Transforming büyüme faktörünün gelişen embriyonik üreter üzerine etkisi: Farelerde in-vitro megaüreter modeli
Effects of transforming büyüme factor on the developing embryonic ureter: An in-vitro megaureter model in mice
Yazar: ERDEM ÖZTÜRK
Danışman: DOÇ. DR. BERK BURGU
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Fareler = Mice ; Kaslar = Muscles ; Transforme edici büyüme faktörleri = Transforming growth factors ; Transforme edici büyüme faktörü-beta = Transforming growth factor-beta ; Üreter = Ureter ; İn vitro = In vitro

Özet:
AMAÇ
Transforming büyüme faktör-ß?nın megaüreter patogenezindeki rolü gösterilmiştir. TGF-ß?nın patolojik olarak yüksek ekspresyonu alt üreterin gelişiminde gecikmeye neden olmaktadır. TGF-ß değerlerinin zaman içinde azalması ile megaüreter spontan olarak düzelmektedir.
Biz bu çalışmada farelerde TGF-ß ve TGF-ß reseptörünün (TGFR) üreterovezikal bileşke (UVB) ve alt üreterdeki ekspresyon paternini belirlemeyi ve embryonic organ kültürü modelinde ekzojen TGF-ß?nın düz kas gelişimi üzerindeki etkisini saptamayı hedefledik.
GEREÇ ve YÖNTEM
Farklı embryonic günlerde (E) (E16, 18,20, postnatal day 1,7) alt üreter ve UVB?deki TGF-ß ve TGFR ekspresyonuna bakıldı. Fare embryolarının üretreleri E16. Günde toplandı ve organ kültürüne ekildi. Bazı kültürlere TGF-ß (2&20 ng/ml) eklenirken bazı kültürlere ise TGF-ß ile birlikte bioaktif blokör olarak TGFR de eklendi. 6 gün sonra organlar toplandı ve örneklerde immunohistokimyasal olarak CD31 ve Ki67 çalışıldı. Flowsitometri kullanılarak UVB?nin ve üreterin kas içeri analiz edildi.
BULGULAR
Embryonic üreterde immunolojik olarak TGF-ß ve TGFR2 pozitif hücreler saptandı. TGF-ß ekspresyonun E18?de en yüksek seviyeye çıktığı ve postnatal dönemde gerilediği görüldü. Ekzojen TGF-ß?nın UVB?deki kas proliferasyonunu ve farklılaşmayı olumsuz etkilediği saptandı. TGF-ß eklenen kültürlerdeki longitudinal kas lifleri belirgin azdı. Ayrıca TGF-ß?nın SMA ekspresyonunda da azalmaya neden olduğu görüldü. TGFR TGF-ß?nın u etkilerini bloke etti.
SONUÇ
Ekzojen TGF-ß eklenen organ kültürünlerinden elde edilen dokularda UVB düz kas proliferasyonun geciktiği ve bunun da kas yapısını etkilediği saptanmıştır. TGF-ß?nın E18. gün en yüksek seviyeye çıkması ve sonrasıda postnatal olarak gerilemesi, patolojik olarak yüksek seviyelerin devam etmesinin primer megaüreter patogenezinde etkili olabileceğini düşündürmektedir.

Abstract:
OBJECTIVES:
It has been shown that segmantal up-regulation of transforming büyüme factor beta (TGF-ß) has a role in the pathogenesis of megaureter. The developmental delay of the lower ureter had been shown to be associated with the pathogenic autocrine TGF-ß overexpression in limited number of human fetuses. The spontaneous resolution of megaureters had been postulated with the late regression of sustained TGF-ß. 
We aimed to determine whether TGF-ß and its receptors (TGFR?s) are expressed during ureterovesical junction (UVJ) and lower ureter development in mice and whether exogenous TGF-ß might postpone the maturation of smooth muscle cells, using an embryonic organ-culture model.
MATERIALS AND METHODS:
Expression of TGF-ß&TGFR?s on the lower ureter and UVJ were determined at different embryonic days (E) (E16,18,20;Postnatal Day1,7). The functional studies were performed by harvesting ureters from wild-type mice,at embryonic day (E) 16, were grown in serum-free organ-culture; some cultures were supplemented with TGF-ß(2&20 ng/ml) and/or with soluble TGFR, which blocks bioactivity. Organs were harvested after 6 days and the expression of CD31 and Ki67 were assessed using immunohistochemistry. The muscle content of the UVJ and ureter were analyzed by flowcytometry.
RESULTS:
TGF-ß & TGFR2 positive cells were immunodetected in embryonic ureters. The TGF-ß expression was highest on E18 and had decreased postnataly. Exogenous TGF-ß decreased ureterovesical (UV) muscle differentiation and proliferation. The longitudinal muscle fibers were significantly less in TGF-ß explants. TGF-ß also decreased the proportions of cells expressing SMA. SolubleTGFR blocked the effects of exogenous TGF-ß.
CONCLUSIONS:
In organ-culture, exogenous TGF-ß postpones the UV smooth muscle proliferation and affects the muscular structure. Whether the effects of TGF-ß are direct or indirect these form an invitro-megaureter model. The finding that TGF-ß is highest in embryonic ureters in-vivo and decreases postnataly, suggests that a pathological persistance might potentialy explain the pathogenesis of primary megaureters.