Düşük enerji seviyeli lazerin bağ doku fibroblastlarının proliferasyonu üzerine etkisi ve bu hücrelerden salınan b-FGF, IGF ve TIMP-1 düzeylerinin incelenmesi
The effects of low level laser therapy on proliferation of connective tissue fibroblasts andb-FGF, IGF ve TIMP-1 levels
Yazar: BANU KARAKÖSE ÇELİK
Danışman: PROF. DR. UTKU ONAN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Periodontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Bağ doku = Connective tissue ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Fibroblast büyüme faktörü = Fibroblast growth factor ; Fibroblast büyüme faktörü = Fibroblast growth factor ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Lazer tedavisi = Laser therapy ; Lazerler = Lasers ; Matriks metalloproteinazlar = Matrix metalloproteinases ; İnsülin benzeri büyüme faktörü I = Insulin like growth factor I

Özet:
Çalışmamızın amacı düşük enerji seviyeli lazerin bağdoku fibroblastları üzerindeki hücresel etkilerinin araştırılmasıdır. Fibroblastların yara iyileşmesinde kritik bir rol oynaması sebebiyle, Düşük Enerji Seviyeli Lazer (DESL) ile ilgili yayınlanan çalışmaların çoğunda DESL'nin fibroblast hücrelerinin büyümesi, hareketi ve kollojen üretimi üzerine etkisi incelenmiştir. Yaptığımız çalışma, lazer uygulamasının hücrelerin canlılık ve proliferasyonu üzerine etkisini değerlendirmeye, tripan mavisi ile ışık mikroskobu altında total hücre sayısını tespit etmeye, immunohistokimyasal boyama ile DNA sentezini araştırmaya ve akım sitometri yöntemi ile apoptotik ve nekrotik hücreleri belirlemeye yönelik temel bir araştırma programıdır. Ayrıca bazik fibroblast büyüme faktörü (b-FGF), insülin-benzeri büyüme faktörü (IGF) ve matriks metalloproteinaz doku inhibitörü (TIMP-1) seviyeleri ELİSA kitler aracılığıyla değerlendirilmiştir.
3T3 bağdoku fibroblastları standart koşullarda kültüre edilerek 3 gruba ayrılmıştır. Deney gruplarına 810 nm diyot lazer 90 saniye süreyle ilk gruba 0,3 W güçle, ikinci gruba 0,6 W güçle, sürekli dalga modunda ve 24 saat aralıkla 2 kere uygulanmıştır. Üçüncü gruba lazer ışını uygulanmayarak, kontrol grubu olarak tayin edilmiştir. istatistiksel analiz için Student's t-test kullanılmıştır. p<0,05. değerleri istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir. 
Sonuç olarak, fibroblast hücre kültürüne uygulanan düşük enerji seviyeli lazer, total hücre sayısı, hücre proliferasyonu, programlı hücre ölümü ve TIMP-1 dışındaki biyokimyasal parametreler üzerine olumlu bir etki göstermemiştir.

Abstract:
The aim of our study was to investigate the cellular effects of the low level laser on connective tissue fibroblasts. Because the fibroblast plays a crucial role in wound healing, most of the Low Level Laser Therapy (LLLT) studies published in the literature have examined the effect of LLLT on fibroblast cell growth, locomotion, and production of collagen. The present study was part of a basic research programme investigating to evaluate the effects of the laser treatment on the survival and proliferation rate of fibroblasts, to count the total cell numbers under a light microscope by means of trypan blue staining, to research DNA synthesis by immunohistochemical staining, to distinguish apoptotic and necrotic cells using flow cytometric method. In addition to these, b-Fibroblast Growth Factor (b-FGF), Insulin-like Growth Factor (IGF) and Tissue Inhibitor of Matriks Metalloproteinaz (TIMP-1) levels were analysed by ELISA kits. 
The cultured 3T3 connective tissue fibroblasts were prepared at standardized conditions and divided three groups. The first group was determined as non-irradiated control group. The other two experimantal groups were irradiated at different power settings and same duration by GaAlAs diode laser with a wavelenght of 810 nm and continuous wave mode. The power delivery for the second group was 0,3 W and for the third group was 0,6 W with 90 seconds irradiation duration, periodically 24 hours for two times. Student's t-test was performed for statistical analysis. Results were considered to be significant when p<0,05.
In conclusion, LLLT applying at fibroblast cell culture showed no positive effects in total cell number, cell proliferation, programmed cell death and biochemical markers apart from TIMP-1.