Millipore filtrasyon tekniği ve sitolojik materyallerde kullanılması /
Yazar: BUKET KOSOVA
Danışman: PROF.DR. NEJAT TOPÇUOĞLU
Ege Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 1994
Konu: Tıbbi Biyoloji = Medical Biology
Dizin: Bronkoalveolar lavaj = Bronchoalveolar lavage ; Bronkoalveolar lavaj sıvısı = Bronchoalveolar lavage fluid ; Filtreleme = Filtration ; Hücreler = Cells ; Membranlar = Membranes ; Sitolojik teknikler = Cytological technics

Özet:
ÖZET Günümüzde Millipore filtrasyon tekniği ( MFT ), sanayinin birçok dalında sıvıların sterilizasyonunda, mikrobiyolojik analizinde ve santral sistem suyunun temizlenmesinde kullanıldığı gibi; tıpta, çeşitli hastalıkların sitolojik tanısında, hücre ve doku kültürü sarf malzemelerinin temizliğinde ve sterilizasyonunda; steril oda gibi, bazı yerlerin havasının belirli büyüklükteki partiküllerinden arındırılmasında kullanılmaktadır. Çalışmamızda, MFT uygulamasıyla Bronşioalveolar lavaj (BAL) sıvısında Asbestos cisimcikleri ( Asbestos body - AB ) bakılması yanında; idrarda, peritoneal ponksiyon yada yıkama sıvılarında sitolojik hücre özellikleri araştırıldı. BAL sıvısında AB bakısı için, sıvı eşit miktarda sodyum hipoklorit ile karıştırılıp bir gün bırakıldı. 25 mm çapta, 0.45 mikron por büyüklüğünde Millipore filtreden filtre edilerek, 60°C 'de kurutuldu ve lam üzerine yerleştirilip, 1 / 1 oranında karıştırılmış sentetik balsam ve 1 : 1 etil asetat amil asetat karışımından oluşan kapatma ortamı ve lamel ile kapatıldı. Preparatlar faz kontrast mikroskobunda 250 kez büyütmede incelenerek AB değerlendirmesi yapıldı İdrar materyali 1 : 3 oranında % 30 'luk 1 - propanol ile seyreltilip, 45 mm çapta, 5 mikron por büyüklüğünde Millipore filtreden filtre edildi. Filtre % 95 'lik etil alkolde fıkse edildikten sonra, hematoksilen - eosin boyası ile boyandı ve normal ışık mikroskobunda hücrelerin sitolojik özellikleri açısından incelendi. Batın materyali proteinik içeriğine ve kanlı olup olmadığına göre, fizyolojik su ile seyreltilip, 45 mm çapta, 5 mikron por büyüklüğünde Millipore filtreden filtre edildi. Filtre % 95 'lik etil alkolde fıkse edildikten sonra, hematoksilen - eosin boyası ile boyandı ve normal ışık mikroskobunda hücrelerin sitolojik özellikleri açısından incelendi. Çalışmamızın sonucunda, BAL sıvısında AB taraması için kullanılan yöntemle memnun edici sonuçlar elde edilmiş olup, AB bakısı için standart bir uygulama yöntemi oluşturuldu. Bu yöntemle, asbest maruziyeti olan kişilerde, BAL sıvısında AB bakısı yapılarak, asbest maruziyetini ortaya koyabilecek ve rutin uygulanabilecek standart bir uygulama getirilerek sitolojik tanıya katkı sağlandı.35 İdrar materyalindeki uygulamada; materyalin içerdiği hücre yoğunluğuna göre uygun seyreltmeler yapıldığında iyi sonuçlar elg*e edilmiş olup, standart bir uygulama yöntemi oluşturulması için yeni çalışmalar yapılması gerektiği saptandı. Batın yıkama materyalinde; hücre ve protein içeriği fazla, kanlı materyallerde, uygun seyreltmeler yapıldığında, iyi sonuçlar elde edildi. Ancak tam standart bir yöntemin oluşturulması için, filtrede çabuk tıkanmaya neden olan çok fazla proteinik içeriğin ortadan kaldırılmasına yönelik çalışmaların geliştirilmesi gerektiği sonucuna varıldı. İdrar ve batın yıkama sıvılarından yapılan preparasyonlarda, iyi bir hücre eldesi sağlanmış olup, sitosantrifüj preparatları ile karşılaştırıldıklarında hücresel morfoloji ile detayların daha iyi korundukları ve büyük hacimdeki sıvılar içerisindeki az sayıdaki hücrelerin izole edilmesi için uygun bir yöntem oluşturduğu gözlendi.

Abstract:
ZUSAMMENFASSUNG Heutzutage wird die Millipore Filtration Technik ( MFT ) wie neben den vielen Bereichen der Industrie, z. B. in der Sterilization von Flüssigkeiten, deren Mikrobiologische Analyse und zur Reinigung des Wassers vom Zentralen Wassersystem; auch in der Medizin, z. B. zur Zytologischen Identifikation verschiedener Krankheiten, zur Reinigung und Sterilization der fur die Zell- und Gewebekulturen verwendeten Materialien, zur Reinigung der Luft von Raurnen, wie z. B. steriles Kabinett, von Partikeln bestimmter GroBen angewendet. In unserer Arbeit wurde die MFT neben dem bestimmen von Asbestosekörperchen ( Asbestos body - AB ) in der bronchoalveolaren Lavage ( BAL ) Flüssigkeit, auch zum untersuchen von Zytologischen Zellbesonderheiten von Urin, Peritonealer Punktion- oder Waschfliissigkeit verwendet. Für die Bestimmung von AB in der BAL Flüssigkeit, wird diese mit dem gleichen Volumen Natriumhipochloride vermischt und einen Tag lang zum einwirken gelassen. Nachdem es durch einen Millipore Filter von 25 mm Durchmesser und 0.45 Mikrometern PorengröBe gefıltert wird, wird es bei 60 °C getrocknet, auf einen Objekttrâger gelegt, und mit Hilfe einer in der Proportion von 1 / 1 mit synthetischem Balsam und mit der in der Proportion von 1 1 angefertigten Âthyl- und Amylacetat Lösung selbst zusammengestellten Eindeckmittel mit einem Deckglass verdeckt. Die Prâparate werden anhand eines Phasenkontrast Mikroskobes mit einer GesamtvergröBerung von 250 nach AB durchsucht. Die Urin Probe wird in einer Proportion von 1 : 3 mit 30 % 'igem 1 - Propanol verdiinnt und durch einen Millipore Filter mit 45 mm Durchmesser und 5 Mikrometern PorengröBe gefıltert. Nach dem fixieren des Filters in 95 % 'igem Âthylalkohol, wird es mit einer Hematoxylen - Eosin Fârbung gefarbt und die Zellen mit einem normalem Lichtmikroskop nach deren Zytologischen Eigenschaften hin untersucht. Die Peritoneale Waschflussigkeitsprobe wird nach ihrem EiweiB- und Blutgehalt mit physiologischem Salzwasser verdiinnt und durch einen Millipore Filter mit 45 mm Durchmesser und 5 Mikrometern PorengröBe gefıltert. Nach dem fixieren des Filters in37 95 % 'igem Âthylalkohol, wird es mit einer Hematoxylen - Eosin Fârbung gefarbt und die Zellen mit einem normalem Lichtmikroskop nach deren Zytologischen Eigenschaften hin untersucht. Am Ende un serer Arbeit wurde mit der Methode fîir das aufspüren von AB in der BAL Flüssigkeit ein gutes Resultat erzielt und flir diese Anwedung eine gute Standartsmethode zusammengestellt. Mit dieser Methode können von Leute mit Asbest Belastung, mit dem aufsuchen von AB in deren BAL Flüssigkeit, die Asbest Belastung gezeigt und mit einer in der Routine verwendbaren Standartsmethode, der Zytologischen Diagnose ein Beitrag geleistet werden. In der Methode flir die Urin Probe wurde ein gutes Resultat erzielt, nachdem diese nach ihrem Zellgehalt hin verdünnt wurde; doch flir das Erstellen einer Standartsmethode müBen noch weitere neue Arbeiten durchgefuhrt werden. In der Methode fur die Peritoneale Waschflussigkeitsprobe wurde ein gutes Resultat erzielt, nachdem diese angemessen nach ihrem Zell-, EiweiB- und Blutgehalt verdünnt wurde. Doch um eine korrekte Standartsmethode zu erstellen, müBen zusatzliche Arbeiten für das Entfernen des überflüBigen Proteingehalts unternommen werden, damit diese das Filter nicht zu schnell verstopft. Bei den Prâparationen der Urin- und Peritonealen Waschflussigkeitsproben wurde ein guter Zellertrag erzielt und bei der Vergleichung deren, mit Zytocentrifuge Verfahren angefertigten Prâparationen festgestellt, daB die Zellmorphologie und Einzelheiten besser aufbewahrt werden. Beobachtet wurde auch, das dieses, flir die Isolierung von wenigen Zellen die sich in groBen Flüssigkeitsvolumen befinden, eine gute Methode darstellt.