Brucella melitensis dış membran protein geninin klonlanması
Cloning of outer membran protein gene of brucella melitensis
Yazar: ERMAN ORYAŞIN
Danışman: PROF. DR. SÜHEYLA TÜRKYILMAZ
Adnan Menderes Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü / Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
Derece: Yüksek Lisans, 2018
Konu: Mikrobiyoloji = Microbiology ; Veteriner Hekimliği = Veterinary Medicine
Dizin: Brusella = Brucella ; Brusella = Brucella ; Gen klonlama = Gene cloning ; Gen klonlama = Gene cloning ; Genler = Genes ; Klonlama = Cloning ; Membran proteinleri = Membrane proteins ; Membranlar = Membranes ; Polimeraz zincirleme reaksiyonu = Polymerase chain reaction

Özet:
Bu çalışmada Brucella melitensis suşundan omp31 geninin klonlanması amaçlandı. Böylelikle aşı geliştirmek, hızlı tanı kiti geliştirmek gibi daha ileri biyoteknolojik çalışmalar ve yaklaşımlarda kullanılabilecek yerli ve potansiyel bir ön çalışma olacağı düşünüldü.
Çalışmada materyal olarak Brucella melitensis REV-1 canlı aşı suşu kullanıldı. İzolasyon ve suşun doğrulanmasının ardından, DNA ekstraksiyonu yapıldı. Dış membran proteini kodlayan gen bölgesi gen bankasından bulundu. Bu bölgeyi klonlamak için gerekli primerler dizayn edildi. Primer dizaynından sonra polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) yoluyla çoğaltılan gen bölgesi, pET28a ekspresyon vektörüne klonlanarak Escherichia coli BL21 bakterisine transformasyonu gerçekleştirildi. 
E. coli BL21 hücresinden plazmid ekstraksiyonu gerçekleştirildi ve klonlama için kullanılan restriksiyon enzimi ile kesim sonucunda insert ve plazmid ayrı olarak gözlemlendi. 790 bp büyüklüğünde bulunan insert, tekrar klonlama primeri ile çoğaltılarak doğrulamak amacıyla sekans analizi yapıldı. Sekans analizi sonrasında elde edilen dizi gen bankası ile karşılaştırıldı ve insertin B. melitensis dış membran proteini olduğu doğrulandı. 
Rekombinant dış membran proteini Omp31 (rOmp31)'in aşı adayı olma potansiyelini bulmak için deneysel çalışmalarda kullanılabilecek deneysel bir komponent olma özelliği vardır. Böylelikle bu çalışmanın aşı geliştirmek, hızlı tanı kiti geliştirmek gibi daha ileri çalışmalarda kullanılabilecek yerli ve potansiyel bir ön çalışma olacağı düşünülmüştür.

Abstract:
In this study cloning of Brucella melitensis outer membrane protein was aimed. It was thought that, this study could be a potential and national preliminary work which would lead a way for rapid diagnosis kit and vaccine development.
Brucella melitensis REV-1 live vaccine strain was used in the study. After isolation and confirmation of strain, DNA was extracted from bacterial culture. Gene sequence which encodes outer membrane protein was obtained from Gene Bank and primers for gene were designated. PCR reaction was carried out and amplicon was cloned Pet28A expression vector, then recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21.
Plasmid was extracted from E. coli BL21 strain and after the restriction digest insert and plasmid were observed separately. Insert with size of 790 bp, amplified with cloning primers again and amplicon was sequenced. Obtained sequence was compared with those in Genbank and insert was confirmed as  B. melitensis outer membrane protein. 
Recombinant outer membrane protein Omp31 (rOmp31) has a feature of experimental component for vaccine candidate researches. In this way this study could be a potential preliminary national work for further studies such as developing rapid diagnostic kits.