Irak popülasyonunda IL-4 ve IL-5 gen polimorfizminin astımlı hastalarla ilişkisinin incelenmesi
Study the relation of gene polymorphism of IL-4 and IL-5 with asthmatic patients in Iraqi population
Yazar: SALAH MAHDI ABDALGHAFOOR ALRAWE
Danışman: PROF. DR. BELGİN ERDEM
Kırşehir Ahi Evran Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering
Dizin: Astım = Asthma ; Polimorfizm = Polymorphism ; Restriksiyon fragman uzunluğu polimorfizmi = Restriction fragment length polymorphisms ; İnterlökin 4 = Interleukin 4 ; İnterlökin 5 = Interleukin 5

Özet:
Bu çalışmada  biyokimyasal parametreler olarak  interlökin -4 (IL-4)  ve interlökin- 5 (IL-5) düzeyi belirlenmiştir. Bu çalışma ile ayrıca astımlı hasta ve kontrol gruplarının kanındaki IL-4 (rs2243250) ve IL-5 rs2069812 genlerinde polimorfizm belirlenmiştir. Bu vaka-kontrol çalışmasında 50 astımlı hastadan  ve kontrol grubu olarak 50 kişiden kan örnekleri alınmıştır. Astımlı hastaların yaş gruplarına göre demografik özellikleri sırasıyla (20 - 40 yaş), (41 - 60 yaş) ve (61 - 80 yaş) , sırasıyla (%52, %40, %8) olmuştur (P-değeri =0,000). Erkek hastaların yüzdesi (%60), kadın hastaların yüzdesinden (%40) daha yüksek olmuştur (P = 0.0174). Ayrıca sigara içmeyen hastaların oranı (%70) sigara içen hastalardan (%30) daha yüksek olmuştur (P-değeri =0.0318). Bu çalışmanın sonuçları, tüm biyokimyasal belirteçlerde kontrol ve astımlı gruplar arasında anlamlı farklılıklar (P˂0.05) göstermiştir.  Kontrol grubunda ortalama İnterlökin- 4 (IL-4) düzeyi (399.25±251.78) pg/ml iken, vaka grubu düzeyi anlamlı olarak (266.61±175.11) pg/ml'ye düşmüştür ( p-değeri=0.003). Ayrıca kontrol grubunda Interlökin-5 (IL-5) düzeyi 326.67±354.04 pg/ml iken, vaka grubu düzeyi anlamlı olarak 174.36±235.98 pg/ml'ye (p-değeri=0.003) düşnüştür. IL-4 ve IL-5 genlerinin polimorfizmi için moleküler araştırmalar, SNP'ler rs2243250 ve rs2069812 için PCR-RFLP tekniği aracılığıyla gerçekleştirilmiştir. IL-4(rs2243250) sonuçlarına göre, vaka grubundaki en yüksek genotip CT heterozigot genotipi (%60), ardından homozigot genotipi CC, TT (%20) olmuştur. Kontrol grubundaki en yüksek genotip TT homozigot genotipi (%76), ardından homozigot  genotip CC (%24) olmuştur.  Analizler, IL-4 (rs2243250) polimorfizminde vaka grubu ve kontrol grubu arasında önemli farklılıklar göstermiştir (CC CT farkı : OR=72.6190., %95 CI 3.9463 ila 1336.3195, P= 0.0039). Yapılan analiz ayrıca vaka ve kontrol grupları arasında, IL-4 (rs2243250) polimorfizminde, IL-4 ve IL-5 düzeyi ile TT genotipi arasında daha yüksek korelasyon düzeyi ile (sırasıyla P = 0,001 ve 0,000) anlamlı farklılıklar göstermiştir  (CC TT farkı: OR=0.3158, %95 CI: 0.1061 ila 0.9399, P=0.0383) Ayrıca CT genotipi ve yaş arasında da anlamlı bir ilişki vardır (p=0,009). IL-5 rs2069812 gen polimorfizmi, kontrol grubundaki en yüksek genotipin TT homozigot genotipi (%66), ardından heterozigot genotip TC (%34) olduğunu ortaya koymuştur. Vaka grubunda en yüksek genotip TC heterozigot genotipi (%64) olmuş, bunu da TT homozigot genotipi (%24) ve homozigot CC (%12) izlemiştir. Homozigot TT ile heterozigot TC'nin genotipik sıklığı (OR= 5.1765,95 CI) = 2.1372 ila 12.5379, P= 0.0003) ve homozigos TT ile homozigot varyant CC'nin genotipik frekansı (OR=34.8, yüzde 95 CI=1.8255 ila 664.9429, P= 0.0183) olmuştur. IL- 5 rs2069812 polimorfizminde kontrol grubuna kıyasla hastalarda C allel frekanslarında anlamlı farklılıklar söz konusudur (OR=3.3130, %95 CI = 1.7041 ila 6.4408, P=0.0004). IL-4 düzeyi ile IL-5 düzeyi arasında TT genotipi ile daha yüksek bir korelasyon (sırasıyla P = 0,017 ve 0,004) mevcut olup ayrıca yaş ile CC genotipi arasında da anlamlı bir korelasyon vardır (p=0,000).

Abstract:
In this study, the following biochemical parameters were determined: interleukin- 4 (IL-4) level and interleukin- 5 (IL-5) level. The present study also determined polymorphism in genes IL-4 (rs2243250), and IL-5 rs2069812 in the blood of asthmatic patients and control groups. In this case-control study, blood samples were collected from 50 asthmatic patients and 50 samples as the control group. The demographic characteristics of asthmatic patients for age,  the age groups were (20 to 40 years), (41 to 60 years), and  (61-80 years) (52, 40, 8%) respectively (P-value =0.000),  whereas the percentage of male patients was higher (60%) than the percentage of female patients (40%)(P = 0.0174).  Also,  the percentage of non-smoking patients(70%) was higher than smoking patients  (30%) (P-value =0.0318). The results of the present study showed significant differences (P˂0.05)  between control and asthmatic groups in all biochemical markers. The mean Interleukin- 4  (IL-4) level in the control group was (399.25±251.78) pg/ml while its level in the case was significantly decreased to (266.61±175.11) pg/ml  ( p-value=0.003).  Furthermore, the level of Interleukin- 5 (IL-5)  in the control group was 326.67±354.04 pg/ml, whereas, its level in the case group significantly decreased to 174.36±235.98 pg/ml ( p-value=0.003). The molecular investigations for the polymorphism of the IL-4 and IL-5 genes have been conducted through the PCR-RFLP technique for the SNPs  rs2243250 and rs2069812. The results of IL-4 (rs2243250): The highest genotype in the case group was the CT heterozygote genotype (60%) followed by the homozygote genotype CC, TT (20%). The highest genotype in the control group was the TT homozygote genotype (76%) followed by the homozygote genotype CC (24 %). Analyses showed significant differences between cases and controls in the IL-4 (rs2243250) polymorphism (CC vs CT: OR=72.6190., 95% CI 3.9463 to 1336.3195, P= 0.0039). The analysis also showed significant differences between cases and controls in the IL-4 (rs2243250) polymorphism (CC vs TT: OR=0. 3158, 95% CI: 0.1061 to 0.9399, P=0. 0383),  higher correlation between IL-4 level and IL-5 level with  TT genotype (P = 0.001 and 0.000, respectively) also there is a significant correlation between age and   CT genotype and age (p=0.009). The IL- 5 rs2069812 gene polymorphism revealed  that The highest genotype in control group was TT homozygous genotype (66 %) followed by heterozygous genotype TC (34%)  . In cases , the highest genotype was TC heterozygous genotype (64 %) followed by TT homozygous genotype (24%) and homozygous CC (12%).The genotypic frequency of heterozygous TC with homozygous TT (OR=  5.1765,95 % CI= 2.1372 to 12.5379, P=  0.0003). and the genotypic frequency of homozygous variant CC with the homozygous TT (OR=34.8, 95 percent CI=1.8255 to 664.9429, P= 0.0183).There were significant differences in C allele frequencies in patients as compared to the controls in the IL- 5 rs2069812 polymorphism (OR=3.3130, 95% CI = 1.7041 to 6.4408 , P=0.0004). A higher correlation between IL-4 level and IL-5 level  with  TT genotype (P = 0.017 and 0.004, respectively) also there are significant  correlation between age and   CC genotype and age (p=0.000).