Klinik örneklerden soyutlanan dermatofitlerin (Trichophyton rubrum kompleks, Trichophyton mentagrophytes kompleks ve Microsporum canis) fenotipik heterojenliği
Phenotypic heterogeneity of dermatophytes (trichophyton rubrum complex, trichophyton mentagrophytes complex and microsporum canis) detailed from clinical samples
Yazar: ÇAĞLA YILDIZ ALAGÖZ
Danışman: PROF. DR. RAMAZAN İNCİ
Ege Üniversitesi / Tıp Fakültesi / Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
Derece: Tıpta Uzmanlık, 2019
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology
Dizin: Dermatofitler = Dermatophytes ; Fenotip = Phenotype ; Heterojen = Heterogeneous ; Mikrosporum = Microsporum ; Trichophyton = Trichophyton ; Trichophyton rubrum = Trichophyton rubrum

Özet:
AMAÇ: Dermatofitlerin tanısında konvansiyonel ve moleküler yöntemler kullanılır. Çalışmamızda, klinik örneklerden soyutlanan dermatofitlerin heterojenitesinin konvansiyonel yöntemlerle araştırılması amaçlandı.

GEREÇ VE YÖNTEM: Çalışma; Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi, Tıbbi Mikrobiyoloji-Mikoloji Laboratuvarında Ağustos 2015 - Mart 2017 döneminde yapıldı.
İncelenen dermatofitler: Toplam 100 dermatofit kökeni incelendi. Bunlardan 70'i T.rubrum kompleks, 20'si M.canis ve 10'u T.mentagrophytes kompleks idi.
Konvansiyonel tanı yöntemleri: %10'luk KOH ve laktofenol pamuk mavisi ile direkt mikroskobik inceleme, Sabouraud dekstroz agar (SDA) ve patates dekstroz agar (PDA) besiyerleri kullanılarak mikolojik kültürleri yapıldı.
Yardımcı testler: Kıl delme deneyi, üreaz deneyi yapıldı. Ayrıca dermatofitlerde radyal büyüme hızı ölçüldü.

BULGULAR: Çalışmada incelenen ve kültürde üremesi olan klinik örneklerin %27'sinin direkt mikroskobik incelemesinde mantar elamanı saptanmadı ; %73'ünde ise mantar elemanı saptandı. 
Soyutlanan T.rubrum kompleks kökenlerinde iki farklı mikromorfoloji saptandı. Mikromorfolojik olarak; mikrokonidyum görülen kökenlerin sayısı 28 (%40), mikrokonidyum ve makrokonidyumun birlikteliği görülenlerin sayısı 42 (%60) idi.
Koloni yüzeyi görünümüne göre değerlendirmede; düz 33 (%47), kabarık 37 (%53) olarak belirlendi. Koloni örgüsü: tüylü 41 (%59) , pamuğumsu 29 (%41) idi. Koloni rengi: üstten beyaz 31 (%44) , sarı 39 (%56); koloni tabanı rengi: kırmızı 33 (%47), sarı/turuncu 37 (%53) idi.
Soyutlanan 20 M.canis kökeninin tümünde kalın duvarlı, uçları pürtüklü makrokonidyum mevcuttu. Koloni yüzeyi değerlendirmesi: düz 13 (%65), kabarık 7 (%35) idi. Koloni örgüsü tüylü 4 (%20), 16 (%80) kadifemsiydi. Koloni rengi 2 (%10) üstten beyaz, taban sarı iken; 18 (%80) üstten sarı, tabanı da sarı renkteydi
Soyutlanan 10 T.mentagrophyes kompleks kökeninin mikroskobik incelemesinde tümünde makro/mikrokonidyumun yanında spiral hifleri de mevcuttu. Koloni yüzeyleri tümünde düz, pudramsıydı. Pigmentasyon açısından incelendiğinde ise 2 (%20)'si üstten beyazdan kreme değişen renkte, 8 (%80) 'i sarımsı görünümdeydi. Taban renklerinin ise 3 (%30) sarı/krem, 7 (%70) kahverengi renkteydi.
Kıl delme deneyinde M.canis kökenleri ektotriks, T.mentagrophytes kompleks kökeninin sekizi endotriks tutulum gösterdi. T.mentagrophytes kökenlerinin ikisinde ve T.rubrum kompleks kökenlerinde kıl delme deneyi negatifti.
Üreaz deneyinde; T.rubrum kompleks kökenleri üreaz negatif olarak değerlendirildi. M.canis ve T.mentagrophytes kökenlerinin tümü ise üreaz pozitifti.
Koloni radyal büyüme hızı incelendiğinde T.mentagrophytes kompleks ve M.canis kökenlerinin, T.rubrum komplekse göre göreceli olarak daha hızlı radyal büyüme özelliği gösterdiği saptandı.

SONUÇ: Çalışmada üç ayrı tür dermatofit konvansiyonel yöntemlerle ve ek biyokimyasal ve fizyolojik testlerle incelenmiş ve fenotipik çeşitlilik araştırılmıştır.

Abstract:
OBJECTIVE: Conventional and molecular methods are used in the diagnosis of dermatophytes.
The aim of this study was to investigate the heterogenity of dermatophytes isolated from clinical specimens by conventional methods.

MATERIALS AND METHODS: This study was done in Ege University Medical Faculty Hospital, Medical Microbiology-Mycology Laboratory in August 2015 - March 2017.
Dermatophytes examined: A total of 100 dermatophytes were examined. Of these, 70 were T.rubrum, 20 were M. canis and 10 were T.mentagrophytes complex.
Conventional diagnostic methods: Direct microscopic examination with 10% KOH and lactophenol cotton blue, mycological cultures were performed using Sabouraud dextrose agar (SDA) and potato dextrose agar (PDA) media.
Supplemental tests: Hair perforation test and urease test were done. In addition, radial origin in dermatophytes was measured rapidly.

RESULTS: In the study, 73% of the clinical specimens examined in culture were found to have fungal element in direct microscopic examination, while 27% did not have fungal element.
Two different micromorphologies were identified in the abstracted T.rubrum complex strains. Micromorphologically; The number of strains seen in microconidium was 28 (40%), microconidium and macroconidium were seen in 42 (60%).
According to the colony surface appearance of T.rubrum complex strains; 33 (47%) of the dermatophytes were flat and 37 (53%) of them were fluffy. Colony pattern: Hairy 41 (59%), 29 (41%) was cottony. Colony color: from the top; white 31 (44%), yellow 39 (56%). Colony base color: red 33 (47%), yellow / orange 37 (53%).
All 20 strains of M.canis were abstracted with thick,rough-walled macroconidium. According to the colony surface appearance flat 13 (65%), fluffy 7 (35%). Colony pattern: Hairy 4 (20%) and 16 (80%) was velvety. Colony color : 2 (10%) were white from the top, the base is yellow; 18 (80%) were yellow from the top and the bottom was yellow.
Microscopic examination of 10 abstracted T.mentagrophyes complex strain revealed spiral hyphae as well as macro / microconidium. The colony surfaces were flat, powdery. When examined in terms of pigmentation, from the top 2 (20%) were yellowish to white and 8 (80%) were yellowish. Base colors were 3 (30%) yellow / cream and 7 (70%) were brown.
In hair perforation test; M.canis strains showed ectothrix, eight of the complex origin of T.mentagrophytes showed endothrix involvement. Two of the T.mentagrophytes strains and the T.rubrum complex strains were negative for the hair-perforation test.
In the urease experiment; T.rubrum complex strains were evaluated as urease negative. All of M.canis and T.mentagrophytes were positive for urease.
In colony radial growth rate examination, it was determined that T.mentagrophytes complex and M.canis strains exhibited relatively faster radial growth than T.rubrum complex.

CONCLUSION: In this study, three different types of dermatophytes were examined by conventional methods and additional biochemical and physiological tests and phenotypic diversity was investigated.