Kronik Miyelositer Lösemilerde füzyon gen kalitatif ve kantitatif değerlerinin FISH ve moleküler genetik yöntemlerle karşılaştırılması
Comparison of qualitative and quantitative values of fusion gene by FISH and molecular genetic methods in chronic myelogenous leukemia
Yazar: ŞEBNEM ÖZEMRİ SAĞ
Danışman: DOÇ. DR. TAHSİN YAKUT
Uludağ Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: FISH = FISH ; FISH = FISH ; Genetik analiz = Genetic analysis ; Genler = Genes ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Amaç: BCR-ABL pozitif hücrelerin tespitinde, Floresan In Situ Hibridizasyon (FISH) ve Kantitatif Revers Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonunu (QRT-PCR) içeren moleküler tanısal yöntemler, klasik sitogenetik analize göre daha sensitiftir. QRT-PCR, üstün sensitivitesinden dolayı, İmatinib ile tedavi edilen Kronik Miyelositer Lösemilerin (KML) takibinde altın standart olarak düşünülmektedir. Bizim çalışmamızın amacı, KML hastalarında farklı zamanlarda FISH ve QRT-PCR'ın diagnostik ve klinik faydalılığının karşılaştırılmasıdır.Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada, retrospektif olarak analiz edilen 78 KML hastasının 135 sonucu Philadelphia (Ph) translokasyonu için hem FISH hem de QRT-PCR çalışmaları ile test ettik ve bu iki farklı tekniğin avantaj ve dezavantajlarını değerlendirdik.Bulgular: Bizim çalışmamız, yeni tanı konmuş vakaların tümünün her iki metotla pozitif olduğunu gösterdi. Bir vakada, FISH pozitifti, QRT-PCR negatifti; 61 vakada QRT-PCR pozitifken FISH negatifti. FISH ve QRT-PCR'ın tam uyumu (her iki testte negatif veya pozitif olma) 73 vakada bulundu (%54,1) ve 62 vakada (%45,9) farklılık tanımlandı. Aynı zamanda QRT-PCR değerleri ile sitogenetik yanıt kategorileri arasında iyi bir uyum vardı.Sonuç: QRT-PCR'ın düşük seviyelerdeki BCR-ABL transkriptlerini tam olarak ölçmeye izin verdiğini ve minimal rezidüel hastalığın (MRH) hassas br göstergesi olarak hizmet verdiğini doğruladık. Ek olarak, yeni tanı konmuş KML hastaları arasında BCR-ABL füzyon genini tespit etmede FISH ile QRT-PCR `ın %100 korele olduğunu gösterdik. Aynı zamanda FISH'in minimal rezidüel hastalığın takibinde uygun olmadığı sonucuna vardık.Anahtar Kelimeler: Kronik miyelositer lösemi (KML), philadelphia (Ph) translokasyonu, floresan in situ hibridizasyon (FISH), kantitatif revers transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonu (QRT-PCR), minimal rezidüel hastalık (MRH).

Abstract:
Objectives: The molecular diagnostic methods including fluorescence in situ hybridization (FISH) and quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (QRT-PCR) are more sensitive than classical cytogenetic analysis for the detection of BCR-ABL positive cells. QRT-PCR, due to its superior sensitivity, is considered the gold standard for the follow-up of chronic myelogenous leukemia (CML) treated with imatinib. The objective of our study was to compare the diagnostic and clinical usefulness of FISH and QRT-PCR at different timepoints for CML patients.Material and Methods: In this study, we retrospectively analyzed 135 results of 78 patients with CML tested by both FISH and QRT-PCR studies for Philadelphia (Ph) translocation and evaluated the advantages and disadvantages of these two different techniques.Results: Our study demonstrated that all newly diagnosed cases were positive with both methods. In one case, FISH was positive QRT-PCR was negative; in 61 cases, FISH was negative while QRT-PCR was positive. An overall concordance of FISH and QRT-PCR (being either negative or positive in both tests) was found in 73 cases (54.1%) and a discrepancy identified in 62 cases (45.9 %). Also there was good concordance between QC-PCR values and cytogenetic response categories.Conclusions: We confirm that QRT-PCR allows precise measurement of low levels of BCR-ABL transcripts and can serve as a sensitive indicator for minimal residual disease. In addition, we demonstrate 100% correlation of QRT-PCR with FISH in detecting the BCR-ABL fusion gene among patients with newly diagnosed CML. FISH is not suitable for monitoring minimal residual disease.Key words: Chronic myelogenous leukemia (CML) , Philadelphia (Ph) translocation ,fluorescence in situ hybridization (FISH), quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (QRT-PCR), minimal residual disease (MRD).