KOMMISSIONENS FÖRORDNING (EEG) nr 718/85 av den 20 mars 1985 om ändring av förordning (EEG) nr 625/78 om tillämpningsföreskrifter för offentlig lagring av skummjölkspulver

EUROPEISKA GEMENSKAPERNAS KOMMISSION HAR ANTAGIT DENNA FÖRORDNING

med beaktande av Fördraget om upprättandet av Europeiska ekonomiska gemenskapen,

med beaktande av rådets förordning (EEG) nr 804/68 av den 27 juni 1968 om den gemensamma organisationen av marknaden för mjölk och mjölkprodukter (), senast ändrad genom förordning (EEG) nr 1557/84 (), särskilt artikel 7.5 i denna, och

med beaktande av följande:

I punkt 2 b i bilaga 1 till kommissionens förordning (EEG) nr 625/78 (), senast ändrad genom förordning (EEG) nr 1128/84 (4) vad avser kvaliteten på skummjölkspulver, fastställs de kontrollmetoder som används för påvisande av vissa produkter.

En ny metod har utvecklats för påvisande av vassle genom bestämning av glykomakropeptider med använd ning av högtrycksvätskekromatografi, framför allt tack vare det ringtest som utvecklats av olika forskningsinstitut och av flera kontrollaboratorier i medlemsstaterna. Nämnda metod har klara fördelar, särskilt när det gäller ett snabbt genomförande av rutintester av många prover per dag. Följaktligen bör möjlighet ges att använda denna metod genom ändring av förordning (EEG) nr 625/78.

Det förefaller lämpligt att införa en tolvmånaders övergångsoch anpassningsperiod under vilken medlemsstaterna kan fortsätta att använda metoden med fri sialinsyra och aktörer kan kräva att nämnda metod skall användas om de inte godtar de resultat som erhållits med den nya metoden.

De åtgärder som föreskrivs i denna förordning är förenliga med yttrandet från Förvaltningskommittén för mjölk och mjölkprodukter.

HÄRIGENOM FÖRESKRIVS FÖLJANDE.

Artikel 1

Förordning (EEG) nr 625/78 ändras på följande sätt:

1. Punkt 2 b andra strecksatsen i bilaga 1 skall ersättas med följande:

" P Vassle: bestämning av glykomakropeptider med högtrycksvätskekromatografi (). Till och med den 31 mars 1981 får medlemsstaterna emellertid även använda bestämning av innehållet av fri sialinsyra (). Till och med nämnda datum kommer bestämning av innehållet av fri sialinsyra, på begäran och bekostnad av den berörda parten, också att användas om den senare inte godtar de resultat som erhållits med den nya metoden, i vilket fall endast de resultat som erhållits med användning av metoden med fri sialinsyra kommer att beaktas."

2. I bilaga 1 blir fotnot () fotnot () och följande fotnot () skall läggas till:

"() Metoden skall vara den metod som fastställs i bilaga 5."

3. Bilagan till denna förordning skall läggas till som bilaga 5.

()()()()Artikel 2

Denna förordning träder i kraft den tredje dagen efter det att den har offentliggjorts i Europeiska gemenskapernas officiella tidning.

Denna förordning är till alla delar bindande och direkt tillämplig i alla medlemsstater.

Utfärdad i Bryssel den 20 mars 1985.

På kommissionens vägnar

Frans ANDRIESSEN

Vice ordförande

() EGT nr L 148, 28.6.1968, s. 13.

() EGT nr L 150, 6.6.1984, s. 6.

() EGT nr L 84, 31.3.1978, s. 19.

() EGT nr L 109, 26.4.1984, s. 9.

BILAGA

"BILAGA 5PÅVISANDE AV VASSLEFÖREKOMST I SKUMMJÖLKSPULVER AVSETT FÖR OFFENTLIG LAGRING GENOM BESTÄMNING AV GLYKOMAKROPEPTIDER MED HÖGTRYCKSVÄTSKEKROMATOGRAFISK METOD (HPLC)1. Syfte och tillämpningsområdeDenna metod medger upptäckt av vassle i skummjölkspulver avsett för offentlig lagring genom bestämning av glykomakropeptider.2. HänvisningIDF-standard 50A: 1980 Mjölk och mjölkprodukter P Riktlinjer för provtagningsmetoder.3. DefinitionGlykomakropeptidhalten i skummjölkspulver: halten substanser fastställd med den nedan beskrivna metoden, uttryckt i viktprocent.4. Princip P Skummjölkspulvret löses i vatten, fett och proteiner avlägsnas med triklorättiksyra, varefter lösningen centrifugeras. P Bestämning av kvantiteten glykomakropeptider (GMP) i supernatanten med högtrycksvätskekromatografi (HPLC). P Bedömning av det resultat som erhålls från proverna i förhållande till standardprover som består av skummjölkspulver med eller utan tillsats av en känd procentsats vasslepulver.5. ReagenserAlla reagenser skall vara av för analytiska ändamål godkänd klass. Vattnet skall vara destillerat vatten eller vatten med minst motsvarande renhetsgrad.5.1 TriklorättiksyralösningLös 240 g triklorättiksyra (Cl3CCOOH) i vatten och späd till 1 000 ml.5.2 Elueringslösning pH 6,0Lös 1,74 g dikaliumvätefosfat (K2HPO4), 12,37 g kaliumdivätefosfat (KH2PO4) och 21,41 g natriumsulfat (Na2SO4) i ca 700 ml vatten.Justera vid behov till pH 6,0 med en lösning av fosforsyra eller natriumhydroxid.Späd till 1 000 ml med vatten och homogenisera.Före användning skall elueringslösningen filtreras genom filtermembran med pordiameter 0,45 ìm.5.3 TvättvätskaBlanda en del acetonitril (CH3CN) med nio delar vatten. Före användning skall blandningen filtreras genom filtermembran med pordiameter 0,45 ìm.Märk: Andra tvättvätskor med bakteriedödande effekt får användas, förutsatt att de inte sätter ned kolonnens separationsförmåga.5.4 Standardprover5.4.1 Skummjölkspulver som uppfyller kraven i förordning (EEG) nr 625/78 (dvs. [0]).5.4.2 Samma skummjölkspulver uppblandat med 5 viktprocent vasslepulver med en standardsammansättning (dvs. [5]).6. Utrustning6.1 Analysvåg.6.2 Centrifug med kapacitet för en centrifugalkraft på 2 200 g, utrustad med proppförsedda centrifugrör som rymmer ca 25 ml.6.3 Mekanisk skakapparat.6.4 Magnetomrörare.6.5 Glastrattar, diameter ca 7 cm.6.6 Filtrerpapper, medelfint, diameter ca 12,5 cm.6.7 Glasfilterutrustning, filtermembran med pordiameter 0,45 ìm.6.8 Graderade pipetter som medger tillförsel av 10 ml (ISO 648, klass A, eller ISO/R 835).6.9 Termostatstyrt vattenbad, inställt på 25 ± 0,5 °C.6.10 Utrustning för högtrycksvätskekromatografi (HPLC), bestående av:6.10.1 Pump.6.10.2 Spruta, manuell eller automatisk, med kapaciteten 15 P30 ìl.6.10.3 Två sammankopplade kolonner TSK 2000-SW (längd 30 cm, inre diameter 0,75 cm) eller motsvarande kolonner med förkolonn (3 cm 0,3 cm) fylld med I 125 eller material med motsvarande egenskaper.6.10.4 Termostatstyrd kolonnugn, inställd på 35 ± 1 °C.6.10.5 UV-detektor, variabel våglängd, som medger mätningar vid 205 nm med känsligheten 0,008 A.6.10.6 Integrator som medger integrering av enskilda toppar.Märk: Man kan använda kolonner vid rumstemperatur, men separationsförmågan blir då något lägre. I sådant fall bör temperaturvariationen vara mindre än ± 5 °C vid varje analys.7. Provtagning7.1 Se IDF-standard 50 A: 1980.7.2 Proven skall förvaras under sådana förhållanden som förhindrar nedbrytning eller förändring av sammansättningen.8. Förfarande8.1 Beredning av provernaÖverför mjölkpulvret till ett kärl med en volym som är ungefär dubbelt så stor som pulvrets och som är försett med lufttätt lock. Förslut behållaren omedelbart.Blanda mjölkpulvret väl genom att upprepade gånger vända behållaren.8.2 ProvmängdVäg upp 2,000 ± 0,001 g av testmaterialet i ett centrifugrör (6.2).8.3 Borttagande av fett och proteiner8.3.1 Tillsätt 20 g varmt vatten (50 °C) till det uppvägda provet. Lös pulvret genom att skaka det i 5 minuter i mekanisk skakapparat (6.3). Kyl röret till 25 °C.8.3.2 Tillsätt under två minuter 10,0 ml av triklorättiksyralösningen (5.1) under omrörning med magnetomröraren (6.4). Placera röret i vattenbad (6.9) och låt det stanna kvar där i 60 minuter.8.3.3 Centrifugera (6.2) i 10 minuter vid 2 200 g eller filtrera genom pappersfilter (6.6) och kasta de första 5 ml av filtratet.8.4 Kromatografisk analys8.4.1 Spruta in 15-30 ìl noggrant uppmätt supernatant eller filtrat (8.3.3) i HPLC-apparaten (6.10) med en flödeshastighet av 1,0 ml elueringslösning (5.2) per minut.Märk:1. Håll elueringslösningen (5.2) vid 85 °C under kromatografin för att bibehålla eluenten avgasad och för att förhindra bakterieväxt. Annan åtgärd med samma effekt får användas.2. Skölj kolonnerna med vatten under varje uppehåll. Lämna aldrig elueringslösningen i dem (5.2).Före varje uppehåll på mer än 24 timmar, skölj kolonnerna med vatten, tvätta dem sedan med lösning (5.3) under minst tre timmar med en flödeshastighet av 0,2 ml per minut.8.4.2 Resultaten av den kromatografiska analysen av provet [E] erhålls i form av kromatogram där varje topp definieras av sin retentionstid RT enligt följande:Topp II: Andra toppen i kromatogrammet med en retentionstid av ca 12,5 minuter.Topp III: Tredje toppen i kromatogrammet, motsvarande GMP, med en retentionstid av 15,5 ± 1,0 minuter.Topp IV: Fjärde toppen i kromatogrammet med en retentionstid RT av ca 17,5 minuter.Kolonnens kvalitet kan påverka de enskilda topparnas retentionstid.Integratorn (6.10.6) beräknar automatiskt arean A för varje topp:AII: arean av topp II,AIII: arean av topp III,AIV: arean av topp IV. Det är av största vikt att varje kromatograms utseende undersöks före kvantitativ bestämning för att upptäcka eventuella avvikelser som beror antingen på felfunktion hos apparaten eller kolonnerna eller på ursprunget eller beskaffenheten hos det analyserade provet.Upprepa analysen i händelse av tveksamhet.8.5 Kalibrering8.5.1 Tillämpa exakt det förfarande som beskrivs från punkt 8.2 till punkt 8.4.2 på standardproven (5.4).Använd nyberedda lösningar, eftersom GMP bryts ner i 8 %-ig triklorättiksyralösning. Förlusten kan uppskattas till 0,2 % per timme vid 30 °C.8.5.2 Före kromatografisk analys av proven, fukta kolonnerna genom att upprepade gånger spruta in standardprov (5.4.2) i lösning (8.5.1) tills arean och retentionstiden för toppen som motsvarar GMP är konstanta.8.5.3 Bestäm kalibreringsfaktorn R genom att spruta in samma volym filtrat (8.5.1) som används för proven.9. Resultatuttryck9.1 Beräkningsmetod och formler9.1.1 Beräkning av kalibreringsfaktorerna R: Topp II: RII = 100AII[0] Topp IV: RIV = 100AIV[0] där: RII och RIV = kalibreringssfaktorerna för topp II respektive topp IV AII[0] och AIV[0] = areorna av standardprovets topp II respektive topp IV erhållna i 8.5.3. Topp III: RIII = WAII[5] PAIII[0] där: RIII = kalibreringsfaktorn för topp III, AIII[0] och AIII[5] = areorna av topp III i standardprov [0] respektive [5] erhållna i 8.5.3, W = mängden vassle i standardprov [5], dvs. 5.9.1.2 Beräkning av de relativa topparna i prov [E]SII[E] = RII AII[E]SIII[E] = RIII AIII[E]SIV[E] = RIV AIV[E]där:SII[E], SIII[E], SIV[E] = de relativa areorna av topparna II, III respektive IV i prov [E],AII[E], AIII[E], AIV[E] = areorna av topparna II, III respektive IV i prov [E] som erhållits i 8.4.2,RII, RIII, RIV = kalibreringsfaktorerna som beräknats i 9.1.1.9.1.3 Beräkning av den relativa retentionstiden för topp III i prov [E] RRTIII[E] = RTIII[E]RTIII[5]därRRTIII[E] = den relativa retentionstiden för topp III i prov [E],RTIII[E] = retentionstiden för topp III i prov [E] som erhållits i 8.4.2,RTIII[5] = retentionstiden för topp III i kontrollprovet [5] som erhållits i 8.5.3.9.1.4 Experiment har visat att det föreligger ett linjärt samband mellan den relativa retentionstiden för topp III, dvs. RRTIII[E] och procentsatsen tillsatt vasslepulver upp till 10 %. P RRTIII[E] är 5 %; P RRTIII[E] är >= 1,000 när halten vassle är = 2,0 och den relativa arean av topp II, SII[E], är >= 160 eller den relativa arean av topp IV, SIV[E] är >= 135, skall proteinhalten bestämmas.9.4.2.1 Om proteinhalten är = 37 g per 100 g P och de relativa areorna av topparna II, III och IV för prov [E] ligger inom de tillåtna gränserna (streckade linjerna; värdena i bilagans kurva 1 6 har erhållits genom statistisk analys av experimentdata) kan förekomst av vassle inte fastställas, P och endast den relativa arean av topp III ligger över den streckade linjen i kurvorna 2, 3 och 6 har förekomst av vassle konstaterats. Mängden vassle beräknas genom att från SIII[E], (beräknad enligt punkt 9.1.2), subtrahera medelvärdet för topp III avläst på kurva 2 (heldragen linje) mitt för proteinhalten i prov [E]. RRTIII[E]-värdet bör motsvara den mängd vassle som påvisats. P I övriga fall kan ingen slutsats dras med avseende på förekomsten av vassle.SKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IISammanlagt proteininnehåll (%)SKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IIISammanlagt proteininnehåll (%),SKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IIITopp IISKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IVSammanlagt proteininnehåll (%),SKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IVTopp IISKUMMJÖLKSPULVER>Hänvisning till film>

Topp IIITopp IV