISA tekniği ile gerçekleştirilmiştir. Aflatoxin M1 ELISA sonuçları 0 ppt, 5 ppt, 15 ppt, 30 ppt, 60 ppt ve 100 ppt içerikli pozitif kontroller ile karşılaştırılarak değerlendirilmiştir. İncelenen 88 örnek için; 7 (% 8,0)'sinde 5 ppt, 12 (% 13,6)'sinde 15 ppt, 32 (% 36,4)'sinde 100 ppt, 37 (% 42,0)'sinde ise 0 ppt düzeylerinde Aflatoksin M1 tespit edilmiştir. Bu sonuçlara göre 32 (% 36,4)'sinde Avrupa Birliği ülkelerinde çiğ sütler için kabul edilen sınırın (50 ppt) üzerinde AFM1 pozitifliği saptanmıştır. Araştırmamızda Aflatoxin M1 ELISA kiti ile incelenen 88 adet mastitisli süt örneğinden elde edilen DNA'lar Aspergillus flavus tür spesifik PCR işlemine tabi tutulmuştur. PCR sonucunda; 7 (% 36,8)'sinde 0 ppt, 1 (% 5,2)'inde 5 ppt, 2 (% 10,5)'sinde 15 ppt ve 9 (% 47,5)'unda 100 ppt düzeyinde Aflatoxin M1 ELISA kiti toksin varlığı belirlenmiştir. Sonuç olarak araştırmamızda ELISA ile 32 örnekte 100 ppt düzeyinde AFM1 pozitifliği saptanırken, PCR ile 9 örnekte 100 ppt düzeyinde pozitiflik saptanmıştır. ELISA testi sonucunda daha fazla çıkan pozitif sonucun, çapraz reaksiyonlara bağlı olarak şekillendiği, teşhis ve identifikasyonda ise FLA gen primerleri ile yapılan PCR yönteminin daha güvenilir olduğu ortaya konulmuştur.

Abstract:
In this study, milk samples were taken in sterile containers, 20 ml, in accordance with aseptic and technique of 90 cows with clinical mastitis in various enterprises around Aydın province between May-September 2017. The samples were brought to the Microbiology Laboratory of Adnan Menderes University Faculty of Veterinary Medicine under the cold chain for examination in terms of the presence of Aspergillus flavus M1 toxin. Two examples are excluded from the research due to structural deformations. The presence of Aspergillus flavus M1 toxin in milk samples was investigated by ELISA technique. Aflatoxin M1 ELISA results were compared with positive controls with 0 ppt, 5 ppt, 15 ppt, 30 ppt, 60 ppt and 100 ppt. For the 88 samples examined; 5 ppt in 7 (8,0 %), 15 ppt in 12 (13,6 %), 100 ppt in 32 (36,4 %) and 0 ppt in 37 (42,0 %) aflatoxin M1 was detected. According to these results, 32 (36,4 %) AFM1 positivity was detected in the European Union countries over the limit (50 ppt) accepted for raw milk. In our study, DNA obtained from 88 mastitis milk samples examined with Aflatoxin M1 ELISA kit was subjected to Aspergillus flavus species specific PCR process. As a result of PCR; Aflatoxin M1 at a level of 0 ppt in 7 (36,8 %), 5 ppt in 1 (% 5,2), 15 ppt in 2 (10,5 %) and 100 ppt in 9 (47,5 %) ELISA kit toxin presence was determined. As a result, 32 samples of 100 ppt AFM1 positivity were detected by ELISA and 9 samples 100 ppt positivity was detected by PCR in our study. The results of the ELISA test revealed that more positive results were formed due to cross-reactions, and the PCR method with FLA gene primers was more reliable in diagnosis and identification.