Metastatik HER2 pozitif meme kanserinde dolaşan tümör hücreleri, solubl her2 reseptörü ve muc4 ekspresyonunun prognostik rolü
The impact of circulating tumor cells, soluble HER2 receptor andMUC4 expression on prognosis of metastatic HER2 positive breast cancer
Yazar: LÜTFİYE DEMİR
Danışman: PROF. DR. HÜLYA ELLİDOKUZ ; PROF. DR. YASEMİN BAŞBINAR
Dokuz Eylül Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Onkoloji Ana Bilim Dalı / Temel Onkoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Onkoloji = Oncology

Özet:
Solubl HER2 (sHER2), dolaşan tümör hücrelerinin (CTC) düzeyi ve bu hücrelerin HER2 ve MUC4 ekspresyonu gibi parametrelerin metastatik HER2 pozitif meme kanserindeki prognostik ve prediktif etkileri net değildir. Bu çalışmada, seri CTC analiziyle hem sayıdaki değişim, hem de HER2 ve MUC4 ekspresyonuna göre CTC fenotipindeki değişimin incelenmesi, ayrıca solubl HER2 düzeylerinin araştırılması planlanmıştır.
      Kasım 2015 ve Haziran 2018 tarih aralığında, 9 merkezin katılımıyla 26 hasta analiz edildi. CTC analizi için üç adet 7,5 ml EDTA'lı tüpte kan örneği, sHER2 içinse bir adet kuru tüpe 4-5 ml kan örneği alınarak tedaviye başlamadan önce, tedavinin 3-4. ayında ve  6-8. ayında olmak üzere üç kez soğuk koruma zinciriyle Dokuz Eylül Üniversitesi Onkoloji Ensititüsü Moleküler Onkoloji Laboratuarlarına gönderildi. CTC hücre zenginleştirmesi için dansiteye göre izolasyon yapan Oncoquick tüpleri kullanıldı. Akım sitometrisiyle CD45(-) EPCAM(+) CTC hücreleri ayrıldı; HER2 ve MUC4 ekspresyonlarına göre CTC fenotipleri tanımlandı. Solubl HER2 düzeyleri ng/ml cinsinden belirlendi. Tüm değişkenlerin klinikopatolojik özelliklerle ve prognozla ilişkisi araştırıldı.
     Tedavi öncesi CTC sayısı medyan 22(8 ml kanda) [bölgesel hastalıkta:20, metastatik hastalıkta:24] olarak saptandı; CTC sayısı <5 olan sadece 2 hasta vardı. Bazal CTC değerinin ölüm ya da metastazı predikte eden cut-off değeri belirlenemedi. Medyan sHER2 düzeyi 22,1 ng/ml bulundu. HER2 ve MUC4 pozitiflik oranı tedavi öncesi analizde sırasıyla %38,6 ve %35,8; ikinci analizde %23,2 ve %65,5; son analizde %95,8 ve %84,1 saptandı. Seri analizlerde CTC'de HER2 ve MUC4 ekspresyonunun arttığı gözlemlendi. Bazal HER2(+) CTC oranı fazla olan ve sHER2 düzeyi medyanın altında olan hastalarda genel sağkalım süreleri anlamlı şekilde uzun saptandı. Geç seri CTC'de HER2 ve MUC4 birlikteliğinin fazla olduğu olgularda da genel sağkalım süreleri uzun saptandı.
      İleri evre HER2 pozitif meme kanserli hastalarda CTC sayıları yüksek, fenotip değişkendir. HER2 pozitif CTC oranı ve düşük sHER2 iyi prognozla ilişkilidir. Seri CTC analizlerinde MUC4 ekspresyonunun artması, MUC4 hedefli tedavilerin preklinik/klinik çalışmalarla araştırılması gerekliliğini düşündürmektedir.

Abstract:
The prognostic and predictive effects of parameters such as soluble HER2 (sHER2), the number of circulating tumor cells (CTC) and HER2 and MUC4 expression of these cells in metastatic HER2 positive breast cancer are not clear. In this study, we planned to examine both the change in number and the change in CTC phenotype according to HER2 and MUC4 expression by serial CTC analysis, and also to investigate the effect of soluble HER2 levels.
      Between November 2015 and June 2018, 26 patients were analyzed with the participation of 9 centers. Blood samples are taken in three 7.5 ml EDTA tubes for CTC analysis, and 4-5 ml blood samples are taken in one dry tube for sHER2, before starting the treatment, at the 3-4th month and 6-8th month of treatment. The samples were sent to Dokuz Eylul University Oncology Institute Molecular Oncology Laboratories with a cold protection chain for three times. Oncoquick tubes, which isolate the cells according to density were used for CTC cell enrichment. CD45(-) EPCAM(+) CTC cells were separated by flow cytometry; CTC phenotypes were defined according to HER2 and MUC4 expressions. Soluble HER2 levels were determined in ng/ml. The relationship of all variables with clinicopathological features and prognosis was investigated.
     The median CTC count before treatment was 22 (8 ml in blood) [in regional disease: 20, in metastatic disease: 24]; There were only 2 patients with CTC count <5. The cut-off value of basal CTC value predicting death or metastasis could not be determined. The median sHER2 level was 22.1 ng/ml. HER2 and MUC4 positivity rates were 38.6% and 35.8%, respectively, in the pre-treatment analysis; 23.2% and 65.5% in the second analysis; in the last analysis, 95.8% and 84.1% were detected. In serial analyzes, it was observed that HER2 and MUC4 expression increased in CTC. Overall survival times were found to be significantly longer in patients with higher baseline HER2(+) CTC and sHER2 levels below the median. In cases with high HER2 and MUC4 co-occurrence in late series CTC, overall survival times were also found to be long.
      Patients with advanced HER2 positive breast cancer have high CTC counts and a variable phenotype. HER2 positive CTC rate and low sHER2 are associated with good prognosis. The increase in MUC4 expression in serial CTC analyzes suggests that MUC4-targeted therapies should be investigated with preclinical/clinical studies.