Ekinokoklu sığır ve koyunların, akciğer ve karaciğerlerindeki yangısal infiltrasyonun histopatolojik ve immünohistokimyasal olarak araştırılması
Histopathological and immunohistochemical evolation of the inflammatory infiltrate in the liver and lungs of the cattle and sheep with echinococcosis
Yazar: ASLI GÜNEŞ
Danışman: PROF. DR. ENVER BEYTUT
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Patoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Akciğer = Lung ; Akciğer hastalıkları = Lung diseases ; Echinococcosis = Echinococcosis ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer hastalıkları = Liver diseases ; Koyunlar = Sheep ; Sığırlar = Cattles ; Veteriner hekimlik = Veterinary medicine ; İnfiltrasyon = Infiltration ; İnflamasyon = Inflammation

Özet:
Ekinokoklu Sığır ve Koyunların, Akciğer ve Karaciğerlerindeki Yangısal İnfiltrasyonun Histopatolojik ve İmmünohistokimyasal Olarak Araştırılması
Ekinokokkozis ülkemizde, Avrupa'da ve tüm dünya ülkelerinde insan ve hayvan sağlığı açısından sorun oluşturan sestod sınıfına ait ekinokok larvalarının neden olduğu oldukça önemli zoonotik bir hastalıktır. Bu çalışmada kistik ekinokok saptanan sığır ve koyunların akciğer ve karaciğerlerinde oluşan yangısal hücre infiltrasyonunun histopatolojik ve immünohistokimyasal yöntemlerle araştırılması amaçlanmıştır. Hem belediye mezbahasına kesim için sunulan hem de Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Patoloji Anabilim Dalına teşhis için sunulan toplam 30 sığır ve 10 koyunun ekinokoklu akciğer ve karaciğer dokusu çalışma materyalini oluşturdu. Toplanan kist hidatikli dokular %10'luk formaldehit solüsyonu ve çinko fiksasyonda tespit edildi. Tespit sonrası rutin doku takibi için örnekler sıvılaştırılmış parafin, dereceli alkoller ve ksilolden geçirildikten sonra parafin bloklar hazırlandı. Mikrotomda 4 mikron kalınlığında alınan seri kesitler normal ve poly-L-lysine kaplı lamlara alındı. Normal lamlara alınan kesitler hematoksilen-eozin (HE) ile boyanarak histopatolojik olarak değerlendirildi. Poly-L-lysine ile kaplı lamlara alınan kesitler ise immünohistokimyasal incelemeler için CD3, CD79αcy, CD4, CD8, İnterferon gamma (IFNγ), Tümör Nekroz Faktör-alfa (TNFα), FoxP3 ve İnterlökin 2 (IL-2) primer antikorları kullanılarak immünperoksidaz tekniği ile boyandı. Histopatolojik incelemelerde kist çeperlerinin germinal tabaka, asellüler laminar tabaka ve ara konakçı dokusu tarafından oluşturulan adventisyal tabaka görüldü. Kistlerin lümeninde ise kist sıvısı ve yaygın kalsifikasyonlar ile koyunlarda fertil kistler ve protoskoleksler saptandı. Kistlerin etrafında ara konakçı dokusunda meydana gelen şiddetli lenfoid hücre infiltrasyonu, çok çekirdekli yabancı cisim dev hücreleri ve yaygın fibrozis gözlendi. İmmünohistokimyasal değerlendirmelerde perikistik alanlarda yangısal infiltrasyonun açık olarak şiddetli CD3+ T lenfositlerden oluştuğu görüldü. Yangısal infiltratta CD3+ T lenfositlere kıyasla daha az sayıda CD79αcy+ B lenfosit ve plazma hücreleri bulunduğu gözlendi. Yangısal infiltratta CD4+ yardımcı ve CD8+ sitotoksik T lenfositler özellikle adevtisyal fibröz kapsula sınırında görüldü. Özellikle yabancı cisim dev hücrelerini çevreleyen ve yer yer kist çeperine sızan hücrelerde belirgin IFNγ ve IL-2 pozitif reaksiyon görüldü. Ayrıca konakçı dokusunun oluşturduğu yangısal infiltratta ve dev hücrelerinde birçok hücrenin TNFα pozitif sitoplazmik reaksiyonu belirlendi. Yangısal infiltratın şiddeti ve lenfositik fenotiplerin karekterizasyonu açısından sığır ve koyun konakları arasında önemli bir değişiklik olmadığı dikkati çekti. Sonuç olarak, Echinococcus granulosus larvalarının sığır ve koyun ara konaklarında özellikle akciğer ve karaciğerlerde kistik lezyonlar oluşturduğu ve bunun ekonomik kayıplar ile insan sağlığını tehdit etme potansiyeli görüldü. Konakçılara ait perikistik adventisyada şiddetli yangısal reaksiyon geliştiği, infiltratif hücrelerin baskın olarak T lenfositler ve daha az sayıda B hücrelerden oluştuğu; bir kısım infiltratif hücrenin ise CD4 ve CD8 pozitif olduğu belirlendi. Bunun yanı sıra infiltratif hücrelerin en önemli pro-inflamatuar sitokinler olan IFNγ ve TNFα pozitif reaksiyon verdiği görülmüş, dolayısıyla sığır ve koyun ara konakçılarında kistik ekinokokkozise karşı savunmada lokal hücresel immün yanıtın önemli rolü ortaya konulmuştur.
Anahtar Sözcükler: Akciğer, Ekinokokkozis, İmmunohistokimya, Karaciğer, Koyun, Sığır

Abstract:
Histopathological and Immunohistochemical Evaluation of the Inflammatory Infiltrate in the Liver and Lungs of Cattle and Sheep with Echinococcosis

Echinococcosis is a very important zoonotic disease caused by the echinococcal larvae belonging to the sestod class, which is a problem in terms of human and animal health in our country, Europe and all over the world. In this study, it was aimed to investigate the inflammatory cell infiltration in the lungs and livers of cattle and sheep with cystic echinococci using histopathological and immunohistochemical methods. Echinococcal lung and liver tissues taken from 30 cattle and 10 sheep presented for slaughter in a municipal slaughterhouse and for diagnosis in the Department of Pathology at Kafkas University Veterinary Faculty were used as material. All collected tissues samples with hydatid cysts were fixed in 10% formaldehyde and zinc fixative solutions. For routine tissue follow-up after fixation, the samples were prepared from liquefied paraffin, graded alcohols, and paraffin blocks after passing through xylol. Serial sections in 4 micron thickness were taken into normal and poly-L-lysine coated slides. Sections taken to normal slides were stained with hematoxylin-eosin (HE) and evaluated histopathologically. The sections taken on the poly-L-lysine-coated slides were used for immunorhistochemical evaluations using immunperoxidase technique with CD3, CD79αcy, CD4, CD8, Interferon gamma (IFNγ), Tumor Necrosis Factor-alpha (TNFα), FoxP3 and Interleukin 2 (IL-2) primary antibodies. Histopathological examinations revealed the germinal layer of the cyst walls, acellular laminar layer and adventitial layer formed by the host tissue. In the lumen of the cysts, cyst fluid and diffuse calcifications and daughter cysts and protoscolices were detected in sheep. Severe lymphoid cell infiltration occurring in the host tissue around the cysts, multinucleated foreign body giant cells and diffuse fibrosis were observed. In the immunohistochemical evaluations, it was observed that inflammatory infiltration in pericystic areas consisted of severe CD3+ T lymphocytes. It was observed that there were fewer CD79αcy+ B lymphocyte and plasma cells in the inflammatory infiltrate compared to CD3+ T lymphocytes. In the inflammatory infiltrate, CD4+ helper and CD8+ cytotoxic T lymphocytes were observed especially at the margin of the adventitious fibrous capsule. Significant IFNγ and IL-2 positive reaction was observed especially in cells surrounding the foreign body giant cells and occasionally infiltrating the cyst wall. In addition, TNFα positive cytoplasmic reaction of many cells was determined in the inflammatory infiltrate and giant cells formed by the host tissue. It was noted that there was no a significant difference between cattle and sheep hosts in terms of severity of inflammatory infiltrate and lymphocytic phenotype characterization. As a result, it was seen that Echinococcus granulosus larvae cause cystic lesions in cattle and sheep intermediate hosts, especially lungs and livers, and this has the potential to threat human health with economic losses. In the pericystic adventitia of the hosts, severe inflammatory reaction developed and infiltrative cells predominantly composed of T lymphocytes and fewer B cells. Some infiltrative cells were found to be positive for CD4 and CD8. In addition, infiltrative cells have been shown to react positively to the most important pro-inflammatory cytokines, IFNγ and TNFα, so an important role of local cellular immune response has been demonstrated in defense against cystic echinococcosis in cattle and sheep intermediate hosts.

Keywords: Bovine, Echinococcosis, Immunohistochemistry, Liver, Lung, Sheep