Yerel Mavidil virusu izolatlarının Plak Redüksiyon Nötralizasyon (PRN) ve Reverz Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PZR) teknikleri ile serotipik identifikasyonu
Serotypic identification of local Bluetongue virus isolates using Plaque Reduction Neutralization (PRN) and Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) Techniques
Yazar: VOLKAN YILMAZ
Danışman: PROF. DR. AYKUT ÖZKUL
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Viroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Bu çalışmada 1998-2005 yılları arasında izole edilen yerel BT viruslarının serotipik identifikasyonu amaçlanmıştır. Bu amaç için jenerik ve serotip spesifik RT-PZR sistemleri ile PRN testi tasarlanmıştır. Jenerik RT-PZR segment 10 düzeyinde daha önce bildirilen (Nikolakaki ve ark., 2005) primerler kullanılarak gerçekleştirilirken, sRT-PZR segment 2 düzeyinde ve serotip 2 ve 4 için daha önce Mertens ve ark. (2007) tarafından, serotip 9 ve 16 için ise bu çalışma kapsamında tasarlanan primerler kullanılarak gerçekleştirildijRT-PZR ile araştırma kapsamında çalışılan 26 adet BTV izolatının tamamında Seg-10 spesifik DNA ürünleri elde edilebilmiştir. Diğer taraftan sRT-PZR uygulaması sonunda ise izolatlardan 19 adedi serotip 9 ve 1 adedi serotip 16 olarak identifiye edildi. sRT-PZR sonunda serotip 2 ve 4 primerleri ile herhangi bir DNA ürünü elde edilemediMoleküler identifikasyon verileri kullanılarak PRN testinin ana komponenti olan tip spesifik hiperimmun serumların elde edilmesi için 3 referans virus (BTV-4, BTV-9 ve BTV-16) tavşanlara inokule edildi. İnokulasyon takvimi sonunda hiperimmun serumlarda her 3 virusa karşı 1:10 düzeyinde nötralizan antikor titresi belirlendi. Bu serumlar kullanılarak yapılan PRN testi sonunda 19 izolat BTV-9, 1'er izolat BTV-4 ve BTV-16 olarak identifiye edildiSonuç olarak RT-PZR direkt olarak laboratuar ve kullanıcı profillerinden etkilense de sRT-PZR ve PRN testleri arasında BT virusu serotiplerinin tanısı açısından benzer duyarlılık tespit edildi.

Abstract:
In this study it is aimed to serotypic identification of local Bluetongue viruses (BTV) isolated between 1998 and 2005. For this purpose, generic (g) and serotype specific (s) RT-PCR systems and Plaque Reduction Neutralization Assay (PRNA) were designed. Generic RT-PCR was performed on segment 10 level using primers designed previously (Nikolakaki et al.). On the other hand, sRT-PCR was carried on segment 2 with primers sets two of which were designed previously by Mertens et al. (2007) while remaining two (BTV-9 and BTV-16) were designed within this studyAt the end of gRT-PCR applications, specific DNA product (822 bp in lenght) was amplified in all of 26 BTV field isolates. On the other hand, based on sRT-PCR, 19 BTV isolates were identified as serotype 9 and one isolates was found as serotype 16. There was no specific DNA amplification as a result of sRT-PCRUsing molecular identification data as a main component of PRNA hyperimmun serums aganist three serotypes (BTV-4, BTV-9 and BTV-16) were produced in rabbits. Neutralizing antibody level in hyperimmun serums for all of three viruses were detected as 1:10. PRNA of field isolates of BTV using hyperimmune serums revealed nineteen BTV-9, one BTV-4 and one BTV-16 serotypic distribution among the isolatesIn conclusion, although RT-PCR is directly influenced by laboratory or user profile, sRT-PCR and PRNA were found in almost similar sensivity in diagnosing BTV serotypes.