Candida türleri üzerine bir borik asit analoğu olan z-leu-leu-leu-b(oh)2 (zl3b)'nin in-vitro etkinliğinin araştırılması
Investigation of in-vitro effects of an boric acid anolog z-leu-leu-leu-b(oh)2 (zl3b) on candida species
Yazar: EMEL UZUNOĞLU
Danışman: PROF. DR. TEOMAN MURAT ÖZSAN
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antifungal duyarlılık testleri = Antifungal sensitivity tests ; Borik oksit = Boric oxide ; Kandida = Candida ; Kandida = Candida ; Kandidiyaz = Candidiasis ; Kandidiyaz-vulvovajinal = Candidiasis vulvovaginal ; Mantarlar = Fungi ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Vulvovajinal kandidoz, tüm dünyada, özellikle doğurganlık çağındaki kadınları etkileyen bir problemdir. Günümüzde mevcut olan ilaç terapileri, yüksek güvenilirlik ve etkinliğe sahip olsalar da, meydana gelen komplike enfeksiyonlar ve ilaç direnç problemi, araştırmacıları; yeni oral ve lokal terapötik alternatiflere yönlendirmektedir. Bu çalışmada, bir borik asit türevi ve proteosom inhibitörü olan ZL3B'nin Candida türleri üzerine in vitro etki mekanizmasını araştırmayı amaçladık.Çalışmamızda; Haziran 2010 - Aralık 2010 tarihleri arasında, Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Kliniğinde VVK ön tanısı almış ve Cebeci Hastanesi Merkez Mikrobiyoloji laboratuvarında kültürü yapılmış vajinal sürüntü örneklerinden, standart yöntemlerle izole edilen, rast gele seçilmiş 23 hasta örneği ve 2 standart köken (C. albicans ATCC 90028, C. crusei ATCC 6258) olmak üzere toplam 25 Candida izolatı kullanılmıştır. Çalışmaya alınan, 23 kökenin 11'i (%45.4) C. albicans, 8'i (%36.3) C. glabrata, 4'ü (%18,1) diğer non- albicans Candida türleri olarak belirlenmiştir.Clinical and Laboratory Standarts Institute `un M27-A3 kriterlerine göre mikrodilüsyon yöntemi ile yapılan antifungal duyarlılık testleri sonucu, kökenlerden sadece bir tanesi flukonazol dirençli olarak tespit edilmiştir. ZL3B etken maddesi, Minimum İnhibitor Konsantrasyon (MİK50) değeri 25-50µg/ml konsantrasyon aralığında, Minimum Fungusidal Konsantrasyon (MFK) değeri ise 50-100 µg/ml konsantrasyon aralığında olmak üzere, Candida türleri üzerine fungusidal etki göstermiştir. Bu etkinin hangi yolla olduğunu göstermek amacıyla ZL3B'nin; germ tüp ve hifa oluşumuna, oksidatif metabolizmaya, biyofilm oluşumuna, apoptoz üzerine etkileri incelendi.Deneyler sonucunda; ZL3B'nin 100-50 µg/ml konsantrasyonlarda oksidatif metabolizmayı, germ tüp, gerçek ve yalancı hif oluşumunu engellediği, 200?g/ml konsantrasyonda apoptozun klasik bulgusu olan kromozom kırıklarına neden olduğu saptanmıştır.ZL3B `nin; 25, 50 ve 100 µg/ml konsantrasyonları standart maya suşları üzerinde biyofilm oluşumuna etkisi göstermemiştir. Ancak mikroorganizmaların, biyofilm inhibitor konsantrasyonları planktonik hücrelerini inhibe eden konsantrasyonlarından çok daha yüksek olduğundan, farklı konsantrasyonlar ile deneylerin tekrarlanması gerekmektedir.ZL3B'nin 20S proteosomu inhibe ederek apoptoza yol açtıgını düşünmekteyiz ancak borik asit ve türevlerinin maya hücreleri üzerindeki bu etki mekanizmasının tespiti için daha ileri çalışmalara ihtiyaç bulunmaktadır.Anahtar Sözcükler: Candida, borik asit, vulvovajinal kandidoz, antifungal duyarlılık testi, proteosom inhibitorleri

Abstract:
Vulvovaginal candidosis is a common worldwide female medical problem, occurring mostly in women of childbearing age. Although current vulvovaginal candidosis drug provides high efficacy and safety, the recent emergence of complicated infections and drug resistance has led to the development and research of new oral and local therapeutic options. In this study, we aimed to evaluate invitro activity of mechanism of ZL3B which is a boric acid analog and a proteasome inhibitor.Randomly selected 25 strains (23 patient and 2 standart C. albicans ATCC 90028, C. crusei ATCC 6258) were included in this study which is isolated by standart methods at Ankara University Medical Faculty Cebeci Central Microbiology Laboratory, from the patients entered Gynaecology and Obstetric Clinic of the same hospital with symptoms of VVC between June 2010- December 2010. Of the isolates 11 (45.4%) were C. albicans, 8 (36.3%) were C. glabrata and 4 (18,1%) non- albicans Candida.Antifungal susceptibility tests were performed according to the Clinical and Laboratory Standarts Institute criteria (M27- A3) with microdilution method and only 1 strain was confirmed as fluconazole resistant. ZL3B showed a fungucidal activity with 25-50µM minimum inhibitory concentration and 50-100 µM minimum fungicidal concentration. To investigate the activation mechanism of ZL3B we did several experiments about germ tube and hypha formation, oxidative methabolism, biofilm formation and apoptosis.Our results showed that ZL3B inhibits oxidative metabolism, germ tube and hypha formation at concentrations of 100-50 µg/ml and causes chromosome breaks which is the classical evidence of apoptosis with 200 µg/ml concentration.25, 50 ve 100 µg/ml concemtrations of ZL3B didn?t show any effect on biofilm formation. However according to literature biofilm inhibitor concentrations on microorganisms are much more higher than planktonic inhibitor concentrations because of this we think that biofilm experiments can be repeated with higher concentrations.We estimate that ZL3B causes apoptosis of Candida species by inhibiting proteasome pathway but further studies are necessary to determine boric acid and its derivates effect on apoptosis.Key words: Candida, boric acid, vulvovaginal candidosis, antifungal susceptibility tests, proteasome inhibitors