2.

Kapitola II prílohy I sa mení takto: a) V časti A bode 1: i) písmeno k) sa nahrádza takto: „k) teplomer s presnosťou 0,5 °C a s rozsahom 20 až 70 °C.“; ii) písmeno o) sa nahrádza takto: „o) Petriho misky s priemerom približne 90 mm, s mriežkou rozdelenou na štvorce s rozmerom približne 1 cm, alebo rovnocenné vybavenie na stanovenie počtu lariev, ako sa uvádza v bode 6.14 normy ISO 18743:2015.“; iii) písmeno q) sa nahrádza takto: „q) pepsín s touto koncentráciou: — ak je práškový alebo granulovaný: 1:10 000 NF (US National Formulary – Národný liekopis USA), ktorá zodpovedá 1:12 500 BP (British Pharmacopoea – Britský liekopis) a 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie – Medzinárodná farmaceutická federácia), alebo — ak je tekutý: stabilizovaný kvapalný pepsín obsahujúci minimálne 660 jednotiek European Pharmacopoeia (Európskeho liekopisu)/ml. Môže sa využiť iné pôsobenie pepsínu za predpokladu, že konečné pôsobenie v tráviacej tekutine zodpovedá pôsobeniu 10 g 1:10 000 NF, ako sa stanovuje v bode 5.3 normy ISO 18743:2015.“; iv) písmeno s) sa nahrádza takto: „s) kalibrovaná váha na váženie vzoriek a/alebo pepsínu (s presnosťou ± 0,1 g).“ b) V časti A sa bod 2 nahrádza takto: „2. Odber vzoriek a množstvo na trávenie Ako sa uvádza v bode 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme).“ c) V časti A bode 3 sa oddiely III a IV nahrádzajú takto: „III. Získanie lariev sedimentáciou — K tráviacej tekutine sa pridá ľad (300 až 400 g ľadových vločiek, šupinového ľadu alebo rozdrveného ľadu) tak, aby sa celkový objem zvýšil na 2 litre. Tráviaca tekutina sa potom mieša, pokým sa ľad neroztopí. V prípade menších súhrnných vzoriek [pozri oddiel II písm. b)] sa množstvo ľadu musí náležite zmenšiť. — Vychladená tráviaca tekutina sa preleje do dvojlitrového deliaceho lievika vybaveného vibrátorom v osobitnej svorke. — Sedimentácia trvá 30 minút, počas ktorých sa deliacim lievikom prerušovane vibruje, t. j. po jednominútovej vibrácii nasleduje jednominútová prestávka. — Po 30 minútach sa 60 ml vzorky sedimentu rýchlo vypustí do 100 ml odmerného valca (lievik sa po použití vypláchne roztokom detergentu). — 60 ml vzorky sa nechá aspoň 10 minút odstáť a po uplynutí tohto času sa supernatant odsaje tak, aby sa ponechal objem 15 ml, ktorý sa má vyšetriť na prítomnosť lariev. — Na odsatie sa môže použiť jednorazová striekačka vybavená plastovou rúrkou. Dĺžka rúrky musí byť taká, aby v odmernom valci zostalo 15 ml, keď sa obruba striekačky opiera o okraj valca. — Zvyšných 15 ml sa vyleje do Petriho misky alebo rovnocenného vybavenia na stanovenie počtu lariev a vyšetrí sa pomocou trichinoskopu alebo stereomikroskopu. — Odmerný valec sa premyje 5 až 10 ml vodovodnej vody a výplachy sa pridajú ku vzorke. — Natráveniny sa musia vyšetriť hneď, ako sú pripravené. Za žiadnych okolností sa vyšetrenie nesmie odložiť na nasledujúci deň. Ak je natrávenina nezreteľná, musí sa vyčeriť týmto spôsobom: — konečná vzorka v objeme 60 ml sa naleje do odmerného valca a nechá sa 10 minút odstáť; 45 ml supernatantu sa potom odsaje a zvyšných 15 ml sa doplní na 45 ml vodovodnou vodou, — po ďalšom desaťminútovom usádzaní sa 30 ml supernatantu odsaje a zvyšných 15 ml sa vyleje do Petriho misky alebo rovnocenného vybavenia na stanovenie počtu lariev a vyšetrí sa pomocou trichinoskopu alebo stereomikroskopu, — odmerný valec sa premyje 10 ml vodovodnej vody a tieto výplachy sa pridajú ku vzorke na vyšetrenie v Petriho miske alebo rovnocennom vybavení na stanovenie počtu lariev a vyšetria sa pomocou trichinoskopu alebo stereomikroskopu. IV. Pozitívne alebo dubiózne výsledky Ak má vyšetrenie kolektívnej vzorky pozitívny alebo neistý výsledok, odoberie sa z každej ošípanej ďalšia vzorka s hmotnosťou 20 g, ako sa uvádza v bode 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme). Dvadsaťgramové vzorky z piatich ošípaných sa zmiešajú a vyšetria s použitím metódy opísanej v tejto kapitole. Takto sa vyšetria vzorky z 20 skupín po piatich ošípaných. Ak sa zistí Trichinella v súhrnnej vzorke od piatich ošípaných, odoberú sa od jednotlivých ošípaných v skupine ďalšie dvadsaťgramové vzorky a každá vzorka sa vyšetrí samostatne s použitím metódy opísanej v tejto kapitole. Na účely konzervácie a identifikácie na úrovni druhov v referenčnom laboratóriu EÚ alebo v národnom referenčnom laboratóriu sa vzorky parazitov majú uchovávať v 70 – 90 % etylalkohole (konečná koncentrácia). Pokiaľ ide o postup dekontaminácie, pozri bod 12 normy ISO 18743:2015.“ d) V časti B sa bod 2 nahrádza takto: „2. Odber vzoriek Ako sa uvádza v bode 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme).“ e) V časti B sa bod 3 mení takto: i) v oddiele III sa písmeno h) nahrádza takto: „h) Po troch minútach sa plastové vrecko spolu s filtračným kotúčom a roztokom renilázy vyberie zo Stomachera a otvorí sa pomocou nožníc. Kvapalný obsah sa vleje do Petriho misky alebo rovnocenného vybavenia na stanovenie počtu lariev. Vrecko sa premyje 5 až 10 ml vody, ktorá sa potom preleje do Petriho misky alebo rovnocenného vybavenia na stanovenie počtu lariev a vyšetrí sa pomocou trichinoskopu alebo stereomikroskopu.“; ii) oddiel IV sa nahrádza takto: „IV. Pozitívne alebo dubiózne výsledky Ako sa stanovuje v časti A bode 3 oddiele IV.“ f) V časti C sa bod 1 mení takto: i) písmeno f) sa nahrádza takto: „f) pepsín s touto koncentráciou: — ak je práškový alebo granulovaný: 1:10 000 NF (US National Formulary – Národný liekopis USA), ktorá zodpovedá 1:12 500 BP (British Pharmacopoea – Britský liekopis) a 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie – Medzinárodná farmaceutická federácia), alebo — ak je tekutý: stabilizovaný kvapalný pepsín obsahujúci minimálne 660 jednotiek European Pharmacopoeia (Európskeho liekopisu)/ml. Môže sa využiť iné pôsobenie pepsínu za predpokladu, že konečné pôsobenie v tráviacej tekutine zodpovedá pôsobeniu 10 g 1:10 000 NF, ako sa stanovuje v bode 5.3 normy ISO 18743:2015.“; ii) písmeno g) sa nahrádza takto: „g) kalibrovaná váha na váženie vzoriek a/alebo pepsínu (s presnosťou ± 0,1 g).“; iii) písmeno m) sa nahrádza takto: „m) teplomer s presnosťou 0,5 °C a s rozsahom 20 až 70 °C.“ g) V časti C sa bod 2 nahrádza takto: „2. Odber vzoriek Ako sa uvádza v bode 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme).“ h) V časti C bode 3 sa oddiel VI nahrádza takto: „VI. Pozitívne alebo dubiózne výsledky Ako sa stanovuje v časti A bode 3 oddiele IV.“ i) V časti D sa bod 1 mení takto: i) písmeno m) sa nahrádza takto: „m) pepsín s touto koncentráciou: — ak je práškový alebo granulovaný: 1:10 000 NF (US National Formulary – Národný liekopis USA), ktorá zodpovedá 1:12 500 BP (British Pharmacopoea – Britský liekopis) a 2 000 FIP (Fédération Internationale de Pharmacie – Medzinárodná farmaceutická federácia), alebo — ak je tekutý: stabilizovaný kvapalný pepsín obsahujúci minimálne 660 jednotiek European Pharmacopoeia (Európskeho liekopisu)/ml. Môže sa využiť iné pôsobenie pepsínu za predpokladu, že konečné pôsobenie v tráviacej tekutine zodpovedá pôsobeniu 10 g 1:10 000 NF, ako sa stanovuje v bode 5.3 normy ISO 18743:2015.“; ii) písmeno o) sa nahrádza takto: „o) kalibrovaná váha na váženie vzoriek a/alebo pepsínu (s presnosťou ± 0,1 g).“; iii) písmeno u) sa nahrádza takto: „u) teplomer s presnosťou 0,5 °C a s rozsahom 20 až 70 °C.“ j) V časti D sa bod 2 nahrádza takto: „2. Odber vzoriek Ako sa uvádza v bode 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme).“ k) V časti D bode 3 sa oddiely II a III nahrádzajú takto: „II. Súhrnná vzorka s hmotnosťou menej ako 100 g, ako sa uvádza v bode 8 normy ISO 18743:2015 V prípade potreby sa môže k úplnej súhrnnej vzorke obsahujúcej 100 g pridať do 15 g materiálu a vyšetriť spolu s týmito vzorkami v súlade s oddielom I. Viac ako 15 g sa musí vyšetriť ako úplná súhrnná vzorka. V prípade súhrnných vzoriek do 50 g sa tráviaca tekutina a prísady môžu zredukovať na 1 liter vody, 8 ml kyseliny chlorovodíkovej a 5 g pepsínu. III. Pozitívne alebo dubiózne výsledky Ak má vyšetrenie kolektívnej vzorky pozitívny alebo neistý výsledok latexového aglutinačného testu, odoberie sa z každej ošípanej ďalšia vzorka s hmotnosťou 20 g v súlade s bodom 4.2 normy ISO 18743:2015 (podrobnejšie informácie sú k dispozícii aj v prílohách A a B k uvedenej norme). Dvadsaťgramové vzorky z piatich ošípaných sa zmiešajú a vyšetria s použitím metódy opísanej v oddiele I. Takto sa musia vyšetriť vzorky z 20 skupín po piatich ošípaných. Ak sa dosiahne pozitívny výsledok latexového aglutinačného testu v skupine piatich ošípaných, odoberú sa z každej ošípanej v skupine ďalšie vzorky s hmotnosťou 20 g a každá vzorka sa vyšetrí samostatne s použitím metódy opísanej v oddiele I. Ak sa dosiahne pozitívny alebo neistý výsledok latexového aglutinačného testu, najmenej 20 g svaloviny ošípaných sa musí poslať do národného referenčného laboratória na potvrdenie s použitím normy ISO 18743:2015 alebo jednej z rovnocenných metód, ako sa opisuje vyššie. Na účely konzervácie a identifikácie na úrovni druhov v referenčnom laboratóriu EÚ alebo v národnom referenčnom laboratóriu sa vzorky parazitov musia uchovávať v 70 – 90 % etylalkohole (konečná koncentrácia). Po odbere parazitov sa musia pozitívne tekutiny dekontaminovať zahriatím na minimálne 60 °C.“