Olea europaea yaprağı, rubus fruticosus ve nigella CV. özütlerinin kolon kanseri hücre hatlarında mikrorna ekspresyon seviyeleri üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of effects of olea europaea leaf, rubus fruticosus and nigella CV extracts on microrna expression levels on colon cancer cell lines
Yazar: ADEM ALEMDAR
Danışman: PROF. DR. BERRİN TUNCA
Uludağ Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Bitki özütü = Plant extract ; Gen ifadesi = Gene expression ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Mikro RNA = Micro RNA ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Nigella sativa L. = Nigella sativa L. ; Olea europaea L. = Olea europaea L. ; Rubus = Rubus ; Tıbbi bitkiler = Plants-medicinal ; Tıbbi onkoloji = Medical oncology

Özet:
Kolorektal kanser, dünyada en yaygın görülen kanserlerden biridir. Son 30 yılda
gelişen cerrahi ve görüntüleme tekniklerine rağmen kemoterapatiklerin tedavide yeterince
etkin sonuçlar veremediği görülmektedir. Biyoaktif ajanlar olarak adlandırılan bitki
özütleri, son yıllarda yeni tedavilerin geliştirilmesi açısından yoğun olarak
araştırılmaktadır. Epigenetik mekanizmalar üzerinden etkili olduğu anlaşılan bitkisel
özütlerin yeni kanser tedavi modellerinin geliştirilmesinde faydalı olacağı
düşünülmektedir. Tüm bu sebepler ile mevcut tez çalışmasında kolorektal kanser
hücrelerinde bitkisel özütlerin etkilerinin, önemli bir epigenetik mekanizma olan
mikroRNA (miRNA) ekspresyon seviyelerindeki değişimler ile değerlendirilmesi
amaçlanmıştır.
Gerçekleştirilen çalışmada, Nigella sativa (çörekotu) tohum özütü (NTE), Olea
europeae (zeytin) yaprağı özütü (OLE) ve Rubus fruticosus (böğürtlen) kök özütü
(RKE)'nün iki kolorektal kanser hücre hattındaki (HT-29 ve LoVo) anti kanser etkisi hücre
proliferasyonu ve invazyonu açısından araştırıldı ve olası anti kanser etkinin moleküler
mekanizması miRNA ekspresyon seviyesinde çalışılarak epigenetik olarak değerlendirildi.
WST-1 analizi sonuçlarına göre değerlendirilen bitki özütlerinin hücre proliferasyonunu
anlamlı düzeyde azaltıcı etkisinin (p<0.05) olduğu belirlendi. RKE ve NTE'nin her iki
hücre hattında da istatistiki olarak anlamlı seviyede (p<0.05), OLE'nin ise LoVo hücre
hattında istatistiki anlamlılığa yakın seviyede (p=0.0641) hücrelerin migrasyon özelliğini
inhibe ettiği görüldü. Bitki özütlerinin RT-PCR yöntemi ile miRNA ekspresyon
profillerine etkisi değerlendirildiğinde RKE'nin her iki hücre hattında da miR-140
ekspresyon artışına (p<0.05), NTE ve OLE'nin ise HT-29 hücrelerinde miR-182a
ekspresyonunda istatistiki olarak anlamlı seviyede (p<0.05) düşüşe neden olduğu
belirlendi.
Mevcut çalışmada, RKE, NTE ve OLE'nin kolorektal kanser hücrelerinde epigenetik
mekanizmalar aracılığı ile hücre proliferasyonu ve migrasyonunu azaltıcı yönde etkiye
sahip olduğu literatürde ilk kez ortaya koyulmuştur. İleri çalışmalar gerekmekle birlikte
her üç bitki özütünün de kolorektal kanserde yeni tedavilerin araştırılmasına yönelik
çalışmalar için potansiyel birer aday olabileceğini düşünmekteyiz

Abstract:
Colorectal cancer one of the most common cancers in the World. Although surgical
and screening techniques have been improved a lot in last 30 years, chemotherapeutics
have not advanced sufficiently for a successful treatment. New treatments options for
many disease by the help of plant extracts, which are called bioactive agents, have been
searching intensively. Plant extracts, also effective on epigenetic mechanisms, are thought
to be efficious for developing new cancer therapy approaches. Aim of this dissertation
study is to evaluate changes in one of the important epigenetic mechanisms microRNA
(miRNA) expression levels due to effects of plant extracts on the colorectal cell lines.
In present study, Nigella sativa (black cumin) seed extract (NTE), Olea europeae
(olive) leaf extract (OLE) and Rubus fruticosus (blackberry) root extract (RKE) are
investigated in two colorectal cell lines (HT-29 and LoVo) for their anti-proliferative and
migration properties in means of effects on microRNA expressions. Anti-proliferative
effects of plant extract are evaluated by WST-1 assay and cell proliferation is reduced
significantly (p<0.05). In cell migration analysis RKE and NTE reduced migration in both
cell line significantly (p<0.05). Migration properties of LoVo cell line is found to be
inhibited by OLE with nearly significant values (p<0.06). Real time-PCR method is used
for investigation of expression differences in miRNA after extract treatment. Statistically
significant increases are observed in miR-140 expressions in both cell lines after RKE
treatment, and in HT-29 cell line miR-182a expression is again significantly reduced after
both OLE and NTE treatments (p<0.05).
Our data show that NTE, OLE, RKE have capability to inhibit colorectal cancer cell
proliferation and migration by the means of epigenetic mechanisms for the first time in the
literature. Although further studies should be conducted in this topic, all three plant
extracts are thought to be potential candidates for future researches on new therapy options
for colorectal cancer.