İskemi-reperfüzyon modeli oluşturulmuş rat beyin dokusunda TRPM2 katyon kanallarının ekspresyonu
The expression of TRPM2 cation channels on rat brain tissue that has ischemia reperfusion model done
Yazar: FERHAT BALGETİR
Danışman: DOÇ. DR. CANER FEYZİ DEMİR
Fırat Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Beyin = Brain ; Melastatin = Melastatin ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Serebrovasküler bozukluklar = Cerebrovascular disorders ; Sıçanlar = Rats ; İskemi = Ischemia

Özet:
Beyin hasarına neden olan inmenin iki temel mekanizması iskemi ve hemorajidir. İskemik inmede, artmış oksidatif strese bağlı olarak beyin hücrelerinde meydana gelen apoptozise bağlı olarak fonksiyon bozukluğu oluşmaktadır. 
Bu çalışmada, iskemi-reperfüzyonun (İ-R) oksidatif stress ile aktive edilen Transient Reseptör Potansiyel Melastatin2 (TRPM2) kanal ekspresyonu üzerine etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır.
Çalışmada, 28 adet 8-10 haftalık Wistar albino cinsi erkek sıçanlar kullanıldı. Deney hayvanları her grupta 6 hayvan olacak biçimde 5 gruba ayrıldı. Kontrol grubuna deney süresince bir uygulama yapılmadı. Sham gruplarında (sham2-sham6) bilateral karotis kommunis arterler ortaya çıkarıldıktan sonra ciltleri kapatılıp deneyin 2.ve 6. saatinde dekapite edildi. İ-R gruplarında ise bilateral karotis kommunis arterler ortaya çıkarıldıktan sonra anevrizma klip'leri ile 45 dakika süre ile kliplenip ardından klipler açılarak İ-R2 grubunda 2 saat, İ-R6 grubunda 6 saat reperfüzyonu sağlandı. 
 Deney sonunda sıçanlar anestezi altında dekapite edildi ve beyin dokuları çıkartıldı. MDA ve TRPM2 mRNA düzeyleri için beyin dokuları çalışmanın sonuna kadar –80OC'de saklandı. Histolojik çalışma için rutin takip işlemi ile dokular parafin bloklara gömüldü. Bloklardan alınan kesitlere apoptotik hücrelerin belirlenmesi için TUNEL metodu, TRPM2 immünreaktivitesi için avidin-biotin-peroksidaz yöntemi uygulandı.
Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında İ-R6 grubunda belirgin olmak üzere İ-R gruplarında MDA, apoptozis ve TRPM2 seviyesi artış gözlendi. 
Deneysel iskemi-reperfüzyonun beyin dokusunda MDA, apoptozis ve TRPM2 seviyelerini arttırdığı, iskemi-reperfüzyonun beyin dokusunu etkilemesinin patofizyolojisinde TRPM2'nin önemli bir rol oynayabileceği kanaatine varıldı.

Anahtar kelimeler: İskemi-reperfüzyon, Sıçan, Beyin, TRPM2, Apoptozis

Abstract:
Stroke is a heterogeneous group of diseases caused by decreased perfusion of the brain due to occlusion of the blood vessels supplying the brain or a haemorrhage originating in them.  In ischemic stroke, apoptosis in the brain cells induced by the increased oxidative stress causes dysfunctions.
The main objective of this study is to analyze the effects of ischemia reperfusion (I-R) on Transient Receptor Potential Melastatin 2 (TRPM2) channel expression activated by oxidative stress.
28 Wistar albino 8-10 weeks old male rats were used in the study. Experimental animals were divided into 5 groups with 6 animals each. Control group was not administered with anything during the tests. In Sham groups (sham2 – sham6), after bilateral carotid communis arteries were extracted, the dermis was sealed and the rats were decapitated on the 2nd and 6th hours of the experiment. In I-R groups, after the bilateral carotid communis arteries were extracted, they were clipped using aneurysm clips for 45 minutes and then unclipped and left for reperfusion for 2 hours in I-R2 group and for 6 hours in I-R6 group.
At the end of the experiment, rats were decapitated under anesthesia and brain tissues were dissected. Brain tissues were stored in -80oC for MDA and TRPM2 mRNA levels until the end of the study. The tissues were buried in paraffin blocks with routine follow-up procedure for histologic study. TUNNEL method was applied to the sections removed from the blocks for determination of apoptotic cells and avidin-biotin-peroxidase method was applied for TRPM2 immunoreactivity.
It was observed that MDA, Apoptosis and TRPM2 levels increased in I-R groups, with a significant increase in the I-R6 group, when compared to the control group.
It was concluded that empirical ischemia reperfusion increased MDA, apoptosis and TRPM2 levels in brain tissues and TRPM2 could play a significant role in the pathophysiology of the effects of ischemia reperfusion on the brain tissue.

Keywords: Ischemia reperfusion, rats, brain, TRPM2, Apoptosis