Sistemik Aspergillus enfeksiyonlarının farklı yöntemlerle mikrobiyolojik tanısı
Microbiological diagnosis of systemic Aspergillus infections by miscellaneous methods
Yazar: HATİCE TUNA HÖRMET ÖZ
Danışman: PROF. DR. A. NEDRET KOÇ
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Aspergilloz = Aspergillosis ; Aspergillus = Aspergillus ; Enfeksiyon = Infection ; Glukanlar = Glucans ; Mikroskopi-ışık = Microscopy-polarization ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Teşhis-ayırıcı = Diagnosis-differential

Özet:
Amaç: İnvaziv aspergillozis (İA) hala çok yüksek mortalite oranlarına sahip bir hastalıktır ve mantarın özelliğinden dolayı çok çeşitli klinik tablolar oluşturabilmektedir. İyi prognoz için erken tanı çok önemli iken konvansiyonel yöntemlerle bunu yapmak çok zordur. Bunun yanında derin doku tutulumunda durumu kritik hastalardan örnek almak da kolay değildir. Bu nedenlerle, alternatif tanı yöntemleri araştırılmıştır. Birçok araştırmacılar alternatif olarak moleküler ve serolojik tanı yöntemleri üzerine yoğunlaşmışlardır. Bu çalışmada İA'da kültürün, direkt mikroskobinin, galaktomannanın (GM), 1,3 ß-D glukan (BDG)'ın ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testlerinin tanı potensiyelinin değerlendirilmesi amaçlandı.Gereç ve yöntem: Aralık 2007-Kasım 2008 tarihleri arasında Erciyes Üniversitesi Gevher Nesibe Hastaneleri kliniklerinde takip edilen İA şüpheli 87 hastadan alınan çesitli klinik örnekler çalışmaya dahil edildi. Aspergillus antijeni serum örneklerinde GM(Platelia Aspergillus, BioRad, France) ve BDG(Fungitell; Associates of Cape Cod) testleri ile araştırıldı. Serum örneklerinden deoksiribonükleikasit (DNA) belirlenmesi için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Light-cycler Roche diagnostics, Australia) uygulandı. Klinik örnekler kültür ve direkt mikroskobi ile değerlendirildi.Bulgular: Çalışmada İA için yüksek riskli 87 hasta çalışmaya alındı. Bu hastaların 57'si invaziv aspergilloz olarak tanımlandı ve hasta grubuna alındı. İA hasta grubunu oluşturan 57 hastanın 3'ü kesin İA, 33'ü yüksek olasılıklı İA ve 21'de düşük olasılıklı olarak sınıflandırıldı. İA olmadığı görülen 30 hasta da kontrol grubu olarak değerlendirildi. Kesin, yüksek olasılıklı ve düşük olasılıklı hasta grubundaki 57 hastanın 39 (% 68)'unun (3 kesin İA'un 3'ünün, 33 yüksek olasılıklı hastanın 28'inin, 21 düşük olasılıklı İA'lu hastanın 8'inin) BDG testi pozitif, 22 (%38.5)'sinin (3 kesin İA'un 2'sinin, 33 yüksek olasılıklı hastanın 13'ünün, 21 düşük olasılıklı İA'lu hastanın 7'sinin) GM testi pozitif ve 8 (%14)'inin (3 kesin İA'un 3'ünün, 33 yüksek olasılıklı hastanın 5'inin) PCR testi pozitifti.Kesin ve yüksek olasılıklı hasta grubundaki 36 hastanın 31 (%86.1)'inin (3 kesin İA'un 3'ünün, 33 yüksek olasılıklı hastanın 28'inin) BDG testi pozitif, 15 (%41.6)' inin (3 kesin İA'un 2'sinin, 33 yüksek olasılıklı hastanın 13' ünün) GM testi pozitif ve 8 (%22.2)' inin (3 kesin İA'un 3'ünün, 33 yüksek olasılıklı hastanın 5' inin) PCR testi pozitifti. BDG ve GM testlerinin birlikte kullanımı ile duyarlılık %71.9'a yükselirken özgüllük %91'e düşmüştür. BDG, GM ve PCR testlerinin birlikte kullanımı ile duyarlılık %73'e yükseldi.Sonuçlar: Yüksek riskli İA tanısında kulanılan testlerden BDG testi tanıda en iyi duyarlılığı sahipti ve GM, BDG ve PCR testlerinin birlikte kullanımı tanının en iyi olduğunu gösterir.Anahtar kelimeler: Aspergillus, 1,3 ß-D-glucan, polimeraz zincir reaksiyonu, galaktomannan, kültür, direkt mikroskobi, invaziv aspergilloz

Abstract:
Aim: Invasive aspergillosis (IA) still have high mortality rate and it can result with various clinical presentations due to characteristics of fungus. While early diagnosis is quite important for better prognosis, it is difficult to achieve this with conventional methods. Sampling is also difficult in critically ill patients with invasive involvement. Therefore, alternative diagnostic methods were investigated. A number of authors focused on molecular and serologic diagnostic methods. In the present study, we aimed to assess diagnostic potential of culture, direct microscopy, galactomannan (GM), (1, 3)-ß-D glucan (BDG) and polymerase chain reaction (PCR) in IA.Materials and Methods: This study was conducted with miscellaneous samples from 87 patients who were followed in Clinics of Erciyes University Gevher Nesibe Hospitals with suspicious IA between December 2007 and November 2008. Aspergillus antigen was evaluated by serum GM (Platelia Aspergillus, BioRad, France) and BDG (Fungitell; Associates of Cape Cod) tests. DNA was investigated by real-time polymerase chain reaction (light-cycler Roche diagnostics, Australia) in sera.Clinic samples were assessed by culture and direct microscopy.Results: 87 patients who had high risk for IA enrolled to the study. Of these patients, 57 patients were identified as invasive aspergillosis (IA) and assigned to patient group. Patients in this group was classified as definitive IA (n=3), probable IA (n=33) and possible IA (n=21). 30 patients without IA considered as control group. Among 57 subject in patient group, BDG test was positive in 39 patients (68.0%; 3/3 of definitive IA, 28/33 of probable IA and 8/21 of possible IA), GM test was positive in 22 patients (38.5%; 2/3 of definitive IA, 13/33 of probable IA and 7/21 of possible IA) and PCR was positive in 8 patients (14.0%; 3/3 of definitive IA, 5/33 of probable IA).Among 36 patients with definitive and probable IA, BDG test was positive in 31 patients (86.1.0%; 3/3 of definitive IA, 28/33 of probable IA), GM test was positive in 15 patients (41.6%; 2/3 of definitive IA, 13/33 of probable IA) and PCR was positive in 8 patients (22.2%; 3/3 of definitive IA, 5/33 of probable IA). Sensitivity elevated to 71.9 with combined use of BDG and GM whereas specifity reduced to 91.0%. Sensitivity elevated to 73.0% with combined use of BDG, GM and PCR.Conclusions: BDG test has highest sensitivity in IA and diagnosis is best with combined use of BDG, GM and PCR testsKeywords: Aspergillus, (1, 3) ß-D-glucan, polymerase chain reaction, galactomannan, culture, direct microscopy, invasive aspergillosis.