Meme kanserlerinde HtrA gen ailesinin gen ifade seviyelerinin incelenmesi ve HtrA proteinlerinin arşiv materyallerinde immunohistokimyasal olarak tesbit edilmesi
An investigation of HtrA gen family gene expression levels in breast cancer and immunohistochemically determination of HtrA proteins in archive materials
Yazar: FERİDUN AKKAFA
Danışman: PROF. DR. AHMET ARSLAN
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology ; Patoloji = Pathology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Gen ifadesi = Gene expression ; Histokimya = Histochemistry ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Peptid hidrolazlar = Peptide hydrolases ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Meme kanseri kadınlarda en çok görülen kanser olmasının yanında, bir çok ülkede kadınlardaki kanser ölümlerinin de başlıca nedenidir. Meme kanserlerinin büyük çoğunluğu sporadik olmakla birlikte yaklaşık %20'si kalıtsal nedenlidir. High temprature requirement factor A family (HtrA) protein ailesi bir serin proteaz ailesi proteinlerdir. Bilinen HtrA ailesi proteinleri HtrA1, HtrA2, HtrA3 ve HtrA4'dür. HtrA gen ailesi gelişme ile ilgili olup, yüksek seviyedeki ifadeleri organizmanın canlılığının ve gelişmesinin muhafaza edilmesinde önemli bir role sahiptir. Memeli HtrA protein üyelerinden bazıları apoptosis düzenleyicileri ve kemoteropotik hücre sitotoksitesinin tetikleyicileri olarak tanımlanırlar. Bu çalışmadaki amacımız, meme kanserli hastaların cerrahi olarak alınmış tümörlü ve normal dokularında, HtrA gen ailesinin mRNA ifade seviyesini ve protein seviyesini sırasıyla RT-PCR ve uygun antikorlar kullanarak immunohistokimyasal yöntemlerle tanımlamaya çalışmaktır. Çalışma için meme kanserli 53 hastanın kanserli ve ona komşu normal dokusu alındı ve kullanılana kadar -80 0C'de saklandı. Kanserli bölgeler sağlıklı dokulardan ayrılarak moleküler ve immünohistokimyasal analizler için kullanıldı. Elde edilen sonuçlarla HtrA gen ailesinin kanserli ve normal dokulardaki mRNA ifade ve protein ifade seviyeleri ile kanserin evreleri arasındaki ilişkiler istatiksel olarak değerlendirildi. HtrA2 va.1 ve HtrA2 mRNA ifade seviyelerinin sırasıyla G1'den G3 evrelerine ve menopoz öncesinden sonrasına doğru gidildiğinde anlamlı bir şekilde azaldığı görülmüştür. Ancak bu bulgular tek başına, HtrA ailesi protein seviyelerinin düşüklüğüne bağlı olarak apoptotik mekanizmaların işlevsizliğini göstermez. Bu nedenle IAP ailesi engelleyicileri gibi diğer metabolitlerinde tayin edilerek meme kanserlerinde apoptotik yolağın işlevsel özelliği hakkında bilgi sağlanabilir. Sonuç olarak kanser hücrelerinin kontrol edilemeyen çoğalımının yol açtığı, kanserin kötü huylu gelişiminin tanımı hala çözüm beklemektedir.

Abstract:
Breast cancer affects mainly women and the leading cause of women mortality in many countries. The breast cancer is many ways sporadic and the hereditary type breast cancer constitutes about 20% in many populations. High temperature requirement factor A (HtrA) family proteins are serin protease family proteins. The HtrA family proteins include HtrA1, HtrA2, HtrA3 and HtrA4. HtrA gene family and are associated with developmental stage of the organisms, they play important roles for maintaining their viability and development. Some members of mamalian HtrA proteins are described as potantial modulators of apoptosis and chemotherapy-induced cytotoxicity. With this project it is aimed to determine HtrA gene family mRNA expression levels and proteins in cancereus tissues of patients removed surgically. The gene family mRNA expression levels were determined using RT-PCR in addition to their associated protein levels that were determined by immunohistochemical procedures using corresponding antibodies. The study was designed to analyze 53 patients fresh tissues that are removed surgically and stored -80 0C until their use. The cancerous regions were seperated from the healthy regions by pathological examinations of slices followed by molecular and immunohistochemical analysis. The obtained results were evaluated statistically in order to find out relationship with the HtrA gene family expression and protein levels in tissues with regard to their cancer stages. HtrA2va.1 and HtrA2 mRNA levels were decreased significantly from G1 to G3 stage and from premenaposal to postmenaposal respectively. However these findings by itself is not sufficient to conclude on the impairment of apoptotic pathway by the reduction of HtrA family protein levels. Therefore, inhibitors of IAP family as well as other metabolites needed to be determined about the functional capability of apoptotic pathway in breast cancer. In conclusion, the question remains to be delienated for uncontrolable proliferation aspect of cancer cells that leads to deliterious cancerous tissues.