Fibrozisin eşlik ettiği myelodisplastik/myeloproliferatif neoplaziler, fibrozisin eşlik ettiği myelodisplastik sendrom ve primer myelofibroz olgularında ASXL1 mutasyonu ve prognoza etkisi
The incidence and prognostic impact of ASXL1 mutations in myelodysplastic/myeloproliferative neoplasias&myelodysplastic syndrome with concurrent fibrosis and primary myelofibrosis
Yazar: DOĞU VURALLI BAKKALOĞLU
Danışman: PROF. DR. NÜKHET TÜZÜNER TUNCAY
İstanbul Üniversitesi / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2016
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Birincil miyelofibroz = Primary myelofibrosis ; DNA mutasyon analizi = DNA mutational analysis ; Fibroz = Fibrosis ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Miyelodisplastik sendromlar = Myelodysplastic syndromes ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prognoz = Prognosis ; Protein ekspresyonu = Protein expression

Özet:
AMAÇ:
Çalışmamızda, fibrozisin eşlik ettiği myelodisplastik/myeloproliferatif neoplaziler (MDS/MPN), myelodisplastik sendrom (MDS) ve primer myelofibrozis-selüler faz (PMF-SF) gibi myeloid kök hücre hastalıklarında, morfolojik ayırıcı tanı özelliklerinin belirlenmesi ve bu hastalıklarda sık görülen ASXL1 mutasyonları ve protein ekspresyonunun prognoza etkisinin araştırılması amaçlanmıştır.
MATERYAL-YÖNTEM:
2008-2013 yılları arasında Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Patoloji Anabilim Dalı'nda tanı alan, fibrozisin eşlik ettiği, erişkin MDS/MPN, MDS ve PMF-SF hastaları taranarak 84 ardışık hastaya ait tüm kemik iliği aspirasyon ve biyopsileri çalışma kapsamına alınmıştır. Hastalar, klinik, morfolojik parametreler, ASXL1 mutasyonu ve protein ekspresyonu açısından incelenmiş, bu parametrelerin birbirleriyle ve sağ kalımla ilişkisi araştırılmıştır.
ASXL1 mutasyonlarına Sanger dizileme, protein ekspresyonuna immunohistokimya (İHK) yöntemleriyle bakılmış, sonuçlar karşılaştırılmıştır.
BULGULAR:
MDS ve MDS/MPN hastalarında, düşük hemoglobin, yüksek/düşük ferritin düzeyleri, kemik iliğinde çoğul displazi (≥2 dizi), displastik megakaryosit morfolojisi, yüksek blast oranları (≥%5, özellikle ≥%15-<%20), interstisyel plazma hücre artışı ve lenfoid nodül sağ kalımı kısaltmaktadır.
ASXL1 mutasyonları ve protein ekspresyonu, sağ kalımı kısaltmakla birlikte, erkek cinsiyet, lökositoz, anemi, yüksek blast oranları, yüksek ferritin ve β2 mikroglobulin düzeyleri, çoğul displazi, interstisyel plazma hücre artışı, takip sırasında blast oranında artma ve lösemik dönüşüm ile ilişkilidir, ancak fibrozisle arasında ilişki gösterilememiştir.
Bu çalışmada, literatürde ilk kez uygulanan yöntemler ve yeni saptanan bulgular elde edilmiştir. Bunlar; DNA'nın kazıma yöntemiyle kemik iliği aspirasyonlarından elde edilmesi, bu sayede, hastalığın değişik evrelerinde mutasyon varlığının araştırılması, ASXL1 mutasyonlarına dizileme yöntemiyle bakılması yanısıra ASXL1 protein ekspresyonuna da bakılıp birbirleriyle karşılaştırılması, morfolojik parametrelerle ilişkisinin araştırılması ve dizilemede yeni 2 frameshift, 6 missense, 1 sessiz mutasyon ile 3' UTR'de daha önce tanımlanmamış 2 genetik değişikliğin gösterilmesidir.
SONUÇ:
İmmunohistokimya; skor 2/3 İHK-ASXL1 protein ekspresyonu, Sanger dizileme yöntemiyle saptanan frameshift mutasyonlarla tam örtüştüğünden, dizileme yapılacak hastaların seçilmesinde, ucuz ve güvenilir bir yöntem olarak kullanılabilir.

Abstract:
OBJECTIVE:
The aim of the study is to identify the morphological criteria for the differential diagnosis of myeloid stem cell diseases such as myelodysplastic/myeloproliferative neoplasias (MDS/MPN) and myelodysplastic syndrome (MDS) with concurrent fibrosis and primary myelofibrosis-cellular phase (PMF-SF) and to determine the incidence and prognostic impact of ASXL1 mutations and protein expression in these patients.
PATIENTS, MATERIALS AND METHODS:
The bone marrow aspirations and biopsies of 84 consecutive adult patients diagnosed as MDS-F, MDS/MPN-F and PMF-SF at Cerrahpaşa Faculty of Medicine, Pathology Department between the years 2008-2013 were included in the study. Patients were evaluated according to clinical, morphological parameters, presence of ASXL1 mutations and protein expression. Correlations between these parameters and their prognostic value were investigated.
Patients were examined for ASXL1 mutations by Sanger sequencing and protein expression by immunohistochemistry (IHC) and the results were compared.
RESULTS:
In MDS-F and MDS/MPN-F patients, low hemoglobin, high blast count (≥5%, especially ≥15%-<20%), high/low ferritin levels, bone marrow dysplasia in ≥2 myeloid lineages, dysplastic megakaryocyte morphology, increase in stromal plasma cells and lymphoid nodules were associated with shorter overall survival (OS).
ASXL1 mutations and protein expression shorten the OS and were significantly associated with male gender, leukocytosis, anemia, high blast count, high ferritin and β2microglobulin levels, dysplasia in ≥2 lineages, increase in stromal plasma cells, blast count raise during follow-ups and leukemic transformation, but not associated with bone marrow fibrosis.
In this study, novel findings were obtained and new methods were used for the first time in literature. These are; extracting DNA by scraping off the bone marrow aspiration slides in order to detect mutations in the course of the disease, searching for ASXL1 protein expression by IHC together with mutation analysis by Sanger sequencing, comparing these two methods, investigating the associations between mutational status/protein expression and the morphological parameters, also indicating 2 frameshift, 6 missense, 1 silent novel mutations and 2 unannotated genetic alterations in 3'UTR.
CONCLUSION:
IHC could be performed as a cheap and reliable method to select the suitable cases for sequencing, since score 2/3 IHC-ASXL1 protein expression is 100% concordant with frameshift mutations in sequencing.