İmmünmodülatör etkisi olan interlökin-10 sitokin geninin klonlanması
Cloning of the immunmodulatory effecst ofinterleukin-10 cytokine gene
Yazar: NİMET BÜŞRA KARARMAZ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYCAN GÜNDOĞDU
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Gen klonlama = Gene cloning ; Genler = Genes ; Klonlama = Cloning ; Sitokinler = Cytokines ; İmmünite = Immunity ; İmmünolojik faktörler = Immunologic factors ; İmmünomodülasyon = Immunomodulation ; İnterlökin 10 = Interleukin 10 ; İnterlökinler = Interleukins

Özet:
İMMÜNMODÜLATÖR ETKİSİ OLAN İNTERLÖKİN-10 
SİTOKİN GENİNİN KLONLANMASI

Nimet Büşra KARARMAZ

Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Kök Hücre Bilimleri Anabilim Dalı
Yüksek Lisans Tezi, Mayıs 2018
Danışman: Dr. Öğr. Üyesi Aycan GÜNDOĞDU

ÖZET
İnterlökin 10 (IL-10) sitokini, immün sistemin doğal ve edinsel kollarının ikisini de doğrudan veya dolaylı olarak kullanıp immün yanıtları farklı düzeylerde engelleyen güçlü bir immünsüpresiftir. IL-10 immün sistem hücreleri üzerinde düzenleyici etkisi bulunan önemli bir sitokindir ve bu nedenle IL-10 proteini terapötik etkinliği olabilecek bir ajandır. IL-10'un protein dizisinin kısa olması, yarılanma ömrünün az olması ve kısa mesafede etkili olması terapötik bir ajan olarak kullanımını zorlaştırmaktadır. İnovatif yöntemler aracılığıyla; zaman ayarlaması, multiple enjeksiyonlar ve çeşitli dozlar yapıldığı takdirde IL-10'u immün tedavide terapötik bir ajan olarak kullanmak mümkün hale gelecektir.
Bu projede amaç terapötik öneme sahip IL-10 proteininin üretilmesi için ön bir aşama olan IL-10 sitokin geninin klonlanmasıdır. Bu amaçla öncelikle bir farenin dalağından RNA izolasyonu yapılmış, elde edilen RNA'dan cDNA elde edilmiş, cDNA'dan IL-10 primerleri kullanılarak PZR ile IL-10 sitokin gen amplikonu elde edilmiş. IL-10 gen amplikonu Ampicilin direnç geni taşıyan plazmid vektöre aktarılmış, IL-10 geni aktarılmış plazmid vektörün E.coli'ye transformasyonu gerçekleştirilmiş, E.coli kolonileri Ampicilin'e dirençli katı besiyerine ekilerek sadece Ampicilin dirençli olan koloniler seçilmiş, seçilen kolonilerde transformasyonun gerçekleşip gerçekleşmediğini tespit edebilmek için PZR yapılmış ve IL-10 geninin varlığı teyit edilerek DNA dizi analizi ile doğrulanmıştır.
Bu çalışma sonucunda; klonlanan IL-10 geni, protein üretimi çalışmalarında, ekzojen fare IL-10'un lokal ve sistemik etkilerini gözlemleyebilmek adına in vitro ve in vivo çalışmalarda kullanılabilecektir.
Anahtar Kelimeler: İmmünmodülatör 10, Sitokin, İmmünoloji, İmmünmodülatör

Abstract:
CLONING of THE IMMUNMODULATORY EFFECST OF
INTERLEUKIN-10 CYTOKINE GENE

Nimet Büşra KARARMAZ

Erciyes University, Graduate School of Health Science
Department of Stem Cell Science
Master Thesis, May 2018
Supervisor: Asst. Prof. Aycan GÜNDOĞDU

ABSTRACT
Interleukin 10 (IL-10) cytokine is a potent immunosuppressant that directly or indirectly uses both natural and acquired arms of the immune system and blocks immunological responses at different levels. IL-10 is an important cytokine with regulatory effects on the immune system cells and is therefore a potential agent for IL-10 protein therapeutic activity. The short protein sequence of IL-10, low half-life and short-range effect make it difficult to use as a therapeutic agent. Through innovative methods; time adjustment, multiple injections and various doses will make it possible to use IL-10 as a therapeutic agent in immunotherapy.
In this project, the aim is to clone the IL-10 cytokine gene, a preliminary step for the production of the IL-10 protein with therapeutic prescription. For this purpose, first RNA isolation was performed from a pharyngeal spleen, cDNA obtained from the RNA, and IL-10 cytokine gene amplicon was obtained by PCR using the primers IL-10 from cDNA. The IL-10 gene amplicon transfected to a plasmid vector carrying Ampicillin resistance gene and this vector transfected to E. Coli. E. coli colonies were cultivated on Ampicillin-resistant solid medium and only the colonies with Ampicillin resistant were selected. PCR was performed to determine if transformation was occurring in the selected colonies and the presence of the IL-10 gene was confirmed. The presence of IL-10 gene was verified by DNA sequencing.
As a result of this study; The cloned IL-10 gene can be used in in vitro and in vivo studies to observe the local and systemic effects of exogenous mouse IL-10 and IL-10 protein production studies.
Keywords: Interleukin 10, Cytokine, Immunology, Immunmodulatory