Sıçan hipertiroidi modelinde, ovaryum ve testis dokusunun histokimyasal, immunohistokimyasal ve moleküler olarak araştırılması
Investigation of the ovarial and testicular tissue histochemically, immunohistochemically and molecularly in a hyperthyroidic rat model
Yazar: FATİH OLTULU
Danışman: DOÇ. DR. ALTUĞ YAVAŞOĞLU
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hipertiroidizm = Hyperthyroidism ; Over = Ovary ; Testis = Testis

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, deneysel olarak hipertiroidi oluşturulan sıçanlarda; hipertiroidiye bağlı olarak testis ve ovaryum yapısındaki olası histopatolojik değişimler, hücre bağlantıları, kök hücre belirteçleri ve oksidatif stres açısından immunohistokimyasal, ışık mikroskobik olarak araştırılacaktır. Ayrıca Revers transkripsiyon- polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) yöntemi kullanılarak moleküler biyolojik olarak araştırılması amaçlanmıştır.Yöntem: Her biri 8 hayvandan oluşan 4 çalışma grubu oluşturuldu. Hipertiroidi grubundaki erkek ve dişi sıçanlara 10 gün boyunca intraperitonal 50µgr/100gr/gün olacak şekilde 3,3',5-Triiodo-L-thyronine enjekte edildi. 11. günde tüm gruplardaki hayvanlara anestezi uygulanmış, biyokimyasal değerlendirmeler için 5 cc kan alındıktan sonra da dekapite edilerek testis ve ovaryumları çıkarılmış ve histokimyasal, immünohistokimyasal ve RT-PCR uygulaması için uygun fiksatifler içine alınmıştır.Bulgular: H.E, Mallory Trikrom ve PAS ile yapılan boyamalarda testislerde, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında hipertiroidi grubunda seminifer tübül ve interstisyumda yapısal değişiklikler gözlenmiştir. Ovaryumlarda ise hipertiroidi grubunda özellikle stromal dokuda ki yapısal değişiklikler dikkati çekmiştir. Testislerde, kök hücre belirteçlerinden, C- kit ve Thy- 1 ekspresyonu kontrol grubuna göre hipertiroidi grubunda belirgin düzeyde azalmış, Nanog ekspresyonuna ise heriki grupta da rastlanmamıştır. iNOS, Konneksin 43 ve Okludin ekspresyonları da kontrol grubuna göre hipertiroidi grubunda belirgin düzeyde azalmıştır. Ovaryumlarda ise, C- kit, Thy- 1, Konneksin 43 ve Okludin ekspresyonu kontrol grubuna göre hipertiroidi grubunda belirgin düzeyde azalmış, Nanog ve iNOS ekspresyonu ise hipertiroidi grubunda artmıştır. RT- PCR' da , Konneksin 43, okludin, inhibin ?, inhibin ßA ve inhibin ßB mRNA düzeylerinin testis ve ovaryum hipertiroidi gruplarında kontrol gruplarına göre artış gösterdiği saptanmıştır.Sonuç: Bulgularımız hipertiroidide literatürde üzerinde pek durulmayan organ parankim hasarı yerine destek mikro çevre bozunumunu göstermektedir. Parankimal yapı korunduğundan bizim modelimizdeki akut toksikozun geri dönüşlü olabileceği düşünülmektedir. Toksikozu sonlandırılmış sıçanlarda stromal değişikliklerin geri dönüşümlü olup olmadığı ileri çalışmalarla araştırılmalıdır.

Abstract:
Purpose: In this study potential histopathologic changes, cellular relations, steam cell indicators, and oxidative stress in ovarial and testicular structures due to hyperthyroidism were investigated immunohystochemically and with light microscope in rat model with hyperthyroidism. Also, molecular biologic investigations were made by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR).Method: Four study groups were formed ( n=4 for each group). To male and female rats in the hyperthyroidism group, 50µgr/ 100g/ day 3,3',5-Triiodo- L- thyronine was enjected intraperitoneally, for ten days. On the 11th. day all animals were anesthesized, 5 cc. blood was drawn for biochemical testes and then they were decapitated, their testes and ovaries were removed and placed in appropriate fixatives for hystochemical, immunohystochemical and RT-PCR testes.Results: H.E, Mallory trichrome and PAS stains showed structural changes in seminiferous tubules and interstitium of the testes in hyperthyroidism group when compared with controls. However in ovaries of hypertiroidic group structural changes, especially in stromal tissue, was noted. In testes; steam cell indicators C-kit and Thy-1 expression reduced significantly in hyperthyroidic group when compared with control group, and Nanog expression was not found in either group. Also iNOS, connexin 43 and occludine expressions were significantly reduced in hyperthyroidic group. In contrast C-kit, Thy-1, connexin 43 and occludine expressions were significantly reduced and Nanog and iNOS expressions were increased in ovaries of the hyperthyroidic group. RT- PCR showed that Connexin 43, occludine, inhibin ?, inhibinßA and inhibin ßB mRNA levels were increased in testes and ovaries of hyperthyroidic group when compared with control group.Conclusion: Our results showed supportive micro-environment disorder, which wasn't investigated in literature adequately, instead of parankimal injury. Because that parankimal structure is saved, it is thought that acute toxicosis in our model can be reversible. Further studies are needed to investigate whether these stromal changes can be reversible in rats when toxicosis is terminated.