Diyabet modeli oluşturulan INS-1E pankreas beta hücrelerinde neoeriositrinin koruyucu etkisinin araştırılması
Investigation of protective effect of neoeriocitrin in INS-1E pancreatic beta cells in diabetic model
Yazar: EYMEN ECE ALDEMİR
Danışman: PROF. DR. GÜLDENİZ SELMANOĞLU
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Diyabet günümüzde çok yaygın görülen ve görülme sıklığı giderek artan metabolik bir  hastalıktır. Diyabette ilaç kullanımının yanı sıra alternatif olarak bitkisel kökenli antidiyabetik özellik taşıyan ürünler de kullanılmaktadır. Flavonoidlerin çeşitli türlerinin antiinflamatuvar, antioksidan, antidiyabetik gibi fitoterapötik etkileri bilinmektedir. Pankreas beta hücre hasarı tip-2 diyabet hastalığında önemli bir etkendir. Tip-2 diyabette oluşan hasarın sebebi tam olarak bilinmemekle birlikte en büyük sebebin oksidatif stres olduğu bildirilmektedir. Flavonoidlerin antioksidan etkileri bilinmekle birlikte neoeriositrin flavonoidi hakkında fazla bilgi bulunmamaktadır. Neoeriositrin, birçok Citrus türünü içeren bazı bitkilerin meyve özütlerinde ve meyve sularında bulunan bir flavonoiddir. Tez çalışmasında streptozotosin (STZ) uygulamasıyla diyabet modeli oluşturulan INS-1E pankreas ß hücre hattında neoeriositrinin (0,25 µM, 0,5 µM ve 1 µM konsantrasyonlarda) antioksidan ve antidiyabetik etkisi araştırılmıştır. Çalışmada kristal viyole, tripan mavisi ve akridin oranj/propidyum iyodit hücre canlılık testleri ve oksidatif stres değerlendirmesi için ROS (reaktif oksijen türleri) ve malondialdehit (MDA) ölçümleri yapılmıştır. Ayrıca, glukoz miktarına bağlı olarak INS-1E hücrelerinin insülin cevabına neoeriositrinin 
etkisi de belirlenmiştir. Pozitif kontrol olarak antidiyabetik ve antioksidan etkisi bilinen N-asetil L-sistein (NAC) kullanılmıştır. Sonuç olarak neoeriositrinin konsantrasyona bağlı olarak hücre canlılığını arttırdığı tespit edilmiştir. Diğer yandan neoeriositrinin konsantrasyonuna bağlı olarak MDA ve ROS miktarlarını azalttığı tespit edilmiştir. Glukoz uyarımlı insülin testi sonuçlarımız, neoeriositrinin glukoz miktarına bağlı olarak INS-1E hücrelerinin insülin cevabında bir artışa neden olduğunu göstermiştir, ancak bu artış istatistiksel olarak anlamlı bulunmamıştır. Sonuç olarak, çalışmadan elde edilen bulgularımız neoeriositrinin pankreas beta hücrelerindeki oksidatif hasara karşı koruyucu olabileceği ve diyabet için yeni bir aday ajan olabileceğini düşündürmektedir. 

Anahtar Kelimeler: Diyabet modelleme, flavonoid, koruyucu etki, neoeriositrin, oksidatif stres, INS-1E pankreatik beta hücre hattı

Abstract:
Diabetes is a very common metabolic disease and its incidence has been increasing. In addition to use of drugs in diabetes treatment, plant-based antidiabetic products are also used as alternative. Phytotherapeutic effects of various types of flavonoids such as anti￾inflammatory, antioxidant, antidiabetic, etc. are known. Pancreatic beta cell damage is an important factor in that leads to type 2 diabetes. In type-2 diabetes, the cause of the 
damage is not known exactly, it is asserted that it is mainly because of oxidative stress. Although antioxidant effects of flavonoids are well known, there is not much information enough about neoeriocitrin flavonoid. Neoeriocitrin is a flavonoid, which found in fruit extracts and fruit juices of some plants containing many Citrus species. In this study, antioxidant and antidiabetic effects of neoeriocitrin (0,25 µM, 0,5 µM ve 1 µM concentrations) were examined in INS-1E pancreas ß cell line by exposing to streptozotocin (STZ) in diabetic model. In this study, cell viability were examined by crystal violet, trypan blue and acridine orange/propidium iodide analyses; while oxidative stress were analysed by reactive oxygen species (ROS) and malondialdehyde 
(MDA) measurements. Also, the effect of neoeriocitrin to insulin response of INS-1E cells according to glucose level in media has been determined. N-acetyl L-cysteine (NAC), known as antidiabetic and antioxidant, has been used as a positive control. Cell viability analyses showed that neoeriocitrin increased the cell viability in a 
concentration-dependent manner. On the other hand, according to results of oxidative stress test, neoeriocitrin decreased the ROS and MDA levels depending on the concentration. Our insulin test results showed that neoeriocitrin caused increase in insülin response of the INS-1E cells according to the glucose amount. As a conclusion, our findings suggest that neoeriocitrin could protect oxidative damage in pancreatic beta cells and might be as a novel agent for diabetes. 

Keywords: Diabetic model, flavonoid, protective effect, neoeriocitrin, oxidative stress, INS-1E pancreatic beta cell line