Endotoksin ile oluşan vasküler hiporeaktivitede G proteini ile kenetli alfa-adrenerjik reseptör/mitojen ile aktive edilen kinazlar yolu ile sitozolik fosfolipaz A2 ve indüklenebilir nitrik oksit sentaz enzimleri arasındaki ilişkinin mekanizmalarının.
The investigation of the mechanisms of relationship among G protein-coupled alpha-adrenergic receptor/mitogen-activated kinases pathway, cytosolic phospholipase A2 and inducible nitric oxide synthase enzymes in endotoxin induced vascular hyporeactivi
Yazar: REMİLE BELMA KORKMAZ
Danışman: DOÇ.DR. BAHAR TUNÇTAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Meslek Bilimleri Ana Bilim Dalı / Farmakoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2004
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology

Özet:
ÖZET Endotoksin ile Oluşan Vasküler Hiporeaktivitede G Proteini ile Kenetli Alfa-Adrenerjik Reseptör/Mitojen ile Aktive Edilen Kinazlar Yolu ile Sitozolik Fosfolipaz A2 ve İndüklenebilir Nitrik Oksit Sentaz Enzimleri Arasındaki İlişkinin Mekanizmalarının Sıçan Aortunda Araştırılması Bu çalışmada, endotoksin ile oluşan vasküler hiporeaktivitede indüklenebilir nitrik oksit (NO) sentaz (İNOS), sitozolik fosfolipaz A2 (sitozolik FLA2) ve mitojen ile aktive edilen protein kinaz kinaz (MEK1/2) enzimlerinin olası rolü sıçan izole torasik aortunda araştırıldı. Miyografa yerleştirilen halka şeklinde ve endoteli sağlam dokularda noradrenalin (0.001-1000 pM) ile kümülatif konsantrasyon-yamt eğrileri alındıktan sonra, dokular endotoksin (100 Hg/ml) ile 1, 2, 4 veya 6 saat inkübe edildi ve konsantrasyon-yanıt eğrileri tekrarlandı. Endotoksin ile 4 saat inkübe edilen dokularda, noradrenalin EC50 değeri kontrole göre daha fazla, Emaks değeri ise daha azdı. Enzim inhibitörleri (0.1, 1 veya 10 fig/ml) ile ortamda endotoksin yokken ve varken 4 saat inkübasyonun ardından noradrenalin konsantrasyon-yanıt eğrileri tekrarlandı. Endotoksin ile artan noradrenalinin EC50 değeri selektif İNOS inhibitörü phenylene-l,3-bis[ethane-2- isothiourea] dihydrobromide (1,3-PBIT), selektif sitozolik FLA2 inhibitörü metilarakidonil florofosfonat (MAFF) ve selektif MEK1/2 inhibitörü 1,4-diamino- 2,3-dicyano~l,4-bis[2-aminophenylthio]butadien (U0126) ile azaldı, azalan Eraaks değeri ise 1,3-PBIT ile arttı, U0126 ile azaldı ve MAFF ile değişmedi. Endotoksin ile artan doku nitrit miktarı ise 1,3-PBIT, MAFF ve U0126 ile azaldı. Bu bulgular, endotoksin ile oluşan vasküler hiporeaktiviteden endotel ve/veya düz kas hücrelerinde İNOS ve FLA2 aktivitesinin artması sonucunda oluşumu artan NO ve vazodilatör etkili FLA2 yolu ürünleri ve bu ürünler arasındaki sinerjistik etkileşmelerin rolü olduğunu göstermektedir; ayrıca, MEK1/2 ekspresyonu ve/veya aktivitesinin artması ile ilişkili vazodilatasyon ve vazokonstriksiyona aracılık eden olayların da hiporeaktiviteye katkısı olabilir. XV

Abstract:
ABSTRACT The Investigation of the Mechanisms of Relationship among G Protein-Coupled Alpha-Adrenergic Receptor/Mitogen-Activated Kinases Pathway, Cytosolic Phospholipase A2 and Inducible Nitric Oxide Synthase Enzymes in Endotoxin Induced Vascular Hyporeactivity in Rat Aorta In this study, possible role of inducible nitric oxide (NO) synthase (iNOS), cytosolic phospholipase A2 (cytosolic PLA2) and mitogen-activated protein kinase kinase (MEK1/2) were investigated in endotoxin-induced vascular hyporeactivity in the rat isolated thoracic aorta. Aortic rings with intact endothelium were mounted in a myograph and cumulative concentration-response curves were obtained with noradrenaline (0.001-1000 jiM). Following by incubation for 1, 2, 4 or 6 h with endotoxin (100 p.g/ml) noradrenaline concentration-response curves were repetaed. At 4 h after endotoxin, EC50 value for noradrenaline was higher than that of control, while Emax value for control was decreased by endotoxin. Following by 4 h incubation with enzyme inhibitors (0.1, 1 or 10 Hg/ml) in the presence and absence of endotoxin, noradrenaline concentration-response curves were repeated. The endotoxin-induced increase in EC50 value for noradrenaline was decreased by selective iNOS inhibitor, l,3-phenylene-bis(l,2-ethanediyl)bis-isothiourea (1,3- PBIT), selective cytosolic PLA2 inhibitor, methyl arachidonyl florophosphate (MAFF), and selective MEK 1/2 inhibitor, l,4-diamino-2,3-dicyano-l,4-bis(2- aminophenylthio)-butadiene (U0126). The endotoxin-induced decrease in Emax value was increased by 1,3-PBIT, decreased by U0126, and not changed by MAFF. Endotoxin-induced increase in tissue nitrite level was decreased by 1,3-PBIT, MAFF and U0126. These findings indicate that increased levels of NO and vasodilatory products of PLA2 pathway which are resulted from increased iNOS and PLA2 activity in endothelial and/or vascular smooth muscle cells and interactions among them sinergistically may be responsible for the endotoxin- induced vascular hyporeactivity. Furthermore, events related to increased MEK1/2 expression and/or activity leading to vasodilatation and vasoconstriction may contribute to this hyporeactivity. XVI