Chılo ırıdescent vırus'e ait 337l ve 295l genlerinin ifadesi ve proteinlerinin birbirleriyle etkileşimleri
Protein interaction and  expression of 337l orf and 295l orf belongs to chilo iridescent virus
Yazar: ERAY KÜÇÜK
Danışman: DOÇ. DR. İSMAİL DEMİR
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Chilo Iridescent Virüs (CIV) Lepidoptera, Diptera, Coleoptera, Hymenoptera ve Orthoptera ordolarına ait çok sayıda  böceği enfekte eden geniş konak spektrumuna sahip bir böcek virüsüdür. CIV virionları endositosis ile konak hücrelerine girer ve viral genom bir sinyal ile nukleusa yönlendirilir. CIV 337L geni açık okuma zinciri (412 amino asit) glikoprotein hormonu beta zincir sinyalini  ve 295L geni açık okuma zinciri (1343 amino asit) ise iki yönlü nükleer lokalizasyon sinyalini kodlamaktadır. Askovirüslerde bulunan, 337L proteininin homologları  ile yapılan çalışmalar, bu proteinin viral enfeksiyonun başlayabilmesi için konak hücreye tutunmayı sağladığını göstermiştir.  295L proteininin diğer Frog Virüs 3 (FV3)'te bulunan homoloğu ile yapılan çalışmada ise bu proteinin viral genomun nükleusa iletilmesinde rol oynadığı tespit edilmiştir. Bu iki proteinin etkileşimleri viral enfeksiyonun hızlı ve verimli bir şekilde gerçekleşmesi açısından önemlidir. Bu çalışmada, 337L HA-taq ve 295L His-taq içerecek şekilde Bac-to-Bac ekspresyon sisteminde Spodoptera frugiperda (Sf9) hücrelerinde ifade edildi. Yapılan Western Blot analizleriyle 337L'ye ait proteinin yaklaşık 46 kDa ve 295L'ye ait proteinin ise yaklaşık 95 kDa olduğu belirlendi. Pull down analizi ile 337L ve 295L proteinleri arasındaki etkileşim, HA antikorları kullanılarak Western Blot ile analiz edildi ve 46 kDa'luk bant gösterildi. Sonuç olarak, saflaştırılan 295L'ye bağlanarak 337L'nin de saflaştırıldığını ve böylece 337L ve 295L gen ürünleri arasındaki etkileşim kanıtladı.

Abstract:
Chilo Iridescent Virus (CIV) belongs to Iridoviridae family and has large host spectrum because it infects insects belong to Lepidoptera, Diptera, Coleoptera, Hymenoptera and Orthoptera. After the entry of CIV virions to host cells via endocystosis, viral genome is directed to nucleus. CIV of 337L ORF (412 amino asids) encodes glycoprotein beta hormones signal and 295L ORF (1343 amino asids) encodes bipartitate nuclear localization signals. Study of homologous of 337L protein belong to ascoviruses showed that the encoded protein facilitate attachment of virus and beginning of viral infection. Another study on homolog of 295L protein in Frog Virus 3 (FV3) showed that expressed protein plays a role for delivering of viral genome to nucleus. Interaction of these proteins is important in frame of making the viral infection quick and efficient. In this study, 337L and 295L were expressed in Sf9 cells using Bac-to-Bac system containing HA-taq and His-taq respectively. Western Blot analysis showed that 337L and 295L encoded proteins about 46 kDa and 95kDa, respectively. Protein-protein interaction between 337L and 295L proteins were demonstrated with pull down assay by using HA-antibody. The band that has a 46 kDa size was shown. As a result, 337L protein also purified with binding to purified 295L and thus the interaction between 337L and 295L gene products was demonstrated.