AT2 reseptör agonisti novokininin miyokardiyal iskemi-reperfüzyona bağlı oksidatif stres, inflamasyon ve nekroz alanı üzerine etkileri
The effects of at2 receptor agonist novokinin on oxidative stress, inflammation and necrosis area due to myocardial ischemia-reperfusion
Yazar: ESRA GÜNDÜZ
Danışman: PROF. DR. ENGİN ŞAHNA
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: ADMA = ADMA ; Antihipertansif ajanlar = Antihypertensive agents ; Miyokardial reperfüzyon = Myocardial reperfusion ; Miyokardial reperfüzyon lezyonu = Myocardial reperfusion injury ; Nekroz = Necrosis ; Nükleer faktör-kappa B = Nuclear factor-kappa B ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sıcaklık şoku proteinleri = Heat shock proteins ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
İskemi ve reperfüzyon (İR) hasarı trombolitik tedavi, organ nakli, koroner anjioplasti ve kardiyopulmoner bypass gibi çeşitli tıbbi ve cerrahi girişimler sırasında görülen önemli bir problemdir ve Renin Anjiyotensin Sistemi bu hasarda önemli rol oynamaktadır. AT2 reseptörleri, AT1'lere zıt olarak, vazodilatör, antiproliferatif, proapoptotik etkiler göstermektedir. Kardiyak hipertrofi, miyokard infarktüsü, konjestif kalp yetmezliği gibi patolojik durumlarda AT2 reseptör sayısında artış olmaktadır. Çalışmamızda, AT2 reseptör agonisti Novokinin?in miyokardiyal İR da nekroz alanı, endotelyal disfonksiyon ve oksidatif stres ile ilişkili CAV-1, HSP90, ADMA, Rhokinaz, NADPH oksidaz ve inflamasyonla artan NF?B ve TLR-4 düzeylerine etkilerinin incelenmesi amaçlandı.
Çalışmada 28 adet Sprague-Dawley cinsi erkek sıçan 4 gruba (n=7) ayrıldı: Kontrol, Novokinin, IR, IR+Novokinin (IRN). İlaç uygulamaları genel anestezi altında juguler vene yerleştirilen kanül yardımı ile infüzyon pompası kullanılarak iskemi öncesinde ve İR süresince yapıldı. Sol ana koroner arterin oklüzyonu ile 30 dk iskemiyi takiben 120 dk reperfüzyon sağlandı. Deney sonunda kalp dokularından CAV-1, HSP90 ve NFKB düzeyleri RT-PCR, ADMA, TLR-4, Rhokinaz ve NADPH oksidaz düzeyleri ELISA yöntemi, nekroz alanı ImageJ görüntü analiz programı ile ölçüldü.
IRN grubununun ortalama kan basıncı değerleri iskemi ve reperfüzyon başlangıcında ve iskemi sonunda IR grubuna göre anlamlı olarak azaldı. NF?B, HSP90, NADPH oksidaz ve TLR-4 düzeyleri İR ile arttı ve novokinin uygulaması 
ile anlamlı olarak azaldı. CAV-1 düzeylerinde gruplar arasında fark yoktu. IR grubunda ADMA ve Rhokinaz düzeylerindeki artışlar novokinin uygulaması ile engellendi. Novokinin İR?a bağlı nekroz oranını azalttı. 
Sonuçlarımız, İR hasarında ADMA, HSP90, NFKB, TLR-4, Rhokinaz ve NADPH oksidaz düzeylerinin önemli rol oynadığını ortaya koymaktadır. AT2 reseptör agonisti Novokinin miyokardiyal İR hasarında oksidatif değişiklikleri, inflamasyonu ve endotel fonskiyonlarını olumlu yönde etkileyebilir.

Anahtar Kelimeler: İskemi-reperüzyon, AT2 reseptör, ADMA, NF?B, HSP90

Abstract:
Ischemia and reperfusion (IR) injury is a serious problem that is occured during a variety of medical and surgical procedures, such as thrombolytic therapy, organ transplantation, coronary angioplasty, and cardiopulmonary bypass and the renin-angiotensin system plays an important role in this damage. In contrast to the AT1 receptors, AT2 receptors have vasodilator, anti-proliferative, proapoptotic effects. In pathological conditions such as cardiac hypertrophy, myocardial infarction, congestive heart failure there is an increase in the number of AT2 receptors. This study was designed to investigate the effects of AT2 receptor agonist Novokinin on necrosis area, CAV-1, HSP90, ADMA, NADPH oxidase and Rhokinase associated due to endothelial dysfunction and oxidative stress, and increased NF?B and Toll-like 4 receptor (TLR-4) levels induced by inflammation on myocardial IR.
The experimental animals were divided into four groups in this study: Control, Novokinin, IR and IR+Novokinin (IRN). Drug administrations was performed with infusion pump via cannula were placed the jugular vein under general anesthesia before ischemia, and during IR. The left main coronary artery was occluded for 30 minutes ischemia followed by 120 minutes reperfusion in rats. At the end of the experimental period, CAV-1, HSP90, and NFKB levels were measured by RT-PCR, ADMA, TLR-4, NADPH oxidase, and Rhokinase levels were measured by ELISA, necrosis area was measured by ImageJ, an image analysis software, in the heart tissue. 
Mean blood pressure significantly decreased at the begining of ischemia and reperfusion and at the end of ischemia in IRN group compared to IR group. NFKB, HSP90, NADPH oxidase and TLR-4 levels increased with IR and significantly decreased with the application of novokinin. CAV-1 levels did not differ between the groups. The increases in the levels of ADMA and Rhokinase due to IR have been prevented by the application of novokinin. Novokinin reduced necrosis area due to IR. 
Our results reveals that, ADMA, HSP90, NFKB, TLR-4, Rhokinase, and NADPH oxidase levels play important roles on IR injury. AT2 receptor agonist Novokinin may affect positively oxidative changes, inflammation, and endothelial function in myocardial IR injury.

Keywords: Ischemia-reperfusion, AT2 receptor, ADMA, NF?B, HSP90