Doğum travması oluşturulmuş ratlarda C vitamini replasmanı ve plateletten zengin plazma uygulamasının pelvik taban üzerine olan etkilerinin ışık ve elektron mikroskobisi düzeyinde incelenmesi ve karşılaştırılması
Examination and comparison of the effects of vitamin c replacement and platelet-rich plasma application on the pelvic floor in rats with birth trauma at the level of light and electron microscopy
Yazar: EBRU YÜCEL
Danışman: DOÇ. DR. MEHMET MURAT SEVAL
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology

Özet:
Amaç: C vitamini ve PRP uygulamasının pelvik taban hasarı sonrasındaki süreçte vajen ve çevre bağ dokulardaki iyileşme süreci üzerine, ayrı ayrı ve birlikte olan etkilerini histolojik açıdan gözlemlemek ve karşılaştırmak 
Gereç ve Yöntem: 30 adet nulligravid Wistar-Albino rat, 5 gruba ayrılıp PRP Donör grubu hariç (Kontrol grubu) hepsine anestezi altında vajinal distansiyon ile vajinal doğum simülasyonu yapılmıştır. 16 Fr foley kateter 8 ml hava ile şişirilip 5 saat beklendikten sonra balon indirilmeden vajenden çekilmiştir. Takiben Ankara Üniversitesi Deney Hayvanları Ünitesi'nde ad libitum beslenme şeklinde 30 gün takip edilirken deney grubuna ek işlem uygulanmamıştır. C vitamini replasmanı grubuna 30 gün boyunca, günlük yenilenecek şekilde içme suyuna 1.25 mg/ml/gün dozunda C vitamini eklendi, PRP enjeksiyon grubunda her ratın vajenindeki balon çekildikten hemen sonra saat 3-9 pozisyonuna toplamda 1 ml PRP subkutan enjekte edilip ek işlem yapılmadı, C vitamini+ PRP enjeksiyonu grubuna ise hem PRP enjeksiyonu hem 30 gün boyunca oral C vitamini replasmanı yapılmıştır. PRP Donör grubu ise anestezi altındayken PRP eldesi için, ayrıca sağlam rat vajen dokusu incelemesi için kontrol grubu olarak kullanılmıştır. 30 günlük takip sonunda izlemi yaoılan 4 gruba CO2 solutularak ötenazi uygulandı. Tüm ratların vajen ve paravajinal alanı diseke edilip ışık ve elektron mikroskobunda incelenmek üzere nötral formalin ve gluteraldehit solüsyonları içine konarak Ankara Üniversitesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı'na iletildi.  Daha sonra Hemotoksilen& Eozin, Masson-Trickrom ve Van-Gieson doku boyaları ile boyanıp ince kesitleri alınıp incelendi. Vajen epitel kalınlığı ve morfolojisi, kolajen-elastik liflerin dağılımı ve morfolojisi, musküler tabakanın yapısı ve keratohyalin granül varlığına bakarak değerlendirme yapılmıştır.
Bulgular: Vajinal distansiyon ile oluşturulan doğum travması ile pelvik tabana hasar verildiği histolojik olarak kanıtlanmıştır. Epitel kalınlığı açısından gruplararası fark anlamlı bulundu (p<0,001). İkili gruplara bakıldığında deney-C vitamini replasmanı, deney-C vitamini replasmanı+ PRP enjeksiyonu, deney-PRP donör ve PRP enjeksiyonu-PRP donör grupları arası farklar anlamlıydı (sırasıyla p=0,043, p=0,035, p<0,001 ve p=0,006). Deney grubuna ait epitel kalınlık ortalaması 31,07±0,42 , C vitamini replasmanı grubunda 70,85±1,11, PRP enjeksiyonu grubunda 68,08±1,46, C vitamini replasmanı+ PRP enjeksiyonu grubunda 70,93±0,97 ve PRP donör (kontrol) grubunda 75,85±0,97 olarak ölçüldü.
 Kollagen liflerin yüzde alanı bakımından beş grup arasındaki fark anlamlı bulundu (p<0,001); en yüksek ortalama C vitamini replasmanı grubunda bulunurken, en düşük ortalama ise deney grubunda bulundu. Deney-C vitamini replasmanı, deney-PRP donör ve PRP enjeksiyonu-C vitamini replasmanı grupları arası farklar anlamlıydı (sırasıyla p<0,001, p=0,001 ve p=0,023). 
Muskular tabakadaki yapısal bozulma varlığı bakımından gruplararası fark anlamlıydı (p=0,004). Çalışmanın sonunda, başlangıçta oluşturulan bozulmamnın devam oranı deney grubunda değişmeden aynı kalmışken, C vitamini grubunda %16,7, PRP enjeksiyonu grubunda %33,3, C vitamini+PRP enjeksiyonu grubunda %33,3 izlendi. PRP donör grubunda yapısal bozulma yoktu.
Keratohyalin granülleri varlığı bakımından ise gruplararası fark anlamlı bulunamadı (p=0,180). Deney grubunda %33,3; C vitamini grubunda %83,3; PRP enjeksiyonu grubunda %66,7, C vitamini+PRP enjeksiyonu grubunda %66,7 oranında izlendi. PRP donör grubundaki ratların ise hepsinde Keratohyalin granülleri görüldü.
Elektron mikroskobi görüntülemesi de elde edilen verilerle uyumlu olarak gözlendi.
Sonuç: Vajinal distansiyon ile oluşturulan doğum travmasının pelvik taban üzerinde ciddi etkileri vardır. Epitel kalınlığındaki incelme ve düzensizleşme, kolajen lif dağılımındaki yüzdesel farklar, musküler tabakadaki yapısal bozulma bunu göstermiştir. Keratohyalin granül varlığına dair bulgular, hücresel düzeydeki değişiklikleri yansıtır.
C vitamini ve PRP uygulaması pelvik taban üzerinde oluşturulan hasar sonrası iyileşme sürecinde olumlu etki göstermiş olup C vitamini, PRP' ye göre daha faydalı olarak tespit edilmiştir. Daha sonra yapılacak klinik ve deneysel çalışmalarla bu sonuçların teyidi ve ileri tedavi seçeneklerinin geliştirilmesi gereklidir.

Abstract:
Aim: To histologically observe and compare the separate and combined effects of vitamin C and PRP application on the healing process of the vagina and surrounding connective tissues after pelvic floor injury.
Materials and Methods: 30 nulligravid Wistar-Albino rats were divided into 5 groups and all of them, except the PRP Donor group (Control group), were simulated with vaginal birth with vaginal distension under anesthesia. The 16 Fr Foley catheter was inflated with 8 ml of air and waited for 5 hours, then the balloon was withdrawn from the vagina without deflating. Subsequently, the experimental group was followed for 30 days with ad libitum feeding at the Experimental Animal Unit of Ankara University, and no additional treatment was applied to the experimental group. In the vitamin C replacement group, vitamin C was added to the drinking water at a dose of 1.25 mg/ml/day, to be renewed daily, for 30 days. In the PRP injection group, a total of 1 ml of PRP was injected subcutaneously at the 3-9 o'clock position immediately after the balloon in the vagina of each rat was removed, and no additional action was taken. In the vitamin C + PRP injection group, both PRP injection and oral vitamin C replacement were administered for 30 days. The PRP Donor group was used to obtain PRP while under anesthesia and as a control group for intact rat vaginal tissue examination. At the end of the 30-day follow-up, 4 groups were euthanized by CO2 inhalation. The vaginal and paravaginal areas of all rats were dissected and placed in neutral formalin and glutaraldehyde solutions to be examined under light and electron microscopy and sent to Ankara University, Department of Histology and Embryology. Then, they were stained with Hematoxylin & Eosin, Masson-Trichrome and Van-Gieson tissue stains, and thin sections were taken and examined. Evaluation was made by looking at the thickness and morphology of the vaginal epithelium, the distribution and morphology of collagen-elastic fibers, the structure of the muscular layer and the presence of keratohyalin granules.
Results: It has been histologically proven that damage to the pelvic floor is caused by birth trauma caused by vaginal distension. The difference between groups in terms of epithelial thickness was found to be significant (p<0.001). When looking at the paired groups, the differences between the experiment-vitamin C replacement, experiment-vitamin C replacement + PRP injection, experiment-PRP donor and PRP injection-PRP donor groups were significant (p=0.043, p=0.035, p<0.001 and p=0.006, respectively). The average epithelial thickness of the experimental group was 31.07±0.42, 70.85±1.11 in the vitamin C replacement group, 68.08±1.46 in the PRP injection group, 70.93±0 in the vitamin C replacement + PRP injection group, It was measured as 97 and 75.85±0.97 in the PRP donor (control) group.
  The difference between the five groups in terms of the percentage area of collagen fibers was found to be significant (p<0.001); The highest mean was found in the vitamin C replacement group, while the lowest mean was found in the experimental group. The differences between the experimental-vitamin C replacement, experimental-PRP donor and PRP injection-vitamin C replacement groups were significant (p<0.001, p=0.001 and p=0.023, respectively).
The difference between groups in terms of the presence of structural deterioration in the muscular layer was significant (p = 0.004). At the end of the study, while the rate of continuation of the initial deterioration remained unchanged in the experimental group, it was observed as 16.7% in the vitamin C group, 33.3% in the PRP injection group, and 33.3% in the vitamin C + PRP injection group. There was no structural deterioration in the PRP donor group.
There was no significant difference between the groups in terms of the presence of keratohyalin granules (p = 0.180). 33.3% in the experimental group; 83.3% in the vitamin C group; It was observed at a rate of 66.7% in the PRP injection group and 66.7% in the vitamin C + PRP injection group. Keratohyalin granules were seen in all rats in the PRP donor group.
Electron microscopy imaging was also observed to be consistent with the data obtained.
Conclusions: Birth trauma caused by vaginal distension has serious effects on the pelvic floor. Thinning and irregularity in epithelial thickness, percentage differences in collagen fiber distribution, and structural deterioration in the muscular layer have demonstrated this. Findings regarding the presence of keratohyalin granules reflect changes at the cellular level.
Vitamin C and PRP application had a positive effect on the healing process after damage to the pelvic floor, and vitamin C was determined to be more beneficial than PRP. It is necessary to confirm these results and develop advanced treatment options with subsequent clinical and experimental studies.