Koyun eritrositleri ve göz lensinden glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaç ve kimyasal maddelerin inhibisyon veya aktivasyon kinetiklerinin incelenmesi
Purification and characterization of glucose-6-phosphate dehydrogenase from sheep erythrocytes and eye lens, and investigation of inhibition or activation kinetics of some drugs and chemical materials on theese enzymes
Yazar: ŞÜKRÜ BEYDEMİR
Danışman: PROF.DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
Atatürk Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2002
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Eritrositler = Erythrocytes ; Glükozfosfat dehidrogenaz = Glucosephosphate dehydrogenases ; Koyunlar = Sheep ; Lensler = Lenses ; İlaçlar = Drugs

Özet:
Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz-6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz, EC 1.1.1.49; G6PD) koyun eritrositleri ve lensinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi, hemolizatın veya homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi olarak üç basamaktan oluştu. Eritrosit ve lens G6PD enzimleri sırasıyla % 37,1 ve % 66,8 verimle, spesifik aktiviteleri 4,64 ve 7,8 U/mg olarak elde edildi. Bu iki enzim için optimal pH, stabil pH, NADP+ ve G6P substratlan için Km ve Vmax değerleri belirlendi. Tüm saflaştırma işlemleri sonunda koyun eritrosit G6PD enzimi 1189,74 kat ve lens G6PD enzimi 10.400 kat saflaştınldı. Jel filtrasyon kromatografisi yapılarak yaklaşık olarak koyun eritrosit G6PD'nm MA' sı 1 19.662 dalton ve lens G6PD'nın MA'sı 56.099 dalton olarak belirlendi. SDS poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile koyun eritrosit ve lens G6PD'nın alt birim MA'ları sırasıyla 66.880 dalton ve 54.957 dalton olarak belirlendi. Enzim aktiviteleri spektrofotometrik olarak 340 nm'de Beutler metoduna göre ölçüldü. Ayrıca, koyun eritrosit ve lens G6PD enzimlerinin akiviteleri üzerine bazı ilaçların in vitro etkileri araştırıldı 2002, 135 sayfa Anahtar kelimeler: Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz, ilaç, koyun, eritrosit, lens

Abstract:
Glucose-6-phosphate dehydrogenase (D-glucose-6-phosphate: NADP+ oxidoreductase, EC 1.1.1.49; G6PD) was purified from sheep erythrocytes and lens. The purification consisted of three steps, preparation of haemolysate or homogenate, ammonium sulphate fractionation and 2', 5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography. Erythrocytes and lens G6PD enzymes were obtained with a yield of 37.1 % and 66.8 % having a specific activity of 4.64, and 7.8 U/mg proteins respectively. Optimal pH, stable pH, Km and Vmax values for NADP+ and glucose-6- phosphate (G6-P) substrates were also determined for the two enzymes. The overall purification was about 1 189.74-fold for erythrocytes G6PD and 10,400-fold for lens G6PD. Molecular weight of sheep erythrocytes and lens G6PD were determined approximately as 119,662 dal and 56,099 dal, respectively by gel-filtration chromatography. Subunit molecular weight of sheep erythrocytes and lens G6PD were determined approximately as 66,880 dal and 54,957 dal, respectively by SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Enzymatic activity was spectrofotometrically measured according to Beutler method at 340 nm. In addition, in vitro effects of some medical drugs on sheep red blood cell and lens G6PD enzymes activity were investigated. 2002 135 pages Key words: Glucose 6-phosphate dehydrogenase, drug, sheep, erythrocyte, lens n