Endoplazmik retikulum stresi üzerine pachymic asit etkisinin meme kanserlerinde incelenmesi
Investigation of pachymic acid effect on endoplasmic reticulum stress in breast cancer
Yazar: NİLÜFER SERTDEMİR
Danışman: DOÇ. DR. NACİ ÇİNE
Kocaeli Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Genetik ve Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Apoptozis = Apoptosis ; Endoplazmik retikulum = Endoplasmic reticulum ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Pachymic asit = Pachymic acid ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Amaç: Meme kanseri dünyada kadınlar arasında çok yaygın görülen bir kanser türüdür. Kanser hücrelerinde meydana gelen bozuklukların aydınlatılması ve bunların araştırılması, yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi kanser tedavisi süreçlerine katkı sağlayacaktır. Bu çalışmanın amacı, pachymic asit (PA) molekülünün, insan meme kanser hücresi MDA-MB-231 üzerindeki gen ekspresyon farklılıklarının tanımlanması, sitotoksik ve apoptotik etkilerinin belirlenmesidir. 
Yöntem: Çalışmamızda, meme kanseri hücre hattı  (MDA-MB-231) kültüre edilerek, PA ile farklı konsantrasyon ve sürelerde muamele edilmiştir. Bu işlem sonrasında hücre canlılığında azalma tespit edilmiştir. PA'nın hücre canlılığına olan etkisi gerçek zamanlı hücre elektronik algılama sistemiyle belirlenmiştir. PA'nın apoptotik etkileri akış sitometrisi yöntemi ile analiz edilmiştir. ER stress yolağında yer alan CASP12, PARP, PERK, CHOP, ATF4, GADD34, IRE1, TRAF2, BCLXL, CASP3, CASP8, ATF6, AP1, eIF2a, S1P ve ASK1 genlerinin ekspresyon farklılıkları gerçek zamanlı PCR ile belirlenmiştir. 
Bulgular: 24 saatlik PA tedavisi sonrasında 50, 100 ve 150µM'lık artan doza bağlı olarak CASP12, ASK1, IRE1, GADD34, CHOP, PERK ve ATF4 genlerinde anlamlı düzeyde artış gözlenmiştir. AP1, TRAF2, S1P ve ATF6 genlerinde 24 saatlik 150uM PA tedavisi sonrasında ekspresyonun anlamlı düzeyde arttığı gözlenirken 24 saatlik 50 ve 100uM'lık PA uygulaması sonrasında bu 4 genin ekspresyonlarında dozlar arası farklılık saptanmamıştır. BCLXL ve CASP8 gen ekspresyonlarında zamana ve doza bağlı bir değişim saptanmamıştır. 
Sonuç: Çalışmamızın sonucunda Pachymic asidin meme kanseri hücreleri üzerinde sitotoksik ve apoptotik etkileri olduğu belirlenmiştir. Bu etkiler ilk 24 saatte ve 150µM'lık doz tedavisinde önem arz etmektedir. Sonuçlarımız meme kanserinde PA'nın terapötik potansiyelinin olabileceğini gösterir niteliktedir.

Abstract:
Objective: Breast cancer is a very common type of cancer among women worldwide. The identification and investigation of disorders in cancer cells will contribute to the development of new treatment strategies and cancer treatment processes. The aim of this study is to investigate gene expression profiling, cytotoxic and apoptotic effects on human breast cancer cell MDA-MB-231 caused by pachymic acid (PA). 
Method: In our study, the effect of PA on ER stress pathways was investigated. The breast cancer cell line (MDA-MB-231) was cultured and treated at different concentrations and for periods with PA. A decrease in cell viability was detected after this procedure. The effect of pachymic acid on cell viability was determined by xCELLigence RTCA system. Apoptotic effects of pachymic acid were analyzed by flow cytometry. Expression differences of CASP12, PARP, PERK, CHOP, ATF4, GADD34, IRE1, TRAF2, BCLXL, CASP3, CASP8, ATF6, AP1, eIF2a, S1P and ASK1 genes were determined by real-time PCR. 
Results: Significant increases were observed in CASP12, ASK1, IRE1, GADD34, CHOP, PERK and ATF4 genes due to increasing doses of 50, 100 and 150 μM after 24 h of PA treatment. Expression of AP1, TRAF2, S1P and ATF6 genes was significantly increased after 24 h of 150 uM PA treatment, but there was no difference between these 4 gene expressions after 24 h of 50 and 100 uM PA treatment. There was no time- and dose-dependent change in BCLXL and CASP8 gene expressions. 
Conclusions: As a result of our study, it was determined that Pachymic acid has cytotoxic and apoptotic effects on breast cancer cells. These effects are important in the first 24 hours and 150 μM dose treatment. Our results show that PA may be the therapeutic potential of breast cancer.