Koyun keçi çiçek aşısı ile aşılanmış sığırlarda lsd hastalığına karşı oluşan hücresel (flow cytometry) ve humoral (elısa ve VNT) immun yanıtın araştırılması
Investigation of cellular (flow cytometry) and humoral (elisa and VNT) immune response to lsd in cattle vaccinated with sheep goat pox vaccine
Yazar: AYŞE PARMAKSIZ
Danışman: PROF. DR. ORHAN YAPICI
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veterinerlik Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Lumpy Skin Disease (LSD) hızla sınır ötesi yayılım gösteren ve sığırlarda önemli verim kayıplarına neden olan viral bir hastalıktır. LSD ile mücadelede en etkili yol aşılamadır. Bu çalışma, koyun keçi çiçek aşısı ile aşılanmış sığırlarda LSD'ye karşı oluşan humoral ve hücresel immum yanıtın belirlenerek Türkiye'de halihazırda uygulanan aşılama ve hastalık kontrol programlarına katkı sunulması amacıyla yapıldı.Araştırmada 3, 4, 5 ve 6 aylık aşılanmamış ve maternal antikor varlığı yönünden negatif olduğu tespit edilmiş 24 adet buzağıya 5 koyun dozu (5 ml) Penpox-M aşısı uygulandı. Aşılama sonrası bir yıl boyunca belirtilen günlerde (0., 5., 10., 15., 20., 21., 22., 28., 42., 60., 90., 120., 150., 180., 210., 240., 270., 300., 330., 360. gün) toplam 480 adet kan serumu örneği alındı. ELISA ile incelenen kan serum örneklerinden 27 (%5,62) adetinde 5. günden 210. güne kadar (10 adet 22. gün, 14 adet 180. gün ve 3 adet 210. gün) seropozitiflik elde edildi. Seropozitiflik açısından yaşlar ve kan alım zamanları arasında istatistiki olarak anlamlı bir fark tespit edilmedi (p>0,05). Virus Nötralizasyon Testi (VNT) ile 15 (%3,12) adet kan serumunda (5. günden 180. güne kadar) nötralizan antikor tespit edildi. Aşılama sonrası 4 ay boyunca farklı zaman aralıklarında (0., 5., 10., 15., 20., 21., 22., 28., 42., 60., 90., 120. gün) kan örnekleri alındı ve immunofenotipleme yöntemi ile boyama yapılarak Flow Cytometry cihazında CD4+, CD8+ ve CD21+T lenfositlerin analizleri yapıldı. Tüm hayvanlarda aşılamadan sonraki 22. ve 28. günlerde ölçülen CD4+ ve CD8+T lenfosit düzeyi ortalamalarının diğer günlerden (90. ve 120. günler hariç) istatistiki olarak anlamlı şekilde daha yüksek olduğu gözlendi (p>0,01). CD21+T lenfosit alt kümelerinin ortalamasının aşılamadan sonraki 15. ve 42. günlerde başlangıçta ölçülen değerlerin üstünde bir değere ulaştığı, 90. ve 120. günlerde ise düştüğü tespit edildi.Sonuç olarak, bir sığır için yılda 5 koyun dozu (5 ml) Penpox-M aşısı uygulamasının humoral ve hücresel bağışıklık yanıtını iyi düzeyde uyardığı kanısına varıldı. LSDV enfeksiyonuna karşı oluşan bağışıklığın çoğunlukla hücre aracılı bağışıklık tepkisi olması nedeniyle aşı çalışmalarında humoral immun yanıtın değerlendirilmesinin yanı sıra hücresel immun yanıtın da incelenmesi gerektiği kanısına varıldı.

Abstract:
Lumpy Skin Disease (LSD) is a Capripoxvirus disease that spreads rapidly across borders and causes significant production losses in cattle. The most effective way to control LSD is vaccination. This study was conducted to determine the cellular and humoral immune response against LSD in cattle vaccinated with Sheep and Goat Pox Vaccine and to contribute to the vaccination and disease control programs currently implemented in Turkey.In the study, 5 sheep doses (5 ml) of Penpox-M vaccine were applied to 24 unvaccinated calves aged 3, 4, 5 and 6 months and found to be negative for the presence of maternal antibodies. A total of 480 blood serum samples were collected on the specified days (day 0th, 5th, 10th, 15th, 20th, 21th, 22nd, 28th, 42nd, 60th, 90th, 120th, 150th, 180th, 210th, 240th, 270th, 300th, 330th, 360th) for one year after vaccination. Seropositivity was obtained in 27 (5.62%) of the blood serum samples examined with ELISA from day 5 to day 210 (10 sera on day 28th, 14 sera on day 180th and 3 sera on day 210th). There was no statistically significant difference between ages and blood collection times in terms of seropositivity (p>0.05). Neutralizing antibodies were detected in 15 (3.12%) blood sera (from day 5th to day 180th) with Virus Neutralization Test (VNT). Blood samples were taken at different time periods (day 0th, 5th, 10th, 15th, 20th, 21th, 22th, 28th, 42th, 60th, 90th, 120th) for 4 months after vaccination and CD4+, CD8+ and CD21+T lymphocytes were analyzed in Flow Cytometry device by immunophenotyping method. It was observed that the mean CD4+ and CD8+T lymphocyte levels measured on the 22nd and 28th days after vaccination in all animals were statistically significantly higher than the other days (except for the 90th and 120th days) (p>0.01). The mean of CD21+T lymphocyte subsets were found to reach a value above the values measured at initial on days 15th and 42nd days after vaccination and decreased on the 90th and 120th days.As a result, it was concluded that the administration of 5 sheep doses (5 ml) of Penpox-M vaccine per year for one cattle stimulated humoral and cellular immune responses at a good level. Since immunity against LSDV infection is mostly a cell-mediated immune response, it was concluded that cellular immune response should be examined as well as humoral immune response in vaccine studies.