Tavşanlarda uygulanan glokom filtran cerrahisinde everolimus uygulamasının skar oluşumu üzerine etkisinin   mitomisin-c ile karşılaştırmalı olarak incelenmesi
Anti̇-proli̇ferati̇on effects of everoli̇mus and comparati̇on wi̇th mi̇tomyci̇n-c i̇n rabbi̇t glaucoma fi̇ltrati̇on surgery
Yazar: RUKEN ÇİNİK
Danışman: PROF. DR. NURŞEN YÜKSEL
Kocaeli Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases

Özet:
Amaç: Medikal tedavi ile kontrol altına alınamayan glokom olgularında kullanılan yöntem cerrahi tedavidir. Glokom filtran cerrahisinde başarı şansını azaltan en önemli faktör olan skar gelişimini engellemek amacı ile çeşitli anti-proliferatif ajanlar kullanılmaktadır. Son zamanlarda, Everolimus organ transplantasyonunda rejeksiyonu engellemek amacı ile kullanılan ve daha birçok alanda çalışmaları yapılan yeni ve başarılı bir antiproliferatif ajandır. Bu çalışmada, glokom filtran cerrahisinde Everolimus'un yara yerinde skar oluşumu üzerinde etkilerinin Mitomisin-C tedavisiyle karşılaştırmalı olarak incelenmesi amaçlandı.
Method: Tavşanlar (n=30) randomize 3 gruba ayrıldı ve sağ gözlerine trabekülektomi cerrahisi uygulandı. Grup 1'deki hayvanlara cerrahi sırasında yara yerine Everolimus emdirilmiş sponge uygulandı. Grup 2'ye ise MMC emdirilmiş sponge uygulandı. Grup 3'e cerrahi sürecinde tedavi uygulanmadı. Cerrahi sonrası 28 gün boyunca, gözlerin intraoküler basınçları ölçüldü, blebteki morfolojik değişiklikler gözlemlendi ve biomikroskopik muayeneleri yapılarak oluşabilecek postoperatif komplikasyonlar açısından değerlendirildi. 28. günde tavşanların opere edilen gözleri enüklee edildi. Gözlerin histolojik incelemesinde fibroblast hipertrofisi ve yeni kollojen lif proliferasyonu açısından değerlendirildi. Ayrıca, immunohistokimyasal olarak TGF -β1 (proinflamatuar sitokin), , metaloproteinazlar (MMP-2, MMP-9) ve bir hücre proliferasyon belirteci olan PCNA ekspresyonları araştırıldı. Apoptoz için TUNEL yöntemi kullanıldı.

Sonuç:  Everolimus'un cerrahide iyi tolere edilebilir bir ajan olduğu görüldü. Blep ömrünün Grup 1'de  Grup 2'ye oranla anlamlı oranda daha uzun olduğu saptandı (p <0,05). Göz içi basıncındaki düşüşün Everolimus grubunda diğer gruplara göre anlamlı oranda daha uzun süreli olduğu tespit edildi (p <0,05). TGF -β1, MMP-2, MMP-9 ve PCNA ekspresyonlarının Grup 1 de diğer gruplara oranla belirgin şekilde azaldığı gözlendi. TUNEL+ hücrelerin Grup 1'de anlamlı şekilde arttığı saptandı.
Tartışma : Everolimus'un filtran glokom cerrahisinde fibroblast proliferasyonu baskılayarak skar oluşumunun önlenmesinde güvenilir ve efektif bir etkiye sahip olabileceği düşünülmektedir.

Abstract:
Purpose:
 It  is known that wound healing affects success of glaucoma filtering surgery in negative way. Antimetabolities and antifibrotic agents were being used to modulate wound healing. Everolimus is a macrolide currently used as an immunomodulatory medication, an anti-tumor agent, or an anti-viral agent, featuring low toxicity and high efficiency. The purpose of this study is to investigate the effects of a Everolimus on the conjunctiva and scleral wound healing process after filtration surgery in rabbit eyes and it is comparation with Mitomycin-C.
Methods:
In this study, thirty female New Zelland Albino rabbits randomly subdivided into 3 equal groups. Limbal based trabeculectomy applied to three groups. Group I was consisted of rabbits in which trabeculectomy and inraoperative 30 ng/ml everolimus was applied under scleral and conjunctival flap for 3 minutes . Group II was consisted of rabbits in which 0.2 mg/ml mitomycin-C was applied for 3 minutes .And Group III was consisted of rabbits in which trabeculectomy  without adjunctive treatment. All investigations involving rabbits, including IOP measurements, slit lamp examination. Operated eyes of rabbits was enucleated at end of 28th day of operation, on histopathological sections which were taken from bleb sites Hematoxylen-Eosin with fibroblasts and new collagen fibers were evaluated, additionally immunohistochemically TGF -β1, MMP-2 and MMP-9  staining densities were evaluated. For apoptotic cells analysis, the terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick end labeling (TUNEL) method was used.

Results:
Everolimus  were well tolerated in this surgery.  Group I had the longest bleb survival time in comparison with other groups (p <0,05). There were significant differences in IOP readings between Group I and other groups at the last follow-up (p<0.05). Immunohistochemistry assay showed that staining density of TGF -β1, MMP-2 and MMP-9   was lower in the Group I  compared to other groups . TUNEL assay showed a significant increase in the number of apoptotic fibroblasts around the surgical area in Group I.

Conclusions:
Everolimus can inhibit inflammatory cell activity, impede fibroblast proliferation activity, and induce fibroblast apoptosis in the filtration surgery sites in rabbit. The results indicate a safe and effective treatment strategy in anti-scaring treatment in glaucoma surgery.