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mente el v. Pirquet en nuestra Policlínica, y podemos atestiguar que á esa edad ya, si el Pirquet es negativo, y nosotros habíamos diagnosticado tbc, es que nos hemos equivocado, y por cierto, que disponemos de una extensa experiencia en el particular.

La punción exploradora nos trae á luz un pus muy espeso, uniforme y coloideo —no sé cómo se puede dar una idea por escrito de la substancia coloidea, es pegajosa de clara de huevo.— No cabe duda que en el pus había substancia coloidea como veremos por el examen practicado luego. Para más grande seguridad, el pus es tratado por el método de la Antiformin-Ligroina y luego de centrifugado, le sometemos á la coloración de carbol-fucsina y azul de metilo ácido, y no nos es posible demostrar en él la presencia de bacilos tuberculosos, lo cual nos afirma una vez más en el resultado negativo del Pirquet.

Una coloración usual de azul metileno bórico nos demuestra la presencia de estafilococos.

Con todos los anteriores datos acabo de excluir la posibilidad de una tiroiditis, ó mejor dicho, de un quiste tiroides que hubiese sido infectado últimamente por el estafilococo, pues aquí se presenta una nueva diferenciación diagnóstica de gran importancia. En el quiste coloideo infectado hay siempre una reacción peri-quística con infiltración que le hace inmóvil, si es que antes era deslizable por debajo de los tegumentos, y este dato falta; además, aquí falta una reacción febril alta y no existe rubefacción ni dolor alguno en la actualidad; el dolor se presenta en forma de alguna que otra punzada, que no dura más allá de unos minutos al mover la cabeza y eso no todos los días.

Antes de incindir el absceso, ya expresé á mis ayudantes la opinión de que nos hallábamos en presencia de un absceso no vulgar y que nos daría alguna sorpresa. Sólo me restaba pensar en un quiste hidatídico!

Practiqué una incisión baja, de un centímetro, por fuera del externo-cleido. El pus se evacuó con fuerza, y á medio vaciar asomó la característica membrana hidatídica que podemos sacar entera y que nos da la clave de este difícil diagnóstico. Lavamos la cavidad con cloruro de zinc al 5 por 100 y aplicamos un vendaje compresivo. Al día siguiente se hallaba cicatrizada la incisión, y ocho días luego de la intervención, no ha ocurrido la menor novedad.

La membrana es claramente hidatídica. Presenta al microscopio la estriación característica de su capa parenquimatosa. En el pus no hallamos escólices; hallamos algún que otro gancho y no hallamos restos de otras hidátides hijas. Se trata, pues, de un quiste hidatídico monolobular, ó acéfaloquiste monolobular; una de las dos variedades conocidas hasta ahora del equinococo
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Artículos originales

MÉTODOS BIOLÓGICOS
PARA EL
DIAGNÓSTICO RETROSPECTIVO DE LA SÍFILIS
POR EL DR. UMBERT (1)
Miembro correspondiente de la Sociedad Francesa de Dermatología y Sifilografía

MÉTODOS BIOLÓGICOS.—REACCIÓN DE WASSERMANN

Por interesante que sea historiar la serie de hechos biológicos sucesivamente conocidos que debían concluir con Bordet y Geugou en el descubrimiento del método general de diagnóstico conocido con el nombre de fijación del complemento, no nos detendremos en ellos más que lo estrictamente preciso para que sean comprendidos los fenómenos que ocurren en la reacción de Wassermann. En cambio, la técnica de este método con todos sus detalles, causas de error y medio de evitarlas, así como su valor intrínseco, han de ser extensamente expuestos.

La sangre de todo animal contiene una parte que se solidifica fuera de los vasos, y otra, que permanece líquida, aunque llevando muchas sustancias en disolución. La primera, que forma el coágulo, no nos interesa, al revés de la segunda, cuyas propiedades cambian según sea el estado de salud ó enfermedad del animal y según hayan entrado en el organismo sustancias extrañas á la composición normal de los elementos de la sangre.

Así, si un agente microbiano penetra en la sangre de un animal, provoca por medio de sus toxinas la formación de otras sustancias que se llaman antitoxinas. Igualmente, si penetran en la sangre sustancias orgánicas disueltas procedentes de otro animal de especie distinta, provoca la formación de otras sustancias que son producto de reacción.

(1) Este trabajo es uno de los capítulos de un volumen que próximamente se publicará, y que trata del diagnóstico retrospectivo de la sífilis adquirida.
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Glóbulos de carnero: — Se obtienen de la sangre desfibrinada y han de ser repetidamente lavados y centrifugados con el objeto de que no lleven la menor cantidad de suero, y, por consiguiente, de complemento. Se usan mezclados al agua salada en proporción de 5 por 100.

Todos estos elementos dispuestos, se colocan en una gradilla 11 tubos de ensayo de iguales proporciones, y bien lavados con agua salada, depositándose en cada uno de ellos las sustancias en el orden y proporciones indicados en el cuadro 4.º

CUADRO 4.º
Reacción de Wassermann — Técnica clásica

    Núm. de los tubos
    Na Cl S p.º/º
    Antígeno
    Suero X
    Complemento
    Ambo-ceptor
    Glóbulos rojos
    Resultado

    positivo
    negativo

    1
    1'5
    0'1
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    No hemolis
    Si

    2
    1'4
    0'2
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    No
    Si

    3
    1'3
    0'3
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    No
    Si

    4
    1'6
    —
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

    5
    1'7
    0'1
    —
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

    6
    1'6
    0'2
    —
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

    7
    1'5
    0'3
    —
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

    8
    1'8
    —
    —
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

    9
    1'9
    —
    —
    —
    0'1
    1
    No
    No

    10

    0'2
    Suero +
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    No
    No

    11

    0'2
    Suero —
    0'2
    0'1
    0'1
    1
    Si
    Si

Procúrese que la pipeta que sirve para el antígeno, lo mismo que la que se usa para el complemento y suero hemolítico no sirvan para otra cosa.

Bien agitados los tubos, de modo que las sustancias contenidas en cada uno de ellos formen una mezcla bien homogénea, se entra en la estufa regulada á 37º centígrados, donde permanece entre dos y tres horas, durante las cuales se agitan los tubos varias veces, y transcurrido este tiempo se echa en cada tubo la cantidad de glóbulos rojos de cordero lavados y la hemolisina. A la media hora, siguiendo nuestros cuadros con exactitud, se leen
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los resultados. Algunos dan, sin embargo, la reacción por terminada cuando los tubos testigos 4.º, 5.º, 6.º, 7.º y 8.º han hemolizado completamente.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Si la operación ha sido bien conducida y las sustancias todas han actuado normalmente, sucederá que en los tres tubos primeros no habrá hemolisis y si en los restantes, menos el último en que no la habrá, en cuyo caso, el resultado es francamente positivo ó todos los tubos estarán hemolizados menos el último, y entonces la reacción es francamente negativa.

Cuando los resultados aparecen en la forma que acabamos de suponer, no hay duda ninguna y la interpretación y el dictamen es concluyente. Pero no sucede siempre así por dos causas generales sobre las que vamos á insistir.

Suele que de los tres tubos primeros, hemoliza completamente el primero un poco, menos el segundo y nada el tercero, y entonces se puede dudar sobre la significación del resultado.

Algunos dicen que estos resultados han de darse como dudosos, con lo cual declaran que el Wassermann no ha aclarado el problema clínico; pero nosotros pensamos y damos los dictámenes en el sentido que vamos á fundamentar.

Si se está seguro de que no ha habido error en la técnica, de que están bien medidas las sustancias y cada tubo contiene todo lo que debe contener, se verá, que si bien los tres tubos primeros no han funcionado en común, siendo los resultados aparentemente contradictorios, el primero es el en que hay hemolisis, en el segundo la hay un poco solamente, y en el tercero no la hay. Así sucede siempre normalmente, y si alguna vez sucede cosa distinta, por ejemplo, que hemolice más el 3.º que el 1.º, no hay que dar dictamen, sino emprender la titulación del antígeno y recomenzar la operación con todo cuidado, no olvidando de poner en cada tubo lo que debe haber y en la cantidad justa. Procediendo así, el resultado será uno de los tres resultados normales, que como hemos indicado, son negativo y positivo claros, ó hemolisis en el primero, y falta de ella en el tercero, quedando el segundo intermedio. En nuestros registros abreviamos estos resultados poniendo al lado del nombre del enfermo la inicial H., que significa hemosis, seguida del número 0, del número 1 ó del 2, y leemos en el primer caso que no hay hemolisis, en el segundo que la hay en el tubo primero completa, escasa en el segundo y nula en el tercero, y cuando hay en el número 2 leemos hemolisis completa, y, por consiguiente, reacción negativa.

Observando los casos y examinando los registros, hemos visto
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que \( H_1 \) correspondía siempre á viejos sifílicos ó á individuos cuya sífilis databa ya de algunos años y había sido tratada defectuosamente, ó á sífilis secundarias intensamente tratadas. Así cuando lo obtenemos, decimos positiva débil.

CAUSAS DE ERROR DE ORDEN TÉCNICO

La minuciosidad exigida por la preparación conveniente de las cinco sustancias que entran en la reacción, el cuidado para conservarlas y la delicadeza y extremada atención que necesita la medición de la actividad del antígeno, complemento y amboceptor, constituyen otras tantas dificultades, de las que se originan frecuentes causas de error. Por esto será difícil que jamás llegue el método de Wassermann á ser utilizado por todos los médicos, y de ahí la convicción de que sólo merecen ser tenidos en cuenta los dictámenes de los laboratorios instalados al efecto.

Un ligero descuido en la cantidad de cualquiera de las sustancias que entran en la reacción, la alteración de una de ellas, un descuido en la graduación de la temperatura del baño maría al inactivar, ó una permanencia superior del suero en el baño, y una multitud de detalles respecto al cuidado en agitar los tubos para que las mezclas sean homogéneas, en bien lavar los glóbulos de carnero, etc., son otras tantas causas de error, contra las que es de absoluta necesidad estar prevenido.

Estos errores se evitan seguramente cuando se ha adquirido una gran práctica del método, cuando se verifican exámenes con frecuencia, y mejor, cuando la persona encargada de ellos adquiera una experiencia suficiente para permitirle orientarse al primer golpe de vista hacia la verdadera causa de error. Todos los conocimientos teóricos no bastan á suplir este sentido que podemos llamar de orientación, que no basta por sí solo ni justifica que se prescinda de las comprobaciones científicas, pero que tampoco es posible excluir, y es por sí solo una garantía. Esto es decir que por experimentado que sea un hombre de laboratorio, sus dictámenes no merecen confianza si no ha adquirido práctica en el método de Wassermann.

Lo mismo el antígeno que el amboceptor, y hasta pudiéramos añadir el complemento, deben ser mesurados con frecuencia, y cuando se empieza á trabajar con un antígeno ó amboceptor nuevo, entonces es preciso repetir el ensayo varias veces y á varios días de intervalo antes de poder confiar en ellos. En muchos casos se verá que el título á que debe usarse es distinto del que lleva la etiqueta del frasco. En nuestro laboratorio nos preparamos el antígeno con hígado de feto sifílico; pero no nos preparamos el amboceptor, que recibimos directamente. El primero no
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se nos ha alterado nunca, dando siempre el mismo resultado en todos los ensayos, quizás porque está guardado constantemente en el mismo armario y conserva la misma temperatura, pero el segundo nos da tan frecuente ocasión de ensayar su fuerza hemolítica, que, en conclusión, pensamos que la etiqueta que llevan los frascos no es para nosotros más que una indicación para simplificar los ensayos.

A veces se ve hemolizar los glóbulos de un tubo testigo que se sabe es positivo por haberlo comprobado antes. Si la causa no es la solución salina, cosa que se habrá visto al lavar los glóbulos rojos, podrá ser una alteración del suero conservado, como lo demostrará el perfecto funcionamiento de los demás tubos testigos. Si uno de los tubos testigos, que no es ni el del suero conocido por positivo ni el negativo, no hemoliza haciéndolo los otros, es seguro que en el acto de poner el complemento se olvidó este tubo. Si varios ó todos los testigos hemolizan mal la reacción, debe volverse á empezar, porque se ha cometido algún error grave, ya sea usando un suero de cobayo sin complemento, ya un antígeno excesivamente activo.

Como resumen diremos que la hemólisis de los tubos testigos 4.º, 5.º, 6.º, 7.º y 8.º debe ser perfecta, para tener la seguridad de no haber cometido error técnico, y es probable que la reacción puede darse por concluida cuando estos tubos han hemolizado completamente. Nuestra experiencia, con efecto, nos permite decir que jamás hemos visto hemolizar los tres primeros tubos completamente cuando permanecían sin hemolizar en el momento que ya lo habían hecho los tubos testigos.

Los resultados normales se obtienen si la técnica es buena; pero como ocurre que la técnica no es así y el principiante podría encontrarse con dudas, no comprendiendo por qué no obtiene resultados claros, analicemos el contenido de cada tubo y el resultado á que teórica y normalmente se ha de llegar en cada uno de ellos, para deducir, de la mutua comparación de los resultados, el error que ha debido cometerse.

Examinando el cuadro 4.º se notará que los tres primeros tubos contienen respectivamente 1, 2 y 3 décimas de c. c. de antígeno. Si la reacción es negativa, hemolizarán los tres al mismo tiempo que los tubos testigos 5.º, 6.º y 7.º Si es positiva débil hemolizará un poco el primer tubo; menos, el segundo, y nada, ó casi nada, el tercero, mientras el 5.º, 6.º, 7.º y 8.º hemolizarán completamente; y si es positiva fuerte no hemolizará ninguno de los tres primeros y si el 4.º, 5.º, 6.º, 7.º y 8.º Cuando el tercer tubo hemoliza más que el 1.º y 2.º, es que el antígeno es defectuoso por contener sustancias hemolíticas, que se comprobarán poniendo en un tubo solos el antígeno y glóbulos rojos de carnero.
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El tubo 1.º debe compararse con el 5.º, que contiene igual cantidad de antígeno, y si en éste la hemolisis no es completa, no hay que confiar en el resultado obtenido en el 1.º. El 2.º debe compararse con el 6.º y razonar del mismo modo, y lo mismo decimos del 3.º comparado con el 7.º Estos tubos 1.º y 5.º, 2.º y 6.º y 3.º y 7.º tienen la misma cantidad de antígeno; pero el 5.º, 6.º y 7.º no contienen suero X, es decir, no tienen la posibilidad de contener amboceptores, y como los seis tienen complemento que ha de quedar siempre libre y á disposición del segundo sistema, si antes no es fijado, la hemolisis debe verificarse infaliblemente en los 5.º, 6.º y 7.º Si no lo hacen, es que el antígeno es excesivamente activo, y el valor del resultado obtenido, nulo.

El tubo 4.º no contiene antígeno; por consiguiente, la combinación antígeno-amboceptor-complemento no puede hacerse, y el complemento queda libre, á disposición del segundo sistema, que hemolizará siempre. Si no lo hace, es que el suero que se examina contiene sustancias que impiden la hemolisis, y el resultado en los tubos 1.º, 2.º y 3.º, que será positivo, no tiene ningún valor.

El 8.º no contiene ni antígeno ni suero del enfermo y sí sólo complemento que, quedando libre, ha de unirse al segundo sistema, y la hemolisis debe hacerse antes que en los otros testigos. Si no sucede así, es que el complemento no existe en el suero de cobayo.

El 9.º no puede hemolizar porque en él se encuentra sólo el segundo sistema incompleto. Si hemolizara, es que el suero hemolítico no ha sido inactivado ó que el suero es hiper ó hipotónico, causa de error esta última que ha debido preaverse al lavar los glóbulos rojos de carnero.

Puede suceder que no hemolice ninguno de los tubos testigos, desde el 4.º al 8.º inclusive, en cuyo caso tampoco habrán hemolizado los tres primeros. Entonces es que el suero hemolítico no tiene actividad ninguna.

Los tubos 10 y 11 contienen respectivamente un suero de enfermo conocido de antemano como sano y sifilítico, y sirven de comprobación á la totalidad de las sustancias y de las operaciones técnicas.

MÉTODOS DE SIMPLIFICACIÓN

La técnica clásica de la reacción de Wassermann exige por lo menos cinco horas de atención. Además, las sustancias que entran en ella son algunas de difícil preparación, por lo cual se han hecho múltiples y laudables esfuerzos para simplificar la técnica y poner tan útil medio diagnóstico al alcance de todos los clíni-
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cos. Vamos á pasar en revista los más importantes, advirtiendo que prescindiremos de ciertos detalles técnicos suficientemente expuestos en el capítulo anterior.

Los métodos de simplificación se pueden dividir en tres grupos, de los cuales el primero comprende aquellos en que únicamente se abrevian las operaciones de la técnica clásica; en el segundo, aquellos que substituyen algunas de las sustancias naturales por otras químicas, y en el tercero, el método de Weil, que utiliza un suero espontáneamente hemolítico para los glóbulos rojos de carnero.

PRIMER GRUPO. — Consisten estos métodos en la supresión de una de las sustancias que contiene la reacción por la técnica clásica. Así Bauer suprime el complemento de cobayo, basándose en que el suero humano que se examina ya lo contiene, y además suprime la hemolosina, porque el suero humano es, aunque en poca cantidad, espontáneamente hemolítico para los glóbulos de carnero. La reacción se simplifica, pues, extraordinariamente, bastando tres ó cuatro tubos, de los cuales los dos ó tres primeros tienen progresivas cantidades de antígeno, y el último no lo contiene.

El antígeno ha de combinarse con el complemento y los amboceptores contenidos en el mismo suero que se examina, en los casos positivos, y en los negativos, no verificándose la combinación, queda el complemento libre, y los amboceptores espontáneos lo aprovechan para hemolizar los glóbulos de carnero. En el tubo testigo no hay antígeno, pero sí complemento y amboceptor, por lo cual han de hemolizar los glóbulos rojos de carnero.

El método de Hecht es casi idéntico.

Método de Foix: Utiliza el suero que se examina, inactivado, como sensibilizatriz para el primero y para el segundo sistema, apoyado, como Bauer, en que el suero humano es espontáneamente hemolítico para los glóbulos de carnero. Cuenta por gotas, y el complemento es el complemento de cobayo. La simplificación consiste, pues, en la supresión del suero hemolítico de conejo.

Método de Tschernogubow: Utiliza como complemento el del mismo suero que se examina, con lo cual evita el trabajo de inactivarlo. Además, para evitar la causa de error procedente de la virtud espontáneamente hemolítica del suero humano para los glóbulos de carnero, usa el suero de conejo antihumano, y, por consiguiente, glóbulos rojos humanos.

Método de Nogouchi: Usa también un suero hemolítico antihumano en lugar del anticarnero. Además, basado en que emplea pequeñas dosis de suero del enfermo, desprecia la pequeñaísima cantidad de complemento que contiene y prescinde de inactivarlo.
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La verdadera particularidad de este método consiste en que el autor embebe un papel-filtro Schleide ó Schull n.º 597 de ambosceptor y otros de antígeno, de tal manera, que un c. cuadrado contiene cantidades exactas de las respectivas sustancias. El complemento se alteraría si se le preparase en esta forma, y es preciso usarlo fresco de cobayo.

MÉTODOS QUÍMICOS

Reacción de Schurmann: Suponiendo este autor que la reacción de Wassermann se producía á causa del ácido láctico contenido en el suero, propuso el siguiente método que designa con el nombre de reacción de los colores:

A 3 ó 4 c. c. de solución fisiológica se añade 1 c. c. de suero. Se añade una gota de perhidrol, se agita y se añade 0'50 gr. del reactivo siguiente:

Ácido fénico... ... ... ... ... ... 0'50 gr.
Cloruro de hierro al 5 p. % ... ... 0'62 »
Agua destilada ... ... ... ... ... 34'5 »

Los sueros normales permanecen claros, y los sifilíticos adquieren un color oscuro.

Método de Porges: Se mezclan 2 décimas de c. c. de suero con una emulsión de lecitina al 1 por 100 en suero fisiológico. Dejada la mezcla cinco horas en la estufa, se forma un precipitado en la superficie.

MÉTODO DE VEIL

El autor, fundado en que el veneno de cobra es espontáneamente hemolítico para los glóbulos rojos humanos, tuvo la idea de ensayar si el fenómeno se producía en iguales condiciones en los glóbulos procedentes de individuos sifilíticos. Empezó por observar que la dosis de 1 por 10,000 diluía los glóbulos, lo mismo sifilíticos que sanos, y que estos últimos seguían diluyéndose aún á dosis de 1 por 20,000 y 1 por 30,000, mientras que los sifilíticos permanecían intactos.

Así, las reacciones fuertemente positivas son aquellas que resisten á 1 por 20,000, y positivas débiles las que sólo resisten á 1 por 30,000.

Para obtener la sangre del enfermo se sirve de una jeringa en la que previamente ha entrado 2 c. c. de solución de citrato de soda al 2 por 100, y absorbe en ella 2 c. c. de sangre, que inmediatamente es centrifugada y lavados los glóbulos.

No nos hemos detenido con las minuciosidades técnicas de estos métodos, porque aunque teóricamente irreprochables, prác-