Renal hücreli karsinomda RING box-1 proteinin (RBX1) ekspresyonunun prognostik değeri
Prognostic value of expression ring box-1 proteinin (RBX1) in renal cell carcinoma
Yazar: EMRE ALTINTAŞ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. MEHMET KAYNAR
Selçuk Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Üroloji = Urology
Dizin: Biyobelirteçler-tümör = Biomarkers-tumor ; Böbrek hastalıkları = Kidney diseases ; Böbrek neoplazmları = Kidney neoplasms ; Gen ifadesi = Gene expression ; Karsinoma = Carcinoma ; Karsinoma-renal hücreli = Carcinoma-renal cell ; Prognoz = Prognosis ; Üroloji = Urology

Özet:
RHK'lerde prognozu etkileyen faktörler; tümörle ilgili faktörler (anatomik ve histolojik), klinik faktörler ve moleküler faktörlerden oluşmaktadır. Prognostik modellerin doğruluğunu arttırabilmek için  klinik ve histolojik değişkenlere ek olarak moleküler faktörlerde  modellere eklenmektedir. RING Box Protein-1 (RBX-1) proteini, fizyolojik hücresel fonksiyonların düzenlenmesinde önemli role sahip olmasının yanı sıra, son zamanlarda Akciğer, meme, kolon kanseri gibi pek çok kanser türünde RBX-1 aşırı ekspresyonu saptanmış moleküldür. Bu çalışmamızda RBX-1 proteininin ekspresyonunun böbrek hücreli kanserde prognostik faktörlerle ilişkisi ve prognostik değerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. 
Çalışmamıza Selçuk Üniversitesi Tıp Fakültesi Üroloji Anabilim dalında RHK nedeni ile radikal nefrektomi ve/veya parsiyel nefrektomi yapılan 88 hasta çalışmaya dahil edilmişir. Hastaların yaş, cinsiyet, tümör lokalizasyonu tümör boyutu ve TNM Evresi değerlendirildi.  Patoloji preparatlarından tümörün histolojik subtipi, Fuhrman çekirdek derecelendirmesi, lenfovasküler invazyon varlığı, renal arter-ven invazyonu, kapsül invazyonu ve perirenal yağ dokusu invazyonu varlığı, sarkomatoid dejenerasyonu, ve  patolojik tümor evresi açısından değerlendirildi. Fuhrman derecelerine göre, Fuhrman grade 1-2 olan hastalar Grup 1 ve Fuhrman grade 3-4 olan hastalar Grup 2 olarak ayrılmıştır. Patoloji preparatları yarı otomatik Ventana Benmark XT immunohistokimya (İHK) boyama cihazında Anti RBX-1 antikoruyla boyama yapıldı. İHK boyalı preparatların ışık mikroskopik değerlendirmesinde 100X büyütmede 10 farklı mikroskop alanında hücreler değerlendirilmiş ve pozitif boyanan hücrelerin boyanma yoğunluğuna göre RBX-1 ekspresyonu  0 (-), 1 (+), 2 (++), 3 (+++) olarak skorlanmıştır.  Ayrıca RBX-1 ekspresyon yoğunluğu (sitoplazmik/nükleer) olarak belirlenmiştir. RBX-1 ekspresyon profilleri ile klinikopatolojik bulgular arasındaki korelasyon istatistiksel olarak değerlendirildi. RBX-1 ekspresyonunun tümör derecesi, evresi ve diğer patolojik prognostik parametreler ilişkisinin saptanmasında Kruskal Wallis, ki-kare ve Mann Whitney U testleri kullanılmıştır.  P <0.05  değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. 
Çalışmadaki 88 hastanın 50'si erkek 38'i kadın hasta olarak tespit edildi.  88 hastanın 66'ı (%75) Berrak hücreli kanser, 13'ü(%14.7) Papiller hücreli kanser ve 9'u(%10.2) da Kromofob hücreli kanser olarak tespit edildi. Berrak hücreli kanser grubunda ortalama yaş 59.8 (32-79 yıl ),  Papiller hücreli kanser grubunda 55,6 (39-70 yıl), Kromofob hücreli kanser grubunda ise 58,1 (49-68 yıl) olarak her üç grubtada benzer olduğu tespit edilmiştir. Tümör boyutları Berrak hücreli kanser grubunda ortalama 47,2 (17-100 mm), Papiller hücreli kanser grubunda (49,2) (25-80 mm), kromofob hücreli kanser grubunda 63,2 (27-105 mm)  olarak diğer iki gruptan ortalama tümör boyutu yüksek bulunmuştur.

RHK'lerin histolojik tipler ile RBX-1 ekspresyonunun nükleer ve sitoplazmik olmasına göre yapılan değerlendirmede Papiller hücreli kanserlerin sitoplazmik boyandığı ve Berrak hücreli kanserler ile Kromofob hücreli kanserlerin nükleer boyandığı gözlenmiş olup bu fark istatiksel olarak anlamlı bulunmuştur (*p<0.00) Fuhrman derecelerine göre, Fuhrman grade 1-2 olarak ayrılan Grup 1 (düşük risk) ve Fuhrman grade 3-4 olarak ayrılan Grup 2 (yüksek risk)'nin immünohistokimyasal incelemesinde; Grup 1 ve Grup 2 RBX-1 proteini ile boyanma derecesi açısından +1, ++2  ve +++3 boyanma derecesi göre (nükleer ve sitoplazmik boyanma birleştirildiğinde); Grup 2 nin RBX-1 ile daha şiddetli boyandığı ve bununda istatiksel olarak anlamlı olduğu gözlenmiştir. (*p<0.008). Berrak hücreli kanser hastaları Fuhrman grade 1-2 olan grup 1 ve Fuhrman grade 3-4 olanlar grup 2 olarak subgruba ayrılmış ve bu subgruplar ile RBX-1 proteini ekspresyonu arasındaki ilişki incelenmesinde  Grup 2' nin grup 1' e RBX-1 proteini ile istatiksel anlamlı olarak daha şiddetli boyandığı tespit edilmiştir.(*p<0.009). Lenfovasküler invazyon, kapsül invazyonu, perirenal invazyon ve cerrahi sınır pozitifliği ile RBX-1 eskpresyonu açısından istatiksel olarak anlamlı fark saptanmamıştır sırasıyla (p=0.155), (p=0.353), (p=0.562), (p=0.543).

Sonuç olarak; RBX-1 protein ekspresyonunun özellikle Fuhrman grade 3 ve 4 olan (yüksek riskli) olgularda anlamlı derecede fazla olması RBX-1'in RHK'de prognostik bir molekül olabileceğini ortaya koymaktadır. Daha geniş hasta serileriyle yapılacak olan çalışmalarda RBX-1 Ekspresyon profilinin RHK'de prognostik bir molekül markır olarak kullanılabileceği konusunda gelişmeler sağlayabileceği kanaatindeyiz.

Anahtar Kelimeler; Renal Hücreli Kanser, RBX-1 Proteini, Prognoz

Abstract:
Factors affecting prognosis in renal cell carcinoma; Tumor-related factors (anatomical and histological), clinical and molecular factors. In addition to clinical and histological variants, molecular factors are added to the models to increase the accuracy of prognostic models. RING Box Protein-1 (RBX-1) protein has an important role in regulation of physiological cellular functions, but recently it has been found that RBX-1 overexpression has been detected in many cancers such as lung, breast, colon cancer.In this study, we aimed to determine the prognostic value of the expression of RBC-1 protein in prognostic factors in renal cell carcinoma.
Eighty-eight patients who underwent radical nephrectomy and / or partial nephrectomy with RCC in the Selcuk University Department of Urology were included in the study.The age, gender, tumor localization, tumor size and TNM stage of the patients were evaluated.Pathologic preparations were evaluated for histologic subtype, progeny nuclei grading, presence of lymphovascular invasion, renal artery-venous invasion, capsule invasion, presence of perirenal fat tissue invasion, sarcomatoid degeneration, and pathologic tumor stage.According to Fuhrman grades, patients with Fuhrman grade 1-2 were classified as Group 1 and patients with Fuhrman grade 3-4 were classified as Group 2.Pathology preparations were stained with Anti RBX-1 antibody in semi-automated Ventana Benchmark XT immunohistochemistry (IHC) staining device.In light microscopic evaluation of IHK stained preparations, cells were evaluated in 10 different microscope fields at 100X magnification and RBX-1 expression was scored as 0 (-), 1 (+), 2 (++), 3 (+++) according to the staining intensity of positive stained cells.In addition, RBX-1 expression density (cytoplasmic / nuclear) was determined. The correlation between RBX-1 expression profiles and clinicopathologic findings was evaluated statistically.Kruskal Wallis, Chi-square and Mann Whitney U tests were used to determine the relationship between tumor grade, stage and other pathological prognostic parameters of RBX-1 expression. A P value of <0.05 was considered statistically significant.
Of the 88 patients in the study, 50 were male and 38 were female.Of the 88 patients, 66 (75%) were clear cell cancer, 13 (14.7%) were Papillary cell cancer and 9 (10.2%) were Chromophobe-cell cancer.The mean age of the clear cell carcinoma group was found to be similar in all three groups as 59.8 (32-79), 55.6 (39-70) years in Papillary cell cancer group and 58.1 (49-68) years in Chromophobe cell cancer group .Tumor size was found to be 47,2 (17-100 mm) in the clear cell cancer group, 49,2 (25-80 mm) in the Papillary cell cancer group and 63,2 (27-105 mm) in the chromophobe cell cancer group mean tumor size was found to be high.
Nuclear and cytoplasmic expression of RBX-1 by histological types and nuclear and cytoplasmic expression of Papillary cell carcinomas and Nuclear staining of clear cell carcinomas and Chromophobe-cell carcinomas were found to be statistically significant (* p <0.00). According to the Fuhrman grades, in the immunohistochemical examination of Group 2 (high risk), which is classified as Fuhrman grade 1-2 and Group 1 (low risk) and Fuhrman grade 3-4, Group 1 and Group 2 were stained with RBX-1 protein at a staining grade of +1, ++ 2 and +++ 3 staining grade (when nuclear and cytoplasmic staining were combined); Group 2 was more strongly stained with RBX-1 and statistically significant. (* p< 0.008).Clear cell carcinoma patients were divided into subgroups as Fuhrman grade 1-2 group 1 and Fuhrman grade 3-4 group 2, and the relationship between these subgroups and RBX-1 protein expression was examined. Group 2 was statistically analyzed with RBX-1 protein in group 1 (* P <0.009). There was no statistically significant difference (p = 0.155), (p = 0.353), (p = 0.562), (p = 0.543), respectively, in terms of lymphovascular invasion, capsule invasion, perirenal invasion and surgical border positivity and RBX-1 espression.
As a result; RBX-1 protein expression may be a prognostic molecule in RCC, especially in cases of Fuhrman grade 3 and 4 (high-risk), which is significantly higher than that of RBX-1 protein expression. We believe that RBX-1 expression profile may improve on the use of a prognostic molecular marker in RCC in studies conducted with larger patient populations.

Keywords; Renal cell carcinoma, RBX-1 protein, prognosis