Dezenfektanların fungisidal/ fungistatik aktivitelerinin ve olası direnç mekanizmalarının candida albicans modeli üzerinde incelenmesi
Fungicidal/ fungistatic activities and the possible mechanisms of resistance of disinfectants evaluated on a candida albicans model
Yazar: ALİ ADİL FOUAD FOUAD
Danışman: PROF. DR. AYŞE KALKANCI
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antifungal ajanlar = Antifungal agents ; Candida albicans = Candida albicans ; Dezenfeksiyon = Disinfection ; Dezenfektanlar = Disinfectants ; Fungusitler = Fungicides ; Galleria mellonella = Galleria mellonella ; Mantarlar = Fungi ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
Dezenfektan maddeler mantar hücresinde fungisidal veya fungistatik etki gösterebilir. Antifungal etkinin mekanizması ile bakterilerde görülen antibakteriyel etki arasında benzerlikler bulunduğu düşünülmektedir. Bu çalışmanın amacı Candida albicans modeli üzerinde çalışarak dezenfektan maddelerin mantar hücresine nasıl etki ettiklerinin incelenmesi ve direnç mekanizmalarının açıklanmasıdır. Duyarlı ve dirençli fenotiplerin ayrılması için 417 klinik Candida albicans kökeni ve referans kökenler taranmıştır. Tarama sonucunda Minimum İnhibitor Konsantrasyon (MİK) ve Minimum Fungisidal Konsantrasyon (MFK) değerleri elde edilmiştir. MİK ve MFK değerleri kullanılarak biyosidler için Epidemiyolojik Sınır Değerler (ECOFF) belirlenmiştir. Biyosid dirençli ve duyarlı kökenlerde membran geçirgenliğinin incelenmesi için kristal viyole deneyi yapılmıştır. Seçilen kökenler arasında membran geçirgenliği açısından fark bulunmuştur. Efluks pompalarını kodlayan genlerin artmış ekspresyonunu göstermek için rodamin 6G (R6G) kullanılmıştır. Biyosid direncinin atım pompaları ile ilişkili olduğu sonucuna varılmıştır. Biyosid duyarlı ve dirençli kökenlerde atım pompalarındaki ekspresyon değişikliklerini göstermek için CDR ve ERG genlerini hedefleyen PZR yöntemi kullanılmıştır. Çalışmada virülans ile direncin arasında ilişki olup olmadığı Galleria mellonella larvalarında araştırılmıştır. Biyosid direncinin kökenlerin virülansını etkilemediği gösterilmiştir.

Abstract:
Disinfectants may have fungicidal or fungistatic effects on a fungal cell. Biocides may have similar effects on fungal cell when compared with bacterial cells. The aim of this study is to evaluate the mechanisms of action of disinfectants against fungi and the mechanisms of fungal resistance in a Candida albicans model. Clinical Candida strains (n:417) and reference strains were subjected to screening step. Minimum inhibitory concentrations (MICs) and minimum fungicidal concentrations (MFCs) of biocides were obtained from microdilution assay. Epidemiological cut off values (ECOFF) were calculated based on the MICs and MFCs of the population. Membrane permeability was investigated by crystal violet assay. Biocide susceptible and resistance strains showed remarkable difference in terms of membrane permeability. Rhodamine uptake assay was performed for the demonstration of the increased expression of genes encoding efflux pumps. The results suggested that biocide resistance associated with efflux pumps. Over-expression of the efflux pump genes was analyzed in the resistant phenotypes by molecular assays such as polymerase chain reaction targeting CDR and ERG efflux pumps. The relationship between virulence and biocide resistance was evaluated in Galleria mellonella larvae. Biocide resistance did not affect the virulence of the strains.