Kanser tedavisinde kullanılabilir olarak geliştirilmiş anti-vegf monoklonal antikorların moleküler ve immünolojik karakterizasyonunun in vitro yöntemler ile araştırılması
In vitro investigation for molecular and immunological characterization of anti-vegf antibodies that were developed for cancer treatment
Yazar: MELEK YAMAN
Danışman: PROF. DR. EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2017
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors

Özet:
Vasküler endotelyal büyüme faktörü-A (VEGF-A) anjiyogenez aktivatörlerinin içinde en önemli olan büyüme faktörüdür. Bu çalışmada VEGF-A'ya karşı yeni geliştirilmiş üç adet monoklonal antikorun moleküler ve immünolojik karakterizasyonu in vitro yöntemler kullanılarak araştırıldı. Antikorlar 5D6.5, 1B4.2 ve 3B2.1 olarak adlandırıldı. Çalışmaların ilk basamağında yeni geliştirilen anti-VEGF-A antikorları hibridoma kültür süpernatanlarından afinite kromotografisi yöntemi kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan antikorların ELİSA, akım sitometri, hücre içi boyama ve Western blot yöntemlerindeki kullanılabilirlikleri test edildi. Karakterizasyonu yapılan antikorlardan 5D6.5 adı verilen antikor ELİSA ve Western blot çalışmalarında VEGF-A proteinine bağlanabilirken, akım sitometri ve immünofloresan boyamada VEGF-A proteinine bağlanamamıştır. 3B2.1 antikoru ise ELİSA, hücre içi boyama ve akım sitometri yönteminde VEGF-A proteinine bağlanabilmiştir. 1B4.2 adı verilen antikor ELİSA, hücre içi boyama ve akım sitometri yönteminde VEGF-A proteinine bağlanabilmiştir. Elde edilen sonuçlara göre bu antikorların VEGF-A ile ilgili olarak araştırma amaçlı yapılan in-vitro çalışmalarda kullanılabileceği anlaşılmıştır.

Abstract:
Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) is the most important growth factor in angiogenesis activators. In this study molecular and immunological characterization of three newly developed monoclonal antibodies against VEGF-A were investigated by in vitro techniques. Antibodies were named as 5D6.5, 1B4.2 and 3B2.1. During the initial step of the research, newly developed anti-VEGF-A antibodies were purified from the hybridoma culture supernatants by using affinity chromatography method. Following the purification of antibodies their uses in different methods such as ELISA, flow cytometry, intracellular cell staining, and Western blot were tested. Among the characterized antibodies 5D6.5 named antibody, could bind VEGF-A protein in ELISA and Western blot studies but not in flow cytometry and intracellular cell staining techniques. Antibody 3B2.1 could bind VEGF-A protein in ELISA, intracellular cell staining and flow cytometry technique. Antibody named as 1B4.2 could bind VEGF-A protein in ELISA, intracellular cell staining and flow cytometry techniques. According to the results these antibodies can be used in vitro techniques in VEGF-A related research studies.