Çevresel biyoteknolojide uygulama potansiyeline sahip metilotrofik maya türlerinin izolasyon ve identifikasyonları
Isolation and identification of methylotrophic yeast species that have potential application in the environmental biotechnology
Yazar: ZÜBEYDE HANOL
Danışman: PROF. DR. FUSÜN B. UÇAR
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Kimliklendirme = Identification ; Mayalar = Yeasts ; Metanol = Methanol

Özet:
Bu tezde, özellikle çürümekte olan bitkiler ve organik materyal açısından zengin olan topraklardan, çiğ sütten, çürümüş meyve ve turşu suyundan izole edilmiş metilotrofik mayaların tanımlanması amaçlanmıştır. Bu amaçla 42 maya izole edilmiştir. Bu 42 izolat fakültatif oldukları düşünülerek öncelikle MYGP ortamında büyütülmüştür. MYGP besiyerinde 19 numaralı izolat üremediğinden metanol açısından obligat olduğu düşünülerek metanollü N-Base agarda büyütülmeye çalışılmıştır. Fakat burada da üremediğinden daha sonraki çalışmalarda kullanılmamıştır. Daha sonra bu strainler Yeast Ekstrakt Broth ortamı kullanılarak bu besiyerine değişen konsantrasyonlarda (% 1(v/v), %2(v/v), %3(v/v), %4(v/v), %(5v/v), %6(v/v), %7(v/v) metanol koyarak izolatların bu konsantrasyonlarda üreyip üremediği test edilmiştir. Sonuçta 42 izolattan 26 tanesinin %1- %6 arasındaki konsantrasyonlarda üreme yoğunlukları arasında farklılık olmasına rağmen hepsinin ürediği görülmüştür. Daha sonra bu türler metanol toleransı, formaldehid'i kullanma kapasitesi ve metilamini kullanma kapasiteleri açısından test edilmiştir.Bu izolatların tanılanmaları fenotipik testler ile yapılmıştır. Fenotipik testler sonucunda 42 izolattan 26 tanesi (2, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 28, 30, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ve 42 numaralı izolatlar) metilotrofik maya olarak tanılanmıştır.Karbon monoksit, karbon dioksit, metan ve metanol gibi tek karbonlu bileşikler, bazı mikroorganizmalar tarafından kullanılmakta veya sentezlenmektedir. Bu bileşikler arasında mikrobiyal endüstride en çok tercih edileni, oldukça saf halde ve bol miktarda bulunabilen metanoldür.Bu çalışmada, çeşitli kaynaklardan izole edilmiş ve metanolü tek karbon ve enerji kaynağı olarak kullanabilen 26 maya izolatı, bu mayaların morfolojik ve fizyolojik özelliklerinden yararlanılarak, çeşitli karbon ve azot kaynaklarının asimilasyonu, karbon kaynaklarının fermentasyonu, farklı sıcaklıklarda büyüme, üre hidrolizi, vitamin ihtiyacı gibi testler ile genus ve tür düzeyinde tanılanmıştır. Bu izolatlardan 10 tanesi Pichia angusta, 2 tanesi Candida boidinii, 2 tanesi P.kodamae, 2 tanesi P. pini, 2 tanesi P. methanolica, 1 tanesi C.methanosorbosa, 1 tanesi C.nomedendra, 5 tanesi ise P. ciferrii ve 1 tanesi C.ovalis olarak tanılanmıştır. Farklı metanol konsantrasyonları ile ilgili yapılan testte (konsantrasyon oranları %1(v/v), %2(v/v), %3(v/v), %4(v/v), %5(v/v), %6(v/v), %7(v/v)) bu konsantrasyonlara en toleranslı türün P.angusta olduğu görülmüştür. %7 ml'lik metanol konsantrasyonunda ise hiç üreme görülmemiştir. Metilamin ve formaldehit denemelerinde ise türler metilamin ve formaldehiti kullanabilmişlerdir.Anahtar Kelimeler: Metilotrofik mayalar, metanol, identifikasyon

Abstract:
In this thesis, identification of the yeasts that were isolated from the soil rich in decaying plants and organic materials, raw milk, decaying fruit juice and decaying pickle has been intended. In this reason, 42 yeast isolate were isolated. These 42 isolates which have been thought fakultativ they first of all have been grown at MYGP medium. 19 numbered isolate didn?t reproduce at MYGP with respect to methanol, it has been tried to be grown as it has been thought as obligationas it didn?t reproduce here as well it hasn?t been used in other studies. After then these strains have been tested whether they been produced or not by putting methanol with changing concentrations (1%(v/v), 2%(v/v), 3%(v/v), 4%(v/v), 5%(v/v), 6%(v/v), 7%(v/v)) a yeast extract broth medium.It has been realised that all of 26 of 42 isolate can grow between 1%- 6% methanol rate although, they have different reproduction density. Afterwards these isolate have been tested for tolerance to methanol, capacitiy to use formaldehyde and capacity to use methylamine.These isolates identified with phenotypic tests. Result of the phenotypic tests, 26 of the 42 isolates (2, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 25, 28, 30, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 and 42 numbered strains) identified as methylotrophic yeast.Compound having one carbon such as carbon monoxide, carbon dioxide, methane and methanol are utilized or synthesized by some microorganisms. Of these compounds, methanol is considered to be preferable for the microbial industry because of its high purity and abundance.In this study, twenty six yeast isolates which can utilize methanol as sole carbon and energy source, were identified at genus and species level by using different tests such as assimilation of carbon and nitrogen source, fermentation of carbon sources, urea hydrolysis, growth at different temperatures and vitamin requirements. In conclusion, ten of twenty six isolates were classified as Pichia angusta, two of twenty six isolates were classified as Candida boidinii, two of twenty six isolates were classified as P.kodamae, two of twenty six isolates were classified as P.pini, two of twenty six isolates were classified as P.methanolica, one of twenty six isolates was classified as C.methanosorbosa, one of twenty six isolates was classified as C.nomedendra, five of twenty six isolates were classified as P.ciferrii and one of twenty six isolate was classified as C.ovalis. Afterwards, these species were tested for tolerance to methanol, capacity to use of formaldehyde and capacity to use of methylamine. The test, which we made about different methanol concentration (the rate of concentration: 1%(v/v), 2%(v/v), 3%(v/v), 4%(v/v), 5%(v/v), 6%(v/v), 7%(v/v), was determined that the most tolerant species was P.angusta. Any species were no proliferation at 7% concentration of methanol. The experiments of methylamine and formaldehyde, the species can use the compound of methylamin an formaldehyde.Key Words: Methylotrophic yeast, methanol, identification