Nitrik oksit sintaz izoformlarının kemik dokusu üzerindeki etkilerinin histomorfometrik olarak incelenmesi
The histomorphametric evaluation of the effects of nitric oxide synthase isoforms on bone tissue
Yazar: HASAN BÜLBÜL
Danışman: DOÇ. HÜSEYİN ÖLMEZ
GATA / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Ortodonti Ana Bilim Dalı
Derece: Doktora, 2005
Konu: Diş Hekimliği = Dentistry

Özet:
vn. ÖZET Ortalama ağırlıkları 250 gr olan 66 adet erişkin erkek sıçanda (Sprague-Dawley); nitrik oksit sintaz izoformlarının inhibitörleri uygulanarak; bu izoformların deneysel ortodontik diş hareketi oluşturulan kemik dokusu üzerindeki etkileri incelenmiştir. Sıçanlardan 11 grup oluşturularak; 1, 2 ve 3. gruba sırası ile 10 ug/20 \ıl, 30 ug/20 ul ve 100 ug/20 ul dozlarında iNOS inhibitörü 1400W dihidroklorit (1400W) uygulanmıştır. 4, 5 ve 6. gruba eNOS inhibitorQ L NİO dihidroklorit (L-NÎO), 7, 8 ve 9. gruba nNOS inhibitörü Noa-Propil-L- Arginin (NPLA) aynı sıra ile üç ayrı dozda uygulanmıştır. 10. gruba ise 20ul % 0.9 NaCl (Serum Fizyolojik-SF) meziobukkal dişeti bölgesine günde iki kez enjekte edilmiştir. Etken maddeler serum fizyolojik içinde dilüe edilmiştir. 11. gruba sadece ortodontik kuvvet uygulanmıştır. Ortodontik kuvvet uygulayan aparey olarak alt kesici diş ile alt birinci azı dişi arasına yerleştirilen kapalı nitinol yaylar tercih edilmiştir. 60 gr. kuvvet uygulayan apareyin yerleştirilmesinden hemen sonra enjeksiyonlara başlanılmış ve deney süresince inhalasyon anestezisi altında enjeksiyonlar 12 saatte bir tekrarlanmıştır. Deney yedi gün sürmüş ve bu sürenin sonunda sıçanlar sakrifiye edilmiştir. Sıçanların alt çeneleri, diseke edildikten sonra 0.1 M fosfat tamponlu %2.5'luk gluteraldehit solüsyonunda fikse edilmiştir. Sert dokuların korunarak histolojik kesitlerin elde edilmesi için, dehidratasyon ve rezin içine gömülme işlemleri uygulandıktan sonra kesme ve inceltme yöntemi kullanılmıştır. 10-20 um. kalınlığına getirilen kesitler % 10' hık H2O2 ile yıkanıp Toluidine blue ile boyanmıştır. Histomorfometrik inceleme için hazırlanmış olan preparatlar ışık mikroskobunda incelenmiştir. Işık mikroskobundan alınan görüntüler, mikroskoba bağlı bir dijital kamera yardımıyla kişisel bilgisayara aktarılmıştır. Analizler WinTAS (Trabecular Analyze System) görüntü analiz programı kullanılarak yapılmıştır. Gruplar kemik hacmi, trabekül sayısı ve trabekül ayrıklığı parametreleri ile karşılaştırılmıştır. Hem grup içi ve gruplar arası hem de kontrol grupları ile karşılaştırmalarda istatistiksel olarak anlamlı fark yaratan grup, 5. gruptur [eNOS inhibitörü (L NÎO dihidroklorit) 30 ug]. Bu nedenle ortodontik mekanik gerilme kuvvetleri altında kemik dokusunda görülen nitrik oksite bağlı etkilerden sorumlu izoenzimin eNOS olduğuna karar verilmiştir. Tüm diğer gruplardan farklı olarak sadece 5. grupta, kontrol gruplarına göre kemik hacmi istatistiksel olarak anlamlı (P<,05) derecede azalmış, trabekül sayısı istatistiksel 103olarak anlamlı (P<,01) derecede azalmış ve trabekül ayrıklığı istatistiksel olarak anlamlı (P<,001) derecede artmıştır. İNOS inhibitörü (1400W dihidroklorit) ve nNOS inhibitörü (Nco-Propil-L-Arginin) uygulanan gruplar ile kontrol grupları arasında her üç parametrede de istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmaması, İNOS ve nNOS 'un ortodontik diş hareketinde etkili olan NO üretimi için asıl sorumlu enzim olmadığını düşündürmektedir. Bu sonuçlar kemik metabolizmasında ve ortodontik diş hareketlerinde önemli rol oynayan nitrik oksit üretimi için gerekli majör izoformun eNOS olduğunu göstermektedir. 104

Abstract:
VOL ZUSAMMENFASSUNG Die Einwirkung von Nitric Oxide Synthase Isoformen auf das Knochen Gewebe wahrend der Experimentalen Kiefer Orthopaedischen Zahn bewegung wurde bei durschschnittlich 250 gr wiegenden, mânnlischen, erwachsenen, 66 stuck Ratten (Sprague- Dawley) nrit der anwendug von Inhibitoren dieser Isoformen erforscht. Es wurden von den Ratten 11 gruppen gebildet. In der ersten, zweiten und dritten gruppe wurde das iNOS Inhibitor 1400W dihydrochloride (1400W) mit der dosis reihe von 10 ug/ 20 uL 30 ug/ 20 ul und 100 |xg/ 20 ul in den mesiobukkalen Zahnfleisch Injektiert. In der vierten, funften und sechsten gruppe wurde das eNOS Inhibitor L NIO dihydrochloride (L- NIO) ; in der siebenten, achten und neunten gruppe wurde das nNOS Inhibitor Nco-Propil-L- Argjnin (NPLA) in der gleichen reihe in den mesiobukkalen Zahnfleisch Injektiert. In der zehnten gruppe wurde nur 20ul 0.9 % NaCl (Physiologisches Blutwasser-PB) in den mesiobukkalen Zahnfleisch Injektiert. Die Injektionen wurden zweimal am Tag ausgeübt. Die Agens wurden im PB auigelöst. In der elften gruppe wurde nur Kraft ausgeübt. Für die ausubung von der Kiefer Orthopaedischen kraft wurden geschlossene Ni-Ti Federn benutzt, die von dem Unterkiefer Schneidezahn zum ersten Backenzahn Gespannt wurden. Nach dem anbringen der apparaten die 60 gr. kraft ausubten sind die Injektionen angefangea Das Experiment dauerte7TageundamsiebentemTag wurden die Ratten getötet. Nach der Dissektion wurden die Unterkiefer der Ratten in 2.5 % glutheraldehyde mit 0.1 M Phosphat Tupfer fiksiert. Um die Harten Gewebe wahrend der verarbeitung von Histologischen preparatten zu schonen wurde nach der dehydratation und einbettung in resin die "Sâgen und Schleifen" Methode benutzt. Die preparatten wurden zu 10-20 um. dicke gebracht, mit 10%H202 gewaschen und mit Toluidine blue gefârbt. Die for die Histomorphometrische Untersuchung vorbereiteten preparatten wurden unter dem Licht Mikroskop Inspiziert. Die von dem Licht Mikroskop erhaltenen Bilder wurden mit Hilfe einer Digitalen Kamera zu einem Personalen Rechner übergetragen. Die Analyzen wurden mit dem WinTAS (Trabecular Analysis System) Bfld Analyze Programm gemacht. Die Gruppen wurden nach dem Knochen Mass, Trabekullaren Zahl und Trabekullaren Trennung parametern Vergliechen. Bei der Vergleichung der parametern in der selben Gruppe, zwischen den Gruppen und gegen die Kontrol Gruppen nur die funfte Gruppe [eNOS Inhibitor (L NIO dihydrochloride) 30 jig] war Statistisch verschieden. Darum haben wir Entscheidigt das wahrend der Experimentalen Kiefer Orthopaedischen Zahn bewegung der Isoenzyme 105eNOS über die Wirkungen von Nitric Oxide in dem Knochen Gewebe verantwortlich ist. Nur in der funften Gruppe verringerte sich das Knochen Mass Statistisch bedeutungsvoll (P<,05), verringerte sich die Trabekullen Zahl Statistisch bedeutungsvoll (P<,01) und steigerte sich die Trabekullen Trennung Statistisch bedeutungsvoll (P<,001). Weil bei den drei parametem kein Statistisch bedeutungsvoller Unterschied zwischen dem iNOS Inhibitor (1400W dfliydrochloride) und der Kontrol Gruppe; dem nNOS Inhibitor (Noa-Propyl-L-Arginin) und der Kontrol Gruppe gefunden wurde haben wir in Betracht gezogen das diese Isoenzymen nicht fur die Produktion von Nitric Oxide in der Experimentalen Kiefer Orthopaedischen Zahn bewegung verantwortlich sind. Diese Ergehnisse zeigen uns, dass eNOS der Tonleiter fur die Produktion von Nitric Oxide ist, der im Knochen Metabolismus und in der Kiefer Orthopaedischen Zahn bewegung eine sehr wichtige Rolle spielt. 106