Meme kanserinde PPAR- Y agonistlerinin  diferansiyasyon ilişkili olarak lipid metabolizması üzerine etkileri
Effects of PPAR- Y agonists on lipid metabolism related to differentiation in breast cancer
Yazar: ZEYNEP DOĞRU
Danışman: PROF. DR. TÜRKAN YİĞİTBAŞI
İstanbul Medipol Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Genetik = Genetics
Dizin: Hücre farklılaşması = Cell differentiation ; Lipid metabolizması = Lipid metabolism ; Meme kanseri =

Özet:
Çalışmanın amacı PPAR-γ agonistlerinin diferansiyasyon ilişkili olarak lipid metabolizması üzerine etkilerinin incelenmesi ve diferansiyasyon sırasında etkili olabilecek yeni yolakların bulunmasıdır.  Bu amaç doğrultusunda PPAR-γ agonisti Roziglitazon ile MEK inhibitörü Trametinib ve kemoterapötik ajan olarak Paklitaksel kullanıldı. Çalışmamızda mus musculus, embriyo kökenli, fibroblast 3T3-L1 hücreleri Rosiglitazon, insülin ve Deksametazon içeren uygun büyüme ortamında yağ hücrelerine dönüştürüldü. MMTV-Py2T transgenik faresinden elde edilen ve epitelyal özellikli Py2T hücrelerine TGF-β varlığında mezankimal özellik kazandırıldı. Elde edilen mezankimal Py2T hücreleri 2 gruba ayrılarak 1. gruba Rosiglitazon ve Trametinib,  2. gruba Rosiglitazone, Trametinib ve Paklitaksel uygulandı. 3T3-L1 farklılaşmış, Py2T, Py2T-TGFβ, Py2T-TGFβ-RT, Py2T-TGFβ-RTP hücrelerinden hedef RNA dizi analizi yapıldı. Hedef RNA dizi analizinde adipojenez, lipogenez, lipid depolanması, β-oksidasyon ve MEK/ERK yolağında rol oynayan 180 genin , ayrıca interlökinlerin gen ekspresyon çalışması yapıldı. Biyoenformatik analizle gen yolak analizi yapıldı. Kanser epitelyal hücrelerine göre kanser mezankimal hücrelerinde Trib3 ve Ceacam1 gen ekspresyon seviyesinde azalma, Bmp2 ve Itgb3 gen ekspresyon seviyesinde artış görüldü (p<0.05). Rosiglitazon ve Trametinib'e kemoterapötik ajan olarak Paklitaksel'in eklenmesi durumunda; lipid biyosentezi ve  lipid depolanmasının düzenlemesini etkileyen Abcg1 gen ekspresyon seviyesinin azalması ilaç direncinin azalması ve Egr1 gen ekspresyon seviyesinin artışı tümör baskılayıcı özelliğin arttığını göstermektedir. Sonuç olarak, Bmp2 ve Itgb3 gen ekspresyon artışı ile Trib3 ve Ceacam1 genlerinde görülen ekspresyon azalışının, meme kanserinde EMT'yi arttırdığı ve kötü prognoz ile ilişkili olacağı düşünüldü. Kemoterapötik ajan Paklitaksel ile hücre diferansiyasyon ajanlarının birlikte kullanılabileceği ortaya kondu.

Abstract:
The aim of the study is to investigate the effects of PPAR-γ agonists on lipid metabolism during differentiation and to identify new pathways that may be effective during differentiation. To achieve this goal, the events of the PPAR-γ agonist Rosiglitazone with the MEK inhibitor Trametinib and Paclitaxel as a chemotherapeutic agent. In our study, mus musculus embryonic fibroblast 3T3-L1 cells were differentiated into adipocytes in a suitable growth medium containing Rosiglitazone, insulin, and Dexamethasone. Epithelial Py2T cells obtained from MMTV-Py2T transgenic mice were induced to acquire mesenchymal properties in the presence of TGF-β. The resulting mesenchymal Py2T cells were divided into two groups: group 1 received Rosiglitazone and Trametinib, while group 2 received Rosiglitazone, Trametinib, and Paclitaxel. Sequence analysis of target RNA was performed from 3T3-L1 differentially structured, Py2T, Py2T-TGFβ, Py2T-TGFβ-RT, Py2T-TGFβ-RTP cells. The gene expression analysis of 180 genes involved in adipogenesis, lipogenesis, lipid storage, β-oxidation, and the MEK/ERK pathway, as well as interleukins, was performed. Gene pathway analysis was conducted using bioinformatics analysis.In cancer mesenchymal cells, a decrease in the expression levels of Trib3 and Ceacam1, as well as an increase in the expression levels of Bmp2 and Itgb3 (p<0.05), were observed compared to cancer epithelial cells. Addition of Paclitaxel as a chemotherapeutic agent to Rosiglitazone and Trametinib resulted in a decrease in the expression of the Abcg1 gene, which affects lipid biosynthesis and lipid storage, leading to a decrease in drug resistance, and an increase in the expression of the Egr1 gene, indicating an increase in tumor suppressive properties. In conclusion, the observed increase in Bmp2 and Itgb3 gene expression and decrease in Trib3 and Ceacam1 expression are thought to promote EMT in breast cancer and be associated with poor prognosis. It was demonstrated that the chemotherapeutic agent Paclitaxel can be used in combination with cell differentiation agents.