MCF-7 meme kanseri hücre kültüründe dosetakselin sin3a, mdm2 ve P53 gen ekspresyonu üzerine etkisi
The effect of docetaxel on sin3A,  MDM2 and P53 expressions in MCF-7 breast cancer cell culture
Yazar: NEZAHAT KURT
Danışman: PROF. DR. NURİ BAKAN
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Dosetaksel = Docetaxel ; Gen ifadesi = Gene expression ; Hücre kültürü = Cell culture ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Protein-P53 = Protein-P53

Özet:
Amaç: Meme kanseri kadınlarda en sık görülen kanser tiplerinden birisidir ve tedavisinde kemoterapi önemli bir etkiye sahiptir. Son zamanlarda kemoterapötik ajanların apoptozda rol olan genler üzerine etkisini araştıran birçok çalışma yapılmaktadır. Mevcut çalışmada meme kanseri tedavisinde kullanılan ve mikrotübül inhibitörü olan dosetakselin MCF-7 hücreleri üzerindeki apoptotik ve sitotoksik etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. 
Materyal ve Metot: Meme kanseri hücre hatlarına farklı dozlarda dosetaxsel uygulanarak 12 adet deney grubu oluşturuldu ve tüm gruplar 24 ve 48 saatlik inkübasyonlara bırakıldı. Sitotoksisiteyi belirlemek amacıyla MTT analizi uygulandı. Histokimyasal olarak apoptozinin tespit edilmesinde TUNEL metodu kullanıldı.  P53, MDM2 ve Sin3A gen ekspresyon düzeyleri Real-Time PCR'la ölçüldü.
Bulgular: MTT sitotoksite analizi sonucunda 100 nM  dosetaksel etkin doz olarak belilenmiştir. Aynı zamanda P53, MDM2 ve Sin3A gen ekspresyonları 100 nM ve 1µM dosetaksel uygulanan gruplarda artış gösterirken en yüksek değeri yine 100 nM dosetaksel grubunda tespit edilmiştir.  TUNEL boyamada, artan dosetaksel dozuyla apoptozda bir yükselme gözlenmiştir. 
Sonuç: Dosetaksel apoptozisde görev alan P53 gen ekspresyonunu arttırarak kanser hücrelerini apoptoza yönlendirdiğini aynı zamanda Sin3A'nın da ekspresyonun arttırarak onu MDM2'nin degredasyonuna karşı koruduğu sonucuna varabilir.

Abstract:
Aim: Breast cancer is the most common type of cancer in women, and chemotherapy is of utmost importance in its treatment. Recently, many studies have investigated the effect of chemotherapeutic agents on the genes responsible for apoptosis. In present study, it is aimed to investigate the apoptotic and cytotoxic effects of docetaxel, which is microtubule inhibitor and used for treatment of breast cancer, on the MCF-7 cells.
Materials and Methods: Twelve experimental groups were formed applying different dose of docetaxel to breast cancer cells line and, all groups were incubated for 24 and 48 hours. MTT analysis was performed to determine the cytotoxicity. TUNEL method was used for histochemical detection of apoptosis. P53, MDM2 and Sin3A gene expression levels were measurement by Real-Time PCR. 
Results: The results of MTT cytotoxicity analysis showed an effective dose of 100nM docetaxel. P53, MDM2 and Sin3A gene expressions were shown to increase in groups to which 100 nM and 1 µM docetaxel doses were applied, with the highest values being identified in 100 nM docetaxel group. The TUNEL staining showed the higher the docetaxel doses, the higher the apoptosis.
Conclusion: It was concluded that the docetaxel directs the cancer cells to apoptosis by increasing P53 gene expression and also protects the P53 against the degradation by MDM2 increasing Sin3A gene expression.