Herediter sferositoz tanısında klasik ve flow sitometrik ozmotik frajilite ile eozin-5-maleimid bağlanma testlerinin karşılaştırılması
Comparison of classical and flow cytometric osmotic fragility and eosin-5-maleimide binding test in the diagnosis of hereditary spherocytosis
Yazar: CEMİL GÜLÜM
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ PELİN EROĞLU
Mersin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Hematoloji = Hematology

Özet:
Herediter Sferositoz (HS), hemolitik aneminin en sık görülen türüdür. Eritrosit membran proteinlerinde meydana gelen kalıtsal hasar nedeniyle eritrositler, bikonkav ve santral solukluğu olan disk şekilli hücrelerden, santral solukluğu olmayan küre seklindeki (sferosit) hücrelere dönüşürler. Hemolize yatkınlığın artması, anemi, sarılık ve dalağın büyümesiyle  seyreden bir hastalıktır. Batı toplumlarındaki prevalansı 1:5000'dir.
Herediter Sferositoz tanısına yönelik birçok test geliştirilmiştir. Ozmotik frajilite (OF) testi, en geleneksel türüdür. Son dönemlerde flow sitometri ile çalışılan eozin-5-Maleimid (EMA) bağlanma testi ve flowsitometrik ozmotik frajilite (FC-OF) testi geliştirilmiştir. Araştırmamızda akan hücre ölçer (FACSCalibur, Becton Dickinson, USA) ile çalıştığımız bu testler, geleneksel olarak çalışılan, Parpart ve arkadaşlarının önerdiği klasik OF testi (K-OF) ile karşılaştırıldı. Testlerin hastalığı ayırt etme gücü ve eşik değerleri (cut-off) değerleri belirlendi.
Araştırmamızda klasik OF testine ait spesifite (80) ve sensitivite (96,7) değerleri literatüre göre biraz daha yüksek bulundu. İnkübasyonlu OF testine ait bulgular ile taze örnekle yapılan OF testine ait bulgular istatistiksel olarak farklı değildi. EMA bağlanma testinin cut-off, spesifite ve sensitivite değerleri sırasıyla >222,64 - % 85 - % 90 olarak bulundu. İnkübasyonlu numune ile yapılan EMA bağlanma testi de taze örneğe göre istatistiksel olarak farklı değildi. FC-OF testine ait cut-off, spesifite ve sensitivite değerleri sırasıyla >67,29 - % 100 - % 100 olarak bulundu. FC-OF testinin inkübasyonlu çalışılması istatistiksel anlamda fark yaratmadı. Flowsitometrik iki yöntemi (EMA / FC-OF) birbirleriyle karşılaştırdığımızda FC-OF testinin EMA bağlanma testine göre daha iyi performans gösterdiği ve bulguların istatistiksel olarak da anlamlı olduğu (p=0,0397) saptandı.

Abstract:
Hereditary spherocytosis (HS) is the most common type of hemolytic anemia. Because of inherited damage in erythrocyte membranous proteins, erythrocytes are transformed into spherical (spherocyte) cells without central pallor from disc shaped cells with biconvirus and central pallor. Increased susceptibility to hemolysis is a disease characterized by anemia, jaundice and spleen growth. The prevalence in Western societies is 1: 5000.
Many tests have been developed for the diagnosis of hereditary spherocytosis. Osmotic fragility (OF) test is the most traditional type. Eozin-5-maleimide (EMA) binding test and flow-flow osmotic fragility (FC-OF) test have been developed in recent years with flow cytometry. In our study, these tests, which we studied with the flowing cell meter (FACSCalibur, Becton Dickinson, USA), were compared with the traditional OF test (K-OF) proposed by Parpart et al. Discrimination power of these tests and cut-off values were determined.
In our study, the specificity (80) and sensitivity (96,7) values of the classical OF test were found to be slightly higher than the literature. Results of the OF test with incubated sample and the results of the OF test with fresh sample were not statistically different. Cut-off, specificity and sensitivity values of EMA binding test were found as >222,64 – 85 % - 90 %, respectively. The EMA binding test with the incubated sample was not statistically different compared to the fresh sample. Cut-off, specificity and sensitivity values of FC-OF test were found as >67,29 – 100 % - 100 %, respectively. The incubation of the FC-OF test did not make any statistical difference. When the flowsitometric two methods (EMA / FC-OF) were compared with each other, the FC-OF test performed better than the EMA and the findings were statistically significant (p=0,0397).