Meme kanseri hücre hatlarında trastuzumab, dosetaksel ve fukoidanın tek ajan ve kombine ajanlar olarak kullanılmasının apoptoz ve hücre toksisitesine etkisi
The apoptotic and cytotoxic effects of trastuzumab, docetaxel and fucoidan as single agent and combined agents in breast cancer cell lines
Yazar: DUYGU DÖNDÜ AYGÜNEŞ
Danışman: DOÇ. DR. BUKET KOSOVA
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Meme kanseri dünyada sık görülen ve kadın ölümlerinden en fazla sorumlu olan multifaktoriyel bir hastalıktır. Meme kanseri tedavisinde, ilaçla tedavi önemli bir yer tutmaktadır. Mevcut ilaçlar içerisinde dosetaksel ve trastuzumab sıklıkla kullanılan ilaçlardandır. Bunlarla birlikte tedavide yeni bir yaklaşım olarak bitkisel destek terapileri son yıllarda önem kazanmıştır. Destek terapisi seçeneklerinden fukoidan, anti-tümöral etkisiyle son yıllarda araştırılmaya başlanmıştır.   
Çalışmamızda fukoidan, dosetaksel ve trastuzumabın  meme kanseri hücre hatları MCF-7 ve MDA-MB-231 ile kanser olmayan meme hücre hattı MCF-10A' da tek ajan ve kombine ajanlar olarak sinerjistik ve/veya antagonistik etkilerini sitotoksik ve apoptotik olarak belirlemeyi ve bu etkilerin hangi moleküler mekanizmalardan kaynaklandığını ekspresyon düzeyinde göstermeyi amaçladık. 
WST-1 sitotoksisite analiziyle bulunan IC50 değerleri uygulanan hücrelerde, apoptoz Annexin V, CaspGLOW Active Caspase 2-3-8-9 ve MitoCapture yöntemleriyle tayin edilmiştir. Apoptoz testleri sonucunda MCF-7 ve MDA-MB-231 hücrelerinde, fukoidanın monodoz ve kombine ajan uygulamalarında kontrole göre yüksek apoptoz yüzdesine sebep olduğu görülmüştür. Bununla birlikte MCF-10A hücrelerinde fukoidan monodoz ve kombinasyonlarında kontrole göre anlamlı bir farklılık görülmemiştir. 
Sitotoksisite ve apoptoz sonuçlarının arkasındaki moleküler temeller değerlendirildiğinde meme kanseri hücre hatlarında fukoidan uygulaması sonucu APAF1, BAD, BAX, CASP2, CASP3, CASP8, CASP9, CD27, CDKN1A, PTEN, SFN, TGFB1, TP53, TP73, BRCA1, BRCA2, CDKN1C, CDKN2A, CTNNB1, MGMT, RB1, CCND1, JUN ve MAPK1 genlerinde ilaç verilmeyen kontrole göre anlamlı ekspresyon değişikliklerinin meydana geldiği tespit edilmiştir. 
Sonuç olarak, fukoidanın meme kanseri tedavisinde destek terapisi olarak kullanılmaya aday bir madde olduğu belirlenmiştir.

Abstract:
Breast cancer is a multifactorial disease which is common in the world and responsible of the women death. In the treatment of breast cancer, drug treatment has an important place. Among the present drugs, docetaxel and trastuzumab  commonly used ones. Herbal supplement therapies have gained importance in recent years as a new approach for cancer treatment.  Fucoidan, as a supplement therapy drug, has been started to investigate because of  its anti-tumor effect in recent years.
In our study, we aimed to determine  the synergistic and / or antagonistic effects of  fucoidan, docetaxel and trastuzumab  as  single agents and combined agents with  cytotoxic and apoptotic tests and to  show these effects as expression levels with  molecular mechanisms in breast cancer cell lines MCF-7, MDA-MB-231 and non-cancerous breast cell line MCF-10A. 
Apoptosis determined with Annexin V, Active Caspase CaspGLOW 2-3-8-9 and MitoCapture methods by applying IC50 values which are found WST-1 cytotoxicity assay. As results of apoptosis tests, fucoidan and its combinations are determined that they have higher apoptotic percentages according to control in MCF-7 and MDA-MB-231 cells.  However, they can not found statistically significant in MCF-10A cells according to control. 
When we evaluate the molecular basis of cytotoxicity and apoptosis results, we determined that the genes APAF1, BAD, BAX, CASP2, CASP3, CASP8, CASP9, CD27, CDKN1, PA, the SFN, TGFb1, TP53, TP73, BRCA1, BRCA2, CDKN1C, CDKN2A , CTNNB1, MGMT, RB1, CCND1, JUN and MAPK1 had significant expression changes after fucoidan application according to untreated controls in breast cancer cell lines.
 As a result, fucoidan has been determined that it can be a candidate  as a herbal supplement in the treatment of breast cancer.