Oficialusis leidinys L 179 , 09/07/2002 p. 0013 - 0018



Komisijos reglamentas (EB) Nr. 1226/2002 2002 m. liepos 8 d. iš dalies keičiantis Tarybos direktyvos 64/432/EEB B priedą EUROPOS BENDRIJŲ KOMISIJA, atsižvelgdama į Europos bendrijos steigimo sutartį, atsižvelgdama į 1964 m. birželio 26 d. Tarybos direktyvą 64/432/EEB dėl gyvūnų sveikatos problemų, turinčių įtakos Bendrijos vidaus prekybai galvijais ir kiaulėmis [1], su paskutiniais pakeitimais, padarytais Reglamentu (EB) Nr. 535/2002 [2], ypač į jos 16 straipsnio 1 dalies antrąją pastraipą, kadangi: (1) 1999 m. spalio 11 d. Gyvūnų sveikatos ir gerovės mokslinis komitetas patvirtino pranešimą [3] apie Tarybos direktyvos 64/432/EEB techninių priedų pakeitimus, padarytus siekiant atsižvelgti į mokslinius pasiekimus tiriant tuberkuliozę, bruceliozę ir enzootinę galvijų leukozę. (2) Remiantis minėtu pranešimu tuberkuliozės tyrimai turėtų būti atliekami laikantis Tarptautinio epizootijų biuro (TEB) Diagnostinių tyrimų ir standartų vadovo (1996 m. trečiasis leidimas). (3) 2001 m. rugpjūčio mėn. TEB išleido minėto Vadovo 2000 metų ketvirtąjį leidimą, į kurį įtraukti kai kurie tuberkuliozės tyrimų aprašymo pakeitimai. (4) 2002 m. sausio mėn. Europos Vaistų kokybės direktoratas išleido 2002 m. Europos farmakopėjos ketvirtąjį leidimą, į kurį įtrauktos 0535 ir 0536 pozicijos – galvijų ir paukščių PPD tuberkulinas. (5) Todėl būtina iš dalies pakeisti Direktyvos 64/432/EEB B priedą, išdėstant tyrimų procedūras, taikomas priežiūros ir prekybos Bendrijoje tikslais atsižvelgiant į Veterinarijos mokslinio komiteto nuomonę. (6) Šiame sprendime numatytos priemonės atitinka Maisto grandinės ir gyvūnų sveikatos nuolatinio komiteto nuomonę, PRIĖMĖ ŠĮ REGLAMENTĄ: 1 straipsnis Direktyvos 64/432/EEB B priedas pakeičiamas šios reglamento priedu. 2 straipsnis Šis reglamentas įsigalioja dvidešimtą dieną po jo paskelbimo Europos Bendrijų oficialiajame leidinyje. Šis reglamentas yra privalomas visas ir tiesiogiai taikomas visose valstybėse narėse. Priimta Briuselyje, 2002 m. liepos 8 d. Komisijos vardu David Byrne Komisijos narys [1] OL 121, 1964 7 29, p. 1977/64. [2] OL L 80, 2000 3 23, p. 22. [3] SANCO/B3/R10/1999. -------------------------------------------------- PRIEDAS " B PRIEDAS TUBERKULIOZĖ 1. SUKĖLĖJO IDENTIFIKAVIMAS Galvijų tuberkuliozės sukėlėjo Mycobacterium bovis (M. bovis) buvimas klinikiniuose ir skerdienos bandiniuose nustatomas pagal nudažytus tepinėlius arba imunoperoksidazės metodika ir patvirtinamas išauginant mikroorganizmą pirminio išskyrimo terpėje. M. bovis patvirtinimui patologinė medžiaga imama iš pakitusių limfmazgių ir parenchiminių organų, pvz., plaučių, kepenų, blužnies ir t. t. Jei gyvūnas pakitusių audinių neturi, tyrimams ir kultūros išskyrimui turėtų būti imami ryklės, bronchų, tarpusienio, paūdrės, apatinio žandikaulio ir kai kurių žarnaplėvės limfinių mazgų bei kepenų mėginiai. Išskirtų kultūrų identifikavimas dažniausiai atliekamas nustatant kultūrines ir biochemines savybes. M. tuberculosis kompleksui surasti gali būti panaudojama polimerazės grandinės reakcija (PGR). M. bovis atskiriami iš kitų M. tuberculosis komplekso narių taikant DNR analizę, kuri yra greitesnė ir patikimesnė nei biocheminiai metodai. Pagal genetinius atspaudus galima atskirti skirtingas M. bovis padermes ir modeliuoti M. bovis kilmę, perdavimo ir platinimo šaltinius. Naudojami tyrimai ir terpės, jų standartizavimas ir rezultatų aiškinimas turi atitikti TEB Diagnostinių tyrimų ir vakcinų standartų vadovo 2000 m. ketvirtojo leidimo 2.3.3 skyrių (galvijų tuberkuliozė). 2. TUBERKULINIZACIJA PPD tuberkulinas (Purified Protein Derivative – išvalytų proteinų darinys), atitinkantis 2.1 punkte nurodytus standartus, naudojamas atliekant oficialią tuberkulinizaciją vadovaujantis 2.2 punkte nurodyta metodika. 2.1. Tuberkulino (galvijų ir paukščių) standartas 2.1.1. Apibrėžimas Išgrynintas baltymo produktas tuberkulinas (galvijų arba paukščių PPD tuberkulinas) – tai preparatas, gautas iš termiškai apdorotų išaugintų ir suirusių Mycobacterium bovis ar Mycobacterium avium (atitinkamai) produktų, pagal kurį nustatomas uždelstas galvijų, įjautrintų tos pačios mikroorganizmų padermės, padidintas jautrumas. 2.1.2. Gamyba Gaunamas iš vandenyje tirpios frakcijos, paruoštos iš skystoje sintetinėje terpėje išaugintos M. bovis ar M. avium (atitinkamai) kultūros, kaitintos tekančia srove ir vėliau filtruotos. Aktyvi filtrato frakcija, kurios didžiąją dalį sudaro baltymas, yra išskiriama nusodinimo būdu, plaunama ir tirpinama. Galima įdėti antimikrobinių konservantų, pvz., nesukeliančių klaidingai teigiamų reakcijų. Galutinis sterilus preparatas, kuriame nėra mikrobakterijų, yra aseptiškai paskirstomas į sterilius saugius stiklinius indus, kurie, saugant nuo užteršimo, yra uždaromi. Preparatas gali būti džiovinamas šalčiu. 2.1.3. Produkto identifikavimas Įjautrintoms albinosinėms jūros kiaulytėms, kurių kiekvienos svoris ne mažesnis negu 250 g, reikiama dozė skirtingose vietose suleidžiama į odą. Injekcijos vietoje po 24–28 val. atsiranda edemoms būdingas paraudimas, nekrozinė eritema arba eritema be nekrozės. Reakcijos dydis ir intensyvumas priklauso nuo dozes. Neįjautrintoms jūrų kiaulytėms po panašių injekcijų reakcijos nebūna. 2.1.4. Tyrimai 2.1.4.1. pH: 6,5–7,5 2.1.4.2. Fenolis: jei tiriamame preparate yra fenolio, jo koncentracija turi būti ne didesnė kaip 5 g/l. 2.1.4.3. Įjautrinimo atlikimas: imama trijų jūros kiaulyčių grupė, kurios nebuvo paveiktos jokia galinčia paveikti tyrimą medžiaga. Tris kartus kas penkias dienas kiekvienai jūrų kiaulytei į odą suleidžiama 500 TV 0,1 mililitre atitinkanti tiriamo preparato dozė. Po trečios injekcijos 15–21 dieną ta pati dozė (500 TV) suleidžiama į odą tiriamiems gyvūnams ir kontrolinei grupei, kurią sudaro trys tokios pačios kūno masės jūrų kiaulytės, kurioms ankščiau tuberkulino injekcijos nebuvo darytos. Po paskutinės injekcijos praėjus 24–28 valandoms, šių dviejų grupių reakcijos ženkliai nesiskirs. 2.1.4.4. Toksiškumas: tiriamos dvi jūrų kiaulytes, kurių kiekviena sveria ne mažiau negu 250 g, ankščiau neveiktos jokia galinčia paveikti tyrimą medžiaga. Įleiskite po oda kiekvienai jūros kiaulytei po 0,5 ml tiriamo preparato. Gyvūnus stebėkite septynias dienas. Stebėjimo laikotarpiu neturi būti jokių nenormalių padarinių. 2.1.4.5. Sterilumas: atliekami sterilumo tyrimai, nustatyti 2002 m. ketvirtojo leidimo Europos Farmakopėjos monografijoje "Veterinarijos vakcinos". 2.1.5. Stiprumas Išgryninto baltymo produkto tuberkulino (galvijų ar paukščių) stiprumas yra nustatomas lyginant įjautrintų jūrų kiaulyčių reakcijos į intrakutanines praskiesto preparato injekcijas rezultatus ir tuos rezultatus, kurie gauti leidžiant žinomos koncentracijos etaloninį išgryninto baltymo produkto tuberkulino (galvijų ar paukščių, atitinkamai) preparatą, kalibruotą tarptautiniais vienetais. Nustatant stiprumą įjautrinkite ne mažiau kaip devynias albinosines jūrų kiaulytes, kurių kiekvienos svoris 400–600 gramų, giliai į raumenis suleidžiant po 0,0001 mg gyvajam svoriui M. bovis – AN5 padermės, suspenduotos 0,5 ml tūrio 9 g/l natrio chlorido tirpalo R, skirto galvijų tuberkulinui, arba atitinkamą įaktyvuotos ar gyvos M. avium paukščių tuberkulino dozę. Po įjautrinimo praėjus ne mažiau negu keturioms savaitėms, nuskutami jūrų kiaulyčių šonai, paruošiant vietą ne daugiau kaip keturioms injekcijoms. Paruošiami tiriamo preparato ir etaloninio preparato skiedimai, naudojant izotoninį buferinį fosfato fiziologinį druskos tirpalą (pH 6,5–7,5), kurio sudėtyje yra 0,005 g/l polisorbito 80 R. Naudoti ne mažiau kaip tris etaloninio preparato dozes ir ne mažiau kaip tris tiriamojo preparato dozes. Parenkamos tokios dozės, kad atsiradusių pažeidimų skersmuo būtų ne mažesnis nei 8 mm ir ne didesnis nei 25 mm. Skiedimai tam tikroms vietoms parenkami atsitiktinės atrankos būdu, pagal lotynišką kvadrato modelį. Kiekvienos į odą suleidžiamos dozės tūris yra pastovus – 0,1 ml arba 0,2 ml. Išmatuokite pažeistų vietų skersmenį po 24–28 val. ir apskaičiuokite tyrimo rezultatą, taikydami įprastus statistinius metodus darant prielaidą, kad pažeidimų skersmuo yra tiesiogiai proporcingas tam tikros koncentracijos tuberkulino logaritmui. Tyrimas galioja tik tuo atveju, jei paklaidos riba (P = 0,95) abiem atvejais yra ne mažesnė negu 50 % ir ne didesnė negu 200 % apskaičiuoto stiprumo. Apskaičiuotas stiprumas yra didesnis nei 66 % ir mažesnis nei 150 % galvijų tuberkulinui nustatyto stiprumo. Apskaičiuotas stiprumas yra didesnis nei 75 % ir mažesnis nei 133 % paukščių tuberkulinui nustatyto stiprumo. Nustatytas stiprumas yra ne mažesnis kaip 20000 TV/ml abiem tuberkulinams (galvijų ir paukščių). 2.1.6. Laikymas Laikyti saugant nuo šviesos 5 ± 3 °C temperatūroje. 2.1.7. Ženklinimas etiketėmis Etiketėje nurodoma: - stiprumas tarptautiniais vienetais mililitre, - įdėtų medžiagų pavadinimas ir kiekis, - džiovintų šaldant preparatų: - regeneruojamojo tirpalo, kurio turi būti įdėta, pavadinimas ir tūris, - reikalavimas produktą naudoti tuoj pat po jo regeneravimo. 2.2. Tyrimo procedūros 2.2.1. Oficialią tuberkulinizaciją sudaro: - intrakutaninis tyrimas: pagal šį tyrimą daroma viena galvijų tuberkulino injekcija, - lyginamasis intrakutaninis tyrimas: pagal šį tyrimą tuo pat metu daroma viena galvijų tuberkulino injekcija ir viena paukščių tuberkulino injekcija. 2.2.2. Tuberkulino dozė: - ne mažiau 2000 TV galvijų tuberkulino, - ne mažiau 2000 TV paukščių tuberkulino. 2.2.3. Kiekvienos injekcijos dozės tūris neviršija 0,2 ml. 2.2.4. Tuberkulino tyrimas atliekamas įšvirkščiant tuberkuliną į kaklo odą. Injekcijos vieta – priekinis ir vidurinis kaklo trečdalis. Paukščių ir galvijų tuberkuliną leidžiant tam pačiam gyvūnui, paukščių tuberkulinas leidžiamas apie 10 cm nuo keteros, o galvijų tuberkulinas – 12,5 cm žemiau, lygiagrečiai pečių linijai arba skirtingose kaklo pusėse; jauniems gyvūnams, kur nėra pakankamai vietos vienoje kaklo pusėje, injekcija daroma abejose kaklo pusėse tose pačiose vietose viduriniojo kaklo trečdalio centre. 2.2.5. Tuberkulinizacijos tyrimas ir reakcijos aiškinimas 2.2.5.1. Metodas Injekcijos vieta apkerpama ir nuvaloma. Odos raukšlė nukirptoje vietoje suimama rodomuoju ir nykščiu, išmatuojama slankmačiu ir užrašomi duomenys. Tuberkulino dozė leidžiama tokiu metodu, kuris užtikrintų, kad tuberkulinas pateko į odą. Gali būti naudojama trumpa sterili adata, kuri leidžiant tuberkuliną matavimo švirkštu, laikoma nuožulniąja puse į išorę ir į giliuosius odos sluoksnius duriama įstrižai. Teisingai atlikus injekciją apčiuopiamas žirnio dydžio pabrinkimas kiekvienos injekcijos vietoje. Odos raukšlės storis kiekvienos injekcijos vietoje iš naujo matuojamas po 72 val. (± 4 valandos) ir užrašomi duomenys. 2.2.5.2. Reakcijos aiškinimas Reakcija aiškinama remiantis klinikiniais tyrimais ir įrašais apie odos raukšlės storio padidėjimą injekcijos vietoje po 72 val.: a) neigiama reakcija: nedidelis patinimas, odos raukšlės storis padidėjęs ne daugiau kaip 2 mm, nėra klinikinių požymių, pvz., difuzinės arba išplitusios edemos, eksudato, nekrozės, skausmo, limfmazgių latakų arba injekcijos vietoje esančių limfmazgių latakų uždegimo ar skausmo; b) abejotina reakcija: nėra klinikinių požymių, pvz., minimų a punkte, ir odos raukšlės storis padidėjęs daugiau kaip 2 mm, tačiau mažiau kaip 4 mm; c) teigiama reakcija: yra a punkte minimų klinikinių požymių arba injekcijos vietoje raukšlės storis padidėjęs 4 mm arba daugiau. 2.2.5.3. Oficialus intrakutaninio tuberkulinizacijos tyrimo aiškinimas 2.2.5.3.1. Vienkartinis intrakutaninis tyrimas: a) teigiamas: teigiama galvijų reakcija kaip apibrėžta 2.2.5.2 dalies c punkte; b) abejotinas: abejotina reakcija kaip apibrėžta 2.2.5.2 dalies b punkte; c) neigiamas: neigiama galvijų reakcija kaip apibrėžta 2.2.5.2 dalies a punkte. Gyvūnams, kurių vienintelio intrakutaninio tyrimo rezultatai yra abejotini, atliekamas dar vienas tyrimas ne anksčiau kaip po 42 dienų. Laikoma, kad gyvūnų, kurių antrojo tyrimo rezultatai nėra neigiami, tyrimas yra teigiamas. Gyvūnams, kurių vienintelio intrakutaninio tyrimo rezultatai yra teigiami, gali būti atliktas intrakutaninis palyginamasis tyrimas, jei manoma, kad gali būti klaidingai nustatyta teigiama reakcija arba tarpinė reakcija. 2.2.5.3.2. Intrakutaninis lyginamasis tyrimas, atliekamas oficialiai tuberkuliozės neapimtos bandos statusui nustatyti ir išlaikyti: a) teigiamas: teigiama galvijų reakcija, kai rezultatas yra 4 mm didesnis nei paukščių reakcijos, arba nėra klinikinių požymių; b) abejotinas: teigiama arba abejotina galvijų reakcija, rezultatas 1–4 mm didesnis nei paukščių reakcijos ir nėra klinikinių požymių; c) neigiamas: neigiama galvijų reakcija arba teigiama ar abejotina galvijų reakcija, tačiau rezultatas lygus ar mažesnis nei neigiamos paukščių reakcijos ir abiem atvejais nėra klinikinių požymių. Gyvūnams, kurių intrakutaninio lyginamojo tyrimo rezultatai yra abejotini, atliekamas dar vienas tyrimas ne anksčiau kaip po 42 dienų. Laikoma, kad gyvūnų, kurių antrojo tyrimo rezultatai nėra neigiami, tyrimo rezultatai yra teigiami. 2.2.5.3.3. Oficialiai tuberkuliozės neapimtos bandos statusas gali būti laikinai panaikintas, o tokios bandos gyvūnų neleidžiama pateikti Bendrijos vidaus prekybai tol, kol bus nustatytas šių gyvūnų statusas: a) gyvūnų, kurių vienintelio intrakutaninio tyrimo rezultatai laikomi abejotinais; b) gyvūnų, kurių vienintelio intrakutaninio tyrimo rezultatai laikomi teigiamais, tačiau laukiama, kol bus atliktas intrakutaninis lyginamasis tyrimas; c) gyvūnų, kurių intrakutaninio lyginamojo tyrimo rezultatai laikomi abejotinais. 2.2.5.3.4. Jei Bendrijos teisės aktuose numatyta, kad gyvūnams prieš juos vežant turi būti atliktas intrakutaninis tyrimas, tyrimas aiškinamas taip, kad gyvūnai, kurių odos raukšlės storis padidėjo daugiau negu 2 mm ir kuriems nenustatyta jokių klinikinių požymių, nepatektų į Bendrijos vidaus prekybą. 2.2.5.3.5. Kad būtų nustatytas didžiausias užsikrėtusių ir sergančių kurios nors bandos ar regiono gyvūnų skaičius, valstybės narės gali keisti tyrinimo aiškinimo kriterijus ir, siekdamos didžiausio tyrimo jautrio, laikyti visas abejotinas reakcijas, minimas 2.2.5.3.1 dalies b punkte ir 2.2.5.3.2 dalies b punkte, teigiamomis. 3. PAPILDOMI TYRIMAI Kad būtų nustatytas didžiausias užsikrėtusių ir sergančių kurios nors bandos ar regiono gyvūnų skaičius, valstybės narės gali leisti taikyti gama interferono analizės metodą, minimą TEB Diagnostinių tyrimų ir vakcinų standartų vadovo (2000 m., ketvirtasis leidimas) 2.3.3 skyriuje (galvijų tuberkuliozė), kartu atliekant ir tuberkulinizaciją. 4. VALSTYBINIAI INSTITUTAI IR NACIONALINĖS ETALONINĖS LABORATORIJOS 4.1. Uždaviniai ir įsipareigojimai Valstybiniai institutai ir etaloninės laboratorijos, išvardyti 3.2. punkte, yra atsakingi už oficialius tuberkulinų ar reagentų, įtrauktų į 2 ir 3 dalis, tyrimus savo šalyse siekiant užtikrinti, kad visi šie tuberkulinai ar reagentai atitiktų pirmiau minėtus standartus. 4.2. Valstybinių institutų ir nacionalinių etaloninių laboratorijų sąrašas 1. Vokietija: Paul-Ehrlich Institut (PEI), Bundesamt für Sera und Impstoffe, D-23207 Langen; Bundesinstitut für gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinärmedizin — Bereich Jena — D-07743 Jena; 2. Belgija: Institut Scientifique de la Santé Publique — Louis Pasteur, 14 Rue Juliette Wytsman — B 1050 Bruxelles — Belgique; 3. Prancūzija: Laboratoire national des médicaments vétérinaires, Fougères; 4. Liuksemburgo Didžioji Hercogystė: tiekiančiosios šalies institutas; 5. Italija: Istituto superiore di sanità, Roma; 6. Nyderlandai: Centraal Instituut voor Dierziekte Controle Lelystad (CIDC-Lelystad), Lelystad; 7. Danija: Danmarks Veterinærinstitut, Bülowsvej 27, DK-1790 København; 8. Airija: tiekiančiosios šalies institutas; 9. Jungtinė Karalystė: Veterinary Laboratory Agency, Addlestone, Weybridge; 10. Graikija: Κέντρο Κτηνιατρικών Ιδρυμάτων, Νεαπόλεως 25, 153 10 Αθήνα; 11. Ispanija: Laboratorio de Sanidad y producción animal de Granada; 12. Portugalija: Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Lisboa; 13. Austrija: Bundesanstalt für veterinärmedizinische Untersuchungen, Mödling; 14. Suomija: Eläinlääkintä — ja elintarviketutkimus-laitos — Forskningsanstalten för veterinärmedicin och livsmedel, Helsinki; 15. Švedija: Statens veterinärmedicinska anstalt, Uppsala. " --------------------------------------------------