Kimyasal karsinojenezle oluşturulmuş meme tümör hücrelerinin CD40 ligand ile genetik modifikasyonu ve allojenik aşı preparatı olarak kullanılabilirliğinin değerlendirilmesi
Genetic modification of mammary tumor cells generated by chemical carcinogenesis with CD40 ligand and evaluation as an allogeneic vaccine preparation
Yazar: GÜNEŞ ESENDAĞLI
Danışman: PROF. DİCLE GÜÇ
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Genetik = Genetics ; Onkoloji = Oncology ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Gen klonlama = Gene cloning ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Transfeksiyon = Transfection

Özet:
CD40 molekülünün karsinom hücreleri üzerindeki varlığı tümöre özgül immün yanıtların geliştirilmesinde önemli bir etkendir. Tümör hücrelerinin heterojenliği ve immün yanıtın baskılanması immünoterapi için engel teşkil eder. Bu çalışmada, otoktonöz sıçan meme tümör modeli kullanıldı ve primer hücre kültürleri oluşturuldu: normal sıçan meme epitel hücreleri (SMEH'ler) ve sıçan meme tümör hücreleri (SMTH'ler). Geliştirilen tüm neoplastik lezyonlar üzerinde, in vivo, CD40 ekspresyonu varken normal meme epitel dokusu negatif idi. Diğer yandan, in vitro ortamda SMEH'ler %15.9±1.4, SMTH'ler %26.1±3.9 oranında CD40 eksprese etmekteydi (P<0.01). Tümör hücrelerinde TNF-?, IL-1ß, CXCL1 ve IL-6 proinflamatuvar sitokinlerinin ekspresyonu normal meme epitel hücrelerine kıyasla azalmıştı. Sıçan CD40 ligand (CD40L, CD154) kodlayan gen dizisi klonlandı (pCD40L) ve fonksiyonelliğinin gösterilmesinin ardından, SMTH'lere transfekte edildi (%12.2±2.9). Tümör hücrelerinde proinflamatuvar sitokin ekspresyonunu arttırdığı ve allojenik immün yanıtları canlandırdığı gözlendi. Boş vektör ile transfekte edilmiş SMTH'ler immün reaksiyonlardaki kostimülatör aktiviteyi engellerken, pCD40L CD80 ve CD86 ekspresyonunu artırabilmekteydi. Bu bulgular, heterojen primer meme tümör hücrelerinin, küçük bir CD40+ popülasyon içerse de, CD40L ile düşük-etkinlikli transfeksiyonunun tümörlerin baskılayıcı özelliklerinin aşılmasında yardımcı olabileceğini göstermiştir.Anahtar Kelimeler: Tümör hücre heterojenliği, meme kanseri, transfeksiyon, CD40, CD40 ligand, genetik-modifiye hücre aşısı

Abstract:
The presence of CD40 on carcinoma cells is an important factor for the generation of tumor-specific immune responses. Tumor cell heterogeneity and inhibition of immune response are the main obstacles for immunotherapeutic interventions. In this study, an autochthonous rat mammary tumor model was used and primary cell cultures, normal rat mammary epithelial cells (RMECs) and rat mammary tumor cells (RMTCs), were established. CD40 was expressed in vivo on all of the neoplastic lesions generated whereas normal mammary epithelial tissue was CD40 negative. On the other hand, 15.9±1.4% of the RMECs and 26.1±3.9% of the RMTCs (P<0.01) expressed CD40 in vitro. Expression of proinflammatory cytokines, TNF-?, IL-1ß, CXCL1, and IL-6, were decreased in tumor cells compared to normal mammary epithelial cells. Coding gene sequence of rat CD40 ligand (CD40L, CD154) was cloned (pCD40L) and after showing its functionality, it was transfected into RMTCs (12.2±2.9%). Modification with CD40L increased the proinflammatory cytokine expression in tumor cells and augmented allogeneic immune responses. Empty vector transfected RMTCs caused impediment of costimulatory activity whereas pCD40L transfection increased the extent of CD80 and CD86 expression. Our findings indicate that low-efficiency transfection of CD40L into heterogeneous populations of primary mammary tumor cells, even containing a small CD40+ population, may help overwhelming the suppressive features of the tumor.Key Words: Tumor cell heterogeneity, mammary cancer, transfection, CD40, CD40 ligand, genetically-modified tumor vaccine.