Iraklı kadınlarda servikal sürme örneğinin sıvı bazlı sitoloji hazırlanmasında yüksek risk tipleri olan insan papilloma virüsünün tespiti için kromojen etiketli içerisinde hibritizasyon (CISH) yaklaşımı
Chromogen labeled in situ hybridization (CISH) approach for detection of high risk types human papillomavirus in liquid based cytology preparation of cervical smear in lraqi women
Yazar: HATEM NADHIM OWAID AL-ISAWI
Danışman: PROF. DR. ÖZCAN ÖZKAN ; DR. ÖĞR. ÜYESİ MAYSAA GHAZİ JUMAA
Çankırı Karatekin Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
İnsan papillomavirüsü (HPV) servikal karsinogenezde en önemli faktördür ve virüs 
enfeksiyonu malign transformasyonda erken bir olay gibi görünmektedir. Yüksek riskli 
insan papillomavirüsleri (HPV) servikal, anal ve vajinal kanserlerin gelişiminde ve penil, 
vulvar ve orofaringeal (tonsiller) kanserlerin önemli bir kısmında başlıca etiyolojik rolü 
oynamaktadır. Yüksek riskli tipler (şu anda 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 
68, 69, 73, 82 tipleri dahil) düşük dereceli servikal hücre anormalliklerine, kanser öncüsü 
olan yüksek dereceli servikal hücre anormalliklerine ve anogenital kanserlere neden 
olabilir. Servikal kanserlerin %99'unda yüksek riskli HPV tipleri tespit edilmektedir. 
HPV enfeksiyonunun bulaşması ciltten cilde temas yoluyla gerçekleşir, genital HPV'ler 
söz konusu olduğunda bu geçiş cinsel aktiviteler sonucunda gerçekleşir. Serviks kanseri 
son birkaç on yıldır önemli morbidite ve mortaliteye neden olmaya devam etmektedir. 
Serviks kanseri, meme kanserinden sonra dünya genelinde kadınlarda en sık görülen 
ikinci kanser türüdür. Gereç ve yöntemler, bu çalışma iki prospektif grup olarak 
tasarlanmıştır. İki gruba ayrılan kadın serviksinden alınan (80) seçilmiş Pap smear 
örneğini içermektedir: Birinci grup: çalışma grubu olarak 50 malign servikal vakanın Pap 
smear örneğini içermektedir. İkinci grup: kontrol çalışması olarak 30 malign olmayan Pap 
smear içerir. tüm örnekler (pap smear lamları) Sağlık Bakanlığı Merkezi Halk Sağlığı 
Laboratuvarları ve Irak'taki Maysan Valiliği'ndeki Al-Sadr Genel Hastanesi'ne ait Genel 
Sağlık Laboratuvarı - sitoloji bölümünden (2019) ile (2023) yılları arasında toplanmıştır, 
Bu lamların teşhisi standart sitolojik kriterler kullanılarak yapılmıştır, bu lamlar 
rehidrasyon (alkol serileri) ile boyandıktan sonra kromojenik in situ hibridizasyon tekniği 
(CISH) ile yeniden incelenmiştir. Bu çalışma için pratik çalışma aşağıdaki şekilde 
gerçekleştirilmiştir: Ksilen içinde bekleterek kapak lamlarını çıkarın. Slaytların 
rehidrasyon serisi (alkol serisi) ile destaining edilmesi. Lamların %1'lik formaldehitte 
fikse edilmesi ve ardından kurutulması. Tespit sistemi ve probun uygulanması. H-R HPV 
sinyallerinin ışık mikroskobu ile değerlendirilmesi. Bulgular, Çalışma gruplarının yaşları 
20 ile ≥50 arasında değişmekte olup, servikal karsinom (%28) ile (40-49) yaş aralığında 
artmış, bunu (%24) ile (≥50) yaş aralığı izlemiş, (%22) ile (30-39) yaş aralığında ve son 
olarak (%16) ile (20-29) yaş grubunda dağılım göstermiştir. Servikal karsinom 
vakalarının (%90)'ında HR-HPVs DNA'sı için CISH sinyallerinin varlığı izlenmiştir. Bu 
oran kontrol grubunda saptanan (%16,7) oranından daha yüksektir. Yaş gruplarına göre 
dağılımda ASCUS'ta (%57,8), HSIL'de (%15,6), LSIL'de (%11,1), servisitte (%8,9), 
ASCH'de (%4,4), atrofide (2,2) ve son olarak normalde (%0) CISH sonuçları ile sitoloji 
incelemeleri arasında anlamlı fark bulundu. CISH sonuçları ile sitoloji incelemesi 
arasında anlamlı olmayan fark. CISH sonuçları ile abortus sayısı arasında anlamlı fark. 
Ayrıca, replikasyon paternleri, servikal karsinom vakalarının (%26)'sının noktasal 
(entegre DNA), (%24)'ünün (hem entegre hem de epizomal HR-HPVs DNA içeren) ve 
(%20)'sinin vaka çalışmasında dağınık (epizomal DNA) olduğunu, kontrol çalışmasında 
ise sadece (%17)'sinin dağınık olduğunu göstermiştir. CISH sonuçları ile doğum sayısı 
arasında anlamlı bir fark bulunmamıştır. Sonuç, Sonuçlarımız HPV CISH testinin HRHPVs 
enfeksiyonu için oldukça hassas olduğunu ve hücre örneklerinde entegre HPV 
DNA'yı tanımlamak için yararlı olabileceğini doğrulamaktadır, Sitolojik örneklerde HPV 
tespiti için standartlar, CISH boyama teknolojileri servikal lezyonların biyolojisinin 
değerlendirilmesinde moleküler testlere uygulanabilir potansiyel bir alternatif olarak 
kabul edilebilir.

Abstract:
Background, human papillomavirus (HPV) is the most important factor in cervical 
carcinogenesis, and infection by the virus seems to be an early event in malignant 
transformation. High-risk human papillomaviruses (HPV) play the leading etiological 
role in the development of cervical, anal, and vaginal cancers and a substantial proportion 
of penile, vulvar, and oropharyngeal (tonsillar) cancers. High-risk types (currently 
including types 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 69, 73, 82) can cause 
low-grade cervical cell abnormalities, high-grade cervical cell abnormalities that are 
precursors to cancer, and anogenital cancers. High-risk HPV types are detected in 99% 
of cervical cancers. Transmission of HPV infection occurs through skin-to-skin contact,
in the case of genital HPVs this transition takes place as a result of sexual activities. 
Cervical cancer continues to cause significant morbidity and mortality over the past few 
decades. After breast cancer, cervical cancer is the second most common type of cancer 
in women worldwide. Materials and methods, this study was designed as a two 
prospective groups. It involved (80) selected Pap smear samples taken from women 
cervix that divided into two groups: The first group: include 50 Pap smear of malignant 
cervical cases as study group. The second group: include 30 Pap smear of nonmalignant 
as control study. all specimens (pap smear slides) were collected from department 
cytology –General Health Laboratory that belong to Ministry of health Central Public 
Health Laboratories and Al-Sadr General Hospital in Maysan Governorate in Iraq from 
period (2019) to (2023) ,The diagnosis of these slides were made using standard 
cytological criteria ,these slides re-examined by chromogenic in situ hybridization 
technique (CISH) after destaining slides by rehydration (alcohols series). The practical 
work for this study conducted the followings: Remove cover slides by soaking in xylene. 
Destaining of slides by rehydration series (alcohol series). Fixing slides in 1% 
formaldehyde and then dry. Applying detection system and probe. Evaluation the H-R 
HPV signals by light microscope. Results, The age of study groups ranged from 20 to 
≥50 years old, cervical carcinoma was increased in age interval (40 - 49) which was (28 
%) followed by ( 24%) of the cases distributed in age interval (≥50) followed by (22%) 
CISH signals for HR-HPVs DNA were monitored in (90%) of cervical carcinoma cases. 
It was higher than that found in control group which made (16.7%). Significant difference 
was found between CISH results and cytology examinations were monitored in (57.8%) 
in ASCUS distributed among age groups, followed by (15.6%) in HSIL, followed by 
(11.1%) in LSIL, followed by (8.9%) in cervicitis, followed by (4.4%) in ASCH, followed 
by (2.2) in atrophy and finally (0%) for normal. Non-significant difference between CISH 
results and cytology examination. Significant difference between CISH results and 
number of abortion. Furthermore, patterns of replication showed that (26%) of cervical 
carcinoma cases were punctuated (integrated DNA), followed by (24%) (which involved 
integrated as well as episomal HR-HPVs DNA), followed by (20%) was diffused 
(episomal DNA) in case study, while only (17%) in control study was diffused. Nonsignificant
 different between CISH results and number of delivery. Conclusion, Our 
results confirm that an HPV CISH assay is reasonably sensitive for HR-HPVs infection 
and that it might be useful to identify integrated HPV DNA in cell specimens, The 
standards for HPV detection in cytological specimens, CISH stain technologies would 
be considered a viable potential alternative to molecular assays in the evaluation of the 
biology of cervical lesions.