Camellia sinensis (çay) ekstrelerinin in vitro antioksidan, yara iyileştirici ve U2OS osteosarkom hücrelerinde antikanser aktivitelerinin araştırılması
Investigations of in vitro antioxidant, wound healing and anticancer activities in U2OS osteosarcoma cells of Camellia sinensis extracts
Yazar: SİNEM ER
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MİRİŞ DİKMEN
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Bitki özütü = Plant extract ; Camellia sinensis = Camellia sinensis ; Osteosarkom = Osteosarcoma ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Çay = Tea

Özet:
Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae) (çay), polifenollerce zengin bir bitki olup, özellikle de flavan-3-ol (kateşin) ve flavonol glikozidleri içerir. C. sinensis'den elde edilen yeşil çayın, içerdiği polifenoller sebebiyle güçlü antioksidan, antienflamatuar, antimutajenik, antikanserojenik, antianjiyojenik, apoptotik, hipolipidemik, antiarteriosklerotik, antidiyabetik, antibakteriyel, antiviral ve yaşlanmayı geciktirici etkilere sahip olduğu açıklanmıştır. Bu çalışmada, Trabzon Sürmene'den toplanan Camellia sinensis yaprakları ile satın aldığımız (ticari) yeşil çay'dan hazırladığımız infüzyon ve metanol ekstrelerinin antioksidan, yara iyileştirici ve antikanser aktiviteleri in vitro olarak araştırılmıştır. Toplam fenolik madde miktarları Folin-Ciocaltaeu Metodu ile, antioksidan aktivite tayini ise DPPH (2.2-difenil-1-pikrilhidrazil) ve ß-Karoten-Linoleik Asit üzerinden tayin edilmiştir.0.5, 1, 2.5, 5, 10 ?g/ml konsantrasyonları hazırlanan C. sinensis ekstrelerinin 24 ve 48 saatlik yara iyileştirici etkileri NIH 3T3 hücrelerinde Masson's Trichrome Tekniği kullanılarak araştırılmıştır. 5, 10, 20, 40, 60 ?g/ml ekstre konsantrasyonlarının 24 ve 48 saatlik antikanser aktiviteleri de U2OS osteosarkom hücrelerinde MTT (sitotoksik etki) ve akım sitometri (apoptotik etki) yöntemler kullanılarak değerlendirilmiştir.C. sinensis metanol ekstrelerinin, infüzyon gruplarına göre total fenolik madde miktarı ve antioksidan aktiviteleri daha yüksek bulunmuştur. Bu bulgulara paralel olarak metanol ekstreleri kontrolle karşılaştırıldığında, hem yara iyileştirici hem de antikanser aktivitelerinin yine infüzyon gruplarına göre daha anlamlı olduğu belirlenmiştir. Yara iyileştirici etkide özellikle İYÇ-Me (işlenmiş yeşil çay-metanol), YÇ-Me (işlenmemiş yeşil çay-metanol) ve SYÇ-Me (satın alınmış yeşil çay-metanol)'nin düşük konsantrasyonlarında, total hücre sayısındaki artışa paralel olarak mitoza giden hücre sayılarında da anlamlı artışlar belirlenmiştir. Yine metanol ekstrelerinin 0.5 ?g/ml konsantrasyonlarında poligonal hücre sayılarındaki artışlar kontrole göre önemli derecede anlamlı bulunmuştur. Granül sayısı bakımından gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlılık belirlenmemiştir. Sitotoksik etki bakımından tüm ekstre gruplarında konsantrasyon ve inkübasyon zamanı arttıkça sitotoksik etkinin arttığı ve hücre proliferasyonun azaldığı görülmüştür. Apoptotik etkinin de metanol ekstrelerinde infüzyon gruplarına göre daha fazla olduğu belirlenmiştir. Özellikle apoptotik hücre oranı 60 ?g/ml İYÇ-Me, YÇ-Me, SYÇ-Me konsantrasyonlarında sırasıyla % 26.3, % 18.9 , % 14.7 olarak bulunmuştur.Sonuç olarak, bu çalışmada in vitro antioksidan, yara iyileştirici ve antikanser aktivitede yüksek toplam fenolik madde içeren Camellia sinensis metanol ekstrelerinin daha etkili olduğunu belirlenmiştir.

Abstract:
Camellia sinensis (L.) Kuntze (Theaceae) (tea) is a plant which is rich in polyphenols including flavan-3-ol (catechin) ve flavonol glycosides. It?s been reported that green tea which is obtained from C. sinensis has a potent antioxidant activity and also antiinflammatory, antimutagenic, anticarcinogenic, antiangiogenic, apoptotic, hipolipidemic, antiarteriosclerotic, antidiabetic, antibacterial, antiviral and antiaging activities. In this study, methanol and infusion extracts were prepared from the leaves of Camellia sinensis that were gathered from Trabzon Sürmene and the green tea that we bought in order to investigate antioxidant, wound healing and anticancer activities in vitro. Total phenol constituents were determined by Folin-Ciocaltaeu Method and DPPH (2.2-difenil-1-pikrilhidrazil) and ß-Caroten-Linoleik Acid System were used to determine antioxidant activity.The prepared C. sinensis extracts were given to NIH 3T3 cells at the concentrations of 0.5, 1, 2.5, 5, 10 ?g/ml and they were incubated for 24, 48 hours to detect wound healing effects by using Masson?s Trichrome Tecnique. The concentrations of extract (5, 10, 20, 40, 60 ?g/ml) were given U2OS osteosarcoma cells to evaluate their anticancer activities at 24, 48 hours by using MTT and flow cytometry assays.Total phenolic constituents and antioxidant activities of methonol extracts were higher than water extracts. The wound healing and anticancer activities of methanol extracts were significantly increased when compared to control. In the low concentrations of methanol extract groups in the wound healing effect, the observed numbers of mitotic cells were significantly high along with the total cell number. The 0.5 ?g/ml concentration of the methanol extract was indicated an increment in polygonal cell numbers when compared to control. There was no significance in the groups in respect to number of granule cells. In cytotoxicity test, it was observed that as the concentrations and incubation time increases the cytotoxic effect was also increased; whereas the proliferation was decreased. The apoptotic effect in methanol extracts were more potent when compared to infusion groups. Especially; the cells which were treated with 60 ?g/ml concentration of methanol extract were indicated higher apoptotic cell ratio.As a result it was concluded that methanol extracts of Camellia sinensis which have high total phenolic constituents were more effective in antioxidant, wound healing and anticancer activities