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«Dejarla en reposo hasta que la disolución sea completa, agregando una gota de formol, ó bien un granito de alcanfor, después de decantar». (Perrando).

Perrando, en su última Memoria (1), agrega que una fórmula fija y definitiva no puede proponerse para todos los casos, debiendo adaptarse la composición á las varias circunstancias del ambiente, y especialmente según la naturaleza de la tela que debe ser seccionada. En todo caso se deberá preparar una solución densísima de goma pura, por ejemplo, al 30-40 por 100, en la cual se disolverá el azúcar de caña en las proporciones variables entre 10 al 20 por 100. Cuando esta masa es abandonada á la desecación espontánea (veinticuatro á cuarenta y ocho horas), deberá adquirir una consistencia idónea para la ejecución de cortes en la tela incluida; las mayores ó menores durezas dependen de la mayor ó menor cantidad de azúcar que se emplee. La albúmina no es indispensable, pero tampoco perturba; como también se puede admitir la alcalinización de la masa, puesto que el amoniaco favorece la penetración por el aumento de fluidez; sin embargo, puede originar leves enturbiamientos.

He aquí la manera de proceder directamente á la inclusión en el porta-objetos de las listas teñidas en masa:

Se desatan los paquetes, y con unas tijeras pequeñas se procede á la separación de las listas, que, como sabemos, se corresponden por las superficies manchadas; se trasladan, convenientemente recortadas, á porta-objetos, donde previamente hemos colocado una gota de la masa gomosa. Se procura que la superficie manchada esté en íntimo contacto con la lámina de vidrio y que la materia de inclusión cubra por completo á la pieza. Si se quiere, pueden incluirse en un mismo porta-objetos varios preparados.

La desecación completa tiene lugar ordinariamente á las veinticuatro horas; los pequeños cuadraditos manchados se han adherido fuertemente á la superficie del vidrio, y han adquirido tal consistencia, casi leñosa, que se prestan á ser seccionados con un bisturí plano afilado ó con una navaja de afeitar ordinaria, como las que se emplean para dar cortes á mano.

¿No podría abreviarse la duración de la desecación sustituyendo el agua amoniacal al 3 por 100 por algún otro disolvente de la goma que se evaporara más rápidamente?

(1) Perrando: L. c., pág. 7.
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4.º Separación, mediante secciones planas, de los estratos inútiles de la tela, excepto del más profundo, sobre el cual se encuentran los elementos morfológicos de la mancha. En efecto, agrupados con fibras y nudos de este estrato, se hallan los espermatozoídes y demás elementos, todos los cuales no han sufrido ni la más mínima alteración.

A nuestro entender, la obtención de buenos preparados estriba en muchas ocasiones en la especial consistencia de la materia de inclusión y en la costumbre en practicar las secciones.

5.º Se redissuelve con una gota de agua amoniacal (3 por 100) el residuo de la inclusión: al cabo de dos horas la disolución es completa, y se ven las fibrillas residuales del tejido disgregarse espontáneamente; en ocasiones es preciso favorecer ó acelerar la disociación, con mucho cuidado, con la punta de las agujas. Se aplica el cubre-objetos y procede á la observación del preparado conservado en la materia que nos sirvió de inclusión. Durante la desecación, para que no queden burbujas de aire, se agregan gotas de goma á medida que el preparado se deseca. Los preparados así obtenidos se conservan largo tiempo, y pueden ser presentados al magistrado como piezas de convicción.

Ha evitado con este método el profesor Perrando el inconveniente de la fragmentación de los elementos, los cuales, por no sufrir cambio alguno, aparecen en algunos preparados muy condensados; los zoospermos se muestran acabalgados unos sobre otros, adheridos á las fibrillas del tejido, formando racimos, etc., lo cual, como se comprende, constituye un inconveniente, fácil de evitar con el uso del agua amoniacal y agujas finísimas, con las cuales no efectuaremos una verdadera maniobra dislacerativa.

El menstro en que se observan los elementos es, por sus condiciones químicas y ópticas, inmejorable; con los líquidos picronítrico y picrosulfúrico hemos conseguido poner en relieve, muy intensamente, gran número de espermatozoídes.

Con la sucesiva separación de los estratos inútiles se pueden examinar grandes extensiones de zonas manchadas; ya después de la coloración y los lavados se distinguen á simple vista los puntos que contienen los elementos morfológicos; es sabido que una mancha espermática, aunque presente toda ella consistencia almidonada, no contiene en todos los puntos espermatozoídes. Colorando con el carmín amoniacal (Petel y Labiche), ó con la eosina en solución alcoholica (Legrand du Saulle), ó amoniacal (Perrando), se diferen-
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cian bastante bien estas zonas ricas en material, que utilizaremos de preferencia á las otras. Ya dijimos en otra ocasión que Petel y Labiche creían erróneamente que sólo las manchas espermáticas tardaban en decolorarse más de doce horas con el lavado en agua alcalinizada con carbonato de sosa; pero si esta prueba no tiene un valor decisivo, lo tiene por lo menos indicario, y puede ser utilizado como criterio directivo en el método de Perrando.

En efecto, según resulta de los estudios de este autor, los preparados coloreados con eosina amoniacal, después de los lavados en agua alcalinizada, se decoloran casi completamente, excepto en los puntos manchados, donde se encuentran elementos espermáticos insistentemente y vivamente coloreados en rosa. En estas condiciones podemos recortar los pedazos donde se encuentran estos puntos y manchitas intensamente coloreadas y servirnos de ellas preferentemente en la ulterior preparación en el porta-objetos. Una vez incluidos dichos cuadraditos, si lo fueron por la superficie manchada, se ven claramente por la cara opuesta del porta-objetos los puntos y manchitas rosadas.

Si alguna vez tenemos dudas acerca de la superficie que contiene los elementos, la tinción con la eosina amoniacal ó otros colorantes apropiados, nos marcará en seguida la superficie manchada, que debe corresponder al cristal, y que hay que respetar en las secciones planas.

Resultado afirmativo.—En los preparados obtenidos con manchas podemos encontrar los espermatozoides en tres estados distintos: espermatozoides enteros, con cabeza y pedazos de cola, y cabezas y colas separadas, enteras ó rotas.

En el primer caso, cuando se observan zoospermos integros, se ha resuelto la cuestión del modo más completo.

El hallazgo de cabezas en relación con las colas más ó menos mutiladas tiene, para Briand y Chaudé, Renaut y Filomusi-Guelfi, un valor positivo; sin embargo, Legrand du Saulle opina que el examen de elementos en estas condiciones, no basta para afirmar el origen espermático de una mancha. ¿Qué caracteres faltan en las cabezas con tractos de cola que posean los zoospermos integros? Tan sólo uno, y es la longitud, carácter, por otra parte, de escasa importancia. En una cabeza relacionada con un tracto de cola, observamos la forma piriforme, la diversa transparencia de las dos mitades, la articulación de los segmentos cefálico y caudal, el desdoblamiento del filamento axil. Además, si el tracto de cola es bas-
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tante largo, podemos también conocer la longitud. Por consiguiente, el reconocimiento de las cabezas con apéndices tres ó cuatro veces más largos que éstas, tiene valor positivo. La unión ó adherencia accidental se pone fácilmente en evidencia, cambiando el enfoque ó golpeando muy suavemente la laminilla (Vibert).

Renaut y Filomusi-Guelfi han insistido justamente en recomendar que sea considerado como negativo el reconocimiento de cabezas y colas separadas. Sin embargo, Ungar, refiriéndose á sus dobles coloraciones, dice que por la diversa transparencia de las dos mitades (que ponemos nosotros de manifiesto empleando únicamente el violeta de genciana), se puede afirmar, aunque se encuentren aisladas, con aproximada seguridad, lo cual sería muy discutible. En la práctica forense se debe procurar llegar á más de una aproximada seguridad; y además en la mayoría de los casos se encuentran al lado de cabezas y colas separadas formas más completas, en las cuales puede basarse el diagnóstico.

La presencia de colas aisladas no tiene, en absoluto, valor alguno; los principiantes suelen tomar por colas de zoospermios hebras del tejido deshilachado.

¿Qué causas obran sobre los zoospermios produciendo tales alteraciones? Unas dependen de la preparación (raspado, deshilachado, etcétera); otras de la desecación, antigüedad, rozamientos, temperaturas elevadas, agentes químicos, etc., y serán estudiadas en seguida. Además, como ha demostrado Massazza, la separación de las cabezas y colas no sólo tiene lugar después que el esperma ha sido eyaculado, sino también cuando ha permanecido algún tiempo dentro de los genitales (1). Nosotros hemos reconocido (agosto, 1906) el contenido vesicular de varios individuos á las veinticuatro horas después de muertos, y hemos hallado gran número de cabezas y colas aisladas; pero probablemente intervendría en este aislamiento, principalmente, la putrefacción.

En algunos casos, cuando hemos conseguido observar en una mancha los espermatozoides, no debemos dar por terminadas nuestras investigaciones, especialmente si es posible determinar la naturaleza de otros elementos que pueden ir asociados á las manchas espermáticas. La determinación de manchas de distinta naturaleza ha tenido en la instrucción de algunas causas criminales grandísima importancia.

(1) G. Massazza: Sulla questione relativa alla potentia generandi dei castrati. Riforma Medica, 29-30-31. Junio, 1891.
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Una joven acusó á un individuo, de oficio barbero, de haberla atropellado; según ella, después de cometido el atropello le había limpiado las partes genitales con un paño, en el que había espuma de jabón; y en efecto, Bayard examinó dicho paño y encontró manchas de esperma mezcladas con manchas de sangre, manchas de secreción vaginal, manchas de jabón y restos de barba de varios individuos.

Roussin (l. c.), requerido para examinar las manchas espermáticas de los vestidos de un hombre acusado de violación y que negaba en absoluto su crimen, notó que dichas manchas estaban mezcladas con gran cantidad de gránulos de almidón, unos procedentes de trigo y otros de patata. Comunicó esta particularidad al juez de instrucción, quien abrió nueva información, consiguiendo descubrir cerca del lecho, en la alcoba donde se había cometido la violación, un saco abierto con harina de trigo y de patata. La investigación microscópica había demostrado, con verosimilitud muy próxima á la certidumbre, el lugar donde se había verificado la eyaculación. Hay que tener presente que en muchos preparados se encuentran granos de almidón, especialmente si se trata de ropa blanca; en el caso descrito por Roussin no podía admitirse este origen por su excesiva cantidad.

El egregio profesor Brouardel (en Commentaires de la traduction francaise du Traité de Méd. lég. d’Hoffmann) examinó las manchas contenidas en una servilleta, propiedad de una mujer asesinada algunos días antes. Contenían espermatozoides, células de epitelium cilindricocónico, provistas de pestañas vibrátiles (procedentes de la mucosa de las vías aéreas), y moléculas de rapé. El examen microscópico demostró, por lo tanto, los hábitos de la víctima, es decir, que el esperma no había sido depositado directamente en la servilleta, sino lanzado desde la boca. Otros casos de índole parecida podríamos citar y que se encuentran en la mayoría de los Tratados de Medicina legal y particularmente en el informe oficial ruso Anleitung-zur Untersuchungen Verdöchliger Flecke für Erste und Jünten (San Petersburgo, 1871). Sin embargo, casi todos los autores recomiendan, y con razón, no hacer afirmaciones con demasiada seguridad; las manchas de distinta naturaleza, en vez de estar mezcladas, pueden estar únicamente sobreuestas. Solamente con reconocimientos muy detenidos y costumbre en realizarlos, se consigue en ocasiones la resolución de estos problemas, que no son tan fáciles como doctrinalmente se admite.
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REVISTA
DE
MEDICINA Y CIRUGÍA PRÁCTICAS

LA IDENTIFICACIÓN DEL ESPERMA

MEDIOS PROPUESTOS HASTA EL DÍA Y UNA NUEVA,
RÁPIDA Y SEGURA PRUEBA MICROQUÍMICA
(Trabajo del Laboratorio de Medicina legal de la Facultad de Valladolid)

POR
ANTONIO LECHA-MARZO
Interno de dicha Facultad.

(Génesis de la reacción.—Hemos llegado á la parte más importante de nuestro estudio. Ya se ha podido observar, por lo escrito anteriormente, que la reacción de Barberio es mucho más específica que la de Florence; tenemos en aquélla muchas esperanzas, y casi nos atrevemos á augurarla un brillante porvenir en la ciencia.

Los cristales de Barberio, ¿son la combinación de un principio orgánico particular del esperma con el ácido pírico? ¿Se trata simplemente de la combinación de una base inorgánica ó de un producto de descomposición del esperma con dicho ácido? Finalmente, ¿cuál es entre los órganos genitales el que produce la materia capaz de suministrar los cristales?

Empecemos por la hipótesis más sencilla, que los cristales de Barberio sean simples cristales de ácido pírico. Hace observar muy justamente el Dr. Barberio que la formación de cristales de ácido pírico, nada más mezclar una solución de este ácido con un líquido acuoso y rico de bases con las cuales pueda entrar fácilmente en combinación, no es un hecho conciliable con las leyes de la química. Por otra parte, aun suponiendo que se agregue ácido en exceso, como éste permanece en solución no precipita; la reacción es
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tado cristalino, para dar lugar á un precipitado formado por gránulos que parecen oleosos y no poseen la menor birrefringencia. Recordaremos también que Modica, con manchas de líquido prostático sometidas durante dos horas á una temperatura de 130° á 140°, ha obtenido, en vez de los cristales, pequeños acúmulos de gránulos del aspecto de gotitas oleosas, de color marrón, de varias dimensiones y agrupadas en número variable en los campos microscópicos. De Dominicis, repitiendo con la mejor técnica el experimento indicado por Barberio y nosotros, no hemos podido observar el mismo hecho, por lo cual no puede ser invocado para excluir que la reacción sea debida á la espermina, en favor de cuya admisión está la semejanza morfológica.

De Dominicis ha obtenido un precipitado algo parecido á la reacción del ácido pírico con el extracto de carne Liebig y con la orina normal después de haberla concentrado con el calor y reducido casi á sequedad. En estos casos la reacción tiene lugar sólo en parte y con conservación del tipo específico, que si no es siempre muy evidente, se puede sin embargo encontrar con pacientes y minuciosas observaciones. Concentrando la orina por el calor y sometiéndola á la acción del ácido pírico, hemos obtenido también cristales algo parecidos á los que suministra el esperma; son más pequeños, se forman principalmente cuando se desea la mezcla y aparecen con la forma de corpúsculos ovoidales y de pequeñas agujas agrupadas en estrellas.

No hemos observado ciertas agrupaciones fasciculares que antes habíamos obtenido con la orina sin concentrar y con esperma putrefacto y empleando el reactivo de Barberio sometido previamente á una mezcla frigorífica.

Como se ve, estos hechos no restan gran valor á la reacción propuesta por Barberio. Además, necesita todavía esta cuestión nuevas investigaciones. Cevidalli, Modica y aun el mismo De Dominicis, están conformes en conceder á la reacción de Barberio mayor valor para el reconocimiento del esperma que á la de Florence. Además, y esto es importantísimo, la reacción de Barberio, por los reconocimientos practicados hasta el día, parece ser específica del esperma humano. Barberio ha obtenido reacción negativa con el jugo testicular, líquido prostático y de las vesículas seminales del cavia, conejo, perro, gato, etc.; De Dominicis y nosotros, con los testículos, epidídimo y próstata de perro. Cevidalli ha obtenido resultados negativos con el esperma completo (eyaculado) de algunos animales
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domésticos (perro, caballo, cerdo), lo cual estaría en relación, según De Dominicis, con cantidades diversas de espermina.

Resulta, pues, de los importantes reconocimientos de Cevidalli, que con la prueba de Barberio se puede diferenciar el esperma humano del esperma de perro: toda mancha espermática que presente espermatozoides, pero que agregando ácido pírico da reacción negativa, tiene probablemente un origen animalesco. Recordaremos á este propósito que la unión bestial del hombre ó de la mujer (pasivos) por la vía del ano ó de la vagina, tiene lugar en la mayoría de los casos con el perro (casuística de Tardieu, Paff, Schauens- tei, Wald, Maschka, Richter, Yañez, Brouardel y Montalti). El diagnóstico diferencial del esperma humano y del esperma de animales, que hasta hace poco parecía insoluble, puede hacerse, por consiguiente, mediante la prueba microquímica de Barberio. Por falta de material no hemos podido confirmar las experiencias de Cevidalli. Creemos superfluo insistir más sobre su importancia.

Por otra parte, si se confirma que el origen de la reacción está en la espermina, la prueba tendrá también interés fuera del campo médico-legal, puesto que respecta á una sustancia cuyo sensible reconocimiento puede ser de gran utilidad en algunas cuestiones de índole fisiológica todavía poco conocidas (De Dominicis).

CONCLUSIONES

1.a En la identificación del esperma no debe utilizarse siempre un mismo procedimiento. Circunstancias y condiciones imprevistas pueden aconsejar procedimientos distintos y aun modificaciones y adaptamientos particulares. Valga un ejemplo: cuando el material espermático se encuentra en plaquitas sobre una tela impermeable, basta únicamente levantarlas con un escalpelo y macerarlas en el porta-objetos con agua destilada, favoreciendo ó acelerando el desleimiento con las agujas; en este caso no tiene, por consiguiente, aplicación alguna el método de Perrando, que tan buenos resultados proporciona si los elementos morfológicos están íntimamente aplicados á uno de los estratos de la tela.

2.a El procedimiento de Filomusi-Guelfi es la combinación del procedimiento de Bayard y del de Robin, y suministra mejores resultados que el primero por la cantidad de espermatozoides, y mejores que el segundo por la integridad de los mismos; se facilita la separación y abrevia la duración de la maceración con el uso del agua amoniacal.
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3.a El procedimiento de Dominicis para la preparación rápida de los zoospermos puede ser utilizado como un ensayo general, del mismo modo que la reacción de Florence; pero con la diferencia de que si se obtienen con aquél resultados positivos, se ha hecho el diagnóstico del modo más rápido y sencillo. Además, se emplean cantidades pequeñísimas de tejido, reservando la porción restante de la mancha por si es preciso, en caso negativo, acudir á otros métodos.

4.a Si alguna sustancia debe recomendarse para la coloración de los espermatozoides de las manchas desecadas, el verde de metilo y el violeta de genciana merecen la preferencia.

5.a Con el método de Perrando, de inclusión en goma de las zonas manchadas, se evita la dehiscencia de las cabezas, y permite el rápido aislamiento de la superficie de la tela sobre la cual se encuentra extendido el esperma bajo la forma de mancha. La materia de inclusión es un menstruo que química y ópticamente resulta favorable á la observación de los apéndices caudales, permitiendo preparados estables sin necesidad de ulteriores manipulaciones.

6.a Los pedacitos de manchas que se utilicen para el método de Perrando, deben ser sometidos en una capsulita, por muy poco tiempo, á la acción del agua destilada que extrae el principio determinante de la reacción de Florence. De esta manera el mismo material sirve para dos procedimientos.

7.a La reacción de Florence no sirve para caracterizar el esperma humano; no es exclusiva tampoco del esperma, ni de los órganos que lo constituyen.

8.a La nueva prueba propuesta por Barberio tiene para el diagnóstico del esperma mayor valor que la reacción de Florence. Toda mancha espermática que presente espermatozoides, pero que agregando ácido pícrico suministre reacción negativa, tiene probablemente un origen animalesco.

9.a Según resulta de nuestros reconocimientos, un tratamiento previo de las manchas con cloroformo favorece notablemente la reacción de Barberio: la cristalización es más copiosa y los cristales de mayor tamaño.

10. La espermina sería la materia capaz de dar los cristales. Se encontraría principalmente en las granulaciones prostáticas de Robin y disuelta en el líquido prostático.
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REVISTA DE DERMATOLOGÍA Y SIFILIOGRAFÍA

POR EL DOCTOR
D. SIXTO MARTÍN Y MIGUEL
Jefe de las consultas de Dermatología y enfermedades venéreas del Instituto Rubio
y de la Policlinica del Refugio.

SUMARIO: I. Lupus eritematoso de la cara, curado unilateralmente por una erisipela unilateral.—II. Sobre un caso de leucoderma sífilítico.—III. De la lencoplasia bucal y sus relaciones con la sífilis.—IV. Diagnóstico de la tiña tonsurante á la simple vista.—V. Tratamiento del epiteloma cutáneo.

I. Los Dres. Hallopeau y Boudet publican en el último número del Boletín de la Sociedad francesa de Dermatología y Sifiliografía, la siguiente interesante historia clínica:
M. R., de veintitrés años, enfermera, entró en el hospital el 3 de diciembre de 1906. Esta enferma tenía un lupus eritematoso desde hacía tres años, que ocupaba en noviembre las dos mejillas, el mentón y las alas de la nariz. En esta época fué atacada por una erisipela circunscrita en el lado derecho de la cara. Consecutivamente ha ido desapareciendo el lupus de este lado y en la actualidad la mejilla derecha no presenta más que una pigmentación algo oscura con aspecto cicatricial.
Esta curación unilateral da á la fisonomía de esta joven un aspecto extraño é inolvidable; nos muestra con toda claridad que la inflamación provocada por las toxinas estreptocócicas destruyen la virulencia del agente generador del lupus eritematoso, de la misma manera que lo hace con la del lupus tuberculoso.

II. El leucoderma es, como sabemos, uno de los síntomas que con frecuencia se presentan en la sífilis y que sirve en muchas ocasiones para ayudarnos á confirmar el diagnóstico de dicha enfermedad.
Durante mi permanencia en los hospitales de Austria y Alemania he tenido ocasión de observar que se le da en aquellos puntos una importancia mayor á este síntoma que aquí; tal vez sea esto debido á que se presenta con mayor frecuencia ó por lo menos es más fácilmente apreciable debido al predominio del color rubio en aquella raza.
Siendo este síntoma, como he dicho anteriormente, un medio