Nikotin maruziyetinin fare embriyonik kök hücrelerinde nöronal farklılaşma üzerine etkisi
The effects of nicotine exposure on neural differentiation in mouse embryonic stem cells
Yazar: İNAYET NUR USLU
Danışman: PROF. DR. AYFER PAZARBAŞI
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Fareler = Mice ; Fetal gelişim = Fetal development ; Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Kök hücreler = Stem cells ; Nikotin = Nicotine ; Nöronlar = Neurons ; Sigara dumanı kirliliği = Tobacco smoke pollution

Özet:
Günlük hayatımızın her evresinde birçok biyolojik, fiziksel ve kimyasal ajanlara maruz kalmamız ciddi sağlık problemlerine yol açmaktadır. Hatta bu ajanlara maruziyetimiz, belki de yaşamımızın en önemli evresi diyebileceğimiz organizmanın temelinin atılıp oluşturulduğu fetal dönemden başlamaktadır. Nikotin de, bu kimyasal ajanlardan biridir. Fetal gelişim sırasında nikotine maruz kalmanın hem anne hem de fetüs için zararlı etkilerinin olduğu ileri sürülmüş ancak bu etkilerin hücresel düzeyde anlaşılabilmesi için bu konudaki çalışmaların artırılması gerekmektedir. Biz de bu tez çalışmasında gelişim sürecinde nikotine maruz kalmanın etkilerini incelemeyi amaçladık.
Bu amaçla fare embriyonik kök hücrelerini in vitro ortamda nikotine maruz bırakarak farklılaştırdık. Farklılaşma sırasında ve sonunda kültürdeki hücreleri toplayarak Gfap, Nestin, O4, β-3 Tubulin ve Map2 proteinlerine immünohistokimyasal boyama (İHC) ile baktık. Real Time PCR analizi ile de NEUROG2, RBFOX3, TUBB3, GSK3B ve PAX6 genlerinin ekspresyonlarına baktık.
Çalışmamızın sonunda; nikotine maruz kalan grubumuzda gen ekspresyonlarının değiştiği, kontrol grubuna nazaran gen ekspresyonlarında azalma olduğu görüldü. İHC sonuçlarında Map2, β-3 Tubulin ve O4 ekspresyonlarında nikotinli gruplarda nikotinsizlere nazaran azalma olduğuGfap ve Nestinde ise 21. gün hariç diğer günlerde azalma olduğu görülmüştür.

Abstract:
Exposure to many biological, physical and chemical agents in our daily life threatens our health. This exposure begins in our early life stages like fetal period that is the most important period in our lives. Nicotine is one of these chemical agents. It has been suggested that exposure to nicotine during fetal development has harmful effects for both mother and fetus, but studies on this subject need to be increased in order to understand these effects at the cellular level. In this thesis, we aimed to examine the effects of nicotine exposure during the development process.
For this purpose, we differentiated mouse embryonic stem cells by exposing them to nicotine in vitro. We looked at Gfap, Nestin, O4, β-3 Tubulin and Map2 proteins by immunohistochemical staining (IHC) by harvesting cells in culture during and at the end of differentiation. We looked at the expressions of NEUROG2, RBFOX3, TUBB3, GSK3B and PAX6 genes with Real Time PCR analysis.
At the end of our study; It was observed that gene expressions were changed in our group exposed to nicotine, and there was a decrease in gene expressions in the nicotine-exposed group compared to the control group. In IHC results, it was observed that Map2, β-3 Tubulin and O4 expressions were decreased in nicotine groups compared to non-nicotine groups, and Gfap and Nestin decreased on days other than 21 days.