Kronik lenfositik lösemide aurora-A kinaz ekspresyonu
Aurora-A kinase expression in chronic lymphocytic leukemia
Yazar: DENİZ ÇETİN
Danışman: PROF. DR. VEFKİ GÜRHAN KADIKÖYLÜ
Adnan Menderes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Aurora kinaz = Aurora kinase ; Kromozom düzensizlikleri = Chromosome aberrations ; Lösemi-lenfositik-kronik-B hücreli = Leukemia-lymphocytic-chronic-B-Cell ; Sitogenetik = Cytogenetics

Özet:
Amaç ve Hipotez: Aurora kinazlar sentrozom olgunlaşması ve ayrılması, mitotik iğ ipliklerinin oluşumu, iğ düzeneği kontrol noktasının denetlenmesi, kromozom ayrılması, sitoplazma bölünmesi gibi mitotik olayların düzenlemesinde önemli serin/threonin kinazlardır. Aurora kinaz A aşırı ekspresyonu pek çok solid organ tümörü ve hematolojik malignitede daha yüksek tümör derecesi, daha fazla proliferasyon hızı ve kötü prognoz ile ilişkilendirilmiştir. Bu çalışmanın amacı kronik lenfositik lösemide Aurora kinaz A ekspresyonunun belirlenmesidir.
Yöntem: Adnan Menderes Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylı ileriye dönük çalışmamıza yeni KLL tanısı konulmuş ve hiç tedavi almamış 41 hasta (22 erkek ve 19 kadın, yaş ortalaması 70±10) ile benign hematolojik hastalığı olan 18 hasta (7 erkek ve 11 kadın, yaş ortalaması 53±20) kontrol grubu olarak alındı. Tüm hastalara kemik iliği aspirasyonu ve biyopsisi yapıldı. Kontrol grubundan bir hastanın Aurora kinaz A mRNA ekspresyon düzeyi teknik sorun nedeniyle analiz edilemedi ve çalışmadan çıkarıldı. Kemik iliği hücrelerinde Aurora kinaz A ekspresyonu kantitatif reverse transkriptaz-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) yöntemiyle β-aktin ve GAPDH housekeeping genleri kullanılarak araştırıldı. Rölatif RNA düzeyleri standart delta/delta Ct (δ/δ Ct) metoduyla elde edildi. Tüm KLL hastaları ve tüm kontrol grubu hastalarının kemik iliği biyopsi kesitlerine Aurora-A antikoru uygulanarak immunhistokimyasal incelemesi yapıldı. KLL hastalarında 13q delesyonu, 17p delesyonu ve trizomi 12 kromozomal anormallikleri kemik iliği aspirasyon örneğinde FISH yöntemiyle araştırıldı. Tüm verilerin karşılaştırılması SPSS 15.0 Windows ortamında Mann-Whitney-U, Ki-Kare ve One-Way ANOVA testleri ile yapıldı ve p<0.05 değerler anlamlı kabul edildi.
Bulgular: Aurora kinaz A mRNA ekspresyonu açısından KLL hastaları ve kontrol grubu arasında anlamlı farklılık saptanmadı (p>0.05). KLL hastalarında Aurora kinaz A immunhistokimyasal pozitifliği istatistiksel olarak anlamlı bulundu (p<0.001). Aurora kinaz A pozitif boyanan tüm hastaların kemik iliği hücrelerinde sitoplazma ve nükleuslarında birlikte boyanma görüldü. 13q delesyonu, 17p delesyonu ya da trizomi 12 kromozomal anormallikleri olan KLL hastalarında Aurora kinaz A immunhistokimyasal boyanma bakımından bir farklılık saptanmadı (p>0.05).
Sonuç: Tedavi görmemiş KLL hastalarıyla yapılan literatürdeki en geniş hasta serisine sahip çalışmamızda Aurora kinaz A mRNA ekspresyonunda bir artış saptanmadı. Ancak immunhistokimyasal boyanma açısından anlamlı farklılık Aurora kinaz A'nın KLL'de potansiyel bir terapötik hedef olabileceğini düşündürmektedir.

Anahtar Kelimeler: Aurora kinaz A, kronik lenfositik lösemi

Abstract:
Aim and Hypothesis: Aurora kinases are serine/threonine kinases that are essential for regulating mitotic events such as centrosome maturation and segragation, mitotic spindle formation, control of spindle assembly checkpoint, chromosome segragation and cytokinesis. Aurora kinase A overexpression was associated with higher tumor grade, proliferation rate and poor prognosis in many solid organ tumors and haematological malignancies. The aim of this study is to determine the Aurora kinase A expression in patients with chronic lymphocytic leukemia.
Method: Our prospective study was approved by the Ethics Committee of Adnan Menderes University. Newly diagnosed, untreated 41 CLL patients (22 males and 19 females with mean age of 70±10) and control group of 19 patients (7 males and 11 females with mean age of 53±20) with benign haematological diseases were included in this study. Bone marrow aspiration and biopsy was performed in all patients. Aurora kinase A mRNA expression could not be analyzed due to technical problem in only one patient of control group and this patient was excluded. Aurora kinase A expression was investigated using β-actin ve GAPDH housekeeping genes by quantitative RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction) method in bone marrow cells. Relative RNA level was performed via standard delta/delta Ct (δ/δ Ct). Aurora-A antibody was applied to all bone marrow biopsy sections of patients with CLL and control group for immunohistochemical analysis. 13q deletion, 17p deletion and trisomy 12 chromosomal abnormalities were investigated by FISH method in bone marrow aspirates of CLL patients. Statistical analysis of the differences between groups was assessed by Mann-Whitney-U, Chi-square and One-Way ANOVA tests in SPSS 15.0 Windows. A p-value of <0.05 was considered statistically significant.
Results: There was no significant difference for Aurora kinase A mRNA expression between CLL patients and control group (p>0.05). Aurora kinase A immunohistochemical positivity in patients with CLL was statistically significant (p<0.001). Cytoplasmic and nuclear staining pattern was both seen in all Aurora kinase A positively stained CLL patients. There was no significant difference for immunohistochemical staining in CLL patients with chromosomal abnormalities 13q deletion, 17p deletion or trisomy 12 (p>0.05).
Conclusion: Aurora kinase A mRNA overexpression was not detected in our study which has largest series of untreated patients with CLL. However, significant immunohistochemical staining represent that Aurora kinaz A might be a potential therapeutic target in CLL.

Key Words: Aurora kinase A, chronic lymphocytic leukemia