Prostat kanseri hücrelerinde tarantula cubensis alkolik ekstraktının in vitro terapötik etkinliği
In vitro therapeutic effectiveness of tarantula cubensis alcholic extract in prostate cancer cells
Yazar: DENİZ GÜL
Danışman: DOÇ. DR. HACI İBRAHİM ÇİMEN
Sakarya Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Akridinler = Acridines ; Anneksin V = Annexin V ; Apoptozis = Apoptosis ; Prostat = Prostate ; Prostat hastalıkları = Prostatic diseases ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Tarantula cubensis = Tarantula cubensis ; İn vitro = In vitro

Özet:
GİRİŞ VE AMAÇ: Homeopatik ilaç olarak kullanılan Tarantula cubensis alkolik ekstraktı (TCAE)'nın prostat kanserindeki terapötik etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır. 
GEREÇ VE YÖNTEM: Prostat kanseri hücre hattı olarak DU-145 ve LNCaP, kontrol hücre hattı olarak ise HUVEC hücreleri kullanılmıştır. TCAE'nin hücre canlılığı üzerine olan etkisi WST-1 analizi, apoptotik etkisi ise Annexin V analizi ile değerlendirilmiştir. Ayrıca TCAE'nin apoptotik hücre morfolojisi üzerine olan etkisi de Akridin Oranj boyama ile gösterilmiştir. Tüm analizlerde hücrelere 25, 50, 100 ve 250 µM dozlarda TCAE uygulanmıştır, TCAE uygulanmayan hücreler negatif kontrol grubu olarak değerlendirilmiştir ve deneyler üçer kez tekrar edilmiştir. WST-1 analizinde hücreler tüm dozlarda 24 ve 48 saat boyunca TCAE ile inkübe edilmiştir. Annexin V analizi ve Akridin Oranj boyaması için ise WST-1 analizine göre 48 saatlik TCAE inkübasyonu etkin süre olarak seçilmiştir.
BULGULAR: TCAE, DU-145 ve LNCaP hücrelerindeki canlılık oranlarını zaman bağımlı olarak bağlı olarak azaltmıştır (p<0,01).  DU-145 ve LNCaP hücreleri için en düşük canlılık oranları 48 saat inkübasyon sonrasında, sırasıyla 250 ve 25 μM dozlarda, %62,76±4,21 ve %55,68±1,84 olarak belirlenmiştir. Ayrıca, TCAE HUVEC hücreleri üzerinde sitotoksik etki göstermemiştir. Apoptotik hücre oranları, DU-145 ve LNCaP hücrelerinde sırasıyla 250 ve 25 μM TCAE inkübasyonu ile %30,45±0,78 ve %45,02±1,32 olarak tespit edilmiştir. Morfolojik olarak, DU-145 ve LNCaP hücrelerinde bozulmuş çekirdek/sitoplazma oranı, kromatin yoğunlaşması, membran tomurcuklanması ve vakuoler hasar gözlenmiştir.
SONUÇ: TCAE'nin, LNCaP hücrelerinin DU-145 hücrelerine göre daha fazla duyarlı olduğu, her iki prostat kanseri hücresi üzerinde sitotoksik apoptotik etkileri bulunmaktadır. Bu çalışma literatürdeki ilk çalışmadır ve bu nedenle TCAE'nin prostat kanseri için kemoterapötik madde olabilme potansiyelini belirlemek için daha ileri moleküler çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.
Anahtar Kelimeler: Apoptoz, DU-145, LNCaP, prostat cancer, Tarantula cubensis alkolik ekstraktı

Abstract:
OBJECTIVE: It was aimed to investigate the therapeutic efficacy of Tarantula cubensis alcoholic extract (TCAE), which is used as a homeopathic medicine, in prostate cancer.
MATERIAL AND METHODS: DU-145 and LNCaP cells were used as prostate cancer cell lines, and HUVEC cells were used as control cell lines. The effect of TCAE on cell viability was evaluated by WST-1 analysis, and its apoptotic effect was evaluated by Annexin V analysis. In addition, the effect of TCAE on apoptotic cell morphology was demonstrated by Acridine Orange staining. In all analyzes; 25, 50, 100 and 250 µM doses of TCAE were applied to the cells, cells without TCAE were considered as negative control group and the experiments were repeated at three times. In the WST-1 assay, cells were incubated with TCAE for 24 and 48 hours for all doses. For Annexin V analysis and Acridine Orange staining, 48 hours incubation of TCAE was selected the effective exposure time according to WST-1 analysis.
RESULTS: TCAE decreased the viability rates in DU-145 and LNCaP cells in a time-dependent manner (p<0.01). The lowest viability rates for DU-145 and LNCaP cells were determined as 62.76%±4.21% and 55.68±1.84% at 250 and 25 μM doses, respectively, after 48 hours of incubation. Moreover, TCAE have not shown any cytotoxic effect on HUVEC cells. Apoptotic cell rates were found as 30.45±0.78% and 45.02±1.32% in DU-145 and LNCaP cells with 250 and 25 μM TCAE incubation, respectively. Morphologically, impaired cell/cytoplasm ratio, chromatin condensation, membrane blebbing, and vacuolar damage were observed in DU-145 and LNCaP cells.
CONCLUSION: TCAE has cytotoxic apoptotic effects, which LNCaP cells more sensitive than DU-145 cells, on both prostate cancer cell lines. This is the first study in the literature and therefore, further molecular studies are needed to determine the potential of TCAE as a chemotherapeutic agent for prostate cancer.
Keywords: Apoptosis, DU-145, LNCaP, prostate cancer, Tarantula cubensis alcoholic extract