Vitiligo hastalarında DROSHA, DICER ve DGCR8 gen polimorfizmlerinin ve ekspresyon düzeylerinin araştırılması
Investigation of DROSHA, DICER and DGCR8 gene polymorphisms and expression levels in vitiligo patients
Yazar: SONER AŞIR
Danışman: DOÇ. DR. ÖZLEM İZCİ AY
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Melaninler = Melanins ; Melanositler = Melanocytes ; Polimorfizm-genetik = Polymorphism-genetic ; RNA = RNA ; Vitiligo = Vitiligo

Özet:
Vitiligo, melanositlerin seçici bir şekilde yok edilmesinden kaynaklanan cilt, saç ve oral mukozayı etkileyen otoimmün bir hastalıktır.  Vitiligoda melanosit kaybı için birden fazla teori önerilmiştir. Son zamanlarda yapılan çalışmalarda vitiligo  patogenezinde  otoimmün teoriyi destekleyen güçlü kanıtlar gösterilmiştir. Bu teorilere rağmen hastalığın genetik alt yapısı hala tam olarak aydınlatılamamıştır. Vitiligo genetiğini aydınlatmak için yapılan çalışmalar son zamanlarda miRNA'lar üzerinde yoğunlaşılmıştır. MİRNA'lar hücre büyümesi, farklılaşma, apoptoz ve immün yanıt gibi çeşitli hücresel işlemlerin temel düzenleyicileri olarak kabul edilmektedir. Ayrıca miRNA biyogenezinde yer alan gen polimorfizmlerinin de miRNA ekspresyon seviyesinde değişime neden olabileceği ve çeşitli hastalıkların patogenezine katkı sağladıkları düşünülmektedir. Çalışmamızda miRNA biyogenezinde yer alan DICER, DROSHA ve DGCR8 genlerinin ekspresyon düzeyleri ve polimorfizmleri, hasta (n=55) ve kontrol (n=56) bireylerin kan örneklerinde belirlendi. Seçilen genlerin ekspresyon düzeyleri ve polimorfizmleri, Real Time PCR'da karşılaştırmalı CT yöntemi ve genotipleme yöntemi kullanılarak analiz edildi.  Genotip ve allel dağılımları değerlendirmeleri sonucunda, DICER geni için grup ile genotipler arasında istatistiksel olarak anlamlı ilişki vardır (p<0,05). Buna göre; sadece hastaların CT genotip oranı (%35,2) kontrollerin CT oranından (%14,8) daha yüksek gözlemlenmiştir. DROSHA ve DGCR8 genlerindeki polimorfizmlerle vitiligo arasında ilişki gözlenmedi (p>0,05). DICER, DROSHA ve DGCR8 geninde hasta ve kontrol grupları arasında gen ekspresyonları bakımından istatistiksel olarak anlamlı bir fark olduğu bulunmuştur (p<0,05). DICER gen ekspresyon düzeyinin hasta grubunda kontrol grubuna kıyasla 0,5 kat azaldığı, DROSHA geninin ekspresyon düzeyinin hasta grubunda kontrol grubuna kıyasla 29 kat azaldığı ve DGCR8 geninde ise hasta grubunun kontrol grubuna kıyasla 1,8 kat azaldığı saptanmıştır. Ayrıca DROSHA ve DGCR8 ekspresyonu arasında interaksiyon gözlenmiştir. Çalışmamızda genlerin polimorfizmi ve ekspresyonu arasındaki ilişkisine de bakıldı. Anlamlı bir ilişki bulunamadı (p>0,05). Elde ettiğimiz bu sonuçlar miRNA'ların vitiligo patogenezinde rol oynayabileceğini göstermektedir. Çalışmamızın miRNA'ların vitiligo etiyolojisindeki rolünün ortaya çıkartılması amacıyla yapılacak araştırmalar için, tanı ve tedavi için yol gösterici olacağı düşünülmektedir.

Abstract:
Vitiligo is an autoimmune disease that affects the skin, hair and oral mucosa caused by the selective destruction of melanocytes. Many theories have been proposed for the melanocyte option in vitiligo. Recent studies have shown strong evidence supporting the autoimmune theory in the pathogenesis of vitiligo. Despite these theories, the genetic background of the disease is still not fully elucidated. Studies to elucidate the genetics of vitiligo have recently focused on miRNAs. MiRNAs are recognized as key regulators of various cellular processes such as cell growth, differentiation, apoptosis, and immune response. In addition, it is thought that gene polymorphisms in miRNA biogenesis may cause changes in miRNA expression level and contribute to the pathogenesis of various diseases. In our study, the expression levels and polymorphisms of DICER, DROSHA and DGCR8 genes, which are involved in miRNA biogenesis, were determined in blood samples from patients (n=55) and control (n=56). Expression levels and polymorphisms of selected genes were analyzed in Real Time PCR using comparative CT method and genotyping method. As a result of the genotype and allele distribution evaluations, there was a statistically significant relationship between the group and genotypes for the DICER gene (p<0.05). According to this; only the CT genotype rate of the patients (35.2%) was higher than the CT rate of the controls (14.8%). No correlation was observed between vitiligo and polymorphisms in DROSHA and DGCR8 genes (p>0.05). A statistically significant difference was found between the patient and control groups in terms of gene expressions in DICER, DROSHA and DGCR8 genes (p<0.05). It was determined that the DICER gene expression level decreased 0.5 times in the patient group compared to the control group, the expression level of the DROSHA gene decreased 29 times in the patient group compared to the control group, and in the DGCR8 gene, the patient group decreased 1.8 times compared to the control group. Also, interaction between DROSHA and DGCR8 expression was observed. In our study, the relationship between polymorphism and expression of genes was also examined. No significant relationship was found (p>0.05). These results show that miRNAs may play a role in the pathogenesis of vitiligo. It is thought that our study will be a guide for the research, diagnosis and treatment to reveal the role of miRNAs in the etiology of vitiligo.