KDELR1 ve COPE genlerinin multipl miyelom patogenezindeki rolü
The role of KDELR1 and COPE genes in multiple myeloma pathogenesis
Yazar: ŞEYMA PUNAR
Danışman: PROF. DR. NESLİHAN ABACI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Multipl miyelom = Multiple myeloma ; Neoplazmlar = Neoplasms ; RNA = RNA

Özet:
Multipl miyelom, terminal olarak farklılaşmış plazma hücrelerinin malignitesidir. Hematolojik maligniteler arasında ikinci sırada yer almaktadır. Kemik iliğinde kontrolsüz monoklonal plazma hücrelerinin çoğalması, hücrelerde fonksiyonel olmayan immünoglobulinlerin veya immünoglobulin zincirlerinin aşırı üretilerek birikmesi ile karakterizedir. Önceki çalışmalarımızda KDELR1 ve COPE genlerinin anlatımının hastalarda arttığını gösterdik. Bu genler endoplazmik retikulm ve golgi arasında proteinlerin taşınmasında rol alan genlerdir. KDELR1 bir reseptördür ve ilgili diziye sahip proteinlerin bağlanmasını sağlar. Proteinlerin COPI aracılı retrograd taşınması için COPI veziküllerine paketlenmesinde rol oynar. COPE geni COPI yapısına katılan epsilon alt birimidir. Çalışmamızda, KDELR1'in multipl miyelomdaki etkisini anlamak için U266 ve RPMI8226 hücrelerindeki gen ifadesi siRNA aracılığı baskılandı. Kontrol grubu ve KDELR1 siRNA uygulanan gruplarda apoptoz tayini için konfokal lazer taramalı mikroskopta floresan boya ile boyanan hücreler görüntülendi. Hücre proliferasyonuna olan etkiyi belirlemek için MTT testi yapıldı. KDELR1 geninin baskılanmasının COPE geni üzerindeki etkisi qRT-PZR yöntemi ile belirlendi. Tüm deney grubu çalışmaları 24 ve 48 saat zaman diliminde gerçekleştirildi. KDELR1 geni baskılanmış U266 hücrelerinde 24 saat diliminde COPE gen anlatımının kontrol grubuna göre arttığı bulunurken RPMI8226 hücrelerinde değişim bulunmadı. Apoptotik hücre oranının her iki hücrede de kontrol grubuna kıyasla siRNA grubunda arttığı bulundu. Hücre canlılığı da özellikle 24 saat diliminde her iki hücre hattında azaldığı belirlendi. KDELR1 geninin baskılanmasının hücre canlılığını azalttığı ve apoptozu tetiklediği gösterildi. Bu çalışma U266 ve RPMI8266 hücrelerinde KDELR1 geni ile yapılan ilk fonksiyonel çalışma özelliğine sahiptir.

Abstract:
Multiple myeloma is the malignancy of terminally differentiated of plasma cells. It is taken place secondly within the hematological malignancy and characterized as proliferation of uncontrolled monoclonal plasma cells in bone marrow, accumulation of nonfunctional immunoglobins. In our previous experiment, we showed KDELR1 and COPE gene expression is increased in patients. Those are the genes taking place in transportation of protein between endoplasmic reticulum and golgi apparatus. KDELR1 makes the proteins with KDEL sequence bind. It plays role in packaging proteins into COPI vesicles to transport as retrograde. COPE gene is the epsilon subunit of COPI complex. In our experiment, KDELR1 expression was silenced in U266 and RPMI8226 cell lines to identify the role of its expression. Cells were scanned in confocal microscope to detect the apoptosis effects in control and KDELR1 siRNA applied groups. MTT test was applied to detect the effect of KDELR1 on cell proliferation. The effect of suppressed KDELR1 on COPE gene was identified by qRT-PCR. All experimental groups were studied during 24 and 48 hours. COPE gene expression difference was compared with the control. Although COPE gene expression in U266 was found dramatically increased in the 24th hour, any change wasn't observed in RPMI82226 cells. Apoptotic cell ratio in cells was found increased when compared with controls. Proliferation was decreased in both cells during 24th hours. Decreased cell proliferation effect was observed when KDELR1 was suppressed. This experiment is the first study showed the function of KDELR1 in the U266 and RPMI82266 cell lines.