Oral alınan deterjanların kolon epitelyal bariyerine etkisinin e-cadherın, N- cadherın , alfa smooth muscle actin (α-SMA) ve transepithelial electrical resistance (TEER) ölçümleri ile belirlenmesi
Determination of the effect of oral detergents on the epithelial barrier of the colon by measurements of e-cadherin, N-cadherin, alpha smooth muscle actin (α-SMA) and transepithelial electrical resistance (TEER)
Yazar: GÖZDE İREM ODABAŞ SELÇUK
Danışman: PROF. DR. HASAN YÜKSEL
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları = Child Health and Diseases
Dizin: Alfa SMA = Alpha SMA ; Cadherinler = Cadherins ; Deterjanlar = Detergents ; Epitel = Epithelium ; Epitel hücreleri = Epithelial cells ; Kolon = Colon ; TEER = TEER

Özet:
Epitel doku ve oluşturduğu bariyer canlılığın devamı için çok önemlidir. Kolon epitel bariyeri hem mikrobiyal kontaminasyonunu önlemekte hem de besin ve su taşınımında çok önemli fizyolojik roller oynamaktadır. E-cadherin epitelyal; N-cadherin ve alfa-SMA mezenkimal belirteçler olup epitel bariyer disfonksiyonu bu belirteçler ile değerlendirilebilmektedir. TEER ölçümü de epitel bariyer fonksiyonunu belirlemede kullanılan en önemli metotlardan biridir. Çalışmamızın amacı farklı konsantrasyonlarda deterjan uygulanmış bağırsak epitel hücrelerinin bu belirteçler aracılığıyla epitel bariyer disfonksiyonunu değerlendirmek ve proktokolit patogenezinde deterjanların rolüne değinmektir. 
GEREÇ VE YÖNTEM
İnsan kolon epitel hücrelerine(Caco2) 1/25.000 ve 1/50.000 oranlarında seyreltilmiş olan bulaşık deterjanı uygulandı. Sonrasında Western blot yöntemi ile 24 ve 72. saatte e-cadherin, n-cadherin ve alfa-SMA düzeyleri ölçüldü. Eş zamanlı olarak 24 ve 72. saatte TEER düzeyi ölçüldü.
BULGULAR
1/25000 konsantrasyonda deterjan uygulanan hücrelerde 24. saatte yapılan ölçümlerde TEER değerinde anlamlı azalma; E-cadherin ve alfa-SMA değerinde anlamlı artış görüldü. N-cadherinin tekrarlayan 3 ölçümde aynı değerde çıkması nedenli istatistiksel analiz yapılamadı .Aynı konsantrasyonda 72. saat ölçümünde TEER değerinde anlamlı fark saptanmazken; E-cadherin değerinde anlamlı artış, n-cadherin ve alfa-SMA değerinde anlamlı azalma görüldü . 
1/50000 konsantrasyonda deterjan uygulanan hücrelerde 24. saatte yapılan ölçümlerde TEER değerinde anlamlı artış ; E-cadherin ve n-cadherin değerinde artış , alfa-SMA değerinde anlamlı azalma görüldü . Aynı konsantrasyonda 72 saatte yapılan ölçümlerde TEER ve e-cadherin değerinde anlamlı fark saptanmazken; n cadherin ve alfa SMA değerinde anlamlı azalma saptandı .
SONUÇ
Deterjanın TEER değerini düşürdüğü ve doz bağımlı olduğu görülmüştür. Burdan yola çıkılarak epitel bariyerini bozucu etkisi anlaşılmıştır . EMT( Epitelyal-mezenkimal dönüşüm ) üzerindeki etkilerine EMT belirteçleri aracılığıyla bakıldığında doza ve ölçüm zamanına göre değişken sonuçlar görülmektedir . Doğru doz ve uygulama süresini belirlemek için daha ayrıntılı çalışmalara ihtiyaç duyulmaktadır .

Abstract:
Epithelial tissue and the barrier it creates are very important for the continuation of life. The colon epithelial barrier both prevents microbial contamination and plays very important physiological roles in nutrient and water transport. E-cadherin epithelial; N-cadherin and alpha-SMA are mesenchymal markers and epithelial barrier dysfunction can be evaluated with these markers. TEER measurement is one of the most important methods used to determine epithelial barrier function. Our study aims to evaluate the epithelial barrier dysfunction of intestinal epithelial cells treated with different concentrations of detergent through these markers and to address the role of detergents in the pathogenesis of proctocolitis.
MATERIALS AND METHODS
Dishwashing detergent diluted at 1/25,000 and 1/50,000 ratios was applied to human colon epithelial cells. Afterward, e-cadherin, n-cadherin and alpha-SMA levels were measured at 24 and 72 hours by Western blot method. TEER level was measured simultaneously at 24 and 72 hours.
RESULTS
In cells where detergent is applied at a concentration of 1/25000; Significant decrease in TEER value, significant increase in E-cadherin and alpha-SMA values were observed in the measurements made at the 24th hour. Statistical analysis could not be performed because N-cadherin was found to be the same in 3 repeated measurements. While there was no significant difference in TEER value at the same concentration at the 72nd hour measurement, a significant increase in E-cadherin value, and a significant decrease in n-cadherin and alpha-SMA values were observed.
In cells where detergent is applied at a concentration of 1/50000; Significant increase in TEER value in measurements made at 24 hours; An increase in e-cadherin and n-cadherin values and a significant decrease in alpha-SMA values were observed. In the measurements made at the same concentration in 72 hours; While there was no significant difference in TEER and e-cadherin values; n cadherin and alpha SMA values were significantly decreased .
CONCLUSION
It was observed that the detergent decreased the TEER value and was dose dependent. From this point of view , its detrimental effect on the epithelial barrier was understood . When the effects on EMT (Epithelial-mesenchymal transformation) are examined through EMT markers, variable results are seen according to dose and measurement time. More detailed studies are needed to determine the correct dose and duration of administration .