Köpeklerde erken gebelik döneminde sitoplazmik yapılara karşı oluşan antikorların titreleri ve floresan görüntüleri üzerinde çalışmalar
The fluorescent appearance and titres of antibodies formed against cytoplasmic structures during early pregnancy in dogs
Yazar: OKAN ALİ AKSOY
Danışman: PROF. DR. HAKKI İZGÜR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2003
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Köpekte erken gebelik döneminde sitoplazmik yapılara karşı oluşan antikorların titreleri ve floresan görüntüleri üzerinde çlışmalar Bu çalışmada, otoantikorların titreleri (antinükleer ve sitoplazmik otoantikorlar) ve florasan görüntüleri (ağ, ipliksi, parçalanmış) bakımından gebe ve gebe olmayan köpeklerdeki farklılıkların ortaya konulması ve aynı zamanda progesteron ve östrojen değerleri arasında gebe ve gebe olmayan köpeklerde farklılıkların olup olmadığının araştırılması amaçlanmıştır. Çalışma için gerekli olan Hayvan Materyali, 4 üncü Ana Jet Üs komutanlığı Köpek Üretim ve Eğitim Merkez Komutanlığında (KÜVEM) ve Akademi Köpek Yetiştirme Özel çiftliğinde, çeşitli ırklardan ( Alman kurdu n=7, Golden Retriver n=1, Sibirya kurdu n=1, Rottweiler n=2, Doberman n=1, Labrador n=1, Setter n=1) sağlıklı köpeklerden elde edilmiştir. Köpekler iki grupta incelenmiştir. Grup I (n=7) normal gebe olan dişi köpekler (Çiftleşme sonrası 5-35 günlerde). Grup II (n=7) östrus gösterdikten sonra çiftleştirilmediği için gebe kalmayan köpekler (metaöstrus başlangıcı 5-35. günlerde). Serumlarda AAb Indirekt İmmunfloresan (IIF) ile birlikte Canine ANA Hep-2 Screening Kit® (Inova Diagnostics Inc.) ile incelendi. İnsan epithel hücre line Hep-2 subsrat olarak uygulandı ve Anti-canine IgG konjugat olarak kullanıldı. Florescein isotiyosiyanat (FITC) ile işaretlendi (Nordic Immunology, Hollanda, 1:1280 PBS de). Serum örneklerinin ortaya konması üreticinin direktifleri doğrultusunda yapıldı. Geçerli olan floresan tipine göre sitoplazmanın floresan örneği 3 tipe ayrıldı (Pollak ve ark., 2001b). Tip-1 File ağ benzeri, tip-2 ipliksi sitoplazmada uzun lif oluşumları, tip-3 sitoplazmanın perfore yapılarını tanımladı. Gebe ve gebe olmayan gruplar bu oluşumlara göre birbirinden ayrıldı. Gebe ve gebe olmayan köpekler arasında Antinükleer Antikorların (ANA) titreleri bakımından 5/6. ve 24/25. günlerde istatistiksel yönden41 herhangi bir önemli farklılık saptanmazken, 10/11. ve 35/37. günlerde p<0,05 ile 15/16 günlerde ise p<0,01 ile önemli farklılıklar saptandı. Floresan görüntüleri bakımında ise farklılıkların çok belirgin olmadığına karar verildi. Gebe ve gebe olmayan dişi köpeklerde istatistiksel yönden ne progesteron değerleri bakımından nede östrojen (Östradiol) değerleri bakımından herhangi bir farklılık saptanmadı. Hormon değerleri bakımından önemli bir bulgu progesteron değerinin 5/6. günlerde elde edilen değerlere göre 35/37. günlerde gebe hayvanlarda önemli ölçüde düşmesi (p<0,03), buna karşılık gebe hayvanlarda östrojen değerlerinin önemli ölçüde yükselmesidir (p<0,01). Tezde kullanılan bütün gebe hayvanlarda muhtemel yapı proteinlerine karşı AAb nedeniyle oluşan farklı sitoplazma floresan yapılar tespit edildi. Tüm örneklerde negatif kromozon dikkat çekiciydi. Elde edilen veriler ANA fitreleri bakımından gebeliğin değişik evrelerinde farklılıklar olduğunu ve immünolojik testlerin gebeliğin fizyolojik değişimini ortaya koymada önemli olduğunu ortaya koymuştur. Anahtar kelimeler: Dişi köpek, Gebelik, Otoimmunoloji, Immunfloresans, Antinükleer otoantikor

Abstract:
The fluorescent appearance and titreş of antibodies formed against cytoplasmic structures during early pregnancy in dogs In this study, it was aimed to reveal the differences between pregnant and non-pregnant bitches with regard to the titreş of antibodies (antinuclear and cytoplasmic) and fluorescent appearances (netlike, filamentary and perforated). It was also aimed to determine whether there is a difference between pregnant and non-pregnant bitches as regards progesterone and oestrogen values. The animal samples needed for the study were obtained from the Central Headquarter of Dog Breeding and Raising of 4th Main Headquarter of Jet Base (KÜVEM) and from various races of healthy dogs in the Private Farm of Academia For Dog Breeding (German shepherd dog n=7, Golden Retriever n=1, Siberian wolf n=1, Rotvider n=2, Doberman=1, Labrador n=1, Setter n=1). Bitches were dividen into two groups. Group I ( n=7) consisted of normally pregnant female bitches ( 5-35 days after mating). Group II ( n=7) consisted of the bitches which could not become pregnant bitches because they were not allowed to mate after displaying oestrus (5.-35 days, beginning of metestrus). In serums, with AAb Indirect Immune fluorescent (IIF), Canine Ana Hep-2 Screening Kit (Inova Diagnostic Inc.) were analysed. Human epithelial cell line was used as Hep-2 substrate and Anti-canine IgG was applied as conjugate. They were marked with fluorescent isotiyosiyanat (FITC) (in Nordic Immunology, Netherlands, 1:1280 BS). The display of serum samples were carried out in accordance with the directives of the producer company. According to the valid fluorescent type, the fluorescent samples of the cytoplasm (Pollak et al, 2001b). Type-1 is like netlike, type-243 filamentary and type-3 perforated cytoplasm. Pregnant and non-pregnant were differentiated according to these formations. While there was no statistically significant difference detected between pregnant and non-pregnant bitches with regard to the titreş of antinuclear antibodies (ANA) on 5/6 and 24/25th days, remarkable differences were observed on 10/11 and 35/37th days with p<0,05,and on 15/1 6th days p<0,01. It was determined that the differences was not significant as regards fluorescent differences. No statistically difference has been detected in pregnant and non pregnant bitches with regard to either progesterone or oestrogen values. An important finding in hormonal values is that while progesterone values drop on 35/37th in days in pregnant bitches remarkably (p<0,03), oestrogen values increased in pregnant bitches significantly (p<0,01). In all the pregnant bitches observed in this study different cytoplasmic fluorescent was detected, which was formed due to AAb despite possible structural proteins. In all samples, negative chromosomes were striking. The findings obtained indicated that pregnancy differs at different stages regarding ANA titreş and that immunological tests are important in determining the physiological difference of pregnancy. Key words: Bitch, Pregnancy, Autoimmunology, Immunofluorescence, Antinuclear antibody