Polisitemia vera'da sitokin sinyal yolağının etkisi
Effect of cytokine signaling pathway in polycythemia vera
Yazar: CEMİL ALTUNAY
Danışman: DOÇ. DR. SELÇUK SÖZER TOKDEMİR
İstanbul Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Genetik Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Genetik = Genetics
Dizin: Gen ifadesi = Gene expression ; Genler = Genes ; Miyeloproliferatif hastalıklar = Myeloproliferative disorders ; Neoplazmlar = Neoplasms ; Polisitemia vera = Polycythemia vera ; Sinyal nakli = Signal transduction ; Sitokinler = Cytokines

Özet:
Klasik Miyeloproliferatif Neoplaziler (MPN), miyeloproliferatif bozukluklar arasında en sık görülen hastalıklardandır. Tamamen işlevsel olan ve son aşamaya kadar farklılaşmış kan hücrelerinin aşırı üretimi ile karakterize edilirler. Önceki bir çalışmada Granülosit-Makrofaj Koloni Uyarıcı Faktörün (GM-CSF) sağlıklı hematopoietik kök hücrelerde proliferasyon kontrolünden sorumlu CXCR3 ekspresyonunu arttırdığı gösterilmiştir. Buradan yola çıkarak bu çalışmanın hipotezi; CXCL9-CXCR3 sinyal yolağının PV progresyonunda etkisi vardır. Bu çalışmada, MPN grubuna dahil olan Polisitemia vera'da (PV) sitokin sinyal yolağı etkisi araştırılmıştır. İnsan perifer kan mononükleer hücrelerinde ve kanser kök hücrelerinde CXCL9 kemokini ve bunun reseptörü olan CXCR3'ün iki izoformunun (CXCR3A ve CXCR3B) gen ifade seviyeleri, mononükleer hücre yüzeyinde ise CXCR3 reseptör varlığı incelenmiştir. Çalışmada ekspresyon seviyelerini araştırmak amacıyla kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu, hücre yüzey reseptör durumunun incelenmesi içinse akım ölçer metotları kullanılmıştır. Mononükleer ve CD34+ hücrelerde ifade seviyelerinin direkt olarak incelenmesinin yanında bu hücreler için gerçek zamanlı PZR metodu hücre kültüründe GM-CSF uygulamasının ardından CXCR3 reseptör ekspresyonuna bakmak amacıyla kullanılmıştır. Mononükleer hücrelerde CXCR3A ekspresyonunun mRNA düzeyinde hastalarda sağlıklılara göre istatistiksel olarak anlamlı arttığı bulunmuşur. Hasta ve sağlıklı kontrol grupları arasında CXCR3B ve CXCL9 ekspresyon seviyeleri kıyaslandığında mRNA düzeyinde istatistiksel olarak anlamlı bir fark olmadığı tespit edilmiştir. Hücre yüzey reseptör durumuna bakıldığında CXCR3 reseptörünün hastalardan elde edilen mononükleer hücre yüzeylerinde sağlıklı gruptan elde edilenlere göre anlamlı bir azalma olduğu görülmüştür. Bu sonuçlar PV'de CXCR3A/CXCR3B dengesi ile bu reseptörlere özgün olarak bağlanan kemokinler CXCL9, CXCL10 ve CXCL11'in inflamasyon ve kanser progresyonu ile ilişkili olabileceğini düşündürmektedir.


Anahtar Kelimeler : Myeloproliferatif Bozukluklar, Polisitemia Vera, Sitokinler,
CXCR3, CXCL9

Abstract:
The classical myeloproliferative neoplasms (MPNs) are the most frequent diseases among myeloproliferative disorders. MPNs are characterized by excessive production of terminally differentiated blood cells. Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) has previously been shown to increase CXCR3 expression responsible for proliferation control in healthy hematopoietic stem cells. Taken together, the hypothesis of study is that the CXCL9-CXCR3 signaling pathway is involved in the PV progression. In this study, effect of the cytokine signaling pathway in Polycythemia vera (PV) was investigated. The aim was to investigate the expression levels of CXCL9 and its receptor CXCR3, in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and cancer stem cells, and finally the CXCR3 on the surface of PBMC. Real-time polymerase chain reaction (qPCR) was used to investigate expression levels, and flow cytometry methods were used to examine cell surface receptor presence. In addition, the qPCR method for these cells has been used to look at CXCR3 expression after GM-CSF application in cell culture. In mononuclear and CD34+ cells, the mRNA level of CXCR3A expression was found to be increased in patients. There was no statistically significant difference in mRNA levels between CXCR3B and CXCL9 expression levels between patients and healthy controls. Given the cell surface receptor status, the CXCR3 receptor was found to have a significant reduction in mononuclear cell surfaces obtained from patients. These results may indicate that the CXCR3A/CXCR3B balance and the chemokines CXCL9, CXCL10 and CXCL11, which bind specifically to these receptors, may be associated with inflammation and cancer progression in PV.

Key Words: Myeloproliferative Neoplasms, Polycythemia Vera, Cytokines,
Chemokine CXCL9, CXCR3