Sıçanlarda iskemi/reperfüzyona bağlı ortaya çıkan hedef ve uzak organ zedelenmelerinde oluşan inflamasyon ile oksidatif/nitrozatif strese MTOR'un katkısının araştırılması
Investigation of the contribution of MTOR to the inflammation and oxidative/nitrossative stress in the target and distant organ injuries due to ischemia/reperfusion in rats
Yazar: ZÜMRÜT KOÇAK
Danışman: DOÇ. DR. SEYHAN ŞAHAN FIRAT
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Oksidatif stres = Oxidative stress ; Rapamisin = Rapamycine ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Sıçanlar = Rats ; İnflamasyon = Inflammation ; İskemi = Ischemia

Özet:
Bu çalışmada rapamisinin memelilerdeki hedefi (mammalian target of rapamycin; mTOR)'nin özgün bir inbitörü olan rapamisin kullanılarak, sıçanlarda iskemi/reperfüzyon (İ/R)'nin neden olduğu hedef ve uzak organ zedelenmelerinde oluşan inflamasyon ve oksidatif/nitrozatif stres durumlarında mTOR'un rolü araştırıldı. Deneylerde, kontrol ve İ/R gruplarında serum fizyolojik (i.p), rapamisin ve İ/R+rapamisin gruplarında ise rapamisin  (1 mg/kg, i.p.) uygulanan sıçanlar kullanıldı. İ/R ve İR+rapamisin gruplarındaki sıçanların her iki bacağına trochanter major düzeyinde 4 saat iskemi ve ardından 4 saat reperfüzyon uygulandı. Kontrol ve rapamisin grubundaki sıçanlara herhangi bir işlem uygulanmadı. Deneyler sonunda sakrifiye edilen sıçanlardan kan, gastrokinemius kası ve böbrek dokuları izole edildi. İzole edilen bu dokulardan doku homojenatları hazırlanarak, bu homojenatlarda ribozomal protein S6 (rpS6), κB inhibitörü (IκB)-α, nükleer faktör κB (NF-κB) p65, indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS), siklooksijenaz (COX)-2, gp91phox protein ekspresyonları ve/veya fosforilasyonları ile nitrit, malondialdehit (MDA), nitrotirozin, tümör nekrozlaştırıcı faktör (TNF)-α düzeyleri ile miyeloperoksidaz (MPO) ve katalaz etkinliği araştırıldı. rpS6 protein ekspresyonu İ/R'de değişmezken, IκB-α protein ekspresyonu azaldı. rpS6 fosforilasyonu, NF-κB p65 ekspresyonu ve fosforilasyonu, IκB-α fosforilasyonu, iNOS, COX-2 ve gp91phox protein ekspresyonları ise İ/R gruplarında artış gösterdi. İ/R uygulamasının ardından serum ve/veya dokularda ölçülen nitrit, nitrotirozin ve TNF-α ve MDA düzeyleri ile MPO ve katalaz etkinliğinde de artma gözlendi. İ/R'nin neden olduğu tüm bu değişiklikler rapamisin ile geri çevrildi. Bu tez çalışmasından elde edilen bulgular, sıçanlarda İ/R'nin neden olduğu inflamasyon ve oksidatif/nirozatif strese mTOR enziminin etkinliğinin katkısının olduğunu gösterdi

Abstract:
In this study, the contribution of mammalian target of rapamycin (mTOR) to the inflammation and oxidative/nitrossative stress in the target and distant organ injuries due to ischemia/reperfusion (I/R) in rats was investigated by using rapamycin which is a specific inhibitor of mTOR. In control and I/R groups, physiological saline solution is applied to rats as an i.p. and in rapamycin and in I/R+ rapamycin groups rapamycin (1 mg/kg, i.p.) was applied to rats as an i.p. In I/R and I/R+rapamycin groups, both legs of rats were applied trochanter at major level for 4 hours and then, reperfusion for 4 hours. In control and rapamycin groups, any procedure was not applied. After the experiments, blood, gastrocnemius muscle and renal tissues were isolated from sacrificed rats. By preparing tissue homogenates from isolated tissues, ribosomal protein S6 (rpS6), κB inhibitor (IκB)-α, nuclear factor κB (NF-κB) p65, inducible nitric oxide synthase expression (iNOS), cyclooxygenase (COX)-2, gp91phox protein expressions and/or phosphorylation and nitrite, malondialdehyde (MDA), nitrotyrosine, tumor necrosis factor (TNF)-α levels and myeloperoxidase (MPO) and catalase activity is were investigated. While rpS6 expression did not change in I/R, IκB-α protein expression decreased. rpS6 phosphorylation, NF-κB p65 expression and phosphorylation, IκB-α phosphorylation, iNOS, COX-2 and gp91phox protein expression were increased in I/R groups. After I/R application, nitrite, nitrotyrosine, TNF-α and MDA levels and MPO and catalase activity are observed as increased at serum and/or tissue. All these changes caused by I/R were reversed with rapamycin. Findings, in this thesis study, shows that mTOR enzymes activities contribute inflammation and oxidative/nitrossative stress in rats.