(2)

poglavje II Priloge I se spremeni: (a) v točki A.1: (i) se točka (k) nadomesti z naslednjim: „(k) Termometer z natančnostjo do 0,5 °C v območju od 20 do 70 °C.“; (ii) se točka (o) nadomesti z naslednjim: „(o) Petrijevke s premerom približno 90 mm z mrežo s kvadrati velikosti približno 1 cm ali enakovredna oprema za štetje ličink kot v točki 6.14 standarda ISO 18743:2015.“; (iii) se točka (q) nadomesti z naslednjim: „(q) Pepsin z naslednjo močjo: — če je v prahu ali granulah: 1:10 000 NF (US National Formulary), kar ustreza 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) in 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie), ali — če je tekoč: stabilizirana raztopina pepsina z najmanj 660 enot Evropske farmakopeje/ml. Uporabijo se lahko tudi druge aktivnosti pepsina, če je končna aktivnost v digestivni tekočini enakovredna aktivnosti 10 g 1:10 000 NF, kot je določeno v točki 5.3 standarda ISO 18743:2015.“; (iv) se točka (s) nadomesti z naslednjim: „(s) Umerjena tehtnica za tehtanje vzorcev in/ali pepsina (natančnost ±0,1 g).“; (b) točka A.2 se nadomesti z naslednjim: „2. Odvzem vzorcev in količina, ki jo je treba prebaviti Kot je določeno v točki 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k standardu).“; (c) v točki A.3 se točki III in IV nadomestita z naslednjim: „III. Ugotavljanje prisotnosti ličink s sedimentacijo — Digestivni tekočini se doda led (300 do 400 g ledenih ploščic, ledenega praška ali zdrobljenega ledu), ki njen volumen poveča na približno dva litra. Digestivna tekočina se nato meša, dokler se led ne raztopi. Pri manjših skupkih (glej oddelek II(b)) je treba količino ledu ustrezno zmanjšati. — Ohlajena digestivna tekočina se prenese v dvolitrski ločilni lijak, ki je opremljen z vibratorjem, pritrjenim s posebno objemko. — Sedimentacija lahko poteka 30 minut, medtem pa sedimentacijski lijak prekinjeno vibrira, tj. enominutna vibracija, kateri sledi enominutni premor. — Po 30 minutah se 60 ml vzorec sedimenta hitro odplakne v 100 ml merilni valj. (Lijak se po uporabi splakne z raztopino detergenta). — 60 ml vzorec se pusti stati najmanj 10 minut, nato se supernatant odvzame s pipetiranjem, da znaša preostala prostornina 15 ml, ki se pregleda na prisotnost ličink. — Za pipetiranje se lahko uporabi brizgalka za enkratno uporabo, opremljena s plastično cevko. Dolžina cevke mora biti tolikšna, da 15 ml ostane v merilnem valju, ko po pipetiranju brizgalka ostane na obroču valja. — Preostalih 15 ml se odlije v petrijevko ali enakovredno opremo za štetje ličink ter pregleda s trihinoskopom ali stereomikroskopom. — Merilni valj se splakne s 5 do 10 ml vode iz pipe, to pa se doda k vzorcu. — Vzorci se morajo pregledati takoj, ko so pripravljeni. V nobenem primeru se pregled ne sme prestaviti na naslednji dan. Če so vzorci motni, jih je treba razbistriti na naslednji način: — končni vzorec 60 ml se vlije v merilni valj in pusti stati 10 minut; nato se 45 ml supernatanta (bistre tekočine) odvzame s pipetiranjem, preostalim 15 ml pa se dolije voda iz pipe do 45 ml, — po nadaljnjem usedanju, ki traja 10 minut, se 30 ml supernatanta (bistre tekočine) odvzame s pipetiranjem, preostalih 15 ml za pregled pa se vlije v petrijevko ali enakovredno opremo za štetje ličink ter pregleda s trihinoskopom ali stereomikroskopom, — merilni valj se splakne z 10 ml vode iz pipe, to pa se skupaj doda k vzorcu v petrijevki ali enakovredni opremi za štetje ličink ter pregleda s trihinoskopom ali stereomikroskopom. IV. Pozitivni ali nejasni rezultati Kadar se pregled zbirnega vzorca konča s pozitivnim ali nejasnim rezultatom, se od vsakega prašiča odvzame dodaten 20-gramski vzorec, kot je določeno v točki 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k temu standardu). Vzorci po 20 g, odvzeti petim prašičem, se združijo in pregledajo po v tem poglavju opisani metodi. Na ta način bodo pregledani vzorci 20 skupin po pet prašičev. Če se v zbirnem vzorcu, odvzetim petim prašičem, odkrije prisotnost trihinel, se od posameznih prašičev iz skupine odvzame nadaljnjih 20 g vzorcev, pri čemer se vsakega pregleda ločeno po v tem poglavju opisani metodi. Vzorci parazitov se hranijo v 70–90 % (končna koncentracija) etanolu, da se ohranijo in da lahko referenčni laboratorij EU ali nacionalni referenčni laboratorij identificira vrsto parazitov. Za postopek razkuževanja glej točko 12 standarda ISO 18743:2015.“; (d) točka B.2 se nadomesti z naslednjim: „2. Odvzem vzorcev Kot je določeno v točki 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k standardu).“; (e) točka B.3 se spremeni: (i) točka III (h) se nadomesti z naslednjim: „(h) Po treh minutah se plastična vrečka skupaj s filtrirnim diskom in rennilase raztopino odstrani iz Stomacherja in odpre s škarjami. Tekoča vsebina se vlije v petrijevko ali enakovredno opremo za štetje ličink. Vrečka se splakne s 5 do 10 ml vode, ki se nato doda v petrijevko ali enakovredno opremo za štetje ličink ter pregleda s trihinoskopom ali stereomikroskopom.“; (ii) točka IV se nadomesti z naslednjim: „IV. Pozitivni ali nejasni rezultati Kot je določeno v točki IV oddelka A(3).“; (f) točka C.1 se spremeni: (i) točka (f) se nadomesti z naslednjim: „(f) pepsin z naslednjo močjo: — če je v prahu ali granulah: 1:10 000 NF (US National Formulary), kar ustreza 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) in 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie), ali — če je tekoč: stabilizirana raztopina pepsina z najmanj 660 enot Evropske farmakopeje/ml. Uporabijo se lahko tudi druge aktivnosti pepsina, če je končna aktivnost v digestivni tekočini enakovredna aktivnosti 10 g 1:10 000 NF, kot je določeno v točki 5.3 standarda ISO 18743:2015.“; (ii) točka (g) se nadomesti z naslednjim: „(g) umerjena tehtnica za tehtanje vzorcev in/ali pepsina (natančnost ±0,1 g).“; (iii) točka (m) se nadomesti z naslednjim: „(m) termometer z natančnostjo do 0,5 °C v območju od 20 do 70 °C.“; (g) točka C.2 se nadomesti z naslednjim: „2. Odvzem vzorcev Kot je določeno v točki 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k standardu).“; (h) v točki C.3 se točka VI nadomesti z naslednjim: „VI. Pozitivni ali nejasni rezultati Kot je določeno v točki IV oddelka A(3).“; (i) točka D.1 se spremeni: (i) točka (m) se nadomesti z naslednjim: „(m) pepsin z naslednjo močjo: — če je v prahu ali granulah: 1:10 000 NF (US National Formulary), kar ustreza 1:12 500 BP (British Pharmacopoea) in 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie), ali — če je tekoč: stabilizirana raztopina pepsina z najmanj 660 enot Evropske farmakopeje/ml. Uporabijo se lahko tudi druge aktivnosti pepsina, če je končna aktivnost v digestivni tekočini enakovredna aktivnosti 10 g 1:10 000 NF, kot je določeno v točki 5.3 standarda ISO 18743:2015.“; (ii) točka (o) se nadomesti z naslednjim: „(o) umerjena tehtnica za tehtanje vzorcev in/ali pepsina (natančnost ±0,1 g).“; (iii) točka (u) se nadomesti z naslednjim: „(u) termometer z natančnostjo do 0,5 °C v območju od 20 do 70 °C.“; (j) točka D.2 se nadomesti z naslednjim: „2. Odvzem vzorcev Kot je določeno v točki 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k standardu).“; (k) v točki D.3 se točki II in III nadomestita z naslednjim: „II. Skupki z manj kot 100 g, kot je določeno v točki 8 standarda ISO 18743:2015 Če je potrebno, se lahko k 100 g skupka doda 15 g, ki se pregleda skupaj s temi vzorci v skladu z oddelkom I. V primeru več kot 15 g se to pregleda kot samostojni skupek. Pri skupkih do 50 g se lahko digestivno tekočino in sestavine zmanjša na 1 liter vode, 8 ml klorovodikove kisline in 5 g pepsina. III. Pozitivni ali nejasni rezultati Kadar se pregled zbirnega vzorca konča s pozitivnim ali nejasnim rezultatom testa lateksne aglutinacije, se od vsakega prašiča odvzame dodaten 20-gramski vzorec v skladu s točko 4.2 standarda ISO 18743:2015 (za več podrobnosti glej tudi prilogi A in B k temu standardu). Vzorci po 20 g, odvzeti petim prašičem, se združijo in pregledajo z metodo, opisano v oddelku I. Na ta način se morajo pregledati vzorci 20 skupin petih prašičev. Kadar je rezultat testa lateksne aglutinacije pri skupini petih prašičev pozitiven, se od posameznih živali iz skupine odvzamejo dodatni 20-gramski vzorci, vsak vzorec pa se ločeno pregleda z metodo, opisano v oddelku I. Kadar je rezultat testa lateksne aglutinacije pozitiven ali nejasen, je treba vsaj 20 g mišic prašičev poslati v nacionalni referenčni laboratorij za potrditev z uporabo standarda ISO 18743:2015 ali ene od enakovrednih metod, ki so opisane zgoraj. Vzorci parazitov se hranijo v 70–90 % (končna koncentracija) etanolu, da se ohranijo in da lahko referenčni laboratorij EU ali nacionalni referenčni laboratorij identificira vrsto parazitov. Po odvzemu parazitov je treba pozitivne tekočine razkužiti s segrevanjem na najmanj 60 °C.“