İnsan kemik iliği endosteal osteoblastik niş bölgesi mezenkimal kök/stroma hücrelerinin immünoregulatuvar özelliklerinin incelenmesi
Investigation of immunoregulatory properties ofhuman bone marrow endosteal osteoblasti̇c ni̇che zonemesenchymal stem cells / mesenchymal stromal cells
Yazar: ZEYNEP ZEHRA COŞKUN
Danışman: PROF. DR. VEDAT BULUT
Gazi Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / İmmünoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2018
Konu: Moleküler Tıp = Molecular Medicine
Dizin: Enzime bağlı immünosorbent testi = Enzyme-linked immunosorbent assay ; Kemik iliği = Bone marrow ; Kemik iliği incelenmesi = Bone marrow examination ; Kök hücreler = Stem cells ; Makrofajlar = Macrophages ; Monositler = Monocytes ; İmmünolojik faktörler = Immunologic factors ; İmmünomodülasyon = Immunomodulation

Özet:
Mikro çevrenin MHH'larda MKH1 ve MKH2 yönünde plastisiteye ve makrofajlarda M1, M2a, M2b, M2c ve M2d/TAM yönünde plastisiteye neden olduğu bilinmektedir. MKH'lerin etkisiyle plastisite gösteren makrofajlar MEM (MKH tarafından etkilenen makrofajlar) olarak adlandırılmaktadır. Poli(I:C) viral bulaşları taklit etmek amacıyla kullanılır. Bu çalışmada poli(I:C), rhİFN-g+düşük doz LPS, rhİL-4+rhİL-10+rhİL-13, rhTNF-a  ve yüksek doz LPS kullanıldı. THP-1'ler 100 nM PMA ile makrofajlara dönüştürüldü. İnsan BM-MKH'lar kullanıldı. Süpernatan kültürleri, direkt ve transvel ko-kültürleri yapıldı. Ko-kültür sonrası hücreler akım sitometri ve ELISA ile incelendi. Viral yangının kronik dönemdeki  mikro çevre taklit edilmek amacı ile hem MKH ve hem de PMA/THP-1'ler 1 g/ml poli(I:C) ile prime edilerek 48 saat transvel ko-kültür yapıldı. Viral yangıda İL-18R , TLR4 eksprese eden MKH'ların yüzdesinin artırabileceği, CD80 eksprese etmeden, HLA-G, CD86 ve CD206 eksprese ederek, immün baskılayıcı bir tipe dönüşmüş olabileceğini,  CD192 ve/veya CD197  üzerinden viral yangı bölgesine göç edebileceğini göstermektedir.Viral yangı bölgesinde TLR4, CD80 ve CD86  eksprese eden makrofajların yüzdesinin artabileceği, makrofajların HLA-G, CD206 ekprese ederek immün baskılayıcı bir tipe dönüşmüş olabileceğini,  CD192 aracılığı ile yangı alanına göç edebileceğini göstermektedir. İL-18R eksprese eden makrofaj yüzdesi hafif artığı bulunmuş olsada makrofajların tek başına yangı ortamında bulunduğu duruma göre belirgin baskılanma vardı. MKH'ların ve makrofajların transvel ko-kültüründe, İNF-g, İL-17A ve TNF-a orta düzeyde salgılandığı, CCL2 yüksek, İL-6, CXCL10, CCL22 ve CCL4'ün çok yüksek seviyede salgılandığı, tekli kültüre göre CCL22, CCL4, TNF-a, IDO, ve İL-1b'nın baskılandığı ve İL-6, CXCL10, CCL2, İNF-g İL-17A ve İL-15 (hafif) artığı, hem MKH ve hem de PMA/THP-1'ler 1 microg/ml poli(I:C) ile prime edilerek 48 saat transvel ko-kültür  yapıldığında İL-6, İNF-g (hafif) ve İL-17A'nın (hafif) artığı, CXCL10, CCL22, IDO'nun azaldığı gösterildi. Sonuç olarak viral yangının kronik fazında MKH ve makrofajların immün baskılayıcı özellikte olabileceği öne sürüldü.

Abstract:
It is known that micro environment causes plasticity in MKH1 and MKH2 directions in MSCs and plasticity in M1, M2a, M2b, M2c and M2d / TAM directions in macrophages. Macrophages exhibiting plasticity with effect of MSC are called MEM. In this study, poly (I:C), hINF-g+low dose LPS, rhIL-4+rhIL-10+rhIL-13, rhTNF-a and high dose LPS were used. THP-1 transformed into macrophages using 100 nM PMA. Human BM-MSC is used. Conditioned medium culture, direct and transwel co-cultures of two cell groups were performed. Cells after co-culture were examined by flow cytometry and ELISA. To simulate the microenvironment of the chronic period of viral fire zone both MKH and PMA/THP-1 prime with 1 g/ml poly(I: C) for 48 hours in transwell ko-culture system. In the viral fire zone could increase the percentage of MSCs which expressing IL-18R and TLR4. By without expressing CD80, with expressing HLAG, CD86 and CD206, MSC may be turned into an immunosuppressive type.  It can be migrate to the viral fire zone with CD192 and/or CD197. İn the viral fire zone could increase the percentage of macrophages which expres TLR4, CD80 and CD86. By expresing HLA-G and CD206 macropahge may be turned into an immunosuppressive type. It can be migrate to the viral fire zone with CD192.There was a slight increase in the percentage of macrophages expressing IL-18R but there was a marked suppression of macrophages in the viral infection environment alone. Transwell ko-culture of MSC and macrophages is secreted with medium level of İNF-, İL-17A and TNF-a high level of CCL2, very high level of İL-6, CXCL10, CCL22 and CCL4. Compared with singular culture,  suppressed secretion of CCL22, CCL4, TNF-g, IDO, and İL-1b İncreased  secretion of İL-6 , CXCL10, CCL2, İNF-g İL-17A and İL-15 (slightly). İL-6, İNF- (slightly) ve İL-17A'nın (slight) is increased and  CXCL10, CCL22 and  IDO are suppresed  in transwell ko-culture system which MKH and PMA/THP-1 prime with 1 micg/ml poly(I: C) for 48 hours. In conclusion, it was suggested that MSCs and macrophages may be immunosuppressive in the chronic phase of viral fire.