Rosa damescena'nın oksidatif strese karşı antioksidan ve antitoksik etkilerinin fibroblast hücre kültüründe değerlendirilmesi
Evaluation of antitoxic and antioxidant effects of Rosa damescena for oxidative stress in cell cultured fibroblasts
Yazar: ZEYNEP KAHYA
Danışman: PROF. DR. İLHAN ONARAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Gül hastalığı = Rosacea ; Hücre kültürü = Cell culture ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Son yıllarda yapılan çalışmalar çeşitli gül türlerinin, farmokolojik etkilere sahip olduğunu ortaya çıkarmıştır. Ülkemizde yetiştirilen ve kozmetik sanayinde birçok kullanım alanı olan Rosa damescena türünün, fibroblast hücreleri üzerine antioksidan etkisi ve sitotoksititesine karşı koyma etkinliği ile ilgili çalışma bulunmamaktadır. Bu çalışmada, 3T3 ve primer fibroblast hücre kültürlerinde, Rosa damescena ekstraktının antioksidan, antitoksik etkisi ayrıca bu etkileri sağlayan en uygun konsantrasyonlar araştırıldı. Bu amaçla Rosa damescena ekstraktı 2 saat önce ve 24 saat önce çeşitli konsantrasyonlar da (2,5-100 µg/ml) inkübe edildi ve 48 saat LD50'ye yakın tert-bütillenmiş hidroperoksite maruz bırakıldı. Ekstraktın kültür şartlarına 24 saat önce verilmesinin incelenen parametreler açısından hücrelerde daha koruyucu olduğu gösterilmiştir. Bu inkübasyon şartında tripan mavisi canlılık testi ile değerlendirilen hücre ölümünü %50 baskılayan Rosa damescena'nın IC50 değerleri 3T3 fibroblast hücreleri için 9,6 µg/ml, primer fibroblast hücreleri için ise 6,1 µg/ml olarak bulunmuştur. Rosa damescena ekstraktının 2,5-40 µg/ml arasındaki konsantrasyonları, t-BOOH inkübasyonu sonucu azalan mitokondri membran potansiyelini ve ATP düzeylerini, sadece t-BOOH ile inkübe edilen negatif kontrol hücre grubuna göre, oldukça düzeltmiştir. Luminol bağımlı kemilüminesans ve DCFH oksidasyon çalışması için 3T3 ve primer fibroblast hücrelerinde reaktif oksijen tür ve radikal süpürücü Rosa damescena'nın IC50 değerleri yaklaşık olarak sırasıyla 4,2 µg/ml ve 3 µg/ml olarak bulunmuştur. Çalışmamızın sonucu olarak solvent olarak su ile hazırlanmış Rosa damescena ekstraktları fibroblast hücre kültürlerinde, hidroperoksitlerin oluşturduğu oksidatif stres ve sitotoksik etkiyi dar bir konsantrasyon aralığında (2,5-40 µg/ml) azalttığı, antioksidan ve antisitotoksik bir aktivite gösterdiği söylenebilir. Ayrıca reaktif oksijen türlerinin en yoğun şekilde meydana geldiği ve etkilediği mitokondri organelini, oksidatif hasara karşı kısmen koruduğunda söyleyebiliriz.

Abstract:
Recent studies show that some species of rose have pharmaceutical properties. Rosa damescena is widely grown in Turkey and is commonly used in cosmetic industry. Anti-oxidative and anti-cytotoxic effect of its extract on fibroblasts has never been reported. In this study, we investigated the presence of anti-oxidative, anti-toxic effects and also most effective concentrations for these effects in 3T3 and primary fibroblast cell cultures. The extract between concentrations of 2,5 µg/ml and 100 µg/ml was added to the fibroblast culture 2 and 24 hours before 48-hour exposition to the tert-buthyl hydroperoxide (t-BOOH) in approximately LD50 concentrations. Regarding parameters above, the protective effect on cells was higher in those exposed to the extract 24 hours prior to oxidative agent. Using tripan blue for evaluation of cell death IC50 was 9,6 µg/ml for 3T3 fibroblast and 6,1 µg/ml for primary fibroblasts. These values were the concentrations of Rosa damescena to supress the death of 50% of all cells. Concentrations between 2,5-40 µg/ml remarkably recovered low levels of t-BOOH induced membrane potentials and ATP levels in mitochondria, comparing to the negative control cells incubated with only t-BOOH. Luminol-dependent chemiluminesance and DCFH oxidation studies showed that, for the 3T3 and primary fibroblasts, IC50 values of Rosa damescena were 4,2 µg/ml and 3 µg/ml, respectively. We could conclude that, between short range of concentrations (2,5-40 µg/ml), water-solved Rosa damescena extracts reduced oxidative stress and cytotoxic effect, and therefore may have anti-oxidative and anti-cytotoxic activity. We may also conclude that mitochondria, organelles where reactive oxygen species mostly happen, can be partially protected by Rosa damescena againts oxidative damage.