Farklı kriyoprotektan solüsyonlarla sperm kriyoprezervasyonu ve sonuçlarının değerlendirilmesi
Evaluation of sperm cryopreservation and its results with different cryoprotectant solutions
Yazar: SİNEM ÖZGÖL
Danışman: PROF. DR. TÜLAY İREZ
Biruni Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Klinik Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Akridinler = Acridines ; Anilin bileşikleri = Aniline compounds ; DNA = DNA ; DNA hasarı = DNA damage ; Dondurarak saklama = Cryopreservation ; Sperm = Spermatozoa ; Sperm mobilitesi = Sperm mobility ; Çözeltiler = Solutions

Özet:
Kriyoprezervasyon; hücrelerin ve dokuların çok düşük sıcaklıkta soğutularak, bütün biyolojik aktivitelerinin durdurulması, minimum hasar ve fonksiyon kaybı olmaksızın gelecekte kullanılması amacıyla uzun süreli saklanmasıdır. Günümüzde erkek faktörünün tedavisinde kullanılan sperm kriyoprezervasyonunda ki amaç spermin kriyoprezervasyon sonrası döllenme kapasitesini sürdürebilmesidir. Bu çalışmamız da kriyoprotektan farkının dondurma çözme sonrasında spermde DNA fragmantasyonuna, maturasyonu ve motilitesine etkisini araştırdık. Bu ve benzer çalışmalar ile sperm DNA hasarı en az olacak şekilde kriyoprezervasyon metodunda değişiklikler yapılarak DNA hasarını en aza indirgeyip  merkezlerin gebelik ve canlı doğum başarısı arttırılabilir. Çalışma 'Biruni Üniversitesi Girişimsel Olmayan Etik Kurul'una sunuldu ve 2017/6-3 sayı ve 13.06.2017 tarihli etik kurul onayı alındı. Çalışma Eylül 2017- Nisan 2018 tarihleri arasında Fertijin Kadın Sağlığı ve Tüp Bebek Merkezine spermiyogram analizi için başvuran hastalarda uygulandı. Kliniğe başvuran hastalardan normozoospermi (n:20) ve oligoastenoteratozoospermi gruplarında (n:20) WHO kriterlerine uygun standart semen analizi uygulanarak ardından asidik anilin mavisi boyama yöntemi ile sperm maturasyonu ve akridin oranj boyama yöntemi ile sperm DNA fragmantasyon hasarı değerlendirildi. Sperm örnekleri sperm yıkama yöntemi olarak "gradient" (farklı yoğunluk ayırma) tekniği kullanılarak yıkandı ve yıkama sorasında kriyoprotektan olarak üç farklı solüsyonlar ile donduruldu 24 saat sonra çözülüp  motilitesi, DNA fragmantasyonu ve sperm maturasyonu yönünden tekrar değerlendirildi. Bu tez çalışmasına göre farklı kriyoprezervasyon solüsyonlarıyla dondurulup çözülen sperm örneklerinin çözme sonrası sperm motilite, DNA fragmantasyonu ve sperm maturasyonu açısından kriyoprotektanlara göre anlamlı fark bulunamamış olup oligoastenoteratozoospermi olgularında normozoospermi olgularına göre motilite, DNA fragmantasyonu ve sperm maturasyonu yönünden dondurma çözme sonrası kötü etkileri benzer olarak tüm kriyoprotektan solüsyonlarda ortaya çıkmıştır.

Anahtar kelimeler: Asidik anilin mavisi, Akridin oranj, DNA fragmantasyonu, sperm maturasyonu, sperm dondurma

Abstract:
Cells and tissues are cooled at very low temperature, all biological activities to stop, minimal damage and function without loss of long-term use the purpose of future storage. We investigated the effect of cryoprotectant on DNA fragmentation, maturation, motility in after freezing. Similar studies, it can be improved by making changes in the cryopreservation method with the least amount of sperm DNA damage these changes will minimize the damage of frozen sperm DNA, better quality sperm can be obtained and the success of pregnancy and live birth rate.The study was submitted to the Biruni University Non-Interventional Ethics Committee and was approved by the ethics committee of 2018-12-9 and dated 29.01.2018. The study was carried out between September 2017 - April 2018 in patients applying for spermiogram analysis to Fertijin Women's Health and IVF Center. Among the patients who applied to IVF Center, standard semen analysis was performed according to WHO criteria in normozoospermia(n: 20) and OAT groups (n: 20). Sperm samples were washed using the in gradient, technique as a sperm washing method and were thawed with three different solutions as the cryoprotectant in the wash thecnique. They were thawed after 24 hours before freezing. Then all samples were evaluated with acridine orange and acidic alanine blue painting procedure on about sperm maturation and DNA fragmentation. According to this study, there is no significant difference between in sperm motility, DNA fragmentation and sperm maturation in these sperm samples after thawing or frozen with different cryopreservation solutions.

Key words : Acridin orange, annilin blue, DNA fragmantation, sperm freezing, sperm  maturation