Antijen taşıyıcı adjuvan özellikteki çoklu emülsiyon formülasyonlarının geliştirilmesi ve değerlendirilmesi
Development and evaluation of antigen delivering multiple emulsion formulations having adjuvant properties
Yazar: DUYGU HINÇ
Danışman: PROF. DR. ASUMAN BOZKIR
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Adjuvant = Adjuvant ; Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Emülsiyonlar = Emulsions ; Tetanoz = Tetanus ; Tetanoz toksoidi = Tetanus toxoid ; İmmün sistem = Immune system ; İmmünizasyon = Immunization

Özet:
Bu tez çalışmasının amacı; model etkin madde olarak tetanoz toksoidini içeren adjuvan özellikteki çoklu emülsiyon formülasyonlarının geliştirilmesi ve parenteral uygulama ile oluşturduğu bağışık yanıtın değerlendirilmesidir.Çalışmamızda, tetanoz toksoidi içeren S/Y/S tipi çoklu emülsiyon formülasyonları iki basamaklı ve modifiye iki basamaklı hazırlama yöntemleri kullanılarak hazırlanmıştır. Ön formülasyon çalışmalarında sistemlerin makroskobik, mikroskobik ve reolojik özellikleri incelenmiştir. Antijenle hazırlamak için aday olabilecek özelliklere sahip stabil formülasyonların geliştirilmesinden sonra seçilen F6, F33 ve F35 kodlu formülasyonların karakterizasyonu ve stabilitesinin belirlenmesi için viskozite, damlacık büyüklüğü ve dağılımının tayini, iç ve dış su fazlarının ozmotik basınçlarının ölçümü ve pH tayini yapılmıştır.Antijenle birlikte hazırlanan F6, F33 ve F35 kodlu formülasyonlarda da karakterizasyon ve stabilite çalışmaları yapılmıştır.Antijenin formülasyonlardan salım profillerini ve formülasyonun yapısal özelliğini koruduğunu göstermek amacıyla in vitro salım çalışmaları yapılmıştır. Salım çalışmaları ile antijenin formülasyonlardan sürekli ve uzatılmış salımının sağlandığını göstermiştir. Salım çalışmalarında salınan antijenin miktar tayini MikroBCA (Mikrobikinoninik asit) analizi ile yapılmış, formülasyon içindeki stabilitesinin korunduğu SDS-PAGE (Sodyum-dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi) yöntemi ile kanıtlanmıştır.Formülasyonların subkutan uygulama sonrası oluşturduğu immün yanıt kobaylarda araştırılmıştır. ELISA testi ile hesaplanan kobayların serumlarındaki Ig G konsantrasyonları, F6 ve F35 kodlu formülasyonların yeterli düzeyde immün yanıt oluşturduğunu ve aşı adjuvanı olarak umut vaat eden sistemler olduğunu göstermiştir.Anahtar Sözcükler: Adjuvan, İmmünizasyon, Parenteral aşı, S/Y/S tipi çoklu emülsiyon, Tetanoz toksoidi

Abstract:
The purpose of this study is to develop adjuvant featured W/O/W multiple emulsion formulations which include tetanus toxoide as model active substance and to evaluate their immune responses composed by parenteral applications.In our study, adjuvant featured W/O/W multiple emulsion formulations are prepared by two-stage and modified two-stage emulsification methods. Macroscobic and microscobis properties of the formulations were investitaged during preformulation studies. Following development of stable formulations, viscocity, globule size and distribution and pH detection, inner and outer water phases osmotic pressure measurments were done in order to find out characterization and stability of F6, F33 and F35 coded choosen formulations.Characterization and stability studies were also carried on for the F6, F33 and F35 coded formulations that were prepared along with antigen.In vitro release studies were done to show release profiles of formulations and sustainability of formulations structure. The studies revealed that antigen shows sustained and prolonged release. The amount of antigen relased was measured by MicroBCA. SDS-PAGE method was used to prove the stability of antigen in formulations.The immune response that was formed by formulations after subcutaneous application was studied on guinea pigs. Ig G concentrations in guinea pigs serum which was calculated by ELISA test showed that F6 and F35 coded formulations are capable to develop enough immune response and they are promising systems as vaccine adjuvants.Key Words: Adjuvant, Immunization, Parentaral vaccine, Tetanus toxoid, W/O/W multiple emulsion