Pyoderma saptanan köpeklerden izole edilen staphylococcus pseudintermedius türlerinin moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of staphylococcus pseudintermedius species isolated from dogs with pyoderma
Yazar: BEGÜM MAŞLAK
Danışman: PROF. DR. ARZU FUNDA BAĞCIGİL
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı / Veteriner Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine

Özet:
Pyoderma, köpeklerde karşılaşılan deri hastalıklarının arasında önemli bir yer tutmaktadır. Pyodermaya neden olan bakteriyel etkenlerin en başında Staphylococcus pseudintermedius gelmektedir. Zoonoz karakteri olan bu etkenin çevre ve halk sağlığı açısından da önemi çok büyüktür. Bu çalışmanın amacı; klinik olarak pyoderma tanısı konulan köpeklerden S. pseudintermedius izolasyon oranının belirlenmesi, antibiyotik direnç profili ile biyofilm oluşturma yeteneklerinin fenotipik ve genotipik olarak değerlendirilmesini içermektedir. Bu amaçla; İstanbul Üniversitesi- Cerrahpaşa Veteriner Fakültesi, İç Hastalıkları Anabilim Dalı Kliniğine getirilen ve pyoderma tanısı konulan 205 köpeğin lezyonlu bölgelerinden alınan sıvab örnekleri, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı'nda S. pseudintermedius yönünden incelenmiştir. İncelenen örneklerin %53,17 (n=109)'sinden S. pseudintermedius izole edilmiştir. İzolatların fenotipik olarak antibiyotik duyarlılıklarının belirlenmesinde disk difüzyon yöntemi kullanılmıştır. Bununla birlikte metisilin (mecA), beta laktamaz (blaZ), makrolid (ermA, ermB, ermC), tetrasiklin (tet(K), tet(L), tet(M), tet(O)), kloramfenikol (cat set1, cat set2) ve gentamisin (aac (6')- aph (2'')) direnci ile ilişkili gen bölgeleri PCR yöntemi ile incelenmiştir. Biyofilm oluşumunun değerlendirilmesinde Congo Red Agar Yöntemi ve Mikrotiter Plate Test kullanılmıştır. Ayrıca biyofilm oluşturma yeteneği ile ilişkili gen bölgeleri (icaA, icaD) de PCR yöntemi ile incelenmiştir. 13 farklı antibiyotik ile yapılan antibiyotik duyarlılık testi incelenmesine göre yapılan antibiyotiplendirme sonucunda 24 antibiyotipte çoklu antibiyotik direnci saptanmıştır. En çok direnç belirlenen antibiyotikler penisilin (n=60), sulfisoksazol (n=50) ve tetrasiklin (n=41) olmuştur. İzolatların dokuzunda ise oksasilin dirençli olarak saptanmıştır. Fenotipik MRSP olan 9 izolatta mecA geni saptanmamıştır. Bununla birlikte bu izolatlarda blaZ gen varlığı belirlenmiştir. Biyofilm oluşturma yeteneğinin değerlendirilmesinde fenotipik olarak yapılan iki yöntemin sonuçları karşılaştırılmıştır. Biyofilm oluşturma özelliği fenotipik olarak negatif olan izolatlarda ilgili gen bölgelerinin varlığı saptanmıştır. Ülkemizde bu etken ile ilgili çalışmalar sınırlı sayıdadır. Özellikle veteriner hekimlikte önemli bir nozokomiyal patojen olan S. pseudintermedius'un zoonotik karakteri ve gelişmiş olan antibiyotik direnci gözardı edilmemelidir.

Abstract:
Pyoderma is the most important disease that the dogs encountered in skin diseases. Staphylococcus pseudintermedius is the most frequently bacterial agent that cause pyoderma. This agents' zoonotic character is the great importance for environment and public health. The aim of this study includes determining the isolation rate of S. pseudintermedius from dogs with pyoderma, phenotypic and genotypic evaluation of antibiotic resistance profiles and biofilm formation abilities. For this purpose, swab samples taken from the lesioned areas of 205 dogs, which were brought to Istanbul University- Cerrahpaşa, Faculty of Veterinary Medicine, Internal Medicine Deparment Polyclinic and diagnosed as pyoderma as a result of clinical examinations, were examined for S. pseudintermedius in the Department of Microbiology. S. pseudintermedius was isolated from 53.17% (n=109) of the examined samples. Phenotypically antibiotic susceptibility test of the isolates was determined by disc diffusion method. However, the gene regions associated with methicillin (mecA), beta lactamase (blaZ), macrolide (ermA, ermB, ermC), tetracycline (tet(K), tet(L), tet(M), tet(O)), chloramphenicol (cat set1, cat set2) and gentamicin (aac (6')-aph (2'')) resistance were investigated by PCR. Congo Red Agar Method and Microtiter Plate Test were used to evaluate biofilm formation. In addition, gene regions (icaA, icaD) associated with biofilm formation ability were also investigated by PCR. As the result of the antibiotic susceptibility test performed with 13 different antibiotics, multi drug resistance was detected in 24 antibiotypes. The most resistant antibiotics were penicillin (n=60), sulfisoxazole (n=50) and tetracycline (n=41). Oxacillin resistance was detected in 9 isolates. The mecA gene was not detected in 9 isolates with phenotypic MRSP. However, the presence of blaZ gene was determined in these isolates. The results of two phenotypic methods were compared to evaluate the biofilm forming ability. The presence of relevant gene regions was determined in isolates that were phenotypically negative for biofilm formation. There are limited studies about S. pseudintermedius in Türkiye. The zoonotic character and developed antibiotic resistance of S. pseudintermedius, which is an important nosocomial pathogen especially in veterinary medicine, should not be ignored.