İskelet ve kalp kası dokusunda yaşa bağlı değişikliklerin immünohistokimyasal ve Western Bloting yöntemleri kullanılarak karşılaştırmalı olarak değerlendirilmesi
Evaluation of changes by age in skeletal and heart muscle via using Western Blotting and immunohistochemistry
Yazar: GÜLESER GÖKTAŞ
Danışman: PROF. DR. DENİZ ERDOĞAN
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2013
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kalp = Heart ; Kaslar = Muscles ; Yaşlanma = Aging ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Yaşlanma süreci doğumla birlikte başlayan, zamana koşut artarak organizmanın ölümüne neden olan hücresel değişimlerin tümüdür. Yaşlanma sırasında belirli dokularda azalan ya da artan moleküllerin ve bu moleküllerin etki düzeneklerinin belirlenmesi bu sürecin işleyişini anlamamıza önemli bir katkı sağlayacaktır. Bu nedenle çalışmamızda, Tip I Kollajen, FGF-2, IGF-I ve GDF-8' in iskelet ve kalp kasında, değişik yaş gruplarında immünhistokimyasal ve Western bloting yöntemleri kullanılarak, SEM ve TEM bulgularıyla da desteklenerek karşılaştırmalı olarak incelenmesi amaçlanmıştır.Çalışmamızda, doğum öncesi ve sonrası farklı yaş gruplarından, her grupta 6 adet sıçan olacak şekilde 5 grup oluşturuldu. Gruplar kas gelişiminde önemli olabilecek günler dikkate alınarak, doğum öncesi grubu (20. gün), yenidoğan grubu, 1 aylık grup (prepubertal evre), 6 aylık grup (erişkin evre) ve 12 aylık grup (yaşlılık dönemi başlangıcı) olarak belirlendi. Tüm gruplarda Tip I Kollajen, FGF-2, IGF-I ve GDF-8 immünreaktiviteleri belirlendi. Western blot analizi ise iskelet ve kalp kasında tüm gruplarda Tip I Kollajen için değerlendirildi. Tüm bulgular SEM ve TEM incelemeleriyle desteklendi.Çalışmamızda kalp kasında da iskelet kasına benzer olarak, Tip I Kollajen ifadesinin yaşa koşut artış gösterdiği belirlendi. FGF-2 ifadesi ise, iskelet ve kalp kasında yenidoğan grubunda yoğundu. IGF-I immünreaktivitesinin 6 aylık grupta sarkolemma ile çekirdek dışındaki belirsizliği dikkati çekti. GDF-8 ifadesinin tüm gruplarda morfogenez tamamlanana değin aşamalı olarak arttığı görüldü.Sonuç olarak tüm bu bulgular ışığında, iskelet ve kalp kası gelişiminden itibaren yaşa koşut farklılık gösterdiği düşünülen önemli moleküllerin, çeşitli yöntemlerle değerlendirildiği, SEM ve TEM bulgularıyla desteklenen çalışmamızda, iskelet kasının kalp kasına karşın yaşlanma sürecini daha etkin yaşadığı, kalp kasının ise erişkin dönemden sonra yaşlılık dönemine değin kendini stabilize ettiği kanısına varılmıştır. Bu bulgular iskelet kasının istemli ve düzenli olmayan çalışmasına karşın kalp kasının istemsiz ve düzenli çalışmasının bir sonucu olarak değerlendirilmiştir.

Abstract:
Aging process begining with the birth contains all cellular changes which cause death of the organism in parallel with time. Determining decreasing or increasing molecules in particular tissues during aging and the effect mechanism of these molecules will contribute to our understanding of functioning of this process significantly. Because of this reason, our study aims at comparative examination of Type I Collagen, FGF-2, IGF-I and GDF-8 in the skeletal and cardiac muscle in the different age groups through the methods of immunohistochemical, SEM, TEM and Western blotting.In our study 5 groups were formed from prenatal and postnatal different age groups, 6 rats were put in each group. Groups were determined as the prenatal group (20th Day), neonatal group, 4-week group (prepubertal period), 6-month group (mature period) and 12-month group (begining of old-age period). Type I Collagen, FGF-2, IGF-I and GDF-8 immunoreactivities were identified in all groups. Western blotting analysis was evaluated for Type I Collagen in all groups in the skeletal and cardiac muscle. All findings are supported by research and analyzes of SEM and TEM.In our study, heart muscle as well as skeletal muscle, similar age related type-1 collagen increments were determined. On the other hand FGF-2 was intense in skeletal and heart muscle at newborn group. In 6th month group, IGF-1 immunoreactivity was not certain except sarcolemma and nucleus. GDF-8 expression was seen in all groups increased gradually until complete morphogenesis.Consequently, in the light of these findings, in our study in which important molecules in parallel with the aging were evaluated through the various methods as of the development of the skeletal and cardiac muscle it has been estimated that the skeletal muscle lives the aging process more effectively in comparison to the cardiac muscle, the cardiac muscle stabilize itself from the adult period to the old age period. These findings have been evaluated as result of the voluntary and irregular mobilization of the skeletal muscle in comparison to involuntary and regular working of the cardiac muscle.