Dentin bariyer testi ile diş hekimliğinde kullanılan kompozit rezin simanların sitotoksisitesinin değerlendirilmesi
Cytotoxicity evaluation of dental composite resin cements by dentin barrier test
Yazar: HAYRİYE ESRA ÜLKER
Danışman: PROF. DR. ABDÜLKADİR ŞENGÜN
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Diş Hastalıkları ve Tedavisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
Kompozit rezin simanlar kompozit ve seramik inlay, onlay simantasyonu, kron ve köprü simantasyonu, gibi geniş bir kullanım alanına sahiptir. Sıklıkla direk olarak prepare edilmiş dentin üzerine uygulandıkları için kompozit rezin simanların biyouyumluluğu çok önemlidir. Bu çalışmanın amacı, beş farklı kompozit rezin simanın sığır ve insan pulpa hücrelerinin canlılıkları üzerine etkilerinin ve oluşturdukları reaktif oksijen ürünlerinin direk kontak testleri ile ve günümüzde in vivo durumu en iyi şekilde taklit ettiği literatürde bildirilen dentin bariyer testleri ile değerlendirilmesidir.Klonal SV 40 large T-antijeni ile transfekte edilmiş sığır ve insan pulpa hücreleri 96 yuvacıklı hücre kültür kaplarına alındı ve 24 saat 37°C'de inkübe edildi. Rely X Unicem Clicker, MaxCem, Panavia F 2.0, BisCem ve Bistite II DC Kompozit rezin simanlar üretici firmanın talimatları doğrultusunda standart teflon halkalar içinde hazırlandı ve polimerize edildi. Örnekler 24 saat serum içeren kültür ortamında saklandı. Kristal viyole testi için, sığır ve insan pulpa hücreleri 24 saat materyal ekstraktı içeren kültür ortamına maruz bırakıldı ve hücre canlılığı kristal viyole boyası ile değerlendirildi. Kompozit rezin simanların monolayer hücre kültürlerinde reaktif oksijen ürünleri üretimi tespiti için materyal ekstraktı içeren kültür ortamına 1 saat maruz bırakılan insan ve sığır pulpa hücrelerinin reaktif oksijen ürünleri üretimi flow sitometre (FAC'S) cihazı ile değerlendirildi. KRS'lerin sitotoksisitesi, dentin bariyer düzeneğinde üç boyutlu hücre kültürleri kullanılarak değerlendirildi. Yapay hücre kültürü perfüzyon odaları dentin diski ile iki odaya ayrıldı. Paslanmaz çelik bir taşıyıcı içinde üç boyutlu hücre kültürleri dentine temas edecek şekilde yerleştirilerek pulpa odası kısmı oluşturdu. Dentin diskinin kavite kısmına ise materyaller uygulandı ve polimerize edildi. Daha sonra, pulpal kısımda hücre kültürlerinin kültür ortamı ile perfüzyonları (2ml/dk) sağlandı, 24 saat sonra hücre canlılığı MTT testi ile değerlendirildi. Mann-Whitney U testi ile istatistiksel değerlendirmeler yapıldı.Kristal viyole testinde, bütün kompozit rezin simanların sığır pulpa hücreleri üzerine sitotoksik olduğu, ancak insan pulpa hücreleri üzerine sadece Maxcem ve Panavia F 2.0 KRS'lerin sitotoksik olduğu tespit edildi. Ayrıca hem insan hem de sığır pulpa hücreleri üzerinde bütün kompozit rezin simanların reaktif oksijen ürünleri üretimini önemli derecede artırdığı saptandı ve dentin bariyer testinde Maxcem kompozit rezin siman en yüksek hücre canlılığı ile kontrol grubuna benzer cevap gösterdi diğer tüm test edilen materyaller üç boyutlu hücre kültürleri üzerine sitotoksik olduğu belirlendi.Sonuç olarak bu çalışmada test edilen kompozit rezin simanların farklı deneylerde sitotoksik etkileri görüldü. Kullanılan kompozit rezin simanların diş hekimliğindeki önemi ve yeri gün geçtikçe artmaktadır. Bu çalışmada kullanılan kompozit rezin simanların sitotoksik potansiyelleri klinik kullanıma ışık tutabilir. Bazı kompozit rezin simanlar dentin kalınlığının yetersiz veya pulpa ile yakın temasta olduğu durumlarda biyolojik olarak aktif monomerler pulpa hücrelerinin metabolizmalarını bozabilir. Bu nedenle rezin simanların biyouyumluluğunun artırılması için çeşitli tedbirlerin alınması gerekmektedir.

Abstract:
Composite resin cements have a wide application area and are being use for cementation of composite or ceramic inlay, onlay, fractured teeth, cementation of crowns, bridges and often applied directly to the prepared dentin, so biocompatibility of composite resin cements are very important. The purpose of this study was to evaluate the effects of five self-etch dental composite resin cements on the cell viability of bovine and human pulp derived cells. We hypothesized that composite resin cements might cause cytotoxicity in pulp cells via the generation of reactive oxygen species (ROS), which may also contribute to genotoxic effects in vitro.Clonal SV 40 large T-antigen transfected bovine and human pulp-derived cells were seeded into 96-well plates for 24h at 37°C. The composite resin cements; Rely X Unicem Clicker, MaxCem, Panavia F 2.0, BisCem and Bistite II DC were prepared according to the manufacturers? instructions in standart teflon disks and samples were extracted in complete cell culture medium for 24 hours. For Crystal violet test, the bovine-pulp derived cells and transformed human pulp-derived cells were exposed to extracts for 24 h and cell viability determined using a crystal violet assay. The generation of ROS in monolayer cultures was measured after a 1h exposure period by flow cytometry (FAC?S). The cytotoxicity of the same materials was also analyzed in a dentin barrier test device using three-dimensional pulp cell cultures. A commercially available cell culture perfusion chamber was separated into two compartments by dentin disk. The three-dimensional cell culture tissues were placed in direct contact with the dentin disk and held in place by the stainless-steel holder. Test materials were introduced into the upper compartment in direct contact with the cavity side of the dentin disks. Then, the materials were cured according to the manufacturer?s instructions. Subsequently, the pulpal part of the perfusion chamber containing the cell cultures was perfused with medium (2 ml/h). After an exposure period of 24 h, the cell survival was determined by the MTT assay. Statistical analysis were performed using the Mann?Whitney U-test.In crystal violet test, all composite resin cements tested cytotoxic on bovine pulp cells but only Maxcem and Panavia F 2.0 were cytotoxic on human pulp cells. All composite resin cements increased the amounts of ROS on bovine and human pulp cells and in dentin barrier test cell survival was similar with Maxcem and negative control group, and all other tested materials were cytotoxic for three dimensional cell cultures.As a conclucision, in this study tested composite resin cements showed cytotoxic effects in different experiments. Nowadays in dentistry the significance of composite resin cements are being more important. The cytotoxic potencies demonstrated by these materials might be of clinical relevance. Some composite resin cements the concentrations of biologically active ingredients of some of the composite resin cements may be high enough to modify pulp cell metabolism when the materials are used in deep cavities or directly contact pulp tissue. Therefore to increase biocompatibility of resin cements we must take some precautions.