Nesfatin-1'in sıçan duyusal nöronlarında kalsiyum sinyalleşmesi üzerine etkisi
The effect of nesfatin-1 on calcium signalling in rat dorsal sensorial neurons
Yazar: ZEYNEP BETÜL GÖK
Danışman: PROF. DR. HALUK KELEŞTİMUR
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Fizyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Fizyoloji = Physiology
Dizin: Ağrı = Pain ; Duyular = Sensation ; Guanin nükleotidler = Guanine nucleotides ; Kalsiyum kanalları = Calcium channels ; Nesfatin 1 = Nesfatin 1 ; Nöronlar = Neurons ; Protein kinazlar = Protein kinases ; Sıçanlar = Rats ; İyon kanalları = Ion channels

Özet:
Nesfatin-1; son yıllarda keşfedilen, nükleobindin 2 (NUCB2) 'nin 
postranslasyonel işlenmesinden elde edilen anoreksijenik hipotalamik bir 
polipeptittir. Birçok çalışma nesfatin-1'in, enerji metabolizmasına ek olarak ağrı 
sinyalleri de dahil olmak üzere somatosensorial ve visseral transmisyonda rol 
aldığını göstermektedir. Bu çalışmanın amacı; neonatal sıçanların kültüre edilmiş 
dorsal kök gangliyon nöronlarında (DKG) nesfatin-1 'in intrasellüler kalsiyum 
seviyeleri ([Ca+2]i) üzerine etkilerini araştırarak, periferal nöronal sinyallerin 
iletiminde olası rolünü keşfetmektir. Nesfatin-1'in DKG nöronlarında [Ca+2]i 
üzerine etkileri in vitro kalsiyum görüntüleme sistemi kullanılarak araştırıldı. 
DKG nöronları; 1-2 günlük neonatal Wistar sıçanlarından alınan ganglionların 
enzimatik ve mekanik ayrıştırma işlemini takiben primer kültürde yetiştirildi. Bu 
tez çalışması ile fura-2 bazlı kalsiyum görüntüleme sistemi tekniği kullanılarak, 
nesfatin-1 'in [Ca+2]i üzerine etkileri ve protein kinaz C (PKC) aracılı yolağının 
rolü incelendi. Nesfatin-1 kültüre DKG nöronlarında [Ca+2]i'i artırdı. Hücreler 
nesfatin-1 uygulaması öncesinde pertussis toksin ile muamele edildiğinde [Ca+2]i 
meydana gelen artış ortadan kalktı. Protein kinaz C inhibitörü chelerythrine 
chloride, nesfatin-1 ile indüklenmiş [Ca+2]i daki artışı baskılamıştır. Bu tez 
çalışmasının sonuçları; nesfatin-1'in kültüre edilmiş DKG nöronlarında protein 
kinaz C aktivasyonuna bağlı olarak, G-protein bağlantılı reseptör ile etkileştiğini 
ve bu sayede [Ca+2]i artışına sebep olduğunu göstermektedir.

Abstract:
Nesfatin-1 is a recently identified anorexigenic hypothalamic polypeptide 
derived from the posttranslational processing of nucleobindin 2 (NUCB2). Several 
studies have indicated that this neuropeptide may be participated in 
somatosensory and visceral transmission including pain signals in addition to 
energy metabolism. The aim of this study was to explore the possible role of 
nesfatin-1 in the transmission of peripheral neural signals by investigating the 
effects of nesfatin-1 on intracellular free calcium levels ([Ca2+]i) in cultured 
neonatal rat dorsal root ganglion (DKG) neurones. The effects of nesfatin-1 on 
[Ca2+]i in DKG neurons were investigated by using an in vitro calcium imaging 
system. DKG neurons were grown in primary culture following enzymatic and 
mechanical dissociation of ganglia from 1-or 2-day-old neonatal Wistar rats. 
Using the fura-2-based calcium imaging technique, the effects of nesfatin-1 on 
[Ca2+]i and role of the protein kinase C (PKC)-mediated pathway in nesfatin-1 
effect were assessed. Nesfatin-1 elevated [Ca2+]i in cultured DKG neurons. The 
response was prevented by pretreating the cells with pertussis toxin. The protein 
kinase C inhibitor chelerythrine chloride suppressed nesfatin-1-induced rise in 
[Ca2+]i. The result shows that nesfatin-1interacts with a G protein-coupled 
receptor, leading to an increase of [Ca2+]i, which is linked to protein kinase C 
activation in cultured rat DKG neurons.