Hiperlipidemi olan obez çocuklarda denatüre gradient jel elektroforez yöntemi ile APO A-1 MSPI polimorfizmi ile lipid profillerinin karşılaştırılması
Comparioson of lipid profiles with Apo A-I MspI polymorphism on obese children with hyperlipidemia by using DGGE.
Yazar: BAHAR TOPTAŞ
Danışman: PROF. DR. TURGAY İSBİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2008
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Çocukluk döneminde gelişen obezite, ileri yaşlarda görülen kardiovasküler hastalıklar için risk faktörü olan pek çok metabolik bozukluğa sebep olmaktadır. Bu faktörlerden bazıları, lipid düzeylerinin değişimi, glukoz toleransının bozulmasıdır. Bu değişimler yetişkin dönemde görülen kroner kalp hastalıklarının başlangıcı olan aterosklerotik plak oluşumuna sebep olabilmektedir. Apo A-I, ters kolesterol taşınmasında rol oynamaktadır. Apo A-I plazmada lipidlerin taşınmasını sağlar bu sebepten Apo A-I geninde oluşan değişimler plazma lipid konsantrasyonlarının değişimine sebep olmaktadır. Çalışmamızda, hiperlipidemik obez çocuklar hasta grubu; birincisi hiperlipidemisi olmayıp obez olan, ikincisi de obezite bulgusu ve hiperlipidemisi olmayan sağlıklı çocuklardan oluşan iki farklı grup kontrol grubu olarak seçilmiştir. Çalışmamızda çocukluk çağı ve adolesan dönemde Apo A-I MspI polimorfizmi ile plazma lipid profillerinin birarada incelenmesi ve Türk toplumunda bu konudaki olası ilişkilerin araştırılması amaçlanmıştır. Apo A-1 geninde, promotor bölgedeki MspI polimorfizmi ile diğer olası polimorfizmleri saptayabilmek için, ilgili gen dizisinin PCR ile çoğaltılıp, olası mutasyonlar Denatüre Gradient Jel Elektroforezinde (DGGE) farklı paternler de gözlendikten sonra, otomatize DNA dizi analiz cihazı ile dizilemesi yapılarak, sonuçlardeğerlendirilmiştir. DGGE ve dizileme sonrasında Apo A-I geninin promotor bölgesinde iki polimorfik bölge saptanmıştır. Çalışma gruplarında MspI polimorfizmi G-75A olarak bilinen tek nükleotid değişimine ait genotipler incelenmiştir. Obez kontrol grubumuzda mutant A allelinin görülme sıklığı istatiksel açıdan anlamlı düzeyde artmıştır ( p:0,035). Obez kontrol grubunda GA genotipine sahip bireylerin total kolesterol düzeyleri, GG genotipli bireylere göre istatiksel olarak yüksek belirlenmiştir (p<0,05). Sağlıklı kontrol grubunda GG genotipi taşiyan bireylerin VLDL düzeylerinin GA genotipi taşıyanlara göre artmış olduğu belirlenmiştir (p<0,05). Çalışmamızda G-75A polimorfizmiyle HDL düzeyi arasında istatiksel olarak anlamlı ilişki belirlenememiştir.Anahtar Kelimeler : Apo A-1, hiperlipidemi, obezite, DGGE, polimorfizmBu çalışma, İstanbul Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: 1704

Abstract:
In childhood obesity also seems lead to the apperance of a number of cardiovascular risk factors, such as altered lipid levels, impaired glucose tolerance which could contribute to atheroma plaque development and lead to the development of coronary heart disease in adult life. Apo A-I is a lipid binding protein which plays an important role in cholesterol transportation and the transport of lipids in plasma. Defects or variations of these apolipoprotein genes are also associated with altered plasma concentrations of lipids and lipoproteins. For our study, we built three separate groups; one of them was the group of obese children with hyperlipidemia, second one was the group of obese children without hyperlipidemia and the last group contained of healthy children neither with hyperlipidemia nor obesity. In our study, we aimed to evaluate Apo A-I MspI polymorphism and plasma lipid parameters altogether in childhood and adolescence cases and this study in Turkey to determine possible relationships of all discussed parameters. We amplified the related gene segments by using polymerase chain reaction (PCR) and determined different patterns by using denaturating gradient gel electtrophoresis (DGGE) and also applied automatic sequence analysis. This analysis results that two polymorphisms exist at the promotor region. There were two or three nucleotide polymorphism on promotor region of Apo A-I gene, known as MspI polymorphism. This polymorphisms; (G-75A), C+83/T and G+83A. We observed that in comparison to the obese control group -75GA genotype had a significantly higher than the -75GG genotype (p:0,035). Our investigations on the obese control group showed that individuals carrying -75 GA genotype had higher plasma total-cholesterol levels than the carries of GG genotypes (p<0,05). Our investigations on the healthy control group showed that individuals carrying GG genotype had higer plasma VLDL-cholesterol levels than the carries of GA genotypes (p<0,05). No relationship between this polymorphism and HDL- cholesterol levels in the patiens and control groups..Key Words: Apo A-1, hyperlipidemia, obesity, DGGE, polymorphismThe present work was supported by the Research Fund of Istanbul University. Project No. 1704