Meme kanseri koşullu besiyerinin endotel hücrelerdeki adezyon molekülleri ve immün kontrol noktaları genleri üzerindeki etkileri
The effects of breast cancer conditioned medium on the genes of adhesion molecules and immune check points in endothelial cells
Yazar: İPEK TÜRKDÖNMEZ
Danışman: PROF. DR. MEHMET ŞAHİN
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Adezyon molekülleri = Adhession moleculs ; Endotelyal hücreler = Endothelial cells ; Endotelyum = Endothelium ; Genler = Genes ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms

Özet:
Meme kanseri, yaygın olarak süt kanallarını oluşturan hücrelerden veya kanallara süt sağlayan lobüllerden kaynaklanan bir kanser türüdür. Kanser gelişimi esnasında tümör mikro-çevresinde bulunan birçok faktör önem kazanmaktadır. Bu faktörler arasında, endotel hücreler ve immün hücreler gibi hücresel faktörler ile integrinler ve ekstraselüler matriks elemanları gibi yapısal faktörler bulunmaktadır. Endotel hücrelerinden sentezlenen bazı faktörlerin immün hücre modülasyonlarında etkili olması ve tümör hücrelerinin metastazında rol oynaması bu faktörleri kanserde önemli kılmaktadır. Çalışmamızda, meme kanseri koşullu besiyerinde inkübe edilen endotel hücrelerdeki immün kontrol moleküllerinin ve adezyon moleküllerinin ekspresyon seviyelerinde değişiklik olup olmadığını inceledik. Bu amaç için normal meme hücre hattı olan CRL-4010, meme kanseri hücre hatları olan CRL-2329 ve MDA-MB-231 hücrelerinden elde edilen koşullu besiyerleri HUVEC'lere uygulandı. Endotel hücrelerinde, hücre proliferasyonu, hücre migrasyonu ve belirlenen adezyon ve immün kontrol noktaları genlerinin ekspresyon seviyelerindeki değişimlere nasıl etkiler yaptığı incelendi. Hücre proliferasyonu deneyinde, CRL-2329 deney grubunda 48 saatin sonunda kontrole göre artış gösterdiği bulunmuştur. Hücre migrasyonu deneyinde ise, meme kanseri koşullu besiyerlerinde bulunan HUVEC grubunun daha hızlı kapandığı gözlemlenmiş ve anlamlı bulunmuştur. Çalışmamızda adezyon moleküllerinden; ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, E-selektin, VE-kaderin, E-kaderin ve immün kontrol noktaları genlerinden; PD-L1, PD-L2, IDO-1, IDO-2, VISTA, LAG3, CTLA-4 genlerinin ekspresyon düzeyleri Real Time PCR yöntemi ile analiz edilmiştir. Gen ekspresyon seviyelerindeki değişimler incelendiğinde, adezyon moleküllerinden olan ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, E-selektin, VE-kaderin anlamlı olarak değişimler göstermiştir. İmmün kontrol noktaları genlerinde ise, PD-L1, PD-L2, IDO-1, VISTA, LAG3 kontrole göre anlamlı değişimler göstermiştir. Elde ettiğimiz verilerin kanser hücrelerinin çoğalmasına ve metastazına destek sağladığını belirtebiliriz. Bu nedenle, bulduğumuz sonuçlar literatüre katkı sağlayabilecektir.

Abstract:
Breast cancer is a type of cancer commonly originating from the cells that make up the milk ducts or the lobules supplying milk to the ducts. Many factors in the tumor microenvironment gain importance during cancer development. These factors include cellular factors such as endothelial cells and immune cells, and structural factors such as integrins and extracellular matrix elements. The fact that some factors synthesized from endothelial cells are effective in both immune cell modulations and the metastasis of tumor cells make these factors important in cancer. This study examined whether there were changes in the expression levels of immune control molecules and adhesion molecules in endothelial cells incubated in breast cancer conditioned medium. For this purpose, conditioned medium obtained from normal breast cell line CRL-4010, breast cancer cell lines CRL-2329 and MDA-MB-231 were applied to HUVECs. The effects of cell proliferation, cell migration, and adhesion and immune checkpoint genes on changes in expression levels in endothelial cells were investigated. In the cell proliferation experiment, CRL-2329 was found to increase in the experimental group compared to the control after 48 hours. In the cell migration experiment, it was observed that the HUVEC group in breast cancer conditioned medium closed faster and was found to be significant. This study, adhesion molecules; ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, E-selectin, VE-cadherin, E-cadherin and immune checkpoints genes; Expression levels of PD-L1, PD-L2, IDO-1, IDO-2, VISTA, LAG3, CTLA-4 genes were analyzed by Real Time PCR method. When the changes in gene expression levels were examined, the adhesion molecules ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, E-selectin, VE-cadherin showed significant changes. In immune checkpoint genes, PD-L1, PD-L2, IDO-1, VISTA, LAG3 showed significant changes compared to control. We can state that the data we obtained provides support for the proliferation and metastasis of cancer cells. Therefore, our results will contribute to the literature.