Glisin, GABA, Glutamat ve Serin'in kulometrik detektörlü sıvı kromatografisi kullanılarak mikrodiyaliz örneklerinden tayini
Determination of glycine, gaba, glutamate and serine FROM microdialysis samples using liquid chromatography with coulometric detector
Yazar: WLAA ALQASIM
Danışman: DOÇ. DR. EROL ŞENER
Anadolu Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Analitik Kimya Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2022
Konu: Eczacılık ve Farmakoloji = Pharmacy and Pharmacology ; Kimya = Chemistry
Dizin: Amino asitler = Amino acids ; Epilepsi = Epilepsy ; Fitalaldehit = Phthalaldehyde ; GABA = GABA ; Glisin = Glycine ; Glutamat = Glutamates ; Kromatografi-gaz = Chromatography-gas ; Kromatografi-yüksek basınçlı-sıvı = Chromatography-high pressure-liquid ; Serine = Serine

Özet:
Amino asitler beyinde en çok bulunan nörotransmiterlerdir. Bu nedenle, beyin hücre dışı konsantrasyonlarının ölçülmesi sinirbilim alanında ilgi konusudur. Uyarıcı amino asitlerin seviyesinde bir artış veya inhibe edici asitlerin seviyesinde bir azalma meydana gelirse epilepsi hastalığı ortaya çıkmaktadır. Bu çalışmada, mikrodiyaliz numunelerinde amino asitlerin beyin dokularındaki tayini için ön kolon o- ftalaldehit ile türevlendirme kullanılarak ve elektrokimyasal saptama ile ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi geliştirilmiştir. Yöntem sırasında sabit faz olarak bir silika Agilent Zorbax Eclipse C18 (3.0mm x 150 mm, 5 µm partikül boyutuna) kolonu, hareketli faz olarak ise gradiyent elünte kullanılmıştır. Çalışma tamponu olarak fosfat tamponu (50 mM, pH: 6,5) belirlenmiştir.  0,8 mL/dk akış hızında çalışılmıştır. 10 µL enjeksiyon hacmi ve kolon sıcaklığı 40°C olarak ayarlanmıştır. 
 Saptama sınırı ve tayin sınırı değerleri sırasıyla Glutamik Asit 0,02 μg/mL ve 0,06 μg/mL, Glisin için 0,05 μg/mL ve 0,02 μg/mL'dir. Gamma_aminobutirik asit için 0,3 μg/mL ve 1,01 μg/mL, Serin için 0,13 μg/mL ve 0,4 μg/mL olarak hesaplanmıştır. Yöntemin doğrusallık aralığı 0,05-2 μg/mL bulunmuştur.

Abstract:
Amino acids are the most abundant neurotransmitters in the brain. Therefore, the measurement of Amino acids concentrations in the brain extracellular is of importance in the field of neuroscience. Epilepsy occurs whenever an increase in the level of excitatory amino acids or a decrease in the level of inhibitory acids. In this study, the reverse-phase high-performance liquid chromatography-electrochemical detection method has been developed for the determination of amino acids in microdialysis samples of brain tissues, utilized derivatization with front column o- ftalaldehit and electrochemical detection. The chromatographic separation was performed on, a silica Agilent Zorbax Eclipse C18 (3.0mm x 150 mm, 5 µm particle size) column, using phosphate buffer (50 mM, pH: 6,5) was determined as a working buffer. The method was conducted in a gradient mode with a flow rate of 0.8 ml/min,10 µL injection volume, and 40°C.  The values of the detection limit and quantity limitations were calculated as follows 0.02 µg/mL, 0.06 µg/mL for Glutamic Acid, 0.05µg/mL, 0.02µg/mL for Glisine, 0.3µg/mL, 1.01µg/mLfor Gamma_aminobutiric acid, 0.13 µg/mL, 0.4 µg/mL for Serine.The linearity range of the method was 0.05-2 μg/mL.