Bazı kimyasal maddelerin mutajenik potansiyellerin salmonella mikrozom testi ile değerlendirilmesi
Evaluation of some mutagenic potentials chemical meterial by salmonella microsome test
Yazar: ABBAS ZOMORRODİ
Danışman: PROF. DR. GÜVEN URAZ
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Çalışmada, sentezlenmiş 5 farklı organik formazan 1-(p-bromophenyl)-3.5 diphenylformazan, 1-(o-methylphenyl)-3,5-diphenylformazan, 1-(m-nitrophenyl)-3,5 diphenylformazan, 1-(p-carboxyphenyl)-3.5-diphenylformazan, 1-(p-chlorophenyl)-3.5 diphenylformazan maddelerinin mutajenik aktivitesi çalışılmıştır. Salmonella Mikrozom  Ames testi uygulanmıştır. Salmonella typhimurium TA 98 ve TA 100 suşları kullanılarak yapılmıştır. Deneylerden önce, test maddelerin sitotoksik dozları belirlenmiştir. Daha sonra her test maddesi için mutajenite testleri çalışılmıştır. Çalışılan 5 formazanın sitotoksik dozlarını tayin etmek için önce hazırlanan (1-2×109) gecelik bakteri kültürden 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 ve 10-6 oranlarında seyreltmeler yapılmıştır. Bu seyreltilmiş dozlardan sadece 10-6 bakteri kültürü sitotoksik test için kullanılmıştır. Pipetle 100µl, 10-6  bakteri kültüründen alınmış Top Agara ilave edilimiştir. Bu kez önce hazırlanan 100µg/petri  test maddesinden 100µl alınmıştır.  Daha sonra Top Agara ilave edilmiştir. Son olarak Top agarı biraz çalkalanmış ve Nutrient Agar (NA) petri üzerine dökerek  yayılmıştır. Kontrol petrileri için aynı yöntem kullanılmıştır. Ancak test maddesi ilave edilmemiştir. Daha sonra petriler 37 ºC 24 saat inkübe edilmiştir. Dozların sitoksik olup olamadıklarının saptanması için formazan olan petriler koloni sayısı, kontrol petrilerdeki koloni sayısıyla karşılaştırılmıştır. Kontrol petrilerdeki koloni sayısının yarısı altında olan dozlar sitotoksik doz olarak kabul edilmiştir. Sonuç olarak çalışılan tüm formazanların 100 µg/petri, 10 µg/petri, 1 µg/petri, 0.1 µg/petri, 0.01 µg/petri  dozlarının hiç biri sitotoksik bulunmamıştır. Yapılan çalışmada formazanların Salmonella typhimurium TA 98 ve TA 100 suşuyla S9 olan ortamda mutajenite testi çalışılmıştır. Ayrıca bu deney S9 ilave edilmeden tekrarlanmıştır. Sunuçlar kontrol ( spontan revertant ) grubunun koloni sayıları ile karşılaştırdığında 2 katından az bulunmuştur. Formazanların 100µg/petri, 10 µg/petri, 1 µg/petri, 0.1 µg/petri ve 0.01 µg/petri dozlarda hiç bir maddesi mutajen bulunmamıştır.
Anahtar Kelimeler: Salmonella / mikrozom / Ames test, Salmonella typhimurium TA 98 ve TA 100, mutajenite.

Abstract:
In this study, 5 different synthetic formazans, 1-(p-bromophenyl)-3.5-diphenylformazan, 1-(o-methylphenyl)-3,5-diphenylformazan,1-(m-nitrophenyl)-3,5-diphenylformazan,        1-(p- carboxyphenyl)-3.5-diphenylformazan,1-(p-chlorophenyl)-3.5-diphenylformazan, were researched for their mutagenic activities using  Salmonella / Microsome / Ames test method. S.typhimurium strains TA 98 and TA 100 was used in this research. Prior to experiments, the cytotoxic dose of test substance was determined and then for each test substance, mutagenicity was assayed. To determine the cytotoxic dose of 5 formazans, activated bacteria cultures (1-2 × 109) were diluted in 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 and 10-6 ranges. Only cytotoxic dose of 10-6 diluted bacteria culture were used for tests. 100μl bacterial cultures derived from   10-6 diluted culture were added to the top agar. 100 µl of prepared 100µg/petri test substance added to top agar. Shaking top agar, Nutrient agar was added and spread into Petri. Same method was used for control petries. However the test substance was not added to control petries. Then the petri dishes were incubated at 37 ° C for 24 hours. To determine whether , used doses were cutotoxic or not, number of colonies in the formazan petrie dishes were compared with the number of colonies in control petries. Half the number of colonies on control petri dishes were considered cytotoxic dose. According to the results none of the used doses, 100µg/petri, 10µg/petri, 1µg/petri, 0.1µg/petri, 0.01 µg/petri, were found cytotoxic. In the study of formazan S.typhimurium strains TA98 and TA100 mutagenicity test has been studied with the S9 in the medium. In addition, this experiment was repeated without addition of S9. Recults compared to control group (spontan revertant) found to be 2 times less then number of colonies. So according the results none of used formazan doses, 100µg/petri, 10µg/petri, 1µg/petri, 0.1µg/petri ve 0.01µg/petri were mutagen.  
Key Words: Salmonella / Mikrosome / Ames test, Salmonella typhimurium TA 98 and TA 100,  Mutagenicity