Türkiye'de endemik olarak yetişen centranthus longiflorus bitkisinin fitokimyasal içeriğinin belirlenmesi ve sitotoksik aktivitesinin araştırılması
Identification of phytochemical constituents of endemic species centranthus longiflorus grown in Turkey and evaluation of its cytotoxic effect
Yazar: ŞEYMA BAKIRCI
Danışman: DOÇ. DR. HAKAN AŞKIN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı / Genetik Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Genetik = Genetics

Özet:
Kadınlarda görülen kanser tipleri arasında meme kanseri ilk sırada yer almaktadır. Her 100 kadından 12,5'i meme kanserine yakalanma riski ile karşı karşıyadır. Günümüzde kemoterapinin olumsuz etkilerine karşı özellikle bitki ve bitki ekstraktlarının kullanıldığı alternatif tedavi yolları üzerindeki araştırmalar yoğunlaşmıştır. Bitki ve bitki ekstraktlarının kanser hücrelerinin aşırı çoğalmalarını engelleyici etkileri (sitotoksik etkileri) sahip oldukları kimyasal bileşenlerine dayandırılmıştır.
Centranthus longiflorus (Valerianaceae), alternatif tıpta sakinleştirici ve antispazmodik amaçlar için kullanılmaktadır. Geleneksel Türk ilaçlarında kullanılan Türkiye orjinli C. longiflorus bitkisi uyku bozuklukları için kullanılmasına rağmen ailesel hiperkolesterolemi, diyabet, koroner arter hastalıkları ve kanser için in vitro biyolojik aktiviteleri araştırılmamıştır. 
Bu çalışmanın amacı, meme kanseri hücre hattı (MCF-7) üzerinde C. longiflorus'un sitotoksik etkilerini ve bununla ilişkili muhtemel mekanizmayı göstermektir. C. longiflorus'un tüm bitki kısımlarından elde edilen bitki ekstraktı Agilent GC-MS sistemi kullanılarak analiz edildi. C. longiflorus'un doz ve zaman bağımlı sitotoksik aktivitesi MTT hücre proliferasyon deneyi ile değerlendirildi. Analizler için üreticinin protokolü izlendi. Daha sonra CDK1, CDK4, p53 ve β-aktin genlerinin mRNA ekspresyon seviyeleri Real Time PCR ile belirlendi.
MCF-7 meme kanseri hücreleri üzerinde antiproliferatif etki test edildiğinde bu ekstrakt, IC50> 50 µg/µl aralığında önemli IC50 değeri gösterdi. C. longiflorus'un etanolik ekstraktı, negatif kontrole kıyasla MCF-7 hücrelerine karşı seçici toksisite gösterdi. Sonuçlarımıza göre MCF-7 hücrelerindeki canlılığın C. longiflorus'un 50 μg/µl dozunda %53'e kadar düştüğü gözlendi. CDK1, CDK4 ve p53 genlerinin ekspresyon seviyelerinde değişiklikler belirlenmesine rağmen bu değişiklikler istatistiksel olarak önemli değildi (p>0,05).
Bu sonuçlar, C. longiflorus'un etanolik ekstraktının kanser hücrelerinin proliferasyonunu azaltabildiğini belirtmektedir ve gelecekte yeni antikanser ilaçların geliştirilmesinde umut vaad edici bir role sahip olabilir.

Abstract:
Breast cancer is ranked the first among the types of cancer in women. 12,5 out of every 100 women are faced with the risk of developing breast cancer. Today, against the negative effects of chemotherapy treatment specifically focused research on alternative ways to administrate with plants and plant extracts. The inhibitory effects (cytotoxic effect) of excessive proliferation of cancer cells with plants and plant extracts are based on chemical ingredients they have.
Centranthus longiflorus (Valerianaceae) is used for alternative medicine for sedative and antispasmodic purposes. A plant of Turkish origin, C. longiflorus used as traditional Turkish medicine have remained uninvestigated for familial hypercholesterolemia, diabetes mellitus, coronary artery disease and cancer for their in vitro biological activity despite their use for sleep disorders.
The purpose of this study was to show the cytotoxic effects of C. longiflorus, and possible mechanisms involved on the breast cancer (MCF-7) cell line. The plant extract obtained from the whole plant parts of C. longiflorus was analyzed using a Agilent GC-MS system. Dose and time dependent cytotoxic activity of C. longiflorus were evaluated by MTT cell proliferation assay. Manufecturer's protocol was followed for analyses. Then, CDK1, CDK4,  p53 and β-actin mRNA expression levels were determined by Real Time PCR. 
When tested for antiproliferative action on MCF-7 breast cancer cells, these extracts exhibited reasonable IC50 values in the range IC50> 50 µg/µl. Ethanolic extract of C. longiflorus exhibited selective toxicity against MCF-7 cells compared to and negative coltrol. According to our results, it was observed that viability of MCF-7 cells decreased to 53% at the 50 μg/µl dose of C. longiflorus. Although alterations in mRNA expression levels of CDK1, CDK4 and p53 genes were determined, this alterations were statistically insignificant (p>0,05).
These results indicate that ethanolic extract of C. longiflorus is capable of reducing cancer cell proliferation and may have a encouraging role to play in the development of novel anticancer drugs in the future.