Kök hücre transplantasyonu yapılan multipl miyelom hastalarında                                            microRNA varyantlarının prognoz ve tedaviye yanıt üzerine etkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of the impact of microrna variants on prognosis and treatment responses in patients wi̇th multiple myeloma undergoing autologous stem cell transplantation
Yazar: MELYA PELİN KIRIK
Danışman: PROF. MUSTAFA PEHLİVAN
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Hematoloji = Hematology
Dizin: Hematopoetik kök hücre transplantasyonu = Hematopoietic stem cell transplantation ; Kök hücre taransplantasyonu = Stem cell transplantation ; Mikro RNA = Micro RNA ; Multipl miyelom = Multiple myeloma ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; Prognoz = Prognosis ; Tedavi = Treatment

Özet:
Giriş ve amaç: Multipl miyelom (MM) bir malign plazma hücre neoplazisidir. MicroRNA (miRNA, miR-, mi-)'lar yaklaşık 21-23 nükleotid uzunluğunda, kısa, tek zincirli, protein kodlamayan RNA molekülleridir. Temel fonksiyonları, translasyon aşamasında gen ekspresyonunu düzenlemektir. Regülasyonu bozulmuş miRNA ekspresyonunun ve miRNA ilişkili polimorfizmlerin, MM patogenezine ve prognozuna olan etkilerine dair çalışmalar literatürde yer almaktadır. MiRNA196a2, geni kromozom 12q13.13 üzerinde lokalize olan ve son dönemde malignite ile ilişkisi çok sayıda çalışmaya konu olmuş bir miRNA'dır. Bu çalışmada amaç; miRNA196a2 polimorfizmlerinin, otolog kök hematopoetik kök hücre nakli yapılan MM hastalarında prognoz ve tedaviye yanıt üzerine etkisinin değerlendirilmesidir.
Gereç ve yöntem: Çalışmaya 200 MM tanılı hasta ve 200 sağlıklı gönüllü dahil edildi. MM tanılı hastalar, 15.06.18-15.10.2018 tarihleri arasında Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi Şahinbey Araştırma ve Uygulama Hastanesi Erişkin Hematoloji Kliniğinde MM tanısı ile takip edilmekte olan hastalardan oluşmaktaydı. Hastalara ait klinik veriler geriye dönük dosya taraması ile değerlendirildi. Otolog hematopoetik kök hücre transplantasyonu (OHKHT) yapılmış/yapılmamış MM tanılı hastalardan ve sağlıklı kontrollerden venöz kan örneğinden DNA izolasyonu yapıldı. DNA örnekleri -20 0C'de bankalandı. Mi196a2 T/C genotiplendirme polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) - sınırlayıcı enzim parça uzunluk çeşitliliği (restriction fragment length polymorphism, RFLP) tekniği ile yapıldı. Takipte, tedavide çalışmaya alınan hastalara herhangi bir müdahalede bulunulmadı. Progresyona kadar olan ve uzun dönem sağkalımları takip edildi. Hastalarda ve sağlıklı kontrollerde miRNA196a2 allel / genotiplerinin dağılımı karşılaştırıldı. Prognostik faktörlerin ve mi196a2 genotip dağılımlarının, MM'da genel sağkalım, progresyonsuz sağkalım üzerine etkisi değerlendirilmeye çalışıldı. 
Bulgular: Hastalar ile kontrol grubu arasında genotip dağılımları arasında anlamlı fark izlenmedi. MiRNA196a2 genotipi dağılımı ile klinik parametreler (yaş, cinsiyet, Ig subgrupları, ISS evresi) arasında ilişki saptanmadı. Univaryant analizde, PFS (progresyonsuz sağkalım) üzerine anlamlı etkisi saptanan faktörler; cinsiyet, ECOG performans skoru, OHKHT yapılmasıdır. OS üzerine anlamlı etisi saptanan faktörler ise; cinsiyet, yaş, ISS evresi, hafif zincir türü, ECOG performans durumu, OHKHT yapılması, miRNA196a2 genotipidir. Multivaryant analize ise, PFS üzerine OHKHT yapılmasının olumlu etkisi izlenirken (p=0.001); OS üzerine, ECOG performans skoru (p=0.016), miRNA196a2 genotipi (p=0.041), ISS evresi (p=0.045) etkenlerinin anlamlı etkisi mevcuttu.

	       Sonuç: MM'da, mi196a2 polimorfizmlerinin OS üzerinde istatistiksel anlamlı etkisi olduğu gösterilmiştir. CC genotip daha kötü prognostik bulgu olarak saptanmıştır. CC genotipe sahip hastaların, erken dönemde daha agresif tedavi seçenekleri açısından değerlendirilebileceği sonucuna varılmştır.  .

	 Anahtar Kelimeler: Multipl miyelom, Otolog kök hücre transplantasyonu, miRSNPs, microRNA, miR196a2 polimorfizm

Abstract:
Background and aim: Multiple myeloma (MM) is a malignant plasma cell neoplasm. MicroRNA(miRNA, miR-, mi-)s are short, single-stranded, approximately 21-23 nucleotides in length and noncoding RNA molecules.  Their main function is regulation of gene expression in the translation stage. There are studies in the literature, about the effects of impaired regulation of miRNA expression and miRNA related polymorphisms on the prognosis and pathogenesis in MM. MiRNA196a2 gene is localized in chromosome 12q13.13 and miRNA196a2 has been the subject of many recent studies related to malignancy. In this study we aimed to evaluate the impact of miRNA196a2 polymorphisms on prognosis and treatment responses in patients with MM undergoing autologous haematopoietic stem cell trasplantation (AHSCT).
Materials and Methods: A total of 200 patients with MM and 200 healthy controls were included in the study. Patient group consisted of patients, followed by Gaziantep University Medical Faculty, Sahinbey Research and Practice Hospital Hematology Clinic, between 15.06.18-15.10.2018. Clinical data were evaluated with retrospective file screening. DNA of patients (with/without AHSCT) and healty controls, was isolated from the venous blood sample. DNA samples were stored at -20 0C. MiRNA196a2 genotyping was performed with the polymerase chain reaction (PCR) – restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique. No intervention was made to the patients included to the study in follow-up and treatment. Survivals to the progression and long-term survival were followed. MiRNA196a2 allels/genotypes distributions were compared in patients and healty controls. The effects of genotype and prognostic factors on overall survival (OS) and progression free survival (PFS) were evaluated. 
Findings: There was no significant difference between the genotype distributions of MM patients and healty controls. No relation was found between genotype distribution and clinical parameters (age, gender, ECOG performance status, ISS stage, Ig subgroups). In univariate analysis; gender, ECOG performance status, underwenting AHSCT were found to have a significant effect on PFS. Gender, age, ISS stage, light chain type, ECOG performance status, underwenting AHSCT, miRNA196a2 genotype were found to have a significant effect on OS. In multivariate analysis, only factor effecting PFS was underwenting AHSCT (p=0.001) and ECOG performance status (p=0.016), miRNA196a2 genotype (p=0.041), ISS stage (0.045) were found to have a significant effect on OS.   
Results: It's shown that mi196a2 polymorphisms effects OS in MM and this effect is statistically significant. CC genotype was found to be worse prognostic finding. It was concluded that patients with CC genotype can be evaluated in terms of more aggressive treatment options in the early period.  

Keywords: Multiple myeloma, autologous haematopoietic stem cell trasplantation, miRSNPs, microRNA, miR196a2 polymorphism