Actinomyces'in insan serviko-vajinal örnekleri ile sitolojik, mikrobiyolojik ve polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yöntemleri kullanılarak araştırılması
The investigation of actinomyces using cytological, microbiological and polymerase chain reaction (PCR) techniques in human cervico-vaginal smears
Yazar: DİLEK KAYA
Danışman: PROF. DR. ŞAYESTE DEMİREZEN
Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Bu çalışmada 200 hastaya ait serviko-vajinal örnekler sitolojik, mikrobiyolojik ve Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) yöntemleri kullanılarak Actinomyces açısından incelenmiştir. İncelenen 200 örneğin 1'inde (%0.5) sitolojik, 9'unda (%4.5) mikrobiyolojik ve 8'inde de (%4.0) PCR yöntemiyle Actinomyces saptanmıştır. Sitolojik ve mikrobiyolojik olarak Actinomyces tanısı verilen vakaların hiçbiri PCR yöntemiyle doğrulanamamıştır. Bu nedenle, altın standart olarak kabul edilen PCR yöntemine göre Actinomyces saptanan 8 hasta çalışma grubu, hiç enfeksiyon etkeni olmayan 144 hasta ise kontrol grubu olarak alınmıştır. Çalışma ve kontrol grubu, bu hastaların serviko-vajinal yaymalarında görülen sitolojik bulgular ve bu hastalara ait klinik şikayetler açısından istatistiksel olarak karşılaştırılmıştır.Sitolojik inceleme için alınan serviko-vajinal örnekler Papanicolaou boyama yöntemine göre boyanmış ve Actinomyces-benzeri organizmalar (ABO) ile diğer sitolojik bulgular açısından değerlendirilmiştir. Mikrobiyolojik inceleme için ise, her hastadan aerobik ve anaerobik olmak üzere iki farklı örnek alınmıştır. Alınan bu örnekler, çeşitli besiyerlerine ekilmiş ve eküvyonda kalan örneklerin lamlara yayılmasıyla da her hastaya ait iki adet direkt yayma hazırlanmıştır. Gram boyama yöntemine göre boyanan bu direkt yaymalardan elde edilen bulgular ile aerobik ve anaerobik kültür sonuçları birlikte değerlendirilmiştir. Aerobik inceleme sonucunda 8 hastada Gardnerella vaginalis ve 5 hastada Candida üretilmiştir. Anaerobik olarak üretilen kolonilerin tanımlaması ise BBL CrystalTM tanımlama sistemi kullanılarak yapılmış ve 6 hastada Actinomyces viscosus, 2 hastada Actinomyces meyeri ve 1 hastada da Actinomyces israelii olmak üzere toplam 9 hastada Actinomyces tespit edilmiştir. Çalışmamız kapsamındaki 200 örneğe PCR yöntemiyle Actinomyces tanısı verilirken ise, ilk aşamada Actinomycetales varlığı araştırılmış ve 16 hastada Actinomycetales varlığı saptanmıştır. Bu 16 hastaya Actinomyces tür tayini yine PCR ile yapılmış ve 5 hastada Actinomyces meyeri, 2 hastada Actinomyces viscosus ve 1 hastada Actinomyces israelii olmak üzere toplam 8 hastaya Actinomyces tanısı verilmiştir.Sonuç olarak, hem sitolojik hem de mikrobiyolojik yöntemlerin Actinomyces tanısında yetersiz olduğu durumlarda, tanının doğrulanması için mutlaka özgül ve duyarlı bir yöntem olan PCR yönteminin uygulanması gerektiği düşünülmüştür.

Abstract:
Cervico-vaginal smears of 200 patients were examined whether it includes Actinomyces by cytological, microbiological and PCR techniques in this study. Of these 200 samples, Actinomyces was detected in 1 (0.5%) sample cytologically, in 9 samples microbiologically (4.5%) and in 8 (4.0%) samples by PCR. The cytological and microbiological results were not confirmed by PCR. Thus, 8 patients with Actinomyces detected by PCR, which is supposed to be a gold standart, became the study group and 144 patients without any infectious agent were the control group. The study and control groups were compared statistically in view of cytological findings seen on their cervico-vaginal smears and their clinical complaints.Cervico-vaginal smears taken for cytological examination were stained by Papanicolau staining method and were investigated in terms of Actinomyces-like organisms (ALOs) and cytological findings. For microbiological examination, two different samples were obtained from each patient: aerobic and anaerobic. These samples were inoculated into several media and then remaining samples were smeared onto glass slides to prepare direct smears. Results from direct smears stained by Gram staining method and findings of aerobic or anaerobic cultures were evaluated together. According to the results of aerobic cultures, Gardnerella vaginalis was isolated from 8 samples and Candida was isolated from 5 samples. Anaerobic media supposed to be Actinomyces were further examined with BBL CrystalTM identification system and 9 samples were diagnosed as Actinomyces. Of them, 6 were Actinomyces viscosus, 2 were Actinomyces meyeri and 1 was Actinomyces israelii. In diagnosis of Actinomyces by PCR, the presence of Actinomycetales was investigated firstly and Actinomycetales was detected in 16 samples. Then, species identification was also performed by PCR and 8 samples were detected as Actinomyces. Of them, 5 were Actinomyces meyeri, 2 were Actinomyces viscosus and 1 was Actinomyces israelii.In conclusion, when both the cytological and microbiological methods are insufficient in the diagnosis of Actinomyces cases, the diagnosis should be confirmed by PCR which is a specific and sensitive method.