Konjonktivitli hastalarda adenovirüsün çeşitli yöntemlerle araştırılması
Investigation of adenoviruses in patients with conjunctivitis by various methods
Yazar: ASLI KİRAZ
Danışman: PROF. DR. SELMA GÖKAHMETOĞLU
Erciyes Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Adenovirüsler = Adenoviridae ; Hücre kültürü = Cell culture ; Konjonktivit = Conjunctivitis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Amaç: Adenovirüsler, toplum kökenli ve nozokomiyal viral konjonktivit salgınlarının en sık görülen etkenidir. Fiziksel ve kimyasal etkenlere dirençli olmaları, kolay bulaşabilmeleri nedeniyle adenoviral göz enfeksiyonlarının hızlı ve doğru tanısı çok önemlidir. Bu çalışmada, adenoviral konjonktivit şüpheli hastaların konjonktival sürüntü örneklerinden hücre kültürü ve PCR yöntemleri uygulanarak Adenovirüs araştırılması amaçlandı.
Gereç ve Yöntem: Mart 2012- Aralık 2012 tarihleri arasında adenoviral konjonktivit düşünülen 50 hastadan konjonktival sürüntü örneği alındı. Örneklerde Adenovirüs DNA real-time PCR (Qiagen, Almanya) yöntemi ile araştırıldı. Örnekler HEp-2 hücre kültürüne ve shell-vial hücre kültürüne ekildi. HEp-2 hücre kültüründe virüs izolasyonu, iki farklı immünofloresan kiti (Argene, Fransa) ve (Vircell, İspanya) kullanılarak doğrulandı. Hücre kültürü altın standart kabul edilerek PCR ve shell-vial hücre kültürü yöntemlerinin duyarlılık ve özgüllükleri hesaplandı.
Sonuçlar: PCR yöntemiyle 50 adet konjonktival sürüntü örneğinden 23?ünde (%46) Adenovirüs DNA tespit edildi. HEp-2 hücre kültüründe 19 (%38) örnek Argene kiti ile, 13 örnek ise Vircell kiti ile gösterildi. Shell-vial hücre kültürü sadece 24 klinik örneğe uygulanabildi ve 17 örnekte üreme saptandı. Bu yöntemle pozitif bulunan 17 örnek, aynı zamanda PCR ve HEp-2 hücre kültürü yöntemleriyle de pozitif olarak bulundu. Dört örnekte Adenovirüs DNA pozitif olmasına rağmen her iki hücre kültürü yöntemiyle de virüs izole edilemedi. İki örnek PCR ve HEp-2 hücre kültürü yöntemleriyle pozitif bulunurken, shell-vial hücre kültüründe Adenovirüs izole edilemedi. PCR yönteminin duyarlılığı % 100, özgüllüğü % 87, shell-vial hücre kültürü yönteminin duyarlılığı % 89 ve özgüllüğü % 100 olarak belirlendi.
Tartışma: Adenoviral göz enfeksiyonlarında hücre kültürü yöntemi halen önemini korumakla beraber hızlı tanı sağlayamamakta, ayrıca deneyimli personel ve donanımlı laboratuvar ortamı gerektirmektedir. Shell-vial hücre kültürü yöntemi, nisbeten daha hızlı sonuç vermektedir ancak iki örnekte HEp-2 hücre kültüründe virüs üretilmesine rağmen shell-vial hücre kültüründe üretilememiştir. Hücre kültürü yöntemlerine kıyasla en kısa sürede sonuç veren ve duyarlılığı son derece yüksek olan real-time PCR yönteminin, adenoviral göz enfeksiyonlarının tanısında kullanılmasının daha uygun olacağı kannatine varılmıştır.

Anahtar Kelimeler: Adenovirüs, hücre kültürü, konjonktivit, PCR.

Abstract:
Purpose: Adenoviruses are the most common causative agents of epidemics of community acquired and nosocomial conjunctivitis. Adenoviruses are resistant to physical and chemical factors and they can spread easily. Due to these factors, rapid and accurate diagnosis is very important in adenoviral eye infections. In this study, it was aimed to investigate adenoviruses from conjunctival swab samples of patients suspected of adenoviral conjunctivitis by cell culture and PCR methods.
Materials and Methods: Conjunctival swab samples from patients suspected of adenoviral conjunctivitis were taken between March 2012- December 2012. Adenovirus DNA was investigated by real-time PCR (Qiagen, Germany) method in specimens. Samples were inoculated on HEp-2 cell culture and shell-vial cell culture. Virus isolation in HEp-2 cell culture was confirmed with two immunofluorescence kits (Argene, France) and (Vircell, Spain). Considering HEp-2 cell culture as gold standart, sensitivities and specifities of PCR and shell-vial culture methods were calculated.
Results: Adenovirus DNA was found positive in 23 (%46) of 50 conjunctival samples by real-time PCR. Virus isolation in HEp-2 cell culture was shown in 19 (38%) samples by Argene kit and 13 (26%) samples by Vircell kit. Shell-vial culture could be performed in 24 swab samples and 17 of samples were found positive. These 17 samples that found positive in shell-vial culture were also positive with PCR and HEp-2 cell culture methods. Additionally, 4 samples were found positive by PCR but we could not isolate adenovirus by HEp-2 and shell-vial cell culture methods. Two samples that were found positive with PCR and HEp-2 cell culture methods were found negative by shell-vial cell culture. The sensitivities and specifities were found as % 100 and % 87 respectively for PCR, % 89 and % 100 respectively for shell-vial cell culture.
Conclusion: The cell culture method is stil important in adenoviral eye infections but can not provide rapid diagnosis. Additionally, cell culture method requires experienced staff and well-equipped laboratory conditions. Shell-vial cell culture method provides relatively more rapid diagnosis but adenoviruses could not be isolated by shell-vial cell culture in two samples that were found positive by PCR and HEp-2 cell culture methods. In adenoviral eye infections, compared with the cell culture methods, it is considered that real-time PCR is a more useful method that gives results in the shortest period of time with high sensitivity.

Keywords: Adenovirus, cell culture, conjunctivitis, PCR.