Kronik miyeloid lösemi dışı klasik miyeloproliferatif neoplazilerde aktivasyonla indüklenmiş sitidin deaminazın ekspresyon düzeyinin genetik instabilite ve JAK2V617F mutasyonu ile ilişkisinin araştırılması
Activation induced cytidine deaminase expression level in myeloproliferative neoplasms and relationship between activaton induced cytidine deaminase level and genetic instability, JAK2V617F mutation
Yazar: HASAN HERMENCİ
Danışman: PROF. DR. AKİF SELİM YAVUZ
İstanbul Üniversitesi / Tıp Fakültesi / İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı / Hematoloji Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Genetik = Genetics ; Hematoloji = Hematology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Birincil miyelofibroz = Primary myelofibrosis ; Cytidin = Cytidin ; JAK 2 = JAK 2 ; Lösemi-miyeloid-kronik-BCR-ABL pozitif = Leukemia-myelogenous-chronic-BCR-ABL positive ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Mutasyon = Mutation ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polisitemia vera = Polycythemia vera ; Trombositoz = Thrombocytosis

Özet:
ÖZETAmaç: Bcr-abl negatif miyeloproliferatif neoplazisi olan hastaların çoğunda tirozin kinazların konstitütif olarak aktif kalmalarına yola açan mutasyon vardır. Buna ilaveten hastaların bir kısmında başka mutasyonlar gelişmektedir. Altta yatan mutajenik fenotipin yeni mutasyonlar oluşturduğu düşünülmektedir. Polisitemia vera, esansiyel trombositemi ve primer miyelofibroz oluşan bu mutasyonların katkısıyla farklı oranlarda lösemi veya miyelofibroza dönüşebilirler. Aktivasyonla indüklenmiş sitidin deaminazın (AİD) aberan ekspresyonu immünglobulin genleri dışındaki genlerde de mutasyon yapabilmektedir ve AİD ekspresyonunun artışının bazı kanserlerle ilişkisi gösterilmiştir. Bu çalışmamızda miyeloproliferatif neoplazilerde AİD'in ekspresyon düzeyini araştırmayı amaçladık.Materyal ve metod: İstanbul Üniversitesi İstanbul Tıp Fakültesi Hematoloji Polikliniği'nde takip edilen bcr-abl negatif miyeloproliferatif 120 hasta ile öğrenci, hasta yakınları ve öğretim üyesinin içinde olduğu 69 sağlıklı kişiden oluşan kontrol grubunda AİD ekspresyonu ölçüldü. Hasta ve kontrollerden alınan kan örneklerinden RNA izolasyonu yapıldı, RNA'dan cDNA'ları elde edildi. Hedef gen AİD ve hipoksantin guanin fosforibozil transferaz 1'e (HPRT1) ait primerler kullanılarak gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu ile cDNA'lar çoğaltılarak, genlerin ekspresyon düzeyi ölçüldü.Bulgular: Bcr-abl negatif miyeloproliferatif neoplazisi olanlarda kontrol grubuna oranla AİD ekspresyonunun anlamlı olarak arttığı gösterildi. (p<0.001) Bcr-abl negatif miyeloproliferatif neoplazisi olanlarda lösemik dönüşüm ve progresyon için risk kriterleri olan hastanın yaşı, lökosit sayısı, hemoglobin düzeyi ile AİD ekspresyonu arasında anlamlı korelasyon saptanmadı. Ayrıca tromboz hikayesi, kemik iliği retikülin derecesi, organomegali olması, serum LDH düzeyi ve JAK2V617F mutasyonu olmaması ile AİD ekspresyonu arasında da korelasyon belirlenmedi.Sonuç: AİD'in aberan ekspresyonunun hayvan deneylerinde kansere neden olduğu, insanlarda ekpresyon artışının ile diğer bazı kanserlerle ilişkisi gösterilmiştir. Bu çalışmamızla AİD'in miyeloproliferatif neoplazilerde ekspresyonunun arttığını gösterdik. AİD miyeloproliferatif neoplazilerde mutasyon üreten ortamdan sorumlu olabilir ve hastalığın progresyonuna etki ediyor olabilir.

Abstract:
SUMMARYObjective: Most patients with myeloproliferative neoplasms (MPN) have a mutation that leads to constitutive activation of the tyrosine kinase signal transduction pathway. In addition to this mutation, some patients with MPN may acquire other mutations. It is thought that the mutagenic phenotype existing inherently in patient with MPN generates new mutation. With the contribution of these mutations, polycytemia vera, essential thrombocytemia and primary myelofibrosis might evolve into secondary myelofibrosis or leukemia at different ratios. Aberrant expression of the activation induced cytidine deaminase (AID) can induces imperfect mutations in non-immunglobulin genes and the link between high AID expression and some cancers has been shown. Current study aims to investigate AID expression levels in myeloproliferative neoplasms.Material and methods: The patient group consisted of 120 patients with bcr-abl negative myeloproliferative neoplasm, who were admitted to Istanbul University, Istanbul Medical Faculty, Division of Hematology Outpatient Clinics. The control group consisted of 69 healthy person who are students, residents and relatives of patient. We evaluated AID expression levels of the patient and of the control group. RNA was extracted from blood samples of patients and controls, RNA was converted to complementary DNA (cDNA). Using the primers of target gene (AID) and reference gene (hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1), cDNA was amplified by real time polymerase chain reaction and expression levels of the genes were evaluated.Results: We found that AID expression levels in the patient group are significantly higher than in the control group (p<0.001). Patient age, blood leukocyte count and blood hemoglobin level had been established as risk factors for leukemic transformation and progression in myeloproliferative neoplasms. We found nor these risk factors neither history of thrombosis, bone marrow reticulin level, serum LDH level, organomegaly and having JAK2V617F mutation correlated with AID expression levels.Conclusions: In this study, we showed that AID expression levels in patient with myeloproliferative neoplasms are significantly higher than in healthy control group. The role and the biological significance of high AID expression levels needs to be elucidated.