Sıçanlarda okratoksin a toksisitesine bağlı gelişen nefrotoksisitede epigallokateşin gallat'ın etkisinin inflamazom aktivitesi ve kaspaz-1 bağımlı piroptozis üzerinden incelenmesi
Investigation the effect of epigallocatechin gallate on nephrotoxicity dependent on ochratoxin a toxicity in rats through inflammasome activity and caspase-1 dependent pyroptosis
Yazar: İLYAS BOZKURT
Danışman: PROF. DR. ŞAZİYE SEZİN YÜCELİK
Atatürk Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya (Ecz) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Farmasötik Toksikoloji = Pharmaceutical Toxicology
Dizin: Biyokimya = Biochemistry ; Toksikoloji = Toxicology

Özet:
Amaç: Bu tez çalışmasının amacı gıdalarda kontaminasyonu nedeniyle maruziyeti kaçınılmaz olan Okratoksin A (OTA)'nın neden olduğu nefrotoksisitede epigallokateşin gallat (EGCG)'ın etkisini değerlendirmek ve bu etkinin inflamazom yolağı ve kaspaz-1 bağımlı piroptozis ile ilişkisini ortaya koymaktır.  
Materyal ve Metot: 200-220 gr ağırlığında 40 adet erkek Wistar albino cinsi sıçan her grupta 8 hayvan olacak şekilde 5 gruba ayrıldı. OTA kontrol grubuna; 0,5 mg/kg/gün OTA; OTA+EGCG 50 grubuna; 0,5 mg/kg/gün OTA+50 mg/kg/gün EGCG ve OTA+EGCG 100 grubuna; 0,5 mg/kg/gün OTA+100 mg/kg/gün EGCG, EGCG kontrol grubuna; 100 mg/kg/gün EGCG 14 gün boyunca gavaj ile verildi. OTA ve EGCG önce %10 DMSO içinde çözülerek daha sonra nihai %5 DMSO konsantrasyonuna ulaşmak için mısır yağı ile gereken hacme ölçeklendi (1:1 oranında). 14. gün sonunda sıçanlar sakrifiye edildi. Serumda üre ve kreatinin düzeyleri ile böbrek doku homojenatlarında ise oksidatif stresin değerlendirilmesi için SOD aktivitesi, GSH ve MDA düzeyleri ölçüldü. TGF-β, NF-κB, IL-1β, IL-18, NLRP3, kaspaz 1, GSDMD mRNA ekspresyonları RT-PCR yöntemi ile yine böbrek dokusunda belirlendi.
Bulgular: OTA ile nefrotoksisite oluşturulan grupta serum üre,  kreatinin düzeylerinin anlamlı bir şekilde yükseldiği benzer şekilde OTA toksisitesinde SOD aktivitesi ve GSH düzeyleri anlamlı bir şekilde azaldığı ve MDA düzeylerinin yükseldiği belirlendi. Moleküler analizlerde ise böbrek dokusunda TGF-β, NF-κB, IL-1β, IL-18, NLRP3, kaspaz 1 ve GSDMD mRNA ekspresyonlarında OTA toksisitesinde belirgin artış olduğu görüldü. EGCG uygulaması ise doz bağımlı olarak bahsi geçen biyokimyasal ve moleküler parametrelerde azalma ve oksidatif stres parametrelerinde değişime neden oldu.  100 mg/kg EGCG ise değerlendirilen tüm parametrelerde sağlıklı gruba daha yakın iyileşme gösterdi. 
Sonuç: OTA maruziyetine bağlı böbreklerde NLRP3 inflamazom aktivasyonu ile kaspaz-1 bağımlı piroptozisin indüklendiği ve güçlü antioksidan etkisi ile bilinen EGCG'ın OTA nefrotoksisitesinde belirtilen yolaklar üzerinden etkili olabileceğine dair yeni bulgular ortaya konmuştur.  
Anahtar kelimeler: Epigallokateşin Gallat, NLRP3, okratoksin A, piroptozis,

Abstract:
Aim: The aim of this thesis study is to evaluate the effect of epigallocatechin gallate (EGCG) on the nephrotoxicity caused by Ochratoxin A (OTA), whose exposure is inevitable due to its contamination in foods, and to reveal the relationship of this effect with the inflammasome pathway and caspase-1-dependent pyroptosis.
Material and Method: 40 male Wistar albino rats weighing 200-220 g were divided into 5 groups, with 8 animals in each group. OTA control group; 0.5 mg/kg/day OTA; OTA+EGCG 50 group; 0.5 mg/kg/day OTA+50 mg/kg/day EGCG and OTA+EGCG 100 group; 0.5 mg/kg/day OTA+100 mg/kg/day EGCG, EGCG to the control group; 100 mg/kg/day EGCG was given by gavage orally for 14 days. OTA and EGCG were first dissolved in 10% DMSO and then scaled up to the required volume with corn oil to reach th final 5% DMSO concentration (1:1 ratio). At the end of the 14th day, the rats were sacrificed. Urea and creatinine levels were measured in serum; SOD activity, GSH and MDA levels were measured in kidney tissue homogenates to evaluate oxidative stress. TGF-β, NF-κB, IL-1β, IL-18, NLRP3, caspase 1, GSDMD mRNA expressions were also determined in kidney tissue by RT-PCR method.
Results: Serum urea and creatinine levels increased significantly in the group in which nephrotoxicity was induced by OTA; Similarly, it was determined that SOD activity and GSH levels decreased significantly and MDA levels increased with OTA toxicity. Molecular analysis showed that there was a significant increase in kidney tissue TGF-β, NF-κB, IL-1β, IL-18, NLRP3, caspase 1 and GSDMD mRNA expressions with OTA toxicity. EGCG administration caused a dose-dependent decrease in the mentioned biochemical and molecular parameters and changes in oxidative stress parameters. 100 mg/kg EGCG showed improvement closer to the healthy group in all evaluated parameters.
Conclusion: Caspase-1-dependent pyroptosis is induced by NLRP3 inflammasome activation in the kidneys due to OTA exposure and new findings have been revealed that EGCG, known for its strong antioxidant effect, may be effective through the pathways specified in OTA nephrotoxicity.
Keywords: Epigallocatechin gallate, NLRP3, ochratoxin A, pyroptosis,