Klinik örneklerden izole edilen haemophilus influenzae duyarlılık testleri ve beta-laktamaz direnç mekanizmalarının fenotipik, genotipik yöntemlerle saptanması
Susceptibility tests for haemophilus influenzae isolated from clinical specimens and determination of beta-lactamase resistance mechanisms by phenotypic and genotypic methods
Yazar: NIGAR MIRALI-ZADA
Danışman: PROF. DR. NEVRİYE GÖNÜLLÜ
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Beta laktamazlar = Beta lactamases ; Fenotip = Phenotype ; Genler = Genes ; Genotip = Genotype ; Hemofilus influenzae = Haemophilus influenzae ; Mikrobiyal duyarlılık testleri = Microbial sensitivity tests ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; İlaçlara direnç = Drug resistance

Özet:
İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Laboratuvar'ında çalışılan 60 H. influenzae kökeni fenotipik yöntemlerle idantifiye edildi. Serotiplendirilmesi lam aglütinasyon yöntemi ile yapıldı. Antimikrobiyal ilaçlara duyarlılıkları EUCAST kriterlerine uygun olarak disk difüzyon yöntemi ile belirlendi. BLNAS'ı BLNAR izolatlarından ayırmak için Benzilpenisilin diski (1 U) tarama testi yapılarak dirençli olan suşlar ileri incelemeye alındı. Antibiyotik duyarlılık testleri ve TEM-1, ROB-1, ftsl genleri için PCR yapıldı.
Çalışılan 60 H. influenzae sekiz (%13,3) tip a, 25 (%41,7) tip b, 14 (%23,3) tip d, dörd (%6,7) tip f olarak tiplendirilmiş olup kalan dokuz (%15) köken tiplendirilememiştir. 60 Haemophilus influenzae kökenleri amoksisilin klavulanik aside %100 duyarlı olarak tespit edilmiştir. Ampisilin %10, sefuroksim %13,3, seftriakson %10, sefpodoksim %8,3, sefiksim %8,3, nalidiksik asid %8,3, tetrasiklin %6,7 dirençli olarak bulunmuştur. Beta-laktamaz pozitif ampisiline dirençli dört kökende TEM-1 beta-laktamaz tespit edildi. Çalışmamızda ROB-1 enzimi bulunmamıştır.
Sonuç olarak hastanemizden izole edilen H. influenzae suşlarında amoksisilin klavulanik asid, sefpodoksim ve sefiksime (<%90) hala düşük düzeylerde direnç olduğunu, beta laktamaz pozitif, ampisiline dirençli suş sayısında artış olmadığını göstermektedir. Bu çalışma da ROB-1 genini taşıyan H. influenzae suşu bulunmaması sevindirici bir durumdur. Ayrıca moleküler çalışmalarından elde edilen bilgilere göre PCR ile PBP3 negatif bulunan bazı BLNAR H. influenzae suşları, PBP3 geninde mutasyon meydana gelmiş olabileceğine veya daha önce tanımlanamayan bir enzimin sorumlu olduğunu düşündürmektedir. Bu hipotezi desteklemek için daha geniş çaplı araştırmalar yapılması gerekmektedir.

Abstract:
60 H. influenzae strains studied in Istanbul University-Cerrahpaşa Medical Faculty Microbiology Laboratory were identified by phenotypic methods. Serotyping was done by slide agglutination method. Their susceptibility to antimicrobial drugs was determined by disc diffusion method in accordance with EUCAST criteria. Benzylpenicillin disk (1 U) screening test was performed to distinguish BLNAS from BLNAR isolates and this was further confirmed for BLNAR with ftsI sequencing. Beta-lactamase enzymes involved in resistance to beta-lactam antibiotics in ampicillin-resistant isolates were determined by PCR method. Studied of the type a 60 H. influenzae 13.3%, type b 41.7% and 41.7%, 23.3 were typed as type d, 6.7% were typed as type f, and the remaining 15% strains could not be typed.
60 Haemophilus influenzae strains were identified as 100% susceptible to amoxicillin clavulanic acid. Ampicillin 10%, cefuroxime 13.3%, ceftriaxone 10%, cefpodoxime 8.3%, cefixime 8.3%, nalidixic acid 8.3%, tetracycline 6.7% were found as resistant. TEM-1 beta-lactamase was detected in four beta-lactamase positive ampicillin-resistant strains. ROB-1 enzyme was not found in our study. As a result, it shows that amoxicillin/clavulanic acid, cefpodoxime and cefixime (<90%) are still at low levels in H. influenzae strains isolated from our hospital, and there is no increase in the number of beta-lactamase positive, ampicillin-resistant strains. It is pleasing that there isn't H. influenzae strain carrying the ROB-1 gene in this study. In addition, according to the information obtained from molecular studies, some beta-lactamase-negative H. influenzae strains that are PBP3 negative suggest that a mutation occurs in the PBP3 gene or that a previously unidentified enzyme is responsible. The more extensive research is needed to support this hypothesis.