Neoadjuvan kemoterapi alan  meme kanseri hastalarında MİR216B ve mir134'ün ekspresyonlarının araştırılması
Investigation of the expressions of Mİt216B and MİR134 in breast cancer patients taking neoadjuvan chemotherapy
Yazar: MÜZEYYEN BURCU KAPLAN YILMAZ
Danışman: DOÇ. DR. TUBA DİLAY KÖKENEK ÜNAL ; PROF. DR. OLÇAY KANDEMİR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2021
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Kemoterapi-adjüvant = Chemotherapy-adjuvant ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazm kök hücreleri = Neoplastic stem cells ; Neoplazmlar = Neoplasms ; RNA = RNA

Özet:
Amaç: Meme kanseri kadınlarda en sık görülen kanser türü olup, tedavisinde geleneksel tedavi yöntemlerinden kemoterapi, radyoterapi, hormonoterapi ve hedefe yönelik tedaviler kullanılmaktadır. Tüm bu tedavilere rağmen bazı hasta gruplarında nüks ve metastazlar önlenememektedir. Bunun nedeninin de, tümör içerisinde mevcut bulunan kanser kök hücreleri olduğu son yıllardaki çalışmalarda gösterilmiştir. Biz de çalışmamızda, kanser kök hücre genleri olan CD133 (PROM1) ve ALDH1A1 ile kanser kök hücrelerini farklı çalışmalarda regüle ettikleri gösterilen miR134 ve miR216b ekspresyonlarını değerlendirmeyi ve sonuçları klinikopatolojik parametreler ile karşılaştırmayı amaçladık. 
Gereç ve Yöntem: Çalışma Ankara Dr. Abdurrahman Yurtaslan Onkoloji Eğitim ve Araştırma Hastanesi Patoloji Kliniği'nde trucut biyopsi ile tanı konan, sonrasında neoadjuvan tedavi alan ve ardından ameliyat edilip, ameliyat materyali hastanemizde değerlendirilen 40 kadın hasta ile yapıldı. Çalışmadaki hastaların yaş aralığı 20-80 olarak belirlendi. Çalışmaya yalnızca İnvaziv Duktal Karsinom tipi meme kanseri bulunan hastalar dahil edildi. Hastaların uygun parafin blokları tedavi öncesi ve tedavi sonrası olarak belirlendi. Uygun parafin bloklardan kesitler alınarak deparafinize edildi, total RNA izolasyonu ve cDNA eldesi yapıldı. Kanser kök hücresi genleri ve miRNAlar için hazırlanmış primerler kullanılarak PCR ile seçili gen ve miRNA'ların ekspresyon düzeyleri belirlendi. PCR sonuçları  2ˉΔΔCt  metodu ile normalize edildi. Sonuçlar tedavi öncesi ve sonrası olmak üzere, belirlenen klinikopatolojik parametreler ile karşılaştırıldı. 
Bulgular: Triple Negatif hasta grubu, HER2 negatifliği gösteren hasta grubu (Triple Negatif + Luminal (B) gruplar) ve tedavi yanıtı izlenen hastaların oluşturduğu grupların hepsinde ayrı ayrı ölçülen CD133 (PROM1) düzeyleri, tedavi sonrasında tedavi öncesine göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde, belirgin düşük bulundu. Tanı anında desmoplastik stromal cevap izlenen hastalarda, miR216b düzeyleri izlenmeyenlere göre istatistiksel olarak anlamlı şekilde düşük bulundu. Neoadjuvan kemoterapi sonrası desmoplastik stromal yanıtlarına göre sınıflandırılan dokuların tedavi öncesi ölçülen değerleri incelendiğinde; immatür cevap oluşturan tümörlerde miR216b düzeyleri moderate ve matür cevap verenlere göre istatistiksel olarak anlamlı yüksek bulundu. NAKT öncesi CD133 (PROM1) ve ALDH1A1 düzeyleri ile, NAKT sonrası tümör yatağı boyutu istatistiksel olarak anlamlı, orta düzeyde korele bulundu. 
Sonuç:Triple Negatif subtipteki hasta grubunda, neoadjuvan kemoterapi yanıtını öngörmede CD133 (PROM1) biyobelirteci pratikte oldukça kullanışlı olabilir. Tedaviye yanıt verecek olan hastalarda, bazal miR216b düzeyleri düşük bulundu. miR216b'nin tedaviye yanıt verecek olan hastalarda saptanan düşüklüğünden yola çıkarak daha kapsamlı çalışmalar ile miR216b, NAKT alacak hastalarda tedavi yanıtını öngörme aracı olarak kullanılabilir. 
Anahtar Kelimeler:Meme kanseri, kanser kök hücresi, neoadjuvan kemoterapi, miR216b, miR134

Abstract:
Aim: Breast cancer is the most common cancer in women, and treatment methods such as chemotherapy, radiotherapy, hormonotherapy and targeted therapies are used for treatment of the patients. Despite all these treatments, recurrence and metastases cannot be prevented in some patient groups. Recent studies have shown that this failure can be a result of the presence of cancer stem cells in the tumor. In our study, we aimed to evaluate the expressions of cancer stem cell markers CD133 (PROM1) and ALDH1A1 and miR134 and miR216b, which have been shown to regulate cancer stem cells in different studies, and to compare the results with clinicopathological parameters.
Materials and Methods: The study was carried out with 40 female patients who were diagnosed with core biopsy in Ankara Dr. Abdurrahman Yurtaslan Oncology Training and Research Hospital Pathology Clinic. After diagnosis, the patients received neoadjuvant treatment before surgery and surgical material evaluated in our hospital. The age range of the patients in the study was 20-80. Only patients with Invasive Ductal Carcinoma were included in the study. Appropriate paraffin blocks of the patients were defined before and after treatment. Sections were taken from the appropriate paraffin blocks and deparaffinized, total RNA isolation and cDNA obtained. Expression levels of selected genes and miRNAs were determined by PCR using primers prepared for cancer stem cell genes and miRNAs. PCR results were normalized by the 2ˉΔΔCt method. The results were compared with the clinicopathological parameters determined before and after the treatment.
Results:CD133 (PROM1) levels of the triple negative group, the patients with HER2 negativity (Triple Negative + Luminal B) and the patients with treatment response were found to be statistically significantly lower after treatment. In patients with desmoplastic stromal response at the time of diagnosis, miR216b levels were found to be statistically significantly lower than those who did not. When the measured parameters of the tissues classified according to their desmoplastic stromal responses after neoadjuvant chemotherapy were examined; in tumors with an immature response, miR216b levels were found to be statistically significantly higher than moderate and mature responders. Pre-NACT CD133 (PROM1) and ALDH1A1 levels were found to be statistically significant and moderately correlated with post-NACT tumor bed size. 
Conclusion: The CD133 (PROM1) can be useful predicting neoadjuvant chemotherapy response in the patient group with the triple negative subtype. miR216b levels before NACT were found to be low in patients who will respond to treatment. With more extensive studies, miR216b can be used to predict treatment response in patients who will receive NACT.
Keywords: Breast cancer, cancer stem cells, neoadjuvant chemotherapy, miR216b, mir134