Levodopa ve amantadinin insan umblikal ven endotelyal hücre canlılığı üzerine etkisinin değerlendirilmesi
Evaluation of the efficacy of levodopa and amantadine on viability of human umbilical vein endothelial cell
Yazar: GÜLSÜM ÇİL
Danışman: PROF. DR. SUAT TOPAKTAŞ
Cumhuriyet Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Nöroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Amantadine = Amantadine ; Anjiyogenez inhibitörleri = Angiogenesis inhibitors ; Endotelyum = Endothelium ; Hareket bozuklukları = Movement disorders ; Hücre kültürü = Cell culture ; Levodopa = Levodopa ; Umbilikal venler = Umbilical veins

Özet:
Parkinson hastalığı (PH) hareketlerde yavaşlama, rigidite, postural instabilite ve istirahat tremoru ile karakterize progresif nörodejeneratif bir hastalıktır.   Levodopa (L-Dopa) PH tedavisinde ilk tercih edilecek ilaçlardan biri olup, kronik kullanımının tetiklediği diskinezi olarak değerlendirilen istenmeyen hareketler en önemli motor komplikasyonlardan biridir. Nigrostriatal endotelyal proliferasyon ve bozulmuş kan beyin bariyeri, L-Dopanın etkilenmiş beyin bölgelerine hızlı ve geniş dağılımına neden olarak L-Dopaya bağlı diskinezi (LID-?Levodopa induced dyskinesia?) ve motor dalgalanmalarda önemli bir patofizyolojik role sahiptir. NMDA-glutamat reseptör antagonisti olan amantadin LID önlenmesinde kullanılan antiviral bir ilaçtır.                       
Bu çalışmada L-Dopa ve amantadinin insan umblikal ven endotelyal hücre (HUVEC) kültüründe hücresel canlılık üzerine etkinliğini değerlendirmeyi amaçladık. Bu amaçla HUVEC hücre serisi 24 saat 370C ve %  5 CO2?li ortamda etüvde inkübe edilmiştir. Kontrol grubu ayrıldıktan sonra kuyucuklara tek başına L-Dopa, amantadin ve vandetanib 10-5, 10-6 ve 10-7 konsantrasyonlarda ve L-Dopa /Amantadin kombinasyonu eklenerek 24,48 ve 72 saat süreyle inkübasyona devam edilmiştir. Deney plağına WST-1 solüsyonu eklendikten sonra 450 nm dalga boyunda mikroplate okuyucusunda okutularak her deney grubunda bulunan hücreler ve ilaç uygulanmayan kontrol grubundaki hücrelerin canlılıkları analiz edilmiştir. Kontrol grubundaki hücrelerin canlılık skoru % 100 olarak kabul edilerek ilaç uygulanan deney grubundaki hücrelerin canlılığı kontrol grubuna göre hesaplanmıştır. Buna göre ilaçların maximum konsantrasyonda uygulandığı deney grupları karşılaştırıldığında 24. saatte en yüksek hücresel canlılık skoru L-Dopa grubunda % 118 iken, ilaçların minumum konsantrasyonda uygulandığı deney gruplarında anlamlı olarak en yüksek canlılık skoru amantadin ile elde edilmiştir(p<0,05). Tek başına L-Dopa ve L-Dopa/Amantadin kombinasyonunun uygulandığı gruplar birlikte değerlendirildiğinde ise hücresel canlılık skorları tek başına L-Dopa grubunda 24.saatte anlamlı olarak daha yüksek bulunmuştur(p<0,05).
Parkinson hastalığı tedavisinde ortaya çıkan diskinezinin etyopatogenezinde yer alan önemli faktörlerden biri olan anjiogenezin engellenmesinde; antidiskinetik bir ajan olan amantadinin dopaminerjik tedaviye erken dönemde eklenmesi diskinezilerin ortaya çıkmasında engelleyici bir faktör olabilir. 

Anahtar kelimeler: Levodopa, amantadin, diskinezi, insan umblikal ven endotelyal hücre, anjiogenez

Abstract:
Parkinson's disease (PD), is a progressive neurodegenerative disease characterized by slowing motion, rigidite, postural instability and resting tremor. Levodopa (L-dopa) is the first choice drug in the treatment of PD, chronic use causes dyskinesia which is one of the most important motor complications as involuntary  movements. Endothelial proliferation and altered blood?brain barrier (BBB) permeability can potentially affect the kinetics of L-DOPA entry into the affected brain regions.  Large and rapid fluctuations in brain levels of L-DOPA have a prime pathophysiological role in L-DOPA-induced dyskinesia (LID) and motor fluctuations. Amantadine is an antagonist of the NMDA type glutamate receptor, that has shown to reduce LID.
In this study, we aimed to evaluate the effect of L-Dopa and amantadine on cellular viability at human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) culture. Cultivation of HUVEC was performed in an incubator having 5 % CO2 at 370C until cell monolayers attained confluence which occurred after 24h. After lefting the control group, L-DOPA and amantadine with concentrations of 10-5, 10-6 ve 10-7and their combinations were used for the proliferation assay in which cells were incubated for 24, 48, and 72 h with these drugs. The cell viability was assessed using the cleavage of WST added to the culture medium and the absorbance of the samples was measured at 450 nm using a microtitre plate reader. The viability score of the control group was defined as 100 % and the viability score of the study drugs on HUVEC was calculated with respect to their negative controls. Among the study drugs with in 24h maximal concentration used in the experiments, L-DOPA was found to be significantly associated with the highest viability score (%118), while amantadin with minimum concentration showed the highest viability score (p<0,05). The combination of L-Dopa/Amantadin and alone L-Dopa groups were assessed with together, cellular vitality scores were significantly higher in L-dopa alone group with in 24h.
Addition of an anti-dyskinetic agent amantadine in the early period of dopaminergic therapy can be a hindering factor in the occurrence of dyskinesias by inhibition of angiogenesis which is one of the important factors in the pathogenesis of dyskinesia in the treatment of Parkinson's disease, 

Key words: Levodopa, amantadine, dyskinesia, human umbilical vein endothelial cells, angiogenesis