Hepatit B enfeksiyonlu hastalarda otoantikor sıklığı ve serum sitokin düzeyi
The frequency autoantibody and level of serum cytokines in patients with hepatitis B infection
Yazar: ZÜBEYDE LALE
Danışman: DOÇ. DR. IŞIL FİDAN
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Hepatit B = Hepatitis B ; Hepatit B = Hepatitis B ; Otoantikorlar = Autoantibodies ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Giriş ve Amaç: HBV, Hepadnaviridae ailesinin orthohepadnavirus cinsinde yer alan hepatotropik, zarflı ve kısmen çift sarmallı bir DNA virusudur. Enfeksiyon  etkenleri   otoimmüniteyi  başlatmak veya sürdürmek için  çeşitli  mekanizmalar  kullanırlar.Bu mekanizmalar arasında, moleküler benzeşme, konak doku ve hücreleri hasar gördüğünde korunmuş gizli antijenlerin salınımı, konak hücre proteinlerinin değişimi ve otoreaktif T  lenfosit aktivasyonu gibi çeşitli mekanizmalar yer alabilir. HBV  enfeksiyonunda   da  diğer  birçok  enfeksiyon  gibi  otoimmüniteyi  tetikleyebileceği  gibi    immün sistem mediatörlerinde   de çeşitli değişiklikler meydana  getirebilir.  Bu  nedenle  çalışmamızda  kronik hepatit  B  hastalarında otoantikor  oluşumunu  ve  serum  sitokin  düzeylerindeki değişiklikleri  belirlemeyi  hedefledik. 
Materyal ve Metod: Çalışmamızda örnekler 18 yaş üstü, erişkin gruptan HBsAg?si  ve  HBV DNA?sı  pozitif  olan   50 adet   kronik  Hepatit B hastası, HBsAg (+)  25 adet   inaktif HBsAg taşıyıcı hasta grubu  ve  HBsAg (-) ve HBV DNA  (-)?sı negatif olan 25 adet sağlıklı kontrol grubundan  seçilmiştir. HBV DNA, kantitatif real-time polimeraz zincir reaksiyonu ile belirlenmiştir. ANA, ASMA, AMA, LKM otoantikorları indirek floresan Ab yöntemi (IFA) ile incelenmiştir. IFA yöntemi ile ANA pozitif olarak bulunan örneklerde daha sonra immünoblot yöntemi ile otoantikorların tanımlanması yapılmıştır. RF, Anti-CCP, antifosfolipid G, antifosfolipid M, antikardiolipin otoantikorlarına ise ELISA yöntemi ile bakılmıştır. Serum sitokin düzeyleri ELISA yöntemi ile İncelenmiştir. Bulgular: Kronik hepatit B?li hasta örneklerinde ANA, AMA, ASMA ve LKM otoantikorlardan en az birinin pozitifliği, inaktif HBsAg taşıyıcı ve kontrol gruplarına göre istatistiksel olarak anlamlı düzeylerde farklı bulunmuştur. Kronik hepatit B?li hasta serum örneklerinde %44 ANA, %10 AMA, %16 ASMA, %2 LKM oranlarında pozitiflik tespit edilmiştir. İnaktif HBsAg taşıyıcısı serum örneklerinde  %28 ANA, %20 ASMA pozitifliği saptanırken, AMA ve LKM antikor pozitifliği tespit edilmemiştir. Kontrol grubu örneklerde ise %40 ANA pozitifliği belirlenirken; ASMA, AMA ve LKM antikor pozitifliği  belirlenmemiştir. HBV DNA viral yük açısından ANA pozitif ve ANA negatif kronik hepatit B grubu örnekleri arasında anlamlı bir fark tespit edilmemiştir. Bu  üç grupta RF pozitifliği  sırasıyla %30,  %24 ve %8 oranında RF pozitifliği tespit edilmiştir. RF pozitifliği açısından kronik hepatit B grubu ile kontrol grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı fark belirlenmiştir. Anti-CCP sadece kronik hepatit B grubu örneklerden 2?sinde (%4) pozitif olarak belirlenmiştir. Çalışmamızda kronik hepatit B grubunda %4 oranında antifosfolipid G pozitifliği, %12 oranında antifosfolipid M pozitifliği tespit edilmiştir Antikardiyolipin antikorları kronik hepatit B grubu örneklerde %14 olarak saptanmıştır. Kronik hepatit B grubu örneklerde, inaktif HBsAg taşıyıcı grup ve kontrol grubu örneklere göre  serum IL-17,IL-22, IL-23 düzeyleri düzeylerinde istatistiksel olarak anlamlı düzeylerde artış meydana gelmiştir.
Sonuç:HBV ile infekte hastalarda otoantikor ve sitokin yanıtının incelenmesinin, HBV ile birlikte bulunan otoimmün hastalıkların, HBV enfeksiyonuna bağlı olarak gelişen otoantikor yanıtından ayırımını sağlamada ve hastalıkların tedavisinde yeni yöntemlerin bulunmasına yardımcı olabilir.Bununla birlikte, HBV infeksiyonu ve konak immün yanıtı ve HBV?nin oluşturduğu otoimmünite mekanizmalarının daha iyi anlaşılması için daha geniş kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
HBV is a DNA virüs, genus of orthohepadnavirus at Hepadnaviridae family,hepatotrophic, enveloped and    partially double-stranded. Infectious agent suse a variety of mechanisms to initiate or sustain  otoimmunity. Of these mechanisms, several mechanisms may be seen such as molecular affinity, and releasing of antigen-kept secret when host tissue and cells are damaged, changing of host cell proteins,  and activation of autoreactive T lymphocyte. Several infectious agents like viruses, bacteria and parasites can trigger so many different mechanisms by Autoimmunity. Molecular mimicry, cryptogenic antigens as a result of the expression of host tissue destruction, transformation of host cell proteins and an activation are some of autoreactive  mechanisms. HBV infection may trigger autoimmunity as several infections, and also may cause many changes mediators in the immune system. Therefore, in our study, we aimed to detect the formation of autoantibodies and changes in serum cytokine levels in patients with chronic hepatitis B.
Materials and Methods:
In this study, 50 adult patients with HbsAg, and HBV DNA-positive and chronic hepatitis B, HBsAg (+) ,over the age of 18,  were selected and 25 patients with HBV DNA (- ) , inactive HBsAg carrier, and HBsAg (-) were selected from healthy control group as samples. HBV DNA was determined by quantitative real-time polymerase chain reaction. ANA, ASMA, AMA, LKM autoantibodies were examined by using indirect fluorescent Ab method. The definition of autoantibodies were made by using immunoblotting method from samples found ANA positive by using IFA method. RF and anti-CCP, antiphospholipid G, antiphospholipid M, anticardiolipin autoantibodies were examined by the ELISA method. Also,Serum cytokin elevels were examined by ELISA. 
Results:
The fact that at least one  positive of ANA, AMA, ASMA and LKM autoantibodies were found to be statistically significant between inactive HBsAg carrier and control groups in the samples of patients with chronic hepatitis B. ANA 44%, AMA 10%, ASMA 16%, LKM 2% positivities were found in samples of patients with chronic hepatitis B.While ANA 28 %, ASMA 20 % positivities were detected in serum samples of inactive HBsAg carriers, ASMA, AMA and LKM antibody positivity could not be detected. There was no statistically difference between ANA positive and ANA negative groups in terms of HBV DNA viral load. In all three groups, RF positivity was found 30 %, 24 %, 8 %, respectively.Anti-CCP was found ( 4%) in examples of chronic hepatitis B group. In our study, 4% antiphospholipid G positivity and 12% antiphospholipid M positivity were found in chronic hepatitis B group. Anticardiolipin antibodies were found in 14% of cases of chronic hepatitis B group. 
Serum IL-17, IL-22, IL-23 levels were found to be significantly increased when compared the examples of chronic hepatitis B to inactive HBsAg carrier group and the control group
Conclusion :
To examine autoantibodies and cytokine response may help to discriminate autoantibody response induced by HBV infection, and contribute to find new treatment methods. However, comprehensive studies are needed to get a beter understanding of autoimmune mechanisms caused by HBV, HBV infection, and host immune reaction.