C6 glioma hücrelerinde oluşturulan glutamat eksitotoksititesinde P-kumarik asit ve kafeik asit'in etkilerinin araştırılması
Investigation of  the  effects  of   P-coumaric acid and caffeic acid against glutamate excitotoxicity in C6 glioma cell line
Yazar: AYŞE NUR KÖSE KUZUCUOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. BİLAL ŞAHİN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Glutamat = Glutamates ; Kafeik asit = Caffeic acid

Özet:
Glutamat beyin fonksiyonlarında önemli rol oynamasına karşın merkezi sinir sistemindeki yüksek konsantrasyonu glutamatın nörotoksik etkisinin ortaya çıkmasına neden olmaktadır. Fenolik bileşenlerin nörotoksik etkilerin üzerindeki olumlu etkileri bilenmektedir. Ancak önemli fenolik bileşenlerden olan p-kumarik asitin ve kafeik asitin glutamat eksitotoksisitesi üzerine etkisi henüz tam olarak belirlenememiştir. Bu araştırmada C6 glioma hücre hattında p-kumarik asit ve kafeik asitin glutamat eksitotoksisitesi üzerine etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır.
C6 glioma hücreleri %80 yoğunluğa ulaştıklarında pasajlanmış ve üçüncü pasajın ardından çalışmalara başlanmıştır. Glutamat toksititesi için önce yapılan araştırmalarda belirlenen 10 mM doz ve 24 saat inkübasyon süresi kullanılmıştır. Kafeik asit ve p-Kumarik asit için çalışılacak dozlar ise 200, 100, 50, 25 mM olarak belirlenmiştir. Hücreler; Kontrol, Glutamat (10 mM), Kafeik asit (100 mM), p-Kumarik asit, Glutamat+ Kafeik asit, Glutamat+ p-Kumarik asit olmak üzere altı gruba ayrılmıştır. p-Kumarik asit ve kafeik asitin glutamat toksititesi sonrası hücre canlılığı üzerine etkisi XTT testi ile araştırılmıştır. Tümör Nekrozis Faktör –α (Tnf-α), İnterlökin-1β (IL-1β), total antioksidan seviyesi (TAS) ve total oksidan seviyesi (TOS) ölçümü ticari kitler ile yapılmış ve COX-1 COX-2 ölçümü için immunohistokimyasal yöntemler kullanılmıştır. Bulgular p-Kumarik asit'in 100 mM dozda glutamat eksitotoksisitesine karşı hücre canlılığını arttırdığını göstermiştir (p<0,05). Ek olarak, p-Kumarik asit eklenmesi glutamat grubu hücrelerde artan TNF-α, IL-1β, ve TOS seviyelerini azaltmıştır (p<0,05). İmmünohistokimyasal bulgular glutamat eksitotoksisitesiyle artan COX-1 ve COX-2 ekspresyonunun p-Kumarik asit ile azaldığını göstermiştir(p<0,05).

Abstract:
Although glutamate plays an important role in brain functions, its high concentration in the central nervous system causes the neurotoxic effect of glutamate. The positive effects of phenolic components on neurotoxic effects are known. However, the effect of p-coumaric acid and caffeic acid, which are important phenolic components, on glutamate excitotoxicity has not yet been elucidated. This study aimed to examine the effects of coumaric acid and caffeic acid on glutamate excitotoxicity in the C6 glioma cell line. C6 glioma cells were passaged when they reached 80% density and studies were started after the third passage. For glutamate toxicity, a 10 mM dose and 24 hour incubation period determined in previous studies were used. The doses to be studied for caffeic acid and p-Coumaric acid were determined as 200, 100, 50, 25 mM. Cells; It was divided into six groups: Control, Glutamate (10 nM), Caffeic acid (100 nM), p-Coumaric acid, Glutamate + Caffeic acid, Glutamate + p-Coumaric acid. The effects of p-Coumaric acid and caffeic acid on cell viability after glutamate toxicity were investigated with the XTT test. Tumor Necrosis Factor -α (Tnf-α), Interleukin-1β (IL-1β), total antioxidant level (TAS) and total oxidant level (TOS) measurements were made with commercial kits and immunohistochemical methods were used for COX-1 COX-2 measurement. Findings showed that p-Coumaric acid increased cell viability against glutamate excitotoxicity at a dose of 100 nM (p<0.05). In addition, the addition of p-Coumaric acid reduced the increased levels of TNF-α, IL-1β, and TOS in the glutamate group cells (p<0.05). Immunohistochemical findings showed that COX-1 and COX-2 expression, which increased with glutamate excitotoxicity, decreased with p-Coumaric acid (p<0.05).