Kars yöresinde atık yapmış inek sürülerinden alınan süt ve vajinal sıvap örneklerinden brucella etkenlerinin bakteriyolojik ve moleküler tanımlanması
Bacteriological and molecular description of brucella species isolated from milk and vaginal swab samples of aborted cattle in kars region
Yazar: ÖZGÜR ÇELEBİ
Danışman: PROF. DR. SALİH OTLU
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Kimliklendirme = Identification ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sığırlar = Cattles

Özet:
Brusellozis, evcil ve yabani hayvanlarda Brucella cinsine ait mikroorganizmalar tarafından oluşturulan ve özellikle uterus, meme ve testis gibi genital organlara yerleşerek yavru atımı, infertilite ve süt veriminde azalmaya neden olan genellikle kronik seyirli, ekonomik öneme sahip bakteriyel bir zoonozdur.Bu araştırmada Kars merkez ve Selim ilçesine bağlı köylerde atık yaptığı bilinen sığır sürülerinde bulunan ve hastalığa karşı aşılanmamış 250 inekten elde edilen süt ve vajinal sıvap örnekleri olmak üzere toplam 500 örnek Brucella cinsi bakteriler yönünden kültürel olarak değerlendirildi. Bakteriyolojik inceleme sonucunda 250 süt örneğinin 11 (%4.4)'inden ve 250 vajinal sıvap örneğinin 16 (%6.4)'sından olmak üzere toplam 27 (%5.4) örnekte Brucella spp. izolasyonu yapıldı. İzole edilen tüm suşlar B. abortus biyotip 3 olarak tiplendirildi. İzolatların PCR ile tespiti amacıyla, cins düzeyinde belirlenmesi için Brucella etkeni dış membran proteinlerden bp26 ile aşı ve virülent saha suşu ayrımı için ise eritritol kullanımından sorumlu ery geni kullanıldı. Elde edilen izolatların genotiplendirilmesi ve aşı suşlarıyla karşılaştırılması amacıyla RAPD-PCR tekniği uygulandı. Bp26 geni hedefli PCR sonucunda tüm izolatlarda 738 baz çiftlik bant gözlendiğinden tamamı Brucella spp. olarak teyit edildi. Ery geni hedefli PCR'da tüm izolatların 904 baz çiftlik bantlar oluşturdukları ve dolayısı ile hepsinin saha suşu olduğu saptandı. İzolasyonu ve identifikasyonu yapılan, bp26 geni bazlı PCR ile pozitif bulunan 27 adet Brucella suşunun RAPD-PCR ile elde edilen DNA profillerinin, aşı suşları olan B. abortus S19 ve B. melitensis REV1 ile karşılaştırılması sonucunda tümü B. abortus S19 suşunun profiline benzerlik gösterdi.Araştırmada elde edilen sonuçlar, yörede bulunan sığırlarda süt ve vajinal akıntı ile Brucella etkenlerinin önemli oranda saçılımını göstermekte, bu durumun hayvan ve insan sağlığı açısından risk potansiyelini ortaya koymaktadır. Ayrıca yöremiz sığırlarında hastalığa neden olan baskın biyotipin B. abortus biyotip 3 olarak tespit edilmesi bundan böyle yapılacak epidemiyolojik araştırmalara ışık tutacak, hastalığın kontrol ve eradikasyonuna katkıda bulunacaktır.

Abstract:
Brucellosis, a bacterial diseases caused by members of the genus Brucella, is a chronic and important zoonosis with a special location to genital organs such as testis, uterus and udder causing of milk and reproductive loses and aborts in domestic and wild animals.In this study, the milk and vaginal swab samples, collected from each of 250 cows raised in Kars and Selim areas, were analysed for culturing Brucella species. These animals had a history of abortion and they were unvaccinated against Brucellosis. Based on the bacteriological examination, Brucella spp. was isolated from total of 27 (%5.4) samples, 11 (%4.4) and 16 (%6.4) originated from milk and vaginal swab samples, respectively. All of the isolated strains were typed as B. abortus biotype 3. For the genus-level identification of the isolates, bp26 outer membrane protein genes were amplified by PCR and ery gene encoding the erythritol use was used to discriminate the strains as vaccine or field isolates. RAPD-PCR technique was utilized for genotyping the strains and comparing them with the vaccine strains. All isolated strains were identified as Brucella spp. based on the observation of 738 bp gene fragment by bp26 targeted PCR. In ery-based PCR, all isolated strains produced 904 bp gene fragments showing them as field strains. RAPD-PCR profiles of all Brucella isolates were compared with the vaccine strains (B. abortus S19 and B. melitensis Rev1) and the amplified gene fragment profiles of the isolates from current study was similar to that of B. abortus S19.The results of the present study showed that cattle in this region scatter the bacteria with milk and vaginal discharge which pose a significant potential to animal and human health. The determination of the dominant biotype as B. abortus biotype 3 is expected to better understand the epidemiology of Brucellosis and to help the control and eradication studies of the disease in this region.