Retinanın iskemi-reperfüzyon hasarında bir anti-vegf ajan olan bevacizumab'ın etkileri
The effects of an anti-vegf agent bevacizumab in an ischemia-reperfusion model of retina
Yazar: MARYO CENK KOHEN
Danışman: PROF. DR. SİNAN TATLIPINAR
Yeditepe Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2012
Konu: Göz Hastalıkları = Eye Diseases
Dizin: Bevacizumab = Bevacizumab ; Reperfüzyon = Reperfusion ; Reperfüzyon lezyonu = Reperfusion injury ; Retina = Retina ; Vasküler endotel büyüme faktörleri = Vascular endothelial growth factors ; İskemi = Ischemia

Özet:
AMAÇ: Geçici iskemi ve reperfüzyon yaratarak iskemik bir retina modeli oluşturmak ve bu modelde bir VEGF antagonistinin anti-apoptotik ve olası nörodejeneratif etkilerini incelemek.GEREÇ VE YÖNTEM: Bu çalışmada, 18 adet, Wistar cinsi, albino, 4- 6 aylık, yaklaşık 200-300 gr. ağırlığındaki sıçanlar kullanıldı. Retina iskemisi derin anestezi sonrası göz içi basıncı yükseltilerek retinal arterden göze kan akımının engellenmesi ile sağlandı. Göz içi basıncı kornea yoluyla ön kamara girişi ile göze bağlanacak steril serum fizyolojik şişesinin yükseltilmesiyle arttırıldı. Göz içi basıncının yeteri kadar arttığı portatif göz içi basıncı ölçer (Tono-Pen) ile ölçüldü. Hedeflenen göz içi basıncı 90 mmhg'dı. Bu basınç 45 dakika boyunca devam ettirilip daha sonra reperfüzyona izin verildi. Oluşturulacak üç gruptan bir tanesine sadece iskemi uygulandı fakat anti-VEGF ajanı verilmedi. İkinci gruba ise iskemi oluşturulmadan iki gün önce intravitreal yol ile en sık kullanılan anti-VEGF ajan olan bevacizumab 0,05ml(1.25mg) dozunda verildi ve daha sonra iskemi modeli oluşturuldu. Son grup ise kontrol grubu olarak bırakılarak sadece kornea yoluyla ön kamara girişi yapıldı ama göz içi basıncı yükseltilmedi. Bir göze yapılmış olan enjeksiyonun muhtemel sistemik yolla diğer gözü de etkileyebildiği literatürde bahsedildiğinden her sıçanın tek gözü kullanıldı. İntravitreal enjeksiyon limbusun 2mm posterioründen superotemporal kadrandan orta vitreus boşluğuna 30 gaugeluk iğne kullanılarak steril şartlarda uygulandı. Enjeksiyon öncesi pupil dilatasyonu %0.5 tropikamid ve %2.5luk fenilefrin hidroklorid, topikal anestezi propakain HCL, sterilizasyon ise %5'lik povidon iyot konjonktivaya damlatılarak sağlandı.Ötanazi sonrası ise oluşturulmuş 6'şar üyeli 3 grup içinden her grup için ayrı ayrı 6 hayvan histomorfometrik 4 hayvan ise immünohistokimyasal ve histopatolojik incelemeye tabi tutuldu. Histomorfometrik olarak retina ganglion hücre sayısı optik dissektör yöntemi ile sayıldı, immünohistokimyasal olarak ise retina dokusunda hücre apoptozisi ve VEGF düzeyleri bakıldı.BULGULAR: Bevacizumab iskemi reperfüzyon hasarında retina ganglion hücre ölümünü ve apoptozu azalttığı görülmüştür. Bevacizumab büyük bir molekül olsa da koroidde de etkili olduğu ve bu dokudaki VEGF miktarını azalttığı tespit edilmiştir.TARTIŞMA: VEGF nörotrofik bir madde olsa da iskemi-reperfüzyon hasarında anti-VEGF bir molekül olan bevacizumab tedavisi apoptozisi azaltmaktadır.

Abstract:
OBJECTIVE: To create a model of ischemic retina by temporary ischemia and reperfusion and examine the possible anti-apoptotic and neurodegenerative effects of a VEGF antagonist.MATERIALS AND METHODS: In this study, 18 Wistar, albino, 4 - 6 months, approximately 200-300 g. weighing rats were used. After deep anesthesia retinal ischemia was induced by raising intraocular pressure which stopped blood flow to the eye by retinal arteries. Intraocular pressure was increased by connectting a bottle of sterile saline to the anterior chamber through cornea. Intraocular pressure was measured by portable (Tono-Pen). Target intraocular pressure was 90 mmhg. This pressure was continued for 45 minutes and then reperfusion was allowed. For the first group ischemia was induced but an anti-VEGF agent was not given. For the second group two days before ischemia 0.05 ml (1.25mg)of the most commonly used intravitreal anti-VEGF agent, bevacizumab, was administered intravitrealy and then ischemic model was created. The last group?s intraocular pressure was not increased as being the control group , only a cannula was introduced into the anterior chamber through the cornea. In the in study only one eye of each rat was used because the injection made to one eye was likely to affect the other eye by the systemic route as mentioned in the literature. Intravitreal injection was performed by a 30 gauge needle under sterile conditions into the mid-vitreous cavity from the superotemporal quadrant 2mm posterior to the limbus. Before injection pupil was dilatated by 2.5% tropicamide and phenylephrine hydrochloride 0.5%. For topical anesthesia HCL propakain was used and sterilization was achieved by dropping 5% povidone-iodine on the conjunctiva.After euthanasia 6 animals from each group were subjected to histomorphometric and four were subjected to immunohistochemical and histopathologic examinations. For histomorphometric examination the number of retinal ganglion cells was counted by optical dissector method. For immunohistochemistry, VEGF levels and apoptosis were examined in the retinal tissue.RESULTS: It was observed that in ischemia reperfusion injury bevacizumab reduces retinal ganglion cell death and apoptosis. It was also identified that although a large molecule bevacizumab effec ts the choroid and reduces the amount of VEGF in this tissue.DISCUSSION: Even though VEGF is a neurotrophic molecule, in the ischemia-reperfusion injury bevacizumab treatment which is an anti-VEGF agent decreases apoptosis