Koyun embriyolarının dondurulmasında farklı soğutma hızlarının gebelik oranına etkisi
Effects of different cooling rates of embryos on pregnancy rates of sheep
Yazar: ELİF KARAMAN
Danışman: PROF. DR. MİTHAT EVECEN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2014
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
ÖZET
Karaman, E. (2006). Koyun Embriyolarının Dondurulmasında Farklı Soğutma Hızlarının Gebelik Oranına Etkisi. İstanbul Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Dölerme ve Sun'i Tohumlama Anabilim Dalı. Doktora Tezi. İstanbul.
Çalışmada, koyun embriyoların kademeli bir şekilde dondurulması sırasında uygulanan farklı soğutma hızlarının gebelik üzerine etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmanın ilk bölümünde, mezbahadan sağlanan ovaryumlardan kazanılan oositler (n= 2990) olgunlaştırma medyumu içerisinde (TCM-199), 22 saat olgunlaştırıldı. Ardından, BSOF içerisine alınan oositler (n=1541%51,53), 20 saat süreyle İn Vitro Fertilizasyona (İVF) bırakıldı. Yarıklanma gösteren embriyolar (n=1305, %69,69), SOF medyumu içerisine alınarak 6 gün süresince İn Vitro Kültüre (İVK) bırakıldılar. İVK sonrası elde edilen embriyolar, farklı soğutma hızları denemesi için üç gruba ayrıldılar (GrupI: 0,5 ºC /dk, GrupII: 0,8 ºC /dk, GrupIII: 1 ºC /dk). Her bir grupta bulunan embriyolar (n=50), 1,5 M etilen glikol bulunan dondurma medyumu içerisinde yavaş dondurma yöntemi kullanılarak donduruldu. Embriyoların eritme sonrası canlılık oranları, 1. saate gruplara göre sırasıyla; % 96,00, % 48,00 ve % 86,00 olarak bulunurken, 24. Saatte % 36,00, % 18,00, % 6,00 ve 48. saatte ise bu değerler; % 36,00, % 8,00 ve % 6,00 olarak saptandı. Sonuçta, 0,5 ºC/dk soğutma hızının en başarılı grup olduğu (p <0.050) belirlendi.
Çalışmanın ikinci bölümünde, verici koyunlardan elde edilenembriyolar çalışmanın birinci bölümünde bulunan en başarılı soğutma hızı (0,5 ºC/dk) ile soğutularak dondurulmuştur. Dondurulan embriyolar (20) hormonel olarak hazırlanmış alıcı koyunlara (17) transfer edildi. Transfer sonrası 60. günde yapılan ultrason muayenesinde iki adet koyunda gebelik (embriyonik kese) görüldü ve 1 adet koyunda ikiz gebelik saptandı. Üç gebe
koyundan 1 tanesinde doğum gerçekleşti ve diğer iki koyunda daha sonra yapılan ultrason muayenesinde gebeliklerin sonlandığı gözlendi.
Sunulan çalışmada koyun embriyolarının dondurulması sırasında 0,5 ºC/dk soğutma hızının diğerlerine nazaran daha başarılı olduğu ve bu yöntemle dondurulan embriyoların transferinden de gebelik elde edilebildiği (3/17) ve sağlıklı bir yavru alınabildiği saptandı.
Anahtar Kelimeler: Koyun, Embriyo, Transfer, Kademeli Soğutma, Dondurma,
Bu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 6662

Abstract:
ABSTRACT
Karaman, E. (2006). Effects of Different Cooling Rates of Embryos on Pregnancy Rates of Sheep. İstanbul University, Institute of Health Science, Department of Artificial Insemination. PhD thesis. Istanbul.
The aim of the study is determining the effect of different cooling rates in slow freezing of sheep embryos on pregnancy. In the first phase of the study, oocytes obtained from ovaries from slaugther house (n =2990) are incubated in maturation medium ( TCM-199), for 24 hours in incubator. Than oocytes (n=1541, %51,53) were left for in vitro fertilization (IVF) for 20 hours in BSOF medium. Cleavaged embryos (n=1305, %69,69) were transfered into SOF medium and left for in vitro cultere (IVC) for 6 days. After in vitro cultere embryos divided randomly into three groups for slow freezing at different cooling rates (grup I: 0,5ºC/min., grup II: 0,8ºC/min., grupIII: 1ºC/min.). Embryos in each group (n=50) were slow freezed at different cooling rates in 1.5 M ethylene glycol containing freezing medium. Viability rates of embryos after thawing according to each group respectivelly were at 1th hour: 96.00%, 48% and 86%, at 24th hour: 36%, 18% and 6%, 48th hour: 36 %, 8% and 6 %. As a result, 0.5ºC/min. cooling rate group was found as the most successful group (p <0.050).
In the second phase of the study embryos derived from donor sheep are slow freezed at 0,5 ºC/min. which was the most succesful rate found in the first phase of the study. Frozen embryos (19) are transfered to hormonally pretreated recipient sheeps (17). In the pregnancy diagnosis performed at 60th day with ultrasound and three recipients are diagnosed as pregnant according to visiulizing the embrional sacks and fluid which one of them has twin pregnancies. One of the three recipients gave birth and at the rest of the two sheeps early embryonic loss are observed in the later ultrasound scaning.
At the study 0.5º C/min. cooling rate in the slow freezing of sheep embryos was found out to be more succesful than the other cooling rates and pregnancy following a healthy lambing is achived with the embryos frozen with this method (3/17).
Key Words: Sheep, Embryo, Transfer, Cooling rate, Freezing
The present work was supported by the Research Fund of Istanbul University. Project No. 6662.