3t3-l1 preadipositlerinin diferansiyasyon, proliferasyon, viabilite ve migrasyonu üzerinde apigenin'in etkisi: WNT yolağının olası katkısı
Effect of apigein on differentiation, proliferation, viability and migration of 3t3-l1 preadiposocytes: Possible contribution of the wnt pathle
Yazar: TUĞÇE COŞKUNCA
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ AHMET SENCER YURTSEVER
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Obezitenin oluşumunda adiposit hipertrofisi ve preadipositlerin adipositlere diferansiye olması rol almaktadır. Maydanoz, kereviz, turunçgiller gibi meyve, sebze ve bitkilerde bulunan apigeninin, adiposit diferansiyasyonunu baskılayarak obeziteyi önleyebileceği bildirilmiştir. Ancak altında yatan mekanizmalar tam olarak aydınlatılamamıştır. Ayrıca, apigeninin preadipositlerin proliferasyonu ve migrasyonu üzerinde etkisini gösteren çalışma bulunmamaktadır. Çalışmamızda apigeninin 3T3-L1 preadipositlerinde hücre proliferasyonu, diferansiyasyonu ve migrasyonu üzerine etkilerini incelemeyi ve oluşacak etkiye Wnt sinyal yolağının aracılık edip etmediğini araştırmayı amaçladık. Wnt inhibitörü olarak niklozamid kullanıldı. Hücre viabilite ve proliferasyonu MTT analizi ile, diferansiyasyon Oil Red O boyama ile değerlendirildi. Apigenin (2,5, 5 ve 10 μM) ve niklozamidin (0,25 μM) hücre canlılığı üzerinde anlamlı bir etkisi olmadı. Proliferasyon, diferansiyasyon ve migrasyon deneylerinde belirli zaman aralıklarında (diferansiyasyon deneylerinde diferansiyasyon protokolünün 0-4, 4-8 ve 0-8'nci; proliferasyon deneylerinde ise 0-2, 2-4 ve 0-4'ncü günleri boyunca; viabilite ve migrasyon deneylerinde 24, 48 ve 72 saat boyunca) niklozamid varlığında veya yokluğunda apigenin uygulandı. Apigenin 10 μM konsantrasyonda diferansiyasyonun tüm zaman noktalarında diferansiyasyonu anlamlı olarak baskıladı. Niklozamid ön uygulaması bu etkiyi ortadan kaldırdı. Proliferasyon sürecinin 0-2. ve 0-4'ncü günlerinde 10 μM apigenin uygulanması hücre proliferasyonunu anlamlı olarak azalttı. Niklozamid ön uygulaması bu etkiyi ortadan kaldırdı. Migrasyon deney serilerinde 24 saat boyunca apigenin ve/veya niklozamid uygulandığında migrasyonda anlamlı bir fark gözlenmedi. Apigenin 48 saat boyunca uygulandığında 2,5 ve 5 μM konsantrasyonda migrasyonda anlamlı bir artış gözlendi, ancak 10 μM apigenin uygulanması anlamlı bir etki göstermedi. Niklozamid ön uygulaması apigeninin 2,5 ve 5 μM konsantrasyonda oluşturduğu hücre migrasyonunu artırıcı etkisini ortadan kaldırdı. Apigenin 72 saat boyunca uygulandığında yalnızca 5 μM konsantrasyonda migrasyonda anlamlı bir artışa neden oldu. Bu etki niklozamid tarafından ortadan kaldırıldı. Bu bulgulara göre, apigeninin, 3T3-L1 preadiposit hücrelerinin canlılığını etkilemeden diferansiyasyonu ve proliferasyonunu baskıladığı; hücre migrasyonunu arttırdığı ve bu etkilere Wnt sinyal yolağı aktivasyonunun aracılık ediyor olabileceği düşünüldü. Bununla birlikte, bu varsayımların doğrulanması için daha detaylı çalışmalar gerekmektedir.

Abstract:
Adipocyte hypertrophy and differentiation of preadipocytes to adipocytes play a role in the formation of obesity. It has been reported that apigenin, which is found in fruits, vegetables and plants such as parsley, celery, and citrus fruits, can prevent obesity by suppressing adipocyte differentiation. However, the underlying mechanisms have not been fully elucidated. In addition, there are no studies showing the effect of apigenin on the proliferation and migration of preadipocytes. In our study, we aimed to examine the effects of apigenin on cell proliferation, differentiation and migration in 3T3-L1 preadipocytes and to investigate whether the effect is mediated by the Wnt signaling pathway. Niclosamide was used as Wnt inhibitor. Cell viability and proliferation were evaluated by MTT analysis, differentiation by Oil Red O staining. Apigenin (2,5, 5, and 10 μM) and niclosamide (0,25 μM) had no significant effect on cell viability. At certain time intervals in proliferation, differentiation and migration experiments (0-4, 4-8 and 0-8 days of the differentiation protocol in differentiation experiments; during 0-2, 2-4 and 0-4 days in proliferation experiments; viability and migration apigenin was administered in the presence or absence of niclosamide (for 24, 48, and 72 hours). Apigenin at 10 μM concentration significantly suppressed differentiation at all time points of differentiation. Niclosamide pre-application eliminated this effect. 0-2 of the proliferation process. Administration of 10 μM apigenin on days 0-4 significantly reduced cell proliferation. Niclosamide pre-application eliminated this effect. In the series of migration experiments, no significant difference in migration was observed when apigenin and/or niclosamide was administered for 24 hours. A significant increase in migration was observed at 2.5 and 5 μM concentrations when apigenin was administered for 48 hours, but administration of 10 μM apigenin did not show a significant effect. Niclosamide pre-application abolished the cell migration-increasing effect of apigenin at 2,5 and 5 μM concentrations. Apigenin caused a significant increase in migration at a concentration of only 5 μM when administered for 72 hours. This effect was abolished by niclosamide. According to these findings, apigenin suppresses the differentiation and proliferation of 3T3-L1 preadipocyte cells without affecting the viability; It was thought that it increased cell migration and that these effects might be mediated by the activation of the Wnt signaling pathway. However, more detailed studies are required to confirm these assumptions.