0-6 yaş grubu sağlıklı Türk çocuklarında timopoezin izlenmesi
Evaluation of the thymopoiesis in healthy Turkish children between 0-6 years
Yazar: AKİF KAVGACI
Danışman: PROF. DR. KAMİLE AYDAN İKİNCİOĞULLARI
Ankara Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2018
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Akım sitometrisi = Flow cytometry ; Antikorlar-monoklonal = Antibodies-monoclonal ; T lenfositleri = T lymphocytes ; Timopoietinler = Thymopoietins ; Timus bezi = Thymus gland ; Türk çocukları = Turkish children ; Çocuklar = Children ; İmmün yetmezlik = Immun deficiency ; İmmün yetmezlik sendromları = Immunologic deficiency syndromes

Özet:
Primer immün yetmezlikler (PİY), immün sistemi oluşturan komponentleri kodlayan genlerdeki mutasyon sonucu ortaya çıkan bir grup kalıtsal hastalıktır. Ülkemizde yaygın olan PİY'lerde erken tanı ve etkin tedavi hayat kurtarıcıdır. Ağır kombine immün yetmezlik (AKİY) temel olarak T hücre gelişim bozukluğudur. Bu hastalığa yol açan 20 kadar genetik defekt tanımlanmıştır. AKİY'lerde yetersiz timopoez nedeniyle deneyimsiz (naif) T hücre sayılarında düşüklük saptanmaktadır. Günümüzde timopoez; bir başka deyişle timus bezinin fonksiyonu; timustan periferik kana geçen naif (deneyimsiz) T hücre gelişiminin ''Recent Thymic Emigrants'' -YTG (Yeni Timik Göçmenler)- gösterilmesi sayesinde ölçülebilmektedir. YTG 2 yöntem ile değerlendirilmektedir. Birincisi TREC; yani moleküler olarak T hücre reseptörünün gelişimi sırasında gerçekleşen VDJ genlerinin rekombinasyonundan arta kalan sirküler yapılı DNA artıklarının ölçümüdür. Diğeri ise CD4, CD45RA ve CD31 monoklonal antikorlarını yüzeyinde taşıyan timustan yeni olarak periferik kana geçen T lenfositlerinin akım sitometrisi ile (flow cytometry) tanımlanması esasına dayalı ölçümüdür. Bu hücrelerin TREC içeriği yüksektir. Bu çalışmanın amacı, kordon kanı ve 0-6 yaş grubu sağlıklı Türk çocuklarında, periferik kanda timustan yeni çıkan naif T lenfositleri;yani YTG (CD4+CD45RA+CD31+) sayı ve düzeylerini immünfenotipik yöntemle ölçerek, farklı yaş gruplarında YTG normal (referans) değerlerini belirlemek ve bu yolla sağlıklı bebek ve çocuklarda timopoezi değerlendirmektir. Çalışmamızda, TREC düzeyini temsil ettiği bilinen CD4, CD45RA, CD31 belirteçlerini yüzeyinde taşıyan T lenfositlerini akım sitometrisi ile ölçerek periferik kanda YTG (CD4+CD45RA+CD31+) hücre düzeyleri normalleri belirlenmiş olup kordon kanı ve 0-6 yaş dönemi 6 ayrı yaş grubunda ülkemiz sağlıklı çocuklarında normal (referans) değerler oluşturulmuştur. Yaşla birlikte YTG (CD4+CD45RA+CD31+) hücre düzeylerinin absolü sayısı (p<0.001) ve yüzde değer (rölatif) oranları (p= 0,018) azaldığı saptanmıştır. Bu değişime yaşla beraber timus dokusundaki involusyonun neden olduğu düşünülmüştür. Çalışmamızda ayrıca absolü lenfosit sayısının yaşla birlikte değiştiği, 6 ay ve 1 yaş gruplarında %5 alt sınırın sırasıyla 3132/mm³ ve 3056/mm³, daha büyük yaş gruplarında azalarak 4 yaş grubunda 1850/ mm³'e olduğu belirlenmiştir. Bu veriler ışığında, süt çocukluğu dönemi sonrasında özellikle 4 yaş üstü lenfopeni sınırının genel kabul olan 1500/mm³'den daha yüksek (1850/ mm³) olduğu gösterilmiştir. Primer immün yetmezliklerin önemli bir sağlık sorunu olduğu ülkemizde, kanımızca, PİY ön tanılı hastalarda belirlenen CD4+CD45RA+CD31+ hücre düzey ve sayılarının bu yaş normalleri ile kıyaslanarak değerlendirilmesi, hastalarının tanı ve tedavilerine önemli ölçüde katkı sağlanacaktır. Bu noktadan hareketle CD4+CD45RA+CD31+ hücre tayini, PİY hastalarının tanı ve tedavisini yürüten tüm merkezlerde periferik kan lenfosit alt grupları panelinde yer almalıdır.

Abstract:
Primary immunodeficiencies (PIDs) are a group of hereditary diseases result from mutations in genes that encode the components of the immune system. Early diagnosis and effective treatment is life-saving in primary immunodeficiencies which are common in our country. Severe combined immunodeficiency is constitutively a T-cell developmental defect. Up to 20 genetic defects leading to this disease have been identified. There is a reduction in naive T cell counts due to inadequate thymopoiesis in severe combined immunodeficiencies. At the present time, thymopoiesis meaning the function of the thymus gland can be measured by demonstration of naive T cell development -Recent Thymic Emigrants(RTE)- that passes into peripheral blood from thymus. RTE can be measured by two methods. The first of these methods is TREC: is the remaining residual circularly formed DNA residues from recombination of VDJ genes that occur molecularly during the normal development of the T cell receptor. The other measurement is based on flow cytometry identification of T lymphocytes newly inflowing peripheral blood from the thymus carrying CD4, CD45RA, CD31 monoclonal antibodies (markers) on its surface. The TREC content of these cells is high. The aim of this study was to determine RTE normal (reference) levels in different age groups (cord blood and 0-6 age group healthy Turkish children) by measuring the number and levels of RTE (CD4 + CD45RA + CD31 +) (naive T lymphocytes newly emerging from thymus to peripheral blood) and to evaluate thymopoiesis in healthy infants and children in this way. In our study, RTE (CD4 + CD45RA + CD31 +) cell levels in peripheral blood were normalized by measuring T lymphocytes bearing surface CD4, CD45RA, CD31 markers that represent TREC levels by flow cytometry. In six different age groups (cord blood and 0-6 age group) normal (reference) values were established in healthy children of our country. The absolute numbers (p <0.001) and relative ratios (p = 0.018) of RTE (CD4+CD45RA+CD31+) decreased with age. This alteration was thought to be caused by the involution of the thymus tissue with age. In our study, the levels of absolute lymphocytes changed with age, and in groups of 6 months and 1 age group, 5% lower limit was 3132/mm3 and 3056/mm3 respectively. The levels of lymphocytes decreased in older age groups and it was found to be 1850/ mm3 in 4 age group. In the light of these data, it has been shown that the lymphopenia limit after infancy especially after above 4 years of age is higher than the general accepted 1500/mm3 (1850/ mm3). In our country, where primary immunodeficiency is an important health problem, we believe that CD4+CD45RA+CD31+ cell levels in primary immunodeficiency pre-diagnosed people compare with healthy people will contribute significantly to the diagnosis and treatment. From this point on, the CD4 + CD45RA + CD31 + cell assay should be included in the panel of peripheral blood lymphocyte subgroups in all centers that perform the diagnosis and treatment of primary immunodeficiency patients.