Leptin tayinine yönelik etiketsiz elektrokimyasal immünosensör geliştirilmesi
Development of label-free electrochemical immunosensor for leptin determination
Yazar: GÜNSELİ KAMAN
Danışman: DOÇ. DR. DERYA KOYUNCU ZEYBEK
Kütahya Dumlupınar Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyokimya Ana Bilim Dalı / Biyokimya Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2021
Konu: Biyokimya = Biochemistry
Dizin: Antikorlar = Antibodies ; Elektrokimya = Electrochemistry ; Leptin = Leptin ; Obezite = Obesity ; Sensörler = Sensors ; İmmünosensör = Immunosensor

Özet:
Bu çalışmada, enerji dengesinde önemli rolü olan leptin hormonununhızlı, ekonomik ve güvenilir olarak tayin edecek etiketsiz birelektrokimyasal immünosensör geliştirilmek istendi. Bu amaçla tez kapsamında camsı karbon eletrot ilk olarak, kitosan (%1'lik asetik asit çözeltisi içerisinde %0,5'lik kitosan) ve demir oksit (2 mg CoFe2O4+1 ml distile su.) aynı oranda ve ultrasonik sonikatörle bir araya getirildi. Hazırlanan kitosanlı CoFe2O4 camsı karbon elektrot (GCE) yüzeyine immobilize edildi. Daha sonra kitosanlı CoFe2O4 NPE üzeri AuNPS ile kaplandı. İmmünosensörün optimizasyon ve karakterizasyonu elektrokimyasal impedans spektroskopisi (EIS), dönüşümlü voltametri (CV), diferansiyel puls voltametrisi (DPV) ve taramalı elektron mikroskopisi (SEM) ile denetlenmiştir. EIS, CV ve SEM ile yapılan karakterizasyon araştırmaları, biyoduyarlı molekülün (MBP) yüzeye etkin şekilde immobilize edildiğini ortaya koymuştur. Optiumum şartların belirlenmesinin ardından kalibrasyon grafikleri çizilmiştir. Kalibrasyon çalışmaları immünosensörün düşük tayin limitine ve geniş aralıklarda doğrusallığa sahip olduğunu göstermiştir. Human leptin doğrusal çalışma aralığı10-2000 ng ml -1 olarak bulundu. Çalışma tamamlandığında insan kanından obezite ve insülin direnci oluşum mekanizmalarında rolü olan anti-leptinin doğru ve hızlı tayini için bir immünosensör önerilmiştir.

Abstract:
In this study, it was aimed to develop an unlabeled electrochemical immunosensor that would quickly, economically and reliably determine the leptin hormone, which has an important role in energy balance. For this purpose, within the scope of the thesis, glassy carbon eletrode was first combined with chitosan (0.5% chitosan in 1% acetic acid solution) and iron oxide (2 mg CoFe2O4 + 1 ml distilled water) in the same ratio and by ultrasonic sonicator. Then, chitosan CoFe2O4 NPE was covered with AuNPS. Optimization and characterization of the immunosensor was supervised by electrochemical impedance spectroscopy (EIS), cyclic voltammetry (CV), differential pulse voltammetry (DPV) and Scanning Electron Microscopy (SEM). Characterisation studies with EIS, CV and SEM revealed that the biosensitive molecule (MBP) was effectively immobilized on the surface. Calibration charts were drawn after determining the optium conditions. Calibration studies have shown that the immunosensor has a low detection limit and wide range of linearity. Human leptin linear working range was 10-2000 ng mL-1. When the study was completed, an immunosensor was proposed for the accurate and rapid determination of anti-leptin from human blood, which has a role in the formation mechanisms of obesity and insulin resistance.