Deneysel bir nekrotizan enterokolit modelinde Apocynin'nin terapötik ve koruyucu etkisi /
Yazar: GÖKER DİNÇ
Danışman: PROF. DR. CÜNEYT TAYMAN
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Ankara Bilkent Şehir Hastanesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases

Özet:
Giriş/Amaç: Apocynin (4-hidroksi-3-metoksiasetofenon), tıbbi bitki Picrorhizakurroa'nın kökünden ekstrakte edilen fitokimyasaldır. Apocynin, nikotinamid adenin dinükleotid fosfat (NADPH)-oksidazın iyi bilinen inhibitörüdür ve etki mekanizmasının, fonksiyonel NADPH-oksidaz kompleksinin toplanmasını engellemesi olduğu bilinmektedir. Yaptığımız deneysel çalışmada nekrotizan enterokolit modeli oluşturulan yenidoğan sıçanlarda po/og(400mg/kg) Apocynin uygulamasının intestinal hasara klinik, histopatolojik, biyokimyasal etkilerinin araştırılması amaçlandı.

Gereç/Yöntem: Çalışmamıza 48 adet wistar albino yenidoğan sıçanı dahil edildi.3 grup oluşturuldu. Bu gruplar Kontrol grubu (n:16), NEK+Apo grubu(n:16), NEK+salin grubu(n:16).Sıçanlar 4. Gün sakrifiye edildi. Hepsinde tartı takibi, klinik hastalık skorlaması, bağırsak dokusunun makroskopik değerlendirilmesi ve bağırsak doku örneklerinde oksidatif stres parametreleri [total oksidan status (TOS), TOS/TAS oranı olarak oksidatif stres indeksi (OSI),NADPH oksidas konsantrasyonu (NOX), gelişmiş oksidasyon protein ürünleri (AOPP),Lipit hidroperoksit, DNA üzerinde oksidatif bağımlı hasarın bir belirteci olan 8-Hidroksideoksiguanozin (8- OhdG)], enflamasyon belirtecleri (NLRP-3,IL-6,IL-18,kaspaz-1 ve kaspaz-3), antioksidan parametreleri [total antioksidan status(TAS),glutatyon seviyeleri (GSH) , superoksit dismutaz (SOD), hücresel redoks hemostazında görev alan (NRF-2) ] düzeyleri kaydedildi.

Bulgular: Çalışma sonunda NEK grubunda 6, NEK+Apo grubunda 3 yavru öldü. NEK+Apo grubundaki sıçan yavruların ortalama vücut ağırlıkları NEK grubundaki yavrulara göre anlamlı derecede yüksek bulundu (p= 0.001) .Klinik hastalık skoru 1. günde tüm gruplarda benzerken çalışmanın sonunda(4.gün) anlamlı derecede farklıydı. Çalışma sonunda NEK+Apo grubundaki yavruların klinik hastalık skorlarının tek başına NEK olanlardan daha iyi olduğu gösterildi (p = 0.001). Ortalama makroskopik bağırsak değerlendirme skoru açısından NEK+ Apo grubunda NEK grubuna göre daha az skorda NEK bulguları bulundu (p =0.012). NEK+Apo grubunda NEK grubuna göre daha az bağırsak hasarı saptanırken (p = 0.002) Kontrol grubunda histolojik değişiklik saptanmadı. Doku oksidatif stres parametreleri olan TOS,OSI,NOX,AOPP, Lipit hidroperoksit,8-OhDG düzeylerini NEK grubuna göre belirgin bir şekilde azalmış olup(p=0.001) antioksidan parametreler TAS , GSH, SOD , NRF-2 anlamlı düzeyde artmıştır (p=0.001). NEK'te ortaya çıkan hasar sonucu meydana gelen inflamasyonun ve hasar görmüş hücreleri ortadan kaldıran apopitoz mekanizmasının belirteçleri olan NLRP-3, IL-6, IL-18, kaspaz-1 ve  kaspaz-3 düzeyleri NEK+Apo grubunda NEK grubuna kıyasla belirgin azalmıştır (p=0.001).

Sonuç: NEK modeli oluşturulan yenidoğan sıçanlarda po yoldan apocynin uygulamasının klinik durum, vücut ağırlığı, makroskopik bağırsak görünümü, histopatolojik değerlendirmenin apocynin uygulanmamış olan NEK grubuna göre etkili olduğu bulundu. Dokuda oksidatif stres parametrelerden olan TOS, OSI, NOX, AOPP, Lipit hidroperoksit,8-OhDG azalmıştır. Antioksidan parametrelerden olan TAS, GSH, SOD, NRF-2 artmıştır. Enflamasyonun ve hasar görmüş hücreleri ortadan kaldıran apopitoz mekanizmasının belirteçleri olan NLRP-3, IL-6, IL-18, kaspaz -1 ve kaspaz -3 düzeyleri NEK Apo grubunda NEK grubuna kıyasla belirgin azalmıştır. Bunlar bize apocyninin NEK şiddetini azalttığını göstermektedir.

Abstract:
Introduction/Aim: Apocynin (4-hydroxy-3-methoxyacetophenone) is a phytochemical extracted from the root of the medicinal plant Picrorhizakurroa. Apocynin is a well-known inhibitor of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-oxidase. The mechanism of action is known to inhibit the assembly of the functional NADPH-oxidase complex. In our experimental study, the clinical, histopathological and biochemical effects of po/og(400mg/kg) Apocynin administration on intestinal damage in newborn rats with necrotizing enterocolitis model.

Material/Method: 48 wistar albino neonatal rats were included in our study.3 groups were created. These groups are Control group (n:16), NEK+Apocynin group (n:16),NEK+saline group (n:16). The rats were sacrificed on the 4th day. All of them are weight monitoring, clinical disease scoring, macroscopic evaluation of intestinal tissue, oxidative stress parameters in intestinal tissue samples [total oxidant status (TOS), oxidative stress index (OSI) as TOS/TAS ratio, nadph oxidase concentration (NOX), enhanced oxidation protein products (AOPP), lipid hydroperoxide, 8-Hydroxydeoxyguanosine (8-OhdG), which is a marker of oxidative-dependent damage on DNA], inflammation markers (NLRP-3, IL-6, IL-18, caspas -1, caspas -3), antioxidant parameters [total antioxidant status (TAS), glutathione levels (GSH), superoxide dismutase (SOD), cellular redox hemostasis (NRF-2)] levels were recorded.

Results: At the end of the study, 6 rats in the NEC group and 3 rats in the NEC+Apo group died. The mean body weights of the rat pups in the NEC+Apo group were higher than the NEC group (p= 0.001). The clinical disease score was similar in all groups on day 1, it was significantly different at the end of the study (day 4). At the end of the study, it was shown that the clinical disease scores in the NEC+Apo group were better than NEC alone (p = 0.001). We found less severe nec findings in the nec + apo group than in the NEC group with mean macroscopic bowel assessment score p =0.012). we detected less intestinal damage nec+ apo group than nec group(p = 0.002). Tissue oxidative stress parameters TOS, OSI, NOX, AOPP, Lipid hydroperoxide, 8-OhDG levels were significantly decreased compared to the nec group (p=0.001). antioxidant parameters TAS, GSH, SOD, NRF-2 increased (p=0.001).NLRP-3, IL-6, IL-18, caspas -1 and caspas -3 levels, which are markers of inflammation and apoptosis in the nec, were decreased in the nec+apo group compared to the nec group(p=0.001).
Conclusion: It was found that oral administration of apocynin in neonatal rats in which a nec model was created was more effective than the nec group in which apocynin was not administered in clinical status, body weight, macroscopic intestinal appearance, histopathological evaluation. TOS, OSI, NOX, AOPP, Lipid hydroperoxide, 8-OhDG,  which are oxidative stress parameters in tissue, decreased. TAS, GSH, SOD, NRF-2, which are antioxidant parameters, increased.NLRP-3, IL-6, IL-18, caspas -1 and caspas -3 levels, which are markers of inflammation and apoptosis in the nec, were decreased in the nec+apo group compared to the nec group. These show us that apocynin reduces the severity of Nec.