Enzootik bovine leukosis virus infeksiyonunun Marmara bölgesinde serolojik ve moleküler yöntemler ile araştırılması
Detection of Bovine Leukemia Virus by using serological and moleculer methods in Marmara region
Yazar: HASAN DEĞİRMENCİ
Danışman: PROF. DR. NURİ TURAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antikorlar = Antibodies ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Genom = Genome ; Lösemi virüsü-sığır = Leukemia virus-bovine ; Marmara bölgesi = Marmara region ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sığır hastalıkları = Cattle diseases ; Sığırlar = Cattles

Özet:
Bu çalışmanın amacı Marmara bölgesinde, sığırlarda Bovine Leukemia Virus genomunun moleküler yöntemlerle saptanması ve ELISA ile anti-BLV antikorlarının tespitidir.Bu çalışmada Marmara bölgesindeki 9 ilçede toplam 13 adet çiftlikten 211 adet kan ve serum toplandı. ELISA için EDTA'sız kan tüpleri, PCR için ise EDTA'lı tüplere kan alındı. Kan serumları BLV'ye karşı oluşan antikorları saptamak için ELISA ile test edildi. Ayrıca total kandan BLV Proviral DNA'sının tespit için real-time ve konvansiyonel PCR kullanıldı. Örneklerden proviral DNA'nın izolasyonu için ticari DNA ekstraksyon kiti kullanıldı. BLV referans kontrol ve primerler kullanılarak PCR standardize edildi. ELISA ile 23 (%10.9) adet kan serumunda seropozitiflik tespit edildi. Örneklerin 24 adetinde (%11.379) BLV proviral DNA'sı konvansiyonel ve real-time PCR ile saptandı. BLV ?env gen? kısmi olarak sekanlandı ve filogenetik analiz yapıldı.Bu çalışma, Marmara bölgesinde EBL infeksiyonunun tanısına yönelik olarak real-time PCR'ın kullanıldığı ilk çalışmadır. Çalışma sonucunda ELISA ve PCR sonuçlarının yüksek oranda benzerlik gösterdiği ortaya konmuştur. Ayrıca sekans analizleri sonucunda 4 adet Türkiye BLV suşu Genotip 4 içerinde sınıflandırıldı.Sonuç olarak, bölgede ve tüm Türkiye'de EBL infeksiyonuna yönelik olarak risk analizlerini de kapsayan ve eradikasyona yönelik daha geniş çapta araştırmaların planlanması gerektiği görüşündeyiz.Anahtar Kelimeler: EBL, PCR, ELISA, Bovine Leukemia Virus, Marmara Bölgesi.

Abstract:
The aim of this study was to detect the genome of bovine leukemia virus (BLV) by molecular methods and antibodies to BLV by ELISA.In this study, 211 cattle belonging to 13 farms from 9 localities in Marmara region of Turkey were sampled. For ELISA, blood samples were taken into vacutainer without EDTA while for PCR blood had taken into tubes with EDTA. Sera samples were analysed by a commercial ELISA kit for precence of antibodies to BLV. In addition, real-time and conventionel PCR were used to detect proviral DNA of BLV in whole blood. The proviral DNA was extracted by using a commercial kit. The PCR was standardized using a positive control and primers. Antibodies to bovine leukosis virus (BLV) were detected in 23 cattle sera (10.9%) by ELISA belonging to thirteen farms in nine localities. The proviral DNA of the BLV was detected in the 24 (%11.37) of the samples by conventional PCR and also with real-time PCR.The ?env gene? of BLV was partially sequenced, and phylogenetic analysis was performed.This is the first study in which real-time PCR has been used to investigate EBL infection in cattle in the Marmara region. Results of PCR and ELISA were found to be correlated. Sequence analyses have shown that 4 Turkish BLV strains clustered within Genotype 4.In conclusion, further investigations are necessarry to establish risk analysis and to eradicate of EBL infection in the Marmara region and in Turkey.Key Words: EBL, PCR, ELISA, Bovine Leukemia Virus, Marmara.