Sıçanlarda oluşturulan over torsiyonu sonrası hiperbarik oksijen ve metformin tedavisinin over rezervine etkisinin araştırılması
After ovarian torsion in ratshyperbaric oxygen and metformin therapy investigation of the effect of the over reserve
Yazar: ENES KARAMAN
Danışman: PROF. DR. MAHMUT TUNCAY ÖZGÜN ; DR. ÖĞR. ÜYESİ FULYA ÇAĞLI
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Antimüllerian hormon = Antimullerian hormone ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Hiperbarik oksijenasyon = Hyperbaric oxygenation ; Metformin = Metformin ; Over = Ovary ; Over rezervi = Ovarian reserve ; Sıçanlar = Rats ; Torsiyon = Torsion

Özet:
Amaç: Sıçanlarda oluşturulan over torsiyon modeli sonrası sıçanlara uygulanan anti-ödem, anti-iskemik etkili hiperbarik oksijen ile antioksidan, antiinflamatuar etkili metformin tedavilerinin, iskemi reperfüzyon hasarına karşı ovaryan rezervin korunmasına olan etkilerinin histopatolojik, biyokimyasal olarak ve doku düzeyinde anti-müllerian hormon (AMH) immünoreaktivitesi düzeylerine bakılarak araştırılması amaçlanmıştır.
Materyal ve Metod: Bu çalışma, Aralık 2021-Haziran 2022 tarihleri arasında Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi Deneysel Araştırmalar Uygulama ve Araştırma Merkezi, Eczacılık Fakültesi Tıbbi Biyokimya Anabilim Dalı ve Histoloji Embriyoloji Anabilim Dalı'nda yürütüldü. Over torsiyonu hayvan modelinde, 40 adet sıçandan 32 adet sıçanın sol overlerinde cerrahi olarak torsiyon oluşturuldu ve bu 40 sıçan rastgele olarak 5 gruba ayrıldı. Grup 1'e (kontrol grubu, 8 sıçan) hiçbir işlem yapılmadı. Grup 2'ye (torsiyon –detorsiyon çalışma grubu, 8 sıçan) tek taraflı over torsiyonu yapıldı, 2 saat beklendikten sonra over detorsiyone edilerek eski haline getirildi. Grup 3'e (torsiyon-detorsiyon-hiperbarik oksijen tedavisi çalışma grubu, 8 sıçan) tek taraflı over torsiyonu yapıldı, 2 saat beklendikten sonra over detorsiyone edilerek eski haline getirildi. Detorsiyon işleminden 4 saat sonra ve devamındaki 13 gün boyunca her gün sıçanlara hiperbarik kabin içerisinde 2 saat süreyle 2.4 atm basınçta % 100 O2 solutularak hiperbarik oksijen tedavisi uygulandı. Grup 4'e (torsiyon-detorsiyon-metformin tedavisi çalışma grubu, 8 sıçan) tek taraflı over torsiyonu yapıldı, 2 saat beklendikten sonra over detorsiyone edilerek eski haline getirildi. Detorsiyon işleminden 4 saat sonra ve devamındaki 13 gün boyunca hergün sıçanlara 50 mg/kg oral metformin tedavisi uygulandı. Grup 5'e (torsiyon-detorsiyon-hiperbarik oksijen-metformin tedavisi çalışma grubu, 8 sıçan) tek taraflı over torsiyonu yapıldı, 2 saat beklendikten sonra over detorsiyone edilerek eski haline getirildi. Detorsiyon işleminden 4 saat sonra ve devamındaki 13 gün boyunca her gün sıçanlara hiperbarik kabin içerisinde 2 saat süreyle 2.4 atm basınçta % 100 O2 solutularak hiperbarik oksijen tedavisi ve 50 mg/kg oral metformin tedavisi uygulandı. Çalışmanın 14. gününde gruptaki tüm sıçanlar sakrifiye edildi, doku örnekleri ve kanları alındı. Sıçanların sol overlerinde oluşturulan cerrahi torsiyonun histopatolojik skorlaması Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, biyokimyasal analizi Eczacılık Fakültesi Tıbbi Biyokimya Anabilim Dalı tarafından yapıldı. 
Bulgular: Kontrol grubunda over rezervleri ve AMH değerlerinin benzer olması nedeniyle tüm gruplarda ortalama over rezervleri ve AMH değerleri benzer olarak alındı. Torsiyon-detorsiyon (Grup 2) çalışma grubundaki sıçanların overlerinde follikül kaybının olduğu, serum AMH düzeyinin anlamlı düştüğü, doku düzeyinde bakılan AMH immünoreaktivitesinin azaldığı, TUNEL Metodu ile bakılan apoptotik hücre sayısının anlamlı şekilde arttığı izlendi. Torsiyon-detorsiyon-hiperbarik oksijen (Grup 3) tedavisi çalışma grubundaki sıçanların overlerinde grup 2 ye göre follikül kaybının daha az olduğu ve yine grup 2 ye göre serum AMH düzeyinin daha az düştüğü izlendi. Torsiyon-detorsiyon-metformin (Grup 4) tedavisi çalışma grubundaki sıçanların overlerinde follikül kaybının grup 2 den az olduğu, yine AMH düzeylerinin de grup 2'den yüksek olduğu bir sonuca ulaşıldığı izlendi. Torsiyon-detorsiyon-hiperbarik oksijen-metformin (Grup 5) tedavisi çalışma grubundaki sıçanların overleri ve AMH değerleri incelendiğinde ise sonuçların grup 1 yani normal dokudan daha iyi olduğu izlendi. (sırasıyla; 9.66 ± 1.07, 7.89 ± 0.31, 9.96 ± 0.42,10.77 ± 0.56,11.74±0.94; P<0,001). Over torsiyonunun histopatolojik değerlendirmesine göre histopatolojik skoru en fazla torsiyon-detorsiyon-hiberbarik oksijen  (HBO) tedavisi-metformin (M) tedavisi çalışma grubunda gözlemlendi.
Sonuç: Hiperbarik oksijen tedavisi ile birlikte reperfüzyon hasarını azaltıcı etkileri olan metforminin birlikte kullanılmasıyla, over torsiyonu-detorsiyonu sonrasında over rezervinin korunduğu istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Yapılan deneysel çalışmanın, klinik açıdan önemli bir infertilite ve mortalite nedeni olan over torsiyonunun neden olduğu ovaryan rezerv kaybının önüne geçmesiyle, hastaların over rezerv kaybını engelleneceği veya çok aza indirgeneceği için cerrahi maliyetleri düşürerek topluma ekonomik ve akademik olarak ciddi katkılar sağlayacağını düşünmekteyiz.
Anahtar kelimeler: Over torsiyonu, detorsiyonu, hiperbarik oksijen tedavisi, metformin, AMH, over rezervi, sıçan

Abstract:
Aim: After the ovarian torsion model created in rats, the effects of anti-edema, anti-ischemic hyperbaric oxygen and antioxidant, anti-inflammatory effective metformin treatments on the protection of ovarian reserve against ischemia-reperfusion injury were evaluated histopathologically, biochemically and at tissue level by anti-müllerian hormone (AMH). levels were investigated.
Materials and Methods: This study was carried out between December 2021 and June 2022 at Erciyes University Faculty of Medicine, Experimental Research Application and Research Center, Faculty of Pharmacy, Department of Medical Biochemistry and Histology Embryology Department. In the ovarian torsion animal model, torsion was surgically created in the left ovaries of 40 rats and these 40 rats were randomly divided into 5 groups. Group 1 (control group, 8 rats) received no treatment. Unilateral ovarian torsion was performed in group 2 (torsion-detorsion study group, 8 rats), after waiting for 2 hours, the ovary was detorted and restored. Unilateral ovarian torsion was performed in group 3 (torsion - detorsion - hyperbaric oxygen therapy study group, 8 rats). After waiting for 2 hours, the ovary was detorsioned and restored. Hyperbaric oxygen therapy was applied to the rats by breathing 100% O2 at 2.4 atm pressure for 2 hours in the hyperbaric cabin every day for 4 hours after the detorsion process and for the following 13 days. Unilateral ovarian torsion was performed in group 4 (torsion - detorsion - metformin treatment study group, 8 rats). 50 mg/kg oral metformin treatment was administered to rats every day for 4 hours after detorsion and for 13 days thereafter. Unilateral ovarian torsion was performed in group 5 (torsion – detorsion – hyperbaric oxygen – metformin treatment study group, 8 rats). After waiting for 2 hours, the ovary was restored by detorsion. 4 hours after the detorsion process and every day for the following 13 days, hyperbaric oxygen therapy and 50 mg/kg oral metformin therapy were administered to the rats by breathing 100% O2 at 2.4 atm pressure for 2 hours in the hyperbaric cabin. On the 14th day of the study, all rats in the group were sacrificed, tissue samples and blood were collected. Histopathological scoring of the surgical torsion created in the left ovaries of the rats was done by the Histology and Embryology Department, and the biochemical analysis was made by the Faculty of Pharmacy, Department of Medical Biochemistry.
Results: Since ovarian reserves and AMH values were similar in the control group, mean ovarian reserves and AMH values were taken as similar in all groups. It was observed that there was a loss of follicles in the ovaries of the rats in the torsion-detorsion (Group 2) study group, the serum AMH level decreased significantly, the AMH immunoreactivity measured at the tissue level decreased, and the number of apoptotic cells measured with the TUNEL method increased significantly. It was observed that the loss of follicles in the ovaries of the rats in the torsion-detorsion-hyperbaric oxygen (Group 3) treatment group was less than that of group 2, and the serum AMH level decreased less than in group 2. It was observed that the loss of follicles in the ovaries of the rats in the torsion-detorsion-metformin (Group 4) treatment study group was less than group 2, and that AMH levels were higher than group 2. When the ovaries and AMH values of the rats in the torsion – detorsion – hyperbaric oxygen – metformin (Group 5) treatment study group were examined, it was observed that the results were better than group 1, that is, normal tissue. (respectively 9.66 ± 1.07, 7.89 ± 0.31, 9.96 ± 0.42.10.77 ± 0.56.11.74 ± 0.94; P<0.001). According to the histopathological evaluation of ovarian torsion, the histopathological score was the highest in the torsion – detorsion – hyperbaric oxygen – metformin treatment study group.
Conclusions: The use of metformin, which has effects on reducing reperfusion injury together with hyperbaric oxygen therapy, resulted in statistically significant preservation of ovarian reserve after ovarian torsion-detorsion. We think that this experimental study will make serious economic and academic contributions to the society by reducing the surgical costs, as the loss of ovarian reserve caused by overtorsion, which is a clinically important cause of infertility and mortality, will be prevented or the loss of ovarian reserve of the patients will be prevented or minimized.
Keywords: Ovarian torsion,  ovarian detorsion, hyperbaric oxygen therapy, metformin, AMH, ovarian reserve, rat