İnsan serumundan paraoksonaz-ı enziminin saflaştırılması ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification of paraoxonase-i enzyme from human serum and investigation of the effects of some drugs on the enzyme activity
Yazar: CÜNEYT TÜRKEŞ
Danışman: DOÇ. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Paraoksonaz (PON1; E.C.3.1.8.1), organik fosforlu bir insektisit olan paratiyonun aktif metaboliti paraoksonu hidroliz etme yeteneğine sahip A-esterazlar grubundan bir enzimdir. PON1, HDL'ye bağlı organofosfat ajanlarının ve sinir gazlarının hidrolizine, LDL'nin oksidasyonu ile lipit peroksitlerinin oluşumuna ve bakteri endotoksinlerine karşı koruyucu rol oynayan önemli bir karaciğer enzimidir.Bu çalışmada PON1 enzimi, insan serumundan amonyum sülfat çöktürmesi (%60-80 aralığında), DEAE-Sephadex A-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-200 jel filtrasyon kromatografisi basamakları kullanılarak, %34,2 verimle yaklaşık 230 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilerek molekül kütlesi yaklaşık 43 kDa olarak belirlendi.Ayrıca çalışmamızda insan serum PON1 enzimi aktivitesi üzerine bazı antibiyotik (sefotaksim sodyum, seftizoksim sodyum, sefepim hidroklorür, levofloksasin hemihidrat, moksifloksasin hidroklorür ve asiklovir), antineoplastik (siklofosfamid, kalsiyum folinat, 5-Fluorourasil, gemsitabin hidroklorür, sisplatin, okzaliplatin, bevasizumab ve palonosetron hidroklorür) ve kalsiyum kanal blokerlerinin (amlodipin besilat, isradipin, nitrendipin ve nifedipin) in vitro şartlarda etkileri incelendi. İnhibisyon etkisi gösteren ilaçların IC50 değerleri ve Ki sabitleri belirlendi.

Abstract:
Paraoxonase (PON1; EC 3.1.8.1) is an enzyme belongs to A-esterases group that has ability to hydrolyze paraoxon to an active metabolite parathion which is an organophosphorus insecticide. PON1 is an important liver enzyme that causes hydrolysis on organophosphate agents which bound to high-density lipoprotein (HDL) and nerve gases. It has also protection role on low-density lipoprotein (LDL) oxidation, lipid peroxidation formation and bacteria endotoxins.In this study PON1 enzyme purified from human serum using ammonium sulfate precipitation (the range of 60-80%), DEAE-Sephadex A-50 ion-exchange chromatography and Sephadex G-200 gel-filtration chromatography that was purified approximately 230 fold with 34.2% yield. For purity determination of the enzyme SDS polyacrylamide gel electrophoresis was used and molecular mass was approximately determined 43 kDa in this method.Also, in our study, the effect of some antibiotics (cefotaxime sodium, ceftizoxime sodium, cefepime hydrochloride, levofloxacin hemihidrate, moxifloxacin hydrochloride and acyclovir), antineoplastics (cyclophosphamide, calcium folinate, 5-Fluorouracil, gemcitabine hydrochloride, cisplatin, oxaliplatin, bevacizumab and palonosetron hydrochloride) and calcium channel blockers (amlodipine besylate, isradipine, nitrendipine and nifedipine) on PON1 enzyme activity from human serum were investigated in vitro conditions. IC50 and Ki values of these drugs which showed inhibition effect were determined.