Karvakrolün SKOV-3 insan over kanseri hücrelerinde epitelyal-mezenkimal geçişe etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of carvacrol on epithelial mesenchymal transition in SKOV-3 human ovarian cancer cells
Yazar: AYÇA YAZICI
Danışman: DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜRKAN YİĞİTTÜRK
Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı / Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2024
Konu: Histoloji ve Embriyoloji = Histology and Embryology

Özet:
Over kanseri günümüzde en sık görülen jinekolojik kanserlerdendir. Tedavisi, cerrahi ve kemoterapinin entegrasyonuna dayanmaktadır. Tedavisine yönelik yeni ve daha etkili ajanlara ihtiyaç duyulmaktadır. Epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT), hücrelerin epitel özelliklerini kaybettiği, mezenkimal fenotipik özellikler kazandığı bir süreçtir. Kanser gelişimi ve yara iyileşmesi gibi fizyolojik ve patolojik olaylarda önemli rolü olduğu düşünülmektedir. Karvakrol, kekik ve kekikgiller ailesinin üyesi olan bitkilerin uçucu yağlarında bulunan fenolik bir monoterpenoiddir. Literatürler incelendiğinde karvakrolün kanser hücre apoptozunu indüklediği gösterilmiştir. Bu çalışmada karvakrolün SKOV-3 insan over kanseri hücrelerinin EMT potansiyeline olan etkilerini belirleyip, vimentin ve TGF-β belirteçleri üzerindeki etkilerini incelemek amaçlanmıştır. Çalışmada ilk olarak WST-1 analizi ile karvakrolün IC50 değeri tespit edilmiştir. EMT ile ilgili analizlerde tespit edilen IC50 değeri (C1 grubu) ve bu değerin %10' u (C2 grubu) kullanılarak deney grupları oluşturulmuştur. Ayrıca uygulama yapılmayan kontrol grubu ve DMSO çözgen grubu oluşturulmuştur. Vimentin ve TGF-β belirteçlerinin incelenmesi için immünofloresan boyama gerçekleştirilmiştir. Floresan ışıma yoğunlukları "düzeltilmiş total hücre floresanı (CTCF) değeri" olarak hesaplanmıştır. EMT potansiyelinin incelenmesi için in vitro yara modeli oluşturulmuş ve yara alanında hücre çoğalmasına bağlı yüzde (%) kapanma oranı belirlenmiştir.  Karvakrol, SKOV-3 hücre canlılığını konsantrasyona bağlı olarak inhibe etmektedir. Yara iyileşme analizinde karvakrol uygulanan gruplarda yara alanlarının kapanma yüzdesi azalmıştır. Anti-vimentin (p<0.05) ve Anti-TGF-β (p<0.01) immünfloresan boyamasında C1 grubu CTCF değerinin kontrol grubu ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı düşük olduğu görülmektedir. Sonuç olarak, karvakrolün doza bağlı olarak SKOV-3 hücrelerinde EMT inhibisyonuna sebep olabileceği görülmektedir. Bu sebeple çalışmamızın, EMT üzerinden kanser tedavi yaklaşımları sunan araştırmalara katkı sağlama potansiyelinin olduğunu düşünmekteyiz.

Abstract:
Ovarian cancer is one of the most common gynecologic cancers today. Its treatment is based on the integration of surgery and chemotherapy. New and more effective agents are needed for its treatment. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a process in which cells lose their epithelial properties and gain mesenchymal phenotypic characteristics. It is thought to play an important role in physiological and pathological events such as cancer development and wound healing. Carvacrol is a phenolic monoterpenoid found in the essential oils of thyme and thyme family members. In the literature, carvacrol has been shown to induce cancer cell apoptosis. In this study, we aimed to investigate the effects of carvacrol on the EMT potential of SKOV-3 human ovarian cancer cells and to examine its effects on vimentin and TGF-β markers. In the study, the IC50 value of carvacrol was first determined by WST-1 analysis. Experimental groups were formed using the IC50 value determined in the analysis related to EMT (C1 group) and 10% of this value (C2 group). In addition, an untreated group (control group) and a solvent group (DMSO group) were formed. Immunofluorescent staining was performed to examine vimentin and TGF-β markers. Fluorescence intensities were calculated as "corrected total cell fluorescence (CTCF) value". In order to examine the overall EMT potential, an in vitro wound model was created and the percentage (%) closure rate due to cell proliferation in the wound area was determined. Carvacrol inhibits SKOV-3 cell viability in a concentration-dependent manner. In wound healing analysis, the percentage of closure of wound areas decreased in the carvacrol-treated groups. Anti-vimentin (p<0.05) and Anti-TGF-β (p<0.01) immunofluorescence staining showed that the CTCF value of C1 group was statistically significantly lower compared to the control group. In conclusion, it appears that carvacrol may cause EMT inhibition in SKOV-3 cells in a dose-dependent manner. Therefore, we think that our study has the potential to contribute to researches that offer cancer treatment approaches through EMT.