Klinik örneklerden izole edilen candıda albıcans suşlarında flukonazol duyarlılığı, proteinaz aktivitesi ve ERG11-SAP2 ekspresyonu ilişkisinin araştırılması
Investigation of the relationship between fluconazol sensitivity, proteinase activity and  ERG11-SAP2 expression in candida albicans strains isolated from clinical samples
Yazar: NAGİHAN EGE
Danışman: PROF. DR. ŞÜKRÜ ÖKSÜZ
Düzce Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı / Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Candida albicans = Candida albicans ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İlaçlara direnç-mikrobiyal = Drug resistance-microbial

Özet:
Amaç: Bu çalışmada amacımız, C. albicans suşlarındaki flukonazol direncinin, suşların proteinaz aktiviteleriyle ve ERG11/ SAP2 genleri ile ilişkisi incelemektir. 
Gereç ve Yöntem: Çalışmamıza, 01.08.2021- 01.08.2022 tarihleri arasında Düzce Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı'na gönderilen örneklerden,  Candida albicans üremesi olan 127 örnekten izole edilen suşlar dahil edildi.  İzolatların flukonazol MİK değerleri, EUCAST önerilerine göre sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile belirlendi.  Flukonazol MİK değerlerinde 48. saatte yükselme durumu ve proteinaz aktiviteleri incelendi. Çalışmaya alınan 44 adet suşun ERG11 ve SAP2 gen ekspresyon seviyeleri real time qPCR ile ölçüldü. Relatif ekpresyon seviyeleri ΔΔCT yöntemi ile hesaplandı. Bu seviyelerin birbirleri ile, flukonazol direnci ile, 48. saat MİK yükselmesi ve proteinaz üretimi ile ilişkileri incelendi. 
Bulgular ve Sonuç: Çalışmamızda saptanan C. albicans'ta flukonazole direnç oranı, dünyada yakın tarihte yapılan çalışmalar ile benzerdir (%3,14). ERG11 VE SAP2 gen ekpresyon seviyeleri arasında pozitif bir lineer korelasyon saptanmıştır (p<0,001). İzolatların SAP2 ve ERG11 ekpresyon seviyeleri ile flukonazol dirençleri arasında ilişki bulunmamıştır. ERG11 ekpresyon seviyeleri ve 48. saat MİK yükselmesi arasında istatiksel olarak anlamlı bir bağlantı varken (p=0,037), SAP2 seviyeleri ve 48. Saat MİK yükselmesi arasında ise istatiksel olarak anlamlı bir ilişki bulunmamıştır.   Aynı şekilde izolatların proteinaz aktiviteleri ve SAP2/ERG11 ekspresyon düzeyleri arasında da istatiksel olarak anlamlı bir ilişki yoktur. Flukonazol 48. Saat MİK değerleri yükselmesinin proteinaz aktivitesiyle ilişkisiz olduğu belirlenmiştir.  Çalışmamız PCR yapılan suş sayısı arttırılarak ve dirençli duyarlı suş eşitliği sağlanarak tekrarlanabilir. Gelecekte, Candida enfeksiyonlarının önlenmesi ve kontrolü, SAP ailesi gibi virülans faktörlerini inhibe etmek için özel olarak modüle edilmiş farmakolojik veya immünolojik araçlarla sağlanabilir.

Abstract:
Background: Our aim in this study is to examine the relationship between fluconazole resistance in Candida albicans strains, their proteinase activities and ERG11/ SAP2 genes.
Material and Method: Strains isolated from 127 samples with C. albicans growth were included in our study, from samples sent to Düzce University Faculty of Medicine Medical Microbiology Laboratory between 01.08.2021 and 01.08.2022. Fluconazole MIC values of the isolates were determined by the broth microdilution method according to EUCAST recommendations. The increase in fluconazole MIC values at the 48th hour and proteinase activities were examined. ERG11 and SAP2 gene expression levels of 44 strains included in the study were measured by real time qPCR. Relative expression levels were calculated by the ΔΔCT method. The relationships of these levels with each other, fluconazole resistance, 48th hour MIC elevation and proteinase production were examined.
Results: The fluconazole resistance rate in C. albicans detected in our study is similar to recent studies conducted around the world (3.14%). A positive linear correlation was detected between ERG11 AND SAP2 gene expression levels (p<0.001). No relationship was found between the SAP2 and ERG11 expression levels of the isolates and their fluconazole resistance. While there was a statistically significant relationship between ERG11 expression levels and the 48th hour MIC increase (p=0.037), there was no statistically significant relationship between SAP2 levels and the 48th hour MIC increase. Likewise, there is no statistically significant relationship between the proteinase activities of the isolates and SAP2/ERG11 expression levels. It was determined that the increase in fluconazole 48th hour MIC values was unrelated to proteinase activity. Our study can be repeated by increasing the number of strains for which PCR is performed and ensuring the equality of resistant-susceptible strains. In the future, prevention and control of Candida infections may be achieved by pharmacological or immunological tools specifically modulated to inhibit virulence factors such as the SAP family.