Mesane kanserli hastalarda Gas6 gen ekspresyonu ve tirozin kinaz Axl – Sky reseptörlerinin tümör evre ve derecesi ile ilişkisi
Gas6 gene expression and tyrosine kinase Axl-Sky receptors: Its relation with tumor stage and grade in patients with bladder cancer
Yazar: HACI MURAT AKGÜL
Danışman: DOÇ. DR. CEM AKBAL
Marmara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Üroloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2013
Konu: Onkoloji = Oncology ; Üroloji = Urology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Mesane = Urinary bladder ; Mesane neoplazmları = Urinary bladder neoplasms ; Neoplazm evreleri = Neoplasm staging ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Reseptörler = Receptors ; Tirozin = Tyrosine

Özet:
ÖZET                              
                                                                                                                 
Amaç:
Tirozin kinaz Axl reseptörü ve ligandı "Growth arrest-specific gen" (Gas6) regülasyon bozukluğunun farklı tümör tiplerinde kötü prognoz ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmada mesane tümörlerinde Gas6 gen ekspresyonu ve tirozin kinaz Axl ve Sky reseptörlerinin tümör evre ve derecesi ile ilişkisi araştırılmıştır.

Materyal ve Metot:
Haziran-Aralık 2012 tarihleri arasında mesane tümörü nedeniyle transüretral rezeksiyon (TUR-Mt) uygulanan 55 hastadan alınan tümör örnekleri ve kontrol grubu olarak radikal prostatektomi operasyonu sırasında normal mesane mukozası alınan 12 hastanın dokuları incelendi. 
Gas6 geni ve Axl, Sky reseptör ekspresyonları söz konusu genlere özel primer dizileri ile 'reverse' transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile değerlendirildi. Doku protein ekspresyon durumu immün-histokimyasal boyama sonrası, sitoplazmik boyama yoğunluğu (0 -3 arası) ve boyanan hücrelerin oranı çarpılarak oluşturulan ekspresyon indeksi ile saptandı. 
Plazma örneklerinde yapılan çalışmalarda ise hastalara ilaveten kontrol grubu olarak malignite hikayesi olmayan 25 bireyden alınan örnekler kullanıldı ve ELISA yöntemi ile Gas6 protein düzeyleri belirlendi. 


Bulgular:
Mesane kanserli hastaların ve kontrol grubunun ortalama yaşları sırasıyla 62,8 ±10,7 ve 57,3± 7,0 yıl olup aralarında istatistiksel olarak anlamlı bir fark saptanmadı (p>0,05). Mesane tümörü hastaları TUR-Mt patolojilerine göre; Ta düşük dereceli (n=17), Ta yüksek dereceli (n=5), T1 düşük dereceli (n=9), T1 yüksek dereceli (n=8) ve T2 yüksek dereceli (n=16) olarak gruplandırıldı.
RT-PCR yöntemi ile yapılan incelemede Gas6 geni ve Axl reseptör ekspresyonunun tümör pozitif hasta grubunda kontrol grubuna göre daha yüksek olduğu ancak aradaki farkın istatistiksel olarak anlamlı olmadığı, immün-histokimyasal incelemede ise kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede fazla protein ekspresyonu olduğu izlendi. 
Hastalar TUR-Mt patolojilerine göre gruplandırıldığında, RT-PCR yöntemi ile Gas6 geni ve Axl reseptörü ekspresyon oranlarında gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı fark izlendi (p˂0,05) ancak Sky reseptörü için istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmadı (p>0,05). 
ELISA yöntemi ile plazma örneklerinde bakılan Gas6 protein düzeyi, tümör grubunda kontrol grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı derecede yüksek bulundu (p<0.001). 

Sonuç:     
Gas6 gen ve Axl reseptör ekspresyonu mesane tümörü varlığı, tümörün evre ve derecesi ile yakından ilişkili olup, neoplastik transformasyon sürecindeki yerini tam olarak anlamak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.

ANAHTAR SÖZCÜKLER: 
Mesane kanseri, Gas6, Gen, Protein, Axl reseptörü, Sky reseptörü

Abstract:
ABSTRACT

Aim:
It has been shown that the dysregulation of tyrosine kinase Axl receptor and its  ligand Growth arrest-specific gene (Gas6) are associated with poor prognosis in  various types of tumors. In this study, we aimed to evaluate the relation of Gas6 gene expression and tyrosine kinase Axl and Sky receptors in patients with bladder cancer.

Material and Methods:
For the studies on bladder tissue; study group consists of the tissues from 55 patients whom transurethral resection (TUR-Mt) has been performed between June-December 2012 due to bladder tumor and the control group consists of the tissues from 12 patients whom normal bladder mucosa has been removed during radical prostatectomy operation, were examined. 
Gas6 gene and Axl, Sky receptors were evaluated by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) with specific primer sequences method and by an expression index, which was generated by multiplying the cytoplasmic staining intensity (between 0-3) and the percentage of stained cells after immune-histochemical staining. 
For the studies on plasma samples, the control group consists of the samples from 25 individuals without a history of malignancy and Gas6 protein levels were evaluted by the ELISA method. 


Results:
Mean ages of the patients with bladder cancer and the control group are 62.8 ±10.7 and 57.3 ±7.0 years, respectively and no statistical significance was determined (p > 0.05). Patients with bladder tumor were grouped as Ta low grade (n=17), Ta high grade (n=5), T1 low grade (n=9), T1 high grade (n=8) and T2 high grade (n=16) according to their TUR-Mt pathologies.
RT-PCR results showed that the expression of Gas6 gene and Axl receptor is higher in the tumor group and the immune-histochemical showed that the bladder samples of the tumor group stained significantly positive compared to the control group.   
When Gas6 protein level in plasma samples are compared by ELISA method, tumor group is statistically significant higher than control group (p<0.001). 

Conclusion:     
Gas6 gene and Axl receptor expressions are closely related with the presence of bladder tumor, further studies are needed for absolute understanding of its place in the neoplastic transformation.


KEYWORDS: 
Bladder cancer, Gas6, Protein, Gene, Axl receptor, Sky receptor