Klinik örneklerden izole edilen staphylococcus aureus izolatlarında SCCmec tiplendirilmesi ve integron varlığının araştırılması
SCCmec typing and integron investigation of staphylococcus aureus strains isolated from clinical samples
Yazar: AYKUT GENÇ
Danışman: PROF. DR. BARIŞ OTLU
İnönü Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Genler = Genes ; Genotip = Genotype ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; Sınıflandırma = Classification ; Virülans = Virulence ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial ; İntegronlar = Integrons

Özet:
Amaç:Staphylococcusaureus, en önemli insan patojenlerinden biridir. Metisilin dirençli S. aureus suşları tüm beta-laktam antibiyotiklere dirençli olmakla birlikte diğer antibiyotik sınıflarına karşı da hızla direnç geliştirme potansiyeline sahiptir. Dolayısı ile bu dirence neden olan mec genlerinin tiplendirilmesi ve antibiyotik direnç genlerinin aktarıldığı integronların saptanması tedavide yol gösterici olacaktır. Bu çalışmada, hastaların klinik örneklerinden izole edilen S. aureus suşlarında mecA vemecC genleri araştırılarak SCCmec tiplerinin belirlenmesi ve sınıf 1-3 integron varlığının saptanması amaçlanmıştır. 
Gereç ve Yöntem: Bu çalışmaya, Mart 2016-Mart 2017 tarihleri arasında Turgut Özal Tıp Merkezi, Merkez Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na gelen klinik numunelerden izole edilen 138 S. aureussuşu dahil edildi. Tanımlanan izolatların metilisin direnci fenotipik olarak disk difüzyon yöntemi ile çalışıldı. Suşların taşıdığı mecA ve mecC genleri, SCCmec tipleri ve integronların tespiti için Polimerize Zincir Reaksiyonu (PZR) yöntemi kullanıldı. İzolatlar arasındaki klonlanal ilişki Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) ile araştırıldı.
Bulgular: Toplam 138 S. aureus izolatının 38'i metisiline dirençli, 84'ü metisiline duyarlı bulundu. Fenotipik olarak metisilin-dirençli bulunan suşların tümünde PZR ile mecA geni saptanırken hiç birinde mecC geni tespit edilmedi. İzolatların SCCmec tiplendirmesinde MRSA olarak tespit edilen 38 izolatın 5'inde (%13) SCCmecI, 5'inde SCCmecII (%13), 10'unda (%26) SCCmec III olarak bulundu ve geriye kalan 18 (%47) izolatın SCCmec tipi belirlenemedi ve bunlar gruplandırılamayan olarak sınıflandırıldı. İzolatların PFGE tiplendirilmesi sonucunda 116 farklı genotip tespit edilerek kümeleşme oranı %13 olarak bulundu. Bu 116 S. aureus genotipinin 19'unda (%16) sadece Sınıf-I integron tespit edildi ve bunların 4'ü mecA geni taşımaktaydı.  
Sonuç: Bu çalışmanın sonuçlarına göre, hastanemizde saptanan ve çoğunluğunu farklı genotiplerin oluşturduğu S. aureus'ların yaklaşık ¼'ü metisilin dirençli olup bu dirençten de mecA geni sorumlu bulunmuştur. Bu çalışma, S.aureus'larda farklı integron türlerinin araştırılması yönünden ve ülkemizde izole edilen S. aureus suşlarında ilk kez sınıf 1 integron varlığı gösterilmiş olması nedenleriyle önemlidir. Moleküler çalışmalar, antimikrobiyal direncin yayılım dinamiklerinin anlaşılması bu dirençlerin önlenmesi açısından önemli veriler sağlayacaktır.

Abstract:
SCCmec Typing and Integron Investigation of Staphylococcus aureus Strains Isolated from Clinical Samples 
Aim:Staphylococcus aureus is one of the leading human pathogens. Methicillin-resistant S. aureus strains are resistant to all beta-lactam antibiotics, and also they have potency to rapid development of resistance to other classes of antimicrobials. Therefore, typing of the mec genes which are responsible for methicillin resistance and determination of the integrons that carry the antibiotic resistance genes will be valuable for a successful treatment against this bacterium. In this study, typing of SCCmec by studying the mecA and mecC genes, and determination of the class 1-3 integrons in the S. aureus strains which were isolated from the patients' samples were aimed to be investigated. 
Material and Method: a total 138 S. aureus strains which were isolated from clinical samples of the patients between March 2016 and March 2017, in the central microbiology laboratory of Turgut Ozal Medical Center were included. Methicillin resistance of the identified strains was phenotypically studied with disk diffusion method. Polymerized Chain Reaction (PCR) was used for determination of mecA and mecC genes, SCCmec types, and for integrons. The clonal relationship of the isolates was studied with Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE).
Results: total 38 out of 138 included strains were found as methicillin-resistant, and remaining 100 were found as methicillin-susceptible. mecA gene was found in all methicillin-resistant strains, and no mecC gene was determined. Regarding the SCCmec typing of these 38 isolates, 5 (13%) were typed as SCCmecI, 5 (13%) were typed as SCCmecII, and 10 (26%) were typed as SCCmec III; however, the remaining 18 (47%) strains couldn't be typed, and classified as "ungrupped". A total 116 different genotypes were determined in PFGE, and the clusture rate was found as 13%. Among these 116 different groups,class-1 integron was determined in only 19 (16%) genotypes of which 4 were positive for mecA gene.
Conclusion: according to the results of this study, almost ¼ of the S. aurues strains that were isolated from our hospital were methicillin-resistant, all which were due to mecA gene. This study is important since the fact that different integron types were investaigated in S. aureus strains, and first detection of class-1 integron in S. aureusstrains in our country. Molecular studies will provide useful data for better understanding the dynamics of the antimicrobial resistance spread, and to prevent this transmission