Kolon kanserli hastalarda interlökin-21 ve interlökin-32 gen ekspresyon düzeyleri ve metastaz ilişkisi
Il-32 and il-21 gene expression levels in patients with colon cancer
Yazar: GİZEM ÖVGÜ ÖNER
Danışman: PROF. DR. EMİN KANSU ; YRD. DOÇ. DR. FÜSUN ÖZMEN
Hacettepe Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı / Tümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2014
Konu: Onkoloji = Oncology
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Kolon neoplazmları = Colonic neoplasms ; Neoplazm metastazları = Neoplasm metastasis ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Sitokinler = Cytokines ; İnterlökin 21 = Interleukin 21 ; İnterlökin 32 = Interleukin 32

Özet:
Erdem G.Ö. Kolon Kanserli Hastalarda İnterlökin-21 ve İnterlökin-32 Gen Ekspresyon Düzeyleri ve Metastaz İlişkisi. Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tümör Biyolojisi ve İmmunolojisi Yüksek Lisans Tezi. Ankara, 2014. Tümör mikroçevresi tümörü, stromayı, stromayla ilişkili ve tümöre infiltre immün sistem hücrelerini içerir. Bu mikroçevredeki immün sistem hücrelerinden salınan kemokin ve sitokinler tümörün prognozunda önemli rol oynar ve tümörün immün fenotipini belirlerler.  IL-32 ve IL-21 immün sistem hücrelerinden salınan proinflamatuvar sitokinlerdir.  IL-32 Th, NK hücreleri, makrofaj ve epitelden, IL-21 ise Th, Tfh, Th17, NKT hücrelerinden salgılanır. Bu sitokinlerin gen ekspresyon düzeyleri kanserin bulunduğu dokuya göre değişim gösterir. Bu çalışmada kolon kanserli hastalarda IL-32 ve IL-21' in gen ekspresyon düzeyleri ve bu sitokinlerin klinikopatolojik parametrelerle ilişkisinin araştırılması amaçlandı. Çalışmaya kolon kanseri tanısı almış 31(17 K) hasta alındı. Ameliyat sırasında hastaların tümörlü ve tümörsüz dokularından örnekler alındı. Bu dokulardan RNA izolasyonu yapıldıktan sonra IL-32 ve IL-21 gen ekspresyon düzeyleri gerçek-zamanlı PCR kullanılarak ölçüldü. Tümörlü dokudaki rölatif gen ekspresyon düzeyi 2-∆∆Ct yöntemi kullanılarak hesaplandı. Ekspresyon düzeyleri ile tümör diferansiyasyonu, evresi, lenf nodu metastazı, vasküler ve perinöral invazyon arasındaki ilişki araştırıldı. IL-32 gen ekspresyonu genel olarak tümörlü dokuda, tümörsüz dokuya göre artış göstermekteydi (median: 1.16). Hastaların %51.6' sında artmış, %48.4' ünde ise azalmış değerler bulundu. IL-21 gen ekspresyon düzeyi tümör dokusunda azalma eğiliminde (median: 0.911) olmasına karşın hastaların %50'sinde artmış, %50' sinde ise azalmıştı.  IL-32 gen ekspresyonu, erken evre kanserlerde düşük düzeyde seyrederken tümör duvarını aşıncaya kadar yükselmekte, ileri evrede özellikle lenf nodu tutulumu ile tekrar düşüş göstermekteydi. Bu ekspresyon düzeyleri patolojik tümör (pT) evresi ile de uyumlu bulundu. Bu bulguyu destekler şekilde tümörlü lenf nodu sayısı arttıkça IL-32 ekspresyon düzeyinin anlamlı düzeyde azaldığı tespit edildi. Öte yandan, IL-21 ekspresyon düzeylerinin vasküler invazyon varlığında anlamlı biçimde arttığı izlendi.  
Sonuç olarak, kolon kanseri mikroçevresinde eksprese olan IL-21 ve IL-32 'ye ilişkin bulgularımız, IL-32 ekspresyonunun tümörün büyümesini kontrol altına alabilmek için artış gösterdiğine, tutulan lenf nodu sayısı arttıkça ekspresyonunun azaldığına;  vasküler invazyon ve lenf nodu tutulumu ile birlikte artan IL-21 düzeyleri de kolon kanserinde tümör büyümesi ve yayılımında sitokinlerin rolü olabileceğine işaret etmektedir.

Abstract:
Erdem, G.Ö. Interleukin-21 and Interleukin-32 gene expression levels and their relationship with metastasis in colon cancer. Hacettepe University, Institute of Health Sciences, A dissertation for the degree of Master of Science in Tumor Biology and Immunology. Ankara, 2014. Tumor microenvironment contains tumor cells, immune cells, stroma and stroma associated immune cells. This microenvironment of the immune system cells release chemokines and cytokines which play an important role in the prognosis of the tumor and determine the immune phenotype of the tumor. IL-32 and IL-21 are pro-inflammatory cytokines released by immune system cells. IL-32 is released by Th, NK, macrophages and epithelium and IL-21 is relased by Th, Tfh, Th17, NKT cells. The gene expression levels of these cytokines changes according to their location. Present study aims to evaluate the gene expression levels of IL-21 and IL-32 and their relationship with clinicopathologic parameters in patients with colon cancer. 31(17F) patients with diagnosis of colon cancer were included. Samples were obtained from normal and tumor tissues during surgery. After RNA isolation, IL-21 and IL-32 gene expression levels were measured using real-time PCR. The relative gene expression levels in tissues were calculated using using 2-∆∆Ct method. The relations between expression levels and tumor differentiation, tumor stage, presence of vascular, perineural invasion and lymph node metastasis were investigated. While IL-32 gene expression levels were found to be increased in tumor tissues (median: 1.16). IL-32 were increased in 51.6 % and decreased in 48.4% of the patients. IL-21 gene expression levels were found to be decreased (median:0.911) in 50% of the patients. While IL-32 expression levels were low in early stages of the tumors, continued to increase with the stage till passing the colonic wall, but were found to be decreased again with the involvement of lymph nodes. These expression levels were also in correlation with the pathological T stages (pT) of the tumor. IL-32 expression levels were also decreased significantly with the increased number of the lymph nodes with metastasis. On the other hand, expression levels of IL-21 increased significantly with the presence of vascular invasion. In conclusion, our findings on IL-21 and IL-32 expressed by tumor microenvironment reveals that IL-32 expression increased to control tumor growth, but levels are decreased with the increased number of involved lymph nodes. Increased levels of IL-21 with vascular invasion and lymph node involvement, together with the changes on IL-32, indicates the role for cytokines in tumor growth and invasion in colon cancer.