Lucilia sericata larva salgısının fibroblast hücre soyu üzerine etkilerinin in vitro hücre kültürü ortamında araştırılması
Investigation of the effects of lucilia sericata larval secretion on fibroblast cell lineage in vitro cell culture environment
Yazar: ONUR YILDIRIM
Danışman: PROF. DR. HÜSEYİN BOTANLIOĞLU
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology

Özet:
Amaç: Bu çalışmadaki amacımız, Lucilia sericata larva salgısının (LS), oksidatif stres koşullarında fibroblast hücre soyu üzerine etkisi ile ilgili hücresel düzeyde yeni bilgiler elde etmektir. Larva salgısının fibroblast hücreleri üzerindeki etkilerinin anlaşılabilmesi durumunda, hasarlı tendonların tamirinde, yumuşak doku ile ilgili cerrahi komplikasyonların azaltılması veya tekrar etmemesi için yeni, minimal invaziv ve ucuz yöntemlerin önü açılacaktır.

Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda, hücre kültür kuyucuklarında uygun büyüklüğe getirilen 3T3 fibroblast hücreleri gruplara ayrıldı. Oksidatif stres, H2O2 verilerek oluşturuldu ve gruplara değişen konsantrasyonlarda LS verildi. Tüm gruplar 0, 24 ve 48. saatlerin sonunda hücre proliferasyonu ve canlılık testlerine tabi tutularak in vitro yara iyileşme modellemesine verdikleri cevaplar değerlendirildi. Bu analizlere ek olarak, gruplar arasında total antioksidan (TAS), total oksidan (TOS) ve kolajen tip 1 (COL1A1) seviyeleri ELISA yöntemi ile saptandı.

Bulgular: Kontrol grubuna kıyasla oksidatif stres ortamındaki hücrelerin anlamlı şekilde yavaş çoğaldığı ve morfolojik değişime uğradığı saptandı. LS ve H2O2'nin birlikte verildiği gruplarda ise hücrelerin sadece H2O2 verilen gruba oranla daha yüksek çoğalma hızına sahip olduğu tespit edildi. Ayrıca LS'nin hücre migrasyon hızını arttırdığı da saptandı. TAS seviyesinin H2O2 uygulanan grupta, hem 24 hem de 48. saatlerde azaldığı buna karşılık 25 μL LS uygulaması ile de arttığı saptandı. TOS seviyesinde ise bunun tam tersi veriler elde edildi. LS uygulanan fibroblastlarda 48. saatte COL1A1 protein seviyesinin diğer gruplara kıyasla arttığı tespit edildi.

Sonuç: Lucilia sericata larva salgısının, hücre proliferasyonunu hızlandırıcı, sferoid modelleme oluşumunu uyarıcı, kolajen sentezini artırıcı ve antioksidan özellikleri ile yara iyileşme sürecini kısaltabileceğini ayrıca yeni doku oluşum sürecinde de katalizleyici etkiler göstererek pozitif yönde etkin olabileceğini düşünmekteyiz.

Anahtar kelimeler: Lucilia Sericata, larva salgısı, fibroblast, oksidatif stres

Abstract:
Objective: Our aim in this study is to obtain new information at the cellular level about the effect of Lucilia sericata larval secretion (LS) on the fibroblast cell lineage. If the effects of larval secretion on fibroblast cells can be understood, new, minimally invasive, and inexpensive methods will be opened for repairing damaged tendons to reduce or prevent recurrence of surgical complications related to soft tissue.

Materials and Methods: 3T3 fibroblast cells in cell culture wells were divided into groups. Oxidative stress was created by giving H2O2 and LS was given to the groups in varying concentrations. At 0, 24 and 48. hours, all groups were subjected to cell proliferation and viability tests and their responses to in vitro wound healing modeling were evaluated. The total antioxidant (TAS), total oxidant (TOS) and collagen type 1 (COL1A1) levels between the groups are determined by ELISA method.

Results: It was found that the cells in the oxidative stress environment multiplied significantly slowly and underwent morphological changes. In the groups where LS and H2O2 were given together, it was found that the cells had a higher proliferation rate compared to the group given only H2O2. It was also found that LS increases the cell migration rate. The TAS level decreased in both the 24th and 48th hours in the H2O2 applied group but increased with the application of 25 μL LS. At the TOS level, the opposite data was obtained. It was determined that the COL1A1 protein level in LS-treated fibroblasts increased at the 48th hour compared to other groups.

Conclusion: Lucilia sericata larval secretion can accelerate cell proliferation, stimulate the formation of spheroid modeling, increase collagen synthesis, and shorten the wound healing process with its antioxidant properties, as well as have a positive effect on the process of new tissue formation by showing catalyzing effects.

Keywords: Lucilia Sericata, larval secretion, fibroblast, oxidative stress