Amino benzohidrazid türevi  moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması
Purification of the peroxidase enzyme with afinite chromatography technique using aamino benzohydrazide derivative molecules
Yazar: ŞEYMA MEHTAP KOÇAK
Danışman: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Bu tez kapsamında bitki peroksidaz enzimlerinin saflaştırma çalışmalarına katkı
sağlamak amacı ile 4-amino 2-nitro benzohidrazid, 4-amino 3-nitro benzohidrazid, 4-
amino 2-bromo benzohidrazid ve 4-amino 3-bromo benzohidrazid molekülleri ligant
olarak sentezlendi ve karaturp köklerinden peroksidaz enzimlerinin saflaştırılmasında
kullanıldı. 4-amino benzohidrazid molekülleri metilbenzoat formlarından hidrazin
sentezleri yapılarak karaturp POD enzimi üzerine inhibisyon etkileri incelendi.
Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyali, dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküllere
bağlanarak afinite jelleri sentezlendi ve tek kademede karaturp POD enziminin
saflaştırılması gerçekleştirildi. 4-amino 2-bromo benzohidrazid molekülü
kullanıldığında POD enzimi, karaturptan %28,5 verimle 258 kat, 4-amino 3-bromo
benzohidrazid ile karaturptan %31,4 verimle 677 kat, 4-amino 2-nitro benzohidrazid ile
karaturptan %33,8 verimle 613,3 kat, 4-amino 3-nitro benzohidrazid ile karaturptan
%7,5 verimle 365,6 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimlerin saflığı ile molekül ağırlığı
SDS-PAGE ile kontrol edildi. Karaturp POD enzimi için 43-47 kDa'da tek bant
gözlendi. Sepharose-4B-L-Tirozin-4-amino-3-bromo benzohidrazid kolonu için kolon
tutma kapasitesi, karaturp POD enzimleri için değişik pH, sıcaklık, iyonik şiddetlerde
çalışıldı. Karaturp POD enzimi için optimum şartlar: pH 7,5, sıcaklık 15°C, iyonik
şiddet 0,30 M olarak hesaplandı.

Abstract:
In this thesis, it is aimed to contribute to the purification studies of plant peroxidase
enzymes 4-amino 2-nitrobenzohydrazide, 4-amino 3-nitrobenzohydrazide, 4-amino 2-
bromobenzohydrazide and 4-amino 3-bromobenzohydrazide molecules was synthesized
as a ligand and was used for the purification of peroxidase enzymes from radish roots. 4
amino benzohydrazide molecules was synthesized from methly benzoate form to obtain
benzohydrazide molecules and effects of inhibition on the black radish POD enzyme
were studied. Sepharose-4B-L-Tyrosine gel material was synthesized by binding to
molecules displaying alternating inhibition effect, and purification of the single-step
POD enzyme was performed. When 4-amino 2-bromo benzohydrazide was used as a
ligand for the black radish POD enzyme was purified 258 fold with a yield of 28.5%, 4-
amino 3-bromo benzohydrazide 677 fold with a yield of 31.4%, 4-amino 2-
nitrobenzohydrazide 613.3-fold with yield of 33%, 4-amino 3-nitro benzohydrazide
365,6 fold with yield of 7,5%. Molecular weight was controlled by purity of the
purified enzymes by SDS-PAGE. Single band at 43-47 kDa was observed for the black
radish POD enzyme. Column retention capacity for Sepharose-4B-L-Tyrosine-4-amino-
3-bromo benzohydrazide column was studied on different pH, temperature, ionic
strengths for black radis POD enzymes. Optimum conditions for black radish POD
enzyme was calculated as a pH 7.5, temperature 15 ° C, ionic strength 0.30 M.