Lokal ileri rektum kanserinde doku lipocalin-2 ekspresyonunun kemoradyoterapi sonrası patolojik yanıt ilişkisi ve prognostik değeri
The relationship of tissue lipocalin-2 expression to post-chemoradiotherapy pathological response and prognostic value in local advanced rectum cancer
Yazar: ÖZCAN SAYGILI
Danışman: PROF. DR. ÖZTÜRK ATEŞ
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Dr. Abdurrahman Yurtaslan Ankara Onkoloji Eğitim ve Araştırma Hastanesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: İç Hastalıkları = Internal diseases

Özet:
Amaç: Lokal ileri rektum kanseri hastalarının tanı aldıkları biyopsi
preparatlarında immunohistokimyasal yöntemler ile Lipocalin-2 (Lcn-2)
ekspresyonunu araştırmayı, neoadjuvan kemoradyoterapi (KRT) sonrası hastalığın
patolojik yanıtı ile Lcn-2 ekspresyonu arasında ilişkiyi, ayrıca Lcn-2 ekspresyonun
prediktif ve prognostik değerini, diğer klinikopatolojik özelliklerle ilişkisini
incelemeyi amaçladık.
Gereç ve Yöntem: Araştırmaya Sağlık Bilimleri Üniversitesi Dr.
Abdurrahman Yurtaslan Ankara Onkoloji Eğitim ve Araştırma Hastanesi Tıbbi
Onkoloji Kliniğinde lokal ileri rektum kanseri tanısıyla 2015-2022 tarihleri arasında
takipli hastalar arasından, biyopsi örnekleri, operasyon materyalleri hastanemizde olan
neoadjuvan KRT almış 51 hasta, hastane bilgi yönetim sistemi taranarak dahil edildi.
Seçilen hastaların tanı aldıkları patoloji preparatları arşivden temin edildi. Daha sonra
bu seçilen preparatlara ait hazır parafin bloklarla gelen dokuların, Leica marka Bond
Max cihazında etüv ve deparafinizasyonu yapıldı, 3 mikron kesitler halinde örnekler
alındı. Sonrasında EDTA'da 20 dk kaynatıldı. Lcn-2/NGAL ile (katalog no: Rabbit
monoclonal ([EPR19912], Abcam marka, Cambridge Biomedical Campus, CB2 0AX,
UK), 1:2000 dilusyonda 30 dk inkübe edildi. Sekonder elemanlar için Leica marka
HRP conjuge polimer detection kit kullanıldı (DS9800, New Castle, United Kingdom).
Hidrojen peroksit ile 10 dk, post polimer ile 8 dk, polimer ile 8 dk, DAB ile 8 dk,
hematoksilen ile 10 dakika muamele edilip her basamakta yıkama solüsyonuyla
yıkandıktan sonra dehidrate edilip entellanla kapatıldı. Pankreas adenokanser dokusu
pozitif kontrol olarak kullanıldı.
Bulgular: Hastalar Lcn-2 seviyesine göre 9'u (%17,6) negatif, 42'si (%82,4)
pozitiftir. Hastalar lipocalin-2 boyanma sıklığı açısından değerlendirildiğinde, 3'ü
(%5,9) negatif, 19'u (%37,3) %1-25 arası, 10'u (%19,6) %26-50 arası, 4'ü (%7,8)
%51-75 arası ve 15'i (%29,4) %76-100 arasındadır. Hastaların lipokalin-2 boyanma
yoğunlukları ise 3'ü (%5,9) negatif, 7'si (%13,7) zayıf boyanma, 16'sı (%31,4) orta
boyanma ve 25'i (%49,0) güçlü boyanma şeklindedir.
x
Lcn-2 ekspresyonuyla demografik özellikler ve kan değerleri arasında ilişki
bulunmadı. Lipocalin-2 boyanma yoğunluğuyla nüks ve mortalite arasında ilişki
bulundu, boyanma yoğunluğu az olan grupta nüks ve mortalite anlamlı derecede daha
fazla (p<0,05). Lcn-2 pozitif ve negatif gruplar arasında anlamlı ilişki bulunmadı.
Kemoradyoterapi yanıtı ile Lcn-2 ekspresyonu arasında ilişki bulunmadı. Lcn-2
ekspresyonu ile yapılan operasyon tipi, preop ve postop TNM evreleri, LVI, PNI, LN
metastazı, adjuvan kemoterapi alma durumu, tümör boyutu, histolojik grade arasında
anlamlı ilişki saptanmadı.
Sonuç: Bu bulgular literatürde yer alan kolorektal kanserlerde hastalık
ilerleyişiyle Lcn-2'nin ters orantılı olduğuna dair yayınları destekler niteliktedir. Lcn2'nin protümöral olduğuna dair yayınları da göz önüne aldığımızda Lcn-2'nin
prognostik ve prediktif bir molekül olarak kullanımı uygun görünmemektedir. Bu
konunun aydınlatılması için daha geniş hasta gruplarında daha fazla çalışma yapılması
gerektiğini düşünüyoruz.

Abstract:
Aim: To investigate the expression of Lipocalin-2 (Lcn-2) using
immunohistochemical methods in biopsy preparations of locally advanced rectal
cancer patients diagnosed, the relationship between the pathological response of the
disease and Lcn-2 expression after neoadjuvant chemoradiotherapy (CRT), as well as
predictive and prognostic effects of Lcn-2 expression. We aimed to examine its value
and its relationship with other clinicopathological features.
Materials and Methods: 51 patients who received neoadjuvant
chemoradiotherapy treatment, whose biopsy samples and operation materials were in
our hospital, were included in the study, among the patients who were followed up
with the diagnosis of locally advanced rectum cancer in the Medical Oncology Clinic
of Health Sciences University Dr.Abdurrahman Yurtaslan Ankara Oncology Training
and Research Hospital between 2015-2022. information management system was
scanned and included. Pathology preparations of the selected patients were obtained
from the archive. Then, the tissues that came with ready-made paraffin blocks of these
selected preparations were incubated and deparaffinized in a Leica brand Bond Max
device, and samples were taken in 3 micron sections. It was then boiled in EDTA for
20 minutes. It was incubated with Lcn-2/NGAL (catalog no: Rabbit monoclonal
([EPR19912], Abcam brand, Cambridge Biomedical Campus, CB2 0AX, UK) at
1:2000 dilution for 30 minutes. Leica brand HRP conjuge polymer detection kit was
used for secondary elements (DS9800, New Castle, United Kingdom). Pancreatic
adenocarcinoma tissue was used as a positive control.
Results: According to the Lcn-2 level, 9 (17.6%) of the patients were
negative and 42 (82.4%) were positive. When the patients were evaluated in terms of
lipocalin-2 staining frequency, 3 (5.9%) were negative, 19 (37.3%) were between 1-
25%, 10 (19.6%) were between 26-50%, 4 (7.8%) were between 51-75% and 15
(29.4%) were between 76-100%. Lipocalin-2 staining intensities of the patients were
negative in 3 (5.9%), weak staining in 7 (13.7%), moderate staining in 16 (31.4%) and
25 (49.0%) patients is in the form of strong staining.
xii
There was no relationship between Lcn-2 expression and demographic
characteristics and blood values. A correlation was found between the intensity of
lipocalin-2 staining and recurrence and mortality, while recurrence and mortality were
significantly higher in the group with low staining intensity (p<0.05). No significant
correlation was found between Lcn-2 positive and negative groups. No correlation was
found between CRT response and Lcn-2 expression. There was no significant
relationship between Lcn-2 expression and the type of operation performed,
preoperative and postoperative TNM stages, LVI, PNI, LN metastasis, adjuvant CT
status, tumor size, and histological grade.
Conclusion: These findings support the publications in the literature that Lcn2 is inversely proportional to disease progression in colorectal cancers. Considering
the publications that Lcn-2 is protumoral, the use of Lcn-2 as a prognostic and
predictive molecule does not seem appropriate. We recommend that further studies be
conducted in larger patient groups to elucidate this issue.