Nikotinamid mononükleotid ve nikotiamid ribozid ile mitokondriyal stres inhibisyonunun DHEA ile indüklenmiş polikistik over sendromlu ratlarda anovulasyon üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of mitochondrial stress inhibition with nicotinamide mononucleotide and nicothiamide riboside on anovulation in DHEA-induced polycystic ovary syndrome rats
Yazar: ZELİHA YETİM
Danışman: DOÇ. DR. OSMAN NURİ KELEŞ
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2021
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Ovulasyon = Ovulation ; Polikistik over sendromu = Polycystic ovary syndrome ; Sıçanlar = Rats

Özet:
Amaç: Bu çalışmada deneysel PKOS modelinde granüloza hücrelerinde oluşan mitokondriyal stres ve buna bağlı anovulasyon üzerine NMN ve NR'nin tedavi edici etkilerinin olup olmadığını araştırmak amaçlandı.
Materyal ve Metot: Çalışmada, ağırlıkları 40-60 gram arasında değişen 21 günlük 20 adet Sprague-Dawley cinsi dişi sıçan kullanıldı. Sıçanlar rastgele 4 gruba ayrıldı. Kontrol grubu haricindekilere 21 gün boyunca Dehidroepiandrosteron (DHEA) verilerek PKOS modeli oluşturuldu. NMN grubuna 17 gün 500 mg/kg intraperitoneal olarak NMN, NR grubuna 7 gün oral olarak 200 mg/kg NR uygulandı. Sıçanlar 37. gün sakrifiye edildi ve alınan overler histopatolojik, immünohistokimyasal ve biyokimyasal olarak değerlendirildi. Mitokondriyal dinamikleri değerlendirmek için Drp1, Mfn1 ve Mfn2 gen ekspresyon seviyeleri RT-PCR ile tespit edildi.
Bulgular: LH/FSH oranı PKOS grubunda yüksekti, fakat NR ve NMN gruplarında kontrol grubu deneklerinin değerlerine yakındı. Histolojik kesitlerde PKOS grubunda fazlasıyla kistik yapı mevuttu, apoptotik hücreler mevcutken teka hücre tabakasında kalınlaşmalar mevcuttu. NMN ve NR gruplarında ise bu hasarların önemli ölçüde azaldığı, gözlendi. İmmünohistokimyasal değerlendirmede PKOS grubunda Drp1 pozitifliği yoğunken kontrol, NMN ve NR gruplarında ise Mfn1 pozitifliği yoğun idi. Mfn2 pozitifliği tüm gruplarda orta derecede izlendi. RT-PCR analizlerinde PKOS grubunda Drp1'in arttığı, Mfn1'in azaldığı görülürken, NMN ve NR uygulanan gruplarda Drp1'in azaldığı, Mfn1'in ise yükseldiği görüldü. Gruplar arasında Mfn2 ekspresyonları açısından istatistiksel bir anlamlılık bulunmadı.
Sonuç: Bu sonuçlar NMN ve NR'nin PKOS modelinde meydana gelen mitokondri stresini inhibe edebileceğini ve anovulasyon üzerine iyileştirici etkilerinin olabileceğini göstermektedir.

Abstract:
Aim: In this study, it was aimed to investigate whether NMN and NR have therapeutic effects on mitochondrial stress related anovulation in granulosa cells in an experimental PCOS model. 
Material and method: In the study, 20 female Sprague-Dawley rats (21 days old) with an average weight of 40-60 grams were used. They were randomly divided into 4 groups. The PCOS model was created by Dehydroepiandrosterone (DHEA) induction for 21 days in the non-control group. NMN  was administered 500 mg/kg intraperitoneally for 17 days to the NMN group, and 200 mg/kg NR was administered orally to the NR group for 7 days. The rats were sacrificed on the 37th day and ovarian tissues were evaluated histopathologically, immunohistochemically and biochemically. To assess mitochondrial dynamics, Drp1, Mfn1 and Mfn2 gene expression levels were detected by RT-PCR.
Results:  The LH/FSH ratio was high in the PCOS group, but the ratio of NR and NMN groups was close to the values of control group ratio. In histological sections, the PCOS group had a very cystic structure, apoptotic cells were available and there were thick theca cell layers. It was observed that these damages were significantly reduced in the NMN and NR groups. In the immunohistochemical evaluation, while Drp1 positivity was intense in the PCOS group, Mfn1 positivity was intense in the control, NMN and NR groups. Mfn2 positivity was moderate in all groups. In RT-PCR analysis, it was observed that Drp1 increased and Mfn1 decreased in PCOS group, while Drp1 decreased and Mfn1 increased in NMN and NR applied groups. There was no statistical significance between the groups in terms of Mfn2 expressions.
Conclusion: These results show that NMN and NR can inhibit mitochondrial stress in the experimental PCOS model and have ameliorative effects on anovulation.