İnvazif mikozların tanısında serolojik tanı yöntemlerinin yeri
Importance of serological methods in the diagnosis of invasive mycoses
Yazar: ESRA KILIÇ
Danışman: PROF. DR. AYŞE KALKANCI
Gazi Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2024
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
İnvazif mikozlar bağışıklığı baskılanmış hastalarda morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Serolojik testler, erken tanı konulmasına imkan sağlayarak antifungal tedavinin hızlı bir şekilde başlanmasına yardımcı olmaktadır. Serumda galaktomannan, 1,3-β-D-glukan testleri erken tanıya yardımcı olması amacıyla kullanılmaktadır. Bu çalışmada Platelia™ Aspergillus Ag Testi referans alınarak Dynamiker Aspergillus Ag Kit (ELISA), Aspergillus Galactomannan Detection Kit (CLIA) ve Fungus (1-3)-ꞵ-D-Glukan Tespit Kit (CLIA) antijen testlerinin duyarlılıkları bulunmuştur.
Çalışmamıza 1 Ekim 2023- 1 Haziran 2024 tarihleri arasında Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi hematoloji servisinde yatan hematopoetik sistem kanserli invazif mikoz şüphesi olan hastalardan (17 hasta), hematopoetik sistem kanserli invazif mikoz şüphesi olmayan hastalardan (49 hasta)  ve sağlıklı gönüllülerden (27 kişi) alınan 93 serum dahil edilmiştir. Tüm örnekler FDA onaylı Platelia™ Aspergillus Ag Testi ile analiz edilmiştir. Bu analiz sonucunda pozitif çıkan 17 hasta EORTC/MSG kriterlerine göre yüksek olasılıklı invazif aspergilloz olarak sınıflandırılmıştır. Toplamda 93 hasta serumu Dynamiker Aspergillus Ag Kit (ELISA), Aspergillus Galactomannan Detection Kit (CLIA) ve Fungus (1-3)-ꞵ-D-Glukan Tespit Kiti (CLIA) kullanılarak test edilmiştir. CLIA testleri FACIS-1(Full-Automatic Chemiluminescence Immunoassay System) cihazında çalışılmıştır. Bu sonuçlara göre Platelia™ Aspergillus Ag Testi referans alınarak özgüllük, duyarlılık, negatif prediktif ve pozitif prediktif değerleri hesaplanmıştır.
FDA onaylı PlateliaTM Aspergillus Ag testi sonuçlarına göre tek serum örneğinde Dynamiker Aspergillus GM testinin duyarlılığı %100, özgüllüğü %97,4, pozitif prediktif değeri (PPD) %89,5, negatif prediktif değeri (NPD) %100 (p<0,001), CLIA GM testinin duyarlılığı %70,6, özgüllüğü %92,1, PPD'si %66,7, NPD'si %93,3 (p<0,001), CLIA BDG testinin duyarlılığı %88,2, özgüllüğü %81,6, PPD'si %51,7, NPD'si %96,9 (p<0,001) olarak bulunmuştur. Bu sonuçlara göre CLIA BDG testinin CLIA GM testinden daha yüksek duyarlılığa sahip olduğu, CLIA GM testinin ise CLIA BDG testinden daha yüksek özgüllüğe sahip olduğu gösterilmiştir.
PlateliaTM Aspergillus Ag testi referans alınarak yapılan ROC analizinde eğri altında kalan alan (AUC) Dynamiker ELISA için 0,994 CLIA BDG için 0,878 ve CLIA GM için 0,869 bulunmuştur. Bu sonuçlara göre invazif aspergilloz tanısında, CLIA temelli yöntemlerin hızlı tanıda kullanılabileceği, ancak daha geniş hasta gruplarını içeren ek çalışmalarla bu verilerin doğrulanması gerektiği düşünülmüştür.

Abstract:
Invasive mycoses are an important cause of morbidity and mortality in immunocompromised patients. Serological testing allows early diagnosis and rapid initiation of antifungal therapy. Serum galactomannan and 1,3-β-D-glucan tests are used for early diagnosis. 
Our study, was performed by using a total of 93 serum samples from patients with suspicion of invasive mycosis with hematopoietic malignancy (17 patients), patients without suspicion of invasive mycosis with hematopoietic malignancy (49 patients) and healthy volunteers (27 people) who were admitted to the Hematology Department of Gazi University Faculty of Medicine Hospital between October 1, 2023 and June 1, 2024. All samples were tested using the FDA approved Platelia™ Aspergillus Ag Test. As a result of this analysis, 17 positive patients were classified as probable invasive aspergillosis according to EORTC/MSG criteria. A total of 93 patient samples were tested using the Dynamiker Aspergillus Ag Kit (ELISA), Aspergillus Galactomannan Detection Kit (CLIA) and Fungus (1-3) ꞵ-D-Glucan Detection Kit (CLIA). CLIA tests were performed on FACIS-1 (Full-Automatic Chemiluminescence Immunoassay System). Specificity, sensitivity, negative predictive value and positive predictive value were calculated according to the reference method Platelia™ Aspergillus Ag Test.
According to the results of the FDA-approved PlateliaTM Aspergillus Ag Test, the sensitivity of the Dynamiker Aspergillus GM Test in a single serum sample was 100%, specificity 97.4%, positive predictive value (PPV) 89.5%, negative predictive value (NPV) 100% (p<0.001), the sensitivity of the CLIA GM test was 70.6%, specificity 92.1%, PPV 66.7%, NPV 93.3% (p<0.001), while the sensitivity of the CLIA BDG test was 88.2%, specificity 81.6%, PPV 51.7%, NPV 96.9% (p<0.001). According to these results, the CLIA BDG test has been shown to have higher sensitivity than the CLIA GM test and the CLIA GM test has higher specificity than the CLIA BDG test. 
Using the PlateliaTM Aspergillus Ag Test as a reference, the areas under the curve (AUC) of the ROC curve were 0.994 for Dynamiker ELISA, 0,878 for CLIA BDG and 0,869 for CLIA GM. According to these results, CLIA-based methods can be used for rapid diagnosis of invasive aspergillosis, but these data should be confirmed with further studies in larger patient groups.