Deneysel diyabetik sıçan testis dokusunda irisin ve apoptozis üzerine vitamin D'nin etkilerinin incelenmesi
Investigation of effects of vitamin D on irisin and apoptosis in experimental diabetic rat's testicular tissue
Yazar: MEHMET HANİFİ YALÇIN
Danışman: PROF. DR. AYDIN GİRGİN
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Diabetes mellitus = Diabetes mellitus ; Diabetes mellitus-deneysel = Diabetes mellitus-experimental ; Hayvan deneyleri = Animal experimentation ; Sıçanlar = Rats ; Testiküler hastalıklar = Testicular diseases ; Testis = Testis ; Vitamin D = Vitamin D ; İrisin = Irisin

Özet:
Diyabet dünyada insidansı gün geçtikçe artan ve testisler dahil tüm
biyolojik dokuları etkileyen önemli bir hastalıktır. Bu çalışmada deneysel olarak
diyabet oluşturulan sıçanların testis dokularında histolojik ve biyokimyasal olarak
irisin, apoptozis, total antioksidan seviye (TAS) ve total oksidan seviye (TOS)
değerleri üzerine vitamin D'nin etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Ağırlıkları 200-220 g arasında değişen, 8-10 haftalık Wistar ırkı 41 adet
erkek sıçan 5 gruba ayrıldı. Birinci gruptaki (Kontrol grubu) 7 hayvana herhangi
bir uygulama yapılmadı. İkinci gruptaki (Sitrat buffer grubu) 7 hayvana tek doz
0.1 Molar (M) sodyum sitrat tamponu periton içi (i.p) uygulandı. Üçüncü gruptaki
(Vitamin D grubu) 7 hayvana, 50 IU/gün oral yolla vitamin D verildi. Dördüncü
gruptaki (Diyabet grubu) 10 hayvana tek doz 50 mg/kg Streptozotosin (STZ) 0.1
M sodyum sitrat tamponunda çözdürülüp i.p verildi. Beşinci gruptaki
(Diyabet+vitamin D grubu) 10 hayvana, tek doz 50 mg/kg STZ, 0.1 M sodyum
sitrat tamponunda çözdürülüp i.p verildikten ve diyabet oluşturulduktan sonra 50
IU/gün oral yolla vitamin D verildi. Yetmişiki saat sonra kuyruk veninden kan
alındı ve kan glikoz düzeyi 250 mg/dl üzerinde olan sıçanlar diyabetik olarak
kabul edildi. Sekiz hafta sonra tüm sıçanların kuyruk veninden kan alındıktan
sonra sıçanlar sakrifiye edildi ve testis dokuları alındı. Alınan testis dokuları
histopatolojik olarak, immünohistokimyasal olarak ve TUNEL metodu ile
incelendi. Kan serumundaki ve testis doku süpernatantlarındaki irisin düzeyi
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) yöntemi ile analiz edildi. TAS ve
TOS sonuçları ise REL yöntemi kullanılarak değerlendirildi.
Histolojik incelemede, diyabet grubundaki sıçanların testislerinde,
seminifer tubullerdeki spermatogenik seri hücrelerde azalma en önemli bulgu
olarak görülürken, vitamin D'nin bu durumu önemli ölçüde önlediği görüldü.
İmmünohistokimyasal incelemede, diyabet grubundaki irisin düzeyinin kontrol
grubuna oranla azaldığı, vitamin D uygulamasının ise irisin düzeyini arttırdığı
gözlemlendi. Apoptotik hücre sayıları kıyaslandığında ise diyabet grubundaki
apoptotik hücrelerin kontrol grubuna oranla arttığı, vitamin D uygulamasının ise
apoptotik hücre sayısını azalttığı gözlemlendi. Biyokimyasal analizlerde, diyabet
grubunda doku ve serum irisin düzeyleri ve TAS düzeyleri azalırken, TOS
düzeyinin arttığı görüldü. Diyabet+vitamin D grubunda ise diyabet grubu ile
kıyaslandığında, doku ve serum irisin düzeyleri ve TAS düzeyleri artarken, TOS
düzeyinin azaldığı tespit edildi. Vitamin D grubunda ise diyabet+vitamin D
grubuna benzer sonuç gözlemlendi.
Sonuç olarak vitamin D uygulamasının diyabetin testis üzerindeki olumsuz
etkilerini önemli ölçüde ortadan kaldırdığını ve diyabetin tedavisine katkı
sağlayabileceği düşünülmektedir.
Anahtar Kelimeler: Diyabet, Testis, İrisin, Vitamin D, Apoptozis.

Abstract:
Diabetes is an important disease in the world that has been increasing day
by day and affecting all biological tissues including testes. The aim of this study
was to investigate the effects of vitamin D on testicular tissue histologically and
biochemically on irisin, apoptosis, total antioxidant status (TAS) and total oxidant
status (TOS).
41 male rats were divided into 5 groups. 7 animals were not treated in the
first group (Control group). A single dose of 0.1 Molar (M) sodium citrate buffer
was administered intraperitoneally (i.p) to 7 animals in the second group (Citrate
buffer group). In the third group (Vitamin D group) 7 animals were given vitamin
D 50 IU/day. 10 animals in the fourth group (Diabetes group) were given a single
dose of 50 mg/kg Streptozotocin (STZ) in 0.1 M sodium citrate buffer to give i.p.
10 animals in the fifth group (Diabetes+vitamin D group) were given 50 mg/kg
STZ, 0.1 M sodium citrate buffer in a single dose and given i.p. Seventy two
hours later blood was collected from the tail vein and the blood glucose levels
above 250 mg/dl were considered diabetic. After eight weeks, the rats were
sacrificed and the testicular tissues were removed after the blood is taken from the
tail vein of all rats. Testis tissues were examined histopathologically,
immunohistochemically and by TUNEL method. The level of irisin in blood
serum and testis tissue supernatants was analyzed by Enzyme Linked
Immunosorbent Assay (ELISA) method. TAS and TOS results were evaluated by
using REL method.
In histological examination, decrease in the number of spermatogenic cells
in seminiferous tubules was the most important finding in the testes of rats in the
diabetes group, whereas vitamin D significantly prevented this condition. In
immunohistochemical examination, it was observed that the level of irisin in the
diabetic group decreased compared to the control group and vitamin D application
increased the level of irisin. When apoptotic cell numbers were compared, it was
observed that apoptotic cells in the diabetes group increased compared to the
control group, whereas vitamin D application decreased the number of apoptotic
cells. In biochemical analyzes, the levels of tissue and serum irisin and levels of
TAS were decreased and the level of TOS was increased in the diabetes group.
Diabetes+vitamin D group compared with the diabetes group, tissue and serum
irisin levels and TAS levels were increased, while TOS level was found to be
decreased. Vitamin D group was similar to diabetes+vitamin D group.
As a result, it is thought that the application of vitamin D significantly
eliminates the negative effects of diabetes on the testis and may contribute to the
treatment of diabetes.

Key Words: Diabetes, Testis, Irisin, Vitamin D, Apoptosis.