Spektroflorimetrik yöntemle farmasotik formülasyonlardan somon kalsitonin miktar tayini
Spektroflorimetrik yöntemle farmasotik formülasyonlardan somon kalsitonin miktar tayini
Yazar: DENİZ KOÇDAN
Danışman: DOÇ. DR. HASAN BASAN
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry
Dizin: Flüoresan spektrometri = Fluorescence spectrometry ; Kalsitonin = Calcitonin ; Som balığı = Salmon

Özet:
Bu çalışmada somon kalsitoninin ampullerden tayini amacıyla spektroflorimetrik bir yöntem geliştirilmiştir. Bu amaçla, kalsitonin florofor bir ajan olan fluorescamin ile türevlendirilmiştir. Türevlendirme işlemi optimize edilmiş ve en uygun türevlendirme koşulunun 0,5 M, pH 8,5 borat tamponu içerisinde olduğu tespit edilmiştir. Türevlendirme amacıyla kullanılan 0,125 mg/mL fluoresamin, aseton içerisinde çözülerek hazırlanmıştır. Türevlendirme işleminin başarı ile gerçekleştirildiğini görmek amacıyla türevlendirilmiş kalsitoninin UV-VIS spektrofotometresi ile spektrumu alınmıştır.Türevlendirme işleminden sonra, uyarma dalga boyu olarak 389 nm ve emisyon dalga boyu olarak da 484 nm kullanılarak floresans sinyalleri ölçülerek miktar tayinleri gerçekleştirilmiştir (uyarma ve emisyon slitlerinin genişlikleri 10 nm). Kalsitonin miktar tayini amacıyla piyasadaki ampul formülasyonu kullanılmıştır. Yöntemin doğrusal aralığı, 0,50-6,0 µg/mL, regresyon denklemi, F=120 C +24,7 korelasyon katsayısı, R=0,9990, gözlenebilme sınırı 0,130 µg/mL ve miktar sınırı ise 0,391 µg/mL olarak bulunmuştur. Yapılan çalışmalarda elde edilen yüksek orandaki geri kazanım değeri, %101,3±4,86, geliştirilen spektroflorimetrik yöntemin doğruluğunu göstermektedir.Floresans spektroflorimetrisine karşı referans bir yöntem olarak HPLC kullanılmıştır. HPLC yöntemi, İngiliz Farmakopeden alınarak (daha kısa zamanda sonuç vermesi için) uyarlanmıştır.Floresans spektroflorimetri yönteminde olduğu gibi kalsitonin miktar tayini amacıyla piyasadaki ampul formülasyonu kullanılmıştır. HPLC yönteminin doğrusal aralığı, 0,475-3,800 µg/mL, regresyon denklemi, y=65012C-7858, korelasyon katsayısı, R=0,9994, gözlenebilme sınırı 0,040 µg/mL ve miktar sınırı ise 0,120 µg/mL olarak bulunmuştur. HPLC ile yapılan çalışmalarda elde edilen geri kazanım değeri, % 97,16±4,52, geliştirilen HPLC yönteminin de doğruluğunu göstermektedir.Spektroflorimetrik yöntem ve HPLC yöntemi istatistiksel olarak Student't ve Fisher Testleri ile karşılaştırılmıştır ve her iki yöntemle elde edilen sonuçlar arasındaki farkın anlamsız olduğu görülmüştür. Yani bu istatistiksel veriler her iki yöntemin doğru ve kesin olduğunu göstermektedir.

Abstract:
In this study, a spectroflourimetric method was developed for the determination of calcitonin in ampules. For this purpose, calcitonin was derivatized using fluorescamine as a fluorogenic agent. After optimization of the derivatization conditions, it was decided to use 5.0 mL of 0.5 M borate buffer pH 8.5. Fluorescamine was dissolved in acetone, 0.125 mg/mL. In order to see whether derivatization reaction was achieved or not, absorption spectrum of derivatized sCT was recorded using UV/VIS spectrophotometer and it was seen that there was an absorption maximum at 389 nm conforming the derivatization.Quantitative determinations were conducted by setting the excitation and emission monochromators and slit widths to 389, 484 and 10 nm, respectively. Standard solutions of the derivatized sCT were in the range of 0.5 to 6.0 µg/mL and regression equation and correlation coefficient were obtained as F=120 C +24.7 and R = 0.9990, respectively. Limits of detection and quantification were 0.130 and 0.391 µg/mL, respectively. High recovery value, 101.3 and low standard deviation value, 4.86 proved the accuracy of the proposed method.HPLC was used as an reference method. The method was updated from British Pharmacopeia for more less analysis time. Regression equation and correlation coefficient were obtained as y=65012C-7858 and R=0.9994, respectively. High recovery value, 97.16% and low standard deviation value, 4.52, proved the accuracy of the HPLC method.Spectroflourimetric method and HPLC method were compared by applying Student?t and Fisher Tests to both methods. As a result, it can be said that accuracy and precision of the proposed method are very high.