Behçet hastalarında ınterlökin-1?, ınterlökin-1ß, ınterlökin-2, ınterlökin-8 ve tümör nekrosis faktor-? gen polimorfizmlerinin belirlenmesi ve bu genlerin behçet hastalığının aktif ve inaktif fazdaki ekspresyonlarının karşılaştırılması
Determination of the interleukin-1?, interleukin-1ß, interleukin-2, interleukin-8 and tumour necrosis factor- ? genes polymorphism in behcet patients and comparison of these genes expression in active and inactive phase of the behcet?s disease
Yazar: SERPİL TAHERİ
Danışman: PROF. DR. YUSUF ÖZKUL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2009
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Behçet hastalığı dünyada ilk kez 1937 yılında bir Türk dermatolog olan Prof. Dr. Hulusi Behçet tarafından tekrarlayan oral aft, genital ülserasyon ve hipopiyonlu iridosiklitten oluşan ayrı bir antite olarak tanımlanmıştır. Bu sendroma 1947 yılında Behçet Sendromu, Morbus Behçet veya Behçet hastalığı(BH) denilmiş ve tıp literatürüne geçmiştir. Ailevi vakalar hastalıkta genetik faktörleri akla getirirken coğrafi dağılım ise çevresel etkenlerin rol oynayabileceğini düşündürmektedir.BH kronik zeminde akut ataklarla seyreden ve ataklar sırasında çok zengin sitokin salınmasının izlendiği bir hastalıktır. Çok sayıda proinflamatuvar sitokin , kemokin ve özellikle T helper 1 tipindeki sitokinlerin hastalık aktivitesi ile alakalı olduğu gösterilmiştir. Bizde bu yoldan hareket ederek Behçet hastalığında IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A) ve TNF-? -1031(T/C) promotor polimorfizmleri ile IL1?, IL1ß, IL2, IL8 ve TNF-? genlerinin aktif, inaktif ve göz tutulumlu fazlarda araştırılmasını amaçladık.Dermatoloji ve Göz Hastalıkları Anabilim Dallarına başvuran 30 Behçet hastası ve 10 kontrolden 2ml EDTA'lı kan örneği alınarak, DNA ve RNA izolasyonları yapıldı. DNA örneklerinden PCR-RFLP ve Multipleks PCR metoduna dayalı olarak gen polimorfizm çalışmaları yapıldı. RNA örneklerinden Real Time PCR metoduna göre internal kontrol olarak Beta-aktin kullanılarak ekspresyon çalışmaları yapıldı.IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A) ve TNF-? -1031(T/C) promotor polimorfizm çalışmalarında sadece IL2 geni -330(T/G) polimorfizmi Behçet hastalarında kontrollere göre yüksek bulundu. IL1?, IL1ß, IL2, IL8 ve TNF-? genlerinin mRNA ekspresyonlarında IL1ß geni dışındaki diğer genlerde behçet hastalığında aktif, inaktif ve göz tutulumlu fazlardaki hasta grupları ve kontroller arasında anlamlı fark elde edildi.Sonuç olarak IL1?, IL1ß, IL2, IL8 ve TNF-? genlerinin Behçet hastalarının aktif, inaktif ve göz tutulumlu fazlarda yüksek/düşük ekspresyon paterni göstermeleri bu genlerin ekspresyon değerlerine bakılarak hastalığın hangi fazda olduğunun belirlenmesinde bir markır olabileceği kanısındayız. Özellikle göz tutulumu olan hastalarda IL1? geninin düşük seviyede, IL8 geninin yüksek seviyede olması da Behçet hastalığında göz tutulumunda genlerin önemli fonksiyona sahip olabileceğini düşündürmektedir.Çalışılan IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A) ve TNF-? -1031(T/C) promotor polimorfizmlerinde IL2-330(T/G) polimorfizmi dışındaki diğer polimorfizmler ile Behçet hastalığı arasında ilişki bulunamamıştır. Özellikle Behçet hastalığı promotor polimorfizmlerinin istatistiksel değerlendirmelerinde hasta sayısının artırılarak yeniden çalışmanın yapılmasıyla anlamsız bulunan promotor polimorfizmlerinin anlamlı kılınabileceğini düşünüyoruz.Anahtar kelimeler: Behçet Hastalığı, sitokin, mRNA ekspresyonu, gen polimorfizmi

Abstract:
Behcet?s disease which is described in 1937 by Turkish Dermatologist Prof Dr. Hulusi Behcet is characterized as a distinct entity by recurrent oral aphthous and genital ulceration and iridocyclitis with hypopyon. This disease was named as Behcet Syndrome, Morbus Behcet or Behcet Disease and accepts as a new entity in the literature. At the time a positive family history thinks the genetic factors; geographic distribution thinks the effect of environmental effects in the disease.BD is a disease that continues as a chronic disorder with acute attacks and very much cytokine secretion at the time of attack. The effects of the proinflammatory cytokines, chemokins and especially type 1 helper T cell (Th1) cytokines to disease activity known very well. In this study we aim to research the promoter polymorphism of IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A), TNF-? -1031(T/C) and the expression level of IL1?, IL1ß, IL2, IL8, TNF-? genes in the patient with active, inactive clinic and ophthalmologic involvement.Genomic DNA and RNA was isolated from 2ml peripheral EDTA anticoagulated the whole blood of the control groups and the Behcet patients? that consult to Departments of Dermatology and Eye Disease. Cytokine polymorphisms were performed from DNA samples with PCR-RFLP and Multiplex PCR method. The expression study was performed with Real Time-PCR using Beta-actin as internal control from RNA samples.In the promoter polymorphism study of IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A), TNF-? -1031(T/C), only IL2-330(T/G) polymorphism is significantly high in Behcets? patient according to control group. In the study of mRNA expressions of IL1?, IL1ß, IL2, IL8, TNF-? genes, significantly difference is determined in all of the genes accept IL1ß between the patient with active, inactive clinic, ophthalmologic involvement and control groups.As a result the high/low expression levels of the IL1?, IL1ß, IL2, IL8 and TNF-? genes in the Behcet patients? with active, inactive clinic and ophthalmologic involvement thinks us that measurements of these genes expression levels could be use as a marker for determining of the disease phase. Especially the low level of the IL1? gene and the high level of the IL8 gene in the patient with ophthalmologic involvement think us that genes would have major functions in ophthalmologic involvement in Behcet Disease.In the study of promoter polymorphism of IL1?-889(C/T), IL1ß-511(C/T), IL2-330(T/G), IL8-251(A/T), TNF-? -308(G/A), TNF-? -1031(T/C), there were no association found between these polymorphism accept IL2-330(T/G) and the Behcet disease. We thinks that especially the new studies with the increase the number of the patients at the statistical assessment of the promoter polymorphism in Behcet Disease will be shows the insignificant promoter polymorphism as significant.Key words: Behçet?s disease, cytokines, mRNA expressions, gene polymorphism