Lucilia sericata larva salgısının echinococcus granulosus üzerindeki etkileri
Effects of lucilia sericata larval secretion on echinococcus granulosus
Yazar: FEZA İREM ALDI
Danışman: PROF. DR. NERMİN ŞAKRU
Trakya Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2023
Konu: Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji = Infectious Diseases and Clinical Microbiology ; Mikrobiyoloji = Microbiology ; Parazitoloji = Parasitology

Özet:
Giriş ve Amaç: Echinococcus granulosus, larvasının insan ve koyun, sığır gibi otçul hayvanların başta karaciğer ve akciğeri olmak üzere çeşitli organ ve dokularında yerleşmesiyle ekinokokkozise neden olan bir parazittir.  Ekinokokkozis, Türkiye'nin de içinde bulunduğu Akdeniz ülkeleri, Orta Doğu, Güney Amerika, Yeni Zelanda ve Güney Afrika'da endemiktir. Maggot Debridman Tedavisi, Lucilia sericata larvalarıyla yapılan yara tedavisidir. Larvalar yara yerinde debridman yaparken, aynı zamanda larval salgılar da antimikrobiyal etki göstermektedirler. 
Bu çalışmada; Lucilia sericata larval salgılarının in vitro olarak Echinococcus granulosus protoskolekslerine etkisini ve oluşturduğu DNA hasarını belirlemeyi amaçladık.
Gereç ve Yöntemler: Echinococcus granulosus protoskoleksleri kültüre edildi ve protoskolekslere Lucilia sericata larva salgılarının farklı konsantrasyonları (1:1, 1:2, 1:4) uygulandı. Protoskolekslerin canlılığı eozin boya testi ile belirlendi. DNA hasarını belirlemek için Comet testi yapıldı. EgATM, EgRad9 ve EgTopo2a genlerinin ekspresyonu Kantitatif Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile analiz edildi.
Bulgular: Çalışma sonucunda kontrol grubunun canlılığı %94 idi; kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, larva salgılarının uygulandığı protoskolekslerin canlılığı sırasıyla 1:1 dilüsyon için %73, 1:2 dilüsyon için %80 ve 1:4 dilüsyon için %88 bulundu. Comet testi sonucunda, larval ekskresyon/sekresyonlarının protoskolekslerde DNA hasarına neden olduğu görüldü (p < 0.05). DNA'daki hasar seviyelerine bakıldığında larval ekskresyon/ sekresyonlarının 1:1 dilüsyonu %36 oranında çok yüksek hasara neden olurken, kontrol grubunda bu oran %0'dı. Kantitatif Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu sonuçlarına göre; kontrol gruplarına kıyasla 1:1 larval ekskresyon/ sekresyonları ATM ve Rad9 gen ekspresyonunu 3,2 kat ve Topo2a gen ekspresyonunu 2,2 kat arttırdı (p < 0.05).
Sonuç: Bu veriler, in vitro ortamda larva salgısının Echinococcus granulosus protoskolekslerinde DNA hasarı meydana getirerek, EgATM, EgRad9 ve EgTopo2a genlerinin ekspresyonunu arttırdığını göstermiştir. Bununla birlikte konuyla ilgili daha fazla in vitro ve in vivo çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Background and Aim: Echinococcus granulosus is a parasite that causes echinococcosis when its larvae settle in various organs and tissues, especially the liver and lung, of humans and herbivorous animals such as sheep and cattle.  Echinococcosis are endemic in Mediterranean countries including Turkey, the Middle East South America, New Zealand and South Africa. Maggot Debridement Therapy is a wound treatment with Lucilia sericata larvae. While the larvae debride the wound site, the larval secretions also have an antimicrobial effect.
In this study, we aimed to determine the effect of Lucilia sericata larval secretions on Echinococcus granulosus protoscoleces in vitro and the DNA damage caused.
Material and Methods: Echinococcus granulosus protoscoleces were cultured and protoscoleces were treated with different concentrations (1:1, 1:2, 1:4) of Lucilia sericata larval secretions. The viability of the protoscoleces was determined by eosin dye test. Comet test was performed to determine DNA damage. Expression of EgATM, EgRad9 and EgTopo2a genes was analyzed by Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction.
Results: The viability of the control group was 94%; compared to the control group, the viability of the protoscoleces treated with larval secretions was 73% for 1:1 dilution, 80% for 1:2 dilution and 88% for 1:4 dilution, respectively. Comet test showed that larval excretion/secretions caused DNA damage in protoscoleces (p < 0.05). When the damage levels in DNA were analyzed, 1:1 dilution of larval excretion/secretions caused 36% very high damage, while this rate was 0% in the control group. According to Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction results; 1:1 larval secretions increased ATM and Rad9 gene expression 3.2-fold and Topo2a gene expression 2.2-fold compared to control groups (p < 0.05).
Conclusion: These data showed that in vitro larval secretion induced DNA damage in Echinococcus granulosus protoscoleces and increased the expression of EgATM, EgRad9 and EgTopo2a genes. However, further in vitro and in vivo studies are needed.