Böbrek iskemi ve reperfüzyonunda Ca++ ve Na+ kanal blokerlerinin otofajiye olan etkisinin araştırılması
The effect of autophagy renal ischemia-reperfusion Ca++ and Na+ channel blockers
Yazar: KEVSER FIRAT
Danışman: DOÇ. DR. TUNCER DEMİR
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Böbrek = Kidney ; Böbrek hastalıkları = Kidney diseases ; Genler = Genes ; Kalsiyum kanal blokerleri = Calcium channel blockers ; Otofaji = Autophagy ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Verapamil = Verapamil ; İskemi = Ischemia

Özet:
Böbrekteki iskemi-reperfüzyon hasarı (İ/R), moleküler basamakları tam olarak aydınlatılamamış, bir patofizyolojik süreçtir. İskemik hasarın derecesi, hipoksinin derinliğine bağlı olmakla birlikte hücre ölümüne kadar uzanan moleküler basamakları tetikler. Çalışmada iskemi gibi stres durumunda böbrek hücrelerinde Ca++ kanal blokeri verapamil ve Na+ kanal blokeri olan lidokainin otofaji yolağındaki genlerinin ekspresyonlarına bakmayı amaçladık. Bunun için 5 tane farklı otofaji geni; Atg5, Atg7, Atg10, Becn1 ve Ulk1 belirledik. Çalışmada toplam 24 adet erişkin 200-250 gram ağırlığında Wistar-Albino sıçan kullanıldı. Sıçanlara, anestezi sonrası orta hat boyunca laparotomi yapılarak, renal artere ve vene klemp uygulandı. Gruplar ve özellikleri: Grup I= Sham Grubu: İskemi ve/veya reperfüzyon yapılmayan grup. Grup II= İ/R uygulanan grup: 60 dk. boyunca iskemi sonrasında 48 saatlik reperfüzyon uygulandı. Grup III= İ/R ve kalsiyum (Ca++) kanal blokeri uygulanan grup: Anesteziden 30 dk. önce verapamil (Ver) ile oral yolla 1.25 mg/kg dozda ön tedavi verildi, sonra İ/R yapıldı. Grup IV= İ/R ve sodyum (Na+) kanal blokeri uygulanan grup: Anesteziden 30 dakika önce lidokain (L) intraperitonal (i.p.) 1 mg/kg doz ön tedavi verildi, sonra İ/R yapıldı. Alınan dokularda moleküler analiz değerlendirilerek, RNA izolasyonu cDNA sentezi ve qPCR ile otofajik mekanizmanın gen ekspresyon analizi yapıldı. Elde edilen sonuçlara bakıldığında; sham grubuna göre Atg5, Atg7, Atg10, Becn1 ve Ulk1 genlerinin ekspesyonu İ/R, İ/R Ca++ (grup III) ve İ/R Na+ (grup IV) gruplarında anlamlı artış gözlendi. İ/R ile İ/R Ca++ grupları arasında tüm genlerde anlamlı olarak ekspresyonun azalmış olduğu gözlendi.

Abstract:
Renal ischemia-reperfusion injury (I / R), the molecular steps are not fully understood, is a pathophysiological processes. The degree of ischemic damage, ranging from molecular step in cell death although it depends on the depth of hypoxia triggers. In the study, we aimed to evaluate the effects of verapamil, a Ca++ channel blocker, and lidocaine, a Na+ channel blocker,  on the genes play role in autophagy pathway in the kidney cells subjected to the I/R injury. For this, 5 autohagy genes; Atg5, Atg7, Atg10, Becn1 and Ulk1 were selected. 24 adult Wistar-albino rats of weight 200–250 grams were used. Rats, after anesthesia along the midline laparotomy was performed clamping the renal artery and vein. Gruops and features; Group I= Sham;  not subjected to ischemia/reperfussion, Group II= I/R group; After ischemia reperfusion for 60 minutes was performed 48 hours. Group III = I / R, and calcium (Ca ++) channel blockers,the group:30 minutes  prior to anesthesia verapamil (Ver) by oral 1.25 mg / kg doses were given pre-treatment, after I / R was performed.  Group IV= lidocaine (L) (1 mg/kg) was intraperitoneally given to the rats as pretreatment in this group 30 minutes before anesthesia, then the rats were subjected to I/R. The advanced molecular analysises (RNA isolation, cDNA synthesis and qPCR) were perfomed to the obtained tissues. The expressions of Atg5, Atg7, Atg10, Becn1 and Ulk1 genes were statistically increased in the I/R, I/R Ca++ (group III) and I/R Na+ (group IV) groups compared to the sham. Also, a significant decrease occured in the all genes in I/R Ca++ group compared to the between I/R groups.