Prostat kanseri hücre soyunda androjen baskılanmasının farklı radyasyon dozlarında radyoduyarlaştırıcı etkisi
Radiosensitization effect of androgen deprivation on prostate cancer cell line in combination with different radiation doses
Yazar: RABİA NERGİZ DAĞOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. FULYA YAMAN AĞAOĞLU
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Radyasyon Onkolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Androjenler = Androgens ; Apoptozis = Apoptosis ; DNA = DNA ; Metilasyon = Methylation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prostat neoplazmları = Prostatic neoplasms ; Radyasyon = Radiation ; Radyasyon dozajı = Radiation dosage

Özet:
AMAÇ:Eksternal radyoterapi (ERT) ve androgen baskılayıcı tedavi'nin (ABT); prostat kanserinin tedavisindeki etkinliği bir çok randomize çalışmada kanıtlanmış olmasına rağmen tedavilerin moleküler düzeydeki etkisi ile ilgili bilgiler halen araştırma konusu olmaktadır. Bu çalışmada ABT ve ERT'nin farklı dozlarda birlikte kullanıldığı zaman moleküler düzeydeki etkileşiminin DNA metilasyonu, apoptotik oran ve klonojenik assay üzerindeki etkisinin gösterilmesi amaçlanmıştır.GEREÇ VE YÖNTEM:LNCaP hücreleri in vitro olarak üç deney grubunda değerlendirildi: 1) CM: tam medyum 2) SS: charcoal stripped serum 3) SS+Testosteron:testosteron eklenen medyum. CM grubu Bovin Serum Albumin medyumu içinde kültüre edildi. SS grubunda androjen baskılanması için charcoal uygulaması yapıldı. Testosteron etkisini değerlendirmek için SS+Testosteron grubu oluşturuldu. Bu grup için SS medyumu içine sentetik testosteron eklendi. Her grup dört alt gruba ayrıldı ve kontol grubu dışında 2,3 ve 5Gy ile ışınlandı. Ölçüm için klonojenik assay, apoptoz ve DNA metilasyon oranları, gruplar arası karşılaştırma için pair t test kullanıldı.BULGULAR:Işınlanan ve tam androjen baskılanmasının sağlandığı SS gruplarında klonojenik assayde ortaya koyulan fark istatistiksel olarak anlamlıdır.SS+Testosteron grubunda klonojenik etkinlikte artış olmakta, ancak bu kontrol grubunda gözlenenlere erişmedi. SS ve SS+Testosteron grupları kıyaslandığında ışınlanmayan gruplar arasında anlamlı fark saptanırken; 2Gy ve 3Gy uygulanan gruplar arasında ise SS-SS+Testosteron arasındaki fark anlamlı düzeye ulaşmadı (2Gy için p=0.08, 3Gy için p=0.095) Sadece 5Gy dozlarda fark saptandı (p=0.02). Apoptoz oranları için CM-SS; CM-SS+Testosteron; SS-SS+Testosteron arasındaki fark anlamlı düzeye ulaşmıştır. SS ve SS+Testesteron gruplarındaki fark testesteronun çekilmesinin apoptoz üzerindeki supradditif etkisine işaret etmektedir. DNA metilasyon oranları karşılaştırıldığında gruplara arasında korelasyon saptanmadı.SONUÇ:Bu bulgular, ABT ve ERT'nin farklı dozlarda birlikte kullanıldığı zaman moleküler düzeydeki etkileşiminin apoptotik orandaki supraadditif etkisinin klonojenik assaye yansımadığını göstermektedir. DNA metilasyonu in vitro çalışmalar için etkin bir değerlendirme yöntemi olarak belirlenmemiştir.

Abstract:
PURPOSE:Although the majority of clinical trials have shown that high risk prostate cancer patients treated with external radiotherapy (ERT) and androgen deprivation therapy (ADT) have a therapeutic advantage over those treated with ERT alone, molecular interactions between these modalities have not been well defined. In this study, the aim is to evaluate the interaction between different doses of ERT and ADT by clonogenic assay, apoptosis and DNA methylation.MATERIALS AND METHODS:LNCaP cells were evaluated in vitro in three different groups: 1) CM: complete medium, 2) SS: charcoal-stripped serum, 3) SS+Testosterone: testosterone added medium. CM group was cultured in Bovine Serum Albumin medium. Androgen deprivation (AD) in SS group was achieved by culturing in charcoal-stripped serum containing medium. SS+Testosterone group was a result of replacement of androgen was done by adding synthetic testosterone. Each group was classified into four subgroups for external radiation application (ERA); non-irradiated and 2,3 and 5Gy subgroups. Analysis was done by clonogenic assay, apoptosis and DNA methylation and the correlations between groups were evaluated with pair t test.RESULTS:SS group which had complete androgen deprivation showed significant difference on clonojenic assay compared with the groups that underwent radiation and that did not. Adding testosterone presented increase in clonogenic assay bur the results did not reach the values of the control group. Comparing SS and SS+Testosterone groups according to the applied radiation doses, 2Gy and 3Gy doses did not point out a significant difference (p=0.08 for 2 Gy and p=0.095 for 3Gy). On the other hand, 5 Gy doses showed significant difference between the two groups (p=0.02). Evaluating the apoptotic ratio, the differences among CM-SS, CM-SS+Tetosteron and SS-SS+Testosterone were significant. The difference between SS and SS+Testesterone implied the supradditive effect of androgen deprivation on apoptotic ratio. Evaluating the results for DNA mehylation did not present a correlation among groups.DISCUSSION:These results attribute to the supraadditive interaction between ADT and ERT is limited to apoptotic ratio but it is not expressed in clonojenic assay. DNA methylation could not be defined as a reliable evaluation method for in vivo studies.