C2C12 fare miyoblast hücre hattında kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirilmesi
Establishment of stable transfection in C2C12 mouse myoblast cell line
Yazar: MEHMET DENİZ AKYÜZ
Danışman: PROF. DR. PERVİN DİNÇER
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Kalıcı transfeksiyon, transfeksiyon yapılmış hücrelerde, ilgilenilen genlerin ifadesinin kontrolü, bir genin susturulması ya da belirli bir proteinin yüksek oranda ifadesinin hücre açısından fizyolojik sonuçlarının gözlenmesi gibi çeşitli amaçlar için kullanılan bir tekniktir. Kalıcı transfeksiyon ile, ilgilenilen genin genoma katılması ve mitotik bölünmeler sonucunda yavru hücrelere aktarılması sağlanır. Bu tez çalışmasının amacı, C2C12 fare miyoblast hücre hattında tetrasiklin ile uyarılabilen gen ifade sistemi oluşturarak kalıcı transfeksiyonu gerçekleştirmektir. Bu nedenle tet repressor (tetR) genini ve blastisidin ilaç direnç genini içeren "pcDNA6/TR" plazmid vektörü C2C12 fare miyoblast hücre hattına transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir.pcDNA6/TR plazmid vektörünün C2C12 fare miyoblast hücre hattına kalıcı olarak transfeksiyonunun sağlandığının kanıtlanması için, pcDNA4/TO-EGFP plazmid vektörünün C2C12 hücrelerine geçici olarak transfeksiyonu gerçekleştirilmiş, bunu takiben hücre kültür ortamına tetrasiklin ilave edilerek yeşil floresan protein (EGFP)'in ifadesi floresan mikroskop altında gözlenmiştir.Kalıcı transfeksiyonun gerçekleştirildiği C2C12 fare miyoblast hücre hattının elde edilmesi sonucunda ilgilenilen herhangi bir genin ifade düzeyini kontrollü bir şekilde değiştirerek bu genin kasdaki işlevini ortaya koymak amaçlı yapılacak bir çok çalışma için yararlı olacak bir sistem oluşturulmuştur. Ayrıca, tetrasiklin ile uyarılabilir gen ifade sisteminin oluşturulması sırasında edinilen tecrübeler, ilerleyen dönemlerde bu ve buna benzer kalıcı transfeksiyon gerektiren sistemlerin başka hücre hatlarında oluşturulmasına katkı sağlayacaktır.

Abstract:
Stable transfection is a technique used for versatile reasons such as gene silencing, inducing the expression of a gene of interest and observing the physiological effects of the overexpression of a target protein. Stable transfection occurs when the gene of interest is inserted in the nuclear genome of the cell and is transmitted to the daughter cells after mitosis. In this thesis study, in order to generate a stable cell line, we transfected the ?pcDNA6/TR? plazmid vector, which contains tetracycline repressor gene and the blasticidin drug resistance gene to the C2C12 mouse myoblast cell line.To prove that the pcDNA6/TR plazmid vector was transfected stably to the C2C12 mouse myoblast cell line, we transiently transfected the pcDNA4/TO-EGFP plazmid vector and observed the EGFP expression by fluorescence microscopy.The establishment of the stable tranfected C2C12 mouse myoblast cell line created a useful tool for the investigation of the effects of protein expression changes in a muscle like environment. The experience acquired while creating a tetracycline inducible expression system, will contribute to further research studies involving such inducible expression systems.