Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerden farklılaştırılan doğal öldürücü hücrelerin pankreas kanseri kök hücreleri ile ko-kültürü sonrasında potansiyal anti-kanser etkinliğinin incelenmesi
Investigation of the anti-cancer efficiency of natural killer cells differentiated from adipose tissue-derived mesenchymal stem cells co-cultured with pancreatic cancer stem cells
Yazar: AYFER KARLITEPE
Danışman: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Pankreas kanseri (PaCa) %3-5'lik 5 yıllık sağkalım oranı ve yaklaşık 6 aylık yaşam süresi ile en öldürücü insan kanser türlerinden birisidir.
MKH'ler in vitro çoğaltılmaya elverişli hücrelerdir. Genellikle invaziv olmayan cerrahi işlemlerle kolay ve bol miktarda elde edilebilen adipoz doku, zengin bir MKH kaynağıdır.
Doğal öldürücü (Natural killer:NK) hücreler malignansi veenfeksiyon durumunda konak immünitesinde önemli rol oynayan hücrelerdir. NK hücrelerinin güçlü antitümör yanıtlara aracılık ettiği yapılan birçok çalışma ile gösterilmiştir.
Çalışmamızda; ticari olarak elde edilen adipojenik mezankimal kök hücreler (AD-MKH) yeterli konfluent duruma gelen kadar önerilen kültür ortamında kültüre edildi. Kültüre edilen AD-MKH'e hematopoietik indüksiyon yapılarak hematopoietik hücre özellikleri kazandırıldı. Hematopoietik indüksiyon yapılan hücreler natural killer (NK) hücrelere diferansiye edildi.  Elde edilen NK hücrelerinin karakterizasyonu CD314 adlı antikor kullanılarak immünohistokimyasal analizlerle belirlenirken, NK hücrelerinde eksprese olan genlerin ekspresyon analizleri ise RT-PCR ile belirlendi. NK hücrelerinin pankreas kanseri üzerindeki apoptotik etkinliği TUNEL yöntemi ile belirlenirken, pankreas kanserinden sorumlu olduğu bilinen genler üzerindeki inhibe edici etkisi de RT-PCR analizi ile gen ekspresyonu düzeylerindeki değişim belirlenerek incelendi.
Sonuç olarak ADMKH'den hematopoietik indüksiyon ve diferansiyasyon yolu ile NK hücrelerinin elde edilebileceği ve pankreas kanserinde etkili olabileceği in vitro olarak gösterilmiştir ve ileride klinik kullanım için önerilebileceği sonucuna varılmıştır.

Abstract:
Pancreaticcancer (PaCa) is one of the most lethal human cancers with a 5-year survival rate of 3–5 % (approximately 6 monthssurvive).
Mesenchymal stem cells are cells which can be proliferated in vitro. Adipose tissue is a rich source of MSCs and it can be usually obtained by a non-invasive surgical procedure easily and abundantly.
Natural killer (NK) cells are critical mediators of host immunity against malignancy and infection and its potential in mediating anti-tumor responses has been shown by many studies.
In our study; commercially available AD-MSCs were cultured in recommended culture media untill it reached to confluency. Cultured ADMSCs gained hematopoietic characteristics after hematopoietic induction and then were differantiated to NK cells. NK cells obtained were characterised by immunohistochemical analysis via labeling the cells with CD314/NKG2D antibody and NK-specific gene expression analysis were determined by RT-PCR. While the apoptotic activity of NK cells on PaCa cells was determined by TUNEL assays, its inhibitory effect on expression levels of genes which were known to be responsible of pancreas cancer were investigated by RT-PCR analysis by determining the alterations in gene expression levels.
In conclusion, NK cells were obtained by hematopoietic induction and then differentiation from ADMSCs its effect on pancreatic cancer was shown in vitro and it can be recommended for further clinical aplications.