Mastitisli ineklerden staphylococcus aureus'un moleküler identifikasyonu ve antibiyotik duyarlılıklarının belirlenmesi
The molecular identification of staphylococcus aureus from cows with mastitis and determination of antibiotic susceptibilies
Yazar: İLKER KURT
Danışman: DOÇ. DR. UĞUR PARIN
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasında, mastitisli ineklerden Staphylococcus aureus (S. aureus) izolasyonu, izole edilen suşlarda nuc, mecA ve blaZ genlerinin PCR ile araştırılması ve suşların veteriner sahada yaygın olarak kullanılan çeşitli antibiyotiklere karşı dirençliliğin belirlenmesi amaçlanmıştır.  
Gereç ve Yöntem: Aydın ili merkez ilçe ve çevresinde bulunan işletmelerden klinik mastitisli 41 hayvandan toplam 57 adet süt numunesi toplanmıştır. İzolasyon ve identifikasyon aşamalarını takiben Staphylococcus sp. olarak biyokimyasal identifikasyonu yapılan izolatların DNA ekstraksiyonları yapılmış, antibiyotik direnç genleri genotipik olarak polimeraz zincir reaksiyonu metoduyla araştırılmıştır. S. aureus ve Koagulaz Pozitif Stafilokok olarak identifiye edilen suşların antibiyotik duyarlılıkları/dirençlilikleri CLSI kriterleri tarafından önerildiği şekilde belirlenmiştir.
Bulgular: İncelenen 57 süt örneğinden 15 (%26,3) adet Koagulaz Pozitif Stafilokok izolasyonu gerçekleştirilmiştir. Koagulaz Pozitif Stafilokokların genotipik identifikasyon sonucu 6 (%10.5) adedi S. aureus olarak belirlenmiştir. Toplam 22 (%38,6) örnekte ise bakteriyel üreme saptanmamıştır. PCR sonucunda, Koagulaz Pozitif Stafilokok izolatlarında, 270 ve 517 bp uzunluğunda ürünler elde edilmiştir. Koagulaz pozitif olarak belirlenen 15 izolatın 6'sı S. aureus olarak doğrulanmıştır. 6 izolatın 2 adedinde blaZ genine rastlanmıştır. İzolatların hiçbirinde ise mecA genine rastlanmamıştır. Antibiyogram testi sonucunda S. aureus izolatları Penisilin G, Sülfometoksazol-Trimetoprim ve Amoksisilin-klavulanik asit'e %100 oranında dirençli, Vankomisin ve Klindamisine %100 oranında, Polimiksin B, Sefoperazon ve Oksasiline %83 oranında ve Enrofloksasin'e ise %50 oranında duyarlı olduğu tespit edilmiştir.
Sonuç: Çalışma sonucunda S. aureus identifikasyonu %10,5 oranında gerçekleşmiştir. Araştırmamız ile birlikte Polimiksin B'nin alternatif bir mastitis terapötik ajanı olarak kullanımın potansiyeli ortaya çıkmıştır. Polymixin B'nin stafilokokal enfeksiyonlarla savaşmak için umut verici bir alternatif ajan olduğunu gösterilmektedir.

Abstract:
Objective: The objective of this study was to investigate Staphylococcus aureus (S. aureus) from cows with mastitis, to investigate the nuc, mecA and blaZ genes in isolated strains by Polymerase Chain Reaction method (PCR) and to determine the resistance of strains to various antibiotics commonly used in the veterinary field.
Material and Methods: A total of 57 milk samples were collected from 41 animals with clinical mastitis from farms located in and around the central district of Aydın. Following the isolation and identification stages, Staphylococcus sp. DNA extractions of the biochemically identified isolates were performed and antibiotic resistance genes were genotypically investigated by PCR. Antibiotic susceptibility/resistance of strains identified as S. aureus and Coagulase Positive Staphylococci were determined as recommended by CLSI criteria.
Results: Fifteen (26.3%) Coagulase Positive Staphylococci were isolated from 57 milk samples. As a result of the genotypic identification of Coagulase Positive Staphylococci, 6 (10.5%) were identified as S. aureus. Bacterial growth was not detected in a total of 22 (38.6%) samples. As a result of PCR, products with a length of 270 and 517 bp were obtained in Coagulase Positive Staphylococcus isolates. Six of the 15 isolates identified as coagulase positive were confirmed as S. aureus. blaZ gene was found in 2 of 6 isolates. MecA gene was not found in any of the isolates. As a result of the antibiogram test, S. aureus isolates are shown to be 100% resistant to Penicillin G, Sulfomethoxazole-Trimethoprim and Amoxicillin-clavulanic acid, 100% sensitive to Vancomycin and Clindamycin, 83% to Polymyxin B, Cefoperazone and Oxacillin and 50% to Enrofloxacin.
Conclution: As a result, S. aureus identification was 10.5% in this study. Our research has revealed the potential for use of Polymyxin B as an alternative mastitis therapeutic agent. Polymixin B is shown to be a promising alternative agent to combat staphylococcal infections.