Multipl myelom hastalığında bcma CAR, CD16, IL12 eksprese eden NK92 hücrelerinin (BCMA car haşhaşin) preklinik etkinlik çalışması
Preclinical effectiveness study of NK92 cells expressing BCMA CAR, CD16, IL12 (BCMA car hashasin) in multiple myelom disease
Yazar: İLHAM GAFARLI
Danışman: PROF. DR. AYŞE NURDAN TÖZÜN ; PROF. DR. SİRET RATİP ; PROF. DR. ERCÜMENT OVALI
Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2022
Konu: Hematoloji = Hematology ; İç Hastalıkları = Internal diseases
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Haşhaşin = Hashasin ; Hematolojik neoplazmlar = Hematologic neoplasms ; Hücre dizisi = Cell line ; Kan hastalıkları = Hematologic diseases ; Katil hücreler-doğal = Killer cells-natural ; Multipl miyelom = Multiple myeloma

Özet:
Amaç: Multipl miyelom (MM), hematolojik kanserlerin yaklaşık %10'unu oluşturan ve kemik iliğinde klonal, malign plazma hücrelerinin çoğalması ve birikmesi ile karakterize  neoplastik bir hastalıktır. MM hastalığı geliştirilen yeni terapotik ajanların etkisiyle hastalarının sağkalımında artışa rağmen, kür ihtimali çok azdır. Bu sebepten hastalığı kontrolde tutabilecek yeni ilaçlar araştırılmaya devam edilmektedir. Son yıllarda, miyeloma karşı farklı mekanizmalara sahip; proteazom inhibitörleri, monoklonal antikorlar, immün modülatör ilaçlar ve histon deasetilaz inhibitörleri gibi yeni ilaçlar geliştirilse de bilim dünyası hem yeni tedavi ajanları, hem de varolan ilaçların etkisini artıracak ve yan etkilerini minimalize edecek yenilikler arayışındadır. Bu nedenle BCMA CAR, CD16, IL12 eksprese eden NK92 hücrelerinin (BCMA CAR HAŞŞAŞİN) H929 myelom hücre hattında in vitro olarak etkinliğini araştırdık.

Gereçler ve yöntemler: Model olarak miyelom hücre hattı H929 kullanıldı. Kültür şartlarında 1:1, 5:1 ve 10:1 Haşşaşin, CAR Haşşaşin, NK-92, CAR NK-92 inkübe edilerdi. 72 saat sonra myelom hücrelerinin ölümleri flow sitometrik olarak test edildi.

Bulgular: Başlangıçta hücre canlılık oranı saf H929 myelom hücre hattında %95,25, H929+PBMC hücre hattında %92,16 olarak ölçüldü. Her iki grupda da BCMA CAR Haşşaşinin 10:1 oranda daha etkili olduğu (%10,12 ve %13,57) tespit edildi. PBMC eklenen gruplarda myelom hücre ölümlerinde diğer gruba kıyasla artış olmadı.

Sonuç: Yapılan çalışmamızda NK92 hücrelerinin Myelom üzerinde etkili olduğu tespit edildi. Elde ettiğimiz bu deyerler klinik çalışmalarda gösterilmiş NK92 antimyelom etkisi ile doğru orantılı bulunmuştur. Fakat çalışmamızdaki BCMA NK92, HAŞŞAŞİN ve BCMA CAR HAŞŞAŞİN'in myelom hücrelerine etkisi istatistiksel olarak belirgin bir üstünlük sağlayamamıştır. Bunun sebebi olarak kulandığımız konstraktın tam çalışmaması olarak düşünülmüştür. Konstraktın yeni dizaynı ile bu çalışmanın tekrar yapılması planlanmakta ve daha etkili bir sonuç elde edilmesi beklenmektedir.

Abstract:
Objective: Multiple myeloma (MM) is a neoplastic disease that accounts for 10% of hematological cancers and is characterized by proliferation and accumulation of clonal, malignant plasma cells in the bone marrow. Despite the increase in the survival of patients with the effect of new therapeutic agents developed for MM disease, the probability of cure is very low. For this reason, new drugs that can keep the disease under control continue to be researched. In recent years, it has different mechanisms against myeloma; Although new drugs such as proteasome inhibitors, monoclonal antibodies, immunomodulatory drugs and histone deacetylase inhibitors have been developed, the scientific world is looking for new treatment agents as well as innovations that will increase the effect of existing drugs and minimize their side effects. Therefore, we investigated the in vitro efficacy of NK92 cells (BCMA CAR HASHASIN) expressing BCMA CAR, CD16, IL12 in H929 myeloma cell line.

Materials and methods: Myeloma cell line H929 was used as a model. 1:1, 5:1 and 10:1 Hasşaşin, CAR Hasşaşin, NK-92, CAR NK-92 were incubated in culture conditions. After 72 hours, the death of myeloma cells was tested flow cytometrically.

Results: Initially, cell viability was measured as 95.25% in the pure H929 myeloma cell line and 92.16% in the H929+PBMC cell line. In both groups, BCMA CAR Hashish was found to be more effective at a ratio of 10:1 (10.12% and 13.57%). There was no increase in myeloma cell death in the PBMC added groups compared to the other group.

Conclusion: In our study, it was determined that NK92 cells were effective on Myeloma. These values ​​we obtained were found to be directly proportional to the NK92 antimyeloma effect shown in clinical studies. However, the effect of BCMA NK92, HASHASIN and BCMA CAR HASHASIN on myeloma cells in our study did not provide a statistically significant advantage. The reason for this was thought to be that the construct we used did not work properly. With the new design of the construct, this study is planned to be repeated and a more effective result is expected.