Fare vitiligo modelinde in vitro çoğaltılan dermis kökenli hücrelerin tedaviye yönelik kullanımının ışık ve elektron mikroskobu düzeyinde araştırılması
Investigation of in vitro cultured dermis derived cells for treatmental purpose in A mouse vitiligo model using light and electron microscopy
Yazar: ASLI ERDOĞAN
Danışman: PROF. DR. SEYHUN SOLAKOĞLU
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2015
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Vitiligo deride ve kıl foliküllerinde renk kaybına yol açan ve dünya popülasyonunun %0,5-1'ini etkileyen bir hastalıktır. Çalışmamızda MBEH ile indüklenmiş fare vitiligo modelinde dermisten elde edilen hücrelerin tedaviye yönelik kullanım potansiyelini ışık ve elektron mikroskobu düzeyinde araştırmayı amaçladık.
Vitiligo ve deney grubundaki C57BL/6 farelerin sırt bölgelerine vitiligo oluşturmak amacıyla %40 konsantrasyonda MBEH içeren kremi kıllarda beklenen ağarma gözlenene dek her gün uyguladık. Deney grubundaki farelerin sırt derilerinden primer kültür ile elde ettiğimiz karma hücre popülasyonunu Cell Tracker CM-Dil ile işaretleyerek, vitiligo oluşturduktan sonra otolog ve intradermal olarak enjekte ettik. Deney grubundaki farelerden hücre transplantasyonu sonrasındaki 3. ve 15. günlerde deri örnekleri alarak, kontrol ve vitiligo gruplarından aldığımız örneklerle karşılaştırarak inceledik.
Deney grubundaki farelerden primer kültür ile elde ettiğimiz hücrelerde immünositokimyasal boyamayla nestin ve versikan immünoreaktivitesi gözlemledik. Floresan mikroskobuyla deney grubuna ait dokularda kıl foliküllerinin çevresinde ve dermiste işaretlenmiş hücreler saptadık. Hematoksilen-Eozin ve Fontana-Masson ile yaptığımız histokimyasal boyamalarda vitiligo grubundaki kıl foliküllerinde melanin görmezken, kontrol grubundaki foliküllerde melanin bulunduğunu gözlemledik. Deney gruplarında ise vitiligo grubuna göre melanin içeren kıl folikülü sayısında artış gözlemledik, deney grubunun transplantasyon sonrası 15. gün örnekleri için bu artış istatistiksel olarak anlamlıydı. MART-1 immünohistokimyasal boyamasıyla kontrol grubunda daha çok kıl foliküllerinin çevresinde, vitiligo grubunda ise dermis bölgesinde immünoreaktivite gözlemledik. Elektron mikroskobu ile kontrol grubunun kıl foliküllerinde melanozomların varlığını, vitiligoda melanozom bulunmadığını, deney gruplarında ise melanozom barındıran ve barındırmayan kıl foliküllerini gözlemledik.   
Çalışmamızda elde ettiğimiz sonuçlar dermisten elde ettiğimiz hücrelerin melaninin tekrar üretilmesine katkı sağlayarak vitiligo tedavisinde etkili olabileceğini düşündürmektedir.

Anahtar Kelimeler: vitiligo, MBEH, melanin, kıl folikülü, dermis kökenli hücre

Abstract:
Vitiligo is a depigmentation disease which effects skin and hair follicles with a prevalence of 0.5-1% worldwide. In our study, we aimed to investigate treatmental potential of dermis derived cells in MBEH induced mouse vitiligo model with light and electron microscopy.
40% MBEH cream is topically applied to C57BL/6 mice until depigmentation occurs in vitiligo and experimental groups. In experimental groups, cell population which we proliferated from back skin is injected intradermally to vitiligo mice after labeling with Cell Tracker CM-Dil. At day 3 and 15 after cell transplantation to experimental groups, skin biopsies are compared with biopsies of control and vitiligo groups.
Cell population which we proliferated with primary culture from skins of experimental groups showed nestin and versican immunoreactivity. In tissues of experimental groups, fluorescent cells are observed around hair follicles and within dermis. Histochemical staining showed melanin in hair follicles of control group whereas hardly any melanin is observed in hair follicles of vitiligo group. In experimental groups, there was an increase in the number of hair follicles with melanin compared to vitiligo group. We observed MART-1 immunoreactive cells mostly around hair follicles in control group and within dermis in vitiligo group. Electron microscopic investigation showed existence of melanosomes in hair follicles of control group and absence of them in vitiligo group. In experimental groups, both type of hair follicles are observed with electron microscope.
Our data suggest that cell population which we derived from dermis may be effective in vitiligo treatment providing contribution to melanin production.

Key Words: vitiligo, MBEH, melanin, hair follicle, dermis derived cells