COMMISSIONE DELLE CCMUNITA EUROPEE 
C0M(93) 698 def. 
Bruxelles, 7 gennaio 1994 
Proposta di 
PIPETUVA PEI CON? I Ql tQ 
che modifica e aggiorna la direttiva 64/432/CEE 
relativa a problemi di polizia sanitaria 
in materia di scambi intracomunitarI 
di animali delle specie bovina e suina 
(presentata dalla Commissione) 
-A 
RELAZIONE 
Ê stata recentemente adottata la legislazione comunitaria in materia di lotta 
contro l'afta epizootica, le malattie esotiche e la peste suina africana. Non è 
quindi opportuno che le disposizioni relative alla lotta contro tali malattie 
continuino a figurare nella direttiva 64/432/CEE, che riguarda gli scambi 
intracomunitari di animali vivi delle specie suina e bovina. Ê pertanto 
necessario eliminare queste sezioni dalla direttiva 64/432/CEE, facendo 
riferimento alla direttiva in materia. 
Nell'ambito del mercato unico è inoltre necessario abolire la condizione secondo 
la quale gli animali debbono restare per un periodo minimo di sei mesi in uno 
Stato membro prima di essere trasportati. Occorre poi estendere il campo 
d'applicazione della direttiva anche ai vitelli di meno di 15 giorni d'età e 
sopprimere i riferimenti ai posti di frontiera. 
Anche l'obbligo di eseguire, prima della spedizione, determinate prove sugli 
animali provenienti da paesi o regioni riconosciuti come indenni da tubercolosi, 
brucellosi e Ieucosi bovina enzootica e di effettuare prove sulle vacche da latte 
per quanto concerne la mastite dovrebbe essere abolito, quale ulteriore passo 
sulla via del mercato unico. 
Dal 1964 in poi, la direttiva 64/432 è stata modificata più di 40 volte ed ò 
ormai necessario procedere all'aggiornamento della direttiva. Si è voluto inoltre 
cogliere l'occasione per semplificare e chiarire le disposizioni della direttiva 
stessa. 
Sono questi gli obiettivi della proposta allegata. 
Essa non comporta alcun impatto finanziarlo per il bilancio delle Comunità 
europee. 
- 1<L-
Proposta di 
Direttiva del Consiglio 
del 
che modifica e aggiorna la direttiva 64/432/CEE 
relativa a problemi di polizia sanitaria 
in materia di scambi intracomunltari 
di animali delle specie bovina e suina 
IL CONSIGLIO DELL' UNIONE EUROPEA. 
visto il trattato che istituisce la Comunità europea, in particolare 
l'articolo 43, 
vista la proposta della Commissione (D, 
visto il parere del Parlamento europeo (2)( 
visto il parere del Comitato economico e sociale O), 
considerando che l'armonizzazione delle disposizioni in campo veterinario ha 
registrato notevoli progressi; che il Consiglio ha adottato, in particolare, la 
direttiva 90/425/CEE, dei 26 giugno 1990, relativa ai controlli veterinari e 
zootecnici applicabili negli scambi intracomunltari di taluni animali vivi e 
prodotti di origine animale, nella prospettiva della realizzazione del mercato 
interno (4), la direttiva 91/496/CEE, del 15 luglio 1991, che fissa i principi 
relativi all'organizzazione dei controlli veterinari per gli animali che 
provengono dai paesi terzi (5), la direttiva 85/511/CEE, del 18 novembre 1985, 
che stabilisce misure comunitarie di lotta contro l'afta epizootica (6^ e la 
direttiva 92/119/CEE, del 17 dicembre 1992, che introduce misure generali di 
lotta contro alcune malattie degli animali nonché misure specifiche per la 
malattia vescicolare dei suini <7>; 
(1) GU n. C 
(2) GU n. C 
(3) GU n. C 
(4) GU n. L 224 del 18.8.1990, pag. 29. 
(5) GU n. L 268 del 24.9.1991, pag. 56. 
(6) GU n. L 315 del 26.11.1985, pag. 11. 
(7) GU n. L 62 del 15.3.1993, pag. 69. 
- 2 -
considerando che, vista questa situazione, è necessario modificare la direttiva 
64/432/CEE del Consiglio (8), del 26 giugno 1964, relativa a problemi di polizia 
sanitaria in materia di scambi intracomunltarI di animali delle specie bovina e 
suina, modificata da ultimo dalla direttiva 92/102/CEE del Consiglio <9), del 
5 dicembre 1992, in particolare per quanto concerne il periodo di permanenza in 
uno Stato membro prima del trasporto, le norme relative agli animali di meno di 
15 giorni e le norme di lotta contro determinate malattie; considerando che la 
direttiva 64/432/CEE è stata sostanzialmente modificata in numerose occasioni; 
che, per maggior chiarezza è necessario procedere all'aggiornamento della 
direttiva 64/432/CEE, 
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA: 
Articolo 1 
La direttiva 64/432/CEE è sostituita dal testo che figura nell'allegato della 
presente dirett iva. 
ArtIcolo 2 
Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative, regolamentari ed 
amministrative necessarie per conformarsi alla presente direttiva entro e non 
oltre ili' luglio 1994. Essi ne informano immediatamente la Commissione. 
Quando gli Stati membri adottano tali disposizioni, queste contengono un 
riferimento alla presente direttiva o sono corredate da siffatto riferimento 
all'atto della pubblicazione ufficiale. Le modalità del riferimento sono decise 
dagli Stat i membri. 
Articolo 3 
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva. 
(8) GU n. L 121 del 29.7.1964, 1977/64 
(9) GU n. L 355 del 5.12.1992, pag. 32. 
3 -
ALLEGATO I 
Articolo 1 
La presente direttiva riguarda gli scambi intracomunltar! di animali delle specie 
bovina e suina. 
Articolo 2 
Ai sensi della presente direttiva s'intende per: 
(a) azienda: 
un'azienda guai é definita all'articolo 2 della direttiva 90/425/CEE del 
Cons i g I io: 
(b) animale da macello: 
un animale delle specie bovina (compresa la specie Bubaius bubalus) o 
suina destinato ad essere condotto ad un macello o ad un mercato, dal 
quale potrà essere avviato solamente alla macellazione: 
(e) animali da allevamento o da produzione: 
gli animali delle specie bovina (compresa la specie Bubalus bubalus) e 
suina diversi da quelli di cui alla lettera b), ed in particolare 
quelli destinati all'allevamento, alla produzione di latte o di 
carne, oppure al lavoro; 
(d) azienda d'allevamento bovino ufficialmente indenne da tubercolosi: 
un'azienda d'allevamento bovino che risponde alle condizioni indicate 
nell'allegato A, parte I, punti 1. 2 e 3: 
(e) Stato membro o parte di Stato membro ufficialmente indenne da tubercolosi: 
uno Stato membro o una parte di Stato membro che risponde alle 
condizioni indicate nell'allegato A. parte I. punti 4. 5 e 6: 
(f) azienda d'allevamento bovino ufficialmente indenne da brucellosi: 
un'azienda d'allevamento bovino che risponde alle condizioni indicate 
nell'allegato A, parte II, punti 1. 2 e 3: 
- 4 -
(g) reolone ufficialmente Indenne da brucellosi: 
una parte di uno punti membro che risponde alle condizioni Indicate 
nell'allegato A. parte li. punti 7. 8 e 9: 
(h) Stato membro ufficialmente Indenne da brucellosi: 
uno Stato membro che risponde alle condizioni Indicate nell'allegato A. 
parte II. punti 10. 11 e 12: 
(i) azienda d'allevamento bovino indenne da brucellosi: 
un'azienda d'allevamento bovino che risponde alle condizioni indicate 
nell'allegato A, parte II, punti 4. 5 e 6: 
(j) azienda indenne da Ieucosi bovina enzootica: 
un'azienda che risponde alle condizioni indicate nell'allegato D, 
capitolo I. sezioni A e B: 
(k) stato membro o regione indenne da Ieucosi bovina enzootica: 
una regione o uno Stato membro che risponde alle condizioni indicate 
nell'allegato D. capitolo I. sezioni E. F e G: 
(l) veterinario ufficiale: 
il veterinario designato dall'autorità centrale competente dello Stato 
membro. 
Articolo 3 
1. Ogni Stato membro vigila affinché dal suo territorio vengano spediti verso il 
territorio di un altro Stato membro soltanto animali che rispondono alle 
condizioni stabilite dalla presente direttiva, nei casi in cui sono 
applicabili. 
2. Gli animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva 
debbono : 
(a) essere sottoposti ad un esame clinico e ad un controllo d'Identità da 
parte di un veterinario ufficiale e non presentare segni clinici di 
malattia; 
5 -
(b) provenire da un'azienda o da una zona non soggette, per motivi di 
polizia sanitaria, a divieto per le specie considerate secondo la 
legislazione comunitaria o nazionale ; 
(e) essere identificati secondo le disposizioni della direttiva 92/102/CEE 
de I Cons i g Ii o; 
(d) non essere destinati alla macellazione nell'ambito di un programma 
nazionale per reradicazione di malattie contagiose o infettive; 
(e) essere conformi alle disposizioni degli articoli 4 e 5. 
Art I co lo 4 
1• Dal momento in cui lasciano l'azienda di origine fino all'arrivo a 
destinazione In un altro Stato membro, gli animali delle specie bovina e 
suina oggetto della presente direttiva non debbono mai entrare in contatto 
con animali biungulati diversi da quelli che rispondono alle condizioni 
previste per gli scambi intracomunltari. 
2. Gli animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva 
devono essere trasportati mediante mezzi di trasporto previamente puliti e 
disinfettati con un disinfettante ufficialmente autorizzato dallo Stato 
membro di origine. I veicoli di trasporto debbono essere costruiti in modo 
tale che il letame, lo strame o il foraggio degli animali non possano scolare 
o fuoriuscire dal veicolo durante il trasporto. 
3. Le modalità per l'autorizzazione del centri dove PUÒ essere effettuata la 
disinfezione e le procedure necessarie per garantire e verificare 11 rispetto 
delle disposizioni di cui al precedente paragrafo 2 sono stabilite secondo la 
procedura di cui all'articolo 12. 
- 6 -
Articolo 5 
1. GII animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva 
debbono essere accompagnati, durante li trasporto verso li luogo di 
destinazione, da un certificato sanitario conforme all'allegato F. Il 
certificato é costituito da un unico fog Ilo ed è provvisto di un numero di 
serie. Esso viene rilasciato il giorno dell'esame sanitario, perlomeno in una 
delle lingue ufficiali del paese di destinazione. Il certificato ha una 
validità di 10 giorni a decorrere dalla data dell'esame sanitario. Qualora 
Quest'ultimo venga eseguito dopo che l'animale ha lasciato l'azienda 
d'origine, come prevede il successivo paragrafo 2. Il certificato è valido 
per i 10 giorni successivi, ali'uscita dall'azienda di origine. 
2. L'esame sanitario ed il rilascio del certificato sanitario per uni 
animali possono essere effettuati nell'azienda di origine o presso il luogo 
di carico. In Quest'ultimo caso il veterinario ufficiale addetto alia 
certificazione deve essere In possesso del documento rilasciato dal 
veterinario ufficiale responsabile dell'azienda di origine, che consiste In 
un documento ufficiale contenente le informazioni necessarie oppure nel 
certificato di cui all'allegato F. con le sezioni A e B debitamente compilate 
e certificate. Il veterinario ufficiale responsabile dell'azienda d'origine 
deve inoltre indicare l'indirizzo di eventuali luoghi di soggiorno 
temporaneo, come ad esempio un mercato o un centro di raccolta autorizzati 
(parte C). 
3. Il veterinario ufficiale responsabile del luogo di soggiorno temporaneo 
certifica l'arrivo degli animali e. se del caso, compila II certificato 
Intracomunltario definitivo (allegato F. parte D). Qualora gli animali non 
facciano soggiorni temporanei, il certificato comunitario definitivo è 
compilato dal veterinario ufficiale responsabile dell'azienda d'origine. 
4. il veterinario ufficiale che compila l'allegato F. parte D è tenuto a 
registrare i movimenti nei sistema ANIMO. 
5. I luoghi di soggiorno temporaneo utilizzati negli scambi intracomunltarI. 
come ad esemplo mercati o centri di raccolta, debbono: 
- 7 -
a) essere sotto II controllo di un veterinario ufficiale che garantisce. In 
particolare, il rispetto delle disposizioni dell'articolo 4. paragrafi 1 
e 2 e che provvede alla certificazione di cui sopra. Le mansioni del 
veterinario ufficiale possono essere ulteriormente specificate mediante 
una decisione adottata secondo la procedura di cui all'articolo 12; 
b) essere situati In una zona non soggetta a divieto secondo la 
legislazione comunitaria: 
e) essere puliti e disinfettati prima dell'uso, secondo le disposizioni del 
veterinario ufficiale responsabile del locali: 
d) essere stati designati dallo Stato membro di origine quali mercati e 
centri di raccolta autorizzati. Tale autorizzazione PUÒ limitarsi ad una 
determinata specie o agli animali da al levamento e da produzione oppure 
agli animali da macello. Lo Stato membro comunica alle autorità centrali 
competenti degli altri Stati membri e alla Commissione quali sono I 
mercati o i centri di raccolta autorizzati. 
6. Il luogo di soggiorno temporaneo PUÒ essere costituito anche da un mercato 
ufficialmente autorizzato e situato In uno Stato membro diverso dallo Stato 
membro di destinazione. In tal caso il certificato di cui all'allegato F 
(compresa la sezione D) deve essere compilato dal veterinario ufficiale 
responsabile dello Stato membro dal quale provengono gii animai I. Il 
veterinario ufficiale responsabile del mercato certifica la destinazione 
degli animali compilando un secondocertificato. come specificato 
nell'allegato F. annotandovi il numero di serie dell'originale e allegandolo 
all'originale oppure ad una copia del certificato originale. 
- 8 -
Articolo 6 
1. Gli animali d'allevamento o da produzione debbono rispondere, oltre al 
requisiti di cui agli articoli 3. 4 e 5. alle seguenti condizioni: 
debbono essere rimasti nell'azienda d'origine negli ultimi 30 giorni 
prima del carico o sin dalla nascita, se hanno meno di 30 giorni d'età. 
Il veterinario ufficiale deve accertarsi. In base all'identificazione 
ufficiale di cui all'articolo 3. paragrafo 2. lettera e) ed ai documenti 
ufficiali, che gli animali soddisfano tale condizione e. inoltre, che 
gli animali provengono dalla Comunità o sono stati importati da un paese 
terzo conformemente alla legislazione veterinaria comunitaria: 
gli animali importati da un paese terzo in uno Stato membro che non 
costituisce la destinazione definitiva devono essere trasportati nello 
Stato membro di destinazione quanto prima, accompagnati dal certificato 
rilasciato ai sensi dell'articolo 7 della direttiva 91/496/CEE del 
Consiglio. Arrivati a destinazione, questi animali sono soggetti, per 
quanto concerne ulteriori movimenti, alle disposizioni delia presente 
direttiva ed in particolare alla disposizione di cui al primo trattino. 
2. I bovini d'allevamento o da produzione debbono rispondere, oltre ai requisiti 
di cui agli articoli 3. 4 e 5. alle seguenti condizioni : 
a) provenire da un'azienda d'allevamento bovino ufficialmente indenne da 
tubercolosi e, qualora si tratti di animali di età superiore a sei 
settimane, aver reagito negativamente ad 
un'intradermotubercolinizzazione effettuata nei trenta giorni precedenti 
l'uscita dall'allevamento d'origine, conformemente alle disposizioni 
dell'allegato B, punto 32 d). 
L'intradermotubercolinizzazione non é necessaria qualora gli animali 
provengano da uno Stato membro o da una parte di uno Stato membro 
riconosciuti ufficialmente indenni da tubercolosi. 
- 9 -
b) Nel caso di animali non castrati, provenire da un'azienda d'allevamento 
bovino ufficialmente indenne da brucellosi e, se sono di età superiore a 
12 mesi, presentare un tasso bruceIlare inferiore a 30 unità 
internazionali (Ul) agglutinanti per millimetro alla sieroagglut inazione 
praticata nei 30 giorni precedenti l'uscita dall'allevamento di origine, 
conformemente alle disposizioni dell'allegato C, paragrafo A. 
La sIeroagglut inazione non é necessaria se gli animali provengono da uno 
Stato membro o da una parte di Stato membro riconosciuti ufflclalmente 
Indenni da brucellosi. 
e) provenire da un'azienda indenne da Ieucosi bovina enzootica ai sensi 
del l'articolo 2, lettera j). 
d) non entrare mai in contatto, dal momento in cui lasciano l'azienda di 
origine sino all'arrivo a destinazione, con animali che soddisfano 
solamente le condizioni di cui al seguente paragrafo 3. 
3. I bovini da macello debbono, oltre a rispondere al requisiti d I cu I ag 11 
articoli 3. 4 e 5. provenire da allevamenti ufficialmente indenni da 
tubercolosi, indenni da Ieucosi bovina enzootica e. se si tratta di bovini 
non castrati, ufficialmente indenni da brucellosi. 
Articolo 7 
Gli animali da macello che, non appena arrivati nel paese di destinazione, sono 
stati condotti in un macello, devono esservi macellati il più rapidamente 
possibile, conformemente ai requisiti di polizia sanitaria. 
Gli animali da macello che, non appena arrivati nello Stato membro di 
destinazione, sono stati condotti in un mercato la cui regolamentazione prevede, 
ai termine del mercato, l'uscita di tutti gli animali verso un macello 
autorizzato a tal fine dall'autorità centrale competente, debbono essere 
macellati in detto macello al massimo cinque giorni dopo il loro arrivo sul 
mercato.__ 
- 10 -
Articolo 9 
Chiunque sospetti la presenza di una delle malattie elencate nell'allegato E. 
parte I ne Informa quanto prima l'autorità competente e. se del caso, il 
proorietarlo o l'al lavatore deal I animali. 
Ciascuno Stato membro comunica annualmente alla Commissione, entro il 31 marzo, 
le informazioni dettagliate relative alla presenza di tubercolosi, brucellosi e 
Ieucosi bovina enzootica sul suo territorio durante il precedente anno di 
calendario nonché, per ogni malattia. Il numero di allevamenti che rientrano In 
ciascuna categoria di qualifica e le informazioni sul programmi di monitoraggio o 
di eradicazione in corso nelle singole regioni. Il contenuto e la forma delie 
informazioni richieste sono stabiliti dalla Commissione. La Commissione presenta 
queste informazioni agli Stati membri nell'ambito del comitato veterinario 
permanente e PUÒ servirsene in particolare per quanto concerne le decisioni di 
cui agi I al legati A e D. 
Art icolo 9 
1. Qualora uno Stato membro proponga, per tutto il suo territorio o parte di 
esso, un programma nazionale obbligatorio di lotta contro una delle malattie 
contagiose elencate nell'allegato E. parte II. esso può sottoporre alla 
Commissione il suddetto programma, precisando in particolare: 
la distribuzione della malattia sul suo territorio, 
la motivazione del programma, in base alla gravità della malattia e al 
probabile rapporto cost I/benefici del programma stesso, 
la zona geografica in cui il programma sarà applicato, 
le varie categorie di qualifica applicabili alle aziende, gli standard 
da conseguire per ciascuna categoria e i metodi di prova da utilizzare, 
- 11 -
le procedure di monitoraggio del programma, I cui risultati debbono 
essere trasmessi perlomeno annualmente alla Commissione. 
le misure da adottare qualora, per un qualsiasi motivo, un'azienda perda 
la propria qualIf Ica, 
le misure da adottare qualora le prove effettuate conformemente alle 
disposizioni del programma diano risultati positivi. 
2. La Commissione esamina i programmi comunicati dagli Stati membri. I programmi 
di cui al paragrafo 1 possono essere approvati, In osservanza dei criteri 
indicati al paragrafo 1, secondo la procedura di cui all'articolo 12. Al 
tempo stesso o al più tardi tre mesi dopo l'approvazione dei programmi sono 
precisate, secondo la stessa procedura, le garanzie complementari, generali o 
limitate, che possono essere richieste negli scambi intracomunltari. Tali 
garanzie debbono essere ai massimo equivalenti a quelle che lo Stato membro 
prevede nell'ambito nazionale. 
3. I programmi presentati dagli Stati membri possono essere modificati o 
completati secondo la procedura di cui all'articolo 12. Secondo la stessa 
procedura possono essere approvate modifiche o integrazioni dei programmi già 
approvati o delle garanzie definite conformemente al paragrafo 2. 
Articolo 10 
1. Se uno Stato membro ritiene che il proprio territorio sia indenne, totalmente 
o in parte, da una delle malattie elencate nell'allegato E. parte li. esso 
presenta alla Commissione la documentazione giustificativa appropriata, 
precisando in particolare: 
la natura della malattia e la cronistoria della sua comparsa sul proprio 
territor io, 
- 12 -
I risultati delle prove di controllo basate su indagini sierologiche, 
microbiologiche, patologiche o epidemiologiche e sul fatto che la 
malattia deve essere obbligatoriamente dichiarata alle competenti 
autorità, 
il periodo durante il quale é stato effettuato il controllo, 
eventualmente il periodo durante il quale é stata vietata la 
vaccinazione contro la malattia e la zona geografica interessata dal 
divieto, 
le misure previste per controllare l'assenza della malattia. 
2. La Commissione esamina la documentazione presentata dagli Stati membri. Le 
garanzie complementari, generali o limitate, che possono essere richieste 
negli scambi intracomunltari, possono essere precisate secondo la procedura 
di cui all'articolo 12. Tali garanzie devono essere al massimo equivalenti a 
quelle applicate dallo Stato membro nell'ambito nazionale. 
3. Lo Stato membro interessato comunica alla Commissione qualsiasi cambiamento 
nelle informazioni relative alla malattia di cui al paragrafo 1, in 
particolare per quanto concerne nuovi focolai della malattia. Alla luce di 
tali comunicazioni, le garanzie definite conformemente al paragrafo 2 possono 
essere modificate o soppresse secondo la procedura di cui all'articolo 12. 
Articolo 11 
Gli allegati della presente direttiva possono essere modificati secondo la 
procedura di cui all'articolo 12. 
In deroga alle disposizioni del la presente direttiva é possibile stabilire, 
secondo la procedura di cui all'articolo 12. condizioni specifiche per gli scambi 
di animali destinati a fini speciali. In particolare a mostre. 
- 13 -
Articolo 12 
1. Nei casi in cui si fa riferimento alla procedura definita nel presente 
articolo, Il comitato veterinario permanente istituito con decisione del 
Consiglio del 15 ottobre 1968, in appresso denominato "comitato", é 
immediatamente consultato dal presidente, su iniziativa di quest'ultimo o su 
richiesta di uno Stato membro. 
2. In seno al comitato, ai voti degli Stati membri é attribuita la ponderazione 
di cui all'articolo 148, paragrafo 2 del trattato. Il presidente non 
partecipa alla votazione. 
3. Il rappresentante della Commissione presenta un progetto delle misure da 
adottare. Il comitato esprime il proprio parere su tali misure entro un 
termine che il presidente può fissare in base all'urgenza dei problemi in 
esame. Esso si pronuncia alla maggioranza di 54 voti. 
4. La Commissione adotta le misure e ne assicura l'immediata applicazione, se 
sono conformi al parere del comitato. Se non sono conformi al parere del 
comitato o in mancanza di un parere, la Commissione presenta senza indugio al 
Consiglio una proposta relativa alle misure da adottare. 
Il Consiglio adotta dette misure a maggioranza qualificata. 
Se il Consiglio non procede all'adozione di misure entro tre mesi dalla data di 
presentazione del la suddetta proposta, la Commissione adotta le misure proposte 
e ne assicura l'immediata applicazione. 
Articolo 13 
1. Nei casi in cui si fa riferimento alla procedura definita nel presente 
articolo, il comitato veterinario permanente istituito con decisione del 
Consiglio del 15 ottobre 1968, in appresso denominato "comitato", é 
immediatamente consultato dal presidente, su iniziativa di quest'ultimo o su 
richiesta di uno Stato membro. 
- 14 -
2. In seno al comitato, ai voti degli Stati membri é attribuita la ponderazione 
di cui all'articolo 148, paragrafo 2 del trattato. Il presidente non 
partecipa alla votazione. 
3. Il rappresentante della Commissione presenta un progetto delle misure da 
adottare. Il comitato esprime II proprio parere su tali misure entro due 
giorni. Esso si pronuncia alla maggioranza di 54 voti. 
4. La Commissione adotta le misure e ne assicura l'immediata applicazione, se 
sono conformi al parere del comitato. Se non sono conformi al parere del 
comitato o in mancanza di un parere, la Commissione presenta senza indugio ai 
Consiglio una proposta relativa alle misure da adottare. 
Il Consiglio adotta dette misure a maggioranza qualificata. Se il Consiglio non 
procede all'adozione di misure entro 15 giorni dalla data di presentazione della 
suddetta proposta, la Commissione adotta le misure proposte e ne assicura 
l'immediata applicazione. 
Articolo 14 
Le norme stabilite dalla direttiva 90/425/CEE del Consiglio, del 26 giugno 1990, 
relativa ai controlli veterinari e zootecnici applicabili negli scambi 
intracomunltari di taluni animali vivi e prodotti di origine animale, nella 
prospettiva della realizzazione del mercato interno, modificata da ultimo dalla 
direttiva 92/60/CEE del Consiglio, del 30 giugno 1992 <10>, si applicano in 
particolare ai controlli all'origine, all'organizzazione e alle conseguenze dei 
controlli a carico del paese di destinazione, nonché alle misure di salvaguardia 
da attuare. 
Articolo 15 
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva. 
(10) GU n. L 268 del 24.9.1992, pag. 75. 
AS -
ALLEGATO A 
I. AZIENDA DI ALLEVAMENTO BOVINO UFFICIALMENTE INDENNE DA TUBERCOLOSI 
1. E' considerata ufficialmente Indenne da tubercolosi un'azienda di 
allevamento bovino nella quale: 
a) nessun animale presenta sintomi clinici di tubercolosi: 
b) tutti gli animali di età superiore a sei settimane hanno reagito 
negativamente ad almeno due intradermotubercolinizzazioni ufficiaii 
praticate secondo le disposizioni dell'allegato B. la prima sei mesi dopo 
I'eradicazione di qualsiasi eventuale infezione dall'azienda e la seconda 
sei mesi più tardi: qualora l'allevamento sia stato creato solamente con 
animali provenienti da allevamenti ufficialmente indenni da tubercolosi, 
la prima intradermotubercolinizzazione ha luogo perlomeno 60 giorni dopo 
la creazione dell'allevamento e la seconda non è richiesta; 
e) dopo l'esecuzione della prima prova di cui alla precedente lettera b).non 
é stato introdotto nell'azienda alcun bovino di età superiore a sei 
settimane. salvo qualora abbia reagito negativamente ad una 
IntradermotubercolInizzazione praticata e valutata secondo le 
disposizioni del l'ai legato B ed eseguita nei 30 giorni precedenti o 
nei 30 giorni successivi alla data d'introduzione dell'animale 
nel l'azienda. 
Questa prova non è richiesta negli Stati membri in cui la percentuale 
delle aziende d'allevamento bovino Infette da tubercolosi é inferiore 
al lo 0.2% oppure quando l'animale proviene da un'azienda ufficialmente 
indenne da tubercolosi. 
2• Un'azienda di allevamento bovino mantiene la qualifica di azienda 
ufficialmente indenne da tubercolosi se: 
a) continuano ad essere soddisfatte le condizioni di cui al paragrafo 1. 
lettere a) e e): 
b) tutti gli animali che entrano nell'azienda provengono da aziende 
ufficialmente indenni da tubercolosi: 
e) tutti gli animali dell'azienda, ad eccezione dei vitelli di meno di sei 
settimane d'età nati nell'azienda. sono sottoposti ad 
intradermotubercolinizzazioni di routine, praticate annualmente secondo 
ledi spos i z i on i de 11'a 11egato B. 
Se. In uno Stato membro o in una parte di Stato membro, tutte le aziende 
di allevamento bovino sono sottoposte alle operazioni ufficiali di lotta 
contro la tubercolosi la Commissione PUÒ tuttavia modificare, secondo la 
procedura di cui all'articolo 12 . la frequenza delle prove di routine 
secondo le seguenti modalità; 
qualora la percentuale delle aziende d'allevamento bovino infette da 
tubercolosi non risulti, in media superiore all'1%. in occasione degli 
ultimi due controlli annuali. l'Intervallo tra le tubercolInizzazioni di 
routine PUÒ essere portato a due anni: 
qualora la percentuale di aziende d'allevamento bovine Infette non 
risulti superiore, in media allo 0.2%. in occasione degli ultimi due 
controlli biennali, l'intervallo tra le tubercolinizzazioni di routine 
PUÒ essere portato a tre anni; 
qualora la percentuale di aziende d'allevamento bovino infette non 
risulti, in media superiore allo 0.1%. in occasione degli ultimi due 
controlli triennali, l'intervallo tra le tubercolinizzazioni di routine 
PUÒ essere portato a quattro anni e/o l'età degli animali sottoposti a 
queste prove PUÒ essere portata a 24 mesi. 
Sempre in base all'articolo 13. la Commissione PUÒ inoltre decidere di 
aumentare la frequenza delle tubercolinizzazioni di routine qualora 
cresca il livello di diffusione della malattia. 
3. La qualifica di azienda ufficialmente Indenne da tubercolosi è sospesa se: 
a) non sono soddisfatte le condizioni di cui al precedente paragrafo 2: 
b) la reazione di un animale ad una tubercol inizzazione di routine sia 
considerata positiva o venga diagnosticato un caso di tubercolosi nel 
corso dell'ispezione post mortem di routine: 
- -V f -
- 3 -
In tale caso la qualifica di "ufficialmente indenne" dev'essere sospesa 
fintanto che tu11 i i rimanenti animali, di età superiore alle sei 
settimane. abbiano reagito negativamente ad almeno due 
intradermotubercolinizzazioni ufficiali effettuati conformemente 
all'ai legato B. la prima delle quali almeno due mesi dopo l'eliminazione 
dell'animale dall'allevamento e la seconda ad almeno 42 giorni di 
distanza. 
Qualora la prova di routine specificata al precedente paragrafo 2. 
lettera e) non sia stata effettuata nei termini previsti, la qualifica 
dell'azienda non é sospesa a condizione che tale prova sia effettuata 
entro i 60 giorni successivi alla scadenza inizialmente prevista e che le 
prove successive avvengano secondo il calendario iniziale. 
e) l'azienda contiene animali aventi una qualifica indeterminata, secondo 
quanto specificato ali'al legato B. punto 32. In tal caso la qualifica 
dell'azienda rimarrà sospesa fino a quando non si sarà chiarita la 
s i tuaz i one dea li an i ma Ii. 
4. Uno Stato membro o una parte di Stato membro possono essere dichiarati. In 
base alla procedura di cui al l'articolo 12. ufficialmente Indenni da 
tubercolosi qualora soddisfino le seguenti condizioni: 
a) la percentuale delle aziende d'allevamento bovino infette non ha 
superato, per sei anni consecutivi, lo 0.01% e almeno il 99.9% delle 
aziende sono state dichiarate. durante un periodo di 10 anni, 
ufficialmente indenni da tubercolosi: 
b) esiste un sistema di Identificazione che consente di identificare gli 
allevamenti di origine e di transito per ciascun bovino; 
e) tutti i bovini macellati sono sottoposti ad un'ispezione post mortem 
effettuata da un veterinario ufficiale: 
d) tutti i casi sospetti di tubercolosi vengono opportunamente indagati, 
avendo cura di risa lire e di controllare gli eventuali allevamenti di 
origine o di transito e di effettuare tutti gli esami di laboratorio 
necessari. In attesa dei risultati di questi esami, la qualifica di 
ufficialmente indenne da tubercolosi degli allevamenti d'origine o di 
transito è sospesa sino al momento in cui gli esami clinici o di 
laboratorio oppure le tubercolinizzazioni abbiano escluso la presenza 
della tubercolosi dei bovini. 
- v> 
5. Lo Stato membro o una parte dello Stato membro mantengono la qualifica di 
ufficialmente indenni da tubercolosi se: 
a) continuano ad essere rispettate le condizioni del precedente paragrafo 
lettere a), b). e) e d): 
b) in presenza di un caso di tubercolosi confermato, viene ritirata la 
qualifica di ufficialmente Indenne da tubercolosi all'azienda di origine 
e di transito: 
e) la qualifica di ufficialmente Indenne da tubercolosi delle aziende nelle 
quali é stata confermata tale malattia é ritirata sin quando: 
- tutti gli animali considerati infetti siano stati macellati 
- siano stati disinfettati I locali e gli attrezzi di lavoro 
- tutti i restanti bovini di età superiore alle sei settimane abbiano 
reagito negativamente ad almeno due intradermotubercolinizzazioni 
ufficiali praticate secondo le disposizioni del l'ai legato B. la prima 
almeno sei mesi dopo la rimozione degli animaiiinfetti e la seconda a 
sei mesi di distanza. 
6. Qualora sussista motivo di ritenere che, per quanto concerne la tubercolosi, 
vi siano cambiamenti significativi nella situazione di uno Stato membro o di 
una parte di Stato membro riconosciuti ufficialmente indenni da tubercolosi 
la Commissione PUÒ decidere. In base alla procedura di cui all'articolo 13. 
di sospendere o di revocare tale qualifica e chiedere che vengano eseguite 
tubercolinizzazioni di routine secondo quanto prevede II precedente 
paragrafo 2. lettera e). 
- A^ -
I I• AZIENDE DI ALLEVAMENTO BOVINO UFFICIALMENTE INDENNI DA BRUCELLOSI E 
INDENNI DA BRUCELLOSI 
Ai fini del presente allegato A. Il si Intende per "bovini" tutti gli animali 
della specie bovina, ad eccezione del maschi castrati prima dei quattro mesi 
d'età. 
1• Un'azienda di allevamento bovino è ufficialmente indenne da brucellosi se: 
a) non contiene bovini vaccinati contro la brucellosi, salvo qualora si 
tratti di femmine vaccinate almeno tre anni prima: 
b) tutti i bovini sono immuni da sintomi clinici di brucoIossi da almeno sei 
mes i : 
e) tutti i bovini di età superiore ai 12 mesi sono stati sottoposti, con 
esito negativo^ ad una delle seguenti serie di prove, eseguite 
conformemente all'allegato C; 
i ) due sieroagglut inazioni. praticate ad un intervallo superiore a tre 
mesi e inferiore a dodici mesi 
i i) tre prove dell'anello (ring test), effettuate a tre mesi di 
intervallo eseguite non meno di sei settimane dopo, da una 
sieroagglut inazione 
Iii) due prove all'antigene di Brucella tamponato, ad un intervallo 
superiore a tre mesi ed inferiore a dodici mesi 
iv) due prove di mlcroagglutInazione, ad un intervallo superiore a tre 
mesi e inferiore a dodici mesi. 
2. Un'azienda di allevamento bovino mantiene la qualifica di ufficialmente 
Indenne da bruce11os i se : 
a) viene effettuata annualmente, con esito negativo, una delle seguenti 
serie di prove, conformemente alle disposizioni dell'allegato C: 
i) tre prove dell'anello, effettuate ad intervalli di almeno tre mesi. 
-£o 
11) tre saggi ELISA sul latte, effettuati ad intervalli di almeno tre 
mesi. 
Hi) due prove dell'anello, effettuate ad un Intervallo di almeno tre 
mesi e seguite, non meno di sei settimane dopo, da una prova 
sierologica 
jv) due saggi ELISA sul latte effettuati ad un Intervallo di almeno tre 
mesi e seguiti, non meno di sei settimane dopo, da una prova 
sierologica 
v) due prove sierologiche, effettuate ad un intervallo non Inferiore a 
tre mesi e non superiore a sei mesi. 
Per uno Stato membro o per una parte di Stato membro non ufficialmente 
indenni da brucellosi, ma in cui tutte le aziende di allevamento bovino 
sono sottoposte ad operazioni ufficiali di lotta contro la brucellosi, la 
Commissione PUÒ tuttavia modificare, in base alla procedura di cui 
all'articolo 12 . la frequenza delle prove di routine secondo le modalità 
sequent i: 
- se le percentuale delle aziende infette non supera l'1%. PUÒ essere 
sufficiente effettuare annualmente due prove dell'anello o due saggi 
ELISA sul latte ad un Intervallo di almeno tre mesi, oppure una prova 
sierologica; 
- se almeno il 99.8% delle aziende di allevamento bovino sono state 
riconosciute, per un periodo minimo di quattro anni, ufficialmente 
indenni da brucellosi, l'intervallo tra i controlli può essere portato 
a due anni ed i controlli debbono essere effettuati ricorrendo ad una 
delle prove sierologiche di cui al successivo paragrafo 7. lettera a). 
b) tutti i bovini che entrano nell'azienda provengono da aziende 
riconosciute come ufficialmente indenni da brucellosi e. nel caso di 
bovini di età superiore ai 12 mesi, essi presentano un tasso brucellare 
infer lore a 30 ui agglutinati per millilitro se sottoposti ad una 
sieroagglut inazione praticata, secondo le disposizioni dell'allegato C. 
nei 30 giorni precedenti l'Introduzione nell'azienda. 
-&.A 
La sieroagglutinazione summenzionata non é tuttavia richiesta negli Stati 
membri. o nel le regioni di Stati membri in cui la percentuale di aziende 
di allevamento bovino infette da brucellosi non supera, da almeno due 
anni, lo 0.2% oppure qualora gli animali provengano da un'azienda 
riconosciuta ufficialmente Indenne da brucellosi all'Interno dello stesso 
Stato membro o della stessa regione e non siano entrati in contatto, 
durante il trasporto, con bovini aventi una Qualifica inferiore. 
e) In deroga al precedente paragrafo 2 . lettera b). i bovini provenienti da 
un'azienda ufficialmente Indenne da brucellosi purché abbiano 
perlomeno 18 mesi di età e siano stati vaccinati contro la brucellosi da 
più di un anno. 
Questi animali debbono presentare. nei 30 giorni precedenti 
all'introduzione, un tasso brucellare inferiore a 30 ui agglutinati per 
millilitro ed una reazione negativa di fissazione del complemento, 
entrambe le prove effettuate secondo le disposizioni dell'allegato C. 
Nel caso in cui, in base alle suddette disposizioni, un bovino 
proveniente da un'azienda indenne da brucellosi venga introdotto in 
un'azienda ufficialmente indenne da brucellosi, quest'ultima sarà 
tuttavia considerata come indenne da brucellosi per i due anni successivi 
al la data d'introduzione dell'animale in questione. 
3. La qualifica di ufficialmente indenne da brucellosi di un'azienda è sospesa 
o ritirata se: 
a) non sono rispettate le condizioni di cui ai precedenti 
paragrafi 1 e 2 oppure 
b) si sospetta, in base a prove di laboratorio o per motivi clinici, che uno 
o più animali siano malati di brucellosi. 
Se si sospetta che uno o più animali di un'azienda ufficialmente indenne da 
brucellosi siano malati di brucellosi, la qualifica dell'azienda può essere 
sospesa piuttosto che ritirata, purché l'animale o gli animali vengano 
immediatamente distrutti o isolât i. 
-U'ì 
Se l'animale é stato distrutto, la sospensione PUÒ essere revocata purché 
tutti i bovini dell'azienda con un'età superiore a 12 mesi, sottoposti a due 
sieroagglutinazioni effettuate conformemente alle disposizioni dell'allegato 
C presentino un tasso brucellare inferiore a 30 ui agglutinanti per 
millilitro. La prima prova é effettuata non prima di 30 giorni dopo la 
rimozione dell'animai e e la seconda perlomeno 60 giorni dopo. 
Se l'animale é stato isolato, esso PUÒ essere reintrodotto nell'azienda, con 
il r ipr ist ino del la qualifica dell'azienda, purché presenti, ad una 
successiva sieroagglutinazione, un tasso brucellare inferiore a 30 ul 
agglutinanti per millilitro ed abbia reagito negativamente alla prova di 
fissazione del complemento: le prove debbono essere eseguite secondo le 
disposizioni dell'al legato C. 
Se. in seguito a prove di laboratorio o a indagini epidemiologiche, é 
confermata la presenza di brucellosi in un'azienda, la qualifica di tale 
azienda non sarà ripristinata fin quando tutte le bovine gravide al momento 
della comparsa della malattia non abbiano reagito negativamente alle prove 
summenzionate, l'ultima delle quali eseguita non prima di 21 giorni dopo il 
parto. 
4. Un'azienda di allevamento bovino é considerata indenne da brucellosi se 
soddisfa le condizioni di cui al paragrafo 1. lettera a) b) e e), tranne per 
il fatto che: 
i) le femmine possono essere vaccinate: 
- entro i primi sei mesi d'età con vaccino vivo (ceppo 19) o con altri 
vaccini autorizzati secondo la procedura di cui 
all 'art ico io 12 oppure 
- entro i primi 15 mesi di età, con vaccino ucciso con adluvante 
45/20. controllato e riconosciuto ufficialmente; 
i i ) i bovini di età inferiore a 30 mesi che sono stati vaccinati con 
vaccino vivo (ceppo 19) possono presentare, alla sieroagglutinazione, 
un tasso brucellare superiore a 30 ui agglutinanti per millilitro, ma 
inferiore a 80 ui agglutinanti per millilitro, sempreché presentino. 
al la reazione di fissazione del complemento, un tasso inferiore 
a 30 unità CEE, se si tratta di femmine vaccinate da meno di 12 mesi, o 
un tasso inferiore a 20 unità CEE in tutti gli altri casi. 
- ï \ 
NI) oltre al le prove e lencate al paragrafo 1. lettera e) sono autorizzate 
anche le sequent i serie di prove, al fine di conseguire la qualifica di 
"indenne da brucellosi": 
a) due prove all'antigene di Brucella tamponato eseguite ad un 
intervallo superiore a tre mesi e inferiore a 12 mesi 
b) due prove di mieroagglut Inazione eseguite ad un intervallo superiore 
a tre mesi e inferiore a 12 mesi. 
Le prove sono eseguite secondo le disposizioni dell'allagato C. 
5. Un'azienda di allevamento bovino mantiene la qualifica di indenne da 
brucellosi se: 
i ) é sottoposta a una delle serie di prove elencate al precedente 
paragrafo 2. lettera a) 
•i) i bovini che arrivano nell'azienda soddisfano ai requisiti elencati al 
precedente paragrafo 2. lettera b) oppure 
- provengono da aziende Indenni da brucellosi e. se si tratta di 
bovini di età superiore a 12 mesi, presentano, nei 30 giorni 
precedent i I'in troduzione nell'azienda. un tasso brucellare 
inferiore a 30 ui agglutinanti per millilitro alla 
sieroagglutinazione e una reazi one negativa di fissazione del 
complemento, conformemente alle disposizioni dell'allegato C oppure. 
- provengono da aziende indenni da brucellosi, hanno un'età inferiore 
a 30 mesi e sono stati vaccinati con vaccino vivo (ceppo 19); essi 
possono presentare un tasso brucellare superiore a 30 ui 
agglutinanti per millilitro, ma inferiore a 80 ui agglutinanti per 
millilitro, sempreché presentino, alla reazione di fissazione del 
complemento, un tasso inferiore a 30 unità CEE se si tratta di 
femmine vaccinate da meno di 12 mesi ed un tasso inferiore 
a 20 unità CEE in tutti gli altri casi. 
6. La qualifica di azienda indenne da brucellosi PUÒ essere sospesa o ritirata 
se: 
a) non sono rispettate le condizioni di cui ai precedenti paragrafi 4 e 5 
b) si sospetta, in seguito a prove di laboratorio o per motivi clinici, che 
uno o più bovini di età superiore al 30 mesi siano malati di brucellosi. 
Se. in un'azienda qualificata Indenne da brucellòsi, si sospetta che uno o 
più bovini siano malati di brucellosi, la qualifica dell'azienda PUÒ essere 
sospesa, invece che ritirata, purché l'animale o gli animali siano 
immediatamente distrutti o Isolati. 
Nel caso in cui l'animale sia stato distrutto, la sospensione può essere 
revocata se tutti i bovini dell'azienda con più di 12 mesi d'età, sottoposti 
a due sieroagglutinazioni secondo le disposizioni del l'ai legato C . 
presentano un tasso brucellare inferiore a 30 ui agglutinanti per 
millilitro. La prima prova dev'essere eseguita non prima di 30 giorni dopo 
la rimozione dell'animale e Ia seconda ad almeno 60 giorni di distanza. 
Nel caso in cui l'animale sia stato isolatp. esso può essere re introdotto 
nell'azienda, con il ripristino della qualifica dell'azienda, con il 
ripristino della qualifica dell'azienda stessa, purché ad una successiva 
sieroagglutinazione presenti un tasso brucellare inferiore a 30 ui 
agglutinanti per millilitro e reagisca negativamente ad una prova di 
fissazione del complemento: le prove debbono esse re eseguite conformemente 
alle disposizioni dell'allegato C. 
Se. in seguito a prove di laboratorio o a indagini epidemiologiche, viene 
confermata la brucellosi in un'azienda, la Qualifica di tale azienda non 
sarà ripristinata sin quando tutte le bovine gravide al momento della 
comparsa della malattia abbiano reagito negativamente alle prove suddette, 
l'ultima delle quali eseguita non prima di 21 giorni dopo il parto. 
7. Una regione di uno Stato membro PUÒ essere dichiarata ufficialmente Indenne 
da brucellosi secondo la procedura di cui all'articolo 12 se soddisfa le 
seguenti condizioni: 
a) non si é verificato, da almeno tre anni, alcun caso di aborto dovuto alla 
brucellosi e perlomeno II 99.8% delle aziende sono state dichiarate, 
da 10 anni. uff lei a Imente Indenni da brucellosi; 
b) esiste un sistema d'identificazione che consente di identificare gli 
allevamenti di origine e di transito per ogni bovino. 
8. Fatte salve le disposizioni di cui al seguente paragrafo 9. una regione 
dichiarata ufficialmente indenne da brucellosi mantiene tale qualifica se 
tutti i bovini di età superiore al 24 mesi sono sottoposti, oonl tre anni, a 
due prove dell'anello oppure ad una prova sierologica. In caso di reazione 
positiva si applicano le disposizioni del precedente paragrafo 6. 
9. Una regione dichiarata ufficialmente indenne da brucellosi deve notificare 
tutti i casi di brucellosi alla Commissione. 
Quest'ultima PUÒ, in base alla procedura di cui all'articolo 13 . proporre 
di sospendere o di revocare la Qualifica e chiedere che vengano effettuate 
le prove di routine relative alla brucellosi secondo uno dei programmi 
esposti al precedente paragrafo 2. 
10. Uno stato membro PUÒ essere dichiarato. In base alla procedura di cui 
all'articolo 12. ufficialmente Indenne da brucellosi se risponde alle 
seguenti condizioni: 
a) non si é verificato, da almeno tre anni, alcun caso di aborto dovuto a 
brucellosi e almeno il 99.8% delle aziende sono state dichiarate, da 10 
anni, ufficialmente Indenni da brucellosi; 
b) esiste un sistema d'identificazione che consente di identificare gli 
allevamenti di origine e di transito per ogni bovino. 
-^é 
11. Uno Stato membro dichiarato ufficialmente indenne da brucellosi mantiene 
tale qualifica se: 
- ogni bovino sospetto di aver contratto la brucellosi é not I ficaio 
all'autorità competente e sottoposto agli esami ufficiali per la 
brucellosi, che devono includere almeno due prove sierologiche del 
sangue, compresa la prova di fissazione del complemento, nonché un esame 
microbiologico dei campioni necessari prelevati in caso di aborto: 
- sino a quando permane il sospetto d'infezione. ossia sino a quando le 
prove di cui al primo trattino abbiano fornito risultati negativi, é 
sospesa la qualifica di ufficialmente indenne da brucellosi 
dell'allevamento di origine o di transito dell'animale sospetto; 
- in caso di reazione positiva si applicano le disposizioni del precedente 
paragrafo 6. 
12. Uno Stato membro dichiarato ufficialmente indenne da brucellosi notifica 
tutti i casi di brucellosi alla Commissione. La Commissione può, in base 
alla procedura di cui al l'arti colo 13 . proporre I a sospensione o la revoca 
della qualifica e chiedere che vengano eseguite le prove di routine per la 
brucellosi, confermemente a uno dei programmi esposti al precedente 
paragrafo 2. 
13. a) Al fini del presente allegato A. Il si intende per prova sierologica una 
prova di sieroagglutinazione, una prova all'antigene di Brucella 
tamponato, una prova di flssazione del complemento, una prova di 
plasmoagglut inazione, una prova dell'anello di latte su plasma sanguigno, 
una prova di microagglutinazione o saggio s ingoio ELISA su sangue, 
secondo la descrizione di cui all'allegato C. 
b) Se le prove dell'anello vengono effettuate su campioni di latte sfuso, il 
numero delle prove indicato nel presente allegato dev'essere raddoppiato 
e gli intervalli tra le prove dimezzati. 
-A/ 
ALLEGATO B 
(Norme per la fabbricazione e l'utilizzazione delle tubercolIne bovine ed 
aviarle) 
1. Le tubercolinizzazioni controllate ufficialmente devono essere effettuate 
mediante tubercolIne PPD o tubercoline preparate sinteticamente e 
concentrate a caldo ("tubercoline sintetiche"). 
2. Gli standard di fabbricazione per II controllo delle tubercoline PPD 
bovine e delle tubercoline cosiddette "sintetiche" devono essere titolati 
in unità tubercolIniche comunitarie (UTC) mediante prove biologiche 
secondo le norme CEE per la tubercolIna standard CEE. 
3. Gli standard di fabbricazione per il controllo delle tubercoline aviarie 
devono essere espressi in unità internazionali e titolati per via 
biologica, secondo lo standard CEE della tubercolina PPD aviaria. 
4. Lo standard CEE per la tubercol ina PPD bovina é fornito dal "Centraal 
Diergeneeskundig Instituut", Afde ling Rotterdam, Paesi Bassi. 
5. Lo standard CEE per la tubercolina "sintetica" bovina é fornito 
dal I'"Institut Pasteur" di Parigi, Francia. 
6. Lo standard CEE per la tubercolina aviaria é fornito dal "Central 
Veterinary Laboratory", Weybridge, Surrey, Regno Unito. 
7. Le tubercoline bovine devono essere preparate con uno dei ceppi di 
Mycobacterium bovi s indicati qui di seguito: 
a) AN5; 
b) Vallée. 
8. Le tubercoline aviarie devono essere preparate con uno dei ceppi di 
Mycobacterium avium indicati qui di seguito: 
a) D4ER; 
b) TB56. 
9. 11 pH delle tubercoline deve essere compreso fra 6,5 e 7,5. 
10. Per quanto concerne l'aggiunta alle tubercolIne di conservanti 
antimicrobici o di altre sostanze, deve risultare dimostrato, a giudizio 
dell'istituto statale responsabile del controllo ufficiale della 
tubercolina, che tale aggiunta non altera l'innocuità né l'efficacia del 
prodotto. 
Le concentrazioni massime consentite per il fenolo e la glicerina sono le 
seguentI : 
a) fenolo: 0,5% M/v; 
b) gìicerina: 10% v/v. 
11. Superata con esito favorevole l'ultima prova di attività, le tubercoline, 
conservate a temperature comprese fra 2*C e 8*C ed al riparo dalla luce, 
rimangono valide per tutta la durata dei periodi sotto indicati: 
a) tubercoline PPD liquide: due anni, 
tubercoline PPD liofilizzate: otto anni; 
b) tubercoline "sintetiche" diluite: due anni. 
12. Nei rispettivi paesi, gli istituti statali sono incaricati del controllo 
ufficiale delle tubercoline: 
a) Germania: Paul-Ehrlich Institut, Frankfurt/Main; 
b) Belgio: Institut d'hygiène et d'épidémlologie, rue J. Wytsman 14, 
B-1050 Bruxelles; 
c) Francia: Laboratoire national des médicaments vétérinaires, 
Fougères; 
d) Granducato 
del 
Lussemburgo: Istituto del paese fornitore; 
e) Italia: Istituto superiore di sanità, Roma; 
f) Paesi Bassi: Centraal Diergeneeskundig Instituut, Af de ling Rotterdam-, 
g) Danimarca: Statens Veterinaere Serum laboratorium, Kobenhavn V; 
h) Irlanda: Istituto del paese fornitore; 
i) Regno Unito: The Central Veterinary Laboratory, Weybrldge, Surrey; 
j) Grecia: KxnVlQTplKÓV IVOTITOÓTOV AOIUWOÓV Kai flQpQOlTlKt&V 
NoonuQTttv. lepâ oôoç 75. AfiiWai 301. 
k) Spagna Laboratorio de Sani dad y Produce!òn Animal de Granada; 
I) Portogallo: Laboratório Nacional de Investigaçâo Veterinâria, Lisboa. 
13. Ciascuna partita di tubercoline infialate e pronte per l'uso dev'essere 
oggetto di un controllo ufficiale. 
14. Le tubercoline devono essere controllate con metodi biologici e chimici. 
15. Le tubercoline devono essere sterili. Le prove di sterilità devono essere 
effettuate secondo le norme della farmacopea europea. 
16. Le tubercoline devono risultare esenti da proprietà tossiche od irritanti 
in base a una prova effettuata secondo le norme della farmacopea europea. 
17. Le tubercoline devono essere sottoposte a un'analisi chimica per 
determinare l'esatta concentrazione della glicerina e/o del fenolo, nonché 
la concentrazione di altri eventuali conservanti. 
18. Una prova di non sensibilizzazione alla tubercolina deve essere effettuata 
secondo le norme della farmacopea europea. 
- V; 
19. L'attività delle tubercoline deve essere valutata con metodi biologici, 
applicabili alle tubercolIne PPD e a quelle "sintetiche" e basati sul 
confronto delle tubercoline in esame con tubercoline standard. 
20. Il contenuto proteico delle tubercoline PPD (tubercoioproteina) si ottiene 
secondo il metodo di Kjeldahl. Il fattore di conversione dell'azoto in 
tubercoloproteine è 6,25. 
21. Lo standard CEE per la tubercolina "sintetica" bovina ha un'attività di 
65.000 unità tubercoliniche comunitarie (UTC) provvisorie per mi, e viene 
distribuito in fiale da 5 mi. 
22. Lo standard CEE per la tubercolina PPD bovina ha un'attività di 50.000 UTC 
per mg di PPD, e viene distribuito allo stato liofilizzato in fiale 
contenenti 1,8 mg di PPD (0,00002 mg di PPD corrispondono cioè ad 1 unità 
tubercolinica comunitaria di attività). 
23. La tubercolina PPD aviaria della norma CEE ha un'attività di 50.000 unità 
internazionali (UI) per mg di derivato proteico purificato essiccato e 
viene distribuita allo stato liofilizzato in fiale contenenti 10 mg di PPD 
più 26,3 mg di sali (0,0000726 mg dello standard corrispondono cioè ad 1 
unità internazionale di attività). 
24. Le tubercoline che i fabbricanti presentano per il controllo agli istituti 
statali di cui al paragrafo 12 devono essere state oggetto di una prova 
biologica di attività in paragone con gli opportuni standard elencati ai 
paragrafi 2 e 3. 
25. a) Prove di attività su cavie 
La prova dev'essere effettuata su cavie albine di peso 
fra 400 e 600 g. Tali cavie devono essere in buona salute al momento 
dell'inoculazione della tubercolina. Per ciascuna prova vanno 
impiegate non meno di otto cavie. La prova dev'essere effettuata a non 
meno di un mese di distanza dalla sensibilizzazione. 
-HA-
aa) Per il controllo delle tubercoline bovine, le cavie devono essere 
sensibilizzate con un dei metodi seguenti: 
1. iniezione di Mycobacterium bovi s del ceppo AN5, ucciso 
col calore, in coadiuvante oleoso; 
2. iniezione di Mycobacterium bovis del ceppo AN5 vivo in 
emulsione salina fisiologica; 
3. Iniezione di vaccino BCG. 
bb) Per il controllo delle tubercoline aviarie, le cavie devono essere 
sensibilizzate mediante inoculazione di 2 mg di micobatteri 
tubercolari del tipo aviario, uccisi col calore, sospesi in 0,5 mi 
di paraffina liquida sterile, ovvero mediante inoculazione di 
micobatteri tubercolari vivi del tipo aviario in emulsione salina 
fisiologica. Il ceppo da impiegare è quello del tipo aviario DA. 
ce) Qualunque tubercolina esaminata dev'essere titolata mediante 
inoculazione intradermica in paragone con l'opportuna tubercolina 
standard, impiegando gruppi di cavie oppurtunamente 
sens ibi 11 zzate. 
Le cavie devono essere tosate sui due fianchi. La prova deve 
essere effettuata confrontando le reazioni indotte da una serie di 
inoculazioni intracutanee di dosi da 0,2 mi al massimo di 
diluizioni della tubercolina standard in soluzione salina 
I soton Ica tamponata contenente lo 0,0005% di Tween 80, con una 
corrispondente serie di inoculazioni della tubercolina in esame. 
Le diluizioni devono essere preparate in serie geometrica ed 
essere iniettate nelle cavie secondo una distribuzione Irregolare 
in quadrato latino (otto iniezioni, da praticarsi in quattro punti 
su ciascun lato). Il diametro delle aree di reazione su ciascun 
lato deve essere misurato e registrato dopo 24-28 ore. 
Per ciascun campione di tubercolina sotto prova deve essere 
effettuata una valutazione dell'attività relativa e dei suoi 
limiti di affidabilità, basata su metodi statistici, impiegando 
come metametri I diametri delle aree di reazione ed I logaritmi 
delle dosi. L'attività della tubercolina bovina in esame è 
accettabile se, in base alla valutazione, ogni dose destinata ai 
bovini risulta contenere 2000 UTC (±25). L'attività di qualunque 
tubercolina in 
esame, deve essere espressa, secondo I casi, in unità 
tubercolini che comunitarie o in Ul/ml. 
b) Controllo dell'attività sui bovini 
Un controllo dell'attività delle tubercoline bovine può essere 
effettuato periodicamente su bovini infetti da tubercolosi per via 
naturale o artificiale. Dette prove di attività, da praticarsi su 
gruppi di bovini tubercolIt Ici, devono essere effettuate per 
inoculazione intradermica della tubercolina in esame in 4 o 6 punti, 
In paragone con l'opportuno standard; l'attività della tubercolina 
deve essere valutata con metodi statistici come nella prova su cavie. 
26. Per l'etichettatura dei contenitori e degli imballaggi delle tubercoline 
devono essere rispettate le seguenti norme: 
L'etichetta del contenitore e quella dell'imballaggio devono indicare: 
il nome del preparato, 
per I preparati liquidi, il volume totale del contenitore, 
il numero di unità comunitarie o di unità internazionali per ml o per 
mg, 
il nome del fabbricante, 
il numero della partita 
per i preparati liofilizzati, la natura e la quantità del liquido di 
ricosituzione. 
L'etichetta del contenitore o dell'imballaggio deve indicare: 
data di scadenza, 
condizioni di conservazione, 
denominazione e, se possibile, proporzione di ogni sostanza aggiunta, 
tipo di bacillo dal quale è stata ricavata la tubercolina. 
27. Dei laboratori comunitari designati conformemente alla procedura di cui 
all'articolo 12 verranno incaricati di controlli complementari delle 
tubercoline utilizzate nei vari Stati membri per assicurare che l'attività 
di ciascuna di queste tubercoline sia conforme a quella della 
corrispondente tubercolina standard comunitaria. Tali analisi devono 
essere effettuate su bovini tubercolit ici, su cavie opportunamente 
sensibilizzate e mediante appropriate reazioni chimiche. 
•-VS--
28. Sono riconosciute ufficialmente le seguenti tecniche di 
intradermotubercolinizzazione: 
a) intradermotubercolinizzazione unica: inoculazione singola di 
tubercolina bovina; 
b) intradermotubercolinizzazione comparativa: inoculazione simultanea 
delle due tubercoline (aviaria e bovina). 
29. La dose di tubercolina inoculata non deve essere inferiore: 
1. 2.000 UCT di tubercolina bovina; 
2. 2.000 UI di tubercolina aviaria. 
Il volume di ciascuna dose non deve superare 0,2 mi. 
30. La tubercolinizzazione deve essere effettuata inoculando la tubercolina, o 
le tubercoline, nella pelle del collo. I punti di inoculazione devono 
trovarsi al limite tra il terzo anteriore ed il terzo mediano del collo. 
Quando nello stesso animale vengono inoculate ambedue le tubercoline il 
punto di Inoculazione della tubercol Ina bovina a 12,5 cm al di sotto di 
una linea approssimativamente parallela a quella della spalla, o su 
diversi punti del collo; negli animali giovani, sul cui collo non vi è 
abbastanza spazio per effettuare le due inoculazioni a distanza 
sufficiente sullo stesso lato, ciascuna inoculazione va praticata su uno 
dei due lati del collo, in punti identici, al centro del terzo mediano del 
collo. 
31. Tecnica ed interpretazione delle reazioni di tubercolinizzazione: 
a) Tecnica: 
Tosare e pulire i punti di inoculazione. Prendere fra II pollice e 
l'indice una piega di pelle in ciascuna delle zone depilate, misurarne 
lo spessore con un calibro e annotarne il risultato. Introdure 
obliquamente negli strati più profondi della pelle, tenendo il taglio 
trasversale della punta rivolto verso l'esterno, un ago corto sterile, 
col legato ad 
- Vi-
una siringa graduata caricata con la tubercolina in esame. Iniettare 
la dose di tubercolina. L'inoculazione è avvenuta in modo corretto se 
la palpazione rivela un piccolo gonfiore, delle dimensioni di un 
pisello, in ciascun punto di di inoculazione. A distanza di 72 ore 
dall'inoculazione, misurare nuovamente lo spessore della piega cutanea 
in ciascun punto di inoculazione e annotarne il risultato. 
b) Interpretazione delle reazioni 
L'interpretazione delle reazioni deve essere fondata su osservazioni 
cliniche e sulla registrazione dell'aumento, o degli aumenti, dello 
spessore della piega cutanea nei punti di inoculazione, 72 dopo 
l'inoculazione della tubercolina o delle tubercoline. 
ba) Reazione negativa: si osserva solo un gonfiore circoscritto con 
aumento di spessore della piega cutanea non superiore a 2 mm, 
senza segni clinici, quali edema diffuso od esteso, essudazione, 
necrosi, dolore o infiammazione dei doti linfatici della regione o 
dei linfonodi. 
bb) Reazione dubbia: non si osservano segni clinici del tipo di quelli 
menzionati al punto ba), e l'aumento dello spessore della piega 
cutanea è superiore a 2 mm ed inferiore a 4 mm. 
be) Reazione positiva: si osservano segni clinici del tipo di quelli 
menzionati al punto ba), o si riscontra un aumento di 4 mm o più 
dello spessore della piega cutanea nel punto di Iniezione. 
32. interpretazione del le intradermotubercolinizzazioni ufficiali: 
a) intradermotubercolinizzazione singola: 
Positiva: reazione secondo la definizione del paragrafo 31 bb); 
Dubbia: reazione secondo la definizione del paragrafo 31 bb); 
Negativa: reazione secondo la definizione del paragrafo 31 ba). 
~'%^-
Gli animali per I quali la intradermotubercolInizzazione singola non 
dà esito conclusivo devono essere sottoposti ad un'altra prova a 
distanza di almeno 42 giorni. 
Gli animali che non risultano negativi a questa seconda prova devono 
essere ritenuti positivi. 
Gli animali che risultano positivi al I'intradermotubercolInizzazione 
singola possono essere sottoposti ad un'intradermotubercolIinizzazione 
comparativa. 
b) Intradermotubercolinizzazione comparativa per il riconoscimento degli 
allevamenti ufficialmente indenni da tubercolosi e per il mantenimento 
di tal qualif Ica: 
Positiva: reazione bovina positiva, superiore di oltre 4 mm alla 
reazione alla tubercolina aviaria, ovvero presenza di 
segnI clinici; 
Dubbia: reazione bovina positiva o dubbia, superiore da 1 a 4 mm 
alla reazione alla tubercolina aviaria, ed assenza di 
segni clinici. 
Negativa: reazione bovina negativa, ovvero reazione bovina positiva 
o dubbia, ma di intensità pari o inferiore ad una 
reazione positiva o dubbia alla tuebrcolina aviaria ed 
assenza di segni clinici in ambedue i casi. 
Gli animali per i quali I'intradermotubercolinizzazione comparativa 
non dà esito conclusivo devono essere sottoposti ad un'altra prova a 
distanza di almeno 42 giorni. Gli animali che non risultano negativi a 
questa seconda prova devono essere ritenuti positivi. 
e) Per gli allevamenti dove siano presenti animali per i quali si ritenga 
che: 
1. abbiano avuto una reazione dubbia ad una 
intradermotubercolinizzazione singola, 
*>6 
2. siano risultati positivi al I'IntradermotubercolInizzazione 
singola, ma che sono in attesa di un nuovo controllo per 
intradermotubercolinizzazione , 
3. abbiano avuto una reazione dubbia 
Intradermotubercolinizzazione comparativa, ad una 
/ la qualifica di "allevamento ufficialmente indenne da tubercolosi" 
può essere sospesa e gli animali dell'azienda esclusi dagli scambi 
intracomunltari fino al momento in cui sia chiarito lo stato degli 
animai I di cui sopra. 
d) Se gli animali devono essere sottopost in base alla legislazione 
comunitaria, a intradermotubercolinizzazione prima del trasporto, la 
prova deve essere interpretata in modo tale da escludere dagli scambi 
Intracomunltari tutti gli animali che mostrano un aumento dello 
spessore della piega cutanea superiore a 2 mm o la presenza di segni 
ci inicl. 
-"Vf 
ALLEGATO C 
BRUCELLOSI 
A. S i ero-aggI ut i naz i one 
1. Il siero agglutinante tipo deve essere conforme al Siro campione 
preparato dal Veterinary Laboratory Weybridge/Surrey, Inghilterra. 
L'ampolla deve contenere 1000 unità Internazionali (UI) agglutinanti 
provenienti dalla liofilizzazione di 1 mi di siero bovino. 
2. La fornitura del siero tipo deve essere assicurata dal 
BundesgesundheItsamt Ber 11no. 
3. Il tasso delle agglutine brucellar! di un siero deve essere espresso 
in unità internazionali per mi (ad esempio:siero X - 80 UI per mi). 
4. La lettura della siero-agglutinazione lenta in tubi deve avvenire al 
50% o al 75% di agglutinazione; l'antigene utilizzato dovrà essere 
stato titolato nelle identiche condizioni in presenza di siero tipo. 
5. L'agglutinabiI ita dei vari antigeni nei confronti del siero tipo deve 
essere compresa entro I seguenti limiti: 
Se la lettura è fatta al 50%: tra 1/600 e 1/1.000. 
Se la lettura è fatta al 75%: tra 1/500 e 1/750. 
6. Per la preparazione dell'antigene destinato alla siero-agglutinazione 
in tubi (metodo lento) devono essere utilizzati i ceppi Weybridge 
n. 99 e USDA 1119 o qualsiasi altro ceppo di sensibilità equivalente. 
7. I terreni di coltura utilizzati sia per la conservazione del ceppo nel 
laboratorio che per la produzione dell'antigene devono essere scelti 
in modo da non favorire la dissociazione batterica (S-R); si dovrà 
impiegare di preferenza I'agarpatata. 
- ->H 
8. L'emulsione batterica deve essere effettuata con soluzione fisiologica 
(NaCI 8,5%) fenicato allo 0,5%. Non deve essere usato II formolo. 
9. Si devono incaricare del control lo ufficlale degli antigeni I seguenti 
istituti ufficiaii: 
a) Germania: Bundesgesundheitsamt, Berlino; 
b) Belgio: Institut national de recherches vétérinaires, 
Bruxelles; 
e) Francia: Laboratoire central de recherches vétérinaires, 
Alfort; 
d) Granducato del Lussemburgo: Istituto del paese fornitore; 
e) Italia: Istituto superiore di sanità, Roma; 
f) Paesi Bassi: Centraal Diergeneeskundig Instituut, Afde ling 
Rotterdam; 
g) Danimarca: Statens Veterinaere Serumlaboratorlum, Kobenhavn V.; 
h) Irlanda: The Veterinary Research Laboratory, Department of 
Agriculture and Fisheries, Dublin; 
i) Regno Unito: 
- Gran Bretagna: The Central Veterinary Laboratory, 
Weybridge, Surrey, England, 
Irlanda del Nord: The Veterinary Research Laboratory, 
Stormont, Belfast; 
j) Grecia: KTHVIQTPIKOV IVOTITOÛTOV Aoiuwôwv KQI nopooiiiKÓv 
NoonuQTwv. I epa oôoç 75. A8iWai 301. 
k) Spagna: Centro Nacional de Bruce I os is de Mure la; 
I) Portogallo: Laboratòrio Nacional de Investigaçâo Veterinària, 
L i sboa. 
10. Gli antigeni possono essere forniti concentrati purché il coefficiente 
di diluizione richiesto sia indicato sull'etichetta del flacone. 
^S 
11. Per effettuare una s I ero-aggi ut inazione occorre preparare almeno tre 
diluizioni per ogni siero. Le diluizioni del siero sospetto devono 
essere effettuate in modo che la lettura delia reazione ai limite 
d'infezione avvenga nel tubo mediano. In caso di reazione positiva in 
questo tubo il siero sospetto conterrà quindi almeno la quantità di 30 
UI agglutinati per millilitro. 
B. Reazione di fissazione del complemento 
1. Come siero standard vale lo stesso substandard del siero della 
brucellosi di cui al punto A 1 del presente allegato. Oltre alle unità 
di agglutinazione internazionali (UAI), devono essere presenti in un 
mililitro di questo siero della brucellosi liofilizzato 1000 unità 
sensibilizzanti che fissano il complemento. Queste unità 
sensibilizzanti sono denominate unità sensibilizzanti CEE (USO. 
2. La fornitura del siero standardizzato è assicurata dal 
BundesgesundheItsmat di Berlino. 
3. Il tenore di anticorpi che fissano II complemento, in un siero, va 
espresso in unità sensibilizzanti CEE (USO (esempio: siero X -
USC/mI). 
4. Un siero contenente in 1/ml 20 unità sensibilizzanti CEE (il che 
corrisponde ad un'attività del 20% dell'attività del siero di 
riferimento) o più, deve essere considerato positivo. 
5. I sieri devono essere inattivati come segue: 
a) bovini: entre 56* - 60'C per 30 - 50 minuti; 
b) suini: 60'C per 30-50 minuti. 
6. Per la produzione dell'antigene si devono usare I ceppi Weybridge n. 
99 o USDA 1119. L'antigene è costituito da un'emulsione batterica in 
soluzione fisiologica allo 0,85% o In soluzione tampone veronal. 
7. Per la reazione si deve usare una dose di complemento che sia maggiore 
della dose minima necessaria per una emolisi totale. 
<(o 
8. Nell'esecuzione della reazione, si devono effettuare ogni volta I 
seguenti control li: 
a) controllo dell'effetto anticomplementare del siero; 
b) control lo del l'antigene; 
e) controllo delle emazie sensibilizzate; 
d) controllo del complemento; 
e) controllo di sensibilità della reazione con t'aiuto di un siero 
posItIvo; 
f) controllo della specificità della reazione con l'aiuto di un siero 
negativo. 
9. La sorveglianza e il controllo ufficiale dei sieri standard e degli 
antigeni sono affidati agli organismi di cui al punto A 9 del presente 
al legato. 
10. Gli antigeni possono essere forniti in forma concentrata, purché 
sull'etichetta sia indicato il coefficiente di diluizione necessario. 
C. Prova dell'anello (Ring Test) 
1. La prova dell'anello deve essere effettuata sul contenuto di ogni 
bidone di latte o sul contenuto di ogni grande contenitore 
del l'aienda. 
2. L'antigene tipo da Impiegare deve provenire da uno degli Istituti 
elencati al punto A.9, lettere da a) a J). Si raccomanda di impiegare 
antigeni standardizzati secondo le raccomandazioni del l'OMS/FAO. 
3. L'antigene può essere colorato solo con ematossiI ina o tetrazolo; 
occorre dare la preferenza al l'ematossiI ina. 
4. Se non sono utilizzati metodi di conservazione, la reazione deve 
essere effettuata tra la 18a e la 24a ora successiva alla mungitura. 
Qualora la prova sul latte debba essere effettuata oltre 24 ore dopo 
il prelievo del campione, si devono adottare sistemi di conservazione. 
Come conservanti si possono utilizzare il formolo o il cloruro 
mercurico; in tal caso, la prova deve essere effettuata entro 14 
giorni successivi al giorno in cui è stato prelevato II campione. 
q-i 
In caso di utilizzazione del formolo, la concentrazione finale nel 
campione di latte deve essere dello 0,2%; la proporzione tra la 
quantità di latte e la soluzione di formolo da aggiungere deve essere 
almeno di 10 a 1. Al posto del formolo si può utilizzare il cloruro 
mercuri co; anche in tal caso la concentrazione finale nel latte deve 
essere dello 0,2% e la proporzione tra quantità di latte e la 
soluzione del cloruro mercurio da aggiungere, di 10 a 1. 
5. La reazione deve essere effettuata secondo uno dei seguenti metodi: 
su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume 
di latte di 1 mi cui sono stati aggiunti 0,03 mi di uno degli 
antigeni standardizzati colorati; 
su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume 
di latte di 1 mi cui sono stati aggiunti 0,05 mi di uno degli 
antigeni standardizzati colorati; 
su un volume di latte di 8 mi cui sono stati aggiunti 0,008 mi di 
uno degli antigeni standardizzati colorati; 
su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume 
di latte di 2 mi cui sono aggiunti 0,05 mi di uno degli antigeni 
3tandardizzatI colorati. 
6. La miscela di latte e di antigeni deve essere tenuta in termostato a 
37'C per almeno 45 e al massimo 60 minuti. La prova deve essere 
valutata entro 15 minuti dalla rimozione della soluzione dal 
termostato. 
7. La reazione deve essere valutata secondo II seguente criterio: 
a) reazione negativa: latte colorato, crema decolorata; 
b) reazione positiva: latte e crema colorati in modo identico o latte 
decolorato e crema colorata. 
D. Prova all'antigene di Brucella tamponato 
La prova all'antigene di Brucella tamponato può essere effettuata secondo 
uno dei seguenti metodi: 
A. Metodo manuale 
1. Come siero standard è impiegato il secondo siero internazionale 
standard anti-Brucella abortus, fornito dal Central Veterinary 
Laboratory, Weybrldge, Surrey, Inghilterra. 
2. L'antigene è preparato senza riferimento alla concentrazione delle 
cellule, ma la sua sensibilità deve essere standardizzata rispetto 
al secondo siero internazionale standard anti-Brucella abortus, In 
modo tale che l'antigene dia reazione positiva con un siero 
diluito 1 : 47,5 e reazione negativa con un siero diluito 1 : 55. 
3. L'antigene deve essere sospeso in diluente per l'antigene di 
Brucella tamponato a pH 3,65 ± 0,5, e può essere stato colorato 
mediante rosa Bengala. 
4. Per la preparazione dell'antigene devono essere utilizzati II 
ceppo Weybridge n. 99 oppure l'USDA 1119 o qualunque altro ceppo 
d i sens i b11i té equI va I ente. 
5. I terreni di coltura impiegati per la conservazione del ceppo in 
laboratorio e per la produzione dell'antigene devono essere tali 
da non provocare la dissociazione batterica (S - R); sono 
raccomandabili il terreno agarpatata oppure I metodi di coltura 
cont inua. 
6. L'antigene deve essere controllato nei confronti di 8 sieri 
liofilizzati riconosciuti rispettivamente posit ivi e negativi. 
7. La sorveglianza e il controllo ufficiale dei sieri e degli 
antigeni standard sono effettuati dagli organismi ufficiali 
elencati nell'allegato C, punto A 9. 
8. L'antigene deve essere fornito pronto per l'uso. 
9. La prova all'antigene di Brucella tamponato deve essere effettuata nel 
modo seguente: 
a) porre una goccia (0,03 mi) di antigene a fianco di una goccia 
(0,03 mi) del siero su una piastra bianca; 
b) mescolare con un agitatore, prima In linea retta, poi tracciando 
del cerchi del diametro di 10-12 mm circa; 
e) agitare la piastra alternativamente per 4 minuti (circa 30 
movimenti al minuto); 
d) effettuare la lettura della prova in buone condizioni 
d'illuminazione; in mancanza di agglutinazione la prova sarà 
considerata negativa; qualsiasi grado di agglutinazione va 
considerato positivo, salvo quando appare chiara un'eccessiva 
. essiccazione intorno ai margini. 
B. Metodo automatizzato 
Il metodo automatizzato deve essere sensibile ed esatto almeno quanto il 
metodo manuale. 
E. Prova dell'anello di latte, effettuata su Plasma sanguigno 
A. Prelievo del plasma sanguigno 
Le provette con il sangue reso non coagulabile mediante aggiunta di 
EDTA sono centrifugate per 3 minuti a 3000 giri al minuto e poi 
conservate per 12-24 ore a 37'C. 
B. Impostazione diagnostica 
Si versano 0,2 mi di plasma stabilizzato in una provetta contenente 1 
mi di latte crudo. Dopo aver agitato, si aggiunge una goccia (0,05 mi) 
di antigene ABR e si agita nuovamente. L'antigene è standardizzato 
rispetto ad un antigene standard messo a disposizione dall'istituto 
menzionato al punto A 9 a). 
-H4-
Dopo aver lasciato riposare per 45 minuti ad una temperatura di 37'C, 
si esamina il risultato entro 15 minuti. La prova è considerata 
positiva se l'anello di latte ha la stessa colorazione o una 
colorazione più pronunciata di quella della colonna di latte. 
F. Agglutinazione del Plasma sanguigno 
Il plasma sanguigno ottenuto conformemente al metodo di cui alla sezione 
E, punto A, può essere utilizzato immediatamente dopo centrJfugazione 
senza che sia necessario procedere alla stabilizzazione termica. 
Si mescolano 0,05 mi di plasma con 1 mi di antigene per la 
sieroagglut inazione al 50%, il che corrisponde ad un titolo di diluizione 
1:20 nel caso della sieroagglutinazione. Si esamina il risultato dopo aver 
lasciato riposare per 18-24 ore alla temperatura di 37'C. La prova è 
considerata positiva se l'agglutinazione è uguale o superiore al 50%. 
G. Prova di mieroagglut inazione 
1. Il diluente è costituito da una soluzione salina fisiologia 0,85% 
fenicata al lo 0,5%; 
2. L'antigene è preparato nel modo descritto nei punti 6,7 e 8 
dell'allegato C, punto A e titolato nel modo descritto al punto A. 5 
dell'allegato C. Al momento dell'uso dell'antigene si aggiunge 
safranina 0 allo 0,02% (diluizione finale). 
3. Il siero standard è lo stesso siero di cui al punto A. 1 
del l'al legato C. 
4. La fornitura del siero standard è assicurata dal Bundesgesundhe!tsamt 
di Berlin. 
5. La prova di microagglutinazione utilizza piastre fornite di pozzetti a 
fondo conico e della capacità di 0,250 mi. La prova viene eseguita 
nella maniera seguente: 
a) Prediluizioni dei sieri: a ciascun pozzetto di una piastra 
contenente 0,075 mi di diluente si aggiungono 0,050 mi di ogni 
siero in esame. Le mescolanze vengono agitate per 30 secondi. 
-'/s, 
b) Diluizioni scalari dei sieri: per ogni siero preparare almeno tre 
diluizioni. A tale scopo a partire dalle prediluizioni (1:2,5) si 
prelevano 0,025 mi di ciascun siero e si trasferiscono su una 
piastra contenente 0,025 mi di diluente. In tal modo la prima 
diluizione viene portata al valore di 1:5 e le successive vengono 
eseguite per raddoppio. 
e) Aggiunta dell'antigene: nei singoli pozzetti contenenti le diverse 
diluizioni dei sieri in esame si aggiunge antigene In volume di 
0,025 mi. Previa agitazione per 30 secondi le piastre vengono 
chiuse con i rispettivi coperchi e poste a 37'C per 20-24 ore in 
atmosfera umidificata. 
d) Lettura dei risultati: si valuta il quadro della sedimentazione 
dell'antigene mediante esame del fondo del pozzetto riflesso da 
uno specchio concavo posto al di sotto di esso. 
Nel caso di prova negativa l'antigene sedimenta sotto forma di un 
bottone compatto, a margini netti e di colore rosso intenso. In 
caso di positività si forma invece un velo diffuso, di colorito 
rosa ed uniformemente distribuito. Le diverse percentuali di 
agglutinazione vengono determinate per raffronto con controlli 
dell'antigene indicatni 0, 25,50,75 e 100% di agglutinazione. Il 
titolo di ciascun siero viene espresso in UIA/ml. Nella prova è 
opportuno inserire controlli costituiti da siero negativo e siero 
positivo diluito in modo da contenere 30 UIA/ml. 
H. Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) per la ricerca della 
brucailosl bovina 
1. Per procedere al saggio ELISA occorrono le attrezzature ed I reattivi 
qui indicati: 
a) micropiastre, cuvette o qualsiasi altro recipiente per la fase 
so Ii da ; 
b) l'antigene è fissato sulla fase solida con o senza l'ausilio di 
anticorpi leganti policlonali o monocIona11 ; 
e) il fluido biologico da esaminare; 
d) controlli positivi e controlli negativi corrispondenti; 
k6 
e) iI coniugato; 
f) un substrato adatto all'ensIma Impiegato; 
g) una soluzione di arresto, se necessario; 
h) soluzioni per la diluizione dei campioni per la preparazione dei 
reattivi e per II lavaggio; 
I) un sistema di lettura corrispondente al substrato Impiegato. 
2. Standardizzazione e sensibilità della prova: 
1. I campioni di latte sfuso vengono classificati negativi se danno 
una reazione inferiore al 50% di quella data da una diluizione: 
1:10000 del secondo siero standard internazionale della brucellosi 
diluito in latte negativo-, 
2. I campioni singoli di siero vengono classificati negativi se danno una 
reazione inferiore al 10% di quella data da una diluizione di 1:200 
del secondo siero standard internazionale della brucellosi diluito in 
soluzione salina o qualsiasi altra soluzione riconosciuta secondo la 
procedura prevista all'articolo 12 previo parere del comitato 
scientifico veterinario. 
Gli standard ELISA della brucellosi devono essere quelli specificati 
nell'allegato C, punti A.1 e A.2 (da usare alle diluizioni indicate 
sull'etichetta). 
3. Condizioni di impiego del saggio ELISA per la ricerca della brucellosi 
bov i na: 
Il metodo ELISA può essere utilizzato su un campione di latte o di 
siero prelevato dal latte proveniente da un'azienda in cui almeno il 
30% delle vacche da latte sono in lattazione. 
Se si utilizza tale metodo, devono essere prese misure per assicurare 
una corrispondenza tra i campioni prelevati e gli animali da cui 
provengono il latte o i sieri esaminati. 
ALLEGATO D 
CAPITOLO I 
AZIENDE. STATI MEMBRI E REGIONI INDENNI 
DA LEUCOSI BOVINA ENZOOTICA 
A. E' considerata indenne da Ieucosi bovina enzootica un'azienda nella quale: 
i) non è stato constatato, in base ad osservazioni cliniche o in seguito 
a esami di laboratorio, alcun caso di Ieucosi bovina enzootica, né si 
è avuta conferma di alcun caso nel corso degli ultimi due anni e 
il) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi hanno, nel corso degli 
ultimi 12 mesi, reagito negativamente a due prove eseguite 
conformemente al presente allegato, ad un intervallo di almeno 
quattro mesi oppure 
Ni) sono soddisfatti i requisiti di cui al precedente punto I) e 
l'azienda è situata in uno Stato membro o in una regione Indenne da 
Ieucosi bovina enzootica. 
B. Un'azienda mantiene la qualifica di Indenne da Ieucosi bovina enzootica 
SSL-
i) continuano ad essere soddisfatte le condizioni di cui al paragrafo A, 
punto I); 
il) tutti gli animali introdotti nell'azienda provengono da un'azienda 
indenne da Ieucosi bovina enzootica; 
Ni) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi continuano a reagire 
negativamente ad una prova eseguita ogni tre anni conformemente al 
capitolo 11. 
C. La qualifica di azienda Indenne da Ieucosi è sospesa se non sono 
rispettate le condizioni di cui al precedente paragrafo B. 
D. La guallflca rimane sospesa sino a quando saranno soddisfatte la...aaguj%ntj_ 
condizioni : 
1. Se un unico animale dell'azienda indenne da Ieucosi bovina enzootica 
ha reagito positivamente ad una delle prove di cui al capitolo II: 
-48-
I) l'animale che ha reagito positivamente e, qualora si tratti di una 
vacca, gli eventuali vitelli da essa partoriti, debbono essere 
destinati alla macellazione, sotto il controllo delle autorità 
veterinarie; 
il) I restanti animali debbono aver reagito negativamente ad una 
prova sierologica eseguita conformemente al capitolo II non prima 
di tre mesi dopo la rimozione dell'animale risultato positivo e 
della sua possibile progenie; 
ili) dev'essere condotta un'Indagine epidemiologica e le aziende 
epidem io logicamente col legate a quella infetta debbono essere 
soggette alle misure di cui al punto li). 
L'autorità competente può tuttavia concedere una deroga all'obbligo di 
macellare il vitello di una vacca infetta qualora sia stato separato 
dalla madre dopo la nascita. In tal caso il vitello deve soddisfare le 
condizioni stabilite al seguente punto 2, ili). 
2. Se più animai I di un'azienda indenne da Ieucosi bovina enzootica hanno 
reagito positivamente o se l'infezione è stata confermata in 
un'azienda: 
I) gli animali che hanno reagito positivamente e i relativi vitelli, 
qualora si tratti di vacche, debbono essere destinati alla 
macellazione sotto il controllo delle autorità veterinarie; 
ii) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi debbono aver 
reagito negativamente a due prove eseguite conformemente al 
capitolo II ad un intervallo di almeno 4 mesi e inferiore a 12 
tS mesi; 
ili) tutti gli altri animali possono, una volta identificati, rimanere 
nell'azienda sino ad aver raggiunto l'età di 24 mesi e devono 
superare le prove di cui al precedente punto il); 
iv) dev'essere condotta un'indagine epidemiologica e le aziende 
epidem io logicamente col legate a quella infetta debbono essere 
soggette alle misure stabilite al precedente punto ii). • -• 
-H<b-
L'autorità competente può tuttavia concedere una deroga all'obbligo di 
macellare II vitello di una vacca infetta purché sia stato separato dalia 
madre dopo la nascita. In tal caso il vitello deve soddisfare le condizioni 
stabilite al precedente punto Ni). 
3. Se la qualifica di azienda indenne da Ieucosi bovina enzootica è stata 
sospesa per un qualsiasi altro motivo, tutti gli animali dell'azienda 
di età superiore al 24 mesi debbono reagire negativamente ad una prova 
sierologica eseguita conformemente al capitolo II. 
E. La Commissione PUÒ proporre, in base alla procedura di cui airartlcolo 12. 
che uno Stato membro o una regione di uno Stato membro siano riconosciuti 
indenni da Ieucosi bovina enzootica purché soddisfino le seguenti 
condizioni : 
a) perlomeno il 99,8% delle aziende di allevamento bovino sono 
considerate aziende indenni da Ieucosi bovina enzootica ai sensi del 
precedente paragrafo A. 
oppure 
b) nessun caso di Ieucosi bovina enzootica è stato confermato nello Stato 
membro o nella regione in questione negli ultimi tre anni e 
nel caso di uno Stato membro, tutti gli animali di età superiore al 24 
mesi in almeno il 10% degli allevamenti, scelti a caso, sono stati 
sottoposti, con esito negativo, alle prove di cui al capitolo II nei 
24 mesi precedent i 
oppure 
nel caso di una regione di uno Stato membro, tutti gli animali di età 
superiore ai 24 mesi sono stati sottoposti, con esito negativo, ad una 
delle prove di cui al capitolo II. 
F. Uno Stato membro o una regione di Stato membro mantiene la qualifica di 
indenne da Ieucosi bovina enzootica se: 
i) si è annualmente provveduto ad accertare, mediante un campione 
aleatorio con un tasso di affidabilità del 99%, che le aziende infette 
sono meno dello 0,2% oppure a sottoporre, con esito negativo, 
perlomeno il 20% dei bovini di età superiore ai due anni ad una prova 
eseguita conformemente al capitolo II; 
oppure 
II) qualora non si sia registrato, per almeno tre anni, nessun caso di 
Ieucosi bovina enzootica nello Stato membro o nella regione in una 
proporzione di un'azienda su 10000 si può decidere, in base 
all'articolo 12, di interrompere le prove sierologiche di routine 
purché: 
- tutti gli animali macellati nel territorio dello Stato membro o 
della regione in questione siano soggetti ad un'ispezione post 
mortem da parte di un veterinario ufficiale, che deve notificare 
tutti i tumori ai fini degli esami di laboratorio; 
- lo Stato membro notifichi tutti I casi di Ieucosi bovina enzootica 
che si verificano nella zona interessata dalla decisione della 
Commissione. La Commissione può decidere, in base alla procedura di 
cui all'articolo 12, di sospendere o di revocare la decisione 
d'interrompere le prove sierologiche di routine; 
- tutti gli animali che reagiscono positivamente ad una prova di 
immunodiffusione vengano macellati e l'azienda resti soggetta alle 
restrizioni sino a quando verrà ripristinata la sua qualifica 
conformemente all'allegato D, capitolo I, paragrafo D. 
G. i) La qualifica di "Indenne da Ieucosi bovina enzootica" di uno Stato 
membro o di una regione di uno Stato membro é sospesa, secondo la 
procedura di cui all'articolo 12. qualora I casi di Ieucosi bovina 
enzootica registrati e confermati riguardino oltre lo 0.2% delle 
aziende della regione o dello Stato membro. 
I ') La qualifica di "Indenne da Ieucosi bovina enzootica" PUÒ, essere 
ripristinata, secondo la procedura di cui all'articolo 12. qualora 
a) oltre alle misure di cui al precedente paragrafo D, punti 1 e 2, 
perlomeno il 20% delle altre aziende della regione o dello Stato 
membro, selezionate a caso, siano state soggette, entro un periodo 
di 12 mesi, ad una delle prove di cui al capitolo II; 
b) I risultati di queste prove consentano di stabilire, con un tasso 
di affidabilità del 99%, che le aziende infette sono meno dello 
0,2%. 
ALLEGATO D 
CAPITOLO II 
ESAMI PER LA RICERCA DELLA LEUCOSI BOVINA ENZOOTICA 
La ricerca della Ieucosi bovina enzootica è effettuata mediante un esame di 
immunodiffusions come descritto nelle lettere A e B o mediante un saggio di 
immunoassoblmento enzimatico (ELISA) come descritto nella lettera C. L'esame di 
immunodiffusione è effettuato solo In esami individuali. In caso di 
contestazione debitamente motivata dei risultati degli esami, si effettua un 
controllo complementare mediante un esame di immunodiffusione. 
A. Reazione di Immunodiffusione su gel di agar 
1. L'antigene da impiegare nella prova deve contenere glicoproteine del virus 
della Ieucosi bovina. Esso va standardizzato rispetto a un siero di 
riferimento (siero E 1) fornito dal laboratorio sierologico veterinario 
statale danese di Copenaghen. 
2. La responsabilità della standardizzazione degli antigeni di laboratorio 
rispetto al siero ufficiale CEE di riferimento (siero E 1) fornito dal 
laboratorio sierologico veterinario di Stato di Copenaghen è affidata ai 
seguenti istituti: 
a) Germania: Bundesforschungsanstalt fUr Viruskrankheiten der Tiere, 
TUb i ngen; 
b) Belgio: Institut National de recherches vétérinaires, Bruxelles; 
e) Francia: Laboratoire national de pathologie bovine, Lyon; 
d) Gran Ducato del Luxemburgo: — 
-'Vi 
e) Italia: 
f) Paesi Bassi : Istituto Zooprofilattico Sperimentale, Perugia; 
Central Diergeneeskundig Instituut, Afde ling 
Rotterdam; 
g) Danimarca: Statens VeterInaere Serum Laboratorium, 
Kobenhavn; 
h) Irlanda Veterinary Research Laboratory, Abbotstown, 
Dublin; 
i) Regno Unito: 
1. Gran Bretagna: The Central Veterinary Laboratory, Weybridge, 
England; 
2. Irlanda del Nord: The Veterinary Research Laboratory, Stormont, 
Belfast; 
J) Spagna: Subdirecciòn general de sanidad animal, 
Laboratorio de sanidad y produceiòn animal de 
ALGETE (Madrid); 
k) Portogallo: Laboratorio Nacional de Investigaçao 
Veterinària, Lisboa; 
I) Grecia: 
3. Gli antigeni standard di laboratorio devono essere presentati almeno una 
volta all'anno ai laboratori di riferimento CEE elencati al paragrafo 2 
per essere esaminati in rapporto al siero CEE. Indipendentemente da detta 
standard!zzi azione, l'antigene in uso può essere standardizzato secondo 
la tecnica descritta alla lettera B. 
4. I reattivi da impiegare sono i seguenti: 
a) antigene: esso dovrà contenere le glicoproteine specifiche del virus 
della Ieucosi bovina enzootica standardizzato rispetto al siero 
ufficiale CEE; 
b) siero in esame; 
e) siero di controllo riconosciuto positivo; 
-sv-
d) gel dl agar: 
0,8% dl agar, 
8,5% di NaCI, 
tampone Tris 0,05 M, a pH 7,2; 
versare 15 ml di questo terreno in una scatola Petri del diametro di 
85 mm, in modo da ottenere uno strato di agar dello spessore di 
2,6 mm. 
5. Nell'agar sul fondo della scatola ricavare sette pozzetti, esenti da 
umidità e distribuiti come segue: un pozzetto centrale e 6 pozzetti 
disposti In cerchio attorno ad esso; 
diametro del pozzetto centrale: 4 mm; 
diametro dei pozzetti periferici: 6 mm; 
distanza fra il pozzetto centrale e I pozzetti periferici: 3 mm. 
6. Riempire il pozzetto centrale con l'antigene standard, i pozzetti 
periferici 1 e 4 (vedi lo schema) con un siero riconosciuto come positivo 
e I pozzetti 2, 3, 5 e 6 con i sieri in esame. Il riempimento va 
effettuato fino a scomparsa del menisco. 
i 
O 
6 O O 2 
o 
5 O O 3 
o 
4 
7. Le quantità ottenute sono le seguenti: 
antigene: 32 microlitrl, 
siero di controllo: 73 microlItri, 
sieri in esame: 73 microlItrI. 
8. Incubare per 72 ore a temperatura ambiente (20-27'C), In atmosfera 
confinata ed umida. 
9. La lettura può essere effettuata dopo 24 e 48 ore, ma non è possibile 
ottenere il risultato finale prima di 72 ore: 
a) Il siero in esame è positivo se forma una linea specifica di 
precipitazione con l'antigene del virus della LBE e una linea completa 
di identità con il siero di riferimento; 
b) il siero in esame è negativo se non forma una linea specifica di 
precipitazione con l'antigene della LBE e se non provoca 
l'incurvamento della linea del siero di riferimento; 
e) la reazione è considerata non conclusiva: 
i) se la linea del siero di riferimento si incurva verso l'antigene 
della LBE senza formare con l'antigene una linea di precipitazione 
vis ibi le, ovvero 
II) se non può essere Interpretata come negativa o positiva. 
Quando la reazione non è conclusiva, la prova può essere ripetuta e può 
essere impiegato siero concentrato. 
10. Può essere utilizzata qualsiasi altra distribuzione o disposizione dei 
pozzetti purché II siero E 4 diluito 1:10 In siero negativo risulti 
PQSitivQ. 
B. Metodo per la standardazzlone dell'antigene 
Soluzioni e materiali necessari: 
1. 40 mi di agarosio ali'1,6% in tampone Tris/HCI 0,05 a pH 7,2, contenente 
I'8,5% di NaCI; 
2. 15 mi di siero della Ieucosi bovina, contenente anticorpi delle sole 
glicoproteine del virus della Ieucosi bovina, diluito 1:10 in tampone 
Tris/HCI 0,05 M a pH 7,2, contenente 8,5% di NaCI; 
3. 15 mi di siero della Ieucosi bovina, contenente anticorpi delle sole 
glicoproteine del virus della Ieucosi bovina, diluito 1:5 in tampone 
Tris 0,05 M de pH 7,2, contenente I'8,5% di NaCI; 
4. quattro scatole Petri in plastica, del diametro di 85 mm; 
5. un punzone del diametro di 4-6 mm; 
6. antigene di riferimento; 
7. antigene da standardizzare; 
8. bagnomaria (56*C). 
Modo di operare: 
Sciogliere I'agarosio (1,6%) nel tempone Tris/HCI, riscaldando 
cautamente a 100'C. Mettere in bagnomaria a 56'C per circa 1 ora. Porre 
in bagnomaria a 56'C anche le diluizioni dl siero della Ieucosi bovina. 
Mescolare 15 mi della soluzione di agarosio a 56'C con 15 mi di siero 
della Ieucosi bovina (1:10), agitare rapidamente e versare due porzioni 
da 15 mi della miscela in due scatole Petri. 
Ripetere il procedimento con il siero della Ieucosi bovina diluito 1:5. 
Quando ragarosio si è solidificato, praticare i pozzetti secondo il 
seguente schema: 
ç-fc-
Scatola Petri n. 1 
Siero 1:10 Scatola Petri n. 2 
Siero 1:10 
Scatola Petri n. 3 
Siero 1:5 Scatola Petri n. 4 
Siero 1:5 
Adiciòn del antigene-: 
i Scatole Petr i 1 e 3: 
pozzetto A -
pozzetto B -
» pozzettoes C y E -
pozzetto D -antigene di riferimento non diluito, 
antigene di riferimento, diluito 1:2, 
antigene di riferimento, 
antigene da controllare, non diluito. 
i i Scatole Petr i 2 e 4: 
pozzetto A -
pozzetto B -
pozzetto C -
pozzetto D -antigene in esame, non diluito, 
antigene in esame, diluito 1:2, 
antigene in esame, diluito 1:4, 
antigene in esame, diluito 1:8. 
Istruzioni complementari %r 
Diametro 
13 -
12 -
11 -
10 -
9 -
8 -
7 -
6 
5 -
4 -
3 -
2 -
1 1. Per realizzare una precipitazione ottimale, l'esperimento va 
effettuato con due diluizioni di siero (1:5 e 1:10). 
2. Se il diametro di precipitazione è troppo piccolo ad ambedue le 
diluizioni, il siero va ulteriormente diluito. 
3. Se la precipitazione per ambedue le diluizioni è indistinta e il 
diametro è troppo grande, per II siero va scelta una diluizione 
infer lore. 
4. La concentrazione finale dell'agarosio deve essere dello 0,8%; quella 
dei sieri deve essere rispettivamente del 5% e del 10%. 
5. Riportare i diametri misurati sul l'accluso sistema di assi coordinati 
La diluizione di lavoro deve corrispondere alla diluizione 
dell'antigene sotto prova che ha lo stesso diametro dell'antigene di 
r ifer imento. 
1:1 7 
1:2 1:3 
1:4 1:5 1:6 1:7 
1:8 
Diluizione dell'antigene 
~« 
C Saggio di Immunoassorblmento enzimatico (ELISA) per la ricerca della Ieucosi 
bovina enzootica. 
1. Per procedere al saggio ELISA occorrono le attrezzature e I reattivi qui 
Indicati: 
a) micropiastre, cuvette o qualsiasi altro recipiente per la fase solida; 
b) l'antigene è fissato sulla fase solida con o senza l'ausilio di 
anticorpi leganti policlonali o monoclonali. Se la fase solida è 
rivestita direttamente dall'antigene, tutti i campioni in esame che 
presentano reazione positiva devono essere riesaminati facendo 
riferimento all'antigene di controllo nel caso di LBE. Quest'ultimo 
deve essere identico all'antigene in questione, salvo nel caso di 
antigeni dei virus della Ieucosi bovina. Se gli anticorpi leganti sono 
distribuiti sulla fase solida, gli anticorpi non devono reagire ad 
antigeni diversi da quelli del virus della Ieucosi bovina; 
e) il fluido biologico da esaminare; 
d) un controllo positivo e negativo corrispondente; 
e) iI coniugato; 
f) un substrato adatto all'enzima impiegato; 
g) una soluzione di arresto, se necessario; 
h) soluzioni per la diluizione dei campioni per la preparazione dei 
reattivi e per il lavaggio; 
i) un sistema di lettura appropriato per il substrato impiegato. 
2. Standardizzazione e sensibilità della prova 
La sensibilità del saggio ELISA deve essere di livello tale che il siero 
E 4 risulti positivo quando è diluito 10 volte (campioni di siero) o 250 
volte (campioni di latte) più della diluizione ottenuta da singoli 
campioni presi congiuntamente. Nelle prove in cui i campioni (siero e 
latte) sono esaminati individualmente, il siero E4 diluito nella 
proporzione di 1:10 (nel siero negativo) o di 1:250 (nel latte negativo) 
deve presentare una reazione positiva quando è esaminato in una 
diluizione di prova uguale a quella impiegata per le prove individuali. 
-SA-
Agli Istituti ufficiali elencati al punto A2 incombe la responsabilità di 
controllare la qualità del metodo ELISA e dl determinare In particolare, 
per ogni partita di produzione, Il numero di campioni da raggruppare, in 
base al tasso dl siero E4. 
Il siero E4 è fornito dal laboratorio veterinario nazionale di 
Copenaghen. 
3. Condizioni di utilizzazione del saggio ELISA 
Il metodo ELISA può essere utilizzato su un campione di latte o dl siero 
prelevato dal latte proveniente da un'azienda In cui almeno il 30% delle 
vacche da latte sono in lattazione. 
Se si ricorre a tale metodo, si devono prendere misure per garantire la 
corrispondenza tra i campioni prelevati e gli animali da cui provengono 
il latte esaminato o i sieri. 
ALLEGATO Ed) 
a) Ma I attle dei bovini : 
rabbia. 
- tubercolosi. 
brucellosl. 
- Pleuropolmonlte contagiosa bovina. 
Ieucosi bovina enzootica. 
b) Malattie dei suini : 
rabbia. 
brucellosl. 
ALLEGATO Efll) 
Malattia dl AuJeszkv. 
Rlnotrachelte Infettiva bovina. 
Infezione da Brucella suis. 
<c>o .-
CERT N* SPECIE bovina/suina per mace 11 azione/ 
al levamento/produzione 
STATO MEMBRO di origine REGIONE DI ORIGINE 
A. 
AZIENDA DI ORIGINI 
Nane 
N* di riferimento 
L'azienda di origine è: 
ufficialmente indenne da tubercolosi 
ufficialmente indenne da brucellosi 
Indenne da brucellosi 
indenne da Ieucosi 
DATA DI SPEDIZIONE 
Firma sf/no 
sf/no 
sf/no 
sf/no indirizzo 
GII animali in appresso elencati sono stati sottoposti 
alle seguenti prove, conformemente alla direttiva 64/432/ŒE: 
DATA DELLA FROVA 
tubercol inizzazione sforni richiesta . . 
sieroagglutinazione brucellosi sf/non richiesta . . 
test per la Ieucosi sf/non richiesto . . 
veterinario ufficiale, azienda di origine 
B. 
IDENTIFICAZIO£ DEGLI ANIMALI 
Razza Tipo Età NJM3© TOTALE DI ANIMAI 
Identificazione ufficiale 
C. 
WEFCATO AUTORIZZATO 
Ubicazione 
Indirizzo 
data n. rlf. 
Firma/timbro LUOGO DI SPEDIZICNE/feAOOOLTA 
Ubicazione 
Indirizzo 
data n. rlf. 
DESTINATARIO 
Indirizzo SOUBI INTRACCMJNITARI 
Mezzi di trasporto 
Identificazione 
Fatti gli opportuni accertamenti, il sottoscritto certi 
fica che: 1) sono state rispettate tutte le disposlzio-
zloni vigenti della direttiva 64/432/CEE del Consiglio; 
2) il trasporto previsto è stato registrato In ANM); 
3) l'animale/gli animali surmenzionati rispondono al le 
garanzie supplementari per (malattia) per 
a _____ (Decisione / /SEEdel la Gannissi orai)/ 
Firma 
data del resane sanitario 
data di scadenza del certificato (specie/tipo) destinati 
Data 
. Nome in stampateI lo 
ALLEGATO I I 
TABELLA Dl CONCORDANZA 
Direttiva aggiornata 
Art ico 
Art ico 
Art Ico 
Art ico 
Art ico 
Art 1 co 
Art ico 
Art Ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art Ico 
Art Ico 
Art Ico 
Art ico 
Art ico 
Artico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Ar t i co 
Ar 11 co 
ArtIco 
comma 
Ar 11 co 
Art ico 
comma 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Art ico 
Artico 
Art ico 
Art ico 1 
2.(a) 
2.(b) 
2.(e) 
2.(d) 
2.(e) 
2.(f) 
2.(g) 
2.(h) 
2.(i) 
2.(j) 
2.(k) 
2.(1) 
3.1. 
3.2.(a) 
3.2.(b) 
3.2.(e) 
3.2.(d) 
3.2.(e) 
4.1. 
4.2. 
4.3. 
5 
6.1, pr imo tratt ino 
6.1, secondo trattino 
6.2.(a), pr imo comma 
6.2.(a), secondo 
6.2.(b), primo comma 
6.2.(b), secondo 
6.2.(e) 
6.2.(d) 
6.3. 
7 
8 
9 
10 
11 
12.1. 
12.2. 
12.3. Direttiva 64/432/CEE 
Articolo 1 
Articolo 2.(b) 
Articolo 2.(e) 
Articolo 2.(d) 
Articolo 2.(e) 
Articolo 2.(f) 
Articolo 2.(s) 
Articolo 2.(t) 
Articolo 2.(1) 
Art icolo 3.1. 
Articolo 3.2.(a) 
Articolo 3.2.(b) 
Art icolo 3.2.(e) 
Ar t i co Io 3.5. 
Articolo 3.2.(f)(i) 
Articolo 3.2.(g) 
Articolo 3.2.(d) 
Art icolo 3.3.(a) 
Articolo 3.3.(b) 
Art icolo 3.3.(d) 
Articolo 3.2.(f)(i i) 
Art icolo 6 
Art icolo 9 
Articolo 10 
Articolo 12.1 
Art icolo 12.2 
Articolo 12.3 
—<o ^ 
Dirett iva aggiornata Direttiva 64/432/CEE 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
Art icoio 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
Art icolo 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 
legato 12.4 
12.4 
12.4 
13.1 
13.2 
13.3 
13.4, 
13.4, 
13 
14 
15 
A 
B.1. 
B.27, 
B.28. 
B.32. 
C.A. 
CD. 
CE. 
CF. 
C.C 
CH. 
D p r i mo comma 
secondo comma 
terzo comma 
pr imo comma 
secondo comma 
- B.26. 
- B.31. 
A.1. - D.II.A.9 
A.10. 
B. 
C Articolo 12.4, primo comma 
Articolo 12.4, secondo comma 
Art icolo 13.1 
Articolo 13.2 
Articolo 13.3 
Articolo 13.4, primo comma 
Articolo 14 
Articolo 16 
- B.26. 
- B.31 legato B.1 
legato B.27. 
legato B.28. 
legato B.32. 
legato C.A. 
legato C.B. 
legato C.C. 
legato CD. 
legato CE. 
legato CF. 
legato C.G. 
legato G. I I .C 
legato G.I. 
legato G.Il.A.1. - G.Il.A.9 
legato G.I I.B 
legato G.I I.C 
<&'*> 
ISSN 0254-1505 
COM(93) 698 def. 
DOCUMENTI 
IT 10 03 
N. di catalogo : CB-CO-93-750-IT-C 
ISBN 92-77-63143-0 
Ufficio delle pubblicazioni ufficiali delle Comunità europee 
L-2985 Lussemburgo