Farelerde oluşturulan kronik deneysel otoimmün ensefalomiyelit modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz inhibisyonunun GPR75/FLC/PI3K/AKTL'e bağımlı antiapopitotik sinyal ileti yolu üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of soluble epoxide hydrolase inhibition on GPR75/FLC/PI3K/AKTL-dependent antiapoptotic signaling pathway in chronic experimental autoimmune encephalomyelitis model in mice
Yazar: MEHMET FURKAN HORAT
Danışman: PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı / Farmakoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Ensefalomiyelit = Encephalomyelitis ; Epoksit hidrolaz = Epoxide hydrolase ; Fareler = Mice ; Hayvan hastalıkları = Animal diseases ; Sinyal nakli = Signal transduction ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Bu tezde, farelerde miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG)35-55 peptit kullanılarak oluşturulan kronik deneysel otoimmün ensefalomiyelit (DOE) modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz (çEH) inhibisyonunun hastalık bulguları üzerindeki yararlı etkisinin mekanizmasının santral sinir sistemi (SSS)'de G proteini reseptörü (GPR) 75/fosfolipaz C (FLC)/fosfoinozitit 3-kinaz (phosphoinositide 3-kinase; PI3K)/Akt1 sinyal ileti yolu aracılıklı enflamasyon, apopitoz, demiyelinizasyon ve remiyelinizasyon ile ilişkilendirilerek araştırılması amaçlanmıştır. Deneylerde 3 gruba ayrılan C57BL/6 dişi farelerin beyin ve omurilik dokuları kullanılmıştır: (1) MOG35-55 peptit (200 ug/fare; 0.1 ml/fare; subkütan [s.k.])+pertusis toksin (PT) (400 ng/fare; 0.1 ml/fare; intraperitoneal [i.p.])+sodyum fosfat tamponu (SFT) (0.1 ml/fare; i.p.), (2) MOG35-55 peptit (200 ug/fare; 0.1 ml/fare; s.k.)+PT (400 ng/fare; 0.1 ml/fare; i.p.)+dimetilsülfoksit (DMSO) (0.1 ml/fare; i.p.) ve (3) MOG35-55 peptit (200 ug/0.1 ml/fare; s.k.)+PT (400 ng/fare; 0.1 ml/fare; i.p.)+triflorometoksifenil-3-(1-propiyonilpiperidin-4-il)üre (trifluoromethoxyphenyl-3-[1-propionylpipe-ridin-4-yl]urea; TPPU) (3 mg/kg; 0.1 ml/fare; i.p.). Doku homojenatlarından hazırlanan süpernatantlarda β-tübülin, çEH, GPR75, Gaq/11, c-Jun (transkripsiyon faktörü etkinleştirici protein [activator protein; AP] 1'in başlıca bileşeni), fosforile c-jun, FLC β4, PI3K p85a, fosforile PI3K p85, Akt1, fosforile Akt1, mitojen ile etkinleştirilen protein kinaz (mitogen-activated protein kinase kinase; MEK) 1/2, fosforile MEK1/2, ekstraselüler sinyal ile düzenlenen kinaz (extracellular signal-regulated kinase; ERK) 1/2, fosforile ERK1/2, siklik adenozin monofosfat yanıt elementi bağlayıcı protein (cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein; CREB) 1, fosforile CREB1, B-cell lymphoma (Bcl)-2, miyelin proteolipit protein (PLP) ve semaforin (SEMA) 3A proteinlerinin ekspresyonu immunoblotting yöntemiyle ölçülmüştür. TPPU uygulanan farelerin dokularında, SFT ve DMSO gruplarına göre, çEH, GPR75, Gq/11, c-jun, fosforile c-Jun ile SEMA3A protein ekspresyonunun daha düşük, FLC β4, fosforile PI3K p85, fosforile Akt1, fosforile MEK1/2, fosforile ERK1/2, fosforile CREB1, Bcl-2 ile miyelin PLP protein ekspresyonunun daha yüksek olduğu, ayrıca PI3K p85a, Akt1, MEK1/2, ERK1/2 ve CREB1 protein ekspresyonunun değişmediği görülmüştür. Bu bulgular, TPPU ile çEH inhibisyonunun DOE'de görülen hastalık bulgularını azaltıcı etkisine, pro-enflamatuvar GPR75/Gaq/11/AP-1 sinyal ileti yolu etkinliği ve remiyelinizasyon inhibitörü SEMA3A ekspresyonundaki azalmanın yanı sıra, antiapopitotik FLC β4/Akt1/MEK1/2/ERK1/2/CREB1/Bcl-2 sinyal ileti yolu etkinliği ve SSS'de miyelin membranın başlıca bileşeni olan PLP ekspresyonundaki artmanın katkıda bulunabileceğini düşündürmüştür.

Abstract:
The aim of this thesis was to investigate the mechanism of the beneficial effect of soluble epoxide hydrolase (sEH) inhibition on disease signs in relation to G protein receptor (GPR) 75/phospholipase C (PLC)/phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt1 signaling pathway-mediated inflammation, apoptosis, demyelination, and remyelination in the central nervous system (CNS) of mice using the myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 peptide-induced chronic experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) murine model. Brains and spinal cords of C57BL/6 female mice divided into 3 groups were used in the experiments: (1) MOG35-55 peptide (200 ug/mouse; 0.1 ml/mouse; subcutaneous [s.c.])+pertusis toxin (PT) (400 ng/mouse; 0.1 ml/mouse; i.p.)+phophate-buffered saline (PBS) (0.1 ml/mouse; i.p.), (2) MOG35-55 peptide (200 ug/mouse; 0.1 ml/mouse; s.c.)+PT (400 ng/fare; 0.1 ml/mouse; i.p.)+dimethyl sulfoxide (0.1 ml/mouse; i.p.), and (3) MOG35-55 peptide (200 ug/0.1 ml/mouse; s.c.)+PT (400 ng/mouse; 0.1 ml/mouse; i.p.)+trifluoromethoxyphenyl-3-(1-propionylpiperidin-4-yl)urea (TPPU) (3 mg/kg; 0.1 ml/mouse; i.p.). Supernatants prepared from tissue homogenates were used for the measurement of β-tubulin, sEH, GPR75, Gaq/11, c-jun (an essential component of the transcription factor activator protein; [AP]-1), PLC β4, PI3K p85a, phosphorylated PI3K p85a, Akt1, phosphorylated Akt1, mitogen-activated protein kinase kinase kinase (MEK) 1/2, phosphorylated MEK1/2, extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2, phosphorylated ERK1/2, cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein (CREB) 1, phosphorylated CREB1, B-cell lymphoma (Bcl)-2, myelin proteolipid protein (PLP), and semaphorin (SEMA) protein expression by using the immunoblotting method. It was observed that, compared to the PBS and DMSO groups, expression of sEH, GPR75, Gaq/11, c-jun, phosphorylated c-Jun, and SEMA3A proteins was lower, expression PLC β4, phosphorylated PI3K p85a, phosphorylated Akt1, phosphorylated MEK1/2, phosphorylated ERK1/2, phosphorylated CREB1, Bcl-2, and myelin PLP proteins was higher, and expression of PI3K p85a, Akt1, MEK1/2, ERK1/2, and CREB1 proteins was not changed in the tissues of mice-treated with TPPU. These findings suggest that reduced activity of pro-inflammatory GPR75/Gq/11/AP-1 signaling pathway and expression of remyelination inhibitor, SEMA3A, as well as increased activity of antiapoptotic PLC/PI3K/Akt1/MEK1/2/ERK1/2/CREB1/Bcl-2 signaling pathway and expression of the main protein of the CNS myelin membrane, PLP, contribute to the attenuating effect of sEH inhibition by TPPU on signs of the disease seen in EAE.