Karbazol ß-laktam türevlerinin paraoksonaz enzimi üzerine etkilerinin araştırılması
Investigating of effect of carbazole ß-lactam derivaties on paraoxonase enzyme
Yazar: BAŞAK GÖKÇE
Danışman: PROF. DR. OKTAY ARSLAN
Balıkesir Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
KARBAZOL b-LAKTAM TÜREVLERİNİN PARAOKSONAZ ENZİMİ ÜZERİNE ETKİLERİNİN İNCELENMESİ
Paraoksonaz (PON1), arilesteraz, paraoksonaz ve laktonaz aktivitesine sahip bir ester hidrolazdır. Detoksifikasyon ve antioksidan aktivitesi ile metabolizmada önemli fizyolojik fonksiyona sahip olan paraoksonaz (PON1) enziminin fizyolojik substratı henüz tanımlanmamıştır. Bu araştırma üç bölümden oluşmaktadır. Birinci bölümde, insan serum paraoksonaz (PON1) enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi ve hidrofobik etkileşim kromatografisi (Sepharose 4B-L-tirozin-1-Naftilamin) yöntemleri kullanılarak saflaştırılmıştır. Saflaştırılmış enzim SDS-Poliakrilamid jel elektroforezinde yaklaşık 43 kDa molekül ağırlığında tek bant vermiştir. 
Araştırmanın ikinci bölümünde, hidrofobik etkileşim kromatografisi ile saflaştırılan paraoksonaz (PON1) enzimi üzerinde 36 farklı karbazol b-laktam türevlerinin in vitro etkileri incelenmiştir. Bileşiklerin tamamının enzimi belirli ölçüde aktive ettiği saptanmıştır.
Çalışmanın son bölümünde ise paraoksonaz enzimini saflaştırmak için yeni bir afinite jeli sentezlenmiştir. Afinite kromatografisi jeli, CNBr ile aktive edilmis Sepharose-4B?ye uzantı kolu olarak L-tirozin bağlandıktan sonra ligand olarak 7-amino-3,4-dihidro-2(1)-kinolin bileşiğinin L-tirozine kenetlenmesi sonucu sentezlenmiştir. Bu amaçla, yeni afinite jelinden paraoksonaz enzimi saflaştırılmış ve enzimin saflığı SDS-poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir.

ANAHTAR KELİMELER: paraoksonaz (PON1), hidrofobik etkileşim kromatografisi, karbazol ?-laktam bileşikleri, in vitro, afinite kromatografisi

Abstract:
Paraoxonase (PON1) is a ester hydrolase, which has arylesterase, paraoxonase and lactonase activity. Paraoxonase (PON1) enzyme has important physiological function on metabolism by detoxification and antioxidant activity. Its physiological substrate has not been determined yet. This study consist of three parts. In the first chapter, human serum paraoksonaz (PON1) was purified by using ammonium sulfate precipitation and hydrophobic interaction chromatography (Sepharose 4B-L-tyrosine-1-Naftilamin). Purified enzyme was shown a single band with 43 kDa in SDS-polyacyrilamide gel electrophoresis.
The second part of the study, the effects of 36 different carbazole b-lactam derivatives in vitro were investigated on paraoxonase (PON1) enzyme purified with hydrophobic interaction chromatography. It was determined that all of the compounds activate the enzyme activity by different rate.
The last part of the study, a novel affinity gel was synthesized to purify paraoxonase enzyme. The affinity chromatography gel was synthesized, Sepharose-4B was activated with CNBr and L-tyrosine was them added as an extension arm. The gel was synthesized by coupling 7-amino-3,4-dihydro-2(1)-quinoline to the spacer arm. For this purpose, paraoxonase enzyme was purified by new synthesized affinity gel and the purity of enzyme was checked with SDS-polyacyrilamide gel electrophoresis.

KEYWORDS: paraoxonase (PON1), hydrophobic interaction chromatography, carbazole ?-lactam compounds, in vitro, affinity chromatography