Influenza nöraminidaz inhibitörlerine karşı fenotipik direnç araştırması
Phenotypic detection of resistance against influenza neuraminidase inhibitors
Yazar: MERVE TULUNOĞLU
Danışman: PROF. DR. OSMAN ŞADİ YENEN
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2013
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antiviral ajanlar = Antiviral agents ; Fenotip = Phenotype ; Floresan antikor tekniği = Fluorescent antibody technic ; Nöraminidaz = Neuraminidases ; İlaçlara direnç = Drug resistance ; İnfluenza = Influenza ; İnhibitör = Inhibitor

Özet:
Influenza virüsleri, morbidite ve mortaliteye neden olan, iş gücü ve ekonomik kayıplara yol açabilen epidemilere, dönem dönem dünyada milyonlarca insanın ölümüyle sonuçlanan pandemilere sebep olabilen en önemli solunum yolu enfeksiyonları etkenidirler. Influenza enfeksiyonunun şiddetini ve süresini azaltmada önemli rol oynayan antiviraller, erken evrelerinde pandemilere yanıt olarak da kullanılabilmektedirler. Bu nedenle, influenza virüslerinin mevcut antivirallere karşı direnç durumlarının bilinmesi gerekmektedir. Ülkemizde, direnç sadece bilinen mutasyonları saptayabilen genotipik direnç saptama yöntemi ile gösterilmektedir. Ülkemizde ilk olarak gerçekleştirilen fenotipik direnç saptama yönteminin kullanıldığı bu çalışmada, 2011-2012 influenza sürveyans mevsiminde gerçek zamanlı RT-PCR ile Influenza A (H3N2) ve Influenza B olarak saptanan örneklerde fluoresan yöntemi ile nöraminidaz inhibitörlerine karşı direnç durumları araştırılmıştır. İki yüz on Influenza A (H3N2) örneği SIAT-1 MDCK, 71 Influenza B örneği MDCK hücrelerinde bir kez pasaj yapılarak çoğaltılmıştır. Yüz sekiz Influenza A (H3N2) örneğinde, 54 Influenza B örneğinde sitopatik etki (CPE) gözlenmiş ve CPE gösteren örneklere hemaglütinasyon deneyi uygulanmıştır. Hemaglütinasyon titresi uygun olan 10 Influenza A (H3N2) ve 10 Influenza B örneğine antiviral direnç testi uygulanmış ve IC50 değerleri saptanmıştır. Sonuç olarak, IC50 değerlerine göre test edilen Influenza A ve B virüslerinden biri hariç tümü oseltamivir ve zanamivire duyarlı olarak bulunurken, Influenza B örneklerinden biri oseltamivire karşı ne dirençli ne de duyarlı olarak bulunmuş dirence doğru yükseliş gösterdiği için "outlier (aralık dışı)" olarak tanımlanmıştır.

Abstract:
Influenza viruses are the etiological agents of the most important respiratory infections that cause morbiditiy and mortality, workforce and economical loss through epidemics and lose of millions of lives worldwide with occasional pandemics. Antivirals that play an important role in reducing the severity and the duration of the infection can also be used in the early phases of pandemic response. Therefore antiviral resistance status of influenza viruses against antivirals are need to be known. In Turkey, resistance has been monitored by genotypic resistance detection method which can only detect known mutations. In this first study from Turkey that makes use of phenotypic resistance detection method, fluorescent method, neuraminidase inhibitors resistance states of A (H3N2) and B viruses isolated with real time RT-PCR during 2011-2012 influenza season have been investigated. Two hundred and ten Influenza A (H3N2) and 71 Influenza B viruses were passaged once on SIAT-1 MDCK and MDCK cells respectively. One hundred and eight Influenza A (H3N2) and 54 Influenza B viruses produced cytopathic effect (CPE) in respective cell cultures and those viruses with detectable CPE were selected for hemaglutination (HA) testing. Ten Influenza A (H3N2) and 10 Influenza B viruses that gave suitable HA titers were used for antiviral resistance testing and IC50 values were determined. Based on IC50 values all tested Influenza A and B viruses except one B virus that was classified as "outlier" due to increased IC50 value compared to sensitive isolates were susceptible to both oseltamivir and zanamivir.