İn vitro fertilizasyon (IVF) tedavisi uygulanan kadınlarda serum D vitamini düzeylerinin oosit toplama işlemi sırasında elde edilen foliküler sıvı granüloza hücrelerinin diferansiyasyonuna etkisi
The effects of serum vitamin D levels on differentiation of granulosa cells obtainded from follicular fluid during oocyte pick up from women undergo İVF treatment
Yazar: EBRU ÇELİK
Danışman: PROF. DR. OYA EVİRGEN
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Fertilizasyon = Fertilization ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Foliküler sıvı = Follicular fluid ; Gebelik = Pregnancy ; Granüloza hücreleri = Granulosa cells ; Kadınlar = Women ; Oositler = Oocytes ; Sperm = Spermatozoa ; Vitamin D = Vitamin D ; Vitamin D eksikliği = Vitamin D deficiency

Özet:
Steroid bir hormon olarak kabul edilen D vitamini deride UV işınları
etkisi ile sentezlendikten sonra önce karaciğerde 25 hidroksilaz ile 25
hidroksi vitamin D'ye (25(OH)D3) sonra da böbreklerde 1-hidroksilaz enzimi
ile aktif formu olan 1,25-dihidroksi vitamin D'ye (1,25(OH)2D3) dönüştürülür.
D vitamini nükleer reseptör süper ailesine ait D vitamini reseptörü için
doğal liganddır. D vitamini reseptörünün hemen her dokuda bulunduğunun
gösterilmesinden sonra günümüzde D vitamininin obezite, kanser,
kardiyovasküler hastalıklar, deri hastalıkları, immün sistem hastalıkları ve
infertilite üzerine etkileri ile ilgili çalışmalar giderek artmıştır. D vitamininin dişi
üreme sisteminde de önemli etkileri vardır (oosit gelişimi, AMH üretimi,
ovaryan steroidogenezis, endometriyal reseptivite gibi) ve IVF ile oluşan
klinik gebeliklerde önemli rol oynadığı düşünülmektedir.
Biz de çalışmamızda Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi Kadın
Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı Üremeye Yardımcı Tedavi ve Eğitim
Merkezi'ne başvuran 18 kadından serum D vitamini yetersiz ve yeterli
olanların OPU sonrası artan folikül sıvısından elde edilen granüloza
hücrelerinin mikroskopik yapısı, granüloza hücrelerinde VDR ifadelenmesi,
toplanan oosit sayısı, ICSI yapılan oosit sayısı, döllenme oranı, 2. ve 3. gün
embriyo gelişimi, blastokist oranı ve gebelik oranını karşılaştırdık.
Işık mikroskobu çalışmaları için; toplanan hücreler sitospin sonrası
elde edilen preparatların Giemza ile boyanması ile gösterildi. Foliküler aspirat
sıvısı santrifüj edilerek elde edilen pellet sitoblok solüsyonları kullanılarak
sitoblok kasetlerine alınmış ve formalin solüsyonunda tespit edilerek rutin
histolojik takip işlemlerinden geçirildi. Elde edilen granüloza hücre sitobloğu
parafine gömülerek parafin hücre bloğu hazırlandı ve bu bloklardan elde
edilen kesitler H&E boyama ve immünhistokimyasal boyama için kullanıldı.
Elektron mikroskobu çalışmaları için granüloza hücreleri protokole uygun 
şekilde tespit ve takip edildikten sonra araldit bloklara gömüldü. Bu
bloklardan ultramikrotomla alınan kesitler toluidin mavisiyle boyandı.
Literatürde serum D vitamini düzeyleri ile IVF başarısı arasında hem olumlu
hem de olumsuz ilişki olduğunu gösteren çalışmalar vardır. Biz de
çalışmamızda da D vitamini yetersiz ve yeterli grup arasında toplanan oosit
sayısı, ICSI yapılan oosit sayısı, döllenme oranı, 2. ve 3. gün embriyo
gelişimi, blastokist oranı, gebelik oranı ve granüloza hücrelerinde VDR
ifadelenmesinin HSCORE oranları ile serum D vitamini düzeyleri arasında
istatistiksel olarak anlamlı fark gözlemlemedik.
D vitamininin IVF başarısına etkilerini anlamak için daha fazla sayıda
vaka içeren çalışmalara ihtiyaç vardır.

Anahtar Kelimeler: D vitamini, gebelik, granüloza hücresi, ICSI, IVF

Abstract:
Vitamin D a steroid hormone is produced in the skin from 7-
dehydrocholesterol by UV irradiation and further metabolized to 25(OH)D in
liver then to 1,25(OH)2D3 in kidney by the enzyme 1-hydroxylase.
Vitamin D is the ligand for the Vitamin D receptor a transcription factor
and member of the steroid hormone nuclear receptor family. With the vitamin
D receptor being found in nearly every tissue the investigations on its impact
on obesity, cancer, cardiovascular disease, skin disease, immune system
disease and infertility has accelerated. Vitamin D has important effects on
female reproductive system as well (oocyte maturation, AMH synthesis,
ovarian steroidogenesis, endometrial receptivity) and its suggest that it plays
an important role on clinical pregnancies after IVF.
In our study we compared total oocytes retrieved, number of oocytes
microinjected, rate of fertilized oocytes, rate of embriyonic development on
second and third day, rate of blastocyst development, rate of pregnancy,
microscopy of granulosa cells and expression of VDR in granulosa cells
obtained from follicular fluid retrieved during OPU from 18 infertile women
that insufficient and sufficient serum vitamin D levels undergoing IVF
treatment in Ankara University Faculty Of Medicine Center for Assisted
Reproduction, Department of Obstetrics an Gynecology.
For the light microscopy studies, collected granulosa cells
demonstrated staining with Giemsa after cytospin procedure. Follicular fluid
centrifugated and the cell consentrate transferred to cytoblock casettes after
adding cytoblock solutions and fixed with formalin. The cytoblock embedded
in parafin wax following histologic tissue processing to obtain parafin block
and sections were taken from those parafin cell blocks for H&E and
immunohistochemical staining.
For electron microscopy studies, granulosa cells embedded in araldite 
after fixation and proper histological tissue processing. Semi-thin sections
were taken and stained with toluidine blue.
Some studies have indicated that deficient vitamin D was associated
with IVF success rate. In contrast, some researchers found no association
between vitamin D statues with outcomes after IVF cycles. In our study, no
statisticly significanat difference was observed between total oocytes
retrieved, number of oocytes microinjected, rate of fertilized oocytes, rate of
embriyonic development on second and third day, rate of blastocyst
development, rate of pregnancy, microscopy of granulosa cells and HSCORE
rates of VDR expression in granulosa cells in the vitamin D insufficient and
sufficient vitamin D groups.
It's necessary to conduct more studies with higher number of cases to
evaluate further vitamin D has effects on IVF success.

Key words: Vitamin D, pregnancy, granulosa cell, ICSI, IVF