Mikroenkapsüle edilen Pediococcus pentosaceus ozf suşunun adezyon ve immunmodülatör etkisinin in vivo koşullarda belirlenmesi
Detection of adhesion and immunomodulatory effect of microencapsulated Pediococcus pentosaceus ozf strain  
in vivo conditions
Yazar: MOHAMED MOKRANİ
Danışman: PROF. DR. ÖZLEM OSMANAĞAOĞLU
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Biyoteknoloji = Biotechnology
Dizin: Probiyotikler = Probiotics

Özet:
Bu çalışmada, önceki çalışmalarımız neticesinde anne sütünden izole edilen ve gelecek vaad eden probiyotik bir bakteri olan Pediococcus pentosaceus OZF suşu kalsiyum aljinat (%2) ve peynir altı suyu proteinleri (%5) kullanılarak enkapsüle edilmiş ve ardından liyofilize edilmiştir. Hazırlanan kapsüllerin yüzey morfolojileri taramalı elektron mikroskobunda (SEM) analiz edilmiştir. Peynir altı suyu proteinleri ile kaplanan aljinat kapsüllerine hapsedilen OZF suşunun canlılığında 6 ay boyunca 4ºC'de hiçbir kayıp olmadığı ve kararlı kaldığı bulunmuştur. Enkapsüle edilmiş OZF suşu pH, safra tuzu, pepsin ve pankreatin gibi simüle edilmiş gastrik ve intestinal koşullarda da canlı bulunmuştur. Kapsüle edilen ve edilmeyen OZF'nin gastrointestinal sistemden geçişi,  adezyonu ve aynı zamanda sırasıyla mikrobiyolojik sayım, qPZR ve DGGE kullanılarak fekal mikrobiyota çeşitliliği üzerine olan etkisi kemirgen modelinde (Balb/C fare) analiz edilmiştir. OZF suşu beslemeyi takip eden 6. saatte fekal örneklerde tespit edilmiş, en yüksek oranına 10. saatte ulaşmış ve ardından düşüşe geçerek 24. saatte tamamen kaybolmuştur. 15. gün beslemeyi takip eden 24. saatte, bağırsağa tutunan bakteri sayısı belirlenmiştir. Çalışmanın başlangıcında, her hayvana 8 log kob uygulama yapılmış ve kapsüle edilmeyen OZF ile beslenen grupta bu sayı 2 log olarak bulunmuştur. Bu durum 24 saatte gastrointestinal sisteme tutunan OZF sayısında 6 log azalma olduğunu göstermektedir. Enkapsüle edilen suşun tutunma özelliği de benzer bulunmuştur (2.5 log, p>0.05). Genel mikrobiyotadaki fekal mikrobiyota kompozisyonu bifidobakteriler, Lactobacillus, E.coli ve bakterioides gibi dominant gruplar açısından ilişkilendirilse de, kontrol ve deney grupları arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark belirlenememiştir.

Abstract:
In this study, a promising probiotic bacterium Pediococcus pentosaceus OZF which had been isolated from human breast milk in our previous studies were encapsulated with calcium alginate (2% ) and whey (5%) proteins, followed by lyophilization. Surface morphologies of the prepared capsules were analyzed under scanning electron microscope (SEM). OZF containing alginate capsules that were coated with whey proteins was found to be stable at 4ºC for 6 months without loss of any viability, and encapsulated OZF was found to be viable in simulated gastric and intestinal juice conditions such as pH, bile salts, pepsin and pancreatin. Transit of capsulated and noncapsulated OZF through gastrointestinal system, their adhesions as well as their effects on faecal microbiota variations were analyzed on murine model (Balb/C mice) by microbiological counts, qPCR and DGGE, respectively. OZF strain was detected in feacal samples of animal followed by 6 hours after feeding, reached the highest value in 10th hours and started to decrease after and lost completely at 24 hr. At 24 hours following the 15th day of feeding, the number of bacteria adhered to the intestine was determined. At the beginning of the trial, 8 log cfu was applied per animal and 2 log was found in the group feed with nonencapsulated OZF, which means there was 6 log decrease in the adhesion of OZF to gastrointestinal system at 24 hr. Adhesion properties of encapsulated strain was also found to be the same (2.5 log, p>0.05). As far as the feacal microbial composition on the general microbiota is concerned in terms of dominant groups such as bifidobacteria, Lactobacillus, E.coli and bacterioides, no significal diffecences were recorded between control and experimental groups.