Perisitlerin farklılaşma kapasitelerinin mezenkimal kök hücrelerle karşılaştırılmalı olarak incelenmesi
Comparative analysis of differentiation capacities of pericytes and mesenchymal stem cells
Yazar: SELEN POLAT
Danışman: DOÇ. DR. YUSUFHAN YAZIR
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Bilim ve Teknoloji = Science and Technology ; Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Doku mühendisliği = Tissue engineering ; Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Kök hücreler = Stem cells ; Perisitler = Pericytes ; Plasenta = Placenta

Özet:
Amaç: Kök hücreler günümüzde birçok hastalığın tedavisinde kullanılmaktadır. Mezenkimal kök hücrelerin farklı dokulara farklılaşma kapasiteleri ve kendilerini yenileme özellikleri rejeneratif tıpta kullanılmasında iki önemli yapıtaşını oluşturmaktadır. Fakat mezenkimal kök hücrelerin insan vücudunda çok fazla sayıda bulunmaması ve her dokudan elde edilen kök hücrenin istenilen doku tipine farklılaştırılamaması yeni kaynakların araştırılması gerekliliğini ortaya koymuştur. Bu yüzden kan damarlarının çevresinde bulunan özelleşmiş hücre toplulukarından biri olan perisitlerin bu çalışmada alternatif bir kaynak olabilir mi sorusuna yanıt aranmaktadır. Böylece mezenkimal kök hücrelerin sınırlı kaldığı alanlarda damar çevresinde bulunan bu hücrelerin kullanılabilmesinin önü açılabilecektir.
Yöntem: Perisitler plasentadan izole edilmiş ve pasaj 3'te karakterize edilmiştir. Kemik iliği mezenkimal kök hücreler ise KÖGEM'de bulunan hücre hattından kullanılmıştır. Mezenkimal kök hücrelerin de karakterizasyonu pasaj 3'te gerçekleştirilmiştir. Bu iki hücrenin pluripotensi kapasiteleri gen ekspresyon analiziyle karşılaştırılmıştır. Çalışmanın ikinci aşamasında ise hücreler osteojenik, adipojenik ve kondrojenik farklılaşmaya alınmıştır. Hücreler 7, 14., ve 21. günlerde  gözlemlenerek hem gen ekspresyonu açısından hem de immunohistokimyasal yöntemlerle farklılaşma kapasiteleri karşılaştırılmıştır.
Bulgular: Plasental perisitlerin ve kemik iliği mezenkimal kök hücrelerin pluripotensi özelliklerinin karşılaştırılması sonucunda pluripotensi genleri olan Lin28, ZPF42, FoxD3, UTF1 ve Sox2' de anlamlı bir yükeliş meydana gelmiştir. GATA6, Nr6a1, Msx1 ve Pdx1 genlerinde ise her iki hücre tipinde de anlamlı bir üretim gözlemlenmemiştir. Ayrıca perisitlerin osteojenik, adipojenik ve kondrojenik farklılaşma gösterdikleri gözlemlenmiştir. Kemik iliğinden elde edilen mezenkimal kök hücrelerde de olduğu gibi osteojenik, adipojenik ve kondrojenik farklılaşmaya gidebildikleri gözlemlenmiştir.
Sonuç: Bu çalışma sonucunda perisitlerin de mezenkimal kök hücreler gibi farklılaşma kapasitelerinin yüksek olduğu ayrıca çoğalma kapasitelerinin yüksek olması sonucunda mezenkimal kök hücreler gibi rejeneratif tıpta ve doku mühendisliğindeki birçok çalışmada kullanılabileceği gösterilmiştir. Böylece mezenkimal kök hücrelerin yetersiz kaldığı alanlarda ve çalışmalarda perisit alternatif bir hücre kaynağı olarak kullanılabilir.

Abstract:
Objective: Stem cells are currently used in the treatment of many diseases. The differentiation capacities of the mesenchymal stem cells to different tissues and their renewal properties constitute two important building blocks in the use of regenerative epithelium. However, the fact that mesenchymal stem cells are not found in the human body in large numbers and the fact that the root cell from each tissue can not be differentiated to the desired tissue type has necessitated the search for new sources. Therefore, the question is whether pericides, one of the specialized cell circles around the blood vessels, can be an alternative source in this study. Thus, in areas where mesenchymal stem cells are limited, these cells in the vicinity of the vessel may be used.

Method: Pericytes were isolated from placenta and passage 3 was characterized. Bone marrow mesenchymal stem cells were used from the cell line found in KÖGEM. Characterization of mesenchymal stem cells was carried out in passage 3. The pluripotency capacities of these two cells were compared by gene expression analysis. In the second phase of the study, cells were differentiated into osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation. Cells were observed at days 7, 14, and 21, and the differentiation capacities for both gene expression and immunohistochemical methods were compared.

Result: Comparison of the pluripotency properties of placental pericytes and bone marrow mesenchymal stem cells resulted in a significant increase in the pluripotency genes Lin28, ZPF42, FoxD3, UTF1 and Sox2. In GATA6, Nr6a1, Msx1 and Pdx1 genes, no significant production was observed in both cell types. It has also been observed that pericytes show osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation. It has been observed that osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation can occur as well as in bone marrow mesenchymal stem cells.

Conclusion: As a result of this study, it has been shown that pericytes have high differentiation capacities, such as mesenchymal stem cells, and that their reproductive capacity is high, which can be used in many studies in regenerative tissue and tissue engineering, such as mesenchymal stem cells. Thus, pericide can be used as an alternative cell source in areas where mesenchymal stem cells are insufficient and in studies.