商務省による検査が1862年12月末に行われ、1863年1月初めに開通が承認された。信号設備のわずかな変更が行われてそれも承認され、数日に渡って運行試験が行われて1863年1月9日の開通を迎えることになった。この日にはパディントンからの開通記念列車が走り、ファリンドン駅では600人の株主と来賓のための大きな宴会が開かれた。チャールズ・ピアソンは1862年9月に亡くなっており、鉄道が開通するのを見ることはできなかった。この全長3.75マイル（約6 km）の路線は、翌1863年1月10日土曜日から一般営業を開始した。駅はパディントン（ビショップス・ロード）駅（現在のパディントン駅）、エッジウェア・ロード駅、ベイカー・ストリート駅、ポートランド・ロード駅（現在のグレート・ポートランド・ストリート駅）、ガワー・ストリート駅（現在のユーストン・スクエア駅）、キングス・クロス駅（現在のキングス・クロス・セント・パンクラス駅）、ファリンドン・ストリート駅（現在のファリンドン駅）があった。鉄道は歓迎されて成功し、初日には38,000人の乗客を輸送して、グレート・ノーザン鉄道の列車を利用して臨時列車が運転された。最初の12か月で950万人の旅客を輸送し、さらにその次の12か月では1200万人へと増加した。当初の時刻表では、途中の5駅に停車して所要時間18分であった。昼間閑散時間帯の運行頻度は15分おきで、朝のラッシュ時には10分おきに増発され、早朝と20時以降は20分おきに減らされた。1864年5月からは、パディントンから朝の5時30分および5時40分に出る列車については労働者向けの割引往復乗車券が片道乗車券と同じ3ペンスで発売された。当初は、メトロポリタン鉄道ではグレート・ウェスタン鉄道から提供されたグレート・ウェスタン鉄道メトロポリタン型蒸気機関車を使って広軌の車両で運転が行われていた。開通から間もなく、運行頻度を増加させる必要性を巡って2社の間で見解の相違が起こり、1863年8月にグレート・ウェスタン鉄道は車両を引き上げることになった。メトロポリタン鉄道では、グレート・ノーザン鉄道の標準軌の鉄道車両を一時的に借り受けて運行頻度を落として運行を行い、その後自社で標準軌の機関車と客車を購入した。煙を出さない機関車で運転されると考えていたため、エッジウェア・ロードからキングス・クロスまでは長いトンネルもあるなど、最初の区間はあまり換気を行わない構造で建設された。駅や客車には煙が充満していたが、当初はそれでも乗客が減るということは無かった。後にキングス・クロスとガワー・ストリートの間のトンネルに開放部を設けたり、駅の天井のガラスを取り外したりして、換気が改善された。煙の問題は1880年代になってからも続いたため、さらにトンネルの開放部を増やしたいメトロポリタン鉄道と、そうすれば馬を驚かせ周辺の地価を下げると主張する地元の当局との間で論争になった。この結果1897年の商務省報告では、メトロポリタン鉄道を利用して疲弊した人々に薬剤師が「メトロポリタン処方」という薬剤を処方している、と報告された。この報告では、もっと多くの開放部の設置が認められるべきだとしたが、実際に建設される前に電化されることになった。
大阪府で毎日放送と朝日放送の両方が加盟している背景には、両方ともTBSラジオの開局以来関係が深かったことによる。TBSラジオの前身であるラジオ東京は、もともと読売新聞系の読売放送・朝日新聞系の朝日放送・毎日新聞系のラジオ日本と電通系の東京放送が合併する形で設立されたため、同根とも言えるABCは早期から特定の時間にラジオ東京とラインを結んで同時ネットを行っていた。MBSもまた毎日新聞を背景とした繋がり（ラジオ東京の新聞勢力は毎日が強かった）や、MBSの主要時間を電通が扱っていたことなどから番組の共同制作やネット受けを行っていた。また、MBSは文化放送（当時は日本文化放送協会）と番組の共同制作を多く行い、ニッポン放送とはFOLスポーツネットワークなどを通じて交流を深めていった。一方のABCもまた文化放送やニッポン放送との交流を深め、ABCラジオの看板番組だった『蝶々・雄二の夫婦善哉』等はニッポン放送で放送されていた。このため、両局は発足当初からJRN・NRN両方とも加盟している。JRN発足記念番組は2時間のうち前半をMBSが、後半をABCが分け合ってネット受けを行った。JRN発足時、TBSのテレビネットワークであるJNNには、旧大阪テレビ放送を合併・継承したABCが加盟していたが、1975年の「腸捻転」解消を機にMBSへと変わった。しかし基幹局であるTBSは、先述の理由でテレビのネットワーク（ネットチェンジ）はラジオと関係ない（ラジオ部門には影響しない）として、今日までABCともラジオのネット関係を続けている。但し、報道・ニュース番組についてはJNN排他協定の解釈上テレビのニュース系列としてJNNを選択した局はラジオ部門も含めた局全体が協定の拘束を受けるとされており、JNN加盟局（1975年3月30日まではABC→「腸捻転」解消以降の同年3月31日以後はMBS）に優先権がある。腸捻転解消後のABCではニュース以外の一般番組だけがネットされる傾向がある。1995年の阪神・淡路大震災発生当時、MBSはTBSからのネット番組を放送していた影響で、地震発生時の初動体制が遅れた影響を教訓として、1998年4月度の改編以後、段階を追って早朝・深夜のワイド番組を自社製作（早朝番組の一部はスポンサーのCMだけをネットする企画ネット番組に準じた扱い）に移行して、JRN共通ネット番組の同時放送を縮小・終了させるようになった。（ただし、2010年代に、一時期JRN共通ネット番組の同時ネットを再開した事例がある）。現在ABCで放送されているニュース（『ABCニュース』など）は100%自社制作であり、全国ニュース番組は、JRN・NRN共にCMも含めネットしない。またプロ野球中継もABCとMBSがともにNRNとのクロスネットであるため、曜日を分担して相互ネットを行うが、2010年度からTBSラジオ発の土・日JRNナイターが放送されなくなった（NRNは継続）。その関係でJRN単独加盟でプロ野球球団がある地域のHBC、CBC、RKBに配慮して、その地域に関係する球団（日本ハム、中日、ソフトバンク）のナイターの試合について、LF-MBSラインを使って相互中継する事例がある（デーゲームは試合日によりABCとの相互中継になる場合もある）。MBS・ABCの両局では、開局時から激しい聴取率競争を繰り広げているため、共に自社制作番組の割合が極めて高い。このため、野球中継以外のJRNラインネット（同時ネット生放送）番組が、和歌山県を除いた関西地域で放送されることは少ない。ネットワークセールス番組であっても、本編を放送せずにCMのみネット受けとなるケースも多い。なおRKBは同じ「毎日新聞」系列のMBSと資本関係にある（MBS及び毎日新聞がRKBの筆頭株主である）事から、RKB制作のJRN全国ネット番組は関西地区ではMBS経由となる場合がほとんどである。但し野球中継についてはRKB制作の中継カードがMBS経由で流れるのは月・金のみで、その他曜日（火・水・木・土・日）はABC経由で放送されている（土日の場合、どちらかがナイトゲームとなる週はMBS経由）。なお近年はラジオ大阪（OBC）が在阪AM3局で唯一JRN非加盟ながらTBSラジオ制作の番組を番組販売扱いでネットしており（『生島ヒロシのおはよう一直線』など）、逆にOBC制作の番組がTBSラジオにネットされたりしている。ライン送出に関して、JRNはNRNとは違って、基幹局の他、大阪にTBSラジオ大阪浪速局が存在し、そこでラインを分岐する（MBSとABC等への送出選択のため）。