Behçet hastalarında CD127 ve FOXP3 taşıyıcılığı açısından Treg Hücreleri, BTLA (CD272), osteoprotegerin ve sCTLA düzeylerinin araştırılması
Levels of BTLA,carriers in terms of CD127 and FOXP3 Treg Cells, BTLA (CD272), osteoprotegerin and sCTLA in Behcet's disease investigation
Yazar: NESRİN DEMİR
Danışman: DOÇ. DR. N. FULYA İLHAN
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Behçet sendromu = Behcet syndrome ; Osteoprotegerin = Osteoprotegerin ; T lenfositleri-düzenleyici = T lymphocytes-regulatory

Özet:
Behçet hastalığı (BH) nörolojik tutulum, tekrarlayan oral ve genital ülserler, artrit, deri lezyonları, oküler ataklar ile tanımlanan kronik, inflamatuvar vaskülit ile karekterize bir hastalıktır Hastalığın tekrarlayan yapısı ve tedaviye cevap azlığı etyopatogenezinin tanımlanmasını zorlaştırır.Periferik toleransın önemli bir bileşeni, CD4+CD25+Foxp3+ regülatör T hücrelerini içeren regulatör fonksiyonları olan lenfositler tarafından temsil edilir. T lymphocyte associated antigen-4 (CTLA-4) lenfosit aktivasyonun engelleyen bir molekül olarak tanımlanmıştır. Soluble CTLA (sCTLA) ise ekstrasellüler olarak salgılanan ve Treg hücrelerinin fonksiyonel bir belirteci olarak tanımlanan CTLA-4'ün bir formudur. B ve T lymphocyte attenuator (BTLA, CD272) B hücreleri, T hücreleri, dendritik hücreleri (DC) , natural killer (NK) hücreleri ve makrofajlar tarafından eksprese edilen lenfoid hücrelere özel bir hücre yüzey reseptörüdür ve inhibitör sinyallere eşlik eder. Osteoprotegerin (OPG) ve onun ligandının (RANKL) immün sisteminin fonksiyon ve düzenli gelişmesini kontrol etmekte anahtar bir rolü vardır.Bu çalışma, Behçet hastalarında CD4+CD25+Foxp3+ regülatör T hücreleri (Tregs), sCTLA, BTLA ve osteoprotegerinin etkisi olup olmadığını araştırmak amacıyla planlandı. Çalışmada kısmen otoimmün bir hastalık olan BH'da, inhibitor reseptörlerin rollerini tanımlamak hedeflendi. CD4+CD25+Foxp3+ regulatör T hücreleri, sCTLA, BTLA ve OPG'in düzeylerini karşılaştırmak için 25 Behçet hastası, yaş ve cinsiyet olarak denk olan 20 sağlıklı kontrol bu çalışma kapsamı içine alındı. Oküler komplikasyonlu (9 hasta aktif oküler ataklı ve 2 hasta inflamatuvar artritli) ve mukokutanöz lezyonlu (2 tanesi aktif) 25 Behçet hastası ile çalışma yapıldı. Behçet hastası yaşları ( aktif BD: % 38.23 ± 5.44, remisyon BD: 36.92 ± 4.22) olan ve tanı süreleri (aktif BD 4.39 ± 1.29, remisyon BD; 8.13 ± 2.04) yıl olan 14 kadın, 11 erkek olmak üzere toplam 25 hasta çalışmaya dahil edildi. Bütün hastalarda BH'nın teşhisi için uluslararası çalışma grubu tarafından tanımlanan kriterlere tamamen uyuldu. Hastalık aktivitesi, yayımlanan kriterlere göre değerlendirildi. Hiçbir akut infeksiyonu ya da kronik hastalığı (diğer otoimmün ve atopik bozukluklar gibi) olmayan yaş ve cins olarak denk olan 20 sağlıklı gönüllü (9 erkek ve 11 kadın; 29.56 ± 2.97 yıl ) kontrol grubu olarak çalışma kapsamına alındı.Periferik kan numuneleri (2 ml), aseptik olarak EDTA'lı (etilen diamin tetra asetik asit) tüplere toplandı. İlk olarak, 25 Behçet hastasını periferik kanında flow-sitometrik yöntemi kullanarak CD4+CD25+ oranlar analiz edildi. Serum OPG ve sCTLA düzeyleri Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) yöntemi ile belirlendiSonuç olarak Behçet hastalarındaki CD4+CD25+ T hücre (Medyan: 5.34 ± 0.65) oranları sağlıklı kontrollere (Medyan: 2.70 ± 0.20) göre önemli şekilde daha yüksek olduğu bulundu. Aynı zamanda Behçet hastalarında (aktif ve remisyon), sağlıklı kontrollere göre önemli ölçüde daha yüksek CD4+CD25+FoxP3+ hücreleri (BH medyan: 3.96±0.59, sağlıklı kontrol medyan : 1.38 ± 0.25) gözlendi. Ancak aktif ve remisyondaki Behçet hastalarında Treg hücreleri arasında hiçbir fark görülmedi. Behçet hastaları ile sağlıklı kontroller kıyaslandığında Behçet hastalarında önemli ölçüde yüksek CD4+CD272+ T hücreleri bulundu (P< 0.001). Ancak, aktif ve remisyondaki hastalar arasında hiçbir fark bulunamadı (P>0.05). OPG'in serum düzeylerinin, Behçetli hastalarda sağlıklı kontrol grubuna göre önemli ölçüde daha yüksek olduğu gözlendi (813.76 ± 10.14 vs 604.22 ± 33, 57 pg mL, P<0.01). Behçet hastaları (0.236 ± 0.12 ng ml) ve sağlıklı kontrol (0.228 ± 0.07 ng/ml) sCTLA-4 serum düzeyleri arasında hiçbir fark bulunamadı (p>0.05). Ama aktif Behçet hastaları ve remisyondaki Behçet hastaları sCTLA-4 serum düzeyleri arasında anlamlı bir fark bulundu (aktif BH : 0.064 ± 0.14 ve remisyon BH : 0.332±0.91). Böylece incelenen parametrelerin BH'nın immun disregülasyonundan sorumlu olabileceği sonucuna varıldı.Anahtar kelimeler : BH, Treg hücreleri, Foxp3, sCTLA, BTLA, Osteoprotegerin

Abstract:
Behçet?s disease (BD) is a chronic, inflammatory vasculitis characterized by recurrent attacks of oral and genital ulcerations, ocular and skin lesions, arthritic and neurologic involvement. The intermittent nature of the disease and lack of consistent response to the therapy make the etiopathogenesis difficult to define.One important component of peripheral tolerance is represented by lymphocytes with regulatory functions, including CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Tregs). CTLA-4 was determined a molecule CTLA-4 that inhibited lymphocyte activation. sCTLA is form of CTLA-4 that secreted into the extracellular space and described as a functional marker of Treg cells. B and T lymphocyte attenuator (BTLA, CD272) is a lymphoid specific cell surface receptor that is expressed by B cells, T cells, dendritic cells (DC), macrophages, and NK cells and participate in inhibitory signaling. Osteoprotegerin (OPG) and its ligand (RANKL) have a key role in controlling the orderly development and function of the immune system.In this study it was aimed to research whether CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Tregs), sCTLA, BTLA and osteoprotegerin have a role on Behçet?s disease. The study is partly as an autoimmune disease; Behcet's disease was aimed at defining the role of inhibitory receptors. CD4+CD25+ Foxp3+ regulatory T cells, sCTLA, BTLA, OPG levels in twenthy-five patients with Behcet?s and twelwe healthy controls, matched for age and sex, were included in this study. Twenthy-five BD patients with ocular complications (9 with active ocular attack and 2 with inflammatory arthritis) and 5 patients with mucocutaneous lesions (2 in active period) were studied. A total of 25 patients (14 females, 11 males) Behçet?s disease whose ages mean (active BD : %38.23 ± 5.44 ,remmission BD : 36.92 ± 4.22) and their diagnosis years mean (active BD: 4.39 ± 1.29, remmission BD : 8.13 ± 2.04) were evaluated. All patients fulfilled the criteria defined by the International Study Group for diagnosis of Behçet?s disease. Disease activity was evaluated according to the published criteria. Twenty healthy volunteers matched for age and sex (9 men and 11 women; mean 29.56 ± 2.97 years) were included as control subjects, none of them had evidence of acute infection or chronic disease (e.g., other autoimmune or atopic disorders).Venous blood samples (2 ml) were collected aseptically into tubes with anti-coagulant (EDTA). We first analyzed the proportions of CD4+CD25+ cells in the peripheral blood of 25 patients with BD by using flow cytometry. Serum levels of OPG and sCTLA were determined by ELISA .As a result the proportions of CD4+CD25+ T cells in BD (median: 5.34 ± 0.65) were significantly higher than those in healthy controls (median:2.70 ± 0.20) . Concurrently BD patients (active and remision) had significantly higher CD4+CD25+FoxP3+ cells, as compared to healthy controls( BD median :3.96±0.59 , healthy controls median:1.38±0.25). However there was no differences in the Treg cells between active and remission BD. BD patients had significantly higher CD4+CD272+ T cells, as compared with healthy controls (p<0.001).But there was no difference between active and remission patient (p>0.05). OPG'in serum levels in patients with BD compared to healthy control group was found to be significantly higher (813.76 ± 10.14 vs 604.22 ± 33.57 pg/mL, P< 0.01). There was no difference between sCTLA-4 serum levels in Behcet?s patients (0.236 ± 0.12 ng/ml) and healthy controls (0.228 ± 0.07 ng/ml) (p>0.05). But Behcet's patients with active Behcet's disease and in remission sCTLA-4 found a significant difference between serum levels ( aktif BH: 0.064±0.14 remisyon BH:0.332 ± 0.91 ).Thus studied parameters may be concluded responsible for immune dysregulations in Behçet's disease.Key Word: Behçet?s disease, Treg cells, Foxp3, sCTLA, BTLA, Osteopotegerin