Eritrosit süspansiyonlarının depolanma sürecinde eksozom/mikropartikül profilindeki değişikliklerin incelenmesi
Investigation of changes in profile of exosome/microparticles during the storage of erythrocytesuspensions
Yazar: MEHRDAD PASHAZADEH
Danışman: PROF. DR. HALUK BARBAROS ORAL
Bursa Uludağ Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı / İmmünoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Eksozomlar = Exosomes ; Eritrositler = Erythrocytes ; Kan transfüzyonu = Blood transfusion ; Partiküller = Particles ; İmmünomodülasyon = Immunomodulation

Özet:
Eksozomlar, çeşitli hücre tipleri tarafından salınan hücre dışı veziküllerdir. Bu veziküller membran hücreleri ile sitozolik proteinler, lipitler ve RNA arasında transfer için araç olarak görev yaparak önemli bir hücre içi iletişim modelini temsil eder. Bu çalışmada, eksozomların eritrosit süspansiyonlarının (ES) içinde depolanma süreci boyunca gösterdikleri değişimleri belirlemek amaçlanmıştır. Sağlıklı bağışçılardan (10) alınan tam kanlar eritrosit süspansiyonuna (ES) eşit miktarda iki ayrı kan torbasına aktarıldı. Torbalardan biri lökosit filtresinden geçirilerek lökositi azaltılmış (LA-ES) ve azaltılmamış ES'ler   (NL-ES) elde edildi ve eşit miktarda dört kan torbasına ayrıldı. 0, 14, 28 ve 42. günlerde incelenmek üzere 4°C de saklandı. Eksozomları önce karboksilateks boncuklar ile anti-CD9 antikorlarla kaplanır ve eksozom içeren örneklerin boncuklarla bağlanması gereken miktarı belirlemek için BCA Protein Assay yapılarak eksozom hacimleri belirlendi ve akan hücre ölçer ile araştırıldı. T ve Tc lenfosit kökenli eksozom seviyelerinde her iki grupta (lökositi azaltılmamış ve azaltılmış) azalma görülmüştür.T hücre kökenliler lökositi azaltılmış grupta 42.gün örneklerinde 0. güne göre anlamlı şekilde azalırken, T sitotoksik lenfosit kökenliler lökositi azaltılmamış grupta 14 ve 42. gün örneklerinde 0. güne göre anlamlı şekilde azalma göstermiştir (p<0,05). B lenfosit kökenli eksozom seviyelerinde de her iki grupta azalma görülmüştür. G-MDSC kökenlı eksozomlar her iki grupta 0, 14 ve 28. günlerde anlamlı şekilde azalmıstır (p<0,05). 42. gün örneklerinde bu eksozomların düzeyleri belirgin şekilde yüksek bulunmuştur. Ayrıca lökositi azaltılmış ve azaltılmamış gruplar arasında da istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmamıştır (p>0,05). Çalışmadan elde edilen sonuclar immün baskılayıcı özellikteki MDSC ve G-MDSC kökenli eksozomların immünmodülasyonda rol oynadığı düşündürmektedir. Çalışma sonuçları eksozomların lökoredüksiyondan etkilenmediklerini göstermiştir. İmmünmodülasyonun lökoredüksiyonla engellenememesinin nedenlerinden birisi de filtrelerden geçebilen eksozomlar olabilir.

Abstract:
Exosomes are EVs (Extracellular Vesicles) released by various cell types and play roles in cell-cell communication. These extracellular vesicles (EVs) represent an important mode of intercellular communication by serving as vehicles for transfer between cells of the membrane and cytosolic proteins, lipids, and RNA. Whole blood from healthy donors (10) was transferred to two separate blood bags by an equal amount converted into erythrocyte suspension (ES). One of the bags was passed through the leukocyte filter to obtain reduced leukocyte (LA-ES) and non-reduced ESs (NL-ES) and divided into four equal blood bags. Flow cytometry was used to identify and quantify exosomes in the samples on the 0th, 14th, 28th and 42nd days at 4 °C. The exosomes were first coated with anti-CD9 antibodies with carboxylates beads and exosome volumes were determined by BCA Protein Assay to determine the amount of exosome-containing samples to be bound by beads and investigated by flow cytometry. T and T cytotoxic lymphocyte-derived exosome levels in both groups (leukocyte reduced and non leukocyte reduced) decreased in the group of leukocytes in the cell-derived group on the 42th day decreased significantly less than the 0th day, Tc lymphocyte origin in the group of the day 14th and 42th in the leukocyte unreduced samples 0 (p <0.05). The exosomal levels of B lymphocytes were decreased in both groups. The leukocyte group was significantly reduced on the 28th and 42nd-day samples compared to day 0 (p <0.05). MDSC and G-MDSC exosomes decreased significantly in both groups (p <0.05). The results obtained from the study suggest that immunosuppressive MDSC and G-MDSC exosomes may play a role in immunomodulation. The effects of transplanted exosomes on the transfusion receptor are not yet known. The results of the study showed that exosomes are not affected by leukoreduction. One of the reasons why immunomodulation cannot be prevented by leukoreduction may be exosomes that can pass through filters.