Silika metodu ile kemikten DNA ekstraksiyonu
Silica based DNA extraction from bone
Yazar: LEMAN DAMLA KOTAN
Danışman: PROF. DR. BEHNAN ALPER
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Adli Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Adli bilimler = Forensic sciences ; Adli tıp = Forensic medicine ; DNA = DNA ; Kemik ve kemikler = Bone and bones ; Kimlik tespiti = Identity establishing ; Kimliklendirme = Identification ; Silanlar = Silanes

Özet:
Adli uygulamalarda ölüm olaylarının incelenmesinde en önemli aşamalardan birisi kişinin kimliğinin tespitidir. Kimliklendirme için çeşitli biyolojik delillerden DNA'ya ulaşmak mümkündür. Cesetlerin maruz kaldığı farklı fiziksel ve kimyasal faktörler sonrası DNA'nın en iyi korunabildiği ve kontaminasyondan en az etkilenen doku kemik dokusudur.Bu çalışmada kemik dokudan silika esaslı DNA ekstraksiyon metodu ile DNA elde edilebilirliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Çalışmada Adana Adli Tıp Kurumunda otopsisi yapılan olgulardan alınan 15 adet kosta kemiği kullanılmıştır. 6 ay oda sıcaklığında bekletilen kemik örneklerinde silika temelli ticari kit olan Qiagen DNA Mini Kit ile 16 STR (D8S1179, D21S11, D7S820, CSFIPO, D3S1358, THO1, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, VWA, TPOX, D18S51, AMEL, D5S818 ve FGA) sisteminin tanımlanabilmesi için yeterli kalite ve kantitede DNA elde edilebilmiştir. Çalışmada kullanılan 15 taze kemik örneğinden DNA eldesinde dekalsifikasyona gerek olmadığı görülmüştür.Çalışmada kullanılan üç eski kemik örneğinin ikisinde dekalsifikasyonlu ve dekalsifikasyonsuz başarılı DNA ekstraksiyonu yapılamamıştır. Birinde ekstraksiyonda tanımlanabilir miktarda DNA bulunmamasına karşın 16 STR sisteminin çalışıldığı multiplex reaksiyonda relatif floresans ünitesi 50'nin altında olmakla birlikte D3S1358, THO1, D19S433, TPOX, AMEL ve D5S818 STR sistemleri tanımlanabilmiştir. Bu durum eski örneklerin toz haline getirilme aşamasında soğutma sistemli bir düzeneğin olmamasına bağlandı.Elde edilen sonuçlar kemik dokudan silika temelli DNA ekstraksiyonunun Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Adli Tıp Anabilim Dalı Adli Seroloji ve Genetik Laboratuvarında rutin hizmette kullanılabilirliğini gösterilmiştir.

Abstract:
Determining the identity of a dead person is one of the most important steps in the practise of Forensic medicine. DNA can be retrieved from a variety of biological material for the correct identification. DNA is best preserved and least likely to be contaminated in the bone tissue after a range of physical and chemical impacts on the corpse.In this study, the feasibility of a silica-based method of DNA extraction from bone has been investigated. A total 15 costal bones obtained from autopsy cases at the Adana Forensic Medicine Institute has been used. Sufficient amount of good quality DNA to successfully run a 16 STR (D8S1179, D21S11, D7S820, CSFIPO, D3S1358, THO1, D13S317, D16S539, D2S1338, D19S433, VWA, TPOX, D18S51, AMEL, D5S818 and FGA) test has been extracted with a silica-based commercial kit, Qiagen DNA Blood Mini Kit) from six months old bones left in room temperature. It was also observed that decalcification was not necessary for the extraction of DNA from 15 fresh bones.In three old bones, the DNA extraction failed with or without decalcification. In one case, although there was not a recogniziable amount of DNA, we were able to determine D3S1358, THO1, D19S433, TPOX, AMEL and D5S818 in a 16 STR multiplex reaction, despite the relative fleurosence unit being below 50. This is explained by not using a system with a cooler during grinding of old samples in this study.These results demonstrate that a silica-based metod of DNA extraction from bone can be employed for routine diagnostics at the Forensic Serology and Genetics Laboratory of the Çukurova University, Faculty of Medicine, department of Forensic Medicine.