Galantaminin biyolojik sıvılarda yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile analizi
Analysis of galantamine in biological fluids by high performance liquid chromatography (HPLC)
Yazar: ELİF ÖZDEMİR
Danışman: PROF. DR. SERAP SAĞLIK ASLAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı / Analitik Kimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
Bu çalışmada galantaminin farmasötik preparatlarda, insan idrar ve plazmasında tayini için hidroksil grupların analizinde spesifik bir belirteç olan 5-dimetilamino-naftalen-1-sülfonil klorür (dansil klorür) ile türev oluşumuna dayanan yüksek performanslı sıvı kromatogafik (HPLC) bir yöntem geliştirildi.
Galantamin ile dansil klorür arasındaki reaksiyonun optimum koşulları incelendiğinde, reaksiyon pH 10,5'da, oda sıcaklığında 30 dakika içerisinde, belirteç/galantamin mol oranı 2,13 olduğunda reaksiyon tamamlanmaktadır. Oluşan türev, diklorometan ile ekstre edildi. Çözücü kuruluğa kadar uçuruldu ve kalıntı mobil fazda çözündürüldü. Kromatografik analiz, Inertsil C18 kolon ve 1,2 mL/dak akış hızında %40 asetonitril :%60 10mM o-fosforik asit mobil faz sistemi kullanılarak ve 20 μL enjeksiyonla gerçekleştirildi. Türev fluoresans detektör (eks.375nm/em.537nm) ile tespit edildi. Galantamin-Dansil türevinin retensiyon zamanları 16,8 dakika olarak belirlendi. Galantamin konsantrasyonu ve pik alanları arasında ölçü eğrisi hazırlandı. Doğrusallık suda, idrar ve plazmada 125-2000ng/mL aralığında gözlendi. Galantaminin idrar ve plazmadan ortalama geri kazanma oranı sırasıyla %95,15 ve %95,78 olarak hesaplandı. Üç farklı konsantrasyonda galantamin içeren idrar ve plazma örneklerinin aynı gündeki analiz sonuçlarının (n=6) tekrarlanabilirlikleri % RSD olarak %0,24-0,59 ve %0,35-0,56 arasında bulundu. Farklı günlerde tekrarlanabilirlikleri sırasıyla %0,13-0,51 ve %0,04-0,15 arasındadır.
Geliştirilen yöntem kapsüllerde galantamin miktar tayinine uygulandı. Sonuçlar USP (USP XXXII) yöntemiyle elde edilen sonuçlarla t- ve F- testleri kullanılarak istatistiksel olarak kıyaslandı ve %95 olasılık düzeyinde anlamlı bir fark bulunmadı.

Abstract:
In this study, a high performance liquid chromatographic method was developed for quantitative determination of galantamine in pharmaceutical drugs, urine and human plasma, based on fluorescence derivatization with 5-(dimethylamino) naphthalene-1-sulfonyl chloride (dansyl chloride) an specific reagent for primary, secondary amines and hydroxyl groups analysis. The reaction between galantamine and dansyl chloride is optimally realized in 30 minutes at room temperature and pH 10.5, with a reagent to galantamine molar ratio of 2.13. The derivative was extracted with dichlorometane. After the extraction, solvent was dried under stream of nitrogen and dissolved in mobile phase. Chromatographic analysis has been performed with Inertsil C18 column and with a flow rate of 1.2mL/min, the mobile phase consisting 40% acetonitrile and 60% 10mM o-phosporic acide. Injection volume was 20μL. The derivatives were detected with a fluorescence detector (ex.375nm/em.537nm). The retention times for dancyl derivative of galantamine was 16.8 min. Linearity was observed between 125-2000ng/mL in water, urine and plasma. The recovery has been calculated as 95.15% for urine and 95.78% for plasma. Inter-day repeatability results of urine and plasma samples (n=6) with three different concentrations were calculated as RSD between 0.24-0.59% and 0.35-0.56. Intra-day repeatabilities are between 0.13-0.51% and 0.04-0.15%, respectively.
The method was applied to galantamine assay to the capsules. The results were compared with pharmacopoeia (USP XXXII) method using t-test and F-test and no significant difference was observed at confidence level of 95%. The HPLC method was applied to determination of galantamine in urine and human plasma.