Kahramanmaraş topraklarından endo-b-1,4 glukanaz üreticisi Bacillus sp. izolasyonu, enzimin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu
Endo-b-1,4 glucanase producing from the soil Of Kahramanmaras Bacillus sp. isolation, partial pürification and characterization of the enzymes
Yazar: GÜLAY MERT
Danışman: DOÇ. ASHABİL AYGAN
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Kahramanmaraş'ın farklı bölgelerinden alınan topraklardan izole edilen bakteri suşları  içerisinden 245 suşun (%85) endo b-1,4- glukanaz enzimi ürettiği belirlenmiştir. Yapılan çalışmalarda en iyi selülolitik aktiviteye sahip olan P-5 suşu enzim üretimi ve karakterizasyon çalışmaları için seçilmiştir. Bazı biyokimyasal ve mikroskobik testlere tabi tutulan bu suş Bacillus sp. olarak tanımlanmıştır. Bacillus türlerinin birçoğu yüksek miktarda enzim sentezleme yeteneğine sahip olmalarından dolayı endüstriyel enzimlerin önemli kaynağıdırlar. İzolasyonunu yaptığımız Bacillus sp. P-5 suşu en iyi selülolitik aktivitesini pH 8.0' de ve 35 °C'de göstermiştir.
Endoglukanaz enziminin optimum aktivite gösterdiği pH değeri pH 7.5, sıcaklık değeri ise 55°C'dir. Endoglukanaz enzimi 15 ve 30 dakika ön inkübasyon sürelerinin ardından en iyi stabilitesini 40°C'de göstermiştir. 1 M'lık tuz konsantrasyonunda ise  % 91,9 kalan enzim aktivitesi tespit edilmiştir.  Enzim MnCl2, CaCl2, MgCl2, NiCl2, CuCl2, KCl gibi metal iyonlarında kalan enzim aktiviteleri sırasıyla  %128, %129, %114, %92, %86, %111 oranlarında olmuştur. En düşük aktivite ise HgCl2 ile elde edilmiştir.
SDS-PAGE analizi ile endo b-1,4- glukanaz enziminin moleküler büyüklüğü 66 kDa olarak bulunmuştur. İnce tabaka kromotografisi sonuçlarına göre enzimin son ürünü maltoz ve diğer sellooligosakkaritler olmuştur.
Yapılan çalışmaların sonucunda Bacillus sp. P-5 suşu tarafından üretilen enzim kağıt ve deterjan endüstrisinde kullanılabilme özelliğine sahiptir.

Abstract:
Among the 245 (%85)  strain of bacteria; isolated from soil samples collected from different regions of Kahramanmaraş,it is stated that strains produce endo b-1,4- glucanase enzymes. P-5 strain which had the best cellulolytic potential was chosen for enzyme production and characterization. This strain was identified Bacillus sp. on the basis of  some biochemical and microscobic examination.As Many of which sorts of Bacillus sp have potential of the highest amount of enzyme synthesizing,they are the most important sources of industrial enzymes. Bacillus sp. P-5 strain showed the best cellulolytic activity at 35°C and pH 8.0.
Endo b-1,4 glucanase enzymes showed the highest activity at 55 °C and pH 7.5 respectively. Endo b-1,4- glucanase enzyme shows its the best stabil ratio is 40°C for 15 and 30 minutes.. Also it showed the remainder of enzyme activity which rate is % 91,9  in presence of 1 M NaCl with pre-incubation.The enzyme activities which remain from the metal ions are  MnCl2 ,CaCl2, MgCl2, NiCl2, CuCl2, KCl. These rates are %128, %129,%114, %92, %86, %111  respectively.The least activity is acquired with HgCl2. 
By the SDS-PAGE analysis, molecular weights of Endo b-1,4- glucanase enzymes were 66 kDa. According to the thin layer chromotography final products of the enzyme were maltose and other cellogosaccharides.
These studies show that the enzymes produced by Bacillus sp. P-5 strain have some useful properties to use in paper and detergent industries.