Metotreksat ve paklitaksel kemoterapilerinin farklı koryokarsinom hücre kültür modelleri üzerindeki etkilerinin karşılaştırılması
The comparison of methotrexate and paclitaxel chemotherapy effects on the different choriocarcinoma cell culture models
Yazar: ÖZGÜR ÖZER
Danışman: DOÇ. DR. AYKUT BARUT
Bülent Ecevit Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2014
Konu: Kadın Hastalıkları ve Doğum = Obstetrics and Gynecology
Dizin: Antineoplastik ajanlar = Antineoplastic agents ; Apoptozis = Apoptosis ; Gebelik = Pregnancy ; Hücre kültürü = Cell culture ; Methatrexate = Methatrexate ; Paklitaksel = Paclitaxel ; Trofoblastik neoplazmlar = Trophoblastic neoplasms

Özet:
Amaç: Gestasyonel Trofoblastik Hastalıklar, insanda plasentadan gelişen bir grup hastalıktır ve koryokarsinom bunların malign formudur. Hastalığın medikal tedavisinde, hastalığın evresine göre, tek başlarına veya kombine kemoterapotik ajanlarla uygulanan pek çok tedavi rejimi bulunmaktadır.
Çalışmamızın amacı, farklı hücre kültürü modelleri (JAR, JEG) kullanılarak Paklitaksel ve MTX'ın tek başına veya kombine kullanıldığında, koryokarsinom tedavisindeki etkinliğinin araştırılmasıdır.
Gereç ve Yöntem: İnsan koryokarsinom benzeri JAR ve JEG-3 hücrelerin RPMI-1640 ortamında  %10 fetal dana serumu, penisilin-steptomisin varlığında k 37°C, %95 hava, %5 CO2 içeren atmosferde çoğaltıldı. Metotreksat (MTX) ve Paklitaksel'in uygulama grupları aşağıdaki gibi belirlendi;
Tek ilaç uygulaması için MTX'in 2 μg/ml, 4 μg/ml, 8 μg/ml; PTX'in 10ηg/ml'lik, 50ηg/ml'lik, 100ηg/ml'lik, 200ηg/ml'lik, 400ηg/ml'lik, 800ηg/ml'lik ve 1600ηg/ml'lik dozları kullanılmıştır. 
PTX ve MTX kombinasyonunda; PTX'in 10ηg/ml'lik, 50ηg/ml'lik, 100ηg/ml'lik, 200ηg/ml'lik, 400ηg/ml'lik, 800ηg/ml'lik ve 1600ηg/ml'lik dozları ile MTX'in 4 μg/ml'lik dozu kullanılmıştır. 
Maddeler hücrelere aynı anda verilmiştir. İlaç uygulamasını izleyen 72. saatte hücreler Tripsin-Etilen Diamin Tetraasetik Asit (EDTA) solüsyonu ile kaldırılıp, apopitoz çalışmasına alınmıştır. Bu çalışmada JAR ve JEG-3 hücrelerinde apoptozun derecesi Flowsitometri (FCM) ile belirlendi. Sadece bir set için tripsin öncesi süpernatan toplanıp, h-hCG ölçümü için derin dondurucuda saklanmıştır. İmmünoenzimatik yöntemle h-hCG ölçümü yapılmıştır. SPSS 19.0 ve Minitab 17 istatistik programları kullanılarak istatistiksel analiz yapılmıştır.
Bulgular: Yaptığımız çalışmada MTX ve PTX'in tek başlarına artan dozlarla kullanıldıklarında hem JAR hem JEG-3 hücre serileri üzerinde ki apoptotik etkilerinin de arttığını istatistiksel olarak gözlemledik. Bu iki ilaç kombine edilip MTX dozu sabit tutulurken PTX'in dozu arttırıldığında JAR hücre serisinde apoptotik etki artarken JEG-3 hücre serisi üzerinde bu etki  400 ηg/ml'a kadar artmış bu doz ve üzerinde ise apoptotik etkinin istatistiksel olarak artmadığı görülmüştür.
Sonuç: İnsan Koryokarsinom hücre hattı modelleri olan JAR ve JEG-3 üzerinde PTX ve MTX'in kombine kullanımlarına ilişkin her iki hücre hattında birden literatürde çok az sayıda çalışma yapılmıştır. Elde edilen bu sinerjistik apoptotik veriler PTX ve MTX kombinasyonunun Koryokarsinom tedavisinde karşılaşılan çoklu ilaç direnciyle mücadelede kullanılabilecek seçeneklerden biri olabileceğini göstermektedir. Ancak ilaçların etkileri ve kombinasyonlarındaki etkilerin in vivo sistemlerde farklı olabileceğinden, veriler ilk olarak hayvan deneyleri ve sonra klinik araştırmalarla da desteklenmelidir.

Abstract:
Aim: Gestational trophoblastic diseases are the group of diseases that originates from human placenta and choriocarcinoma which is the malignant form. There are many medical treatment methods with single or combined chemotherapotic agents, depend on stage of the disase.
The aim of our study is research the effectiveness of single agent use and combined chemotherapy with paclitaxel and MTX on JAR and JEG-3, human choriocarcinoma cell line models for treatment of choriocarcinoma. 
Materials and Methods:  Human choriocarcinoma like JAR and JEG-3 cells were cultured at conditions 37°C, O2 95%, CO2 5% in RPMI-1640 environment that include 10% fetal bovine serum, penicillin-streptomycin. MTX and PTX trial groups are determined as shown below;
For single drug trial; MTX 2 μg/ml, 4 μg/ml, 8 μg/ml; dosages were maintained.
For the combination of PTX and MTX; PTX 10ηg/ml, 50ηg/ml, 100ηg/ml, 200ηg/ml, 400ηg/ml, 800ηg/ml and 1600ηg/ml dosages were maintained with MTX 4 μg/ml dosage.
Drugs were given to the cells at the same time. Following drug administration at the 72nd hour the cells were detached by the Trypsine- Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) solution.  The degree of apoptosis was obtained by flow cytometry (FCM). Supernatant was collected before trypsine application for only one set, and stored in deep-freeze to investigate h-hCG levels. h-hCG levels were investigated by immunoenzymatic method. SPSS 19.0 and Minitab 17 programmes were used to make statistical analysis.
Findings: We observed that in our study MTX and PTX's single  or combined application with the increasing dosages cause to statistically significant increase of apoptosis ratios on the JAR and JEG-3 cell lines. We showed that there's been increase of apoptosis ratios on the both of JAR and JEG-3 cell lines when we apply the fixed dose of MTX with the increasing dosages of PTX. But this effect hasn't found statistically significant on JEG-3 cell lines with 400ηg/ml PTX and upper dosages.
Result: There are very slightly number of resarches has been made in the literature about the application of PTX and MTX on the both of JAR and JEG-3, human choriocarcinoma cell line models. The obtained synergistic apoptotic data indicated that; the combination of  PTX and MTX could be used as one of the options in the struggle against multi-drug resistance encountered in the treatment of choriocarcinoma. However, the effect of the drugs with single application and with combination methods may be different in vivo systems, therefore the data should be supported initially by animal experiments and then clinical trials.