Hiyalüronan molekülünün pulmoner hipertansiyon patolojisindeki rolünün araştırılması
İnvestigate the pathological role of hyaluronan in pulmonary hypertension
Yazar: PINAR ALTIN
Danışman: DOÇ. DR. METİN AYTEKİN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Ekstrasellüler matriks = Extracellular matrix ; Hipertansiyon-pulmoner = Hypertension-pulmonary ; Hyalüronik asit = Hyaluronic acid

Özet:
Hiyalüronan (HA) ekstraselüler matriks'in temel komponentlerinden olan glikosaminogilikan'dır. Bu çalışmadaki hipotezimiz HA seviyeleri pulmoner arterial hipertansiyon (PAH) rat modelinde kontrollere göre yüksek olduğudur. Çalışmamızın amacı PAH rat modeli oluşturmak ve HA seviyelerinin belirlenmesidir.
Çalışmamızda 24 adet Sprague Dawley rat kullanıldı. İki gruba ayrılan ratlardan Grup 1, normoksi koşullar altındaki kontrol grubu. Grup 2'deki ratlar ise birkez olmak üzere Sugen-5416 maddesi (20 mg/kg) verildikten sonra %10'luk O2 ile 3,5 hafta pleksiglas kafeslerde beslendiler. PAH ve normal ratlarda pulmoner arter kan basınçları (PAP) mikro kateter yardımıyla Power Lab cihazıyla ölçüldü. Plazma HA ölçümü ELİSA yöntemiyle yapıldı. Akciğer dokularından immuno boyama ile HA seviyeleri tespit edildi. Protein seviyeleri için Western blot tekniği kullanıldı. mRNA ekspresyonları Real Time RT-PCR ile ölçüldü. Tüm istatistik analizleri JMP versiyon: 5.0.1.2 programı ile gerçekleştirildi. 
PAH rat modelinde PAP değerleri kontrollere göre yüksek bulundu [PAP mmHg, Ort±SS: PAH 19.03±1.77, kontrol 10.58±0.40, p=0.00012]. PAH rat modelinde plazma HA seviyeleri kontrollere göre yüksek belirlendi [HA ng/mL, Ort±SS: PAH 3.8±0.41, kontrol 1.96±0.31 p < 0.0015]. Hem kontrol hem de PAH ratlarda HAS1 ve HAS3 protein ekspresyonları bulunmadı. HAS2 protein ekspresyonu PAH ratlarda kontrollere göre anlamlı derecede yüksek bulundu [HAS2 protein seviyesi, Ort±SS: PAH 2.0±0.5, kontrol 0.86±0.07 p=0.0493]. Hyal2 protein ekspresyonu her iki grupta da aynıydı [Hyal2 protein seviyesi, Ort±SS: PAH 1.41±0.18, kontrol 1.05±0.14 p=0.214]. HAS1,3 ve Hyal1 mRNA ekspresyonuna her iki grupta da rastlanmazken Hyal2 ekspresyonu her iki grupta da belirlendi fakat anlamlı bir fark gözlenmedi. HAS2 mRNA ekspresyonu da her iki grupta vardı ve hipoksi Sugen-5416 PAH rat modelinde kontrollere göre istatistiksel olarak anlamlı derecede artış gözlemlendi.
Bu bulgular hep birlikte ele alındığında HA molekülünün PAH hastalığının patolojisinde ve ilerlemesinde önemli role sahip olabileceğini gösteriyor. Aynı zamanda oluşturulan hipoksi Sugen5416 PAH rat modelindeki ekstaselüler matriks profili insandakine benzemesi bu modelin ekstraselüler matriks çalışmalarında kullanılabilceğini gösteriyor.

Anahtar kelimeler: Hiyalüronan, Ekstraselüler matriks, SUGEN 5416

Abstract:
Hyaluronan (HA) is a glycosaminoglycan which is one of the major components of extracellular matrix. In this study, our hypothesis is that higher HA levels in a rat model with pulmonary arterial hypertension (PAH) than in controls. The aim of our study was to create a rat model of PAH and to determine the levels of HA.
24 Sprague Dawley rats were used in this study. Rats were separated into two groups. Group 1 was the control group under normoxia conditions. The rats in group 2 were injected Sugen-5416 material (20 mg/kg) once and then were fed 3,5 weeks in special cages with %10 O2. Pulmonary artery blood pressure (PAP) of PAH and normal rats were measured with the help of micro-catheter Power Lab device. HA plasma density was measured by ELISA method. HA levels were determined by immunostaining from lung tissues. Western blot technique was used for the detection of protein levels. mRNA expressions were measured by Real Time RT-PCR. All statistical analysis was performed with the JUMP JMP version: 5.0.1.2 program.
In a rat model of PAH PAP values were higher than in controls [PAP mmHg, Mean±SD: PAH 19:03 ± 1.77, control 10.58±0.40 p=0.00012]. In a rat model of PAH HA plasma levels were determined higher than in controls [HA ng/mL, Mean ± SD: PAH 3.8±0.41, control 1.96±0.31 p < 0.0015]. Both control and PAH rats HAS1 and HAS3 protein expressions were not found. HAS2 protein expression was significantly higher in PAH rats than controls [HAS2 levels, Mean ± SD: PAH 2.0±0.5, control 0.86±0.07 p=0.0493]. Hyal2 protein expression was same in both groups [Hyal2 levels, Mean ± SD: PAH 1.41±0.18, control 1.05±0.14 p=0.214]. Although HAS1, 3 and Hyal1 mRNA expressions were not found in both groups, Hyal2 expression was found in both groups, but any significant difference wasn't observed. HAS2 mRNA expression was existed in both groups also and in a rat model of hypoxia Sugen-5416 PAH statistically more significant increase was observed than in controls.
When all these findings taken together are showing that HA molecule might have an important role in the pathology and progression of PAH disease. Also generated extraceluler matrix hypoxia Sugen-5416 profile in the rat model to resemble that of human PAH shows that this model can be used in extracelluler matrix operation.

Key Words: Hyaluronan, extracellular matrix, SUGEN 5416