İnsan embriyonik böbrek 293 (hek293) hücrelerinde amiloid beta toksisitesine karşı ısı şoku proteini 70 (hsp70)'in rolü
The role of heat shock protein 70 (hsp70) in toxicity of beta amyloid in human embryonic kidney 293 (hek293) cells
Yazar: SEMA YILDIZ
Danışman: PROF. DR. NESRİN ÖZSOY ERDAŞ
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada insan embriyonik böbrek hücre hattında (HEK 293) amiloid beta ile indüklenen sitotoksisite üzerine Hsp70 şaperonunun koruyucu rolünün incelenmesi amaçlanmıştır. Toksisite oluşturmak için HEK 293 hücrelerine 24 saat süreyle 5-10 mikromolar konsantrasyonlarında amiloid beta uygulanmıştır. Hem normal hem de amiloid beta ile muamele edilmiş HEK 293 hücrelerine 2 saat süreyle 2 mikrogram/ml konsantrasyonunda Hsp70 uygulanmıştır. Amiloid betanın hücre canlılığına etkisi MTT yöntemi ile ölçülmüştür. Oksidatif hasar, lipid hidroperoksidasyon (LPO) düzeyleri ölçülerek belirlenmiştir. Ayrıca Hsp70'in koruyucu etkisinin araştırılması için glutatyon (GSH) düzeyleri, katalaz (CAT) ve süperoksit dismutaz (SOD) enzim aktiviteleri kolorimetrik ELISA (enzim bağlı immün assay) kitleri aracılığıyla ölçülmüştür. Sonuçlar istatistiksel olarak analiz edilmiştir. Deney sonuçlarına göre çalışmada amiloid beta uygulamasının lipid peroksidasyonuna yol açarak hücre toksisitesini indüklediği gözlenmiştir. Bu gruplarda SOD, CAT enzim aktivitelerinde azalma olduğu belirlenmiştir. Glutatyon düzeylerinde azalma olmadığı dikkati çekmiştir. Hsp70'in sitotoksisiteye karşı etkisi değerlendirildiğinde amiloid betanın sebep olduğu lipid peroksidasyonunu azaltamadığı ancak uygulanan amiloid dozuna bağlı olarak SOD ve CAT enzim aktivitelerinde ve GSH düzeylerinde artışa sebep olduğu gözlenmiştir. Ancak bu artış istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır. Elde edilen verilere göre; ekzojen Hsp70 uygulamasının HEK 293 hücrelerinde amiloid betanın sebep olduğu sitotoksisite üzerine kısmen koruyucu etkisinin olduğu ifade edilebilir.

Abstract:
The aim of this study is to investigate the protective effects of Hsp70 chaperone on the amyloid beta induced toxicity in the human embryonic kidney cell line (HEK 293) cells. In order to induce toxicity in the HEK 293 cell line, 5-10 micromolar concentration of amyloid beta was applied for 24 hours. Afterwards, both normal and amyloid beta treated cells were treated with 2 microgram/ml concentration of Hsp70 for 2 hours. The effect of amyloid beta on cell viability was evaluated by MTT assay. Oxidative damage was assessed by measuring lipid hydroperoxide (LPO) levels. Furthermore, glutathione (GSH) levels, catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) enzyme activities were measured by colorimetric ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kits, in order to understand the protective effect of Hsp70. The results were analyzed using statistical methods. The experimental results of this study indicate that amyloid beta application causes lipid peroxidation and induces cell toxicity. In these groups, there was a reduction of SOD and CAT enzyme activities. However, no reduction in glutathione levels were found. Evaluating of the effects of Hsp70 against cytotoxicity, it was observed that Hsp70 could not reduce the lipid peroxidation induced by amyloid beta. Hsp70 caused an increase in SOD and CAT enzyme activities and GSH levels depending on the dose of amyloid beta, however, no significant statistical difference could be found. Experimental results suggest that exogenous Hsp70 application to HEK 293 cells has a partial protective effect against the amyloid beta induced cytotoxicity in the HEK 293 cells.