TITLE: Gewebesammlung Frischgewebe Prostatektomie
AUTHORS: Annika Fendler, Bettina Ergün

[DESCRIPTION]
Dieses Protokoll beschreibt die Schritte für die Sammlung von Frischgewebe, Gefriergewebe (Fresh-frozen), und Blut von Patienten mit Prostatakarzinom bei Prostatektomie. 

Verwandte Dokumente: 
Protokoll zur Blutaufarbeitung 

[BEFORE_START]
Vor der OP: 
Patienten werden von Michela de Martino im Rahmen der Biobank Planung identifiziert und gegebenenfalls gemeinsam besprochen. 
Prostatagewebe wird direkt im OP gesammelt und muss daher nicht auf der Schnellschnittliste vermerkt werden. 
Die Patientenliste mit Datum der vorstationären Aufnahme wird jeweils am Donnerstag an das Patientenmanagement geschickt. 
Wenn ein Patient die EVEs unterschrieben hat und Blut abgenommen wurde, wird in SAP im Bemerkungsfeld für das OP-Personal vermerkt, dass sie uns 20 min vor Entnahme der Prostata anrufen sollen. 
Änderungen im OP-Plan sollten im besten Fall täglich überprüft und mit dem Team abgesprochen werden. 
 
Am Tag der OP: 
Vorbereitung: 
Flüssiger Stickstoff, sowie die Box mit Stanzen, Skalpellen, Pinzetten, Kryoröhrchen, Labels und den Gewebescheinen bereit haben 
In der Gewebeliste die letzte Gewebenummer identifizieren und nächste fortlaufende Nummer verwenden (vorgelabelte Röhrchen vorhanden) 
Nach Anruf des OP-Teams sollten im besten Fall 2 Personen in den OP gehen.  
15 ml Falcon mit Transportmedium aus dem Kühlschrank im OP-Trackt (Raum 14; 4. Ebene) holen. 
Röhrchen mit Formalin aus dem Regal vor Saal 5 entnehmen. 

[GUIDELINES]
 Beschreibung der biologischen Proben:
Probentyp Kurzbeschreibung Prozess Zweck Bemerkung 2 x EDTA NA Aufarbeitung und Lagerung von Vollblut und Plasma Findet im Rahmen der Biobank Sammlung statt. Zuständig: Michela de Martino 1 x koaguliertes Blut in CAT tubes NA Aufarbeitung und Lagerung von Serum Findet im Rahmen der Biobank Sammlung statt. Zuständig: Michela de Martino Frischgewebe Sammlung in Transportmedium in 15 ml Falcon.  Aufarbeitung zu Tumorfragmenten und/oder Einzelzellen Zuständig: Annika Fendler, Bettina Ergün Gefriergewebe (Fresh-frozen) Sammlung in 2 ml Kryoröhrchen, schockfrosten in LN, Lagerung bei -80°C Lagerung für verschiedene Anwendungen Findet im Rahmen der Biobank Sammlung statt. Zuständig: Michela de Martino 

Einschlusskriterien für Patienten: 

Auf Grund des Fokus unserer Projekte auf fortgeschrittene Karzinome, sowie der Problematiken bei der Gewebesammlung bei kleinen Tumoren, fokussieren wir momentan auf Patienten, die mind. ein intermediäres Risiko haben. Die Kriterien sind in Tabelle 2 zusammengefasst. Zudem sollte vermerkt werden, wie viele Biopsien analysiert wurden und in welchem Bereich der Prostata.  
Weiterhin sollte der PIRAD score, sowie die Ausdehnung und Position des Tumors aus dem MRT vermerkt werden (falls vorhanden).  
  
Risikogruppe Kriterien Intermediate-risk PSA 10-20 ng/ml OR ISUP 2-3 (= Gleason 3+4 or 4+3) OR cT2b (Befall von mehr als 50 % eines Seitenlappens – Tastbefund!) High-risk PSA >20 ng/ml OR ISUP 4-5 (=Gleason Score 4+4, 4+5, 5+4, 5+5) OR cT2c (in beiden Seitenlappen vorkommender Tumor) Locally advanced   Any PSA Any ISUP  cT3-4 (extraprostatisches Wachstum oder Infiltration von Nachbarorganen; meist im MRT beschrieben) OR cN+ (Lymphknotenmetastasen pelvin) 
 
Allgemein: 

Die Entscheidung von welcher Seite oder ob von beiden Seiten Gewebe entnommen wird, wird auf Grund der vorhandenen Informationen im SAP (welche Stanzen waren positiv bzw. MRT Befund) getroffen, sowie in Rücksprache mit dem Operateur. Tumorsuspekte Areale werden per Tastbefund durch den Operateur oder das Laborpersonal identifizieren. 
Im Falle von Neurosafe: Gewebe im Bereich der Schnittfläche aus der verbleibenden Prostata entnehmen. 
Kein Neurosafe: Prostata ggf. anschneiden, wie für Neurosafe und Gewebe von innen entnehmen. Mit dem Operateur Farbmarkierung anbringen. 
Gestanzt wird im vertikalen Winkel zum Gewebe so tief, wie die Stanze erlaubt (kompletter metallener Bereich). Stanzzylinder dann vorsichtig mit Pinzette rausziehen und unteres Ende mit Messer abtrennen. 
Falls beide Seiten gestanzt werden, eine neue Stanze für die zweite Seite verwenden. 

Verantwortliche:

Sammlung für folgende Arbeitsgruppen: 
AG Fendler (Organoide) 
Urologische Forschung 
 
Zuständige Labor: 
Annika Fendler, Tel.: 515040 
Michela de Martino, Tel.: 515040 
Bettina Ergün, Tel. 515128/615009 

Zuständige Klinik für Urologie: 
Antonia Franz 
Kira Kornienko, Tel. 615166 

Zuständige Pathologie: 
Simon Schallenberg, Tel.: 536054  

Zuständige Klinik für Radiologie: 
Markus Lerchbaumer, Tel.: 657084 

Kontakt Patientenmanagment 
Silvia Stark, Tel.: 615028 
Nadine Stremlau, Tel.: 615029 
 

[STEPS]
SECTION: Gewebesammlung im OP
1. Frischgewebe :
Die erste 6 mm Stanze sollte für Frischgewebe verwendet werden und wird direkt in Medium überführt. 
Röhrchen mit Gewebenummer und falls nötig T1 und T2 beschriften. 
SECTION: Gewebesammlung im OP
2. Fresh-frozen tissue:
Die zweite Stanze sollte direkt neben der Frischgewebestanze erfolgen und für fresh-frozen erfolgen. 
Gewebe direkt in Kryoröhrchen (mit Gewebenummer und T1/T2 beschriftet) überführen und im flüssigen Stickstoff schockfrosten 
SECTION: Gewebesammlung im OP
3. Forschungsstanze: 
Dritte Stanze für Forschungsstanze verwenden. 
Stanze sollte zwischen den Stanzen für Frischgewebe und fresh-frozen entnommen werden. 
Gewebe direkt in Formalinkontainer überführen. Sticker „AG-Uropatho“ aufkleben. 
Mit T1/T2 beschriften. 
Namenssticker von OP-Team aufkleben lassen und auf dem Histoschein vermerken. 
Die Nummer auf dem Histoschein auch auf das Röhrchen schreiben. 
Auf Gewebeschein vermerken welche Nummern die Stanzen haben. 
 
SECTION: Dokumentation
9. Patientendaten in Datei hinterlegen und korrespondierende Liquidnummer eintragen: \\Charite.de\Centren\C08\UR\FO\Intern\PROBEN_PATIENTEN\01-Gewebe\Gewebe_FF\ Biobank_Gewebe_ab01012019.xlsx 


SECTION: Dokumentation
10. In der Liquid-Sammelliste die korresspondierende Gewebenummer eintragen: \\Charite.de\Centren\C08\UR\FO\Intern\PROBEN_PATIENTEN\02-Liquid\Uro-Biobank\ Biobanking-lfdListe_ab190311.xlsx 

SECTION: Dokumentation
11. In Labfolder die Vorlage “Tissue_Collection_Fragments” bzw. seit dem 15.5.2023 “Tissue_Collection_Fragments_new_15052023” ausfüllen und Bilder des Gewebebegleitscheins sowie des Entnahmeorts und des Gewebes vor der Aufarbeitung im Labor einfügen. 
SECTION: Aufarbeitung im Labor
4. Gewebe sollte, wenn möglich am selben Tag verarbeitet werden, kann aber maximal über Nacht bei 4°C gelagert werden 
Zur Reduktion der Keimbelastung sollte das Gewebe 60 min bei Room temperature inkubiert werden 

SECTION: Aufarbeitung im Labor
5. Das Gewebe wird im Labor in Stücke mit 1-2 mm Kantenlänge aufgeteilt.
Die Fragmente eines Tumorstückes mixen, damit jedes Aliquot möglichst repräsentativ für das Tumorareal ist. 

 
SECTION: Aufarbeitung im Labor
6. Je 16 (bis 28.6.2023 nur 8) Fragmente werden in 1 ml Gefriermedium in einem Kryoröhrchen gelagert. 
Falls genug Fragmente für mehr als 4 Kryoröhrchen vorhanden sind, können auch mehr Fragmente in einem Röhrchen vereinigt werden. Maximal werden 5 Kryoröhrchen jeder Entität eingefroren. 

SECTION: Aufarbeitung im Labor
7. Proben über Nacht in Mr. Frosty einfrieren. 

SECTION: Aufarbeitung im Labor
8. Am nächsten Tag werden die Kryoröhrchen in den Stickstofftank überführt und im Ordner “N2-Tank” dokumentiert.