Otoimmün epilepsilerde anti-nöronal antikor pozitif olgularda b lenfosit fenotiplerinin flow sitometri ile değerlendirilmesi /
Yazar: DOĞA COŞKUN SÖNMEZ
Danışman: DOÇ. DR. DEMET KINAY
Sağlık Bilimleri Üniversitesi / İstanbul Okmeydanı Eğitim. ve Araştırma. Hastanesi / Nörobilim Ana Bilim Dalı / Nöroloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2020
Konu: Nöroloji = Neurology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Antikorlar = Antibodies ; B lenfositleri = B lymphocytes ; Ensefalitler = Encephalitis ; Epilepsi = Epilepsy ; Fenotip = Phenotype ; İmmünofenotip tayini = Immunophenotyping

Özet:
Amaç : Son yıllarda enflamasyon ve otoimmünitenin epilepsi patofizyolojisindeki yerine giderek daha çok dikkat çekilmektedir. Epilepsi hastalarında otoimmün etyolojinin saptanması, spesifik bir terapötik yaklaşımın (immün tedavi) önünü açabilir. Bu çalışmada, epilepsi olgularının periferik kan hücrelerindeki immun fenotip değişikliklerinin ve bu değişikliklerin biyobelirteç olarak değerlerinin araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem : Bu çalışmaya Okmeydanı EAH, Epilepsi Polikliniği'nden takipli, 2018-2019 yılları arasında fokal ve/veya jeneralize nöbetleri olan, kranyal MRG'de mezyal temporal skleroz dışında yapısal bir lezyonu olmayan 18 -65 yaş aralığında bulunan 133 hasta (ortalama yaş: 30.80 ) ve yaş, cinsiyet uyumlu 25 sağlıklı kontrol grubu (ortalama yaş: 35; 20-62 yaş aralığında) dahil edildi. GAD antikorları düzeyleri ELİSA kiti ile belirlendi. Ardından randomize seçilen 14 hastada periferik kan immün fenotiplemesi yapıldı. İstatiksel analiz için ANOVA testi, FlowJo7.6.5 programı, Student-t testi, GraphPadPrism programları kullanıldı.
Bulgular : Hastaların 47'si fokal epilepsi, 86 tanesi idiopatik jeneralize epilepsi tanısı aldı. 133 hastadan birinde GAD antikor pozitifliği (OD:3,52 ve 1,70), birinde de sınırda pozitiflik saptandı (OD:0,22). GAD-65 antikorlarının fokal epilepside görülme oranı %2 (1/47)'dir. Bu hasta, erişkin dönemde başlayan, hippokampus atrofisi eşlik etmekle birlikte tipik MTLE sendromu klinik bulgularını göstermemiştir. Sağlıklı  kontroller ile karşılaştırıldığında epilepsi olgularında toplam CD3 pozitif T hücresi populasyonunda azalma ve pro-inflamatuar yanıtı inhibe eden düzenleyici anti-inflamatuar T hücresi (Treg) populasyonunda ise artma saptanmıştır. Ayrıca, NK hücrelerinin yüzdelerinin iki GAD65 antikoru pozitif olguda, tüm diğer epilepsi olgularından ve sağlıklı kontrollerden yüksek saptanmıştır. 
Sonuç: Atipik özellikleri olan bir geç başlangıçlı MTLE olgusunda GAD antikoru saptanması bu tür olgularda anti-nöronal antikor araştırılmasının düşünülmesi gerektiğini ortaya koymaktadır. Antikorlu olgularda gözlenen yüksek NK hücresi oranlarının,  doğal bağışıklıkta görevli glial aktivitenin yüksek olması ile ilişkili olduğu düşünülmüştür. Genel epilepsi populasyonunda azalmış T hücresi ve artmış düzenleyici T hücresi (Treg) oranları gösterilmiş olmakla birlikte farklı epilepsi alt grupları arasında farklılık olmaması, epilepsinin doğasından ve kökeninden bağımsız bir şekilde epileptik aktivitenin non-spesifik bir sonucu olarak ortaya çıktığını ve periferik kan immün fenotiplerinin henüz bir epilepsi biyobelirteci olarak kullanılamayacağını düşündürmektedir.

Abstract:
Aim : In recent years, more and more attention has been drawn to the place of inflammation and autoimmunity in epilepsy pathophysiology. Detection of autoimmune etiology in epilepsy patients can pave the way for a specific therapeutic approach (immune therapy). In this study, it was aimed to investigate immune phenotype changes in peripheral blood cells of epilepsy cases and their values as biomarkers.
Materials and Methods : In this study, 133 patients (between the ages of 18-65) who had follow-up from the Epilepsy Policlinic of Okmeydanı EAH, who had focal and / or generalized seizures between 2018 and 2019, and who did not have a structural lesion except cranial temporal sclerosis in cranial MRI (mean age: 30.80) and 25 age and sex matched healthy control groups (mean age: 35; 20-62 age range) were included. GAD antibodies levels were determined by ELISA kit. Then, peripheral blood immune phenotyping was performed in 14 randomized patients. ANOVA test, FlowJo7.6.5 program, Student-t test, GraphPadPrism programs were used for statistical analysis.
Results : 47 of the patients were diagnosed with focal epilepsy and 86 of them were idiopathic generalized epilepsy. GAD antibody positivity (OD: 3.52 and 1.70) was detected in one of 133 patients, and borderline positivity was found in one (OD: 0.22). The incidence of GAD-65 antibodies in focal epilepsy is 2% (1/47). This patient was accompanied by hippocampus atrophy, which started in the adulthood, but did not show typical MTLE syndrome clinical manifestations. Compared to healthy controls, a decrease in total CD3 positive T cell population and an increase in the regulatory anti-inflammatory T cell (Treg) population that inhibits pro-inflammatory response were detected in epilepsy cases. In addition, the percentages of NK cells were higher in two GAD65 antibody positive cases than all other epilepsy cases and healthy controls.
Conclusion : The detection of GAD antibody in a late-onset MTLE case with atypical features suggests that anti-neuronal antibody research should be considered in such cases. The high NK cell ratios observed in antibody cases were thought to be related to high glial activity in natural immunity. Although decreased T cell and increased regulatory T cell (Treg) ratios were shown in the general epilepsy population, there were no differences between different epilepsy subgroups; It suggests that regardless of the nature and origin of epilepsy, it occurs as a non-specific result of epileptic activity, and peripheral blood immune phenotypes cannot yet be used as an epilepsy biomarker.