Serebral iskemi/ reperfüzyon modelinde intravital görüntüleme yöntemiyle mikrovasküler yatağın incelenmesi
Analysis of microvasculature in experimental model of cerebral ischemia/ reperfusion by intravital imaging techniques
Yazar: ASLIHAN TAŞKIRAN
Danışman: DOÇ. DR. YASEMİN GÜRSOY ÖZDEMİR
Hacettepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2011
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Beyin iskemisi = Brain ischemia ; Kapilerler = Capillaries ; Mikroskopi = Microscopy ; Oksidatif hasar = Oxidative damage ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; İskemi = Ischemia

Özet:
Serebral iskemi/ reperfüzyon hasarında mikrovasküler yatağın etkilendiği ve ana damarlarda reperfüzyon sağlansa bile kapiller düzeyde reperfüzyonun yetersiz olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada kapiller düzeyde perisitleri kasarak tıkanmaya neden olan oksidatif hasarın kaynağı intravital olarak uzaysal ve kompartmantal düzeyde incelenmiştir. Bu amaçla, farelerde doğrudan bası yöntemiyle 1 saatlik distal orta serebral arter (OSA) tıkanması gerçekleştirilmiş, ardından reperfüzyon sağlanmıştır. İzleyen 1 saat boyunca süperoksit oluşumu topikal dihidroetidyum (DHE) uygulanarak vasküler yatak ve parenkimde takip edilmiştir. Bir serbest radikal tutucu olan N-tert-bütil alfa-fenil-nitron (PBN), reperfüzyondan 15 dakika önce intraperitoneal olarak uygulanmış, koruyucu etkisini hangi kompartmanda gösterdiği tespit edilmeye çalışılmıştır. İntravital mikroskopi altında gerçekleştirilen deneylerde anlık fluoresan sinyali kaydedilmiş, zamana bağlı değişimler her bölge için ayrı ayrı analiz edilmiştir. İstatistiksel incelemelerde karışık doğrusal modelleme yöntemi ve Bonferroni yöntemi kullanılmıştır. Çalışma sonucunda, iskemi/ reperfüzyona bağlı oksidatif etkilenmenin hem vasküler yatakta hem de parenkimde olduğu görülmüştür. Reperfüzyondan hemen önce verilen PBN ise, arter duvarında ve ilk 12 dakikada daha belirgin olacak şekilde, tüm kompartmanlarda etkili olmuş ve oksidatif hasarda belirgin azalma sağlamıştır (arter duvarı için p< 0.001; ven duvarı için p= 0.009; parenkim için p= 0.016).

Abstract:
It is known in cerebral ischemia/ reperfusion injury that microvasculature is disturbed and reperfusion of main arteries do not result in sufficient reperfusion in capillaries. In this study, the source of oxidative stress that contracts pericytes resulting in capillary occlusion was investigated by intravital techniques, both spatially and temporally. For this purpose, distal middle cerebral artery (MCA) was occluded in mice, by direct compression over it for 1 hour and then reperfused. For the following 1 hour, superoxide formation was monitored in the vascular bed and in parenchyma with topical dihydroethidium (DHE). N-tert-butyl alpha-phenyl-nitrone (PBN), a free radical scavenger, was applied intraperitoneally to some animals 15 minutes before reperfusion and the compartment on which PBN shows most of its protective action was searched. During the experiments held under intravital microscopy, fluorescent signals were recorded instantaneously, and change in signal intensity over time was analyzed for each compartment separately. Mixed linear modelling and Bonferroni methods were used for statistical evaluations. This study revealed that oxidative damage of ischemia/ reperfusion occurs both in vascular bed and parenchyma. PBN, when applied 15 minutes before reperfusion, is protective in all compartments, more prominently in arterial wall and during the first 12 minutes of reperfusion, and decreases oxidative injury significantly (p< 0,001 for arterial wall; p= 0.009 for venous wall; p= 0,016 for parenchyma).