Glioblastoma multiforme tümör hücrelerine karşı Temozolomide ve Suberoylanilide hydroxamic acid'in kombine/sinerjik tedavisinde apoptoz etkinliğinin araştirilmasi
Synergistic effect of Temozolomide and Suberoynlanilide hydroxamic acid on apoptosis in glioblastoma multiforme cell line
Yazar: CENAY CİHAN
Danışman: PROF. DR. YAVUZ TAGA
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Antineoplastik birleşik kemoterapi protokolleri = Antineoplastic combined chemotherapy protocols ; Apoptozis = Apoptosis ; Glioblastoma = Glioblastoma ; Kök hücreler = Stem cells ; Protein-P53 = Protein-P53 ; Suberoylanilid hidroksamik asit = Suberoylanilide hydroxamic acid ; İlaç kombinasyonları = Drug combinations

Özet:
Gliomalar, merkezi sinir sisteminde en sık görülen tümörlerdir. Metilleyici ilaç temozolomide (TMZ) oral alkilleyici bir ajandır ve glioblastoma tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA), bir histon deasetilaz inhibitörüdür (HDAC). TMZ ve SAHA, tümör hücrelerinde apoptotik ölümü ve hücre döngüsü arestini indükler. Bu çalışmada p53-wt (wild type) insan glioblastoma hücre hattında, TMZ ve SAHA?nın potensiyel sinerjik etkisi incelendi.
Bu çalışmada hücre kültürü, hücre canlılık testi, annexin V / PI yöntemi ile apoptotik hücre analizi, hücre döngüsü analizi, mitokondriyal membran potansiyeli (MMP) ölçümü ve reaktif oksijen türevleri (ROS) ölçümü analizlerini gösterdik. DBTRG-05 MG glioblastoma hücreleri 1x106 hücre olacak şekilde 48 ve 72 saat inkübe edildi. TMZ ve SAHA?nın konsantrasyonları sırasıyla 50?M - 1000?M ve 0,5?M - 10?M olarak uygulandı. Belirtilen süreler içinde hücreler ilaçların çeşitli konsantrasyonlarını içeren ve içermeyen ortamlara maruz bırakıldı. Konsantrasyon bağımlı glioblastoma hücre büyümesinde TMZ ve SAHA?nın % 50 inhibe ettiği konsantrasyon (IC50)  bulundu. Apoptoz analizi annexin V / PI, hücre döngüsü, MMP ve ROS ile belirlendi. Elde edilen değerler ortalama ± SD değerleri olarak hesaplandı.  P değeri < 0.05 olarak bulundu. TMZ / SAHA kombinasyonunun isobologram analizi CalcuSyn yazılımı kullanılarak hesaplandı.
TMZ ve SAHA?nın tek ve birlikte kullanımı karşılaştırıldığında, iki ilacın eş zamanlı uygulanmasında DBTRG-05 MG hücrelerinde apoptoz uyarıldı ve p53 `ün etkisiyle hücre döngüsünde G2/M fazında bir birikme oldu. MMP kaybında ve ROS?ta zayıf bir artış bulundu. Tümör hücrelerinin proliferasyonu hücrelerin p53 durumu ile ilişkilidir. Uygulanan TMZ/SAHA kombinasyonu, glioblastoma hücrelerinde antiproliferatif bir etki gösterdi.

Abstract:
Gliomas are the most common primary tumours of the central nervous system. Methylating drug temozolomide (TMZ) is an oral alkylating agent that has been widely used in the treatment of glioblastoma. Suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA), an inhibitor of histone deacetylases (HDAC). TMZ and SAHA induces growth arrest and apoptotic cell death in a tumor cells. We evaluated the potential synergistic effect of TMZ and SAHA in p53-wt (wild type) human glioblastoma cell line.
We demonstrated in this study cell culture, cell viability assay, apoptotic cell annexin V / PI assay, cell cycle analysis, measurement of mitochondrial membrane potential (MMP) and measurement of intracellular reactive oxygen species (ROS). Glioblastoma cells DBTRG-05 MG (1×106) were cultured in 48h and 72 h. The concentrations of TMZ and SAHA used in this study were 50?M - 1000?M and 0,5?M - 10?M respectively. The cells were exposed to a medium with or without various concentrations of drugs for the indicated times. TMZ and SAHA determined glioblastoma cell growth in a concentration-dependent manner with a 50% inhibitory concentration (IC50). Apoptosis was measured with annexin V / PI , cell cycle , MMP (R123 dye) and ROS. The precentage of apoptotic cells by flow cytometry. Data are presented as the mean ± standard deviation from at least three independent experiments. P value of <0.05 was considered statistically significant. Isobologram analysis of the TMZ/SAHA combination in glioblastoma was calculated using the CalcuSyn software.
Compared with the use of TMZ or SAHA alone, concurrent treatment with both drugs synergistically induced apoptosis and duration of G2/M arrest in DBTRG-05 MG cells as evidenced by p53, slightly MMP loss and ROS production. The p53 status of cells was also associated with proliferation of tumor cells. Combination of TMZ and SAHA showed an antiproliferative effect on glioblastoma cells.