Sepsis oluşturulan ratlarda eritropoetin ve IgM-enrich immünglobulin tedavisi sonrası serumda TNF-α, IL-1β seviyeleri ile gastrointestinal sistem ve akciğer histopatolojisinin incelenmesi
Enrich IgM immunoglobulin and erythropoietin  therapy in septic rats  after serum TNF-α, IL-1β levels and analysis of gastrointestinal and lung histopathology
Yazar: İREM ATEŞ
Danışman: PROF. DR. NAZIM DOĞAN
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation
Dizin: Eritropoietin = Erythropoietin ; Histopatoloji = Histopathology ; Sepsis = Sepsis ; Sitokinler = Cytokines ; Sıçanlar = Rats ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors ; İmmünoglobülin M = Immunoglobulin M ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins ; İnterlökin 1 = Interleukin 1

Özet:
Sepsis, patogenez ve tedavide kaydedilen çok önemli gelişmelere karşın bugün önemini koruyan bir infeksiyon ve infeksiyona reaksiyon tablosudur. Tedavi protokollerine eklenen yeni faktörlere rağmen özellikle tabloya organ yetmezliklerinin de eklendiği septik şok durumunda mortalite en ileri merkezlerde bile çok yüksek seviyelerdedir.
 Tümör nekroz faktör (TNF?) ,İnterlökin (IL-1ß) gibi sitokinlerin sepsis ve multiorgan yetmezliği sendromu fizyopatolojisindeki rollerinin belirlenmiş olması sepsiste klasik sağaltımın yanısıra sistemik antiinflamatuar yanıtın modüle edilmesine yönelik yaklaşımların popülerite kazanmasına yol açmıştır. Bu çalışmada IgM-enrich immünglobulin ve eritropoetin tedavisinin ağır sepsiste prognoz üzerine etkilerini araştırmayı amaçladık. Bu nedenle çekal ligasyon-perforasyon (CLP) yöntemi ile intraabdominal sepsis modeli oluşturulan deneklerde  IgM enrich immünglobulin ve eritropoetin  tedavisinin antiinflamatuar yanıt üzerine etkilerini araştırmaya yönelik bir çalışma yaptık. Çalışmamızda sepsisin erken yanıt sitokinlerinden olan TNF?,IL-1ß `ın serum düzeyinde meydana gelen değişiklikleri inceledik. IgM-enrich immünglobulin ve eritropoetin tedavisinin sepsisli akciğer ve gastrointestinal sistem dokularındaki etkileri araştırdık.
	Çalışmamızda 102 adet erkek Sprag-Dawley kullanıldı. Grup K (n=6, Kontrol grubu), Grup SH (n=6, Sham grubu), Grup CLP (n=30, sepsis grubu), Grup CLP EPO (n=30, sepsis+eritropoetin), Grup CLP PEN (n=30,sepsis+ IgM-enrich immünglobulin) olmak üzere 5 grup oluşturuldu. Grup CLP EPO ve Grup CLP PEN? deki ratlara intraperitoneal olarak sırasıyla eritropoetin ve IgM-enrich immünglobulin verildi. Deneysel sepsis modeli olarak Wicherman ve arkadaşları tarafından geliştirilen CLP yöntemi uygulandı. Grup K ve Grup SH?daki ratlardan 0. saatte serum sitokin değerlerini ölçmek için kan örneği alındı.  Grup CLP, Grup CLP EPO, Grup CLP PEN `deki 6?şar rattan 3.,6.,9.,12.,16. saatlerde kan örnekleri alındı. Çalışmamızın sonunda gruplar arası sitokin değerleri tüm saatlerde istatistiki olarak karşılaştırıldı. Kan alma işlemi sonunda sakrifiye edilen ratların histopatolojik inceleme için akciğer ve gastrointestinal sistemlerinden doku örnekleri alınıp patoloji laboratuarına gönderildi.
	Grup CLP?deki deneklerin TNF? ve IL-1ß düzeyleri hem grup K, hem de grup SH `daki deneklere göre belirgin olarak yüksekti (P<0,05). Grup CLP EPO ve grup CLP PEN  gruplarındaki  sitokin düzeylerinde grup CLP?ye göre belirgin derecede düşük olduğu gözlendi. Ancak sitokin düzeyindeki bu düşüş TNF? düzeyleri açısından gruplar arasında istatistiki olarak anlamlı olmazken (P > 0,05)  IL-1ß seviyelerindeki düşüş Grup CLP?deki deneklerle karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlıydı  (P <0,05).
 Yapılan histopatolojik çalışmamız sonucunda ise Grup CLP?de sepsise bağlı belirgin doku hasarı mevcutken Grup CLP EPO ve grup CLP PEN`de ilaçlara bağlı dokusal hasar koruyucu etki görüldü. Gruplarımızda şiddetli inflamasyonda artmasını beklediğimiz ödem, hemoroji, konjesyon, epitel kaybı, PNL infiltrasyonu gibi parametreleri karşılaştırdık. Kontrol ve sham gruplarında çok belirgin inflamasyon bulgularına rastlanmazken sepsis grubunda tüm değerler anlamlı derecede yükselmişti, grup CLP EPO ve grup CLP PEN`de ise sepsis grubuna göre düşüş mevcuttu.
Sonuç olarak, IgM-enrich immünglobulin ve eritropoetin kullanılmasının sepsis tedavisinde faydalı etkinin olduğunu, ancak bu konuda daha geniş çalışmalar yapılması gerektiğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Sepsis, despite very important improvements in pathogenesis and treatment, is today still a major infection and infection-reaction pattern. Although new factors are added to treatment protocols, mortality is at bile very high levels even in the most advanced medical centers, especially in septic shock cases, where organ failures are added to the pattern.
 	The fact that roles of cytokine such as Tumor Necrosis Factor (TNF-?) and Interleukin (IL-1ß) are documented in physiopathology of sepsis and multi-organ failure syndromes have popularized the approaches for modulating systemic anti-inflammatory responses besides the conventional therapy in sepsis. In this study, we aimed to research the effects of IgM-enriched immunoglobulin and erythropoietin treatment on prognosis in severe sepsis. Therefore, we performed a study to research the effects of IgM-enriched immunoglobulin and erythropoietin  treatment on anti-inflammatory response on subjects who were given an intra-abdominal sepsis model by cecal ligation-perforation (CLP) method. In our study, we examined the changes that occurred in the serum level of TNF-?, IL-1ß, which is one of the early response cytokines of sepsis. We researched the effects of IgM-enriched immunoglobulin and erythropoietin treatment on pulmonary and gastrointestinal system tissues that have sepsis.	In our study, 102 male Sprag-Dawleys were used. 5 groups were created: Group K (n=6, Control Group), Grup SH (n=6, Sham Group), Group CLP (n=30, Sepsis Group), Group CLP EPO (n=30, sepsis + erythropoietin), Group CLP PEN (n=30, Sepsis + IgM-enriched immunoglobulin). Rats in Group CLP EPO and Group CLP PEN were intraperitoneally given erythropoietin and IgM-enriched immunoglobulin, respectively. As the experimental sepsis model, the CLP method, developed by Wicherman et al., was applied. Blood samples were taken from rats in Group K and Group SH at hour 0, to measure serum cytokine values.  Blood samples were taken from 6 rats from each of Group CLP, Group CLP EPO, and Group CLP PEN at hour 3., 6., 9., 12., and 16. At the end of our study, cytokine values of all groups were statistically compared for all hours. At the end of blood-taking operations, tissue samples were taken from the pulmonary and gastrointestinal systems of the sacrificed rats, and sent to the pathology laboratory for a histopathologic review.
	TNF-? and IL-1ß levels of the subjects in Grup CLP were significantly higher than those in both Group K and Group SH (p<0.05). It was observed that Group CLP EPO and Group CLP PEN cytokine levels were significantly lower than those in Group CLP. However, this fall in cytokine level is not statistically meaningful among groups in terms of TNF-? levels (p>0.05), while the fall in IL-1ß levels was statistically meaningful when compared to subjects in Group CLP (p<0,05).
 As a result of our histopathologic study, bağlı significant tissue damage was seen in Group CLP due to sepsis, and tissue damage protective effect was seen in Group CLP EPO and Group CLP PEN due to the medicines. In our groups, we compared parameters such as edema, hemorrhage, congestion, epithelium loss, PNL infiltration, etc., which are expected to increase in severe inflammations. Significant inflammations were not found in Control and Sham Groups (p > 0,05)  while Sepsis Group had all values meaningfully increased (p <0,05). Group CLP EPO and Group CLP PEN had a decrease according to the Sepsis Group (p <0,05).
As a result, we think that IgM-enriched immunoglobulin and erythropoietin usage has a positive effect in sepsis treatment but more extensive studies must be performed in this topic.