MCF -7 ve MDA –MB -231 meme kanseri hücre hatlarında Juglon ve Kurkumin uygulamasının  mt –ATP6 ve sitokrom P450 Moleküllerine etkilerinin incelenmesi
Investigation of MT-ATP6 and cytochrome P450 molecules' effects on Juglone and Curcumin treatment in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cell lines
Yazar: SALİHA AYDEMİR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ EMİNE NEDİME KORUCU
Necmettin Erbakan Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Meme kanseri, dünyada kadınlarda en sık görülen malign kanserdir. Sürekli artan sayıda meme kanseri vakası nedeniyle, birincil ve ikincil korunmada etkili aktiviteler geliştirmek hayati önem taşımaktadır. Her iki tür kanser önleme yöntemini birleştiren en iyi değer vaat eden yöntemlerden biri, kimyasal müdahale gibi görünmektedir. Karsinojenez sürecini inhibe etmek, geciktirmek veya tersine çevirmek için doğal veya sentetik bileşikler kullanır. Doğal kökenli kemoprevansiyon maddeler arasında, geniş spektrumlu bir anti-kanser polifenol türevi olan kurkumin ve juglona büyük önem verilmektedir.
              Çalışmamızda kurkuminin ve juglonun farklı doz gruplarında MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücre hatlarında proliferasyonuna etkileri MTT hücre canlılık testi ile analiz edildi. Hücrelere 24 saat boyunca kurkumin ve juglon ile farklı dozlarda muamele edildi. Real time PCR ve Western blot yöntemiyle CYP3A4 ve mt-ATP6 gen ve protein ekspresyonları kontrol grubu ile karşılaştırıldı.

              MCF-7  meme kanseri hücre hattında kurkumin uygulaması sonucunda, CYP3A4'ün ve mt-ATP6' nın  ekspresyonunlarının arttığı, MCF-7 hücrelerine juglon uygulaması sonucu CYP3A4'ün ekspesyonunun arttğı ayrıca mt-ATP6 gen ifadelerinin azaldığı belirlenmiştir. 
              MDA-MB-231 hücre hattında, hem kurkumin hem de juglon uygulaması sonucunda CYP3A4'ün ve mt-ATP6 gen eksperesyonunun azaldığı tespit edilmiştir.            
              İfade analizleri yapıldıktan sonra, bu moleküllere ait özgün antikorlar kullanılarak Western blot çalışmaları yapılmıştır.
               MCF-7 hücrelerinde kurkumin uygulamasının CYP3A4 ve mt-ATP6  proteinlerinin kontrol grubuna göre ifadesini arttırdığı belirlenmiştir.
 MDA-MB-231 hücrelerinde kurkumin uygulaması sonucu CYP3A4 proteininin ifadesinde kontrol grubuna göre azaldığı tespit edilmiştir.
              Yapılan  literatür taramasında kurkumin ve juglon un mtATP6 ve sitokrom p450 sistemini açıklayacak yayına rastlanmamıştır. Çalışmamızda mitokondiriyal enerji metabolizması ve antioksidan sistem üzerine etkileri   bu moleküllerdeki değişimlerle açıklanmaya çalışılmıştır. Bunun sonucunda da tedaviye yönelik  strateji geliştirilmiş olacaktır.

Abstract:
Breast cancer is the most common malignant cancer in women in the world. Due to the ever increasing number of breast cancer cases, developing effective activities in primary and secondary prevention is vital. One of the best-value methods combining both types of cancer prevention seems to be chemical intervention. It uses natural or synthetic compounds to inhibit, delay or reverse the carcinogenesis process. Among the chemoprevention agents of natural origin, curcumin and juglone, a broad spectrum anti-cancer polyphenol derivative, are of great importance.
In this study, the effects of curcumin and juglone on proliferation of MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cell lines in different dose groups were analyzed by MTT cell viability test. The cells were treated with curcumin and juglone at different doses for 24 hours. CYP3A4 and mt-ATP6 gene and protein expressions were compared with the control group by real time PCR and Western blot method.
              As a result of the application of curcumin in MCF-7 breast cancer cell line, it was determined that the expression of CYP3A4 and mt-ATP6 were increased and that expression of CYP3A4 was increased as a result of juglon application in MCF-7 cells and mt-ATP6 gene expression was decreased.
In the MDA-MB-231 cell line, it was found that CYP3A4 and mt-ATP6 gene expression decreased as a result of both curcumin and juglone application.
After expression analysis, Western blot studies were performed using specific antibodies of these molecules.
It was determined that the application of curcumin in MCF-7 cells increased the expression of CYP3A4 and mt-ATP6 proteins compared to control group.
It was determined that the expression of CYP3A4 protein decreased in MDA-MB-231 cells compared to the control group.
In the literature review, no publication was found to explain the mtATP6 and cytochrome p450 system of curcumin and juglone. In our study, the effects of mitochondrial energy metabolism and antioxidant system on these molecules are explained. As a result, a treatment strategy will be developed.