Libya'da böbrek nakli olmuş hastaların parvovirus b19 (pvb19) tespitinde elisa sonuçlarının real-time pcr ile doğrulanması
The use real time-pcr to confirm elisa results in parvovirus b19 (Pvb19) detection of patients with kidney transplantation in libya
Yazar: MUSBAH EMHAMED FARAQ ALMBSUOT
Danışman: PROF. DR. BAYRAM KIRAN
Kastamonu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2020
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Genetik = Genetics

Özet:
Tek zincirli bir DNA virüsü olan B19, Parvoviridia familyasına aittir ve sadece insanda patojen olduğu bilinir. İnsanda özellikle organ nakli alıcıları gibi immün baskılanmış hastalarda birçok soruna neden olur. Böbrek nakli hastalarında parvovirüs B19, immün yanıtın başarısızlığından dolayı yıllarca devam edebilir, anemi ve başka bir retikülonitopeni gibi kronik klinik belirtilerle ilişkili olabilir.  

Libya'da iki ana böbrek nakli merkezinde (Tripoli Central Hospital- General Hawari Hospital) 2017 Ocak ayından 2017 Aralık ayına kadar olan periyotta kontrol edilen yaşları 12-64 arasında değişen 50 böbrek nakli hastasından (10 kadın-40 erkek) 5 mL kan örneği alındı. Numunelere 3000 RPM'de 5 dakika santrifüj yapıldı ve serumu alındı. Alınan serumlar analize kadar -20 °C'de dondurularak saklandı. Numuneler hastaların yaş, cinsiyet, kanın alım tarihi, kullandıkları immün süpresif ilaçlar, tıbbi öyküleri gibi bilgilerle desteklendi. Tüm numuneler, Parvovirus B19 IgM'ye karşı tespit antikoru ve dolaylı ELISA prensiplerine bağlı olarak parvovirus B19 IgG'ye karşı antikor için enzim bağlı immünosorbent tahlil tekniği (ELISA) ile analiz edildi. Pozitif sonuçlar, RT-PCR ile doğrulandı.  

Parvovirus B19 oranının seropozitifi, IgM (akut enfeksiyon) için 3/50 (%6) ve IgG (kronik enfeksiyon) için 34/50 (%66) idi. Libya böbrek naklinde ParvovirusB19'un seropozitifliği (Her iki IgM, IgG) yaşa bağlıdır; etkilenen yaş, 20-39 yaş arasındaydı. Tüm IgM sonuçları pozitif iken, 20 örnekten 6 BN pozitif seçildi.  

Sonuç, Libya'daki böbrek nakli arasında yaygın olan Parvovirus B19'un ve Libya böbrek nakli hastalarının %35'inin B19 tarafından enfeksiyona duyarlı olduğunu göstermiştir. RT-PCR, özellikle virüs prevalansını saptadığında, gerçek viral enfeksiyonu ELISA'dan daha fazla tespit eder.

Abstract:
B19 is a single strand DNA virus belongs to the Parvoviridia family and only parvovirus known to be a pathogen in human. It causing several problems in human especially in immunosuppressed patients such as organ transplant recipients. In kidney transplant patients parvovirus B19 can continue for years due to failure the immune response and it may be associated with chronic clinical manifestations such as anemia and another reticuloncytopenia.  

Fifty renal transplant patient (10 women and 40 men) who checked up in two main kidney transplant centers in Libya (Tripoli Central Hospital-General Hawari Hospital) during the period from first of January 2017 to end of December 2017 in different years post transplantation, the age ranged between 12-64 years old, 5ml of blood samples collected from each patient in white tube to getting serum by centrifugation them for 5 min at 3000RPM, and kept frozen at (-20) till analyses. The samples were collected support by questioner include some information about patient include age, sex, date of translation, immunosuppression drugs and medical history. All samples were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay technique (ELISA) for detection antibody against Parvovirus B19 IgM and antibody against parvovirus B19 IgG depended on indirect ELISA principles. The positive results were confirmed by RT-PCR. The seropositive of Parvovirus B19 rate was 3/50 (6%) for IgM (acute infection) and 34/50(66%) for IgG (chronic infection). Seropositive of ParvovirusB19 in Libyan kidney transplant (Both IgM, IgG) depends on age; most age affected was between 20-39 years old. All positive results of IgM, while the 6kt positive from 20 samples were chosen.  

The conclusion demonstrated that ParvovirusB19 common among kidney transplant in Libya and 35% of Libyan kidney transplant patients were susceptible to the infection by B19, RT-PCR detect the real viral infection more than ELISA especially in case detect the prevalence of virus.