Seronegatif nöromiyelitis optika hastalarında tanımlanmamış antijenik hedeflerin araştırılması
Investigation of unidentified antigenic targets in patients withseronegative neuromyelitis optica
Yazar: ZERRİN KARAASLAN
Danışman: PROF. DR. CEM İSMAİL KÜÇÜKALİ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Nöroloji = Neurology

Özet:
Amaç: Nöromiyelitis optika spektrum hastalıkları (NMOSH) santral sinir sisteminin
özürlülük yaratan bir hastalığıdır. Olguların büyük bir kısmında Aquaporine-4 (AQP4)
antijenine karşı patojen antikorlar tespit edilmiştir. Antikor tespit edilemeyen
seronegatif NMOSH grubunun ise patogenezi henüz tam olarak aydınlatılamamıştır.
Spinal kord ve optik sinir ağırlıklı tutulum ile seyreden bir multipl sklerozis (MS) altipi
olan optikospinal MS (OSMS) olguları özellikle seronegatif grup ile ayırıcı tanıda
zorluklara neden olmaktadır. Bu çalışmada amacımız seronegatif NMOSH grubunda
astrosit antijenlerine karşı henüz tanımlanmamış antikorların saptanması, OSMS ile
ayrıcı tanıya yardımcı biyobelirteçlerin saptanmasıdır.
Yöntem: Çalışma için seronegatif NMOSH(n=30), OSMS (n=10), ve sağlıklı kontrol
(n=5) olgularından elde edilen serumlarda astrosit yüzey antijenlerine karşı antikor
varlığı primer sıçan astrosit kültürü ile araştırıldı. Spesifik bağlanma izlenen olgu
serumlarında antijen-antikor kompleksleri immünpresipitasyon (İP) yöntemi ile
çöktürülerek, ürünler jel elektroforezde yürütüldü. Sağlıklı kontrollerden farklılık
gösteren bantlar içeren örnekler hedef antijenin tanımlanabilmesi için kütle
spektrometre ile analiz edildi. Biyoinformatik analizler sonucu daha geniş bir olgu
grubunda (AQP4 pozitif NMOSH=19, seronegatif NMOSH=11, OSMS =29,
konvansiyonal MS (KMS)= 36, rekürren inflamatuvar optik nörit (RİON)=15, sağlıklı
kontrol=36) home-made Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) yöntemi ile
antikor varlığı doğrulandı.
Bulgular: Primer astrosit kültüründe 2 seronegatif NMOSH ve 5 OSMS olgusunda
immün boyama izlendi. Bu örneklerle yapılan İP incelemesinde yalnızca OSMS
grubunda birden fazla olguda ortak protein bantları izlendi. Kütle spektrometre
incelemesi ve biyoinformatik analizler sonucu Chloride intracellular channel protein 1
(CLIC1) hedef antijen olarak tespit edildi. ELISA ile doğrulama deneyleri OSMS ve
RİON gruplarında CLIC1 antikor pozitifliği olduğunu gösterdi.
Sonuç: CLIC1 antijenine karşı gelişmiş antikorlar OSMS grubu ile seronegatif
NMOSH olgularında ayırıcı tanı için yardımcı olabilecek bir biyobelirteç olabilir.

Anahtar Kelimeler: Nöromiyelitis optika; multipl sklerozis; otoantikor; Chloride
intracellular channel protein 1

Abstract:
Objective: Neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD) is a disabling disease of
the central nervous system. Pathogenic antibodies against Aquaporine-4 (AQP4)
antigen were detected in most of the cases. The pathogenesis of the seronegative
NMOSD group in which no antibodies could be detected has not yet been fully
elucidated. Optico-spinal multiple sclerosis (OSMS) cases with predominantly spinal
cord and optic nerve involvement cause difficulties in the differential diagnosis,
especially with the seronegative group. Our aim in this study is to establish the
unidentified antibodies against astrocyte antigens in the seronegative NMOSD and to
identify biomarkers that help differential diagnosis with MS-SCON.
Method: For the study, the presence of antibodies against astrocyte surface antigens in
the sera obtained from seronegative NMOSD(n=30), OSMS (n=10), and healthy
control(n=5) cases were investigated by primary rat astrocyte culture. Antigen-antibody
complexes were precipitated by immunoprecipitation (IP) method in the sera of the
cases with specific binding, and the products were carried out in gel electrophoresis.
Samples containing bands that differed from healthy controls were analyzed by mass
spectrometry to identify the target antigen. After bioinformatic analysis, the presence of
antibodies was confirmed by the home-made Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
(ELISA) method with a larger cohort (AQP4 positive NMOSD=19, seronegative
NMOSD=11, OSMS =29, conventional MS (CMS)= 36, recurrent inflammatory optic
neuritis (RION)= 15, healthy control=36)
Results: Immunostaining was observed in 2 seronegative NMOSD and 5 OSMS cases
in primary astrocyte culture. Gel electrophoresis of the IP products of these samples
revealed the bands that were observed only in OSMS group. Chloride intracellular
channel protein 1 (CLIC1) was identified as the target antigen after mass spectrometry
and bioinformatic analysis. Confirmation experiments by ELISA showed antibody
positivity in OSMS and RION groups.
Conclusion: Antibodies against CLIC1 antigen may be a helpful biomarker for
differential diagnosis in OSMS group and seronegative NMOSD cases.
Key Words: Neuromyelitis optica, multiple sclerosis, autoantibody, chloride
intracellular channel protein 1