Mezenkimal kök hücrelerin in vitro kolon kanser hücre hatlarındaki etkisi
The effect of mesenchymal stem cells in vitro colon cancer cell lines
Yazar: FİGEN ABATAY SEL
Danışman: PROF. DR. FATMA OĞUZ
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Fetal kan = Fetal blood ; Kolon hastalıkları = Colonic diseases ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Kök hücreler = Stem cells ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Umbilikal kord = Umbilical cord ; İn vitro = In vitro

Özet:
Mezenkimal kök hücre (MKH) kendini yenileme, plastik adherent ve multipotent özellikleri sebebiyle özel bir grup kök hücredir. MKH'ler birçok dokudan elde edilirler ve özellikle kordon kaynaklı dokulardan elde edilen MKH'ler, invazif olmayışlarından dolayı avantajlıdırlar. MKH'ler başlıca rejeneratif tıp alanında ve ayrıca kanser terapilerinde kullanımı konusunda birçok araştırma mevcuttur. Dünyada sıklığı bakımından üçüncü sırada yer alan kolorektal kanser (KRK) tedavisi hem hasta hem de sorumlu olan hekimler için oldukça zorludur. Çalışmamızda MKH'lerin KRK hücreleri (KRKh) üzerindeki terapötik etkisinin incelenmesi amaçlanmaktadır.
Çalışmamızın amacı, KRK hücre hattı olarak HT-29 ve HCT-116 hücrelerinde, kordon kanı kaynaklı (KK-MKH) ve kordon dokusu olan Wharton jeli kaynaklı MKH (WJ-MKH)'lerin apoptotik etkisini incelemekti. 1/5 ve 1/10 (MKH:Kanser) hücre oranları ile 24 ve 72 saatlik inkübasyonlarda in vitro kültür olarak MKH'nin KRKh üzerindeki apoptotik etkisi araştırıldı. Aynı koşullarda sağlıklı periferal kan mononüklear hücreler kontrol grubu deneyi olarak oluşturuldu. İnkübasyon süreleri bittikten sonra Annexin/PI-FITC apoptoz metodu ile flow sitometrik analiz yapıldı. Hem WJ-MKH hem KK- MKH'lerde her iki KRKh'de, her iki oranda ve inkübasyon sürelerinde anlamlı (p<0.05) apoptotik etki gözlemlendi. Ayrıca ELISA yöntemi ile kaspaz-3 ve HTRA2/Omi protein değişimlerine bakıldı. Her iki hücre hattında 24 saat 1/5 oranının WJ-MKH terapisinin anlamlı (p<0.05) olarak daha yüksek olduğu tespit edildi. Bu veriler hem WJ-MKH'nin hem de KK-MKH'nin kolorektal kanserler için olası bir hücre tedavisi olabileceğini göstermiştir. Ayrıca ELISA ile yapılan çalışmalar hem mitotik hem de sitoplazmadaki apoptotik protein değişimlerini göstererek apoptozun indüklendiği yolaklar hakkında bilgi vermektedir.

Abstract:
Mesenchymal stem cells (MSCs) are special group of stem cells due to their self-renewal, plastic adherent and multipotency. MSCs are obtained from many tissues, and MSCs obtained from cord-derived tissues have the advantage of being non-invasive. There are lots of researches on the use of MSCs mainly in the field of regenerative medicine and also in cancer therapies. The treatment of colorectal cancer (CRC), which is the third in the world, is quite challenging for both the patient and the physicians. In our study, it is aimed to examine the therapeutic effect of MSCs on CRC cells (CRCc).
The aim of our study was to examine the apoptotic effect of cord blood (CC-MSC) and cord tissue Wharton's jelly-derived-MSCs (WJ-MSCs) in HT-29 and HCT-116 cells. The apoptotic effect of MSC on CRCc was investigated as in vitro during 24 and 72 hour with 1/5 and 1/10 (MSC:Cancer) ratios. Peripheral blood mononuclear cells were used as a control group. After incubations, Annexin/PI-FITC-based flow cytometry was performed. In both CRCc for all rates, incubations, and MSC sources were found significant (p<0.05). Additionally, caspase-3 and HTRA2/Omi changes were analyzed by ELISA. In both cell lines, the ratio of 1/5, for 24 hours was found to be significantly (p<0.05) higher than the WJ-MSC therapy. These data indicated that both WJ-MSC and CC-MSC could be a possible cell therapy for CRC. In addition, studies with ELISA provide information about the pathways in which apoptosis is induced by showing apoptotic protein changes in both mitotic and cytoplasm.