Pkos modeli geliştirilmiş sıçanlarda D vitamininin over fonksiyonları ve insülin rezistansı üzerine etkilerinin histolojik ve biyokimyasal parametrelerle değerlendirilmesi
Evaluation the effects of vitamin D to over function  and insulin resistance  with histological and biochemical parameters in pcos i̇mproved rat models
Yazar: AYŞEGÜL GÜLCAN
Danışman: PROF. DR. MERT KAZANDI
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Over = Ovary ; Over fonksiyon testleri = Ovarian function tests ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome ; Sıçanlar = Rats ; Vitamin D = Vitamin D ; Vitamin D eksikliği = Vitamin D deficiency ; İnsülin direnci = Insulin resistance

Özet:
Polikistik over sendromu reproduktif yaş grubundaki kadınlarda en sık görülen endokrin bozukluktur. İnsülin direnci, hiperinsülinemi ve obezite polikistik over sendromunun gelişmesinde önemli rol oynamaktadır. PKOS'lu kadınlarda D vitamini eksikliğine sık rastlanılmakta ve 25(OHD) serum konsantrasyonlarının bu kadınların %67-85'inde 20 ng/ml'den düşük saptandığı görülmektedir. Yapılan çalışmalarda düşük 25(OHD) düzeylerinin insülin direnci, ovulatuar ve menstrüel düzensizlikler, düşük gebelik oranları, hirsutizm, hiperandrojenizm, obesite ve artmış kardiyovasküler hastalık risk faktörleri ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu nedenle D vitamini eksikliğinin PKOS'da görülen semptomları şiddetlendirebileceği düşünülmektedir. Bu çalışmanın amacı, deneysel olarak polikistik over sendromu oluşturulmuş sıçan modellerinde, D vitamininin PKOS'daki insülin direnci, folikül rezervi ve oksidan stres üzerine  etkilerini araştırmaktır.
 Çalışmamızda 14 sıçana PKOS modeli oluşturmak için subkutan olarak, içinde 7,5 mg dihidrotestesteron (5α-DHT) içeren (günlük doz 83 mcgr) ve 90 gün sürekli salınım yapan pelletler yerleştirildi, 7 sıçan normal kontrol olarak çalışmaya alındı ve herhangi bir işlem uygulanmadı. 90 günün sonunda, PKOS modeli oluşturulan sıçanlardan günlük vajinal sürüntü alındı ve siklus arrestinin oluşup oluşmadığı belirlendi. Daha sonra DHT verilen sıçanlar (n=14) randomize bir şekilde 2 gruba (n=7) ayrıldı. 1. grup sıçanlar  plasebo grubu olarak belirlenip, 1 ml/kg izotonik NaCl, 2. grup sıçanlara tedavi olarak kolekalsiferol (D-3 vitamini) 500 I.U/kg (Devit-3, 1 ml Ampul) 4 hafta süre ile  intraperitoneal (i.p.) olarak uygulandı. Daha sonra tüm sıçanlardan anestezi altında serumda çalışılacak parametreler için kan örneği alındı ve tüm sıçanlara bilateral ooferektomi uygulandı. Sonrasında sıçanlar servikal dislokasyon ile sakrifiye edildi. Ooferektomi materyallerinin histolojik kesitlerinde foliküler yapı (antral folikül sayısı) değişiklikleri incelendi. Kan örneklerinde de AMH (anti mullerian hormon), IGF-1 (Insulin benzeri büyüme faktörü) ve lipid peroksidayon göstergesi olan malonaldialdehit düzeylerine bakıldı. Over dokusunda redukte glutatyon, superoksid dismutaz (SOD), katalaz, MDA düzeylerine bakıldı.
 PKOS modeli geliştirilmiş sıçanlarda D vitamininin over fonksiyonları ve insülin rezistansı üzerine etkilerini araştırdığımız çalışmamızın sonuçları şunlardır;
1.	D vitamini over dokusunda polikistik over sendromu bağımlı oluşan oksidan stresin artmasını, SOD ve glutatyon artışı yolu ile önleyerek serbest radikal klirasyonunu arttırmıştır. 
2.	Polikistik over sendromunun tedavisinde D vitamini eksikliği olmadan vitamin replasmanınının, PKOS'da oluşan IGF artışı ve IGF'nin gösterdiği insulin rezistansı üzerine etkisi bulunmamaktadır.
3.	D vitamini seviyesi düşük PKOS'lu hastalarda D vitamini replasmanı verilip D vitamini plazma seviyesi normal değerlere (30–40 ng/ml) getirilse bile, D vitaminin aynı zamanda AMH transkripsiyonunu artırıcı etkisi olması nedeni ile PKOS takip markeri AMH'da beklenen olumlu düşme etkisi maskelenebilir ve bu nedenle bu hastalarda AMH takip markeri olarak kullanılmaz. 
4.	D vitamini histolojik olarak ovulasyon artışına neden olmuştur. Bu etki insulin rezistansının azalmasına bağlı etkiden bağımsız gibi görünmektedir. Bu bulgular eşliğinde D vitamini replasmanının PKOS'da ovulasyonu anlamlı artırdığı görülmektedir. 
5.	Özellikle 25-OH D vitamin düzeyi düşük olan kişilerde replasmanla D vitamini düzeyinin normal değerlere (30–40 ng/ml) getirilmesi PKOS tedavisinde olumlu klinik etkiler (ovulasyon ve gebelik artışı gibi) gösterebilir.

Abstract:
Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is the most common endocrinological disorder in women in the reproductive age group. Insulin resistance, hyperinsulinemia and obesity play an important role in development of polycystic ovary syndrome. Vitamin D deficiency is common in women with polycystic ovary syndrome (PCOS), with the 67–85% of women with PCOS having serum concentrations of 25-hydroxy vitamin D(25OHD) <20 ng/ml. Vitamin D deficiency may exacerbate symptoms of PCOS, with observational studies showing lower 25OHD levels were associated with insulin resistance, ovulatory and menstrual irregularities, lower pregnancy success, hirsutism, hyperandrogenism, obesity and elevated cardiovascular disease.  The aim of this study is to examine the effects of vitamin D on the insulin resistance, follicle reserve and oxidant stress in dihydrotestosterone (DHT)-induced polycystic ovary syndrome (PCOS) rat models.
 To create a rat model of PCOS, we placed pellets to rats subcutaneosly that contains 7,5 mg of dihydrotestesterone (a daily dose of 83 mcg) 90 days of continuous oscillating. Seven rats were studied as normal controls, and no operation was implemented. At the end of 90 days, PCOS model of rats received daily vaginal swab and determine whether or not they have a cycle of arrest. Then rats that treated with DHT (n = 14), were randomly separeted into 2 groups (n = 7). The first group identified as placebo group and was adminestered 1 ml / kg saline, second group treated with cholecalciferol (vitamin D-3) 500 IU / kg (Devita-3, 1 ml ampoule) intraperitoneal (i.p.) for 4 weeks. Then blood samples were taken from rats under anesthesia for the parameters that will  be studied in serum and all rats underwent bilateral oophorectomy. After, the rats were sacrificed by cervical dislocation. In the histological sections of oophorectomy materials, follicular structure changes (antral follicle count) were examined. AMH (anti-Mullerian Hormone), IGF-1 (Insulin-like growth factor) and  malonaldialdehit (lipid peroxidation indicator) levels were measured in blood samples. Reduced glutathione, superoxide dismutase (SOD), catalase, MDA levels were measured in ovarian tissue.
 The results of our study are;
1.	Vitamin D is preventing the increase of oxidative stress in ovarian tissue dependent to polycystic ovary syndrome, through the increase of SOD and glutathione  and increased free radical cliration. 
2.	In the treatment of polycystic ovary syndrome vitamin replacement  without vitamin D deficiency showed no effect on the increase of IGF that occurs in PCOS and insulin resistance shown by IGF.
3.	Even though taking  vitamin D  plasma levels to normal values with supplementation to patients who has low levels,  the expected positive effect of falling in AMH levels as a marker of PCOS may be masked because of the enhancing effect of  AMH transcription caused by vitamin D. Therefore AMH can not be used as a follow-up marker for these patients.
4.	Vitamin D is let to increase ovulation histologically. This effect appears to be independent  from the decreased insulin resistance. In light of these findings vitamin D resuscitation is seen to improve ovulation in PCOS significantly.
5.	Especially bringing the vitamin D levels to normal values (30-40 ng / ml) with vitamin D supplementation to patients who has low levels of 25-OH vitamin D, can show positive clinical effects (such as increased ovulation and pregnancy) in the treatment of PCOS.