Helıcobacter pylorı patogenezinde inflamatuar sitokinlerin immün reaktif moleküllerin rolü
The role of inflammatory cytokines and immune reactive molecules in the pathogenesis of helicobacter pylori
Yazar: SALAH SHAYYAL SHİNJAR SHINJAR
Danışman: PROF. DR. SEÇİL AKILLI ŞİMŞEK
Çankırı Karatekin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Helicobacter pylori gram-negatif bir bakteridir. Üreaz üretir, spiral benzeri bir 
konformasyona sahiptir, mikroaerofiliktir ve flagella sayesinde hareketlidir. H. pylori 
mide ortamında hayatta kalmak ve kalıcı kolonizasyon sağlamak için mekanizmalar 
geliştirmiştir. Hem doğuştan gelen hem de edinilmiş bağışıklık yanıtlarının aktif bir 
uyarıcısıdır. H. pylori enfeksiyonunun ayırt edici özelliği, çeşitli bağışıklık hücrelerinin 
enfekte mide mukozasına infiltrasyonu ile belirgin bir inflamatuar yanıttır; konakçı 
bağışıklık yanıtı enfeksiyonu temizleyemez ve aslında ilişkili patogeneze katkıda 
bulunabilir. Bu çalışma için yaşları 5 ile 60 arasında değişen toplam 150 hasta (70 kadın 
ve 80 erkek) taranmıştır. Hastalar 1 Ekim-1 Nisan 2023 tarihleri arasında tekrarlayan 
karın ağrısı ve diğer gastrointestinal şikayetler nedeniyle Samawa şehrindeki AL-Hussien 
Eğitim Hastanesi Gastroenteroloji Ünitesine başvurmuştur. Antrumun kabaca iltihaplı 
bölgelerinden üç biyopsi alınmıştır. Biyopsilerden biri Ultra Hızlı Üreaz testi ve üre ve 
dupA genini tespit etmek için moleküler analizler için kullanılırken, diğer biyopsi 
örnekleri, histolojik değerlendirme için parafine gömülü doku bloklarının hazırlanması, 
TNF alfa ve CD54 tespiti için immünohistokimyasal boyama testleri (IHC) için %10 
tamponlanmış formalize salin ile sabitlenmiştir. Ayrıca, endoskopiden sonra her hastadan 
H. pylori için IgG antikorları; serum gastrin-17 ve (serum interlökin-6,10 ve interlökin8) tespiti için kan örneği alınmıştır. Sonuçlarımız 150 hastadan sadece 86'sının (%57,3) 
H. pylori ile enfekte olduğunu göstermektedir. UreB ve dup A genlerinin tespiti için 
yapılan moleküler analizler 20 biyopsi için sadece 13 örneğin ureB geni için pozitif 
olduğunu ve 9 örneğin dup A geni için pozitif olduğunu göstermiştir. Mevcut çalışmada, 
H. pylori ile ilişkili gastritteki histopatolojik değişiklikleri değerlendirmek için histolojik 
çalışma yapılmıştır. Tüm H. pylori pozitif bireylerde kronik aktif gastritin yanı sıra, H. 
pylori ile enfekte kişilerin gastrik hasarının patogenezinde önemli bir rol oynadığı 
düşünülen çok sayıda inflamatuar infiltre lenfosit ve nötrofil gözlenmiştir. H. pylori ile 
ilişkili gastritin derecelendirilmesi, inflamatuar aktivitenin derecesinin değerlendirilmesi 
için güncellenmiş Sydney sistemi kullanılmıştır. Buna göre, kronik enflamasyon, atrofik 
gastrit ve yüzey epitel hasarlarına ek olarak pozitif ve negatif H. pylori enfekte hastalar 
arasında anlamlı bir fark (P <0,005) tespit edilmiştir. Ayrıca, bu çalışmada, H. pylori ile 
enfekte hastalarda Gastrit şiddetinin tespiti için IL-6, 8, 10 ve TNF alfa seviyeleri ELISA 
ii
testi ile ölçülmüştür. Sonuçlar, normal bireylerle karşılaştırıldığında enfekte hastalarda 
IL-10 dışında IL-6, 8 ve TNF alfa ekspresyonunun yüksek olduğunu göstermiştir. Biyopsi 
örneklerinin immünohistokimyasal çalışmasına göre, enfekte bireylerde CD54 ve TNF 
alfanın aşırı ekspresyonu gözlenmiştir. Enfekte ve enfekte olmayan biyopsi örnekleri 
arasında mide mukozasında TNF alfa ve IL-6, 8'in yanı sıra PMNC'ler ve MNC'lerin 
artmış lokal varlığı ile birlikte CD54 ve TNF alfa ekspresyonunda anlamlı bir fark 
belirlenmiştir (p=0,005).

Abstract:
Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium. It produces urease, has a spiral-like 
conformation, is microaerophilic and is motile by flagella. H. pylori has evolved 
mechanisms to survive in the gastric environment and achieve permanent colonization. It 
is an active stimulator of both innate and acquired immune responses. The hallmark of H. 
pylori infection is an inflammatory response marked by infiltration of various immune 
cells into the infected gastric mucosa; the host immune response is unable to clear the 
infection and may in fact contribute to the associated pathogenesis. A total of 150 patients 
(70 women and 80 men) aged between 5 and 60 years were screened for this study. 
Patients were admitted to the Gastroenterology Unit of AL-Hussien Teaching Hospital in 
Samawa city for recurrent abdominal pain and other gastrointestinal complaints between 
October 1 and April 1, 2023. Three biopsies were taken from roughly inflamed areas of 
the antrum. One of the biopsies was used for Ultra-Rapid Urease assay and molecular 
analyses to detect urea and dupA gene, while the other biopsy samples were fixed with 
10% buffered formalized saline for preparation of paraffin-embedded tissue blocks for 
histological evaluation, immunohistochemical staining tests (IHC) for detection of TNF 
alpha and CD54. In addition, blood samples were collected from each patient after 
endoscopy for IgG antibodies to H. pylori, serum gastrin-17 and (serum interleukin-6,10 
and interleukin-8) detection. Our results show that only 86 out of 150 patients (57.3%) 
were infected with H. pylori. Molecular analysis for detection of ureB and dup A genes 
showed that only 13 samples out of 20 biopsies were positive for ureB gene and 9 samples 
were positive for dup A gene. In the present study, a histologic study was performed to 
evaluate histopathologic changes in H. pylori-associated gastritis. In addition to chronic 
active gastritis in all H. pylori-positive individuals, a large number of inflammatory 
infiltrating lymphocytes and neutrophils were observed, which are thought to play an 
important role in the pathogenesis of gastric damage in H. pylori-infected individuals. 
The grading of H. pylori-associated gastritis used the updated Sydney system for the 
assessment of the degree of inflammatory activity. Accordingly, in addition to chronic 
inflammation, atrophic gastritis and surface epithelial damage, a significant difference 
(P<0.005) was found between positive and negative H. pylori-infected patients. 
Furthermore, in this study, IL-6, 8, 10 and TNF alpha levels were measured by ELISA 
ii
assay to determine the severity of gastritis in H. pylori-infected patients. The results 
showed that the expression of IL-6, 8 and TNF alpha, but not IL-10, was higher in infected 
patients compared to normal individuals. According to immunohistochemical study of 
biopsy specimens, overexpression of CD54 and TNF alpha was observed in infected 
individuals. There was a significant difference in the expression of CD54 and TNF alpha 
in the gastric mucosa between infected and uninfected biopsy specimens, with increased 
local presence of TNF alpha and IL-6, 8, as well as PMNCs and MNCs (p=0.005).