Kistik fibrozis hastalarında nötrofil fonksiyonları ve sitokin düzeylerinin araştırılması
Determinetion of neutrophil functions and cytokine levels in patients with cyctic fibrosis
Yazar: ÜMİT ASLANHAN
Danışman: PROF. DR. ESİN ÇETİN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Göğüs Hastalıkları = Chest Diseases
Dizin: Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Genetik hastalıklar-doğuştan = Genetic diseases-inborn ; Kistik fibroz = Cystic fibrosis ; Nötrofiller = Neutrophils ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Kistik fibrozis (KF) beyaz ırkta çocuk ve genç yetişkinlerde görülen, daha çok akciğer tutulumuyla karakterize genetik bir hastalıktır. Bu hastalık epitel hücre membranındaki Kistik Fibrozis Transmembran Regülatör klor kanal defekti sonucu oluşmakta, P. aeruginosa ve çeşitli patojenlerin kolonizasyonuna zemin hazırlamaktadır. KF'de havayolu enflamasyonunda yoğun nötrofilik infiltrasyon görülmektedir. Çalışmamızda kronik P. aeruginosa kolonizasyonlu KF'li hastalarda nötrofil fonksiyonları araştırılmıştır.
Balgam kültürlerinde P. aeruginosa üremesi pozitif (P+) ve negatif (P-) KF'li hastalar ve sağlıklı çocuklar çalışmaya dahil edilmiştir. Nötrofillerin adezyon molekül ekspresyon ve fonksiyonları, apoptotik indeksleri, P. aeruginosa ve LPS uyarımı sonrası hücre içi CAP-18, IL-8 ve TNF-α salınımları akan hücre ölçerde incelenmiştir. P. aeruginosa ve LPS uyarımlı kan kültürlerinde LUMINEX yöntemiyle plazma IL-1β, IL-6, TNF-α ve IL-17 düzeyleri değerlendirilmiştir. P(+) ve P(-) hastalarda nötrofil CD62L, CD62L/CXCR2 ekspresyonları yüksek saptanmış, E. coli ve P. aeruginosa'ya karşı fagositik aktivite, oksidatif patlama, kemotaktik aktivitelerle erken ve geç apoptotik indeks yüzdeleri sağlıklı gruba göre artmıştır. Uyarımsız kültürde, P(+) ve P(-) hastalarda CD16+TNF-α+, CD16+IL8+ nötrofil oranları sağlıklı gruba göre artarken, P. aeruginosa ve LPS uyarımı her iki hasta grubunda CAP-18+CD16+ ve CAP-18+CD16+CD66b+ oranlarını düşürmüştür. Uyarımsız şartlarda P(+) hasta grubunda plazma IL-1β, IL-6, TNF-α ve IL-17 düzeyleri, P(-) ve kontrol grubuna oranla yüksek saptanmıştır.
KF hastalarının nötrofillerinde adezyon molekülü, pro-enflamatuvar sitokin salınımıyla apoptotik indeks değerlerindeki artış dikkat çekicidir. P. aeruginosa'ya karşı artmış bulunan nötrofil fonksiyonları ve aktivasyonlarının apoptotik süreci etkileyerek nötrofillerin yaşam sürelerini kısaltabileceği düşünülmektedir. Lokal enflamasyonda sekonder nötrofil fonksiyon bozukluğunun mortalite risk faktörü olarak kabul edildiği KF'de, P. aeruginosa kolonizasyon mekanizmalarını aydınlatacak yeni çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır.

Abstract:
Cystic fibrosis (CF) is a common and lethal genetic disease of Caucasians, resulting from CFTR gene mutations and affecting children and young adults. Respiratory system is chronically colonized with P. aeruginosa. Clinical outcome is defined through a neutrophil-guided chronic inflammation. This study investigated neutrophil functions of chronically P. aeruginosa colonized CF patients. Patients with CF were grouped by P. aeruginosa sputum culture; positive (P+) and negative (P-), and compared with healthy controls. Neutrophil adhesion molecule expressions, apoptotic index and intracellular CAP-18, IL-8, and TNF-α levels of CD16+CD66b+/CD16+CD66b- neutrophils following P. aeruginosa and LPS stimulation were analyzed by flow cytometry. IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-17 plasma levels were analyzed by LUMINEX. Increased CD62L+, CD62L+CXCR2 levels were observed on neutrophils of (P+) and (P-) CF patients. Increased phagocytosis of E. coli and P. aeruginosa, oxidative burst, chemotactic capacity and increased ratio of early and late apoptotic neutrophils together with increased levels of CD16+TNF-α+and CD16+IL8+ neutrophils were determined in CF patients. Bacterial stimulation significantly decreased CAP-18 production on CD16+ and CD16+CD66b+ neutrophils of CF patients. Plasma levels of IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-17 in P(+) patients were increased in comparison with P(-) patients and controls.
Increased adhesion molecules and pro-inflammatory cytokines, also increased apoptotic index values in neutrophils of CF patients was striking. Over-activation of neutrophilic activities against P. aeruginosa in patients may affect apoptotic process and shorten neutrophil lifespan. Intense studies are required for clarification of action mechanisms in P. aeruginosa colonization in CF.