Sıçanlarda deneysel spinal kord hasarında mir-30a ve mir-17 biyobelirteçleri ve metilprednizolonun etkileri
The effects of mir-30a and mir-17 with methylprednisolonein experimental spinal cord injury in rats
Yazar: ECE UYSAL
Danışman: DOÇ. DR. SUAT EROL ÇELİK
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Okmeydanı Eğitim. ve Araştırma. Hastanesi / Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Genetik = Genetics ; Nöroşirürji = Neurosurgery ; Ortopedi ve Travmatoloji = Orthopedics and Traumatology
Dizin: Biyobelirteçler = Biomarkers ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Metilprednizolon = Methylprednisolone ; Mikro RNA = Micro RNA ; Spinal kord = Spinal cord ; Spinal kord yaralanmaları = Spinal cord injuries ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Spinal kord hasarını takiben erken dönemde inflamaasyon, hücre kan akım değişiklikleri, apopitoz gibi birçok etkin mekanizma ile nöroprotektif bir steroid olan metilprednizolonun; morbidite ve mortalitenin en önemli sebepleri arasında kabul edilen erken spinal hasarını önleyebilmek amacıyla genomik regülasyonda rol aldığı öngörülen microRNA ekspresyonları üzerinden, inhibitör etkinliğinin gösterilmesi.
Gereç ve Yöntem: Her biri 7 hayvandan oluşan, kontrol grubu, spinal hasar oluşturulan gruplar ve metilprednizolon tedavisi ile birlikte toplam 8 gruptan oluşan, 56 adet erkek Sprague-Dawley Sprague cinsi sıçan üzerinde yapılan bu çalışmada sıçanlara T5-8 seviyesinde laminektomi yapıldıktan sonra kontrol grubu ve kontrol grubunun 6.saati haricindeki 6 gruba T5 seviyesinde Yaşargil anevrizma klibi ile spinal hasar uygulandı. Hasar verilen grupların 6., 12. ve 24. saatinde T5 altındaki omurilik parçası çıkarılarak sakrifiye edildi. Spinal hasar verilen Grup 4, 6 ve 8'e hasar sonrası 30 mg/kg dozunda metilprednizolon verildi. Her gruptan rastgele seçilen ikişer adet sıçana histopatolojik inceleme ve immunohistokimyasal örnekleme yapıldı. Histopatolojik ve immumohistokimyasal inceleme sonucunda metilprednizolon verilen gruplarda hücre nekrozu, ödem, hemoraji ve ak madde-gri madde geçişinde belirgin azalma izlendi. Tüm sıçanların çıkarılan hasarlı omurilik örnekleri ise real time PCR yöntemi ile miR-30a ve miR-17 gen ekspresyon düzeyleri değerlendirildi.
Bulgular: miR-30a'nın spinal kord hasarı sonrası 12.saat ve 24.saatte anlamlı olarak upregüle olduğu ve bu artışın metilprednizolon verilen gruplarda sınırlandırıldığı saptanmıştır. miR-17'nin ise spinal kord hasarı sonrası down-regüle olduğu ve bu down-regülasyonun 6.saatte artmaya başlayıp 12.saatte en fazla olduğu izlenmiş, metilprednizolon verildiğinde ise 6. ve 12.saatte ise down-regülasyonun azaldığı saptanmıştır.  
Sonuç: Metilprednizolonun spinal kord hasarı üzerinde miR-30a ve miR-17'nin etki mekanizması üzerinden istatistiksel olarak anlamlı, hasarı iyileştirici etkileri olduğu saptanmıştır.


Anahtar Kelimeler: miRNA, metilprednizolon, spinal kord hasarı

Abstract:
Objectives: Methylprednisolone, a neuroprotective steroid with many effective mechanisms such as early infusion, cell blood flow changes, apoptosis following spinal cord injury; Demonstration of inhibitory activity through predicted microRNA expressions in genomic regulation to prevent early spinal injury, which is considered as one of the most important causes of morbidity and mortality.
Materials and Methods: In this study, 56 male Sprague-Dawley Sprague rats, each consisting of 7 animals, consisting of control group, spinal damage group and methylprednisolone treatment, consisted of 8 groups. After laminectomy was performed at the level of T5-8 in rats. Spinal injury was performed with Yaşargil aneurysm clip at T5 level in 6 groups except control group. At the 6th, 12th and 24th hours of the injured groups, the spinal cord under T5 was removed and sacrificed. Group 4, 6, and 8 with spinal injury were treated with 30 mg / kg methylprednisolone. Histopathological examinations and immunohistochemical sampling were performed in two randomly selected rats from each group. 
Histopathological and immumohistochemical examination showed a significant decrease in cell necrosis, edema, hemorrhage and white matter-gray matter transition in methylprednisolone treated groups. The samples of the injuried spinal cord extracted from all rats and miR-30a and miR-17 gene expression levels were evaluated by real-time PCR.
Results: It was observered that miR-30a was significantly upregulated at the 12th hour and 24th hours after spinal cord injury and this upregulation was limited in the groups when the methylprednisolone was administered. It was observed that miR-17 was down-regulated after spinal cord injury and this down-regulation started to increase at the 6th hour and was the highest at 12 hours, and when methylprednisolone was administered, the down-regulation was found to decreased at the 6th and 12th hours.
Conclusion: Methylprednisolone was found to have a statistically significant effect with the miR-30a and miR-17 on spinal cord injury.


Key words: miRNA, methylprednisolone, spinal cord injury