Embriyonal gelişim üzerine nikotinin teratojenik etkisine karşı b12 vitamininin sıçan ön (üst) ekstremite kemiklerinin gelişimine etkisi
The effect of b12 vitamin on rat front (upper) extremi̇ty development against nicotine's teratogenic effects on embryonal development
Yazar: AHMET PAYAS
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHTAP NİSARİ
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Anatomi Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Anatomi = Anatomy

Özet:
Çalışmamızda nikotinin gebe sıçanların fetuslarının kemik gelişimine olası etkileri ve vitamin B12'nin (Vit-B12) bu etkilere karşı teratojenik etkisi ikili iskelet sistemi boyama yöntemi ile araştırıldı. Erciyes Üniversitesi Deneysel Araştırmalar Uygulama ve Araştırma Merkezinde (DEKAM) üretilen ortalama ağırlığı 150 g olan 18 adet genç dişi Wistar albino cinsi sıçan kullanıldı. 2 dişi sıçana 1 erkek sıçan olacak şekilde saat 17.00'den saat 07.00'e kadar aynı kafeste tutuldu. Mikroskop altında vaginal smear incelenerek spermium görülen dişi sıçanlar 0.5 günlük gebe kabul edildi. Gebe sıçanlar rastgele kontrol, düşük doz nikotin (DDN), yüksek doz nikotin (YDN), düşük doz nikotin+vitamin B12 (DDN+Vit-B12), yüksek doz nikotin+vitamin B12 (YDN+Vit-B12) ve Vit-B12  olarak oluşturuldu. Gebeliğin 1-20. günleri arasında kontrol grubuna 1 ml/kg serum fizyolojik (SF), DDN grubuna 3 mg/kg nikotin, YDN grubuna 6 mg/kg nikotin, DDN+ Vit-B12 grubuna 3 mg/kg nikotine ek olarak 0.5 mg/kg Vit-B12, YDN+ Vit-B12 grubuna 6 mg/kg nikotine ek olarak 0.5 mg/kg Vit-B12, ve Vit-B12 grubuna 0.5 mg/kg Vit-B12 verildi. 
Gebe sıçanlardan gebeliğin 20. gününde fetuslar sezaryenle alınarak, ağırlıkları ve baş-kıç uzunlukları ölçülüp kaydedildi. Daha sonra fetusların ikili iskelet boyama yöntemiyle kemik yapıları Alizarin Red-S ile kırmızıya, kıkırdak yapıları da Alcian Blue ile mavi renge boyandı. Fetuslara ait ön ekstremite kemikleri (scapula, humerus, ulna, radius) stereomikroskop altında incelenerek  fotoğrafları çekildi. Daha sonra Image J programı kullanılarak kemik boyu, kemikleşme uzunluğu ve kemikleşme yüzde oranları hesaplandı. Elde edilen veriler R 3.2.3 programında değerlendirildi.
Kemik boyu değerlendirildiğinde; DDN grubu ile kontrol grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir farkın olmadığı; YDN grubunun kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede düşük olduğu (p<0.05) görüldü. Kemik boyunun Vit-B12 verilen DDN+Vit-B12 ve YDN+Vit-B12 gruplarında DDN ve YDN gruplarına göre istatistiksel olarak anlamlı derecede yükseldiği ve kontrol grubu verilerine yakın olduğu tespit edildi. Kemikleşme uzunluğunun DDN ve YDN gruplarında kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede azaldığı (p<0.05), DDN ve YDN gruplarına nikotine ilaveten Vit-B12 verildiğinde ise kemikleşme uzunluğunun istatistiksel olarak anlamlı derecede arttığı (p<0.05) ve kontrol grubuna yaklaştığı belirlendi.
Çalışmamızda gebelikte kullanılan nikotinin iskelet sistemi üzerinde kemikleşmeyi geciktirdiği, Vit-B12'nin ise bu teratojenik etkiyi azaltarak kemikleşmeyi arttırabileceği sonucuna ulaşıldı. 
Anahtar Kelimeler: Sıçan, nikotin, vitamin B12, kemikleşme, ikili iskelet boyaması.

Abstract:
In our study, the possible effects of nicotine on the bone development of fetuses of pregnant rats and the teratogenic effect of vitamin B12 (Vit-B12) on these effects were investigated by the dual skeletal system staining method. Eighteen female Wistar albino rats were used in Erciyes University Experimental Research Application and Research Center (DEKAM) with an average weight of 150 g. Two female rats were kept in the same cage as 1 male rat from 17.00 to 07.00 hrs. Under vaginal smear examination under the microscope, female rats with spermium were regarded as 0.5 day pregnant. Groups were formed as control, low dose nicotine (LDN), high dose nicotine (HDN), low dose nicotine+vitamin B12 (LDN+Vit-B12), high dose nicotine+vitamin B12 (HDN+ Vit-B12) and Vit-B12. Between 1-20 days of pregnancy 1 ml/kg of saline given for control group, 3 mg/kg of nicotine for LDN group, 6 mg/kg of nicotine for HDN, in addition 3 mg/kg nicotine 0.5 mg/kg Vit-B12 for LDN+Vit-B12 group, in addition 6 mg/kg nicotine 0.5 mg/kg Vit-B12 for HDN+Vit-B12 group and 0.5 mg/kg of Vit-B12 for Vit-B12 group.
On the 20th day of the pregnancy, the fetuses were caesarean sectioned and their weights and head-to-hip lengths were measured. Subsequently dual skeletal staining was used to redirect fetal bones red with Alizarin Red-S and cartilage blue with Alcian Blue. After examination of fetal front bone (scapula, humerus, ulna, radius) under the stereomicroscope photos were taken. Then, using the Image J program, bone length, ossification length and percentage of ossification were calculated. The obtained data were evaluated with the R 3.2.3 program.
When bone size was evaluated; There was no statistically significant difference between the LDN group and the control group; The HDN group was statistically significantly lower than the control group (p <0.05). Bone size; The LDN +Vit-B12 and HDN + Vit-B12 groups given Vit-B12 were statistically significantly higher than the LDN and HDN groups and were close to the control group. Length of ossification; LDN, HDN groups were statistically significantly lower than control group (p <0.05) when Vit-B12 was given in addition to LDN and HDN, the length of ossification increased statistically significantly (p <0.05) and close to the control group.
In our study, it was found that nicotine used in pregnancy delayed ossification on the skeletal system,Vit-B12 is the result that it can increase ossification by reducing this teratogenic effect.
Keywords: Rat, nicotine, vitamin B12, ossification, double skeletal staining.