Farede oluşturulan Leishmaniasis modelinde konvansiyonel yöntemlerle enfeksiyon takibinin yapılması
Model of Leishmaniasis in mice with conventional methods and monitoring infection
Yazar: ALİ HUSSEİN M. AFANDY
Danışman: DOÇ. DR. FUNDA DOĞRUMAN AL
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Enfeksiyon = Infection ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Fareler = Mice ; Leishmania = Leishmania ; Seroloji = Serology ; Teşhis = Diagnosis

Özet:
Leishmaniasis, Dünya Sağlık Örgütü Tropikal Hastalıkları Araştırma 
Merkezi'nin önemli kabul ettiği altı hastalıktan birisidir. Bu hastalıkta; Visseral 
Leishmaniasis (VL), Kutanöz Leishmaniasis (KL) ve Mukokütanöz 
Leishmaniasis (MKL) olmak üzere üç  farklı klinik tablo ortaya çıkmaktadır.  
VL; öldürücü  leishmaniasis  parazit hastalığı olup, tropikal ve
subtropikal bölgelerde görülür.  L.donovani Batı Afrika ve Hindistan?da, 
L.infantum  ise  Avrupa, Kuzey Afrika ve Latin Amerika?da yaygın suş olarak 
görülmekte olup, ilaca direncin giderek artması nedeniyle erken tanı, tedavide 
büyük önem taşımaktadır. VL tanısı zor ve invazivdir. Dalak aspirasyonu 
tanıda duyarlılığı yüksek olmasına rağmen hayati riski taşımakta, lenf ve
kemik iliği aspirasyonu ise invaziv yöntemlerdir.
Dünya Sağlık Örgütünün yayınladığı (Leishmaniasis Worldwide and 
Global Estimates of Its Incidence)   raporunda her yılı yaklaşık 0.2  - 0.4 
milyon  VL vakası rapor edilmektedir. VL vakalarının %10 kadarı ölümle 
sonuçlanmaktadır. Tahmini olarak yılda 20.000  - 40.000 VL nedeniyle kişi
hayatını yitirdiği bildirilmektedir.
Çalışmamızda  Leishmania infantum   (MONI/EP126) suşu ile BALB/C 
farelerde VL fare modeli oluşturmak  ve enfekte farelerdeki enfeksiyonun
mikroskobik, kültür ve serolojik olarak ELISA yöntemiyle üç aylık sürede 
takibinin yapılması amaçlandı. Parazitin farklı promastigot formlarının immun 
yanıt üzerine etkisi, farelerdeki anti-leishmania IgG yanıtının ELISA 
yöntemiyle spektrofotometrik olarak saptanan OD düzeylerinin ölçümleriyle 
yapıldı.Enfektif fare grupları prosiklik promastigot (PP), metasiklik promastigot 
(MP) ve her iki formu içeren total promastigotlarla (TP) enfekte edildi. Aynı 
zamanda kontrol grubu olarak sağlıklı fareler kullanıldı.
MP ile enfekte edilen grupta  Geimsa boyama ve mikrokültür 
yöntemiyle PP formla enfekte edilen gruba göre daha erken enfeksiyon 
oluşturduğu tespit edilmiştir. Çalışmamızda aynı anda kan örneklerine 
uyguladığımız direkt mikroskobinin duyarlılığı  %25  - 81.8 mikrokültür 
yönteminin ise duyarlılığı %72.5 - 100 arasında saptanmıştır. Mikrokültür 
yöntemi leishmaniasis tanısında kısa sürede sonuçlanan, pratik, güvenilir ve 
düşük maliyeti olan bir yöntem olup, direk mikroskobik incelemeye ve klasik
kültür yöntemine göre daha üstündür.
ELISA sonuçlarında birinci ayda üç grupta da kontrol grubuna göre 
antikor yanıtının yüksek olduğu, ancak birinci PP ve TP gruplarının OD 
düzeylerinin MP grubundan yüksek olduğu gözlenmiştir. İkinci ayda MP 
grubunun OD düzeyinin diğer iki gruptan da yüksek olduğu, üçüncü ayda ise 
MP ve TP gruplarının OD düzeylerinin PP grubundan daha yüksek olduğu 
saptandı. MP ile enfekte grupta ilk ayda diğer enfekte gruplara göre antikor 
düzeyinin daha düşük saptanması, enfeksiyon sonrasındaki ilk dönemde 
MP?in immun sisteminden kaçış mekanizmaları ve makrofaj içerisinde sinyal 
yolaklarını, gen ekspresyonu gibi fonksiyonları inhibe etmesinden 
kaynaklandığı düşünülmektedir.
Deneysel çalışmalarda aşı üretimi için parazitin formlarının eldesi ve
aşı hedefi olarak aday gen bölgelerinin belirlenmesi amacıyla faklı 
promastigot formların üzerinde çalışmaların sürdürülmesi faydalı olacaktır.

Abstract:
Visceral leishmaniasis (VL) is a potentially fatal parasitic disease of the 
tropics and the subtropics.  Leishmania. donovani in East Africa and the 
Indian subcontinent and  Leishmania. infantum in Europe, North Africa, and 
Latin America. With the increasing incidence of drug resistance in endemic 
areas, early case-finding and accurate diagnosis for effective treatment is an 
essential component of VL control. VL diagnosis was complex and invasive 
(direct microscopic examination of splenic, lymph gland, or bone marro
aspirate).
According to the report published by the World Health Organization 
about the leishmaniasis, Based on these estimates, approximately 0.2 to 0.4 
cases and 0.7 to 1.2 million VL and  Cutaneous Leishmania  (CL) cases,
respectively, occur each yearUsing an overall case-fatality rate of 10%, we
reach a tentative estimate of 20,000 to 40,000 leishmaniasis deaths per year.
İn our  research we have injected the BALB / C mice with  Leishmania 
infantum  (MONI/EP126)    for  create  the  leishmaniasis disease and follow
infection with three method  microscopy, culture and serological  Enzymelinked Immunosorbent Assay )ELISA( method.  Aimed to evaluated  the 
infection by  three month period  and  in infection, we used  three different 
promastigote forms effect of the parasite on the immune response in mice o
different forms of anti-leishmania IgG OD measurements  was determined by
ELISA. 
The  mice groups was; procyclic promastigot (PP), metacyclic 
promastigot (MP), containing two  forms  total promastigotes (TP) and healthy 
mice were used in control group.In our studies we found the  MP group   Geimsa staining  and microculture method was early infection befor  PP group. Direct microscopy
sensitive %25 - 81.8 whereas the microculture method was  %72.5 - 100 as 
a result the microculture method is more sensitive than  direct microscop
method.
Microculture method a short time, resulting diagnosis of leishmaniasis,
quick, reliable and low-cost method. Microculture method is better than direct 
microscopic and classical culture method.
According to the results, in  ELISA?s method the  response of the three 
groups according to  the control group in three months was high. In the first 
month, in PP and TP groups the OD levels  was  higher than the that level in  
MP group. In the second month MP group  was  higher than the two groups. 
In the third month MP  and TP groups was  higher than the PP group. OD 
levels in MP group was low in the first month due to   infection escape from 
the immune responses that would otherwise be directed against it. However, 
it is also necessary to inhibit numerous macrophage functions, particularly 
those involved in immune surveillance and macrophage activation, at either
the protein or gene expression level.
In experimental studies, In order to determine gene regions vaccine 
targeted  for vaccine production, it is recomended to obtain  parasite forms 
and  In our studies we found the  MP group   Geimsa staining  and 
microculture method was early infection befor  PP group. Direct microscopy
sensitive %25 - 81.8 whereas the microculture method was  %72.5 - 100 as 
a result the microculture method is more sensitive than  direct microscopy
method.
Microculture method a short time, resulting diagnosis of leishmaniasis,
quick, reliable and low-cost method. Microculture method is better than direct 
microscopic and classical culture method.
According to the results, in  ELISA?s method the  response of the three 
groups according to  the control group in three months was high. In the first 
month, in PP and TP groups the OD levels  was  higher than the that level in  
MP group. In the second month MP group  was  higher than the two groups. 
In the third month MP  and TP groups was  higher than the PP group. OD 
levels in MP group was low in the first month due to   infection escape from 
the immune responses that would otherwise be directed against it. However, 
it is also necessary to inhibit numerous macrophage functions, particularly 
those involved in immune surveillance and macrophage activation, at either
the protein or gene expression level.
In experimental studies, In order to determine gene regions vaccine 
targeted  for vaccine production, it is recomended to obtain  parasite forms  
and continue to work on the different forms of promastigote.In our studies we found the  MP group   Geimsa staining  and  microculture method was early infection befor  PP group. Direct microscopy sensitive %25 - 81.8 whereas the microculture method was  %72.5 - 100 as 
a result the microculture method is more sensitive than  direct microscopy method.
Microculture method a short time, resulting diagnosis of leishmaniasis,
quick, reliable and low-cost method. Microculture method is better than direct microscopic and classical culture method.
According to the results, in  ELISA?s method the  response of the three 
groups according to  the control group in three months was high. In the first 
month, in PP and TP groups the OD levels  was  higher than the that level in  
MP group. In the second month MP group  was  higher than the two groups. 
In the third month MP  and TP groups was  higher than the PP group. OD 
levels in MP group was low in the first month due to   infection escape from 
the immune responses that would otherwise be directed against it. However, 
it is also necessary to inhibit numerous macrophage functions, particularly 
those involved in immune surveillance and macrophage activation, at either 
the protein or gene expression level.
In experimental studies, In order to determine gene regions vaccine 
targeted  for vaccine production, it is recomended to obtain  parasite forms  
and continue to work on the different forms of promastigote.. continue to work on the different forms of promastigote.