İstanbul'daki Akdeniz Servisi (Cupressus sempervirens L.) ve Sabin Ardıcı (Juniperus sabina L.) polenlerinin alerjenik proteinleri
Allergenic proteins of Mediterranean Cypress (Cupressus sempervirens L.) and Sabin Juniper (Juniperus sabina L.) pollens in İstanbul
Yazar: ŞAHİN TAŞ
Danışman: PROF. DR. EMİNE ŞEKÜRE NAZLI ARDA ; DOÇ. DR. ASLI GELİNCİK
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology

Özet:
Rüzgar aracılığıyla yayılış gösteren polenler önemli aeroalerjenlerdir.  Atmosfere yeterli miktarlarda salındıklarında alerjik olarak duyarlı kişilerde astım, rinit, konjunktivit vb. hastalıkların gelişimine yol açabilirler. Polenlerin yayılışı, havadaki miktarları, yapıları coğrafi bölge ve iklimden etkilenmektedir. Bu nedenle farklı bölgelerde yaşayan duyarlı kişilerin maruz kaldığı polen miktarı değişebilmekte ve etkilenen bireylerde farklı alerjik reaksiyonlar gelişebilmektedir. Servigiller (Cupressaceae) ailesinde bulunan ağaçların polenleri potansiyel aeroalerjenlerdir. Bunlar arasında özellikle servi (Cupressus) ve ardıç (Juniperus) polenleri en önemli alerjen kaynağıdır.

Servi türleri bol miktarda polen üretmektedir. Üretilen polen miktarının fazla olması polen duyarlılığını artırmaktadır. Servigiller ailesindeki bazı türler Türkiye'de geniş ve doğal yayılış göstermektedir. Dolayısıyla bu türlerin bölgeye özgü alerjenik etkilerinin araştırılması önemli hale gelmektedir.

Bu tez çalışmasında İstanbul'da yayılış gösteren Servigiller (Cupressaceae) ailesinden Akdeniz servisi (Cupressus sempervirens L.) ve Sabin ardıcı (Juniperus sabina L.) polenlerinin alerjenik proteinleri araştırıldı.

Polenler tozlaşma dönemlerinde toplanarak polen ekstreleri hazırlandı. Hazırlanan polen ekstreleri belirli oranlarda dilüe edilerek alerjik rinit hastalarına ve herhangi bir alerjik reaksiyon gözlenmemiş olan sağlıklı bireylere (kontrol grubu) deri prik ve nazal provokasyon testleri ile uygulandı.

Polen ekstreleri suda çözündürüldükten sonra proteinler sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile molekül ağırlıklarına göre ayrıldı. Ayrılan proteinler Western blot tekniği ile poliviniliden diflorür (PVDF) membran yüzeyine transfer edildikten sonra hasta serumları (primer antikor) ile muamele edilerek spesifik IgE antikorlarının alerjenik proteinlerle reaksiyona girmesi sağlandı. Membran daha sonra sekonder antikor (yaban turpu peroksidazı ile konjuge fare anti-insan IgE antikoru) ile muamele edildi. Gözlenen bantlar alerjenik proteinler olarak kabul edildi ve diğer klinik verilerle birlikte değerlendirildi. 

Akdeniz servisi polen ekstresi uygulanmış 18 hastanın 5'inde spesifik IgE antikorlarının ~20-68 kDa arasında molekül ağırlığına sahip toplam 8 polen proteinine bağlandığı gözlendi. Sabin ardıcı polen ekstresi uygulanmış 17 hastanın 9'unda spesifik IgE antikorları ~22-85 kDa arasında molekül ağırlıklarına sahip toplam 9 polen proteinine bağlandığı gözlendi. Kontrol bireyleriyle yapılan Western işaretleme çalışmalarında hiçbir bant gözlenmedi.

Abstract:
Wind-mediated spreading pollens are important aeroallergens. When they are released to atmosphere in sufficient amount, they can cause the development of diseases such as asthma, rhinitis, conjunctivitis etc. in allergically hypersensitive individuals. The spreading of pollens are affected by their amount in the air, their structures, geographic areas and the climate. Therefore, the amount of pollens that hypersensitive individuals who live in different regions are exposed to may differ and different allergic reactions may ocur in effected individuals. The pollens of cypress family (Cupressaceae) trees are potential aeroallergens. Among them especially the pollens of cypress (Cupressus) and junipers (Juniperus) are the most important allergen sources.
Cypress species produce high amount of pollens. The high amount of pollen production enhance the pollen sensitivity. Some species in cypress family are widely and naturally distributed in Turkey. Thus the research on region-spesific allergenic effects of these species becomes important. 
In this thesis project the allergenic proteins of pollens from Mediterranean cypress (Cupressus sempervirens L.) and Sabin juniper (Juniperus sabina L.) in cypress family (Cupressaceae) deployed in Istanbul were investigated.
Pollens were collected in pollination period and their extracts were prepared. The pollen extracts were diluted in certain ratios and were subjected to patients with allergic rhinits and to healthy individuals without any allergic reactions (control group) via skin prick and nasal provacation tests.
After dissolving the pollen extracts in water, proteins were separated by sodium dodecyl sulphate polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) according to their molecular weights. The separated proteins were transferred to polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane by Western blotting and were treated with patient serums (primary antibody) for inducing the reaction between IgE antibodies and allergenic proteins. Subsequently the membrane was treated with secondary antibody (horseradish peroxidase conjugated mouse anti-human IgE antibody). The observed bands were considered as allergenic proteins and were evaluated with other clinical data. 
It was observed that spesific IgE antibodies bound to total 8 pollen proteins betwen ~20-68 kDa in 5 out of 18 patients implemented Mediterranean cypress pollen extract, and implemented Sabine juniper pollen extract bound to total 9 pollen proteins between ~22-85 kDa. spesific IgE antibodies in 9 out of 17 patients. No band was detected in Western blotting studies performed with control individuals.