Antikoagülan kullanım endikasyonu olan hastalarda VKORC1 C1173T ve G-1639A gen polimorfizmlerinin farmakogenetik etkisinin araştırılması
Investigation of pharmacogenetic effects of VKORC1 C1173T and G-1639A gene polymorphisms in patients with indications for the use of anticoagulant drugs
Yazar: FİLİZ ÇETİNKAYA
Danışman: DOÇ. DR. AHMET RÜÇHAN AKAR
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Kumarin türevi bir antikoagülan olan varfarin, tüm dünyada tromboembolik olayların tedavisinde ve önlenmesinde kullanılan bir ilaçtır. Kumarin türevi olan varfarin, antikoagülan etkinliğini vitamin-K-epoksi-redüktaz enzim sentezini inhibe ederek göstermekte, sonuç olarak K vitaminine bağımlı olarak ? -karboksilasyona uğrayan II, VII, IX, X gibi koagülasyon faktörlerinin üretimi engellenmektedir. Varfarin tedavi sürecinde bireyler arası ilaç yanıt farklılıkları, varfarine özgü dar terapötik pencere ve ilaç etkisinin nötralize edilmesindeki zorluklarla karşılaşılmakta ve hastalar tedavi sürecinde kanama veya tromboemboli gibi ciddi komplikasyonlarla karşı karşıya kalabilmektedir. Bu çalışmanın amacı, vitamin K epoxide redüktaz kompleks alt ünite-1 (VKORC1 [G-1639A, C1173T]), Faktör V Leiden G1691A (FVL), Prothrombin/Faktör II (G20210A) ve Metilentetrahidrofolat redüktaz (MTHFR C677T) genlerindeki tek nükleotid polimorfizmlerinin oluşturduğu farmogenetik bilginin warfarin yanıtı ve klinik sonuçları üzerindeki etkisinin araştırılmasıdır.Bu çalışmaya terapötik hedef INR değeri 2.5-3.5 arasında değişen toplam 120 hasta dahil edilmiştir. Varfarin endikasyonu 90 hastada kardiyak nedenlerle (mekanik kapak replasmanı, atriyal fibrilasyon), 30 hastada ise vasküler nedenlerle (derin ven trombozu, pulmoner tromboemboli) konmuştur. Tüm çalışma grubu için günlük ortalama warfarin dozu 4,54 mg'dır. Periferal kan EDTA içeren vakumlu tüplere toplanmıştır. DNA izolasyonundan sonra, FVL, FII, MTHFR ve VKORC1 polimorfizmlerini tespit etmek için eş zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ve erime eğrisi analizleri yapılmıştır.Hasta grubunda, trombotik risk allel frekansı verileri: FVL G-A %23.3 (28), A-A %3.4 (4); FII (G20210A) G-A %10 (12), A-A 0% (0); MTHFR (C677T) C-T %46.6 (56), T-T %5.9 (7)- olarak belirlenmiştir. Hastaların %40'ında VKORC1 (G1639A) için AA genotipi ve VKORC1 (C1173T) için TT genotipi bulunmuştur. Antikoagülasyon ve hemorajik komplikasyon riski (%10.8), VKORC1 genetik varyantlarına sahip hastalarda yüksek bulunmuş, bu varyantların taşıdığı A ve T alleleleri arasında tam bağlantı bulunmuştur. Varfarin gereksinimi olan hasta grubunda FVL polimorfizmini taşıma oranı sağlıklı birey prevelansına göre yüksek bulunmuştur.

Abstract:
Warfarin, a coumarin derivative, is an oral anticoagulant used for prevention and treatment of thromboembolitic cases all over the world. Warfarin, a coumarin derivative, produces an anticoagulant effect by interfering with the vitamin K 2,3 epoxide reductase (VKOR) enzyme and ? -carboxylation of vitamin K-dependent clotting factors such as II, VII, IX, and X. However, management of warfarin therapy is complicated with inter individual differences in drug response, delayed onset of action, difficulty with reversal and a narrow therapeutic window leading to increased risk of life-threatening hemorrhagic adverse events or thromboembolism. The objective of this study was to investigate the relative impact of pharmacogenetic information including vitamin K epoxide reductase complex subunit-1 (VKORC1 [G1639A, C1173T]), factor V gene G1691A (FVL), prothrombin/factor II (G20210A) and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR C677T) single nucleotide polymorphisms (SNP) on warfarin response and clinical outcome.A total of 120 patients with therapeutic INR values ranging between 2.5 and 3.5 were included in the study. Warfarin therapy were started in 90 patient due to cardiac disorders (mechanical heart valve replacement, atrial fibrillation), and 30 patient due to vascular disorders (deep vein thrombosis and pulmonary thromboembolism). For the entire cohort, daily mean dose of warfarin was 4.54 mg. Peripheral blood was collected into evacuated tubes containing EDTA. After DNA isolation, Real-time PCR and melting curve analysis were performed to detect FVL, FII, MTHFR and VKORC1 polymorphisms .Among 120 individuals, the data showed that thrombotic risk allele frequencies ? Factor V Leiden (G1691A) G-A 23.3% (28), A-A 3.4% (4), FII (G20210A) G-A 10% (12), A-A 0% (0), MTHFR (C677T) C-T 46.6% (56), T-T 5.9% (7). The risk of over-anticoagulation and hemorrhagic complications (10.8%) were higher in patients with VKORC1 genetic variants carrying this A and T alleles showing complete linkage had . Patients started warfarin therapy shows FVL polymorphism carring patient higher prevalence than normal patient.