Morusinin insan fibroblast hücre hattında matriks metaloproteinaz-1 üzerine etkisinin ın-vitro araştırılması
In-vitro investigation of the effect of morusin on matrix metalloproteinase-1 in human fibroblast cell line
Yazar: SERHAT BOZKURT
Danışman: PROF. DR. HASAN HÜSEYİN BAŞIBÜYÜK
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Gerontoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyoloji = Biology ; Dermatoloji = Dermatology ; Geriatri = Geriatrics
Dizin: Deri yaşlanması = Skin aging ; Ekstrasellüler matriks = Extracellular matrix ; Fibroblastlar = Fibroblasts ; Flavonoidler = Flavonoids ; Hücre dizisi = Cell line ; Matriks metalloproteinazlar = Matrix metalloproteinases ; Morus alba L. = Morus alba L. ; Morusin = Morusin ; Yaşlanma = Aging ; İn vitro = In vitro

Özet:
Amaç: Morusinin insan fibroblast Hs68 hücre hattında, MMP-1 üzerine etkisi in-vitro olarak araştırmaktır.
Yöntem: Hs68 hücreleri çoğaltılıp Tripsin-EDTA ile kaldırılarak 96 kuyucuklu plaklara bölünmüştür. 24 saatlik inkübasyon süresi sonunda morusin 32- 0,015625 μM/mL konsantrasyon aralığındaki dozlar hücrelere uygulanmıştır. 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyonları sonunda hücre proliferasyonu üzerine etkileri WST-1 kiti ile çalışılmıştır. Çoğaltılan hücreler bu sefer 6 kuyucuklu plaklara bölünmüştür. 24 saatlik inkübasyon süresi sonunda morusin 4 - 0,5 μM/mL konsantrasyon aralığındaki dozlar hücrelere uygulanmıştır. 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyon süreleri sonunda MMP-1 salınımına etkisi MMP-1 kiti ile çalışılmış ve absorbans değerleri ELISA okuyucuyla alınmıştır.
Bulgular: Morusin'in Hs68 hücre hattına uygulanan 32, 16 ve 8 μM/mL konsantrasyonları hücrelerin tamamına yakınını öldürdüğü görülmüştür. 4 ve 2 μM/mL konsantrasyonlarında anlamlı bir sitotoksik etki, 1 ve 0,5 μM/mL konsantrasyonlarda daha az sitotoksik etki gösterdiği belirlenmiştir. MMP-1 miktarı, uygulanan morusin konsatrasyonuna bağlı olarak 24 saat inkübasyon süresi sonunda 4 μM/mL'de %1,64 ve 0.5 μM/mL'de %1,72 artmış; 2 μM/mL'de %2,80 ve 1 μM/mL'de %8,70 azalmıştır. MMP-1 miktarı 48 saat sonra 4 μM/mL'de %1,90; 2 μM/mL'de %11,90 ve 0.5 μM/mL'de %4,12 azalmış, 1 μM/mL'de ise %1,67 artmıştır. MMP-1 miktarı 72 saat sonra 4 μM/mL'de %10,64; 2 μM/mL'de %8,26; 1 μM/mL'de %21,78 ve 0.5 μM/mL'de ise %12,80 artmıştır.
Sonuç: Morusinin uygulanan konsantrasyonları Hs68 hücreleri için sitotoksik ve hücre proliferasyonunu azaltıcı özellik göstermiştir. Kullanılan morusinin zamana bağlı olarak sadece 2 konsantrasyonu MMP-1 miktarını azaltması, hücreler için yaşlanma karşıtı bir sonuç ortaya koyarken diğer konsantrasyonlarının yaşlanmayı hızlandırıcı bir etki gösterdiği görülmüştür.

Abstract:
Objective: To investigate the effect of morusin on MMP-1 in human fibroblast Hs68 cell line in-vitro.
Method: Hs68 cells were multiplied and lifted with Trypsin-EDTA and divided into 96-well plates. At the end of the 24-hour incubation period, morusin was applied to the cells at a concentration range of 32-0.015625 μM/mL. Its effects on cell proliferation at the end of 24, 48 and 72 hours incubation was studied with the WST-1 kit. Proliferated cells were divided into 6-well plates this time. At the end of the 24 hours incubation period, morusin was applied to the cells at doses in the concentration range of 4-0.5 μM/mL. The effect on the MMP-1 release at the end of the 24, 48, and 72 hours incubation periods was studied with the MMP-1 kit and the absorbance values were taken with the ELISA Reader.
Results: It was observed that Morusin killed almost all of them on the Hs68 cell line applied at concentrations of 32, 16 and 8 μM/mL. It was determined that it had a significant cytotoxic effect at 4 and 2 μM/mL concentrations, and less cytotoxic effect at 1 and 0.5 μM/mL concentrations. The amount of MMP-1 was increased 1.64% at 4 μM/mL and 1.72% at 0.5 μM/mL depending on morusin concentration in as the 24 hours incubation period, it decreased 2.80% at 2 μM/mL and 8.70% at 1 μM/mL. The amount of MMP-1 was decreased 1.90% at 4 μM/mL, 11.90% at 2 μM/mL and 4.12%, at 0.5 μM/mL in as the 48 hours incubation period, it was increased 1.67% at 1 μM/mL. In the 72-hour, the amount of MMP-1 was increased 10.64% at 4 μM/mL, 8.26% at 2 μM/mL; 21.78% at 1 μM/mL and 12.80% at 0.5 μM/ mL.
Conclusion: The applied concentrations of morusin showed cytotoxic or cell proliferation reducing properties for Hs68 cells. It was observed that the morusin used decreased the amount of MMP-1 in only 2 concentrations depending on time, while it showed an antiaging effect for the cells, while other concentrations showed an accelerated aging effect.