Toxoplasma gondii DNA aşısı adayı sag1 geninin klonlanması
Cloning dna vaccine candidate sag1 gene of toxoplasma gondi̇i
Yazar: HÜSNİYE LALEK
Danışman: PROF. DR. SALİH KUK
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Aşılama = Vaccination ; Aşılar = Vaccines ; Beden Terbiyesi Genel Müdürlüğü = General Directorate of Physical Education ; DNA = DNA ; Gen klonlama = Gene cloning ; Gen tedavisi = Gene therapy ; Genetik mühendisliği = Genetic engineering ; Toksoplazmoz = Toxoplasmosis ; Toxoplasma gondii = Toxoplasma gondii

Özet:
Toxoplasma gondii tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de görülen bir parazittir. Mortaliteye de sebep olabilen bu parazit gebelerden transplasental yolla bebeklere geçişi sebebiyle oldukça önemli bir halk sağlığı sorunu olarak görülmektedir. İnsanlarda bradizoit ve takizoit formu bulunan parazitin oluşturduğu toxoplasmosisin patogenezinde bir çok faktör rol oynamaktadır. Patogenezde parazite ait faktörler parazitin tanısının konulması ve parazitten korunmak için aşı geliştirilmesi çalışmalarında önemlidir. SAG1 proteini hastalığın patogenezinde önemli olan ve takizoit dönemde salgılanan bir poteindir. Bu çalışmada SAG1 geninin klonlanması amaçlanmıştır. 
Toxoplasma gondii takizoitlerinden Genomik DNA izolasyonu, QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN) prosedürü modifiye edilerek yapılmıştır. Genomik DNA'dan SAG1 genini hedef alan primerler kullanılarak PCR ile SAG1 geni çoğaltılmıştır. Çoğaltılan SAG1 geni pJET1.2/blunt vektörüne kit prosedürüne uygun olarak klonlanmış ve rekombinant plazmit, kompetan E.coli hücrelerine transforme edilmiştir. Transformasyon sonrası oluşan kolonilerdeki rekombinant plazmit varlığı PCR Screening yapılarak doğrulanmıştır. Kolonilerdeki rekombinant plazmitler, High Pure Plasmid Isolation Kit ile saflaştırılmıştır. Saflaştırılan rekombinant plazmitlerdeki SAG1 geninin varlığı, PCR ve restriksiyon enzim kesimleri ile doğrulanmıştır. 
Bu çalışma sonrasında SAG1 geni tanısal amaçla kullanılabileceği gibi parazite karşı aşı geliştirme çalışmalarında da kullanılabilecektir.

Anahtar Kelimeler: Toxoplasma gondii, Toxoplasmosis, SAG1 Geni, Klonlama, DNA Aşısı,

Abstract:
Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite that is found more prevalant in our country, as well as all over the world. This parasite can cause mortality and also it is an important public health problem because of engaging babies from pregnant women. Many factors play a role in the pathogenesis of Toxoplasmosis that is caused by the tachyzoites and bradyzoites stage of parasites which are present in human. At pathogenesis, interference factors of the parasite are important to diagnosis and protective vaccine development studies. SAG1 protein released from bradyzoites and tachyzoites which is stage of  T.gondii, is important at pathogenesis of dissease.
Genomic DNA was isolated from tachyzoites of T.gondii using modified QIAmp DNA Mini Kit (QIAGEN) by manifacture's suggestion. SAG1 gene was amplified with primers which is spesific that target sequence using PCR techinque. That amplified SAG1 gene cloned into pJET1.2 /blunt vector according to kit procedure and recombinant plasmid was transformed into kit competant E.coli cells. After that, the presence of plasmid was confirmed in the cells after cloning E.coli by PCR screening. That recombinant plasmid which cloned into E.coli cells, was purified High Pure Plasmid Isolation Kit. After purification of plasmids the presence of  SAG1 gene on the plasmid was confirmed PCR technique and resricted with enzymes.
After this study, SAG1 gene can be used for diagnostic purposes and can also be used in the development of vaccines against the parasite.

Keywords: Toxoplasma gondii, Toxoplasmosis, SAG1 Gene, Cloning, DNA Vaccine