Kayseri'deki farklı binaların su depolarında Legionella araştırılması
Legionella researging in water depots' of different buildings in Kayseri
Yazar: ZAHİDE AKKAYA
Danışman: PROF. DR. YUSUF ÖZBAL
Erciyes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2009
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology

Özet:
Dünyanın her yerinde, doğal sularda, hidrotermal alanlarda ve yeraltı su sediementlerinde yaygın olarak bulunan Legionella türleri pleomorfik gram negatif organizmalardır. Canlı ve virülan legionella içeren aerosol partiküllerin inhalasyonu ile insanlarda infeksiyon yapmaktadır. Alveollere ulaşan legionellalar, alveoler makrofajlar tarafından tutulur ve orada çoğalırlar. Kesin tanı için laboratuar testleri gereklidir. Hastaneler genellikle geniş ve karışık su sistemlerine sahip ve duyarlı kişilerin yaşadığı ortamlardır. Bu nedenle hastane, otel okul ve mesken su sistemlerinde Legionella araştırıldı.Kayseri İl'inde yer alan 8 hastane, 10 okul, 5 otel ve 6 meskenden 01 Eylül-31 Aralık 2008 tarihleri arasında toplam 120 örnek (16 depo suyu, 64 musluk-duş suyu ve 40 musluk-duş sürüntüsü) alındı ve bakteriyolojik ve serolojik yöntemlerle Legionella yönünden araştırıldı. Çalışma, Erciyes Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı laboratuarlarında gerçekleştirildi. Uygun olarak alınan her bir örnek santrifüj ile yoğunlaştırıldıktan sonra sedimentten BCYE-? besiyerine direk ekim yapıldı. Kalan örnek de, asit çözeltisi ile dekontamine edildikten sonra legionella izolasyonu için yaygın olarak kullanılan BCYE-? besiyerine ekildi. Kültürler 37oC'de 10-15 gün inkübasyona bırakıldı ve üçüncü günden itibaren her gün kontrol edildi. Genelde inkübasyondan 3-5 gün sonra gelişen Legionella şüpheli kolonilerden alınarak gram boyama yapıldı. Zayıf Gram negatif, çomak şeklinde bakterilerin görülmesi durumunda TSA ve BCYE-? besiyerlerine pasaj edildi. 37oC'de 24-48 saat inkübasyon sonucunda, TSA besiyerinde üreme olmayan ancak BCYE-? besiyerinde üreyen koloniler alınarak lateks aglutinasyon testi ile serotiplendirildi.Toplam 120 örneğin 8'inde Legionella şüpheli bakterilerin ürediği ve bunların gram boyamasında Legionella türünün morfolojilerine benzer Gram negatif bakteriler görüldü. Legionella türü olarak belirlenen 8 külür, lateks aglutinasyon testi ile serotiplendirildi. 16 depo suyundan 3'ünün L.pneumophila serogrup 1, 64 musluk-duş başlığı suyundan üretilen 2 Legionella türünün 1'i L.pneumophila serogrup 1 (diğeri Legionella spp.) ve 40 musluk-duş başlığı sürüntüsünden üretilen 3 Legionella türünün 2'si L. pneumophila serogrup 1 (diğeri Legionella spp.) olduğu belirlendi.Bu çalışmada bölgemizde bulunan hastane ve otel gibi binaların su depolarında legionella bakterileri izole edildi ve serogruplandırıldı. Elde edilen bulgularımız diğer araştırıcıların sonuçları ile uyumlu idi. Epidemiyolojik önemi olan fenotipleri belirlemek için kapsamlı çevresel moleküler biyolojik çalışmaların (PCR gibi) yapılması gerekmektedir. Legionelloz, kontamine bir kaynaktan legionelların inhalasyonu ve aspirasyonu ile kazanılmaktadır. Turistik konaklama yerleri ve hastanelerin su depoları daha kapsamlı araştırılmalı, gerekli dezenfeksiyon işlemleri yapılmalıdır.Anahtar kelimeler: Legionella, Legionella pneumophila, Lejyoner hastalığı, Kayseri

Abstract:
Legionella species are pleomorphic gram negative organisms, which are ubiquitous of worldwide in natural freshwater habitats, water in hydrotermal areas and subterrestrial graundwater sediments. Infection in humans occurs folowing inhalation of fine aerosol containing organisms, that are both viable and virulent. Once within the alveoli, the legionellae are taken up by alveolar macrophages where they multiply. Laboratory tests are essential for a definitive diagnosis. Hospitals often have large and complex water distribution systems and a populations of susceptible patients. For this reason, legionellae was researched at hospitals, hotels, schools and dwelling houses water systems.Totaly 120 samples were collected from 8 hospitals, 5 hotels and 6 dwelling houses located in Kayseri metropoliton (16 depot?s water, 64 tap-douches? water and 40 tap-douches? track) in between 01 September to 31 December 2008 and it was researched with bacteriological and serological methods for Legionella. This study was performed in Microbiology and Clinic Microbiology laboratory of Medical Faculty of Erciyes University. Each sample which was taken conveniently, were condensed with centrifuges, than cultivated directly from sediment to BCYE-? agar media which most widely used for legionellae isolation. The rest sample was decontaminated with acid?s solution and cultured in BCYE-? agar media. The cultures were incubated for 10-15 days at 370C and it was checked every day after 3th day of incubation. Colonies usually first appeared after 3-5 days of incubaiton and stained suspect legionellae colonies by gram staining methods. Gram negative bacilli which possess Legionella species, subcultivated on TSA and on BCYE-? media. After extended cultivation for 20-48 hours incubation period, growth were seen on BCYE-? and not seen on TSA culture. They were serotyped with latexes agglutination?s test.Legionellae suspected colonies grown in 8 of 120 samples were stained with gram staining and appeared gram negative bacilli in shape alike Legionella species morphology. These 8 cultures which were determined Legionella species, serotyped with latex aglutinasyon as L.pneumophila serogrup 1 in 3 of 16 depot?s water, L.pneumophila serogrup 1 in one of 2 Legionella species (other is Legionella spp.) of 64 tap-douches? water, and L. pneumophila serogrup 1 in 2 of 3 Legionella species (other is Legionella spp.) of 40 tap-douches? track.In this study, legionellae were isolated and were serogrouped in our area?s institution such as hospital, hotel?s water depots. Obtained finding was been compatible with other searched out results. Extensive environmental studies indicate that molecular biological methods should be use for determining of phenotyping for epidemiology significances. Legionellosis is acquired by inhalation or aspirasyon of legionellae from a contaminated source. Touristic accommodation places and hospitals must be researched more comprehensive, necessary disinfection treating should be done.Key words: Legionella, Legionella pneumophila, Legionnaire's disease,