Kivi meyvesinin (Actinidia deliciosa) antioksidan ve antiradikal aktivitelerinin belirlenmesi, karbonik anhidraz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Determination of antioxidant and antiradical activities of kiwifruit (Actinidia deliciosa), purification and characterisation of carbonic anhydrase from kiwifruit
Yazar: ERCAN BURSAL
Danışman: DOÇ. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Kivi meyvesinin (Actinidia deliciosa) antioksidan ve antiradikal aktivitelerini belirlemek için 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) (ABTS) radikal giderme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil (DPPH?) serbest radikal giderme aktivitesi, N,N-dimetil-p-fenilendiamin (DMPD?+) radikal giderme aktivitesi, süperoksit anyon radikali (O2?-) giderme aktivitesi, potasyum ferriksiyanit indirgeme metodu ile toplam indirgeme kuvveti, kuprak metodu ile kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme kapasitesi, ferrozin ve 2,2´-bipiridin ile ferröz iyonları (Fe2+) şelatlama aktiviteleri çalışıldı. Ayrıca birer standart antioksidan olan BHA, BHT, ?-tokoferol ve troloks referans antioksidan bileşikler olarak kullanıldı. Bu çalışmada kivi meyvesinin (Actinidia deliciosa) liyofilize su ekstresi, etkili bir şekilde DPPH, ABTS, DMPD ve O2?- radikal giderme aktiviteleri, ferrik (Fe3+) ve kuprik (Cu2+) iyonlarını indirgeme kuvveti ve metal şelatlama aktivitesi gösterdiği tespit edildi.Ayrıca LC-MS/MS analiz metodu ile kivi (Actinidia deliciosa) meyvesinin liyofilize su ekstresinde kafeik asit, ferulik asit, sirinjik asit, elajik asit, kuersetin, ? -tokoferol, katekol, pirogalol, p-hidroksi benzoik asit, vanilin, p-kumarik asit, gallik asit ve askorbik asit gibi fenolik asit miktarları belirlendi.Bu çalışmada kivi (Actinidia deliciosa) meyvesinin karbonik anhidraz enzimi; amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz, CM Sephadex C-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-25 saflaştırma basamakları ile %61,5 verimle ve 5,23 kat saflaştırıldı. Kivi meyvesinin (Actinidia deliciosa) karbonik anhidraz enzimi kinetik çalışmalarında optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet ve stabil pH değerleri belirlendi. Ayrıca p-nitrofenil asetat substratı ile Lineveawer-Burk grafiği çizilerek KM sabiti ve Vmax değeri hesaplandı. Poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) ile enzimin molekül kütlesi 66 kDa olarak bulundu.

Abstract:
In order to determine the antioxidant and antiradical activities of kiwifruit (Actinidia deliciosa), different in vitro methods such as 2,2´-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) radical scavenging activity, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH?) free radical scavenging activity, N,N-dimethyl-p-phenylenediamine (DMPD) radical scavenging activity, superoxide anion radical (O2?-) scavenging activity, total reducing power by potassium ferricyanide reduction method, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by cuprac method, ferrous ions (Fe2+) chelating activities with ferrozine and 2,2´-bipyridine were performed separately. Also BHA, BHT, ?-tocopherol and trolox were used as the reference antioxidant compounds. The liyophilised water extract from kiwifruit (Actinidia deliciosa) effectively showed DPPH, ABTS, DMPD and O2?- radical scavenging activities, reducing power of ferric (Fe3+) and cupric (Cu2+) ions and metal chelating activities.Also, the amount of fenolic acid such as caffeic acid, ferulic acid, syringic acid, ellagic acid, quercetin, ? -tocopherol, catechol, pyrogallol, p-hydroxy benzoic acid, vanillin, p-coumaric acid, gallic acid and ascorbic acid were determined by LC-MS/MS analitical method.In the present study, carbonic anhydrase enzyme was purified with 61,25% efficiency and 5,23 fold from kiwifruit (Actinidia deliciosa) by ammonium sulphate precipitation, dialysis, CM Sephadex C-50 ion-exchange chromatography and Sephadex G?25 purification steps. Optimum pH, optimum temperature, optimum ionic strength and stabil pH were determined. Also KM and Vmax values were calculated from Lineveawer-Burk graph with p-nitrophenyl acetate substrate. Molecular weight of the enzyme was found to be 66 kDa by polyacrylamide gel electrphoresis (PAGE).