Endotoksemik sıçanlarda 20-hete analoğu 5,14-hedge'nin sistemik mir-150, mir-223 ve mir-297 düzeyleri üzerindeki etkisinin myd88/tak1/nf-kb yolu etkinliği ile ilişkilendirerek araştırılması
Investigation of the effect of 20-hete analog, 5,14-hedge, on systemic mir-150, mir-223, and mir-297 levels in relation with activity of MYD88/tak1/NF-KB pathway in endotoxemic rats
Yazar: AYŞE NİHAL SARI
Danışman: PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Endotoksinler = Endotoxins ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; Mikro RNA = Micro RNA ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Sepsis = Sepsis ; Sıçanlar = Rats ; Transforme edici büyüme faktörleri = Transforming growth factors ; İnterlökin 6 = Interleukin 6

Özet:
Bu çalışmada, sistemik yoldan dayanıklı bir 20-hidroksieikozatetraenoik asit (20-HETE) analoğu olan ve endojen olarak oluşan 20-HETE'nin etkilerini taklit ettiği bilinen N-(20-hidroksieikoza-5[Z],14[Z]-dienoil] glisin (5,14-HEDGE) uygulandığında, gerek kontrol ve gerekse endotoksemik sıçanların serumlarında miR-150, miR-223 ve miR-297 ekspresyon düzeyleri ile renal, kardiyak ve vasküler dokularında sitozolik miyeloit farklılaşma faktörü 88 (MyD88), sitozolik transforme edici büyüme faktörü ile etkinleştirilen kinaz (TAK1), IkB kinaz (IKK) ß ve kB inhibitörü a(IkB-a) ile sitozolik/nükleer nükleer faktör kB (NF-kB) p65 protein ekspresyonları ve/veya etkinliklerinin ne yönde değiştiği araştırıldı. Deneylerde kontrol grubu olarak serum fizyolojik ve septik şok grubu olarak lipopolisakkarit (LPS), deney grubu olarak da tek başına veya LPS ile birlikte 5,14-HEDGE uygulanan erkek Wistar sıçanlar kullanıldı. 5,14-HEDGE, hayvanlara serum fizyolojik veya LPS enjeksiyonundan 1 saat sonra uygulandı. Sıçanlara serum fizyolojik veya LPS enjeksiyonundan önce ve 1, 2, 3 ve 4 saat sonra kuyruktan ortalama arteriyel basınç (OAB) ve kalp hızı (KH) kayıtları alındı. Deneyler sonunda, öldürülen sıçanlardan alınan kanlardan hazırlanan serum örneklerinde miR-150, miR-223 ve miR-297 ekspresyon düzeyleri ile böbrek, kalp, torasik aort ve süperiyor mezenterik arterlerinde sitozolik MyD88, TAK1, fosforile TAK1, IkB-a ve fosforile IkB-a ile sitozolik/nükleer NF-kB p65 ve fosforile NF-kB p65 protein ekspresyonları ölçüldü. Sıçanlara LPS uygulanmasından 4 saat sonra OAB 35 mmHg kadar azaldı, KH 75 atım/dakika kadar arttı. LPS uygulanan sıçanların serumlarında miR-150, miR-223 ve miR-297 ekspresyon düzeyleri ile dokularının sitozolik fraksiyonlarında MyD88 ekspresyonu ile fosforile TAK1/TAK1 ve fosforile IkB-a/IkB-a oranı, sitozolik ve nükleer fraksiyonlarında fosforile NF-kB p65/NF-kB p65 oranı ile nükleer/sitozolik NF-kB p65 ve nükleer/sitozolik fosforile NF-kB p65 oranında artış olduğu gözlendi. LPS'nin neden olduğu bütün bu değişiklikler 5,14-HEDGE ile önlendi. Bu çalışmanın bulguları, 5,14-HEDGE'nin endotoksemi sırasında miR-150, miR-223 ve miR-297 ekspresyon düzeyleri ile MyD88/TAK1/IKKß/IkB-a/NF-kB yolunun ekspresyon ve etkinliğindeki artmayı önlediğini ve böylece septik şok tedavisinde yararlı olabileceğini gösterdi.

Abstract:
In this study, effects of a stable analog of 20-HETE, N-20-hydroxyeicosa-5[Z],14[Z]-dienoyl]glycine (5,14-HEDGE), which mimics the effects of endogenously produced 20-HETE, on miR-150, miR-223, and miR-297 expression levels in sera and cytosolic myeloid differentiation factor 88 (MyD88), transforming growth factor-activated kinase (TAK1), IkB kinase (IKK) ß, and inhibitor of kB-a (IkB-a) as well as cytosolic/nuclear nuclear factor k B (NF-kB) p65 protein expressions and/or activities in renal, cardiac and vascular tissues of control and endotoxemic rats were investigated. In these studies, saline, lipopolysaccharide (LPS), and 5,14-HEDGE alone or in combination with LPS-treated male Wistar rats were used as control, septic shock, and experimental groups, respectively. 5,14-HEDGE was administered 1 hour after injection of saline or LPS. Mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) were measured from rats received either saline or LPS at time 0, 1, 2, 3, and 4 hours. At the end of the experiments, rats were sacrificed, serum miR-150, miR-223, and miR-297 expression levels and cytosolic MyD88, TAK1, phosphorylated TAK1, IkB-a, and phosphorylated IkB-a as well as cytosolic/nuclear NF-k p65 and phosphorylated NF-kB p65 protein expressions in kidney, heart, thoracic aorta, and superior mesenteric artery were measured. MAP fell by 35 mmHg, HR rose by 75 beats/min at 4 hour after LPS administration. Serum miR-150, miR-223, and miR-297 expression levels and tissue protein expression of MyD88 and phosphorylated TAK1/TAK1, and ratios of phosphorylated IkB-a/IkB-a ratio in cytosolic fractions and phosphorylated NF-kB p65/NF-kB p65 in cytosolic and nuclear fractions as well as nuclear/cytosolic NF-kB p65 ratio and nuclear/cytosolic phosphorylated NF-kB p65 ratio were observed to be increased in LPS-treated rats. The LPS-induced changes were prevented by 5,14-HEDGE. The results of the study demonstrated that 5,14-HEDGE prevented the increase in miR-150, miR-223, and miR-297 expression levels as well as expression and activity of MyD88/TAK1/IKKß/IkB-a/NF-kB pathway during endotoxemia, and thus it could have a beneficial effect in septic shock treatment.