PRÍLOHA III

Odber vzoriek a testovanie uvedené v článkoch 4 a 7

1. Odber vzoriek a testovanie na účely úradných detekčných prieskumov, ako sa uvádza v článku 4 ods. 1 a 2, sa vykonávajú takto: odber vzoriek, ktorý zahŕňa vzorku pôdy odobratú so štandardnou mierou odberu vzoriek aspoň 1 500 ml pôdy na hektár z minimálne 100 vpichov/ha podľa možnosti v pravouhlej mriežke so šírkou väčšou ako 5 metrov a dĺžkou menšou ako 20 metrov medzi miestami vzorkovania, ktoré sú rozmiestnené po celej výrobnej prevádzke. Celá vzorka sa použije na ďalšie skúmanie, t. j. extrakciu cýst, identifikáciu druhov a prípadne určenie patotypu/virulentnej skupiny. Testovanie s použitím týchto metód extrakcie špecifikovaného škodcu, ktoré sú opísané v príslušných validovaných a medzinárodne uznávaných diagnostických protokoloch: a) pokiaľ ide o extrakciu, metódy založené na Fenwickovej nádobe, Schuilingovej odstredivke, elutriátore Seinhorst alebo elutriátore Kort; b) v súvislosti s detekciou a identifikáciou: i) izolácie cýst rodu Globodera zo zvyškov rastlín na základe morfológie cýst, po ktorej nasleduje identifikácia druhu založená na morfológii jednotlivých cýst a nedospelých jedincov v spojení s konvenčným testom PCR podľa Bulman & Marshall, 1997 (1) (v prípade pochybnosti o výskyte druhu G. tabacum sa môže navyše vykonať konvenčný test PCR podľa Skantar et al., 2007 (2); ii) izolácia cýst rodu Globodera zo zvyškov rastlín na základe morfológie cýst, po ktorej nasleduje identifikácia druhu na základe morfológie jednotlivých cýst a nedospelých jedincov v kombinácii s testom PCR v reálnom čase na základe Gamel et al., 2017 (3); iii) izolácia cýst háďatka zo zvyškov rastlín, po ktorej nasleduje detekcia druhov s testom PCR v reálnom čase na základe Gamel et al., 2017 (3).

2. Odber vzoriek na účely úradného monitorovacieho prieskumu, ako sa uvádza v článku 7, sa vykonáva v súlade s jedným z týchto postupov: a) odber vzoriek uvedený v bode 1 s minimálnou frekvenciou odberu vzoriek aspoň 400 ml/ha; b) cielený odber vzoriek s minimálnym objemom 400 ml pôdy po vizuálnej prehliadke koreňov, na ktorých sú viditeľné príznaky; alebo c) odber vzoriek s minimálnym objemom 400 ml pôdy spojenej so zemiakmi po zbere, ak je možné vysledovať výrobnú prevádzku, v ktorej sa zemiaky vypestovali. Testovanie na účely úradného monitorovacieho prieskumu, ako sa uvádza v článku 7, sa vykonáva v súlade s bodom 1.

3. Odchylne od bodu 1 sa štandardná frekvencia odberu vzoriek môže znížiť na minimálne 400 ml pôdy/ha v každom z týchto prípadov: a) existuje písomný dôkaz o tom, že počas šiestich rokov pred úradným detekčným prieskumom sa vo výrobnej prevádzke nepestovali ani nevyskytovali zemiaky alebo iné rastliny uvedené v bode 1 prílohy I; b) počas posledných dvoch po sebe nasledujúcich úradných detekčných prieskumov sa vo vzorkách s objemom 1 500 ml pôdy/ha nezistil výskyt žiadnych exemplárov špecifikovaného škodcu ani sa po prvom úradnom detekčnom prieskume nepestovali žiadne zemiaky ani iné rastliny uvedené v bode 1 prílohy I, okrem rastlín, v prípade ktorých sa podľa článku 4 ods. 1 vyžaduje úradný detekčný prieskum; c) počas posledného úradného detekčného prieskumu, ktorý musel pozostávať zo vzorky s veľkosťou aspoň 1 500 ml pôdy/ha, sa nenašiel žiaden exemplár špecifikovaného škodcu ani cysty špecifikovaného škodcu bez živého obsahu ani sa od vykonania posledného úradného detekčného prieskumu nepestovali žiadne zemiaky alebo iné rastliny uvedené v bode 1 prílohy I, okrem rastlín, v prípade ktorých sa podľa článku 4 ods. 1 vyžaduje úradný detekčný prieskum.

4. Frekvencia odberu vzoriek sa môže znížiť v prípade polí väčších ako 8 ha a 4 ha (v uvedenom poradí) v každom z týchto prípadov: a) v prípade štandardnej frekvencie odberu vzoriek uvedenej v bode 1 sa z prvých 8 ha odoberajú vzorky s frekvenciou uvedenou v danom bode, ale pre každý ďalší hektár sa frekvencia môže znížiť na minimálne 400 ml pôdy/ha; b) v prípade zníženej frekvencie odberu vzoriek uvedenej v bode 3 sa z prvých 4 ha odoberajú vzorky s frekvenciou uvedenou v danom bode, ale pri každom ďalšom hektári sa frekvencia môže znížiť na minimálne 200 ml pôdy/ha.

5. Kým sa špecifikovaní škodcovia nezistia v dotknutej výrobnej prevádzke, môžu sa pri ďalších úradných detekčných prieskumoch uvedených v článku 3 ods. 1 využívať redukované vzorky, ako sa uvádza v bodoch 3 a 4.

6. Štandardná veľkosť vzorky pôdy sa môže zmenšiť na minimálne 200 ml pôdy/ha, ak sa výrobná prevádzka nachádza v oblasti vyhlásenej za oblasť bez výskytu špecifikovaného škodcu a je označená, udržiavaná a pod dohľadom v súlade s príslušnými medzinárodnými normami pre rastlinolekárske opatrenia (ISPM č. 4) (4).

7. Minimálna veľkosť vzorky pôdy je vo všetkých prípadoch 200 ml pôdy na výrobnú prevádzku.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997). Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR). New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 25, 123 – 129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology 39(2), 133 – 144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017). Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii. Nematology 19 (7):789 – 804.

(4) ISPM 4. 1995.Requirements for the establishment of pest free areas. Rome, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/.