İn vitro embriyo üretiminde kültür mediumlarına ilave edilen bazı antioksidanların blastosist oranına etkisi
The effect of some antioxidants added to culture mediums on blastosist rate in in vitro embryo production
Yazar: MEHMET BURAKALP YUSUFLU
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ SAKİNE ÜLKÜM ÇİZMECİ
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Doğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Antioksidanlar = Antioxidants ; Blastosist = Blastocyst ; Embriyo = Embryo ; Ergotiyonin = Ergothionine ; Fertilizasyon-in vitro = Fertilization-in vitro ; Sisteamin = Cysteamine ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; Vitamin E = Vitamin E ; İn vitro = In vitro

Özet:
İn vitro embriyo üretimi; ovaryumların toplanması, toplanan ovaryumlardan oositlerin aspirasyonu, aspire edilen oositlerin in vitro maturasyonu, mature oositlerin in vitro fertilizasyonu ve embriyo kültürü aşamalarını kapsar. Embriyo gelişimini etkileyen önemli etkenlenerden birisi oksidatif strestir. İn vitro embriyo üretiminde antioksidan maddeler okisdatif stresin azaltılması amacıyla kullanılmaktadır. Sunulan çalışmada in vitro embriyo üretiminde kültür medyumlarına eklenen bazı antioksidanların blastosist gelişim oranlarına etkisinin belirlenmesi amaçlanmıştır. 
Çalışmanın materyalini mezbahadan alınan ovaryumlardan toplanan oositler oluşturmuştur. Ovaryumlarda bulunan 3-8 mm çapındaki foliküller aspire edildi. Kumulus oosit kompleksleri (COC) stereo mikroskop altında toplandı ve sınıflandırıldı. Çalışmaya alınacak oositler maturasyon ve fertilizasyon aşamalarına tabi tutuldu. Kültür medyumuna alınırken muhtemel zigotların kumulus hücreleri temizlendi ve antioksidanların ((L-ergotiyonin 100 μM (n:163), Vitamin E 100 μM (n:151) Sisteamin 50 μM (n:154) ve Kontrol (N:187)) ilave edildiği kültür (IVC) droplarına aktarılarak tri gaz (Hera Cell- %6 O2, %6CO2, %88N) inkübatörde kültüre bırakıldı. Kültür ortamındaki 6. ve 7. gün blastosist oranları ve embriyo kaliteleri değerlendirildi. IVMFC aşamalarında oluşan farklılıklar Ki-kare testi ile değerlendirildi.
Mezbahadan toplanan 162 ovaryumdan 966 adet oosit toplandı. Ovaryum başına oosit sayısının 5,96 olduğu A ve B kalite oosit sayısının ise 4,26 olduğu belirlendi. In vitro maturasyona alınan toplam 690 oositin oositin 655'inin (%94,93) mature olduğu belirlendi. Mature olan ve fertilizasyon aşamasına alınan oositlerin 539 tanesinin fertilize olduğu ve en az iki hücreye bölündüğü (%82,14) (L-ergotionin: 136; vitamin E: 122, sisteamin: 124 ve kontrol:157) görüldü. Grupların cleavage oranları sırasıyla %83,44; %80,79; %79,87 ve %83,96 olduğu ve istatistiki farkın önemsiz olduğu belirlendi (p>0,05). Kültür aşamasına alınan 655 oositten 140 (%21,37) adet blastosist elde edildi ve gruplardaki blastosist oranları sırasıyla %33,13; %8,61; %7,79 ve %32,62 olduğu görüldü.
Yapılan çalışma sonucunda kotrol ve L-ergotiyonin gruplarına göre sisteamin ve Vitamin E eklenen gruplarda blastosisit oranlarının önemli oranda düştüğü belirlendi. Bu düşüşün antioksidanların dozu yada oosit gelişim yeterliliğinden etkilenmiş olabileceği düşünüldü. Vitamin E ve siteaminin farklı dozlarının denenmesi ile daha doğru sonuçların alınabileceği kanaati oluştu. 
Anahtar Kelimeler: Antioksidan, İn -vitro embriyo, L-ergotiyonin, Sisteamin, Vitamin E

Abstract:
In vitro embryo production; collection of ovaries, aspiration of oocytes from collected ovaries, in vitro maturation of aspirated oocytes, in vitro fertilization of mature oocytes, and embryo culture. One of the important factors affecting embryo development is oxidative stress. Antioxidant substances are used in in vitro embryo production to reduce oxidative stress. The present study, it was aimed to determine the effect of some antioxidants added to culture media on blastocyst development rates in in vitro embryo production.
The material of the study consisted of oocytes collected from the ovaries taken from the slaughterhouse. Follicles with a diameter of 3-8 mm were aspirated in the ovaries. Cumulus oocyte complexes (COC) were collected and classified under a stereomicroscope. Oocytes included in the study were subjected to maturation and fertilization stages. The cumulus cells of probable zygotes were cleaned when placed in the culture medium and transferred to the culture (IVC) containing antioxidants (L-ergothionine 100 μM (n: 163), Vitamin E 100 μM (n: 151) Cysteamine 50 μM (n: 154) and control (n:187)) and were cultured in a tri gas incubator (Hera Cell- 6% O2%, 6%CO2, 88%N). Blastocyst rates and embryo quality were determined on the 6th and 7th days in culture medium. Differences in IVMFC stages were evaluated by chi-square test.
966 oocytes were collected from 162 ovaries collected from the slaughterhouse. It was determined that the number of oocytes per ovary was 5,96, and the number of A and B quality oocytes was 4,26. It was determined that 655 (94,93%) of a total of 690 oocytes undergoing in vitro maturation were mature. It was observed that 539 of the mature oocytes taken to the fertilization stage were fertilized and divided into at least two cells (82.14%) (L-ergothionin: 136; Vitamin E: 122, Cysteamin: 124 ve kontrol:157). The cleavage rates of the groups were 83,44%; 80,79%; 79.87%, and 83,96%, respectively, and the statistical difference was insignificant (p>0,05). 140 (21,37%) blastocysts were obtained from 655 oocytes taken into the culture stage and the blastocyst rates in the groups were 33,13%; 8,61%; 7,79%, and 32.62%, respectively.
As a result of the study, it was determined that the rates of blastocysts in the L-ergothioneine added the group was similar to the control group, but the blastocyst rates decreased significantly in the cysteamine and Vitamin E added groups. It was thought that this decrease might have been affected by the dose of antioxidants or the adequacy of oocyte development. It was concluded that more accurate results could be obtained by trying different doses of vitamin E and cystamine.
Keywords: Antioxidant, Cysteamine, In-vitro embryo production, L-ergothionine, Vitamin E