Sıçan prostat kanserinde voltaj kapılı sodyum kanal aktivitesinin araştırılması: Dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC)
Investigation of voltage-gated Na+ channel activity on the rat prostate cancer: Circulating tumor cells (CTC)
Yazar: GÖKÇE ERDEMİR
Danışman: PROF. DR. SEYHAN ALTUN
İstanbul Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı / Radyobiyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2016
Konu: Biyoloji = Biology ; Moleküler Tıp = Molecular Medicine

Özet:
Prostat kanseri, ilerleyen yaşla birlikte erkeklerde görülme oranı hızla artış gösteren oldukça yaygın bir kanser türüdür. Kanser hastalığında, primer tümör tespit edilerek, kanser tanısı konulduktan sonra cevabı aranan en önemli soru, hastalığın uzak doku ve organlarda, ikincil tümör odaklarını, yani, metastazları geliştirip geliştirmediğidir. Günümüzde tanı, tedavi, genel hasta bakımı ve destekleyici tedavi yöntemleri açısından, kanser konusunda,  belirgin ilerlemeler kaydedilmiş olmakla birlikte, hastaların önemli bir oranı, metastazlardan dolayı hayatını kaybetmektedir. Bu nedenle metastaz oluşumunun altında yatan mekanizmaların anlaşılması üzerindeki çalışmalar yoğunluk kazanmıştır. Yapılan çalışmalarda; kanser hücrelerindeki VGSC (Voltaj Kapılı Sodyum Kanalı) fonksiyonunun metastazla ilişkili olduğu ve kanalın fonksiyonu inhibe edildiğinde, metastatik aktivitede de inhibisyonun meydana geldiği görülmüştür. Son yıllarda bu alanda yapılan çalışmalar arasında "dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC)" gelecek vaat eden bir konudur. Metastaz yapmak üzere dolaşım sisteminde bulunan bu hücreler, diğer kanserlerde olduğu gibi, prostat kanserinde de diagnostik ve prognostik parametre olma potansiyeli taşımaktadır. 
Çalışmada, yüksek metastatik karakterli Mat-LyLu sıçan prostat kanser hücrelerinin, Copenhagen ırkı sıçanlara deri altına inokülasyonu ile oluşturulan Dunning model prostat kanserli tedavi alan ve almayan sıçanların kanlarında elde edilen CTC'lerde Nav1.7 mRNA ekspresyonunun düzeyini belirleyerek, ısrarlı akım blokeri Ranolazine (RNL)'nin Nav1.7 ekspresyonu üzerindeki etkisini saptamak amaçlanmıştır.
İn vitro olarak yetiştirilen yüksek metastatik Mat-LyLu hücreleri, Copenhagen ırkı sıçanlara deri altı inoküle edilerek Dunning modeli prostat kanseri oluşturulmuştur. Hayvanlar 2,5 µM ve 5 µM RNL ile 22 gün tedavi edildikten sonra, sağlıklı, kontrol ve tedavili sıçanların kanlarından Ficoll Paque ile mononükleer hücre fazı elde edilmiştir. Elde edilen hücre fazından Real-Time PCR yöntemiyle Nav1.7 ekspresyon düzeyleri saptanmış ve gruplar arasındaki farklar karşılaştırılarak tedavinin Nav1.7 ekspresyonu üzerindeki etkisi belirlenmiştir. Sağlıklı bireylere oranla sadece tümör içeren kontrol grubunda Nav1.7 ekspresyonunun artış gösterdiği, 2,5 µM RNL tedavisinde ekspresyon artarken, 5 µM RNL tedavisi ile ekspresyonun baskılandığı izlenmiştir.
Değerlendirmeler göz önünde bulundurulduğunda, CTC'lerin başta prostat kanseri olmak üzere kanser tanı ve tedavisinde biyobelirteç olarak kullanılabilmesinin dolayısıyla da prostat kanserinde kesin bilgi vermeyen PSA testinden daha güvenilir bir diagnostik/prognostik parametre olma potansiyelinin bulunduğu, CTC kullanımı doğrultusunda basit bir kan testi ile non-invaziv ve tekrarlanabilir bir yöntemle kanser sürecinin başlangıcında metastaz aşamasına gidilmeden teşhis yapılabileceği görülmektedir. Bu çalışmanın, ülkemizdeki ilk deneysel ön çalışmalardan biri olarak literatürde yerini alması ve ilerleyen dönemlerde iyon kanalları ve kanser üzerindeki CTC etkisinin araştırılacağı yeni projelere kaynak oluşturması hedeflenmektedir.

Abstract:
Prostate cancer is the incidence in men with age advancing rapidly increased quite a common type of cancer. Cancer disease, primary tumor identified was diagnosed with cancer, the answer to the most important question is sought after, tissue and organ in the distant disease, secondary tumors, i.e., their focus is to develop the development of metastases. Today, diagnosis, treatment, supportive care, and general patient care and in terms of the methods, although significant progress has been recorded regarding cancer, a significant proportion of patients, have lost their lives due to metastases. Therefore, understanding the underlying mechanisms of the formation of metastases studies on density has earned. Studies; cancer cells and is associated with the metastases function of channel function VGSC inhibiting the metastatic activity inhibition in when has been seen to occur. In recent years, studies in this area include "circulating tumor cells (CTC)" a promising subject. Metastasis to the circulatory system, these cells, as with other cancers, prostate cancer has the potential to be the diagnostic and prognostic parameters.
In this study, the aim was to decide Nav1.7 mRNA expression level on CTCs which were obtained from the bloods of Copenhagen rats, which were divided into two groups and one of which subjected to inoculation of high metastatic charactered prostate cancer cells for rats under their skins, and the other did not and to determine the effect of persistent current blocker Ranolazine (RNL) on Nav1.7 expression.
High metastatic Mat-Lylu cells, grown in vitro were inoculated under the skins of Copenhagen rats and Dunning model prostate cancer obtained. After the animals were cured for 22 days with 2,5 µM and 5 µM RNL, mononuclear cell phase with Ficoll Paque were obtained from the bloods of healthy, controlled and cured rats. Nav1.7 expression levels of obtained cell phase were determined using Real-Time PCR and the effect of the treatment on Nav1.7 expression via comparing the difference between groups. It was found out that Nav1.7 expression raised on controlled group compared to healthy ones, and while the expression was at raise on 2,5 µM RNL treatment, it was repressed on 5 µM RNL treatment.  
It has been aimed this study to enlighten the potential of evaluation on diagnosis/prognosis phases of prostate cancer, to take its place in literature as one of the very first experimental studies in our country and to be a source of information on the projects which aim to study the effect of CTC on ion channels and cancer in the future.