Rekombinant anti-vegf üretilmesi ve nanokonjugatının geliştirilmesi
Preparation of recombinant anti-vegf antibody and development of it's nanoconjugate
Yazar: DERYA KARAARSLAN
Danışman: PROF. DR. ARZU ERSÖZ
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı / Biyoteknoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Kanser hastaları = Cancer patients ; Konjugasyon = Conjugation ; Konjugat = Conjugate ; Nano yapı = Nano structure ; Rekombinant DNA teknolojisi = Recombinant DNA technology ; Rekombinant protein üretimi = Recombinant protein production

Özet:
Vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF)'nin kanser metabolizmasındaki rolü literatürde ortaya konulmuş olup bu çalışmada,  insan kanında da bulunan, VEGF'ye bağlanan ve iki zincirden oluşan bloklayıcı Anti-VEGF antikorunun rekombinant olarak üretilmesi amaçlanmıştır. Bu bağlamda, insan kanından total RNA izole edilmiş, buradan cDNA sentezlenmiş ve Anti-VEGF antikorunun iki zincirinin gen dizisine spesifik primerler kullanılarak PCR reaksiyonları ile anti-VEGF genleri klonlanmıştır. Daha sonra klonlanan genler yine aynı teknikle birleştirilip tek zincir haline getirilmiş ve uygun klonlama, ekspresyon plazmit vektörleri ve konakçılar ile birlikte ekspresyonu sağlanmıştır. 
Çalışmanın son aşamasında, konakçı bakteriden, ağır ve hafif zincirinin birbirine bağlı olduğu rekombinant Anti-VEGF antikorunun izolasyonu ve saflaştırması gerçekleştirilmiştir. Saflaştırma nikel afinite kromatografisi kullanılarak sağlanmış ve Western Blot ile proteinin karakterizasyonu yapılmıştır. Daha sonra; Anti-VEGF antikorunun, dış ortam koşullarına dayanıklılığını arttırmak için, rutenyum tabanlı aminoasit monomerleri ile fotosensitif çapraz bağlamayı sağlayan ANADOLUCA metodu kullanılarak Nano-Anti-VEGF konjugatı üretilmiştir. Bu VEGF nanobloklayıcının karakterizasyonları Zeta ile boyut analizi, SEM ile yüzey morfolojisi ve CD spektroskopisi ile sekonder yapısı incelenerek ortaya konulmuştur. Nano-Anti-VEGF'nin ilaç sektöründe, tedavi sürecinin nasıl devam ettiğini izleyebilmek amacı ile moleküler görüntüleme teknolojisi sayesinde takip edilebilirliğini sağlamak için akridin, BODIPY ve FITC gibi farklı floresans özellikteki maddeler ile konjugatı sentezlenmiştir.

Abstract:
The role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in cancer metabolism has been pointed in literature, within this work, it has been aimed to produce the blocking Anti-VEGF antibody which is bound to VEGF, consisting of two chains and found in human blood as well, as recombinant. In this respect, total RNA has been isolated from human blood, cDNA has been synthesized by that and Anti-VEGF genes have been cloned using specific primers on gene sequence of two chains of the Anti-VEGF antibody. After that, cloned genes have reformed in one chain by the same technique and the expression has been made with the relevant cloning and expression plasmid vectors and hostcells.
In the last phase of the work, the purification and isolation of recombinant Anti-VEGF antibody of which the heavy and light chains are bound to each other have been achieved from the host bacterias. Purification and characterization of the protein have been realized by nickel affinity chromatography and the Western Blot, respectively. Then, in order to increase the durability of the Anti-VEGF antibody against outer environment circumstances, Nano-Anti-VEGF conjugate has been produced by ANADOLUCA metot which ensures photosensitive cross linking with ruthenium-based amino acid monomers. The characterizations of this nano-blocker have been exposed by investigating dimensional analysis, surface morphology and seconder structure by Zeta, SEM and CD spectroscopy, respectively. The conjugate of Nano-Anti-VEGF has been synthesized with different fluorescent substances such as acridine, BODIPY and FITC in order to observe how the course of treatment proceeds via molecular imaging technology to ensure it's traceability in pharmaceutical industry.