Normotermik intraperitonal uygulanan nanodoksorubisinin biyolojik sıvılarda analizi
Analysis of normothermic intraperitoneally applied nanodoxorubicin in biological fluids
Yazar: NEŞET NEŞETOĞLU
Danışman: PROF. DR. SERAP SAĞLIK ASLAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Antineoplastik birleşik kemoterapi protokolleri = Antineoplastic combined chemotherapy protocols ; Antineoplastik protokoller = Antineoplastic protocols ; Asit sıvısı = Ascitic fluid ; Doksorubisin = Doxorubicin ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Plazma = Plasma ; İlaç tedavisi = Drug therapy

Özet:
Normotermik intraperitonal nanodoksorubisin tedavisi uygulanan hastalarda ilacın kan ve periton sıvısı konsantrasyonunun tayini için yüksek performanslı sıvı kromatografisi tandem kütle spektrometrisi kullanılarak miktar tayini metodu geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Kromatografik ayırma Poroshell 120 EC-C18 kolon ile hareketli faz olarak % 0,1 formik asit içeren metanol ve % 0,1 formik asit içeren su (85:15, h/h) kullanılarak, izokratik olarak gerçekleştirilmiştir. Hareketli faz akış hızı 0,8 mL/dakikadır. Dedeksiyon, çoklu reaksiyon izleme modu kullanarak yapılmıştır. Doksorubisin ve iç standart olarak kullanılan repaglinide ait ana iyon ve parçalanma iyonları kütle/yük değerleri sırasyla 544,0; 397,0 ve 453,4; 162,3 olarak ölçülmüştür. Teşhis ve tayin sınırı sırasıyla 0,028 µg/mL ve 0,1 µg/mL olarak hesaplanmıştır. Kalibrasyon eğrisi 0,1 – 100,0 µg/mL konsantrasyonları arasında doğrusal bulunmuştur. Gün içi ve günler arası doğruluk ve kesinlik çalışmaları Avrupa İlaç Ajansı biyoanalitik metod validasyonu kılavuzu gerekliliklerini yerine getirmektedir. İç standarda normalize, düşük konsantrasyon matriks etkisi %1,04 ve iç standarda normalize, yüksek konsantrasyon matriks etkisi % 0,90 olarak bulunmuştur. Terapötik ilaç düzeyi izlemi analizlerine uygun bir LC-MS/MS yöntemi geliştirilmiştir. Valide edilen yöntem, normotermik nanodoksorubisin tedavisi gören hastaların periton sıvısı ve plazma örneklerine başarıyla uygulanmıştır. Hızlı, doğrusal, güvenilir, kesin ve tekrar edilebilir sonuçlar vermektedir. Doksorubisin ve nanodoksorubisin eş zamanlı olarak plazma ve periton sıvısı analizlerinde kullanılabilecektir. Bu tez çalışması, intraperitonal sıvı ve plazmada eş zamanlı olarak yapılacak analizlere öncülük edecektir.



Anahtar Kelimeler : Doksorubisin, Nanodoksorubisin, Periton Sıvısı, Plazma, LC-MS/MS

Abstract:
The quantitative determination of the blood and peritoneal fluid concentration of the drug in patients undergoing normothermic intraperitoneal nanodoxorubicin treatment was developed and validated with high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry. The chromatographic separation was achieved under isocratic conditions with Poroshell 120 EC-C18 column by using methanol containing 0.1% formic acid and water containing 0.1% formic acid (85:15, v/v) as mobile phase. The mobile phase flow rate was 0.8 mL/min. Detection was performed in multiple reaction monitoring mode. The precursor ion and fragmentation ions mass/charge values of doxorubicin and repaglinide used as internal standard were measured as 544.0, 397.0, 453.4 and 162.3 respectively. The limit of detection and the lower limit of quantification results were found as 0,028 µg/mL and ve 0,1 µg/mL respectively. The calibration curve was linear within the range of 0.1-100.0 µg/mL.  Intraday and interday accuracy and precision studies are in accordance with the requirements of bioanalytical method validation guideline of the European Medicines Agency. The matrix effect of low concentration normalized to the internal standard was 1.04%, and the matrix effect of high concentration normalized to the internal standard was 0.90%.
An convenient LC-MS/MS method for analyzes of therapeutic drug level monitoring was developed. The validated method was successfully applied to peritoneal fluid and plasma samples of patients treated with normothermic nanodoxorubicin.
Fast, linear, reliable, precise and repeatable results were achieved with this method. Doxorubicin and nanodoxorubicin can be analysed simultaneously in plasma and peritoneal fluid. This thesis will be pioneer to simultaneous analyzes in intraperitoneal fluid and plasma.

Keywords: Doxorubicin, Nano doxorubicin, Peritoneal Fluid, Plasma, LC-MS/MS