Pnömonili sığır akciğerlerinden bakteri izalosyanları ve izole pastörella'ların polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile saptanması
Isolation of bacterial agents from the lungs of cattle with pneumonia and detection of pasteurella spp. by polymerase chain reaction (PCR)
Yazar: AYŞE KILIÇ
Danışman: PROF. DR. ADİLE MUZ
Fırat Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2003
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
l.OZET Bu çalışmada Elazığ mezbahasında kesilen toplam 8222 sığır akciğeri makroskopik olarak incelendi ve bu akciğerlerin 500 (%6.1)'inde pnömoni şaptandı. Bu akciğer örneklerinden kültür yöntemi ile bakteriyel etkenler izole ve identifiye edildi ve bu etkenlerin içerisinden Pasteurella'bnn DNA'sı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile araştırıldı. Ayrıca şüpheli Pasteuretta multocida suşlanna fere inokulasyon testi de yapıldı. 500 akciğer örneğinin %7 koyun kanı ilave edilmiş kanlı ağarda 24-48 saatlik kültürü sonucunda, 36 (%7.2) Staphylococcus aureus, 30 (%6) Pasteurella multocida, 30 (%6) Corynebacterium spp, 29 (%5.8) Maya, 19 (%3.8) Streptococcus spp, 18 (%3.6) Staphylococcus epidermidis, 13 (%2.6) Escherichia coli, 11 (%2.2) Bacillus spp, 10 (%2) Pseudomonas spp, 9 (%1.8) Mannheimia haemolytica, 8 (%1.6) Actinobacillus spp, 6 (%1.2) Klebsiella spp, 1 (%0.2) Moraxella spp, 1 (%0.2) Proteus spp ve 90 (%18) miks olmak üzere toplam 311 (%62.2) bakteri izole ve identifiye edildi ve 189 (%37.8) örnekte herhangi bir bakteriyel etken üremedi. Pasteurella multocida suşlannın 24(%80)lünde fere inokulasyon testi ile pozitif sonuç alındı. Kültür ile pozitif P. multocida ve M. haemolytica suşlannın tümünün PZR ile de pozitif olduğu bulundu. Bununla birlikte, toxA geninin sekansından hazırlanan primerlerin kullanılması ile yapılan PZR ile toksijenik P. multocida suşlannın varlığı araştırıldı. Bütün örneklerin toksijenik P. multocida suşlan yönünden negatif olduğu tespit edildi Sonuç olarak bu çalışma, Pasteurella'hrm bakteriyolojik yöntemler yanısıra son yıllarda geliştirilmiş önemli moleküler biyoloji metotlanndan biriolan ve kültürden daha sensitiÇ spesifik ve çabuk olan Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile identifiye edilebileceğini ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler: Pnomoni, Sığır, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica, Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR).

Abstract:
2.ABSTRACT In this study, lungs of 8222 cattle slaughtered at an abattoir in Elazığ were examined macroscopically and pneumonia was detected, in 500(6.1%) lungs.These samples were inoculated on to blood agar supplemented with 7% sheep blood for isolation of bacterial agents. A Polymerase Chain Reaction (PCR) based upon the use of species-specific primers was carried out on DNA samples extracted from Pasteurella spp. suspicious isolates. In addition, mouse inoculation test was carried out on Pasteurella multocida suspected isolates. A total of 311 (62.2 %) bacterial agents were isolated from the lung samples and were identified as 7.2 % Staphylococcus aureus, 6 % Pasteurella multocida, 6 % Corynebacterium spp, 5.8 % Yeast, 3.8 % Streptococcus spp, 3.6 % Staphylococcus epidermidis, 2.6 % Escherichia coli, 2.2 % Bacillus spp, 2 % Pseudomonas spp, 1.8 % Mannheimia haemolytica, 1.6 % Actinobacillus spp, 1.2 % Klebsiella spp, 0.2 % Moraxella spp, 0.2 % Proteus spp and 18 % mix bacteria in cattle. Twenty four (80 %) of Pasteurella multocida isolates were positive in the mouse inoculation test in cattle. All P. multocida and M. haemolytica strains that were positive by culture were also found to be positive by the PCR. However, toxigenic Pasteurella multocida were not detected in any isolates by PCR using primers derived from toxA gene. In conclusion, this study showed that PCR which is reported to be more sensitive and specific than culture may be used in the identification of Pasteurella spp. as an alternative to conventional testsKey Words: Pneumonia, Cattle, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica, Polymerase Chain Reaction (PCR).