İskemi/reperfüzyon hasarında Apelin'in etkilerinin araştırılması
The effects of Apelin in ischemia/reperfusion injury research
Yazar: ORHAN FAHRİ DEMİR
Danışman: PROF. DR. TAHİR GÜRLER
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi = Plastic and Reconstructive Surgery
Dizin: Apelin = Apelin ; Cerrahi flepler = Surgical flaps ; Hidrojeller = Hydrogels ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; İskemi = Ischemia

Özet:
Uzun zamandır plastik cerrahların ilgi odağında olan doku defektlerine flep
uygulaması esnasında teknik ve aletlerdeki ilerlemelere rağmen zorlu süreçlerin başında iskemi
reperfüzyon hasarı gelmektedir. İskemi reperfüzyon hasarının etkilerinden kurtulmak için
çeşitli madde enjeksiyonları tanımlanmış, cerrahi teknikte farklı yaklaşımlar denenmiştir ancak
bu konu flep cerrahisinin zorlayıcı yanlarından biri olmaya devam etmektedir.Bu çalışmamız, sıçan modellerinde serbest inguinal fleplerde oluşan iskemi
reperfüzyon hasarı tablosunun jel formülasyonunda hazırlanan apelin'in azaltıcı etkisi olup
olmadığı araştırılmıştır. Çalışmamızdaki amaç, daha önce hayvan deneylerinde kalp, beyin,
deride iskemik hasara karşı etkili olduğu gösterilen apelinin jel formülasyonuyla uzun süreli
dokuya salınımın flep içinde ve flep etrafı dokuda oluşan anormal değişiklikleri azaltabileceği,
hasarı ne boyutta engelleyeceği, damar oluşumuna etkisiyle dokunun iskemiye karşı yanıtının
ne yönde etkileyeceğinin tespit edilmesidir.Deney modelimizde biyoistatistiksel olarak anlamlı sonuç almak için 28 adet Wistar
albino türü sıçan kullanıldı. 4 ayrı grup oluşturuldu. Anestezi için önce indüksiyon odasında
gaz inhalasyonu inhaler isofluran 3 lt/dk dan ve 5 lt/dk dan oksijen gazı uygulandı. Sıçanlara
sonrasında ketamin ve ksilazin ile anestezi uygulandı. Devamında 2 lt/dk dan isofluran ve 4
lt/dk dan oksijen gazı ile idame genel anestezi sağlanmış oldu. Anestezi sonrası deneyin
yapılacağı inguinal bölgede %70 etanol ve ardından steril serum fizyolojik ile temizlik işlemi
yapıldı. Birinci grupta herhangi bir iskemik girişim yapılmayarak inguinal flep kaldırıldı. Daha
sonra flep flow-through olacak şekilde femoral arter ve ven üzerinden kaldırıldı ve herhangi bir
iskemik işlem uygulanmadı. İkinci gruptaki sıçanlarda ise aynı şekilde inguinal flep kaldırıldı.
2-saat iskemi süresi sonrası damar anastomozu gerçekleştirildi. Üçüncü gruptaki sıçanlarda,
aynı şekilde serbest flep inguinal bölgeden kaldırıldı, 2-saat süreyle iskemi uygulandı ve damar
anastomozu sonrası subkutan planda apelin içermeyen jel formülayonu uygulandı. Dördüncü
grupta iste aynı işlemler apelin içeren jel formülasyonu ile beraber uygulandı. Yedi gün sonra
tüm flepler kontrol edilerek tamamen alındı ve makro düzeyde incelemeler sonrası formaldehit
solüsyonu içerisine konularak fikse edildi ve rutin histolojik takip prosedürü uygulandı.
Histolojik değerlendirmede hemotoksilen-eosin ve Mallory azan ile boyanmış
örnekler histopatolojik olarak Modifiye Verhofstad Skorlaması ile değerlendirildi. Ayrıca anti
e-NOS ve anti-VEGF immunohistokimyasal boyamaları gerçekleştirildi. Örneklere modifiye
verhostad skorlaması yapılarak skorların ortalamaları hesaplandığında 4.grubun 2.gruba göre
daha az iskemi-reperfüzyon skoru aldığı görüldü.

Abstract:
Ischemia reperfusion damage is one of the most challenging processes despite
advances in techniques and instruments during the application of flaps to tissue defects that
have long been the focus of attention of plastic surgeons. Various injections of substances have
been defined to overcome the effects of ischemia reperfusion injury, different approaches have
been tried in surgical technique, but this issue remains one of the challenging aspects of flap
surgery.
In this study, it was investigated whether apelin prepared in gel formulation had a
mitigating effect on the ischemia reperfusion damage in free inguinal flaps in a rat model. The
aim of our study is to determine The aim of our study is that long-term release to the tissue with
the gel formulation of apelin, which has been shown to be effective against ischemic damage
to the heart, brain and skin in animal experiments, can reduce the abnormal changes occurring
in the flap and the tissue around the flap, to what extent it will prevent the damage, and in what
direction the tissue's response will be to ischemia with its effect on vessel formation,
determining its impact.
In our experimental model, 28 Wistar albino type rats were used to obtain
biostatistically significant results. 4 separate groups were created. For anesthesia, inhaler
isofluran and oxygen gas mix between 3 lt/min and 5 lt/min was applied in the induction
chamber. Rats were then anesthetised with ketaminele xylazin. Afterwards, general anesthesia
was provided with 2 lt/min isofluran and 4 lt/min oxygen. After anesthesia induction, inguinal
area was cleaned with 70% ethanol and sterile serum phsyiologique. In the first group, the
inguinal flap was elevated without any ischemic insult. The flap was then elevated till femoral
artery and vein so that it would be a flow-through flap without any ischemia. In rats in the
second group, the inguinal flap was elevated the same way. Vascular anastomoses were
performed after a 2 hours of ischemia period. In rats of the third group, the free flap was elevated
65
from the inguinal region, ischemia was applied for 2-hours, and Apelin-free gel formulation
was applied to the subcutanous plane after vascular anastomosis. In the fourth group, the same
procedures were done together with the gel formulation containing apelin. After seven days, all
the flaps were checked, and excised, and after macroscopic examinations, flaps were put into
formaldehyde solution and routine histological follow-up.
In histological evaluation, samples stained with hemotoxylene-eosin and Mallory azan
were evaluated histopathologically with modified Verhofstad Scoring. In addition, sections
were stained with anti e-NOS and anti-VEGF immunohistochemical dyes. When the averages
of the scores were calculated by performing modified verhostad scoring on the samples, it was
seen that the 4th group received fewer ischemia-reperfusion scores than the 2nd group. With
these findings, it was concluded that the use of apelin gel formulation had a meaningful effect
in order to prevent the development of ischemia-reperfusion damage.