HIV-1 replikasyonunu kontrol altında tutabilmek için HIV-1 transaktivatör proteinin (TAT) aktivitesini durduracak inhibitörlerin araştırılması
Investigation of inhibitors to stop the HIV-I transactivator      protein (TAT) in order to control the HIV replication
Yazar: GÜZİDE ŞATIR BAŞARAN
Danışman: PROF. DR. İLHAN DEMİRHAN
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: AIDS = AIDS ; Gen ürünleri = Gen products ; Gen ürünleri = Gen products ; HIV = HIV ; HIV I = HIV I ; HIV enfeksiyonları = HIV infections ; Kloramfenikol = Chloramphenicol ; Proteinler = Proteins ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Kazanılmış bağışıklık yetmezliği sendromu (AIDS), insan immün yetmezliği virüsü (HIV) sitotoksisitesinden kaynaklanan CD4+ hücrelerinin kaybıdır. HIV-1 Transaktivatör protein (Tat) ise virüsün gen ekspresyonu ve viral döngüsü için hücre içinde ve dışında görev alan önemli bir düzenleyici proteindir. Bu proteinin aktivitesinin yok edilmesi virüsün yaşam döngüsünü durdurabilir. Bu nedenle çalışmamızda Tat?ın, hücre içinde viral genomu aktive etmek üzere transaktivasyon duyarlı bölgesi (TAR) ile etkileştiği bazik aminoasit bölgesi ve proteininin fonksiyonunda önemli yeri olan sisteince zengin bölgesinin inhibisyonu hedeflenmiştir. 
Sistein (L-Sistein hidroklorit monohidrat, L-Sistin dimetilester dihidroklorit, 2- Merkaptonikotinik asit) ve bazik amino asit (D-Histidin monohiroklorit monohidrat, DL-Lizin dihidroklorit) türevi bileşiklerin Tat-proteinin aktivitesi üzerine etkileri jurkat hücre kültüründe araştırılmıştır. Hücreler tat genini kodlayan pCV1, promotor (Uzun Uç Tekrar Dizisi, LTR) ve markır gen bölgesi (Kloramfenikol Asetil Transferaz, CAT) taşıyan pC15CAT plazmitleri ile transfekte edilmiştir. İnhibitör bileşikler 50 ?g/ml konsantrasyonda yalnız bazik aminoasit türevleri ve L-Sistein hidroklorit monohidrat için, 100 ?g/ml? lik konsantrasyon ise bütün diziler için uygulanmıştır. CAT ekspresyonu ELISA kiti (Roche) kullanılarak tespit edilmiş, elde edilen sonuçlar Tat-proteinin aktivitesinin CAT ekspresyonu ile doğru orantılı olduğu esasına dayanarak yorumlanmıştır. 
Yapılan denemeler sonucunda 50 ve 100 ?g/ml?lik konsantrasyonda CAT enzim aktivasyonunun arttığı, sadece L-Sistin dimetilester dihidroklorit için 100 ?g/ml?lik konsantrasyonda % 2?lik inhibisyon gerçekleştiği tespit edilmiştir. Sonuç olarak çalışmamızda kullanılan bileşiklerin Tat protein inhibisyonunu gerçekleştirmediği gösterilmiştir. Bu sebeple ilaç geliştirme çalışmalarına önemli katkıları olacağı düşünülmektedir. 

Anahtar Kelimeler: AIDS, HIV, Tat-protein, CAT

Abstract:
AIDS is due to the loss of  CD4+ cells resulting from HIV cytotoxicity. Transactivator proteins of HIV-1 (Tat) is an important regulatory protein that functioned in and out of cells for the cycle of the virus and viral gene expression . Destruction of the this protein activity could stop of virus life cycle.  
In this study, it was aimed to inhibit cysteine-rich region that important for protein functions and basic amino acid region that interactions with Trans Activation-Responsive Region (TAR) to activating viral genome in the cell by Tat (trans activation of transcription).
The effects of cysteine derivates (L-Cysteine hydrochlorid monohydrate, L-Cystin dimetilester dihydrochloride, 2-Mercaptonikotinicacid) and basic  amino acid derivates  (D-Histidine monohydrochloride monohydrate, DL-Lysine dihydrochloride)  were investigated on Jurkat cell line cultures. The cells were transfected according to DEAE dextran procedure by using two plasmids containing HIV genome constituents tat and HIV-1-LTR gene (pCV1) and Chloramphenicol Acetyl Transferase, (CAT) gene (pC15CAT) in the study.
Inhibitor compounds were used for basic amino acids derivates  and L-Cysteine hydrochlorid monohydrate at doses including 50?g/ml and  were used for all inhibitors at doses 100?g/ml. CAT (Chloramphenicol Acetyl Transferase) activation was determined by using  CAT ELISA kit. Obtained results, based on the principle that activity of Tat-protein is directly proportional to CAT expression
In consequence of assays performed at dose of 50 and 100 ?g/ml  observed that activation of enzyme CAT increased, mean values of  2% inhibition observed  for L-Cystin dimetilester dihydrochloride at 100 ?g/ml dose.
As a result, in our study  Tat protein inhibition of using compounds was not a significant inhibition. For this reason, it is believed that this study will make contribution to drug development.  
   
Keywords: AIDS, HIV, Tat-protein, CAT, LTR