Doksorubisin'in hepatoselüler karsinoma(HCC)'daki antitümör etkisinde kaempferol'ün rolü
The roles of kaempferol on anti-tumor effects of doxorubicin
Yazar: EMİNE ERDAĞ
Danışman: YRD. DOÇ. DR. EMEL ERGENE
Anadolu Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Hepatoselülerkarsinoma (HCC), genel olarak kronik karaciğer hastalığında görülen bir tümörüdür. Dünyada yaygın beşincisi, kansere bağlı ölümlerin üçüncü önemli nedenidir. Günümüzde, antrasiklinler, kanser tedavisinde önemli bir yer tutmaktadır vealternatifsiz gibi görünmektedir.HCC gibi çoğu tümörün tedavisinde ve yan etkilerinin azaltılmasına yönelik çalışmalar oldukça önemlidir.Bu çalışmada, bir flavonoidKaempferol (Kaem)'ün,Doksorubisin'in (Dox) anti-tümör etkisini arttırıcı ve yan etkilerini azaltıcı etkileriHep-G2 hücre hattındaaraştırılmıştır. Bu amaçla, Dox, Kaem ve kombinasyonların hücrelerdeki sitotoksik etkileri MTT testiyle belirlenmiştir. Ayrıca, bazı biyolojik aktiviteleri de çeşitli yöntemlerle analiz edilmiştir. Morfolojik apoptotik etkileri AkridinOranj/EtidiumBromid (AO/EB) çift boyamayla, apoptotik etkiler;erken apoptozdamembrandeğişikliğiAnnexin V-FITC Flowsitometrik analizle,hücre döngüsü analiziflowsitometrikyöntemle ve Kaspaz 3-9 enzim aktivasyonları da kolorimetrik ölçümleyapılmıştır. Hep-G2 canlılığında doza ve zamana bağlı azalma gözlenmiştir. 48. saatteki IC50değerleri,Dox için 0,5µM,Kaempferol için 100 µM olarak belirlenmiştir. Test bileşenlerinin uygulanmasının ardından, her iki bileşen ve kombinasyonun etkisiyle apoptotikindeksde anlamlı artış gözlenmiştir. Hücre döngüsü analizinde,Dox ve Kaempferol tek başına uygulandığında G2'de tutuklu hücre oranı nispeted düşük olmasına karşın kombine uygulandığında,hücrelerin G2 evresinde yüksek oranda tutuklandığı tespit edilmiştir.Anneksin sonuçlarında ise 1µM Dox ve 150 µM Kaempferolkombinasyon dozunda erken apoptotik hücre sayısı oldukça dikkat çekmiştir. Son olarak; kombinasyon dozlarının Kaspaz 3 enzim aktivitesini arttırdığı saptanmıştır. Kaempferol'ün hücreyi Doksorobisin'in yan etkilerinden koruduğu, aynı zamanda anti-tümör etkiyi de arttırdığı düşünülmüştür. Sonuç olarak, HCC'nin etkin tedavisinde Kaempferol potansiyel bir ilaçtır.
Anahtar Kelimeler: Hepatosellüler Karsinoma, Doksorubisin, Kaempferol, sitotoksisite, apoptoz

Abstract:
Liver cancer or hepatocellular carcinoma (HCC) is primary tumor seen with chronic liver disease in general. The fifth common type of cancer in the world and the third major cause of cancer-related deaths worldwide. Nowadays, there are new developments in treatment of chronic didease and anthracyclines has an important place in the treatment of cancer. Anthracyclines seems to be any alternative in the treatment of many tumors, such as hepatocellular carcinoma and efforts to reduce its side effects are also very important. In this study, we investigated that a flavonoid Kaempferol (Kaem)'s role enhancing anti-tumor effect and educing the side effects of Doxorubicin (Dox) on Hep-G2 cell lines.
The cytotoxic effect of independent and combined of Dox and Kaemferol was determined by MTT assay and also some biological activities were measured with some methods, morphological effects of apoptosis by AO/EB double staining, apoptotoic membran by Annexin V-FITC flowcytometer method, cell cycle analysis by flow cytometric analysis, Caspase 3 and -9 activities by colorimetrically. In results, Hep-G2 cell viability was decreased dose and time-dependent. IC50 values were determined in 48 hours, 0,5 and 100µM for Kaem and Dox, respectively. After exposure of the test compounds, Dox, Kaem and combinations were caused to increase apoptotic index significantly. In cell cycle analysis, When Dox and Kaempferol applied independently, G2-arrested cell ratio is relatively low. In conrast, when applied in combination, the ratio of G2-arrested cells were found to be very high. According to results of Annexin V-FITC flowcytometer analysis, the number of early apoptotic cells have attracted attention in combination treatment (1µM Dox+150 µM). In anaother analysis, It was determined that all of the combination doses increased the caspase 3 enzyme activity. Finnaly, we commented Kaempferol preserved cells against Doksorobisin-dependent side effects also increase anti-tumor effect. Kaempferol is a potential drug both combination and indipendently for the effective treatment of HCC.



Keywords:Hepatocellular carcinoma, Doxorubicin, Kaempferol, cytotoxicity, apoptosis.