Hela hücre hattında EF-4'ün,Taksol'ün oluşturduğu apoptotik ve anti-proliferatif cevabı üzerine etkisinin araştırılması
Investigation of the EF-24s effect on Taxol 's apoptotic and anti-proliferative response in HeLa cell line
Yazar: IŞINSU KARAOĞLU
Danışman: PROF. SEVDA MENEVŞE
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Tıbbi Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kurkumin = Curcumin ; Paklitaksel = Paclitaxel ; Uterin servikal neoplazmlar = Uterine cervical neoplasms

Özet:
ÖZETEF-24'ün, Taksol'ün oluşturduğu apoptotik ve anti-proliferatif cevabı üzerine etkilerinin HeLa hücre hattında araştırılması.Mikrotübül stabilizatörleri olarak kullanılan moleküller, mikrotübül dinamiğinde meydana getirdikleri değişiklikten dolayı metafaz/anafaz geçişini engellerler ve hücreleri apoptoza yönlendirirler. Bu moleküllerden biri olan Taksol çeşitli kanserlerde kemoterapötik bir ajan olarak kullanılmaktadır. Çeşitli kanser çalışmalarında kullanılan diğer bir kemoterapötik ajan da curcuminin sentetik anologlarından biri olan EF-24 dür. EF-24'ün in vitro koşullarda çeşitli kanser hücrelerinin hücre proliferasyonunu inhibe ederek apoptozu uyardığı bilinmektedir. Bu çalışma ile Taksol'ün ve EF-24'ün serviks kanseri hücre hattı olan HeLa hücreleri üzerindeki apoptotik ve anti-proliferatif etkisi ile hücre döngüsünün ilerlemesinde etkin rol oynayan siklin D1 ve PI3K genleri ile apoptotik yolakda görevli olan kaspaz-3 ve kaspaz-9 genlerinin mRNA ifade düzeyleri üzerindeki etkilerinin araştırılması amaçlandı.Çalışmamızda Taksol ve EF-24'ün farklı dozlarda tek tek ve kombine olarak HeLa hücre hattı üzerine uygulanması sonrasında 24. ve 48. saatte hücre kültürleri sonlandırılarak hücrelerin canlılık oranları MTT yöntemi kullanılarak belirlendi. Ayrıca, Taksol ve EF-24'ün hücre proliferasyonu ve apoptozla ilgili genlerin mRNA ifade düzeylerini belirlemek için kantitatif Real-time PCR yöntemi kullanıldı.Çalışmamızda tek başına EF-24 ve Taksol uygulamasının, hücre canlılığını artan konsantrasyonlarda düşürdüğü gözlendi. Bu ilaçların birlikte kullanımlarının ise özellikle tek başına EF-24 uygulamasına oranla hücre canlılığını daha az düşürdüğü ve birlikte uygulamanın antagonistik bir etkiye neden olduğu gözlendi. Özellikle yüksek doz Taksol ile birlikte kullanılan EF-24'ün Taksol'ün etkisini azalttığı, düşük doz Taksol ile birlikte kullanılan EF-24'ün ise Taksol'ün etkisini arttırdığı çalışma sonunda gösterildi. Aynı şekilde mRNA analizlerinden elde edilen verilere göre birlikte uygulama sonucu kaspaz-3, kaspaz-9, siklin D1 ve PI3K mRNA düzeylerine bakıldığında da bu sonuçları destekleyıci bulgular elde edildi.Anahtar Kelimeler:Gen İfadesi,Apoptoz,Serviks Kanseri,Taksol, EF-24

Abstract:
SUMMARYInvestigation of the EF-24?s effect on Taxol 's apoptotic and anti-proliferative response in HeLa cell lineThe molecules used as stabilizers of microtubules inhibit metaphase and anaphase transition and direct the cells to apoptosis due to the change in microtubule dynamics. Taxol is one of these molecules which is used as chemotherapeutic agent in various cancer types. Another chemotherapeutic agent used in a variety of cancer studies is EF-24, one of the curcumin?s synthetic analogues. EF-24, under in vitro conditions, is known to stimulate apoptosis of various cancer cells by inhibiting cell proliferation.In this study, we aimed to research the apoptotic or anti-proliferative effect of Taxol and EF-24 on HeLa cells , Cyclin D1 and PI3K genes which play a crucial role in cell cycle progression and the effects of caspase-3 and caspase-9 genes in charge in apoptotic pathway on the mRNA expression levels.In our study, after Taxol and EF-24 were implemented on Hela cell line both individually and combined, their cell cultures were ended in 24 and 48 hours? time. The cell viability rates were determined by MTT method. In addition, quantitative real-time PCR method was used to determine the levels of mRNA expressions genes related to cell proliferation and apoptosis of Taxol?s and EF-24's .In our study, we observed that when EF-24 and Taxol were applied separately, the viability of cells decreased in increasing concentrations. However, when these drugs were used together, it has been observed that the viability of cells decreased less-especially compared with the application of EF-24 alone- and that when they were used together they were creating an antagonistic effect. At the end of the study, it has been shown that especially EF-24 used with a high dose of Taxol decreased the effect of Taxol, EF-24 used with a low dose of Taxol increased the effect of Taxol. Similarly, according to the data obtained from mRNA analysis, as a result of the use of those drugs together, as we look to the levels of caspase-3, caspase-9, cycline D1 and PI3K mRNA, supporting symptoms have been obtained.Key Words: Gene expression, Apoptosis, Cervix Cancer, Taxol, EF-24