Vulpinik asit liken sekonder metabolitinin meme kanser hücre hatları üzerine sitotoksik etkisinin ve apoptozla ilgili genlere ait mrna ifade seviyelerinin belirlenmesi
Determination of cytotoxic effect of vulpinic acid in breast cancer cell lines and mrna expression levels of apoptototi̇c related genes
Yazar: NİL KILIÇ
Danışman: PROF. DR. EMİNE SÜMER ARAS ; DOÇ. DR. DEMET CANSARAN DUMAN
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Onkoloji = Oncology

Özet:
Meme kanseri kadınlarda en sık görülen kanser tipidir. Meme kanseri tedavisindeki ilaçlara karşı direnç gelişmesi nedeniyle tedavide başarı oranı düşmektedir. Bu nedenle alternatif terapötik özellikli ajanların keşfi kanser hastaları için umut kaynağı olmaktadır. Vulpinik asit (VA) MDA-MB-231, MCF-7, BT-474, SK-BR-3 ve normal meme hücre hattı (MCF-12A) üzerinde 48 saat süre ile antiproliferatif etkisinin değerlendirilmesi sonrasında apoptotik etkinin tespiti amaçlı flow sitometri, kazpaz-3 aktivitesi belirlenmiştir. Ayrıca apoptoz belirteci olarak TP53, Bax, Bcl-2, BIRC5 ve ekspresyonu degişmeyen gen olarak GAPDH, Kaspaz 3, 7, 8, 9 genlerin ifade analizi mRNA düzeyinde belirlenmiştir. Elde edilen veriler; VA 100, 50, 35, 25, 15, 12.5, 6.25, 3.125, 1.56 ve 0.78'den oluşan konsantrasyonların MTT testi sonuçları ile hesaplanan EC50 değerlerine göre MDA-MB-231 için 11 μM, SK-BR-3 için 10 μM, 18 μM olarak MCF-7 ve BT-474 için 5 μM olarak hesaplanmıştır. Gerçekleştirilen flow sitometri sonucunda en yüksek hücre ölümü MCF-7 hücresinde %53 olarak görülürken, en düşük hücre ölümü %29 olarak BT-474'de görülmüştür. Kaspaz-3 aktivite sonuçlarına göre tüm hücreler için kaspaz aktivitesi %10-13 arasındaki oranlarda artmıştır. Real Time PCR sonuçlarına göre proapoptotik genlerin ifadesi artarken antiapoptotik gen ifadesi azalmıştır. Sonuçlar değerlendirildiğinde doğada bol ve kolay bulunan liken türlerinden hızlı, maliyeti düşük ve uygulaması etkin sekonder metabolitlerin eldesi ile meme kanseri tedavisinde alternatif bir terapötik ajan olarak kullanılmalarını sağlayacak çalışmalara önemli bir basamak oluşturmuştur.

Abstract:
Breast cancer is the most common cancer type in women. The success rate for treatment is reduced due to the development of drug resistance in breast cancer treatment. Therefore, discovery of alternative therapeutic capable agent may be a source of hope for patients with cancer. In this context, it is designed for the determination of apoptotic effects using flow cytometry and caspase-3 activity after the evaluation antiproliferative effect of Vulpinic acid (VA) 48 hours oncancer cell line such as MDA-MB-231, MCF-7, BT-474, SK-BR-3 and normal breast cell line such as MCF-12A. Also analysis of mRNA levels were determined for TP53, Bax, Bcl-2, BIRC5 as apoptosis markers and caspase-3, 7, 8, 9 gene expression. The resulting data; MTT assay results were obtained according to concentration including VA 100, 50, 35, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.56 and 0.78. The value of EC50 which were calculated according to MTT results were indicated that 11 µM for MDA-MB-231, 10 µM for SK-BR-3, 18 µM for MCF-7 and 5 µM for BT-474. According to the flow cytometry results, the highest cell death was determined to be 53% in MCF-7 cells and the lowest cell death was shown to be 29% in BT-474. The caspase-3 activities were increased by 10-13% for all the cancer cells. According to Real Time PCR results, proapoptotic genes expression value were increased, but antiapoptotic gene expression value were decreased in our study. Our results were demonstrated, used of secondary lichen metabolites which low cost and effective application in the treatment of breast cancer as an alternative therapeutic agents to provide an important step.