SDS-PAGE, agarose cellulose asetat teknikleri kullanılarak farelerde (Musmusculus var. albinus) oluşan anyonik immünglobülin prodiksiyonunun saptanması /
Yazar: HATİCE KORKMAZ
Danışman: PROF. DR. ÖMER ÇOLAK
Çukurova Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1995
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Adjuvant = Adjuvant ; Antijenler = Antigens ; Antikorlar = Antibodies ; Fareler = Mice ; İmmünoglobülinler = Immunoglobulins

Özet:
76 6. ÖZET Bu çalışmada çeşitli bakteri antijenleri ile aşılanmış Mus muscutus var. albinos farelerinde immün cevap oluşumunun saptanmasında çeşitli elektroforez tekniklerinin başarı düzeyi araştırılmıştır. Aşılama için P. aeruginosa, Klebsiella sp., S. albus, S. aureus ve Streptococcus bakterileri kullanılmıştır. Değişik periyodfarda ve konsantrasyonlarda subkutan antijen uygulamasından sonra dalak, kalp, böbrek, karaciğer ve serum örnekleri çeşitli elektroforez teknikleri kullanılarak analiz edilmişlerdir. Ayırma ortamı olarak homojen SOS-PAGE, Gradient SDS-PAGE, Nativ- PAGE, Agarose ve selluloz asetat teknikleri kullanılmıştır. Homojen jeller % 7.5- to konsantrasyonlarda kullanılırken, gradient Jeller % 3.5-25 arasında değişen konsantrasyonlarda uygulanmıştır. Agarose jeller % 0.8, nativ jel ise % 7.5 konsantrasyonda tatbik edilmiştir. Analizler sonucunda kalp ve karaciğer (toplam 10 farklı protein fragmenti ortaya çıkmıştır) dokularının İmmün cevabın gelişmesinde diğer sistemlere göre daha iyi sonuç verdikleri bulunmuştur. Kullanılan bakteri antijenlerinin immünojenik etkisi en fazla 5. albus antijeninde görülmüş ve bunu sırasıyla Klebsiella sp., ve S.aureus antijenleri izlemiştir. Elektroforez teknikleri arasında en başarılı separasyon gradient jeilerte gerçekleştirilmiştir (toplam 29 protein fragmenti). En başarısız separasyon agarose ve sellulose asetat tekniklerinde görülmüş ve toplam 4 protein fragmenti saptanabilmiştir. Denature edilen örneklerde iyi bir separasyon sağlanmasına karşın, denature edilmemiş örneklerde birbirinden ayrılmış protein fragmenti saptanamamıştır. Selüloz asetat yöntemi ile separe edilen protein fragmentleri densitometrik olarak değerlendirilmiş ve antijen uygulanmış bütün örneklerde, albumin düzeyinde azalma olduğu görülmüştür.

Abstract:
77 7. SUMMARY In this study, the success level of different electrophoretic techniques were investigated that occurring of immune response in Musmuscutus var. albinos mice which were vaccinationed with various bacteria antigens. Psmntomonas aeruginosa Xtebsfelfa sp" Staphylococcus albus, S. aureus and Streptococcus sp. were used for vaccination. Spleen, hearth, kidney, liver, and sera samples were analysed after application antigens to mice at the different time and concentration using various electrophoretic techniques. Following separations techniques were used, homogen SDS-PAGE, gradient SDS-PAGE, native-PAGE, agarose gel, and cellulose acetate. Homogen SDS-PAGE 7.5%, gradient SDS-PAGE 3.5-25%, native-PAGE 7.5%, and agarose gel 0.8% concentration were prepared. Hearth and fiver tissues were given more good results than others. The most immunogenic effect was observed with 5. sfbus, Klebsiella sp., and S. aureus antigens respectively. Among electrophoretic techniques the best separation was performed with gradient gels techniques (total 29 protein fragments), the worst separation was cellulose acetate and agarose techniques (oniy 4 protein fragments). The most successful separation was observed with denaturated samples in contrast to, any protein fragment wasnt determined with nondenaturated samples. The protein fragments which separated by cellulose acetate, were evaluated as densitometric and albumin level of mice sera which obtained after the vaccination, decreased in ait samples when compared with control.