Datça papatyasının (Chrysanthemum coronarium) bazı biyoaktif bileşenlerinin belirlenmesi; ilaç ve kozmetik endüstrisinde hammadde olarak kullanılabilirliğinin araştırılması
Determination of some bioactive compounds of (Chrysanthemum coronarium) and investigation of usage on drug and cosmeti̇c industry as raw material
Yazar: BEGÜM PINAR DEMİRKENT
Danışman: PROF. DR. NAZAN DEMİR
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bu çalışmada, Muğla'nın Datça ilçesinin kırsal bölgelerinde doğal olarak yetişen datça papatyası (Chrysanthemum coronarium) çiçekleri Mart-Nisan aylarında toplanmış, bazı biyoaktif bileşenleri belirlenmiş ve proteaz enzim aktivitesi üzerine araştırmalar yapılmıştır.
Enzimler, canlı hücrede meydana gelen metabolizma reaksiyonlarının pek çoğunu hızlandıran veya düzenleyen protein yapısındaki biyolojik katalizörlerdir. Endüstride hemen her alanında kullanılan enzimler genellikle mikroorganizmalardan elde edilmektedir. Mikrobiyal kaynaklardan insanlara geçen bazı hastalıkların bulunması mikrobiyal enzimlerin özellikle gıda maddesi yapımında kullanımı konusunda kuşkuları artırmıştır. Bu gelişme araştırmacıları yeni bitkisel enzim kaynakları aramaya sevk etmiştir. 
Proteaz enzimi prtoeinlerin peptitlere ve amino asitlere hidrolizini katalizler. Hem endüstriyel hem de biyokimyasal uygulamalarda en önemli enzim gruplarından biridir. Datça papatyasından (Chrysanthemum coronarium) proteaz enzimi saflaştırmak için  (NH4)2SO4 çöktürmesi yöntemi ve CM-Sephadex iyon değişim kromotografisi kullanıldı. Enzim için optimum pH ve optimum sıcaklık, kazein, azokazaein, jelatin, hemoglobin, azoalbümin substratları için KM ve Vmax değerleri belirlendi. Datça papatyasından (Chrysanthemum coronarium) saflaştırılan proteaz enziminin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE kullanıldı. Enzimin molekül ağırlığının 33,2 kDa olduğu jel filtrasyon kromatografisinden yararlanılarak hesaplandı.
Enzim aktivitesi üzerine 10 mM, 1 mM, 0,1 mM SDS, EDTA, β-merkaptoetanol bileşiklerinin ve 10 mM, 1 mM, 0,1 mM Mg+2, Ca+2, Mn+2, Ni+2, Hg+2, Fe+2, Fe+3 katyonlarının etkisi araştırıldı.
Datça papatyasındaki bazı vitaminlerin varlığı tespit edildi. A vitamini (β-karoten) miktarı 56±0,24 μg/100 g, E vitamini (α-tokoferol) miktarı 38±0,11 μg/100 g ve C vitamini (askorbik asit) miktarları 18±0,34 mg/100 g olarak belirlendi.

Headspace GC/MSD ile uçucu ve aroma verici bileşenleri analiz edildi. Ayrıca hekzan, etil asetat ve alkol fraksiyonları olmak üzere Datça papatyası çiçeklerinden elde edilen üç farklı polaritedeki ekstrelerin antioksidan aktiviteleri belirlendi. Toplam antioksidan aktivite (β-karoten renk açılımı yöntemi ile), DPPH serbest radikali giderimi ve ABTS katyon radikali giderimi aktivitesi belirlendi.
Yapılan çalışmalar datça papatyası (Chrysanthemum coronarium) çiçeklerinin, proteaz enzimini, uçucu organik bileşenlerden aselaldehit(%17,238),  kampor(%22,308)  içerdiği  ve A, C, E grubu vitamin içeriği bakımından zengin olduğu tespit edilmiştir. Bu sonuca dayanarak bitkinin kozmetik ve ilaç endüstirisinde kullanılabileceği kanısına varılmıştır.

Abstract:
In this study, Chrysanthemum coronarium flowers which are grown up naturaly in countyside regions of Muğla's Datça were collected in March and April, had identified some bioacvtive components, and made research on protease enzyme activity. 
Enzymes are protein structered biological catalyzors which accelerating and regulating many of the metabolic reactions that placed in living cells. The enzymes used in almost all areas of industry and usually obtained from microorganisms. The presence of microbial disease passed to some people has increased doubts about its use in food production of especially enzymes obtained from microbial sources. This development has led researchers to look for new sources of plant enzymes.
Proteases enzymes catalayses hydrolysis of proteins to peptides and amino acids. They are one of the important groups both in biochemical and industrial applications. (NH4)2SO4 precipitate and CM-Sephadex ion exchange chromatography were used for purification of the protease from Chrysanthemum coronarium flowers. Optimal pH and temperature and Km and Vmax values for casein, azocasein, azoalbumin, gelatin, hemoglobin substrats for purified enzyme were calculated. Sodium dodecyl sulphate polacrylamide gel electrophoresis was applied for control of the protease enzyme purified from Chrysanthemum coronarium and molecular weight of purified protease enzyme is determined as 33,2 kDa by using gel filtration chromotografphy.
The effect of Hg2+, Mn2+, Ca2+, Fe2+, Fe3+, Ni2+, Mg2+ (10 mM, 1 mM, 0,1 mM) cations and EDTA, SDS and β-mercapto ethanol chemicals on enzyme activity were studied. 
Some Vitamines were determined in Chrysanthemum coronarium flowers. Amount of Vitamine A (β-karoten) is 56±0,24 μg/100 g, vitamine E (α-tokoferol) 38±0,11 μg/100 g and vitamine C (ascorbic acid) 18±0,34 mg were found in 100 g Chrysanthemum coronarium.
Chrysanthemum coronarium flowers were analyzed for volatile and flavor compounds using Headspace GC/MSD. Moreover, extracts of hexane, ethyl acetate and alcohol fractions, which were in three different polarities, obtained from Chrysanthemum coronarium flowers were evaluated for antioxidant activities: Total antioxidant activity (using β-carotene bleaching method), DPPH free radical scavenging assay, ABTS radical cation scavenging assay.
At the end of studies, protease enzyme, acetaldehyde (17.238%), camps (22.308%) as volatile organic compound, A, C, E group of vitamines were found as huge amounts in Chrysanthemum coronarium. Relying on this results we concluded the plant can be used in the cosmetic and pharmaceutical industries.