Oosit gelişim kapasitesinin değerlendirilmesinde insan kümülüs hücrelerindeki gen ifade profillerinin biyobelirteç olarak incelenmesi
Investigation of gene expression profiles of human cumulus cells to evaluation of oocyte development capacity as a biomarker
Yazar: DERYA DENİZ ERCAN
Danışman: PROF. DR. LEYLA AÇIK
Gazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Embriyo = Embryo ; Gebelik = Pregnancy ; Gen ifadesi profili = Gene expression profiling ; Kümulus hücresi = Cumulus cell

Özet:
Bu çalışmada, tüp bebek tedavisi sonucunda iyi/ zayıf morfolojiye sahip embriyo geliştiren oositlerin kümülüs hücrelerinde, versikan (VCAN), prostaglandin-endoperoksit sentetaz 2 (PTGS2), inositol-trifosfat 3-kinaz A (ITPKA) genlerinin ifade seviyeleri incelenmiştir. Artmış ya da azalmış gen ifadesinin, embriyo morfolojisi ve tedavi sonuçları ile karşılaştırılarak, potansiyel gebelik olasılığını değerlendirebilecek bir biyobelirteç araştırılması hedeflendi. Çalışmaya Gazi Üniversitesi Tüp bebek Merkezine gebelik istemi ile başvuran 20 açıklanamayan infertil hasta dâhil edildi. Tüp bebek tedavisi ile kontrollü ovaryen hipersitümülasyon yapılarak elde edilen oositlerin kümülüs hücreleri toplanarak donduruldu. Tedavi boyunca gelişen en kaliteli embriyolar hastaya transfer edildi. Transfer sonrası 12. günde serumda β-hcg seviyesi ölçülerek gebelik sonucu değerlendirildi. Hastaların geliştirdiği en kaliteli/zayıf morfolojiye sahip embriyoların gelişimini sağlayan oositin kümülüs hücreleri çözülerek RNA izolasyonu yapıldı ve qPCR ile ilgili genlerin ifade seviyeleri değerlendirildi. Tedavi sonucunda hastaların geliştirdikleri en iyi kaliteli embriyo ile en zayıf kaliteli embriyoların kümülüs hücrelerindeki ITPKA (p-value = 0.11), VCAN (p-value = 0.78), PTGS2 (p-value = 0.19) gen ifade seviyelerinde anlamlı bir farklılık gösterilmemiştir (p değeri < 0,005 anlamlılık düzeyi). Transfer edilen iyi kaliteli embriyoların kümülüs hücrelerinde ilgili genlerin ifadesi ile gebelik sonuçları karşılaştırıldığında, ITPKA geninin ekspresyonunda anlamlı bir farklılık gözlenmemiştir. Kümülüs hücrelerinde VCAN geninin ifade seviyesi ise daha yüksek bulundu, ancak istatistiksel olarak anlamlı değildi (p= 0.10). PTGS2 geninin ekspresyon seviyesi, gebe olmayan gruba göre gebe olan grupta önemli ölçüde artmıştı (p= 0.01; anlamlılık düzeyi p> 0.05). Gebe olanlar hastaların iyi kaliteli embriyolarının kümülüs hücrelerinde PTGS2 geninin ifadelenmesi, gebe olmayanlara göre 3,18 kat arttı. Bulgulara göre gen
ekspresyonundaki 3,18 kat artış, gebelik tahmininde biyobelirteç olarak kullanılabilir. Bu sayede tüp bebek tedavisindeki başarı oranının artırılabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
In this study, the relationship between the expression level of versican (VCAN), prostaglandin-endoperoxide synthetase 2 (PTGS2), inositol-triphosphate 3-kinase A (ITPKA) genes in cumulus cells and embryo morphology, pregnancy outcomes were evaluated by using qPCR. 20 unexplained infertile patients who applied to Gazi University
IVF Center were included in the study. Cumulus cells of oocytes obtained by controlled ovarian hypersitulation in IVF treatment were collected and then frozen. The best quality embryos are choosen for transfer. The β-hcg level in the serum was measured 12 days after the transfer, and the pregnancy outcome was assessed. Dissolving the cumulus cells of the oocyte, which provided the production of the good and poor embryos of the patients, was
used to isolate RNA. Then expression levels of genes were evaluated by qPCR. According to embryo morphology, there was no significant difference in the expression levels of ITPKA (p-value = 0.11), VCAN (p-value = 0.78), PTGS2 (p-value = 0.19) genes in the cumulus cells. (p-value <0.005 significance level). When the relationship between the
expression of genes in the cumulus cells of the transferred good quality embryos was compared to pregnancy outcomes, no significant difference was observed in the expression of the ITPKA gene. When the expression level of the VCAN gene in cumulus cells was found to be higher, but not statistically significant. (p = 0.10). The expression level of the PTGS2 gene increased significantly in the pregnant group relative to the non-pregnant group. (p = 0.01; significance level p> 0.05). When pregnant women compared to non-pregnant women, gene expression in high quality embryos increased 3.18 times. The 3.18-fold increase in gene expression may be used as a biomarker in pregnancy prediction, according to the findings. We believe that the success rate in IVF treatment can be increased by this means.