Gebelikte uygulanan diklofenak sodyum ve timokinonun postnatal 4 ve 10 haftalık sıçan ovaryum preantral follikül sayısına etkilerinin stereolojik yöntemle araştırılması
Investigation of effects of diclofenac sodium and thymoquinone administered during pregnancy on ovarium follicle number of postnatal 4 and 10 weeks old rats with stereological method.
Yazar: AYFER KÖRKOCA
Danışman: PROF. DR. MURAT ÇETİN RAĞBETLİ
Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Diklofenak = Diclofenac ; Diklofenak sodyum = Diclofenac sodium ; Gebelik = Pregnancy ; Over = Ovary ; Overyan folikül = Ovarian follicle ; Stereoloji = Stereology ; Sıçanlar = Rats ; Timokinon = Thymoquinone

Özet:
Diklofenak Sodyum (DS) gebelikte uygulandığında embriyo, fetüs ve yenidoğan üzerine zararlı etkilere neden olduğu bildirilmektedir. Timokinon (TQ) ise ovaryum folliküllerinde değişikliklere yol açtığı bildirilmektedir. Bu çalışmada gebelikte uygulanan DS ve TQ'un postnatal sıçan ovaryumlarında preantral follikül sayısına etkileri araştırıldı. Çalışma için 20 Albino Wistar dişi sıçanlar rastgele grublara ayrıldı. Sıçanlar gebeliğin beşinci gününde 10 gün süreyle; 1. gruba 6.1mg/kg DS IM uygulandı, 2. gruba 6.1mg/kg DS IM enjekte edildi ve 5mg/kg/gün TQ oral olarak verildi. Aynı sürede 3. gruba 5mg/kg/gün yalnızca TQ oral olarak verildi, 4. gruba ise 1ml/kg/gün Serum Fizyolojik IP enjekte edildi. 5. gruba herhangi bir işlem uygulanmadı. Postnatal dişi yavrular 4 ve 10 haftalık grublara ayrıldı. Sıçanlar 4. ve 10. haftanın sonunda anestezi altında, sağ atriumdan kan (2 cc) ve perfüzyon yapılarak akabinde sağ overler alındı. Overlerin Bouin tesbitinden sonra, rutin histolojik takibi yapıldı. Hematoksilen-Eozin ile boyandı. Follikül sayımında fiziksel disektör yöntemi, over hacmi belirlemede Cavalieri prensibi kullanıldı. ELISA yöntemi ile de AMH değeri belirlendi. İstatistik için Kruskal-Wallis analiz testi kullanıldı.Bulgular;DS grubu 4 ve 10 haftalık ovaryumların preantral folliküllerin sayısında anlamlı bir fark görülmedi fakat erken antral follikül sayısını anlamlı azalma gözlendi (p≤0.05). TQ grubu 4 haftalık ovaryumların preantral ve erken antral follikül sayısını anlamlı artma (p≤0.05) ve 10 haftalık ovaryumlarında ise anlamlı azalma gözlendi (p≤0.05). Deney grupların tümünde primordiyal follikül sayısında anlamlı bir fark gözlenmedi. DS ve TQ grubu 10 haftalık ovaryumların korpus luteum sayısında anlamlı azalma ve AMH değerinde anlamlı artış belirlendi(p≤0.05). DS ve TQ 10 haftalık ovaryumların medulla haciminin korteks hacimine oranını anlamlı olarak arttığı gözlendi (p≤0.05). Sonuç olarak. Gebelikte uygulanan DS'nin postnatal 4 ve 10 haftalık ovaryumların preantral folliküllerin sayısına etkisi olmadığı fakat erken antral follikül sayısını anlamlı azalttığı gözlendi. TQ 4 haftalık ovaryunlarda preantral ve erken antral follikül sayısını arttırdığı fakat 10 haftalıklarda azalttığı gözlendi. Hem DS hem de TQ 10 haftalık sıçanlarda serum AMH değerini anlamlı arttırması ve korpus luteum sayısını ise anlamlı azaltması ovulasyon kısmen önleyebileceğifikrini verdi. Ayrıca DS ve TQ 10 haftalık ovaryumların medulla/korteks hacmini arttırdığı belirlendi.

Abstract:
Diclofenac sodium (DS) is reported to cause some deleterious effects on embryo, fetus and neonatals. Thymoquinon (TQ) is known for its alterations on ovarium follicles. In this study, effects of diclofenac sodium and thymoquinone administered during pregnancy on preantral follicle numbers in rat overs. 20 albino Wistar rats were divided into groups randomly for the study. Rats were administered at 5th day of pregnancy and continued for 10 days; 6.1 mg/kg DS IM was administered to 1st group, 6.1 mg/kg DS IM was injected and TQ was given orally as 5 mg/kg/day to 2nd group. During same time period, only Thymoquinone was administered orally as 5 mg/kg/day to 3rd group.4th group was administered 1 ml/kg/day saline solution IP. 5th group in any transaction implemntede. Postnatal female offspring was separated into groups of 4 and 10 weeks of old. At the end of 4th and 10th weeks, blood (2 cc) was withdrawn from right atria and perfused, then right overs were extracted under anesthesia. Ovaries were fixed in Bouin and later routine histological investigation follow-up was performed. They were stained with Hematoxylen-Eosin. Physical dissector method for estimating follicle number and Cavalieri's principle for estimating the ovary volumes were used.  ELISA method was used for quantitative measurement of anti-mullerian hormone (AMH). Kruskal-Wallis test was used for statistical analysis. Diclofenac sodium group showed a significant decrease in antral follicle number (p≤0.05) in 4 week old ovary, primary, early antral follicle number and corpus luteum number (p≤0.05) decreased significantly at 10 week old ovary and an increase in AMH value (p≤0.05) was observed. In thymoquinone group significant increase in preantral and antral follicle numbers in 4 weeks old ovarium (p≤0.05) and a significant decrease in primary, preantral, early antral follicle and number of corpus luteum (p≤0.05), a significant increase in AMH value (p≤0.05) was observed. No significant difference in primordial follicle number in all groups was observed. DS and TQ grubu10 weekly cortex volume ratio of ovaries was observed medulla volume increased significantly. As a result it was observed that DS did not affect the number of prenatal follicles in postnatal ovaries butdecreasedsignificantlyprimary, early antral follicle number at 10 week old ovary. TQ increased the number of preantal follicles at 4 weeks and decreased at 10 weeks.Both DS and TQ gave the idea that ovulation could be partially prevented by a significant increase in serum AMH and a significant reduction in corpus luteum counts in 10 week old rats.In addition, DS and TQ 10 week old ovaries were found to increase medulla/cortex volume.