COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ' EUROPEE 
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Bruxelles, 24.07.1996 
COM(96) 365 dei'. 
RELAZIONE DELLA COMMISSIONE 
SVILUPPO, CONVALIDA E ACCETTAZIONE LEGALE 
DEI METODI ALTERNATIVI ALLA SPERIMENTAZIONE ANIMALE 
NEL CAMPO DEI PRODOTTI COSMETICI 
1995 

SVILUPPO, CONVALIDA E ACCETTAZIONE LEGALE 
DEI METODI ALTERNATIVI ALLA SPERIMENTAZIONE ANIMALE 
NEL CAMPO DEI PRODOTTI COSMETICI 
1995 
Sunto 
I - INTRODUZIONE 
Obblighi della Commissione 
L'articolo 4(i) della direttiva 76/768/CEE, modificata dalla direttiva 93/35/CEE specifica 
che "gli Stati membri vietano la commercializzazione dei prodotti cosmetici contenenti... 
gli ingredienti o le combinazioni di ingredienti sperimentali su ammali a partire dal 1 ° 
gennaio 1998". 
L'ambiguità della formulazione "combinazioni di ingredienti" è stata successivamente 
eliminata per quanto riguarda la Commissione, la quale ritiene che il divieto riguarda 
anche i prodotti cosmetici finiti. 
L'attuazione di tale divieto è legata all'elaborazione di "metodi atti a sostituire in modo 
soddisfacente la sperimentazione animale ... di cui sia stato scientificamente dimostrato 
che offrono al consumatore un grado di protezione equivalente". 
Allo scopo di fornire un'informazione regolare sugli sviluppi della situazione si specifica 
che "la Commissione presenta annualmente al Parlamento europeo ed al Consiglio una 
relazione sui progressi realizzati in materia di sviluppo, convalida e accettazione legale 
di metodi atti a sostituire la sperimentazione animale. La relazione contiene dati precisi 
sul numero e sul tipo di esperimenti concernenti prodotti cosmetici effettuati su animali". 
Relazione 1994 
Una prima relazione è stata presentata nel 1994. Essa illustrava risultati interessanti ma 
limitati "che non permettevano di sostituire i modelli animali ma potevano contribuire alla 
riduzione del numero di animali utilizzati". Tuttavia, le prospettive erano ragionevolmente 
ottimistiche per la convalida di metodologie alternative in ordine ai test d'irritazione 
oculare, di assorbimento percutaneo, di fototossicità/fotoirritazione ed ai test di base di 
mutagenicità. Veniva inoltre sottolineato che "allo stadio attuale delle conoscenze era 
alquanto improbabile la prospettiva di sostituire interamente la sperimentazione animale 
negli studi tossicologici concernenti la valutazione del rischio sistemico", cioè legato a 
un'azione per via sanguigna sull'insieme dell'organismo dopo l'assorbimento percutaneo. 
II - RELAZIONE 1995 
Gli obiettivi della relazione, la nozione di rischio potenziale per la salute umana 
rimangono gli stessi della relazione 1994. 
Le parti interessate dall'attuazione di tale disposizione rimangono: 
la Commissione europea: DG XI, DG-JRC, DG XXIV, DG XII 
l'industria europea rappresentata da COLIPA, Comité de Liaison Européen des 
Industries Cosmétiques 
il governo americano e la federazione americana di cosmetologia, CFTA 
il governo giapponese e la federazione giapponese di cosmetologia, JCIA 
L'OCSE 
1 - Chiarificazione delle tappe della convalida 
La convalida è il processo attraverso il quale la pertinenza e l'affidabilità di una procedura 
sono definite in relazione ad un determinato obiettivo. Tale processo è risultato più 
complesso e richiederà più tempo del previsto. È stato necessario meglio definire le tappe 
della valutazione di nuovi test (elaborazione di un test e produzione di un protocollo; 
convalida preliminare, convalida propriamente detta; valutazione obiettiva e indipendente 
dello studio, progressione verso l'accettazione legale). 
2 - Le iniziative 
Le varie parti interessate hanno preso numerose iniziative al fine di raggiungere gli 
obiettivi prescritti. 
DGXI 
La DG XI è responsabile da un lato della direttiva 86/609/CEE relativa alla 
protezione degli animali utilizzati a fini sperimentali o per altri scopi scientifici, 
ed in questo senso incaricata di raccogliere i dati statistici sugli animali utilizzati; 
e dall'altro della direttiva 67/548/CEE relativa alla classificazione e 
all'etichettatura delle sostanze chimiche pericolose e che nei suoi allegati definisce 
i metodi di test riconosciuti dall'UE. 
DG-JRC: 
ECVAM (European Centre for the Validation of Alternative Methods) ha 
già organizzato 14 seminari sullo sviluppo e sulla convalida dei metodi 
alternativi. Sette di essi, dei quali sono state pubblicate le rispettive 
relazioni, riguardavano la sicurezza dei prodotti cosmetici. Sono inoltre 
disponibili altre due relazioni sulle procedure di convalida preliminare e 
di convalida. 
ECB (European Chemicals Bureau) fornisce il supporto tecnico e 
scientifico necessario alla DG XI 
DG XXIV / CSC (Comitato Scientifico di Cosmetologia): 
La DG XXIV svolge un ruolo propulsore nelle azioni intraprese dovuto al 
fatto di essere responsabile della direttiva "Prodotti cosmetici" ed 
incaricata di preparare per la Commissione il progetto di misure intese a 
rinviare, qualora necessario, i termini del divieto dei test sugli animali. 
Il CSC e il suo sottogruppo più specificamente incaricato dei metodi 
alternativi hanno valutato vari documenti e pratiche presentati da COLIPA. 
Hanno inoltre adottato un documento su "L'informazione richiesta per la 
valutazione scientifica degli studi di convalida dei test alternativi ai fini 
della loro utilizzazione nella valutazione della sicurezza dei prodotti 
cosmetici". 
DGXH 
La DG XII ha finanziato vari programmi di ricerca sullo sviluppo e sulla 
convalida dei metodi alternativi. 
COLIPA/SCAAT (Steering Committee on Alternatives to Animal Testing) 
Oltre all'elaborazione delle pratiche e alla partecipazione a numerosi studi, 
COLIPA ha organizzato un convegno scientifico internazionale sulle alternative 
alla sperimentazione animale a Bruxelles il 29 e 30 novembre 1995. 
USA 
Il governo americano ricerca attivamente una cooperazione internazionale 
che consenta di emettere raccomandazioni. 
La FDA (Food and Drug Administration), agenzia responsabile della 
sicurezza dei prodotti cosmetici, ha espresso le proprie inquietudini per 
quanto riguarda la messa al bando della sperimentazione animale in sede 
di attuazione della direttiva 93/35/CEE. 
OCSE 
L'OCSE publica linee direttrici relative ai test di tossicità appprovate dai paesi 
membri. È attualmente in fase di discussione una linea direttrice relativa al 
controllo in vitro dell'assorbimento percutaneo. 
3 - Statistiche sulla sperimentazione animale 
La raccolta di dati specificamente riguardanti gli ingredienti e i prodotti cosmetici è stata 
resa difficile dal fatto che non è stata concepita su base annuale la raccolta dei dati sul 
numero di animali utilizzati a fini sperimentali e per altri scopi scientifici in applicazione 
della direttiva 86/609/CEE. 
8 Stati membri hanno dichiarato che sul loro territorio non venivano effettuati test 
su animali per i prodotti cosmetici finiti (Italia, Grecia, Belgio, Irlanda, Svezia, 
Finlandia, Lussemburgo, Germania). 
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6 Stati membri hanno dichiarato che sul loro territorio non venivano effettuati test 
su animali per gli ingredienti cosmetici (Grecia, Paesi Bassi, Irlanda, Svezia, 
Finlandia, Lussemburgo). 
3 Stati membri (Austria, Francia, Regno Unito) hanno comunicato dei dati, 
precisando nel contempo che tali cifre rivestivano un carattere di incertezza e che 
non erano interpretabili. 
Occorre inoltre osservare che taluni Stati membri non produttori di ingredienti possono 
utilizzare ingredienti sottoposti a test in altri Stati membri o in paersi terzi e che taluni 
ingredienti possono essere stati sottoposti a test per altri scopi. 
4 - Conclusioni e Prospettive relative allo sviluppo di metodi alternativi per i vari test 
di tossicità utilizzati nella valutazione della sicurezza degli ingredienti e dei prodotti 
cosmetici. 
4-1 Ingredienti 
Fototossicità/fotoirritazione (reazione cutanea previa applicazione epicutanea di 
una sostanza chimica in presenza di radiazione UV). Ciò riguarda in particolare 
i filtri UV. 
I risultati della seconda fase dello studio internazionale di convalida EU/COLIPA 
sui test in vitro per la fotoirritazione hanno già consentito di compiere mportanti 
progressi. È prevista una terza fase. Sarà necessario uno studio complementare sui 
filtri UV. La convalida è prevedibile per un prossimo avvenire. 
Assorbimento percutaneo 
Una nuova linea direttrice relativa ai test in vitro per l'assorbimento percutaneo 
potrebbe essere accettata dagli Stati membri e dall'OCSE in un prossimo futuro. 
Irritazione cutanea 
Si propone di valutare l'irritazione cutanea degli igredienti cosmetici su volontari 
umani. Ciò sarebbe possibile qualora studi preliminari sui rischi tossici 
apportassero sufficienti garanzie. 
Sensibilizzazione cutanea 
La valutazione in vitro della sensibilizzazione cutanea richiede ricerche più 
approfondite sulla base meccanicistica della sensibilizzazione prima di poter 
prendere in considerazione uno studio di convalida. 
Irritazione oculare 
I risultati degli studi di convalida di metodi alternativi al test d'irritazione oculare 
di Draize sono stati deludenti (studio EU/Home Office e studio COLIPA) e 
nessuno dei test utilizzati ha risposto agli obiettivi dello studio. Si potrebbe 
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incoraggiare un più flessibile approccio della sperimentazione accettando 
combinazioni di metodi scientificamente convalidati e valutando la tossicità delle 
sostanze considerate in rapporto ad adeguate sostanze di controllo standard 
(benchmark substances). 
Fotomutageni cita (complesso delle modifiche del contenuto informativo del 
materiale genetico che intervengono in presenza di radiazione UV) 
Sono state proposte raccomandazioni circa i criteri da adottare al fine di definire 
protocolli di test in vitro. 
Corrosività cutanea 
Gli ingredienti corrosivi non vengono utilizzati nei prodotti cosmetici. Tuttavia, 
lo studio di convalida ECVAM di test in vitro sulla corrosività cutanea potrebbe 
servire per la fase di screening e fornire informazioni fondamentali prima di poter 
prendere in considerazione studi su volontari umani. 
Mutagenicità 
Vengono correntemente utilizzati i test in vitro che valutano il potenziale 
mutagenico degli ingredienti cosmetici. I test in vivo vengono praticati soltanto 
quando i test in vitro forniscono risultati dubbi. 
Sarà probabilmente impossible sostituire integralmente in un futuro prevedibile i 
test in vivo che valutano il rischio sistemico, quali i test di tossicità acuta, di 
tossicità subcronica, di cancerogenicità, di tossicità della riproduzione e dello 
sviluppo. Tuttavia, l'affinamento dei metodi impiegati ha già consentito di ridurre 
in maniera considerevole il numero di animali utilizzati. 
4-2 Prodotti cosmetici finiti 
La tolleranza oculare e la tolleranza cutanea dei prodotti cosmetici finiti possono 
essere normalmente valutate in vitro se i dati relativi alla tossicità degli ingredienti 
ed alle loro proprietà fisico-chimiche sono noti e forniscono le necessarie garanzie. 
La compatibilità cutanea (assenza d'irritazione cutanea) dei prodotti cosmetici finiti 
può essere valutata nell'uomo se può collocarsi nel contesto di studi clinici 
strettamente controllati. 
È importante sottolineare che l'impiego di volontari umani quale metodo 
sostitutivo dei test sugli animali deve essere esaminato con la massima prudenza. 
Siffatti studi dei quali è evidente la dimensione etica dovrebbero essere autorizzati 
soltanto dopo che studi in vitro e in vivo abbiano dimostrato la mancanza di 
rischi di serie conseguenze. 
Nel complesso : - È prevedibile per un prossimo futuro la convalida di 
metodi alternativi per la valutazione 
dell'assorbimento percutaneo e della fotoirritazione 
nel caso degli ingredienti, per la valutazione della 
tolleranza oculare e della tolleranza cutanea per i 
prodotti finiti. 
L'elaborazione di metodi alternativi per la 
valutazione dell'irritazione oculare, dell'irritazione 
cutanea e della sensibilizzazione cutanea relativa 
agli ingredienti richiede lo svolgimento di studi 
preliminari. 
L'elaborazione di metodi in vitro in settori che 
comportano un rischio sistemico non è prevista per 
un prossimo futuro anche se risulta possibile una 
riduzione del numero di animali. 
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GLOSSARIO DELLE ABBREVIAZIONI 
CAPT. Committee of Adaptation to Technical Progress 
CAAT: Centre for Alternatives to Animal Testing (John Hopkins University. USA) 
CFTA: Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association (USA) 
COLIPA: European Cosmetic, Toiletry and Perfumery Association 
DEREK: Deductive Estimation of Risk from Existing Knowledge 
ECB: European Chemicals Bureau 
ECVAM: European Centre for the Validation of Alternative Methods 
ERGATT: European Research Group for Alternatives in Toxicity Testing 
ESAC: ECVAM Scientific Advisory Committee 
EU: European Union 
EU/HO international validation study: 
European Union/Home Office international validation study 
Food and Drug Administration (USA) 
Food, Drug and Cosmetics Act (USA) 
Fluorescein Leakage Test 
Fund for the Replacement of Animals in Medical Experiments 
Good Laboratory Practice 
US Inter-Agency Coordinating Committee for the Validation of Alternative 
Methods 
International Fund for Animal Welfare 
Interagency Regulatory Alternatives Group 
In Vitro Testing Industrial Platform 
Japanese Cosmetics Industry Association 
Joint Research Centre 
Modified Maximum Average Score 
Ministry for Health and Welfare (Japan) 
National Institute of Environmental Health Sciences (USA) 
Neutral Red Uptake Assay 
National Toxicology Program (USA) 
Prediction Model 
Organisation for Economic Cooperation and Development 
Quantitative Structure-Activity Relationships 
Red Blood Cell Haemolysis Test 
Steering Committee on Alternatives to Animal Testing 
Scientific Committee on Cosmetology 
Scweizerisches Institut fur Alternativen zu Tierversuchen 
Tissue Equivalent Assay 
Ultra Violet 
Zentrastelle zur Erfassung und Bewertung von Ersatz und FDA: 
FDCA: 
FLT: 
FRAME: 
GLP: 
ICCVAM: 
IFAW: 
IRAG: 
IVTIP: 
JCIA: 
JRC: 
MMAS: 
MHW: 
NIEHS: 
NRU: 
NTP: 
PM: 
OECD: 
QSAR: 
RBC: 
SCAAT: 
SCC: 
SIAT: 
TEA: 
UV: 
ZEBET: 
Ergànzungsmethoden zum Tierversuch im Bundesgesundheitsamt 
VU 
INDICE 
PAGINA 
A INTRODUZIONE 2 
B CHIARIMENTI SULLE TAPPE DELLA CONVALIDA 2-5 
- Convalida dei metodi alternativi usati a fini diversi 3 
- Tappe nello valutazione dei nuovi test 3 
C. LE INIZIATIVE DEL 1995 5-13 
Parti en causa 5 
Le iniziative 6 
1. Unione Europea 6 
DGXI 6 
DG CCR 7 
DG XXIV/CSC 8 
DG XII 11 
COLIPA/SCAAT 11 
2. USA 12 
3. Giappone 13 
4. OCSE 13 
D. STATO DI AVANZAMENTO DEI LAVORI 13-17 
E. STATISTICHE SULLA SPERIMENTAZIONE ANIMALE 17-18 
F CONCLUSIONI 18-19 
G PROSPETTIVE 19-20 
A. INTRODUZIONE 
La presente è la seconda delle relazioni che la Commissione è incaricata di presentare 
ogni anno al Parlamento europeo e al Consiglio sui progressi realizzati nel campo dello 
sviluppo, della convalida e dell'accettazione legale dei metodi alternativi alla 
sperimentazione animale a fini di prova dei cosmetici. 
"La Commissione presenta annualmente al Parlamento europeo e al Consiglio 
una relazione sui progressi realizzati in materia di sviluppo, convalida e 
accettazione legale di metodi atti a sostituire la sperimentazione animale. La 
relazione contiene dati precisi sul numero e il tipo di esperimenti concernenti 
prodotti cosmetici effettuati su animali. Gli Stati membri sono tenuti a raccogliere 
tali informazioni in aggiunta alla raccolta dì statistiche che loro incombe in virtù 
della direttiva 86/609/CEE concernente la protezione degli animali utilizzati a fini 
sperimentali o ad altri fini scientifici. La Commissione vigila in particolare sullo 
sviluppo, la convalida e l'accettazione legale dei metodi sperimentali che non 
fanno ricorso ad animali viventi. " (direttiva 93/35/CEE, art. 4) (i). 
Ad eccezione degli obiettivi, delle parti in causa e della nozione di rischio potenziale per 
la salute dell'uomo e che sono rimasti gli stessi, sono presi in esame i punti sviluppati 
nella prima relazione annuale (COM(94)606): 
Chiarimenti sulle tappe della convalida (B) 
Iniziative del 1995 (C) 
Lo stato di avanzamento dei lavori (D) 
Statistiche relative alla sperimentazione animale (E) 
Conclusioni (F) 
Prospettive (G) 
B. CHIARIMENTI SULLE TAPPE DELLA 
CONVALIDA 
L'obiettivo principale della Commissione rimane quello di incoraggiare lo sviluppo, 
la convalida e l'adozione legale di metodologie alternative atte ad offrire al 
consumatore un livello di protezione equivalente a quanto ottenuto tramite la gli 
studi sugli animali. 
La convalida è il processo attraverso il quale la pertinenza e l'affidabilità di un test 
sono definite in relazione ad un determinato obiettivo. 
Le tappe da superare per raggiungere questo risultato si rivelano più numerose e il 
procedimento si dimostra più complesso di quanto previsto inizialmente. 
Il primo seminario di Amden (Svizzera) è servito a determinare la base teorica essenziale 
del processo di convalida, ovvero: una convalida intralaboratorio, una valutazione 
interlaboraton, lo sviluppo di basi dati, la valutazione dei risultati. 
L'esperienza acquisita grazie agli studi di convalida effettuati successivamente al 1990 ha 
dimostrato la necessità di definire meglio i vari obiettivi degli studi di convalida e di 
integrare nuove tappe nel processo di valutazione dei nuovi test. 
L'ECVAM (Centro europeo per la convalida dei metodi alternativi), Unità del Centro 
comune di ricerca (ISPRA), è al centro delle discussioni e importanti contributi sono stati 
forniti per i seguenti settori. 
* aspetti pratici della convalida 
* schema di convalida preliminare 
* discussioni internazionali con 1TCCVAM (USA - Inter-Agency Coordinating 
Committee for tha Validation of Alternative Methods) e con l'OCSE (Organismo 
di cooperazione e sviluppo economico) sull'armonizzazione dei criteri di convalida 
e di accettazione. 
In occasione del secondo seminario di Amden (24-28 gennaio 1994), organizzato 
congiuntamente da ECVAM e ERGATT (il gruppo di ricerca europeo sulle prove 
alternative di tossicità) sono state formulate raccomandazioni — esposte nella relazione 
seminariale ECVAM n. 5 — riguardanti gli aspetti pratici e logistici della convalida dei 
test alternativi. 
Convalida dei metodi alternativi usati a fini diversi 
Gli studi di convalida dei test alternativi sono effettuati allo scopo di raggiungere quattro 
tipi di obiettivi principali. Si distinguono pertanto: 
1. La convalida di procedure alternative per uso in studi non regolamentari. 
2. La convalida di test alternativi nell'ambito di linee guida regolamentari. 
3. La convalida di test alternativi per sostituire le linee guida esistenti. 
4. La convalida di test alternativi destinati a fornire una parte delle informazioni 
richieste da linee guida regolamentari. 
Tappe nello valutazione dei nuovi test 
1. Messa a punto di un test ed elaborazione di un protocollo. 
I criteri presi in considerazione in sede di sviluppo di un test comprendono 
principalmente la descrizione della base su cui si fonda il metodo, la definizione 
del suo obiettivo scientifico, la specificazione e la misurazione della finalità 
biologica, l'espressione e l'interpretazione dei risultati, attraverso un modello di 
predizione (PM). 
II modello di predizione deve consentire di convertire ogni risultato ottenuto 
mediante un metodo alternativo in una predizione corretta di tossicità in vivo. 
Il modello di predizione risulta critico ai fini della corretta e soddisfacente 
attuazione di un programma di convalida. Esso consente di provare una ipotesi 
chiaramente definita, di valutare obiettivamente le prestazioni del test e serve 
inoltre da guida per la pianificazione dello studio di convalida. 
2. Preconvalida 
L'esperienza ha mostrato che i risultati di studi di convalida estesi e costosi 
possono essere compromessi se i loro gestori non insistono sul fatto che i 
protocolli di test ottimizzati e la prova della loro efficacia siano presentati prima 
dell'inizio di uno studio formale di convalida. Gli obiettivi della preconvalida, e 
uno schema del processo di preconvalida, sono descritti nella prima relazione della 
"Task Force Preconvalida ECVAM". 
La preconvalida si prefigge di: 
- ottimizzare e standardizzare il protocollo 
valutare la trasferibilità del metodo 
L'esercizio di preconvalida comprende tre fasi: 
un affinamento del protocollo, che implica una collaborazione tra il 
laboratorio che ha messo a punto il metodo e quello destinato per 
ottimizzarlo; 
- il trasferimento del protocollo che implica la collaborazione tra i due primi 
laboratori e il laboratorio designato per il trasferimento; 
- uno studio cieco che implica almeno la partecipazione di questi 3 
laboratori destinati a studiare le prestazioni del protocollo. 
3. Convalida 
La convalida comprende uno studio interlaboratori formale 
Le tappe principali sono: 
- la descrizione dello studio 
- la selezione dei test 
- la selezione dei laboratori 
- la selezione e la distribuzione dei materiali di test 
- la raccolta e l'analisi dei risultati 
- la valutazione dello studio. 
4. Valutazione indipendente dell'esecuzione e dei risultati dello studio 
Tale valutazione comprende una valutazione oggettiva del valore dei test 
scientificamente convalidati per comparazione con altri test, tenendo conto degli 
obiettivi di convalida. 
5. Processo in vista dell'accettazione legale. 
È essenziale che ogni nuovo metodo ritenuto adeguatamente convalidato quale 
sostituto di un metodo esistente abbia un riconoscimento internazionale il più 
ampio possibile. Per esempio, le linee guida OCSE sono di particolare rilievo al 
proposito, essendo usate per test eseguiti in paesi membri in Europa e in America 
settentrionale, nonché in Giappone, Australia e Nuova Zelanda. 
Inoltre, ai sensi dell'Accordo OCSE sulla reciproca accettazione dei dati, i paesi 
membri hanno convenuto di accettare dati che risultano da test eseguiti in 
conformità delle linee guida OCSE in materia di test, purché siano rispettati i 
principi della Buona prassi di laboratorio (GLP). L'OCSE ha definito una 
procedura per l'aggiornamento delle linee guida in materia di test l'introduzione 
di nuovi metodi di test. 
C. LE INIZIATIVE DEL 1995 
PARTI IN CAUSA 
Promemoria, le parti in causa nel campo dell'incoraggiamento della ricerca, dello sviluppo 
e della convalida dei metodi alternativi sono: 
1. L'UNIONE EUROPEA 
La Commissione europea: 
Vari servizi della Commissione sono impegnati in problemi relativi alla 
sperimentazione animale e allo sviluppo di metodi alternativi. 
La DG XI, Ambiente, sicurezza nucleare e protezione civile, gestisce la direttiva 
86/609/CEE concernente la protezione degli animali impiegati a fini sperimentali 
o ad altri fini scientifici e la direttiva 67/548/CEE, sulla classificazione, 
l'imballaggio e l'etichettatura delle sostanze pericolose. 
// CCR, Centro comune di ricerca 
• ECVAM, Centro europeo per la convalida dei metodi alternativi 
• ESAC, Comitato scientifico consultivo dell'ECVAM 
• ECB, Ufficio europeo delle sostanze chimiche 
La DG XXIV: Politica dei consumatori 
• Unità 4, Politica di qualità e mercato dei prodotti, gestisce la direttiva 
"cosmetici" 
• CSC: Comitato scientifico di cosmetologia, comitato consultivo della 
Commissione. 
La DG XII, Scienza, ricerca e sviluppo sovvenziona programmi di ricerca: 
L'Industria europea 
COLIPA - Si tratta del Comitato di collegamento europeo delle industrie del 
settore dei cosmetici, dei prodotti da toilette e della profumeria, che ha posto in 
atto lo SCAAT 
• SCAAT - Steering Committee on Alternatives to Animal Testing (Comitato 
d'indirizzo sulle alternative alla sperimentazione animale), cura la supervisione 
degli studi di convalida del COLIPA e il coordinamento degli sforzi di 
convalida dell'industria dei cosmetici, su base mondiale. 
2. USA 
CTFA - Cosmetic, toiletry and fragrance association, appoggia le azioni del 
CAAT 
3. GIAPPONE 
JCIA - Japanese Cosmetic Industry Association 
4. ORGANIZZAZIONE PER LO SVILUPPO E LA COOPERAZIONE 
ECONOMICA (OCSE) 
L'OCSE pubblica linee guida in materia di test, approvate per consenso dai paesi 
membri. Esse sono quasi identiche ai metodi di test dell'allegato V dell'UE, e in 
combinazione col principio di reciproca accettazione dei dati, danno l'opportunità 
di un'armonizzazione internazionale e di un approccio razionale all'applicazione 
delle Tre R. 
LE INIZIATIVE 
1. UNIONE EUROPEA 
DGXI 
La DG XI, Ambiente, sicurezza nucleare e protezione civile ha convenuto con gli Stati 
membri il migliore orientamento da adottare per raccogliere, su base biennale, i dati statistici 
imposti dagli articoli 13 e 26 della direttiva 86/609/CEE, riguardante la protezione degli 
animali impiegati a fini sperimentali o a ad altri fini scientifici. Le tabelle che devono essere 
completate dagli Stati membri a tal fine riguardano i cosmetici a livello globale. La DG XI 
è inoltre responsabile della direttiva 67/548/CEE e dei metodi di test dell'UE, in base a 
quanto esposto in dettaglio nella direttiva della Commissione 87/302/CEE e nell'allegato alla 
direttiva della Commissione 92/69/CEE (Parte B - Metodi per la determinazione della 
tossicità). 
La DG XI ha sostenuto lo studio internazionale UE/HO di convalida sulle alternative al test 
Draize di irritazione degli occhi, nonché lo studio internazionale UE/COLIPA di convalida 
sulla fototossicità in vitro. 
CCR 
ECVAM (Centro europeo per la convalida dei metodi alternativi) è al servizio di tutte 
le DG interessate alla problematica dei metodi alternativi. 
ECVAM è stato costituito dalla Commissione europea in conformità di una Comunicazione 
dalla Commissione al Consiglio e al Parlamento europeo dell'ottobre del 1991, nonché a 
seguito dell'articolo 23 della direttiva 86/609/CEE, che afferma quanto segue: 
"La Commissione e gli Stati membri dovrebbero incoraggiare la ricerca intesa a sviluppare 
e rendere più efficaci tecniche alternative atte a fornire lo stesso livello d'informazione degli 
esperimenti su animali ma che prevedano l'utilizzo di un minor numero di animali o 
comportino procedimenti meno dolorosi e prendono tutte le misure che ritengono opportune 
per favorire la ricerca in questo settore. La Commissione e gli Stati membri seguono 
l'evoluzione dei metodi sperimentali". 
ECVAM è stato costituito per: 
1. coordinare la convalida dei metodi alternativi a livello di Unione europea; 
2. fungere da punto focale per lo scambio di informazioni sullo sviluppo dei metodi 
alternativi; 
3. costituire, mantenere e gestire una banca dati sulle procedure alternativi; 
4. promuovere il dialogo tra legislatori, industrie, scienziati biomedici, organizzazioni dei 
consumatori e gruppi di protezione degli animali, nell'ottica di sviluppare, convalidare 
e riconoscere a livello internazionale metodi alternativi per i test. 
Il simposio di inaugurazione di ECVAM organizzato a Ispra il 18 ottobre 1994 era dedicato 
alla convalida di metodi alternativi di sostituzione. In occasione del simposio è stato discusso 
il ruolo di ECVAM in sede di elaborazione, convalida e accettazione di test alternativi e di 
strategie di sperimentazione, che può essere riassunto come segue: 
contributo all'elaborazione di linee direttrici da parte del processo stesso di convalida, 
dei suoi rapporti con lo sviluppo e dall'accettazione di test pertinenti e affidabili per 
obiettivi specifici; 
- individuare le priorità tenendo conto del progresso scientifico in particolari campi; 
assicurarsi che i testi alternativi implichino finalità biologiche semplici, distine e ben 
definite, con sufficiente comprensione delle loro basi meccanicistiche; 
promuovere un approccio pluridisciplinare per l'elaborazione di strategie di test 
integrati che comportino rapporti quantitativi struttura/attività (QSAR), la biocinetica 
e i modelli cellulari e tessutali; 
affrontare le difficoltà derivanti dalla mancanza di materiali sperimentali con dati di 
qualità in vivo combinati; 
incoraggiare una rivalutazione delle attuali linee direttrici e procedure regolamentari; 
- raggiungere un consenso lavorando con le adeguate organizzazioni governative, 
industriali, accademiche e altre; 
stabilire criteri di convalida, valutazione indipendente dei risultati degli studi di 
convalida o di accettazione legale di test alternativi e delle strategie sperimentali, 
tramite cooperazione attiva con, per esempio, l'OCSE e l'ICCVAM (Inter-Agency 
Coordinating Committee for the Validation of Alternative Methods negli USA). 
Fino ad oggi, ECVAM ha organizzato seminari relativi allo sviluppo e alla convalida di test 
alternativi ed ha pubblicato le relazioni di 13 di tali seminari. Per ragioni politiche, ECVAM 
ha riconosciuto una priorità alle alternative per i test dei cosmetici. Le relazioni che 
presentano un interesse diretto per la valutazione della sicurezza dei cosmetici sono: 
- relazione 2 - In vitro phototoxicity testing (1994) 
- relazione 5 - Practical aspects of the validation of toxicity tests procedures (1995) 
- relazione 6 A prevalidation study on in vitro skin corrosivity testing (1995) 
- relazione 7 - Development and validation of non-animal tests and testing strategies: 
the identification of a coordinated response to the challenge and the 
opportunity presented by the sixth amendment to the Cosmetic directive 
(1995) 
- relazione 8 - The integrated use of alternative approaches for predicting toxic hazard 
(1995) 
- relazione 11 - The three Rs: The Way Forward (1995) 
- relazione 13 - Methods for assessing percutaneous absorption (1995) 
Nel 1995 sono stati pubblicati due fascicoli sui temi seguenti 
convalida dei metodi altemativi di sperimentazione (comunicazione congiunta di 
ECVAM e ECB) 
prima relazione della Task force di preconvalida dell'ECVAM. 
Tra i temi prioritari di ECVAM per gli anni 1995-1998 dobbiamo inoltre ricordare: 
la tossicità dello sviluppo 
il metabolismo 
la corrosività 
la fototossicità 
la penetrazione dermica 
irritazione oculare e dermica 
sensibilizzazione. 
L'ECB (Ufficio europeo delle sostanze chimiche) fornisce sostegno tecnico e scientifico alla 
DG XI in materia di classificazione ed etichettatura della sostanze pericolose, notifica di 
nuove sostanze, sostanze chimiche esistenti, controllo dell'importazione ed esportazione delle 
sostanze pericolose, e metodi di prova (ai sensi dell'allegato V della direttiva 67/548/CEE). 
Tra ECB ed ECVAM si sta sviluppando un'efficace collegamento in relazione ai metodi di 
prova alternativi e sostitutivi, nonché alle modifiche delle procedure relative agli animali 
intese a ridurre il numero di animali richiesti o ridurre la sofferenza di animali 
necessariamente utilizzati in conformità di regolamenti e linee guida. 
DG XXIV/CSC 
La DG XXIV - Politica dei consumatori, che gestisce la direttiva "cosmetici" (direttiva 
76/768/CEE), ha proseguito il suo ruolo motore ed ha moltiplicato le azioni allo scopo di 
rispettare al meglio le disposizioni della direttiva 93/35/CEE nei termini previsti. 
8 
Se non sono stati scientificamente convalidati e legalmente accettati metodi alternativi, 
la DG XXTV è incaricata di preparare per conto della Commissione un progetto 
recante provvedimenti per rinviare la scadenza di divieto dei test su animali secondo la 
procedura stabilita dal Comitato per l'adeguamento al progresso tecnico (art. 10, dir. 
768/CEE). 
Tale Comitato (C.A.P.T.) è composto di rappresentanti degli Stati membri ed è presieduto da 
un rappresentante della Commissione. Quest'ultimo trasmette al Comitato un progetto in cui 
sono indicati i provvedimenti da adottare. 
Il parere è formulato a maggioranza qualificata. 
Conformemente alla nuova procedura di codecisione, il Parlamento europeo sarà informato 
contemporaneamente e nelle stesse condizioni di ogni progetto relativo a provvedimenti da 
adottare, trasmesso al CAPT. 
"Qualora non siano stati compiuti progressi sufficienti nella messa a punto di metodi 
atti a sostituire in modo soddisfacente la sperimentazione sugli animali e 
segnatamente qualora, malgrado ogni ragionevole sforzo, non sia stato 
scientificamente dimostrato che i metodi sperimentali alternativi offrono al 
consumatore un grado di protezione equivalente, tenuto conto delle direttive 
dell'OCSE in materia di prove di tossicità, la Commissione presenta, al più tardi il 
1° gennaio 1997, un progetto di misure miranti a rinviare la data di attuazione della 
presente disposizione di un periodo di tempo sufficiente e comunque non inferiore a 
due anni, conformemente alla procedura di cui all'articolo 10. Prima di proporre i 
progetti in questione, la Commissione consulta il Comitato scientifico di 
cosmetologia" (art. 4(i) della direttiva 76/768/CEE, modificata dalla direttiva 
93/35/CEE)". 
La DG XXTV ha varie volte pregato gli Stati membri di rispettare i loro obblighi riguardo alla 
raccolta di dati precisi sugli esperimenti condotti su animali per ingredienti e prodotti 
cosmetici finiti. Le tabelle che dovevano essere compilate dagli Stati membri per rispettare 
gli obblighi della direttiva 86/609 riguardano i cosmetici ad un livello globale. Tuttavia, la 
raccolta di dati statistici imposta dalla direttiva 93/35 va oltre questi dati di base per quanto 
riguarda i cosmetici ed è stato chiesto agli Stati membri di trasmettere risultati più dettagliati 
a scadenze annuali (cfr. tabella in allegato). 
La DG XXIV ha mantenuto rapporti regolari principalmente con la DG XI ed ECVAM ed 
ha facilitato la comunicazione fra tutte le parti in causa. 
CSC: H Comitato scientifico di cosmetologia, comitato consultivo della Commissione, è 
incaricato di trasmettere un parere scientifico alla DG XXIV sull'applicabilità dei metodi 
altemativi, convalidati nel processo di valutazione della sicurezza dei cosmetici per uso 
umano. 
D sottocomitato Metodi alternativi/linee guida del CSC ha organizzato due riunioni di 
lavoro (2 febbraio, 11 maggio) e due riunioni in comune con SCAAT/COLIPA (19 settembre, 
1° dicembre) durante le quali sono state sviluppate le seguenti azioni: 
1. Valutazione dei documenti e dei fascicoli presentati da COLIPA 
Fotoirritazione in vitro (progetto UE/COLIPA) 
L'analisi dei dati comunicati da COLIPA, e cioè dei risultati parziali pubblicati nelle 
riviste scientifiche, della fase di preconvalida e un'informazione parziale sulla fase II, 
degli studi di convalida non ha consentito al CSC di esprimere un'opinione scientifica 
sull'insieme del progetto. 
Il CSC sottolinea comunque che i modelli animali risultano inadeguati a formulare 
previsioni sugli effetti fototossici sull'uomo e considera che lo studio del potenziale 
fototossico "in vitro" sia una passo importante nel processo di valutazione della 
sicurezza dei cosmetici che contengono filtri UV. 
Assorbimento percutaneo in vitro (COLIPA) 
In base all'analisi dei documenti presentati da COLIPA, e cioè delle linee guida per 
i test di assorbimento percutaneo in vitro, dei protocolli standard e di una panoramica 
generale delle correlazioni in vitro/in vivo, il CSC raccomanda di presentare la 
metodologia di assorbimento percutaneo "in vitro" in modo uniforme e di completarla 
con i risultati intralaboratorio e interlaboratori ottenuti su materiali di test e veicoli 
scelti convenientemente. 
Fotomutagenicità (COLIPA) 
Le raccomandazioni di COLIPA nella relazione finale trasmessa al CSC, indicano i 
criteri sui quali basarsi nella definizione dei protocolli di sperimentazione. 
Il CSC esprime il suo rammarico per non aver potuto ancora fondare la valutazione 
del potenziale fotomutagenico dei filtri UV su metodi debitamente convalidati, 
malgrado il fatto di aver messo a punto criteri generali per la realizzazione di test di 
fotomutagenicità nel 1990 (SPC/803/90). 
2. Informazioni richieste per la valutazione scientifica degli studi di convalida dei 
test alternativi, in vista del loro impiego per la definizione della sicurezza dei 
cosmetici 
Prendendo in considerazione i problemi relativi alla convalida delle metodologie 
alternative, il CSC ha ritenuto pertinente redigere un documento che costituisce un 
contributo diretto agli studi futuri di convalida. 
Nella relazione si tiene conto degli aspetti qualitativi e quantitativi dei problemi di 
convalida. 
I criteri prescelti: 
riguardano la convalida scientifica dei test 
consentono di misurare un grado di tossicità 
sono applicabili agli ingredienti cosmetici 
comportano la definizione della terminologia statistica. 
10 
È posta in evidenza la necessità di fornire le prove dell'ottimizzazione dei protocolli 
e di formalizzare la relazione fra i dati in vitro e quelli in vivo, sotto forma di una 
relazione matematica. 
DGXII 
La DG XII, Scienza, ricerca e sviluppo sovvenziona programmi di ricerca che comprendono 
in particolare lo sviluppo e la convalida di metodi alternativi, in conformità della decisione 
n. 1110/94/CE del Parlamento europeo e del Consiglio del 26 aprile 1994 relativa al IV 
Programma quadro per la ricerca e lo sviluppo tecnologico, che riporta le seguenti, chiare 
istruzioni: "Ogni volta che è possibile, la sperimentazione e i testi sugli animali devono essere 
sostituiti da metodi in vitro o altri metodi...". 
La DG XII ha sostenuto e sostiene diversi programmi sullo sviluppo e la convalida di test in 
vitro. Alcuni progetti possono risultare utili al settore dei cosmetici: 
BRIDGE - Relazione finale (EUR 15777, pubblicata nel 1995) 
Sviluppo di un test predittivo in vitro per il rilevamento dei composti con effetto di 
sensibilizzazione. 
BIOTECH (1992-1994) 
Alcuni progetti riguardano la tossicologia dello sviluppo in vitro. 
BIOTECH (1994-1998) 
Il programma di lavoro prevede attività di ricerca prenormativa sulle alternative in 
vitro alla sperimentazione animale in farmatossicologia. 
IVTIP (In Vitro Testing Industrial Platform): 
forum organizzato pe migliorare i contatti tra produttori e utenti di tecnologia. Nel 
1995 sono state organizzate due riunioni, relative al progresso effettuato nell'ambito 
del IV Programma quadro e ad una rassegna dei progressi in materia di convalida. 
COLIPA/SCAAT 
SCAAT ha creato, per ciascun settore d'investigazione, gruppi di lavoro specifici che 
riuniscono vari esperti ai fini della realizzazione della convalida. 
Un simposio scientifico intemazionale sulle alternative alla sperimentazione animale, 
organizzata da COLIPA ha riunito a Bruxelles il 29 e 30 novembre 1995 i rappresentanti 
dell'industria, della comunità scientifica, della Commissione e del Parlamento europeo, nonché 
delle società di protezione degli animali. 
La prima sessione dedicata alla CONVALIDA ha posto in evidenza il ruolo critico dei 
modelli di predizione e ha fatto il punto degli studi di convalida in corso, sulla fotoirritazione 
e sull'irritazione oculare. La sessione è terminata con una tavola rotonda sulle prospettive di 
orientamento normativo. 
11 
La seconda sessione, dedicata allo SVILUPPO, comprendeva presentazioni sull'assorbimento 
percutaneo, sulla compatibilità e sulla sensibilizzazione cutanea 
La terza sessione, sul tema della VALUTAZIONE DELLA SICUREZZA ha trattato le 
iniziative prese dal CSC e l'orientamento delle autorità responsabili della normativa nel 
Regno Unito e in Germania. È stata quindi sottolineata l'importanza della messa a 
disposizione dei dati scientifici su cui si basano gli studi e le strategie inteme dell'industria 
cosmetica a fini di valutazione della sicurezza del prodotto finito 
I vari interventi sono stati completati da una mostra di manifesti. 
Nell'ambito di tale mostra, è stato posto a disposizione dei partecipanti un opuscolo in cui è 
schematizzato l'orientamento dellTFAW (International fund for Animal Welfare). 
Dato che appare con chiarezza che non è possibile sostituire un test su animali con un 
semplice test in vitro, l'IFAW presenta una strategia articolata su varie tappe, basata 
essenzialmente su alternative di sostituzione che privilegiano l'impiego di cellule di tessuti 
di origine umana, escludendo il ricorso ad ogni sperimentazione animale in vivo e a test in 
vivo su volontari umani. 
II simposio ha posto in evidenza il ruolo rilevante di COLIPA (Industria cosmetica europea) 
nell'organizzazione dei lavori di ricerca, sviluppo e convalida di metodi alternativi. Gli 
sforzi posti in atto dalle grandi società europee di cosmetici sono assai onerosi rispetto al 
numero di animali impiegati nella sperimentazione dei cosmetici e le conoscenze acquisite 
rivestono una utilità fondamentale per le altre industrie. 
Inoltre, il simposio ha contribuito a informare in modo scientifico ed esatto le varie parti in 
causa ed ha aperto un interessante confronto di opinioni. Le conclusioni richiamano un 
orientamento comune dell'industria e della Commissione inteso a sostituire rapidamente i test 
sugli animali sotto il profilo della compatibilità cutanea, della fotoirritazione e 
dell'assorbimento percutaneo. 
2. USA 
Il governo USA auspica una cooperazione internazionale per raccomandare un orientamento 
e definire i criteri di adozione normativa di nuovi metodi alternativi, che stabiliscano con 
chiarezza le condizioni d'impiego dei metodi stessi (finalità biologiche, pertinenza per classi 
di sostanze, ecc.). ICCVAM ha organizzato, nel 1995 ad Arlington, Virginia, un seminario 
sulla convalida e l'accettazione regolamentare di metodi alternativi di prova tossicologica, 
sponsorizzato dall'Istituto nazionale delle scienze della salute ambientale (NIEHS) e dal 
Programma nazionale di tossicologia (NTP). Il seminario si prefiggeva di discutere il progetto 
di relazione dell'ICCVAM contenente raccomandazioni in materia di criteri e processi di 
convalida e accettazione regolamentare di metodi nuovi e riveduti di prova tossicologica. 
La FDA (Food and Drug Administration: Ente alimenti e farmaci) è l'agenzia USA 
responsabile in materia di sicurezza dei cosmetici. La FDA mantiene rapporti interattivi con 
le agenzie pubbliche e private che si occupano dello sviluppo e della convalida dei test 
alternativi e si concentra su metodi che generano solidi dati scientifici. 
La FDA esprime inquietudini per quanto riguarda il divieto della sperimentazione 
animale nell'attuazione della direttiva 93/35/CEE. Taluni cosmetici prodotti nell'UE 
12 
potrebbero non soddisfare le condizioni di sicurezza (per la salute) definite dall'US-FDCA 
(Food, Drug and Cosmetic Act: Legge sugli alimenti, i farmaci e i cosmetici). 
3. GIAPPONE 
Il Ministero giapponese per la salute e il benessere è responsabile per i test e le pertinenti 
linee guida in Giappone. I gruppi di ricerca giapponesi sono implicati in particolare nella 
convalida dei test alternativi al test Draize. L'accettazione delle alternative dipende dal loro 
impiego specifico nella valutazione dell'irritazione oculare (screening o sostituzione; test 
individuale o batteria di test). La JCIA prevede che sarà difficile raccomandare a fini di prove 
normative per la valutazione della sicurezza dei cosmetici un test o una batteria di test, il cui 
grado di predizione sarebbe inferiore a quello dei metodi in vitro. 
4. OCSE 
Nell'ottobre del 1994, la 5a riunione dei Coordinatori nazionali del Programma OCSE di linee 
guida in materia di test ha convenuto sull'opportunità di tentare di armonizzare a livello 
intemazionale i diversi concetti pubblicati e suggeriti per la convalida dei metodi di prova 
alternativi. Nell'ottica del dibattito intemazionale in materia, è stato ritenuto che per l'OCSE 
fosse il momento di inserirvisi e proporre una piattaforma per tutte le parti in causa, tale da 
rendere possibile pervenire ad un consenso intemazionale sui criteri di convalida e 
accettazione. I Coordinatori nazionali hanno sottolineato chele proposte esistenti possono 
essere utilizzate come base per un approccio accettabile a livello intemazionale, piuttosto che 
per lo sviluppo di un altro concetto. Al proposito è stato oggetto di riconoscimento positivo 
l'operato di centri come il CAAT (Centro di alternative alle prove sugli animali della Johns 
Hopkins University) negli USA, ECVAM nell'UE, ERGATT e vari centri e comitati nazionali 
(per esempio FRAME nel Regno Unito, IRAG e ICCVAM negli USA, NCA nei Paesi Bassi, 
SIAT in Svizzera, ZIBET in Germania). 
I Coordinatori nazionali hanno convenuto che un Seminario OCSE sarebbe l'approccio 
migliore, offrendo a tutte le parti interessate in materia ampie opportunità di discussione e di 
ricerca del consenso. Inoltre, è stato ritenuto di rilevanza decisiva il fatto che i paesi membri 
designino tra l'altro persone con responsabilità nel settore normativo. La Svezia si è offerta 
per ospitare il seminario. 
Nel gennaio del 1995 è stato costituito un Comitato d'indirizzo incaricato di consigliare il 
Segretariato OCSE in ordine alla portata e alla struttura del seminario, nonché di assistere 
nello sviluppo del programam del seminario, previsto per il 22-24 gennaio 1996 a Solna, 
Svezia. ECVAM e ZEBET sono rappresentati nel Comitato d'indirizzo. 
D. STATO DI AVANZAMENTO DEI 
LAVORI 
METODI IN CORSO DI SVILUPPO E DI CONVALIDA 
13 
Sensibilizzazione cutanea 
La sensibilizzazione costituisce un settore di ricerca considerevole e di estrema rilevanza per 
la sicurezza dei cosmetici. Un orientamento interessante per valutare la sensibilizzazione 
cutanea in vitro è stato presentato in occasione del simposio organizzato da COLIPA (29-30 
novembre 1995). Nel 1995 si è tenuto un seminario ECVAM sulla la sensibilizzazione 
cutanea, la cui relazione sarà pubblicata nel 1996. 
La struttura chimica e il potenziale sensibilizzante di vari composti sono stati esaminati 
diffusamente e i sistemi informatici esperti come DEREK (Deductive Estimation of Risk from 
Existing Knowledge) consentono di paragonare sullo schermo l'informazione strutturale e la 
descrizione delle sottostrutture molecolari o degli allarmi strutturali, correlati al potenziale 
sensibilizzante. Un orientamento predittivo può essere basato sulla misurazione dei segnali 
molecolari indotti da sostanze sensibilizzanti su colture di cellule. 
In particolare in questo settore è opportuno sottolineare che la predizione del potenziale di 
sensibilizzazione nell'uomo rimane un problema di rilievo in ragione della variabilità 
individuale delle risposte. 
Fotomutagenicità - Convalida (COLIPA) 
Dal 1990 in poi, COLIPA ha presentato fascicoli di studio sui filtri UV contenenti dati di 
fotomutagenicità ottenuti in base a vari tipi di test. 
Questa istanza ha organizzato un ring test per la definizione di un protocollo adatto che 
prevede l'impiego di due sostanze aventi un potenziale fotomutageni co noto, attivate dagli 
UVA, nonché vari ceppi batterici. I risultati di questo ring test hanno consentito di mettere 
a punto raccomandazioni riguardanti i criteri di scelta dei ceppi batterici o delle colture 
cellulari, il simulatore solare, la tecnica di irradiazione dei campioni, le dosi di irraggiamento 
singolo o molteplice UV, le dosi di sostanze da sperimentare, l'impiego di controlli positivi. 
Assorbimento percutaneo 
ECVAM, COLIPA e OCSE hanno cooperato per facilitare l'adozione intemazionale di una 
linea guida in materia di test di assorbimento percutaneo in vitro. 
Fotoirritazione/fototossicità; convalida: fase II (UE/COLIPA) 
ECVAM e la DG XI sono rappresentati nel Comitato direttivo dello studio, coordinato da 
ZEBET, che esamina la possibilità di uno studio supplementare di convalida destinato a 
predire il potenziale fotoirritante dei filtri UV. 
Nella prima fase (preconvalida), l'analisi dei risultati ottenuti con un test di viabilità cellulare 
ha consentito di determinare un fattore limite che distingue le sostanze fotoirritanti da quelle 
che non lo sono. L'obiettivo della seconda fase (convalida) programmata come prova cieca 
era di determinare se un test di tossicità cellulare e un test di misurazione dei danni cellulari, 
impiegati correntemente (si tratta del NRU1 e del test combinato RBC2 
NRU: Neutral red uptake assay, impiega le cellule come bersaglio e la tossicità cellulare come finalità 
biologica. 
2RBC. Red blood cell haemolysis test, valuta i danni alle membrane cellulari. 
14 
(fotoemolisi+ossidazione dell'emoglobina)) sono in grado di predire correttamente il 
potenziale fotoirritante per l'uomo di 32 sostanze chimiche, somministrate nell'uomo per via 
sistemica o per via topica. 
I risultati preliminari della seconda fase, portata a termine nel 1995, sono limitati al test NRU 
impiegato in tutti i laboratori. Il protocollo RBC è stato impiegato soltanto in tre laboratori. 
Ulteriori valutazioni statistiche sono svolte da un biostatistico indipendente e saranno 
disponibili nel corso del primo semestre 1996. 
Irritazione oculare - Relazione finale dello studio EU/HO sui metodi alternativi al test di 
irritazione oculare di Draize 
Questo studio aveva lo scopo di stabilire se nove test alternativi, da soli o in combinazione, 
potevano sostituire il test di Draize per materiali di test fortemente irritanti o per valutare il 
potenziale irritante di sostanze chimiche, con o senza rapporto con la classe chimica e in tutta 
la gamma dei potenziali misurabili. 
Sono state così analizzate indipendentemente 60 sostanze chimiche, in 37 laboratori. I risultati 
sono stati comparati con i MMAS (Modified maximum average score) ottenuti con il test di 
Draize e sottoposti a valutazione statistica. 
Ad eccezione della predizione del potenziale irritante dei surfattanti, nessuno dei nove test 
ha raggiunto l'obiettivo previsto. 
Lo studio ha arrecato numerose, preziose lezioni, di cui si è tenuto conto nella pianificazione 
dello studio COLIPA. Esse hanno inoltre condotto ad un seminario ECVAM sugli aspetti 
pratici della convalida, nonché allo sviluppo di uno schema di preconvalida ECVAM. La 
variabilità dei dati in vivo è stata individuata come ostacolo di rilievo al raggiungimento di 
rilevanza e affidabilità nei test in vivo. 
Irritazione oculare: convalida (COLIPA) 
L'esercizio di convalida è stato realizzato su 23 ingredienti cosmetici (surfattanti, alcoli, 
conservatori), 20 dei quali sono comuni allo studio EU/HO sopra citato e su 32 formulazioni 
cosmetiche (con un'ampia gamma di forme fìsicochimiche). I materiali di test sono stati 
sperimentati in vivo, conformemente alle linee guide dell'OCSE (OCSE405). 
Gli obiettivi specifici di questo studio erano di determinare se i dati ottenuti in base a 10 
protocolli in vitro correntemente impiegati nell'industria cosmetica (di cui 5 valutati anche 
nello studio EU/HO): 
- dimostrano una correlazione accettabile con il MMAS (modified maximum average 
score) 
- forniscono una correlazione accettabile con le notazioni individuali e il tempo di 
recupero, quali figurano nella linea guida OCSE 405 
- predicono correntemente il potenziale di irritazione oculare dell'occhio di coniglio in 
base ad algoritmi alternativi. 
15 
Per la prima volta in uno studio di convalida, sono stati definiti modelli di predizione 
(PM) prima dell'inizio dello studio. Essi definiscono esattamente le finalità biologiche 
ottenute per ciascun metodo in vitro e le modalità secondo quali convertire ciascuna finalità 
biologica in vitro in predizione di un potenziale di irritazione oculare. I PM impiegati in 
questo studio sono basati su dati storici disponibili per ingredienti e formulazioni di interesse 
per l'industria cosmetica e in particolare per sostanze aventi un potenziale di irritazione da 
modesto a moderato. 
Il programma non ha consentito una convalida completa per via del numero ristretto 
di laboratori che hanno partecipato ad esperimenti particolari del programma. Nessuno 
dei metodi sperimentati può ancora sostituire validamente il test di irritazione oculare 
di Draize. 
L'affidabilità dei PM è stata valutata determinando se i risultati interiaboratori erano 
riproducibili e se i dati erano distribuiti negli intervalli di predizione dei PM predefiniti. 
Il test RBC mostra una buona riproducibilità interlaboratori, soddisfacendo inoltre i criteri di 
affidabilità. 
Tre dei protocolli sperimentati si conformano ragionevolmente ai loro modelli di predizione 
(FLT3, RBC, TEA4) ma sono necessari lavori supplementari per risolvere molteplici questioni 
tecniche associate con i PM, prima che possano essere stabilite conclusioni definitive sulle 
loro prestazioni. 
Questo studio di convalida dimostra l'importanza dei "dati in vivo di buona qualità". 
I dati in vivo disponibili sono adeguati alla valutazione del rischio, tuttavia, per paragonare 
i dati in vivo e in vitro le due serie di dati dovrebbero teoricamente presentare una variabilità 
quanto più piccola possibile, per consentire una valutazione statistica precisa. L'esperienza ha 
dimostrato che ciò non avviene sempre. 
L'esame dei risultati indica che taluni dei PM potrebbero essere affinati e sottoposti a 
sperimentazione in un prossimo studio. 
Corrosività cutanea: preconvalida (ECVAM) 
I tre test di corrosività cutanea allo studio sono oggetto di una valutazione e di un lavoro di 
ottimizzazione (TER= dosaggio della resistenza elettrica transcutanea riferito alla pelle dei 
ratti, CORROSITEX™, Skin2™ e EPISKJN™) nell'intento di elaborare un programma di 
convalida formale. 
Compatibilità cutanea (COLIPA) 
FLT: Fluoresceine leakage test, misura i danni causati ad una barriera cellulare. 
4TEA: Tissue equivalent assay, misura il tempo necessario alla diminuzione del 50% della vitalità cellulare 
di cellule umane in colture comuni. 
16 
La compatibilità cutanea si definisce quale l'assenza di irritazione cutanea in condizioni 
normali di impiego e in condizioni ragionevolmente prevedibili di cattivo impiego. 
Sette compagnie affiliate alla COLIPA valutano la compatibilità cutanea dei loro prodotti 
finiti per l'uomo, in condizioni controllate, perché il potenziale irritante della maggior parte 
dei prodotti cosmetici è assai basso. 
COLIPA ha messo a punto linee guida per la valutazione della compatibilità dei prodotti 
cosmetici finiti per la pelle umana: 
- tenendo conto di esigenze etiche: gli studi sull'uomo devono essere condotti 
coerentemente con la Dichiarazione di Helsinki (1964, 1989); 
- è essenziale un orientamento prudente della sperimentazione, tappa dopo tappa; 
precisando la necessità di una conoscenza preliminare della composizione e della 
stabilità dei prodotti sperimentati, nonché di una valutazione preventiva dei dati di 
tossicità degli ingredienti che rientrano nella composizione dei prodotti. 
Sono attualmente in corso di elaborazione linee guida sulla compatibilità cutanea dei prodotti 
cosmetici. 
Studi su volontari umani (ECVAM) 
Tra i metodi sostitutivi delle prove su animali sono spesso citati anche gli studi su volontari 
umani. I problemi di ordine etico, giuridico, logistico, scientifico e di sicurezza connessi a 
simili studi sono all'esame dell'ECVAM, in collaborazione con l'università di Pavia, 
l'università di Nottingham e diverse imprese del settore cosmetico. 
E. STATISTICHE SULLA SPERIMENTAZIONE ANIMALE 
La raccolta dei dati sul numero di animali utilizzati a fini sperimentali o altri fini scientifici 
in applicazione degli articoli 13 e 26 della direttiva 86/609/CEE non è impostata su base 
annuale. 
Ciò spiega in parte le difficoltà incontrate nel raccogliere annualmente i dati relativi 
specificamente agli ingredienti e prodotti cosmetici. 
La Commissione ha comunque insistito a più riprese presso gli Stati membri per ottenere le 
statistiche richieste, e ciò è stato ribadito anche nelle attività della DG XXIV e della DG XI. 
1) 8 Stati membri hanno dichiarato che sul loro territorio non sono effettuati test su 
animali per i prodotti cosmetici finali (Italia, Grecia, Belgio, Irlanda, Svezia, 
Finlandia, Lussemburgo, Germania). 
2) 6 Stati membri hanno dichiarato che sul loro territorio non sono effettuati test su 
animali per ingredienti cosmetici (Grecia, Paesi Bassi, Irlanda, Svezia, Finlandia, 
Lussemburgo). 
3) Solo 3 Stati membri (Austria, Francia, Regno Unito) hanno comunicato dati sul 
numero di animali utilizzati, precisando talora che le cifre non sono suscettibili 
d'interpretazione e che permangono incertezze sulla loro verità. In siffatte circostanze, 
3 17 
la presente relazione non può riportare tabelle comparative con dati numerici, che 
darebbero un'immagine erronea e falsa della realtà. 
4) Per quanto riguarda le dichiarazioni di assenza dei test, occorre inoltre segnalare che 
taluni Stati membri, non produttori d'ingredienti, possono utilizzare ingredienti testati 
in altri Stati membri o in paesi terzi e che taluni ingredienti utilizzati per i prodotti 
cosmetici possono essere stati testali per altri fini. 
La Commissione esprime vivo rammarico per la mancata disponibilità attuale di dati più 
precisi, ma per la loro raccolta essa dipende dagli Stati membri. 
F. CONCLUSIONI 
I progressi registrati nel 1995 per i metodi di prova alternativi e la loro convalida possono 
essere riassunti come segue: 
1. La relazione sulla Fase II dello studio intemazionale di convalida UE/COLIPA sui test 
in vitro per la fototossicità (potere fotoirritante) sarà resa disponibile nel 1996, ma è 
già chiaro che la convalida del test di cultura cellulare NRU ha avuto ottimo esito. Gli 
addetti allo studio confidano che si possa produrre una linea guida OCSE accettabile 
entro due anni, ovvero dopo la pubblicazione della relazione finale e dopo aver 
proceduto a lievi affinamenti ai protocolli. 
2. L'esperienza accumulata dall'Industria cosmetica europea nel settore critico 
dell'assorbimento cutaneo si è concretizzata in una proposta di linea guida OCSE per 
un test in vitro. ECVAM e COLIPA lavorano con l'OCSE e altri al fine di agevolare 
l'adozione da parte dei paesi membri OCSE di una linea guida per l'assorbimento 
percutaneo in vitro. 
3. I risultati dello studio intemazionale di convalida UE/HO delle alternative al test di 
irritazione oculare di Draize sono deludenti, dato che nessuno dei test ha raggiunto gli 
obiettivi dello studio. Tuttavia, lo studio ha permesso l'apprendimento di molte lezioni 
preziose, che consentiranno di migliorare sensibilmente la qualità degli studi futuri di 
convalida. 
4. Sono stati ottenuti risultati più promettenti, per una gamma di materiali ridotta rispetto 
allo studio UE/HO, nella prima fase dello studio di convalida COLIPA delle 
alternative al test di irritazione oculare di Draize, che ha mostrato l'utilità di inserire 
modelli di predizione nei protocolli di test. 
5. A seguito dello studio COLIPA, sono state formulate raccomandazioni per i criteri da 
rispettare nella definizione dei protocolli di test di fotomutagenicità in vitro. 
6. A seguito di un altra iniziativa COLIPA, sono state elaborate linee guida per i test 
sulla compatibilità cutanea di prodotti cosmetici e loro ingredienti sull'uomo. 
7. Il ricorso a volontari umani quale alternativa di sostituzione merita ulteriore esame, 
ma si deve sottolineare che studi simili devono essere condotti solo dopo che i 
18 
risultati di precedenti studi in vivo e/o in vitro permettono di evitare il rischio di 
eventuali conseguenze gravi. 
8. La convalida si è rivelata più difficile e più onerosa ~ in termini di tempo e di denaro 
~ di quanto previsto. Ancora in corso è il dibattito su cosa di fatto significhi la 
convalida e su come si possa definire la rilevanza e affidabilità di metodi alternativi. 
ECVAM è al centro del dibattito, e in diversi modi sono stati fatti contributi di 
particolare rilievo. 
9. Lo schema di preconvalida ECVAM, attualmente sottoposto a valutazione 
intemazionale, dovrebbe migliorare il tasso di successo degli studi di convalida e 
ridurre il tempo necessario ad effettuarli, nonché i loro costi. 
10. In ambito europeo, ma anche con gli USA e il Giappone, hanno avuto luogo 
discussioni intemazionali sull'armonizzazione dei criteri per la convalida e 
l'accettazione di metodi di prova alternativi di sostituzione. 
G. PROSPETTIVE 
1. L'emergere di aspettative più realistiche nei confronti del processo di convalida, 
e il successo delle discussioni internazionali sui criteri per la convalida e 
l'accettazione di metodi alternativi di sostituzione dovrebbero condurre in futuro 
a progressi considerevoli. 
2. Dopo la conclusione di un ulteriore, piccolo studio sulle sostanze chimiche di 
particolare interesse per il CSC, è lecito aspettarsi la produzione di un progetto 
di linee guida normative in materia di testi in vitro di fototossicità, da sottoporre 
all'accettazione delle autorità normative. 
3. Si auspica che nuove linee guida in materia di test in vitro dell'assorbimento 
percutaneo siano accettate in tempi brevi dagli Stati membri dell'UE e dai paesi 
membri dell'OCSE. 
4. È probabile un'accelerazione del progresso verso lo sviluppo di metodi in vitro 
standardizzati e appropriati per il rilevamento del potenziale di sensibilizzazione. 
5. Sarà essenziale riesaminare cosa ci si attende dai test (in vivo e in vitro) di 
irritazione oculare. Nel frattempo si potrebbe incoraggiare un approcci più 
flessibile alle prove, per esempio accettando la valutazione delle tossicità di nuovi 
prodotti e ingredienti per comparazione con le conoscenze relative ad appropriate 
sostanze di valutazione. 
6. Si potrebbe fare più ampio ricorso al fatto che la tolleranza oculare e cutanea dei 
prodotti cosmetici finali può essere valutata in vitro, purché siano rispettate le 
condizioni cruciali, cioè la precedente conoscenza dei dati di tossicità pertinenti 
gli ingredienti e le loro proprietà fisico-chimiche. Inoltre, la compatibilità dei 
prodotti cosmetici finali può essere valutata nel contesto di studi clinici 
rigorosamente controllati. 
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7. Un buon esito dovrebbe caratterizzare Io studio di convalida ECVAM sui test di 
corrosività cutanea, che potrebbero essere in seguito utilizzati, per esempio, per 
fornire parte delle informazioni ritenute essenziali prima che siano giudicati 
ammissibili studi su volontari umani. 
8. Maggiore accento sarà posto sull'uso integrato di vari approcci diversi (per 
esempio, predizioni basate su elaborazioni informatiche, test in vitro) e di 
strategie gerarchiche di prova, per ridurre, affinare e sostituire il ricorso ad 
animali a fini sperimentali. 
D Sesto emendamento alla direttiva 76/768/CEE fornisce un'opportunità unica di 
considerevole progresso verso la sostituzione della sperimentazione animale nel settore 
dei cosmetici. D progresso è in corso, ma la sua prosecuzione dipende dal mantenimento 
di buone relazioni e di un'efficace collaborazione tra tutte le parti in causa, ovvero la 
Commissione e i suoi comitati consultivi, gli Stati membri, l'industria cosmetica e le 
autorità normative. 
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ISSN 0254-1505 
COM(96) 365 def. 
DOCUMENTI 
IT 10 15 05 03 
N. di catalogo : CB-CO-96-366-IT-C 
ISBN 92-78-07195-1 
Ufficio delle pubblicazioni ufficiali delle Comunità europee 
L-2985 Lussemburgo 
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