Amin grubu içeren bazı moleküllerin glutatyon redüktaz enzim aktivitesi üzerine etkilerinin in vitro yöntemler ile belirlenmesi
Determining the in vitro effects of chemicals including amine group atom on glutation reductase enzyme activity from human blood
Yazar: MELİSA SEVAL
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ MUHAMMET KARAMAN
Kilis 7 Aralık Üniversitesi / Lisansüstü Eğitim Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry

Özet:
Glutatyon Redüktaz (GR) , NADPH varlığında okside, glutatyonun (GSSG), 2 mol indirgenmiş forma (GSH) dönüşüm reaksiyonunu katalizleyen bir antioksidan enzimdir. GSH, ekzojen toksik maddeleri detoksifiye eder ve reaktif oksijen türlerini söndürerek hücrelerin oksidatif strese karşı korunmasında kritik bir rol oynar. GR enziminin GSH'nun üretilmesinde birincil rol oynaması nedeni ile enzim inhibisyonuna bağlı olarak, GSH eksikliği ya da yetersizliğine bağlı oluşabilecek hastalıkların tahmin edilmesi için bu tez çalışmasında amin grubu içeren moleküllerin enzim aktivitesi üzerine etkileri araştırıldı. Bu amaçla GR enzimi, insan eritrositlerinden afinite ve jel filtrasyon kromatografik teknikleri kullanılarak iki basamakta 571,1 kat saflaştırıldı. Saflaştırma işlemini takiben, SDS-PAGE jel elektroforezi kullanılarak, enzimin molekül kütlesi 65 kDa olarak belirlendi. Saf enzim franksiyonları kullanılarak amin grubu içeren moleküllerin GR enzim aktivitesi üzerine etkileri in vitro yöntemler ile belirlendi. Kinetik çalışmalar sonucunda 4,4-diaminodifenilmetan ve m-ksilendiamin moleküllerinin sırası ile 0,540 μΜ ve 5,72 μΜ IC50 değerleri ile GR enzimini inhibe ettiği, 1,3-fenilendiamin molekülünün ise belirli konsantrasyonlarda GR enzimine karşı aktivatör özelliği sergilediği belirlendi. 4-(Dietilamino)salisilaldehid, 4-nitroasetanalid, 3,5-dimetilpirozol molekülleri ise GR enzim aktivitesi üzerine bir etki göstermediği belirlendi.

Abstract:
Glutathione reductase (GR) is an antioxidant enzyme that catalyzes conversion reaction to 2 moles of reduced glutathione (GSH) from a mole oxidized glutathione (GSSG) in the presence of NADPH. GSH scavenges reactive oxygen species by detoxifying exogen toxic substances and thus plays a critical role in protecting cells against oxidative stress. For this reason, estimation of diseases caused by deficiency of GSH associate with GR enzyme inhibition is quite important. In this thesis, the effect on GR enzyme activity of compounds including the amine group was investigated. For this purpose, the GR enzyme was purified 571,1 fold from human erythrocytes with two purification steps including affinity and gel filtration chromatography methods. Following this, the molecular weight of purified GR enzyme was detected as 65 kDa using SDS-PAGE gel electrophoresis. Effect on GR enzyme activity of the compounds was detected using pure enzyme fraction with in vitro methods. 4,4-diaminodiphenylmethane and m-xylenediamine compounds have exhibited an inhibitor properties against GR enzyme with 0,540 μΜ and 5,72 μΜ IC50 values, respectively. On the other side, while 1,3- phenylenediamine compound has exhibited activator properties at particular concentrations against GR enzyme. 4- (Diethylamino)salicylaldehyde, 4-nitroasetanalid and 3,5- dimethylpyrazole compounds didn't have any effect on GR enzyme activity.