日本仏教では、禅宗は武家層にも広まり、武家の保護を受けた禅の五山が定められるなど仏教を通じて武家文化と貴族文化が融合するなど、室町文化に影響する。都市部では日蓮宗が広まり、京都では日親が布教活動を行い、町衆は信徒的な団結力で土一揆に対して戦う。1536年には日蓮宗は比叡山延暦寺と衝突して天文法華の乱と呼ばれる騒動となる。庶民の間では曹洞宗が広まる。浄土真宗には本願寺派や高田派、仏光寺派、三門徒派などの宗派があったが、その中でも、本願寺派の蓮如が再興した本願寺派(一向宗とも呼ばれた)は、講と呼ばれる信徒集団を形成し、浄土真宗の宗派の中で最も有力な宗派となった。本願寺派の信徒は、自らの宗派を守るために、信仰を基にして一向一揆を結び、団結した。本願寺派は、応仁の乱以降の戦国の騒乱の中では、加賀一向一揆を通じて加賀国を支配し、戦国大名に匹敵する勢力になり、室町幕府や様々な戦国大名と合従連衡を繰り広げた。織田信長が上洛した際、信長は足利義昭を支持していたが、後に対立した。その際に、本願寺派は義昭を支持して信長に対抗し、石山合戦を繰り広げた。大坂の石山本願寺が落とされて以降は沈静する。信長は日蓮宗の僧と浄土宗の僧と論争をさせる（安土宗論）。神道では、吉田兼倶が吉田神道を創始する。1549年にはヨーロッパからキリスト教がフランシスコ・ザビエルなどによってもたらされている。
室町時代の学問の担い手は主に禅僧や公家である。京都の五山を中心に禅僧の間で漢文学や朱子学の研究が行われ、五山文学と呼ばれる。五山は幕府の保護を受け、日明貿易を行う足利義満の外交的顧問役でもあった。無力化した公家は有職故実や和歌、古典の研究を行い、一条兼良や東常縁、三条西実隆などの公家より古典文化が守られた。応仁の乱で京都が荒廃すると、公家や禅僧は地方に移り、学問や文化の地方波及や庶民化が進む。関白一条兼良は越前国朝倉氏のもとへ身を寄せ、子は土佐国中村に土着して土佐一条氏となる。桂庵玄樹は肥後国及び薩摩国に招かれ、現地で朱子学の一派である薩南学派を開くが江戸時代には衰亡した。大内義隆に仕えていた南村梅軒は土佐に招かれて、同じく朱子学の一派の海南学派を開く。また、この頃関東では、上杉憲実により足利学校が再興される。大内氏や堺、奈良の商人の間でも独自の出版が行われた。
室町幕府3代将軍足利義満は、公家には公家の礼法、武家には武家の礼法があるとし、幕府の諸行事における公式の礼法を明確に定めた。小笠原長秀・今川左京大夫氏頼・伊勢武蔵守憲忠に「三議一統」を編纂させ、武士の一般常識をまとめさせた。小笠原貞慶は、「三議一統」後に加えられた記述をし、武家礼法を「小笠原礼書七冊」としてまとめた。指南役である高家（伊勢家、小笠原家、今川家（後の吉良家）の、 伊勢家は主に内の礼法（殿中の礼法）、小笠原家は主に外の礼法（主に弓馬礼法）を任せ 大名・旗本などに限って家伝（口頭伝承）により秘伝伝承した。今川家は書と画を任された。また、支配階層が身に付けるべき「能」（実践的な教養）であった「弓術・蹴鞠・庖丁」の内、庖丁を大草公次に命じて創始させた。
室町時代は惣村の成立や都市の発達により、農民とは別の都市部に住む庶民が文化の担い手になってくる時代でもあった。庶民の間では短編の読み物集である御伽草子が読まれ、狂言や小唄、幸若舞などの庶民芸能が流行する。食文化では、味噌、醤油、豆腐など日本料理の基本要素が出揃った。醤油を除き、中国から伝わっていた要素で、室町時代の商工業発達によって普及した（醤油の普及はやや遅れ、関西では江戸時代初期、江戸では中期）。
足利義満の保護を受けた観阿弥・世阿弥元清の親子が鎌倉時代から行われていた猿楽・田楽を能楽として大成させる。世阿弥は「風姿花伝」で芸道論を著す。対話劇である狂言も成立した。
2005年のテルグ語映画『Super』でアッキネーニ・ナーガールジュナ、アーイシャー・ターキヤーと共演し、映画デビューした。IndiaGlitzは「アヌシュカとアーイシャーという2人の女優はクールで上品です。これらのアングルと曲線美は全ての魅力を出して、あなたを没頭させます。演技についてはどうか?そう、彼女たちはそのために映画に出演しています」と述べ、Sifyは「セクシー・ガールのアヌシュカとアーイシャーは、彼女たちの身体を披露します」と述べている。同年、アヌシュカは『Maha Nandi』に出演してシュリハリ、スマントと共演している。ndiaGlitzは「アヌシュカは、まるでそのためにあるように美しく見える」と評価したが、映画自体は「脚本の縫い目は擦り切れている」と批評している。Sifyは映画を「前半は活気に溢れ幸先良く始まるが、テンポが緩み不首尾に終わります」と批評し、アヌシュカについては「彼女はVasuのカメラのお陰で魅力的に映ります」と述べている。2006年にS・S・ラージャマウリの『Vikramarkudu』でヒロインを演じ、ラヴィ・テージャと共演した。映画の成功によりアヌシュカの知名度は挙がり、特にテランガーナ州とアーンドラ・プラデーシュ州において彼女は人気女優となった。Nowrunning.comのキショーアは、「映画の最高のポイントは、ラヴィ・テージャの完璧な演技とアヌシュカの甘美さです。ラヴィは俳優が持つべき才能の全てを備えており、アヌシュカは女性が持つべき全ての素質を備えている」と批評している。同年に『Sarfarosh』をリメイクした『Astram』に出演し、『Stalin』にも特別出演している。2007年に『Lakshyam』に出演して同作は興行的に成功を収め、『Don』では再びナーガールジュナと共演した。2008年に『Okka Magaadu』に出演し、ナンダムーリ・バーラクリシュナと共演した。同年に『Swagatam』に出演するが、興行的に失敗し、批評家からも酷評されている。