Bazı doğal bileşiklerin antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi, AChE ve BChE enzimleri ile hCA I ve hCA II izoenzimleri üzerine inhibisyon etkilerinin araştırılması
Determination of antioxidant capacity of some natural compounds and investigation of their inhibition effects on AChE and BChE enzymes and hCA I and hCA II isoenzymes
Yazar: LEYLA POLAT KÖSE
Danışman: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2016
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Tez kapsamında Secoisolariciresinol (SECO), Secoisolariciresinoldiglicoside (SDG), Dietilstilbestrol, Enterodiol (END), Enterolakton (ENL), Nordihidroguaretik asit (NOR) ve α-Conidendrin (α-CON)'ın antioksidan ve radikal giderme kapasiteleri değerlendirildi. Bu amaçla Fe3+-Fe2+ indirgeme kapasitesi, kuprak metodu ile kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme kapasitesi, FRAP metoduna göre indirgeme kapasitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH·) giderme, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS∙+) giderme kapasiteleri incelendi. Elde edilen sonuçlar, birer standart antioksidan olan BHA, BHT α-tokoferol ve troloks'un kapasiteleri ile karşılaştırıldı. Diğer yandan, bu fenolik bileşiklerin AChE ve BChE enzimleri üzerindeki inhibisyon özellikleri incelendi. Elde edilen sonuçlar ile her bir molekül için IC50 ve Ki değerleri hesaplanarak inhibisyon türleri belirlendi. Çalışmanın son basamağında ise fenolik bileşiklerin, insan eritrositlerinden saflaştırılan karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (hCA I ve II) üzerindeki inhibisyon etkileri araştırıldı. İlk olarak hCAI ve II izoenzimleri Sefaroz-4B-L-Tirozin afinite kolon kromatografisi tekniği kullanılarak saflaştırıldı. Enzim saflığını kontrol etmek için, SDS-PAGE uygulandı ve tek bant gözlendi. Çalışma kapsamında kullanılan fenolik bileşiklerin hCA I ve II izoenzimlei üzerindeki inhibisyon etkileri esteraz aktivite yöntemi uygulanarak incelendi ve her bir molekül için IC50 ve Ki değerleri hesaplanarak inhibisyon türü belirlendi.

Abstract:
In this thesis, antioxidant and radical scavenging capacities of Secoisolariciresinol (SECO), Secoisolariciresinoldiglicoside (SDG), Diethylstilbestrol, Enterodiol (END), Enterolacton (ENL), Nordihydroguaretic acid (NOR) and α-Conidendrin (α-CON) were evaluated. For this purpose Fe3+-Fe2+ reducing capacity, cuprac method and cuprac ions reducing capacity (Cu2+), FRAP method reducing capacity, DPPH· free radical scavenging capacity, ABTS∙+ radical scavenging capacity were examined. These acquired results were compared with capacities of BHA, BHT, α-tocoferol and trolox, which being a standart antioxidant. Moreover, inhibition effects of these phenolic materials on AChE and BChE enzymes were studied. With these results, inhibition type were determined and IC50 and Ki values calculated for each molecule. In the last step of this study, inhibition effects of phenolic substances were searched on hCA isoenzymes I and II purified from human erythrocytes. For this purpose both isoenzymes were purified by using Sefaroz-4B-L-Tyrosine affinity column chromatography method. To check the purity of enzyme SDS-PAGE was applied and single band had been observed. Scope of work, inhibition effects of used phenolic materials on hCA I and II isoenzymes were examined by applying esterase activity methodology and inhibition type were defined by calculating IC50 and Ki values for each molecule.