02009R0152 — MT — 26.04.2017 — 005.001

Dan it-test hu maħsub purament bħala għodda ta’ dokumentazzjoni u m’għandu l-ebda effett legali. L-istituzzjonijiet tal-Unjoni m'għandhom l-ebda responsabbiltà għall-kontenut tiegħu. Il-verżjonijiet awtentiċi tal-atti rilevanti, inklużi l-preamboli tagħhom, huma dawk ippubblikati fil-Ġurnal Uffiċjali tal-Unjoni Ewropea u disponibbli f’EUR-Lex. Dawk it-testi uffiċjali huma aċċessibbli direttament permezz tal-links inkorporati f’dan id-dokument

►B REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 152/2009 tas-27 ta' Jannar 2009 li jistabbilixxi l-metodi ta' teħid ta' kampjuni u analiżi għall-kontroll uffiċjali tal-għalf (Test b’relevanza għaż-ŻEE) (ĠU L 054 26.2.2009, p. 1)

Emendat bi:









▼B

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 152/2009

tas-27 ta' Jannar 2009

li jistabbilixxi l-metodi ta' teħid ta' kampjuni u analiżi għall-kontroll uffiċjali tal-għalf

(Test b’relevanza għaż-ŻEE)







▼M3

Artikolu 1

Il-kampjunar għall-kontroll uffiċjali tal-għalf, b’mod partikolari biex jiġu ddeterminati l-kostitwenti, inkluż materjal li fih organiżmi ġenetikament modifikati (GMOs), jikkonsisti minnhom jew jiġi prodott minnhom, l-addittivi tal-għalf kif definiti fir-Regolament (KE) Nru 1831/2003 tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill ( 1 ), u s-sustanzi mhux mixtieqa kif definiti fid-Direttiva 2002/32/KE tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill ( 2 ), għandu jsir skont il-metodi stabbiliti fl-Anness I.

Il-metodu ta’ kampjunar stabbilit fl-Anness I huwa applikabbli biex jiġi kkontrollat l-għalf bil-għan li jiġu ddeterminati r-residwi mill-pestiċidi kif definit fir-Regolament (KE) Nru 396/2005 tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill ( 3 ) u biex tiġi vverifikata l-konformità mar-Regolament (UE) Nru 619/2011.

▼B

Artikolu 2

Il-preparazzjoni tal-kampjuni għall-analiżi u l-espressjoni tar-riżultati għandha ssir skont il-metodi stabbiliti fl-Anness II.

Artikolu 3

L-analiżi għall-kontroll uffiċjali tal-għalf għandha ssir bl-użu tal-metodi stabbiliti fl-Anness III (Metodi ta' analiżi biex tiġi kkontrollata l-kompożizzjoni tal-materjal tal-għalf u l-għalf kompost), fl-Anness IV (Metodi ta' analiżi biex jiġi kkontrollat il-livell ta' addittivi awtorizzati fl-għalf) u fl-Anness VI (Metodi ta' analiżi għad-determinazzjoni ta' kostitwenti li ġejjin mill-annimali għall-kontroll uffiċjali tal-għalf).

Artikolu 4

Il-valur ta' enerġija tal-għalf kompost għat-tjur għandu jiġi kkalkulat skont l-Anness VII.

Artikolu 5

Il-metodi ta' analiżi għall-kontroll tal-preżenza illegali ta' addittivi li m’għadhomx awtorizzati fl-għalf stabbiliti fl-Anness VIII għandhom jintużaw għal skopijiet ta' konferma.

Artikolu 6

Id-Direttivi 71/250/KEE, 71/393/KEE, 72/199/KEE, 73/46/KEE, 76/371/KEE, 76/372/KEE, 78/633/KEE, 81/715/KEE, 84/425/KEE, 86/174/KEE, 93/70/KEE, 93/117/KE, 98/64/KE, 1999/27/KE, 1999/76/KE, 2000/45/KE, 2002/70/KE u 2003/126/KE huma revokati.

Ir-referenzi għad-Direttivi revokati għandhom jiġu interpretati bħala referenzi għal dan ir-Regolament u għandhom jinqraw skont it-tabelli ta' korrelazzjoni fl-Anness IX.

Artikolu 7

Dan ir-Regolament għandu jidħol fis-seħħ fl-għoxrin jum ta' wara l-pubblikazzjoni tiegħu f’Il-Ġurnal Uffiċjali tal-Unjoni Ewropea.

Dan għandu japplika mis-26 ta' Awwissu 2009.

Dan ir-Regolament għandu jorbot fl-intier tiegħu u għandu japplika direttament fl-Istati Membri kollha.

▼M3









ANNESS I

METODI TA’ KAMPJUNAR

1. L-GĦAN U L-KAMP TA’ APPLIKAZZJONI

Il-kampjuni intiżi għall-kontroll uffiċjali tal-għalf għandhom jittieħdu skont il-metodi deskritti hawn taħt. Il-kampjuni miksubin b’dan il-mod jitqiesu rappreżentattivi tal-porzjonijiet kampjunati.

L-għan tal-kampjunar rappreżentattiv hu li tinkiseb frazzjoni żgħira minn lott b’mod li meta tiġi ddeterminata xi karatteristika partikolari ta’ din il-frazzjoni, din tkun tirrappreżenta l-valur medju tal-karatteristika tal-lott. Il-kampjunar mil-lott isir billi ripetutament jittieħdu kampjuni inkrimentali minn għadd ta’ punti partikolari mil-lott. Dawn il-kampjuni inkrimentali jiġu kkumbinati billi jitħalltu hekk li jiffurmaw kampjun wieħed biex minnu jiġu ppreparati kampjuni rappreżentattivi finali permezz ta’ qsim rappreżentattiv.

Jekk minn spezzjoni viżiva l-porzjonijiet tal-għalf li jkunu se jiġu kampjunati jkunu jidhru ta’ kwalità differenti mill-bqija tal-għalf mill-istess lott, dawn il-porzjonijiet jiġu separati mill-bqija tal-għalf u jiġu ttrattati bħala sublott separat. Jekk ma jkunx possibbli li l-għalf jiġi diviż f’sublottijiet separati, l-għalf jiġi kampjunat bħallikieku hu lott wieħed. F’każijiet bħal dawn, dan irid jissemma fir-rapport dwar il-kampjunar.

Meta l-għalf kampjunat skont id-dispożizzjonijiet ta’ dan ir-Regolament jiġi ddeterminat li ma jissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, u jkun parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni, jiġi preżunt li dan japplika għall-għalf kollu f’dak il-lott, kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma jirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

2. DEFINIZZJONIJIET

— Lott : kwantità identifikata ta’ għalf iddikjarata li għandha karatteristiċi komuni, bħalma huma l-oriġini, il-varjetà, it-tip ta’ imballaġġ, il-pakkettist, l-ispeditur jew it-tikkettar, u fil-każ ta’ proċess tal-produzzjoni, unità ta’ produzzjoni minn impjant wieħed bl-użu ta’ parametri tal-produzzjoni uniformi jew numru ta’ tali unitajiet, meta jkunu prodotti f’ordni kontinwa u maħżuna flimkien,

— Porzjon kampjunat : lott jew parti identifikata mil-lott jew mis-sublott,

— Kampjun issiġillat : kampjun issiġillat b’tali mod li ma jkun possibbli l-ebda aċċess għall-kampjun mingħajr ma jitkisser jew jitneħħa s-siġill,

— Kampjun inkrimentali : kwantità meħuda minn punt wieħed fil-porzjon kampjunat,

— Kampjun aggregat : aggregat ta’ kampjuni inkrimentali meħudin mill-istess porzjon kampjunat,

— Kampjun ridott : parti minn kampjun aggregat, miksuba minnu bi proċess ta’ riduzzjoni rappreżentattiva,

— Kampjun finali : parti mill-kampjun ridott jew mill-kampjun aggregat omoġenizzat,

— Kampjun tal-laboratorju : kampjun intenzjonat għal-laboratorju (kif jasal fil-laboratorju) u jista’ jkun il-kampjun finali, ridott jew dak aggregat.

3. DISPOŻIZZJONIJIET ĠENERALI

— Persunal tal-kampjunar: il-kampjuni jittieħdu minn uffiċjali awtorizzati għal dak il-għan mill-awtorità kompetenti,

— Il-kampjun għandu jkun issiġillat b’tali mod li ma jkun possibbli l-ebda aċċess għall-kampjun mingħajr ma jitkisser jew jitneħħa s-siġill. Il-marka tas-siġill għandha tkun identifikabbli b’mod ċar u viżibbli b’mod ċar ukoll. Alternattivament, il-kampjun jista’ jitqiegħed f’riċevitur li jista’ jingħalaq b’tali mod li ma jkunx jista’ jinfetaħ mingħajr ma ssir ħsara permanenti lill-kontenitur jew lir-reċipjent, hekk li l-kontenitur jew ir-reċipjent ma jkunx jista’ jerġa’ jintuża,

— L-identifikazzjonijiet tal-kampjun: il-kampjun irid jiġi mmarkat b’mod permanenti u jrid jiġi identifikat b’mod li ma jkunx hemm xi rabta ambigwa mar-rapport tal-kampjunar,

— Minn kull kampjun aggregat jittieħdu mill-inqas żewġ kampjuni finali: mill-inqas wieħed għall-kontroll (infurzar) u wieħed għall-operatur tan-negozju tal-għalf (difiża). Eventwalment, jista’ jittieħed kampjun finali ta’ referenza. Fil-każ li l-kampjun aggregat sħiħ ikun omoġenizzat, il-kampjuni finali jittieħdu mill-kampjun aggregat omoġenizzat, u dan kemm-il darba din il-proċedura ma tiġix f’kunflitt mar-regoli tal-Istati Membri fejn jidħlu d-drittijiet tal-operatur ta’ negozju tal-għalf.

4. APPARAT

4.1. L-apparat għall-kampjunar irid ikun magħmul minn materjal li ma jikkontaminax il-prodotti li jridu jiġu kampjunati. Apparat li huwa intiż biex jintuża iktar minn darba jrid ikun wieħed li faċli jitnaddaf biex tkun evitata l-kontaminazzjoni kroċjata.

4.2. Apparat rakkomandat għall-kampjunar minn għalf solidu 4.2.1. Kampjunar manwali 4.2.1.1. Pala b’qiegħ ċatt bil-ġnub weqfin. 4.2.1.2. Paletta tal-kampjunar b’qasma twila jew bil-kompartimenti. Il-qisien tal-paletta tal-kampjunar iridu jkunu adattati għall-karatteristiċi tal-porzjon kampjunat (il-fond tal-kontenitur, id-dimensjonijiet tal-ixkora, eċċ.) u għad-daqs tal-partikoli tal-għalf. Fil-każ li l-paletta tal-kampjunar ikollha bosta fetħiet, sabiex jiġi żgurat li l-kampjun jittieħed minn postijiet differenti fil-paletta, il-fetħiet għandhom ikunu separati permezz ta’ kompartimenti jew ta’ fetħiet imtawla, waħda viċin l-oħra. 4.2.2. Kampjunar mekkaniku Għall-kampjunar ta’ għalf fi fluss jista’ jintuża apparat mekkaniku adattat. “Adattat” tfisser li tal-anqas tiġi kampjunata s-sezzjoni kollha tal-għalf fi fluss. Il-kampjunar tal-għalf fi fluss (fi fluss mgħaġġel) jista’ jitwettaq permezz ta’ mekkaniżmi awtomatiċi għall-kampjunar. 4.2.3. Diviżur Jekk possibbli u jekk ikun f’loku, biex jiġu ppreparati kampjuni ridotti b’mod rappreżentattiv, għandu jintuża apparat imfassal biex jiddividi l-kampjun f’partijiet bejn wieħed u ieħor indaqs.

5. REKWIŻITI KWANTITATTIVI DWAR L-GĦADD TA’ KAMPJUNI INKRIMENTALI

— Ir-rekwiżiti kwantitattivi fil-punti 5.1 u 5.2 dwar l-għadd ta’ kampjuni inkrimentali huma applikabbli għal daqsijiet ta’ porzjonijiet kampjunati sa massimu ta’ 500 tunnellata u li jista’ jittieħed minnhom kampjun b’mod rappreżentattiv. Il-proċedura tal-kampjunar deskritta tkun valida bl-istess mod fil-każ ta’ kwantitajiet akbar mid-daqs massimu preskritt tal-porzjon kampjunat kemm-il darba n-numru massimu ta’ kampjuni inkrimentali mogħti fit-tabelli hawn taħt jiġi injorat, fil-każ li n-numru ta’ kampjuni inkrimentali jiġi stabbilit permezz tal-formula square-root mogħtija fil-parti xierqa tal-proċedura (ara l-punt 5.3) u jekk id-daqs minimu tal-kampjun aggregat ikun żdied proporzjonalment. Dan ma jfissirx li lott kbir ma jkunx jista’ jiġi diviż f’sublottijiet iżgħar u jiġi kampjunat kull sublott, skont il-proċedura deskritta fil-punti 5.1 u 5.2.

— Id-daqs tal-porzjon kampjunat irid ikun tali li jkun jista’ jittieħed kampjun minn kull waħda mill-partijiet li tikkostitwih.

— Għal-lottijiet jew sublottijiet kbar ħafna (> 500 tunnellata), u fil-każ ta’ lottijiet li jiġu trasportati jew li jinħażnu b’tali mod li l-kampjunar ma jkunx jista’ jsir skont il-proċedura ta’ kampjunar stipulata fil-punti 5.1 u 5.2 ta’ dan il-Kapitolu, għandha tiġi applikata l-proċedura tal-kampjunar prevista fil-punt 5.3.

— F’każ li l-operatur tan-negozju tal-għalf ikun obbligat bil-liġi li jikkonforma ma’ dan ir-Regolament fil-qafas ta’ sistema ta’ monitoraġġ mandatorja, l-operatur tan-negozju tal-għalf ikun jista’ jiddevja mir-rekwiżiti kwantitattivi kif ipprovdut f’dan il-kapitolu biex jitqiesu l-karatteristiċi operattivi bil-kundizzjoni li l-operatur tan-negozju tal-għalf jkun wera, b’mod li jissodisfa l-awtorità kompetenti, l-ekwivalenza tal-proċedura tal-kampjunar f’dik li hi rappreżentattività, u dan jagħmlu wara li jkun awtorizzat mill-awtorità kompetenti.

— F’każijiet eċċezzjonali, jekk ma jkunx possibbli li wieħed ikompli jaħdem bil-metodu ta’ kampjunar stabbilit fir-rigward tar-rekwiżiti kwantitattivi minħabba l-ħsara kummerċjali li tkun saret lil-lott (dovuta għat-tip ta’ imballaġġar, għall-mezz ta’ trasport, għall-mod kif inħażen, eċċ.), ikun jista’ jiġi applikat metodu alternattiv ta’ kampjunar, sakemm ikun kemm jista’ jkun rappreżentattiv u jiġi deskritt u dokumentat bis-sħiħ.

5.1. Rekwiżiti kwantitattivi rigward kampjuni inkrimentali b’rabta mal-kontroll ta’ sustanzi jew ta’ prodotti ddistribwiti b’mod uniformi fl-għalf

5.1.1. Għalf solidu mhux imballaġġat







Id-daqs tal-porzjon kampjunat L-għadd minimu ta’ kampjuni inkrimentali ≤ 2,5 tunnellati 7 > 2,5 tunnellati √20 darba n-numru ta’ tunnellati li fih il-porzjon kampjunat (1), sa 40 kampjun inkrimentali (*1) Fejn in-numru miksub huwa frazzjoni, dan għandu jitqarreb għan-numru sħiħ li jmiss.

5.1.2. Għalf likwidu mhux imballaġġat







Id-daqs tal-porzjon kampjunat L-għadd minimu ta’ kampjuni inkrimentali ≤ 2,5 tunnellata jew ≤ 2 500 litru 4 (1) > 2,5 tunnellata jew > 2 500 litru 7 (1) (*1) Fil-każ li ma jkunx possibbli li l-likwidu jiġi omoġenizzat, l-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jkun irid jiżdied.

5.1.3. Għalf imballaġġat

L-għalf (solidu u likwidu) jista’ jkun imballaġġat f’boroż, xkejjer, laned, bramel, eċċ. li fit-tabella jissemmew bħala unitajiet. L-unitajiet kbar (≥ 500 kg jew litru) iridu jiġu kampjunati skont id-dispożizzjonijiet previsti għall-għalf mhux imballaġġat (ara l-punti 5.1.1 u 5.1.2)







Id-daqs tal-porzjon kampjunat L-għadd minimu ta’ unitajiet li minnhom irid jittieħed (mill-inqas) kampjun inkrimentali wieħed (1) bejn unità 1 sa 20 unità unità 1 (2) bejn 21 u 150 unità 3 unitajiet (2) bejn 151 u 400 unità 5 unitajiet (2) > 400 unità ¼ tan-√numru ta’ unitajiet li jiffurmaw il-porzjon kampjunat (3), sa 40 unità (*1) Fil-każ fejn il-ftuħ ta’ unità jista’ jaffettwa l-analiżi (eż. għalf imxarrab li jista’ jitħassar) kampjun inkrimentali minnhom ikun l-unità mhux miftuħa. (*2) Għal unitajiet li l-kontenut tagħhom ma jaqbiżx il-1 kg jew litru, kampjun inkrimentali ikun il-kontenut ta’ unità waħda oriġinali. (*3) Fejn in-numru miksub ikun frazzjoni, dan jitqarreb għan-numru sħiħ li jmiss.

5.1.4. Blokok tal-għalf u licks minerali

Mill-inqas jittieħed kampjun minn blokka jew lick għal kull porzjon kampjunat ta’ 25 unità, sa massimu ta’ erba’ blokok jew licks.

Għal blokok jew licks li ma jiżnux aktar minn 1 kg kull wieħed, kampjun inkrimentali għandu jkun il-kontenut ta’ blokka waħda jew lick waħda.

5.1.5. Għalf oħxon/foraġġ







Id-daqs tal-porzjon kampjunat L-għadd minimu ta’ kampjuni inkrimentali (1) ≤ 5 tunnellati 5 > 5 tunnellati √5 darbiet in-numru ta’ tunnellati li jiffurmaw il-porzjon kampjunat (2), sa 40 kampjun inkrimentali (*1) Huwa fatt magħruf li f’ċerti sitwazzjonijiet (eż. għall-ħaxix tal-għalf f’sajlo) ma jkunx possibbli li jittieħdu l-kampjuni inkrimentali meħtieġa mingħajr ma ssir ħsara inaċċettabbli lil-lott. F’sitwazzjonijiet bħal dawn jista’ jiġi applikat metodu alternattiv ta’ kampjunar, u qabel ma jidħol fis-seħħ dan ir-Regolament se tiġi elaborata gwida biex jittieħed kampjun minn dawn il-lottijiet. (*2) Fejn in-numru miksub huwa frazzjoni, dan għandu jitqarreb għan-numru sħiħ li jmiss.

5.2. Rekwiżiti kwantitattivi rigward kampjuni inkrementali b’rabta mal-kontroll ta’ kostitwenti jew sustanzi li x’aktarx jiġu distribwiti mingħajr uniformità fl-għalf

Dawn ir-rekwiżiti kwantitattivi b’rabta ma’ kampjuni inkrimentali jridu jintużaw fis-sitwazzjonijiet li ġejjin:

— il-kontroll tal-aflatossini, l-ergotina tas-segala, il-mikotossini u impuritajiet botaniċi perikolużi oħra f’materjal tal-għalf;

— il-kontroll ta’ kontaminazzjoni kroċjata minn xi kostitwent, inkluż materjal ġenetikament modifikat, jew sustanza li fil-każ tagħha tkun mistennija distribuzzjoni mingħajr uniformità f’materjali tal-għalf.

Fil-każ li l-awtorità ta’ kontroll jiġiha suspett qawwi li t-tali distribuzzjoni mingħajr uniformità sseħħ ukoll fil-każ ta’ kontaminazzjoni kroċjata minn kostitwent jew sustanza f’għalf kompost, ikunu jistgħu jiġu applikati r-rekwiżiti kwantitattivi kif stipulati fit-tabella ta’ hawn taħt.







Id-daqs tal-porzjon kampjunat L-għadd minimu ta’ kampjuni inkrimentali < 80 tunnellata Ara r-rekwiżiti kwantitattivi fil-punt 5.1. L-għadd ta’ kampjuni inkrimentali li jridu jittieħdu jrid jiġi multiplikat bi 2,5. ≥ 80 tunnellata 100

5.3. Rekwiżiti kwantitattivi fir-rigward ta’ kampjuni inkrimentali fil-każ ta’ lottijiet kbar ħafna

Fil-każ ta’ porzjonijiet kampjun kbar ħafna (porzjonijiet kampjun > 500 tunnellata), l-għadd ta’ kampjuni inkrimentali li għandu jittieħed = 40 kampjun inkrimentali + √tunnellati fejn jidħol il-kontroll ta’ sustanzi jew prodotti ddistribwiti b’mod uniformi fl-għalf, jew 100 kampjun inkrimentali + √tunnellati fejn jidħol il-kontroll ta’ kostitwenti jew sustanzi li x’aktarx jiġu distribwiti mingħajr uniformità fil-materjal tal-għalf.

6. REKWIŻITI KWANTITATTIVI FIR-RIGWARD TA’ KAMPJUN AGGREGAT







Hu meħtieġ kampjun aggregat wieħed għal kull porzjon. In-natura tal-għalf Daqs minimu tal-kampjun aggregat (1) (2) 6.1. Għalf mhux imballaġġat 4 kg 6.2. Għalf imballaġġat 4 kg (3) 6.3. Għalf likwidu jew semilikwidu 4 litri 6.4. Blokok tal-għalf jew licks minerali 6.4.1. kull waħda tiżen aktar minn 1 kg 4 kg 6.4.2. kull waħda ma tiżinx aktar minn 1 kg piż ta’ erba’ blokok jew licks oriġinali 6.5. Għalf oħxon/foraġġ 4 kg (4) (*1) Fil-każ li l-għalf fil-kampjun ikun ta’ valur għoli, tkun tista’ tittieħed kwantità iżgħar tal-kampjun aggregat bil-kundizzjoni li dan jiġi deskritt u ddokumentat fir-rapport tal-kampjunar. (*2) Skont id-dispożizzjonijiet tar-Regolament tal-Kummissjoni (UE) Nru 619/2011 tal-24 ta’ Ġunju 2011 li jistabbilixxi l-metodi ta’ teħid ta’ kampjuni u analiżi għall-kontroll uffiċjali tal-għalf fir-rigward tal-preżenza ta’ materjal ġenetikament modifikat li għalih hija pendenti proċedura ta’ awtorizzazzjoni jew li l-awtorizzazzjoni tiegħu skadiet (ĠU L 166, 25.6.2011, p. 9), il-kampjun aggregat biex tiġi vverifikata l-preżenza ta’ materjal ġenetikament modifikat għandu jkun fih mill-inqas 35 000 żerriegħa/qamħa. Dan ifisser li, fil-każ tal-qamħirrum, id-daqs tal-kampjun aggregat irid ikun mill-inqas 10,5 kg u għas-sojja 7 kg. Għal żrieragħ u ċereali oħra bħax-xgħir, il-millieġ, il-ħafur, ir-ross, is-segala, il-qamħ u ż-żerriegħa tar-rapa, id-daqs tal-kampjun aggregat ta’ 4 kg jikkorrispondi għal aktar minn 35 000 żerriegħa. (*3) Fil-każ tal-għalf imballaġġat, jista’ wkoll ma jkunx possibbli li jintlaħaq id-daqs ta’ 4 kg għall-kampjun aggregat, minħabba li dan jiddependi mid-daqs tal-unitajiet individwali. (*4) Jekk dan ikun il-każ għall-għalf oħxon u l-foraġġ bi gravità speċifika baxxa (eż. ħuxlief, tiben), id-daqs tal-kampjun aggregat għandu jkun minn tal-inqas 1 kg.

7. REKWIŻITI KWANTITATTIVI FIR-RIGWARD TA’ KAMPJUNI FINALI

Kampjuni finali

Hija meħtieġa l-analiżi ta’ mill-inqas kampjun finali wieħed. L-ammont fil-kampjun finali li jkun se jiġi analizzat ma għandux ikun inqas minn kif ġej:







Għalf solidu 500 g (1) (2) (3) Għalf likwidu jew semilikwidu 500 ml (1) (*1) Skont id-dispożizzjonijiet tar-Regolament (UE) Nru 619/2011, il-kampjun finali biex tiġi vverifikata l-preżenza ta’ materjal modifikat ġenetikament irid ikollu mill-inqas 10 000 żerriegħa/qamħa. Dan ifisser li, fil-każ tal-qamħirrum, id-daqs tal-kampjun finali jrid ikun mill-inqas 3 000 g u għas-sojja 2 000 g. Għal żrieragħ u qmuħ oħra bħax-xgħir, il-millieġ, il-ħafur, ir-ross, is-segala, il-qamħ u ż-żerriegħa tar-rapa, id-daqs tal-kampjun finali ta’ 500 g jikkorrispondi għal aktar minn 10 000 żerriegħa. (*2) Meta d-daqs tal-kampjun aggregat ikun konsiderevolment inqas minn 4 kg jew litru (ara n-noti tal-qiegħ, il-punt 6), tkun tista’ tittieħed ukoll kwantità iżgħar mill-kampjun finali, bil-kundizzjoni li dan jiġi deskritt u dokumentat fir-rapport tal-kampjunar. (*3) Fil-każ tal-kampjunar tal-legumi, il-qamħ taċ-ċereali u l-ġewż tas-siġar biex jiġi determinat fihomx residwi mill-pestiċidi, id-daqs minimu tal-kampjun finali għandu jkun 1 kg skont id-dispożizzjonijiet tad-Direttiva tal-Kummissjoni 2002/63/KE (ĠU L 187, 16.7.2002, p. 30).

8. METODU TA’ KAMPJUNAR GĦAL LOTTIJIET KBAR ĦAFNA JEW LOTTIJIET MAĦŻUNA JEW TRASPORTAT B’MOD LI MA JKUNX FATTIBBLI LI JSIR KAMPJUNAR TAL-LOTT KOLLU

8.1. Prinċipji ġenerali

Jekk il-mod ta’ trasport jew ta’ ħażna ta’ lott ma jippermettix li jittieħdu kampjuni inkrimentali mil-lott kollu, il-kampjunar ta’ tali lottijiet preferibbilment għandu jsir meta l-lott ikun fi fluss.

Fil-każ ta’ mħażen kbar intiżi biex jaħżnu l-għalf, l-operaturi għandhom jiġu inkoraġġuti jinstallaw tagħmir fil-maħżen li jippermetti l-kampjunar (awtomatiku) mil-lott kollu maħżun.

Fil-każ li jiġu applikati l-proċeduri ta’ kampjunar previsti f’dan il-Kapitolu 8, l-operatur tan-negozju tal-għalf jew ir-rappreżentant tiegħu jiġi infurmat dwar il-proċedura tal-kampjunar. Jekk din il-proċedura ta’ kampjunar tiġi kkontestata mill-operatur tan-negozju tal-għalf jew mir-rappreżentant tiegħu, l-operatur tan-negozju tal-għalf jew ir-rappreżentant tiegħu għandhom jippermettu lill-awtorità kompetenti tieħu kampjuni mil-lott kollu bi spejjeż tagħhom.

8.2. Lottijiet kbar trasportati bil-baħar

8.2.1. Kampjunar dinamiku ta’ lottijiet kbar trasportati bil-baħar

Il-kampjunar ta’ lottijiet kbar fuq il-bastimenti preferibbilment isir filwaqt li l-prodott ikun fi fluss (kampjunar dinamiku).

Il-kampjunar isir għal kull stiva (entità li tkun tista’ tiġi separata fiżikament). L-istivi madankollu jiġu mbattla parzjalment, waħda wara l-oħra, biex is-separazzjoni fiżika inizjali ma tibqax hemm wara t-trasferiment tal-lottijiet f’faċilitajiet tal-ħżin. Il-kampjunar għalhekk jista’ jsir skont is-separazzjoni fiżika inizjali jew skont is-separazzjoni wara t-trasferiment fil-faċilitajiet tal-ħżin.

Il-ħatt ta’ vapur jista’ jdum diversi jiem. Normalment, il-kampjunar isir f’intervalli regolari tul il-perjodu kollu li fih ikun għaddej il-ħatt. Madankollu mhux dejjem ikun fattibbli jew f’loku li jkun hemm spettur uffiċjali preżenti waqt il-kampjunar tul l-operazzjoni kollha tal-ħatt. Għaldaqstant, il-kampjunar jitħalla jsir fuq parti (porzjon kampjunat) mil-lott kollu. L-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jiġi stabbilit billi jittieħed kont tad-daqs tal-porzjon kampjunat.

Meta jittieħed kampjun minn parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni u jinstab li dik il-parti mil-lott ma tissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, jiġi preżunt li l-għalf kollu f’dak il-lott huwa affettwat bl-istess mod, u dan kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma tirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

Anke jekk il-kampjun uffiċjali jittieħed b’mod awtomatiku, il-preżenza ta’ spettur hija neċessarja. Madankollu, meta l-kampjunar awtomatiku jsir skont parametri ddeterminati minn qabel u li ma jkunux jistgħu jinbidlu waqt il-kampjunar, u l-kampjuni inkrimentali jinġabru f’reċipjent issiġillat b’mod li jelimina kull possibbiltà ta’ frodi, il-preżenza ta’ spettur allura tkun meħtieġa biss fil-bidu tal-kampjunar, kull darba li r-reċipjent tal-kampjuni jkun irid jinbidel u fi tmiem il-kampjunar.

8.2.2. Kampjunar tal-lottijiet trasportati bil-baħar permezz ta’ kampjunar statiku

Jekk il-kampjunar isir b’mod statiku, tkun trid tiġi applikata l-istess proċedura kif prevista fil-faċilitajiet ta’ ħżin (sajlos) aċċessibbli minn fuq (ara l-punt 8.4.1).

Il-kampjunar isir fuq il-parti aċċessibbli (minn fuq) tal-lott/stiva. L-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jiġi stabbilit billi jittieħed kont tad-daqs tal-porzjon kampjunat. Meta jittieħed kampjun minn parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni u jinstab li dik il-parti mil-lott ma tissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, jiġi preżunt li l-għalf kollu f’dak il-lott huwa affettwat bl-istess mod, u dan kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma tirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

8.3. Il-kampjunar ta’ lottijiet kbar maħżuna fi mħażen

Għaldaqstant, il-kampjunar irid isir fuq il-parti aċċessibbli tal-lott. L-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jiġi stabbilit billi jittieħed kont tad-daqs tal-porzjon kampjunat. Meta jittieħed kampjun minn parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni u jinstab li dik il-parti mil-lott ma tissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, jiġi preżunt li l-għalf kollu f’dak il-lott huwa affettwat bl-istess mod, u dan kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma tirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

8.4. Il-kampjunar ta’ faċilitajiet ta’ ħażna (sajlos)

8.4.1. Il-kampjunar minn sajlos (faċilment) aċċessibbli minn fuq

Il-kampjunar irid isir fuq il-parti aċċessibbli tal-lott. L-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jiġi stabbilit billi jittieħed kont tad-daqs tal-porzjon kampjunat. Meta jittieħed kampjun minn parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni u jinstab li dik il-parti mil-lott ma tissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, jiġi preżunt li l-għalf kollu f’dak il-lott huwa affettwat bl-istess mod, u dan kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma tirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

8.4.2. Il-kampjunar minn sajlos mhux aċċessibbli minn fuq (sajlos magħluqa)

8.4.2.1. Sajlos mhux aċċessibbli minn fuq (sajlos magħluqa) ta’ > 100 tunnellata

Għalf maħżun f’sajlos bħal dawn ma jistax jitteħidlu kampjun b’mod statiku. Għalhekk, jekk l-għalf maħżun fis-sajlo jrid jittieħed kampjun minnu u ma hemm l-ebda possibbiltà li l-kunsinna tiċċaqlaq, irid isir ftehim mal-operatur li hu jrid jinforma l-ispettur dwar meta jkun se jinħatt is-sajlo hekk li l-kampjunar isir meta l-għalf ikun fi fluss.

8.4.2.2. Sajlos mhux aċċessibbli minn fuq (sajlos magħluqa) ta’ < 100 tunnellata

Il-proċedura tal-kampjunar tinvolvi li f’kontejner tiġi rilaxxata kwantità ta’ bejn 50 u 100 kg biex imbagħad jittieħed il-kampjun minnha. Id-daqs tal-kampjun aggregat jikkorrispondi mal-lott kollu u l-għadd ta’ kampjuni inkrimentali jikkorrispondu mal-kwantità rilaxxata mis-sajlo għal ġo reċipjent biex jittieħed kampjun minnha. Meta jittieħed kampjun minn parti minn lott ta’ għalf tal-istess klassi jew deskrizzjoni u jinstab li dik il-parti mil-lott ma tissodisfax ir-rekwiżiti tal-UE, jiġi preżunt li l-għalf kollu f’dak il-lott huwa affettwat bl-istess mod, u dan kemm-il darba minn valutazzjoni dettaljata ma tirriżulta l-ebda evidenza li l-bqija tal-lott jonqos milli jissodisfa r-rekwiżiti tal-UE.

8.5. Kampjunar ta’ għalf mhux imballaġġat, u f’kontenituri kbar u magħluqa

Spiss, dawn il-lottijiet ikun jista’ jittieħed kampjun minnhom biss wara li jinħattu. F’ċerti każi ma jkunx possibbli li jinħattu fil-post li jaslu fih mal-importazzjoni jew fejn jiġu kkontrollati, u għalhekk il-kampjunar għandu jsir meta jinħattu dawn il-kontenituri.

9. STRUZZJONIJIET GĦAT-TEĦID, IL-PREPARAZZJONI U L-IMBALLAĠĠ TAL-KAMPJUNI

9.1. Ġenerali

Il-kampjuni jridu jittieħdu u jiġu ppreparati kemm jista’ jkun malajr filwaqt li wieħed iżomm f’moħħu l-prekawzjonijiet neċessarji biex ikun żgurat li l-prodott la jinbidel u lanqas jiġi kkontaminat. Kemm l-istrumenti kif ukoll is-superfiċji u l-kontenituri maħsuba biex jiġu f’kuntatt mal-kampjuni għandhom ikunu nodfa u xotti.

9.2. Kampjuni inkrimentali

Mill-porzjon kampjunat kollu jridu jittieħdu kampjuni inkrimentali b’mod aleatorju, u bejn wieħed u ieħor iridu jkunu tal-istess daqs.

Id-daqs tal-kampjun inkrimentali jkun mill-inqas 100 gramma, inkella 25 gramma fil-każ ta’ għalf oħxon jew foraġġ bi gravità speċifika baxxa.

Meta jkunu jridu jittieħdu inqas minn 40 kampjun inkrimentali, skont ir-regoli dwar il-proċedura tal-kampjunar stabbiliti fil-punt 8, id-daqs tal-kampjuni inkrimentali jiġi ddeterminat skont id-daqs mitlub għall-kampjun aggregat li jkun irid jittieħed (ara l-punt 6).

Fil-każ tal-kampjunar ta’ lottijiet żgħar ta’ għalf imballaġġat fejn, skont ir-rekwiżiti kwantitattivi, ikun irid jittieħed numru limitat ta’ kampjuni inkrimentali, kampjun inkrimentali jkun kostitwit mill-kontenut ta’ unità waħda oriġinali li l-kontenut tagħha ma jkunx jaqbeż il-1 kg jew litru.

Fil-każ ta’ kampjunar ta’ għalf imballaġġat u magħmul minn unitajiet żgħar (eż. < 250 g), id-daqs tal-kampjun inkrimentali jiddependi mid-daqs tal-unità.

9.2.1. Għalf mhux imballaġġat

Fejn ikun hemm bżonn, it-teħid ta’ kampjuni jista’ jsir meta l-porzjon kampjunat ikun qiegħed jiġi spustjat (jitgħabba jew jinħatt).

9.2.2. Għalf imballaġġat

Wara li jkun intgħażel l-għadd meħtieġ ta’ unitajiet għall-kampjunar, kif indikat fil-Kapitolu 5, parti mill-kontenut ta’ kull pakkett titneħħa permezz ta’ paletta jew pala. Fejn ikun meħtieġ, il-kampjuni jittieħdu wara li l-unitajiet jitbattlu separatament.

9.2.3. Għalf likwidu jew semilikwidu, omoġenju jew omoġenizzabbli

Wara li jkun intgħażel l-għadd meħtieġ ta’ unitajiet għall-kampjunar, kif indikat fil-Kapitolu 5, jekk ikun meħtieġ il-kontenut jiġi omoġenizzat u jittieħed ammont minn kull unità.

Il-kampjuni inkrimentali jistgħu jittieħdu meta l-kontenut ikun qiegħed jinħatt.

9.2.4. Għalf likwidu jew semilikwidu mhux omoġenizzabbli

Wara li jkun intgħażel l-għadd meħtieġ ta’ unitajiet għall-kampjunar, kif indikat fil-Kapitolu 5, jittieħdu kampjuni minn livelli differenti.

Jistgħu wkoll jittieħdu kampjuni meta l-kontenut ikun qiegħed jinħatt imma l-ewwel frazzjonijiet għandhom jintremew.

F’kull każ, il-volum totali meħud ma għandux ikun inqas minn 10 litri.

9.2.5. Blokok tal-għalf u licks minerali

Wara li jkun intgħażel l-għadd meħtieġ ta’ blokok jew licks għall-kampjunar kif indikat fil-Kapitolu 5, tista’ tittieħed parti minn kull blokka jew lick. F’każ ta’ suspett ta’ blokka jew lick mhux omoġenja, bħala kampjun tista’ tittieħed il-blokka jew il-lick sħiħa.

Għal blokok jew licks li ma jiżnux aktar minn 1 kg kull wieħed, jittieħed bħala kampjun inkrimentali il-kontenut ta’ blokka waħda jew lick waħda.

9.3. Preparazzjoni tal-kampjuni aggregati

Il-kampjuni inkrimentali jitħalltu biex jagħmlu kampjun aggregat wieħed.

9.4. Preparazzjoni tal-kampjuni finali

Il-materjal fil-kampjun aggregat jitħallat tajjeb ( 4 ).

— Kull kampjun jitpoġġa f’kontenitur/reċipjent xieraq. Għandhom jittieħdu l-prekawzjonijiet kollha meħtieġa sabiex tiġi evitata xi bidla fil-kompożizzjoni tal-kampjun, xi kontaminazzjoni jew adulterazzjoni li jistgħu jfiġġu waqt il-ġarr jew il-ħżin.

— Meta jkunu qed jiġu kkontrollati kostitwenti jew sustanzi ddistribwiti b’mod uniformi fl-għalf kollu, il-kampjun aggregat jista’ jitnaqqas b’mod rappreżentattiv għal mill-inqas 2,0 kg jew 2,0 litri (kampjun ridott) ( 5 ), preferibbilment billi jintuża diviżur mekkaniku inkella wieħed awtomatiku. Meta tkun qed tiġi kkontrollata l-preżenza ta’ residwi tal-pestiċidi fil-legumi, fiċ-ċereali u fil-ġewż tas-siġar, id-daqs minimu tal-kampjun ridott ikun 3 kg. Jekk in-natura tal-għalf ma tkunx tippermetti l-użu ta’ diviżur, jew jekk ma jkunx hemm diviżur, allura l-kampjun ikun jista’ jitnaqqas bil-metodu tal-qsim f’erba’ partijiet. Mill-kampjuni ridotti mbagħad jiġu ppreparati l-kampjuni finali (għall-kontroll, id-difiża u r-referenza) ta’ bejn wieħed u ieħor l-istess ammont u b’mod li jikkonformaw mar-rekwiżiti kwantitattivi tal-Kapitolu 7. Meta jkun qed isir kontroll għall-kostitwenti — inkluż xi materjal modifikat ġenetikament - jew għal sustanzi li x’aktarx ikunu se jiġu ddistribwiti mingħajr uniformità fil-materjal tal-għalf, il-kampjun aggregat ikun: — — kompletament omoġenizzat u wara jiġi diviż f’kampjuni finali, jew — imnaqqas għal tal-anqas 2 kg jew 2 litri ( 6 ) billi jintuża diviżur mekkaniku jew wieħed awtomatiku. Fil-każ biss fejn in-natura tal-għalf ma tippermettix l-użu ta’ diviżur, il-kampjun jista’, jekk ikun hemm bżonn, jitnaqqas permezz tal-metodu tal-qsim f’erba’ partijiet. Biex tiġi vverifikata l-preżenza ta’ materjal modifikat ġenetikament fil-qafas tar-Regolament (UE) Nru 619/2011, il-kampjun ridott għandu jkun fih mill-inqas 35 000 żerriegħa/qamħa biex ikunu jistgħu jittieħdu l-kampjuni finali għall-infurzar, id-difiża u r-referenza ta’ mill-inqas 10 000 żerriegħa/qamħa (ara n-nota tal-qiegħ (**) fil-Kapitolu 6 u n-nota tal-qiegħ (*) fil-Kapitolu 7).

9.5. Imballaġġ tal-kampjuni

Il-kontenituri jew il-pakketti għandhom jiġu ssiġillati u ttikkettjati b’tali mod li ma jkunux jistgħu jinfetħu mingħajr ma ssir ħsara lis-siġill. It-tikketta trid tkun inkorporata għalkollox fis-siġill.

9.6. L-ispedizzjoni ta’ kampjuni fil-laboratorju

Il-kampjun għandu jintbagħat mingħajr telf ta’ żmien lil-laboratorju analitiku magħżul, flimkien mal-informazzjoni essenzjali għall-analista.

10. REĠISTRAZZJONI TAL-KAMPJUNI

Kull kampjun irid jiġi reġistrat, hekk li kull porzjon kampjunat u d-daqs tiegħu jiġu identifikati b’mod ċar.

Ir-reġistrazzjoni għandha tinkludi kull devjazzjoni mill-proċedura tal-kampjunar kif previst f’dan ir-Regolament.

Barra milli tkun disponibbli għal-laboratorju uffiċjali ta’ kontroll, ir-reġistrazzjoni trid tkun disponibbli wkoll għall-operatur tan-negozju tal-għalf u/jew il-laboratorju magħżul mill-operatur tan-negozju tal-għalf.









ANNESS II

DISPOŻIZZJONIJIET ĠENERALI DWAR IL-METODI TA’ ANALIŻI TAL-GĦALF

A. PREPARAZZJONI TAL-KAMPJUNI GĦALL-ANALIŻI

1. L-iskop

Il-proċeduri deskritti hawn taħt jikkonċernaw il-preparazzjoni għall-analiżi tal-kampjuni mibgħuta fil-laboratorji tal-kontroll wara l-proċess tal-kampjunar skont id-dispożizzjonijiet stabbiliti fl-Anness I.

Il-kampjuni tal-laboratorju jridu jiġu ppreparati b’tali mod li l-ammonti li jintiżnu, kif stipulat fil-metodi ta’ analiżi, ikunu omoġenji u jirrappreżentaw il-kampjuni finali.

2. Prekawzjonijiet li jridu jittieħdu

Il-proċedura li trid tiġi segwita tiddependi mill-metodi ta’ analiżi li jridu jintużaw, u mill-kostitwenti jew is-sustanzi li jkunu se jiġu kkontrollati. Għalhekk huwa importanti ferm li wieħed jiżgura li l-proċedura tal-preparazzjoni tal-kampjun segwita tkun adattata għall-metodu ta’ analiżi użat u għall-kostitwenti jew is-sustanzi li jkunu se jiġu kkontrollati.

L-operazzjonijiet neċessarji kollha jridu jsiru b’tali mod li kemm jista’ jkun tiġi evitata kemm il-kontaminazzjoni tal-kampjun u kemm kull bidla fil-kompożizzjoni tiegħu.

It-tħin, it-taħlit u l-għarbil għandhom isiru kemm jista’ jkun malajr hekk li l-kampjun kemm jista’ jkun ma jkunx espost għall-arja u d-dawl, jew inkella verament mill-inqas. M’għandhomx jintużaw imtieħen u moli li jistgħu jsaħħnu l-kampjun b’mod sinifikanti.

It-tħin manwali huwa rakkomandat fil-każ ta’ għalf li jkun partikolarment sensittiv għas-sħana. Wieħed irid joqgħod attent u jiżgura li l-apparat innifsu ma jkunx sors ta’ kontaminazzjoni.

Jekk il-preparazzjoni ma tkunx tista’ ssir mingħajr ma taffettwa b’mod sostanzjali l-kontenut umdu tal-kampjun, iddetermina l-kontenut umdu qabel u wara l-preparazzjoni skont il-metodu stabbilit fil-Parti A tal-Anness III.

3. Proċedura

3.1. Proċedura ġenerali

L-alikwota tat-test tittieħed mill-kampjun finali. Il-metodu ta’ formazzjoni ta’ konu u ta’ qsim f’erba’ partijiet mhux rakkomandat għax dan jista’ jwassal għal alikwoti tat-test bi probabbiltà għolja ta’ żball fil-qsim.

3.1.1. Għalf li jista’ jintaħan kif inhu

— Ħallat il-kampjun finali mgħarbul u iġbru ġo kontenitur adattat, nadif, niexef u mgħammar b’tapp li jissiġilla l-arja. Erġa’ ħallat biex tiżgura l-omoġenizzazzjoni sħiħa; dan agħmlu immedjatament qabel ma tiżen l-ammont għall-analiżi (l-alikwota tat-test).

3.1.2. Għalf li jista’ jintaħan wara li jinxef

— Sakemm ma jkunx speċifikat mod ieħor fil-metodi ta’ analiżi, nixxef il-kampjun finali sabiex tbaxxi l-livell tal-kontenut umdu ta’ ġo fih għal bejn 8 u 12 %, skont il-proċedura preliminari ta’ tnixxif deskritta fil-punt 4.3 tal-metodu biex tiġi ddeterminata l-umdità (imsemmi fil-Parti A tal-Anness III). Wara kompli kif indikat fit-taqsima 3.1.1.

3.1.3. Għalf likwidu jew semilikwidu

— Iġbor il-kampjun finali ġo kontenitur adattat, nadif, niexef u mgħammar b’tapp li jissiġilla l-arja. Ħallat sew biex tiżgura l-omoġenizzazzjoni sħiħa; dan agħmlu immedjatament qabel ma tiżen l-ammont għall-analiżi (l-alikwota tat-test).

3.1.4. Għalf ieħor

— Il-kampjuni finali li ma jkunux jistgħu jiġu ppreparati skont waħda mill-proċeduri msemmija hawn fuq għandhom jiġu ttrattati bi kwalunkwe proċedura oħra li tiżgura li l-ammonti li jintiżnu għall-analiżi (l-alikwota tat-test) jkunu omoġenji u rappreżentattivi tal-kampjuni finali.

3.2. Il-proċedura speċifika f’każ ta’ eżami bi spezzjoni viżiva jew bil-mikroskopija jew f’każijiet fejn jiġi omoġenizzat il-kampjun aggregat sħiħ

— Fil-każ ta’ eżami permezz ta’ spezzjoni viżiva (mingħajr l-użu ta’ mikroskopju), jiġi eżaminat il-kampjun tal-laboratorju kollu kemm hu,

— Fil-każ ta’ eżami mikroskopiku, il-laboratorju jista’ jnaqqas il-kampjun aggregat, jew ikompli jnaqqas mill-kampjun ridott. Il-kampjuni finali għall-finijiet ta’ difiża u, eventwalment, għall-finijiet ta’ referenza, jittieħdu skont proċedura ekwivalenti għall-proċedura segwita fil-każ tal-kampjun finali għall-infurzar,

— Fil-każ li l-kampjun aggregat jiġi omoġenizzat kollu kemm hu, il-kampjuni finali jittieħdu mill-kampjun aggregat omoġenizzat.

4. Ħżin tal-kampjuni

Il-kampjuni jridu jinħażnu f’temperatura li ma tibdilx il-kompożizzjoni tagħhom. Il-kampjuni intenzjonati għall-analiżi ta’ vitamini jew sustanzi li huma partikolarment sensittivi għad-dawl għandhom jinħażnu b’mod li l-kampjun ma jiġix affettwat ħażin mid-dawl.

B. DISPOŻIZZJONIJIET MARBUTA MAR-REAĠENTI U MAL-APPARAT UŻAT FIL-METODI TA’ ANALIŻI

1. Sakemm ma jkunx speċifikat mod ieħor fil-metodi ta’ analiżi, ir-reaġenti analitiċi kollha jridu jkunu analitikament puri (a.p.). Meta ssir analiżi tat-traċċi, il-purità tar-reaġenti trid tiġi ċċekkjata b’test in bjank. Skont ir-riżultati miksuba, jista’ jkun hemm bżonn li r-reaġenti jiġu ppurifikati aktar.

2. Kull operazzjoni li tinvolvi l-preparazzjoni ta’ soluzzjonijiet, dilwizzjoni, tlaħliħ jew ħasil imsemmija fil-metodi ta’ analiżi u li ma tindikax in-natura tas-solvent jew id-dilwent użat, timplika li jrid jintuża l-ilma. Bħala regola ġenerali, l-ilma jrid jiġi demineralizzat jew distillat. F’każijiet partikolari, li jkunu indikati fil-metodi ta’ analiżi, l-ilma jkun irid jiġi sottomess għal proċeduri speċjali ta’ purifikazzjoni.

3. Minħabba li xi apparat hu normali li ssibu fil-laboratorji ta’ kontroll, fil-metodi ta’ analiżi ssir referenza biss għal dawk l-istrumenti u dak l-apparat li huma speċjali, jew li jkunu jirrikjedu użu speċifiku fil-metodi ta’ analiżi. Dawn iridu jkunu nodfa, speċjalment meta jkun hemm bżonn li jiġu ddeterminati ammonti żgħar ta’ sustanza.

C. APPLIKAZZJONI TAL-METODI TA’ ANALIŻI U L-ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

1. Proċedura ta’ estrazzjoni

Hemm diversi metodi li jiddeterminaw proċedura ta’ estrazzjoni speċifika. Bħala regola ġenerali, jistgħu jiġu applikati proċeduri oħrajn ta’ estrazzjoni apparti l-proċedura msemmija, bil-kundizzjoni li tkun ingħatat prova li l-proċedura ta’ estrazzjoni użata hija ekwivalenti f’dik li effiċjenza fl-estrazzjoni għall-matriċi analizzata bħall-proċedura msemmija fil-metodu.

2. Proċedura ta’ tindif

Hemm diversi metodi li jiddeterminaw proċedura speċifika ta’ tindif. Bħala regola ġenerali, jistgħu jiġu applikati proċeduri oħra ta’ tindif apparti l-proċedura msemmija, bil-kundizzjoni li tkun ingħatat prova li l-proċedura ta’ tindif użata twassal għal riżultati analitiċi ekwivalenti għall-matriċi analizzata bħall-proċedura msemmija fil-metodu.

3. In-numru ta’ determinazzjonijiet

Fil-każ tal-analiżi ta’ sustanzi mhux mixtieqa, jekk ir-riżultat tal-ewwel determinazzjoni ikun sostanzjalment (> 50 %) inqas mill-ispeċifikazzjoni li trid tiġi kkontrollata, m’hemmx bżonn ta’ determinazzjonijiet addizzjonali, bil-kundizzjoni li jiġu applikati l-proċeduri ta’ kwalità xierqa. F’każijiet oħra jkun hemm bżonn ta’ analiżi duplikata (it-tieni determinazzjoni) u dan sabiex tiġi eskluża l-possibbiltà ta’ kontaminazzjoni kroċjata interna jew li, bi żball, jitħawwad kampjun ma’ ieħor. Biex tkun verifikata l-konformità tintuża l-medja taż-żewġ determinazzjonijiet, u dan filwaqt li jittieħed kont tal-inċertezza tal-kejl.

Fil-każ tal-kontroll tal-kontenut iddikjarat ta’ sustanza jew ingredjent, jekk ir-riżultat tal-ewwel determinazzjoni jikkonferma l-kontenut iddikjarat, jiġifieri jekk ir-riżultat analitiku jaqa’ fil-marġni ta’ varjazzjoni aċċettabbli tal-kontenut iddikjarat, ma jkun hemm bżonn tal-ebda determinazzjoni addizzjonali, u dan bil-kundizzjoni li jiġu applikati l-proċeduri ta’ kwalità addattati. F’każijiet oħra jkun hemm bżonn ta’ analiżi duplikata (it-tieni determinazzjoni) u dan sabiex tiġi eskluża l-possibbiltà ta’ kontaminazzjoni kroċjata interna jew li, bi żball, jitħawwad kampjun ma’ ieħor. Biex tkun verifikata l-konformità tintuża l-medja taż-żewġ determinazzjonijiet, u dan filwaqt li jittieħed kont tal-inċertezza tal-kejl.

F’ċerti każijiet dan il-marġni ta’ varjazzjoni aċċettabbli huwa definit fil-leġiżlazzjoni bħalma hu l-każ fir-Regolament (KE) Nru 767/2009 tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill tat-13 ta’ Lulju 2009 dwar it-tqegħid fis-suq u l-użu ta’għalf, li jemenda r-Regolament tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill (KE) Nru 1831/2003 u li jħassar id-Direttiva tal-Kunsill 79/373/KEE, id-Direttiva tal-Kummissjoni 80/511/KEE, id-Direttivi tal-Kunsill 82/471/KEE, 83/228/KEE, 93/74/KEE, 93/113/KE u 96/25/KE u d-Deċiżjoni tal-Kummissjoni 2004/217/KE ( 7 ).

4. Rappurtaġġ tal-metodu ta’ analiżi użat

Ir-rapport tal-analiżi għandu jsemmi l-metodu ta’ analiżi użat.

5. Rappurtaġġ tar-riżultat analitiku

Ir-riżultat analitiku għandu jiġi espress bil-mod stabbilit fil-metodu ta’ analiżi, f’numru xieraq ta’ ċifri sinifikanti, u jekk ikun hemm bżonn, għandu jiġi kkoreġut skont il-kontenut umdu tal-kampjun finali qabel il-preparazzjoni.

6. Inċertezza tal-kejl u r-rata ta’ rkupru fil-każ ta’ analiżi ta’ sustanzi mhux mixtieqa.

Rigward is-sustanzi mhux mixtieqa fit-tifsira tad-Direttiva 2002/32/KE, prodott intenzjonat għall-għalf tal-annimali għandu jitqies mhux konformi mal-kontenut massimu stabbilit, kemm-il darba r-riżultat analitiku, b’relazzjoni mal-għalf b’kontenut umdu ta’ 12 %, jitqies li jaqbeż il-kontenut massimu filwaqt li jittieħed kont kemm tal-inċertezza tal-kejl estiża kif ukoll tal-korrezzjoni għall-irkupru. Sabiex tiġi analizzata l-konformità, tintuża l-konċentrazzjoni analizzata wara li tiġi kkoreġuta għall-irkupru u wara t-tnaqqis tal-inċertezza tal-kejl estiża. Din il-proċedura hija applikabbli biss f’każijiet fejn il-metodu ta’ analiżi jippermetti l-istima tal-inċertezza tal-kejl u l-korrezzjoni għall-irkupru (eż. mhux possibbli fil-każ ta’ analiżi mikroskopika).

Ir-riżultat analitiku għandu jiġi rappurtat kif ġej (sakemm il-metodu ta’ analiżi użat jippermetti li tiġi stmata l-inċertezza tal-kejl u r-rata ta’ rkupru):

(a) ikkoreġut għall-irkupru, u jiġi indikat il-livell ta’ rkupru. Il-korrezzjoni għall-irkupru mhix neċessarja fejn ir-rata tal-irkupru tkun bejn 90 u 110 %.

(b) bħala “x +/– U”, fejn x hija r-riżultat analitiku u U hija l-inċertezza tal-kejl estiża, billi jintuża fattur ta’ kopertura ta’ 2 li jagħti livell ta’ fiduċja ta’ madwar 95 %.

Madankollu, jekk ir-riżultat tal-analiżi jkun sostanzjalment (> 50 %) inqas mill-ispeċifikazzjoni li trid tiġi kkontrollata, u bil-kundizzjoni li jiġu applikati l-proċeduri ta’ kwalità addattati, u l-analiżi sservi biss l-iskop li tiġi ċċekkjata l-konformità mad-dispożizzjonijiet legali, ir-riżultat analitiku jista’ jiġi rrappurtat mingħajr korrezzjoni għall-irkupru u, f’dawn il-każijiet, ir-rappurtaġġ tar-rata tal-irkupru u l-inċertezza tal-kejl jistgħu jitħallew barra.

▼B









ANNESS III

METODI TA' ANALIŻI GĦALL-KONTROLL TAL-KOMPOŻIZZJONI TAL-MATERJALI TAL-GĦALF U L-GĦALF KOMPOST

A. DETERMINAZZJONI TAL-UMDITÀ

1. Għan u Skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi stabbilit l-umdità fl-għalf. Fil-każ ta' għalf li jkun fih sustanzi volatili, bħall-aċidi organiċi, għandu jiġi osservati li ammont sinifikanti ta' sustanzi volatili wkoll jiġi determinat flimkien mal-umdità.

Dan ma jkoprix l-analiżi ta' prodotti tal-ħalib bħala materjal għall-għalf, l-analiżi ta' sustanzi minerali u taħlitiet fil-maġġoranza komposti minn sustanzi minerali, l-analiżi ta' xaħmijiet u żjut mill-annimali u mill-ħxejjex jew l-analiżi taż-żerriegħa taż-żejt u frott żejtni.

2. Prinċipju

Il-kampjun jitnixxef taħt kundizzjonijiet speċifikati li jvarjaw skont in-natura tal-għalf. It-telf fil-piż huwa ddeterminat bl-użin. Huwa neċessarju li tagħmel tnixxif preliminari meta tkun qed titratta ma' għalf solidu li li għandu kontenut ta' umdità għoli.

3. Apparat

3.1. Kraxer magħmul minn materjal li ma jassorbix l-umdità u li jkun faċli biex jitnaddaf, jippermetti tifrik rapidu u ndaqs mingħajr ma jipproduċi sħana apprezzabbli, sa fejn possibbli jipprevjeni l-kuntatt mal-arja ta' barra u jissodisfa l-ħtiġiet stabbiliti f'4.1.1. u 4.1.2. (e.ż. taħħana-mikro tal-martell jew imkessħa bl-ilma, taħħana f'forma ta' koni li jistgħu jiġu żarmati, taħħana li jaħdmu bil-mod jew dawk b'roti bis-snien).

3.2. Miżien analitiku, preċiż sa 1 mg.

3.3. Kontenituri xotti magħmulin minn metall li ma jissaddadx jew tal-ħġieġ bl-għotien li jassiguraw għeluq li ma tgħaddix arja minnu, superfiċje ta' fejn isir ix-xogħol li jippermetti li l-kampjun għat-test jinfirex f'madwar 0,3 g/cm2.

3.4. Forn isotermiku li jissaħħan bl-elettriku (± 2 oC) ventilat kif suppost u li jassigura regolazzjoni rapida tat-temperatura ( 8 ).

3.5. Forn tal-vakum li jisħon bl-elettriku li jista' jkun aġġustat armat b'pompa għaż-żejt u/jew b'mekkaniżmu li jintroduċi arja xotta sħuna jew aġent li jnixxef (eż. ossidu tal-kalċju).

3.6. Dessikatur b'metall oħxon perforat jew pjanċa tal-porċellana, li fiha aġent li jnixxef b'mod effiċjenti.

4. Proċedura

N.B. L-operazzjonijiet deskritti f'din it-taqsima jridu jsiru immedjatament wara li jinfetħu l-pakketti tal-kampjuni. Tal-inqas, l-analiżi trid issir darbtejn.

4.1. Preparazzjoni

4.1.1. Għalf għajr dak imniżżel taħt 4.1.2 u 4.1.3

Ħu tal-inqas 50 g mill-kampjun. Jekk ikun hemm bżonn, farrak jew aqsam b'tali mod li tevita kwalunkwe varjazzjoni fl-umdità (ara 6).

4.1.2. Ċereali u xgħir u barli mitħun oħxon

Ħu tal-inqas 50 g mill-kampjun. Itħan f'partikoli li minnhom tal-inqas 50 % jgħaddu minn passatur b'malji ta' 0,5 mm u ma jibqax iktar minn 10 % skart f'passatur tond b'malji ta' 1 mm

4.1.3. Għalf f'forma likwida jew pejst, għalf kompost fil-maġġoranza minn żjut u xaħmijiet

Ħu madwar 25 g mill-kampjun, iżen sal-eqreb 10 mg, żid kwantità xierqa ta' ramel anidridu miżun sal-eqreb 10 mg u ħallat sakemm jinkiseb prodott omoġenju.

4.2. Tnixxif

4.2.1. Għalf aparti dak taħt 4.2.2 u 4.2.3

Iżen kontenitur (3.3) bl-għatu sal-eqreb 1 mg. Fil-kontenitur miżun, iżen sal-eqreb 1 mg, madwar 5 g tal-kampjun u xerred b'mod uniformi. Poġġi l-kontenitur mingħajr l-għatu fil-forn li jkun diġà msaħħan sa 103 oC. Sabiex it-temperatura tal-forn tinżamm milli tinżel ħafna, introduċi l-kontenitur malajr kemm jista' jkun. Ħallih ħa jinxef għal madwar erba' sigħat ikkalkolati mill-ħin meta t-temperatura tal-forn terġa' lura għal 103 oC. Erġa' poġġi l-għatu fuq il-kontenitur, u neħħih mill-forn u ħallih jibred għal madwar 30 sa 45 minuta fid-dessikatur (3.6) u iżen sal-eqreb 1 mg.

Għal għalf kompost fil-maġġoranza minn żjut u xaħmijiet, nixxef fil-forn għal 30 minuta oħra b'temperatura ta' 130 oC. Id-differenza bejn użin u ieħor m'għandhiex tkun aktar minn 0,1 % tal-umdità.

4.2.2. Ċereali, dqiq, xgħir u barli mitħun oħxon u qamħ mitħun mhux raffinat

Iżen kontenitur (3.3) bl-għatu sal-eqreb 0,5 mg. Fil-kontenitur miżun, iżen sal-eqreb 1 mg, madwar 5 g tal-kampjun mitħun u xerred b'mod uniformi. Poġġi l-kontenitur mingħajr l-għatu fil-forn li jkun diġà msaħħan sa 130 oC. Sabiex it-temperatura tal-forn tinżamm milli tinżel ħafna, introduċi l-kontenitur malajr kemm jista' jkun. Ħallih ha jinxef għal sagħtejn ikkalkolati mill-ħin meta t-temperatura tal-forn terġa' lura għal 130 oC. Erġa' poġġi l-għatu fuq il-kontenitur, u neħħih mill-forn u ħallih jibred għal madwar 30 sa 45 minuta fid-dessikatur (3.6) u iżen sal-eqreb 1 mg.

4.2.3. Għalf kompost li fih aktar minn 4 % sukrożju jew lattożju: materjal tal-għalf bħal ħarrub, prodotti taċ-ċereali idrolizzati, żerriegħa tax-xgħir, laqx tal-pitravi imnixxef, sustanzi li jdubu tal-ħut u taz-zokkor; għalf kompost li fih aktar minn 25 % melħ minerali inkluż l-ilma tal-kristallazzjoni.

Iżen kontenitur (3.3) bl-għatu sal-eqreb 0,5 mg. Fil-kontenitur miżun, iżen sal-eqreb 1 mg, madwar 5 g tal-kampjun u xerred b'mod uniformi. Poġġi l-kontenitur mingħajr l-għatu fil-forn tal-arja (3.5) li huwa diġà msaħħan sa bejn 80 oC u 85 oC. Sabiex it-temperatura tal-forn tinżamm milli tinżel ħafna, introduċi l-kontenitur malajr kemm jista' jkun.

Tella' l-pressjoni sa 100 Torr u ħallih ħa jinxef f'din il-pressjoni għal madwar erba' sigħat, jew f'kurrent ta' arja taħraq u niexfa jew bl-użu ta' aġent li jnixxef (madwar 300 g għal 20 kampjun). F'każ li tuża dan tal-aħħar, skonnettja l-pompa tal-arja meta tintlaħaq il-pressjoni preskritta. Ikkalkula l-ħin tat-tnixxif mill-mument meta t-temperatura tal-forn terġa' lura għal 80 oC sa 85 oC. B'attenzjoni erġa' ġib il-forn lura għall-pressjoni atmosferika. Iftaħ il-forn, poġġi l-għatu fuq il-kontenitur minnufih, neħħi l-kontenitur mill-forn, ħallih ħa jibred għal 30 sa 45 minuta f'dessikatur (3.6) u iżen sal-eqreb 1 mg. Nixxef għal 30 minuta oħra fil-forn vakwu b'temperatura ta' 80 oC sa 85 oC u erġa' iżen. Id-differenza bejn iż-żewġ piżijiet m'għandhiex tkun aktar minn 0,1 % tal-umdità.

4.3. Tnixxif preliminari

4.3.1. Għalf aparti dak taħt 4.3.2

Għalf solidu b'umdità għolja li jagħmel it-tħin diffiċli għandu jkun soġġett għal tnixxif preliminari kif ġej:

Iżen 50 g tal-kampjun mhux imfarrak sal-eqreb 10 mg (jekk ikun hemm bżonn, għalf kompressat jew agglomerat jista' jinqasam b'mod każwali) f'kontenitur adattat (eż. platt tal-aluminju 20 × 12 cm b'xifer ta 0,5 cm). Ħallih ħa jinxef f'forn b'60 oC sa 70 oC sakemm l-umdità tkun tnaqqset għal bejn 8 % u 12 %. Neħħih mill-forn u ħallih ħa jibred mikxuf fil-laboratorju għal siegħa u iżen sal-eqreb 10 mg. Farrak immedjatament kif indikat f'4.1.1 u nixxef kif indikat f'4.2.1 jew 4.2.3 skont in-natura tal-għalf.

4.3.2. Ċereali

Qamħ b'umdità ta' aktar minn 17 % irid ikun soġġett għal tnixxif preliminari kif ġej:

Iżen 50 g qamħ mhux mitħun sal-eqreb 10 mg f'kontenitur adattat (eż. platt tal-aluminju 20 × 12 cm b'xifer ta 0,5 cm). Ħallih ħa jinxef f'forn ta' 130 oC għal 5 sa 7 minuti. Neħħih mill-forn u ħallih ħa jibred mikxuf fil-laboratorju għal sagħtejn u iżen sal-eqreb 10 mg. Farrak immedjatament kif indikat f'4.1.2 u nixxef kif indikat f'4.2.2.

5. Kalkolu tar-riżultati.

L-umdità (X), bħala perċentwal tal-kampjun, hija kkalkulata billi jintużaw il-formoli li ġejjin:

5.1. Tnixxif mingħajr tnixxif preliminari

fejn:

m = piż inizjali fi grammi, tal-kampjun għat-test,

m0 = piż fi grammi, tal-kampjun għat-test imnixxef.

5.2. Tnixxif bi tnixxif preliminari

fejn:

m = piż inizjali fi grammi, tal-kampjun għat-test,

m1 = piż fi grammi, tal-kampjun għat-test wara t-tnixxif preliminari,

m2 = piż fi grammi, tal-kampjun għat-test war t-tifrik jew it-tħin,

m0 = piż fi grammi, tal-kampjun għat-test imnixxef.

5.3. Ripetibbiltà

Id-differenza bejn ir-riżultati ta' żewġ determinazzjonijiet paralleli li saru fuq l-istess kampjun m'għandhiex tkun aktar minn 0,2 % tal-valur assolut tal-umdità.

6. Osservazzjoni

Jekk jidher li hemm bżonn tat-tifrik u jekk dan jidher li jibdel l-umdità tal-prodott, ir-riżultati tal-analiżi tal-komponenti tal-għalf iridu jiġu korretti skont l-umdità tal-kampjun fl-istat inizjali tiegħu.

B. DETERMINAZZJONI TAL-UMDITÀ FIX-XAĦMIJIET U Ż-ŻJUT TAL-ANNIMALI U L-ĦXEJJEX

1. Għan u Skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi determinat il-kontenut tal-ilma u sustanzi volatili fiż-żjut u x-xaħmijiet tal-annimali.

2. Prinċipju

Il-kampjun jitnixxef għal piż kostanti (it-telf fil-piż bejn żewġ piżijiet suċċessivi jrid ikun inqas jew ugwali għal 1 mg) f'103 oC. It-telf fil-piż huwa ddeterminat bl-użin.

3. Apparat

3.1. Dixx b'qiegħ ċatt, magħmul minn materjal li jiflaħ għall-korrużjoni, b'dijametru ta' 8 sa 9 cm u għoli bejn wieħed u ieħor 3 cm.

3.2. Termometru b'bozza rinfurzata u b'tubu ta' espansjoni fit-tarf ta' fuq, immarkat minn madwar 80 oC sa mill-anqas 110 oC, u twil madwar 10 cm.

3.3. Banju tar-ramel jew hot-plate tal-elettriku.

3.4. Dessikatur, li fih aġent li jnixxef effiċjenti.

3.5. Miżien analitiku.

4. Proċedura

Iżen sal-eqreb mg bejn wieħed u ieħor 20 g tal-kampjun omoġenizzat, fid-dixx xott li jkun intiżen minn qabel (3.1) bit-termometru fih (3.2). Saħħan fuq il-banju tar-ramel jew fuq il-hot-plate (3.3), filwaqt li tħawwad kontinwament sabiex it-temperatura tilħaq 90 oC f'madwar 7 minuti.

Naqqas is-sħana, filwaqt li tinnota l-frekwenza li biha l-bżieżaq jitilgħu mill-qiegħ tad-dixx. It-temperatura m'għandhiex taqbeż il-105 oC. Kompli ħawwad, aqla' mill-qiegħ tad-dixx sakemm ma jibqgħux jiffurmaw aktar bżieżaq.

Sabiex tassigura l-eliminazzjoni kompluta tal-umdità, erġa' saħħan għal diversi drabi għal 103 oC ± 2 oC, berred sa 93 oC bejn it-tisħin suċċessiv. Imbagħad ħallih jiksaħ sat-temperatura tal-ambjent fid-dessikatur (3.4) u iżen. Irrepeti din l-operazzjoni sakemm it-telf fil-piż bejn żewġ piżijiet suċċessivi ma tkunx aktar minn 2 mg.

N.B. Żieda fil-piż tal-kampjun wara tisħin ripetut tindika ossidazzjoni tax-xaħam, u f'dan il-każ ikkalkula r-riżultat mill-użin li jkun sar immedjatament qabel ma beda jiżdied il-piż.

5. Kalkolu tar-riżultati

Il-kontenut tal-umdità (X), bħala perċentwali tal-kampjun, jiġi kkalkulat permezz tal-formula segwenti:

fejn:

m = piż, fi grammi, tal-kampjun għat-test;

m1 = piż, fi grammi, tad-dixx bil-kontenuti tiegħu qabel jissaħħan;

m2 = piż fi grammi, tad-dixx bil-kontenuti tiegħu wara li jissaħħan.

Riżultati inqas minn 0,05 % jridu jiġu rrekordjati bħala “inqas minn 0,05 %”.

Ripetibbiltà

Id-differenza fl-umdità bejn ir-riżultati ta' żewġ determinazzjonijiet paralleli li jkunu saru fuq l-istess kampjun m'għandhomx jaqbżu 0,05 %, f'valur assolut.

C. DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TAL-PROTEINA MHUX RAFFINATA

1. Għan u skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi ddeterminat il-kontenut tal-proteina mhux raffinata fl-għalf fuq il-bażi tal-kontenut tan-nitroġenu, iddeterminat skont il-metodu Kjeldahl.

2. Prinċipju

Il-kampjun huwa diġerit bl-aċidu sulfuriku fil-preżenza ta' katalista. Is-soluzzjoni aċidika hija magħmula alkalina b'soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju. L-ammonja hija distillata u miġbura fi kwantità mkejla ta' aċidu sulfuriku li l-eċċess tagħha huwa titrat b'soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju.

Inkella, l-ammonja libera hija distillata f'eċċess ta' soluzzjoni ta' aċidu boriku, segwita minn titrazzjoni b'soluzzjoni ta' aċidu idrokloriku jew aċidu sulfuriku.

3. Reaġenti

3.1. Sulfat tal-potassju.

3.2. Katalist: copper (II) oxide CuO jew copper (II) sulphate pentahydrate, CuSO4 5H2O.

3.3. Frak taż-żingu.

3.4. Aċidu sulfuriku, ρ20 = 1,84 g/ml.

3.5. Aċidu sulfuriku, soluzzjoni volumetrika standard, c(H2SO4) = 0,25 mol/l.

3.6. Aċidu sulfuriku, soluzzjoni volumetrika standard, c(H2SO4) = 0,10 mol/l.

3.7. Aċidu sulfuriku, soluzzjoni volumetrika standard, c(H2SO4) = 0,05 mol/l.

3.8. Indikatur tal-metil aħmar; dewweb 300 mg metil aħmar f'100 ml etanol, σ = 95–96 % (v/v).

3.9. Soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (Jista' jintuża l-grad tekniku) β = 40 g/100 ml (m/v: 40 %).

3.10. Idrossidu tas-sodju, soluzzjoni volumetrika standard c (NaOH) = 0,25 mol/l.

3.11. Idrossidu tas-sodju, soluzzjoni volumetrika standard c (NaOH) = 0,10 mol/l.

3.12. Ħaffiefa mfarrka, maħsula fl-aċidu idrokloriku u mogħTija n-nar.

3.13. Acetanilide (m.p. = 114 oC, N-kontenut = 10,36 %).

3.14. Sukrożju (ħieles min-nitroġenu).

3.15. Aċidu boriku (H3BO3).

3.16. Soluzzjoni tal-indikatur tal-metil aħmar: dewweb 100 mg metil aħmar f'100 ml etanol jew metanol.

3.17. Soluzzjoni ta' bromocresol aħdar: dewweb 100 mg bromocresol aħdar f'100 ml etanol jew metanol.

3.18. Soluzzjoni tal-aċidu boriku (10 g/l sa 40 g/l skont l-apparat użat)

Meta tiġi applikata l-aħħar ditezzjoni kolorimetrika, l-indikaturi metil aħmar u l-bromocresol iridu jiżdiedu mas-soluzzjonijiet tal-aċidu boriku. Jekk jiġi ppreparat 1 l aċidu boriku, qabel jiġi aġġustat il-volum, għandhom jiżdiedu 7 ml soluzzjoni tal-indikatur metil aħmar (3.16) u 10 ml soluzzjoni ta' bromocresol aħdar (3.17).

Il-pH tas-soluzzjoni tal-aċidu boriku tista' tvarja minn lott għal lott skont l-ilma użat. Ħafna drabi jkun hemm bżonn ta' aġġustament b'volum żgħir ta' alkali sabiex tinkiseb risposta pożittiva.

Nota: Iż-żieda ta' 3 ml sa 4 ml NaOH (3.11) f'1 l ta' 10 g/l aċidu boriku ġeneralment tagħti aġġustamenti tajbin. Aħżen is-soluzzjoni f'temperatura ambjentali u waqt il-ħażna, ipproteġġi s-soluzzjoni mid-dawl u sorsi ta' dħaħen tal-ammonja.

3.19 Soluzzjoni volumetrika standard tal-aċidu idrokloriku c(HCl) = 0,10 mol/l.

Nota: jistgħu jintużaw konċentrazzjonijiet oħra ta' soluzzjonijiet volumetriċi (3.5, 3.6, 3.7, 3.10, 3.11, u 3.19), jekk isir tajjeb għalihom fil-kalkoli. Il-konċentrazzjonijiet għandhom dejjem ikunu mfissra sa erba' postijiet deċimali.

4. Apparat

Apparat adattat sabiex issir id-diġestjoni, distillazzjoni u titrazzjoni skont il-proċedura Kjeldahl.

5. Proċedura

5.1. Digestjoni

Iżen 1 g tal-kampjun sal-eqreb 0,001 g u qiegħed il-kampjun fil-kunjett tal-apparat tad-diġestjoni. Żid 15 g sulfat tal-potassju (3.1.), kwantità adatta tal-katalist (3.2) (0,3 sa 0,4 g copper (II) oxide jew 0,9 sa 1,2 g copper (II) sulphate pentahydrate), 25 ml aċidu sulfuriku (3.4) u jekk meħtieġ, ftit frak tal-ħaffiefa (3.12) u ħallat.

Saħħan il-kunjett moderatament għall-ewwel, jekk ikun hemm bżonn ħawdu minn żmien għal żmien sakemm il-massa tkun ikkarbonizzata u r-ragħwa tkun sparixxiet; imbagħad saħħan b'mod aktar intensiv sakemm il-likwidu jkun qiegħed jagħli sew. It-tisħin huwa adegwat jekk l-aċidu li jkun qiegħed jagħli jikkondensa fuq il-ħajt tal-kunjett. Tħallix li l-ġnub jisħnu żżejjed u li partikoli organiċi jeħlu magħhom.

Meta s-soluzzjoni ssir ċara u ħadra ċara, kompli għalli għal sagħtejn oħra, u wara ħalliha ħa tibred.

5.2. Distillazzjoni

Bil-mod, żid biżżejjed ilma sabiex tassigura li s-sulfati jdubu kompletament. Ħalli ħa jibred u wara, jekk ikun hemm bżonn, żid ftit trab taż-żingu (3.3). Kompli skont 5.2.1. jew 5.2.2.

5.2.1. Distillazzjoni f'aċidu sulfuriku

Fil-kunjett tal-ġbir tal-apparat għad-distillazzjoni poġġi kwantità mkejla eżatta ta' 25 ml aċidu sulfuriku (3.5) jew (3.7) skont il-kontenut preżunt tan-nitroġenu. Żid ftit qtar ta' indikatur tal-metil aħmar (3.8).

Qabbad il-kunjett tad-diġestjoni mal-kondensatur tal-apparat għad-distillazzjoni u għaddas it-tarf tal-kondensatur fil-likwidu li jinsab fil-kunjett tal-ġbir għal fond ta' madwar 1 cm (ara l-osserv azzjoni 8.3). Bil-mod, ferra' 100 ml ta' soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (3.9) fil-kunjett għad-diġestjoni mingħajr telf ta' ammonja (ara osservazzjoni 8.1). Saħħan il-kunjett sakemm l-ammonja tkun iddistillat.

5.2.2. Distillazzjoni f'aċidu boriku

Fejn it-titrazzjoni tal-kontenut tal-ammonja fid-distillat issir manwalment, tapplika l-proċedura msemmija hawn taħt. Fejn l-unità tad-distillazzjoni hija kompletament awtomatika biex tinkludi t-titrazzjoni tal-kontenut tal-ammonja fid-distillat, segwi l-istruzzjonijiet tal-manifattur għall-operazzjoni tal-unità tad-distillazzjoni.

Poġġi l-kunjett tal-ġbir li fih 25 ml sa 30 ml tas-soluzzjoni tal-aċidu boriku (3.18) taħt il-ħruġ tal-kondensatur b'tali mod li t-tubu tal-ġarr ikun taħt il-wiċċ tas-soluzzjoni ta' aċidu boriku żejda. Irranġa l-unità tad-distillazzjoni biex tagħti 50 ml ta' soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (3.9). Irranġa l-unità tad-distillazzjoni skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur u ddistilla ‘l barra l-ammonja li nħelset biż-żieda tas-soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju. Iġbor id-distillat fis-soluzzjoni tal-aċidu boriku riċevitriċi. L-ammont ta' distillat (ħin tad-distillazzjoni bil-fwar) jiddependi mill-ammont ta' nitroġenu fil-kampjun. Segwi l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

Nota: F'unità għad-distillazzjoni semi-awtomatika, iż-żieda tal-eċċess ta' idrossidu tas-sodju u d-distillazzjoni bil-fwar isiru awtomatikament.

5.3. Titrazzjoni

Ipproċedi skont 5.3.1. jew 5.3.2.

5.3.1. Aċidu sulfuriku

Fil-kunjett tal-ġbir ittitra l-eċċess tal-aċidu sulfuriku b'soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju (3.10 jew 3.11) skont il-konċentrazzjoni ta' aċidu sulfuriku użat, sakemm jintlaħaq il-punt finali.

5.3.2. Aċidu boriku

Ittitra l-kontenut tal-kunjett tal-ġbir bis-soluzzjoni volumetrika standard tal-aċidu idrokloriku (3.19) jew bis-soluzzjoni volumetrika standard tal-aċidu sulfuriku (3.6) billi tuża buretta u aqra l-ammont ta' titrant użat.

Meta tiġi applikata l-aħħar ditezzjoni kolorimetrika, il-punt finali jintlaħaq mal-ewwel traċċa tal-kulur roża fil-kontenut. Ivvaluta l-qari tal-buretta sal-eqreb 0,05 ml. Stirrer plate manjetika jew ditettur fotometriku jistgħu jgħinu sabiex tara l-punt finali.

Dan jista' jsir awtomatikament billi jintuża distillatur tal-fwar b'titrazzjoni awtomatika.

Segwi l-istruzzjonijiet tal-manifattur biex tħaddem id-distillatur speċifiku jew distillatur/titratur.

Nota: Meta tintuża sistema ta' titrazzjoni awtomatika, it-titrazzjoni tibda immedjatament wara li tibda d-distillazzjoni u tintuża 1 % tas-soluzzjoni tal-aċidu boriku (3.18). Fejn titħaddem unità tad-distillazzjoni kompletament awtomatika, it-titrazzjoni awtomatika tal-ammonja tista' ssir bid-ditezzjoni tal-punt finali billi tintuża sistema ta' potentiometric pH. F'dan il-każ jintuża titratur awtomatiku b'pH-miter. Il-pH-miter għandu jkun ikkalibrat sewwa fil-medda ta' pH 4 sa pH 7 bi proċeduri ta' kalibrar ta' pH normali fil-laboratorju. Il-punt finali ta' pH tat-titrazzjoni jintlaħaq f'pH 4,6 , billi huwa l-ogħla punt fil-kurva tat-titrazzjoni (punt ta' inflezzjoni).

5.4. Test blank

Biex tikkonferma li r-reaġenti m'għandhomx nitroġenu, agħmel test blank (diġestjoni, distillazzjoni u titrazzjoni) billi tuża 1 g sukrożju (3.14) minflok il-kampjun.

6. Kalkolu tar-riżultati

Il-kalkoli jsiru skont 6.1 jew 6.2.

6.1. Kalkolu tat-titrazzjoni skont 5.3.1

Il-kontenut tal-proteina mhux raffinata, imfisser bħala perċentwali skont il-piż, huwa kkalkulat skont il-formula segwenti:

fejn:

Vo = hija l-volum (ml) ta' NaOH (3.10 jew 3.11) użat fit-test blank.

V1 = hija l-volum (ml) ta' NaOH (3.10 or 3.11) użat fil-kampjun tat-titrazzjoni.

c = hija l-konċentrazzjoni (mol/l) ta' idrossidu tas-sodju (3.10 jew 3.11).

m = hija l-piż (g) tal-kampjun.

6.2 Kalkolu tat-titrazzjoni skont 5.3.2

6.2.1. Titrazzjoni bl-aċidu idrokloriku

Il-kontenut tal-proteina mhux raffinata, imfisser bħala perċentwali skont il-piż, huwa kkalkulat skont il-formula segwenti:

fejn:

m = hija l-piż (g) tal-porzjon għat-test;

c = hija l-konċentrazzjoni (mol/l) tas-soluzzjoni volumetrika standard ta' aċidu idrokloriku (3.19);

V0 = hija l-volum (f'ml) ta' aċidu idrokloriku użat għat-test blank;

V1 = hija l-volum (f'ml) ta' aċidu idrokloriku użat għall-porzjon għat-test.

6.2.2. Titrazzjoni bl-aċidu sulfuriku

Il-kontenut tal-proteina mhux raffinata, imfisser bħala perċentwali skont il-piż, huwa kkalkulat skont il-formula segwenti:

fejn:

m = hija l-piż (g) tal-porzjon għat-test;

c = hija l-konċentrazzjoni (mol/l) tas-soluzzjoni volumetrika standard ta' aċidu sulfuriku (3.6);

V0 = hija l-volum (f'ml) ta' aċidu sulfuriku (3.6) użat għat-test blank;

V1 = hija l-volum (f'ml) ta'aċidu sulfuriku (3.6) użat għall-porzjon għat-test.

7. Verifika tal-metodu

7.1. Ripetibbiltà

Id-differenza bejn ir-riżultati ta' żewġ determinazzjonijiet paralleli li twettqu fl-istess kampjun m'għandhomx jaqbżu:

— 0,2 , f'valur assolut għall-kontenut mhux raffinat ta' proteini ta' inqas minn 20 %;

— 1,0 %, relattiv għall-ogħla valur, għall-kontenut mhux raffinat ta' proteini ta' mhux inqas minn 20 % u mhux aktar minn 40 %;

— 0,4 , f'valur assolut, għall-kontenut mhux raffinat ta' proteini ta' aktar minn 40 %.

7.2. Preċiżjoni

Agħmel l-analiżi (diġestjoni, distillazzjoni u titrazzjoni) fuq 1,5 sa 2,0 g acetanilide (3.13) fil-preżenza ta' 1 g sukrożju (3.14); 1 g acetanilide tikkonsma 14,80 ml aċidu sulfuriku (3.5). L-irkupru jrid ikun tal-inqas 99 %.

8. Osservazzjonijiet

8.1. L-apparat jista' jkun tat-tip manwali, semi-awtomatiku jew awtomatiku. Jekk l-apparat jeħtieġ it-trasferiment bejn diġestjoni u distillazzjoni, dan it-trasferiment għandu jitwettaq mingħajr telf. Jekk il-kunjett tal-apparat tad-distillazzjoni ma jkunx iffittjat b'lenbut għat-tifrigħ żid l-idrossidu tas-sodju immedjatament qabel ma tqabbad il-kunjett mal-kondensatur, waqt li tferra' l-likwidu bil-mod mal-ġnub tal-kondensatur.

8.2. Jekk id-diġestjoni tissolidifika, erġa' ibda d-determinazzjoni billi tuża ammont akbar ta' aċidu sulfuriku (3.4) minn dak speċifikat hawn fuq.

8.3. Għall-prodotti b'kontenut baxx ta' nitroġenu, il-volum tal-aċidu sulfuriku (3.7) li għandu jitqiegħed fil-kunjett tal-ġbir jista' jitnaqqas, fejn meħtieġ, sa 10 jew 15 ml u jiżdied sa 25 ml bl-ilma.

8.4. Għal analiżi ta' rutina, jistgħu jiġu applikati metodi ta' analiżi alternattivi għad-determinazzjoni ta' proteina mhux raffinata iżda l-metodu Kjeldahl deskritt f'din il-Parti C huwa l-metodu ta' referenza. L-ekwivalenti tar-riżultati miksubin bil-metodu alternattiv, (eż. DUMAS) imqabbla mal-metodu ta' referenza, jridu jintwerew individwalment għal kull massa. Billi r-riżultati miksubin b'metodu alternattiv, jistgħu jvarjaw xi ftit mir-riżultati miksubin bil-metodu ta' referenza anke wara li tkun ġiet ivverifikata l-ekwivalenza, fir-rapport analitiku jrid jissemma' l-metodu ta' analiżi għad-determinazzjoni tal-proteina mhux raffinata.

D. DETERMINAZZJONI TA' UREA

1. Għan u skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi stabbilit il-livell ta' urea fl-għalf.

2. Prinċipju

Il-kampjun jiġi sospiż fl-ilma b'aġent li jiċċara. Is-sospensjoni tiġi filtrata. Il-kontenut tal-urea tal-filtrat jiġi stabbilit wara ż-żieda ta' 4-dimethylaminobenzaldehyde (4-DMAB) billi titkejjel id-densità ottika f'wavelength ta' 420 nm.

3. Reaġenti

3.1. Soluzzjoni ta' 4-dimethylaminobenzaldehyde: dewweb 1,6 g ta' 4-DMAB f'100 ml ta' 96 % etanol u żid 10 ml aċidu idrokloriku ((ρ201,19 g/ml). Dan ir-reaġent iżomm għal perjodu massimu ta' ġimagħtejn.

3.2. Soluzzjoni Carrez I: fl-ilma dewweb 21,9 g zinc acetate, Zn(CH3COO)2 2H2O u 3 g aċidu aċetiku inġazzat. Żid għal 100 ml bl-ilma.

3.3. Soluzzjoni Carrez II: dewweb fl-ilma 10,6 g potassium ferrocyanide, K4 Fe (CN)6 3H2O. Żid għal 100 ml bl-ilma.

3.4. Karbonju attiv li ma jassorbix l-urea (irid jiġi vverifikat).

3.5. 0,1 % soluzzjoni (w/v) ta' urea.

4. Apparat

4.1. Mixer (tazza): bejn wieħed u ieħor 35 sa 40 rpm.

4.2. Test tubes: 160 × 16 mm b'tappijiet tal-ħġieġ mitħun.

4.3. Spettrofotometru.

5. Proċedura

5.1. Analiżi tal-kampjun

Iżen 2 g tal-kampjun sal-eqreb mg u qiegħed f'kunjett volumetriku ta' 500 ml 1g karbonju attiv(3.4). Żid 400 ml ilma u 5 ml ta' soluzzjoni Carrez I (3.2) u ħawwad għal madwar 30 sekonda u żid 5 ml ta' soluzzjoni Carrez II (3.3). Ħawwad għal tletin minuta fit-tazza. Żid sal-volum bl-ilma, ħawwad u ffiltra.

Neħħi 5 ml tal-filtrati trasparenti bla kulur, qiegħed f'test tubes b'tappijiet tal-ħġieġ mitħun, żid 5 ml ta' soluzzjoni 4-DMAB (3.1) u ħawwad. Qiegħed it-tubi f'banju bl-ilma sħun f'temperatura ta' 20 oC (+/- 4 oC). Wara ħmistax-il minuta kejjel id-densità ottika tas-soluzzjoni tal-kampjun bl-ispettrofotometru f'420 nm. Qabbel is-soluzzjoni tat-test blank tar-reaġenti.

5.2. Kurva ta' kalibrar

Neħħi volumi ta' 1, 2, 4, 5 u 10 ml tas-soluzzjoni tal-urea (3.5), qiegħed f'kunjetti volumettriċi ta' 100 ml u żid sal-volum bl-ilma. Neħħi 5 ml minn kull soluzzjoni, żid 5 ml ta' soluzzjoni ta' 4-DMAB (3.1) f'kull wieħed minnhom, omoġenizza u kejjel id-densità ottika kif murija fuq meta mqabbla mas-soluzzjoni ta' kontroll li jkun fiha 5 ml ta' 4-DMAB u 5 ml ilma ħieles mill-urea. Ipplottja l-kurva ta' kalibrar.

6. Kalkolu tar-riżultati

Stabbilixxi l-ammont ta' urea fil-kampjun permezz tal-kurva ta' kalibrar.

Esprimi r-riżultat bħala perċentwal tal-kampjun.

7. Osservazzjonijiet

7.1. Fil-każ ta' kontenuti ta' urea li jaqbżu t-3 %, naqqas il-kampjun sa 1 g jew żid is-soluzzjoni oriġinali bl-ilma sabiex ma jkunx hemm aktar minn 50 mg urea f'500 ml.

7.2. Fil-każ ta' kontenuti baxxi ta' urea, żid il-kampjun sakemm il-filtrat jibqa' trasparenti u bla kulur.

7.3. Jekk il-kampjun ikun fih komponenti nitroġeni sempliċi bħal ma huma amino acids, id-densità ottika għandha titkejjel f'435 nm.

E. DETERMINAZZJONI TA' BAŻIJIET VOLATILI TAN-NITROĠENU

I. BIL-MIKRODIFFUŻJONI

1. Għan u Skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi stabbilit il-kontenut ta' bażijiet volatili tan-nitroġenu, imfissra bħala ammonja, fl-għalf.

2. Prinċipju

Il-kampjun huwa estratt bl-ilma u s-soluzzjoni kjarifikata u ffiltrata. Il-bażijiet volatili tan-nitroġenu huma spustjati bil-mikrodiffużjoni bl-użu ta' soluzzjoni ta' karbonat tal-potassju, miġburin f'soluzzjoni ta' aċidu boriku u titrat b'aċidu sulfuriku.

3. Reaġenti

3.1. 20 % soluzzjoni (w/v) ta' trichloroacetic acid.

3.2. L-indikatur: dewweb 33 mg bromokresol aħdar u 65 mg metil aħmar f'100 ml 95 %-96 % (v/v) etanol.

3.3. Is-soluzzjoni tal-aċidu boriku: f'kunjett iggradat ta' 1 l dewweb 10g aċidu boriku f'200 ml ta' 95 %-96 % (v/v) etanol u 700 ml ilma. Żid 10 ml tal-indikatur (3.2.). Ħallat u, jekk neċessarju, aġġusta l-kulur tas-soluzzjoni għal aħmar ċar billi tiżdied soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju. 1 ml ta' din is-soluzzjoni tiffissa massimu ta' 300 μg ta' NH3.

3.4. Soluzzjoni saturata tal-karbonat tal-potassju: dewweb 100 g karbonat tal-potassju f'100 ml ilma jagħli. Ħallih jiksaħ, iffiltra.

3.5. Aċidu sulfuriku 0,01 mol/litru.

4. Apparat

4.1. Mixer (tazza): bejn wieħed u ieħor 35 sa 40 r.p.m.

4.2. Ċelloli tal-ħġieġ jew tal-plastik Conway (ara t-tpinġija).

4.3. Mikroburetti ggradati f'1/100 ml.

5. Proċedura

Iżen 10 g tal-kampjun sal-eqreb 1 mg u qiegħed ma' 100 ml ilma f'kunjett iggradat ta' 200 ml. Ħallat fit-tazza għal 30 minuta. Żid 50 ml ta' soluzzjoni ta' trichloroacetic acid (3.1), żid sal-volum bl-ilma, ħawwad bis-saħħa u ffiltra minn filtru mmewweġ.

Bl-użu ta' pipetta, introduċi 1 ml soluzzjoni ta' aċidu boriku (3.3) fil-parti ċentrali taċ-ċellola Conway u 1 ml tal-kampjun iffiltrat fil-parti ta' fuq taċ-ċellola. għatti parzjalment bl-għatu bix-xaħam. Ferra' 1 ml tas-soluzzjoni tal-karbonat tal-potassju saturat (3.4) malajr fil-parti ta' fuq u agħlaq l-għatu sabiex iċ-ċellola tkun issiġillata kontra d-dħul tal-arja. Dawwar iċ-ċellola b'attenzjoni fi pjan orizzontali sabiex jitħalltu ż-żewġ reaġenti. Ħalliha inkubata għal mill-inqas erba' sigħat f'temperatura ambjentali jew għal siegħa f'40 oC.

Bl-użu ta' mikroburetta (4.3), ittitra l-bażijiet volatili fis-soluzzjoni tal-aċidu boriku bl-aċidu sulfuriku (3.5).

Wettaq test blank bl-użu tal-istess proċedura imma mingħajr kampjun li għandu jiġi analizzat.

6. Kalkolu tar-riżultati

1 ml ta' H2SO40,01 mol/litru jikkorrispondi għal 0,34 mg ammonja.

Esprimi r-riżultat bħala perċentwal tal-kampjun.

Ripetibbiltà

Id-differenza bejn ir-riżultati ta' żewġ determinazzjonijiet paralleli mwettqa fuq l-istess kampjun m'għandhiex tkun aktar minn:

— 10 %, f'valur relattiv, għal kontenut tal-ammonja ta' inqas minn 1,0 %;

— 0,1 %, f'valur assolut, għal kontenuti tal-ammonja ta' 1,0 % jew iktar.

7. Osservazzjoni

Jekk il-kontenut tal-ammonja tal-kampjun ikun aktar minn 0,6 %, iddilwixxi l-filtrat inizjali.

CONWAY CELL

Scale 1/1

II. BID-DISTILLAZZJONI

1. Għan u Skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġi determinat il-kontenut ta' bażijiet volatili tan-nitroġenu, imfisser bħala ammonja, f'ħut mitħun li ma jkun fih prattikament ebda urea. Huwa applikabbli biss għal kontenuti tal-ammonja ta' inqas minn 0,25 %.

2. Prinċipju

Il-kampjun huwa estratt bl-ilma u s-soluzzjoni kjarifikata u ffiltrata. Il-bażijiet volatili tan-nitroġenu huma spustjati fil-punt ta' togħlija billi jiżdied l-ossidu tal-manjeżju u miġbura fi kwantità speċifika ta' aċidu sulfuriku, li l-eċċess tiegħu huwa titrat lura b'soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju.

3. Reaġenti

3.1. 20 % soluzzjoni (w/v) ta' trichloroacetic acid.

3.2. Ossidu tal-manjeżju.

3.3. Emulsjoni kontra r-ragħwa (eż. silicone).

3.4. Aċidu sulfuriku 0,05 mol/litru.

3.5. Soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju 0,1 mol/litru.

3.6. 0,3 % (w/v) soluzzjoni tal-metil aħmar f'95 %-96 % (v/v) etanol.

4. Apparat

4.1. Mixer (tazza): bejn wieħed u ieħor 35 sa 40 r.p.m.

4.2. Apparat ta' distillazzjoni tat-tip Kjeldahl.

5. Proċedura

Iżen 10 g tal-kampjun sal-eqreb 1 mg u qiegħed ma' 100 ml ilma f'kunjett iggradat ta' 200 ml. Ħallat fit-tazza għal 30 minuta. Żid 50 ml ta' soluzzjoni ta' trichloroacetic acid (3.1), żid sal-volum bl-ilma, ħawwad bis-saħħa u ffiltra minn filtru mmewweġ.

Ħu kwantità ta' filtrat ċar xieraq għall-kontenut preżunt ta' bażijiet volatili tan-nitroġenu (100ml huwa normalment xieraq). Iddilwixxi sa 200 ml u żid 2 ossidu tal-manjeżju (3.2) u ftit qtar ta' emulsjoni li ma tagħmilx ragħwa (3.3). Is-soluzzjoni għandha tkun alkalina għal karta litmus; inkella żid ftit ossidu tal-manjeżju (3.2). Kompli skont 5.2 u 5.3 tal-metodu tal-analiżi għad-determinazzjoni tal-kontenut tal-proteina mhux raffinata (Parti C ta' dan l-Anness).

Wettaq test blank bl-użu tal-istess proċedura imma mingħajr kampjun li għandu jiġi analizzat.

6. Kalkolu tar-riżultati

1 ml ta' H2SO40,05 mol/litru jikkorrispondi għal 1,7 mg ammonja.

Esprimi r-riżultat bħala perċentwal tal-kampjun.

Ripetibbiltà

Id-differenza bejn ir-riżultati ta' żewġ determinazzjonijiet paralleli mwettqa fuq l-istess kampjun m'għandhiex tkun aktar minn, f'valur relattiv, 10 % ammonja.

F. DETERMIMAZZJONI TA' AMINO ACIDS (BARRA TRYPTOPHAN)

1. Għan u skop

Dan il-metodu jagħmilha possibbli li jiġu determinati l-amino acids ħielsa (sintetiċi u naturali) u totali (marbutin b'peptides u ħielsa) fl-għalf, bl-użu ta' analizzatur tal-amino acid. Dan japplika għall-amino acids li ġejjin: cycs(e)ine, methionine, lysine, threonine, alanine, arginine, aspartic acid, glutamic acid, glycine, histidne, isoleucine, leucine, phenylalanine, proline, serine, tyrosine u valine.

Il-metodu ma jiddistingwix bejn l-imluħa tal-amino acids u ma jistax jagħmel distinzjoni bejn il-forom D u L tal-amino acids. M'huwiex validu għad-determinazzjoni ta' analogi ta' tryptophan jew hydroxy ta' amino acids.

2. Prinċipju

2.1. Amino acids ħielsa

L-amino acids ħielsa jinħarġu b'aċidu idrokloriku dilwit. Makromolekuli nitroġeniċi koestratti jiġu ppreċipitati bis-sulfosalicylic acid u jitneħħew billi jiġu ffiltrati. Is-soluzzjoni ffiltrata tiġi aġġustata għal pH 2,20 . L-amino acids jiġu sseparati bi kromatografija ta' skambju tal-jonji u jiġu ddeterminati permezz ta' reazzjoni man-ninhydrin b'ditezzjoni fotometrika f'570 nm.

2.2. Amino acids totali

Il-proċedura magħżula tiddependi fuq l-amino acids li jkunu qegħdin jiġu investigati. Is-Cyst(e)ine u l-methionine għandhom jiġu ossidizzati għal cysteic acid u methionine sulphone rispettivament qabel ma ssir l-idroliżi. It-tyrosine għandu jiġi ddeterminat f'hydrolysates ta' kampjuni mhux ossidizzati. L-amino acids l-oħra kollha li huma mniżżlin fil-paragrafu 1 jistgħu jiġu ddeterminati kemm fil-kampjun ossidizzat kif ukoll f'dak li mhuwiex ossidizzat.

L-ossidizzazzjoni ssir f'0 oC b'taħlita ta' performic acid/phenol. Ir-reaġent li jkun fadal jiġi dekompost b'sodium disulphate. Il-kampjun ossidizzat jew mhux ossidizzat jiġi idrolizzat bl-aċidu idrokloriku (3.20) għal 23 siegħa. Il-hydrolysate jiġi aġġustat għal pH 2,20 . L-amino acids jiġu sseparati bi kromatografija ta' skambju tal-jonji u jiġu ddeterminati permezz ta' reazzjoni man-ninhydrin b'ditezzjoni fotometrika f'570 nm (440 nm għall-proline).

3. Reaġenti

Għandu jintuża ilma ddistillat darbtejn jew ilma ta' kwalità ekwivalenti (konduttività < 10 μS).

3.1. Hydrogen peroxide, w (w/w) = 30 %.

3.2. Formic acid, w (w/w) = 98 – 100 %.

3.3. Phenol.

3.4. Sodium disulphite.

3.5. Idrossidu tas-sodju.

3.6. 5-Sulfosalicylic acid dihydrate.

3.7. Aċidu idrokloriku, densità bejn wieħed u ieħor 1,18 g/ml.

3.8. tri-Sodium citrate dihydrate.

3.9. 2,2'-Thiodiethanol (thiodiglycol).

3.10. Sodium chloride.

3.11. Ninhydrin.

3.12. Petroleum ħafif, jiftaħ jagħli bejn 40 – 60 oC.

3.13. Norleucine, jew komponent ieħor xieraq għall-użu bħala standard intern.

3.14. Gass tan-nitroġenu (< 10 ppm ossiġnu).

3.15. 1-Octanol.

3.16. Amino acids.

3.16.1. Sustanzi standard imniżżlin fil-paragrafu 1. Komponenti puri li ma jkunx fihom ilma tal-kristallizzazzjoni. Nixxef taħt vakwu fuq P2O5 jew H2SO4 għal ġimgħa (1) qabel l-użu.

3.16.2. Cysteic acid.

3.16.3. Methionine sulphone.

3.17. Soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju, c = 7,5 mol/l:

Dewweb 300 g NaOH (3.5) fl-ilma u imla sakemm ikollok 1 l.

3.18. Soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju, c = 1 mol/l:

Dewweb 40 g NaOH (3.5) fl-ilma u imla sakemm ikollok 1 l.

3.19. Soluzzjoni ta' Formic acid-phenol:

Ħallat 889 g formic acid (3.2) ma' 111 g ilma u żid 4,73 g phenol (3.3).

3.20. Taħlita ta' hydrolysis, c = 6 mol HCl/l li jkun fih 1 g phenol/l:

Żid 1 g phenol (3.3) sa 492 ml HCl (3.7) u żid bl-ilma sakemm ikollok 1 l.

3.21. Taħlita għall-estrazzjoni, c = 0,1 mol HCl/l li jkun fiha 2 % thiodiglycol: Ħu 8,2 ml HCl (3.7), żid bejn wieħed u ieħor 900 ml ilma, żid 20 ml thiodiglycol (3.9) u żid bl-ilma sakemm ikollok 1 l, (tħallatx 3.7 u 3.9 direttament).

3.22. 5-Sulfosalicylic acid, ß = 6 %:

Dewweb 60 g 5-sulfosalicylic acid (3.6) fl-ilma u imla sakemm ikollok 1 l.

3.23. Taħlita għall-ossidizzazzjoni (Performic acid-phenol):

Ħallat 0,5 ml hydrogen peroxide (3.1) ma' 4,5 ml soluzzjoni ta' formic acid-phenol (3.19) f'tazza żgħira. Poġġi f'inkubatur f'temperatura ta' bejn 20-30 oC għal madwar siegħa (1hr) sabiex tifforma l-performic acid, imbagħad kessaħ f'banju tal-ilma bis-silġ (15-il minuta) qabel ma żżid mal-kampjun.

Attenzjoni: Evita l-kuntatt mal-ġilda u ilbes ilbies protettiv.

3.24. Citrate buffer, c = 0,2 mol Na+/l, pH 2,20 :

Dewweb 19,61 g sodium citrate (3.8), 5 ml thiodiglycol (3.9), 1 g phenol (3.3) u 16,50 ml HCl (3.7) f'bejn wieħed u ieħor 800 ml ilma. Aġġusta l-pH għal 2,20 . Żid sa 1 l bl-ilma.

3.25. Elution buffers, ippreparati skont il-kundizzjonijiet tal-analizzatur użat (4.9).

3.26. Reaġent tan-ninhydrin, ippreparat skont il-kundizzjonijiet tal-analizzatur użat (4.9).

3.27. Soluzzjonijiet standard tal-amino acids. Dawn is-soluzzjonijiet għandhom jitpoġġew taħt temperatura ta' 5 oC.

3.27.1. Soluzzjoni standard ta' amino acids (3.16.1).

c = 2,5 μmol/ml minn kull wieħed fl-aċidu idrokloriku.

Jista' jinkiseb kummerċjalment

3.27.2. Soluzzjoni stokk standard ta' cysteic acid u methionine sulphone, c = 1,25 μmol/ml.

Dewweb 0,2115 g cysteic acid (3.16.2) u 0,2265 g methionine sulphone (3.16.3) f'citrate buffer (3.24) f'kunjett iggradat tal-1 l u imla sal-marka bis-citrate buffer. Aħżnu f'temperatura taħt il-5 oC għal mhux aktar minn 12-il xahar. Din is-soluzzjoni ma tinużax jekk is-soluzjoni standard (3.27.1) ikun fiha cysteic acid u methionine sulphone.

3.27.3. Soluzzjoni standard tal-istandard intern eż. norleucine, C = 20 μmol/ml.

Dewweb 0,6560 g norleucine (3.13) f'citrate buffer (3.24) f'kunjett iggradat u imla sa 250 ml bis-citrate buffer. Aħżnu f'temperatura taħt il-5 oC għal mhux aktar minn 6 xhur.

3.27.4. Soluzzjoni ta' kalibrar ta' amino acids standard biex jintużaw ma' hydrolysates, c = 5nmol/50μl cysteic acid u methionine sulphone u c = 10 nmml/50 μl tal-amino acids l-oħra. Dewweb 2,2 g sodium chloride (3.10) f'tazza ta' 100 ml ma' 30 ml citrate buffer (3.24). Żid 4,00 ml soluzzjoni standard tal-amino acids (3.27.1), 4,00 ml soluzzjoni standard cysteic acid u methionine sulphone (3.27.2) u 0,50 ml soluzzjoni stokk standard tal-istandard intern (3.27.3) jekk intuża. Aġġusta l-pH għal 2,20 bis-idrossidu tas-sodju (3.18).

Ittrasferixxi kwantittivament f'kunjett iggradat ta' 50ml u imla sal-marka bis-citrate buffer (3.24) u ħawwad.

Aħżnu f'temperatura taħt il-5 oC għal mhux aktar minn 3 xhur.

Ara wkoll l-osservazzjonijiet 9.1

3.27.5. Soluzzjoni ta' kalibrar tal-amino acids standard għall-użu mal-hydrolysates ippreparati skont il-paragrafu 5.3.3.1. u għall-użu mal-estratti (5.2). Is-soluzzjoni ta' kalibrar tiġi ppreparata skont 3.27.4 mingħajr sodium chloride.

Aħżnu f'temperatura taħt il-5 oC għal mhux aktar minn 3 xhur.

4. Apparat

4.1. Kunjett bil-qiegħ tond ta' 100 jew 250 ml li għandu reflux condenser imwaħħal miegħu.

4.2. Kunjett tal-ħġieġ borosilicate 100 ml bit-tapp bil-kamin b'kisja ta' gomma/teflon (eż. Duran, Schott) sabiex jintuża fil-forn.

4.3. Forn b'ventilazzjoni sfurzata u regolatur tat-temperatura bi preċiżjoni aqwa minn + 2 oC.

4.4. miter tal-pH (tliet postijiet deċimali).

4.5. Filtru tal-membrana (0,22 μm).

4.6. Magna ċentrifuga.

4.7. Evaporatur tat-tip rotary vacuum.

4.8. Shaker mekkaniku jew stirrer manjetika.

4.9. Analizzatur tal-amino acids jew apparat HPLC b'kolonna għall-iskambju tal-jonji, tagħmir għan-ninhydrin, post column derivatization u ditettur fotometriku.

Il-kolonna timtela b'sulfonated polystyrene resins li huma kapaċi li jisseparaw l-amino acidsi minn xulxin u minn materjali li huma ninhydrin-positive. Iċ-ċirkolazzjoni fit-tubi tal-buffer u tan-ninhydrin hija pprovduta minn pompi li għandhom stabilità ta' ċirkolazzoni ta' ±0,5 % fil-perjodu li jkopri kemm it-test tal-kalibrar standard kif ukoll l-analiżi tal-kampjun.

B'xi ftit analizzatturi tal-aċidu amminiku, jistgħu jintużaw proċeduri li fihom, il-hydrolysate għandu konċentrazzjoni ta' sodju ta' c = 0,8 mol/l u li jkun fih il-formic acid li jifdal mill-istadju tal-ossidazzjoni. Oħrajn ma jagħtux separazzjoni sodisfaċenti ta' ċerti amino acidsi jekk il-hydrolysate ikun fih wisq formic acid u/jew konċentrazzjonijiet għoljin ta' sodium ion. F'dan il-każ il-volum ta' aċidu jitnaqqas permezz ta' evaporazzjoni għal bejn wieħed u ieħor 5 ml wara l-idroliżi u qabel l-aġġustament tal-pH. L-evaporazzjoni għandha ssir f'vakwu f'temperatura massima ta' 40 oC.

5. Proċedura

5.1. Preparazzjoni tal-kampjun

Il-kampjun jintaħan biex jgħaddi minn passatur b'malji ta' 0,5 mm. Kampjuni bi kwantità għolja ta' umdità jridu jew jitnixxfu bl-arja f'temperatura li ma tkunx aktar minn 50 oC jew jitnixxfu bil-friża qabel ma jintaħnu. Kampjuni b'kontenut għoli ta' xaħam għandhom jiġu estratti b'żejt ħafif mhux raffinat (3.12) qabel ma jintaħnu.

5.2. Determinazzjoni ta' Amino Acids Ħielsa fl-għalf u Taħlit li jkun sar minn qabel

Iżen sal-eqreb 0,2 mg ammont xieraq (1-5 g) tal-kampjun ippreparat (5.1), f'kunjett koniku u żid 100,0 ml mit-taħlita tal-estrazzjoni (3.21). Ħawwad it-taħlita għal 60 minuta bl-użu ta' shaker mekkaniku jew stirrer manjetiku (4.8). Ħalli s-sediment joqgħod u itfa' bil-pipetta 10,0 mis-supernatant solution f'tazza ta' 100 ml.

Żid 5,0 ml soluzzjoni ta' sulfosalicylic acid (3.22), mat-taħwid u kompli ħawwad bl-għajnuna ta' stirrer manjetika għal 5 minuti. Iffiltra jew iċċentrifuga s-supernatant sabiex jitneħħa kull preċipitat. Qiegħed 10,0 ml mis-soluzzjoni li tirriżulta f'tazza ta' 100 ml u aġġusta l-pH għal 2,20 bl-użu ta' soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (3.18), ittrasferixxi għal kunjett volumetriku ta' volum xieraq bl-użu ta' citrate buffer (3.24), u imla sal-marka bil-buffer solution (3.24).

Jekk qiegħed jintuża standard intern, żid 1,00 ml mill-istandard intern (3.27.3) għal kull 100 ml soluzzjoni finali u imla sal-marka bil-buffer solution (3.24).

Ipproċedi għal fażi tal-kromatografija skont il-paragrafu 5.4.

Jekk l-estratti m'humiex qegħdin jiġu eżaminati, għandhom jinħażnu taħt il-5 oC.

5.3. Determinazzjoni tal-Amino Acids Totali

5.3.1. Ossidazzjoni

Iżen sal-eqreb 0,2 mg minn 0,1 sa 1 g mill-kampjun ippreparat (5.1) fi:

— kunjett bil-qiegħ tond ta' 100 ml (4.1) għall-idroliżi miftuħa (5.3.2.3) jew,

— kunjett ta' 250 ml bil-qiegħ tond (4.1) jekk hi meħtieġa konċentrazzjoni baxxa ta' sodju (5.3.3.1) jew,

— kunjett ta' 100 ml b'tapp bil-kamin (4.2), (għall-idroliżi magħluqa 5.3.2.4).

Il-porzjon tal-kampjun miżun għandu jkollu kontenut ta' nitroġenu ta' bejn wieħed u ieħor 10 mg u umdità ta' mhux aktar minn 100 mg.

Qiegħed il-kunjett/flixkun f'banju ilma bis-silġ u kessaħ sa 0 oC, żid 5 ml mit-taħlita ta' ossidazzjoni (3.23) u ħawwad bi spatula tal-ħġieġ bil-ponta mgħawġa. Issiġilla l-kunjett/flixkun li fih l-ispatula b'rita li ma jgħaddix arja minnha, qiegħed il-banju bl-ilma bis-silġ li fih ir-reċipjent issiġillat fi friġġ f'temperatura ta' 0 oC u ħalli għal 16-il siegħa. Wara 16-il siegħa neħħi mill-friġġ u ddekomponi r-reaġent eċċessiv tal-ossidazzjoni biż-żieda ta' 0,84 g sodium disulphite (3.4).

Ipproċedi għal 5.3.2.1.

5.3.2. Idroliżi

5.3.2.1. Idroliżi ta' kampjuni ossidizzati

Mal-kampun ossidizzat ippreparat skont 5.3.1 żid 25 ml taħlita ta' idroliżi (3.20) u oqgħod attent li tlaħlaħ ir-residwu tal-kampjun li jeħel mal-ġnub tar-reċipjent u tal-ispatula.

Skont il-proċedura ta' idroliżi li qiegħda tintuża, kompli skont 5.3.2.3 jew 5.3.2.4.

5.3.2.2. Idroliżi ta' kampjuni li m'humiex ossidizzati

Iżen f'kunjett bil-qiegħ tond ta' 100 ml jew 250 ml (4.1) jew kunjett ta' 100 ml bit-tapp bil-kamin (4.2), sal-eqreb 0,2 mg, minn0,1 sa 1 g tal-kampjun ippreparat (5.1). Il-porzjon miżun tal-kampjun għandu jkollu kontenut ta' nitroġenu ta' bejn wieħed u ieħor 10 mg. B'attenzjoni żid 25 ml tat-taħlita tal-idroliżi (3.20) u ħallat mal-kampjun.. Kompli skont 5.3.2.3 jew 5.3.2.4.

5.3.2.3. Idroliżi miftuħa

Żid 3 żibeġ tal-ħġieġ mat-taħlita fil-kunjett (ippreparat skont 5.3.2.1 jew 5.3.2.2) u għalli kontinwament taħt reflux għal 23 siegħa. Meta titlesta l-idroliżi, aħsel il-kondensatur b'5 ml citrate buffer (3.24). Skonnettja l-kunjett u kessħu f'banju ta' silġ.

Kompli skont 5.3.3.

5.3.2.4. Idroliżi magħluqa

Poġġi l-kunjett li jkun fih it-taħlita ppreparata f'konformità ma' 5.3.2.1 jew 5.3.2.2 f'forn (4.3) f'temperatura ta' 110 oĊ. Waqt l-ewwel siegħa sabiex tipprevjeni milli tiżdied il-pressjoni (minħabba l-evoluzzjoni ta' sustanzi li fihom il-gass) u sabiex tipprevjeni xi splużjoni, poġġi t-tapp bil-kamin fuq ir-reċipjent. Tagħlaqx ir-reċipjent bit-tapp. Wara siegħa, agħlaq ir-reċipjent bit-tapp u ħallih fil-forn (4.3) għal 23 siegħa. Meta titlesta l-idroliżi, neħħi l-kunjett mill-forn, iftaħ it-tapp tal-kunjett b'attenzjoni u poġġi l-kunjett f'banju ta' ilma bis-silġ. Ħallih jiksaħ.

Skont il-proċedura għall-aġġustament tal-pH (5.3.3), ittrasferixxi kwantitattivament il-kontenuti tal-kunjett f'tazza ta' 250 ml jew kunjett ta' 250 ml bil-qiegħ tond bl-użu ta' citrate buffer (3.24).

Kompli skont 5.3.3.

5.3.3. Aġġustament tal-pH

Skont it-tolleranza tas-sodju tal-analizzatur tal-amino acids (4.9), kompli skont 5.3.3.1 jew 5.3.3.2 għall-aġġustament tal-pH.

5.3.3.1. Għal Sistemi Kromatografiċi (4.9) li jeħtieġu konċentrazzjoni baxxa tas-sodju:

Huwa rrakkomandat li tintuża soluzzjoni stokk standard interna (3.27.3) meta jintużaw l-analizzaturi tal-amino acids li jeħtieġu konċentrazzjoni baxxa tas-sodju (meta l-volum tal-aċidu jkollu jitnaqqas).

F'dan il-każ, żid 2,00 ml mis-soluzzjoni stokk standard interna (3.2-7.3) mal-hydrolysate qabel l-evaporazzjoni.

Żid 2 qatriet 1-octanol (3.15) mal-hydrolysate miksub f'konformità mal-paragrafu 5.3.2.3 jew 5.3.2.4.

Bl-użu ta' evaporatur rotanti (4.7) naqqas il-volum sa 5-10 ml f'vakwu f'temperatura ta' 40 oC. Jekk il-volum aċċidentalment jitnaqqas għal inqas minn 5 ml il-hydrolysate għandu jintrema u l-analiżi terġa' tibda.

Aġġusta l-pH għal 2,20 bis-soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (3.18) u kompli għall-paragrafu 5.3.4.

5.3.3.2. Għall-Analizzaturi ta' Amino Acids l-oħrajn kollha (4.9)

Ħu l-hydrolysates miksuba f'konformità ma' 5.3.2.3 jew 5.3.2.4 u nnewtralizzahom parzjalment billi żżid filwaqt li tħawwad b'attenzjoni, 17-il ml soluzzjoni tas-idrossidu tas-sodju (3.17) filwaqt li tiżgura li t-temperatura tinżamm taħt l-40 oC.

Aġġusta l-pH għal 2,20 f'temperatura ambjentali bl-użu tas-soluzzjoni tas-idrossidu tas-sodju (3.17) u finalment soluzzjoni ta' idrossidu tas-sodju (3.18). Kompli għal 5.3.4.

5.3.4. Kampjun ta' soluzzjoni għall-kromatografija

Ittrasferixxi kwantittivament il-hydrolysate bil-pH aġġustat (5.3.3.1 jew 5.3.3.2) bis-citrate buffer (3.24) f'kunjett iggradat ta' 200 ml, u imla sal-marka bil-buffer (3.24).

Jekk ma ntużax diġà standard intern, żid 2,00 ml standard intern (3.27.3) u imla sal-marka bis-citrate buffer (3.24). Ħawwad sew.

Kompli għall-istadju tal-kromatografija (5.4).

Jekk il-kampjuni tas-soluzzjonijiet ma jkunux sejrin jiġu eżaminati dakinhar stess għandhom jinħażnu taħt il-5 oC.

5.4. Kromatografija

Qabel il-kromatografija ġib l-estratt (5.2) jew tal-hydrolysate (5.3.4) għal temperatura ambjentali. Ħawwad it-taħlita u ffiltra ammont xieraq minn filtru tal-membrana ta' 0,22 μm (4.5). Is-soluzzjoni ċara li tirriżulta tiġi soġġetta għal kromatografija ta' skambju tal-jonji bl-użu ta' analizzatur tal-amino acid (4.9).

L-injezzjoni tista' ssir b'mod manwali jew awtomatiku. Huwa importanti li tiżdied l-istess kwantità tas-soluzzjoni ± 0,5 % mal-kolonna għall-analiżi tal-istandards u kampjuni ħlief meta jintuża standard intern, u li l-proporzjonijiet ta' sodju: amino acid fis-soluzzjonijiet standard u kampjuni huma simili kemm jista' jkun.

B'mod ġenerali, il-frekwenza tal-provi tal-kalibrar tiddependi fuq l-istabilità tar-reaġent tan-ninhydrin u s-sistema analitika. L-istandard jew il-kampjun jiġi dilwit bis-citrate buffer (3.24) sabiex jagħti erja tal-ogħla livell tal-istandard ta' 30-200 % tal-erja tal-ogħla livell tal-kampjun tal-amino acid.

Il-kromatografija tal-amino acids tvarja ftit skont it-tip tal-analizzatur u r-raża użati. Is-sistema magħżula għandha tkun kapaċi tissepara l-amino acids minn xulxin u mill-materjali li huma pożittivi fin-ninhydrin. Fil-medda tal-operazzjoni, is-sistema kromatografika għandha tagħti rispons lineari għat-tibdil fl-ammonti ta' amino acids miżjudin mal-kolonna.

Waqt l-istadju tal-kromatografija japplikaw il-proporzjonijiet tal-inqas: l-ogħla livell imsemmija hawn taħt, meta tiġi analizzata soluzzjoni ekwimolari (tal-amino acids li qegħdin jiġu stabbiliti). Is-soluzzjoni ekwimolari għandu jkollha mill-inqas 30 % tat-tagħbija massima ta' kull amino acid li jista' jitkejjel amino acid (4.9).

Għas-separazzjoni tat-threonine-serine, il-proporzjon tal-inqas:l-ogħla livell minn żewġ amino acids li huma overlapping fuq il-kromatogramma ma għandux ikun aktar minn 2:10 (jekk jiġu ddeterminati biss is-cyst(e)ine, methionine, threonine u lysine, separazzjoni insuffiċjenti mill-ogħla livelli (qċaċet) qrib xulxin tinfluwenza d-determinazzjoni b'mod ħażin). għall-amino acids l-oħrajn kollha, is-separazzjoni għandha tkun aħjar minn 1:10.

Is-sistema għandha tiżgura li l-lysine huwa sseparat mill-“lysine artifacts” u ornithine.

6. Kalkolu tar-riżultati

L-erja tal-kampjun u l-ogħla livelli standard jitkejlu għal kull amino acid individwali u jiġi kkalkulat l-ammont (X), fi g amino acid għal kull kg tal-kampjun.

Jekk jintuża standard intern immultiplika bi:

A = erja tal-ogħla livell, hydrolysate jew estratt

B = erja tal-ogħla livell, soluzzjoni standard ta' kalibrar

C = erja tal-ogħla livell, standard intern f'hydrolysate jew estratt

D = erja tal-ogħla livell, standard intern, soluzzjoni ta' kalibrar standard

M = piż molekulari tal-amino acid li qiegħed jiġi ddeterminat

c = konċentrazzjoni ta' standard f'μmol/ml

m = piż tal-kampjun (g) (ikkoreġut għall-piż oriġinali jekk huwa mnixxef jew bix-xaħam imneħħi)

V = ml hydrolysate totali (5.3.4) jew kalkolu f'ml tal-volum tal-estratt totali dilwit (6.1)

Kemm is-cystine kif ukoll is-cysteine t-tnejn huma ddeterminati bħala cicteic acid fil-hydrolysates ta' kampjun ossidizzat, iżda huma kkalkulati bħala cystine (C6H12N2O4S2, M 240,30 g/mol) billi jintuża M 120,15 g/mol (= 0,5 x 240,30 g/mol).

Il-methionine huwa ddeterminat bħala methionine sulphone f'hydrolysates ta' kampjun ossidizzat iżda kkalkulat bħala methionine billi jintuża M tal-methionine: 149,21 g/mol.

Methionine ħieles miżjud huwa ddeterminat wara l-estrazzjoni bħala methionine, għall-kalkolu jintuża l-istess M.

6.1. Il-volum totali dilwit ta' estratti (F) għad-determinazzjoni ta' amino acids ħielsa (5.2) huwa kkalkulat kif ġej:

V = volum ta' estratt finali

7. Evalwazzjoni tal-metodu

Il-metodu ġie ttestjat f'interparagun f'livell internazzjoni fl-1990 billi intużaw erba' tipi differenti ta' għalf (għalf tal-majjali mħallat, kompost tal-brojlers, konċentrazzjoni ta' proteini, taħlit minn qabel). Ir-riżultati, wara eliminazzjoni ta' dawk li jvarjaw ħafna, ta' devjazzjoni medja u standard huma mogħtija fit-tabelli f'dan il-punt:







Medji f'g/kg Materjal għar-referenza Amino Acid Threonine Cyst(e)ine Methionine Lysine Għalf tal-majjali mħallat 6,94 n = 15 3,01 n = 17 3,27 n = 17 9,55 n = 13 Kompost għall-brojlers 9,31 n = 16 3,92 n = 18 5,08 n = 18 13,93 n = 16 Konċentrat ta' proteini 22,32 n = 16 5,06 n = 17 12,01 n = 17 47,74 n = 15 Taħlit minn qabel 58,42 n = 16 — 90,21 n = 16 98,03 n = 16 n = Numru ta' laboratorji parteċipanti

7.1. Ripetibbiltà

Ir-ripetibilità mfissra bħala “Fi ħdan id-Devjazzjoni Standard tal-Laboratorju” tal-interparagun imsemmi hawn fuq hija mogħtija fit-tabella ta' hawn taħt:







Fi ħdan id-Devjazzjoni Standard tal-Laboratorju (Sr) fi g/kg Materjal għar-referenza Amino Acid Threonine Cyst(e)ine Methionine Lysine Għalf tal-majjali mħallat 0,13 n = 15 0,10 n = 17 0,11 n = 17 0,26 n = 13 Kompost għall-brojlers 0,20 n = 16 0,11 n = 18 0,16 n = 18 0,28 n = 16 Konċentrat ta' proteini 0,48 n = 16 0,13 n = 17 0,27 n = 17 0,99 n = 15 Taħlit minn qabel 1,30 n = 16 — 2,19 n = 16 2,06 n = 16 n = Numru ta' laboratorji parteċipanti







Koeffiċjent ta' Varjazzjoni ( %) għal Fi ħdan id-Devjazzjoni Standard tal-Laboratorju (Sr) Materjal għar-referenza Amino Acid Threonine Cyst(e)ine Methionine Lysine Għalf tal-majjali mħallat 1,9 n = 15 3,3 n = 17 3,4 n = 17 2,8 n = 13 Kompost għall-brojlers 2,1 n = 16 2,8 n = 18 3,1 n = 18 2,1 n = 16 Konċentrat ta' proteini 2,7 n = 16 2,6 n = 17 2,2 n = 17 2,4 n = 15 Taħlit minn qabel 2,2 n = 16 — 2,4 n = 16 2,1 n = 16 n = Numru ta' laboratorji parteċipanti

7.2 Riproduċibilità

Ir-riżultati għal bejn id-devjazzjoni standard tal-laboratorju mill-interparagun imsemmi hawn fuq huma mogħtija fit-tabella ta' hawn taħt:







Devjazzjoni Standard Bejn il-Laboratorji (SR) f'g/kg Materjal għar-referenza Amino Acid Threonine Cyst(e)ine Methionine Lysine Għalf tal-majjali mħallat 0,28 n = 15 0,30 n = 17 0,23 n = 17 0,30 n = 13 Kompost għall-brojlers 0,48 n = 16 0,34 n = 18 0,55 n = 18 0,75 n = 16 Konċentrat ta' proteini 0,85 n = 16 0,62 n = 17 1,57 n = 17 1,24 n = 15 Taħlit minn qabel 2,49 n = 16 — 6,20 n = 16 6,62 n = 16 n = Numru ta' laboratorji parteċipanti







Koeffiċjent ta' varjazzjoni ( %) għad-Devjazzjoni Standard Bejn il-Laboratorji (SR) Materjal għar-referenza Amino Acid Threonine Cyst(e)ine Methionine Lysine Għalf tal-majjali mħallat 4,1 n = 15 9,9 n = 17 7,0 n = 17 3,2 n = 13 Kompost għall-brojlers 5,2 n = 16 8,8 n = 18 10,9 n = 18 5,4 n = 16 Konċentrat ta' proteini 3,8 n = 16 12,3 n = 17 13,0 n = 17 3,0 n = 15 Taħlit minn qabel 4,3 n = 16 — 6,9 n = 16 6,7 n = 16 n = Numru ta' laboratorji parteċipanti

8. Użu ta' materjali għar-referenza

L-applikazzjoni korretta tal-metodu għandha tiġi vverifikata billi jsir kejl ripetut ta' materjali għar-referenza ċċertifikati meta huma disponibbli. Huwa rrakommandat kalibrar b'soluzzjoni ta' kalibrar ċċertifikata ta' amino acids.

9. Osservazzjonijiet

9.1. Minħabba differenzi bejn l-analizzaturi tal-amino acids il-konċentrazzjonijiet finali tas-soluzzjonijiet ta' kalibrar tal-amino acids standard (ara 3.27.4 u 3.27.5) u tal-hydrolysate (ara 5.3.4) għandhom jittieħdu bħala gwida.

Ir-rispons lineari varju tal-apparat għandu jiġi ċċekkjat għall-amino acids kollha.

Is-soluzzjoni standard tiġi dilwita bis-citrate buffer sabiex tagħti l-ogħla livelli f'nofs il-medda.

9.2. Fejn jintuża apparat ta' kromatografija b'likwidi ta' prestazzjoni għolja sabiex jiġu analizzati l-hydrolysates, il-kundizzjonijiet sperimentali għandhom jiġu ottimizzati f'konformità mar-rakkommandazzjonijiet tal-manifattur.

9.3. Billi jiġi applikat il-metodu għall-għalf li jkun fih aktar minn 1 % ta' chloride (konċentrat, għalf minerali, għalf supplimentari) l-istima tal-methionine tista' tirriżulta f'waħda baxxa u jkun jeħtieġ li jsir trattament speċjali.

G. DETERMINAZZJONI TA' TRYPTOPHAN

1. Għan u skop

Dan il-metodu jagħmel possibbli d-determinazzjoni tat-tripotofan totali u ħieles fl-għalf. Ma jagħmilx distinzjoni bejn il-forom D- u L-.

2. Prinċipju

Għad-determinazzjoni ta' tryptophan totali, il-kampjun jiġi idrolizzat f'kundizzjonijiet alkalini ma' soluzzjoni ta' barium hydroxide saturata u msaħħna sa 110 oC għal 20 siegħa. Wara jiżdied l-istandard ta' idroliżi interna.

Għad-determinazzjoni ta' tryptophan ħieles, il-kampjun huwa estratt taħt kundizzjonijiet aċidi ħfief fil-preżenza ta' standard intern.

It-tryptophan u l-istandard intern fil-hydrolysate jew fl-estratt huma determinati bl-HPLC b'ditezzjoni fluworexxenti.

3. Reaġenti

3.1. Irid jintuża ilma ddistillat darbtejn jew ilma ta' kwalità ekwivalenti (konduttività < 10 μS/cm).

3.2. Is-sustanza standard: tryptophan (purità/kontenut ≥ 99 %) imnixxef taħt vakwu fuq phosphorous pentoxide.

3.3. Sustanza standard interna: α-methyl-tryptophan (purità/kontenut ≥ 99 %), imnixxef taħt vakum fuq phosphorous pentoxide.

3.4. Barium hydroxide octa-hydrate (għandha tingħata attenzjoni sabiex il-Ba(OH)2 .8 H2O ma jiġix espost b'mod eċċessiv għall-arja sabiex tiġi evitata l-formazzjoni ta' BaCO3, li jista jiddisturba d-determinazzjoni) (ara l-osservazzjoni 9.3).

3.5. Idrossidu tas-sodju.

3.6. Ortho-phosphoric acid, w (w/w) = 85 %.

3.7. Aċidu idrokloriku, ρ201,19 g/ml.

3.8. Metanol, ekwivalenti għall-grad HPLC.

3.9. Petroleum ħafif, medda ta' togħlija 40 – 60 oĊ.

3.10. Soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju, c = 1 mol/l:

Dewweb 40,0 g NaOH (3.5) fl-ilma u imla sa 1 l bl-ilma (3.1).

3.11. Aċidu idrokloriku, c= 6 mol/l:

Ħu 492 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.

3.12. Aċidu idrokloriku, c= 1 mol/l:

Ħu 82 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.

3.13. Aċidu idrokloriku, c= 0,1 mol/l:

Ħu 8,2 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.

3.14. Ortho-phosphoric acid, c = 0,5 mol/l:

Ħu 34 ml ortho-phosphoric acid (3.6) u imla sa 1 l bl-ilma (3.1).

3.15. Soluzzjoni konċentrata ta' tryptophan (3.2), c = 2,50 μmol/ml:

F'kunjett volumetriku ta' 500 ml dewweb 0,2553 g tryptophan (3.2) fl-aċidu idrokloriku (3.13) u imla sal-marka bl-aċidu idrokloriku (3.13). Aħżen f'-18 oC għal massimu ta' 4 ġimgħat.

3.16. Soluzzjoni standard konċentrata interna, c = 2,50 μmol/ml:

F'kunjett volumetriku ta' 500 ml dewweb 0,2728 g α-methyl-tryptophan (3.3) fl-aċidu idrokloriku (3.13) u imla sal-marka bl-aċidu idrokloriku (3.13). Aħżen f'-18 oC għal massimu ta' 4 ġimgħat.

3.17. Soluzzjoni standard ta' kalibrar ta' tryptophan u standard intern:

Ħu 2.00 ml ta' soluzzjoni konċentrata ta' tryptophan (3.15), u 2,00 ml ta' soluzzjoni standard interna konċentrata (α-metil-tryptophan) (3.16). Ħallat bl-ilma (3.1) u l-metanol (3.8) għal bejn wieħed u ieħor l-istess volum u għal bejn wieħed u ieħor l-istess konċentrazzjoni ta' metanol (10-30 %) bħall-hydrolysate lest.

Din is-soluzzjoni trid titħejja friska qabel l-użu.

Ipproteġi mid-dawl tax-xemx dirett waqt l-operazzjoni.

3.18. Acetic acid

3.19. 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanol.

3.20. Ethanolamine w (w/w) > 98 %.

3.21. Soluzjoni ta' 1 g 1,1,1-trikloro-2-metil-2-propanol (3.19) f'100 ml metanol (3.8)

3.22. Fażi mobbli għal HPLC: 3,00 g aċidu aċetiku (3.18) + 900 ml ilma (3.1) +50,0 ml soluzzjoni (3.21) ta' 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanol (3.19) fil-metanol (3.8) (1g/100ml). Aġġusta pH għal 5,00 bl-użu ta' etanolamina (3.20). Imla sa 1 000 ml bl-ilma (3.1).

4. Apparat

4.1. Apparat HPLC bid-ditettur spektrofluworimetriku.

4.2. Kolonna għal kromatografija b'likwidi, 125 mm × 4 mm, C18, 3 μm ippakkjar, jew ekwivalenti.

4.3. Miter tal-pH.

4.4. Kunjett tal-polypropylene, kapaċità 125 ml, bl-għonq wiesa' u b'tapp bil-kamin.

4.5. Filtru membrana, 0,45 μm.

4.6. Autoclave, 110 (± 2) oC, 1,4 (0,1 ) bar.

4.7. Shaker mekkaniku jew stirrer manjetika.

4.8. Vortex mixer.

5. Proċedura

5.1. Preparazzjoni ta' kampjuni

Il-kampjun jintaħan biex jgħaddi minn passatur b'malji ta' 0,5 mm. Kampjuni bi kwantità għolja ta' umdità jridu jew jitnixxfu bl-arja f'temperatura li ma tkunx aktar minn 50 oC jew jitnixxfu bil-friża qabel ma jintaħnu. Kampjuni b'kontenut għoli ta' xaħam iridu jiġu estratti b'petroleum ħafif (3.9) qabel ma jintaħnu.

5.2. Determinazzjoni ta' tryptophan ħieles (estratt)

Iżen sal-eqreb 1 mg ammont xieraq (1-5