Testiküler sperm ekstraksiyon (TESE) sonrası seminifer tübülüslerde spermatogenik hücre varlığının araştırılması
Investigating the presence of spermatogenic cells in post testicular sperm extraction (TESE) material
Yazar: MASOUD AFSHANI
Danışman: PROF. DR. ÖZGÜR ÇINAR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
spermatogenezis olarak adlandırılan bir süreç ile oluşur. Spermatogoniyumlardan primer spermatositler ve bunlardan birbirini izleyen iki mayoz bölünme sonucunda da spermatit oluşur. Bu hücreler spermiyogenezis adı verilen bir dizi değişim sonucu olgun spermatozoon haline gelir. Bu değişim sırasında, hücre aşamasına özgün çeşitli proteinlerin ekspresyonları da izlenebilmektedir. Bu proteinler seminifer tübülüslerdeki spermatogenik kök hücrelerin varlığının saptanmasına ve farklılaşmasının izlenmesinde kullanılabilmektedir. 
Azoospermi olguları erkek infertilitesinin %10-15'ini ve dolayısıyla tüm infertilite olgularının %1'ini etkilemektedir. İnfertilite olgularında spermatozoon, TESE (Testiküler Sperm Ekstraksiyonu) işlemi sonrasında elde edilmektedir. TESE işleminden sonra arta kalan seminifer tübülüs parçaları ise usulüne uygun bir şekilde imha edilmektedir.
Bu çalışmada, azoospermik olgulara uygulanan TESE işlemi sonrası usulüne uygun olarak imha edilecek olan seminifer tübülüslerde, spermatogenik seriye ait hücrelerin varlığının gösterilmesi amaçlandı ve bu doğrultuda spermatogenik kök hücrelere ait belirteçler olan Anti-DDX4, Anti-MAGEA4, Anti-SSEA4 ve Anti-OCT4 immünohistokimya ve immünfloresan yöntemleriyle işaretlenip H-SCORE yöntemi ile değerlendirildi. Yapılan incelemeler sonucunda örneklerde yapılan antikor işaretlenme yoğunlukları arasında istatistiksel anlamlı bir fark bulunmazken çoğu örnekte spesifik spermatogenik hücre işaretlenmesi tespit edildi ve TESE işlemi sonrası imha edilen dokuda bu hücrelerin varlığının kanaatine varıldı. Ortaya konulmuş olan bulgular belki de ileri aşamalarda TESE işlemi sonrasında atılan dokulardan kök hücrelerin izole edilip olgunlaştırılarak, spermatozoonlara dönüştürülmesiyle infertilite tedavisinde yol gösterici olacaktır.

Anahtar Sözcükler: Azoospermi, İnfertilite, Spermatogoniyal kök hücre, TESE

Abstract:
process known as spermatogenezis. These precursor cells turn to spermatogonia after puberty and subsequently change to primary spermatosits, secondary spermatosits and round spermatids respectively. Eventually spermatid turn into the maturing spermatozoa. During these changes, stage specific protein expressions are detected. These proteins can be used to validate the presence and monitoring the differentiation of spermatogonial stem cells.
Sperm cells in patients with azoospermia can be achieved via surgical method named TESE (Testicular Sperm Extraction) and following this procedure the remaining parts of the seminiferous tubules are routinely discarded. 
The aim of this study is to apply appropriate spermatogonial stem cell markers as in this case Anti-DDX4, Anti-MAGEA4, Anti-SSEA4 and Anti-OCT4 as well as procedures like immunhistochemistry and immunofluoresence to identify and characterize the potential presence of spermatogonial stem cells in post TESE applications of seminiferous tubules from azoospermic patients. Intensity of staining was evaluated using H-SCORE method and no significant difference was detected between antibody groups although there were specifically stained cells inside seminiferous tubules indicating presence of spermatogonial stem cells inside discarded tissues. The objective data for this study will be revive the trashed post TESE procedure spermatogonial stem cells and possibly bring to isolation and differentiation of these cells to spermatogonial series cell line. This maybe assist infertility treatments in the future.

Keywords: Azoospermia, Infertility, Spermatogonial Stem cells, TESE