İskemik önkoşullamanın sıçan testisinin iskemi ve reperfüzyon yaralanması üzerine etkisi: 5-hidroksidekanoik asit ve y-27632'nin rolü
Protectıve role of ıschemıc precondıtıonıng on rat testıcular ischemıa: effects of y-27632 and 5-hydroxydecanoıc acıd
Yazar: SEBĞETÜLLAH AHMET GÖZEN
Danışman: PROF. DR. HALUK CEYLAN
Gaziantep Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Cerrahisi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Çocuk Cerrahisi = Pediatric Surgery
Dizin: 5-hidroksidekanoik asit = 5-hydroxydecanoic acid ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Rhokinaz = Rhokinase ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; İskemi = Ischemia

Özet:
Amaç: Testisin torsiyon ve detorsiyonu organda iskemi-reperfüzyon (İR) yaralanmasına yol açar. Kısa süreli iskemik periyotların, daha uzun süreli iskemik dönemlerde organ, doku ve hücrelerde nekroz gelişmesine karşı belirgin bir direnç oluşturması iskemik önkuşullama olarak adlandırılır. Bu çalışma iskemik önkoşullamanın sıçan testisinin İR yaralanması üzerindeki etkilerini ve selektif bir KATP kanal inhibitörü olan 5-hidroksi dekanoik asit (5-HD) ve selektif bir Rho kinaz inhibitörü olan Y-27632'nin testisin iskemik önkoşullamasındaki rolünü araştırmak amacıyla gerçekleştirilmiştir.Gereç ve yöntem: Testis iskemisi testis pedikülünün bir atarvamatik damar klipsi ile geçici olarak tutularak oluşturuldu. Testisin İR hasarı organın 180 dk iskemisi ve ardından 60 dk reperfüzyonuyla gerçekleştirildi. İskemik önkoşullamanın her bir siklüsü testisin 5 dk iskemi ve 5 dk reperfüzyonuyla gerçekleştirildi. Kırk erkek Wistar albino türü sıçan 5 eşit gruba ayrıldı. Deneyler sağ testis üzerinde gerçekleştirildi. Grup 1'de yalnızca sham operasyonu yapıldı. Grup 2'de yer alan sıçanlarda yalnızca testis İR uygulandı. Grup 3'te İR öncesi testiste 3 siklüslü iskemik önkoşullama yapıldı. Grup 4 ve grup 5'de yer alan deneklere iskemik önkoşullama ve İR öncesi sırasıyla 0.3 mg/kg Y-27632 ve 10 mg/kg 5-HD intraperitoneal yoldan verildi. Deney sonunda hayvanlar öldürüldü ve testis dokusu histopatolojik ve biyokimyasal incelemler için alındı. Dokular histopatolojik olarak germinal epitelin incelenmesiyle yapılan modifiye Johnson skoru (MJS) ile değerlendirildi. Biyokimyasal incelemelerde lipidperoksit (LOOH) düzeyi, myeloperoksidaz (MPO) aktivitesi, toplam antioksidatif kapasite (TAK), toplam oksidatif seviye (TOS) ve oksidatif stres indeksi (OSİ) ölçüldü.Sonuçlar: İR hasarı, sıçan testisinde spermatozoaların, spermatid ve geç spermatidlerin kaybı gibi histopatolojik lezyonlara yol açarak MJS'nin sham grubuna göre anlamlı olarak düşmesinin yanısıra, LOOH düzeyinde ve MPO aktivitesinde yükselmeye, TAK, TOS ve OSİ'de anlamlı artışa neden oldu. İR hasarı öncesinde uygulanan iskemik önkoşullama MJS'de anlamlı yükselme ve MDA, MPO, TAK, TOS ve OSİ değerlerinde anlamlı düşme meydana getirdi. Grup 3 ile karşılaştırıldığında Y-27632 tedavisi MPO aktivitesindeki anlamlı azalma dışında MJS ve çalışılan diğer parametrelerde anlamlı değişikliğe yol açmadı. 5HD tedavisi uygulanan grup, grup 3 ile karşılaştırıldığında, MJS anlamlı olarak düşük, TOS dışında çalışılan biyokimyasal parametreler anlamlı olarak yüksek bulundu.Yorum: Bu çalışmada uygulanan iskemik önkoşullama, sıçan testisinde İR'nin yol açtığı doku zedelenmesi üzerinde olumlu etki göstermiştir. Bu olumlu etkinin 5-HD uygulamasından sonra anlamlı olarak azalması, KATP kanallarının testisin iskemik önkoşullamasının oluşum mekanizmasında rolü olduğunu göstermiştir. Y-27632 tedavisi iskemik önkoşullamanın etkilerini değiştirmemiştir.ANAHTAR KELİMELER: İskemik önkoşullama, testis, sıçan, Y-27632, 5-hidroksi dekanoik asit

Abstract:
Background/purpose: Torsion and detorsion of testis results in an ischemia/reperfusion (I/R) induced injury to the testis. Brief periods of ischemia with intermittent reperfusion protect an organ or tissue against a sustained period of subsequent ischemia. This phenomenon is known as ischemic preconditioning (IPC). This study was undertaken to determine the role of IPC on I/R-induced injury of rat testis. Furthermore, the effects of 5-hydroxydecanoic acid (5-HD), a selective KATP channel antagonist, and Y-27632, a selective Rho kinase inhibitor, on testis IPC was investigated.Methods: Ischemia was achieved by clamping of the testicular pedicle using a vessel clip. I/R injury was created by 180 min ischemia and 60 min reperfusion of the testis. One cycle IPC was created by 5 min trancient ischemia of the testis that was followed by 5 min reperfusion. Forty male adult Wistar albino rats were randomly allocated into 4 groups. Group 1 was served as untreated controls. The rats in Group 2 were subjected to I/R only. In group 3, 3 cycles of IPC performed prior to I/R. In groups 4 and 5, the rats were treated with intraperitoneal (i.p.) injection of 0.3 mg/kg Y-27632 and 10 mg/kg i.p. injection of 5-HD before 3 cycles of IPC that is followed by I/R. The rats were killed at the end of experimental protocols. Testis specimens were isolated for histopathology and biochemical investigation. Germinal epithelium was evaluated by the modified Johnson scoring (MJS) method. Biochemical analyses consisted of evaluation of tissue lipid peroxide (LOOH) levels, myeloperoxydase (MPO) activity, and total antioxidative capacity (TAC), total oxidative status (TOS) and oxidative stress index (OSI).Results: I/R lead to severe histopathological lesions in the rat testis such as vanishing of spermatozoa, spermatids and late spermatids, and significantly lowered the MJS when compared to unterated controls. I/R resulted in significant elevation in LOOH levels, MPO activity, and TAC, TOS and OSI levels. Protective effects of IPC on I/R induced testicular injury of rats were observed with the significant elevation in the testicular injury score, supression in MDA and MPO levels and increase in TAC, TOS and OSI. Y-27632 treatment only lead a significant decrease in MPO activity but there was no significant change in the remaining parameters when compared to group 3. 5-HD injection significantly depressed MJS and significantly increased all biochemical parameters, but TAC level, when compared to group 3.Conclusion: IPC protected rat testis against I/R-induced injury. As this effect is blocked by 5-HD, KATP channel appears to be a mediator of IPC in the rat testis. Y-27632 did not alter the effect of IPC in this experimental model.KEYWORDS: Ischemic preconditioning, testis, rat, Y-27632, 5-hydroxydecanoic acid