Ratlarda deneysel olarak indüklenen periodontitis modelinde alveolar kemik kaybı üzerine sistemik eritropoetin uygulamasının etkisi
The effect of the application of systemic erythropoet on alveolar bone loss in the periodontitis model experimentally induced in the rats
Yazar: AMİN ADİL
Danışman: DOÇ. DR. HAKAN ÖZDEMİR
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Diş Hekimliği Fakültesi / Periodontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Diş Hekimliği Uzmanlık, 2020
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Alveolar kemik kaybı = Alveolar bone loss ; Eritropoietin = Erythropoietin ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Periodontitis = Periodontitis ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç
Bu araştırmada amacımız deneysel olarak indüklenen periodontitis varlığında sistemik olarak uygulanan Eritropoetin (EPO)'nin periodontal dokulardaki inflamasyon ve kemik kaybı üzerindeki etkilerini gözlemlemek ve terapötik etkisini araştırmaktır. 
Gereç ve Yöntem
Çalışmada 250-300 gram ağırlığında 50 adet 12-14 haftalık erkek Sprague Dawley rat kullanılmıştır. Ratlar beş eşit gruba ayrıldı: Kontrol grubu (K, n=10), Periodontitis grubu (P, n=10), Kontrol+Darbepoetin alfa 0.25 µg/kg/gün grubu (K+EPO 0.25, n=10), Periodontitis+Darbepoetin alfa 0.1 µg/kg/gün grubu (P+EPO 0.1, n=10) ve Periodontitis+Darbepoetin alfa 0.25 µg/kg/gün grubu (P+EPO 0.1, n=10). Deneysel periodontitis oluşturmak için ratların sağ mandibular 1.moları dişlerine 4/0 ipek ligatürler submarjinal olarak yerleştirildi. 11 günlük EPO uygulamasından sonra ratlar sakrifiye edildi. Ratlardan dişeti örnekleri ve mandibula total olarak alınmıştır. Mikro-bilgisayarlı tomografi (Mikro-BT) analizi yaparak alveoler kemik kaybı miktarı mandibular 1.molar ve 2.molar arasında interproksimal bölgede mine-sement sınırından alveoler kret arası mesafeler ölçülerek hesaplanmıştır. Gruplardan alınan diğer kemik örneklerinde histolojik yöntemlerle osteoklast hücre sayımı yapılmıştır ve immünhistokimyasal yöntemlerle apoptoz oranı hesaplanmıştır. qRT-PCR yöntemi ile EPO, EPO-R, TNF-α, IL-1β ve IL-6 mRNA düzeyleri ölçülmüştür.
Bulgular
Mikro-BT analizi sonuçlarına göre, P+EPO 0.1 (0,7980±0,05978) ve P+EPO 0.25 (0,7720±0,03967) gruplarında kemik kaybı miktarı periodontitis (1,2720±0,07729) grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azalmıştır (p<0.05). Yapılan histolojik analizlerin sonucuna göre, P+EPO 0.1 ve P+EPO 0.25 gruplarında osteoklastik aktivite periodontitis grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı düzeyde düşük bulunmuştur (p<0.05). İmmünhistokimyasal analizin sonuçlarına göre TUNEL boyaması incelendiğinde, P+EPO 0.1 (7,060±4,076) ve P+EPO 0.25 (10,19±9,746) gruplarında apoptotik hücre indeksi periodontitis (44,93±16,86) grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı düzeyde düşük bulunmuştur (p<0.05). qRt-PCR yöntemi analizi sonucunda, P+EPO 0.1 ve P+EPO 0.25 gruplarında TNF-α, IL-1β ve IL-6 gen ekspresyon düzeyleri kontrol grubuna yakın bulunmuştur (p>0.05). EPO-R gen ekspresyon düzeyleri ise P+EPO 0.1 ve P+EPO 0.25 gruplarında periodontitis grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı olmasa da yüksek çıkmıştır (p>0.05).
Sonuç
Bu çalışmanın sonucunda EPO'nin anti-inflamatuar, antiapoptotik ve sitoprotektif etkileriyle periodontal hastalık esnasında perioodontal dokuları koruyabileceğini söyleyebiliriz.
Anahtar Kelimeler: Ertiropoetin, İnflamasyon, Periodontitis

Abstract:
Aim
In this study, our aim is to observe and investigate the therapeutic effect of Erythropoietin (EPO) systemically applied in the presence of experimentally induced periodontitis on inflammation and bone loss in periodontal tissues.
Material and Method
In this study, fifty 12-14 week old male Sprague Dawley rats weighing 250-300 grams were used. Rats were divided into five equal groups: Control group (K, n = 10), Periodontitis group (P, n = 10), Control + Darbepoetin alpha 0.25 µg / kg / day group (K + EPO 0.25, n = 10), Periodontitis + Darbepoetin alpha 0.1 µg / kg / day group (P + EPO 0.1, n = 10) and Periodontitis + Darbepoetin alpha 0.25 µg / kg / day group (P + EPO 0.1, n = 10). To create experimental periodontitis, 4/0 silk ligatures were placed submarginally in the right mandibular 1st molar teeth of the rats. After 11 days of EPO application, the rats were sacrificed. Gingival samples and mandible were collected from rats. By micro-computed tomography (Micro-CT) analysis, the amount of alveolar bone loss was calculated by measuring the distances between the mandibular 1st molar and the 2nd molar between the alveolar crest in the interproximal region. In other bone samples taken from the groups, osteoclast cell counts were performed by histological methods and the rate of apoptosis was calculated by immunohistochemical methods. EPO, EPO-R, TNF-α, IL-1β and IL-6 mRNA levels were measured by qRT PCR method.
Results
According to micro-computed tomography (Micro-ct) analysis, bone loss amount in group P+ EPO 0.1 (0.7980 ± 0.05978) and group P+ EPO 0.25 (0.77720 ± 0.03967) was decreased significantly compared to the periodontitis group (1,2720 ± 0,07729) (p<0.05). According to the results of histological analysis, the osteoclastic activity is significantly lower in the P+ EPO 0.1 and P+ EPO 0.25 groups compared to the periodontitis group (p<0.05). According to the results of the immunohistochemical analysis, apoptotic cell index was statistically significantly lower in the P+ EPO 0.1 (7,060 ± 4,076) and P+ EPO 0.25 (10,19 ± 9,746) groups compared to the periodontitis group (44.93 ± 16.86) (p <0.05). According to the results of qRt-PCR method analysis, TNF-α, IL-1β and IL-6 gene expression levels were found close to the control group in P+ EPO 0.1 and P+ EPO 0.25 groups (p>0.05). EPO-R gene expression levels were higher in P+ EPO 0.1 and P+ EPO 0.25 groups, although not statistically significant compared to the periodontitis group (p>0.05).
Conclusion
As a result of this study, we can say that EPO can protect the perioodontal tissues during periodontal disease with its anti-inflammatory, antiapoptotic and cytoprotective effects.
Key Words: Erythropoietin, İnflammation, Periodontitis