Teke spermasının dondurulmasında l-2 thiohistidin kullanımının çözüm sonu spermatolojik ve bazı biyokimyasal parametreler üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of the use of l-2 thiohistidine on the end-solution spermatological and some biochemical parameters in the freezing of goat semen
Yazar: İLHAN ALKAN
Danışman: PROF. DR. UMUT ÇAĞIN ARI
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Histidin = Histidine ; Sperm = Spermatozoa ; Tekeler = Billygoats ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine

Özet:
Bu çalışmada teke spermasının dondurulmasında L-2 thiohistidin kullanımının çözüm sonu spermatolojik ve bazı biyokimyasal parametreler üzerine etkilerini araştırıldı. Çalışmada, Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Prof. Dr. Ali Rıza AKSOY Araştırma ve Eğitim Çiftliğinde barındırılan 3 baş erkek teke kullanıldı. Bu araştırmada kullanılan tekelere ait seminal plazma, suni vajenle alınan spermaların 5000 g'de 15 dakika süreyle santrifüj işleminden geçirildikten sonra üst sıvı kısımlarının (süpernatant) alınmasıyla elde edildi. Bu yolla elde edilen teke seminal plazması, plastik tüpler içinde –20oC'de muhafaza edildi. Erkek teke spermasının yıkanması amacıyla Tris-sitrik asit-glukoz solüsyonu kullanıldı. Erkek teke sperması 3 adet erkek tekeden dişi varlığında suni vajen ile, alındı. Fantom olarak dişi teke kullanıldı. Çiftleşme sezonu boyunca düzenli olarak erkek keçilerden haftada en az iki kez suni vajenle sperma alındı. TRİS solüsyonuyla 1:10 sulandırılmış ve, eşit hacimde olacak şekilde toplam 6 adet santrifüj tüpünde 1:10 oranında sulandırılmış erkek teke sperması 1900 rpm'de 12-13 dakika santrifüj işleminden geçirildi. Santrifüj işleminin (yıkamanın) bitimini takiben erkek teke seminal plazmasını içeren üst duru kısım (süpernatant) pastör pipeti yardımıyla uzaklaştırıldı ve,, santrifüj tüplerinin dibinde kalan peletler, L-2 Thiohistidine içermeyen (Kontrol), 0,25 mmol/L, 0,5 mmol/L, 1 mmol/L, 2,5 mmol/L ve 5 mmol/L L-2 Thiohistidine içeren süt bazlı sulandırıcı ile eşit dozlarda sulandırılarak, payetlere çekildi ve,, equilibrasyon işleminin tamamlanması amacıyla +5oC de 2 saat tutulduktan sonra, sıvı azot seviyesinin 4-7 cm üzerinde (-110/-130oC de) sıvı azot buharında 15 dakika süreyle donduruldu. Dondurma işlemini takiben, payetler sıvı azot içine daldırıldı., Payetler spermatolojik değerlendirilmelerin yapıldığı güne kadar sıvı azot tankında (sıvı azot içinde) saklandı. Böylece birisi kontrol olmak üzere toplam 6 grup oluşturuldu. İşlemlerden geçirilerek, payetlerde dondurulan ve,, sıvı azot içinde tutulan 6 farklı çalışma grubuna ait spermalar ise +37oC'lik su banyosunda 1 dakika süre ile, eritme işlemi sonrası; spermatozoa motiliteleri(%), anormal spermatozoa oranı(%), ölü spermatozoa oranı (%) ve Hipo-ozmotik şişme tesi (HipoOsmotik Swelling Test-HOS test-%) parametreleri bakımından
değerlendirildi. Toplam gerçekleştirilen 13 deneme sonucundaki veriler üzerinden, 2,5 mmol/L ve, 5 mmol/L L-2 TH katkısının sayısal olarak özellikle motilite ve, bazı spermatolojik verileri olumlu yönde etkilediği belirlenmiştir. Ancak bu fark istatistiksel olarak önemli bulunmadı, 0,5 mmol/L L-2TH'nin özellikle motilite üzerine olumsuz etkisi gözlendi.

Abstract:
In this study, the effects of the use of L-2 thiohistidine on freezing of goat semen were investigated on end-spermatological and some biochemical parameters. In the study, Kafkas University Faculty of Veterinary Medicine. Dr. Ali Rıza AKSOY Research and Education Farm 3 head male goats were used. Seminal plasma belonging to the heads used in this research was obtained by removing the supernatant from the semen taken by artificial vagina after centrifugation at 5000 g for 15 minutes. Goat seminal plasma obtained in this way was stored at –20oC in plastic tubes. Tris-citric acid-glucose solution was used to wash male goat semen. Male goat sperm was removed from the vagina of 3 male vagina with artificial vagina. Female goat was used as phantom. During the mating season, semen was regularly taken from male goats at least twice a week with artificial vagina. Male goat sperm, diluted 1:10 with TRIS solution and diluted 1:10 in a total of 6 centrifuge tubes, was centrifuged at 1900 rpm for 12-13 minutes. Following the completion of the centrifugation (washing), the upper clarity portion (supernatant) containing the male goat seminal plasma was removed with the help of a pasteur pipette, and pellets remaining at the bottom of the centrifuge tubes, L-2 Thiohistidine-free (Control), 0.25 mmol / L, 0.5 It was diluted in equal doses with a milk-based diluent containing mmol / L, 1 mmol / L, 2.5 mmol / L and 5 mmol / L L-2 Thiohistidine, and after being kept at + 5oC for 2 hours to complete the equilibration process, It was frozen in liquid nitrogen vapor for 15 minutes at 4-7 cm (at -110 / -130oC) above the liquid nitrogen level. Following freezing, the straws were immersed in liquid nitrogen. The sequins were stored in the liquid nitrogen tank (in liquid nitrogen) until the day of spermatological evaluations. Thus, a total of 6 groups were created, one of which was control. Sperms belonging to 6 different working groups, which are processed, frozen in straws and kept in liquid nitrogen, after melting for 1 minute in a + 37oC water bath; Spermatozoa motility (%), abnormal spermatozoa ratio (%), dead spermatozoa ratio (%) and Hypo-osmotic swelling test
(HypoOsmotic Swelling Test-HOS test-%) parameters were evaluated. Based on the results of the 13 trials performed, it was determined that the contribution of 2.5 mmol / L and 5 mmol / L L-2 TH had a positive effect on numerical especially motility and some spermatological data. However, this difference was not statistically significant. The negative effect of 0.5 mmol / L L-2TH on motility was observed.