Triton WR-1339 ile indüklenen hiperlipidemik sıçanlarda ceviz tohum kabuğu ekstresinin hipolipidemik, antiinflamatuar ve antioksidan özelliklerinin değerlendirilmesi
Evaluation of the hypolypidemic, anti-inflammatory and antioxidant properties of walnut seed peel extract in hyperlipidemic rats induced by triton WR-1339
Yazar: ESRA PALABIYIK
Danışman: PROF. DR. HAKAN AŞKIN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Genetik Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Antiinflamatuar ajanlar = Anti inflammatory agents ; Antioksidanlar = Antioxidants ; Ceviz kabuğu = Walnut shell ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Amaç: Ceviz tohum kabuğu (CTK), Juglandaceae familyasına ait olan cevizden elde edilen ekonomik ve ekolojik açıdan önemli olan bir yan üründür. Yapılan bu çalışmada, Triton WR-1339 enjeksiyonu ile indüklenen hiperlipidemili ratların (♂ Wistar) kan, kalp, karaciğer ve böbrek dokularında etanolik ceviz tohum kabuğu ekstresinin hipolipidemik, antiinflamatuar ve antioksidan etki potansiyeli biyokimyasal, histopatolojik ve moleküler teknikler kullanılarak değerlendirildi.
Yöntem: Ardahan'ın Posof ilçesinden temin edilen cevizlerden tohum kabukları (CTK-septa kısımları) çıkarıldı, laboratuvar ortamında kurutuldu, toz haline getirildi ve etanolik özüt hazırlandı. E-CTK'nın antioksidan aktivite (DPPH •, ABTS•+, FRAP, CUPRAC) tayini yapıldı. Çalışmada kullanılacak deney hayvanları; K1: Sağlıklı kontrol grubu, K2: E-CTK-(150 mg. o.d.), K3: E-CTK-(300 mg, o.d.), K4: HL – (Hiperlipidemik grup) (400 mg/kg Triton WR-1339, i.p.), K5: HL + E-CTK 300 mg olacak şekilde beş gruba ayrıldı (n=6). Çalışma gruplarında, uygulamalar yapıldıktan bir gün sonra anti-hiperlipidemik analizlerin (TK, TG, LDL-K, HDL-K, ALT ve AST) gerçekleştirlebilmesi için kan örnekleri alındı. Çalışma gruplarına ait kalp, karaciğer ve böbrek dokularında öncelikle oksidatif stres parametreleri (MDA, SOD ve CAT) analiz edildi. Daha sonra dokuların histopatolojik incelemesi gerçekleştirildi. Çalışma, inflamatuar biyobelirteçler olan Tnf-α, Il-6 ve Il-1β genlerinin ifade stabilitesinin q-RT PCR yöntemi kullanılarak belirlenmesi ile tamamlandı. 
Bulgular: Bu çalışmada yapılan testler sonucunda, E-CTK'nın iyi bir antioksidan madde olduğu ve serbest radikalleri indirgeyici özelliklere sahip olduğu belirlenmiştir. Triton WR-1339 (2.5 mL/kg, i.p.) ile indüklenen hiperlipidemi, 4 gün boyunca (150 mg/kg ve 300 mg/kg, o.d.) verilen E-CTK ile düzenlenmiştir. Yapılan uygulama ile TK ve TG seviyelerindeistatistiksel olarak önemli düzeyde bir düşüş görülürken, HDL-K seviyelerinde ise önemli bir artış sağlanmıştır. Triton WR-1339 ile uyarılan lipid peroksidasyonunda E-CTK uygulması ile karaciğer, böbrek ve kalp dokularında MDA ve SOD değerleri oksidatif stresi azaltma özelliği gösterirken CAT ise böbrek dokusunda bu özelliği sağlamıştır. Karaciğer, böbrek ve kalp dokularında hiperlipideminin neden olduğu bozulmalara karşı E-CTK'nın histopatolojik olarak koruyucu etkiye sahip olduğu belirlendi. Son olarak pro-inflamatuar sitokinlerden olan Tnf-α, IL-6 ve IL-1β genlerinin ekspresyon düzeyleri üzerinde E-CTK'nın önemli bir inhibisyon ajanı olduğu tespit edildi. Böylece E-CTK'nın anti-inflamatuar etkisi açıkça ortaya konuldu.
Sonuç: Triton WR-1339 ile indüklenen hiperlipidemi oksidan-antioksidan dengesini bozarak çalışmada kullanılan organlarda fonksiyon bozukluğuna neden olmuştur. Çalışılan parametreler değerlendirildiğinde E-CTK'nın hiperlipidemiyi düzeltme özelliği sayesinde karaciğer, böbrek ve kalp dokusu üzerinde koruyucu etkileri olduğu belirlenmiştir.

Abstract:
Purpose: Walnut seed coat (WSC) is an economically and ecologically important by-product obtained from Walnut (walnut), which belongs to the Juglandaceae family. In this study, the hypolipidemic, anti-inflammatory and antioxidant effect potential of ethanolic walnut seed coat extract in the blood, heart, liver and kidney tissues of rats with hyperlipidemia induced by Triton WR-1339 injection (♂ Wistar) was evaluated using biochemical, histopathological and molecular techniques.
Method: Seed coat (WSC-septa parts) were extracted from walnuts obtained from Posof district of Ardahan, dried in laboratory environment, ground into powder and ethanolic extract (E-WSC) was prepared. The antioxidant activity (DPPH •, ABTS•+, FRAP, CUPRAC) of E-WSC was determined. Experimental animals to be used in the study; K1: Healthy control group, K2: E-WSC-(150 mg. o.d.), K3: E-WSC-(300 mg, o.d.), K4: HL – (Hyperlipidemic group) (400 mg/kg Triton WR-1339, i.p.), K5: HL + E-WSC 300 mg were divided into five groups (n=6). In the study groups, blood samples were taken one day after the applications to perform anti-hyperlipidemic analyzes (TC, TG, LDL-C, HDL-C, ALT and AST). First, oxidative stress parameters (MDA, SOD and CAT) were analyzed in the heart, liver and kidney tissues of the study groups. Then, histopathological examination of the tissues was performed. The study was completed by determining the expression stability of inflammatory biomarkers Tnf-α, Il-6 and Il-1β genes using q-RT PCR method.
Findings: As a result of the tests performed in this study, it was determined that E-WSC is a good antioxidant substance and has free radical-reducing properties. Triton WR-1339 (2.5 mL/kg, i.p.) induced hyperlipidemia was regulated by E-WSC given for 4 days (150 mg/kg and 300 mg/kg, o.d.). With the application, a slight and moderate decrease was observed in TK and TG levels, while a significant increase was achieved in HDL-C levels. In lipid peroxidation induced by Triton WR-1339, MDA and SOD values in liver, kidney and heart tissues showed the ability to reduce oxidative stress with E-WSC application, while CAT provided this feature in kidney tissue. It was determined that E-WSC had a histopathologically protective effect against the deteriorations caused by hyperlipidemia in liver, kidney and heart tissues. Finally, it was determined that E-WSC is an important inhibitory agent on the expression levels of Tnf-α, IL-6 and IL-1β genes, which are pro-inflammatory cytokines. Thus, the anti-inflammatory effect of E-WSC was clearly demonstrated.
Results: Hyperlipidemia induced by Triton WR-1339 disrupted the oxidant-antioxidant balance and caused dysfunction in the organs used in the study. When the studied parameters were evaluated, it was determined that E-WSC has protective effects on liver, kidney and heart tissue thanks to its ability to correct hyperlipidemia.