25-OH vitamin D3'ün analitik standardizasyonunda test performans kriterlerinin HPLC, RIA ve ELISA yöntemleriyle karşılaştırılması
Comparison of HPLC, RIA, ELISA methods in determining 25-OH vit D levels by the means of test performance criteria
Yazar: SERKAN PİRİNÇÇİ
Danışman: PROF. DR. ABDURRAHMAN KAPLAN
Dicle Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kolekalsiferol = Cholecalciferol ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Radyoimmünoassay = Radioimmunoassay ; Vitamin D = Vitamin D ; Vitamin D eksikliği = Vitamin D deficiency

Özet:
AMAÇ: Vitamin D düzeyinin belirlenmesinde 25-OH Vitamin D ölçülmesi klinik bir belirleyici olarak kabul edilmiştir. Bu nedenle 25-OH Vitamin D'nin doğru ölçülmesi büyük önem arz etmektedir. Bu çalışmada, HPLC yöntemi için yöntem değerlendirme çalışması yapılmış, HPLC yöntemi geçerli kılınmış ve bu yöntem ELISA ve RIA yöntemleri ile karşılaştırılmıştır.GEREÇ ve YÖNTEMLER: 25-OH Vitamin D ölçümünde yöntem geçerli kılma çalışması yapıldıktan sonra HPLC referans yöntem olarak kabul edilmiştir. Daha sonra HPLC yöntemi ELISA ve RIA yöntemleri ile karşılaştırılmıştır.BULGULAR: 25-OH Vitamin D için HPLC yöntemiyle 2 seviyede gün içi ve günler arası tekrarlanabilirlik çalışması yapıldı. Gün içi tekrarlanabilirlik çalışmasında %CV değerleri 5.93 ve 2.37, günler arası tekrarlanabilirlik çalışmasında ise 7.00 ve 2.60 bulunmuştur. Geri kazanım çalışması sonucu ortalama %95 (%93-96) bulunmuştur. HPLC yönteminin ELISA yöntemi ile karşılaştırılması sonucunda r değeri 0.36, p değeri ise 0.022, RIA yöntemi ile karşılaştırılması sonucunda ise r değeri 0.22, p değeri ise 0.174 bulunmuştur.SONUÇ: HPLC yönteminin referans yöntem kabul edildiği çalışmada RIA yönteminin sonuçlarının istatistiksel olarak anlamlı olmadığı ve klinik çalışmalarda doğruluğunun yeterli olmadığı, ELISA yönteminin ise istatistiksel olarak anlamlı ve orta derecede uyumlu olduğu belirlendi.ANAHTAR KELİMELER: 25-OH Vitamin D, HPLC, ELISA, RIA, Yöntem karşılaştırma

Abstract:
Objective: 25-OH Vitamin D measurement is the most common and valuable method when identifying Vitamin D status. On this account precise measurement of 25 OH Vitamin D is highly important. In this study, method evaluation process has been done for HPLC method, the method has been made valid and it is compared with ELISA and RIA methods respectively.Material and Methods: After doing method validation study for 25-OH Vitamin D, HPLC is regarded as reference method. Then HPLC is compared with ELISA and RIA methods respectively.Results: Repeatability study has been done in 2 levels, interassay and intraassay %CV values, for 25-OH Vitamin D. for interassay repeatability process, levels of %CV are found as 5.93 and 2.37. For intraassay repeatability process, levels of %CV are found as 7.00 and 2.60. Result of recovery assay is found as mean of %95 (%93-96). When comparing HPLC to ELISA, R value is found 0.36 and p value is found 0.022; when comparing HPLC to RIA, R value is found 0.22 and p value is found 0.174.Conclusions: In this study which regards HPLC method as reference, it is found that RIA method is statistically differs significant from HPLC method and lacks precision in clinic studies while ELISA method is statistically insignificant from HPLC method but half precise.Keywords: 25-OH Vitamin D, HPLC, ELISA, RIA, Method Comparison