İnsanda tümörlü ve tümörsüz prostat dokularında etkin olduğu düşünülen iyon kanal ekspresyonlarının araştırılması
The investigation of ion channel expressions thought to be effective in tumor containing and tumor-free prostate tissues in human
Yazar: SEDA ÖZAYDIN
Danışman: DOÇ. DR. EBRU ÖNALAN
Fırat Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2017
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine ; Tıbbi Biyoloji = Medical Biology

Özet:
Prostat kanseri dünya çapında en çok ölüme sebebiyet veren kanserlerin en başında gelmektedir. Çeşitli iyon kanalların kanser hücrelerinde proliferasyon, anjiyogenez, invazyon, hücre farklılaşması, hücre hacmi büyümesi, tümör büyümesi, metastaz ve apoptoz mekanizmasına etki ettiği tespit edilmiştir. İyon kanalları aktivitesi sonucu oluşan iyon akımı, bahsedilen temel mekanizmalarda etkili moleküller olduğundan dolayı kanser tedavisi için potansiyel hedefler olarak düşünülmektedir. Bu nedenle çalışmamızda prostat kanser dokularında iyon kanal ifade düzeylerinin kontrolle karşılaştırılarak araştırılması amaçlanmıştır.
Çalışmaya adenokarsinom tanısı almış 100 [n=105], benign prostat hiperplazisi [BPH] tanısı almış 30 [n=30] ve normal prostat dokusuna ait 30 [n=30] olmak üzere formalinde fiske edilip parafine gömülmüş toplam 165 vakanın örneği dâhil edilmiştir. RNA izolasyonu sonrası mRNA ifade analizlerinde kantitatif Real Time-PZR yöntemi kullanıldı. Örnekde TRPC1, TRPC3, TRPC4, TRPC5, TRPC6, TRPC7, TRPV2, TRPV3, TRPV4, TRPV5, TRPA1, Cav3.1, Cav3.2, Cav3.3, Kv1.3, Kv1.4, Kv1.6, Kv4.3, Kv11.1, KCa1.1, KCa3.1, TASK-3[KCNK9] ve Clcn-3 iyon kanal ifadeleri tüm örneklerde analiz edildi.
Kantitatif RT-PCR sonuçları KCNA3 gen ekspresyonunda gleason skor 6 ve 7'deki anlamlı azalma dışında diğer gruplarda anlamlı bir değişiklik olmadığını gösterdi. KCNA6, KCNK9, KCNMA1, KCNN4 gen mRNA ifadelerinin kontrolle karşılaştırıldığında KCNA6 için BPH hariç tüm kanser dokularında anlamlı bir azalmaya sahip olduğu tespit edildi. TRPC3 mRNA ifadesi kontrolle kıyaslandığında yalnızca gleason skor 10'da anlamlı bir artışa sahipken TRPC4 ve TRPC6 mRNA ifadelerinde ise önemli ölçüde artış tespit edildi. TRPC5, TRPA1, TRPV3 ve TRPV4 mRNA ifadelerinde ise anlamlı düzeyde azalma gözlendi. CIC-3 gen ekspresyonunda kontrolle karşılaştırıldığında gleason skor 7'de anlamlı bir artış ve gelason skor 10'da ise ciddi bir azalma olduğu saptandı. TRPC7, CACNA1G ve KCNA4 mRNA ifadelerinde kontrolle karşılaştırıldığında prostat kanser gruplarında anlamlı bir farklılık olmadığı bulundu.
İyon kanal mRNA ifadelerindeki değişimler proliferasyon artışı, apoptozise direnç, metastaz ve invazyon gibi pek çok transformasyon sürecinde katkıda bulunarak kanser gelişimine yol açabilir. Elde ettiğimiz veriler ön bulgular niteliğinde olup her bir kanalın hücre transformasyonu sürecine katkısnın daha ileri çalışmalarla irdelenmesi ve doğrulanması gerekmektedir.

Abstract:
Prostate cancer is one of the most deadly cancers in the worldwide. İt is has been found that, a variety of ion channels affect mechanisms such as proliferation, angiogenesis, invasion, cell differentiation, cell volume growth, tumor growth, metastasis and apoptosis in cancer cells. It is considered as a potential targets for cancer therapy due to the ion current resulting from ion channel activity is a effective molecules in the mentioned basic mechanisms. In consequence, we are aimed to investigate the ion channel expression levels in prostate cancer tissues by comparison normal prostate tissues.
A total of 165 cases that are formalin fixed paraffin embedded 105 patients that was diagnosed prostate adenocarcinoma [n=105], 30 benign prostatic hyperplasia [BPH] patient tissues [n=30] and 30 being normal prostate tissue [n=30] evaluated in our research. Quantitative Real Time-PCR method was used for mRNA expression analysis after RNA isolation. TRPC1, TRPC3, TRPC4, TRPC5, TRPC6, TRPC7, TRPV2, TRPV3, TRPV4, TRPV5, TRPA1, Cav3.1, Cav3.2, Cav3.3, Kv1.3, Kv1.4, Kv1.6, Kv4.3 , Kv11.1, KCa1.1, KCa3.1, TASK-3 [KCNK9] and Clcn-3 ion channels expressions were analyzed in all samples.
The quantitative RT-PCR results showed that there was no significant change in the KCNA3 gene expression in the other groups except for a significant decrease in gleason scores 6 and 7. When KCNA6, KCNK9, KCNMA1, and KCNN4 gene mRNA expressions were compared to controls, it was found that this ion channels has a significant decreases in all cancer tissues except for BPH in KCNA6. While TRPC3 mRNA expression compared with control's has a significant increase in only gleason score 10, it was found that important increases in TRPC3 and TRPC4 mRNA expressions in all groups. It was established that meaningful decreases in the mRNA expressions of TRPC5, TRPA1, TRPV3 and TRPV4. As compared with control, while CIC-3 gene expression has a significant increase in gleason score 7, there was a significant decrease in gleason score 10. Prostate cancer groups compared with controls were not found meaningful difference in TRPC7, CACNA1G and KCNA4 mRNA expressions.
Alterations in ion channel mRNA expressions may lead to prostate carcinogenesis by contributing to many transformation processes such as increased proliferation, apoptosis resistance, metastasis, and invasion. The data we obtain are preliminary findings and the contribution of each channel to the cell transformation process needs to be examined and verified with further researches.