Kranial defekt uygulanmış sıçanlarda ankaferd(ABS) uygulamasının kemik rejenerasyonu üzerine olan etkilerinin immünohistokimyasal olarak değerlendirilmesi
Immunohistochemical evaluation of the effects of ankaferd(ABS) application on the bone regeneration in the rats applied cranial defect
Yazar: SÜLEYMAN KARADEMİR
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ HATİCE KÜBRA BAŞALOĞLU ; DOÇ. DR. MEHMET TURGUT
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Ankaferd kanama durdurucu = Ankaferd bloodStopper ; Kafa yaralanmaları = Head injuries ; Kemik rejenerasyonu = Bone regeneration ; Osteogenez = Osteogenesis ; Sıçanlar = Rats ; Yaralar ve yaralanmalar = Wounds and injuries ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Kranial defekt diğer kemik defektleri gibi; günümüzde sıklıkla karşılaşılan problemlerden biridir. Nöroşirürji pratiğinde, kranial defektlerin onarımı oldukça önemli bir alan olup, tedavisi konusunda hala tartışmalar mevcuttur. Cerrahi pratikte sıklıkla kullanılan hemostatik ajanların kemik rejenerasyonu üzerine olan etkileri konusunda bir çalışma yapmayı hedefledik. Bu çalışmada, gerek deneysel ve gerekse klinik uygulamalarda hemostatik ajan olarak kullanılan Ankaferd Blood Stoper (ABS) 'nin kemik rejenerasyonu üzerine olan olası etkilerinin klasik histolojik, immünohistokimyasal ve sintigrafik olarak değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Ratlar Kontrol (İntakt) grubu (n=10), Beta grubu (Bonewax uygulanan n=10), Alfa grubu (ABS uygulanan n=10) olarak üç gruba ayrıldı. Deneme süresi 8 hafta olarak belirlendi. Ratların kraniumlarında 2 cm. lik cilt insüzyonları yapıldıktan sonra cilt altı diseke edilerek kemiğe ulaşılmıştır. Her üç gruptaki ratların kraniumlarının sağ tarafından Class mini grinder set kullanarak 1.4 mm.lik delikler açıldı.. Cerrahi işlemler intraperitoneal Ketamin (Ketalar®) 100 mg/kg ile sağlanan genel anestezi altında gerçekleştirildi. Sıçanlar çalışma sonunda intraperitoneal Ksilazin (Alfazyne®) 5 mg/kg uygulanarak sakrifiye edildi. Dokular %10'luk formalin solüsyonu ile 48 saat fiksasyonu takiben %20'lik formik asit solüsyonu içerisine alınarak dekalsifikasyona başlandı. Solüsyon haftada bir değiştirildi. Uygun şekilde dekalsifikasyonun gerçekleştiğini tespit etmek için kemiğin deneyin kurgulandığı kısmından uzak kısımlarına toplu iğne batırılarak kontroller yapıldı. Dekalsifikasyon tamamlandıktan sonra dokular bolca yıkanarak rutin histolojik takibe alındı. Gerekli histolojik prosedür uygulanarak parafinde bloklandı. Elde edilen kranial parça örnekleri hem  H&E ile hem de Anti Bone Sialoprotein ile boyanarak boyanarak, osteoblastik aktivite, osteokalcin ve osteonektin yoğunlukları Olympus BX51 ışık mikroskobu kullanılarak yapıldı. Dijital görüntülemeler Olympus C5050 dijital kamera ile yapıldı. Çalışma sonunda elde edilen veriler istatistiksel değerlendirmeye alındı. Ayrıca, bir başka hemostatik ajan olan ve sıkça kullanılan Bonewax'ın kemik osteogenezisi üzerine olan etkileri de (ABS) ile karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir. Yaptığımız çalışmada ABS, primer fonksiyonunu başarılı bir şekilde yerine getirmekle birlikte; kemik rejenerasyonuna da olumlu bir etki oluşturduğu sonucuna varıldı. Bone wax ise primer fonksiyonunu başarılı olarak gerçekleştirmekle birlikte; kemik rejenerasyonuna olumsuz etki yarattığı deneysel çalışmamızda tespit edildi. ABS'nin kanamayı hızla durdurmasının yanı sıra kemik iyileşmesine olumlu etkisini yaptığımız histolojik, immunohistokimyasal ve kemik sintigrafik veriler desteklemektedir. Bu tür cerrahi işlemlerde hem kanamanın hızla kontrolünü sağlıyacak hem de kemik onarımına yardımcı olarak rejenerasyonu hızlandıracak kan durdurucu ajan seçimi önemli olduğunu düşünmekteyiz. ABS'nin bitki içeriklerinin antiinflamatuar, antimikrobiyal özeliklerinin bulunması operasyon sırasında ve postoperatif dönemde çeşitli komplikasyonların önlenmesi açısından da değerlendirilmesi gerektiğini düşünüyoruz.

Abstract:
The cranial defect is one of the most frequently encountered problems of today, like other bone defects. The repair of the cranial defects is a highly significant domain in the neurosurgery practice, and there is still controversy on its treatment. We aimed at carrying out a study on the effects of the hemostatic agents that are commonly used in the surgical practice on the bone regeneration. The aim of this study is to conduct the classical histological, immunohistochemical and scintigraphic evaluation of the possible impacts of the Ankaferd Blood Stopper (ABS), which is used as a hemostatic agent both in the experimental and clinical applications, on the bone regeneration. The rats were divided into three groups: Control (Intact) group (n=10), Beta group (in which Bonewax was applied, n=10) and Alpha group (in which ABS was applied, n=10). The trial period was determined to be 8 weeks. Following the performance of 2 cm skin incisions in the rat craniums, the bone was revealed through the subcutaneous dissection. 1.4 mm holes were drilled on the right side of the rat craniums by using a Class mini grinder set in all three groups. The surgical procedures were performed under general anesthesia through administration of intraperitoneal Ketamine (Ketalar®) 100 mg / kg. The rats were sacrificed by applying intraperitoneal Xylazine (Alfazyne®) 5 mg / kg at the end of the study. The tissues were taken into the 20% formic acid solution following the 48 hours fixation with the 10% formalin solution, and the decalcification was started. The solution was altered once a week. The controls were performed by pinning starting from the section of the bone where the trail was conducted to the distal parts in order to determine whether the decalcification was properly done. After the decalcification was completed, the tissues were irrigated with plenty of water and routine histological follow-up was conducted. The paraffin was blocked via applying the necessary histological procedure. The osteoblastic activity, osteolacin and osteonectin concentrations were practiced through Olympus BX51 light microscope by staining the obtained samples of cranial parts with both H&E and Anti-Bone Sialoprotein. The digital imaging was realized with the Olympus C-5050 digital camera. The data acquired at the end of the study were taken into statistical evaluation. Furthermore, the impacts of Bonewax that is another hemostatic agent and frequently used on the osteogenesis were compared with the ABS. In our study, it has been concluded that not only the ABS can successfully meet the primary function, but also it yields affirmative effect on the bone regeneration. Bonewax, on the other hand, has been detected to satisfactorily fulfill the primary function, but it also leads to negative impact on the bone regeneration. The histological, immunohistochemical and bone scintigraphic data of the study support the affirmative impact of the ABS on the bone healing apart from the quick stop of hemorrhage. We believe that it is vital to select a hemostatic agent which provides a quick control of the hemorrhage and accelerates the regeneration by assisting the bone repair in these types of surgical procedures. In addition, we think that anti-inflammatory and antimicrobial features of ABS plant contents are required to be assessed regarding the hindrance of various complications during the operation and postoperative period.