Mk-1775' in antiproliferatif etkisinin hela hücre hattında araştırılması
Investigation of the antiproliferative effect of mk-1775 on hela cell line
Yazar: AYŞE MÜGE ŞAHİN
Danışman: PROF. DR. FATMA GÜL ÖZCAN
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Genel Biyoloji Ana Bilim Dalı / Radyobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu Tez çalışmasında, hipobarik stres koşulları ve Wee1 inhibitörü MK-1775' in insan serviks kanseri kökenli HeLa hücre hattında oluşturduğu antiproliferatif etki araştırıldı. Bu amaçla, MK-1775' in IC50 konsantrasyonu olarak belirlenen 100 μM 24 saat süre ile, hipobarik stres koşulları ise 8 saat süre ile tek başlarına ve birlikte deney gruplarına uygulandı. Deney süreleri sonunda antiproliferatif etkinin belirlenmesi amacı ile 3-[4,5-dimetil-2-tiazolil]-2,5-difenil tetrazolyum bromid (MTT) testi uygulandı. HeLa hücre hattında meydana gelen morfolojik değişiklikler ışık ve floresan mikroskobunda, sitotoksik etki ise faz-kontrast mikroskobunda gösterildi. MK-1775 ve hipobarik stres koşullarının HeLa hücre hattı üzerindeki antiproliferatif etkisinin açıklanması amacı ile hücre kinetiği parametrelerinden apoptotik indeks ve mitotik indeks kullanıldı. Ayrıca ortaya çıkan antiproliferatif etkide apoptozun rolünün saptanması amacı ile kaspaz 3, 7 ve 9 aktiviteleri ile DNA fragmentasyonu analizleri yapıldı. 
Deney gruplarında meydana gelen antiproliferatif etkinin kontrol gruplarına göre anlamlı olduğu belirlendi (p<0,01). Saptanan sonuçlar ışığında mitotik indeks seviyelerinin kontrole göre anlamlı bir şekilde azaldığı, apoptotik indeks ve kaspaz 9 aktivite seviyelerinin ise anlamlı bir şekilde arttığı saptandı (p<0,01).
Sonuç olarak elde edilen parametreler doğrultusunda, HeLa hücre hattına MK-1775 ve hipobarik stres koşullarının tek başlarına ve birlikte uygulanmasının sitotoksik bir etkiye sebep olduğu, ayrıca birlikte uygulanan deney gruplarında maksimum antiproliferatif etkiye ulaşıldığı belirlendi (p<0,01). HeLa hücre hattına hipobarik stres koşulları ve MK-1775' in tek başına ve birlikte uygulanması ile oluşan additif etkinin literatürde ilk kez ortaya konmuş olması bu çalışmanın özgün yönünü oluşturmaktadır.  Dolayısıyla saptanan bu sonuçlar serviks kanseri tedavi rejimlerinin planlanacağı daha ileri çalışmalarda temel teşkil edecektir.

Abstract:
In this Thesis study, hypobaric stress conditions and the antiproliferative effect of Wee1 inhibitor MK-1775 were investigated on the human cervical cancer-originated HeLa cell line. For this purpose, 100 μM of IC50 concentration of MK-1775 for 24 hours and  hypobaric stress conditions for 8 hours were applied to the experimental groups  alone and in combination. At the end of the experiment period 3- [4,5-dimethyl-2-thiazolyl] -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay was applied to determine the antiproliferative effect. Morphological changes in the HeLa cell lines were shown in phase contrast, light and fluorescence microscopy. MK-1775 and hypobaric stress conditions were used to explain the antiproliferative effect on the HeLa cell line, apoptotic index and mitotic index from cell kinetics parameters were used. Furthermore, analysis of DNA fragmentation and caspase 3, 7 and 9 activities was performed with the aim of detecting the role of apoptosis in the antiproliferative effect .

Antiproliferative efficacy in the experimental groups was found to be significant compared to the control groups (p <0,01). In the light of the detected results, the mitotic index levels decreased significantly compared to the control group, apoptotic index and caspase 9 activity levels increased significantly (p<0,01). 
As a result of the obtained parameters, it was determined that the alone and combined application of MK-1775 and hypobaric stress conditions to the HeLa cell line resulted in a cytotoxic effect and that maximal antiproliferative effect was achieved in the combined experimental groups. The unique side of this study is, the determination of the additive effect by appliying hypobaric stress conditions and the of MK-1775 alone and combined to the HeLa cell lines for the first time in the literature. Therefore, these results will serve as a basis for further studies in which cervical cancer treatment regimens are planned.