MCF-7 meme kanseri/CD8+ hücre hattı ko-kültür modelinde PD-L1 hedefli miR-34a'nın immün kontrol noktası modülasyon etkisinin araştırılması
Investigation of immune checkpoint modulation effect of PD-L1 targeted miR-34a in breast cancer/CD8+ cell line co-culture model
Yazar: NURAY BAYDAR
Danışman: PROF. DR. YASİN TÜLÜCE
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Genetik = Genetics ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; Antikanser = Anticancer ; Meme kanseri =   ; Sitotoksisite testleri-immünolojik = Cytotoxicity tests-immunologic ; Sitotoksisite-immünolojik = Cytotoxicity-immunologic

Özet:
Kanser, bağışıklık sistemi tarafından tanınmaya ve hatta bağışıklık tepkisine yol açabilecek tümör antijenlerinin üretimine katkıda bulunan çeşitli genetik ve epigenetik değişiklikleri içeren karmaşık bir hastalıktır. Meme kanseri, akciğer kanserinden sonra dünyada en sık görülen ikinci kanser türüdür. Kanser hücrelerinin bağışıklık sistemi tarafından tanınabildiği ve yok edilebildiği kanser immünoterapisi günümüzde popüler bir tedavi yöntemidir. Bu çalışmada, MCF-7 meme kanseri hücrelerinde ve sağlıklı HME1 meme hücrelerinde miR-34a transfeksiyonu ile PD-L1 genini susturarak çözünmüş veya membrana bağlı PD-L1 miktarını azaltmayı ve T hücrelerinin kanser hücrelerini tanıyıp yok etmesini sağlamayı amaçladık. Bu doğrultuda, farklı miR-34a dozları in vitro koşullar altında meme kanseri hücre hatlarına transfekte edilmiş ve MTT sitotoksisite deneyi ile IC50 sonuçları elde edilmiştir. IC50 sonucuna göre, sitotoksik etkiye sahip miR-34a dozu MCF-7 meme kanseri hücre hattında 0.77 nM ve HME1sağlıklı meme hücre hattında 8.08 nM olarak belirlenmiştir. PD-L1 Elisa deneyi, meme kanseri hücrelerinin yüzeyindeki membrana bağlı veya çözünmüş PD-L1 seviyesini incelemek için kullanılmıştır. Sonuçlar, 10 nM miR-34a'nın PD-L1 seviyelerini önemli ölçüde azalttığını göstermiştir. Bu çalışmada, miR-34a'nın meme kanserinde PD-L1'e bağlandığı ve bu bölgeyi susturarak PD-L1 ekspresyonunu azalttığı, T hücreleri tarafından tanınmaya izin verdiği ve meme kanseri hücre hatlarında sitotoksik bir etki meydana getirdiği bulunmuştur. Birlikte ele alındığında, kanıtlar miR-34a'nın kanser tedavisinde yararlı olan immünoterapötik bir ilaç olma potansiyeline sahip olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Cancer is a complex disease that involves a variety of genetic and epigenetic changes that contribute to the production of tumor antigens that are recognized by the immune system and can even lead to an immune response. Breast cancer is the second most common cancer in the world after lung cancer. Cancer immunotherapy, in which cancer cells can be recognized and destroyed by the immune system, is now a popular treatment method. In this study, we sought to reduce the amount of solubilized or membrane-bound PD-L1 by silencing the PD-L1 gene in MCF-7 breast cancer cells and healthy HME1 breast cells by miR-34a transfection, and to enable T cells to recognize and destroy cancer cells. In this direction, breast cancer cell lines were transfected with different doses of miR-34a under in vitro conditions and the IC50 results were determined by MTT cytotoxicity assay. According to the IC50 result, the dose of miR-34a with cytotoxic effect was determined as 0.77 nM in MCF-7 breast cancer cell line and 8.08 nM in HME1healthy breast cell line. The PD-L1 Elisa assay was used to investigate the level of membrane-bound or solubilized PD-L1 on the surface of breast cancer cells. The results showed that 10 nM miR-34a significantly reduced PD-L1 levels. In this study, it was found that miR-34a binds to PD-L1 in breast cancer and reduces PD-L1 expression by silencing this region, allowing recognition by T cells and inducing a cytotoxic effect in breast cancer cell lines. Taken together, the evidence suggests that miR-34a has the potential to be an immunotherapeutic drug that is useful in the treatment of cancer.