Küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre serilerinde 14-3-3sigma ekspresyon ve metilasyon düzeylerinin kemoterapi direnci gelişimindeki etkileri
The effects of 14-3-3sıgma expressıon and methylatıon levels on chemotherapy resıstance ın non small cell lung cancer cell lınes
Yazar: VİLDAN BOZOK ÇETİNTAŞ
Danışman: PROF. DR. NEJAT TOPÇUOĞLU
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Akciğer neoplazmları = Lung neoplasms ; Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Genler = Genes ; Hücre dizisi = Cell line ; Karsinoma-küçük hücreli olmayan-akciğer = Carcinoma-non small cell-lung ; Metilasyon = Methylation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sisplatin = Cisplatin ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
Bu çalışmada 14-3-3sigma gen ekspresyonunun ve metilasyonun, küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK) hücre serilerinde cisplatin direnci gelişiminde etkisi olup olmadığı araştırılmıştır. A549 ve Calu1 KHDAK hücre serileri kemoterapotik bir ilaç olan cisplatine dirençli duruma getirildikten sonra RT-PCR ve Western Blot yöntemleri ile14-3-3sigma ekspresyon düzeyleri ve MS-PCR yöntemi ile metilasyon durumlarındaki değişiklikler analiz edilmiştir. Dirençli hücre serilerinde belirgin olarak artış gösteren14-3-3sigma gen ekspresyon düzeyinin, siRNA transfeksiyonu ile susturulması sonucunda A549 ve cisplatin dirençli Calu1 hücre gruplarında cisplatin yanıtının anlamlı olarak arttığı belirlenmiştir. Elde ettiğimiz bu bulguların 14-3-3sigma' nın yeni bir ilaç hedefi olarak kullanılabileceğini destekler nitelikte olduğu saptanmıştır.Çalışmamızda ayrıca cisplatin direnci gelişiminde etkili olabileceğini düşündüğümüz, hücrede farklı yolaklarda rolleri olan 88 farklı geni hedef alarak dizayn ettiğimiz gen ekspresyon arrayi ile hücre serilerinin ekspresyon profilleri analiz edildiğinde; cisplatin direnci gelişimi sırasında gen ekspresyon düzeylerinde belirgin bir azalmanın olduğu gözlenmiştir. Bu azalmanın dirençli hücre serilerinin genomlarında meydana gelen hipermetilasyona bağlı olabileceği düşünülmüş ve hücre serilerine demetilleyici bir ajan olan azasitidin uygulaması yapılmıştır. Bu uygulama sonucunda gen ekspresyon düzeylerinin artması ile birlikte cisplatin yanıtının da arttığı belirlenmiştir. Günümüzde myelodisplastik sendromlu olgularda destek tedavi olarak kullanılmakta olan Azasitidinin, kemoterapi direnci gelişen küçük hücreli dışı akciğer kanserli olgularda alternatif bir tedavi olarak kullanılabileceği gösterilmiştir.

Abstract:
In this study, we investigated whether gene expression and methylation of14-3-3sigma effects the development of cisplatin resistance in non small cell lung cancer (NSCLC). 14-3-3sigma expression levels were analyzed by RT-PCR and Western Blot methods, whereas methylation status alterations were analyzed by MS-PCR after getting the NSCLC cell lines A549 and Calu1 resistant to the chemotherapeutic agent cisplatin.14-3-3sigma gene expression levels dramatically increased in the resistant cell lines, and by silencing it through siRNA transfection the response to cisplatin significantly increased in the A549 and CD-Calu1 cell groups. Our findings support that 14-3-3sigma could be used as a new drug target.Moreover, when we analyzed the expression profile alterations of 88 distinct genes that to our thoughts could play a role in the development of cisplatin resistance in the cell groups with a self- designed gene expression array; we observed that the gene expression levels significantly decreased during development of cisplatin resistance. Because, this reduction could based on the genomic hypermethylation of the resistant cell lines treatment with the demethylating agent azacytidine was accomplished and an increase in cisplatin response together with gene expression levels was determined. Since azacytidine is nowadays being used as a supporting therapy in patients with myelodysplastic syndrome, it raises the possibility that it can also be used as an alternative therapy in non small cell lung cancer patients that develop resistance to chemotherapy.