PROTOKOLL TILL DET EUROPEISKA AVTALET om utbyte av reagenser för blodgruppsbestämning

ALLMÄNNA BESTÄMMELSER

1. Specificitet

Ett reagens för blodgruppsbestämning måste reagera med alla testade blodprov som innehåller det antigen som är homologt med den antikropp eller någon annan substans som nämns på etiketten.

När ett reagens används i enlighet med den teknik som rekommenderas av tillverkaren får ingen av de nedanstående faktorerna förekomma eller fenomenen uppträda

a) hemolytiska egenskaper,

b) antikroppar eller andra substanser utom de som nämns på etiketten,

c) bakterieprodukter som kan förorsaka falskt positiva eller falskt negativa reaktioner,

d) pseudo-agglutination genom myntrullebildning,

e) prozonfenomen.

2. Styrka

Titer mäts genom att successiva halverande dilutioner framställs av det reagens som skall studeras i ett lämpligt medium. Till varje dilution tillsätts en lika stor volym av en suspension med röda blodkroppar. Titer är reciproken av det tal som utgör den högsta serumdilutionen i vilken en reaktion uppträder, varvid dilutionen beräknas utan att blodkroppssuspensionens volym i den totala volymen räknas med.

För anti-A, anti-B och andra reagenser avsedda för användning på objektsglas uttrycks aviditet genom den tid som åtgår för agglutination på objektsglaset.

3. Internationella standarder och internationella enheter

Världshälsoorganisationen har fastställt internationella standarder för reagenserna för blodgruppsbestämning anti-A och anti-B och ofullständigt anti-D, och är i färd med att fastställa sådana för reagenser för blodgruppsbestämning med annan specificitet. Ett internationellt standardpreparat innehåller definitionsmässigt ett visst antal internationella enheter per mg eller ml och denna definition är oberoende av den titer som observeras mot särskilda preparat med röda blodkroppar(1).

4. Stabilitet och utgångsdatum

Varje reagens bör, om den förvaras under sådana förhållanden som rekommenderas av tillverkaren, bevara sina nödvändiga egenskaper under minst ett år.

Utgångsdatumet för ett reagens i flytande form skall enligt vad som anges på etiketten inte vara senare än ett år räknat från datumet för den senaste tillfredsställande styrkekontrollen. Utgångsdatumet kan flyttas fram med ytterligare perioder om ett år efter en förnyad styrkekontroll.

Utgångsdatumet för ett reagens i torkad form skall enligt vad som anges på etiketten överensstämma med resultaten från stabilitetsundersökningar och vara godkänt av de nationella kontrollmyndigheterna.

5. Konservering

Reagenser för blodgruppsbestämning får konserveras i flytande eller frystorkat tillstånd. Frystorkade reagenser skall förvaras i en atmosfär av inert gas eller i vakuum i den glasbehållare som de torkades i och denna skall vara försluten på ett sätt som utestänger fukt. Ett torkat reagens får inte förlora mer än 0,5 % av sin vikt när det kontrolleras genom torkning över fosforpentoxid vid ett tryck på högst 0,02 mm kvicksilver i 24 timmar.

Reagenser skall beredas med aseptiska säkerhetsåtgärder och skall vara fria från bakteriell kontamination. För att kunna förhindra bakterietillväxt får den behöriga nationella myndigheten besluta att ett antiseptikum eller antibiotikum, eller bådadera, skall tillsättas reagenset (eller till varje annat lösningsmedel som levereras tillsammans med torkade reagenser), under förutsättning att reagenset uppfyller kraven för specificitet och styrka även vid förekomst av den tillsatta substansen.

Serum av mänskligt ursprung för blodgruppsbestämning skall minst innehålla 2,5 mg proteinnitrogen per ml flytande eller rekonstituerat serum.

Reagenser i flytande eller rekonstituerat tillstånd bör vara transparenta och inte innehålla vare sig sediment, gel eller synliga partiklar.

6. Färgning

Reagenser för blodgruppsbestämning avsedda för internationellt utbyte bör så långt det är möjligt inte vara artificiellt färgade, åtminstone inte till dess att en internationell överenskommelse om ett enhetligt system uppnås. Eventuella färgtillsatser får inte interferera med den specifika reaktionen.

7. Dispensering och mängd

Reagenser för blodgruppsbestämning skall dispenseras på ett sådant sätt och i sådana mängder att reagenset i en behållare är tillräckligt för att genomföra prover med positiva och negativa kontrollblodkroppar samt prover med okända blodkroppar. Mängden i en behållare skall vara sådan att innehållet, om det är nödvändigt, kan användas för att utföra den styrkekontroll som beskrivs i detta protokoll.

8. Anteckningar och prover

Tillverkningslaboratoriet skall förvara anteckningar om alla led i tillverkningen och all kontroll av reagenser för blodgruppsbestämning. Tillräckliga prover av alla reagenser som lämnas ut skall förvaras på laboratoriet till dess det rimligen kan antagas att partiet inte längre är i bruk.

9. Klassificering av reagenser

Reagenser för blodgruppsbestämning kan innehålla substanser av mänskligt, animaliskt, vegetabiliskt (eller mineraliskt) ursprung, av vilka somliga utgör den aktiva principen och somliga utgör tillsatser som förstärker reagensets aktivitet eller bibehåller dess stabilitet.

Av tekniska skäl har dessa reagenser delats in i tre kategorier efter vilket ursprung deras aktiva princip har. Detta innebär inte att reagenser av mänskligt ursprung uteslutande innehåller substanser av mänskligt ursprung eller att animaliska eller vegetabiliska reagenser inte kan innehålla substanser av mänskligt ursprung.

10. Etiketter, bruksanvisningar och intyg

En etikett med engelsk och fransk text med svart tryck på vit botten skall fästas på varje enskild behållare och innehålla följande uppgifter:

1. Tillverkarens namn och adress.

2. Reagensets namn så som det anges i rubriken i den aktuella specifikationen.

3. Namn och mängd på antiseptikum eller antibiotikum, eller bådadera, vid förekomst, eller uppgift om att sådana inte förekommer.

4. Mängd eller, om reagenset är frystorkat, mängd och sammansättning på den vätska som behövs för att rekonstituera det.

5. Utgångsdatum.

6. Partiets nummer.

Dessutom skall denna etikett eller etiketten på den kartong som innehåller flera enskilda behållare, eller den bruksanvisning som åtföljer behållarna innehålla följande uppgifter:

1. Tillverkarens fullständiga namn och adress.

2. Reagensets namn så som det anges i rubriken i den aktuella specifikationen.

3. Mängd eller, om reagenset är frystorkat, mängd och sammansättning på den vätska som behövs för att rekonstituera det.

4. Datum för senaste styrkekontroll.

5. Eventuellt utgångsdatum.

6. Partiets nummer.

7. Tillräcklig beskrivning av den användningsmetod som rekommenderas av tillverkaren.

8. Lagringsanvisningar för oöppnade ampuller och försiktighetsåtgärder som skall iakttas sedan de öppnats.

9. Exakt uppgift om sammansättning, inklusive eventuella antiseptikum eller antibiotikum, eller bådadera.

10. Uppgift om huruvida produkten innehåller material av mänskligt ursprung eller ej.

Varje sändning skall åtföljas av ett intyg enligt vad som föreskrivs i artikel 4 i avtalet och i bilagan till detta protokoll. Mallar till etiketter och bruksanvisning finns som bilaga till detta protokoll.

SÄRSKILDA BESTÄMMELSER

A. SERUM AV MÄNSKLIGT URSPRUNG FÖR BLODGRUPPSBESTÄMNING

a) SERUM AV MÄNSKLIGT URSPRUNG FÖR AB0-GRUPPBESTÄMNING

i) Anti-A-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-A-serum framställs av blod från utvalda personer med blodgrupp B som kan vara immuniserade med röda blodkroppar från blodgrupp A eller med substans som är specifik för blodgrupp A. Anti-A-serum agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller A-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna A och AB, inklusive sub-grupperna A1, A2, A1B och A2B, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller A-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna 0 och B.

Styrka

Titrering

Ett anti-A-serum skall titreras separat mot suspensioner med blodkroppar av grupperna A1, A2 och A2B, parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat. Serumets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-A-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupperna A1, A2, och A2B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination i varje suspension uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

ii) Anti-B-serum för blodgrupps bestämning

(humant)

Anti-B-serum framställs av blod från utvalda personer med blodgrupp A som kan vara immuniserade med röda blodkroppar från blodgrupp B eller med substans som är specifik för grupp B. Anti-B-serum agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller B-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna B och AB, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller B-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna 0 och A.

Styrka

Titrering

Ett anti-B-serum skall titreras mot en suspension med blodkroppar från blodgrupp B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat. Serumets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-B-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupp B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

iii) Anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum framställs av blod från utvalda personer med blodgrupp 0 som kan vara immuniserade med röda blodkroppar från blodgrupp A och blodgrupp B eller substanser som är specifika för blodgrupp A och blodgrupp B. Anti-A- plus anti-B-serum (grupp 0) agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller A- eller B-agglutinogener eller bådadera, dvs. blodkroppar från blodgrupp A inklusive subgrupperna A1 och A2, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller A- eller B-agglutinogener, dvs. blodkroppar från blodgrupp 0. Det agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller Ax (Ay eller A°)-antigen (som i allmänhet inte agglutineras av anti-A-serum från givare med blodgrupp B).

Styrka

Titrering

Ett anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum skall titreras separat mot suspensioner med blodkroppar från blodgrupperna A1 och A2, parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt standardpreparat det skall också titreras mot en suspension med blodkroppar från blodgrupp B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt standardpreparat.

Serumets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum för blodgruppsbestämning som används outspätt skall även framkalla en klart påvisbar agglutination av blodkroppar från blodgrupperna Ax (Ay eller A0).

Aviditetsbestämning

När anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum blandas på ett objektsglas med lika stora mängder av en suspension med blodkroppar från blodgrupperna A1 och A2 med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet. När anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupp B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referenspreparat med motsvarande aviditet. När anti-A- plus anti-B (grupp 0)-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupperna Ax (Ay eller A0) med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst fem minuter vid en temperatur på mellan 18-25 °C.

b) SERUM AV MÄNSKLIGT URSPRUNG FÖR Rh-BLODGRUPPSBESTÄMNING

Anti-Rh-serum för blodgruppsbestämning kan oavsett deras specificitet vara av två slag som skiljer sig åt genom de betingelser under vilka agglutination av homologa blodkroppar uppnås. Vissa serum, som benämns "fullständiga", agglutinerar blodkroppar som är uppslammade i en saltvattenlösning. Med andra, som benämns "ofullständiga" kan agglutination endast uppnås genom förekomst av vissa kolloider som bovint albumin eller med hjälp av andra specialtekniker. Serumen bör användas enligt föreskrifterna från det laboratorium som framställer dem.

Några "ofullständiga" serum kan också agglutinera homologa röda blodkroppar som är uppslammade i sitt eget serum eller sin egen plasma på objektsglas.

Nedanstående krav på styrka för Rh-blodgruppsbestämning kan behöva anpassas när internationella standardpreparat blir tillgängliga.

i) Anti-D- (anti-Rh0)-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-D-serum framställs av blod från en eller flera personer som immuniserats med Rh-systemets D-antigen. Det reagerar med humana röda blodkroppar som innehåller D-antigenen, men inte med humana röda blodkroppar som inte innehåller D-antigenen.

Styrka

Titrering

"Fullständiga" anti-D-serum skall ha en titer av lägst 32 mot CcDee-blodkroppar i en lösning som innehåller 9 g natriumklorid per liter.

Ett "ofullständigt" anti-D-serum skall titreras mot CcDee-blodkroppar parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med ofullständigt anti-D (anti-Rh0)-serum eller ett likvärdigt referenspreparat. Det skall ha en styrka av lägst 32 internationella enheter. Förutom att serumet reagerar med alla röda blodkroppar som innehåller D-antigenen bör det så långt det är möjligt reagera med blodkroppar som innehåller Du-antigenen.

Aviditetsbestämning

Anti-D-serum avsett för användning på objektsglas för test enligt Diamond och Abelson skall, när det blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en 40-50-procentig suspension av CcDeeblodkroppar vid ca. 40°C, uppvisa agglutination inom 30 sekunder, och agglutinationen skall vara avslutad inom 120 sekunder.

ii) Anti-C (anti-Rh')-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-C-serum framställs av blod från en eller flera personer som immuniserats med Rh-systemets C-agglutinogen. Det agglutinerar suspensioner av humana röda blodkroppar som innehåller C-antigenen, men inte med humana röda blodkroppar som inte innehåller C-antigenen. I detta sammanhang betraktas C-antigenen som om den innehöll Cw-antigenen.

De flesta diagnostiska anti-C-serum innehåller "fullständigt" anti-C tillsammans med "ofullständigt" anti-D. Dessa serum är därför specifika för C-antigenen endast när de blodkroppar som skall testas är uppslammade i en lösning som innehåller 9 g natriumklorid per liter.

Styrka

Titrering

Anti-C-serum ("fullständigt" eller "ofullständigt") bör ha en titer på lägst 8 mot Ccddee-blodkroppar.

Aviditetsbestämning

Anti-C-serum avsett för användning på objektsglas för test enligt Diamond och Abelson (och som inte får innehålla någon form av anti-D) skall, när det blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension av Ccddee-blodkroppar med en volymfraktion av mellan 0,4-0,5, vid ca 40°C, skall uppvisa agglutination inom 30 sekunder, och agglutinationen skall vara avslutad inom 120 sekunder.

iii) Anti-E (anti-rh'')-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-E-serum framställs av blod från en eller flera personer som immuniserats med Rh-systemets E-antigen. Det reagerar med humana röda blodkroppar som innehåller E-antigenen.

Styrka

Titrering

Anti-E-serum ("fullständigt" eller "ofullständigt") bör ha en titer på lägst 8 mot ccddEe-blodkroppar.

Aviditetsbestämning

Anti-E-serum avsett för användning på objekts-glas för test enligt Diamond och Abelson (och som inte får innehålla någon form av av anti-D) skall, när det blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension av ccddEe-blodkroppar med en volymfraktion av mellan 0,4-0,5, vid ca 40°C, uppvisa agglutination inom 30 sekunder, och agglutinationen skall vara avslutad inom 120 sekunder.

iv) Anti-D- plus -C (anti-RH0rh'')-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Anti-D- plus -E (anti-Rh0rh'')-serum för blodgruppsbestämning (humant)

Serum med specificitet anti-D plus -C och med specificitet anti-D plus -E kan framställas direkt av blod från immuniserade personer eller genom att anti-D-serum blandas med anti-C- eller anti-E-serum. I ett givet serum måste båda antikropparna vara aktiva samtidigt under de reaktionsbetingelser som föreskrivs av tillverkaren. Varje serum måste reagera med alla typer av röda blodkroppar som skulle reagera med någon av de ingående antikropparna, och får inte reagera med röda blodkroppar som inte innehåller vare sig C- eller D-antigenen när det gäller anti-D- plus -C, eller vare sig D- eller E-antigenen när det gäller anti-D-plus -E. Titer bör inte vara lägre än den som anges för de ingående antikropparna, men när det gäller anti-D- plus -C (vilket är en vanligt förekommande kombination i de immuniserade personernas serum) är det önskvärt att anti-C-titer inte är lägre 32, och när det gäller anti-D- plus -E är det önskvärt att anti-E-titer inte är lägre än 8. Om ett serum är avsett för användning på objektsglas för test enligt Diamond och Abelson, bör agglutinationstiderna för alla reagerande typer av röda blodkroppar inte understiga dem som anges för de ingående antikropparna.

B. REAGENSER AV ICKE-MÄNSKLIGT URSPRUNG

a) SERUM AV ANIMALISKT URSPRUNG

i) Anti-A-serum för blodgruppsbestämning

(animaliskt)

Anti-A-serum framställs av blod från djur som kan vara immuniserade med röda blodkroppar från blodgrupp A eller med substanser som är specifika för blodgrupp A. Anti-A-serum agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller Aantigen, dvs. blodkroppar av blodgrupperna A och AB, inklusive sub-grupperna A1, A2, A1B och A2B, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller A-antigenen, dvs. blodkroppar av blodgrupperna 0 och B.

Styrka

Titrering

Ett anti-A-serum skall titreras separat mot suspensioner med röda blodkroppar från blodgrupperna A1, A2 och A2B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat(2). Serumets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-A-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupperna A1, A2 och A2B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination i varje suspension uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

ii) Anti-B-serum för blodgruppsbestämning

(animaliskt)

Anti-B-serum framställs av blod från djur som kan vara immuniserade med röda blodkroppar från blodgrupp B eller med substanser som är specifika för blodgrupp B. Anti-B-serum agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller B-antigen, dvs. blodkroppar av blodgrupperna B och AB, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller B-antigenen, dvs. blodkroppar av blodgrupperna 0 och A.

Styrka

Titrering

Ett anti-B-serum skall titreras mot en suspension med blodkroppar från blodgrupp B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat(3). Serumets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-B-serum blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupp B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

iii) Anti-humanglobulin-serum (animaliskt)(4)

Anti-humanglobulin-serum för användning i blodgruppsserologi skall innehålla agglutinerande antikroppar mot IgG-globulin och agglutinerande antikroppar mot komplementfaktorer. Det framställs av blod från djur som har immuniserats genom injektion av humant serumprotein. Det skall agglutinera alla humana röda blodkroppar som är belagda med humant IgG eller komplementfaktorer, eller bådadera. Vid användning under de betingelser som föreskrivs av tillverkarna agglutinerar det inte ej belagda humana röda blodkroppar oavsett vilken blodgrupp de tillhör.

Specificitet

Specificiteten hos ett anti-humanglobulin-serum för användning i blodgruppsserologi skall vara testad med humana röda blodkroppar som är belagda med en rad antikroppar, t.ex. röda blodkroppar som sensibiliserats med humana ofullständiga anti-D-, anti-K- och anti-Fya-antikroppar, röda blodkroppar som sensibiliserats med komplement-bindande ofullständiga anti-Lea-antikroppar vid förekomst av färskt humant serum, och röda blodkroppar som sensibiliserats med s.k. "ofullständiga kalla antikroppar" och med tanninbehandlade röda blodkroppar som sensibiliserats med humant IgG och, slutligen, med tio olika prover av ej belagda humana röda blodkroppar med och utan A- och B-antigener.

Styrka

Titrering

Ett anti-humanglobulin-serum skall i den form det levereras eller i den dilution som rekommenderas på etiketten åstadkomma en kraftig agglutination hos humana röda blodkroppar som är belagda med ett humant ofullständigt anti-D-serum vars titer är 4 (eller lägre) mot D-positiva blodkroppar när titreringen görs enligt albumin replacementmetoden. I samma dilution skall det agglutinera K-positiva humana röda blodkroppar som sensibiliserats med utvalda svaga anti-K-antikroppar och Fya-positiva röda blodkroppar som sensibiliserats med utvalda svaga anti-Fya-antikroppar.

Det skall även i samma eller i en annan dilution, enligt vad som anges på etiketten, agglutinera humana röda blodkroppar som sensibiliserats med svaga komplementbindande ofullständiga anti-Lea-antikroppar vid förekomst av färskt serum.

För klinisk användning är det önskvärt att beläggningen hos alla ovannämnda typer av ofullständiga antikroppar skall kunna påvisas med en enda dilution av anti-humanglobulin-serum.

b) REAGENSER FÖR BLODGRUPPSBESTÄMNING AV VEGETABILISKT URSPRUNG

i) Anti-A-reagens för blodgruppsbestämning

(vegetabiliskt)

Anti-A-reagens framställs genom extraktion ur frön eller andra delar av en lämplig växt och eventuell efterföljande rening. Anti-A-reagens agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller A-antigener, dvs. blodkroppar från blodgrupperna A och AB, inklusive sub-grupperna A1, A2, A1B och A2B, och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller A-antigener, dvs. blodkroppar från blodgrupperna 0 och B.

Styrka

Titrering

Ett anti-A-reagens skall titreras separat mot suspensioner med blodkroppar från blodgrupperna A1, A2 och A2B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat(5).

Reagensets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-A-reagens blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupperna A1, A2 och A2B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination i varje suspension uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-A-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

ii) Anti-B-reagens för blodgruppsbestämning (vegetabiliskt)

Anti-B-reagens framställs genom extraktion ur passande delar av en lämplig växt och eventuell efterföljande rening. Anti-B-reagens agglutinerar humana röda blodkroppar som innehåller B-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna B och AB och agglutinerar inte humana röda blodkroppar som inte innehåller B-antigen, dvs. blodkroppar från blodgrupperna 0 och A.

Styrka

Titrering

Ett anti-B-reagens skall titreras mot en suspension med blodkroppar från blodgrupp B parallellt med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet av anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller ett likvärdigt referenspreparat(6). Reagensets styrka får inte i något fall vara lägre än 64 internationella enheter per ml.

Aviditetsbestämning

När anti-B-reagens blandas på ett objektsglas med en lika stor mängd av en suspension med blodkroppar från blodgrupp B med en volymfraktion på mellan 0,05-0,1 skall agglutination uppträda inom högst dubbelt så lång tid som krävs när samma prov görs med det rekonstituerade men outspädda internationella standardpreparatet med anti-B-serum för blodgruppsbestämning eller med ett referensstandardpreparat med motsvarande aviditet.

(1) Styrkan hos reagenser för blodgruppsbestämning inom de flesta systemen uttrycks som den agglutinationstiter som observeras i en dilutionsserie i en suspension med röda blodkroppar. Titer anger reagensets dilution i den sista blandningen i serien som uppvisar agglutination som är synlig i mikroskop.

Styrkan hos reagenser för blodgruppsbestämning för vilka det finns internationella standardpreparat (f.n. anti-A och anti-B och ofullständigt anti-D) kan uttryckas i internationella enheter (se Bull, Wld. Hlth. Org. 1954, 10, 937, 941 - 1950, 3, 30) på grundval av titrering av ett okänt reagens i jämförelse med den internationella standarden eller en nationell sub-standard.

De internationella standardpreparaten med serum för blodgruppsbestämning finns tillgängliga i ampuller med torkat humant serum. Efter rekonstituering till volymen 1 ml innehåller serumen anti-A och anti-B definitionsmässigt 256 internationella enheter per ml. De kan erhållas utan kostnad från WHO:s internationella laboratorium för biologiska standarder, Statens Seruminstitut, Köpenhamn.

Nedanstående tabell visar ett exempel på jämförande titrering av internationellt standardserum anti-A (S) och ett "okänt" anti-A-reagens (U) mot röda blodkroppar A1 och röda blodkroppar A2B.

Discarding a TABLE

>Plats för tabell>

(2) Det internationella standardpreparatet är av mänskligt ursprung. Om ett likvärdigt referenspreparat används kan det vara av mänskligt eller annat ursprung.

(3) Coombs, R. R. A., Mourant, A. E. och Race, R. R. (1945), Lancet, iii 5, Coombs, R. R. A., Mourant, A. E. och Race, R. R. (1945), Brit. J. exp. Path, 26. 255.

(4) Det internationella standardpreparatet är av mänskligt ursprung. Om ett likvärdigt referenspreparat används kan det vara av mänskligt eller annat ursprung.

BILAGA TILL PROTOKOLLET

EXEMPEL PÅ ETIKETT

EUROPARÅDET EUROPEISKA AVTALET OM UTBYTE AV REAGENSER FÖR BLODGRUPPSBESTÄMNING

>Start Grafik>

a) Flytande serum

1. Laboratorium, Amsterdam

2. Anti-A-serum (humant)

3. N3Na 0,1 %

4. 5 ml

5. 7 september 1965

6. Nr 1234

b) Torkat serum

1. Laboratorium, Amsterdam

2. Anti-B-serum (animaliskt)

3. Mersalat 0,1 %

4. Rekonstitueras med 5 ml destillerat vatten

5. 31 december 1968

6. Nr 4321>Slut Grafik>

EXEMPEL PÅ BRUKSANVISNING

EUROPARÅDET EUROPEISKA AVTALET OM UTBYTE AV REAGENSER FÖR BLODGRUPPSBESTÄMNING

>Start Grafik>

1. Centrallaboratoriet för blodtransfusioner, 1 Main Street, Metropolis, Westland.

2. Anti-E- (anti-rh'')-serum (humant).

3. 10 ml.

4. Datum för senaste styrkekontroll: 30 maj 1961.

5. Utgångsdatum: 30 maj 1962.

6. Nr 5432.

7. De röda blodkroppar som skall undersökas tvättas en eller flera gånger med en natriumkloridlösning med en koncentration av 9 g/l. En suspension av röda blodkroppar med en volymfraktion på ca 0,03 bereds genom att en del eller en droppe röda blodkroppar blandas med 30 delar natriumkloridlösning. Med lite övning kan suspensionens styrka bedömas på ett tillfredsställande sätt med blotta ögat.

Med en Pasteur-pipett överförs en liten droppe serum till ett reagensrör (6 mm × 30 mm), och en lika stor droppe av suspensionen med de röda blodkropparna tillsätts. (Med lite övning kan betydliga besparingar göras genom att serumet och blodkroppssuspensionen tillsätts med hjälp av pipetter som är graderade i 10 ìl). Rörets innehåll blandas och inkuberas vid 37 °C i två timmar. Rörets innehåll överförs därefter försiktigt till ett objektsglas och fördelas på detta. Om någon agglutination inte kan iakttas med blotta ögat undersöks objektsglaset i mikroskop för att fastställa huruvida en agglutination har inträtt och i så fall med vilken styrka.

8. Serumet skall förvaras vid en temperatur på -20 °C eller lägre. Om produkten inte används samma dag som den öppnas tillsätts 0,1 ml av en N3Na-lösning med en koncentration av 100 g/l.

9. Humant anti-E (anti-rh'')-serum: 5 ml.

30-procentig lösning med bovint albumin: 5 ml.

10. Detta preparat innehåller material från människa.>Slut Grafik>

BILAGA TILL PROTOKOLLET

EUROPARÅDET EUROPEISKA AVTALET OM UTBYTE AV REAGENSER FÖR BLODGRUPPSBESTÄMNING INTYG (Artikel 4)

>Start Grafik>

SKALL MEDFÖLJA SÄNDNINGEN

..........

.......... 19

..........

(ort)

(datum)

Antal kollin

Jag intygar härmed att den sändning som anges i marginalen ..........

..........

..........

Beteckning

framställd av det ansvariga laboratoriet ..........

..........

..........

..........

..........

Parti nr.

(referenslaboratorium som avses i artikel 6 i avtalet) motsvarar de specifikationer som avses i protokollet till avtalet och omedelbart kan levereras till mottagaren.

..........

(namn och adress) ..........

..........

..........

..........

..........

(stämpel)

(underskrift)

(befattning)>Slut Grafik>