İntraperitoneal nikotin uygulanan sıçanların ovaryumunda meydana gelen hasar üzerine E vitamin etkilerinin mikroskopik düzeyde incelenmesi
Examination at microscopic level of the effect of vitamin E on ovarian damage caused by nicotine administration
Yazar: ZEHRA SEZER
Danışman: DOÇ. DR. EMİNE ELİF GÜZEL MEYDANLI
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kadınlar = Women ; Mikroskopi = Microscopy ; Nikotin = Nicotine ; Oksidatif stres = Oxidative stress ; Over = Ovary ; Vitamin E = Vitamin E

Özet:
Nikotin serbest radikallerin oluşumuna yol açarak oksidatif hasara sebep olmaktadır. Üreme için gerekli olan E vitamini doğada bulunan etkili bir antioksidandır. Çalışmamızda, kadınlarda özellikle son yıllarda artan tütün tüketimi sebebiyle ovaryumdaki nikotinin sebep olduğu hasarları ve bunların oluş mekanizmasını ve bu hasarlar üzerine E vitamininin etkilerini incelemek amaçlandı.
Çalışmamızda deney gruplarındaki hayvanlara (12 haftalık dişi Wistar şıçanlar) nikotin, E vitamini ve nikotin+vitamin uygulaması yapıldı. Hayvanların serumlarında 17ß-östradiol, LPO ve MDA seviyeleri ölçüldü. Ovaryumların parafin kesitlerinde H+E boyaması ve 4-HNE, Ki-67, TUNEL işaretlemeleri yapıldı, immunohistokimyasal değişiklikler skorlanarak değerlendirildi. Ovaryumun araldit kesitlerinde ultrasrüktürel değişiklikler incelendi. Veriler istatistiksel olarak karşılaştırıldı.
Nikotin uygulaması, serumdaki LPO ve MDA seviyelerini arttırırken, östrojen seviyesini azalttı; ovaryum foliküllerinin sayısında azalmaya sebep olurken, granüloza hücrelerinde Ki-67 işaretlenmesini azalttı ve 4-HNE ile TUNEL işaretlenmelerini arttırdı. Nikotin+vitamin uygulaması nikotin grubuna kıyasla, serum östrojen seviyesini arttırdı, LPO ve MDA seviyelerini azalttı; folikül sayısını ve granüloza hücrelerindeki Ki-67 işaretlenmesini arttırdı; 4-HNE ve TUNEL işaretlenmelerini azalttı. Ultrastrüktürel olarak nikotin uygulaması ile granüloza hücrelerinde apoptozun arttığı, ancak bu durumun nikotin+vitamin uygulaması sonucu hafiflediği izlendi.
Sonuç olarak, nikotinin folikülogenezde ve streoidogenezde sebep olduğu oksidatif stres kaynaklı olumsuz etkileri, granüloza hücrelerinin lipit peroksidasyonu üzerinden gerçekleştirdiğini biyokimyasal ve immunohistokimyasal olarak ve ultrastrüktürel düzeyde göstermiş bulunmaktayız. Nikotin tarafından hedef alınan granüloza hücrelerinde gerçekleşen hasarlarda E vitamininin iyileştirici etkisi ile fertilitenin korunmasına yönelik farmakolojik tedavi seçeneklerine yeni bir bakış açısı sağlanabileceğini düşünmekteyiz.

Abstract:
Nicotine causes the formation of free radicals and oxidative damage. Vitamin E which is required in reproduction is a potent antioxidant found in nature. In our study, due to increasing tobacco consumption in women in especially recent years it was aimed to examine the nicotine-induced damage in ovary, its mechanisms and the curative effects of vitamin E on these damages.
In our study, rats were treated with nicotine and vitamin E alone or in combination in experimental groups. Levels of 17ß-estradiol, LPO and MDA were measured in serum of the animals. H+E staining and labeling of Ki-67, 4-HNE and TUNEL in paraffin sections of the ovaries was performed; immunohistochemical changes were assessed by scoring system. Ultrastructural changes in the ovaries were evaluated. The data were compared statistically.
In nicotine-treated rats, estrogen level was decreased, LPO and MDA levels were increased in serum; number of ovarian follicles and Ki-67-labeling in granulosa cells was decreased, 4-HNE immunoreactivity and TUNEL-labeling were increased. Ultrastructurally, frequent apoptotic profiles were observed in granulosa cells in nicotine group. Nicotine+vitamin E administration ameliorated the nicotin-induced changes in the serum and ovary. Vitamin E also demonstrated positive effects on biochemical and histological parameters compared to the control group.
In conclusion, our findings demonstrates that oxidative stress-induced adverse effects caused by nicotine in folliculogenesis and streoidogenesis occur via lipid peroxidation in granulosa cells. Vitamin E may be an pharmacologic alternative for preserving fertility owing to its beneficial effects on the nicotine induced damages occurred in the granulosa cells.