İskemi/reperfüzyon hasarı oluşturulan sıçan böbrek dokusunda quercetinin apoptozis ve real-time PCR ile tayin edilen iNOS gen ekspresyonu üzerine etkisi.
Effects of quercetin on iNOS expression by using real-time PCR and apoptosis in ischemia-reperfusion injured rat kidney tissue
Yazar: MUSTAFA KENAN KINACI
Danışman: DOÇ. DR. NİLÜFER ERKASAP
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2008
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Böbrek yetmezliği = Kidney failure ; Oksidatif stres = Oxidative stress

Özet:
Bu çalışmanın amacı quercetinin, böbrekte iskemi/reperfüzyon (I/R) hasarı oluşturulmuş sıçanlarda apoptoz ve iNOS gen ekspresyonu üzerine etkisini araştırmaktır. Çalışmada 42 adet Sprague-Dawley türü sıçan kullanılmış ve 3 gruba ayrılmıştır. I; kontrol grubu, II; 2 saat iskemi ve 6 saat reperfüzyon grubu, III; iskemiden 1 saat önce 50 mg/kg quercetin (i.p.) verilmiş ve böbrek dokuları (I/R) hasarına maruz bırakılmıştır. Dokulardan biyokimyasal olarak MDA ve GSH düzeyleri çalışılmıştır. Çalışmanın sonucunda MDA, quercetin ile tedavi sonrası I/R grubuna göre önemli düzeyde düşük bulunmuş ve GSH düzeyi ise İ/R grubunda azalırken quercetin tedavisi ile artış göstermiştir.Histolojik sonuçlarımızda, hematoksilen eosin ile yapılan genel doku değerlendirmesinde I/R grubunda, belirgin derecede ödem, vaskülarizasyon ve yer yer inflamatuar hücrelere ait infiltrasyon alanları vardı. Quercetin uygulanan gruptaki apoptotik hücre sayısının I/R grubundaki apoptotik hücre sayısına göre daha az olduğu tespit edildi. Real-Time PCR ile yapılan iNOS gen ifadesi analizlerinde İ/R grubunda iNOS gen (hedef gen) ekspresyonun arttığı gözlenmiş ancak bunun GAPDH (referans gen) ile relatif konsantrasyonuna bakıldığında gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunamamıştır.Quercetin, böbrek İ/R hasarına karşı dokuda apoptotik hücre sayısını azaltarak ve iNOS gen ifadesini düzenleyerek koruyucu bir etki göstermiştir.

Abstract:
The aim of this study is to evaluate the effects of quercetine on apoptosis and iNOS gene expression on kidney of I/R induced rats. Divided in three groups, 42 Sprague-Dawley rats were used for this study. The animals were. Control group, I/R group (was exposed to two hours ischemia and six hours reperfusion) and quercetin+I/R group (50 mg/kg quercetin, i.p, one hour before the ischemia). After reperfusion, the animals were sacrificed and kidneys were removed. MDA and GSH levels were analyzed by biochemical methods. Compared to the I/R group, MDA levels were significantly decreased in quercetine group, however GSH levels were increased with quercetine treatment.Histological evaluation of hematoxylene eosine stained tissue sections in the I/R group showed edema vascularisations and local areas of inflammatory cell infiltration. The number of apoptotic cells in the quercetine treatment group was found to be less than the apoptotic cells in the I/R group. iNOS gene expression analysis by Real-Time PCR showed that the expression of iNOS gene (target gene) was increased in the I/R group, but when the concentration was calculated relative to the GAPDH (reference gene), the differences were not statistically significant.Quercetin, decreased apoptotic cell number and regulates iNOS gene expression, so it has protective effects on renal tissue I/R injury.