Siklofosfamid ile indüklenerek dna hasarı oluşturulmuş civciv embriyolarında ganoderma lucidum (curtis) p.karst (ölümsüzlük mantarı)'ın XPF gen ifadesinin üzerine etkisi
The effect of ganoderma lucidum (curtis) P.karst (reishi) on XPF gene expression in chicken embryos occured dna damage by inducing vi̇a cyclophosphami̇de
Yazar: İLKYAZ YILMAZ
Danışman: PROF. DR. EMİNE ARSLAN
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Civcivler = Chicks ; DNA = DNA ; DNA hasarı = DNA damage ; Embriyo = Embryo ; Ganoderma lucidum = Ganoderma lucidum ; Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Siklofosfamid = Cyclophosphamide

Özet:
"Ölümsüzlük Mantarı" olarak da bilinen Ganoderma lucidum özütlerinin terapötik yararlarından dolayı üzerinde klinik araştırmalar yapılmaktadır ve geniş bir kullanıma sahiptir. Alkilleyici ajanlardan biri olan siklofosfamid kovalent bağlarla DNA'ya bağlanıp DNA'yı zedeleyerek çift zincir kırığına neden olmaktadır. Tamir edilmeyen çift zincir kırıkları hücre ölümüne neden olabilmektedir, bu nedenle tamiri önemlidir. Xpf (Xeroderma Pigmentosum F) geni, tamir mekanizmaları arasında bilinen en genel ve etkili gendir. Bu çalışmada civciv embriyolarında G. lucidum'un sulu özütlerinin siklofosfamidin neden olduğu DNA hasarının tamirinde görev aldığı düşünülen Xpf geninin ifadesinin üzerine etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Çalışmamızda eşit ağırlıklarda, aynı ırk anaçlardan elde edilen, 12 grupta sınıflandılan, 76 adet döllü tavuk yumurtaları kullanılmıştır. Türkiye'deki wild grown G. lucidium'un 3 farklı dozdaki sulu özütü genotoksik etkisi bilinen siklofosfamid ile birlikte ve anti-genotoksik etkisi bilinen askorbik asit ile birlikte kuluçkanın 8. Gününde uygulanmıştır. Kuluçkanın 11. Günü civciv embriyolarından alınan karaciğer dokuları -80°'de RNA izole edilene kadar muhafaza edilmiştir. Elde edilen RNA'dan cDNA sentezlenip, Xpf geninin ifade düzeyi kantitatif olarak Real Time PCR ile belirlenmiştir. Kontrol grubu ve siklofosfamid grubu ile diğer gruplar arasındaki farkların belirlenmesi için t-testi ile analiz edilmiştir.
Siklofosfamid uygulanan grup kontrole göre (p<0,05) anlamlı bir fark göstermiştir. G. lucidum özütü ile birlikte siklofosfamid uygulanması sonucu, genin ifadesinde anlamlı bir fark göstermemiştir (p>0,05). Mantar özütlerinin ikinci dozu (875 µg/y) tek başına tamir geninin ifadesini arttıran siklofosfamidi baskılayarak Xpf geninin ifadesini tetiklememiştir. Bu durum mantar ektraktının siklofosfomide karşı DNA'yı koruduğunu göstermekte ve genin tamir için uyarılmadığını düşündürmektedir.

Abstract:
Due to the therapeutic benefits of Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst, also known as "reishi mushroom" and have a wide use, clinical investigations have been carried out on it. Cyclophosphamide (CP), one of the alkaline agents, binds to DNA via covalent bonds and damages DNA, causing double chain breakage. Unrepaired double chain fractures can cause cell death, so repair is important. The Xpf (Xeroderma Pigmentosum F) gene is the most common and effective known among repair mechanisms. In this study, it was aimed to determine the effect of the aqueous extract of G. lucidum on the expression of the Xpf gene, which is thought to be related to the repair of DNA damage caused by cyclophosphamide in chick embryos.
In this study, 76 fertilized hen's eggs, obtained from the same rootstock and classified in 12 groups were used. The aqueous extract of wild-grown G. lucidium from Turkey at three different doses was injected into eggs on day 8 of incubation together with CP as genotoxic agent. Also ascorbic acid (AsA) as anti-genotoxic agent was used. Liver tissues of chick embryos on day 11 of the incubation were stored at -80°C until RNA was isolated. cDNA was synthesized from the obtained RNA and expression level of Xpf gene was quantitatively determined by Real Time PCR. The data were analyzed by the t-test to determine the differences between the control group and CP group or the other groups. 
The CP group showed a significant difference (p<0.05) compared to the control group. The result of CP administration together with G. lucidum extract did not show a significant difference in gene expression (p>0.05). The mushroom extract (875 µg/y)  did not induce the expression of the Xpf gene by suppressing CP. This suggests that mushroom extract protects DNA against CP and the gene is not stimulated for repair.