Emdogain materyalinin MC3T3-E1 preosteoblast hücreleri üzerindeki etkisinin in vitro koşullar altında incelenmesi
The effect of Emdogain in MC3T3-E1 preosteoblastic cell line in vitro
Yazar: EZEL ŞIK
Danışman: PROF. DR. ZEYNEP AYTEPE
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Pedodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2008
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Bir mine matriks türevi olan Emdogain® (EMD), dişi destekleyen dokuların ve pulpanın rejenerasyonunda klinik olarak kullanılan bir materyaldir ancak etki mekanizması hala çözülebilmiş değildir.Bu çalışmanın amacı Emdogain® materyalinin osteojenik medyum varlığında ve osteojenik medyum yokluğunda MC3T3-E1 hücrelerindeki hücre proliferasyonuna, diferensiasyonuna, mineralize nodül oluşumuna ve morfolojik görünümüne etkisinin incelenmesidir.MC3T3-E1 hücrelerinde 1, 3, 7, 14. günlerde çeşitli doz aralıklarında osteojenik medyum varlığında ve yokluğunda EMD (25-100 ?g/ml) kullanıldı. Kontrol grubu EMD olmaksızın hazırlandı. Hücre proliferasyonu tetrazolium salt deneyi (XTT) ile değerlendirildi. Osteoblastik diferensiasyon miktarını saptamak için alkalen fosfataz (ALP) aktivitesi incelendi. Mineralize nodüllerin oluşumu Von Kossa metodu ile belirlendi. Morfolojik bulgular ışık mikroskobu altında değerlendirildi.Hücre proliferasyonunda 3. günden 7. güne kadar osteojenik medyum içeren ve içermeyen grupların tüm EMD içeren alt gruplarında istatistiksel olarak anlamlılık saptanmıştır. ALP aktivitesi deneyinde osteojenik medyum içeren ve içermeyen gruplar kendi içlerinde bir fark göstermemiştir. Mineralize nodüllerin doza bağlı olarak oluştuğu belirlenmiştir.EMD nin hücre proliferasyonunu artırdığı fakat diferensiasyona etkisi olmadığı saptanmıştır.Bu sonuçlara dayanarak, EMD nin, erken safhada hücrelerin osteoblastlara diferensiasyonuna etki etmediği ve etkinliğini hasarlı bölgeye hücre göçünü yönlendirerek sağladığına karar verilmiştir.

Abstract:
Emdogain®, a formulation of mine matrix derivative (EMD) is used clinically for regeneration of the tooth supporting tissues and pulp, but molecular mechanisms of its action have not been elucidated.The purpose of this study was to investigate the effects of Emdogain® on the growth, differentiation, mineralized-nodule formation and morphology in MC3T3-E1 cells within the presense and absense of osteogenic media.MC3T3-E1 cells were treated with EMD (25-100 ?g/ml) for 1, 3, 7, 14 days within the presence and absense of osteogenic media. Cells incubated without EMD served as negative control. Cell proliferation were determined by tetrazolium salt (XTT). Osteoblastic differentiation was estimated by alkaline phosphatase (ALP) activity. Von Kossa method was performed to determine mineralized-nodule formation. Morphologic observations were made by light microscopy.A marked increase in cell proliferation and cell number was observed in EMD groups from day 3 to 7 both within the presence and absense of osteogenic media groups. There was no signaficant differences between EMD groups and control in ALP activity. An increased deposition of mineralized-nodules was found in dose depending manner.EMD treatment promotes proliferation and cell number of MC3T3-E1 cells but did not effect differentiation.These results indicate that EMD does not have ability to differentiate cells into osteoblast in early phase and it is suggested that regenerative activity was built by guiding cell migration to wounded area.