Çeşitli yumuşak astar materyalleri ve akrilik yüzeyinden izole edilen Candida albicans suşlarında, ALS gen ailesinden ALS1 adezyon geninin ve Als1 proteininin araştırılması
Identification of ALS1 gene from ALS gene family and Als1 protein of Candida albicans strains isolated from different soft lining materials and acrylic surfaces
Yazar: YEŞİM GÖKNUR BABAÇ
Danışman: PROF.DR. DİLEK NALBANT
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Protetik Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2007
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry
Dizin: Candida albicans = Candida albicans

Özet:
Bu çalışmada; çeşitli yumuşak astar materyalleri ve akrilik yüzeylerle karşılaşmış C. albicans hücrelerindeki ALS1 gen ekspresyonundaki değişikliklerin ve Als1 proteininin hücrelerin bu yüzeylere adezyonundaki rolünün araştırılması amaçlanmıştır.Bu amaçla; dört adet tam protez kullanan hasta, iki adet protez kullanmayan hasta olmak üzere toplam altı adet hastadan elde edilen C. albicans suşları kullanılmıştır. Bu suşların akrilik rezin (Acron Duo) ve yumuşak astar materyalleri (Visco Gel, Ufi Gel P, Mollosil, Molloplast B) ile in-vitro olarak karşılaşmasından önce ve karşılaşmasından sonraki ALS1 gen ifadelerindeki değişiklikleri RT-PZR ile incelenmiş; aynı suşların protein ifadesinde değişiklik olup olmadığı ise Western blot ve akım sitometri yöntemleri kullanılarak araştırılmıştır. Bu şekilde, adezyondan sorumlu olan mekanizmayı oluşturan Als1 proteinini (Als1p) kodlayan genin ekspresyonu ve proteinin hücre yüzeyinde gösterilmesi eş zamanlı olarak incelenmiştir.RT-PZR ve Western blot analizinden elde edilen sonuçlar C. albicans suşlarının protez materyalleriyle karşılaştıktan sonra ALS1 gen ve Als1p ifadelerinin değiştiğini göstermiştir. Akım sitometri analiziyle yapılan kantitatif inceleme sonucunda kullanılan materyale bağlı olarak protein ifadesinde farklı derecelerde değişiklik olduğu gösterilmiştir. En düşük seviyedeki Als1p ekspresyonu akrilik rezinde elde edilmiştir. Yumuşak astar materyallerinde protein ifadesindeki değişiklik akrilik rezinden daha fazla bulunmuştur.Yumuşak astar materyalleri birbirleriyle kıyaslandığında Visco Gel ve Molloplast B'de birbirine oldukça yakın sonuçlar elde edilmiş; en düşük Als1p ekspresyonları bu iki yumuşak astar materyalinde görülmüştür. Oda ısısında vulkanize olan silikon esaslı iki materyal olan Mollosil ve Ufi Gel P ise sırasıyla diğer iki yumuşak astar materyalinden daha fazla ekspresyon göstermiştir. Ancak yumuşak astar materyallerinin ortalama ekspresyon düzeyleri arasında belirgin bir fark bulunamamıştır.Elde edilen veriler ışığında ALS1 gen ekspresyonunun ve Als1p ifadesinin kullanılan protez materyalinin türüne göre değişik oranlarda etkilediği; Als1p'nin epitel ve endotel hücrelerine adezyonun dışında restoratif materyallere adezyonu da etkilediği sonucuna varılmıştır.Anahtar Kelimeler: Candida albicans, ALS1, adezyon, yumuşak astar materyalleri

Abstract:
The aim of this study was to investigate the differences of ALS1 gene expression in C. albicans cells isolated from different softlining materials, and acrylic surfaces, and to investigate the role of Als1 protein in adhesion to these surfaces.For this purpose; six C. albicans strains isolated from four patients with complete dentures, and two patients without dentures were used. The differences of ALS1 gene expression patterns were evaluated before and after these strains contacted with acrylic resin (Acron Duo) and softlining materials (Visco Gel, Ufi Gel P, Mollosil, Molloplast B) in-vitro using RT-PCR. In addition, differences in protein expression levels of these C. albicans strains were investigated with Western blot and flow cytometry analyses also. Thereby, the expression of gene encoding Als1 protein (Als1p) that is responsible from adhesion mechanism and protein existence on the cell surface were evaluated simultaneously.Results obtained form RT-PCR and Western blot analyses showed that ALS1 and Als1p expression levels were changed in C. albicans strains after exposure to different denture materials. Quantitative investigation with flow cytometry showed that material depended protein expression levels were different. Minimum Als1p expression was obtained from strains contacted with acrylic resin. Protein expression levels in softlining materials were higher than in acrylic resin.Results obtained from Visco Gel and Molloplast B were similar and showed lowest Als1p expression level when softlining materials were compared to each other. Room temperature vulcanized silicone based softlining materials Mollosil and Ufi Gel P showed higher expression than the other two softlining materials. However, there were no significant differences between average Als1p expression levels in softlining materials.With these findings, it was concluded that ALS1 and Als1p expression were affected from the type of denture material at different levels, and Als1p affects the adhesion to restorative materials as it affects the adhesion to epithelial and endothelial cells.Keywords: Candida albicans, ALS1, adhesion, softlining materials