İnek ağız sütünden izole edilen bakterilerin bazı probiyotik özelliklerin belirlenmesi
Determination of some probiotic properties of bacteria isolated from cow colostrum milk
Yazar: MEHMET CAMBAZ
Danışman: PROF. DR. DERYA ÖNAL DARILMAZ
Aksaray Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji ve Moleküler Biyoloji  Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Bu çalışmada ineklerin ağız sütünden (kolostrum) izole edilen 11 Lactobacillus spp. izolatlarının probiyotik özellikleri araştırılmıştır. Yapılan çalışmalar sonucunda; Lactobacillus spp. OO1, OO3, OO4 ve TO4 izolatlarının % 0,4 fenole karşı yüksek tolerans gösterdiği tespit edilmiştir. İzole edilen Lactobacillus spp. izolatları düşük pH koşuluna duyarlılık göstererek (pH 2.0), pH 3 (4,03-7,52 log kob/mL), pH 4 (6,70-7,60 log kob/mL) ve pH 7'de (7,83-9,60 log kob/mL) canlılıklarını sürdürmüşlerdir. Lactobacillus spp. izolatlarının %0,3 ve 0,5 safra ortamlarında ortalama calılıkları sırayla 8,56 ve 8,04 log kob/mL olarak tespit edilmiştir. Lactobacillus spp. izolatlarından elde edilen metabolitlerin gıda ve bağırsak patojenlerine antimikrobiyal etkisi araştırılmış ve Escherichia coli ATCC 35218 (3,04-17,48 mm), E. coli ATCC 11229 (2,64-17,16 mm) Salmonella enteritidis ATCC 13076 (2,24-11,56 mm), Bacillus cereus RSKK 863 ve Staphylococcus aureus ATCC 25923 (6,98-20,18 mm) test bakterilerine karşı antimikrobiyal etki gösterdikleri gözlemlenmiştir. Lactobacillus spp. izolatlarının ampisilin, oflotoksin, eritromisin, kromfenikol, netilmisin, gentamisin ve polimiksin antibiyotiklerine duyarlılıkları test edilmiştir. İzolatlar polimiksine karşı direnç gösterirken, OO4 ampisiline ve gentaisine, TO4 ise gentamisin antibiyotiğine direnç göstermiştir. Probiyotik suşların agregasyon ve hidrofobiste aktivitelerinde etkili olduğu düşünülen ekzopolisakkarit (EPS) üretimleri 205,91 – 372,36 mg/L belirlenmiştir. Lactobacillus spp. izolatlarından otoagregasyon aktivitesi %9-31 oranında belirlenirken, S. aureus ATCC 25923 (%1,3-27,3) ve E. coli ATCC 35218 (%1,5-30) test bakterileri ile düşük düzeyde koagrege olabildikleri gözlenmiştir. Lactobacillus spp. izolatlarının yüzde hidrofobisite değerleri sırasıyla, %13,5-94,80, %1,15-85 ve %1,6-84,8 olarak tespit edilmiştir. Yüksek EPS üretimi gösteren TO3, TO4 ve OO4 izolatları agregasyon, hidrofobisite, antimikrobiyal aktivete ve gastrointestinal sistem koşullarına tolerans gibi probiyotik özellikler göstermiştir. İzolatların hemolitik aktivitesi γ-hemolotik olarak belirlenmiştir. Probiyotik özellikleri araştırılan izolatlar arasında en iyi aktivite gösteren TO4 izolatı 16S rDNA dizi analizi sonucunda %99.86 oranında Limosilactobacillus fermentum türüne benzerlik göstermiştir.

Abstract:
In this study, the probiotic properties of 11 Lactobacillus spp isolates isolated from cow colostrum were investigated. As a result of the studies; it was determined that Lactobacillus spp. OO1, OO3, OO4 and TO4 isolates showed high tolerance against 0.4 %phenol. Isolated Lactobacillus spp. isolates showed sensitivity to low pH condition (pH 2.0), while they maintained their viability at pH 3, pH 4 and pH 7. Lactobacillus spp. isolate's average viability in 0.3% and 0.5% bile environments were determined as 8.56 and 8.04 log cfu/mL respectively. The antimicrobial effect of metabolites obtained from Lactobacillus spp isolates on food and intestinal pathogens was investigated and results revealed that isolates have antimicrobial activity against test bacteria Escherichia coli ATCC 35218 (3.04-17.48 mm), E. coli ATCC 11229 (2.64-17.16 mm) Salmonella enteritidis ATCC 13076 (2.24-11.56 mm), Bacillus cereus RSKK 863 and Staphylococcus aureus ATCC 25923 (6.98-20.18 mm). Lactobacillus spp. isolates were tested using Lactobacillus isolates were tested for their susceptibility to ampicillin, ofloxacin, erythromycin, chloramphenicol, netilmicin, gentamicin, and polymyxin antibiotics. While the OO4 strain showed resistance to ampicillin and gentamicin, the TO4 strain exhibited resistance to gentamicin. The production of EPS believed to be effective in the aggregation and hydrophobic activities of probiotic strains was determined between 205.91 and 372.36 mg/L. While autoaggregation activity was observed in Lactobacillus spp. isolates at a rate of 9-31%, low levels of coaggregation were observed with test bacteria S. aureus ATCC 25923 and E. coli ATCC 35218. Lactobacillus spp. isolates exhibited hydrophobicity values ranging from 13.5% to 94.80%, 1.15% to 85%, and 1.6% to 84.8%, respectively. Strains TO3, TO4, and OO4, with high EPS production, showed probiotic properties such as aggregation, hydrophobicity, antimicrobial activity, and tolerance to gastrointestinal conditions. The hemolytic activity of these strains was determined as γ-hemolytic. The TO4 isolate, which showed the highest activity among the isolates whose probiotic properties were investigated, showed 99.86% similarity to the Limosilactobacillus fermentum species as a result of 16S rDNA sequence analysis.