Bruseloz'da spesifik T hücre yanıtının regülasyonu
The regulation of spesifik T cell response in brucellosis
Yazar: ESRA KAZAK
Danışman: DOÇ.DR. HALUK BARBAROS ORAL
Uludağ Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2006
Konu: Klinik Bakteriyoloji ve Enfeksiyon Hastalıkları = Clinical Microbiology and Infectious Diseases

Özet:
ÖZETBrucella, insanlarda endokardit, artrit, osteomiyelit, menenjite yol açangram negatif hücre içi bakteridir. Hastalığın kronikleşme riski ve yüksekmorbiditesi nedeni ile etkili aşı ve yeni tanı reaktanlarının geliştirilmesineihtiyaç duyulmuştur. Bu amaçla Brucella antijenlerinden yeni sentetik peptitlergeliştirilmiş ve hayvan modellerinde denenmiştir. Ancak bu peptidlere karşıinsan immün sisteminin yanıtına ait yeterli çalışma yoktur.Çalışmamızda B. abortus'dan elde edilen L7/L12 ve GAPDH peptitlerinekarşı Bruselloz'lu hastaların periferal kan lenfositlerinin profilleri ve sitokinyanıtının araştırılması amaçladık. Akut Bruselloz'lu ve sağlıklı hastaların kanlenfositlerinde bu antijenlere yanıt olarak ortaya çıkan lenfosit alt gruplarındakideğişiklikleri akım sitometrisi ile ve hücre dışı sitokin üretimini bu hücrelerinkültür süpernatantlarında ELISA yöntemi ile araştırdık.Çalışmaya 25 Akut Bruselloz hastası ve 15 sağlıklı birey alındı. Bukişilerden elde edilen periferal mononükleer hücreler PHA, L7/L12, GAPDHile uyarıldıktan sonra lenfosit alt grupları ve hücre dışı sitokin (IFN-Î³, IL-4, IL-10) miktarı ölçüldü. Uyarı sonucu Bruselloz'lu hastalarda hücre dışı IFN-Î³seviyeleri yüksek tespit edildi. Gruplar arasında uyarı sonrası IL-4, IL-10seviyeleri arasında farklılık yoktu. Çalışmada ayrıca CD3+/CD4+, CD3+/CD8+,CD4+/CD25+, CD4+/CD27-, CD3+/CD152+(CTLA4), CD3+/CD69+ lenfositdağılımı araştırıldı. Bu peptidler ile uyarı sonucunda hastalarda CD3+/CD69+lenfosit oranının arttığı saptandı. Ancak diğer lenfosit alt gruplarınındağılımında hasta ve sağlıklı gruplar arasında farklılık tespit edilmedi.Bu çalışmalarda elde edilen veriler ışığında Bruselloz'da koruyucuimmüniteden Th1 tip immünitenin sorumlu olduğunu, GAPDH ve/veyaiiL7/L12'nin yeni Bruselloz aşı preparasyonlarında; bu peptitler ile uyarıyıtakiben IFN-Î³ yapımını temel alan spesifik hücresel immün yanıtı ölçenimmünolojik tanı testlerinde kullanılabileceğini söyleyebiliriz. Bununla birlikteGAPDH ve L7/L12'nin kompleks immünomodülatör etkilerini açıklığakavuşturacak yeni ve daha ileri çalışmalara gereksinim vardır.Anahtar Kelimeler: Akut Bruselloz, GAPDH, L7/L12, Sitokin, Lenfosit AltGrupları, IFN-Î³, IL-4, IL-10.iii

Abstract:
SUMMMARYThe Regulation Of Spesific T Cell Response In BrucellosisBrucella is a gram-negative intracellular bacterium that leads toendocarditis, arthritis, meningitidis and osteomyelitis in humans. Because ofthe chronicity risk of the disease and high morbidity, there are requirementsfor effective vaccines and spesific diagnostic reagents to eradicatebrucellosis. For that purpose novel synthetic peptides derived from Brucellaantigens were generated and tested in animal models. However there is alittle known about the human immune response to these peptides.In this study we investigated the profiles of the peripheral bloodlymphocytes and cytokine responses of Acute Brucellosis patients andhealthy subjects in response to two novel peptides derived from Brucella;GAPDH and L7/L12 by evaluating changes in lymphocyte subpopulationsand by measuring the amount of cytokine productions in culture supernatantsusing flow cytometry and ELISA, respectively.Twenty-five Acute Brucellosis patients and fifteen healthy subjects wereincluded in the study. The peripheral blood mononuclear cells obtained fromAcute Brucellosis patients (study group) and healthy subjects (control group)were stimulated with PHA, L7/L12, GAPDH prior to the measurement ofextracellular cytokines (IFN-Î³, IL-4, IL-10) and evaluation of the lymphocytessubgroups. As a result of stimulation, extracellular IFN-Î³ levels increased inbrucellosis patients. There were no differences in the levels of IL-4, IL-10under the stimulation with these peptides between the groups. AlsoCD3+/CD4+, CD3+/CD8+, CD4+/CD25+, CD4+/CD27-, CD3+/CD152+(CTLA4),CD3+/CD69+ lymphoctes were counted. The CD3+/CD69+ counts in patientsincreased under the stimulation with L7/L12, GAPDH. However there wereivno statistically significant differences in the other lymphocytes subpopulationsbetween the healthy and patient groups.In the light of the data obtained in our study, it can be suggested thatTh1 type spesific cellular immunity is responsible for protective immunity inBrucellosis. The more potent vaccines may be developed by includingL7/L12, GAPDH and diagnostic tests using these peptides may be evaluated.However, there are needs for new and further studies which reveals thecomplex immunomodulatory effects of GAPDH and L7/L12.Key Words: Acute Brucellosis, GAPDH, L7/L12, Cytokine, LymphocyteSubpopulation, IFN-Î³, IL-4, IL-10v