Süt örneklerinden Staphlococcus ve Streptococcus türlerinin izolasyonu, tiplendirilmesi ve antibiyotik dirençlerinin belirlenmesi
Isolation and identification of Staphylococcus and Streptococcus species from milk and determination of their antibiotic susceptibilities
Yazar: SÜLEYMAN BAYAR
Danışman: YRD. DOÇ. DR. EMEL BANU BÜYÜKÜNAL BAL
Kahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2007
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada, 221 subklinik mastitis süt örneklerinden Staphylococcus ve Streptococcus türlerinin izolasyonu ve identifikasyonu yapılmıştır. Ayrıca izole edilen türlerin antibiyotik duyarlılıkları disk difüzyon metodu ile belirlenmiştir.İzole edilen bütün Staphylococcus türleri Coagulase Negatif Staphylococci (CNS) olmuştur. Toplam 100 CNS ve 34 Streptoccoccus türü geleneksel identifikasyon ve VITEK gram-positive (GP) identifikasyon kart metodları kullanılarak identifiye edilmiştir. CNS türleri arasında en fazla izole edilenler 27% oranında S. haemolyticus ve 24% oranında S. simulans olarak belirlenmiştir. İzole edilen diğer CNS türleri S. auricularis, S. hominis, S. warneri, S. capitis, S. cohnii, S. xylosus, S. epidermidis ve S. sciuri olmuştur. İdentifikasyonu cins düzeyinde moleküler düzeyde doğrulamak için, S. sciuri and S. xylosus isolatlarının bazılarından elde edilen kromozomal DNA, Staphylococcus 16S rRNA genine özgü PCR primerleri ile PCR metodu kullanılarak çoğaltılmıştır. CNS izolatlarının antimikrobiyal duyarlılık testleri sonucunda en fazla direnç Penicillin G (%58) ve Ampicillin (%49) için tespit edilmiştir. CNS izolatlarının çalışılan antibiyotiklere duyarlılık oranları, Oleandomycin (%65), Kanamycin (%66), Erythromycin (%81), Tetracycline (%86), Neomycin (%80), Clindamycin (%86), Chloramphenicol (%98) and Streptomycin (%80) olarak bulumuştur. İzole edilen dokuz farklı Streptoccocus türü arasında en fazla düzeyde izole edilenler S. uberis (%52) and S. agalactiae (%15)'dir. 34Streptococcus izolatı üzerinde aynı antibiyotiklerin disk difüzyonu ile değerlendirilmesi sonucunda, % 62 duyarlılık oranı ile en az etkili antibiyotik Streptomycin olarak bulunmuştur. Kanamycin ve Neomycin ise %0 direnç oranı ile en etkili antibiyotikler olarak tespit edilmiştir. Sonuçlar CNS ve Streptococcus türlerine ait patojenlerin sürüde bir arada bulunabildiği durumlarda, meme patojenlerinin izolasyon ve identifikasyonunun antibiyotik tedavisi seçiminde önemli bir kriter olabileceğini göstermektedir.Anahtar Kelimeler: Koagulaz negative Staphylococci (CNS), Streptococcus, Mastitis, Süt ve Antibiyotik duyarlılık

Abstract:
In this study, isolation and identification of Staphylococcus and Streptococcus species from 221 subclinical mastitic milk samples were performed. Moreover, antibiotic susceptibilities of isolates were determined using disk diffusion method.All of the isolated Staphylococcus species were Coagulase Negative Staphylococci (CNS). Total of 100 CNS and 34 Streptoccoccus species were identified using both conventional and VITEK gram-positive (GP) identification card methods. S. haemolyticus (27%) and S. simulans (24%) were the most frequently isolated species among CNS. The other isolated CNS species were S. auricularis, S. hominis, S. warneri, S. capitis, S. cohnii, S. xylosus, S. epidermidis and S. sciuri. To provide molecular level confirmation to identification, chromosomal DNA obtained from S. sciuri and S. xylosus isolates was amplified by PCR with Staphylococcus 16S rRNA gene specific primers. Antimicrobial susceptibility tests of 100 CNS isolates revealed the highest resistance to Penicillin G (58%) and Ampicillin (49%). The CNS isolates were also susceptible to Oleandomycin (65%), Kanamycin (66%), Erythromycin (81%), Tetracycline (86%), Neomycin (80%), Clindamycin (86%), Chloramphenicol (98%) and Streptomycin (80%). S. uberis (52%) and S. agalactiae (15%) were the most frequently isolated species among nine different identified Streptoccocus species. Same antibiotics were also evaluated in vitro on 34 Streptococcus isolates. Streptomycin was the least effective antibiotic on these isolates with 62% susceptibility rate. Kanamycin and Neomycin were the most effective antibiotics on these isolates yielding 0% resistance. Results indicate that isolation and identification of udder pathogens in herds suffering from different pathogens such as CNS and Streptococcus spp. might be an important criteria for selecting the most effective antibiotics for treatment.Key Words: Coagulase Negative Staphylococci (CNS), Streptococcus, Mastitis, Milk, Antibiotic susceptibility