N- ve O- glikozilasyonu engellenmiş BALB/C fare embriyolarının gelişen karaciğer dokusunda apoptozisin ve sialik asitle ilişkisinin mikroskobik, stereolojik ve analitik yöntemlerle belirlenmesi
Determination of apoptosis and apoptosis-sialic acid relation during developing liver tissue in inhibited N- and O- glycosylation in embriyonic BALB/C mouse by microscopic, stereologic and analytic methods
Yazar: HÜSEYİN ÖZAYDIN
Danışman: DOÇ. DR. REMZİYE DEVECİ
Ege Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology

Özet:
Glikokonjugatların; hücre tutunması, hücre göçü, hücre farklılaşması, fertilizasyon, gelişim, sinyal iletimi, tümör metastazı ve gelişimi gibi birçok biyolojik olaylarda oldukça önemli rolleri vardır. Protein glikozilasyonu, ökaryotik hücrelerin proteinlerinin çoğunda gözlenen bir posttranslasyonel modifikasyondur. Polipeptid zinciri üzerinde bağlı oldukları amino aside ve oligosakkarit zincirlerine göre proteinlerle bağlantı kuran çeşitli glikan aileleri tanımlanmıştır.Bu çalışmada N- ve O- bağlı glikozilasyonun engellenmesinin embriyonik fare karaciğer gelişimine etkilerinin histolojik olarak incelenmesi ve bu glikozilasyon değişimlerinin gelişim sürecindeki apoptozise etkilerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada mikroskobik olarak histolojik yapının ve apoptozisin incelenmesinin yanı sıra, stereolojik yöntemlerle de apoptotik hücre sayımları yapılmıştır. Ayrıca glikozilasyonun engellenmesine bağlı sialik asit analizi için Kapiler HPLC - ElektroSprey İyonizasyon - Kütle Spektroskopisi (Cap LC-ESI-MS/MS) kullanılmıştır.N- ve O- glikozilasyonun engellenmesi karaciğer gelişiminde çeşitli anormalliklere neden olmuştur. Sinüzoidal alanların yapısı bozulmuş ve doku içinde neredeyse kaybolmuştur. Doku içinde yer yer hücre yığınları oluşmuştur. Ayrıca venlerin bazal tabakalarında da bozulmalar görülmüştür. Glikozilasyonun engellendiği gruplarda apoptozisin azaldığı ve bundan dolayı da apoptozisin doku modellenmesinde etkili olamadığı gözlenmiştir. Yapılan sialik asit analizleri sonucunda ise Neu5Ac ve Neu5Gc'nin miktarlarında belirgin bir farklılık olmadığı ancak, stres durumunda artış gösterdiği bilinen asetilli sialik asit miktarlarının arttığı belirlenmiştir.Sonuç olarak glikozilasyonun engellenmesinin hem embriyonik fare karaciğer gelişiminde hem de gelişim sürecindeki apoptotik mekanizmada olumsuz etkilere neden olduğu görülmüştür.

Abstract:
Glycoconjugates have important roles in biological process such as cell adhesion, cell migration, cell differentiation, development, fertilization, signal communications, tumor metastasis and tumor development. Protein glycosylation is a posttranslational modification which occurs in most of eukaryotic cells? protein. There are different types of glycan families which make linkage with proteins depends on amino acid and oligosaccaride chains which bind to polypeptide.The aim of this study is to show effect of N- and O- glycosylation inhibition on the mouse embryonic liver development by histologically, and investigation these effects on apoptosis during development. In this study, beside investigation of apoptosis and histological structure obtaining by microscopy, apoptotic cells calculating were also done by stereological techniques. Furthermore, Capillary HPLC-ElectroSpray Ionization-Mass Spectroscopy (Cap LC-ESI-MS/MS) was used for analysis of sialic acid that depends on inhibition of glycosylation.N- and O- glycosylation inhibition causes some abnormalities in liver development. Structure of sinusoidal zones were damaged and nearly missed inside the tissue. Inside the tissue, aggregations of cells formed in some places. Also some deformations was observed in the basal layer of veins. In inhibited glycosylation groups, it is observed that, apoptosis decreases therefore apoptosis could not effect on tissue modeling. In the analysis of Neu5Ac and Neu5Gc no significant quantitation difference was observed. But, it is known that quantitation of acetylated sialic acid increases in stress condition, also it is observed at the groups in which glycosylation inhibited.As conclusion, in this study we observed that glycosylation inhibition has negative effect either on embryonic mouse liver development and apoptotic mechanism in the process of development.