CD36'ya karşı monoklonal antikor geliştirilmesi ve adipogeneze etkisinin incelenmesi
Development of monoclonal antibody against CD36 and investigation of its effect on adipogenesis
Yazar: ÜMİT ÜREK
Danışman: PROF. DR. ERKAN YILMAZ
Ankara Üniversitesi / Biyoteknoloji Enstitüsü / Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyomühendislik = Bioengineering ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Vücutta adipogenez ile öncü yağ hücreleri olgun yağ hücrelerine dönüşmekte ve aşırı yağ dokusu birikimi sonucu obezite ortaya çıkmaktadır. Obezitenin genel sağlık tablosu üzerindeki olumsuz etkisi göz önüne alındığında, önlenmesi halk sağlığı açısından önemlidir. Monoklonal antikorlar (mAb) düşük yan etki ihtimali, diğer ilaçlarla daha az etkileşimleri ve hedefe özgü olmaları gibi avantajları nedeniyle birçok önemli hastalığın tedavisinde, önlenmesinde ve teşhisinde kullanılmaktadır. Obezitenin önlenmesinde sağlıklı beslenme ve hareketli yaşamın önemli olması ile birlikte bozulan moleküler fonksiyonun onarılmasıyla adipogenezi engelleyen tedavi stratejileri önem arz etmektedir. Yağ asidi translokaz proteini CD36'nın metabolik komplikasyonlarla ve hücre duvarından yağ asidi geçişi ile ilişkili olduğu bilinmektedir. Bu tez çalışması kapsamında, CD36 proteininde yağ asidi geçişi ile ilişkili hedef gen bölgesinin literatür araştırması ve biyoinformatik araçlarla belirlenmesi, çoğaltılması, plazmide aktarılması, konak hücreye transformasyonu, protein ekspresyonu, protein saflaştırması, fare immünizasyonu, hibridoma oluşturulması, mAb üretilmesi, hücre kültürü deneyleri ile geliştirilen anti-CD36 antikorunun adipogenez üzerinde etkisinin araştırılması ve gelecekteki çalışmalara yönelik olarak antikorun değişken bölgelerinin çoğaltılması işlemleri gerçekleştirilmiştir. Geliştirilen monklonal anti-CD36 antikorunun moleküler seviyede etki göstererek adipogenezin erken evresinde 3T3-L1 pre-adiposit hücrelerin olgun yağ hücrelerine dönüşmelerini önemli derecede engellediği gösterilmiştir.

Abstract:
Adipogenesis leads to the differentiation of precursor fat cells into mature adipocytes, and excessive accumulation of adipose tissue results in obesity. Considering the negative impact of obesity on overall health, its prevention is crucial for public health. Monoclonal antibodies (mAb) are used in the treatment, prevention and diagnosis of many important diseases due to their advantages such as low possibility of side effects, less interaction with other drugs and target specificity. In addition to the importance of healthy eating and active living for the prevention of obesity, treatment strategies that inhibit adipogenesis by restoring disrupted molecular functions are of great significance. The fatty acid translocase protein CD36 is known to be associated with metabolic complications and the transport of fatty acids across the cell membrane. In this thesis, the target gene region related to fatty acid transport in the CD36 protein was identified through literature research and bioinformatics tools, amplified, cloned into a plasmid, transformed into host cells, followed by protein expression, purification, mouse immunization, hybridoma production, monoclonal antibody generation, and cell culture experiments. The effect of the developed anti-CD36 antibody on adipogenesis was investigated, and for future studies, the variable regions of the antibody were amplified. We have shown that the developed monoclonal anti-CD36 antibody significantly inhibited the differentiation of 3T3-L1 pre-adipocytes into mature adipocytes by acting at the molecular level during the early stages of adipogenesis.