Anacardiaceae ailesinden (Pistacia vera L. cv. Siirt) Lipaz enzimlerinin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of Lipase enzyme from Anacardiaceae (Pistacia vera L. cv. Siirt)
Yazar: CANAN MERİÇ
Danışman: PROF. DR. METİN BÜLBÜL
Dumlupınar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Lipazlar, lipitlerin ester bağlarının hidrolizini katalizleyen, birçok canlıda trigliseridlerin (gıdasal lipitlerin)sindirim, taşınım ve işleniminde önemli rol alan hidroliz reaksiyonlarının yanı sıra esterifikasyon ve transesterifikasyon reaksiyonlarını da katalizleme yeteneğine sahip olan esterazların bir alt sınıfı enzimlerdir. Lipazlar, kimyasal sentezi ve ayrıştırılması zor özel bileşiklerin üretimi ve ayrıştırılması, geniş spektrumlardaki substratları kullanabilme yeteneklerine sahip oluşları, hidrolitik reaksiyon katalizinde kofaktöre gereksinim duymamaları, yan ürün oluşumunu engellemeleri gibi özelliklerinden dolayı son yıllarda biyolojik, endüstriyel, vs… gibi kullanım alanları giderek artmaktadır. Bu çalışmada alternatif bir kaynak olarak siirt fıstığı tohumundan lipaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu hedeflenmiştir. Siirt fıstığı tohumundan lipaz enzimi saflaştırabilmek için; siirt fıstığı tohumlarının proteinleri yağsızlaştırılarak amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon kromotografisi metodları kullanılarak siirt fıstık tohumları lipazı saflaştırılmaktadır. Her basamakta Bradford metoduna göre protein tayini, jel filtrasyon yöntemiyle sephadexG-100 jelinde saflaştırılmış, titrimerik metod lipaz aktivite tespiti yapılmış ve spesifik aktivite hesaplanmıştır. Elde edilen enzimlerin saflığının tespiti için aktivite ve elektroforez (SDS-PAGE) tayini yapılmıştır. Yapılan işlemler sonucunda antepfıstığı tohumu lipazının 1,97 kat saflaştırılmış olduğu tespit edilmiştir. 
Siirt fıstığı tohumundan saflaştırılan enzim en yüksek aktiviteyi 45°C optimum sıcaklıkta ve optimum pH 8,8'de göstermektedir. Ayrıca stabil sıcaklık 45°C ve stabil pH 8,4 olarak tespit edilmiştir. Siirt fıstığı tohumundan elde edilen lipaz enziminin depo kararlılığını tespit etmek için, 120 saat süreyle aktivite ölçümleri yapılmıştır. Enzim aktivitesinin 120 saat sonunda 45°C de korunduğu gözlemlenmiştir. Triolenin substratı kullanılarak antep fıstığı tohumu lipazının Km ve Vmax değerleri hesaplanmıştır. Vmax 15,60 U/dk. mg ve Km 0,078 Mm enzim olarak hesaplanmıştır.

Abstract:
Lipases are an enzyme that catalyzes the hydrolysis of lipids. Lipases are a subclass of the esterases. Lipases perform essential roles in the digestion, transport and processing of dietary lipids ( triglycerides, fats, oils ) in organisms.Lipases serve important roles being exploited as cheap and versatile catalysts to degrade lipids in more modern applications. In the present work pistachios seed is choosen as an alternative source for purification and characterization of lipase.
           By purification of lipase from pistachios seed procure rem, deoiling of pistachios seeds protein procure ammonium sulfate precipitation purify by dialysis gel filtration chromatography methods. Protein concentration was determined by the Bradford method using Sephadex G-100 gel filtration column chromatography. In the and specific activity has been calculated as purification coefficient of 1.97 fold. Lipase activity was highest at PH 8.8 and at 45°C . Also stable activity showed at PH 8.4 and at 45°C.
          Pistachios seed's lipase stability is been tested for 120 hours and at the end of the test it has showed thah it's stability is protected at 45°C.
          Lipase substrate specificity has been calculated Vmax and Km. Their Vmax 15,60 U/dk.mg and Km 0,078 Mm enzyme, respectively.