Kara dut (Morus nigra) yaprağı etanol ekstraktının DNA glikasyonuna etkısi
The effect of ethanol extract of leaf of black mulberry (Morus nigra) on DNA glycation
Yazar: FERYAL ZELİHA AKAY BÜLBÜL
Danışman: PROF. DR. GÖKSEL KIZIL
Dicle Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Kimya = Chemistry
Dizin: Morus nigra L. = Morus nigra L.

Özet:
Son 30 yılda hem sanayileşmiş hem de gelişmekte olan ülkelerde şeker katkılı gıdaların ve şekerli içeceklerin tüketiminin artması ile metabolik hastalıklarda hızlı bir artış meydana gelmiştir. Özellikle fruktozun tatlandırıcı olarak yaygın şekilde kullanılmasının lipogenezis ve hücre içi lipit birikimini arttırdığı bilinmektedir. Modern beslenme ile ilişkili metabolik hastalıkların patogenezinde ortaya çıkan bir konu İleri Glikasyon Son Ürünlerin (AGE) rolüdür. AGE'leri sadece metabolik kontrolü değil aynı zamanda küresel sağlığı da etkilemektedir. DNA'nın şekerle reaksiyona girmesi DNA-AGE oluşumu ile sonuçlanır. Glikasyon DNA' ya önemli derecede hasar verir. DNA'nın depürinasyonu iplikçik kopması, ekleme, slime gibi mutasyonlara neden olur. Bu nedenle DNA-AGE'leri; yaşlanma sırasında oluşan genomic bütünlüğün kaybedilmesi, kanser, nörolojik hastalıklar ve kalp dammar hastalıkları gibi birçok hastalığın en önemli nedenlerinden biridir. İleri glikasyon sürecinin Diyabetus mellitusta komplikasyonlarının gelişiminde önemli rol oynadığı bilinmektedir.
Bu tez çalışmasında, Kara dut (Morus nigra) yaprağının; sokslet, maserasyon, ultrasound yöntemleri ile hazırlanan etanol ekstraktlarının total fenolik, total flavonoid, ve 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikalini söndürme aktivitesi incelendi. Sokslet yöntemi ile elde edilen ekstrakt test edilen tüm parametlerde en iyi aktiviteyi gösterdiği belirlendi. Bu yöntemle elde edilen ekstraktın aynı zamanda hidroksi radikalini söndürme aktivitesine bakıldı. Ayrıca Kara dut yapraklarının etanol ekstraktının ve yaprağın etken maddelerinden biri olan kuarsetinin fruktoz kaynaklı DNA glikasyonunu ve hidroksi radikali kaynaklı  oksidatif DNA hasarını inhibisyon etkilerinin belirlemesi amaçladı. Çalışmada, fruktoz (50mM) ile plasmid DNA ( 25µg/ml ) % gün boyunca steril koşullarda 37oC' de inkübe edildi. Dut yaprağının etanol ekstraktı (50-250 µg/ml) ve kuersetin (50-250 µg/ml)'nin antiglikasyon aktiviteleri incelendi. Reaksiyon ürünü, floresans ve UV spektroskopisi, nitroblue tetrazolium (NBT) indirgeme analizi ve elektroforetik çalışma ile karakterize edildi.
Sonuç olarak; M. nigra yaprağı etanol ekstraktlarının 1mg'ının içerdiği fenolik bileşenleri; sokslet yönteminde 76,3±0.003µg Gallik asit (GAE), maserasyon yönteminde 64,4±0.003 µg Gallik asit (GAE), ultrasound yönteminde 54,8±0.003 µg Gallik asit (GAE) eşdeğer olarak belirlendi. M. nigra yaprağı etanol ekstraktının 1 mg'ının içerdiği flavonoid miktarı ise; sokslet yönteminde 143.94±0.06 µg Kuersetin (QUE), maserasyon yönteminde 138,62±0.06 µg Kuersetin (QUE), ultrasound yönteminde 105,33±0.06 µg Kuersetin (QUE) eşdeğer olarak hesaplandı.

Abstract:
Over the past 30 years, with the rise of sugar-added foods in both industrialized and developing countries, and with the increase in the consumption of sweetened beverages, a rapid increase in metabolic diseases has occurred. It is known that the widespread use of fructose as a sweetener enhances lipogenesis and intracellular lipid accumulation. One issue that arises in the pathogenesis of metabolic diseases associated with modern nutrition is the role of Advanced Glycation End Products (AGEs). AGEs not only affect metabolic control, but also affect global health. Reaction of DNA with sugar results in DNA-AGE formation. Glycation causes significant damage to DNA. Depurination of DNA causes mutations such as strand breakage, splicing, slime. DNA-AGEs for this reason; loss of genomic integrity during aging, cancer, neurological diseases and heart dammar diseases are among the most important causes of many diseases. It is known that the advanced glycation process plays an important role in the development of complications of diabetes mellitus.
In this thesis, we have studied the black mulberry (Morus nigra) leaf; The extinguishing activity of total phenolics, total flavonoids, and 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radicals of ethanol extracts prepared by soxlet, maceration and ultrasound methods was examined. The extract obtained with the soxhlet method showed the best activity in all the tested parameters. The extract obtained by this method was also examined for quenching activity of the hydroxy radical. It was also aimed to determine the inhibitory effects of oxidative DNA damage induced by fructose-derived DNA glycation and hydroxy radicals of ethanol extract of black mulberry leaves and quercetin, one of the active ingredients of the leaf. In the study, plasmid DNA (25μg / ml) with fructose (50 mM) was incubated at 37 ° C in sterile conditions throughout the day. Antigelling activities of ethanol extract of mulberry leaf (50-250 μg / ml) and quercetin (50-250 μg / ml) were investigated. Reaction product was characterized by fluorescence and UV spectroscopy, nitroblue tetrazolium (NBT) reduction analysis and electrophoretic study.
In a conclusion; the phenolic constents of 1 mg of M. nigra leaf ethanol extracts; we found to be 76.3 ± 0.003μg (GAE) gallic asid in soxhlet method ,64.4 ± 0.003 μg (GAE) gallic asid in maceration method and 54.8 ± 0.003 μg (GAE) gallic asid in ultrasound method. The flavonoid contents we found to be 143.94 ± 0.06 μg Quercetin (QUE) in soxhlet method, 138.62 ± 0.06 μg Quercetin (QUE) in  maceration method and 105.33 ± 0.06 μg Quercetin (QUE)in ultrasound method.