Klinik materyallerden ve çevreden izole edilen aspergillus fumigatus kökenlerinde olası azol direnci ile ilişkili tr34/l98h ve diğer mutasyonların araştırılması
Investigation of tr34/l98h and other mutations associated with putative azole resistance in aspergillus fumigatus strains isolated from clinical specimens and environment
Yazar: KÜBRA ERDEM
Danışman: PROF. DR. NİLGÜN ÇERİKÇİOĞLU
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antifungal ajanlar = Antifungal agents ; Antifungal duyarlılık testleri = Antifungal sensitivity tests ; Aspergillus fumigatus = Aspergillus fumigatus ; Azoller = Azoles ; Genler = Genes ; Mutasyon = Mutation ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
Aspergillus türleri immünsuprese ve akciğerin yapısal bozukluklarının olduğu hastalarda yüksek morbidite ve mortaliteyle ilişkili klinik tablolara neden olabilmektedirler. Azol grubu antifungaller halihazırda aspergillozların tedavisi ve profilaksisinde ilk seçenek ilaçlardır. Ancak klinikte ve tarımda bu bileşiklerin yaygın kullanımı nedeniyle izolatlarda direnç bildirilmeye başlanmıştır. Direnç gelişimindeki en önemli mekanizma hedef enzim 14-α-demetilazı kodlayan cyp51A genindeki mutasyonlardır. Bu çalışmada Aralık 2014- Aralık 2015 arasında izole edilen Aspergillus fumigatus izolatları azol direnci ile ilintili cyp51A mutasyonları açısından irdelenmiştir.
       Çalışmaya alınan 49 klinik ve 7 çevre kaynaklı toplam 56 izolat azol direnci açısından 4µg/mL itrakonazol (İTZ) içeren Sabouraud dekstroz agarda (SDA) taranmıştır. Tüm izolatların İTZ, posakonazol (POS), vorikonazol (VOR) ve zirai azol olan penkonazol (PNZ) ve tebukonazole (TBZ) için in-vitro duyarlılıkları CLSI M38-A2 rehberinine göre çalışılmış ve kökenlerde olası mutasyonları belirlemek üzere cyp51A geninin ve promotor bölgesinin dizi analizi yapılmıştır.
       Tarama testi ile klinik izolatların ikisinde (% 3.57) İTZ direnci gözlendi. Ek olarak pan-azol direnç belirlenen bu kökenlerin birinde TR34/L98H mutasyonu saptandı. Tarama testinde İTZ direnci saptanmayan çevre izolatlarının birinde zirai azollere ve VOR'e yüksek MİK belirlendi.
       Çevre kökenlerinin ülkemizde ilk kez araştırıldığı çalışmamızda, izolatlarımız arasındaki azol direnç oranı düşük bulunmakla birlikte, dünyadaki farklı merkezlerden bildirildiği gibi, hastanemizde de çevresel kaynaklı kökenlerin dirençli enfeksiyonlara yol açabileceği belirlenmiştir. 

Anahtar kelimeler: Aspergillus fumigatus, azol direnci, cyp51A, TR34/L98H

Abstract:
Aspergillus species can cause clinical manifestations associated with high morbidity and mortality in immunosupressive patients and in the patients with structural abnormalities in lungs. Azole group of antifungals are currently the first choice of drugs for the treatment and prophylaxis of aspergillosis. However, resistance has been reported in isolates due to the widespread use of these compounds both in clinic and in agriculture. The most important mechanism in the development of resistance is mutations in the cyp51A gene, which encodes the target enzyme 14-α-demethylase. In this study, Aspergillus fumigatus strains isolated between December 2014 and December 2015 were examined for cyp51A mutations associated with azole resistance.
       A total of 56 isolates of 49 clinical and 7 environmental isolates were screened for azole resistance for 4 μg/mL of itraconazole containing (ITZ) Sabouraud's dextrose agar (SDA). 
       In-vitro susceptibilities of all isolates to ITZ, posaconazole (POS), voriconazole (VOR) and agricultural azoles penconazole (PNZ) and tebukonazole (TBZ) was studied according to CLSI M38-A2 guideline and sequence analysis of the cyp51A gene and its promotor region was performed to determine possible mutations in the strains. In screening test in the two of the clinical isolates (3.57%) ITZ resistance was observed. In addition, TR34 / L98H mutation was detected in one of these pan-azole resistant strains. One of the environmental isolates with no detectable ITZ resistance in the screening test, was found to have high concentrations of MICs for agricultural azoles and VOR. 
       In our study in which environmental strains were investigated for the first time in our country, although the rate of azole resistance among our isolates was low, it has been determined that environmental originated strains may cause resistant infections in our hospital, as reported from different centers in the world.
Key words: Aspergillus fumigatus, azole resistance, cyp51A, TR34/L98H