Bombyx mori'nin yeni hemapoietik organında neu5ac(α2,3)galβ1,4glcnac, neu5ac(α2,6)gal/galnac,galβ1,3galnac ve galnac şekerlerin altın işaretli lektinlerle belirlenmesi
Detection of neu5ac(α2,3)galβ1,4glcnac, neu5ac(α2,6)gal/galnac,galβ1,3galnac and galnac by lectin labelled gold in new hemapoietic organ of bombyx mori
Yazar: SAVAŞ İZZETOĞLU
Danışman: PROF.DR. SABİRE KARAÇALI
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2006
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
ivÖZETBombyx mori'nin Yeni Hemapoietik OrganındaNeu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc,GalÎ²1,3GalNAc ve GalNAc Şekerlerin Altın İşaretli LektinlerleBelirlenmesiİZZETOĞLU, SavaşDoktora Tezi, Biyoloji BölümüTez Yöneticisi: Prof. Dr. Sabire KARAÇALIEylül 2006, 110 SayfaBu çalışmada son larval evre Bombyx mori'de (Lepidoptera)konumu ilk defa belirlenen dorsal damar ile ilişkili hemapoietik organda(DDHPO) salgı loplarının sitolojik yapısı ve lektin işaretlemeyöntemiyle Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAcile Galaktoz (Gal) ve N-asetilgalaktozamin (GalNAc) şekerlerinindağılışı çalışılmıştır.Işık ve elektron mikroskobu incelemeleri için örnekler, rutenyumkırmızısı içeren veya içermeyen Karnovsky solüsyonunda tespit edilerekrutin işlemlerden sonra Epon 812'ye gömülmüştür. Dokulardan alınan1Î¼m'luk kesitler ışık mikroskobu incelemeleri, 100 Ao'lük kesitler deelektron mikroskobu incelemeleri için kullanılmıştır. Hücre içi şekerlerindağılışı, -35oC'de Lowicryl HM20'ye gömülmüş reçineden gridlerealınan ince kesitlere altın bağlı lektinle işaretlenme yapıldıktan sonraelektron mikroskobunda incelenmiştir.Maackia amurensis (MAA) Neu5AcÎ±2,3GalÎ²1,4GlcNAc dizisini,Sambucus nigra (SNA) Neu5AcÎ±2,6Gal/GalNAc sırasını, Limulusvpolyphemus (LPA) lektini tüm glikozit bağlarla bağlı Neu5Ac'leri Arachishypogea (PNA) GalÎ²1,3GalNAc sırasını ve Helix pomatia (HPA)GalNAc>Gal belirlemeleri için kullanılan lektinlerdir.Doku kültür ortamında DDHPO'dan esas olarak plazmatositler veprohemositler ile az miktarda granulositler salınır. Kalın bir bazal tabaka ileörtülü olan DDHPO hücreleri arasında sinsiyal, bölmeli, yanaşık ve fibrilligelişmiş desmosomlar gözlenmiştir. Yoğun salgı aktivitesi gösterenhücrelerde morfolojik olarak farklı dört tip granül ayırt edilmiştir.Î±2,3- ve Î±2,6-bağlı sialik asitler bazal tabakada salgı hücrelerininzarlarında, sitosölde, ve nukleus kılıfı ile nukleus plazmasında,heterokromatin ve ökromatinde bulunmaktadır. Î±2,6-bağlı sialik asitler hemhücreler arası sahada hem de sitosölde daha fazla bulunmuştur. Î±2,3-bağlısialik asitler ise salgı granüllerinde Î±2,6'ya göre daha çok yer almıştır.Galaktoz hücre zarında, sitosölde, nukleus kılıfı dış zarında ve nukleusplazmasında bulunmuştur. Salgı granüllerinde az miktarda yer almaktadır.GalNAc DDHPO'da hücre zarı, bazal tabaka, hücreler arası alanlar, sitosöl,granüllü endoplazmik retikulum zarları veya keseleri, salgı granülleri,nuklues kılıfı ve nuklues plazmasında en fazla bulunan şekerdir. Sonuçolarak, DDHPO'nun salgı hücreleri Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc veNeu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc oligosakkaritleri şeklinde iki farklı glikozitbağla bağlanan sialik asitler ile galaktoz ve N-asetilgalaktozamin şekerleriiçermektedir.Anahtar Kelimeler: Dorsal damar ile ilişkili hemapoietik organ (DDHPO),Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc, Galaktoz (Gal),N-asetilgalaktozamin (GalNAc), Lowicryl HM20, Lektin, Elektronmikroskobu.

Abstract:
viABSTRACTDetection of Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc,GalÎ²1,3GalNAc and GalNAc by Lectin Labelled Gold in NewHemapoietic Organ of Bombyx moriIZZETOGLU, SavasPh.D in BiologySupervisor: Prof. Dr. Sabire KARACALISeptember 2006, 110 PagesIn this study, cytologic structure of hemapoietic organ?s secretory lobeswhich is related to dorsal vessel whose localization is firstly determined; anddistrubution of Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc andGalactose (Gal) and N-acetylgalactosamine (GalNAc) sugars are examined inlast instar larvae Bombyx mori (Lepidoptera).For both light and electron microscopic observations, samples areembedded into Epon 812 after routine process of fixation in Karnovskysolution which contains either ruthenium red or not. The sections about1Î¼m and 100 Ao were taken from tissues for light and electron microscopicinvestigation, respectively. Intracellular sugars were examined usingelectron microscope after labelling of thin sections with gold-labeling lectin,taken to grids from embedding resin Lowicryl HM20 at -35 oC.The lectins Maackia amurensis (MAA) for Neu5AcÎ±2,3GalÎ²1,4GlcNAcsequence, Sambucus nigra (SNA) for Neu5AcÎ±2,6Gal/GalNAc sequence,Limulus polyphemus (LPA) for all Neu5Ac Arachis hypogea (PNA) forGalÎ²1,3GalNAC and Helix pomatia (HPA) for GalNAc>Gal were used.viiIn tissue culture environment mainly plasmatocytes andprohemotocytes and low amount of granulocytes were secreted fromDDHPO. Sinsisyal, septate, tight and fibrillated desmosomes were observedamong the DDHPO cells covered with a thick basal lamina. Four types ofsecretory granules were determined in the cells that show dense secretionactivities.Î±2,3- and Î±2,6-linked sialic acids were found in the cell membrane,basal lamina, cytosol nuclear envelope and heterochromatine andeuchromatine in the nuclear plasma. Î±2,6-linked sialic acids were moreseen in the both places extracellular area and cytosol. Î±2,3-linked sialicacids compared to Î±2,6-linked sialic acids were more seen in the secretorygranules. Galactose was observed in the cell membrane, cytosol, outernuclear envelope and nuclear plasma. It was found in secretory granules inlow number. N-acetylgalactosamine was the most seen sugar in DDHPO,cell membrane, basal lamina, intercellular spaces between the cells, cytosol,granulated endoplasmic reticulum membrane or vesicles, secretion vesiclesnuclear envelope and nuclear plasma. As a result, the secretory cells ofDDHPO contain sialic acids with two different glycosidic linkage asNeu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc and Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAcoligosaccharide sequences, galactose and N-acetylgalactosamine sugars.Key words: Hemapoeitic organ associated with dorsal vessel (DDHPO),Neu5Ac(Î±2,3)GalÎ²1,4GlcNAc, Neu5Ac(Î±2,6)Gal/GalNAc, Galactose(Gal), N-acetylgalactosamine (GalNAc), Lowicryl HM20, Lectin, Electronmicroscopy.