02002D0657 — MT — 10.06.2021 — 003.001

Dan it-test hu maħsub purament bħala għodda ta’ dokumentazzjoni u m’għandu l-ebda effett legali. L-istituzzjonijiet tal-Unjoni m'għandhom l-ebda responsabbiltà għall-kontenut tiegħu. Il-verżjonijiet awtentiċi tal-atti rilevanti, inklużi l-preamboli tagħhom, huma dawk ippubblikati fil-Ġurnal Uffiċjali tal-Unjoni Ewropea u disponibbli f’EUR-Lex. Dawk it-testi uffiċjali huma aċċessibbli direttament permezz tal-links inkorporati f’dan id-dokument

►B ID-DEĊIŻJONI TAL-KUMMISSJONi tat- 12 ta' Awissu 2002 li jimplimenta d-Direttiva tal-Kunsill 96/23/KE rigward il-ħidma ta' metodi analitiċi u l-interpretazzjoni tar-riżultati (notifikata taħt dokument numru K(2002) 3044) (Test b'rilevanza għaż-ŻEE) (2002/657/KE) (ĠU L 221 17.8.2002, p. 8)

Emendata bi:









▼B

ID-DEĊIŻJONI TAL-KUMMISSJONi

tat- 12 ta' Awissu 2002

li jimplimenta d-Direttiva tal-Kunsill 96/23/KE rigward il-ħidma ta' metodi analitiċi u l-interpretazzjoni tar-riżultati

(notifikata taħt dokument numru K(2002) 3044)

(Test b'rilevanza għaż-ŻEE)

(2002/657/KE)

▼M3 —————









▼B

2. KRITERJI TAL-ĦIDMA U REKWIŻITI OĦRAJN GĦAL METODI ANALITIĊI

Metodi analitiċi jew kombinazzjonijiet ta' metodi minbarra dawk deskritti hawn taħt jistgħu jintużaw biss għal screening jew għal skopijiet konfermatorji jekk jista' jiġi ppruvat illi jilħqu r-rekwiżiti rilevanti mwaqqfa f'din id-Deċiżjoni.

2.1. REKWIŻITI ĠENERALI

2.1.1. Maniġġjar tal-kampjuni

Il-kampjuni għandhom jiġi maniġġjati u pproċessati b'tali mod li hemm ċans massimu ta' skoperta tas-sostanza. Il-proċeduri ta' l-immaniġġjar tal-kampjuni għandhom jipprevjenu l-possibilità tal-kontaminazzjoni aċċidentali jew telf ta' l-analiti.

2.1.2. Tweetiq tat-testijiet

2.1.2.1. L-irkupru

Waqt l-analiżi tal-kampjuni l-irkupru għandu jiġi ddeterminat f'kull lott ta' kampjuni, jekk jintuża fattur tal-korrezzjoni ta' l-irkupru fiss. Jekk l-irkupru huwa limitat, il-fattur fiss tal-korrezzjoni jista' għalhekk jintuża. Inkella il-fatturi ta' l-irkupru akkwistat għal dak il-lott speċifiku għandu jintuża, sakemm il-fattur speċifiku ta' l-irkupru ta' l-analite fil-kampjun għandu jiġi applikat f'liema każ għandha tintuża l-proċedura standard ta' l-addizzjoni (ara 3.5) jew standard intern għad-determinazzjoni kwantitattiva ta' analite fil-kampjun.

2.1.2.2. Speċifiċita'

Metodu għandu jkun jista' jiddistingwi bejn l-analite u sostanzi oħrajn taħt kondizzjonijiet esperimentali. Għandha tingħata stima dwar l-estent sa fejn dan huwa possibbli. Strateġiji biex tiġi kkumbattuta kwalunkwe interferenza ma' sostanzi meta tintuża t-teknika ta' kejl deskritta, eż., omologi, analogi, prodotti metaboliċi tar-residwu ta' interess għandhom jiġu wżati. Huwa ta' importanza prinċipali illi l-interferenza, li tista' ssir mill-komponenti tal-matriċi, tiġi investigata.

2.2. METODI TA' SCREENING

Għandhom jintużaw biss għal skopijiet ta' screening b'konformità mad-direttiva 96/23/KE dawk it-tekniċi analitiċi li għalihom jista' jintwera b'mod dokumentat u traċċabbli illi huma validati u għandhom rata ta' konformità falza ta' < 5 % ((1-żball) fil-livell ta' interess. Fil-każ ta' riżultat suspettat mhux konformi dan ir-riżultat għandu jiġi kkonfermat b'metodu konfermatorju.

2.3. METODI KONFERMATORJI GĦAL RESIDWI U KONTAMINANTI ORGANIĊI

Metodi konfermatorji għar-residwi jew il-kontaminanti organiċi għandhom jipprovdu informazzjoni dwar l-istruttura kimika ta' l-analite. Konsegwentement metodi bbażati biss fuq analiżi kromatografika minghajr l-użu ta' skoperta spettrometrika m'humiex xierqa waħedhom għall-użu bħala metodi konfermatorji. Iżda, jekk teknika waħedha m' għandhiex biżżejjed speċifiċità l-ispeċifiċità mixtiqa għandha tiġi akkwistata bil-proċeduri analitiċi li jikkonsistu f'kombinazzjonijiet xierqa għat-tindif, separazzjoni(jiet) kromatografiċi u skoperta spettrometrika.

Dawn il-metodi jew kombinazzjonijiet ta' metodi li ġejjin huma kkunsidrati xierqa għall-identifikazzjoni ta' residwi jew kontaminanti organiċi tal-gruppi ta' sostanzi indikati







Tabella 1 Metodi konfermatorji xierqa għar-residwi jew kontaminanti organiċi Teknika ta' kejl SostanziAnness 1 96/23/KE Limitazzjonijiet LC jew GC bi skoperta spettrometrika massa Gruppi A u B Biss jekk wara separazzjoni kromatografika on-line jew off-line Biss jekk tekniċi ta' skanjar sħaħ jintużaw jew bl-użu ta' mhux inqas minn 3 (grupp B) jew 4 (grupp A) punti ta' identifikazzjoni għal tekniċi li ma jirreġistrawx l-ispettri tal-massa sħaħ LC jew GC bi skoperta spettrometrika Gruppi A u B Għandhom jintlaħqu rekwiżiti speċifiċi għall-assorbiment fl-ispettrometrija ta' l-IR LC-full-scan DAD Grupp B Għandhom jintlaħqu rekwiżiti speċifiċi għall-assorbiment fl-ispettrometrija tal-UV LC -florexxenza Grupp B Biss għall-molekuli li juru florexxenza native u għal molekuli li juru florexxenza jew wara trasformazzjoni jew wara derivatizzazzjoni 2-D TLC - full-scan UV/VIS Grupp B HPTLC bi-dimenzjonali u l-ko-kromatografija huma obbligatorji GC-Elektron capture detection Grupp B Biss jekk jintużaw żewġ kolonni ta' polarità differenti LC-immunogramma Grupp B Biss jekk jintużaw żewġ sistemi kromatografiċi differenti jew metodu ieħor ta' skoperta indipendenti LC-UV/VIS (tul ta' wave waħda) Group B Biss jekk jintużaw żewġ żewġ sistemi kromatografiċi differenti jew metodu ieħor ta' skoperta indipendenti.

2.3.1. Kriterji u rekwiżiti ta' ħidma komuni

Il-metodi konfermatorji għandhom jipprovdu informazzjoni dwar l-istruttura kimika ta' l-analite. Meta aktar minn kompost wieħed jagħti l-istess risposta, allura l-metodu ma jistax jiddiskrimina bejn dawk il-komposti. Metodi bbażati biss fuq analiżi kromatografika mingħajr l-użu ta' skoperta spettrometrika mhumiex xierqa waħedhom għall-użu konfermatorju.

Fejn użat fil-metodu, għandu jiżdied standard intern xieraq għall-parti tat-test fil-bidu tal-proċedura ta' estrazzjoni. Skond id-disponibilita' għandhom jintużaw jew forom ittikkettjati bl-isotope ta' l-analite, li huma partikolarment xierqa għall-iskoperta spettrometrika massa, jew komposti li huma stutturalment relatati ma' l-analite.

Meta ma jista' jintuża l-ebda standard intern xieraq, l-identifikazzjoni ta' l-analite għandha tiġi kkonfermata bil-ko-kromatografija. F'dan il-każ għandu jiġi akkwistat punt ewlieni wieħed biss, fejn l-għoli tal-punt ewlieni mtejjeb (jew l-arja) għandha tkun ekwivalenti għall-ammont ta' analite miżjud. Bil-kromatografija bil-gass (GC) jew bil-kromatografija likwida (LC), il-wesgħa ewlenija f'nofs l-għoli massimu għandu jkun bejn 90 % u 110 % tal-wisgħa oriġinali, u l-ħijiniet ta' ritenzjoni għandhom ikunu identiċi f'; marġini ta' 5 %. Għal metodi ta' kromatografija fuq saff irqiq (TLC), għandha tiġi intensifikata biss it-tikka li hija maħsuba li hija l-analite; tikka ġdida m' għandhiex tidher u l-apparenza viżiva m' għandhiex tinbidel.

Materjal ta' riferenza jew materjal iffortifikat li fih ammont magħruf ta' analite, fil-limitu permess jew il-limitu tad-deċiżjoni jew qrib (kampjun ta' kontroll mhux konformi) kif ukoll materjali ta' kontroll konformi kif ukoll reaġent vojta għandhom preferibbilment jintużaw fil-proċedura sħiħa fl-istess ħin ma' kull lott ta' kampjuni tat-testijiet analizzati. L-ordni għall-injezzjoni ta' l-estratti fl-istrument analitiku huwa kif ġej: reaġent vojt, kampjun tal-kontroll konformi, kampjun(i) li għandu/hom jiġu/I kkonfermat(i), kampjun għall-kontroll konformi għal darb'oħra u fl-aħħar kampjun għall-kontroll mhux konformi. Varjazzjonijiet minn din is-sekwenza għandhom jiġu ġġustifikati

2.3.2. Kriterji ta' ħidma addizzjonali u rekwiżiti oħrajn għal metodi ta' analiżi kwantitattivi

2.3.2.1. Verita' tal-metodi kwantitattivi

Fil-każ ta' analiżi ripetuti ta' materjal ta' riferenza ċċertifikat, il-gradi ta' gwidi għad-devjazzjoni tal-medja korretta bl-irkupru ddeterminat bl-esperimenti tas-sehem tal-piż mil-valur iċċertifikat huma kif ġej:







Tabella 2 Verita' minima tal-metodi kwantitattivi Sehem tal-piż Skala ≤ 1 jig/kg 50 % sa + 20 > 1 jig/kg to 10 jig/kg 30 % sa + 10 ≥ 10 jig/kg 20 % sa + 10

Meta mhumiex disponibbli tali CRMs, huwa aċċettabbli illi l-verita' tal-kejl tiġi stmata permezz ta' l-irkupru ta' addizzjonijiet ta' ammonti magħrufa ta' l-analite/i għal matriċi vojta. Data korretta bil-medja ta' l-irkupru huma aċċettabbli biss meta jaqgħu fil-meded li jidhru fit-Tabella 2.

2.3.2.2. Preċiżjoni tal-metodi kwantitattivi

Il-koeffiċjenti inter-laboratorju tal-varjazzjoni (CV) għall-analiżi ripetuta ta' materjal ta' riferenza jew materjal fortifikat, taħt kondizzjonijiet ta' riproduċibilita' m'għandux jeċċedi l-livell ikkalkolat bl-Ekwazzjoni ta' Horwitz. L-ekwazzjoni hija

fejn C hija s-sehem tal-piż espress bħala potenza (esponent) ta' 10 (e.g. 1 mg/g = 103). L-eżempji jintwerew fit-Tabella 3.







Tabella 3 eżempji għaċ-CV tar-riproduċibilita' ta' metodi kwantitativi fi skala ta' ishma tal-piż ta' l-analite Sehem tal-Piż CVs tar-Riproduċibilita' CV(%) 1 jig/kg (*1) 10 jig/kg (*1) 100 jig/kg 23 1 000 jig/kg (1 jig/kg) 16 ( *1 ) Għal ishma tal-piż inqas minn 100 jig/kg l-applikazzjoni ta' l-Ewkazzjoni ta' Horwitz tagħti valuri għoljin mhux aċċettabbli. Għalhekk is-CVs għal konċentrazzjonijiet inqas minn 100 jig/kg għandhom ikunu baxxi kemm jista' jkun.

Għall-analiżi mwettqa taħt kondizzjonijiet ta' repetibilità, is-CV inter-laboratorju tipikament ikun bejn nofs u żewġ terzi tal-valuri msemmija fuq. Għal analiżi mwettqa taħt kondizzjonijiet ta' repetibilità fil-laboratorju, is-CV fil-laboratorju m'għandux ikun akbar mis-CV tar-riproduċibilità.

F'każ ta' sostanzi f'limitu permess stabbilit, il-metodu għandu jilħaq ir-riproiduċibilità fil-laboratorju mhux akbar mis-CV tar-riproduċibilità korrispondenti f'konċentrazzjoni ta' 0,5 x il-limitu permess.

2.3.3. Kriterji ta' ħidma u rekwiżiti oħrajn għal skoperta massa spettrometrika

Metodi massi spettrometriċi huma xierqa għal konsiderazzjoni bħala metodi konfermatorji biss wara separazzjoni kromatografika on-line jew off-line.

2.3.3.1. Separazzjoni kromatografika

Għal proċeduri GC-MS, is-separazzjoni kromatografika bil-gass għandha ssir bl-użu ta' kolonni kapillari. Għall-proċeduri LC-MS, is-separazzjoni kromatografika għandha ssir bl-użu ta' kolonni LC xierqa. F'kwalunkwe każ, il-ħin minimu ta' ritenzjoni aċċettabbli għall-analite li qed tiġi eżaminata hija darbtejn daqs il-ħin ta' ritenzjoni li jikkorrispondi għall-volum vojt tal-kolonna. Il-ħin ta' ritenzjoni (jew il-ħin ta' ritenzjoni relattiv) ta' l-analite fil-parti tat-test għandu jaqbel ma' dak ta' l-istandard tal-kalibratura fi żmien ta' ritenzjoni speċifikat. Iż-żmien ta' ritenzjoni għandu jkun kommensurat mal-qawwa tar-riżoluzzjoni tas-sistema kromatografika. Is-sehem tal-ħin tar-ritenzjoni kromatografika ta' l-analite għal dak ta' l-instandard inter, i.e., il-ħin ta' ritenzjoni relattiv ta' l-analite, għandu jikkorrespondi ma' dak tas-soluzzjoni tal-kalibratura b'tolleranza ta' ± 0,5 % għal GC u ± 2,5 % għal LC.

2.3.3.2. Skoperta spettrometrika tal-piż

L-iskoperta spettrometrika tal-piż għandha titwettaq billi jintużaw metodi ta' MS bħal reġistrazzjoni ta' spettri ta' piż sħiħ (sc ans sħaħ) jew sorveljanza ta' l-ions magħżula (SIM), kif ukoll metodi MS-MS bħal Sorveljanza ta' Reazzjonijiet Magħżula (SRM), jew metodi oħrajn xierqa ta' MS jew MS-MS flimkien ma' modi ta' jonizzazzjoni xierqa. Fl-ispettrometrija massa ta' riżoluzzjoni għolja (FIRMS), ir-riżoluzzjoni tipikament tkun akbar minn 10 000 għall-iskala sħiħa tal-piż f'wied ta' 10 %.

Scan sħiħa: meta d-determinazzjoni spettrometrika tal-piż issir bi twettiq ta' spettra ta' scan sħiħa, il-preżenza tal-joni djanjostiċi mkejla kollha (l-jone molekulari, addutti karatteristiċi ta' l-jone molekulari, joni karatteristiċi tas-sehem u joni ta' l-iżotopi) b'intensita' relattiva ta' aktar minn 10 % fl-ispettru ta' riferenza ta' l-istandard tal-kalibratura hija obbligatorja.

SIM: meta d-determinazzjoni spettrometrika tal-piż issir bil-frammentografija, il-jone molekulari għandu preferibbilment ikun wieħed mill-joni djanjostiċi magħżula (l-jone molekulari, addutti karatteristiċi ta' l-jone molekulari, joni karatteristiċi tas-sehem u joni ta' l-iżotopi). L-joni djanjostiċi magħżula m'għandhomx joriġinaw esklussivament mill-istess parti tal-molekula Il-grad tas-sinjal għall-ħoss għal kull jone djanjostiku għandha tkun >_ 3:1.

Scan sħiħa u SIM: L-intensitajiet relattivi tal-joni skoperti, espress bħala perċentwal ta' l-intensità ta' l-jone l-aktar intens jew tranżizzjoni, għandhom jikkorrispondu għal dawk ta' l-istandard tal-kalibratura, jew minn taħlitiet standard għall-kalibratura jew minn kampjuni spiked, imkejla taħt l-istess kondizzjonijiet, fit-tolleranzi li ġejjin:







Tabella 4 Tolleranzi massimi permessi għal intensitajiet relativi ta l-joni bl-użu ta' skala ta' tekniċi spettrometriċi dwar il-piż Intensità relattiva (% tal-base peak) EI-GC-MS (relattiv) CI-GC-MS, GC-MS “LC-MS, LC-MS” (relattiv) > 50 % ± 10 % ± 20 % > 20 % 50 % ± 15 % ± 25 % > 10 % 20 % ± 20 % ± 30 % ≤ 10 % ± 50 % ± 50 %

Interpretazzjoni tad-data spettrali dwar il-piż: L-intensitajiet relattivi ta' l-joni relattivi u/jew pari tal-jone tal-prodott prekursur għandhom jiġu identifikati billi jitqabblu l-ispettri jew bl-integrazzjoni tas-sinjali tat-traċċi tal-piż wieħed. Meta jiġi applikat korrezzjoni fi sfond, dan għandu jiġi applikat uniformament fil-lott kollu (ara 2.3.1, paragrafu 4) u għandu jiġi indikat b'mod ċar.

Scan sħiħa: Meta jiġu rreġistrati spettri ta' scan sħiħa fl-ispettrometrija ta'piż wieħed, għandhom ikunu preżenti minimu ta' erba' joni b'intensità relattiva ta' > = 10 % tal-base peak. L-jone molekulari għandu jiġi inkluż jekk huwa preżenti fl-ispettru ta' riferenza b'intensità ta' >_ 10 %, Għall-inqas erba' joni għandhom ikunu fit-tolleranzi massimi permessi għal intensijtajiet ta' l-joni rispettivi (Tabella 5). Tiftix fil-libreriji megħjun mill-kompjuter jista' jintuża. F'dan il-każ, it-tqabbil tad-data spettrali dwar il-piż fil-kampjuni tat-test ma' dak tat-taħlita tal-kalibratura għandha teċċedi fattur ta' qbil kritiku. Dan il-fattur għandu jiġi ddeterminat waqt il-proċess tal-validazzjoni għal kull analite a bażi ta' spettri li għalihom il-kriterji deskritti taħt ikunu ntlaħqu. Il-varjabilità fl-ispettri kkaważa mill-matriċi tal-kampjuni u ħidma tad-indikatur għandhom jiġu vverifikati.

SIM: Meta l-ishma tal-piż jitkejlu bl-użu ta' tekniċi mhux ta' scan sħiħa, sistema ta' punti ta' identifikazzjoni għandha tintuża sabiex id-data tiġi interpretata. Għall-konferma ta' sostanzi elenkati fil-Grupp A ta' l-Anness I tad-Direttiva 96/23/KE, għandu jkun meħtieġ minimu ta' 4 punti ta' identifikazzjoni. Għall-konferma ta' sostanzi elenkati fil-Grupp B ta' l-Anness I tad-Direttiva 96/23/KE, huwa meħtieġ minimu ta' 3 punti ta' identifikazzjoni. It-tabella taħt turi n-numru ta' punti ta' identifikazzjoni li jista' jiggwadanja kull wieħed mill-metodi bażiċi spettrometriċi tal-piż. Iżda, sabiex ikun hemm kwalifika għall-punti ta' identifikazzjoni meħtieġa ghall-konferma u s-somma tal-punti ta' identifikazzjoni li għandhom jiġu kkalkolati:

(a) għandu jitkejjel minimu ta' mhux inqas minn skala waħda ta' jone, u

(b) l-iskali kollha mkejla rilevanti ta' l-joni għandhom jilħqu l-kriterji deskritti fuq, u

(ċ) jistgħu jiġu kkombinati massimu ta' tliet metodi separati biex jiġi akkwistat in-numru minimu ta' punti ta' identifikazzjoni.







Tabella 5 Ir-relazzjoni bejn skala ta' klassijiet ta' ishma tal-piż u l-punti ta' identifikazzjoni gwadanjati Teknika ta' MS Punti ta' identifikazzjoni ggwadanajti għal kull jone Spettrometrija tal-piż ta' riżoluzzjoni baxxa (LR) 1,0 Jone tal-prekursur LR-MS 1,0 Prodotti ta' tranżizzjoni LR-MS 1,5 HRMS 2,0 Jone tal-prekursur HR- MS 2,0 Prodotti ta' tranżizzjoni HR-MS 2,5 Noti: (1) Kull jone jista' jingħadd darba biss. (2) GC-MS bl-użu ta' jonizzazzjoni ta' l-impatt ta' l-elettroni jitqies bħala metodu differenti minn GC-MS bl-użu ta'ionisation kimika (3) L-analite differenti tista' tintuża biex jiżdied in-numru ta' punti ta' identifikazzjoni biss jekk id-derivativi jużaw kimiċi ta' reazzjoni differenti. (4) Għal sostanzi fil-Grupp A ta' L-Anness I tad-Direttiva 96/23/KE, jekk waħda mit-tekniċi tintuża fil-proċedura analitika: HPLC flimkien ma' full-scan diode array spectrophotometry (DAD); HPLC flimkien ma' skoperta tal-florexxenza; HPLC flimkien ma' immunogramma; TLKC bi-dimensjonali flimkien ma' skoperta spettrometrika; jista' jiġiu kkontribwit massimu ta' punt wieħed ta' identifikazzjoni, kemm-il darba jintlaħqu l-kriterji rivelanti ghal dawn il-metodi. (5) Il-prodotti ta' transizzjoni jistgħu jinkludi prodotti derivati kif ukoll derivati minn derivati.







Tabella 6 Eżempji tan-numru ta' punti ta' identifikazzjoni ggwadanjati għal skala ta' metodi u kumbinazzjonijiet tagħhom (n = inteġer) Metodu/i Numru ta' joni Punti ta' identifikazzjoni GC-MS (El jew CI) N n GC-MS (El u CI) 2 (EI) + 2 (CI) 4 GC-MS (El jew CI) 2 derivativi 2 (Derivativ A) + 2 (Derivativ B) 4 LC-MS N n GC-MS-MS 1 prekursur u 2 derivattivi 4 LC-MS-MS 1 prekursur u 2 derivattivi 4 GC-MS-MS 2 joni prekursuri, kull wieħed b'derivattivi wieħed 5 LC-MS-MS 2 joni prekursuri, kull wieħed b'derivattivi wieħed 5 LC-MS-MS-MS 1 prekursur, 1 derivattiv u 2 derivattivi mid-derivattiv 5,5 HRMS N 2 n GC-MS u LC-MS 2 + 2 4 GC-MS u HRMS 2 + 1 4

2.3.4. Kriterji tal-ħidma u rekwiżiti oħrajn għall-kromatografija flimkien ma' l-iskoperta bl-Infrared

Punti għoljin xierqa: Il-punti għolijin xierqa huma l-massimi ta' l-assorbiment fl-ispettru ta' l-infrared ta' standard tal-kalibratura li jilħaq dawn ir-rekwiżiti li ġejjin.

2.3.4.1. Skoperta bl-infra-red

Massimu ta' l-assorbiment: Dan għandu jkun skala tan-numru tal-mewġa 4 000 - 500 cm-1.

Intensità ta' l-assorbiment: Dan m'għandux ikun inqas minn jew

(a) assorbenza speċifika molari ta' 40 rigward il-peak base line; jew

(b) assorbenza relattiva ta' 12,5 % ta' l-assorbenza tal-punt l-aktar għoli l-aktar intens fir-reġjun ta' 4 000 - 5 000 cm-1

fejn it-tnejn jitkejlu rigward assorbenza żero,u 5 % ta' l-assorbenza tal-punt l-aktar għoli l-aktar intens fir-reġjun ta' 4 000 - 5 000 cm-1 meta t-tnejn jitkejlu rigward il- peak base line tagħhom

Nota:

Għalkemm il-punti l-aktar għoljin adegwati skond (a) jistgħu jiġu preferuti minn perspettiva teoretika, dawk skond (b) huma aktar faċli biex jiġu determinati fil-prattika.

In-numru ta' punti l-aktar għoljin fl-ispettru infrared ta' l-analite li l-frekwenzi tagħhom jikkorrispondu ma' punt l-aktar għoli fl-ispettru ta' l-istandard tal-kalibratura, f'marġini ta' ± 1 cm-1 jiġi ddeterminat.

2.3.4.2. Interpretazzjoni ta' data spettrali ta' l-infra-red

L-assorbiment għandu jkun preżenti fir-reġjuni kollha ta' l-ispettru ta' l-analite li jikkorrespondi ma' punt l-aktar għoli adegwat fl-ispettru ta' riferenza ta' l-istandard tal-kalibratura. Minimu ta' sitt punti l-aktar għoljin adegwati huwa meħtieġ fl-ispettru ta' l-infrared ta' l-istandard tal-kalibratura. Jekk hemm inqas minn sitt punti l-aktar għoljiin (7), l-ispettru in kwistjoni ma jistax jintuża bħala spettru ta' riferenza. Il-'marka', i.e., il-perċentwal tal-punti l-aktar għoljin adegwati misjuba fl-ispettru ta' l-infrared ta' l-analite, għandu jkun mhux inqas minn 50. Fejn m'hemmx qbil eżatt għal punt l-aktar għoli adegwat, ir-reġjun rilevanti ta' l-ispettru ta' l-analite għandhu jkun konsistenti mal-preżenza ta' punt l-aktar għoli li jaqbel. Il-proċedura tgħodd biss għal punti l-aktar għoljin ta' l-assorbiment fl-ispettru tal-kampjun n' intensità ta' għall-inqas tliet darbiet daqs il-peak noise.

2.3.5. Kriterji tal-ħidma u rekwiżiti ohrajn għad-determinazzjoni ta' analite bl-użu ta' LC ma' metodi oħrajn ta' skoperta

2.3.5.1. Separazzjoni kromatografika

Għandu jintuża standard intern jekk huwa disponibbli materjal xieraq għal dan l-iskop. Għandu preferibbilmenti ikun standard relatat b'ħin ta' ritenzjoni qrib dak ta' l-analite. L-analite għandu jeluta fil-ħin tar-ritenzjoni li huwa tipiku għall-istandard tal-kalibratura korrispondenti ta' l-istess kondizzjonijiet sperimentali. Il-ħin minimu ta' ritenzjoni aċċettabbli għal analite għandu jkun darbtejn daqs il-ħin ta' ritenzjoni li jikkorrispondi għall-volum vojt tal-kolonna. Il-proporzjon tal-ħin ta' ritenzjoni ta' l-analite għal dak ta' l-istandard intern, i.e., il-ħin ta' ritenzjoni relattiv ta' l-analite, għandu jkun l-istess bħal dak ta' l-istandard tal-kalibratura fil-matriċi xierqa, f'marġinu ta' ± 2,5 %.

2.3.5.2. Skoperta bl-iscan sħiħa UV/VIS

Għandhom jitlaħqu l-kriterji tal-ħidma għall-metodi ta' l-LC.

Il-massimi ta' l-assorbiment fl-ispettru ta' l-analite għandhom ikunu fl-istess wavelengths bħal dawk ta' l-istandard tal-kalibratura f'marġini ddeterminat bir-reżoluzzjoni tas-sistema ta' l-iskoperta. Ghall-iskoperta bid-diode array, dan huwa tipikament sa ± 2 nm. L-ispettru ta' l-analite 'l fuq minn 220 nm għandu, għal dawk il-partijiet taż-żewġ spettri b'assorbenza relattiva ≥10 %, ma jkunx viżibbilment differenti mill-ispettru ta' l-istandard tal-kalibratura. Dan il-kriterji jintlaħaq l-ewwel nett meta l-istess massimi jkunu preżenti u t-tieni meta d-differenza bejn iż-żewġ spettri ma tkun fl-ebda punt osservat aktar minn 10 % ta' l-assorbenza ta' l-istandard tal-kalibratura. Fil-każ li jintużaw tfittxija fil-libreri jew tqabbil bl-għajnuna tal-kompjuter, il-paragun bejn id-data spettrali fil-kampjuni tat-test ma' dak tat-taħlita tal-kalibratura għandha teċċedi fattur ta' tqabbil kritiku. Dan il-fattur għandu jiġi ddeterminat waqt il-proċess tal-validazzjoni għal kull analite fuq il-bażi ta' spettra li għalihom il-kriterji deskritti hawn fuq huma milħuqa. Il-varjabbilità fl-ispettri ikkawżata mill-matriċi tal-kampjuni u l-ħidma tad-indikatur għandhom jiġu vverifikati.

2.3.5.3. Kriterji ta' ħidma għall-iskoperta florimetrika

Għandhom jitlaħqu l-kriterji tal-ħidma ghall-metodi ta' l-LC.

Dan jgħodd għal molekuli li juru florexxenza nativa u għal molekuli li juru florexxenza wara trasformazzjoni jew derivatizzazzjoni. L-għażla tal-wavelengths ta' l-eċċitazzjoni u l-emissjoni flimkien mal-kondizzjonijiet kromatografiċi għandha ssir b'tali mod li l-okkorrenza ta' komponenti interferenti tiġi mminimizzata fl-estri vojta tal-kampjuni.

L-eqreb massimu ta' l-ogħla punt fil-kromatogramma għandu jiġi sseparat mill-ogħla punt indikat ta' l-analite b'għall-inqas wesgħa waħda sħiħa ta' l-ogħla punt f'10 % tal-għoli massimu ta' l-ogħla punt ta' l-analite.

2.3.5.4 Kriterji ta' ħidma għad-determinazzjoni ta' analite b'immunogramma LC

Immunogramma LC mhix xierqa waħedha għall-użu bħala metodu konfermatorju.

Għandhom jintlaħqu l-kriterji rilevanti għall-metodi LC

Il-parametri tal-kontroll tal-kwalità definiti minn qabel, eż., rbit mhux speċifiku, l-irbit relattiv tal-kampjuni tal-kontroll, il-valur ta' l-assorbenza tal-vojt għandhom ikunu fil-limiti milħuqa waqt il-validazzjoni ta' l-prova.

L-immunogramma għandu jkun mibni minn għall-inqas ħames ishma.

Kull sehem għandu jkun inqas minn nofs il-wesgħa ta' l-ogħla punt.

Is-sehem bil-kontenut massimu ta' l-analite għandu jkun l-istess għall-kampjun suspettat, il-kampjun tal-kontroll mhux konformi u l-istandard.

2.3.5.5. Determinazzjoni ta' analite bl-użu ta' LC bi skoperta bl-UV/VIS (wavelength waħda)

LC b'skoperta bl-UV/VIS (wavelength waħda) mhix xierqa waħedha għall-użu bħala metodu konfermatorju.

Il-massimu ta' l-eqreb ogħla punt fil-kromatogramma għandu jiġi sseparat mill-ogħla punt ta' l-analite indikat b'għall-inqas wesgħa waħda sħiħa ta' l-ogħla punt f'10 % ta' l-għoli massimu ta' l-ogħla punt ta' l-analite.

2.3.6. Kriterji ta' ħidma u rekwiżiti oħrajn għad-determinazzjoni ta' analite bl-użu ta' 2-D TLC flimkien ma' skoperta spettrometrika bl-UV/VIS bi scan sħiħa

HPTLC bi-dimensjonali u l-ko-kromatografija huma obbligatorji

Il-valur ta' RF ta' l-analite għandhom jaqblu mal-valuri RF ta' l-istandards sa ±5 %.

Id-dehra viżiva ta' l-analite għandha ma tkunx tista' tingħaraf minn dik ta' l-istandard.

Għal tikkek ta' l-istess kulur in-nofs ta' fejn għandha tkun l-eqreb tikka għandu jiġi sseparat min-nofs tat-tikka ta' l-analite b'mhux inqas minn nofs is-somma tad-djametri tat-tikek.

L-ispettru ta' l-analite m'għandux ikollu dehra differenti mill-ispettru ta' l-istandard, kif deskritt għall-iskoperta b'scan sħiħa bl-UV/VIS.

Fil-każ li jintużaw tfittixija u tqabbil bl-għajnuna tal-kompjuter, it-tqabbil tad-data spettrali fil-kampjuni tat-testijiet ma' dak tat-taħlita tal-kalibratura għandu jeċċedu fattur kritiku tal-qbil. Dan il-fattur għandu jiġi ddeterminat waqt il-proċess tal-validazzjoni għal kull analite fuq il-bażi ta' spettri li għalihom il-kriterji deskritti fuq huma milħuqa. Il-varjabbilità fl-ispettru kkawżata mill-matriċi tal-kampjuni u l-ħidma tad-indikatur għandhom jiġu vverifikati.

2.3.7. Il-kriterji u r-rekwiżiti tal-ħidma għad-determinazzjoni ta' analite bil-GC flimkien ma' l-iskoperta bil-qbid ta' l-elettroni (ECD)

Għandu jintuża standard intern jekk huwa disponibbli materjal xieraq għal dan l-iskop. Għandu jkun preferibbilment sostanza b'ħin ta' ritenzjoni qrib dak ta' l-analite. L-analite għandu jeluta ħin ta' ritenzjoni li huwa tipiku għall-istandard tal-kalibratura korrispondenti taħt l-istess kondizzjonijiet esperimentali. Il-ħin ta' ritenzjoni minimu aċċettabbli għandu jkun darbtejn il-ħin ta' ritenzjoni li jikkorrispondi volum vojt tal-kolonna. Il-proporzjon tal-ħin ta' ritenzjoni ta' l-analite ma' dak ta' l-istandard internali, i.e., il-ħin ta' ritenzjoni relattiv ta' l-analite, għandu jkun l-istess bħal dak ta' l-istandard tal-kalibratura fil-matriċi xieraq, f'marġini ta' ± 0,5 %. Il-massimu ta' l-eqreb ogħla mpunt fil-kromatogramma għandu jiġi sseparat mill-ogħla punt ta' l-analite indikat b'b'għall-inqas wesgħa waħda sħiħa ta' l-ogħla punt f'10 % ta' l-għoli massimu ta' l-ogħla punt ta' l-analite. Għal aktar informazzjoni tista' tintuża l-ko-kromatografija.

2.4 METODI KONFERMATPORJI GĦALL-ELEMENTI

Il-metodi konfermatorji għall-elementi kimiċi għandhom ikunu bbażati fuq il-kunċett ta' identifikazzjoni mhux ekwivoka u kwantifikazzjoni akkurata kif ukoll preċiża permezz ta' proprjetajiet fiżiċi-kimiċi uniċi għall-element kimiku in kwistjoni (eż., wavelength karatteristika ta' l-element ta' radjazzjoni emessa jew assorbita, massa atomika) fil-livell ta' interess.

Dawn il-metodi jew kombinazzjonijiet ta' metodi li ġejjin jitqiesu xierqa għall-identifikazzjoni ta' elementi kimiċi:







Tabella 7 Metodi konfermatorji xierqa għall-elementi kimiċi Teknika Parametru mkejjel Differential pulse anodic stripping voltametry Sinjal elettriku Spettrometrija ta' l-assorbiment atomiku Fjamma Wavelengthta' l-assorbiment Ġenerazzjoni tal-hydrides Wavelengthta' l-assorbiment Fwar kiesaħ Wavelengthta' l-assorbiment Atomizzazzjoni elettrotermali (forn tal-grafite) Wavelengthta' l-assorbiment Spettrometrija ta' l-emissjoni atomika plażma kkopjata b'mod induttiv Wavelengthta' l-emissjoni Spettrometrija tal-piż plażma kkopjata b'mod induttiv Proporzjoni piż-kariga

2.4.1. Kriterji komuni għall-ħidma u rekwiżiti oħrajn għall-metodi konfermatorji

Materjal ta' riferenza jew fortifikat li fiha ammonti magħrufa ta' analite, fi jew viċin il-limitu massimu permess jew il-limitu tad-deċiżjoni (kampjun tal-kontroll mhux konformi) kif ukoll materjali tal-kontroll konformi u reaġent vojts għandhom preferibbilment jintużaw matul il-proċedura kollha fl-istess ħin ma' kull lott ta' kampjuni tat-testijiet. Analizzati. Is-sekwenza rakkmandata għall-injezzjoni ta' l-estratti fl-istrument analitiku huwa kif ġej: reaġent vojt, kampjun tal-kontroll konformi, kampjun li jrid jiġi kkonfermat, kampjun tal-kontroll konformi u fl-aħħar kampjun tal-kontroll mhux konformi. Kull varjazzjoni minn dan għandha tiġi ġġustifikata.

Ġeneralment, il-parti l-kbira tal-metodi analitiċi jirrikjedu diġestjoni sħiħa tal-matriċi organiku sabiex jiġu akkwistati taħlitiet qabel id-determinazzjoni ta' l-analite. Dan jista' jsir bl-użu tal-proċedura tal-mineralizzazzjoni bil-microwaves, li timminimizza r-riskju ta' telf u/jew kontaminazzjoni ta' l-analiti ta' interess. Għandhom jintużaw kontenituri tat-Teflon dikontaminati ta' kwalità tajba. Jekk jintużaw metodi oħrajn ta' diġestjoni mxarrba jew niexfa, għandha tkun disponibbli evidenza dokumentata sabiex il-fenomeni ta' telf jew kontaminazzjoni potenzjali jistgħu jiġu esklużi. Bħala alternattiva għad-diġestjoni, proċeduri tas-separazzjoni (eż., estrazzjoni) jistgħu jingħażlu f'xi ċirkostanzi biex l-analiti jiġu sseparati mill-komponenti tal-matriċi u/jew biex l-analiti jiġu kkonċentrati sabiex jiġu introdotti fit-tagħmir analitiku.

Rigward il-kalibratura, kemm jekk esterna jew inkella bbażata fuq il-metodu standard taż-żieda, għandu jkun hemm attenzjoni sabiex l-iskala tal-ħidma stabbilita għall-analiżi ma tiġix eċċeduta. Fil-każ tal-kalibratura esterna, huwa obbligatorju li l-istandards tal-kalibratura huma ppreparati f'taħlita li taqbel kemm jista' jkun mal-kompożizzjoni tat-taħlita tal-kampjun. Il-korrezzjoni fl-isfond għandha tiġi applikata wkoll jekk meħtieġ, b'ċirkostanzi analitiċi speċifiċi.

2.4.2. Kriterji ta' ħidma addizzjonali u rekwiżiti oħrajn għall-metodi ta' analiżi kwantitattivi

2.4.2.1. Verità tal-metodi kwantitattivi

Fil-każ ta' analiżi ripetuti ta' materjal ta' riferenza ċċertifikat għall-elementi, id-devjazzjoni tal-medja tal-kontenut ddeterminata bl-esperimenti mill-valur iċċertifikat m'għandux jaqa' barra l-limitu ± 10 %. Meta m'humiex disponibbli tali CRMs, huwa aċċettabbli illi l-verita' tal-kejl tiġi stmata permezz ta' rkupru ta' addizzjonijiet ta' ammonti magħrufa ta' l-element għall-kampjuni mhux magħrufa. L-attenzjoni tinġibed lejn il-fatt li, mhux bħall-analite, l-element miżjud mhuwiex marbut kimikament fil-matriċi ta' veru u li għalhekk ir-riżultati akkwistati b'dan il-mod għandhom inqas validità minn dawk akkwistati bl-użu ta' CRMs. Id-data ta' l-irkupru huma aċċettabbli biss meta huma sa ± 10 % mill-valur immirat

2.4.2.2. Preċiżjoni tal-metodi kwantitattivi

fil-każ ta' analiżi ripetuta ta' kampjun imwettqa taħt kondizzjonijiet ta' riproduċibilità fil-laboratorju, il-koeffiċjenti intra-laboratorju tal-varjazzjoni (CV) tal-medja m'għandiex teċċedi l-valuri li ġejjin:







Tabella 8 CVs għal metodi kwantitattivi fi skala ta' ishma tal-piżijiet ta' l-elementi Sehem tal-piż CV (%) ≥ 10 jig/kg sa 100 jig/kg 20 > 100 jig/kg sa 1 000 jig/kg 15 ≥ 1 000 jig/kg 10

2.4.3. Rekwiżiti speċifiċi għal differential pulse anodic stripping voltametry (DPASV)

Qirda totali ta' materja organika f'kampjuni qabel id-determinazzjoni b'DPASV huwa ta' importanza prinċipali. L-ebda sinjali wesgħin minħabba l-preżenza ta' materjali organiċi m'għandha tidher fil-voltamogrammi. Il-kostitwenti tal-matriċi inorganika jistgħu jinfluwenzaw l-ogħla punti f'DPASV. Għalhekk, il-kwantifikazzjoni għandha ssir bil-metodu ta' addizzjonijiet standard. kampjuni ta' voltamogrammi tipiċi ta' taħlita kampjun għandhom jiġu forniti mal-metodu.

2.4.4. Rekwiżiti speċifiċi għall-ispettrometrija bl-assorbiment atomiku (AAS)

Din it-teknika hija fuq il-bażi mono-elementali u teħieġ għalhekk ottimizzazzjoni tas-settings ta' l-esperiment skond l-element partikolari li għandu jiġi kkwantifikat. Fejn possibbli, ir-riżultati għandhom jiġu vverifikati kwalitattivament u kwantitattivament billi jintużaw linji ta' assorbiment alternattivi (idealment, għandhom jingħażlu żewġ linji differenti ta' l-assorbiment). L-istandards tal-kalibratura għandhom jiġu ppreparati f'matriċi ta' taħlitiet li taqbel kemm jista' jkun ma' dik tat-taħlita għall-kejl tal-kampjun (eż., konċentrament ta' l-aċidu jew komposizzjoni tal-modifikatur). Biex il-valuri vojta jiġu mminimizzati, ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta' l-akbar purità disponibbli. Skond il-mod magħżul għall-vaporizzazzjoni u/jew atomizzazzjoni ta' kampjun, jistgħu jiġu distinti diversi tipi ta' AAS.

2.4.4.1. Ħtiġiet speċifiċi għall-AAS bil-fjamma

Is-settings ta' l-istrument għandhom jiġu ottimizzati għal kull element. Għandhom jiġu vverifikati speċjalment il-komposizzjoni tal- gass u r-rati tal-mixi. Korrettur ta' l-għajn kontinwu għandu jintuża sabiex jiġu evitati interferenzi mill-assorbiment fl-isfond. Fil-każ ta' matriċi mhux magħrufa, għandha ssir verifika rigward liema korrezzjoni ta' l-isfond hija meħtieġa.

2.4.4.2. Rekwiżiti speċifiċi għall-AAS bil-forn tal- grafite

Il-kontaminazzjoni fil-laboratorju spiss taffettwa l-eżattezza meta jintużaw livelli ultra-traċċi fil-forn tal-grafite. Għalhekk, reaġenti ta' purezza għolja, ilma deionizzat u oġġetti tal-plastik inert għall-użu tal-kampjun u ta' l-istandard għandhom jintużaw. Is-settings ta' l-istrumenti għandhom jiġu ottimizzati għal kull element. Għandhom jiġu vverifikati speċjalment il-kondizzjonijiet qabel it-trattament u ta' l-atomizzazzjoni (temperatura, ħin) u l-modifika tal-matriċi.

Il-ħidma taħt kondizzjonijiet ta' atomizzazzjoni iżotermali (eż., tubu tal-grafite trasvers imsaħħan bi pjanċa ta' Lvov integrata (8) tnaqqas l-influwenza tal-matriċi rigward l-atomizzazzjoni ta' l-analite. Flimkien mal-modifikazzjoni tal-matriċi u l-korrezzjoni ta' l-isfond ta' Zeeman (9), il-kwantifikazzjoni permezz ta' kurva tal-kalibratura fuq il-bażi tal-kejl ta' taħlitiet bl-ilma standard jiġi permess.

2.4.5. Rekwiżiti speċifiċi għall-ispettrometrija ta' l-assorbiment atomiku bil-ġenerazzjoni tal-hydrides

Il-komposti organiċi li fihom elementi bħall-arseniku, bismuth, germanju, ċomb, antimonju, selenju, landa u tellurju jistgħu jkunu stabbli ħafna u jjkunu jeħtieġu dekomposizzjoni ossidattiv biex jiġu akkwistati riżultati korretti għall-konenut ta' l-element kollu. Għalhekk id-diġestjoni bil-microwaves jew inċinerazzjoni bil-pressa għolja taħt kondizzjonijiet ossidattivi qawwijin huma rrakkmandati. Għandha tingħata l-akbar attenzjoni għall-konverżjoni sħiħa u riproduċibbli ta' l-elementi għall-hydrides korrrispondenti tagħhom

Il-formazzjoni ta' arsenic hydride fit-taħlita ta' aċidu idrokloriku b'NaBH4 tiddependi fuq l-istat ta' ossidazzjoni ta' l-arsenic (As III: formazzjoni mgħaġġla, As V: ħin itwal tal-formazzjoni). Biex jiġi evitat telf ta' sensittivita' għad-determinazzjoni ta' As V bil-metodu ta' injezzjoni tal-mixja, ikkawżata mill-ħin qasir għar-reazzjoni f'din is-sistema. As V għandu jitnaqqas għal As III wara d-dekomposizzjoniossidattiv. Il-potassium iodide/aċidu askorbiku jew cysteine huma xierqa għal dak l-għan. Riżultati vojta, taħlitiet tal-kalibratura u taħlitiet tal-kampjuni għandhom jiġu ttrattati bl-istess mod. Il-ħidma b'sistema ta' lottijiet tippermetti d-determinazzjoni taż-żewġ speċje ta' arseniku mingħajr ma tiġi affettwata l-eżattezza. Minħabba l-formazzjoni ttardjata ta' As V-hydride, il-kalibratura għandha ssir b'integrazzjoni ta' l-arja ta' l-ogħla punt. Is-settings ta' l-istrumenti għandhom jiġu ottimizzati. Il-mixja tal-gass, li jittrasferixxi l-hydride għall-atomizzatur, huwa ta' importanza speċjali u għanduha tiġi vverifikata.

2.4.6. Rekwiżiti speċifiċi għall-ispettrometrija ta' l-assorbiment atomiku bil-fwar kesħa

Il-fwar kiesaħ jintuża biss fil-każ tal-merkurju. Minħabba t-telf mill-iżvintar u l-assorbiment tal-merkurju elementali, hija meħtieġa attenzjoni speċjali matul l-analiżi kollha. Il-kontaminazzjoni bir-reaġenti jew mill-ambjent għandha tiġi evitata bir-reqqa.

Il-komposti organiċi li fihom il-merkurju jeħtieġu dekomposizzjoni ossidattiva biex jiġu akkwistati r-riżultati għall-kontenut sħiħ tal-merkurju. Għad-dekomposizzjoni, sistemi ssiġillati bid-diġestjoni bil-microwaves jew inċineraturi bil-pressa għolja għandhom jitnużaw. Hija meħtieġa attenzjoni speċjali għat-tindif tat-tagħmir li kellu kuntatt mal-merkurju.

Hemm vantaġġi fil-ħidma bil-metodu ta' injezzjoni tal-fluss. Għal limiti ta' deċiżjoni aktar baxxi, l-assorbiment tal-merkurju elementali fuq assorbitur tad-deheb jew tal-platina segwita minn desorbiment termali hija rrakkmandata. Kuntatt ta' l-assorbitur jew taċ-ċellola ma' l-umdità jiddisturba l-kejl u għandu jiġi evitat.

2.4.7. Rekwiżiti speċifiċi għall-ispettrometrija ta' l-emissjoni atomika bil-plażma kkoppjata induttivament (ICP-AES)

L-ispettrometrija ta' l-emissjoni atomika bil-plażma kkoppjata induttivament (10) huwa metodu multi-element, li jippermetti kejl simultanju ta' diversi elementi. Biex tuża l-ICP-AES, il-kampjuni għandhom l-ewwel jiġu diġeriti sabiex il-matriċi organiċi jiġu dikomposti. Għandhom jintużaw sistemi ssiġillati bid-diġestjoni bil-microwaves jew inċineraturi bil-pressa għolja. Għall-analiżi ICP-AES sinifikanti, il-kalibratura ta' l-istrumenti u l-għażla ta' l-element jew tal-wavelength għandhom rwol essenzjali.Għall-kalibratura ta' l-istrumenti, fil-każ ta' kurvi ta' kalibratura lineari, huwa ġeneralment neċessarju li jitkejlu t-taħlitiet tal-kalibratura ta' erba' konċentrazzjonijiet biss, għaliex il-kurvi tal-kalibratura ta' l-AES ġeneralment huma lineari fuq erba' sa sitt ordnijiet ta' kobor tal-konċentrazzjoni. Il-kalibratura tas-sistema ta' l-ICP-AES għandha normalment issir b'standard multi-elementali, li għandu jiġi ppreparat f'taħlita li fiha l-istess konċentrazzjoni ta' l-aċidu daqs it-taħlita tal-kejl. Għall-kurva lineari, il-konċentrazzjonijiet ta' l-elementi għandhom jiġu vverifikati.

L-għażla tal-wavelengths għall-kejl ta' l-emissjoni mill-analiti hija xierqa għall-konċentrazzjoni ta' l-elementi li għandhom jiġu determinati. Meta l-konċentrazzjoni ta' l-analite taqa' barra mill-iskala tal-ħidma ta' linja ta' emissjoni, għandha tintuża linja ta' emissjoni differenti. Għall-ewwel għandha tingħażel il-linja ta' emissjoni l-aktar sensittiva bla interferenza), imbagħad linja inqas sensittiva. Meta jsir ix-xogħol fi jew qrib limitu ta' skoperta, il-linja l-aktar sensttivia għall-analite rispettiva hija ġeneralment l-aħjar għażla. L-interferenzi spettrali u mill-isfond jikkawżaw l-akbar diffikultajiet fl-ICP-AES. Interferenzi possibbli huma, eż., taqlib sempliċi fl-isfond, taqlib minħabba sfond immejjel, overlap dirett spettrali u taqlib kumpless fl-isfond. Kull waħda minn dawn l-interferenzi għandha l-kawżi u r-rimedji tagħha.. Skond il-matriċi,il-korrezzjoni ta' l-interferenzi u l-ottmizzazzjoni tal-parametri operanti għandhom jiġu applikati. Xi interferenzi jistgħu jiġu evitati bit-taħlit jew adattament tal-matriċi. Ma' kull lott ta' kampjuni tat-tesijiet li jiġi analizzat, materjal ta' riferenza jew iffortifikat li fih ammonti magħrufa ta' l-analite/i kif ukoll matejral vojt għandhom jiġu ttrattati bl-istess mod bħall-kampjuni tat-testijiet. Għat-testjar għal drift, l-istandard għandu jiġi vverifikat, eż., wara 10 kampjuni. Ir-reaġenti kollha u l-gass tal-plażma għandhom ikunu ta' l-ogħla purezza disponibbli..

2.4.8. Ħtiġiet speċifiċi għall-ispettrometrija bil-piż ikkoppjat induttivament (ICP-MS)(11))

Id-determinazzjoni ta' l-elementi traċċi tal-piż mmedju atomiku, bħall-kromju, ramm u nikel tista' tkun soġġetta għal interferenza qawwija minn joni oħrajn iżobariċi u poliatomiċi. Dan jista' jitrażżan biss meta hija disponibbli saħħa ta' riżoluzzjoni ta' mhux inqas minn 7 000 sa 8 000 . diffikultajiet assoċjati mat-tekniċi MS jinkludu drift istrumentali, effetti tal-matriċi u interferenza mill-joni molekulari (m/z < 80). Standardizzazzjoni multipla interna li tkopri l-istess grad ta' piżijiet bħall-elementi hija meħtieġa għall-korrezzjoni tad-drift istrumentali u l-effetti tal-matriċi

Dekomposizzjoni sħiħa tal-materja organika fil-kampjuni qabel il-kejl ta' l-ICP_MS huwa meħtieġ. Bħal fl-AAS, wara d-diġestjoni f'kontenituri ssiġillati, l-elementi volatili, eż., l-jodju għandhom jiġu ttrasferiti fi tat stabbli ta' ossidazzjoni. L-interferenza l-aktar severa tirrużulta mill-kombinazzjonijiet ta' l-joni molekulari ta' l-argon (gass tal-plażma), idroġenu, karbon, nitroġenu u ossiġenu (aċidi tat-taħlit, impuritajiet fil-gass tal-plażma u gassijiet atmosferiċi entrained) u l-kampjun tal-matriċi. Id-diġestjoni kompleta, il-kejl ta' l-isfond, għażla xierqa ta' piżijiet analitiċi kultant assoċjata ma' abbundanza inqas (limitu ta' skoperta aktar nieqes) u tat-taħlitiet ta' l-aċidi, eż., aċidu nitriku, huma meħtieġa biex jiġu evitati l-interferenzi.

Biex jiġu ddeterminati l-elementi, l-interferenzi għandhom jiġu esklużi bl-għażla xierqa ta' piżijiet analitiċi speċifiċi inkluża l-konferma ta' proporzjonijiet ta' l-iżotopi. Ir-risposta ta' l-istrumenti li jikkunsidraw il-Fano-fatturi għandhom jiġu vverifikati għal kull kejl bl-użu ta' standards interni.

3. VALIDAZZJONI

Il-validazzjoni għandha turi li l-metodu analitiku jikkonforma mal-kriterji li jgħoddu ghall-karatteristiċi tal-ħidma rilevanti.

Skopijiet ta' kontroll differenti jeħtieġu kategoriji differenti ta' metodi. Din it-tabella tiddetermina liema karatteristika ta' ħidma għandha tiġi vverifikata għal limea tip ta' metodu.







Tabella 9 Klassifika ta' metodi analitiċi bil-karatteristiċi ta' ħidma li għandhom jiġu ddeterminati Limitu ta' l-iskoperta CCE Limitu tad-deċiżjoni CCa Verità/irkupru Preċiżjoni Selettività/Speċifiċità' Applikabbilità/saħħa/stabbilità Metodi kwalitattivi S + – – – + + C + + – – + + Metodi kwantitattivi S + – – + + + C + + + + + + S = metodi ta' screening; C = metodi konfermatorji; + = determinazzjoni obbligatorja.

3.1. PROĊEDURI TA' VALIDAZZJONI

Dan il-kapitlu jipprovdi eżempji u/jew riferenzi għall-proċeduri ta' validazzjoni ta' metodi analitiċi. Modi oħrajn biex jintwera li l-metodi analitku jikkonforma mal-kriterji tal-ħidma għall-karatteristiċi tal-ħidma jistgħu jintużaw, kemm-il darba jilħqu l-istess livell u kwalità ta' informazzjoni.

Il-validazzjoni tista' ssir ukoll billi jsir studju inter-laboratorju bħal dak stabbilit bil-Codex Alimentarius, ISO jew l-IUPAC (12), jew skond metodi alternattivi bħal studji f'laboratorju wieħed jew validazzjoni interna (13)(14).Din il-parti tiffoka fuq studji f'laboratorju wieħed (jew validazzjoni interna) bl-użu ta' mod modulari. Dan il-mod jikkonsisti f'

1. sett ta' karatteristiċi tal-ħidma komuni indipendenti mill-mudell ta' validazzjoni użat u

2. proċeduri aktar speċifiċi li jiddependu fuq il-mudell kif deskritt fit-Tabella 10.







Tabella 10 Parametri tal-ħidma indipendenti mill-mudell u dipendenti fuq il-mudell Validazzjoni Parametri tal-ħidma indipendenti mill-mudell Parametri tal-ħidma dipendenti fuq il-mudell Karatteristiċi komuni tal-ħidma (3.1.1) Mod ta' validazzjoni konvenzjonali (3.1.2) Mod ta' validazzjoni interna (3.1.3) Speċificità Irkupru Irkupru Verità Repetibilità Repetibilità Saħħa: tibdil minuri Riproduċibilità fil-laboratorju Riproduċibilità fil-laboratorju stabilità Riproduċibilità Riproduċibilità Limitu tad-deċiżjoni (CCa) Limitu tad-deċiżjoni (CCa) Kapaċità ta' l-iskoperta (CCP) Kapaċità ta' l-iskoperta (CCP) Kurvi tal-kalibratura Kurvi tal-kalibratura Saħħa: tibdil maġġuri Saħħa

3.1.1. Karatteristiċi tal-ħidma indipendenti mill-mudell

Irrespettivament mill-mod ta' validazzjoni magħżul, dawn il-karatteristiċi tal-ħidma għandhom jiġu ddeterminati. Biex l-ammont ta' xogħol jiġi minimizzat, mod iddiżinjat bir-reqqa u statistikament bis-sens jista' jintuża sabiex l-esperimenti jiġu kkombinati biex jiġu ddeterminati parametri differenti.

3.1.1.1. Speċifiċità

Għall-metodi analitiċi, is-saħħa tad-diskriminazzjoni bejn l-analite u s-sostanzi relatati fil-qrib (isomers, metaboliti, prodotti degradati, sostanzi endoġeni, kostitwenti tal-matriċi, eċċ) hija imporatanti. Huma meħtieġa żewġ metodi għall-verifika dwar jekk hemmx interferenzi

Għalhekk, sostanzi li potenzjalment jinterferixxu għandhom jingħażlu u l-kampjuni vojta rilevanti għandhom jiġu analizzati sabiex tiġi skoperta l-preżenza ta' interferenzi possibbli u jkun stmat l-effett ta' l-inteferenzi:

— agħżel skala ta' komposti relatati kimikament (metaboliti, derivattivi, eċċ) jew sostanzi oħrajn li x' aktarx setgħu ltaqgħu mal-kompost ta' interess li jista' jkun preżenti fil-kampjuni;

— analizza n-numru xieraq ta' kampjuni vojta rapprezentattivi (n ≥ 20) u vverifika jekk hemmx interferenzi (sinjali, l-ogħla punti, traċċi ta' l-joni) fir-reġjun ta' l-interess fejn huwa mistenni li jeluta l-analite mmirat;

— minbarra dan, il-kampjuni vojta rappreżentattivi għandhom jiġu ffortifikati f'konċentrazzjoni rilevanti b'sostanzi li x' aktarx jinterferixxu ma' l-identifikazzjoni u/jew il-kwantifikazzjoni ta' l-analite;

— wara l-analiżi, investiga jekk: — il-preżenza tistax twassal għal identifikazzjoni falza — l-identifikazzjoni ta' l-analite mmirata hijiex ostakolata bil-preżenza ta' interferenza waħda jew aktar minnhom, jew — il-kwantifikazzjoni hijiex influwenzata notevolment

3.1.1.2. Verità

F'dan il-paragrafu, hija deskritta d-determinazzjoni tal-verità (component wieħed ta' l-eżattezza) Il-verità tista' tiġi stabbilita biss permezz ta' materjal ta' riferenza ċċertifikat (CRM). CRM jintuża kull fejn hu disponibbli. Il-proċedura hija deskritta fid-dettall f'ISO 5725-4 (5). Jingħata eżempju taħt

— analizza sitt repliki tas-CRM skond l-istruzzjonijiet tat-test għall-metodu,

— iddetermina l-konċentrazzjoni ta' l-analite preżenti f'kull kampjun tar-replikati,

— aħdem il-medja, id-devjazzjoni standard u l-koeffiċjenti tal-varjazzjoni ( %) għal dawn il-konċentrazzjonijiet,

— aħdem il-verità billi tiddividi l-medja tal-konċentrazzjoni skoperta bil-valur ċertifikat (imkejjel bħala konċentrazzjoni) u mmolteplika b'100, biex tesprimi r-riżultat bħala perċentwal.

Verità ( %) = konċentrazzjoni medja korretta bl-irkupru skopert x 100/valur iċċertifikat

Jekk mhux disponibbli CRM, minflok il-verità, l-irkupru jista' jiġi ddeterminat kif deskritt hawn taħt f'4.1.2.1.

3.1.1.3. Applikabilità/Saħħa (tibdil minuri)

Dawn l-istudji jużaw l-introduzzjoni deliberat ta' varjazzjonijiet minuri raġjonevoli mil-laboratorju u l-osservazzjoni tal-konsegwenzi tagħhom.

L-istudji li jsiru qabel l-investigazzjonijiet għandhom isiru billi jingħażlu l-fatturi tal-kampjun qabel it-trattament, tindif u analiżi, li jistgħu jinfluwenzaw ir-riżultati tal-kejl. Dawn il-fatturi jistgħu jinkludu l-analist, l-għajn u l-eta' tar-reaġenti, is-solventi, l-istandards u l-estratti tal-kampjuni, ir-rata tas-sħana, it-temperatura, il-valur pH kif ukoll ħafna fatturi oħrajn li jistgħu jseħħu fil-laboratorju. Dawn il-fatturi għandhom jiġu mmodifikati f'segwenza ta' kobor li taqbel mad-devjazzjonijiet li normalment jokkorru qalb il-laboratorji.

— Identifika l-fatturi possibbli li jistgħu jinfluwenzaw ir-riżultati.

— Varja kull fattur ftit.

— Agħmel test għas- saħħa bl-użu tal-metodu ta' Youden (15) (16). (Jistgħu jintużaw metodi approvati oħrjan f'dan il-punt. Iżda l-metodu ta' Youden iżomm fil-minimu l-ħin u l-isforz meħtieġa). Il-metodu ta' Youden huwa disinn fattoriku frazzjonali. Interazzjonijiet bejn il-fatturi ma jistgħux jiġu skoperti.

— Fejn fattur jinsab li jinfluwenza r-riżultati tal-kejl b'mod sinifikanti, agħmel esperimenti oħrajn sabiex tiddeċiedi dwar il-limit ta' l-aċċettabilità ta' dan il-fattur

— Il-fatturi li jinfluwenzaw lir-riżultati b'mod sinifikanti għandhom jiġu identifikati b'mod ċar fil-protokoll tal-metodu

L-idea bażika mhix li tiġi studjata alterazzjoni waħda waħda iżda li jiġu introdotti diversi varjazzjonijiet f'daqqa. Bħala eżempju, jekk A, B, C, D, E, F, G jindikaw il-valuri nominali għal seba' fatturi differenti li jistgħu jinfluwenzaw ir-riżultati, jekk il-valuri nominali tagħhom jinbidlu xi ftit; u jekk il-valuri alternattivi tagħhom jiġu indikati bl-ittri żgħar korrispondenti a, b, c, d, e, f u g. Dan jirriżulta f'27 jew 128 kombinazzjonijiet differenti possibbli.

Huwa possibbli li jingħażel subsett ta' tmienja minn dawn il-kombinazzjonijiet li għandhom bilanċ bejn l-ittri bkbar u żgħar (tabella 11). Għandhom isiru tmien determinazzjonijiet, li jużaw kombinazzjoni tal-fatturi magħżula (A-G). Ir-riżultati tad-determinazzjonijiet jintwerew fit-Tabella 11 taħt bħala S sa Z.







Tabella 11 Disinn għall-esperiment għall-istudji tas- saħħa (tibdil minuri) Valur tal-fattur F Kombinazzjoni tan-numru tad-determinazzjonijiet 1 2 3 4 5 6 7 8 Ana A A A A a a a a Bib B B b b B B b b C/c C c C c C c C c Did D D d d d d D D Eke E e E e e E e E F/f F f f F F f f F Gig G g g G g G G g Osservat riżultat R Għsaħħa S T U V W X Y Z Għall-kalkoli ara l-eżempji għat-testjar għas-saħħa f' 3.3.

3.1.1.4. Stabbilità

Ġie osservat illi stabbilità insuffiċjenti ta' l-analite jew il-kostitwenti tal-matriċi fil-kampjun matul il-ħażna jew l-analiżi jistgħu jwasslu għal devjazzjonijiet sinifikanti fir-riżultat ta' l-analiżi. Monbarra dan, l-istabbilità ta' l-istandard tal-kalibratura fit-taħilita għandha tiġi vverifikata. Normalment l-istabbilità ta' l-analite hija karatterizzata sew taħt kondizzjonijiet varji tal-ħażna. Is-sorveljanza tal-kondizzjonijiet tal-ħażna tifforma parti mis-sistema ta' akkreditazzjoni tal-laboratorju normali. Meta dan mhux magħruf, jingħataw eżempji taħt dwar kif tista' tiġi ddeterminata l-istabbilità.

Stabbilità ta'l-analite f'taħlita:

— Ipprepara taħlitiet friski ta' l-analite/i, u ħallat kif speċifikat fl-istruzzjonijiet tat-test biex tagħti alikwoti suffiċjenti (eż., 40) ta' kull konċenmtrazzjoni magħżula (madwar il-limitu minimu tal-ħidma meħtieġ għal sostanzi li għalihom ma ġie stabbilit l-ebda limitu permess jew madwar il-limitu permess għal sostanzi oħrajn. Ipprepara ż-żewġ taħlitiet ta' l-analite użat għall-fortifikazzjoni u użat fit-taħlita ta' l-analiżi finali, u kwalunkwe taħlita oħra li hija ta' interess (eż., standards derivatizzati).

— Iżen il-kontenut ta' l-analite fit-taħlita friska skond l-istruzzjonijiet tat-test.

— Itfa' volumi xierqa f kontenituri xierqa, ittikkettja u aħżen skond l-iskema:



Tabella 12 Skema għad-determinazzjoni ta' l-istabbilità ta' l-analite f'taħlita -20°C +4°C +20°C skuri 10 alikwoti 10 alikwoti 10 alikwoti ċari 10 alikwoti

— Iż-żmien kemm jinħażen jista' jingħażel bħala ġimgħa, ġimgħatejn, tliet jew erba' ġimgħat jew aktar jekk dan huwa neċessarju eż sa ma jkunu osservabbli l-ewwel fenomeni ta' degradazzjoni matul l-identifikazzjoni u/jew il-kwantifikazzjoni. Il-ħin massimu kemm jinħażen u l-kondizzjonijiet ottimi għall-ħażna għandhom jiġu rreġistrati.

— - Il-kalkolu tal-konċentrazzjoni ta l-analite/i f'kull alikwota għandu jsir bl-użu tat-taħlita friska ta' l-analite magħmula fil-ħin ta' l-analiżi bħala 100 %. Ci = koncentrazzjoni fil-punt tal-ħin Cfresh = konċentrazzjoni tat-taħlita friska

Stabbilità ta' analite/i fil-matriċi

— Kull fejn possibbli għandhom jintużaw il-kampjuni incurred . Meta ma jkun disponibbli l-ebda materjal incurred , għandha tintuża l-matriċi fortifikata bl-analite.

— Meta huwa disponibbli materjal incurred , il-konċentrazzjoni fil-materjal għandha tiġi ddeterminata waqt li l-materja ikun għadu frisk. Aktar alikwoti tal-materjal jistgħu jittieħdu wara ġimgħa, ġimagħtejn, erba' ġimgħat u għoxrin ġimgħau l-konċentrazzjoni għandhom jiġu ddeterminati. It-tessut għandu jinħażen f; għall-inqas minus 20 °C jew inqas jekk meħtieġ, l

— Jekk ma jkun disponibbli l-ebda materjal incurred , ħu ftit materjal vojt u omoġenizzat. Qassam il-materjal f'ħames alikwoti. iffortifika kull alikwota bl-analite, li preferibbilment għandu jiġi ppreparat f'kwantità żgħira ta' taħlita bl-ilma. Analizza alikwota wa]da minnufih. Aħżen l-alikwoti li fadal f'għal inqas 20 °C jew inqas jekk meħtieġ u analizzahom wara ġimgħa, ġimagħtejn, erba' ġimgħat u għoxrin ġimgħa.

3.1.1.5. Kurvi tal-kalibratura

Meta jintużaw il-kurvi tal-kalibratura għall-kwantifikazzjoni:

— għandhom jintużaw għall-inqas ħames livelli (inkluż iż-żero) fil-kostruzzjoni tal-kurva,

— l-iskala tal-ħidma tal-kurva għandha tiġi deskritta,

— il-formola matematika tal-kurva u l- goodness-of-fit tad-data mal-kurva għandhom jiġu deskritti,

— skali ta' aċċettabilita' għall-parametri tal-kurva għandhom jiġu deskritti.

Meta tkun meħtieġa l-kalibratura serjali fuq il-bażi ta' taħlita, għandhom jiġu indikati l-iskali aċċettabbli għall-parametri tal-kurva tal-kalibratura li jistgħu jvarjaw minn serje għall-oħra.

3.1.2. Proċeduri ta' validazzjoni konvenzjonali

Il-kalkolu tal-parametri skond il-metodi konvenzjonali jirrikjedi t-twettiq ta' diversi esperimenti individwali. Kull karatteristika ta' ħidma għandha tiġi ddeterminata għal kull tibdil maġġuri (ara taħt applikabilità saħħa fuq). Għall-metodi b'ħafna analiti, diversi analiti jistgħu jiġu analizzati fl-istess ħin, sa fejn jiġu esklużi interferenzi possibilment rilevanti qabel. Diversi karatteristiċi tal-ħidma jistgħu jiġu ddeterminati b'mod simili. Għalhekk, biex jitnaqqas l-ammont tax-xogħol, huwa rrakkmandat li l-esperimenti jiġu kkombinati kemm jista' jkun (eż., repetibilità u r-riproduċibilità fil-laboratorju ma' l-ispeċfiċità, analiżi ta' kampjuni vojta għad-determinazzjoni tal-limitu tad-deċiżjoni u t-testjar għall-ispeċifiċità.

3.1.2.1. Irkupru

Jekk l-ebda CRM ma hu disponibbli, l-irkupru għandu jiġi ddeterminat bl-esperimenti bl-użu ta' matriċi vojta ffortifikata, bl-użu, per eżempju, ta' l-iskema li ġejja:

— agħżel 18-il alikwota ta' materjal vojt u ffortifika sitt alikwoti f'kull waħda minn 1, 1,5 u 2 darbiet daqs il-minimu tal-limitu tal-ħidma rekwiżit jew 0,5, 1 u 1,5 darbiet daqs il-limitu permess,

— analizza l-kampjuni u kkalkula l-konċentrazzjoni preżenti f'kull kampjun,

— bl-użu ta' l-ekwazzjoni taħt, aħdem l-irkupru għal kull kampjun,

— aħdem il-medja ta' l-irkupru u s-CV mis-sitt riżultati f'kull livell,

— % Irkupru = 100 x il=kontenut miżun/livell ta' fortifikazzjoni

Dan il-metodu konvenzjonali għad-determinazzjoni ta' l-irkupru huwa varjant tal-metodu ta' żieda standard deskritt f'3.5, meta:

— il-kampjun jitqies kampjun vojt minflok kampjun li għandu jiġi analizzat,

— jitiqes li l-għotja ( 1 ) u l-irkupru ( 2 ) huma simili għaż-żewġ partijiet tat-test,

— il-kampjuni tat-test għandhom l-istess piżijiet u l-estratti tal-partijiet tat-test għandhom l-istess volum

— l-ammont ta' l-istandard tal-kalibratura li jiżdied mat-tieni parti tat-test (imħallat) jiġi nnutat X ADD ·(X ADD = p A ·V A ),

— x 1 huwa l-valur imkejjel għall-vojt u x 2 il-valur imkejjel għat-tieni parti tat-test (imħallat),

— mela, % irkupru = 100 (x 2 -x 1 )/x ADD .

Meta xi waħda mill-kondizzjonijiet fuq hija (jew suppost li ma ġietx) milħuqa, allura l-proċedura sħiħa għad-determinazzjoni ta' l-irkupru permezz tal-metodu taż-żieda standard kif deskritt f'3.5 għandha titwettaq.

3.1.2.2. Repetibilità

— Ipprepara sett ta' kampjuni ta' matriċi identiċi, iffortifikati bl-analite biex jagħtu konċentrazzjonijiet ekwivalenti għal 1, 1,5 u 2 darbiet il-limitu minimu tal-ħidma meħtieġ jew 0,5, 1 u 1,5 darbiet il-limitu permess.

— F'kull livell l-analiżi għandha ssir b'għall-inqas sitt repliki.

— Analizza l-kampjuni.

— Aħdem il-konċentrazzjoni skoperta f'kull kampjun.

— Sib il-medja tal-konċentrazzjoni, id-devjazzjoni standard u l-koeffiċjenti tal-varjazzjoni ( %) tal-kampjuni ffortifikati.

— Irrepeti dawn il-passi f'għall-inqas żewġ okkażjonijiet oħrajn.

— Aħdem il-medja tal-konċentrazzjonijiet kollha u s-CVs għall-kampjuni ffortifikati.

3.1.2.3. Riproduċibilitàfil-laboratorju

— Ipprepara sett ta' kampjuni ta' materjal tat-test speċifikat (matriċi identiċi jew differenti ffortifikati bl-analite/i) biex jagħtu konċentrazzjonijiet ekwivalenti għal 1, 1,5 u 2 darbiet il-limitu minimu tal-ħidma meħtieġ jew 0,5, 1 u 1,5 darbiet il-limitu permess.

— F'kull livell l-analiżi għandha ssir b'għall-inqas sitt repliki.

— Irrepeti dawn il-passi f'għall-inqas żewġ okkażjonijiet oħrajn b'operaturi differenti u kondizzjonijiet ambjentali differenti eż., lottijiet differenti ta' reaġenti, solventi, eċċ, temperaturi ambjentali differenti, strumenti differenti, eċċ jekk possibbli.

— Analizza l-kampjuni

— aħdem il-konċentrazzjoni skoperta f'kull kampjun.

— Sib il-medja tal-konċentrazzjoni, id-devjazzjoni standard u l-koeffiċjenti tal-varjazzjoni ( %) tal-kampjuni ffortifikati

3.1.2.4. Riproduċibiltà

Meta r-riproduċibilità trid tiġi vverifikata, il-laboratorji għandhom jipparteċipaw fi studji kollaborattivi skond l-ISO 5725-2 (5).

3.1.2.5. Limitu tad-Deċiżjoni (CCa)

Il-limitu tad-deċiżjoni għandu jitwaqqaf skond ir-rekwiżiti għall-identifikazzjoni jew l-identifikazzjoni bil-kwantifikazzjoni kif definiti taħt “Kriterji ta' Ħidma u rekwiżiti oħrajn għal metodi analitiċi” (it-2 Parti).

Il-każ ta' sostanzi li għalihom ma twaqqaf l-ebda limitu permess, CCa jista' jitwaqqaf:

— jew bil-proċedura tal-kurva tal-kalibratura skond l-ISO 11843 (17) (hawn imsemmi bħala l-valur kritiku tal-varjabbli netta ta' l-istat) F'dan il-każ għandu jintuża materjal vojt, li huwa ffortifikat fi u oltre l-minimu tal-livell tal-ħidma f'passi ekwidistanti. Analizza l-kampjuni. Wara l-identifikazzjoni, ippjana s-sinjal kontra l-konċentrazzjoni miżjuda.Il-konċentrazzjoni korrispondenti fl-interċessjoni y flimkien 2,33 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilità fil-laboratorju ta' l-interċessjoni huwa daqs il-limitu tad-deċiżjoni. Dan jgħodd għall-provi kwantitattivi biss (a = 1 %),

— jew bl-analiżi ta' għall-inqas 20 materjal vojt għal kull matriċi sabiex wieħed ikun jista' jikkalkola l-proporzjon tas-sinjal għall-ħoss fit-terminu li fih huwa mistenni l-analite. Tliet darbiet il-proporzjoni tas-sinjal għall-ħoss jista' jintuża bħala l-limitu tad-deċiżjoni. Dan jgħodd għal provi kwantitattivi u kwalitattivi.

Fil-każ ta' sostanzi bil-limitu permess stabbilit, CCa jista' jitwaqqaf:

— jew bil-proċedura tal-kurva tal-kalibratura skond l-ISO 11843 (17) (hawn imsemmi bħala l-valur kritiku tal-varjabbli netta ta' l-istat) F'dan il-każ għandu jintuża materjal vojt, li huwa ffortifikat fi u oltre l-minimu tal-livell tal-ħidma f'passi ekwidistanti. Analizza l-kampjuni. Wara l-identifikazzjoni, ippjana s-sinjal kontra l-konċentrazzjoni miżjuda. Il-konċentrazzjoni korrispondenti fil-limitu permess plus 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilità fil-laboratorju huwa daqs il-limitu tad-deċiżjoni (a = 5 %),

— jew bl-analiżi ta' għall-inqas 20 materjal vojt għal kull matriċi iffortifikat bl-analite/i fil-limitu permess. Il-konċentrazzjoni korrispondenti fil-limitu permess flimkien ma' 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilità fil-laboratorju huwa daqs il-limitu tad-deċiżjoni (a = 5 %).

Ara wkoll l-Artikolu 5 u punt 3.2.

3.1.2.6. Kapaċità ta' l-iskoperta (CCβ)

Il-kapaċità ta' l-iskoperta għandha tiġi ddeterminata skond ir-rekwiżiti għall-iscreening, l-identifikazzjoni jew l-identifikazzjoni bil-kwantifikazzjoni kif iddefiniti (ara l-parti 2).

Fil-każ ta' sostanzi li għalihom ma twaqqaf l-ebda limitu permess, CCβ jista' jitwaqqaf b':

— proċedura tal-kurva tal-kalibratura skond l-ISO 11843 (17) (hawn imsemmi bħala l-valur minimu li jista' jiġi skopert tal-varjabbli net state ). F'dan il-każ għandu jintuża materjal rappreżentanti vojt, iffortifikat fi u taħt il-livell minimu ta' ħidma meħtieġ f'passi ekwidistanti. Analizza l-kampjuni. Wara l-identifikazzjoni, ippjana s-sinjal kontra l-konċentrazzjoni miżjuda. Il-konċentrazzjoni korrispondenti fil-limitu tad-deċiżjoni plus 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilita' fil-laboratorju huwa daqs il-limitu tad-deċiżjoni (β = 5 %),

— analiżi ta' għall-inqas 20 materjal vojt għal kull matriċi iffortifikat bl-analite/i fil-limitu tad-deċiżjoni. Analizza l-kampjuni u identifika l-analiti. Il-valur tal-limitu tad-deċiżjoni plus 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilita' fil-laboratorju huwa daqs il-kapaċità ta' l-iskoperta (β = 5 %),

— fejn ma huma disponibbli l-ebda riżultati kwantitattivi, il-kapaċità ta' l-iskoperta tista' tiġi ddeterminata bl-investigazzjoni ta' materjal vojt iffortifikat fi u lil hinn mil-limitu tad-deċiżjoni. F'dan il-każ, il-livell tal-konċentrazzjoni, fejn jibqgħu biss <_ 5 riżultati konformi foloz, huwa daqs li-kapaċità ta' l-iskoperta tal-metodu. Għalhekk, għall-inqas 20 investigazzjoni għal mhux inqas minn livell wieħed ta' konċentrazzjoni għandhom isiru sabiex jiġi aċċertat li hemm bażi affidabbli għal din id-determinazzjoni.

Fil-każ ta' sostanzi li għalihom twaqqaf limitu permess, CCβ jista' jitwaqqaf:

— jew bil-proċedura tal-kurva tal-kalibratura skond l-ISO 11843 (17) (hawn imsemmi bħala l-valur minimu ta' l-iskoperta ta' l-istat nett). F'dan il-każ għandu jintuża materjal vojt rappreżentant, li huwa ffortifikat madwar il-limitu permess f'passi ekwidistanti. Analizza l-kampjuni u identifika l-analite/i. Aħdem id-devjazzjoni standard tal-kontenut medju mkejjel fil-limitu tad-deċiżjoni. Il-konċentrazzjoni korrispondenti fil-valur tal-limitu tad-deċiżjoni permess plus 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilità fil-laboratorju huwa daqs il-kapaċità ta' l-iskoperta (β= 5 %),

— - jew bl-analiżi ta' għall-inqas 20 materjal vojt għal kull matriċi iffortifikat bl-analite/i fil-limitu tad-deċiżjoni. Il-valur tal-limitu tad-deċiżjoni permess plus 1,64 darbiet daqs id-devjazzjoni standard tar-riproduċibilità fil-laboratorju huwa daqs il-kapaċità ta' l-iskoperta (β = 5 %).

Ara wkoll taqsima 3.2.

3.1.2.7. Saħħa (tibdil maġġuri)

Il-metodu analitiku għandu jiġi ttestjat taħt kondizzjonijiet esperimentali differenti, li jinkludu, ngħidu aħna, speċje differenti, matriċi differenti jew kondizzjonijiet differenti tat-teħid tal-kampjuni. It-tibdiliet introdotti għandhom ikunu maġġuri. L-importanza ta' dawn it-tibdiliet tista' tiġi valutata, per eżempju, bl-użu tal-metodu ta'Youden (15)(16). Kullkaratteristika tal-ħidma għandha tiġi ddeterminata għat-tibdil maġġuri kollu li ntwera li għandu effett sinkifikanti fuq il- ħidma ta' l-prova.

3.1.3. Validazzjoni skond mudelli alternattivi

Meta jiġu applikati proċeduri ta' validazzjoni alternattivi, il-mudell u l-istrateġija bil-prerekwiżiti, assunzjonijiet u formoli rispettivi għandhom jitwaqqfu fil-protokoll tal-validazzjoni jew għall-inqas għandhom jingħataw riferenzi għad-disponibilitŕ tagħhom. F'dan li ġej jingħata eżempju għal metodu alternattiv. Meta jiġi applikat eż il-mudell ta'validazzjoni interna, il-karatteristiċi tal-ħidma jiġu ddeterminati b'mod li jippermetti l-validazzjoni għat-tibdil maġġuri fl-istess proċedura tal-validazzjoni. Dan jeħtieġ diżinn ta' pjan esperimentali għall-validazzjoni

3.1.3.1. Pjan Esperimentali

Għandu jiġi ddiżinjat pjan esperimentali skond in-numru ta' speċje differenti u fatturi differenti taħt l-investigazzjoni. Għalhekk, l-ewwel pass tal-proċedura tal-validazzjoni għandu jikkunsidra l-gruppi tal-kampjuni li għandhom jiġu analizzati fil-laboratorju fil-futur sabiex jingħażlu l-ispeċje l-aktar importanti u dawk il-fatturi li jistgħu jinfluwenzaw ir-riżultati tal-kejl. Sussegwentament, l-iskala tal-konċentrazzjoni għandha tingħażel b'mod addattat għall-iskop skond il-livell ta' interess.

Eżempju:

— jistgħu jiġu analizzati diversi analite fl-istess ħin bil-metodu analitiku li qed jiġi validat,

— żewġ varjazzjonijiet tal-fattur ewlieni ġew identifikati (A u B). Il-fatturi ewlieni jiffurmaw il-bażi li fuqha jiġu kkombinati. Dawn il-fatturi ewlenin jistgħu jinkludu fatturi jew il-matriċi. F'dan l-eżempju il-fattur ewlieni ġie varjat fuq żewġ livelli, i.e., żewġ speċje differenti (speċje A u B) ġew meqjusa. Ġeneralment, huwa possibbli li l-fatturi ewlenin jiġu varjati fuq aktar minn żewġ livelli, li jżidu biss in-numru ta' analiżijiet li għandhom jiġu mwettqa,

— il-fatturi magħżulin għandhom jiġu varjati fuq żewġ livelli (indikati bħala jew + jew -).







Tabella 13 Eżempji għall-fatturi kkunsidrati importanti għall-proċedura tal-validazzjoni Sess ta’ l-annimal (fattur 1) Razza (fattur 2) Kondizzjonijiet tat-trasport (fattur 3) Kondizzjonijiet tal-ħażna (fattur 4) Kemm hu frisk il-kampjun (fattur 5) Kondizzjonijiet tat-tismin (fattur 6) Operaturi differenti b’esperjenza differenti (fattur 7).







Tabella 14 Pjan possibbli esperimentali għall-eżempju ta' fuq Speċje Fattur 1 Fattur 2 Fattur 3 Fattur 4 Fattur 5 Fattur 6 Fattur 7 Nru tal-Kampjun A + + + + - + - 1 A + + - - + - - 2 A + - + - - - + 3 A + - - + + + + 4 A - + + - + + + 5 A - + - + - - + 6 A - - + + + - - 7 A - - - - - + - 8 B + + + + + - + 9 B + + - - - + + 10 B + - + - + + - 11 B + - - + - - - 12 B - + + - - - - 13 B - + - + + + - 14 B - - + + - + + 15 B - - - - + - + 16

Minħabba li kull kampjun (kull kombinazzjoni tal-livell tal-fatturi) għandu jiġi mħallat b'erba' konċentrazzjonii differenti madwar il-livell ta' l-interess, u kampjun wieħed vojt għandu jiġi analizzat għal kull livell, 5 x 16 = 80 għandhom isiru analiżi għall-esperiment tal-validazzjoni sħiħ.

Minn dawn it-80 riżultat ta' kejl huwa possibbli li taħdem (13)(14).

Irkupru

— repetibilità għal kull livell ta' konċentrazzjoni (s ir ),

— riproduċibilità fil-laboratorju konċentrazzjoni (s ir ),

— limitu tad-deċiżjoni (CCα),

— kapaċitŕ ta' l-iskoperta (CCβ),

— rata ta' żball-β għall-kurva tal-qawwa kontra l-konċentrazzjoni (ara 3.1.3.2),

— saħħa ta' tibdil maġġuri; saħħa għal tibdil minuri jista' jiġi determinat skond il-paragrafu 3.1.1.3

— 16 kurvi tal-kalibratura relatati mal-kampjuni

— kurva ġenerali tal-kalibratura waħda ġenerali

— interval tat-tbassir tal-kurva ġenerali tal-kalibratura ġenerali,

— devjazzjonijiet ikkawżati mill-matriċi (s mat )

— devjazzjonijiet ikkawżati mir-run (s run ),

— effett tal-fatturi individwali fuq ir-riżultati tal-kejl.

Dawn il-karatteristiċi ta' ħidma jippermettu l-valutazzjoni komprensiva tal-livell tal-ħidma tal-metodu, ladarba ma tiġix investigata biss l-influwenza tal-fatturi individwali, iżda wkoll il-kombinazzjonijiet rilevanti ta' dawn il-fatturi. bl-għajnuna ta' dan id-diżinn ta' esperiment huwa possibbli li wieħed jiddeċiedi jekk xi wieħed mill-fatturi magħżula għandux jiġi eskluż mill-kurva tal-kalibratura ġenerali, għaliex jiddevja b'mod sinifikanti mid-devjazzjonijiet standard tal-fatturi l-oħrajn.

3.1.3.2. Kurva tal-qawwa

Il-kurva tal-qawwa tagħti informazzjoni dwar il-kapaċità ta' l-iskoperta tal-metodu fl-iskala tal-konċentrazzjoni magħżula. Tirreferi għar-risku ta' żball-β meta l-metodu ta' investigazzjoni jiġi applikat. Il-kurva tal-qawwa tippermetti l-kalkolu tal-kapaċitajiet ta' l-iskoperta għall-kategoriji rispettivi (screening, konferma) jew tipi (kwalitattiv jew kwant- itattiv) tal-metodi għal żball-β ċert (eż. 5 %).

Figura 1

Konċentrazzjoni

Il-figura 1 turi eżempju tat-twaqqif grafiku ta' kapaċità ta' l-iskoperta (CCβ) ta' metodu analitiku. Dan il-metodu partikolari għandu riskju rimanenti li tittieħed deċiżjoni falza ta' 5 % f'konċentrazzjoni ta' 0,50 jig/kg. F'konċentrazzjoni ta' 0,55 jig/kg ir-riskju li tittieħed deċiżjoni konformi falza jonqos għal %.

3.1.3.3. Riproduċibilità

Id-determinazzjoni tar-riproduċibilità ta' metodu bil-kunċett ta' l-istudji f'laboratorju wieħed (validazzjoni interna)tirrikjedi parteċipazzjoni ripetuta fi studji ta' profiċjenza skond il-gwida ta' l-ISO 43-1 (3) u 43-2 (4). Il-laboratorji huma permessi li jagħżlu l-metodi tagħhom, sakemm dawn il-metodi jintużaw taħt il-kondizzjonijiet ta' rutina. Id-devjazzjoni standard tal-laboratorju tista' tintuża biex tiġi stmata r-riproduċibilità tal-metodu

3.2. RAPPREŻENTAZZJONI GRAFIKA TAL-LIMITI ANALITIĊI DIFFERENTI

Figura 2

Sostanzi li għalihom ma twaqqaf l-ebda limitu permess

Figura 3

Sostanzi b'limitu permess stabbilita

3.3. EŻEMPJU TA' KIF JINĦADEM IT-TESTJAR TAR-SAĦĦA TA' TIBDIL MINURI SKOND IL-METODU TA' YOUDEN(16)







Paragun tal-medji (A) AA = Σ(Ai)/4 AB = Σ(Bi)/4 AC = Σ(Ci)/4 AD = Σ(Di)/4 AE = Σ(Ei)/4 AF = Σ(Ei)/4 AG = Σ(Gi)/4 Aa = Σ(ai)/4 Ab = Σ(bi)/4 Ac = Σ(ci)/4 Ad = Σ(di)/4 Ae = Σ(ei)/4 Af = Σ(fi)/4 Ag = Σ(gi)/4 Qabbel il-medji ta’ l-ittri kbar (AA sa A G) mal-medji ta’ l-ittri żgħar korrispondenti (Aa to A g). Jekk fattur għandu effett, id-differenza tkun sinifikatament akbar mid-differenzi tal-fatturi l-oħrajn. Metodu robust m’għandux jiġi affettwat minn tibdil li jsibu kważi żgur il-laboratorji Jekk m’hemmx differenza lampanti, il-kejl l-aktar realistiku ta’ l-iżball każwali jingħata bis-seba’ differenzi.







Differenzi (Di) Kubu tad-differenzi (Di 2) Da = A - a = Σ(Ai) - Σ(ai) Db = B - b = Σ(Bi) - Σ(bi) Dc = C - c = Σ(Ci) - Σ(ci) Dd = D - d = Σ(Di) - Σ(di) De = E - e = Σ( Ei ) - Σ(ei) Df = F - f = Σ( Fi) - Σ(fi) Dg = G - g = Σ(Gi) - Σ(gi) Da 2 = valur a Db 2 = valur b Dc 2 = valur c Dd 2 = valur d De 2 = valur e Df 2 = valur f Dg 2 = valur g

Devjazzjoni standard tad-differenzi Di (SDi):

Fejn SDi huwa sinifikatament akbar mid-devjazzjoni standard tal-metodi mwettaq taħt kondizzjonijiet ta' riproduċibilità fil-laboratorju skond (ara fuq) hija konklużjoni ovvja li l-fatturi kollha flimkien għandhom effett fuq ir-riżultat anke jekk kull fattur waħdu ma jurix influwenza sinifikanti u li l-metodu m'huwiex robust biżżejjed kontra l-modifiki magħżula.

3.4. EŻEMPJI TA' KIF TINĦADEM IL-PROĊEDURA TAL-VALIDAZZJONI INTERNA

Eżempji u kalkoli għall-protokoll tal-validazzjoni interna kif deskritta taħt il-validazzjoni skond mudelli alternattivi(3.1.3) (13) (14).

3.5. EŻEMPJI TA' KIF JINĦADEM IL-METODU TA' ADDIZZJONI STANDARD

Kampjun tat-test b'kontenut T ta' l-analite jinqasam f'żewġ partijiet tat-test 1 u 2 tal-piżijiet rispettivi m1 u m2. Il-parti tat-test 2 jitħallat ma' volum VA ta' taħlita ta' konċentrazzjoni PA ta' l-analite. Żewġ estratti tal-partijiet tat-test tal-volumi rispettivi V1 u V2 jiġu akkwistati wara l-estrazzjoni u l-purifikazzjoni tal-metodu. L-irkupru ta' l-analite għandha tkun rc. Iż-żewġ estratti jiġu provati b'metodu ta' kejl ta' sensittivitŕ b u jagħtu risposta analitika ta' x1, u x2 rispettivament.

Jekk jiġi assunt li rc u b huma l-istess għall-analite fil-kampjun nativ u fil-kampjun imħallat, allura l-kontenut T jista' jinħadem bħala:

Il-metodu jippermetti d-determinazzjoni ta' l-irkupru rc. Imbagħad, flimkien ma' l-prova deskritta fuq, parti mill-estratt tal-parti tat-test 1 (volum V) jitħallat ma' ammont magħruf p,.VB ta' l-analite u jiġi provat. Ir-risposta analitika hija X3 u l-irkupru huwa:

Barra dan, huwa possibbli li tinħadem is-sensitività, b, bħala:

Il- kondizzjonijiet kollha ta' l-applikazzjoni u d-dettalji ġew deskritti (18).

▼M3 —————

▼M1









L-ANNESS II







Limiti minimi meħtieġa għall-prestazzjoni Sustanza u/jew sustanza ffurmata fi jew meħtieġa għall-mataboliżmu Matriċijiet MRPL Chloramphenicol Laħam Bajd 0,3 μg/kg Ħalib Awrina Prodotti ta' l-akkwakultura Għasel Aċetat tal-Medroxyprogesterone Xaħam tal-kliewi tal-majjal 1 μg/kg Sustanzi ffurmati fi jew meħtieġa għall-mataboliżmu tan-Nitrofuran: — furazolidone Laħam tat-tajr 1 μg/kg għal kollha — furaltadone Prodotti ta' l-akkwakultura — nitrofurantoin — nitrofurazone ▼M2 Is-somma ta' malachite green u leucomalachite green Laħam ta' prodotti mill-akwakutura 2 μg/kg