21987A0207(05)
2.7.1987 URADNI LIST EVROPSKIH SKUPNOSTI L 37/33
PROTOKOL K EVROPSKEMU SPORAZUMU
O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN
SPLOŠNE DOLOČBE
1.
Specifičnost
Reagenti za določanje krvnih skupin (1) morajo reagirati z
vsemitestiranimikrvnimivzorci,kivsebujejoantigen,ustre-
zen protitelesu ali drugi snovi, navedeni na etiketi.
Kadarsereagentuporabljaskladnozmetodo,kijopriporoča
proizvajalec, ne sme biti znakov za nobenega od naslednjihdejavnikov ali pojavov:
a) hemolitične lastnosti,b) protitelesa ali druge snovi poleg navedenih na etiketi,c) bakterijske produkte, ki bi lahko povzročili lažno
pozitivne ali lažno negativne reakcije,
d) psevdoaglutinacijo s tvorjenjem rolojev,e) prozonske pojave.
2.
Jakost
Titer reagenta merimo z zaporednimi dvakratnimi
razredčitvami reagenta, ki ga preverjamo v ustreznemmediju.Kvsakirazredčinidodamoenakvolumensuspenzijerdečih krvnih celic. Titer je recipročna vrednost števila, kipredstavljanajvečjerazredčenjereagenta,prikateremnastopireakcija. Pri izračunu razredčitve ne upoštevamo volumnasuspenzije krvnih celic v skupnem volumnu.
Prireagentihanti-A,anti-Bkottudidrugih,kisozauporabona stekleni ploščici, avidnost izrazimo s časom, ki je potre-ben za aglutinacijo na stekleni ploščici.
3.
Mednarodni standardi in mednarodne enote
Mednarodne standarde je določila Svetovna zdravstvenaorganizacijazareagenteanti-Ainanti-Bternekompletnerea-genteanti-Dzadoločanjekrvnihskupin;vpostopkudoloča-nja so še standardi za reagente za določanje krvnih skupindrugih specifičnosti. Mednarodni standardni pripravek podefiniciji vsebuje določeno število mednarodnih enot na mgali ml; ta definicija je neodvisna od titrov, ugotovljenih zdodanimi določenimi suspenzijami rdečih krvnih celi (
2).
(1) Ob sprejemanju te različice protokola in pripadajočih prilog so se preds tavniki pogodbenic dogovorili, da v angleškem
besedilu sporazuma izraz „blood incompatibilities“ pomeni „blood group ing incompatibilities“.
Dogovorjeno je bilo tudi, daje treba izraz „blood-grouping “ z v ezajem v angleškem besedilu sporazuma in protokola
razumeti kot „blood grouping“ brez vezaja.
(2) Jakostreagentovzadoločanjekrvnihskupinvečinespecifičnostijeizr aženakotaglutinacijskititer,ugotovljenpriserijskem
razredčenju reagenta in z dodano suspenzijo rdečih krvnih celic. Titer oz načuje zadnje razredčenje reagenta v seriji, ki še
kaže mikroskopsko vidno aglutinacijo.
Jakostreagentovzadoločanjekrvnihskupin,zakatereobstajajomednaro dnistandardnipripravki(trenutnoanti-Ainanti-B
in nepopoln anti-D), se lahko izrazi v mednarodnih enotah (Glej Bull, Worl d Health Organization 1954, 10, 937, 941 –
1950, 3, 301) na podlagi titracije neznanega reagenta v primerjavi z medna rodnim standardom ali državnim
podstandardom.Mednarodni standardni pripravki serumov za določanje krvnih skupin so na voljo v ampulah, ki vsebujejo dehidriran
človeškiserum.Kadarserumaanti-Ainanti-Brekonstituiramonavolumen 1ml,vsebujetapodefiniciji256mednarodnih
enot na ml. Dobiti ju je mogoče brezplačno pri Mednarodnem laboratoriju za biološke standarde pri Svetovni zdravstveni
organizaciji, Statens Seruminstitut, Köbenhavn.Naslednja tabela prikazuje primer primerjalne titracije mednarodnega s tandardnega seruma anti-A (S) in „neznanega“
reagenta anti-A (U) z rdečimi krvnimi celicami A
1in rdečimi krvnimi celicami A2B.
Serum S Reagent U Serum S Reagent U
Krvna celica A1 1:512 1:128 256 64
Krvna celica A2B 1:32 1:16 256 128
titri
(ugotovljeni)titri
(ugotovljeni)enote
(po definiciji)enote
(po primerjavi)02/Zv. 2 SL Uradni list Evropske unije 253
4.Stabilnost in rok uporabnosti
Vsakreagentmoraobdržatizahtevanelastnostinajmanjeno
leto, kadar je shranjen pod pogoji, ki jih priporoča proizva-jalec.
Rok uporabnosti reagenta v tekoči obliki, kot je označen na
etiketi, ni daljši od enega leta od dneva zadnjega preverjanjanjegovejakosti,kizadostizahtevam.Sponavljanjemprever-janja jakosti se rok njegove uporabnosti vsakokrat lahkopodaljša za eno leto.
Rok uporabnosti reagentov v dehidrirani obliki, kot je nave-
dennaetiketi,jevskladuzugotovitvamipreizkusovnjihovestabilnosti in ga potrdijo državni kontrolni organi.
5.
Shranjevanje
Reagente za določanje krvnih skupin lahko hranimo v teko-čemalivdehidriranemstanju.Dehidriranereagentehranimov atmosferi inertnega plina ali v vakuumu v steklenički, vkateri so bili dehidrirani in ki je zaprta tako, da se preprečiprodiranjevlage.Dehidriranireagentnesmeizgubitivečkot0,5 % svoje mase po dodatnem 24-urnem sušenju v prisot-nosti fosforjevega pentoksida pri tlaku, ki ne presega0,02 mm živega srebra.
Reagente pripravljamo v aseptičnih pogojih in ne smejo biti
bakteriološko kontaminirani. Za preprečitev rasti bakterijlahkopristojnidržavniorganodloči,dasereagentu(alikaterikoli raztopini, ki je priložena dehidriranim reagentom) dodaantiseptik in/ali antibiotik pod pogojem, da v prisotnostidodaneučinkovinereagentševednoizpolnjujezahtevegledespecifičnosti in jakosti.
Serumičloveškegaizvorazadoločanjekrvnihskupinmorajo
vsebovati najmanj 2,5 mg proteinskega dušika na ml teko-čega ali rekonstituiranega seruma.
Reagenti v tekočem stanju ali po rekonstituciji morajo biti
prozorni in ne smejo vsebovati nobene usedline, gela alividnih delcev.
6.
Obarvanje
Reagentizadoločanjekrvnihskupinzamednarodnoizmen-javo naj ne bodo, če je le mogoče, umetno obarvani, vsajdokler ni dosežen mednarodni dogovor o enotnem sistemu.Kakršen koli dodatek barvila ne sme motiti specifične reak-cije.
7.
Odmerjanje in volumen
Reagente za določanje krvnih skupin pripravimo inrazdelimo tako in v takih volumnih, da reagent v enisteklenički poleg izvedbe testov z neznanimi krvnimicelicami zadostuje za izvedbo testov s pozitivnimi in nega-tivnimi kontrolnimi krvnimi celicami. Volumen enestekleničkejetakšen,davsebina,čejetopotrebno,omogočaizvedbo ustreznih testov jakosti, opisanih v tem protokolu.
8.
Dokumentacija in vzorci
Laboratorij,kiproizvajareagente,hranipisnodokumentacijoovsehfazahproizvodnjeinkontrolereagentovzadoločanjekrvnih skupin. Laboratorij hrani ustrezne vzorce vseh izda-nih reagentov tako dolgo, da lahko utemeljeno domneva, daserija ni več v uporabi.
9.
Klasifikacija reagentov
Reagenti,kiseuporabljajozadoločanjekrvnihskupin,lahkovsebujejo učinkovine človeškega, živalskega, rastlinskega (alimineralnega)izvora,odkaterihsonekatereaktivnasestavina,druge pa so dodatki za povečanje aktivnosti ali vzdrževanjestabilnosti reagentov.
Reagenti so iz tehničnih razlogov razdeljeni v tri kategorije
glede na izvor svoje aktivne sestavine. To pa ne pomeni, dareagenti človeškega izvora vsebujejo izključno učinkovinečloveškega izvora ali da živalski in rastlinski reagenti nemorejo vsebovati učinkovin človeškega izvora.
10.
Etikete, kontrolni listi in certifikati
Navsakikončnistekleničkijenalepljenaetiketa,natisnjenavangleškem in francoskem jeziku, v črni barvi na belem papi-rju z naslednjimi podatki:
1. ime in naslov proizvajalca;2. ime reagenta, kot je navedeno v naslovu ustrezne speci-
fikacije;
3. ime in količina antiseptika in/ali antibiotika, če sta pri-
sotna in/ali navedba njune odsotnosti;
4. volumen,aličejereagentdehidriran,volumeninsestava
tekočine, ki je potrebna za rekonstitucijo;
5. rok uporabnosti;6. številka serije.Ta etiketa ali etiketa na kartonski škatli, v kateri je več posa-
meznih stekleničk, ali kontrolni list, ki je priloženstekleničkam, vsebuje naslednje podatke:
1. polno ime in naslov proizvajalca;2. ime reagenta, kot je navedeno v naslovu ustrezne speci-
fikacije;254
SL Uradni list Evropske unije 02/Zv. 2
3. volumen,aličejereagentdehidriran,volumeninsestava
tekočine, ki je potrebna za rekonstitucijo;
4. datum zadnjega preverjanja jakosti;
5. rok uporabnosti (če obstaja);6. številka serije;7. ustrezen opis načina uporabe, ki ga priporoča proizva-
jalec;8. pogojihranjenjaneodprtihampulinvarnostniukrepi,ki
jih je treba upoštevati po odprtju ampul;
9. natančna sestava, vključno z navedbo antiseptika in/ali
antibiotika, če sta dodana;
10. izjava o tem, ali izdelek vsebuje snovi človeškega izvora
ali ne.
Vsakipošiljkijepriložencertifikat,kotjenavedenovčlenu4
Sporazuma in v Prilogi k temu protokolu. Vzorca etikete inkontrolnega lista sta priložena temu protokolu.
POSEBNE DOLOČBE
A.SERUMI ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN ČLOVEŠKEGA IZVORA
(a) SERUMIČLOVEŠKEGAIZVORAZADOLOČANJEKRV-
NIH SKUPIN AB0
(i)
Serum anti-A za določanje krvnih skupin
(humani)
Serumanti-Apridobivamoizkrviizbranihosebsku-
pineB,kisobileimuniziranealinezrdečimikrvnimicelicami skupine A ali s specifično učinkovino sku-pineA.Serumanti-Aaglutiniračloveškerdečekrvnecelice, ki vsebujejo antigen A, to je krvne celice krv-nih skupin A in AB, vključno s podskupinami A1,A2, A1B in A2B, ne aglutinira pa človeških rdečihkrvnih celic, ki ne vsebujejo antigena A, to je krvnihcelic krvnih skupin 0 in B.
Jakost
Titracija
Serum anti-A titriramo ločeno za suspenzije krvnih
celic A1, A2 in A2B vzporedno z rekonstituiranim,vendar nerazredčenim mednarodnim standardnimpripravkom seruma anti-A za določanje krvnih sku-pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom.Jakostserumajevvsakemprimerunajmanj64med-narodnih enot na ml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo zenakimvolumnomsuspenzijecelicA1,A2inA2Bzvolumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se moraaglutinacija pojaviti v največ dvakratnem času, ki jepotreben za izvedbo enakega testa narekonstituiranem,vendarnerazredčenemmednarod-nemstandardnempripravkuserumaanti-Azadolo-čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom zenakovredno avidnostjo.(ii)
Serum anti-B za določanje krvnih skupin
(humani)
Serumanti-Bpridobivamoizkrviizbranihosebsku-pineA,kisobileimuniziranealinezrdečimikrvnimicelicami skupine B ali s specifično učinkovino sku-pine B. Serum anti-B aglutinira človeške rdeče krvnecelice, ki vsebujejo antigen B, to je krvne celice krv-nihskupinBinAB,neaglutinirapačloveškihrdečihkrvnih celic, ki ne vsebujejo antigena B, to je krvnihskupin 0 in A.
Jakost
Titracija
Serumanti-Btitriramoindodamosuspenzijokrvnih
celic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,vendar nerazredčenim mednarodnim standardnimpripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom.Jakost seruma je najmanj 64 mednarodnih enot naml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo zenakim volumnom suspenzije celic skupine B zvolumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se moraaglutinacija pojaviti v največ dvakratnem času, ki jepotreben za izvedbo enakega testa narekonstituiranem,vendarnerazredčenemmednarod-nem standardnem pripravku seruma anti-B za dolo-čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom zenakovredno avidnostjo.
(iii)
Serum anti-A + anti-B (skupina 0) za določanje
krvnih skupin (humani)
Serum anti-A + anti-B (skupina 0) pridobivamo izkrvi izbranih oseb skupine 0, ki so bile imuniziraneali ne z rdečimi krvnimi celicami skupine A in02/Zv. 2
SL Uradni list Evropske unije 255
skupineBalisspecifičnimaučinkovinamaskupineA
in skupine B. Serum anti-A + anti-B (skupina 0)aglutinira človeške rdeče krvne celice, ki vsebujejoantigene A ali B ali oboje, to je krvne celice skupineA vključno s podskupinama A1 in A2, skupine B inskupine AB vključno s podskupinama A1B in A2B,ne aglutinira pa človeških rdečih krvnih celic, ki nevsebujejoantigenovAaliB,tojekrvnihcelicskupine0.Aglutiniračloveškerdečekrvnecelice,kivsebujejoantigen Ax (Ay ali Ao) (ki jih serum anti-A, pridob-ljen iz krvi krvodajalcev skupine B, običajno neaglutinira).
Jakost
Titracija
Serum anti-A + anti-B (skupina 0) titriramo ločeno
za suspenziji krvnih celic A1 in A2 vzporedno zrekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-nim standardnim pripravkom seruma anti-A zadoločanje krvnih skupin ali z enakovrednimstandardnim pripravkom. Titriramo ga tudi ssuspenzijo krvnih celic skupine B vzporedno zrekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-nimstandardnimpripravkomserumaanti-Bzadolo-čanjekrvnihskupinalizenakovrednimstandardnimpripravkom.
Jakost seruma je v vseh primerih najmanj 64 med-
narodnih enot na ml.
Nerazredčeni serum anti-A + anti-B (skupina 0) za
določanjekrvnihskupinpravtakoomogočaugotav-ljanjeaglutinacijerdečihkrvnihcelicskupineAx(Ayali Ao).
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-A + anti- B (skupina 0) na stekleni
ploščici zmešamo z enakima volumnoma suspenzijcelic A1 in A2 z volumensko frakcijo od 0,05 do0,1, se aglutinacija pojavi v največ dvakratnem času,ki je potreben za izvedbo enakega testa narekonstituiranem,vendarnerazredčenemmednarod-nemstandardnempripravkuserumaanti-Azadolo-čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom zenakovredno avidnostjo. Kadar serum anti-A + anti-B(skupina0)nastekleniploščicizmešamozenakimvolumnom suspenzije celic B (skupina 0) zvolumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacijapojavi v največ dvakratnem času, ki je potreben zaizvedbo enakega testa na rekonstituiranem, vendarnerazredčenem mednarodnem standardnempripravku seruma anti-B za določanje krvnih skupinali z referenčnim standardom z enakovrednoavidnostjo. Kadar serum anti-A + anti-B (skupina 0)na stekleni ploščici zmešamo z enakim volumnomsuspenzijecelicAx(AyaliAo)zvolumenskofrakcijood 0,05 do 0,1, se aglutinacija pojavi v največ 5minutah pri temperaturi od 18 °C do 25 °C.
(b) SERUMIČLOVEŠKEGAIZVORAZADOLOČANJEKRV-
NIH SKUPIN Rh
Serumi anti-Rh za določanje krvnih skupin, kakršna koli
žejenjihovaspecifičnost,sodvehvrst,kiserazlikujetavpogojih, pod katerimi dosežemo aglutinacijohomolognihkrvnihcelic.Določeniserumi,splošnoznanikot„kompletni“,aglutinirajokrvnecelice,suspendiranevfiziološki raztopini. Pri drugih, splošno znanih kot„nekompletni“, lahko dosežemo aglutinacijo le v prisot-nosti določenih koloidov, kot je goveji albumin, ali spomočjo drugih posebnih metod. Serume je trebauporabljati pod pogoji, kot jih podrobno navajalaboratorij, ki je serume pripravil.
Nekateri „nekompletni“ serumi aglutinirajo tudi
homologne rdeče krvne celice, shranjene v njihovemlastnem serumu ali v plazmi na steklenih ploščicah.
Ko bodo mednarodni standardni pripravki na voljo, bo
morda treba revidirati naslednje zahteve glede jakostiserumov za določanje krvnih skupin Rh.
(i)
Serum anti-D (anti-Rh0) za določanje krvnih
skupin (humani)
Serum anti-D pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,
imuniziranih z antigenom D sistema Rh. Reagira sčloveškimi rdečimi krvnimi celicami, ki vsebujejoantigen D, ne reagirajo pa z rdečimi krvnimi celi-cami, ki ne vsebujejo antigena D.
Jakost
Titracija
„Kompletni“ serumi anti-D imajo titer najmanj 32 s
celicami CcDee, suspendiranimi v raztopini, kivsebuje 9 gramov natrijevega klorida na liter.
„Nekompletni“ serum anti-D titriramo in dodamo
krvne celice CcDee vzporedno z rekonstituiranim,todanerazredčenimmednarodnimstandardnimpri-pravkomnekompletnegaanti-D(anti-Rh0)alizena-kovrednim referenčnim pripravkom. Njegova jakostje najmanj 32 mednarodnih enot. Poleg reagiranja zvsemirdečimikrvnimicelicami,kivsebujejoantigenD, mora serum, kolikor je to mogoče, reagirati skrvnimi celicami, ki vsebujejo antigen Du.
Določanje avidnosti
Serumi anti-D, ki so namenjeni uporabi vDiamondovem in Abelsonovem testu na stekleniploščici, potem ko smo jih pri približno 40 °C na256
SL Uradni list Evropske unije 02/Zv. 2
stekleni ploščici zmešali z enakim volumnom
40-50 % suspenzije krvnih celic CcDee, pokažejovidno aglutinacijo v 30 sekundah, aglutinacija pamora biti končana v 120 sekundah.
(ii)
Serumi anti-C (anti-Rh′) za določanje krvnih
skupin (humani)
Serum anti-C pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,imuniziranih z antigenom C sistema Rh. Aglutinirasuspenziječloveškihrdečihkrvnihcelic,kivsebujejoantigenC,neaglutinirajopardečihkrvnihcelic,kinevsebujejoantigenaC.VtejzvezisezaantigenCšteje,da vključuje antigen Cw.
Večina diagnostičnih serumov anti-C vsebuje
„kompletne“anti-Cskupajz„nekompletnimi“anti-D.Navedeni serumi so zato specifični za antigen C le,kadar so celice, ki jih preverjamo, suspendirane vraztopini, ki vsebuje 9 g/l natrijevega klorida.
Jakost
Titracija
Serumi anti-C („kompletni“ ali „nekompletni“)
morajo imeti titer najman j 8 s krvnimi celicami
Ccddee.
Določanje avidnosti
Serumi anti-C, ki so namenjeni uporabi vDiamondovem in Abelsonovem testu na stekleniploščici(inkinesmejovsebovatinobeneoblikeanti-D),morajopokazati,potemkosmojihpripribližno40 °C na stekleni ploščici zmešali z enakim volum-nom suspenzije celic Ccddee z volumensko frakcijood 0,4 do 0,5, vidno aglutinacijo v 30 sekundah,aglutinacija pa mora biti končana v 120 sekundah.
(iii)
Serum anti-E (anti-rh′) za določanje krvnih sku-
pin (humani)
Serum anti-E pridobivamo iz krvi ene ali več oseb,imuniziranih z antigenom E sistema Rh. Reagira sčloveškimi rdečimi krvnimi celicami, ki vsebujejoantigen E.
Jakost
Titracija
Serumi anti-E („kompletni“ ali „nekompletni“)
morajo imeti titer najman j 8 s krvnimi celicami
ccddEe.
Določanje avidnosti
Serumi anti-E, ki so namenjeni uporabi vDiamondovem in Abelsonovem testu na stekleniploščici(inkinesmejovsebovatinobeneoblikeanti-D),morajopokazati,potemkosmojihpripribližno40 °C na stekleni ploščici zmešali z enakim volum-nom suspenzije krvnih celic ccddEe z volumenskofrakcijood0,4do0,5,vidnoaglutinacijov30sekun-dah, aglutinacija pa mora biti končana v 120 sekun-dah.
(iv)
Serumanti- D+C(anti-Rh0rh′)zadoločanjekrv -
nih skupin (humani)
Serumanti- D+E(anti-Rh0rh′)zadoločanjekrv -
nih skupin (humani)
Serumespecifičnostianti- D+Cinspecifičnostianti-
D+Epridobivamoneposrednoizkrviimuniziranih
posameznikov, lahko pa jih pripravimo z mešanjemserumaanti-Dsserumomanti-Calianti-E.Vdanemserumu morajo biti oboja protitelesa aktivna hkratipod pogoji reakcije, ki jih podrobno navaja proizva-jalec.Vsakserummorareagiratizvsemivrstamirde-čih krvnih celic, ki bi reagirale z enimi ali drugimivsebovanimi protitelesi, ne smejo pa reagirati z rde-čimikrvnimicelicami,kinevsebujejonitiantigenaCaliDvprimeruanti- D+CnitiantigenaDal iEvpri-
meru anti-D + E. Titri morajo biti najmanj taki, kotso navedeni za posamezna protitelesa, toda v pri-meruanti- D+C(kijepogostakombinacijavserumu
imuniziranih oseb) je zaželeno, da je titer anti-Cnajmanj 32, in v primeru anti- D+Ej ezaželeno, da
je titer anti-E najmanj 8. Kadar je serum namenjenuporabi v Diamondovem in Abelsonovem testu nastekleni ploščici, morajo biti časi aglutinacije za vsereaktivne vrste rdečih krvnih celic najmanj taki, kotso navedeni za posamezna protitelesa.02/Zv. 2
SL Uradni list Evropske unije 257
B.REAGENTI, KI NISO ČLOVEŠKEGA IZVORA
(a) SERUMI ŽIVALSKEGA IZVORA
(i)
Serum anti-A za določanje krvnih skupin (žival-
ski)
Serum anti-A pridobivamo iz krvi živali, ki so bile
imunizirane ali ne z rdečimi krvnimi celicami sku-pine A ali s specifičnimi učinkovinami skupine A.Serum anti-A aglutinira človeške rdeče krvne celice,kivsebujejoantigenA,tojekrvnecelicekrvnihsku-pin A in AB, vključno s podskupinami A1, A2, A1BinA2B,neaglutinirapačloveškihrdečihkrvnihcelic,ki ne vsebujejo antigena A, to je krvnih celic krvnihskupin 0 in B.
Jakost
Titracija
Serum anti-A titriramo ločeno za suspenzije rdečih
krvnih celic A1, A2 in A2B vzporedno zrekonstituiranim, vendar nerazredčenim mednarod-nim standardnim pripravkom seruma anti-A zadoločanje krvnih skupin ali z enakovrednim refe-renčnim pripravkom (
1). Jakost seruma je v vsakem
primeru najmanj 64 mednarodnih enot na ml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo zenakimvolumnomsuspenzijecelicA1,A2inA2Bzvolumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacijaposamezne suspenzije v vsakem primeru pojavi vnajveč dvakratnem času, ki je potreben za izvedboenakega testa na rekonstituiranem, vendarnerazredčenem mednarodnem standardnempripravkuserumaanti-Azadoločanjekrvnihskupinali z referenčnim standardom z enakovrednoavidnostjo.
(ii)
Serum anti-B za določanje krvnih skupin (žival-
ski)
Serum anti-B pridobivamo iz krvi živali, ki so bileimunizirane ali ne z rdečimi krvnimi celicami sku-pine B ali s specifičnimi učinkovinami skupine B.Serum anti-B aglutinira človeške rdeče krvne celice,ki vsebujejo antigen B, to je krvne celice krvnih sku-pinBinAB,neaglutinirapačloveškihrdečihkrvnihcelic, ki ne vsebujejo antigena B, to je krvnih skupin0i nA .Jakost
Titracija
Serumanti-Btitriramoindodamosuspenzijokrvnihcelic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,vendar nerazredčenim mednarodnim standardnimpripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (
1).
Jakost seruma je najmanj 64 mednarodnih enot naml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo zenakimvolumnomsuspenzijekrvnihcelicskupineBzvolumenskofrakcijood0,05do0,1,seaglutinacijaposamezne suspenzije pojavi v najmanj dvakratnemčasu, ki je potreben za izvedbo enakega testa narekonstituiranem,vendarnerazredčenemmednarod-nem standardnem pripravku seruma anti-B za dolo-čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom zenakovredno avidnostjo.
(iii)
Antiglobulinski serumi (živalski) (2)
Antiglobulinski serum za uporabo v serologiji krv-nih skupin mora vsebovati aglutinacijska protitelesaproti globulinom IgG in aglutinacijska protitelesaproti faktorjem komplementa. Pridobivamo ga izkrvi živali, imuniziranih z injekcijo humanegaserumskegaproteina.Aglutiniratimoravsečloveškerdeče krvne celice, prekrite s humanim IgG in/alifaktorji komplementa. V pogojih, ki jih podrobnonavaja izdelovalec, ne aglutinira neprekritih člove-ških rdečih krvnih celic katere koli skupine.
Specifičnost
Specifičnost antiglobulinskega seruma za uporabo vserologiji krvnih skupin mora biti testirana s člove-škimi rdečimi krvnimi celicami, prekritimi zraznolikimi protitelesi, to je rdečimi krvnimi celi-cami, senzibiliziranimi s človeškimi nekompletnimiprotitelesianti-D,anti-Kinanti-Fya,rdečimikrvnimicelicami, senzibiliziranimi z nekompletnimiprotitelesi anti-Lea, ki vežejo komplement v prisot-nosti svežega humanega seruma, in rdečimi krvnimicelicami, senzibiliziranimi s tako imenovanimi
(1) Mednarodni standardni pripravek je človeškega izvora; enakovreden
referenčni pripravek, če ga uporabljamo, je lahko človeškega izvora
ali pa ne.(2) Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. in Race, R.R. (1945), Lancet, iii 5
Coombs,R.R.A.,Mourant,A.E.inRace,R.R.(1945),Brit.J.exp.Path,26, 255.258 SL Uradni list Evropske unije 02/Zv. 2
„nekompletnimihladnimiprotitelesi“,instaniranimi
rdečimi krvnimi celicami, senzibiliziranimi shumanim IgG, in končno, z 10 različnimi vzorcineprekritihčloveškihrdečihkrvnihceliczantigeniAin B ali brez.
Jakost
Titracija
Antiglobulinskiserum,kotgadostavljajodobavitelji,
ali v razredčini, ki je priporočena na etiketi, močnoaglutinira človeške rdeče krvne celice, prekrite shumanim nekompletnim serumom anti-D, ki imatiter 4 (ali manj), z D-pozitivnimi krvnimi celicami,kotitracijoizvajamozmetodonadomeščanjazalbu-minom. Pri enaki razredčitvi aglutinira K-pozitivnečloveške rdeče krvne celice, senzibilizirane z izbra-nimi šibkimi protitelesi anti-K, in Fya pozitivne člo-veške rdeče krvne celice, senzibilizirane z izbranimišibkimi protitelesi anti-Fya.
Prav tako pri enaki ali različni razredčitvi, kot je
navedeno na etiketi, aglutinira človeške rdeče krvnecelice, senzibilizirane s šibkimi nekompletnimiprotitelesi anti-Lea, ki vežejo komplement v prisot-nosti svežega seruma.
Za klinično uporabo je zaželeno, da je prekritost z
vsemi vrstami nekompletnih protiteles, navedenihzgoraj, mogoče odkriti z enkratno razredčinoantiglobulinskega seruma.
(b) REAGENTI ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN RAS-
TLINSKEGA IZVORA
(i)
Reagent anti-A za določanje krvnih skupin (ras-
tlinski)
Reagent anti-A pripravljamo iz izvlečkov semen ali
drugih delov ustrezne rastline, čemur sledi, če jepotrebno, čiščenje. Reagent anti-A aglutinira člove-ške rdeče krvne celice, ki vsebujejo antigen A, to jekrvne celice krvnih skupin A in AB, vključno spodskupinamiA1,A2,A1BinA2B,neaglutinirapačloveških rdečih krvnih celic, ki ne vsebujejoantigena A, to je krvnih celic krvnih skupin 0 in B.
Jakost
Titracija
Reagentanti-Atitriramoločenozasuspenzijekrvnih
celic A1, A2 in A2B vzporedno z rekonstituiranim,vendar nerazredčenim mednarodnim standardnimpripravkom seruma anti-A za določanje krvnih sku-pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (
1).
Jakostserumajevvsakemprimerunajmanj64med-narodnih enot na ml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-A na stekleni ploščici zmešamo zenakimvolumnomsuspenzijecelicA1,A2inA2Bzvolumensko frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacijaposamezne suspenzije pojavi v največ dvakratnemčasu, ki je potreben za izvedbo enakega testa narekonstituiranem,vendarnerazredčenemmednarod-nemstandardnempripravkuserumaanti-Azadolo-čanje krvnih skupin ali z referenčnim standardom zenakovredno avidnostjo.
(ii)
Reagent anti-B za določanje krvnih skupin (ras-
tlinski)
Reagent anti-B pripravljamo iz izvlečkov semen alidrugih delov ustrezne rastline, čemur sledi, če jepotrebno, čiščenje. Reagent anti-B aglutinira člove-ške rdeče krvne celice, ki vsebujejo antigen B, to jekrvne celice krvnih skupin B in AB, ne aglutinira pačloveških rdečih krvnih celic, ki ne vsebujejoantigena B, to je krvnih celic krvnih skupin 0 in A.
Jakost
Titracija
Reagent anti-B titriramo in dodamo suspenzijo krv-
nih celic skupine B vzporedno z rekonstituiranim,vendar nerazredčenim mednarodnim standardnimpripravkom seruma anti-B za določanje krvnih sku-pin ali z enakovrednim referenčnim pripravkom (
1).
Jakostserumajevvsakemprimerunajmanj64med-narodnih enot na ml.
Določanje avidnosti
Kadar serum anti-B na stekleni ploščici zmešamo zenakim volumnom suspenzije celi c B z volumensko
frakcijo od 0,05 do 0,1, se aglutinacija pojavi v naj-več dvakratnem času, ki je potreben za izvedbo ena-kega testa na rekonstituiranem, vendarnerazredčenem mednarodnem standardnempripravku seruma anti-B za določanje krvnih skupinali z referenčnim standardom z enakovrednoavidnostjo.
(1) Mednarodni standardni pripravek je človeškega izvora; enakovreden
referenčni pripravek, če ga uporabljamo, je lahko človeškega izvora
ali pa ne.02/Zv. 2 SL Uradni list Evropske unije 259
VZOREC ETIKETE
SVET EVROPE
EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN
a)Tekoči serum
1. … laboratorij, Amsterdam
2. Serum anti-A (humani)3. Natrijev azid 0,1 %4. 5 ml5. 7. september 19656 . Š t .1234
b)Dehidrirani serum
1. … laboratorij, Amsterdam2. Serum anti-B (živalski)3. Mersalate 0,1 %4. Rekonstituirat is5m ldestilirane vode
5. 31. december 19686. Št. 4321260 SL Uradni list Evropske unije 02/Zv. 2
VZOREC KONTROLNEGA LISTA
SVET EVROPE
EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN
1. Centralni laboratorij za transfuzijo krvi, 1 Main Street, Metropolis,
Westland.
2. Serum anti-E (anti-rh") (humani).
3. 10 ml.4. Datum zadnjega preverjanja aktivnosti: 30. maj 1961.5. Rok uporabnosti: 30. maj 1962.6. Št. 5432.7. Rdeče krvne celice, ki jih preverjamo, je treba enkrat ali večkrat oprat i z raztopino 9 g/l NaCl. Pripravimo
3-odstotno suspenzijo eritrocitov, tako da zmešamo eno volumensko enoto ali kapljico koncentriranih rdečih
krvnih celic s 30 volumenskimi enotami ali kapljicami izotonične raztopi ne NaCl. Na podlagi izkušenj jakost
suspenzije lahko ocenimo po videzu.S Pasteurjevo pipeto kanemo kapljico seruma v precipitinsko epruveto (6 m m x 30 mm) in dodamo enako
kapljico suspenzije rdečih krvnih celic. (Na podlagi izkušenj lahko dose žemo znaten prihranek, če serum in
celičnosuspenzijopipetiramospipetozoznačenimvolumnom10ml).Vsebi noepruvetepremešamoindveuri
inkubiramopri37°C.Vsebinoepruvetenatoprevidnoprenesemonaobjektn ostekelceinjorahlorazmažemo.
Če aglutinacija ni dobro vidna s prostim očesom, preparat pregledamo pod m ikroskopom, da ugotovimo
prisotnost in stopnjo aglutinacije.
8. HranimopriŒ20°Calinižjihtemperaturah.Čeboreagent,kismogaodprl i,uporabljennaslednjidan,dodamo
0,1 ml raztopine, ki vsebuje 100 g/l natrijevega azida.
9. Humani serum anti-E („anti-rh“): 5 ml; raztopina, ki vsebuje 300 g/l gov ejega albumina: 5 ml.
10. Izdelek vsebuje snovi človeškega izvora.02/Zv. 2 SL Uradni list Evropske unije 261
PRILOGA K PROTOKOLU
Svet Evrope
EVROPSKI SPORAZUM O IZMENJAVI REAGENTOV ZA DOLOČANJE KRVNIH SKUPIN
CERTIFIKAT
(člen 4)
NE SME SE LOČITI OD POŠILJKE
…………………………………………
(kraj)……………………………………… 19…
(datum)
Število paketov Podpisani potrjuje,da je pošiljka, opisana ob robu, ………… ………………………
…………………………… … …………………………………………………………………………………………
Oznake za katere pripravo je odgovoren ……………………………………………………
…………………………… … …………………………………………………………………………………………
…………………………… … …………………………………………………………………………………………
številka serije eden od organov, navedenih v členu 6 Sporazuma, pripravlj ena skladno s specifi-
kacijami Protokola k Sporazumu in se lahko takoj dostavi prejemniku
…………………………… (ime in kraj)……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
(žig)……………………………
(podpis)………………………………
(naziv)262 SL Uradni list Evropske unije 02/Zv. 2