Candida türlerinin tiplendirilmesinde ve antifungal duyarlılığın belirlenmesinde çeşitli yöntemlerin karşılaştırılması
The Comparison of different methods in identification and antifungal susceptibility of candida species
Yazar: ASUMAN BİRİNCİ
Danışman: DOÇ.DR. AHMET SANİÇ
Ondokuz Mayıs Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 1999
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Antifungal ajanlar = Antifungal agents ; Kandida = Candida ; Mantarlar = Fungi

Özet:
ÖZET CANDİDA TÜRLERİNİNTİPLENDİRİLMESİNDE VE ANTİFUNGAL DUYARLILIĞIN BELİRLENMESİNDE ÇEŞİTLİ YÖNTEMLERİN KARŞILAŞTIRILMASI Bu çalışmanın amacı yeni selektif kromojenik besiyerlerinden MAST ID- CHROMagar Candida ve ticari kitlerden API 20C AUX'un kandidalan idantifiye edebilme derecelerinin, klasik mikolojik tanı yöntemleri referans alınarak araştırılmasıdır. Ayrıca basit bir agar difüzyon methodu olan E test yönteminin, Candida türlerinin amfoterisin B, flukonazol ve ketokonazol'e karşı antifungal duyarlılıklarının belirlenmesinde, National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) tarafindan önerilen standart makrodilüsyon yöntemine alternatif olup olamayacağının araştırılmasıdır. Çalışmada vajinal örneklerden izole edilen 50 Candida kökeni kullanılmıştır. Çalışmaya alman 50 Candida kökeninin standart klasik yöntemler (pirinç ekstresi Tween 80 agar, karbonhidrat asimilasyon, germ tüp) ile idantifiye edilmesi sonucu, 34 (%68)'ü C. albicans, 9 (%18)'u C. krusei, 5 (%10)'i C. tropicalis, 2 (%4)'si C. glabrata olarak değerlendirildi. Germ tüp testi 34 C. albicans kökeninin 31 (%91,2)'inde olumlu bulundu. API 20C AUX ile çalışmaya alman suşlann %98'i klasik mikolojik yöntemlerle uyumlu olarak değerlendirildi. C. krusei kökenlerinden l'i C. zeylanoides olarak tanımlandı. Diğer kökenlerin hepsi doğru olarak tanımlandı. Mast ID-CHROMagar Candida' run 48 saat inkübasyondan sonra idantifikasyon derecesi %92 olarak değerlendirildi. 34 C. albicans kökeninin 33 'ü doğru olarak saptanırken, l'i C. tropicalis olarak saptandı (duyarlıhk=%97.0, özgüllük=%93.7). 5 C. tropicalis kökeninin ise 4'ü doğru olarak saptanırken, l'i C. albicans olarak saptandı (duyarlılık=%80.0, özgüllük=%97.8). C. krusei ve C. glabrata kökenlerinin ise hepsi doğru olarak saptandı. EC. Y6K5Rtâft*»r!J!f i vn "T3f50 Candida kökeninin standart makrodilüsyon yöntemi ile MİK aralığı, MİK90 değerleri sırasıyla amfoterisin B için C. albicans kökenlerinde 0.03-0.5 ug/ml, 0.5 |ig/ml, diğer kökenlerde 0.125-lu,g/ml, 1 |!g/ml; flukonazol için C. albicans kökenlerinde 0.125-2 |ig/ml, 1 |ig/ml, diğer kökenlerde 1-64 ug/ml, 64 ug/ml; ketokonazol için C. albicans kökenlerinde 0.03-0.125 ug/ml, 0.125 ng/ml, diğer kökenlerde 0.03-0. 5 |ig/ml, 0.5 ug/ml, olarak belirlendi. C. albicans kökenlerinde MİK değerleri diğer kökenlerdeki MİK değerlerinden daha düşük olarak saptandı. E test yöntemi ile Candida kökenlerinin antifungal duyarlılığının belirlenmesinde azoller için üç farklı ortam (MOPS tamponlu RPMI 1640, Fosfat tamponlu RPMI 1640, Casitone agar) kullanıldı. İstatistiksel olarak bu ortamlarda elde edilen ortalama MİK değerlerinin karşılaştırılmasında fark bulunamadı (p>0.05). E test yönteminin standart makrodilüsyon yöntemi ile uyumu ± 1 dilüsyonlar aynı kabul edilerek, amfoterisin B için MOPS tamponlu RPMI 1640' da %84; flukonazol için MOPS tamponlu RPMI 1640'da %97, Fosfat tamponlu RPMI 1640 ve Casitone ağarda %90; ketokonazol için MOPS tamponlu RPMI 1640'da %78, Fosfat tamponlu RPMI1640'da %79, Casitone ağarda %60 olarak saptanmıştır. Sonuçlarımız Candida türlerinin idantifikasyonunda API 20C AUX ve Mast ID-CHROMagar Candida' nın kullanılabileceğini gösterdi. Ayrıca E test yönteminin Candida türlerinin antifungal duyarlılığının rutinde saptanmasında amfoterisin B ve flukonazol için standart makrodilüsyon yöntemine değerli bir alternatif olduğu, ketokonazol için ise olmadığı sonucuna varıldı. Anahtar Kelimeler: Candida, İdantifikasyon, Antifungal duyarlılık, Makrodilüsyon, E test. VHI

Abstract:
SUMMARY THE COMPARISION OF DIFFERENT METHODS IN IDENTIFICATION AND ANTTFUNGAL SUSCEPTIBILITY OF CANDD3A SPECD2S The aim of this study to evaluate the performance with respect to identification of Candida species of new selective chromogenic media MAST ID-CHROMagar Candida, commercial kit API 20C AUX, and classical mycological methods as reference and also to evaluate E test a simple agar diffusion method as a alternative to the National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) reference standard macrodilution method for detennining the MICs of amphotericin B, fluconazole, ketoconazole by testing 50 vaginal Candida isolates. By using classical mycological methods (Rice extrate-Tween 80 agar, carbon hyrate assimilation and germ tube) 50 Candida strains were identified as follows: 34 (68%) C. albicans, 9 (18%) C. krusei, 5 (10%) C. tropicalis, 2 (4%) C. glabrata. The germ tube test was positive in 31 (91,2%) of 34 C. albicans strains. By using API 20C AUX, 49 of 50 studied strains were correctly identified with an overall concordance of 98% this method and standard one. One of the C. krusei strains was identified as C. zeylanoides. All other strains were showed 100% concordance with classical mycological methods. The identification performance of Mast ID-CHROMagar Candida, was 92%. As 33 of 34 C. albicans strains were correctly identified, one of them was identified as C. tropicalis (sensitivity=97.0%, specifity=93.7%). 4 of 5 C. tropicalis strains were correctly and one was identified as C. albicans (sensitivity=80%, specifity=97.8%). All of C. krusei strains were correctly identified but none of C. glabrata strains could be identified. MIC ranges and MIC 90 values for amphotericin B 0.03-0.5 ug/ml, 0.5 ug/ml in C. albicans strains 0.125-1 ug/ml, 1 ug/ml in non albicans strains; for fluconazole 0.125-2 u,g/ml, 1 ug/ml in C. albicans strains, 1-64 ug/ml, 64 ug/ml; in non albicans strains; for ketoconazole 0.03-0.125 ug/ml, 0.125 ug/ml, in C. albicans strains, IX0.03-0.5u,g/ml, 0.5 ug/ml in non albicans strains. MIC values were lower in C. albicans strains than non albicans strains. Three different mediums (MOPS buffered RPMI 1640, Phosphate buffered RPMI 1640 and Casitone agar) were used for azoles in determining the antifungal susceptibility of Candida strains with E test. There was no statistically significant difference between MIC values obtained in these medium (p>0.05). Agreement (±1 twofold dilutions) between E test and macrodilution tests were 84% in MOPS bufferred RPMI 1640 for amphotericin B, 97%, 90%, 90% in MOPS bufferred RPMI 1640, Phosphate buffered RPMI 1640, Casitone agar respectively for fluconazole and 78%, 79% and 60% in MOPS bufferred RPMI 1640, Phosphate buffered RPMI 1640, Casitone agar respectively for ketoconazole. In conclusion, it is thought that MAST ID-CHROMagar Candida and API 20C AUX can be used in identification of Candida species. In the other hand we conclude that E test is valuable alternative to the standard macrodilution method for routine susceptibility testing of Candida species with amphotericin B and fluconazole but not with ketoconazole. Key Words: Candida, Identification, Antifungal susceptibility, Macrodilution, E test. X