ß-galaktozidazın farklı taşıyıcılarda immobilizasyonu ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Immobilization of ß-galaktosidase on different carriers and investigation of some properties
Yazar: FULYA AYTAÇ
Danışman: DOÇ. DR. AYŞEGÜL PEKSEL
Yıldız Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Galaktozidazlar, ekzoglikozidazların en iyi bilinen sınıfıdırlar. Glikozidik bağın ?- veya ß- çeşidine etki etmelerine göre ?-galaktozidazlar ve ß-galaktozidazlar olmak üzere iki alt gruba ayrılırlar. ß-galaktozidaz, ß-D-galaktozil grupları içeren oligosakkaritleri hidroliz edebildiği gibi galaktozil kalıntılarının bir molekülden diğer moleküle aktarılmasını sağlayarak transferaz aktivitesi de gösteren bir glikozidazdır. ß-Galaktozidaz endüstride; sütün hidrolizinde, laktozsuz süt ürünlerinin eldesinde, dondurma üretiminde, peyniraltı suyunun hidrolizinde, hayvansal besin uygulamalarında kullanılır.Bu çalışmada ß-galaktozidaz küf mantarı Hypocrea jecorina' dan kısmi olarak saflaştırıldı. H. jecorina ß-galaktozidaz ilk defa çeşitli taşıyıcı materyallere bağlanarak adsorbsiyon yöntemiyle immobilize edildi. Çalışmada kullanılan taşıyıcılar cam buncuklar, kitosan boncuklar, PEG 6000 kaplı kitosan boncuklar, amberlit XAD-16, bentonit, deniz kumu, silika, hidroksi apatit, selit ve alüminadır. H. jecorina ß-galaktozidaz' ı için uygun immobilizasyon metodu seçildikten sonra immobilize enzimin optimum pH, optimum sıcaklık, termal stabilite, Km ve Vmax değerleri belirlendi. Karakterizasyon çalışması için seçilen immobilizasyon yöntemi kullanılarak, immobilize ß-galaktozidaz üzerine çeşitli iyon ve bileşiklerin etkisi incelendi. İmmobilize enzimin depo kararlılığı belirlendi.Çalışmanın sonucunda, ß-galaktozidazın immobilizasyonu için uygun olan yöntem kitosan boncuklara adsorbsiyon olarak belirlendi. Kitosan boncuklara adsorbsiyon yöntemine göre, immobilize ß-galaktozidazın karakteristikleri; optimum pH' ı 8, optimum sıcaklığı 80°C, Km değeri 1,026.10-3 g/ml, Vmax değeri 0,1447 U/ml olarak bulundu. Depo kararlılığı 50 gün olarak bulundu. Co+2, Cu+2, Ag+ iyonlarının ve tritonX-100 yüzey aktif maddesinin immobilize ß-galaktozidazın aktivitesini %100' ün üzerinde arttırdığı tespit edildi.

Abstract:
The galactosidases are well-known class of the exoglicosidases. According to the effect to the kind of ?- or ß- of glycosidic bond the galactosidases divide in two subclass as ß- galactosidases and ?- galactosidases. Not only the ß-galactosidase hydrolase the oligo-sacckarids which containe ß-D galactosyl groups but also it is a glicosidase which shows the activity of transferase by carrying the galactosyl moieties from a molecule to another ß- galactosidase is used in the industry for hydrolysis of milk, getting the productions of lactose free milk, manufacturing the ice-cream, hydrolysis of whey and the practises in animal nutrition.In this study, the partial purification of ß- galactosidase than the fungus of Hypocrea jecorina was done. For the first time, the ß- galactosidase of H. jecorina was immobilized by the methods of adsorption by linking to various carriers. Carriers used in this study; chitosan beads, chitosan beads which contains PEG 6000, amberlite-XAD16, bentonite, sea sand, silica, hydoxy apatite, celite, alumina. The proper method for the immobilization of the ß-galactosidase of H. jecorina was chosen. Later on, the optimum pH, the optimum temperature, thermal stability, of Km and Vmax values of the immobilized enzyme were determined. It is examined the effect of various ions and compounds on immobilized ß-galactosidase by using the immobilization method which was chosen for labour characterization. Storage stability of the immobilized enzyme were determined.As a result of the study, the proper method for immobilization of the ß-galactosidase of H. jecorina were emerged as: the adsorption of chitosan beads. According to the adsorption method, the characteristics of the immobilized ß-galactosidase are found as the following; the optimum pH is 8, the optimum temperature is 80?C, the Km value is 1,026.10-3 g/ml, the Vmax value is 0,1447 U/ml. Storage stability was found to be 50 days. Co+2, Cu+2, Ag+ ions and surface active-agent triton X-100 activity of immobilized enzyme was found to increase by over 100%.