Uzun süreli steroid baskısı altındaki farelerde oluşturulan yara modelinde fare embriyonik kök hücrelerinden farklılaştırılan keratinositlerin yara iyileşmesi üzerine olan etkisi
The effect of keratinocytes differentiated from mouse embryonic stem cells on wound healing in a wound model created in mice under long-term steroid pressure
Yazar: İLAYDA GENÇER USLU
Danışman: PROF. DR. HASAN AYDEDE
Manisa Celal Bayar Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Genel Cerrahi Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2023
Konu: Genel Cerrahi = General Surgery ; Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Kronik hastalıklara bağlı uzun dönem steroid kullanımı yara iyileşmesini geciktirerek kronik yaralara neden olmaktadır. Deksametazon sıklıkla kullanılan glukokortikoidlerden biridir. Bu uzmanlık tezinin amacı farelerde uzun dönem steroid kullanımında, fare embriyonik kök hücrelerinden farklılaştırılan keratinosit benzeri hücrelerin yara iyileşmesine etkilerinin histokimyasal ve immünohistokimyasal yöntemlerle incelenmesidir. 
64 adet balb-c tipi erkek fare sadece yara modeli oluşturulan (yara grubu); yara modeli oluşturulduktan sonra keratinosit uygulanan (hücre grubu); 1 hafta günde 2 mg/kg deksametazon uygulandıktan sonra yara yeri oluşturulan ve deksametazon uygulamasına devam edilen (steroid grubu) ve yara modeli oluşturulmadan önce 1 hafta günde 2 mg/kg deksametazon uygulanan, yara modeli oluşturulduktan sonra keratinosit uygulanan ve deksametazon uygulamasına devam edilen (steroid+hücre grubu) olmak üzere 4 gruba ayrıldı. Yara yerine uygulanacak olan keratinosit benzeri hücrelerin, fare embriyonik kök hücrelerinin fare fibroblastları ile kültüre edilmesi ile çoğaltıldı, BMP-4 uygulaması ile farklılaştırıldı, sitokeratin-8 ve sitokeratin-14 seviyelerinin hem immünositokimyasal hem de akış sitometrisi ile doğrulanmasıyla karakterizasyonları tamamlandı. Keratinosit benzeri hücreler sadece hücre ve hücre+steroid grubuna bir kez uygulandı, deksametazon uygulamasına steriod ve hücre+steroid grubunda yara oluşturulduktan sonra 21 gün boyunca devam edildi. Yara oluşturulması sonrası 10. ve 21. günlerde alınan deri doku kesitleri öncelikle hematoksilen-eozin boyaması ile değerlendirildi. Sonrasında sitokeratin-8, sitokeratin-14, MCP-1, TNF-α, VEGF, IL-1β ve COL1A1'in dağılımları immünohistokimyasal olarak değerlendirilerek yara iyileşme süreçleri izlendi ve grupların birbirleriyle karşılaştırılması yapıldı. 
Sonuçlar uzun dönem steroid varlığında (21 gün) histokimyasal olarak yara iyileşmesinin hücre uygulaması ile pozitif yönde etkilendiğini, immünohistokimyasal olarak keratinosit benzeri hücrelerin yara yerinde sitokeratin ekspresyonuna devam ettiğini, 21 gün boyunca bazal düzeyde kalan TNF-α'ya karşın negatif izlenen IL-1β'ya ek olarak MCP-1, VEGF ve COL1A1 seviyelerindeki artış birlikte yara yerine hücre uygulamasının keratinizasyonu destekleyerek yara iyileşmesine katkı sağlandığını gösterdi. Bu uzmanlık tezi klinik pratik için bir ön bilgi sağlamıştır, halen farklı gereç ve yöntemlerle yapılan çalışmalara ihtiyaç vardır.

Abstract:
Long-term steroid use due to chronic diseases causes chronic wounds by delaying wound healing. Dexamethasone is one of the commonly used glucocorticoids. The aim of this specialization thesis is to examine the effects of keratinocyte-like cells differentiated from mouse embryonic stem cells on wound healing by histochemical and immunohistochemical methods in long-term steroid use in mice.
64 balb-c type male mice were divided into 4 groups: only the wound model was created (wound group); after the wound model was created, keratinocyte was applied (cell group); after applying 2 mg/kg dexamethasone per day for 1 week, the wound model was created and dexamethasone application was continued (steroid group); 2 mg/kg dexamethasone was applied daily for 1 week before the wound model was created, keratinocyte was applied after the wound model was created and dexamethasone application was continued (steroid group+cell group). Keratinocyte-like cells to be applied to the wound site were amplified by culturing mouse embryonic stem cells with mouse fibroblasts, differentiated by BMP-4 application, and their characterization was completed by confirming cytokeratin-8 and cytokeratin-14 levels both by immunocytochemical and flow cytometry. Keratinocyte-like cells were applied only once to the cell and cell+steroid group, and dexamethasone application was continued for 21 days in the steroid and cell+steroid group after the wound was created. Skin tissue sections taken on the 10th and 21st days after wound formation were first evaluated by hematoxylin-eosin staining. Afterwards, the distributions of cytokeratin-8, cytokeratin-14, MCP-1, TNF-α, VEGF, IL-1β and COL1A1 were evaluated immunohistochemically, the wound healing processes were monitored and the groups were compared with each other. 
The results showed that histochemically wound healing was positively affected by cell application in the presence of long-term steroids (21 days), immunohistochemically, keratinocyte-like cells continued to express cytokeratin at the wound site, TNF-α remained at basal level for 21 days, but negative IL-1β' was observed. In addition, the increase in MCP-1, VEGF and COL1A1 levels showed that cell application to the wound site contributed to wound healing by supporting keratinization. This specialization thesis provided a preliminary information for clinical practice, there is still a need for studies with different materials and methods.