PC12 nöronal hücre hattında amiloid beta ile oluşturulan Alzheimer modelinde saponinlerin oksidatif makromolekül hasarı üzerine etkisinin incelenmesi
The effects of saponins on oxidative macromolecule damage in Alzheimer model generated by amyloid beta-induced PC12 neuronal cell line
Yazar: NİDA DEMİRÇAK
Danışman: DOÇ. DR. PINAR AKAN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Nöroloji = Neurology
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Amiloid beta protein = Amyloid beta protein ; Oksidatif hasar = Oxidative damage ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Saponinler = Saponins

Özet:
Alzheimer Hastalığı (AH) progresif ilerleme gösteren, hafıza kaybı ile sonuçlanan geri dönüşümsüz nörodejeneratif bir hastalıktır.65 yaş üstü ölüm nedenleri arasında altıncı sırada yer almaktadır. Geleneksel Çin tıbbında kullanılan saponinlerin antioksidatif etkiye sahip olduğunu gösteren çalışmalar, oksidatif strese bağlı nöronal hücre ölümünde önleyici ya da destekleyici bir tedavi yöntemi olarak kullanımlarını düşündürmektedir.Amaç: AH tedavisine yönelik ilaç adayı olabilecek dört farklı saponin türü olan Astragalozit IV (Ast IV), Sikloastragenol (CG), Astragalozit VII (Ast VII) ve Makrofillosaponin B (Mac B)'nin PC12 hücrelerinde Aß toksisitesi ile oluşturulan Alzheimer modelinde hücre canlılığı ve oksidatif makromolekül hasarı üzerine etkilerini belirlemektir.Yöntem: PC12 hücrelerine 24 saat eş zamanlı ve ayrı ayrı Aß(25-35) ve saponinler uygulanarak doza bağlı değişen hücre canlılıkları MTT yöntemi ve mikroskobik inceleme ile değerlendirildi. Oksidatif hasarlardan lipit peroksidasyonu (malondialdehit) HPLC yöntemi, oksidatif DNA baz hasarı GC/MS yöntemi ve protein oksidasyonu (total tiyol düzeyi) Ellman's yöntemi ile saptandı.Bulgular: 20 µM Aß(25-35)'in 24 saat uygulanması hücre canlılığını ~%65 düzeyinde azaltmaktadır. 20 µM Aß(25-35) toksisitesine karşı 100 µM CG ve Ast IV'ün hücre canlılığını sırasıyla %27 (p=0.000) ve %6 (p=0.017) oranında arttırdığı saptandı. Ancak Aß(25-35) toksisitesine karşı 1 nM-100 µM Ast VII ve Mac B'nin hücre canlılığı üzerine anlamlı etkisi gözlenmedi. Aß uygulaması total tiyol ve FapyAde düzeylerini kontrol grubuna göre azaltırken (sırası ile p=0.011, p=0.021), MDA düzeyini istatistiksel olarak anlamlı olmamakla birlikte arttırdığı gözlendi. Aß ile birlikte Ast IV ve CG uygulanan grupların total tiyol, MDA ve FapyAde düzeylerinde Aß uygulanan gruba göre anlamlı fark gözlenmedi.Sonuç: Çalışmamızda Aß toksisitesine karşı dört farklı saponinin koruyucu etkisi incelendi ve sadece Ast IV ve CG'nin hücre canlılığını arttırdığı saptandı. Bu saponinlerin 24 saatlik uygulamasının PC12 hücrelerinde oksidatif makromolekül hasarı üzerine anlamlı bir etkisi saptanmadı. Bu moleküllerin koruyucu etkisinin daha kapsamlı in vitro ve in vivo çalışmalar ile ortaya konması, toplumumuz için önemli bir sosyo-ekonomik problem halini alan Alzheimer hastalığında bir tedavi seçeneği olma potansiyelini artırabilir.

Abstract:
Alzheimer?s disease (AD) is a progressive, irreversible neurodegenerative disorder which results in memory impairment. Alzheimer?s disease is the sixth leading cause among all the death causes in individuals over 65 years of age. Studies show that saponins that are used in Traditional Chinese Medicine have antioxidative effects; therefore, these molecules may be of use as preventive or supportive therapy against oxidative damage mediated neuronal cell death.Objective: To determine the effects of four different saponins (as drug candidates against AH), Astragaloside IV (Ast IV), Cycloastragenol (CG), Astragaloside VII (Ast VII) and Macrophyllosaponin B (Mac B), on cell viability and oxidative macromolecules? damage in Aß-induced PC12 cells in the context of Alzheimer model.Method: Aß and saponins were exposed as tandem or separately in PC12 cells for 24 h, and dose dependent cell viabilities were evaluated by MTT assay and microscopic investigation. Among the oxidative damages, lipid peroxidation (malondialdehyde) was detected with the HPLC method, DNA oxidation with the GC/MS method and the protein oxidation (total thiol levels) with Ellman?s method.Results:Treatment with 20 ?M Aß(25-35)for 24 h reduced cell viability by ~65% as compared to