Kromatografik strip test geliştirrerek şap virusu antijeninin tespit edilmesi
Development of rapid chromatographic strip test for detection of foot -and ?mouth disease virus antigen
Yazar: BERRİN MÜZEYYEN ALPAY
Danışman: PROF. DR. UÇKUN SAİT UÇAN
Selçuk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2011
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Kromatografi = Chromatography ; Virüsler = Viruses ; Şap hastalığı = Foot and mouth disease ; Şap hastalığı virüsü = Foot and mouth disease virus

Özet:
Şap Hastalığı evcil çiftlik hayvanları ve vahşi hayvanların çok bulaşıcı bir hastalığıdır. Şap hastalığı virusu etkili kontrol tedbirlerinin uygulanması için doğru ve güvenilir tanı gerektirir. Şap hastalığının rutin teşhisi amacıyla OIE/FAO Dünya Referens Laboratuarı ve Türkiyede Şap Enstitüsünde RT-PCR ile hücre kültür üst sıvısından virus izolasyonu ve ELISA metodu birlikte kullanılmaktadır. Bu teknikler uzman personel ve pahalı laboratuar uygulamalarına ihtiyaç duyar. Şap hastalığı virus antijeninin tepiti için hızlı ve kolay test gelişimi saha uygulamalarına yönelik kromotografik strip test teknolojisi kullanılarak tanımlandı. Bu tertip şap hastalığı viral antijenini vezikül sıvısı, epitel süspansiyonları, saha klinik numuneleri, deneysel enfekte hayvan epiteli ve doku kültür pasajlarında tespit edilmiştir. Monoklonal antikorların nitrosellülöz, latex mikropartikül, glass fiber filtrelere bağlanması için optimum şartlar tespit edildi ve bir prototip tertip geliştirildi. Tertip viral antijeni deneysel ve doğal enfekte sığırlarda tespit etmiş ancak diğer ilgili viruslarla çapraz bağlanma göstermemiştir.Tertip serotip O ve A tipi şap virusu suşları için epitel süspansiyonları, enfekte doku kültür üst sıvıları, probang ve vezikül sıvısında poliklonal ELISA testinden daha hassas bulundu. Bu sonuçlar şap hastalığı salgınından şüpheli bölgelerde çok daha hızlı teşhisi sağlayarak hızlı ve etkili kontrol programlarının uygulanmasına izin verebilir. Bu kolay ve hızlı test şap virusunun ilk anda doğru tanısına izin verir.Kromotografik strip testte 220 numunenin 183'ü (% 85) pozitif sonuç verirken ELISA da 260 numunenin 125 i (%48) pozitif bulundu. Takip eden istatistikî analizde elde elden sonuçlar; epitel süspansiyonu, supernatant ve probang numunelerinde ELISA ve kromotografik strip test sonuçları arasında önemli derecede farklılık olduğunu tespit edilmiştir.Bu çalışma şaptan şüpheli bölgelerde klinik teşhisin teyidini ve böylece hızlı kontrol programlarının uygulanmasının mümkün olabildiğini göstermiştir.Sonuç olarak: geliştirilen hızlı, güvenilir kromotografik strip test tekniği, ELISA metoduna göre önemli avantajlar sağlamıştır. Kromotografik strip test FMDV antijenin sahada kolay ve hızlı teşhisini sağlamıştır.Anahtar Sözcükler: Kromotografik strip test; Monoklonal antikor; Şap virusu.

Abstract:
Foot?and-mouth disease (FMD) is the most contagious viral disease of cloven-hoofed domestic and wild animals. Foot-and- mouth disease virus (FMDV) requires reliable and accurate diagnosis for the implementation of measures to control effectively its spreading. Routine diagnosis of foot ?and- mouth disease (FMD) viruses carried out at the OIE/FAO World Referense Laboratory and FMD Institute of Turkiye by combined use of ELISA and virus isolation in cell culture suplemented by reverse transcription polymerase chain reaction (RT- PCR) methods. This techniques require skilled personel and dedicated laboratory facilities which are expensive. The development of a rapid and simple test for the detection of foot-and- mouth (FMD) disease virus antigen using chromotographic strip test technology for field application is described. This device detected foot-and- mouth (FMD) disease viral antigen in vesicul fluids, epithelial suspensions and probangs from clinical samples submitted from the field, from animals infected experimentally and in consequent supernatants from their passage in cell culture. Optimum conditions for binding monoclonal antibody to nitrocellulose and latex microparticles and glass fiber filters were determined and a prototype device was developed. The device detected viral antigen from experimentally and naturally infected cattle and showed no cross reactivity with other related viruses.The device were more sensitive then the polyclonal ELISA for the diagnosis of serotype A and serotype O foot-and-mouth (FMD) disease virus in the suspensions of epithelium, infected cell culture supernatant, probang, vesicul fluid samples. These results indicate that such strip test devices could potentially achieve a more immediate diagnosis at the site of a suspected FMD outbreak to allow control procedures to be effected more rapidly. This simple, rapid test allows for the first time accurate pen-side diagnosis of FMD) virus.Of the 260 diagnostic samples, a total of 125 (%48) were found to be positive in ELISA tests while 183(%85) out of 220 samples were positive in the chromotographic strip tests. Following the statistical analysis of the obtined results, significant difference (p<0,05) was detected between the results of ELISA and chromotographic strip test assays applied to epithelial suspensions, passage fluids and probangs.This study demonstrated a potential for this device to confirm a clinical diagnosis at the site of a suspected FMD outbreak thereby offering the possibility of implementing control procedures more rapidly.As a conclusion, chromotographic strip test technique developed rapid, reliable method and providing a significant advantage over to the ELISA method. Chromotographic strip test kit provided a simple and rapid diagnosis of FMDV antigen in the field.Key Words: Chromatographic strip test; Foot and mouth disease virus; Monoclonal antibody.