PRILOGA III

Vzorčenje in testiranje iz členov 4 in 7

1. Vzorčenje in testiranje za uradne preiskave za ugotavljanje navzočnosti iz člena 4(1) in (2) se izvajata na naslednji način: Vzorčenje vključuje vzorec zemlje standardne velikosti, ki zajema najmanj 1 500 ml zemlje/ha in je sestavljen iz vsaj 100 vbodov/ha, po možnosti vzetih v obliki pravokotne mreže širine najmanj 5 m in dolžine največ 20 m med točkami vzorčenja, ki pokriva celotno enoto pridelave. Celotni vzorec se uporabi za nadaljnji pregled, tj. ekstrakcijo cist, identifikacijo vrste in če je ustrezno, določitev patotipa/skupine virulence. Testiranje z uporabo naslednjih metod za ekstrakcijo zadevnega škodljivega organizma, ki so opisane v ustreznih potrjenih in mednarodno priznanih diagnostičnih protokolih: (a) ekstrakcija: metode, ki temeljijo na Fenwickovi napravi, Schuilingovi centrifugi, Seinhorstovem elutriatorju ali Kortovem elutriatorju; (b) odkrivanje in identifikacija: eno od naslednjega: (i) izolacija cist Globodera iz odpadkov na podlagi morfologije cist, ki ji sledi identifikacija vrste na podlagi morfologije posameznih cist in ličink v kombinaciji s konvencionalnim testom PCR na podlagi Bulman in Marshall, 1997 (1) (v primeru dvoma o navzočnosti G. tabacum se lahko dodatno izvede konvencionalni test PCR na podlagi Skantar et al., 2007 (2); (ii) izolacija cist Globodera iz odpadkov na podlagi morfologije cist, ki ji sledi identifikacija vrste na podlagi morfologije posameznih cist in ličink v kombinaciji s PCR v realnem času na podlagi Gamel et al., 2017 (3); (iii) izolacija cist ogorčic iz odpadkov, ki ji sledi odkrivanje vrste s PCR v realnem času na podlagi Gamel et al., 2017 (3).

2. Vzorčenje za uradno spremljanje iz člena 7 se izvaja v skladu z enim od naslednjega: (a) vzorčenjem iz točke 1 z vzorcem zemlje najmanj 400 ml/ha; (b) ciljnim vzorčenjem najmanj 400 ml zemlje po vizualnem pregledu korenin, kadar so simptomi vidni, ali (c) vzorčenjem najmanj 400 ml zemlje, ki se drži krompirja po spravilu, če se lahko izsledi, na kateri enoti predelave je bil posajen krompir. Testiranje za uradno preiskavo za spremljanje iz člena 7 se izvaja v skladu s točko 1.

3. Z odstopanjem od točke 1 se lahko standardna velikost vzorca zmanjša na najmanj 400 ml zemlje/ha v vsakem od naslednjih primerov: (a) obstajajo listinski dokazi, da se na enoti pridelave šest let pred uradno preiskavo za ugotavljanje navzočnosti niso pridelovali ali niso bili prisotni krompir ali rastline iz točke 1 Priloge I; (b) med zadnjima dvema zaporednima uradnima preiskavama za ugotavljanje navzočnosti v vzorcih velikosti 1 500 ml zemlje/ha ni bil odkrit primerek zadevnega škodljivega organizma, in po prvi uradni preiskavi za ugotavljanje navzočnosti ni bilo pridelave krompirja ali rastlin iz točke 1 Priloge I, razen tistih, za katere se zahteva uradna preiskava za ugotavljanje navzočnosti v skladu s členom 4(1); (c) v zadnji uradni preiskavi za ugotavljanje navzočnosti, ki je morala zajemati vzorec velikosti vsaj 1 500 ml/ha, niso bili odkriti primerki zadevnega škodljivega organizma ali ciste zadevnega škodljivega organizma brez žive vsebine, na enoti pridelave pa od zadnje uradne preiskave za ugotavljanje navzočnosti ni bilo pridelave krompirja ali rastlin iz točke 1 Priloge I, razen tistih, za katere se zahteva uradna preiskava za ugotavljanje navzočnosti v skladu s členom 4(1).

4. Velikost vzorca se lahko zmanjša za polja, večja od 8 ha oziroma 4 ha, v vsakem od naslednjih primerov: (a) v primeru standardne velikosti iz točke 1 se prvi 8 ha vzorčijo, kakor je opredeljeno v tej točki, vendar se lahko ta velikost za vsak dodatni hektar zmanjša do najmanj 400 ml zemlje/ha; (b) v primeru manjše velikosti iz točke 3 se prvi 4 ha vzorčijo, kakor je opredeljeno v tej točki, vendar se lahko ta velikost za vsak dodatni hektar še dodatno zmanjša do najmanj 200 ml zemlje/ha.

5. Vzorec zmanjšane velikosti iz točk 3 in 4 se lahko še naprej uporablja pri naslednji uradni preiskavi za ugotavljanje navzočnosti iz člena 3(1), dokler zadevna škodljiva organizma na zadevni enoti pridelave še nista bila odkrita .

6. Standardna velikost vzorca zemlje se lahko zmanjša na najmanj 200 ml zemlje/ha, če je enota pridelave na območju, razglašenem za prostega zadevnega škodljivega organizma, ter je enota pridelave določena, vzdrževana in pregledana v skladu z ustreznimi mednarodnimi standardi za fitosanitarne ukrepe (ISPM št. 4) (4).

7. Najmanjša velikost vzorca zemlje v vseh primerih je 200 ml zemlje na enoto pridelave.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997). Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR). New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 25, 123–129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology 39(2), 133–144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017). Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii. Nematology 19 (7):789–804.

(4) ISPM 4. 1995. Requirements for the establishment of pest free areas. Rim, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/.