DNMT1 enziminin ürogenital kanserlerde ifadelenme düzeyi
DNMT1 expression level in urogenital cancers
Yazar: NURAY VAROL
Danışman: DOÇ. ECE KONAÇ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: DNA = DNA ; Enzimler = Enzymes ; Gen ifadesi = Gene expression ; Metilasyon = Methylation ; Metiltransferaz = Methyltransferase ; Neoplazm evreleri = Neoplasm staging ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Teşhis = Diagnosis ; Teşhis-ayırıcı = Diagnosis-differential ; Ürogenital neoplazmlar = Urogenital neoplasms

Özet:
DNA metilasyonunun en önemli epigenetik mekanizmalardan biri olduğu düşünülmekte ve DNA metiltransferazlar (DNMT) tarafından katalizlenmektedir. Artmış DNMT1 ürogenital sistem tümörlerinde sıklıkla görülmektedir ancak bu artışın nedeni tam olarak bilinmemektedir. Çalışmamızda ürogenital kanserlerinde transkripsiyonel ve protein düzeyde WNT/ß-katenin sinyal yolağının DNMT1 aşırı ifadelenmesi üzerine etkisi ve DNMT1 stabilitesinden sorumlu olan UHRF1 ve HAUSP enzimlerin değişen ifade düzeylerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. SB216763'in sitotoksitesi, mesane, renal hücre karsinoma ve prostat kanser hücrelerinde zamana ve doza bağımlı olarak WST1 aracılığıyla,  CCND1 (ß-katenin) ve WIF-1 hedef genlerin ifadelenme değişimleri real-time PCR and  ß-katenin, DNMT1, pGSK3ß(Ser9), HAUSP ve UHRF1 protein düzeyleri western blot kullanılarak belirlendi. Bulgularımıza göre, SB216763 düşük dozlarda T24, Caki-2, PC3 hücrelerinde hücre proliferasyonunu arttırırken yüksek dozlarda ise hücre proliferasyonunun inhibisyonuna neden olmaktadır. Her iki durumda da CCND1 mRNA(p<0,001)  ve protein düzeyinin arttığı belirlendi. Aynı şartlar altında ß-katenin düzeyinde artışına paralel olarak DNMT1 protein düzeyinde artma belirlendi. Ayrıca HAUSP ve UHRF1 ise kanser özgü olarak protein düzeylerinde artma veya azalma gözlemlendi. Bizim sonuçlarımız, Wnt/ß-katenin sinyal yolağının moleküler etkilerinin DNMT1 üzerine etkilerinin tam olarak belirlenmesine kanserlerinin tedavisi için yeni moleküler hedeflerin tanımlanmasına katkı sağlayabilecektir.

Anahtar Kelimeler: DNMT1, HAUSP, UHRF1, Wnt/β-katenin sinyal yolağı86

Abstract:
DNA methylation is considered as the most important epigenetic mechanism and is catalyzed by DNA methyltransferases (DNMT). DNMT1 abundance has been seen frequently in urogenital system tumors but the reasons for these increased are not well understood. We aimed to determinate effect of Wnt/ß-catenin signal pathway on overexpression of DNMT1 and aberrant expression of UHRF1 and HAUSP responsible for stability of DNMT1 at transcriptional and protein levels in urogenital cancer. Cytotoxic effect of SB216763 in bladder cancer, renal cell carcinoma and prostate cancer cells was detected time and dose dependent manner with WST1, expression aberration of target genes CCND1(ß-catenin) and WIF-1 using real-time PCR and  protein levels of ß-catenin, DNMT1, pGSK3ß(Ser9), HAUSP and UHRF1 using western blot. Our results indicated that SB216763 caused an increased cell proliferation at low dose in the meantime high dose caused a decreased cell proliferation in cells.  In both cases, SB216273 was increased CCND1 mRNA,  pGSK3ß(Ser9) and ß-catenin, DNMT1 at protein level. Also, HAUSP and UHRF1 up/down-regulated at the same doses (p<0,01) depending on the types of cancer. Also, we showed that ß-catenin and UHRF1 were decreased after reexpression of WIF-1 following treatment with DAC. Our findings may offer a new approach determination of molecular effect of Wnt/ß-catenin signal pathway on DNMT1 would allow us to identify new molecular targets for treatment of the cancer.

Keywords: DNMT1, HAUSP, UHRF1, WNT/β-catenin signaling pathway