Plevral malign mezotelyomalarda Fish yöntemi ile p16 delesyonu sıklığı ve immünohistokimyasal olarak p16 ekspresyonunun değerlendirilmesi
Detection of p16 deletion by Fish in pleural malignant mesotheliomas and p16 protein expression profiles
Yazar: GAMZE KULDUK
Danışman: PROF. DR. LEYLA MEMİŞ
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2015
Konu: Patoloji = Pathology
Dizin: Delesyon = Deletion ; FISH = FISH ; Gen ifadesi = Gene expression ; Histopatoloji = Histopathology ; Mezotelyoma = Mesothelioma ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Plevra = Pleura ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Malign mezotelyoma,  mezotelyal yüzeylerden köken alan kötü prognozlu bir tümördür. Tanısı histopatoloji, klinik ve radyolojik yöntemlerin birlikte değerlendirilmesi ile konulmaktadır.  WHO sınıflamasına göre 4 tipi bulunmaktadır: Epitelioid, bifazik, sarkomatoid ve desmoplastik.  Epitelioid tip aynı zamanda asiner, tübülopapiller, adenomatoid (mikrokistik/ mikroglandüler), solid, şeffaf hücreli, desiduoid, pleomorfik, taşlı yüzük hücreli ve küçük hücreli gibi çok sayıda varyant içermektedir. Bu patern zenginliği sebebiyle MM'yı özellikle akciğer adenokarsinomlarından ayırmak güç olabilmektedir. Aynı zamanda benign mezotelyal proliferasyonlardan ayırmak da hastanın gereksiz tedaviler almasını önlemek açısından önem taşımaktadır.
MM'da en sık rastlanılan genetik bozukluk 9. kromozomun kısa kolunda (9p21) bulunan INK4a/ARF lokusunda görülen delesyondur. p16, INK4a/ARF lokusu tarafından kodlanan CDK inhibitörü olan bir gendir.  INK4a/ARF lokusu aynı zamanda MDM2'nin degredasyonunda rol oynayan p14ARF'yi kodlar.  Sonuç olarak p53 görevini yapamaz ve kontrolsüz hücre çoğalması ve malignite gelişir. 
MM'larda p16 delesyonuna sıklıkla rastlanılmaktadır. Bu nedenle çalışmamızda , MM olgularındaki CDKN2A delesyon durumu ve p16 protein ekspres-yon profillerini inceledik. FISH  sonuçlarımıza göre 114 olgunun 82'sinde (%71,9) 9p21 delesyonu izledik. p16 protein ekspresyonu sonuçlarına göre 114 olgunun 75'inde (%65,8) negatiflik saptadık. 9p21 homozigot delesyonu epitelioid MM'ların 44'ünde (%59,5); bifazik MM'ların 31'inde (%93,9) sarkomatoid MM'ların  7'sinde (%100) mevcuttur. p16 protein ekspresyonu ise epitelioid MM'ların 36'sında (%48,6); bifazik MM'ların 2'sinde (%6,1) sarkomatoid MM'ların  1'inde (%14,3) mevcuttur.  Aynı zamanda 9p21 delesyon varlığı ile p16 immünhistokimyasal ekspresyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki gözlenmiştir.
Sonuç olarak p16 delesyonunun gösterilmesi MM'da son derece spesifik olmasına karşın bazı olgularda rastlanılmaktadır. Bizim çalışmamızda ve diğer araştırmacılar tarafından da gösterildiği gibi FISH yöntemi ile p16 delesyonunun gösterilmesi benign ve malign mezotelyal proliferasyonların ayrımında kullanıla-bilecek faydalı bir yöntemdir. p16 homozigot delesyonu izlenen olgularda eş za-manlı p16 negatifliğinin de izlenmesi sebebiyle p16 protein ekspresyonunun da tanıya yardımcı bir teknik olarak kullanılabileceğini düşünmekteyiz. Diğer bir önemli nokta epitelioid MM ile reaktif mezotel proliferasyonu ayrımında faydalanılacak immünhistokimyasal metodlar bulunurken sarkomatoid MM ile fibröz plörit ayrımında böyle bir teknik bulunmamasıdır. Çalışma sonuçlarımıza göre delesyon sarkomatoid MM'ların tümünde görülürken, fibröz plöritlerde görülme-mektedir . p16 ekspresyonu ve delesyonunun diagnostik olması dışında gelecekte p16(CDKN2A) ya da p14'ün onarımını sağlayabilecek gen terapileri, olası hedefe yönelik tedavi modaliteleri açısından da önem taşımaktadır.

Abstract:
Malignant mesothelioma is an aggressive tumor originates from mesothelial surfaces which has a poor prognosis. The diagnosis of MM is mainly based on histopathologic features, together with clinical and imaging information. According to WHO classification there are four types of MM: Epitelioid, biphasic, sarcomatoid and desmoplastic. The epitelioid type of MM also has many histologic patterns such as acinar, tubulopapillary, adenomatoid (glandular/microcystic), solid, clear cell, deciduoid, pleomorphic, signet ring, and small cell pattern. Beca-use of these features the differentiation of MM can be a diagnostic challenge which can mimic other cancers such as lung. Another importance of MM is to differentiate from benign proliferations.
Most common genetic alteration in MM is the deletion of  INK4a/ARF locus which is located in the short arm of chromosome 9 (9p21). p16 is a CDK in-hibitor which is encoded by INK4a/ARF locus. INK4a/ARF locus also codes for p14ARF which is responsible for MDM2 degradation. As a result p53 doesn't function and rapid cell growth and immortality of the cell occurs leading to ma-lignancy. 
p16 is often deleted in malignant mesotheliomas. Therefore we constitute our research on CDKN2A deletion status and p16 expression profiles in MM. FISH results  demonstrated 9p21 deletion in 82 of 114 cases with MM (71,9%).  p16 expression results were negative in 75 of 114 cases (65,8%). Homozygous deletion was noted in  44 of epithelioid  (59,5%) 31 of biphasic 31 (93,9%), 7 of  sarcomatoid (100%) MM. p16 protein expression was noted in 36 of epithelioid  (48,6%) 2 of biphasic (6,1%), 1 of sarcomatoid (14,3%) MM. The correlation between p16 protein expression and 9p21 homozygous deletion in the tumor cells was statistically significant.
İn conclusion, despite the fact that homozygous deletion of p16 is very spesific, it is not detected in all MM. As reported recently by other investigators the detection of homozygous deletions of p16 by FISH technique is useful  for distinguishing benign proliferations from malignant mesothelioma. Therefore p16 deletion can be use as a diagnostic marker. Our results also support this fact. Because of the cases who have p16 homozygous deletion also are p16 negative we also conclude  that p16 negativity can be use to support the diagnosys of MM. Another important point is the differentiation of sarcomatoid MM especially desmoplastic type from fibrous pleuritis. According to our results homozygous deletion was noted in all  sarcomatoid MM and none in fibrous peuritis (more than 13,3%). While the prevalance of 9p21 deletion is very high in MM's, this knowledge can be use for therapetic modalities in the future like lung carcinomas in addition to diagnostic usefulness.