Leptin hormonunun OVCAR-3 ve MDAH-2774 over kanseri hücre 
serilerinde hücre çoğalmasına etkileri ve sitokin/büyüme 
faktörü değişimleri
Effects of leptin on cell proliferation and cytokine levels in human ovarian cancer cell lines ovcar-3 and mdah-2774
Yazar: FATİH DİNÇER
Danışman: PROF. DR. MUSTAFA COŞAN TEREK
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Büyüme maddeleri = Growth substances ; Hormonlar = Hormones ; Hücre dizisi = Cell line ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Leptin = Leptin ; Obezite = Obesity ; Over hastalıkları = Ovarian diseases ; Over neoplazmları = Ovarian neoplasms ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Obezite çeşitli kanser tiplerinin gelişimiyle sıkı bağlantılı bir hastalıktır. Epidemiyolojik ve deneysel çalışmalar beslenme ve kanser arasındaki ilişkiyi ortaya koymaktadır. Obezitenin, kanser riskini hangi biyolojik mekanizmalarla ve nasıl etkilediğine dair yapılan çalışmalar; farklı kanser türleri için farklı mekanizmaların söz konusu olabileceğini göstermektedir. Obez hastalarda leptin seviyelerinin normal populasyona göre daha yüksek olduğu bilinmektedir. Overde leptin reseptörü eksprese olması ve foliküler sıvıda leptin bulunması leptinin over fonksiyonlarında rolü olduğunun göstergesidir. Bu çalışmada leptinin over kanseri hücrelerinde (OVCAR-3 ve MDAH-2774) hücre çoğalmasına ve sitokinlerin seviyeleri üzerindeki etkileri ortaya koymak amaçlanmıştır. 
24 ve 48 saat serum açlığına bırakılan OVCAR-3 ve MDAH-2774 hücre hatlarında artan konsantrasyonlarda leptin uygulamasının (0.5-400 ng/ml) 24, 48 ve 72 saat sonunda hücre çoğalması üzerindeki etkilerini belirlemek amacıyla XTT testi, sitokin miktarlarındaki değişimleri belirlemek amacıyla sitokin array (Human Cytokine Array C5, RayBiotech) yöntemi kullanılmıştır. Elde edilen bulgular ANOVA ve ardından Dunnett's istatistiksel analizleriyle değerlendirilmiştir. 
Çalışmamızda 24 ve 48 saat serum açlığına bırakılan hücre hatlarında leptin uygulamasının hücre çoğalmasını artırdığı gözlenmiştir. 48 saat serum açlığına bırakılan OVCAR-3 hücre hattında 50 ng/ml leptin uygulaması ile 24. saatte hücrelerin kontrol hücrelerine göre %187.4 oranında çoğalması ile maksimum etki görülmüştür. 24 saat serum açlığına bırakılan MDAH-2774 hücre hattında ise 25 ng/ml leptin uygulaması ile 72. saatte hücrelerin kontrol hücrelerine göre %127.1 oranında çoğalması ile maksimum etki gözlenmiştir. 
Leptin uygulaması sonucu her iki hücre hattında da interlökin ailesinden IL-3 ve IL-10 seviyelerinde artış, IL-2 seviyelerinde azalma, kemokinlerden MCP-2/CCL8 ve MCP-3/CCL7 seviyelerinde azalma ve insülin benzeri çoğalma faktörü bağlanma proteinleri (IGFBP) IGFBP-1, IGFBP-2 ve IGFBP-3 miktarlarında artış görülmüştür. OVCAR-3 hücre hattında leptin uygulaması ile interlökin ailesinden IL-1 seviyesinde artış belirlenmiştir. MDAH-2774 hücre hattında ise antianjiyojenik özellikteki IFN- γ miktarında azalma, inflamatuvar bir sitokin olan TGF- β miktarında artış görülmüştür. 
Epidemiyolojik araştırmalar, obezitenin over kanseri insidansını arttırdığını, yaşam süresini ve nüks riskini arttırdığını göstermektedir. Bu çalışma klinik gözlemlerin altında yatan ve henüz tam olarak aydınlatılmamış olan moleküler mekanizmalar açısından bir kaynak oluşturabilir.

Anahtar kelimeler: Leptin, over kanseri, obezite, sitokin, serum açlığı.

Abstract:
Obesity is closely linked to the development of various cancer types. Epidemiological and experimental studies have revealed the relationship between nutrition and cancer. Studies on which biological mechanisms and how obesity affects the cancer risk showed that there may be different mechanisms for different types of cancer. It is known that leptin levels in obese patients are higher than in normal population. Presence of leptin receptor expression in ovarian and existance of leptin in follicular fluid indicate that leptin plays a role in ovarian functions. In this study, it was aimed that to reveal the effects of leptin on cell proliferation and cytokine levels in human ovarian cancer cell lines OVCAR-3 and MDAH-2774.
XTT test was used to evaluate the effect of increasing concentrations of leptin treatment (0.5 – 400 ng/ml) on cell proliferation in OVCAR-3 and MDAH-2774 cell lines at 24, 48 and 72 hours after 24h and 48h serum starvation, respectively. Human Cytokine Array was used to determine the changes in cytokine levels. The findings were evaluated by ANOVA followed by Dunnett's statistical analyzes.  
In our study it was observed that leptin treatment increased the cell proliferation after 24h and 48h serum starvation. 
The maximum effect was observed with a proliferation of 187.4% compared to control cells in OVCAR-3 cell line with 50 ng/ml leptin treatment at 24h after 48h serum starvation. The maximum effect was observed with a proliferation of 127.1% compared to control cells in MDAH-2774 cell line with 25 ng/ml leptin treatment at 72h after 24h serum starvation.
As a result of leptin treatment, an increase in IL-3 and IL-10 levels, decrease in IL-2 level of interleukin family and decrease in MCP-2/CCL8 and MCP-3/CCL7 levels of chemokine family, an increase IGFBP-1, IGFBP-2 and IGFBP-3 levels of insulin-like growth factor binding protein family has been found in both of cell lines. An increase in IL-1 level in OVCAR-3 cell line, a decrease in antiangiogenic IFN-γ level and an increase TGF-β level that is inflamatuar cytokine has been detected in MDAH-2774 cell line. 
Epidemiological studies have shown that obesity increased the ovarian cancer incidance, life span and risk of relapse. This study may be a reference for the molecular mechanisms, which are not fully identified, underlying clinical observations.


Key words: Leptin, ovarian cancer, obesity, cytokine, serum starvation.