Over kanserli hastalarda mthfr polimorfizmi, folat, homosistein düzeyleri ve apoptoza eğilimleri
MTHFR polymorphism and folate, homocysteine levels in patients with ovarian cancer and susceptibility to apoptosis
Yazar: ANIL ÇAĞLA ÖZKILIÇ
Danışman: PROF.DR. MÜJGAN CENGİZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
MTHFR, 5,10-metilentetrahidrofolatın 5-metiltetrahidrofolata redüksiyonunu katalizler.Bu ürün homosisteinden metiyonin sentezinde metil vericisidir. 5-metiltetrahidrofolat,plazma folatının primer formudur. MTHFR folat metabolizması, DNA sentezi vetamirinde çok önemli bir role sahiptir. MTHFR C677T varyantında, alanin yerine valinkodlanır. MTHFR enziminin aktivitesindeki azalma homosisteinden metiyonineremetilasyonun azalmasına ve hiperhomosisteinemiye yolaçar, plazma folat düzeyidüşer. MTHFR C677T genotipiyle bağlantılı olarak plazma homosistein düzeyiintraselüler folat düzeyi hakkında belirteç görevi görür. Gen polimorfizmine bağlıolarak gelişen hiperhomosisteinemiyle beraber düşük folat tablosunun karsinogenezleilişkili olabileceği bildirilmiştir.Kontrol ve hastalardaki C677T polimorfizmi belirlenerek, MTHFR metabolizmasındarol oynayan homosistein, folat ve vitamin B12 düzeylerinin incelenmesi ve Cometdeneyi aracılığıyla çeşitli evrelerdeki over kanserli hastalarda meydana gelen DNAhasarını göstererek, hastalığın oluşum mekanizmasının aydınlatılmasına katkıdabulunmayı amaçlamaktayız.Çalışmamıza 50 over kanserli hasta ve 54 sağlıklı birey dahil edildi. MTHFR C677Tpolimorfizmini belirlemek için genomik DNA izolasyonu yapılarak, MTHFR geni PZRyöntemiyle çoğaltıldı ve agaroz jel elektroforeziyle mutasyonlu bölgeler saptandı.Homosistein düzeyi ELISA, folat ve vitamin B12 düzeyleri de kemilüminesansyöntemleriyle belirlendi. Over kanserli hastaların lenfositlerinde meydana gelen DNAkırıkları Comet deneyi aracılığıyla gösterildi.Sonuç olarak çalışmamızda MTHFR C677T polimorfizmi ile over kanseri arasında birilişki bulunamadı. Hasta ve kontrol grubunun homosistein, folat, vitamin B12 düzeylerikarşılaştırıldığında istatistiksel bir anlamlılık tespit edilemedi. Bu durumun hastasayımızın az olmasından, yaşam şartlarının iyileşmesine bağlı olarak besinlerle yeterlimiktarda folat ve vitamin B12 alımından kaynaklanabileceğini düşünmekteyiz.Çalışmamızda over kanserli hastalarda apoptoza eğilimi incelemek amacıyla yapılanComet deneyi sonuçlarına göre, tümörlerin grade'leri arttıkça DNAfragmentasyonunun da arttığı belirlendi. DNA kırıklarının oluşması, DNAmetilasyonunda bir bozukluk olduğunu düşündürmektedir. MTHFR C677Tpolimorfizmi ile over kanseri arasında bir yargıya varabilmek için daha büyük serilerleçalışma yapılması gerektiği inancındayız.

Abstract:
MTHFR catalyses the reduction of 5,10-methylenetetrahydrofolate to 5-methyltetrahydrofolate. This product is responsible of methyl donation in the synthesisof methionine from homocysteine. 5-methyltetrahydrofolate is the primary form ofplasma folate. MTHFR folate metabolism has a very important role in DNA synthesisand repair. Reduction in the activity of MTHFR enzyme causes hyperhomocysteinemiaand a reduction in remethylation of methionine from homocysteine, resulting a decreasein the plasma folate levels. Plasma homocysteine level has an indicator role inintracellular folate level related to MTHFR C677T genotype. It has been suggested that,hyperhomocysteinemia due to gene polymorphism together with low levels of folatemight be related to cancerogenesis.In this study, our aim was to determine C677T polymorphism; homocysteine, folate andvitamin B12 levels in MTHFR metabolism and to show DNA damage by Comet assayin patients with ovarian cancer in different grades and to show the reasons of diseasepathogenesis.50 patients with ovarian cancer and 54 healthy controls were involved in the study.Genomic DNA was isolated from peripheral blood to determine the C677Tpolymorphism, the DNA was amplified by PCR and the products were visualized underUV light after running on agarose gel electrophoresis. Homocysteine, vitamin B12 andfolate levels were determined by ELISA and chemiluminesence methods, respectively.DNA fragmentation in patients with ovarian cancer was shown by Comet assay.As a result, we did?nt find any relationship between the C677T polymorphism andovarian cancer. There was no statistical difference between homocysteine, folate,vitamin B12 in patient and control groups. This might be because of inadequete patientnumber or sufficent levels of folate and vitamin B12 intake due to better life conditions.We found that, DNA fragmentation increased due to increasing grades of patients withovarian cancer. DNA fragmentation might be a possible consequence of DNAmethylation deficiency. More studies have to be made for reaching a final verdict forthe relationship between the MTHFR C677T polymorphism and ovarian cancer.