Bazı polinükleer metal komplekslerinin alkalen proteaz, plazmid DNA üzerine etkilerinin ve antioksidan kapasitelerinin araştırılması
Investigation of effects on alkalen protease and plasmid DNA of polynuclear metal complex and antioxidant capacity
Yazar: ŞEVKİNAZ KONAK
Danışman: PROF. DR. İSMAİL ÖZMEN
Süleyman Demirel Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu çalısmada bazı metal komplekslerinin, Bacillus subtilis'den izole edilen alkalen proteaz enzimi ve plazmid DNA üzerine etkileri araştırılmış ve antioksidan özellikleri incelenmiştir. Alkalen proteaz üretimi uygun besi ortamında, Bacillus subtilis'in 37°C'de ve 180 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütülmesi ile gerçekleştirilmiştir. Amonyum sülfat çöktürmesi ve jel filtrasyon kromatografisi adımları ile enzim %9,9 verimde ve 69,6 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE elektroforez sonrası tek bant gözlenmiş ve protein molekülünün 30,0 kDa ağırlığında olduğu tespit edilmiştir.Çalışmamızda, komplekslerin proteaz enzim aktivitesi üzerinde aktive edici bir etki gösterdiği tespit edilmiştir. BHA'ya göre kıyaslandığında homo ve heterodinükleer bakır içeren komplekslerden B2'nin antioksidan aktivitesi diğer metal kompleksler ve ligandlardan daha fazladır. B2'den sonra en iyi antioksidan aktivite gösteren metal kompleksi B3, ligand B1'dir. Çalışmamızda homo ve heterodinükleer bakır içeren komplekslerin DNA'nın doğrusal formunu arttırdığı ve ortama hidrojen peroksidin ilave edilmesi ile bu komplekslerin etkinliklerinin arttığı ve süper sarmal yapının oldukça açıldığı gözlenmiştir. Bunlardan bazılarının DNA'yı tamamen parçaladığı bazılarının ise hidrojen peroksit ilavesi ile süper sarmal yapıyı tamamen parçaladığı gözlenmiştir.

Abstract:
In this study, the effects of some metal complexes on alkaline protease enzyme isolated from Bacillus subtilis and plasmid DNA were researched and also their antioxidant features were investigated. The production of alkaline protease enzyme was performed with the growth of Bacillus subtilis at 37°C and at a shaking rate of 180rpm in 24 hours. With the ammonium sulfate precipitation and gel-filtration chromatography steps, the enzyme was refined at 9,9 % of yield and 69,6 fold. After SDS-PAGE electrophorese, single band was observed and it was determined that the protein molecule was weighted at 30,0 kDa.In our study, it was determined that the complexes increased the activity of proteaz enzyme . According to BHA, when compared, the antioxidant activity of B2 from homo and heteronuclear complexes containing copper is more than the activity of other metal complexes and ligands. The metal complex, performing the best antioxidant activity subsequent to B2, is B3 and the ligand is B1. In this study, it was observed that homo and heteronuclear complexes containing copper raised the linear form of DNA and with the addition of hydrogen peroxide, the efficiency of these complexes was icreased and the super coiling was unwind. It was also observed that some of these completely lysed DNA and some others lysed the super coiling with the addition of hydrogen peroxide. In conclucion, it was determined that the complexes has an activating effect on enzyme activity.