Sodyum florür (NAF) uygulanmasının PI3K/AKT sinyal yolağı üzerine etkisinin in vitro olarak araştırılması
Invitro investigation of theeffect of sodium fluoride (NAF) administration on PI3K/AKT signaling pathway
Yazar: RISKİYE KORKMAZ
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ VEYSEL YÜKSEK ; PROF. DR. SEMİHA DEDE
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Veteriner Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Fosfoinositid 3-kinaz = Phosphoinositide 3-kinase ; Hücre dizisi = Cell line ; Protein-P53 = Protein-P53 ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Sodyum florür = Sodium fluoride ; İn vitro = In vitro

Özet:
Korkmaz R, Sodyum Florür (NaF) uygulanmasının PI3K/AKT sinyal yolağı üzerine Etkisinin in vitro olarak araştırılması. Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya (Veteriner) Anabilim Dalı, Yüksek Lisans Tezi, Van, 2020. Bu tez çalışması, yüksek elektronegativiteye sahip flor elementinin neden olduğu hücre içi moleküler mekanizmaların düzenlenmesinde önemli bir role sahip PI3K/AKT yolağına olan etkisini ortaya koymak amacıyla plandı.Bu amaçla, flordan ençok etkilenen dokuların başında böbrek dokusu geldiği için çalışma materyalı olarak NRK-52E rat böbrek epitel hücresi seçildi. Çalışmada flor kaynağı olarak NaF kullanıldı. Uygulanacak NaF konsantrasyonu MTT canlılık testi ile belirlendi. NaF konsantrasyonları 24 saat için proliferasyon artırıcı konsantrasyon olan (10 μM) ve sitotoksik konsatrasyonlar olan IC25 (2250 μM) ve IC50 (4250 μM) olarak belirlendi ve uygulandı. Çalışmada PI3K/AKT yolağında önemli role sahip olan genler ERBB2, PI3K, AKT ve mTOR genleri ile TP53 geni hedef genler olarak düşünüldü. Belirlenen NaF konsantrasyonu hücrelere uygulandı ve 24 saatin sonunda çalışma gruplarında total mRNA izole edildi. Elde edilen mRNA'lar cDNA'ya çevrildi. Elde edilen cDNA'lar kullanılarak hedef genlerin ekspresyon seviyeleri gerçek zamanlı-qPCR yöntemiyle tespit edildi. Çalışma sonunda elde edilen sonuçlara göre düşük konsantrasyonda verilen NaF konsantrasyonun ERBB2, PI3K, AKT genlerini ekspresyonunu artırdığı, yüksek konsantrasyonda ise değiştirmediği tespit edildi. mTOR ise verilen tüm konsantrasyonlarda ekspresyonunun azaldığı ortaya konuldu. TP53 geni ise düşük konsantrayonda değişmediği, yüksek konsantrasyonda ise artış gösterdiği belirlendi. Yapılan çalışmadan elde edilen sonuçlar ve literatürlere göre, florun PI3K/AKT yollağında yer alan kinaz enzimlerini inhibe edebileceği ve bunun sonucunda bazı genlerin ekspresyonunun azalmasına veya artışına neden olabileği sonucuna varılabilir. Özet olarak NRK-52E böbrek epitel hücre serisinde florun neden olduğu hücre hasarının patogenezinde PI3K/AKT/mTOR yolağı önemli bir sinyal yolağıdır

Abstract:
Korkmaz R, Invitro investigation of theeffect of sodium fluoride (NaF) administration on PI3K/AKT signaling pathway. Health Sciences Institute, Department of Biochemistry (Veterinary Medicine), M.Sc. Thesis, Van, 2020. This thesis study was planned to determine the effect of fluoride has high electronegativity on the PI3K/AKT pathway, which has an important role in the regulation of intracellula rmolecular mechanisms. For this purpose, NRK-52E rat kidney epithelial cell was chosen as the study material, since kidney tissue is the leading tissue the most affected by fluoride. NaF was used as a source of fluorine in thestudy. The NaF concentration to be applied was determined byt he MTT viability test. NaF concentrations were determined as concentrations (10 μM) which are proliferation enhancing, IC25 (2250 μM) and IC50 (4250 μM) cytotoxic concentrations for 24 hours, and were applied. In the study, genes ERBB2, PI3K, AKT and mTOR genes , an important role in PI3K/ AKT pathways , and TP53 genes that have pathway were considered as target genes. The determined NaF concentration was applied to the cells and at the end of 24 hours. Total mRNA was isolated in the study groups. The obtained mRNAs were translated into cDNA. Expression levels of target genes were determined by real time-qPCR method by using the cDNAs. According to the results obtained at the end of the study, it was determined that the low concentration of NaF increased the expression of ERBB2, PI3K, AKT genes, but did not change in high concentrations. It was found that mTOR decreased in all NaF concentrations given. TP53 gene was found to be unchanged at low concentration, but increased in highs concentration. According to the results obtained from the study and the literature, it was concluded that fluoride can inhibit the kinase enzymes in the PI3K/AKT pathway and as a result, it may cause a decrease or increase in the expression of somegenes. In summary, the PI3K/AKT/mTOR is an important signaling pathway in the pathogenesis of fluorine-induced cell damage in the NRK-52E renal epithelial cell line.