Arrêté du 1 octobre 1986 relatif à la méthode officielle de dosage des composés polaires dans les graisses et les huiles comestibles
   Les laboratoires chargés de concourir à l'application de la réglementation relative à la répression des fraudes sont tenus d'employer, pour déterminer la teneur en composés polaires dans les graisses et les huiles comestibles, la méthode décrite en annexe du présent arrêté.


Le directeur général de la concurrence, de la consommation et de la répression des fraudes au ministère de l'économie, des finances et de la privatisation et le directeur général de la santé au ministère des affaires sociales et de l'emploi sont chargés, chacun en ce qui le concerne, de l'exécution du présent arrêté, qui sera publié au Journal officiel de la République française.

AnnexesMéthode officielle de dosage des composés polaires dans les graisses et huiles comestiblesI. - Objet et domaine d'application.II. - Définition.III. - Principe.IV. - Réactifs.V. - Appareillage.VI. - Mode opératoire.VII. - Expression des résultats.Note : Vérification de la qualité de la séparation par chromatographie en couche mince.
   La présente méthode a pour objet le dosage des composés polaires formés au cours du chauffage des matières grasses.
   Elle s'applique à toutes les huiles et graisses d'origines animale et/ou végétale ; elle permet d'apprécier leur degré d'altération thermo-oxydative.

   On entend conventionnellement par composés polaires les constituants des matières grasses dosés dans les conditions opératoires décrites ci-après.


   Séparation par chromatographie sur colonne des composés polaires et non polaires : les composés polaires sont retenus sur la colonne, les composés non polaires sont élués et pesés. Dosage des composés polaires par différence entre la masse de la prise d'essai et celle de la fraction éluée.
   La qualité de la séparation peut être vérifiée par chromatographie en couche mince.

   Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit étre de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
   4.1, Ether de pétrole (eb = 40 - 60 °C).
   4.2, Ethanol à 95 p. 100 (v/v).
   4.3, Chloroforme.
   4.4, Oxyde diéthylique, exempt de peroxydes et de résidu.
   4.5, Acide acétique cristallisable.
   4.6, Solvant d'élution : mélange d'éther de pétrole (4.1) et d'oxyde diéthylique (4.4), 87/13 (v/v).
   4.7, Solvant de développement : mélange d'éther de pétrole (4.1), d'oxyde diéthylique (4.4) et d'acide acétique (4.5), 70/30/2 (v/v/v).
   4.8, Gel de silice, 0,063 - 0,200 mm (70 - 230 mesh), Merck n° 7734 ou équivalent ajusté à une teneur en eau de 5 p. 100 (m/m).
   4.9, Acide phosphomolybdique, solution à 100 g/litre dans l'éthanol (4.2).
   4.10, Sable marin, purifié par un acide et calciné.
   4.11, Coton hydrophile.
   4.12, Azote 99,0 - 99,8 p. 100.

   Matériel courant de laboratoire et, notamment :
   5.1, Ballons à fond rond de 250 ml adaptables à l'évaporateur rotatif.
   5.2, Béchers de 100 ml.
   5.3, Ballon de 500 ml avec bouchon rodé adaptable.
   5.4, Colonne en verre pour chromatographie : diamètre intérieur 21 mm, longueur 450 mm, munie d'un robinet (de préférence en polytétrafluoroéthylène) et d'un rodage en verre.
   5.5, Réservoir de 250 ml muni d'un rodage en verre adaptable sur la colonne (5.4.).
   5.6, Agitateur en verre ou polytétrafluoroéthylène longueur 60 cm environ.
   5.7, Fiole jaugée de 50 ml.
   5.8, Pipette jaugée de 20 ml.
   5.9, Pipette capillaire de 2 ml pour chromatographie en couche mince.
   5.10, Plaques pour chromatographie en couche mince, de 20 x 20 cm, recouvertes d'une couche de silicagel (sans indicateur de fluorescence) de 0,25 mm d'épaisseur.
   5.11, Cuve de développement pour chromatographie en couche mince, avec couvercle rodé en verre.
   5.12, Pulvérisateur pour chromatographie en couche mince.
   5.13, Etuve réglée à 103 7 2 °C.
   5.14, Etuve réglable entre 120 et 160 °C.
   5.15, Bain d'eau.
   5.16, Evaporateur rotatif sous-vide.
   5.17, Agitateur à mouvement rotatif ou oscillant ou tout autre appareil remplissant les mêmes fonctions.

   6.1 :
   Préparation de l'échantillon.
   Homogénéiser par agitation, éliminer par filtration les impuretés visibles (en présence d'eau, utiliser un papier hydrophile).
   Les produits semi-liquides ou solides seront préalablement chauffés à une température légèrement supérieure à leur point de fusion en évitant toute surchauffe.
   6.2 :
   Préparation du gel de silice (4.8).
   Mettre le gel de silice du commerce dans une capsule de porcelaine, sécher à 160 °C dans l'étuve (5.14) pendant quatre heures minimum et laisser refroidir à température ambiante dans un dessiccateur.
   Ajuster le gel de silice à une teneur en eau de 5 p. 100 (m/m) :
 peser 152 grammes de gel de silice séché et 8 grammes d'eau dans un ballon de 500 ml (5.3). Fermer le ballon et agiter une heure à l'aide d'un agitateur mécanique approprié (5.17).
   6.3 :
   Préparation de la colonne.
   Remplir la colonne avec environ 30 ml du solvant d'élution (4.6). A l'aide de l'agitateur (5.6) introduire un tampon de coton hydrophile (4.11) à la partie inférieure de la colonne et chasser l'air en pressant le coton.
   Dans un bécher (5.2) préparer une pâte avec 25 grammes de gel de silice (4.8) et environ 80 ml de solvant (4.6) et transférer cette pâte dans la colonne à l'aide d'un entonnoir. Afin d'assurer un transfert total du gel de silice dans la colonne, rincer avec le solvant d'élution. Ouvrir le robinet et soutirer le solvant d'élution dans un second bécher (5.2) jusqu'à ce que le niveau du solvant soit à 10 cm au-dessus du gel de silice. Taper légèrement sur la colonne pour niveler le gel de silice.
   Ajouter environ 4 grammes de sable marin (4.10) à l'aide d'un entonnoir. Soutirer le solvant d'élution surnageant au-dessus de la couche de sable. Ne pas réutiliser le solvant ainsi soutiré.
   6.4 :
   Chromatographie sur colonne.
   Peser dans une fiole jaugée (5.7), à 0,001 gramme près 2,5 + 0,1 gramme de l'échantillon préparé selon 6.1.
   Dissoudre dans environ 20 ml du solvant (4.6) en chauffant légèrement, laisser refroidir à température ambiante et porter au trait de jauge avec le solvant d'élution (4.6). Introduire à l'aide d'une pipette jaugée (5.8) 20 ml de cette solution dans la colonne préparée selon 6.3. Eviter de perturber la surface. Sécher deux ballons de 250 ml (5.1) dans l'étuve (5.13) à une température de 103 + 2 °C. Laisser refroidir à la température ambiante et peser exactement à 0,001 gramme près. Placer l'un de ces ballons sous la colonne. Ouvrir le robinet et laisser s'écouler le liquide dans le ballon jusqu'à ce que le niveau affleure la couche de sable. Eluer les composés non polaires par 150 ml du solvant d'élution (4.6) introduits dans le réservoir (5.5). Ajuster le débit afin que 150 ml traversent la colonne en 60-70 minutes. En fin d'élution, rincer l'extrémité inférieure de la colonne à l'aide du solvant d'élution et recueillir le solvant de rinçage dans le ballon.
   Si la vérification de la qualité de la séparation est effectuée, éluer les composés polaires retenus sur la colonne dans un second ballon sec de 250 ml (5.1) à l'aide de 150 ml d'oxyde diéthylique (4.4) dans les conditions décrites ci-dessus.
   Rejeter le gel de silice.
   Utiliser l'évaporateur rotatif (5.16) pour chasser sous-vide le solvant à une température n'excédant pas 60 °C.
   Introduire de l'azote (4.12) dans l'appareillage, peu avant la fin de l'opération. Peser.

   7.1 :
   Mode de calcul et formule.
   La teneur en composés polaires en pour cent (m/m) est donnée par la formule :
   (m - m 1)/m x 100
   où
   m 1
   est la masse, en gramme, de la fraction non polaire ;
   m
   est la masse, en gramme, de l'échantillon contenu dans 20 ml de la solution déposée sur la colonne.

   Préparer des solutions des fractions polaires et non polaires à 10 p. 100 dans le chloroforme (4.3) et à l'aide d'une pipette capillaire (5.9) déposer 2 ml de chaque solution sur une plaque (5.10).
   Garnir la cuve de développement (5.11) avec du papier filtre afin de favoriser la saturation, mettre la plaque dans la cuve de développement et procéder au développement avec le solvant (4.7). Normalement, après trente-cinq minutes, le front du solvant atteint une hauteur d'environ 17 cm. Enlever la plaque et laisser le solvant s'évaporer. Pulvériser la solution d'acide phosphomolybdique (4.9) sur la plaque. Après évaporation de l'éthanol, chauffer la plaque à 125 - 130 °C dans l'étuve (5.14).
   La figure ci-dessous donne un exemple de séparation chromatographique obtenue après fractionnement d'une huile de friture.
   Exemple de séparation chromatographique obtenue après fractionnement :
   (figure non reproduite, voir au Journal officiel).
   Référence bibliographique : Méthode U.I.C.P.A. (Union internationale de chimie pure et appliquée), n° 2, 507.