G6PDaktivitesi referans değerleri altında olan bireylerde gen ekspresyonlarının karşılaştırılması
Comparison of gene expressions in subjects with G6Pd activity below the reference values
Yazar: BAŞAK SANNA
Danışman: PROF. DR. ABDULLAH TULİ
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Enzimler = Enzymes ; Gen ifadesi = Gene expression ; Glükozfosfat dehidrogenaz = Glucosephosphate dehydrogenases ; Kinetik = Kinetics ; Referans standartları = Reference standards

Özet:
Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz pentoz fosfat yolunun ilk basamağını katalizleyen kilit bir enzimdir. Eritrositlerde NADPH oluşumu için tek kaynak pentoz fosfat yolu olup, G6PD eksikliğinde NADPH üretimi önemli ölçüde azalmaktadır. G6PD enzim eksikliği enfeksiyonlar sırasında, bazı ilaçların kullanımıyla, yeni doğan dönemde, bakla tüketimiyle ve stres koşullarında hemolitik anemiyle sonuçlanabilir. Enzim aktivitesi düşük olan olguların oksidatif ajanlara maruz kalması durumunda bazılarının eritrositlerinin etkilendiği, bazılarının etkilenmediği görülmüştür. Bu duruma açıklık getirebilmek için G6PD aktivitesi referans değerleri altında olan bireylerde G6PD enziminin kinetik özellikleri, genotipi ve G6PD geninin mRNA ekspresyon seviyeleri arasındaki ilişkinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Çalışmamız, G6PD enzim aktivitesi referans aralığından düşük veya sıfır olan 3'ü kadın 7'si erkek 10 olgudan oluşmaktadır. G6PD aktivitesi Beutler yöntemi ile tayin edilmiştir. G6PD enzimi DE-52 anyon değiştirici reçine ile kısmi olarak saflaştırılarak kinetik özellikleri çalışılmıştır. Tüm olgularda MboII enzim kesimi ve sekans analizi ile Gd Akdeniz mutasyonu genotiplendirilmiştir. G6PD geninin ekspresyon seviyesi 2-ΔΔCt formülüne göre hesaplanmıştır. Elde edilen değişkenler Korelasyon testi ile değerlendirilmiştir. 
Çalışmamızda 4 hastada Gd Akdeniz mutasyonu belirlenmiş ve bunlardan 2 olgunun hemizigot, 2 olgunun da heterozigot olduğu bulunmuştur. Genin ekspresyon seviyeleri ile diğer değişkenler değerlendirilmiştir. Buna göre G6PD geninin ekspresyon düzeyi ile KmNADP arasında yüksek düzeyde, anlamlı pozitif bir ilişki olduğu, KmG6P arasında orta düzeyde, anlamlı pozitif bir ilişki olduğu belirlenmiştir. Bu da G6PD enziminin substrat bağlanma bölgesinin post-transkripsiyonel veya post-translasyonel modifikasyon geçirmiş olabileceğini düşündürmüştür.

Abstract:
Glucose 6-phosphate dehydrogenase is the key enzyme which catalyzes first step of pentose phosphate metabolic pathway. Unique source of NADPH in erythrocyte is the pentose phosphate metabolic pathway and synthesis of NADPH decreases in G6PD deficiency. The deficiency of G6PD deficiency may result in hemolytic anemia due to drug toxicities, infections during the neonatal period, consumption of beans and stress conditions. Reported that if exposed to these conditions, while some case has been affected, some of which has not been affected. In order to clarify this situation G6PD enzyme kinetics were studied from cases G6PD activity below the reference values. The aim of this study was to evaluate the relationship between G6PD gene expression and G6PD enzyme kinetics parameters and genotype.
Ten cases (7 male and 3 female) of low or null G6PD enzyme activity were enrolled in this study. Enzyme activity was determined with the Beutler method. G6PD was partially purified DE-52 anion exchange resin and then enzyme kinetics were studied. G6PD Mediterranean mutation was genotyped by sequencing analysis and MboII restriction enzyme. G6PD gene expression levels were analyzed by using the 2-ΔΔCt formula. Variables were evaluated by correlation test.
In this study G6PD Mediterranean mutation were identified in 4 cases two of hemizygote and two of heterozygote. We evaluated relationship of G6PD gene expression with other variables. There was statistically significant high positive correlation with G6PD gene expression levels and KmNADP, statistically significant moderate positive correlation with G6PD gene expression levels and KmG6P. This case is suggested to have different specifications in the substrate binding site as a result of post-translational or post-transcriptional modifications.