İnterlökin 12'nin akciğer kanseri hücreleri üzerine etkisi
The effect of interleukin 12 on lung cancer cells
Yazar: SEVAL TURNA
Danışman: PROF. DR. MELİHA BURCU IRMAK YAZICIOĞLU
Haliç Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji ve Genetik  Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Günümüzde kök hücre tedavileri, tıbbın birçok alanında deneysel veya klinik olarak kullanılan tedavi yöntemlerindendir. Farklı tedavi yöntemleri geliştirilmiş olmasına rağmen henüz kanseri yok edebilecek bir tedavi bulunmamaktadır. Akciğer kanseri en sık görülen kanser türleri arasındadır. Birçok deneysel çalışmada mezenkimal kök hücrelerin (MKH) tedavi edici ve koruyucu özelliği bildirilirken kanser modellerinde ise, kanserli hücrelerin çoğalmalarını baskıladığı ve durdurduğu gösterilmektedir. Ancak yapılan bazı çalışmalarda da kök hücrelerin kanser oluşumunu tetikleyerek kitleyi büyüttüğü, yeni damar oluşumuna ve kanserin invazyonuna neden olduğu gösterilmiştir. MKH'ler ile kanser hücreleri arasındaki iletişim hücrelerden salgılanan sitokinler yardımıyla sağlanmaktadır. MKH'lerin tedavi edici özelliği bu sitokinler ile gerçekleşmektedir. 
Bu çalışmanın amacı, MKH'ler ile A549 akciğer kanser hücrelerini in-vitro olarak aynı ortamda tutarak, MKH'lerin kanserli hücrelerin büyümesini baskılamak için kullandığı sitokinlerden interlökin (IL)-12 salgılamasını sağlayarak, IL-12'nin A549 kanser hücrelerinde apoptotik ve otofajik yolaklardaki genlere olan etkileri ile birlikte hücre döngüsü ve proliferasyon genleri üzerindeki etkilerini araştırarak MKH'lerin kanser hücreleri üzerindeki etkisini görebilmektir.
Bu çalışma hücre kültürü seviyesinde 3 ayrı grup oluşturularak ve 6 farklı saat diliminde yapılmıştır. Hücrelerden salınan sitokinlerden IL-12p70 ve IL-12p40 seviyeleri toplanan besiyerlerinden ELİSA çalışılarak tespit edilmiştir. Ayrıca IL-12 alt birimleri ve reseptörleri, apoptoz ve otofaji , hücre döngüsü belirteçleri ile birlikte proliferasyon belirteçleri gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi ile araştırılmıştır. 
Yaptığımız ELİSA testi ve gz-PZR sonucunda, IL-12'nin salgılanmaya başladığı ilk saatlerde apoptoza direnç gelişmeye başlamış olabileceği gibi ilerleyen zaman diliminde bu apoptotik direncin IL-12 etkisi ile gerilemiş olabileceği ve hücre döngüsü süresinin ise IL-12 salınımından sonra G1/S fazında uzadığı düşünülmektedir. Proliferasyon belirteçlerinin gz-PZR ile mRNA ekspresyon düzeylerine baktığımızda ise IL-12 salgılandıktan sonra azalırken daha sonra yavaşta olsa tekrar eksprese olmaya başladığı gözlemlenmiştir. 
Sonuç olarak, MKH'lerin, IL-12 salınımı ile A549 kanser hücrelerini baskılamak için tek başına kullanıldığında yetersiz kaldığı, ancak IL-12 salınımı ile kanser hücrelerinin çoğalmasının baskılanmasına rağmen durdurulamadığı düşünülmüştür.

Abstract:
Nowadays, stem cell therapies are one of the therapeutic methods used in many areas of medicine. Although different treatment methods have been developed, there is no cure for cancer. Lung cancer is the most common type of cancer. Many experimental studies have reported the therapeutic and protective properties of mesenchymal stem cells (MSCs), while in cancer models it has been shown to suppress and stop the proliferation of cancer cells. However, in some studies, it has been shown that stem cells stimulate the formation of cancer, increase the mass, cause new vessel formation and invasion of cancer. Communication between MSCs and cancer cells is provided by the help of cytokines secreted from the cells. The therapeutic properties of MSCs are mediated by these cytokines. 
The aim of this study was to keep MSCs and A549 lung cancer cells in vitro in the same medium, to ensure that MSCs secrete interloukin (IL)-12 from cytokines that suppress the growth of cancer cells. To investigate the effects of IL-12 on genes in apoptotic and autophagic pathways in A549 cancer cells, as well as their effects on cell cycle and proliferation genes, to see the effect of MSCs on cancer cells.
This study was carried out by forming 3 different groups at cell culture level and in 6 different time zones. IL-12p70 and IL-12p40 levels from cytokines released from cells were determined by ELISA from the collected media. In addition, IL-12 subunits and receptors, apoptosis and autophagy, cell cycle markers and proliferation markers were investigated by real time polymerase chain reaction (rt-PZR).
As a result of our ELISA test and gz-PCR, resistance to apoptosis may have started to develop in the first hours when IL-12 is secreted, and this apoptotic resistance may be regressed with IL-12 effect in the later hours and the cell cycle time may be decreased after IL-12 release. phase is thought to extend. When the proliferation markers of mRNA expression with real time PCR were examined, it was observed that IL-12 decreased after secretion and then started to be expressed again slowly.
In conclusion, MSCs were found to be insufficient when used alone to suppress A549 cancer cells by IL-12 release, but could not be stopped despite the suppression of proliferation of cancer cells by IL-12 release.