Helvella L. ve yakın ilişkili mantar türleri arasındaki genetik akrabalık ilişkilerinin ISSR yöntemi ile belirlenmesi
The determination of genetic relationship among Helvella L. and closely related fungi by ISSR methods
Yazar: MEHMET ALİ KARASELEK
Danışman: YRD. DOÇ. DR. SİNAN AKTAŞ
Selçuk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Genetik haritalama = Genetic mapping ; Mantarlar = Fungi ; Moleküler markerler = Molecular markers

Özet:
Son yıllarda moleküler biyolojideki gelişmeler biyolojinin bütün alanlarını olumlu yönde etkilemiştir. Bu gelişmeler fungal sistematikte de etkisini göstererek hızlı ve güvenilir teşhislere imkan sağlamıştır. Moleküler çalışmalar yaygınlaşmadan önce morfolojiye ve biyokimyasal tekniklere dayalı araştırmalar daha yoğun olarak yapılmaktaydı. Ancak bu çalışmalarda özellikle morfolojik olarak yapılan gözlemlerle sonuçlara ulaşmak hem fazlasıyla deneyim hem de oldukça fazla zaman gerektirmekte, ayrıca sonuçlar zaman zaman araştırıcılara göre farlılıklar gösterebilmekteydi. Moleküler tekniklerin ilerlemesi ile mantarların sistematikteki yeri kesin olarak belirlenmektedir.Bu çalışmada birbirleriyle yakın ilişkili olduğu düşünülen Helvella, Peziza, Gyromitra, Verpa ve Sarcoscypha cinsleri arasındaki akrabalık ilişkileri moleküler ISSR-PCR (Inter-Repeat-Polymerase Chain Reaction) yöntemi ile ortaya konmuştur. Kontrol dış grup olarak da Morchella esculenta (L.) Pers. kullanılmıştır.Çalışmamızı oluşturan mantar türleri Sonbahar ve İlkbahar aylarında Adana, Antalya, Isparta, Konya ve Amasya illerinden toplanmıştır. Toplanan örneklerin tayini teşhis kitaplarından yararlanılarak yapılıp mantarlar fungaryum tekniklerine uygun olarak kurutulmuştur. Toplanan mantarların askokarplarından 0,01 gr alınarak havanda ezildikten sonra DNA izololasyon işlemlerine tabi tutulmuştur.DNA izolasyonu Doyle'ün metodu kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Çalışılan türlerden elde edilen DNA'ya ait konsantrasyon ve saflık derecesi ölçümleri ND-2000 spektrofotometri ile yapılmıştır.Jel profillerindeki DNA fragment sayısı ve büyüklüklerine dayalı olarak NTSYS bilgisayar programı ile örneklerin birbirlerine olan genetik uzaklıkları belirlenmiş ve bu genetik uzaklıklara göre filogenetik haritaları çıkarılmıştır.

Abstract:
Developments in molecular biology have affected whole fields of biology positively in recent years. These developments have also showed their effects on fungal systematic and provided fast and reliable identifications. Before molecular studies, morphologic and biochemical techniques have been extensively used in researches. But it was hard to obtain results, especially with the morphological examinations, and lots of times, experience have been required in these studies. The results of these studies have also been subjective, sometimes showing inconsistencies among the researchers. With the advancement of molecules techniques the place in systematic of fungi precisely determined.In this study, the relative relationship between Helvella, Peziza, Gyromitra, Verpa ve Sarcoscypha was revealed by molecular ISSR-PCR (Inter-Repeat-Polymerase Chain Reaction) process. Morchella esculenta (L.) Pers.was used as control group.The mushrooms which were the subject of investigation were collected between autumn and spring in the vicinity Adana, Antalya, Isparta, Konya and Amasya. Diagnosis of collected samples were identified by using books and samples, which are collected, were dried in accordance with fungarium techniques. 0,01 gr samples from ascocarp of collected fungi were subjected for DNA isolation after powdered in havana.DNA isolation were performed by using Doyle?s method. The concentration and purity degrees measurements of DNA were carried out by ND-2000 spectrophotometer.Genetic distances were determined based on fragment number and size of DNA in gel profiles by a computer program NTSYS and phylogenetic maps were enacted according to genetic distance.