İnsan embriyolarında hızlı ve yavaş dondurma yöntemlerinin çözme sonrası  elde edilen gebelik parametrelerine 
etkisi ve zaman içinde değişimi /
Yazar: KÖNÜL MÜRSEL
Danışman: PROF. DR. RECEP ONUR KARABACAK
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Embriyo = Embryo ; Embriyo nakli = Embryo transfer ; Gebelik = Pregnancy ; Retrospektif çalışmalar = Retrospective studies

Özet:
Bu retrospektif çalışmanın amacı kriyoprezervasyonda kullanılan iki ana
yöntem olan— Slow Freezing ve Vitrifikasyon arasında başarı oranlarını
karşılaştırmak ve gebelik hızını arttıracak bir prospektif metod geliştirmektir.
Çalışma Gazi Üniversitesi Tüp Bebek Merkezinde 2005-2014 yıllarında
300 çözme embriyo transferi siklusu yapılan hastaların arşiv dosyalarını
incelenerek yapılmıştır. Çalışmadaki sikluslar 2 grupta toplanmıştır: 1.Grup:Slow
Freezing (SF); 2. Grup:Vitrifikasyon (V).
Çalışma grupları arasındaki kadın yaşı, VKİ, siklus öncesi D3-FSH, D3-
LH, D3-E2, TSH, sT4 değerleri, önceki İVF siklus sayısı, ayrıntılı infertilite
nedenleri arasında anlamlı fark saptanmamıştır. Mevcut yaşayan çocuk sayısı İVF
öncesi SF grubunda V grubuna göre anlamlı yüksek bulunmuştur (p=0,001).
Çalışmada Gazi Üniversitesi Tüp Bebek Merkezinde çözme embriyo
transferi yapılan vakaların sayısının yıllar bazında lineer olarak arttığı ve SF
yönteminin zamanla yerini V' na bıraktığı gözlenmiştir. V grubunda vakaların
%94' lük kısmına bir veya iki embriyo transferi yapılırken, SF grubunda ancak
%47' sinde bir veya iki embriyo transferi yapılmıştır ve bu istatistiki anlamlıdır
(p=0,001). Bu fark yasal uygulamaların etkisi ile[100] ortaya çıkmıştır. 105
2004-2014 yılları arasında 1469' u erken evre (2. ve 3. gün) embriyosu ve
239 adedi ise blastokist (5. ve 6. gün embriyoları) olmakla, toplamda 1708
embriyo dondurulmuştur. SF grubunda 2004-2008 yılları arasında Grade 1
embriyoların dondurulma hızı %4,5' ten lineer bir sekilde %33' e yükselmiştir.
Yani zamanla dondurulmak üzere daha iyi grade' li embriyolar seçilmiş ve
teknikte tecrübe kazanılmıştır. Dondurma Grade' lerine göre iki grup
karşılaştırıldığında, V grubunda (%75,6) SF' e nazaran (%68,2) istatistiki anlamlı
olarak daha fazla Grade 1 embriyo (p=0,002) ve daha az (uygun olarak, %4,4 ve
%8,9) Grade 3 embriyo (p=0,001) dondurulmuştur. Çalışmada 2005-2014 yılları
arasında transfer amaçlı toplamda 1207 adet erken evre embriyo ve 211 adet
blastokist çözulmüştür. Çözme embriyo Grade' lerine göre iki grup
karşılaştırıldığında, çözme sonrası Grade A oranı V grubunda SF' e göre istatistiki
anlamlı olarak daha yüksek (p=0,0001), Grade C ve D oranları istatistiki anlamlı
olarak daha düşüktür (P=0,001).
Blastokistler sadece V grubunda dondurulduğu için gruplar arasında
karşılaştırma yapılamamıştır. Blastokist çözmede 2008-2010 yıllarında %75-
%100 ile başlayan dejenere blastokist oranları teknik deneyimle ile lineer olarak
%21' lere kadar azalmış ve buna benzer şekilde çözme sonrası Grade A blastokist
oranları 2010 yılında %22 iken 2014 yılında %64' e bir eğilim (trend) ile
yükselmiştir.
Çözme sonrası embriyoların kalite Grade'lerine A dan D' ye bakıldığında,
SF ile karşılaştırmada V yöntemi embriyoları istatistiki anlamlı olarak bir Grade 106
daha iyi çözmüş gözükmektedir. Bir baska deyisle, embryiolar çözüldüğünde
Grade A olarak çözülme hızı SF ve V sonrası sırasıyla %30 ve %51 dir.
Çalışmamızda çözme sonrası embriyo yaşam oranları SF grubunda %66,8
ve V grubunda %75 olup, V grubunda SF' e nazaran istatistiki alamlı olarak
yüksek saptanmıştır (p=0,0006). Çözme sonrası blastokist yaşam oranı %54,5
olarak saptanmıştır.
Toplam vakaların klinik gebelik hızı %22,3 (54 gebelik) saptanmış ve
yıllara göre gebelik hızında lineer artış izlenmemiştir (p=0,28). SF grubunda
çözme embriyo transferi yapılan 84 siklusun toplam %25' inde (21 gebelik ile)
klinik gebelik izlenmiş olup, gebelik hızında zaman bazında lineer artış
saptanmamıştır (p=0,209). V grubunda embriyo transferi yapılan 158 siklusun
%20,9' da (33 gebelik) klinik gebelik izlenmiş olup, yıllara göre gebelik hızında
lineer artış trendi saptanmıştır (p=0,138). İki grubun klinik gebelik hızı arasında
Yates düzeltmeli Ki-kare testi ile istatistiki anlamlı fark saptanmamıştır (p>0,05).
 Her iki grupta da çözme sonrası transfer başına ortalama klinik gebelik
sayıları, çözme embriyo grade kalitesi düştükçe, orantılı olarak düşmüştür. Bu
sonuçlar göz önüne alınarak, Grade' lemenin transfer sonrası gebelik hızını
predikte edebildiği görülmektedir.
Çalışmamızda endometriumun hazırlanma yöntemi çözme embriyo
transferi yapılan toplam 242 siklusun %37,2' de (90 siklus) doğal, %62,8' de (152
siklus) doğal olmayan sikluslardır. Çözme embriyo transferi yapılan doğal
sikluslarda klinik gebelik oranı (%30), ek takviyeli sikluslardakine (%17,8) göre
yüksek bulunmuştur ve bu fark istatistiki olarak anlamlı (p=0,027) saptanmıştır. 107
SF grubunda çözme embriyo transferi yapılan doğal siklusların %20' sinde (3
siklus), doğal olmayan siklusların % 26,1' inde (18 siklus) klinik gebelik
saptanmış olup, gebelik oranları arasındaki fark istatistiki anlamsızdır (p=0,62). V
grubunda çözme embriyo transferi yapılan doğal siklusların klinik gebelik hızı
(%32), doğal olmayan siklusların klinik gebelik hızına (%10,8) göre yüksek
saptanmış olup, bu fark istatistik olarak anlamlıdır (p=0,001). Tüp Bebek
Ünitemizde çözme embryo transferlerinin doğal siklusta olması, özellikle
Vitrifikasyon grubunda gebeliği predikte edebilmektedir. Bu da bizim çözme
embriyo transfer sikluslarında doğal sikluslarla karşılaştırmada endometrium
hazırlama protokollerimizin rafine edilmesi gerektiğini ortaya koymaktadır.
Çalışmada toplam vakaların canlı doğum hızı %12,8 olarak saptanmıştır
ki, bu da toplamda klinik gebelik izlenen siklusların % 42,6' sının gebelik kaybı
ile sonuçlandığını göstermektedir. Dolayısıyla, gebe kalanların (%22,3) yaklaşık
yarıya yakını düşük yapmıştır.
SF grubunda gebelik hızı % 25 iken doğum hızı %14,3 (12 canlı doğum)
olarak saptanmıştır ve klinik gebelik izlenen %42,9 vakada gebelik kaybı
izlenmiştir. V grubunda doğum hızı %12 (19 doğum) olarak saptanmıştır. Gebelik
hızı %20,9 olan bu grupta vakaların %42,4' ü gebelik kaybı ile sonuçlanmıştır.
SF grubunda doğumların %75' i tek ve %25' i ikiz doğum, V grubunda ise
%95'i tek ve %5' i ikiz doğum saptanmıştır. Ancak gruplar arasındaki bu fark
istatistiki olarak anlamlı bulunmamıştır (p>0,05).
Yates düzeltmeli Ki-kare testi ile SF ve V grupları arasında yıllara göre
canlı doğum oranları açısından istatistiki anlamlı fark saptanmamıştır (p>0,05).108
Bu çalışma sonuçlarına göre, dondurulup çözülen embriyo yaşam
oranlarına açısından SF' e nazaran V yöntemi üstün bulunmuş, fakat gebelik hızı
ve doğum hızı açısından iki yöntem arasında anlamlı fark saptanmamıştır.
Embriyo yaşam hızı, gebelik ve doğum hızlarının bu çalışmada daha düşük
saptanmasının nedeni, dondurma öncesindeki embriyo seçim kriterilerinin cut-off
değerlerinin daha düşük olması ve çözme sonrası sadece Grade A değil diğer
düşük grade' li embriyoların da transfer edilmesi şeklinde yorumlanmıştır.

Abstract:
The aim of this retrospective study is to compare the success rates between
two main methods used in cryopreservation: Slow Freezing (SF) and Vitrification
(V) and to develop a prospective method to increase the pregnancy rate.
The archive files of 300 patients who underwent thawing embryo transfer
cycles in IVF Center of Gazi University between years 2005-2014 were analysed.
Cycles in the study were collected in two groups: Group 1:Slow Freezing (SF);
Group 2: Vitrification (V).
There were no difference between groups in terms of age, BMI, serum
levels of D3-FSH, D3-LH, D3-E2, TSH, fT4 before cycle, number of previous
IVF cycles, detailed cause of infertility. The number of living children before IVF
in the SF group significantly higher than those of V (p = 0.001).
In this study we observed, the linear increase of thawed embryo transfer
cases in IVF Center of Gazi University and the SF method replaced by V in time.
In the V group one or two embryos transferred to 94% of patients, while in the SF
group, only to 47%, and this difference was statistically significant (p = 0.001).
This difference has emerged due to the legal practice [100]
.
A total of 1708 embryos were cryopreserved between 2004-2014 years,
1469 of them were early stage (day 2 and day 3) embryos and 239 were 110
blastocysts (day 5 and day 6 embryos). The Freeze rate of Grade 1 embryos in SF
group showed linear increase from 4,5% to 33% between 2004-2008 years. So
embryos with better grade were selected and through the technical experience in
time. Comparing pre thaw grades between two groups, Grade 1 embryos in group
V (%75,6)were statistically significantly higher (p=0,002) and Grade 3 embryos
(4,4%) were statistically significantly lower (p=0,001) compared to group SF
(respectively, 68,2% and 8,9%). A total of 1207 early stage embryos and 211
blastocysts thawed between 2005-2014 year in study. After thaw Grade A embryos
in group V statistically significantly higher (p=0,0001), in concordance Grade B
and C embryos were statistically significantly lower than group SF (p=0,001).
Because of blastocysts cryopreserved only in group V though possible in
group SF, comparison could not be made between groups. Blastocyst thawing in
between 2008-2010 were with 75%-100% of degenerating rate is linearly
decreased to 21% by gaiınıng technical dexterity through 2014, similer Grade A
after thaw rate 22% in 2010 increased in trend to 64% respectively.
Group V seems to thaw embryos a grade significantly better than group
SF. In other words, thaw rate of Grade A embryos, in SF and V groups were 30%
and 51% respectively.
The survival rate of embryos after thaw were significant higher (p=0,0006)
in group V (75%) than in SF (66,8%). Survival rate of blastocysts after thaw were
54,5%.
Cumulative clinical pregnancy rate (CPR) was 22,3% (54 pregnancies),
linear increase of rate was not observed (p=0,28). In SF group CPR was 25% (21 111
pregnancies), linear increase of CPR was not observed in time. In the V group
CPR was 20,9% (33 pregnancies), and linear increase was not observed in time
(p=0,138), but in trend. There were no significant difference between the CPR of
two groups (p> 0.05).
The average number of clinical pregnancies per thawed embryo transfer in
both groups, is decreased proportionally as thawed embryo quality grade
decreased. It seems that, Grade of transferred embryos are strong predict of CPR.
Endometrial preparation in 242 thaw cycles of our study were 37,2% (90
cycles) natural and 62,8% (152 cycles) artificial cycles. In natural cycles CPR
after thaw embryo transfer is observed higher (30%) than artificial cycles (17,8%)
(p=0,027). In SF group CPR were 20% (3 cycles) in natural cycles and 26% (18
cycles) in artificial cycles similar (p=0,62). In V group same rates were 32% and
10,8%, better respectively (p=0,001). This means, in our IVF Unit thaw embryo
transfer in natural cycles is able to predict pregnacy, in V group better and in
artificial cycles were need rafinement.
The live birth rate of total cases were found 12.8%, this shows that 42,6%
of clinical pregnancy is resulted with the loss of the pregnancy in this study.
SF group birth rate was found 14.3% (12 live births) and 42,9% is resulted
with loss of pregnancy. In V group similar rates were 12% (19 live births) and
42,4% respectively.
In the SF group 75% of total live births were singleton and 25% were
twins, in V group same rates were similar, 95% and 5% respectively (p> 0.05).112
SF and V groups in terms of live birth rates by years were similar (p>
0.05).
According to our results frozen-thawed embryo survival rate of group V
was found superior compared to SF group, but there was no significant difference
in pregnancy rate and live birth rate between two methods. Strict embryo selection
cut-off values as Grade A only to predict CPR before and after cryopreservation
and strict transfer of thawed embryos policy is needed with improing the artificial
endometrial stimulation.