Eskuletinin in-vivo ve ex-vivo sıçan migren modellerinde ağrı davranışı ve migren ağrısından sorumlu mekanizmalar üzerine etkileri
Effects of esculetin on pain behavior and mechanisms underlying migraine pain in in-vivo and ex-vivo rat models of migraine
Yazar: AYÇA NUR GÖNÜL
Danışman: DOÇ. DR. ERKAN KILINÇ
Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Fizyoloji = Physiology

Özet:
Sunulan çalışmada, kumarin türevlerinden Eskuletin isimli fitokimyasalın, sıçanlarda nitrogliserin (NTG) ile oluşturulan in-vivo ve ex-vivo migren modellerinde migren ile bağlantılı belirteçler üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
       İn-vivo deneylerde Wistar erkek sıçanlar 7 gruba ayrıldı (n=7/grup). Migren modeli 10 mg/kg NTG (i.p.) uygulaması ile oluşturuldu. Migren modelinde Eskuletin'in farklı dozlarının (5, 10 ve 20 mg/kg) etkisi test edildi ve pozitif kontrol olarak  migren ilacı sumatriptan uygulandı. Ayrıca Eskuletin'in tek başına etkisi de test edildi. Ex-vivo trigeminovasküler preparatlarda (n=8/grup) NTG ile indüklenen kalsitonin gen-ilişkili peptid (CGRP) salımı üzerine Eskuletin'in (100 μM) etkisi test edildi. Mekanik hiperaljezi von-Frey testi ile, in-vivo ve ex-vivo örneklerde CGRP ve beyin sapı c-Fos düzeyleri ELISA ile, meningeal mast hücreleri ise toluidine-blue boyaması ile değerlendirildi. Veriler one-way ANOVA ile analiz edildi.
      İn-vivo deneylerde Eskuletin, NTG'nin yol açtığı hiperaljeziyi, plazma ve trigeminal ganglion CGRP düzeylerini, beyin sapı CGRP ve c-fos düzeylerini ve mast hücre aktivasyonunu azalttı (p<0.05). Ex-vivo trigeminal gangliyon ve beyin sapı yapılarında Eskuletin, NTG'nin uyardığı CGRP salımını azalttı (p<0.001), ancak dural preparatlarda etkisiz kaldı. Pozitif kontrol olarak sumatriptan, in-vivo ve ex-vivo deneylerde NTG'nin etkilerini tersine çevirdi (p<0.01).  
     Eskuletin'in in-vivo ve ex-vivo'da migren ağrısı ile ilişkili yapılardan migren mediyatörü CGRP'nin salımını azaltması ve nörojenik inflamasyonun önemli bileşeni olan meningeal mast hücre aktivasyonunu baskılaması migren tedavisinde çok hedefli yeni bir ilaç adayı olabileceğini önermektedir. İleride farklı migren modelleri ile çalışmaların ve klinik denemelerin yapılması Eskuletin'in anti-migren potansiyelinin daha fazla anlaşılmasına katkı sunacaktır.

Abstract:
This study aimed to investigate the effects of Esculetin, one of the coumarin derivatives, on migraine-related markers in in-vivo and ex-vivo migraine models induced by nitroglycerin (NTG) in rats. In the in-vivo experiments, Wistar male rats were divided into 7 groups (n=7/group). 
          The migraine model was established by 10 mg/kg NTG administration. Different doses of Esculetin (5, 10, and 20 mg/kg) was tested in the migraine model and migraine drug sumatriptan was administered as a positive control group. The effect of Esculetin alone was also tested. In ex-vivo trigeminovascular preparations (n=8/group), the effect of Esculetin (100 μΜ) on the release of calcitonin gene-related peptide (CGRP) induced by NTG. Mechanical hyperalgesia was assessed by von-Frey filaments and CGRP concentrations in in-vivo and ex-vivo samples and c-Fos expression in brainstem by ELISA and meningeal mast cells by toluidine-blue staining. Data were compared by one-way ANOVA. 
          In the in-vivo experiments, Esculetin reduced the hyperalgesia, plasma and trigeminal ganglion CGRP levels, brainstem CGRP and c-fos levels, and mast cell activation induced by NTG (p<0.05). In the ex-vivo trigeminal ganglion and brainstem preparations, Esculetin reduced CGRP release stimulated by NTG (p<0.001), but it was ineffective in dural preparations. Sumatriptan, as a positive control, reversed the effects of NTG in in-vivo and ex-vivo experiments (p<0.01). 
          The fact that Esculetin reduced the release of migraine mediator CGRP from migraine pain-related structures in the in-vivo and ex-vivo and suppressed meningeal mast cell activation, which is a key component of neurogenic inflammation, suggests that it may be a new multi-targeted drug candidate in the treatment of migraine. Future studies with different migraine models and clinical trials will contribute to further understanding the anti-migraine potential of Esculetin