Pan-aurora kinaz inhibitörü olan danusertib'in, pankreas kanseri hücrelerinde sitotoksisite, hücre döngüsü ve apoptoz üzerine etkilerinin araştırılması
The investigation of the effect of danusertib, a pan-aurora kinase inhibitor, onto cytotoxicity, cell cycle and apoptosis in pancreatic cancer cells
Yazar: İSMAİL AYBERK KIRBIYIK
Danışman: DOÇ. DR. AHMET ATA ÖZÇİMEN
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, CFPAC-1 ve Mia PaCa-2 duktal pankreatik adenokarsinoma hücre hatlarında Pan-Aurora kinaz inhibitörü olan Danusertib'in sitotoksisite, DNA hücre döngüsü ve apoptoz üzerine etkileri araştırılmıştır. xCELLigence DP eş zamanlı hücre analizi cihazında, Danusertib'in CFPAC-1 ve Mia PaCa-2 hücre hatları üzerindeki IC50 değerleri bulunmuştur. xCELLigence DP gerçek zamanlı hücre analizi cihazında, CFPAC-1 için 20.000 hücre, Mia PaCa-2 için 5000 hücre kullanılmıştır. Danusertib'in uygulama saati ise 24. Saat olarak belirlenmiştir. Danusertib (1nM, 10nM, 100nM, 1mM, 10 mM) uygulaması sonucu IC50 değeri CFPAC-1 için ''400 nM'', Mia PaCa-2 için ''300 nM'' olarak bulunmuştur. Danusertib'in doz/zaman bağımlı olarak bulunan IC50 değerleri her iki hücre hattı için 24 ve 48 saat olmak üzere uygulanmıştır. Akım sitometride apoptozun belirlenmesi için Annexin V/APC testi yapılmıştır. Test sonucunda, CFPAC-1 için %21 erken apoptotik, Mia PaCa-2 için (%1 erken apoptotik) değerlendirilemeyecek kadar az miktarda apoptotik hücre olduğu belirlenmiştir. DNA hücre döngüsü analizi akım sitometride yapılmıştır. Analiz sonucunda Danusertib'in anti-mitotik etkisi, hücre döngüsünü tutuklandığı fazların (G1, S, G2) yüzde oranları ile belirlenmiştir. CFPAC-1'in hücre döngüsünün S (%31) ve G2 (%11) fazında, Mia PaCa-2'nin hücre döngüsünün S (%67) fazında tutuklandığı gözlemlenmiştir. Sonuç olarak, Pan-Aurora Kinaz inhibitörü olan Danusertib'in Pankreatik Duktal Adenokarsinom hücrelerinde potansiyel sitotoksik etkili olabileceği ancak apoptoz ile ilgili çalışmaların daha ayrıntılı yapılması öngörülmektedir.

Abstract:
In this study, the effects of Danusertib, a Pan-Aurora Kinase inhibitor, onto the cytotoxicity, apoptosis and DNA cell cycle analysis were investigated in CFPAC-1 and Mia PaCa-2 ductal pancreatic adenocarcinoma cell lines. The IC50 values of Danusertib on CFPAC-1 and Mia PaCa-2 cell lines were measured by using xCELLigence DP real-time cell analyser. Using the xCELLigence DP real-time cell analyser, 20,000 cells and 5000 cells were found to apply for CFPAC-1 and Mia PaCa-2 cells respectively. Afterwards, Danusertib's application time set at 24 hours. As a result of Danusertib (1nM, 10nM, 100nM, 1mM, 10 mM) application, IC50 values were found as ''400 nM'' and ''300 nM'' for CFPAC-1 and Mia PaCa-2 cells respcetively. These IC50 values for time/dose dependent manner Danusertib were incubated for 24 and 48 hours onto the both cell lines. Annexin V / APC test was performed using by Flow Cytometry to check apoptosis. As a result of the test, early stage of apoptosis was found as 21% for CFPAC-1, however any apoptosis could not be measured as low as not to be assessed for Mia PaCa-2 (1% early apoptotic) cells. DNA cell cycle tests for cells were analysed using by flow cytometry. As a result of the analysis, the antimitotic effect of Danusertib was measured as percentage ratios of the arrested phases of cell cycle (G1, S, G2). It was observed that the cell cycle of CFPAC-1 was arrested in S (31%) and G2 (11%) while the Mia PaCa-2 was arrested in S (67%) phase of cell cycle. In conclusion, Danusertib, a Pan-Aurora Kinase inhibitor, might be a potantial effective cytotoxic drug however it presumably further apoptotic studies were predicted.