Deneysel renal iskemi
reperfüzyon modelinde levosimendan ve n-asetilsisteinin etkileri / Effects of levosimendan and n-acetylcysteine in experimental renal ischemia / reperfusion model
Yazar: NEZİH SALGINCI
Danışman: PROF. DR. SEZAİ ÖZKAN
GATA / Haydarpaşa Eğitim Hastanesi  / Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Anestezi ve Reanimasyon = Anesthesiology and Reanimation
Dizin: Böbrek = Kidney ; Böbrek fonksiyon testleri = Kidney function tests ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; İnflamasyon = Inflammation ; İskemi = Ischemia

Özet:
Marmara Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurulu onayı alındıktan sonra ağırlıkları 250-300 gr arasında değişen, 38 adet erkek Wistar Albino rat rastgele 5 gruba ayrıldı. Gruplar 1.Yalancı Opere (n=6), 2.İR-Kontrol (n=8), 3.İR+Levosimendan (n=8), 4.İR+N-Asetilsistein (n=8), ve 5.İR+Levosimendan+N-Asetilsistein (n=8) idi.
Venöz kateterizasyonu takiben tüm gruplara laparotomi yapıldı ve sol böbrek diseke edildi. Yalancı opere grubuna başka bir işlem yapılmadı. Çalışma metodumuza göre her gruba sırasıyla serum fizyolojik, Levosimendan (12 mcg/kg), N-asetilsistein (150 mg/kg) ve hem Levosimendan hem de N-asetilsisteinin yükleme dozları perfüzör ile 10 dakikada infüze edildi. İnfüzyonun sonunda sol renal arter ve ven renal pedikülden atravmatik mikrovasküler damar klembi ile klemplendi. Sırasıyla 60 dakika iskemi ve 60 dakika reperfüzyon uygulandı. İskemi ve reperfüzyon dönemleri boyunca idame dozları (Levosimendan: 0,2 mcg/kg/dk, N-Asetilsistein: 20 mg/kg/sa) her gruba sırasıyla infüze edildi. Yükleme ve idame dozları için infüze edilen sıvı miktarı her grup için aynıydı. Her bir sıçanın sakrifikasyonundan sonra doku ve kan örnekleri toplandı.
Doku örnekleri ile histopatolojik değerlendirme yapıldı. Doku malondialdehit seviyeleri oksidatif stresin bir göstergesi olarak ölçüldü. Doku miyeloperoksidaz, serum miyeloperoksidaz ve TNF-? düzeyleri inflamasyon belirteçleri olarak ölçüldü. Serum BUN, kreatinin ve nötrofil jelatinaz ilişkili lipokalin düzeyleri böbrek fonksiyon testleri olarak ölçüldü. p<0.05 değeri grupların karşılaştırılmasında istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. 
Histopatolojik inceleme, bowman kapsül aralığında genişleme, tübül epitelinde dejenerasyon ve hücresel şişme ile tübül epitelinde nekroz parametrelerinin 3. 4. ve 5. gruplarda 2. gruba göre anlamlı olarak daha düşük olduğunu gösterdi (p<0.05). Ancak, her bir gruba ait tübüler proteinöz materyal birikimi, konjesyon ve tübüler dilatasyon parametreleri birbiri ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı fark bulunamadı.
2. grupta artmış doku MDA ve MPO seviyeleri 3, 4, ve 5. gruplarda anlamlı olarak düşüktü (p<0.05).  2. grupta artmış serum MPO düzeyi 3. ve 5. gruplarda anlamlı olarak düşüktü (p<0.05). 2. grupta artmış serum NGAL düzeyi 3. grupta anlamlı olarak düşüktü (p<0.05). Ancak, her grubun serum TNF-?, BUN ve kreatinin düzeyleri karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı fark bulunamadı.   
Çalışmamızda böbrek iskemi/reperfüzyon hasarında Levosimendan ve N-asetilsisteinin hem ayrı ayrı hem de birlikte kullanımının iskemi/reperfüzyon hasarının azaltılmasında, inflamasyonun baskılanmasında ve akut böbrek hasarının önlenmesinde etkili olduğu bulunmuştur. Çalışmada kullanılan ilaçların olumlu etkilerinin ileri çalışmalar ile desteklenmesi gerektiği kanaatine varılmıştır.

Abstract:
The purpose of the our study was to examine the effects of Levosimendan and  N-acetylcysteine on renal ischemia / reperfusion injury model in rats.
After the approval of Local Ethics Committee for Animal Researches of Marmara University, 38 male Wistar Albino rats weighing 250-300 gr were randomly divided into 5 groups. Groups were 1.Pseudo Operated (n=6),  2.IR-Control (n=8), 3.IR+Levosimendan (n=8), 4.IR+N-Acetylcysteine (n=8) and 5.IR+Levosimendan+N-Acetylcysteine (n=8). 
Laparotomy was applied to all groups following venous catheterisation and left kidney was dissected. Nothing else was applied to Pseudo Operated Group. According to our study design, loading doses of saline, levosimendan (12 mcg / kg), N-acetylcysteine (150 mg / kg) and both levosimendan and the N-acetylcysteine was infused with perfuser in 10 minutes to each group respectively. At the end of infusion the left renal artery and vein were clamped from renal pedicles with atraumatic microvascular vessel clamp. 60 minutes ischemia and 60 minutes reperfusion were administered respectively. During periods of ischemia and reperfusion, maintenance doses (Levosimendan: 0,2 mcg/kg/min, N-acetylcysteine: 20 mg/kg/h) was infused to each group respectively. The amount of fluid infused for loading and maintanence doses were the same for each group. Tissues and blood samples were gathered after sacrification of each rat. 
Histopathologic evaluation was performed with the tissue samples. Tissue malondialdehyde levels were measured as a marker of oxidative stress. Tissue myeloperoxidase, serum myeloperoxidase and TNF-? levels were measured as inflammation markers. Serum BUN, creatinine and neutrophil gelatinase-associated lipocalin levels were measured as kidney function tests. p<0.05 value was accepted as statistically significiant in comparing groups.
Histopatological examination showed that the parameters of dilatation of bowman's capsule, degeneration of tubuler epithelium and cellular swelling and necrosis in tubuler epithelium in the 3rd, 4th and 5th groups were significiantly lower than the 2nd group. However, when the parameters of accumulation of proteinaceous material in the tubul, congestion and tubular dilatation of each group were compared, there was no statistically significant difference.
Increased tissue MDA and MPO levels in 2nd group was significiantly lower in 3rd, 4th and 5th groups (p<0.05). Increased serum MPO level in 2nd group was significiantly lower in 3rd and 5th groups (p<0.05). Increased serum NGAL level in 2nd group was significiantly lower in 3rd group (p<0.05). However, when the serum levels of TNF-?, BUN and creatinine of each group were compared, no statistically significant difference was found. 
In our study, the use of Levosimendan and N-acetylcysteine both separately and together on ischemia/reperfusion injury was found to be effective in reducing ischemia/reperfusion injury, suppression of inflamation and prevention of acute kidney injury. It was concluded that the positive effects of the drugs used in the study should be supported by further studies.