İneklerde natif ve dondurulmuş embriyo nakli üzerine saha çalışması
A field study on fresh and frozen embryo transfer in cows
Yazar: SEYRANİ MERSİN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MUSTAFA KAYA
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
Derece: Doktora, 2009
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Mersin S, İneklerde natif ve dondurulmuş embriyo nakli üzerine saha çalışması, Yüzüncü Yıl Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Dölerme ve Sun'i Tohumlama Anabilim Dalı, Doktora Tezi, VAN, 2009. Bu çalışmada ineklerde natif ve dondurulmuş embriyo transferinin saha şartlarında uygulanması ve sonuçlarının araştırılması amaçlandı. Çalışmanın birinci kısmında verici ineklerden süperovulasyon ile çoklu embriyo üretimi, değerlendirmesi ve nakli, ikinci kısmında ise ithal edilen dondurulmuş embriyoların alıcılara nakli gerçekleştirildi. Çalışmada, 18-21 aylık 2 adet düve ve 3?6 yaşlı 4 adet inek verici, 3-7 yaşlı 25 adet inek ise taşıyıcı olarak toplamda 31 adet hayvan kullanıldı. Hayvanlar 11 gün arayla 2 PGF2? (i.m.; 15 mg of Kloprostenol) enjeksiyonu ile senkronize edildi. Birinci PGF2? uygulamasından sonraki 8. gün sabah başlayan süperovulasyon, 17.6 mg oFSH'ın (Ovagen, 1., 2., 3. ve 4. günde azalan dozlar halinde sırasıyla 2.55, 2.55, 2.55, 2.55, 2.12, 2.12, 1.27 ve 1.27 mg günlük 2 enjeksiyon) bölünmüş dozlar halinde enjeksiyonuyla uyarıldı. İkinci PGF2? enjeksiyonundan 36 saat sonra 4 gün süreyle, her 12 saate bir kızgınlık tespiti yapıldı. Vericiler kızgınlığın gözlenmesinden sonra 10., 24. ve 36. saatte 3 kez dondurulmuş sperma ile tohumlandı. Dondurulmuş sperma payetleri 34 0C'deki suda 30 sn süreyle çözüldü. Vericilerde oluşan ovaryum yanıtları ultrason yardımıyla folikül ve korpus luteum takibi ve uterus yıkamasından sonra elde edilen embriyo sayısı ile belirlendi. Östrüs tespitinden 7 gün sonra, epidural anestezi ve hafif sedasyon altındaki vericilerin uterusları, 2 kanallı Foley kateteri kullanılarak 1000 ml hazır yıkama medyumuyla yıkandı. Embriyoların yıkanması, değerlendirilmesi ve transfer pipetinde konumlandırılarak hemen naklinde, kullanıma hazır % 0.4 bovine serum albumin (BSA) ve 25 mg/L oranında Kanamycin Sulphate içeren Emcare? Holding Solution (ICPbio) kullanıldı. Nakledilebilir olarak değerlendirilen 6 adet embriyo hemen epidural anestezi altındaki taşıyıcılara nakledildi. Embriyolar korpus luteumla ipsilateral kornuya nakledildi. Çalışmanın ikinci kısmında, 9 adet dondurulmuş embriyo kullanıldı. Dondurulmuş embriyolar alıcılara kızgınlığın başlamasından 183±3saat sonra nakledildi. Vericilerde FSH ve PGF2? ile östrüs arasında geçen ortalama süre sırasıyla düvelerde 145.00±0.70 ve 55.00±7.77 ineklerde 159.00±12.66 ve 70.42±7.19 saat olarak saptanmıştır. Taşıyıcı ineklerde PGF2? ile östrüs arasında geçen süre 77.20±7.75 idi. Vericilerde süperovulasyona cevap olarak oluşan folikül ve korpus luteum sayısı sırasıyla, 6.17±1.17 ve 4.67±1.12 olarak bulundu. Verici başına ortalama 3.75±0.75 embriyo elde edildi. Korpus luteum sayısı ile elde edilen embriyo sayısı arasındaki ilişki önemli bulundu (P<0.05). Folikül sayısı ile embriyo sayısı arasındaki koreleasyon önemsizdi (P>0,05). Düvelerde serviks geçilemediğinden uterus yıkanamadı. Verici başına ortalama nakledilebilir embriyo sayısı 1.5 olarak bulundu. Natif ve dondurulmuş embriyo transferinden sırasıyla % 50.00 ve %44.44 oranında gebelik elde edildi. Çalışma sonunda natif ve dondurulmuş embriyo transferinin saha şartlarında uygulanabilir olduğu sonucuna varıldı.

Abstract:
Mersin S, A field study on fresh and frozen embryo transfer in cows, Department of Reproduction and Artificial Insemination, Institute of Health Sciences of Yüzüncü Yil University, Ph.D Thesis, Van, 2009. The aims of the study were to evaluate that result of embryo transfers by using fresh or frozen ones in the field conditions. In the first part of the study, embryo production by means multiple ovulation, collecting, classification and transfer of embryos, in the second part, transfer of frozen thawed embryos by direct transfer method and their results were evaluated. In the study, 2 heifers and 38 cows totally 40 animals were used. Donors, 2 heifers aged 18-21 months and 4 cows aged 3-6 years old and recipients, 25 cows aged 3-8 years old, were synchronized by using PGF2? analogue (15 mg of Cloprostenol, i.m.) 11 days apart. Superovulation was induced by twice daily injections of overall 17.6 mg ovine FSH (Ovagen) that was given by decreasing doses as follow, 2.55, 2.55, 2.55, 2.55, 2.12, 2.12, 1.27 and 1.27 mg on 8-12 days after I.PGF2?. Oestrous detection was performed every 12 h for 4 days starting 36 h after the second PGF2? injection. The donors were inseminated tree times with frozen semen at 10, 24 and 36 h after the first standing heat. Payets were thawed in a water bath at 340C for 30 seconds. The superovulation responses of donors were estimated by scanning of ovarian follicle and corpus luteum by using an ultrasound equipped with a 5/7.5 MHz transducers and embryos after uterine flushing. To embryo collection each donors? uterus was flushed by using Foley catheter with 1000 ml of (ICPbio Emcare Complete) medium on 7 day after detection of oestrus, under epidural anaesthesia and light sedation. The complete holding solution, containing bovine serum albumin, % 0.4, and Canamycin sulphate, 25 mg/l was used to processing of embryos such as washing, searching, evaluating and loading of embryos into transfer payets. The six transferable embryos were transferred into uterine horn ipsilateral to the recipient?s corpus luteum, under epidural anaesthesia, as soon as possible. In the second part of the study, 9 frozen embryos were used. Embryos were thawed in water bath at 35oC for 20 sec and loaded transfer gun. Frozen thawed embryos were transferred into recipient by direct transfer method within 183±3 hours after onset of natural oestrus. The time from FSH and PGF2? to onset of standing heat in donors was found to be in heifers, 145.00±0.70 and 55.00±7.77, in cows 159.00±12.66 and 70.42±7.19 hours. The time from PGF2? to standing heat in the recipients was found 77.20±7.75 hours. The response of superovulation in based ovarian follicle and corpus luteum was found to be 6.17±1.17 and 4.67±1.12, respectively. The mean embryo per donor was found to be 3.75±0.75. The correlation between numbers of corpus luteum and collected embryos was found statistically important (P<0.05). There was not a correlation between numbers of follicle and collected embryos (P>0.05). Because of permanent problems with inserting the Foley catheter into cervical opening, donor heifers' uterus could not be flushed. The mean of transferable embryos per donor was found to be 1.5. The pregnancy rate after transfer of fresh and frozen embryos was found to be 50.00 and 44.44 %, respectively. It was concluded that transfers with fresh or frozen embryos could be preferred for rapid genetic improvement in field conditions.