Sıçanlarda gözün ön kamarasına lenfosit enjeksiyonu yapılmasını takiben "split-thickness skin graft (STSG)" nakli sonrası immun toleransın değerlendirilmesi
Assessment of post-transplant immunotolerance of "split-thickness skin graft (STSG)" following lymphocyte injection into the anterior chamber of the eye in rats
Yazar: RECEP ERÇİN SÖNMEZ
Danışman: PROF. DR. CEMALETTİN ERTEKİN
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2017
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery
Dizin: Enjeksiyonlar = Injections ; Histopatoloji = Histopathology ; Lenfositler = Lymphocytes ; Sıçanlar = Rats ; Transplantlar = Transplants ; Ön kamara = Anterior chamber ; İmmün tolerans = Immune tolerance

Özet:
Amaç: Literatürde, transplantasyon ile ilgili yapılmış en yeni çalışmalarda antijene özgü, kazanılmış immun tolerans modeli üzerinde durulmaktadır. Bu deneysel çalışmada; tarafımızca önceden duyarlılık yaratılmış deneklerle yaratılmamış olanlar arasında yapılacak cilt grefti nakillerinin klinik ve histopatolojik sonuçlarını karşılaştırmak amaçlanmaktadır. 
Gereç ve Yöntem: Toplam 16 adet Wistar albino erkek sıçan çalışmaya alındı. Denekler test grubu ve kontrol grubu olarak ikiye ayrıldı. Bu gruplar kendi içlerinde 4'er alt gruba ayrıldı ve her bir grupa 2 sıçan yerleştirildi. Kontrol grubundaki (2 no'lu grup) deneklerden santrifügasyon sonrası elde edilen lenfosit derivatifleri karşılığındaki test grubu (1 no'lu grup) deneklerin gözün ön kamarasına enjekte edildi ve bu işlemi takiben 7. günde 2 numaralı gruptaki (Kontrol grup) sıçanlardan alınan 1 cm çapında dairesel şekilde STSG (Kısmi kalınlıkta deri grefti) ler 1 numaralı gruptaki (Test grubu) sıçanlara nakledildi. Kontrol grubundaki deneklere ise lenfosit enjeksiyonu yapılmaksızın gözün ön kamarasına aynı volümde serum fizyolojik enjeksiyonunu takiben test grubundan alınan deri greftleri nakledildi. Operasyondan 1 hafta sonra transplante edilen greft dokuları eksize edilip doku iyileşmeleri histopatolojik ve klinik olarak karşılaştırıldı.
Bulgular: Greft nakli sonrası deneklerin mikroskop altında yapılan histopatolojik değerlendirmeleri tarafımızca oluşturulan 'Modifiye yara iyileşme skalası'na göre puanlandırılmıştır. Test grubu için hesaplanan ortalama skorlar; akut enflamasyon: %50, granülasyon dokusu miktarı: %96, granülasyon dokusu ve fibroblast olgunlaşması: %96, kollajenizasyon: %59, neovaskülasrizasyon: %96 ve reepitelizasyon: %33 olarak değerlendirildi. Kontrol grubu için yapılan histopatolojik değerlendirmede ortalama skorlar ise; akut enflamasyon: %77, granülasyon dokusu miktarı:%80, granülasyon dokusu ve fibroblast olgunlaşması: %83, kollajenizasyon: %53, neovaskülarizasyon:%93 ve reepitelizasyon:%17 olarak hesaplandı. Bu sonuçlara göre 'granülasyon' ve 'reepitelizasyon' oluşumunun test gruplarında daha belirgin olduğu saptanmıştır. Buna karşın kontrol gruplarında ise akut enflamasyonun daha yoğun olduğu belirlenmiştir. Neovaskülarizasyon ve kollajenizasyon aktivitesi açısından her iki grup arasında anlamlı fark saptanmamıştır.
Sonuç: Transplantasyon cerrahisinde erken veya geç dönemde rejeksiyona sekonder doku ve organ kayıpları olabilmektedir. Bizim çalışmamızda gözün ön kamarasına lenfosit enjeksiyonu yapılan sıçanlarda kazanılmış immun tolerans yaratılması ve bu sayede rejeksiyon sürecini yavaşlatmak amaçlanmıştır. Planlanan bu model pratikte başarılı bir şekilde uygulanabildiği takdirde, uzun dönem rejeksiyonsuz sağkalım bir hayal olmaktan öteye gidecektir. 

Anahtar kelimeler: immun tolerans, ACAID, transplantasyon, deri grefti

Abstract:
Objective: Most recent studies done about transplantation emphasize on adaptive immunotolerance model spesific to antigen. In this experimental study, we aimed to compare the clinic and histopathological results of skin graft transplants of rodents whom were sensitized before the experiment with the ones who were not.  
Material and Method: A total of 16 Wistar Albino male rodents were included into the study. The subjects were separated as test and control groups. These two groups were divided into 4 subgroups in itself and 2 rodents were placed in each of them. Lymphocyte suspensions driven from the rodents of control groups (number 2) after centrifugation procedure were enjected to anterior chamber of the eye of each opposing rodent of the test groups (number 1). Also, serum physiologic with exact volume as lymphocyte suspensions were enjected to anterior chamber of control groups to prevent bias. 1 week after this procedure, 1 cm diameter of circular skin grafts were transplanted within opposing groups (Between test and control groups). At the seventh day of the operations, transplanted grafts were excised to compare wound healings clinically and histopathologically. 
Results: Histopathologic validations of transplanted grafts done under the microscope were scored according to the 'Modified wound healing scale' which was created by us. Average scores calculated for the test group were such as; acute enflamation: 50%, granulation tissue amount: 96%, granulation tissue and fibroblast maturation: 96%, collagenization: 59%, neovascularization: 96%, and reepithelization as 33%. Average values for the control group were; acute enflamation: 77%, granulation tissue amount: 80%, granulation tissue and fibroblast maturation: 83%, collagenization: 53%, neovascularization: 93%, and reepithelization as 17%. According to these results, it had been seen that 'granulation' and 'reepithelization' processes were evident for the test groups. On the other hand, 'acute enflammation' was more significant within the control groups. No significant difference was noticed about 'neovascularization' and 'collagenization' among the groups. 
Conclusion: Tissue and organ lost may result due to early or late rejection in transplantation surgery. In our study, we aimed to slow down the rejection process by creating an adaptive immunotolerance in rodents by enjecting lymphocytes to the anterior chamber of the eye. Being able to applicate this planned model in daily clinic, long term of graft survey without rejection will be beyond imagination.

Key words: immunotolerance, ACAID, transplantation, skin graft