Ratlarda methotreksata bağlı karaciğer toksisitesinde leflunomidin muhtemel koruyucu etkisinin araştırılması: Deneysel bir çalışma
The investigation of possible protective affect of leflunomide on methotrexate induced liver toxicity: An experimental study
Yazar: UFUK KUTLUANA
Danışman: PROF. DR. NADİR YÖNETCİ
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Gastroenteroloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Gastroenteroloji = Gastroenterology

Özet:
Methotreksat (MTX)'e bağlı karaciğer toksisitesi bu immunsupresif ilacın klinik kullanımını kısıtlamaktadır. Bu çalışmada MTX'e bağlı karaciğer toksisitesinde leflunomidin muhtemel koruyucu etkisini araştırmayı amaçladıkWistar tip ratlar (n = 40) 4 gruba ayrıldı. Birinci grup MTX , 2. grup MTX + leflunomid, 3. grup leflunomid, 4. grup kontrol ( ya da taşıyıcı) grubunu oluşturmaktaydı. MTX intraperitoneal olarak injekte edildi. Tek doz MTX uygulamasını takiben (serum fizyolojik içinde 20 mg/kg), ya leflunomid (9 mg/kg, MTX + leflunomid grubu) ya da taşıyıcı (MTX grubu) intragastrik olarak 5 gün boyunca verildi. Leflunomidin su içinde erimemesi nedeniyle %1 karboksi metil selüloz (CMC) taşıyıcı olarak kullanıldı. Diğer ratlarda tek doz intraperitoneal serum fizyolojik uygulamasını takiben ya CMC (kontrol grubu) ya da leflunomid (9 mg/kg, leflunomid grubu) 5 gün boyunca intragastrik olarak uygulandı. Ardışık 5 günün sonunda ratlar dekapitasyonla sakrifiye edildi. Dekapitasyon sonrası intrakardiyak kan örneği alındı ve hepatik doku örnekleri çıkartılarak malondialdehid (MDA) ve süperoksit dismutaz (SOD) düzeyleri ve myeloperoksidaz (MPO) aktivitesi değerlendirilmesi amaçlı muhafaza edildi. Karaciğer doku örnekleri aynı zamanda histopatolojik olarakta değerlendirildi. Serum aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT) ve alkalen fosfataz (ALP) değerleri ölçüldü.Leflunomid tedavisinin, tedavi uygulanmayan MTX grubu ile karşılaştırıldığında hepatik histopatolojik skoru anlamlı ölçüde iyileştirdiği görüldü. Serum ALT ve ALP seviyeleri MTX + leflunomid grubunda MTX grubuna göre anlamlı ölçüde düşük bulundu. Hepatik MPO ve SOD seviyeleri MTX + leflunomid ve MTX gruplarında benzer düzeylerde bulundu. Hepatik MDA düzeyleri MTX + leflunomid grubunda MTX grubundan yüksekti. Bu sonuçlar bize leflunomidin MTX'e bağlı karaciğer toksisitesi üzerindeki iyileştirici etkisinin antioksidan etkisinden bağımsız olduğunu düşündürdü. Leflunomidin MTX'e bağlı karaciğer toksisitesini önleyici etkisinin nükleer faktör kappa B (NF- ? B) üzerine olan etkisiyle bağlantılı olduğunu düşündük.Sonuç olarak leflunomid MTX'e bağlı histolojik karaciğer hasarını anlamlı ölçüde iyileştirdi. Leflunomid MTX'e bağlı karaciğer toksisitesini önleyebilir.

Abstract:
Methotrexate (MTX) induced hepatotoxicity restricts the clinical use of this immunosuppressive drug. In this study, we aimed to research the possible protective effect of Leflunomide on MTX induced hepatotoxicity.Wistar type rats (n = 40) were divided into four groups; group 1 as the MTX , group 2 as the MTX + leflunomide, group 3 as the leflunomide, group 4 as the control ( or vehicle). MTX was injected intraperitoneally. Following a single dose of MTX (in physiological saline, 20 mg/kg), either leflunomide (9 mg/kg, MTX + leflunomide group) or vehicle (MTX group) was administered intragastrically for the consecutive 5 days. Leflunomide was insoluble in water therefore 1% sodium carboxymethylcellulose (CMC) was used as a vehicle. In other rats, CMC (control or vehicle group) or leflunomide (9 mg/kg, leflunomide group) was was administered intragastrically for 5 days, following a single dose of saline injection. After 5 days, all the rats were sacrificed by decapitation. After decapitation of the rats, intracardiac blood was collected and hepatic tissue samples were carefully dissected and stored for the determination of tissue malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) levels, myeloperoxidase (MPO) activity. Tissue samples were also examined histopathologically. Levels of serum aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (ALP) were measured.Leflunomide treatment significantly ameliorated histopathological score compared to untreated MTX group. The serum ALT and ALP levels in MTX + leflunomide group were significantly lower than MTX group. The hepatic SOD and MPO levels were similar between MTX + leflunomide and MTX groups. The hepatic MDA level in MTX + leflunomide group was higher than MTX group. These results suggest that the ameliorative affect of leflunomide on MTX induced liver toxicitiy was independent from its antioxidant activity. We thought that the preventive affect of leflunomide on the MTX induced liver toxicity may be related to its affect on nuclear factor kappa B (NF- ? B).Finally, leflunomide significantly ameloriated MTX induced histologic hepatic injury. Leflunomide can inhibit MTX induced liver toxicity.