Çeşitli antiviral ajanların adenovirüse karşı etkinliğinin in vitro olarak değerlendirilmesi
Evaluation of in vitro efficiency of various antiviral agents on adenovirus
Yazar: AYNURA SARIYEVA AYDAMIROV
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ İBRAHİM İNAN HARBİYELİ
Çukurova Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Adenovirüs enfeksiyonları = Adenoviridae infections ; Adenovirüsler = Adenoviridae ; Antiviral ajanlar = Antiviral agents ; Göz hastalıkları = Eye diseases ; Hücre kültür teknikleri = Cell culture techniques ; Konjonktivit = Conjunctivitis ; İn vitro = In vitro

Özet:
Amaç: Konjonktivit etkeni olan bir adenovirüs izolatı üzerinde in vitro antiviral
etkinlik göstermesi muhtemel bazı ajanların etkinliğinin değerlendirilmesidir.
Gereç ve Yöntem: Kliniğimizde adenoviral konjonktivit tanısı konulan
hastalardan flocked eküvyonla alınan konjonktival sürüntü örnekleri viral transport
besiyerinde Ç.Ü. Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Viroloji Bilim Dalı
Laboratuvarı'na gönderildi. Örnekler hücre kültürüne ekilerek adenovirus izolasyonu
yapıldı. Adenovirusun izolasyonunda A549 hücre kültürü kullanıldı. Adenovirus tanısı
Real-Time PZT ile doğrulandı. Hücre kültüründen izole edilen bir izolat pasaj yapılarak
çoğaltıldı. TCID50 testi (Tissue Culture Infectious Dose % 50 ) ile adenovirus
titrasyonu belirlendi. Tüm testlerde aynı izolat kullanıldı. Sidofovir, siklosporin-A
(CSA), povidon iyot (PVP-I) ve klorheksidinin (CHX) adenovirusa karşı etkinliği
incelendi. Her ilaç için öncelikle MTS testi ile hücrelere toksik konsantrasyon (CC₅₀)
belirlendi. Ardından CC₅₀'nin altındaki konsantrasyonlarda antiviral etkinlik testi
yapılarak, ilacın virüs üzerindeki inhibitör konsantrasyon (IC₅₀)'u saptandı.
Bulgular: A549 hücre kültüründe ilaçların CC₅₀ değerleri; sidofovirde 564± 26
µM, CSA'da 6,11± 0,23 µM, PVP–I'da % 0,54± 0,06 ve CHX'de ise % 0,00058±
0,0002 olarak bulunmuştur. Sidofovir'in adenovirusa karşı IC50 değeri 3,07± 0,8 µM
olarak bulunurken, CSA, PVP–I ve CHX CC₅₀ değerinin altındaki konsantrasyonlarda
adenoviruse karşı etkili bulunmamıştır.
Sonuç: Sidofovirin adenovirüse in vitro koşullarda etkinlik gösterdiği, saptanan
IC₅₀ değerinin literatürdeki konsantrasyon aralıklarında olduğu belirlenmiştir. PVP-I
ve CHX'in düşük konsantrasyonlarda bile oldukça sitotoksik olduğu görülmüştür ve
gelecekteki klinik çalışmalarda bu ajanların etkinlik/yan etki profillerinin birlikte
değerlendirilmesinin ayrıca önemli olduğu düşünülmektedir. CSA in vitro olarak
adenovirüse karşı literatürde ilk kez çalışılmıştır. İlacın sitotoksik konsantrasyonun
altında etkin olmadığı görülmüştür ancak bu çalışmanın gelecekte planlanacak
çalışmalara yol gösterici olacağı düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: Adenovirüs, A549, antiviral etkinlik, hücre kültürü, in vitro

Abstract:
Evaluation of In Vitro Efficiency of Various Antiviral Agents on Adenovirus
Purpose: To evaluate the efficiency of various antiviral agents that are likely to
exhibit in vitro antiviral activity on an adenovirus isolate, that is the causative agent of
conjunctivitis.
Material and Methods: Conjunctival swab samples taken with flocked swab
from patients who were diagnosed as adenoviral conjunctivitis were carried out on viral
transport medium and sent to Virology Laboratory of Microbiology Department,
Faculty of Medicine, Cukurova University. Clinical samples were inoculated into cell
culture and adenovirus isolation was performed. Continuous cell line A549 cells were
used for the isolation of adenovirus. The diagnosis of adenovirus was confirmed by
Real-Time PCR test. An isolate of adenovirus that isolated in cell culture was
propagated by serial passage. Adenovirus titration was detected by performing TCID50
assay protocol (Tissue Culture Infectious Dose 50 %). The same adenovirus isolate was
used in all antiviral tests. The in vitro efficacy of Cidofovir, Cyclosporin-A (CSA),
povidone iodine (PVP-I) and chlorhexidine (CHX) on adenovirus were investigated. For
each drug, % 50 cytotoxic concentration (CC₅₀) to the cells was determined with
MTS assay. Then, an antiviral efficacy test was performed in concentrations below
CC₅₀, in this way the % 50 inhibitory concentrations (IC₅₀) of antiviral agents were
found.
Results: CC₅₀ values of agents in A549 cell culturewere found as 564 ± 26 µM
in cidofovir, 6,11 ± 0,23 µM in CSA, 0,54 ± 0,06 % in PVP-I and 0,00058 ± 0,0002 %
in CHX. While IC50 value of cidofovir against adenovirus was found as 3,07 ± 0,8 µM,
CSA, PVP – I and CHX were not effective on adenovirus in concentrations below
CC₅₀.
Conclusion: It was determined that cidofovir have in vitro efficiency on
adenovirus and the IC₅₀ value was detected in concentration ranges described in the
literature. PVP-I and CHX were found to be highly cytotoxic even at low concentrations
and it is considered as important to evaluate the efficacy/side effect profiles of these
agents together in future clinical studies. In vitro efficiency of CSA on adenovirus was
investigated first time in the literature. This agent was found as ineffective in sub-
cytotoxic concentrations, but this study is thought to be a guide for future studies.

KeyWords: Adenovirus, A549, antiviral activity, cell culture, in vitro