Sıçanlarda rekürren larengeal  sinirde ezilme hasarı sonrası kök hücre uygulanmasının sinir rejenerasyonuna etkisi
The effect of stem cell therapy on recurrent laryngeal nerve regeneration after vocal cord paralysis at rats
Yazar: UBEYDULLAH HİKMET YURDAKUL
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ALPEREN VURAL
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Kök hücreler = Stem cells ; Laringeal sinirler = Laryngeal nerves ; Larinks = Larynx ; Nüks = Recurrence ; Sinir ezilmesi = Nerve crush ; Sinir rejenerasyonu = Nerve regeneration ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Vokal kord paralizisi sonrası lokal olarak uygulanan yağ dokusu kökenli mezenkimal kök hücrelerinin rekürren larengeal sinir rejenerasyonu ve fonksiyonel düzelme üzerine etkisini incelemektir.
Materyal ve metod: Bu kontrollü prospektif çalışmada 22 adet Sprague-Dawley cinsi erkek sıçan kullanıldı. Hayvanlar kök hücre uygulanmayan grup (kontrol grubu) ve kök hücre uygulanan grup (çalışma grubu) olarak iki gruba ayrıldı. Sıçanların sol rekürren larengeal sinirleri (RLS) disseke edilerek, sinire bu çalışma için geliştirilmiş basınç sensörlü bir cihazla 1 dk boyunca basınç uygulanarak her hayvanda standard bir ezilme hasarı oluşturuldu. Çalışma grubundaki sıçanlara izole edilen ve hücre karakteri flow sitometri ile yapılan yağ dokusu kaynaklı mezenkimal kök hücreler (YDKMKH) lokal olarak uygulandı. Her sıçanın vokal kordları cerrahi işlem öncesi, hasar sonrası hemen ve hasardan sonra 2. ayda muayene edildi. Yine her sıçanın larengeal elektromyografisi (LEMG) cerrahi işlem öncesi, hasar sonrası hemen ve hasardan sonra 2. ayda motor ünite potansiyel (MÜP) amplitüdleri açısından değerlendirildi. Hasar sonrası 2. ayda larengeal sinir biyopsisi alınarak sıçanlar sakrifiye edildi. Sinir biyopsisinde histolojik olarak akson sayısı, akson çapı ve s100 ekspresyonuna bakıldı. 
Bulgular: Hasar sonrası 2. ayda yapılan vokal kord muayenesinde kord hareketlerinde iki grupta da tamamen düzelme görüldü. Çalışma grubundaki MÜP amplitüd ölçümünün zamana göre değişimi anlamlı olarak bulundu (p<0.001). Kontrol grubundaki MÜP amplitüd ölçümünün zamana göre değişimi de anlamlı olarak bulundu (p=0.001). Çalışma ve kontrol gruplarının hasar sonrası 2. ayda yapılan EMG' lerinde saptanan MÜP amplitüdleri karşılaştırıldığında istatiksel olarak anlamlı fark saptanmadı (p=0.262).
Akson sayımı açısından karşılaştırılma yapıldığında çalışma grubu ve kontrol grubu arasında anlamlı fark gözlenmedi (p=0.313). Akson çapı açısından karşılaştırma yapıldığında kontrol grubunda çalışma grubuna göre anlamlı farklılık gözlendi (p<0.001). S100 immunoreaktivite yoğunluğu açısından çalışma grubunda kontrol grubuna göre anlamlı farklılık saptanmadı (p=0.128).
Sonuç: Vokal kord paralizisi sonrası lokal olarak uygulanan yağ dokusu kökenli mezenkimal kök hücrelerinin sinir rejenerasyonu ve fonksiyonel düzelme üzerine etkisi incelenen bu çalışmada kök hücre verilen grupta verilmeyen gruba göre anlamlı farklılık izlenmedi.
Anahtar Kelimeler: 	Rekürren Larengeal Sinir, Sinir Rejenerasyonu, Yağ Dokusu Kökenli Mezenkimal Kök Hücre, Vokal Kord Paralizisi

Abstract:
Aim: The aim of this study is to evaluate the effect of locally injected adipose tissue derived mesencymal stem cells on nerve regeneration and functional recovery after vocal fold paralysis.
Materials and metods: Twenty two Sprague-Dawley male rats were used in this prospective controlled study. Rats were divided into two groups as control (no intervention after crush injury) and study (application of locally injected stem cells after crush injury). Rat's left recurrent laryngeal nerves were dissected and crushed with a newly developed device with pressure gauge for one minute in order to apply a standartized crush injury. Adipose tissue derived mesenchymal stem cells (ATDMSC) were applied locally to left RLN's of each rat in the study group. Each rat's vocal fold motion was examinated before, immediately after and two months after crush injury. Each rat was evaluated with larengeal electromyography in terms of motor unit potential amplitudes before, immediately after and two months after crush injury. Two months after the injury, the crushed segment of the laryngeal nerves were excised for histologic evaluation in terms of axon numbers, axon diameters and S100 expression and then the rats were sacrified. 
Results: Vocal cord examinations performed two months after the injury showed complete recovery in both groups. The change in MUP amplitude measurements over time was significant in the study group (p <0.001). The change in MUP amplitude measurement over time was also significant in the control group (p = 0.001). There was no statistically significant difference between the MUP amplitudes of the study and control groups at 2 months after injury (p = 0.262).

When the axon counts were compared, no significant difference was observed between the study and control groups (p = 0.313). When the axon diameters were compared, a significant difference was observed in the control group compared to the study group(p <0.001). There was no significant difference in S100 immunoreactivity intensity between the two groups (p = 0.128).
Conclusion: The effect of locally injected adipose tissue derived mesenchymal stem cells on nerve regeneration and functional recovery after vocal cord paralysis was not observed in this study.
Key Words: 	Adipose-derived mesenchymal stem cells, nerve regeneration, recurrent laryngeal nerve, vocal fold paralysis,