Úradný vestník L 037 , 07/02/1987 S. 0033 - 0043

Fínske špeciálne vydanie: Kapitola 11 Zväzok 11 S. 0378

Švédske špeciálne vydanie: Kapitola 11 Zväzok 11 S. 0378



Protokol k Európskej dohode o výmene reagencií na určovanie krvných skupín VŠEOBECNÉ USTANOVENIA 1. Špecifickosť Činidlo na určovanie krvných skupín [1] musí reagovať so všetkými testovanými krvnými vzorkami, ktoré obsahujú antigén zhodný s protilátkou alebo inou látkou uvedenou na štítku. Pri použití činidla podľa metódy odporúčanej výrobcom nesmú byť známky žiadneho z nasledovných faktorov alebo úkazov: a) hemolytické vlastnosti; b) protilátky alebo iné substancie mimo tých, ktoré sú uvedené na štítku; c) bakteriálne produkty, ktoré môžu spôsobiť klamlivé pozitívne alebo negatívne reakcie; d) nepravé zhlukovanie krviniek tvorbou stĺpčekov krviniek e) javy pro-zóny 2. Účinnosť Titer sa meria vytvorením následných dvojnásobných roztokov činidla za skúmania v príslušnom médiu. Do každého roztoku sa pridá rovnaký objem suspenzie červených krviniek. Titer je prevrátenou hodnotou hodnoty predstavujúcej najvyššie zriedenie séra, v ktorom nastane reakcia, kým zriedenie sa vypočítava bez zahrnutia objemu korpuskulárnej suspenzie do celkového objemu. V prípadoch anti-A, anti-B a iných činidiel určených na použitie na podložné sklíčka sa avidita vyjadruje prostredníctvom času, ktorý je potrebný na zhlukovanie na sklíčku. 3. Medzinárodné normy a univerzálne jednotky Medzinárodné normy zaviedla Svetová zdravotnícka organizácia pre reagencie na určovanie krvných skupín anti-A a anti-B a nekompletné anti-D a sú v procese zavádzania pre reagencie na určovanie krvných skupín iných špecifickostí. Medzinárodný normovaný preparátpodľa definície obsahuje určitý počet univerzálnych jednotiek na mg alebo ml a táto definícia je nezávislá na pozorovaných titroch proti príslušným preparátom červených krviniek [2] 4. Stabilita a trvanlivosť Každé činidlo by si malo za podmienok skladovania, ktoré odporúča výrobca, uchovať vlastnosti po dobu minimálne jedného roka. Doba trvanlivosti činidla v tekutej forme, ako je uvedená na štítku, by nemala byť dlhšia ako jeden rok po dátume poslednéhotestu účinnosti s uspokojivým výsledkom. Doba trvanlivosti sa môže predĺžiť na ďalšie jednoročné obdobia opakovanými testami účinnosti. Doba trvanlivosti činidiel v sušenej forme, ako je uvedené na štítku, je v súlade s dôkazmi získanými z experimentov na stabilitu, a schváli ju štátny kontrolný úrad. 5. Uchovávanie Reagencie na určovanie krvných skupín sa môžu uchovávať v tekutom alebo sušenom stave. Suché reagencie sa uchovávajú v atmosfére inertného plynu alebo vo vákuu, v sklenej nádobke, v ktorej sa sušili a ktorá je uzavretá pre ochranu proti vlhkosti. Sušené činidlo nesmie stratiť viac ako 0,5 % svojej hmotnosti, keď sa testuje ďalším sušením oxidom fosforečným pri tlaku nepresahujúcom 0,02 mm ortute po dobu 24 hodín. Reagencie sa pripravujú za dezinfekčných opatrení a nie sú bakteriálne kontaminované. Aby sa zabránilo rastu baktérií, príslušný štátny úrad môže rozhodnúť, či sa do činidla (alebo akéhokoľvek rozpúšťadla vydaného spolu so sušenými činidlami) pridá antiseptikum a/alebo antibiotikum, za predpokladu, že aj za prítomnosti pridanej substancie spĺňa činidlo požiadavky na špecifickosť a účinnosť. Séra ľudského pôvodu na určovanie krvných skupín musia obsahovať minimálne 2,5 mg bielkovinového dusíka na 1 ml tekutého alebo rekonštituovaného séra. Reagencie by mali byť aj v tekutom stave aj po rekonštitúcii číre a nemali by obsahovať žiadne usadeniny, gél ani viditeľné čiastočky. 6. Zafarbenie Reagencie na určovanie krvných skupín určené na medzinárodné výmeny by sa, pokiaľ možno, nemali umelo farbiť minimálne kým sa nedosiahne medzinárodná dohoda o jednotnom systéme. Pridané farbivo nesmie mať vplyv na špecifickú reakciu. 7. Vydávanie a množstvo Reagencie na určovanie krvných skupín sa vydávajú takým spôsobom a v takom množstve, aby činidlo v jednej nádobke bolo postačujúce na vykonanie testov s pozitívnymi a negatívnymi kontrolnými krvinkami, mimo testov vykonaných s neznámymi krvinkami. Objem v jednej nádobke by mal byť taký, aby jeho obsah v prípade potreby postačil na vykonanie príslušných testov účinnosti popísaných v tomto protokole. 8. Záznamy a vzorky Výrobné laboratórium vedie písomné záznamy o všetkých krokoch pri výrobe a kontrole činidiel na určovanie krvných skupín. Dostatočné vzorky všetkých vydaných činidiel sa uchovajú v laboratóriu až do doby, keď bude dôvod predpokladať, že sa daná várka už nepoužíva. 9. Klasifikácia činidiel Reagencie použité na určovanie krvných skupín môžu obsahovať substancie ľudského, živočíšneho a rastlinného (alebo minerálneho) pôvodu, z ktorých niektoré tvoria aktívnu zložku a ostatné sú pomocnými látkami na zvýšenie aktivity alebo udržiavanie stability činidla. Tieto reagencie boli z technických dôvodov rozdelené do troch katogórií podľa pôvodu ich aktívnych zložiek. Neznamená to, že reagencie ľudského pôvodu obsahujú výhradne substancie ľudského pôvodu alebo že živočíšne alebo rastlinné reagencie nemôžu obsahovať substancie ľudského pôvodu. 10. Štítky, informačné letáky a certifikáty Na každú nádobku sa prilepí štítok v anglickom a francúzskom jazyku, vytlačený čiernou farbou na bielom papieri. Obsahuje nasledovné informácie: 1. Meno a adresa výrobcu; 2. Názov činidla, ako je uvedený v hlavičke príslušného popisu; 3. Názov a množstvo antiseptika a/alebo antibiotika, ak je prítomné, alebo označenie absencie; 4. Objem alebo v prípade sušeného činidla objem a zloženie tekutiny potrebnej na rekonštituovanie; 5. Dátum trvanlivosti; 6. Číslo série. Tento štítok alebo štítok na krabici s viacerými konečnými nádobkami alebo sprievodný leták k nádobkám má navyše obsahovať nasledovné údaje: 1. Plné meno a adresa výrobcu; 2. Názov činidla, ako je uvedený v hlavičke príslušného popisu; 3. Objem alebo v prípade sušeného činidla objem a zloženie tekutiny potrebnej na rekonštituovanie; 4. Dátum posledného testu účinnosti; 5. Dátum trvanlivosti (ak existuje); 6. Číslo série 7. Adekvátny popis metódy použitia, ktorú odporúča výrobca; 8. Podmienky pre skladovanie neotvorených ampuliek a bezpečnostné opatrenia po otvorení; 9. Presné zloženie, vrátane antiseptika a/alebo antibiotika, ak je prítomné; 10. Prehlásenie, či produkt obsahuje alebo neobsahuje substancie ľudského pôvodu. Každú zásielku bude sprevádzať certifikát, ako je stanovené v článku 4 tejto dohody a prílohy k tomuto protokolu. Príklady štítkov a letákov sú priložené k súčasnému protokolu. ŠPECIFICKÉ USTANOVENIA A. SÉRA ĽUDSKÉHO PÔVODU NA URČOVANIE KRVNÝCH SKUPÍN a) SÉRA ĽUDSKÉHO PÔVODU NA URČOVANIE SKUPÍN AB0 i) Anti-A sérum na určovanie krvných skupín (ľudské) Anti-A sérum pochádza z krvi vybraných ľudí skupiny B, ktorí mohli alebo nemuseli byť imunizovaní červenými krvinkami skupiny A alebo špecifickou látkou skupiny A. Anti-A sérum zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén A, t. j. krvinky krvných skupín A a AB, vrátane podskupín A1, A2, A1B, A2B, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén A, t. j. krvinky skupín 0 a B. Účinnosť Titrácia Anti-A sérum sa titruje oddelene proti suspenziám krviniek A1, A2 a A2B súbežne s rekonštituovaným ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-A séra s rovnakým objemom suspenzie krvniniek A1,A2 a A2B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. ii) Anti-B sérum na určovanie krvných skupín (ľudské) Anti-B sérum pochádza z krvi vybraných ľudí skupiny A, ktorí mohli alebo nemuseli byť imunizovaní červenými krvinkami skupiny B alebo špecifickou látkou skupiny B. Anti-B sérum zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén B, t. j. krvinky krvných skupín B a AB, vrátane podskupín A1, A2, A1B, A2B, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén B, t. j. krvinky skupín 0 a A. Účinnosť Titrácia Anti-B sérum sa titruje oddelene proti suspenziám krviniek B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-B séra s rovnakým objemom suspenzie krvniniek B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. iii) Anti-A + anti-B sérum (skupina 0) na určovanie krvných skupín (ľudské) Anti-A + anti-B sérum (skupina 0) pochádza z krvi vybraných ľudí skupiny 0, ktorí mohli alebo nemuseli byť imunizovaní červenými krvinkami skupiny A a skupiny B alebo špecifickou látkou skupiny A a skupiny B. Anti-A + anti-B sérum (skupina 0) zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú aglutinogény A alebo B alebo oboje, t. j. krvinky krvnej skupiny A, vrátane podskupín A1 a A2, skupiny B a skupiny AB, vrátane podskupín A1B, A2B, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce aglutinogén A alebo B, t. j. tie zo skupiny 0. Zhlukuje ľudské červené krvinky obsahujúce antigén Ax (Ay alebo Ao), ktoré vo všeobecnosti nezhlukuje anti-A sérum pochádzajúce od darcov zo skupiny B. Účinnosť Titrácia Anti-A + anti-B sérum (skupina 0) sa titruje oddelene proti suspenziám krviniek A1 a A2 súbežne s rekonštituovaným ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. Tiež sa titruje proti suspenzii krviniek skupiny B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra na určovanie krvných skupín alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-A + anti-B séra (skupina 0) s rovnakým objemom suspenzie krviniek A1 a A2 s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. Pri zmiešaní anti-A + anti-B séra (skupina 0) s rovnakým objemom suspenzie krvniniek B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. Pri zmiešaní anti-A + anti-B séra (skupina 0) s rovnakým objemom suspenzie krvniniek Ax (Ay alebo Ao) s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa pri teplote od 18 do 25 °C malo zhlukovanie objaviť naskôr za čas nie dlhší ako päť minút. b) SÉRA ĽUDSKÉHO PÔVODU NA URČENIE Rh FAKTORU Séra na určovanie Rh faktoru krvnej skupiny, pri akejkoľvek špecifickosti, môžu byť ktoréhokoľvek z oboch typov odlišujúcich sa v podmienkach, za ktorých sa dosahuje zhlukovanie zhodných krviniek. Určité séra, ktoré sú všeobecne známe ako "úplné", zhlukujú krvinky vo fyziologickom roztoku. Pri iných, ktoré sú známe ako "nekompletné", sa aglutinácia môže dosiahnuť len za prítomnosti istých koloidov, ako napríklad hovädzieho albumínu alebo pomocou iných špeciálnych metód. Séra sa používajú podľa podmienok, ktoré určuje dané prípravné laboratórium. Niektoré "nekompletné" séra môžu tiež zhlukovať zhodné červené krvinky suspendované v ich vlastnom sére alebo plazme na sklíčku. Ďalšie požiadavky účinnosti pre séra na určovanie Rh faktoru sa po sprístupnení medzinárodných normovaných preparátov budú musieť skontrolovať. i) Anti-D (anti-Rh0) sérum na určenie krvných skupín (ľudské) Anti-D sérum pochádza z krvi jedného alebo viacerých ľudí imunizovaných antigénom D systému Rh. Reaguje s ľudskými červenými krvinkami, ktoré obsahujú antigén D, ale nie s tými ľudskými krvinkami, ktoré neobsahujú antigén D. Účinnosť Titrácia Úplné anti-D séra majú titer nie menej ako 32 proti bunkám CcDee v roztoku obsahujúcom 9 gramov chloridu sodného na liter. Nekompletné anti-D sérum sa titruje oddelene proti krvinkám CcDee súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom nekompletného anti-D (anti-Rh0) séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. Má účinnosť nie menej ako 32 univerzálnych jednotiek. Okrem reagovania so všetkými červenými krvinkami, ktoré obsahujú antigén D, by malo sérum, pokiaľ možno, reagovať s krvinkami obsahujúcimi antigén Du. Stanovenie avidity Anti-D séra určené na mikroskopický test Diamonda a Abelsona by pri zmiešaní na sklíčku s rovnakým objemom 40–50 % – nej suspenzie krvniniek CcDee pri teplote približne 40 °C mali vykazovať viditeľné zhlukovanie do 30 sekúnd a zhlukovanie by sa malo ukončiť do 120 sekúnd. ii) Anti-C (anti-Rh') sérum na určenie krvných skupín (ľudské) Anti-C sérum pochádza z krvi jedného alebo viacerých ľudí imunizovaných aglutinogénom C systému Rh. Reaguje s ľudskými červenými krvinkami, ktoré obsahujú antigén C, ale nie s tými ľudskými krvinkami, ktoré neobsahujú antigén C. Sem je zahrnutý aj antigén Cw. Väčšina diagnostických anti-C sér obsahuje "úplné" anti-C s "nekompletným" anti-D. Tieto séra sú preto špecifické pre antigén C len pri suspenzii testovaných buniek v roztoku 9 gramov chloridu sodného na liter. Účinnosť Titrácia Kompletné alebo nekompletné anti-D séra by mali mať titer nie menej ako 8 proti bunkám Ccddee. Stanovenie avidity Anti-C séra určené na mikroskopický test Diamonda a Abelsona (a ktoré nesmú obsahovať žiadnu formu anti-D) by pri zmiešaní na sklíčku s rovnakým objemom suspenzie buniek Ccddee s objemovou frakciou od 0,4 do 0,5 pri teplote približne 40 °C mali vykazovať viditeľné zhlukovanie do 30 sekúnd a zhlukovanie by sa malo ukončiť do 120 sekúnd. iii) Anti-E (anti-Rh') sérum na určenie krvných skupín (ľudské) Anti-E sérum pochádza z krvi jedného alebo viacerých ľudí imunizovaných antigénom E systému Rh. Reaguje s ľudskými červenými krvinkami, ktoré obsahujú antigén E. Účinnosť Titrácia Úplné alebo nekompletné anti-E séra by mali mať titer nie menej ako 8 proti bunkám ccddEe. Stanovenie avidity Anti-E séra určené na mikroskopický test Diamonda a Abelsona (a ktoré musia obsahovať nejakú formu anti-D) by pri zmiešaní na sklíčku s rovnakým objemom suspenzie buniek ccddEe s objemovou frakciou od 0,4 do 0,5 pri teplote približne 40 °C mali vykazovať viditeľné zhlukovanie do 30 sekúnd a zhlukovanie by sa malo ukončiť do 120 sekúnd. iv) Anti-D + anti-C (anti-Rh0rh') sérum na určenie krvných skupín (ľudské) Anti-D + anti-E (anti-Rh0rh') sérum na určenie krvných skupín (ľudské) Séra špecifickosti anti-D + C a špecifickosti anti-D + E sa môžu získať priamo z krvi imunizovaných jedincov alebo sa môžu pripraviť zmiešaním anti-D s anti-C alebo anti-E séra. V danom sére musia byť zároveň aktívne protilátky za podmienok reakcie stanovených výrobcom. Každé sérum musí reagovať so všetkými typmi červených krviniek, ktoré by reagovali s ktoroukoľvek s protilátok zložky, a nesmie reagovať s červenými krvinkami, ktoré neobsahujú ani antigén C ani D v prípade anti-D + C a ani antigén D ani E v prípade anti-D + E. Titre by nemali byť menej ako tie, ktoré sú určené pre protilátky zložky, ale v prípade anti-D + C (čo je bežná kombinácia v sére imunizovaných ľudí) sa vyžaduje, aby titer anti-C nebol menej ako 32 a v prípade anti-D + E sa vyžaduje, aby titer anti-E nebol menej ako 8. Keď je sérum určené na mikroskopický test Diamonda a Abelsona, doby na zhlukovanie všetkých reagujúcich typov červených krviniek by nemali byť kratšie ako tie, ktoré sú stanovené pre protilátky zložky. B. REAGENCIE INÉHO AKO ĽUDSKÉHO PÔVODU a) SÉRA ĽUDSKÉHO PÔVODU NA URČOVANIE SKUPÍN AB0 i) Anti-A sérum na určovanie krvných skupín (živočíšne) Anti-A sérum pochádza z krvi zvierat, ktoré mohli alebo nemuseli byť imunizované červenými krvinkami skupiny A alebo špecifickou látkou skupiny A. Anti-A sérum zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén A, t. j. krvinky krvných skupín A a AB, vrátane podskupín A1, A2, A1B a A2B, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén A, t. j. krvinky skupín 0 a B. Účinnosť Titrácia Anti-A sérum sa titruje oddelene proti suspenziám červených krviniek A1, A2 a A2B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom [3]. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-A séra s rovnakým objemom suspenzie krvniniek A1, A2 a A2B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. ii) Anti-B sérum na určovanie krvných skupín (živočíšne) Anti-B sérum pochádza z krvi zvierat, ktoré mohli alebo nemuseli byť imunizované červenými krvinkami skupiny B alebo špecifickými látkami skupiny B. Anti-B sérum zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén B, t. j. krvinky krvných skupín B a AB, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén B, t. j. krvinky skupín 0 a A. Účinnosť Titrácia Anti-B sérum sa titruje oddelene proti suspenziám krviniek B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom [4]. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-B séra s rovnakým objemom suspenzie krvniniek B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. iii) Sérum proti ľudskému globulínu (živočíšne) [5] Antiglobulínové sérum na použitie v sérológii krvných skupín musí obsahovať aglutinačné protilátky proti globulínu IgG a aglutinačné protilátky proti doplnkovým zložkám. Sérum pochádza z krvi zvierat očkovaných injekčne ľudským krvným proteínom. Musí zhlukovať všetky ľudské červené krvinky obalené ľudským IgG a/alebo doplnkovými zložkami. Podľa podmienok stanovených výrobcami nezhlukuje neobalené ľudské červené krvinky bez ohľadu na to, do ktorej skupiny patria. Špecifickosť Špecifickosť antiglobulínového séra na použitie pri sérológii krvných skupín sa musí testovať s ľudskými červenými krvinkami obalenými množstvom protilátok, t. j. s červenými krvinkami, ktorých citlivosť zvýšili ľudské nekompletné protilátky anti-D, anti-K a anti-Fya, s červenými krvinkami, ktorých citlivosť zvýšili nekompletné komplement-viažúce protilátky anti-Lea v prítomnosti čerstvého ľudského séra, s červenými krvinkami, ktorých citlivosť zvýšili tzv. "nekompletné studené protilátky", so zhnednutými červenými krvinkami, ktorých citlivosť zvýšil ľudský IgG a, nakoniec, s 10 rozdielnymi vzorkami neobalených červených krviniek s alebo bez antigénov A a B. Účinnosť Titrácia Antiglobulínové sérum, tak ako sa dodáva, alebo v zriedení odporúčanom na štítku, má silne zhlukovať ľudské červené krvinky obalené ľudským nekompletným anti-D sérom s titrom 4 (alebo menej) proti D-pozitívnym krvinkám, v prípade, ak sa vykoná titrácia metódou náhrady albumínu. Pri rovnakom zriedení by mal zhlukovať K-pozitívne ľudské červené krvinky, ktorých citlivosť zvýšili vybrané slabé protilátky anti-K a Fya-pozitívne červené krvinky, ktorých citlivosť bola zvýšená vybranými slabými protilátkami anti-Fya. Sérum v rovnakom alebo odlišnom zriedení (ako je predpísané na štítku) taktiež zhlukuje ľudské červené krvinky, ktorých citlivosť zvýšili slabé komplement-viažúce nekompletné protilátky anti-Lea v prítomnosti čerstvého séra. Na klinické účely sa vyžaduje, aby sa dal obal všetkých vyššieuvedených typov nekompletných protilátok detekovať jediným roztokom tohto séra. b) REAGENCIE NA URČOVANIE KRVNÝCH SKUPÍN RASTLINNÉHO PÔVODU i) Anti-A činidlo na určovanie krvných skupín (rastlinné) Anti-A činidlo sa pripravuje extrakciou zo semien alebo iných častí vhodnej rastliny, po ktorej nasleduje v prípade potreby čistenie. Anti-A činidlo zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén A, t. j. krvinky krvných skupín A a AB, vrátane podskupín A1, A2, A1B a A2B, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén A, t. j. krvinky skupín 0 a B. Účinnosť Titrácia Anti-A činidlo sa titruje oddelene proti suspenziám červených krviniek A1, A2 a A2B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom. [6] Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-A činidla s rovnakým objemom suspenzie krvniniek A1, A2 a A2B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie každej suspenzie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-A séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. ii) Anti-B činidlo na určovanie krvných skupín (rastlinné) Anti-B činidlo sa pripravuje extrakciou z príslušnej časti vhodnej rastliny, po ktorej nasleduje v prípade potreby čistenie. Anti-B činidlo zhlukuje ľudské červené krvinky, ktoré obsahujú antigén B, t. j. krvinky krvných skupín B a AB, a nezhlukuje ľudské červené krvinky neobsahujúce antigén B, t. j. krvinky skupín 0 a A. Účinnosť Titrácia Anti-B činidlo sa titruje oddelene proti suspenziám krviniek B súbežne s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s ekvivalentným porovnávacím preparátom [7]. Účinnosť séra nemôže byť v žiadnom z prípadov menej ako 64 univerzálnych jednotiek na 1 ml. Stanovenie avidity Pri zmiešaní anti-B činidla s rovnakým objemom suspenzie krvniniek B s objemovou frakciou od 0,05 do 0,1 na sklíčku by sa zhlukovanie malo objaviť najskôr za čas nie dlhší ako dvojnásobok času, za aký sa vykoná ten istý test s rekonštituovaným, ale nezriedeným medzinárodným normovaným preparátom anti-B séra alebo s etalónom ekvivalentnej avidity. [1] V čase schvaľovania súčasnej verzie protokolu a jeho príloh sa zástupcovia zmluvných strán dohodli na tom, že v texte dohody bude namiesto termínu "krvná neznášanlivosť" použitý termín "neznášanlivosť krvných skupín". [2] Účinnosť najšpecifickejších činidiel na určovanie krvných skupín je vyjadrená ako aglutinačný titer pozorovaný v rade roztokov proti rozplýleniu červených krviniek. Titer udáva zriedenie činidla v poslednej zmesi v rade, ktorá vykazuje mikroskopicky viditeľné zhlukovanie.Účinnosť najšpecifickejších činidiel na určovanie krvných skupín, na ktoré existujú medzinárodné normované preparáty (v súčasnosti anti-A, anti-B a neplný anti-D), môže byť vyjadrená v univerzálnych jednotkách (pozri vestník WHO 1954, 10, 937, 941–1950, 3, 301) na základe titrácie neznámych činidiel v porovnaní s medzinárodnou normou alebo štátnou subnormou.Medzinárodné normované preparáty sér na určovanie krvných skupín sa vydávajú v ampulkách obsahujúcich podľa definície 256 univerzálnych jednotiek na ml. Je možné ich získať bezplatne z Medzinárodného laboratória pre biologické normy WHO, Statens Seruminstitut v Kodani.Nasledovná tabuľka uvádza príklad porovnávacej titrácie medzinárodného normovaného séra anti-A (S) a "neznámeho" činidla anti-A (U) proti červeným krvinkám A1 a červených krviniek A2B. [3] Medzinárodný normovaný preparát je ľudského pôvodu; ekvivalentný porovnávací preparát v prípade použitia môže alebo nemusí byť ľudského pôvodu. [4] Medzinárodný normovaný preparát je ľudského pôvodu; ekvivalentný porovnávací preparát v prípade použitia môže alebo nemusí byť ľudského pôvodu. [5] Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Lancet, iii 5Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Brit. J. exp. Path, 26, 255. [6] Medzinárodný normovaný preparát je ľudského pôvodu; ekvivalentný porovnávací preparát v prípade použitia môže alebo nemusí byť ľudského pôvodu. [7] Medzinárodný normovaný preparát je ľudského pôvodu; ekvivalentný porovnávací preparát v prípade použitia môže alebo nemusí byť ľudského pôvodu. -------------------------------------------------- PRÍKLADY ŠTÍTKU RADA EURÓPY EURÓPSKA DOHODA O VÝMENE ČINIDIEL NA URČOVANIE KRVNÝCH SKUPÍN a) sérum liquide 1. Laboratoire X, Amsterdam 2. Sérum anti-A (humain) 3. N3Na 0,1 % 4. 5 ml 5. 7 septembre 1965 6. No 1 2 3 4 b) sérum desséché 1. Laboratoire X, Amsterdam 2. Sérum anti-B (animal) 3. Mersalate 0,1 % 4. Reconstiruer avec 5 ml d'eau distillée 5. 31 décembre 1968 6. No 4 3 2 1 -------------------------------------------------- PRÍKLAD INFORMAČNÉHO LETÁKU RADA EURÓPY EURÓPSKA DOHODA O VÝMENE ČINIDIEL NA URČOVANIE KRVNÝCH SKUPÍN 1. Centrálne transfúzne laboratórium, 1 Main Street, Metropolis, Westland 2. Anti-E (anti-Rh″) sérum (ľudské) 3. 10 ml 4. Dátum posledného testu na aktivitu: 30. máj 1961 5. Dátum trvanlivosti: 30. máj 1962 6. Číslo 5432 7. Červené krvinky na testovanie sa musia raz alebo viackrát premyť roztokom NaCl s koncentráciou 9 g/l. Suspenzia erytrocytov s objemovou frakciou približne 0,03 sa pripraví zmiešaním jednej jednotky alebo kvapky zhustených červených krviniek a 30 jednotiek alebo kvapiek izotonického roztoku NaCl. V praxi sa sila suspenzie môže hodnotiť primeranou kontrolou. Malá kvapka séra sa Pasteurovou pipetou kvapne do zrážacej trubice (6 mm x 30 mm) a pridá sa rovnaká kvapka suspenzie červených krviniek. (V praxi sa môže dosiahnuť úsporné narábanie tým, že sa sérum a bunková suspenzia dodajú pomocou pipiet s označeným objemom 10 μl). Obsah trubice sa zmieša a inkubuje pri teplote 37 °C dve hodiny. Obsah trubice sa potom opatrne prenesie na mikroskopické sklíčko a jemne sa naň rozotrie. Pokiaľ je zhlukovanie pozorovateľné voľným okom, sklíčko sa preskúma na prítomnosť a stupeň aglutinácie pod mikroskopom. 8. Skladujte pri teplote – 20 °C alebo nižšej. Ak sa má použiť po dni otvorenia, pridajte 0,1 ml roztoku s obsahom 100 gramov azidu sodného na liter. 9. Ľudské anti-E ("anti-Rh") sérum: 5 ml; roztok obsahuje 300 gramov hovädzieho albumínu na liter: 5 ml. 10. Tento produkt obsahuje substancie ľudského pôvodu. -------------------------------------------------- PRÍLOHA K PROTOKOLU RADA EURÓPY EURÓPSKA DOHODA O VÝMENE ČINIDIEL NA URČOVANIE KRVNÝCH SKUPÍN CERTIFIKÁT (Článok 4) NEOODEĽOVAŤ OD ZÁSIELKY … (miesto) | … (dátum) | | Počet balení | Dolupodpísaný osvedčuje, že zásielka | … | … | Označené | pripravená na základe zodpovednosti… | … | … | … | … | Číslo série | jedného z orgánov uvedených v článku 6 tejto dohody, je v zhode s podmienkami protokolu k dohode a môže sa ihneď dodať príjemcovi | … | (meno a miesto)… | | … | | … (pečiatka) | … (podpis) | … (titul) | --------------------------------------------------