İşitme engelli olgularda moleküler etiyolojik sebeplerin araştırılması
Investigation of molecular etiologies in hearing impaired patients
Yazar: DUYGU KANKAYA
Danışman: PROF. DR. FATMA SILAN
Çanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Genetik = Genetics ; Genler-GJB2 = Genes-GJB2 ; Kulak hastalıkları = Ear diseases ; Mutasyon = Mutation ; İşitme engelliler = Hearing impaired ; İşitme kaybı = Hearing loss ; İşitme kaybı-sensori nöral = Hearing loss-sensorineural

Özet:
Konjenital Bilateral Sensorinöral işitme kayıplarının %60' ına genetik faktörler neden olmakta ve ileri derecede işitme kayıplarının yarısının tek bir gen mutasyonuna bağlı olduğu bildirilmektedir. GJB2 geninde ortaya çıkan mutasyonlardan biri olan 35delG mutasyonu anormal konneksin 26 (GJB2) proteinin sentezine neden olur ve bozulan konneksin 26 protein sentezi işitme kaybına sebep olur. Bu çalışmada; İşitme kaybı olan hastalarda GJB2 gen mutasyonlarının işitme kaybı üzerindeki etiyolojisinin araştırılması amaçlanmaktadır. Çalışmaya 90 desibel ve üzeri bilateral sensörinöral işitme kaybı olan 46 hasta dahil edildi.  Hastaların periferik kan-EDTA örneklerinden total DNA izole edildi. GJB2 geninin 1. ve 2. ekzonları PCR ve Sanger Sequencing yöntemi ile analiz edildi. Bu çalışmada 3130 Genetic Analyzer cihazı ve Seqscape v 2.6 ve Sequencing Analysis 5.3.1 yazılımları kullanıldı. İşitme kaybı olan 46 hasta (5 K, 41 E) incelendiğinde 6 hastada patolojik mutasyon saptandı (%13)  ve 11 hastada mutasyon saptanmadı (%24). Bu mutasyonlar, 35delG heterozigot, H100P homozigot, V153I heterozigot, V27I heterozigot mutasyonlarıdır. GJB2 genin 1. ekzonunda mutasyon saptanmadı. GJB2 geni 2.ekzonunda; 2 hastada 35delG heterozigot (%4,3), 2 hastada V27I heterozigot  (%4,3), 2 hastada V153I heterozigot (%4,3), 33 hastada H100P homozigot mutasyon (%71,7) saptandı. En sık saptanan mutasyon H100P homozigot mutasyonu olup, bu mutasyon polimorfizm olarak değerlendirildi (%71,7). Ancak işitme kaybı ile ilişkisi olup olmadığını belirlemek amacıyla tam işiten sağlıklı kontrollerde H100P mutasyonunun analizi planlandı. İşitme engelli kardeşi olan 9 hastadan 7'sinde H100P homozigot, 1'inde 35delG heterozigot ve H100P homozigot mutasyonları birlikte saptantı. İşitme kaybına ek olarak spina bifidası olan bir hastada 35delG heterozigot ve H100P homozigot mutasyonu saptandı.

Abstract:
The genetic factors causes 60% of Congenital Bilateral Sensorineural hearing loss and it is reported to be dependent on a single gene mutation half of hearing loss. 35delG that is one of the mutations occurs in GJB2 gene causes the synthesis of an abnormal protein connexin 26 (GJB2) and deteriorating connexin 26 protein synthesis leads to hearing loss. In this study; It was aimed to investigate the etiology on hearing loss of GJB2 gene mutations in patients with hearing loss. 46 patients were 90 decibels or higher with bilateral sensorineural hearing loss included to study. Total genomic DNA was isolated from patient's periferal blood-EDTA samples. The exons 1 and 2 of GJB2 gene were analyzed by PCR and Sequencing Sanger method. In this study, 3130 Genetic Analyzer instrument and Seqscap v 2.6 and Sequencing Analysis 5.3.1 software was used. When examined 46 patients (5F,41M)  with hearing loss, pathological mutation was detected in 6 patients (%13) and was not detected mutation in 11 patients (%24). These mutations are 35delG heterozygous, H100P homozygous, V153 heterozygous and V27I heterozygous mutations. The exon 1 of GJB2 genewas not detected mutation.  2.ekzon in the GJB2 gene; 35delG heterozygous mutation was detected in 2 patients (%4,3), V27I heterozygous mutation was detected in 2 patients(%4,3), V153I heterozygous mutation was detected in 2 patients (%4,3), H100P homozygous mutation was detected in 33 patients (%71,7). H100P homozygous mutation which was detected frequently was evaluated as polymorphism (%71,7). But;  in order to determine whether the association with hearing loss, H100P mutation analysis was scheduled in full hearing healthy controls. In 7 of 9 patients who have brother with hearing impaired was detected H100P homozygotes, In 1 of 9 patients were detected H100P homozygotes, 35 delG heterozygous mutations. In addition to hearing loss, 35delG heterozygous and H100P homozygous mutations were detected in a patient with spina bifida.