Farklı konsantrasyonlardaki astaksantin'in kriyoprezervasyon sonrası insan sperm parametrelerine etkisi
The effect of astaxanthin in different concentrations on human sperm parameters after cryopreservation
Yazar: GİZEM DEDE
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ ASLIHAN ŞAYLAN
Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Astaksantin = Astaxanthin ; Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Sperm = Spermatozoa ; Sperm mobilitesi = Sperm mobility ; Sperma özellikleri = Sperm characteristics

Özet:
Çalışmanın amacı, antioksidan etkisi olduğu bilinen astaksantinin (ASTA) sperm kriyoprezervasyonu sırasında oluşan hasara karşı koruyucu etkinliğini incelemektir.
Bu deneysel çalışma, Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi Tıp Fakültesi'ne semen analizi sebebiyle başvuran 25-40 yaş arası erkek bireylerin atık semen örneklerinde gerçekleştirilmiştir. Dünya Sağlık Örgütü (WHO) 2010 kriterlerine göre; 30 normospermik birey çalışmaya dahil edilmiştir. Kriyoprotektan madde olarak dimetil sülfoksit (DMSO) kullanılan semen örnekleri 4 eşit hacme bölünüp herbir gruba sırasıyla 0 μM, 50 μM, 100 μM ve 500 μM ASTA eklenmiştir. Tüm gruplar; sıvı azot (LN2/-196°C) tankında dondurularak saklanmıştır. 72 saat sonra sıvı azottan çıkarılan semen örnekleri, çözdürüldükten sonra DMSO ve ASTA uzaklaştırılmıştır. Kriyoprezervasyon öncesi - sonrası spermlerin motilite değerlendirmesi yapılmıştır. Ayrıca spermler, DNA kromatin yoğunlaşmasının tespiti için asidik anilin mavisiyle boyanmıştır. Kriyoprezervasyon sonrasında, kriyoprezervasyon öncesine oranla tüm gruplarda motilite bakımından genel bir düşüş gözlenmiştir. Kriyoprezervasyon sonrası gruplar kendi aralarında karşılaştırıldığında; en fazla motilite kaybına kontrol grubunda (0 ASTA μM) rastlanırken, en az motilite kaybı 100 μM ASTA grubunda olmuştur. Bununla birlikte; genel bir düşüş gözlenmesine rağmen ASTA, sperm motilitesini olumlu etkilemiştir. Kriyoprezervasyon sonrası gruplar sperm kromatin kondensasyonu bakımından incelendiğinde ise; kondanse sperm sayısı 100 μM ASTA grubunda diğer gruplara oranla yüksek çıkmıştır. 
Elde edilen sonuçlar ve istatistiksel veriler doğrultusunda; sperm kriyoprezervasyonu esnasında kriyoprotektan maddeye eklenen ASTA'nın, sperm motilitesini olumlu yönde etkilediği ve dekondanse sperm sayısını azalttığı görülmüştür. Böylelikle, ASTA'nın kriyoprezervasyon esnasında kriyoprotektanlara ek olarak kullanılabileceği düşünülmektedir. ASTA ile ilgili yeni araştırmaların yapılması, hücre kriyoprezervasyon protokollerinin geliştirilebilmesine ışık tutacaktır.

Abstract:
The aim of the study was to examine the protective effectiveness of astaxanthin (ASTA), which is known to have an antioxidant effect, against damage caused during sperm cryopreservation. This experimental study was conducted in fallout semen samples of male individuals aged 25-40 who were admitted to Bolu Abant Izzet Baysal University Faculty of Medicine for semen analysis. According to the World Health Organization (WHO) 2010 criteria, 30 normospermic individuals were included in the study. Semen samples using dimethyl sulfoxide (DMSO) as a cryoprotectant were divided into 4 equal volumes and added to each group 0 µM, 50 µM, 100 µM and 500 µM ASTA, respectively. All groups are stored by freezing in liquid nitrogen (LN2/-196°C) tank. After 72 hours, semen samples extracted from liquid nitrogen were thawed and DMSO and ASTA were removed. Motility assessment of sperm was performed before and after cryopreservation. Moreover, sperms were dyed acidic aniline blue for detection of DNA chromatin condensation. After cryopreservation, a general decrease in motility was observed in all groups compared to before cryopreservation. When the groups after cryopreservation were compared among themselves; The highest motility loss was observed in the control group (0 ASTA μM), while the least motility loss was in the 100 μM ASTA group. However, although a general decrease was observed, ASTA had a positive effect on sperm motility. After cryopreservation, the groups were examined in terms of sperm chromatin condensation; the number of condensed sperm was higher in the ASTA group of 100 µM compared to other groups. According to the results obtained and statistical data, ASTA added to the cryoprotectant substance during sperm cryopreservation positively affects sperm motility and reduces the number of decondanse sperm. Thus, it is thought that ASTA can be used as an additional supplement to cryoprotectants during cryopreservation. Conducting new research on ASTA will shed light on the development of cell cryopreservation protocols. Conducting new research on ASTA will shed light on the development of cell cryopreservation protocols.