Gastrik ve pankreatik nöroendokrin tümörlerde alfa interneksin geninin ki-67 proliferasyon indeksiyle korelasyonu /
Yazar: İREM ERDOĞAN VEZİROĞLU
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLTEN CAN SEZGİN
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları = Endocrinology and Metabolic Diseases ; Gastroenteroloji = Gastroenterology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Fenotip = Phenotype ; Gastrointestinal hastalıklar = Gastrointestinal diseases ; Gastrointestinal neoplazmlar = Gastrointestinal neoplasms ; Genler = Genes ; Hücre çoğalması = Cell proliferation ; Ki-67 = Ki-67 ; Nöroendokrin tümörler = Neuroendocrine tumors ; Pankreas hastalıkları = Pancreatic diseases ; Pankreas neoplazmları = Pancreatic neoplasms

Özet:
Giriş ve Amaç: "Nöroendokrin" hibrit terimi, hem nöronal hem de endokrin sistemlerin çeşitli morfolojik ve fizyolojik özelliklerini barındıran bir hücre tipinin kombine tanımıdır. Nöroendokrin tümörler (NET), nöroendokrin hücrelerin malign transformasyonu sonucu oluşan heterojen bir tümör grubudur. Pankreatik NET'ler (pNET), gastrointestinal NET' ler (GI-NET) ile birçok ortak özellikler taşısalar da farklı patogenez ve moleküler profile sahiptir. Alfa interneksin, tip 4 ara filament ailesinin üyesi olan, nöronal sistem belirteci olan bir hücre iskeleti proteinidir. Alfa interneksinin NET grubunun fenotiplerinin tanımlanmasında rol oynayabileceği düşünülerek bu çalışma tasarlanmıştır.
Materyal ve Metodoloji: Bu çalışmada Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi'nde 2000-2021 yılları arası nöroendokrin tümör tanı almış, 18-90 yaş arasında olan 60 hastanın (30 gastrik NET, 30 pankreatik NET) biyopsi-rezeksiyon materyalleri ve 30 adet normal doku tanısı olan grubun (15 normal mide dokusu, 15 normal pankreas dokusu) patoloji örnekleri incelenmiştir. Patoloji kısmında; tümör dokularında ve normal dokularda immünohistokimyasal (IHC) olarak alfa interneksin proteinin boyanmasında Recombinant Anti-alpha Internexin antibody [EPR1529] (ab108302) kullanılmıştır. Dokuların gen ifadesi çalışmaları Erciyes Üniversitesi Betül-Ziya Eren Genom ve Kök Hücre Merkezi'nde (GENKÖK) yapılmıştır. Bu analizler; dokulardan RNA izolasyonu sonrası Reverse Transkriptaz PCR'da SYBR Green yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. Bu değerler, IHC boyama ile tespit edilen protein ekspresyonu değerleri ile karşılaştırılarak korelasyonuna bakılmıştır. 
Bulgular: GNET ve pNET grubundan oluşan hasta grubun erkek/kadın oranı: %48,3 /51,7 idi. Hasta grubunun ortalama yaş 52,78 ± 1,90 yıl olarak bulundu. %85'inin tanı anında bir semptomu mevcuttu, 30 hasta (%50) karın ağrısı ile prezente olurken bunu dispepsi ve kilo kaybı izledi. 31 hasta grade 1 (%51,7), 23 hasta grade 2 (%38,3), 6 hasta grade 3 (%10) idi. Alfa interneksin protein ekspresyon düzeyleri ortalamaları büyükten küçüğe pNET>GNET>Normal gastrik dokusu(NG)>Normal pankreas dokusu(NP) olarak tespit edildi. pNET grubunda boyanma oranı NG grubundan anlamlı (p < 0,05) ve NP grubundan anlamlı (p < 0,05) olarak daha yüksekti. Alfa interneksin IHC yöntemiyle boyanma olmayan grubun daha yüksek Kromogranin A (CgA) ile seyrettiği görüldü (p < 0,05). Erkek hastaların daha yüksek Ki-67 proliferasyon indeksiyle seyrettiği ve daha düşük tanı yaşına sahip olduğu görüldü (p < 0,05). GNET ve pNET olgularının tümör çapları ve Ki-67 proliferasyon indeksleri arasında korelasyon mevcuttu. Gen analiz bulgularında; INA geni, normal gastrik dokularına göre GNET dokularında istatistiksel olarak anlamlı baskılanmıştır (0,82±0,07 fold) (p<0,05). INA geni, pNET dokularında normal pankreas dokularına göre istatistiksel olarak çok anlamlı bir şekilde baskılanmıştır (0,15±0,03 fold) (p<0,001). INA gen ekspresyon seviyesi GNET ve pNET dokuları arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlıdır (p<0,01). pNET grubunun INA kopya sayısı ile yaşın regresyon analizi istatistiksel olarak anlamlıdır (p<0,05). 
Tartışma ve Sonuç: Çalışmamızda grupların alfa interneksin protein ekspresyon sonuçlarıyla gen ekspresyon sonuçları hem primer lokalizasyona göre farklı, hem de birbirleri arasında ise diskorele bulundu. Buna sebep olarak; hücre içinde daha önceden depolanmış proteinlerin boyanma vermesi, proteinin oluşumunda başka genlerin etkileşimi, tümör oluşumunda rol alan başka bir genin sekonder olarak bu protein oluşumunu arttırması veya eliminasyonunu azaltması, boyanın başka ara filamentlerle veya benzer yapılarla reaksiyon vermesi ve miRNA'lardaki yeniden düzenlenmenin INA genine etkisi olabilir. Bu alanda net çıkarımlar yapabilmek için daha fazla genetik ve epigenetik çalışmalarla posttranslasyonel mekanizmaların araştırılması gerekmektedir.

Abstract:
Introduction and Aim: The  "neuroendocrine" hybrid term is a combined definition of a cell type that contains various morphological and physiological features of both neuronal and endocrine systems. Neuroendocrine tumors (NET) are a heterogeneous group of tumors resulting from malignant transformation of neuroendocrine cells. Although pancreatic NETs (pNETs) share many common features with gastrointestinal NETs (GI-NETs), they have different pathogenesis and molecular profile. Alpha internexin is a cytoskeletal protein that is a member of the type 4 intermediate filament family, is a neuronal system marker. This study was designed considering that alpha internexin may play a role in defining the phenotypes of the NET group.
Material and Methodology: In this study, biopsy-resection materials of 60 patients (30 gastric NET, 30 pancreatic NET) aged 18-90 years, diagnosed with neuroendocrine tumor between 2000-2021 at Erciyes University Faculty of Medicine and 30 normal tissue The pathology samples of the group (15 normal stomach tissue, 15 normal pancreatic tissue) were examined. In the pathology section; Recombinant Anti-alpha Internexin antibody [EPR1529] (ab108302) was used for staining alpha internexin protein immunohistochemically (IHC) in tumor tissues and normal tissues. Gene expression studies of tissues were carried out at Erciyes University Betül-Ziya Eren Genome and Stem Cell Center (GENKÖK). These analyzes are; After RNA isolation from tissues, Reverse Transcriptase was determined in PCR using SYBR Green method. Correlations of these values were compared with the protein expression values determined by IHC staining. 
Results: The male/female ratio of the patient group consisting of GNET and pNET groups was 48.3% /51.7%. The mean age of the patient group was 52.78 ± 1.90 years. 85% had a symptom at the time of diagnosis, 30 patients (50%) presented with abdominal pain, followed by dyspepsia and weight loss. 31 patients were grade 1 (51.7%), 23 patients were grade 2 (38.3%), and 6 patients were grade 3 (10%). The mean of alpha internexin protein expression levels were determined as pNET>GNET>Normal gastric tissue (NG)>Normal pancreatic tissue (NP) from largest to smallest. The staining rate in the pNET group was significantly (p < 0.05) higher than the NG group and significantly (p < 0.05) higher than the NP group. It was observed that the group without staining with the alpha internexin IHC method had higher Chromogranin A (CgA) (p < 0.05). It was observed that male patients progressed with a higher Ki-67 proliferation index and had a lower age at diagnosis (p < 0.05). There was a correlation between tumor diameters and Ki-67 proliferation indices of GNET and pNET cases. In gene analysis findings; INA gene was statistically significantly suppressed in GNET tissues compared to normal gastric tissues (0.82±0.07 fold) (p<0.05). The INA gene was significantly suppressed in pNET tissues compared to normal pancreatic tissues (0.15±0.03 fold) (p<0.001). The difference in INA gene expression level between GNET and pNET tissues was statistically significant (p<0.01). Regression analysis of INA copy number and age of the pNET group was statistically significant (p<0.05).
Discussion and Conclusion: In our study, alpha internexin protein expression results and gene expression results of the groups were both different according to the primary localization and were discorrelated between each other. Because of this; The staining of the proteins previously stored in the cell, the interaction of other genes in the formation of the protein, the secondary increase or decrease of the elimination of this protein by another gene involved in tumor formation, the reaction of the dye with other intermediate filaments or similar structures, and the effect of rearrangement in miRNAs on the INA gene. it could be. In order to make clear inferences in this area, posttranslational mechanisms should be investigated with more genetic and epigenetic studies.