Meme kanseri modelinde melatoninin koruyucu etkisinin primer tümör ve metastaz açısından değerlendirilmesi
Evaluation of the protective effect of melatonin in primary tumor and metastasis in the breast cancer model
Yazar: ASİYE KÜBRA KARADAŞ
Danışman: PROF. DR. GAMZE TANRIÖVER
Akdeniz Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2019
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Anjiyogenez = Angiogenesis ; Melatonin = Melatonin ; Meme hastalıkları = Breast diseases ; Meme neoplazmları = Breast neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Meme kanseri dünyada kadınlarda en çok görülen kanser tipidir. Ölüme sebebiyet veren, hastalarda bulunan primer tümörlerden ziyade tümör hücrelerinin yapmış olduğu metastazlardır. Melatonin, kan, tükürük ve idrar gibi birçok sıvıda bulunan, pineal bezden suprakiazmatik nükleus aracılı olarak salgılanan indol türevli bir bileşiktir. Melatoninin tümörle ilgili çalışmalarda anti-proliferatif, anti-inflamatuvar ve anti-karsinogenik etkisiyle onkostatik özelliğe sahip olduğu söylenmektedir. Bu projede; melatonin uygulamasının primer tümör ve metastazlar üzerine etkisinin, metastatik meme kanseri hücreleri kullanılarak oluşturulan modelde değerlendirilmesi amaçlanmaktadır.  
Çalışmamızda 4 haftalık Balb-C dişi fareler kullanılıp, 6 gruba ayrıldı. Melatonin, 4TLM (4T1 karaciğer metastaz hücreleri) hücrelerinin meme dokusuna enjekte edilmesinden önce (M1) ya da (M2) sonra verildi. Melatonin gruplarının kontrolü olarak; melatoninin içinde çözündüğü  %6 EtOH çözücü olarak verildi. M1 enjeksiyonu tümör inokülasyonundan bir ay önce başlayıp ve 4TLM hücrelerinin enjeksiyonundan sonra yaklaşık 4 hafta devam etti. M2, 4TLM hücrelerinin enjeksiyonundan 1 gün sonra başladı. Nekropsi, 4TLM hücre enjeksiyonundan 27 gün sonra yapıldı. Primer tümör, karaciğer ve akciğer dokuları çıkarıldı. Tümör taşıyan farelerin periferik kan yaymalarında immün hücrelerin fenotiplerinin sayımı gerçekleştirildi. Ayrıca akciğer metastazı ve primer tümör büyümesinde değişiklikler değerlendirildi. Anjiyogenezi göstermek için; primer tümörler anjiyogenik proteinler açısından immünohistokimya ve western blot yöntemi ile değerlendirildi. Karaciğer dokularına metastaz analizi yapıldı.
Primer tümör ve karaciğer dokularında melatonin tedavi gruplarında MKSH belirteçlerinin immunreaksiyonlarının melatonin almayan TM grubuna göre azaldığı görüldü. Melatonin uygulanan gruplarda; anjiyogenik belirteçlerin ekspresyonlarının immünohistokimya ve western blot yöntemleriyle anlamlı olarak azaldığı gösterildi. 
Sonuç olarak; melatonin uygulamasının fare meme kanseri modelinde, primer tümör ve mikroçevrede tümör gelişimi ve metastatik yanıtlarını azalttığı gözlendi.  
Anahtar Kelimeler: Meme kanseri, melatonin, anjiyogenez, immünohistokimya, western blot

Abstract:
Breast cancer is the most common type of cancer in women in the world. It is the metastases performed by tumor cells rather than the primary tumors present in patients. Melatonin is an indole-derived compound, which is secreted by the suprachiasmatic nucleus through the pineal gland, found in many fluids such as blood, saliva and urine. Melatonin has been indicated as a possible oncostatic effects in a different type of cancers, it's anti-proliferative, anti-inflammatory and anti-carcinogenic roles being demonstrated in tumor-related studies. The aim of this study is to evaluate the effect of melatonin administration on primary tumors and metastases by using metastatic breast cancer cells.
4-week-old Balb-C female mice were separated 6 groups. Melatonin treatments were either given before (M1) or after (M2) the injection of 4TLM (4T1 liver metastasis) cells into the mammary pad. Vehicle which was %6 EtOH were also given to control group in compliance with the pre or post melatonin treatment group (M1 and corresponding vehicle group). M1 started a month from the inoculation (M1 and V groups) and continued for approximately 4 weeks after the injection of 4TLM cells. M2 started 1 day after injection of 4TLM cells. Necropsies were performed 27 days after injection of 4TLM. Primary tumors and lung tissues were removed. We performed phenotypes of immune cells in peripheral blood smears obtained tumor-bearing mice. For angiogenesis; primary tumors were evaluated by immunohistochemistry and western blot analysis in terms of angiogenic proteins. Metastasis analysis was performed on liver tissues. 
In primary tumor and liver tissues, MDSC markers immunoreactivity decreased in melatonin treatment groups compared to TM group. Melatonin treated groups; a significant decrease in the expression of angiogenic markers was demonstrated by both immunohistochemistry and western blot methods. 
As a result; melatonin treatment decreases tumor development and metastatic response both in primary tumors and tumor microenvironment in the mouse breast cancer model.
Anahtar Kelimeler: Breast cancer, melatonin, angiogenesis, immunohistochemistry, western blot