Over torsiyon-detorsiyonunda mezenkimal kök hücrenin etkisi
Over torsiyon-detorsiyonunda mezenkimal kök hücrenin etkisi
Yazar: NEVİN ERSOY
Danışman: DOÇ. DR. H. ALPER BAĞRIYANIK
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kök hücreler = Stem cells ; Over = Ovary ; Over hastalıkları = Ovarian diseases ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; Torsiyon = Torsion ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: 
Over torsiyonu acil müdahele gerektiren cerrahi bir patolojidir. İhmal edilmiş ya da geç kalınmış olgularda kan akımı uzun süre kesildiğinden over dokusunda nekroz meydana gelir. Yani overlerde geri dönüşümsüz hasarlar oluşmaktadır. Bu da kadınlarda infertiliteye neden olmaktadır.
Mezenkimal kök hücreler genetik ve metabolik hastalık için umut verici sonuçlar ortaya koymuştur. Biz de bu çalışmada sıçanlarda deneysel oluşturulmuş over torsiyonunda mezenkimal kök hücre(MKH) uygulamasının doku onarımındaki katkısının histokimyasal, immünohistokimyasal ve biyokimyasal olarak incelemeyi amaçladık.
Yöntem: 
35 adet Wistar suşu dişi sıçanlar (200-250g) rastgele 5 gruba ayrıldı (n=7). Grup I, Kontrol Grubu: Hiçbir müdahale yapılmayan grup (n=7). Grup II, Torsiyon Grubu (T): 2 saat torsiyonun uygulandığı grup (n=7). Grup III, Torsiyon/Detorsiyon Grubu (T/D): 2 saat torsiyon süresini takiben 2 hafta detorsiyon uygulanan grup (n=7). Grup IV, Mezenkimal Kök Hücre Grubu (MKH); Torsiyonun uygulanmadığı, sadece over başına 1x10⁶ mezenkimal kök hücrenin enjekte edildiği grup (n=7). Grup V, Torsiyon/Detorsiyon+Mezenkimal Kök Hücre Grubu(T/D+MKH); 2 saat torsiyon süresi sonunda ovaryumlara 1x10⁶ mezenkimal kök hücrenin enjekte edilip 2 hafta detorsiyon uygulanan grup (n=7). Deney sonunda deneklerin ovaryum dokuları cerrahi yöntemlerle alındı. Histokimyasal incelemeler için Hematoksilen & Eozin (H&E) ve Masson Trikrom ve immünohistokimyasal olarak da apoptozun belirlenmesi için TUNEL ve Aktif Kaspaz- 3 boyamaları yapıldı. Deneylerde iskemi-reperfüzyon modelinin oluşup oluşmadığını incelemek için ise biyokimyasal olarak doku homojenatlarında total glutatyon (GSH), glutatyon peroksidaz (GPx) ve malondialdehit (MDA) düzeyleri incelendi. Gruplar arası farklılıklar istatistiksel olarak Kruskal Wallis, Mann Whitney-U ve ANOVA testi ile değerlendirildi.
Bulgular:  
Kontrol grubunda her iki ovaryumda da korteks bölgesinde çok sayıda primordiyal, primer, sekonder, graff folikül ve korpus luteumların gözlenmesini yanında medullada bulunan kan damarları ve bağ dokusu yapısı normal histolojik yapıda gözlendi. Torsiyon grubunda bunun aksine, deneklerin her iki ovaryumunun medulla bölgesinde şiddetli hemoraji gözlendi. Ayrıca bu gruptaki deneklerin ovaryumunda primordiyal foliküllerin sayısı azalırken, atretik folikül sayısında çok ciddi bir artış olduğu gözlendi. T ve T/D grubundaki primordiyal folikül sayılarının kontrol grubuna göre azaldığı tespit edildi. Yapılan immunohistokimyasal incelemeler sonucu T ve T/D grubu kontrol grubu ile kıyaslandığında apoptotik hücre sayısında ciddi bir artış olduğu, MKH ve T/D+MKH grubu kontrol grubu ile kıyaslandığında ise apoptotik hücre sayısı bakımından istatistiksel olarak bir fark olmadığı gözlenmiştir. Biyokimyasal olarak T grubu kontrol grubu ile kıyaslandığında MDA seviyesi çok ciddi bir artış göstermiştir.
Sonuç: 
Torsiyon ve torsiyon/detorsiyonun oksidatif strese ve apoptoza bağlı histolojik doku hasarını arttırdığını ve ayrıca biyokimyasal değişikliklere neden olduğunu gözlemledik. Mezenkimal kök hücrelerin de bu hasarı en aza indirgediğini saptadık. Sonuç olarak ovaryum torsiyon/detorsiyonundan etkilenen primordiyal folikül sayısının mezenkimal kök hücre tedavisi ile korunabileceğini söylemek mümkündür.



Anahtar kelimeler: Mezenkimal Kök Hücre, Ovaryum, Torsiyon, Detorsiyon, İskemi, Reperfüzyon, Sıçan

Abstract:
Objective:
Ovarian torsion is a surgical pathology that requires immediate intervention. Necrosis occurs in the tissue blood flow of the ovary is interrupted for a long time. Ovary consist of irreversible damage. It also causes infertility in women.
Mesenchymal stem cells have revealed promising results for genetic and metabolic disease. In this study we aimed to investigate effect of mesenchymal stem cell on experimentally induced ovarian torsion/detorsion ischemia/reperfusion injury of female rats by using different morphometric, immunohistochemically and biochemical analysis.
Method:
In this study, thirty-five female Wistar rats (200-250 gr) were divided randomly into five groups (n=7). Group I, Control group; No application was performed to this animals. Group II, Torsion group(T); Torsion was performed for 2 hours. Group III, Torsion/Detorsion(T/D) group; Following 2 hours torsion, detorsion was  performed for 2 weeks. Group IV,Mesenchymal Stem cell injected group(MSC); Ovary torsion was not performed. Only 1x10⁶ mesenchymal stem cells were injected into for each ovary. Group V,Torsion/Detorsion+MSC group(T/D+MSC); After torsion was performed for 2 hours, 1x10⁶ mesenchymal stem cells were injected into each ovary and following 2 weeks detorsion was performed. Both ovaries were surgically removed from all groups. Ovary tissue slides were stained with Hematoxylene&Eosine (H&E) and Masson Trichrome for histochemical analysis. Glutathione (GSH) and  malondialdehyde (MDA) levels were also evaluated  in order to understand whether ischemia and/or ishemia/reperfusion worked properly in the experiments. Further, apoptosis were analysed both by TUNEL assay and immunostaining of active form of Caspase 3. Results were statistically compared between groups by using Kruskal Wallis, Mann Whitney-U and ANOVA tests with SPSS 15.0.
Results:
In control group, both ovary tissues had normal histological structures including many primordial, primer, seconder, mature follicles and corpora lutea in the ovary cortex as well as normal blood vessel and connective tissue organization in medulla. Contrarily, there was severe hemorage in medulla of both ovaries in the animals that torsion was performed (Group T). Additionally, atretic follicle numbers were increased significantly, while there was a decrease in primordial follicule numbers in these animals. Primordial follicle numbers were low in the ovaries of T and T/D group's animals with respect to control group. Based on immunohistochemical analysis, apoptotic cell death was increased significantly in both T and T/D groups as compared with control group. MCS and T/D+MCS group were observed no significant difference in number of apoptotic cells  compare with control group. Furthermore, Level of MDA was significant increased in T group animals as compare with control groups.
Conclusion:
We found that torsion and torsion/detorsion caused increase in histological tissue damage  including oxidative stress and apoptosis as well as biochemical changes in ovary. And mesenchymal stem cell minimize damage effect of torsion/detorsion in ovary tissue. In conclusion it is possible to tell that treatment of MSC migth be possible way to protect the numbers of primordial follicule affected by torsion/detorsion in ovary.
         


Key Words:  Mesenchymal Stem Cell, Ovary, Torsion, Detorsion, Ischemia, Reperfusion, Rat