Metilentetrahidrofolat redüktaz mutasyonlarının real time PCRile belirlenmesi
Determination of methylentetrahydrofolat reductase mutations by real-time PCR
Yazar: ONUR ALBAYRAK
Danışman: PROF. DR. M. AKİF ÇÜRÜK
Çukurova Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Anemi = Anemia ; Anemi-orak hücreli = Anemia-sickle cell ; Folik asit = Folic acid ; Genler = Genes ; Genler-MTHFR = Genes-MTHFR ; Homosistein = Homocysteine ; Metilentetrahidrofolat = Methylenetetrahydrofolate ; Mutasyon = Mutation ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Metilentetrahidrofolat redüktaz (MTHFR) enzimi folat metabolizmasında önemli rol oynamaktadır. MTHFR gen lokusundaki genetik varyasyonlar homosistein seviyesinin artmasına ve enzim aktivitesinin azalmasına sebep olmaktadır. Hiperhomosisteinemi reaktif oksijen türlerinin üretimine ve endotel hücre hasarına yol açar. MTHFR geninin polimorfik varyantları vasküler patolojiler, inme, nöral tüp defektleri, demans, mental bozukluklar, nörodejeneratif bozukluklar, migren, alzehimer, parkinson, kanser ile ilişkilidir.Hemoglobinopatiler ülkemizde sık görülen genetik hastalıklardır. Türkiye'nin güneyinde yer alan Çukurova Bölgesi'nde (Adana, Mersin ve Hatay) Orak Hücre Anemisi taşıyıcı sıklığı %10, beta talasemi ise %3.7 dir. Orak Hücre Anemisi (OHA) Çukurova Bölgesinde yaygın iken beta talasemi ülkenin her yerinde görülmektedir. Sağlık Bakanlığı tarafından bölgede evlilik öncesi tarama merkezleri 15 yıl önce kurulmuş olmasına rağmen yaklaşık 300 Orak Hücre Anemili hasta Çukurova Üniversitesi Balcalı Hastanesi Çocuk Hematoloji Kliniğinde tedavi görmektedir. Yayınlarda OHA hastalarda MTHFR polimorfizmlerinin damar tıkayıcı komplikasyonlar ve inmeyi artırdığı rapor edilmiştir.Bu çalışmada 28 OHA hastadan EDTA'lı tüplere kan örneği alınarak DNA izole edildi. Tüm örnekler ARMS yöntemi ile analiz edildi. Toplan 28 hastadan 23'ü HbSS ve 5 hasta ise HbS/ßtalasemi olarak belirlendi. MTHFR gen polimorfizmleri Real Time PCR ile karekterize edildi. MTHFR 677 ve 1298 polimorfik allerin dağılımı sıra ile CC %54, CT %39, TT %7 ve AA %43, AC %53, CC %7 olarak bulundu. Homosistein ve eritrosit folat düzeyleri MTHFR genotipleri ile birlikte değerlendirildi.Anahtar Sözcükler: MTHFR, Orak Hücre Anemisi, Homosistein, Folik asit

Abstract:
Methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) enzyme plays an important role in folate metabolism. The genetic variations at the MTHFR gene locus may contribute the increase in homocysteine level and decrease enzymatic activity. Hyperhomocysteinemia causes the production of reactive oxygen species and to endothelial damage. Polymorphic variant of the MTHFR gene is related with vascular disorders, stroke, neural tube defects, dementia, mental disorders, neurodegenerative disorders, migraine, alzheimer, parkinson's disease and cancer.Hemoglobinopathies are the most common genetic diseases in Turkey. The incidence of sickle cell trait is 10.0% and beta thalassemia trait is 3.7% in the Çukurova region (Adana, Mersin and Hatay) of southern Turkey. Sickle cell anemia is prevalent in the Çukurova region, but ? -thalassemia is seen all over the country. Although three premarital screening centers were set up by the Ministry of Health in the Çukurova region about 15 years ago, more than 300 sickle cell patient were born and having treatment from Pediatric Clinic of Çukurova University Balcalı Hospital. In literature, it was reported that MTHFR polymorphism with HbSS patients increased with vaso-occlusive complications and stroke.In this study, blood samples were taken into tubes with EDTA and DNA was isolated from 28 patients with sickle cell anemia. The samples were analyzed by the amplification refractory mutation system (ARMS). A total of 23 of these 28 were diagnozed as HbSS and the others (5 patients) were HbS/ßthal. MTHFR gene polymorphisms were charecterized by Real Time PCR. Distribution of 677 and 1298 polymorphic alleles were found as CC 54%, CT 39%, TT 7% and AA 43%, AC 53%, CC 7% respectively. Homocysteine and erythrocyte Folat levels were evaluated with genotypes of MTHFR.Key words: MTHFR, Sickle Cell Anemia, Homosystein, Folic asit