Rosiglitazon ve metformin'in kapiler elektroforez ve yüksek basınçlı sıvı kromatografisi yöntemleri ile farmasötik preparatlardan ve biyolojik materyalden aynı anda analizi
Simultaneous analysis of rosiglitazone and metformin in pharmaceutical preparations and biological material by capillary electrophoresis and high pressure liquid chromatography methods
Yazar: CEREN YARDIMCI
Danışman: PROF.DR. NURAN ÖZALTIN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry

Özet:
ÖZETYardımcı, C., Rosiglitazon ve Metformin'in Kapiler Elektroforez ve YüksekBasınçlı Sıvı Kromatografisi Yöntemleri ile Farmasötik Preparatlardan veBiyolojik Materyalden Aynı Anda Analizi, Hacettepe Üniversitesi SağlıkBilimleri Enstitüsü Analitik Kimya Programı Doktora Tezi, Ankara, 2006. Buçalışmanın amacı, Tip 2 diyabet tedavisinde kombine olarak kullanılan rosiglitazon(ROS) ve metformin'in (MET) farmasötik preparatlardan ve biyolojik materyaldenaynı anda analizi için kapiler elektroforez (CE) ve yüksek basınçlı sıvıkromatografisi (HPLC) yöntemleri geliştirmektir. CE yönteminde en iyi sonuçlar,çalışma tamponu olarak 25 mM pH 4.0 asetat tamponu kullanılmasıyla eldeedilmiştir. Ayırım, eritilmiş silika kapilerde (80.5 x 75 Âµm i.ç., 72 cm etkin uzunluk)25ºC'de, 50 mbar basınçla 3 sn süreli hidrodinamik enjeksiyon ve 25 kV potansiyeluygulanarak gerçekleştirilmiştir. ROS, MET ve iç standart olarak kullanılanverapamil 203 nm'de dizi diyot dedektörle saptanmıştır. Farmasötik preparat analiziiçin geliştirilen HPLC yönteminde fenil kolon (250 x 4.6 mm i.ç., 5 Âµm) veasetonitril:10 mM pH 5.5 fosfat tamponu (70:30 h/h) karışımından oluşan hareketlifaz kullanılmıştır. Akış hızı 1 mL dk-1'dir. Teşhis, UV dedektörle 245 nm'deyapılmış ve iç standart olarak verapamil kullanılmıştır. Validasyon çalışmalarısonucunda geliştirilen yöntemlerin doğru, kesin, duyarlı, seçici, sağlam ve tutarlıolduğu ispatlanmıştır. Geliştirilen ve valide edilen yöntemler yurtdışı piyasalarındabulunan ROS ve MET'i bir arada içeren farmasötik preparatlara uygulanmıştır.Sonuçlar, kaynaklarda bulunan yöntemle yapılan analiz sonuçları ile karşılaştırılmışve istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır. Biyolojik materyal analizi içingeliştirilen HPLC yönteminde ise fenil kolonda asetonitril:5 mM pH 5.5 sodyumasetat (75:25 h/h) karışımından oluşan hareketli faz ile başlayan basamaklı gradientelüsyon uygulanmıştır. 1 mL dk-1 akış hızı ve UV dedektör (245 nm) kullanılmıştır.İç standart verapamil'dir. Plazma örnekleri asetonitrille protein çöktürme işlemindensonra HPLC sistemine enjekte edilmiştir. Yöntem valide edildikten sonra ROS veMET'i birlikte kullanan hastaların kanlarının analizine başarıyla uygulanmıştır.Anahtar kelimeler: Rosiglitazon, metformin, CE, HPLC, validasyon, plazmaDestekleyen Kurumlar: H.Ü. B.A.B. Destek Projesi (04D05301001)H.Ü. B.A.B. Lisansüstü Öğrenim Araştırma Projesi (06T05102005)

Abstract:
ABSTRACTYardımcı, C., Simultaneous Analysis of Rosiglitazone and Metformin inPharmaceutical Preparations and Biological Material by CapillaryElectrophoresis and High Pressure Liquid Chromatography Methods,Hacettepe University Institute of Health Sciences Analytical ChemistryProgram Ph.D. Thesis, Ankara, 2006. The aim of this study is to develop capillaryelectrophoresis (CE) and high pressure liquid chromatography (HPLC) methods forthe simultaneous determination of ROS and MET used in combination therapy forType 2 diabetes in pharmaceutical preparations and biological material. The bestresults in the CE method were obtained using 25 mM pH 4.0 acetate buffer as thebackground electrolyte. The separation was performed through a fused silicacapillary (80.5 x 75 Âµm i.d., 72 cm effective length) at 25ºC with the application ofhydrodynamic injection for 3 s at 50 mbar pressure and a potential of 25 kV. ROS,MET and verapamil used as the internal standard were detected by using a diodearray detector at 203 nm. Phenyl column (250 x 4.6 mm i.d., 5 Âµm) and mobile phasecomposed of acetonitrile:10 mM pH 5.5 phosphate buffer (70:30 v/v) was used in theHPLC method developed for the analysis of pharmaceutical preparations. Flow ratewas 1 mL min-1. Detection was carried out by UV detector at 245 nm and verapamilwas used as the internal standard. According to the results of validation studies, itwas proved that the developed methods were accurate, precise, sensitive, selective,rugged and robust. The developed and validated methods were applied to thecombined dosage forms of ROS and MET available in international markets. Theresults were compared to the results obtained by using the method mentioned in theliterature and no statistically significant difference was found. In the HPLC methoddeveloped for the analysis of biological material, a step gradient elution wasperformed on a phenyl column starting with mobile phase composed of acetonitrile:5mM sodium acetate pH 5.5 (75:25, v/v). 1 mL min-1 flow rate and UV detector (245nm) were used. The internal standard was verapamil. Plasma samples were injectedto HPLC system after protein precipitation procedure with acetonitrile. The methodwas successfully applied to the analysis of patients? bloods who were treated withROS and MET after validation.Keywords: Rosiglitazone, metformin, CE, HPLC, validation, plasmaSupported by: H.Ü. B.A.B. Support Project (04D05301001)H.Ü. B.A.B. Ph. D. Thesis Grant (06T05102005)