LX2 hücre hattında silibinin'in fosfatidilserin/IL-6/GAS6 /AXL metabolizması üzerine etkisi
Effect of silibin on phosphatidylserine/IL-6/GAS6/AXL metabolism in LX2 cell line
Yazar: ŞÜHEDA GÖKBULUT
Danışman: PROF. DR. GÜLDEN BAŞKOL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Hepatik fibrozis, karaciğerde hasar oluşturan tekrarlayıcı veya kronik uyarılara sekonder gelişen, bağ dokusunun progresif birikimiyle sonuçlanan "yara iyileşmesi benzeri" karmaşık ve dinamik bir süreçtir. Bu süreçte GAS6/AXL yolağının, hepatik stellat hücrelerin (HSC) aktivasyonuna katılarak karaciğer fibrozisi ile birlikte çeşitli karaciğer hastalıklarında yeni bir terapötik hedef olabileceği bildirilmiştir. Bununla birlikte, fosfatidilserin (PS) hücre zarının bir bileşeni olan fosfolipittir ve apopitoz sürecinde hücrelerin yüzeyinde eksternalize olur. İnsan karaciğer fibrozisinin, özellikle sirozun tamamen çözülmesini sağlamak için insanlarda aktifleştirilmiş HSC'lerin/miyofibroblast (MFB) hücrelerin apopitozunun indüklenmesi gereklidir. Ayrıca, hepatik fibrozis sürecinde interlokin-6 (IL-6), doku yaralanmalarına yanıt olarak olarak bağışıklık hücreleri tarafından üretilen ve akut yanıtlar, hematopoez ve bağışıklık reaksiyonları gibi hücresel süreçlerde rol oynayan önemli bir sitokindir.
Silibinin, süt devedikeni bitkilerinin tohumlarından izole edilen flavonolignan ekstraktının ana bileşenidir. Bunun yanı sıra, antioksidan, antienflamatuar ve antifibrotik gücünden dolayı başta kronik karaciğer hastalıkları, siroz ve hepatosellüler karsinom olmak üzere farklı karaciğer rahatsızlıklarında sıklıkla kullanılmaktadır.
Yapılan bu tez projesinde; insan LX2 hücre hattında silibininin GAS6/AXL yolağı, PS ve IL-6 ile olan ilişkisini araştırdık.
Çalışmamızda, LX2 hücrelerine 96 saat 50 μM silibinin uyguladık ve silibininin kontrol grubuna göre koloni oluşumunu ve migrasyonu anlamlı olarak inhibe ettiğini (p<0.05, p<0.001), erken ve geç apopitozun indüklenmesine bağlı olarak total apopitozu anlamlı bir şekilde arttırdığını (p<0.05) bulduk. Hücre döngüsünde ise, silibininin hepatik stellat hücrelerini istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde G0/G1 fazında tuttuğunu (p<0.001) bulduk. Bununla birlikte, silibininin GAS6 ve PS seviyelerini istatistiksel olarak anlamlı bir şekilde arttırdığını (p<0.05, p<0.05), AXL ve IL- seviyelerini ise düşürdüğünü (p<0.01, p<0.05) gözlemledik.
Sonuç olarak, silibininin LX2 hücre hattında koloni oluşumunu ve migrasyonu azaltması, apopitozu indüklemesi ve aktif olan HSC'leri G0/G1 evresinde tutması antifibrotik etkinliğinin bir göstergesidir. Ayrıca, silibininin GAS6 seviyelerini arttırması ve AXL seviyelerini düşürmesi ile birlikte PS seviyelerini arttırması silibininin fibrozis sürecinin geri döndürebilir olmasında etkili olabileceğini göstermektedir. Silibininin PS seviyelerini arttırması apopitozun indüklenmesinde önemli bir etkidir çünkü aktif olan HSC'ler de hedef, patojenlerin ve hepatotoksinin yok edilerek sürecin geri döndürebilir olmasını sağlamaktır. Silibinin antifibrotik etkilerini gösterirken apopitoz mekanizmasını kullanmış olabilir ancak bu mekanizmaların aydınlatılabilmesi için daha fazla çalışmaya ihtiyaç olduğunu düşünmekteyiz.

Anahtar Kelimeler: Hepatik fibrozis; LX2, GAS6/AXL; PS; Silibinin

Abstract:
Hepatic fibrosis is a complex and dynamic "wound healing-like" process that develops secondary to repetitive or chronic stimuli that damage the liver, resulting in progressive accumulation of connective tissue. In this process, it has been reported that the GAS6/AXL pathway may be a new therapeutic target in various liver diseases with liver fibrosis by participating in hepatic stellate cell (HSC) activation. Besides, phosphatidylserine (PS) is a phospholipid, a component of the cell membrane, and is externalized on the surface of cells during apoptosis. Induction of apoptosis of activated HSC/myofibroblast (MFB) cells is necessary to achieve complete resolution of human liver fibrosis, particularly cirrhosis. Moreover, in the process of hepatic fibrosis, interlokin-6 (IL-6) is an important cytokine produced by immune cells in response to tissue injuries and involved in cellular processes such as acute responses, hematopoiesis, and immune reactions.
Silibinin is the main component of flavonolignan extract isolated from the seeds of milk thistle plants. In addition, due to its antioxidant, anti-inflammatory and antifibrotic power, it is frequently used in different liver diseases, especially chronic liver diseases, cirrhosis and hepatocellular carcinoma.
In this thesis project; we investigated the relationship of silibinin with the GAS6/AXL pathway, PS and IL-6 in the human LX2 cell line.
In our study, we applied 50 μM silibinin to LX2 cells for 96 hours and found that Silibinin significantly inhibited colony formation, migration (p<0.05; p<0.001) and increased total apoptosis significantly (p<0.05) due to the induction of early and late apoptosis compared to the control group. In the cell cycle, we found that silibinin significantly arrested hepatic stellate cells in G0/G1 phase (p<0.001). However, we observed that silibinin significantly increased GAS6 and PS levels (p<0.05, p<0.05), and decreased AXL and IL-6 levels (p<0.01, p<0.05).
In conclusion, decreased colony formation, induction of apoptosis, and arrested of active hepatic stellate cells in the G0/G1 phase are indicators of the antifibrotic activity of silibinin. Increasing PS levels is an important effect in inducing apoptosis because the target in active hepatic stellate cells is to destroy pathogens and hepatotoxin so that the process is reversible.

Key Words: Hepatic fibrosis; LX2, GAS6/ AXL; PS; Silybum Marianum