Tip 1 diabetes mellitus' un farklı klinik süreçlerinde TH1, TH2, TH17 ve TREG hücrelerinin rolünün araştırılması
Investigation of the role of TH1, TH2, TH17 and treg cells in various clinical phases of TYPE 1 diabetes
Yazar: BURÇİN ÖZGÜR
Danışman: PROF. DR. ALİ OSMAN GÜROL
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetes mellitus-tip 1 = Diabetes mellitus-type 1 ; Lenfositler = Lymphocytes ; Sitokinler = Cytokines ; T lenfositleri = T lymphocytes ; Transkripsiyon-genetik = Transcription-genetic ; Tümör nekroz faktörü-alfa = Tumor necrosis factor-alpha ; İnterferon-gamma = Interferon-gamma ; İnterlökinler = Interleukins

Özet:
Diabetes Mellitus (DM), çeşitli patogenetik mekanizmaların yol açtığı insülin üretimi, salgılanmasındaki bozukluk veya insülin direncine bağlı hiperglisemi ile karakterize metabolik bir hastalıktır. Hastalığın patogenezinde yardımcı T hücreleri (Th) önemli rol oynamaktadır. Çalışmamızda,  yeni tanılı, 1 yıllık ve 5 yıllık Tip 1 diyabet (T1D) hastaları (8'er hasta) ile 8 sağlıklı kontrolden alınan periferik kan örneklerinden periferik kan mononükleer hücreler (PKMH) izole edilerek uyarımsız ve uyarımlı şartlar altında 24 saat süreyle kültüre edilmiştir. Kültür sonrası, Th1, Th2, Th17 ve regülatör T (Treg) hücre oranları ve IFN-γ, TNF-α, IL-10, TGF-β, IL-5, IL-13, IL-17 ve IL-21 hücre içi sitokinleri Akan Hücre Ölçerle; bu hücrelerin transkripsiyon faktörleri T-bet, GATA3, ROR-γt ve FOXP3'ün mRNA ekspresyonları da Gerçek Zamanlı PZR ile değerlendirilerek hastalığın patogenezi ile olan ilişkisi incelenmiştir. T1D'liler ve sağlıklı kontrollere arasında CD3+CD8- hücrelerinde fark gözlenmemiştir. Uyarımsız koşullarda, yeni tanılı T1D'lilerde, azalmış CD4+CD25yüksek hücre oranları saptanmıştır. Uyarımlı şartlar altında, CD4+CD25yüksek hücrelerin yeni tanılı ve 1 yıllık hasta grubunda sağlıklı kontrollere kıyasla düştüğü saptanmıştır. Uyarımsız ve uyarımlı şartlarda, Th1 hücre içi IFN-γ ve TNF-α seviyeleri hasta gruplarında düşük saptanmıştır. Hücre içi IL-5, IL-13 seviyeleri açısından fark gözlenmemiştir. Th17 sitokinleri IL-17A ve IL-21'in hücre içi seviyeleri, uyarımsız ve uyarımlı koşullarda hastalarda yüksek bulunmuştur. Treg sitokinleri IL-10 ve TGF-β'nın hücre içi ekspresyonlarının hastalarda düştüğü gözlenmiştir. Hasta gruplarında Th1/Th2, Th17/Treg ve Th1/Treg oranlarının yüksek olduğu gözlenmiştir. Uyarımlı ve uyarımsız şartlarda, FOXP3 ve GATA3 mRNA ekspresyonları hasta gruplarında düşük saptanırken, RORγt ve T-bet mRNA seviyelerinin sağlıklı kontrollere göre yüksek olduğu gözlenmiştir. Sonuçlarımız, Th hücre altgruplarının T1D patogenezinde önemli rol oynadığını düşündürmektedir.

Abstract:
Diabetes Mellitus (DM) is a metabolic disorder characterized by hyperglycaemia due to insulin production/secretion disorder or insulin resistance caused by various pathogenetic mechanisms. T helper cells (Th) play an important role in the pathogenesis of the disease. In our study, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from peripheral blood samples from newly diagnosed, 1 year and 5 year type 1 diabetes (T1D) patients (8 patients) and 8 healthy controls and cultured for 24 hours under unstimulated and stimulated conditions. After culture, the cell ratios of Th1, Th2, Th17, and regulator T (Treg) and the intracellular levels of IFN-, TNF-α, IL-10, TGF-β, IL-5, IL-13, IL-17 and IL-21 cytokines were evaluated using Flow Cytometry; whereas mRNA expressions of the transcription factors T-bet, GATA3, ROR-γt and FOXP3 of these cells were determined by Real-Time PCR. Reduced CD4+CD25high cell ratios were detected in newly diagnosed T1D patients under unstimulated conditions. CD4+CD25high cells were found to be reduced in the newly diagnosed and 1 year group of patients compared to healthy controls under stimulated conditions. Intracellular IFN-γ and TNF-α levels were low in patients under unstimulated and stimulated conditions. IL-17A and IL-21 were found to be high in patients with unstimulated and stimulated conditions. Expressions of IL-10 and TGF-β have been observed to be reduced in patients. Th1/Th2, Th17/Treg and Th1/Treg ratios were higher in the patient groups. FOXP3 and GATA3 mRNA expressions were found to be low in patients, while RORγt and T-bet mRNA levels were higher than healthy controls under stimulated and unstimulated conditions. Our results suggest that Th cell subgroups play an important role in the pathogenesis of T1D.