Kan ve oral kavite örneklerinden soyutlanan candida albicans suşlarının fosfolipaz aktivitelerinin araştırılması
Investigation of phospholipase activity in candida albicans strains isolated from blood and oral cavity specimens
Yazar: BUĞSE TUNÇ
Danışman: PROF. MİNE DOLUCA DERELİ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases ; Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Ağız mukozası = Mouth mucosa ; Candida albicans = Candida albicans ; Fosfolipazlar = Phospholipases ; Kan = Blood ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Amaç: İnvaziv ve mukozal enfeksiyonlara neden olan fırsatçı patojenlerden Candida spp. sahip olduğu önemli virulans faktörü olan fosfolipaz enzimleri ile konak hücre membranlarındaki fosfolipidleri parçalayarak hücreleri lizise uğratır. Çalışmamızda, kan ve oral kavite örneklerinden soyutlanan C. albicans izolatlarında fosfolipaz B1 ve C1 aktivitesinin incelenmesi ve bu iki grup arasındaki farkın araştırılması amaçlandı. 
Yöntem: Ocak 2015-Aralık 2015 tarihleri arasında Dokuz Eylül Üniversitesi Hastanesi Mikoloji Laboratuvarı'nda kan kültürü (n=30) ve oral kavite örneklerinden (n=30) soyutlanan toplam 60 adet C. albicans suşu çalışmaya alındı. Suşların fosfolipaz aktivitesi, yumurta sarılı agar besiyerinin kullanıldığı plak yöntemi ve fosfolipaz B1 ve C1 enzimlerini C. albicans türünde kodlayan PLB1 ve PLC1 genleri ters transkriptaz polimeraz zincir tepkimesi (RT-PZT) yöntemi ile araştırıldı. Her iki grup için elde edilen veriler istatistiksel olarak karşılaştırıldı. 
Bulgular: Plak yöntemi ile kan ve oral kavite örneklerinden soyutlanan suşların sırasıyla 26'sı (%86.7) ve 24'ünde (%80) fosfolipaz aktivitesi belirlendi. Gruplar arasında olumluluk oranları karşılaştırıldığında anlamlı bir fark gözlenmedi (χ2=0.48; p=0.49). Kan ile oral kavite suşlarının Pz ortalamaları (0.6138±0.9823; 0.6988±0.9910) arasında ise anlamlı bir fark saptandı (Mann Whitney U=173.500; p=0.007). RT-PZT yöntemi ile çalışılan 30 kan ve 30 oral kavite suşların tümünde (%100) PLB1, sırasıyla 27'sinde (%90) ve 22'sinde (%73.3) PLC1 ekspresyonu saptandı. Çalışmaya alınan suşların RT-PZT sonuçlarının kantitasyonlarının yapılması sonucunda, PLB1 ekspresyonu kan izolatları için 0.52-1.05; oral kavite izolatları için 0.70-1.33 değerleri arasında izlendi. PLB1 ekspresyonu açısından her iki grup suş arasında anlamlı bir fark saptanmadı (t=-0.307; p=0.760). PLC1 ekspresyonu, kan ve oral kavite örneklerinden soyutlanan suşlar için sırasıyla 0.35-1.04 ve 0.75-1.33 değerleri arasında belirlendi. PLC1 ekspresyon düzeyi oral kavite izolatlarında, kan izolatlarına göre anlamlı derecede yüksek bulundu (Mann Whitney U=103.500; p<0.001). 
Sonuç: Çalışmamızda oral kavite ve kan örneklerinden elde edilen C. albicans izolatlarında yüksek oranlarda fosfolipaz aktivitesinin belirlenmesi, bu enzimlerin üretiminin virulansta önemli bir rol oynadığını desteklemekte olup; bulgularımız doğrultusunda PLC1 enziminin mukozal enfeksiyonlarda önemli bir rolü olduğu söylenebilir ancak bu konuda daha geniş kapsamlı çalışmalara gereksinim söz konusudur.

Anahtar sözcükler: Candida albicans, fosfolipaz B1, fosfolipaz C1, RT-PZT

Abstract:
Objective: An opportunistic pathogen, Candida spp, cause invasive and mucosal infections with its important virulence factor, phospholipase enzymes which break down and lyse the phospholipids of the host cell membranes. In our study, investigation of phospholipase B1 and C1 activities of C. albicans strains isolated from blood and oral cavity specimens and comparison of the two groups were aimed. 
Methods: A total number of 60 C. albicans strains isolated from blood culture (n=30) and oral cavity specimens (n=30) in Dokuz Eylul University Hospital Mycology laboratory between January 2015-December 2015 were included. Phospholipase activity of the strains were investigated by plate method using egg yolk agar and PLB1 and PLC1 genes encoding phospholipase B1 and C1 enzymes in C. albicans were examined by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The data obtained for two groups were compared statistically. 
Results: Twenty six (86.7%) and 24 (80.0%) of the strains isolated from blood and oral cavity specimens had phospholipase activity by plate method, respectively. When the positivity rates of the groups were compared, no statistically important difference was observed (χ2=0.48; p=0.49). There was an important difference between the average Pz values (0.6138±0.9823 and 0.6988±0.9910) of the groups (Mann Whitney U=173.500; p=0.007). All blood and oral cavity isolates expressed PLB1 and 27 (90.0%) and 22 (73.3%) of the strains isolated from blood and oral cavity, respectively expressed PLC1. When the results of RT-PCR test were quantitated, PLB1 expression was found to be between 0.52-1.05 for blood and 0.70-1.33 for oral cavity isolates. No statistically important difference was detected between the PLB1 expression values of two groups. PLC1 expression values were determined to be between 0.35-1.04 and 0.75-1.33 for blood and oral cavity strains, respectively. PLC1 expression values of the oral cavity isolates were statistically higher when compared with the values of blood strains (Mann Whitney U=103.500; p<0.001).
Conclusion: Determination of high phospholipase activity of C. albicans strains isolated from oral cavity and blood samples; support that the production of these enzymes play an important role in virulence and from the results of our study it can be concluded that PLC1 enzymes have an important role in mucosal infections however more comprehensive studies are required.

Key words: Candida albicans, phospholipase B1, phospholipase C1, RT-PCR