Eventos moleculares associados ao aumento gengival induzido por ciclosporina A são atenuados pela superexpressão de Smad7 (2011)

O aumento gengival induzido por ciclosporina A (CsA) e causado por um acumulo excessivo de matriz extracelular, resultado da acao do fator de crescimento transformante-beta 1 (TGF-s1) sobre a atividade dos fibroblastos gengivais. O presente estudo investigou in vitro os efeitos da superexpressao de Smad7, um inibidor da sinalizacao de TGF-s1, nos eventos biologicos associados ao acumulo de matriz extracelular induzido por CsA. Para verificar os efeitos inibitorios de Smad7, nos superexpressamos Smad7 em fibroblastos de gengiva normal (GN) de uma maneira estavel. Celulas superexpressando Smad7 e celulas controle foram incubadas com CsA e a sintese de colageno tipo I, producao e atividade de metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2) e proliferacao celular foram analisadas por ELISA, zimografia, curva de crescimento, metodo de incorporacao de bromodeoxiuridina (BrdU) e analise do ciclo celular. Os efeitos de CsA na viabilidade celular e apoptose dos fibroblastos de GN tambem foram avaliados. Analises de western blot e imunofluorescencia para fosforo-Smad2 foram realizados para verificar a ativacao da cascata de sinalizacao de TGF-s1. Apesar do tratamento com CsA estimular a producao de TGF-s1 tanto nas celulas controle quanto nos fibroblastos superexpressando Smad7, a via de sinalizacao de TGF-s1 foi marcantemente inibida nas celulas superexpressando Smad7, como revelado pelos niveis reduzidos de fosforilacao de Smad2. Nas celulas superexpressando Smad7, os efeitos de CsA na proliferacao, sintese de colageno tipo I e producao e atividade de MMP-2 foram significativamente bloqueados. A superexpressao de Smad7 bloqueou a proliferacao dos fibroblastos gengivais induzida por CsA via regulacao de p27. CsA e a superexpressao de Smad7 nao induziram morte celular. Os resultados deste estudo confirmaram que a expressao de TGF-s1 e correlacionada com os eventos moleculares associados ao aumento gengival induzido por CsA, e sugerem que a superexpressao de Smad7 e efetiva no bloqueio de tais eventos, incluindo proliferacao, sintese de colageno tipo I e atividade de MMP-2%%%%Cyclosporin A (CsA)-induced gingival overgrowth is attributed to an exaggerated accumulation of extracellular matrix, which is mainly due to an increased expression of transforming growth factor-beta1 (TGF-s1). Herein the in vitro investigation of effects of overexpression of Smad7, a TGF-s1 signaling inhibitor, in the events associated with CsA-induced extracellular matrix accumulation was performed. To assess the inhibitory effects of Smad7, we stably overexpressed Smad7 in fibroblasts from normal gingiva (NG). Smad7 overexpressing cells and controls were incubated with CsA and type I collagen synthesis, matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) production and activity, and cellular proliferation were evaluated by ELISA, zymography, growth curve, BrdUincorporation assay and cell cycle analysis. CsA effects on cell viability and apoptosis of NG fibroblasts were also evaluated. Western blot and immunofluorescence for phospho-Smad2 were performed to measure the activation of…