Sıçan serviksinin olgunlaşmasında indüklenebilir Nitrik Oksit Sentaz'ın (iNOS) önemi ve olası rolü
The importance and potential role of inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) in the maturation of rat cervix
Yazar: MELİKE SAÇAN
Danışman: PROF. DR. MEVLÜT ASAR
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Servikal olgunlaşma lökosit infiltrasyonu, ESM'nin su içeriğindeki değişiklikler ve kollajen liflerin yeniden düzenlenmesi dahil inflamatuvar bir reaksiyondur. Bu olayın kontrolü, birçok mediyatörün görev aldığına işaret edilmesine rağmen hala büyük oranda bilinmemektedir. İnflamatuvar bir mediyatör olan NO'nun başka dokularda MMP aktivitesini stimüle ettiği ve proteoglikan sentezini baskıladığı bilindiğinden, bu çalışmada NO'nun gebelik süresinde ve doğumda serviksin yeniden yapılanmasında görev alıp almadığı ışık mikroskopu ile immünohistokimyasal olarak ve TEM düzeyinde belirlenmeye çalışıldı. Bu amaçla daha önce deneye girmemiş 200-250 g arasında 108 adet dişi Wistar sıçan kullanıldı. İki dişiye bir erkek olacak şekilde kafeste bir gece bırakılan dişi sıçanlara vajinal simir yapılarak spermiyum gözlenen dişiler gebeliğin 0. günüde kabul edildi. Östrus ve gebeliğin 18, 20, 21., doğum sonrası 0. günler olmak üzere 5 kontrol, gebeliğin 18, 20, 21., doğum sonrası 0. günler olmak üzere 4 deney grubu oluşturuldu. Deney hayvanlarına sabahları 5 gün süreyle oral yolla 50 mg/gün/sıçan L-NAME verildi. Kontrol ve deney hayvanları belirtilen günün sabahında eter anestezisi altında diseke edildi ve ışık ve tranmisyon elektron mikroskopu için ayrıca nitrit/nitrat ölçümlerinde kullanılmak üzere servikal doku örnekleri alındı. Toplanan örneklerden bir kısmı rutin histolojik ve elektron mikroskop takip işlemlerinden geçirildi. Parafin bloklardan alınan kesitlerde iNOS'un dağılımlarına, keza CD45 immünboyanması ile de genel lökosit yoğunluğuna, TEM için alınan ince kesitlerde hücresel ve lifsel elemanların yapısal değişikliklerine bakıldı. L-NAME uygulanan hayvanların servikal dokularında gebelik boyunca ve PPO. günde kollajen lif düzeninde bozulmalar gözlendi. iNOS boyanması kontrole göre daha azdı, nitrit/nitrat değerleri de oldukça düşüktü. CD45 pozitif boyanmış lökosit sayısında, görünüşte östrusa göre kontrol ve deney grubunun gebelik devresinde ve PPO. günlerde artış vardı.Sonuç olarak; 1) L-NAME uygulanan deney grubunda iNOS boyanma şiddeti ile nitrit/nitrat değerlerinin gebelik devresinde kontrole göre önemlilik düzeyinde düşük olmasından NOS ürünü olan NO'nun sıçan serviksinin olgunlaşma ve doğum olayına katıldığını, 2) L-NAME uygulanmasının doğumla sonuçlanmasından NO'nun yalnız olmadığı başka mediyatörlerin de bu olayda görev aldığını, 3) CD45 pozitif lökosit sayısı iki grupta da görünüşe göre artış gösterdiğinden servikal olgunlaşma ve doğum olayının inflamatuvar bir olay olduğunu ifade edebiliriz.

Abstract:
Cervical maturation is an inflammatory reaction which involves infiltration of leukocytes, changes in ECM component elements and restructuring of collagen fibers. Despite many mediators of this event having been known, the exact control mechanism is still largely unknown. The inflammatory mediator NO has been suggested to stimulate MMP activity and to suppress proteoglican synthesis in some other tissues. Therefore, we aimed to clarify the possible role of NO during pregnancy and cervical reconstruction at birth by using immunohistochemical techniques combined with TEM. In this study, we used 108 female Wistar rats which were 200-250g. Two males per one female were caged together overnight for copulation. The pregnancies were detected by vaginal smear and spermium positive females were accepted as pregnant as of day 0. Estrous day, pre-natal days 18, 20, 21 and post-natal day 0 animals were constituted of the control group. Pre-natal days 18, 20, 21 and post-natal day 0 animals were constituted of the experimental group. The experimental group were treated with orally given L-NAME for 5 days with a dose of 50mg/day/rat. The tissues from both control and experimental groups were taken from the desired days and processed for routine light microscope and transmission electron microscope examinations. One piece of each tissue were also stored for nitrite/nitrate measurements. The iNOS distribution were evaluated in paraffin cervix tissue sections. These sections were also used to detect the leukocyte density with CD45 immunohistochemistry. TEM sections were used to evaluate the cellular and structural changes. In L-NAME treated experimental group, dissolving of collagen fibers were also seen throughout the progression of pregnancy and at post-partum day 0. However, the staining intensity of iNOS and the nitrite/nitrate levels decreased more than in the control group. The number of CD45 positive leukocyte was increased with the progression of pregnancy and in post-partum 0 both in control and experimental groups compared to estrous.Our conclusions are as follows: 1) Because in L-NAME treated experimental group, the intensity of iNOS staining and the nitrite/nitrate levels were lower than the control group throughout the pregnancy, the NOS product NO might contribute to the cervical maturation and birth, 2) Because the treatment of L-NAME also resulted in birth, mediators other than NO might regulate this event, 3) Because the number of CD45 positive leukocytes seemed to be increased with the progression of pregnancy in both groups, we can tell the cervical maturation and birth events are inflammatory processes.