Nitrik oksit inhibisyonunun piliç embriyosu akciğer gelişimi üzerine etkisi
Nitric oxide inhibition effect of chicken embryo development of lung
Yazar: ESRA UÇAR
Danışman: DOÇ. DR. BEYHAN GÜRCÜ
Celal Bayar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Zooloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Tavuk embriyosu = Chick embryo ; eNOS = eNOS ; iNOS = iNOS

Özet:
NO, mikroorganizmalara karşı savunma dahil olmak üzere önemli fizyolojik rolleri olan, 
başta  epiteliyal  hücreler  olmak  üzere  pek  çok  hücre  tarafından  salınan  inorganik  serbest  bir 
radikaldir.  L-NG-Nitroarginine  methyl  ester  (L-NAME)  özel  bir  Nitrik  Oksit  (NO)  sentez 
inhibitörüdür.  Yapılan  çalışmalarda,  nitrik  oksit  sentez  inhibisyonunun  oksidan  artışına  ned en 
olduğu, oksidatif stress altında sitotoksisiteyi ve genotoksisiteyi arttırıcı, apoptozisi tetikleyen bir 
etki gösterdiği bildirilmektedir. Ayrıca, canlıda yoğun ve tekrarlanmış oksidatif stres, sitoiskelet 
yapılarının  yıkımı, yapışkanlığın azalması ve  hücre kayıpları ile sonuçlanan patolojilere neden 
olabilir.  Çalışmamızda,  NO  inhibisyonunun  piliç  akciğer  gelişimine  etkisi  histolojik  olarak 
incelenerek, laminin α1 dağılımı ve apoptozise etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. 
Bu  çalışmada;  kontrol,  sham  ve  L-NAME  (15-30  mg/kg  doz)  uygulanmış  piliç 
embriyolarında  akciğer  gelişim  safhalarına  eNOS,  iNOS  ve  Laminin  α1  dağılımı  için 
immunohistokimya,  Apoptozis  için  TUNEL  yöntemi  ve  genel  histolojik  değerlerdirme  için  ise 
Hematoksilen-Eosin boyamaları uygulanarak değerlendirilmiştir. 
Piliç akciğer gelişiminin, embriyonik (4-7. gün), psödoglandular (8-  14. gün), kanaliküler 
(14-  17.  gün)  ve  sakküler  (17.  gün  ve  doğum  sonrası)  evrelerden  geçerek  tamamlandığı  ve 
memeli akciğer gelişimi ile benzer olduğu gözlenmiştir. NO inhibisyonunun piliç akciğerlerinde; 
mezenşim  dokuda  hücre  kayıplarına,  akciğer  hacmi  ile  hava  yolu  dallanmalarında  belirgin  bir 
azalmaya,  bronşların  lümen  çaplarında  küçülme,  pulmoner  emboli,  alveoler  proteinozis, 
bölgesel kanamalar, kan damarlarının normal olmayan modellenmesi ve çaplarında küçülmeye 
neden  olduğu  gözlenmiştir.  Gelişimin  erken  safhalarında  L-NAME  uygulamasına  bağlı  eNOS, 
iNOS  ve  laminin  α1  immunoreaktivitesi  ile  apoptozisin  oldukça  azaldığı,  geç  gelişim 
safhalarında ise oldukça arttığı ve sonrasında bir miktar azalarak sabit kaldığı izlenmiştir. 
Sonuç  olarak  NO  inhibisyonunun  hem  akciğer  gelişimi  hem  de  hücreler  arası  madde 
kompozisyonu  ve  apoptozis  üzerine  olumsuz  etkiye  sahip  olduğu  belirlenmiştir.  Bu  durumun 
yaşam  süresini  ve  alitesini  olumsuz  etkileyen  pek  çok  histopatolojik  duruma  yol  açabileceği 
düşünülmektedir.

Abstract:
NO  is  an  inorganic  free  radical  which  has  important  physiological  roles,  including 
defense  against  microorganisms  which  are  mainly  released  by  many  cell  types  including 
epithelial  cells.  L-NG-Nitroarginine  methyl  ester   (L-NAME)  is  a  special  Nitric  Oxide  (NO) synthesis inhibitor. In the related studies it is reported that nitric oxide syntheses inhibition leads to  the  increase  of  oxidants,  under  the  oxidative  stres  causing  to  the  increasing  of  both genotoxicity and cytotoxicity, adventually;   triggering apoptosis. Moreover, intense and repeated oxidative stress in vivo may cause the pathologies of destruction of cytoskeleton structure, and loss  of  adhesion  and  pathologies  that  resulting  in  the  cell  loss.  In  our  study,  it  is  aimed  to determine the effect on apoptosis and the distribution of laminin α1 through the inhibition of NO 
effect on the development of the chick lung is examined histologically.
In this investigation; control, sham and L-NAME (15-30 mg/kg dose) have been treated 
in chick embryos, in lung development phases; immunohistochemistry method for eNOS, iNOS 
and  Laminin  α1  distribution,  TUNEL  method  for  apoptosis  and  hematoxylin-eosin  staining  for general histological Analysing have been applied.
It  was  observed  that  the  chick  lung  development  is  consisting  with  the  4  stages; 
embryonic  (4-7  days),  pseudoglandular  (8-14  days),  canalicular  (14-17  days)  and  saccular 
stage (17. days - postnatal) and very similar to mammalian lung development.
NO  inhibition  caused  cell  loss  in  mesenchymal  tissue,  significant  reduction  in  airway 
branching and lung volume, reduction in luminal diameter of the bronchi, pulmonary embolism, 
alveolar proteinosis, regional bleeding, irregular modeling of blood vessels and contraction in its 
diameter. It was observed that during the early period of the development, depends on the LNAME application eNOS, iNOS and laminin α1 by immunoreactivity apoptosis is much reduced; 
increased in late stages of development and decrease slightly and remained stable after that. 
As  a  result  it  is  determined  that  inhibition  of  NO  has  a  negative  impact  both  on  lung development  as  well  as  on  the  composition  of  intracellular  substances  and  apoptosis.  This adversely leads to many histopathological conditions that affect the lifetime and its quality.