PC12 hücre hattında Aβ25-35 ile indüklenen hücre sitotoksisitesi ve oksidatif hasar üzerine şikoninin etkileri
The effect of shikonin on Aβ25-35 induced cell cytotoxicity and oxidative injury in PCc12 cell line
Yazar: NESLİHAN ÖZTAŞ
Danışman: PROF. DR. SEYİTHAN TAYSI
Gaziantep Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Alzheimer hastalığı = Alzheimer disease ; Amiloid = Amyloid ; Amiloid beta protein = Amyloid beta protein ; Hücre dizisi = Cell line ; Naftakinonlar = Naphthoquinones ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Sitotoksisite = Cytotoxicity ; Şikonin = Shikonin

Özet:
Alzheimer Hastalığı (AH) ilerleyici hafıza kaybı ile seyreden, kronik nörodejeneratif bir hastalıktır. Şikonin antioksidan, anti-inflamatuar, anti-trombotik, anti-mikrobial, anti-kanser ve yara iyileşmesi gibi birçok olumlu etkiye sahip olduğu görülmüştür. Bu tez çalışmasında PC12 hücre hattında Aβ25-35 ile oluşturulan AH modelinde şikonin'in Aβ toksisitesine ve sonucunda oluşan oksidatif hasara karşı olası koruyucu etkisinin varlığı araştırılması amaçlanmıştır. Aβ25-35 ve şikonin'in PC12 hücre canlılığı üzerine etkileri MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5 diphenyl-2H-tetrazolium bromide] yöntemi ile belirlendi. Süperoksit dismutaz (SOD), glutatyon peroksidaz (GSH-Px), katalaz (CAT) aktiviteleri, malondialdehit (MDA) ve nitrik oksit (NO•) düzeyleri ELISA yöntemi ile analiz edildi. 5µM Aβ25-35 ile azalan hücre viabilitesinin 20 μM şikonin ilavesi ile anlamlı bir şekilde arttığı, Aβ25-35 ile artan NO• ve MDA düzeyleri şikonin ilavesi ile azaldığı, Aβ25-35 ile azalan SOD ve GSH-Px enzim aktiviteleri şikonin ilavesi ile arttığı ve benzer şekilde Aβ25-35 ile azalan katalaz enzim aktivitesi şikonin ilavesi ile arttığı gözlendi. Aβ25-35 ile PC12 hücrelerinde oluşturulan in vitro AH modelinde şikoninin oluşan nöronal sitotoksisite ve oksidatif hücre hasarı üzerine olumlu etkilerini ortaya koymuştur. Böylece, şikoninin AH'ında önemli bir patofizyolojik mekanizma olan Aβ ile indüklenen sitotoksisite ve oksidatif hasarın önlenmesinde potansiyel bir ajan olabileceği düşüncemizi desteklenmektedir.

Abstract:
Alzheimer's Disease (AD) is a chronic neurodegenerative disorder characterized by progressive loss of memory. Shikonin has been shown to have many positive effects such as anti-oxidant, anti-inflammatory, antithrombotic, antimicrobial, anticancer and wound healing properties. In this study, using the AD model induced with Aβ25-35 in the PC12 cell line, we aimed to investigate the potential protective effect of Shikonin against Aβ toxicity and its resulting oxidative damage. The effects of Aβ25-35 and shikonin on PC12 cell viability was determined by MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5 diphenyl-2H-tetrazolium bromide] assay. To examine the effects of Aβ25-35 and Shikonin oxidative stress, we analyzed the levels of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT) and lipid peroxidation product, malondialdehyde (MDA) using Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method. Nitric oxide (NO•) was colorimetrically analyzed by Griess method. On addition of 20μM shikonin, reduced cell viablility noted with 5µM Aβ25-35 was significantly increased. increased levels of NO• and MDA by Aβ25-35 decreased by the addition of shikonin, increased SOD and GSH-Px enzyme activities reduced Aβ by the addition of shikonin. Similarly, CAT enzyme activity decreased with Aβ25-35 by the addition of shikonin. Results obtained from this study reveal the positive effects of shikonin on neurotoxicity and oxidative damage in Aβ25-35-induced AD model created in vitro in the PC12 cells We therefore are of the opinion that shikonin may be a potential agent in preventing the cytotoxicity and oxidative damage induced by Aβ.