Efecto de un surfactante sobre la integridad de espermatozoides ovinos crioconservados (1997)

Con el objetivo de comprobar el efecto de la adicion de un tensido comercial (Equex STM® a diluyentes tris y citrato de Na en la sobrevivencia de semen ovino, se realizaron 4 ensayos con diseno factorial de crioconservacion de eyaculados de 2 carneros de raza Austral y un carnero Border Leicester, procesados separadamente. Fue comun para todos los ensayos la dilucion monofasica rapida a temperatura ambiente, en diluyentes con 20% (v/v) de yema de huevo, divididos en fracciones sin y con 0.5% (v/v) de Equex STM, el empaque en minitubos de 0.25 ml, periodos de adaptacion a +5°C de 3 a 4 h, la curva de congelacion en vapor de nitrogeno a 10 cm sobre la fase liquida de aproximadamente 5°C/min y la posterior descongelacion en agua a 40°C por 15 s. Los criterios de evaluacion del semen descongelado fueron el indice de motilidad (IM) y la integridad del borde apical de los acrosomas (AN). Los resultados se sometieron a analisis de varianza, test de Duncan y test de t (TWOSAM) del paquete STATGRAF 5.1, asumiendo p <0.05%. La comparacion en el 1er. ensayo de los diluyentes tris y citrato de Na al 2.9% mostro diferencias significativas de IM, causadas principalmente por dano osmotico, manifiesto por la inflexion de los flagelos espermaticos en la fraccion diluida en citrato de Na sin la adicion del tensido. La alteracion no se observo en tris. Tanto en tris como en citrato de Na el efecto favorable del tensido sobre la integridad de los acrosomas fue significativo. En el 2° ensayo, con el cambio comparativo de la formulacion del diluyente citrato de Na por la adicion de sulfanilamida, que elevo la osmolaridad y el pH, se repitio lo observado en el ensayo anterior: el efecto significativo del tensido sobre AN en tris y citrato de Na como tambien sobre IM en ambas formulaciones del diluyente citrato de Na. En el 3er. ensayo, destinado a comparar la sobrevivencia espermatica en dos concentraciones del diluyente citrato de Na (2.9% vs. 3.1%), y a comparar un posible efecto deletereo de la dilucion rapida frente a una dilucion lenta, no hubo diferencia entre las concentraciones del citrato de Na, como tampoco hubo una diferencia estadisticamente significativa entre ambas velocidades de dilucion. El efecto del tensido sobre AN fue nuevamente significativo, como tambien sobre IM, al considerar las diferentes fracciones en conjunto. En el 4° ensayo, destinado a probar el efecto de una dilucion lenta con diluyente tris, no se apreciaron diferencias frente a la dilucion rapida. Nuevamente las fracciones con el tensido mostraron valores de AN significativamente mayores, tendencia que para IM solo fue significativa al considerar la muestra en conjunto. De los ensayos se concluyo que diluyentes de citrato de Na sin surfactante son mal tolerados por espermatozoides ovinos, que presentaron multiples inflexiones flagelares espermaticas como senal de shock osmotico consecutivo a la dilucion. Dicha alteracion no se observo con el surfactante. La adicion del surfactante al diluyente tris permitio recuperar cerca del 60% mas de espermatozoides aparentemente intactos despues de la congelacion, lo cual permitiria reducir la cantidad de espermatozoides congelados por dosis, factor que, por su parte, tambien favorece la sobrevivencia espermatica del semen ovino crioconservado