Kistik fibrozisde oluşan solunum enfeksiyonlarında bakteri fenotipik özelliklerinin araştırılması
Investigation of bacterial phenotypical characteristics of respiratory infections in cystic fibrosis
Yazar: MERYEM ÖZLEM ERSOY
Danışman: PROF. DR. SERHAN SAKARYA
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases
Dizin: Bakteriler = Bacteria ; Biyofilmler = Biofilms ; Fenotip = Phenotype ; Fibroz = Fibrosis ; Pseudomonas aeruginosa = Pseudomonas aeruginosa ; Solunum = Respiration ; Solunum yolları enfeksiyonları = Respiratory tract infections

Özet:
Amaç: İn vitro koşullarda KF?li ve normal insan epitelyumunun P. aeruginosa ile enfekte edilmesi sonrasında bakterinin fenotipik yapı (biyofilm oluşumu, aderans oluşumu, büyüme oranları) özelliklerindeki değişimlerinin tespit edilmesidir.Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda green florasan protein (GFP) transfer edilmiş P.aeruginosa `nın bronşiyal epitelyum hücresi, kistik fibrozis trakeal epitelyum hücresi, normal insan trakeal epitelyum hücresi, kistik fibrozis bronşiyal epitelyum hücresinde kantitatif (fluorometride 485-532 dalga boyunda okutularak) ve kalitatif (florasan mikroskopda) yöntemle aderans tayini yapılmıştır. Mikroorganizmanın büyüme oranları fluorometrede 37 oC de inkübasyonda 485-535 nm dalga boyunda 0, 6, 8, 12 ve 16. saatlerdeki fluoresans değerlerine bakılarak tespit edildi. Kristal viyole boyama yöntemi ile slime üretimine bakıldı. İstatistik yöntemi olarak T-test kullanıldı. P<0.05 anlamlı kabul edildi.Bulgular: P. aeruginosa? nın normal ve KF trakeal ve bronşiyal epitelyum hücrelerine adherans oranı karşılaştırılmıştır, aynı bölge normal ve KF epitelleri arasında aderans farkı istatistiksel olarak (p<0.05) anlamlı bulunmuştur. GFP P. aeruginosa suşlarının aderanslarının florasan mikroskopda görüntülemesinde aderansda farklılık net olarak belirlenememekle birlikte ilginç olarak IB3 hücrelerinde bakteri morfoloji değişikliği tespit edilmiştir Farklı zaman dilimlerinde tüm hücrelerin büyüme oranları kontrol grubu ve kendi aralarında karşılaştırılmıştır istatiksel olarak anlamlı bir sonuç elde edilememiştir. Buna karşın normal ve KF bronşiyal epitelyum hücrelerinde slime üretiminin KF hücrelerinde normal epitelyum hücresi ve kontrol grubuna oranla istatistiksel olarak anlamlı bir artış gözlenmiştirSonuç: Çalışmamızda P.aeruginosa?nın KF epitelinde aderans ve biyofilm üretimi gibi fenotipik farklılıkların görülmesinin epitelyum yüzey yapısında oluşan yapısal değişikliklerin bakteri aderansına ve muhtemelen bu değişiklikler sonucu oluşan olumsuz ortam veya bu değişikliklere neden olan genetik uyarının bakteri üzerine direkt etkisine bağlı olarak biyofilm üretimini arttırdığını düşündürmektedir. KF? li hastalarda P.aeruginosaenfeksiyonlarının tam olarak tedavi edilememesinin ana nedenlerinden birisinin bakterinin uğradığı fenotipik değişiklikler olabileceği düşünüldü.Anahtar Kelimeler: Kistik Fibrozis, Pseudomonas aeruginosa, Aderans, Biyofilm

Abstract:
Objective: The purpose of the study is determination of the changes in bacterial phenotypical structures (biofilm formation, adherence formation, growth ratio) after P.aeruginosa infection normal human epithelium and human epithelium with CF in vitro conditions.Material and Methods: In our study quantitative (fluorometric) and qualitative (fluorescent microscopic) methods have been used to determine the amount of adherence of green fluorescent protein transferred P.aeruginosa in normal and CF bronchial and, tracheal epithelium cells. Growth ratio of microorganism has been determined by using fluorometry in 37 0C incubation at 0,6,8,12,16 th hour values. Chrystal violet staining method has been used for searching slime production. T-test has been used as the statistical method. P<0.05 has been accepted as significant.Findings: Adherence of P. aeruginosa to CF bronchial epithelium was decreased compared to normal bronchial epithelium and it was statistically significant. However, P. aeruginosa adherence to CF tracheal epithelium was decreased compared to normal tracheal epithelium but it is not statistically significant. Interestingly, GFP P.aeruginosa, morphological changes have been determined in bronchial epithelium cell with CF cells. Growth ratio of all cells has been compared between control group and themselves in different time intervals, but no differences have been gathered. Conversely, statisticallysignificant increment of slime production of P. aeruginosa in CF bronchial epithelium cells has been determined compared to normal epithelium cells and control group.Result: In our study, changes in P. aeruginosa phenotypic properties such as adherence has biofilm production and morphologic changes with CF bronchial epitheliummay due to effect of structural changes on epithelial superficial structures and induction of genetic differences. It is thought that these effects directly effects bacterial phenotypic properties while infections in CF patients and these phenotypic changes may be the major determinant of the therapeutic failure of infections.Kay Words: Cystic Fibrosis, Pseudomonas aeruginosa, Adherence, Slime production