Deneysel kronik astım modelinde farklı dozlarda verilen inhale steroidin akciğer histopatolojisi üzerine etkisi
The efficiency of different nebulized steroid dosage regiments in mouse model of chronic asthma
Yazar: PINAR UYSAL
Danışman: PROF. DR. ÖZKAN KARAMAN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Yan Dal Uzmanlık, 2012
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Akciğer = Lung ; Astım = Asthma ; Fareler = Mice ; Histopatoloji = Histopathology ; Kemik ve kemikler = Bone and bones ; Steroidler = Steroids

Özet:
AMAÇ:İnhale kortikosteroidler persistan astımın tüm basamaklarında ilk tedavi seçeneği olarak kullanılır. Uzun dönemde, özellikle çocuklarda tedavi düzeninin günde iki kez olması tedaviye uyumu azaltır. Astımlı hastalarda inhale steroid tedavi düzeninin toplam doz aynı olacak şekilde günde iki kez, günde bir kez veya günaşırı olmasının etkinlik ve olası yan etki açısından karşılaştırmasını gösteren bir çalışma bulunmamaktadır.MATERYAL VE METOD:Çalışmada, 6-8 haftalık, 20-25 gr ağırlığındaki patojen içermeyen dişi BALB/C fareler Dokuz Eylül Tıp Fakültesi Hayvan Araştırmaları Laboratuvarı'ndan temin edildi. Hijyenik makrolen kafeslerde barındırılan ve ad libitum beslenen hayvanlar havalandırmalı ve 12 saatlik karanlık ve aydınlık ortamda muhafaza edildi. Tüm deneysel işlemler öncesinde Dokuz Eylül Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu'ndan onay alındı.Otuz beş adet BALB/C fare her birinde 7 fare olmak üzere kontrol grubu (grup 1), 2, 3, 4 ve 5'e ayrıldı. Kontrol grubu dışındaki çalışma grubundaki fareler, kronik astım modelinin oluşturulabilmesi için 0. ve 14. günlerde tavuk yumurtası albumini (ovalbumin, grade V, ? 98% pure; Sigma, St. Louis, MO, USA) ve alimunyum ile intraperitoneal olarak duyarlaştırıldı. Çalışmanın 21. gününden sonra kontrol grubu hariç diğer fareler 8 hafta süresince aerolize ovalbumine maruz bırakıldılar. Duyarlaşma dönemi boyunca kontrol grubundakilere salin nebulizasyonu uygulandı.Duyarlaşma döneminden sonra, grup 2'deki fareler günde iki kez salin ile, grup 3'teki fareler 250 mcg budezonid ile, grup 4'teki fareler 500 mcg budezonid ile, grup 5'teki fareler 1000 mcg budezonid ile duyarlaşma döneminin son 14 gününde tedavi edildiler. Hayvanlar sakrifiye edilerek akciğer örnekleri epitel kalınlığı, goblet ve mast hücre sayısı ve subepitel düz kas kalınlığı farklı dozlardaki inhale steroidlerin akciğer histolojisi üzerindeki etkilerini değerlendirmek üzere incelendi. Proksimal tibiadan elde edilen kemik dokuları 6 ay süren dekalsifikasyon döneminden sonra inhale steroidlerin trabekular kemik ve osteoid matriks üzerindeki yan etkielrinin araştırılması amacı ile incelendi.BULGULAR:Akciğer dokusunun tüm histolojik parametreleri placebo grubunda (grup 2) kontrol grubuna (grup 1) göre artmıştır. Bu sonuçlar, kronik astım modelinin başarı ile oluştuğunu göstermektedir. Akciğerin histolojik bulguları açısından grup 2'yi diğer gruplar ile karşılaştırdığımızda grup 3'te goblet hücre sayısı hariç diğer parametreler; grup 4'te bazal membran kalınlığı (p=0.000), subepitel düz kas kalınlığı (p=0.000), epitel yüksekliği (p=0.024); grup 5'te de tüm parametreler istatistiksel anlamlı olarak düşük bulunmuştur. Akciğer histolojisinin parametrelerinin sonuçları grup 3 ile 4 arasında karşılaştırıldığında bazal membran kalınlığı grup 4'te daha azalmış olarak saptanmıştır (p=0.003). Grup 5'te grup 3 ve 4'ün her biri ile karşılaştırıldığında subepitel düz kas kalınlığı (p=0.008, p=0.008, sırasıyla) belirgin olarak azalmıştır.Proksimal tibianın kemik dokusunun histolojik parametreleri grup 2 ile grup 3, 4 veya 5 ile karşılaştırıldığında osteoid kemik kalınlığı haricindeki tüm parametreler grup 2'de daha yüksek bulunmuştur (p<0.05). Grup 3, 4 ve 5 arasında tarabeküler sayı, tarbeküler kalınlık ve korteks kalınlığı açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmadı (p>0.05).SONUÇ:İnhale kortikosteroid verilen tüm gruplarda plasebo grubuna göre akciğer bulguları daha iyi saptanmıştır. İnhale kortikosteroid verilen tüm gruplarda plasebo grubuna göre akciğer bulguları daha iyi saptanmıştır. Günaşırı 1000 mcg budezonid alan grupta diğer gruplara göre kronik astım bulgularındaki düzelme daha fazladır. Gruplar arasında budezonidin kemikler üzerindeki yan etkilerini karşılaştırdığımızda, placebo grubu (grup 2) hariç diğer tüm gruplarda, belirgin bir trabekular kemik ve osteoid matriks kaybı gösterilmiştir. Fakat, grup 3, 4 ve 5 arasında ölçülen trabekular kemik ve osteoid matriks parametreleri açısından belirgin bir fark saptanmamıştır.

Abstract:
AIM:Inhaled corticosteroids are recommended as a first line treatment for all levelş of persistant asthma. In long term, compliance to the treatment declines according to twice a daily treatment regiments, particularly in children. There is no study demonstrating comparison of the effectiveness and potential side effects of inhaled steroid regiments in asthmatics either twice a day or once a day and every other day in the circumstances of same total cumulative dosage.MATERIAL AND METHOD:Spesific pathogen-free, 6- to 8-week-old, female BALB/c mice, weighting 20 to 25 g, were obtained from Animal Studies Laboratory of Dokuz Eylul University Medical Faculty. They were kept in hygenic macrolene cages and allowed ad libitum in air-conditioned rooms on a 12-hour light/12-hour dark cycle. All experimental procedures complied with the requirements of the Animal Care and Ethics Committee of the Dokuz Eylul University.Thirty-five BALB/c mice were divided into five groups which include seven mice in each; control group (group 1), plasebo group (group 2), 3, 4, and 5. The mice in study groups except control group were sensitized with chicken egg albumin (ovalbumin, grade V, ?98% pure; Sigma, USA) with aluminium intraperitoneally to constitute chronic astma model on 0. and 14. days of the study. After 21th day of the study the mice except controls received aerolized ovalbumine for 8 weeks. Controls received nebulized saline during sensitization period.After sensitization, mice in group 2 treated with saline twice a day, group 3 with budesonide of 250 mcg twice a day, group 4 with budesonide of 500 mcg once a day, and group 5 with budesonide of 1000 mcg every other day in the last 14 days of the challenge period. Animals were sacrificed and lung samples were examined for thicknesses of epithelium, goblet and mast cell counts and subepithelial smooth muscle thickness of lung tissue for examination of effectiveness of different dose regiments of inhaled steroids on lung histology. Bone tissues obtained from proximal tibia were examinated after 6 months of decalsification period for determination of side effects of inhaled streoid on trabecular bone and osteoid matrix.RESULTS:All of the histological parameters of the lung tissue were increased in the placebo group (group 2) than the controls (group 1). The results demonstrate the chronic asthma model was established succesfully.When we compare the histological parameters of lung between group 2 and other groups, all the parameters except goblet cell count was decreased in group 3; basement membrane thickness (p=0.000), subepithelial smooth muscle thickness (p=0.000), epithelial height (p=0.024) were decreased in group 4; and all parameters were sattistically significantly decreased in group 5. When the results of histological parameters of lung were compared between group 3 and 4 basement membrane thickness was decreased in group 4 (p=0.003). In group 5 subepithelial thickness was decreased when compared with either group 3 or group 4 (p=0.008, p=0.008, respectively).When the histological parameters of bone tissue of proximal tibia was compared to demonstrate the side effects of budesonide on bone tissue between group 2 and either the group 3, 4 or 5; all parameters except osteoid bone thickness were statistically significantly higher in group 2 (p<0.05). There was no statistically significant difference found between group 3, 4 and 5 among trabecular count, trabecular thickness and cortex thickness (p>0.05).CONCLUSION:The pulmonary parameters were alimeorated in all groups which received inhaled corticosteroid. Th pulmonary findings were alimeorated more than the other groups in which received budezonide of dose of 1000 mcg every other day. When we compare the side effects of budesonide on bone between the groups, in all groups except placebo group (group 2), a significant trabecular bone and osteoid matrix loss was demonstrated. Unfortunately, there was no significant difference between the groups of 3, 4, and 5 about measured parameters of trabecular bone and osteoid matrix.