Transplantasyon sonrası hastaların kan, saç ve bukkal sürüntü örneklerinin DNA profilleri
DNA profiling in blood, buccal swabs and hair follicles of patients transplantation
Yazar: VOLKAN ZEYBEK
Danışman: PROF. DR. YÜCEL ARISOY
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Adli Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Adli Tıp = Forensic Medicine
Dizin: Adli tıp = Forensic medicine ; DNA = DNA ; Kan = Blood ; Kimerizm = Chimerism ; Kimlik tespiti = Identity establishing ; Saçlar = Hair ; Transplantasyon = Transplantation

Özet:
Giriş ve Amaç: Adli olgularda kimliklendirme ve babalık/akrabalık incelemelerinde periferik kanın DNA profilleri sık kullanılmaktadır. Çalışmalarda, allo PBSCT ve karaciğer nakli yapılan hastalarda, kan ve bazı dokularda kimerizm geliştiği ve nakil sonrası engrafman ve bazı komplikasyonların tanısında, gelişen kimerizmin analizlerinin önemli olduğu saptanmıştır. Günümüzde transplantasyon geçirmiş hastaların sayısının giderek artması nedeniyle Adli olgularda transplantasyon öyküsünün sorgulanması önem kazanmış ve bu tür olgularda daha doğru sonuç alabilmek için periferik kan yerine bukkal sürüntü örnekleri veya saç foliküllerinin çalışılması gündeme gelmiştir. Çalışmamızda, kök hücre ve organ transplant hastalarında kimerizm analizleri ile kan, saç folikülleri ve bukkal sürüntü örneklerinin adli kimliklendirmede kullanılabilirliliğinin araştırılması amaçlanmıştır.Gereç- Yöntem: DEÜTF Hematoloji Bilim Dalı tarafından allo- PBSCT yapılmış beş hastanın, DEÜTF Genel Cerrahi Anabilim Dalı tarafından karaciğer transplantasyonu yapılmış 35 hastanın kan, saç folikülü ve bukkal sürüntü örnekleri kör olarak incelendi. Örneklerin DNA'ları izole edildikten sonra, belirli kısa ardışık tekrar dizileri, PCR analizi ile çoğaltılıp kapiler elektroforezde genotip tayini yapıldı.Bulgular: DNA profilleri karşılaştırıldığında; allo- PBSCT yapılan hastaların dördünde kan örneklerinin, saç ve bukkal sürüntü örneklerinden tamamen farklı olduğu, miks kimerizm bulunmadığı belirlendi. Bu üç örneği birbirinin aynı olan tek olguda da engrafman başarısızlığı olduğu ve nakil tekrarı planlandığı öğrenildi. Karaciğer transplantasyonu yapılanlarda DNA profilleri karşılaştırıldığında bir fark gözlenmedi. Karaciğer nakli yapılmış hastaların hiç birinde GVHD gelişmemiş, iki tanesinde akut rejeksiyon gelişmişti.Tartışma ve Sonuç: Başarılı allo- PBSCT yapılmış kişilerin periferik kan DNA profillerinin donör kimerizmi gösterdiği, bukkal sürüntü örneklerinin DNA profilleri, nakil sonrası geçen süre ile değişkenlik gösterdiği ancak saç örneklerinin DNA profillerinin tamamen alıcıya ait olduğu gösterilmiştir. Karaciğer transplantasyonu yapılmış 35 hastanın, her üç örneğinin DNA profilleri arasında bir fark yoktu. Bu durum olguların hiçbirinde GVHD gelişmemesine bağlandı.

Abstract:
Introduction and Object: Peripheral blood DNA profiles are often used in forensic identification and paternity/ kinship investigations. Studies were showed that, patients undergoing allo PBSCT, and liver transplantation, chimerism developed in blood and some tissues and this chimerism was important to show posttransplant engrafment and to diagnose some of complications. Nowadays, due to the increasing number of patients who had undergone transplantation, questioning the story of transplantation has gained importance in forensic cases and buccal swab or hair follicles samples was raised rather than peripheral blood samples to get more accurate results in such cases. In this study, it is aimed to investigate availability of chimerism analysis of blood, hair follicles and buccal swab samples in forensic identification of stem cell and organ transplant patients.Materials and Methods: Blood, hair follicle and buccal swab samples of five patients who were made alloPBSCT by Department of Hematology DEU and 35 patients who were made liver transplantation by Department of General Surgery DEU were analyzed as blind. After the isolation of samples DNA, specific short tandem repeats sequences were amplificated with PCR and then genotype was determined with capillary electrophoresis.Results: DNA profiles were compared with patients who underwent allo-PBSCT in four blood samples, hair and buccal swab samples were completely different, there was no mixed chimerism. It was learned that one patient whose three examples were same had failure of engraftment and transmission repetition scheduled.Discussion and Conclusion: It is showed that after succesful allo PBSCT, DNA profiles of peripheral blood samples show donor chimerism, DNA profiles of buccal swab samples varies with time after transplantation, and DNA profiles of hair samples are fully recepient?s. There was no difference between each of the three samples DNA profiles of 35 liver transplant patients. This situation is connected to the absence of development of GVHD.