Gonadotropin stimülasyonundan sonra aspire edilen ovulasyon öncesi oositlerin yardımcı üreme yöntemleriyle döllenebilme özelliklerinin olgunlaşma (Maturite) evreleri yönünden ışık ve elektron mikroskop düzeylerinde incelenmesi
Light and ultrastructurel investigation of aspirated preovulatuar oocytes stimulated by gonadotropins from point of fertilizability as to the maturity stages, using assisted reproduction techniques
Yazar: MEHMET CINCIK
Danışman: PROF. DR. AYSEL ŞEFTALİOĞLU
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1997
Konu: Morfoloji = Morphology
Dizin: Fertilizasyon = Fertilization ; Oositler = Oocytes ; Üreme teknikleri = Reproduction techniques

Özet:
Glikoliz yolunun anahtar enzimlerinden Piruvate kinaz (E.C.2.7.1.40, ATP: Pyruvate- O-phosphotransferase) fosfoenolpiruvatın (PEP) piravata dönüşümü ile ATP oluşumunu katalizlemektedir. Piruvat kinaz tetramer yapıdadır. Memelilerde, piruvat kinaz enzimi Mİ, M2, L ve R tip olmak üzere dört farklı izoenzimi bulunmaktadır. İzoenzimler kinetik, düzenleyici özellikleri ve lökalize olduğu dokuya göre farklılık göstermektedir. Günümüze değin yapılan araştırmalarda, tümörlü hücrelerde metabolik değişikliğin kontrolünde M2 tip piruvat kinazın rolü saptanmış olup hemen hemen tüm çoğalan hücrelerde fazla miktarlarda bulunduğu, özellikle tümörlü hücrelerde ise bu miktarın çok fazla arttığı gözlenmiştir. Karsinogenez süresince, piruvat kinazın dokuya özgün izoenzimlerinden Ml- PK kas, L-PK karaciğer, R-PK eritrosit izoenzimlerinin ortadan kalktığı M2-PK' tun sentezinin arttığı bulunmuştur. M2-PK enzimin substratı olan PEP'e karşı yüksek affinite gösteren aktif tetramerik yapıda ve PEP'e daha az affinite gösteren dimerik yapıda bulunabilmektedir. Dimerik formda olan M2-PK hücresel PEP derişiminde neredeyse inaktif durumdadır. ScheBo Biotech firması Tümör M2-PK' nın EDTA-plazmada ölçümü için ELISA yöntemini geliştirmiştir. Immünohistolojik boyama sonuçlarıyla uyumlu olarak, böbrek, pankreas, akciğer, meme ve kolon kanserli hastaların EDTA-plazma örneklerinin Tümör M2- PK miktarı, tümörlerin metastatik durumlarım direk yamıtmaktadır. Meme kanseri yüksek morbidite ve mortaliteye sebep olduğu için dünyadaki en önemli üçüncü kanser türüdür. Çalışmada, plazma ve doku örneklerinin piruvat kinaz enzim spesifik aktivitesi 92 hastada Beutler ve ELISA yöntemleri ile çalışıldı. Hem ELISA hem de Beutler yöntemi ile çalışılan, kontrol ve hasta gruplarına ait plazma örneklerinin piruvat kinaz aktiviteleri karşılaştırıldı ve anlamlı bir fark (p< 0.001) bulundu. Ayrıca, Beutler yöntemi ile çalışılan tümörlü ve normal doku ömelderinin PK aktiviteleri arasında farklılık olduğu gözlendi (p< 0.001). Anahtar Kelimeler: Meme Kanseri, Piruvat Kinaz, Tümör M2- piruvat kinaz x

Abstract:
Pyruvate kinase (EC 2.7.1.40, ATP: Pyruvate-O-phosphotransferase), a key enzyme in glycolysis, catalyzes conversion of phosphoenolpyruvate (PEP) into pyruvate with regeneration of adenosine triphosphate (ATP). Pyruvate kinase is a tetramer. In mammalian tissues, four distinct isoenzymes of pyruvate kinase are found: Ml -type; M2-type ; L-type, and R-type. These isoenzymes differ in kinetic and regulatory properties and localization in different tissues. The key regulator of the metabolic alterations found in tumor cells is the glycolytic isoenzyme pyruvate kinase type M2 that is generally expressed in all proliferating cells and overexpressed in all tumor cells investigated to date. During carcinogenesis a shift in the pyruvate kinase isoenzyme equipment always takes place, such that the tissue-specific isoenzymes disappear (such as Ml-PK in muscle and brain, L-PK in liver and kidney, and R- PK in red blood cells), and M2-PK is expressed. M2-PK can exist in a highly active tetrameric form with a high affinity to its substrate, phosphoenolpyruvate (PEP), and in a dimeric form with a low PEP affinity. The dimeric form of M2-PK is virtually inactive at cellular PEP concentration. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELIS A) for the determination of Tumor M2- PK in ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)-plasma is available from ScheBo Biotech AG. In accordance with results from immunohistological staining, the amount of Tumor M2-PK in ETDA-plasma samples from patients with renal cell carcinoma, pancreatic, lung, breast, and colon cancer directly reflected the metastatic state of the tumors. Carcinoma of the breast, the third most common cancer worldwide, accounts for the highest morbidity and mortality. In the present study, pyruvate kinase specific activity of plasma and tissue samples were studied with Beutler and ELISA method in 92 patients. Pyruvate kinase activities of plasma samples are belonging to control and patient gruops which were studied both ELISA and Beutler methods were compared and were found significant result(p<0.001). Also, pyruvate kinase aktivities of tumor and normal tissue samples which studied with Beutler method were compared and the results were found p< 0.001. Key Words: Breast Carcinoma, Pyruvate Kinase, Tumor M2- pyruvate kinase. XI