[normattiva_dump]

Agitare, sigillare ed incubare a 37 °C per 12'. Qualora fosse presente qualche siero con azione anticomplementare, procedere nuovamente alla inattivazione. Screening. - Porre in ogni pozzetto: 0,025 ml di siero diluito ed inattivato; 0,025 ml di Antigene alla diluizione d'uso; 0,025 ml di C' a due Unità. - Agitare, sigillare ed incubare per 12' a bagnomaria a 37 °C. - Aggiungere in ciascun pozzetto 0,025 ml di SE (una parte di Emolisina + una parte di globuli rossi di montone al 3%). - Agitare, sigillare ed incubare per 12' a bagnomaria a 37 °C. - I sieri che risulteranno positivi alla diluizione 1:6 dovranno essere titolati. In ogni piastra si dovrà procedere ai seguenti controlli: KAg 0,025 ml di diluente; 0,025 ml di Ag; 0,025 ml di C' contenente 2U; 0,025 ml di SE contenente, in parti uguali 1U di emolisina e GR di montone sensibilizzati al 3%. KSE+C' 0,050 ml di diluente; 0,025 ml di C' ; 0,025 ml di SE. KSE-C' 0,075 ml di diluente; 0,025 ml di SE. Titolazione dei Sieri risultati positivi allo Screening. Usare piastre con fondo a U per microtitolo. - Porre 0,025 ml di diluente (*) in tutti i pozzetti ad eccezione che nei primi (colonna X). - Porre 0,025 ml di siero già diluito nei 12 pozzetti delle colonne X, Y e Y2. - Servendosi dei microdiluitori, procedere alla diluizione dei sieri, partendo dalla colonna Y fino alla colonna X2. - Aggiungere, in tutti i pozzetti ad eccezione che nei pozzetti della colonna Y2, 0,025 ml di Antigene alla diluizione d'uso. - Aggiungere in tutti i pozzetti 0,025 ml di Complemento contenente 2U. - Agitare, sigillare ed incubare le piastre a bagnomaria a 37 °C per 12'. ------------------------------------------------------- (*) Diluente: tampone Veronal (VBS). Parte di provvedimento in formato grafico Aggiungere in tutti i pozzetti 0,025 ml di SE. Agitare e sigillare le piastre, incubare a bagnomaria a 37°C per 12'. Lettura: Si considera come titolo del siero la più alta diluizione dello stesso che dà completa fissazione. In ogni prova di titolazione dei sieri devono essere presenti: a) un siero positivo standard, che serve come controllo della prova (tale siero deve dare il suo titolo); b) un siero negativo; c) i controlli di: Antigene (K Ag): 0,025 ml diluente 0,025 ml Ag 0,025 ml C' 0,025 ml SE K SE + C: 0,05 ml diluente 0,025 ml C' 0,025 ml SE K SE - C: 0,075 ml diluente 0,025 ml SE Va inserito infine il controllo di anticomplementarità dell'Antigene e dei sieri. Visto, il Ministro degli affari esteri ANDREOTTI