In vitro fertilizasyon uygulamalarında mikroakışkan yöntemle sperm hazırlığının insan embriyo gelişimine etkisinin incelenmesi /
Yazar: BERKAY AKÇAY
Danışman: PROF. DR. EMİR TAN
İstanbul Yeni Yüzyıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Embriyo gelişimi = Embryonic development ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Sperm = Spermatozoa ; Üreme = Reproduction ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Bu çalışmanın amacı mikroakışkan-tabanlı sperm seçme (MASS) yöntemi ile gerçekleştirilen sperm hazırlığı ile konvansiyonel Dansite Gradient (DG) yöntemi ile gerçekleştirilen sperm hazırlığının laboratuvar ve klinik verimliliği bakımından değerlendirmektir. Çalışma infertilite tedavisi gören izole teratospermi vakalarında elde edilmiş kardeş oositlerin eşleşmiş iki grup halinde prospektif değerlendirmesi şeklinde gerçekleştirildi. Matür (mII) oositler randomize olarak iki gruba ayrıldı ve birinci grup MASS yöntemi ile ve ikinci grup DG yöntemi ile elde edilmiş spermler kullanılarak İntrasitoplazmik Morfolojik olarak Seçilmiş Sperm Enjeksiyonu (IMSI) tekniği kullanılarak insemine edildi. Elde edilen embriyolar laboratuvar ortamında blastosist aşamasına kadar takip edildiler ve uygun gelişim gözlenen tüm embriyolar (3. Günde veya blastosist aşamasında) donduruldu. Tüm embriyo transferleri dondurulmuş/çözülmüş embriyo transferi (DÇET) olarak gerçekleştirildi. Fertilizasyon oranı, erken dönem klivaj oranı, 3. günde grade I embriyo oranı, blastosist gelişim oranı, klinik gebelik oranı ve canlı doğum oranı çalışmanın temel çıktı parametreleri olarak belirlendi. Toplamda 30 hastanın 30 siklusundan 540 kümülüs oosit kompleksi (KOK) ve 439 mII oosit elde edildi. MASS (n=217) ve DG (n=222) yöntemi ile insemine edilen oositler arasında yapılan karşılaştırmada temel laboratuvar parametreleri olan fertilizasyon oranı (73,7% vs. 77,4%), erken dönem klivaj oranı (98,8% vs. 99,4%), 3. günde grade I embriyo oranı (71,5% vs. 74,7%) ve blastosist gelişim oranı (45,8% vs. 48,4%) bakımından istatistiksel olarak anlamlı farklılık gözlenmedi (p>0.5). Gerçekleştirilen In 26 DÇET siklusu sonrası 18 pozitif b-hCG (69,2%; ET başına) ve 17 Sac+ gebelik (65,4% ET başına) elde edildi. Onbiri tekiz ve 3'ü ikiz olmak üzere toplamda 17 sağlıklı bebek doğdu. Bebeklerin 4'ü MASS yöntemi ile seçilmiş spermlerin kullanılması ile elde edildi. Çalışmamızdaki öncül sonuçlar, izole teratozoospermia vakalarında DG yöntemine kıyasla Fertile ® ürününün kullanımı doğrultusunda MASS yöntemi ile gerçekleştirilen sperm seçiminin kabul edilebilir laboratuvar ve klinik çıktılar oluşturduğunu işaret etmektedir. MASS yöntemi ile sperm seçiminin konvansiyonel ART uygulamalarındaki faydalarını valide etmek için daha fazla yeni çalışmaya ihtiyaç vardır.

Abstract:
The aim of this study is to evaluate the laboratory and clinical efficiency of sperm preparation through a microfluidics-based sperm sorter (MFSS) over conventional density gradient (DG) sperm preparation approach. This is a paired prospective trial with sibling oocytes of isolated teratozoospermia cases undergoing infertility treatment. Mature (m2) oocytes were randomly allocated and inseminated by intracytoplasmic morphologically selected sperm injection (IMSI) with spermatozoa prepared either through MFSS or DG method. Resulting embryos were cultured up to blastocysts stage before (or after if cryopreserved on day 3) a cryopreservation/warming cycle. All embryo transfers were performed as frozen embryo transfer (FET). Main outcome measures were fertilization rate, cleavage rate, percent of grade I embryos on day 3 of embryo development, blastocyst development rate, clinical pregnancy and live birth rates.  A total of 540 cumulus oocyte complexes (COCs) and 439 m2 oocytes were retrieved from 30 patients/cycles. In each case, m2 sibling oocytes were randomly (and equally where available) allocated either in MFSS group or DG group for IMSI. After IMSI, resulting embryos were individually cultured until blastocyst stage. No statistically significant differences were found with respect to main laboratory performance indicators including fertilization rates (73,7% vs. 77,4%), early cleavage rate (98,8% vs. 99,4%), grade I embryos on day 3 (71,5% vs. 74,7%) as well as blastocyst development rate (45,8% vs. 48,4%) between groups respectively (p>0.5). In 26 cycles, FET resulted in 18 positive b-hCG (69,2% per ET) and 17 Sac+ pregnancies (65,4% per ET). A total of seventeen heathy babies have been born as 11 singletons and 3 twins. Four of these babies developed from embryos inseminated by spermatozoa selected through the MFSS device. Our preliminary results indicate that, when compared to conventional DG sperm preparation method, use of  MFSS device for sperm preparation results in acceptable laboratory as well as clinical outcome in isolated teratozoospermia cases. Further studies are needed to validate the benefits of MFSS-based sperm selection approach in contemporary ART practice.