1991R2568 — MT — 01.01.2008 — 021.001

Dan id-dokument ġie magħmul bil-ħsieb li jintuża bħala għodda ta’ dokumentazzjoni u l-istituzzjonijiet ma jassumu l-ebda responsabbiltà għall-kontenut tiegħu

Emendat bi:







(*) Dan l-att qatt ma ġie ppubblikat bil-Malti.









▼B

IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 2568/91

tal-11 ta’ Lulju 1991

dwar il-karatteristiċi taż-żejt taż-żebbuġa u l-fdal taż-żejt taż-żebbuġa u dwar il-metodi ta’ analiżi rilevanti







IL-KUMMISSJONI TAL-KOMUNITAJIET EWROPEJ, Wara li kkunsidrat it-Trattat li jistabbilixxi l-Komunità Ekonomika Ewropea, Wara li kkunsidrat ir-Regolament tal-Kunsill Nru 136/66/KEE tat-22 ta’ Settembru 1966 dwar it-twaqqif ta’ organizzazzjoni komuni tas-suq fiż-żjut u x-xaħmijiet ( 1 ), kif l-aħħar emendat bir-Regolament (KEE) Nru 3577/90 ( 2 ), u b’mod partikolari Artikolu 35a tiegħu, Billi l-Anness għar-Regolament No 136/66/KEE fih d-deskrizzjonijiet u d-definizzjonijiet taż-żejt taż-żebbuġa u ż-żejt tal-fdal taż-żebbuġa impoġġi fis-suq f’kull Stat Membru, fil-kummerċ intrakomunitarju u fil-kummerċ ma’ pajjiżi terzi; Billi, bil-għan li wieħed jiddistingwi bejn it-tipi differenti ta’ żejt, għandhom jiġu ddefiniti il-karatteristiċi fiżiċi u kimiċi ta’ kull wieħed minnhom u l-karatteristiċi organolettiċi taż-żejt verġni, biex tiġi ggarantita l-purità u l-kwalità tal-prodotti msemmija, mingħajr preġudizzju għad-disposizzjonijiet eżistenti; Billi l-preżenza tal-karatteristiċi tat-tipi differenti ta’ żejt għandha tiġi determinata b’uniformità fil-Komunità kollha; billi, għal dan il-għan, għandhom jiġu stabbiliti metodi ta’ analiżi kimika u ta’ evalwazzjoni organolettika tal-Komunità; billi għandu jitħalla jsir użu ta’ metodi oħra ta’ analiżi, għal perjodu transizzjonali, applikati fl-Istati Membri sakemm, fejn ikun hemm differenza fir-riżultati, dawk miksuba bl-użu tal-metodu komuni jkunu deċisivi; Billi d-definizzjoni tal-karatteristiċi fiżiċi u kimiċi taż-żejt tażżebbuġa u tal-metodi ta’ analiżi titlob l-emenda tan-noti addizzjonali għall-Kapitolu 15 tan-nomenklatura magħquda; Billi l-metodu ta’ evalwazzjoni tal-karatteristiċi organolettiċi tażżejt taż-żebbuġa jinkludi t-twaqqif ta’ bordijiet ta’ dewwieqa magħżula u mħarrġa; billi għalhekk, għandu jiġi stabbilit il-perjodu meħtieġ għat-twaqqif ta’ struttura bħal din; billi fid-dawl tad-diffikultajiet li xi Stati Membri sejrin jiltaqgħu magħhom fit-twaqqif ta’ bordijiet ta’ dewwieqa, l-użu ta’ bordijiet fi Stati Membri oħra għandu jiġi awtorizzat; Billi, sabiex ikun żgurat li s-sistema ta’ taxxi applikabbli għall-importazzjonijiet tal-fdal taż-żebbuġ taħdem sewwa, għandu jiġi stabbilit metodu wieħed għad-determinazzjoni tal-kontenut ta’ żejt ta’ dawn il-prodotti; Billi, biex ma ssirx ħsara lill-kummerċ, għandhom isiru disposizzjonijiet biex iż-żejt ippakkjat qabel id-dħul fis-seħħ ta’ dan ir-regolament jitwarrab f’perjodu limitat; Billi jeħtieġ li r-Regolament tal-Kummissjoni (KEE) Nru 1058/77 ( 3 ) jiġi rrevokat, kif emendat l-aħħar bir-Regolament (KEE) Nru 1858/88 ( 4 ); Billi l-Kumitat ta’ Ġestjoni għaż-Żjut u x-Xaħmijiet ma tax opinjoni fil-limitu ta’ żmien stabbilit mill-president tiegħu, ADOTTAT DAN IR-REGOLAMENT:







▼M20

Artikolu 1

1. Iż-żjut, li l-karatteristiċi tagħhom jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punti 1 u 2 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandhom jitqiesu bħala żjut verġni taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 1(a) u (b) ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

2. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 3 ta' l-Anness I ma' dan ir-Rgolament, għandu jitqies bħala żejt lampante taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt (ċ) ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

3. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 4 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt irraffinat taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 2 ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

4. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 5 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt taż-żebbuġa kompost minn żjut irraffinati taż-żebbuġa u żjut verġni taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 3 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

5. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 6 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt krud taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 4 ta' l-Anness mar-Rgolament 136/66/KEE.

6. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 7 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt irraffinat taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 5 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

7. Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 8 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 6 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

▼B

Artikolu 2

1. Il-karatteristiċi taż-żjut stabbiliti f’Anness I għandhom jiġu determinati b’konformità mal-metodi ta’ analiżi mniżżla hawn taħt:

— għad-determinazzjoni tal-aċidi grassi liberi, espressi bħala perċentwali ta’ aċidu oleiku, l-metodu stabbilit f’Anness II,

— għad-determinazzjoni tal-indiċi tal-perossidu, il-metodu stabbilit f’Anness III,

▼M19

— for determination of the wax content, the method given in Annex IV,

▼B

— għad-determinazzjoni tal-kontenut ta’ sterolo, il-metodu stabbilit f’Anness V,

— għad-determinazzjoni tal-erythrodiol u tal-uvaol, il-metodu stabbilit f’Anness VI,

▼M21

— għad-determinazzjoni tal-perċentwal ta’ 2-glyceril monopalmitate, il-metodu msemmi fl-Anness VII,

▼M20 —————

▼B

— għall-analiżi spettrofotometrika, il-metodu stabbilit f’Anness IX,

— għad-determinazzjoni tal-kompożizzjoni tal-aċidi grassi, il-metodu stabbilit f’Anness X A u X B,

— għad-determinazzjoni tas-solventi aloġenati volatili, il-metodu stabbilit f’Anness XI,

— għall-evalwazzjoni tal-karatteristiċi organolettiċi taż-żejt taż-żebbuġa verġni, il-metodu stabbilit f’Anness XII,

▼M20 —————

▼M11

— għad-determinazzjoni tas-stigmastadienes, il-metodu stabbilit fl-Anness XVII,

▼M13

— for determining the content of triglycerides with ECN42, the method set out in Annex XVIII,

▼M19

— for determination of the aliphatic alcohol content, the method given in Annex XIX.

▼M19

2. Verification by national authorities or their representatives of the organoleptic characteristics of virgin oils shall be effected by tasting panels approved by the Member States.

The organoleptic characteristics of an oil as referred to in the first subparagraph shall be deemed consonant with the category declared if a panel approved by the Member State confirms the grading.

Should the panel not confirm the category declared as regards the organoleptic characteristics, at the interested party's request the national authorities or their representatives shall have two counter-assessments carried out by other approved panels, at least one by a panel approved by the producer Member State concerned. The characteristics concerned shall be deemed consonant with the characteristics declared if at least two of the counter-assessments confirm the declared grade. If that is not the case, the interested party shall be responsible for the cost of the counter-assessments.

▼M17

3. When the national authorities or their representatives verify the characteristics of the oil as provided for in paragraph 1, samples shall be taken in accordance with international standards EN ISO 661 on the preparation of test samples and EN ISO 5555 on sampling. However, notwithstanding point 6.8 of standard EN ISO 5555, in the case of batches of such oils in immediate packaging not exceeding 100 litres, the sample shall be taken in accordance with Annex Ia to this Regulation.

▼M19

Without prejudice to standard EN ISO 5555 and Chapter 6 of standard EN ISO 661, the samples taken shall be put in a dark place away from strong heat as quickly as possible and sent to the laboratory for analysis no later than:

— the tenth working day after they are taken, during the period from October to May, and

— the fifth working day after they are taken, during the period from June to September.

▼M17

4. ►M20 Għall-għanijiet tal-verifika pprovvduta fil-paragrafu 3, l-analiżijiet riferiti fl-Annessi II, III, IX, X u XII u, meta japplika, kull kontro-analiżi meħtieġa skond il-liġijiet nazzjonali, għandhom jitwettqu qabel id-data minima tad-durabbiltà. Meta l-kampjunar isir iktar minn erba' xhur qabel id-data minima tad-durabbiltà, l-analiżijiet għandhom jitwettqu mhux iktar tard mir-raba' xahar li fih ikun ittieħed il-kampjun. Ma għandu japplika l-ebda limitu taż-żmien għall-analiżijiet l-oħra pprovvduti f'dan ir-Regolament. ◄

Unless the sample was taken less than one month before the minimum durability date, if the results of the analyses do not match the characteristics of the category of olive oil or olive-residue oil declared, the party concerned shall be notified no later than one month before the end of the period laid down in the first subparagraph.

▼M19

5. For the purpose of determining the characteristics of olive oils by the methods provided for in paragraph 1, the analysis results shall be directly compared with the limits laid down in this Regulation.

▼M20

Artikolu 2a

L-awtoritajiet nazzjonali jew ir-rappreżentanti tagħhom jistgħu jivverifikaw jekk kampjun ikunx konsistenti mal-kategorija dikjarata:

(a) jew billi jitwettqu, f'kull ordni, l-analiżijiet ipprovvduti fl-Anness I;

(b) jew billi tiġi segwita l-ordni ddikjarata fl-Anness Ib fuq is-sensiela tad-deċiżjonijiet sakemm tintlaħaq waħda mid-deċiżjonijiet li jidhru fis-sensiela tad-deċiżjonijiet.

▼M19 —————

▼M5

Artikolu ►M19 3 ◄

Meta jinstab li l-karatteristiċi organolettiċi ta’ xi żejt ma jaqblux mad-deskrizzjoni li tingħata, l-Istati Membri nteressati għandhom, mingħajr preġudizzju għal xi penalitajiet oħra, japplikaw penalitajiet finanzjarji amministrattivi, li jiġu stabbiliti fid-dawl tal-gravità ta’ l-irregolarità misjuba.

Meta ssir stima ta’ l-irregolarità, għandha tingħata l-attenzjoni b’mod partikolari għat-tibdil naturali fil-karatteristiċi ta’ żejt maħżun taħt kondizzjonijiet normali.

Fil-bidu ta’ kull nofs sena, l-Istati Membri għandhom jgħarrfu lill-Kummissjoni bin-numru u t-tip ta’ irregolaritajiet misjuba u l-penalitajiet applikati matul in-nofs sena ta’ qabel.

▼M5

Artikolu 4

▼M19

1. The Member States may approve assessment panels so that national authorities or their representatives can assess and verify organoleptic characteristics.

The terms of approval shall be set by Member States and ensure that:

— the requirements of Annex XII.4 are met,

— the panel head is given training recognised for this purpose by the Member State,

— continued approval depends on performance in annual checks arranged by the Member State.

Member States shall notify to the Commission a list of approved panels and the action taken under this paragraph.

▼M5

2. Meta xi Stati Membri jiltaqgħu ma’ tfixkil fit-twaqqif tal-panels fit-territorju tagħhom, dawn jistgħu isejħu lil xi panel ieħor ta’ dewwieqa approvat f’ xi Stat Membru ieħor.

3. Kull Stat Membru għandu jagħmel lista ta’ panels ta’ dewwieqa mwaqqfa minn organizzazzjonijiet professjonali jew ta’ l-istess qasam skond il-kondizzjonijiet preskritti fil-paragrafu 1 u għandhom jaraw li dawk il-kondizzjonijiet jiġu mħarsa.

▼M19 —————

▼B

Artikolu 6

1. Il-kontenut ta’ żejt tal-għaġna ta’ żejt u fdalijiet oħra miksuba mill-estrazzjoni taż-żejt taż-żebbuġa (Kodiċi NM 2306 90 11 u 2306 90 19) għandu jiġi determinat billi jintuża l-metodu stabbilit f’Anness XV.

2. Il-kontenut ta’ żejt imsemmi fil-paragrafu 1 għandu jiġi espress bħala perċentwali tal-piż ta’ żejt għall-piż ta’ materjal niexef.

▼M20

Artikolu 7

Għandhom japplikaw id-dispożizzjonijiet Komunitarji li jirrigwardaw il-preżenza tal-kontaminanti.

Rigward is-solventi aloġenati, il-limiti għall-kategoriji kollha taż-żjut taż-żebbuġa huma kif ġej:

— il-kontenut massimu ta' kull solvent aloġenat mikxuf: 0,1 mg/kg,

— il-kontenut massimu tas-solveni aloġenati mikxufa: 0,2 mg/kg.

▼B

Artikolu 8

1. L-Istati Membri għandhom jgħarrfu lill-Kummisjoni bil-miżuri meħuda għall-implimentazzjoni ta’ dan ir-Regolament.

2. L-Istati Membri għandhom jibagħtu lill-Kummissjoni, fil-bidu ta’ kull nofs sena, prospett tat-tagħrif analitiku li jkollu x’jaqsam mat-testijiet imwettqa matul in-nofs sena ta’ qabel.

Ir-riżultati għandhom jitqiesu mill-Kumitat ta’ Ġestjoni għaż-Żjut u x-Xaħmijiet skond il-proċedura stabbilita f’Artikolu 39 tar-Regolament Nru 136/66/KEE.

Artikolu 9

Ir-Regolament (KEE) Nru 1058/77 huwa b’dan il-mezz revokat.

Artikolu 10

1. Dan ir-Regolament għandu jidħol fis-seħħ fit-tielet jum wara l-pubblikazzjoni tiegħu fil-Ġurnal Uffiċjali ta l-Komunitajiet Ewropej.

Iżda, il-metodu stabbilit f’Anness XII għandu japplika ►M1 mill-1 ta’ Novembru 1992 ◄ , għajr sa fejn għandhom x’jaqsmu l-operazzjonijiet marbuta mas-sistema ta’ intervent.

▼M5

Dak il-metodu ma għandhux japplika għaż-żejt taż-żebbuġa verġni lest għas-suq qabel l-1 ta’ Novembru 1992.

▼B

2. Dan ir-Regolament ma għandux japplika għaż-żejt taż-żebbuġa u għaż-żejt tal-fdal taż-żebbuġa ppakkjat qabel id-dħul fis-seħħ ta’ dan ir-Regolament u mpoġġi fis-suq sal-31 ta’ Ottubru 1992.

Dan ir-Regolament għandu jorbot fl-intier tiegħu u għandu japplika direttament fl-Istati Membri kollha.









ANNESSI

Sommarju







Anness I: Karatteristiċi taż-żejt taż-żebbuġa ▼M17 Annex IA: Sampling of batches of olive oil or olive-residue oil in immediate packaging not exceeding 100 litres ▼M20 Anness Ib Is-siġr tad-deċijżjonijiet ▼B Anness II: ►M21 Determinazzjoni ta’ l-aċidi grassi liberi, metodu fil-kiesaħ ◄ Anness III: Determinazzjoni tal-valur tal-perossidu Anness IV: ►M6 Determinazzjoni tal-kontenut tax-xama bil-kolonna kapillari tal-likwidu ggassat kromotografat ◄ Anness V: Determinazzjoni tal-kompożizzjoni u l-kontenut ta’ steroli bil-kromatografija kolonna-kapillari tal-gass Anness VI: Determinazzjoni tal-erythrodiol u l-uvaol Anness VII: ►M21 Determinazzjoni tal-perċentwal ta’ 2-glyceryl monopalmitate ◄ ▼M20 ————— ▼B ▼M20 ————— ▼M19 ————— ▼B ▼M11 Anness XVII: Determinazzjoni tas-stigmastadienes fiż-żjut tal-ħaxix ▼M13 Annex XVIII: Method for determining the content of triglycerides with ECN42 ▼M19 Annex XIX: Method for determining aliphatic alcohol content

▼M21









ANNESS I

KARATTERISTIĊI TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA







TIp Aċidità (%) (*) Valur ta' perossidu mEq O2/kg (*) Xama' mg/kg (**) 2 glyceryl monopalmitate (%) Stigmastadeina mg/kg (1) Differenza ECN42 HPLC - et ECN42 Kalkolu teoretiku K232 (*) K270 (*) Delta-K (*) Evalwazzjoni organoleptika - Medjan tad-difett (*) Evalwzzjoni organoleptika - Medjan tat-togħma tal-frott (Mf) (*) 1. Żejt taż-żebbuġa extra verġni ≤ 0,8 ≤ 20 ≤ 250 ≤ 0,9 jekk % Aċidu palmitiku totali ≤ 14 % ≤ 1,0 jekk % Aċidu palmitiku totali > 14 % ≤ 0,10 ≤ 0,2 ≤ 2,50 ≤ 0,22 ≤ 0,01 Md = 0 Mf > 0 2. Żejt taż-żebbuġa verġni ≤ 2,0 ≤ 20 ≤ 250 ≤ 0,9 jekk % Aċidu palmitiku totali ≤ 14 % ≤ 1,0 jekk % Aċidu palmitiku totali > 14 % ≤ 0,10 ≤ 0,2 ≤ 2,60 ≤ 0,25 ≤ 0,01 Md ≤ 2,5 Mf > 0 3. Żejt taż-żebbuġa lampanti > 2,0 — ≤ 300 (3) ≤ 0,9 jekk % Aċidu palmitiku totali ≤ 14 % ≤ 1,1 jekk % Aċidu palmitiku totali > 14 % ≤ 0,50 ≤ 0,3 — — — Md > 2,5 (2) — 4. Żejt taż-żebbuġa raffinat ≤ 0,3 ≤ 5 ≤ 350 ≤ 0,9 jekk % Aċidu palmitiku totali ≤ 14 % ≤ 1,1 jekk % Aċidu palmitiku totali > 14 % — ≤ 0,3 — ≤ 1,10 ≤ 0,16 — — 5. Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żjut taż-żebbuġa raffinati u verġni ≤ 1,0 ≤ 15 ≤ 350 ≤ 0,9 jekk % Aċidu palmitiku totali ≤ 14 % ≤ 1,0 jekk % Aċidu palmitiku totali > 14 % — ≤ 0,3 — ≤ 0,90 ≤ 0,15 — — 6. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa mhux raffinat — — > 350 (4) ≤ 1,4 — ≤ 0,6 — — — — — 7. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa raffinat ≤ 0,3 ≤ 5 > 350 ≤ 1,4 — ≤ 0,5 — ≤ 2,00 ≤ 0,20 — — 8. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa ≤ 1,0 ≤ 15 > 350 ≤ 1,2 — ≤ 0,5 — ≤ 1,70 ≤ 0,18 — —







TIp Kontenut ta' aċidu (1) Total ta' l-iżomeri tranżoleiċi (%) Total ta' l-iżomeri tranżlinoleiċi + tranżlinoleniċi (%) Il-komposizzjoni ta' l-Isteroli Steroli totali (mg/kg) Erythrodiol u uvaol (%) (**) Miristiku (%) Linoleniku (%) Arakidiku (%) Ejkosenojku (%) Beheniku (%) Linjoċeriku (%) Kolesterol (%) Brassikasterol (%) Kampesterol (%) Stigmasterol (%) Betasitosterol (%) (2) Delta-7-Stigmastenol (%) 1. Żejt taż-żebbuġa extra verġni ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,2 ≤ 0,2 ≤ 0,05 ≤ 0,05 ≤ 0,5 ≤ 0,1 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 000 ≤ 4,5 2. Żejt taż-żebbuġa verġni ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,2 ≤ 0,2 ≤ 0,05 ≤ 0,05 ≤ 0,5 ≤ 0,1 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 000 ≤ 4,5 3. Żejt taż-żebbuġa lampanti ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,2 ≤ 0,2 ≤ 0,10 ≤ 0,10 ≤ 0,5 ≤ 0,1 ≤ 4,0 — ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 000 ≤ 4,5 (3) 4. Żejt taż-żebbuġa raffinata ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,2 ≤ 0,2 ≤ 0,20 ≤ 0,30 ≤ 0,5 ≤ 0,1 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 000 ≤ 4,5 5. Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żjut taż-żebbuġa raffinati u verġni ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,2 ≤ 0,2 ≤ 0,20 ≤ 0,30 ≤ 0,5 ≤ 0,1 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 000 ≤ 4,5 6. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa mhux raffinat ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,3 ≤ 0,2 ≤ 0,20 ≤ 0,10 ≤ 0,5 ≤ 0,2 ≤ 4,0 — ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 2 500 > 4,5 (4) 7. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa raffinat ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,3 ≤ 0,2 ≤ 0,40 ≤ 0,35 ≤ 0,5 ≤ 0,2 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 800 > 4,5 8. Żejt tal-fdal taż-żebbuġa ≤ 0,05 ≤ 1,0 ≤ 0,6 ≤ 0,4 ≤ 0,3 ≤ 0,2 ≤ 0,40 ≤ 0,35 ≤ 0,5 ≤ 0,2 ≤ 4,0 < Camp. ≥ 93,0 ≤ 0,5 ≥ 1 600 > 4,5

▼M20









ANNESS Ia

Il-Kampjunar taż-żejt taż-żebbuġa jew taż-żejt taż-żebbuġa pomace ikkunsinnati f'pakkeġġi immedjati li ma jaqbżux il-100 litru

Dan il-metodu ta' kampjunar japplika għall-kunsinni taż-żejt taż-żebbuġa jew taż-żejt taż-żebbuġa pomace li ma jaqbżux il-125000 litru, imqiegħda f'pakkeġġi li ma jaqbżux il-100 litru.

Jekk il-kunsinna taqbeż il-125000 litru, tiġi ssubdiviża f'lottjiet ta' 125000 litru jew taħthom. Jekk il-kunsinna tkun inqas minn 125000 litru, għandha tikkostitwixxi lott wieħed. TIl-metodu għandu mbagħad jiġi applikat għal kull lott.

In-numru minimu tal-kampjuni primarji li jrid jittieħed jiġi stabbilit mid-daqs tal-lott skond it-tabella ddikjarata fil-punt 1.

Id-daqs tal-kampjun primarju jiġi stabbilit fuq il-bażi tal-kapaċità tal-pakkeġġjar immedjat, skond it-tabella ddikjarati fil-punt

Il-kunsinna, il-kampjun primarju u l-kampjun tal-laboratorju għandhom ifissru d-definizzjonijiet mogħtija fl-istandard EN ISO 555.

“Lott” għandu jfisser sett ta' unitajiet tal-bejgħ li jiġu prodotti, iffabbrikati u ppakkjati f'ċirkostanzi hekk illi ż-żejt li jkun jinsab f'kull unita tal-bejgħ hija kkunsidrata li tkun omoġenja fit-termini tal-karatteristiċi analitiċi kollha.

1. IN-NUMRU TAL-KAMPJUNI PRIMARJI LI JRID JITTIEĦED

In-numru minimu tal-kampjuni primarji li jrid jittieħed irid jiġi stabbilit mid-daqs tal-lott, skond it-tabella li ġejja:







Id-Daqs tal-lott (litri) minn In-numru minimu tal-kampjuni primarji 7 500 2 25 000 3 75 000 4 125 000 5

Il-pakki immedjati magħżula għalbiex jagħmlu kampjun primarju jridu jkunu maġenb xulxin fil-lott.

F'każijiet ta' dubju, l-Istati Membri għandhom iżidu n-numru ta' kampjuni primarji li jridu jittieħdu.

2. IL-KONTENUT TAL-KAMPJUNI PRIMARJI

2.1 Il-kampjuni primarji jrid ikun fihom dan li ġej:



Meta l-pakkeġġjar immedjat ikollu kapaċità ta': Il-kampjun prinċipali għandu jinkludi żejt mill: a) 5 litri jew iktar a) 3 pakki immedjati b) 3 litri jew iktar imma inqas minn 5 litri b) 3 pakki immedjati c) 2 litri jew iktar imma inqas minn 3 litri c) 3 pakki immedjati d) litru 1 jew iktar imma inqas minn 2 litri d) 6 pakki immedjati e) 0,75 ta' litru jew iktar imma inqas minn litru e) 6 pakki immeedjati f) inqas minn 0,75 ta' litru f) tliet darbiet iż-żejt min-numru minimu tal-pakki b'kapaċità totali ta' iktar minn 1,5 litri

2.2 Il-kampjuni primarji jridu jinżamu fil-pakkeġġjar immedjat sal-waqt ta' l-analiżi. Iż-żejt fil-kampjuni primarji għandu mbagħad, skond kif japplika, jiġi ssuddiviż fi tliet kampjuni tal-laboratorju sabiex jitwettqu: (a) l-analiżijiet riferiti fl-Annessi II, III, IX u X, (b) l-analiżi riferita fl-Anness XII, (ċ) l-analiżijiet l-oħra.

2.3 Il-pakki li jikkostitwixxu kampjun primarju għandhom jiġu ssuddiviżi skond il-roċeduri tal-kontroll ipprovvduti fil-liġijiet nazzjonali.

3. L-ANALIŻIJIET U R-RIŻULTATI

(a) Kull wieħed mill-kampjuni primarji riferit fil-punt 1 għandu jiġi ssuddiviż f'kampjuni tal-laboratorju, skond il-punt 2.5 ta' l-istandard EN ISO 555, u analizzat kif ġej: — li jiġu stabbiliti l-aċidi xaħmin ħielsa, kif riferit fl-ewwel inċiż ta' l-Arrikolu 2(1), — li jiġi stabbilit il-valur tal-perossidu, kif riferit fit-tieni inċiż ta' l-Artikolu 2(1), — l-analiżi spettrofotometriku, kif riferitr fit-tmien inċiż ta' l-Artikolu 2(1), — li tiġi stabbilita l-komposizzjoni ta' l-aċidu xaħmi, kif riferit fid-disa' inċiż ta' l-Artikolu 2(1).

(b) Meta wieħed mir-riżultati riferiti fil-(a) għal mill-inqas wieħed mill-kampjuni primarji meħuda mill-istess lott ma jikkonformax mal-karatteristiċi tal-kategorija ddikkjarata taż-żejt, il-lott kollu interessat irid jiġi ddikjarat li ma jikkonformax. Meta r-riżultati ta' l-analiżjiet riferiti fil-(a) għal kull wieħed mill-kampjuni primarji meħud mill-istess lott ma jkunux kollha uniformi, mogħtija l-karatteristiċi tat-tennija tal-metodi interessati, il-lott intier għandu jiġi ddikjarat mhux uniformi u kull kampjun primarju jrid jiġi ssoġġettat għall-analiżijiet l-oħra meħtieġa. Inkella, kampjun primarju minn dan il-lott irid jiġi ssoġġettat għall-analiżijiet l-oħra meħtieġa.

(ċ) Meta wieħed mir-riżultati ta' l-analiżijiet riferiti fit-tieni paragrafu tal-punt (b) ma jikkonformax mal-karatteristiċi tal-kategorija ddikjarata taż-żejt, il-lott kollu interessat irid jiġi ddikjarat li ma jikkonformax. Meta r-riżultti ta' l-analiżijiet riferiti fit-tieni paragrafu tal-punt (b) jikkonformaw mal-karatteristiċi tal-kategorija ddikjarata taż-żejt, il-lott kollu jrid jiġi ddikjarat li jikkonforma.

▼M20









ANNESS Ib

IS-SIĠRA TAD-DEĊIŻJONIJIET GĦALBIEX JIĠI VVERIFIKAT JEKK KMPJUN TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA HUX KONSISTENTI MAL-KATEGORIJA DDIKJARATA

L-analiżi għalbiex jiġi vverifikat jekk żejt taż-żebbuġa jew żejt taż-żebbuġa pomace jkunux konsistenti mal-kategorija ddikjarata jista' jiġi midħul għalih:

(a) TEXT MISSING!!!

(b) TEXT MISSING!!!

L-analiżijiet li għandhom x'jaqsmu mal-kontaminati meħtieġa sabiex tiġi vverifikata l-konformità ma' l-istandards tal-Komunità Ewropea jridu jitwettqu separatament.

Is-siġra tad-deċiżjonijiet tapplika għall-kategoriji kollha taż-żejt taż-żebbuġa u taż-żejt taż-żebbuġa pomace. Tikkonsisti mit-tabelli enumerati minn 1 sa 11 li jridu jiġu avviċinati fuq il-bażi tal-kategorija ddikjarata taż-żejt interessat fl-ordni ddikjarata fit-tabella ġenerali.

Il-muftieħ għat-tabelli ġenerali sal-11:

— Il-linja doppja (=) tindika r-rotta li trid tiġi segwita fil-każ ta' konformità (tweġiba pożittiva) mal-kriterji speċifikati fil-kaxxa ta' qabel. Il-linja bit-tikek (…) tindika r-rotta alternattiva li trid tiġi segwita filkaż ta' nuqqas ta' konformità,

— l-intestaturi fil-kaxex fit-tabelli minn 1 sa 11 jirreferu għall-analiżijiet ipprovvduti f'dan ir-Regolament fuq il-bażi tat-tabella ta' l-ekwivalenza ddikjarata- flAppendiċi 1 ma' dan l-Anness,

— l-ittri fil-parentesi li jidhru fiċ-ċrieki tad-deċiżjoni negattiva fit-tabelli minn 1 sa 11 jirreferu inkroċjament għat-tagħrif indikattiv mogħti fl-Appendiċi 2 ma' dan l-Anness. Fihom infushom l-ittri ma jintitolawx l-obbligu li jiġu segwiti l-analiżijiet jew jimplikaw il-veraċità ta' l-assunzjonijiet iddikjarati.









Appendiċi 1

It-tabella ta' l-ekwivalenza bejn l-annessi ma' dan ir-Regolament u l-analiżijiet speċifikati fis-siġra tad-deċiżjonijiet







▼M21 L-Aċidità L-Anness II Determinazzjoni ta’ l-aċidi grassi liberi, metodu fil-kiesaħ ▼M20 Il-Valur tal-perossidu L-Anness III Li jiġi stabbilit il-valur tal-perossidu L-Ispettrometrija UV L-Anness IX L-Analiżi spettometrika L-Istima oragnolettika L-Anness XII L-Itsima organolettika taż-żejt taż-żebbuġa verġni It-3,5-Stigmastadjeni L-Anness XVII Il-Metodu ta' kif jiġu stabbiliti l-istigmastadjeni fiż-żjut veġetali It-Trans isomeri ta' l-aċidi xaħmin L-Anness Xa u L-Analiżi bil-kromatografija tal-gass tal-metil esteri ta' l-aċidi xaħmin L-Anness Xb It-Tħejjija tal-metil esteri ta' l-aċidi xamin Il-Kontenut ta' l-aċidi xaħmin L-Anness Xa u L-Analiżi bil-kromatografija tal-gass tal-metil esteri ta' l-aċidi xaħmin L-Anness Xb It-Tħejjija tal-metil esteri ta' l-aċidi xamin Il-ΔECN42 L-Anness XVIII Li tiġi stabbilita l-komposizzjoni tat-trigliċeridi ma' l-ECN42 (id-differenza bejn l-informazzjoni HLPC u l-kontenut teoretiku) Il-Komposizzjoni ta' l-isteroli u t-total ta' l-isteroli L-Anness V Li jiġu stabbiliti l-komposizzjoni u l-kontenut ta' l-isteroli bil-kromatografija tal-gass tal-kolonna kapillarja L-Eritrodjolu u l-Uvaolu L-Anness VI Li jiġu stabbiliti l-eritrodjolu u l-uvaolu Ix-Xama' L-Anness IV Li jiġi stabbilit il-kontenut tax-xama' bil-kromatorgrafija tal-gass tal-kolonna kapillarja L-Alkoli alifatiċi L-Anness XIX Li jiġi stabbilit il-kontenut ta' l-alkoli alifatiċi bil-kromatografija tal-gass tal-kolonna kapillarja ▼M21 L-Aċidi grassi ssaturati fil-pożizzjoni 2 L-Anness VII Determinazzjoni tal-perċentwal ta’ 2-glyceryl monopalmitate ▼M20









Appendiċi 2

It-Tabella 1

(a) ara ż-żejt taż-żebbuġa verġni jew lampante (Il-Kriterja tal-Kwalità tat-Tabella 2 jew il-Kriterji tal-Kwalità u tas-safa tat-Tabella 4)

(b) Ara ż-żejt taż-żebbuġa lampante (Il-Kriterji tal-Kwalità u tas-safa tat-Tabella 4)

It-Tabella 2

(a) Ara ż-żejt taż-żebbuġa lampante (Il-Kriterji tal-Kwalità u s-safa tat-Tabella 4)

(b) Ara ż-żejt taż-żebbuġa ekstra veġni (Il-Kriterji tal-Kwalità tat-Tabella 1)

It-Tabella 3

(a) Il-Preżenza taż-żejt irraffinat (taż-żubbuġa u oħrajn)

(b) Il-Preżenza taż-żejt taż-żebbuġa pomace

It-Tabella 4

(a) Ara ż-żejt taż-żebbuġa ekstra verġni u ż-żejt taż-żebbuġa verġni (Il-Kriterji tal-Kwalità tat-Tabella 1 u t-Tabella 2)

(b) Il-Preżenza taż-żejt irraffinat (taż-żebbuġa u oħrajn)

(c) Il-Preżenza taż-żejt taż-żebbuġa pomace

(d) Il-Preżenza taż-żjut esterifikati

It-Tabella 7

(a) Il-Preżenza taż-żejt taż-żebbuġa pomace

(b) Il-Preżenza taż-żjut esterifikati

Tabella 8

(a) Il-Preżenza taż-żejt irraffinat (taż-żebbuġa u oħrajn)

(b) Ara ż-żejt taż-żebbuġa lampanti (Il-Kriterji tal-Kwalità u s-safa tat-Tabella 4)

(ċ) Il-Preżenza taż-żjut esterifikati

Tabella 11

(a) Il-Preżenza taż-żjut esterifikati

▼B









ANNESS II

▼M21

DETERMINAZZJONI TA’ L-AĊIDI GRASSI LIBERI, METODU FIL-KIESAĦ

▼B

1. DETERMINAZZJONI TAL-AĊIDITÀ

Determinazzjoni tal-aċidi grassi liberi fiż-żjut taż-żebbuġa. Il-kontenut tal-aċidi grassi liberi jitkejjel bħala aċidità kkalkolata b’mod konvenzjonali.

1.1. Prinċipju

Jiddewweb kampjun f’taħlita ta’ solventi u l-aċidi grassi liberi preżenti jiġu ttitrati billi tintuża soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju.

1.2. Reaġenti

Ir-reaġenti kollha għandhom jkunu ta’ kwalità analitika magħrufa u l-ilma wżat għandu jkun jew iddistillat jew ta’ purità ekwivalenti.

1.2.1. Eteri tad-Dijetill ether; 95 % etanol (v/v), taħlita ta’ partijiet ugwali bil-volum. Nota: L-eteru tad-dietill jieħu n-nar malajr u jista’ jifforma perossidi splussivi. Għandha tingħata attenzjoni speċjali matul l-użu tiegħu. Innewtralizza preċiżament fil-mument tal-użu b’soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju (1.2.2), biż-żjieda ta’ 0,3 ml ta’ soluzzjoni ta’ phenolpthalein (1.2.3) għal kull 100 ml ta’ taħlita. Nota: Jekk ma jkunx possibli li jintuża l-eteru tad-dietill, tista’ tintuża taħlita ta’ solventi bl-etanol u t-toluene. Jekk meħtieġ, l-etanol jista jiġi mibdul bi propanol-2.

1.2.2. Soluzzjoni etanolika titrata tal-idrossidu tal-potassju, c(KOH) xi 0,1 mol/l jew, jekk meħtieġ, c(KOH) xi 0,5 mol/l. Il-konċentrazzjoni eżatta tas-soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju għandha tkun magħrufa u kkontrollata immedjatamement qabel tintuża. Uża soluzzjoni li għallinqas tkun ġiet ippreparata ħamest ijiem qabel l-użu u mferragħ ġewwa flixkun kannella tal-ħġieġ b’tapp tal-gomma. Is-soluzzjoni għandha tkun mingħajr kulur jew lewn it-tiben. Nota: Soluzzjoni stabbli mingħajr kulur tal-idrossidu tal-potassju tista’ tiġi ppreparata kif ġej. Agħlli 1 000 ml ta’ etanol flimkien ma’ 8 g tal-idrossidu tal-potassju u 0,5 g ta’ ċana tal-aluminju u kompli għalli taħt rifluss għal siegħa. Iddistilla minnufih. Dewweb il-kwantità meħtieġa tal-idrossidu tal-potassju fid-distillat. Ħallih għal ftit jiem u ferra’ l-likwidu ċar tal-wiċċ mid-depożitu ta’ karbont tal-potassju. Is-soluzzjoni tista’ tiġi ppreparata wkoll mingħajr distillazzjoni kif ġej: ma’ 1 000 ml ta’ etanol żid 4 ml ta’ aluminju butylate u ħalli t-taħlita toqgħod għal xi ftit jiem. Ferragħ il-likwidu tal-wiċċ u dewweb il-kwantità meħtieġa tal-idrossidu tal-potassju. Is-soluzzjoni hija lesta biex tintuża.

1.2.3. Soluzzjoni ta’ 10 g/l ta’ phenolphthalein ġewwa 95 sa 96 % ta’ etanol (v/v) jew alkaline blue, (fil-każ ta’ grassi b’kulur qawwi) soluzzjoni ta’ 20 g/l ġewwa 95 sa 96 % ta’ etanol (v/v).

1.3. Apparat

Tagħmir normali tal-laboratorju li jinkludi:

1.3.1. miżien analitiku;

1.3.2. flask koniku ta’ 250 ml;

1.3.3. buretta ta’ 10 ml, gradata f’0,05 ml.

1.4. Il-Proċedura

1.4.1. Il-preparazzjoni tal-kampjun għall-ittestjar (Wettaq it-test fuq il-kampjun iffiltrat. Meta l-umdità u l-impuritajiet flimkien huma anqas minn 1 %, uża l-kampjun mingħajr trattament addizzjonali; meta jaqbżu l-1 %, dan għandu jiġi ffiltrat.)

1.4.2. Teħid tal-kampjun Ħu kampjun skond in-numru aċidiku preżunt skond it-tabella li ġejja:



Valur aċidiku mistenni Piż tal-kampjun (g) Preċiżjoni tal-użin (g) < 1 20 0,05 1 to 4 10 0,02 4 to 15 2,5 0,1 15 to 75 0,5 0,001 > 75 0,01 0,0002 Iżen il-kampjun fil-flask koniku (1.3.2).

1.4.3. Determinazzjoni Dewweb il-kampjun (1.4.2) f’50 sa 150 ml tat-taħlita nnewtralizzata minn qabel tal-eteru tad-dietill u etanol (1.2.1). Ittitra filwaqt li tħawwad ma’ soluzzjoni 0,1 mol/l tal-idrossidu tal-potassju (1.2.2) (ara Nota 2) sakemm jinbidel l-indikatur (il-kulur roża tal-phenolphtalein jibqa’ għal mill-inqas għaxar minuti). Nota 1. Is-soluzzjoni etanolika ttitrata tal-idrossidu tal-potassju (1.2.2) tista’ tiġi sostitwita b’soluzzjoni milwiema tal-idrossidu tal-potassju jew tas-sodju sakemm il-volum ta’ ilma introdott ma jwassalx għas-separazzjoni tal-fażi. Nota 2. Jekk il-kwantità ta’ soluzzjoni 0,1 mol/l tal-idrossidu tal-potassju meħtieġa taqbeż 10 ml, uża s-soluzzjoni 0,5 mol/l. Nota 3. Jekk is-soluzzjoni ssir mċajpra matul it-titrazzjoni, żid biżżejjed solventi (1.2.1) biex tikseb soluzzjoni ċara.

1.5. Aċidità: espressa bħala perċentwali tal-aċidu oleiku

L-aċidità bħala perċentwali bil-piż hija ugwali għal:

fejn:

V = il-volum tas-soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju ttitrata wżata, f’millimetri;

ċ = il-konċentrazzjoni eżatta f’moli għal kull litru tas-soluzzjoni ttitrata tal-idrossidu tal-potassju wżata;

M = il-piż molari fi grammi għal kull mol ta’ aċidu wżat biex tesprimi r-riżultat (= 282);

m = il-piż fi grammi tal-kampjun.

Ħu bħala r-riżultat, il-medja aritmetika ►M6 ta’ żewġ kalkulazzjonijiet ◄ imwettqa.









ANNESS III

DETERMINAZZJONI TAL-VALUR TAL-PEROSSIDU

1. SKOP

Dan l-Istandard jiddeskrivi metodu għall-istabbilizzazzjoni tal-valur ta’ perossidu ta’ żjut u xaħmijiet

2. QASAM TA’ APPLIKAZZJONI

Dan l-Istandard huwa applikabbli għaż-żjut u x-xaħmijiet tal-annimali u l-ħxejjex

3. DEFINIZZJONI

Il-valur tal-perossidu huwa l-kwantità ta’ dawk is-sostanzi fil-kampjun, espressa f’termini ta’ milliekwivalenti ta’ ossiġenu attiv għal kull kilogramma, li jossidaw il-jodju tal-potassju taħt il-kondizzjonijiet ta’ operazzjoni deskritti.

4. PRINĊIPJU

Trattament tal-porzjon tat-test, f’soluzzjoni fl-aċidu aċetiku u kloroforma, b’soluzzjoni ta’ jodju tal-potassju. Titrazzjoni tal-jodju meħlus b’soluzzjoni standardizzata ta’ sodium thiosulphate.

5. APPARAT

It-tagħmir użat għandu jkun ħieles minn sostanzi ta’ riduzzjoni jew ossidanti.

Nota: Tidlikx l-uċuħ tal-qiegħ b’xi grass

5.1. Mgħarfa tal-ħġieġ ta’ 3 ml.

5.2. Flasks, bl-għonq u t-tapp immolati, ta’ kapaċità ta’ xi 250 ml, imnixxfin minn qabel u mimlija b’gass pur, xott u inerti (nitroġenu jew, jekk jista’ jkun, diossidu tal-karbonju).

5.3. Buretta ta’ 25- jew 50-ml, gradata b’0,1 ml.

6. REAĠENTI

6.1. Kloroforma, kwalità ta’ reaġent analitiku, meħlus mill-ossiġenu billi jitbaqbaq minn ġewwa fih kurrent ta’ gass pur, xott u inerti.

6.2. Aċidu aċetiku glaċjali, kwalità ta’ reaġent analitiku, meħlus mill-ossiġenu billi jitbaqbaq minn ġewwa fih kurrent ta’ gass pur, xott u inerti.

6.3. Jodur tal-potassju, soluzzjoni milwiema saturata, ppreparata dan l-aħħar, ħielsa mill-jodju u mill-iodates

6.4. Soluzzjoni milwiema standardizzata bi preċiżjoni ta’ sodium thiosulphate ta’ 0,01 jew 0,002 Mol/L, standardizzata eżatt qabel tintuża.

6.5. Dispersjoni milwiema ta’ soluzzjoni ta’ lamtu ta’ 10 g/l, imħejjija riċentament minn lamtu naturali li jinħall.

7. KAMPJUN

Ara li l-kampjun jitneħħa u jinżamm il-bogħod mid-dawl, jinżamm kiesaħ ġewwa reċipjenti tal-ħġieġ mimlijin għal kollox, issiġillati ermetikament b’tappijiet tal-ħġieġ immolati jew tas-sufra.

8. PROĊEDURA

It-test għandu jsir f’dawl diffuż jew f’dawl artifiċjali. Iżen f’magħrfa tal-ħġieġ (5.1) jew, fin-nuqqas tagħha, fi flask (5.2), sa l-eqreb 0,001 g, piż tal-kampjun skond it-tabella li ġejja, skond il-valur ta’ perossidu mistenni:







Valur ta’ perossidu mistenni (meq) Piż tal-porzjon tat-test (g) 0 sa 12 5,0 sa 2,0 12 sa 20 2,0 sa 1,2 20 sa 30 1,2 sa 0,8 30 sa 50 0,8 sa 0,5 50 sa 90 0,5 sa 0,3

Neħħi t-tapp ta’ flask (5.2) u daħħal l-imgħarfa tal-ħġieġ li jkun fiha l-porzjon għall-ittestjar. Żid 10 ml ta’ kloroforma (6.1). Dewweb malajr il-parti għall-ittestjar billi tħawwadha Żid 15 ml ta’ aċidu aċetiku (6.2), u mbagħad 1 ml ta’ soluzzjoni ta’ jodur tal-potassju (6.3). Daħħal malajr it-tapp, ħawwadha għal minuta, u ħalliha għal ħames minuti eżatt il-bogħod mid-dawl b’temperatura ta’ minn 15 sa 25 oC.

Żid bejn wieħed u ieħor 75 ml ta’ ilma ddistillat. Ittitra l-jodju meħlus bis-soluzzjoni ta’ sodium thiosulphate (6.4) (soluzzjoni ta’ 0,002 N għall-valuri mistennija ta’ inqas minn 12, u soluzzjoni ta’ 0,01 N għal valuri mistennija ’l fuq minn 12) filwaqt li tħawwad sewwa, billi tuża soluzzjoni ta’ lamtu (6.5) bħala indikatur.

Wettaq żewġ determinazzjonijiet fuq l-istess kampjun tat-test.

Wettaq blank test fl-istess waqt. Jekk ir-riżultat tal-blank test jaqbeż 0,05 ml ta’ soluzzjoni ta’ 0,01 ta’ sodium thiosulphate (6.4), ibdel ir-reaġenti impuri.

9. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

Il-valur tal-perossidu (PV), f’milliekwivalenti ta’ ossiġenu attiv għal kull kilogramma, jingħata bil-formula:

fejn:

V = in-numru ta’ ml ta’ soluzzjoni standardizzata ta’ sodium thiosulphate (6.4) użat għat-test, korrett sabiex jagħti kas tal-blank test;

T = il-molarità eżatta tas-soluzzjoni ta’ sodium thiosulphate (6.4) wżata;

m = il-piż fi g. tal-porzjon tat-test.

Ħu il-medja aritmetika taż-żewg determinazzjonijiet imwettqa bħala r-riżultat.

▼M21









ANNESS IV

DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TAX-XAMA’ PERMEZZ TAL-KROMATOGRAFIJA TAL-GASS B’KOLLONA KAPILLARI

1. SKOP

Dan il-metodu jiddeskrivi proċedura għad-determinazzjoni tal-kontenut ta’ xama’ fiż-żjut taż-żebbuġa. Ix-xama’ jinfired skond l-għadd ta’ atomi tal-karbonju. Dan il-metodu jista’ jintuża partikularment biex issir distinzjoni bejn iż-żejt taż-żebbuġ miksub permezz tat-tagħsir u bejn dak miksub permezz ta’ l-estrazzjoni (żejt tal-fdal).

2. PRINĊIPJU

Il-materja grassa, miżjuda b’livell standard intern xieraq, tiġi frazzjonata bil-kromatografija fuq kolonna ta’ ġell idratat tas-silika; l-ewwel frazzjoni miksuba fil-kondizzjonijiet ta’ prova (bil-polarità tiegħu tkun inqas minn dik tat-triglycerides) jiġi rkuprat, imbagħad jiġi analizzat direttament bil-kromatografija tal-gass fuq kolonna kapillari.

3. APPARAT

3.1. Flask Erlenmeyer ta’ 25 ml.

3.2. Kolonna tal-ħġieġ għall-kromatografija tal-gass, ta’ diametru intern ta’ 15,0 mm, twila bejn 30 u 40 cm, u mgħammra b’vit.

3.3. Apparat ta’ kromatografija tal-gass addattat għall-funzjonament bil-kolonna kapillari, mgħammar b’sistema għall-intoduzzjoni diretta fil-kolonna, u magħmul minn: 3.3.1. Kompartiment termostatiku għall-kolonni, mgħammar bi programmatur tat-temperatura. 3.3.2. Injettur kiesaħ għall-introduzzjoni diretta fil-kolonna. 3.3.3. Indikatur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma u konvertitur-amplifikatur. 3.3.4. Reġistratur-integratur adattat għall-konvertitur-amplifikatur (3.3.3.), b’rata ta’ rispons ta’ mhux aktar minn sekonda, u b’velocità tal-karta varjabbli. (Wieħed jista’ juża wkoll sistemi informatiċi li jippermettu l-ġbir tad-dejta tal-kromatografija bil-gass permezz ta’ kompjuter.) 3.3.5. Kolonna kapillari tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba, twila bejn 8 u 12 m, ta’ diametru intern ta’ bejn 0,25 u 0,32 mm, miksija minn ġewwa b’likwidu, u bi ħxuna uniformi ta’ bejn 0,10 u 0,30 μm. (Likwidi għat-tifrix adattati għall-użu, tat-tipi SE52 jew SE54 fis-suq.)

3.4. Mikrosiringa għall-introduzzjoni diretta fil-kolonna ta’ 10 μl, mgħammra b’labra iebsa.

3.5. Vibratur ta’ l-elettriku.

3.6. Evaporatur ċirkolari.

3.7. Muffle furnace.

3.8. Miżien analitiku li jiggarantixxi preċiżjoni ta’ + 0,1 mg.

3.9. L-apparat tal-ħġieġ normali tal-laboratorju.

4. REAĠENTI

4.1. Ġell tas-silika tad-daqs ta’ fraka ta’ bejn 60 u 200 μm. Poġġi l-ġell fil-forn f’temperatura ta’ 500 °C għal talanqas erba’ sigħat. Kessħu mill-ġdid, imbagħad żidlu l-ilma fi kwantità ta’ 2 % tal-ġell tas-silika mtella’. Ħawwad sew it-taħlita omoġenizzata. Ħalli fid-dlam għal talanqas 12-il siegħa qabel l-użu.

4.2. n-hexane, għall-kromatografija.

4.3. Eter etiliku, għall-kromatografija

4.4. n-Heptane, għall-kromatografija.

4.5. Soluzzjoni standard ta’ lauryl arachidate, f’0,1 % (m/V) fil-hexane (skond il-livell standard intern). (Wieħed jista’ juża wkoll palmitate tal-palmitil jew inkella methyl stearate) 4.5.1. Soudan 1 (1-phenyl-azo-2-naphthol)

4.6. Gass portatur: idroġenu jew elju pur għall-kromatografija tal-gass.

4.7. Gassijiet awżiljari: — idroġenu pur għall-kromatografija tal-gass; — arja safja, għall-kromatografija tal-gass.

5. PROĊEDURA

5.1. Tħejjija tal-kolonna kromatografika

Dendel 15 g ta’ ġell tas-silika (4.1) fl-n-hexane (4.2) u daħħlu fil-kolonna (3.2). Ħallih joqgħod spontanjament, u kompli t-tqegħid bl-għajnuna ta’ shaker elettroniku (3.5) biex is-saff kromatografiku jsir aktar omoġenju. Saffi 30 ml ta’ n-hexane biex tneħħi l-impuritajiet li jista’ jkun hemm. Iżen eżatt 500 mg mill-kampjun bl-għajnuna tal-miżien (3.8.) fl-Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1.), u żid il-kwantità meħtieġa ta’ standard intern (4.5.) skond il-kontenut previst ta’ xama’. Per eżempju, żid 0,1 mg ta’ lauryl arachidat fil-każ taż-żejt taż-żebbuġa, u minn 0,25 sa 0,5 mg fil-każ taż-żejt tal-fdal taż-żebbuġa. Ittrasferixxi l-kampjun hekk ippreparat għall-kolonna kromatografika bl-għajnuna ta’ żewġ porzjonijiet ta’ 2 ml ta’ n-hexane (4.2.).

Ħalli s-solvent inixxi sa 1 mm ’il fuq mill-ogħla livell ta’ l-assorbent, imbagħad saffi 70 ml addizzjonali ta’ n-hexane sabiex tneħħi l-n-alcanes li jkunu preżenti naturalment. Imbagħad ibda l-eluzzjoni kromatografika billi tiġbor 180 ml tat-taħlita n-hexane/eter etiliku, b’proporzjon 99:1, filwaqt li tinżamm rata ta’ madwar 15-il taqtira kull 10 sekondi. L-eluzzjoni tal-kampjun għandha ssir f’temperatura ta’ l-ambjent ta’ 22 °C + 4.

Noti:

— It-taħlita n-hexane/eter etiliku (99:1) għandha titħejja kuljum.

— Biex tikkontrolla viżwalment l-eluzzjoni korretta tax-xama’, tista’ żżid mal-kampjun fis-soluzzjoni 100 μl ta’ 1 % Sudan fit-taħlita ta’ l-eluzzjoni. Peress li l-kolorant għandu retenzjoni intermedjarja bejn ix-xama’ u t-triglycerides, malli l-kulur jilħaq il-fond tal-kolonna kromatografika, jeħtieġ li l-eluzzjoni tkun sospiża għax ix-xama’ kollu jkunu ġew eluti.

Nixxef il-frazzjoni hekk miksuba fl-evaporatur ċirkolari (3.6.) sakemm is-solvent prattikament ikun tneħħa għalkollox. Neħħi l-aħħar 2 ml tas-solvent bl-għajnuna ta’ kurrent dgħajjef ta’ nitroġenu; imbagħad żid 2-4 ml ta’ n-heptane.

5.2. Analiżi bil-kromatografija tal-gass

5.2.1. Proċeduri preliminari

Waħħal il-kolonna mal-kromatografu tal-gass (3.3.) billi tqabbad it-terminal ta’ dħul fis-sistema on-column u t-terminal ta’ ħruġ ma’ l-indikatur. Agħmel verifika ġenerali ta’ l-apparat ta’ kromatografija bil-gass (l-operazzjoni taċ-ċirkwiti tal-gass, l-effiċjenza ta’ l-indikatur u tas-sistema ta’ reġistrazzjoni, eċċ.).

Jekk il-kolonna tkun qiegħda tintuża għall-ewwel darba, l-ewwel għandu jsir il-kondizzjonament tagħha. Għaddi nixxija rqiqa ta’ gass fil-kolonna, imbagħad ixgħel l-apparat tal-kromatografija tal-gass. Saħħanha bil-mod sakemm wara xi 4 sigħat tilħaq temperatura ta’ 350 °C. Żomm din it-temperatura għal talanqas sagħtejn, imbagħad għaddi għall-aġġustament ta’ l-apparat biex ikun jista’ jitħaddem (l-aġġustar tar-rata ta’ ċirkolazzjoni tal-gassijiet, it-tqabbid tal-fjamma, it-tqabbid mar-reġistratur elettroniku (3.3.4.), l-aġġustar tat-temperatura ta’ l-ambjent għall-kolonna, għall-indikatur, eċċ.) u rreġistra s-sinjal għal sensibbiltà talanqas darbtejn ikbar minn dik prevista għat-twettiq ta’ l-analiżi. Il-linja bażilari għandha tkun lineari, mingħajr l-ebda tip ta’ quċċata, u ma jista’ jkollha l-ebda sinjal ta’ devjazzjoni.

Devjazzjoni rettilineari negattiva tindika li l-konnessjonijiet tal-kolonna mhumiex sew; devjazzjoni pożittiva tindika li l-kolonna ma ġietx ikkondizzjonata kif suppost.

5.2.2. Għażla tal-kondizzjonijiet tat-tħaddim

B’mod ġenerali, il-kundizzjonijiet tat-tħaddim li għandhom ikunu osservati huma dawn li ġejjin:

— it-temperatura tal-kolonna: —



20 °C/minuta 5 °C/minuta 20 °C/minuta fil-bidu 80 °C (1′) → 240 °C → 325 °C (6′) → 340 °C (10′)

— it-temperatura ta’ l-indikatur: 350 °C;

— il-kwantità tal-materjal injettat: 1 μl tas-soluzzjoni (2-4 ml) ta’ n-heptane;

— gass portatur: elju jew idroġenu bil-veloċità lineari l-aktar xierqa għall-gass magħżul (ara l-Appendiċi);

— sensittività ta’ l-istrument: livell xieraq skond il-kundizzjonijiet ta’ hawn isfel:

Dawn il-kundizzjonijiet jistgħu jkunu mmodifikati skond il-karatteristiċi tal-kolonna u ta’ l-apparat ta’ kromatografija tal-gass, bil-għan li jinfired ix-xama’ kollu u li jkun hemm riżoluzzjoni sodisfaċenti tal-qċaċet (ara l-figura); il-periodu ta’ retenzjoni ta’ l-standard intern C32 għandu jkun ta’ 18-il minuta + 3. L-aktar quċċata tax-xama’ rappreżentattiva għandha tidher f’talanqas 60 % ta’ l-iskala.

Il-parametri ta’ l-integrazzjoni tal-qċaċet għandhom jiġu ddeterminati b’tali mod li tinkiseb evalwazzjoni korretta tas-superfiċji tal-qċaċet ikkunsidrati.

Nota: Minħabba t-temperatura finali għolja, hija permessa devjazzjoni pożittiva ta’ mhux aktar minn 10 % ta’ l-iskala sħiħa.

5.3. Eżekuzzjoni ta’ l-analiżi

Tella’ 1 μl mis-soluzzjoni bl-għajnuna tal-mikrosiringa ta’ 10 μl; neħħi l-plunger tas-siringa sabiex il-labra tibqa’ vojta. Daħħal il-labra fl-injettur, u wara sekonda jew tnejn, injetta malajr; wara madwar 5 sekondi, oħroġ il-labra bil-mod.

Agħmel ir-reġistrazzjoni sa l-eluzzjoni totali tax-xama’.

Il-linja bażilari għandha dejjem tissodisfa l-kundizzjonijiet stipulati.

5.4. Identifikazzjoni tal-qċaċet

L-identifikazzjoni tal-qċaċet differenti għandha ssir abbażi tal-ħin ta’ retenzjoni, skond tqabbil ma’ taħlitiet ta’ xama’ b’ħinijiet ta’ retenzjoni magħrufin, analizzati fl-istess kundizzjonijiet.

Il-Figura turi kromatogramma tax-xama’ ta’ żejt taż-żebbuġa verġni.

5.5. Evalwazzjoni kwantitattiva

Ikkalkola s-superfiċji tal-qċaċet ta’ l-istandard intern, kif ukoll ta’ l-esters alifatiċi minn C40 sa C46, bl-għajnuna ta’ l-integratur.

Ikkalkola l-kontenut tax-xama’ ta’ kull wieħed mill-esters, f’mg/kg ta’ xaħam, skond il-formula:

Fejn:

Ax = is-superfiċje tal-quċċata ta’ kull ester, f’millimetri kwadri;

As = is-superfiċje tal-quċċata ta’ l-istandard intern, f’millimetri kwadri;

ms = il-massa ta’ l-istandard intern miżjud, f’milligrammi;

m = il-massa tal-kampjun meħud għall-analiżi, fi grammi.

6. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Indika t-total tal-kontenut tat-tipi differenti ta’ xama’ minn C40 sa C46, fi mg/kg ta’ materja grassa (ppm).

Nota: Il-komponenti li għandhom jiġu kkwantifikati jirreferu għall-qċaċet b’numru biż-żewġ tal-karbonju, bejn l-estri C40 u C46, skond l-eżempju tal-kromatogramma tax-xama’ taż-żejt taż-żebbuġa indikat fil-figura li ġejja. Jekk l-ester C46 jidher darbtejn, biex jiġi identifikat, jaqbel li ssir analiżi tal-frazzjoni tax-xama’ f’żejt tal-fdal taż-żebbuġa fejn il-quċċata C46 huwa faċilment identifikabbli għax għandha maġġoranza ċara.

Ir-riżultati għandhom ikunu espressi sa punt deċimali wieħed.

FIGURA

Kromatogramma tax-xama’ f’żejt taż-żebbuġa ( 5 )

Tifsir:

I.S. = Lauryl arachidate

1. = Diterpenic esters

2 + 2′ = Esters C40

3 + 3′ = Esters C42

4 + 4′ = Esters C44

5. = Esters C46

6. = Sterol esters u alkoħol triterpenic









APPENDIĊI

Determinazzjoni tal-veloċità lineari tal-gass

Injetta minn 1 sa 3 μl metanu (jew propan) fl-apparat kromatografiku tal-gass, wara l-aġġustament tiegħu għall-kundizzjonijiet normali ta’ l-operazzjoni. Żomm kont tal-ħin li l-gass jieħu biex jgħaddi mill-kolonna, mill-mument li jiġi injettat sakemm tintlaħaq il-quċċata (tM).

Il-veloċità lineari f’ċm/sek. hija mogħtija bil-formula L/tM, fejn L huwa t-tul tal-kolonna f’ċm, u tM huwa l-ħin imkejjel f’sekondi.

▼B









L-ANNESS V

DETERMINAZZJONI TAL-KOMPOŻIZZJONI U L-KONTENUT TA’ STEROLI BIL-KROMATOGRAFIJA TAL-KOLONNA KAPILLARI TAL-GASS

1. SKOP

Il-metodu jiddesskrivi proċedura għad-determinazzjoni ta’ kontenut ta’ steroli individwali u totali ta’ sostanzi grassi.

2. PRINĊIPJU TAL-METODU

Is-sostanza grassa, bil-ß-cholestanol miżjud bħala standard intern, tiġi ssapunifikata bl-idrossidu tal-potassju f’soluzzjoni etanolika u s-sostanzi li ma jistgħux jiġu saponifikati jiġu estratti eteru tal-etill.

Il-frazzjoni tal-isteroli tiġi mifruda mill-estratt li ma jistax jiġi ssapunifikat bil-kromatografija fuq pjanċa talġell tas-silika bażika. L-isteroli rkuprati mill-ġell tas-silika jiġu ttrasformati f’ eteri tat-trimethyl-silyl u dawn jiġu analizzati bil-kromatografija ta’ kolonna kapillari tal-gass.

3. APPARAT

3.1. Flask ta’ 250ml b’kondensur ta’ rifluss b’ġonot tal-ħġieġ immolati.

3.2. Njiebet ta’ separazzjoni ta’ 500 ml.

3.3. Flasks ta’ 250 ml.

3.4. Apparat komplut għall-analiżi bi kromatografija ta’ saff irqiq bl-użu ta’ pjanċi tal-ħġieġ 20 × 20 ċm.

3.5. Lampa ultravjola b’tul ta’ mewġa ta’ 366 jew 254 nm.

3.6. Mikrosiringi ta’ 100 ml u 500 ml.

3.7. Filtru ċilindriku b’septum poruż G3 (porożità 15 sa 40 μm) ta’ djametru ta’ bejn wieħed u ieħor 2 ċm u fond ta’ xi 5 cm, bi tqabbid xieraq għall-filtrazzjoni taħt vakwu u ġonta tat-tip male 12/21 tal-ħġieġ immolat.

3.8. Flask vakwu koniku ta’ 50 ml b’ġonta tat-tip female 12/21 ta’ ħġieġ immolat li tista’ titwaħħal fuq il-lembut filtru (3.7).

3.9. Tubu tat-testijiet tal-ħġieġ ta’ 10 ml. b’bażi ġejja għax-xejn għax-xejn u tapp li jissiġilla.

3.10. Kromatografija tal-gass addattata sabiex tintuża ma’ kolonna kapillari, ipprovduta b’sistema li tifred magħmula minn: 3.10.1. kompartiment termostatiku għall-kolonni li jifilħu jżommu t-temperatura mixtieqa bi preċiżjoni ta’ ± 1 oC; 3.10.2. unità ta’ vaporizzazzjoni bit-temperatura regolabbli b’element vaporizzanti tal-ħġieġ persilanizzat; 3.10.3. Didekter tal-jonizzazzjoni tal-fjamma u amplifier-converter; 3.10.4. rikorder-integrator addattat għall-użu ma’ l-amplifier-converter (3.10.3) li għandu ħin ta’ rispons ta’ mhux aktar minn sekonda u veloċità varjabbli tal-karta.

3.11. Kolonna kapillari tal-ħġieġ jew tal-fused-silica twila 20 sa 30 m, dijametru intern ta’ 0,25 sa 0,32mm, miksija għal kollox b’likwidu SE-52 jew SE-54 jew ekwivalenti bi ħxuna uniformi ta’ bejn 0,10 u 0,30 mm.

3.12. Mikrosiringa għall-kromatografija bil-gass ta’ 10 ml b’labra iebsa.

4. REAĠENTI

4.1. Idrossidu tal-potassju, bejn wieħed u ieħor soluzzjoni etanolika ta’ 2 mol/L. Dewweb 130 g ta’ idrossidu tal-potassju (konċentrazzjoni minima ta’ 85 %), bi ksieħ f’200 ml ta’ ilma ddistillat u mbagħad żid sa litru bl-etanol. Żomm is-soluzzjoni fi fliexken tal-ħġieġ skuri li jagħlqu sewwa.

4.2. Eteru tad-dietill, purità analitika.

4.3. Sulfat tas-sodju anidridu, purità analitika.

4.4. Pjanċi tal-ħġieġ miksija bill-ġell tas-silika, mingħajr indikatur fluworexxenti, bi ħxuna ta’ 0,25 mm (disponibbli kummerċjalment u lesti għall-użu).

4.5. Idrossidu tal-potassju, soluzzjoni etanolika ta’ 0,2 mol/L. Dewweb 13 g ta’ idrossidu tal-potassju f’20 ml ta’ ilma ddistillat u żid sa litru bl-etanol.

4.6. Benzene, għall-kromatografija. (Ara 5.2.2).

4.7. Aċetun, għall-kromatografija. (Ara 5.2.2).

4.8. Hexane, għall-kromatografija. (Ara 5.2.2).

4.9. Eteru dietill, għall-kromatografija. (Ara 5.2.2).

4.10. Kloroforma, purità analitika. (Ara 5.2.2).

4.11. Soluzzjoni ta’ referenza għal kromatografija ta’ saff irqiq: kolesterol jew phytosterols, soluzzjoni ta’ ►M6 2 % ◄ fil-kloroforma.

4.12. 2,7-dichlorofluorescein, soluzzjoni etanolika ta’ 0,2 %. Ġibha ftit bażika billi żżid xi qtar ta’ soluzzjoni alkoħolika ta’ 2 mol/L tal-idrossidu tal-potassju.

4.13. Pyridine anidriduża, għall-kromatografija.

4.14. Hexamethyl disilazane.

4.15. Trimethylchlorosilane.

4.16. Soluzzjonijiet ta’ referenza ta’ eteri sterol trimethylsilyl. Li għandhom jiġu mħejjija fil-ħin tal-użu minn steroli jew taħlitiet puri ta’ steroli minn żjut li fihom dawn l-isteroli.

4.17. ß-cholestanol, 0,2 % soluzzjoni (m/V) fil-kloroforma (standard intern).

4.18. Gass carrier: idroġenu u elju, purità tal-kromatografija tal-gass.

4.19. Gassijiet awżiljarji: — idroġenu, purità tal-kromatografija tal-gass, — arja, purità tal-kromatografija tal-gass.

5. PROĊEDURA

5.1. Tħejjija ta’ materji li ma jistgħux jiġu ssaponifikati. 5.1.1. Permezz tal-mikrosiringa ta’ 500μl qiegħed fi flask ta’ 250 ml, volum ta’ soluzzjoni ta’ β-cholestanol ta’ 0,2 % fil-kloroforma (4.17) li fiha jinsab ammont ta’ kolestanol li jikkorrispondi għal bejn wieħed u ieħor 10 % tal-kontenut ta’ sterol tal-alikwota tal-kampjun li għandu jittieħed għad-determinazzjoni Eżempju, għal ħames grammi ta’ kampjun żid 500 μl tas-soluzzjoni 0,2 % α-cholestanol fil-każ ta’ xi żejt taż-żebbuġa u 1 500 μl għaż-żjut ►M6 ————— ◄ żejt taż-żebbuġa pomaca. Evapora sa ma jinxef f’kurrent ta’ nitroġenu u mbagħad iżen bi preċiżjoni 5 g tal-kampjun xott u ffiltrat u qegħedhom fl-istess flask. ►M6 Żjut ◄ li jkun fihom kwantitajiet apprezzabbli ta’ kolesterol jistgħu juru quċċata li jkollha ħin ta’ żamma identiku għal tal-kolestanol. Jekk jiġri dan, il-frazzjoni ta’ sterol tkun trid tiġi analizzata darbtejn bi u mingħajr standard intern ►M6 jew betulinol ikollu jintuża minflok cholestanol. ◄ . 5.1.2. Żid 50 ml ta’ soluzzjoni etanolika ta’ 2 mol/L tal-idrossidu tal-potassju, waħħal il-kondensur ta’ rifluss u saħħan banju Marija sakemm jagħli bil-mod filwaqt li tħawwad il-ħin kollu bis-saħħa sas-saponifikazzjoni (s-soluzzjoni issir ċara). Kompli saħħan għal 20 minuta oħra, mbagħad żid 50 ml ta’ ilma ddistillat għall-parti ta’ fuq tal-kondensur, aqla’ l-kondensur u kessaħ il-flask sa bejn wieħed u ieħor 30 oC. 5.1.3. Ferragħ il-kontenut tal-flask b’mod kwantitattiv f’lembut ta’ separazzjoni ta’ 500 ml filwaqt li tlaħħlaħ spiss bl-ilma ddistillat, li jammonta b’kollox għal bejn wieħed u ieħor 50 ml. Żid bejn wieħed u ieħor 80 ml ta’ eteru tad-dietill, ħawwad bis-saħħa għal bejn wieħed u ieħor 30 sekonda u ħallih joqgħod (Nota 1). Ifred il-parti l-milwiema ta’ isfel billi tiġborha ġewwa tieni lembut ta’ separazzjoni. Agħmel żewġ estrazzjonijiet oħra mill-fażi milwiema bl-istess mod billi tuża 60 sa 70 ml ta’ eteru tad-dietill kull darba. Nota 1. Kwalunkwe emulsjoni tista’ tiġi meqruda biż-żjieda ta’ kwantitajiet żgħar ta’ alkoħol tal-etill jew alkoħol tal-metill permezz ta’ sprej. 5.1.4. Iġbor l-estratti tal-eteru flimkien fl-lembut ta’ separazzjoni u aħsel b’ilma distillat (50 ml kull darba) sakemm l-ilma tal-ħasil jagħti reazzjoni newtrali. Meta jitneħħa l-ilma tal-ħasil, nixxef bis-sulfat tas-sodju anidridu u ffiltra mis-sulfat tas-sodju anidriduż ġewwa flask ta’ 250 ml li jkun intiżen minn qabel, filwaqt li taħsel il-lembut u l-filtru bi kwantitajiet żgħar ta’ eteru tad-dietill. 5.1.5. Iddistilla l-eteru sa ftit ml, u mbagħad nixxef taħt vakwu ħafif jew f’kurrent ta’ nitoġenu, u kompli nixxef ġewwa forn b’temperatura ta’ 100 oC għal bejn wieħed u ieħor kwarta, u mbagħad iżen wara li tkessaħ f’dessikatur.

5.2. Separazzjoni tal-frazzjoni tal-isterol. 5.2.1. Tħejijja tal-pjanċi bażiċi. Għaddas il-pjanċi tal-ġell tas-silika (4.4) għal kollox fis-soluzzjoni etanolika ta’ 0,2 mol/L ta’ idrossidu tal-potassju (4.5) għal għaxar sekondi, mbagħad erħilhom jinxfu fi fume cupboard għal sagħtejn u fl-aħħar poġġihom f’forn b’temperatura 100 oC għal siegħa: Neħħihom mill-forn u żommhom f’dessikatur tal-klorur tal-kalċju sakemm terġa tiġi bżonnhom (il-pjanċi hekk ittrattati għandhom jintużaw fi żmien 15 il-ġurnata). Nota 2. Meta jintużaw pjanċi tal-ġell tas-silika bażiċi biex tifred il-frazzjoni tal-isterol ma hemmx għalfejn tittratta dawk li ma jissaponifikawx bl-alumina. B’dan il mod il-komposti kollha ta’ natura aċida (aċidi grassi u oħrajn) jinżammu fuq il-linja ta’ rilevament u l-faxxa ta’ steroli hija mifruda b’mod ċar mill-faxxa tal-alkoħol alifatiku u triterpeni. 5.2.2. Qiegħed taħlita ta’ 95:5 (v/v) ta’ benzene/aċetub fil-kompartiment tal-iżvilupp tal-pjanċi sa fond ta’ 1 ċm. Jew inkella tista’ tintuża taħlita ta’ 65:35 (v/v) ta’ hexane/eteru tal-etill. Agħlaq il-kamra b’għata xieraq u ħallihom hekk għal bejn wieħed u ieħor nofs siegħa sabiex jinkiseb l-ekwilibriju ta’ likwidu u fwar. Jistgħu jitpoġġew strippi ta’ filtri tal-karta mgħaddsa fl-eluent fuq il-wiċċ ġewwieni tal-kamra. Dan inaqqas il-ħin ta’ żvilupp bejn wieħed u ieħor b’terz u jġib l-elużjoni tal-komponenti aktar uniformi u regolari. Nota 3. It-taħlita tal-iżvilupp għandha tinbidel għal kull test sabiex jinkisbu kondizzjonijiet ta’ elużjoni perfettament riproduċibbli. 5.2.3. Ħejji soluzzjoni ta’ bejn wieħed u ieħor 5 % ta’ materji li ma jistgħux jiġu ssapunifikati (5.15) fil-kloroforma u, permezz tal-mikrosiringa ta’ 100 ml, irriga pjanċa kromatografika (5.2.1) b’bejn wieħed u ieħor 300 μl 2 ċm minn tarf wieħed f’riga irqieqa u uniformi kemm jista’ jkun. F’linja waħda mar-riga qiegħed 2 sa 3 ml tas-soluzzjoni ta’ referenza ta’ sterol (4.11) fuq tarf wieħed tal-pjanċa sabiex il-faxxa ta’ sterol tkun tista’ tiġi identifikata wara l-iżvilupp. 5.2.4. Qiegħed il-pjanċa fil-kamra tal-iżvilupp mħejjija kif speċifikat f’ 5.2.2. It-temperatura tal-ambjent għandha tinżamm bejn 15 u 20 oC. Agħlaq minnufih il-kamra bl-għatu u ħalli ssir l-elużjoni sakemm il-parti ta’ quddiem tas-solvent tilħaq bejn wieħed u ieħor 1 ċm mit-tarf ta’ fuq tal-pjanċa. Neħħi l-pjanċa mill-kamra tal-iżvilupp u evapora s-solvent f’kurrent ta’ arja sħuna jew billi tħalli l-pjanċa għal ftit ħin taħt għata. 5.2.5. Sprejja l-pjanċa fuq fuq u b’mod uniformi bis-soluzzjoni ta’ 2,7- dichlorofluoroscein. Meta l-pjanċa tiġi osservata taħt dawl ultravjola, l-faxxa ta’ sterol tista’ tiġi identifikata billi tiġi allineata mat-tebgħa miksuba mis-soluzzjoni ta’ referenza. Immarka l-limiti tal-faxxa matul t-truf tal-fluworexxenza b’lapes iswed. 5.2.6. Permezz ta’ spatula tal-metall obrox il-ġell tas-silika fil-parti mmarkata. Qiegħed il-materjal mneħħi imfarrak fin fil-lembut filtru (3.7). Żid 10 ml ta’ kloroforma sħuna, ħawwad bil-galbu bl-ispatula tal-metall u ffiltra taħt vakwu, filwaqt li tiġbor l-iffiltrat fil-flask koniku (3.8) mwaħħal mal-lembut. Aħsel il-fdal fil-lembut tliet darbiet bl —eteru tad-dietill (bejn wieħed u ieħor 10 ml kull darba) filwaqt li tiġbor l-iffiltrat fl-istess flask imwaħħal mal-lembut. Evapora l-iffiltrat għal volum ta’ 4 sa 5 ml, ferragħ is-soluzzjoni li tibqa’ fit-tubu tat-testijiet tal-ħġieġ ta’ 10 ml li tkun intiżnet minn qabel, evapora sa ma tinxef billi ssaħħan bil-mod f’kurrent ħafif ta’ nitroġenu, erġa’ żid bi ftit qtar ta’ aċetun, erġa’ evapora sa ma jinxef, qiegħed f’forn b’temperatura ta’ 105 oC għal bejn wieħed u ieħor 10 minuti u mbagħad ħallih jiksaħ ġewwa dessikatur u iżen. Il-fdal li jibqa fit-tubu tat-testijiet tal-ħġieġ huwa magħmul mill-frazzjoni tal-isterol.

5.3. It-tħejjija tal-eteru trimethilsili. 5.3.1. Żid ir-reaġent silylation, li huwa magħmul minn taħlita 9:3:1 (v/v/v) ta’ pyridine/hexamethyl disilazane/trimethyl chlorosilane (Nota 4) fil-proporzjon ta’ 50 μl għal kull milligramma ta’ steroli fit-tubu tat-testijiet tal-ħġieġ li jkun fiha l-frazzjoni tal-isterol, mingħajr ma jassorbi umdità (Nota 5). Nota 4. Soluzzjonijiet lesti għall-użu huma disponibbli b’mod kummerċjali. Reaġenti oħra ta’ silanizzazjoni bħal, per eżempju, bis-trimethilsilil, aċetamide tat-trifluor ċ 1 % trimethyl chlorosilane, li għandhom jiġu dilwiti b’volum ugwali ta’ pyridine anidriduż, huma disponibbli wkoll. 5.3.2. Sodd it-tubu tat-testijiet tal-ħġieġ, ħawwad bil-galbu (mingħajr ma taqlibha rasha l-isfel) sakemm l-isteroli jinħallu kollha. Ħalliha toqgħod għal mill-inqas 15-il minuta f’temperatura tal-ambjent u mbagħad iċċentrifuga għal ftit minuti. Is-soluzzjoni ċara hija lesta għall-analiżi ta’ kromatografija tal-gass. Nota 5. L-opalexxenza ħafifa li tista’ tifforma hija normali u ma tikkawża ebda interferenza. Il-formazzjoni ta’ tajjar abjad jew id-dehra ta’ xi kulur roża huma sinjali tal-preżenza ta’ umdità jew ta’ deterjorament tar-reaġent. Jekk dan iseħħ, it-test għandu jerġa’ jsir.

5.4. Analiżi bil-kromatografija tal-gass. 5.4.1. Operazzjonijiet preliminari, l-ippakkjar tal-kolonni. 5.4.1.1. Waħħal il-kolonna fil-kromatografu tal-gass, billi t-tarf tad-dħul jitwaħħal ma’ l-evaporatur ímwaħħal mas-sistema li tifred u t-tarf tal-ħruġ mad-didekter. Wettaq kontrolli ġenerali fuq l-unità tal-kromatografu tal-gass (tnixxijiet miċ-ċirkuwiti tal-gass, l-effiċjenza tad-didekter, l-effiċjenza tas-sistema ta’ separazzjoni u s-sistema ta’ recording, eċċ.). 5.4.1.2. Jekk il-kolonna tkun qegħda tintuża għall-ewwel darba huwa rrakkomandat li din tiġi soġġetta għal kondizzjonament. Għaddi kurrent ħafif ta’ gass minn ġewwa l-kolonna u mbagħad ixgħel l-unità ta’ kromatografija tal-gass u saħħan bil-mod sa temperatura ta’ mill-inqas 20 oC ogħla mit-temperatura ta’ operazzjoni (Nota 6). Żomm din it-temperatura għal mill-inqas sagħtejn, u mbagħad qiegħed l-unità kollha fil-kondizzjoni ta’ tħaddim (aġġustament tal-kurrenti u separazzjoni ta’ gass, it-tqabbid tal-fjamma, ir-rabta mar-rikorder elettroniku, aġġustament tal-kompartiment (chamber) tal-kolonna, it-temperatura tad-didekter u tal-injettur, eċċ.) u mbagħad irreġistra s-sinjal b’sensittività ta’ mill-inqas darbtejn akbar minn dik maħsuba għall-analiżi. Il-mogħdija tal-linja ta’ bażi għandha tkun lineari, mingħajr qċaċet ta’ kwalunkwe tip, u ma għandhiex toħroġ minn postha. Moviment negattiv mil-linja dritta juri tnixxija mit-tqabbid tal-kolonna; moviment pożittiv juri kondizzjonament mhux xieraq tal-kolonna. Nota 6. It-temperatura ta’ kondizzjonament għandha dejjem tkun ta’ mill-inqas 20 °C inqas mit-temperatura massima speċifikata għall-fażi stazzjonarja wżata. 5.4.2. Għażla ta’ kondizzjonijiet ta’ tħaddim. 5.4.2.1. Il-kondizzjonijiet ta’ tħaddim ta’ linji ta’ gwida huma dawn: — temperatura tal-kolonna: 260 ± 5 oC, — temperatura ta’l-evaporatur: 280 oC, — temperatura tad-didekter: 290 oC, — veloċità lineari tal-gass carrier: elju 20 sa 35 ċm/s, idroġenu 30 sa 50 ċm/s, — proporzjon ta’ separazzjoni: minn 1:50 sa 1:100, — sensittività tal-istrument: minn 4 sa 16-il darba l-attenwazzjoni minima, — sensittività tar-recording: 1 sa 2 mV fs, — veloċità tal-karta: 30 sa 60 ċm/siegħa, — ammont ta’ sostanza injettata: 0,5 sa 1 μl ta’ soluzzjoni TMSE. Dawn il-kondizzjonijiet jistgħu jinbidlu fid-dawl tal-karatteristiċi tal-kromatografija tal-kolonna u tal-gass sabiex jinkisbu kromatogrammi li jissodisfaw dawn il-kondizzjonijiet: — iż-żmien ta’ żamma għal β-sitosterol għandu jkun ta’ 20 ± 5 minuta, — il-quċċata tal-campesterol għandha tkun: għaż-żejt taż-żebbuġa (il-kontenut medju 3 %) 15 ± 5 % tal-iskala sħiħa; għaż-żejt tas-sojja (kontenut medju 20 %) 80 ± 10 % tal-iskala sħiħa, — l-isteroli kollha preżenti għandhom ikunu separati. Barra milli jkunu mifrudin, il-qċaċet għandhom jkunu wkoll maqtugħin għal kollox, i.e. il-linja tal-quċċata għandha tmur lura lejn il-linja bażi qabel ma titlaq għall-quċċata li jmiss. Iżda risoluzzjoni mhux sħiħa hija tollerata sakemm il-quċċata f’TRR 1,02 tkun tista’ tiġi kkwantifikata permezz tal-perpendikolari. 5.4.3. Proċedura analitika. 5.4.3.1. Permezz ta’ mikrosiringa ta’ 10 μl ħu 1 μl ta’ hexane, iġbed 0,5 μl ta’ arja u mbagħad 0,5 sa 1 μl tas-soluzzjoni kampjun. Għolli l-plunger tas-siringa aktar biex tiżvojta l-labra. Niffed il-labra fil-membrana tal-injection unit u wara sekonda jew tnejn injetta malajr, u mbagħad neħħi bil-mod il-labra wara xi ħames sekondi. 5.4.3.2. Kompli bir-recording sakemm it-TMSE tal-isteroli preżenti jiġu elużat għal kollox Il-linja bażi għandha tkompli tissodisfa l-kondizzjonijiet meħtieġa (5.4.1.2). 5.4.4. Identifikazzjoni tal-quċċata. Identifika l-qċaċet individwali fuq il-bażi taż-żmien ta’ żamma u bi tqabbel mat-taħlitiet ta’ TMSE ta’ steroli analizzati taħt l-istess kondizzjonijiet. L-isteroli jiġu elwiti fl-ordni li ġejja: cholesterol, brassicasterol, 24-metilin cholesterol, campesterol, campestanol, stigmasterol, Δ 7-campesterol, Δ 5,23-stigmastadienol, chlerosterol, β-sistosterol, sitostanol, Δ 5-avenasterol, Δ 5,24-stigmastadienol, Δ 7-stigmastenol, Δ 7-avenasterol. Il-ħinijiet ta’ żamma għas-sitosterol għal kolonni SE-52 u SE-54 jidhru f’Tabella 1. Il-Figuri 1 u 2 juru kromatogrammi tipiċi għal xi żjut. 5.4.5. Evalwazzjoni kwantitattiva. 5.4.5.1. Ikkalkola l-arei ta’ ß-cholestanol u l-qċaċet ta’ isterol permezz tal-integratur. Tagħtix kas tal-qċaċet għal kwalunkwe komposti li mhumiex inklużi fost dawk elenkati fit-Tabella 1. Il-koeffiċjent ta’ rispons għal a-cholestanol għandu jkun ugwali għal 1. 5.4.5.2. Ikkalkula l-konċentrazzjoni ta’ kull sterol individwali f’mg/100 g ta’ materjal grass kif ġej: fejn: Ax = area tal-quċċata għall-isterol × ►M6 ————— ◄ ; As = area tal-quċċata ta’ α-cholestanol ►M6 ————— ◄ ; ms = piż ta’ α-cholestanol miżjud, f’milligrammi; m = piż tal-kampjun użat għad-determinazzjoni, fi grammi.

6. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

6.1 Irreġistra l-konċentrazzjonijiet individwali tal-isterol bħala mg/100 g ta’ sostanza grassa u t-total tagħhom bħala “steroli totali”.

6.2 Ikkalkola l-perċentwali ta’ kull sterol individwali mill-proporzjon tal-area tal-quċċata rilevanti ma’ l-arja totali tal-quċċata għall-isteroli. fejn: Ax = area tal-quċċata għal x; ΣA = area totali tal-qċaċet għall-isteroli.









APPENDIĊI:

Determinazzjoni tal-veloċità lineari tal-gass

Bil-kromatografu tal-gass taħt kondizzjonijiet ta' operazzjoni normali injetta 1 sa 3 μl ta' metanu (jew propan) u kejjel il-ħin li jieħu l-gass biex jgħaddi mill-kolonna mill-ħin tal-injezzjoni sal-ħin li fih tidher il-quċċata (tM).

Il-veloċità lineari f'ċm/s toħroġ minn L/tM, fejn L huwa t-tul tal-kolonna f'ċentimetri u tM il-ħin mkejjel f'sekondi.







Tabella I Ħinijiet relattivi ta’ żamma għall-isteroli Quċċata Identifikazzjoni Ħin relattiv ta’ żamma Kolonna SE 52 Kolonna SE 52 1 cholesterol Δ-5-cholesten-3β-ol 0,67 0,63 2 cholestanol 5α-cholestan-3β-ol 0,68 0,64 3 brassicasterol [24S]- 24-methyl-Δ-5,22-cholestadien-3β-ol 0,73 0,71 4 24-methylene-cholesterol 24-methylene-Δ-5,24-cholesten-3β-ol 0,82 0,80 5 campesterol [24R]- 24-methyl-Δ-5-cholesten-3β-ol 0,83 0,81 6 campestanol [24R]- 24-methyl-cholestan-3β-ol 0,85 0,82 7 stigmasterol [24R]- 24-ethyl-Δ-5,22-cholestadien-3β-ol 0,88 0,87 8 Δ-7-campesterol [24R]- 24-methyl-Δ-7-cholesten-3β-ol 0,93 0,92 9 Δ-5,23-stigmastadienol [24R, S]- 24-ethyl-Δ-5,23-cholestadien-3β-ol 0,95 0,95 10 chlerosterol [24S]- 24-ethyl-Δ-5,25-cholastadien-3β-ol 0,96 0,96 11 β-sitosterol [24R]- 24-ethyl-Δ-5-cholestan-3β-ol 1,00 1,00 12 sitostanol 24-ethyl-cholestan-3β-ol 1,02 1,02 13 Δ-5-avenasterol [24Z]- 24-ethylidene-5-cholesten-3β-ol 1,03 1,03 14 Δ-5,24-stigmastadienol [24R, S]- 24-ethyl-Δ-5,24-cholestadien-3β-ol 1,08 1,08 15 Δ-7-stigmastenol [24R, S]- 24-Ethyl-Δ-7,24-cholestadien-3β-ol 1,12 1,12 16 Δ-7-avenasterol [24Z]- 24-ethyliden-Δ-7-cholesten-3β-ol 1,16 1,16

Figura 1

Kromatogramma tal-gass tal-frazzjoni ta’ sterol ta’ xi żejt taż-żebbuga mhux raffinat

Figura 2

Kromatogramma tal-gass tal-frazzjoni ta’ sterol ta’ żejt taż-żebbuġa raffinat









ANNESS VI

DETERMINAZZJONI TAL-ERYTHRODIOL U UVAOL

INTRODUZZJONI

Erythrodiol (mifhum b'mod komuni bħala l-glikoli erythrodiol u uvaol flimkien) huwa kostitwent tal-frazzjoni li ma jistax jiġi ssaponifikat, karatteristika ta' xi tipi ta' sostanzi grassi. Jinsab f'konċentrazzjonijiet konsiderevolment ogħla f'żejt taż-żebbuġa estratt b'solvent milli fi żjut oħra, bħal żejt taż-żebbuġa magħsur u żejt ta' żerriegħa tal-għenba, li jinsab fiha wkoll, u għalhekk il-preżenza tiegħu tfisser preżenza ta' żejt taż-żebbuġa estratt b'solvent.

1. SKOP

Il-metodu jiddeskrivi proċedura għall-iskoperta tal-erythrodiol fis-sostanzi grassi.

2. PRINĊIPJU TAL-METODU

Is-sostanza grassa tiġi ssaponifikata bl-idrossidu tal-potassju f'soluzzjoni etanolika. Il-frazzjoni mhux issaponifikata tiġi mbagħad estratta bi l-eteru tad-dietill u msaffija billi tiġi mgħoddija minn kolonna ta' alumina.

Materji li ma jistgħux jiġu ssaponifikati huma soġġetti għall-kromatografija ta' saff irqiq fuq pjanċa tal-ġell tas-silika sakemm il-faxex li jikkorrispondu għall-frazzjonijiet tal-isterol u l-erythrodiol jiġu sseparati. L-isteroli u l-erythrodiol miġbura mill-pjanċa jinbidlu f' eteri tat-trimetilsill u t-taħlita tiġi analizzata bil-kromatografija tal-gass.

Ir-riżultat jingħata bħala perċentwali ta' erythrodiol fit-taħlita ta' erythrodiol u steroli.

3. APPARAT

3.1. L-apparat deskritt f'Anness V (determinazzjoni tal-kontenut ta' steroli).

4. REAĠENTI

4.1. Ir-reaġenti deskritti f'Anness V (determinazzjoni tal-kontenut tal-isteroli).

4.2. Soluzzjoni ta' referenza ta' erythrodiol, soluzzjoni ta' 0,5 % fil-kloroforma.

5. PROĊEDURA

5.1. Tħejjija ta' materji li ma jistgħux jiġu ssapunifikati.

Kif deskritt fil-paragrafu 5.1.2 t'Anness V.

5.2. Separazzjoni tal-erythrodiol u l-isteroli.

5.2.1. Ara l-paragrafu 5.2.1 t'Anness V.

5.2.2. Ara l-paragrafu 5.2.2 t'Anness V.

5.2.3. Ħejji soluzzjoni ta' 5 % tal-materji li ma jistgħux jiġu ssaponifikati fil-kloroforma. Bl-użu ta' mikrosiringa 0,1 ml, irriga pjanċa kromatografika b'soluzzjoni ta' 0,3 ml bejn wieħed u ieħor 1,5 ċm mit-tarf t'isfel f'riga li tkun kemm jista' jkun uniformi u rqiqa. Fit-tarf tal-pjanċa qiegħed xi ftit mikrolitri mis-soluzzjonijiet ta' kolesterol u erythrodiol biex iservu bħala referenza.

5.2.4. Qiegħed il-pjanċa fil-kompartament tal-iżvilupp imħejji kif speċifikat f'5.2.1. It-temperatura tal-ambjent għandha tkun 20 oC. Minnufih għatti l-kompartament bl-għatu u ħalli l-elużjoni ssir sakem il-parti ta' quddiem tas-solvent tilħaq bejn wieħed u ieħor 1 ċm mit-tarf ta' fuq tal-pjanċa. Neħħi l-pjanċa mill-kamra tal-iżvilupp u evapora s-solvent f'kurrent ta' arja sħuna.

5.2.5. Sprejja l-pjanċa fuq fuq u b'mod uniformi bis-soluzzjoni alkoħolika ta' 2,7- dikloroflorexxent. Meta l-pjanċa tiġi osservata taħt dawl ultravjola, il-faxex tal-isterol u erythrodiol jistgħu jiġu identifikati billi jiġu allineati mar-referenzi.. Immarka b'tikka eżatt barra t-truf tal-fluworexxenza.

5.2.6. Permezz ta' spatula tal-metall obrox il-ġell tas-silika fil-postijiet mmarkati. Qiegħed il-materjal mill-pjanċa fi flask ta' 50 ml. Żid 15 ml ta' kloroforma sħuna, ħawwad tajjeb u ffiltra minn lembut b'diska tal-ħġieġ sinterizzat biex il-ġell tas-silika jiġi ttrasferit fil-filtru. Aħsel tliett darbiet bi kloroforma sħuna (10 ml kull darba) filwqat li tiġbor l-iffiltrat fi flask ta' 100 ml. Evapora l-iffiltrat sa volum ta' 4 sa 5 ml, ferragħ ġewwa tubu tal-magna ċentrifuga bil-qiegħ koniku ta' 10 ml, nixxef bis-sħana bil-mod f'kurrent ta' nitroġenu u iżen.

5.3. It-tħejjija ta' eteri tat-trimethlsili.

Kif deskritt fil-paragrafu 5.3 t'Anness V.

5.4. Analiżi bil-kromatografija tal-gass.

Kif deskritt fil-paragrafu 5.4 tal-metodu hawn fuq. Il-kondizzjonijiet ta' tħaddim tal-kromatografu tal-gass fl-analiżi għandhom jkunu b'mod li jwettqu l-analiżi tal-isterol u jifirdu t-TMSE mill-erythrodiol u l-uvaol.

Meta l-kampjun jkun ġie injettat, kompli bir-recording sakemm l-isteroli preżenti, l-erythrodiol u l-uvaol jkunu ġew imnaddfa (elużat). Imbagħad identifika l-qċaċet (il-ħinijiet ta' żamma għall-erythrodiol u l-uvaol relattivi mal-b-sitosterol huma xi 1,45 u 1,55 rispettivament) u kkalkola l-areas fir-rigward tal-isteroli.

6. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

fejn:

A1 = area tal-quċċata għall-erythrodiol ►M6 ————— ◄ ;

A2 = area tal-quċċata għall-uvaol ►M6 ————— ◄ ;

Σ Asteroli = area tal-qċaċet totali għall-isteroli ►M6 ————— ◄ .

Ir-riżultat jingħata sa punt deċimali wieħed.

▼M21









ANNESS VII

DETERMINAZZJONI TAL-PERĊENTWAL TA’ 2-GLYCERYL MONOPALMITATE

1. SKOP U QASAM TA’ APPLIKAZZJONI

Dan il-metodu jiddeskrivi l-proċedura analitika biex jiġi ddeterminat il-perċentwal ta’ l-aċidu palmitiku fit-2 pożizzjoni tat-triglycerides permezz ta’ l-evalwazzjoni tat-2-glyceryl monopalmitate.

Dan il-metodu huwa applikabbli għaż-żjut veġetali likwidi fit-temperatura ta’ l-ambjent (20 °C).

2. PRINĊIPJU

Wara t-tħejjija, il-kampjun ta’ żejt huwa sottomess għall-azzjoni tal-lipażi pankreatiku: idroliżi parzjali u speċifiku fil-pożizzjonijiet 1 u 3 tal-molekula ta’ triglyceride ġġib magħha id-dehra tal-monoglycerides fil-pożizzjoni 2. Il-preċentwal ta’ 2-glyceril monopalmitate fil-frazzjoni ta’ monoglyceride jiġi ddeterminat, wara silylation, permezz ta’ kromatografija tal-gass fuq kolonna kapillari.

3. APPARAT U TAGĦMIR

3.1. Flask Erlenmeyer ta’ 25 ml.

3.2. Bikers ta’ 100, 250 u 300 ml.

3.3. Kolonna tal-ħġieġ għall-kromatografija, b’dijametru intern ta’ 21-23 mm, twila 400 mm, mgħammra bi pjanċa tal-ħġieġ sinterizzat u vit.

3.4. Provetti ta’ 10, 50, 100 u 200 ml.

3.5. Flaskijiet ta’ 100 u 250 ml.

3.6. Evaporatur ċirkolari.

3.7. Tubi għaċ-ċentrifuga bil-qiegħ koniku ta’ 10 ml, b’tapp immolat.

3.8. Ċentrifuga għat-tubi ta’ 10 u 100 ml.

3.9. Termostat biex it-temperatura tinżamm f’ 40 ± 0,5 °C

3.10. Pipetti ggradwati ta’ 1 u 2 ml.

3.11. Siringa ipodermika ta’ 1 ml.

3.12. Mikrosiringa ta’ 100 μl.

3.13. Lenbut ta’ 1 000 ml

3.14. Kromatografu tal-gass għal kolonni kapillari, mgħammar b’injettur on column fil-kiesaħ għall-introduzzjoni diretta tal-kampjun fil-kolonna, u b’forn biex tinżamm temperatura ta’ madwar 1 °C.

3.15. Injettur on column fil-kiesaħ għall-introduzzjoni diretta tal-kampjun fil-kolonna.

3.16. Rilevatur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma u elettrometru.

3.17. Reġistratur-integratur adattat għall-elettrometru b’veloċità ta’ risposta ta’ mhux aktar minn sekonda, u b’veloċità tal-karta varjabbli.

3.18. Kolonna kapillari tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba ta’ bejn 8 u 12-il metru, b’dijametru intern ta’ bejn 0,25 u 0,32 mm, miksija b’methylpolysiloxane jew b’phenyl methylpolysiloxane 5 %, bi ħxuna ta’ bejn 0,10 u 0,30 μm, li tista’ tintuża f’temperatura ta’ 370 °C.

3.19. Mikrosiringa ta’ 10 μl mgħammra b’labra iebsa, twila talanqas 7.5 cm, għall-injezzjoni diretta fuq il-kolonna.

4. REAĠENTI

4.1. Ġell tas-silika tad-daqs ta’ fraka ta’ bejn 0 063 u 0 200 mm (70/280 mesh), imħejji kif ġej: qiegħed il-ġell tas-silika ġewwa kapsula tal-porċellana, nixxef fil-forn f’temperatura ta’ 160 °C għal 4 sigħat, imbagħad kessaħ f’temperatura ta’ l-ambjent f’dessikatur. Żid volum ta’ ilma ewkivalent għal 5 % tal-piż tal-ġell tas-silika, kif ġej: ġewwa flask Erlenmeyer ta’ 500 ml, iżen 152 g ġell tas-silika u żidlu 8 g ta’ ilma distillat, sodd it-tubu u ħawwad bil-mod sabiex l-ilma jinfirex b’mod uniformi. Ħalli joqgħod għal talanqas 12-il siegħa qabel l-użu.

4.2. n-hexane (għall-kromatografija).

4.3. Isopropanol.

4.4. Isopropanol, soluzzjoni milwiema 1/1 (V/V).

4.5. Lipażi pankreatika. Il-lipażi li tintuża għandu jkollha attività ta’ bejn 2 u 10 unitajiet ta’ lipażi għal kull mg (fis-suq jeżistu lipażi pankreatiċi b’attività ta’ bejn 2 u 10 unitajiet għal kull mg ta’ enżima).

4.6. Soluzzjoni stabbilizzanti ta’ trishydroxymethylaminomethane: soluzzjoni milwiema 1 M miġjuba sa pH 8 (kontroll potenzjometriku) permezz ta’ HCI kkonċentrat (1/1 V/V).

4.7. Sodju kolat, ta’ kwalità enżimatika, soluzzjoni milwiema 0,1 % (din is-soluzzjoni għandha tintuża sa 15-il jum wara l-preparazzjoni tagħha).

4.8. Klorur tal-kalċju, soluzzjoni milwiema 22 %.

4.9. Eter djetiliku għall-kromatografija.

4.10. Solvent ta l-iżvilupp: taħlita n-hexane/eter djetiliku (87/13) (V/V).

4.11. Idrossidu tas-sodju, soluzzjoni ta’ 12 % fil-piż.

4.12. Phenolphthalein, soluzzjoni ta’ 1 % fl-etanol.

4.13. Gass portatur: idroġenu jew elju, għall-kromatorgrafija tal-gass.

4.14. Gassijiet awżiljari: – idroġenu, b’purità minima ta’ 99 %, mingħajr umidità jew sustanzi organiċi – u arja, għall-kromatografija tal-gass, bl-istess livell ta’ purità.

4.15. Reaġent ta’ silanizzazzjoni: taħlita pyridine/hexamethyldisilazane, trimethylchlorosilane 9/3/1 (V/V/V) (Fis-suq jeżistu soluzzjonijiet lesti għall-użu). Jistgħu jintużaw reaġenti oħrajn ta’ silylation, partikolarment bit-trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, dilwiti ma’ l-istess volum ta’ anhydrous pyridine).

4.16. Kampjuni ta’ referenza: monoglycerides puri jew taħlitiet ta’ monoglycerides b’kompożizzjoni magħrufa tal-perċentwal, simili għal dik tal-kampjun.

5. PROĊEDURA

5.1. Tħejjija tal-kampjun

5.1.1. Iż-żjut b’aċidità ħielsa ta’ inqas minn 3 % ma jeħtiġux jiġu newtralizzati qabel il-kromatografija tal-kolonna bil-ġell tas-silika. Iż-żjut b’aċidità ħielsa ta’ aktar minn 3 % għandhom ikunu sottomessi għan-newtralizzazzjoni skond il-punt 5.1.1.1. 5.1.1.1. Ferra’ 50 g żejt u 200 ml n-hexane fil-lenbut ta’ 1 000 ml (3.13). Żid 100 ml isopropanol u kwantità tas-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 12 % (4.11) ekwivalenti għall-aċidità ħielsa taż-żejt, miżjuda b’5 %. Ħawwad sewwa għal minuta. Żid 100 ml ilma distillat, erġa’ ħawwad u ħalli joqgħod. Ferra’, imbagħad neħħi l-aħħar saff li fih is-sapun. Neħħi s-safef intermedji li jista’ jkun hemm (muċilaġni u sustanzi li ma jdubux). Aħsel is-soluzzjoni hexane taż-żejt newtralizzat b’porzjonijiet suċċessivi ta’ bejn 50 u 60 ml tas-soluzzjoni isopropanol/ilma 1/1 (V/V) (4.4) sakemm ma jibqax jidher il-kulur roża tal-phenolphthalein. Neħħi l-biċċa l-kbira mill-hexane permezz tad-distillazzjoni fil-vakwu (per eżempju, jista’ jintuża evaporatur ċirkolari) uttrasferixxi ż-żejt għal ġo flask ta’ 100 ml (3.5). Nixxef iż-żejt fil-vakwu sakemm is-solvent ikun tneħħa għal kollox. Fi tmiem din il-proċedura, l-aċidità taż-żejt għandha tkun inqas minn 0,5 %.

5.1.2. Ferra’ 1 g ta’ żejt ippreparat kif deskritt hawn fuq, ġewwa flask Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1) u dewweb f’10 ml mit-taħlita ta’ l-iżvilupp (4.10). Ħalli s-soluzzjoni toqgħod għal talanqas kwarta qabel ma ssir il-kromatrografija fuq kolonna bil-ġell tas-silika. Jekk is-soluzzjoni tkun imċajpra, għaddiha miċ-ċentrifuga biex tiżgura l-aqwa kundizzjonijiet għall-kromatografija. (Jistgħu jintużaw skrataċ ta’ ġell tas-silika SPE ta’ 500 mg lesti għall-użu).

5.1.3. Tħejjija tal-kolonna kromatografika Ferra’ fil-kolonna (3.3) madwar 30 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10), daħħal biċċa qoton fil-parti ta’ isfel tal-kolonna bl-għajnuna ta’ virga tal-ħġieġ; agħfas biex tneħħi l-arja. Ġo biker, ipprepara suspensjoni ta’ 25 g ġell tas-silika (4.1) f’madwar 80 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp, u ferragħ fil-kolonna bl-għajnuna ta’ lenbut. Iċċekkja li l-ġell kollu tas-silika jkun daħal fil-kolonna; aħsel bis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10), iftaħ il-vit u ħalli l-livell tal-likwidu jilħaq madwar 2 mm ‘il fuq mil-livell superjuri tal-ġell tas-silika.

5.1.4. Kromatografija fuq kolonna Ġo flask Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1), iżen eżatt 1 g tal-kampjun imħejji skond il-punt 5.1. Dewweb il-kampjun f’10 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10). Ferragħ is-soluzzjoni fil-kolonna kromatografika mħejjija skond il-punt 5.1.3. Kemm jista’ jkun, tħarrikx is-superfiċje tal-kolonna. Iftaħ il-vit u ħalli s-soluzzjoni tal-kampjun tnixxi sakemm tilħaq il-livell tal-ġell tas-silika. Żviluppa b’150 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp. Aġġusta r-rata sa 2 ml/min (sabiex 150 ml inixxu fil-kolonna f’madwar 60-70 minuta). Irkupra l-eluzzjoni ġo flask ta’ 250 ml li jkun ġie mwieżen minn qabel. Evapora s-solvent fil-vakwu u neħħi l-aħħar traċċi tiegħu taħt kurrent ta’ nitroġenu. Iżen il-flask u ikkalkula l-estratt irkuprat. (Fil-każ li jkunu qed jintużaw skrataċ SPE tas-silika lesti għall-użu, ipproċedi kif ġej: Daħħal 1 ml mis-soluzzjoni (5.1.2.) ġo l-iskrataċ, imħejjija minn qabel b’3 ml ta’ n-hexane. Saffi s-soluzzjoni, u żviluppa b’4 ml ta’ n-hexane/eter djetiliku 1/1 (V/V). Irkupra s-soluzzjoni f’tubu ta’ 10 ml, u evapora taħt kurrent ta’ nitroġenu sakemm tkun nixfet. Esponi l-fdal niexef għal-lipażi pankreatika (5.2.). Huwa fondamentali li tivverifika l-kompożizzjoni ta’ aċidi grassi qabel u wara li jiġi mgħoddi mill-iskartoċċ SPE).

5.2. Idroliżi bil-lipażi pankreatika

5.2.1. Fit-tubu għaċ-ċentrifuga, iżen 0,1 g taż-żejt imħejji skond il-punt 5.1. Żid 2 ml mis-soluzzjoni stabbilizzanti (4.6.), 0,5 ml mis-soluzzjoni ta’ sodju kolat (4.7), u 0,2 ml mis-soluzzjoni ta’ klorur tal-kalċju, filwaqt li tħawwad sewwa wara kull żieda. Agħlaq it-tubu b’tapp li jissiġilla mħejji għal dan il-għan u qiegħdu fit-termostat f’temperatura ta’.

5.2.2. Żid 20 mg lipażi, ħawwad bil-galbu (filwaqt li tevita li jixxarrab it-tapp), u qiegħed it-tubu fit-termostat għal eżatt 2 minuti, imbagħad aqilgħu, ħawdu sewwa għal eżatt minuta, u ħallih jiksaħ.

5.2.3. Żid 1 ml ta’ eter djetiliku, agħlaq bit-tapp u ħawwad sew, imbagħad għaddi miċ-ċentrifuga, u ittrasferixxi s-soluzzjoni ta’ eter ġo tubu nadif u niexef, bl-għajnuna ta’ mikrosiringa.

5.3. Tħejjija tad-derivattivi silanizzati u tal-kromatografija tal-gass

5.3.1. Bl-għajnuna ta’ mikrosiringa, daħħal 100 μl mis-soluzzjoni (5.2.3.) ġo tubu bil-qiegħ koniku ta’ 10 ml.

5.3.2. Neħħi s-solvent taħt kurrent dgħajjef ta’ nitroġenu, żid 200 μl ta’ reaġent ta’ silanizzazzjoni (4.15.), agħlaq bit-tapp u ħalli joqgħod għal 20 minuta.

5.3.3. Wara 20 minuta, żid bejn 1 u 5 ml n-hexane (skond il-kundizzjonijiet kromatografiċi): is-soluzzjoni li tirriżulta hija lesta għall-kromatografija tal-gass.

5.4. Kromatografija tal-gass

Il-kundizzjonijiet ta’ tħaddim huma dawn li ġejjin:

— Temperatura ta’ l-injettur (on column) inqas mit-temperatura tat-tgħollija tas-solvent (68 °C);

— Temperatura tar-rivelatur: 350 °C;

— Temperatura tal-kolonna: programmar tat-temperatura tal-forn: 60 °C għal minuta, b’żieda ta’ 15 °C kull minuta sa 180 °C, imbagħad ta’ 5 °C kull minuta sa 340 °C, imbagħad 340 °C matul 13-il minuta;

— Gass portatur: idroġenu jew elju, aġġustat għall-veloċità lineari xierqa sabiex tinkiseb r-riżoluzzjoni riflessa fil-Figura 1. Il-ħin tar-retenzjoni tat-triglyceride C54 għandu jkun ta’ 40 + 5 minuti (ara l-Figura 2); (Il-kundizzjonijiet ta’ tħaddim indikati hawn fuq jingħataw bħala proposta indikattiva. Kull operatur ikollu jaddattahom kif xieraq biex jilħqu r-reżoluzzjoni mixtieqa. It-tul tal-quċċata li tikkorrispondi għat-2-glyceryl monopalmitate għandu jkun ugwali għal talanqas 10 % mill-iskala tar-reġistratur).

— L-ammont ta’ sostanza injettata: 0,5-1 μl mis-soluzzjoni (5 ml) ta’ n-hexane (5.3.3.).

5.4.1. Identifikazzjoni tal-qċaċet

Il-monoglycerides individwali jiġu identifikati skond il-ħinijiet ta’ retenzjoni miksuba, u b’relazzjoni ma’ dawk miksuba bit-taħlitiet standard ta’ monoglycerides analizzati fl-istess kundizzjonijiet.

5.4.2. Evalwazzjoni kwantitattiva

Is-superfiċje ta’ kull quċċata tiġi kkalkulata permezz ta’ integratur elettroniku.

6. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

Il-perċentwal ta’ glyceryl monopalmitate jiġi kkalkulat abbażi tar-relazzjoni bejn is-superfiċje tal-quċċata u t-total tas-superfiċji tal-qċaċet tal-monoglycerides kollha (ara l-Figura 2), skond il-formula:

Fejn:

Ax = is-superfiċje tal-quċċata li tikkorrispondi għall-glyceryl monopalmitate

ΣA = it-total tas-superfiċji tal-qċaċet kollha tal-monoglycerides

Ir-riżultat għandu jingħata b’ punt deċimali wieħed.

7. RAPPORT TA’ L-ANALIŻI

Ir-rapport ta’ l-analiżi għandu jispeċifika:

— ir-referenza għal dan il-metodu;

— it-tagħrif kollu meħtieġ għall-identifikazzjoni kompleta tal-kampjun;

— ir-riżultat ta’ l-analiżi;

— kull devjazzjoni minn dan il-metodu, sew minħabba deċiżjoni tal-partijiet ikkonċernati sew minħabba raġuni oħra;

— id-dettalji ta’ l-identifikazzjoni tal-laboratorju, id-data ta’ l-analiżi u l-firma tal-persuni responsabbli għaliha.

Figura 1

Kromatogramma tal-prodotti tar-reazzjoni tas-silanizzazzjoni miksubin bl-azzjoni tal-lipażi fuq żejt taż-żebbuġa raffinat miżjud b’20 % ta’ żejt esterifikat (100 %).

Nota: “aċidi grassi liberi” = xaħmijiet ta' l-aċtu; “Żejt taż-żebbuġa raffinat + 20 % taż-żejt estratt” = żejt taż-żebbuġa raffinat + 20 % żejt esterifat; “1-2 monopalmitolein” = 1-2 monopalmitolein; “1-2 mono C18 insat.” = mhux saturat 1-2 mono C18

Figura 2

Kromatogramma ta’:

A) Żejt taż-żebbuġa mhux esterifikat, wara l-lipażi; wara s-silanizzazzjoni; f’dawn il-kundizzjonijiet (kolonna kapillari 8-12 m), il-frazzjoni ta’ xama’ tiġi elwita fl-istess ħin bħall-frazzjoni ta’ diglyceride, jew ftit wara. Wara l-lipażi, il-kontenut ta’ triglycerides ma għandux jaqbeż 15 %. Tifsir: 1 = Aċidi grassi liberi 2 = Monoglycerides 3 = Diglycerides 4 = Triglycerides * = 2-monopalmitine ** = Triglycéride C54

Kromatogramma ta’:

B) żejt esterifikat wara l-lipażi; wara s-silanizzazzjoni; f’dawn il-kundizzjonijiet (kolonna kapillari 8-12 m), il-frazzjoni ta’ xama’ tiġi elwita fl-istess ħin bħall-frazzjoni ta’ diglyceride, jew ftit wara. Wara l-lipażi, il-kontenut ta’ triglycerides ma għandux jaqbeż 15 %. Tifsir: 1 = Aċidi grassi liberi 2 = Monoglycerides 3 = Diglycerides 4 = Triglycerides * = 2-monopalmitine ** = Triglyceride C54

8. NOTI

Lipażi b’attività sodisfaċenti huma disponibbli fis-suq. Wieħed jista’ jippreparahom ukoll fil-laboratorju, kif ġej:

Kessaħ 5 kg ta’ frixa friska tal-majjal sa 0 °C. Neħħi x-xaħam solidu u t-tessut konnettiv ta’ madwarha, u itħan ġo blender sakemm issir pasta likwida. Ħawwad din il-pasta għal bejn 4 u 6 sigħat ma’ 2,5 litru ta’ anhydrous acetone, imbagħad għaddi miċ-ċentrifuga. Oħroġ il-fdal tliet darbiet oħra bl-istess volum ta’ anhydrous acetone, imbagħad darbtejn b’taħlita acetone/eter djetiliku (1/1) (V/V), u darbtejn bl-eter djetiliku.

Nixxef il-fdal matul 48 siegħa fil-vakwu biex jinkiseb trab stabbli li jżomm għal żmien twil fil-friġġ u protett mill-umdità.

Ħejji emulsjoni ta’ żejt taż-żebbuġa kif ġej:

Ġo mikser, ħawwad għal 10 minuti taħlita magħmula minn 165 ml soluzzjoni ta’ gomma arabika f’100 g/l, 15 g silġ mitħun u 20 ml żejt taż-żebbuġa newtralizzat minn qabel.

Imbagħad daħħal 10 ml minn din l-emulsjoni f’biker ta’ 50 ml, imbagħad 0,3 ml minn soluzzjoni ta’ sodju kolat f’0,2 g/ml u 20 ml ilma distillat.

Qiegħed il-biker ġo termostat regolat għal 37 °C; daħħal l-elettrodi tal-miter tal-pH u l-aġitatur bl-iskrun.

Bl-għajnuna ta’ buretta, qattar soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 0,1 N sakemm jintlaħaq livell pH ta’ 8,3.

Żid kwantità ta’ sospensjoni ta’ trab tal-lipażi fl-ilma (0,1 g/ml ta’ lipażi). Malli l-miter tal-pH jindika livell pH ta’ 8.3, qabbad il-kronometru u żid is-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju billi tqattarha bir-ritmu meħtieġ biex il-livell pH jinżamm f’8.3. Innota kull minuta l-volum tas-soluzzjoni li jkun ġie kkunsmat.

Irreġistra din l-informazzjoni fi grafika x/y, bil-ħin fuq l-assi x, u l-millilitri ta’ soluzzjoni ta’ alkali 0,1 N ikkunsmati biex jinżamm livell kostanti tal-pH fuq l-assi y. B’hekk għandha tinkiseb grafika lineari.

L-attività tal-lipażi, imkejla f’unitajiet ta’ lipażi għal kull mg, tiġi kkalkolata bil-formula li ġejja:

Fejn:

A hija l-attività f’unitajiet ta’ lipażi/mg;

V hija l-għadd ta’ millilitri ta’ soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 0,1 N kull minuta (ikkalkulat abbażi tal-grafika);

N hija n-normalità tas-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju;

m hija l-massa tal-lipażi tat-test f’mg.

L-unità ta’ lipażi hija ddefinita bħala l-kwantità ta’ enżimi li jeħilsu 10 mikro-ekwivalenti ta’ aċidu kull minuta.

▼M20 —————

▼B









L-ANNESS IX

INVESTIGAZZJONI SPETTROFOTOMETRIKA FL-ULTRAVJOLA

DAĦLA

Eżaminazzjoni spettrofotometrika fl-ultravjola tista’ tipprovdi tagħrif dwar il-kwalità ta’ xaħam, l-istat ta’ konservazzjoni u tibdiliet mwettqa fih bi proċessi teknologiċi.

L-assorbiment tal-wavelengths speċifikat fil-metodu huwa dovut għall-preżenza ta’ sistemi konjugati ta’ diene u triene. Dawn l-assorbimenti huma espressi bħala estinzjonijiet speċifiċi E1 %1 ċm (l-estinzjoni ta’ soluzzjoni ta’ 1 % tax-xaħam fis-solvent speċifikat, fi ħxuna ta’ 1ċm) konvenzjonalment indikata b’K (imsejħa wkoll “koeffiċjent ta’ estinzjoni”).

1. SKOP

Il-metodu jiddeskrivi l-proċedura għat-twettieq ta’ eżaminazzjoni spettrofotometrika ta’ żejt taż-żebbuġa fl-ultravjola.

2. PRINĊIPJU TAL-METODU

Ix-xaħam imsemmi jiġi mdewweb fis-solvent meħtieġ u l-estinzjoni tas-soluzzjoni tiġi mbagħad ikkalkolata fil-wavelengthsspeċifikati b’referenza għal solvent pur. Estinzjonijet speċifiċi huma kkalkolati mill-qari tal-ispettrofotometru.

3. TAGĦMIR

3.1. Spettrofotometru biex tkejjel l-estinzjoni fl-ultravjola bejn 220 u 360 nm, bil-possibilità li taqra unitajiet nanometrici individwali.

3.2. Kuvetti rettangolari tal-quartz, bil-għotjien, li għandhom tul ottiku ta’ metru. Meta mimlija bl-ilma jew b’solventi oħra xierqa, il-kuvetti ma għandhomx juru xi differenza bejniethom ta’ aktar minn 0,01 unitajiet ta’ estinzjoni.

3.3. Flasks gradati ta’ 25 ml.

▼M6

3.4. Kolonna kromatografika li għandha l-parti ta’ fuq twila 270 mm u dijametru ta’ 35 mm u l-parti t’isfel twila 270 mm u dijametru ta’ madwar 10 mm.

▼B

4. REAĠENTI

4.1. Iso-octane spettrofotometrikament pur (2,2,4-trimethylpentan). B’referenza għall-ilma ddistillat dan għandu jkollu trasmittenza ta’ mhux anqas minn 60 % fuq 220 nm u mhux anqas minn 95 % fuq 250 nm, jew — cyclohexane spettrofotometrikament pur: b’referenza għall-ilma ddistillat dan għandu jkollu trasmittenza ta’ mhux anqas minn 40 % fuq 220 nm u mhux anqas minn 95 % fuq 250 nm. ▼M6 ————— ▼B

4.2. Alumina bażika għall-kromatografija tal-kolonna mħejjija u kkontrollata kif deskritt f’Appendiċi I.

4.3. n-hexane, għall-kromatografija.

5. PROĊEDURA

5.1. Il-kampjun imsemmi għandu jkun perfettament omoġenju u mingħajr suspett ta’ tniġġis. Żjut li huma likwidi f’temperatura ambjentali għandhom jiġu ffiltrati mill-karta f’temperatura ta’ madwar 30 oC, xaħmijiet iebsin għandhom jiġu omoġenizzati u ffiltrati f’temperatura ta’ mhux aktar minn 10 oC il-fuq mill-punt ta’ dewbin.

5.2. Iżen bi preċiżjoni madwar 0.25 g tal-kampjun hekk imħejji fi flask gradat ta’ 25 ml, żid sal-marka bis-solvent speċifikat u omoġenizza. Is-soluzzjoni miksuba għandha tkun perfettament ċara. Jekk ikun hemm opalexxenza jew torbidezza ffiltra malajr mill-karta.

5.3. Imla kuvetta bis-soluzzjoni miksuba u kejjel l-estinzjonijiet fuq wavelength xieraq bejn 232 u 276 nm, billi tuża s-solvent użat bħala referenza. Il-valuri ta’ estinzjoni rrekordjati għandhom jkunu fi ħdan medda ta’ bejn 0,1 sa 0,8. Jekk le għandu jerġa’ jsir il-kejl billi jintużaw soluzzjonijiet aktar konċentrati jew aktar dilwiti kif xieraq.

5.4. Meta tkun tinħtieġ determinazzjoni ta’ estinzjoni speċifika wara l-mogħdija fuq l-alumina, kompli kif ġej. Qiegħed 30 g ta’ alumina bażika f’sospensjoni fil-hexane fil-kolonna kromatografika. Wara li l-assorbent ikun qagħad, neħħi l-hexane żejjed sa madwar 1ċm ’il fuq mit-tarf ta’ fuq tal-alumina. Dewweb 10 g tax-xaħam, omoġenizzat u ffiltrat kif deskritt f 5.1, f’100 ml ta’ hexane u ferragħ is-soluzzjoni ġol-kolonna. Iġbor l-elwit u evapora s-solvent kollu taħt vakwu b’temperatura taħt il- 25°C. Kompli minnufih kif speċifikat f’ 5.2 filwaqt li tuża x-xaħam hekk miksub.

6. ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1. Żomm rekord tal-estinzjonijiet speċifiċi (koeffiċjenti ta’ estinzjonijiet) fuq il-bosta wavelengths ikkalkolati kif ġej: fejn: Kλ = estinzjoni speċifika fuq wavelength λ; Eλ = estinzjoni mkejla fuq wavelength λ; c = konċentrazzjoni tas-soluzzjoni fi g/100 ml; s = ħxuna tal-kuvetta f’ċm. Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

6.2. L-analiżi spettrofotometrika taż-żejt taż-żebbuġa skond il-metodu uffiċjali fir-regolamenti tal-KEE tispeċifika d-determinazzjoni tal-estinzjoni speċifika f’soluzzjoni iso-octane fuq wavelengths ta’ 232 u 270 nm u d-determinazzjoni K, mogħtija bi: fejn Km hija l-estinzjoni speċifika fuq wavelength m, il-wavelength għall-assorbiment massimu madwar 270 nm.









APPENDIĊI I

Preparazzjoni tal-alumina u l-ittestjar tal-attività tagħha

A.1.1. Preparazzjoni tal-alumina

Qiegħed l-alumina li tkun qabel ġiet imnixxfa fil-forn f’380 sa 400 °C għal tliet sigħat f’reċipjent issiġillat ermetikament, żid l-ilma ddistillat fi proporzjon ta’ 5 ml kull 100 g ta’ alumina, minnufih agħlaq ir-reċipjent, ħawwad ripetutament, imbagħad ħalliha għal mill-inqas 12-il siegħa qabel tużaha.

A.1.2. Kontroll tal-attività tal-alumina

Ħejji kolonna kromatografika bi 30 g ta’ alumina. B’ħidma kif deskritta f’paragrafu 5,4 għaddi taħlita li tkun magħmula minn:

— 95 % żejt taż-żebbuġa verġni li jkollu estinzjoni speċifika ta’ inqas minn 0,18 ma’ 268 nm,

— 5 % żejt tal-lewż mitħun ittratat bil-ħamrija fil-proċess ta’ raffinar, li jkollu estinzjoni speċifika ta’ mhux anqas minn 4 f’268 nm

minn ġewwa l-kolonna.

Jekk wara l-mogħdija minn ġewwa l-kolonna, it-taħlita jkollha estinzjoni speċifika ta’ iżjed minn 0,11 ma’ 268 nm l-alumina hija aċċettabbli, jekk le il-livell ta’ tnixxif ta’ ilma għandu jiġi miżjud.









APPENDIĊI II

Kalibrar tal-ispettrofotometru

A.2. It-tagħmir għandu jiġi kkontrollat kultant żmien (tal-inqas kull sitt xhur) kemm għar-rispons tal-wavelength kemm għall-preċiżjoni tar-rispons.

A.2.1. Il-wavelength jista’ jiġi kkontrollat permezz ta’ lampa tal-fwar tal-merkurju jew permezz ta’ filtri xierqa.

A.2.2. Sabiex tikkontrolla r-rispons tal-fotoċellula u l-fotomultiplikatur ipproċedi kif ġej: iżen 0,2000 g ta’ kromat tal-potassju pur għall-ispettrofotometrija u dewweb f’soluzzjoni ta’ 0,05 N tal-idrossidu tal-potassju fi flask gradat ta’ 1 000 ml u żid sal-marka. Ħu eżattament 25 ml tas-soluzzjoni miksuba, ferragħ fi flask gradat ta’ 500 ml u ddilwa sal-marka billi tuża l-istess soluzzjoni ta’ idrossidu tal-potassju. Kejjel l-estinzjoni tas-soluzzjoni hekk miksuba f’275 nm, billi tuża s-soluzzjoni ta’ idrossidu tal-potassju bħala referenza. L-estinzjoni mkejjla permezz ta’ kuvetta ta’ 1 ċm għandha tkun ta’ 0,200 ± 0, 005.









ANNESS X A

ANALIŻI BIL-KROMATOGRAFIJA TAL-GASS TA’ ESTERI TAL-METILL TA’ AĊIDI GRASSI

1. SKOP

Dan il-metodu jipprovdi gwida ġenerali għall-applikazzjoni tal-kromatografija tal-gass, bl-użu ta’ kolonni ppakkjati jew kapillari, għad-determinazzjoni tal-kompożizzjoni kwalitattiva u kwantitattiva ta’ taħlita ta’ esteri tal-metill ta’ aċidu grass miksuba skond il-metodu speċifikat f’Anness X B.

Dan il-metodu mhuwiex applikabbli għall-aċidi grassi polimerizzati.

2. REAĠENTI

2.1. Gass carrier:

Gass inerti (nitroġenu, elju, argon, idroġenu, eċċ.), imnixxef sewwa u b’kontenut ta’ ossiġenu ta’ inqas minn10 mg/kg.

Nota 1.

L-idroġenu, li jintuża bħala gass carriermal-kolonni kapillari biss, jista’ jirdoppja l-veloċità ta’ analiżi iżda huwa perikoluż. Mezzi ta’ sigurtà huma disponibbli.

2.2. Gassijiet awżiljarji:

2.2.1. Idroġenu (purità ≥ 99,9 %), ħieles mit-tniġġis organiku.

2.2.2. Arja jew ossiġenu, ħielsa mit-tniġġis organiku.

2.3. Standard ta’ riferenza

Taħlita ta’ esteri tal-metill ta’ aċidi grassi puri, jew l-esteri tal-metill ta’ xi grass ta’ kompożizzjoni magħrufa, jekk jista’ jkun jixbah lil dak tal-materja grassa li tkun trid tiġi analizzata.

Wieħed għandu joqgħod attent li jimpedixxi l-ossidazzjoni ta’ aċidi grassi polyunsaturati.

3. APPARAT

L-istruzzjonijiet mogħtija għandhom x’jaqsmu mat-tagħmir normali wżat għall-kromatografija tal-gass, bl-użu ta’ kolonni kapillari u/jew ippakkjati u didekter ta’ jonizzazzjoni tal-fjamma. Kull apparat li jipprovdi l-effiċjenza u r-riżoluzzjoni speċifikata f’4.1.2 huwa xieraq.

3.1. Kromatografu tal-gass

Il-kromatografu tal-gass għandu jkollu dawn l-elementi..

3.1.1. Sistema ta’ injezzjoni

Juża sistema ta’ injezzjoni jew:

(a) b’kolonni ppakkjati, li jkollhom l-inqas spazju moħli possibbli (f’dan il-każ is-sistema ta’ injezzjoni għandha tkun tiflaħ għas-sħana sa temperatura ta’ bejn 20 sa 50 oC ogħla minn dik tal-kolonna); jew

(b) b’kolonni kapillari, f’liema każ is-sistema ta’ injezzjoni għandha tkun iddisinjata b’mod speċjali għall-użu ma’ kolonni bħal dawn. Tista’ tkun tat-tip li tifred jew tista’ tkun tat-tip li ma tifridx fuq tip ta’ injezzjoni tal-kolonna.

Nota 2. Fin-nuqqas ta’ aċidi grassi b’inqas minn 16-il atomu ta’ karbonju, jista’ jintuża injettur bil-labra li tiċċaqlaq.

3.1.2. Forn

Il-forn għandu jkun jista’ jsaħħan il-kolonna sa temperatura ta’ mill-inqas 260 °C u li jżomm it-temperatura mixtieqa sa 1 oC b’kolonna ppakkjata u sa 0,1 oC b’kolonna kapillari. L-aħħar ħtieġa hija b’mod partikolari importanti meta jintuża tubu tas-silika mġonġi.

L-użu tat-tisħin bit-temperatura pprogrammata huwa rrakkomandat fil-każijiet kollha, u b’mod partikolari għall-aċidi grassi b’inqas minn 16-il atomu tal-karbonju.

3.1.3. Kolonna ppakkjata

3.1.3.1. Kolonna, mibnija minn materjal inerti għas-sostanzi li għandhom jiġu analizzati (i.e. ħġieġ jew stainless steel) li għandha dawn id-daqsijiet: (a) tul: 1 sa 3 m. Għandha tintuża kolonna relattivament qasira meta jkunu preżenti aċidi grassi ta’ katina twila (’l fuq minn C20). Meta jiġu analizzati aċidi b’4 jew 6 atomi tal-karbonju, huwa rrakkommandat li tintuża kolonna twila 2 m; (b) djametru intern: 2 sa 4 mm. Nota3. Jekk jkunu preżenti xi komponenti polyunsaturated b’aktar minn tlett bonds doppji, jistgħu jiġu dekomposti f’kolonna tal-istainless steel. Nota 4. Tista’ tintuża sistema b’kolonni tewmin ippakkjati.

3.1.3.2. Ippakkjar, li jinkludi l-elementi li ġejjin: (a) support: ħamrija bid-diatomiji maħsula bl-aċidu u silanizzata, jew xi support inerti xieraq ieħor b’medda dejqa ta’ daqs tal-fraka (medda ta’ 25 mm bejn il-limiti 125 sa 200 mm) filwaqt li d-daqs medju tal-fraka jkollu x’jaqsam mad-djametru intern u t-tul tal-kolonna; (b) fażi stazzjonarja: tip ta’ likwidu polari polyester (e.g. diethylene glycol polysuccinate, butanediol polysuccinate, ethyleneglycol polyadipate, eċċ.) cyanosilicones jew xi likwidu ieħor li jippermetti s-separazzjoni kromatografika meħtieġa (ara l-klawsola 4). Il-fażi stazzjonarja għandha tkun 5 sa 20 % (m/m) tal-ippakkjar. Fażi stazzjonarja mhux polari tista’ tintuża għal ċerti separazzjonijiet.

3.1.3.3. Kondizzjonament tal-kolonna Bil-kolonna mhux imqabbda mad-didekter, jekk ikun possibli, saħħan il-forn bil-mod sa 185 oC u għaddi kurrent ta’ gass inerti minn ġewwa l-kolonna ppreparata ftit qabel b’rata ta’ 20 sa 60 ml/min għal mill-inqas 16-il siegħa f’din it-temperatura, u għal sagħtejn oħra f’195 oC.

3.1.4. Kolonna kapillari

3.1.4.1. Tubu, magħmul minn materjal inerti għas-sostanzi li għandhom jiġu analizzati (ġeneralment ħġieġ jew fused silica). Id-djametru intern għandu jkun bejn 0,2 u 0,8 mm. Il-wiċċ intern għandu jiġi ttrattat b’mod xieraq (eż. tħejjija tal-wiċċ, disattivazzjoni) qabel ma jirċievi l-kisja tal-fażi stazzjonarja. F’bosta każijiet, tul ta’ 25 mm huwa biżżejjed.

3.1.4.2. Fażi stazzjonarja, ġeneralment tat-tip polyglycol (poly(ethylene glycol) 20 000), polyester (butanediol polysuccinate) jew polysiloxane polari (cyanosilicones). Kolonni bonded (imsallbin) huma xierqa. Nota 5. Hemm riskju li l-polysiloxanes polari jagħtu lok għal xi diffikultajiet fl-identifikazzjoni u s-separazzjoni tal-aċidu linoleniku u l-aċidi C20. Il-kisjiet għandhom ikunu rqaq, i.e, 0,1 sa 0,2 μm.

3.1.4.3. Assemblaġġ u kondizzjonament tal-kolonna Ħares il-prekawzjonijiet normali għall-assemblaġġ ta’ kolonni kapillari, i.e. it-tqegħid tal-kolonna fil-forn (support), l-għażla u l-assemblaġġ tal-ġonot (nuqqas ta’ tnixxijiet), it-tqassim tat-truf tal-kolonna fl-injettur u d-didekter (tnaqqis tal-ispazji moħlija). Qiegħed il-kolonna taħt kurrent ta’ gass carrier (eż. 0,3 bar (30 kPa) f’każ ta’ kolonna ta’ tul ta’ 25 mm u djametru intern ta’ 0,3 mm). Ikkondizzjona l-kolonna billi tipprogramma t-temperatura tal-forn fuq 3 oC/min mit-temperatura tal-ambjent sat-temperatura ta’ 10 oC taħt il-limiti ta’ dekomposizzjoni tal-fażi stazzjonarja. Żomm il-forn f’din it-temperatura għal siegħa sa l-istabbilizzazzjoni tal-linja bażi. Reġġa t-temperatura għal 180 oC biex taħdem taħt kondizzjonijiet isotermiċi. Nota 6. Kolonni kkondizzjonati minn qabel b’mod xieraq huma disponibbli kummerċjalment.

3.1.5. Didekter, jekk jista’ jkun li jiflaħ għal tisħin għal temperatura ogħla minn dik tal-kolonna.

3.2. Siringa

Is-siringa għandha jkollha kapaċità massima ta’ 10 μl, u tkun iggradata f’diviżjonijiet ta’ 0,1 μl.

3.3. Rikorder

Jekk għandha tintuża l-kurva tar-rikorder biex tikkalkula l-kompożizzjoni tat-taħlita analizzata, ikun jinħtieġ rikorder elettroniku ta’ preċiżjoni għolja, kompatibbli ma’ l-apparat użat. Ir-rikorder għandu jkollu dawn il-karatteristiċi:

(a) rata ta’ rispons, taħt 1,5 s, jekk jista’ jkun 1 s (ir-rata ta’ rispons huwa l-ħin meħud mill-pinna tar-rikorder biex tgħaddi minn 0 sa 90 % wara l-introduzzjoni f’daqqa ta’ sinjal ta’ 100 %);

(b) wisa’ tal-karta, minimu ta’ 20 ċm;

(ċ) veloċità tal-karta, li tista’ tiġi aġġustata għal bejn 0,4 u 2,5 ċm/min.

3.4. Integratur

Tista’ ssir determinazzjoni mgħaġġla u preċiża bil-għajnuna ta’ integratur elettroniku. Dan għandu jagħti reazzjoni lineari b’sensittività adekwata, u l-korrezzjoni għad-devjazzjoni tal-linja bażi għandha tkun soddisfaċjenti.

4. PROĊEDURA

L-operazzjonijiet deskritti f’4.1 sa 4.3 huma marbutin ma’ l-użu ta’ didekter tal-jonizzazzjoni tal-fjamma.

Bħala alternattiva tista’ tintuża kromatografija tal-gass li tħaddem catharometer didekter (li jaħdem fuq il-prinċipju ta’ tibdil fil-konduttività termika). Il-kondizzjonijiet ta’ tħaddim huma mbagħad mibdula kif deskritti fi klawsola 6.

4.1. Kondizzjonijiet tat-test

4.1.1. Għażla tal-aqwa kondizzjonijiet ta’ tħaddim 4.1.1.1. Kolonna ippakkjata Fl-għażla tal-kondizzjonijiet tat-test, għandhom jitqiesu l-varjabbli li ġejjin: (a) it-tul u d-djametru tal-kolonna; (b) in-natura u l-ammont tal-fażi stazzjonarja; (ċ) it-temperatura tal-kolonna; (d) iċ-ċirkolazzjoni tal-gass carrier; (e) ir-risoluzzjoni meħtieġa; (f) id-daqs tal-porzjon tat-test, magħżul b’mod li l-assemblaġġ tad-didekter u l-elettrometru jagħti reazzjoni lineari; (g) it-tul ta’ żmien tal-analiżi. B’mod ġenerali, il-valuri mogħtija fit-Tabella 1 u t-Tabella 2 jwasslu għar-riżultati mixtieqa, i.e. tal-inqas 2 000 pjanċa teoretika għal kull metru ta’ tul tal-kolonna għal stearat tal-metill u l-elużjoni tiegħu f’madwar 15-il minuta. Fejn l-apparat jippermetti, l-injettur għandu jkun f’temperatura ta’ madwar 200 oC u d-didekter f’temperatura daqs jew ogħla minn dik tal-kolonna. Bħala regola, l-proporzjon tar-rata ta’ ċirkolazzjoni tal-idroġenu mgħoddi lid-didekter ta’ jonizzazzjoni tal-fjamma għal dik tal-gass carrier tinbidel minn 1:2 għal 1:1 skond id-djametru tal-kolonna. Iċ-ċirkolazzjoni ta’ ossiġenu hija madwar 5 sa 10 darbiet dik tal-idroġenu.



Tabella 1 Dijametru intern tal-kolonna mm Ċirkolazzjoni tal-gass carrier ml/mm 2 15 sa 25 3 20 sa 40 4 40 sa 60



Tabella 2 Konċentrazzjoni ta’ fażi stazzjonarja % (m/m) Temperatura tal-kolonna oC 5 175 10 180 15 185 20 185 4.1.1.2. Kolonna kapillari Il-proprjetajiet ta’ effi