Listeria monocytogenes'in salamura beyaz peynir üretim hattında kontaminasyon kaynaklarının belirlenmesi ve PFGE metodu ile genotiplendirilmesi
Detection of contamination sources of listeria monocytogenes in pickled white cheese production process line and genotyping with PFGE method
Yazar: NİHAT TELLİ
Danışman: PROF. DR. AHMET GÜNER
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2012
Konu: Besin Hijyeni ve Teknolojisi = Food Hygiene and Technology ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Besin kirlenmesi = Food contamination ; Beyaz peynir = White cheese ; Elektroforez = Electrophoresis ; Listeria monocytogenes = Listeria monocytogenes ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Araştırmada, dört işletmeden salamura beyaz peynir üretim prosesinin 16 noktasından toplam 192 numune, L. monocytogenes kontaminasyonu bakımından incelendi. Numunelerde Listeria spp. varlığı, kültürel ve PCR yöntemiyle araştırıldı. Antiserumlarla serotiplendirilen izolatlar, PFGE yöntemiyle genotiplendirildi. İzolatların on antibiyotiğe duyarlılıkları disk difüzyon metoduyla belirlendi.192 numuneden 17'sinin (%8,85) Listeria spp. ile kontamine olduğu tespit edildi. Kontamine numunelerden üçünde L. monocytogenes izole edildi. L. monocytogenes izolatları; A işletmesi baskı kasaları ve duvar-zemin, C işletmesi çiğ süt örneklerinden elde edildi.L. monocytogenes izolatlarının hepsinin 4b serotipine dahil olduğu belirlendi. L. monocytogenes izolatlarının AscI restriksiyon enzimiyle genotiplendirilmelerinde, ATCC ve EGD suşuna olan homolojileri sırasıyla ~%85 ve ~%33 olarak saptandı. ApaI restriksiyon enzimiyle ATCC suşuna olan homoloji, C işletmesi çiğ süt izolatında %100, A işletmesi duvar-zemin izolatında ~%94, A işletmesi baskı kasaları izolatında ~%80 olarak belirlendi. EGD suşu ile izolatlar arasındaki homoloji ~%52 olarak bulundu.İzolatların hepsi ampisilin, gentamisin, tetrasiklin, sefalotin, vankomisin, penisilin ve sülfametoksazol/trimethoprime duyarlı bulundu. Bunun yanı sıra A işletmesi duvar-zemin örneğinden elde edilen izolat on antibiyotiğin hepsine duyarlı, A işletmesi baskı kasaları ve C işletmesi çiğ süt örneklerinden elde edilen izolatlar eritromisine dirençli bulundu.Sonuç olarak, salamura beyaz peynir üretim prosesinde yer alan farklı noktalardan L. monocytogenes izole edilmesi, salamura beyaz peynirlerin kontaminasyonu ve halk sağlığı bakımından önem arz etmektedir. Birincil üretimden tüketime kadar olan bütün aşamaların gıda güvenliği açısından kontrol altına alınması, beyaz peynir kaynaklı listeriozis riskinin azaltılması bakımından önem arz etmektedir. L. monocytogenes'in epidemiyolojisine etkin veriler kazandırılması, listeriozisin tedavisinde etkili antibiyotiklerin kullanılması ve antibiyotik direncinin engellenmesi amacıyla genotiplendirme çalışmalarına hız verilmesi ve PulseNet değerlendirme ağının genişletilerek bütün ülkelerin epidemiyolojik bilgi paylaşımına dahil olması önem arz etmektedir.Anahtar Sözcükler : Salamura beyaz peynir; L. monocytogenes; PCR; Serotiplendirme; PFGE.

Abstract:
In this study, totally 192 samples collected from 16 different points of production processes of pickled white cheese from four different establishments were investigated for presencing of contamination with L. monocytogenes. Presence of Listeria spp. in samples was examined using cultural and PCR methods. The isolates serotyped using antisera were genotyped by PFGE method. Isolates were evaluated to determine the susceptibility to ten antibiotics using disc diffusion method.17 out of 192 samples (8,85%) were found contaminated with Listeria spp. Three of the samples from contaminated samples were identified as L. monocytogenes. L. monocytogenes were isolated from pressure equipments and wall-surfaces of establishment A, from raw milk samples of establishment C.It was determined that all of the isolates of L. monocytogenes were among 4b serotype. The homology levels of L. monocytogenes isolates to ATCC and EGD strains which were genotyping with AscI restriction enzyme were determined as ~85% and ~33%. The homology level of the isolates restricted with ApaI enzyme to ATCC strain was determined as 100% in raw milk isolates from establishment C, ~94% in wall-surface isolates and ~80% in pressure equipments from establishment A. The homology level of all isolates to EGD strain were determined as ~52%.All of the isolates were found susceptible to ampiciline, gentamycine, tetracycline, cephalotine, vancomycine, peniciline, sulphametoxasol/trimethoprime. Isolates from wall-surface samples in establishment A were found susceptible to all of ten antibiotics. Isolates from pressure equipments in establishment A and raw milk samples in establishment C were found resistant to eritromycine.As a result, isolation of L. monocytogenes in different points of pickled white cheese production processes poses a major risk to public health and contamination of pickled white cheeses. From primary production to consumption, the controlling of all the processes throughout food production line for the production of safety food present a major importance for reducement of listeriosis risk sourced in pickled white cheese. It is important that the genotyping studies should be increased to add active data to L. monocytogenes epidemiology and to utilise effective antibiotics in treatment of listeriosis and to prevent antibiotic resistance for extention and also addition of PulseNet evaluation network into worldwide epidemiologic database for these purposes.Key Words : Pickled white cheese; L. monocytogenes; PCR; Serotyping; PFGE.