Deneysel hipospadyas modelinde doku kültürü ile oluşturulmuş üretra epiteli ile onarım
In an experimental hypospadias model to repair with tissue engineered urethral epithelium
Yazar: HAKAN SAMSUM
Danışman: PROF.DR. YUNUS SÖYLET
İstanbul Üniversitesi / Cerrahpaşa Tıp Fakültesi / Çocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2007
Konu: Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery ; Üroloji = Urology

Özet:
Amacımız, deneysel hipospadyas modeli oluşturulan tavşanların üretra epiteliniin vitro üreterek greftleme tekniği ile otolog transplante etmek ve üretral plak göreviniyerine getirmek üzere yaşamlarını sürdürdüğünü göstermektir.Kontrol ve çalışma grubunda altışar adet olmak üzere toplam 12 Yeni Zelandaerkek tavşanı kullanıldı. Distal üretranın yaklaşık 1 cm' lik bölümü eksize edilerekhipospadyas modeli oluşturuldu. Eksize edilen bölümün üretral mukozası incedisseksiyonla ayrıldı. Mukoza , laminer hava akımı altında steril şartlarda mekanik yollaparçalandı. DMEM-Ham's F 12 besiyeri içinde, 37 °C ısı ve %5 CO2 içeren nemliortamda, doku eksplant tekniği ile üretildi. Tüm flask yüzeyini dolduran hücrelerBromodeoxyuridine (BrdU) ile 24 saat inkübe edildikten sonra tripsinle ayrılıp sayıldıve steril, 1x1.5 cm ebadında Polyglycolic asit (PGA) polimerleri üzerine ekildi.Hücreler 5 gün süreyle inkübe edildi. Hücre-polimer kompleksi çalışmanın başındaeksize edilmiş olan penis yüzeyine greftleme tekniği ile yayıldı. Kontrol grubunda dahücresiz polimerler kullanıldı. Bir ay sonra penektomi yapıldı. Parafin bloklarda kesitleralındı. Hemotoksilen ve BrdU antikoru kullanılarak immunositokimyasal yöntemleboyandı.Çalışma grubundaki altı adet tavşanın greftlenmiş olan üretra epitel hücreleri,alınan kesitlerde BrdU antikoru ile boyandı. Kontrol grubundaki kesitlerde boyanmagörülmedi. Çalışma grubunun kesitleri ışık mikroskobu ile incelendiğinde gerftlenenyeni üretra epiteli kesitlerinin hemen tümünde bir tabaka halinde düzenli dağılımgöstermekteydi. Kontrol grubunda ise sadece proksimal orijinal üretraya yakın alanlardalokalize dağınık hücreler görüldü.Çalışmamızda üretra mukoza hücrelerinin in vitro çoğaltıldıktan sonragreftlendiği penis yüzeyinde düzenli bir tabaka olarak yer aldığı gösterilmiştir. Üretralplağın olmadığı veya yetersiz olduğu olgularda bu teknikle plak oluşturulabileceğidüşünülmektedir.

Abstract:
The aim of study is to perform autologous transplantation of in vitro cultivatedurethral epithelium using grafting technique and to demonstrate their survival asurethral plaque In experimental hypospadias model created in rabbits.We formed control and study groups, each one contained six adult male NewZealand rabbits. Hypospadias model was created by excision approximately one cmdistal urethra. Urethral mucosa was stripped off by fine dissection. In laminar air flow,mucosa was mechanically disrupted under sterile condition. Urethral epithelium wascultivated with tissue explants technique using DMEM-Ham?s F 12 as medium and in37 °C and 5 % CO2 . When they reached confluence, cells were treated withBromodeoxyuridine (BrdU) for 24 hours, then collected following trypsinization,counted and seeded onto steril Polyglycolic asit (PGA) polymers 1x1,5 cm in size. Cellswere incubated for five days. Cell-polymer complexes were laid on ventral penil surfaceby autologous grafting technique. In control group, cell-free polymers were used. Onemonth later, penectomie was performed in all animals. Specimens were paraffinembedded and sections were stained with hemotoxylen and immuncytochemically forBrdU antibodies.In study group, urethral epithelial cells in grafted six rabbits were stainedpositive for BrdU antibodies. In control group, sections were not stained for antibodies.When sections from study group were examined with light microscopy, almost in allsections, grafted neo-urethral epithelium was detected as regular linear cell layer. Incontrol group, urethral cells were seen to localize irregularly only adjacent to proximaloriginal urethra.In our study, we demonstrated that after in vitro propagated, urethral mucosalcells composed of grafted ventral penil surface as a regular epithelial layer. Weproposed that in cases without or lack of urethral plaque, this technique can be appliedas engineered tissue.