Agrotis segetum (Dennis ve schiffermüller) (Lepidoptera: noctuidae) hemolenfindeki lektin aktivitesi
Lectin activity in agrotis segetum (Dennis and schiffermüller) haemolymph
Yazar: NURSEL GÜL
Danışman: PROF. DR. CEVAT AYVALI
Ankara Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 1998
Konu: Biyoloji = Biology
Dizin: Agrotis segetum = Agrotis segetum ; Hemolenf = Haemolymph ; Lektinler = Lectins

Özet:
ÖZET Doktora Tezi Agrotis segetum ( Dennis ve Schiffmüller ) ( Lepidoptera: Noctuidae ) HEMOLENFİNDEKİ LEKTİN AKTİVİTESİ Nursel GÜL Ankara Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı Danışman: Prof.Dr. Cevat AYVALI 1998, Sayfa: 57 Jüri: Prof. Dr. Cevat AYVALI Doç. Dr. Cumhur ÇÖKMÜŞ Doç. Dr. AH ATEŞ Agrotis segetum hemolenfinden çözünebilir lektin, Sepharose-4B kolonunda affinite kromatografisi ve Superdex 200 kolonunda jel filtrasyonuyla saflaştırılmıştır. SDS-PAGE (Sodyum Dodesil Sülfat* Poliakrilamid Jel Elektroforezi)'de, 2-Merkaptoetanollü ve merkaptoetanolsüz olarak yaklaşık 69.000Da molekül ağırlığında bir protein bandı halinde olduğu belirlenmiştir. Benzer şekilde, Süperdex-200 kolonunda jel filtrasyonu yöntemi, hemolenf lektininin aynı molekül ağırlığına sahip protein piki oluşturduğunu göstermiştir. Bu araştırma, 94.25.00.14 No'lu Doktora Tez Projesi olarak A.Ü. Araştırma Fonu tarafından desteklenmiştir.11 Sığır, at, tavşan, koyun, tavuk ve insan (A, B, O grubu) kanı eritrositleri kullanılmak suretiyle A. segetum beşinci evre larvalarından elde edilen hemolenf lektininin hemaglutinasyonu in vitro olarak araştırılmıştır. A grubu insan kanı eritrositlerinin hemaglutinasyonu yüksek titre (1:256) ile olmuştur. Hemaglutinasyonun inhibisyonu deneylerinde bazı karbohidrat ve glikoproteinler kullanılmıştır. Hemaglutinasyon aktivitesinin en fazla D-Iaktoz olmak üzere, N-asetil galaktozamin, N-asetil glukozamin D-fruktoz, D-galaktoz, D-glukoz, D-maltoz, D-mannoz, D-rafinoz ve L-riboz ile inhibe olduğu belirlenmiştir. Elektron mikroskobunda, saflaştırılan lektinin ağsı (retiküler) bir yapıda olduğu ve birbiri ardına dizilmiş küresel yapılardan meydana geldiği saptanmış ve lektinin eritrositlerin yüzeyine bağlanarak hemaglutinasyonu sağladığı da gözlenmiştir. Anahtar Kelimeler: Lektin, Hemaglutinasyon, İnhibisyon, Affınite kromatografi, Jel filtrasyonu, SDS-PAGE, Elektron mikroskobu

Abstract:
Ill ABSTRACT Ph.D. Thesis LECTIN ACTIVITY IN Agrotis segetum ( Dennis and Schiffmüller ) (Lepidoptera: Noctuidae) HAEMOLYMPH Nursel GÜL Ankara University Graduate School of Natural and Applied Sciences Department of Biology Supervisor: Pröf.Df. Cevat AYVALI 1998, Page: 57 Jüri: Prof. Dr. Cevat AYVALI Assoc. Prof. Dr. Cumhur ÇÖKMÜŞ Assoc. Prof. Dr. Ali ATEŞ A soluble hemagglutinin (lectin) was purified from the hemolymph of Agrotis segetum by affinity chromatography on Sepharose'4B and gel filtration on Süperdex-200. SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis) showed a single protein band with a molecular weight of 69.000Da in the presence and absence of 2» Mercaptoethanol. Similary, on Superdex-200 jel filtration showed a single protein peak with a molecular weight of hemolymph lectin. This research which has the number 94.25.00.14 was supported by the Research found of Ankara University as Ph.D. Thesis project.IV In vitro hemagglutination of hemolymph lectin obtained from fifth instar larvae of A. segetum was observed using the red blood cells from chicken, sheep, rabbit, bovine and human A, B, O group. The highest titre (1:256) was observed with human blood group A erythrocytes. Inhibition tests of hemaglutination were done by some carbohyrates and glycoproteins. N-acetyl galactoseamine, N-acetyl glucoseamine, D-fructose, D- galactose, D-glucose, D-maltose, D-mannose, D-raffinose, L-riboz inhibited hemaglutination activity of hemolymph lectin, but inhibition of D-lactose was stronger than others. Electron microscopic examination showed that the purified molecules of hemolymph lectin of A. segetum were reticular structure, that the molecules consists of tandemly aligned ring shaped basic units and that agglutination was resulted from bounding of lectin with surface of erythrocytes. Key Words: Lectin, Hemagglutination, Inhibition, Affinity chromatography, Gel filtration, SDS-PAGE, Electron microscopy.