MİR-7-5P ile akut myeloid lösemi (AML) ilişkisinin incelenmesi
Investigation of the relationship between MİR-7-5P and acute myeloid leukemia (AMP)
Yazar: EZGİ MEHTEROĞLU
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ PALANDUZ ; ÖĞR. GÖR. İLKNUR SUER
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; HL60 = HL60 ; Lösemi = Leukemia ; Lösemi-miyeloid = Leukemia-myeloid ; Lösemi-miyeloid-akut = Leukemia-myeloid-acute ; Mikro RNA = Micro RNA

Özet:
Akut Myeloid Lösemi (AML) blast hücrelerinin farklılaşarak aşırı çoğalması ile karakterizedir. Kanser patogenezinde önemli rolü bilinen miRNA'lar, 18-22 nükleotid uzunluğunda kısa kodlanmayan RNA'lardır. Bu tez çalışmasında, çeşitli kanserlerde tümör supresör olarak görev aldığı bilinen miR-7-5p'nin AML'deki rolü ve olası hedef genleriyle ilişkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla HL60 ve NB4 AML hücrelerine miR-7-5p mimiği Lipofektamin aracılı yöntemle transfekte edilmiştir. Transfeksiyon validasyonu için TaqMan primer-problar kullanılarak qRT-PZR gerçekleştirilmiştir. miR-7-5p'nin proliferasyona etkisi WST-8 yöntemi ile, apoptoza etkisi ise Kaspaz 3 miktar tayini ile incelenmiştir. miRDB, miRTarBase, Targetscan ve miRWalk veritabanları kullanılarak miR-7-5p'nin olası hedef genleri olarak belirlenen BCL2, SKP2, OGT, KLF4, EGFR genlerinin ve EMT belirteci olarak bilinen VIM geninin rölatif gen ekspresyonları karşılaştırmalı olarak qRT-PZR tekniğiyle değerlendirilmiştir. Transfeksiyonun başarılı bir şekilde gerçekleştiği anlaşılan hücrelerde miR-7-5p transfekte edilen grupta kontrol grubuna kıyasla hücre proliferasyonunun anlamlı düzeyde azaldığı apoptoza eğilimin ise arttığı tespit edilmiştir. miR-7-5p transfekte edilen grupta kontrol grubuna kıyasla SKP2, KLF4 ve OGT genlerinin ekspresyon seviyelerinin istatistiksel olarak anlamlı düzeyde azaldığı; BCL2, EGFR ve VIM genlerinin ekspresyon seviyelerinin ise istatistiksel olarak anlamlı seviyede değişmediği tespit edilmiştir. Sonuç olarak; miR-7-5p'nin AML'de proliferasyonun azalması ve apoptozun artmasıyla ilişkisi olabileceği tespit edilmiştir. Ayrıca miR-7-5p'nin AML'de kanser sürecine SKP2, KLF4 ve OGT genlerini hedefleyerek etki edebileceği düşünülmüştür. AML için erken tanı ve tedavide yeni bir belirteç olabilme potansiyeline sahip miR-7-5p'nin hedef genlerinin tespit edilmesi ve doğrulanması oldukça önem taşımaktadır. Bu yüzden mRNA düzeyinde elde edilen verilerimizin ileri çalışmalarla doğrulanması gerekmektedir.

Abstract:
Acute Myeloid Leukemia (AML) is characterized by differentiation and overgrowth of blast cells. It was aimed to investigate the role of miR-7 5p, which is known to act as a tumor suppressor, through AML and its relationship with target genes. For this purpose, miR-7-5p mimic was transfected to HL60 and NB4 AML cells by Lipofectamine-mediated method. qRT-PCR was performed for transfection validation. The effect of miR-7-5p on proliferation was investigated by WST-8 method, and its effect on apoptosis was investigated by Caspase 3 assay. The relative gene expressions of BCL2, SKP2, OGT, KLF4, EGFR genes which were determined as possible target genes of miR-7-5p using the miRDB, miRTarBase, Targetscan and miRWalk databases and VIM gene known as the EMT marker were investigated by qRT-PCR technique. In the miR-7-5p transfected group, compared to the control group, cell proliferation was found to be significantly decreased and apoptosis increased. It was determined that the expression levels of SKP2, KLF4 and OGT genes were statistically decreased in the miR-7-5p transfected group. However, it was detected that BCL2, EGFR and VIM genes expression levels did not change statistically. In addition, it was thought that miR-7-5p might affect the cancer process in AML by targeting SKP2, KLF4 and OGT genes. It is very important to detect and confirm the target genes of miR-7-5p, which has the potential to be a new marker in the early diagnosis and treatment of AML. Therefore, our data obtained at the mRNA level should be confirmed by further studies.