Oficiālais Vēstnesis L 117 , 04/05/2002 Lpp. 0006 - 0009



Komisijas Regula (EK) Nr. 765/2002 (2002. gada 3. maijs) par paraugu ņemšanu un konkrētu sīki izstrādātu noteikumu pieņemšanu saistībā ar tādu atkaulotas liellopu gaļas izcirtņu fiziskām pārbaudēm, uz ko attiecas eksporta kompensācijas EIROPAS KOPIENU KOMISIJA, ņemot vērā Eiropas Kopienas dibināšanas līgumu, ņemot vērā Padomes 1999. gada 17. maija Regulu (EK) Nr. 1254/1999 par liellopu gaļas tirgus kopīgo organizāciju [1], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Komisijas Regulu (EK) Nr. 2345/2001 [2], un jo īpaši tās 33. panta 12. punktu, ņemot vērā Padomes 1990. gada 12. februāra Regulu (EEK) Nr. 386/90 par kontroli, ko veic, eksportējot tādus lauksaimniecības produktus, uz kuriem attiecas kāda kompensācija vai cita veida atmaksājums [3], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Regulu (EK) Nr.163/94 [4], un jo īpaši tās 6. pantu, tā kā: (1) Saskaņā ar 33. pantu Regulā (EK) Nr. 1254/1999, to produktu cenu starpību pasaules tirgū un Kopienas teritorijā, kuri paredzēti minētās regulas 1. pantā, var segt ar eksporta kompensāciju. Lauksaimniecības produktiem noteikumi, kas regulē šo sistēmu, ir izklāstīti Komisijas 1999. gada 15. aprīļa Regulā (EK) Nr. 800/1999, ar kuru noteikti kopīgi sīki izstrādāti noteikumi eksporta kompensāciju sistēmas piemērošanai attiecībā uz lauksaimniecības produktiem [5], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Regulu (EK) Nr. 2299/2001 [6]. (2) Saskaņā ar I pielikuma 5. daļu Komisijas 1987. gada 17. decembra Regulā (EEK) Nr. 3846/87, ar ko izveido lauksaimniecības produktu nomenklatūru eksporta kompensācijām [7], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Regulu (EK) Nr. 488/2002 [8], kompensācijas inter alia ir piešķiramas par noteiktiem atkaulotiem izcirtņiem ar nosacījumu, ka tie atbilst liesas liellopu gaļas daudzuma minimumam un, pieaugušu vīriešu dzimuma liellopu izcirtņu gadījumā, ar nosacījumu, ka tie ir atsevišķi iesaiņoti. (3) Komisijas Regulā (EK) Nr. 2221/95 [9], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Regulu (EK) Nr. 2655/1999 [10], paredzēti sīki izstrādāti noteikumi par fiziskām pārbaudēm, ko veic, izvedot tādus lauksaimniecības produktus, uz kuriem attiecas kompensācijas. Īpaši nosacījumi attiecībā uz liellopu gaļu ir izklāstīti Komisijas 1997. gada 10. decembra Regulā (EK) Nr. 2457/97 parparaugu ņemšanu saistībā ar tādu atkaulotu liellopu gaļas izcirtņu fiziskām pārbaudēm, uz kuriem attiecas eksporta kompensācijas [11]. (4) Būtu jāparedz izcelsmes pārbaudes atkaulotiem pieaugušu vīriešu kārtas liellopu gaļas izcirtņiem, kā arī šīm pārbaudēm pielietojamā metodoloģija, lai panāktu standartizāciju un noteiktu atbilstīgas sankcijas gadījumos, kad nav izpildīts nosacījums par izcelsmi. Turklāt būtu jāatjaunina Regula (EK) Nr. 2457/97, ņemot vērā izmaiņas nomenklatūrā, kas piemērojama lauksaimniecības produktu eksporta kompensācijām, kura paredzēta Regulā (EEK) Nr. 3846/87, kurā grozījumi izdarīti ar Regulu (EK) Nr. 2556/2001 [12]. (5) Skaidrības labad Regula (EK) Nr. 2457/97 būtu jāatceļ un jāaizstāj. (6) Šajā regulā paredzētie pasākumi saskan ar Liellopu gaļas pārvaldības komitejas atzinumu, IR PIEŅĒMUSI ŠO REGULU. 1. pants 1. Šo regulu piemēro gadījumā, kad veic fiziskas produkta veida un īpašību pārbaudes Regulas (EEK) Nr. 386/90 2. panta a) apakšpunkta nozīmē attiecībā uz: a) atbilstību prasībai par atsevišķu iesaiņojumu atkaulotiem izcirtņiem, uz kuriem attiecas šādi produktu kodi: - 020130009100, - 020130009120; b) izcelsmi pieaugušu vīriešu dzimuma liellopu gaļas atkaulotiem izcirtņiem, uz ko attiecas šādi produktu kodi: - 020130009100, - 020130009120; c) minimālo liesās gaļas daudzumu atkaulotiem izcirtņiem, uz ko attiecas šādi produktu kodi: - 020130009100, - 020130009120, - 020130009060, - 020230909200. 2. Panta 1. punktā paredzēto produktu apraksts ir apraksts lauksaimniecības produktu nomenklatūrā eksporta kompensācijām, kas izklāstīta Regulas (EEK) Nr. 3846/87 I pielikuma 5. daļā. 2. pants 1. Fizisku pārbaužu vajadzībām paraugi sastāv no divām ar tādu gaļu pilnām kastēm, kas ņemta no divām dažādām sūtījuma daļām. Pirmā kaste ir paredzēta iestādēm, kas ir atbildīgas par pārbaudēm, savukārt otru glabā rezervei muitas iestāžu uzraudzībā. 2. Par sūtījumu uzskata tādu produktu daudzums, attiecībā uz kuru pieņemta viena no šādām deklarācijām: a) deklarācija, kas minēta Regulas (EK) Nr. 800/1999 5. panta 1. punktā, b) deklarācija, kas minēta Regulas (EK) Nr. 800/1999 26. panta 1. punktā, situācijā, kas minēta konkrētajā punktā, tikai attiecībā uz uzglabāšanu. 3. pants Lai pārbaudītu 1. panta 1. punkta a) apakšpunktā minētās prasības izpildi, muitas iestādes pārbauda, vai katrs izcirtnis pirmajā parauga kastē, kas minēta 2. pantā, ir atsevišķi iesaiņots, un vai katrā iesaiņojumā nav vairāk par vienu izcirtni. Ja tā nav, tās pašas pārbaudes izdara otrajai kastei. Ja izrādās, ka abās kastēs kopā ir tikai viens izcirtnis, kas nav iesaiņots atsevišķi, vai tikai vienā iesaiņojumā ir vairāk par vienu izcirtni un visi pārējie nosacījumi attiecībā uz kompensāciju ir ievēroti, sūtījumu neuzskata par nestandarta. Ja šie nosacījumi nav ievēroti, uzskata, ka noticis pārkāpums. Ja konstatē pārkāpumu, kompensāciju, kas maksājama attiecībā uz sūtījumu, aprēķina, pamatojoties uz koriģēto svaru. Koriģēto svaru iegūst, samazinot deklarēto neto svaru par procentuālo daļu, kas atbilst neatbilstīgo izcirtņu svaram attiecībā uz parauga kopējo neto svaru. 4. pants Regulas 1. panta 1. punkta b) apakšpunktā minētā izcelsmes nosacījuma pārbaudes nolūkā, analīzes paraugu veido viens vai divi izcirtņi, kas nejauši izvēlēti no 2. pantā minētā parauga pirmās kastes. Ja analīze liecina, ka tur atrodas cita veida gaļa, nevis pieaugušu vīriešu kārtas liellopu gaļa, kompensācijas maksājumu nepiešķir. Pārbaudes izdara saskaņā ar pielikumā aprakstīto metodoloģiju. Neskarot papildu pārbaudes, par ko pieņem lēmumu, ja ir aizdomas par pārkāpumu, pārbaudes veic pēc nejaušības principa, aptverot visas eksporta darbības, vismaz vienai trešdaļai darbību, kas izvēlētas fiziskai pārbaudei. 5. pants Lai pārbaudītu atbilstību 1. panta 1. punkta c) apakšpunktā minētajam nosacījumam, visu 2. pantā minētā parauga pirmās kastes saturu samaļ, izveidojot homogēnu masu. Ja liesās gaļas daudzums paraugā ir zem noteiktā minimuma, tādā pat veidā pārbauda otrās kastes saturu. Ja abu kastu vidējais rādītājs ir zemāks nekā vidējais noteiktais liesas gaļas daudzums, kompensācijas maksājumu nepiešķir. 6. pants Saskaņā ar Padomes Regulas (EEK) Nr. 2913/92 [13] 68. pantu un neskarot 78. pantu, šajā regulā paredzēto paraugu ņemšanu un pārbaudes veic brīdī, kad pārbauda 2. panta 2. punktā minētās deklarācijas, kas ir pieņemtas. 7. pants Ar šo Regulu (EK) Nr. 2457/97 atceļ. 8. pants Šī regula stājas spēkā 2002. gada 1. jūlijā. To piemēro darbībām, kam deklarācija, kas minēta 2. panta 2. punktā, pieņemta no 2002. gada 1. jūlija. Regula uzliek saistības kopumā un ir tieši piemērojama visās dalībvalstīs. Briselē, 2002. gada 3. maijā Komisijas vārdā — Komisijas loceklis Franz Fischler [1] OV L 160, 26.6.1999., 1. lpp. [2] OV L 315, 1.12.2001., 29. lpp. [3] OV L 42, 16.2.1990., 6. lpp. [4] OV L 24, 29.1.1994., 2. lpp. [5] OV L 102, 17.4.1999., 11. lpp. [6] OV L 308, 27.11.2001., 19. lpp. [7] OV L 366, 24.12.1987., 1. lpp. [8] OV L 76, 19.3.2002., 11. lpp. [9] OV L 224, 21.9.1995., 13. lpp. [10] OV L 325, 17.12.1999., 12. lpp. [11] OV L 340, 11.12.1997., 29. lpp. [12] OV L 348, 31.12.2001., 1. lpp. [13] OV L 302, 19.10.1992., 1. lpp. -------------------------------------------------- PIELIKUMS NOTEIKTU ATKAULOTU VĪRIEŠU DZIMUMA LIELLOPU GAĻAS IZCIRTŅU IZCELSMES ANALĪZE Metodoloģija, kas piemērojama, lai noteiktu dzimumu liellopu gaļā Piemērojamā metodoloģija pamatojas uz polimerāzes ķēdes reakciju un ietver paraugu savākšanu, DNS ekstrakciju, polimerāzes ķēdes reakciju un gēla elektroforēzi. 1. Parauga ņemšana un pakārtotā parauga ņemšana Pakārtoto paraugu ņem no izvēlētā gaļas gabala vidusdaļas, izmantojot sterilu [1] nazi (skalpeli vai līdzīgu instrumentu). Tad šo paraugu samaļ, izmantojot mikrodzirnavas, vai sagriež mazākos gabalos, lai nodrošinātu pietiekamu ekstrakcijas efektivitāti. Paraugi ir jāsagatavo citā darba zonā nekā tā, kur veic polimerāzes ķēdes reakciju. Materiāla apstrāde ir jāveic vidē, kuru ir viegli tīrīt, vēlams, uz tīra galda, lai nodrošinātu to, ka nenotiek tālāka piesārņošana ar citiem paraugiem. Gaļas parauga sagatavošanai ir jāizmanto sterili [2] asmeņi, skalpeļi vai līdzīgi instrumenti. 2. DNS ekstrakcija un attīrīšana DNS ekstrakcija un attīrīšana ir jāveic, izmantojot tradicionālas metodes [3], gatavus komplektus (pamatojoties uz principu: gaļas parauga šķīdināšana līzes buferšķīdumā, kas satur virsmaktīvas vielas, mazgāšanas līdzekļus un K proteināzi, izšķīdušā parauga piemērošana DNS saistošiem sveķiem, DNS nesaturošu savienojumu atdalīšana ar vairākkārtēju skalošanu un visbeidzot attīrītās DNS eluēšana ūdenī vai bufervielā ar zemu sāls saturu), vai arī ekstrahējot DNS nātrija hidroksīda šķīdumā [4]. Ir ieteicama veiksmīgas ekstrakcijas kontrole ar gēla elektroforēzi, bet tā nav obligāta. Ekstrakcijas protokola apstiprināšana: katrai ekstrahējamo paraugu partijai paralēli veic ekstrakcijas kontroli (t.i., bez gaļas), lai pārbaudītu izmantotās procedūras ticamību. 3. Polimerāzes ķēdes reakcija Princips: polimerāzes ķēdes reakcijas princips ir trīs posmu procedūra (denaturācija, DNS praimeru renaturācija, pagarināšana), kas ir jāatkārto kādas 25 līdz 40 reizes (metodes "ciklu" skaits). Reaģentus (reakcijas bufervielu, MgCl2, dezoksinukleotīdus, praimerus, termistabilu DNS polimerāzi, sterilu ūdeni) sajauc kopā saskaņā ar izstrādāto metodi, iegūstot "mastermix". Lai sagatavotu mastermix, izmanto speciālas pipetes. Tad šo mastermix pievieno DNS matricai (ekstrahētai DNS). Reakciju veic reaktorā. Beigās polimerāzes ķēdes reakcijas produktus analizē ar gēla elektroforēzi vai uzglabā temperatūrā 4 °C vai – 20 °C. Ieteiktajai [5] metodei, kas attiecas uz matricu, ir jāpastiprina secība vai nu amelogenīna lokusā (homologs gēns), vai arī ZFX/Y reģionā (specifiskā alēle). Īpašie praimeri šiem diviem metožu veidiem ir šādi. Tiešais amelogenīns: 5’-CAGCCAAACCTCCCTCTGC-3’ Pretējais amelogenīns: 5’-CCCGCTTGGTCTTGTCTGTTGC-3’ (Ennis, S., and Gallagher, T.F. (1994) Anim. Genet. 25: 425-427) Tiešais amelogenīns: 5’-AAATTCTCTCACAGTCCAAG-3’ Pretējais amelogenīns: 5’-CAACAGGTAATTTTCCTTTAG-3’ (Chen, C.M., Hu, C.L., Wang, C.H., Hung, C.M., Wu, H.K., Choo, K.B., and Cheng, W.T.K. (1999) Mol. Reprod. Dev. 54, 209-214) Tiešā ZFX (specifiskā alēle): 5’-GACAGCTGAACAAGTGTTACTG-3’ Pretējā ZFX (specifiskā alēle): 5’-AATGTCACACTTGAATCGCATC-3’ Tiešā ZFY (specifiskā alēle): 5’-GAAGGCCTTCGAATGTGATAAC-3’ Pretējā ZFY (specifiskā alēle): 5’-CTGACAAAAGGTGGCGATTTCA-3’ (Kirkpatrick, B.W., and Monson, R.L. (1993) J. Reprod. Fertil. 98: 335-340) Tiešā ZFX: 5’-AGCTGAACAAGGGTTACTG-3’ Tiešā ZFY: 5’-CAAGCTTACCAGCAAGTCA-3’ Pretējā ZFX/Y: 5’-CCAGTATGGATTCGCATGT-3’ (Zinovieva, N., Palma, G., Müller, M., and Brem G. (1995) Theriogenology 43: 265) Polimerāzes ķēdes reakcijas mastermix ir jāsagatavo uz tīra galda, ko pēc darba dezinficē, izmantojot mazgāšanas līdzekļus un UV gaismu. - Metodes izstrāde: iespējams, ka publicētajās metodēs ir jāizdara varbūtēji labojumi, jo īpaši, precīzs mastermix sastāvs (piemēram, MgCl koncentrācija, praimeru koncentrācija), izmantoto DNS matricu daudzums un piemērotas temperatūras programma (temperatūras, turēšanas laiki). Gadījumā, ja parādās nespecifiski amplifikācijas produkti, būtu jāoptimizē metode (piemēram, DNS renaturācijas temperatūra, MgCl2 koncentrācija, praimeru koncentrācija u.tml.), lai garantētu rezultātu precizitāti. - Polimerāzes ķēdes reakcijas apstiprināšana: regulārās analīzēs izmantojamā metode ir pienācīgi jāapstiprina. Paraugu kopā ir jāiekļauj šādu kontroles pasākumu analīze: ekstrakcijas kontrole (bez gaļas), negatīvā polimerāzes ķēdes reakcijas kontrole un atsauces paraugi (vīriešu un sieviešu dzimuma liellopu gaļa, kā arī viens citas gaļas paraugs, kas nav liellopu gaļa). Turklāt ir jāveic atkārtota apstiprināšana gadījumā, ja izmainīti procedūras galvenie komponenti, piemēram, DNS polimerāze (cits piegādātājs vai produkts) vai praimeri (jauna partija). - Laba laboratorijas prakse ir obligāti nepieciešama, jo īpaši, pienācīga darba zonas un izmantoto instrumentu tīrīšana un dezinfekcija, praimeru alikvotā pārbaude, pipešu izmantošana vienam mērķim u.tml. 4. Amplikonu analīze ar gēla elektroforēzi Polimerāzes ķēdes reakcijā iegūtie fragmenti (amplikoni) ir analizējami ar gēla elektroforēzi. Ir izmantojami vai nu agarozes gēli, kas iekrāsoti ar etīdija bromīdu, vai arī poliakrilamīdu gēli, kas ir iekrāsoti ar sudrabu, pēc elektroforētiskas sadalīšanas. Ir jāizmanto atbilstīgs molekulmasas rādītājs gēlam, lai noteiktu iegūto amplikonu aptuvenu lielumu. 5. Dokumentācija Iegūtie rezultāti ir pienācīgi jādokumentē (gēla veidols, rezultātu apraksts, jebkāda negaidīta rezultāta atzīmēšana). [1] Nepiesārņots ar DNS. [2] Nepiesārņots ar DNS. [3] Kā aprakstīts: Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. (eds) in: Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989). [4] Kā aprakstīts: Elphinestone, J.G., Hennessey, J., Wilson, J.K., and Stead, D.E. (1996) Bulletin OEPP/EPPO 26, 663-678. [5] Citām polimerāzes ķēdes reakcijas metodēm, kas atšķiras no ieteicamās, ir obligāts oficiāli noteiktas etalonlaboratorijas apstiprinājums. --------------------------------------------------