Doğal ürünlerden elde edilen potansiyel sitotoksik moleküllerin NFKB (Nükleer Faktör KappaB) aktivasyonuna olan etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of potential cytotoxic molecules from natural products on NFKB (Nuclear Factor KappaB) activation
Yazar: FATMA KOCABAŞ
Danışman: PROF. DR. ERDAL BEDİR
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Onkoloji = Oncology

Özet:
NF?B, 400'e yakın genin regülasyonunu sağlayan bir protein kompleksidir. Tümör oluşumundaki etkinliği ve birçok kemoterapötik ajana karşı direnç gelişimi sağlaması NF?B'yi kanserle mücadelede önemli hedeflerden birisi yapmaktadır.Saponinler, doğal kaynaklardan elde edilen kemoterapötikler arasında tümör inhibitör potansiyelleriyle gelecek vaat eden moleküllerdir.Bu tez çalışmasında SBAG-109S345 no'lu proje kapsamında yarısentezi yapılmış olan 110 sikloartan grubu saponinin beş farklı kanser hücre hattında (PC-3, DU-145, LNCaP, HT-29, MDA-MB-231) MTT yöntemiyle sitotoksik aktiviteleri taranmıştır. Çıkış molekülleri olarak Astragalus (Geven) türlerinin taşıdığı majör sapogenol olan sikloastragenol (CA) ve artifaktı astragenol (AG) kullanılmıştır. Elde edilen sonuçlar ışığında; CA ve AG de dahil olmak üzere 16 potent molekül ileri çalışmalar için seçilmiş ve moleküllerin NF?B inhibitör etkilerinin araştırılması için, LNCaP hücre hattında kronik enflamasyon modelinden yararlanılmıştır. Western blot yöntemi ile I?B seviyesinde meydana gelen değişiklikler belirlenmiş ve ayrıca, moleküllerin TNF? aracılıklı NF?B aktivasyonuna olan etkilerinin tespiti için NF?B raportör testi kullanılmıştır.Sonuç olarak; başlangıç moleküllerine göre sitotoksik etkide 1.2 ile 13.6 kat arasında bir artış gözlenirken, NF?B'nin inhibisyonunda 1.2 ile 241.3 kat arasında aktivite yükselişi saptanmıştır.

Abstract:
NF?B is a protein complex that regulates about 400 genes. Its regulatory function in tumorigenesis and development of resistance to many chemotherapeutic agent, makes NF?B one of the most important targets against cancer.Among the chemotherapeutic agents derived from natural sources, saponins are promising molecules with their tumor inhibitory properties.In this study, 110 semi-synthetic cycloartane type saponins, prepared as a part of SBAG-109S345 project, were screened versus 5 different cancer cell lines (PC-3, DU-145, LNCaP, HT-29, MDA-MB-231) by MTT assay. Cycloastragenol (CA), a major sapogenol originating from Astragalus species, and its artifact astragenol (AG) were used as starting molecules. Based on the results, 16 potent molecules including CA and AG were selected for further studies. A chronic inflammation model on LNCaP cell line was used to investigate the inhibitory effects of the molecules on NF?B. The changes in I?B levels were determined by Western blotting method and besides, the inhibitory effects of the molecules on TNF?-induced NF?B activation was further studied by NF?B reporter assay.As a result, 1.2 to 13.6 fold cytotoxicity increase and 1.2 to 241.3 fold inhibition rate on NF?B were observed for semi-synthetic molecules compared to the starting compounds CA and AG.