Klinik Staphylococcus aureus izolatlarında metisilin direncinin fenotipik ve genotipik yöntemlerle araştırılması
Investigation of methicillin resistance with phenotypic and genotypic methods in clinical isolates of Staphylococcus aureus
Yazar: SİLVA POLAT
Danışman: PROF. DR. GÜNER SÖYLEDİR
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Fenotip = Phenotype ; Genotip = Genotype ; Metisilin = Methicillin ; Oksasilin = Oxacillin ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Metisiline heterojen dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) kökenleri mecA geni taşımalarına rağmen rutin testlerle her zaman saptanamamakta, bazı kökenler ise mecA geni taşımadıkları halde metisiline dirençli olarak tanımlanabilmektedir. Sınırda oksasilin direncine sahip olan ve ?Borderline resistant S. aureus? (BORSA) olarak adlandırılan bu kökenlerdeki direncin bir nedeni aşırı beta laktamaz üretimi, bir diğer nedeni de penisilin bağlayan proteinlerdeki modifikasyonlardır. Çalışmamızda test edilen 338 S. aureus kökeninde metisilin direncini saptamak üzere disk difüzyon (DD) yöntemi ile sefoksitin ve oksasilin duyarlılıkları, agar dilüsyon yöntemi ile oksasilin MİK değerleri ve PZR yöntemi ile mecA varlığı ve uzamış inkübasyonla zon içi üremeye dayalı olarak heterodirenç araştırılmıştır. Çalışmamızda heterodirenç gösteren bir köken saptanmamıştır. Rutin yöntemlerle MRSA olarak tanımlanan 138 kökenin 136?sı mecA pozitif olup, tüm kökenler sefoksitin DD ile doğru tanımlanmıştır. Oksasilin DD ise mecA negatif 2 kökeni orta olarak saptamıştır. Oksasilin DD orta ve oksasilin MİK 1 µg/ml olan bu iki köken ile mecA negatif olup oksasilin MİK 2 µg/ml olan 2 kökenin beta laktamaz üretimlerine bakıldığında bu 4 kökenin 60. dakikadaki enzim aktiviteleri pozitif kontrole kıyasla 2 kat fazla bulunmuştur. Buna göre hastanemiz izolatları içerisinde BORSA oranımız %1,9 olarak belirlenmiştir. Çalışmamızda rutin yöntemlerle MRSA olarak bildirilen kökenlerin %1,4?ü mecA negatif olup, aşırı beta laktamaz üretimi nedeniyle MRSA fenotipi sergilemiştir. Bu tür izolatların saptanma sıklığı çok düşük olmakla birlikte, gereksiz glikopeptid kullanımını önlemek amacıyla bu kökenlerin varlığı göz ardı edilmemelidir. Rutinde bu tür kökenlerin saptanması için ek testlerin kullanımına ilişkin daha fazla kökenle yapılacak çalışmalara gereksinim vardır.

Anahtar Kelimeler: BORSA, mecA, MRSA.

Abstract:
Heterogeneous methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains can not always be identified by routine tests, despite the presence of mecA gene. Some strains can also be identified as methicillin resistant even though they don't carry mecA gene. One reason for these strains having borderline oxacillin resistance and named as `Borderline resistant S. aureus? (BORSA) is hyperproduction of beta lactamase and another reason is the modifications of penicilin binding proteins. In our study, 338 S. aureus strains were tested by disc diffusion (DD) method for cefoxitin and oxacillin susceptibility, by agar dilution method for oxacillin MIC, by PCR for presence of mecA gene and by prolonged incubation regarding of intrazonal growth for heteroresistance in order to detect methicillin resistance. None of the strains showed heteroresistance in our study. 136 of 138 strains rouitinely identified as MRSA were mecA positive and all strains were confirmed by cefoxitin DD test. Oxacillin DD test determined two mecA negative strains as intermediate. Two strains, which are oxacilin DD intermediate and having oxacilin MIC 1 µg/ml together with another two strains which are mecA negative and oxacilin MIC 2 µg/ml were examined for beta lactamase activity at 1 hour and enzyme activity of these 4 strains showed 2 fold increase compared to positive control. According to these results, rate of BORSA is determined as %1,9 in the isolates from our hospital. In our study, 1,4% of strains determined as MRSA in routine were mecA negative and showed MRSA phenotype due to the hyperproduction of beta lactamase. Although the detection frequency of these isolates is very low, their existence should be considered in order to prevent unnecessary glycopeptide consumption. In conclusion, further investigation on more strains by additional tests is needed to clarify such strains precisely in routine.

Key words: BORSA, mecA, MRSA.