Fonksiyonel gastrointestinal bozukluğu olan hastalarda blastocystis sp. varlığının konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle araştırılması
Investigation of the presence of blastocystis sp. in patients with functional gastrointestinal disorders by conventional and molecular methods
Yazar: GÖZDE KAHRAMAN
Danışman: PROF. DR. İDRİS ŞAHİN
Düzce Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Çalışmamızda fonksiyonel gastrointestinal bozukluğu olan hastalardaki Blastocystis sp.  varlığı ve alt tiplerinin saptanması ile Blastocystis sp.'nin hastalık etiyolojisindeki yerinin belirlenmesi amaçlanmaktadır. Ayrıca bölgemizdeki normal sağlıklı kişilerdeki Blastocystis sp.  sıklığı saptanarak epidemiyolojik verilere katkı sağlanacağı düşünülmektedir.
Eylül 2023- Mayıs 2024 tarihleri arasında Düzce Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Gastroenteroloji polikliniğine başvurup fonksiyonel gastrointestinal hastalık tanısı (Fonksiyonel dispepsi (FD), fonksiyonel barsak hastalıkları (FBH)) alan 200 hastanın ve kontrol grubu olarak 100 kişinin Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na gönderilen dışkı örneklerine direkt mikroskopi (DM) ve trikrom boya yapıldı. DM ile Blastocystis sp. tespit edilen gaita örneklerine Gerçek zamanlı PZR yapıldı. Blastocystis sp. saptanan örneklerden 20 tanesine alt tip belirlenmesi amaçlı sekans analizi yapıldı.
Hasta grubunun DM ile 28'inde (%14), kontrol grubunun ise 10'unda ( %10), trikrom boyama yöntemi ile hasta grubunun 25'inde (%12,5), kontrol grubunun 7'sinde (%7) Blastocystis sp. saptanmıştır. DM ile parazit görülen 38 örneğe Gerçek zamanlı PZR yapılmıştır. Hasta grubunun 24'ünde (%12) , kontrol grubunun ise 7'sinde (%7) olmak üzere toplam 31 (%10,33) örnekte PZR ile parazit varlığı saptanmıştır (p=0,180). Hasta grubunda Blastocystis enfeksiyonu saptanan ve saptanmayan olgular arasında cinsiyet, hastalık grubu (FD, FBH, FD ve FBH birlikteliği),  kronik hastalık varlığı, kişilerin yerleşim yeri (kırsal-kent) yönünden istatistiksel olarak anlamlı fark bulunmamıştır. Hasta grubunda Blastocystis sp. saptananların 7'si (%29,2) 35 yaş altında, 17'si (%70,8) 35 yaş üzerinde olup yaş grupları arasında anlamlı bir fark bulunmuştur (p=0,030). Blastocystis alt tipleri belirlenen 18 izolatın 3'ü (%16,7) ST1, 6'sı (%33,3) ST2 ve 9'u (%50) ST3 olarak belirlenmiştir. FBH olanlarda en sık ST3 (%66,8), FD olanlarda ise ST3 (%45,5) ve ST2 (%45,5)  ST1 (%9)'den daha yüksek oranda tespit edilmiştir.
Çalışmamız, Batı Karadeniz bölgesinde Blastocystis prevelansı ve FD tanısı olan hastalarda Blastocystis varlığı üzerine yapılan ilk çalışma olması açısından önemlidir. Düzce ilinde saptanan Blastocystis prevelansı ve alt tip dağılımı dünya ve ülkemizdeki çalışmalarla benzerlik göstermektedir. Blastocystis rutin tanısında DM yöntemi ile birlikte ikinci bir yöntemin (moleküler yöntem gibi) daha kullanılması faydalı görülmektedir.

Abstract:
Our study aims to determine the presence and subtypes of Blastocystis sp. in patients with functional gastrointestinal disorders and to determine the role of Blastocystis sp. in the etiology of the disease. In addition, it is thought to contribute to epidemiologic data by determining the frequency of Blastocystis sp. in normal healthy people in our region.
Direct microscopy (DM) and trichrome staining were performed on stool samples sent to the Medical Microbiology Laboratory of 200 patients who applied to the Gastroenterology outpatient clinic of Düzce University Faculty of Medicine Hospital between September 2023 and May 2024 and diagnosed with functional gastrointestinal diseases (Functional dyspepsia (FD), functional bowel diseases (FBD)) and 100 people as a control group. Real-time PCR was performed on stool samples in which Blastocystis sp. were detected by DM. Sequence analysis was performed to determine the subtype of 20 of the Blastocystis sp. detected samples.
Blastocystis sp. was detected in 28 (14%) of the patient group and 10 (10%) of the control group with DM, in 25 (12.5%) of the patient group and 7 (7%) of the control group with trichrome staining method. Real-time PCR was performed on 38 samples in which parasites were detected by DM. A total of 31 (10.33%) samples, 24 (12%) in the patient group and 7 (7%) in the control group, were found to have parasites by PCR (p=0.180). There was no statistically significant difference between the cases with and without Blastocystis infection in the patient group in terms of gender, disease group (FD, FBD, FD and FBD coexistence), presence of chronic disease, and place of residence (rural-urban). In the patient group, 7 (29.2%) were under 35 years of age and 17 (70.8%) were over 35 years of age and a significant difference was found between the age groups (p=0.030). Blastocystis subtypes were determined as ST1 in 3 (16.7%), ST2 in 6 (33.3%) and ST3 in 9 (50%) of 18 isolates. ST3 (66.8%) was the most common in patients with FBD, while ST3 (45.5%), ST2 (45.5%) and ST1 (9%) were more common in FD patients.
Our study is important as it is the first study on the prevalence of Blastocystis in the Western Black Sea region and the presence of Blastocystis in patients with FD. Blastocystis prevalence and subtype distribution in Düzce province are similar to the studies in the world and in our country. It seems useful to use a second method (such as molecular method) together with the DM method in the routine diagnosis of Blastocystis.