D vitamini ölçümünde yüksek basınçlı sıvı kromatografisi, kütle spektrometresi ve kemiluminesans yöntemlerinin karşılaştırılması
Comparison of high performance liquid chromatography, mass spectrometry and chemiluminescence methods for vitamin D measurement
Yazar: ÜMMÜ GÜLSÜM ÇİFTÇİ AKSOY
Danışman: DOÇ. DR. HÜLYA ÇİÇEK
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Kütle spektrometri = Mass spectrometry ; Luminesan ölçümler = Luminescent measurements ; Vitamin D = Vitamin D ; Vitamin D eksikliği = Vitamin D deficiency

Özet:
Vücuttaki vitamin D düzeylerini belirlemek için 25(OH) vitamin D düzeyleri klinik bir belirteç olarak ölçülmektedir. Bu yüzden 25(OH) vitamin D düzeylerinin ölçülmesi ve standardize edilmesi büyük önem taşır. Bu araştırmada 25(OH) vitamin D düzeylerinin Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC), kütle spektrometresi ve kemilüminesans yöntemleriyle ölçülüp elde edilen sonuçların karşılaştırılması amaçlandı. Çalışmaya 13 ü erkek (%22,8), 44 i kadın (%77,2) olmak üzere toplam 57 gönüllü katıldı. Gönüllülerden alınan serum örneklerinde üç farklı yöntemle yapılan ölçümler sonucunda 25(OH) vitamin D düzeyleri; kemilüminesans yöntemiyle 19,73 ± 11,87 ng/mL (ort ± SD), HPLC yöntemiyle 18,87 ± 12,47 ng/mL ve sıvı kromatografi tandem kütle spektroskopisi (LC-MS/MS) yöntemiyle 18,40 ± 10,90 ng/mL olarak ölçüldü. Bu çalışmada kemilüminesans ve HPLC yöntemleri karşılaştırıldığında ICC değeri 0.911 (p=0.001), kemilüminesans ve LC-MS/MS yöntemleri için 0.924 (p=0.001), HPLC ve LC-MS/MS yöntem için 0.961 (p=0.001) olarak ölçüldü. En yüksek uyumun HPLC ve LC-MS/MS yöntemleri arasında gözlenmesiyle birlikte her üç yöntemin birbirine uyumlu olduğu bulundu. Çalışmamız her üç yöntemle yapılan D vitamini ölçümünün güvenilir olduğunu göstermektedir. Bu nedenle rutin laboratuvarlarda vitamin D düzeylerini ölçmek için HPLC, kemilüminesans veya LC-MS/MS yöntemlerinin herhangi birinin güvenle kullanılabileceği görülmektedir.

Abstract:
The levels of 25(OH) vitamin D is measured as a clinical marker to determine the level of vitamin D in the body. Therefore, it is important to measure and to standardize the levels of 25(OH) vitamin D. In the present study, it was aimed to measure the levels of 25(OH) vitamin D by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), mass spectrometry and chemiluminescence methods and to compare the results obtained in three ways. A total of 57 volunteers, including 14 males (23.7%) and 45 females (76.3%), included to the study. As a result of measurements made by three different methods, 25(OH) vitamin D levels were measured as 19.73 ± 11.87 ng / ml (approx. ± SD) by chemiluminescence method, 18.87 ± 12.47 ng / mL by HPLC method and 18.40 ± 10.90 ng / ml by LC-MS / MS method in the serum samples taken from the volunteers. In the present study, when chemiluminescence and HPLC methods are compared, ICC value was 0.911 (p=0.001), it was 0.924 (p=0.001) for chemiluminescence and LC-MS / MS methods, and was 0.961 (p=0.001) for HPLC and LC-MS/MS methods. The highest correlation was found among HPLC and LC-MS / MS methods, as well as it was observed that in all three methods is harmonious. Our study suggested that the measurement of vitamin D performed by all three methods is reliable. Therefore, HPLC, chemiluminescence or LC-MS / MS methods can be used safely to measure the levels of vitamin D in routine laboratories.