Fenolik bileşiklerin Rp-Hplc-Pda ile analiz yöntemi geliştirilmesi, validasyonu ve etanolik propolis özütlerine uygulanması
Developing analysis method Of phenolıc compounds by Rp-Hplc-Pda, validatıon and applıcation to ethanolic propolis extracts
Yazar: YAKUP KARA
Danışman: PROF. DR. SEVGİ KOLAYLI
Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Kimya = Chemistry

Özet:
Bal, polen ve propolis gibi arı ürünlerinin biyolojik aktif değerleri yapılarında bulunan polifenollerden ileri gelmektedir. Arı ürünleri içinde en yüksek polifenol içeren ürün propolisdir. Propolis arılar tarafından çiçek ve tomurcuklardaki reçinelerin toplanması ve bazı enzimlerle işlenmesiyle oluşan doğal bir karışım olup kovanın savunmasında rol oynar. Kovanlardan kazımak suretiyle elde edilen ham propolis direk olarak tüketilemez. Etanolik ekstrakları şeklinde değişik formülasyonlarda işlendikten sonra tüketilmektedir. Yapılan bu çalışma ile etanolik propolis ekstraklarının hazırlanmasında ve fenolik profilinin tespit edilmesinde optimum şartların belirlenmesi amaçlandı. %0 dan %100'e kadar farklı yüzdeliklerde etanol/su karışımı kullanılarak en ideal ekstraksiyon çözücüsü arandı. Toplam polifenol (TP), toplam flavonoid (TF), toplam antioksidan (TA) kapasite ve briks düzeylerine göre propolis örneklerinin değerlendirmesi yapıldı. Propolis ekstraklarının fenolik kompozisyonu kesinlik, doğruluk, LOD, LOQ ve % geri kazanım gibi validasyon parametreleri dikkate alınarak 25 fenolik standart üzerinden HPLC-PDA sisteminde analiz edildi. Sonuç olarak optimum etanolik çözücü yüzdesinin %60 ile %70 arasında değişim gösterdiği, ultrasonik ekstraksiyon işleminin verimi arttırdığı ve en ideal propolis-çözücü oranının (g/v) 1:5 ile 1:10 aralığında değişim gösterdiği tespit edildi. Kullanılan çözücünün polaritesi arttıkça fenolik asit miktarının arttığı, buna karşın polarite azaldıkça flavanoidlerin miktarı arttığı tespit edildi.

Abstract:
The biological active values of bee products such as honey, pollen and propolis are due to the polyphenols contained in it. The highest polyphenol-containing product among the bee products is propolis. Propolis is a natural mixture formed by collecting the resins in flowers and buds by bees and processing them with some enzymes and plays a role in the defense of the hive. Raw propolis obtained by scraping from the hives cannot be consumed directly. It is consumed after processing in different formulations as ethanolic extracts. With this study, it was aimed to determine the optimum conditions for the preparation of ethanolic propolis extracts and determination of the phenolic profile. The ideal extraction solvent was searched using ethanol / water mixture in different percentages from 0% to 100%. Propolis samples were evaluated according to total polyphenol (TP), total flavonoid (TF), total antioxidant (TA) capacity and brix values. The phenolic composition of propolis extracts were analyzed with the 25 phenolic standards in the HPLC-PDA system, considering the validation parameters such as precision, accuracy, LOD, LOQ and % recovery. As a result, it was determined that the optimum ethanolic solvent percentage varies between 60% and 70%, the ultrasonic extraction process increases the solubility and the most ideal propolis-solvent ratio (g/v) varies between 1: 5 and 1:10. It was found that the amount of phenolic acid increased as the polarity of the solvent used increased, whereas the amount of flavonoids increased as the polarity decreased.