Keçi ve manda sütü laktoperoksidaz enziminin bazı sülfanilamid türevleri kullanılarak afinite tekniği ile saflaştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from goat and buffalo milk by using affinity technique
Yazar: SONGÜL BAYRAK
Danışman: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Laktoperoksidaz (LPO) enziminin inhibitörü olan 2-kloro-4-sülfamoyilanilin, 5-amino-1-naftalinsülfonamid, 4-amino-3-metil sülfonamid, 3-amino-4-kloro benzensülfonamid, 4-amino-6-kloro-1,3-benzendisülfonamid, 3,4-diamino-benzensulfonamid, 6-aminopiridin-3-sulfonamid, 4'-amino[1,1'-bifenil]-4-sulfonamid molekülleri enzimin saflaştırılmasında afinite kromatografisi ligandı olarak kullanıldı. Ligand moleküller ile CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-tirozin afinite jelleri sentezlendi. 2-kloro-4-
sülfamoyilanilin afinite kolonundan keçi sütü LPO enzimi %35,24 verimle 417,7 kat saflaştırılırken manda sütü LPO enzimi %20,34 verimle 151,86 kat saflaştırıldı. 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolonundan ise keçi sütü %5,45 verimle 350,18 kat saflaştırılırken, manda sütü %3,48 verimle 388,80 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (80 kDa). 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolonundan saflaştırılan keçi sütü LPO için optimum pH: 5,5, optimum sıcaklık 70°C, Km değeri 1,44 mM ve Vmax değeri 0,09 EÜ/ml iken manda sütü LPO için optimum pH: 5,5, optimum sıcaklık 70°C, Km değeri 0,08 mM ve Vmax değeri 0,52 EÜ/ml olarak tespid edildi. 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolunu için LPO'nun bağlanma kapasitesi 10°C'de pH:8,5 ve 0,35 M iyonik şiddet konsantrasyonunda 0,05 mg/g jel olarak belirlendi.

Abstract:
Molecules which were 2-chloro-4-sulfamoilaniline, 5-amino-1-naphthalenesulfonamide, 3-amino-4-chlorobenzenesulfanilamide, 4-amino-3-methyl benzenesulfanilamide, 4-amino-6-chloro-1,3-benzenedisulfanilamide, 3,4-diamino-benzenesulfonamide, 6-aminopyridine-3-sulfonamide and 4'-amino [1,1'-biphenyl]-4-sulfonamide inhibitors of the Lactoperoxidase (LPO) enzyme using as affinity chromatography ligands to purification of enzyme. CNBr activated Sepharose 4B-L-tyrosine affinity columns were synthesized with these ligand molecules. As a result of purification steps through a column of 2-chloro-4-sülfamoilaniline LPO enzyme from goat and buffalo milk was purified respectively 417.7 fold with a yield of 35.24% and 151.86 fold with a yield of 20.34%. Using with 5-amino-1-naphthalenesulfonamide column goat and buffalo milk LPO enzyme was purified respectively 350.18 fold with a yield of 5.45% and 388.80 fold with a yield of 3.48%. The purities of the purified enzymes were checked by SDS-PAGE and one band was found (80 kDa). Goat milk LPO that purified from 5-amino-1-naphthalenesulfonamide column, optimum pH: 5.5, optimum temperature 70°C, Km value 1.44 mM and Vmax value 0.09 EU/ml while for buffalo milk LPO optimum pH: 5.5, optimum temperature 70°C, Km value 0.08 mM and Vmax value 0.52 EU/ml were determined. Binding capacity of LPO by 5-amino-1-naphthalenesulfonamide column was determined 0.05 mg/g gel at 10°C pH: 8.5 and at a concentration of 0.35 M ionic strength.