Farklı kanser hücre hatlarında 1.25 dihidroksi vitamin D3'ün apopitozis, anjiogenez ve VDR ekspresyonu üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of 1.25 dihydroxyvitamin D3 on apoptosis, angiogenesis and VDR expression in different cancer cell li̇nes
Yazar: TUĞBA FATSA
Danışman: DOÇ. DR. CANAN YILMAZ
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Biyokimya = Biochemistry ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Anjiyogenez = Angiogenesis ; Apoptozis = Apoptosis ; Caco-2 = Caco-2 ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kolekalsiferol = Cholecalciferol ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Vitamin D = Vitamin D

Özet:
Amaç: Meme, prostat ve kolon kanserleri dünyada en çok görülen kanser türleri arasında yer almaktadır. Vitamin D reseptörü (VDR), biyolojik olarak D vitamininin en aktif formu olan 1α,25(OH)2D3 (kalsitriol) ile kompleks oluşturarak farklı gen transkripsiyonlarını modüle eder. Amacımız MCF-7, CaCo-2 ve DU-145 hücre hatlarına uyguladığımız kalsitriolün hücrelerdeki antiproliferatif, apopitotik ve antianjiogenik etkilerin araştırılmasıdır. Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda meme kanseri hücre hattı (MCF-7), prostat kanseri hücre hattı (DU-145) ve kolon kanseri hücre hattı (CaCo-2) üzerine aynı şartlarda, aynı ortamda ve aynı dozlarda kalsitiriol uygulandı. Hücre hatlarına 24 ve 48 saat boyunca farklı dozlarda kalsitriol maruziyeti sonrası MTT sitotoksisite testi gerçekleştirildi. IC/50 (etkin doz) oranı belirlendi. Etkinliği belirlenen kalsitiriol dozları (100-1 000 ve 10 000 nM) ile 24 saat kalsitriol maruziyeti sonunda apopitoz ölçümleri ve Real Time PCR (RT-PCR) analizi gerçekleştirildi. Kalsitriolün hücre içerisindeki; nükleer aktivitesi VDR, antiproliferatif etkisi Ki-67, anjiogenik etkisi VEGF ve EGFR m-RNA ekspresyon düzeylerinin ölçülmesiyle değerlendirildi. Sonuçlar kalsitriol uygulaması yapılmayan kontrol grupları ile karşılaştırıldı. Bulgular: 100 nM kalsitriol maruziyeti sonrası yapılan MTT testinde MCF-7'de canlılık %84±2,14; DU-145'te canlılık %87±3,12 ve CaCo-2'de canlılık %77,2±2,71 olarak belirlendi (p<0.05). 100 nM kalsitriol maruziyeti sonrası yapılan Annexin V testinde, apopitozis değerleri MCF-7'de %12,2±1,27; DU-145'te %4,8±0,13; CaCo-2'de %9,4±0,21 olarak belirlendi (p<0.05). 100 nM'lık kalsitriol uygulaması ile, 24 saat sonunda MCF-7, DU-145 ve CaCo-2 hücre hatlarında VDR ekspresyon düzeyinin, kontrol gruplarına göre arttığı, Ki-67, VEGF ve EGFR'nin ekspresyon düzeylerinin ise azaldığı saptandı. Sonuç: MCF-7, DU-145 ve CaCo-2 hücre hatlarında 100 nM kalsitriol uygulaması ile apopitozisde artış, anjiogenez ve proliferasyonda ise azalma saptanmıştır (p<0.05).

Abstract:
Objective: Our aim is to investigate the antiproliferative, apoptotic and antiangiogenic effects of various calcitriol doses we applied on MCF-7, CaCo-2 and DU-145 cell lines. Materials and Methods: In our study, calcitriol was applied on the breast cancer cell line (MCF-7), prostate cancer cell line (DU-145) and colon cancer cell line (CaCo-2) under the same conditions, in the same medium and doses. MTT cytotoxicity test was performed after exposure to different doses of calcitriol for 24 and 48 hours. The IC/50 ratio was determined. Apoptosis measurements and Real Time PCR (RT-PCR) analysis were performed after 24 hours of calcitriol exposure with calcitriol doses (100-1000 and 10000nM) whose effectiveness was determined. Calcitriol in the cell; Its nuclear activity was evaluated by measuring VDR, Ki-67, VEGF and EGFR m-RNA expression levels. The results were compared with the control groups. Results: In the MTT test performed after exposure to 100 nM calcitriol, the viability of MCF-7 was 84±2.14%; The viability was 87±3.12% in DU-145 and 77.2±2.71% in CaCo-2 (p<0.05). In the Annexin V test performed after 100nM calcitriol exposure, apoptosis values were 12% in MCF-7, 2±1.27; 4.8±0.13% in DU-145; It was determined as 9.4±0.21% in CaCo-2 (p<0.05). With 100nM calcitriol application, at the end of 24 hours VDR expression level in MCF-7, DU-145 and CaCo-2 cell lines increased compared to control groups, while expression levels of Ki-67, VEGF and EGFR were found to decrease. Conclusion: In MCF-7, DU-145 and CaCo-2 cell lines, 100nM calcitriol application increased apoptosis and decreased angiogenesis and proliferation (p<0.05).