Isatis cappadocica'nin antioksidan, antimikrobiyal, tirozinaz inhibitör ve sitotoksik etkilerinin incelenmesi
Investigation of antioxidant, antimicrobial, tyrosinase inhibitor and cytotoxic effect of isatis cappadocica
Yazar: MELTEM LERMİ
Danışman: PROF. DR. REZZAN ALIYAZICIOĞLU
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antienfektif ajanlar = Anti infective agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Isatis = Isatis ; Isatis cappadocica = Isatis cappadocica ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Tirozin = Tyrosine

Özet:
Yapılan çalışmada Isatis cappadocica subsp. alyssifoli'nin sulu ve metanollü ekstrelerinin antioksidan, antimikrobiyal, tirozinaz inhibitör, sitotoksik aktiviteleri ve ters faz-yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC) yöntemi kullanılarak fenolik profilinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
Bitkinin metanollü ve sulu ekstreleri hazırlanarak spektrofotometrik in vitro antioksidan analizleri için FRAP, DPPH Radikal Temizleme Aktivitesi ve CUPRAC testleri uygulanmıştır. Çalışmamızda toplam fenolik madde miktarı bitkinin metanollü ekstresinde 10.1mg GAE/g numune, sulu ekstresinde ise 22.1 mg GAE/ g numune olarak tespit edilmiştir. FRAP ve CUPRAC yöntemine göre ise toplam antioksidan kapasitesi Troloks eşdeğeri cinsinden hesaplanmıştır. FRAP sonuçları bitkinin sulu ekstresinde 848 μmolTroloks/g numune, metanollü ekstresinde ise 398 μmol Troloks/g numune bulunmuştur. CUPRAC sonuçları sulu ekstrede 2189 μM Troloks/g numune, metanollü ekstrede ise 4377 μM Troloks/g numune olarak bulunmuştur. I. cappadocica bitkisinin sulu ekstresi (SC50: 0.0425 mg/mL) metanollü ekstresine (SC50: 0.0661 mg/mL) göre daha yüksek DPPH radikaltemizleme aktivitesine sahiptir. I. cappadocica ekstrelerinin antimikrobiyal aktivitesi Agar Well Difüzyon ve Mikrodilüsyon yöntemiyle test edilmiştir. Bitkinin sulu ekstresinin antimikrobiyal aktivite göstermediği metanollu ekstresinin ise antimikrobiyal aktivite gösterdiği belirlenmiştir. I. cappadocica metanol ekstresi ters faz–yüksek performanslı sıvı kromatografisi (RP-HPLC-UV) ile incelendiğinde yapısında sinapik asit, benzoik asit tespit edilmiştir. Sadece metanol ekstresinin tirozinaz enziminin inhibe ettiği ve artan konsantrasyonlarda da bu etkiyi giderek arttırdığı saptanmıştır. MTT yöntemine göre metanollü ekstrelerde test edilen konsantrasyonlarda PC-3 ve 3T3 hücre hatlarında yüksek konsantrasyonlarda doza bağlı olarak sitotoksiteye neden olmuştur.
I. cappadocica ekstrelerinin antioksidan, antimikrobiyal, sitotoksik ve tirozinaz inhibitör aktivitelerinin test edildiği bu çalışma sonuçlarına göre bitkinin farmakolojik, kozmetik ve besin endüstrilerinde kullanılabileceği kanaati doğmuştur.

Anahtar Sözcükler: Antioksidan, Antimikrobiyal, Sitotoksite, Tirozinaz İnhibitör Aktivite, HPLC, Isatis cappadocica

Abstract:
In this study, it is aimed to examine antioxidant, antimicrobial, tyrosinase inhibitor, cytotoxic activities and determination of phenolic profile using reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) method in the aqueous and methanolic extracts of Isatis cappadocica subsp. alyssifoli. 
The CUPRAC, FRAP and DPPH Radical Scavening Activity tests are applied to spectrophotometric in vitro antioxidant analysis by preparing methanolic and aqueous extracts of the plant. The total phenolic substance quantity is idendified as 10.1mg GAE/ g in methanolic extracts and 22.1 mg GAE/g in the aqueous extracts. According to FRAP and CUPRAC methods, the antioxidant capacity is counted as Trolox equivalent. The FRAP results are defined as 848 µmol Trolox/g sample in the aqueous extract and as 398 umolTrolox/g sample in methanolic extract. CUPRAC results are defined as 2189 uMTrolox/g sample in the aqueous extract and as 4377 uM Troloks/g sample in methanolic extract. DPPH radical scavenging activity (SC50: 0.0425 mg/mL) of the aqueous extract of I. cappadocica has higher than methanolic extract (SC50: 0.0661 mg/mL). The antimicrobial activities of I. cappadocica extracts are tested as Agar Well Diffusion Method. The aqueous extract of plant hasn't showed antimicrobial activity, but methanolic extract has showed antimicrobial activity. Synapic acid, benzoic acid was detected when methanol extract of I. cappadocica was examined by reverse phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC-UV). It was found that only methanol extract inhibited tyrosinase enzyme and this effect is increasing gradually in increasing concentrations. According to MTT method, the methanol extract has caused to death of cells by dosagein thehigh concentrations cytotoxic activity on the PC-3 ve 3T3 celllines. 
When the antioxidant, antimicrobial, cytotoxic and tyrosinase inhibitor activities of I. cappadocica extracts were examined, we believe that there may be usage areas in pharmacological, cosmetic and food industries.,

Keywords: Antioxidant Activity, Antimicrobial Activity, Cytotoxicity, Tyrosinase Inhibitor, HPLC, Isatis cappadocica