Aspalathus linearis (Rooibos) ekstraktının, sıçan testis dokusunda akut dönemde melaminin oluşturduğu hasar üzerine iyileştirici etkisinin histolojik ve immünohistokimyasal incelenmesi
Histological and immunohistochemical investigation of the healing effect of aspalathus linearis (Rooibos) extract on melamine-induced damage in rat testicular tissue in the acute period
Yazar: MÜGE SARICAOĞLU
Danışman: PROF. DR. SELEN AKYOL BAHÇECİ
İzmir Katip Çelebi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Aspalathus linearis = Aspalathus linearis ; Baklagiller = Leguminosae ; Bitki özütü = Plant extract ; Fabaceae = Fabaceae ; Histoloji = Histology ; Melamin = Melamine ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Çalışmamızda, günlük kullanımı oldukça yaygın olan ve böbrek, dalak, mesane, testis, gibi birçok dokuda toksisiteye sebep olan melaminin testiste akut toksisite sonucu, neden olduğu histopatolojik değişikliklere günlük kullanımı oldukça yaygınlaşan yüksek antioksidan özelliğe sahip rooibosun iyileştirici etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. On sekiz adet Wistar-Albino erkek sıçan her grupta 6 hayvan olmak üzere; kontrol, melamin ve Melamin+Rooibos gruplarına ayrıldı. 31 gün süren deney sonrası alınan testis dokularında H&E, PAS, Masson Trikrom, Toluidin Mavisi, immunohistokimyasal olarak Okludin, Klauidin ve TUNNEL boyamaları yapıldı. Ayrıca karbonmonoksit ve nitrik oksitten sonra üçüncü gazotransmitter olarak kabul edilmekte olan H2S miktarına da bakıldı. 
Melamin ve Melamin + Rooibos gruplarına 3 gün tek doz oral gavaj ile 140 mg/kg melamin verilmiştir, sonrasında melamin grubuna 28 gün boyunca SF, Melamin+Rooibos grubuna 28 gün 200 mg/kg Rooibos uygulanmıştır. Kontrol grubuna 3 gün oral gavaj, 28 gün I.P olacak şekilde sadece SF uygulanmıştır. Tüm deney gruplarındaki sıçanlar deneyin 31. gününde ketamin/ksilazin anestezisi altında dekapite edilmiş ve testisleri alınmıştır. 
Kontrol grubunda normal tubulus seminiferus kontortus morfolojisi gözlendi. Melamin grubunda tubulus seminiferus kontortus çapı ve alanında azalma, spermatogenik seri hücrelerde dejenerasyon, lümende azalmış spermatozoalar, seminifer epitel bazal membranında PAS pozitiflikte azalma, interstisyel alanda ödem, açılma ve vasküler konjesyonda artmalar görüldü. Masson Trikrom boyamada İntersitisyel alanda ödem, toksisite sonucu hücre sayısında ve stromal liflerde azalma görüldü.  Yine intersitisyel alanda vasküler konjesyonda büyüme meydana geldi. Toluidin Blue boyamada melamin grubunda ödemli ve mast hücresinden artış olan intersitesyel alan mevcuttu. Okludin ve klaudin boyamalarda diğer gruplardan daha az immün reaktivite pozitifliği vardı. TUNEL immünhistokimyasında ise büyük oranda artış mevcuttu. Melamin alan grubun testis dokularında H2S seviyelerinin anlamlı ölçüde azaldığı görüldü. Rooibosun uygulandığı grupta olası antioksidan etkileri ile melamin kaynaklı oluşan histopatolojik hasarı ve apoptotik hücrelerde ışık mikroskobik düzeyde azalma izlendi. Yine Rooibos uygulanan grupta rooibosun antioksidan etkilere sahip olması sebebiyle H2S seviyelerinin artmış olduğu gözlendi.
Sonuç olarak, çalışmamızda melamin maruziyeti testis dokusunda hasar oluşturdu ve infertilite tehlikesini arttırdığı, testiste oksidatif stresi indüklediği, H2S seviyelerinde düşüşe sebep olduğunu ve oksidan-antioksidan denge üzerine olumsuz etkisi olduğunu gözlemledik. Bu hasarın tedavisinde Rooibosun iyileştirici etkisinin olduğunu tespit ettik.

Abstract:
In our study, it was aimed to investigate the curative effect of rooibos, which has high antioxidant properties, which is widely used daily and causes toxicity in many tissues such as kidney, spleen, bladder, testis, and histopathological changes caused by acute toxicity in the testis. Eighteen Wistar-Albino male rats, 6 animals in each group; were divided into control, melamine and Melamine+Rooibos groups. H&E, PAS, Masson Trichrome, Toluidine Blue, immunohistochemically Ocludin, Clauidin and TUNNEL stainings were performed on testicular tissues taken after the 31-day experiment. In addition, the amount of H2S, which is considered as the third gasotransmitter after carbon monoxide and nitric oxide, was also examined.
Melamine and Melamine + Rooibos groups were given 140 mg/kg melamine by oral gavage as a single dose for 3 days, then SF was applied to the melamine group for 28 days, and 200 mg/kg Rooibos was administered to the Melamine+Rooibos group for 28 days. Only SF was applied to the control group, with oral gavage for 3 days and I.P for 28 days. Rats in all experimental groups were decapitated under ketamine/xylazine anesthesia on the 31st day of the experiment and their testicles were removed.
Normal tubulus seminiferus contourus morphology was observed in the control group. In the melamine group, decrease in tubulus seminiferus contourus diameter and area, degeneration in spermatogenic series cells, decreased spermatozoa in the lumen, decrease in PAS positivity in the seminiferous epithelial basement membrane, edema in the interstitial area, dilation and increased vascular congestion were observed. Masson Trichrome staining revealed edema in the interstitial area, and a decrease in cell number and stromal fibers as a result of toxicity. Again, enlargement of vascular congestion occurred in the interstitial area. In Toluidine Blue staining, there was an edematous interstitial area with an increase in mast cells in the melamine group. Occludin and claudin stainings had less immunoreactivity positivity than the other groups. On the other hand, there was a large increase in TUNEL immunohistochemistry. It was observed that H2S levels in the testicular tissues of the group receiving melamine were significantly reduced. In the group in which rooibos was applied, possible antioxidant effects and histopathological damage caused by melamine and a decrease in apoptotic cells at the light microscopic level were observed. Again, it was observed that H2S levels increased in the rooibos administered group, due to the antioxidant effects of rooibos.

In conclusion, in our study, we observed that melamine exposure caused damage to the testicular tissue and increased the danger of infertility, induced oxidative stress in the testis, caused a decrease in H2S levels and had a negative effect on the oxidant-antioxidant balance. We found that Rooibos has a healing effect in the treatment of this damage.