TITLE: External Quality Control for inter-Batch comparison 
AUTHORS: Ricardo M. Borges

[DESCRIPTION]
Controle de Qualidade Externo (QCExt): A amostra contendo a cepa código CCMR0280 cultivada em paralelo a todos os lotes servirá como referência para estudos comparativos estudo de comparação entre as cepas do CCMR (Culture Collection of Microorganisms at the Federal University of Rio de Janeiro). Após secagem da biomassa, a nova amostra da cepa código CCMR0280 obtida no cultivo corrente será combinada com o estoque de CCMR0280-CQExt para distribuição equitativa de Controle de Qualidade inter-lote.

Este documento se baseia no artigo: Long-Term Metabolomics Reference Material. G.J. Gouveia, A.O. Shaver, B.M. Garcia, A.M. Morse, E.C. Andersen, A.S. Edison*, and L.M. McIntyre*. Analytical Chemistry. 2021, 93, 26, 9193–9199. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.1c01294

[STEPS]
SECTION: Material
1. microtubos de 2 mL com tampa de rosca
tudo de centrifugação de 50 mL tipo Falcon
Balança analítica (AUW220 , Shimadzu)
SECTION: Material em Estoque
2. Inicialmente, um lote inicial composto por 25 réplicas do cultivo da cepa código CCMR0280
foi (i) cultivado, (ii) coletado e combinado, (iii) submetido a liofilização e (iv) posteriormente triturado em pó
SECTION: Material em Estoque
3. Esta amostra triturada está meticulosamente separada em 50, se possível, alíquotas de 50 mg em microtubos de 2 mL com tampa de rosca

SECTION: Para cada lote a ser produzido
4. Em cada lote de cianobactérias cultivado para o estudo de comparação entre as cepas do CCMR, o cultivo da cepa código CCMR0280 será adicionado, mantendo o mesmo número de réplicas do estudo.

Esta amostra será utilizada para controle de qualidade intra-lote e também fará parte da composição da amostra CCMR0280-CQExt que, por sua vez, será utilizada para controle de qualidade inter-lotes.
SECTION: Para cada lote a ser produzido
5. A cada lote de cepas a serem cultivadas, após a conclusão da etapa de coleta e liofilização da biomassa, uma amostra de CCMR0280-CQExt será adicionada como amostra de controle de qualidade

O objetivo é minimizar a variância entre as amostras em todas as etapas de análises dos lotes, facilitando o processo de correção entre diferentes lotes.

SECTION: Para cada lote a ser produzido
6. Das amostras da cepa código CCMR0280 cultivadas a cada lote, após coleta da biomassa e liofilização, será retirada uma alíquota e combinada em um tudo de centrifugação de 50 mL tipo Falcon para a quantidade equivalente a pelo menos 100 mg
SECTION: Para cada lote a ser produzido
7. Essa amostra combinada será triturada e homogeneizada
SECTION: Para cada lote a ser produzido
8. Uma alíquota de 50 mg desta amostra (da cepa código CCMR0280 cultivadas em cada lote) será adicionada à sequência de amostras CCMR0280-CQExt
 
As amostras CCMR0280-CQExt serão armazenadas em freezer a -20oC em uma caixa devidamente identificada. Cada nova amostra deverá ser etiquetada com o número de lote e data de produção.

Neste momento, teremos uma série de alíquotas de 50 mg de amostras CCMR0280-CQExt, incluindo aquelas que serão produzidas a cada novo lote de cultivo
SECTION: Para cada lote a ser produzido
9. Quando chegar o momento de realizar a etapa de extração e preparo das amostras de cada lote, as 10 primeiras amostras CCMR0280-CQExt da série serão (i) reunidas, (ii) homogeneizadas e (iii) 5 alíquotas representativas de 50 mg serão adicionadas a sequência de extração

Para o primeiro lote, as amostras de 1-10 serão utilizadas
Para o segundo lote, as amostras de 2-11 serão utilizadas
Para o terceiro lote, as amostras de 3-12 serão utilizadas
Para o quarto lote, as amostras de 4-13 serão utilizadas, e assim por diante

 
SECTION: Para cada lote a ser produzido
10. O protocolo de extração das biomassas deverá ser seguido rigorosamente com todas as amostras de cada lote, incluindo essas 5 amostras CCMR0280-CQExt
SECTION: Para cada lote a ser produzido
11. Todas os dados analíticos adquiridos a partir das amostras CCMR0280-CQExt serão avaliadas quanto a sua homogeneidade

10 das alíquotas produzidas inicialmente (step 3) serão separadas e submetidas a etapa de extração e preparo das amostras para aquisição dos dados analíticos

Estes dados analíticos serão utilizados para comprovação de homogeneidade