Karaciğer ve meme kanseri hücrelerinde çoklu ilaç direnci ve apoptotik proteinlerin gen ekspresyon düzeylerinin incelenmesi
Examining the gene expression levels of apoptotic proteins and multi drug resistance in liver and mammary cancer cells
Yazar: GÖZDE AYDIN
Danışman: YRD. DOÇ. DR. AYŞE ERCAN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Genetik = Genetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Doksorubisin = Doxorubicin ; Genler-Bcl-2 = Genes-Bcl-2 ; Karaciğer = Liver ; Karaciğer neoplazmları = Liver neoplasms ; Meme = Breast ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Protein-P53 = Protein-P53 ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
Bu tez çalışmasında, kanser hücrelerinde işleyişi hasarlı olan apoptotik, anti-apoptotik mekanizmaların ve çoklu ilaç direnci yolakların incelenmesi amacıyla, karaciğer kanseri hücre hattı (HepG2) ve meme kanseri hücre hattı (MCF-7) kullanılmıştır. Bu çalışmanın amacı: iki farklı kanser hücre hattını en etkili antikanser ilaçlardan biri olan Doksorubisin ile muamele ederek, apoptozun uyarılması ve apoptozda önemli rol oynayan birbiriyle ilişkili p53, Bcl-2 ve MDR-1 genlerinin ekspresyon düzeylerinin incelenmesidir. Bu amaçla hücreler ilaç ile muamele edilerek büyütülmüş, sonrasında RNA'ları saflaştırılmış, cDNA'ya dönüştürülmüş ve üç genin ekspresyon düzeyini belirlemek amacıyla RT-PCR cihazında kullanılmıştır. HepG2 hücrelerinde 50 nM, 200 nM, 400 nM ve 800 nM ilaç uygulanmasından sonra kontrol gruplarına kıyasla deney gruplarında, p53 geninin ekspresyon düzeylerinin sırasıyla 2,176, 1,718, 1,524, 1,225 kat arttığı, Bcl-2 gen ekspresyon düzeylerinin sırasıyla 4,182, 6,512, 5,641, 3,910 kat arttığı ve MDR-1 gen ekspresyon düzeyinin ise uygulanan ilaç dozundan bağımsız olarak değişmediği gözlenmiştir. MCF-7 hücrelerinde 50 nM, 200 nM, 400 nM ve 800 nM ilaç uygulanmasından sonra kontrol gruplarına kıyasla deney gruplarında, p53 gen ekspresyon düzeylerinin sırasıyla 0,520, 0,349, 0,419, 0,338, Bcl-2 gen ekspresyon düzeylerinin sırasıyla 0,349, 0,269, 0,115, 0,096 ve MDR-1 gen ekspresyon düzeylerinin 0,612, 0,382, 0,282, 0,182 kat azaldığı gözlenmiştir. İki kanser hücre hattında p53 genomik dizisinin 72. kodonunda polimorfizm çalışması, restriksiyon enzimleri kullanılarak yapılmıştır. Bu deneyin sonucunda ise her iki hücre hattı için, p53 genomik dizisindeki 72. kodonun heterozigot Arg/Pro genotipine sahip olduğu tespit edilmiştir.

Abstract:
In this study, liver cancer cell line (HepG2) and mammary cancer cell line (MCF-7) were used with the aim of examining the apoptotic-antiapoptotic mechanisms and multi drug resistance pathways which are defective in cancer cells. The aim of this study: is to trigger apoptosis by treatment of two different cancer cell lines with one of the most effective anticancer drug Doxorubicin and to investigate the expression levels of p53, Bcl-2 and MDR-1 genes which are related with each other and play an important role in apoptosis. With this purpose, cells were grown by treating with the increasing doses of Doxorubicin. Their RNA?s were purified, converted into cDNAs and used in Real Time PCR device in order to determine the expression levels of these genes. It is observed in HepG2 cells, compared to the control groups after 50 nM, 200 nM, 400 nM ve 800 nM drug treatment, p53 gene expression level is respectively 2,176, 1,718, 1,524, 1,225 fold increased, Bcl-2 gene expression level is respectively 4,182, 6,512, 5,641, 3,910 fold increased and MDR-1 gene expression level is not dependent to the treated drug dose. It is observed in MCF-7 cells, compared to the control groups after 50 nM, 200 nM, 400 nM ve 800 nM drug treatment, p53 gene expression level is respectively 0,520, 0,349, 0,419, 0,338, Bcl-2 gene expression level is respectively 0,349, 0,269, 0,115, 0,096 and MDR-1 gene expression level is 0,612, 0,382, 0,282, 0,182 fold decreased. In two cancer cell lines, p53?s genomic sequence 72nd codon polymorphism study was done by using restriction enzymes. As a result of this experiment for both two cell lines, it is identified that 72nd codon in p53 genomic sequence is having heterozygote Arg/Pro genotypes.