Hibridoma yöntemi ile Leishmania tropika parazitinin cell surface antijenine karşı monoklonal antikor üretimi ve saflaştırılması
Monoclonal antibody production and purification against the cell surface antigen of Leishmania tropica with hibridoma method
Yazar: ALİ RIZA OCAK
Danışman: PROF. DR. ABDURRAHİM KOÇYİĞİT
Harran Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2009
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Biyoteknoloji = Biotechnology ; Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Hibridomalar = Hybridomas ; Hücre füzyonu = Cell fusion ; Kromatografi = Chromatography ; Leishmania tropika = Leishmania tropica ; İmmünizasyon = Immunization

Özet:
Leishmania (L) tropika'nın vektörü olan tatarcıklar Akdeniz ülkeleri içinde özellikle Türkiyenin güneydoğusunda yaygın olarak bulunmaktadır. Hastalığın tanısı erken dönemde konamadığında aylarca ve belki yıllarca iyileşmemekte, enfekte olabilmekte veya skarlaşarak deride kansere kadar giden kalıcı hasarlar bırakabilmektedir. Ayrıca kalıcı hasarlar genç toplumda kozmetik ve psikolojik sorunlara yol açmaktadır. Bir halk sağlığı olan L. Tropika enfeksiyonunun önüne geçmek için ülkemizde bir çok sağlık politikaları geliştirilmesine rağmen hala enfeksiyon devam etmektedir. Son yıllarda daha hızlı ve spesifik tanı yöntemleri için araştırmalar artarak sürmektedir. Günümüzde hibridoma yöntemi kullanılarak monoklonal antikorların üretilmesi, teşhiste ve aşı çalışmalarında kullanılması ile ilgili çalışmalar yoğunluk kazanmıştır.? Hibridoma Yöntemi ile Leishmania Tropika Parazitinin Cell Surface Antijenine Karşı Monoklonal Antikor Üretimi ve Saflaştırılması? isimli çalışma ile Leishmania tropika enfeksiyonlarının erken tanısına yardımcı olabilecek kitlerin üretimi amaçlanmıştır.Hibridoma teknolojisi kullanılarak Leishmania cell surface antijeni ile immünize edilen Balb/c farelerden en iyi immün yanıt veren farenin dalak hücreleri ile daha önce temin edilen myeloma hücreleri, polietilen glikol yardımıyla füzyon işlemine alındı. Spesifik olarak monoklonal antikor üreten hibrit hücreler oluşturuldu ve bu hücrelerin sentezledikleri antikorlar, protein A kolon kromatografisi ile saflaştırıldı. Elde edilen kromatografik fraksiyonlardaki antikor spesifitesi, ELISA ile gösterildi.

Abstract:
Sand flies, which are vectors of Leishmania (L) tropica, have commonly found in particularly South-east area of Turkey among the Mediterrian countries. Since the dissease can not be diagnosed in early stages, perhaps, the disease has not been recovered for months and even years and has been impressed permanent damage to scarring on the skin and this lesion may be cancerous. This problem has also caused cosmetic and psychologic problems in the young population. L. tropica infection has been continued yet, although it has been developed many health politics in our country, because prevention from this infection is a public health problem. In recent years, more rapid and spesific diagnostic methods had been developed. The most popular method among these methods at the present time is the Hibridoma method.In our study named ?Monoclonal antibody production and purification against the cell surface antigen of Leishmania Tropica with Hibridoma Method?, we have planned to find out a tool study for early diagnosis of the Leishmania tropica infections.In this study, using Hibridoma Technology, earlier obtained myeloma cell and spleen cells from the most immun respondent mouse among the Balb/c mice immunized with Leishmania cell surface antigen is taken to fusion process by using polyethylene glycole. Spesifically monoclonal antibody produced by hibridoma cells are developed and antibodies that are synthetised by these cells, are purified by protein A colon chromatography. Spesicifite of these antibodies on chromatographic fractions is showed by ELISA.