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Reacción de Barberio.—El 8 de abril de 1905 el Dr. Barberio (1) presentó una comunicación á la Real Academia de Ciencias físicas y matemáticas de Nápoles, en la que describe una nueva prueba microquímica para caracterizar el esperma, que considera sensible, segura y particular. La reacción ha sido después estudiada por Modica, Cevidalli y De Dominicis; nuestros reconocimientos, muy numerosos, nos permiten hacer una valuación de dicha prueba y llevar alguna contribución sobre las aplicaciones prácticas que pueda permitir.

Tratando Barberio una gota de esperma fresco, después de pocos minutos de eyaculado, ó de esperma putrefacto, ó de una infusión de mancha de esperma antigua, obtuvo unos microcristales amarillos, fuertemente refringentes y muy característicos. He aquí la técnica propuesta por el autor: se lleva una gota de esperma ó de infusión de mancha sobre un porta-objetos y se agrega una pequeña cantidad de solución acuosa saturada de ácido pírico, cantidad que no deberá sobrepasar la mitad del volumen del líquido que se ha de examinar. Después de pocos segundos el líquido se enturbia por la formación de un precipitado, el cual, limitado en un principio al punto de contacto de los dos líquidos, poco á poco, al mezclarse éstos, se difunde por toda la gota, que adquiere color amarillo y aspecto turbio. Después de pocos minutos (dos á cinco) la reacción puede considerarse como terminada; se aplica el cubre-objetos y pasa á la observación microscópica.

Si el líquido está muy diluido, la precipitación cristalina es más lenta; lo mismo sucede si se agrega ácido pírico en exceso ó en solución diluida: la reacción es menos neta y el precipitado adquiere una forma preponderantemente granulosa, perdiendo en parte ó totalmente su valor demostrativo. Nosotros tampoco hemos obtenido buenos resultados empleando esperma concentrado; las cristalizaciones más espléndidas se obtienen con una dilución media, que se llega á conocer muy bien después de haber hecho varios preparados. Barberio aconseja, en los primeros ensayos, comenzar con una cantidad mínima de ácido pírico, por ejemplo, la que puede ser transportada con un asa de hilo de platino, y después, á los pocos minutos, agregar, si es necesario, otra pequeña cantidad para obtener un enturbiamiento difuso y sensible.

(1) M. Barberio: Nuova reazione microchemica dello sperma e sua applicazione nelle ricerche medico-legali. Rend. della R. Accademia delle Scienze Fisiche e Matematiche di Napoli, fasc. 4.º, abril, 1905.
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Según resulta de nuestros reconocimientos, un tratamiento previo de las manchas con cloroformo favorece notablemente la reacción de Barberio: la cristalización es más copiosa y los cristales de mayor tamaño.

Cevidalli (1) ha modificado el reactivo de Barberio empleando una solución glicerico-alcohólica, que obtiene disolviendo al calor en la glicerina tanto ácido picrilo hasta que con el enfriamiento no se separe ningún cristal, y después agregando todo el alcohol absoluto necesario para redissolver el libre exceso de ácido. Esta solución glicerico-alcohólica, escribe Cevidalli, presenta las siguientes ventajas, que nosotros hemos podido también apreciar: 1.ª Evita y mantiene entre límites reducidos la formación de cristales de ácido pírico, los cuales, especialmente empleando éste en solución alcohólica, se producen á veces tan rápida y copiosamente que perturban la observación. 2.ª Permite, sin otras maniobras, una prolongada conservación de los preparados, mientras para obtener este intento con las soluciones acuosas ó alcohólicas es necesario hacer uso de preparados en gota pendiente, ó bien dejarlos desecar para montarlos después en bálsamo, previo un rápido lavado en agua. 3.ª Resalta eficazmente el campo microscópico.

Las soluciones picrogomas presentan las mismas ventajas: nos han dado resultados muy satisfactorios con esperma fresco y putrefacto. Cevidalli, con el reactivo de Barberio y su modificación, ha encontrado constante la reacción en el esperma de 10 individuos y en manchas espermáticas datantes de tres años y medio.

Barberio recomienda también el empleo de soluciones alcohólicas de ácido pírico, especialmente cuando se opera con esperma líquido putrefacto; se debe tratar con el reactivo una cantidad mínima de esperma (el volumen de una cabeza de alfiler), para que al mezclarse las dos gotitas no haya dispersión excesiva y consecutiva y rápida evaporación de la mezcla hidro-alcohólica. Con las soluciones alcohólicas nos parece que el precipitado es menos copioso; además, el ácido pírico cristaliza muy fácilmente, lo cual se puede evitar con la mezcla glicerico-alcohólica de Cevidalli ó con nuestras soluciones picrogomas. Por otra parte, la prueba microquímica de Barberio resiste fuertemente á la putrefacción, como luego tendremos ocasión de apreciar.

(1) Attilio Cevidalli: Ueber eine neue mikrochemische Reaktion des Sperma. Viertel jahrsschrift für gerichtl. Med. u. öffentl. Sanitätswesen, 8.ª serie, vol. xxxi, fasc. 1.º.
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La observación microscópica requiere aumentos de 400 á 600 diámetros. Los cristales son menudos, tres ó cuatro veces más largos que anchos, amarillos, fuertemente refringentes, aislados ó agrupados los unos en cruz, otros en estrella. Son sutilísimos y se pre-

Fig. 2.a.—Cristales de Barberio: Ocular 3 y objetivo 6. Koristka.—Microfotografía del Dr. Cevidalli.

Fig. 3.a.—Cristales de Barberio: Ocular 4 y objetivo \( \frac{1}{15} \). Koristka.—Microfotografía del Dr. Cevidalli.

sentan como agujas de contorno rómbico, frecuentemente atravesadas longitudinalmente por una línea refringente; algunos semejan dos conos pegados por las bases. Hemos observado también
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agujas octaedrinas y cristales alargados en forma de bastoncitos, con los cabos redondeados (fig. 3.a., de Cevidallii). «Los ángulos ob-

Fig. 4.a.— Cristales de Barberio: Arriba y á la derecha hemos dibujado algunas formas cristalinas en los primeros estadios de desarrollo.

tusos están casi siempre truncados y redondeados, y en los individuos menos perfectos también los ángulos agudos han sufrido la

Fig. 5.a.— Manera característica de agruparse los cristales de Barberio; preparación hecha en un pequeño tubo de ensayo.

misma suerte. En este último caso el cristal presenta el aspecto de un corpúsculo ovoidal, más ó menos alargado, que en los casos ex-
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REVISTA DE MEDICINA Y CIRUGÍA PRÁCTICAS

LA IDENTIFICACIÓN DEL ESPERMA

MEDIOS PROPUESTOS HASTA EL DÍA Y UNA NUEVA, RÁPIDA Y SEGURA PRUEBA MICROQUÍMICA
(Trabajo del Laboratorio de Medicina legal de la Facultad de Valladolid)

POR ANTONIO LECHA-MARZO
Interno de dicha Facultad.

(Continuación).

Demostración de las manchas espermáticas por inclusión en goma de las zonas manchadas. Procedimiento de Perrando.—El Dr. G. G. Perrando, profesor de Medicina legal en la Universidad de Catania y benemérito en la ciencia por sus estudios sobre la identificación del esperma, ideó recientemente en 1905 (1) una técnica especial para la preparación de los espermatozoides, que después ha desarrollado genialmente en dos segundas Memorias (2).

Varias son las causas que originan resultados negativos en el examen de manchas espermáticas. El deshilachado y el raspado separan multitud de cabezas de las porciones caudales. La maceración, especialmente si se trata de manchas, es á veces insuficiente para el aislamiento de muchos espermatozoides que permanecen íntimamente adheridos á las fibras del tejido. Las maniobras de preparación, la adición de medios de disgregación, sustitución de líquidos (deshidratación, aclaramiento) y montaje, hacen perder

(1) G. G. Perrando: Di una speciale tecnica per la ricerca dei nemaspermi nelle macchie. Rassegna Internazionale della Medicina Moderna, año IV, número 5, 1905.
(2) G. G. Perrando: Eine neue Methode des Spermanachweises aus Flecken. Aertlichen Sachverständigen-Zeitung, 1905, núm. 22.—Idem: Dimostrazione delle macchie spermatiche per inclusione in gomma delle zone macchiate. Messina, Tip. del Progreso, 1906.

Año XXXI.—Tomo LXXIV.—Núm. 937.—21 Febrero, 1907.
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Resultado negativo.—Si una vez puestos en práctica los principales procedimientos indicados no conseguimos encontrar el elemento esencial del esperma, ¿estamos autorizados á negarlo? No; los zoospermios, aunque resisten bien la acción del tiempo (hasta dieciocho años, Orfila, Roussin), en ocasiones sufren alteraciones importantes que les hacen irreconocibles; otros agentes pueden llegar al mismo resultado. El profesor Strassmann (de Berlin) (1), fundándose en sus experiencias, practicadas para responder á una cuestión que le fué propuesta, afirma que en una camisa sumergida en lejía de jabón las manchas de esperma no son demostrables.

Ya Gibbes en 1880 (2), al demostrar que la composición química de la cabeza difiere de la de las otras partes del espermatozoide, indicó que los álcalis no ejercen ninguna influencia sobre éstas (excepto sobre la membrana de envoltura); pero actúan sobre la cabeza.

Según Bayard (1839) el alcohol concentrado, las soluciones concentradas de potasa, de sosa y de amoníaco destruirían los filamentos espermáticos. La sosa y la potasa al 20 por 100 y el amoniaco al 10 por 100 los aislan, pero no los atacan.

Las experiencias de Filomusi-Guelfi (publicadas en la Gazzeta Medica de Pavia, año I, núm. 3) son muy diferentes de los resultados obtenidos por Bayard. A Filomusi, que nunca consultaremos bastante siempre que se trate de la preparación de zoospermios de manchas desecadas, es á quien debemos una exacta valuación de la influencia de ciertos tratamientos químicos como causa de resultados negativos en los reconocimientos médico-legales de manchas. Procuraremos resumir, todo lo más brevemente posible, dichos estudios:

De los varios agentes químicos experimentados, el ácido nítrico es el único que ejerce una acción destructiva rápida sobre los espermatozoídes; el ácido sulfúrico los destruye (esperma seco) en un tiempo más largo, á los siete días. Difícilmente estos ácidos pueden ejercer su influencia destructiva sobre los zoospermios en las manchas, pues antes de todo las hacen desaparecer, las borran por completo y el tejido aparece más ó menos alterado según el tiempo de sumersión.

En el ácido hidroclórico los zoopermos se alteran muy lentamente; á los dos meses el examen del líquido no es aún completamente

(1) Strassmann-Carrara: L. c., pág. 141.
(2) Heneage Gibbes: The structure of the spermatozoon. Quart. journ. of micr. sc., Boston med. and surg. journ., 8 marzo 1880.
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negativo. Del mismo modo obran las soluciones concentradas de sosa y potasa; tanto éstas como aquél pueden determinar resultados negativos disolviendo las manchas.

En el amoníaco y en el ácido acético, aun después de dos meses, se encuentran numerosos espermatozoides bien conservados; pueden determinar también resultados negativos por disolución de las manchas. El álcali volátil posee en máximo grado la propiedad de aislar los zoospermos del esperma seco. En el ácido acético la propiedad aisladora es intermedia entre el amoníaco y el ácido hidroclórico por un lado y el alcohol, el ácido fénico y sublimado por otro, que no la poseen.

El alcohol puro, las soluciones de sublimado (1 por 1,000) y el ácido fénico (5 por 100) no los disgregan, y al menos durante diez días no los destruyen; por consiguiente, inmersiones de las manchas durante veinticuatro horas en alcohol puro ó en soluciones de ácido fénico ó de bichloruro de mercurio no las alteran, ni impiden el aislamiento de los zoospermos con un tratamiento adecuado consecutivo.

En general, entre las sustancias estudiadas no se ha encontrado ninguna que, respetando las manchas, destruyan solamente los zoospermos; todas ellas, respeten ó no las manchas, al menos por una acción de veinticuatro horas, no impiden la separación de los filamentos espermáticos por un tratamiento adecuado consecutivo, y por lo tanto influencias químicas exclusivas sobre los zoospermos con persistencia de las manchas son poco verosímiles como causa de resultados negativos (Filomusi).

Hemos citado que Orfila y Roussin habían observado zoospermos después de dieciocho años de antigüedad: el primero en esperma desecado en lámina de vidrio; el segundo en esperma conservado en un pequeño tubo. Mantegazza (1) ha conseguido conservarlos bastante bien durante quince años en ácido acético. Pero la persistencia en las manchas es algo menor. Casper y Devergie los han encontrado después de un año. Ritter, después de cuatro, Bayard á los seis, y nosotros los hemos revelado también en manchas de esta antigüedad, colorándolas con el violeta de genciana ó con las soluciones píricas acidificadas (líquidos de Kleinenberg y de Mayer). Como hace notar oportunamente Filomusi-Guelfi, los zoospermos son destruidos en tiempo relativamente breve en ciertas circunstancias, por ejemplo, cuando hay gran desarrollo de moho.

(1) Mantegazza: Igiene dell'amor. Milán, 1881, pág. 43.
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Otra de las causas que pueden obrar alterando ó destruyendo los filamentos espermáticos es la fricación. Roussin recomendó que las manchas recogidas de la ropa del imputado, de la víctima ó de otra parte, sean empaquetadas entre dos cartones y transmitidas así á los peritos. Después Longuet, Vibert y otros autores han recomendado á éstos la mayor delicadeza posible durante los reconocimientos, pues los zoopermos, cuando están desecados, son muy frágiles. Filomusi-Guelfi ha demostrado que con la fricación, en una mancha rica en zoospermos, no es muy fácil la destrucción de todos ellos, hasta el punto que los reconocimientos resulten negativos; pero si la mancha es pobre en dichos elementos, considera posible, con una fricación prolongada, su fragmentación. Si la mancha conserva la consistencia almidonada, la fricación no ha sido muy prolongada y por consiguiente no impide el examen de los zoopermos, en caso de que existan; la falta de almidonamiento no excluye la existencia de espermatozoides.

La Audiencia de París, conocedora de los estudios de Roussin, dirigió el 2 de julio de 1864 á los comisarios de policía una circular (1) en la que se les ruega el empaquetamiento de las manchas entre dos cartones, para evitar las alteraciones que sin esta precaución pudieran experimentar. En general, se siguen las prescripciones de dicha circular, pero frecuentemente, dice Vibert (l. c., pág. 609), reemplazan las hojas de cartón con otras de papel, cuya eficacia es completamente ilusoria. Esta queja, formulada por Vibert, dice Luis Comenge, no puede aplicarse á nuestro país, en donde la diligencia y el esmero en las remisiones casi son desconocidas en los Tribuna-

(1) «Sucede con frecuencia que los exámenes periciales ordenados por asuntos de violación ó atentados contra el pudor no pueden realizarse con toda utilidad en lienzos ó vestidos por la alteración ó desaparición completa de las manchas espermáticas, sanguinolentas ó de otra clase que existían en las ropas y mencionadas en las diligencias sumariales. La desaparición de dichas manchas fué consecuencia evidente de rozamientos de las telas mancilladas al tiempo de recoger las prendas y de transportarlas; interesa, por tanto, no descuidar precaución alguna para preservar los tejidos manchados de todo contacto que pueda alterarlos.

»A este objeto, y según consejo de peritos muy competentes, recomendamos en semejante circunstancia colocar entre dos pedazos de cartón y bien sujetas todas las porciones de vestidos, elegidos, sobre las que se encuentren las manchas principales de naturaleza sospechosa, y os rogamos que vigiléis al tiempo de disponer los paquetes contenedores de las piezas de convicción, á fin de que se guarden cuantas precauciones sean indispensables, en beneficio de la información, para la conservación de elementos de prueba, siempre útiles y á menudo decisivos en asuntos de esta índole».
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les; excepcionalmente ó por maravilla, continúa el ilustre director de Higiene urbana de Barcelona, disponen los análisis químicos y micrográficos que puedan interesar con los abusos contra la honestidad.

El calor puede originar también resultados negativos. Orfila (1), con el objeto de hacer visibles pequeñas manchas espermáticas en tejidos del mismo color, propuso un medio sencillísimo, consistente en aproximar al fuego el tejido hasta que la mancha adquiera un color amarillo leonado; dicho autor cree que en este experimento el esperma no prueba más que un alto grado de desecación, pues sumergiendo la mancha en agua destilada, pierde su color y el líquido adquiere las propiedades de las soluciones de esperma.

«Los demás humores no presentan aquel carácter, pero es necesario calentarlos poco tiempo y á poco calor, porque todas las manchas de humores se obscurecen calentándolas, tomando también ese color amarillo leonado á gran calor y estando algún tiempo» (Mata) (2). De Crecchio (3) recomienda abandonar este procedimiento, que puede hacer difíciles y aun imposibles los ulteriores reconocimientos. Y como el calentamiento podría ser adoptado por algunos peritos que se inspirasen en los consejos de Orfila y empleado maliciosamente por personas interesadas para neutralizar la demostración médico-legal, Filomusi-Guelfi (4) ha creído importante hacer una exacta valuación de la influencia del calor en las manchas.

Calentando una mancha de esperma adquiere el color amarillo leonado indicado por Orfila á los 130° y se hace aún más evidente á los 140°; desaparece después de una maceración de veinticuatro horas en agua, y en ésta el examen microscópico demuestra la persistencia de los espermatozoides. Si la mancha se calienta hasta 150°, la decoloración después de la maceración es solamente parcial y los resultados microscópicos todavía afirmativos. Calentando las manchas hasta 160 y 165°, conservan después de la maceración la coloración y el reconocimiento de los zoospermios es negativo. Sin embargo, los zoospermios contenidos entre dos cristales resisten temperaturas más altas de 165° (hasta 222°); se explicarían los resultados negativos que se obtienen con manchas calentadas á 165°

(1) Orfila : L. c., pág. 144.
(2) P. Mata : L. c., t. I, pág. 469.
(3) De Crecchio : L. c., pág. 255.
(4) Filomusi-Guelfi : L. c., pág. 18.
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por lo extremadamente frágiles que se vuelven los espermatozoides por la desecación.

Por otra parte, el esperma eyaculado no contiene siempre espermatozoides: sobreviene la azoospermia por enfermedades, en las edades avanzadas, y en ocasiones sin causas demostrables (Casper, Hubrich, Dieu, Liman y Schlemmer), aun en hombres robustos y de buena salud aparente.

Según Liman, la azoospermia temporal sobreviene frecuentemente á consecuencia de coitos repetidos (18 casos); sin embargo, Fürbringer (1) la considera rarísima, pues en su larga práctica no la ha encontrado más que una vez á consecuencia de excesos venéreos extraordinarios.

Lo que sí es muy frecuente, después de coitos repetidos (Schlemmer) (2), es encontrar modificaciones en los elementos del esperma, dependientes de un desarrollo incompleto: los espermatozoides son más cortos que de ordinario (con una longitud media de 44 á 47 \( \mu \)); en vez de las células granulosas dotadas de varios núcleos, se observan células privadas de núcleo ó con uno solo y muy pocas granulaciones. En un caso de espermatorrea, descrito y dibujado por Hermann Eichhorst (3), estaban incompletamente desarrollados la mayor parte de los espermatozoarios y la cabeza envuelta en una especie de cubierta, que en algunos estaba hendida y caída á los lados de la cabeza. Otros autores han indicado la notable fragilidad y escasa movilidad de los espermatozoides. Análogas anomalías ha encontrado también Schlemmer después de marchas fatigosas y á consecuencia de graves enfermedades y envenenamientos. Mantegazza ha comprobado la falta de espermatozoides en individuos de veinte años, cuya pubertad estaba retrasada por causa de malas condiciones higiénicas, fiebres palúdicas, etc.

La detención de los testículos en el conducto inguinal ó por encima (Haelts, Goubeaux, Follin, Godard, Ledentu, Kocher, Cornil, Marchand y Morax, Variot, Bezançon, Launnois, Félicet y Branca), la obliteración de los conductos deferentes á consecuencia de una epididimitis doble, la destrucción del parénquima testicular por tu-

(1) Fürbringer : De la spermatorrhée et de la prostatorrhée. En 8.º Leipzig, 1882.
(2) Schlemmer : Vierteljahrsschrift für gerichtl. Medizin, nueva serie, vol. 27, páginas 454-456.—Idem : Contributo all'istologia dello sperma umano. Rivista sperimentale di Freniatria e Medicina legale, año III, pág. 722, 1877.
(3) Hermann Eichhorst : L. c., t. II, pág. 748.
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berculosis (1), por carcinoma, etc., privan al esperma eyaculado de espermatozoides (2).

Dieu (3), antiguo médico del Hospital de los Inválidos de París, refiere que en condiciones normales el 32 por 100 de los sexagenarios, el 41 por 100 de los septuagenarios y el 52 por 100 de los octogenarios, no tienen ya espermatozoides; no los encontró tampoco en cuatro nonagenarios ni desde los ochenta y seis años en adelante. Estas cifras, término medio de un gran número de observaciones, no se ven libres de excepciones. Schlemmer ha hallado zoospermos vivos en individuos de setenta á noventa años; Casper (4) los ha encontrado en un hombre de noventa y seis años; Curling (5) en el jugo testicular de un hombre de más de setenta años y otra vez en un individuo de ochenta y siete; Rayer (6) los ha comprobado en viejos de ochenta y dos años; Debron (7) refiere casos análogos. Según Duplay (8), el líquido seminal de los viejos contiene espermatozoarios hasta cuando han pasado ya de la edad en que pueden fecundar.

Por término medio, los espermatozoides comienzan á desarrollarse y á aparecer en el esperma hacia la edad de los catorce años y medio, teniendo esta cifra numerosas excepciones, pues como todos sabemos, influye notablemente en la aparición de dicha secreción el clima, los medios de vida, la constitución, el ambiente social que rodea al individuo, etc. (9). Se citan casos, muy excepcionales, de

(1) G. G. Perrando: Sulla capacita generativa nella tuberculosi del testicolo. Giorn. di med. leg., año XI, núm. 1, pág. 1, 1905.
(2) En los casos de azoospermia es importante el examen microscópico del esperma, pero habrá que tener mucha prudencia, pues el paciente para obtener un certificado de aptitud para la procreación (para verificar un casamiento, por ejemplo), puede dar á reconocer esperma de otra persona. (Fürbringer: Impotenz und Stirilität. Eulenberg's Real Encyclopädie, 2.ª edición, y Specielle Pathologie und Therapie, vol. XIII, fasc. 8.º Viena, 1895).
Creemos que el mejor medio para el reconocimiento de la azoospermia, no habiendo observado previamente los espermatozoides, es la reacción de Barberio.
(3) Dieu: Med. Chir. Rev., junio de 1831.—Journ. d'anat. et de physiol., 1864, pág. 449.
(4) Cit. por Sappey. Traité d'anatomie descriptive, 1879, pág. 646.
(5) Curling: Diseases of the testis. Londres, 1857.
(6) Rayer: Gazette Médicale, 2 de junio de 1849.
(7) Debron: Gazette Hébdomadaire, 4 de enero de 1861, pág. 6.
(8) Duplay: Arch. gén. de méd., diciembre de 1852; Medical Times and Gazette, 4 de junio de 1853, pág. 481.
(9) Véase Leprince. Début de la spermatogenèse dans l'espèce humaine. Applications médico-légales. Thèse de Paris, núm. 512