Tümör immünitesinde WWOX proteininin rolü
The role of WWOX protein in tumor immunity
Yazar: ELİF SERDAL
Danışman: DOÇ. DR. BAHADIR BATAR
Tekirdağ Namık Kemal Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Genetik = Genetics ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Hücre ölümü = Cell death ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İmmün sistem = Immune system ; İmmünite = Immunity ; İnterferonlar = Interferons

Özet:
WWOX protein ifadesi çoğu insan kanserlerinde sıklıkla kaybolur veya azalır. WWOX protein ifadesi kaybı üçlü negatif meme kanserlerinde sık görülmektedir. İmmün sistem meme kanseri gelişiminde, ilerlemesinde ve kontrolünde aktif rol oynamaktadır. Programlanmış hücre ölüm ligandı 1 (PD-L1), immün sistemden kaçışa katılan önemli immün kontrol noktası molekülüdür. PD-L1 çeşitli immün hücrelerde ve meme kanseri de dâhil olmak üzere birçok farklı tümör tiplerinde ifade edilir. STAT3, PD-L1 ifadesinin düzenlenmesinde önemli rol oynar. PD-L1'in, JAK aracılı STAT3 fosforilasyonu ve aktivasyonu nedeniyle meme kanseri hücre hatlarında ifadesi yüksektir. Kanser hücrelerinde STAT3 sinyal yolağı, IFN-γ'nın atipik bir sinyal ileticisi olarak aktive edilir. WWOX proteini IL-6 / JAK2 / STAT3 sinyal iletim yolağı üzerinden kanser hücrelerinin büyümesini ve metastazını STAT3'e bağlı olarak baskılamaktadır. WWOX'un aşırı ifadesi bazal meme kanseri hücrelerinde STAT3 aktivitesini inhibe eder. Tüm bu bulgular, WWOX'un PD-L1 ifadesinin düzenlenmesinde olası bir rol oynayacağını ve böylece meme kanserinin ilerlemesinde ve metastazında potansiyel bir baskılayıcı olarak görev yapacağını göstermektedir. Bu tezin amacı WWOX'un MDA-MB-231 insan üçlü negatif meme kanseri hücrelerinde bazal düzeyde ve/veya IFN-γ ile uyarılmış PD-L1 ifadesi üzerindeki etkilerini araştırmaktır. MDA-MB-231 hücrelerinde WWOX'u aşırı ifade etmek için geçici transfeksiyonlar gerçekleştirildi. Wwox proteininin aşırı ifadesi western blot ile değerlendirildi. PD-L1 ifadesi flow sitometri sistemi ile analiz edildi. IFN-γ uygulanmamış, WWOX ifade eden hücrelerde WWOX ifade etmeyen hücrelere göre istatistiksel olarak anlamlı artmış PD-L1 ifadesi saptandı (p=0,05). Bu bulgulara ek olarak, IFN-γ uygulanmış, WWOX ifade eden hücrelerde WWOX ifade etmeyen hücrelere göre istatistiksel olarak anlamlı artmış PD-L1 ifadesi saptandı (p=0,05). Sonuç olarak, WWOX ifade etmeyen MDA-MB-231 hücreleri ile karşılaştırıldığında MDA-MB-231 hücrelerinde WWOX ifadesinin arttırılması IFN-γ varlığında veya yokluğunda PD-L1 ifadesini anlamlı olarak azaltmaktadır.

Abstract:
WWOX protein expression is often lost or reduced in most human cancers. Loss of Wwox protein expression is common in triple negative breast cancers. The immune system plays an active role in the development, progression and control of breast cancer. Programmed cell death ligand 1 (PD-L1) is an important immune checkpoint molecule involved in escape from the immune system. PD-L1 is expressed in a variety of immune cells and many different tumor types, including breast cancer. STAT3 plays an important role in the regulation of PD-L1 expression. PD-L1 is overexpressed in breast cancer cell lines due to JAK-mediated STAT3 phosphorylation and activation. The STAT3 signaling pathway is activated as an atypical signal transmitter of IFN-γ in cancer cells. WWOX suppresses growth and metastasis of cancer cells through the IL-6 / JAK2 / STAT3 signal transduction pathway, depending on STAT3. Overexpression of WWOX inhibits STAT3 activity in basal breast cancer cells. All these findings suggest that WWOX can play a possible role in the regulation of PD-L1 expression and thus act as a potential suppressor in the progression and metastasis of breast cancer. The aim of this thes is to investigate the effects of WWOX on PD-L1 expression at basal level and / or IFN-γ stimulated in MDA-MB-231 human triple negative breast cancer cells. Transient transfections were performed to overexpress WWOX in MDA-MB-231 cells. Overexpression of the WWOX protein was assessed by western blotting. PD-L1 expression was analyzed by flow cytometry system. A statistically significant increase in expression of PD-L1 was found in cells expressing WWOX compared to cells not expressing WWOX (p=0.05). In addition to these findings, a statistically significant increase in expression of PD-L1 was found in cells expressing WWOX  in IFN-γ treated cells compared to cells not expressing WWOX (p=0.05). As a result, the increase of WWOX expression in MDA-MB-231 cells significantly decreased PD-L1 expression levels in the presence or absence of IFN-γ compared to MDA-MB-231 cells not expressing WWOX.