IVF ile elde edilen granuloza hücrelerinde apopitoz, kalsiyum sinyali ve oksidatif stres parametrelerinin değerlendirilmesi
Evaluating apoptosis, calcium signal and oxidative stress markers on granulosa cells obtained by IVF
Yazar: DİLEK ULUSOY KARATOPUK
Danışman: PROF. DR. MERAL ÖNCÜ ; PROF. DR. Mustafa NAZIROĞLUİç
Süleyman Demirel Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Kalsiyum = Calcium ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sinyal nakli = Signal transduction

Özet:
İnfertilite, herhangi bir doğum kontrol yöntemi kullanmaksızın, düzenli cinsel ilişkiye rağmen bir yıl süre ile gebe kalınamama durumu olarak tanımlanır ve çok boyutlu ciddi bir problemdir. Granuloza hücreleri, ovaryan folikülün somatik hücreleridir. Oositler folikül içerisinde olgunlaşıp geliştiklerinden granuloza hücreleri ile karşılıklı ve yoğun bir etkileşim içindedir. Son yıllarda yapılan çalışmalar, granuloza hücreleri ve oositler arasındaki kanalların önemli roller üstlendiğini göstermektedir.
PCOS (hasta) ve erkek infertilitesi (kontrol) nedeniyle tedavi gören IVF hastalarından elde edilen granuloza hücrelerinde, oksidatif stresin, kalsiyum sinyalinin, apopitoz ve apopitotik yolakların nasıl etkilendiğini ve TRPV1 kanallarının etkisinin olup olmadığını değerlendirdik.
Bu tez çalışmasında sonuçlar incelendiğinde, kontrol grubuna kıyasla hasta grubunda hücre içi kalsiyum düzeylerinin istatistiksel olarak önemli düzeyde arttığı gözlemlendi. Kontrol+CAP ve Kontrol+CAP+CPZ gruplarına kıyasla Hasta+CAP+CPZ grubunun hücre içi kalsiyum düzeylerinin yüksek olduğu gözlemlendi. Bu sonuçlar, granuloza hücelerinde hücre içi kalsiyum düzeylerinin arttığı ve bu artışın TRPV1 kanalları aracılığı ile gerçekleştiği gözlemlendi. Ayrıca infertilitede, hücre içerisine Ca+2 akışının artışı ve buna bağlı olarak mitokondriyal depolarizasyon artışı, serbest oksijen radikallerinin üretimini artırdığı, sonuç olarak da kaspaz aktivasyonlarını artırarak apoptozisi tetiklediği iyi bilinmesine rağmen granulosa hücrelerinde bu etkinin varlığı bu çalışmamızla literatürde ilk kez tespit edilmiş olup neticede granulosa hücrelerinden sitozole Ca+2 akışının artışının, hücre içi ROS üretimini, apopitoz, kaspaz 3 ve kaspaz 9 aktivitelerini artırdığı gözlemlendi. 
Bu sonuçlara göre çeşitli infertilite nedenlerinde TRPV1 kanallarının önemi gözlemlendi. Çalışmada Ca+2, apopitozis, hücre içi ROS sonuçları incelendiğinde uyum içerisinde olduğu gözlenmektedir. Diğer bir ifadeyle, hücre içi aşırı Ca+2 iyon akışının hücre canlılığını azalttığı, ROS üretimini artırdığı ve hücre ölümünü tetiklediği gözlemlendi.

Anahtar sözcükler: granuloza hücreleri, kalsiyum sinyali, oksidatif stres ve apopitoz

Abstract:
Infertility is defined as the failure to conceive a recognized pregnancy after 1 year of unprotected intercourse and its multidimensional serious problem. Granulosa cells are somatic cells of ovarian follicle. Because of oocytes matured and evolved in follicular, they are in intense interaction with granulosa cells. In recent years, studies show that the channels between granulosa cells and oocytes have important roles.
We evaluated oxidative stress, calcium signal and apoptosis in granulosa cells, obtained from PCOS (patients) and male infertility (control) treated for IVF, affected by how and TRPV1 channels whether influence.
When examining the results in this thesis, in the patient group compared to the control group, a statistically significant level of intracellular calcium levels was observed to increase. Control CAP and control+CAP+CPZ group compared to the patient group+CAP+CPZ had higher levels of intracellular calcium were observed. These results showed that, intracellular calcium levels increase in granulosa cells and this increase were observed to take place by TRPV1 channels. Also infertility, increase of Ca2+ flow into cell and consequently mitochondrial depolarization increases, the free oxygen radicals production increases, as a result, caspase activation by increasing apoptosis triggered well known, but this effect of granulosa cells in our study is the first report are located and consequently the flow of Ca2 + increase from granulosa cells into the cytosol, this increases intracellular ROS production, apoptosis, caspase3 and caspase9 activity.
According to these results, the importances of TRPV1 channels varieties of infertility were observed. In this study, Ca +2, apoptosis, intracellular ROS results are observed to be in harmony. In other words, excess of intracellular Ca2+ ions flow reduced cell viability, increased ROS production and induced cell death was observed.

Key words: granulosa cell, calcium signal, oxidative stress and apoptosis