Süt ve süt ürünlerinden laktik asit bakterilerinin izolasyonu ve moleküler identifikasyonu /
Yazar: BARIŞ BOSTANCI
Danışman: DOÇ. SEVİM FEYZA ERDOĞMUŞ
Afyon Kocatepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Medikal Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Bakteriyosinler = Bacteriocins ; Kimliklendirme = Identification ; Laktik asit = Lactic acid ; Laktik asit bakterileri = Lactic acid bacteria ; Süt = Milk ; Süt ürünleri = Milk products

Özet:
Laktik asit bakterileri antimikrobiyal etkiye sahip bakteriyosin gibi bazı maddeler üretirler. Bunlar, hem gıda üretiminde hem de sağlık sektöründe patojen mikroorganizmalara karşı inhibitör olarak kullanılma potansiyeline sahiptirler. Bu çalışmada, Afyonkarahisar İli'nde satışa sunulan markasız, paketsiz  20 farklı süt ve süt ürününden (peynir, kefir, yoğurt) 34 adet laktik asit bakterisi izole edilmiştir. İzolatların moleküler identifikasyonları için 16S rDNA PZR analizi yapılmıştır. İzolatların 16S rDNA sekans analiz sonuçlarına göre, % 41,1'i Lactobacillus, % 26,4'sı Lactococcus, % 32,3'ü Enterococcus cinsine dahil bulunmuştur. En fazla laktik asit bakterisi peynir örneklerinden izole edilerek identifikasyonları tamamlanmıştır. 16S rDNA sekans analizi sonuçlarına göre peynir örneklerinden izole edilen laktik asit bakterileri Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium olarak tanımlanmıştır. Süt örneklerinden elde edilen laktik asit bakterileri Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Enterococcus faecium türleri olarak tanımlanmıştır. Kefir örneklerinden elde edilen laktik asit bakterileri  Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecium, Enterococcus durans türleri olarak tanımlanmıştır. Yoğurt örneklerinden ise Lactococcus lactis ve Lactococcus garvieae, Enterococcus durans, Lactobacillus fermentum türleri olarak tanımlanmıştır. İzolatların antimikrobiyal aktivitesini belirlemek için agar spot ve agar kuyu difüzyon testi kullanılmıştır. İzolatların tümü test edilen patojen mikroorganizmalar üzerinde farklı seviyelerde antimikrobiyal etki göstermiştir. LAB izolatları Listeria monocytogenes ATCC 1911, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Klebsiella pneumoniea NRRLB 4420, Pseudomonas aeuroginosa ATCC 11778, Streptococcus feacalis üzerinde Escherichia coli ATCC 35218 ve Bacillus subtilis NRS-744 göre daha yüksek seviyede antimikrobiyal etki göstermiştir. LAB izolatları en yüksek antimikrobiyal etkiyi ise Listeria monocytogenes ATCC 1911 üzerinde göstermiştir.

Anahtar Kelimeler: Bakteriyosin, İzolasyon, İdentifikasyon, Laktik asit bakterileri

Abstract:
Lactic acid bacteria produce some substances that has got a antimicrobial activity, such as bacteriocin. They have the potential to be used as inhibitors against pathogenic microorganisms in both food production and health sector. In this study, 34 lactic acid bacteria were isolated from 20 different milk and fermented milk products (cheese, kefir, yogurt) in Afyonkarahisar province. 16S rDNA PCR analysis was performed for molecular identifications of isolates. According to the results of 16S rDNA sequence analysis of isolates, 41,1% were found to belong to Lactobacillus, 26.4 % to Lactococcus and 32,3 % to Enterococcus genus. Most of lactic acid bacteria were isolated from cheese samples and their identified. As a result of 16S rDNA sequence analysis isolates of cheese samples were identifed as Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium. İsolates of milk samples were identifed as Lactobacillus fermentum, Lactococcus lactis, Enterococcus faecium. Lactic acid bacteria of kefir samples were identifed as Lactobacillus fermentum, Enterococcus faecium, Enterococcus durans. Lactic acid bacteria of yogurt samples were identifed as Lactococcus lactis ve Lactococcus garvieae, Enterococcus durans, Lactobacillus fermentum. Agar spot and agar-well diffusion assay method were used to determine the antimicrobial activity of the lactic acid bacteria isolates. All of the isolates showed antimicrobial activity at different levels on the tested pathogenic microorganisms. LAB isolates showed higher antimicrobial activity on Listeria monocytogenes ATCC 1911, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Klebsiella pneumoniea NRRLB 4420, Pseudomonas aeuroginosa ATCC 11778, Streptococcus. feacalis than Escherichia coli ATCC 35218 and Bacillus subtilis NRS-744. LAB isolates showed the highest antimicrobial activity on Listeria monocytogenes ATCC 1911.

Key words: Bacteriocin, İdentification, İsolation, Lactic Acid Bacteria