Buzağılarda sepsis patogenezinde RIPK1, RIPK2 ve RIPK3 ifadesinin rolü
The role of RIPK1, RIPK2 and RIPK3 expression in sepsis pathogenesis in calves
Yazar: ATİLLA DOĞAN
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ DİLARA AKÇORA YILDIZ
Burdur Mehmet Akif Ersoy Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2020
Konu: Biyoloji = Biology

Özet:
Sepsis, enfeksiyona karşı gelişen disregüle inflamatuvar yanıt olup genellikle organ disfonksiyon sendromu ile sonuçlanmakta ve ölüme neden olmaktadır. Sepsis için bugüne kadar spesifik bir tedavi yöntemi mevcut değildir. Sepsisi teşhis etmek amacıyla klinik uygulamada kullanılan geleneksel biyobelirteçler sepsisi diğer hastalıklardan ayırt etmede yetersiz kalmaktadır. Bu nedenle, sepsisli hastaları tedavi eden klinisyenleri daha iyi bilgilendirebilecek yeni biyobelirteçlere belirlenmesine ihtiyaç vardır.
Hücre ölüm mekanizmaları sepsis patogenezinde özellikle immünosupresyonun gelişiminde önemli rol oynamaktadır. Yapılan çalışmalar hücre ölüm yolaklarından nekroptozisin sepsis patogenezinde önemli bir role sahip olduğunu göstermektedir. Bu çalışmada ise nekroptozis yolağında rol oynayan reseptör ile etkileşen protein kinaz 1 (RIPK1), RIPK2 ve RIPK3'ün sepsisli buzağılara ait kan örneklerinde mRNA seviyeleri değerlendirilerek veteriner hekimlikte sepsis patogenezindeki rolleri ve sepsis teşhisinde biyobelirteç olarak kullanılma potansiyellerinin ortaya koyulması amaçlanmıştır.
Çalışmamızda 1-20 gün yaş aralığında olan 20 holştayn buzağı ve kontrol grubu olarak aynı yaş aralığında olan 10 sağlıklı (holştayn) buzağı değerlendirilmiştir. Enterit enfeksiyonu şekillenen ve hastalığın ileriki aşamalarında sepsis kriterlerini sağlayan buzağılar çalışmaya dâhil edilmiş ve kan örnekleri lökosit (WBC), eritrosit (RBC), hemoglobin (Hb), hemotokrit (Ht) ve trombosit parametreleri ölçülmüştür. Arta kalan kan örneklerinden total RNA izole edilmiş, elde edilen RNA örneklerinden İScript Reverse Transkiripsiyon kiti kullanımı ile cDNA sentezlenmiş ve kantitatif PCR (qPCR) yöntemi kullanılarak hedef genlerin göreli ifade seviyeleri belirlenmiştir. qPCR sonuçları RIPK1 ve RIPK3 ifadelerinin sepsisli buzağılarda kontrol grubuna göre önemli derecede azaldığını gösterirken, RIPK2 ifade seviyesi düşük olduğu için örneklerde saptanamamıştır. Sonuç olarak, veteriner hekimlikte sepsisli buzağıların teşhisinde RIPK1 ve RIPK3 mRNA ifadelerinin biyobelirteç olarak kullanılmasının faydalı olabileceği düşünülmüş ancak daha ayrıntılı deneysel sepsis modellerinin kurulması gerekliliği görülmüştür.

Abstract:
Sepsis, a dysregulated inflammatory response to infection, often results in organ dysfunction syndrome and causes death. There is no specific treatment for sepsis to date. Traditional biomarkers widely used in clinical practice to diagnose sepsis are insufficient to distinguish sepsis from other diseases. Therefore, there is a need to develop new biomarkers that can better inform clinicians treating patients with sepsis.
Cell death mechanisms play an important role in the pathogenesis of sepsis, especially in the development of immunosuppression. Studies in human medicine show that necroptosis, one of the cell death pathways, has an important role in the pathogenesis of sepsis. In this study, it was aimed to reveal the role and their potential use as biomarkers of mRNA levels of receptor interacting protein kinase1 (RIPK1), RIPK2 and RIPK3 which play a role in the necroptosis pathway as in blood samples of calves with sepsis in veterinary medicine.
In our study, 20 Holstein calves between 1-20 days of age and 10 healthy (Holstein) calves in the same age range as the control group were evaluated. Calves, which form the infection of enteritis and meet the sepsis criteria in the later stages of the disease were included in the study and atheir leukocyte (WBC), erythrocyte (RBC), haemoglobin (Hb), haematocrit (Ht) and platelet parameters were measured. Total RNA was isolated from the remaining blood samples using the nucleosol agent, cDNA was synthesized from the RNA samples obtained using the commercial kit, and relative expression levels of the target genes were determined using the quantitative PCR (qPCR) method. While qPCR results showed that RIPK1 and RIPK3 expressions significantly decreased in calves with sepsis compared to the control group, RIPK2 could not be detected in the samples because of its low expression level. As a result, it is thought that RIPK1 and RIPK3 mRNA expressions could be use as biomarkers in the diagnosis of calves with sepsis in veterinary medicine, but more detailed experimental sepsis models were required to be established.