Tetrasiklinlerin kromatografik tayin öncesi zenginleştirilmesi için ekstraksiyon yöntemi geliştirilmesi
Progressing an extraction method for enrichment of tetracyclines before their chromatografic determination
Yazar: MELİS KAYNAKER
Danışman: PROF. DR. MELEK MERDİVAN
Dokuz Eylül Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Kimya = Chemistry

Özet:
Hayvansal gıdalardaki tetrasiklin kalıntılarını analiz etmek için birçok yöntem kullanılmıştır. Bu çalışmada, süt, bal ve yumurtadaki kalıntı tetrasiklin antibiyotiklerini yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile tayini öncesi önderiştirme için iki farklı dispersif sıvı sıvı mikroekstraksiyon yöntemi geliştirilmiştir. İlk yöntemde, geleneksel iyonik sıvı bazlı dispersif sıvı sıvı mikroekstraksiyonu yöntemi geliştirilmiştir. İyonik sıvı olarak, 1-hegzil-3-metilimidazolyum bis[(triflorometil)sülfonil]imid kullanılmıştır. Ekstraksiyon verimliliğini arttırmak için pH, tuz etkisi, ekstraksiyon çözücüsü hacmi, dispersif çözücü türü, dispersif çözücü miktarı, ekstraksiyon süresi ve santrifüj süresi optimize edilmiştir. Belirlenen optimizasyon koşullarında, çalışılan altı tetrasiklin antibiyotiklerinin (minosiklin, oksitetrasiklin, tetrasiklin, klortetrasiklin, metasiklin, doksisiklin) zenginleşme faktörü 15-105 arasında bulunmuştur. Gerçek örneklerde tetrasiklin kalıntılarına rastlanmamıştır. Yöntemin doğruluğu için, 100-250 µg Lˉ1 derişimlerde standart tetrasiklin çözeltilerinden süt, bal ve yumurta örneklerine eklenmiş ve % 50-95 arasında geri kazanım elde edilmiştir.

İkinci yöntemde ise, dört tetrasiklin antibiyotiklerin kromatografik tayin öncesi zenginleştirilmeleri için yerinde (in-sitü) iyonik sıvı bazlı dispersif sıvı sıvı mikroekstraksiyonu yöntemi geliştirilmiştir. İyonik sıvı olarak, benzil-metilimizadazolyum klorür kullanılmıştır. Ekstraksiyon verimliliğini arttırmak için optimizasyon parametreleri (amonyum hegzaflorofosfat tuz çözeltisinin hacimi, denge süresi, santrifüj süresi, iyonik sıvı/tuz hacim oranları) incelenmiştir. Belirlenen optimizasyon şartlarında, dört tetrasiklin antibiyotiklerinin (tetrasiklin, klortetrasiklin, metasiklin, doksisiklin) zenginleşme faktörü 25-98 arasında elde edilmiştir. Gerçek örneklerde tetrasiklin kalıntılarına rastlanmamıştır. Yöntemin doğruluğu için, litresinde 50-250 mikrogram derişimlerde standart tetrasiklin çözeltilerinden süt, bal ve yumurta örneklerine eklenmiş ve 65-120 arasında yüzde geri kazanım elde edilmiştir.

Abstract:
Many methods have been used for an antibiotic residue analysis in animal foods. In this study, two different dispersive liquid-liquid microextraction methods for enrichment of tetracyclines before high performance liquid chromatography determination in milk, egg and honey samples have been progressed. In the first method, traditional ionic liquid based dispersive liquid-liquid microextraction method has been developed. 1-Hexyl-3-methylimidazolium bis[(trifluoromethane)sulfonyl]imide as an ionic liquid was used. To increase extraction efficiency, pH, salt effect, volume of extractant solvent, type of dispersive solvent, volume of dispersive solvent, extraction time and centrifugation time were optimized. At optimized conditions, the enrichment factors of the studied six tetracycline antibiotics (minocycline, oxytetracycline, tetracycline, chlorotetracycline, methacycline, doxycycline) were found  in the range of 15 to 105. The residue of tetracyclines were not found in the studied real samples. For the accuracy of the method, the 100 and 250 microgram per liter of standard tetracycline mixture solutions were spiked to the blank real milk, honey and egg samples and the percentage recovery was obtained betwwen 50 and 95. 

In the second method, in-situ ionic liquid based dispersive liquid-liquid microextraction method has been introduced for enrichment of four tetracycline antibiotics before chromatographic determination. 1-benzyl-3-methylimidazolium chloride was used as ionic liquid. To increase extraction efficiency, optimization parameters (volume of ammonium hexafluorophoshate salt solution, equilibrium time, centrifugation time, volume ratio of ionic liquid/salt) were investigated. At optimized conditions, enrichment factors of four tetracycline antibiotics (tetracycline, chlorotetracycline, methacycline, doxycycline) were found between 25 and 98.  The residue of tetracyclines were not found in the studied real samples. For the accuracy of the method, the 50 and 250 microgram per liter of standard tetracycline mixture solutions were spiked to the blank real milk, honey and egg samples and the percentage recovery was obtained betwwen 65 and 120.