Effects of various inhibitors including carboxin on Botrytis cinerea mitochondria isolated from mycelium (1993)

— Due to the development of resistant srains, the practical control of Botrytis cinerea remains a problem. Little is known about its respiratory chain and this paper describes the preparation and the properties of B cinerea mi- tochondria with the aim of testing new antifungal compounds. NADH, succinate and α-ketoglutarate as substrates pro- vided good oxygen consumption. Respiratory control ratios were high and showed that electron transport was well coupled to oxidative phosphorylation. The phosphorylation efficiencies (ADP/O) obtained with all 3 substrates were compatible with theoretical values. The addition of cytochrome c did not greatly enhance the oxygen consumption due to ascorbate: the quality of the outer mitochondrial membrane was good enough to prevent externally added cyto- chrome c from interacting easily with the respiratory chain. These observations indicate that the mitochondria isolated sustain a high level of structural and functional integrity. This study showed also that they were devoid of the alterna- tive pathway resistant to antimycin A and cyanide, but that they exhibited a rotenone-insensitive respiratory route. The action and the effective doses of oligomycin, carbonylcyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP) and carboxyatracty- loside on B cinerea mitochondria were similar to those observed with plant mitochondria. At 10 μM, carboxin comple- tely inhibited succinate oxidation in mitochondria from B cinerea but failed to have any effect on NADH and α- ketoglutarate oxidation. This toxicity level was comparable to that reported by other authors with members of the fun- gal class Basidiomycetes. respiration inhibitors / rotenone insensitive route / carboxin / alternative pathway / B cinerea Rsum — Effets d'inhibiteurs dont la carboxine sur les mitochondries de Botrytis cinerea isoles de myclium. Du fait de l'apparition de phnomnes de rsistance aux produits anti-Botrytis, la lutte contre la pourriture grise demeure un problme. La chane respiratoire de B cinerea, dont on connat peu de chose, pourrait constituer une cible intressante pour dcouvrir des produits de remplacement. Cet article dcrit une mthode simple pour prparer des mitochondries de B cinerea et prcise leurs caractristiques. Le NADH, le succinate et l'α-ctoglutarate sont des substrats qui stimulent fortement la consommation d'oxygne. Les contrles respiratoires sont levs et prouvent que le transport des lectrons est bien coupl la phosphorylation oxydative. Les rapports ADP/O obtenus avec les 3 substrats sont compatibles avec les valeurs thoriques. L'addition de cytochrome c n'augmente pas notablement la consommation en oxygne provoque par l'ascorbate : la qualit de la membrane externe des mitochondries est suffi- sante pour empcher le cytochrome c de ragir sur la chane respiratoire. Ces observations montrent que les mito- chondries isoles prsentent une bonne intgrit tant sur le plan structural que fonctionnel. Cette tude montre aussi qu'elles ne possdent pas une voie alternative rsistante l'antimycine A et au cyanure mais prsentent une voie in- sensible la rotnone. Les effets et les niveaux d'activit de l'oligomycine, du carbonylcyanide m- chlorophnylhydrazone (CCCP) et du carboxyatractyloside sur les mitochondries de B cinerea ont t similaires ceux gnralement observs avec les mitochondries vgtales. A 10 μmol.l -1 , la carboxine inhibe compltement l'oxydation du succinate par les mitochondries de B cinerea mais n'a aucun effet sur les oxydations du NADH et de l'α-ctoglutarate. Ce niveau de toxicit est comparable celui relev par d'autres auteurs avec des champignons ap- partenant la classe des Basidiomyctes. inhibiteur de la respiration / voie rsistante la rotnone / carboxine / voie alternative / B cinerea