Farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz inhibisyonunun etkisinin  NLRC4 inflamazomu ve antienflamatuvar NLRC3 ile ilişkilendirilerek araştırılması
Investigation of the effect of soluble epoxide hydrolase inhibition in relation to NLRC4 inflammasome and antiinflammatory NLRC3 in lipopolysaccharide-induced inflammatory hyperalgesia model in mice
Yazar: ALİ CAĞLİ
Danışman: PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN
Mersin Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2023
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology
Dizin: Antiinflamatuar ajanlar = Anti inflammatory agents ; Epoksit hidrolaz = Epoxide hydrolase ; Fareler = Mice ; Hiperestezi = Hyperesthesia ; Kaspazlar = Caspases ; Lipopolisakkaritler = Lipopolysaccharides ; İnflamazom = Inflammasome

Özet:
Bu tezde, lipopolisakkarit (LPS) ile farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde çözünebilir epoksit hidrolaz (çEH) inhibisyonunun etkisinin mekanizmasının pro-enflamatuvar klasik nükleotit bağlayıcı oligomerizasyon alanı reseptör C (nucleotide binding oligomerization domain-like receptor C; NLRC) 4/apopitozla ilişkili nokta benzeri protein içeren bir kaspaz biriktirici alan (apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain; ASC)/pro-kaspaz-1 inflamazomu ile klasik olmayan kaspaz-11 inflamazomu ve antienflamatuvar NLRC3 ile ilişkilendirilerek araştırılması amaçlanmıştır. Deneyler 9 gruba ayrılan fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir: (1) Serum fizyolojik (SF), (2) LPS, (3) SF+dimetil sülfoksit, (4) LPS+triflorometoksifenil-3-(1-propiyonilpiperidin-4-il)üre (trifluoromethoxy-phenyl-3-(1-propionylpiperidin-4-yl)urea; TPPU) (0.3 mg/kg), (5) SF+TPPU (0.5 mg/kg), (6) LPS+TPPU (0.5 mg/kg) ve (7) LPS+TPPU (1 mg/kg).  TPPU (4 ml/kg) SF (10 ml/kg) veya LPS (10 mg/kg; 10 ml/kg) ile aynı anda intraperitoneal yoldan uygulanmıştır. Farelerin 30 saniye içinde termal uyarıya tepki verme süreleri SF veya LPS enjeksiyonundan 6 saat sonra değerlendirilmiştir. Deneyler sonunda öldürülen farelerin beyinleri ve omurilikleri alınmıştır. Beyinler ve omuriliklerden hazırlanan doku homojenatı süpernatantlarında β-tübülin, NLRC4, ASC, kaspaz-1 p20, kaspaz-11 p20, interlökin (interleukin; IL)-1β ve NLRC3 ekspresyonu immunoblotting yöntemiyle, 14,15-dihidroksieikozatrienoik asit (14,15-DHET) ve IL-1β düzeyleri ise uygun enzyme-linked immunosorbent assay kitleri kullanılarak ölçülmüştür. Farelerin termal uyarıya yanıt verme sürelerinde LPS'nin neden olduğu azalma yalnızca 0.5 ve 1 mg/kg dozlarda çEH inhibitörü TPPU ile önlenmiştir. TPPU etkili olan en düşük dozunda (0.5 mg/kg) uygulandığında, LPS'nin neden olduğu 14,15-DHET ve IL-1β düzeyleri ile NLRC4, ASC, kaspaz-1 p20, kaspaz-11 p20 ve IL-1β ekspresyonundaki artmanın yanı sıra, NLRC3 ekspresyonundaki azalma önlenmiştir. Bu bulgular, TPPU ile çEH inhibisyonunun LPS'nin neden olduğu enflamatuvar hiperaljeziyi önleyici etkisine santral sinir sisteminde pro-enflamatuvar klasik NLRC4/ASC/pro-kaspaz-1 ile klasik olmayan kaspaz-11 inflamazomunun oluşumundaki/etkinliğindeki azalmanın yanı sıra, antienflamatuvar NLRC3'ün ekspresyonundaki artmanın katkıda bulunabileceğini düşündürmüştür.

Abstract:
In this thesis, the mechanism of the effect of soluble epoxide hydolase (sEH) inhibition in relation to pro-inflammatory canonical nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor C (NLRC) 4/apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC)/pro-caspase-1 inflammasome and noncanonical caspase-11 inflammasome in addition to antiinflammatory NLRC3 was investigated in lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory hyperalgesia model in mice. Mice were divided into 9 groups: (1) saline, (2) LPS, (3) saline+dimethyl sulfoxide, (4) LPS+triflorometoksifenil-3-(1-propiyonilpiperidin-4-il)üre (trifluoromethoxyphenyl-3-(1-propionylpiperidin-4-yl)urea; TPPU) (0.3 mg/kg), (5) saline+TPPU (0.5 mg/kg), (6) LPS+TPPU (0.5 mg/kg), and (7) LPS+TPPU (1 mg/kg). TPPU (4 ml/kg) was administered simultaneously with saline (10 ml/kg) or LPS (10 mg/kg) intraperitoneally. Reaction time to thermal stimuli within 30 seconds was evaluated in mice that received either saline or LPS after 6 hours. At the end of the experiments, the brains and spinal cords of the mice were removed after they were killed. In tissue homogenate supernatants prepared from brains and spinal cords, expression of β-tubulin, NLRC4, ASC, caspase-1 p20, caspase-11 p20, interleukin (IL)-1β, and NLRC3 proteins was measured by using the immunoblotting method in addition to 14,15-dihydroxyeicosatrienoic acid (14,15-DHET) and IL-1β levels by using suitable enzyme-linked immunosorbent assay kits. It was observed that LPS-induced decrease in the response time of mice to thermal stimulation was prevented with sEH inhibitor TPPU only at doses of 0.5 and 1 mg/kg. When TPPU was injected at the lowest effective dose (0.5 mg/kg), it prevented the increase induced by LPS in 14,15-DHET and IL-1β levels in addition to the expression of NLRC4, ASC, caspase-1 p20, caspase-11 p20, and IL-1β as well as decreased expression of NLRC3. These results suggested that a decrease in the formation/activation of pro-inflammatory canonical NLRC4/ASC/pro-caspase-1 and noncanonical caspase-11 inflammasome in addition to increased expression of NLRC3 in the central nervous system contributes to the preventive effect of inhibition of sEH with TPPU on inflammatory hyperalgesia induced by LPS.