İmmün sistemi baskılanmış ishalli hastalarda enterocytozoon bieneusi ve encephalitozoon intestinalis varlığının IFA ve real time PCR yöntemleri ile araştırılması
Investigation of enterocytozoon bieneusi and encephalitozoon intestinalis in patients with immunocompromised diarrhea by İFA and real time PCR methods
Yazar: SELAHATTİN AYDEMİR
Danışman: PROF. DR. ZEYNEP TAŞ CENGİZ ; DR. ÖĞR. ÜYESİ AHMED GALİP HALİDİ
Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Parazitoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2022
Konu: Parazitoloji = Parasitology
Dizin: Diyare = Diarrhea ; Encephalitozoon intestinalis = Encephalitozoon intestinalis ; Enterocytozoon bieneusi = Enterocytozoon bieneusi ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; İmmün sistem = Immune system ; İmmünosüpresyon = Immunosuppression

Özet:
Bu çalışmada IFA ve Real-Time PCR yöntemi kullanılarak immün sistemi bozulmuş ishalli hastalarda Enterocytozoon bieneusi ve Encephalitozoon intestinalis sıklığının araştırılması amaçlanmıştır. Bu çalışma, 01.12.2019-01.12.2021 tarihleri arasında Van Yüzüncü Yıl Üniversitesi Tıp Fakültesi Parazitoloji Anabilim Dalı Araştırma Laboratuvarı, Muş Bulanık ve Bitlis Devlet Hastanesinde yürütüldü. Çalışmaya Muş Bulanık ve Bitlis Devlet Hastanesinin farklı kliniklerine başvurup Mikrobiyoloji ya da Parazitoloji Laboratuvarına yönlendirilen 18-85 yaş aralığında 88 immün sistemi baskılanmış ishalli (hasta grubu) hasta; 38 immün sistemi sağlam ishalli (kontrol grubu (KG) 1) hasta, 38 immün sistemi baskılanmış ishalli olmayan (KG 2) hasta ve 36 immün sistemi sağlam ishalli olmayan (KG 3) birey olmak üzere toplam 200 kişi dahil edildi. Toplanan dışkı örnekleri E.intestinalis ve E.bieneusi sıklığını belirlemek için  IFA-MAbs ve Real Time PCR yöntemleriyle değerlendirildi. İncelenen 200 dışkı örneğinin 90'ı (%45) intestinal microsporidan parazitleri yönünden pozitif bulundu. Pozitif bulunan 90 örneğin 39'unda (%43,33) E. intestinalis, 29'unda (%32,22) E. bieneusi, birinde (%1,11) diğer microsporida türleri, 16'sında (%17,78) E. intestinalis ve E. bieneusi birlikte, dördünde (%4,44) E. intestinalis ve diğer mikrosporidia türleri birlikte, birinde (%1,11) ise E. bieneusi ve diğer mikrosporidia türleri birlikte saptandı. E. intestinalis pozitifliği ile cinsiyet, yaş, ishal durumu ve immün sistem durumu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmazken E. bieneusi pozitifliği ile sadece ishal durumu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki belirlendi. Real Time PCR yöntemi altın standart olarak kabul edildiğinde, IFA-MAbs yönteminin E. intestinalis tanısındaki sensitivitesi %94,54, spesifitesi 97,24, E. bieneusi tanısındaki sensitivitesi %95,45, spesifitesi %98,72 olarak bulundu. Ayrıca IFA-MAbs yönteminin genel doğruluk oranı E. intestinalis tanısı için %96,5 ve E. bieneusi tanısı için %98 olarak bulundu. Sonuç olarak, çalışmamızdan elde ettiğimiz bulgular E. intestinalis ve E. bieneusi'nin ishalli olan hem immünsüprese hem de sağlıklı bireylerde akla getirilmesi gerektiğini ortaya koymuştur. Ayrıca E. intestinalis ve E. bieneusi tanısı için Real Time PCR yöntemi yanı sıra IFA-MAbs yönteminin de kullanılabileceği anlaşılmıştır.

Abstract:
In this study, it was aimed to investigate the frequency of Enterocytozoon bieneusi and Encephalitozoon intestinalis in patients with diarrhea with impaired immune system using IFA and Real-Time PCR method. This study was carried out at Van Yüzüncü Yıl University Faculty of Medicine Parasitology Department Research Laboratory, Muş Bulanık and Bitlis State Hospital between 01.12.2019 and 01.12.2021. Patients between the ages of 18-85 who applied to different clinics of Muş Bulanık and Bitlis State Hospitals and were referred to microbiology or parasitology laboratory were selected for the study. A total of 200 individuals, including 88 immunosuppressed diarrheal (patient group) patients, 38 immunocompetent diarrheal (Control group 1 (CG 1)) patients, 38 immunosuppressed non-diarrheal (CG 2) patients, and 36 immunocompetent non-diarrheal (CG 3) individuals, were included in the study. Collected stool samples were evaluated by IFA-MAbs and Real Time PCR methods to determine the frequency of E.intestinalis and E.bieneusi. Ninety (45%) of 200 stool samples analyzed were positive for intestinal microsporidan parasites. Of 90 positive samples  was found in 39 (43.33%) E. intestinalis , in 29 (32.22%) E. bieneusi, in one (1.11%) other microsporida species , in 16 (17.78%) E. intestinalis and E. bieneusi together, in four (4.44%) E. intestinalis and other microsporidia species together  and in one (1.11%) E. bieneusi and other microsporidia species together . While there was no statistically significant difference between E. intestinalis positivity and gender, age, diarrhea status and immune system status, a statistically significant relationship was determined between E. bieneusi positivity and diarrhea only. When the Real Time PCR method was accepted as the gold standard, the sensitivity of the IFA-MAbs method in the diagnosis of E. intestinalis was 94.54%, the specificity was 97.24, the sensitivity in the diagnosis of E. bieneusi was 95.45%, and the specificity was 98.72%. In addition, the overall accuracy of the IFA-MAbs method was found to be 96.5% for the diagnosis of E. intestinalis and 98% for the diagnosis of E. bieneusi. In conclusion, the findings of our study revealed that E. intestinalis and E. bieneusi should be considered in both immunosuppressed and healthy individuals with diarrhea. In addition, it has been understood that the IFA-MAbs method can be used in addition to the Real Time PCR method for the diagnosis of E. intestinalis and E. bieneusi.