Anti-apoptotik Bcl-xl proteininin immunolojik, fonksiyonel ve yapı çalışmaları için rekombinant olarak üretilmesi
Expression of recombinant anti apoptotic Bcl-xl protein for immunologic, functional and structure studies
Yazar: FATMA GEDİKLİ
Danışman: PROF. DR. İSA GÖKÇE
Gaziosmanpaşa Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Bölümü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Escherichia coli = Escherichia coli ; Rekombinant DNA teknolojisi = Recombinant DNA technology ; Rekombinant protein üretimi = Recombinant protein production

Özet:
Programlı hücre ölümü yani apoptosis çok hücreli organizmaların hayatlarının devamı için embriyonik gelişme ve doku hemostazi süreçlerinde istenmeyen, hasar görmüş, yaşlanmış, yanlış yerleştirilmiş veya otoimmün hücrelerin yok edilmesini sağlar. Bcl-2 ailesi proteinleri apoptosis mekanizmasının düzenlenmesinde oldukça önemli bir rol oynarlar. Bcl-xl de bu aileye ait proteinlerden biridir. Bcl-xl antiapoptotik bir düzenleyici protein olarak görev yapar. Apoptosisin anormal bir şekilde kontrol edilmesi kanser, otoimmün ve dejeneratif türden hastalıkların içerisinde olduğu birtakım düzensizliklere neden olur. Apoptosis mekanizmasının anlaşılması ve aydınlatılması kanser ve benzeri hastalıkların teşhis ve tedavisinde önemli rol oynamaktadır. Bu çalışmalara katkıda bulunmak, amacı ile apoptosisin bir parçası olan Bcl-xl proteinini rekombinant olarak üretmek istedik ve rekombinant Bcl-xl-Maltoz bağlanma protein füzyonu olarak 90 mg/l verimle üretildi. Elde edilen rekombinant Bcl-xl proteininin yapı olarak doğru bir şekilde katlandığı ?circular dichroism? (CD) spektroskopisi çalışmaları ile ve fonksiyonelliği de yapılan yüzey plazma rezonans (SPR) spektroskopisi deneyleri ile ispatlandı. Üretmiş olduğumuz, doğru katlanmış ve fonksiyonel protein kullanılarak bu protein için monoklonal antikorlar geliştirilebilir. Üretilen bu antikorlar birçok kanser türü için doku ve vücut sıvılarında western blotlama ve immünolojik çalışmalarla Bcl-xl proteinin fazla üretildiğini göstermek için kullanılabilir.

Abstract:
Programmed cell death (apoptosis) plays an integral role in the maintenance of multicellular organisms through the eliminating unwanted, damaged, aged and misplaced or autoimmune cells during embryonic development and tissue homeostasis. The ubiquitous Bcl-2 family of proteins that includes Bcl-xl plays a pivotal role in regulating apoptosis. Bcl-xl functions as an anti-apoptotic protein in the cell. Abnormal regulation of apoptosis results in a variety of diseases including cancer, autoimmunity and degenerative disorders. Understanding and explaining of apoptosis mechanism is acting very important role in diagnosing and therapy of cancer and some cancer like illnesses. In addition to Apoptotic studies we would like to produce recombinant anti-apoptotic Bcl-xl protein and recombinant protein is expressed as a Bcl-xl-maltose binding protein fusion with 90 mg/l yield. Structurally, proper folding of Bcl-xl protein is demonstrated by using circular dichroism (CD) spectroscopy and also its functionality was shown by surface plasmon resonance spectroscopy studies (SPR). Monoclonal antibodies could be produced against folded and functional recombinant Bcl-xl protein. These antibodies can be used for western blottings and some immunological studies to indicate over expression of Bcl-xl protein in some cancer tissues and biological liquids.