Fare embriyonik fibroblastlardan izole edilen eksozomların deneysel diyabetik fare modelinde yara iyileşmesi üzerine etkisinin araştırılması
An investigation of the effect of exosomes isolated from mouse embryonic fibroblasts on wound healing in an experimental diabetic mouse model
Yazar: AHMET SARPER BOZKURT
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DAVUT SİNAN KAPLAN
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Deri = Leather ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Eksozomlar = Exosomes ; Fareler = Mice ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Yara iyileşmesi = Wound healing ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries

Özet:
Fare embriyonik fibroblastlar (MEF) besi yeri ortamında fare embriyonik kök (MES) hücrelerini besleyen özelleşmiş yapılardır. Fare embriyonik fibroblastlardan salgılanan eksozomların (mExo) deneysel diyabet modeli ve tam kat deri defekti oluşturulan farelerde yara iyileşmesine etkisinin araştırılması amacıyla planlanmıştır.
Bu çalışma hem in vitro hem in vivo deneysel çalışmaları içermektedir. Bu deneysel çalışmada 82 adet fare (balp-c) kullanılmıştır. Deneysel çalışmanın in vitro aşamasında 2 adet fareye gebeliğinin 13 - 15. günleri arasında histeroktomi yapılmış, hücre kültürü ile mExo'ları izole edilmiştir. İn vivo aşamasında 4 gruba ayrılmış olan farelerin; 1. grupta tam kat deri defekti oluşturuldu. 2. grupta tam kat deri defekti oluşturulup ve mExo enjekte edildi. 3. grupta STZ enjeksiyonu ile deneysel diyabet fare modeli oluşturuldu ve  tam kat deri defekti yapıldı. 4. grupta deneysel diyabet fare modeli yapıldıktan sonra tam kat deri defekti oluşturuldu ve bu gruptaki farelere mExo enjekte edildi. Her iki günde bir makroskopik olarak ölçülen yara alanlarının mExo'ların etkisiyle yara iyileşmesini hızlandırdığı tespit edilmiştir (p<0.05).
Postoperatif 5. 7. 14 ve 21. günlerde her gruptan 5, toplamda 20 adet sakrifiye edilen farelerden alınan dokular biyokimyasal ve histopatolojik olarak değerlendirilmiştir. 
Çalışmada mExo uygulanan 2. ve 4. gruptaki farelerden alınan dokularda mExo'ların VEGF'in 5. günde protein değerlerinde artış gözlenmiştir (p<0.05). Sakrifikasyon günlerinde IL-6, TNF-α protein değerlerinde istatistiki olarak anlamlı fark bulunmamıştır  (p>0.05). 
Sonuç olarak deneysel çalışma sonucunda elde edilen veriler, mExo'ların deneysel diyabet oluşturulmuş farelerde yara iyileşmesi sürecini hızlandırdığı göstermektedir.

Anahtar Kelimeler: Deneysel Diyabetik Fare Modeli, Fare Embriyonik Fibroblast,
Fare Embriyonik Fibroblast Eksozomları, Tam Kat Deri Defekti Modeli, Yara
İyileşmesi.

Abstract:
Mouse embryonic fibroblasts (MEF) are specialized structures that feed mouse embryonic stem (MES) cells in a growth medium. It was aimed to investigate effects of exosomes secreted from mouse embryonic fibroblasts (mExo) on wound healing of full-thickness skin defect in diabetic mice model full-thickness skin defect.  
The study includes both in vitro and in vivo experimental studies, in which 82 mice (Balp-c) were used. In the in vitro stage of the experimental study, hysterectomy was performed on two mice between the 13-15th days of pregnancy and then mExos were isolated by cell culturing. In vivo stage of the experiments, full-thickness skin defect was created in the first group.  The second group had a full-thickness skin defect was mExo injection. In the third group of animal, experimental diabetic mouse model was created with STZ injection and had a full-thickness skin defect. In the forth group of animal, experimental diabetic mouse model was also created with STZ injection and had a full-thickness skin defect. Measurements of the wound surface area macroscopically every other day showed that application of mExos significantly accelerated wound healing (p<0.05). 
Tissues samples from the wound area from 5 mice of each group, 20 mice in total, at the postoperative 5, 7, 14 and 21 days were taken after sacrification and were evaluated biochemically and histopathologically. In the second and fourth groups of animals, application of mExo resulted in significant increases of VEGF protein in only 5th day-sacrificied animals. There was no significant changes in the protein levels of IL-6 and TNF-α cytokine values between any of the groups (p<0.05).
In conclusıon, obtained from this experimental study appear to indicate that exosomes isolated from mouse embryonic fibroblasts accelerate the wound healing process in experimental diabetes-induced mice.


Keywords: Experimental Diabetic Mouse Model, Mouse Embryonic Fibroblast, Mouse
Embryonic Fibroblast Exosomes, Full-Thickness Skin Defect Model, Wound Healing