Paste誌のJason Killingsworthは2000年代の新ゲームキャラクターにおいて6位に挙げている。彼はゲーム史上最も好感が持てる悪役だとしている。GamesRadarの編集者も2000年代最高の新ゲームキャラクターの一つとしている。Epic Gamesのデザイン・ディレクター、クリフ・ブレジンスキーはGLaDOSの声が聞きたくてテストチェンバーをクリアしていたと語る。また、以前デートの約束をしていた女の子から、最初は上機嫌なメールが届き、30秒後には怒りをぶちまけ、30秒後には謝ってきた話を引き合いに出し、GLaDOSのことをよく知っていると述べている。GamesRadarのJustin Towellは倒すのが難しい敵の第3位に挙げ、理由をストックホルム症候群のように結びつきを感じてしまうからだと述べている。IGNの編集者Daemon Hatfieldはゲーム史上最も魅力的なキャラクターと述べる。Cinema Blendは2007年のベストキャラクターとし、ゲーム中に彼女の息遣い、感情、はしゃぎっぷりを感じられるとしている。GamesRadarは『Portal』をストーリーの出来が良いゲームとし、主な理由にGLaDOSの存在を挙げている。確固としたキャラクター性を持ち、受動攻撃性を再定義したと述べる。
GLaDOSはファンを獲得し、さまざまなジャンルでファンが作った作品が公開されている。例えば、擬人化したイラストやコスプレ、レゴで製作したGLaDOS、GPSにGLaDOSの音声（を模したもの）を使うものなどである。またGLaDOS製作キットも販売されている。これは『Portal 2』において、Wheatleyに改造されジャガイモ電池に取り付けられた姿を、実物のジャガイモを使って作製するものである。エンディング曲「Still Alive」も多くのファンを獲得することになった。『The Orange Box Official Soundtrack』に収録され、音楽ゲームロックバンドに採用された。また、Valveから発売された『Left 4 Dead 2』のゲーム中にも聴くことができる。GDC 2008や2008年のPenny Arcade Expo（PAX）、2009年のPRESS STARTなどで「Still Alive」は演奏されている。「Still Alive」はゲーム音楽に関する非営利団体Game Audio Network Guild（G.A.N.G.）の第6回G.A.N.G. Awardsにおいて、BEST ORIGINAL VOCALのPOP部門を獲得している。イスラエルのロックバンドmissFlagを始め、YouTube上にカバーが存在する。2013年の映画『パシフィック・リム』では、AIの声としてEllen McLainのものが使われた。監督のギレルモ・デル・トロはPortalシリーズの「大ファン」であり、AIの音声はGLaDOSのものにわざと似せたというGLaDOSはPortalシリーズ以外にも『Poker Night 2』のディーラー役、『Dota 2』のアナウンサーパックとして、また『Defense Grid』のDLCにも登場する。NASAのスピッツァー宇宙望遠鏡チームが作成している動画シリーズIRrelevant AstronomyにもGLaDOSが登場している。
1952年（昭和27年）1月、歌手の渡辺はま子は、来日したフィリピンの国会議員ピオ・デュランから衝撃的な事実を知らされた。同国モンテンルパ市のニュービリビット刑務所には、多数の元日本軍兵士が収監されており、すでに14人が処刑されたと聞きかされた。第二次世界大戦後7年も経つのに、なお刑を受刑し続け、中には死刑を待つだけの人達も居ると聞いた彼女は、銀座の鳩居堂から香を同刑務所宛に送った。1952年6月、神奈川県鎌倉市にあった渡辺はま子の自宅に、一通の封書が届けられた。その封書の中には、楽譜と短い手紙が入っており、その楽譜の題名には「モンテンルパの歌」作詞代田銀太郎、作曲伊藤正康と書いてあった。二人はフィリピン・マニラ市郊外のモンテンルパ市の丘にあった「ニュービリビット刑務所」で、戦争犯罪者としてマニラ軍事裁判で死刑判決を受けていた人物であった。作詞の代田銀太郎は、元フィリピン憲兵隊少尉。作曲の伊藤正康は、元大日本帝国陸軍将校。「モンテンルパの歌」は、刑務所で収容されていた日本人111名の、日本への望郷の念を込めた曲であった。封書を受け取った渡辺は、早速歌をビクターレコードに持ち込み、ほとんど修正無しで吹き込んだ。題名には色を付けられ『あゝモンテンルパの夜は更けて』と名付けられた。渡辺と宇都美が歌った『あゝモンテンルパの夜は更けて』のレコードは、20万枚を売り上げたヒット曲となった。『あゝモンテンルパの夜は更けて』が大ヒットしていた1952年（昭和27年）12月25日、渡辺がニュービリビット刑務所を訪れた。吹き込み以来、刑務所慰問の決意を固めていた渡辺が、国交が無いフィリピン政府に対し、戦犯慰問の渡航を嘆願し続けて半年後の事だった。渡辺来訪時、作詞の代田銀太郎と作曲の伊藤正康は開演前に対面し、歌を作ってもらった事に対し礼を述べた。慰問のステージは、ドレス姿の渡辺が「蘇州夜曲」などの往年のヒット曲を歌い、ステージ終盤に『あゝモンテンルパの夜は更けて』は披露された。この曲を聞いた108名の収容者は、死刑が執行された戦犯たちの事を想い、またある者は日本への望郷の想いを胸に、皆感極まって涙し、最後には全員起立しての大合唱となった。作詞者の代田も、作曲者の伊藤も涙を流していた。その後、この歌のヒットや渡辺はま子を始め、加賀尾秀忍ら関係者の努力が、当時のフィリピン政府当局を動かし、1953年（昭和28年）7月、すでに同曲をおさめたオルゴールを加賀尾から贈られていたフィリピン共和国大統領エルピディオ・キリノの独立記念日特赦によって、戦争犯罪者108名全員の日本への帰国が計られ、実現した。