MCF-7 hücrelerinde oksidatif hasara karşı cisplatin ile kombinasyonda resveratrolün sinerjik etkisi ve oksidatif stres indeksi
Synergistic effect of resveratrol in combination withcisplatin against oxidative damage and oxidative stressindex on MCF-7 cells
Yazar: ARDA SEVER
Danışman: DOÇ. DR. FİLİZ ÖZDEMİR
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücreler = Cells ; Kombinasyon = Combination ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm kök hücreleri = Neoplastic stem cells ; Oksidatif hasar = Oxidative damage ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Resveratrol = Resveratrol ; Sisplatin = Cisplatin

Özet:
Dünya genelinde, kardiyovasküler hastalıklardan sonra en çok ölüme kanser neden olmaktadır. Meme kanseri, kadınlarda en sık rastlanan kanser türü olması nedeni ile önemli bir sağlık problemidir. Cisplatin (CDDP); akciğer, rahim, meme, testis ve beyin kanseri gibi pek çok kanser türüne karşı sıklıkla uygulanan bir kemoterapi ajanıdır. Cisplatin, hücrelerde DNA hasarı ve oksidatif stres oluşturarak etki göstermektedir. Resveratrol (RSV), kuvvetli antioksidan özelliğe sahip olan, stilbenler grubuna ait bir flavonoiddir. RSV'nin anti-kanser, östrojenik/anti-östrojenik, anti-inflamatuvar, anti-koagulant ve dolaşım sistemini koruyucu gibi pek çok biyolojik aktiviteye sahip olduğu belirlenmiştir. Bu tez çalışması kapsamında, CDDP ve RSV'nin kombinasyon halinde kullanımının, MCF-7 meme adenokarsinom hücreleri üzerindeki apoptotik ve oksidatif stres oluşturucu etkileri ele alınmıştır. CDDP ve RSV'nin MCF-7 hücreleri üzerindeki sitotoksik etkilerinin belirlenmesi amacı ile MTT yöntemi kullanılmıştır. MTT deneyi sonucunda CDDP ve RSV'nin IC50 değerleri sırasıyla 96±12 μM ve 180±16 μM olarak hesaplanmıştır. Elde edilen IC50 değerlerinin yüzdeleri üzerinden KM30 (28,8 μM CDDP + 54 μM RSV) ve KM40 (38,4 μM CDDP + 72 μM RSV) kombinasyonları oluşturulmuştur. CDDP, RSV ve kombinasyonların hücreler üzerindeki apoptotik etkileri, Annexin/PI, MMP ve TUNEL yöntemleri ile belirlenmiştir. KM40 kombinasyonu, apotozun belirlemesi amacı ile yapılan tüm deneylerde, CDDP ve RSV'nin tek başına uygulandığı gruplardan daha yüksek oranda apoptoza neden olmuştur. Maddelerin hücrelerin oksidatif dengeleri üzerindeki etkilerinin belirlenmesi amacı ile Total Antioksidan Durum (TAS) ve Total Oksidan Durum (TOS) kolorimetrik yöntemleri kullanılmış ve bu deneylerden alınan veriler kullanılarak Oksidatif Stres İndeksi (OSI) hesaplanmıştır. Kombinasyon uygulanan hücre grupları (KM30: 0,70, KM40: 1,60), tek başına cisplatin uygulanan grup (OSI: 1,97) ile kıyaslandığında, oksidatif stresin azaldığı belirlenmiştir. Sonuç olarak düşük doz CDDP ve RSV içeren KM30 ve KM40 kombinasyonları, apoptotik ölümü indükleyerek MCF-7 hücre büyümesini sinerjistik bir şekilde inhibe etmiş ve hücrelerde CDDP aracılığı ile oluşan oksidatif stresi azaltmıştır.

Abstract:
Cancer is the most common cause of death after cardiovascular diseases. Breast cancer is an important health problem with the reason that it is the most common type of cancer in women. Cisplatin (CDDP) is a widely used chemotherapeutic agent against lung, cervix, breast, testicle and brain cancers. Cisplatin's anticancer activity comes from its ability to induce DNA damage and oxidative stress in cells. Resveratrol (RSV) is a potent antioxidant flavonoid belonging to stilbenoids. It has been shown that RSV has many biological activities including anti-cancer, estrogenic/ anti-estrogenic, anti-inflammatory, anti-coagulant and cardioprotective activity. Within the scope of this thesis study, apoptotic and oxidative stress inducing effects of CDDP and RSV combinations against MCF-7 breast adenocarcinoma cells was investigated. MTT assay was used to determine the cytotoxic effects of CDDP and RSV. IC50 values of CDDP and RSV was found at 96±12 μM and 180±16 μM respectively. KM30 (28,8 μM CDDP + 54 μM RSV) and KM40 (38,4 μM CDDP + 72 μM RSV) combinations were prepared from percentages of IC50 doses. To evaluate the apoptotic effects of CDDP, RSV and combinations; Annexin V-FITC/PI, MMP and TUNEL assays were conducted. In all of the experiments that were conducted to detect apoptosis, KM40 combination caused the highest apoptotic response. In order to determine the compounds effect on cells oxidative balance, Total Antioxidant Status (TAS) and Total Oxidant Status (TOS) colorimetric assays were used and by using the data from these assays, Oxidative Stress Index (OSI) was calculated. When compared to the cisplatin-only group (OSI: 1,97), combinations (KM30: 0.70, KM40: 1,60) reduced the oxidative stress of cells. In conclusion, combinations of low doses of CDDP and RSV, synergistically inhibited the growth of MCF-7 cells by inducing apoptosis and reduced the oxidative stress caused by CDDP.