Genişlemiş spektrumlu beta-laktamaz üreten gram negatif enterobakterilerde blactx-m beta-laktamaz direnç genlerinin araştırılması
Investigation of blactx-m beta-lactamase resistance genes in extended spectrum beta-lactamase producing grams negative enterobacteria
Yazar: İLKAY BAHÇECİ
Danışman: PROF. DR. OSMAN BİROL ÖZGÜMÜŞ
Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Giriş ve Amaç: Son yıllarda toplum ve nazokomiyal enfeksiyonların en sık sebebi olarak kabul edilen Enterobacteriaceae ailesinde ki GSBL üretme ve beta-laktam antibiyotiklere karşı direnç sürekli artış göstermektedir. Enterobacteriaceae ailesinde tedavide karşılaşılan zorluklar sebebiyle beta-laktam direncinin doğru tespit edilmesi önem arz etmektedir. Bu nedenle son dönemde GSBL üreten Enterobacteriaceae' ler de en sık direnç geni olarak tanımlanan ve pandemilere yol açan blaCTX-M enzim tipini epidemiyolojik verilere de katkıda bulunabilecek şekilde bölgemizde tespit etmek amaçlandı.
Materyal ve Metot: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi Tıp Fakültesi Eğitim ve Araştırma Hastanesi rutin klinik mikrobiyoloji laboratuarına poliklinik, servis ve yoğun bakım ünitelerinden gelen klinik örnekler çalışmaya dâhil edilmiştir. Bu çalışmada ki klinik suşlar 27.10.2010 ile 28.02.2012 tarihleri arasında her hastadan tek örnek olacak şekilde toplandı ve tarama testi sonuçlarına göre GSBL olarak tanımlanan 276 suş çalışmaya alındı. GSBL tanısı kombine disk difüzyon yöntemi ve çift disk sinerji testi ile doğrulandı. Antimikrobiyal hassasiyet testleri disk difüzyon yöntemiyle CLSI kriterlerine göre yapıldı. Klinik suşlarda blaCTX-M beta-laktamaz direnç genleri, iki farklı primer seti içeren, multipleks polimeraz zincir reaksiyonu ile araştırıldı.
Bulgular: Çalışmaya dâhil edilen 276 klinik izolatın 206 (%74,6)'ı E.coli iken ikinci sırada 61 suş (% 22,2) ile Klebsiella spp. idi. Çalışmaya dâhil izolatların poliklinik ve servis oranları birbirlerine eşit olarak saptandı. Antimikrobiyal duyarlılığında ise 3. Kuşak sefalosporinlere % 90 üzerinde direnç saptandı. Kinolonlardan siprofloksasin direnci ve trimetoprim/sulfametaksazole direnci % 50' nin üzerinde saptandı. Karbapenem dirençli izolata ise rastlanılmadı. Bu suşlardan 194 tanesinde (% 70,2) tanesinde blaCTX-M beta-laktamaz direnç genleri saptanmıştır. En sık saptanan CTX-M grubu 155 suş ( % 79,8) ile blaCTX-M -1olurken blaCTX-M-8 grubuna hiç rastlanmamıştır. 
Tartışma ve Sonuç: Günümüzde; hem ülkemizde hem de dünyada artan GSBL pozitifliği üretimi ve bunlar içinde özellikle plazmid kökenli CTX-M direncinin yüksek oranda saptanması ve beta-laktam antibiyotiklere direncin dramatik boyutlara ulaşması bir takım önlemler almayı zorunlu kılmaktadır. Fenotipik ve genotipik olarak GSBL tiplerinin doğru tanımlanması önemlidir., antibiyotik kullanımında yeni politikalara ihtiyaç duyulması ve epidemiyolojik çalışmaların sürekli yapılarak veri tabanlarının oluşturulması kaçınılmazdır. Sonuç olarak bu konuda daha çok çalışma yapılması ve eğitimlerin devamlılığı önemlidir. 
Anahtar Kelimeler: Genişlemiş Spektrumlu Beta-laktamaz, blaCTX-M Enterobacteriaceae,

Abstract:
Introductıon and Aim: In recent years, the most frequently encountered causative agent of community and nosocomial infections is the extended spectrum beta lactamase (ESBL) producing bacteria belonging to the Enterobacteriaceae family. The resistance to the beta lactam has been progressively increasing. It is important to detect the beta-lactam resistance in the Enterobacteriaceae family because of the difficulties faced in the provision of therapy. For his reason, we decided to investigate the most frequently isolated resistance gene (blaCTX-M) bearing type of the ESBL-producing bacteria, which has caused recent pandemics, in order to contribute to the regional epidemiological database.
Materials and Methods: Clinical isolates included in this study were from the Clinical Microbiology Laboratory of the Medical School of the Recep Tayyip Erdogan University Hospital, which receives routine specimens from polyclinics, wards and ICU cases.  The 276 tests included in this study were clinical isolates collected between 27 October 2010 and 28 February 2012, which were single samples from each patient and were defined as ESBL in accordance with the screening results. The ESBL diagnosis was confirmed by the combined disc diffusion method and the double disc synergy test, and the antibiotic susceptibility tests were carried out in line with the criteria of CLSI ( Clinical And Laboratory Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing) . The beta lactamase resistance blaCTX-M genes were amplified by multiplex PCR employing two different sets of primers. 
Results: Of the 276 clinical isolates included in the study, 206 ( 74,6 %) were E. coli and 61 ( 22,2 %) were Klebsiella spp. The ward and polyclinic distribution of the isolates was found to be the same. 194 ( 70,2 %) of the isolates were found to contain blaCTX-M beta lactamase resistance genes. While the most frequent CTX-M group was CTX-M-1 ( 79,8 % ), there was none of the CTX-M-8 type. In the antibiotic sensitivity tests,  > 90 % resistance to third generation cephalosporins was detected. Resistance to ciprofloxacin (from Quinolones) and trimetoprim/sulfamethoxazole was found to be over 50%.  No carbapenem-resistant isolate was found.
Discussion and Conclusion: In Turkey and in the world, the increase in the ESBL production in general and that of CTX-M resistance of plasmid origin in particular, and the dramatic increase in the resistance to the beta lactam antibiotics have necessitated some preventative actions.  Accurate determination of the genotype and phenotype of ESBL, the requirement of the issueing of new policies on the use of antibiotics, and the conduction of epidemiological studies fort he constitution of databases is inescapable.  In conclusion, more studies and continuous training in this subject are impotant requirements.
Key Words: Extended Spectrum Beta lactamase, CTX-M Enzymes, Enterobacteriaceae