Toxoplasma gondıı'nin invazyonundan sorumlu hedef rhoptry neck protein (RON) geninin sirna transfeksiyonu ile susturulması
Silencing the target rhoptry neck protein (RON) gene responsible for the invasion of toxoplasma gondii with sirna transfection
Yazar: MERVE YÜRÜK
Danışman: DOÇ. DR. ÖNDER DÜZLÜ
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Parazitoloji = Parasitology

Özet:
Toxoplasma gondii, coccidian bir protozoondur. Seroprevalans çalışmaları toxoplasmosis'in dünyada en yaygın zoonotik enfeksiyon olduğunu göstermiştir. Toxoplasmosis tüm dünyada olduğu gibi Türkiye'de de yaygın bir hastalıktır. İmmun sistemin durumuna, yaşa veya yerleştiği bölgeye göre çok farklı klinik belirtilere sebep olmaktadır. Parazitin ön ucunda; apikal kompleks adı verilen organel bulunmaktadır. Bu organelin bir bileşeni olan Rhoptry'nin Rhoptry Neck (RON) Proteinleri konak hücreye invazyon sürecinde 'moving junction' formasyonunda ve parazitoforik vakuolün oluşumunda kritik bir role sahiptir. Öte yandan son yıllarda geliştirilen interferens RNA (iRNA) ile tedavi seçenekleri ortaya çıkmıştır. Small interferens (siRNA) ile paraziter hastalıkların tedavisi ve kontrolünün yapılabilmesi de mümkün görülmektedir. Buradan hareketle toxoplasmosis'e karşı da bu metodun kullanılması düşünülmüştür. Proje kapsamında, özelllikle immunkompromize hastalarda önemli klinik belirtilere ve patolojilere neden olan T. gondii'nin HeLa hücre kültüründe in vitro kültivasyonu yapılmıştır. Sebep olduğu patolojiler,  hücre membranındaki invazyon moleküllerinin konak hücreye tutunmasıyla ortaya çıkmaktadır. Dolayısıyla projede hedeflenen invazyon molekülleri RON1 geni olup siRNA transfeksiyonu ile bu genin susturulması amaçlanmıştır. Bu şekilde RON1 geninin son ürün olan proteine dönüştürülmesi engellenmiştir. siRNA1 (p<0.0055), siRNA2 (p<0.0003), siRNA3 (p<0.0001), siRNA4 (p<0.0001), siRNA5 (p<0.0001), siRNA6 (p<0.0001), siRNA7 (p<0.0182), siRNA9 (p<0.0011) ve siRNA10 (p<0.0004) ile yapılan deneylerde gen ifadesinde anlamlı fark olduğu fakat siRNA8 (p<0.4049) ile yapılan deneyde istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığı tespit edilmiştir. Anti-toxoplasmosis aşıların ve terapötik ajanların geliştirilmesi için TgRON1 gen ifadesinin bu metot ile baskılanması umut verici bir basamak niteliğindedir.

Abstract:
Toxoplasma gondii is a coccidian protozoon. Seroprevalence studies have shown that toxoplasmosis is the most common zoonotic infection in the world. Toxoplasmosis is a common disease in Turkey as it is all over the world. It causes very different clinical symptoms depending on the immune system status, age, or location of the disease. There is an organelle called the apical complex at anterior end of the parasite. Rhoptry Neck Proteins (RONs), a component of this organelle, play a critical role in the formation of 'moving junction' and parasitophoric vacuoles during host cell invasion. On the other hand, interfering RNA (iRNA) treatment options developed in recent years have emerged. With small interferences (siRNA) it is also possible to treat and control parasitic diseases. From here it is thought to use this method against toxoplasmosis. Within the scope of the project, in vitro cultivation of T. gondii, which causes significant clinical symptoms and pathologies in immunocompromised patients, was performed in HeLa cell culture. The pathologies have been caused with T. gondii were occured by attaching the host cell membrane with the invasion molecules. Therefore, the target invasion molecules in the project are RON gene and it is aimed to silence this gene with siRNA transfection. In this way, the translation of the RON1 gene into the final product, protein, is inhibited. Significant difference in gene expression was detected in experiments with siRNA1 (p<0.0055), siRNA2 (p<0.0003), siRNA3 (p<0.0001), siRNA4 (p<0.0001), siRNA5 (p<0.0001), siRNA6 (p<0.0001), siRNA7 (p<0.0182), siRNA9 (p<0.0011) and siRNA10 (p <0.0004). However, there was no significant difference statistically in the experiment with siRNA8 (p<0.4049). The suppression of the TgRON1 gene expression by this method is a promising step for the development of anti-toxoplasmosis vaccines and therapeutic agents.