Otozomal resesif non-sendromik işitme kayıplarında connexin 26 gen çalışmaları
Connexin 26 gene studies in autosomal recessive non-syndromic hearing losses
Yazar: ZEYNEP OCAK
Danışman: PROF.DR. SITKI ÖZTAŞ
Atatürk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2007
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: İşitme kaybı = Hearing loss

Özet:
Günümüze kadar non-sendromik işitme kaybının etiyolojisinde yaklaşık 34 gen ve 100'den fazla lokus belirlenmiştir. Çeşitli toplumlarda yapılan mutasyon taramaları sonucunda otozomal resesif non-sendromik işitme kayıplı olguların yaklaşık %50'sinden GJB2 (gap junction ß-2) gen mutasyonlarının sorumlu olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı bölgemizde non-sendromik otozomal resesif işitme kayıplarının genetiğinde etkili olan GJB2 mutasyonlarının taranmasıdır.Bu çalışmaya 50 işitme kayıplı hasta ve 50 sağlıklı gönüllü alınmıştır. Ayrıca, tek zincir konformasyon polimorfizmi (SSCP) analizinde şüpheli bant paterni olan hastaların ebeveynleri de çalışmaya dahil edilmiştir. Hastaların yaşları 15 ile 35 yaş arasında değişmekte olup, çalışma protokolü tüm katılımcılara anlatılarak onayları alınmıştır.KBB servisinde muayene ve işitme testleri yapılan hastalar, sendromik açıdan bölümümüzde değerlendirilmiştir. DNA ekstraksiyonu için, hastalardan 2 ml periferik kan örneği alınarak, GJB2 geni Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile amplifiye edilmiştir. Daha sonra, her bir amplikon %8'lik poliakrilamid jel elektroforezinde (PAGE), SSCP tekniği ile yürütülerek şüpheli bant paternine sahip hastalar kaydedilmiştir. SSCP ile farklı bant paterni veren 13 otozomal resesif non-sendromik işitme kayıplı bireyde PCR-RFLP tekniği kullanılarak; 35delG, 235delC, 167delT, 176-191del16, V95M ve W77X mutasyonlarının varlığı araştırılmıştır.Çalışma grubumuzu oluşturan 50 hastanın GJB2 gen incelemesinde 10 hastada (7 homozigot ve 3 heterozigot) 35delG mutasyonu tespit edilmiştir. Bu 7 homozigot hastanın ulaşabildiğimiz iki tanesinin ebeveyninde heterozigot 35delG mutasyonu saptanmıştır. Çalışılan 50 sağlıklı kontrolün bir tanesinde heterozigot 35delG mutasyonu saptanmış olup, genetik danışmanlık verilmiştir. GJB2 genine ait diğer mutasyonlar (V95M, 176-191Del16, 235DelC, 167DelT, W77X) çalışılan her iki grupta da tespit edilememiştir.Çalışma grubumuzdaki 50 hastada SSCP ve PCR-RFLP teknikleri kullanılarak 13 tanesinde GJB2 gen mutasyonları tespit edilirken, 37 hastada GJB2 gen mutasyonları tespit edilememiştir. İşitme fonksiyonlarında rol oynayan diğer genlerin de non-sendromik işitme kayıplı hastalarda DNA dizi analizi gibi daha ileri bir teknik ile araştırılmasınında etyopatogenezi açıklamada yardımcı olacağını düşünmekteyiz.

Abstract:
Up to day, about 34 genes and more than 100 loci have been detected in the etiology of non-syndromic hearing loss. In the result of mutation scannings carried out in various communities, it has been indicated that GJB2 (gap junction B2) gene mutations are responsible for nearly 50% of the cases with autosomal recessive non-syndromic hearing loss. The purpose of this study is to scan GJB2 mutations, having an influence on non-syndromic autosomal recessive hearing loss, in our region.Fifty patients with hearing loss and 50 healthy volunteers were included in this study. Additionally, The parents having doubtful band pattern in the analysis of Single Strand Conformational Polymorphism (SSCP) were also included in this study. The ages of the subjects were between 15 and 35 years, and the study protocol was explained to all participants, and their approvals were taken.The patients whose examinations and hearing tests were performed in ENT clinic were assessed in our clinic as regards syndromically. For DNA extraction, peripheral blood samples (2 mL) were taken from the patients, and GJB2 gene was amplified by means of polymerase chain reaction (PCR). Then, each amplicon was conducted in 8% polyacrylamid gel electrophoresis by means of SSCP technique, and the patients having doubtful band pattern were recorded. In 13 individuals with autosomal reccessive non-syndromic hearing loss and with different band patterns by SSCP and PCR-RLFP techniques, the existence of W77X, V95M, 176-19del16, 167delT, 235delC and 35delG mutations has been also investigated.In the investigation GJB2 gene in our study group comprising 50 patients, it was found that 10 cases (7 homozygote and 3 heterozygote cases) had 35delG mutation. Of 7 homozygote cases, we contacted with only two parents in whom heterozygote 35delG mutation was detected.In the healthy control group (n=50), only one case had 35delG mutation and this case was given genetic counseling. Other mutations (W77X, V95M, 176-19del16, 167delT, 235delC) in GJB2 gene were not detected in neither patient nor control groups. While GJB2 gene mutations were determined with SSCP and PCR-RFLP techniques in 13 cases, no GJB2 mutations was determined in the remaining 37 cases.We think that the determination of the other genes, which may play a significiant role in hearing functions, with more sophisticated methods, such as DNA sequence analysis, will contribute in explaining etiopathogenesis of patients with non-syndromic hearing loss.