Puberte döneminde Capsaıcın uygulanan rat testislerinde transforme edici gelişim faktörü beta 2'nin real-tıme pcr ile gen ekspresyonu ve immunohistokimyasal dağılımı
Evaluating gene expression profile of transforming growth factor beta-2 in the testes of Capsaicin applied rats at the puberty using real-time pcr and immunohistochemical distribution.
Yazar: GÖKHAN NUR
Danışman: PROF. DR. MÜMTAZ NAZLI
Kafkas Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2011
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology
Dizin: Kapsaisin = Capsaicin ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction ; Sıçanlar = Rats ; Testis = Testis ; Tümör nekroz faktörleri = Tumor necrosis factors ; İmmünohistokimya = Immunohistochemistry

Özet:
Çalışmamızda puberte döneminde capsaicin uygulanan rat testislerinde Transforme Edici Gelişim Faktörü Beta-2 (TGF-ß2)'nin Real-Time PCR ile gen ekspresyonu ve immunohistokimyasal lokalizasyonu incelenmiştir.Çalışmada her grupta 10'ar adet Sparaque-Dawley cinsi rat olmak üzere capsaicin (CAP), sham ve kontrol grupları oluşturulmuştur. CAP grubundaki ratlara, 1 mg/kg dozdaki capsaicin % 10 etanol içinde çözündürüldü ve % 1 Tween 20 ile distile su ilavesi yapıldıktan sonra subkutan olarak enjekte edildi. Sham grubuna, 0.3 cc. % 10 etanol, % 1 Tween 20 ve distile sudan oluşan taşıyıcı solüsyon subkutan yolla enjekte edildi. Kontrol grubundaki ratlara herhangi bir enjeksiyon yapılmadı. CAP ve sham grubundaki ratlara 1 hafta boyunca yapılan enjeksiyondan sonra 1 hafta beklenildi ve süre sonunda tüm gruplardaki ratlar dietil eter anestezisi altında servikal dislokasyonla öldürüldü.Ratların canlı ağırlık artışları, CAP grubunda % 9.05, sham grubunda % 17.46 ve kontrol grubunda ise % 25.60, testis ağrlığının canlı ağırlığa oranlamasında, CAP grubu 15.072, sham grubu 13.673 ve kontrol grubu ise 13.907 olarak belirlenmiştir.Testis kesitleri histolojik görünüm açısından değerlendirildiğinde; sham ve kontrol grubunda bağ doku ve seminifer tübülün düzenli yapısının korunduğu ancak CAP grubunda tübül hücre tabakaları arasında boşluklar, tübül hücre duvarında invaginasyon, tübül bütünlüğünde bozulma ve bağ dokuda parçalanmalar gözlenmiştir.Tüm gruplarda TGF-ß2 immunoreaktivitesi olgun spermatitlerde gözlenmiş, ayrıca her üç gruptada immunoreaktivite birbirine benzer yoğunlukta bulunmuştur.Real-Time PCR analizinde; tüm gruplardaki TGF-ß2 amplifikasyon değerleri referans gen olan GAPDH (Gliseraldehit 3-fosfat dehidrojenaz) ile normalize edildiğinde, bu oran CAP grubunda 0.0032, sham grubunda 0.0060 ve kontrol grubunda 0.0076 olarak gözlenmiş ve elde edilen bulgular sonucunda CAP grubunda TGF-ß2 ekspresyonunun kontrol grubuna kıyasla önemli bir azalma gösterdiği belirlenmiştir.

Abstract:
In our study, gene expression and immunohistochemical localization of transforming growth factor beta-2 with Real-time PCR was analysed in the testes of rats, which were implemented capsaicin, during puberty period.In the study, capsaicin, sham and control groups, each group includes 10 Sparaque-Dawley rats, were formed. 1mg/kg dose of capsaicin dissolved in % 10 ethanol and after addition of 1% Tween 20 with distilled water it was injected as subcutan. Carrier solution, which includes 0.3 cc. %10 etanol, %1 Tween 20 and distilled water, was injected with subcutan way. Any injection to rats in the control group was not performed. After the injection, which was progressed for one week, to the rats in the groups of CAP and sham one week awaited and all groups of rats was killed under diethyl ether anesthesia at the end of time with the cervical dislokasyonla.Live weight gain of rats is determined as % 9.05 in the group of CAP, % 17.46 in the sahm group and % 25.60 in the control group while the rationing of testicular weight to the live weight 15.072 in the group of CAP, 13.673 in sham group and 13.907 in the control group.In terms of histological appearance of testicular sections, it was observed that sham and control groups maintained the structure of connective tissue and seminiferous tübülün while CAP groups, gaps among the tubule cells, invagination in the tubule cell wall, tubular integrity degradation, breakdowns in the connective tissue were also monitered.TGF-ß2 immunoreactivity was observed in mature spermatids of all groups; moreover, immuno reactivities in the groups were found to be similar in intensity.In the analysis of Real-Time PCR, when TGF-ß2 amplification values in all groups normalized with the reference gene GAPDH, that ratio was observed as 0.0032 for CAP group, 0.0060 for sham group and 0.0076 for control group and as the result of obtained findings, a significant decrease was determined for CAP group compared with TGF-ß2 expression to the control group.