Akciğer adenokarsinom hücrelerinde RhoB'un hedeflenmesi yoluyla epitelyal - mezenkimal geçiş özelliklerinin miRNA-21-5p ile düzenlenmesi
Regulation of epithelial-mesenchymal transition properties by miRNA-21-5p via targeting RhoB in lung adenocarcinoma cells
Yazar: HIBA HUSSEIN  ABUBAKER KHAIR
Danışman: PROF. DR. IŞIK DİDEM KARAGÖZ
Gaziantep Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2024
Konu: Biyoloji = Biology ; Onkoloji = Oncology
Dizin: Moleküler biyoloji = Molecular biology

Özet:
Akciğer kanserinde MicroRNA-21-5p (miR-21-5p) aşırı ekspresyonu epitelyalmezenkimal geçişi (EMG) teşvik ederek tümör ilerlemesini, invazyonu, göçü, metastazı ve ilaç direncini artırır. MiR-21-5p, akciğer kanserinde EMG ile bağlantılı küçük bir GTPaz olan Ras homolog gen ailesi üyesi B'yi (RhoB) hedefler. Ancak, miR-21-5p/RhoB birlikteliğinin akciğer adenokarsinomunda EMG'yi düzenlemedeki rolü belirsizliğini korumaktadır. Bu çalışmada, akciğer adenokarsinomunda EMG, invazyon, migrasyon, sferoid oluşumu ve sisplatin direncine aracılık etmede miR-21-5p'nin aşağı akış hedefi olarak RhoB'nin potansiyel rolü araştırılmıştır. EMG ve ilgili özellikler, migrasyon ve invazyon için yara iyileşmesi ve transwell deneyleri, sisplatin direnci için MTT deneyi ve ankrajdan bağımsız büyüme için sferoid oluşum deneyi kullanılarak ko-transfekte hücrelerde analiz edilmiştir. EMG işaretleyici ekspresyonu RT-qPCR kullanılarak ölçülmüştür. Sonuçlar, miR-21-5p baskılanmasının migrasyonu, invazyonu, sisplatin direncini, sferoid oluşumunu azalttığını, E-kaderin'i yukarı regüle ettiğini ve Slug mRNA seviyelerini aşağı regüle ettiğini göstermektedir. RhoB'nin susturulması EMG ve ilgili özellikleri geri kazandırmıştır. Bu bulgular, miR-21-5p'nin RhoB'yi aşağı regüle ederek akciğer adenokarsinomunda EMG ve kanserojen özellikleri teşvik ettiğini, miR-21-5p/RhoB birlikteliğinin potansiyel bir terapötik hedef olarak öne çıktığını göstermektedir.

Anahtar Kelimeler: MiR-21-5p, RhoB, EMG, Migrasyon, İnvazyon, Sferoid Oluşumu, Sisplatin Direnci.

Abstract:
MicroRNA-21-5p (miR-21-5p) overexpression in lung cancer enhances tumor progression, invasion, migration, metastasis, and drug resistance by promoting epithelial-mesenchymal transition (EMT). MiR-21-5p targets Ras homolog gene family member B (RhoB), a small GTPase linked to EMT in lung cancer. However, the role of the miR-21-5p/RhoB axis in regulating EMT in lung adenocarcinoma
remains unclear. This study investigated the potential role of RhoB as a downstream target of miR-21-5p in mediating EMT, invasion, migration, spheroid formation, and cisplatin resistance in lung adenocarcinoma. A549 cells were transfected with miR-21-5p inhibitor, RhoB siRNA, and their negative controls. EMT and related properties were analyzed in co-transfected cells using wound healing and transwell assays for migration and invasion, MTT assay for cisplatin resistance, and spheroid formation assay for anchorage-independent growth. EMT marker expression was measured using
RT-qPCR. Results showed that miR-21-5p knockdown reduced migration, invasion, cisplatin resistance, spheroid formation, upregulated E-cadherin, and downregulated Slug mRNA levels. RhoB silencing restored EMT and related properties. These findings suggest that miR-21-5p promotes EMT and carcinogenic properties in lung adenocarcinoma by downregulating RhoB, highlighting the miR-21-5p/RhoB axis as a potential therapeutic target.

Key Words: MiR-21-5p, RhoB, EMT, Migration, Invasion, Spheroid Formation, Cisplatin Resistance.