Deneysel karbapenem dirençli acınetobacter baumannii sepsisinde adrenal tutulumun değerlendirilmesi
The adrenal involvement in experimental mouse model carbapenem resistant acinetobacter baumannii sepsis
Yazar: ESMA EREN
Danışman: PROF. DR. MEHMET DOĞANAY
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Acinetobacter = Acinetobacter ; Acinetobacter baumannii = Acinetobacter baumannii ; Adrenal bez hastalıkları = Adrenal gland diseases ; Adrenal bezler = Adrenal glands ; Karbapenemler = Carbapenems ; Sepsis = Sepsis ; İlaçlara direnç-çoklu = Drug resistance-multiple ; İnflamasyon = Inflammation ; Şok-septik = Shock-septic

Özet:
Giriş ve Amaç: Sepsis ve septik şok, günümüzde yoğun bakımlarda en fazla mortaliteye neden olan durumlardır. Gram negatif bakteriyel sepsislerde adrenal fonksiyonların etkilendiği ve hastanın klinik seyrini olumsuz yönde etkilediği bilinmektedir. Çoklu antimikrobiyale dirençli Acinetobacter baumannii sepsisinde adrenal tutulumun hangi düzeyde olduğu konusunda herhangi bir bilgi yoktur. Bu nedenle çoklu ilaca dirençli A. baumannii (ÇDAB) sepsisinde enflamasyonun ve adrenal tutulumun değerlendirilmesi amaçlanmıştır. 
Yöntem: Bu amaca ulaşmak için; karbapeneme duyarlı ve dirençli A. baumannii ve Escherichia coli, türleri ile fare sepsis modeli oluşturuldu. Deneyde kullanılacak fareler Hakan Çetinsaya Deneysel ve Klinik Araştırma Merkezi'nden temin edildi ve çalışma aynı merkezde yapıldı. Her bir gruba 15 fare olmak üzere dört grupta 60 fare ile çalışma yapıldı. Gruplar; i) karbapeneme duyarlı A. baumannii (KSAB), ii) karbapeneme dirençli A. baumannii (KRAB), iii) Escherichia coli ve iv) kontrol grubu olarak belirlendi. Bakteri inokülasyonundan 72 saat sonra fareler anestezi altında sakrifiye edilecek, her bir fareden sitokinler için intrakardiyak kan alındı ve santrifüj edilerek -20 C'de çalışma gününe kadar saklandı. Ayrıca her iki adrenal bez diseke edilerek çıkarıldı sağ adrenal bez 0,6 ml SF içinde homojenize edilerek kültüre edildi ve koloni sayıları hesaplandı. Sol adrenal bez ise histopatolojik çalışma için %10 formol içine konuldu. Histopatolojik çalışma Patoloji laboratuarında yapıldı. Karbapeneme duyarlı ve dirençli A. baumannii ile E.coli sepsisinin adrenal fonksiyonlar ve sitokin düzeyleri üzerine etkileri karşılaştırıldı ve karbapeneme dirençli A.baumannii sepsisinde enflamasyon ve adrenal fonksiyonlardaki farklar ortaya konuldu. Çalışma Erciyes Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu tarafından onaylandı (Karar no:15/93).
Bulgular: Adrenal bezdeki konjesyon değerlendirildiğinde, tüm sepsis gruplarında kontrol grubuna göre anlamlı derecede fazla konjesyon bulundu. Grupların birbiri ile karşılaştırılmasında ise, E.coli grubunda, KSAB ve KRAB gruplarına göre konjesyon düzeyi anlamlı derecede fazla idi. KSAB grubunda da konjesyon, KRAB'a göre daha fazla olmasına rağmen istatiksel olarak anlamlı bulunmadı. Bakteriyel yük; E.coli grubunda, KRAB ve KSAB grubuna göre daha fazla saptandı. En düşük kortikosteron seviyesi E. coli grubunda görüldü ve KRAB grubunda da KSAB grubuna göre daha düşük kortikosteron düzeyi ölçüldü.TNF alfa seviyesi KRAB ve E. coli grubunda en yüksek idi ve kontrol grubuna göre fark istatistiksel olarak anlamlıydı. Sepsis gruplarının üçünde de kontrol grubundan daha yüksek seviyede IL-6 düzeyi tespit edildi; istatistiksel olarak değerlendirildiğinde, KRAB grubunda IL-6 düzeyi, kontrol grubuna göre anlamlı yüksek bulundu.
Sonuç: KRAB sepsisinde, virülansı yüksek olan E. coli sepsisine benzer adrenal tutulum ve inflamatuvar reaksiyonlar izlenmektedir. Buradaki bulgular, ileride yapılacak klinik çalışmalara ışık tutacaktır.
Bu çalışma Erciyes Üniversitesi Bilimsel Araştırma Proje Birimi tarafından desteklenmiştir (Proje No: TTU-2017-6921).

Abstract:
Background: In the last years, incidence of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii sepsis is increasing with high mortality. However, it is not clear whether this is due to inadequate antimicrobial choice or a more severe clinical course. The aim of this study is to evaluate the inflammation and adrenal involvement in the carbapenem resistant A. baumannii experimental mouse model sepsis. 
Method: Balb/cmale mice, aged 20-24 weeks weighing 30-40 g were used. Animals were randomised in to control and three sepsis groups (A. baumannii susceptible to carbapenem-CSAB-, A. baumannii resistant to carbapenem-CRAB-, Escherichia coli). Sixty mice were included in this study and each group had 15 mice. Mice were sacrificed, 72 hours after bacterial inoculation and intra cardiac blood was taken from each mice for cytokines and corticosteron. In addition, both adrenal glands were dissected and right adrenal gland was cultured for bacterial colony counts. The left adrenal gland was used for histopathological study. The histopathological changes and bacterialcounts in adrenal and cytokine and corticosterone levels were compared between the control and study groups.Data were presented as mean SD. A P-value of 0.05 was considered significant. This study was approved by the Local Ethical Committee for Animal Studies of Erciyes University (No.5/93).
Results: The adrenal gland congestion was significantly severein all the sepsis groups than control group. In the comparison of groups, congestion was significantly severe in the E. coli group than in CSAB and CRAB groups. Furthermore, bacterial load was higher in E. coli than CRAB and CSAB group. The lowest level of corticosterone was observed in the E. coli group and the level of corticosterone in the CRAB group was lower than in the CSAB group. TNF alpha level was highest in CRAB and E. coli group and difference was statistically significant than control group. Although, IL-6 level in KRAB group was significantly higher than control group.
Conclusion: In CRAB sepsis, the level of corticosterone and the inflammatory cytokine response are similar to E.coli sepsis, however severe than CSAB. These findings will be highlightedwith future clinical trials. This study was supported by Erciyes University Scientific Research Unit (Project No: TTU-2017-6921).