Gebelikte olaylanan deneysel hipokside Ginkgo Biloba'nın testis dokusunda olası etkisinin incelenmesi
Evaluation of Ginkgo Biloba's potential effects on testis tissue in experimental hypoxia induced during pregnancy
Yazar: ELİF ENSARİ
Danışman: DOÇ. DR. GÜLNUR TAKE
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2010
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Gebelik = Pregnancy ; Ginkgo biloba = Ginkgo biloba ; Hipoksi = Hypoxia ; Mikroskopi-elektron = Microscopy-electron ; Testis = Testis ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry ; İnce yapı = Ultrastructure

Özet:
Bu çalışmamızda, kronik hipobarik hipoksiye etkin kalan gebe sıçanlardan elde edilen yavrularda, testis gelişimi ve doğum sonrası süreçte uygulanan Ginkgo biloba'nın bu gelişim üzerindeki olası etkilerinin immünohistokimyasal ve elektron mikroskobik olarak incelenmesi amaçlanmıştır.Bu doğrultuda Wistar albino cinsi sıçanlar gebeliğin 5. gününde %10'luk O2 ve %90'lık N2 gaz karışımı verilen hipoksik kamaralara konularak 10 gün süreyle bekletilmiştir. Doğum sonrası erkek yavrulardan üç grup oluşturulmuştur. 1. grup kontrol, 2. grup hipoksi, 3. grup hipoksi+Ginkgo biloba. Deneklerden 7., 14., 21. günlerde testis dokuları alınarak hücre çoğalmasını değerlendirmek için PCNA antikoru ile immünohistokimyasal boyama yapılmıştır ve apoptozisin belirlenmesi için TUNEL yöntemi kullanılmıştır. Testis ince yapı düzeyindeki değişiklikler taramalı elektron mikroskobunda değerlendirilmiştir. Her bir grup için altı denekte, altı alanda spermatogenik epitel boyu ölçülmüştür. Shapiro Wilk testi, Bonferroni Düzeltmeli Kruskal Wallis ve Bonferroni Düzeltmeli Mann Whitney U testi ile istatiksel değerlendirme yapılmıştır.PCNA immün boyamasında hipoksik gruplarda tutulumun kontrol grubuna karşın azaldığı, Ginkgo biloba uygulanan hipoksik gruplarda ise kontrole yakın tutulum olduğu saptanmıştır.TUNEL yöntemi ile hipoksinin hücre proliferasyonunu azalttığı, buna karşın apoptozisi göreceli indüklediği belirlenmiştir. Ginkgo biloba uygulamasının ise 21. günde kontrole uyumlu koruyuculuk gösterdiği gözlenmiştir.Elektron mikroskobik incelemelerde, hipoksi grubunda spermatogenik seri ve Leydig hücrelerinde başta mitokondriyonal kristolizis ve vakuolizasyon olmak üzere çeşitli dejeneratif değişikliler gözlenmiştir. Seminifer epitelin gelişimini tetikleyen Leydig hücrelerinin hipoksiden birincil olarak etkilendiği görülürken, Ginkgo biloba uygulanan grupta ise ince yapının kısmen korunduğu saptanmıştır.Yapılan istatiksel değerlendirmede de hipoksi grubunda spermatogenik epitel boyunun kontrol grubuna karşın kısaldığı, Ginkgo biloba uygulamasının ise spermatogenik epitel boyunu kısmen arttırdığı belirlenmiştir. 21 günlük hipoksi+Ginkgo biloba uygulanan grupta ise epitel boyunun kontrole eşdeğer olduğu görülmüştür.Sonuç olarak gebelikte uygulanan hipoksinin yavru deneklerin testis yapısında hücre döngüsünü olumsuz yönde etkilediği, Leydig hücre aktivitesini arttırdığı; buna karşın Ginkgo biloba'nın özellikle uzun süreli kullanımda koruyucu etki gösterdiği kanısına varılmıştır.

Abstract:
The present study aims to investigate the potential effects of Ginkgo biloba administered during testis development and postnatal periods to the offspring of pregnant rats subjected to chronic hypobaric hypoxia on testis development using immunohistochemical and electron microscopy techniques.For the study purposes, Wistar albino rats on the fifth day of pregnancy were placed in hypoxic chambers filled with a gaseous mixture of O2 10% and N2 90% for 10 days. Three groups of postnatal male rats were formed: the first group served as the control, the second as the hypoxia group and the third as the hypoxia + Ginkgo biloba treatment group. Testis tissues were obtained from the experimental animals on Day 7, 14 and 21, which were stained immunohistochemically with PCNA antibody to study cell proliferation and evaluated using the TUNEL method to determine apoptosis. Changes on the testis thin structure level were examined by using scanning electron microscope. Length of the spermatogenic epithelium was measured in six animals at six points for each group. Statistical analyses were carried out using Shapiro Wilk test, Bonferroni Adjusted Kruskal Wallis and Bonferroni Adjusted Mann Whitney U tests.PCNA immunostaining demonstrated decreased involvement in the hypoxic group compared to the control group, while the extent of involvement was similar between the hypoxic group to which Ginkgo biloba was administered, and the control group.TUNEL assay showed decreased cell proliferation with hypoxia, whereas apoptosis was relatively induced by this condition. Administration of Ginkgo biloba demonstrated protective effects consistent with the control group on Day 21.Electron microscopic studies revealed spermatogenic serial changes and several degenerative alternations, particularly mitochondrial cristae lysis and vacuolization in Leydig cells in the hypoxia group. Leydig cells, which stimulate the development of seminiferous epithelium, were primarily affected by hypoxia, while the thin structure was partially protected in the group to which Ginkgo biloba was administered.Statistical analyses also showed shorter spermatogenic epithelium length in the hypoxic group compared to the control group, whereas a partial increase was achieved after treatment with Ginkgo biloba. In the hypoxic group treated with Ginkgo biloba for 21 days, epithelium length was comparable to that observed in the control group.In conclusion, hypoxia induced during pregnancy adversely affects cell cycle in testis structure of the offspring of experimental animals and also induced Leydig cells activity. On the other hand Ginkgo biloba provides protective effects, particularly with long-term use.