Perforasyon tedavisinde kullanılan çeşitli materyallerin sitotoksisite ve antimikrobiyal etki yönünden karşılaştırılması
Comparison of cytotoxicity and antimicrobial effects of various materials using for treatment of tooth perforations
Yazar: ESMA ASUMAN ÇAVDAR TETİK
Danışman: PROF. DR. MELTEM DARTAR ÖZTAN
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Endodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Benzoik asit = Benzoic acid ; Dental materyaller = Dental materials ; Kök kanal dolgu materyalleri = Root canal filling materials ; Sitotoksisite = Cytotoxicity

Özet:
Bu çalışmanın amacı, diş perforasyonlarının tamirinde kullanılan BA, MTA, Super EBA ve amalgamın L-929 hücre kültüründe MTT testi ile sitotoksik etkilerinin, Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis ve Pseudomonas aeruginosa üzerinde agar difüzyon testi ile antimikrobiyal etkilerinin incelenmesidir.Çalışmanın birinci bölümünde, her bir materyalden 5 mm iç çapında ve 2 mm derinliğinde hazırlanan 15 adet örnek, hücre kültürü plakalarında, üzerine DMEM ilave edilerek 24, 48 ve 72 saat bekletilmiştir. Elde edilen ekstraksiyon sıvıları, L-929 hücre süspansiyonu içeren 96 gözlü hücre kültürü plakalarının her bir gözüne 100 µl yerleştirilmiştir. 24 saatlik inkübasyon süresi sonunda tabletlerden ekstraksiyon sıvıları uzaklaştırılmış ve her bir göze MTT solüsyonu ilave edilerek karanlık bir ortamda 4 saat süre ile bekletilmiştir. Bu sürenin sonunda spektrofotometrede 570 nm' de absorbansları ölçülmüştür.Çalışmanın ikinci bölümünde, materyallerden hazırlanan örnekler C. albicans, E. faecalis, E. coli, S. mutans, S. Sanguinis ve P. aeruginosa mikroorganizma süspansiyonlarının ekiminin yapıldığı agar plaklarına yerleştirilmiştir. 24 ve 48 saatlik inkübasyon süresi sonunda agar plaklarındaki örneklerin etrafında oluşan inhibisyon zonları ölçülmüştür.MTT testi sonuçlarına göre 24 saatlik değerlendirmede BA ile MTA grupları arasında hücre canlılık oranları açısından istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmezken (p=0,805) bu iki grubun Super EBA ve amalgam gruplarından daha iyi sonuçlar verdiği gözlenmiştir (p<0,025). Grupların 48 saatlik değerlendirmelerinde BA grubu diğer gruplara göre istatistiksel olarak anlamlı ölçüde daha yüksek hücre canlılık oranı göstermiştir (p<0,024). Bu zaman noktasında en düşük canlılık oranının Super EBA grubunda olduğu (p<0,024), MTA ve amalgam grupları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığı belirlenmiştir (p=0,461). 72 saatlik değerlendirmede gruplar arasında BA grubu istatistiksel olarak en yüksek hücre canlılık oranını gösterirken bunu sırasıyla amalgam, MTA ve Super EBA gruplarının takip ettiği gözlenmiştir (p<0,015). Bu çalışmada her bir materyal için 24. saatten 72. saate kadar olan zamana bağlı hücre canlılık oranındaki değişimlerde anlamlı bir fark gözlenmemiştir (p<0,0125).Agar difüzyon testi sonuçlarına göre 24 ve 48 saatlik inkübasyon periyodu sonunda BA ve MTA materyalleri çeşitli düzeylerde tüm mikroorganizmalar üzerinde inhibisyon oluşturmuştur. Super EBA' nın ise E. coli, S. mutans ve S. sanguinis üzerinde etkin olduğu görülürken C. albicans, E. faecalis ve P. aeruginosa üzerinde etkin olmadığı bulunmuştur. Ayrıca, çalışmamızda kullandığımız tüm mikroorganizmalar üzerinde amalgamın etkisiz olduğu görülmüştür. Bununla birlikte, materyallerin etkinlik zamanları karşılaştırıldığında E. faecalis, E. coli, S. mutans, S. sanguinis üzerinde 24. saatten 48. saate anlamlı bir fark oluşmamıştır (p>0,05). C. albicans üzerinde BA ve MTA' nın ve P. aeruginosa üzerinde BA' nın etkinliğinde 24. saatten 48. saate anlamlı bir azalma meydana gelmiştir (p<0,05).

Abstract:
The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity of perforation repair materials BA, MTA, Super EBA and amalgam on L-929 cells with the MTT assay and the antimicrobial effects on Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis ve Pseudomonas aeruginosa using the agar diffusion test.In the first part of this study, 5x2 mm cylinders of each material samples were prepared and placed in DMEM for 24, 48 and 72 hours. 100 µl of eluate was transferred to a 96-well plate containing L-929 cell suspension. After 24 hours incubation the extracts were removed from the wells, MTT solution was added to each well and kept in a dark environment for 4 hours. Subsequently, the spectrophotometric absorbance was measured at 570 nm using a spectrophotometer.In the second part of this study, samples of each material were placed on agar plates inoculated with C. albicans, E. faecalis, E. coli, S. mutans, S. Sanguinis ve P. aeruginosa suspensions. After 24 and 48 hours incubation, the diameters of the zones of inhibition were measured.According to the results of MTT assay, there was no statistically significant difference between BA and MTA in the rates of cell viability at 24-hour evaluation (P=0,805). These two groups showed better results than Super EBA and amalgam (P<0,025). At 48-hour evaluation of the groups, BA group showed higher rate of cell viability than the other groups (P<0,024). At that time, the lowest rate of viability was in the Super EBA group (P<0,024) and there was no statistically significant difference between MTA and amalgam groups (P=0,461). While BA showed the highest rate of cell viability at 72-hour evaluation, it was followed by amalgam, MTA and Super EBA respectively (P<0,015). In the present study, time-dependent changes in the cell viability from 24 to 72 hours were not statistically significant for each material (P<0,0125).The results of the agar diffusion tests showed that BA and MTA were effective on the tested microorganisms at 24 and 48 hours incubation periods. Super EBA showed antimicrobial effect on E. coli, S. mutans and S. sanguinis, whereas it was ineffective on C. albicans, E. faecalis and P.aeruginosa. Amalgam was also ineffective on all the test microorganisms at 24 and 48 hours incubation. When the time of the efficiency of the materials were compared, there was no statistically difference between 24 to 48 hours on E. coli, E. faecalis, S. mutans, S. sanguinis in all groups (p>0,05). There was statistically significant decrease 24 to 48 hours on C. Albicans in BA and MTA groups and P. Aeruginosa in BA group (p<0,05).