Domuz timusunda apoptozisin immunohistokimyasal ve ultrastrüktürel yöntemlerle incelenmesi
Investigation on apoptosis in thymus of the pigs by immunohistochemical and ultrastructural techniques.
Yazar: AHMET CEYLAN
Danışman: PROF. DR. BELMA ALABAY
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2014
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Domuz = Swine ; Kaspazlar = Caspases ; Mikroskopi-elektron = Microscopy-electron ; Timus bezi = Thymus gland ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Bu araştırmada iki farklı yaş grubundaki (7 günlük, 1 aylık) sağlıklı Yorkshire ırkı domuzların formol tespitli, parafine gömülü timus dokusundaki apoptotik lenfostilerin, dağılımı, sıklığı ve ince yapısı incelenmiştir. Timustan alınan örnekler histolojik olarak işlendi ve apoptozis; TUNEL reaksiyonu, kaspaz-3, immunohistokimyası ve ultrastrüktürel olarak değerlendirildi. Her iki teknikte, lenfoid dokulardaki belirlenen bölgelerdeki pozitif olarak işaretlenen hücrelerin sayımları yapıldı. TUNEL yönteminin çoğunlukla makrofajların ve çevredeki diğer hücrelerin içindeki apoptotik cisimleri boyadığı görülmekle beraber serbest apoptotik cisimlerin ve lenfositlerin çekirdeklerini de boyadığı görüldü. Anti-kaspaz-3 antikorlarının genellikle lenfositlerin çekirdek ve sitoplazmalarını işaretlediği görüldü. Apoptotik yolağın dağılımı bakımından yedi günlük grupta farklılıklar görüldü. Bu grupta, pozitif işaretlenen hücrelerin paranşimde dağınık bir görüntü sergiledikleri tespit edildi. Tüm gruplarda elektron mikroskobik olarak da incelenen apoptotik lenfositlerin benzer morfolojiler sergiledikleri görüldü. Genel olarak TUNEL yönteminin kaspaz-3 immunohistokimyasına göre daha fazla sayıda pozitif hücreyi işaretlediği görüldü. Bu çalışmada iki farklı yaş grubundaki domuz timusunda şekillenen apoptozisin histokimyasal kararkterizasyonu ve ultrastrüktürü; TUNEL, kaspaz-3 immunohistokimyası ve TEM ile tanımlanmıştır.

Abstract:
In this research, the density, the distribution and ultrastructure of apoptotic lmyphocytes were investigated in formalin-fixed paraffin-embedded thymus tissue from healthy Yorkshire pigs at two different ages (7 days, 1 month). Thymus samples were histologically processed and apoptosis were assessed with the TUNEL reaction, caspase-3 immunohistochemistry and ultrastructuraly by TEM. In both techniques, positive labelling cells counting was carried out for each particular thymus tissue area. TUNEL stained mostly apoptotic bodies inside macrophages and paracrin cells, but postive labelling was also seen in free apoptotic bodies and in the nuclei of T lymphocytes. The anti-caspase-3 antibody labelled mainly nuclei and cytoplasm of T lymphocytes. Seven-days-old group presented a particular dispersion pattern of apoptosis. In this group, a scattered distribution of positive cells was detected in thymus. Transmission electron microscopic investigation showed that lymphoctes in all groups have similar morpholgies of apoptosis. In general, TUNEL yielded higher rates of positive cells than caspase-3 immunolabelling. This research elucidates a detailed histochemical characterization and ultrastucture of apoptosis in pig thymus tissues using TUNEL, caspase-3 immunolabelling and TEM at two different ages.