Lakkaz üretici mayaların izolasyonu ve tanılanması
Isolation and identification of laccase producing yeasts
Yazar: FIRUZA ABDULLAYEVA
Danışman: DOÇ. DR. ALİ KOÇYİĞİT
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Temel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Exophiala = Exophiala ; Lakkaz = Laccase ; Mantarlar = Fungi ; Maya = Maya

Özet:
Bu çalışmada farklı çevrelerden mayalar izole edilmiş olup lakkaz üretim potansiyelleri kalitatif ve kantitaif olarak taranmıştır. Lakkaz geniş susbstrat aralığına sahip en önemli lignolitik enzimlerdendir. İzolasyon aşaması ile lakkaz aktivitesi kalitatif taranması aynı anda yürütülerek lakkaz üretici maya taraması yapılmıştır. Kalitatif tarama ve izolasyon prosedüründe lakkaz indikatörleri olarak 0,3 ml/L oranında Guaiacol ve 0,274 g/L ile 2,743 g/L oranlarında ABTS kullanılmıştır.  İzolasyon için toprak, kurumuş ağaç kabukları ve beş farklı ticari orkide toprağı kullanılmıştır. Ticari orkide toprağının birinden lakkaz üretici siyah pigmentli bir maya izole edilerek moleküler tanımlama aşamasına geçilmiştir. İzolatın moleküler tanımlanması ITS1 ve ITS4 primerleri kullanılarak gerçekleştirilmiştir. İzolatın maya benzeri siyah pigmentli Exophiala sp. cinsine ait olduğu bulunmuştur. Lakkaz pozitif maya izolatının kantitatif denemesi için lakkaz indükleyici sıvı besiyeri kullanılarak ABTS oksidasyonuna bağlı enzim aktivitesi ölçümü yapılmıştır.  Lakkaz aktivite ölçümü denemesinde pozitif sonuç alma hedefi için çeşitli lakkaz indükleyici sıvı besiyerleri, lakkaz substratları (ABTS ve Guaiacol), farklı pH (3, 5) aralığına sahip farklı tamponlar kullanılmıştır. Kantitatif tarama sonucunda pozitif sonuç lakkaz substratı ABTS (5mM) ve pH 3 Glisin-HCl tamponu denemesinde elde edilmiştir. Exophiala sp. izolatı 3. gün 1979 mU/L en yüksek lakkaz aktivitesi göstermiştir. Exophiala sp. izolatına fizyolojik testler yapılarak ekstrem koşullara karşı direnci incelenmiştir.

Abstract:
In this study, yeasts were isolated from different environments and their laccase production potentials were screened qualitatively and quantitatively. Laccase is one of the most important lignolytic enzymes with a wide substrate range. The isolation step and the qualitative screening of laccase activity were carried out simultaneously, and the screening of laccase-producing yeast was performed. In the qualitative screening and isolation procedure, 0.3 ml/L Guaiacol and 0.274 g/L and 2.743 g/L ABTS were used as laccase indicators. Soil, dried bark and five different commercial orchid soils were used for isolation. A laccase-producing yeast with black pigment was isolated from one of the commercial orchid soils and the molecular identification stage was started. Molecular identification of the isolate was performed using primers ITS1 and ITS4. It was the isolate was found to belong to the yeast-like black pigmented genus Exophiala sp. For the quantitative assay of laccase-positive yeast isolate, enzyme activity due to ABTS oxidation was measured using laccase-inducing broth. Various laccase-inducing broths, laccase substrates (ABTS and Guaiacol), and different buffers with different pH (3, 5) ranges were used to achieve positive results in the laccase activity measurement experiment. Various laccase-inducing broths, laccase substrates (ABTS and Guaiacol), and different buffers with different pH (3, 5) ranges were used to achieve positive results in the laccase activity measurement experiment. As a result of quantitative screening, a positive result was obtained in the assay of laccase substrate ABTS (5mM) and pH 3 Glycine-HCl buffer. Exophiala sp. isolate showed the highest laccase activity of 1979 mU/L on day 3. Exophiala sp. physiological tests were performed on the isolate and its resistance to extreme conditions was examined.