Servikste Notch sinyalizasyonu üzerinde indometazin ile surfaktan-A' nın rolünün belirlenmesi ve preterm doğumun önlenmesi
Determination of the role of indomethacin and SP-A on Notch signaling pathways in the cervix and the prevention of preterm labor
Yazar: SEMA AVCI
Danışman: PROF. DR. İSMAİL ÜSTÜNEL ; PROF. DR. EMMET HIRSCH
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Doğum = Delivery ; Doğum-prematür = Labor-premature ; Serviks uteri = Cervix uteri ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Uterus = Uterus ; Yüzey aktif ajanlar = Surface active agents ; Çentik = Notch ; İndometazin = Indomethacin

Özet:
Amaç: Mekanizmalar açık olmasa da, enfeksiyon preterm doğum için öne sürülen en
önemli nedenlerden biridir. Bu nedenle tedavi odaklı pek çok çalışma yapılmaktadır.
Surfactant A (SP-A) gebelik için mükemmel bir güvenlik profiline sahip endojen fetal bir
maddedir. Bu çalışmanın amacı; SP-A ve bir prostaglandin inhibitörü olan İndomethacin
(IND)' nin erken doğumu önleme potansiyelini daha ayrıntılı tanımlamak ve SP-A' nın
gebelerde preterm doğum için koruyucu bir ajan olarak kullanım potansiyelini
belirleyebilmektir.
Yöntem: RAW (267.7 Mouse Macrophage Cell) ve RAW Blue (267.7 Mouse
Macrophage Reporter Cell Line) hücrelerinin kullanıldığı kültür ortamında, SP-A ile
fragmentlerine ait doz ve etki süresi belirlemesi yapılarak, SP-A ve IND'nin etkisi,
lipopolysaccharide (LPS) indüklü cerrahi model üzerinde, koitus sonrası 14.5 günlük gebe
CD-1 fareleri kullanılarak değerlendirilmiştir.
Bulgular: 5 saatlik 0.2 ng/ml LPS indüksiyonu sonrası RAW hücrelerinde Polymerase
Chain Reaction (PCR) ile doğrulanan Interlökin 1 beta (IL1ß) ekspresyonunun
oluşturduğu inflamatuar cevabı, SP-A; 20 ug/ul ile baskılamaktadır. Aynı doz LPS ile
indüklenen deney hayvanı modelinde LPS aracılı erken doğum yapan grupta Notch
aktivitesinin arttığı ve SPA ve IND' nin özellikle mast hücreleri ile Jag-2 aracılı
modülasyon yaptığı görüldü.
Sonuç: SP-A ve fragmentlerine ait doz zaman eğrisi incelendiğinde, SP-A' nın
inflamatuar yanıtı baskıladığı ancak SP-A'yı oluşturan parçaların farklı cevap
özelliklerine sahip olabileceği görülmüştür. Ayrıca, SP-A'nın moleküler etki
mekanizmasının karakterize edilmesinde Notch sinyali ile bağlantısının incelenmesinin
önemli olduğu tespit edildi. Bu alanda daha çok araştırmanın yapılmasına ihtiyaç
duyulmakla birlikte, bu çalışma, SP-A için, tedavi amaçlı ilaç dizaynına yardımcı
olacaktır.

Anahtar Kelimeler: SP-A, Indomethacin, Notch, Serviks

Abstract:
Objective: Although the mechanisms are not clear, infection is one of the most important
reasons for preterm labor. For this reason, many studies are carried out for treatment.
Surfactant A (SP-A) is an endogenous fetal substance with an excellent safety profile for
pregnancy. The aim of this study is to identify the potential of indomethacin (IND) which
is a prostaglandin inhibitor and of the SP-A as a protective agent for preterm delivery in
pregnant women.
Method: The dose-effect duration of SP-A and fragments was determined using RAW
and RAW Blue cells. The effect of SP-A and Indomethacin was evaluated on a LPS
induced surgical model using 14.5 dpc CD-1 mice.
Results: After induction with 0.2 ng/ml LPS for 5 hours, expression of IL1β by PCR in
RAW cells was evaluated. This effect was suppressed in RAW Blue cells with 20 ug/ml
and evaluated by Quanti Blue analysis. The response of the fragments is different
depending on the dose and time. Molecular structure after Commassie Blue staining; the
monomeric (24 kDa) and dimeric (50-60 kDa) for the full-length SP-A. KINK (22 kDa)
was detected as CDM (4 kDa) with GLOB (28 kDa) and PL (2 kDa) with smaller
fragments. In the experimental animal model induced by the same dose LPS. The Notch
activity in the LPS-mediated preterm delivery group was increased. At the same time,
SPA and IND affected the Jag-2 mediated mast cell modulation.
Conclusion: When the dose time curve of SP-A and fragments was examined, it was seen
that SP-A suppressed the inflammatory response, but SP-A components had different
response characteristics. In addition, it was determined that SP-A was important to
investigate the linkage of Notch signal in characterizing the molecular mechanism of
action. Although more research is needed in this area, this study will be help the design to
drug for SP-A.

Keywords: SP-A, Indomethacin, Notch, Cervix