Dental folikül kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin ev tozu akarına duyarlı astımlı hastaların lenfositleri üzerine immunolojik etkilerinin invitro ortamda araştırılması
The investigation of immunological effects of dental follicule mesenchymal stem cells on house dust mites sensitive asthma patients' lymphocytes in vitro
Yazar: ÜLKÜ ARIĞ
Danışman: PROF. DR. TUNÇ AKKOÇ ; YRD. DOÇ. DR. ESRA ÇAĞAVİ
Marmara Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı / İmmünoloji ve Allerji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Allerji ve İmmünoloji = Allergy and Immunology
Dizin: Akarlar = Acari ; Alerji ve immünoloji = Allergy and immunology ; Astım = Asthma ; Ev tozu = House dust ; Kök hücreler = Stem cells ; Kök hücreler = Stem cells ; Lenfositler = Lymphocytes ; İmmünolojik faktörler = Immunologic factors ; İmmünolojik testler = Immunologic tests ; İn vitro = In vitro

Özet:
Amaç: Bu çalışmada, İnsan Dental Folikül Kaynaklı Mezankimal Kök Hücrelerin (iDF-MKH); astım hastalığında, immünolojik ve hücresel parametreler üzerine immünomodülatör etkisini araştırması planlandı. 
Gereç ve Yöntem: Marmara Üniversitesi Diş Hekimliği Fakültesi Ağız, Diş ve Çene Cerrahisi Anabilim başvuran 19-25 yaş bireylerin diş folikülünden mezenkimal kök hücre  izolasyonları, karakterizasyonları yapıldı. Sağlıklı ve Derp 1+ astımlı bireylerin venöz kanlarından periferal kan mononükleer hücreleri (PBMC) izole edildi. Lenfositlerin iDF-MKH' larla birlikte, iDF-MKH'sız kültürde uyarımsız, IFN-γ, Derp 1, dexametasone ve anti-CD3 anti-CD28 (CDmix) uyarımlı koşullarda 72 saat kültürleri yapıldı. Lenfosit proliferasyonu, Annexin V/PI ile apoptoz ve CD4+CD25+FoxP3+ T regülatörhücre oranlarının analizi ve sitokin miktarlarına bakıldı.
Bulgular ve Sonuçlar: Derp1, IFN-γ  ve CDmix ile uyarılmış iDF-MKH'ların lenfosit proliferasyonunu baskıladığı ve CD4+CD25+FoxP3+ T lenfositi iDF-MKH olmayanPBMC kültürlerine göre arttırdı. iDF-MKH' lar CD4+CD25+FoxP3+ T hücre proliferasyonunu önemli ölçüde baskıladı (p < 0.05).  IFN-γ ile uyarılmış iDF-MKH' lar CD4+CD25+FoxP3+ T hücre proliferasyonunu uyarılmamış MKH' lardan daha etkin baskıladı (p<0.01). IFN-γ  ile uyarılmış iDF-MKH' lar T düzenleyici hücre oranını uyarılmamış MKH'lere göre arttırdı (p = 0.01 ). IFN-γ ile uyarılan ve uyarılmayan iDF-MKH' lar lenfosit apoptozunu baskıladı (p<0.05). iDF-MKH'lar lenfosit  proliferasyonunu baskıladı ve bu baskılama iDF-MKH' ların  IFN-γ ön uyarımı ile arttı. IFN- γ ileuyarılmış iDF-MKH' lar Derp 1 + astım hastaların  lenfositlerindeki CD4+CD25+FoxP3+ Treg hücreleri arttırdı. Kültür süpernatanındanki sitokin analizlerinde kök hücrelerin IL-4 sitokin miktarını baskıladığı, iDF-MKH hücrelerinin ise diğer kök hücrelere oranla IL-10 sitokin miktarını arttırdi. Sonuçta bu hücrelerin immün sistemi düzenleyici etkileri olduğu görüldü. 
Anahtar Sözcükler: Allerjik Astım, Ev Tozu Akarı, DF-MKH, İmmünmodülasyon

Abstract:
Aim: This study aims to investigate the immunomodulatory effects of human dental follicle mesenchymal stem cells (hDF-MSCs) pre-stimulated with/without IFN-γ; in Der p 1 + asthma patients lymphocytes in vitro.
Method: Dental folliclesobtained from University of Marmara Faculty of Dentistry Oral and Maxillofacial Surgery Department were isolated, characterized into osteogenic, chondrogenic linageages. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolated from healty (hPBMC) and Derp 1 + asthma patients (aPBMC) and  hPBMCs,  aPBMC were cultured with and without hDF-MSCs and were stimulated with Derp 1, dexametasone and anti-CD3 anti-CD28 (CDmix), pre and post stimulated IFN-γ. Lymphocyte proliferation, Annexin V / PI apoptosis and CD4+CD25+FoxP3+ regulatory T cell ratio and cytokine were analyzed after 72 hours of culture period.
Results and Conclusions: Derp 1, IFN-γ and CDmix stimulated hDF-MSCs suppressed lymphocyte proliferation, and enhanced CD4+CD25+FoxP3+ T regulatory lymphocyte compared to PBMC cultures without MSCs. HDF-MSCs suppressed CD4+ T cell proliferation (p < 0.05). IFN-γ -stimulation of hDF-MSCs enhanced T regulatory cell. Both hDF-MSCs suppressed lymphocyte apoptosis (p<0.05). hDF-MSCs + suppressed lymphocyte proliferation  increased with pre IFN- γ stimulation of hDF-MSCs. IFN- γ pre-stimulated hDF-MSCs suppressed lymphocyte proliferation, apoptosis and increased CD4+CD25+FoxP3+ Treg cells of Derp 1 + asthma patients' lymphocytes. IFN- γ stimulation of hDF-MSCs has more suppressive effect on CD4+ T cell response by enhanced CD4+CD25+FoxP3+ Treg cells. Cytokine analysis shows that stem cells suppress the IL-4 cytokine too. HDF-MSCs suppressed  the proliferation  of  lymphocytes. Thus, one can assume that  these cells can modulate  immune system cells.
Keywords: Allergic Asthma, House Dust Mites, Dental Follicle, Immunomodulation.