Yem katkısı olarak kullanılan enzimleri üreten yeni bakteri suşlarının izolasyonu, mutasyonu ve enzim üretimindeki etkinliklerinin saptanması
Isolation, mutation and enzyme production potential of novel bacteria producing enzyme used as feed additives
Yazar: FAKHRADDİN KHODAYARI
Danışman: PROF. DR. ZEYNEL CEBECİ ; YRD. DOÇ. DR. BAHRİ DEVRİM ÖZCAN
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Bu çalışma ile alkalifilik, halofilik ve termofilik Bacillus sp suşları V-41 (amilaz+), KH-13 (amilaz+, ksilanaz+) ve CU-48 (amilaz+, CMCaz+) izole edilmiş ve kısmi karakterizasyonları yapılmıştır. İzolatların türlerinin tanımlanması 16S rRNA dizi analizi ile yapılmıştır. Her üç izolat da Ethidium Bromid (EtBr) ile mutasyona uğratılmış ve üçünden de dörder adet mutant varyete elde edilmiştir. V-41 suşundan elde edilen   V41-M4 mutant varyetesinde -amilaz aktivitesinin orijinal suşa göre %90.9 oranında daha yüksek olduğu görülmüştür. KH-13 izolatından elde edilen KH13-M3 mutant varyetesinin %15.74 oranında daha yüksek -amilaz, KH13-M4 mutant varyetesinin ise %35.08 oranında daha yüksek ksilanaz aktivitesi olduğu görülmüştür. CU-48 izolatından elde edilen CU48-M2 mutant varyetesi ise orjinal bakteriye göre %101.32 oranında daha fazla ?-amilaz aktivitesi göstermiştir. Zimogram analizleri ile enzimlerin moleküler ağırlıkları; V-41 -amilaz için 70 kDa, KH-13 -amilaz ve ksilanazı için 66 ve CU-48 -amilaz için 45 kDa olarak belirlenmiştir. Enzimlerin spesifik aktiviteleri araştırılmış ve V41-M4 -amilazı için 1.27 µmol mg-1 dk-1, KH-13 ?-amilaz ve ksilanazı için sırasıyla 5.35 ve 2.58 µmol mg-1 dk-1, ve son olarak CU-48 -amilaz ve CMCazı için sırasıyla 4.4 ve 1.30 µmol mg-1 dk-1 olarak belirlenmiştir. Son olarak enzimlerin kısmi karakterizasyonları da yapılmış ve zamana göre enzim aktiviteleri de belirlenmiştir.

Abstract:
In this study alkalifilik, halophilic and thermophilic strains of Bacillus sp V-41 (amylase+), KH-13 (amylase +, xylanase+) and CU-48 (amylase +, CMCaz+) were isolated and partial characterized. Identification strains conducted with 16S rRNA analyzes. These three strains (Bacillus sp. V-41, Bacillus sp. KH-13 and Bacillus sp. CU-48) were mutagenized by using Ethidium Bromide (EtBr) and four mutant variants obtained from each bacteria. -amylase activity of V41-M4 mutant variant was higher than the rate of % 90.9 compared to the original strain V-41. Mutant variants of KH13-M3 and KH13-M4 had more -amylase and ksilanase activity than original strain KH-13 by 15.74 % and 35.08% respectivily. Also -Amylase activity of CU48-M42 mutant variant was higher than the rate of %101.32 compared to the original strain CU-48. By using Zimogram analyses, molecular weight of enzymes were determined as for -amylase of V-41 strain it was 70 kDa, as for -amylase and xylanase of KH-13 strain it was 66, and as for -amylase of CU-48 strain it was 45 kDa. The specific activities of enzymes were investigated and it was determined that it was  1.27 µmol mg-1 dk-1 for V-41 strain, 5.35 and 2.58 µmol mg-1 dk-1 for -amylase and xylanase of KH-13  respectivily, and lastly  for -amylase and CMCase of CU-48 are 4.4 and 1.30  µmol mg-1 dk-1. Finally, the characteristics of enzymes and their activities acording to the time period was determined.