Bacillus thuringiensis cry ıva ve cry ıvd genlerine ait proteinlerin bacılovirüs ekspresyon vektor sisteminde üretilmeleri
Expression of the combination of cry IV A and crylVD genes of Bacillus thuringiensis in Baculovirus Expression Vector System
Yazar: REMZİYE NALÇACIOĞLU
Danışman: DOÇ. DR. ZİHNİ DEMİRBAĞ
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1998
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Bacillus thuringiensis = Bacillus thuringiensis ; Baculovirüs = Baculovirus ; Genler = Genes ; Proteinler = Proteins

Özet:
ÖZET Bu çalışmada, Bacillus thuringiensis subsp. israelensis's ait insektisidal kristal proteinlerini kodlayan crylVA ve crylVD genlerinin baculovirüs ekspresyon vektör sisteminde ekspresyonları gerçekleştirilmiştir. B. thrungiens'in çoğu suşları spor oluşumu esnasında yüksek oranda insektisidal inklüzyonlar üretirler. Bu inklüzyonlar Diptera, Lepidoptera ve Coleoptera gruplarına ait larvalara karşı toksik özelliğe sahiptirler. Bu nedenle, B. thuringiensis çeşitli tarım bitkilerini zararlılardan korumak amacıyla önemli ölçüde kullanılmaktadır. Ancak, bu insektisidal inklüzyonların saf bir şekilde üretilmeleri ve bunların entegre zararlı yöntemlerinde kullanılmaları sadece zararlı olan böceklerin öldürülmeleri bakımından büyük önem taşımaktadır. B. thuringiensis subsp. israelensis'e ait insektisidal kristal proteinlerini kodlayan crylVA ve crylVD genlerinin kodlayan DNA bölgeleri elde edilerek çoğaltıldı. Bu genleri taşıyan DNA fragmanları birlikte Autographa californica nüklear polihedrozis virüsü (AcNPV, Baculovirüs) transfer plazmidindeki polihedrin (polh) promotorunun önüne klonlandı. Transfer plazmidi yabani tip AcNPV DNA'sı ile birlikte Spodoptera frugiperda böcek hücre kültürüne transfekte edildi. Hücre içerisinde oluşan cryTVA ve crylVD genlerine sahip rekombinant AcNPV "plak" yöntemiyle seçilerek saflaştırıldı. Bu genlerin kodladığı proteinlerin sentezleri poliakrilamid jel elektroforez yöntemiyle tespit edildi. Anahtar Kelimeler: Bacillus thuringiensis, crylVA, crylVD, baculovirüs, gen ekspresyon

Abstract:
SUMMARY  In this study, expression of the genes encoding Bacillus thuringiensis subsp. israelensis insecticidal crystal proteins (ICPs; the combination of cry IV A gene and crylVD gene) in baculovirus expression vector system have been carried on. Various strains of B. thrungiensis produce large amount of insecticidal inclusions during sporilation. These inclusions have toxic effects on the larvae belong to Diptera, Lepidoptera and Coleoptera. For this reason, B. thrungiensis is utilized to protect agricultural plants from noctious insects. However, in order to kill only the harmful insects, but not harmless or beneficial insects, it is essential to produce these ICPs so pure and use them against harmfull insects. The coding sequences of cryTVA and crylVD genes belong to B. thuringiensis were obtained and amplified. The DNA fragments belong to the combination of these genes were cloned into Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV, Baculovirus) transfer vector in front of polh promotor. The transfer vector and wild-type AcNPV were co-transfected into Spodoptera frugiperda insect cetT culture. The recombinant AcNPV which has the coding regions of crylVA and crylVD genes was selected and purified by plaque assay. The production of the ICPs by recombinant viruses was detected by polyacrilamid gel electrophoresis. Key Words: Bacillus thrungiensis, crylVA, crylVD, baculovirus, gene expression VI