Meme kanserinde erken tanı, tedavi, prognoz ve aksiller metastazda lncRNA ve miRNA rolü
The role of lncRNA and miRNA in early diagnosis, treatment, prognosis and axillary metastasis in breast cancer
Yazar: TAHA YASİN BARAN
Danışman: DOÇ. DR. SEVDA YILMAZ
Pamukkale Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery ; Patoloji = Pathology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Erken teşhis = Early diagnosis ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Prognoz = Prognosis ; RNA = RNA ; Tedavi = Treatment ; Teşhis = Diagnosis

Özet:
Meme kanseri dünyada kadınlarda en sık görülen kanser türüdür. Ayrıca kadınlarda kanser mortalitesinde ilk sırada yer almaktadır. Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ) GLOBOCAN 2020 verilerine göre yaklaşık 2,3 milyon yeni vaka ve %11,7 oranı ile tüm kanserler arasında en sık görülen kanser türüdür (1).  

Meme kanserinin tanı, tedavi ve prognozunda aksiller metastaz varlığı önemli bir kriterdir. Meme kanserlerinde aksiller metastaz varlığı araştırmasında Sentinel Lenf Nodu Biyopsisi (SLNB) altın standarttır. Ancak SLNB operasyon süresini uzatan invaziv bir yöntemdir. Son yıllarda alternatif aksiller metastaz tespit yöntemleri araştırılmaktadır (2).

Günümüzde kanser hastalarında long non coding RNA (lncRNA), mikro RNA (miRNA/miR) çalışmaları popülerlik kazanmaya başlamış ve bu çalışmalarda anlamlı sonuçlar elde edilmiştir. Son zamanlarda çeşitli miRNA'ların meme kanseri patogenezi üzerinde hayati bir etki yaptığı ortaya konmuştur. lncRNA'lar meme kanseri dahil çeşitli kanser türlerinde önemli roller oynar. lncRNA'ların anormal ekspresyonu meme kanserinde kanserin başlamasına ve ilerlemesine önemli ölçüde katkıda bulunur (3, 4).
 
Biz bu çalışmada Pamukkale Üniversitesi Genel Cerrahi Kliniğinde son 2 yılda tedavi edilen erken evre meme kanseri olan hastalarda; ameliyat öncesi alınan kan örneklerinden serum miR150-5p ve miR503-5p, lncRNA BLACAT1, bir kemokin reseptör proteini olan Ccr2, bir apoptoz regülatörü olan Bcl-2'yi çalıştık. Böylece bu çalışmada; meme kanserinde aksiller metastaz varlığını sadece doku örneklerinden değil de serum örnekleri üzerinden de tespit edebilmenin mümkün olup olmadığını araştırdık.


Operasyon sırasında meme kanserinde aksiller metastaz doğrulaması için SLNB frozen çalışması yapıldı. Ayrıca operasyon sonrası parafinli patoloji örneklerinde aksiller metastaz varlığı kontrol edildi. 
Çalışmamızda yaş ortalaması 53,15±12,82 olan 57 hasta yer aldı. Çalışmamızın sonuçlarına göre; Hastaların Sentinel lenf nodu frozen sonuçlarıyla ekspresyon analizleri yapıldığında sadece miR-503-5p ekspresyonu en az bir adet malign sentinel lenf nodu olan hastalarda sentinel lenf nodu tamamı benign olan hastalara göre aşağı yönde 2,33 kat oranında ekspresyon gösterdi diğer markerlarda anlamlı fark bulunamadı.
Ekspresyon analizleri tedavi açısından önemli olan kriterlere göre de değerlendirildi. Moleküler sınıflamalarına göre incelendiklerinde lncRNA BLACAT 1 ekspresyonu Luminal B tümörlerde diğer moleküler subtiplere göre 3,04 kat yükselme ve HER2 tümörlerde 26,65 kat yükselmeyle anlamlı bulunmuştur. miR-503-5p Luminal B tümörlerde diğerlerine oranla 2,12 kat yüksek, Her 2 tümörlerde 82,33 kat yüksek eksprese edilerek anlamlı bulunmuştur. miR-150-5p Luminal B tümörlerde diğerlerine oranla 2,93 kat yüksek eksprese edilerek anlamlı bulunmuştur. 

Prognoz açısından önemli olan yaş ile korelasyon değerlendirildiğinde; BLACAT1' in 50 yaş altı hastalara göre 50 yaş üstü hastalarda 2,48 kat aşağı yönde eksprese olduğu gözlemlenip anlamlı olarak bulunmuştur. Mir-150-5p'nin 50 yaş altı hastalara göre 50 yaş üstü hastalarda 2,50 kat artış yönünde eksprese olduğu gözlenerek anlamlı olarak değerlendirildi.

Erken tanı için önemli olan aile öyküsü ile korelasyon değerlendirildiğinde; BLACAT1'in ailesinde meme kanseri öyküsü olan hastalarda ailesinde meme kanseri öyküsü olmayan hastalara göre 5,37 kat aşağı yönde anlamlı olarak eksprese oldukları gözlemlenmiştir. miR-503-5p'nin ailesinde meme kanseri öyküsü olan hastalarda ailesinde meme kanseri öyküsü olmayan hastalara göre 6,41 kat yukarı yönde anlamlı olarak eksprese oldukları gözlemlenmiştir. mir-150-5p'nin ailesinde meme kanseri öyküsü olan hastalarda ailesinde meme kanseri öyküsü olmayan hastalara göre 2,29 kat yukarı yönde anlamlı olarak eksprese oldukları gözlemlenmiştir. 
Tanı, tedavi ve prognozda önemli olan Ki-67 ile korelasyon değerlendirildiğinde, çalışmamızda mir-503-5p ekspresyonu Ki-67 %20'den fazla sentezlenen hastalarda Ki-67 %20'den daha az sentezlenen hastalara göre 3,52 kat artış göstererek anlamlı olarak değerlendirilmiştir. mir-150-5p ekspresyonu Ki-67 %20'den fazla sentezlenen hastalarda Ki-67 %20'den daha az sentezlenen hastalara göre 3,54 artış göstererek anlamlı olarak değerlendirilmiştir.

Sonuç olarak çalışmamızda erken evre meme kanseri tanısı alan, herhangi bir ek kanseri olmayan, neoadjuvan kemoterapi almayan hastalarda meme kanseri ile ilişkilendirilen miRNAlar (miR-503-5p, miR150-5p) lncRNA BLACAT1, bcl2,ccr2'nin operasyon öncesi serum örneklerindeki ekspresyon seviyeleri incelenmiştir. Bu parametrelerin operasyon öncesi serum örneklerinde değişiklikleri gösterilmiştir.

Çalışmamıza göre serum mir 503-5p ekspresyonunun aksiller metastaz tespiti için kullanılan SLNB ye göre daha az invaziv ek bir yöntem olarak kullanılabileceği düşünülmüştür. 

Erken tanı, tedavi ve prognoz için önemli olan faktörlerle değerlendirildiğinde, lncRNA BLACAT1, miR 503-5p ve miR150-5p'nin erken evre meme kanserli, neoadjuvan kemoterapi almamış hastaların serum örneklerinden bakılarak tanı, tedavi ve prognoz açısından fikir sunabileceği düşünülmüştür.














Anahtar kelimeler: miR150-5p,miR503-5p, BLACAT1, moleküler sınıflandırma, sentinel lenf nodu

Abstract:
Breast cancer is the most common type of cancer in women worldwide. It also ranks first in cancer mortality in women. According to the World Health Organization (WHO) GLOBOCAN 2020 data, it is the most common cancer type among all cancers with approximately 2.3 million new cases and 11.7% rate (1). 

The presence of axillary metastases is an important criterion in the diagnosis, treatment and prognosis of breast cancer. Sentinel Lymph Node Biopsy (SLNB) is the gold standard in the investigation of axillary metastases in breast cancers. However, SLNB is an invasive method that prolongs the operation time. In recent years, alternative axillary metastasis detection methods have been investigated (2).

Nowadays; lncRNA and miRNA studies in cancer patients have started to gain popularity and significant results have been obtained in these studies. It has also been demonstrated that various miRNAs have a vital effect on the pathogenesis of breast cancer. Long ncRNAs play a crucial role in various types of cancer, including breast cancer. Abnormal expression of lncRNAs contributes significantly to cancer initiation and progression in breast cancer (3, 4).

In this study, in patients with early stage breast cancer treated in Pamukkale University General Surgery Clinic in the last 2 years; we studied serum miR150-5p and miR503-5p, lncRNA BLACAT1, a chemokine receptor protein Ccr2 and an apoptosis regulator Bcl-2 in preoperative blood samples. Thus, in this study; we investigated whether it is possible to detect the presence of axillary metastases in breast cancer not only from tissue samples but also from serum samples.
We performed SLNB frozen study to confirm axillary metastases in breast cancer during the operation. In addition, we checked the presence of axillary metastases in the pathology samples with paraffin after the operation. 
Our study included 57 patients with a mean age of 53,15±12,82 years. According to the results of our study; When expression analyzes performed with the correlation of frozen sentinel lymph node results of the patients, only miR-503-5p expression showed 2,33-fold expression in patients with at least one malignant sentinel lymph node compared to patients with all benign sentinel lymph nodes. We found no significant difference in other markers.
We also evaluated expression analyzes according to criteria important for treatment. When we analyzed according to their molecular classification, lncRNA BLACAT 1 expression was found to be significant with a 3,04-fold increase in Luminal B tumors and a 26,65-fold increase in HER2 tumors compared to other molecular subtypes. miR -150-5p was found to be significant by being expressed 2,93 times higher in Luminal B tumors compared to the others.
We evaluated these markers correlation with age (which is important for prognosis), We observed that BLACAT1 was expressed 2,48 times downstream in patients over 50 years of age compared to patients under 50 years of age. We observed that mir-150-5p was expressed in the direction of a 2,50-fold increase in patients over 50 years of age compared to patients under 50 years of age, and it was evaluated as significant.
When the correlation with family history, which is important for early diagnosis evaluated. We observed that BLACAT1 was significantly expressed 5,37 times downstream in patients with a family history of breast cancer compared to patients without a family history of breast cancer. We observed that miR-503-5p was significantly expressed 6,41 times upstream in patients with a family history of breast cancer compared to patients without a family history of breast cancer. We observed that mir-150-5p was significantly expressed 2,29 times upstream in patients with a family history of breast cancer compared to patients without a family history of breast cancer. 
Considering the correlation with Ki-67, which is important in diagnosis, treatment and prognosis; we found the expression of mir-503-5p to be significant in patients with Ki-67 synthesized more than 20%, showing an increase of 3,52 times compared to patients with Ki-67 expression less than 20%. In the expression of mir-150-5p, we evaluated as significant by showing an increase of 3,54 in patients with Ki-67 expressed more than 20% compared to the patients with Ki-67 expression less than 20%.

As a result, in our study; We investigated the expression levels of breast cancer-associated miRNAs (miR-503-5p, miR150-5p) lncRNA BLACAT1, bcl2, ccr2 in preoperative serum samples in patients diagnosed with early stage breast cancer, without any additional cancer, and not received neoadjuvant chemotherapy. The changes of these parameters in preoperative serum samples are shown.
According to our study, we thought that serum mir 503-5p expression could be used as a less invasive additional method compared to SLNB used for axillary metastasis detection.

When evaluated with factors that are important for early diagnosis, treatment and prognosis, we thought that lncRNA BLACAT1, miR 503-5p and miR150-5p could provide an idea in terms of diagnosis, treatment and prognosis by looking at the serum samples of patients with early stage breast cancer who did not receive neoadjuvant chemotherapy.



















Keywords: miR150-5p, miR503-5p, BLACAT1, molecular classification, sentinel lymph nod