Soğuk ürtikerli hastalarda otolog serum test (OST), otolog plazma test (OPT), soğuk otolog serum test, soğuk plazma test sonuçlarının karşılaştırılması
Autologous serum skin test (asst), autologous plasma skin test (apst), cold autologous serum skin test, cold autologous plasma skin test results comparison in cold urti̇caria
Yazar: YAVUZ TEZCAN
Danışman: DOÇ. DR. FİLİZ TOPALOĞLU DEMİR
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Haseki Eğitim ve Araştırma Hastanesi / Deri ve Zührevi Hast. Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Dermatoloji = Dermatology
Dizin: Deri hastalıkları = Skin diseases ; Dermatoloji = Dermatology ; Kan plazması = Blood plasma ; Kan serumu = Blood serum ; Soğuk = Cold ; Teşhis testleri = Diagnostic tests ; Ürtiker = Urticaria

Özet:
Amaç: Soğuk ürtiker tanısı konulan hastalarının serumlarında ve/veya plazmasında soğukla tetiklenen otoantikor ya da vazoaktif maddelerin varlığını gösterek soğuk ürtiker patogenezine katkı sağlamaktır. Soğuk ürtikerli hastalarda serumların pasif transferi literatürde daha önceleri belirtilmiştir. Kronik spontan ürtikere özgü testler olan OST ve OPT testlerinin, fiziksel bir ürtiker olan soğuk ürtikerinde soğuk uyarısıyla IgE'ye bağlanmayı arttıran bir immun kompleks oluşumuna yol açabileceği hipotezini kurguladık. Soğuk OST'nin yanı sıra soğuk OPT'ye bakarak, soğuk ürtiker patogenezinde koagülasyon kaskadının rolünün olup olmadığını araştırmak istedik. Ayrıca pozitiflik saptanan hastalarda, pozitifliğin cinsiyet, hastalık süresi, laboratuvar tetkikleri, etyolojik faktörler ve tedaviye yanıt ile ilişkisi olup olmadığının gösterilmesi hedeflenmektedir.

Gereç ve Yöntem: Çalışmaya katılan hasta grubunu, Eylül 2017 - Eylül 2019 tarihleri arasında 2 yıllık bir dönemde, Sağlık Bilimleri Üniversitesi Haseki Eğitim ve Araştırma Hastanesi Dermatoloji Kliniği'ne başvuran, provakasyon testleri (TempTest ® , buz küpü testi) sonucu soğuk ürtikeri tanısı konulan 14 kadın ve 6 erkek hasta oluşturmaktadır. Soğuk provakasyon testlerine cevap vermeyen hastalar, diğer fiziksel ürtiker (kolinerjik, solar, basınç vb…) tanılarından bir vey a birden fazlasını alan hastalar, Son 3 hafta içinde antihistaminik, NSAİİ, ACEi, omalizumab, IVIG, immunsupresif ilaç (steroid, AZT, MTX, siklosporin, mikofenolat mofetil vb…) kullanmış olan hastalar, ilaç allerjisi öyküsü olan hastalar, otoimmun tiroid hastalığı olan hastalar ve atopi hikayisi olan hastalar çalışmaya dahil edilmemiştir. OST, OPT, Soğuk OST, Soğuk OPT testleri için hastalardan 4 tüp kan alındı. OST için kuru tüp, OPT için sitratlı tüpler kullanıldı. Soğuk OPT için negatif kontrol olarak boş bir sitratlı tüpe 4 ml serum fizyolojik konuldu. Soğuk OST ve soğuk OPT için alınan kanlar ile birlikte + 4°C 'de 30 dakika bekletildi. Soğuk inkübasyondan sonra dışarı çıkarılarak oda ısısında diğer tüpler ile 30 dakika bekletilerek tüm kan örneklerinin ve soğuk SFve sitrat karışımının aynı sıcaklığa ulaşması sağlandı. 4 tüp kan örneği 500 G kuvvetle 15 dakika santrifuj edildi. Elde edilen serum ve plazma örneklerinden ve negatif konrollerden 0,05 ml alındı. 30 gauge iğne ile hastaların ön koluna 0,05 ml' lik örnekler ve 0,05 ml serum fizyolojik ve 0,05 ml SF +sitrat karışımı negatif kontrol olarak intradermal olarak ve histamin prick test şeklinde pozitif kontrol olarak uygulandı. Uygulama bölgeleri arasındaki mesafe azami 3 cm olarak belirlendi.


Bulgular: TempTest ® tüm hastalarda alt sıcaklık 4°C olarak saptandı. Üst sınır 8°C-28°C (ort: 18,0±6,3) arasında değişmekteydi. 7 hastanın EBV, 1 hatanın CMV, 1 hastanın Borrelia mikroorganizmalarıyla karşılaştığı saptandı. Uygulanan testlerde 20 hastanın 11 tanesinde (%55) soğuk OST pozitif, 7 tanesinde (%35) soğuk OPT pozitif saptandı. Soğuk OPT pozitif olan hastaların tamamında soğuk OST de pozitifti. OST ve OPT testleri hiçbir hastada pozitiflik vermedi. Soğuk OST pozitiflik oranı OST ye göre, Soğuk OPT pozitiflik oranı OPT ye göre istatistiksel olarak anlamlı yüksek saptandı.

Sonuç: Soğuk OST 11 hastada, soğuk OPT 7 hastada pozitif saptandı. Bu sonuç, soğuk ürtikeri fizyopatolojisinde mekanizmaya serum ve/veya plazmadan katılan kısımların immünolojik ayağının olabileceğini ya da soğuk maruziyeti sonrası, serum ve plazmada dolaşan vazoaktif ajanların salınarak ürtikeryan lezyonları oluşturabileceğini düşündürmüştür. Soğuk OST, soğuk OPT'ye göre daha sensitif bulunmuştur.

Abstract:
Objective: The aim of this study is to demonstrate autoantibodies or vasoactive substances that trigerred by cold provacation in plasma of the patients diagnosed with cold urticaria and contribute knowledge of the pathogenesis of cold urticaria. Pasif transfer of cold urticaria is shown at past studies. We claim the hipothesis of ASST and APST, which are spesific to chronic urticaria, may increase immuncomplexis to bind IgE when they cooled. We investigated the role of coagulation cascade regarding to cold urticaria pathogenesis by observing cold autologous plasma skin test (APST) along with cold autologous serum skin test (ASST). Furthermore, evaluation of the correlation between the postive results and gender, duration of disease, laboratory results, etiologic factors and treatment response in patients with positive results are intended.

Materials and Methods: Study group consisted of 14 female and 6 male patients who applied to Sağlık Bilimleri University, Haseki Training and Research Hospital Dermatology Clinic between the dates of September 2017 – September 2019 and diagnosed with cold urticaria with regard to the results of provocation tests (TempTest ®, ice cube test). Patients who did not respond to cold provocation tests or diagnosed with other at least one of the other physical urticaria (cholinergic, solar, pressure etc.) or applied antihistaminic, NSAID, ACE inhibitors, omalizumab, IVIG, immunsuppresive drugs (steroids, AZT, MTX, cyclosporine, mikofenolat mofetil etc.) or had a history of drug reaction, atopia or autoimmune thyroiditis were excluded from the study. Four tubes of blood sample were obtained from each patient for OST, OPT, cold OST, cold OPT tests. Dry tubes for ASST and citrated tubes for APST were utilized. Blood samples obtained for cold ASST and cold APST tests were incubated together for 30 minutes at +4 °C temperature. Following cold incubation, tubes were kept in room temperature along with other tubes for 30 minutes and fınally, identical temperature for all blood samples was provided. Four tubes of blood samples were centrifuged in 500G force for 15 minutes. From the serum and plasma samples and negative controle, 0,05 ml was attained. Obtained 0,05 ml samples, 0,05 ml saline and 0,05 ml saline-citrate mix were applied with 30 gauge needle to the forearm of the patients via intradermal route and positive control was applied as histamine prick test. Distance between the application zone was determined as at least 3 cm.

Results: The minimum temperature was 4°C in all patients by TempTest ®. The upper limit ranged between 8°C and 28°C (mean: 18,0±6,3). Interference of seven patients with EBV, 1 patient with CMV and 1 patient with Borrelia microorganisms were revealed. Regarding to applied tests, 11/20 (55 %) patients had positive cold autologous serum skin test  and 7/20 (35 %) patients had positive cold autologous plasma skin test. In all patients with positive cold OPT, cold OST was also found positive. ASST and APST tests were not positive in any subject. Cold ASST positive results was higher than ASST, and cold APST positive results were higher than APST, which were also statistically significant (p<0,05).

Conclusion: Cold ASST was positive in 11 patients and cold APST was positive in 7 patients. These findings suggest that an immunologic branch participated from serum and/or plasma might have role in the pathogenesis of cold urticarial or vasoactive substances that burst into the plasma or serum after cold exposure might result with urticarial lesions. It was noticed that cold ASST is more sensitive than cold APST.