Kuş tipi mikobakteriyozisin tavuk ve hindi sürülerinde kültür ve PCR teknikleri ile teşhisi
Diagnosis of avian mycobacteriosis in layers and turkey flocks by culture and PCR techniques
Yazar: KHAIR ELSID ABDALLA
Danışman: PROF. DR. HAKAN YARDIMCI
Ankara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2010
Konu: Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Hindiler = Turkeys ; Mycobacterium = Mycobacterium ; Tavuklar = Chickens

Özet:
Yumurtacı tavuk ve hindi sürülerinde Mycobacterium avium complex (MAC) tarafından oluşturulan kanatlı mikobakteriyozisinin tanısı zordur. Bu çalışmada kanatlılardan alınan organ ve dışkı örnekleri kültür ve Ziehl Neelsen boyama (Z-N) ile asido-rezistans organizmaların tanısı yapılarak değerlendirildi. İzole edilen etkenlerin kuş tipi Mycobacterium avium subsp. avium olduğu Polimeraz Zincir Reaksiyonu (Polymerase Chain Reaction-PCR) ile doğrulandı. Kültür için 3 farklı besiyeri (Gliserollü Lowenstein-Jensen , ADC ile zenginleştirilmiş Middlebrook 7H9 buyyon ve OADC içeren Middlebrook 7H10 agar) kullanılarak, bunların mikobakterileri izole etmekte de başarısı test edildi. Aside-dirençli boyama metodu olarak Z-N tekniği uygulandı. Mikobakteri izolatlarında M. avium subsp. avium'un moleküler identifikasyonu için IS901 genine spesifik primerler ile yapılan PCR testi kullanıldı.Bu çalışma kapsamında toplam 103 tavuk ve hindi kanatlı mikobakteriyozisi yönünden incelendi. Toplam 103 hayvanın 8'inde (%7.8) Mycobacterium avium subsp. avium izole edildi. İzolasyon yapılan toplam 8 kanatlının 7'sinde (6 tavuk ve 1 hindi) nekropside lezyon görülmesine karşın 1 tavukta lezyona rastlanmadı. İncelenen materyallerde, mikobakteri izolasyon oranları 40 ticari tavukta 3 (% 7.5), 45 köy tavuğunda 4 (%8.9) ve 18 hindide 1 (% 5.5) olarak belirlendi. Toplam 385 doku örneğinin 20'sinde (%5.19) tipik tüberküloz lezyonları görüldü. Direkt mikroskobik muayene ile 488 örneğin 45'inde (% 9.2) asido-rezistans bakteriler (ARB) görüldü. Kültür ?Gold standart? test olarak kabul edildi. Diğer besiyerleriyle karşılaştırıldığında L-J besiyeri ile daha fazla sayıda pozitif kültür elde edildi. Mikobakteri izolatlarının PCR testi ile değerlendirmesi sonucunda, 18 (% 4.67) izolatın Mycobacterium avium subsp. avium, 1 izolatın ise Mycobacterium spp. olduğu saptandı. Bu çalışmada elde edilen bulgular açısından ticari ve köy kanatlı sürüleri arasında önemli farklılıklar bulunmadı (p>0.05).Sonuç olarak, kanatlı mikobakteriyozisi şüphesiyle getirilen tavuk ve hindilerden M. avium subsp. avium üredi ve izolasyon amacıyla L-J'in Middlebrook 7H10 agar'a göre daha etkin olduğu saptandı. İzole edilen suşların doğrulanmasında moleküler tekniklerin teşhiste kullanılabilirliği ortaya konuldu. M. avium subsp. avium' un kanatlı yetiştiriciliği ve halk sağlığı yönünden dikkate alınması gerektiği sonucuna varıldı.

Abstract:
Diagnosis of avian mycobacteriosis in layer hens and turkeys, caused by Mycobacterium avium complex (MAC), is problematic. In this study, culture and Ziehl-Neelsen stain (Z-N) were used to detect acid-fast orgamisms in tissue and fecal samples. The isolates were confirmed using Polymerase chain reaction (PCR). Three different culture media (Lowentein-Jensen [L-J] with glycerol, Middlebrook 7H9 broth supplemented with ADC and Middlebrook 7H10 agar with OADC were tested to determine which medium had the greatest success in isolating mycobacteria. Acid-fast staining method included Ziehl-Neelsen (Z-N) technique was applied. The PCR assay was applied to identificate M. avium subsp. avium from mycobacterium isolates using specific primers to IS901 gene.Mycobacterium avium subsp. avium was cultured from 8 (7.8%) of 103 layer hens and turkeys. From a total of 8 nekropsied birds, 7 (6 layer hens and 1 turkey) birds with tuberculous lesions and 1 bird without lesions showed growth on mycobacterial medium. Considering to the origins of materials examined, mycobacteria were detected in 3 (7.5%) from 40 commercial, in 4 (8.9%) from 45 backyard hens, and in 1 (5.5 %) of 18 turkeys. Typical tuberclous lesions were observed in 20 (5.19%) samples out of 385 organs. Acid-fast bacilli (AFB) were detected in 45 (% 9.2) out of 488 samples following direct microscopic examination. Culture was considered the gold standard. Compared with other culture media, L-J yielded more positive cultures and greater numbers of colonies on positive tubes, and incubation times were shorter. From a total of 19 isolates 18 were found belonging to Mycobacterium avium subsp. avium, and only 1 was identified as Mycobacterium spp. From the results of this study, no significant differences were detected between commercial and backyard poultry flocks (p>0.05).In conclusion, M. avium subsp. avium was isolated from mycobacteriosis suspected hens and turkeys and L-J medium was determined to be more effective than Middlebrook 7H10 agar concerning bacterial isolations. The feasibility of molecular techniques for confirmation of laboratory diagnosis of isolated strains had been stated.