Tüp bebek merkezine başvuran hastaların oosit mikroçevresinde meydana gelen histolojik ve biyokimyasal değişikliklerin fertilizasyon başarısı ile ilişkisinin araştırılması
Investigation of the relationship between fertilization success and histological and biochemical changes in oocyte microenvironment of patients in the ivf center
Yazar: NURHAN AKARAS
Danışman: YRD. DOÇ. DR. TUBA DEMİRCİ
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Fertilizasyon = Fertilization ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Foliküler sıvı = Follicular fluid ; Histoloji = Histology ; Kaspazlar = Caspases ; Kumulus hücresi = Cumulus cells ; Kısırlık = Infertility ; Oositler = Oocytes ; Rapamisin = Rapamycine ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Amaç: Bu çalışmada infertilite hastalarında oosit mikroçevresini oluşturan, folikül sıvısındaki biyokimyasal ve kumulus hücrelerindeki histolojik değişimin, oosit sayısı ve gebelik üzerine etkisinin araştırılması amaçlandı.
Materyal ve Metod: Atatürk Üniversitesi Araştırma Hastanesi İnfertilite Kliniği'ne başvuran 18-35 yaş arası infertilite tedavisi planlanan toplam 50 kadın hasta çalışmaya dahil edilerek oosit sayısına göre; 5'ten az oosit sayısı olan hastalar Grup 1, 5-20 sayıda oosite sahip olan hastalar Grup 2, 20'den fazla oosite sahip olan hastalar Grup 3 olmak üzere 3 gruba ayrıldı. Oosit toplama işlemi sırasında foliküllerden, foliküler sıvı aspire edildi ve kumulus hücreleri toplandı. Elde edilen foliküler sıvı  biyokimyasal (MDA, TOS, TAS, SOD, GSH) analizlerde kullanılmak üzere -80 °C 'de saklandı. Kumulus hücrelerinden yayma preparatlar hazırlanarak kaspaz 3 ve mTOR immünoreaktivitesini ışık mikroskobik düzeyde incelenmek amacıyla immünohistokimyasal boyama yapıldı.
Bulgular: Foliküler sıvıdaki MDA, TOS seviyeleri; diğer iki grupla karşılaştırıdığında Grup 1 hastalarında daha yüksek bulunurken, SOD seviyesinde azalma gözlendi (p<0,05). Grup 2 hastalarında MDA, TOS seviyesi Grup 3'e kıyasla yüksek bulunurken SOD seviyesinde azalma gözlendi (p<0,05).  TAS, GSH seviyelerinin oosit sayısına bağlı olarak değişmediği izlendi (p<0,05). Gebe hastalara ait foliküler sıvılarda tespit edilen MDA seviyesi gebe olmayanlara kıyasla yüksek bulunmasına rağmen farkın istatistiksel düzeyde anlamlı olmadığı gözlendi (p>0.05). Yapılan immünohistokimyasal boyamalarda mTOR ve kaspaz 3 immünoreaktivitesinin Grup 1'de diğer gruplara göre daha yoğun olduğu gözlendi. 
Sonuç: Sonuç olarak mTOR ekspresyonundaki artışın kaspaz 3 yolağını aktive edebileceği ve bu aktivasyonun da oksidatif strese yol açabileceği düşünüldü. Elde ettiğimiz bulgular neticesinde mTOR yolağının oosit sayısı ve gebelik oluşumu üzerine etkisi olabileceği sonucuna varıldı.

Abstract:
Aim: To investigate the effect of the chemical changes in the follicular fluid and histological changes in the cumulus cells of the oocyte microenvironment on oocyte number and pregnancy in infertile patients.
Material and Method: A total of 50 female patients who were admitted to Atatürk University Research Hospital Infertility Clinic and planned for infertility treatment between the ages of 18-35 were included in the study patients were divided into 3 groups and according to the number of oocytes; Patients with oocytes less than 5 as Group 1, patients with oocytes 5-20 as Group 2, patients with more than 20 oocytes as Group 3. During oocyte collection process, the follicular fluid was aspirated from the follicles and the cumulus cells were collected. The obtained follicular fluid was stored at -80 ° C for use in biochemical (MDA, TOS, TAS, SOD, GSH) analyzes. Immunohistochemical staining was performed to examine caspase 3 and mTOR immunoreactivity at light microscopic level.
Results: MDA, TOS levels in follicular fluid were higher in Group 1 patients when compared with the other two groups  and a decrease in SOD was observed. (p <0,05). In Group 2 patients, MDA, TOS level were found to be higher than Group 3, while SOD level was decreased (p <0,05). TAS, GSH levels did not change depending on oocyte number (p <0.05). Although the MDA level detected in the follicular fluid of pregnant patients was higher than that of non-pregnant women, the difference was not statistically significant (p>0.05). Immunohistochemical stainings showed that mTOR and caspase 3 immunoreactivity were more intense in Group 1 than in the other groups.
Conclusion: As a result, it was thought that the increase in mTOR expression could activate the Caspase 3 pathway and this activation could lead to oxidative stress. As a result of the findings we have found that mTOR pathway may have effects on oocyte number and pregnancy formation.