Bazı tıbbi bitki ve mantar ekstrelerinin insan melanoma hücreleri üzerine etkileri
Effects of some medicinal plant and mushroom extracts on human melanoma cells
Yazar: FATMA AYDOĞMUŞ ÖZTÜRK
Danışman: PROF. DR. KERİMAN GÜNAYDIN ; PROF. DR. ŞULE ARI
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Melanom = Melanoma

Özet:
İstatistikler, malign melanomaya bağlı ölümlerin, ameliyattan immünoterapi, radyoterapi ve kemoterapi ile gerçekleştirilen pek çok antikanser stratejisine rağmen giderek artmaya devam ettiğini göstermektedir. Kanserle mücadelede, doğal ürünlerin kanser hücrelerine karşı etkilerinin incelendiği pek çok çalışma yapılmaktadır. Bu tez çalışması kapsamında bazı tıbbi bitki ve mantar ekstreleri ile visnagin'in melanoma hücrelerine karşı etkileri araştırılmıştır. İlk olarak 309 tıbbi bitki ve mantar ekstresi ile 10 saf maddenin, RNO renk açılımı metoduyla singlet oksijen üretme kapasiteleri araştırılmıştır. Daha sonra singlet oksijen ürettiği belirlenen 17 tıbbi bitki, 4 mantar ekstresi ve visangin'in HT 144 (insan malign melanoma hücre hattı) hücrelerine karşı sitotoksik aktiviteleri incelenmiştir. Sitotoksik aktivite testleri MTT analizi ile gerçekleştirilmiştir. Bütün örneklerin yüksek sitotoksik aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Ayrıca sitotoksisite deneylerinde görünür ışığın etkisi MTT analiziyle değerlendirilmiştir. 150 W halojen lamba altında görünür ışığı geçiren filtre (Pleksiglas) kullanılarak gerçekleştirilen analiz sonucunda 100 µg/mL konsantrasyonda en yüksek aktivite gözlenmiştir. Ancak birkaç ekstre dışında genel olarak ışık uygulamadan elde edilen sitotoksik aktivite sonuçlarının daha yüksek olduğu görülmüştür. DCFH-DA analizi ile örneklerin intraselüler ROT ürettikleri gözlenmiştir. Apoptoz deneyleri, flow sitometrede Annexin V/PI ikili boyama ile gerçekleştirilmiştir. ROT üretimi ile ekstreler ve saf maddenin hücrelerde apoptozu teşvik ettikleri belirlenmiştir. Ayrıca TNF-α üretiminin apoptoz üzerinde etkisi araştırılmıştır. Sideritis leptoclada, Salvia cedronella, Salvia chionantha, Salvia adenophylla, Serratula kurdica ve Serratula bornmuelleri ekstrelerin, TNF-α üretimi gerçekleştirdiği tespit edilmiştir. Ancak Serratula bornmuelleri ekstresi dışında, TNF-α üretimi ile apoptoz yüzdesi arasında bir korelasyon gözlenmemiştir. Bu nedenle çalışma kapsamında incelenen diğer bitki ve mantar ekstreleri ile visnagin'in TNF- α üretimi ile apoptozu indüklemediği ve apoptozun başka bir yolla uyarılmış olabileceği kanısına varılmıştır.

Abstract:
The statistics show that the deaths due to malign melanoma have been increasing everyday although there have been different cancer treatments including surgery, immunotherapy, radiotherapy and chemotherapy. To find a cure in fighting cancer, many studies including searching of natural products against cancer cell lines have been performed. Searching of effective drugs is even necessary for continuous life. In the frame of this thesis study, the effect of some medicinal plants and mushrooms along with visnagin, a pure compound, were investigated against melanoma cell lines. First of all, the singlet oxygen production capacity using RNO bleaching method of 309 extracts including plants and mushrooms as well as 10 pure compounds were tested. Then the selected 17 medicinal plant extracts, 4 mushroom extracts as well as visnagin producing singlet oxygen were considered for the cytotoxic activity against HT144 (human malign melanoma cell lines). The cytotoxic activity test was employed using MTT assay.  All selected 21 extract and visnagin exhibited cytotoxic activity. In addition, the effect of visible light on the cytotoxic activity was also searched. For this purpose, 150 W halogen lamp and a visible light permeable filter (Plexiglas) were used to be carried out the experiment. The higher activity was detected in 100 µg/mL concentrations. When standard and illuminated cytotoxic activity results compared, in general activity results were observed higher in the standard MTT assay, except for a few extracts. It is observed that the samples produced intracellular ROS which was evaluated using DCFH-DA analyses. Apoptosis assays were performed by Annexin V / PI dual staining on a flow cytometer. The apoptosis induced in the cell lines with the production of ROS. Moreover, the effect of TNF-α production was searched on the apoptosis. Sideritis leptoclada, Salvia cedronella, Salvia chionantha, Salvia adenophylla, Serratula kurdica, Serratula bornmuelleri secreted TNF-α. However, there was no correlation between TNF-α secretion and apoptosis percentage, expect for the Serratula bornmuelleri extract. For this reason, it was concluded that visnagin and studied plant and mushroom extracts may not induce apoptosis by TNF- α secretion; accordingly, apoptosis may have been by another pathway.