Sığırlarda in vitro koşullarında üretilen sığır embriyolarının kalitelerinin iyileştirilmesi olanakları
Possibilities for improving quality of in-vitro produced embryos in cattle
Yazar: SHAHRAM BOHLOOLI
Danışman: PROF. DR. FATİN CEDDEN
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Zootekni Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2015
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology ; Fizyoloji = Physiology ; Ziraat = Agriculture
Dizin: Embriyo = Embryo

Özet:
Bu araştırma üç aşamadan oluşturulmuştur. İlk araştırmada kümülüs oosit komplek (KOK) ve embriyo üretim üzerine farklı ovaryum taşıma ortamı ve sıcaklıkların etkisi incelenmiştir. İkinci aşamada oosit maturasyonu ve üretilmiş olan zigot ve embriyoların miktarı ve kalitesi üzerine üç farklı somatik hücre ile beş farklı ortamın ko-kültür edilmesinin etkisi incelenmiştir. Son aşama olarak ikinci aşamada üretilmiş olan 2-8 blastomerli zigotlar tavuk embriyo amniyotik boşluğu (TEAB) içinde inkübe edilerek blastosist oluşum oranı ve diğer özellikleri incelenmiştir. İlk aşamanın sonuçlarına göre ovaryum taşıma ortamı ve sıcaklıkları KOK'lerin maturasyonunu etkileyerek en çok maturasyon oranı, 4 °C sıcaklık ve CR1 ortamında görülmüştür. Ancak blastosist oluşum oranı, iç hücre kümesi (İHK) ve terfoktoderm (TE) hücre sayısı özellikleri bu faktörlerden etkilenmemiştir. İkinci araştırmanın sonuçlarına göre ovidukt hücreleri ile tavuk embriyo amniyotik sıvısı (TEAS) ortamında ko-kültüre tabi tutulan zigotlarda maturasyon, fertilizasyon, blastosist oluşum oranı ve blastosistlerin diğer özellikleri iyileşmiştir. Üçüncü araştırmanın sonuçları ise TEAB içinde zigotların inkübasyonu hücre içermeyen sistemlerden daha çok blastosist oluşumuna neden olmuştur. Sonuç olarak, ovaryum taşıması için en iyi sıcaklık ve ortam olarak 4 °C sıcaklıkta CR1 ortamı bulunmuştur. Ayrıca KOK ve zigotların ovidukt hücresi ile beraber TEAS ortamı içinde ko-kültür edildiğinde oositlerin gelişme yetenekleri ve üretilen embriyoların özellikleri iyileşmiştir.

Abstract:
This study was composed from three examinations. The first examination was conducted to investigate the effects of ovary transportation medium and temperature on cumulus oocyte complexes (COCs) and characteristics of embryos. The second examination was investigated for the effects of co-culturing of COCs and zygotes with three somatic cells in five media on oocyte maturation and quality and quantity of produced embryos. In the final examination chick embryonic amnion cavity was used for the incubation of 2-8 cell zygotes which produced by the second examination. The result of first examination was revealed that the COC's maturation rate was affected by medium and temperature. It was found that, 4 °C resulted in high maturation rate than other transportation temperatures. The Charles Rosenkrans medium (CR1) has given better maturation cleavage rate compared to the others. There was neither significant difference in blastocyst formation rate and nor inner cell mass (ICM) and trophectoderm (TE) cells counts regarding transportation factors. The second examination was shown that co-culturing of the COCs and zygotes with oviductal epithelial cells in check embryo amniotic fluid (ChEAF) resulted in higher rate of maturation, fertilization, blastocyst formation and quality. The third examination demonstrated that incubation of zygotes in check embryo amniotic cavity (ChEAC) only improved blastocyst formation rate in culturing systems without any somatic cells. In conclusion, the transport of ovaries in CR1 at 4 °C is effective for maintaining early developmental competence of cattle oocytes. And co-culturing of COCs and zygotes with bovine oviductal epithelial cells in ChEAF was improved the developmental competence of oocytes and embryos.