L-asparaginaz enzimi üreten mikroorganizmaların izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of microorganisms producing l-asparaginase enzyme
Yazar: EMİNE GÖKÇE
Danışman: PROF. DR. ÖMER FARUK ALGUR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Genel Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
L-asparaginaz, kanser tedavisinde kullanılan önemli bir terapötik enzimdir.L-asparaginaz üretimi için daha verimli mikrobiyal kaynak bulmak oldukça önemlidir. Çalışmamızda L-asparaginaz enzimi üreten mikrobiyal kaynaklar, farklı hayvansal organizmaların (insan, sığır, tavuk, balık, böcek ve toprak solucanı) sindirim sisteminden izole edilmiştir.İzole edilen bakterilerinL-asparaginaz üretme yetenekleri;  fenol kırmızısı ve L-asparagin aminoasidi içeren M9 ortamında test edilmiştir. İnsan dışkısındanizole edilen WC, sığır sindirim sisteminden izole edilen E6ve toprak solucanından izole edilen SC4'ün L-asparaginaz aktivitesi pozitif özellik göstermiştir. İzolatlar için yapılan optimum koşullar; karbon kaynağı glikoz, glikoz miktarı 2g/L, azot kaynağı tavuk tüyü peptonu, pH 7.0,inkübasyon süresi 48 saat olarak belirlenmiş ve elde edilen aktivite değerleri; E6 147 U/ml, WC165 U/ml ve SC4 150 U/ml şeklindedir.Bu bakterilerin fizyolojik, morfolojik ve biyokimyasal özellikleri belirlenmiştir. 16S DNA analizlerine göre bu bakteriler; (WC)MN420918 Bacillus atrophaeus, (E6) MN420916Bacillus subtilis ve (SC4)MN420917Bacillus pumilus'tur.Ürettikleri L-asparaginaz enzimi kısmi olarak saflaştırılmış ve molekül ağırlıkları SDS-PAGE ile belirlenmiştir. Kısmi saflaştırılmış L-asparaginazın molekül ağırlıkları; WC (MN420918 Bacillus atrophaeus); 100 kDa, E6 (MN420916 Bacillus subtilis);35 kDa ve SC4 (MN420917 Bacillus pumilus); 75 kDa olarak belirlenmiştir.
2019, 69sayfa
Anahtar Kelimeler:L-asparaginaz,Bacillus, sindirim sistemi florası, SDS-PAGE

Abstract:
L-asparaginase is an important therapeutic enzyme used in the treatment of cancer. It is important to find a more efficient microbial source for the production of L-asparaginase. In our study, microbial sources producing L-asparaginase enzyme were isolated from the digestive system of different animal organisms (human, cattle, chicken, fish, insect and soil worm). The ability of isolated bacteria to produce L-asparaginase; phenol red and L-asparagine amino acid. L-asparaginase activity of WC isolated from human feces, E6 isolated from bovine digestive system and SC4 isolated from soil worm showed positive properties. Optimum conditions for isolates; carbon source glucose, glucose amount 2 g / L, nitrogen source chicken feather peptone, pH 7.0, incubation time was determined as 48 hours and obtained activity values; E6 147 U / ml, WC 165 U / ml and SC4 150 U / ml. Physiological, morphological and biochemical properties of these bacteria were determined. According to 16S DNA analysis, these bacteria; (WC) MN420918 Bacillus atrophaeus, (E6) MN420916 Bacillus subtilis and (SC4) MN420917 Bacillus pumilus. The L-asparaginase enzyme produced was partially purified and their molecular weights were determined by SDS-PAGE. Molecular weights of partially purified L-asparaginase; WC (MN420918 Bacillus atrophaeus); 100 kDa, E6 (MN420916 Bacillus subtilis); 35 kDa and SC4 (MN420917 Bacillus pumilus); 75 kDa.
2019, 69 pages
Key words: L- asparaginase,  Bacillus, flora of the digestive system, SDS-PAGE