Propofol ketamin remifentanil ve kombinasyonlarının meme kanser hücrelerinin proliferasyonu migrasyonu ve apoptozu üzerine etkisinin in vitro araştırılması
Investigation of the in vitro effects of propofol ketamine remifentanil and their combinations on the proliferation, migration and apoptosis of breast cancer cells
Yazar: EBRU SÖNMEZ
Danışman: PROF. DR. ALİYE ESMAOĞLU ÇORUH
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, propofol, ketamin, remifentanil ve bu ilaçların propofolle kombinasyonlarının MDA-MB-231 hücre hattında proliferasyon, koloni formasyonu, migrasyon, apoptoz ve apoptoz yolağında yer alan kaspazlar üzerine etkilerinin in vitro araştırılması amaçlanmıştır.
Materyal ve metot: Tüm deneylerde üçlü negatif meme kanseri hücre hattı MDA-MB-231 hücre hattı kullanıldı. Hücre canlılığını değerlendirmek için MTS analizinde hücreler propofol, ketamin ve remifentanilin 1, 10, 25, 50, 100 μM konsantrasyonları ile 24 saat muamele edildi. Klonojenik testte propofol, ketamin, remifentanil, propofol+ketamin, propofol+remifentanilin 1, 10, 25, 50, 100 μM konsantrasyonları kullanıldı. İlaçların tek başına ve propofolle kombinasyonları 100 μM dozda migrasyon, apoptoz ve kaspaz düzeylerini belirlemek için kullanıldı. Migrasyonu değerlendirmek için yara iyileştirme testi, apoptoz analizi annexin-V ile boyanan hücrelerin flowsitometrik analizi ve kaspaz-3, 8, 9 düzeyleri içinse western blot yöntemi uygulandı.
Bulgular: Hücre canlılığını propofol 10 μM konsantrasyonda azaltırken (p<0,05), 100 μM konsantrasyonda artırdı (p<0,0001). Remifentanille hücre proliferasyonunda anlamlı bir fark gözlemlenmezken ketamin sadece 1 μM konsantrasyonda proliferasyonu artırdı (p<0,05). MDA-MB-231 hücrelerinde koloni formasyonunu propofol (p<0,05) ve propofol-remifentanil (p<0,01) kombinasyonu 100 μM konsantrasyonda azaltırken ketamin ve remifentanilin anlamlı bir etkisi yoktu.  Profopol-ketamin kombinasyonu ise tüm konsantrasyonlarda koloni formasyonunu azalttı (bütün konsantrasyonlarda p<0,0001). Migrasyonu 24. saatte remifentanil hariç diğer ilaçlar azaltırken (P+R; p<0,05, propofol; p<0,001, diğerleri; p<0,0001), 48. saatte tamamı migrasyonu azalttı (p<0,0001). Apoptozu sadece propofol-ketamin ve propofol-remifentanil ilaç kombinasyonları arttırdı. (P+R; p<0,05, P+K; p<0,001).  Kaspaz düzeyleri çoğunlukla değişmezken, propofol-ketamin ve propofol-remifentanil ilaç kombinasyonlarının kaspaz-9 düzeyini azalttığı tespit edildi (P+R; p<0,05, P+K; p<0,01).
Sonuç: Bulgularımıza dayanarak tek başına ilaçlardan ziyade anestezi pratiğinde uygulanan TİVA'da olduğu gibi propofol-ketamin ve propofol-remifentanil ilaç kombinasyonlarının iyi onkolojik sonuçlarla ilişkili olabileceğini tespit ettik.

Abstract:
Purpose: In this study, it was aimed to investigate the effects of propofol, ketamine, remifentanil and combinations of these drugs with propofol on proliferation, colony formation, migration, apoptosis and caspases involved in apoptosis pathway in MDA-MB-231 cell line in vitro.
Materials and methods: The triple negative breast cancer cell line MDA-MB-231 was used in all experiments.To assess cell viability, cells were treated with 1, 10, 25, 50, 100 μM concentrations of propofol, ketamine and remifentanil for 24 hours in the MTS assay. In the clonogenic assay, 1, 10, 25, 50, 100 μM concentrations of propofol, ketamine, remifentanil, propofol+ketamine (P+K), propofol+remifentanil (P+R) were used in MDA-MB-231. The drugs alone and in combination with propofol were used to determine migration, apoptosis and caspase levels at a dose of 100 μM. Wound healing test was used to evaluate migration, flow cytometric analysis of cells stained with annexin-V for apoptosis analysis and western blot method for caspase-3, 8, 9 levels.
Findings: Cell viability was decreased by propofol at a concentration of 10 μM  (p<0,05) and increased at a concentration of 100 μM (p<0,0001). No significant difference in cell proliferation was observed with remifentanil, while ketamine increased proliferation only at a concentration of 1 μM (p<0,05). In MDA-MB-231 cells, propofol (p<0,05) and propofol-remifentanil combination (p<0,05) decreased colony formation at a concentration of 100 μM, while ketamine and remifentanil had no significant effect. Profopol-ketamine combination decreased colony formation at all concentrations (p<0,0001 for all concentrations). While all drugs except remifentanil decreased migration at 24 h (P+R; p<0,05, propofol; p<0,001, others; p<0,0001), all drugs decreased migration at 48 h (p<0,0001). Only combination drugs increased apoptosis (P+R; p<0,05, P+K; p<0,001). While caspase levels were mostly unchanged, combination drugs decreased caspase-9 levels (P+R; p<0,05, P+K; p<0,01).
Conclusion: Based on our findings, we found that combination drugs, such as TIVA as applied in anaesthetic practice, rather than monotherapy, may be associated with better oncological outcomes.