Sinapik asitin C6 glioma hücre hattında glutamat eksitotoksisitesine etkileri ve bu etkide proinflamatuvar sitokinler ile endoplazmik retikulum stres yolağının rolü
The effects of synapic acid on glutamat excitotoxicity in C6 glioma cell line: The role of proinflammatory cytokins and endoplasmic reticulum stress pathway
Yazar: AHMET MAHMUT ORTASÖZ
Danışman: PROF. DR. ERCAN ÖZDEMİR ; DOÇ. DR. AHMET ŞEVKİ TAŞKIRAN
Sivas Cumhuriyet Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Eksitotoksisite = Excitotoxicity ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; Glioma = Glioma ; Glutamat = Glutamates ; Hücre dizisi = Cell line ; Sinaptik asit = Synapic acid ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Glutamat, merkezi sinir sisteminde en fazla bulunan eksitatör bir nörotransmitterdir. Hücre dışı glutamat miktarının aşırı artması, glutamat eksitotoksisitesine neden olur. Sinapik asit, bir hidrosinamik asit türevidir ve antikanser, antiinflamatuvar, antioksidan ve nöroprotektif etkiler gösterir. Bu çalışmada amacımız sinapik asitin glutamat eksitotoksisitesi oluşturulan C6 glioma hücre hattında etkisini incelemek ve bu etkide proinflamatuvar sitokinler ile endoplazmik retikulum stres yolağın olası rolünü araştırmaktır.
   Çalışmada sinapik asitin glutamat eksitotoksisitesine etkilerini değerlendirmek için C6 sıçan glioma hücre hattı kullanıldı ve hücreler kontrol, glutamat, sinapik asit ve glutamat + sinapik asit olmak üzere 4 gruba ayrıldı. Glutamat gruplarında eksitotoksisite oluşturmak için hücreler 24 saat süreyle 10 mM glutamat ile muamele edildi. Ayrıca, sinapik asit grubu ile glutamat + sinapik asit grubu hücreler 100 µM, 50 µM, 25 µM ve 12,5 µM konsantrasyonlarda sinapik asite maruz bırakıldı. Hücre canlılığı XTT testi ile değerlendirildi.  Hücrelerin, tümör nekrozis faktör–alfa (TNF-α), interlökin-1 beta (IL-1 β), glukoz düzenleyici protein 78 (GRP78), aktive edici transkiripsiyon faktör-4 (ATF-4), C/EBP homolog protein (CHOP) ve kaspaz-3 seviyeleri ticari kitler ile ölçüldü.
    Çalışma bulguları, sinapik asitin (50 µM dozda) glutamat eksitotoksisitesine karşı hücre canlılığını istatistiksel olarak anlamlı oranda arttırdığını göstermiştir (p < 0,05). Ek olarak, sinapik asit eklenmesi glutamat grubu sıçanlarda artan TNF-α, IL-1β, GRP78, ATF-4, CHOP ve kaspaz-3 seviyelerini istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azaltmıştır (p < 0,05). 
    Sonuç olarak, bu tez çalışması sinapik asitin proinflamatuvar sitokin üretimi ile endoplazmik retikulum stres oluşumunu bloke ederek ve apoptozisi önleyerek glutamat ile oluşturulan eksitotoksisiteyi azalttığını ortaya koymuştur. Sinapik asidin oluşturduğu bu nöroprotektif etkinin mekanizmasını açıklayabilmek için daha ileri çalışmalar gerekmektedir.

Abstract:
Glutamate is the most abundant excitatory neurotransmitter in the central nervous system. Excessive increase in extracellular glutamate amount causes glutamate excitotoxicity. Sinapic acid is a derivative of hydrocinnamic acid and shows anticancer, anti-inflammatory, antioxidant and neuroprotective effects. In this study, our aim is to examine the effect of sinapic acid on the C6 glioma cell line with glutamate excitotoxicity and to investigate the possible role of proinflammatory cytokines and endoplasmic reticulum stress pathway in this effect.
   C6 rat glioma cell line was used to evaluate the effects of sinapic acid on glutamate excitotoxicity and the cells were divided into 4 groups as control, glutamate, sinapic acid and glutamate + sinapic acid. Cells were treated with 10 mM glutamate for 24 hours to induce excitotoxicity in glutamate groups. In addition, cells in the sinapic acid group and glutamate + sinapic acid group were exposed to sinapic acid at concentrations of 100 µM, 50 µM, 25 µM and 12.5 µM. Cell viability was evaluated with the XTT test. Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1β), glucose regulatory protein 78 (GRP78), activating transcription factor-4 (ATF-4), C/EBP homologous protein ( CHOP) and caspase-3 levels were measured with commercial kits.
   Study findings showed that sinapic acid (at 50 µM dose) statistically significantly increased cell viability against glutamate excitotoxicity (p < 0.05). In addition, the addition of sinapic acid significantly decreased the increased levels of TNF-α, IL-1β, GRP78, ATF-4, CHOP and caspase-3 in glutamate group rats (p < 0.05). 
   In conclusion, this study showed that sinapic acid reduces glutamate-induced excitotoxicity by blocking proinflammatory cytokine production and endoplasmic reticulum stress formation. Further studies are required to explain the mechanism of this neuroprotective effect of sinapic acid.