Kan-testis bariyerinin bozulduğu fare modelinde kromatin helikaz/atpaz DNA bağlanma protein 1 benzeri (CHD1L) proteininin ekspresyonunun değerlendirilmesi
Evaluation of expression of chromatin helicase/atpase DNA binding protein 1-like (CHD1L) protein in mouse model of disrupted blood-testis barrier
Yazar: GAMZE TOSUN
Danışman: PROF. DR. ÇİLER ÇELİK ÖZENCİ
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: DNA bağlayıcı proteinler = DNA-binding proteins ; Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kan = Blood ; Kapiler geçirgenlik = Capillary permeability ; Kromatin = Chromatin ; Sertoli hücreleri = Sertoli cells ; Spermatogenez = Spermatogenesis ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Kanser hücrelerinin, CHD1L aracılı MMP'lerin aktivasyonu ile invazyon sağladığı gösterilmiştir. Erkek üreme sisteminde ise; CHD1L'nin spermatogonyal kök hücrelerin hayatta kalmasını sağladığı bildirilmiştir. Amacımız, bozulmuş kan testis bariyerinde CHD1L ekspresyonunun araştırılmasıdır.
Yöntem: Çalışmada 48 adet BALB/c ırkı yetişkin (5 haftalık) erkek fare kullanıldı. Kan testis bariyerinin (KTB) bozulması için farelere oral gavaj yolu ile MEHP (Mono-(2-Etilheksil Fitalat) 30mg/ml uygulandı. Taşıyıcı (mısır yağı) ve MEHP uygulanan gruplardan; 6., 12. ve 24. saatlerde testis dokuları elde edildi. Testis dokularına histopatolojik değerlendirme için PAS-H boyanması ve Johnsen skor değerlendirmesi yapıldı. β1-integrin protein ekspresyonu KTB bozulduğunu göstermek amacıyla western blot analiziyle değerlendirildi. İmmünohistokimya tekniği ile CHD1L, MMP-2, MMP-9 ve TIMP-2 protein ekspresyonu değerlendirildi. CHD1L protein ekspresyonu western blot analizi ile de değerlendirildi. 15P-1 fare Sertoli hücre hattında CHD1L ekspresyonu western blot analizi ile değerlendirildi. Verilerin dağılımına göre parametrik ya da parametrik olmayan testlerle uygun istatistiksel analizler yapıldı.
Bulgular: MEHP uygulanan grupta histopatolojik değerlendirmeler ve β1-integrin protein ekspresyonu azalmasıyla KTB'nin bozulduğu gösterildi. KTB'nin bozulduğu modelde fare testisinde 6. ve 24. saatte CHD1L ekspresyonunun gruplar arasında benzer olduğu, 12. saatte MEHP grubunda ekspresyonunun anlamlı olarak arttığı gösterildi (p<0.05). KTB'nin bozulduğu testis dokusunda, 6., 12., ve 24. saatlerde MMP-2 ve MMP-9 ekspresyonlarının arttığı ve TIMP-2'nin ise azaldığı gösterildi. CHD1L ekspresyonunun sıçan ve insan testisinde; Sertoli ve germ hücrelerinde de olduğu ortaya kondu. Sadece Sertoli hücrelerindeki CHD1L ekspresyonu kültüre edilen Sertoli hücrelerinde ayrıca gösterildi.
Sonuç: Çalışmamız; KTB'nin bozulduğu modelde CHD1L ekspresyonunu değerlendirmiştir ve bu durumda oluşan germ hücre kaybı ve neticesinde oluşan erkek infertilitesinin moleküler sebeplerini anlamak için temel bir çalışma niteliğindedir.
Anahtar Kelimeler: fare, testis, CHD1L, Sertoli hücresi, kan testis bariyeri

Abstract:
Objective: Cancer cells have been shown to invade tissues by activation of MMPs after activation of the CHD1L-mediated signaling pathway. In the male reproductive system; CHD1L has been reported to promote the survival of spermatogonial stem cells. Our aim was to investigate the expression of CHD1L in the impaired blood testis barrier in mice.
Method: 48 BALB/c adult male (5-week-old) mice were used in the study. 30mg/ml MEHP (Mono-(2-Ethylhexyl phthalate) was administered via oral gavage to induce blood testis barrier (BTB) distruption. Two groups were performed, vehicle and MEHP, to evaluate testis tissues at 6h, 12h, and 24h. PAS-H staining and Johnsen score were done for histopathological evaluations. β1-integrin protein expression was evaluated by western blot technique to confirm BTB distruption. CHD1L, MMP-2, MMP-9, and TIMP-2 protein expression was evaluated by immunohistochemistry. CHD1L protein expression was evaluated by western blot analysis in all groups. Expression of CHD1L in Sertoli cell line was also evaluated. Statistical analyses for parametric and non-parametric data were performed where appropriate.
Results: Histopathological evaluations showed that BTB was impaired in MEHP group. CHD1L expression increased significantly in 12h group after BTB distruption (p<0.05). Expression of MMP-2 and MMP-9 increased whereas TIMP-2 expression decreased after BTB distruption. CHD1L protein expression was also confirmed in Sertoli and germ cells of rat and human testes. Expression of CHD1L was confirmed in cultured Sertoli cells only.
Conclusion: In this study, expression of CHD1L was evaluated with in distrupted BTB model in mice. Possible roles of CHD1L in BTB regualtion/dysregulation which may lead to germ cell loss and male infertility needs further investigation.
Keywords: mouse, testis, CHD1L, Sertoli cell, blood testis barrier