Deguelinin insan servikal karsinoma (HeLa) hücre dizisi üzerindeki antiproliferatif ve apoptotik etkilerinin araştırılması
Investigation of the antiproliferative and apoptotic effects of deguelin on human cervical carcinoma (HeLa) cell line
Yazar: MELEK GÜNİNDİ KORKUT
Danışman: PROF. DR. AYŞE PINAR ÖZTOPCU VATAN
Eskişehir Osmangazi Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Kanser, çağımızın en önemli sağlık sorunlarından birisidir. Serviks kanseri, dünyada kadınlarda görülen kanserler arasında dördüncü sırada yer almaktadır. Hastalığın tedavisi için yeni ve doğal maddelerin arayışı sürmektedir. Deguelin de Mundulea sericea'nın (Leguminosae) da içinde bulunduğu çeşitli bitkilerden izole edilen ve güçlü sitotoksik ve kemopreventif özellik gösteren bir rotenoidtir. 

	Çalışmamızda deguelinin (1, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250 and 300 µM) insan serviks karsinoma (HeLa) hücreleri üzerindeki antiproliferatif etkileri MTT yöntemi ile araştırılmıştır. Deguelinin sitotoksik etkisini karşılaştırmak için, sisplatin ve 5-FU pozitif kontrol olarak seçilmiştir. Deguelinin IC50 değerleri 24 ve 48 saat için sırasıyla 50 µM ve 23 µM olarak hesaplanmıştır. Yirmidört saat için hem sisplatin hem de 5-FU'nun IC50 değeri hesaplanamazken, 48 saatte sisplatinin IC50 değeri 167 µM olarak belirlenmiştir. Deguelinin HeLa hücre morfolojisi üzerindeki etkileri ters ışık mikroskobu kullanılarak araştırılmıştır. Seçilen 25, 50 ve 100 µM deguelin dozlarının apoptotik hücre ölümünü doza ve zamana bağlı olarak arttırdığı DNA fragmentasyon yöntemiyle belirlenirken; 50 ve 100 µM deguelin dozlarının ise TP53, SURVİVİN, FAS ve KASPAZ3 gen anlatım düzeyleri üzerindeki etkisi RT-RZR yöntemi ile araştırılmıştır. Deguelinin SURVİVİN gen anlatımını azalttığı, TP53, FAS ve KASPAZ3 gen anlatım düzeylerinin ise arttığı belirlenmiştir. 

	Çalışmamızda, deguelinin insan serviks karsinoma (HeLa) hücre dizisi üzerinde doza ve zamana bağlı olarak antiproliferatif, morfolojik ve apoptotik etki gösterdiği belirlenmiştir. Aynı zamanda, deguelinin apoptotik süreçte görev alan SURVİVİN gen anlatımını baskılayıp, TP53, FAS ve KASPAZ3 genlerinin anlatım düzeylerini ise arttırdığı gösterilmiştir. Çalışmamızın, ileride serviks kanseri ile ilgili yapılacak farklı in vitro ve in vivo çalışmalara ışık tutacağını düşünmekteyiz.

Abstract:
Cancer is a terrible disease and represents one of the serious health-care issues for the human race, demanding a proactive strategy for cure. Cervical cancer is the fourth most common cancer in female worldwide. Finding novel and efficient compounds of natural origin has been a major point of concern for research in the pharmaceutical sciences. Deguelin, a rotenoid, isolated from several plant species including Mundulea sericea (Leguminosae) has been shown to be a strong antitumor and cancer chemopreventive agent in several mammalian cell culture systems.

The current study was thus designed to investigate antiproliferative effects of deguelin on human cervical cancer (HeLa) cells by MTT assay. Cisplatin and 5-FU used as positive controls in comparison to the cytotoxic activity of deguelin. HeLa cells were treated with all agents in doses of (1, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250 and 300 µM) for 24 and 48 hours. IC50 values of deguelin were estimated as 50 µM and 23 µM for 24 and 48 hours, respectively. While IC50 values of neither cisplatin nor 5-FU were not determined for 24 hour, cisplatin's IC50 value was calculated as 167 µM for 48 hours. The effects of deguelin on HeLa cell's morphology were examined by using inverted microscopy. To show whether the antiproliferative effect of deguelin is through apoptosis, DNA fragmentation was measured by cell death ELISA plus kit. RT-PCR was employed to assess the expression levels of TP53, SURVIVIN, FAS and CASPASE3. The expression of SURVIVIN was downregulated and TP53, FAS and CASPASE3 expressions were upregulated in deguelin-treated HeLa cells.

In our present study, we determined that deguelin shows antiproliferative, morphological and apoptotic effects on human cervical carcinoma (HeLa) cells in a dose and time dependent manner. Also, we demonstrated that deguelin downregulates SURVIVIN expression and upregulates TP53, FAS and CASPASE3 expressions on HeLa cells. We are thinking that our research will be source of further in vitro and in vivo studies for cervix cancer.