BHV-1 ile enfekte hücre kültüründe asiklovir ve insan amniyon membran etkinliğinin ve viral DNA yükünün real-time PCR ile değerlendirilmesi
Evaluation of acyclovir and human amniotic membrane efficiency on BHV-1 infected cell culture and viral DNA load with real-time PCR
Yazar: FERİDE AYLİN GÜN
Danışman: PROF. DR. FİKRET AKATA
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2010
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Amnion = Amnion ; Asiklovir = Acyclovir ; DNA = DNA ; Herpes simplex = Herpes simplex ; Hücre kültürü = Cell culture ; Keratit = Keratitis ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Virüsler = Viruses

Özet:
HSV, korneal hastalığın ve görme kaybının en önemli nedenlerinden biridir. Yüksek prevelansa rağmen rekürrens yapısı ve körleştiren komplikasyonlarının mekanizması net değildir. Görmeyi tehdit eden oküler enfeksiyon kontrolünde erken tanı ve tedavi önemlidir. Antiviral tedavilerle klinik düzelme sağlanmasına rağmen bu ilaçların latent Herpes virüsüne etki etmemektedir. Şiddetli vakalarda alternatif tedavi olarak AMT uygulanabilmektedir. Bu çalışmanın amacı, Herpes virüs ve hücre kültüründe asiklovir ve amniyon membran etkinliğinin Real-time PCR ile viral DNA yük analizi yapılarak değerlendirilmesi amaçlanmıştır.Çalışmamız Ankara Üniversitesi Veteriner Fakültesi Viroloji Anabilim Dalı laboratuvarında yapılmıştır. MDBK hücre kültürleri ve BHV-1 suşları kullanılmıştır. İki grup oluşturularak 1. gruba hücre kültürüne adsorbsiyonlu virüs inokulasyonunu takiben kültür petrilerine amniyon membran, asiklovir tek ya da kombine uygulandı. İkinci grupta ise virüs inokulasyonu yapılmadan sadece hücre kültürüne benzer uygulamalar yapıldı. Membran ve ilacın uygulanmasını takiben 24. ve 48. saatte CPE (+)'liği açısından doku kültürü mikroskobu ile incelendi. CPE (+)'liği görülen örneklerden DNA ekstraksiyonu sonrası Real-time PCR ile viral DNA yük analizi yapıldı.Analiz sonunda Ct değerinin VZ

Abstract:
HSV is one of the most important causes of corneal disease and loss of vision. Despite of high prevalance, mechanisms of reccurence and blinding complications are not obvious. Early diagnosis and treatment is important in the control of vision threatening complications. Clinical improvement can be achieved by antiviral treatment but they are not effective in the latent Herpes infections. In severe cases AMT is an alternative treatment choise. The aim of this study was to evaluate the effect of acyclovir and human amniotic membrane on herpes virus culture by analysis of viral DNA with RT-PCR.This study was conducted in Ankara University Veterinary Faculty Virology Department laboratory. MDBK cell culture and BHV-1 types were used. Out of two groups the first culture group was inoculated by absorbted virus and then amniotic membrane, acyclovir or both were added. In the second group virus inoculation wasn?t done, only applications similar to cell cuture were performed. After mebrane and drug application, culture was evaluated on 24th and 48th hours for CPE positivity with tissue culture microscope. In CPE (+) samples DNA was extracted for viral DNA analysis by real time PCR.After analysis Ct was found as VZ