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La Gazzetta Ufficiale n. 312 del 15 novembre 1979 ha pubblicato il testo del decreto del Presidente della Repubblica lo giugno 1979, n. 575, e quelli della convenzione e dell'allegato accordo. Non sono stati inserti nella predetta Gazzetta Ufficiale gli annessi all'accordo che vengono di seguito pubblicati. ANNESSO C BRUCELLOSI BOVINA A) SIERO-AGGLUTINAZIONE 1. Il siero agglutinazione standard deve essere conforme al siero campione preparato dal "Veterinary Laboratory Wey-bridge" - Surrey - Inghilterra. La fiala deve contenere 1.000 unità internazionali agglutinanti provenienti dalla liofilizzazione di 1 ml di siero bovino. 2. Per l'Italia la fornitura del siero standard deve essere assicurata dal "Bundesgendheitsant" di Berlino. 3. Il tasso di agglutine brucellari di un siero deve essere espresso in unità internazionali per ml/ per esempio: siero x 80 U.I. per ml/. 4. La lettura della siero-agglutinazione lenta in provetta deve essere fatta a 50 p. 100 o 75 p. 100 d'agglutinazione, l'antigene utilizzato dovendo essere stato titolato in condizioni identiche con siero standard. 5. L'agglutinabilità dei diversi antigeni con siero standard deve essere compresa entro i seguenti limiti: se la lettura viene fatta a 50 p. 100: tra 1/600 e 1/1000; se la lettura viene fatta a 75 p. 100: tra 1/500 e 1/750. 6. Per la preparazione dell'antigene destinato alla siero-agglutinazione in provetta/metodo lento/, si devono utilizzare i ceppi Weybridge n. 99 e U.S.D.A. 1119 o qualsiasi altro ceppo di sensibilità equivalente. 7. I terreni di cultura impiegati sia per la conservazione del ceppo in laboratorio che per la produzione dell'antigene devono essere scelti in modo che non favoriscano la dissociazione batterica (S-R). 8. L'emulsione batterica deve essere fatta in soluzione Fisiologica (NaCl 8,5 p 100), fenicata a 0,5 p. 100. Non deve essere impiegato il formolo. 9. Gli antigeni devono essere controllati da istituti ufficiali. 10. Gli antigeni possono essere rilasciati allo stato concentrato purché sull'etichetta del flacone sia menzionato il fattore di diluizione da impiegare. 11. Per effettuare una siero-agglutinazione si devono preparare almeno tre diluizioni per ciascun siero. Le diluizioni del siero sospetto devono essere effettuate in maniera tale che la lettura della reazione al limite d'infezione avvenga nella provetta intermedia. In caso di reazione positiva in questa provetta, il siero sospetto ha quindi almeno 30 unità internazionali agglutinanti per millilitro. 12. I sieri degli ovini e dei caprini devono essere diluiti in soluzione di NaCL 5% invece che in soluzione fisiologica (NaCL 0,85). B) PROVA DELL'ANELLO (RING-TEST) 13. Il ring-test deve essere eseguito sul contenuto di ogni bidone di latte dell'azienda. 14. Si considera come standard l'antigene proveniente da tino dei sottoindicati Istituti ufficiali: a) Germania - Bundesgesundheitsamt - Berlino; b) Olanda - Central Diergeneeskunding Institut Afdeling - Rotterdam; c) CSSR - Ustav pro Statni kontrolu veterinarnich bio-preparatù a leciv, Brno. 15. L'antigene può essere colorato solo con ematossilina o tetrazolium; bisogna dare la preferenza all'ematossilina. 16. La reazione deve essere effettuata in provette di diametro di 8 - 10 mm. 17. La reazione deve essere effettuata con 1 ml di latte, addizionato di 0,05 ml di uno degli antigeni colorati. 18. La sospensione di latte ed antigene deve essere posta in termostato a 37 gradi C per un tempo compreso tra un minimo di quarantacinque minuti ed un massimo di sessanta minuti. 19. La reazione deve essere effettuata intorno alla diciottesima ora dopo la mungitura e valutata secondo i seguenti criteri: a) Reazione negativa: latte colorato, crema decolorata; b) Reazione positiva: latte e crema colorate in maniera uguale oppure latte decolorato e crema colorata. 20. Non deve essere aggiunto formolo al campione. L'unico prodotto la cui aggiunta sia autorizzata è il cloruro mercurico in soluzione 0,2 p. 100 (0) e, in questo caso, la proporzione tra la quantità di latte e la soluzione di cloruro mercurico deve essere di 10 a 1.