Mastitisli sığır sütlerinden izole edilen escherıchıa colı suşlarının önemli virulens genlerinin ve antibakteriyel duyarlılıklarının incelenmesi
Investigation of the important virulence genes and antibacterial sensitivity of escherichia coli strains isolated from mastitic cattle milk
Yazar: MELİKE BEKÖZ
Danışman: PROF. DR. SÜHEYLA TÜRKYILMAZ
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antibakteriyel ajanlar = Anti-bacterial agents ; Escherichia coli = Escherichia coli ; Genler = Genes ; Mastit = Mastitis ; Mikrobiyal duyarlılık testleri = Microbial sensitivity tests ; Sığır hastalıkları = Cattle diseases ; Sığırlar = Cattles ; Virülans = Virulence ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Bu çalışmada mastitisli sığır sütlerinden E. coli'nin izolasyonu, identifikasyonu, izolatların önemli virulens genlerinin [Shiga toksin 1 (stx1), Shiga toksin 2 (stx2), ısıya duyarlı toksin (lt), ısıya dirençli toksin (st), invaziv antijen lokusu (ial), intimin (eaeA), demet oluşturan pilus (bfpA), fimbrial antijen (aafII)] ve antibiyotik duyarlılık profillerinin incelenmesi amaçlandı. Çalışmada materyal olarak özel bir süt işletmesindeki mastitisli 328 inekten bir yıl boyunca alınan 390 süt örneği kullanıldı. E. coli izolasyonu klasik yöntemler kullanılarak gerçekleştirildi. Bakteri identifikasyonunun doğrulanmasında ve virulens genlerinin belirlenmesinde polimeraz zincir reaksiyonundan (PZR) faydalanıldı. İzolatların sekiz antimikrobiyal aileye ait on antibiyotiğe karşı duyarlılıkları disk difüzyon yöntemi ile incelendi. Çalışmada mastitisli süt örneklerinin % 17,2'sinden (67/390) E. coli izole ve identifiye edildi. İzolatların % 19,4'ünün (13/67), incelenen virulens genlerinden en az bir tanesini taşıdığı belirlendi. En sık görülen virulens genleri stx1 (5/13=% 38,5), stx2 (2/13=% 15,4), st (2/13=% 15,4), lt (1/13=% 7,7), eaeA (3/13=% 23,1) iken; bfpA ve aafII genleri hiçbir izolatta bulunmadı. Virulens geni taşıyan izolatların  % 53,8'i (7/13) EHEC, % 23,1'i (3/13) ETEC ve % 23,1'i (3/13) EPEC olarak tespit edildi. İzolatların% 89,5'i (60/67), % 37,3'ü (25/67), 35,8'i (24/67) kloramfenikol, ampisilin ve tetrasikline dirençli olduğu tespit edilirken; kullanılan diğer 8 antibiyotik için direnç % 2,9 ile % 22,3 arasında değişti. İzolatların % 3,0 (2/67)'ü kullanılan tüm antibiyotiklere duyarlı iken; % 30,0'u (20/67) çoklu direnci gösterdi. Antimikrobiyal duyarlılık, bakterilerin direnç profillerindeki değişiklikleri saptamak için izlenmelidir.

Anahtar kelimeler: Escherichia coli, mastitis, antibiyogram, virulens gen

Abstract:
In this study, isolation and identification of E. coli from mastitic cattle milk samples, detection of important virulence genes [Shiga toxin 1 (stx1), Shiga toxin 2 (stx2), heat sensitive toxin (lt), heat resistant toxin (st), invasive antigen locus (ial), intimin (eaeA), bundle pilus (bfpA), fimbrial antigen (aafII)] and antibiotic susceptibility profiles of isolates were aimed. In the study, 390 milk samples were taken from 328 mastitic milk samples in a special farm for one year. E. coli isolation was performed using conventional methods. Polymerase chain reaction (PCR) was used to confirm bacterial identification and identification of virulence genes. Sensitivities of ten isolates to ten antibiotics belonging to eight antimicrobial families were examined by disk diffusion method. In the study, E. coli was isolated and identified in 17.2% (67/390) of mastitis milk samples. Most prevalent virulence genes were stx1 (5/13=38.5%), stx2 (2/13=15.4%), st (2/13=15.4%), lt (1/13=7.7%), eaeA (3/13=23.1%); bfpA  and aafII were not present in any isolate. 53.8% (7/13) of the isolates were identified as EHEC, 23.1% (3/13) as ETEC and 23.1% (3/13) as EPEC. It was determined that 89.5% (60/67), 37.3% (25/67), 35.8% (24/67) of isolates were resistant to chloramphenicol, ampicillin and tetracycline while antibiotic resistances for other 8 antibiotics varying between 2.9% and 22.3%, 3.0% (2/67) of the isolates were susceptible to all antibiotics used; 30.0% (20/67) were multiple resistant. Antimicrobial susceptibility should be monitored to detect changes in bacterial resistance profiles.

 Key Words: Escherichia coli, mastitis, antibiogram, virulence gene