TRPM2 iyon kanallarını kontrol eden miRNA'ların glioblastoma multiforme doku örneklerinde gen ifadesi ve glioblastoma kültür hücrelerinde TRPM2 kanallarının elektrofizyolojik karakterizasyonu
Expression of mi̇krornas regulating TRPM2 ion channels in glioblastoma multiforme tissues and electrophysiological characterization of TRPM2 channels in glioblastoma cell lines
Yazar: NURCAN ŞAHİN DEMİR
Danışman: PROF. DR. RAMAZAN BAL
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Tıp Bilimleri Bölümü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Fizyoloji = Physiology ; Nöroloji = Neurology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Elektrofizyoloji = Electrophysiology ; Gen ifadesi = Gene expression ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Hücre kültürü = Cell culture ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
TRPM2 İYON KANALLARINI KONTROL EDEN miRNA'LARIN GLİOBLASTOMA MULTİFORME DOKU ÖRNEKLERİNDE EKSPRESYONU VE GLİOBLASTOMA KÜLTÜR HÜCRELERİNDE TRPM2 KANALLARININ ELEKTROFİZYOLOJİK KARAKTERİZASYONU

Nurcan ŞAHİN DEMİR

Yüksek Lisans Tezi, Fizyoloji Anabilim Dalı
Tez danışmanı: Prof. Dr. Ramazan BAL
Haziran 2014, 46 sayfa 

Dünya sağlık örgütü, Glioblastoma multiformeyi (GBM) şiddetlerine göre 4 evreye ayırmıştır. Bunlar evre I, evre II, evre III ve evre IV tür. Bu sıralamaya göre I. evre tümörler en az şiddetli, IV. evre tümörler ise en agresif tümörler olarak bilinmektedir.  TRP iyon kanallarının çok çeşitli doku ve hücre gruplarında iyon dengelenmesi ve farklı uyartılara karşı hassas olabilme gibi çeşitli fizyolojik olaylardan sorumlu olduğu bilinmektedir. TRP iyon kanallarının çoğunluğu seçici olmayan katyon kanallarına sahip iken, bazıları Ca2+ iyonlarını oldukça seçici bazıları da Mg2+ iyonlarına karşı geçirgen özellik taşımaktadır. MikroRNA (miRNA) lar yaklaşık 18-24 nükleotid uzunluğunda küçük RNA molekülleridir. miRNA'lar hücrede proliferasyonu, hücre farklılaşması veya hücre ölümü gibi homeostatik süreçlerde önemli roller oynarlar. Yapılan çalışmalarda miRNAların bazılarının tümör baskılayıcı özelliklerinin yanı sıra bazı miRNA larında onkogenik özelliklerinin olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmanın amacı,  farklı evrelerdeki glioblastoma hastalarından alınan arşiv materyallerinde TRPM2 genini hedefleyen miR-4755-3p ve miR-423-5p nin ifadesi seviyeleri RT-PCR tekniğiyle araştırılmıştır. Glioblastoma hücre hattı olan U87 de TRPM2 iyon kanallarının varlığı, yama-kenetleme (patch-clamp) tekniği ile gösterilmiştir. Normal beyin dokusu olmadığından 4. evredeki hastaların miR-4755-3p ve miR423-5p ifade değerleri 1 olarak kabul edilmiş ve diğer evredeki hastaların miR-4755-3p ve miR423-5p ekspresyon değerleri evre 4 e göre kıyaslanmıştır. miR-4755-3p ve  miR-423-5p nin  ekspresyonlarının evre 2 de azaldığı gözlenmiştir. Tüm hücre (whole-cell) akımı kısmen N-(p-amylcinnamoyl) anthranilic acid (AAC) (50µM) tarafından inhibe edilmiştir. ACA'ya duyarlı bu akım, TRPM2 akımı olarak tanımlanmıştır. 

Anahtar Kelimeler: Glioblastoma, Kanser, miRNA, Patch-Clamp, TRPM2

Abstract:
EXPRESSION OF MİKRORNAS REGULATING TRPM2 ION CHANNELS IN GLIOBLASTOMA MULTIFORME TISSUES AND ELECTROPHYSIOLOGICAL CHARACTERIZATION OF TRPM2 CHANNELS IN GLIOBLASTOMA CELL LINES


Nurcan ŞAHİN DEMİR

Master of Science Thesis, Department of Physiology
Supervisor: Prof. Dr. Ramazan BAL
June 2014, 46 pages

World Health Organization (WHO) divided gliomas into four grades depending on their aggressiveness; grade I, grade II, grade III and grade IV.  According to this grading, grade I is the most benign and grade IV is the most malignant tumors. It was found that TRP ion channels are responsible for several physiological phenomenons such as  ionic equilibrium and sensitivity to different types of stimuli  in many cell groups and tissues. Many of TRP ion channels have nonselective cation channels, whereas some of them are selective for Ca2+ ions, some are permeable to Mg2+ ions. miRNAs are small RNA molecules with 18-24 nucleotides. miRNAs have important roles in cell proliferation, cell differentiation and cell death. It has been suggested that some miRNAs are acting as tumor suppressors, whereas others have oncogenic properties. The aim of the study is to analyze of expression of miR4755-3p and miR-423-5p, which target TRPM2 in paraffin tissue samples taken from different glioblastoma patients with different grades by using by qRT-PCR. Presence of TRPM2 channels was demonstrated by using patch-clamp technique in glioblastome cell line U87. The expression levels of miR-4755-3p and miR423-5p of grade IV patients were assumed as 1 because of absence of normal brain tissue.The expression levels of miR-4755-3p ve miR423-5p of patients with grade I, II and III were compared with grade IV.  It was found that the expression levels of miR-4755-3p and miR423-5p were decreased in grade II.  Whole cell current was partially blocked by N-(p-amylcinnamoyl) anthranilic acid (AAC) (50µM). The ACA-sensitive current was referred as TRPM2 current.

Key words: Glioblastoma, Cancer, miRNA, Patch-Clamp, and TRPM2