Fare depresyon modelinde TREK1 ve TRPC3/6 iyon kanal inhibitörlerinin mikrorna ekspresyonları üzerine etkilerinin araştırılması
The investigation of the effects on microrna expressions of TREK1 and TRPC3/6 ion channel inhibitors in a mouse model of depression.
Yazar: İLAY BURAN
Danışman: PROF. DR. HALİT MOHAMMED ELYAS ; PROF. DR. MEHMET EMİN ERDAL
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Depresif bozukluk = Depressive disorder ; Depresyon = Depression ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Fareler = Mice ; Gen ifadesi = Gene expression ; Mikro RNA = Micro RNA ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Testler = Tests ; Yüzme = Swimming

Özet:
Derin üzüntülü duygu durumu olarak tanımlanan depresyon yaygın
görülen bir hastalıktır. Son yıllarda mikroRNA ve iyon kanallarındaki
değişimlerin depresyona neden olabileceği belirtilmektedir. Çeşitli çalışmalarda
miRNA'lar ile sinyal iletiminin önemli elemanları olan iyon kanalları arasında
ilişki olduğu saptanmıştır. Ancak iyon kanal aktivitelerindeki değişimlerin
miRNA'ların sentezi üzerine etkileri bilinmemektedir. Çalışmamızda fare
depresyon modelinde, beynin prefrontal korteks bölgesinde mikroRNA
ekspresyonları ve TREK1 iyon kanal inhibitörü anandamide ve TRPC3/6
inhibitörü norgestimate'ın mikroRNA ekspresyonu üzerine etkilerinin
araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmada albino BALB/c ırkı fareler kullanıldı. Gruplar kontrol, sham,
sertralin, anandamide, sertralin+anandamide, norgestimate ve sertralin
+norgestimate olarak düzenlendi. Farelerde depresyon modeli kronik hafif stres
protokolü ile oluşturuldu ve depresyon düzeyinin değerlendirilmesinde zorunlu
yüzme testi kullanıldı. Çalışmada kullanılan inhibitörler 5mg/kg/gün dozunda
sertralin ise 10mg/kg/gün dozunda verildi. Grupların total beyin dokularının
serotonin seviyeleri ELİSA, miRNA ve iyon kanallarının ekspresyon düzeyleri ise
RT-PCR ile değerlendirildi.
Analizler sonucunda depresyonda (sham grubunda) miR-9-5p, miR-128-1-
5p, miR-382-5p'de anlamlı artış ve miR-16-5p, miR-129-5p, miR-219a-5p'de
anlamlı azalma olduğu belirlendi. Çalışmamızda iyon kanal inhibitörlerinin miR-
16-5p, miR-30c-5p, miR-34a-5p, miR-128-1-5p, miR-132-3p, miR-139-5p, miR-
219a-5p ve miR-382-5p ekpresyonlarını anlamlı olarak arttırdığı bulundu.
Sertralin+inhibitör uygulanan gruplarda ise miR-30c-5p, miR-34a-5p, miR-128-1-
5p, miR-129-5p, miR-132-3p, miR-139-5p, miR-219a-5p, miR-497-5p'de önemli bir
artış olduğu görüldü. İnhibitörlerin özellikle sertralinle birlikte kullanıldığında
ZYT'de antidepresif etkiye sahip olduğu belirlendi.
Literatürle uyumlu olarak özellikle miR-9-5p ve miR-128-1-5p'deki artışın
depresyon etyopatogenezinde önemli roller oynayabileceği düşünülmektedir.
Anandamide ve norgestimate'ın ZYT'de antidepresif etkiye sahip olmaları bu
inhibitörlerin sertraline ek olarak tedavide kullanılabileceğini göstermektedir.
Çalışmamız iyon kanal inhibitörlerinin miRNA'lar üzerine etkilerinin anlaşılması
ve yeni tedavi yöntemlerinin bulunmasına yönelik çalışmalara ışık tutması
bakımından önem taşımaktadır.
Anahtar Kelimeler: Depresyon, mikroRNA, TRPC3, TRPC6, TREK1,
Norgestimate, Anandamide, Kronik Hafif Stres, Zorunlu Yüzme Testi.

Abstract:
Depression which is defined as profound sad-soul feeling is a common
disease. In recent years, it is mentioned that alteration of microRNAs and ion
cahnnels can cause to depression. Association between miRNAs and ion channels
that are important molecules in signal transduction pathway has been shown by
many studies. However, the effects on synthesis miRNAs of changes in ion channel
activities are unknown. In our study, we aimed to investigation of effects on
miRNA expression of norgestimate, inhibitor of TRPC3/6 ion channel and
anandamide, inhibitor of TREK1 ion channel and miRNA expression in prefrontal
cortex region of brain in mouse model of depression.
In this study, strains of albino BALB/c mice were used. Groups as sham,
sertralin, anandamide, sertralin+anandamide, norgestimate and
sertralin+norgestimate were organized. Depression model in mice was created with
chronic mild stress protocol and forced swim test was used to assess level of
depression. Inhibitors used in this study 5mg/kg/day were given and also sertralin
10mg/kg/day was given. Serotonin was measeured from total tissues of brain in all
groups by ELISA tool. miRNA and ion channel expression were quantified by RTPCR.
Statistical analysis showed that a significant increase was determined in
miR-9-5p, miR-128-1-5p, miR-382-5p, while a signifcant decrease was determined
in miR-16-5p, miR-129-5p, miR-219a-5p in depression (in sham group). It was
found that ion channel inhibitors led to significantly increase in expression of miR-
16-5p, miR-30, miR-34, miR-128-1-5p, miR-132-3p, miR-139-5p, miR-219a-5p and
miR-382-5p in depression. It is also demonstrated that miR-30c-5p, miR-34a-5p,
miR-128-1-5p, miR-129-5p, miR-132-3p, miR-139-5p, miR-219a-5p, miR-497-5p
was a significant increase in the groups treated sertralin+inhibitor. It has been
determined to have effect of antidepressant at FST when the combination of
especially sertralin and ion channel inhibitors was used.
Consistent with the literature, increase in particularly miR-9-5p and miR-
125-1-5p is thought to be taken important roles in depression etiopathogenesis.
Since anandamide and norgestimate have antidepressive effect in FST, both of
them can be used in treatment of depression in addition to sertraline. Our study is
important since it contributes to understanding of their effects on miRNAs of ion
channels and elucidates to find novel treatments of depression.
Key Words: Depression, microRNA, TRPC3, TRPC6, TREK1, Norgestimate,
Anandamide, Chronic Mild Stress, Forced Swimming Test