İzole perfüze sıçan mezenterik damar yatağında "shear stress" etkisi ile indüklenen NOS inhibitörlerine duyarlı ve duyarsız NO aktivitesinde Kaveolin-1' in modülatör rolü
Modulator role of Caveolin-1 in shear stress-induced NOS inhibitor?sensitive and insensitive NO activity in the isolated perfused rat mesenteric bed
Yazar: ÖZLEM YORULMAZ ÖZÜ
Danışman: PROF. DR. ERGİN ŞİNGİRİK
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Endotelyum = Endothelium ; Kaveolin = Caveolin ; Nitrik oksit = Nitric oxide ; Stres = Stress ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Bu çalışmada izole perfüze sıçan mezenterik damar yatağında shear stress ile indüklenen eNOS inhibitörlerine duyarlı ve duyarsız NO aktivitesinde kaveolin-1' in olası modülatör rolü araştırıldı.Mezenterik damar yatağının basıncı kümülatif fenilefrin uygulamalarıyla konsantrasyona bağımlı şekilde arttırıldı, dokuların bir kaveol deplesanı olan Metil-ß-siklodekstrin (MßCD) ile ön muamelesi fenilefrine bağlı basınç artışlarını kontrole göre güçlendirdi. Bu dokularda elektron mikroskopu ile yapılan ölçümlerde kaveol sayısının kontrole göre azaldığı gözlenirken, mikroelisa yöntemiyle yapılan incelemelerde nitrik oksid sentaz (NOS) miktarının arttığı gözlendi. ?1 adrenoseptör agonisti fenilefrin, NOS inhibitörleri Nw-nitro-L-arjinin (L-NA) ve Nw-nitro-L-arjinin metil ester (L-NAME) varlığında veya endotel yokluğunda perfüzyon basıncını kontrole göre daha güçlü bir şekilde arttırdı. MßCD ile ön muamele edilmiş dokularda L-NA veya L-NAME varlığında kasılmaları, sadece MßCD ile muamele edilenlerle karşılaştırıldığında, daha büyüktü. Endotelyumsuz dokuların MßCD ile ön muamelesi ise bu kasılmaları azalttı.MßCD ile ön muamele edilmiş dokularda, tek doz fenilefrinle oluşturulan submaksimal basınç üzerinde NOS inhibitörleri ve onların varlığında hidroksikobalamin (HK) nin birlikte uygulamasına bağlı gelişen ilave artışların, MßCD uygulanmamış olanlara göre anlamlı bir şekilde azaldığı görüldü.Bu bulgular, 1) izole perfüze sıçan mezenterik damar yatağında, fenilefrinle oluşturulan vazokonstriksiyona bağlı olarak sentez ve salınımı uyarılan NO' nun NOS inhibisyonuna duyarlı ve duyarsız olmak üzere iki ayrı bileşeninin olduğunu, 2) bu bileşenlerin, damar yatağının kasılma ve buna bağlı gelişen basınç artışlarının modülasyonunda önemli bir role sahip olabileceğini, 3) bu modulasyonun kolesterolden zengin membran kaveollerini de içerdiğini, 4) bu yapıların bir kolesterol deplesanı olan bu MßCD tarafından bütünlüğünün bozulmasının fenilefrine bağlı basınç artışlarını güçlendirdiğini, 5) basınç artışlarındaki bu büyümenin kaveolle birlikte, bu yapıda yerleşik, NOS enzim düzeylerindeki azalmadan kaynaklanabileceğini ve 6) kaveol düzeylerindeki bu azalmanın NOS inhibisyonuna hem duyarlı hem de duyarsız NO etkisine paralel olduğunu telkin etmektedir.

Abstract:
In this study, it was investigated that the probable modulator role of Caveolin-1 in shear stress- induced NOS inhibitors-sensitive and insensitive NO activity in the isolated perfused rat mesenteric bed. In the control, the pressure of mesenteric bed was increased depending on cumulative phenylephrine,?1 adrenoceptor agonist. Pretreatment of the tissue with MßCD, a cholesterole depletant, augmented the pressure increased by phenylephrine. Also MßCD-treatment of the tissue disrupted the structural integrity of caveolea as demonstreated by the reduction of caveolea invaginations at the endothelial membrane surface which was clearly visible as revealed by electron microscopy. However, the level of eNOS was increased in the tissue treated with MßCD when compared to untreated. NOS inhibitors, L-NA or L-NAME, and endothelium denudation increased the pressure more potently aganist the control. However pretreatment of MßCD inhibited the contractions in the endothelium ?denuded tissue.In the MßCD-pretreated tissue, increament in the pressure by the presence of NOS inhibitors or NOS inhibitors plus NO inhibitor hydroxocobalamine (HC), was significantly lower than that of observed with MßCD-untreated groups.These findings suggest that 1- NO release evoked by vasoconstriction has two components which are NOS inhibitor-sensitive and ?insensitive forms, 2- they may have important roles in modulation of vascular bed contraction, 3- this modulation is associated with cholesterol-rich membrane caveolaes. 4- the distruption of the membrane caveolae with MßCD augmented the pressure induced by phenylephrine. 5- this augmentation in the pressure may be due to the decreased levels of NOS which localized by caveolin-1, 6- the diminished levels caveola associated with the reduction in both NOS inhibitors-sensitive and ?insensitive NO activity.