Stafilokokal enterotoksin A (SEA) antijenine karşı monoklonal antikor üretimi
Production of monoclonal antibody against staphylococcal enterotoxin A (SEA) antigen
Yazar: ARZU PINARBAŞI
Danışman: DOÇ. DR. FATIMA YÜCEL
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2012
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Antijenler = Antigens ; Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Enterotoksinler = Enterotoxins ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Hibridoma teknolojisi = Hybridoma technology ; Hibridomalar = Hybridomas ; Staphylococcus = Staphylococcus ; Staphylococcus aureus = Staphylococcus aureus

Özet:
Stafilokokal enterotoksinler (SE) gıda zehirlenmelerinin yanı sıra, toksik şok benzeri sendroma, artrite, alerjik reaksiyonlara ve otoimmün hastalıklara neden olmaktadır. Stafilokokal gıda zehirlenmesi olgularında ölüm nadirdir ancak çocuklar ve yaşlılarda ölüm oranının %0.03'ten %4.4'e kadar değişebildiği bildirilmiştir. Stafilokokal gıda zehirlenmeleri, tüm dünyada üretim kaybı ve medikal masraflar nedeniyle yüklü bir maliyete mâl olmaktadır.Stafilokokal enterotoksinlerin; en sık görüleni, en toksik olanı, en ısıya ve asite dayanıklı olanı stafilokok enterotoksin A'dır. Stafilokokal Enterotoksin A; tükettiğimiz besinlerde özellikle de bebeklerimizin beslenmesinde önemli bir yere sahip olan sütte, dünya çapında ciddi anlamda kontaminasyona neden olmaktadır.Tez çalışmamda; Hibridoma tekniğini kullanarak, SEA antijenine karşı özgün monoklonal antikor geliştirmek ve etkenin tanısına yönelik sistemlerde monoklonal antikorun etkin olarak kullanılması amaçlanmıştır.Bu amaçla, deneylerde ticari olarak temin edilen SEA antijeni ile 6-8 haftalık BALB/c türü fareler immünize edildi. Hibridoma teknolojisi kullanılarak güçlü antikor yanıtı alınan fareler ile 3 ayrı füzyon çalışmaları gerçekleştirildi. Füzyonlarda, B lenfosit kaynağı olarak dalak organı kullanıldı. Dalak hücreleri ile fare myeloma hücreleri, polietilen glikol varlığında birleştirildi. Füzyon çalışmaları sonucunda 8 adet hibrit klon elde edildi. Bu klonlar içerisinde 1 adet klonun ürettiği antikorun SEA antijeni ile özgün reaksiyon verdiği dolaylı ELISA yöntemi ile belirlendi.Sonuç olarak; elde ettiğimiz bu monoklonal antikor ile sütte ki SEA'nın tespiti için (antijen-antikor ilişkisine dayalı tüm sistemlerde) hızlı, basit, güvenilir ve hassas tanı sistemlerinin geliştirilmesi mümkün olacaktır.Anahtar Kelimeler: Staphlococcus Aerus, Enterotoksin, Süperantijen, Monoklonal Antikorlar, ELISA Test Sistemleri, Hibridoma Teknolojisi

Abstract:
Staphylococcal Enterotoxins cause syndromes like toxic shock, arthritis, allergic reactions and autoimmune diseases beside food poisoning. The mortality rate is low for staphylococcal food poisoning but for children and old people the mortality rate is in the range 0.03% to 4.4%. Staphylococcal poisonings may cause a loss of revenue due to the production and medical costs.Among all the Staphylococcal Enterotoxins the most common, the most toxic, the most heat resistant and the most acid-resistant is the Staphylococcal Enterotoxin A. Staphylococcl Entorotoxin A, causes serious contamination around the world to the food which we consume daily and to the milk which is so important for our babies.In my thesis study, the aim is to produce monoclonal antibodies against SEA antigen by using hybridoma technology so that a SEA detection kit may be produced in the future.With this purpose, commercially obtained SEA antigen is used for immunisation of 6-8 weeks old BALB/c mice in the experiments. By using hybridoma technology, three fusion studies were carried out with the high immune response giving mice. The spleen was used as a lymphocyte source in the fusion studies. Spleen and myeloma cells were fused in the presence of polyethylenglycol. As a result of fusion, 8 positive hybrid clones were obtained. Among these clones it is observed that one clone (1D3) produces spesific monoclonal antibody against SEA by indirect ELISA.In conclusion, using this monoclonal antibody it will be possible to develope quick, easy and cheap serologic systems to detect the SEA amount in milk .Key Words: Staphlococcus Aerus, Enterotoxin, Superantigen, Monoclonal Antibodies, ELISA Test Systems, Hybridoma Technology.