Spodoptera exigua pkg geninin antisense RNA ile susturulmasına yönelik çalışmalar
Study towards knockdown of spodoptera exigua pkg gene by antisense RNA
Yazar: MERVE KONGUR
Danışman: YRD. DOÇ. DR. REMZİYE NALÇACIOĞLU
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bakülovirüslerle enfekte olan böceklerde enfeksiyon sonucu bazı davranışsal değişiklikler meydana gelir. Bu davranışsal değişimler böceğin aşırı aktif hareketi ve bulunduğu yerin dikey doğrultusunda (bitkinin) en üst noktaya tırmanması şeklindedir. Virüs enfeksiyonu sonucunda böcekte meydana gelen davranışsal değişikliklere neden olan mekanizmaların çoğu bilinmemektedir. Bu çalışmada virüsün konak canlıda oluşturduğu davranış değişikliğinden sorumlu olduğu düşünülen cGMP protein kinaz (pkg) geninin rolü incelenmiştir. for geninin Drosophila melanogaster ve Apis mellifera gibi bazı farklı böceklerde, yem arama davranışını ve hareket kabiliyetini sağladığı gösterilmiştir.Bu çalışmanın amacı Spodoptera exigua pkg geninin RNA interferans tekniği kullanılarak baskılanması ve pkg geninin konağın davranış değişikliğindeki rolünün aydınlatılmasıdır. Çalışmada öncelikle gfp ve pkg genlerinin, gene özgü dsRNA üreten AcMNPV virüsü ile susturulduğu tespit edildi. Bu amaçla hedef genlere (pkg ve gfp) karşı dsRNA üreten AcMNPV bakmidleri ayrı ayrı gfp ekspresyonu yapan rekombinant AcMNPV ile Sf-9 hücrelerine birlikte enfekte edildiler. Ko enfeksiyon sonucunda 3. ve 4. gün de pkg ve gfp genlerinin susturulduğu belirlenmiştir. Bu deneyi takiben pkg geninin susturulmasında daha farklı sistemlerin test edilmesi amacı ile pkg genine karşı firkete yapısında dsRNA üreten bakmidin inşası için gerekli plazmid vektörler hazırlanmıştır.Bu çalışmada aşırı aktif hareket etme davranışına etkide bulunması muhtemel konak proteinlerin araştırılmasına katkı sağlayacak viral bakmid sisteminin oluşturulmasında kullanılacak teknolojinin tasarımı hedeflenmiştir.

Abstract:
As a result of infection, some behavioural changes occur in insects infected with baculoviruses. These behavioural changes include hypermobility and climbing the top of the plant. The mechanisms, by which the virus infection induces this behavioural change, are largely unknown. In this study, the role of cGMP protein kinase (pkg) gene thought to be responsible from behavioural changes occurred in host induced by the virus have been examined. It is shown that for gene provided food searching context and mobility in different insects, such as Drosophila melanogaster and Apis mellifera.The aim of the study is to silence Spodoptera exigua pkg gene and determine the role of pkg gene in the behavioural response of the host. In the study initially, it is detected that pkg and gfp genes were down regulated with AcMNPV bacmid producing dsRNA against these genes. For this purpose, AcMNPV bacmids expressing dsRNAs against target genes (pkg and gfp) separately co-infected with recombinant AcMNPV expressing gfp to Sf-9 cells. As a result of the infection, it was determined that pkg and gfp genes were successfully down regulated in the 3 d.p.i and the 4 d.p.i, respectively. Following these experiments, in order to test different systems for down regulating pkg gene, the plasmid vectors necessary for constructing bacmid producing dsRNA at hairpin structure against pkg gene.In this study it is aimed to design the technology that will be used for the production of viral bacmid system potentially useful for understanding the mechanism involving hypermobility behaviour in host insects larvae?s upon viral infection