Intra uterin inseminasyon (IUI) hastalarında, sperm DNA statüsünün gebelik sonuçları ile değerlendirilmesi
The effect of sperm DNA fragmentation on pregnancy rates intrauterine insemination (IUI) cycles
Yazar: SİBEL IŞIK
Danışman: PROF. DR. TURAN KARACA
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: DNA = DNA ; DNA hasarı = DNA damage ; Dölleme = Insemination ; Dölleme-yapay = Insemination-artificial ; Gebelik = Pregnancy ; Kısırlık = Infertility ; Sperm = Spermatozoa ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Bu çalışmada, IUI uygulaması kararı alınan infertil çiftlerden, erkek bireylerden elde edilen spermlerin özel hazırlama yöntemleri sonrasında TUNEL boyama ile DNA hasar oranını tespit etmek ve hamilelik oluşumu üzerine etkisini araştırmak amaçlandı.
Çalışmamıza 81 çift dahil edildi. Çiftlerin semen örnekleri, öncelikle Androloji laboratuarında makroskopik ve mikroskopik olarak değerlendirildi. Her örnek, likefiye olması için 5 dk aralarla kontrol edilerek en fazla 60 dk beklendi ve bu süreyi aşan örnekler visköz olarak kaydedildi. Enjektör yardımı ile volüm belirlendi, pH değeri de özel indikatör kağıt ile ölçüldü. Mililitredeki sperm sayısını ve hareketlilik yüzdesini bulmak için Makler sayım kamerası kullanıldı. Morfolojik değerlendirme, spermlerin Spermac Stain boya seti ile boyandıktan sonra Kruger'in mutlak değerlerine göre yapıldı.
Spermler, gradiyent ve yüzdürme yöntemleri kullanılarak IUI için hazırlandı. En iyi yüzen spermler toplanarak IUI uygulaması yapıldı ve geriye kalan spermler TUNEL boyama için hazırlandı. TUNEL boyama hazırlığı için örnekler PBS ile yıkanarak %4'lük PFA ile fiksasyonları yapıldı. Fiksasyon sonrasında örnekler en az bir gece +4 derece buzdolabında bekletildi. TUNEL boyama kitindeki prosedüre göre boyama işlemi yapıldı ve örneklerin sperm DNA hasar oranı fluoresan mikroskop ile tespit edildi.
Yapılan istatistiksel değerlendirme sonucunda gebelik elde edilen grup ile gebelik elde edilmeyen grup arasındaki semen örneklerinin likefaksiyon süresi, volümleri, pH değerleri, sperm konsantrasyonları, hareketlilikleri ve morfolojik özellikleri arasında anlamlı bir fark elde edilemedi. Yine iki grup arasında sperm DNA hasar oranları değerlendirildiğinde gebelik (+) olan grupta gebelik (-) olan gruba göre TUNEL (+) olan sperm oranı düşük olmasına rağmen, aralarında istatistiksel olarak bir anlam bulunamamıştır.
Sonuç olarak, semen örneklerinin özelliklerine ve spermlerin DNA hasar oranına bakılarak, IUI uygulaması sonrası gebelikle ilgili bir öngörüde bulunulamayacağı kanısına varıldı.

Abstract:
In this study, we aimed to detect the DNA damage ratio of the sperm samples of infertile couples scheduled to intrauterine insemination treatment with TUNEL test and observe its effect on the rate of pregnancy.
In our study, 81 men were included. Semen samples were examined macro- and microscopically in the andrology laboratory. Each sample was observed for liquefaction 5 minutes intervals for maximum 60 minutes. Time to liquefaction was noted. The samples liquefied after 60 minutes were accepted as viscous. The volume of each sample was measured by drawing into a syringe and the pH was read after the immersion of pH indicator paper into the sample. Sperm number and percentage of motility were estimated with Makler counting chamber. The morphological evaluation was done according to absolute values of Kruger's strict criteria after staining with Spermac Stain. 
	Gradient and swim-up sperm preparation techniques were used for intrauterine insemination (IUI). The most motile sperms in the supernatant after swim-up were used for intrauterine insemination and the sperms in the pellet were prepared for TUNEL staining. For TUNEL staining preparation, the samples were bathed with PBS and fixed with 4% PFA. After stabilization/fixation, the samples were kept overnight under + 4°C. The staining was done according to the TUNEL staining kit procedure and the ratios of defected DNA in the sperms were determined by fluorescent microscopy.
	There was no statistical difference between the pregnancy and no pregnancy groups in terms of liquefaction time, volume, pH, sperm concentration, motility and morphology. Although DNA damage percentage measured by TUNEL test was less in the pregnancy achieved group compared to no pregnancy group, it did not reach statistically significant levels.
	In conclusion, the characteristics of semen samples and the ratio of the sperm DNA damage can not be used to predict pregnancy rates in IUI cycles.