Erkek infertilitesi ve STPG2 geni ekspresyonu arasındaki bağlantının araştırılması /
Yazar: GİZEM AZİZOĞLU
Danışman: PROF. DR. SİBEL KARAÜZÜM
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Genetik = Genetics ; Üroloji = Urology

Özet:
Amaç: İnfertil erkeklerin büyük bir kısmı sebebi bilinmeyen (idiyopatik) infertilite kategorisinde bulunmaktadır. Son yıllarda gelişen moleküler yöntemlerle gen düzeyinde çalışmalar hız kazanmıştır. Bu çalışmada, STPG2, GTSF1 ve RNF8 genlerinin ekspresyonu ile erkek infertilitesi arasındaki bağlantıların araştırılması amaçlanmıştır.
Yöntem: 31'i idiyopatik, 9'u sebebi belli infertil olmak üzere toplamda 40 infertil erkek bireyden testis dokusu ve kan, 32 fertil erkek bireyden ise kan örnekleri alınmıştır. Örneklerin total RNA izolasyonu yapılıp cDNA elde edilmiştir. STPG2 geninde yapılan qRT-PCR çalışmalarından sonuç elde edilememesi üzerine 8'i sebebi belirlenmiş ve 8'i idiyopatik infertil olmak üzere 16 doku örneğinden transkriptom (RNAseq) çalışması yapılmıştır. Gruplar arasında farklılık göstermiş olan GTSF1 ve RNF8 genleri seçilmiş ve qRT-PCR yöntemi ile ekspresyon seviyeleri belirlenmiştir. Elde edilen bulguların ∆Cq değerleri kullanılarak istatistiksel analizleri yapılmıştır.
Bulgular: RNAseq analizleri sonucunda STPG2 geninin gruplar arasında ekspresyon farklılığı göstermediği bulunmuştur. qRT-PCR ile yapılan çalışmalarda fertil ve infertil bireylerin kan örneklerinde GTSF1 geninde ekspresyon değişimi gözlemlenmezken, RNF8 geninin expresyonunda istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmuştur. İki gende de idiyopatik ve sebebi bilinen infertil dokular arasında fark gözlenmezken, patolojik tanılarına göre karşılaştırıldığında, her iki gende de dokularda ekspresyon farkı belirlenmiştir.
Sonuç: İdiyopatik infertil bireylerle kontrol bireyler arasında STPG2 geninde ekspresyon farklılığı saptanmamıştır. GTSF1 gen ekspresyonu sadece patolojik tanısı "Sertoli Cell Only" (SCO) olan hasta grubunda düşüş gösterirken, RNF8 gen ekspresyonunun sadece SCO tanılı olguların doku örneklerinde değil, infertil ve fertil bireylerin kan örneklerinde de farklılığının belirlenmesi, RNF8 geninin aday bir biyobelirteç olabileceğini göstermiştir.

Abstract:
ABSTRACT 
Objective: A large number of infertile men are diagnosed with "idiopathic infertility", the reason behind their infertility is unknown. Recently, due to improved molecular methods, genetic studies on male infertility increased. This study is aimed to investigate the relationship between the candidate genes; STPG2, GTSF1, RNF8 and male infertility.
Method:  Testicular tissue and blood samples from 40 infertile men; 31 diagnosed with idiopathic infertility and 9 with known causes, and blood samples from 32 fertile men were collected. Following total RNA isolation from the samples, cDNAwas synthesized. The results obtained from Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR) studies on STPG2 were inconclusive. Transcriptome (RNAseq) analysis was conducted on 16 tissue samples, 8 with identified causes and 8 with idiopathic infertility. Following RNAseq, GTSF1 and RNF8 genes that showed differential expression among groups, were selected for further investigation. Subsequently, their expression levels were measured using qRT-PCR method. Statistical analysis was conducted using obtained ∆Cq values.
Results: No results were obtained from the qRT-PCR studies on STPG2, and RNAseq analysis showed no differencial expression. While no expression changes were observed for GTSF1 in blood samples from fertile and infertile individuals via qRT-PCR studies, a significant difference was detected in expression of the RNF8 gene. No difference was observed in the expression of both genes between idiopathic infertile and control tissues with known causes. However, when grouped by pathological diagnosis, expression differences were observed in tissues for both genes.
Conclusion: No expression difference was detected in STPG2 between idiopathic infertile individuals and control subjects. The expression of the GTSF1 gene showed a decrease only in the "Sertoli Cell Only" (SCO) patient group. Differences were identified in the RNF8 gene expression in tissue samples of SCO-diagnosed cases and in blood samples of infertile and fertile individuals which indicates that RNF8 gene could be a candidate biomarker.