Rat modelinde mitomisin C 'nin timpanik membran perforasyonuna ve yara iyileşmesinde bFGF, TGF-B1, KGF-1 ekspresyonuna etkisi,deneysel çalışma
Effects of mitomycin-C on tympanic membrane perforation wound healing and expressions of BFGF, TGF-B1, KGF-1 in a rat model, an experimental study
Yazar: HATİCE DURAK
Danışman: DOÇ. DR. SİNAN ATMACA
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kulak Burun Boğaz Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Kulak Burun ve Boğaz = Otorhinolaryngology (Ear-Nose-Throat)
Dizin: Büyüme maddeleri = Growth substances ; Fibroblast büyüme faktörü = Fibroblast growth factor ; Keratinositler = Keratinocytes ; Mitomisin = Mitomycins ; Timpanik membran = Tympanic membrane ; Transforme edici büyüme faktörleri = Transforming growth factors ; Yara iyileşmesi = Wound healing

Özet:
Amaç: Bu çalışmanın amacı, timpanik membran yara iyileşmesinde topikal mitomisin C' nin büyüme faktörleri salımına etkisini saptamaktır. 
Gereç: Ağırlıkları 250-300 gr arasında değişen 20 erkek, 20 dişi toplam 40 Wistar albino cinsi yetişkin rat, 5 eşit gruba ayrıldı. Birinci gruba herhangi bir işlem uygulanmadan sakrifiye edilerek normal timpanik membranları eksize edildi. Diğer ratların her iki kulaklarına koter miringotomi işlemi uygulandı. Bu ratların sağ kulak zarı perforasyonu üzerine 0,4 mg/ ml mitomisin C, sol kulak zarı perforasyonu üzerine ise salin içeren gelfoamlar 5 dk süre ile uygulandı. İkinci, 3, 4 ve 5. gruplar sırası ile 3, 7, 14 ve 30. günlerde perforasyon kapanma durumları otomikroskopik olarak kontrol edildikten sonra sakrifiye edildi. Ratların perforasyon kapanma durumları salin ve mitomisin C grubunda kaydedildikten sonra karşılaştırıldı. Tüm gruplarda kulak zarında epitel, fibroblast, makrofajlarda TGF-β1, bFGF, KGF-1 salınımları immünhistokimyasal boyama yöntemi ile değerlendirildi ve sonuçlar karşılaştırıldı.
Bulgular: Salin ve mitomisin C grubunda 7 ve 14. günde tam iyileşen perforasyon sayısı açısından istatistiksel olarak anlamlı fark mevcuttu. Bu günlerde mitomisin C grubunda salin grubuna göre tam iyileşen perforasyon sayısının anlamlı olarak daha az olduğu görüldü(p< 0,05). İmmünohistokimyasal değerlendirmede iki grup arasında günler arasında bFGF, KGF-1 salınımı açısından anlamlı fark gözlenmedi. TGF-β1 salınımı 3. günde zar makrofajlarında mitomisin C grubunda salin grubuna göre anlamlı olarak fazlaydı(p= 0,001).
Sonuç: Mitomisin C' nin akut travmatik timpanik membran perforasyonlarına uygulanması perforasyon kapanma süresini geciktirmektedir. Perforasyon sonrasında timpanik membranda TGF-β1, bFGF, KGF-1 salınımları farklı günlerde artmaktadır. Mitomisin C, bFGF ve KGF-1 salınımlarını kontrol grubuna göre anlamlı fark yaratacak düzeyde etkilemezken,  3. günde TGF-β1 salınımını arttırmaktadır.

Anahtar Kelimeler:  timpanik membran yara iyileşmesi, mitomisin C, TGF-β1, bFGF, KGF-1

Abstract:
Aim: The purpose of this study is to evaluate the effect of topical mitomycin C on growth factor expression in tympanic membrane wound healing.
Method: Forty -twenty male and twenty female- adult Wistar albino rats, varied 250-300 grams in weight were divided into five groups. In the first group, no intervention was performed, the intact tympanic membranes were excised after the rats were sacrified. In the other groups, both ears of rats underwent an electrocautery myringotomy procedure. Gelfoams soaked in 0,4 mg/ml mitomycin C solution were appied to the perforations of the right sided ears for 5 minutes, and saline solution to the left side with the same manner. Second, 3rd, 4th and 5th groups were examined otomicroscopically for perforation closure and were sacrified sequentially on the 3rd, 7th, 14th and 30th days. Closure formation at the perforations were noted and compared between the groups. In all groups, TGF-β1, bFGF, KGF-1 expressions of tympanic membrane epithelia, fibroblasts and macrophages were evaluated by immunohistochemical staining and compared among the groups.
Results: Number of complete perforation closure was significantly lesser in the mitomycin C group with respect to saline group on the 7th and the 14th days (p<0.05). At immunohistochemical study, no significant differences in bFGF, KGF-1 expressions were observed between groups with an exception; on the 3rd day, expression of TGF-β1 from macrophages were more elevated in the mitomycin C group when compared with the saline group (p=0,001).
Conclusion: Application of mitomycin C to the acute tympanic membrane perforations delays the closure duration. After the perforation is created, TGF-β1, bFGF, KGF-1 expressions elevate on different days in the tympanic membranes. Mitomycin C has unsignificant effects on the expressions of bFGF and KGF-1, but a remarkable elevation on TGF-β1 expression on the 3rd day, with respect to the control group.

Key words:  tympanic membrane wound healing, mitomycin C, TGF-β1, bFGF, KGF-1