Nöroblastomda kanser kök hücrelerine mezenkimal kök hücre ve tümör infiltre edici lenfositlerin etkisi
Impact of mesenchymal stem cells and tumor infiltrating lymphocytes to cancer stem cells in  neuroblastoma
Yazar: ZÜBEYDE YILDIRIM EKİN
Danışman: PROF. DR. SAFİYE AKTAŞ
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Onkoloji = Oncology ; Patoloji = Pathology ; Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery

Özet:
Nöroblastom , çocukluk çağında en sık görülen ekstrakranial solid tümördür. Kanser kök hücrelerinin (KKH'ler) tümörün başlatılması, ilerlemesi ve rekürrensinde merkezi bir rol oynadığı düşünülmektedir. Artmış KKH seviyeleri kötü prognoz ile ilişkilidir. Bu çalışmanın amacı; nöroblastom hücreleri, KKH'ler ve tümör infiltre edici lenfositler (TIL'ler) ve mezenkimal kök hücreler (MKH) olan tümör mikro çevre elemanları arasındaki etkileşimi ex vivo ilk defa araştırmaktır.
Nöroblastom ameliyat materyali taze dokularından tek hücre süspansiyonu yapılıp kültüre edildi. CD133+ kök hücreleri, nöroblastoma kanseri hücrelerinden manyetik izolasyon kullanılarak izole edildi. TIL'ler, AIMV ortamı göç yöntemi MSC ile izole edildi ve CD54 +, CD90 + manyetik izolasyon ile izole edildi. İzole edilen hücreler, tümör infiltre edici lenfositler ve CDDP çok kuyucuklu platelere ekildi Sonra hücrelerin canlılığı 24 ve 48 saatte ölçüldü. TIL'lerin fenotipi flow sitometri ve immünhistokimyasal yöntemle belirlendi. nonparametrik sonuçların karşılaştırılması için Mann Whitney U testi testi kullanıldı. P<0.05 anlamlı kabul edildi.
Çalışmada yaşları 2-168 (39 ortalama) ay arası 20 hastanın materyali hücre kültürü ile değerlendirildi. Bunların 8'i düşük riskli grupta, 12'si ise yüksek riskli grupta idi. Çalışmaya 10 kız ve 10 erkek çocuk alındı. MKH'ler KKH'leri üzerindeki CDDP'nin öldürücü etkisini azalttığını ve bunu apoptotik etkiyi azaltarak yaptığını bulduk. Ayrıca TIL'ler NB ve KKH üzerindeki CDDP'nin öldürücü etkisini arttırdığını bulduk.
Bu etkileşimin kanıtlanması, nöroblastom ve KKH hedefli tedavilerin planlanmasında mikro ortamı düşünmek için yararlı bilgiler sunmaktadır.
Anahtar Sözcükler: Nöroblastom, Kanser Kök Hücresi, Mezenkimal Kök Hücre, , Mikroçevre, Tümör İnfiltre Edici Lenfosit

Abstract:
Neuroblastoma (NB) is the most common extra-cranial solid tumor in childhood. Cancer stem cells(CSCs) are thought to play a central role in tumor initiation, progression and recurrence. Increased levels of CSCs are associated with poor prognosis. The aim of this study is to investigate the interaction between neuroblastoma cells, CSCs and the elements of tumor microenvironment which is tumor infiltrating lymphocytes(TILs) and mesenchymal stem cells(MSC) ex vivo for the first time.
Isolated fresh tissues of neuroblastoma surgical material were perfomed single-cell suspension and cultured. CD133+ stem cells were isolated using magnetic isolation from cultured neuroblastoma cancer cells. TILs were isolated by AIMV medium migration method MSC were isolated with CD54+, CD90+ magnetic isolation. The isolated cells, tumor infiltrating lymphocytes and cisplatin were seeded in multi-well Plates Then the viability of cells measured at 24 and 48 hours. Also phenotype of TILs were identified by flow cytometry and immunohistochemistry. Result were analysed by nonparametric tests at p<0.05 level.
A total of 20 neuroblastoma samples from patients who are 2 to 168 (mean 39) months old, were evaluated with cell culture 8 of them were at low risk group and 12 were at high-risk group. Ten females and ten males were included in the study. We found that MSCs reduce the killing effect of CDDP on CSC reducing apoptotic effect. We have also found that TILs increase the killing effect of CDDP on NB and CSC.
Proving this interaction offers useful information to consider microenvironment in planning neuroblastoma and CSC-targeted therapies.
Keywords: Neuroblastoma Cancer Stem Cell, Mesenchymal Stem Cells, Microenvironment, Tumor Infiltrating Lymphocytes